技術情報

GelStar®, SYBR® Green I, II核酸ゲル染色によるDNAの検出
電気泳動後のDNAの染色方法

アガロースゲルでGelStar®染色を使用する場合の手順

1.

1.

GelStar® または SYBR® Green 染色の濃縮ストック溶液を冷凍庫から取り出し、室温で融解します。

2.
3.

し、融解します。

微小遠心分離用チューブで溶液を遠心分離し、チュー2.

微小遠心分離用チューブで溶液を遠心分離します。

ブ底部の染料を回収します。

3.

アガロース溶液を調製します（406 - 408ページ参照）。

透明のプラスチック製ポリプロピレン容器でpH 7.5 〜8.5の緩衝液を使い、10,000X濃縮液を1X希釈標準溶液（1 µl / 10 ml）に希釈します。ゲルの上面を覆うのに十分な染色溶液を用意します。

4.

ゲルを電気泳動チャンバーから取り出します。

5.

ゲルを染色溶液に浸します。

6.

室温でゲルを静かにかき混ぜます。

7.

15 〜 30 分間ゲルを染色します。最適な染色時間は、トサイズによって異なります。ゲルが厚く、アガロース濃度が高ければ、染色時間も長くなります。

アガロース溶液が70℃まで冷えたら、濃縮ストック溶液をゲル溶液で1:10,000に希釈し、ゲルに流し入れて染料を追加します（1 µl / 10 ml）。

5.

溶液をゆっくりと渦動させます。

6.

ゲルをキャスティングトレイに流し入れます

Reader®トラン

スイルミネーター（Clare Chemical Research, Inc.）で7.

DNAをウェルに入れます。

8.

ゲルを電気泳動させます。

9.

電気泳動チャンバーからゲルを取り出します。

10. 300 nm UVトランスイルミネーター、CCDカメラまたはDark Reader®トランスイルミネーター（Clare ChemicalResearch, Inc.）で観察します。GelStar®は脱染不要です。染料による蛍光発色は、溶液中よりもDNAと結合した場合のほうがより強くなります。

観察します。GelStar® および SYBR® Greenで染色されたゲルは脱染不要です。染料による蛍光発色は、溶液中よりも DNA と結合した場合のほうがより強くなります。

GelStar®およびSYBR® Green染色を用いた垂直ゲル染色
GelStar®およびSYBR® Green染色を組み合わせてゲルに使用

電気泳動・分析

ゲルを染色溶液から取り出し、300 nm UVトランスイ
ルミネーター、CCDカメラまたはDark

4.

（409ページ参照）。

ゲルの厚さ、アガロース濃度、検出されるフラグメン

8.

GelStar®染色の濃縮ストック溶液を冷凍庫から取り出したり、使用する DNA を垂直のまま事前に染色したりすることは推奨されません。ガラスまたはプラスチックのプレートや DNA に結合する染料は、ほとんどまたは全くシグナルを示さない場合があります。ゲルは、前のセクションで説明したように、後で染色してください。

GelStar®またはSYBR® Green染色で垂直ゲルを染色する場合は、本手順に従ってください。上記の手順1〜4に従います。
5.

カセットを開封してゲルをプレート上に配置します。

6.

側面を持ち上げながらプレートとゲルを染色容器に配置します。

7.

ゲル表面に染料を静かに流し入れます。

8.

5〜15分間ゲルを染色します。

9.

300 nm UVトランスイルミネーター、CCDカメラまたはDark Reader®トランスイルミネーター（Clare ChemicalResearch, Inc.）で観察します。GelStar®およびSYBR®
Green染色ゲルは脱染不要です。染料による蛍光発色は、溶液中よりもDNAと結合した場合のほうが強くなります。

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GelStar®, SYBR® Green I, II核酸ゲル染色によるDNAの検出
続き

写真による可視化

適用上の注意小量のDNAを検出する場合、GelStar®およびSYBR®

Green染色で染色されるゲルが示すバックグラウンド蛍光はわずか–であり、これによって長時間の撮影用曝露が可能となります。染色用の適切な撮影用フィルターを使用してくだ

GelStar®およびSYBR® Green染色は、これらの蛍光特性によりアルゴンイオンレーザーに対応しています。

–

これらの染色剤は核酸のエタノール沈殿の標準プロトコ
ルによって二本鎖DNAから除去できます。

さい。
–

エチジウムブロマイドであらかじめ染色されたゲルは、後染色の標準プロトコルに従って、泳動後にGelStar®ま推奨撮影タイプと撮影条件：

Poloaroid® Filmf-stopExposure TimeType 57 or 667

4.5

0.5 – 2 seconds

Type 55

4.515 – 45 seconds

たはSYBR® Green染色で染色できます。
–

塩化セシウム密度勾配プラスミドの調製にGelStar®およびSYBR® Green染色を使用することは推奨されません。
DNAの浮遊密度への染色液の効果が不明です。

画像取り込みシステムによる可視化–

これらの染色は酵素反応に干渉しません。

最善の結果と最適な感度を得るには、Dark–

これらの染料で染色されたゲルにサザンプロット法を適Reader®トラン
Chemical Research, Inc.）上でGelStar® で染色したゲルを可視化します。 GelStar® およびSYBR® Green染色はほとんどのCCDおよび動画イメージング

スイルミネーター（Clare

フィルターの種類によっては、新しいフィルターを購入する必要があります。必要なフィルターについては、システ
ムのメーカーに問い合わせてください。

ブリダイゼーションにおいて0.1%〜0.3%のSDSを添加するよう推奨されます。
–二本鎖DNA結合GelStar®またはSYBR®

Green染色はUV透照下で緑蛍光を発色します。一本鎖領域をもつDNAを含むゲルは緑ではなく橙色を発する可能性があります。

汚染除去
Stain

Emission (nm)

Excitation (nm)GelStar®染色527493SYBR® Green I染色521494SYBR® Green II染色513497染色溶液は、活性炭でろ過してから廃棄し活性炭は焼却し

et.
al., pp. 6.16 – 6.19（1989年）を参照してください。核酸染てください。活性炭による吸収については、Sambrook

電気泳動・分析システムに対応しています。実際に使用するシステムの用する場合は、プレハイブリダイゼーションおよびハイ色溶液の汚染除去と処理については、国と地方公共団体のガイドラインに従ってください。

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