サケ由来コラーゲンペプチドとエラスチンペプチドのヒト皮膚正常繊維芽細胞（SF-TY）におけるヒアルロン酸産生促
進および細胞増殖への相乗効果
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日本水産學會誌00215392
本村,亜矢子
秋田,涼子
多田,元比古高橋,義宣
江成,宏之
日本水産學會
75巻1号
p. 86-88
2009年1月

農林水産省 農林水産技術会議事務局筑波産学連携支援センター
Tsukuba Business-Academia Cooperation Support Center, Agriculture, Forestry and Fisheries Research Council
Secretariat

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uisanGakkaishi

75(1)，86‑88(2009)

実
豆幸
自

サケ由来コラーゲンペプチドとエラスチンペプチドのヒト皮膚正常繊維芽細胞 (SF‑TY)
におけるヒアルロン酸産生促進および細胞増殖への相乗効果

まず，繊維芽細胞に対する CPのヒアルロン酸産生促進能の評価を実施した。 1，2) ヒアルロン酸は，コラーゲン

本村亜矢子，秋田 涼子，多田元比古，高橋義宣*江成宏之

として，サケ皮由来 CP (平均分子量 M w1，900，ニチ400，ゼライス)，スズキロ)，サメ皮由来 CP (Mw3，(2008年 3月 31日受付， 2008年 5月 16臼受理)

鱗由来 CP (剖w 2，500) の 3種を用いて評価した。な

掛ニチロ中央研究所
tofcollagenpeptideandelastinpeptideSynergistic巴町己 cderivedfromsalmononpromotinghyaluronicacidproductionandcellgrowtho
fnormalhumand巴rmal五broblastcells(SF‑TY)

やエラスチン等とともに細胞外マトリックスを形成する
ムコ多糖の一種であり，保水位に優れていることから，肌の水分，蝉力，張りの保持に寄与している。被験試料

お，平均分子量は，

TSKgelG3000PWカ ラ ム(TOSOH) を用いたゲル櫨過クロマトグラフィーによ5)り測定した。 4，24穴プレートの各ウェ l
レに 3.
6X 104cells/m
Lの繊維芽細胞を 1mL播種し， 5%FBS(牛胎児血清)含有イー
0AYAKOHONMURA，RYOKOAKITA，MOTOHIKOTADA，YOSHINORITAKAHASHIANDHIROYUKIENARICenfralResearchLaboraf01Y， NICHIRO CORPO
九4‑TIO，
N Kaωasaki，Kanagawa215‑0033，Jaρan
キーワード:エラスチンペプチド，コラーゲンペプチド，サケ皮，サケ心臓コラーゲンやヒア jレロン酸は大量の水分を保持する性

グl
レMEM培地中で， 37C，5%C02の条件下にて 3臼間培養した。続いて，被験試料を 100μg/mLとなるように添加した 0，5%FBS含有イーグル MEM培地に置換した。 24時間後の培養上清中のヒアルロン酸量を，HyaluronanAssayKit (生化学工業)を用いて定量した。各試料のヒア l
レロン酸産生促進率は，試料無添加区のヒアルロン酸産生量を 100%として算出した。
本試験において，サメ皮由来 CPおよびスズキ鱗由来
CPのヒア J
レロン酸産生促進率は，試料無添加区と比較質を持ち，またエラスチンは伸縮性，弾力性に富むことしてほぼ同程度であったのに対し，サケ皮由来 CPではから，相侠って肌組織に潤いと張り，柔軟性を与える。

122%と促進した (Table1)。これらの結果は，サケ皮

これらの物質は真皮の繊維芽細胞により作り出される由来 CPが持つ特有のアミノ酸配列が影響している可能が，不足するとタルミやシワの原因となる。従って，肌性，もしくは，サケ皮由来 CPの平均分子量が他と比較

繊維芽細胞の賦活は，肌機能の維持，改善など，美肌効して小さいため，細胞に対して効果的に作用している可果が期待できる。コラーゲンやエラスチンは，経皮吸収能性が考えられた。

や経口摂取持の消化・腸管吸収を考慮し，低分子化した

次に，同様の評価手法で EPのヒアルロン酸産生促進ものが化粧品や機能性食品などに多く利用され注目度の能について検証した。 EPはサケ心臓 (100g) の動脈高い素材である。また，従来，晴乳動物由来の原料が利球を分離し，これをアルカリ処理した後，残留物を酵素用されていたが， BSE問題から海洋性由来の素材に注目が集まり，コラーゲン原料として魚類の皮が，エラスチン原料として魚類の心臓が利用されつつある。日)本研究では，サケ皮よりコラーゲンペプチド (Colla‑Table1 ThepromotingeffectofCPonhyalu
ronicacidproductiongenpeptide:以下 CPと略す)を，またサケ心臓動脈

Source%)Promotingrate(球よりエラスチンペプチド (Elastinpeptide:以下 EPSalmonskinShar
kskinSeaperchscalea
122:
t7a98:
t6bb84土 7と略す)を調製し， CPおよび EPの美肌効果の探索を目的に，ヒト皮膚正常繊維芽細胞 (SF‑TY:ヒューマ
ンサイエンス研究資源パンクより入手，以下繊維芽細胞と略す)に対する効果を検証した。そこで両者の栢乗的な作用を確認したので，これを報告する。

CPconcentration:100μg/m
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05，Tukey.
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6708. Fax:81‑29‑
864‑6964.Email:yo‑takahashi@
maruha‑nichiro.
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現樹マルハニチロホーl
レディングス中央研究所 〒300‑4295茨城県つくば市和台 16‑2

87

サケ由来ペプチドの皮膚細胞への相乗効果
Table2 ThepromotingeffectofEPonhyaluronicacidproduction巴ntration(μg/mL)
ConcPromotingrate(%)

0.
050.
252
132土 1
1
30土 1
1

1
30
g1
20C
O

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11目。

"'E100=。
。
90。

Eachvaluei
smean土 S.
E.

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♂ 80

Table3 Thep
romotingeffectofCP/EPmixtur
巴*
1onhyaluronicacidp
roductionSamplePromotin
grate(%)

ρvalue*2CP
判CP/EPm
ixture

1
22:
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146:
t1
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08

CPconcentration:100μg/mLsmean土 S.
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eo
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判 Ther
ateo
fCP/
EPw
as1
000/
1
*2 Pvaluew
ascalculatedbyt‑test70

CP正PCP/EPmixtureControlndCP/EPmixtureonth
巴Fig.1 TheeffectofCP，EPagrowthofSF‑TYcells.Valuesar
em巴ans土 S.
E.(刀=8)殴盟 indicatedCP (0.
8mg/mL)， ~ indicatedndicate
dCP/EPmixture(0.
8EP(0.
8μg/mL)，狙醒 indicatedcontrol.TherateofCP/mg/mL)an
dCコi
1.Thedifferentletterswer
esignificant‑EPwas1000/est).
lydi
fferent(
ρ<0.
05，Tukey‑Kramert養した。続いて，被験試料を目的濃度となるように添加分解，ろ過，減圧濃縮を行い噴霧乾燥して調製した(0，8g，M w1，600) EPの濃度を 0，05および 0.25μg/した 0.5%FBS含有イーグル MEM培地に置換した。
さらに 7日間培養後， MTT (3‑(4，5一dimethyl‑2‑thiamLとしてとアルロン醸産生促進能を評価した結果，そzolyl)‑2，5‑diphenyl‑2Htetrazoliumbromide，東京化成

れぞれ 132%および 130%であり工業)アッセイ 14，15)を実施して細胞数を測定した。すな0(Table2)，EPはCPと比較して低濃度で高い活性を示した。

続いて CPと EPの相乗効果を確認するため， CP/EP

同わち，各ウェルに 0，5%MTT溶液 (11μL) を添加し，3rC，5%C02の条件下で 2時間静置した後，遠心分離混合物について 100μg/mLの濃度で評価した。なお，を行い上清部を除去した。各ウェルに DMSO (和光純EPは単独での評価時に低濃度でヒアルロン酸産生を促薬)を 100μLずつ添加して沈殿物を溶解し， 590nm進すること，また混合物中における EPの検出限界を考の吸光度を測定した。各試料の縮問増殖率(%)は，試癒し， CPに対する EPの配合比を 0.1%と設定した。

料無添加区の吸光度を 100%として算出した。

その結果， CPおよび EPを単独で添加した場合と比較

CPおよび EPを単独で評価した場合， CP添 加 持して， CP/EP混合物ではヒアルロン酸産生促進率が向(800μg/mL) には増殖率が 109%に向上することが確上する傾向が見られた (Table3)。

認されたが， EP添加時 (0.8μg/mL) では増殖率が 92

さらに， CP，EPおよび CP/EP混合物の繊維芽細胞%となり，試料無添加と比較して低下した。一方， CPに対するヒアルロン酸産生促進メカニズムを追究するた/EP混合物 (EPの配合比は 0.1%) の添加時 (800μg/め，ヒアルロン酸産生との関与が知られている 4種のmL) では 120%となり， CPおよび EPを単独で添加受容体 (EpidermalGrowthFactor[EGF，J6‑8) Interleu‑

した場合よりも有意に繊維芽細胞の増殖率が向上するこkin [IL‑1]，9，10) Platelet‑Derived Growth Factor

Fig，1)。とが確認された (ρ<0.05，Tukey‑Kramer法)(

11，12) Transforming Growth Factor‑s[PDGF]，

このことから， CPと EPとが相乗的に作用して，繊維[TGF̲sJ6，13)) に対する親和性を評価した。しかし，い芽細胞の増殖に関与していることが示された。

ずれの項自においても顕著な活性を示さず，作用機序解明には，更に詳細な解析を行う必要がある。
次に， CPおよび EPの繊維芽細胞増殖に対する効果

以上の結果より，識維芽細胞を用いた評価にて，サケ皮由来 CPは，サメ皮由来 CPおよびスズキ鱗由来 CPと比較して，高いヒアルロン酸産生促進活性を有するこについて検証した。繊維芽細胞の機能低下は，コラーゲとが示された。また，繊維芽細砲の細胞増殖評価においンやエラスチン等の細胞外マトリックスの減少や変性をては， CP/EPの混合物で相乗的な増殖促進効果を示す引き起こし，皮膚弾性の低下，タルミやシワの発生につことが明らかとなった。また，田中，長谷)1116)は，皮ながる。そのため，繊維芽細胞の活性化は皮膚の老化防膚浸透試験 (YucatanMicropig皮膚切片使用)におい止・改善に重要であると考えられる。て，平均分子量が 460および 3，500の CPと比較して平96穴プレートの各ウェルに， 1.0X 104cells/mLの繊均分子量が 950の CPは，表皮層から真皮層，さらには維芽細胞を 100μLずつ播種し， l%FBS含有イーグル皮下組織へと効果的に浸透すると報告している。今回用MEM培地中で， 3rC，5%C04時間培2の条件下にて 2いたサケ皮由来 CPの平均分子量は 1，900であり，浸透本村，秋田，多田，高橋，江成

88000前後の CPも多く含ま性や効果の高い平均分子量 1，れていると考えられる。したがって，ヒトの皮膚への塗布時には皮膚の弾力や張りに効果的に寄与すると考えられ，繊維芽細臨に対して相乗的に効果が認められる CP/EP混合物は化粧品への利用が期待される。

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