2021 Summer

ADMETox 製品ガイド
Primary Human Hepatocytes
Primary Animal Hepatocytes
NoSpin HepaRGTM Cells
Hepatic Non-Parenchymal Cells

The Importance of In Vitro ADME and Toxicity Studies
in Drug Discovery and Development
医薬品の吸収、分布、代謝、排泄および毒性（ADMETox）を理解することは、創薬研究の重要な要素です。これらの研究によって、化合物の安全性および有効性を含め、体内での薬物動態に対する洞察が得られます。創薬プロセスにおいて、in vitro ADMETox データを可能な限り早期に得ることには多くの利点があります。開発初期に ADMETox 試験から得られた結果は、ある化合物が良好なバイオアベイラビリティを有するかどうかについての貴重な指標を提供し、薬剤候補が ADME の特性を満たさないか、または毒性であるという徴候を示す場合には、後の臨床段階におけるドロップアウトを回避するのに役立ちます。また、前臨床医薬品開発段階での ADMETox 試験における重要な課題の一つは、臨床用途に適用できる試験モデルを構築することです。前臨床 ADMETox 研究において動物モデルは、依然として最も重要なツールの一つですが、一方でヒト初代肝臓細胞などの in vitro 試験系は、創薬パイプラインにおける意思決定にとってますます重要なツールとなっています。

目次
肝臓細胞製品リスト

Page 3接着型ヒト肝臓細胞

Page 4DonorPlex ™ 浮遊型ヒトプールド肝臓細胞

Page 5ヒト肝セルライン NoSpin HepaRG ™ 細胞

Page 6

動物肝臓細胞Page 7

肝 非実質細胞Page 8, 9

誘導試験プロトコル

Page 10

代謝試験 技術資料

Page 11

弊社ヒト初代細胞は、健常なドナーから単離された細胞です。すべてのドナーは FDA（米国食品医薬品局）認定の手法を用いて、HIV-1、2、B 型および C 型肝炎ウイルス陰性であることを確認済みです。ドナーの検査が実施できない場合、細胞製品は HIV, B 型および C 型肝炎ウイルスのウイルスゲノムの有無が検査されます。製品のご利用は研究用途に限定されます。
弊社ヒト初代細胞製品のリソース入手にあたっては、各種の法律に基づいたインフォームドコンセントが取得されています。また、個人情報の連結不可能匿名化がなされた製品です。

2Hepatocytes Product List
肝臓細胞製品リスト

アプリケーション

ロンザは、ご研究用途に応じた幅広い肝臓細胞製品ラインナップを取■ 薬物代謝酵素阻害試験 – DonorPlex ™ を推奨

り揃えています。また、関連培地として融解培地・播種培地・メンテ■ CYP 誘導試験 – HUCPI を推奨

ナンス培地の 3 種類をご用意しております。

■トランスポーター試験 – HUCPI を推奨■ 毒性試験

ロットご評価期間におけるロットリザーブを積極的に承っておりま■ 臓器再生研究す。ロット情報・在庫情報などお気軽に弊社までお問合せ下さい。

ドナー細胞数（個）

定価（円：税抜）

融解培地

播種培地

メンテナンス培地

HUCPI単一≥5.0 x 106

150,000

MCHT50MP100 / MP250

CC-3198

HUCPG単一≥5.0 x 106

135,000

MCHT50MP100/MP250

CC-3198

HUCS10P

10ドナー≥5.0 x 106

100,000

MCHT50P―

CC-3198

HUCS10PF

女性、10ドナー

6≥5.0 x 10100,000

MCHT50P―

CC-3198

HUCS10PM

男性、10ドナー≥5.0 x 106

100,000

MCHT50P―

CC-3198

HUCS20P

20ドナー≥5.0 x 106

110,000

MCHT50P―

CC-3198

HUCS20PF

女性、20ドナー≥5.0 x 106

110,000

MCHT50P―

CC-3198

HUCS20PM

男性、20ドナー

6≥5.0 x 10110,000

MCHT50P―

CC-3198

HUCS50P

50ドナー≥5.0 x 106

120,000

MCHT50P―

CC-3198

HUCSD

単一≥5.0 x 106

62,500

MCHT50P―

CC-3198NSHPRG

単一≥8.0 x 106

71,000MH100, MHTAP

MH100, MHTAPMH100
MHIND / MHPIT /MHMETMCCP01

複数（CD-1）≥5.0 x 106

90,000

MCRT50MP100 / MP250

CC-3198

MBCP01

複数（C57BI/6）≥5.0 x 106

90,000

MCRT50MP100 / MP250

CC-3198

MXCP01

複数（B6C3F1）

6≥5.0 x 1090,000

MCRT50MP100 / MP250

CC-3198

MCCS01

複数（CD-1）

6≥5.0 x 1070,000

MCRT50―CC-3198

MBCS01

複数（C57BI/6）≥5.0 x 106

70,000

MCRT50―CC-3198

MXCS01

複数（B6C3F1）≥5.0 x 106

70,000

MCRT50―CC-3198

RICP01複数（Wistar）

6≥5.0 x 1070,000

MCRT50MP100 / MP250

CC-3198

RSCP01複数（SD）≥5.0 x 106

70,000

MCRT50MP100 / MP250

CC-3198

RWCP01

複数（WH）≥5.0 x 106

70,000

MCRT50MP100 / MP250

CC-3198

RICS01

複数（Wistar）≥5.0 x 106

50,000

MCRT50―CC-3198

RSCS01

複数（SD）

6≥5.0 x 10

50,000

MCRT50―CC-3198

RWCS01

複数（WH）≥5.0 x 106

50,000

MCRT50―CC-3198

CYCP01単一（カニクイザル）≥5.0 x 106

125,000

MCRT50MP100 / MP250

CC-3198

RHCP01単一（アカゲザル）≥5.0 x 106

125,000

MCRT50MP100 / MP250

CC-3198

CYCS01単一（カニクイザル）

6≥5.0 x 10

70,000

MCRT50―CC-3198

RHCS01単一（アカゲザル）≥5.0 x 106

70,000

MCRT50―CC-3198

接着

DBCP01

単一 / 複数（ビーグル）≥5.0 x 106

95,000MCAT50MP100 / MP250

CC-3198

浮遊

DBCS01

単一 / 複数（ビーグル）≥5.0 x 106

70,000MCAT50―CC-3198

浮遊

NZCS01

単一（NZ White）≥5.0 x 10

90,000MCAT50―CC-3198

ヒト
浮遊

接着

接着

マウス

浮遊

接着

ラット

浮遊

接着
サル
浮遊

イヌ

ウサギ

■ 肝炎・肝繊維化研究

カタログ番号接着

ヒト肝セルライン■ 肝ヒト化動物モデル作製

6融解培地
ロンザは、肝臓細胞タイプ毎に最適化された複数の融解培地（MCHT50、MCHT50P、MCRT50、MCAT50）を扱っています。
ロンザの融解培地は、高い Cell Viability を維持できると多くのお客様からご評価を頂いています。
3

Primary Human Hepatocytes
接着型ヒト肝臓細胞
ロンザ凍結ヒト肝臓細胞の全ロットにおいて、解凍後の生存率（>80%）および細胞数を確認しています。

HUCPI は代表的な CYP 誘導薬による誘導試験データ（mRNA レベルおよび酵素活性）およびトランスポーター（取込と排出）データを細胞購入前に、ロット毎の試験成績書〔CoA〕で確認可能です。また 7 日間の培養が可能なことを確認済みです。

HUCPG はリーズナブルな価格にて、全般的な研究用途に利用できます。また 5 日間の培養が可能なことを確認済みです。
どちらの製品も代謝試験データが入手可能であり、またスフェロイド形成能および 96 ウェ
ルプレートでの培養が可能なことを確認しています。

接着型ヒト肝臓細胞

接着型ヒト肝臓細胞（酵素誘導試験用）
カタログ番号HUCPI 試験項目

接着型ヒト肝臓細胞（代謝試験用）
カタログ番号HUCPG 試験項目

細胞生存率>80％

細胞生存率>80％

スフェロイド形成能細胞数

7 日間培養可CYP 1A2 誘導試験
mRNA

CYP 2B6 誘導試験
mRNA

CYP3A4 誘導試験
mRNA

CYP 1A2 誘導試験

CYP 2B6 誘導試験

CYP 3A4 誘導試験

酵素活性

酵素活性

96 ウェル培養可CYP2C8 誘導試験
mRNA

細胞数

クリアランス試験（接着）CYP2C9, 2D6, 3A4ECOD

第 1 相（CYPs）

酵素活性

スフェロイド形成能

5 日間培養可96 ウェル
培養可クリアランス試験（浮遊）CYP1A2, 2A6, 2B6, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1, 3A4（M）, 34A（T）
7-HCS, 7HCS

第 2 相（SULT, UGT）

トランスポーター試験

Uptake: OAT1B1/3, OCT-1/2, NTCP
クリアランス試験（接着）CYP2C9, 2D6, 3A4
ECOD

クリアランス試験（浮遊）CYP1A2, 2A6, 2B6, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1, 3A4（M）, 34A（T）
7-HCS, 7HCS

第 1 相（CYPs）

Cell no.

Efflux: BSEP

第 2 相（SULT, UGT）

1,000

3,000

5,000

Day
7500 μm

500 μm500 μmスフェロイド形成能

胆細管形成の確認

ロンザの接着型ヒト肝臓細胞（HUCPI および HUCPG）は、ロット毎ヒト肝臓細胞から形成されたスフェロイドに対して、Cholyl-lysyl-に超低接着表面プレートにおけるスフェロイド形成能の確認を行ってfluorescein（CLF）蛍光染色を行い、スフェロイド内の胆細管の可視います。

化を行いました。上記画像 3 点は 3 次元胆細管ネットワークを垂直軸に異なる位置で観察しました。
＊ロット毎の胆細管形成確認は行っておりません

オーダー情報接着型細胞融解培地

播種培地

メンテナンス培地

カタログ番号製品名

ドナー細胞数（個）/容量

定価（円：税抜）

HUCPI

接着型ヒト肝細胞（酵素誘導試験用）

単一≥5.0 x 106

150,000

HUCPG

接着型ヒト肝細胞（代謝試験用）

単一≥5.0 x 106

135,000

MCHT50ヒト肝細胞用 融解培地（単一ドナー用）―培地50ml

10,000MP100

肝細胞 播種培地（接着用）セット―培地100ml / 添加因子

10,000MP250

肝細胞 播種培地（接着用）セット―

培地250ml / 添加因子

20,000CC-3198

HCM™ – 肝細胞培養培地BulletKit™

―

培地500ml / 添加因子

28,500【保存条件】細胞：ー180 ℃、培地：2〜 8 ℃、添加因子：ー20 ℃＊凍結肝臓細胞製品は品質保持のためドライシッパーにてお届けします4Primary Human Hepatocytes

DonorPlex™ 浮遊型
ヒトプールド肝臓細胞す。トランスポーターを含む包括的な薬物代謝阻害試験ツールとして

140

pmol/million/min

DonorPlex ™ は 10、20 および 50 ドナーのラインナップを揃えたヒトプールド浮遊肝臓細胞です。全ロットにおいて、 代謝試験およびトランスポーター試験データを試験成績書〔CoA〕で確認可能で120100

DonorPlex ™をお奨めします。DonorPlex ™ カスタムバッチ作製サービスでは独自の代謝予測アルゴリズムにより、製造ロットが変わっ80
60ても一貫性のある代謝プロファイルを持つ新ロットをご提供することが40可能です。

20細胞数

UGT

SULT

GeneralCYP2E1CYP3A4
Midazolam
CYP3A4
Testosterone

CYP2D6CYP2C9CYP2A6CYP2C19細胞生存率>80％

試験項目

CYP2B6

DonorPlex™ ヒトプールド浮遊肝臓細胞

CYP1A20

DonorPlex ™ の薬物代謝プロファイルの安定性を示しています。同一ドナー群かトランスポーター試験ら構成される 3 バッチを異なる時期に製造したにも関わらず、3 バッチ間で再Uptake :OATP1B1/3, OCT1/2, NTCP

現性の高いプロファイルが得られています。

クリアランス試験（浮遊）CYP1A2, 2A6, 2B6, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1, 3A4（M）, 34A（T）
7-HCS, 7HCS

pmol/million/min

ECOD

第 1 相（CYPs）

第 2 相（SULT, UGT）

140120100806040

Predictedます。下記のステップで、テストバッチのご評価→スケールアップなUGT

SULTGeneral

CYP2E1CYP2D6

CYP3A4
Midazolam
CYP3A4
Testosterone

代謝予測アルゴリズムを利用して、お客様のご要望に応じた薬物代謝プロファイルを持つ DonorPlex ™ ヒト浮遊肝臓細胞をカスタム作製し

CYP2C19

CYP2C9CYP2B6

CYP1A2

DonorPlex™ カスタムバッチ作製サービス

CYP2A6200

Actual activity

どのカスタム対応が可能です。詳細については、弊社までお問合せ

DonorPlex ™ 製造で使用されている代謝予測アルゴリズムの有用性を示しています。8 つの CYP 酵素および第 2 相反応における予測値と実際の酵素活性が近似下さい。

しています。

バッチデザイン評価用バッチ作製（5-10 vials）

お客様の承認

お客様のバッチ評価

スケールアップ

オーダー情報カタログ番号

製品名

ドナー

細胞数（個）/容量

定価（円：税抜）

複数、10ドナー

6≥5.0 x 10

100,000

HUCS10P

DonorPlex™ 浮遊型ヒト肝細胞（10ドナー）

HUCS10PF

DonorPlex™ 浮遊型ヒト肝細胞（女性10ドナー）

複数女性、10ドナー≥5.0 x 106

100,000

HUCS10PM

DonorPlex™ 浮遊型ヒト肝細胞（男性10ドナー）

複数男性、10ドナー≥5.0 x 106

100,000

HUCS20P

DonorPlex™ 浮遊型ヒト肝細胞（20ドナー）

複数、20ドナー≥5.0 x 106

110,000

HUCS20PF

DonorPlex™ 浮遊型ヒト肝細胞（女性20ドナー）

複数女性、20ドナー

6≥5.0 x 10

110,000

HUCS20PM

DonorPlex™ 浮遊型ヒト肝細胞（男性20ドナー）

複数男性、20ドナー≥5.0 x 106

110,000

HUCS50PDonorPlex™ 浮遊型ヒト肝細胞（50ドナー）

複数、50ドナー≥5.0 x 106

120,000

HUCSD

浮遊型ヒト肝細胞（シングルドナー）

単一

6≥5.0 x 10

62,500融解培地

MCHT50P

ヒト肝細胞用 融解培地（複数ドナー用）―

培地50ml

10,000

メンテナンス培地

CC-3198

HCM™ – 肝細胞培養培地BulletKit™

―

培地500ml / 添加因子

28,500浮遊型細胞【保存条件】細胞：ー180 ℃、培地：2〜 8 ℃、添加因子：ー20 ℃＊凍結肝臓細胞製品は品質保持のためドライシッパーにてお届けします5Human Hepatic Cell Line

NoSpin HepaRG™ 細胞

NoSpin HepaRG ™細胞は BIOPREDIC International 社製造の成人肝機能のフェノタイプを有した肝セルラインです。ヒト初代肝臓細胞と相関した多くの特徴を持ち、初代肝臓細胞と同じ用途での使用が可能です。当細胞は細胞融解後の遠心およびセルカウントのステップを必要せず、試験成績書〔CoA〕記載の細胞数に基づいてプレートに播種するだけのスピーディーな実験構築を可能とします。各ロットは一貫した細胞数、生存率、機能性を有しています。
■ HepaRG ™ 細胞は初代肝臓細胞より長期間の培養が可能です（初代細胞 7 日間に対して 21 日間）

融解・播種〜従来の HepaRG ™ 細胞と比較して２ステップを省略する融解・播種プロトコル〜■ CYP 誘導試験やトランスポーター試験など多くの薬物動態アプリケーションに対応■ セルラインのため、再現性の高い、

NoSpin HepaRG ™ 細胞

従来の HepaRG ™ 細胞

改良された凍結プロトコル（凍結バイアルにつき 0.5 ml 細胞）

クラシカルな凍結プロトコル（凍結バイアルにつき 1 ml 細胞）0.5 ml / 8 million cells / 10% DMSO

一貫したデータを取得可能です

1.0 ml / 8 million cells / 10% DMSO■ NoSpin 細胞融解後、試験成績書〔CoA〕記〜改良された融解プロトコル〜〜クラシカルな融解プロトコル〜

載の細胞数に基づいてプレートに播種するだ① 7.5ml の融解 / 播種培地で融解し、8ml細胞懸濁液を調製する（8ml / 8 million cells / 0.5% DMSO）① 9 ml の融解 / 播種培地で融解および細胞懸濁② 遠心、Wash 、再懸濁
③ セルカウント（Viability 、収量を確認）④ 0.96 million cells /ml の細胞密度に調整後、細胞をプレートに播種

けの簡便性

遠心、セルカウントのステップを省略② CoA の細胞播種量にそって、細胞をプレートに播種

Fold inductionof control CYP activity

20

7.5 ml 融解 / 播種培地

8 ml 細胞懸濁液に＋αの融解 / 播種培地を添加する（CoA をご参照下さい）。

0.5 ml 細胞溶液

1510

細胞懸濁液をプレートに播種する（CoA に記載されている細胞播種量をご参照下さい）。

凍結バイアル

5融解 / 播種培地

01A2 - 50µM
Omeprazole

2B6 - 1mM
Phenobarbital

3A4 - 10µM
Rifampicin

NoSpin HepaRG™ におけるCYP 1A2 2B6 3A4誘導試験

8 ml 細胞懸濁液

NoSpinHepaRG 細胞
Lot: HNS1001の場合

37 ℃ウォーター
バス 90 秒プレートタイプ

6 well plate
12 well plate
24 well plate
48 well plate
96 well plate

融解 / 播種培地

オリジナルの細胞懸濁液
8 mlに融解/播種培地を添加して、以下の容量にする

1ウェル当たりの播種量

播種可能なウェル数

9.1 ml2 ml
1 ml
0.5 ml0.2 ml0.1 ml4111957
126

11.4 ml
9.5 ml11.4 ml
12.6 ml

細胞数/ウェル

2x106 cells
8x105 cells
4.8x105 cells
1.6x105 cells
7.2x104 cells

オーダー情報カタログ番号

細胞数（個）/ 容量

定価（円：税抜）≥8.0 x 10

71,000

培地100ml / 添加因子

15,000接着型細胞株

NSHPRG

NoSpin HepaRG™ 細胞

基本培地

MH100HepaRG™ 基本培地

融解/播種

MHTAP

HepaRG™ 融解/播種用添加剤

1 Kit

15,000

誘導試験

MHIND

HepaRG™ 誘導試験用添加剤

1 Kit

15,000

毒性試験

MHPIT

HepaRG™ 毒性試験用添加剤

1 Kit

15,000

代謝試験

MNMET

HepaRG™ 代謝試験用添加剤

1 Kit

15,000【保存条件】細胞：ー180 ℃、培地：2〜 8 ℃、添加因子：ー20 ℃

6

製品名6

Primary Animal Hepatocytes
動物肝臓細胞
ロンザは、ご研究用途に応じた幅広い動物種の肝臓細胞製品ラインナップを取り揃えています。
凍結動物肝臓細胞の全ロットにおいて、解凍後の生存率（>80％） および細胞数を確認しています。また第 1 相として CYPs 全般、第 2 相として SULT、UGT の薬物代謝酵素活性を測定しています。

細胞生存率>80％

細胞数

動物肝臓細胞

試験項目

スフェロイド形成能

第 1 相（CYPs）

ECOD

7-HCS, 7HCS

第 2 相（SULT, UGT）

接着型ラット肝臓細胞* サル由来肝細胞：CITES輸出許可に適合しないロットの国内輸入は不可となります* イヌ由来肝細胞：健康証明書の発行のため国内取寄せにお時間がかかります

オーダー情報ドナー細胞数（個）/容量定価（円：税抜）

MCCP01接着型マウス肝細胞（CD-1）

複数≥5.0 x 106

90,000

MBCP01接着型マウス肝細胞（C57BI/6）

複数≥5.0 x 106

90,000

MXCP01接着型マウス肝細胞（B6C3F1）

複数≥5.0 x 106

90,000

RICP01

接着型ラット肝細胞（Wistar）

複数

6≥5.0 x 10

70,000

RSCP01

接着型ラット肝細胞（SD）

複数

6≥5.0 x 10

70,000RWCP01

接着型ラット肝細胞（WH）

複数

6≥5.0 x 10

70,000CYCP01接着型サル肝細胞（カニクイザル）

単一≥5.0 x 106

125,000

RHCP01接着型サル肝細胞（アカゲザル）

単一≥5.0 x 106

125,000

MCRT50

動物肝細胞用 融解培地（げっ歯類用）―培地50ml12,000MP100

肝細胞 播種培地（接着用）セット―培地100ml / 添加因子

10,000MP250

肝細胞 播種培地（接着用）セット―培地250ml / 添加因子

20,000

メンテナンス培地

CC-3198

HCM™ – 肝細胞培養培地BulletKit™

―

培地500ml / 添加因子

28,500

接着型イヌ

DBCP01接着型イヌ肝細胞（ビーグル）

単一 / 複数

6≥5.0 x 10

95,000融解培地

MCAT50

動物肝細胞用 融解培地（げっ歯類除く）―

培地50ml

12,000MP100

肝細胞 播種培地（接着用）セット―培地100ml / 添加因子

10,000MP250

肝細胞 播種培地（接着用）セット―培地250ml / 添加因子

20,000CC-3198

HCM™ – 肝細胞培養培地BulletKit™

―培地500ml / 添加因子

28,500

ドナー

細胞数（個）/容量

定価（円：税抜）

6

カタログ番号

接着型マウス

接着型ラット

接着型サル

融解培地
播種培地

播種培地
メンテナンス培地

カタログ番号

製品名

製品名

MCCS01

浮遊型マウス肝細胞（CD-1）

複数≥5.0 x 10

70,000

MBCS01

浮遊型マウス肝細胞（C57BI/6）

複数

6≥5.0 x 10

70,000

MXCS01

浮遊型マウス肝細胞（B6C3F1）

複数

6≥5.0 x 10

70,000

RICS01

浮遊型ラット肝細胞（Wistar）

複数

6≥5.0 x 10

50,000

RSCS01

浮遊型ラット肝細胞（SD）

複数≥5.0 x 106

50,000

RWCS01

浮遊型ラット肝細胞（WH）

複数≥5.0 x 106

50,000

CYCS01

浮遊型サル肝細胞（カニクイザル）

単一≥5.0 x 106

70,000

RHCS01

浮遊型サル肝細胞（アカゲザル）

単一

6≥5.0 x 10

70,000融解培地

MCRT50

動物肝細胞用 融解培地（げっ歯類用）―培地50ml12,000

メンテナンス培地

CC-3198

HCM™ – 肝細胞培養培地BulletKit™

―培地500ml / 添加因子

28,500

浮遊型イヌ

DBCS01浮遊型イヌ肝細胞（ビーグル）

単一 / 複数≥5.0 x 106

70,000

浮遊型ウサギ

NZCS01

浮遊型ウサギ肝細胞（NZ White）

単一≥5.0 x 106

90,000融解培地

MCAT50

動物肝細胞用 融解培地（げっ歯類除く）―培地50ml12,000

メンテナンス培地

CC-3198

HCM™ – 肝細胞培養培地BulletKit™

―

培地500ml/添加因子28,500

浮遊型マウス

浮遊型ラット

浮遊型サル【保存条件】細胞：ー180 ℃、培地：2〜 8 ℃、添加因子：ー20 ℃＊凍結肝臓細胞製品は品質保持のためドライシッパーにてお届けします7Hepatic Non-Parenchymal Cells
肝 非実質細胞より複雑なin vitro 肝臓培養モデルの構築に向けて
ロンザはヒト初代肝臓細胞の他に肝非実質細胞として、ヒト肝星細胞、肝クッパー細胞、肝臓由来内皮細胞をご提供します。これらの非実質細胞の使用により、more physiologically relevant な肝臓培養モデルを構築することが可能です。

肝クッパー細胞（Hepatic Kupffer Cells）
クッパー細胞はマクロファージの一種で、肝組織における細菌や毒物からの防御反応を司ります。クッパー細胞は典型的なマクロファージ形態を示し、活性化により炎症性サイトカインや増殖因子の生産を開始します。クッパー細胞の長期間に亘る活性化はしばしば 非アルコー
ル性脂肪肝疾患（NAFLD）や非アルコール性脂肪肝炎（NASH）、また化学物質による肝傷害に関連付けがなされます。
単離されたクッパー細胞は播種時の形態情報や Lipopolysaccharide（LPS）刺激による応答性データをロット毎に試験成績書〔CoA〕で確認可能です。クッパー細胞は 10％ FBS を添加した RPMI 培地により維持されます。

クッパー細胞の明視野イメージ

LPS induction response

24 hours in culture

72 hours in culture

Morphology
INF- γIL-10IL-13IL-1βIL-6IL-8TNF-α

LPSに対する応答性（ロット毎の数値化した情報をご提供しています）

ヒト肝臓由来内皮細胞（Human Liver-derived Endothelial Cells）
肝組織において、内皮細胞は血管や類洞に隣接して、これらの構造を保持する役割を果たします。
ロンザの肝内皮細胞は CD3、CD32b、vWF、LYVE-1 の内皮細胞マーカ―により品質保証され、限られた継代の範囲内で内皮細胞の形態を維持します。

CD31抗体によるヒト肝内皮細胞の染色

ヒト肝非実質細胞（Human Liver NPCs）
当製品はヒト肝臓由来の非実質細胞各種の混合物です。ロット毎に細胞タイプの割合は異なります。

ヒト肝内皮細胞の明視野イメージ

8

Hepatic Non-Parenchymal Cells
肝 非実質細胞
肝 星細胞（Hepatic Stellate Cells）
星細胞は肝臓において主にレチノイドを蓄積する働きを持ちます。肝傷害の応答として、星細胞は蓄積されたレチノイドを失い、コラーゲンマトリックスを蓄える線維芽細胞様の細胞に分化し、最終的に肝硬変へと至ります。
星細胞はプレート播種後、直ちに活性化状態に遷移します。
当 細 胞 製 品 は Passage1 の 状 態で 凍 結 保 存されています。 品 質
チェックとして、星細胞の形態確認および Vinculinm、Vimentin また
α -SMA のフローサイトメトリーによる確認が実施されています。

星細胞の明視野イメージ

オーダー情報カタログ番号

クッパー細胞

星細胞

肝 内皮細胞

非実質細胞

製品名

ドナー

細胞数（個）/容量定価（円：税抜）

HLKC

HKC - 肝クッパー細胞

単一≥1.0 x 10

254,000

12-702Q

RPMI 1640培地 *別途10%FBSを添加

―

1L

7,500

HUCLS

ヒト肝 星細胞単一≥1.0 x 105

50,000

HUCLS1

ヒト肝 星細胞単一≥1.0 x 106

400,000

MCST250

肝 星細胞用増殖培地―250ml

12,500HLECP2

HLEC - ヒト肝臓由来内皮細胞単一≥1.0 x 105

258,000

CC-3162

RPMI 1640培地 *別途10％FBSを添加―

培地500ml / 添加因子

23,000

HUCNP

ヒト肝非実質細胞単一≥1.0 x 106

50,0005【保存条件】細胞：ー180 ℃、培地：2〜 8 ℃、添加因子：ー20 ℃

細胞毒性試験キット,

ToxiLight ™ バイオアッセイキットは、ルシフェラーゼ発光反応を利用して細胞毒性を高感度に検出することができます。LDH 法の代替アッセイ法としてお奨めします。
培地上清を回収すれば、貴重な初代肝臓細胞を破壊することなく継時的な毒性試験が実施可能です。

Luminescence (RLU)

ToxiLight™ Non-Destructive Cytotoxicity
BioAssay Kit
120,000
100,000
80,00060,00040,00020,0000

オーダー情報カタログ番号

LT07-217
LT07-117

10,000R2 = 0.9979

製品名

ToXiLight™

非破壊細胞毒性アッセイ

ToXiLight™

非破壊細胞毒性アッセイ

サイズ

定価（円：税抜）

500回

55,0001,000回

98,00020,00030,00040,00050,000Cells/well

ToxiLight™ バイオアッセイキットは10細胞まで検出可能【保存条件】培地：2〜 8 ℃

9― 技術資料 1 ― ヒト初代肝臓細胞 CYP誘導試験プロトコル
本資料は代表的な CYP 誘導薬による CYP1A2、2B6、3A4 の活性誘導プロトコル抜粋資料です。
必要な試薬

誘導薬ストック（DMSOに溶解）

基質ストック（DMSOに溶解）■ 接着型ヒト肝臓細胞（HUCPI）■ Omeprazole（50mM）■ Phenacetin（100mM）■ 融解培地（MCHT50）■ Phenobarbital（1mM）■ Bupropion（250mM）■ 播種培地（MP100）■ Rifampicin（10mM）■ Testosterone（200mM）■ メンテナンス培地（CC-3198）

DAY 0DAY 1

1. 弊社肝臓細胞培養インストラクションに基づいて、24ウェルプレートにてヒト肝臓細胞のマトリックス（サンドイッチ）培養系を作製する。[500 µlメンテナス培地 /well, 5x105 cells/well]
2. 各誘導薬ストック溶液およびコントロールのDMSOを、予め37℃に温めたHCM™ 培地で1,000 倍に希釈し、誘導用培地とする。

3. [CYPの誘導] 肝臓細胞を培養しているプレートの全ウェルからHCM™ 培地を吸引し、2で調製した誘導用培地500μlに置換する。
（図1プレートレイアウト例を参照）
12

3456

A
B

Control（DMSO only）

COMZ

（1A2）

PHB

（2B6）

RIF（3A4）D
図1. CYP誘導薬添加 24ウェル プレートレイアウト例

DAY 2-3

4. DAY2とDAY3に、3の誘導用培地 置換ステップを繰り返す。
5. [酵素アッセイ] ３種類の基質（PHE、BUP、TST）ストック溶液を、37℃に温めたHCM™ 培地で1,000 倍に希釈し、基質溶液を調製する。

DAY 4

6. 肝臓細胞を培養しているプレートの全ウェルからHCM™ 培地を吸引し、 37℃に温めたHCM™ 培地で細胞を洗浄する。
7. 1ウェル当り300µlの基質溶液に置換する。（図2プレートレイアウト例を参照）
Control（DMSO only）
12

OMZ（1A2） PHB（2B6） RIF（3A4）
3456

A
B
C

PHE

BUP

（1A2）

（2B6）

15分

20分

TST

PHE

BUP

TST

（3A4）

（1A2）

（2B6）

（3A4）

15分

15分

20分

15分

D
インキュベーション時間
図2. CYP基質添加 24ウェルプレートレイアウト例

8. 基質溶液に置換後、すみやかに37℃ CO2インキュベーターに設置したオービタルシェーカー上にプレートを置く。
プレートは95 rpmで振とうし、図2に記載されたインキュベーション時間に従って反応を行う。
9. 反応が終了したら、ウェル内の反応溶液 250µlをドライアイス上においた96ウェルプレートに移し、反応を停止する。
ドライアイスの代わりに停止溶液を使用しても良い。

10. 反応停止した溶液を用いて、LC-MS分析による代謝産物測定を行う。
11. [CYP 発現解析 （mRNA 定量）] PBS等で細胞を洗浄後、RNA 抽出および CYP 発現解析を行う。

10

― 技術資料 2 ―浮遊型ヒト初代肝臓細胞 代謝試験資料

表 1. 代謝試験における基質および至適インキュベーション時間
EnzymeSubstrate

Final [Substrate]（µM）

Metabolism
MarkerSample Time（minutes）

CYP1A2Phenacetin

100

Phenacetin Odealkylation

15

CYP2A6

Coumarin

50

Coumarin 7-hydroxylation

15

CYP2B6

Bupropion

500

Bupropion hydroxylation

15

CYP2C8Amodiaquine

20

Amodiaquine N-dealkylation

30

CYP2C9Diclofenac25Diclofenac 4'-hydroxylation

15

CYP2C19

Mephenytoin

250

S-Mephenytoin 4'-hydroxylation

30

CYP2D6

Dextromethorphan

15

Dextromethorphan O-demethylation

15

CYP2E1Chlorzoxazone

250

Chlorzoxazone 6-hydroxylation

15

CYP3A4/5

Testosterone

200

Testosterone 6β-hydroxylation

15

CYP3A4/5

Midazolam

20

Midazolam 1'-hydroxylation

15

CYP General

7-Ethoxycoumarin100

7-Hydroxycoumarin

30

UGT

7-Ethoxycoumarin100

7-Hydroxycoumarin glucuronidation

30

SULT

7-Ethoxycoumarin100

7-Hydroxycoumarin sulfonation

30

UGT

7-Hydroxycoumarin100

7-Hydroxycoumarin glucuronidation

30

SULT

7-Hydroxycoumarin100

7-Hydroxycoumarin sulfonation30

Aldehyde Oxidase

Zoniporide

252-oxozoniporide

1511

RES-LF2105-01