Vegetarian Research
published by JSVR・www.jsvr.jp

Short Report

含嗽液としての緑茶と紅茶の口腔内細菌に対する殺菌・抗菌効果
高井 明徳*
大阪信愛学院短期大学

Bactericidal and Antibacterial Effects of Green Tea and Black Tea As Gargle Solutions
Against Oral Bacteria
Akinori Takai
Osaka Shin-Ai College, Japan
Abstract. In this study, we have conducted bactericidal and antibacterial effects of green tea and black tea against
oral bacteria using agar-agar as a culture medium. Survival rate of the oral bacteria treated with each tea for two
minutes was approximately 50% (50.7% in green tea and 55.5% in black tea). This study suggests that thosegreen and black tea are effective as gargle solutions due to their bactericidal and antibacterial properties against
oral bacteria.
Keywords: gargle solution, green tea, black tea, oral bacteria, bactericidal and antibacterial activities

１．はじめに腔内の汚染物等の除去のための含嗽の効果として、機口腔内には外界から自然に侵入する微生物や微小粒は含嗽の方法によるもの、化学的効果は用いる含嗽剤子状物質等の汚染物や食事の残渣等が存在し、これらの殺菌・抗菌効果を含む化学的作用によるものである。

械的な効果と化学的な効果が考えられる。機械的効果

は感染症予防や口腔内を清潔に保つためにできるだけ強い殺菌・抗菌効果を期待する場合は、イソジンの除去することが望ましい。一方、口腔内には 400 種類ような消毒薬剤の使用が考えられる。また、近年口腔以上の常在細菌叢が形成され、増加しすぎると疾患やを清潔に保つため各種洗口剤が発売され、殺菌・抗菌

う蝕などの原因になるので適度に除去することが望ま効果を有するものもあり、効果が評価されている。一しい。加齢や全身性疾患により免疫力が低下すると、方、日常での恒常的な使用において、殺菌・抗菌効果

容易に感染症（日和見感染）が発症する[1,2]。

が期待される緑茶や紅茶などの飲料の使用が注目され含嗽（うがい）は、感染症予防や口腔内清潔保持の有効な方法の一つとして、日常的に行われている。口ている。これらの含嗽液の効果については、様々な方法に基づき評価されている[3-9]。
高井[10]は、各種含嗽剤の口腔内細菌に対する殺Vegetarian Research Vol. 21, 9-12 (2020)

菌・抗菌効果を直接的に調べる方法として、含嗽剤にReceived 1 December 2020
Accepted 20 December 2020

口腔内細菌を一定時間混合した液を寒天培地で培養し、*E-mail: ak.takai.dsc@live.jp〒538-0053 大阪市鶴見区鶴見 6-2-28
短期大学

増殖可能な細菌の生残率を調べる方法を報告している。
大阪信愛学院

本研究では、同じ方法により緑茶と紅茶の口腔内細菌に対する殺菌・抗菌効果を調べた。

©2020 The Japanese Society for Vegetarian Research

9Vegetarian Research Vol. 21 (2020)

2.1. 口腔内細菌液の準備
起床後、歯磨き及び含嗽を行い、約 3 時間後に 20mLの滅菌蒸留水を口腔に含み、１分間含嗽を行った後の含嗽水を 10 倍希釈し細菌液とした。細菌液は、1 名の男性のものを用いた。研究の実施は、所属研究機関に研究倫理審査申請を行い承認を得た内容に従った。
2.2. 試験液の準備
含嗽液として、緑茶と紅茶を用いた。含嗽液 9mLを試験管に入れ、これに細菌液 1mL を加え、細菌が含嗽液中に均質に広がるように試験管を 5 回左右に振り、撹拌した。撹拌時間を含め 2 分間処理した。その間、約 30 秒毎に攪拌した。2 分間の処理後、この液を 103倍希釈し、培養に用いた。コントロールとしては、9mLの滅菌蒸留水に試験用細菌液 1mL 加え、撹拌後すぐに103 倍希釈したものを用いた[10]。
緑茶、紅茶は、いずれもティーバッグを用い、ビーカーに約 80℃の高温水を 100mL 入れ、ティーバッグを浸し、最初に 1 回あたり約 1 秒の速度で 20 回上下させ、30 秒後にティーバッグを除き、しばらく放置して液温が 30－40℃のものを用いた。
2.3. 寒天培地での細菌の培養
試験液は作製後すぐに、マイクロピペットで試験液を 0.1mL 取り、37℃に加温した一般生菌数測定用標準寒天培地（詳細は下記）に入れ、コンラージ棒で寒天培地上に均質に広げ、塗布した。試験区毎に 3 枚の寒天培地を用いた。以上の操作は、クリーンベンチ内で無菌的に行った。寒天培地を 37℃の恒温器に入れ、72時間培養し、生じたコロニー数を算定した。実験結果の変動を確認するため同じ実験を 2 回行った。
2.4. 寒天培地の作製
寒天培地は、一般生菌数測定用標準寒天培地「ニッスイ」を用いて作製した。培地 4.7g を蒸留水 200mLに溶解し（23.5g/L）、オートクレーブにて 2 気圧 121℃
で 15 分間加熱高圧滅菌処理し、クリーンベンチ内で9cm 径の滅菌済のシャーレ 10 枚にそれぞれ培地を約20mL 流し込み固形化した。
寒天培地は、使用まで冷蔵庫（4℃）で保管し、使用直前に恒温器中（37℃）に 20 分程度放置し加温した。
培地成分は、培地１L（23.5g）中、カゼイン製ペプト
ン 5.0g、酵母エキス 2.5g、ブドウ糖 1.0g、カンテン15.0g（pH 7.1±0.1）であった。
2.5. 生残率の算定
増殖可能な細菌の生残率は、含嗽液の 3 枚の寒天培地のそれぞれについて、コントロール（蒸留水）の 310枚の寒天培地の平均値で除した数値のパーセントで示した。2 群の有意差の検定には、Fisher の Exact test、Student の t-検定を用いた。有意確率は p<0.05 とした。

３．結果と考察
今回の実験において、緑茶と紅茶、それぞれ 1 回目と 2 回目の結果については有意差は示されなかった（Exact test）（Table 1）。シャーレ毎に増殖可能な細菌の生残率を求め、2 回の実験結果を平均すると、緑Table 1. The number of colonies in control, green tea(GT) and black tea (BT)123MeanSD[1]Control
GTBT247125168266119109300
180168271.0
141.3
148.3± 26.9± 33.6± 34.1

[2]Control285303345311.0± 30.8GT147
163BT184193
SD: standard deviation

150148

153.3
175.0

± 8.5
± 23.8

Table 2. Survival rate (%) of oral bacteria in greentea (GT) and black tea (BT)
[1]
146.1
62.0

GTBT

[1]
Mean

23
43.9
40.2

66.4
62.0

[2]
1
47.3
59.2

23
52.4
62.1

48.2
47.6

Total
±SD Mean ±SD49.3 ±2.750.7 ±8.2
GT52.2 ±12.4
BT54.7 ±12.656.3 ±7.755.5 ±9.3
Survival rate = percentage of the number of colonies
per that of the control.
Control value: [1]- 271.0; [2]- 311.0.
±SD[2]
Mean7060Survival rate (%)

２．研究方法55.55050.7403020100Green tea Black tea

Figure 1. Survival rate (%) of oral bacteria ingreen tea and red tea. Error bars indicate SD.

高井：緑茶と紅茶の口腔内細菌に対する殺菌・抗菌効果
茶で処理した増殖可能な細菌の生残率は 50.7±8.2%、紅茶の場合は 55.5±9.3%で、ほぼ 50％の殺菌・抗菌率であった（Table 2）。緑茶と紅茶の間に有意な差は示されなかった（t-検定）。
今回と同じ方法により得られた洗口剤やイソジンの殺菌・抗菌率は 95%以上であった[10]。これに比べると、緑茶や紅茶の殺菌・抗菌率は低いものの、50%程度の殺菌・抗菌効果があり、日常において殺菌・抗菌効果を有す含嗽液として用いることは有効であると考えられる。
茶の殺菌・抗菌効果については、茶に含まれるカテキンが殺菌・抗菌作用を示すことが報告されている[11-12]。また、茶には様々な種類があり、含まれるカテキン量は異なる[13]。今後の課題として、様々な茶の殺菌・抗菌効果を調べると共に、処理時間や濃度、茶葉によるお茶とペットボトルの茶との違いなどによる効果の違いも挙げられる。
今回の研究では、含嗽剤の殺菌・抗菌効果を、含嗽剤に口腔内細菌を混合し、寒天培地で培養し、その生残率に基づき評価したが、簡易に行え、有効性は高いと考える。今回の研究は、1 名の男性からの口腔内細菌に対する結果であるが、健康な成人での年齢差による口腔内常在細菌叢の総細菌数や種類の違いは認められないことが報告されているので[14]、今回の結果は一般化できると考えられる。
今回の研究では、細菌の培養を標準寒天培地を用いて行った。口腔内細菌を構成する細菌については、レンサ球菌が最も多く、口腔内常在細菌の 30%程度を占めることが報告されている [15]。しかし、レンサ球菌は普通寒天培地では増殖しないので、類似の組成の標準寒天培地で培養した今回の結果は、レンサ球菌及び同様の特性を有す細菌以外の細菌が評価対象となっていると考えられる。レンサ球菌の培養には血液寒天培地が適しているので、今後、そのような培地を用いた研究が必要である。
謝辞：英文要旨を修訂いただきました東野映子氏に感謝いたします。
本研究に利益相反に係る事項はない。

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Vegetarian Research Vol. 21 (2020)
Vegetarian Research Vol. 21, 9－12 (2020)
含嗽液としての緑茶と紅茶の口腔内細菌に対する殺菌・抗菌効果
高井 明徳

た。これらの液を希釈して、寒天培地で培養した結果、増殖可能な細菌の生残率は緑茶で 50.7％、紅茶では55.5％で、ほぼ 50%の殺菌・抗菌効果を示した。本研究結果から、緑茶と紅茶は口腔内細菌の殺菌・抗菌効果を有す含嗽液として効果的であることが示された。

本研究において、緑茶と紅茶の口腔内細菌に対する殺菌・抗菌効果を寒天培地による培養法を用いて調べた。
蒸留水での含嗽により得られた口腔内細菌液と緑茶と紅茶をそれぞれ 1：9 の割合で混合して、2 分間放置しキーワード：含嗽液・緑茶・紅茶・口腔内細菌・殺菌・抗菌効果12