PCR 産物精製キット

ISOSPIN PCR Product
マニュアル（第 4 版）

Code No. 315-08001

NIPPON GENE CO., LTD.

I 製品説明ISOSPIN PCR Product（アイソスピン PCR プロダクト）は、PCR 反応液中の PCR 産物を精製するためのキットです。
本キットは、カオトロピックイオン存在下で DNA がシリカへ吸着する原理を応用しており、操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。使用するスピンカラ
ムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカゲル膜は、充分な DNA 吸着容量と高い溶出効率を確保しています。
本キットでは、約 20 分間という短い時間で PCR 反応液から DNA ポリメラーゼ、塩、プライマー、dNTPs などを取り除き、PCR 産物のみを回収することができます。本キットによって精製された PCR 産物は、各種分子生物学実験に使用することができます。

II キット内容キット内容品（100 回用）

備考

ISB Buffer

100 ml × 1 本（吸着液）

ISW Buffer

100 ml × 1 本エタノール含有（洗浄液）ISE Buffer

10 ml × 1 本

組成：10 mM Tris-HCl (pH 8.5)（溶出液）

Spin Column

50 本 × 2 袋

上部パーツ：カラム
下部パーツ：Collection Tube

III 保存
室温保存
・ ISW Buffer にはエタノールが含まれています。ご使用後は蒸発を防ぐため速やかに蓋を閉め、保管して下さい。

1

IV 使用上の注意・ 本品は、試験研究用試薬ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。
・ 試薬についての基本的な知識のある方以外は取り扱わないで下さい。
・ 本品の取り扱いは、マニュアル記載内容通りに行って下さい。
・ マニュアル記載内容と異なった取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いかねます。
・ 製品安全性データシート（MSDS）につきましては、ニッポンジーンホームページ（http://www.nippongene.com/）にてご覧いただけます。

V プロトコール＜キット以外に用意するもの＞
・マイクロピペット・ピペットチップ
・1.5 ml マイクロチューブ
・遠心分離機2

＜プロトコール＞PCR 反応液に 5 倍量の ISB Buffer を添加し、溶液が完全に混合するように①転倒混和する。軽くスピンダウンする。
例）PCR 反応液 50μl あたり ISB Buffer を 250μl 加えます。

↓
メンブレンに PCR 産物を吸着させるため、混合液を全量 Spin Column に添②加する。
注）混合液量が多く Spin Column に一度に添加できない場合はステップ②～④を繰り返して、1 本の Spin Column に全量を添加して下さい。

③

遠心（12,000×g、1 分間、室温）する。

④

Spin Column のカラムを外し、Collection Tube の中のろ液を捨てた後、カラムを同じ Collection Tube の上に戻す。
↓⑤

洗浄のため、750μl の ISW Buffer を Spin Column に添加する。

⑥遠心（12,000×g、1 分間、室温）する。

⑦

ろ液を捨て、カラムを Collection Tube に再度戻す。
↓Spin Column を空の状態のまま遠心（12,000×g、1 分間、室温）し、メン⑧ブレンを乾燥させる。
注）ISW Buffer に含まれていたエタノール分を取り除くための操作です。

↓⑨

Spin Column のカラムを新しい 1.5 ml マイクロチューブの上にのせる。

⑩

メンブレンに吸着していた PCR 産物を溶出させるため、50μl の ISE Bufferをメンブレン中央に滴下した後、3 分間室温で静置する。
注）ISE Buffer（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）の代わりに Nuclease フリー水や TE（pH 8.0）も溶出液として使用できます。

⑪

遠心（12,000×g、1 分間、室温）する。

⑫

PCR 産物が 1.5 ml マイクロチューブの中に回収される。

3

＜簡易プロトコール＞
PCR 反応液5 倍量の ISB Buffer を添加
転倒混和
軽くスピンダウン
Spin Column に全量を添加
遠心（12,000×g, 1 分間, 室温）
ろ液を捨てる
750μl の ISW Buffer を添加
遠心（12,000×g, 1 分間, 室温）
ろ液を捨てる
空の状態で遠心（12,000×g, 1 分間, 室温）
Spin Column のカラムを新しい 1.5 ml マイクロチューブの上に移す
50μl の ISE Buffer をメンブレン中央に滴下
室温静置 3 分間
遠心（12,000×g, 1 分間, 室温）
PCR 産物4

VI

トラブルシューティング

トラブル

予想される原因

対 策
ISE Buffer（溶出液）量を増やす。
（溶出量を増やす

溶出が不十分。と精製される PCR 産物の濃度が低くなります）
ISE Buffer 添加後、室温で 3 分間必ず静置する。
ISE Buffer はメンブレンの中央に滴下する。

DNA の回収効率が低い。

精製前に PCR 反応液の一部を電気泳動して、増幅をPCR 反応液中のPCR 産物の量が少ない。

確認する。
PCR 反応液を複数準備し、それぞれを 1 本のチューブにまとめてから 1 本の Spin Column で精製プロトコールを行う。
PCR 条件を検討する。
ISW Buffer による洗浄後、再度 ISW Buffer（もしく精製した PCR 産 塩類もしくはエタ は 80% エタノール）を Spin Column に添加して洗物 が 酵 素 反 応 に ノールが残存して 浄を 2 回行う。
使用できない。

いる。

洗浄後に行う空の Spin Column の遠心時間を 5 分間に延ばす。

PCR 反応溶液中精製した PCR 産 に存在する PCR物の濃度が低い。 産物量に対して溶出液量が多い。

溶出の際、ISE Buffer の量を減らす。（溶出量を 30μl より少なくすると、回収効率が 50μl 溶出時よりも低くなります）

精製した PCR 産 DNA がせん断さ ISB Buffer と PCR 反応溶液の混合は、ピペッティン物 を ア ガ ロ ー ス れている。
ゲル電気泳動す
ると、精製前とサイズが異なっている。

DNA がヌクレアーゼにより分解している。

グではなく転倒混和で行う。
試薬、ピペットチップ、チューブ類は滅菌処理したものを使用する。

5

VII

データ

＜製品性能＞DNA 吸着容量20μg

最低溶出液量10μl

回収効率60–95％（100 bp–20 kbp）

カラム容量

900μl

Primer（single strand DNA）除去 40 mer 以下＜溶出液量による回収効率の変動と精製産物の濃度変動＞（濃度比率：50μl 溶出時の濃度を 100%とした場合の相対比）＜DNA Fragment Size による回収効率の変動＞

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VIII 関連製品
Code No.

製品名

包装単位

316-90025
314-90021

500 mlTE (pH8.0)

100 ml100 ml×6310-90023
316-90405
314-90401

500 ml1M Tris-HCl (pH8.5)

100 ml318-90105
316-90101

500 mlDistilled Water, Deionized, Sterile

100 ml×6312-90103
311-07763
319-07764
319-07041
315-07043
311-07523
319-07524

100 ml96 回分

Gene RED PCR Mix Plus

960 回分
250 units

Hot-Start Gene Taq

250 units×4
250 units

Hot-Start Gene Taq NT

250 units×4

マニュアル記載内容や製品仕様、価格に関しては予告なしに変更する場合があります。

お問い合わせ先株式会社ニッポンジーン
研究試薬部
TELURL

学術営業課

076 - 451 - 6548
http://www.nippongene.com/siyaku/

お問い合わせは、お電話もしくは WEB フォームより承っております。

ISOSPIN PCR Product マニュアル（第 4 版）201311-1703

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