ECOS™ Competent E. coli
DH5α, JM109, XL1-Blue, BL21（DE3）
マニュアル（第 14 版）1806KM

Ⅳ 保存と凍結融解（再凍結）について
製品名
ECOS™ Competent E. coli
DH5α

ECOS™ Competent E. coli
JM109

ECOS™ Competent E. coli
XL1-Blue
ECOS™ Competent E. coli
BL21(DE3)

Code No.

包装単位

310-06236

50 µl×40 本

310-06231

100 µl× 2 本

316-06233

100 µl×20 本

314-06234

100 µl×80 本

317-06246

50 µl×40 本

317-06241

100 µl× 2 本

313-06243

100 µl×20 本

311-06244

100 µl×80 本

311-06521

100 µl× 2 本

317-06523

100 µl×10 本

315-06524

100 µl×20 本

318-06531

100 µl× 2 本

314-06533

100 µl×10 本

312-06534

100 µl×20 本

Ⅰ 製品説明本品は大腸菌 DH5α、JM109、XL1-Blue、BL21（DE3）のコンピテントセ
ルです。本品ではプレーティング前の回復ステップである SOC 培地での約1 時間の培養が不要なことから、短時間で形質転換を行うことができます。
また、本品は長期間高い形質転換効率を保ったまま保存できることや、1 度凍結融解（再凍結）しても形質転換効率があまり低下しないことなど、従来のコンピテントセルにはなかった特長を持ち合わせています。
■ 特 長・ ECOS™ 6 分間プロトコールで高効率形質転換が可能
・ ECOS™ 1 分間プロトコールで最高速形質転換が可能
・ 凍結融解に対する高い耐性・ 長期保存が可能
Ⅱ 各菌株の遺伝子型
DH5αF－, Φ80dlacZ⊿M15, ⊿（lacZYA-argF）U169, hsdR17（rk－mk＋）, recA1, endA1, relA1, deoR, supE44, thi-1,gyrA96, λ－JM109

F’[traD36, proAB, lacＩ , lacZ⊿M15], ⊿（lac-proAB）,
hsdR17（rk－mk＋）, recA1, endA1, relA1, supE44, thi-1,gyrA96, e14－(mcrA－)

XL1-Blue
BL21（DE3）q

保存温度： －80℃
・ 温度変化の少ない条件下であれば長期間安定して保存することができます。長期保存による形質転換効率低下の目安は、1 年間で約 1/2 に低下する程度です。
・ 一度の凍結融解（再凍結）では形質転換効率はあまり低下しませんが、凍結融解の繰り返しは形質転換効率の大幅な低下の原因となりますので避けて下さい。凍結融解（再凍結）を行う場合は、融解、操作は氷上で素早く行い、－80℃で再凍結して下さい。
・ これらの内容については製品の性能として保証するものではありません
ので、ご了承下さい。
Ⅴ 注意
・ 本品は試験研究用ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。また、試薬についての基本的な知識のある方以外は取り扱わないで下さい。本品の取り扱いはマニュアル記載内容通りに行って下さい。
マニュアル記載内容と異なった取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いかねます。
・ 本品に関連する技術については、現在特許出願中です。
・ BL21（DE3）株は T7 Gene Expression System 関連製品であり、T7
Gene Expression System については Brookhaven National Laboratoryが米国特許を有しております。
T7 Gene Expression System 関連製品およびこれを利用して製造した製品を国外に持ち出すことを想定している場合には、Brookhaven NationalLaboratory とライセンスを締結する必要があります。
ライセンス締結については下記担当者に直接お問合わせ下さい。
担当者
Christine Brakel
電話+1-631-344-7134 / Fax +1-631-344-3729Emailbrakel@bnl.gov
本製品を日本国内のみで研究用途にご使用いただく場合にはライセンス締結の必要はありません。
・ 製品「ECOS™ Competent E. coli BL21（DE3）」について（Code No. 318-06531, 314-06533, 312-06534）
遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律第 26 条第 1 項に基づく情報提供

hsdR17, recA1, endA1, gyrA96, thi-1, supE44, relA1,
qrlac[F’, proAB, LacＩ Z⊿M15, Tn10（tet ）]宿 主：

E. coli B, F－, dcm, ompT, hsdS（rB－mB－), gal,λ（DE3）

核酸又はその複製物：

遺伝子組換え生物等の第二種使用等をしています
Escherichia coli BL21 （B 株由来）
T7 ファージ由来 RNA Polymerase 遺伝子を含む

Ⅲ 形質転換効率

バクテリオファージ lambda DE3 （溶原化）

ECOS™ 1 分間プロトコールを以下の条件で実施した場合
DH5α、JM109、XL1-Blue
BL21（DE3）

7≧1×10 （cfu/µg pUC19 DNA）
6
≧1×10 （cfu/µg pUC19 DNA）

・ コンピテントセルを室温のウォーターバスで約 1/3 量を融解して DNA溶液を添加。
・ 形質転換には pUC19 DNA を使用。
・ 全て室温で連続的に操作。
・ アンピシリンは 50 µg/ml で使用。
・ LB プレートは 4℃のものを使用。

株式会社ニッポンジーン

TEL 076-451-6548

連絡先：〒930-0834 富山県富山市問屋町 2-7-18
株式会社ニッポンジーン 組換え DNA 実験安全委員会
担当責任者： 二上正裕

TEL（076）451-6548

使用に際しては貴施設の安全委員会の指示に従って下さい。
・ カルタヘナ法（遺伝子組換え生物等規制法）につきましては、下記 URLに大変詳しく記述されておりますので、ご参考下さい。
文部科学省ホームページ
http://www.lifescience.mext.go.jp/bioethics/anzen.html#kumikaewww.nippongene.com

Ⅵ ECOS™ 6 分間プロトコール（高効率迅速形質転換法）

Ⅷ プロトコールに関する注意本プロトコールは、大腸菌の形質転換を高効率（ECOS™ 1 分間プロトコールの 2～3 倍）に短時間（6 分間）で行うことができる優れたプロトコールです。特に、6 kbp 以上の大きなプラスミドを使用する場合には、必ず本プロトコールで行って下さい。ECOS™ 1 分間プロトコールでは形質転換効率が低下する場合があります。

ECOS™ 1 分間・6 分間プロトコールは、薬剤にアンピシリンを使用する場合にのみ有効です。
薬剤耐性機構の違いにより、薬剤にカナマイシンやテトラサイクリンを使用する場合には形質転換効率が低下しますので、熱処理後に培地を添加し回復培養を行ってからプレートに移して下さい。

①氷上でコンピテントセルを融解する。（＊1）②

直ちに、4℃または氷上で冷却したプラスミド溶液またはライゲーション溶液を添加する。（＊2）③

直ちにボルテックスで 1 秒間撹拌する。（＊3）④

氷上で 5 分間インキュベートする。

⑤

直ちに 42℃で 45 秒間インキュベートする。

⑥

直ちにボルテックスで 1 秒間撹拌する。（＊3）⑦⑧

直ちに全量を LB プレートに移し均一に塗布する。
（＊4）

37℃で 12～16 時間インキュベートする。

Ⅶ ECOS™ 1 分間プロトコール（最速形質転換法）
本プロトコールは、最も時間と手間がかからないプロトコールです。
1 チューブずつの操作であれば、氷上での操作も必要ありません。42℃のウォーターバスとボルテックスがあれば、約 1 分間で形質転換を行うことができます。複数本を同時に形質転換に用いる場合など、各操作を直ちに連続操作で進めることができない場合には、全ての操作を氷上で行うことで、安定した形質転換効率を得ることができます。
① 氷上でコンピテントセルを融解する。（＊1）↓② 直ちに、4℃または氷上で冷却したプラスミド溶液またはライゲーション溶液を添加する。（＊2）↓③ 直ちにボルテックスで 1 秒間撹拌する。（＊3）↓④ 直ちに 42℃で 45 秒間インキュベートする。
↓⑤ 直ちにボルテックスで 1 秒間撹拌する。（＊3）↓⑥ 直ちに全量を LB プレートに移し均一に塗布する。（＊4）↓⑦ 37℃で 12～16 時間インキュベートする。
株式会社ニッポンジーン① 氷上でコンピテントセルを融解する。（＊1）↓② 直ちに、4℃または氷上で冷却したプラスミド溶液またはライゲーション溶液を添加する。（＊2）↓③ 直ちにボルテックスで 1 秒間撹拌する。（＊3）↓④ 氷上で 5 分間インキュベートする。
↓⑤ 直ちに 42℃で 45 秒間インキュベートする。
↓⑥ 氷上で 2 分間インキュベートする。
↓⑦ あらかじめ 37℃で保温しておいた Hi-Competence Broth または SOC培地を、コンピテントセルの 4 倍量程度加え、37℃で約 30 分間インキュベートする。
↓⑥ 100 µl～全量を LB プレートに移し均一に塗布する。（＊4）↓⑦ 37℃で 12～16 時間インキュベートする。

（＊1） 水道水や室温のウォーターバスでコンピテントセルを素早く融解することも可能です。その場合は、約 1/3 量を融解した時点で DNA を添加して下さい。完全に融解させた場合には形質転換効率が約 1/3 に低下することがあります。
（＊2） 添加する DNA 溶液の量はコンピテントセルの容量の 5%以下にして下さい。5%以上の DNA 溶液を添加した場合には、形質転換効率が低下することがあります。
（＊3） 1 秒間のボルテックスは形質転換効率に悪影響を与えません。
ECOS™ Competent E.coli はボルテックスに耐えられるように調製されています。
（＊4） LB プレートは 4℃のものを使用することができます。また、セレクシ
ョンに使用する薬剤は以下の濃度で使用することをお勧めします。
50 µg/ml
アンピシリン
25 µg/ml
カナマイシン
12.5 µg/ml
テトラサイクリン
薬剤濃度が高すぎる場合には、形質転換効率が低下する場合があります。
また薬剤濃度が低すぎる場合には、サテライトコロニー数が増加する場合があります。
Ⅸ 関連製品Code No.

製品名314-07731

ECOS™ X Competent E. coli DH5α

100 µl× 2 本

310-07733(イーコスエックス 高効率コンピテントセル)

100 µl×10 本

319-05961

Ligation-Convenience Kit (2×Ligation Mix)

100 回分

314-06251

Bac’n’Roll Beads

100 回分

319-01343

Hi-Competence Broth

1 ml×20 本

包装単位

その他詳細についてはニッポンジーンのホームページをご覧ください。
https://www.nippongene.com/siyaku/index.html
ECOS™ Competent E. coli マニュアル（第 14 版） 1806KM