13［臨床研究］

細胞診断における簡易セルブロックの有用性
1

戸田

尾道市立市民病院
1

久美子 ，竹井

2

中央検査室， 岡山大学大学院医歯薬学総合研究科，
3

尾道市立市民病院

1内科
1

絵梨 ，木下 実穂 ，森田
3
開原 正展

1

美智子 ，松川2

昭博 ，

要 旨 2016 年 12 月より細胞診標本作製後の残検体を用いた遺伝子変異解析や発現タンパクの検出を目的とした簡易セルブロックの作製を開始した．同時に，細胞診とセルブロックとの併用による診断精度の向上にも取り組んだ．今回，2021 年 3 月までにセルブロックを作製した 68 例について有用性を検討した．
その結果，細胞診残検体によるセルブロックを用いて免疫染色を追加でき，良悪性の鑑別に加えて組織型の決定も可能となった症例があった．さらに組織検体を採取できない症例でもコンパニオン診断を実施できるようになり，セルブロックの有用性が認められた．
Key words: セルブロック，細胞診，コンパニオン診断

はじめに織採取が困難である症例のより広域なコンパニオ

セルブロックは，細胞診検体の沈渣をホルマリン

ン診断を目的に，安価で操作が簡便な方法 を用い固定後，パラフィン包埋して作製した標本である．てセルブロック作製を開始した．現在では病理検査

HE 染色での細胞所見の観察が可能であり，特殊染技師の技能向上により，セルブロックを安定的に作．また，細製できるようになった．今回，2016 年 12 月から胞検体では実施困難な遺伝子解析検査や発現タン

2021 年 3 月までの期間で作成したセルブロック 68

パクの検出も可能となる ．これにより，ゲフィチ例について有用性を検討したので報告する．

色や免疫染色の追加も簡便にできる

1）2）

3）

1）

ニブやオシメルチニブにおける EGFR 遺伝子変異やトラスツマブにおける HER2 タンパクなど，治療対象と方法薬が標的とする遺伝子変異やタンパクの発現等を2016 年 12 月から 2021 年 3 月までの期間で，細検査するコンパニオン診断を行うことで，治療薬の胞診標本作製後に充分量残った検体や当初からセ有効性や安全性を考慮した治療選択を行うことがルブロック作製が目的で提出された検体を対象としできる ．当検査室では，2015 年より細胞診残検た．症例数は全例 68 例，うち胸水 38 例，腹水 11

体にて EGFR 遺伝子変異検査を実施するため細胞例，EUS-FNA 4 例，気管支洗浄液 6 例，甲状腺穿

沈渣を凍結保存していたが，2016 年 12 月より，組刺 4 例，耳下腺穿刺，皮下血腫穿刺，リンパ節穿刺，

4）

Utility of simple cell block in cytology diagnosis
1
Department of Clinical Laboratory, Onomichi Municipal Hospital2
Department of Pathology and Experimental Medicine, Okayama University
3
Department of Internal Medicine , Onomichi Municipal Hospital
Kumiko Toda1, Eri Takei1, Miho Kinoshita1, Michiko Morita1, Akihiro Matsukawa2,
Masanobu Kaihara3

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肝腫瘤穿刺，自然尿それぞれ 1 例であった．いずれ結果の検体も受付直後に 3,000rpm 5 分間の遠心を行

全例 68 例でセルブロックを作製できた．その内い，上清を取り除き，細胞診標本を作製したのち，沈組織検体採取があったのは 25 例（36.8％）であっ

渣を 1.5mL マイクロチューブ（アジア器材株式会た．セルブロックでの病理組織検査依頼があったの社，ポリエチレン製サンプリングチューブ 1.5mL）

は 15 例（22.1％）であった．内訳は胸水 12 例，腹に入れ，同じ条件で再遠心した．再度上清を取り除

水 2 例，気管支洗浄液 1 例であり体腔液が主であっいた後，沈渣を巻き上げないように 10% 中性緩衝た．セルブロック診断は，陽性 7 例（胸水 6 例，腹ホルマリンをゆっくりと注入し，一晩室温固定した．

水 1 例），疑陽性 1 例（気管支洗浄液），陰性 7 例

ホルマリン固定後，沈渣が入っているマイクロ（胸水 6 例，腹水 1 例）であり，それに対して細胞チューブの先端部分を切り離し，半分に割を入れ，ス

診では陽性 5 例（胸水 4 例，腹水 1 例）
，疑陽性 1ポンジで挟んだ状態でカセットに入れたものをパラ例（気管支洗浄液），陰性 9 例（胸水 8 例，腹水 1

フィン浸透装置にかけた．パラフィン浸透終了後，マ例）であった．胸水 2 例において細胞診陰性であっイクロチューブの先端部分から固化した沈渣を取りたが，セルブロックにより陽性と診断された症例が出し，パラフィン包埋を行った（図 1）．その後通常みられた．の薄切にて HE 染色を行った．

また，セルブロック全例の内 4 例（5.9％：胸水 3

図1

セルブロック作製過程例

ａ：遠心分離後 10％中性緩衝ホルマリンにて室温固定
ｂ：マイクロチューブの先端を切り取り半割ｃ：固化した沈渣をカセットに入れる
ｄ：完成したパラフィンブロック

細胞診断における簡易セルブロックの有用性

15例，腹水 1 例）に対して細胞診検体しか採取できなてセルブロックを作製した．細胞診標本では一部にかった症例でもコンパニオン診断を行うことができ，核腫大した細胞が少数認められるのみで，明らかな8 例（11.8％：胸水 7 例，腹水 1 例）に対して免疫悪性細胞は認められないため，陰性の判定となった

染色，2 例（2.9％：胸水 2 例）に対して特殊染色（図 2-a）．セルブロック標本を確認したところ，悪（PAS 染色）を施行することができた．

性を疑う異型細胞が認められたため，臨床医に報告し，セルブロックにて病理診断を行うこととなった．

症例紹介

セルブロック標本では，リンパ球を背景に，大型なセルブロックにて診断を行った症例のうち，有用核を有する異型細胞が孤在性あるいは小集塊状にであったと考えられる症例を 2 例紹介する．

多数出現しており，核の偏在傾向を認め，核小体が目立つことから腺癌が推定された（図 2-b）．腺癌の1：症例 1（70 歳代 男性 胸水）確定のため，PAS 染色と各種免疫染色を行い，腫瘍左胸部痛を主訴として，近医にて X 線単純撮影，細胞中に PAS 染色陽性の粘液を認め（図 2-c）
，CT を施行．左胸水と右肺野多発結節を認めたため，

AE1/3 陽性，肺腺癌に特異性の高い TTF1 陽性（図当院にて良悪性診断の目的で胸水穿刺が行われた．

2-d），扁平上皮癌で陽性を示す p63 陰性となったた

病理検査部門で，細胞診の実施および残検体を用いめ，肺原発腺癌と診断できた ．さらにセルブロッ5）

図2

症例 1

ａ：胸水細胞所見（Papanicolaou 染色，対物× 40）
ｂ：セルブロック（HE 染色，対物× 40）
ｃ：セルブロック（PAS 染色，対物× 40）
ｄ：セルブロック（TTF-1 抗体免疫染色，対物× 40）

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ク標本から EGFR 遺伝子変異 v2.0（リアルタイム行われた．その結果，肺組織にて CK7 陽性，CK20PCR 法），ALK タンパク D5F3（IHC 法），PD-L1

陽性，CDX2 陰性，TTF-1 陰性，膀胱癌組織にてタンパク 22C3（IHC 法）の検索を行い，EGFR 変

CK7 陽性，CK20 陽性，CDX2 陰性，TTF-1 陰性，異陽性（exon21 L858R），PD-L1 タンパク 22C3

胃癌組織にて CK7 陽性，CK20 陰性，CDX2 陽性，発現率 15％，ALK タンパク陰性の結果を得たため，

TTF-1 陰性となり，膀胱癌の転移と診断された．
（図オシメルチニブでの治療が開始された．

3-f 〜 h，表 1）

2：症例 2（70 歳代 男性 気管支洗浄液）

考察

膀胱癌術後，早期胃癌 ESD 術後 4 年経過した症

症例 1 では，細胞診の残検体でセルブロック標本例．紹介医により右股関節の病的骨折を認め，CTを作製することにより，悪性細胞の見落としを防ぐにて右股関節の他に骨盤に多発性の骨溶解像が認ことができた．また，細胞検体しか採取できない症められた．また，左肺に肺癌を疑う腫瘤像が認めら例でも特殊染色や免疫染色を施行することで組織れたことから，肺原発か転移性かの鑑別目的にて透型や原発巣が同定でき，コンパニオン診断も可能で視下気管支鏡検査（bronchofiberscope，BF）があった．また症例 2 では採取した組織に異型細胞が行われた．1 回目の肺生検組織では異型が認められ認められない場合でも気管支洗浄液の細胞診にてなかったが，同時に採取された気管支洗浄液にて細異型細胞が認められ，セルブロック標本でより異型胞診とセルブロック作製を行ったところ，細胞診標の強い細胞を得たことで細胞診の所見を裏付け，確本では，やや異型のみられる上皮集塊が一部認めら

定診断のために複数回の組織採取を行う根拠となれ，atypical cell と判定された（図 3-a）．セルブり得たと考えられる．細胞診は，個々の細胞異型をロック標本においては N/C 比の増加など，細胞診とらえることに適している反面，細胞重積がみられ標本と比較してより強い異型を示す上皮がわずかた場合は構造異型の判断が困難なことがある ．まに認められ，atypical cell と判定された（図 3-b）．

た細胞診検体を用いて特殊染色や免疫染色を行う

その後，確定診断のために行われた 2 回目の BF で際には細胞転写法を用いる等，手間がかかるというは提出検体中に悪性所見は認められなかったが，3面もある ．セルブロックの利点は，細胞異型所見

回目の BF にて，核腫大を示す異型細胞の集塊が認に加えて構造異型が明確にとらえることができ ，められ（図 3-c）
，組織型同定のために既往の膀胱癌

通常のホルマリン固定組織と同様の方法で特殊染（図 3-d）
，胃癌組織（図 3-e）と併せて免疫染色が色や免疫染色が追加できることである ．そのため，

表16）

2）

6）

CK7 と CK20 の染色性による癌の鑑別診断
CK7 陽性CK20 陽性2）

5）

CK7 陰性尿路上皮癌，粘液性卵巣癌，結腸・直腸癌，胃癌，膵臓癌，胆道癌，胃癌

Merkel 細胞癌

肺腺癌，乳癌，子宮内膜癌，肝細胞癌，前立腺癌，胃癌，

漿液性・類内膜性卵巣癌，胃癌， 扁平上皮癌，神経内分泌癌，
CK20 陰性膵臓癌，悪性中皮腫，低分化神経内分泌癌．
甲状腺癌，唾液腺癌，腎細胞癌

副腎皮質癌，悪性中皮腫

細胞診断における簡易セルブロックの有用性

図317

症例 2

ａ：BF（1 回目）気管支洗浄液細胞所見（Papanicolaou 染色，対物× 40）
ｂ：BF（1 回目）気管支洗浄液セルブロック（HE 染色，対物× 40）
ｃ：BF（3 回目）肺生検（HE 染色，対物× 40）
ｄ：膀胱がん（HE 染色，対物× 40）
ｅ：胃癌（HE 染色，対物× 40）
ｆ：BF（3 回目）肺生検（CK7 抗体免疫染色，対物× 40）ｇ：

同上（CK20 抗体免疫染色，対物× 40）ｈ：

同上（TTF-1 抗体免疫染色，対物× 40）

セルブロックを併用することで弱点を補うことがで準備が不用であり，さらに作業手順も簡潔であるたき，今回の症例のように細胞診での見落とし等を防め，安価で簡便に行うことができる ．また，パラぐことができると考えられる．ただし，セルブロッフィンブロックに包埋しているため細胞検体では難ク作製には充分量の細胞沈渣が必要であり，微量検しい半永久的な保存も可能である．細胞診検体とと体には使用できない点に注意しなければならない ．

もに簡易セルブロックを作製することは，低コスト当院が採用したセルブロック作製法は，様々なセで実施可能であり，より詳しい検査の追加が可能でルブロック作製法（コロジオンバッグ法，クライオあるため，正確な病理診断，治療方針の決定においバイアル法 ，アルギン酸ナトリウムを用いたセルて大変有用と考えられる．

2）7）

ブロック法8）等）がある中で，専用の試薬や器具の1）しかし，今回検討した期間中に作製されたセルブ18

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Vol.34 No.1（2021）

ロック 標 本 で 組 織 診 ま で 至 ったも の は 全 体 の3） 真下 照子，井上 慶一，北野 宏，他：細胞22.1% に止まった．これは組織採取も並行して行わ診断におけるセルブロックの活用．京都第二赤れ，組織診断によって充分な診断がなされている症

十字病院医学雑誌 35 巻：72-77，2014．

例，セルブロック標本にも悪性所見を持つ細胞が確

4） 登 勉：コンパニオン診断：個別化医療におけ認できず細胞診のみで判定が行われた症例などがる意義と将来展望．痛風と核酸代謝 36 巻 2あったことによると考えられる．

号：79-85，2012．

今回，セルブロックで診断が施行されていたもの

5） 森永 正二郎：1．原発不明癌の病理診断におは体腔液が主であった．体腔液への播種の有無は予ける免疫染色の意義．
「病理と臨床」常任編集

後因子の一つであり，治療方針の決定に大きく関員会，病理と臨床臨時増刊号 - 免疫組織化学

わってくるため ，細胞診断が唯一の診断材料と診断と治療選択の指針 -（32 巻）．文光堂，東なった場合，重要度がかなり高いと思われる．また，

京都文京区本郷 7-2-7．64-75，2014．

細胞診とセルブロックの併用の大きな利点として，

6） 細胞検査士会（編）：細胞診標本作製マニュア

検体採取の侵襲の低さがあるため，生検を行う前にル（体腔液） 1 版．細胞検査士会，東京都．16-

診断の確定ができれば，診断の低侵襲化が実現で18，2008．

3）

き，精度を高めるとともに治療成績の向上に寄与で7） 佐野 順司，吉本 尚子，溝口 良淳，他：ア
ルギン酸ナトリウムを用いたセルブロック法のきると考えられる．

有用性についての検討．日本臨床細胞学会雑誌
まとめ44 巻 5 号：291-297，2005．

セルブロック標本を作製することで，細胞診検体

8） 菅間 博，亀山 香織：「特集 2．甲状腺の細胞への特殊染色や免疫染色，コンパニオン診断が可能診の新しい報告様式と技術」によせて．日本内となり，組織型・原発巣の決定や治療方針の決定の分泌・甲状腺外科学会雑誌 31 巻 2 号：98，一助となると考えられた．しかし，当院においてセ2014．

ルブロックに対して病理診断が行われている症例

9） 藪下 廣光，古谷 博，水野 義己，他：子宮は全例に対してまだ少なく，症例増加のために今回体癌のスクリーニングにおける子宮内膜細胞認めたセルブロックの有用性などを臨床に周知する診とセルブロック法併用の有用性．日本臨床細検討を行う必要性を感じた．今後，組織診の代わり胞学会雑誌 34 巻 6 号：1089-1093，1995．に穿刺吸引細胞診が行われる甲状腺穿刺検体のように，細胞診検体による診断に特に高い正診率が求められる分野

9）においてもセルブロック標本による診断向上を進めていきたい．
文献1） 信広 亮輔，柴田 淳，小林 剛，他：消化器および体腔液細胞診における簡易セルブロック作製法併用の有用性．医学検査 64 巻 2 号：196-201，2015．
2） 西村 理恵子，寺本 典弘，山本 珠美，他：
穿刺吸引検体におけるセルブロックの有用性．
日本臨床細胞学会雑誌 51 巻 4 号：235-240，
2012．