2022
June Vol. 65 No. 3
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NiTi ロータリーファイル

医療機器認証番号：301ABBZX00035000
管理医療機器
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東京本社 ■ 〒110 - 8 513 東京都台東区上野2丁目 11番 15 号

日本歯科保存学会

優秀発表賞

本賞は，本学会とカボデンタルシステムズジャパン株式会社・株式会社松風・株式会社ジーシーの 3 社との協定により設けられました．特定非営利活動法人日本歯科保存学会定款第 5 条第 1 項第 8 号に基づき，日本歯科保存学雑誌に掲載された優秀な論文を年間優秀論文賞，学術大会で発表された優秀な演題を優秀ポスター賞として，本会が表彰いたします．
日本歯科保存学雑誌 64 巻および ODEP 1 巻 1 号における優秀論文賞および 2021 年度春季学術大会（第 154回）
・秋季学術大会（第 155 回）における優秀ポスター賞の受賞論文・演題は，下記のとおりです．2021 年度の学術大会は，新型コロナウイルス感染症の感染状況を鑑み Web 開催となりましたが，優秀ポスター賞対象
演題の審査については Zoom システムを利用して行いました．また優秀ポスター賞は，本年から分野別ではなく，研究領域別での審査を実施しました．
今回受賞された皆様方には心からお慶び申し上げますとともに，今後ますますの研究成果を期待いたします．
表彰委員会
優秀論文賞

受賞論文

保存修復学分野（松風優秀論文賞）「Influence of Surface Moisture on the Bond Strength of a Universal Adhesive in the Etch-and-rinse Mode」（ODEP 1 巻 1 号掲載）
筆頭著者：杉村留奈，辻本暁正，岩瀬 慶，嘉月 駿，Ahmad ALKHAZALEH，Olajide OBE，髙見澤俊樹，
宮崎真至
筆頭著者所属：日本大学歯学部保存学教室修復学講座
歯内療法学分野（ジーシー優秀論文賞）「Development of Multilayered Dental Pulp Cell Sheets and Consideration for Calcification Ability」（ODEP 1 巻 1 号掲載）
著者：小栁圭史，前田宗宏，関谷美貴，西田太郎，五十嵐 勝
筆頭著者所属：日本歯科大学生命歯学部歯科保存学講座
歯周病学分野（カボデンタル優秀論文賞）「循環器疾患患者におけるプロービング時の出血の有無と全身的因子の関連の検討」（64 巻 2 号掲載）
著者：青山典生，呉 圭哲，藤井利哉，喜田さゆり，髙瀬雅大，杉原俊太郎，門田大地，三辺正人
筆頭著者所属：神奈川歯科大学大学院歯学研究科口腔統合医療学講座歯周病学分野
優秀ポスター賞

受賞演題

154 回
研究領域 A（松風優秀ポスター賞）「In vivo における多孔性ナノゲル架橋ハイブリッドゲルによる配向性を有する骨組織の再生」（P1）
演者：足立哲也，宮本奈生，足立圭司，山本俊郎，金村成智
筆頭演者所属：京都府立医科大学大学院医学研究科歯科口腔科学
研究領域 B（ジーシー優秀ポスター賞）「高脂肪食誘発型糖尿病マウスにおける歯肉創傷治癒に対するメトホルミン投与の効果」（P6）
演者：小湊広美，水谷幸嗣，武田浩平，城戸大輔，三上理沙子，齋藤夏実，竹村 修，中川佳太，岩田隆紀
筆頭演者所属：東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科歯周病学分野

研究領域 C（カボデンタル優秀ポスター賞）「トモシンセシス法を用いたパノラマ X 線画像における歯周組織所見の主観的および物理学的画質評価」（P7）
演者：杉原俊太郎，両⻆俊哉，三辺正人
筆頭演者所属：神奈川歯科大学歯科保存学講座歯周病学分野
155 回
研究領域 A（カボデンタル優秀ポスター賞）「歯肉幹細胞由来エクソソーム内包 miR-1260b による小胞体ストレス応答制御を介した歯槽骨吸収抑制作
用」（P2）
演者：林 千華子，福田隆男，渡邊ゆかり，川上賢太郎，豊田真顕，中尾雄紀，四本かれん，大和寛明，
新城尊徳，讃井彰一，西村英紀
筆頭演者所属：九州大学大学院歯学研究院口腔機能修復学歯周病学分野
研究領域 B（松風優秀ポスター賞）「IκBζによる H3K4 のトリメチル化を介した反応性象牙質形成制御機構の解析」（P5）
演者：鈴木茂樹，袁航，平田‒土屋志津，根本英二，齋藤正寛，柴 秀樹，山田 聡
筆頭演者所属：東北大学大学院歯学研究科エコロジー歯学講座歯内歯周治療学分野
研究領域 C（ジーシー優秀ポスター賞）「超音波スケーラーから発生するエアロゾルに対する吸引装置の飛散防止効果―流体工学的および模擬臨
床的検討―」（P7）
演者：高橋直紀，山縣貴幸，峯尾修平，加藤光太，多部田康一
筆頭演者所属：新潟大学大学院医歯学総合研究科歯周診断・再建学分野※著者・演者の所属は発表当時のものである．

日本歯科保存学雑誌
第 65 巻第 3 号

令和 4 年 6 月
目

次

総
説
頸動脈アテローム性硬化と歯周病との臨床疫学的関連

原著
歯根肉芽腫中でのカルシウム結合タンパク S100A8 と S100A9 の発現

ヒト歯髄培養細胞における lipopolysaccharide による
kallikrein‒related peptidase 8 産生と炎症反応

古市

保志，寺田
森

裕，長澤
真理，川上

敏行
智史 （ 189 ）

田村
羽鳥
鈴木
岡田
正覺

隆仁，宮田 泰伎，氷見啓介，中村 健志，清水
裕介，蓮池
聡，井上
將司，藪原佑季子，勝呂泰佑，安川 拓也，林
武市

一馬
康平
聖也
尚
誠
収 （ 198 ）

神尾
深井
倉持

直人，葉山
譲滋，鈴木
光成，岡部

朋美，渡邊
誠，五明
達，松島

昂洋
夏子
潔 （ 205 ）

貴文，川村
山本

和章，椎谷
龍生，向井

亨
義晴 （ 215 ）活動性根面齲蝕様病巣に対するジェルタイプ象牙質知覚過敏治療材の中野
進行停止効果（ 221 ）
（ 223 ）

投稿規程
編集後記

発

〒 170‒0003

行

特定非営利活動法人 日本歯科保存学会
東京都豊島区駒込 1-43-9 （一財）口腔保健協会内

THE JAPANESE JOURNAL OFCONSERVATIVE DENTISTRY
Vol. 65, No. 3

CONTENTSJUNE 2022

Review
Clinicoepidemiological Association between Carotid Atherosclerosis and Periodontal Disease
FURUICHI Yasushi, TERADA Yutaka, NAGASAWA Toshiyuki,
MORI Mari and KAWAKAMI Tomofumi （ 189 ）Original Articles
Expression of S100A8/A9 in Human Periapical Granulomas
TAMURA Takahito, MIYATA Taiki, HIMI Kazuma, HATORI Keisuke,
NAKAMURA Takeshi, SHIMIZU Kouhei, SUZUKI Yusuke, HASUIKE Akira,
INOUE Seiya, OKADA Masashi, YABUHARA Yukiko, SUGURO Hisashi,
SHOUKAKU Taisuke, YASUKAWA Takuya, HAYASHI Makoto and TAKEICHI Osamu （ 198 ）Lipopolysaccharide-induced Kallikrein-related Peptidase 8 Production
and Inflammatory Response in Human Dental Pulp Cells
KAMIO Naoto, HAYAMA Tomomi, WATANABE Takahiro,
FUKAI Joji, SUZUKI Makoto, GOMYO Natsuko,
KURAMOCHI Kosei, OKABE Tatsu and MATSUSHIMA Kiyoshi （ 205 ）Effect of Gel-type Desensitizer Containing Copolymer and Sodium Fluoride
NAKANO Takafumi, KAWAMURA Kazuaki, SHIIYA Toru,
on Active Root Caries-like Lesions in Vitro
YAMAMOTO Tatsuo and MUKAI Yoshiharu （ 215 ）Publishedby
THE JAPANESE SOCIETY OF CONSERVATIVE DENTISTRY（JSCD）
c/o Oral Health Association of Japan（Kōkūhoken kyōkai）
1‒43‒9, Komagome, Toshima-ku, Tokyo 170‒0003
Japan2022 年 6 月

189

総

説

日歯保存誌 65（3）：189～197，2022

頸動脈アテローム性硬化と歯周病との臨床疫学的関連
古

市

保

志1,2

森

寺

田

真

理2,4

川

裕2

長

澤

上

智

史2,4

敏

行2,3

北海道医療大学歯学部口腔機能修復・再建学系歯周歯内治療学分野

1

2

北海道医療大学病院総合歯科診療科

北海道医療大学歯学部総合教育学系臨床教育管理運営分野

3

北海道医療大学歯学部口腔機能修復・再建学系高度先進保存学分野

4

Clinicoepidemiological Association between Carotid Atherosclerosis
and Periodontal Disease
FURUICHI Yasushi1,2, TERADA Yutaka2, NAGASAWA Toshiyuki2,3,
MORI Mari2,4 and KAWAKAMI Tomofumi2,4
1

Division of Periodontology and Endodontology, Department of Oral Rehabilitation, School of Dentistry,
Health Sciences University of Hokkaido
2

Division of General Dentistry, Health Sciences University of Hokkaido Hospital

3

Division of Advanced Clinical Education, Department of Integrated Dental Education, School of Dentistry,
Health Sciences University of Hokkaido
4

Division of General Dental Sciences, Department of Oral Rehabilitation, School of Dentistry,
Health Sciences University of Hokkaido

キーワード：歯周病，頸動脈硬化，頸動脈内中膜厚，疫学

はじめにと心筋梗塞3）および脳梗塞4）との関連がみられる報告が発表されて以降，再度注目されるようになり現在にいたっている．

歯および歯周病といった口腔の健康が，全身の健康状

本稿では，心筋梗塞や脳梗塞の発症に関連している動態にも関連していることが解明されてきている．この歴

脈硬化の診断に使用される形態学的検査法5）のなかで，史については，1891 年に Miller1）が，口腔内の感染は口一般的に頸動脈エコーといわれている頸動脈超音波検

腔内に限局せず，全身部位に広がる感染源であると提唱

査6）による頸動脈硬化の進展程度と，歯周病との関連研した．よって当初根尖病変が，次に遠隔部の全身感染の究について関連する論文を通覧し，著者らが実施した臨原因として歯周病原細菌に着目した病巣感染説（focal

床疫学的研究と合わせて，現在までに得られている知見

infection theory）が誕生した ．ただ当時これに対するについて述べる．

1）

主な治療は抜歯で，多数歯の抜歯後に病態が悪化する報
告2）がみられたことなどから，1940 年代以降この説1）は放棄されていた．その後 1989 年に，口腔内が不良である
DOI：10.11471/shikahozon.65.189

日

190

本

歯

科

保

存

学

雑

誌

第 65 巻第3号

1 回程度の検査が妥当な頻度とされている5）．

動脈硬化の臨床診断法
動脈硬化は，動脈壁にコレステロールが沈着し，組織

頸動脈硬化と歯周病に関しての論文検索

変性と弾力性低下によって血管が硬化した状態で，そのアテローム性頸動脈硬化と歯周病に関する論文を調べ部位に炎症性細胞が集積することで，粥状の塊（アテるために，電子検索データベースとして PubMed と医中

ローム性プラーク）が生じる7,8）．

誌を利用した．キーワードは PubMed で「carotid intima‒

動脈硬化性疾患の一次予防における動脈硬化の評価法

media thickness」「carotid atherosclerosis」を，歯周病

は非侵襲的なものが使用されており，大別すると形態学に関しては「periodontal disease」「periodontitis」に設的検査法と，血管機能検査法がある5,9）．形態学的検査法

定して検索した．医中誌では「頸動脈内中膜厚」「頸動脈には，粥状硬化をみる超音波検査，石灰化病変をみる

硬化」「歯周病」「歯周炎」で検索した．動物実験などのエックス線検査および CT などがある．実際の臨床で人間以外を対象とした研究は除外した．抽出された論文は，これらの検査に問診および身体所見も加えて診断をの抄録を通覧し，アウトカムについては IMT または頸行っている ．

動脈アテローム硬化に設定した．曝露因子については歯

5,9）

5）

科診療での使用頻度が多い，プロービングポケットデプ

頸動脈超音波検査の概要

ス（PPD）などの歯周組織検査項目を適用している論文とした．

頸動脈を含む血管超音波検査は，断層画像が表示でき

1 ．頸動脈硬化と歯周病の関連についての系統的レるので血管壁内，血管表面および血管内腔の状態が視認

ビューとメタ解析

でき，動脈硬化を視覚的にとらえ診断できる ．また頸IMT あるいは頸動脈アテローム硬化と歯周組織検査

動脈病変は，評価が容易なこと，動脈硬化性疾患のうちの関連についての系統的レビューとメタ解析に関する文

脳血管障害と直接的に関係する，冠動脈疾患と関係が深

献報告は，3 編20‒22）みられる（Table 1，最終検索年月日：

いなどから欧米を中心として動脈硬化性疾患の診断に汎2022 年 4 月 9 日）．

6）

用されている6）．頸動脈における動脈硬化度の評価項目

Orlandi ら20）は 2014 年 1 月 31 日までに発表された報としては，頸動脈の内中膜厚（intima‒media thickness：

告から，9 編の横断研究23,31,36,37,39,40,43,45,46），7 編の症例対

IMT），動脈硬化性プラーク（1.1 mm 以上の限局性隆起

照研究29,30,33,34,41,42,44）および 1 編の介入研究35）を抽出した．

性病変）などが日本超音波医学会と日本脳神経超音波学

続いて横断研究と症例対照研究については，メタ解析を会から標準的評価法として推奨されている9‒11）．この理実施した．その結果歯周病群は対照群と比較して，IMT

由として，頸動脈の超音波像は層構造を示すが，内膜とが平均 0.08 mm｛95％ confidence interval：（CI）＝0.07～

中膜，および外膜と周囲組織との分離は超音波検査では0.09，p＜0.0001｝有意に増加していた．また，横断研究

困難なことがある ．ただし，内膜と中膜を合わせた厚と症例対照研究別のサブグループ解析でも同様の結果でみは病理組織像と一致すると報告されている11,12）．そのあった．さらに，研究ごとの患者背景や検査の違いからため頸動脈の壁厚を評価する際は，内膜と中膜の複合体

生じる異質性（I2）もみられなかった（p＝0.922，I2＝の厚みが用いられ，IMT と称している11）．一般に IMT

0.0％）．なおイタリアの大学病院で実施された，軽度かは加齢に伴い，健常成人では 0.009 mm/年程度増加する

ら中等度歯周炎患者への介入研究35）では，4 週以内の抗が11,13），この増加分を含めても正常値は 0.5 mm から 1.0

菌療法を併用した歯周基本治療後 6 カ月および 12 カ月にmm 程度とされている6,10）．このため，IMT が 1.1 mm 以

おいて，IMT がベースライン時と比較して有意に改善し上を異常肥厚と診断する

6,10,14）．IMT は全身の動脈硬化たと報告されている．しかしながら，この研究35）は対照の程度の反映，ないしは動脈硬化性疾患の合併および発群のない 35 名の前後比較試験であることから，より大規症リスク予想の代替評価因子としても用いられてい模な対照群を含めた研究が必要との結論にいたっている9,15‒18）．特に，頸動脈の最も肥厚している部位を測定す

る20）．

11）

る最大 IMT（maximum IMT：max‒IMT）の数値の増

Zeng ら21）は 2015 年 2 月 20 日までに発表された報告か

加は，早期の動脈硬化，虚血性心疾患および脳卒中の予ら，15 編の横断および症例対照研究23‒27,30,32,38,41,45‒50）を抽後を反映しているとされ10），本邦における大規模前向き

出して解析した．その結果，歯周病であると頸動脈アテ追跡研究では，max‒IMT は脳卒中の発症と関連していローム硬化の発症リスクが有意に増加していた｛オッズることが示されている．なお動脈硬化は一般的には比（odds ratio：OR）＝1.27，95％CI＝1.14～1.41，p＜

急速に進行しないので，異常がなければ 1 年から 2 年に0.001｝．研究間の異質性は，有意に存在していた（p＜11,19）

23‒25, 27‒30,
32, 38, 41, 45‒51
22

23‒27, 30, 32,
38, 41, 45‒50
21

20

23, 29‒31, 33‒
37, 39‒46

頸動脈アテローム性硬化と歯周病との臨床疫学的関連

191

0.01，I2＝78.9％）．また喫煙と糖尿病を共変量として調整した 6 編26,30,32,45,49,50）のサブグループ解析では，有意水準境界線上であったことを報告している（OR＝1.08，
95％CI＝1.00～1.18，p＝0.051）．
Wang ら22）は，2019 年 1 月 30 日までに末梢動脈疾患と歯周炎との関連を調査した文献から，25 編の横断および症例対照研究に対してメタ解析を実施した．さらに，

1.24 to 1.56
Odds ratio＝1.39
The risk for developing
carotid atherosclerosis ofperiodontitis

1.14 to 1.41
Odds ratio＝1.27
The risk for developing
carotid atherosclerosis ofperiodontal disease

The mean difference incarotid intima-media thickness values in individuals
with periodontitis compared to controls

0.08（mm）

0.07 to 0.09（mm）

末梢動脈疾患は主に下肢動脈あるいは頸動脈である末梢動脈のアテローム性動脈硬化症と定義している報告52,53）を基に，頸動脈を対象とした 17 編23‒25,27‒30,32,38,41,45‒51）のサブグループ解析を行った．その結果，歯周炎であると頸動脈アテローム硬化の発症リスクが有意に増加していた（OR＝1.39，95％CI＝1.24～1.56，p＜0.001）．研究間の異質性は有意に存在していた（p＜0.001，I2＝79.4％）．
2 ．日本国内における頸動脈硬化と歯周病の横断研究
日本国内においても，IMT と歯周病の関連について実施された横断研究は 5 編46,54‒57）みられる（Table 2，最終
検索年月日：2022 年 4 月 9 日）．これらの研究ではすべて，IMT の進展と歯周病において有意な関連がみられていた．
著者ら55）は，2003 年から 2014 年に北海道医療大学病院内科に通院中の脂質異常症患者のなかで，同歯科も受診し，頸動脈超音波検査を 2 回以上実施ずみの 52 名を対象に横断研究を実施した．その結果，二項ロジスティッ
ク回帰分析では，max‒IMT≥1.1 mm 群で PPD≥6 mm

Jan. 30, 2019Feb. 20, 2015

Jan. 31, 2014

歯数割合が中央値の 4.16％を超えている，つまり上位50％群が有意に関連していた（OR＝8.275，95％CI＝1.462～46.844，p＝0.017）．また重回帰分析では，max‒
IMT の肥厚に対して現在歯数の減少が有意に関連していた｛偏回帰係数＝－0.014，95％CI＝－0.024～－0.003，

Meta-analysis of 17 cross-sectional and case-control studies
2019

2016

2014

Meta-analysis of 15 cross-sectional and case-control studies

p＝0.014｝．
Meta-analysis of 9 cross-sectional and 7 case-control studies and systematic review of
1 intervention study

3 ．頸動脈硬化と歯周病のコホート研究
頸動脈硬化と歯周病のコホート研究は，8 編58‒65）みられる（Table 3，最終検索年月日：2022 年 4 月 9 日）
．結
果は 1 編58）を除いて頸動脈硬化と歯周病は有意な関連がみられていた．日本で実施された研究は 2 編61,65）であった．
Kudo ら61）は歯周外科を含む歯周治療を受けた患者について，サポーティブペリオドンタルセラピー（SPT）
開始時，SPT 開始 1 年後および同 3 年後に IMT を測定したところ，全段階においてベースライン時より有意に改善していたことを報告している．69 歳から 71 歳の日

Wang et al.

Zeng et al.

本の地域住民を対象にした SONIC 研究65）では，ベース
Orlandi et al.

Primaryreferences
Reference
95％ confidence
interval
ResultEndpoint
Date of last search
for literature
Study design
Publicationyear
Authors

Table 1

Systematic reviews and meta-analyses of the association between carotid intima-media thickness or atherosclerosis and periodontal disease2022 年 6 月

ライン時の PPD≥4 mm 以上の存在は，3 年後にアテローム性動脈硬化に相当する max‒IMT≥1.1 mm 以上と有意な関連がみられたことを報告している．

日

192
Table 2

本

歯

科

保

存

学

雑

誌

第 65 巻第3号

Cross-sectional studies in Japan of the relationship between carotid intima-media thickness and periodontal disease

Authors
Publica（Study name） tion year

Hayashida et al.
（The Nagasaki
Islands study）

Tada et al.
（The
SONIC study）

Terada et al.

Shimizu et al.

Yamada et al.
（The Ohasama
study）

Subjects

Age, mean±SD

Assesment
method for
periodontitis

Main results

Reference

Mean PPD was associated witha risk of max-IMT＞1 mm（OR＝1.430, 95％ CI＝1.067 to 1.918,
p＝0.017）. Mean CAL was associated with a risk of max-IMT＞1 mm（OR＝1.251, 95％ CI＝1.032 to 1.516, p＝0.022）
.

46

2013

1,053 subjects with 10
teeth or more in Goto
PPD and CAL
Over 40, 63.5
City, Nagasaki Pre（b o t h 2 si t e s±10.0
fecture（394 men andper tooth）
659 women）

2017

468 participants in
Itami City and Asago
City, Hyogo Prefec- 69 to 71
t u r e（m a l e：2 1 7 ,female：251）

Individuals with severe periodontal disease were significantly higher risk of max-IMT
PPD（1 site per
1.1 mm or more than those
tooth）
with healthy periodontal tissues（O R＝2 . 0 1 , 9 5％ C I＝1 . 0 6 t o
3.79, p＝0.032）
.

54

2018

52 dyslipidemia
patients attending a
66.9±8.9
university hospital（21
men and 31 women）

There was a significant association between max-IMT 1.1 mm
PPD and BOP or more and ％ of teeth with（b o t h 6 s i t e s PPD 6 mm or more（more than
50 versus less than 50％）（ORper tooth）＝8 . 2 7 5 , 9 5％ C I＝1 . 4 6 2 t o
46.844, p＝0.017）
.

55

2019

9 0 7 p e o p le in Go t oCity, Nagasaki Prefecture（353 men and554 women）

60 to 99,（72.1±7 . 0：m e n ,7 1 . 3±6 . 8：
women）The OR and 95％ CI of PPD 6
mm or more were OR 2.01 andP P D（2 s i t e s
95％ CI 1.06 to 3.81 for participer tooth）
pants with max-IMT 1.1 mm or
more.

56

2022

602 community
dwellers residing in
Ohasama Town,
Iwate Prefecture（male：37.7％）

PPD, CAL（b o t h 6 si t e sOver 55, 66.0 per tooth）and±7.3
radiographic
alveolar boneloss

In the multivariate model,
regarding CDC/AAP classification, compared to those with noor mild periodontitis, OR（95％
CI）for those with severe periodontitis were 4.26（1.01 to
17.5）
.

57

Abbreviations：SD, standard deviation；PPD, probing pocket depth；CAL, clinical attachment level；max-IMT, maximum-intima media thickness；OR, odds ratio；CI, confidence interval；SONIC, Septuagenarian, Octogenarian, Nonagenarian Intervention with Centenarian；BOP, bleeding on probing；CDC/AAP, Centers for Disease Control/American Academy of Periodontology.

4 ．頸動脈硬化に対する歯周治療の介入研究

名に分けて 12 カ月追跡した．その結果，歯周治療群では頸動脈硬化に対する歯周治療の介入研究は，海外からベースライン時と比較して，12 カ月後の IMT が有意に

3 編35,66,67）の報告がみられる（Table 4，最終検索年月日：

改善していた．ブラジルの大学病院で実施された非無作

2022 年 4 月 9 日）．

為比較試験67）では，23 名の歯肉健常者群に口腔清掃指導

無作為比較試験である PerioCardio study66）では，歯周を，21 名の中等度から重度の歯周炎患者群に口腔清掃指炎のアボリジナルオーストラリアンズの参加者を，1 回

導と SRP を実施した結果，両群ともに術後 6 カ月で IMT

で全顎スケーリング・ルートプレーニング（SRP）を行が術前よりも有意に改善していたことを報告している．

う歯周治療群 138 名と，口腔清掃指導のみの対照群 135

2022 年 6 月

頸動脈アテローム性硬化と歯周病との臨床疫学的関連

Table 3
Authors

Cohort studies of the relationship between carotid intima-media thickness and periodontal disease

Publica-

Coun-

Study

（Study name） tion year

try

designVernon et al.

2011

193

USA

Prospective

Subjects

Age, mean±

Assesment method

Follow-up

SD or medianfor periodontitis

period43 HIV-infected adults
with 20 teeth or more

PPD, REC, CAL andOver 18, 38±8（male：77％）

BOP（both 6 sites
per tooth）

Median 24
monthsMain results

Reference

Both PPD, REC, CAL or
BOP were not significantly

58

associated with IMT.
Mean IMT increased

Desvarieux etal.（INVEST）

2013

USA

Prospective

during follow-up by 0.139±

420 residents in Manhattan, New York City,

Over 55, 68±8（male：37％）

PPD and CAL（bothMedian 3.1

0.008 mm. Longitudinal IMT

6 sites per tooth）

years

progression attenuated with59

improvement in clinicalperiodontal status.
A multivariate analysis

Napora et al.

2016

PolandProspectivewith type 2 diabetes（67demonstrated a significant

PPD, CAL, BOP

119 patients diagnosed
Median 62

men and 52 women）（b o t h 6 s i t e s p e r

1 yeartooth）and PCR

correlation between mean
CAL and IMT change after

60

o n e y e a r（ β＝0 . 2 5 , p＝0.011）.
During all stages of SPT,

Kudo et al.
（Japanese prospective multicentre

2018

Japan

observational

Prospective

104 medical or periodontal patients（male：54,

PPD, BOP（both 657.4±13.7

female：50）

sites per tooth）andmobile teeth

study）Start of SPT,at 1 year
and 3 years
under SPT

corresponding to improvements in ％ of positive BOP
and average of PPD were61

decreased with periodontal
treatment, max-IMT
decreased significantly.

755 participants（male：
Pussinen et al.

49.1％）in 1980 at age 6,（the Cardiovascular Risk in2019

FinlandYoung Finns

Prospective

Study）

9, or 12 years and fol-

8.07±2.00

low-up in adulthood in （at baseline in2001 at age 27, 30, or 33

1980）

years and/or in 2007 at

In boys, periodontal disease

PPD and BOP｛b o t h 2 s i t e s o f 6

21 and 27

index teeth（16, 21,

years

24, 36, 41, and 44）｝

（RR＝1.69, 95％ CI＝1.21 to2.36）were statistically sig-

62

nificantly associated with
the IMT 27 years later.

age 33, 36, or 39 years
726,300 periodontitis

8.65±3.06

patients（male：47.3％） 44.02±14.63：
RetroTong et al.

2019

Taiwanand 726,300 contorols

periodontitis

spective （male：47.0％）from thepatients, 44.15

doubleTaiwanese National±14.41：

Health Insurance

controls

The ICD-9-CM code
523.4 was used to
identify the patientswith periodontitis

Research Databaseyears：
periodontitis
patients,8.59±3.08
years：
controls

Multivariate Cox regression
analysis indicated that the
male group had significantly higher incidence risk

63

of carotid atherosclerosis（log rank p＝0.046）.
Multiple linear regression
analysis showed that periodontitis and CMV anti-

32 HIV-infected adults
Wulandari et al.

2020

Indonesia

Prospec- （m a l e：5 9％）a n d 3 2
tive

age-matched healthy

Median 36

OHI-S and CPI

5 years

body levels optimally predicted poor right and left64

IMT（adjusted R2＝0.36, p＝

contorols（male：56％）

0.0013；adjusted R2＝0.40, p＝0.001, respectively）.
It was revealed that the
proportion of teeth with
PPD 4 mm or more was
182 community-dwellers
Kitamura etal.
（the SONIC
study）

2021

Japan

Prospective

independently associatedof Itami City and Asago
City in Hyogo Prefecture（male：70, female：69 to 71

PPD
（6 sites per tooth）

with max-IMT 1.1 mm or
3 years112）

more without any relation-

65

ship to the other traditionalrisk factors for max-IMT
1.1 mm or more（OR＝1.029,
95％ CI＝1.00 to 1.06, p＝0.022）.

Abbreviations：SD, standard deviation；HIV, human immunodeficiency virus；PPD, probing pocket depth；REC, gingival recession level；CAL, clinical attachmentlevel；BOP, bleeding on probing；IMT, intima-media thickness；INVEST, the oral INfections and Vascular disease Epidemiology STudy；PCR, plaque control record；β, partial regression coefficient；SPT, supportive periodontal therapy；max-IMT, maximum IMT；RR, risk ratio；CI, confidence interval; ICD‒9‒CM, International
Classification of Disease, Ninth Revision, Clinical Modification；OHI-S, oral hygine index-simplified；CPI, community periodontal index；CMV, cytomegalovirus；R2,
coefficient of determination；SONIC, Septuagenarian, Octogenarian, Nonagenarian Intervention with Centenarian; OR, odds ratio.

Age, mean±SD

All patients received oral
h y g i e n e i n s t r u c t i o n；patients in group 2 also
underwent supragingival
and subgingival scaling
and root planing.

23 healthy patients
M e a n 3 9 . 8 1±
（group 1, men：30.4％）
Non-random7.98（39.47 years
a nd 21 pa t i e nt s w i t hBrazilized conin group 1 andmoderate to severe
trolled trial
40.77 years inperiodontitis（group 2,
group 2）
men：22.7％）

Toregeani
et al.

Reference

35

66

67

Main results
The diminution in carotid IMT was observed as early as 6 months after
treatment, persisted throughout the study period, and could be detected
in multiple sites along the carotid axis.
IMT decreased significantly after 12 months in the intervention group｛mean reduction＝－0.023, 95％ CI＝－0.038 to －0.008（mm）｝but not in
the control group｛mean increase＝0.002, 95％ CI＝－0.017 to 0.022（mm）｝.
The difference in IMT change between treatment groups was statistically significant｛－0.026, 95％ CI＝－0.048 to －0.003（mm）, p＝0.03｝.
A statistically significant improvement in clinical periodontal parameters
occurred in both groups（p＜0.05）. Improvements were more evident
between the first and second evaluations and were greater in group 2.
Both groups experienced a statistically significant decrease in IMT in
the first 6 months（p＜0.05）. Treatments oral hygiene instruction ingroup 1 and instruction plus mechanical periodontal instrumentation ingroup 2 were effective in improving clinical periodontal parameters ofboth groups and promoting reduction in IMT at 6 months.

6 and
12
months3 and 12months6 and 12monthsFollow-up
period日本
歯Abbreviations：SD, standard deviation；IMT, intima-media thickness；CI, confidence interval.

2016

Intervention participantsreceived full-mouth periodontal scaling during asingle visit, whereas controls received no treatment.

Over 18,（treatment：40.2±10.9,
control：40.3±
9.6）

273 Aboriginal AustraRandomized lians with periodontitis
controlled （treatments：138, men
trial
55.8％, controls：135,
men 60.0％）

Australia

The anti-infective periodontal therapy included no surgical debridement and wascompleted within 4 weeks.

Methods of periodontal
intervention

Kapellas etal.
（The Perio- 2014
Cardio study）

35 subjects（15 men and
20 women）affected byMean 46.21
mild to moderate periodontitis

Subjects

Italy

One-group
pretestposttest

PubliCouncation
Study design
try
year

Periodontal intervention studies for the development of carotid intima-media thickness

2009

Piconi et al.

Authors（Studyname）

Table 4
194

科
保
存
学
雑
誌
第 65 巻

文

第3号

おわりに

頸動脈硬化に対して行う頸動脈超音波検査と歯周病との関連報告は，以上の結果であった．メタ解析より，頸動脈硬化と歯周病の関連性はあるといえる．しかしながら，観察研究では因果関係を調べることは困難である．

因果関係を調べるための介入研究では，歯周治療で IMT

値が改善する傾向がみられるが，報告数が少なく，対象者の選択バイアスなども考慮して解釈する必要がある．

近年では，24 歳時の歯周炎が 30 歳時の IMT 値へ関連して い る か を， 周 辺 構 造 モ デ ル（marginal structuralmodel）で統計解析した結果，30 歳時の高感度 CRP 値の強い影響が原因で，有意な関連はみられなかった報告68）もある．

さらにより質の高い，観察および介入研究が必要である．

今後はこの分野のエビデンスを明確にするためにも，

献1）Miller WD. The human mouth as a focus of infection.
Lancet 1891; 138: 340‒342.
2）Vaizey JM, Clark-Kennedy AE. Dental sepsis: Anaemia,
dyspepsia, and rheumatism. Br Med J 1939; 1: 1269‒
1273.
3）Mattila KJ, Nieminen MS, Valtonen VV, Rasi VP, Kesäniemi YA, Syrjälä SL, Jungell PS, Isoluoma M, Hietaniemi K, Jokinen MJ. Association between dental healthand acute myocardial infarction. BMJ 1989; 298: 779‒
781.
4）Syrjänen J, Peltola J, Valtonen V, Iivanainen M, Kaste M,
Huttunen JK. Dental infections in association with cerebral infarction in young and middle-aged men. J Intern
Med 1989; 225: 179‒184.
5）日本動脈硬化学会．動脈硬化性疾患予防のための脂質異常症診療ガイド 2018 年版．1 版．日本動脈硬化学会：東京；2018．11‒14，148．
6）半田伸夫．頸動脈エコーによる動脈硬化性病変評価のガ
イ ド ラ イ ン（ 案 ）．Neurosonology： 神 経 超 音 波 医 学

2002；15：20‒33．
7）山崎和久，高橋直紀，五味一博．第 1 部 臨床研究からのエビデンス 1）歯周病と血管障害 概説．日本歯周病学会．歯周病と全身の健康．1 版．医歯薬出版：東京；
2016．10‒11．
8）Ross R. Atherosclerosis―an inflammatory disease. N
Engl J Med 1999; 340: 115‒126.
9）日本動脈硬化学会．動脈硬化性疾患予防ガイドライン
2017 年版．1 版．日本動脈硬化学会：東京；2017．19‒22．
10）日本脳神経超音波学会・栓子検出と治療学会合同ガイド
ライン作成委員会．頸部血管超音波検査ガイドライン．

2022 年 6 月

頸動脈アテローム性硬化と歯周病との臨床疫学的関連

Neurosonology：神経超音波医学 2006；19：49‒69．

11）日本超音波医学会用語・診断基準委員会，頸動脈超音波

195sclerosis: A meta-analysis of 17,330 participants. Int J
Cardiol 2016; 203: 1044‒1051.

診断ガイドライン小委員会．超音波による頸動脈病変の22）Wang J, Geng X, Sun J, Zhang S, Yu W, Zhang X, Liu H.

https://www.jsum.or.jp/committee/diagnostic/pdf/
jsum0515_guideline.pdf（2022 年 3 月 26 日アクセス）
12）Pignoli P, Tremoli E, Poli A, Oreste P, Paoletti R. Intimalplus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging. Circulation 1986; 74:1399‒1406.
13）Homma S, Hirose N, Ishida H, Ishii T, Araki G. Carotid
plaque and intima-media thickness assessed by b-mode
ultrasonography in subjects ranging from young adults
to centenarians. Stroke 2001; 32: 830‒835.
14）Barnett HJ, Taylor DW, Eliasziw M, Fox AJ, Ferguson
GG, Haynes RB, Rankin RN, Clagett GP, Hachinski VC,
Sackett DL, Thorpe KE, Meldrum HE, Spence JD. Benefit of carotid endarterectomy in patients with symptomatic moderate or severe stenosis. North American
Symptomatic Carotid Endarterectomy Trial Collaborators. N Engl J Med 1998; 339: 1415‒1425.
15）Nezu T, Hosomi N, Aoki S, Matsumoto M. Carotid intima-media thickness for atherosclerosis. J Atheroscler
Thromb 2016; 23: 18‒31.
16）O’Leary DH, Polak JF, Kronmal RA, Manolio TA, Burke
GL, Wolfson SK Jr. Carotid-artery intima and media
thickness as a risk factor for myocardial infarction andstroke in older adults. Cardiovascular Health Study Collaborative Research Group. N Engl J Med 1999; 340: 14‒22.
17）del Sol AI, Moons KG, Hollander M, Hofman A, Koudstaal PJ, Grobbee DE, Breteler MM, Witteman JC, Bots
ML. Is carotid intima-media thickness useful in cardiovascular disease risk assessment? The Rotterdam
Study. Stroke 2001; 32: 1532‒1538.
18）Lorenz MW, Markus HS, Bots ML, Rosvall M, Sitzer M.
Prediction of clinical cardiovascular events with carotid
intima-media thickness: a systematic review andmeta-analysis. Circulation 2007; 115: 459‒467.
19）Kitamura A, Iso H, Imano H, Ohira T, Okada T, Sato S,
Kiyama M, Tanigawa T, Yamagishi K, Shimamoto T.
Carotid intima-media thickness and plaque characteristics as a risk factor for stroke in Japanese elderly men.
Stroke 2004; 35: 2788‒2794.
20）Orlandi M, Suvan J, Petrie A, Donos N, Masi S, Hingorani A, Deanfield J, D’Aiuto F. Association between
periodontal disease and its treatment, flow-mediateddilatation and carotid intima-media thickness: a systematic review and meta-analysis. Atherosclerosis 2014;
236: 39‒46.
21）Zeng XT, Leng WD, Lam YY, Yan BP, Wei XM, Weng
H, Kwong JS. Periodontal disease and carotid athero-

The risk of periodontitis for peripheral vascular disease:a systematic review. Rev Cardiovasc Med 2019; 20: 81‒
89.
23）Beck JD, Elter JR, Heiss G, Couper D, Mauriello SM,
Offenbacher S. Relationship of periodontal disease tocarotid artery intima-media wall thickness: the atherosclerosis risk in communities（ARIC）study. Arterioscler
Thromb Vasc Biol 2001; 21: 1816‒1822.
24）Persson RE, Hollender LG, Powell VL, MacEntee M,
Wyatt CC, Kiyak HA, Persson GR. Assessment of periodontal conditions and systemic disease in older subjects. Ⅱ. Focus on cardiovascular diseases. J Clin Periodontol 2002; 29: 803‒810.
25）Ravon NA, Hollender LG, McDonald V, Persson GR.
Signs of carotid calcification from dental panoramic
radiographs are in agreement with Doppler sonography
results. J Clin Periodontol 2003; 30: 1084‒1090.
26）Desvarieux M, Schwahn C, Völzke H, Demmer RT,
Lüdemann J, Kessler C, Jacobs DR Jr, John U, Kocher
T. Gender differences in the relationship between periodontal disease, tooth loss, and atherosclerosis. Stroke
2004; 35: 2029‒2035.
27）Engebretson SP, Lamster IB, Elkind MS, Rundek T, Serman NJ, Demmer RT, Sacco RL, Papapanou PN, Desvarieux M. Radiographic measures of chronic periodontitis and carotid artery plaque. Stroke 2005; 36: 561‒566.
28）Desvarieux M, Demmer RT, Rundek T, Boden-Albala B,
Jacobs DR Jr, Sacco RL, Papapanou PN. Periodontal
microbiota and carotid intima-media thickness: the Oral
Infections and Vascular Disease Epidemiology Study（INVEST）. Circulation 2005; 111: 576‒582.
29）Leivadaros E, van der Velden U, Bizzarro S, ten Heggeler JM, Gerdes VE, Hoek FJ, Nagy TO, Scholma J, Bakker SJ, Gans RO, ten Cate H, Loos BG. A pilot study
into measurements of markers of atherosclerosis inperiodontitis. J Periodontol 2005; 76: 121‒128.
30）Söder PO, Söder B, Nowak J, Jogestrand T. Early carotid
atherosclerosis in subjects with periodontal diseases.
Stroke 2005; 36: 1195‒1200.
31）Franek E, Blaschyk R, Kolonko A, Mazur-Psonka L, Łangowska-Adamczyk H, Kokot F, Wiecek A. Chronic periodontitis in hemodialysis patients with chronic kidneydisease is associated with elevated serum C-reactive
protein concentration and greater intima-media thickness of the carotid artery. J Nephrol 2006; 19: 346‒351.
32）Schillinger T, Kluger W, Exner M, Mlekusch W, Sabeti
S, Amighi J, Wagner O, Minar E, Schillinger M. Dental
and periodontal status and risk for progression of
carotid atherosclerosis: the inflammation and carotid

標準的評価法 2017（2018 年 1 月 29 日公示）．

196

日

本

歯

科

保

存

学

雑

誌

第 65 巻第3号

artery risk for atherosclerosis study dental substudy.

posity, blood pressure and periodontal disease indepen-

Stroke 2006; 37: 2271‒2276.
33）Söder B, Yakob M, Nowak J, Jogestrand T. Risk for thedent of cross-sectional distensibility and intima-media

development of atherosclerosis in women with a highamount［corrected］of dental plaque and severe gingival
inflammation. Int J Dent Hyg 2007; 5: 133‒138. Erratum
in: Int J Dent Hyg 2009; 7: 79. Nowak J［added］; Jogestrand T［added］.
34）Cairo F, Castellani S, Gori AM, Nieri M, Baldelli G,
Abbate R, Pini-Prato GP. Severe periodontitis in young
adults is associated with sub-clinical atherosclerosis. J
Clin Periodontol 2008; 35: 465‒472.
35）Piconi S, Trabattoni D, Luraghi C, Perilli E, Borelli M,
Pacei M, Rizzardini G, Lattuada A, Bray DH, Catalano
M, Sparaco A, Clerici M. Treatment of periodontal disease results in improvements in endothelial dysfunction
and reduction of the carotid intima-media thickness.
FASEB J 2009; 23: 1196‒1204.
36）Li X, Tse HF, Yiu KH, Jia N, Chen H, Li LS, Jin L.
Increased levels of circulating endothelial progenitor
cells in subjects with moderate to severe chronic periodontitis. J Clin Periodontol 2009; 36: 933‒939.
37）Y l ö s t a l o P , A n t t i l a S , R a j a l a U , P ä i v ä n s a l o M ,Keinänen-Kiukaanniemi S, Sakki T, Knuuttila M. Periodontal infection and subclinical atherosclerosis: the roleof high-density lipoprotein as a modifying factor. J Clin
Periodontol 2010; 37: 617‒624.
38）Carallo C, Fortunato L, de Franceschi MS, Irace C, Tripolino C, Cristofaro MG, Giudice M, Gnasso A. Periodontal disease and carotid atherosclerosis: are hemodynamic forces a link?. Atherosclerosis 2010; 213: 263‒267.
39）Vieira CL, Cury PR, Miname MH, Martinez LR, Bortolotto LA, Giuliano IB, Santos RD, Caramelli B. Severe
periodontitis is associated with diastolic blood pressure
elevation in individuals with heterozygous familial
hypercholesterolemia: a pilot study. J Periodontol 2011;82: 683‒688.
40）Li P, Zhang DK, Zhang JR, Chen L. Detection of theparameters for early atherosclerosis in patients withmetabolic syndrome and periodontitis. Beijing Da Xue
Xue Bao Yi Xue Ban/J Peking Univ Health Sci 2011; 43:
34‒39.（in Chinese）
41）Lopez-Jornet P, Berna-Mestre JD, Berna-Serna JD,
Camacho-Alonso F, Fernandez-Millan S, Reus-Pintado
M. Measurement of atherosclerosis markers in patientswith periodontitis: a case-control study. J Periodontol
2012; 83: 690‒698.
42）Zahnd G, Vray D, Serusclat A, Alibay D, Bartold M,
Brown A, Durand M, Jamieson LM, Kapellas K, MapleBrown LJ, O’Dea K, Moulin P, Celermajer DS, Skilton
MR. Longitudinal displacement of the carotid wall andcardiovascular risk factors: associations with aging, adi-43）Franek E, Januszkiewicz-Caulier J, Błach A, Napora M,
Jedynasty K, Budlewski T, Gozdowski D, Górska R. Intima-media thickness and other markers of atherosclerosis in patients with type 2 diabetes and periodontal dis-

thickness. Ultrasound Med Biol 2012; 38: 1705‒1715.

ease. Kardiol Pol 2012; 70: 7‒13.
44）Puhar I, Lovrencic-Huzjan A, Sodec-Simicevic D,
Strineka M, Bozic D, Plancak D. Carotid intima-media
thickness in patients with chronic and aggressive periodontitis. Deblijina intime-medije karotidnih arterija kodpacijenata s kronicnim i agresivnim parodontitisom.
Acta Stomatol Croat 2012; 46: 255‒262.（in Croatian,English）
45）Pinho MM, Faria-Almeida R, Azevedo E, Manso MC,
Martins L. Periodontitis and atherosclerosis: an observational study. J Periodontal Res 2013; 48: 452‒457.
46）Hayashida H, Saito T, Kawasaki K, Kitamura M, Furugen R, Iwasaki T, Hayashida Y, Nakazato M, Sekita T,
Takamura N, Maeda T. Association of periodontitis
with carotid artery intima-media thickness and arterial
stiffness in community-dwelling people in Japan: theNagasaki Islands study. Atherosclerosis 2013; 229: 186‒
191.
47）Wożakowska-Kapłon B, Włosowicz M, Gorczyca-Michta
I, Górska R. Oral health status and the occurrence andclinical course of myocardial infarction in hospital phase:a case-control study. Cardiol J 2013; 20: 370‒377.
48）Ramesh A, Soroushian S, Ganguly R. Coincidence of calcified carotid atheromatous plaque, osteoporosis, andperiodontal bone loss in dental panoramic radiographs.
Imaging Sci Dent 2013; 43: 235‒243.
49）Jung YS, Shin MH, Kim IS, Kweon SS, Lee YH, Kim OJ,
Kim YJ, Chung HJ, Kim OS. Relationship between periodontal disease and subclinical atherosclerosis: theDong-gu study. J Clin Periodontol 2014; 41: 262‒268.
50）Yu H, Qi LT, Liu LS, Wang XY, Zhang Y, Huo Y, Luan
QX. Association of carotid intima-media thickness andatherosclerotic plaque with periodontal status. J Dent
Res 2014; 93: 744‒751.
51）Ahn YB, Shin MS, Han DH, Sukhbaatar M, Kim MS, ShinHS, Kim HD. Periodontitis is associated with the risk of
subclinical atherosclerosis and peripheral arterial disease in Korean adults. Atherosclerosis 2016; 251: 311‒
318.
52）Criqui MH, Aboyans V. Epidemiology of peripheralartery disease. Circ Res 2015; 24: 116: 1509‒1526. Erratum in: Circ Res 2015; 19: 117: e12.
53）Gerhard-Herman MD, Gornik HL, Barrett C, Barshes
NR, Corriere MA, Drachman DE, Fleisher LA, Fowkes
FGR, Hamburg NM, Kinlay S, Lookstein R, Misra S,

2022 年 6 月

頸動脈アテローム性硬化と歯周病との臨床疫学的関連

Mureebe L, Olin JW, Patel RAG, Regensteiner JG,
Schanzer A, Shishehbor MH, Stewart KJ, Treat-Jacobson D, Walsh E. 2016 AHA/ACC guideline on the management of patients with lower extremity peripheralartery disease: a report of the American college of cardiology/American heart association task force on clinical practice guidelines. J Am Coll Cardiol 2017; 69: e71‒
e126. doi：10.1016/j.jace.2016.11.007. Erratum in: J Am
Coll Cardiol 2017; 69: 1521.
54）Tada S, Ikebe K, Kamide K, Gondo Y, Inomata C,
Takeshita H, Matsuda KI, Kitamura M, Murakami S,
Kabayama M, Oguro R, Nakama C, Kawai T, Yamamoto K, Sugimoto K, Shintani A, Ishihara T, Arai Y,
Masui Y, Takahashi R, Rakugi H, Maeda Y. Relationshipbetween atherosclerosis and occlusal support of natural
teeth with mediating effect of atheroprotective nutrients: From the SONIC study. PLoS One 2017; 12:e0182563. doi：10.1371/journal. pone. 0182563
55）寺田 裕，長澤敏行，小西ゆみ子，尾立達治，森 真理，
舞田健夫，森谷 満，井出 肇，辻 昌宏，川上智史，
古市保志．脂質異常症患者における残存歯数および重度
歯 周 炎 と 頸 動 脈 内 中 膜 厚 と の 関 連 性． 日 歯 保 存 誌
2018；61：132‒144．
56）Shimizu Y, Yamanashi H, Kitamura M, Furugen R, Iwasaki T, Fukuda H, Hayashida H, Kawasaki K, Kiyoura K,
Kawashiri SY, Saito T, Kawakami A, Maeda T. Association between human T cell leukemia virus type-1（HTLV-1）infection and advanced periodontitis in relation to atherosclerosis among elderly Japanese: across-sectional study. Environ Health Prev Med 2019;24: 81. doi：10.1186/s12199-019-0836‒257）Yamada S, Komiyama T, Ohi T, Murakami T, Miyoshi Y,
Endo K, Hiratsuka T, Hara A, Satoh M, Tatsumi Y,
Inoue R, Asayama K, Kikuya M, Hozawa A, Metoki H,
Imai Y, Ohkubo T, Hattori Y. Regular dental visits, periodontitis, tooth loss, and atherosclerosis: The Ohasama
study. J Periodontal Res 2022; 57: 615‒622.
58）Vernon LT, Babineau DC, Demko CA, Lederman MM,
Wang X, Toossi Z, Weinberg A, Rodriguez B. A prospective cohort study of periodontal disease measuresand cardiovascular disease markers in HIV-infected
adults. AIDS Res Hum Retroviruses 2011; 27: 1157‒
1166.
59）Desvarieux M, Demmer RT, Jacobs DR, Papapanou PN,
Sacco RL, Rundek T. Changes in clinical and microbiological periodontal profiles relate to progression of
carotid intima-media thickness: the Oral Infections and
Vascular Disease Epidemiology study. J Am Heart
Assoc 2013; 2: e000254. doi：10.1161/JAHA.113.000254
60）Napora M, Grabowska E, Górska R. Prospective analysisof the relationship between the state of periodontal tissues and changes in selected cardiovascular parameters197

in patients with type 2 diabetes. Adv Clin Exp Med
2016; 25: 879‒886.
61）Kudo C, Shin WS, Sasaki N, Harai K, Kato K, Seino H,
Goke E, Fujino T, Kuribayashi N, Pearce YO, Taira M,
Matsushima R, Minabe M, Takashiba S; Periodontitis
and Atherosclerosis Project-Tokyo and Chiba Consortiums. Effects of periodontal treatment on carotid intima-media thickness in patients with lifestyle-relateddiseases: Japanese prospective multicentre observational study. Odontology 2018; 106: 316‒327. Erratum in:
Odontology 2018; 106: 349.
62）Pussinen PJ, Paju S, Koponen J, Viikari JSA, Taittonen L,
Laitinen T, Burgner DP, Kähönen M, Hutri-Kähönen N,
Raitakari OT, Juonala M. Association of childhood oral
infections with cardiovascular risk factors and subclinical atherosclerosis in adulthood. JAMA Netw Open
2019; 2: e192523. doi：10.1001/jamanetworkopen.2019.2523
63）Tong C, Wang YH, Chang YC. Increased risk of carotid
atherosclerosis in male patients with chronic periodontitis: A nationwide population-based retrospective cohort
study. Int J Environ Res Public Health 2019; 16: 2635.
doi：10.3390/ijerph16152635
64）Wulandari EAT, Wijaya IP, Karim B, Ariyanto I, Tanudjaja SA, Lee S, Price P. Periodontitis and cytomegalovirus associate with atherosclerosis among HIV patients
after 5 years on ART. J Acquir Immune Defic Syndr
2020; 85: 195‒200.
65）Kitamura M, Ikebe K, Kamide K, Gondo Y, Yamashita
M, Takedachi M, Nozaki T, Fujihara C, Yamada S,
Kashiwagi Y, Miki K, Iwayama T, Hatta K, Mihara Y,
Kurushima Y, Takeshita H, Kabayama M, Oguro R,
Kawai T, Akasaka H, Takeya Y, Yamamoto K,
Sugimoto K, Ishizaki T, Arai Y, Masui Y, Takahashi R,
Rakugi H, Maeda Y, Murakami S. Association of periodontal disease with atherosclerosis in 70-year-old Japanese older adults. Odontology 2021; 109: 506‒513.
66）Kapellas K, Maple-Brown LJ, Jamieson LM, Do LG,
O’Dea K, Brown A, Cai TY, Anstey NM, Sullivan DR,
Wang H, Celermajer DS, Slade GD, Skilton MR. Effect of
periodontal therapy on arterial structure and function
among Aboriginal Australians: a randomized, controlled
trial. Hypertension 2014; 64: 702‒708.
67）Toregeani JF, Nassar CA, Nassar PO, Toregeani KM,
Gonzatto GK, Vendrame R, Castilhos JS, Rotta LS, Reinheimer AC, Longoni A, Barcella MW. Evaluation of
periodontitis treatment effects on carotid intima-media
thickness and expression of laboratory markers related
to atherosclerosis. Gen Dent 2016; 64: 55‒62.
68）Leite FRM, Nascimento GG, Peres KG, Demarco FF,
Horta BL, Peres MA. Collider bias in the association of
periodontitis and carotid intima-media thickness. Community Dent Oral Epidemiol 2020; 48: 264‒270.

日

198

本

歯

科

原

保

存

学

雑

誌

著

第 65 巻第3号

日歯保存誌 65（3）：198～204，2022

歯根肉芽腫中でのカルシウム結合タンパク S100A8 と S100A9 の発現
田

村

隆

仁1

宮

田

泰

伎1

氷

見

一

馬1

羽

鳥

啓

介1,2

中

村

健

志1

清

水

康

平1,2

鈴

木

裕

介1,2

蓮

池

聡2,3

井

上

聖

也1

岡

田

將

司1

藪

原

佑季子1

勝

呂

尚1,2

正

覺

泰

佑1

安

川

拓

也1,2

林

誠1,2

武

市

収1,2

日本大学歯学部歯科保存学教室歯内療法学講座

1

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門

23

日本大学歯学部歯科保存学教室歯周病学講座

抄録
目的：根尖性歯周炎は，感染根管に起因した二次的病変として発症するリンパ球活性の増進，炎症性細胞の遊走や浸潤および破骨細胞の活性化を伴う根尖周囲の炎症性疾患で，疼痛や根尖部歯肉の腫脹など，さまざまな臨床症状を引き起こす．これまでに，根尖性歯周炎の病態を解明することを目的として，サイトカインや成長因子のようなさまざまな炎症性メディエーターの関与について研究が行われてきているが，その詳細は明らかにされていない．そこで本研究では歯根肉芽腫の病態を解明することを目的として，慢性炎症性疾患の病態に関与することが報告されているカルシウム結合タンパク S100A8 と S100A9 に着目し，両タンパクの歯根肉芽腫と健常歯肉におけるタンパクおよび遺伝子発現の検索を行った．
材料と方法：日本大学歯学部付属歯科病院歯内療法科に来院し，根尖性歯周炎と診断され歯根尖切除法が適応とされた患者から根尖病変組織を採取した．採取した試料はただちに二分割し，一方を 10％ホルマリンで固定およびパラフィン切片の作製後，病理組織学的検索を行った．加えて，病理組織学的検索の結果，歯根肉芽腫と診断した試料を用いて，免疫組織化学的検索を行った．他方は，OCT コンパウンドに包埋し，ドライアイ
ス‒アセトンで凍結した後，real‒time polymerase chain reaction（PCR）法による遺伝子発現の検索を行った．
また，健常歯肉組織は埋伏智歯抜歯時に採取し，根尖性歯周炎と同様に検索を行った．なお，被験者に対して試料を本実験に使用することを説明し，文書にて同意を得た後に試料採取を行った（EP18D014）．
成績：病理組織学的検索の結果，採取した 44 例の根尖病変組織のうち，32 例は歯根肉芽腫，12 例は歯根囊胞であった．次に歯根肉芽腫組織と健常歯肉組織に対して，蛍光標識した抗体を用いて免疫組織化学的検索を行った結果，健常歯肉中では S100A8 と S100A9 タンパクの発現を認めなかったが，歯根肉芽腫では両タンパ
クの発現を認めた．また，real‒time PCR 法を用いて検索した結果，健常歯肉と比較して歯根肉芽腫では有意に高い S100A8 と S100A9 遺伝子の発現を認めた．
結論：慢性炎症性疾患である歯根肉芽腫中で S100A8 および S100A9 が発現し，S100A8 および S100A9 は慢性炎症性疾患においてその病態に関与していることから，口腔内の慢性炎症性疾患である歯根肉芽腫においても病態の調節に関与している可能性が示唆された．
キーワード：歯根肉芽腫，S100A8，S100A9

責任著者連絡先：羽鳥啓介〒 101‒8310 東京都千代田区神田駿河台 1‒8‒13 日本大学歯学部歯科保存学教室歯内療法学講座
TEL：03‒3219‒8142，FAX：03‒3219‒8348，E-mail：hatori.keisuke@nihon-u.ac.jp
受付：2022 年 3 月 4 日/受理：2022 年 4 月 12 日
DOI：10.11471/shikahozon.65.198

2022 年 6 月

歯根肉芽腫における S100A8 と S100A9 の局在

緒199

2 ．組織切片の調製

言

採取した組織はただちに 2 分割し，一方を通法に従って 10％中性緩衝ホルマリンで固定後，パラフィン包埋

根尖性歯周炎は，感染根管に起因した病変として発症

し，薄切切片を作製した．他方は，real‒time PCR 法にし，炎症性細胞の遊走および破骨細胞の活性化を伴う根使用するため，OCT コンパウンドに包埋後，ドライアイ

尖周囲の炎症性疾患である1‒3）．これまでに，根尖性歯周ス‒アセトンで凍結し，凍結試料を作製した．

炎の病態解明を目的としてサイトカインや成長因子など

3 ．病理組織学的検索の炎症性メディエーターの関与に関するさまざまな研究採取したすべての組織の薄切切片に対して，ヘマトキが行われてきた．著者らの所属する講座においても根尖

シリン・エオジン染色を行い，病理組織学的に歯根肉芽性歯周炎の病態解明のために同様の研究が行われてきた腫と診断したものを本実験に供試した．健常歯肉についが，その詳細はいまだに明らかにされていないても同様に検索を行った．

．

4‒6）

カルシウム結合タンパク S100（S100 タンパク）はさ4 ．蛍光二重免疫染色法

まざまな細胞から発現され，25 種類のサブクラスが報告

歯根肉芽腫および健常歯肉の薄切切片を 10％正常ウ

されている7,8）．近年の研究で，S100 ファミリーのなかでサギ血清（Vectastain，Vector Laboratories，USA）でも S100A4，S100A8 および S100A9 は健常者に比べ，慢20 分間ブロッキングした後，抗ヒト S100A8 マウスモノ性炎症性疾患である関節リウマチ患者の血清中とリウマ

クローナル抗体（Aviva systems biology，USA）と抗ヒチ組織中で高く発現し，その病態調節に関与しているこト S100A9 ウサギモノクローナル抗体（Abcam，UK）をとが報告されている．著者ら は，S100 ファミリー

用いて 1 時間インキュベートした．リン酸緩衝生理食塩の一種である S100A4 が歯根肉芽腫中で発現し，その病水で洗浄した後，fluorescein isothiocyanate 標識ヤギ抗態へ関与していることを報告した．一方，S100A8 とマウス IgG 抗体（Abcam），rhodamine isothiocynate 標

S100A9 は全身の炎症組織内において好中球・マクロ識ヤギ抗ウサギ IgG 抗体（Abcam）および 4’,6‒diamid-

ファージに発現し，その病態に関与していることが報告

ino‒2‒phenylindole, 2 dihydrochloride（Vector Laborato-

されている が，歯根肉芽腫での S100A8 と S100A9 のries）を同時に用いてインキュベートした．洗浄後，切発現は明らかにされていない．

片を水溶性マウント溶液（Vectashield，Vector Labora-

8‒11）

12）

13）

これらのことから，S100A8 と S100A9 が口腔内の慢性
炎症性疾患である歯根肉芽腫においてもその病態に関与

tories）にて封入し，蛍光顕微鏡（E‒600，ニコン）下で観察を行った．

している可能性があると思われる．しかしながら歯根肉

5 ．RNA 抽出および real⊖time PCR 法

芽腫における S100A8 および S100A9 の発現は報告され

歯根肉芽腫（n＝32）および健常歯肉（n＝5）の凍結ていないことから，本研究では免疫組織化学的検索およ

切片に 1 ml の Trizol（Invitrogen，USA）を加え，RNAび real‒time polymerase chain reaction（PCR）法を用いの採取を行った後，cDNA 合成キット（Prime Script RTて，S100A8 と S100A9 局在の検索を行うこととした．

reagent kit，タカラバイオ）を用いて相補的 DNA を合材料および方法
1 ．試料の採取成した．次いで，PCR プライマー（Table 1）と real‒time PCR 用スタンダード試薬（TB Green Premix Ex
Taq，タカラバイオ）を使用し，Smart Cycler（Cepheid，
USA）を用いて業者指定の増幅条件で PCR 反応を行っ日本大学歯学部付属歯科病院歯内療法科を受診し，診た．なお，S100A8 と S100A9 遺伝子の発現量は glycer-

査によって根尖性歯周炎と診断され，歯根尖切除術ある

aldehyde‒3‒phosphate dehydrogenase（GAPDH）遺伝

いは抜歯が適応とされた患者から根尖病巣を採取した．

子発現量を用いて，標準化を行った．

健常歯肉は，埋伏智歯の抜歯を目的に日本大学歯学部付

6 ．統計学的分析

属歯科病院口腔外科を受診した患者から採取した．試料Real‒time PCR を用いて得られた歯根肉芽腫と健常歯採取にあたっては，採取方法，術中・術後の不快症状と肉における標的遺伝子発現量に対して，Mann‒Whitney

使用目的を口頭で説明し，書面による同意を得た．根尖

U test を用いて有意水準 5％未満で統計学的分析を行っ病巣を採取した患者は，32 歳から 64 歳までの 44 名（男た．

性 26 名，女性 18 名）であった．健常歯肉を採取した患者は，25 歳から 37 歳までの 5 名（男性 3 名，女性 2 名）であった．なお本研究は，日本大学歯学部倫理委員会の承認を得ている（EP18D014）．

結果

薄切標本を病理組織学的に検討した結果，採取した 44

日

200

本

S100A8S100A9
GAPDH

科

保

存

学

雑

誌

第3号

GenBank

Primer sequence

accession number

Forward 5’‒GTGTCCACCTTCCACAAATACTCA‒3’
Reverse 5’‒ACTTCATTGTCCCTGTTGCTGTC‒3’
Forward 5’‒TCATGGAGGACCTGGACACAAA‒3’
Reverse 5’‒GCAGCTTCTCATGACAGGCAAA‒3’
Forward：5’‒GCACCGTCAAGGCTGAGAA‒3’
Reverse：5’‒ATGGTGGTGAAGACGCCAGT‒3’

A

第 65 巻

PCR primers used in this study

Table 1
Gene

歯

B

100μm

NM_002961
NM_002965
NR_152150

C

100μm

100μm

Histological examination of periapical lesions and healthy gingival tissues
stained using hematoxylin and eosin（A）Periapical granulomas showing rich blood vessels and inflammatory cell infiltration,（B）radicular cysts with epithelial cell lining, and（C）healthy gingival tissues.

Fig. 1

例のうち 32 例で著明な炎症性細胞浸潤と肉芽組織を認
め，歯根肉芽腫と診断した（Fig. 1A）．他の 12 例は囊胞腔と裏層上皮を認め，歯根囊胞と診断し（Fig. 1B）
，本

考

察

研究から除外した．また，採取した健常歯肉 5 例につい

根尖性歯周炎は，感染根管に起因した口腔常在菌や感ては，炎症性細胞浸潤がほぼないことを確認し，対照群

染歯髄の分解産物などによって発症し，好中球の浸潤にとした（Fig. 1C）．

より膿瘍が形成される．活動期から修復期へと移行する作製した薄切切片を用いて蛍光二重免疫染色法を行っと，膿瘍はマクロファージなどの炎症性細胞が浸潤したた結果，歯根肉芽腫中の炎症性細胞において，S100A8 と肉芽組織に置き換わって歯根肉芽腫となる1‒3）．しかし

S100A9 の 共 発 現 を 認 め た（Fig. 2）．陽性細胞率はながら，歯根肉芽腫の成立に関して，さまざまな炎症性

S100A8 が 66.4％，S100A9 が 48.7％，共発現率が 29.0％

メディエーターが関与していることが報告されていると，約半数が共発現を示す結果となった．一方，健常歯が，その詳細は明らかにされていない．そこで，S100A8

肉中では S100A8 および S100A9 の発現は認められなと S100A9 に着目し，歯根肉芽腫での発現を検索するこ

かった（Fig. 3）．

とを目的として本研究を行った．

歯根肉芽腫と健常歯肉中での S100A8 と S100A9 遺伝

蛍光二重免疫染色において，歯根肉芽腫中で S100A8子の発現量を検索する目的で Real time PCR 法を行っと S100A9 の発現が認められたが，健常歯肉中では認めた．その結果，すべてのサンプル中で S100A8 と S100A9られなかった．加えて，real‒time PCR 法によって，歯遺伝子発現を認め，その発現量は歯根肉芽腫で健常歯肉根肉芽腫における S100A8 と S100A9 遺伝子の発現が健と比較して有意に高かった（Fig. 4）．また，Pearson の常歯肉よりも有意に高いことが明らかになった．以前の相関係数を算出したところ S100A8 および S100A9 との研究において，IL‒1βと IL‒10 は線維芽細胞やマクロ間に有意な正の相関を認めた（Fig. 5）．

ファージにおける S100A8 の発現を促進することが報告2022 年 6 月

歯根肉芽腫における S100A8 と S100A9 の局在
A

201

B

25μm

25μm
C

D

25μm

25μm

Fig. 2 Two‒color immunofluorescence image analysis of periapical granulomas（A）Staining with anti‒human mouse S100A8 monoclonal antibody.（B）Staining with anti‒human rabbit S100A9 monoclonal antibody.（C）Merged images.
（D）Nuclear counterstaining with 4’,6‒diamidino‒2‒phenylindole.

A

B

50μm

50μm

C

50μm
Fig. 3 Two‒color immunofluorescence image analysis of healthy gingival tissues（A）Staining with anti‒human mouse S100A8 monoclonal antibody.（B）Staining
with anti‒human rabbit S100A9 monoclonal antibody.（C）Nuclear counterstaining
with 4’,6‒diamidino‒2‒phenylindole.

歯

科

＊＊

S100A8S100A8 Gene Expression（S100A8/GAPDH）

本

2.0
1.6
1.2
0.8
0.4
Periapicalgranulomas（n=32）

存学

雑誌

第 65 巻Healthy gingival
tissues（n=5）
Mann－Whitney U test＊＊：p<0.01
Bars：Median

第3号

＊＊

S100A9

2.4

0.0

保

S100A9 Gene Expression（S100A9/GAPDH）

日

202

0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00

Periapicalgranulomas（n=32）

Healthy gingival
tissues（n=5）
Mann－Whitney U test＊＊：p<0.01
Bars：MedianReal‒time polymerase chain reaction analysis for S100A8 and S100A9 mRNA expression in periapicalgranulomas and healthy gingival tissues
The value for（A）S100A8 and（B）S100A9 mRNA expression was divided by that for GAPDH expression.
All mRNA expressions in PGs were significantly higher than those in HGTs. ＊＊：p＜0.01（Mann‒Whitney
U test）.

Fig. 4

S100A9/GAPGH

0.3

R2＝0.160.2

れ，炎症の惹起や調節に関与している可能性がある．一方，著者12）らは歯根肉芽腫中で S100A4 が発現し，IL‒1βと TNF‒α発現に関与している可能性があることを報告している．IL‒1βと TNF‒αが炎症を増悪させる働
きをもつことは，広く知られている．S100A4 は，S100

0.1

ファミリーである S100A8 と S100A9 発現を上昇させる
0.0
0.0

S100A8/GAPDH

調 節 因 子 と し て 知 ら れ て い る20,21）． こ の こ と か ら，

p＝0.023

S100A8 と S100A9 は炎症の増悪に関与していることがReal‒time PCR and Pearson’s correlation coefficient analysis were performed to compare
the mRNA expression of S100A8 with S100A9in human periapical granulomas
A positive correlation between the expression of
S100A8 and S100A9（p＝0.023, R2＝0.16）was noted.

考えられる．しかしながら，単球の cell line である THP‒

Fig. 5

1 に S100A8 と S100A9 により刺激を行うと，IL‒10 の発現が上昇したとの報告がある22）．IL‒10 は抗炎症作用をもつ炎症性メディエーターであることから，S100A8 とS100A9 は歯根肉芽腫中で炎症を抑制する働きも併せもっている可能性もある．
以 上 の こ と か ら， 歯 根 肉 芽 腫 に お い て 発 現 し た

されている．Kangら は肺の上皮細胞を S100A8 で14,15）

15）

刺激することによって，NF‒κB を活性化することを明らかにした．さらに Gebhardt らは，TNF‒αと IL‒1 によって，S100A8 発現を強く促進することを報告した16）．
また，ヒト単球を Porphyromonas gingivalis から抽出し

S100A8 および S100A9 は炎症性メディエーターを介して，その病態に関与している可能性が示唆された．

結論

たリポ多糖，TNF‒αおよび IL‒1βを用いて刺激したと

S100A8 および S100A9 は歯根肉芽腫中で共発現してころ，S100A8 と S100A9 の発現が促進するとの報告があおり，その遺伝子発現も健常歯肉中よりも有意に高かっる17）．また，S100A8 と S100A9 は慢性炎症である関節リた．このことから，S100A8 と S100A9 は歯根肉芽腫中でウマチ中で発現し，その病態に関与していることが報告

発現すること，また慢性炎症性疾患における S100A8 おされている18）．S100A8 と S100A9 は感染性疾患や自己免よび S100A9 の機能の報告より，その成因に関与してい疫疾患中で Toll‒like receptor 4 との相互作用を介してる可能性が示唆された．

初期免疫反応に関与していることも知られている19）．このことから歯根肉芽腫中で炎症性メディエーターにより刺激された炎症性細胞から S100A8 と S100A9 が発現さ本論文に関して，開示すべき利益相反状態はない．

2022 年 6 月

歯根肉芽腫における S100A8 と S100A9 の局在

20313）Carle R, Karen V, Pascal R, Marieve T, Philippe AT.

文献1）Nair PN. On the causes of persistent apical periodontitis:a review. Int Endod J 2006; 39: 249‒281.
2）Nair PN. Apical periodontitis: a dynamic encounter
between root canal infection and host response. Periodontol 2000 1997; 13: 121‒148.
3）Lin L, Huang GTJ. Pathobiology of apical periodontitis.
Berman LH, Hargreaves KM, Cohen S, Burns RC.
Cohen’s pathways of the pulp. 11th ed. Mosby Elsevier:St. Louis; 2016. 630‒659.
4）Hama S, Takeichi O, Fujisaki K, Tanabe N, Maeno M,
Ochiai K. Nitric oxide attenuates vascular endothelial
cadherin-mediated vascular integrity in human chronic
inflammation. Clin Exp Immunol 2008; 154: 384‒390.
5）Hatori K, Takeichi O, Ogiso B, Maeno M, Komiyama K.
Midkine expression in human periapical granulomas. J
Endod 2011; 37: 781‒785.
6）Ishii K, Tamura T, Hatori K, Himi K, Nakamura T,
Toyama Y, Miyata T, Takeichi O. Elevated Foxo3a andFas-ligand expression in human periapical granulomas
as a potential treatment target. Oral Dis 2021; DOI:
10.1111/odi.14052［Online ahead of print］.
7）Moore BW. Chemistry and biology of two brain-specificproteins, s-100 and 14-3-2. Adv Exp Med Biol 1972; 32:
5‒7.
8）Pietzsch J. S100 proteins in health and disease. Amino
Acids 2011; 41: 755‒760.
9）Salama I, Malone PS, Mihaimeed F, Jones JL. A reviewof the S100 proteins in cancer. Eur J Surg Oncol 2008;
34: 357‒364.
10）Donato R, Cannon BR, Sorci G, Riuzzi F, Hsu K, Weber
DJ, Geczy CL. Functions of S100 proteins. Curr Mol
Med 2013; 13: 24‒57.
11）Sinha P, Okoro C, Foell D, Freeze HH, Ostrand-Rosenberg S, Srikrishna G. Proinflammatory S100 proteinsregulate the accumulation of myeloid-derived suppressor cells. J Immunol 2008; 181: 4666‒4675.
12）Tamura T, Miyata T, Hatori K, Himi K, Nakamura T,
Toyama Y, Takeichi O. Role of S100A4 in the pathogenesis of human periapical granulomas. In Vivo 2021; 35:
2099‒2106.

Proinflammatory activities of S100: proteins S100A8,
S100A9, and S100A8/A9 induce neutrophil chemotaxis
and adhesion. J Immunol 2003; 170: 3233‒3242.
14）Rahimi F, Hsu K, Endoh Y, Geczy CL. FGF-2, IL-1 beta
and TGF-beta regulate fibroblast expression of S100A8.
FEBS J 2005; 272: 2811‒2827.
15）Kang JH, Hwang SM, Chung IY. S100A8, S100A9 and
S100A12 activate airway epithelial cells to produce
MUC5AC via extracellular signal-regulated kinase andnuclear factor-κB pathways. Immunology 2015; 144: 79‒90.
16）Gebhardt C, Németh J, Angel P, Hess J. S100A8 and
S100A9 in inflammation and cancer. Biochem Pharmacol 2006; 72: 1622‒1631.
17）Kido J, Hayashi N, Kataoka M, Nagata T. Calprotectin
expression in human monocytes: induction by Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide, tumor necrosis factor-alpha, and interleukin-1 beta. J Periodontol 2005; 76:437‒442.
18）Wang Q, Chen W, Lin J. The role of calprotectin in rheumatoid arthritis. J Transl Int Med 2019; 7: 126‒131.
19）Ehrchen JM, Sunderkötter C, Foell D, Vogl T, Johannes
R. The endogenous Toll-like receptor 4 agonist S100A8/
S100A9（calprotectin）as innate amplifier of infection,
autoimmunity, and cancer. J Leukoc Biol 2009; 86: 557‒
566.
20）Donato R, Sorci G, Riuzzi F, Arcuri C, Bianchi R, Brozzi
F, Tubaro C, Giambanco I. S100B’s double life: intracellular regulator and extracellular signal. Biochim Biophys
Acta 2009; 1793: 1008‒1022.
21）Hansen MT, Forst B, Cremers N, Quagliata L, Ambartsumian N, Grum-Schwensen B, Klingelhöfer J, Abdul‒Al
A, Herrmann P, Osterland M, Stein U, Nielsen GH,
Schere PE, Lukanidin E, Sleeman JP, Grigorian M. A
link between inflammation and metastasis: serum amyloid A1 and A3 induce metastasis, and are targets ofmetastasis-inducing S100A4. Oncogene 2015; 34: 424‒
435.
22）Yang J, Anholts J, Kolbe U, Stegehuis-Kamp JA, Claa
FHJ, Eikmans M. Calcium-binding proteins S100A8 and
S100A9: Investigation of their immune regulatory effectin myeloid cells. Int J Mol Sci 2018; 19: 1833.

日

204

本

歯

科

保

存

学

雑

誌

第 65 巻第3号

Expression of S100A8/A9 in Human Periapical Granulomas
TAMURA Takahito1, MIYATA Taiki1, HIMI Kazuma1, HATORI Keisuke1,2,
NAKAMURA Takeshi1, SHIMIZU Kouhei1,2, SUZUKI Yusuke1,2, HASUIKE Akira2,3,
INOUE Seiya1, OKADA Masashi1, YABUHARA Yukiko1, SUGURO Hisashi1,2,
SHOUKAKU Taisuke1, YASUKAWA Takuya1,2, HAYASHI Makoto1,2 and TAKEICHI Osamu1,2
1

Department of Endodontics, Nihon University School of Dentistry2

Division of Advanced Dental Treatment, Dental Research Center, Nihon University School of Dentistry3

Department of Periodontology, Nihon University School of Dentistry

Abstract
Purpose: Calcium-binding proteins termed S100 proteins are involved in the pathogenesis of various inflammatory diseases. Among the S100 proteins, S100A8 and S100A9 expression is associated with the pathology
of chronic inflammatory diseases. In this study, the expression of two S100 proteins（S100A8 and S100A9）inhuman periapical granulomas was investigated.
Methods: Periapical lesions were excised from 44 patients during endodontic surgery or tooth extraction.
The samples were divided in half immediately after the periapical lesions were excised. One half of thedivided tissues was fixed with 10％ neutral-buffered formalin and paraffin sections were prepared. The otherhalf of the tissue samples was fixed with 4％ paraformaldehyde prepared in phosphate-buffered saline,
embedded in OCT compound, and frozen in dry-ice acetone. These samples were then used for RNA preparation. Five healthy gingival tissue samples were also prepared as described above. After 32 samples werediagnosed as periapical granulomas based on histological evaluation, paraffin sections were examined using
two-color immunofluorescent staining with anti-human S100A8 and anti-human S100A9 antibodies to search
for the expression of S100A8 and S100A9 in human periapical granulomas. In addition, a quantitative analysis
of S100A8 and S100A9 mRNA expression was performed using real-time PCR, using total RNA extracted
from frozen samples of periapical granulomas and gingival tissues. The assays were performed using Smart
Cycler, and gene expression levels were normalized by dividing the calculated values for the mRNA samples
by those of GAPDH mRNA. Healthy gingival tissues were used as a negative control. Real-time PCR data
were statistically analyzed using the Mann-Whitney U test. Significance was considered at p＜0.05.
Results: S100A8 positive inflammatory cells in periapical granulomas were stained with S100A9 Abs.
S100A8 and S100A9 mRNA were expressed in human periapical granulomas, and their expression levels inperiapical granulomas were significantly higher than in the negative control.
Conclusion: The results indicate the possibility that S100A8 and S100A9 expression could be associatedwith pathogenesis and growth of human periapical granulomas.
Key words：periapical granulomas, S100A8, S100A9

Corresponding author: Dr. HATORI, Department of Endodontics, Nihon University School of Dentistry, 1‒8‒13, Kanda-Surugadai, Chiyoda-ku, Tokyo 101‒8310, Japan
TEL: ＋81‒3‒3219‒8142, FAX: ＋81‒3‒3219‒8348, E-mail: hatori.keisuke@nihon-u.ac.jp
Received for Publication: March 4, 2022/Accepted for Publication: April 12, 2022

2022 年 6 月

205

原

著

日歯保存誌 65（3）：205～214，2022

ヒト歯髄培養細胞における lipopolysaccharide による
kallikrein‒related peptidase 8 産生と炎症反応
神

尾

直

人1,2

葉

山

深

井

譲

滋1,2

鈴

倉

持

光

成1

岡

朋

美1,2

渡

邊

昂

洋1,2

木

誠1,2

五

明

夏

子1

部

達1,2

松

島

1

日本大学松戸歯学部歯内療法学講座

2

日本大学松戸歯学部口腔科学研究所

潔1,2

抄録
目的：Kallikrein‒kinin カスケードは炎症時における血管透過性亢進や発痛に関与するが，組織カリクレインとも呼ばれる kallikrein‒related peptidase（KLK）は，そのカスケードを担うだけでなく，生体内でさまざまな機能を示す．また，グラム陰性菌の外膜成分である lipopolysaccharide（LPS）は起炎物質の一つとして知られており，歯髄でもまた炎症の誘発・進展に作用する．著者らは，歯髄で LPS が KLK8 の発現を促進し，さらに KLK8 が炎症促進的に作用するという仮定の下，ヒト歯髄培養細胞を用いて基礎的研究を行った．
材料と方法：抜去歯よりアウトグロースした細胞をヒト歯髄培養細胞とし，10％ FCS 添加α‒MEM にて培養した．培養上清中に LPS を添加後の KLK8 発現量の変化，もしくは KLK8 添加後の COX‒2 発現について，
RT‒PCR 法，Western blot 法にて検索した．細胞内の遊離カルシウムイオン濃度の測定は，蛍光カルシウムプ
ローブ Fura‒2 を用いた蛍光連続測定にて行い，また培養上清中に放出された PGE2量を enzyme immunoassay
kit にて検討した．

成績：ヒト歯髄培養細胞において，LPS は時間依存的，濃度依存的に KLK8 mRNA とタンパク質の発現を促進した．LPS による KLK8 タンパク質発現は ERK1/2，P38 MAPK 阻害剤で抑制された．また，KLK8 はPAR‒1 受容体非依存的に COX‒2 タンパク質発現および培養上清中 PGE2産生を促進し，その効果は tyrosine
kinase 阻害剤で抑制された．

結論：LPS は KLK8 の産生に関与し，kallikrein‒kinin カスケードに影響を及ぼすことで歯髄炎の進行に関わることが示唆された．また KLK8 は歯髄で kininogen 活性化だけでなく PAR‒1 非依存的，tyrosine kinase 依
存的に COX‒2 の産生，PGE2の分泌を促進する可能性が示唆された．
キーワード：lipopolysaccharide（LPS），kallikrein‒related peptidase（KLK），COX‒2，歯髄培養細胞

責任著者連絡先：神尾直人〒 271‒8587 千葉県松戸市栄町西 2‒870‒1 日本大学松戸歯学部歯内療法学講座
TEL：047‒360‒9369，FAX：047‒360‒9370，E-mail：kamio.naoto@nihon-u.ac.jp
受付：2022 年 2 月 2 日/受理：2022 年 4 月 22 日
DOI：10.11471/shikahozon.65.205

日

206

緒

本

歯

科

言

感染症では，微生物による宿主組織への侵入が多様な
炎症反応や免疫病理学的反応を引き起こす．歯髄におい

保

存

学

雑

誌

第 65 巻

第3号

る可能性を報告した．PGE2は炎症のケミカルメディ

エーターとして発痛や血管透過性亢進に関わることは知られているが，歯髄においては特に硬組織形成能のコントロールに関わる14）点で重要であり，その産生調節は歯髄の予後に大きく影響すると考えられる．

ても，齲蝕や外傷による生物学的・物理学的な侵襲によ

そこで本研究では，ヒト歯髄におけるグラム陰性菌のり歯髄炎が惹起される．感染した根管象牙質や壊死歯髄

LPS が KLK8 発現に与える影響と，KLK8 と歯髄炎の関からはグラム陰性菌が頻繁に検出され1），歯髄炎や根尖係について，特に PGE2の産生に与える影響に注目し，性歯周炎の進行に深く関与していると考えられている．

培養細胞を用いて基礎的な検討を行った．

なかでもグラム陰性菌の細胞壁成分である lipopolysac-

材料および方法

charide（LPS）は，宿主組織の破壊につながる生物学的活性を誘発する起炎物質の一つである．LPS の刺激は，歯髄培養細胞において Toll‒like receptor（TLR）4 を介

1 ．材

料

して mitogen‒activated protein kinase（MAPK）系を活

本実験では，牛胎児血清（fetal calf serum：FCS），

性化し，IL‒6，IL‒8 などの炎症性サイトカインを誘導すalpha minimum essential medium（α‒MEM），trypsin

ること2,3）や，血管内皮増殖因子（VEGF）を誘導して血は Invitrogen（USA），penicillin G は Meiji seika ファル

管透過性の亢進や炎症性細胞の集積を修飾すること4），

マ，LPS（Escherichia coli O111：B4），Cellytic M Cellまたは転写因子 nuclear factor‒κB の活性化による炎症

lysis reagent，U0126，SB239063，JNK inhibitor 2，性シグナルの誘発を促進する5）．このような免疫応答バ

genistein は Sigma‒ Aldrich（USA），KLK8 は富士フイ

ランスの破綻は，結果的に組織破壊へつながる．

ルム和光純薬，plasma kallikrein は R & D Systems

歯髄組織は周囲を硬組織に囲まれた閉鎖的な空間に存（USA），Fura‒2/AM は同仁化学研究所，PAR‒1 活性化

在するため，炎症の進行は強い臨床症状とともに組織圧剤は Tocris Bioscience（USA），抗 COX‒2 抗体は Santaの亢進，脈管系の圧迫による循環障害を引き起こし，最Cruz Biotech（USA），抗 KLK8 抗体は abcam（UK），

終的に壊死にいたることもある．生活歯に比べ失活歯の抗β‒actin 抗体，HRP 標識抗ウサギ IgG 抗体は Cell Sig-

生存率は確実に短いことが統計学的にも示され，また機

naling Techology（USA），RNeasy Mini Kit，One step

能歯数の減少が寿命にまで影響を与えること6）が明らか

RT‒PCR kit は QIAGEN（Germany），SDS sample bufferになっており，積極的な歯髄保存が試みられている．

は New England Biolabs（UK），Prostaglandin E 2

Kallikrein‒related peptidase（KLK）は，アミノ酸配列の相同性からヒトでは現在 15 種のサブタイプが報告されているトリプシン・キモトリプシン様セリンプロテ

enzyme immunoassay（EIA）kit は Cayman Chemical（USA）より購入したものを使用した．
2 ．歯髄細胞の培養

アーゼファミリーで，kallikrein‒kinin システム以外にも

日本大学松戸歯学部倫理委員会の承認（承認番号：

種々の組織で生理学的・病理学的機能を担うことが近年

EC20‒19‒19‒003‒2 号）を受け，日本大学松戸歯学部付報告されてきた7）．KLK8/neuropsin はマウス脳の海馬属病院に来院し，矯正治療により抜去された 10 歳代～20で神経可塑性や記憶形成に関与するプロテアーゼとして

歳代の男女の患者の健康な第三大臼歯から歯髄を無菌的同定 されたが，ヒトでは逆に脳での発現は画一的ではに取り出した．取り出した歯髄は Somerman らの方法15）なく9），ケラチノサイトでの細胞外基質の分解を担い，に基づき，PBS で十分に洗浄した後，約 2 mm 角に細切

皮膚における炎症性疾患とその創傷治癒に関与すること

し，組織片を 35 mm culture dish に静置後，10％ FCS，が報告されている ．詳細な機能や疾患との関連性につ

100μg/ml penicillin G を添加したα‒MEM を用いていて，口腔領域での報告はない．歯髄炎や壊死歯髄にお37℃，5％ CO2，95％気相下にて out growth させた．細

8）

10）

いて，エラスターゼやコラゲナーゼ活性の上昇がみられ11），他組織同様にプロテアーゼが炎症時の細胞外基質

胞がコンフルエントに達した時点で 0.05％ trypsin を用いて回収し，5～9 代継代培養したものを研究に用いた．

代謝に重要な役割を担っていることが考えられる．著者

3 ．半定量的 RT⊖PCR 法らはこれまでに，セリンプロテアーゼである plasmin12）

1 ）RNA の抽出や plasma kallikrein がそのタンパク質分解酵素として

上記の培養条件にてヒト歯髄培養細胞を 10 cm cul-の機能のみならず，protease activated receptor（PAR）sture dish で 1×106個/dish で播種し，LPS 作用 24 時間前を介して細胞内シグナル伝達を誘発し，cyclooxygenaseに 1％ FCS 含有α‒MEM に交換した．作用後の歯髄細胞（COX）‒2 の発現や prostaglandin（PG）E2産生に寄与すの total RNA を RNeasy Mini Kit を用いて抽出し，得ら

13）2022 年 6 月

ヒト歯髄における LPS による KLK 8 産生と炎症反応れた全 RNA の純度は 260 nm と 280 nm の比で測定した．
2 ）半定量的 RT‒PCR 法

207

shop Elements 10 にて数値化し，GAPDH との対比から有意差の検定を行い，グラフに示した．

得られた total RNA，DNA プライマー（KLK8 および

5 ．細胞内カルシウムイオン濃度（［Ca2＋］i）の測定

g l y c e r a l d e h y d e s‒3‒p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s e：

上記の培養条件にてヒト歯髄培養細胞を 10 cm cul-GAPDH），One step RT‒PCR kit を使用して RT‒PCR

ture dish で 1×106個/dish で播種し，2μM Fura‒2/AMを行った．すなわち total RNA（250 ng），5 pmol プライ

にてα‒MEM 中で 37℃，30 分間インキュベートした後，

マー，および 5×Reaction Mix（0.4 mM dNTP，2.5 mM

0.25％ trypsin，0.02％ EDTA にて細胞を dish から剝離

MgCl2含有），を混和した後，総量を 25μl とし，TaKaRa

し，Krebs‒Ringer‒Hepes 溶液（120 mM NaCl，5 mM

PCR Thermal Cycler Dice（タカラバイオ）にて cDNA
合成および増幅反応を行った．用いた DNA プライマー

KCl，1 mM MgSO4，0.96 mM NaH2PO4，0.2％ glucose，0.1％ BSA，1 mM CaCl2，20 mM HEPES buffer：pH7.4）の塩基配列は，KLK815） forward 5’‒ACA GAC CATに浮遊させた後，KLK8，plasma kallikrein，PAR‒1 活

GCC ATC TGT GA‒3’，reverse 5’‒ATG AGT GCC

性化剤を作用させた．Fura‒2 にてラベルした細胞内のAAC CCC ATT C‒3’，GAPDH 12） forward 5’‒ATC

蛍光測定は，日本分光 CAF‒110 型スペクトロフルオロ

ACC ATC TTC CAG GAG‒3’，reverse 5’‒ATG GAC

メーターにて 340 nm と 380 nm の二波長励起，500 nm

TGT GGT CAT GAG‒3’ とした．RT‒PCR の反応条件の蛍光測定にて行った．［Ca2＋］i の測定は Grynkiewicz

は，50℃ 30 分，95℃ 15 分を 1 cycle 行って cDNA を合らの方法17）により行った．

成し，次いで DNA 変性を 94℃ 30 秒，アニーリングを

6 ．PGE2量の検索

55℃ 30 秒，伸長反応を 72℃ 30 秒行い，これを 1 cycle

前述の培養条件にて，24 穴細胞培養プレートに 5×104

として 28 cycle 行った後，最終伸長反応を 72℃ 10 分間

個/dish で播種した．サンプルは KLK8 作用後の培養上行った．PCR 合成産物は 2％アガロースゲルで電気泳動

清とし，PGE2の分泌量を Prostaglandin E2 EIA kit を用を行った後，エチジウムブロマイド染色を行い紫外線照射下にて遺伝子増幅を確認した．得られたバンドパター

いて波長 450 nm における吸光度を測定した．
7 ．統計処理ンの一部は，濃度および面積を画像編集ソフト Adobe

得られた測定値は，平均値±標準誤差（SEM）で示し

Photoshop Elements 10 にて数値化し，GAPDH との対た．有意差の検定には，Tukey test を用い，有意水準 5％比から有意差の検定を行い，グラフに示した．

で検定した．

4 ．Western blot 法

結LPS，KLK8 作用後の歯髄培養細胞を 100μM Phenylmethylsulfonyl fluoride（PMSF），0.2 mM EGTA，2 mM
EDTA を含有する Cellytic M Cell lysis reagent にて溶解した．Bradford 法16）にて，タンパク質量の調整を施し

果

1 ．ヒト歯髄培養細胞における LPS による KLK8mRNA 発現た後 SDS sample buffer を加え 5 分間煮沸し，15,000 rpm

ヒト歯髄培養細胞に各種濃度の LPS を 3 時間作用させで 1 分間遠心分離した後の上清をサンプルとした．7.5％

ると，KLK8 mRNA 発現量は LPS の用量依存的に増加の SDS polyacrylamide gel electrophoresis（PAGE）用

し，1μg/ml で最大値に達し，それ以上の濃度では減少

ゲル（Mini‒PROTEAN TGX Gels，Bio‒Rad，USA）にした（Fig. 1A）．また，1μg/ml LPS を作用させると，て電気泳動後，転写装置（日本エイドー）を使用してニKLK8 mRNA 発現量は時間依存的に増加し，作用 3 時間

トロセルロース膜（Bio‒Rad）へ転写した．その後 skim

で最大値に達し，以後減少した（Fig. 1B）．

milk（Becton Dickinson，USA）にて室温で 30 分ブロッ
キングを行い，一次抗体を室温で 2 時間振盪反応させ，2 ．ヒト歯髄培養細胞における LPS による KLK8 タ
ンパク質発現二次抗体を室温で 90 分同様に反応させた．一次抗体とし

ヒト歯髄培養細胞に各種濃度の LPS を 6 時間作用させて抗 KLK8 抗体（1/1,000），抗 COX‒2 抗体（1/1,000），

ると，KLK8 タンパク質発現量は用量依存的に増加し，

抗β‒actin 抗体（1/3,000）を供した．二次抗体として，1μg/ml で最大値に達し，それ以上では減少した（Fig.

HRP 標識抗マウス IgG 抗体または HRP 標識抗ウサギ

1C）．また，1μg/ml LPS を作用させると，KLK8 タン

IgG 抗体を供した．ECL prime Western Blotting detec-

パク質発現量は時間依存的に増加し，作用 6 時間で最大

tion system（Cytiva，Switzerland）を用いて化学発光を値に達し，12 時間においてもタンパク質量は維持された行い，X 線フィルム（Hyperfilm ECL，Cytiva）上に感（Fig. 1D）．

光させて発現量を確認した．得られたバンドパターンの一部は，濃度および面積を画像編集ソフト Adobe Photo-

日

208
A

本

歯

科

保

存

学
B

KLK8

雑

第 65 巻

第3号

KLK8

GAPDH

GAPDH
0

0.01 0.11LPS（μg/ml）

10

0

1
3
Time
（h）

6

0

1
3
Time
（h）

6

1
3
6
Time
（h）

12

3.0
Relative Quantity（KLK8/GAPDH）

3.0
Relative Quantity（KLK8/GAPDH）

誌

2.0
1.0

0

0.01 0.1
1
LPS（μg/ml）

2.0
1.0

10

C

D
KLK8

KLK8

β－actinβ－actin00.01 0.11LPS（μg/ml）

100

Lipopolysaccharide-dependent expression of kallikrein-related peptidase 8 mRNA andkallikrein-related peptidase 8 protein（A）The cells were treated with LPS（0‒10μg/ml）
for 3 h.（B）The cells were stimulated with

Fig. 1or without 1μg/ml LPS for the indicated times.（A, B：Lower parts）Data are calculated as thequantity of KLK8 mRNA relative to that of GAPDH and normalized against the control（＊：p＜0.05 versus unstimulated cells）.（C）Cells were treated with LPS（0‒10μg/ml）for
6 h.（D）Cells were stimulated with or without 1μg/ml LPS for the indicated times. KLK8 inthe cell lysate was detected by Western blotting using anti-KLK8 antibody.

3 ．LPS に よ る KLK8 タ ン パ ク 質 発 現 に 対 す る
MAPK 阻害剤の効果
歯髄培養細胞における LPS による KLK8 の産生作用が明らかになったことから，次に KLK8 産生シグナルにおる KLK8 タンパク質発現は抑制されなかった（Fig. 2）．
4 ．ヒト歯髄培養細胞における KLK8 による COX⊖2タンパク質発現次に COX‒2 タンパク質発現に与える KLK8 の影響をける MAPK の関与について阻害剤を用いて検索した．

確認した．ヒト歯髄培養細胞に各種濃度の KLK8 を 3 時

その結果，1μg/ml LPS を 6 時間作用させて認められた間作用させると，COX‒2 タンパク質発現量は用量依存

KLK8 タンパク質発現の増強は，Extracellular Signal‒的に増加し，10 nM で最大値に達し，それ以上では減少

regulated Kinase（ERK）1/2 MAPK 阻害剤である U0126

した．また，10 nM KLK8 を作用させると，COX‒2 タン（10μM）および p38 MAPK 阻害剤である SB239063（10パク質発現量は時間依存的に増加し，作用 3 時間で最大μM）の存在下では有意に抑制された（Fig. 2）．一方，値に達し，以後減少した（Fig. 3）．

c‒Jun N‒terminal kinase（JNK）1/2/3 MAPK 阻害剤である JNK inhibitor 2（10μM）の存在下では，LPS によ2022 年 6 月

ヒト歯髄における LPS による KLK 8 産生と炎症反応
LPS（1μg/ml）

A

209

5．
［Ca2＋］i に与える KLK8，plasma kallikrein の効果
Kallikrein フ ァ ミ リ ー で あ る KLK8 が，plasma

KLK8kallikrein13）や KLK5，618）と同様に PAR‒1 受容体を介して［Ca2＋］i の上昇を引き起こす可能性について検索した．Fura‒2 を 負 荷 し た ヒ ト 歯 髄 培 養 細 胞 に 100μM

β－actinB

Relative KLK8
expression rate

06

3
J
in N
hi K
bi
to
r2

ると，30 秒後から［Ca2＋］i は上昇し，120 秒後にピー

SB
2

39

U
01

26

PAR‒1 活性化剤，1μg/ml plasma kallikrein を作用させクに達し，その後緩やかに減少した．一方，10 nM KLK8の作用では［Ca2＋］i に変化はみられなかった（Fig. 4）．
6 ．KLK8 に よ る COX⊖2 タ ン パ ク 質 発 現 お よ び

6.0

PGE2分泌に対する tyrosine kinase 阻害剤の効
果4.0

KLK8 が tyrosine kinase 型受容体を介してシグナル伝
達を担う報告がある19,20）．そこで，tyrosine kinase 阻害剤である genistein を用いて KLK8 による COX‒2 タンパ

2.0

ク質発現に対する効果を確認した．その結果，ヒト歯髄培養細胞における 10 nM KLK8（3 時間）による COX‒20
U0126
SB239063
JNK inhibitor 2
LPS

－
－
－
－

－
－
－
＋

＋
－
－
＋

－
＋
－
＋

タンパク質発現量の増加は，genistein の用量依存的に抑

－
－
＋
＋

制された（Fig. 5）．また，KLK8 の 6 時間の添加により培養上清中の PGE2量は有意に増加し，genistein 存在下

では PGE2分泌量の増加は抑制された（Table 1）．

Involvement of mitogen-activated protein
kinases in lipopolysaccharide-induced
kallikrein-related peptidase 8 expression inhuman dental pulp cells（A）Cells were pretreated with U0126（10μM）,
SB239063（10μM）, or JNK inhibitor 2（10μM）for 1 h,followed by LPS stimulation for 6 h. KLK8 in the celllysate was determined by Western blot analysis using
anti-KLK8 antibody.（B）Quantitation of the Western
blotting data of the KLK8 was normalized against theabsence of LPS and MAPK inhibitors.（＊：p＜0.05 verFig. 2

考

歯髄は局在的な特徴から，炎症が惹起されたときのその症状は激烈なものとなるのに加え，不可逆的な病態変化に進行しやすい組織である．したがって，痛みの除去やさらなる炎症の波及を防止する目的で歯髄除去療法を選択することが多い．炎症は免疫担当細胞の浸潤やサイ
トカインの発現を介して各種侵襲に対して発された生体の防御反応であり，炎症の適切なコントロールは組織の創傷治癒を促す．実際に，血管透過性亢進や発痛に関与

sus unstimulated cells；†：p＜0.05 versus cells stimulated with LPS in the absence of MAPK inhibitors）

する PGE2は低濃度では歯髄の硬組織形成能を促進す

A

B

COX－2

COX－2

β－actinβ－actin
0

0.1

1

KLK8
（nM）

10

100

察

0

0.5

1

3

6

Time（h）

Fig. 3 Kallikrein-related peptidase 8-induced cyclooxygenase-2 protein expression in human dental pulp cells
COX-2 in the lysate was detected using Western blotting.（A）Cells were treated with KLK8（0‒100 nM）
for 3 h.（B）Cells were stimulated with or without 10 nM KLK8 for the indicated times.

日

210

本

歯

科

［Ca2＋］
（nM）
i

300

保

存

学

雑

誌

第 65 巻KLK8（10nM）

A

200

plasmakallikrein
PAR－1
agonist

100

第3号

COX－2

β－actin

KLK8
0

60

120
180
Time
（s）

240

300

Fig. 4 Effect of protease-activated receptor-1 agonist,
plasma kallikrein, or kallikrein-related peptidase 8 on intracellular Ca2＋ concentration inhuman dental pulp cells
Ca2＋ mobilization in human dental pulp cells was
loaded with Fura-2 and stimulated with 100μM of
PAR-1 agonist, 1μg/ml of plasma kallikrein, or 10 nM
KLK8 at the time point marked with an arrow.

genisteinB8

Relative COX－2
expression rate

0

6

Kallikrein-related peptidase 8-induced
prostaglandin E2 secretion in the absenceor presence of tyrosine kinase antagonist（－）

Control
KLK8genistein（＋）

Prostaglnadin E2（pg/105 cells）
193.0±35.0

1,264.9±326.2＊

290.8±85.7

571.4±114.6†

After treatment with or without the tyrosine
kinase antagonist genistein（50μM）for 30 min,the human dental pulp cells were stimulated with
10 nM KLK8 for 6 h. PGE2 secreted into the con-ditioned medium was determined using an
enzyme immunoassay kit. These results are representative of four independent experiments.
（＊：p＜0.05 versus unstimulated cells；†：p＜0.05 versus cells stimulated with KLK8 in
the absence of genistein）

－

5μM

50μM

－
－

＋
－

＋
5μM

＋
50μM

4
2
0

Table 1－

KLK8
genistein

Kallikrein-related peptidase 8-induced
signaling in human dental pulp cells
mediated by phosphorylation of tyrosine（A）Inhibition of genistein（5μM and 50μM）
downregulated the COX-2 expression, as analyzed by Western blotting.（B）Quantitation of
the Western blotting data of COX-2 was normalized against the absence of KLK8 andgenistein.（†：p＜0.05 versus cells stimulatedwith KLK8 in the absence of genistein）
Fig. 5進み，膵臓23）や卵巣，子宮24）では癌の侵襲性との相関性から有用な癌細胞マーカーとして期待されている．炎症との関連については皮膚での研究が進んでおり，アトピー性皮膚炎患者のケラチノサイトでは，アレルギーと関連深い IL‒4 や IL‒13 が KLK7，8 の分泌量を促進25）

る ことや，メタロプロテアーゼである MMP‒3 によるし，細胞外フィブロネクチンの分解に関与することが報

細胞遊走の促進 や血管新生，修復象牙質の形成促進作

告されている26）．また，KLK8 が細胞増殖を促進させる用 など，プロテアーゼやプロスタノイドが歯髄を治癒と同時に細胞間接着を減弱させることが乾癬性皮膚疾患に導くと考察された報告も散見される．本研究では，細につながると考察された報告もある27）．LPS は歯髄培養

菌学的侵襲の一つである LPS により，セリンプロテアー細胞において TLR 4 を介して MAPK 系を活性化2）し，ゼの KLK8 がヒト歯髄培養細胞で発現を促進し，PGE2産炎 症 性 サ イ ト カ イ ン の 誘 導3）， 血 管 内 皮 増 殖 因 子

14）

21）

22）

生調節に関与する可能性を示した．

（VEGF）を誘導して血管透過性の亢進や炎症性細胞の集比較的近年報告されたヒト KLK8 は，アルツハイマー

積を修飾すること4），ラット歯髄でアラキドン酸代謝のとの関わりや種々の癌細胞での発現促進に関する研究が増加を誘引することで PGE2，PGI2の産生を増強させ

2022 年 6 月

ヒト歯髄における LPS による KLK 8 産生と炎症反応

211る28）ことなど，起炎物質としての報告も多い．本研究で分化促進に関する報告31）があり，炎症の進展と治癒とし示した，ヒト歯髄培養細胞における LPS による濃度依存ての石灰化機構の間には複雑な制御システムが関与して的・時間依存的な KLK8 の mRNA 発現量・タンパク質いると考えられる．本研究では，グラム陰性菌の侵害刺発 現 量 の 促 進 も ま た，ERK 1/2 MAPK お よ び p38

激により歯髄で KLK8 産生が促進され，さらに KLK8 が

MAPK による調節を介することが示唆された．Jurkat T

オートクリン/パラクリン様に細胞に作用し，COX‒2 の細胞では 5μg/ml LPS の作用による KLK ファミリーの発現や PGE2の産生が増強される可能性を示した．LPS

mRNA 発現の増強と，dexamethasone をはじめとしたはそれ単独でも MAPK33）や tyrosine kinase34）を介してステロイドホルモンによる発現調節が示されている ．

COX‒2 発現に直接的に寄与することも報告されており，また，p38 MAPK のリン酸化がケラチノサイトにおける本研究で示した KLK8 を介した作用はさらなる炎症の促

KLK5，7 のタンパク質発現調節に関与し，デスモソーム

進因子だけでなく二次的な調節機構である可能性も推察

代謝に影響を与えているとの報告 はあるが，KLK8 のされる．複雑で多彩な調節機構の結果として PGE2量は

29）

30）

報告はない．歯髄培養細胞において，LPS がそのシグナ

コントロールされ，炎症進展や石灰化へ寄与しているもル伝達過程で MAPK 系を介する報告のうち，標的タンのと理解すべきであろう．このように歯髄における炎症

パクの違いから JNK を介する報告 と介さない報告 が時のメカニズムを解明することが，歯髄炎の予防・治ある．本研究では前者同様に JNK 阻害剤では LPS 誘導

療・再生医療に向けた創薬に貢献すると考えられる．

31）

2）

性 KLK8 タンパク質発現は抑制されなかったが，ERK
1/2 MAPK および p38 MAPK を介して炎症性のシグナ
ルを惹起する点では共通であった．今後，それぞれの
MAPK のリン酸化を Western blot 法などで検討することで，詳細解明に近づくものと考えられる．
KLK8 受容体についての報告も，組織によって見解が分かれる．トリプシン・キモトリプシン様セリンプロテ
アーゼファミリーであるため，トリプシン受容体である
PAR‒1，2 を介する報告は心筋細胞20）でみられる．一方で，腎上皮 KNRK 細胞では KLK5，14 で PAR‒2 が活性化されるものの KLK8 では活性化されないことが本研究と同手技の［Ca2＋］i の研究で示されている ．歯髄に32）

お け る PARs の 発 現 に つ い て， わ れ わ れ は 恒 常 的 にPAR‒1 が 多 く 発 現 し て い る こ と を 示 し12），plasma

結論

ヒト歯髄培養組織において，LPS は KLK8 の mRNA
発現，タンパク質発現を促進すること，またその KLK8はヒト歯髄培養細胞で tyrosine のリン酸化を介してCOX‒2，PGE2産生に関与する可能性が示唆された．
本研究において開示すべき利益相反はない．
本研究の一部は 2015～2017 年度文部科学省研究補助金若手研究（B）研究課題番号（15K11131），2020～2022 年度文部科学省研究補助金基盤研究（C）研究課題番号（20K09979）の補助により行われた．

kallikrein によるシグナル伝達を介することも過去に示した13）．本研究においてもまた，ヒト歯髄培養細胞でPAR‒1 活性化剤と plasma kallikrein により［Ca2＋］i の上昇は認められたが，KLK8 では認められなかったことから，歯髄において細胞内カルシウムイオンの関わるシ
グナル伝達を誘発しないことが推察される．他の報告で
は，扁桃体では Ephrin B2 受容体19），心筋細胞では epidermal growth factor 受容体20）の関与が示されている．
本研究では上記の受容体が tyrosine kinase 受容体ファ
ミリーであることから，tyrosine kinase 阻害剤による影響を検討し，genistein により KLK8 による COX‒2 タン
パク質発現および PGE2の産生は抑制されることを明らかにした．そして少なくとも歯髄では KLK8 は PARs の活性化に関与しないこと，COX‒2・PGE2の産生に tyro-sine のリン酸化が関与することが示唆された．それぞれの受容体の特異的阻害剤や RNA 干渉を用いた解析により，詳細が明らかになると考えられる．
低濃度 PGE2や LPS シグナルが及ぼす象牙芽細胞への文

献1）Pekovic DD, Fillery ED. Identification of bacteria in
immunopathologic mechanisms of human dental pulp.
Oral Surg Oral Med Oral Pathol 1984; 57: 652‒661.
2）He W, Qu T, Yu Q, Wang Z, Lv H, Zhang J, Zhao X,
Wang P. LPS induces IL-8 expression through TLR4,
MyD88, NF-kappaB and MAPK pathways in humandental pulp stem cells. Int Endod J 2013; 46: 128‒136.
3）Hosoya S, Matsushima K. Stimulation of interleukin-1
beta production of human dental pulp cells by Porphyromonas endodontalis lipopolysaccharide. J Endod 1997;
23: 39‒42.
4）Matsushita K, Motani R, Sakuta T, Nagaoka S, Matsuyama T, Abeyama K, Maruyama H, Takada H, Torii
M. Lipopolysaccharide enhances the production of vascular endothelial growth factor by human pulp cells in

212

日

本

歯

科

culture. Infect Immun 1999; 67: 1633‒1639.
5）Chang J, Zhang C, Tani-Ishii N, Shi S, Wang CY. NF-kappaB activation in human dental pulp stem cells by TNF
and LPS. J Dent Res 2005; 84: 994‒998.
6）Fukai K, Takiguchi T, Ando Y, Aoyama H, Miyakawa Y,
Ito G, Inoue M, Sasaki H. Functional tooth number and15-year mortality in a cohort of community-residing
older people. Geriatr Gerontol Int 2007; 7: 341‒347.
7）Avgeris M, Scorilas A. Kallikrein-related peptidases（KLKs）as emerging therapeutic targets: focus on prostate cancer and skin pathologies. Expert Opin Ther
Targets 2016; 20: 801‒818.
8）Suzuki J, Yoshida S, Chen ZL, Momota Y, Kato K, Hirata
A, Shiosaka S. Ontogeny of neuropsin mRNA expression in the mouse brain. Neurosci Res 1995; 23: 345‒351.
9）Kishi T, Grass L, Soosaipillai A, Shimizu-Okabe C, Diamandis EP. Human kallikrein 8: immunoassay development and identification in tissue extracts and biologicalfluids. Clin Chem 2003; 49: 87‒96.
10）Shingaki K, Matsuzaki S, Taniguchi M, Kubo T, Fujiwara T, Kanazawa S, Yamamoto A, Tamura H, Maeda
T, Ooi K, Matsumoto K, Shiosaka S, Tohyama M.
Molecular mechanism of kallikrein-related peptidase 8/
neuropsin-induced hyperkeratosis in inflamed skin. Br J
Dermatol 2010; 163: 466‒475.
11）Morand MA, Schilder H, Blondin J, Stone PJ, Franzblau
C. Collagenolytic and elastinolytic activities from diseased human dental pulps. J Endod 1981; 7: 156‒160.
12）Kamio N, Hashizume H, Nakao S, Matsushima K, Sugiya
H. Plasmin is involved in inflammation via protease-activated receptor-1 activation in human dental pulp. Biochem Pharmacol 2008; 75: 1974‒1980.
13）Hayama T, Kamio N, Okabe T, Muromachi K, Matsushima K. Kallikrein promotes inflammation in humandental pulp cells via protease-activated receptor-1. J Cell
Biochem 2016; 117: 1522‒1528.
14）坂本真樹，塩沢 督，松島 潔，山崎宗与．ヒト歯髄細胞における Prostaglandin E2の硬組織形成促進作用．日
歯保存誌 2003；46：445‒450．
15）Somerman MJ, Archer SY, Imm GR, Foster RA. A comparative study of human periodontal ligament cells andgingival fibroblasts in vitro. J Dent Res 1988; 67: 66‒70.
16）Bradford MM. A rapid and sensitive method for thequantitation of microgram quantities of protein utilizing
the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 1976;
72: 248‒254.
17）Grynkiewicz G, Poenie M, Tsien RY. A new generationof Ca2＋ indicators with greatly improved fluorescence

properties. J Biol Chem 1985; 260: 3440‒3450.
18）Oikonomopoulou K, Hansen KK, Saifeddine M, Vergnolle
N, Tea I, Blaber M, Blaber SI, Scarisbrick I, Diamandis
EP, Hollenberg MD. Kallikrein-mediated cell signalling:

保

存

学

雑

誌

第 65 巻

第3号

targeting proteinase-activated receptors（PARs）. BiolChem 2006; 387: 817‒824.
19）Attwood BK, Bourgognon JM, Patel S, Mucha M, Schiavon E, Skrzypiec AE, Young KW, Shiosaka S, Korostynski M, Piechota M, Przewlocki R, Pawlak R. Neuropsin cleaves EphB2 in the amygdala to control anxiety.
Nature 2011; 473: 372‒375.
20）Cao B, Yu Q, Zhao W, Tang Z, Cong B, Du J, Lu J, Zhu
X, Ni X. Kallikrein-related peptidase 8 is expressed in
myocardium and induces cardiac hypertrophy. Sci Rep
2016; 7: 20024.
21）Muromachi K, Kamio N, Narita T, Annen-Kamio M,
Sugiya H, Matsushima K. MMP-3 provokes CTGF/
CCN2 production independently of protease activity anddependently on dynamin-related endocytosis, which contributes to human dental pulp cell migration. J Cell Biochem 2012; 113: 1348‒1358.
22）Zheng L, Amano K, Iohara K, Ito M, Imabayashi K, Into
T, Matsushita K, Nakamura H, Nakashima M. Matrix
metalloproteinase-3 accelerates wound healing following
dental pulp injury. Am J Pathol 2009; 175: 1905‒1914.
23）Hua Q, Li T, Liu Y, Shen X, Zhu X, Xu P. Upregulationof KLK8 predicts poor prognosis in pancreatic cancer.
Front Oncol 2021; 11: 624837.
24）Borgoño CA, Kishi T, Scorilas A, Harbeck N, Dorn J,
Schmalfeldt B, Schmitt M, Diamandis EP. Human
kallikrein 8 protein is a favorable prognostic marker inovarian cancer. Clin Cancer Res 2006; 12: 1487‒1493.
25）Morizane S, Yamasaki K, Kajita A, Ikeda K, Zhan M,
Aoyama Y, Gallo RL, Iwatsuki K. TH2 cytokines
increase kallikrein 7 expression and function in patientswith atopic dermatitis. J Allergy Clin Immunol 2012;
130: 259‒261.
26）Tani N, Matsumoto K, Ota I, Yoshida S, Takada Y, Shiosaka S, Matsuura N. Effects of fibronectin cleaved byneuropsin on cell adhesion and migration. Neurosci Res
2001; 39: 247‒251.
27）Kishibe M, Bando Y, Terayama R, Namikawa K, Takahashi H, Hashimoto Y, Ishida-Yamamoto A, Jiang YP,
Mitrovic B, Perez D, Iizuka H, Yoshida S. Kallikrein 8 is
involved in skin desquamation in cooperation with otherkallikreins. J Biol Chem 2007; 282: 5834‒5841.
28）Okiji T, Morita I, Sunada I, Murota S. Involvement ofarachidonic acid metabolites in increases in vascularpermeability in experimental dental pulpal inflammationin the rat. Arch Oral Biol 1989; 34: 523‒528.
29）Scarisbrick IA, Blaber SI, Tingling JT, Rodriguez M,
Blaber M, Christophi GP. Potential scope of action oftissue kallikreins in CNS immune-mediated disease. J
Neuroimmunol 2006; 178: 167‒176.
30）Choi H, Yang SH, Bae IH, Park JY, Kim HJ, Noh M, Lee
TR, Shin DW. Fructose 1, 6-diphosphate regulates des-2022 年 6 月

ヒト歯髄における LPS による KLK 8 産生と炎症反応

213

mosomal proteins and collagen fibres in human skin33）Hou GQ, Guo C, Song GH, Fang N, Fan WJ, Chen XD,

equivalents. Exp Dermatol 2013; 22: 847‒849.
31）He W, Wang Z, Luo Z, Yu Q, Jiang Y, Zhang Y, Zhou Z,

Yuan L, Wang ZQ. Lipopolysaccharide（LPS）promotes
osteoclast differentiation and activation by enhancing

Smith AJ, Cooper PR. LPS promote the odontoblastic
differentiation of human dental pulp stem cells via
MAPK signaling pathway. J Cell Physiol 2015; 230: 554‒
561.
32）Stefansson K, Brattsand M, Roosterman D, Kempkes C,
Bocheva G, Steinhoff M, Egelrud T. Activation of proteinase-activated receptor-2 by human kallikrein-related
peptidases. J Invest Dermatol 2008; 128: 18‒25.

the MAPK pathway and COX-2 expression in
RAW264.7 cells. Int J Mol Med 2013; 32: 503‒510.
34）McElroy SJ, Hobbs S, Kallen M, Tejera N, Rosen MJ,
Grishin A, Matta P, Schneider C, Upperman J, Ford H,
Polk DB, Weitkamp JH. Transactivation of EGFR by
LPS induces COX-2 expression in enterocytes. PLoS
One 2012; 7: e38373. doi: 10.1371/journal. pone. 0038373

日

214

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歯

科

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雑

誌

第 65 巻

第3号

Lipopolysaccharide-induced Kallikrein-related Peptidase 8 Production
and Inflammatory Response in Human Dental Pulp Cells
KAMIO Naoto1,2, HAYAMA Tomomi1,2, WATANABE Takahiro1,2,
FUKAI Joji1,2, SUZUKI Makoto1,2, GOMYO Natsuko1,
KURAMOCHI Kosei1, OKABE Tatsu1,2 and MATSUSHIMA Kiyoshi1,21Departments of Endodontics, Nihon University School of Dentistry at Matsudo

2

Research Institute of Oral Science, Nihon University School of Dentistry at Matsudo

Abstract
Purpose: The kallikrein-kinin cascade is involved in vascular permeability and pain during inflammation.
Kallikrein-related peptidase（KLK）, called tissue kallikrein, not only plays a role in the cascade, but also performs various functions within the tissue. Additionally, lipopolysaccharide（LPS）, an adventitial component ofgram-negative bacteria, is one of the pro-inflammatory substances, and it affects the induction and progression of inflammation in the dental pulp. This study was conducted using cultured human pulp cells, assumingthat LPS enhances the expression of KLK8 and promotes pulpitis.
Methods: Human dental pulp cells were cultured in 10％ fetal calf serum（FCS）-supplemented alpha-minimal essential medium（α-MEM）. When the cells were confluent, they were incubated in α-MEM containing
1％ FCS for 24 h, and then stimulated with LPS or KLK8. The expression of KLK8 mRNA was determinedby reverse transcription-polymerase chain reaction. KLK8 or cyclooxygenase（COX）-2 protein expression was
detected by Western blotting, and the prostaglandin（PG）E2 concentration in the culture medium was mea-

sured using an enzyme immunoassay kit. The intracellular Ca2＋ concentration was determined by fluorescence measurement using the fluorescent calcium probe Fura-2.

Results: In the human dental pulp cells, LPS promoted KLK8 mRNA expression and protein expression ina time- and concentration-dependent manner. KLK8 protein expression by LPS was suppressed by extracellular signal-regulated kinase 1/2 and P38 mitogen-activated protein kinase inhibitors. Furthermore, KLK8
promoted COX-2 protein expression and PGE2 secretion in a protease-activated receptor（PAR）-1-independent manner, but its effect was suppressed by a tyrosine kinase inhibitor.
Conclusion: This study suggests that LPS is involved in the production of KLK8 and in the kallikrein-kinincascade, thereby affecting the progression of pulpitis. Furthermore, KLK8 may promote the production of
COX-2 and the secretion of PGE2 in the dental pulp in a PAR-1-independent and tyrosine kinase-dependent
manner.
Key words: lipopolysaccharide（LPS）, kallikrein-related peptidase（KLK）, COX-2, dental pulp cells

Corresponding author: Dr. KAMIO, Department of Endodontics, Nihon University School of Dentistry at Matsudo, 870‒1,
Sakaecho, Nishi‒2, Matsudo, Chiba 271‒8587, Japan
TEL: ＋81‒47‒360‒9369, FAX: ＋81‒47‒360‒9370, E-mail: kamio.naoto@nihon-u.ac.jp
Received for Publication: February 2, 2022/Accepted for Publication: April 22, 2022

2022 年 6 月

215

原

著

日歯保存誌 65（3）：215～220，2022

活動性根面齲蝕様病巣に対するジェルタイプ象牙質知覚過敏治療材の進行停止効果

中

野

貴

文

川

村

和

章1

椎

谷

山

本

龍

生3

向

井

義

晴2

亨2

神奈川歯科大学大学院 社会歯科学分野
1

神奈川歯科大学健康科学講座口腔保健学分野

神奈川歯科大学歯科保存学講座保存修復学分野

2

3

神奈川歯科大学健康科学講座社会歯科学分野

抄録
目的：活動性根面齲蝕に類似した象牙質病巣を作製し，ジェルタイプのフッ化物含有知覚過敏治療材の塗布時間の違いによる病巣変化と進行停止効果について，TMR（Transverse microradiography）を用いて検討を行った．
材料と方法：フッ化物含有象牙質知覚過敏治療材として，MS コート Hys ブロックジェルを使用した．ウシ
歯根部象牙質に耐酸性バーニッシュを塗布し，2×3 mm の被験面を作製した．実験群は Baseline lesion 群，
Control 群，30 s‒Tr 群，5 min‒Tr 群の 4 群とした．4 群とも脱灰溶液（1.5 mM CaCl2，0.9 mM KH2PO4，50

mM 酢酸，0.2 ppm F，pH 5.0）を注いで 24 時間 37℃で基準病巣を作製した後，Baseline lesion 群はこの直後に TMR 分析を行った．他の 3 群は各処理を行った後に 96 時間脱灰を行い，TMR 分析を行った．被験面処理
方法は，Control 群では脱イオン水を 30 秒間，30 s‒Tr 群では Hys ブロックジェルを 30 秒間，5 min‒Tr 群では Hys ブロックジェルを 5 分間塗布した．すべての群の試料から薄切片を切り出した後，TMR 撮影してミネ
ラルプロファイルから脱灰深度とミネラル喪失量を測定した．統計分析は Kruskal‒Wallis 検定ならびに Steel‒
Dwass の多重比較検定により，有意水準 5％で実施した．
結果：5 min‒Tr 群のミネラルプロファイルは Control 群に比較し顕著に高いミネラル vol％を示し，特に表層部は約 45 vol％であった．各群の病巣深度は，Baseline lesion 群で 71.5μm，Control 群で 165.8μm，30 s‒Tr
群で 155.7μm，5 min‒Tr 群で 100.1μm であり，ミネラル喪失量は，Baseline lesion 群で 2,020.0 vol％×μm，Control 群で 4,727.5 vol％×μm，30 s‒Tr 群で 3,592.5 vol％×μm，5 min‒Tr 群で 2,102.5 vol％×μm であった．
病巣深度およびミネラル喪失量とも，5 min‒Tr 群は Control 群および 30 s‒Tr 群に比較し有意に小さな値を示した．
結論：表層の再石灰化が乏しい根面脱灰病巣に対し，MS コート Hys ブロックジェルを規定の塗布時間を超えて 5 分間処理することにより，効果的な病巣進行停止効果が認められた．
キーワード：根面齲蝕，象牙質知覚過敏，フッ化物，TMR

責任著者連絡先：川村和章〒 238‒8580 神奈川県横須賀市稲岡町 82 神奈川歯科大学健康科学講座口腔保健学分野
TEL & FAX：046‒822‒8862，E-mail：kawamura@kdu.ac.jp
受付：2022 年 3 月 14 日/受理：2022 年 4 月 26 日
DOI：10.11471/shikahozon.65.215

日

216

緒

本

歯

科

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雑

誌

第 65 巻第3号

灰進行の停止効果について検討を行った．

言材料および方法

わが国では，急速に高齢化が進んでいることから疾病
構造が変化している．高齢者は身体機能が低下するため

1 ．実験材料に，身体的フレイルやオーラルフレイルを自覚する割合

本実験では，歯科用知覚過敏抑制材料の MS コート

が加齢に伴い段階的に増加し，ADL（Activities of Daily

Hys ブロックジェル（サンメディカル，以下，Hys ブロッ

Living：日常生活動作）は低下する1,2）．さらに，高齢者クジェル）を使用した（Table 1）．

は唾液流出量減少などの生理的機能の低下ならびに手指

2 ．試料作製の運動機能や感覚機能の低下によりプラークコントロー

凍結保存したウシ下顎中切歯 24 本を歯頸部直下ならルも困難になることから，根面齲蝕の発症や歯周疾患をびに 5 mm 根尖側の位置を低速切断機（Isomet，Buehler，

重篤化させやすい状況にある．自力で日常生活を行うこUSA）で切断し，ドーナツ状の試料を作製後，ダイヤモとが困難となり，なんらかの介護を要する状態とされる

ンドワイヤー式精密切断機（Well 3242，Walter Ebner，

要介護または要支援の認定を受けた人の推移は平成 19

Germany）で 2 分割するとともに，平坦な試験面を作製

年度末では約 437.8 万人，平成 28 年度末では約 618.7 万するために歯根表面を 1 層削除し，48 個の試料を作製し人と約 180.9 万人増加している ．また，介護施設を利用た．平坦な試験面を 2,000 番の耐水研磨紙（Fujistar

する高齢者の 9 割以上が根面齲蝕を経験しており，歯磨剤

DCCS，三共理化学）にて研磨し，脱イオン水中で 5 分

4）の非使用や歯周病の罹患との関連も明らかになっている ．

間超音波洗浄（US‒2R US Cleaner，AS ONE）を行っ

エナメル質と比較して象牙質やセメント質は，ハイドた．その後，耐酸性バーニッシュを塗布して約 2×3 mm

ロキシアパタイトの割合が少なく耐酸性が低いため脱灰の被験面を作製し，6 個ずつの試料を 8 つの容器にスが進行しやすい5）ことや，歯冠部齲蝕と比較して根面齲

ティッキーワックスにて固定した．

3）

蝕は視診により確認することが困難であることから発見が遅れやすい．また，高齢者の根面齲蝕と歯冠部齲蝕の関連についての研究6）では，歯冠部齲蝕歯数は根面齲蝕

3 ．脱灰および処理
1 容器当たり 60 ml の脱灰溶液（1.5 mM CaCl2，0.9 mM

10,11）
KH2PO4，50 mM 酢酸，0.2 ppm F，pH 5.0）に試料をの有無に関連があることが示されており，根面齲蝕の発浸漬させ，37℃の保温機に静置して，4 群の前脱灰を生部位や進行状態によっては歯冠全体の処置が必要とな行った．24 時間経過後，脱イオン水にて 5 秒間の洗浄をる可能性もある．さらには，高齢期の全身の健康状態が行い，エアーにて乾燥，基準病巣群とした（Baseline

歯の喪失に影響を及ぼしていることも示唆されていlesion 群）．Control 群は，前脱灰後，脱イオン水にて 5る ．これらに対して，フッ化物含有歯磨剤を使用した

秒間の洗浄を行い，エアーにて乾燥後，被験面に脱イオ

日常的なブラッシングやフッ化物洗口により，初期根面

ン水を 30 秒間塗布，エアー乾燥後，再び 60 ml の脱灰溶

7）齲蝕を非侵襲的に治療することも可能とされている

8）

液に浸漬し，37℃の保温機にて 96 時間の脱灰を行った．

が，口腔清掃を十分に行えない要介護者や高齢者にはよ

30 s‒Tr 群は，前脱灰後，脱イオン水にて 5 秒間の洗浄

り積極的かつ簡便な手法によるアプローチが求められてを行い，エアーにて乾燥後，被験面に Hys ブロックジェ

いる．

ルを塗布し，30 秒間静置した．その後，脱イオン水で 5

根面齲蝕は，臨床的には病変部の硬さを指標として

秒間の洗浄を行い，エアー乾燥後，再び 60 ml の脱灰溶

soft lesion（活動性），leathery lesion（活動性または非活液に浸漬，37℃の保温機にて 96 時間の脱灰を行った．5

動性）および hard lesion（非活動性）に分類される9）．

min‒Tr 群は，前脱灰後，脱イオン水にて 5 秒間の洗浄

これまでに，象牙質知覚過敏治療材を歯根象牙質面に塗を行い，エアー乾燥後，被験面に Hys ブロックジェルを布し，その後脱灰液に浸漬することで TMR（Transverse

塗布し，5 分間静置した．その後，30 s‒Tr 群同様に脱イ

microradiography）による脱灰抑制効果を検討した論オン水で 5 秒間の洗浄を行い，エアー乾燥後，再び 60 ml

文10）は存在するが，活動性様の根面齲蝕に適用し進行停の脱灰溶液に浸漬，37℃の保温機にて 96 時間の脱灰を止効果を検討した報告はない．本研究では，根面齲蝕の行った，なお，各群の試料数は 12 とした．

分類のなかでも活動性根面齲蝕に類似した表層のミネラ
ル密度が低い病巣を作製し，塗布が容易で擦り込み操作

4 ．TMR 撮影および病巣深度とミネラル喪失量の測定も不要なジェルタイプの象牙質知覚過敏治療材をメー

各群の実験期間終了後，ダイヤモンドワイヤー式精密カー指定の塗布時間ならびにそれより長い塗布時間を設

切断機で厚さ約 300μm の薄切片を各試料から 2 枚ずつ，定することで，塗布時間の違いによる病巣内の変化と脱歯軸に対して垂直方向に切り出した．各切片は High

2022 年 6 月

活動性根面齲蝕様病巣に対するジェルタイプ象牙質知覚過敏治療材の進行停止効果
Table 1

217

Material used

Material

IngredientspH

Lot number

Manufacturer

MS Coat Hys Block Gel

methyl methacrylate-co-p-styrene sulfonic acid（MS）polymer
1％ oxalic acidsodium fluoride（900 ppmF）

2.0

FV012

Sun Medical

acidity regulator（potassium phosphate salt）, thickener
water, others

Baseline lesion

Control

Mineral content（vol %）

60
50
40
30
20

Baseline lesion
Control

10

30 s－Tr
5 min－Tr

0

0

50

100

150

200 250 300
Depth
（μm）

350

400

450

Fig. 2 Average mineral profiles
5 min-Tr showed higher mineral density at both surface layer and lesion body as compared with the Control and 30 s-Tr.

30 s－Tr

5 min－Tr

Fig. 1

Representative TMR images

5 min-Tr showed most intense radiopacity as compared with the Control and 30 s-Tr.

resolution X‒ray glass plate（コニカミノルタ）を用いて，発生源に Cu およびフィルターに Ni を使用した顕微

5 ．統計分析
統 計 分 析 は，Kruskal‒Wallis 検 定 な ら び に Steel‒
Dwass の多重比較検定により有意水準 5％として実施した（EZR version 1.35 software，自治医科大学附属さい
15）
たま医療センター）．

結果

エックス線装置（PW3830，Spectris，UK）で，13 段階

各群の代表的 TMR 像を Fig. 1 に，平均ミネラルプロのステップウェッジとともに TMR 撮影（管電圧 35 kV，ファイルを Fig. 2 に示す．前脱灰を行ったのみの Base-

管電流 15 mA，焦点‒試験片間距離 570 mm，照射時間

line lesion 群の TMR 像ならびにミネラルプロファイル

15 分）を行った．なお TMR 撮影は，試験片の乾燥を防は， 表 層 が 確 認 で き ず 活 動 性 の 根 面 齲 蝕 で あ る soft

止するために 13 段階のアルミステップウェッジが組み

lesion に類似した状態であった．Control 群の TMR 像は込まれたホルダーに脱イオン水とともに封入して行っ脱灰病巣幅の拡大が認められ，ミネラルプロファイルでた12）．現像，定着，水洗，乾燥後，セットアップされたは深度約 20μm から 200μm の範囲で脱灰が進行し，ミmicroscope‒videocamera‒microcomputer システム，おネラル密度が 10 vol％程度の表層および 8 vol％程度の病よびミネラル量分析ソフト（TMR2006・TMR2012，

巣体部が確認された．30 s‒Tr 群と 5 min‒Tr 群のミネラ

Inspektor Research System，Netherlands）を使用してルプロファイルの比較では，前者が表層約 30 vol％，病

ミネラルプロファイルを作成，ミネラル喪失量（IML：

巣体部 15 vol％程にまでミネラル密度が下がっているの

vol％×μm）を測定した．

10,13,14）に対し，後者では，表層は約 45 vol％，病巣体部も約 40

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科

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学

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第 65 巻第3号

Lesion depth（LD）

Table 3Integrated mineral loss（IML）

Group

LD（μm）Group

IML（vol ％×μm）

Baseline lesion
Control
30 s-Tr71.5（63.3‒74.4）
165.8（124.5‒182.0）

2,020.0（1,841.3‒2,100.0）
4,727.5（3,895.0‒5,318.8）

155.7（138.2‒160.2）

Baseline lesion
Control
30 s-Tr

5 min-Tr

100.1（80.8‒113.0）

5 min-Tr

2,102.5（1,798.8‒2,333.8）

Table 2

3,592.5（3,348.8‒3,882.5）

The results are expressed as medians
and interquartile ranges.
Brackets represent significant differences
within the same column（p＜0.05）. n＝12

The results are expressed as medians andinterquartile ranges.
Brackets represent significant differences
within the same column（p＜0.05）. n＝12

vol％で維持されていた．また，Control 群に比較し 30 s‒

おいて要介護や看護状態にある高齢者などは，日常的なTr 群の TMR 像では不透過層が明瞭となり，5 min‒Tr

セルフケアを含めた口腔ケアが困難となる．また慢性的群の TMR 像では不透過性がさらに増加した表層の存在に進行する根面齲蝕に対しては，発見が遅れ修復処置がが確認された．各群の病巣深度（μm）は，Control 群

困難となる可能性がある．本研究では，歯根面への塗布（165.8）と 30 s‒Tr 群（155.7）は Baseline lesion 群（71.5）が容易なジェルタイプの象牙質知覚過敏材を活動性の根に比較し有意に大きな値を示した（ともに p＝0.0002）

面齲蝕を模した歯根面に塗布し，メーカー指定の塗布時が，Baseline lesion 群と 5 min‒Tr 群（100.1）との間に間を変更することによる病巣状態の変化を TMR で評価は有意差は認められなかった（p＝0.160）．また，5 min‒

した．

Tr 群は，Control 群と 30 s‒Tr 群に比較して有意に小さNyvad らが活動性齲蝕と判断した根面齲蝕の TMR 像

な値を示した（p＝0.005，0.001）（Table 2）．ミネラル喪では，歯根表面の再石灰化が乏しく不透過性の表層がほ失量（vol％×μm）の比較では，Control 群（4,727.5）とぼ認められない20,21）．今回の研究においても，基準病巣30 s‒Tr 群（3,592.5）は Baseline lesion 群（2,020.0）に比では表層におけるミネラル密度の高まりが認められない

較して有意に大きな値を示した（ともに p＝0.0002）が，活動性病巣に類似した根面齲蝕病巣が再現できたものと

5 min‒Tr 群（2,102.5）との間に有意差は認められなかっ考えられた．その後，脱イオン水で処理して再度脱灰をた（p＝0.939）．また，5 min‒Tr 群は Control 群および行った Control 群ならびにメーカー指定の 30 秒処理群

30 s‒Tr 群に比較して有意に小さな値を示し（ともに p＝（30 s‒Tr）では，基準病巣に比較して有意に大きな病巣

0.0002），30 s‒Tr 群も Control 群に比較して有意に小さ

深度およびミネラル喪失量を示し，病巣の進行が認めらな値を示した（p＝0.009）（Table 3）．

れたのに対し，5 分処理群（5 min‒Tr）ではミネラル喪考察

根面齲蝕は高齢者において罹患率が増加することが報

失量および病巣深度ともに基準病巣と比較して有意な差はなく，効果的な進行抑制効果が示された．今回使用した MS コート Hys ブロックジェルには，MS コート F と同様に NaF を含有する MS（methacrylate‒co‒p‒styrene，発症部位の解剖学的形態が治療を困

sulfonic acid）ポリマーならびにシュウ酸カリウムが含ま難にすることからも進行を積極的に防止することが重要れている．フッ化物濃度は MS コートの約 1/3 であるが，告されており16,17）

である．Nyvad ら は頰側歯根面の活動性齲蝕を対象に18）した臨床実験において，フッ化物配合歯磨剤の毎日の使

歯根面に塗布することで NaF が歯質と反応して CaF2が形成され，その後の酸侵襲により CaF2より溶け出た用とともに NaF 溶液の塗布を併用することで 2 カ月から

フッ化物イオン，カルシウムイオンならびに象牙質から半年後にはすべての齲蝕が非活動性に転じたと報告して溶出したカルシウムイオン，リン酸イオンが相まって，いる．また，う蝕治療ガイドライン第 3 版根面う蝕の診

フルオロアパタイトの形成がもたらされたと考えられ療ガイドライン19）には，「フッ化物配合歯磨剤（1,100～

る．今回の研究では，塗布時間をメーカー指定の 30 秒か

1,400 ppm F）にフッ化物配合洗口剤（250～900 ppm F）

ら 10 倍の 5 分に延長したことで形成される CaF2の量がを毎日併用することにより，永久歯の活動性根面う蝕が増加し，その後のフルオロアパタイトの形成量も増加し回復する（硬くなり，非活動性になる）．よって永久歯のて優れた耐酸性効果が獲得されたと考えられた．本材料

活動性根面う蝕の回復（reversals）に，本法を提案する」

はすでに効果的な細管封鎖性ならびに象牙質知覚過敏抑と記載されている．この指針は臨床家にとって，きわめ

制効果が確認されており22,23），本ポリマーならびに唾液

て有用な情報であると考える．その一方で，日常生活にや歯質のカルシウムと反応して形成されたシュウ酸カル

2022 年 6 月

活動性根面齲蝕様病巣に対するジェルタイプ象牙質知覚過敏治療材の進行停止効果

シウムが象牙細管を物理的に封鎖すると考えられている．今回の結果から，本材を塗布した歯根面は，フッ化
ジアンミン銀のように歯質を黒変させることなく，塗布時間を延長することで齲蝕進行抑制ならびに象牙質知覚
過敏抑制の両方の効果を兼ね備えた有効な治療法となる可能性が示された．

結論

表層の再石灰化が乏しい活動性根面齲蝕様病巣に，フッ化物含有ジェルタイプ知覚過敏治療材である MS
コート Hys ブロックジェルをメーカー指定の塗布時間を超えて 5 分間処理することにより，効果的な病巣進行停止効果が認められた．
本研究の遂行において開示すべき一切の利益相反はない．

文献1）檜原 司，後藤崇晴，柳沢志津子，中道敦子，市川哲雄．
各年齢階層におけるオーラルフレイルと身体的フレイルに関連する兆候―アンケートによる実態調査―．老年歯学 2017；32：33‒47．

2）厚生労働省．介護・高齢者福祉，第 5 期介護保険事業（支援）計画の策定準備及び地域支援事業の見直しに係る会
議，日常生活圏域ニーズ調査モデル事業・結果報告書（全体版）．https://www.mhlw.go.jp/topics/kaigo/dl/
tp101027-01c.pdf（2022 年 3 月 1 日アクセス）
3）内閣府．令和元年版高齢社会白書，高齢期の暮らしの動向，2 健康・福祉．https://www8.cao.go.jp/kourei/
whitepaper/w-2019/zenbun/pdf/1s2s_02_01.pdf（2021 年
12 月 28 日アクセス）4）持田悠貴，山本龍生，川村和章，宋 文群，渕田慎也，
中野貴文，川田和重，榎田中外，佐塚仁一郎，竹内 智，
荒川浩久．介護老人保健施設利用高齢者における根面う蝕の有病状況と関連要因．神奈川歯学 2019；12：85‒91．
5）守屋信吾，安藤雄一，三浦宏子．日本人の口腔状態の推移 ～「8020」 達 成 度 の 推 移 と 見 通 し． 保 健 医 療 科 学

2011；60：379‒386．
6）高野尚子，葭原明弘，安藤雄一，小川祐司，廣富敏伸，
山賀孝之，花田信弘，宮﨑秀夫．高齢者の根面う蝕の有病状況と歯冠う蝕との関連．口腔衛生会誌 2003；53：592‒599．
7）清田義和，葭原明宏，安藤雄一，宮﨑秀夫．70 歳高齢者の歯の喪失リスク要因に関する研究．口腔衛生会誌
2002；52：663‒671．
8）向井義晴．象牙質再石灰化研究と臨床戦略．日歯保存誌
2021；64：303‒307．
9）宮崎真至．硬組織疾患，歯の発育異常および関連疾患，

1

齲蝕．千田

彰，宮崎真至，林219
美加子，向井義晴，

斎藤隆史．保存修復学．7 版．医歯薬出版：東京；2019．
14‒27．
10）Kawamura K, Kunimatsu Y, Nakano T, Hasegawa H,
Arakawa H, Mukai Y. Anti-demineralization effect ofdesensitizer containing copolymer and sodium fluoride
on root dentin―a transverse microradiographic study.
Acta Biomater Odontol Scand 2019; 5: 38‒43.
11）Shiiya T, Tomiyama K, Iizuka J, Hasegawa H, Kuramochi E, Fujino F, Ohashi K, Nihei T, Teranaka T, Mukai
Y. Effect of the coating material on root dentin remineralization in vitro. Am J Dent 2014; 27: 258‒262.
12）Van Strijp AJP, Buijs MJ, Ten Cate JM. Contact microradiography of dentine under wet conditions to prevent
lesion shrinkage. Caries Res 1995; 29: 107‒110.
13）長谷川晴彦，椎谷 亨，見明康雄，日髙恒輝，國松雄一，

石澤将人，二瓶智太郎，向井義晴．亜鉛ガラス含有グラ
スアイオノマーセメントによる歯根象牙質脱灰抑制能．
日歯保存誌 2018；61：361‒367．
14）Ogihara T, Tomiyama K, Iizuka J, Ishizawa M, Shiiya M,
Mukai Y. Effect of desensitizer containing fluoroaluminocalciumsilicate glass nanoparticles on remineralization of root dentin subsurface lesions in vitro. Dent
Mater J 2021; 40: 1027‒1032.
15）Kanda Y. Investigation of the freely available easy-to-use
software‘EZR’for medical statistics. Bone Marrow
Transplant 2013; 48: 452‒458.
16）Burt BA, Ismail AI, Eklund SA. Root caries in an optimally fluoridated and a high-fluoride community. J Dent
Res 1986; 65: 1154‒1158.
17）Imazato S, Ikebe K, Nokubi T, Ebisu S, Walls AWG.
Prevalence of root caries in a selected population ofolder adults in Japan. J Oral Rehabil 2006; 33: 137‒143.
18）Nyvad B, Fejerskov O. Active root surface caries converted into inactive caries as a response to oral hygiene.
Scand J Dent Res 1986; 94: 281‒284.
19）日本歯科保存学会．う蝕治療ガイドライン 第 3 版．永末書店：東京；2020．15‒23．
20）Nyvad B, Ten Cate JM, Fejerskov O. Arrest of root surface caries in situ. J Dent Res 1997; 76: 1845‒1853.
21）Nyvad B, Fejerskov O. Active and inactive root surfacecaries―structural entities? Thylstrup A, Leach SA,
Qvist V. Dentine and dentine reactions in the oral cavity. IRL Press: Oxford; 1987. 165‒179.
22）鈴木司郎，山口博康．
「MS コート Hys ブロック® ジェル」の臨床的検証．歯界展望 2016；128：776‒785．
23）Kameyama A, Haruyama A, Nakazawa Y, Furusawa M,
Muramatsu T. Micrographic and spectroscopic analysesof the application of methyl methacrylate-p-styrene sulfonic acid copolymer-based desensitizing agents tobovine dentin. Asian Pac J Dent 2019, 19: 51‒57.

日

220

本

歯

科

保

存

学

雑

誌

第 65 巻

第3号

Effect of Gel-type Desensitizer Containing Copolymer and Sodium Fluoride
on Active Root Caries-like Lesions in Vitro
NAKANO Takafumi, KAWAMURA Kazuaki1, SHIIYA Toru2,
YAMAMOTO Tatsuo3 and MUKAI Yoshiharu2
Division of Dental Sociology, Graduate School of Dentistry, Kanagawa Dental University
1

Division of Oral Health, Kanagawa Dental University

2

Division of Restorative Dentistry, Kanagawa Dental University
3

Division of Dental Sociology, Kanagawa Dental University

Abstract
Purpose: This study used transverse microradiography（TMR）to investigate changes in active root caries-like lesions following the application of a gel-type desensitizer containing copolymer and sodium fluoride
with different application times.
Materials and Methods: Acid-resistant varnish was applied to the surface of 48 bovine root dentin samples,
except over 2×3 mm test areas. These samples were immersed in demineralization solution（1.5 mM CaCl2,
0.9 mM KH2PO4, 50 mM acetic acid, 0.2 ppmF, pH 5.0）at 37℃ for 24 h to make baseline lesions. The samples
in the Control group were immersed in deionized water for 30 s, and those in the 30 s-Tr and 5 min-Tr
groups were treated with a MS Coat Hys Block Gel containing fluoride for 30 s and 5 min, respectively. Then,the samples of these three groups were further immersed in the demineralization solution for 96 h at 37℃.
Thin sections from samples in all groups were analyzed by TMR for demineralization depth and mineral loss.
Statistical analysis was performed using the Kruskal-Wallis test and the Steel-Dwass multiple comparison
test at a significance level of 5％.
Results: The mineral profile of the 5 min-Tr group showed a remarkably higher mineral density comparedto the Control and 30 s-Tr groups, and particularly the surface layer vol％ of the 5 min-Tr group was about
45％. The lesion depth（μm）of each group was 71.5 in the Baseline lesion group, 165.8 in the Control group,
155.7 in the 30 s-Tr group, and 100.1 in the 5 min-Tr group, and the depth of the 5 min-Tr group was significantly shallower than that of the Control and 30 s-Tr groups. Mineral loss（vol％×μm）was 2,020.0 in the
Baseline lesion group, 4,727.5 in the Control group, 3,592.5 in the 30 s-Tr group, and 2,102.5 in the 5 min-Tr
group, and mineral loss of the 5 min-Tr group was significantly smaller than that of the Control and 30 s-Trgroups.
Conclusion: Five-minute treatment, which is longer than the manufacturer’s recommendation of 30 s, by
MS Coat Hys Block Gel effectively stopped the progression of active root caries-like lesions.
Key words: root caries, dentin hypersensitivity, fluoride, TMR

Corresponding author: Dr. KAWAMURA, Department of Oral Health, Kanagawa Dental University, 82, Inaoka-cho, Yokosuka,
Kanagawa 238‒8580, Japan
TEL & FAX: ＋81‒46‒822‒8862, E-mail: kawamura@kdu.ac.jp
Received for Publication: March 14, 2022/Accepted for Publication: April 26, 2022

2022 年 6 月

221

日 本 歯 科 保 存 学 雑 誌 投 稿 規 程
1．この学術雑誌は，研究成果の論文発表による発信を通して，歯科保存学（保存修復学，歯内療法学，歯周病学）の発展に寄与することを目的としている．そのため，歯科保存学の基礎，臨床，教育ならびに歯科保存学を基盤とした歯科医学全般に関する論文を掲載する．
2．論文の種類は，原著論文（独創性がある研究の成果に関するもの），総説（歯科保存学に関する争点を整理して今後の方向性を示唆しようとするもの，あるいは既発表論文の内容をまとめて新たな概念を提唱しようとするもの），ミニレビュー（歯科保存学に関する最近のトピックを総説形式で簡潔にまとめたもので，各賞の受賞論文を含む），症例・臨床報告（歯科保存学領域から広く歯科医療の実践と発展に有用となる臨床の記録）などの 4 種に分類する．なお，総説とミニレビューは，編集委員会からの依頼によるものと投稿によるものとに分ける．
3．原著論文および症例・臨床報告の内容は，過去に他誌に掲載されたり，現在投稿中あるいは掲載予定でないものに限る．
4．論文の採否は，査読を経て決定する（編集委員会からの依頼によるものを除く）．
5．投稿原稿は，日本語または英語で簡潔に記述されたものとする．
6．原著論文の形式は，原則として和文（英文）抄録，緒言，材料および方法，結果あるいは成績，考察，結論，文献，英文（和文）抄録の順に記載する．原著論文以外の論文も，原則としてこれに準ずる．
7．本誌の発行は，原則として 2 月，4 月，6 月，8 月，10 月および 12 月に行う．12 月には英文誌“Operative Dentistry, Endodontology and Periodontology”として発行する．また，必要があれば増刊する．
8．筆頭著者が会員の場合のみ，一定額の掲載料補助を行う．また，筆頭著者が会員であるが共著者に非会員が含まれる場合については，掲載料補助は行われるが非会員の人数に応じて別途負担金を求める．なお，図表・写真な
どの実費，発送および別刷にかかわる費用，J‒STAGE 登載用データ作成代は，著者負担とする．ただし，編集委員会からの依頼によるものは除くものとする．
9．論文投稿票は，最新のものを用い，投稿原稿に必ず添付する．
10．受付日は，投稿原稿が学会事務局へ到着した日付とする．また，受理日は，査読担当者から採択可と判定された日付とする．
11．掲載順序は，受理順とする．なお，採択論文の掲載証明は希望がある場合に発行する．
12．論文投稿は E-mail 投稿または学会ホームページ等からの Web 投稿とする．投稿原稿の送付先は，学会事務局とする．
13．著者による校正は，原則として 2 校までとする．その際には，字句の著しい変更，追加，削除などは認めない．
校正刷は所定の日までに必ず返却する．校正不要の場合には，その旨表紙左側に明記する．
14．本誌掲載の著作物の著作権は，本学会に帰属するものとする．
15．この規程にない事項は，別に編集委員会で決定する．
附則
1．本規程は平成 6 年 11 月 10 日から施行する（第 38 巻第 1 号より適用）．
2．本規程は平成 7 年 10 月 26 日から一部改正し施行する．
3．本規程は平成 9 年 6 月 5 日から一部改正し施行する．
4．本規程は平成 11 年 11 月 17 日から一部改正し施行する．
5．本規程は平成 16 年 6 月 9 日から一部改正し施行する．
6．本規程は平成 18 年 11 月 9 日から一部改正し施行する．
7．本規程は平成 20 年 6 月 5 日から一部改正し施行する．
8．本規程は平成 21 年 10 月 28 日から一部改正し施行する．
9．本規程は平成 22 年 6 月 3 日から一部改正し施行する．
10．本規程は平成 24 年 6 月 28 日から一部改正し施行する．
11．本規程は平成 25 年 6 月 27 日から一部改正し施行する．
12．本規程は令和 2 年 6 月 25 日から一部改正し施行する．
13．本規程は令和 3 年 6 月 9 日から一部改正し施行する．
投稿にあたっては「投稿規程」のほか，必ず各巻の 1 号に掲載されている「投稿の手引き」に準拠すること．

第 65 巻222

第3号

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握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握

渥握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握渥編 集 後 記渥握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握 ・例年通りに梅雨が訪れて，湿度の高い中で，鬱陶しい季節が始まりました．一方で，このような世の中で， いつもどおりに季節を体感できることに安心を感じております．会員の皆様におかれましては，益々ご健勝で 日々ご活躍のことと存じます．
 ・コロナウイルスの弱毒化によって，with コロナで社会が動いており，感染者数は漸減の様相ですが，日常が 少しずつ戻りつつあるのが感じられるようになってまいりました．Web 会議や学会にも慣れて，移動がないこ とのメリットを享受しつつも，やはり対面で行われることの重要度はとても高いものであると改めて認識され ます．
 ・早いもので，2022 年も半分が過ぎようとしていますが，世界情勢がかくも短期間で大きく変化するものかと 実感させられた期間でもありました．このようなことが，21 世紀になっても繰り返されるとは思いもしません でした．平和であることで，人類は進歩し，よりよい未来を築き続けることができるのだと改めて考えさせら
 れました．
 ・さて，今号は論文数が少ない号となりましたが，次号以降では多数の投稿をいただきますことを，会員の皆 様に改めましてお願い申し上げます．また一方で，前編集委員長の中田和彦先生が発刊に向けてご尽力された，
 本学会のもう 1 つの機関誌である Operative Dentistry, Endodontology and Periodontology は，昨年度第 1 号
 が無事に誕生しました．今年の 2 号の発行に向けても順調に進んでおり，本学会にしっかりと根を張ってきて おります．和文誌と並んでさらに発展していくことが期待されます．
 ・平和で健康な時間の中で，歯科保存学が益々躍進することを祈念しつつ，秋の学術大会では，久しぶりに先 生方と対面でお目にかかれますことを楽しみにしております．
（前田英史 記）握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握握渥

日本歯科保存学雑誌編集委員会
委 員 長
副委員長

幹

事

柴
秀
前 田 英
亀 山 敦
北 村 和
平 山 聡
村 松
八 重 柏
山 本 一
山 本 松
湯 本 浩
吉 羽 邦
吉 村 篤
米 田 雅
武 田 克

樹（広島大学大学院医系科学研究科）
史（九州大学大学院歯学研究院）
史（松本歯科大学）夫（日本歯科大学）司（日本大学松戸歯学部）
敬（東京歯科大学）隆（岩手医科大学歯学部）
世（大阪歯科大学）男（昭和大学歯学部）
通（徳島大学大学院医歯薬学研究部）
彦（新潟大学大学院医歯学総合研究科）
利（長崎大学大学院医歯薬学総合研究科）
裕（福岡歯科大学）
浩（広島大学大学院医系科学研究科）

編集・発行予定
号

投稿締切日

発 行 日

1

前年 11 月 15 日

2 月末日

2

1 月 15 日

4 月末日

3

3 月 15 日

6 月末日

4

5 月 15 日

8 月末日

5

7 月 15 日

10 月末日英文誌

9 月 15 日

12 月末日（50 音順）令和 4 年 6 月 30 日

発

行

編集兼発行者制作

特定非営利活動法人 日本歯科保存学会理事長
石者

井一般財団法人信之口腔保健協会

http：//www.kokuhoken.or.jp/

印

刷

所

発

行

所

三 報 社 印 刷 株 式 会 社

特定非営利活動法人

日本歯科保存学会

日 本 歯 科 保 存 学 雑 誌 編 集 委 員 会〒 170‒0003 東京都豊島区駒込 1‒43‒9（一財）口 腔 保 健 協 会 内
電話

03（3947）8891

ＦＡＸ

03（3947）8341Ⓒ The Japanese Society of Conservative Dentistry

第 65 巻224

第3号

特定非営利活動法人 日本歯科保存学会賛助会員名簿
賛

助

会

員

名

郵便番号

所

在

地

電話番号

ア グ サ ジ ャ パン 株 式 会 社

540‒0004

大阪市中央区玉造 1―2―34（06）
6762―8022

医 歯 薬 出 版 株 式 会 社

113‒8612

東京都文京区本駒込 1―7―10（03）5395―7638

イボクラールビバデント株式会社

113‒0033

東京都文京区本郷 1―28―24

4F

（03）
6801―1303

長 田 電 機 工 業 株 式 会 社 141‒8517

東京都品川区西五反田 5―17―5（03）3492―7651

カボデンタルシステムズ株式会社

140‒0001

東京都品川区北品川 4―7―35

御殿山トラストタワー 15F （03）6866―7480

クラレノリタケデンタル株式会社

100‒0004

東京都千代田区大手町 1―1―3

大手センタービル

ク ル ツ ァ ー ジ ャ パ ン 株 式 会 社 113‒0033

東京都文京区本郷 4―8―13

小567‒0057

大阪府茨木市豊川 1―30―3

コ ル テ ン ジ ャ パ ン 合 同 会 社 190‒0012

東京都立川市曙町 2―25―1

サ ン メ デ ィ カル 株 式 会 社

524‒0044

滋賀県守山市古高町 571―2（077）
582―9981

株

林

式

製

薬

会

式

ー

（072）
640―0117
2F（042）
595―6945（03）
3815―1511

東京都文京区本郷 1―28―34（03）
5689―1580

株

605‒0983

京都市東山区福稲上高松町 11（075）
561―1112

ス リ ー エ ム ジ ャ パ ン 株 式 会 社 141‒8684

東京都品川区北品川 6―7―29（03）6409―3800

タ カ ラ ベ ル モ ン ト 株 式 会 社 542‒0083

大阪市中央区東心斎橋 2―1―1（06）
6212―3619

デ ン ツ プ ラ イ シ ロ ナ 株 式 会 社 106‒0041

東京都港区麻布台 1―8―10（03）5114―1005

株 式 会 社 東 洋化 学 研 究 所

173‒0004

東京都板橋区板橋 4―25―12（03）3962―8811

株 式 会 社 ト ク ヤ マ デ ン タ ル 110‒0016

東京都台東区台東 1―38―9

イトーピア清洲橋通ビル 7F （03）3835―2261

株

式

会

社

ナ

カ

ニ

シ

322‒8666

栃木県鹿沼市下日向 700（0289）
64―3380

株

式

会

社

ニ

ッ

シ

ン

601‒8469

京都市南区唐橋平垣町 8（075）681―5346

日 本 歯 科 薬 品 株 式 会 社 750‒0015

山口県下関市西入江町 2 番 5 号（0832）
22―2221

ネ オ 製 薬 工 業 株 式 会 社 150‒0012
白

水

貿

ピ

ヤ

ス

マ

ニ

ー

松

ー

（03）
5803―2151

東京都文京区本郷 3―2―14

社

シ

社

113‒0033会

ジ会

株 式 会 社 ジ ー シ ー 昭 和 薬 品 113‒0033
式社

株

TSK ビル 2F（03）6701―1730

風東京都渋谷区広尾 3―1―3（03）3400―3768

式

会社

532‒0033

大阪市淀川区新高 1―1―15（06）
6396―4455

株

式

会

社

132‒0035

東京都江戸川区平井 6―73―9（03）3619―1441

株

式

会

易

株

社

321‒3231

宇都宮市清原工業団地 8―3（028）
667―1811

株 式 会 社 茂 久 田 商 会

650‒0047

神戸市中央区港島南町 4―7―5（078）
303―8246

株

式

会

株

式

会

モ

リ

タ

564‒8650

大阪府吹田市垂水町 3―33―18（06）
6388―8103

リムラ

110‒0005

東京都台東区上野 3―17―10（03）3836―1871

Y A M A K I N 株 式 会 社 543‒0015

大阪市天王寺区真田山町 3―7（06）6761―4739

株東京都台東区上野 7―6―9（03）3845―2931

式

会

社
社
社

モ

ヨ

シ

ダ

110‒0005（五十音順）

日本歯科保存学雑誌論文投稿票（第1． 論文の分類（チェックして下さい）
2． 論文種別（チェックして下さい）

□修復
□原著

□歯内

□歯周

□総説

□ミニレビュー

巻

号掲載希望）□その他□症例・臨床報告

3． 論文タイトル
4． ランニングタイトル（サブタイトルでなく，論文内容を的確に示す略表題．
40 字以内とし，英文は 2 文字が和文 1 文字に相当する）

5． 著者名（全員）
6． 筆頭著者の所属機関名
7． 原稿の構成
・本文（和文・英文表紙，和文・英文抄録，本文，文献，付図説明を含む）

枚

・図

枚

枚（うちカラー掲載希望の図番号

8． 別刷希望部数部（□カラー印刷），表□モノクロ印刷）

9． 連絡先（投稿・校正責任者）
・氏名
・住所

〒

・電話

内線

Fax

・E‒mail
10．備考，連絡事項

日本歯科保存学会

殿

日本歯科保存学雑誌著作権帰属承諾書
年月日

下記に署名・捺印した著者は，下記の表題の投稿原稿が「日本歯科保存学雑誌」に掲載された際には，同誌の投稿規程により，著作権を貴学会に帰属することを承諾いたします。
・論文タイトル
・著者（全員）

印

印

印

印

印

印

印

印

印

印

印

印

印

印

印

著者全員の署名・捺印が投稿締切までに揃わない場合は，事務局までご相談ください．

（裏面にチェックリストがあります）

65 巻 3 号

貴稿が日本歯科保存学雑誌の投稿規程に沿ったものであるかを確認し，1～12 の項目については，必ず著者チェック欄にチェック（✓印）して下さい．さらに，その項目について，所属機関の編集連絡委
員のチェックを受けてから投稿して下さい．（編集連絡委員名簿は各巻 1・4 号に掲載しています）
なお，13～20 の項目については該当する場合にチェックして下さい．

チェック
著者

チェック

編集連絡委員

編集委員会□□

1．保存学会 HP 掲載の最新の投稿票を用いていますか．

□□□□

2．原稿（図，表を含む）は A4 サイズで作成していますか．

□□□□

3．原稿は和文（英文）表紙，和文（英文）抄録，本文，文献，英文（和文）表紙，
英文（和文）抄録の順になっていますか．

□□□□

4．和文抄録，英文抄録には，見出しが付いていますか．

□□□□

5．和文・英文各表紙の末尾に責任著者連絡先が記入してありますか．

□□□□

6．和文・英文各キーワード（索引用語）を 3 語程度，和文抄録・英文抄録の末尾に記入してありますか．

□□□□

7．表紙には，ランニングタイトルが記入してありますか．

□□□□

8．原稿には通しページ番号（表紙から文献まで）が記載されていますか．

□□□□

9．文献は所定の書き方で，引用順になっていますか．

□□□□

10．図表にはそれぞれ番号が記入してありますか．

□□□□

11．図表とその説明は英語で表記していますか．

□□□□

12．投稿論文に関わる利益相反（COI）自己申告書を添付していますか．

□□□□

13．トレースの必要な図は，余白にその旨記載してありますか．

□□□□

14．カラー掲載希望の場合にはカラーデータを，モノクロ掲載希望の場合にはモノ
クロデータを添付していますか．

□□□□

15．英文論文の場合は，ネイティブスピーカー等による英文校閲証明書を添付して
いますか．

□□

□□

16．ヒトを対象とする研究について，所属機関の長もしくはその長が委託する倫理委員会等の承認を得ていますか．

□□□□

17．再生医療等安全性確保法に定められている再生医療等技術を含む症例発表については，その法に従い患者に提供された技術であることを明記していますか．

□□□□

18．適応外使用の薬剤・機器あるいは国内未承認の医薬品，医療機器，再生医療等製品を用いた治療法を含む症例発表については，所属機関の長もしくはその長が委託する倫理審査委員会，未承認新規医薬品等審査委員会等の承認を得ていま
すか．

□□

□□

19．患者資料（臨床写真，エックス線写真など）を症例報告論文に掲載するにあたり，患者（保護者・代諾者）から同意を得ていることを明記していますか．

□□□□

20．論文発表に際して，研究対象者（患者）個人が特定できないよう，個人情報を保護していますか．

□□

編集連絡委員名㊞

編集委員会からのお願い：所属機関に編集連絡委員がおられない場合には，その旨明記の上，締切日に余裕をもって事務局までお送り下さい．

CAD/CAM 冠も 、CAD/CAM インレーもやっぱりセラスマート
令和４年４月より CAD/CAM インレー保険収載

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色調●5 色 =メタルコアオペーク、ホワイト（オペーク）、AO3、ユニバーサル（A2）、トランスルーセント
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