Product Instructions
MDA2CRO96
Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter
FR Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter
DE Molekularer Detektions Assay 2 - Cronobacter
IT Analisi molecolare di seconda generazione per il rilevamento di
Cronobacter
ES Ensayo 2 Detección Molecular - Cronobacter
NL Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter
SV Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter
DA Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter
NO Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter
FI Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri
PT Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter
EL Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter
PL Molekularny test do wykrywania 2 - Cronobacter
RU Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter
TR Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter
JA 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用
ZH 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌 (Simplified)TH ชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์
KO 분자 검출 키트 2 - 크로노박터ID Deteksi Molekuler 2 - untuk Pengujian CronobacterEN

2

Cronobacter

EN(English)Issue Date: 2024-01

Product Instructions
Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter
Product Description and Intended Use

The Neogen® Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter is used with the Neogen® Molecular Detection System for the
rapid and specific detection of Cronobacter in enriched food and food process environmental samples.
The Neogen Molecular Detection Assay uses loop-mediated isothermal amplification to rapidly amplify nucleic acidsequences with high specificity and sensitivity, combined with bioluminescence to detect the amplification. Presumptive
positive results are reported in real-time while negative results are displayed after the assay is completed. Presumptive
positive results should be confirmed using your preferred method or as specified by local regulations(1, 2).
The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter is intended for use in a laboratory environment by professionals
trained in laboratory techniques. Neogen has not documented the use of this product in industries other than food orbeverage. For example, Neogen has not documented this product for testing pharmaceutical, cosmetics, clinical orveterinary samples. The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter has not been evaluated with all possible
food products, food processes, testing protocols or with all possible strains of bacteria.
As with all test methods, the source, formulation and quality of enrichment medium can influence the results. Factors
such as sampling methods, testing protocols, sample preparation including homogenization and mixing, handling, andlaboratory technique may also influence results. Neogen recommends evaluation of the method including enrichment
medium, in the user’s environment using a sufficient number of samples with particular foods and/or environmental
samples and microbial challenges to ensure that the method meets the user’s criteria.
Neogen has evaluated the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter with Buffered Peptone Water (ISO)enrichment medium.
The Neogen® Molecular Detection Instrument is intended for use with samples that have undergone heat treatment
during the assay lysis step, which is designed to destroy organisms present in the sample. Samples that have not been
properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard and should NOT be inserted
into the Neogen Molecular Detection Instrument.
Neogen Food Safety is certified to ISO (International Organization for Standardization) 9001 for design and manufacturing.
The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter test kit contains 96 tests, described in Table 1.
Table 1. Neogen Molecular Detection Assay Kit Components
Item

Identification

Quantity

Contents

Comments

Neogen® Lysis Solution (LS)

Pink solution in clear
tubes

96 (12 strips of 8 tubes)

580 μL of LS per tube

Racked andready to use

Neogen® Molecular
Detection Assay 2
Orange-red tubes-Cronobacter Reagent Tubes

96 (12 strips of 8 tubes)

Lyophilized specificamplification anddetection mix

Ready to use

Extra caps

Orange-red caps

96 (12 strips of 8 caps)

Clear flip-top tubes

16 (2 pouches of 8
individual tubes)

Neogen® Reagent Control(RC)

Ready to use
Lyophilized control
DNA, amplificationand detection mix

Ready to use

The Negative Control, not provided in the kit, is sterile enrichment medium, e.g., BPW ISO. Do not use water as a
Negative Control.

SafetyThe user should read, understand and follow all safety information in the instructions for the Neogen Molecular Detection
System and the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter. Retain the safety instructions for future reference.
WARNING: Indicates a hazardous situation, which, if not avoided, could result in death or serious injury and/or
property damage.
NOTICE: Indicates a potentially hazardous situation which, if not avoided, could result in property damage.
1

EN(English)W WARNING
Do not use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter in the diagnosis of conditions in humans or animals.
The user must train its personnel in current proper testing techniques: for example, Good Laboratory Practices(3),ISO/IEC 17025(4), or ISO 7218(5).
To reduce the risks associated with a false-negative result leading to the release of contaminated product:• Follow the protocol and perform the tests exactly as stated in the product instructions.
• Store the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter as indicated on the package and in the product instructions.
• Always use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter by the expiration date.
• Use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter with food and food process environmental samples thathave been validated internally or by a third party.
• Use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter only with surfaces, sanitizers, protocols and bacterial
strains that have been validated internally or by a third party.
• For an environmental sample containing Neutralizing Buffer with aryl sulfonate complex, perform a 1:2 dilution
before testing (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth). Another option is to transfer 10 μL of the NB
enrichment into the Neogen Lysis Solution tubes. Neogen® Sample Handling products which include Neutralizing
Buffer with aryl sulfonate complex: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G and
HS2410NB2G. This protocol has not been tested during the NF Validation study.
To reduce the risks associated with exposure to chemicals and biohazards:• Perform pathogen testing in a properly equipped laboratory under the control of trained personnel. Incubatedenrichment media and equipment or surfaces that have come into contact with incubated enrichment media may
contain pathogens at levels sufficient to cause risk to human health.
• Always follow standard laboratory safety practices, including wearing appropriate protective apparel and eye
protection while handling reagents and contaminated samples.
• Avoid contact with the contents of the enrichment media and reagent tubes after amplification.
• Dispose of enriched samples and associated contaminated waste according to current local/regional/national/
industry standards.
• Do not exceed the recommended temperature setting on heater.
• Do not exceed the recommended heating time.
• Use an appropriate, calibrated thermometer to verify the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert temperature(e.g., a partial immersion thermometer or digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer). The
thermometer must be placed in the designated location in the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert.
To reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:• Always wear gloves (to protect the user and prevent introduction of nucleases).
To reduce the risks associated with exposure to hot liquids:• Do not exceed the recommended temperature setting on heater.
• Do not exceed the recommended heating time.
• Use an appropriate, calibrated thermometer to verify the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert temperature(e.g., a partial immersion thermometer or digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer). The
thermometer must be placed in the designated location in the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert.

NOTICETo reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:• Change gloves prior to reagent pellet hydration.
• Use of sterile, aerosol barrier (filtered), molecular biology grade pipette tips are recommended.
• Use a new pipette tip for each sample transfer.
• Use Good Laboratory Practices to transfer the sample from the enrichment to the lysis tube. To avoid pipettor
contamination, the user may choose to add an intermediate transfer step. For example, the user can transfer eachenriched sample into a sterile tube.
• Use a molecular biology workstation containing germicidal lamp where available.
• Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1-5% (v:v inwater) household bleach solution or DNA removal solution.
To reduce the risks associated with a false-positive result:• Never open tubes post amplification.

2

EN
•
•
•

(English)

Always dispose of the contaminated tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour
and away from the assay preparation area.
Never autoclave reagent tubes post amplification.
If samples are suspected to contain high levels of Cronobacter DNA (e.g., DNA from non-viable Cronobacter cells
that have been subjected to a kill / inactivation step), presumptive positive enrichments should be treated with
DNase before the Lysis step. Contact your Neogen Representative for additional instructions. This protocol has notbeen tested during the NF Validation study.

Consult the Safety Data Sheet for additional information and local regulations for disposal.
If you have questions about specific applications or procedures, please visit our website at www.neogen.com or contact
your local Neogen representative or distributor.

User Responsibility

Users are responsible for familiarizing themselves with product instructions and information. Visit our website atwww.neogen.com, or contact your local Neogen representative or distributor for more information.
When selecting a test method, it is important to recognize that external factors such as sampling methods, testing protocols,
sample preparation including homogenization and mixing, handling, and laboratory technique may influence results.
It is the user’s responsibility in selecting any test method or product to evaluate a sufficient number of samples with theappropriate matrices and microbial challenges to satisfy the user that the chosen test method meets the user’s criteria.
It is also the user’s responsibility to determine that any test methods and results meet its customers’ and suppliers’
requirements.
As with any test method, results obtained from use of any Neogen Food Safety product do not constitute a guarantee ofthe quality of the matrices or processes tested.
To help customers evaluate the method for various matrices, Neogen has developed the Neogen® Molecular Detection
Matrix Control kit. When needed, use the Matrix Control (MC) to determine if the matrix has the ability to impact the
Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter results. Test several samples, representative of the matrix, i.e.
samples obtained from different origin, during any validation period when adopting the Neogen method or when testing
new or unknown matrices or matrices that have undergone raw material or process changes.
A matrix can be defined as a type of product with intrinsic properties such as composition and process. Differences
between matrices may be as simple as the effects caused by differences in their processing or presentation for example,
raw vs. pasteurized; fresh vs. dried, etc.

Limitation of Warranties / Limited Remedy

EXCEPT AS EXPRESSLY STATED IN A LIMITED WARRANTY SECTION OF INDIVIDUAL PRODUCT PACKAGING,
NEOGEN DISCLAIMS ALL EXPRESS AND IMPLIED WARRANTIES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO, ANY
WARRANTIES OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR USE. If any Neogen Food Safety Product is
defective, Neogen or its authorized distributor will, at its option, replace or refund the purchase price of the product.
These are your exclusive remedies. Please contact your Neogen representative or authorized Neogen distributor for any
further questions.

Limitation of Neogen Liability

NEOGEN WILL NOT BE LIABLE FOR ANY LOSS OR DAMAGES, WHETHER DIRECT, INDIRECT, SPECIAL, INCIDENTAL
OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO LOST PROFITS. In no event shall Neogen’s
liability under any legal theory exceed the purchase price of the product alleged to be defective.

Storage and Disposal

Store the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter at 2-8°C. Do not freeze. Keep kit away from light duringstorage. After opening the kit, check that the foil pouch is undamaged. If the pouch is damaged, do not use. After
opening, unused reagent tubes should always be stored in the re-sealable pouch with the desiccant inside to maintainstability of the lyophilized reagents. Store resealed pouches at 2-8°C for no longer than 60 days.
Do not use Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter past the expiration date. Expiration date and lot number
are noted on the outside label of the box. After use, the enrichment medium and the Neogen Molecular Detection Assay
2 - Cronobacter tubes can potentially contain pathogenic materials. When testing is complete, follow current industry
standards for the disposal of contaminated waste. Consult the Safety Data Sheet for additional information and local
regulations for disposal.

3

EN(English)

Instructions for Use

Follow all instructions carefully. Failure to do so may lead to inaccurate results.
Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1-5% (v:v inwater) household bleach solution or DNA removal solution.
The user should complete the Neogen Molecular Detection System operator qualification training, as described in
the “Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen Molecular
Detection System” document(6).
See Section “Specific Instructions for validated methods” for specific requirements:
Table 3 for enrichment protocols according to AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 and Performance TestedSM
Certificate number 101703
Table 4 for enrichment protocols according to NF VALIDATION certificate 3M 01/20-03/18
Sample Enrichment
Tables 2, 3, or 4 present guidance for enrichment protocols for food and environmental samples.
It is the user’s responsibility to validate alternate sampling or enrichment protocols or dilution ratios to ensure this test
method meets the user’s criteria.
Foods, Environmental Powders, Dusts, Sweepings and Sponges
1. Equilibrate the enrichment medium to ambient temperature (20-25°C) unless otherwise noted in the enrichment
protocol (See Table 2, 3 or 4).
2. Aseptically combine the enrichment medium and sample and homogenize thoroughly by blending, stomaching,vortexing or hand mixing for 2 ± 0.2 minutes or until all lumps are completely dissolved and the enrichment
suspension is homogeneous(7, 8).
a.

Factors such as sample preparation including homogenization and mixing, handling, and laboratory technique
may influence results.

b. For highly particulate samples, the use of filter bags is recommended.
c.

For matrices which swell in water and are highly viscous (e.g., cereals, starches), it is suggested to make further
dilutions (> 1:10) until viscosity is suitably reduced or add sterile 1% (w/v) alpha-amylase to BPW (ISO)(8).

d. For large sample sizes of cereals, add the powdered cereal slowly to the liquid with frequent mixing to avoid
clumps.
3. Incubate as outlined in the appropriate protocol table (See Table 2, 3, or 4).
Table 2. General Enrichment Protocols
Sample Matrix

SampleSize1

Enrichment Broth
Volume1, 2Enrichment
Temperature(± 1°C)

Enrichment
Time (hours)

SampleAnalysis
VolumePowdered infant formula (PIF) and raw
materials such as dry milk powder, soypowder, whey powder, lactose, rice
flour, and maltodextrin

1X gramsample9X mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Raw materials such as salts, minerals,amino acids, DHA (docosahexaenoicacid) and vitamins

1X gramsample99X mL BPW (ISO)(1:100)

37

18-24

20 µL

Dry environmental samples such as
dust, sweepings, vacuum collection

1X gramsample9X mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Environmental sponge with 10 mL
1 sampling
Letheen Broth or D/E Neutralizing Brothdevice90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

1. Neogen has evaluated the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter using the dilution ratios in Table 2 up
to 300g. It is the user’s responsibility to validate alternate dilution ratios or protocols to ensure the method meets theuser’s criteria.
2. Use pre-warmed BPW (ISO) if enrichment broth volume is > 300 mL (e.g., sample is > 30 grams).

4

EN(English)Specific Instructions for Validated Methods
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certificate #101703

In AOAC Research Institute OMASM and PTMSM studies, the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter was
found to be an effective method for the detection of Cronobacter. The matrices tested in the study are shown in Table 3.
Table 3. Enrichment protocols according to AOAC® OMASM 2018.01 and PTMSM 101703
SampleSize

Enrichment Broth
Volume1

Enrichment
Temperature(± 1°C)

Enrichment
Time (hours)

SampleAnalysis
VolumePowdered Infant Formula and
Powdered Infant Cereal

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Powdered Infant Cereal non-probiotic

300 g

2700 mL BPW(ISO) (1:10)

Pre-Warmed 37

18-24

20 µL

Powdered Infant Formula and
Powdered Infant Cereal with probiotics

300 g

2700 mL BPW(ISO) + 10 mg/L
Vancomycin

Pre-Warmed 37

22-24

20 µL

Lactose

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

1
sampling
device90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Sample Matrix

Environmental sponge with 10 mL D/E
Neutralizing Broth

1. Use pre-warmed BPW (ISO) if enrichment broth volume is > 300 mL.
NF VALIDATION by AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
For more information about end of validity, please refer to NF VALIDATION certificate available on the website
mentioned above.
NF VALIDATION certified method in compliance with ISO 16140-2(9) in comparison to ISO 22964.
Scope of the validation: Powdered infant formula and infant cereals with and without probiotics, raw materials andenvironmental samples.
Sample preparation: Samples should be prepared according to EN ISO 22694(2) and EN ISO 6887(7, 8).
Software version: See certificate.

5

EN(English)

Table 4. Enrichment Protocols According to NF VALIDATION Certified Method 3M 01/20-03/18
Sample Matrix
•
•
•

•

•

Sample Size

Powdered infant
formulaPowdered infantcereals
Ingredients such as
dry milk powder, soypowder, whey powder,lactose, rice flour,
maltodextrin
Dry environmental
samples such as dust,
sweepings, vacuum
collection,

10 gSponge, rinse water,wipes

1 sampling
device or
10 mL

Powdered infant formulaand powdered infant cereal(non-probiotic)
Powdered infant cereal andpowdered infant formula(including probiotic)

Enrichment Enrichment Enrichment Sample
Recommended
Broth
Temperature
Time
AnalysisInterruption
Point2, 3
Volume1(± 1°C)(hours)Volume90 mL BPW
(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Enrichment broth or
sample lysate canbe stored at 2-8°C
for up to 72 hours

Enrichment broth or
sample lysate canbe stored at 2-8°C
for up to 72 hours

30-300 g

BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Enrichment broth or
sample lysate canbe stored at 2-8°C
for up to 72 hours

30-300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/L
vancomycin(1:10)

37

22-24

20 µL

None

1. Use pre-warmed BPW (ISO) if enrichment broth volume is > 300 mL (e.g., sample is > 30 grams).
2. After removing the enrichment broth from storage, resume testing from Step 1 in the Lysis section. After removing
the sample lysate from storage, resume testing from Step 7 in the Lysis section.
3. Refer to Appendix A for re-testing of stored heat-treated lysates.
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Speed Loader Tray
1. Wet a cloth or disposable towel with a 1-5% (v:v in water) household bleach solution and wipe the Neogen Molecular
Detection Speed Loader Tray.
2. Rinse the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray with water.
3. Use a disposable towel to wipe the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray dry.
4. Ensure the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray is dry before use.
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Chill Block Insert
Place the Neogen Molecular Detection Chill Block Insert directly on the laboratory bench: The Neogen Molecular
Detection Chill Block Tray is not used. Use the block at ambient laboratory temperature (20-25°C).
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert
Place the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert in a dry double block heater unit. Turn on the dry block heater
unit and set the temperature to allow the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert to reach and maintain atemperature of 100 ± 1°C.
NOTE: Depending on the heater unit, allow approximately 30 minutes for the Neogen Molecular Detection Heat Block
Insert to reach temperature. Using an appropriate, calibrated thermometer (e.g., a partial immersion thermometer,
digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer) placed in the designated location, verify that
the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ± 1°C.

6

EN

(English)Preparation of the Neogen® Molecular Detection Instrument
1. Launch the Neogen® Molecular Detection Software and log in. Contact your Neogen Food Safety representative toensure you have the most updated version of the software.
2. Turn on the Neogen Molecular Detection Instrument.
3. Create or edit a run with data for each sample. Refer to the Neogen Molecular Detection System User Manual for details.
NOTE: The Neogen Molecular Detection Instrument must reach Ready state before inserting the Neogen Molecular
Detection Speed Loader Tray with reaction tubes. This heating step takes approximately 20 minutes and is indicated by an
ORANGE light on the instrument’s status bar. When the instrument is ready to start a run, the status bar will turn GREEN.
Lysis
Remove the bottom of Neogen Lysis Solution Rack with a screwdriver before placing in in the Neogen Molecular
Detection Heat Block Insert.

1. Allow the Neogen Lysis Solution tubes to warm up by setting the rack at ambient temperature (20-25°C) overnight(16-18 hours). Alternatives to equilibrate the Neogen Lysis Solution tubes to ambient temperature are to set the
Neogen Lysis Solution tubes on the laboratory bench for at least 2 hours, incubate the Neogen Lysis Solution tubes
in a 37 ± 1°C incubator for 1 hour or place them in a dry double block heater for 30 seconds at 100 ± 1°C.
2. Invert the capped tubes to mix. Proceed to next step within 4 hours after inverting.
3. Remove the enrichment broth from the incubator.
4. One Neogen Lysis Solution tube is required for each sample and the NC sample (sterile enrichment medium).
4.1 Neogen Lysis Solution tube strips can be cut to desired number. Select the number of individual Neogen Lysis
Solution tubes or 8-tube strips needed. Place the Neogen Lysis Solution tubes in an empty rack.
4.2 To avoid cross-contamination, decap one Neogen Lysis Solution tubes strip at a time and use a new pipette tip
for each transfer step.
4.3 Transfer enriched sample to Neogen Lysis Solution tubes as described below:
Transfer each enriched sample into an individual Neogen Lysis Solution tube first. Transfer the NC last.
4.4 Use the Neogen® Molecular Detection Cap/Decap Tool-Lysis to decap one Neogen Lysis Solution tube strip one strip at a time.
4.5 Discard the Neogen Lysis Solution tube cap – If lysate will be retained for retest, place the caps into a clean
container for re-application after lysis.
4.5.1. For processing of retained lysate, see Appendix A.
4.6 Agitate the enrichment bag before collecting the sample from the filtered side when working with viscous
samples.
4.7 Transfer 20 µL of sample into a Neogen Lysis Solution tube unless otherwise indicated in the protocol table.
5. Repeat step 4.4 to 4.7 until each individual sample has been added to a corresponding Neogen Lysis Solution tube in
the strip.

7

EN(English)

6. When all samples have been transferred, transfer 20 µL of NC (sterile enrichment medium e.g. BPW) into Neogen
Lysis Solution tube. Do not use water as a NC.
7. Verify that the temperature of the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ± 1°C.
8. Place the uncovered rack of Neogen Lysis Solution tubes in the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert andheat for 15 ± 1 minutes. During heating, the Neogen Lysis Solution will change from pink (cool) to yellow (hot).
Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential
biohazard and should NOT be inserted into the Neogen Molecular Detection Instrument.
9. Remove the uncovered rack of Neogen Lysis Solution tubes from the Neogen Molecular Detection Heat Block and allow
to cool in the Neogen Molecular Detection Chill Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes. The Neogen
Molecular Detection Chill Block Insert, used at ambient temperature without the Neogen® Molecular Detection Chill Block
Tray, should sit directly on the laboratory bench. When cool, the Neogen Lysis Solution will revert to a pink color.
10. Remove the rack of Neogen Lysis Solution tubes from the Neogen Molecular Detection Chill Block Insert.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplification
1. One Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagent Tube is required for each sample and the NC.
1.1 Tube strips can be cut to desired tube number. Select the number of individual Neogen Molecular Detection
Assay 2 - Cronobacter Reagent Tube or 8-tube strips needed.
1.2 Place Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagent Tubes in an empty rack.
1.3 Avoid disturbing the reagent pellets from the bottom of the tubes.
2. Select one Neogen Reagent Control Tube and place in rack.
3. To avoid cross-contamination, decap one Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagent Tube strip at
a time and use a new pipette tip for each transfer step.
4. Transfer each lysate to Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagent Tube and Neogen Reagent
Control Tube as described below:
Transfer each sample lysate into individual Neogen Molecular Detection Assay 2- Cronobacter Reagent Tube first
followed by the NC. Hydrate the Neogen Reagent Control Tube last.
5. Use the Neogen® Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to decap the Neogen Molecular Detection Assay
2 - Cronobacter Reagent tubes –one Reagent tube strip at a time. Discard cap.
5.1 Transfer 20 µL of sample lysate from the upper 1/2 of the liquid (avoid precipitate) in the Neogen Lysis
Solution Tube into corresponding Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagent Tube.
Dispense at an angle to avoid disturbing the pellets. Mix by gently pipetting up and down 5 times.
5.2 Repeat step 5.1 until individual Sample lysate has been added to a corresponding Neogen Molecular Detection
Assay 2 - Cronobacter Reagent Tube in the strip.

8

EN(English)

5.3 Cover the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagent Tubes with the provided extra caps anduse the rounded side of the Neogen Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to apply pressure in a backand forth motion ensuring that the cap is tightly applied.
5.4 Repeat steps 5.1 to 5.3 as needed, for the number of samples to be tested.
5.5 When all sample lysates have been transferred, repeat 5.1 to 5.3 to transfer 20 µL of NC lysate into a Neogen
Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagent Tube.
5.6 Transfer 20 µL of NC lysate into a Neogen Reagent Control Tube. Dispense at an angle to avoid disturbing thepellets. Mix by gently pipetting up and down 5 times.
6. Load capped tubes into a clean and decontaminated Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray. Close andlatch the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray lid.

7. Review and confirm the configured run in the Neogen Molecular Detection Software.
8. Click the Start button in the software and select instrument for use. The selected instrument’s lid automatically
opens.
9. Place the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray into the Neogen Molecular Detection Instrument andclose the lid to start the assay. Results are provided within 60 minutes, although positives may be detected sooner.
10. After the assay is complete, remove the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray from the Neogen Molecular
Detection Instrument and dispose of the tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1
hour and away from the assay preparation area.
NOTICE: To minimize the risk of false positives due to cross-contamination, never open reagent tubes containing
amplified DNA. This includes Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagent, Neogen Reagent Control,and Neogen Matrix Control Tubes. Always dispose of sealed reagent tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water)household bleach solution for 1 hour and away from the assay preparation area.

Results and Interpretation

An algorithm interprets the light output curve resulting from the detection of the nucleic acid amplification. Results
are analyzed automatically by the software and are color-coded based on the result. A Positive or Negative result isdetermined by analysis of a number of unique curve parameters. Presumptive positive results are reported in real-time
while Negative and Inspect results will be displayed after the run is completed.
NOTE: Even a negative sample will not give a zero reading as the system and Neogen Molecular Detection Assay 2 Cronobacter amplification reagents have a “background” relative light unit (RLU) reading.
Confirmation• Confirmation of results according to the NF Validation Certified Method
In the context of the NF VALIDATION, all presumptive positive enrichments should be confirmed by following reference
method confirmation(2), beginning with transfer from the primary enrichment (BPW ISO or BPW ISO supplemented with
10 mg/L of vancomycin).
•

Other confirmation protocol

Presumptive positive enrichments should be confirmed per the laboratory standard operating procedures or byfollowing the appropriate reference method confirmation(1,2), beginning with transfer from the primary enrichment (BPW
ISO or BPW ISO supplemented with 10 mg/L of vancomycin) to a secondary enrichment media, followed by subsequentplating and confirmation of isolates using appropriate biochemical, serological and/or molecular methods.
In the rare event of any unusual light output, the algorithm labels this as Inspect. Neogen recommends the user torepeat the assay for any Inspect samples. If the result continues to be Inspect, proceed to confirmation test using yourpreferred method or as specified by local regulations(1,2).
9

EN(English)In the event of discordant results (presumptive positive with the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter,
non-confirmed by one of the means described above), the laboratory should follow their established standard operatingprocedures to report their results.
If you have questions about specific applications or procedures, please visit our website at www.neogen.com or contact
your local Neogen representative or distributor.
Appendix A. Protocol Interruption: Storage and re-testing of heat-treated lysates
1. To store a heat-treated lysate, re-cap the lysis tube with a clean cap (see Lysis section 4.5)
2. Store at 2 to 8°C for up to 72 hours.
3. Prepare a stored sample for amplification by inverting 2-3 times to mix.
4. Decap the tubes.
5. Place the mixed lysate tubes on Neogen Molecular Detection Heat Block Insert and heat at 100 ± 1°C for 5 ± 1 minutes.
6. Remove the rack of Neogen Lysis Solution Tubes from the heating block and allow to cool in the Neogen Molecular
Detection Chill Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes.
7. Continue the protocol at the Amplification section detailed above.

References:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Refer to the current versions of the standard methods listed above.

Explanation of Symbols
info.neogen.com/symbols

10Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

FR(Français)Date de parution : 2024-01

Instructions relatives au produit
Kit de détection moléculaire version 2 – Cronobacter
Description et utilisation du produit

Le Neogen® kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter est utilisé avec le système de détection moléculaire
Neogen® pour une détection rapide et précise des Cronobacter dans les prélèvements environnementaux d’aliments
supplémentés et d’aliments transformés.
Le Neogen Kit de détection moléculaire utilise la technique LAMP (loop-mediated isothermal amplification –amplification isotherme médiée par des boucles) afin d’amplifier rapidement les séquences d’acide nucléique de façonextrêmement spécifique et sensible, associée à la bioluminescence pour détecter l’amplification. Les résultats présumés
positifs sont visibles en temps réel tandis que les résultats négatifs sont affichés à la fin de l’essai. Les résultats présumés
positifs doivent être confirmés par les méthodes usuelles ou en fonction des méthodes spécifiques répondant aux
normes locales(1, 2).
Le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter est destiné à être utilisé au sein de laboratoires, par desprofessionnels formés aux techniques s’y rapportant. Neogen n’a pas étudié l’utilisation de ce produit dans des secteurs
autres que l’alimentaire et les boissons. Par exemple, Neogen n’a pas documenté ce produit dans le cadre de tests surdes échantillons de produits pharmaceutiques, cosmétiques, cliniques ou vétérinaires. Le Neogen Kit de détection
moléculaire version 2 - Cronobacter n’a pas été évalué en utilisant tous les produits et processus de transformation
alimentaire, tous les protocoles de test ou toutes les souches bactériennes possibles.
Comme avec toutes les méthodes de test, la source, la formulation et la qualité du milieu d’enrichissement peuvent
influencer les résultats. Des facteurs tels que les méthodes d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation deséchantillons, notamment l’homogénéisation et le mélange, la manipulation et les techniques de laboratoires peuventégalement influencer les résultats. Neogen recommande d’évaluer la méthode, notamment le milieu d’enrichissement,
dans l’environnement de l’utilisateur à l’aide d’un nombre d’échantillons suffisant et avec des épreuves alimentaires etmicrobiennes et/ou des prélèvements environnementaux déterminés pour répondre aux critères de l’utilisateur.
Neogen a évalué le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter avec un milieu d’enrichissement Eau
peptonée tamponnée ISO.
L’instrument de détection moléculaire Neogen® est conçu pour être utilisé avec des échantillons traités thermiquement
pendant l’étape de lyse, procédé qui détruit les organismes présents dans l’échantillon. Les échantillons qui n’ont pas
été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent être considérés comme potentiellement
dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection moléculaire Neogen.
La conception et la fabrication Neogen Sécurité Alimentaire sont certifiées ISO (International Organization forStandardization) 9001.
Le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter contient 96 tests, décrits dans le tableau 1.
Tableau 1. Composants du Neogen Kit de détection moléculaire
Élément

Identification

QuantitéContenu

Commentaires

Solution de lyse (LS) Neogen®

Solution roseen tubestransparents

96 (12 barrettes de
8 tubes)

580 μl de LS partube

Placé surportoir et prêtà l’emploi

Tubes de réactif du Neogen® Kit deTubes rougedétection moléculaire version 2 orangé
Cronobacter96 (12 barrettes de
8 tubes)Mélange spécifiquelyophilisé pourl’amplification et ladétectionPrêts à l’emploi

Bouchons supplémentaires

Bouchons
rouge orangé

96 (12 barrettes de8 bouchons)

Contrôle de réactif Neogen® (RC)

Tubes
« Flip-Top »transparents

16 (2 poches de 8 tubes
individuels)

1Prêts à l’emploi
ADN témoin
lyophilisé, mélange
pour l’amplification
et la détectionPrêts à l’emploi

FR(Français)Le témoin négatif, non fourni dans le kit, est un milieu d’enrichissement stérile, par exemple EPT ISO. Ne pas utiliserd’eau comme témoin négatif.

Consignes de sécurité

L’utilisateur doit lire, comprendre et suivre toutes les informations de sécurité mentionnées dans les instructions relatives
au système de détection moléculaire Neogen et au Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter.
Conserver ces consignes de sécurité pour s'y référer ultérieurement.
AVERTISSEMENT : Indique une situation dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner un décès, desblessures graves et/ou des dommages matériels.
REMARQUE :indique une situation potentiellement dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner
des dommages matériels.

W AVERTISSEMENT
Ne pas utiliser le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter pour diagnostiquer des pathologies
chez les humains ou les animaux.
L’utilisateur doit former son personnel de manière appropriée aux techniques d’analyse actuelles : par exemple, lesbonnes pratiques de laboratoire(3), les normes ISO/IEC 17025(4) ou ISO 7218(5).
Afin de réduire les risques associés aux faux négatifs, qui peuvent entraîner la diffusion de produits contaminés :• Se conformer au protocole et effectuer les tests en suivant exactement les instructions relatives au produit.
• Conserver le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter conformément aux indications surl’emballage et aux instructions relatives au produit.
• Toujours utiliser le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter avant la date de péremption.
• Utiliser le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter avec les échantillons environnementaux
d’aliments et d’aliments transformés qui ont été validés en interne ou par une tierce partie.
• N’utiliser le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter qu’avec des surfaces, des désinfectants,
des protocoles et des souches bactériennes validés en interne ou par une tierce partie.
• En cas d’échantillon environnemental contenant un tampon neutralisant avec un composé d’aryle sulfonate, diluerl’échantillon dans un bouillon d’enrichissement stérile 1:2 avant l’analyse (1 volume d’échantillon pour 1 volume
de bouillon). Une autre option consiste à transférer 10 µl de l’enrichissement TN dans les tubes de solution de lyse
Neogen. Produits pour la manipulation des échantillons Neogen® comprenant un tampon neutralisant contenant
une composition d’aryle sulfonate : RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G et
HS2410NB2G. Ce protocole n’a pas été testé dans le cadre de l’étude NF Validation.
Afin de réduire les risques associés à l’exposition aux produits chimiques et aux dangers biologiques :• Effectuer les analyses bactériologiques dans un laboratoire correctement équipé et sous la supervision deprofessionnels qualifiés. Les milieux et les équipements d’enrichissement incubés ou les surfaces ayant été
en contact avec des milieux d’enrichissement incubés peuvent contenir des agents pathogènes à des niveauxsuffisamment élevés pour entraîner des risques pour la santé humaine.
• Toujours respecter les consignes de sécurité courantes du laboratoire, porter des tenues et lunettes de protection
adaptées lors de la manipulation de réactifs et d’échantillons contaminés.
• Éviter tout contact avec le contenu du milieu d’enrichissement et les tubes de réactifs après l’amplification.
• Éliminer les échantillons enrichis et les déchets contaminés associés conformément aux normes locales/régionales/
nationales/du secteur actuelles.
• Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chauffe.
• Ne pas dépasser le temps de chauffe recommandé.
• Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérifier la température du support de bloc chauffant pour systèmede détection moléculaire Neogen® (p. ex. thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple
numérique et non un thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du support
de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen.
Afin de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’essai :• Toujours porter des gants (afin de protéger l’utilisateur et de prévenir l’introduction de nucléases).
Afin de réduire les risques associés à l’exposition à des liquides très chauds :• Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chauffe.
• Ne pas dépasser le temps de chauffe recommandé.

2

FR
•

(Français)Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérifier la température du support de bloc chauffant pour systèmede détection moléculaire Neogen® (p. ex. thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple
numérique et non un thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du support
de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen.

REMARQUE
Afin de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’essai :• Changer de gants avant l’hydratation des pastilles réactives.
• Utiliser de préférence des pipettes de qualité biologie moléculaire, stériles et munies d’embouts à filtre.
• Utiliser une nouvelle pipette pour chaque transfert d’échantillon.
• Utiliser les bonnes pratiques de laboratoire pour transférer l’échantillon de l’enrichissement vers le tube de lyse. Pouréviter toute contamination des pipettes, l’utilisateur peut choisir d’ajouter une étape de transfert intermédiaire. Par
exemple, l’utilisateur peut transférer chaque échantillon enrichi dans un tube stérile.
• Utiliser un poste de travail de biologie moléculaire disposant si possible d’une lampe germicide.
• Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/defermeture, etc.) avec une solution de 1-5 % d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination
de l’ADN.
Afin de réduire les risques associés à un résultat faux positif :• Ne jamais ouvrir les tubes après amplification.
• Toujours éliminer les tubes contaminés en les faisant tremper dans une solution d’eau de Javel concentrée à 1-5 %(v:v dans l’eau) pendant une heure. Effectuer cette procédure à distance de la zone de préparation de l’analyse.
• Ne jamais stériliser à l’autoclave les tubes de réactifs après amplification.
• Si des niveaux élevés d’ADN de Cronobacter (p. ex., ADN de cellules de Cronobacter non viables ayant fait l’objet
d’une étape de destruction/d’inactivation) sont suspectés dans les échantillons, les enrichissements présumés
positifs doivent être traités par DNase avant l’étape de Lyse. Pour en savoir plus, contacter un représentant Neogen.
Ce protocole n’a pas été testé dans le cadre de l’étude NF Validation.
Consulter la fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la réglementation
locale relative à la mise au rebut.
Pour toute question concernant des applications ou procédures spécifiques, consulter notre site Internet à l’adressewww.neogen.com ou contacter le représentant ou distributeur Neogen local.

Responsabilité de l’utilisateur

Il incombe aux utilisateurs de connaître les instructions et les informations relatives au produit. Rendez-vous sur notre sitewww.neogen.com, ou contactez votre représentant ou distributeur Neogen local pour obtenir de plus amples informations.
Lors du choix d’une méthode de test, il est important d’admettre que des facteurs externes comme les méthodesd’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des échantillons, notamment l’homogénéisation et le mélange,la manipulation et les techniques de laboratoires peuvent influencer les résultats.
Il incombe à l’utilisateur de sélectionner une méthode ou un produit d’analyse adapté pour évaluer un nombre suffisantd’échantillons avec les matrices et les souches microbiennes appropriées, afin de garantir que la méthode d’analyse est
conforme à ses critères.
Il incombe également à l’utilisateur de déterminer si une méthode d’analyse et ses résultats répondent aux exigences deses clients ou fournisseurs.
Comme pour toute méthode d’analyse, les résultats obtenus avec un produit Neogen Sécurité Alimentaire ne
constituent pas une garantie de la qualité des matrices ou des processus testés.
Dans le but d’aider les clients à évaluer la méthode pour différentes matrices, Neogen a élaboré le kit de contrôle dematrice pour système de détection moléculaire Neogen®. Lorsque cela est nécessaire, utiliser le Contrôle de matrice(MC) pour déterminer si la matrice peut avoir un impact sur les résultats du Neogen Kit de détection moléculaire version
2 - Cronobacter. Tester plusieurs échantillons représentatifs de la matrice, c.-à-d. des échantillons d’origines différentes,
au cours de toute période de validation lors de l’adoption de la méthode Neogen ou dans le cadre d’analyses dematrices nouvelles, inconnues ou ayant subi des modifications de matières premières ou de processus.
Une matrice peut être définie comme un type de produit présentant des propriétés intrinsèques, telles que lacomposition et le processus. Les différences entre les matrices peuvent être aussi simples que les effets causés par leursdifférences de processus ou de présentation, par exemple, cru/pasteurisé, frais/sec, etc.

3

FR(Français)Limitation de garantie/limites de recours

SAUF SI EXPRESSÉMENT ÉTABLI DANS LA SECTION DE GARANTIE LIMITÉE D’UN EMBALLAGE DE PRODUITINDIVIDUEL, NEOGEN RENONCE À TOUTE GARANTIE EXPLICITE ET IMPLICITE, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y
LIMITER, TOUTE GARANTIE DE COMMERCIALISATION OU D’ADAPTATION POUR UN USAGE SPÉCIFIQUE. En
cas de défaut de tout produit Neogen Sécurité Alimentaire, Neogen ou son distributeur agréé s’engage, à son entière
discrétion, au remplacement ou au remboursement du prix d’achat du produit. Il s'agit de vos recours exclusifs. Merci decontacter votre représentant Neogen ou votre distributeur Neogen agréé pour toute autre question.

Limitation de responsabilité de Neogen

NEOGEN NE SERA PAS TENUE POUR RESPONSABLE DES PERTES OU DES DOMMAGES ÉVENTUELS, QU’ILSSOIENT DIRECTS, INDIRECTS, SPÉCIFIQUES, ACCIDENTELS OU CONSÉCUTIFS, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y
LIMITER, LES PERTES DE PROFITS. En aucun cas et en aucune manière, la responsabilité de Neogen ne sera engagéeau-delà du prix d'achat du produit prétendu défectueux.

Conservation et élimination des déchets

Conserver le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter à une température comprise entre 2 et 8 °C. Ne
pas congeler. Conserver à l’abri de la lumière. Une fois le kit ouvert, vérifier que le sachet en aluminium est intact. Si ce sachet
est endommagé, ne pas utiliser le kit. Après ouverture, les tubes de réactif non utilisés doivent toujours être conservés dans lesachet refermable, en laissant l’agent déshydratant à l’intérieur afin de maintenir la stabilité des réactifs lyophilisés. Conserver
les poches refermées à une température comprise entre 2 et 8 °C. Ne pas conserver plus de 60 jours.
Ne pas utiliser le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter après la date de péremption. La date depéremption et le numéro de lot sont inscrits sur l’étiquette à l’extérieur de la boîte. Après utilisation, il est possible que
les tubes de milieu d’enrichissement et du Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter contiennent
des éléments pathogènes. Lorsque l’analyse est terminée, suivre les normes actuelles du secteur pour l’élimination
des déchets contaminés. Consulter la fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires etconnaître la réglementation locale relative à la mise au rebut.

Instructions d’utilisation

Suivre attentivement toutes les instructions. Dans le cas contraire, les résultats obtenus risquent d’être inexacts.
Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/de fermeture,etc.) avec une solution de 1-5 % d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination de l’ADN.
L’utilisateur doit suivre la formation de qualification de l’opérateur du système de détection moléculaire Neogen, commedécrit dans le document intitulé « Protocoles et instructions relatifs à la qualification d’installation (IQ)/qualification
opérationnelle (OQ) pour le système de détection moléculaire Neogen »(6).
Se référer à la section « Instructions spécifiques pour méthodes validées » pour connaître les exigences spécifiques :Voir le tableau 3 pour les protocoles d’enrichissement selon l’AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 et lePerformance TestedSM Certificate n° 101703
Voir le tableau 4 pour les protocoles d’enrichissement selon la méthode de certification NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
Enrichissement de l’échantillon
Les tableaux 2, 3 et 4 fournissent des indications pour les protocoles d’enrichissement des échantillons alimentaires etenvironnementaux.
Il incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage/d’enrichissement ou des proportions de dilution
différents pour garantir que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.
Aliments, poudres environnementales, poussières, balayures et éponges
1. Équilibrer le milieu d’enrichissement à une température (20-25 °C), sauf mention contraire dans le protocole
d’enrichissement (voir les tableaux 2, 3 et 4).
2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon et homogénéiser soigneusement parmélange, par digestion, en secouant ou à la main pendant 2 ± 0,2 minutes ou jusqu’à dissolution complète desparticules et jusqu’à ce que la suspension de l’enrichissement soit homogène(7, 8).
a.

Des facteurs tels que la préparation des échantillons, notamment l’homogénéisation et le mélange, lamanipulation et les techniques de laboratoires peuvent influencer les résultats.

b. Pour les échantillons à forte teneur en particules, il est recommandé d’utiliser des sacs avec filtre.

4

FR
c.

(Français)Pour les matrices qui gonflent au contact de l’eau et qui sont très visqueuses (p. ex., céréales, amidons), il est
recommandé de réaliser une dilution supplémentaire (> 1:10) jusqu’à ce que la viscosité soit réduite de manière
appropriée ou d’ajouter de l’alpha-amylase 1 % (p/v) stérile à EPT (ISO)(8).

d. Pour les échantillons de céréales de grande taille, ajouter lentement les céréales en poudre au liquide en
mélangeant régulièrement pour éviter la création d’amas particulaires.
3. Incuber comme indiqué dans le tableau de protocole adéquat (voir les tableaux 2, 3 et 4).
Tableau 2. Protocoles d’enrichissement généraux
Température
Durée
VolumeVolume de bouillond’enrichissement d’enrichissementd’analyse
1, 2d’enrichissement(± 1 °C)(h)d’échantillon

Matrice del’échantillon

Taille del’échantillon1

Préparation en
poudre pournourrisson (PEP) etmatières premières
telles que lait enpoudre, soja en
poudre, petit-lait
en poudre, lactose,
farine de riz et
maltodextrine

1X échantillon
gram

9X ml EPT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Matières premières
telles que sels,minéraux, acides
aminés, DHA (acide
docosahexaénoïque)et vitamines

1X graméchantillon

99X ml EPT (ISO)(1:100)

37

18-24

20 µl

Échantillons
environnementaux
secs comme lespoussières, lesbalayures, lescollectes par
aspiration

1X échantillon
gram

9X ml EPT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Épongeenvironnementale
avec bouillon
Letheen 10 ml ou
bouillon neutralisant(D/E)

1 dispositifd’échantillonnage

90 ml EPT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

1. Neogen a évalué le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter à l’aide des proportions de dilution
figurant dans le tableau 2 jusqu’à 300 g. Il incombe à l’utilisateur de valider des proportions ou des protocoles dedilution différents pour garantir que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.
2. Utiliser une EPT ISO préchauffée si le volume du bouillon d’enrichissement est supérieur à 300 ml (p. ex. sil’échantillon est > 30 grammes).
Instructions spécifiques pour méthodes validées
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certificat n° 101703

5

FR(Français)Dans les études « Official Methods of AnalysisSM » et « Performance Tested MethodSM » de l’Institut de recherche del’AOAC, il a été démontré que le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter était une méthodeefficace de détection de Cronobacter. Les matrices testées au cours de l’étude sont répertoriées dans le tableau 3.
Tableau 3. Protocoles d’enrichissement selon AOAC® OMASM 2018.01 et PTMSM 101703
Température
Durée
VolumeVolume ded’enrichissement d’enrichissementd’analysebouillon(± 1 °C)(h)d’échantillond’enrichissement1

Matrice del’échantillon

Taille del’échantillon

Préparation en poudre
pour nourrisson etcéréales en poudre
pour nourrisson

10 g

90 ml EPT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Céréales en poudresans probiotiques pournourrisson

300 g

2 700 ml EPT(ISO) (1:10)

Préchauffés 37

18-24

20 µl

Préparation en poudre
avec probiotiquespour nourrisson etcéréales en poudre
avec probiotiques pournourrisson

300 g

2 700 ml EPT(ISO) + 10 mg/l
vancomycine

Préchauffés 37

22-24

20 µl

Lactose

10 g

90 ml EPT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

1 dispositifd’échantillonnage

90 ml EPT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Épongeenvironnementale
avec 10 ml de bouillon
neutralisant D/E

1. Utiliser une EPT (ISO) préchauffée si le volume du bouillon d’enrichissement est supérieur à 300 ml.
Méthode certifiée par AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

MÉTHODES ALTERNATIVES D’ANALYSE POUR L’AGROALIMENTAIRE
http://nf-validation.afnor.org/en
Pour plus d’information sur l’expiration de la validité, se reporter au certificat NF VALIDATION disponible sur le site
Internet cité ci-dessus.
Méthode de certification NF Validation, conformément à la norme ISO 16140-2((9) par rapport à la norme ISO 22964.
Portée de la validation : Préparation en poudre pour nourrisson et céréales pour nourrisson avec et sans probiotiques,matières premières et échantillons environnementaux.
Préparation de l’échantillon : les échantillons doivent être préparés conformément aux normes EN ISO 22694(2) et EN
ISO 6887(7, 8).

6

FR(Français)Version de logiciel : voir le certificat.
Tableau 4. Protocoles d’enrichissement selon la méthode de certification NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
Matrice del’échantillon
•
•
•

•

•

Préparation en
poudre pournourrisson
Céréales en
poudre pournourrisson
Ingrédients tels
que lait en poudre,
soja en poudre,
petit-lait enpoudre, lactose,
farine de riz,maltodextrine
Échantillons
environnementaux
secs comme lespoussières, lesbalayures, lescollectes par
aspiration,

Éponge, eau derinçage, lingettes

Préparation en poudre
pour nourrisson etcéréales en poudre
pour nourrisson (sansprobiotiques)Céréales en poudre
pour nourrisson etpréparation en poudre
pour nourrisson (avec
probiotiques)

Volume de Température
Durée
VolumeTaille debouillond’enrichisse- d’enrichissed’analysel’échantillon d’enrichissementmentd’échantillon
ment1(± 1 °C)(heures)

10 g

90 ml EPT
(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Point
d’interruption
recommandé2, 3

Le bouillond’enrichissement
ou le lysat del’échantillon
peuvent êtrestockés à une
températurecomprise entre 2
et 8 °C pendantune duréemaximale de72 heures

1 dispositifd’échantillonnage ou
10 ml

Le bouillond’enrichissement
ou le lysat del’échantillon
peuvent êtrestockés à une
températurecomprise entre 2
et 8 °C pendantune duréemaximale de72 heures

30-300 g

EPT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Le bouillond’enrichissement
ou le lysat del’échantillon
peuvent êtrestockés à une
températurecomprise entre 2
et 8 °C pendantune duréemaximale de72 heures

30-300 g

EPT (ISO)+ 10 mg/L
vancomycine(1:10)

37

22-24

20 µl

Aucun

7

FR

(Français)1. Utiliser une EPT ISO préchauffée si le volume du bouillon d’enrichissement est supérieur à 300 ml (p. ex. sil’échantillon est > 30 grammes).
2. Après avoir retiré le bouillon d’enrichissement de son lieu de stockage, reprendre l’analyse à partir de l’étape 1 dela section Lyse. Après avoir retiré le lysat de l’échantillon de son lieu de stockage, reprendre l’analyse à partir del’étape 7 de la section Lyse.
3. Se reporter à l’Annexe A pour le nouveau test des lysats stockés soumis à un traitement thermique.
Préparation du plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen®
1. Humidifier un chiffon ou une serviette jetable à l’aide d’une solution de 1-5 % d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) et
nettoyer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen.
2. Rincer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen à l’eau.
3. Utiliser un chiffon jetable pour sécher le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire
Neogen.
4. S’assurer que le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen est sec avant touteutilisation.
Préparation du support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen®
Poser le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen sur le plan de travail dulaboratoire : le plateau de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen n’est pas utilisé. Utiliser lebloc refroidissant à la température ambiante du laboratoire (20-25 °C).
Préparation du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen®
Placer le support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen dans une unité de traitement
thermique à sec double bloc. Allumer l’unité de traitement thermique à sec et régler la température afin que le support
de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen atteigne et conserve une température de 100 ± 1 °C.
REMARQUE : selon l’unité de traitement thermique utilisée, le support de bloc chauffant pour système de détection
moléculaire Neogen atteint la température souhaitée en 30 minutes environ. Utiliser un thermomètre étalonné adapté(p. ex., un thermomètre à immersion partielle ou un thermomètre à thermocouple numérique, et non un thermomètreà immersion totale) placé à l’endroit indiqué du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire
Neogen afin de vérifier que sa température est de 100 ± 1 °C.
Préparation de l’instrument de détection moléculaire Neogen®
1. Lancer le logiciel de détection moléculaire Neogen® et ouvrir une session. Contacter votre représentant Neogen
Sécurité Alimentaire pour vous assurer d’avoir la version la plus récente du logiciel.
2. Mettre l’instrument de détection moléculaire Neogen sous tension.
3. Créer ou modifier une analyse en saisissant les données pour chaque échantillon. Pour plus de précisions, consulter
le manuel d’utilisation du système de détection moléculaire Neogen.
REMARQUE : l’instrument de détection moléculaire Neogen doit être prêt avant l’insertion du plateau de chargement
rapide pour système de détection moléculaire Neogen, dans lequel sont placés les tubes de réactif. Cette étape dechauffage prend environ 20 minutes ; pendant ce processus, un voyant lumineux ORANGE s’allume sur la barre d’état del’instrument. Lorsque l’instrument est prêt pour l’analyse, la barre d’état passe au VERT.
Lyse
Retirer le portoir pour tubes de solution de lyse Neogen avec un tournevis avant de le placer dans le support de bloc
chauffant pour système de détection moléculaire Neogen.

8

FR(Français)1. Laisser les tubes de solution de lyse Neogen se réchauffer en plaçant le support à température ambiante (20 à
25 °C) pendant une nuit (16 à 18 heures). Il est également possible d’amener les tubes de solution de lyse Neogen à
température ambiante en les plaçant sur le plan de travail du laboratoire pendant au moins 2 heures, en incubant les
tubes de solution de lyse Neogen dans un incubateur à 37 ± 1 °C pendant 1 heure ou en les plaçant dans une unitéde traitement thermique à sec double bloc pendant 30 secondes à 100 ± 1 °C.
2. Retourner les tubes recouverts d’un bouchon pour les mélanger. Passer à l’étape suivante dans un délai de 4 heuresaprès avoir retourné les tubes.
3. Retirer le bouillon d’enrichissement de l’incubateur.
4. Un tube de solution de lyse Neogen est nécessaire pour chaque échantillon et pour l’échantillon TN (milieu
d’enrichissement stérile).
4.1 Les barrettes de tubes de solution de lyse Neogen peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre
souhaité. Sélectionner le nombre de tubes de solution de lyse Neogen ou de barrettes de 8 tubes nécessaire.
Placer les tubes de solution de lyse Neogen dans un portoir vide.
4.2 Pour éviter toute contamination croisée, ouvrir les barrettes de tubes de solution de lyse Neogen une à une etutiliser un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.
4.3 Transférer l’échantillon enrichi dans les tubes de solution de lyse Neogen comme indiqué ci-dessous :Transférer tout d’abord chaque échantillon enrichi dans des tubes de solution de lyse Neogen individuels.
Transférer le NC en dernier.
4.4 Ouvrir les barrettes de tubes de solution de lyse Neogen une à une à l’aide de l’outil d’ouverture/fermeture poursystème de détection moléculaire Neogen® - Lyse.
4.5 Jeter le bouchon du tube de solution de lyse Neogen. Si le lysat doit être soumis à un nouveau test, placer lesbouchons dans un récipient propre pour réapplication après la lyse.
4.5.1. Pour le traitement du lysat conservé, voir l’annexe A.
4.6 Agiter le sac contenant l’enrichissement avant de prélever des échantillons du côté filtré lors du travail avec deséchantillons visqueux.
4.7 Transférer 20 µl d’échantillon dans un tube de solution de lyse Neogen, sauf indication contraire mentionnée
dans le tableau de protocole.
5. Répéter l’étape 4.4 à 4.7 jusqu’à ce que chaque échantillon individuel soit ajouté à un tube de solution de lyse
Neogen correspondant au niveau de la barrette.

6. Une fois tous les échantillons transférés, transférer 20 µl de TN (milieu d’enrichissement stérile, p. ex. EPT) dans un
tube de solution de lyse Neogen. Ne pas utiliser d’eau comme témoin négatif.
7. Vérifier que la température du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen est de 100 ± 1 °C.
8. Placer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse Neogen dans le support de bloc chauffant pour systèmede détection moléculaire Neogen et chauffer pendant 15 ± 1 minutes. Lors du chauffage, la solution de lyse Neogen
passera de rose (froide) à jaune (chaude).
Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuventêtre considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection
moléculaire Neogen.
9. Retirer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse Neogen du bloc chauffant pour système de détection
moléculaire Neogen et laisser refroidir dans le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire
Neogen pendant au moins 5 minutes et au plus 10 minutes. Utilisé à température ambiante sans le plateau de bloc
9

FR(Français)refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen®, le support de bloc refroidissant pour système dedétection moléculaire Neogen doit être posé directement sur le plan de travail du laboratoire. Une fois froide, lasolution de lyse Neogen retrouvera une couleur rose.
10. Retirer le couvercle des tubes de solution de lyse Neogen du support de bloc refroidissant pour système dedétection moléculaire Neogen.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplification
1. Il est nécessaire d’utiliser un tube de réactif du Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter pourchaque échantillon et pour le NC.
1.1 Les barrettes de tubes peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes souhaité. Sélectionner lenombre de tubes de réactif du Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter ou de barrettes de
8 tubes nécessaire.
1.2 Placer les tubes de réactif du Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter dans un portoir vide.
1.3 Éviter de toucher les pastilles réactives se trouvant au fond des tubes.
2. Sélectionner un tube de contrôle de réactif (RC) Neogen et le placer dans le portoir.
3. Afin d’éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de réactif du Neogen Kit de détection
moléculaire version 2 - Cronobacter à la fois et utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.
4. Transférer chaque lysat dans un tube de réactif du Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter etdans un tube de contrôle de réactif Neogen comme décrit ci-dessous :Transférer d’abord chaque lysat d’échantillon dans un tube de réactif du Neogen Kit de détection moléculaire version
2 - Cronobacter, puis faites de même avec le NC. Hydrater le tube de contrôle de réactif Neogen en dernier.
5. Ouvrir les tubes de réactif du Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter un à un à l’aide de l’outild’ouverture/fermeture pour système de détection moléculaire Neogen® – Réactif. Jeter le bouchon.
5.1 Transférer 20 μl de lysat d’échantillon prélevé au niveau de la moitié (1/2) supérieure du liquide (éviter
le précipité) dans le tube de solution de lyse Neogen du Neogen Kit de détection moléculaire version 2- Cronobacter correspondant. Incliner la pipette pour ne pas agiter les pastilles. Mélanger en effectuant
5 cycles d’aspiration/de refoulement avec la pipette.
5.2 Répéter l’étape 5.1 jusqu’à ce que chaque lysat d’échantillon individuel ait été ajouté au tube de réactif duNeogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter correspondant dans la barrette.
5.3 Placer la capsule supplémentaire prévue à cet effet sur les tubes de réactif du Neogen Kit de détection
moléculaire version 2 - Cronobacter, puis prendre le bord arrondi de l’outil d’ouverture/fermeture pour systèmede détection moléculaire Neogen – Réactif et appuyer dans un mouvement de va-et-vient afin de s’assurer quela capsule est fermement insérée sur le tube.
5.4 Répéter les étapes 5.1 à 5.3 pour tous les échantillons à analyser.
5.5 Lorsque tous les lysats d’échantillons ont été transférés, répéter les étapes 5.1 à 5.3 afin de transférer 20 µl de
lysat de TN dans un tube de réactif Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter
5.6 Transférer 20 µl de lysat de TN dans un tube de contrôle de réactif Neogen. Incliner la pipette pour ne pas
agiter les pastilles. Mélanger en effectuant 5 cycles d’aspiration/de refoulement avec la pipette.
6. Charger les tubes recouverts d’un bouchon dans un plateau de chargement rapide pour système de détection
moléculaire Neogen propre et décontaminé. Fermer et verrouiller le couvercle du plateau de chargement rapide
pour système de détection moléculaire Neogen.

10

FR

(Français)7. Examiner et confirmer l’analyse configurée sur le logiciel de détection moléculaire Neogen.
8. Cliquer sur l’icône « Démarrer » du logiciel et sélectionner l’instrument à utiliser. Le couvercle de l’appareil
sélectionné s’ouvre automatiquement.
9. Placer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen dans l’instrument dedétection moléculaire Neogen et fermer le couvercle pour lancer l’essai. Les résultats sont obtenus en 60 minutes ;toutefois, les résultats positifs peuvent être détectés plus tôt.
10. Une fois l’analyse terminée, retirer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen
de l’instrument de détection moléculaire Neogen et tremper les tubes dans une solution d’eau de Javel à 1-5 % (v:vdans de l’eau) pendant 1 heure, et ce, à l’écart de la zone de préparation des analyses.
REMARQUE : pour réduire le risque de résultats faux positifs dus à une contamination croisée, ne jamais ouvrir
les tubes de réactif contenant de l’ADN amplifié. Ceci comprend les tubes de réactif du Neogen Kit de détection
moléculaire version 2 - Cronobacter, les tubes de contrôle de réactif Neogen et les tubes de contrôle de matrice
Neogen. Toujours éliminer les tubes de réactif fermés en les trempant dans une solution d’eau de Javel à 1-5 % (v:vdans de l’eau) pendant 1 heure, et ce à l’écart de la zone de préparation des analyses.

Résultats et interprétation

Un algorithme interprète la courbe de résultats lumineuse provenant de la détection de l’amplification de l’acide
nucléique. Les résultats sont automatiquement analysés par le logiciel et sont codés par couleur en fonction du résultat.
Un résultat positif ou négatif est déterminé par l’analyse d’un nombre de paramètres des courbes individuelles. Les
résultats présumés positifs sont rapportés en temps réel tandis que les résultats négatifs ou à vérifier sont affichés à lafin de l’essai.
REMARQUE : même un échantillon négatif ne donnera pas de résultat égal à 0 RLU car le système et les réactifs
d’amplification du Neogen Kit de détection moléculaire version 2 - Cronobacter effectuent une lecture d’unité relativede lumière (RLU) « de base ».
Confirmation• Confirmation des résultats selon la méthode de certification NF Validation
Dans le cadre de la méthode de certification NF VALIDATION, tous les enrichissements présumés positifs doiventêtre confirmés en suivant la confirmation de la méthode de référence(2), en commençant par effectuer un transfert del’enrichissement primaire (EPT ISO ou EPT ISO contenant 10 mg/l de vancomycine).
•

Autre protocole de confirmation

Les enrichissements présumés positifs doivent être confirmés selon les procédures standard des laboratoires ou
en suivant la confirmation de la méthode de référence appropriée(1,2), en commençant par effectuer un transfert del’enrichissement primaire (EPT ISO ou EPT ISO contenant 10 mg/l de vancomycine) dans les milieux d’enrichissement
secondaire, puis un étalement et une confirmation des isolats à l’aide des méthodes biochimiques, sérologiques et/ou
moléculaires appropriées.
Dans le cas peu probable d’un résultat lumineux inhabituel, l’algorithme considérera ce dernier comme « À vérifier ».
Neogen recommande à l’utilisateur de recommencer l’essai pour tout échantillon considéré comme « À vérifier ». Si lerésultat continue à être « À vérifier », passer au test de confirmation en utilisant les méthodes usuelles ou en suivant lesméthodes spécifiques répondant aux normes locales(1,2).
En cas de résultats contradictoires (positif présumé avec le Neogen Kit de détection moléculaire version 2 Cronobacter, non confirmé par l’un des moyens décrits ci-dessus) le laboratoire doit respecter les procédures standardétablies pour communiquer leurs résultats.
Pour toute question concernant des applications ou procédures spécifiques, consulter notre site Internet à l’adressewww.neogen.com ou contacter le représentant ou distributeur Neogen local.
11

FR(Français)Annexe A. Interruption du protocole : Stockage et nouveau test des lysats soumis à un traitement thermique
1. Pour conserver un lysat soumis à un traitement thermique, refermer le tube de lyse avec un bouchon propre (voir lasection Lyse, 4.5)
2. Stocker à une température comprise entre 2 et 8 °C jusqu’à 72 heures.
3. Préparer un échantillon conservé pour amplification en retournant 2 à 3 fois pour mélanger.
4. Ouvrir les tubes.
5. Placer les tubes de lysats mélangés dans le support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire
Neogen et chauffer à 100 ± 1 °C pendant 5 ± 1 minutes.
6. Retirer le portoir pour tubes de solution de lyse du bloc chauffant et laisser refroidir dans le support de bloc
refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen entre 5 et 10 minutes.
7. Poursuivre le protocole à la section Amplification détaillée ci-dessus.

Références :1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Se reporter aux versions en cours de validité des méthodes normalisées citées plus haut.

Explication des symboles
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

DE (Deutsch)
Erscheinungsdatum: 2024-01

Gebrauchsanweisungen
Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter
Produktbeschreibung und Verwendungszweck

Der Neogen® Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter wird in Verbindung mit dem Neogen® Molekulares
Detektionssystem für den schnellen und spezifischen Nachweis von Cronobacter in angereicherten Proben aus Lebensund Futtermitteln sowie Umgebungen der Lebensmittelverarbeitung verwendet.
Neogen Molekulares Detektions Assays verwenden die mittels einer „Loop“ initiierte isotherme Amplifikation, um in
Kombination mit der Biolumineszenz die Amplifikation von Nukleinsäuresequenzen mit hoher Spezifität, Sensitivität
und Geschwindigkeit zu bestimmen. Die vorläufig positiven Ergebnisse werden in Echtzeit erstellt, während negative
Ergebnisse erst nach Abschluss des Tests dargestellt werden. Die vorläufig positiven Ergebnisse sollten mithilfe eines
Testverfahrens Ihrer Wahl oder gemäß der jeweils geltenden Richtlinien bestätigt werden(1, 2).
Der Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter ist für den Gebrauch in Labors bestimmt und muss von inLaborverfahren geschultem Fachpersonal angewendet werden. Neogen verfügt über keine Daten zur Anwendung dieses
Produkts in anderen Industrien als der Lebensmittel- und Getränkeindustrie. Zum Beispiel verfügt Neogen über keine
Daten zur Verwendung dieses Produkts mit Pharmazeutika-, Kosmetika- oder klinischen und tiermedizinischen Proben.
Der Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter wurde nicht für alle möglichen Lebensmittelprodukte,
Lebensmittelverarbeitungsverfahren, Testprotokolle oder alle möglichen Bakterienstämme evaluiert.
Wie bei allen Testverfahren können die Ergebnisse durch die Quelle, Zusammensetzung und Qualität desAnreicherungsmediums beeinflusst werden. Faktoren wie Probennahme, Testprotokolle, Probenaufbereitung
einschließlich Homogenisierung und Mischung, Handhabung und Labortechnik können die Ergebnisse beeinflussen.
Neogen empfiehlt die Beurteilung der Methode einschließlich Anreicherungsmedium in der Umgebung des Benutzers
mit einer ausreichenden Anzahl an Proben mit bestimmten Lebensmitteln und/oder Umgebungsproben und mikrobiellen
Pathogenen, um sicherzustellen, dass die Methode den Anforderungen des Benutzers entspricht.
Neogen hat den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter mit gepuffertem Peptonwasser (ISO) evaluiert.
Das Neogen® Molekulare Detektion – Gerät ist für die Verwendung mit Proben bestimmt, die während der Assay-Lyse
wärmebehandelt wurden, wodurch die in der Probe vorhandenen Organismen zerstört werden sollen. Proben, diewährend der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein biologisches Risiko dar
und sollten NICHT in das Neogen Molekulares Detektion – Gerät eingesetzt werden.
Neogen Food Safety hat für die Bereiche Entwicklung und Fertigung die Zertifizierung ISO 9001 der Internationalen
Organisation für Normung (ISO) erhalten.
Der Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter enthält 96 Testverfahren, die in Tabelle 1 beschrieben werden.
Tabelle 1. Komponenten des Neogen Molekulares Detektions Assay
ArtikelKennzeichnung

Stückzahl

InhaltKommentare

Neogen® Lyselösung (LS)

Rosafarbene Lösung
in transparenten
Gefäßen96 (12 Streifen in
8 Gefäßen)580 µl LS pro Gefäß

Abgefüllt undgebrauchsfertig

Reagenzgefäße für Neogen®
Molekulares Detektions
Assay 2 - Cronobacter

Orangerote Gefäße

96 (12 Streifen in
8 Gefäßen)Lyophilisierte
spezifische
Amplifikations- und
DetektionsmischungGebrauchsfertig

Zusätzliche Kappen

Orangerote Kappen

96 (12 Streifen in
8 Kappen)

Neogen® Reagenzkontrolle(RC)

Durchsichtige
Kippgefäße

16 (2 Beutel mit 8
einzelnen Gefäßen)Gebrauchsfertig
Lyophilisierte
Kontroll-DNS,
Amplifikations- und
Detektionsmatrix

Gebrauchsfertig

Die Negativkontrolle (nicht im Set enthalten) ist steriles Anreicherungsmedium, z. B. gepuffertes Peptonwasser (ISO). Als
Negativkontrolle kein Wasser verwenden.
1DE (Deutsch)

Sicherheit

Der Anwender sollte sämtliche in der Gebrauchsanleitung des Neogen Molekulares Detektionssystems und des Neogen
Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter aufgeführten Sicherheitshinweise gelesen und verstanden haben.
Bewahren Sie diese Sicherheitshinweise auf, um später auf sie zurückgreifen zu können.
WARNUNG: Bezeichnet eine Gefahrensituation, die – wenn sie nicht vermieden wird – zum Tode oder zu schweren
Verletzungen und/oder Sachschäden führen kann.
HINWEIS: Bezeichnet eine potenzielle Gefahrensituation, die – wenn sie nicht vermieden wird – zu Sachschäden
führen kann.

W WARNUNG
Den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter nicht zur Diagnose von Erkrankungen bei Menschenoder Tieren einsetzen.
Der Anwender muss sein Personal in den entsprechenden Testmethoden unterweisen: z. B. in den Grundsätzen derGuten Laborpraxis(3), ISO 17025(4) oder ISO 7218(5).
Maßnahmen zur Reduzierung der mit einem falsch negativen Ergebnis verbundenen Risiken, die zur Freigabe eines
kontaminierten Produkts führen können:• Befolgen Sie das Protokoll und führen Sie die Tests genau wie in der Gebrauchsanweisung angegeben durch.
• Lagern Sie den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter wie auf der Packung und in derGebrauchsanweisung beschrieben.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter stets vor Ablauf des Verfalldatums.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter mit Lebensmittel-, Futter- undLebensmittelverfahrensproben, die entweder intern oder von einem Dritten evaluiert worden sind.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter nur mit Oberflächen,
Desinfektionsmitteln, Protokollen und Bakterienstämmen, die intern oder durch Dritte validiert wurden.
• Wenn Sie eine Umgebungsprobe haben, die einen Neutralisierungspuffer mit einem Acrylsulfonat-Komplex
enthält, dann müssen Sie vor dem Testen der Probe eine 1:2 Verdünnung (1 Teil Probe in 1 Teil steriler
Anreicherungsbouillon) vornehmen. Ebenso können Sie 10 μl Anreicherungsmedium mit Neutralisationspuffer in
die Neogen Lyselösungsgefäße übertragen. Neogen® Produkte zur Probenhandhabung, die Neutralisierungspuffer
mit Acrylsulfonat-Komplex enthalten: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G und
HS2410NB2G. Dieses Protokoll wurde nicht im Rahmen der NF Validation Studie getestet.
Zur Verminderung der Risiken, die mit der Exposition gegenüber Chemikalien und biogefährlichen Stoffen
verbunden sind:• Führen Sie die Testverfahren mit Pathogenen in einem entsprechend ausgerüsteten Labor und unter der Aufsicht
von geschultem Fachpersonal durch. Inkubierte Anreicherungsmedien und Arbeitsgeräte oder Oberflächen, die in
Kontakt mit inkubierten Anreicherungsmedien gekommen sind, können so stark mit Krankheitserregern belastet
sein, dass ein Risiko für die menschliche Gesundheit besteht.
• Befolgen Sie stets die üblichen Labor-Sicherheitsmaßnahmen und tragen Sie bei der Handhabung von Reagenzienund kontaminierten Proben angemessene Schutzkleidung und geeigneten Augenschutz.
• Vermeiden Sie nach der Amplifikation den Kontakt mit dem Anreicherungsmedium und den Reagenzgefäßen.
• Entsorgen Sie die angereicherten Proben und die damit verbundenen kontaminierten Abfälle gemäß den gültigen
lokalen/regionalen/nationalen/Branchennormen.
• Achten Sie darauf, die empfohlene Temperatur des Heizgeräts nicht zu überschreiten.
• Achten Sie darauf, die empfohlene Anwärmdauer nicht zu überschreiten.
• Verwenden Sie ein geeignetes, kalibriertes Thermometer, um sicherzustellen, dass der Neogen® Molekulare
Detektion – Heizblockeinsatz die richtige Temperatur aufweist (z. B. ein Thermometer zum partiellen Eintauchenoder ein Digitalthermometer, kein Tauchthermometer). Das Thermometer muss an der vorgesehenen Stelle desNeogen Molekularen Detektion – Heizblockeinsatzes platziert werden.
Zur Verminderung von Kreuzkontaminationsrisiken bei der Vorbereitung des Tests:• Tragen Sie stets Handschuhe (sowohl zum Schutz des Anwenders als auch, um ein Einbringen von Nukleasen zu
vermeiden).
Zur Verminderung der Risiken, die mit der Exposition gegenüber heißen Flüssigkeiten verbunden sind:• Achten Sie darauf, die empfohlene Temperatur des Heizgeräts nicht zu überschreiten.
• Achten Sie darauf, die empfohlene Anwärmdauer nicht zu überschreiten.

2DE (Deutsch)•

Verwenden Sie ein geeignetes, kalibriertes Thermometer, um sicherzustellen, dass der Neogen® Molekulare
Detektion – Heizblockeinsatz die richtige Temperatur aufweist (z. B. ein Thermometer zum partiellen Eintauchenoder ein Digitalthermometer, kein Tauchthermometer). Das Thermometer muss an der vorgesehenen Stelle desNeogen Molekularen Detektion – Heizblockeinsatzes platziert werden.

HINWEIS
Zur Verminderung von Kreuzkontaminationsrisiken bei der Vorbereitung des Tests:• Wechseln Sie vor Hydratation des Reagenzpellets die Handschuhe.
• Es wird empfohlen, sterile, hochreine Pipettenspitzen mit Feuchtigkeitsschutz (Filter) zu verwenden.
• Verwenden Sie für jede Probenübertragung eine neue Pipettenspitze.
• Wenden Sie die Grundsätze der Guten Laborpraxis bei der Übertragung der angereicherten Probe auf das Lysegefäß
an. Um eine Kontamination der Pipette zu vermeiden, sollte der Anwender bei der Übertragung einen Zwischenschritt
durchführen. Beispielsweise kann der Anwender jede angereicherte Probe auf ein steriles Gefäß übertragen.
• Sofern möglich, arbeiten Sie an einer molekularbiologischen Arbeitsstation mit Germizidlampe.
• Desinfizieren Sie die Laborbänke und Arbeitsgeräte (Pipetten, Cap/Decap-Werkzeuge usw.) regelmäßig mit einer
1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder DNS-Entfernungslösung.
Zur Verminderung der Risiken, die mit einem falsch positiven Ergebnis verbunden sind:• Öffnen Sie die Gefäße niemals nach der Amplifikation.
• Kontaminierte Gefäße immer aus dem Nachweis-Vorbereitungsbereich entfernen, in 1–5%iger (v:v in Wasser)
Haushaltsbleichmittellösung für 1 Stunde einweichen und dann entsorgen.
• Autoklavieren Sie die Reagenzgefäße niemals nach der Amplifikation.
• Wenn der Verdacht besteht, dass Proben einen hohen Anteil an Cronobacter DNS enthalten (z. B. DNS vonnicht lebensfähigen Cronobacter-Zellen, die zuvor abgetötet/inaktiviert wurden), müssen mutmaßlich positive
Anreicherungen vor der Lyse mit DNase vorbehandelt werden. Zusätzliche Anweisungen erhalten Sie bei Ihrem
Neogen-Ansprechpartner. Dieses Protokoll wurde nicht im Rahmen der NF Validation Studie getestet.
Weitere Informationen sowie die jeweils vor Ort geltenden Richtlinien zur Entsorgung entnehmen Sie bitte dem
Sicherheitsdatenblatt.
Sollten Sie Fragen zu bestimmten Anwendungen oder Verfahren haben, besuchen Sie unsere Website unter
www.neogen.com oder wenden Sie sich an den lokalen Neogen-Verkaufsvertreter oder Händler.

Anwenderverantwortung

Anwender müssen sich auf eigene Verantwortung mit den Gebrauchsanweisungen und Informationen des Produkts
vertraut machen. Für weitere Informationen, besuchen Sie unsere Website unter www.neogen.com oder wenden Sie
sich an Ihren lokalen Neogen Verkaufsvertreter oder Händler.
Bei der Auswahl einer Testmethode ist zu beachten, dass externe Faktoren wie Probennahme, Testprotokolle,
Probenaufbereitung einschließlich Homogenisierung und Mischung, Handhabung und Labortechnik die Ergebnisse
beeinflussen können.
Es liegt in der Verantwortung des Anwenders bei der Auswahl einer Testmethode oder eines Produkts, diese mit einer
ausreichenden Anzahl von Proben und Kontrollen zu evaluieren, um sicherzustellen, dass die gewählte Testmethodeseinen Anforderungen entspricht.
Ebenso liegt es in der Verantwortung des Anwenders, zu bestätigen, dass die Testmethoden und -ergebnisse den
Anforderungen seiner Kunden und Lieferanten entsprechen.
Wie bei allen Testmethoden stellen die mit Neogen Lebensmittelsicherheitsprodukten erhaltenen Ergebnisse keine
Garantie für die Qualität der untersuchten Matrizen oder Prozesse dar.
Als Unterstützung von Kunden bei der Validierung der Methode für verschiedene Matrizes hat Neogen das Set Neogen®
Molekulare Detektion Matrixkontrolle entwickelt. Verwenden Sie bei Bedarf die Matrixkontrolle (MC), um zu bestimmen,
ob die Matrix in der Lage ist, die Ergebnisse des Neogen Molekulares Detektion Assay 2 – Cronobacter Nachweises
zu beeinträchtigen. Testen Sie mehrere für die Matrix repräsentative Proben, d. h. Proben unterschiedlicher Herkunft,während einer Validierungsphase, wenn die Neogen Methode zum Einsatz kommt oder beim Testen neuer oder
unbekannter Matrizes oder Matrizes, die Rohmaterial- oder Verfahrensänderungen durchlaufen haben.
Eine Matrix kann als eine Produktart mit spezifischen Eigenschaften, z. B. in Bezug auf ihre Zusammensetzung undVerarbeitung, definiert werden. Unterschiede zwischen Matrizen können so einfach sein wie die Auswirkungen, die vonUnterschieden bei deren Verarbeitung oder deren Präsentation (z. B. roh im Vergleich zu pasteurisiert; frisch im Vergleich
zu getrocknet etc.) verursacht werden.
3

DE (Deutsch)

Haftungsbeschränkungen/Beschränktes Rechtsmittel

AUSSER ES WIRD AUSDRÜCKLICH ANDERS IM ABSCHNITT DER HAFTUNGSBESCHRÄNKUNGEN DER
VERPACKUNG DES JEWEILIGEN PRODUKTS ANGEGEBEN, LEHNT NEOGEN ALLE AUSDRÜCKLICHENUND STILLSCHWEIGENDEN GARANTIEN, EINSCHLIESSLICH, JEDOCH NICHT BESCHRÄNKT AUF, DIEGEWÄHRLEISTUNG DER MARKTGÄNGIGKEIT ODER DER EIGNUNG FÜR EINEN BESTIMMTEN ZWECK AB. Sollte
sich ein Produkt von Neogen Food Safety als defekt herausstellen, wird es von Neogen oder einem autorisierten
Vertragshändler nach eigenem Ermessen ersetzt oder der Kaufpreis zurückerstattet. Gewährleistungsansprüche
bestehen nicht. Bei weiteren Fragen wenden Sie sich bitte an Ihren Neogen-Vertreter oder autorisierten NeogenHändler.

Einschränkung der Haftung von Neogen

NEOGEN HAFTET NICHT FÜR VERLUSTE ODER SCHÄDEN, GANZ GLEICH OB MITTELBARE, UNMITTELBARE,
SPEZIELLE, NEBEN- ODER FOLGESCHÄDEN EINSCHLIESSLICH ABER NICHT BESCHRÄNKT AUF ENTGANGENEN
GEWINN. In keinem Fall übersteigt die Haftung der Neogen den Kaufpreis des angeblich defekten Produkts.

Lagerung und Entsorgung

Lagern Sie den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter bei 2–8 °C. Nicht einfrieren. Lichtgeschützt
lagern. Vergewissern Sie sich nach dem Öffnen des Sets, dass der Folienbeutel unbeschädigt ist. Verwenden Sie das Set
keinesfalls bei beschädigtem Beutel. Nach dem Öffnen sollten nicht verwendete Reagenzgefäße gemeinsam mit dem
Trockenmittel stets im wiederverschließbaren Beutel verwahrt werden, um die Stabilität der lyophilisierten Reagenziensicherzustellen. Wieder verschlossene Beutel können maximal 60 Tage bei 2 bis 8 °C aufbewahrt werden.
Verwenden Sie den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter nicht nach Ablauf des Verfalldatums. Das
Verfalldatum und die Chargennummer sind auf dem äußeren Etikett der Packung angegeben. Nach dem Gebrauch
können das Anreicherungsmedium und die Gefäße des Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter
pathogene Stoffe enthalten. Beachten Sie nach Abschluss der Testverfahren die gültigen Branchennormen für die
Entsorgung von kontaminierten Abfällen. Weitere Informationen sowie die jeweils vor Ort geltenden Richtlinien zur
Entsorgung entnehmen Sie bitte dem Sicherheitsdatenblatt.

Bedienungsanleitung

Befolgen Sie alle Anweisungen genau. Andernfalls werden möglicherweise ungenaue Ergebnisse erzielt.
Desinfizieren Sie die Laborbänke und Arbeitsgeräte (Pipetten, Cap/Decap-Werkzeuge usw.) regelmäßig mit einer
1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder DNS-Entfernungslösung.
Der Anwender sollte die Funktionsqualifizierung (Operational Qualification, OQ) für das Neogen Molekulares
Detektionssystem absolvieren wie im Dokument „Protokolle und Anweisungen für Installationsqualifizierung (IQ) /Funktionsqualifizierung (OQ) für das Neogen Molekulares Detektionssystem“(6) beschrieben.
Spezifische Anweisungen finden Sie im Abschnitt „Spezielle Anweisungen für validierte Verfahren“:Anreicherungsprotokolle gemäß AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 und Performance TestedSM Certificate#101703 siehe Tabelle 3.
Anreicherungsprotokolle gemäß NF VALIDATION Neogen 01/20 -03/18 siehe Tabelle 4.
Probenanreicherung
Tabelle 2, 3 und 4 enthalten Richtlinien für das Anreichern von Lebensmittel- und Umgebungsproben.
Der Anwender ist selbst für die Validierung von alternativen Probennahme- oder Anreicherungsprotokollen oder
Verdünnungsverhältnissen verantwortlich, durch die sichergestellt werden muss, dass dieses Testverfahren den
Anforderungen entspricht.
Lebensmittel, Umgebungspulver, Stäube, Kehricht und Schwämme
1. Lassen Sie das Anreicherungsmedium Raumtemperatur (20–25 °C) annehmen, sofern im Anreicherungsprotokoll
nichts anderes angegeben ist (siehe Tabellen 2, 3 oder 4).
2. Mischen Sie das Anreicherungsmedium und die Probe aseptisch und homogenisieren Sie diese gründlich durch
2 ± 0,2 Minuten langes Mischen, Stomachen, Vortexen oder Handmischen bzw. bis alle Klumpen vollständig
aufgelöst sind und die Anreicherungslösung homogen ist(7, 8).
a.

Faktoren wie Probenaufbereitung einschließlich Homogenisierung und Mischung, Handhabung undLabortechnik können die Ergebnisse beeinflussen.

b. Bei der Handhabung von partikelreichen Proben wird die Verwendung von Filterbeuteln empfohlen.

4DE (Deutsch)c.

Bei Matrizen, die in Wasser quellen und hochviskos sind (z. B. Getreide, Stärke), wird empfohlen, bis zu einer
angemessenen Viskosität weiter zu verdünnen (> 1:10), oder dem gepufferten Peptonwasser (ISO) sterile 1 %(w/v) Alpha-Amylase hinzuzufügen(8).

d. Bei umfangreichen Getreideproben das Getreidepulver allmählich und unter häufigem Mischen der Flüssigkeit
beifügen, um Klumpenbildung zu vermeiden.
3. Inkubieren Sie die Probe gemäß der entsprechenden Protokolltabelle (siehe Tabellen 2, 3 oder 4).
Tabelle 2. Allgemeine Anreicherungsprotokolle
Probenmatrix

Menge derProbengröße1 Anreicherungsbouillon1, 2AnreicherungsAnreProbenanalysetemperatur
icherungszeit
volumen(± 1 °C)(Stunden)

Säuglingsmilch in Pulverform(PIF) und Rohstoffe wie
Trockenmilchpulver, Sojapulver,
Molkenproteinpulver, Laktose,
Reismehl und Maltodextrin

1X Gramm
Probe

9X ml
Gepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:10)

37

18–24

20 µl

Rohstoffe wie Salze,
Mineralien, Aminosäuren, DHA(Docosahexaensäure) und
Vitamine

1X Gramm
Probe

99X mlGepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:100)

37

18–24

20 µl

1X Gramm
Probe

9X ml
Gepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:10)

37

18–24

20 µl

1 Probengerät

90 ml
Gepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:10)

37

18–24

20 µl

Trockene Umgebungsproben
wie Staub, Kehricht,
Staubsaugerproben
Umgebungsschwamm
mit 10 ml Letheen-Bouillon
oder Dey-Engley(D/E)-Neutralisationsbouillon

1. Neogen hat den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter unter Verwendung derVerdünnungsverhältnisse in Tabelle 2 bis zu 300 g evaluiert. Der Anwender ist selbst für die Validierung vonalternativen Verdünnungsverhältnissen oder Protokollen verantwortlich, durch die sichergestellt werden muss, dassdas Verfahren den Anforderungen entspricht.
2. Verwenden Sie vorgewärmtes gepuffertes Peptonwasser ISO, wenn die Menge der Anreicherungsbouillon > 300 ml
ist (z. B. Probe > 30 Gramm).
Spezifische Anweisungen für validierte Verfahren
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance Tested SM (PTM) Certificate #101703

In OMASM und PTMSM-Studien des AOAC-Forschungsinstituts wurde Neogen Molekularer Detektions Assay 2 –Cronobacter als effektive Methode für den Nachweis von Cronobacter bewertet. Die in der Studie getesteten Matrizes
sind in Tabelle 3 aufgeführt.

5

DE (Deutsch)
Tabelle 3. Anreicherungsprotokolle gemäß AOAC® OMASM 2018.01 und PTMSM 101703
Probenmatrix
Säuglingsmilch in Pulverformund Säuglingsgetreide in
Pulverform
Säuglingsgetreide in
Pulverform, nicht-probiotischSäuglingsmilch in Pulverformund Säuglingsgetreide in
Pulverform mit Probiotika

LaktoseUmgebungsschwamm mit
10 ml Dey-Engley (D/E)Neutralisationsbouillon

Probengröße

Menge derAnreicherungsAnreProbenanalyseAnreicherungstemperatur
icherungszeit
volumenbouillon1(± 1 °C)(Stunden)

10 g

90 ml
Gepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:10)

37

18–24

20 µl

300 g

2700 mlGepuffertes
Peptonwasser(ISO) (1:10)

Vorgewärmt 37

18–24

20 µl

300 g

2700 mlGepuffertes
Peptonwasser(ISO) + 10 mg/l
Vancomycin

Vorgewärmt 37

22–26

20 µl

10 g

90 ml
Gepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:10)

37

18–24

20 µl

1 Probengerät

90 ml
Gepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:10)

37

18–24

20 µl

1. Verwenden Sie vorgewärmtes gepuffertes Peptonwasser ISO, wenn die Menge der Anreicherungsbouillon > 300 ml ist.
NF VALIDATION gemäß AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Für weitere Informationen zum Ablauf der Validierung siehe NF VALIDATION-Zertifikat unter der oben genannten
Website.
Die NF VALIDATION in Übereinstimmung mit der ISO Methode 16140-2(9) im Vergleich zur ISO 22964.
Einsatzgebiet der Validierung: Säuglingsmilch in Pulverform und Säuglingsgetreide in Pulverform mit und ohne
Probiotika, Rohstoffe und Umgebungsproben.
Probenvorbereitung: Die Proben sollten gemäß EN ISO 22694(2) und EN ISO 6887(7, 8) vorbereitet werden.
Softwareversion: Siehe Zertifikat.

6

DE (Deutsch)
Tabelle 4. Anreicherungsprotokolle gemäß NF VALIDATION zertifizierte Methode 3M 01/20–03/18

Probenmatrix
•
•
•

•

•

Säuglingsmilch in
Pulverform
Säuglingsgetreide in
Pulverform
Inhaltsstoffe wie
Trockenmilchpulver,
Sojapulver,
Molkenproteinpulver,
Laktose, Reismehl
und Maltodextrin
TrockeneUmgebungsproben
wie Staub, Kehricht,
Staubsaugerproben,

Schwamm,
Spülwasser,
Wischtücher

Säuglingsmilch in
Pulverform undSäuglingsgetreide in
Pulverform (nichtprobiotisch)
Säuglingsmilch in
Pulverform undSäuglingsgetreide in
Pulverform (einschließlich
probiotisch)

AnreMenge der
AnreProbenaEmpfohlenProbenicherungsAnreicherungsicherungszeit nalysevoler Untergröße
temperatur
bouillon1(Stunden)umenbrechungspunkt2, 3(± 1 °C)

10 g
90 ml
Gepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:10)

37

18–24

20 µl

Die Anreicherungsbouillon
bzw. das Probenlysat kann bis zu
72 Stunden bei
2–8 °C gelagert
werden.

1
Probengerät
oder 10ml

Die Anreicherungsbouillon
bzw. das Probenlysat kann bis zu
72 Stunden bei
2–8 °C gelagert
werden.

30–300g

Gepuffertes
Peptonwasser
ISO (1:10)

37

18–24

20 µl

Die Anreicherungsbouillon
bzw. das Probenlysat kann bis zu
72 Stunden bei
2–8 °C gelagert
werden.

30–300g

Gepuffertes
Peptonwasser(ISO) + 10 mg/l
Vancomycin(1:10)

37

22–26

20 µl

Keine

1. Verwenden Sie vorgewärmtes gepuffertes Peptonwasser ISO, wenn die Menge der Anreicherungsbouillon > 300 ml
ist (z. B. Probe > 30 Gramm).
2. Fahren Sie mit dem Testen ab Schritt 1 im Abschnitt Lyse fort, nachdem Sie die Anreicherungsbouillon aus derLagerung genommen haben. Fahren Sie mit dem Testen ab Schritt 7 im Abschnitt Lyse fort, nachdem Sie das
Probenlysat aus der Lagerung genommen haben.
3. Weitere Informationen zum erneuten Testen von gelagerten wärmebehandelten Lysaten entnehmen Sie bitte
Anhang A.
Vorbereitung der Neogen® Molekulare Detektion – Beladehilfe
1. Befeuchten Sie ein Tuch oder ein Einwegtuch mit einer 1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) undwischen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe ab.
2. Spülen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit Wasser ab.
3. Trocknen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit einem Einmalhandtuch.
4. Vergewissern Sie sich, dass die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe vor dem Gebrauch trocken ist.

7

DE (Deutsch)
Vorbereitung des Neogen® Molekularen Detektion – Kühlblockeinsatzes
Stellen Sie den Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz direkt auf die Laborbank: Der Neogen Molekulare
Detektion – Kühlblockträger wird nicht verwendet. Verwenden Sie den Block bei Raumtemperatur (20–25 °C).
Vorbereitung des Neogen® Molekularen Detektion – Heizblockeinsatzes
Legen Sie den Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz in ein Trocken-Doppelblock-Heizgerät. Schalten Sie
das Trocken-Blockheizgerät ein und stellen Sie die Temperatur für den Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz
auf 100 ± 1 °C ein.
HINWEIS: Warten Sie je nach Heizgerät etwa 30 Minuten, bis der Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz
die geeignete Temperatur erreicht hat. Stellen Sie mit einem kalibrierten Thermometer (z. B. ein Thermometer zum
partiellen Eintauchen oder ein Digitalthermometer, kein Tauchthermometer) an der vorgesehenen Messposition fest,
ob der Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die erforderliche Temperatur von 100 ± 1 °C erreicht hat.
Vorbereitung des Neogen® Molekulare Detektion – Geräts
1. Starten Sie die Neogen® Molekulare Detektion – Software und loggen Sie sich ein. Setzen Sie sich mit dem Ihrem Neogen
Food Safety Verkaufsvertreter in Verbindung, um sicherzustellen, dass Sie über die aktuellste Softwareversion verfügen.
2. Schalten Sie das Neogen Molekulare Detektion – Gerät ein.
3. Erstellen oder bearbeiten Sie für jede Probe einen Testdurchlauf. Weitere Details entnehmen Sie bitte dem
Benutzerhandbuch zum Neogen Molekularen Detektionssystem.
HINWEIS: Das Neogen Molekulare Detektion – Gerät muss bereit sein, bevor die Neogen Molekulare Detektion –Beladehilfe mit den Reaktionsgefäßen eingesetzt werden kann. Dieses Erwärmungsverfahren nimmt etwa 20 Minuten in
Anspruch und wird durch eine ORANGEFARBENE Leuchte auf der Statusleiste des Geräts angezeigt. Sobald das Gerät
einsatzbereit ist, wechselt die Leuchte der Statusleiste auf GRÜN.
Lyse
Entfernen Sie die Unterseite des Neogen Lyselösungs-Trägers mit einem Schraubendreher, bevor Sie ihn im Neogen
Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz platzieren.

1. Lassen Sie die Neogen Lyselösung im Gefäß über Nacht (16–18 Stunden) bei Raumtemperatur (20–25 °C)
aufwärmen. Um die Neogen Lyselösungsgefäße auf Raumtemperatur zu erwärmen, können Sie sie für mindestens
2 Stunden auf die Laborbank stellen, für 1 Stunde bei 37 ± 1 °C inkubieren oder sie für 30 Sekunden bei 100 ± 1 °C
in ein Trocken-Doppelblock-Heizgerät setzen.
2. Mischen Sie die mit Kappen verschlossenen Gefäße. Fahren Sie innerhalb von 4 Stunden nach dem Mischen mit
dem nächsten Schritt fort.
3. Nehmen Sie die Anreicherungsbouillon aus dem Inkubator.
4. Für jede Probe (steriles Anreicherungsmedium) und die Negativkontrolle (NC) wird jeweils ein Gefäß mit Neogen
Lyselösung benötigt.
4.1 Die Neogen Lyselösung-Gefäßstreifen können auf die gewünschte Anzahl zurechtgeschnitten werden.
Bestimmen Sie die Anzahl der erforderlichen Neogen Lyselösungsgefäße oder Streifen zu 8 Gefäßen. Setzen Sie
die Neogen Lyselösungsgefäße in einen leeren Gefäßträger.
4.2 Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, öffnen Sie jeweils nur einen Neogen Lyselösungsgefäßstreifen undverwenden Sie bei jeder einzelnen Übertragung eine neue Pipette.
4.3 Übertragen Sie die angereicherte Probe wie unten beschrieben auf die Neogen Lyselösungsgefäße:Übertragen Sie zuerst die angereicherten Proben jeweils einzeln in ein Neogen Lyselösungsgefäß. Übertragen
Sie die NC zuletzt.

8DE (Deutsch)
4.4 Öffnen Sie jeden Neogen Streifen mit Lyselösungsgefäßen einzeln mit dem Neogen® Molekulare Detektion –Cap/Decap-Werkzeug – Lyse.
4.5 Entsorgen Sie die Kappen der Neogen Lyselösungsgefäße. Wenn noch Lysat für weitere Tests übrig bleibt,
bewahren Sie die Kappen in einem sauberen Container auf, um sie nach der Lyse wieder aufzusetzen.
4.5.1. Informationen zur Verarbeitung von nicht verwendetem Lysat finden Sie in Anhang A.
4.6 Schütteln Sie bei der Arbeit mit viskosen Proben den Anreicherungsbeutel, bevor Sie die Probe über die
gefilterte Seite entnehmen.
4.7 Übertragen Sie 20 µl der Probe in ein Neogen Lyselösungsgefäß sofern in der Protokolltabelle nichts anderes
angegeben ist.
5. Wiederholen Sie Schritte 4.4 bis 4.7, bis jede einzelne Probe in ein zugeordnetes Neogen Lyselösungsgefäß im
Streifen gegeben wurde.

6. Sobald Sie alle Proben übertragen haben, übertragen Sie 20 µl der Negativkontrolle (steriles Anreicherungsmedium,z. B. gepuffertes Peptonwasser BPW) in ein Neogen Lyselösungsgefäß. Als Negativkontrolle kein Wasser verwenden.
7. Stellen Sie fest, ob der Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die erforderliche Temperatur von
100 ± 1 °C erreicht hat.
8. Stellen Sie den Träger ohne Deckel mit Neogen Lyselösungsgefäßen in den Neogen Molekulare Detektion –Heizblockeinsatz und erwärmen Sie ihn 15 Minuten ± 1 Minute lang. Dabei ändert sich die Farbe der Neogen
Lyselösung von rosafarben (kalt) zu gelb (heiß).
Proben, die während der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein
biologisches Risiko dar und sollten NICHT in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät eingesetzt werden.
9. Nehmen Sie den Träger ohne Deckel mit den Neogen Lyselösungsgefäßen aus dem Neogen Molekulare Detektion– Heizblockeinsatz. Lassen Sie ihn im Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz 5 bis 10 Minuten langabkühlen. Der Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz wird bei Raumtemperatur ohne den Neogen®
Molekulare Detektion – Kühlblockträger verwendet und sollte direkt auf die Laborbank gesetzt werden. Wenn die
Neogen-Lyselösung abgekühlt ist, nimmt sie wieder eine rosa Farbe an.
10. Nehmen Sie den Träger mit den Neogen Lyselösungsgefäßen aus dem Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplifikation
1. Für jede Probe und ihre Negativkontrolle ist ein Reagenzgefäß für Neogen Molekulares Detektions Assay 2 Cronobacter erforderlich.
1.1 Die Gefäßstreifen können auf die gewünschte Anzahl der Gefäße zurechtgeschnitten werden. Wählen Sie die
Anzahl der erforderlichen Reagenzgefäße für den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter bzw.
der Gefäßstreifen zu 8 Gefäßen.
1.2 Stellen Sie die Reagenzgefäße für Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter in einen leeren Gefäßträger.
1.3 Vermeiden Sie es, die Reagenzkügelchen im unteren Teil der Gefäße aufzurühren.
9DE (Deutsch)
2. Wählen Sie ein Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle und stellen Sie es in den Gefäßträger.
3. Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, öffnen Sie jeweils nur einen Reagenzgefäßstreifen des Neogen Molekulares
Detektions Assay 2 - Cronobacter und verwenden Sie bei jedem Übertragungsschritt eine neue Pipettenspitze.
4. Übertragen Sie wie unten beschrieben die einzelnen Lysate in ein Reagenzgefäß für Neogen Molekulares
Detektion Assay 2 – Cronobacter und ein Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle:Übertragen Sie jedes Probenlysat zuerst in ein eigenes Reagenzgefäß für Neogen Molekulares Detektions Assay 2 Cronobacter, gefolgt von der neutralen Kontrolle. Hydrieren Sie das Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle als letztes.
5. Öffnen Sie die Reagenzgefäße für den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter mit dem Neogen®
Molekulare Detektion Cap/Decap-Werkzeug – Reagenz, und zwar immer nur einen Reagenzgefäßstreifen auf
einmal. Werfen Sie die Kappe weg.
5.1 Übertragen Sie 20 µl des Probenlysats aus der oberen Hälfte der Flüssigkeit (Ablagerungen vermeiden) im
Neogen Lyselösungsgefäß in das entsprechende Reagenzgefäß für den Neogen Molekulares Detektions
Assay 2 - Cronobacter. Pipettieren Sie schräg in die Gefäße, um ein Aufrühren der Kügelchen zu vermeiden.
Mischen Sie anschließend den Gefäßinhalt, indem Sie ihn 5 Mal auf und ab pipettieren.
5.2 Wiederholen Sie Schritt 5.1, bis Sie jedes einzelne Probenlysat einem entsprechenden Reagenzgefäß für den
Neogen Molekulares Detektion Assay 2 – Cronobacter Nachweis im Streifen hinzugefügt haben.
5.3 Verschließen Sie die Reagenzgefäße für den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter mit
den mitgelieferten zusätzlichen Kappen und üben Sie mit der abgerundeten Seite des Neogen Molekularen
Detektion Cap/Decap-Werkzeugs – Reagenz in einer Vorwärts- und Rückwärtsbewegung Druck aus, um
sicherzustellen, dass die Kappe fest sitzt.
5.4 Wiederholen Sie bei Bedarf die Schritte 5.1 bis 5.3 bei allen zu prüfenden Proben.
5.5 Sobald Sie alle Probenlysate übertragen haben, wiederholen Sie die Schritte 5.1 bis 5.3, um 20 µl des NC-Lysats
in ein Reagenzgefäß für den Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter zu übertragen.
5.6 Übertragen Sie 20 µl des NC-Lysats in ein Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle. Pipettieren Sie schräg in die
Gefäße, um ein Aufrühren der Kügelchen zu vermeiden. Mischen Sie anschließend den Gefäßinhalt, indem Sie
ihn 5 Mal auf und ab pipettieren.
6. Beladen Sie eine saubere und dekontaminierte Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit den mit Kappen
verschlossenen Gefäßen. Schließen und verriegeln Sie die Klappe der Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe.

7. Überprüfen und bestätigen Sie die Konfiguration des Testdurchlaufs in der Neogen Molekulare Detektion – Software.
8. Klicken Sie auf die Schaltfläche „Start“ in der Software und wählen Sie anschließend das zu verwendende Gerät aus.
Die Klappe des gewählten Geräts öffnet sich automatisch.
9. Setzen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät undschließen Sie die Klappe, um mit dem Test zu beginnen. Die Ergebnisse sind innerhalb von 60 Minuten verfügbar,
obgleich positive Ergebnisse möglicherweise schneller erfasst werden.
10. Nehmen Sie nach Abschluss des Tests die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe aus dem Neogen Molekulare
Detektion – Gerät und entsorgen Sie die Gefäße, indem Sie sie 1 Stunde lang in ausreichender Entfernung vom
Vorbereitungsbereich in einer 1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) einweichen.
HINWEIS: Um das Risiko eines falsch positiven Ergebnisses infolge einer Kreuzkontamination zu minimieren, öffnen
Sie niemals Reagenzgefäße, die amplifizierte DNS enthalten. Dies betrifft Reagenzien für den Neogen Molekularen
Detektions Assay 2 - Cronobacter sowie Gefäße mit Neogen Reagenzkontrolle und Neogen Matrixkontrolle.
Entsorgen Sie die verschlossenen Reagenzgefäße, indem Sie sie 1 Stunde lang in ausreichender Entfernung vom
Vorbereitungsbereich in einer 1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) einweichen.
10DE (Deutsch)

Auslegung der Ergebnisse

Die durch die Detektion der Nukleinsäureamplifikation entstehende Lichtkurve wird anhand eines Algorithmus
ausgewertet. Die Ergebnisse werden automatisch von der Software analysiert und je nach Ergebnis farbcodiert. Ein
positives oder negatives Ergebnis wird durch die Analyse einer bestimmten Anzahl an eindeutigen Kurvenparameternbestimmt. Die mutmaßlich positiven Ergebnisse werden in Echtzeit erstellt, während negative und zu überprüfende
Ergebnisse erst nach Abschluss des Testdurchlaufs dargestellt werden.
HINWEIS: Selbst ein negatives Ergebnis führt nicht zu einem Ergebnis von null, da das System und die
Amplifikationsreagenzien des Neogen Molekulares Detektions Assay 2 - Cronobacter über einen „Hintergrund“
verfügen, der in relativem Verhältnis zur Lichteinheit (RLE) steht.
Bestätigung• Bestätigung der Ergebnisse anhand der zertifizierten NF Validation MethodeIm Rahmen der NF VALIDATION sollten alle vermutlich positiven Anreicherungen durch Befolgen der
Referenzbestätigungsmethode(2) bestätigt werden, beginnend mit der Überführung aus der Erstanreicherung(Gepuffertes Peptonwasser (ISO) oder gepuffertes Peptonwasser (ISO) mit 10 mg/l Vancomycin).
•

Anderes Bestätigungsprotokoll

Vermutlich positive Anreicherungen sollten anhand der Standardarbeitsanweisungen (SOP) des Labors oderdurch Befolgen der geeigneten Referenzbestätigungsmethode (1,2), beginnend mit der Überführung aus derErstanreicherung (Gepuffertes Peptonwasser (ISO) oder gepuffertes Peptonwasser (ISO) mit 10 mg/l Vancomycin)
in die Zweitanreicherung, gefolgt von anschließendem Ausplattieren und Bestätigen von Isolaten mittels geeigneter
biochemischer, serologischer und/oder molekularer Methoden.
Falls es in seltenen Fällen zu einer ungewöhnlichen Lichtleistung kommt, wird diese vom Algorithmus als „Zuüberprüfen“ gekennzeichnet. Neogen empfiehlt, den Nachweis der so gekennzeichneten Proben zu wiederholen.
Falls das Ergebnis weiterhin als „Zu überprüfen“ gekennzeichnet bleibt, bestätigen Sie das Ergebnis anhand Ihres
bevorzugten Testverfahrens oder gemäß den jeweils geltenden Richtlinien(1,2).
Bei abweichenden Ergebnissen (mutmaßlich positiven beim Neogen Molekulares Detektions Assay 2 Cronobacter unbestätigten Ergebnissen eines der oben genannten Verfahren) sollte das Labor seine geltenden
Standardarbeitsanweisungen befolgen, um die Ergebnisse darzustellen.
Sollten Sie Fragen zu bestimmten Anwendungen oder Verfahren haben, besuchen Sie unsere Website unter
www.neogen.com oder wenden Sie sich an den lokalen Neogen-Verkaufsvertreter oder Händler.
Anhang A. Unterbrechungen: Lagerung und erneutes Testen von wärmebehandelten Lysaten
1. Um ein wärmebehandeltes Lysat zu lagern, setzen Sie eine saubere Kappe auf das Lysegefäß (siehe Lyse,
Abschnitt 4.5)
2. Lagern Sie sie bis zu 72 Stunden bei 2 bis 8 °C.
3. Bereiten Sie eine gelagerte Probe zur Amplifikation vor, indem Sie sie zum Mischen 2 bis 3 Mal umdrehen.
4. Entkappen Sie die Gefäße.
5. Setzen Sie die gemischten Lysatgefäße in den Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz und erwärmen Sie
sie 5 Minuten ± 1 Minute lang bei 100 ± 1 °C.
6. Nehmen Sie den Träger mit den Neogen Lyselösungsgefäßen aus dem Heizblockeinsatz. Lassen Sie ihn 5 bis
10 Minuten lang im Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz abkühlen.
7. Setzen Sie das Protokoll ab dem oben beschriebenen Abschnitt Amplifikation fort.

11DE (Deutsch)

Literaturnachweise:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Konsultieren Sie bitte die jeweils aktuelle Version der oben aufgelisteten Standardmethoden.

Erklärung der Symbole
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

IT(Italiano)

Data di pubblicazione: 2024-01

Istruzioni sul prodotto
Analisi molecolare di seconda generazione per il rilevamento di
Cronobacter
Descrizione del prodotto e uso previsto

L'analisi molecolare di seconda generazione Neogen® per il rilevamento di Cronobacter è utilizzata con il Sistema perl’analisi molecolare Neogen® per il rilevamento rapido e specifico di Cronobacter in campioni ambientali di alimenti, dimangimi e di processi alimentari arricchiti.
L'Analisi molecolare Neogen per il rilevamento dei microrganismi patogeni utilizza l'amplificazione isotermica mediatada loop per amplificare rapidamente le sequenze di acidi nucleici a elevata specificità e sensibilità, combinata alla
bioluminescenza per rilevare l'amplificazione. I risultati presunti positivi sono riportati in tempo reale, mentre quelli
negativi si visualizzano al completamento dell'analisi. I risultati presunti positivi vanno confermati utilizzando il proprio
metodo d'elezione o secondo quanto specificato dalle normative locali(1,2).
L'analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter è concepita per essere utilizzata
in un ambiente di laboratorio da professionisti formati in tecniche di laboratorio. Neogen non ha documentato l'utilizzodel presente prodotto in settori diversi da quello alimentare e delle bevande. Ad esempio, Neogen non ha documentato
il presente prodotto per l'analisi su campioni di tipo farmaceutico, cosmetico, clinico o veterinario. L’Analisi molecolare
di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter non è stata valutata con tutti i possibili prodotti
alimentari, processi alimentari, protocolli di test o ceppi di batteri.
Come tutti i metodi analitici, i risultati possono essere influenzati dall'origine, dalla formulazione e dalla qualità delterreno di arricchimento. Anche fattori quali i metodi di campionamento, i protocolli di analisi, la preparazione delcampione, tra cui omogeneizzazione e miscelazione, la manipolazione e le tecniche di laboratorio possono influenzare
i risultati. Neogen consiglia la valutazione del metodo, compreso il terreno di arricchimento, nell'ambiente dell'utente,
utilizzando un numero sufficiente di campioni che presentano particolari caratteristiche alimentari e/o ambientali omicrobiche, per assicurare che il metodo soddisfi i criteri dell'utente.
Neogen ha valutato l'Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter con terreno diarricchimento con acqua peptonata tamponata (ISO).
Lo Strumento per l'analisi molecolare Neogen® è destinato all'uso su campioni sottoposti a trattamento termico durante
la fase di lisi dell'analisi, atto ad annientare gli organismi presenti nel campione. I campioni non correttamente trattati
termicamente durante la fase di lisi dell'analisi possono essere considerati un potenziale rischio biologico e NON
dovranno essere inseriti nello Strumento per l'analisi molecolare Neogen.
Neogen Food Safety è certificata ISO (International Organization for Standardization) 9001 per la progettazione e la produzione.
Il kit di prova per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter contiene 96
test, descritti nella Tabella 1.
Tabella 1. Componenti del kit dell'analisi molecolare Neogen
Articolo

Identificazione

Quantità

IndiceCommenti

Soluzione di lisi (LS)
Neogen®

Soluzione rosa intubi trasparenti

96 (12 strisce da 8 tubi)

580 μl di LS per tubo

In rastrelliera
e pronti all'uso

Tubi di reagente per l’Analisi
molecolare di seconda
generazione Neogen® per ilrilevamento di Cronobacter

Tubi arancio-rosso

96 (12 strisce da 8 tubi)

Miscela di rilevamento
e amplificazione
Pronti all'uso
specifica liofilizzata

Tappi supplementari

Tappi arancio-rosso 96 (12 strisce da 8 tappi)

Pronti all'uso

Controllo reagente (RC)
Neogen®

Tubi trasparenti con 16 (2 strisce da 8 tubi
apertura a scatto
singoli)

Miscela di rilevamento
e amplificazione DNA Pronti all'uso
di controllo liofilizzato

Il controllo negativo, non fornito nel kit, è un terreno di arricchimento sterile, ad esempio, BPW ISO. Non utilizzare
l'acqua come Controllo negativo.
1

IT(Italiano)

Sicurezza

L’utente dovrebbe leggere, capire e seguire tutte le informazioni per la sicurezza contenute nelle istruzioni del Sistema
per l’analisi molecolare Neogen e dell’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Cronobacter. Conservare le istruzioni di sicurezza per poterle consultare in futuro.
AVVERTENZA: indica una situazione pericolosa che, se non evitata, potrebbe provocare la morte o lesioni gravi e/odanni materiali.
AVVISO: indica una situazione potenzialmente pericolosa che, se non evitata, potrebbe provocare danni materiali.

W AVVERTENZA
Non utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter per la diagnosidelle condizioni di soggetti umani o animali.
L'utente è tenuto a formare il proprio personale alle attuali tecniche di analisi appropriate: ad esempio, le buone
prassi di laboratorio(3), ISO/IEC 17025(4) o ISO 7218(5).
Per ridurre i rischi associati a risultati falsi negativi che comportano l'emissione di un prodotto contaminato:• Attenersi al protocollo ed eseguire i test esattamente come descritto nelle Istruzioni sul prodotto.
• Conservare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter come indicato sulla
confezione e nelle istruzioni sul prodotto.
• Utilizzare sempre l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter entro ladata di scadenza.
• Utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter con campioni
ambientali di alimenti, di mangimi e di processi alimentari che sono stati convalidati internamente o da terzi.
• Utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter solo con superfici,
disinfettanti, protocolli e ceppi di batteri che sono stati validati internamente o da terzi.
• Per un campione ambientale contenente un tampone neutralizzante con il complesso di aril solfonato, eseguireuna diluizione 1:2 prima di eseguire il test (1 parte di campione in 1 parte di brodo di arricchimento sterile).
Un’altra opzione consiste nel trasferimento di 10 µl di arricchimento del tampone neutralizzante all’interno dei
tubi della soluzione di lisi Neogen. Prodotti per la movimentazione campioni di Neogen® che includono Tampone
neutralizzante con complesso aril-solfonato: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G
e HS2410NB2G. Questo protocollo non è stato testato durante lo studio NF Validation.
Per ridurre i rischi associati all'esposizione a sostanze chimiche e a pericoli biologici:• Eseguire un test per patogeni in un laboratorio adeguatamente equipaggiato, sotto la supervisione di personale
esperto. Il terreno di arricchimento incubato e le attrezzature o le superfici che sono venute in contatto con il terreno
di arricchimento incubato potrebbero contenere patogeni a livelli sufficienti per causare rischi alla salute umana.
• Durante la manipolazione di reagenti e campioni contaminati, seguire sempre le pratiche standard di sicurezza dilaboratorio, compreso l'utilizzo di abbigliamento protettivo e protezioni appropriate per gli occhi.
• Evitare il contatto con il contenuto dei tubi di reagente e del terreno di arricchimento dopo l'amplificazione.
• Smaltire i campioni arricchiti e i rifiuti contaminati associati conformemente agli attuali standard locali/regionali/
nazionali/settoriali.
• Non superare l'impostazione di temperatura raccomandata sul riscaldatore.
• Non superare il tempo di riscaldamento raccomandato.
• Utilizzare un termometro calibrato e appropriato per verificare la temperatura dell'Inserto del blocco di calore peril sistema di rilevamento molecolare Neogen® (ad es., un termometro a immersione parziale o con termocoppia
digitale, non un termometro a immersione totale). Il termometro deve essere collocato nella posizione indicata
nell'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen.
Per ridurre i rischi associati alla contaminazione crociata durante la preparazione dell'analisi:• Indossare sempre i guanti (per proteggere l'utente e prevenire l'introduzione di nucleasi).
Per ridurre i rischi associati all'esposizione a liquidi caldi:• Non superare l'impostazione di temperatura raccomandata sul riscaldatore.
• Non superare il tempo di riscaldamento raccomandato.
• Utilizzare un termometro calibrato e appropriato per verificare la temperatura dell'Inserto del blocco di calore peril sistema di rilevamento molecolare Neogen® (ad es., un termometro a immersione parziale o con termocoppia
digitale, non un termometro a immersione totale). Il termometro deve essere collocato nella posizione indicata
nell'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen.

2

IT(Italiano)

AVVISOPer ridurre i rischi associati alla contaminazione crociata durante la preparazione dell'analisi:• Cambiare i guanti prima di idratare il reagente con pastiglie.
• Si consiglia di utilizzare punte di pipetta di grado biologico molecolare sterili con barriera di aerosol (filtrate).
• Utilizzare una nuova punta di pipetta per ciascun trasferimento di campione.
• Adottare buone prassi di laboratorio per trasferire il campione dall'arricchimento al tubo di lisi. Per evitare lacontaminazione della pipettatrice, l'utente può scegliere di aggiungere una fase di trasferimento intermedia. Ad
esempio, l'utente può trasferire ciascun campione arricchito in un tubo sterile.
• Utilizzare una stazione di lavoro di biologia molecolare contenente una lampada germicida, laddove disponibile.
• Decontaminare periodicamente i banchi e l'attrezzatura di laboratorio (pipette, strumenti di inserimento/rimozionedel tappo ecc.) con una soluzione di candeggina per uso domestico all'1-5% (diluita in acqua v:v) o una soluzione perla rimozione di DNA.
Per ridurre i rischi associati a un risultato falso positivo:• Non aprire mai i tubi dopo l'amplificazione.
• Gettare sempre i tubi contaminati immergendoli in una soluzione di candeggina per uso domestico all'1-5% (diluita inacqua v:v) per 1 ora lontano dall'area di preparazione dell'analisi.
• Non sterilizzare mai in autoclave i tubi di reagente dopo l'amplificazione.
• Se si sospetta che i campioni contengano livelli elevati di DNA di Cronobacter (ad es., DNA da cellule non vitali diCronobacter che sono state sottoposte a fase di distruzione/inattivazione), i presunti arricchimenti positivi devono
essere trattati con DNase prima della fase Lisi. Contattare il rappresentante Neogen locale per ulteriori informazioni.
Questo protocollo non è stato testato durante lo studio NF Validation.
Per ulteriori informazioni, consultare la Scheda di sicurezza dei materiali e le normative locali per lo smaltimento.
Per qualsiasi domanda su applicazioni o procedure specifiche, visitare il nostro sito Web all'indirizzo
www.neogen.com o contattare il distributore o il rappresentante Neogen di zona.

Responsabilità dell'utente

Gli utenti sono tenuti a leggere e acquisire familiarità con le istruzioni e le informazioni sul prodotto. Visitare il sito web
www.neogen.com o contattare il distributore o rappresentante Neogen di zona per ulteriori informazioni.
Nella scelta di un metodo di test, è importante tener conto del fatto che fattori esterni quali i metodi di campionamento,
i protocolli di test, la preparazione del campione, inclusa omogeneizzazione e miscelazione, la manipolazione e letecniche di laboratorio possono influenzare i risultati.
È responsabilità dell'utente, nel selezionare un qualsiasi metodo di analisi o prodotto, valutare un numero sufficiente
di campioni con le matrici appropriate e con particolari caratteristiche microbiche per soddisfare i criteri relativi alla
metodologia di analisi scelta dall'utente.
L'utente ha inoltre la responsabilità di accertarsi che tutti i metodi di analisi utilizzati e i risultati ottenuti soddisfino i
requisiti dei propri clienti e fornitori.
Come per qualsiasi metodo di analisi, i risultati ottenuti grazie al prodotto di Sicurezza alimentare Neogen non
costituiscono una garanzia della qualità delle matrici o dei processi sottoposti a prova.
Per aiutare i clienti nella valutazione del metodo per le varie matrici, Neogen ha elaborato il kit di Controllo della matrice
di rilevamento molecolare Neogen®. Quando necessario, utilizzare il Controllo della matrice (CM) per determinare sequesta sia in grado di influenzare i risultati dell'Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Cronobacter. Durante qualsiasi periodo di valutazione in caso di adozione di un metodo Neogen o durante l'esecuzione
di test su matrici note o sconosciute o su matrici sottoposte a modifiche di materie prime o di processo, sottoporre a
test numerosi campioni rappresentativi della matrice, cioè campioni di diversa origine.
Si definisce matrice un tipo di prodotto con proprietà intrinseche quali la composizione e il processo. Le differenze fra
le matrici possono essere semplici come gli effetti causati dalle differenze nella loro lavorazione o presentazione, ad
esempio: crude o pastorizzate, fresche o secche, ecc.

Limitazione di garanzia/Rimedio limitato

SALVO NEI CASI ESPRESSAMENTE INDICATI IN UNA SEZIONE DI GARANZIA LIMITATA DELLA SINGOLACONFEZIONE DEL PRODOTTO, NEOGEN NON RICONOSCE ALCUNA GARANZIA ESPLICITA O IMPLICITA,
INCLUSE, MA NON A ESSE LIMITATE, LE EVENTUALI GARANZIE DI COMMERCIABILITÀ O DI IDONEITÀ A UNO
SCOPO PARTICOLARE. Qualora un prodotto Neogen Sicurezza alimentare sia difettoso, Neogen o il suo distributore
3

IT(Italiano)

autorizzato provvederanno, a loro discrezione, alla sostituzione o al rimborso del prezzo d'acquisto del prodotto.
Questi sono gli unici rimedi a disposizione del cliente. Per ulteriori domande, contattare il rappresentante Neogen o il
distributore autorizzato Neogen.

Limitazione di responsabilità da parte di Neogen

NEOGEN NON SARÀ RESPONSABILE DI PERDITE O DANNI, DIRETTI, INDIRETTI, SPECIALI, INCIDENTALI O
EMERGENTI, INCLUSA, MA NON IN VIA STRETTAMENTE LIMITATIVA, LA PERDITA DI PROFITTO. In nessun caso la
responsabilità legale di Neogen andrà oltre il prezzo d'acquisto del prodotto presunto difettoso.

Conservazione e smaltimento

Conservare l'Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter a 2-8 °C. Noncongelare. Conservare il kit lontano da fonti luminose. Dopo aver aperto il kit, verificare che la busta d'alluminio non risulti
danneggiata. Qualora la busta d'alluminio fosse danneggiata, non utilizzare i prodotti contenuti all'interno. Dopo l'apertura,i tubi di reagente inutilizzati dovrebbero essere sempre conservati in una busta richiudibile con essiccante all'interno permantenere la stabilità dei reagenti liofilizzati. Conservare le buste richiudibili a 2-8 °C per non oltre 60 giorni.
Non utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter oltre la data discadenza. La data di scadenza e il numero di lotto sono riportati sull'etichetta esterna della scatola. Dopo l’utilizzo,
il terreno di arricchimento e i tubi per l'analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Cronobacter possono potenzialmente contenere materiali patogeni. Una volta completato il test, attenersi agli standard
di settore vigenti in materia di smaltimento di rifiuti contaminati. Per ulteriori informazioni, consultare la Scheda disicurezza dei materiali e le normative locali per lo smaltimento.

Istruzioni per l’uso

Seguire attentamente tutte le istruzioni. In caso contrario, si rischia di ottenere risultati non precisi.
Decontaminare periodicamente i banchi e l'attrezzatura di laboratorio (pipette, strumenti di inserimento/rimozione deltappo ecc.) con una soluzione di candeggina per uso domestico all'1-5% (diluita in acqua v:v) o una soluzione per larimozione di DNA.
L’utente dovrà completare la formazione di qualifica operatore per il Sistema per l'analisi molecolare Neogen, comedescritta nel documento “Protocolli di qualifica per l’installazione (IQ)/qualifica operativa (OQ) e istruzioni del Sistema
per l'analisi molecolare Neogen”(6).
Per i requisiti specifici, consultare la sezione “Istruzioni specifiche per metodi validati”:
Tabella 3 per i protocolli di arricchimento secondo AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 e Performance
TestedSM certificato n. 101703
Tabella 4 per i protocolli di arricchimento secondo il certificato NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
Arricchimento del campione
Le tabelle 2, 3 o 4 presentano una guida ai protocolli di arricchimento per campioni ambientali di alimenti.
È responsabilità dell'utente convalidare i protocolli di campionamento alternativi o i rapporti di diluizione per assicurare
che il presente metodo di test soddisfi i propri criteri.
Alimenti, polveri ambientali, polveri, spazzate e spugne
1. Portare il terreno di arricchimento alla temperatura ambiente (20-25 °C) salvo diversamente indicato nel protocollo
di arricchimento (vedere Tabella 2, 3 o 4).
2. Unire asetticamente il terreno di arricchimento al campione e omogeneizzare accuratamente miscelando con vortex
o a mano e agitando per 2 ± 0,2 minuti o finché tutti i grumi non siano completamente sciolti e la sospensione diarricchimento risulti omogenea(7, 8).
a.

Fattori quali la preparazione del campione, tra cui omogeneizzazione e miscelazione, la manipolazione e letecniche di laboratorio possono influenzare i risultati.

b. Per tutti i campioni a elevato numero di particelle, si consiglia l'utilizzo di filtri a sacco.
c.

Per matrici che si gonfiano in acqua e sono molto viscose (es. cereali, amidi), si consiglia di effettuare ulteriori
diluizioni (> 1:10) finché la viscosità non risulta adeguatamente ridotta oppure aggiungere l'1% (p/v) di alfa-amilasi
al BPW (ISO)(8).

d. Per campioni di grandi dimensioni di cereali, aggiungere lentamente cereale in polvere al liquido, mescolando
frequentemente per evitare grumi.
3. Incubare secondo quanto specificato nella rispettiva tabella del protocollo (vedere Tabella 2, 3 o 4).
4IT(Italiano)

Tabella 2. Protocolli di arricchimento generici
Temperatura di
Tempo diarricchimento arricchimento(± 1 °C)(ore)

Volumedell'analisidelcampione

Matrice campione

Dimensione
campione1

Volume brodo diarricchimento1, 2

Alimenti per lattanti in polvere(PIF) e materie prime comelatte in polvere secco, polvere
di soia, siero di latte inpolvere, lattosio, farina di riso
e maltodestrina

1X grammo dicampione

9X ml di BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Materie prime come sali,
minerali, amminoacidi, DHA(acido docosaesaenoico) e
vitamine

1X grammo dicampione

99X ml di BPW(ISO) (1:100)

37

18-24

20 µl

Campioni ambientali secchi
come polvere, spazzate,
raccolta a vuoto

1X grammo dicampione

9X ml di BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Spugna ambientale con 10
ml di brodo Letheen o brodo
neutralizzante D/E

1 dispositivo dicampionamento

90 ml di BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

1. Neogen ha valutato l'analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter
utilizzando i rapporti di diluizione indicati nella Tabella 2 fino a 300 g. È responsabilità dell'utente convalidare i
rapporti di diluizione o i protocolli alternativi per assicurare che il metodo soddisfi i propri criteri.
2. Utilizzare BPW (ISO) preriscaldato qualora il volume del brodo di arricchimento sia > 300 ml (es. campione > 30 grammi).
Istruzioni specifiche per metodi validati
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) certificato n. 101703

Negli studi OMASM e PTMSM dell’Istituto di ricerca AOAC, l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per ilrilevamento di Cronobacter è stata scoperta essere un efficace metodo per il rilevamento di Cronobacter. Le matrici
testate nello studio sono riportate nella Tabella 3.

5

IT(Italiano)

Tabella 3. Protocolli di arricchimento secondo AOAC® OMASM 2018.01 e PTMSM 101703
Temperatura di
Tempo diarricchimento arricchimento(± 1 °C)(ore)

Volumedell'analisidelcampione

Matrice campione

Dimensione
campione

Volume del brodo
di arricchimento1

Alimenti per lattanti in polvere
e cereali in polvere per lattanti

10 g

90 ml di BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Cereali in polvere non
probiotici per lattanti

300 g

2700 ml di BPW(ISO) (1:10)

Preriscaldato
a 37

18-24

20 µl

Alimenti per lattanti in polvere
e cereali in polvere con
probiotici per lattanti

300 g

2700 ml di BPW(ISO) + 10 mg/l divancomicina

Preriscaldato
a 37

22-24

20 µl

Lattosio

10 g

90 ml di BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

1 dispositivo dicampionamento

90 ml di BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Spugna ambientale con 10 ml
di brodo neutralizzante D/E

1. Utilizzare BPW (ISO) preriscaldato se il volume del brodo di arricchimento è > 300 ml.
NF VALIDATION concessa dalla AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Per maggiori informazioni sulla scadenza, consultare il certificato NF VALIDATION, disponibile sul sito Web menzionato
in precedenza.
Metodo certificato NF VALIDATION in conformità a ISO 16140-2(9) in confronto a ISO 22964.
Ambito della validazione: alimenti per lattanti in polvere e cereali per lattanti con e senza probiotici, materie prime ecampioni ambientali.
Preparazione del campione: i campioni devono essere preparati secondo EN ISO 22694(2) ed EN ISO 6887(7, 8).
Versione del software: vedere il certificato.

6

IT(Italiano)

Tabella 4. Protocolli di arricchimento secondo il metodo certificato NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
Dimensione
Matrice campione
campione
•
•
•

•

•

Alimenti inpolvere perlattanti
Cereali inpolvere perlattanti
Ingredienti
come latte inpolvere secco,
polvere di soia,
siero di lattein polvere,lattosio,
farina di riso e
maltodestrina
Campioni
ambientali
secchi comepolvere,spazzate,
raccolta a
vuoto

Volume delTemperatura dibrodo diarricchimento
arricchimento1(± 1 °C)

Tempo diarricchimento(ore)Volumedell'analisidelcampione

10 g
90 ml di BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Cereali in polvere
per lattanti ealimenti in polvere
per lattanti (conprobiotici)

Il brodo diarricchimento olisato campione
può essere
conservato a 2-8°C fino a 72 ore

Il brodo diarricchimento olisato campione
può essere
conservato a 2-8°C fino a 72 ore

1 dispositivo
Spugna, acqua
di campiodi risciacquo,
namento o
panni
10 ml

Alimenti in polvere
per lattanti ecereali in polvere
per lattanti (nonprobiotici)

Punto diinterruzione
raccomandato2, 330-300 g

BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Il brodo diarricchimento olisato campione
può essere
conservato a 2-8°C fino a 72 ore

30-300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/l divancomicina(1:10)

37

22-24

20 µl

Nessuno1. Utilizzare BPW (ISO) preriscaldato qualora il volume del brodo di arricchimento sia > 300 ml (es. campione > 30 grammi).
2. Dopo aver rimosso il brodo di arricchimento dal luogo di conservazione, riprendere il test dal Punto 1 nella sezione
Lisi. Dopo aver rimosso il lisato campione dal luogo di conservazione, riprendere il test dal Punto 7 nella sezione Lisi.
3. Fare riferimento all'Appendice A per rieseguire il test di lisati trattati termicamente conservati.
Preparazione del Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen®
1. Bagnare un panno o un asciugamano monouso con una soluzione di candeggina per uso domestico all'1-5% (diluitain acqua v:v) e pulire il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen.
2. Sciacquare con acqua il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen.

7

IT(Italiano)

3. Utilizzare un panno usa e getta per asciugare il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento
molecolare Neogen.
4. Assicurarsi che il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen sia asciutto primadell'uso.
Preparazione del supporto per il Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare
Neogen®
Posizionare il supporto per il Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare Neogen
direttamente sul banco di laboratorio: il Vassoio per blocco di raffreddamento estraibile per il sistema rilevamento
molecolare Neogen non viene utilizzato. Utilizzare il blocco alla temperatura ambiente del laboratorio (20-25 °C).
Preparazione dell'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen®
Posizionare l'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen in un'unità riscaldante a secco con
doppio blocco. Accendere l'unità riscaldante a secco con blocco e impostare la temperatura per consentire all'Inserto delblocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen di raggiungere e mantenere una temperatura di 100 ± 1 °C.
NOTA: a seconda dell'unità riscaldante, attendere circa 30 minuti affinché l'Inserto del blocco di calore per il sistema
di rilevamento molecolare Neogen raggiunga la temperatura. Utilizzando un termometro adeguatamente calibrato(ad es., un termometro a immersione parziale o uno digitale a termocoppia, non un termometro a immersione totale)
inserito nella posizione designata, verificare che l'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare
Neogen sia a 100 ± 1 °C.
Preparazione dello Strumento per l’analisi molecolare Neogen®
1. Avviare il Software per l’analisi molecolare Neogen® ed effettuare l’accesso. Contattare il proprio rappresentante
Neogen Food Safety per assicurarsi di avere la versione del software più aggiornata.
2. Accendere lo Strumento per l'analisi molecolare Neogen.
3. Creare o modificare una corsa con i dati per ciascun campione. Fare riferimento al Manuale per l'utente del Sistema
per l'analisi molecolare Neogen per i dettagli.
NOTA: lo Strumento per l'analisi molecolare Neogen deve raggiungere lo stato Pronto prima di inserire il Vassoio per
caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen con tubi di reazione. Tale fase di riscaldamento dura
20 minuti circa ed è indicata da una spia ARANCIONE sulla barra di stato dello strumento. Quando lo strumento è pronto
per avviare l'analisi, la barra di stato diventa VERDE.
Lisi
Rimuovere la parte inferiore della rastrelliera per la soluzione di lisi Neogen con un cacciavite prima di posizionarla
nell'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen.

1. Far riscaldare i tubi della soluzione di lisi Neogen lasciando la rastrelliera a temperatura ambiente (20-25 °C) per una
notte (16-18 ore). Le alternative per equilibrare i tubi della soluzione di lisi Neogen a temperatura ambiente sono:
posizionare i tubi della soluzione di lisi Neogen sul banco di laboratorio per almeno 2 ore; incubarli in un incubatore a
37 ± 1 °C per 1 ora; oppure posizionarli in un’unità riscaldante a secco con doppio blocco per 30 secondi a 100 ± 1 °C.
2. Capovolgere i tubi provvisti di tappo per miscelare. Procedere con la fase successiva entro 4 ore dopo l'inversione.
3. Rimuovere il brodo di arricchimento dall'incubatore.
4. È richiesto un tubo della soluzione di lisi Neogen per ciascun campione e campione NC (terreno di arricchimento
sterile).
4.1 Le strisce di tubi per soluzione di lisi Neogen possono essere tagliate al numero desiderato. Selezionare il
numero necessario di strisce dei tubi della soluzione di lisi Neogen singole o da 8 tubi. Posizionare i tubi dellasoluzione di lisi Neogen in una rastrelliera vuota.
8

IT(Italiano)

4.2 Al fine di evitare la contaminazione crociata, stappare una striscia di tubi della soluzione di lisi Neogen alla voltae utilizzare una nuova punta di pipetta per ciascuna fase di trasferimento.
4.3 Trasferire il campione arricchito nei tubi della soluzione di lisi Neogen come descritto di seguito:
Trasferire innanzitutto ciascun campione arricchito in un tubo della soluzione di lisi Neogen singolo. Trasferirel'NC per ultimo.
4.4 Utilizzare lo Strumento di inserimento/rimozione del tappo per il rilevamento molecolare Neogen® - Lisi per
rimuovere il tappo da una striscia di tubi della soluzione di lisi Neogen, una striscia alla volta.
4.5 Gettare via il tappo del tubo della soluzione di lisi Neogen; se il lisato viene conservato per effettuare nuovamente il
test, posizionare i tappi in un contenitore pulito per consentirne nuovamente l'applicazione dopo la lisi.
4.5.1. Per l’elaborazione del lisato conservato, consultare l’Appendice A.
4.6 Agitare la busta di arricchimento prima di raccogliere il campione dal lato filtrato quando si lavora con campioni
viscosi.
4.7 Trasferire 20 µl di campione in un tubo della soluzione di lisi Neogen, a meno che non venga indicato altrimenti
nella tabella del protocollo.
5. Ripetere i punti da 4.4 a 4.7 finché ciascun singolo campione non è stato aggiunto a un tubo della soluzione di lisi
Neogen corrispondente nella striscia.

6. Quando tutti i campioni sono stati trasferiti, trasferire 20 μl di NC (mezzo di arricchimento sterile, ad esempio BPW)
in un tubo della soluzione di lisi Neogen. Non utilizzare l'acqua come NC (Controllo negativo).
7. Verificare che la temperatura dell’Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen sia 100 ±1 °C.
8. Posizionare la rastrelliera per tubi della soluzione di lisi Neogen, scoperta, nell’Inserto del blocco di calore per ilsistema di rilevamento molecolare Neogen e riscaldare per 15 ± 1 minuti. Durante il riscaldamento, la soluzione dilisi Neogen passerà dal colore rosa (freddo) al giallo (caldo).
I campioni non correttamente trattati termicamente durante la fase di lisi dell'analisi possono essere considerati unpotenziale rischio biologico e NON dovranno essere inseriti nello Strumento per l'analisi molecolare Neogen.
9. Rimuovere la rastrelliera dei tubi della soluzione di lisi Neogen senza coperchio dal Blocco riscaldante per ilsistema di rilevamento molecolare Neogen e far raffreddare nel Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema
di rilevamento molecolare Neogen per almeno 5 minuti e per un massimo di 10 minuti. Il Blocco di raffreddamento
estraibile per il sistema di rilevamento molecolare Neogen, utilizzato a temperatura ambiente senza il Vassoio
per Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare Neogen®, deve essere posto
direttamente sul banco del laboratorio. Quando è fredda, la soluzione di lisi Neogen torna a essere di colore rosa.
10. Rimuovere la rastrelliera dei tubi della soluzione di lisi Neogen dal Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema
di rilevamento molecolare Neogen.

9

IT(Italiano)

00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplificazione
1. È richiesto un tubo di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Cronobacter per ciascun campione e per il NC.
1.1 Le strisce dei tubi possono essere tagliate al numero di tubo desiderato. Selezionare il numero necessario ditubi di reagente singoli o di strisce da 8 tubi per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per ilrilevamento di Cronobacter.
1.2 Collocare i tubi di reagente per l'Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Cronobacter in una rastrelliera vuota.
1.3 Evitare di spostare le pastiglie di reagente poste sul fondo dei tubi.
2. Selezionare un tubo di Controllo reagente Neogen e posizionarlo nella rastrelliera.
3. Al fine di evitare la contaminazione crociata, rimuovere i tappi da una striscia di tubi di reagente per l'Analisi
molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter alla volta e utilizzare un nuovo puntale
per pipetta per ciascuna fase di trasferimento.
4. Trasferire ciascuno dei lisati in un tubo di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per ilrilevamento di Cronobacter e un tubo di controllo reagente Neogen come indicato di seguito:
Trasferire prima ciascun lisato campione nei tubi di reagente singoli per l'Analisi molecolare di seconda generazione
Neogen per il rilevamento di Cronobacter, quindi trasferire il NC. Idratare il tubo di controllo reagente Neogen per
ultimo.
5. Utilizzare lo Strumento di inserimento/rimozione del tappo per il rilevamento molecolare Neogen® per rimuovere
il tappo da un tubo di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Cronobacter, una striscia di tubi per volta. Gettare il tappo.
5.1 Trasferire 20 μl di lisato campione dalla metà superiore del liquido (evitare il deposito) di un tubo dellasoluzione di lisi Neogen nel corrispondente tubo di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione
Neogen per il rilevamento di Cronobacter. Erogare con un'inclinazione per evitare il movimento dellepastiglie. Miscelare pipettando delicatamente su e giù per 5 volte.
5.2 Ripetere il punto 5.1 finché ciascun singolo lisato campione non è stato aggiunto al corrispondente tubo direagente per l’analisi molecolare Neogen di seconda generazione per il rilevamento di Cronobacter nella striscia.
5.3 Coprire i tubi di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Cronobacter con i tappi supplementari forniti e utilizzare il lato arrotondato dello strumento di inserimento/rimozione dei tappi per il rilevamento molecolare Neogen – Reagente per applicare pressione con un
movimento avanti e indietro assicurandosi di stringere bene il tappo.
5.4 Ripetere i punti da 5.1 a 5.3 fin quando è necessario, per il numero di campioni da testare.
5.5 Quando tutti i lisati sono stati trasferiti, ripetere i punti da 5.1 a 5.3 per trasferire 20 µl di lisato NC in un tubo direagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter.
5.6 Trasferire 20 µl di lisato NC in un tubo di controllo reagente Neogen. Erogare con un'inclinazione per evitare ilmovimento delle pastiglie. Miscelare pipettando delicatamente su e giù per 5 volte.
6. Caricare i tubi provvisti di tappo su un Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare
Neogen pulito e decontaminato. Chiudere saldamente il coperchio del Vassoio per caricamento rapido per il sistema
di rilevamento molecolare Neogen.

10

IT

(Italiano)

7. Controllare e confermare l’esecuzione configurata sul Software per l’analisi molecolare Neogen.
8. Fare clic sul pulsante Start nel software e selezionare lo strumento da utilizzare. Il coperchio dello strumento
selezionato si apre automaticamente.
9. Posizionare il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen nello Strumento
per l'analisi molecolare Neogen e chiudere il coperchio per avviare l'analisi. I risultati sono forniti entro 60 minuti,
sebbene quelli positivi possano essere rilevati prima.
10. Una volta completata l'analisi, rimuovere il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare
Neogen dallo Strumento per l'analisi molecolare Neogen e smaltire i tubi immergendoli in una soluzione dicandeggina per uso domestico 1-5% (diluita con acqua v:v) per 1 ora e lontano dall'area di preparazione dell'analisi.
AVVISO: per ridurre il rischio di falsi positivi dovuti alla contaminazione crociata, non aprire mai i tubi di reagente
contenenti DNA amplificato. Questi includono il reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen peril rilevamento di Cronobacter, i tubi di controllo reagente Neogen e i tubi di controllo della matrice Neogen. Smaltire
sempre i tubi di reagente sigillati immergendoli in una soluzione di candeggina per uso domestico 1-5% (diluita con
acqua v:v) per 1 ora e lontano dall'area di preparazione dell'analisi.

Risultati e interpretazione

Un algoritmo interpreta la curva di emissione luminosa risultante dal rilevamento dell'amplificazione degli acidi nucleici.
I risultati sono analizzati automaticamente dal software e codificati mediante un colore in base all'esito. Un risultato
positivo o negativo è determinato dall'analisi di un numero di parametri unici della curva. I risultati presunti positivi sono
riportati in tempo reale mentre i risultati Negativi e Da esaminare sono visualizzati al completamento dell'esecuzione.
NOTA: anche un campione negativo non fornirà una lettura zero poiché il sistema e i reagenti di amplificazione
dell’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Cronobacter hanno una lettura di“background” dell’unità di luce relativa (RLU).
Conferma• Conferma dei risultati secondo il metodo certificato NF Validation
Nel contesto del NF VALIDATION, tutti gli arricchimenti presunti positivi dovranno essere confermati seguendo il
metodo di riferimento per la conferma(2), iniziando dal trasferimento dall'arricchimento primario (BPW ISO o BPW ISO
integrato con 10 mg/l di vancomicina).
•

Altro protocollo di conferma

Tutti i presunti risultati positivi vanno confermati in base alle procedure operative standard del laboratorio o seguendo
un adeguato metodo di riferimento per la conferma(1,2), iniziando dal trasferimento dall'arricchimento primario (BPW ISOo BPW ISO integrato con 10 mg/l di vancomicina) a un terreno di arricchimento secondario, seguito dall'applicazione di
un disco e dalla conferma degli isolati utilizzando metodi biochimici e sierologici adeguati.
Nel raro caso di emissione luminosa insolita, l'algoritmo la classifica come Da esaminare. Neogen consiglia all'utente diripetere l'analisi per qualsiasi campione da esaminare. Se il risultato continua a essere Da esaminare, procedere con iltest di conferma utilizzando il proprio metodo di elezione o come specificato dalle normative locali(1,2).
Nel caso di eventi discordanti (presunto positivo con l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per ilrilevamento di Cronobacter, non confermato da uno dei mezzi suindicati), il laboratorio deve agire di conseguenza per
garantire la validità dei risultati ottenuti.
Per qualsiasi domanda su applicazioni o procedure specifiche, visitare il nostro sito Web all'indirizzo
www.neogen.com o contattare il distributore o il rappresentante Neogen di zona.

11

IT

(Italiano)

Appendice A. Interruzione del protocollo: conservazione e nuovo test dei lisati trattati con calore
1. Per conservare un lisato trattato con calore, richiudere il tubo di lisi con un tappo pulito (vedere la sezione Lisi, 4.5)
2. Conservare a 2-8 °C fino a 72 ore.
3. Preparare il campione conservato per l'amplificazione capovolgendolo 2-3 volte per miscelarlo.
4. Togliere il tappo ai tubi.
5. Collocare i tubi di lisato miscelato sull'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen e
riscaldare a 100 ± 1 °C per 5 ± 1 minuti.
6. Rimuovere la rastrelliera dei tubi della soluzione di lisi Neogen dal blocco di calore e consentire il raffreddamento nel
Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare Neogen per almeno 5 minuti e per unmassimo di 10 minuti.
7. Continuare il protocollo indicato nella sezione Amplificazione illustrata sopra.

Bibliografia:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Fare riferimento alle versioni attuali dei metodi standard elencati in precedenza.

Legenda dei simboli

info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

ES(Español)Fecha de emisión: 2024-01

Instrucciones del Producto
Ensayo 2 Detección Molecular - Cronobacter
Descripción del producto y uso previsto

El Ensayo 2 Detección Molecular Neogen® - Cronobacter se utiliza con el Sistema de Detección Molecular Neogen®
para la detección específica y rápida de Cronobacter en muestras enriquecidas de alimentos y muestras ambientales dedonde se procesan alimentos.
El Ensayo de Detección Molecular Neogen usa amplificación isotérmica mediada por asas para amplificar rápidamente
las secuencias de ácido nucleico con alta especificidad y sensibilidad, combinadas con bioluminiscencia para detectar laamplificación. Los resultados presuntamente positivos se reportan en tiempo real, mientras que los resultados negativos
se revelan una vez terminado el ensayo. Los resultados presuntamente positivos se deben confirmar con su método depreferencia, o según se especifique en las regulaciones locales(1, 2).
El Ensayo 2 Detección Molecular - Cronobacter está previsto para su uso en laboratorios por profesionales capacitados
en el empleo de técnicas de laboratorio. Neogen no documentó el uso de este producto en otras industrias que no seanla alimentaria o la de bebidas. Por ejemplo, Neogen no ha documentado este producto para la evaluación de muestras
farmacéuticas, cosméticas, clínicas o veterinarias. Ensayo 2 Detección Molecular - Cronobacter no se evaluó con
todos los productos alimenticios, los procesos de alimentos o protocolos de pruebas posibles ni con todas las cepas debacterias posibles.
Como con todos los métodos de prueba, el origen, la formulación y la calidad del medio de enriquecimiento
puede influir sobre los resultados. Los factores como los métodos de toma de muestras, los protocolos de prueba, la
preparación de la muestra, incluso la homogenización y mezclado, manipulación y técnicas de laboratorio aplicados
sobre las muestras también pueden influir sobre los resultados. Neogen recomienda la evaluación del método lo que
incluye el medio de enriquecimiento en el ambiente del usuario mediante un número suficiente de muestras con
determinados alimentos o muestras ambientales y retos microbianos para garantizar que el método satisface loscriterios del usuario.
Neogen ha evaluado el Ensayo 2 Detección Molecular - Cronobacter con Agua Peptonada Tamponada ISO.
El Equipo de Detección Molecular Neogen® está previsto para ser utilizado con muestras que hayan sido tratadas
con calor durante el paso de lisis del ensayo, que se diseñó para destruir los organismos presentes en la muestra. Las
muestras que no se hayan tratado debidamente con calor durante el paso de lisis del ensayo pueden considerarse unposible riesgo biológico y NO deben introducirse en el Equipo de Detección Molecular Neogen.
Neogen Food Safety tiene certificación ISO (International Organization for Standardization) 9001 para diseño yfabricación.
El kit de prueba para el Ensayo 2 Detección Molecular - Cronobacter contiene 96 pruebas, que se describen en la Tabla 1.
Tabla 1. Componentes del Kit para el Ensayo de Detección Molecular
Artículo

Identificación

CantidadContenido

Comentarios

Solución de Lisis (LS)
Neogen®

Solución rosada en
tubos transparentes

96 (12 tiras de 8 tubos)

580 µl de LS por tubo

En bastidor ylista para usar

Tubos de reactivos parael Ensayo 2 Detección
Molecular Neogen® Cronobacter

Tubos naranjas-rojos 96 (12 tiras de 8 tubos)

Mezcla de deteccióny amplificación
específica liofilizada

Listos parausar

Tapas adicionales

Tapas naranjas-rojas

96 (12 tiras de 8 tapas)

Control de Reactivos
Neogen® (RC)

Tubos transparentes
con tapa de bisagra

16 (2 bolsas de 8 tubos
individuales)

Listos parausar
Mezcla de deteccióny amplificación decontrol liofilizado de
ADN

Listos parausar

El Control Negativo, no provisto en el kit, es un medio de enriquecimiento estéril, por ejemplo, Agua Peptonada
Amortiguada (BPW) ISO. No use agua como Control Negativo.
1

ES(Español)Seguridad

El usuario debe leer, comprender y proceder de acuerdo con toda la información sobre seguridad incluida enlas instrucciones para el Sistema de Detección Molecular Neogen y el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen Cronobacter. Guarde las instrucciones de seguridad como referencia en el futuro.
ADVERTENCIA: Indica una situación peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar la muerte o lesiones graves, y/odaños materiales.
ATENCIÓN: Indica una situación potencialmente peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar daños materiales.

W ADVERTENCIA
No use el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter para el diagnóstico de afecciones en seres humanos
ni animales.
El usuario debe capacitar a su personal en las técnicas de evaluación adecuadas: por ejemplo, Buenas Prácticas deLaboratorio(3), la norma ISO 17025(4) o la norma ISO 7218(5).
Para reducir los riesgos asociados con un resultado falso negativo que provoque la liberación de productos
contaminados:• Siga el protocolo y realice las pruebas exactamente como se indica en las instrucciones del producto.
• Almacene el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter como se indica en el embalaje y en las
Instrucciones del producto.
• Siempre use el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter antes de su fecha de vencimiento.
• Use el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter con muestras de alimentos y muestras ambientales dedonde se procesan alimentos validadas internamente o por un tercero.
• Use el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter solo con superficies, desinfectantes, protocolos y
cepas bacterianas que hayan sido validados internamente o por un tercero.
• En el caso de muestras ambientales que contengan una solución amortiguadora neutralizante (NB) con un complejo
de aril sulfonato, prepare una dilución en una proporción de 1:2 (1 parte de muestra en 1 parte de caldo deenriquecimiento estéril) antes de realizar la prueba. Otra opción es transferir 10 µL de la solución amortiguadora
neutralizante a los tubos de Solución de Lisis Neogen. Productos de manipulación de la muestra Neogen® que
incluyen la solución amortiguadora Neutralizante con el complejo de aril sulfonato: RS96010NB, RS9604NB,
SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G y HS2410NB2G. Este protocolo no se ha evaluado durante el estudiode NF Validation.
Para reducir los riesgos asociados con la exposición a productos químicos y riesgos biológicos:• Realice las pruebas de patógenos en un laboratorio debidamente equipado, bajo la supervisión de personal
capacitado. El medio de enriquecimiento incubado y el equipo o las superficies que hayan entrado en contacto con
el medio de enriquecimiento podrían contener patógenos en niveles suficientes para provocar un riesgo para lasalud humana.
• Siempre proceda de acuerdo con las prácticas estándar de seguridad del laboratorio. Eso incluye usar la ropa deprotección adecuada y protección para los ojos al manipular reactivos y muestras contaminadas.
• Evite el contacto con el contenido del medio de enriquecimiento y de los tubos de reactivos después de laamplificación.
• Deseche las muestras enriquecidas y desechos contaminados asociados según los estándares locales/regionales/
nacionales/industriales actuales.
• No exceda la temperatura recomendada al configurar el calentador.
• No exceda el tiempo de calentamiento recomendado.
• Use un termómetro calibrado adecuado para verificar la temperatura del Bloque de Calor para el Sistema de
Detección Molecular Neogen® (por ej., un termómetro de inmersión parcial o un termómetro digital termopar, no un
termómetro de inmersión total). El termómetro debe colocarse en la ubicación designada en el Bloque de Calor parael Sistema de Detección Molecular Neogen.
Para reducir los riesgos relacionados con contaminación cruzada mientras se prepara el ensayo:• Use siempre guantes (para proteger al usuario y evitar que se introduzcan nucleasas).
Para reducir los riesgos relacionados con la exposición a líquidos calientes:• No exceda la temperatura recomendada al configurar el calentador.
• No exceda el tiempo de calentamiento recomendado.

2

ES
•

(Español)Use un termómetro calibrado adecuado para verificar la temperatura del Bloque de Calor para el Sistema de
Detección Molecular Neogen® (por ej., un termómetro de inmersión parcial o un termómetro digital termopar, no un
termómetro de inmersión total). El termómetro debe colocarse en la ubicación designada en el Bloque de Calor parael Sistema de Detección Molecular Neogen.

ATENCIÓN
Para reducir los riesgos relacionados con contaminación cruzada mientras se prepara el ensayo:• Cámbiese los guantes antes de hidratar los gránulos reactivos.
• Se recomienda usar puntas de pipetas estériles de calidad de biología molecular con barrera para aerosoles (puntas
con filtro).
• Use una nueva punta de pipeta para cada transferencia de muestra.
• Use las Buenas Prácticas de Laboratorio para transferir la muestra del enriquecimiento al tubo de lisis. Para evitar
la contaminación de la pipeta, el usuario puede elegir agregar un paso de transferencia intermedia. Por ejemplo, el
usuario puede transferir cada muestra enriquecida a un tubo estéril.
• Use una estación de trabajo de calidad para biología molecular con una lámpara germicida, siempre que disponga
de una.
• Descontamine periódicamente las mesas y el equipo de laboratorio (pipetas, herramientas para tapar/destapar, etc.)
con una solución de cloro de uso doméstico del 1 % al 5 % (v:v en agua) o en una solución para eliminación de DNA.
Para reducir los riesgos relacionados con un resultado falso positivo:• Nunca abra los tubos después de la amplificación.
• Siempre deseche los tubos contaminados sumergiéndolos en una solución de cloro de uso doméstico del 1 % al 5 %(v:v en agua) durante 1 hora y lejos del área en que se prepara el ensayo.
• Nunca abra los tubos de reactivos después de la amplificación.
• Si se sospecha que las muestras contienen niveles elevados de ADN de Cronobacter (es decir, ADN de célulasde Cronobacter no viables que hayan estado sujetas a un paso de eliminación/inactivación), los enriquecimientos
presuntamente positivos se deben tratar con la DNasa antes del paso de Lisis. Comuníquese con su Representante de
Neogen para recibir instrucciones adicionales. Este protocolo no se ha evaluado durante el estudio de NF Validation.
Consulte la Hoja de Datos de Seguridad para obtener más información y conocer las regulaciones locales para eldesecho de materiales.
Si tiene preguntas acerca de los procedimientos o las aplicaciones específicas, visite nuestro sitio web en
www.neogen.com o comuníquese con su representante o distribuidor local de Neogen.

Responsabilidad del usuario

Los usuarios son responsables de familiarizarse con las instrucciones e información del producto. Visite nuestro sitio
web en www.neogen.com, o póngase en contacto con su representante o distribuidor local de Neogen para obtener
más información.
Al seleccionar un método de prueba, es importante reconocer que factores externos tales como los métodos demuestreo, los protocolos de prueba, la preparación de la muestra, la manipulación y la técnica de laboratorio pueden
afectar los resultados.
Al seleccionar cualquier método de prueba o producto, es responsabilidad del usuario evaluar un número suficiente demuestras con exposiciones microbianas y matrices apropiadas para satisfacer al usuario en cuanto a que el método deprueba cumple con los criterios que este estipule.
Además, es responsabilidad del usuario determinar que cualquier método de prueba y sus resultados cumplen con losrequisitos de sus clientes y proveedores.
Como sucede con cualquier método de prueba, los resultados obtenidos del uso de cualquier producto de Neogen Food
Safety no constituyen una garantía de calidad de las matrices ni de los procesos analizados.
Para ayudar a los clientes a evaluar el método de varias matrices, Neogen ha desarrollado el kit de Control de Matriz
para Detección Molecular Neogen®. Cuando sea necesario, utilice el Control de Matriz (MC) para determinar si la matriz
tiene la capacidad de impactar en los resultados del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter. Analicevarias muestras representativas de la matriz, es decir, las muestras obtenidas de diferente origen, durante cualquierperiodo de validación al adoptar el método de Neogen o al analizar matrices nuevas o desconocidas, o matrices que
hayan sido sometidas a cambios en el proceso o la materia prima.

3

ES(Español)Una matriz se puede definir como un tipo de producto con propiedades intrínsecas, tales como composición y proceso.
Las diferencias entre las matrices pueden ser tan simples como los efectos provocados por las diferencias en su
procesamiento o presentación, por ejemplo, crudo o pasteurizado, fresco o deshidratado, etc.

Limitación de garantías / Recurso limitado

SALVO LO EXPRESAMENTE ESTIPULADO EN UNA SECCIÓN DE GARANTÍA LIMITADA O EN EL EMBALAJE DE
UN PRODUCTO ESPECÍFICO, NEOGEN RENUNCIA A TODAS LAS GARANTÍAS EXPRESAS Y TÁCITAS INCLUIDA,ENTRE OTRAS, CUALQUIER GARANTÍA DE COMERCIABILIDAD O IDONEIDAD PARA UN USO EN PARTICULAR. Si
un producto de Neogen Food Safety es defectuoso, Neogen o su distribuidor autorizado reemplazará el producto oreembolsará el precio de compra del producto, a su elección. Estos son sus recursos exclusivos. Póngase en contacto
con su representante de Neogen o distribuidor autorizado de Neogen para que se le responda cualquier otra pregunta.

Limitación de responsabilidad de Neogen

NEOGEN NO SERÁ RESPONSABLE DE NINGUNA PÉRDIDA O DAÑO, YA SEA DIRECTO, INDIRECTO, ESPECIAL,DAÑOS ACCIDENTALES O CONSECUENCIAS, INCLUIDOS ENTRE OTROS, LA PÉRDIDA DE GANANCIAS. En
ningún caso la responsabilidad de Neogen conforme a ninguna teoría legal excederá el precio de compra del producto
supuestamente defectuoso.

Almacenamiento y desecho

Almacene el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter a una temperatura entre 2 °C y 8 °C. No congelar.
Durante el almacenamiento, mantenga el kit fuera del alcance de la luz. Después de abrir el kit, verifique que la bolsa dealuminio no esté dañada. Si la bolsa está dañada, no use el producto. Después de abrir el embalaje, los tubos de reactivo
no utilizados se deberán guardar siempre en la bolsa resellable junto con el desecante para conservar la estabilidad de losreactivos liofilizados. Almacene las bolsas reselladas a una temperatura entre 2 °C y 8 °C durante 60 días como máximo.
No use el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter después de su fecha de vencimiento. La fecha devencimiento y el número de lote están impresos en la etiqueta externa de la caja. Después de usarlos, el medio deenriquecimiento y los tubos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter podrían contener materiales
patógenos. Una vez terminada la prueba, proceda de acuerdo con los estándares actuales de la industria para eldesecho de residuos contaminados. Consulte la Hoja de Datos de Seguridad para obtener más información y conocerlas regulaciones locales para el desecho de materiales.

Instrucciones de uso

Siga todas las instrucciones atentamente. De lo contrario, los resultados obtenidos podrían llegar a ser incorrectos.
Descontamine periódicamente las mesas y el equipo de laboratorio (pipetas, herramientas para tapar/destapar, etc.) con
una solución de cloro de uso doméstico del 1 % al 5 % (v:v en agua) o en una solución para eliminación de DNA.
El usuario debe completar la capacitación de calificación del operador (OQ) del Sistema de Detección Molecular
Neogen según se describe en el documento “Protocolos de Calificación para la Instalación (IQ)/Calificación Operativa(OQ) e Instrucciones para el Sistema de Detección Molecular Neogen”(6).
Consulte la Sección “Instrucciones específicas para los métodos validados” para obtener requisitos específicos:
La Tabla 3 para los protocolos de enriquecimiento según el OAOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 y elCertificado Performance TestedSM n.º 101703.
La Tabla 4 de los protocolos de enriquecimiento según el certificado NF VALIDATION 3M 01/20-03/18.
Enriquecimiento de la Muestra
Las Tablas 2, 3 o 4 presentan una guía para los protocolos de enriquecimiento de muestras ambientales y de alimentos.
Es responsabilidad del usuario validar protocolos de muestreo o enriquecimiento, o proporciones de dilución
alternativos para garantizar que este método de prueba satisface los criterios del usuario.
Alimentos, polvos ambientales, polvos, barreduras y esponjas
1. Equilibre el medio de enriquecimiento a la temperatura ambiente de la sala (20-25 °C) a menos que el protocolo de
enriquecimiento indique lo contrario (Consulte la Tabla 2, 3 o 4).
2. Combine asépticamente el medio de enriquecimiento y la muestra y homogenice mediante mezclado, unhomogeneizador peristáltico o a mano durante 2 ± 0,2 minutos o hasta que todos los grumos se hayan disuelto porcompleto y la suspensión de enriquecimiento sea homogénea(7, 8).
a.

Los factores como la preparación de la muestra, incluso la homogenización y mezclado, manipulación y técnicas
de laboratorio pueden influir sobre los resultados.
4

ES(Español)b. Para muestras con alto contenido de partículas, se recomienda utilizar bolsas con filtro.
c.

Para matrices que se expanden en agua y son ampliamente viscosas (por ejemplo, cereales, almidones), sesugiere hacer más diluciones (> 1:10) hasta que la viscosidad se haya reducido de manera adecuada o agregue
1% (p/v) de alfa-amilasa a BPW (ISO)(8).

d. Para muestras de gran tamaño de cereales, agregue el cereal en polvo lentamente al líquido mezclando
frecuentemente para evitar los grumos.
3. Incube como se indica en la tabla del protocolo que corresponda (Consulte la Tabla 2, 3 o 4).
Tabla 2. Protocolos Generales de Enriquecimiento
Temperatura deenriquecimiento(± 1 °C)

Tiempo deenriquecimiento(horas)Volumendeanálisisde lamuestraMatriz de Muestreo

Tamaño dela muestra1

Volumendel caldo deenriquecimiento1, 2

Fórmula en polvo para
lactantes (Powdered infant
formula, PIF) y materias primas
tales como leche en polvo,
polvo de soja, suero en polvo,
lactosa, harina de arroz ymaltodextrina

Muestra de
1X gramos

9X ml de BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Materias primas como sales,
minerales, aminoácidos, DHA(ácido docosahexaenoico)

1X gramos
Muestra de

99X ml de BPW(ISO) (1:100)

37

18-24

20 µl

Muestras ambientales secas
como polvo, barreduras ysuciedad aspirada

Muestra de
1X gramos

9X ml de BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Esponja ambiental con 10 ml
de caldo de Letheen o D/E
Caldo Neutralizante

1 dispositivo
de muestreo

90 ml de BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

1. Neogen ha evaluado el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter usando las proporciones de dilución
que se indican en la Tabla 2 hasta 300 g. Es responsabilidad del usuario validar protocolos o las proporciones dedilución alternativos para garantizar que este método de prueba satisface los criterios del usuario.
2. Use BPW (ISO) precalentada si el volumen del caldo de enriquecimiento es >300 ml (por ejemplo, si la muestra es>30 gramos).
Instrucciones Específicas para Métodos Validados
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) N.º de certificado 101703

En los estudios de AOAC Research Institute, OMASM y PTMSM, se descubrió que el Ensayo 2 Detección Molecular
Neogen - Cronobacter era un método efectivo para la detección de la Cronobacter. Las matrices evaluadas en el
estudio se muestran en la Tabla 3.

5

ES(Español)Tabla 3. Protocolos de enriquecimiento según AOAC® OMASM 2018.01 y PTMSM101703
Temperatura deenriquecimiento(± 1 °C)

Tiempo deenriquecimiento(horas)Volumendeanálisisde lamuestraMatriz de Muestreo

Tamaño dela muestra

Volumendel caldo deenriquecimiento1

Fórmula en polvo para lactantes
y cereal en polvo para lactantes

10 g

90 ml de BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Cereal en polvo para lactantes
no probiótico

300 g

2700 ml de BPW(ISO) (1:10)

Precalentada 37

18-24

20 µl

Fórmula en polvo para lactantes
y cereal en polvo para lactantes
con probióticos

300 g

2700 ml de BPW(ISO) + 10 mg/l devancomicina

Precalentada 37

22-24

20 µl

Lactosa

10 g

90 ml de BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

1
dispositivo
demuestreo

90 ml de BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Esponja ambiental con 10 ml de
D/E Caldo Neutralizante D/E

1. Use BPW (ISO) precalentada si el volumen del caldo de enriquecimiento es >300 ml.
NF VALIDATION por AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

METODOS ALTERNATIVOS DE ANÁLISIS PARA LA AGROINDUSTRIA
http://nf-validation.afnor.org/en
Para más información acerca del fin de la validez, consulte el certificado de NF VALIDATION disponible en el sitio web
mencionado anteriormente.
Método certificado de NF VALIDATION en cumplimiento de la norma ISO 16140-2(9) comparada con la norma ISO
22964.
Alcance de la validación: Fórmula en polvo para lactantes y cereal en polvo para lactantes con y sin probióticos,
materias primas y muestras ambientales.
Preparación de la muestra: Las muestras se deben preparar según las normas EN ISO 22694(2) y EN ISO 6887(7, 8).
Versión de Software: Consulte el certificado.

6

ES(Español)Tabla 4. Protocolos de enriquecimiento según el método certificado de NF VALIDATION 3M 01/20-03/18.

Matriz de Muestreo
•
•
•

•

•

Fórmula en polvo
para lactantes
Cereal en polvo
para lactantes
Ingredientes comoleche en polvo,
polvo de soja, sueroen polvo, lactosa,
harina de arroz,
maltodextrina
Muestrasambientales secas
como polvo,
barreduras ysuciedad aspirada,

Esponja, agua deenjuague, paños

Fórmula en polvo para
lactantes y cereal en
polvo para lactantes (noprobiótico)Fórmula en polvo para
lactantes y cereal en
polvo para lactantes(incluso probióticos)

Tamaño dela muestra

Volumendel caldo deenriquecimiento1

Temperaturade enriquecimiento(± 1 °C)

Tiempo deenriquecimiento(horas)Volumen deanálisis de lamuestra10 g

90 ml de BPW(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Punto deinterrupción
recomendado2, 3

El caldo deenriquecimientoo el lisadode muestra
se puede
almacenar a
2-8 °C por hasta
72 horas.

1
dispositivo
demuestreoo 10 ml

El caldo deenriquecimientoo el lisadode muestra
se puede
almacenar a
2-8 °C por hasta
72 horas.

30-300 g

BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

El caldo deenriquecimientoo el lisadode muestra
se puede
almacenar a
2-8 °C por hasta
72 horas.

30-300 g

BPW (ISO) +10 mg/l devancomicina(1:10)

37

22-24

20 µl

Ninguno

1. Use BPW (ISO) precalentada si el volumen del caldo de enriquecimiento es >300 ml (por ejemplo, si la muestra es>30 gramos).
2. Después de extraer el caldo de enriquecimiento del almacenamiento, retome la prueba desde el Paso 1 en lasección Lisis. Después de extraer el lisado de muestra del almacenamiento, retome la prueba desde el Paso 7 enla sección Lisis.
3. Consulte el Apéndice A para repetir las pruebas de lisados tratados con calor.
Preparación de la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
1. Humedezca un paño o una toalla desechable con una solución de cloro de uso doméstico del 1 % al 5 % (v:v en agua)
y limpie la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen.
2. Enjuague la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen con agua.
3. Utilice una toalla desechable para secar la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen.
4. Antes de utilizarla, asegúrese de que la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen
esté seca.
7

ES(Español)Preparación del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
Coloque la Inserción del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen directamente sobre la mesa dellaboratorio: No se usa la Bandeja para el Bloque de Frío del Sistema de Detección Molecular Neogen. Use el bloque atemperatura ambiente del laboratorio (20 °C a 25 °C).
Preparación del Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
Coloque el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen en una unidad o plancha de calentamientoseca. Encienda la unidad de calentamiento de bloques seca y ajuste la temperatura para permitir que el Bloque de Calorpara el Sistema de Detección Molecular Neogen alcance y mantenga una temperatura de 100 °C ±1 °C.
NOTA: Según la unidad de calentamiento, espere aproximadamente 30 minutos para que el Bloque de Calor para el
Sistema de Detección Molecular Neogen alcance la temperatura deseada. Con un termómetro calibrado apropiado(por ej., un termómetro de inmersión parcial o un termómetro digital termopar, no un termómetro de inmersión total)
colocado en la ubicación designada, verifique que el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen
se encuentre a 100 °C ±1 °C.
Preparación del Equipo de Detección Molecular Neogen®
1. Inicie el Software de Detección Molecular Neogen® e inicie sesión. Comuníquese con su representante de Neogen
Food Safety para asegurarse de que cuenta con la versión más actualizada del software.
2. Encienda el Equipo de Detección Molecular Neogen.
3. Cree o edite una corrida con datos para cada muestra. Para obtener detalles, consulte el Manual del Usuario delSistema de Detección Molecular Neogen.
NOTA: El Equipo de Detección Molecular Neogen debe alcanzar el estado de Listo antes de insertar la Bandeja de Carga
Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen con los tubos de reacción. Este paso de calentamiento lleva
unos 20 minutos y aparece indicado por una luz NARANJA en la barra de estado del equipo. Una vez que el equipo estélisto para iniciar una corrida, la barra de estado se cambiará a color VERDE.
Lisis
Retire la parte inferior de la Gradilla de Solución de Lisis de Neogen con un destornillador antes de colocarlo en el
Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen.

1. Permita que los tubos de Solución de Lisis Neogen se calienten colocando la gradilla a temperatura ambiente (2025 °C) durante la noche (16 a 18 horas). Las alternativas para que los tubos de Solución de Lisis Neogen alcancen
temperatura ambiente son colocar los tubos de Solución de Lisis Neogen sobre el banco de laboratorio durante por
lo menos 2 horas, incubar los tubos de Solución de Lisis Neogen en una incubadora a 37 ± 1 °C durante 1 hora ocolocarlos en una unidad de calentamiento de dos bloques seca durante 30 segundos a 100 ± 1 °C.
2. Invierta los tubos tapados para mezclarlos. Proceda con el paso siguiente dentro de las 4 horas después de la inversión.
3. Retire el caldo de enriquecimiento de la incubadora.
4. Se requiere un tubo de Solución de Lisis Neogen para cada muestra y la muestra NC (medio de enriquecimiento estéril).
4.1 Las tiras de tubos de Solución de Lisis Neogen pueden cortarse para obtener la cantidad deseada de tubos.
Seleccione la cantidad de tubos de Solución de Lisis Neogen individuales o de tiras de 8 tubos necesarias.
Coloque los tubos de Solución de Lisis Neogen en una gradilla vacía.
4.2 Para evitar la contaminación cruzada, destape una tira de tubos de Solución de Lisis Neogen por vez y use una
nueva punta de pipeta para cada paso de transferencia.
4.3 Transfiera la muestra enriquecida a los tubos de Solución de Lisis Neogen como se describe a continuación:
Transfiera cada muestra enriquecida a un tubo de Solución de Lisis Neogen individual primero. Transfiera el
NC al final.
8

ES(Español)4.4 Utilice la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado del Sistema de Detección Molecular – Lisis
Neogen® para destapar una tira de tubos de Solución de Lisis Neogen, una tira por vez.
4.5 Deseche la tapa del tubo de Solución de Lisis Neogen; si se conservara el lisado para una repetición de prueba,
coloque las tapas en un envase limpio para su reaplicación luego de la lisis.
4.5.1. Para ver cómo procesar el lisato conservado, consulte el Apéndice A.
4.6 Agite la bolsa de enriquecimiento antes de recolectar la muestra del lado filtrado cuando trabaje con muestras
viscosas.
4.7 Transfiera 20 µl de la muestra a un tubo de Solución de Lisis Neogen a menos que se indique de manera
contraria en la tabla de protocolo.
5. Repita los pasos 4.4 a 4.7 hasta que cada muestra individual se haya agregado al correspondiente tubo de Soluciónde Lisis Neogen de la tira.

6. Cuando se hayan transferido todas las muestras, transfiera 20 µl del NC (medio de enriquecimiento estéril, por
ejemplo, BPW) a un tubo de Solución de Lisis Neogen. No use agua como un NC.
7. Verifique que la temperatura del Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen sea de 100 °C ±1 °C.
8. Coloque la gradilla descubierta de tubos de Solución de Lisis Neogen en el Bloque de Calor para el Sistema de
Detección Molecular Neogen y caliente durante 15 ±1 minutos. Durante el calentamiento, la Solución de Lisis
Neogen cambiará de rosado (frío) a amarillo (caliente).
Las muestras que no se hayan tratado debidamente con calor durante el paso de lisis del ensayo pueden
considerarse un posible riesgo biológico y NO deben introducirse en el Equipo de Detección Molecular Neogen.
9. Retire la gradilla descubierta de tubos Solución de Lisis Neogen del bloque de calentamiento y deje que se enfríe enla Inserción del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen al menos durante 5 minutos y por
un máximo de 10 minutos. Cuando se usa la Inserción del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular
Neogen a temperatura ambiente sin la Bandeja para el Bloque de Frío del Sistema de Detección Molecular Neogen®,debe colocarse directamente sobre el banco de laboratorio. Cuando esté frío, la Solución de Lisis Neogen se
revertirá a un color rosado.
10. Retire la gradilla de tubos de Solución de Lisis Neogen de la Inserción del Bloque de Frío para el Sistema de
Detección Molecular Neogen.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplificación
1. Se necesita un Tubo de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter por cada muestra y el NC.
1.1 Las tiras de tubos pueden cortarse para obtener la cantidad de tubos deseada. Seleccione la cantidad de Tubos
de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter o tiras de 8 tubos según sea necesario.
1.2 Tubos de reactivos para el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter
1.3 Evite mover las perlas de reactivo en el fondo de los tubos.
2. Seleccione un tubo de Control de Reactivos Neogen y colóquelo en la gradilla.
9

ES(Español)3. Para evitar la contaminación cruzada, destape una tira de Tubos de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular
Neogen - Cronobacter por vez y use una nueva punta de pipeta para cada paso de transferencia.
4. Transfiera cada uno de los lisados a un Tubos de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobactery a un Tubo de Control de Reactivos Neogen como se describe a continuación:
Transfiera el lisado de cada muestra a los Tubos de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen Cronobacter primero, seguido por el NC. Hidrate el Tubo de Control de Reactivos Neogen al final.
5. Use la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado del Sistema de Detección Molecular – Reactivo Neogen®
para destapar los Tubos de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter, una tira de tubo a lavez. Desecha la tapa.
5.1 Transfiera 20 µl del lisado de muestra de la 1/2 superior del líquido (evite el precipitado) en el tubo de
Solución de Lisis Neogen que corresponde al Tubo de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen- Cronobacter. Aplique en un ángulo que permita evitar que se muevan los gránulos. Mezcle pipeteando
suavemente hacia arriba y hacia abajo 5 veces.
5.2 Repita el paso 5.1 hasta que se haya añadido una muestra individual del lisado a un Tubo de Reactivos delEnsayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter en la tira.
5.3 Cubra los Tubos de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter con las tapas
adicionales provistas y utilice el lado redondeado de la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado delSistema de Detección Molecular – Reactivo Neogen para aplicar presión con un movimiento hacia adelante yhacia atrás para asegurarse de que la tapa quede bien ajustada.
5.4 Repita los pasos 5.1 a 5.3 según sea necesario para la cantidad de muestras que se deben analizar.
5.5 Cuando se hayan transferido todos los lisados de la muestra, repita los pasos 5.1 a 5.3 para transferir 20 µl delisado NC a un Tubo de Reactivos del Ensayo 2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter.
5.6 Transfiera los 20 µl del lisado NC a un tubo de Control de Reactivos Neogen. Aplique en un ángulo que permita
evitar que se muevan los gránulos. Mezcle pipeteando suavemente hacia arriba y hacia abajo 5 veces.
6. Cargue los tubos tapados en una Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen limpia
y descontaminada. Cierre y trabe la tapa de la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular
Neogen.

7. Revise y confirme la corrida configurada en el Software de Detección Molecular Neogen.
8. Haga clic en el botón de inicio del software y seleccione el equipo que usará. La tapa del equipo seleccionado se
abrirá automáticamente.
9. Coloque la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen en el Equipo de Detección
Molecular Neogen y cierre la tapa para comenzar con el ensayo. Obtendrá los resultados al cabo de 60 minutos,
aunque los positivos pueden detectarse antes.
10. Una vez terminado el ensayo, retire la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogendel Equipo de Detección Molecular Neogen y deseche los tubos sumergiéndolos en una solución de cloro de uso
doméstico del 1 % al 5 % (v:v en agua) durante 1 hora y lejos del área en que se prepara el ensayo.

10

ES

(Español)ATENCIÓN: Para minimizar el riesgo de falsos positivos a causa de contaminación cruzada, nunca abra tubos dereactivo que contengan DNA amplificado. Esto incluye un Tubo de Reactivo del Ensayo 2 Detección Molecular
Neogen - Cronobacter, el Control de Reactivos Neogen y los Tubos de Control de Matriz Neogen. Siempre desechelos tubos de reactivo sellados sumergiéndolos en una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5% (v:v en agua)
durante una hora y lejos del área de preparación del ensayo.

Resultados e interpretación

Un algoritmo interpreta la curva de producción de luz que se obtiene de la detección de ácido nucleico amplificado.
El software analiza automáticamente los resultados y los expresa en color según el resultado. Los resultados Positivo o
Negativo se determinan mediante el análisis de una cantidad de parámetros característicos de la curva. Los resultados
presuntivos positivos se informan en tiempo real, mientras que los resultados Negativo e Inspeccionar se muestran una
vez terminado el análisis.
NOTA: Incluso una muestra negativa no arrojará una lectura de cero, ya que los reactivos de amplificación del Ensayo
2 Detección Molecular Neogen - Cronobacter tienen unidades relativas de luz de fondo (RLU).
Confirmación• Confirmación de los resultados según el Método Certificado de NF Validation
En el contexto de NF VALIDATION, todos los enriquecimientos presuntamente positivos se deben confirmar siguiendo
la confirmación del método de referencia(2), comenzando con la transferencia desde el enriquecimiento primario (BPW
ISO o BPW ISO suplementada con 10 mg/l de vancomicina).
•

Otro protocolo de confirmación

Todos los enriquecimientos con resultados presuntamente positivos deben ser confirmados de acuerdo con losprocedimientos operativos estándar del laboratorio o mediante la confirmación del método de referencia apropiado(1, 2),
comenzando con la transferencia del medio de enriquecimiento primario (BPW ISO o BPW ISO suplementada con
10 mg/l de vancomicina) al secundario, seguido del subsiguiente sembrado en placa y la confirmación de cepas,
utilizando métodos bioquímicos, serológicos o moleculares apropiados.
En el raro caso de que haya una interrupción inusual del suministro eléctrico, el algoritmo lo señalará como
“Inspeccionar”. Neogen recomienda al usuario repetir el ensayo para aquellas muestras etiquetadas como Inspeccionar.
Si el resultado sigue siendo Inspeccionar, continúe con la prueba de confirmación usando su método preferido o según
se especifique en las reglamentaciones locales(1,2).
En caso de resultados discordantes (presuntamente positivo con el Ensayo 2 Detección Molecular Neogen Cronobacter no confirmado por alguno de los medios descritos anteriormente), el laboratorio debe seguir los pasos
necesarios para asegurar la validez de los resultados obtenidos.
Si tiene preguntas acerca de los procedimientos o las aplicaciones específicas, visite nuestro sitio web en
www.neogen.com o comuníquese con su representante o distribuidor local de Neogen.
Apéndice A. Interrupción por protocolo: Almacenamiento y repetición de pruebas de lisados tratados con calor
1. Para almacenar un lisato tratado con calor, vuelva a tapar el tubo de lisis con una tapa limpia (consulte Lysis, lasección 4.5)
2. Almacene entre 2 y 8 °C por hasta 72 horas.
3. Prepare una muestra almacenada para amplificación invirtiéndola 2 a 3 veces para mezclar.
4. Destape los tubos.
5. Coloque los tubos de lisado mezclados en el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen ycaliéntelos a 100 °C ±1 °C durante 5 ±1 minutos.
6. Retire la gradilla de tubos Solución de Lysis Neogen del bloque de calentamiento y deje que se enfríe en laInserción del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen al menos durante 5 minutos y por un
máximo de 10 minutos.
7. Siga el protocolo en la sección Amplificación que se detalla arriba.

11

ES

(Español)Referencias:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Consulte las versiones actuales de los métodos estándar enumerados anteriormente.

Explicación de los símbolos
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879ANL(Nederlands)
Datum van uitgifte: 2024-01

Productinstructies
Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter
Productbeschrijving en beoogd gebruik

De Neogen® Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter wordt samen met het Neogen® Moleculair Detectiesysteem
gebruikt voor een snelle en specifieke detectie van Cronobacter in verrijkte voedingsmonsters en omgevingsmonsters
uit de voedingsindustrie.
De Neogen Moleculair Detectie Assay maakt gebruik van lusgebonden isothermische amplificatie voor de snelle
amplificatie van nucleïnezuurschakels met een hoge specificiteit en gevoeligheid, in combinatie met bioluminescentie
om de amplificatie op te sporen. Vermoedelijk positieve resultaten worden onmiddellijk gerapporteerd, terwijl negatieve
resultaten pas na de voltooiing van de analyse worden weergegeven. Vermoedelijk positieve resultaten moeten worden
bevestigd door middel van de door u verkozen methode of volgens de lokale regelgevingen(1, 2).
De Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter is bedoeld voor gebruik in een laboratoriumomgeving door
professionals geschoold in laboratoriumtechnieken. Neogen heeft het gebruik van dit product niet gedocumenteerd inandere sectoren dan de voedings- of dranksector. Neogen heeft dit product bijvoorbeeld niet gedocumenteerd voor
farmaceutische, cosmetische, klinische of veterinaire monsters. De Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacteris niet geëvalueerd voor alle mogelijke voedingsmiddelen, voedselverwerkingen, testprotocollen of voor alle mogelijke
bacteriestammen.
Zoals bij alle testmethoden, kunnen de bron, de formulering en de kwaliteit van het verrijkingsmedium de resultatenbeïnvloeden. Factoren zoals monstermethoden, testprotocollen, monstervoorbereiding inclusief homogeniseren en
mixen, behandeling en laboratoriumtechniek kunnen de resultaten tevens beïnvloeden. Neogen beveelt evaluatie van demethode aan, waaronder verrijking van het medium, in de omgeving van de gebruiker aan de hand van een voldoende
aantal monsters met specifieke voedings- en/of omgevingsmonsters en microbiële uitdagingen om te verzekeren dat demethode aan de criteria van de gebruiker voldoet.
Neogen heeft de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter geëvalueerd met ISO Gebufferd Peptonwater als
verrijkingsmedium.
Het Neogen® Moleculair Detectieinstrument is bedoeld voor gebruik bij monsters die een warmtebehandeling hebben
ondergaan tijdens de lyse-stap (wordt op twee verschillende manieren geschreven in dit document) van de analyse, die
ontwikkeld is om de in het monster aanwezige organismen te vernietigen. Monsters die tijdens de lyseanalysestap niet
de correcte warmtebehandeling hebben ondergaan, kunnen als een potentieel biologisch gevaar worden beschouwd en
mogen NIET in het Neogen Moleculaire Detectieinstrument worden geplaatst.
Neogen Voedselveiligheid is ISO 9001-gecertificeerd voor het ontwerp en de productie (ISO staat voor Internationale
Organisatie voor Standaardisatie).
De Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter testset bevat 96 testen, beschreven in Tabel 1.
Tabel 1. Onderdelen testset Neogen Moleculair Detectie Assay
ArtikelIdentificatie

Hoeveelheid

InhoudOpmerkingen

Neogen Lyse-oplossing(LS)

Roze oplossing indoorzichtige buisjes

96 (12 stroken van 8
buisjes)

580 µL LO per buisje

In rek en klaar
voor gebruik

Neogen® Moleculair
Detectie Assay
2 -Cronobacter
reagensbuisjes

Oranjerode buisjes

96 (12 stroken van 8
buisjes)Gevriesdroogde
specifieke amplificatie- endetectiemix

Klaar voor
gebruik

Extra doppen

Oranjerode doppen

96 (12 stroken van 8
doppen)Neogen® Reagenscontrole(RC)

Doorzichtige buisjes 16 (2 zakjes met 8
met kliksluiting
individuele buisjes)®

Klaar voor
gebruik
Gevriesdroogd controleDNA, amplificatie- endetectiemix

Klaar voor
gebruikDe Negatieve Controle, niet meegeleverd in de set, is een steriel verrijkingsmedium, bijv. BPW ISO. Gebruik geen water
als Negatieve Controle.
1

NL(Nederlands)

Veiligheid

De gebruiker moet alle veiligheidsinformatie in de instructies van het Neogen Moleculair Detectiesysteem en de Neogen
Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter lezen en in acht nemen. Bewaar de veiligheidsinstructies om deze later tekunnen raadplegen.
WAARSCHUWING: geeft een gevaarlijke situatie aan die, indien deze niet wordt vermeden, de dood, ernstig letsel
en/of materiële schade tot gevolg kan hebben.
OPMERKING:geeft een mogelijk gevaarlijke situatie aan die, als ze niet vermeden wordt, kan resulteren inmateriële schade.

W WAARSCHUWING
Gebruik de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter niet voor de diagnose van aandoeningen bij mensen of
dieren.
De gebruiker moet zijn personeel scholen in de huidige juiste testtechnieken, bijvoorbeeld goedelaboratoriumpraktijken(3), ISO/IEC 17025(4), of ISO 7218(5).
Om de risico’s van een vals negatief resultaat dat tot de vrijlating van het besmet product leidt te verminderen, doetu het volgende:• Volg het protocol en voer de testen exact uit zoals aangegeven in de productinstructies.
• Bewaar de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter zoals wordt aangegeven op de verpakking en in deproductinstructies.
• Gebruik de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter altijd voor de vervaldatum.
• Gebruik de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter met voedingsmonsters en omgevingsmonsters uit devoedingsindustrie die intern of door een derde partij zijn goedgekeurd.
• Gebruik de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter alleen met oppervlakken, reinigingsmiddelen,
protocollen en bacteriestammen die intern of door een derde partij zijn goedgekeurd.
• Voor een milieumonster dat een neutraliserende bufferoplossing bevat met een arylsulfonaatcomplex, verdunt u 1:2
vóór het testen (1 maat van het monster in 1 maat steriele verrijkingsbouillon). Een andere optie is om 10 μl van deNB-verrijking in de Neogen buisjes met lyse-oplossing over te brengen. Neogen® monsterverwerkende producten,
waaronder een neutraliserende buffer met arylsulfonaatcomplex: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G,
HS10NB, HS10NB2G en HS2410NB2G. Dit protocol is niet getest tijdens de NF Validation-studie.
Om het risico op blootstelling aan biologische en chemische gevaren te beperken, doet u het volgende:• Voer de pathogeentesten uit in een goed uitgerust laboratorium onder begeleiding van opgeleid personeel.
Geïncubeerde verrijkingsmedia en -apparatuur of oppervlakken die in contact zijn gekomen met geïncubeerde
verrijkingsmedia bevatten mogelijk voldoende pathogenen om een gevaar te vormen voor de menselijke gezondheid.
• Volg altijd de standaard veiligheidsvoorschriften voor laboratoria op, waaronder het dragen van toepasselijkebeschermende kleding en oogbescherming bij het behandelen van reagentia en besmette monsters.
• Vermijd contact met de inhoud van de verrijkingsmedia en reagensbuisjes na amplificatie.
• Voer verrijkte monsters met bijbehorende besmet afval af conform de geldende plaatselijke/regionale/nationale/industrienormen.
• Overschrijd de aanbevolen temperatuurinstelling op de verwarmer niet.
• Overschrijd de aanbevolen verwarmingstijd niet.
• Gebruik een geschikte, gekalibreerde thermometer om de temperatuur van het Neogen® Moleculaire Detectie Verwarmingsblokinzetstuk te controleren (bijv. gedeeltelijk ondergedompelde thermometer of digitale
thermokoppelthermometer, geen volledig ondergedompelde thermometer). De thermometer moet op deaangewezen locatie in het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk geplaatst worden.
Om de risico's op kruisbesmetting te beperken tijdens de voorbereiding van de test, doet u het volgende:• Draag altijd handschoenen (om de gebruiker te beschermen en de introductie van nucleases te voorkomen).
Om de risico's van blootstelling aan hete vloeistoffen te verminderen, dient u aan de volgende voorschriften te voldoen:• Overschrijd de aanbevolen temperatuurinstelling op de verwarmer niet.
• Overschrijd de aanbevolen verwarmingstijd niet.
• Gebruik een geschikte, gekalibreerde thermometer om de temperatuur van het Neogen® Moleculaire Detectie Verwarmingsblokinzetstuk te controleren (bijv. gedeeltelijk ondergedompelde thermometer of digitale
thermokoppelthermometer, geen volledig ondergedompelde thermometer). De thermometer moet op deaangewezen locatie in het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk geplaatst worden.

2

NL(Nederlands)

OPMERKING
Om de risico's op kruisbesmetting te beperken tijdens de voorbereiding van de test, doet u het volgende:• Verwissel uw handschoenen vóór hydratatie van reagenspellets.
• Gebruik van steriele pipettips geschikt voor moleculaire biologie met spuitbusbarrière (gefilterd) wordt aanbevolen.
• Gebruik een nieuwe pipettip bij elke monsteroverdracht.
• Pas goede laboratoriumpraktijken toe bij de monsteroverdracht van de verrijking naar het lysebuisje. Om
pipetbesmetting te voorkomen, kan de gebruiker ervoor kiezen een extra overdrachtsstap toe te voegen. De
gebruiker kan bijvoorbeeld elk verrijkt monster in een steriel buisje overbrengen.
• Gebruik waar mogelijk een moleculair biologiewerkstation met een kiemdodende lamp.
• Ontsmet regelmatig laboratoriumtafels en apparatuur (pipetten, cap/decap-gereedschap, enz.) met een
bleekwateroplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) of DNA-verwijderingsoplossing.
Om het risico op valse positieve resultaten te beperken, doet u het volgende:• Open de buisjes nooit na de amplificatie.
• Verwijder de verontreinigde buisjes altijd door ze 1 uur lang onder te dompelen in een
huishoudbleekmiddeloplossing van 1-5% (volume in water), uit de buurt van de testbereidingsruimte.
• U dient reagensbuisjes nooit te autoclaveren na amplificatie.
• Als u vermoedt dat monsters een hoog gehalte Cronobacter-DNA bevatten (d.w.z. DNA van niet-levensvatbare
Cronobacter-cellen die gedood/geïnactiveerd zijn), dienen vermoedelijk positieve monsters vóór de lyse-stap teworden behandeld met DNase. Neem voor instructies contact op met uw Neogen-vertegenwoordiger. Dit protocol
is niet getest tijdens de NF Validation-studie.
Raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor bijkomende informatie en de lokale regelgeving inzake afvalverwerking.
Als u vragen hebt over specifieke toepassingen of procedures, kunt u onze website www.neogen.com bezoeken ofcontact opnemen met uw plaatselijke vertegenwoordiger of distributeur van Neogen.

Verantwoordelijkheid van de gebruiker

Gebruikers worden geacht zich vertrouwd te maken met de productinstructies en -informatie. Bezoek onze website
www.neogen.com of neem contact op met uw plaatselijke Neogen-vertegenwoordiger of -distributeur voor meer
informatie.
Bij het kiezen van een testmethode is het belangrijk om te erkennen dat externe factoren zoals monsternamemethoden,
testprotocollen, monstervoorbereiding inclusief homogeniseren en mixen, behandeling en laboratoriumtechniek deresultaten kunnen beïnvloeden.
De gebruiker is verantwoordelijk voor de selectie van een testmethode of product waarbij een voldoende aantal
monsters met gepaste matrices en microbiële problemen wordt onderzocht zodat de gekozen testmethode voldoet aan
de criteria van de gebruiker.
Het is ook de verantwoordelijkheid van de gebruiker om te bepalen of testmethoden en resultaten aan de vereisten van
klanten en leveranciers voldoen.
Zoals bij elke testmethode, garanderen de verkregen resultaten van het gebruik van een Neogen Food Safety-productde kwaliteit van de geteste matrices of processen niet.
Om klanten te helpen bij het evalueren van de methode voor verschillende matrices heeft Neogen de Neogen®
Moleculaire Detectie - Matrix controleset ontwikkeld. Gebruik indien nodig de Matrix controle (MC) om te bepalen ofde matrix het vermogen heeft om de resultaten van de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 Cronobacter te beïnvloeden.
Test meerdere monsters die representatief zijn voor de matrix, bijv. monsters met een verschillende oorsprong, tijdens
een willekeurige goedkeuringsperiode bij het aannemen van de Neogen-methode of bij het testen van nieuwe of
onbekende matrices of matrices die grondstof- of procesveranderingen hebben ondergaan.
Een matrix kan gedefinieerd worden als een type product met intrinsieke eigenschappen zoals samenstelling en proces.
Verschillen tussen de matrices hangen af van hun verwerking of presentatie, bijvoorbeeld rauw vs. gepasteuriseerd; vers
vs. gedroogd, enz.

Beperkte garantie / Beperkt verhaal

BEHALVE WAAR UITDRUKKELIJK VERMELD IN EEN BEPERKTE GARANTIEBEPALING VAN EEN INDIVIDUELE
PRODUCTVERPAKKING, WIJST NEOGEN ALLE UITDRUKKELIJKE EN IMPLICIETE GARANTIES AF, MET INBEGRIP
VAN, MAAR NIET BEPERKT TOT, ELKE GARANTIE MET BETREKKING TOT DE GOEDE WERKING EN DE GESCHIKTHEID
VOOR EEN BEPAALD DOEL. Als een Neogen Voedselveiligheidproduct gebrekkig is, zal Neogen of zijn gevolmachtigde
distributeur naar eigen keuze het product vervangen of de aankoopprijs van het product terugbetalen. Dit is het enige
3

NL(Nederlands)

rechtsmiddel waarover u beschikt. Neem contact op met uw Neogen-vertegenwoordiger of erkende Neogen-distributeur
voor verdere vragen.

Beperking van Neogen-aansprakelijkheid

NEOGEN IS NIET AANSPRAKELIJK VOOR ENIG VERLIES OF SCHADE, ONGEACHT OF HET GAAT OM
RECHTSTREEKSE, ONRECHTSTREEKSE, SPECIALE, INCIDENTELE OF GEVOLGSCHADE, MET INBEGRIP VAN, MAAR
NIET BEPERKT TOT WINSTDERVING. In geen geval zal de wettelijke aansprakelijkheid van Neogen onder om het evenwelke juridische theorie de aankoopprijs van het zogenaamd gebrekkige product overschrijden.

Opslag en afvalverwerking

Bewaar de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter bij 2-8 °C. Niet invriezen. Bewaar de set tijdens opslag uit
het licht. Controleer na het openen van de set of het foliezakje niet beschadigd is. Gebruik het product niet als het zakje
beschadigd is. Na het openen moeten de ongebruikte reagensbuisjes altijd worden bewaard in de hersluitbare zak met
droogmiddel om de stabiliteit van de gevriesdroogde reagentia te behouden. Bewaar opnieuw verzegelde zakjes tussende 2 en 8 °C niet langer dan 60 dagen.
Gebruik de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter niet na de vervaldatum. De vervaldatum en
het partijnummer zijn terug te vinden op het etiket aan de buitenzijde van de doos. Na gebruik bevatten het
verrijkingsmedium en de buisjes van de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter mogelijk pathogeen
materiaal. Na het voltooien van de testen dient u de van kracht zijnde industrienormen op te volgen betreffende deafvoer van besmet afval. Raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor bijkomende informatie en de lokale regelgeving
inzake afvalverwerking.

Gebruiksaanwijzingen

Volg alle instructies zorgvuldig op. Het niet opvolgen van de instructies kan onnauwkeurige resultaten tot gevolg hebben.
Ontsmet regelmatig laboratoriumtafels en apparatuur (pipetten, cap/decap-gereedschap, enz.) met een
bleekwateroplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) of DNA-verwijderingsoplossing.
De gebruiker dient de kwalificatietraining voor de bediener van het Neogen Moleculair Detectiesysteem te voltooien,
zoals beschreven in het document 'Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Protocols andInstructions for Neogen Molecular Detection System'(6).
Raadpleeg voor de gedetailleerde eisen het gedeelte 'Specifieke instructies voor gevalideerde methoden'.
Tabel 3 voor verrijkingsprotocollen conform AOAC® Official Method voor analyseSM 2018.01 en Performance TestedSM
certificaatnummer 101703
Zie Tabel 4 voor verrijkingsprotocollen volgens het NF VALIDATION-certificaat 3M 01/20-03/18
Monsterverrijking
Tabel 2, 3 of 4 biedt advies voor algemene verrijkingsprotocollen voor voedings- en omgevingsmonsters.
Het is de verantwoordelijkheid van de gebruiker om alternatieve bemonsterings- of verrijkingsprotocollen of
verdunningsverhoudingen te valideren om ervoor te zorgen dat deze testmethode voldoet aan de criteria van de gebruiker.
Voedsel, omgevingspoeders, stof, veegsel en sponzen
1. Breng het verrijkingsmedium op kamertemperatuur (20-25 °C), tenzij het verrijkingsprotocol anders voorschrijft (zieTabel 2, 3 of 4).
2. Voeg het monster toe aan het verrijkingsmedium op een aseptische wijze en homogeniseer het mengsel grondig met
een blender, stomacher, vortexer of handmixer gedurende 2 ± 0,2 minuten of totdat alle klonteringen volledig zijn
opgelost en de verrijkingssuspensie homogeen is(7, 8).
a.

Factoren zoals monstervoorbereiding inclusief homogeniseren en mixen, behandeling en laboratoriumtechniek
kunnen de resultaten beïnvloeden.

b. Voor alle hoge-partikelmonsters is het gebruik van filterzakken aanbevolen.
c.

Voor matrices die opzwellen in water en die hoog viskeus zijn (bijvoorbeeld granen, zetmeel), wordt aangeradenom de verdunning te verhogen (> 1:10) totdat de viscositeit voldoende is verlaagd, of voeg steriele 1% (w/v)
alpha-amylase toe aan BPW (ISO)(8).

d. Bij grote graanmonsters moet het poedervormige graanmateriaal langzaam aan de vloeistof worden toegevoegd
met frequent mixen, om klonteringen te voorkomen.
3. Incubeer volgens de instructies in de toepasselijke protocoltabel (zie Tabel 2, 3 of 4).

4

NL(Nederlands)

Tabel 2. Algemene verrijkingsprotocollen
Monstermatrix

Monstergrootte1

Volume verrijkingsbouillon1, 2Verrijkingstemperatuur(± 1 °C)

VolumeVerrijkingstijd
monster(uur)analyseBabymelkpoeder (PIF) en
grondstoffen zoals drogemelkpoeder, sojapoeder,
weipoeder, lactose, rijstmeel enmaltodextrine

Monster 1X
gram

9X ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Ruwe grondstoffen als zouten,
mineralen, aminozuren, DHA(docosahexaeenzuur) en
vitaminen

Monster 1X
gram

99X ml BPW (ISO)(1:100)

37

18-24

20 µL

Droge omgevingsmonsters
zoals stof, veegsel, opgezogen
materiaal

Monster 1X
gram

9X ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Omgevingsspons met 10
ml letheenbouillon of D/E
neutraliserende bouillon

1 hulpmiddelvoor
monstername

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

1. Neogen heeft de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter geëvalueerd met behulp van deverdunningsverhoudingen in Tabel 2 tot 300 g. Het is de verantwoordelijkheid van de gebruiker om alternatieve
verdunningsverhoudingen of -protocollen te valideren om ervoor te zorgen dat deze testmethode voldoet aan degebruikerscriteria.
2. Gebruik voorverwarmde BPW (ISO) als het volume van de verrijkingsbouillon meer dan 300 ml bedraagt (bijv. het
monster is > 30 gram).
Specifieke instructies voor gevalideerde methoden
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certificaatnr. 101703

Uit de studies OMASM en PTMSM van het AOAC Research Institute blijkt dat de Neogen Moleculair Detectie Assay
2 - Cronobacter een effectieve methode is voor de detectie van Cronobacter. De matrices die getest werden in het
onderzoek worden getoond in Tabel 3.

5

NL(Nederlands)

Tabel 3. Verrijkingsprotocollen conform AOAC® OMASM 2018.01 en PTMSM 101703
Monstergrootte

Volume verrijkingsbouillon1

Verrijkingstemperatuur(± 1 °C)

Verrijkingstijd (uur)Volumemonsteranalyse

Babymelkpoeder enbabygraanpoeder

10 g

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Babygraanpoeder niet-probiotisch

300 g2700 ml BPW (ISO)(1:10)

Voorverwarmd
37

18-24

20 µL

Babymelkpoeder enbabygraanpoeder met probiotica

300 g

2700 ml BPW(ISO) + 10 mg/l
vancomycine

Voorverwarmd
37

22-24

20 µL

Lactose

10 g

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

1 hulpmiddelvoor
monstername

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Monstermatrix

Omgevingsspons met 10 ml D/E
neutraliserende bouillon

1. Gebruik voorverwarmde BPW (ISO) als het volume van de verrijkingsbouillon meer dan 300 ml bedraagt.
NF VALIDATION door AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Voor meer informatie betreffende het einde van de geldigheid, kunt u het NF VALIDATION-certificaat op de hierboven
vermelde website raadplegen.
Gecertificeerde methode NF VALIDATION conform ISO 16140-2(9) in vergelijking met ISO 22964.
Toepassingsgebied van de validatie: Babymelkpoeder en babygranen met en zonder probiotica, ruwe grondstoffen en
omgevingsmonsters.
Voorbereiding van het monster: Monsters moeten worden voorbereid conform EN ISO 22694(2) en EN ISO 6887(7, 8).
Softwareversie: Zie certificaat.

6

NL(Nederlands)

Tabel 4. Verrijkingsprotocollen volgens de gecertificeerde methode NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
Monstermatrix
•
•
•

•

•

Verrijkingstijd

Volumeverrijkingsbouillon1

Verrijkingstemperatuur(± 1 °C)

Monstergrootte(uur)

Volumemonsteranalyse

Aanbevolen onderbrekingspunt2, 3Babymelkpoeder
Babygraanpoeder
Ingrediënten als
droog melkpoeder,
sojapoeder,
weipoeder,
lactose, rijstmeel,
maltodextrine
Droge
omgevingsmonsters
zoals stof, veegsel,
opgezogenmateriaal,

10 gSpons, spoelwater,
doekjes

1 monsternameapparaat
of
10 mL

Verrijkingsbouillonof hetlysaatmonster
kunnen tot 72 uur
worden bewaard
tussen 2 en 8 °C

30-300 g

BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Verrijkingsbouillonof hetlysaatmonster
kunnen tot 72 uur
worden bewaard
tussen 2 en 8 °C

30-300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/l
vancomycine(1:10)

37

22-24

20 µL

Geen

Babymelkpoeder enbabygraanpoeder (nietprobiotisch)Babygraanpoeder
en babymelkpoeder(inclusief probiotica)

90 ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Verrijkingsbouillonof hetlysaatmonster
kunnen tot 72 uur
worden bewaard
tussen 2 en 8 °C

1. Gebruik voorverwarmde BPW (ISO) als het volume van de verrijkingsbouillon meer dan 300 ml bedraagt (bijv. het
monster is > 30 gram).
2. Nadat de verrijkingsbouillon uit de opslag is gehaald, kan het testen verdergaan vanaf Stap 1 in het lysehoofdstuk.
Nadat het lysaatmonster uit de opslag is gehaald, kan het testen verdergaan vanaf Stap 7 in het lysehoofdstuk.
3. Raadpleeg bijlage A voor het opnieuw testen van opgeslagen warmtebehandelde lysaten.
Voorbereiding van de Neogen® Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray
1. Maak een doek of wegwerpdoek vochtig met een bleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) en
reinig de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray.
2. Spoel de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray met water.
3. Gebruik een wegwerpdoekje om de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray af te vegen.
4. Zorg ervoor dat de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray droog is voordat u hem gebruikt.
Voorbereiding van het Neogen® Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk
Plaats het Neogen Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk rechtstreeks op de laboratoriumtafel: de Neogen
Moleculaire Detectie - Lade voor koelblok wordt niet gebruikt. Gebruik het koelblok op de omgevingstemperatuur van
het laboratorium (20-25 °C).
Voorbereiding van het Neogen® Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk
Plaats het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk in een droge dubbelblokverhitter. Schakel de droge
blokverhitter in en stel de temperatuur in zodat het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk 100 ± 1 °C
kan bereiken en behouden.
7

NL(Nederlands)

OPMERKING: afhankelijk van de verhitter laat u het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk ongeveer 30
minuten op temperatuur komen. Gebruik een geschikte, gekalibreerde thermometer (bijv. gedeeltelijke dompelthermometerof digitale thermokoppelthermometer, geen volledige dompelthermometer) geplaatst op de aangewezen locatie om tecontroleren of het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk zich op 100 ± 1 °C bevindt.
Voorbereiding van het Neogen® Moleculair Detectieinstrument
1. Start de Neogen® Moleculaire Detectiesoftware op en meld u aan. Neem contact op met uw vertegenwoordigervoor Neogen Voedselveiligheid om ervoor te zorgen dat u de nieuwste versie van de software hebt.
2. Zet het Neogen Moleculaire Detectieinstrument aan.
3. Creëer of bewerk de gegevens van elk monster. Raadpleeg de handleiding van het Neogen Moleculair
Detectiesysteem voor meer informatie.
OPMERKING: Het Neogen Moleculaire Detectieinstrument moet de status Klaar bereiken voordat u de Neogen
Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray met reagensbuisjes invoert. Deze verhittingsstap duurt ongeveer 20 minuten
en wordt aangeduid met een ORANJE lampje op de statusbalk van het instrument. Wanneer het instrument klaar is voor
gebruik, zal de statusbalk GROEN worden.
Lyse
Verwijder de bodem van het rek met Neogen lyse-oplossing met een schroevendraaier voordat u het in het Neogen
Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk plaatst.

1. Laat de Neogen buisjes met lyse-oplossing opwarmen door het rek een nacht lang (16-18 uur) op
omgevingstemperatuur (20-25 °C) te plaatsen. U kunt de Neogen buisjes met lyse-oplossing eveneens op
omgevingstemperatuur brengen door de buisjes ten minste 2 uur lang op de laboratoriumtafel te plaatsen, de buisjes
1 uur lang te incuberen in een incubator bij 37 ± 1 °C of ze 30 seconden lang in een droge dubbelblokverhitter op
100 ± 1 °C te plaatsen.
2. Keer de buisjes met dop om om ze te mengen. Ga binnen 4 uur na het omkeren verder met de volgende stap.
3. Haal de verrijkingsbouillon uit de incubator.
4. Er is een Neogen buisje met lyse-oplossing vereist voor elk monster, evenals het NC-monster (steriel
verrijkingsmedium).
4.1 Stroken met Neogen buisjes met lyse-oplossing kunnen worden afgesneden tot op het gewenste aantal buisjes.
Selecteer het aantal individuele Neogen buisjes met lyse-oplossing of 8-buis stroken, indien nodig. Plaats de
Neogen buisjes met lyse-oplossing in een leeg rek.
4.2 Haal de stroken van de Neogen buisjes met lyse-oplossing een voor een uit de verpakking en gebruik een
nieuwe pipettip voor elke overdrachtstap om zo kruisbesmetting te voorkomen.
4.3 Breng het verrijkte monster over in de Neogen buisjes met lyse-oplossing zoals hieronder beschreven:
Breng eerst ieder verrijkt monster over in een individueel Neogen buisje met lyse-oplossing. Breng de NC het
laatst over.
4.4 Gebruik het Neogen® Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Lyse (glossary) om een strook van een
Neogen buisje met lyse-oplossing open te doen - één strook per keer.
4.5 Gooi de dop van het Neogen buisje met lyse-oplossing weg - als er lysaat wordt bewaard voor een hertest,
plaats de doppen dan in een schone bak om ze na de lyse opnieuw aan te brengen.
4.5.1. Zie Appendix A voor de verwerking van bewaard lysaat.
4.6 Roer de inhoud van de verrijkingszak voordat u een monster van de gefilterde zijde neemt, bij het werken met
viskeuze monsters.
8

NL(Nederlands)

4.7 Breng 20 µl monster over in een Neogen buisje met lyse-oplossing, tenzij dit anders in de protocoltabel wordt
aangegeven.
5. Herhaal stap 4.4 t/m 4.7 totdat elk individueel monster is toegevoegd aan een bijhorende Neogen buisje met lyseoplossing in de strook.

6. Wanneer alle monsters overgebracht zijn, brengt u 20 µL NC (steriel verrijkingsmedium, bijv. BPW) over in een
Neogen buisje met lyse-oplossing. Gebruik geen water als NC.
7. Controleer of de temperatuur van het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk zich op 100 ± 1 °C
bevindt.
8. Plaats het onbedekte rek met Neogen buisjes met lyse-oplossing in het Neogen Moleculaire Detectie Verwarmingsblokinzetstuk en verwarm 15 ± 1 minuten. Tijdens de verwarming verandert de Neogen lyse-oplossing
van roze (koel) naar geel (heet).
Monsters die tijdens de lyseanalysestap niet de correcte warmtebehandeling hebben ondergaan, kunnen als een
potentieel biologisch gevaar worden beschouwd en mogen NIET in het Neogen Moleculaire Detectieinstrument
worden geplaatst.
9. Haal het onbedekte rek met Neogen buisjes met lyse-oplossing uit het Neogen Moleculaire Detectie Verwarmingsblok en laat het ten minste 5 minuten en niet meer dan 10 minuten afkoelen in het Neogen
Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk. Het Neogen Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk, gebruikt op
omgevingstemperatuur zonder de Neogen® Moleculaire Detectie - Lade voor Koelblok, moet rechtstreeks op delaboratoriumtafel leunen. Zodra de Neogen lyse-oplossing koel is, zal deze een roze kleur krijgen.
10. Haal het rek met Neogen buisjes met lyse-oplossing uit het Neogen Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplificatie
1. Er is één Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter reagensbuisje vereist voor elk monster en de NC.
1.1 Buisstrookjes kunnen gesneden worden tot op het gewenste aantal buisjes. Selecteer het vereiste aantal
individuele Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter reagensbuisjes of stroken met 8-buisjes.
1.2 Plaats Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter reagensbuisjes in een leeg rek.
1.3 Vermijd dat u de reagens op de bodem van de buisjes beweegt.
2. Selecteer één buisje voor Neogen Reagenscontrole en plaats deze in het rek.
3. Om kruisbesmetting te vermijden, opent u één strook met Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter
reagensbuisjes per keer en gebruikt u een nieuwe pipettip voor elke overdrachtsstap.
4. Breng elk lysaat over in een Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter reagensbuisje en een Neogen
Reagenscontrolebuisje zoals hieronder is beschreven:
Breng elk lysaatmonster eerst over naar een individueel Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter
reagensbuisje, gevolgd door de NC. Hydrateer het buisje voor Neogen Reagenscontrole als laatste.

9NL(Nederlands)

5. Gebruik de Neogen® Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Reagens om het Neogen Moleculair Detectie
Assay 2 - Cronobacter reagensbuisje te openen - één strook met reagensbuisjes per keer. Gooi de dop weg.
5.1 Breng 20 µl van het lysaatmonster uit de bovenste helft van de vloeistof (voorkom bezinksel) in het Neogen
buisje met lyse-oplossing over in het bijbehorende Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter
reagensbuisje. Laat het mengsel in een hoek uitlopen om de pellets niet te veel te bewegen. Meng doorvoorzichtig 5 keer naar boven en naar onder te pipetteren.
5.2 Herhaal stap 5.1 totdat elk individueel lysaatmonster is toegevoegd aan het bijbehorende Neogen Moleculair
Detectie Assay 2 - Cronobacter reagensbuisje in de strook.
5.3 Bedek de Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter reagensbuisjes met de bijgeleverde extra dop en
gebruik de afgeronde zijde van het Neogen Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Reagens om druk
uit te oefenen in een voor- en achterwaartse beweging om ervoor te zorgen dat de dop goed vastzit.
5.4 Herhaal stappen 5.1 tot 5.3 voor alle monsters die worden getest.
5.5 Zodra alle lysaatmonsters zijn overgebracht, herhaalt u stappen 5.1 t/m 5.3 om 20 µl NC-lysaat over te brengennaar een Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter reagensbuisje.
5.6 Breng 20 µL NC-lysaat over naar een buisje voor Neogen Reagenscontrole. Laat het mengsel in een hoek
uitlopen om de pellets niet te veel te bewegen. Meng door voorzichtig 5 keer naar boven en naar onder tepipetteren.
6. Plaats de buisjes met dop in een propere en ontsmette Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray. Sluit envergrendel het deksel van de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray.

7. Reviseer en bevestig de geconfigureerde instelling en start de Neogen Moleculaire Detectiesoftware.
8. Klik op de Startknop van de software en selecteer het te gebruiken instrument. Het deksel van het geselecteerde
instrument opent automatisch.
9. Plaats de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray in het Neogen Moleculaire Detectieinstrument en sluit
het deksel om de analyse te beginnen. De resultaten zijn binnen 60 minuten beschikbaar, maar positieve resultaten
kunnen sneller gedetecteerd worden.
10. Als de test voltooid is, haal dan de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray uit het Neogen Moleculaire
Detectieinstrument en verwijder de buisjes door ze eerst gedurende 1 uur, op een plaats die ver verwijderd is van
het testgebied, in een bleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) te dompelen.
OPMERKING: Om het risico op valse positieve resultaten door kruisbesmetting te beperken, mag u nooit
reagensbuisjes met geamplificeerd DNA openen. Dit geldt voor Neogen Moleculair Detectie Assay 2 - Cronobacter
reagensbuisjes, buisjes voor Neogen Reagenscontrole en Neogen Matrix controlebuisjes. Gooi verzegelde
reagensbuisjes weg door ze eerst gedurende 1 uur, op een plaats die ver verwijderd is van het testgebied, in een
bleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) te dompelen.

Resultaten en interpretatie

Een algoritme interpreteert de lichtcurve die het resultaat is van de nucleïnezuuramplificatie. De software analyseertde resultaten automatisch en worden aangegeven met een kleurencode, afhankelijk van het resultaat. Een positief ofnegatief resultaat wordt bepaald door de analyse van een aantal unieke curveparameters. Vermoedelijke positieve
resultaten worden onmiddellijk gerapporteerd, terwijl de negatieve en inspectieresultaten pas na de voltooiing van deanalyse worden weergegeven.
OPMERKING: Zelfs een negatief monster zal u geen nulresultaat geven, want het systeem en de Neogen Moleculair
Detectie Assay 2 - Cronobacter amplificatiereagentia hebben een 'achtergrond' van relatieve lichteenheid (RLU).

10

NL

(Nederlands)

Bevestiging• Verificatie van resultaten conform de gecertificeerde methode NF Validation
In het kader van de NF Validation moeten alle vermoedelijk positieve verrijkingen worden geverifieerd met de volgende
referentiemethodeverificatie(2), te beginnen met de overdracht van de primaire verrijking (BPW ISO of BPW ISO
aangevuld met 10 mg/l vancomycine).
•

Ander verificatieprotocol

Vermoedelijk positieve verrijkingen moeten worden geverifieerd conform de standaard werkmethode van het laboratorium,
door de toepasselijke referentiemethodeverificatie(1,2) te volgen, te beginnen met de overdracht van de primaire verrijking (BPW
ISO of BPW ISO aangevuld met 10 mg/l vancomycine) naar een secundair verrijkingsmedium, gevolgd door een lagenkweek enverificatie van isolaten met gebruik van toepasselijke biochemische, serologische en/of moleculaire methoden.
In het onwaarschijnlijke geval van ongebruikelijke lichtuitvoer, definieert het algoritme dit als 'Inspecteren'. Neogen beveelt degebruiker aan om de test voor de te inspecteren monsters opnieuw uit te voeren. Als het resultaat nog steeds 'Inspecteren' is,voert u een bevestigingstest uit aan de hand van uw voorkeursmethode of volgens de plaatselijke regelgeving(1,2).
In geval van tegenstrijdige resultaten (vermoedelijke positieve resultaten met de Neogen Moleculair Detectie Assay
2 - Cronobacter, niet geverifieerd met één van de hierboven beschreven methoden), moet het laboratorium zijn eigen
ingestelde standaard werkmethoden volgen om de resultaten te rapporteren.
Als u vragen hebt over specifieke toepassingen of procedures, kunt u onze website www.neogen.com bezoeken ofcontact opnemen met uw plaatselijke vertegenwoordiger of distributeur van Neogen.
Appendix A. Protocolonderbreking: het bewaren en hertesten van warmtebehandelde lysaten
1. Om een warmtebehandeld lysaat te bewaren, sluit u het lysebuisje opnieuw af met een schone dop (zie hoofdstuk 4.5 Lyse)
2. Bewaar maximaal 72 uur bij 2 tot 8 °C.
3. Bereid een bewaard monster voor op de amplificatie door het 2-3 keer om te draaien om het te mengen.
4. Haal de doppen van de buisjes.
5. Plaats de gemengde lysaatbuisjes op het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk en verwarm
gedurende 5 ± 1 minuten op 100 ± 1 °C.
6. Haal het rek met Neogen buisjes met lyse-oplossing uit het verwarmingsblok en laat het ten minste 5 minuten enniet meer dan 10 minuten afkoelen in het Neogen Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk.
7. Ga verder met het protocol in het gedeelte Amplificatie dat hierboven wordt omschreven.

Referenties:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Raadpleeg de huidige versies van de standaardmethodes die hierboven zijn opgesomd.

Verklaring van symbolen
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

SV(Svenska)
Datum för utgåva: 2024-01

Produktinformation
Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter
Produktbeskrivning och avsedd användning

Neogen® Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter används med Neogen® Molekylärt Detektionssystem för snabb
och specifik detektion av Cronobacter i prover från anrikade livsmedel och livsmedelsbearbetningsmiljöer.
Neogen Molecular Detection Assay använder LAMP-teknik (Loop-Mediated Isothermal Amplification) för att snabbt
amplifiera nukleinsyrasekvenser med hög specificitet och sensitivitet kombinerat med bioluminiscens för att detektera
amplifieringen. Presumtivt positiva resultat rapporteras i realtid medan negativa resultat visas när analysen har slutförts.
Presumtivt positiva resultat bör bekräftas med hjälp av egen vald metod eller som specificeras av lokala föreskrifter(1, 2).
Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter är avsedd för användning i laboratoriemiljö av yrkespersoner som
har utbildning i laboratorieteknik. Neogen har inte dokumenterat användningen av denna produkt inom andra industrierän livsmedels- och dryckesindustrin. Neogen har exempelvis inte dokumenterat produkten för testning av läkemedel,kosmetika, kliniska prover eller veterinärprover. Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter har inte utvärderats
med samtliga möjliga livsmedelsprodukter, livsmedelsbearbetningsmetoder, testprotokoll eller bakteriestammar.
Precis som för alla testmetoder kan källan till, beredningen av och kvaliteten på anrikningsmedlet påverka resultaten.
Faktorer som provtagningsmetod, testprotokoll, provpreparering inklusive homogenisering och blandning, hanteringoch laboratorieteknik kan också påverka resultat. Neogen rekommenderar att metoden, inklusive anrikningsmedlet,
utvärderas i användarens miljö med tillräckligt många prover av särskilda livsmedel och/eller miljöprover samt
mikrobiella utmaningar för att säkerställa att metoden uppfyller användarens kriterier.
Neogen har utvärderat Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter med anrikningsmedlet buffrat peptonvatten
ISO.
Neogen® Molekylärt Detektionsinstrument är avsett att användas med prover som har värmebehandlats underanalysens lyseringssteg, vilket är utformat för att förstöra organismer i provet. Prover som inte har värmebehandlats
korrekt under analysens lyseringssteg bör betraktas som en potentiell biologisk fara och ska INTE föras in i Neogen
Molekylärt Detektionsinstrument.
Neogen Food Safety är certifierat enligt den internationella standardiseringsorganisationen (ISO) 9001 avseende
konstruktion och tillverkning.
Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter testsats innehåller 96 tester, som beskrivs i tabell 1.
Tabell 1. Komponenter i Neogen Molecular Detection Assay Testsats
ArtikelIdentifikation

Antal

Innehåll

Kommentarer

Neogen® Lyseringslösning(LL)

Rosa lösning igenomskinliga rör

96 (12 remsor om 8 rör)

580 µl LL per rör

I ställ ochklara att
användas

Neogen® Molecular
Detection Assay 2-Cronobacter Reagensrör

Orangeröda rör

96 (12 remsor om 8 rör)

Specifik frystorkad
amplifierings- ochdetektionsblandning

Klara att
användas

Extra lockOrangeröda lock96 (12 remsor om 8 lock)

Neogen® Reagenskontroll

Genomskinliga rör
med knäpplock

16 (2 påsar om 8
enskilda rör)

Klara att
användas
Frystorkad
kontroll-DNA,
amplifierings- ochdetektionsblandning

Klara att
användas

Det negativa kontrollprovet (medföljer ej i satsen) är ett sterilt anrikningsmedel, t. ex. buffrat peptonvatten ISO. Använd
inte vatten som negativ kontroll.

1

SV(Svenska)

SäkerhetAnvändaren ska läsa, förstå och följa all säkerhetsinformation i anvisningarna till Neogen Molekylärt Detektionssystem
och Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter. Behåll säkerhetsanvisningarna för framtida bruk.
VARNING! Indikerar en farlig situation som, om den inte undviks, kan resultera i dödsfall eller allvarliga personskador
och/eller materiella skador.
OBSERVERA! Indikerar en potentiellt farlig situation som, om den inte undviks, kan resultera i materiella skador.

W VARNING
Använd inte Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter för diagnostisering av tillstånd hos människor eller djur.
Användaren måste utbilda sin personal i rådande och korrekta testtekniker: exempelvis god laboratoriesed(3),ISO/IEC 17025(4) eller ISO 7218(5).
För att minska riskerna som förknippas med ett falskt negativt resultat som leder till utgivning av kontaminerad produkt:• Följ protokollet och utför testerna exakt så som beskrivs i relevant produktinformation.
• Förvara Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter enligt föreskrifterna på förpackningen och i
produktinformationen.
• Använd alltid Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter före utgångsdatumet.
• Använd Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter med prover från livsmedel och
livsmedelsbearbetningsmiljöer som har validerats internt eller av tredje part.
• Använd endast Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter med ytor, desinficeringsmedel, protokoll och
bakteriestammar som har validerats internt eller av tredje part.
• För miljöprov innehållande neutraliseringsbuffert med arylsulfonatkomplex, späd till 1:2 innan testet utförs (1 delprov till 1 del steril anrikningsbuljong). Ett annat alternativ är att föra över 10 µL av neutraliserande buffertanrikningi Neogen Lyseringslösningsrör. Neogen® provhanteringsprodukter som inkluderar neutraliseringsbuffert med
arylsulfonatkomplex: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G och HS2410NB2G.
Detta protokoll har inte testats under NF Validation-studien.
För att minska riskerna som förknippas med exponering för kemikalier och biologiska smittorisker:• Utför tester av patogener i ett välutrustat laboratorium under överinseende av utbildad personal. Inkuberat
anrikningsmedel och utrustning eller ytor som har haft kontakt med inkuberat anrikningsmedel kan innehålla
patogener vid nivåer som är tillräckliga för att utgöra en hälsorisk för människor.
• Följ alltid praxis för standardiserad laboratoriesäkerhet, inklusive användning av lämpliga skyddskläder och
skyddsglasögon vid hantering av reagenser och kontaminerade prover.
• Undvik kontakt med innehållet i anrikningsmedlet och reagensrören efter amplifiering.
• Kassera anrikade prover och tillhörande kontaminerat avfall enligt gällande lokala/regionala/nationella/branschstandarder.
• Överskrid inte rekommenderad temperaturinställning på uppvärmningsanordningen.
• Överskrid inte den rekommenderade uppvärmningstiden.
• Använd en lämplig, kalibrerad termometer (t.ex. en termometer för delvis nedsänkning eller en digitalvärmeelementstermometer, inte en termometer för fullständig nedsänkning) för att kontrollera temperaturen i
Neogen® Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock. Termometern måste placeras på anvisad plats i Neogen
Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock.
För att minska riskerna för korskontaminering vid analysförberedelserna:• Bär alltid handskar (för att skydda användaren och förhindra införsel av nukleaser).
För att minska riskerna som förknippas med exponering för heta vätskor:• Överskrid inte rekommenderad temperaturinställning på uppvärmningsanordningen.
• Överskrid inte den rekommenderade uppvärmningstiden.
• Använd en lämplig, kalibrerad termometer (t.ex. en termometer för delvis nedsänkning eller en digitalvärmeelementstermometer, inte en termometer för fullständig nedsänkning) för att kontrollera temperaturen i
Neogen® Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock. Termometern måste placeras på anvisad plats i Neogen
Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock.

OBSERVERA
För att minska riskerna för korskontaminering vid analysförberedelserna:• Byt handskar innan reagenspelletsarna vätes.
• Användning av sterila pipettspetsar med aerosolbarriär (filtrerade) för molekylärbiologiskt bruk rekommenderas.
2

SV
•
•
•
•

(Svenska)Använd en ny pipettspets för varje provöverföring.
Följ god laboratoriesed vid överföringen av provet från anrikningsröret till lyseringsröret. För att undvika
kontaminering av pipetten kan användaren välja att lägga till ett mellanliggande överföringssteg. Exempelvis kan
användaren föra över varje anrikat prov till ett sterilt rör.
Använd en arbetsstation avsedd för molekylärbiologi med bakteriedödande lampa om sådan finns tillgänglig.
Dekontaminera laboratoriebänkar och utrustning (pipetter, verktyg för att fästa och ta av lock o.s.v.) regelbundet
med en 1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning eller DNA-borttagningslösning.

För att minska riskerna som förknippas med ett falskt positivt resultat:• Öppna aldrig provrör efter amplifieringen.
• Kassera alltid kontaminerade rör genom att blötlägga dem i en 1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning i 1 timme
och på avstånd från platsen där analysen förbereds.
• Autoklavera aldrig reagensrör efter amplifieringen.
• Om prover misstänks innehålla stora mängder Cronobacter-DNA (t.ex. DNA från icke-livsdugliga Cronobacterceller som har genomgått ett döda-/inaktiverasteg) ska presumtiva positiva anrikningar behandlas med DNase före
LYSERINGS-steget. Kontakta din Neogen-representant för ytterligare anvisningar. Detta protokoll har inte testats
under NF Validation-studien.
Se säkerhetsdatabladet för ytterligare information och lokala föreskrifter för kassering.
Om du har frågor om specifika tillämpningar eller procedurer kan du besöka vår hemsida på www.neogen.com eller
kontakta din lokala representant eller återförsäljare för Neogen.

Användaransvar

Det åligger användarna att bekanta sig med produktinstruktioner och produktinformation. Besök vår webbsida på
adressen www.neogen.com eller kontakta din lokale Neogen-representant eller -leverantör för mer information.
Vid val av testmetod är det viktigt att inse att externa faktorer som provtagningsmetod, testprotokoll, provpreparering
inklusive homogenisering och blandning, hantering och laboratorieteknik kan påverka resultat.
Det åligger användaren vid val av testmetoder att utvärdera tillräckligt många prover med lämpliga matriser ochutmaningar för att övertyga användaren att den valda metoden uppfyller kraven.
Det åligger också användaren att fastställa att en testmetod och dess resultat uppfyller kraven från dennes kunder ochleverantörer.
Liksom med alla testmetoder utgör inte resultat som erhållits från användning av någon produkt från Neogen
Livsmedelshygien en garanti för kvaliteten hos de matriser eller processer som testats.
För att hjälpa kunder att utvärdera metoden för olika matriser har Neogen utvecklat satsen Neogen® Molekylär
Detektion Matriskontroll. Vid behov kan Matriskontroll (MK) användas för att avgöra om matrisen förmår påverka
resultaten hos Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter. Testa flera prover som är representativa för
matrisen, d.v.s. prover som inhämtats från olika källor, vid varje valideringstillfälle när Neogen-metoden används eller när
nya eller okända matriser eller matriser som har genomgått råmaterial- eller bearbetningsändringar testas.
En matris kan definieras som en typ av produkt med särskilda egenskaper, såsom sammansättning eller bearbetning.
Skillnaderna mellan matriser kan vara så enkla som effekterna som orsakas av skillnader i bearbetning eller utformning,till exempel rå kontra pastöriserad, färsk kontra torkad, o.s.v.

Begränsad garanti / Begränsad ersättning

MED UNDANTAG AV VAD SOM UTTRYCKLIGEN ANGES I AVSNITT OM GARANTIBEGRÄNSNING FÖRINDIVIDUELLA FÖRPACKNINGAR, FRÅNSÄGER SIG NEOGEN ALLA UTTRYCKLIGA OCH UNDERFÖRSTÅDDAGARANTIER, INKLUSIVE, MEN INTE BEGRÄNSAT TILL, ALLA GARANTIER BETRÄFFANDE SÄLJBARHET ELLERLÄMPLIGHET FÖR ETT VISST ÄNDAMÅL. Om någon produkt från Neogen Livsmedelshygien är defekt kommer Neogen
eller dess auktoriserade leverantör att efter eget gottfinnande ersätta produkten eller återbetala produktens inköpspris.
Detta är den enda ersättning som ges. Kontakta din Neogen-representant eller en godkänd Neogen-distributör om duhar fler frågor.

Neogen:s ansvarsfriskrivning

NEOGEN KOMMER INTE ATT PÅTA SIG NÅGOT ANSVAR FÖR FÖRLUST ELLER SKADOR, VARE SIG DIREKTA,
INDIREKTA, SÄRSKILDA, TILLFÄLLIGA ELLER EFTERFÖLJANDE SKADOR, INKLUSIVE, MEN INTE BEGRÄNSADE
TILL, FÖRLORADE VINSTER. Under inga omständigheter ska Neogen:s ansvar i något som helst lagrum överskrida
inköpspriset för den påstått defekta produkten.

3

SV(Svenska)

Förvaring och kassering

Förvara Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter vid 2–8 °C. Förvara inte i frys. Förvara satsen på en mörk
plats. Kontrollera att foliepåsen är oskadad när satsen har öppnats. Använd inte om påsen är skadad. Efter att påsen haröppnats ska oanvända reagensrör alltid förvaras i den återförslutningsbara påsen med torkmedlet inuti för att bevara de
frystorkade reagensernas stabilitet. Förvara återförslutna påsar vid 2–8 °C i högst 60 dagar.
Använd inte Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter efter utgångsdatumet. Utgångsdatum ochpartinummer anges på etiketten på lådans utsida. Efter användning kan anrikningsmedlet och rören till Neogen
Molecular Detection Assay 2 Cronobacter eventuellt innehålla patogena material. Följ gällande branschstandarder för
kassering av kontaminerat avfall när testen har genomförts. Se säkerhetsdatabladet för ytterligare information och lokala
föreskrifter för kassering.

Bruksanvisning

Följ alla anvisningar noggrant. Underlåtenhet att göra detta kan leda till felaktiga resultat.
Dekontaminera laboratoriebänkar och utrustning (pipetter, verktyg för att fästa och ta av lock o.s.v.) regelbundet med en
1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning eller DNA-borttagningslösning.
Användaren måste genomgå utbildningen i driftkvalifikation för Neogen Molekylärt Detektionssystem, enligt
beskrivningen i dokumentet ”Protokoll för installationskvalifikation/driftkvalifikation och anvisningar för Neogen
Molekylärt Detektionssystem” (Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions
for Neogen Molecular Detection System)(6).
Se avsnittet ”Specifika anvisningar för validerade metoder” för särskilda krav:
Tabell 3 för anrikningsprotokoll enligt AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 och Performance TestedSM
Certificate number 101703
Tabell 4 för anrikningsprotokoll enligt NF VALIDATION-certifikatet 3M 01/20-03/18.
Provanrikning
I tabell 2, 3 eller 4 visas en vägledning till anrikningsprotokoll för livsmedels- och miljöprover.
Användaren ansvarar för att validera alternativa provtagnings- eller anrikningsprotokoll eller spädningsförhållanden för
att säkerställa att testmetoden uppfyller användarens kriterier.
Livsmedel, miljöstoft, damm, sopningar och svampar
1. Värm anrikningsmedlet till rumstemperatur (20-25 °C) såvida inget annat anges i anrikningsprotokollet (se tabell 2, 3
eller 4).
2. Kombinera berikningsmediet och provet aseptiskt och homogenisera noggrant genom att blanda, stomachera,
vortexa eller handblanda i 2 ± 0,2 minuter eller tills alla klumpar är helt upplösta och berikningssuspensionen är
homogen(7, 8).
a.

Faktorer som provpreparering inklusive homogenisering och blandning, hantering och laboratorieteknik kanpåverka resultat.

b. För prover som innehåller en stor mängd partiklar rekommenderas att filterpåsar används.
c.

För matriser som sväller i vatten och är mycket viskösa (t.ex. spannmål, stärkelse), rekommenderas det att göra
ytterligare spädningar (> 1:10) tills viskositeten reduceras till lämplig nivå eller att tillsätta sterilt 1 % (w/v) alfaamylas till buffrat peptonvatten (ISO)(8).

d. För stora provstorlekar av spannmål tillsätter du pulveriserat spannmål långsamt till vätskan med frekvent
blandning för att undvika klumpar.
3. Inkubera enligt anvisning i lämplig protokolltabell (se tabell 2, 3 eller 4).

4

SV(Svenska)

Tabell 2. Allmänna anrikningsprotokoll
Provmatris

Provstorlek1

Volym anrikningsbuljong1, 2

Anrikningstemperatur(± 1 °C)

Anrikningstid(tim)

Volym för
provanalys

Modersmjölksersättning ipulverform och råvaror såsom
mjölkpulver, sojapulver,
vasslepulver, laktos, rismjöl och
maltodextrin

1 x gram prov

9 x ml Buffrat
peptonvatten(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Råvaror som salter,mineraler, aminosyror, DHA(docosahexaensyra) och
vitaminer

1 x gram prov

99 x ml Buffrat
peptonvatten(ISO) (1:100)

37

18–24

20 µl

Torra miljöprover som
damm, sopningar,
dammsugningsinsamling

1 x gram prov

9 x ml Buffrat
peptonvatten(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Miljösvamp med 10 ml
Letheen-buljong eller D/Eneutraliseringsbuljong

1
provtagningsenhet

90 ml Buffrat
peptonvatten(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

1. Neogen har utvärderat Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter med spädningsförhållandena i tabell
2, upp till 300 g. Användaren ansvarar för att validera alternativa spädningsförhållanden eller protokoll för att
säkerställa att metoden uppfyller användarens kriterier.
2. Använd föruppvärmt buffrat peptonvatten ISO om anrikningsbuljongvolymen är > 300 ml (t.ex. provet är > 30 gram).
Specifika anvisningar för validerade metoder
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certificate #101703

I AOAC Research Institute OMASM och PTMSM-programmen var Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter en
effektiv metod för att upptäcka Cronobacter. Matriserna som testades i studien visas i tabell 3.

5

SV(Svenska)

Tabell 3. Anrikningsprotokoll enligt AOAC® OMASM 2018.01 och PTMSM 101703
AnrikningsVolym anrikningsAnrikningstid Volym för
temperatur
1
buljong(tim)
provanalys(± 1 °C)

Provmatris

Provstorlek

Modersmjölksersättning ipulverform och pulveriserade
spannmålsprodukter för
spädbarn

10 g

90 ml Buffrat
peptonvatten (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Pulveriserade
spannmålsprodukter för
spädbarn icke-probiotiska

300 g

2 700 ml Buffrat
peptonvatten (ISO)(1:10)

Förvärmt
37

18–24

20 µl

Modersmjölksersättning ipulverform och pulveriserade
spannmålsprodukter för
spädbarn med probiotika

300 g

2 700 ml Buffrat
peptonvatten(ISO) + 10 mg/l
Vancomycin

Förvärmt
37

22-24

20 µl

Laktos10 g

90 ml Buffrat
peptonvatten (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

90 ml Buffrat
1 provtagningsenhet peptonvatten (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Miljösvamp med 10 ml D/Eneutraliseringsbuljong

1. Använd föruppvärmt buffrat peptonvatten ISO om anrikningsbuljongvolymen är > 300 ml.
NF VALIDATION av AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
För ytterligare information om valideringsslut, läs NF VALIDATION-certifikatet som finns tillgängligt på ovan angivna
webbplats.
NF Validation-certifierad metod i enlighet med ISO 16140-2(9) i jämförelse med ISO 22964.
Omfattning av valideringen: Modersmjölksersättning i pulverform och pulveriserade spannmålsprodukter för spädbarn
med och utan probiotika, råvaror och miljöprover.
Provberedning: Prover bör beredas enligt EN ISO 22694(2) och EN ISO 6887(7, 8).
Mjukvaruversion: Se certifikatet.

6

SV(Svenska)

Tabell 4: Anrikningsprotokoll enligt NF VALIDATION-certifierad metod 3M 01/20-03/18
Provmatris
•
•
•

•

•

Modersmjölksersättning ipulverform
Pulveriserade
spannmålsprodukter för
spädbarnIngredienser såsom
mjölkpulver, sojapulver,
vasslepulver, laktos,
rismjöl, maltodextrin
Torra miljöprover som
damm, sopningar,
dammsugningsinsamling,
Svamp, sköljvatten,
torkdukar

Modersmjölksersättning ipulverform och pulveriserade
spannmålsprodukter för
spädbarn (icke-probiotiska)
Pulveriserade
spannmålsprodukter
för spädbarn ochmodersmjölksersättning ipulverform (med probiotika)

Provstorlek

Volymanrikningsbuljong1

AnrikningsAnritemperatur kningstid(± 1 °C)(timmar)Volym
för provanalys

10 g
90 ml Buffrat
peptonvatten(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

1 provtagningsenhet
eller
10 ml

Rekommenderadbrytpunkt2, 3Anrikningsbuljong
eller provlysat kan
förvaras i 2–8 °C i
upp till 72 timmar

Anrikningsbuljong
eller provlysat kan
förvaras i 2–8 °C i
upp till 72 timmar

30-300 g

Buffratpeptonvatten(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Anrikningsbuljong
eller provlysat kan
förvaras i 2–8 °C i
upp till 72 timmar

30-300 g

Buffratpeptonvatten(ISO) +
10 mg/lvancomycin(1:10)

37

22-24

20 µl

Ingen

1. Använd föruppvärmt buffrat peptonvatten ISO om anrikningsbuljongvolymen är > 300 ml (t.ex. provet är > 30 gram).
2. Efter det att anrikningsbuljongen har avlägsnats från förvaringsplatsen kan testet återupptas från steg 1 i avsnittet
Lysering. Efter att provlysatet har avlägsnats från förvaringsplatsen kan testet återupptas från steg 7 i avsnittet
Lysering.
3. Se Bilaga A för omtestning av lagrade värmebehandlade lysater.
Förberedelse av Neogen® Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda
1. Fukta en trasa eller en engångshandduk med 1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning för hushållsanvändning och
torka av Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda.
2. Skölj Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda med vatten.
3. Torka av Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda med en pappershandduk.
4. Säkerställ att Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda är torr innan den används.
Förberedning av Neogen® Molekylär Detektion, Insats för Kylblock
Placera Neogen Molekylär Detektion, Insats för Kylblock direkt på laboratoriebänken: Neogen Molekylär Detektion,
Kylblockslåda används inte. Använd blocket i laboratoriets omgivningstemperatur (20–25 °C).
Förberedelse av Neogen® Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock
Lägg Neogen Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock i en torr dubbelblocksvärmare. Aktivera den torra
blockvärmaren och ställ in temperaturen så att Neogen Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock tillåts uppnå ochbibehålla en temperatur på 100 ± 1 °C.

7

SV(Svenska)

OBS! Beroende på värmaren tar det cirka 30 minuter för Neogen Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock att uppnå
rätt temperatur. Använd en lämplig, kalibrerad termometer (t.ex. en termometer för delvis nedsänkning eller en digitalvärmeelementstermometer, inte en termometer för fullständig nedsänkning) placerad på den avsedda platsen och
kontrollera att Neogen Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock har en temperatur på 100 ± 1 °C.
Beredning av Neogen® Molekylärt Detektionsinstrument
1. Starta Neogen® Molekylär detektionsprogramvara och logga in. Kontakta din Neogen-representat för
livsmedelssäkerhet för att säkerställa att du har den senaste versionen av programvaran.
2. Aktivera Neogen Molekylärt Detektionsinstrument.
3. Skapa eller redigera en datakörning för varje prov. Se användarhandboken till Neogen Molekylärt Detektionssystemför detaljerad information.
OBS! Neogen Molekylärt Detektionsinstrument måste försättas i redotillstånd innan Neogen Molekylär Detektion,
Snabbladdningslåda med reagensrör förs in. Detta uppvärmningssteg tar cirka 20 minuter och indikeras av en ORANGE
lampa i instrumentets statusfält. När instrumentet är redo att starta en körning blir statusfältet GRÖNT.
Lysering
Avlägsna nedre delen av Neogen Provrörsställ för lyseringslösning med en skruvmejsel innan du placerar det i Neogen
Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock.

1. Låt Neogen Lyseringslösningsrör värmas upp genom att placera stället i rumstemperatur (20–25 °C) över natten(16‑18 timmar). Alternativa metoder för att värma Neogen Lyseringslösningsrören till rumstemperatur är att ställa
Neogen Lyseringslösningsrören på laboratoriebänken i minst 2 timmar, inkubera Neogen Lyseringslösningsrören vid
37 ± 1 °C i 1 timme eller placera dem i en torr dubbelblockvärmare i 30 sekunder vid 100 ± 1 °C.
2. Invertera de lockförsedda rören för att blanda. Fortsätt till nästa steg inom 4 timmar efter invertering.
3. Ta ut anrikningsbuljongen från inkubatorn.
4. Ett Neogen Lyseringslösningsrör krävs för varje prov och NK-prov (sterilt anrikningsmedel).
4.1 Remsor med Neogen Lyseringslösningsrör kan klippas för önskat antal. Välj det antal individuella Neogen
Lyseringslösningsrör eller remsor om 8 rör som behövs. Placera Neogen Lyseringslösningsrören i ett tomt ställ.
4,2 Undvik korskontaminering genom att öppna ett lock på en remsa med Neogen Lyseringslösningsrör i taget ochanvänd en ny pipettspets vid varje överföringssteg.
4.3 För över det anrikade provet till Neogen Lyseringslösningsrören enligt beskrivningen nedan:
För över varje anrikat prov till ett enskilt Neogen Lyseringslösningsrör först. Överför NK sist.
4.4 Använd Neogen® Molekylär Detektion, Cap/Decap Redskap - Lysering för att öppna en remsa med Neogen
Lyseringslösningsrör, en remsa i taget.
4.5 Kassera locket till Neogen Lyseringslösningsröret – om lysatet ska behållas för omprov ska locken placeras i enren behållare för återanvändning efter lysering.
4.5.1. Se bilaga A för information om behandling av förvarat lysat.
4.6 Agitera anrikningspåsen innan du samlar in provet från den filtrerade sidan när du arbetar med viskösa prov.
4.7 Överför 20 µL prov till ett Neogen Lyseringslösningsrör såvida inte annat anges i protokolltabellen.
5. Upprepa steg 4.4 till 4.7 tills varje enskilt prov har tillsatts i ett motsvarande Neogen Lyseringslösningsrör i remsan.

8

SV(Svenska)

6. När alla prover har överförts ska 20 µL NK (sterilt anrikningsmedel, t.ex. buffrat peptonvatten) överföras till ett
Neogen Lyseringslösningsrör. Använd inte vatten som NK.
7. Kontrollera att temperaturen på Neogen Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock är 100 ± 1 °C.
8. Placera det oövertäckta stället med Neogen Lyseringslösningsrör i Neogen Molekylär Detektion, Insats för Värmeblockoch värm i 15 ± 1 minuter. Under uppvärmningen kommer Neogen Lyseringslösningen att ändra färg från rosa (kall) tillgul (varm).
Prover som inte har värmebehandlats korrekt under analysens lyseringssteg bör betraktas som en potentiell
biologisk fara och ska INTE föras in i Neogen Molekylärt Detektionsinstrument.
9. Ta ut det oövertäckta stället med Neogen Lyseringslösningsrör från Neogen Molekylär Detektion, Värmeblock och låt
det svalna i Neogen Molekylär Detektion, Insats för Kylblock under minst 5 minuter men högst 10 minuter. Neogen
Molekylär Detektion, Insats för Kylblock som används vid omgivningstemperatur utan Neogen® Molekylär Detektion,
Kylblockslåda ska placeras direkt på laboratoriebänken. När Neogen Lyseringslösningen svalnar återgår dess färg tillrosa.
10. Ta ut stället med Neogen Lyseringslösningsrör från Neogen Molekylär Detektion, Insats för Kylblock.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplifiering
1. Ett Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagensrör krävs för varje prov och för NK-provet.
1.1 Remsorna med rör kan klippas till önskat antal rör. Välj antalet enskilda Neogen Molecular Detection Assay 2 Cronobacter reagensrör eller remsor om 8 rör som behövs.
1.2 Placera Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter Reagensrör i ett tomt ställ.
1.3 Undvik att röra upp reagenspelletsarna i provrörens botten.
2. Välj ett rör för Neogen Reagenskontroll och placera det i stället.
3. Undvik korskontaminering genom att öppna ett lock på en remsa med Neogen Molecular Detection Assay 2 Cronobacter reagensrör i taget och använd en ny pipettspets vid varje överföringssteg.
4. För över varje lysat till ett Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter reagensrör och ett rör för Neogen
Reagenskontroll enligt beskrivningen nedan:Överför varje provlysat till enskilda Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter reagensrör först , följt av
NK. Hydrera rör för Neogen Reagenskontroll sist.
5. Använd Neogen® Molekylär Detektion, Cap/Decap Redskap - Reagens för att öppna Neogen Molecular Detection
Assay 2 - Cronobacter Reagensröret – en remsa reagensrör i taget. Kassera locket.
5.1 För över 20 µL av provlysat från den övre 1/2 av vätskan (undvik utfällning) i Neogen Lyseringslösningsröret
till motsvarande Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter reagensrör. Dispensera i en vinkel för
att undvika att pelletsarna rörs upp. Blanda genom att pipettera upp och ned 5 gånger.

9SV(Svenska)

5.2 Upprepa steg 5.1 tills enskilda provlysat har lagts till i ett motsvarande Neogen Molecular Detection Assay 2 Cronobacter Reagensrör i remsan.
5.3 Täck Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter reagensrör med medföljande extralock och använd
den rundade sidan av Neogen Molekylär Detektion, Cap/Decap Redskap - Reagens och pressa fram och tillbaka
för att stänga locket ordentligt.
5.4 Upprepa efter behov steg 5.1 till 5.3 för det antal prover som ska testas.
5.5 När alla provlysat har överförts upprepar du 5.1 till 5.3 för att föra över 20 µL NK-lysat i ett Neogen Molecular
Detection Assay 2 - Cronobacter reagensrör.
5.6 För över 20 µL av NK-lysat i ett rör för Neogen Reagenskontroll. Dispensera i en vinkel för att undvika attpelletsarna rörs upp. Blanda genom att pipettera upp och ned 5 gånger.
6. Ladda de förslutna provrören i en ren och dekontaminerad Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda. Stäng
och lås locket på Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda.

7. Granska och bekräfta den konfigurerade körningen i Neogen Molekylär detektionsprogramvara.
8. Klicka på startknappen i programmet och välj vilket instrument som ska användas. Det valda instrumentets locköppnas automatiskt.
9. Placera Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda i Neogen Molekylärt Detektionsinstrument och stäng
locket för att starta analysen. Resultaten ges inom 60 minuter, men positiva resultat kan detekteras tidigare.
10. Ta ut Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda från Neogen Molekylärt Detektionsinstrument när
analysen har slutförts och kassera rören genom att blötlägga dem i en 1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning förhushållsanvändning i 1 timme på avstånd från analysberedningsområdet.
OBSERVERA! För att minimera risken för falskt positiva resultat på grund av korskontaminering ska reagensprovrör
med amplifierad DNA aldrig öppnas. Detta inkluderar rör för Neogen Molecular Detection Assay 2 - Cronobacter
reagens, Neogen Reagenskontroll och Neogen Matriskontroll. Kassera alltid förslutna reagensrör genom att blötlägga
dem i en 1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning i 1 timme på avstånd från analysberedningsområdet.

Resultat och Tolkning

En algoritm tolkar ljusutstrålningskurvan som genereras genom detektion av nukleinsyraamplifiering. Resultaten
analyseras automatiskt av programmet och färgkodas baserat på resultatet. Ett positivt eller negativt resultat fastställs
genom analys av ett antal unika kurvparametrar. Presumtivt positiva resultat rapporteras i realtid medan resultat som ärnegativa och sådana som är märkta Inspektera visas när körningen har slutförts.
OBS! Inte ens ett negativt prov kommer att ge ett nollresultat eftersom systemet och amplifieringsreagenserna i Neogen
Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter innehar en tidigare RLU-avläsning (avläsning i enheten ”relative light unit”).
Bekräftelse• Bekräftelse av resultat enligt NF Validation-certifierad metod
I samband med NF VALIDATION bör alla presumtiva positiva anrikningar bekräftas genom att följa lämplig
referensmetodbekräftelse(2), med början vid överföringen från den primära anrikningen (Buffrat peptonvatten ISO eller
Buffrat peptonvatten ISO kompletterat med 10 mg/l vankomycin).
•Andra bekräftelseprotokoll

Presumtiva positiva anrikningar bör bekräftas enligt laboratoriets standardiserade rutiner eller genom att följa lämplig
referensmetodbekräftelse(1, 2), med början vid överföringen från den primära anrikningen (Buffrat peptonvatten ISO
eller Buffrat peptonvatten ISO kompletterat med 10 mg/l vankomycin) till det sekundära anrikningsmedel, åtföljt av
uppläggning och bekräftelse av isolater med hjälp av lämpliga biokemiska, serologiska och/eller molekylära metoder.

10

SV

(Svenska)

Skulle ovanlig ljusutstrålning förekomma, vilket är sällsynt, märker algoritmen detta med Inspektera. Neogen
rekommenderar att användaren upprepar analysen av prover som resulterar i Inspektera. Om resultatet fortsätter att vara
Inspektera ska du gå vidare till testbekräftelse med den metod du föredrar eller så som anges i lokala föreskrifter(1,2).
I fall av icke överensstämmande resultat (presumtivt positiva med Neogen Molecular Detection Assay 2 – Cronobacter,ej bekräftat med någon av de beskrivna metoderna ovan) bör laboratoriet följa sina etablerade standardiserade rutiner
för att rapportera sina resultat.
Om du har frågor om specifika tillämpningar eller procedurer kan du besöka vår hemsida på www.neogen.com eller
kontakta din lokala representant eller återförsäljare för Neogen.
Bilaga A. Protokollavbrott: Förvaring och omprovning av värmebehandlade lysater
1. Återförslut lyseringsprovröret med ett rent lock (se avsnittet Lysering, 4.5) för att förvara ett värmebehandlat lysat.
2. Förvara vid 2 till 8 °C i upp till 72 timmar.
3. Förbered ett förvarat prov för amplifiering genom att vända det upp och ned 2–3 gånger så att det blandas.
4. Avlägsna locken från rören.
5. Placera de blandade lysatrören i Neogen Molekylär Detektion, Insats för Värmeblock och värm vid 100 ± 1 °C i
5 ± 1 minuter.
6. Ta ut stället med Neogen Lyseringslösningsrör från värmeblocket och låt det svalna i Neogen Molekylär Detektion,
Insats för Kylblock under minst 5 minuter men högst 10 minuter.
7. Fortsätt enligt protokollet i avsnittet Amplifiering som beskrivs ovan.

Referenser:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Se de aktuella versionerna av standardmetoderna som anges ovan.

Symbolförklaringar

info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

DA(Dansk)Udstedelsesdato: 2024-01

Produktvejledning
Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter
Teknisk beskrivelse og tilsigtet anvendelse

Neogen® Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter bruges sammen med Neogen® Molekylær Detektions System
til hurtig og præcis detektion af Cronobacter i opformerede fødevareprøver og fødevaremiljøprøver.
Neogen Molekylær Detektions Analyse bruger loop-medieret, isotermisk amplifikation til hurtigt at forstærke
nukleinsyresekvenser med høj specificitet og følsomhed kombineret med bioluminescens for at afsløre amplifikationen.
Formodede positive resultater bliver rapporteret i realtid, mens negative resultater bliver vist, når analysen er
gennemført. Formodede positive resultater bør verificeres ved hjælp af din foretrukne metode eller som angivet i delokale vedtægter(1, 2).
Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter er beregnet til brug i laboratorieomgivelser af professionelle, derer uddannede i laboratorieteknikker. Neogen har ikke dokumenteret brugen af dette produkt i andre brancher end fødeog drikkevarebranchen. For eksempel har Neogen ikke dokumenteret dette produkt til test af medicinalvarer, kosmetiske,kliniske eller veterinære prøver. Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter er ikke blevet evalueret med allemulige fødevarer, forarbejdningsprocesser, testprotokoller eller med alle mulige bakteriestammer.
Som for alle testmetoder kan kilden, sammensætningen og kvaliteten af opformeringsmediet påvirke resultatet.
Faktorer så som prøvetagningsmetoder, testprotokoller, klargørelse af prøver, inklusive homogenisering og blanding,håndtering samt laboratorieteknik kan ligeledes påvirke resultaterne. Neogen anbefaler evaluering af metoden inklusive
opformeringsmediet i brugerens omgivelser ved hjælp af et tilstrækkeligt antal prøver med specifikke fødevarer og/eller
fødevaremiljøprøver og mikrobielle udfordringer for at sikre, at metoden opfylder brugerens kriterium.
Neogen har evalueret Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter med Bufferet Peptonvand ISO
opformeringsmedie.
Neogen® Molekylær Detektions Instrument er beregnet til brug sammen med prøver, der har gennemgået
varmebehandling under analysens lysinbehandlingstrin, der er designet til at destruere organismer, der optræder
i prøven. Prøver, som ikke er blevet korrekt varmebehandlet under analysens lysinbehandlingstrin, kan udgøre envæsentlig miljørisiko og bør IKKE sættes ind i Neogen Molekylær Detektions Instrument.
Neogen Food Safety er ISO 9001-certificeret (International Organisation for Standardisering) med hensyn til design og
produktion.
Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter testkittet indeholder 96 tests, beskrevet i tabel 1.
Tabel 1. Komponenter i Neogen Molekylær Detektions Analyse analysesæt
ArtikelIdentifikation

Kvantitet

Indholdsfortegnelse

Kommentarer

Neogen Lysinopløsning(LS)

Lyserød opløsning iklare reagensglas

96 (12 strimler med 8
reagensglas)

580 µl LS pr.
reagensglas

På holder ogklar til brug

Neogen® Molekylær
Detektions Analyse 2-Cronobacter reagensglas

Orange-røde
reagensglas

96 (12 strimler med 8
reagensglas)

Frysetørret, specifik
amplifikations- og
detektionsblanding

Klar til brug

Ekstra hætter

Orange-røde hætter

96 (12 strimler med 8hætter)Neogen Reagens Kontrol(RC)

Reagensglas med
gennemsigtig fliptop®

®

16 (2 poser med 8
individuelle reagensglas)

Klar til brugFrysetørret
kontrol-DNA,
amplifikations- og
detektionsblanding

Klar til brug

Den negative kontrol, som ikke medfølger i kittet, er et sterilt opformeringsmedie, f.eks. BPW ISO. Brug ikke vand somen negativ kontrol.

1

DA(Dansk)Sikkerhed

Brugeren skal læse, være indforstået med og følge alle sikkerhedsoplysninger i vejledningen til Neogen Molekylær
Detektions System og Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter. Gem sikkerhedsvejledningen til fremtidig
reference.
ADVARSEL: Indikerer en farlig situation, som kan resultere i dødsfald eller alvorlig personskade og/eller skade på
ejendele, hvis denne ikke undgås.
BEMÆRK: Indikerer en potentielt farlig situation, som udgør en risiko for beskadigelse af ejendom, hvis den ikkeundgås.

W ADVARSELDu må ikke anvende Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter til diagnosticering af sygdomme på
mennesker eller dyr.
Brugeren skal uddanne sit personale i de aktuelle, korrekte testteknikker: for eksempel God laboratoriepraksis(3),ISO/IEC 17025(4) eller ISO 7218(5).
For at reducere risiciene forbundet med et falsk-negativt resultat, der fører til frigørelse af kontaminerede produkter:• Følg proceduren, og udfør tests præcist som angivet i produktvejledning.
• Opbevar Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter som angivet på pakken og i produktvejledningen.
• Anvend altid Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter inden udløbsdatoen.
• Benyt Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter med miljøprøver der er valideret internt eller af
tredjepart.
• Anvend udelukkende Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter med overflader, desinfektionsmidler,
protokoller og bakteriestammer, der er blevet evalueret internt eller af tredjepart.
• For at lave en miljøprøve, der indeholder neutraliserende buffer med arylsulfonatkompleks, udføres et 1:2
blandingsforhold inden testning (1 del prøve til 1 del steril opformeringsbouillon). En anden mulighed er at overføre
10 μL NB opformeringsbuffer til Neogen lysinbehandlingsreagensglassene. Neogen®-produkter til prøvehåndtering,som inkluderer neutraliserende buffer med arylsulfonatkompleks: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G,
HS10NB, HS10NB2G og HS2410NB2G. Denne protokol er ikke blevet testet under NF Validations undersøgelsen.
For at reducere risiciene forbundet med eksponering for kemikalier og biologiske farer:• Foretag patogentestning i et korrekt udstyret laboratorium under uddannet personales kontrol. Inkuberet
opformeringsmedie og udstyr eller overflader, der har været i kontakt med inkuberet opformeringsmedie, kan
indeholde patogenniveauer, der er tilstrækkelige til at udgøre en risiko for menneskelig sundhed.
• Følg altid sikkerhedspraksis for et standardlaboratorium, inklusive brug af passende beskyttelsesudstyr og
beskyttelsesbriller under håndtering af reagenser og kontaminerede prøver.
• Undgå kontakt med indholdet af opformeringsmediet og reagensglas efter amplifikationen.
• Bortskaf opformerede prøver og kontamineret affald forbundet hermed i overensstemmelse med den aktuelle
lokale/regionale/nationale lovgivning.
• Overskrid ikke den anbefalede temperaturindstilling på varmeelementet.
• Overskrid ikke den anbefalede opvarmningstid.
• Brug et passende, kalibreret termometer til at verificere temperaturen for Neogen® Molekylær Detektions
Varmeblok Indlæg (f.eks. et termometer til delvis nedsænkning eller et digitalt termoelementtermometer, ikke ettermometer til hel nedsænkning). Termometeret skal anbringes på det dertil indrettede sted i Neogen Molekylær
Detektions Varmeblok Indlæg.
Overhold følgende forholdsregler for at reducere risiciene i forbindelse med krydskontaminering under klargøring af
analysen:• Brug altid handsker (for at beskytte brugeren og undgå introduktion af nukleaser).
For at reducere risici forbundet med eksponering af varme væsker:• Overskrid ikke den anbefalede temperaturindstilling på varmeelementet.
• Overskrid ikke den anbefalede opvarmningstid.
• Brug et passende, kalibreret termometer til at verificere temperaturen for Neogen® Molekylær Detektions
Varmeblok Indlæg (f.eks. et termometer til delvis nedsænkning eller et digitalt termoelementtermometer, ikke ettermometer til hel nedsænkning). Termometeret skal anbringes på det dertil indrettede sted i Neogen Molekylær
Detektions Varmeblok Indlæg.

2

DA(Dansk)BEMÆRK
Overhold følgende forholdsregler for at reducere risiciene i forbindelse med krydskontaminering under klargøring
af analysen:• Skift handsker før reagenskuglehydrering.
• Der anbefales brug af sterile, aerosol-barriere (filtrerede), molekylærbiologiske pipettespidser.
• Brug en ny pipettespids til hver prøveoverførsel.
• Anvend god laboratoriepraksis til overførsel af prøven fra opformeringsglasset til lysinreagensglasset. For at undgå
kontaminering af pipetterne kan brugeren vælge at tilføje et mellemliggende overførselstrin. For eksempel kan
brugeren overføre hver enkel opformerede prøve til et sterilt reagensglas.
• Anvend om muligt en molekylærbiologisk arbejdsstation, der inkluderer en bakteriedræbende lampe.
• Dekontaminer med jævne mellemrum laboratoriets arbejdsborde og udstyr (pipetter, luknings-/åbningsredskaber osv.)
med en 1-5 % (v:v i vand) husholdningsklorinopløsning eller DNA-renseopløsning.
For at reducere risiciene i forbindelse med et falsk-positivt resultat:• Reagensglas må aldrig åbnes efter amplifikation.
• Før bortskaffelse af de kontaminerede reagensglas skal de altid iblødlægges i en 1-5 % (v:v i vand)husholdningsklorinopløsning i 1 time og holdes væk fra området for analyseforberedelse.
• Reagensglas må aldrig autoklaveres efter amplifikation.
• Hvis det mistænkes, at prøver indeholder høje niveauer af Cronobacter DNA (f.eks., DNA fra ikke-levedygtige
Cronobacter celler, som har været udsat for et aflivnings-/ inaktiveringstrin), skal formodede positive opformeringer
behandles med DNase før Lysis trinet. Kontakt din Neogen-repræsentant for yderligere vejledninger. Denne protokol
er ikke blevet testet under NF Validations undersøgelsen.
Se sikkerhedsdatabladet for yderligere oplysninger og lokale vedtægter for bortskaffelse.
Hvis du har spørgsmål til specifikke anvendelser eller procedurer, bedes du besøge vores websted på
www.neogen.com eller kontakte din lokale Neogen-repræsentant eller -leverandør.

Brugeransvar

Brugerne er ansvarlige for at gøre sig bekendt med produktvejledninger og oplysninger. Besøg vores websted på
www.neogen.com eller kontakt din lokale Neogen repræsentant eller forhandler for yderligere oplysninger.
Når der vælges en testmetode, er det vigtigt, at man er klar over, at eksterne faktorer, så som prøveudtagningsmetoder,
testprotokoller, klargøring af prøven, inklusive homogenisering og blanding, håndtering samt laboratorieteknikker, kanpåvirke resultaterne.
Det er brugerens eget ansvar at vælge en testmetode, som evaluerer et tilstrækkeligt antal prøver med de passende
matricer og udfordringer for derved at sikre brugeren, at den valgte testmetode lever op til brugerens krav.
Det er også brugerens eget ansvar at fastsætte, at alle testmetoder og resultater lever op til kundernes og
leverandørernes krav.
Som med alle andre testmetoder gælder det, at de resultater, der opnås med dette Neogen Food Safety-produkt, ikke
giver garanti for kvaliteten af de testede matricer og processer.
For at hjælpe kunder med at evaluere metoden til flere forskellige matricer har Neogen udviklet Neogen® Molekylær
Detektions Matrix Kontrolkit. Efter behov kan Matrix Control (MC) anvendes til at afgøre om matricen har evnen til
at påvirke Neogen Molekylær Detektionsanalyse 2 - Cronobacter resultaterne. Test flere forskellige repræsentative
prøver fra matricen, dvs. prøver hentet fra forskellige kilder, fra enhver valideringsperiode under anvendelse af Neogenmetoden eller under testning af nye eller ukendte matricer eller matricer, der har gennemgået ændringer i råmaterialet
eller i processen.
En matrice kan defineres som en produkttype med iboende egenskaber såsom sammensætning og proces. Forskellemellem matricer kan være så simple som effekterne forårsaget af forskelle i deres bearbejdning eller præsentation, f.eks.
rå vs. pasteuriseret, frisk vs. tørret osv.

Begrænsning af garantier / Begrænset restitution

BORTSET FRA HVAD DER ER UDTRYKKELIGT ANFØRT I DEN BEGRÆNSEDE GARANTI TIL INDIVIDUELPRODUKTEMBALLAGE, FRASIGER NEOGEN SIG ALLE UDTRYKKELIGE OG UNDERFORSTÅEDE GARANTIERINDBEFATTET MEN IKKE BEGRÆNSET TIL ENHVER SALGBARHEDSGARANTI ELLER EGNETHED TIL EN BESTEMTANVENDELSE. Hvis et Neogen Food Safety-produkt er behæftet med fejl eller mangler, vil Neogen eller en af dennes
autoriserede distributører efter dennes eget skøn udskifte eller refundere produktets købspris. Dette er den eneste til
3

DA(Dansk)rådighed værende afhjælpning. Kontakt venligst din Neogen-repræsentant eller autoriserede Neogen-distributør foryderligere spørgsmål.

Begrænsning af Neogen's ansvar

NEOGEN SKAL IKKE HOLDES ANSVARLIG FOR EVT. TAB ELLER SKADER, HVAD END DE ER OPSTÅET DIREKTE,INDIREKTE, UNDER SÆRLIGE OMSTÆNDIGHEDER ELLER TILFÆLDIGE SKADER INDBEFATTET MEN IKKEBEGRÆNSET TIL MISTET FORTJENESTE. Under ingen omstændigheder skal Neogen's erstatningsansvar kunne
overstige købsprisen af produktet der efter sigende er behæftet med fejl.

Opbevaring og bortskaffelse

Opbevar Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter ved temp. mellem 2-8 °C. Undlad at fryse. Opbevar
kittet på et mørkt sted. Efter åbning skal det kontrolleres, at folieposen er intakt. Hvis posen er beskadiget, må produktet
ikke anvendes. Efter åbning bør ubenyttede reagensglas altid opbevares i den genlukkelige pose med tørremidlet indeni
for at opretholde de frysetørrede reagensers stabilitet. Opbevar de forseglede poser ved temperaturer mellem 2-8 °C i
højst 60 dage.
Du må ikke anvende Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter efter udløbsdatoen. Udløbsdato og
lotnummer findes på æskens udvendige mærkat. Efter brug, kan det beriget medie og Neogen Molekylær Detektions
Analyse 2 - Cronobacter reagensglas muligvis indeholde sygdomsfremkaldende materialer. Når testning er fuldført,
bedes du følge nuværende industristandarder for bortskaffelse af kontamineret affald. Se sikkerhedsdatabladet foryderligere oplysninger og lokale vedtægter for bortskaffelse.

Brugsanvisning

Følg omhyggeligt alle vejledninger. Hvis dette ikke overholdes, kan det medføre unøjagtige resultater.
Dekontaminer med jævne mellemrum laboratoriets arbejdsborde og udstyr (pipetter, luknings-/åbningsredskaber osv.)
med en 1-5 % (v:v i vand) husholdningsklorinopløsning eller DNA-renseopløsning.
Brugeren skal fuldføre undervisningen til Neogen Molekylær Detektions System brugerkvalifikation, som beskrevet idokumentet “Installationskvalifikations- (IQ) / driftskvalifikations (OQ) -protokoller og -vejledning til Neogen Molekylær
Detektions System”(6).
Se afsnittet “Specifik vejledning i validerede metoder” for specifikke krav:
Tabel 3 for opformningsprotokoller i henhold til AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 og Performance testedSM
Certifikatnummer 101703
Tabel 4 for opformeringsprotokol ifølge NF VALIDATION-certifikat 3M 01/20-03/18
Prøveopformering
Tabel 2, 3 eller 4 viser retningslinjer for opformeringsprotokoller for fødevare-, foder- og miljøprøver.
Det er brugerens ansvar at evaluere alternative prøve- eller opformeringsprotokoller, eller blandingsforhold for at sikre,
at denne testmetode imødekommer brugerens kriterier.
Fødevarer, miljøpulver, støv, opfejninger og svampe
1. Stabiliser opformeringsmediet til stuetemperatur (20-25 °C) med mindre andet er angivet i opformeringsprotokollen(Se tabel 2, 3 eller 4).
2. Kombiner opformningsmediet og prøven aseptisk og homogeniser grundigt ved blending, centrifugering, vortexbehandling eller håndmixing i 2 ± 0,2 minutter eller indtil alle klumper er helt opløst og opformningsopløsningen
er homogen(7, 8)
a.

Faktorer så som prøveklargøring inklusive homogenisering og blanding, håndtering og laboratorieteknikker kanpåvirke resultaterne.

b. Til højpartikelprøver anbefales brug af filterposer.
c.

Hvad angår matricer, der svumer op i vand og her stærkt viskøse (f.eks. kornprodukter, stivelse), kan det foreslås,at fortynde yderligere (>1:10), indtil viskositeten er passende reduceret, eller tilsætte 1 % (w/v) alpha-amylase til
BPW (ISO)(8).

d. Hvad angår store prøvestørrelse af kornprodukter tilsættes kornprodukt i pulverform langsomt væsken underhyppig omrøring for at undgå klumper.
3. Inkuber som beskrevet i den relevante protokoltabel (se Tabel 2, 3, eller 4).

4

DA(Dansk)Tabel 2. Generelle opformeringsprotokoller
Prøvematrice

Prøvestørrelse1

Opformeringsbouillonvolumen1, 2

Opformeringstemperatur(± 1 °C)

Modermælkserstatningi pulverform og råvarer,
så som mælkepulver,
sojapulver, vallepulver,
laktose, rismel, og
maltodekstrin

1X gram prøve

9X ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Råmaterialer, såsom salte, mineraler,aminosyrer, DHA(docosahexaensyre) og
vitaminer

1X gram prøve

99X ml BPW (ISO)(1:100)

37

18-24

20 µl

Prøver fra tørt miljø, såsom støv, opfejninger,
støvsuger opsamlinger

1X gram prøve

9X ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Miljøsvamp med 10 ml
Letheen bouillon eller
D/E neutraliserende
bouillon

1 prøveenhed

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Opformeringstid Prøveanalyse(timer)
volumen

1. Neogen har evalueret Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter ved brug af blandingsforhold i Tabel
2 op til 300 g. Det er brugerens ansvar at evaluere alternative blandingsforhold eller protokoller for at sikre, attestmetoden imødekommer brugerens kriterier.
2. Brug for-opvarmet BPW (ISO), hvis opformeringsbouillonvolumen er > 300 ml (f.eks., prøven er > 30 gram).
Specifik vejledning i validerede metoder
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certifikat #101703

I AOAC Research Institute OMASM og PTMSM-programmer viste Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter
sig at være en effektiv metode til detektion af Cronobacter. Matricerne, der er testet i denne undersøgelse, er vist i Tabel 3.

5DA(Dansk)Tabel 3. Opformeringsprotokoller i henhold til AOAC® OMASM 2018.01 og PTMSM 101703
OpformeringOpformeringstemperatur
stid (timer)(± 1 °C)

Prøvematrice

Prøvestørrelse

Opformeringsbouillonvolumen1

Powdered Infant Formula og
Powdered Infant Cereal

10 g

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Powdered Infant Cereal uden
probiotika

300 g

2700 ml BPW(ISO) (1:10)

For-opvarmet
37

18-24

20 µl

Powdered Infant Formula og
Powdered Infant Cereal med
probiotika

300 g

2700 ml BPW(ISO) + 10 mg/l
Vancomycin

For-opvarmet
37

22-24

20 µl

Laktose

10 g

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

1 prøveenhed

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Miljøsvamp med 10 ml D/E
neutraliserende bouillon

Prøveanalysevolumen

1. Brug for-opvarmet BPW ISO hvis opformerings bouillonvolumen er > 300 ml.
NF VALIDATION af AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
For yderligere oplysninger om validering henvises der til NF VALIDATION certifikatet, der er tilgængeligt på det
websted, som blev nævnt ovenfor.
NF VALIDATION-certificeret metode i overensstemmelse med ISO 16140-2(9) i sammenligning med ISO 22964.
Valideringsområdet: Powdered infant formula og infant cereals med og uden probiotika, råmaterialer og miljøprøver.
Prøveforberedelse: Prøver bør forberedes i henhold til EN ISO 22694(2) og EN ISO 6887(7, 8).
Softwareversion: Se certifikat.

6

DA(Dansk)Tabel 4. Opformeringsprotokol ifølge NF VALIDATION certificeret metode 3M 01/20-03/18
Prøvematrice
•
•
•

•

•

PowderedInfant Formula
PowderedInfant cereals
Ingredienser,
så sommælkepulver,
sojapulver,
vallepulver,
laktose,rismel, og
maltodekstrin
Prøver fra
tørt miljø,så som støv,
opfejninger,
støvsuger
opsamlinger,
Svamp,
skyllevand,wipes

Powdered Infant
Formula og
Powdered Infant
Cereal (udenprobiotika)
Powdered Infant
Formula og
Powdered Infant
Cereal (medprobiotika)

Prøvestørrelse

OpformerOpformerings- BerigelsPrøveanalyseAnbefalede
ingsbouillontemperatur
estid
2, 3
volumenafbrydelsespunktervolumen1(± 1 °C)(timer)

10 g
90 ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µl

Opformeringsbouillon
eller prøvelysat kan
opbevares ved 2-8 °C
i op til 72 timer

1
prøveenhed
eller
10 ml

Opformeringsbouillon
eller prøvelysat kan
opbevares ved 2-8 °C
i op til 72 timer

30-300 g

BPW ISO(1:10)

37

18-24

20 µl

Opformeringsbouillon
eller prøvelysat kan
opbevares ved 2-8 °C
i op til 72 timer

30-300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/l
Vancomycin(1:10)

37

22-24

20 µl

Ingen

1. Brug for-opvarmet BPW (ISO), hvis opformeringsbouillonvolumen er > 300 ml (f.eks., prøven er > 30 gram).
2. Efter at have taget opformeringsbouillonen ud af opbevaring genoptages testning fra trin 1 i afsnittet
Lysinbehandling. Efter at have taget lysatprøven ud af opbevaring genoptages testning fra trin 7 i afsnittet
Lysinbehandling.
3. Se Bilag A for genprøvning af opbevarede, varmebehandlede lysater.
Forberedelse af Neogen® Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning
1. Fugt en klud eller et engangshåndklæde med en 1-5 % (v: v i vand) husholdningsklorinopløsning, og aftør Neogen
Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning.
2. Skyl Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning med vand.
3. Brug et engangshåndklæde til at aftørre Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning.
4. Sørg for, at Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning er tør inden brug.
Klargørelse af Neogen® Molekylær Detektions Køleblok Indlæg
Anbring Neogen Molekylær Detektions Køleblok Indlæg direkte på laboratoriebordet: Neogen Molekylær Detektions
Køleblok Bakke benyttes ikke. Brug blokken ved laboratorietemperatur (20-25 °C).

7

DA

(Dansk)Klargørelse af Neogen® Molekylær Detektions Varmeblok Indlægget
Anbring Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg på en tør dobbelt varmeenhed. Tænd for den tørre varmeenhed, og
indstil temperaturen, så Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg kan nå og opretholde en temperatur på 100 ±1 °C.
BEMÆRK: Afhængigt af varmeenheden skal man påregne ca. 30 minutter, før Neogen Molekylær Detektions
Varmeblok Indlæg opnår temperaturen. Ved hjælp af et passende, kalibreret termometer (f.eks. et termometer til delvisnedsænkning eller et digitalt termoelementtermometer, men ikke et fuldstændigt nedsænkningstermometer) anbragt
på det dertil indrettede sted skal det verificeres, at Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg er på 100 ±1 °C.
Klargørelse af Neogen® Molekylær Detektions Instrument
1. Start Neogen® Molekylær Detektions Softwaren og log på. Kontakt din Neogen Food Safety-repræsentant for atsikre, at du har den mest opdaterede version af softwaren.
2. Tænd for Neogen Molekylær Detektions Instrument.
3. Opret, eller rediger en kørsel med data for hver prøve. Se brugsanvisningen til Neogen Molekylær Detektions
System for flere oplysninger.
BEMÆRK: Neogen Molekylær Detektions Instrument skal opnå Klar-tilstanden inden der indsættes reagensglas i
Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning. Dette opvarmningstrin varer ca. 20 minutter og bliver angivet
med et ORANGE lys på instrumentets statussøjle. Når instrumentet er klart til en kørsel, lyser statussøjlen GRØNT.
Lysinbehandling
Fjern bunden af holderen til Neogen Lysinbehandlingsopløsning med en skruetrækker før den placeres i Neogen
Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg.

1. Lad Neogen Lysinbehandlingsreagensglassene varme op ved at indstille holderen på stuetemperatur (20-25 °C)
natten over (16-18 timer). Alternativer til at stabilisere Neogen Lysinbehandlingsreagensglassene til stuetemperatur
er at sætte Neogen Lysinbehandlingsreagensglassene på arbejdsbordet i mindst 2 timer, inkubere Neogen
Lysinbehandlingsreagensglassene i en 37 ±1 °C inkubator i 1 time eller stille dem i en tør, dobbelt varmeblok i 30
sekunder ved 100 ± 1 °C.
2. Vend de lukkede reagensglas på hovedet for at blande. Gå til næste trin inden 4 timer efter at have vendt glasset.
3. Fjern opformeringsbouillonen fra inkubatoren.
4. Et Neogen Lysinbehandlingsreagensglas er påkrævet til hver prøve og til NC-prøven (sterilt opformeringsmedie).
4.1 Neogen Lysinbehandlingsreagensglasstrips kan skæres til det ønskede antal rør. Vælg antallet af individuelle
Neogen LS-reagensglas eller 8-reagensglasstrimler efter behov. Sæt Neogen LS-reagensglassene i en tom
glasholder.
4.2 Åbn én Neogen LS-reagensglasstrimmel ad gangen for at undgå krydskontaminering, og brug en ny pipette til
hvert overførselstrin.
4.3 Overfør opformeret prøve til Neogen LS-reagensglas som beskrevet nedenfor:
Overfør hver opformeret prøve til et individuelt Neogen LS-reagensglas først. Overfør NC til sidst.
4.4 Brug Neogen® Molekylær Detektions Værktøj til Cap/Decap (lukning/åbning) – Lysinbehandling til at åbne én
Neogen LS-reagensglasstrimmel ad gangen.
4.5 Smid Neogen LS-reagensglassets låg væk – hvis lysat vil blive bevaret til gentestning, så placér lågene i en renbeholder til genpåsætning efter lysinbehandlingen.
4.5.1. For bevaring af lysat se bilag A.
4.6 Ryst opformningsposen før prøven indhentes fra den filtrerede side, når der arbejdes med viskøse prøver.

8

DA(Dansk)4.7 Overfør 20 µl af prøven ind i et Neogen Lysinbehandlingssreagensglas, medmindre andet er indikeret i
protokoltabellen.
5. Gentag trin 4.4 til 4.7, indtil hver individuel prøve er blevet tilføjet til et tilsvarende Neogen
Lysinbehandlingsreagensglas i strimlen.

6. Når alle prøver er blevet overført, skal der overføres 20 µl NC (sterilt opformeringsmedie, f.eks. BPW) til et Neogen
Lysinbehandlingsreagensglas. Brug ikke vand som en NC.
7. Kontrollér, at Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg har en temperatur på 100 ±1 °C.
8. Anbring glasholderen med Neogen Lysinbehandlingsreagensglas i Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg,og opvarm i 15 ±1 minutter. I løbet af opvarmningen vil Neogen Lysinopløsningen skifte fra pink (kølig) til gul (varm).
Prøver, som ikke er blevet korrekt varmebehandlet under analysens lysinbehandlingstrin, kan udgøre en væsentlig
miljørisiko og bør IKKE sættes ind i Neogen Molekylær Detektions Instrument.
9. Fjern den udækkede holder med Neogen Lysinbehandlingsreagensglas fra Neogen Molekylær Detektions Varmeblok,og lad det køle i Neogen Molekylær Detektions Køleblok Indlæg i mindst 5 minutter og i højst 10 minutter. Neogen
Molekylær Detektions Køleblok Indlæg brugt ved stuetemperatur uden Neogen® Molekylær Detektions Køleblok
Bakke bør stå direkte på laboratoriebordet. Når det er koldt, skifter Neogen lysinopløsningen til lyserød.
10. Fjern stativet med Neogen LS-reagensglas fra Neogen Molekylær Detektions Køleblok Indlæg.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplifikation
1. Et Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter reagensglas er påkrævet til hver prøve og NC.
1.1 Reagensglasstrimler kan tilpasses til det ønskede antal reagensglas. Vælg antallet af individuelle Neogen
Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter reagensglas eller 8-reagensglasstrimler efter behov.
1.2 Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 -Cronobacter reagensglas i en tom glasholder.
1.3 Undgå at forstyrre reagenskuglerne på bunden af reagensglassene.
2. Vælg ét Neogen Reagens Kontrol-reagensglas, og anbring det i holderen.
3. For at undgå krydskontaminering åbnes én Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter
reagensglasstrimler ad gangen, og der bruges en ny pipettespids til hvert overførselstrin.
4. Overfør hvert lysat til et Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter reagensglas og Neogen Reagens
Kontrol-reagensglas som beskrevet nedenfor:
Overfør hver prøvelysat til individuelle Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter reagensglas først,efterfulgt af NC. Hydrer Neogen Reagens Kontrol-reagensglasset sidst.
5. Brug Neogen® Molekylær Detektions Værktøj til Cap/Decap (lukning/åbning) - Reagens til at åbne Neogen
Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter -reagensglas - én reagensglasstrimmel ad gangen. Bortskaf hætten.

9DA(Dansk)5.1 Overfør 20 µl prøvelysat fra den øverste halvdel af væsken (undgå præcipitat) i Neogen
Lysinbehandlingsreagensglasset til tilsvarende Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter
reagensglas. Dosér med en skrå hældning for at undgå at forstyrre kuglerne. Bland forsigtigt ved at pipettere
op og ned 5 gange.
5.2 Gentag trin 5.1, til individuelt prøvelysat er blevet tilføjet til et tilsvarende Neogen Molekylær Detektions
Analyse 2 - Cronobacter reagensglas i strimlen.
5.3 Dæk Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter reagensglasset med det medfølgende ekstra låg
og brug den runde side af Neogen Molekylær Detektions Værktøj til Cap/Decap (lukning/åbning) - Reagens tilat påføre tryk i en frem- og tilbagegående retning, og sørg for, at låget sidder fast.
5.4 Gentag trinene 5.1 til 5.3 efter behov for antallet af prøver, der skal testes.
5.5 Når alle prøvelysater er blevet overført, gentages trinene 5.1 til 5.3 for at overføre 20 µl NC-lysat til et Neogen
Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter reagensglas.
5.6 Overfør 20 µL NC-lysat til et Neogen Reagens Kontrol-reagensglas. Dosér med en skrå hældning for at undgå
at forstyrre kuglerne. Bland forsigtigt ved at pipettere op og ned 5 gange.
6. Sæt reagensglassene med låg påsat i en ren og dekontamineret Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtigpåfyldning. Luk, og lås låget til Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning.

7. Gennemgå og bekræft den konfigurerede kørsel i Neogen Molekylær Detektions softwaren.
8. Klik på startknappen i softwaren, og vælg det instrument, du vil bruge. Det valgte instruments låg åbnes automatisk.
9. Anbring Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning i Neogen Molekylær Detektions Instrument, og
luk låget for at påbegynde analysen. Resultaterne fremkommer inden for 60 minutter, skønt positive resultater kan
fremkomme hurtigere.
10. Når analysen er færdig, fjernes Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning fra Neogen Molekylær
Detektions Instrument, reagensglassene smides væk ved at lade dem ligge i blød i en 1-5 % (v:v i vand)husholdningsklorinopløsning i 1 time og på god afstand af analyseklargørelsesområdet.
BEMÆRK: For at minimere risikoen for falsk-positiver pga. krydskontaminering må reagensglas, der indeholder
forstærket DNA, aldrig åbnes. Dette omfatter Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Cronobacter reagensglas,
Neogen Reagens Kontrol - og Neogen Matrix Kontrol-reagensglas. Læg altid forseglede reagensglas i blød i en 1-5 %(v:v i vand) husholdningsklorinopløsning i 1 time og på god afstand af analyseklargørelsesområdet.

Resultater og fortolkning

En algoritme fortolker lyseffektkurven, der er et resultat af detektionen af nukleinsyreamplifikation. Resultaterne bliver
automatisk analyserede af softwaren og bliver farvekodede baseret på resultatet. Et positivt eller negativt resultat bliver
fastslået ved at analysere et antal unikke kurveparametre. Formodede positive resultater bliver rapporterede i realtid,
mens negative resultater og inspektionsresultater bliver vist, efter kørslen er gennemført.
BEMÆRK: Selv en negativ prøve vil ikke give en nulaflæsning, idet systemet og Neogen Molekylær Detektions
Analyse 2 - Cronobacter-amplifikationsreagenser har en "baggrundsmæssig" relativ lysenhed (RLU)-læsning.
Bekræftelse• Bekræftelse af resultater ifølge den certificerede metode NF Validation
Inden for rammerne of NF Validation, bør alle formodet positive opformeringer bekræftes med følgende
referencemetodebekræftelse(2), startende med overførsel fra primær opformning (BPW ISO eller BPW ISO suppleretmed 10 mg/l vancomycin).
•Andre bekræftelsesprotokoller

10

DA

(Dansk)Formodede positive opformeringer skal bekræftes ifølge sikkerhedspraksis for et standardlaboratorium eller ved at følge
den relevante referencemetodebekræftelse(1,2), der begynder med overførsel fra den primære opformering (BPW ISO
eller BPW ISO suppleret med 10 mg/l vancomycin) til et sekundært opformeringsmedium, efterfulgt af efterfølgende
plettering og bekræftelse af isolater ved hjælp af passende biokemiske, serologiske og/eller molekulære metoder.
I sjældne tilfælde af en usædvanlig lyseffekt vil algoritmemærkaterne kategorisere dette som Inspektion. Neogen
anbefaler brugeren at gentage analysen for alle inspektionsprøver. Hvis resultatet fortsat markeres til Inspektion, skal dufortsætte til bekræftelsestest ved brug af din foretrukne metode eller som specificeret i lokale forskrifter(1,2).
I tilfælde af uoverensstemmende resultater (formodede positive med Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 Cronobacter, ikke bekræftet med en af metoderne beskrevet ovenfor), skal laboratoriet følge de deres etablerede standard
arbejdsprocedurer for at sikre valideringen af de opnåede resultater.
Hvis du har spørgsmål til specifikke anvendelser eller procedurer, bedes du besøge vores websted på
www.neogen.com eller kontakte din lokale Neogen-repræsentant eller -leverandør.
Bilag A. Protokolafbrydelse: Opbevaring og gentestning af varmebehandlede lysater
1. Til opbevaring af varmebehandlet lysat påsættes en ren hætte på lysisreagensglasset (se afsnittet Lysis, afsnit 4.5)
2. Opbevar ved 2 til 8 °C i op til 72 timer.
3. Forbered en opbevaret prøve til amplifikation ved at vende den på hovedet 2-3 gange for at blande.
4. Tag lågene af reagensglassene.
5. Placér de blandede lysatreagensglas på Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg, og varm op til 100 ±1 °C i
5 ±1 minutter.
6. Fjern holderen med Neogen LS-reagensglas fra varmeblokken, og lad det køle i Neogen Molekylær Detektions
Køleblok Indlæg i mindst 5 minutter og i højst 10 minutter.
7. Fortsæt protokollen i afsnittet Amplifikation som angivet ovenfor.

Litteraturhenvisninger:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Der henvises til de gældende versioner af de standardmetoder, som er angivet ovenfor.

Symbolforklaring

info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

NO(Norsk)Utgivelsesdato: 2024-01

Produktveiledning
Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter
Produktbeskrivelse og tiltenkt bruk

Neogen® Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter brukes sammen med Neogen® System for molekylær deteksjon for
rask og spesifikk deteksjon av Cronobacter i miljøprøver av beriket mat, fôr- og matprosess.
Neogen Molekylære deteksjonstester bruker sløyfe-mediert isotermisk amplifikasjon for hurtig amplifikasjon av
nukleinsyresekvenser med høy spesifisitet og sensitivitet, kombinert med bioluminescens for å registrere amplifikasjonen.
Antatte positive testresultater rapporteres i sanntid, mens negative resultater vises etter at testen er fullført. Antatte
positive resultater skal bekreftes ved hjelp av din foretrukne metode eller som spesifisert av lokale forskrifter(1, 2).
Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter er ment for bruk i et laboratoriemiljø av fagpersoner med opplæring
i laboratorieteknikker. Neogen har ikke godkjent dette produktet for bruk i andre industrier enn mat og drikke. Neogen
har for eksempel ikke godkjent dette produktet for testing av farmasøytiske, kosmetiske, kliniske eller veterinærprøver.
Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter har ikke blitt evaluert med alle mulige matprodukter, matprosesser,
testprotokoller eller med alle mulige bakteriestammer.
Som ved alle testmetoder kan kilden, formuleringen og kvaliteten til anrikningsmediet påvirke resultatene. Faktorer
som prøveinnsamlingsmetoder, testprotokoller, prøveforberedelse inkludert homogenisering og blanding, håndteringog laboratorieteknikk kan også påvirke resultatet. Neogen anbefaler å evaluere metoden, inkludert anrikningsmediet,i brukerens miljø ved bruk av et tilstrekkelig antall prøver ved spesielle mat- og/eller miljøprøver og mikrobielle
utfordringer for å sikre at metoden oppfyller brukerens kriterier.
Neogen har evaluert Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter med bufret peptonvann ISO.
Neogen® Instrument for molekylær deteksjon er ment for bruk med prøver som har gjennomgått varmebehandlingi testens lyseringstrinn, som er konstruert for å ødelegge organismer som finnes i prøven. Prøver som ikke har blitt
ordentlig varmebehandlet under testlyseringstrinnet kan vurderes som en potensiell biologisk fare og skal IKKE settes
inn i Neogen Instrument for molekylær deteksjon.
Neogen Food Safety er ISO (International Organization for Standardization) 9001-sertifisert for utforming og produksjon.
Settet med Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter inneholder 96 tester, beskrevet i tabell 1.
Tabell 1. Komponenter i Neogen Molekylært deteksjonskit
ObjektBeskrivelse

AntallInnhold

Kommentarer

NeogenLyseringsoppløsning (LS)Rosa oppløsning igjennomsiktige rør

96 (12 rekker med 8 rør)

580 µl LS per rør

Plassert i stativ
og klar til bruk

Reagensrør for Neogen®
Molekulær deteksjonskit
2 - Cronobacter

Orange-røde rør

96 (12 rekker med 8 rør)

Lyofilisert spesifikk
amplifikasjon og
deteksjonsblanding

Klar til bruk

Ekstra lokk

Orange-rød hetter

96 (12 rekker med 8 lokk)

Neogen® Reagenskontroll(RC)

Gjennomsiktige rør
med vippelokk

16 (2 poser med 8
individuelle rør)®

Klar til brukLyofilisert
kontroll-DNA,
amplifikasjon og
deteksjonsblanding

Klar til brukDen negative kontrollen (NC), som ikke følger med i settet, er et sterilt anrikningsmedium, f.eks. BPW ISO. Ikke brukvann som negativ kontroll.

Sikkerhet

Brukeren må lese, forstå og følge all informasjon om sikkerhet i instruksjonene for Neogen System for molekylær
deteksjon og Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter. Behold sikkerhetsveiledningen for fremtidig referanse.
ADVARSEL: Indikerer en farlig situasjon som, om den ikke unngås, kan resultere i død eller alvorlig personskade
og/eller materielle skader.
MERKNAD: Indikerer en potensielt farlig situasjon som, om den ikke unngås, kan føre til materielle skader.
1

NO(Norsk)W ADVARSEL
Ikke bruk Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter i diagnostisering av tilstander hos mennesker eller dyr.
Brukeren må sørge for at personalet får tilstrekkelig opplæring i korrekte testteknikker: for eksempel, Godlaboratoriepraksis(3), ISO/IEC 17025(4) eller ISO 7218(5).
For å redusere risikoene forbundet med et falskt negativt resultat som kan føre til utslipp av kontaminert produkt:• Følg protokollen og utfør testene akkurat slik de beskrives i produktveiledning.
• Oppbevar Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter slik som beskrevet på pakningen og i
produktveiledningen.
• Bruk alltid Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter før utløpsdatoen.
• Bruk Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter med miljøprøver i mat-, fôr- og næringsmiddelprosesser som
har blitt godkjent internt eller av tredjepart.
• Bruk kun Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter med overflater, desinfeksjonsmidler, protokoller og
bakteriestammer som har blitt validert internt eller av en tredjepart.
• For en miljøprøve som inneholder nøytraliserende buffer med aryl sulfonat-kompleks, skal du utføre en 1:2
fortynning før testing (1 del prøve i 1 del steril anrikningsbuljong). Et annet alternativ er å overføre 10 µl av den
NB-anrikningen inn i Neogen lyseringsoppløsningsrørene. Prøvehåndteringsprodukter fra Neogen® som inkluderer
nøytraliserende buffer med arylsulfonatkompleks: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,
HS10NB2G og HS2410NB2G. Denne protokollen er ikke blitt testet under NF Validation-studien.
For å redusere risikoene forbundet med eksponering for kjemikalier og biologiske farer:• Utfør patogentesting i et laboratorium som er korrekt utstyrt, under oppsyn av fagopplært personell. Inkubertanrikningsmedium og utstyr eller overflater som har vært i kontakt med inkubert anrikningsmedium, kan inneholde
patogener på et nivå som kan innebære helserisiko for mennesker.
• Følg alltid standard praksis for laboratoriesikkerhet, inkludert bruk av egnet personlig verneutstyr og øyevern vedhåndtering av reagensrør og kontaminerte prøver.
• Unngå kontakt med innholdet i anrikningsmediet og reagensrør etter amplifisering.
• Kast anrikede prøver og tilhørende kontaminert avfall i henhold til gjeldende lokale/regionale/nasjonale/industriellestandarder.
• Ikke overstig den anbefalte temperaturinnstillingen på varmeblokken.
• Ikke overstig den anbefalte oppvarmingstiden.
• Bruk et passende, kalibrert termometer til å kontrollere temperaturen på Neogen® Varmeblokkinnsats for molekylær
deteksjon (f.eks. delvis nedsenket termometer eller digitalt termoelement-termometer, ikke et helt nedsenket
termometer). Termometeret må plasseres på det angitte stedet på Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon.
For å redusere risikoene forbundet med krysskontaminering ved klargjøring av test:• Bruk alltid hansker (for å beskytte brukeren og forhindre innføring av nukleaser).
For å redusere risiko forbundet med eksponering for varme væsker:• Ikke overstig den anbefalte temperaturinnstillingen på varmeblokken.
• Ikke overstig den anbefalte oppvarmingstiden.
• Bruk et passende, kalibrert termometer til å kontrollere temperaturen på Neogen® Varmeblokkinnsats for molekylær
deteksjon (f.eks. delvis nedsenket termometer eller digitalt termoelement-termometer, ikke et helt nedsenket
termometer). Termometeret må plasseres på det angitte stedet på Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon.

MERKNADFor å redusere risikoene forbundet med krysskontaminering ved klargjøring av test:• Skift hansker før hydrering av reagens-pellet.
• Det anbefales å bruke pipettespisser med sterile, spraybaserte barrierer (filtrerte), av molekylærbiologi-karakter.
• Bruk en ny pipettespiss for hver prøveoverføring.
• Bruk gode laboratoriepraksiser til å overføre prøven fra anrikningen til lyseringsrøret. For å unngå kontaminering av
pipetter kan brukeren velge å legge til et mellomtrinn under overføring. Brukeren kan for eksempel overføre hver
anrikede prøve til et sterilt rør.
• Dersom tilgjengelig, bør brukeren bruke en arbeidsstasjon for molekylær biologi som har en bakteriedrepende
lampe.
• Utfør periodisk dekontaminering av benker og utstyr (pipetter, verktøy for lukking/åpning, osv.) i laboratoriet med en
1–5 % (volumandel i vann) oppløsning av husholdningsblekemiddel eller oppløsning for fjerning av DNA.

2

NO

(Norsk)For å redusere risikoene forbundet med falskt positivt resultat:• Åpne aldri rørene etter amplifisering.
• Kast alltid de kontaminerte rørene ved å bløtlegge dem i en 1–5 % (volumandel i vann) oppløsning av
husholdningsblekemiddel i 1 time og borte fra testens forberedelsesområde.
• Autoklaver aldri rørene etter amplifisering.
• Hvis prøvene er mistenkt for å inneholde høye nivåer av Cronobacter-DNA (for eksempel, DNA fra ikke-levedyktige
Cronobacter-celler som har vært utsatt for en drepe-/inaktiveringstrinn), presumptive positive anrikninger bør
behandles med DNase før LYSIS-trinnet. Kontakt din Neogen representant for ytterligere instruksjoner. Denne
protokollen er ikke blitt testet under NF Validation-studien.
Se HMS-databladet for ytterligere informasjon og lokale forskrifter for avhending.
Hvis du har spørsmål om spesifikke bruksområder eller prosedyrer, besøk vårt nettsted på www.neogen.com eller
kontakt den lokale Neogen-representanten eller forhandleren.

Brukeransvar

Brukere er ansvarlige for å sette seg inn i produktveiledningen og informasjon om produktet. Besøk nettsiden vår
www.neogen.com eller kontakt din lokale Neogen-representant eller distributør for mer informasjon.
Ved valg av testmetode er det viktig å ta hensyn til at eksterne faktorer som metoder for stikkprøver, testprotokoller,
preparering av prøver inkludert homogenisering og blanding, håndtering og laboratorieteknikk kan påvirke resultatene.
Ved valg av testmetode er det brukerens ansvar å vurdere et tilstrekkelig antall prøver med passende matriser og
mikrobielle utfordringer for å tilfredsstille brukeren om at den valgte prøvemetoden oppfyller brukerens kriterier.
Det er også brukerens ansvar å fastslå at alle prøvemetoder og resultater tilfredsstiller kundens og leverandørens krav.
Som med alle testmetoder, utgjør ikke resultatene som oppnås ved bruk av noe Neogen Food Safety-produkt noen
garanti om kvaliteten av matrisene eller prosessene som testes.
For å hjelpe kunder med å evaluere metoden for forskjellige matmatriser, har Neogen utviklet Neogen®
Matrisekontrollsett for molekylær deteksjon. Bruk matrisekontroll (MC) ved behov for å avgjøre om matrisen har
egenskapen til å påvirke resultatene for Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter. Test flere prøver som
representerer matrisen, dvs. prøver innhentet fra forskjellige opphav, i løpet av en hvilken som helst valideringsperiodenår Neogen-metoden brukes, ved testing av nye eller ukjente matriser, eller matriser som har gjennomgått endringer iråvaremateriale eller prosess.
En matrise kan defineres som en produkttype med indre egenskaper, slik som sammensetning og prosess. Forskjeller
mellom matriser kan være så enkle som effekter som skyldes forskjeller i prosessering eller presentasjon, for eksempel råi motsetning til pasteurisert, fersk i motsetning til tørket osv.

Begrensning av garantier / begrensede rettigheter

MED MINDRE DET ER UTTRYKKELIG SKREVET I EN BEGRENSET GARANTI PÅ EN PRODUKTPAKNING, FRASKRIVER
NEOGEN SEG ALLE DIREKTE OG INDIREKTE GARANTIER, INKLUDERT MEN IKKE BEGRENSET TIL, ENHVERGARANTI OM SALGBARHET ELLER ANVENDELSE TIL ET BESTEMT FORMÅL. Hvis noe Neogen Food Safety-produkt
er defekt vil Neogen eller dets autoriserte distributør erstatte eller refundere produktets kjøpesum etter eget skjønn.
Dette er dine ubetingede rettigheter. Kontakt Neogen-representanten din eller den autoriserte Neogen-distributøren
hvis du har flere spørsmål.

Begrensning av Neogens ansvar

NEOGEN VIL IKKE VÆRE ANSVARLIG FOR NOE TAP ELLER SKADE, DIREKTE ELLER INDIREKTE, SPESIELL, TILFELDIG
ELLER FØLGESKADE, INKLUDERT, MEN IKKE BEGRENSET TIL, TAPT FORTJENESTE. Ikke under noen omstendighet skal
Neogens ansvar, under noen juridisk teori, overstige kjøpesummen for et produkt som antas å være defekt.

Oppbevaring og avhending

Oppbevar Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter ved 2–8 °C. Må ikke fryses. Hold settet borte fra lys
under oppbevaring. Etter at settet er åpnet, skal folieposen undersøkes for skader. Må ikke brukes dersom posen er
skadet. Etter åpning skal ubrukte reagensrør alltid oppbevares i den gjenlukkbare posen med tørkemiddelet inni, for å
opprettholde stabiliteten til de lyofiliserte reagensene. Oppbevar forseglede poser ved 2–8 °C i maksimalt 60 dager.
Ikke bruk Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter etter utløpsdatoen. Utløpsdato og lotnummer er angitt på
etiketten på utsiden av esken. Etter bruk kan rørene med oppformeringsmediet og Neogen Molekylær deteksjonskit 2 Cronobacter inneholde potensielle patogent materiale. Når testingen er fullført, følger brukeren gjeldende industristandarderfor kasting av kontaminert avfall. Se HMS-databladet for ytterligere informasjon og lokale forskrifter for avhending.
3

NO(Norsk)Bruksanvisning

Følg alle instruksjonene nøye. Dersom dette ikke blir gjort, kan det føre til unøyaktige resultater.
Utfør periodisk dekontaminering av benker og utstyr (pipetter, verktøy for lukking/åpning, osv.) i laboratoriet med en
1–5 % (volumandel i vann) oppløsning av husholdningsblekemiddel eller oppløsning for fjerning av DNA.
Brukeren må fullføre opplæringen for operatører av Neogen System for molekylær deteksjon (OQ), som beskrevet idokumentet «Installasjonskvalifikasjon (IQ) / Driftskvalifikasjon (QW) Protokoller og instruksjoner for Neogen System
for molekylær deteksjon» (Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for
Neogen Molecular Detection System)(6).
Se avsnittet «Spesifikke veiledninger for validerte metoder» for spesifikke krav:
Tabell 3 for anrikningsprotokoller i henhold til AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 and Performance TestedSM
sertifikatnummer 101703
Tabell 4 for anrikningsprotokoller i henhold til NF VALIDATION-sertifikat 3M 01/20-03/18
Prøveanriking
Tabell 2, 3 eller 4 viser veiledning for anrikningsprotokoller for mat-, fôr- og miljøprøver.
Det er brukerens ansvar å validere alternative prøve- eller berikelsesprotokoller eller fortynningsforhold for å sikre attestmetoden møter brukerens krav.
Næringsmidler, miljøpulvere, støv, søppel og svamper
1. Ekvilibrer anrikningsmediet til værelsestemperatur (20-25 °C) hvis ikke annet er angitt i anrikningsprotokollen(se tabell 2, 3 eller 4).
2. Kombinere anrikningsmediet og prøven aseptisk og homogeniser grundig ved å blande, homogenisere,
blande i virvelblander eller håndblande i 2 ± 0,2 minutter eller til alle klumper er fullstendig oppløst, og
anrikingsopphenget er homogent(7, 8).
a.

Faktorer som prøveforberedelse inkludert homogenisering og blanding, håndtering og laboratorieteknikk kanpåvirke resultatet.

b. For svært oppdelte prøver anbefales det å bruke filterposer.
c.

For matriser som svulmer i vann og er svært viskøse (f.eks. kornblandinger, stivelser), anbefales det å gjøre
ytterligere fortynninger (> 1:10) til viskositeten reduseres hensiktsmessig eller tilsette steril 1 % (v/v) alfa-amylasetil BPW (ISO)(8).

d. For store prøvestørrelser av kornblandinger, tilsett det pulverformige kornet væsken sakte mens du blander ofte
å unngå klumper.
3. Inkuber i henhold til de passende protokolltabellene (se tabell 2, 3 eller 4).

4

NO(Norsk)Tabell 2. Generelle anrikningsprotokoller
Prøvematrise

Prøvestørrelse1

Volum anrikningsbuljong1, 2

Anrikningstemperatur(± 1 °C)

Anrikningstid(timer)Prøveanalysevolum

Pulverisert morsmelkerstatning(PIF) og råvarer som foreksempel tørrmelkpulver,
soyapulver, mysepulver,
laktose, rismel og
maltodekstrin

1X gram prøve

9X mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Råvarer som salter,mineraler, aminosyrer, DHA(docosahexaensyre) og
vitaminer

1X gram prøve

99X mL BPW (ISO)(1:100)

37

18–24

20 µl

Tørre miljøprøver som støv,
feiing, vakuum-innsamling

1X gram prøve

9X mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Miljøsvamp med 10 ml
Letheen-buljong eller D/Enøytraliserende buljong

1 prøvetaker

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

1. Neogen har evaluert Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter ved hjelp av fortynningsforhold i tabell 2
opp til 300 g. Det er brukerens ansvar å validere alternative prøveprotokoller eller fortynningsforhold for å sikre attestmetoden møter brukerens krav.
2. Bruk forvarmet BPW ISO hvis anrikningsbuljongs volum er > 300 ml (f.eks. hvis prøven er > 30 gram).
Spesifikke veiledninger for validerte metoder
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) sertifikat #101703

Studier ved AOAC Research Institute OMASM og PTMSM viste at Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobactervar en
effektiv metode for å påvise Cronobacter. Matrisene som ble testet i studien er vist i tabell 3.

5NO(Norsk)Tabell 3. Anrikningsprotokoller i henhold til AOAC® OMASM 2018.01 og PTMSM 101703
AnrikningsVolum anrikningsAnrikningstid Prøveanalysetemperatur
1
buljong(timer)volum(± 1 °C)

Prøvematrise

Prøvestørrelse

Pulverisert morsmelkerstatningog pulverisert kornblanding forbabyer

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Pulverisert morsmelkerstatning,ikke-probiotisk

300 g

2700 mL BPW(ISO) (1:10)

Forvarmet
37

18–24

20 µl

Pulverisert morsmelkerstatningog pulverisert kornblanding forbabyer med probiotika

300 g

2700 mL BPW(ISO) + 10 mg/l
vancomycin

Forvarmet
37

22-24

20 µl

Laktose

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

1 prøvetaker

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Miljøsvamp med 10 ml D/Enøytraliserende buljong

1. Bruk forvarmet BPW ISO hvis anrikningsbuljongs volum er > 300 ml.
NF VALIDATION av AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
For mer informasjon om utløp av validitet, henvises det til NF VALIDATION-sertifikat tilgjengelig på nettstedet nevnt
ovenfor.
NF VALIDATION sertifisert metode i henhold til ISO 16140-2(9) sammenlignet med ISO 22964.
Omfang av godkjenningen: Pulverisert morsmelkerstatning og pulverisert kornblanding for babyer uten probiotika,råmaterialer og miljøprøver.
Prøveklargjøring: Prøver skal klargjøres i henhold til EN ISO 22694(2) og EN ISO 6887(7, 8).
Programvareversjon: Se sertifikat.

6

NO(Norsk)Tabell 4. Anrikningsprotokoller i henhold til NF VALIDATION sertifisert metode 3M 01/20-03/18
Prøvematrise
•
•
•

•

•

Pulverisert
morsmelkerstatning
Pulverisert
kornblanding forbabyerIngredienser som
for eksempel
tørrmelkpulver,
soyapulver,
mysepulver,
laktose, rismel og
maltodekstrin
Tørre miljøprøver
som støv,
feiing, vakuuminnsamling,

Svamp, skyllevann,vaskeservietter

Pulverisert
morsmelkerstatningog pulverisert
kornblanding for babyer(ikke-probiotisk)
Pulverisert
kornblanding forbabyer og pulverisert
morsmelkerstatning(inkludert probiotika)

Prøvestørrelse

Volum
Anriknings- AnrikningPrøveanalyseAnbefalt
anriknings- temperatur
stid
2, 3
volum
avbruddspunkt
buljong1(± 1 °C)(timmer)

10 g
90 mL BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Anrikningsbuljongen eller prøvelyseringen kan
oppbevares ved
2–8 °C i opptil 72
timer

1 prøvetakereller 10 ml

Anrikningsbuljongen eller prøvelyseringen kan
oppbevares ved
2–8 °C i opptil 72
timer

30-300 g

BPW ISO(1:10)

37

18–24

20 µl

Anrikningsbuljongen eller prøvelyseringen kan
oppbevares ved
2–8 °C i opptil 72
timer

30-300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/l
vancomycin(1:10)

37

22-24

20 µl

Ingen

1. Bruk forvarmet BPW ISO hvis anrikningsbuljongs volum er > 300 ml (f.eks. hvis prøven er > 30 gram).
2. Etter at anrikningsbuljongen tas ut fra oppbevaring, gjenopptas testingen fra trinn 1 i delen Lysering. Etter at
prøvelyseringen tas ut fra oppbevaring, gjenopptas testingen fra trinn 7 i delen Lysering.
3. Se i vedlegg A for ny testing av varmebehandlede lysate.
Klargjøring av Neogen® Brett til hurtiglading for molekylær deteksjon
1. Væt en klut med 1–5 % (volumandel i vann) husholdningsblekemiddel og tørk av Neogen Brett til hurtiglading formolekylær deteksjon.
2. Skyll Neogen Brett til hurtiglading for molekylær deteksjon med vann.
3. Bruk en engangsklut til å tørke Neogen Brett til hurtiglading for molekylær deteksjon.
4. Sørg for at Neogen Brett til hurtiglading for molekylær deteksjon er tørt før bruk.
Klargjøring av Neogen® Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon
Plasser Neogen Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon direkte på laboratoriebenken: Neogen Brett til kjøleblokk formolekylær deteksjon er ubrukt. Bruk kjøleblokken ved laboratoriets romtemperatur (20–25 °C).

7

NO

(Norsk)Klargjøring av Neogen® Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon
Plasser Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon i en tørr, dobbelblokkvarmeenhet. Slå på den tørre
blokkvarmeenheten og still inn temperaturen slik at Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon når og
opprettholder en temperatur på 100 ±1 °C.
MERK: Avhengig av varmeenheten, skal Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon bruke omtrent 30
minutter på å nå temperaturen. Bruk et passende, kalibrert termometer (f.eks. et delvis nedsenket termometer eller etdigitalt termoelement-termometer, ikke et helt nedsenket termometer) plassert på angitt sted og verifiser at Neogen
Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon er ved 100 ±1 °C.
Klargjøring av Neogen® Instrument for molekylær deteksjon
1. Start programvaren Neogen® molekylær deteksjon og logg inn. Kontakt Neogen Food Safety-representanten for å få
bekreftet at du har den nyeste versjonen av programvaren.
2. Slå på Neogen Instrument for molekylær deteksjon.
3. Opprett eller endre en gjennomkjøring med data for hver prøve. Se brukermanualen for Neogen System formolekylær deteksjon for mer informasjon.
MERK: Neogen Instrument for molekylær deteksjon må nå klar tilstand før innsetting av Neogen Brett til hurtiglading formolekylær deteksjon med reagensrør. Dette varmetrinnet tar omtrent 20 minutter og indikeres av et ORANSJE lys på
instrumentets statuslinje. Når instrumentet er klart for å starte en gjennomkjøring, vil statuslinjen lyse GRØNT.
Lysering
Fjerne bunnen av stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør med en skrutrekker før du plasserer den i Neogen
Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon.

1. La Neogen lyseringsoppløsningsrørene varmes opp ved å sette stativet i omgivelsestemperatur (20–25 °C) over natten (16–18 timer). Alternativer til å stabilisere Neogen lyseringsoppløsningsrørene til
omgivelsestemperatur er å sette Neogen lyseringsoppløsningsrørene på laboratoriebenken i minst 2 timer,
inkubere Neogen lyseringsoppløsningsrørene i en inkubator ved 37 ± 1 °C i 1 time, eller plassere dem i en tørr
dobbelblokkvarmeenhet i 30 sekunder ved 100 ± 1 °C.
2. Vend rørene med hetten på for å blande. Fortsett til neste trinn innen 4 timer etter invertering.
3. Fjern anrikningsbuljongen fra inkubatoren.
4. Ett Neogen lyseringsoppløsningsrør kreves for hver prøve og NC-prøve (sterilt anrikningsmedium).
4.1 Rekker med Neogen lyseringsoppløsningsrør kan klippes til ønsket antall rør. Velg det nødvendige antalletenkeltstående Neogen lyseringsoppløsningsrør eller rekker med 8 rør. Plasser Neogen lyseringsoppløsningsrørene i
et tomt stativ.
4.2 For å unngå krysskontaminering skal kun én rekke med Neogen lyseringsoppløsningsrør åpnes om gangen og enny pipettespiss brukes for hvert overføringstrinn.
4.3 Overfør anriket prøve til Neogen lyseringsoppløsningsrørene som beskrevet under:
Overfør hver anrikede prøve til enkeltstående Neogen lyseringsoppløsningsrør først. Overfør NC-prøven til sist.
4.4 Bruk Neogen® Verktøy for lukking/åpning av lyseringsrør for molekylær deteksjon for å åpne én rekke med
Neogen lyseringsoppløsningsrør – én rekke om gangen.
4.5 Kast lokket på Neogen lyseringsoppløsningsrøret – dersom lysatet skal oppbevares for ny test, plasseres
lokkene i en ren beholder for å sette dem på igjen etter lysering.
4.5.1. Se vedlegg A for prosessering av tilbakeholdt lysat.

8

NO(Norsk)4.6 Agiter anrikningsposen før du samler prøven fra den filtrerte siden når du arbeider med viskøse prøver.
4.7 Overfør 20 µl med prøve til et Neogen lyseringsoppløsningsrør, med mindre noe annet er indikert i protokolltabellen.
5. Gjenta trinn 4.4 til 4.7 til alle individuelle prøver er lagt til et korresponderende Neogen lyseringsoppløsningsrør irekken.

6. Når alle prøvene er overført, overføres 20 µl av NC (sterilt anrikningsmedium, f.eks. BPW) inn i et Neogen
lyseringsoppløsningsrør. Ikke bruk vann som NC.
7. Verifiser at Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon har en temperatur på 100 ±1 °C.
8. Plasser det utildekkede stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør i Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær
deteksjon og varm opp i 15 ± 1 minutter. Under oppvarmingen vil Neogen lyseringsoppløsningen endre farge fra rosa
(kald) til gul (varm).
Prøver som ikke har blitt ordentlig varmebehandlet under testlyseringstrinnet kan vurderes som en potensiell
biologisk fare og skal IKKE settes inn i Neogen Instrument for molekylær deteksjon.
9. Fjern det utildekkede stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør fra Neogen varmeblokken for molekylær
deteksjon og la det avkjøles i Neogen Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon i minst 5 minutter og
maksimum 10 minutter. Når Neogen Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon, som brukes deteksjon bruke
ved romtemperatur uten Neogen® Brett til kjøleblokk for molekylær deteksjon, skal det plasseres direkte pålaboratoriebenken. Når den er avkjølt, vil Neogen lyseringsoppløsningen endre farge tilbake til rosa.
10. Fjern stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør fra Neogen Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplifikasjon
1. Ett reagensrør for Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter kreves for hver prøve og for NC.
1.1 Rekker med rør kan klippes til ønsket antall rør. Velg det nødvendige antallet enkeltstående reagensrør ellerrekker med 8 rør for Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter.
1.2 Plasser reagensrør for Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter i et tomt stativ.
1.3 Unngå å forstyrre reagenspelletene i bunnen av rørene.
2. Velg ett Neogen Reagenskontroll-rør og plasser det i stativet.
3. For å unngå krysskontaminering, ta av lokket på én Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter rørrekke omgangen og bruk ny pipette ved hver prøveoverføring.
4. Overfør hvert lysat til reagensrør for Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter og et Neogen
Reagenskontroll-rør som beskrevet nedenfor:
Overfør hvert prøvelysat til individuelle Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter-reagensrør SR-rør først
etterfulgt av NC. Hydrer Neogen Reagenskontroll-røret til sist.

9

NO(Norsk)5. Bruk Neogen® Verktøy for lukking/åpning av reagensrør for molekylær deteksjon for å åpne én rekke med reagensrør
for Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter – én rekke om gangen. Kast lokket.
5.1 Overfør 20 µl av prøvelysatet fra den øverste halvdelen av væsken (unngå presipitat) i Neogen
lyseringsoppløsningsrøret til det korresponderende reagensrøret for Neogen Molekulær deteksjonskit 2 Cronobacter. Hold i vinkel under overføring for å unngå å forstyrre pelletene. Bland ved å bevege pipetten
forsiktig opp og ned 5 ganger.
5.2 Gjenta trinn 5.1 til individuelt prøvelysat har blitt lagt til i et korresponderende reagensrør for Neogen Molekylær
deteksjonskit 2 - Cronobacter i rekken.
5.3 Tildekk reagensrørene for Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter med de medfølgende ekstra
lokkene, og bruk den avrundede siden av Neogen Verktøy for lukking/åpning av reagensrør for molekylær
deteksjon til å presse i en fram-og-tilbake-bevegelse slik at lokket festes godt.
5.4 Gjenta trinn 5.1 til 5.3 som nødvendig, for det antall valgte prøver som skal testes.
5.5 Når alt prøvelysatet er overført, gjentas trinn 5.1 til 5.3 for å overføre 20 ml med NC-lysat inn i et reagensrør for
Neogen Molekulær deteksjonskit 2 - Cronobacter.
5.6 Overfør 20 µl med NC-lysat inn i et Neogen Reagenskontroll-rør. Hold i vinkel under overføring for å unngå å
forstyrre pelletene. Bland ved å bevege pipetten forsiktig opp og ned 5 ganger.
6. Sett lukkede rør over i et rent og dekontaminert Neogen Brett til hurtiglading for molekylær deteksjon. Lukk og lås
lokket til Neogen Brett til hurtiglading for molekylær deteksjon.

7. Se igjennom og bekreft den konfigurerte gjennomkjøringen i programvaren for Neogen Molekylær deteksjon.
8. Klikk på startknappen i programvaren og velg instrumentet som skal brukes. Det valgte instrumentets lokk åpnes
automatisk.
9. Plasser Neogen Brett til hurtiglading for molekylær deteksjon inn i Neogen Instrument for molekylær deteksjon
og lukk lokket for å starte testen. Resultatene er klare innen 60 minutter, mens positive resultat kan bli oppdagetraskere.
10. Etter at testen er fullført, fjern Neogen Brett til hurtiglading for molekylær deteksjon fra Neogen Instrument
for molekylær deteksjon og kvitt deg med rørene ved å senke dem i en 1–5 % (volumandel i vann)husholdningsblekemiddel i 1 time og borte fra testens forberedelsesområde.
MERKNAD: For å minimere risikoen for falske positive resultater på grunn av krysskontaminering skal aldri reagensrør
som inneholder amplifisert DNA, åpnes. Dette inkluderer reagensrør for Neogen Molekulær deteksjonskit 2 Cronobacter, Neogen Reagenskontroll-rør og Neogen matrisekontrollrør. Kvitt deg alltid med de forseglede rørene ved åsenke dem i et 1–5 % (volumandel i vann) husholdningsblekemiddel i 1 time og borte fra testens forberedelsesområde.

Resultater og tolkning

En algoritme tolker lyseffektskurven som er resultatet av deteksjonen av nukleinsyre-amplifikasjon. Resultatene
analyseres automatisk av programvaren og er fargekodet basert på resultatet. Et positivt eller negativt resultat fastslås
av analysen av flere unike kurveparametere. Antatt positive resultater rapporteres i sanntid, mens negative og «Inspect»(inspiser)-resultater vil vises etter at gjennomkjøringen er fullført.
MERK: Ikke engang en negativ prøve vil gi et null-resultat ettersom systemet og amplifikasjonsreagensene til Neogen
Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter har en «bakgrunns»-, relativ lysenhet (RLU).
Bekreftelse• Bekreftelse av resultatene i henhold til NF Validation sertifisert metode

10

NO

(Norsk)I forbindelse med NF VALIDATION må alle antatte positive anrikninger bekreftes ved å følge referansemetode forbekreftelse(2), som begynner med overføring fra den primære anrikningen (BPW ISO elle BPW ISO supplert med 10 mg/l
av vancomycin).
•

Annen bekreftelsesprotokoll

Antatte positive anrikninger må bekreftes i henhold til laboratoriets standard operasjonsprosedyrer eller ved å følge
den aktuelle referansemetoden for bekreftelse(1,2), som begynner med overføring fra den primære anrikningen (BPW
ISO elle BPW ISO supplert med 10 mg/l av vancomycin) til sekundære anrikningsmedia, etterfulgt av videre plating og
bekreftelse av isolater ved å bruke de riktige biokjemiske, serologiske og/eller molekylære metodene.
I et sjeldent tilfelle av eventuelle uvanlige lyseffekter, merker algoritmen dette som Inspect. Neogen anbefaler brukerenå gjenta testen for alle «Inspect»-prøver. Dersom resultatet fortsatt er «Inspect», fortsett til bekreftelsestesten og bruk
av din foretrukne metode eller som oppgitt av lokale forskrifter(1,2).
I tilfelle av forskjellige svar (antatt positiv med Neogen Molekylær deteksjonskit 2 - Cronobacter, ikke bekreftet av
én av metodene beskrevet ovenfor), må laboratoriet følge etablerte standard operasjonsprosedyrer for å rapportere
resultatene.
Hvis du har spørsmål om spesifikke bruksområder eller prosedyrer, besøk vårt nettsted på www.neogen.com eller
kontakt den lokale Neogen-representanten eller forhandleren.
Vedlegg A. Avbrytelse av protokoll: Oppbevaring og ny testing av varmebehandlede lysater
1. Lukk igjen lyseringsrøret med et rent lokk for å oppbevare et varmebehandlet lysat (se del 4.5 Lysering)
2. Oppbevar ved 2 til 8 °C i opptil 72 timer.
3. Bland en oppbevart prøve ved å vende den 2–3 ganger for å forberede den på amplifikasjon.
4. Åpne rørene.
5. Plasser de blandede lysatrørene på Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon og varm ved 100 ±1 °C i
5 ±1 minutter.
6. Fjern stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør fra varmeblokken og la det avkjøles i Neogen Kjøleblokkinnsats
for molekylær deteksjon i minst 5 minutter og maksimum 10 minutter.
7. Se delen Amplifikasjon beskrevet ovenfor for å fortsette protokollen.

Referanser:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Se gjeldende versjoner av standardmetodene oppført ovenfor.

Symbolforklaring

info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

FI(Suomenkielinen)
Julkaisuajankohta: 2024-01

Tuoteseloste
Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri
Tuotteen kuvaus ja käyttötarkoitus

Neogen® Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri on tarkoitettu käytettäväksi yhdessä Neogen®
Molekyläärisen testijärjestelmän kanssa Kronobakteeri-suvun bakteerien nopeaan ja täsmälliseen tunnistamiseenrikastetuista elintarvikenäytteistä ja elintarvikevalmistuksen ympäristönäytteistä.
Neogen Molekylääriset testipakkaukset perustuvat nukleiinihapposekvenssien nopeaan, täsmälliseen ja herkkään
silmukkavälitteiseen isotermiseen monistamismenetelmään (loop-mediated isothermal amplification, LAMP) ja käyttävät
monistuksen havaitsemiseen bioluminesenssia. Oletetut positiiviset tulokset ilmoitetaan reaaliaikaisesti, kun taas
negatiiviset tulokset näytetään testin valmistumisen jälkeen. Oletetut positiiviset tulokset on vahvistettava käyttämällä
itse parhaaksi katsottua tai paikallisten määräysten mukaista menetelmää(1, 2).
Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri on tarkoitettu laboratoriotekniikoihin koulutettujen
ammattilaisten käytettäväksi laboratorioympäristössä. Neogen ei ole osoittanut tuotetta käytettäväksi muilla kuin
elintarvike- ja
juomateollisuuden aloilla. Neogen ei esimerkiksi ole osoittanut tuotetta lääke- tai kosmetiikkanäytteiden testaamiseen eikä
kliinisten tai eläinlääketieteellisten näytteiden testaamiseen. Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri
ei ole arvioitu kaikkien mahdollisten elintarviketuotteiden, elintarvikeprosessien tai testauskäytäntöjen suhteen eikä
kaikkien mahdollisten bakteerikantojen suhteen.
Kuten kaikkien testausmenetelmien tapauksessa, rikastusalustan lähde, koostumus ja laatu voivat vaikuttaa
tuloksiin. Esimerkiksi näytteenottomenetelmät, testauskäytännöt, näytteiden valmistelu mukaan lukien homogenointi
ja sekoittaminen, käsittely ja laboratoriotekniikka saattavat myös vaikuttaa tuloksiin. Neogen suosittelee menetelmän
sekä rikastusalustan arviointia käyttäjän ympäristössä käyttäen riittävän suurta näytemäärää ja tiettyjä elintarvike- tai
ympäristönäytteitä ja mikrobisisältöjä sen varmistamiseksi, että menetelmät vastaavat käyttäjän vaatimuksia.
Neogen on arvioinut Neogen Molecular Detection -testipakkauksen 2 – Kronobakteeri käyttäen rikastusalustanapuskuroitua peptonivettä (ISO).
Neogen® Molekyläärinen testi-instrumentti on tarkoitettu käytettäväksi sellaisten näytteiden kanssa, jotka on
lämpökäsitelty testin lyysivaiheen aikana näytteessä olevien organismien tuhoamiseksi. Jos näytteitä ei ole
asianmukaisesti lämpökäsitelty testin lyysivaiheen aikana, ne saattavat muodostaa biologisen vaaratekijän, jolloin niitä EI
saa asettaa Neogen Molekylääriseen testi-instrumenttiin.
Neogen Food Safety -osaston suunnittelu- ja valmistusmenetelmät on ISO (International Organization forStandardization) 9001 -sertifioitu.
Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri sisältää 96 testiä, jotka on kuvattu taulukossa 1.
Taulukko 1. Neogen Molecular Detection -testipakkauksen osat
NimikeTunnusmerkki

Määrä

SisältöKommentit

Neogen® Lyysiliuos (LS)

Vaaleanpunainen
liuos läpinäkyvissä
putkissa

96 (12 kpl 8 putken
liuskoja)

580 μl lyysiliuosta/
putki

Telineessä jakäyttövalmis

Neogen® Molecular
Detection -testipakkaus
2 – Kronobakteeri-reagenssiputket

Oranssit/punaiset
putket96 (12 kpl 8 putken
liuskoja)

Lyofilisoitu spesifi
monistus- ja
tunnistusyhdistelmä

Käyttövalmis

Lisäsuojukset

Oranssit/punaiset
suojukset

96 (12 kpl 8 suojuksenliuskoja)

Neogen® Reagenssin
valvonta (RC)

16 (2 pussia, joissa
Läpinäkyvät flip-topkummassakin 8
putketyksittäistä putkea)

Käyttövalmis
Lyofilisoitu kontrolliDNA, monistus- ja
tunnistusyhdistelmä

Käyttövalmis

Negatiivinen kontrolli, jota ei toimiteta paketin mukana, on steriili rikastusaine, esim. BPW ISO. Älä käytä vettä
negatiivisena kontrollina.
1

FI(Suomenkielinen)

Turvallisuus

Käyttäjän on luettava ja ymmärrettävä kaikki Neogen Molekylääristä testijärjestelmää ja Neogen Molecular Detection-testipakkausta 2 – Kronobakteeri koskevat turvallisuusohjeet ja noudatettava niitä. Säilytä turvallisuusohjeet myöhempää
käyttöä varten.
VAROITUS:

Osoittaa vaarallisen tilanteen, joka saattaa johtaa kuolemaan tai vakavaan loukkaantumiseen ja/tai
omaisuusvahinkoon, jos tilannetta ei vältetä.

HUOMAUTUS: Osoittaa mahdollisesti vaarallisen tilanteen, joka saattaa johtaa aineelliseen vahinkoon, jos tilannetta
ei vältetä.

W VAROITUSÄlä käytä Neogen Molecular Detection -testipakkausta 2 – Kronobakteeri ihmisten tai eläinten diagnosointiin.
Käyttäjän on järjestettävä henkilökunnalleen koulutusta ajantasaisista ja asianmukaisista testausmenetelmistä,
esimerkiksi Good Laboratory Practices(3), ISO/IEC 17025(4) tai ISO 7218(5).
Väärien negatiivisten tulosten vuoksi markkinoille voi päästä kontaminoituneita tuotteita. Voit vähentää tähän liittyvä
riskejä toimimalla seuraavasti:• Noudata käytäntöä ja tee testit täsmälleen tuoteselosteessa esitetyllä tavalla.
• Säilytä Neogen Molecular Detection -testipakkausta 2 – Kronobakteeri pakkausmerkintöjen ja tuoteselosteen mukaan.
• Käytä Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri aina ennen viimeistä käyttöpäivää.
• – Käytä Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri elintarvikenäytteille ja
elintarvikevalmistuksen ympäristönäytteille, jotka on hyväksytty sisäisesti tai kolmannen osapuolen toimesta.
• Käytä Neogen Molecular Detection -testipakkausta 2 – Kronobakteeri vain sellaisten pintojen, puhdistusaineiden,
käytäntöjen ja bakteerikantojen kanssa, jotka on hyväksytty sisäisesti tai kolmannen osapuolen toimesta.
• Laimenna ympäristönäytteet, joissa käytetään aryylisulfonaattikompleksia sisältävää neutraloivaa puskuria,
suhteessa 1:2 ennen testausta (1 osa näytettä 1 osaan steriiliä rikastusliuosta). Toinen vaihtoehto on siirtää 10 μl
neutraloivaa puskuririkastusliuosta Neogen-lyysiliuosputkiin. Neogen®-näytteiden käsittelytuotteet, jotka sisältävät
aryylisulfonaattikompleksia sisältävää neutraloivaa puskuria, ovat seuraavat: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB,
SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G ja HS2410NB2G. Tätä käytäntöä ei ole testattu NF Validation -tutkimuksessa.
Vähennä kemikaaleille altistumiseen ja biologisiin vaaratekijöihin liittyviä riskejä noudattamalla seuraavia ohjeita:• Testaa taudinaiheuttajat asianmukaisesti varustetussa laboratoriossa koulutetun henkilöstön valvonnassa. Inkuboitu
rikastusaine ja laitteet tai pinnat, jotka ovat joutuneet kosketuksiin inkuboidun rikastusaineen kanssa, saattavat
sisältää taudinaiheuttajia määrän, joka riittää aiheuttamaan vaaran ihmisten terveydelle.
• Noudata aina laboratorioiden vakioturvallisuuskäytäntöjä, joihin kuuluu asianmukaisten suojavaatteiden ja
silmäsuojainten käyttäminen reagensseja ja kontaminoituja näytteitä käsiteltäessä.
• Vältä kosketusta rikastusalustan ja reagenssiputkien sisällön kanssa monistuksen jälkeen.
• Hävitä rikastetut näytteet ja niihin liittyvä jäte voimassa olevien paikallisten, alueellisten tai kansallisten
määräysten mukaisesti.
• Älä ylitä lämmityslaitteeseen merkittyä suositeltua lämpötila-asetusta.
• Älä ylitä suositeltua kuumennusaikaa.
• Tarkasta Neogen® Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämpötila tarkoituksenmukaisella kalibroidulla
lämpömittarilla (esim. osittain upotettavalla lämpömittarilla tai digitaalisella termoparimittarilla, ei kokonaan
upotettavalla lämpömittarilla). Lämpömittari on asetettava sille määrättyyn paikkaan Neogen Molekyläärisen
testilämpölohkon pistokkeessa.
Vähennä ristikontaminaatioon liittyviä riskejä testin valmistelun yhteydessä toimimalla seuraavasti:• Käytä aina suojakäsineitä (käyttäjän suojaamiseksi ja nukleaasien siirtymisen estämiseksi).
Jotta voit vähentää kuumille nesteille altistumisesta aiheutuvia riskejä, noudata seuraavia ohjeita:• Älä ylitä lämmityslaitteeseen merkittyä suositeltua lämpötila-asetusta.
• Älä ylitä suositeltua kuumennusaikaa.
• Tarkasta Neogen® Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämpötila tarkoituksenmukaisella kalibroidulla
lämpömittarilla (esim. osittain upotettavalla lämpömittarilla tai digitaalisella termoparimittarilla, ei kokonaan
upotettavalla lämpömittarilla). Lämpömittari on asetettava sille määrättyyn paikkaan Neogen Molekyläärisen
testilämpölohkon pistokkeessa.

2

FI(Suomenkielinen)

HUOMAUTUS
Vähennä ristikontaminaatioon liittyviä riskejä testin valmistelun yhteydessä toimimalla seuraavasti:• Vaihda käsineet ennen reagenssipelletin kastelemista.
• Steriilien aerosoliesteen muodostavien molekyylibiologiaan soveltuvaa laatua olevien pipetinkärkien(suodatinkärkien) käyttö on suositeltavaa.
• Käytä jokaisen näytteen siirtämiseen uutta pipetinkärkeä.
• Käytä näytteiden siirtämiseen rikastamisesta lyysiputkeen hyviä laboratoriokäytäntöjä. Pipetoijan kontaminoitumisen
välttämiseksi käyttäjä voi halutessaan lisätä ylimääräisen siirtovaiheen. Jokaisen rikastetun näytteen voi esimerkiksi
siirtää steriiliin putkeen.
• Jos mahdollista, käytä molekyylibiologista työasemaa, jossa on bakteerintuholamppu.
• Steriloi laboratorion työtasot ja välineet (pipetit, sulku- ja avaustyökalut jne.) säännöllisesti 1–5-prosenttisella(veteen laimennetulla) talouskäyttöisellä valkaisuaineliuoksella tai DNA:n poistoliuoksella.
Vähennä vääriin positiivisiin tuloksiin liittyviä riskejä toimimalla seuraavasti:• Älä avaa putkia monistuksen jälkeen.
• Hävitä kontaminoituneet putket aina liottamalla niitä 1–5-prosenttisessa (veteen laimennetussa)
valkaisuaineliuoksessa 1 tunnin ajan etäällä testin valmistelualueelta.
• Älä koskaan autoklavoi reagenssiputkia monistuksen jälkeen.
• Jos näytteiden epäillään sisältävän runsaasti Kronobakteeri-DNA:ta (esim. DNA:ta elinkelvottomista Kronobakteerisoluista inaktivointivaiheen jälkeen) oletetut positiiviset rikastetut näytteet on käsiteltävä DNaasilla ennen lyysivaihetta.
Pyydä tarvittaessa lisäohjeita Neogen-edustajalta. Tätä käytäntöä ei ole testattu NF Validation -tutkimuksessa.
Katso lisätietoja hävittämisestä ja paikallisista määräyksistä käyttöturvallisuustiedotteesta.
Jos sinulla on jotain tiettyä sovellusta tai menetelmää koskevia kysymyksiä, käy verkkosivuillamme osoitteessa
www.neogen.com tai ota yhteyttä paikalliseen Neogen-edustajaan tai -jälleenmyyjään.

Käyttäjän vastuu

Käyttäjän vastuulla on tutustua tuotteen käyttöohjeisiin ja tietoihin. Saat lisätietoja käymällä verkkosivustollamme
osoitteessa www.neogen.com tai ottamalla yhteyttä paikalliseen Neogen-tytäryhtiöön tai -jälleenmyyjään.
Testausmenetelmää valitessa on tärkeää ottaa huomioon, että ulkoiset tekijät, kuten näytteenottomenetelmät,
testauskäytännöt, näytteiden valmistus mukaan lukien homogenaatio ja sekoitus, käsittely ja laboratoriotekniikat voivat
vaikuttaa testaustuloksiin.
Käyttäjä on aina testausmenetelmää valitessaan vastuussa siitä, että hän arvioi riittävän määrän näytteitä kyseisistä
elintarvikkeista ja mikrobialtistuksista varmistamaan käyttäjän kriteerien täyttymisen.
Käyttäjän vastuulla on myös varmistaa, että testausmenetelmät ja tulokset täyttävät hänen asiakkaidensa tai
toimittajiensa vaatimukset.
Kuten kaikkien testausmenetelmien kohdalla, minkä tahansa Neogen Food Safety -tuotteen käytöstä saavutetut tulokset
eivät ole takuu matriisien tai testatuiden prosessien laadusta.
Voidakseen auttaa erilaisten matriisien arvioinnissa Neogen on kehittänyt Neogen® Molekyläärisen testitaulukon
valvontapakkauksen. Määritä tarvittaessa matriisinvalvontapakkauksen avulla, vaikuttaako matriisi Neogen Molecular
Detection -testipakkauksen 2 – Kronobakteeri tuloksiin. Testaa validointivaiheiden aikana useita matriisia edustavia
näytteitä, ts. eri lähteistä saatuja näytteitä, kun olet ottamassa käyttöön Neogen-menetelmää tai kun olet testaamassa
uusia tai tuntemattomia matriiseja tai matriiseja, joiden raaka-aineita tai valmistustapoja on muutettu.
Matriisi voidaan määrittää tuotetyypiksi, jolla on sisäisiä ominaisuuksia, kuten koostumus ja valmistustapa. Matriisienväliset erot voivat johtua niinkin yksinkertaisista tekijöistä kuin eroista niiden käsittelyssä tai esittämistavassa, esim. raaka
tai pastöroitu, tuore tai kuivattu.

Takuiden rajoitukset / Rajoitettu korvaus

NEOGEN KIISTÄÄ KAIKKI NIMENOMAISET JA EPÄSUORAT TAKUUT MUKAAN LUKIEN KAIKKI TAKUUTKÄYPYYDESTÄ TAI SOPIVUUDESTA TIETTYYN KÄYTTÖTARKOITUKSEEN, PAITSI JOS TUOTEPAKKAUKSENTAKUUOSIOSSA TOISIN MAINITAAN. Jos mikä tahansa Neogen Food Safety -tuote on viallinen, Neogen tai sen
valtuutettu jälleenmyyjä joko korvaa tuotteen tai palauttaa sen ostohinnan. Nämä ovat ainoat myönnetyt korvaukset.
Ota yhteyttä Neogen-edustajaasi tai valtuutettuun Neogen-jälleenmyyjään, jos sinulla on kysyttävää.

3

FI(Suomenkielinen)

Neogen:n vastuun rajoitukset

NEOGEN EI OLE VASTUUSSA MENETYKSISTÄ TAI VAHINGOISTA, OLIVAT NE SITTEN SUORIA, EPÄSUORIA,
ERITYISLAATUISIA, SATUNNAISIA TAI VÄLILLISIÄ, MUKAAN LUKIEN VOITONMENETYKSET. Missään tapauksessa
Neogen:n vastuu ei minkään laillisen perusteen mukaan ole suurempi kuin vialliseksi väitetyn tuotteen hinta.

Säilytys ja hävittäminen

Säilytä Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri 2–8 °C:n lämpötilassa. Suojattava jäätymiseltä.
Säilytä paketti valolta suojattuna. Kun olet avannut paketin, tarkista, että foliopussi on ehjä. Ei saa käyttää, jos pussi on
vahingoittunut. Avaamisen jälkeen käyttämättömät reagenssiputket on aina säilytettävä uudelleensuljettavassa pussissa,
jonka sisällä on kuivausainetta lyofilisoitujen reagenssien stabiliteetin ylläpitämiseksi. Säilytä uudelleensuljettuja pusseja
2–8 °C:n lämpötilassa enintään 60 päivän ajan.
Älä käytä Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri viimeisen käyttöpäivän jälkeen. Viimeinen
käyttöpäivä ja eränumero on merkitty pakkauksen ulkopuolelle. Käytön jälkeen rikastusaine ja Neogen Molecular
Detection -testipakkauksen 2 – Kronobakteeri putket voivat sisältää mahdollisesti patogeenisia aineita. Kun testi on
suoritettu loppuun, noudata saastuneen jätteen hävittämisessä alan nykykäytäntöjä. Katso lisätietoja hävittämisestä japaikallisista määräyksistä käyttöturvallisuustiedotteesta.

Käyttöohjeet

Noudata huolellisesti kaikkia ohjeita. Jos ohjeita ei noudateta, tulokset saattavat olla epätarkkoja.
Steriloi laboratorion työtasot ja välineet (pipetit, sulku- ja avaustyökalut jne.) säännöllisesti 1–5-prosenttisella(veteen laimennetulla) talouskäyttöisellä valkaisuaineliuoksella tai DNA:n poistoliuoksella.
Käyttäjän on suoritettava Neogen Molekyläärisen testijärjestelmän käyttäjäkoulutus, kuten asiakirjassa ”Installation
Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen Molecular Detection System”(6)kuvataan.
Katso erityisvaatimukset kohdasta Erikoisohjeet validoituja menetelmiä varten.
Taulukko 3 sisältää rikastusmenetelmät seuraavien mukaisesti: AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 ja
Performance TestedSM -sertifikaatti #101703
Taulukko 4 sisältää NF VALIDATION -sertifikaatin Neogen 01/20–03/18 mukaisen rikastuskäytännön
Näytteen rikastaminen
Taulukoissa 2, 3 tai 4 on nykyiset rikastuskäytäntöjen ohjeet elintarvike- ja ympäristönäytteille.
Käyttäjän vastuulla on vahvistaa vaihtoehtoisten näytteenotto- tai rikastuskäytäntöjen ja laimennussuhteiden soveltuvuus
sen varmistamiseksi, että testimenetelmä vastaa käyttäjän kriteereitä.
Elintarvikkeet, ympäristön jauhenäytteet, pölynäytteet, pyyhkäisynäytteet ja sienellä otetut näytteet
1. Anna rikastusaineen lämpötilan tasaantua huoneenlämpöön (20–25 °C), ellei rikastuskäytännössä toisin mainita(katso taulukko 2, 3 tai 4).
2. Yhdistä rikastusalusta ja näyte aseptisesti ja homogenoi sekoittamalla, vatsasekoituksella, sekoitusalustalla tai
käsin sekoittamalla 2 ± 0,2 minuuttia tai kunnes kaikki kiinteät palat ovat täysin liuenneet ja rikastusliuos on
homogenoitu(7, 8).
a.

Esimerkiksi näytteiden valmistelu mukaan lukien homogenointi ja sekoittaminen, käsittely ja laboratoriotekniikka
saattavat vaikuttaa tuloksiin.

b. Erittäin hiukkaspitoisten näytteiden yhteydessä suositellaan käyttämään suodatinpusseja.
c.

Vedessä paisuville ja erittäin viskoosit matriisit (esim. viljat, tärkkelykset) suositellaan lisälaimennusta (> 1:10),
kunnes viskositeetti on vähentynyt riittävästi, tai steriilin 1 % (w/v) alfa-amylaasin lisäämistä puskuroituun
peptoniveteen (ISO)(8).

d. Suurten viljanäytekokojen tapauksessa lisää jauhettu vilja hitaasti nesteeseen jatkuvasti sekoittaen, jotta rykelmiä
ei muodostuisi.
3. Inkuboi noudattamalla asianmukaista käytäntötaulukkoa (katso taulukko 2, 3 tai 4).

4FI(Suomenkielinen)

Taulukko 2. Yleiset rikastuskäytännöt
Näytematriisi

Näytteenkoko1

Rikastusliemen Rikastuslämpötila Rikastusaika Näyteanalyysintilavuus1, 2(± 1 °C)(h)laajuusJauhemainen äidinmaidonkorvike
ja raaka-aineet, kuten
1X gramman
maitojauhe, soijajauho,
näyte
herajauhe, laktoosi, riisijauho ja
maltodekstriini

9X ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Raakamateriaalit, kuten suolat,
mineraalit, aminohapot, DHA(dokosaheksaeenihappo) ja
vitamiinit

1X grammannäyte

99X ml BPW(ISO) (1:100)

37

18–24

20 µl

Kuivat ympäristönäytteet, kuten
pöly, pyyhkäisynäytteet ja
alipainenäytteet

1X grammannäyte

9X ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Ympäristönäyte sienessä, jossa
on 10 ml Letheen-lientä tai
neutraloivaa D/E-lientä

1
näytteenotin

90 ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

1. Neogen on arvioinut Neogen Molecular Detection -testipakkauksen 2 – Kronobakteeri käyttäen taulukon 2
laimennussuhteita 300 grammaan saakka. Käyttäjän vastuulla on vahvistaa vaihtoehtoisten laimennussuhteiden tai
käytäntöjen soveltuvuus sen varmistamiseksi, että menetelmä vastaa käyttäjän kriteereitä.
2. Käytä esilämmitettyä BPW ISO -ainetta, mikäli rikastusliemen tilavuus on > 300 ml (esim. näyte on > 30 grammaa).
Erikoisohjeet validoituja menetelmiä varten
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certificate #101703

Tutkimuslaitos AOAC:n OMASM- ja PTMSM-ohjelmissa Neogen Molekulaarinen testisetti 2 – Kronobakteeri todettiin
tehokkaaksi kronobakteerin havaitsemismenetelmäksi. Tutkimuksessa testatut matriisit näkyvät taulukossa 3.

5FI(Suomenkielinen)

Taulukko 3. Rikastuskäytännöt AOAC® OMASM 2018.01:n ja PTMSM 101703:n mukaan
Näytteenkoko

Näytematriisi

Rikastusliemen Rikastuslämpötila Rikastusaika Näyteanalyysintilavuus1(± 1 °C)(h)laajuusJauhemainenäidinmaidonkorvike jajauhemainen vauvojen puuro

10 g

90 ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Jauhemainen vauvojen puuro, ei
probiootteja

300 g

2700 ml BPW(ISO) (1:10)

Esilämmitetty 37

18–24

20 µl

Jauhemainenäidinmaidonkorvike jajauhemainen vauvojen puuro
probiooteilla

300 g

2700 ml BPW(ISO) + 10 mg/l
vankomysiini

Esilämmitetty 37

22–24

20 µl

Laktoosi

10 g

90 ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

1
näytteenotin

90 ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Ympäristönäyte sienessä, jossa
on 10 ml neutraloivaa D/E-lientä

1. Käytä esilämmitettyä BPW (ISO) -ainetta, mikäli rikastusliemen tilavuus on > 300 ml.
AFNOR Certificationin myöntämä NF VALIDATION -sertifikaatti

3M 01/20–03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Lisätietoja validointiajan päättymisestä on NF VALIDATION -sertifikaatissa, joka on saatavissa edellä mainitusta
verkkosivustosta.
NF VALIDATION -sertifioitu ISO 16140-2(9) -standardin mukainen menetelmä verrattuna ISO 22964 -standardiin.
Validoinnin soveltamisala: Jauhemainen äidinmaidonkorvike ja vauvan puurot probiooteilla ja ilman, raakamateriaalit ja
ympäristönäytteet.
Näytteiden valmistaminen: Näytteiden valmistamisessa on noudatettava standardeja EN ISO 22694(2) ja EN ISO 6887(7, 8).
Ohjelmistoversio: Katso sertifikaatista.

6

FI(Suomenkielinen)

Taulukko 4. NF VALIDATION -sertifioidun 3M 01/20–03/18 -menetelmän mukaiset rikastusmenetelmät
Näytematriisi
•
•
•

•

•

Jauhemainenäidinmaidonkorvike
Jauhemainen vauvojen
puuro
Raaka-aineet,kuten maitojauhe,soijajauho, herajauhe,laktoosi, riisijauho,
maltodekstriini.
Kuivatympäristönäytteet,kuten pöly,
pyyhkäisynäytteet ja
alipainenäytteet.

Sieni, huuhteluvesi,
pyyhkeet

Jauhemainenäidinmaidonkorvike jajauhemainen vauvojen
puuro (ei probiootteja)
Jauhemainen vauvojen
puuro ja jauhemainenäidinmaidonkorvike(probiooteilla)

Näytteenkoko

Rikastusliemen
tilavuus1

RikasRikastuslämpötila tusaika(± 1 °C)(tuntia)

Näyteanalyysin
Suositeltu
laajuuskeskeytyspiste2, 3

10 g
90 ml BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Rikastuslientä tai
näytelysaattia
voidaan säilyttää
2–8 °C:ssa
enintään
72 tuntia

1
näytteenotintai 10 ml

Rikastuslientä tai
näytelysaattia
voidaan säilyttää
2–8 °C:ssa
enintään
72 tuntia

30–300 g

BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Rikastuslientä tai
näytelysaattia
voidaan säilyttää
2–8 °C:ssa
enintään
72 tuntia

30–300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/l
vankomysiini(1:10)

37

22–24

20 µl

Ei mitään

1. Käytä esilämmitettyä BPW ISO -ainetta, mikäli rikastusliemen tilavuus on > 300 ml (esim. näyte on > 30 grammaa).
2. Kun rikastusliemi on ollut säilöttynä ja otetaan käyttöön, aloita testaus uudelleen Lyysi-osion vaiheesta 1. Kun
näytelysaatti on ollut varastoituna ja otetaan käyttöön, jatka testausta Lyysi-osion vaiheesta 7.
3. Lisätietoja säilytettyjen, lämpökäsiteltyjen lysaattien uudelleentestaamisesta on liitteessä A.
Neogen® Molekyläärisen testinopeuden latausalustan valmistelu
1. Kostuta liina tai kertakäyttöinen liina 1–5-prosenttisella (veteen laimennetulla) talouskäyttöisellä valkaisuliuoksella ja
pyyhi Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta.
2. Huuhtele Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta vedellä.
3. Pyyhi Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta kuivaksi kertakäyttöisellä liinalla.
4. Varmista ennen käyttöä, että Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta on kuiva.
Neogen® Molekyläärisen testijäähdytyslohkon pistokkeen valmistelu
Aseta Neogen Molekyläärisen testijäähdytyslohkon pistoke suoraan laboratorion työtasolle: Neogen Molekyläärisen
testijäähdytyslohkon alustaa ei käytetä. Käytä lohkoa laboratorion ilman lämpötilassa (20–25 °C).
Neogen® Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen valmistelu
Aseta Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistoke kaksilohkoiseen kuivalämmityslaitteeseen. Kytke kuivalohkolämmitin
päälle, aseta lämpötila ja anna Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämmetä 100 ±1 °C:n lämpötilaan niin,
että saavutettu lämpötila pysyy samana.

7

FI(Suomenkielinen)

HUOMAA: Anna Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämmetä asetuslämpötilaan noin 30 minuuttia
lämmityslaitteen mukaan. Varmista tarkoituksenmukaisen kalibroidun lämpömittarin avulla (esim. osittain upotettava
lämpömittari tai digitaalinen termoparimittari, ei kokonaan upotettava lämpömittari), joka on asetettu sille määrättyyn
paikkaan, että Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämpötila on 100 ±1 °C.
Neogen® Molekyläärisen testi-instrumentin valmistelu
1. Käynnistä Neogen® Molekyläärisen testijärjestelmän ohjelmisto ja kirjaudu sisään. Varmista Neogen Food Safety-edustajaltasi, että käytössäsi on ohjelmiston uusin versio.
2. Kytke Neogen Molekyläärinen testi-instrumentti päälle.
3. Luo tai muokkaa ajo kunkin näytteen tiedoille. Katso tarkemmat tiedot Neogen Molekyläärisen testijärjestelmän
käyttöoppaasta.
HUOMAA: Neogen Molekyläärisen testi-instrumentin on saavutettava Valmis-tila ennen Neogen Molekyläärisen
testinopeuden latausalustan ja reaktioputkien asettamista laitteeseen. Lämmitysvaihe kestää noin 20 minuuttia,
ja sen merkiksi instrumentin tilarivillä palava oranssi valo. Kun instrumentti on valmis ajon käynnistämistä varten,tilarivin valo muuttuu VIHREÄKSI.
Lyysi
Poista Neogen Lyysiliuostelineen pohja ruuvimeisselillä ennen kuin asetat sen Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon
pistokkeeseen.

1. Anna Neogen Lyysiliuosputkien lämmetä jättämällä teline huoneenlämpöön (20–25 °C) yön yli (16–18 tunnin
ajaksi). Neogen Lyysiliuosputket voi lämmittää huoneenlämpöön myös asettamalla ne laboratorion työtasolle
vähintään 2 tunniksi, inkuboimalla Neogen Lyysiliuosputkia inkubaattorissa 37 ±1 °C:ssa 1 tunnin ajan tai asettamalla
Neogen Lyysiliuosputket kaksilohkoiseen kuivalämmittimeen 100 ± 1 °C:n lämpötilaan 30 sekunniksi.
2. Sekoita suljetut putket kääntämällä ne ylösalaisin. Siirry seuraavaan vaiheeseen 4 tunnin kuluessa kääntämisestä.
3. Poista rikastusliemi inkubaattorista.
4. Jokaiselle näytteelle ja negatiiviselle kontrollinäytteelle (steriili rikastusaine) tarvitaan yksi Neogen Lyysiliuosputki.
4.1 Neogen Lyysiliuos-putkiliuskat voidaan leikata haluttuun määrään. Valitse tarvittava yksittäisten
Neogen Lyysiliuosputkien tai 8 putken liuskojen määrä. Aseta Neogen Lyysiliuosputket tyhjään telineeseen.
4.2 Ristikontaminaation välttämiseksi poista suojus yhdestä Neogen Lyysiliuosputkiliuskasta kerrallaan ja käytä
jokaiseen siirtovaiheeseen uutta pipettiä.
4.3 Siirrä rikastettu näyte Neogen Lyysiliuosputkiin seuraavien ohjeiden mukaisesti:
Siirrä jokainen rikastettu näyte ensin erilliseen Neogen Lyysiliuosputkeen. Siirrä negatiivinen kontrolli (NC)viimeiseksi.
4.4 Käytä Neogen® Molekyläärisen testin cap/decap-työkalua – Lysis yhden Neogen Lyysiliuosputkiliuskan
avaamiseen. Avaa yksi liuska kerrallaan.
4.5 Heitä Neogen Lyysiliuosputken suojus pois – jos lysaatti säilytetään uudelleentestausta varten, laita suojukset
puhtaaseen astiaan lyysin jälkeistä uudelleenkäyttöä varten.
4.5.1. Säilytetyn lysaatin käsittelyyn liittyvät ohjeet ovat liitteessä A.
4.6 Sekoita rikastuspussia ennen kuin keräät näytteen suodatetulta puolelta, kuntyöskentelevätviskoosisten
näytteiden kanssa.
4.7 Siirrä 20 µl näytettä Neogen Lyysiliuosputkeen, jollei näytteenottokäytäntötaulukossa muuta mainita.

8FI(Suomenkielinen)

5. Toista vaiheet 4.4–4.7, kunnes kukin yksittäinen näyte on lisätty vastaavaan Neogen Lyysiliuosputkeen liuskassa.

6. Kun kaikki näytteet on siirretty, siirrä 20 µl negatiivista kontrollia (steriiliä rikastusainetta, esim. puskuroitua
peptonivettä, BPW) Neogen Lyysiliuosputkeen. Älä käytä vettä negatiivisena kontrollina.
7. Varmista, että Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämpötila on 100 ±1 °C.
8. Aseta peittämätön Neogen Lyysiliuosputkiteline Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeeseen ja
kuumenna 15 ±1 minuuttia. Kuumennuksen aikana Neogen Lyysiliuoksen väri muuttuu vaaleanpunaisesta (viileä)
keltaiseksi (kuuma).
Jos näytteitä ei ole asianmukaisesti lämpökäsitelty testin lyysivaiheen aikana, ne saattavat muodostaa biologisen
vaaratekijän, jolloin niitä EI saa asettaa Neogen Molekylääriseen testi-instrumenttiin.
9. Poista Neogen Lyysiliuosputkiteline Neogen Molekyläärisestä lämmityslohkosta ja anna sen viilentyä Neogen
Molekyläärisessä testijäähdytyslohkon pistokkeessa vähintään 5 minuuttia ja enintään 10 minuuttia. Neogen
Molekyläärisen testijäähdytyslohkon pistoke, jota käytetään ympäristön lämpöisenä ilman Neogen® Molekyläärisen
testijäähdytyslohkon alustaa, asetetaan suoraan laboratorion työtasolle. Viileänä Neogen-lyysiliuoksen väri palaavaaleanpunaiseksi.
10. Poista Neogen Lyysiliuosputkiteline Neogen Molekyläärisen testijäähdytyslohkon pistokkeesta.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Monistaminen
1. Jokaiselle näytteelle ja negatiiviselle kontrollinäytteelle tarvitaan yksi Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 –Kronobakteeri -reagenssiputki.
1.1 Putkiliuskat voidaan leikata haluttuun määrään putkia. Valitse tarvittava yksittäisten Neogen Molecular
Detection -testipakkausten 2 – Kronobakteeri -reagenssiputkien tai 8 putken liuskojen määrä.
1.2 Aseta Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri -reagenssiputket tyhjään telineeseen.
1.3 Vältä liikuttamasta reagenssipellettejä putkien pohjalta.
2. Valitse yksi Neogen Reagenssin valvontaputki ja aseta telineeseen.
3. Ristikontaminaation välttämiseksi poista suojus yhdestä Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 –Kronobakteeri -reagenssiputkinauhasta kerrallaan ja käytä uutta pipetin kärkeä jokaisessa siirtovaiheessa.
4. Siirrä jokainen lysaatti Neogen Molecular Detection -testipakkauksen 2 – Kronobakteeri -reagenssiputkeen ja
Neogen Reagenssin valvontaputkeen seuraavasti:
Siirrä jokainen näytelysaatti yksittäiseen Neogen Molecular Detection -testipakkaus 2 – Kronobakteeri-reagenssiputkeen ensin, ja sitten negatiivinen kontrolli. Hydratoi Neogen Reagenssin valvontaputki viimeisenä.
5. Avaa Neogen Molecular Detection -testipakkauksen 2 – Kronobakteeri -reagenssiputki käyttämällä Neogen®
Molekyläärisen testin cap/decap-työkalua – Reagenssi. Avaa yksi reagenssiputkiliuska kerrallaan. Heitä suojus pois.
5.1 Siirrä 20 µL näytelysaattia Neogen Lyysiliuosputkessa olevan nesteen ylemmästä puoliskosta (vältä sakkaa)
vastaavaan Neogen Molecular Detection -testipakkauksen 2 – Kronobakteeri -reagenssiputkeen. Annostele
vinossa kulmassa, jotta et liikuta pellettejä. Sekoita pipetoimalla varovasti ylös ja alas 5 kertaa.
9

FI(Suomenkielinen)

5.2 Toista vaihe 5.1, kunnes kaikki näytelysaatit on lisätty vastaavaan Neogen Molekulaarisen testisetin 2 –Kronobakteeri -reagenssiputkeen liuskassa.
5.3 Peitä Neogen Molekyläärisen testipakkauksen 2 – Kronobakteeri -reagenssiputket mukana toimitetuilla
lisäsuojuksilla ja varmista, että ne ovat tiukasti paikoillaan painamalla niitä Neogen Molekyläärisen testin
cap/decap-työkalun – Reagenssi pyöristetyllä puolella eteen- ja taaksepäin suuntautuvalla liikkeellä.
5.4 Toista tarvittaessa vaiheet 5.1–5.3 testattavien näytteiden määrän mukaan.
5.5 Kun kaikki näytelysaatit on siirretty, siirrä 20 µl negatiivista kontrollilysaattia Neogen Molecular Detection-testipakkauksen 2 – Kronobakteeri -reagenssiputkeen toistamalla vaiheet 5.1–5.3.
5.6 Siirrä 20 µl negatiivista kontrollilysaattia Neogen Reagenssin valvontaputkeen. Annostele vinossa kulmassa,
jotta et liikuta pellettejä. Sekoita pipetoimalla varovasti ylös ja alas 5 kertaa.
6. Aseta suojuksella suljetut putket puhtaaseen ja steriloituun Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalustaan.
Sulje ja lukitse Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalustan kansi.

7. Tarkasta ja vahvista määritetty ajo Neogen Molekyläärisen testijärjestelmän ohjelmistossa.
8. Napsauta ohjelmiston Start (Käynnistä) -painiketta ja valitse käytettävä instrumentti. Valitun instrumentin kansi
aukeaa automaattisesti.
9. Aseta Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta Neogen Molekylääriseen testi-instrumenttiin ja aloita testi
sulkemalla kansi. Saat tulokset 60 minuutin kuluessa, positiiviset tulokset saatetaan kuitenkin havaita jo aikaisemmin.
10. Kun testi on suoritettu loppuun, ota Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta Neogen Molekyläärisestä
testi-instrumentista ja hävitä putket liottamalla niitä 1–5-prosenttisessa (veteen laimennetussa) talouskäyttöisessä
valkaisuaineliuoksessa 1 tunnin ajan ja etäällä testin valmistelualueelta.
HUOMAUTUS: Jotta ristikontaminaation aiheuttamien väärien positiivisten riski olisi mahdollisimman pieni,
älä koskaan avaa monistettua DNA:ta sisältäviä reagenssiputkia. Tämä koskee Neogen Molecular Detection-testipakkauksen 2 – Kronobakteeri -reagenssiputkia, Neogen Reagenssin valvontaputkia ja Neogen Testitaulukon
valvontaputkia. Hävitä tiiviisti suljetut reagenssiputket aina liottamalla niitä 1–5-prosenttisessa (veteen laimennetussa)
talouskäyttöisessä valkaisuaineliuoksessa 1 tunnin ajan ja etäällä testin valmistelualueelta.

Tulokset ja tulkinta

Algoritmi tulkitsee nukleiinihappojen monistuksen tunnistuksesta saatavaa valon sirontakäyrää. Ohjelmisto analysoi
tulokset automaattisesti, ja tulokset värikoodataan tuloksen mukaan. Positiivinen tai negatiivinen tulos määritetään
analysoimalla useita yksilöllisiä käyräparametreja. Oletetut positiiviset tulokset ilmoitetaan reaaliaikaisesti, kun taas
negatiiviset ja tarkastettavat tulokset näytetään ajon valmistumisen jälkeen.
HUOMAA: Negatiivinenkaan näyte ei anna nollalukemaa, sillä järjestelmällä ja Neogen Molecular Detection-testipakkauksen 2 – Kronobakteeri monistusreagensseilla on tausta-RLU-lukema (suhteellinen valoyksikkö).
Vahvistus• Tulosten vahvistaminen NF VALIDATION -sertifioidun menetelmän mukaisesti
NF VALIDATIONin yhteydessä kaikki määritetyt positiiviset rikastukset tulisi vahvistaa seuraavalla
viitetapavahvistuksella(2), joka alkaa ensisijaisen rikastuksen (BPW ISO tai BPW ISO, johon lisätty 10 mg/l vankomysiiniä)
siirrosta.
•

Muu vahvistuskäytäntö

10

FI

(Suomenkielinen)

Oletetut positiiviset rikastetut näytteet on vahvistettava laboratorion vakiotoimintamenetelmien mukaisesti tai
noudattamalla asianmukaista vertailumenetelmää(1,2) aloittamalla näytteen siirrosta ensisijaisesta rikastusaineesta (BPW
ISO tai BPW ISO, johon lisätty 10 mg/l vankomysiiniä) toissijaiseen rikastusaineeseen, mitä seuraa viljely petrimaljassa ja
isolaattien vahvistaminen asianmukaisilla biokemiallisilla ja serologisilla menetelmillä.
Joissain harvoissa tapauksissa valon sironta voi olla epätavallinen, jolloin algoritmi merkitsee sen tarkastettavaksi(”Inspect”). Neogen suosittelee testin uusimista tarkastettavaksi merkittyjen (Inspect) näytteiden osalta. Jos tulokseksitulee jatkuvasti Inspect, tee varmistustesti käyttämällä itse parhaaksi katsomaasi menetelmää tai paikallisten määräysten
mukaista menetelmää(1,2).
Jos tulokset ovat ristiriitaisia (oletettu positiivinen tulos Neogen Molecular Detection -testipakkauksella 2 –Kronobakteeri, jota ei saada vahvistettua jollakin edellä kuvatuista tavoista), laboratorion on tehtävä tarvittavat
toimenpiteet saatujen tulosten raportoimiseksi.
Jos sinulla on jotain tiettyä sovellusta tai menetelmää koskevia kysymyksiä, käy verkkosivuillamme osoitteessa
www.neogen.com tai ota yhteyttä paikalliseen Neogen-edustajaan tai -jälleenmyyjään.
Liite A. Käytännön keskeytys: Lämpökäsiteltyjen lysaattien säilyttäminen ja uudelleentestaus
1. Säilytä lämpökäsitelty lysaatti sulkemalla lyysiputki uudelleen puhtaalla suojuksella (katso Lyysi-osio, 4.5).
2. Säilytä 2–8 °C:ssa enintään 72 tuntia.
3. Valmistele säilytetty näyte monistamista varten kääntelemällä sitä 2–3 kertaa, jotta se sekoittuu.
4. Poista suojukset putkista.
5. Aseta sekoitetut lyysiputket Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeeseen ja kuumenna 100 ±1 °C:ssa
5 ±1 minuuttia.
6. Poista Neogen Lyysiliuosputkiteline lämmityslohkosta ja anna sen viilentyä Neogen Molekyläärisen
testijäähdytyslohkon pistokkeessa vähintään 5 minuuttia ja enintään 10 minuuttia.
7. Jatka edellä olevasta kohdasta Monistaminen.

Viitteet:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Tarkista edellä mainittujen standardien mukaisten menetelmien ajantasaiset versiot.

Symbolien selitykset

info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

PT(Português)Data de emissão: 2024-01

Instruções do Produto
Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter
Descrição do produto e Uso Recomendado

O Neogen® Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter é usado com o Neogen® Sistema de Detecção Molecular para adetecção rápida e específica de Cronobacter em alimentos enriquecidos e amostras ambientais da produção de alimentos.
O Neogen Ensaio de Detecção Molecular utiliza amplificação isotérmica mediada por alça para amplificar rapidamentesequências de ácidos nucleicos com alta especificidade e sensibilidade, combinadas com bioluminescência paradetectar a amplificação. Os resultados positivos presuntivos são relatados em tempo real enquanto os resultados
negativos são exibidos após a conclusão do ensaio. Os resultados positivos presuntivos devem ser confirmados através
do seu método de preferência ou conforme especificado pelos regulamentos locais(1, 2).
O Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter destina-se ao uso em ambiente laboratorial por profissionais
treinados em técnicas laboratoriais. A Neogen não documentou o uso deste produto em outros setores que não o dealimentos e bebidas. Por exemplo, a Neogen não documentou este produto para testar amostras farmacêuticas, decosméticos, clínicas ou veterinárias. O Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter não foi avaliado com todos ospossíveis produtos e/ou processos alimentícios e protocolos de teste, e nem com todas as linhagens de bactérias possíveis.
Como acontece em todos os métodos de teste, a fonte, a formulação e a qualidade do meio de enriquecimento
podem influenciar os resultados. Fatores como métodos de amostragem, protocolos de teste, preparação de amostras,
incluindo mistura e homogeneização, manuseio e técnica de laboratório também podem influenciar os resultados. A
Neogen recomenda avaliação do método, incluindo o meio de enriquecimento, no ambiente do usuário, usando um
número suficiente de amostras com alimentos e/ou amostras ambientais específicos e desafios microbianos paragarantir que o método atenda aos critérios do usuário.
A Neogen avaliou o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter com meio de enriquecimento de ÁguaPeptonada Tamponada (ISO).
O Neogen® Equipamento de Detecção Molecular destina-se ao uso com amostras que passaram por tratamento
térmico durante a etapa lise do ensaio, projetado para destruir organismos presentes na amostra. Amostras que não
foram tratadas com aquecimento de forma adequada durante a etapa lise do ensaio, podem ser consideradas um risco
biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no Neogen Equipamento de Detecção Molecular.
A Neogen Food Safety é certificada pela Organização Internacional para Normatização (ISO) 9001 para projeto efabricação.
O kit de testes do Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter contém 96 testes, descritos na Tabela 1.
Tabela 1. Componentes do kit Neogen Ensaio de Detecção Molecular
Item

Identificação

Quantidade

Conteúdo

Comentários

Solução de Lise Neogen(SL)

Solução rosa em
tubos transparentes

96 (12 tiras de 8 tubos)

580 µL de SL por
tubo

Armazenados
na rack e
prontos parao uso

Tubos de Reagentes
para Neogen® Ensaio de
Detecção Molecular 2-Cronobacter

Tubos laranjaavermelhados

96 (12 tiras de 8 tubos)

Mistura de detecção
e amplificação
específica liofilizada

Pronto parauso

Tampas adicionais

Tampas laranjaavermelhadas

96 (12 tiras de 8 tampas)

Neogen® Controle deReagentes (CR)

Tubos transparentes
com tampa
articulada

16 (2 pacotes de 8 tubos
individuais)®

Pronto parauso
Mistura de DNA decontrole liofilizado,
amplificação edetecção

Pronto parauso

O Controle Negativo, não fornecido no kit, é um meio de enriquecimento estéril, por exemplo, APT ISO. Não utilize águacomo controle negativo.
1

PT(Português)Segurança

O usuário deve ler, compreender e seguir todas as informações de segurança presentes nas instruções do Neogen
Sistema de Detecção Molecular e do Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter. Guarde as instruções desegurança para consulta futura.
AVISO: Indica uma situação de perigo que, se não evitada, pode resultar em morte ou ferimentos graves
e/ou danos materiais.
RECOMENDAÇÃO: Indica uma situação potencialmente perigosa que, se não evitada, pode resultar em danos materiais.

W AVISONão utilize o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter em diagnósticos da saúde humana e animal.
O usuário deve treinar seu pessoal nas técnicas de testes apropriadas atuais: por exemplo, Boas Práticas deLaboratório(3), ISO/IEC 17025(4) ou ISO 7218(5).
Para reduzir os riscos associados a um resultado falso-negativo levando à liberação do produto contaminado:• Siga o protocolo e realize os testes exatamente conforme especificado nas instruções do produto.
• Armazene o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter conforme indicado na embalagem e nas
instruções do produto.
• Sempre utilize o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter dentro da data de validade.
• Use o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter com alimentos e amostras ambientais de processosde alimentos que tenham sido validadas internamente ou por um terceiro.
• Utilize o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter somente com superfícies, desinfetantes,
protocolos e linhagens de bactérias que tenham sido validados internamente ou por um terceiro.
• Para uma amostra ambiental que contém um tampão neutralizante com complexo de sulfonato de arila, faça uma
diluição de 1:2 antes de testar (1 parte da amostra em 1 parte do caldo de enriquecimento estéril). Outra opção
é transferir 10 μL do enriquecimento NB para os tubos de Solução de Lise Neogen. Produtos Neogen® Sample
Handling que incluem Tampão de Neutralização com complexo de sulfonato de arila: RS96010NB, RS9604NB,
SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G e HS2410NB2G. Este protocolo não foi testado durante o estudo
da NF Validation.
Para reduzir os riscos de exposição a produtos químicos e agentes biológicos nocivos:• Execute testes de agentes patogênicos em um laboratório adequadamente equipado, sob o controle de pessoal
bem treinado. O meio de enriquecimento incubado e equipamentos ou superfícies que tenham entrado em contato
com o meio de enriquecimento incubado podem conter patógenos em níveis suficientes para apresentar riscos à
saúde humana.
• Sempre adote as práticas de segurança padrão em laboratórios, como usar trajes de proteção adequados e óculosde proteção ao manipular reagentes e amostras contaminadas.
• Evite o contato com o conteúdo do meio de enriquecimento e dos tubos de reagentes após a amplificação.
• Descarte as amostras enriquecidas e os resíduos contaminados relacionados de acordo com as normas locais/regionais/nacionais/industriais vigentes.
• Não exceda a temperatura recomendada ao ajustar o aquecedor.
• Não exceda o tempo de aquecimento recomendado.
• Utilize um termômetro calibrado adequado para verificar a temperatura de inserção do Neogen® Bloco deAquecimento de Detecção Molecular (por exemplo, um termômetro de imersão parcial ou termômetro termopar
digital, e não um termômetro de imersão total). O termômetro deve ser colocado no local indicado do Neogen Bloco
de Aquecimento de Detecção Molecular.
Para reduzir os riscos de contaminação cruzada ao preparar o ensaio:• Sempre use luvas (para proteger o usuário e evitar a introdução de nucleases).
Para reduzir os riscos de exposição com líquidos quentes:• Não exceda a temperatura recomendada ao ajustar o aquecedor.
• Não exceda o tempo de aquecimento recomendado.
• Utilize um termômetro calibrado adequado para verificar a temperatura de inserção do Neogen® Bloco deAquecimento de Detecção Molecular (por exemplo, um termômetro de imersão parcial ou termômetro termopar
digital, e não um termômetro de imersão total). O termômetro deve ser colocado no local indicado do Neogen Bloco
de Aquecimento de Detecção Molecular.

2

PT(Português)RECOMENDAÇÃO
Para reduzir os riscos de contaminação cruzada ao preparar o ensaio:• Troque de luvas antes da hidratação do pellet do reagentes.
• Recomenda-se o uso de ponteiras de pipeta estéreis, com barreira de aerossol (filtros) e de grau de biologia molecular.
• Utilize uma nova ponteira de pipeta para cada transferência de amostra.
• Utilize Boas Práticas Laboratoriais para transferir a amostra do meio de enriquecimento para o tubo de lise. Para
evitar a contaminação da pipeta, o usuário pode decidir adicionar uma etapa de transferência intermediária. Por
exemplo, o usuário pode transferir cada amostra enriquecida para um tubo estéril.
• Utilize uma estação de trabalho de biologia molecular contendo lâmpada germicida, sempre que possível.
• Periodicamente, descontamine as bancadas e os equipamentos do laboratório (pipetas, ferramentas detampar/destampar, etc.) com uma solução de 1-5% (v:v em água) de água sanitária ou solução de remoção de DNA.
Para reduzir os riscos de um resultado falso-positivo:• Nunca abra os tubos após a amplificação.
• Sempre descarte os tubos contaminados enxaguando-os em uma solução de hipoclorito doméstico de 1 a 5%
(v:v em água) por 1 hora, longe da área de preparação de ensaio.
• Nunca submeta os tubos de reagentes a autoclave após a amplificação.
• Se houver suspeita de as amostras conterem elevados níveis de DNA de Cronobacter (por exemplo, DNA de
células Cronobacter não viáveis que tenham sido submetidas a uma etapa de destruição/desativação), os
enriquecimentos positivos presuntivos devem ser tratados com DNase antes da etapa de Lise. Entre em contato
com seu representante da Neogen para obter mais instruções. Este protocolo não foi testado durante o estudo da
NF Validation.
Consulte a Ficha de Dados de Segurança para obter informações adicionais e informações sobre os regulamentos locais
para descarte.
Em caso de dúvidas sobre aplicações ou procedimentos específicos, acesse nosso site www.neogen.com ou entre em
contato com o seu representante ou distribuidor local Neogen.

Responsabilidade do usuário

Os usuários são responsáveis por se familiarizarem com as informações e instruções do produto. Acesse nosso website
em www.neogen.com, ou contate o seu representante ou distribuidor local da Neogen para obter mais informações.
Ao selecionar um método de teste, é importante considerar que fatores externos, como métodos de amostragem,
protocolos de teste, preparo de amostras, incluindo mistura e homogeneização, manipulação e a técnica de laboratório
utilizada, podem influenciar nos resultados.
É responsabilidade do usuário, ao selecionar qualquer método de teste ou produto, avaliar um número suficiente deamostras com as matrizes e os testes microbiológicos adequados que permitam assegurar que o método escolhido
satisfaça os critérios por ele estabelecidos.
Também é de responsabilidade do usuário determinar se o método de teste e os resultados satisfazem as exigências deseus clientes ou fornecedores.
Como em qualquer outro método, os resultados obtidos com qualquer produto da Neogen Food Safety não constituem
uma garantia da qualidade das matrizes ou processos com eles testados.
Para ajudar os clientes a avaliar o método para diversas matrizes, a Neogen desenvolveu o kit Neogen® Controle deMatriz para Detecção Molecular. Quando necessário, utilize o Controle de Matriz (MC) para determinar se a matriz tem
a capacidade de impactar os resultados do Neogen Ensaio para Detecção Molecular 2 - Cronobacter. Teste diversas
amostras representativas da matriz, isto é, amostras obtidas a partir de diferentes origens, durante qualquer período devalidação quando adotar o método da Neogen, quando testar matrizes novas ou desconhecidas ou matrizes que tiverem
passado por mudanças de processo ou matéria-prima.
Uma matriz pode ser definida como um tipo de produto com propriedades intrínsecas, tais como composição eprocesso. As diferenças entre matrizes podem ser tão simples quanto os efeitos causados pelas diferenças em seu
processamento ou apresentação, por exemplo, cru vs. pasteurizado, fresco vs. desidratado, etc.

Limitação de Garantia/Recursos Limitados

EXCETO EM CASOS ESPECÍFICOS DE GARANTIA LIMITADA DE PRODUTOS INDIVIDUAIS, A NEOGEN REJEITATODOS OS TERMOS EXPRESSOS E IMPLÍCITOS DE GARANTIA, INCLUINDO MAS NÃO SE LIMITANDO A,QUAISQUER GARANTIAS DE COMERCIALIZAÇÃO OU DE ADEQUAÇÃO PARA UM DETERMINADO USO. Se ficar
provado que qualquer produto da Neogen Food Safety encontra-se defeituoso, a Neogen ou seu distribuidor autorizado
3

PT(Português)procederá à respectiva substituição ou, se assim o decidir, restituirá o dinheiro da compra do produto. Estes são os seusúnicos termos de recurso. Entre em contato com seu representante da Neogen ou distribuidor autorizado da Neogenpara qualquer dúvida adicional.

Limitação de responsabilidade da Neogen

A NEOGEN NÃO SERÁ RESPONSÁVEL POR QUAISQUER DANOS, SEJAM DIRETOS, INDIRETOS, ESPECIAIS,ACIDENTAIS OU SUBSEQUENTES, INCLUINDO, MAS SEM EXCLUSIVIDADE, A PERDA DE LUCROS. Exceto quando forproibido por lei, em nenhuma circunstância nem ao abrigo seja de que teoria jurídica for, deverá a responsabilidade da
Neogen exceder o preço de compra dos produtos supostamente defeituosos.

Armazenamento e Descarte

Armazene o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter a 2-8°C. Não congele. Mantenha o kit fora doalcance da luz durante o armazenamento. Após abrir o kit, verifique se a embalagem protetora de alumínio não estádanificada. Se a embalagem estiver danificada, não utilize. Após a abertura, os tubos de reagentes não utilizados devem
sempre ser armazenados na embalagem resselável, juntamente com o dessecante para manter a estabilidade dos
reagentes liofilizados. Armazene as embalagens resseladas de 2 a 8 °C por, no máximo, 60 dias.
Não utilize o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter após a data de validade. A data de vencimento e onúmero do lote estão impressos na parte externa da caixa. Após o uso, o meio de enriquecimento e os tubos do Neogen
Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter podem conter materiais patogênicos. Quando o teste for concluído, siga
os regulamentos industriais padrões vigentes para descarte de resíduos contaminados. Consulte a Ficha de Dados deSegurança para obter informações adicionais e informações sobre os regulamentos locais para descarte.

Instruções de Uso

Siga todas as instruções com atenção. Caso contrário, pode haver resultados imprecisos.
Periodicamente, descontamine as bancadas e os equipamentos do laboratório (pipetas, ferramentas de tampar/destampar,etc.) com uma solução de 1-5% (v:v em água) de água sanitária ou solução de remoção de DNA.
O usuário deve concluir o treinamento de qualificação do operador do Neogen Sistema de Detecção Molecular,
conforme descrito no documento “Protocolos e Instruções de Qualificação de Instalação (IQ)/Qualificação Operacional(OQ) para o Neogen Sistema de Detecção Molecular”(6).
Consulte a seção “Instruções Específicas para Métodos Validados” para obter os requisitos específicos:
Tabela 3 para protocolos de enriquecimento conforme o Official Method of AnalysisSM e o Certificado Performance
TestedSM nº 101703 da AOAC® 2018.01
Tabela 4 para protocolos de enriquecimento de acordo com certificado NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
Enriquecimento da Amostra
As Tabelas 2, 3 ou 4 oferecem orientação para protocolos de enriquecimento de alimentos e amostras ambientais.
É responsabilidade do usuário validar os protocolos de amostragem ou de enriquecimento, ou taxas de diluição
alternativas para garantir que este método de teste atenda aos critérios do usuário.
Alimentos, Pós Ambientais, Poeiras, Varreduras e Esponjas
1 Estabilize o meio de enriquecimento à temperatura ambiente (20-25°C), salvo indicação contrária no protocolo de
enriquecimento (vide Tabela 2, 3 ou 4).
2

Usando técnica asséptica, misture o meio de enriquecimento e a amostra e homogenize vigorosamente batendo,
usando um vórtex ou misturando à mão por 2 ± 0,2 minutos ou até que os grumos se dissolvam completamente e asuspensão de enriquecimento esteja homogênea(7, 8).
a.

Fatores como a preparação de amostras, incluindo mistura e homogeneização, manuseio e técnica delaboratório podem influenciar os resultados.

b. Para amostras altamente particuladas, recomenda-se o uso de sacos de filtragem.
c.

Para matrizes que se dilatam em água e são altamente viscosas (por exemplo, cereais, amidos), sugere-se
efetuar mais diluições (> 1:10) até que a viscosidade seja devidamente reduzida ou acrescentar alfa-amilase
estéril 1% (p/v) ao APT (ISO)(8).

d. Para amostras maiores de cereal, adicione o cereal em pó no líquido vagarosamente, mexendo com frequência
para evitar grumos.
3

Incube conforme descrito na tabela de protocolo apropriada (vide Tabela 2, 3 ou 4).

4

PT(Português)Tabela 2. Protocolos Gerais de Enriquecimento
Tamanho da
Amostra1

Volume do
Caldo deEnriquecimento1, 2Temperatura de
Enriquecimento(± 1°C)

Tempo deEnriquecimento(horas)VolumeAnalisadodaAmostraFórmulas infantis em pó(PIF – powdered infant
formula) e matérias-primas
como leite em pó, soja empó, soro de leite em pó,
lactose, farinha de arroz emaltodextrina

Amostra de
1X g

9X mL de APT(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Matérias-primas como sais,
minerais, aminoácidos, DHS(ácido docosahexaenoico) e
vitaminas

Amostra de
1X g

99X mL de APT(ISO) (1:100)

37

18-24

20 µL

Amostras ambientais secas,
tais como poeira, varreduras
e coleta a vácuo

Amostra de
1X g

9X mL de APT(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Esponja ambiental com 10 mLde caldo Letheen ou caldo
neutralizante D/E

1 dispositivodeamostragem

90 mL de APT(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Matriz de Amostra

1

A Neogen avaliou o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter utilizando as taxas de diluição da Tabela
2 até 300 g. É responsabilidade do usuário validar protocolos ou taxas de diluição alternativos para garantir que ométodo atenda aos seus critérios.

2

Use APT (ISO) preaquecido se o volume do caldo de enriquecimento for > 300 mL (por exemplo, a amostra é > 30 g).

Instruções Específicas para Métodos Validados
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
Certificado AOAC® Performance TestedSM (PTM) nº 101703

Nos programas do Instituto de Pesquisa AOAC OMASM e PTMSM, o Neogen Ensaio de Detecção Molecular de 2 Cronobacter foi constatado como um método eficiente para a detecção de Cronobacter. As matrizes testadas no estudosão apresentadas na tabela 3.

5

PT(Português)Tabela 3. Protocolos de enriquecimento segundo a AOAC® OMASM 2018.01 e PTMSM 101703
VolumeTemperatura deTempo deAnalisado
Enriquecimento Enriquecimentoda(± 1°C)(horas)AmostraMatriz de Amostra

Tamanho daamostraVolume do
Caldo deEnriquecimento1

Fórmula infantil em pó e Cereal
infantil em pó

10 g

90 mL de APT(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Cereal infantil em pó não
probiótico

300 g

2700 mL de APT(ISO) (1:10)

Preaquecido 37

18-24

20 µL

Fórmula infantil em pó e Cereal
infantil em pó com probióticos

300 g

2700 mL de APT(ISO) + 10 mg/L
de Vancomicina

Preaquecido 37

22-24

20 µL

Lactose

10 g

90 mL de APT(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

1 dispositivodeamostragem

90 mL de APT(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Esponja ambiental com 10 mLde caldo neutralizante D/E
1

Use APT (ISO) preaquecido se o volume do caldo de enriquecimento for > 300 mL.
NF VALIDATION da AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Para obter mais informações sobre o final da validade, consulte o certificado NF VALIDATION disponível no site
mencionado acima.
Método certificado da NF VALIDATION em conformidade com a ISO 16140-2(9) em comparação com a ISO 22964.
Escopo da validação: Fórmula infantil em pó e cereais infantis com e sem probióticos, matérias-primas e amostras
ambientais.
Preparo da amostra: As amostras devem ser preparadas segundo a EN ISO 22694(2) e a EN ISO 6887(7, 8).
Versão do software: Consulte o certificado.

6

PT(Português)Tabela 4. Protocolos de enriquecimento de acordo com o método certificado da NF VALIDATION 3M 01/20-03/18

Matriz de Amostra

•
•
•

•

•

Fórmula infantil em pó
Cereais infantis em pó
Ingredientes comoleite em pó, soja empó, soro de leite em
pó, lactose, farinha dearroz, maltodextrina
Amostras ambientais
secas, tais comopoeira, varreduras ecoleta a vácuo,Esponja, enxágue com
água, toalhas

Fórmula infantil em pó ecereal infantil em pó (nãoprobiótico)Fórmula infantil em pó
e cereal infantil em pó(incluindo probiótico)

Tamanho daamostraVolume do
Caldo deEnriquecimento1

Temperatura Tempo dede Enriquec- Enriquecimento
imento(± 1°C)(horas)VolumeAnalisado
da Amostra

10 g

90 mL deAPT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Ponto deInterrupção
recomendado2, 3Os caldos deenriquecimento
ou lisadosde amostra
podem serarmazenados
entre 2ºC e 8°C
por até 72 horas

1 dispositivodeamostragem
ou
10 mL

Os caldos deenriquecimento
ou lisadosde amostra
podem serarmazenados
entre 2ºC e 8°C
por até 72 horas

30-300 g

APT (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Os caldos deenriquecimento
ou lisadosde amostra
podem serarmazenados
entre 2ºC e 8°C
por até 72 horas

30-300 g

APT (ISO) +10 mg/L devancomicina(1:10)

37

22-24

20 µL

Nenhum1

Use APT (ISO) preaquecido se o volume do caldo de enriquecimento for > 300 mL (por exemplo, a amostra é > 30 g).

2

Após a remoção do caldo de enriquecimento do armazenamento, continue o teste a partir da Etapa 1, na seção Lise.
Após a remoção do lisado de amostra do armazenamento, continue o teste a partir da Etapa 7, na seção Lise.

3

Consulte o Apêndice A para testar novamente lisados armazenados tratados termicamente.

Preparo da Neogen® Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular
1 Umedeça um pano em uma solução de 1 a 5% (v:v em água) de água sanitária (hipoclorito) e limpe a Neogen Bandeja
de Carga Rápida de Detecção Molecular.
2

Enxágue a Neogen Bandeja de Carga Rápida de Detecção Molecular com água.

3

Utilize uma toalha descartável para secar a Neogen Bandeja de Carga Rápida de Detecção Molecular.

4

Certifique-se de que a Neogen Bandeja de Carga Rápida de Detecção Molecular esteja seca antes de utilizá-la.

Preparação do Neogen® Bloco de Resfriamento de Detecção Molecular
Coloque o Neogen Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular diretamente sobre a bancada do laboratório: A
Neogen Bandeja de Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular não é utilizada. Utilize o bloco à temperatura
ambiente do laboratório (de 20°C a 25°C).
7

PT(Português)Preparo do Neogen® Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular
Coloque o Neogen Bloco de Aquecimento de Detecção Molecular em uma unidade de aquecimento com bloco seco
duplo. Ligue a unidade de aquecimento de bloco a seco e defina a temperatura para permitir que o Neogen Bloco deAquecimento de Detecção Molecular alcance e mantenha a temperatura de 100 ± 1°C.
NOTA: Dependendo da unidade de aquecimento, aguarde aproximadamente 30 minutos até que o Neogen Bloco
de Aquecimento de Detecção Molecular alcance a temperatura. Utilizando um termômetro calibrado adequado (porexemplo, um termômetro de imersão parcial ou um termômetro digital de termopares, não um termômetro de imersão
total) colocado no local indicado, verifique se o Neogen Bloco de Aquecimento de Detecção Molecular está a 100 ± 1°C.
Preparo do Neogen® Equipamento de Detecção Molecular
1 Inicie o Neogen® Software do Sistema de Detecção Molecular e faça login. Entre em contato com seu representanteda Neogen Food Safety para garantir o uso da versão mais atualizada do software.
2

Ligue o Neogen Equipamento de Detecção Molecular.

3

Crie ou edite uma execução com dados para cada amostra. Consulte o Manual do Usuário do Neogen Sistema de
Detecção Molecular para obter mais detalhes.

NOTA: O Neogen Equipamento de Detecção Molecular deve estar pronto para o uso antes de inserir a Neogen Bandeja
de Carga Rápida para Detecção Molecular com os tubos de reação. Esta etapa de aquecimento leva aproximadamente
20 minutos e é indicada por uma luz LARANJA na barra de status do instrumento. Quando o equipamento estiver prontopara iniciar uma execução, a barra de status ficará VERDE.
Lise
Remova o fundo da Neogen Rack de Solução de Lise com uma chave de fenda antes de inserir o Neogen Bloco deAquecimento para Detecção Molecular.

1

Deixe que os tubos de Neogen Solução de Lise, cheguem à temperatura ambiente (de 20 a 25°C) deixando as racks
fora de refrigeração de um dia para o outro (de 16 a 18 horas). A alternativa para equilibrar os tubos de Neogen
Solução de Lise à temperatura ambiente é posicioná-los na bancada do laboratório durante pelo menos 2 horas,
incubá-los em uma incubadora a 37 ± 1°C por 1 hora ou colocá-los em um aquecedor com bloco seco duplo por 30
segundos a 100°C ± 1°C.

2

Inverta os tubos com tampa para misturar. Prossiga para a próxima etapa em até 4 horas após a inversão.

3

Remova o caldo de enriquecimento da incubadora.

4

Um tubo de Neogen Solução de Lise é necessário para cada amostra e além do CN (meio de enriquecimento esterilizado).
4.1 As tiras de tubos de Neogen Solução de Lise podem ser cortadas para obter o número de tubos desejado.
Selecione o número de tubos de Neogen Solução de Lise individuais ou as tiras de 8 tubos necessárias. Coloqueos tubos de Neogen Solução de Lise em uma rack vazia.
4.2 Para evitar contaminação, destampe uma tira de tubo Neogen LS de cada vez e utilize uma nova ponteira depipeta para cada etapa da transferência.
4.3 Transfira a amostra enriquecida para os tubos Neogen SL conforme descrito abaixo:
Primeiro, transfira cada amostra enriquecida para tubos Neogen SL individuais. Por último, transfira o NC.
4.4 Utilize a Neogen® Ferramenta de Tampar/Destampar de Detecção Molecular - Lise para destampar uma tira detubos Neogen SL – uma tira de cada vez.
4.5 Descarte a tampa do tubo de Neogen Solução de Lise; se o lisado for mantido para novo teste, coloque as
tampas em um recipiente limpo para reutilização após a lise.
4.5.1. Para processar o lisado mantido, consulte o Apêndice A.
8

PT(Português)4.6 Agite o saco de enriquecimento antes de coletar a amostra do lado filtrado ao trabalhar com amostras viscosas.
4.7 Transfira 20 µL de amostra para um tubo de Neogen Solução de Lise, salvo indicação contrária na tabela do
protocolo.
5

Repita as etapas 4.4 a 4.7, até que todas as amostras individuais tenham sido adicionadas a um tubo correspondente
de Neogen Solução de Lise na tira.

6

Quando todas as amostras tiverem sido transferidas, transfira 20 µL de CN (meio de enriquecimento estéril, por
exemplo, APT) para um tubo Neogen SL. Não use água como CN.

7

Verifique se a temperatura do Neogen Bloco de Aquecimento de Detecção Molecular está a 100 ± 1°C.

8

Coloque a rack descoberta de tubos Neogen SL no Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular eaqueça por 15 ± 1 minutos. Durante o aquecimento, a solução Neogen SL irá mudar de cor de rosa (frio) paraamarelo (quente).
Amostras que não foram tratadas com aquecimento de forma adequada durante a etapa lise do ensaio, podem serconsideradas um risco biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no Neogen Equipamento de Detecção Molecular.

9Retire a rack descoberta de tubos de Neogen Solução de Lise do Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção
Molecular e deixe esfriar no Neogen Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular por pelo menos 5 minutos
e no máximo 10 minutos. O Neogen Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular, usado em temperatura
ambiente sem a Neogen® Bandeja de Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular, deve ser colocado
diretamente sobre a bancada do laboratório. Quando resfriada, a Neogen Solução de Lise voltará à cor rosa.

10 Retire a rack de tubos Neogen SL do Bloco de Resfriamento de Detecção Molecular Neogen.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplificação
1 É necessário um Tubo de Reagente Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter para cada amostra e opara o CN.
1.1 As tiras de tubos podem ser cortadas para obter o número de tubos desejado. Selecione o número de tiras
individuais de 8 Tubos de Reagentes necessárias para Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter.
1.2 Coloque os Tubos de Reagentes Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter em uma rack vazia.
1.3 Evite agitar os reagentes precipitados da parte inferior dos tubos.
2

Selecione um Neogen Tubo de Controle de Reagentes e coloque-o na rack.

3

Para evitar contaminação cruzada, destampe uma tira de Tubo de Reagente Neogen Ensaio de Detecção Molecular
2 - Cronobacter de cada vez e utilize uma nova ponteira de pipeta para cada etapa da transferência.

4Transfira cada um dos lisados a um Tubo de Reagente Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter e
Neogen Tubo de Controle de Reagentes conforme descrito abaixo:
Transfira cada amostra de lisado em Tubos de Reagente Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter
individuais primeiro; depois transfira o CN. Hidrate o Neogen Tubo de Controle de Reagentes por último.
9

PT
5

(Português)Use a Ferramenta Reagente de Tampar/Destampar de Detecção Neogen® para destampar o Tubo de Reagente para
Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter - uma tira de Tubos de Reagentes por vez. Descarte a tampa.
5.1 Transfira 20 µL de amostra de lisado da metade superior do líquido (evite o precipitado) no tubo de Neogen
Solução de Lise para o Tubo de Reagente para Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter.
Dispense em ângulo para evitar a agitação dos pellet. Misture pipetando gentilmente 5 vezes.
5.2 Repita a etapa 5.1 até que a amostra de lisado individual tenha sido adicionada a um Tubo de Reagente para
Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter correspondente na tira.
5.3 Cubra os Tubos de Reagentes para Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter com a tampa
adicional fornecida e utilize o lado arredondado da Neogen Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção
Molecular para aplicar pressão com um movimento de vai e vem, garantindo que a tampa fique bem apertada.
5.4 Repita as etapas 5.1 a 5.3, conforme necessário, para o número de amostras a serem testadas.
5.5 Quando todas as amostras de lisado tiverem sido transferidas, repita as etapas de 5.1 a 5.3 para transferir 20 µL
de lisado CN para um Neogen Tubo de Reagente para Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter.
5.6 Transfira 20 µL de lisado CN para um Neogen Tubo de Controle de Reagente. Dispense em ângulo para evitara agitação dos pellet. Misture pipetando gentilmente 5 vezes.

6

Carregue os tubos tampados em uma Neogen Bandeja de Carga Rápida de Detecção Molecular limpa edescontaminada. Feche e trave a tampa da Neogen Bandeja de Carga Rápida de Detecção Molecular.

7

Analise e confirme a corrida configurada no Neogen Software do Sistema de Detecção Molecular.

8

Clique no botão iniciar do software e selecione o instrumento a utilizar. A tampa do instrumento selecionado abreautomaticamente.

9

Posicione a Neogen Bandeja de Carga Rápida de Detecção Molecular no Neogen Equipamento de Detecção
Molecular e feche a tampa para iniciar o ensaio. Os resultados são fornecidos em 60 minutos, embora os positivos
possam ser detectados ainda mais cedo.

10 Depois que o ensaio estiver concluído, remova a Neogen Bandeja de Carga Rápida de Detecção Molecular do
Neogen Equipamento de Detecção Molecular e descarte os tubos mergulhando-os em uma solução de 1-5% (v: v
em água) de água sanitária por 1 hora, fora da área de preparação do ensaio.
RECOMENDAÇÃO: Para minimizar o risco de falso-positivos por contaminação cruzada, nunca abra Tubos deReagentes que contenham DNA amplificado. Isso inclui o Tubo de Reagente para Neogen Ensaio de Detecção
Molecular 2 - Cronobacter, Tubos Neogen Controle de Reagentes e Neogen Tubos de Controle de Matriz. Sempre
descarte os Tubos de Reagentes selados mergulhando-os em uma solução de água sanitária de 1 a 5% (v:v em água)por 1 hora, fora da área de preparação do ensaio.

Resultados e Interpretação

Um algoritmo interpreta a curva de saída de luz que resulta da detecção da amplificação do ácido nucleico. Os resultados são
analisados automaticamente pelo software e são codificados em cores de acordo com o resultado. Um resultado é determinado
positivo ou negativo através da análise de diversos parâmetros exclusivos das curvas. Resultados positivos presuntivos são
relatados em tempo real, enquanto resultados negativos e a verificar serão exibidos após a conclusão da execução.
NOTA: Até mesmo uma amostra negativa não resultará em leitura zero, uma vez que o sistema e os reagentes de amplificação
do Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacter possuem uma leitura da unidade de luz relativa (RLU) intrínseca.
Confirmação
• Confirmação de resultados segundo o método NF de Validação Certificado

10

PT

(Português)No contexto da VALIDAÇÃO NF, todos os enriquecimentos positivos presuntivos devem ser confirmados segundo ométodo de confirmação de referência(2), começando com a transferência do meio de enriquecimento primário (APT ISO
ou APT ISO complementado com 10 mg/L de vancomicina).
•

Outro protocolo de confirmação

Os enriquecimentos positivos presuntivos devem ser confirmados conforme os procedimentos laboratoriais
operacionais padrão ou seguindo o método de confirmação de referência apropriado(1,2), começando com atransferência do meio de enriquecimento primário (APT ISO ou APT ISO complementado com 10 mg/L de vancomicina)para o meio de enriquecimento secundário, seguido por plaqueamento e confirmação posterior de isolados utilizando
métodos bioquímicos, sorológicos e moleculares apropriados.
Em casos raros de saída de luz fora do comum, o algoritmo rotula o caso como A verificar. A Neogen recomenda que ousuário repita o ensaio para qualquer amostra Inspecionar. Se o resultado continuar a ser Inspecionar, prossiga com oteste de confirmação utilizando o método de sua preferência ou conforme especificado pelos regulamentos locais(1,2).
No caso de resultados divergentes (positivos presuntivos com o Neogen Ensaio de Detecção Molecular 2 - Cronobacternão confirmados por um dos meios descritos acima), o laboratório deve seguir seus procedimentos operacionaispadrões para relatar os resultados.
Em caso de dúvidas sobre aplicações ou procedimentos específicos, acesse nosso site www.neogen.com ou entre em
contato com o seu representante ou distribuidor local Neogen.
Apêndice A. Interrupção de protocolo: Armazenamento e reteste de lisados tratados termicamente
1 Para armazenar um lisado tratado termicamente, tampe novamente o tubo de lise com uma tampa limpa (consulte aseção Lise, 4.5)
2

Armazene à temperatura na faixa de 2ºC a 8°C por até 72 horas.

3

Prepare uma amostra armazenada para amplificação invertendo de 2 a 3 vezes para misturar.

4

Destampe os tubos.

5

Coloque os tubos de lisado misturados no Neogen Bloco de Aquecimento de Detecção Molecular e aqueça a
100 ± 1°C por 5 ± 1 minutos.

6

Retire o suporte de tubos Neogen Solução de Lise do bloco de aquecimento e deixe esfriar no Neogen Bloco de
Resfriamento para Detecção Molecular por pelo menos 5 minutos e no máximo 10 minutos.

7

Continue o protocolo na seção Amplificação detalhada acima.

Referências:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Consulte as versões atuais dos métodos-padrão listados acima.

Explicação dos Símbolos
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

EL(Ελληνικά)Ημερομηνία έκδοσης: 2024-01

Πληροφορίες προϊόντος
Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - CronobacterΠεριγραφή Προϊόντος και Σκοπός Χρήσης

Η Neogen® Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter χρησιμοποιείται με το Neogen® Σύστημα Μοριακής
Ανίχνευσης για τη γρήγορη και ειδική ανίχνευση του Cronobacter, σε εμπλουτισμένα περιβαλλοντικά δείγματατροφίμων και κατεργασιών τροφίμων.
Η Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης χρησιμοποιεί ισοθερμική ενίσχυση με μεσολάβηση βρόχου για τηγρήγορη ενίσχυση αλληλουχιών νουκλεϊνικών οξέων με υψηλή ειδικότητα και ευαισθησία, σε συνδυασμό μεβιοφωταύγεια για την ανίχνευση της ενίσχυσης. Τα υποθετικά θετικά αποτελέσματα αναφέρονται σε πραγματικό
χρόνο, ενώ τα αρνητικά αποτελέσματα εμφανίζονται μετά την ολοκλήρωση της δοκιμασίας. Τα υποθετικά θετικά
αποτελέσματα πρέπει να επιβεβαιώνονται χρησιμοποιώντας τη μέθοδο που προτιμάτε ή όπως καθορίζεται απότους τοπικούς κανονισμούς(1, 2).
Η Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter προορίζεται για χρήση σε εργαστηριακό περιβάλλον
από επαγγελματίες εκπαιδευμένους στις εργαστηριακές τεχνικές. Η Neogen δεν έχει τεκμηριώσει τη χρήση αυτού
του προϊόντος σε βιομηχανίες άλλες από εκείνες των τροφίμων και ποτών. Για παράδειγμα, η Neogen δεν έχειτεκμηριώσει αυτό το προϊόν για τον έλεγχο δειγμάτων φαρμακευτικών προϊόντων, καλλυντικών, κλινικών ήκτηνιατρικών δειγμάτων. Η Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter δεν έχει αξιολογηθεί με όλα ταπιθανά προϊόντα τροφίμων, κατεργασίες τροφίμων, πρωτόκολλα δοκιμών ή με όλα τα πιθανά στελέχη βακτηρίων.
Όπως και με όλες τις δοκιμαστικές μεθόδους, η πηγή, η σύνθεση και η ποιότητα του μέσου εμπλουτισμού
μπορεί να επηρεάσει τα αποτελέσματα. Παράγοντες όπως οι μέθοδοι δειγματοληψίας, τα πρωτόκολλα
ελέγχου, η προετοιμασία των δειγμάτων συμπεριλαμβανομένης της ομογενοποίησης και της ανάμειξης, οχειρισμός και η εργαστηριακή τεχνική μπορεί επίσης να επηρεάσουν τα αποτελέσματα. Η Neogen συνιστά τηναξιολόγηση της μεθόδου συμπεριλαμβανομένου του μέσου εμπλουτισμού, στο περιβάλλον του χρήστη με τηχρήση επαρκούς αριθμού δειγμάτων με συγκεκριμένα τρόφιμα ή/και περιβαλλοντικά δείγματα και μικροβιακές
προκλήσεις ώστε να διασφαλιστεί ότι η μέθοδος πληροί τα κριτήρια του χρήστη.
Η Neogen έχει αξιολογήσει την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter με μέσο εμπλουτισμού
Ρυθμιστικό Νερό Πεπτόνης ISO.
Το Neogen® Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης προορίζεται για χρήση με δείγματα που έχουν υποβληθεί σε θερμική
κατεργασία κατά τη διάρκεια του βήματος λύσης της δοκιμασίας, το οποίο είναι σχεδιασμένο για την καταστροφή
των οργανισμών που είναι παρόντες στο δείγμα. Δείγματα που δεν έχουν υποβληθεί στην κατάλληλη θερμική
κατεργασία κατά τη διάρκεια του βήματος λύσης της δοκιμασίας μπορούν να θεωρηθούν ως πιθανός βιολογικός
κίνδυνος και ΔΕΝ πρέπει να εισάγονται στο Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης.
Η Neogen Food Safety είναι πιστοποιημένη κατά το πρότυπο του Διεθνούς Οργανισμού Τυποποίησης (ISO) 9001για σχέδιο και κατασκευή.
Το κιτ ελέγχου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter περιέχει 96 δοκιμές που περιγράφονταιστον Πίνακα 1.

1EL(Ελληνικά)Πίνακας 1. Στοιχεία του κιτ Neogen Δοκιμασίας Μοριακής ΑνίχνευσηςΕίδοςΤαυτοποίηση

ΠοσότηταΠεριεχόμενα

Neogen® Διάλυμα Λύσης(ΛΣ)Ροζ διάλυμα
σε διαφανείς
δοκιμαστικούς
σωλήνες96 (12 ταινίες των
8 δοκιμαστικών
σωλήνων)Σε στατώ και
580 µL ΛΣ ανάέτοιμο προςδοκιμαστικό σωλήνα
χρήσηΔοκιμαστικοί σωλήνες
Αντιδραστηρίου Neogen®
Δοκιμασίας Μοριακής
Ανίχνευσης 2 - CronobacterΠορτοκαλί-κόκκινοι 96 (12 ταινίες τωνδοκιμαστικοί
8 δοκιμαστικών
σωλήνεςσωλήνων)Επιπλέον πώματα

Πορτοκαλί-κόκκινα
πώματα96 (12 ταινίες των
8 πωμάτων)Neogen® Έλεγχος
Αντιδραστηρίου (ΕΑ)Διαφανείς
δοκιμαστικοί
σωλήνες μεαρθρωτό πώμα16 (2 σακουλάκια
των 8 ατομικών
δοκιμαστικών
σωλήνων)Λυοφιλοποιημένο
ειδικό μίγμα
ενίσχυσης καιανίχνευσης

ΣχόλιαΈτοιμο προςχρήσηΈτοιμο προςχρήσηΛυοφιλοποιημένος
έλεγχος DNA, μίγμα
ενίσχυσης καιανίχνευσης

Έτοιμο προςχρήσηΟ Αρνητικός Έλεγχος, που δεν παρέχεται στο κιτ, είναι ένα στείρο μέσο εμπλουτισμού, π.χ. Ρυθμιστικό ΝερόΠεπτόνης (BPW) ISO. Μη χρησιμοποιείτε νερό ως Αρνητικό Έλεγχο.

ΑσφάλειαΟ χρήστης πρέπει να διαβάσει, κατανοήσει και ακολουθήσει όλες τις πληροφορίες ασφαλείας στις οδηγίες για το
Neogen Σύστημα Μοριακής Ανίχνευσης και την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter. Φυλάξτετις οδηγίες ασφάλειας για μελλοντική αναφορά.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Υποδεικνύει μια επικίνδυνη κατάσταση, η οποία, εάν δεν αποφευχθεί, μπορεί να έχει ωςαποτέλεσμα θάνατο ή σοβαρό τραυματισμό ή/και καταστροφή ιδιοκτησίας.
ΥΠΟΔΕΙΞΗ: Υποδεικνύει μια δυνητικά επικίνδυνη κατάσταση, η οποία, εάν δεν αποφευχθεί, μπορεί ναέχει ως αποτέλεσμα καταστροφή ιδιοκτησίας.

W ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗΜη χρησιμοποιείτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter για τη διάγνωση
καταστάσεων σε ανθρώπους ή ζώα.
Ο χρήστης πρέπει να εκπαιδεύσει το προσωπικό του στις τρέχουσες κατάλληλες τεχνικές ελέγχου: γιαπαράδειγμα, Καλές Εργαστηριακές Πρακτικές(3), ISO/IEC 17025(4) ή ISO 7218(5).
Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με ένα ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα που οδηγεί στηναποδέσμευση μολυσμένου προϊόντος:• Ακολουθείτε το πρωτόκολλο και διενεργείτε τους ελέγχους ακριβώς όπως περιγράφεται στις πληροφορίες
προϊόντος.
• Φυλάσσετε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter όπως υποδεικνύεται στη συσκευασία
και στις οδηγίες του προϊόντος.
• Χρησιμοποιείτε πάντοτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter μέχρι την ημερομηνία
λήξης.
• Χρησιμοποιείτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter με περιβαλλοντικά δείγματατροφίμων και κατεργασιών τροφίμων που έχουν επικυρωθεί εσωτερικά ή από τρίτο μέρος.
• Χρησιμοποιείτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter μόνο με επιφάνειες,
αποστειρωτικά, πρωτόκολλα και βακτηριακά στελέχη που έχουν επικυρωθεί εσωτερικά ή από τρίτο μέρος.
• Για ένα περιβαλλοντικό δείγμα που περιέχει Ρυθμιστικό Διάλυμα Ουδετεροποίησης με αρυλ-σουλφονικό
σύμπλοκο, πραγματοποιήστε αραίωση 1:2 πριν τον έλεγχο (1 μέρος δείγματος σε 1 μέρος στείρου ζωμού
εμπλουτισμού). Μια άλλη επιλογή είναι να μεταφέρετε 10 mL Ρυθμιστικού Διαλύματος Ουδετεροποίησης
(NB) εμπλουτισμού μέσα στους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης. Προϊόντα χειρισμού
δειγμάτων της Neogen® που περιέχουν Ρυθμιστικό Διάλυμα Ουδετεροποίησης με αρυλ-σουλφονικό
σύμπλοκο: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G και HS2410NB2G. Αυτό τοπρωτόκολλο δεν έχει ελεγχθεί κατά τη διάρκεια της μελέτης NF Validation.
2

EL(Ελληνικά)Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με την έκθεση σε χημικές ουσίες και τους βιολογικούς
κινδύνους:• Διενεργείτε τον έλεγχο παθογόνων σε κατάλληλα εξοπλισμένο εργαστήριο υπό τον έλεγχο εκπαιδευμένου
προσωπικού. Επωασμένα μέσα εμπλουτισμού και εξοπλισμός ή επιφάνειες που έχουν έρθει σε επαφή με
επωασμένα μέσα εμπλουτισμού μπορεί να περιέχουν παθογόνα σε επίπεδα επαρκή να προκαλέσουν κίνδυνογια την ανθρώπινη υγεία.
• Τηρείτε πάντοτε τις τυπικές πρακτικές εργαστηριακής ασφάλειας, όπως χρήση κατάλληλης προστατευτικής
ενδυμασίας και προστασίας ματιών, όταν χειρίζεστε αντιδραστήρια και μολυσμένα δείγματα.
• Αποφεύγετε την επαφή με τα περιεχόμενα των μέσων εμπλουτισμού και με τους δοκιμαστικούς σωλήνες
αντιδραστηρίου μετά την ενίσχυση.
• Απορρίψτε τα εμπλουτισμένα δείγματα και τα σχετικά μολυσμένα απόβλητα σύμφωνα με τα ισχύοντα τοπικά/περιφερειακά/εθνικά/βιομηχανικά πρότυπα.
• Μην υπερβαίνετε τη συνιστώμενη ρύθμιση θερμοκρασίας στο θερμαντήρα.
• Μην υπερβαίνετε το συνιστώμενο χρόνο θέρμανσης.
• Χρησιμοποιείτε ένα κατάλληλο, βαθμονομημένο θερμόμετρο για να επαληθεύσετε τη θερμοκρασία του Neogen®
Ένθετου για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρος Μοριακής Ανίχνευσης (π.χ. θερμόμετρο μερικής εμβύθισης ήψηφιακό θερμόμετρο θερμοζεύγους, όχι θερμόμετρο ολικής εμβύθισης). Το θερμόμετρο πρέπει να τοποθετείται
στην προβλεπόμενη θέση στο Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης.
Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με διασταυρούμενη μόλυνση κατά την προετοιμασία τηςδοκιμασίας:• Φοράτε πάντοτε γάντια (για την προστασία του χρήστη και την πρόληψη εισαγωγής νουκλεασών).
Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με την έκθεση σε καυτά υγρά:• Μην υπερβαίνετε τη συνιστώμενη ρύθμιση θερμοκρασίας στο θερμαντήρα.
• Μην υπερβαίνετε το συνιστώμενο χρόνο θέρμανσης.
• Χρησιμοποιείτε ένα κατάλληλο, βαθμονομημένο θερμόμετρο για να επαληθεύσετε τη θερμοκρασία του Neogen®
Ένθετου για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρος Μοριακής Ανίχνευσης (π.χ. θερμόμετρο μερικής εμβύθισης ήψηφιακό θερμόμετρο θερμοζεύγους, όχι θερμόμετρο ολικής εμβύθισης). Το θερμόμετρο πρέπει να τοποθετείται
στην προβλεπόμενη θέση στο Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης.

ΣΗΜΕΙΩΣΗΓια να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με διασταυρούμενη μόλυνση κατά την προετοιμασία τηςδοκιμασίας:• Αλλάξτε γάντια πριν από την ενυδάτωση των σφαιριδίων αντιδραστηρίου.
• Συνιστάται να χρησιμοποιούνται αποστειρωμένα, με φραγμό για αερολύματα (με φίλτρο), ρύγχη πιπέτας
κατηγορίας μοριακής βιολογίας.
• Χρησιμοποιείτε νέο ρύγχος πιπέτας για κάθε μεταφορά δείγματος.
• Χρησιμοποιείτε Καλές Εργαστηριακές Πρακτικές για τη μεταφορά του δείγματος από το δοκιμαστικό σωλήνα
εμπλουτισμού στο δοκιμαστικό σωλήνα λύσης. Για να αποφευχθεί η μόλυνση της πιπέτας, ο χρήστης μπορεί
να επιλέξει να προσθέσει ένα ενδιάμεσο βήμα μεταφοράς. Για παράδειγμα, ο χρήστης μπορεί να μεταφέρει
κάθε εμπλουτισμένο δείγμα μέσα σε έναν αποστειρωμένο δοκιμαστικό σωλήνα.
• Χρησιμοποιείτε σταθμό εργασίας μοριακής βιολογίας που να περιέχει μικροβιοκτόνο λυχνία, όπου είναι
διαθέσιμη.
• Απολυμαίνετε περιοδικά τους πάγκους και τον εξοπλισμό του εργαστηρίου (πιπέτες, εργαλεία
σφράγισης/αποσφράγισης κτλ.) με διάλυμα οικιακής χλωρίνης 1–5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) ή με διάλυμα
απομάκρυνσης DNA.
Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με ψευδώς θετικό αποτέλεσμα:• Μην ανοίγετε ποτέ τους δοκιμαστικούς σωλήνες μετά την ενίσχυση.
• Απορρίπτετε πάντοτε τους μολυσμένους δοκιμαστικούς σωλήνες μουλιάζοντάς τους σε διάλυμα οικιακής
χλωρίνης 1–5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) για 1 ώρα και μακριά από την περιοχή προετοιμασίας της δοκιμασίας.
• Μην κλιβανίσετε ποτέ τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίου μετά την ενίσχυση.
• Εάν πιθανολογείται ότι τα δείγματα περιέχουν υψηλά επίπεδα DNA Cronobacter (π.χ. DNA από μη βιώσιμα
κύτταρα Cronobacter τα οποία έχουν υποβληθεί σε βήμα καταστροφής/αδρανοποίησης), οι υποθετικοί θετικοί
εμπλουτισμοί θα πρέπει να υποβάλλονται σε επεξεργασία με DNάση πριν από το βήμα Λύσης. Επικοινωνήστε
με τον τοπικό σας αντιπρόσωπο της Neogen για πρόσθετες οδηγίες. Αυτό το πρωτόκολλο δεν έχει ελεγχθεί
κατά τη διάρκεια της μελέτης NF Validation.
3

EL(Ελληνικά)Συμβουλευθείτε το Φύλλο Δεδομένων Ασφαλείας για πρόσθετες πληροφορίες και τοπικούς κανονισμούς σχετικά
με την απόρριψη.
Εάν έχετε ερωτήσεις σχετικά με συγκεκριμένες εφαρμογές ή διαδικασίες, παρακαλούμε επισκεφθείτε τηδιεύθυνση www.neogen.com ή επικοινωνήστε με τον τοπικό σας αντιπρόσωπο ή διανομέα της Neogen.

Ευθύνη του χρήστηΟι χρήστες είναι υπεύθυνοι να εξοικειωθούν με τις οδηγίες και τις πληροφορίες του προϊόντος. Επισκεφθείτε τηνιστοσελίδα μας στο www.neogen.com ή επικοινωνήστε με τον τοπικό σας αντιπρόσωπο ή διανομέα της Neogenγια περισσότερες πληροφορίες.
Κατά την επιλογή μιας μεθόδου ελέγχου, είναι σημαντικό να αναγνωρίζετε ότι οι εξωτερικοί παράγοντες όπωςοι μέθοδοι δειγματοληψίας, τα πρωτόκολλα ελέγχου, η προετοιμασία των δειγμάτων συμπεριλαμβανομένης τηςομογενοποίησης και της ανάμειξης, ο χειρισμός και η εργαστηριακή τεχνική μπορεί επίσης να επηρεάσουν τααποτελέσματα.
Αποτελεί ευθύνη του χρήστη να επιλέξει οποιαδήποτε μέθοδο ή προϊόν ελέγχου, για να αξιολογήσει ένανεπαρκή αριθμό δειγμάτων με τις κατάλληλες μήτρες και μικροβιακές προκλήσεις, ώστε η επιλεγμένη μέθοδος ναικανοποιεί τα κριτήρια του χρήστη.
Αποτελεί επίσης ευθύνη του χρήστη να καθορίσει ότι όλες οι μέθοδοι δοκιμής και τα αποτελέσματαανταποκρίνονται στις απαιτήσεις των πελατών και των προμηθευτών του.
Όπως και με κάθε μέθοδο ελέγχου, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από τη χρήση οποιουδήποτε προϊόντος
Neogen Food Safety δεν συνιστούν εγγύηση της ποιότητας των μητρών ή των διαδικασιών που υποβάλλονται σεέλεγχο.
Για να βοηθήσει τους πελάτες να αξιολογήσουν τη μέθοδο για τις διάφορες μήτρες τροφίμων, η Neogen έχειαναπτύξει το κιτ Neogen® Πίνακα Ελέγχου Μοριακής Ανίχνευσης. Όταν χρειάζεται, χρησιμοποιήστε τον Πίνακα
Ελέγχου (MC) για να προσδιορίσετε εάν η μήτρα έχει τη δυνατότητα να επηρεάσει τα αποτελέσματα από την
Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter. Ελέγξτε διάφορα δείγματα που είναι αντιπροσωπευτικά
της μήτρας, δηλ. δείγματα που λαμβάνονται από διαφορετική προέλευση, κατά τη διάρκεια οποιασδήποτε
περιόδου επικύρωσης όταν υιοθετείτε τη μέθοδο της Neogen, ή όταν ελέγχετε νέες ή άγνωστες μήτρες ή μήτρεςπου έχουν υποβληθεί σε αλλαγές στις πρώτες ύλες ή στην επεξεργασία.
Μια μήτρα μπορεί να οριστεί ως ένας τύπος προϊόντος με ενδογενείς ιδιότητες όπως σύνθεση και επεξεργασία.
Οι διαφορές μεταξύ των μητρών μπορεί να είναι απλές, όπως οι επιδράσεις που προκαλούνται από διαφορές
στην επεξεργασία ή στην παρουσίασή τους, για παράδειγμα, ακατέργαστο έναντι παστεριωμένου, φρέσκο έναντιαποξηραμένου κτλ.

Περιορισμός εγγυήσεων / Περιορισμένη αποκατάστασηΕΚΤΟΣ ΕΑΝ ΔΗΛΩΝΕΤΑΙ ΡΗΤΑ ΣΕ ΜΙΑ ΕΝΟΤΗΤΑ ΓΙΑ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΕΝΗ ΕΓΓΥΗΣΗ ΣΤΗΝ ΑΤΟΜΙΚΗΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ ΤΟΥ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ, Η NEOGEN ΑΠΟΠΟΙΕΙΤΑΙ ΟΛΕΣ ΤΙΣ ΡΗΤΕΣ ΚΑΙ ΕΝΝΟΟΥΜΕΝΕΣ ΕΓΓΥΗΣΕΙΣ,ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΜΕΝΩΝ ΑΛΛΑ ΟΧΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΤΙΚΑ, ΟΠΟΙΩΝΔΗΠΟΤΕ ΕΓΓΥΗΣΕΩΝ ΕΜΠΟΡΕΥΣΙΜΟΤΗΤΑΣΉ ΚΑΤΑΛΛΗΛΟΤΗΤΑΣ ΓΙΑ ΜΙΑ ΣΥΓΚΕΚΡΙΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ. Εάν οποιοδήποτε προϊόν Neogen Food Safety είναι
ελαττωματικό, η Neogen ή ο εξουσιοδοτημένος διανομέας της, κατά την κρίση τους, θα αντικαταστήσουν ήεπιστρέψουν την τιμή αγοράς του προϊόντος. Αυτές είναι οι αποκλειστικές σας αποκαταστάσεις. Επικοινωνήστε
με τον αντιπρόσωπο της Neogen ή τον εξουσιοδοτημένο διανομέα της Neogen για περαιτέρω ερωτήσεις.

Περιορισμός της ευθύνης της Neogen

Η NEOGEN ΔΕΝ ΕΥΘΥΝΕΤΑΙ ΓΙΑ ΟΠΟΙΑΔΗΠΟΤΕ ΑΠΩΛΕΙΑ Ή ΖΗΜΙΑ, ΕΙΤΕ ΑΜΕΣΗ, ΕΜΜΕΣΗ, ΕΙΔΙΚΗ,ΣΥΜΠΤΩΜΑΤΙΚΗ Ή ΑΠΟΘΕΤΙΚΗ ΖΗΜΙΑ, ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΜΕΝΩΝ, ΑΛΛΑ ΟΧΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΤΙΚΑ, ΔΙΑΦΥΓΟΝΤΩΝΚΕΡΔΩΝ. Η ευθύνη της Neogen δεν υπερβαίνει σε καμία περίπτωση και υπό καμία νομική θεωρία την τιμή αγοράς
του προϊόντος που εικάζεται ότι είναι ελαττωματικό.

Αποθήκευση και Aπόρριψη

Φυλάσσετε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter στους 2–8 °C. Να μην καταψύχεται.
Αποφεύγετε την έκθεση του κιτ στο φως κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης. Αφού ανοίξετε το κιτ, ελέγξτε ότιτο αλουμινένιο σακουλάκι είναι άθικτο. Εάν το αλουμινένιο σακουλάκι έχει υποστεί ζημιά, μη χρησιμοποιήσετε
το προϊόν. Μετά το άνοιγμα, οι αχρησιμοποίητοι δοκιμαστικοί σωλήνες αντιδραστηρίων πρέπει πάντοτε ναφυλάσσονται στο επανασφραγιζόμενο σακουλάκι με το αφυγραντικό μέσο, ώστε να διατηρείται η σταθερότητατων λυοφιλοποιημένων αντιδραστηρίων. Φυλάσσετε τα επανασφραγισμένα σακουλάκια στους 2–8 °C για χρονικό
διάστημα όχι μεγαλύτερο από 60 ημέρες.
4EL(Ελληνικά)Μη χρησιμοποιείτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter μετά την ημερομηνία λήξης. Η
ημερομηνία λήξης και ο αριθμός παρτίδας επισημαίνονται στην εξωτερική ετικέτα του κουτιού. Μετά τη χρήση,το μέσο εμπλουτισμού και οι δοκιμαστικοί σωλήνες της Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacterμπορεί ενδεχομένως να περιέχουν παθογόνα υλικά. Μετά την ολοκλήρωση του ελέγχου, τηρείτε τα τρέχοντα
βιομηχανικά πρότυπα για την απόρριψη μολυσμένων αποβλήτων. Συμβουλευθείτε το Φύλλο Δεδομένων
Ασφαλείας για πρόσθετες πληροφορίες και τοπικούς κανονισμούς σχετικά με την απόρριψη.

Οδηγίες Xρήσης

Ακολουθείτε όλες τις οδηγίες προσεκτικά. Η μη τήρηση των οδηγιών μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή
αποτελέσματα.
Απολυμαίνετε περιοδικά τους πάγκους και τον εξοπλισμό του εργαστηρίου (πιπέτες, εργαλεία
σφράγισης/αποσφράγισης κτλ.) με διάλυμα οικιακής χλωρίνης 1–5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) ή με διάλυμα
απομάκρυνσης DNA.
Ο χρήστης πρέπει να ολοκληρώσει την εκπαίδευση πιστοποίησης χειριστή για το Neogen Σύστημα Μοριακής
Ανίχνευσης, όπως περιγράφεται στο έγγραφο “Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ)
Protocols and Instructions for Neogen Molecular Detection System” (Πρωτόκολλα και οδηγίες πιστοποίησης
εγκατάστασης (IQ) / πιστοποίησης λειτουργίας (OQ) για το Neogen Σύστημα Μοριακής Ανίχνευσης)(6).
Βλέπε την ενότητα “Ειδικές οδηγίες για επικυρωμένες μεθόδους” για τις ειδικές απαιτήσεις:Πίνακας 3 για τα πρωτόκολλα εμπλουτισμού σύμφωνα με AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 καιPerformance TestedSM Αριθμός Πιστοποιητικού 101703
Πίνακας 4 για τα πρωτόκολλα εμπλουτισμού σύμφωνα με NF VALIDATION Πιστοποιητικό 3M 01/20-03/18
Εμπλουτισμός του δείγματοςΟ Πίνακας 2, 3 ή 4 παρουσιάζει οδηγίες για πρωτόκολλα εμπλουτισμού για δείγματα τροφίμων καιπεριβαλλοντικών δειγμάτων.
Αποτελεί ευθύνη του χρήστη η επικύρωση εναλλακτικών πρωτοκόλλων δειγματοληψίας ή εμπλουτισμού ήαναλογιών αραίωσης, προκειμένου να διασφαλιστεί ότι αυτή η μέθοδος ελέγχου πληροί τα κριτήρια του χρήστη.
Τρόφιμα, περιβαλλοντικές πούδρες, σκόνες, σαρώματα και σπόγγοι
1. Εξισορροπήστε το μέσο εμπλουτισμού σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (20–25 °C) εκτός εάν επισημαίνεταιδιαφορετικά στο πρωτόκολλο εμπλουτισμού (Βλ. Πίνακα 2, 3 ή 4).
2. Συνδυάστε με ασηπτικό τρόπο το μέσο εμπλουτισμού και το δείγμα, και ομογενοποιήστε πλήρως μέσωανάμειξης, διαδικασίας stomaching, ανάδευσης σε συσκευή vortex ή ανάμειξης με το χέρι για 2 ±0,2 λεπτά ήμέχρι όλα τα συσσωματώματα να έχουν διαλυθεί τελείως και το εναιώρημα εμπλουτισμού να είναι
ομοιογενές(7, 8).
α. Παράγοντες όπως η προετοιμασία των δειγμάτων συμπεριλαμβανομένης της ομογενοποίησης και τηςανάμειξης, ο χειρισμός και η εργαστηριακή τεχνική μπορεί να επηρεάσουν τα αποτελέσματα.
β. Για τα δείγματα με υψηλή περιεκτικότητα σε σωματιδιακή ύλη, συνιστάται η χρήση ασκών
φιλτραρίσματος.
γ.

Για μήτρες που διογκώνονται στο νερό και είναι ιδιαίτερα ιξώδεις (π.χ. δημητριακά, άμυλα), συνιστάταιη διενέργεια περαιτέρω αραιώσεων (>1:10) μέχρι το ιξώδες να μειωθεί κατάλληλα, ή η προσθήκη
αποστειρωμένης 1% (βάρος κατ' όγκο) άλφα-αμυλάσης στο BPW (ISO)(8).

δ. Για μεγάλα μεγέθη δείγματος δημητριακών, προσθέστε τη σκόνη δημητριακών αργά στο υγρό με συχνή
ανάμειξη για να αποφύγετε τα συσσωματώματα.
3. Επωάστε όπως περιγράφεται στον αντίστοιχο πίνακα πρωτοκόλλου (βλ. Πίνακα 2, 3 ή 4).

5EL(Ελληνικά)Πίνακας 2. Γενικά πρωτόκολλα εμπλουτισμού
Πίνακας δειγμάτων

Μέγεθος
δείγματος1Όγκος ζωμού
εμπλουτισμού1, 2

Θερμοκρασία
εμπλουτισμού
(±1 °C)Χρόνος
Όγκος
εμπλουτισμού ανάλυσης
(ώρες)
δείγματοςΠαιδικό γάλα σε σκόνη
(PIF) και πρώτες ύλεςόπως ξηρή σκόνη
γάλακτος, σκόνη σόγιας,σκόνη ορού γάλακτος,λακτόζη, ρυζάλευρο καιμαλτοδεξτρίνη

1X γραμμάριοανά δείγμα

9X mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µL

Πρώτες ύλες όπωςάλατα, μεταλλικά
στοιχεία, αμινοξέα, DHA(δοκοσαεξαενοϊκό οξύ)και βιταμίνες

1X γραμμάριο
δείγμα99X mL BPW (ISO)(1:100)

37

18–24

20 µL

Ξηρά περιβαλλοντικά
δείγματα όπως σκόνη,σαρώματα, συλλογή
ηλεκτρικής σκούπας

1X γραμμάριοανά δείγμα

9X mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µL

Περιβαλλοντικός
σπόγγος με 10 mL
Zωμό Letheen ή ZωμόOυδετεροποίησης D/E

1 συσκευή
δειγματοληψίας

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µL

1. Η Neogen έχει αξιολογήσει την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter χρησιμοποιώντας τιςαναλογίες αραίωσης στον Πίνακα 2 έως και 300 g. Αποτελεί ευθύνη του χρήστη η επικύρωση εναλλακτικών
αναλογιών ή πρωτοκόλλων αραίωσης, προκειμένου να διασφαλιστεί ότι η μέθοδος πληροί τα κριτήρια τουχρήστη.
2. Χρησιμοποιείτε προθερμασμένο BPW (ISO) εάν ο όγκος του ζωμού εμπλουτισμού είναι >300 mL (π.χ. τοδείγμα είναι >30 γραμμάρια).
Ειδικές οδηγίες για επικυρωμένες μεθόδους
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Πιστοποιητικό αρ. 101703

Στις μελέτες του Ερευνητικού Ινστιτούτου OMASM και PTMSM, η Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 Cronobacter βρέθηκε ότι αποτελεί αποτελεσματική μέθοδο για την ανίχνευση του Cronobacter. Οι μήτρες πουελέγχθηκαν στη μελέτη παρουσιάζονται στον Πίνακα 3.

6EL(Ελληνικά)Πίνακας 3. Πρωτόκολλα εμπλουτισμού σύμφωνα με AOAC® OMASM 2018.01 και PTMSM 101703
Πίνακας δειγμάτων

Μέγεθος
δείγματοςΌγκος ζωμού
εμπλουτισμού1Θερμοκρασία
εμπλουτισμού
(±1 °C)Βρεφικό γάλα σε σκόνη
και βρεφικά δημητριακά
σε σκόνη

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µL

Βρεφικά δημητριακά σεσκόνη χωρίς προβιοτικά

300 g

2700 mL BPW(ISO) (1:10)

Προθερμασμένο
37

18–24

20 µL

Βρεφικό γάλα σε σκόνη
και βρεφικά δημητριακά
σε σκόνη με προβιοτικά

300 g

2700 mL BPW(ISO) + 10 mg/L
βανκομυκίνη

Προθερμασμένο
37

22–24

20 µL

Λακτόζη

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µL

1 συσκευή
δειγματοληψίας

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µL

Περιβαλλοντικός
σπόγγος με 10 mL ΖωμόΟυδετεροποίησης D/EΧρόνος
Όγκος
εμπλουτισμού ανάλυσης
(ώρες)
δείγματος

1. Χρησιμοποιείτε προθερμασμένο BPW (ISO) εάν ο όγκος του ζωμού εμπλουτισμού είναι >300 mL.
NF VALIDATION από την AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/enΓια περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τη λήξη της εγκυρότητας, παρακαλούμε ανατρέξτε στο πιστοποιητικόNF VALIDATION που διατίθεται στον ιστότοπο που αναφέρεται παραπάνω.
Μέθοδος πιστοποίησης NF VALIDATION σύμφωνα με το πρότυπο ISO 16140-2(9) σε σύγκριση με το πρότυπο
ISO 22964.
Πεδίο εγκυρότητας: Βρεφικό γάλα σε σκόνη και βρεφικά δημητριακά με και χωρίς προβιοτικά, πρώτες ύλες καιπεριβαλλοντικά δείγματα.
Προετοιμασία δείγματος: Τα δείγματα πρέπει να προετοιμάζονται σύμφωνα με τα πρότυπα EN ISO 22694(2) και
EN ISO 6887(7, 8).
Έκδοση λογισμικού: Βλ. πιστοποιητικό.

7EL(Ελληνικά)Πίνακας 4. Πρωτόκολλα εμπλουτισμού σύμφωνα με την πιστοποιημένη μέθοδο NF VALIDATION 3M 01/20-03/18

Πίνακας δειγμάτων
•
•
•

•

•

Βρεφικό γάλα σεσκόνηΒρεφικά
δημητριακά σεσκόνηΣυστατικά όπωςξηρή σκόνη
γάλακτος, σκόνη
σόγιας, σκόνη
ορού γάλακτος,λακτόζη,ρυζάλευρο,
μαλτοδεξτρίνηΞηράπεριβαλλοντικά
δείγματα όπωςσκόνη, σαρώματα,συλλογή
ηλεκτρικής
σκούπας,Σπόγγος, νερόέκπλυσης,
μαντιλάκια

Βρεφικό γάλα σεσκόνη και βρεφικά
δημητριακά σε σκόνη
(χωρίς προβιοτικά)Βρεφικά δημητριακά
σε σκόνη και βρεφικό
γάλα σε σκόνη (μεπροβιοτικά)Μέγεθος
δείγματος

Όγκος
ζωμού
εμπλουτισμού1Θερμοκρασία Χρόνος
Όγκος
εμπλουεμπλουανάλυσης
τισμού
τισμού
δείγματος(±1 °C)(ώρες)

10 g

90 mL BPW
(ISO) (1:10)

37

18–24

20 µL

Συνιστώμενο
σημείο
διακοπής2, 3Ο ζωμός
εμπλουτισμούή το λύμα
δείγματοςμπορεί ναφυλαχθεί
στους 2–8 °C
για έως
72 ώρες

1 συσκευή
δειγματοληψίας
ή 10 mLΟ ζωμός
εμπλουτισμούή το λύμα
δείγματοςμπορεί ναφυλαχθεί
στους 2–8 °C
για έως
72 ώρες

30–300 g

BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µL

Ο ζωμός
εμπλουτισμούή το λύμα
δείγματοςμπορεί ναφυλαχθεί
στους 2–8 °C
για έως
72 ώρες

30–300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/L
βανκομυκίνη
(1:10)

37

22–24

20 µL

Κανένα1. Χρησιμοποιείτε προθερμασμένο BPW (ISO) εάν ο όγκος του ζωμού εμπλουτισμού είναι >300 mL (π.χ. τοδείγμα είναι >30 γραμμάρια).
2. Αφού ο ζωμός εμπλουτισμού τεθεί εκτός φύλαξης, συνεχίστε τις δοκιμές από το Βήμα 1 στην ενότητα Λύση.
Αφού το λύμα δείγματος τεθεί εκτός φύλαξης, συνεχίστε τις δοκιμές από το Βήμα 7 στην ενότητα Λύση.
3. Ανατρέξτε στο Παράρτημα A για τον επανέλεγχο αποθηκευμένων θερμικά κατεργασμένων λυμάτων.

8EL(Ελληνικά)Προετοιμασία του Neogen® Δίσκου Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης
1. Διαβρέξτε ένα πανί ή πετσέτα μίας χρήσης με διάλυμα οικιακής χλωρίνης 1–5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) καισκουπίστε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης.
2. Ξεπλύνετε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης με νερό.
3. Χρησιμοποιήστε μια πετσέτα μίας χρήσης για να στεγνώσετε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής
Ανίχνευσης.
4. Διασφαλίστε ότι ο Neogen Δίσκος Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης είναι στεγνός πριν τη χρήση.
Προετοιμασία του Neogen® Ένθετου Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης
Τοποθετήστε το Neogen Ένθετο Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης απευθείας στον πάγκο
του εργαστηρίου: Ο Neogen Δίσκος Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης δεν χρησιμοποιείται.
Χρησιμοποιήστε το ένθετο υποδοχής σωλήνων σε θερμοκρασία περιβάλλοντος εργαστηρίου (20–25 °C).
Προετοιμασία του Neogen® Ένθετου για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρος Μοριακής Ανίχνευσης
Τοποθετήστε το Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης σε μια διπλή μονάδα
υποδοχής σωλήνων ξηρής θέρμανσης. Ενεργοποιήστε τη μονάδα ξηρής θέρμανσης και ρυθμίστε τη θερμοκρασία
για να επιτρέψετε στο Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης να φθάσει και ναδιατηρήσει θερμοκρασία 100±1 °C.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ανάλογα με τη μονάδα θέρμανσης, αφήστε το Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα
Μοριακής Ανίχνευσης να φθάσει στην κατάλληλη θερμοκρασία για περίπου 30 λεπτά. Χρησιμοποιώνταςένα κατάλληλο, βαθμονομημένο θερμόμετρο (π.χ. θερμόμετρο μερικής εμβύθισης ή ψηφιακό θερμόμετροθερμοζεύγους, όχι θερμόμετρο ολικής εμβύθισης) τοποθετημένο στην καθορισμένη θέση, επαληθεύστε ότι το
Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης βρίσκεται στους 100±1 °C.
Προετοιμασία του Neogen® Οργάνου Μοριακής Ανίχνευσης
1. Εκκινήστε το Neogen® Λογισμικό Μοριακής Ανίχνευσης και συνδεθείτε. Επικοινωνήστε με τον τοπικό
σας αντιπρόσωπο της Neogen Food Safety για να διασφαλίσετε ότι διαθέτετε την τελευταία έκδοση τουλογισμικού.
2. Ενεργοποιήστε το Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης.
3. Δημιουργήστε ή επεξεργαστείτε μια διαδικασία με δεδομένα για κάθε δείγμα. Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο
χρήσης του Neogen Συστήματος Μοριακής Ανίχνευσης για λεπτομέρειες.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης πρέπει να φθάσει σε κατάσταση ετοιμότητας προτού
εισαχθεί ο Neogen Δίσκος Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης με τους δοκιμαστικούς σωλήνες
αντίδρασης. Αυτό το βήμα θέρμανσης διαρκεί περίπου 20 λεπτά και υποδεικνύεται από ένα ΠΟΡΤΟΚΑΛΙ φωςστη γραμμή κατάστασης του οργάνου. Όταν το όργανο είναι έτοιμο για να αρχίσει μια διαδικασία, η γραμμή
κατάστασης θα γίνει ΠΡΑΣΙΝΗ.
Λύση
Αφαιρέστε τον πυθμένα του στατώ Neogen Διαλύματος Λύσης με ένα κατσαβίδι πριν το τοποθετήσετε στο
Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης.

1. Αφήστε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης να θερμανθούν θέτοντας το στατώ σεθερμοκρασία περιβάλλοντος (20–25 °C) κατά τη διάρκεια της νύχτας (16–18 ώρες). Εναλλακτικές λύσεις γιατην εξισορρόπηση των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης σε θερμοκρασία περιβάλλοντος
είναι να θέσετε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης επάνω στον πάγκο του εργαστηρίου
για τουλάχιστον 2 ώρες, να επωάσετε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης σε επωαστήρα
37±1 °C για 1 ώρα ή να τους τοποθετήσετε σε διπλή μονάδα υποδοχής σωλήνων ξηρής θέρμανσης για30 δευτερόλεπτα στους 100 ±1 °C.
9EL(Ελληνικά)2. Αναστρέψτε τους πωματισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες για να αναμίξετε. Προχωρήστε στο επόμενο βήμαεντός 4 ωρών μετά την αναστροφή.
3. Βγάλτε το ζωμό εμπλουτισμού από τον επωαστήρα.
4. Απαιτείται ένας δοκιμαστικός σωλήνας Neogen Διαλύματος Λύσης για κάθε δείγμα και δείγμα ΑΕ (στείρο μέσοεμπλουτισμού).
4.1 Οι ταινίες δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης μπορούν να κοπούν στον επιθυμητό
αριθμό. Επιλέξτε τον αριθμό των μεμονωμένων δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης ή τιςαπαιτούμενες ταινίες των 8 δοκιμαστικών σωλήνων. Τοποθετήστε τους δοκιμαστικούς σωλήνες NeogenΔιαλύματος Λύσης σε ένα κενό στατώ.
4.2 Για να αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση, αποσφραγίζετε μία ταινία δοκιμαστικών σωλήνων
Neogen Διαλύματος Λύσης κάθε φορά, και χρησιμοποιείτε νέο ρύγχος πιπέτας για κάθε βήμα μεταφοράς.
4.3 Μεταφέρετε το εμπλουτισμένο δείγμα στους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης όπωςπεριγράφεται παρακάτω:Μεταφέρετε κάθε εμπλουτισμένο δείγμα σε μεμονωμένο σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης πρώτα.
Μεταφέρετε τον ΑΕ τελευταίο.
4.4 Χρησιμοποιήστε το Neogen® Εργαλείο Σφράγισης / Αποσφράγισης - Λύσης Μοριακής Ανίχνευσης για νααποσφραγίσετε μία ταινία δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης – μία ταινία κάθε φορά.
4.5 Απορρίψτε το πώμα του δοκιμαστικού σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης – εάν το λύμα πρόκειται ναδιατηρηθεί για επανέλεγχο, τοποθετήστε τα πώματα μέσα σε ένα καθαρό δοχείο, για εκ νέου εφαρμογή
μετά τη λύση.
4.5.1. Για την επεξεργασία του διατηρημένου λύματος, βλ. Παράρτημα A.
4.6 Αναταράξτε τον σάκο εμπλουτισμού πριν τη συλλογή του δείγματος από την πλευρά με το φίλτρο ότανεργάζεστε με ιξώδη δείγματα.
4.7 Μεταφέρετε 20 µL δείγματος σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης εκτός εάνυποδεικνύεται διαφορετικά στον πίνακα πρωτοκόλλου.
5. Επαναλάβετε τα βήματα 4.4 έως 4.7 μέχρι το κάθε επιμέρους δείγμα να έχει προστεθεί σε έναν αντίστοιχο
δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης στην ταινία.

6. Όταν έχουν μεταφερθεί όλα τα δείγματα, μεταφέρετε 20 µL ΑΕ (στείρο μέσο εμπλουτισμού, π.χ. BPW) μέσα σεδοκιμαστικό σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης. Μη χρησιμοποιείτε νερό ως ΑΕ.
7. Επαληθεύστε ότι η θερμοκρασία του Neogen Ένθετου για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής
Ανίχνευσης βρίσκεται στους 100±1 °C.
8. Τοποθετήστε το ακάλυπτο στατώ δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης στο Neogen Ένθετο γιαΥποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης και θερμάνετε για 15±1 λεπτά. Κατά τη διάρκεια τηςθέρμανσης, το Neogen Διάλυμα Λύσης θα αλλάξει από ροζ (ψυχρό) σε κίτρινο (θερμό).
Δείγματα που δεν έχουν υποβληθεί στην κατάλληλη θερμική κατεργασία κατά τη διάρκεια του βήματος λύσηςτης δοκιμασίας μπορούν να θεωρηθούν ως πιθανός βιολογικός κίνδυνος και ΔΕΝ πρέπει να εισάγονται στο
Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης.

10

EL

(Ελληνικά)9. Αφαιρέστε το ακάλυπτο στατώ των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης από το Neogen Ένθετο γιαΥποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης και αφήστε το να κρυώσει στο Neogen Ένθετο Υποδοχής
Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης για τουλάχιστον 5 λεπτά και μέγιστο 10 λεπτά. Το Neogen ΈνθετοΥποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης, όταν χρησιμοποιείται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος χωρίς
τον Neogen® Δίσκο Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης, πρέπει να τοποθετηθεί απευθείας επάνω
στον πάγκο του εργαστηρίου. Όταν κρυώσει, το Neogen Διάλυμα Λύσης θα αποκτήσει ξανά ροζ χρώμα.
10. Αφαιρέστε το στατώ των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης από το Neogen Ένθετο Υποδοχής
Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Ενίσχυση
1. Απαιτείται ένας δοκιμαστικός σωλήνας Αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 Cronobacter για κάθε δείγμα και τον ΑΕ.
1.1 Οι ταινίες δοκιμαστικών σωλήνων μπορούν να κοπούν στον επιθυμητό αριθμό δοκιμαστικών σωλήνων.
Επιλέξτε τον απαιτούμενο αριθμό των μεμονωμένων δοκιμαστικών σωλήνων Αντιδραστηρίου NeogenΔοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter ή τις απαιτούμενες ταινίες των 8 δοκιμαστικών σωλήνων.
1.2 Τοποθετήστε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 Cronobacter σε ένα κενό στατώ.
1.3 Αποφύγετε να διαταράξετε τα σφαιρίδια αντιδραστηρίου από τον πάτο των δοκιμαστικών σωλήνων.
2. Επιλέξτε έναν δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Ελέγχου Αντιδραστηρίου και τοποθετήστε τον στο στατώ.
3. Για να αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση, αποσφραγίζετε μία ταινία δοκιμαστικών σωλήνων
Αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter κάθε φορά, και χρησιμοποιείτε νέορύγχος πιπέτας για κάθε βήμα μεταφοράς.
4. Μεταφέρετε κάθε λύμα σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 Cronobacter και δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Ελέγχου Αντιδραστηρίου, όπως περιγράφεται παρακάτω:Μεταφέρετε κάθε λύμα δείγματος στους επιμέρους δοκιμαστικούς σωλήνες Αντιδραστηρίου NeogenΔοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter πρώτα και στη συνέχεια τον ΑΕ. Ενυδατώστε τονδοκιμαστικό σωλήνα Neogen Ελέγχου Αντιδραστηρίου τελευταίο.
5. Χρησιμοποιήστε το Neogen® Εργαλείο Σφράγισης / Αποσφράγισης - Αντιδραστηρίου Μοριακής Ανίχνευσης γιανα αποσφραγίσετε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 Cronobacter – μία ταινία δοκιμαστικών σωλήνων Αντιδραστηρίου κάθε φορά. Απορρίψτε το πώμα.
5.1 Μεταφέρετε 20 µL του λύματος δείγματος από το επάνω 1/2 του υγρού (αποφύγετε το ίζημα)στον δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης στον αντίστοιχο δοκιμαστικό σωλήνα
Αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter. Χορηγήστε υπό γωνία
για να αποφύγετε να διαταράξετε τα σφαιρίδια. Αναμίξτε πιπετάροντας προσεκτικά πάνω-κάτω
5 φορές.
5.2 Επαναλάβετε το βήμα 5.1 μέχρι το επιμέρους λύμα Δείγματος να έχει προστεθεί σε έναν αντίστοιχο
δοκιμαστικό σωλήνα Αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter στηνταινία.
5.3 Καλύψτε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Aντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 Cronobacter με τα παρεχόμενα επιπλέον πώματα και χρησιμοποιήστε τη στρογγυλευμένη πλευρά του
Neogen Εργαλείου Σφράγισης / Αποσφράγισης - Αντιδραστηρίου Μοριακής Ανίχνευσης για να ασκήσετε
πίεση με μια κίνηση εμπρός-πίσω, διασφαλίζοντας ότι το πώμα έχει εφαρμοστεί σφιχτά.
5.4 Επαναλάβετε τα βήματα 5.1 έως 5.3 όπως απαιτείται, για τον αριθμό των δειγμάτων προς έλεγχο.
11EL(Ελληνικά)5.5 Όταν έχουν μεταφερθεί όλα τα λύματα δείγματος, επαναλάβετε τα βήματα 5.1 έως 5.3 για να μεταφέρετε 20 µL
του λύματος ΑΕ μέσα σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter.
5.6 Μεταφέρετε 20 µL του λύματος ΑΕ μέσα σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Ελέγχου
Αντιδραστηρίου. Χορηγήστε υπό γωνία για να αποφύγετε να διαταράξετε τα σφαιρίδια. Αναμίξτε
πιπετάροντας προσεκτικά πάνω-κάτω 5 φορές.
6. Φορτώστε τους σφραγισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες σε έναν καθαρό και απολυμασμένο Neogen Δίσκο
Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης. Κλείστε και ασφαλίστε το καπάκι του Neogen Δίσκου Ταχείας
Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης.

7. Ανασκοπήστε και επιβεβαιώστε τη διαμορφωμένη διαδικασία στο Neogen Λογισμικό Μοριακής Ανίχνευσης.
8. Κάντε κλικ στο κουμπί Έναρξη στο λογισμικό και επιλέξτε το όργανο που θα χρησιμοποιηθεί. Το καπάκι τουεπιλεγμένου οργάνου ανοίγει αυτόματα.
9. Τοποθετήστε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης μέσα στο Neogen Όργανο Μοριακής
Ανίχνευσης και κλείστε το καπάκι για να εκκινήσετε τη δοκιμασία. Τα αποτελέσματα παρέχονται εντός
60 λεπτών, αν και τα θετικά μπορεί να ανιχνευθούν νωρίτερα.
10. Αφού ολοκληρωθεί η δοκιμασία, αφαιρέστε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσηςαπό το Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης και απορρίψτε τους δοκιμαστικούς σωλήνες μουλιάζοντάς
τους σε διάλυμα οικιακής χλωρίνης 1–5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) για 1 ώρα και μακριά από την περιοχή
προετοιμασίας της δοκιμασίας.
ΥΠΟΔΕΙΞΗ: Για την ελαχιστοποίηση του κινδύνου ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων λόγω διασταυρούμενηςμόλυνσης, ποτέ μην ανοίγετε τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίων που περιέχουν ενισχυμένο DNA. Αυτόπεριλαμβάνει τον δοκιμαστικό σωλήνα Αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter,τον δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Ελέγχου Αντιδραστηρίου και τον δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Πίνακα
Ελέγχου. Απορρίπτετε πάντοτε τους σφραγισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίου μουλιάζοντάς
τους σε διάλυμα οικιακού λευκαντικού 1–5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) για 1 ώρα και μακριά από την περιοχή
προετοιμασίας της δοκιμασίας.

Αποτελέσματα και ερμηνεία

Ένας αλγόριθμος ερμηνεύει την καμπύλη παροχής φωτός που προκύπτει από την ανίχνευση της ενίσχυσης
νουκλεϊνικών οξέων. Τα αποτελέσματα αναλύονται αυτόματα από το λογισμικό και κωδικοποιούνται χρωματικά
με βάση το αποτέλεσμα. Ένα Θετικό ή Αρνητικό αποτέλεσμα καθορίζεται μέσω ανάλυσης ενός αριθμού
μοναδικών παραμέτρων καμπύλης. Τα υποθετικά θετικά αποτελέσματα αναφέρονται σε πραγματικό χρόνο, ενώτα Αρνητικά και τα αποτελέσματα Προς Επιθεώρηση εμφανίζονται μετά την ολοκλήρωση της διαδικασίας.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ακόμα και ένα αρνητικό δείγμα δεν θα δώσει μηδενική ένδειξη, καθώς το σύστημα και τααντιδραστήρια ενίσχυσης Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 - Cronobacter έχουν μια σχετική μονάδα
φωτός (RLU) “υποβάθρου”.
Επιβεβαίωση• Επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων σύμφωνα με τη μέθοδο πιστοποίησης NF ValidationΣτο πλαίσιο του NF VALIDATION, όλοι οι υποθετικοί θετικοί εμπλουτισμοί πρέπει να επιβεβαιώνονταιακολουθώντας επιβεβαίωση μεθόδου αναφοράς(2), αρχίζοντας με τη μεταφορά από τον πρωτογενή εμπλουτισμό
(BPW ISO ή BPW ISO που συμπληρώνεται με 10 mg/L βανκομυκίνης).
•Άλλο πρωτόκολλο επιβεβαίωσης

12

EL

(Ελληνικά)Οι υποθετικοί θετικοί εμπλουτισμοί πρέπει να επιβεβαιώνονται σύμφωνα με τις τυπικές διαδικασίες λειτουργίας
του εργαστηρίου ή ακολουθώντας την κατάλληλη επιβεβαίωση μεθόδου αναφοράς(1,2), αρχίζοντας με τη μεταφοράαπό τον πρωτογενή εμπλουτισμό (BPW ISO ή BPW ISO που συμπληρώνεται με 10 mg/L βανκομυκίνης) σε ένα μέσοδευτερεύοντος εμπλουτισμού, ακολουθούμενη από μετέπειτα εξέταση σε αντικειμενοφόρο και επιβεβαίωση τωναπομονωμάτων χρησιμοποιώντας τις κατάλληλες βιοχημικές, οροδιαγνωστικές ή/και μοριακές μεθόδους.
Στη σπάνια περίπτωση ασυνήθιστης παροχής φωτός, ο αλγόριθμος το επισημαίνει ως Προς Επιθεώρηση.
Η Neogen συνιστά στο χρήστη να επαναλάβει τη δοκιμασία για όλα τα δείγματα Προς Επιθεώρηση. Εάν τοαποτέλεσμα συνεχίζει να είναι Προς Επιθεώρηση, προχωρήστε στον έλεγχο επιβεβαίωσης χρησιμοποιώντας τημέθοδο που προτιμάτε ή όπως καθορίζεται από τους τοπικούς κανονισμούς(1,2).
Σε περίπτωση ασυμφωνίας των αποτελεσμάτων (υποθετικά θετικά με την Neogen Δοκιμασία Μοριακής
Ανίχνευσης 2 - Cronobacter, που δεν έχουν επιβεβαιωθεί με έναν από τους τρόπους που περιγράφονται
παραπάνω), το εργαστήριο πρέπει να ακολουθεί τις καθιερωμένες τυπικές διαδικασίες λειτουργίας του για νααναφέρει τα αποτελέσματά του.
Εάν έχετε ερωτήσεις σχετικά με συγκεκριμένες εφαρμογές ή διαδικασίες, παρακαλούμε επισκεφθείτε τηδιεύθυνση www.neogen.com ή επικοινωνήστε με τον τοπικό σας αντιπρόσωπο ή διανομέα της Neogen.
Παράρτημα A. Διακοπή πρωτοκόλλου: Αποθήκευση και επανέλεγχος θερμικά κατεργασμένων λυμάτων
1. Για να αποθηκεύσετε ένα θερμικά κατεργασμένο λύμα, επαναπωματίστε το δοκιμαστικό σωλήνα λύσης με ένακαθαρό πώμα (βλ. ενότητα Λύση, 4.5)
2. Αποθηκεύστε στους 2 έως 8 °C για έως 72 ώρες.
3. Προετοιμάστε ένα αποθηκευμένο δείγμα για ενίσχυση αναστρέφοντας 2–3 φορές για να αναμίξετε.
4. Αφαιρέστε το πώμα από τους δοκιμαστικούς σωλήνες.
5. Τοποθετήστε τους δοκιμαστικούς σωλήνες με το αναμεμιγμένο λύμα στο Neogen Ένθετο για Υποδοχή
Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης και θερμάνετε στους 100±1 °C για 5±1 λεπτά.
6. Αφαιρέστε το στατώ των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης από το ένθετο θέρμανσης
και αφήστε το να κρυώσει στο Neogen Ένθετο Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης γιατουλάχιστον 5 λεπτά και μέγιστο 10 λεπτά.
7. Συνεχίστε το πρωτόκολλο στην ενότητα Ενίσχυση που περιγράφεται λεπτομερώς παραπάνω.

Βιβλιογραφία:1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements andguidance for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact
your Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initialsuspension and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation ofmilk and milk products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initialsuspension and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of
miscellaneous products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Ανατρέξτε στις τρέχουσες εκδόσεις των τυπικών μεθόδων που παρατίθενται παραπάνω.

Επεξήγηση των Συμβόλων
info.neogen.com/symbols

13

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

PL(Polski)
Data wydania: 2024-01

Informacje o produkcie
Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter
Opis i przeznaczenie produktu

Neogen® Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter stosuje się razem z systemem Neogen® do diagnostyki
molekularnej w celu szybkiego i swoistego wykrywania bakterii Cronobacter w próbkach pochodzących ze
wzbogaconego pokarmu oraz środowiska przetwarzania żywności.
Molekularny test Neogen do wykrywania wykorzystuje metodę pętlowej amplifikacji izotermicznej do szybkiego
namnażania sekwencji kwasów nukleinowych z zachowaniem wysokiej swoistości i czułości, w połączeniu z
bioluminescencją do wykrywania amplifikacji. Domniemane wyniki dodatnie przekazuje się w czasie rzeczywistym, zaśwyniki ujemne wyświetlą się po zakończeniu testu. Domniemane wyniki dodatnie wymagają potwierdzenia preferowaną
metodą lub metodą wynikającą z lokalnych przepisów(1, 2).
Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter jest przeznaczony do stosowania w środowisku
laboratoryjnym przez specjalistów stosownie przeszkolonych w zakresie praktyk laboratoryjnych. Firma Neogen nie
udokumentowała zastosowania tego produktu w gałęziach przemysłu innych niż żywność i napoje. Przykładowo firma
Neogen nie udokumentowała zastosowania tego produktu do badania próbek leków, kosmetyków, próbek klinicznych
ani weterynaryjnych. Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter nie oceniono w przypadku
wszystkich możliwych produktów spożywczych, procesów przetwarzania żywności, protokołów testowych ani w
przypadku wszystkich dostępnych szczepów bakterii.
Podobnie jak w przypadku wszystkich metod testowych, pochodzenie, skład i jakość podłoża wzbogacającego
może mieć wpływ na otrzymywane wyniki. Czynniki takie jak metody pobierania próbek, protokoły przeprowadzaniabadań, przygotowanie próbki, w tym homogenizacja i mieszanie, postępowanie i techniki laboratoryjne również mogąwpłynąć na wynik badania. Firma Neogen zaleca ocenienie metody wykorzystującej podłoże wzbogacające w środowiskuużytkownika, stosując wystarczającą liczbę próbek konkretnej żywności i/lub próbek środowiskowych oraz próbek
stwarzających wyzwania związane z drobnoustrojami, aby zapewnić, że dana metoda spełnia potrzeby użytkownika.
Firma Neogen oceniła Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter przy użyciu buforowanej wody
peptonowej wg ISO.
Urządzenie Neogen® do diagnostyki molekularnej należy stosować z próbkami poddanymi obróbce cieplnej na etapie
lizy, której zadaniem jest zniszczenie organizmów obecnych w próbce. Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki
cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu
Neogen do diagnostyki molekularnej.
Firma Neogen Food Safety została wyróżniona certyfikatem ISO (ang. International Organization for Standardization —Międzynarodowa Organizacja Normalizacyjna) 9001 w zakresie projektowania i wytwarzania.
Zestaw Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter zawiera 96 testów, opisanych w Tabeli 1.
Tabela 1. Elementy zestawu Neogen Molekularnego testu do wykrywania
Element

Charakterystyka

Liczba sztuk

Roztwór lizujący Neogen®
(LS)Różowy roztwór w
przezroczystych
probówkach

96 (12 taśm z
580 μl LS na probówkę
8 probówkami)

Neogen® Molekularny test do Probówki
wykrywania 2 – Cronobacter pomarańczowoProbówki z reagentami
czerwone

Zawartość

Komentarze
Ustawione
w statywie
i gotowe doużytkuLiofilizowana swoista
96 (12 taśm z
Gotowe domieszanina do amplifikacji
8 probówkami)użyciai wykrywania

Dodatkowe korki

Korki pomarańczowoczerwone

96 (12 taśm z
8 korkami)

Kontrola Neogen® reagenta
(KR)

16 (2
Przezroczyste probówki z woreczki pokorkiem zatrzaskowym
8 oddzielnych
probówek)
1

Gotowe doużyciaLiofilizowane DNA
kontrolne, mieszanina do
amplifikacji i wykrywania

Gotowe doużyciaPL(Polski)

Kontrola ujemna, niebędąca częścią zestawu, to jałowe podłoże wzbogacające, np. BPW ISO. Nie stosować wody jako
kontroli ujemnej.

Bezpieczeństwo

Użytkownik powinien dokładnie zapoznać się ze wszystkimi informacjami dotyczącymi bezpieczeństwa zawartymi w
instrukcji dotyczącej systemu Neogen do diagnostyki molekularnej oraz Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2– Cronobacter i się do nich stosować. Instrukcję bezpieczeństwa należy zachować do przyszłego wykorzystania.
OSTRZEŻENIE:

Oznacza niebezpieczną sytuację, której skutkiem, w razie braku podjęcia środków
zapobiegawczych, mogą być poważne obrażenia ciała lub śmierć i/lub uszkodzenia mienia.

WAŻNA INFORMACJA: Oznacza potencjalnie niebezpieczną sytuację, której skutkiem, w razie niepodjęcia środków
zapobiegawczych, może być uszkodzenie mienia.

W OSTRZEŻENIE
Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter nie należy stosować do diagnozowania ludzi ani zwierząt.
Obowiązkiem użytkownika jest przeszkolenie personelu w zakresie aktualnych, odpowiednich technik badań:przykładowo, Dobrych praktyk laboratoryjnych(3), ISO/IEC 17025(4) lub ISO 7218(5).
Aby zmniejszyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie ujemnym prowadzącym do wydania zanieczyszczonego
produktu:• Należy postępować zgodnie z protokołem i wykonywać testy zgodnie z zaleceniami podanymi w Informacjach oprodukcie.
• Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter należy przechowywać w sposób podany na opakowaniu i w
informacjach o produkcie.
• Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter należy zawsze wykorzystać przed upływem terminuważności.
• Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter należy wykorzystać do badania próbek żywności, paszy iśrodowiska przetwarzania żywności, które poddano walidacji wewnętrznej lub przez osoby trzecie.
• Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter należy stosować wyłącznie w połączeniu z
powierzchniami, środkami odkażającymi, protokołami i szczepami bakterii poddanymi walidacji wewnętrznej lub
przez osoby trzecie.
• W przypadku próbki środowiskowej zawierającej bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu przed
rozpoczęciem badania należy przygotować roztwór rozcieńczony w stosunku 1:2 (1 część próbki w 1 części jałowego
bulionu wzbogacającego). Inną możliwością jest przeniesienie 10 μl wzbogacającego buforu neutralizującego do
probówek z roztworem lizującym Neogen. Produkty firmy Neogen® do postępowania z próbkami, które zawierają
bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,
HS10NB2G i HS2410NB2G. Protokół ten nie został przetestowany podczas badania NF Validation.
Aby zmniejszyć ryzyko związane z narażeniem na substancje chemiczne i zagrożenia biologiczne:• Badania patogenów należy prowadzić w odpowiednio wyposażonym laboratorium pod kontrolą przeszkolonego
personelu. Inkubowane podłoże wzbogacające oraz sprzęt lub powierzchnie, które mogły mieć kontakt z
inkubowanym podłożem wzbogacającym, mogą zawierać patogeny na poziomie zagrażającym ludzkiemu zdrowiu.
• Należy zawsze przestrzegać standardowych laboratoryjnych praktyk bezpieczeństwa, łącznie z noszeniem
odpowiedniej odzieży i okularów ochronnych przy pracy z reagentami i skażonymi próbkami.
• Należy unikać kontaktu z zawartością probówek z podłożem wzbogacającym oraz reagentem po amplifikacji.
• Należy utylizować wzbogacone próbki i związane z nimi zanieczyszczone odpady zgodnie z obowiązującymi
normami lokalnymi/regionalnymi/krajowymi/branżowymi.
• Nie przekraczać zalecanych ustawień temperatury w bloku grzewczym.
• Nie przekraczać zalecanego czasu ogrzewania.
• Stosować odpowiedni, skalibrowany termometr do potwierdzenia poprawności temperatury Wkładki Neogen®
bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej (np. termometr zanurzeniowy zanurzany częściowo lub cyfrowy
termometr z termoogniwem, ale nie termometr zanurzeniowy zanurzany całkowicie). Termometr należy umieścić wwyznaczonym miejscu Wkładki Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.
Aby zmniejszyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem krzyżowym podczas przygotowania testu:• Należy zawsze nosić rękawiczki (aby chronić użytkownika i zapobiegać wprowadzaniu nukleaz).
Aby zmniejszyć ryzyko związane z narażeniem na gorące płyny:• Nie przekraczać zalecanych ustawień temperatury w bloku grzewczym.

2

PL
•
•

(Polski)Nie przekraczać zalecanego czasu ogrzewania.
Stosować odpowiedni, skalibrowany termometr do potwierdzenia poprawności temperatury Wkładki Neogen®
bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej (np. termometr zanurzeniowy zanurzany częściowo lub cyfrowy
termometr z termoogniwem, ale nie termometr zanurzeniowy zanurzany całkowicie). Termometr należy umieścić wwyznaczonym miejscu Wkładki Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.

UWAGA
Aby zmniejszyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem krzyżowym podczas przygotowania testu:• Zmienić rękawiczki przed nawodnieniem osadu reagenta.
• Zaleca się stosowanie jałowych końcówek pipet do biologii molekularnej z (filtrowaną) barierą aerozolową.
• Do każdego przeniesienia próbki używać nowej końcówki pipety.
• Przy przenoszeniu próbek z probówki wzbogacenia do probówki lizującej należy przestrzegać zasad dobrej praktyki
laboratoryjnej. Aby uniknąć skażenia pipetora, użytkownik może zdecydować się dodać etap transferu pośredniego.
Przykładowo można przenieść wzbogaconą próbkę do jałowej probówki.
• W miarę możliwości należy używać stanowiska badawczego biologii molekularnej z lampą bakteriobójczą.
• Należy okresowo dezynfekować stoły i sprzęt laboratoryjny (pipety, narzędzia do zakładania/zdejmowania korków itp.)
za pomocą 1–5% (obj./obj., wodnego) roztworu domowego wybielacza lub roztworu do usuwania DNA.
Aby ograniczyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie dodatnim:• Nie otwierać probówek po procesie amplifikacji.
• Zanieczyszczone probówki należy utylizować, namaczając je w 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworze domowego
wybielacza przez 1 godzinę i wynosząc poza obszar przygotowania testów.
• Nie umieszczać probówek reagenta w autoklawie po procesie amplifikacji.
• Jeśli istnieje podejrzenie, że próbki zawierają duże ilości DNA bakterii Cronobacter (np. DNA pochodzące z tkaneknieżywotnych Cronobacter poddanych etapowi eliminacji/inaktywacji), domniemane dodatnie wzbogacenia próbeknależy poddać DNazie przed etapem lizy. Dodatkowe instrukcje można uzyskać u przedstawiciela firmy Neogen.
Protokół ten nie został przetestowany podczas badania NF Validation.
Dodatkowe informacje oraz lokalne przepisy dotyczące utylizacji zawiera karta charakterystyki produktu.
W przypadku pytań dotyczących konkretnych zastosowań lub procedur należy odwiedzić stronę
www.neogen.com lub skontaktować się z lokalnym przedstawicielem lub dystrybutorem firmy Neogen.

Obowiązki użytkownikaUżytkownicy są zobowiązani do zapoznania się z instrukcjami oraz informacjami dotyczącymi produktu. W celu
uzyskania dalszych informacji należy odwiedzić stronę internetową www.neogen.com, lub skontaktować się z lokalnym
przedstawicielem lub dystrybutorem firmy Neogen.
Przy wyborze metody testowania należy pamiętać, że takie czynniki zewnętrzne, jak metody próbkowania, protokoły
testowania, przygotowanie próbki, w tym homogenizacja i mieszanie, dalsze postępowanie i technika laboratoryjnamogą wpływać na uzyskiwane wyniki.
Obowiązkiem użytkownika przy wyborze jakiejkolwiek metody testowania lub produktu jest poddanie ocenie
dostatecznej liczby próbek z właściwymi macierzami i z uwzględnieniem zagrożeń powodowanych przez
mikroorganizmy, tak aby zastosowana metoda mogła spełnić oczekiwania użytkownika i ustalone przez niego kryteria.
Obowiązkiem użytkownika jest również dopilnowanie, aby zastosowane metody testowania i uzyskane wyniki spełniały
wymagania klienta i dostawcy.
Podobnie jak w przypadku każdej metody testowania, wyniki uzyskiwane za pomocą produktu firmy Neogen Food
Safety nie stanowią gwarancji jakości testowanych macierzy lub procesów.
Aby pomóc klientom ocenić metodę dla różnych macierzy, firma Neogen opracowała zestaw kontroli Neogen® macierzy
do diagnostyki molekularnej. W razie potrzeby należy użyć zestawu kontroli macierzy (KM) do ustalenia, czy danamacierz może wpływać na wyniki Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter. Należy przetestować
kilka próbek reprezentatywnych dla macierzy, czyli próbek pozyskanych z różnych źródeł, podczas dowolnego okresu
walidacji przy stosowaniu metody firmy Neogen lub podczas testowania nowych lub nieznanych macierzy albo macierzypoddanych zmianom w zakresie procesu lub surowców.
Macierz można zdefiniować jako typ produktu o nieodłącznych właściwościach, takich jak skład i proces wytwarzania.
Różnice pomiędzy macierzami mogą być równie łatwo zauważalne, jak efekty spowodowane różnicami w procedurach
obróbki lub prezentacji, przykładowo surowe a pasteryzowane, świeże a suszone itd.

3

PL

(Polski)Ograniczenie gwarancji / Ograniczony środek prawnyJEŚLI NIE ZOSTAŁO TO WYRAŹNIE OKREŚLONE W ROZDZIALE DOT. OGRANICZONEJ GWARANCJI POJEDYNCZYCHOPAKOWAŃ PRODUKTÓW, FIRMA NEOGEN WYŁĄCZA ODPOWIEDZIALNOŚĆ WSZYSTKICH GWARANCJIDOMNIEMANYCH I DOROZUMIANYCH, W TYM MIĘDZY INNYMI, DOWOLNYCH GWARANCJI ZGODNOŚCI Z
PRZEZNACZENIEM I PRZYDATNOŚCI DO OKREŚLONEGO CELU. W razie wad jakiegokolwiek produktu firmy Neogen
Food Safety firma Neogen lub jej autoryzowany dystrybutor wymieni taki produkt lub, wedle własnego uznania, zwrócikoszty zakupu tego produktu. Są to jedyne przysługujące środki zaradcze. W przypadku dalszych pytań prosimy o kontakt z
przedstawicielem firmy Neogen lub autoryzowanym dystrybutorem firmy Neogen.

Ograniczenie odpowiedzialności firmy Neogen

FIRMA NEOGEN NIE BĘDZIE ODPOWIEDZIALNA ZA JAKIEKOLWIEK SZKODY ANI STRATY, ZARÓWNOBEZPOŚREDNIE, POŚREDNIE, SZCZEGÓLNE, UBOCZNE LUB NASTĘPCZE, W TYM MIĘDZY INNYMI ZA UTRACONEZYSKI. W żadnym wypadku odpowiedzialność firmy Neogen przyznana na mocy prawa nie może przekroczyć ceny
zakupu rzekomo wadliwego produktu.

Przechowywanie i utylizacja

Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter należy przechowywać w temp. 2–8°C. Nie zamrażać.
Podczas przechowywania chronić zestaw przed światłem. Po otwarciu zestawu należy sprawdzić, czy woreczek
foliowy nie jest uszkodzony. Nie używać zestawu, jeżeli woreczek jest uszkodzony. Po otwarciu nieużywane probówki
z reagentem należy przechowywać w woreczku wielokrotnego zamknięcia z pochłaniaczem wilgoci wewnątrz, copozwoli zachować stabilność liofilizowanych reagentów. Ponownie zamknięte woreczki można przechowywać w temp.
2–8°C maksymalnie przez 60 dni.
Nie stosować Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter po upływie daty ważności. Terminważności i numer partii podano na zewnętrznej etykiecie pudełka. Po użyciu podłoże wzbogacające i probówki Neogen
Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter mogą zawierać materiały patogenne. Po zakończeniu badanianależy stosować się do aktualnych standardów branżowych dotyczących utylizacji zanieczyszczonych odpadów.
Dodatkowe informacje oraz lokalne przepisy dotyczące utylizacji zawiera karta charakterystyki produktu.

Instrukcja użycia

Należy dokładnie przestrzegać wszystkich instrukcji. W przeciwnym razie wyniki mogą być niedokładne.
Należy okresowo dezynfekować stoły i sprzęt laboratoryjny (pipety, narzędzia do zakładania/zdejmowania korków itp.)
za pomocą 1–5% (obj./obj., wodnego) roztworu domowego wybielacza lub roztworu do usuwania DNA.
Użytkownik powinien ukończyć szkolenie kwalifikacyjne użytkownika systemu Neogen do diagnostyki molekularnej(OQ), jak opisano w dokumencie „instrukcje i protokoły odnośnie wymagań dotyczących instalacji (IQ) / kwalifikacji
operacyjnej (OQ) systemu Neogen do diagnostyki molekularnej”(6).
Szczegółowe wymagania opisano w części „Specjalne instrukcje dotyczące zatwierdzonych metod”:
Tabela 3 – protokoły wzbogacania według AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 i certyfikatu Performance
TestedSM nr 101703.
Tabela 4 – protokoły wzbogacania zgodnie z certyfikatem NF VALIDATION 3M 01/20-03/18.
Wzbogacanie próbki
Tabele 2, 3 i 4 zawierają wytyczne dotyczące protokołów wzbogacania żywności i próbek środowiskowych.
Użytkownik ma obowiązek przeprowadzić walidację alternatywnych protokołów próbkowania i wzbogacania lub
proporcji roztworów, aby sprawdzić, czy dana metoda badawcza spełnia kryteria określone przez użytkownika.
Żywność, proszki środowiskowe, pył, zmiotki i gąbki
1. Jeśli procedura wzbogacania nie stanowi inaczej (patrz Tabele 2, 3 lub 4), doprowadzić podłoże wzbogacające dotemperatury pokojowej (20-25°C).
2. Aseptycznie połączyć podłoże wzbogacające z próbką i dokładnie zhomogenizować poprzez zmieszanie,wytrząsanie, wirowanie lub mieszanie ręczne przez 2 ± 0,2 minuty lub do całkowitego rozpuszczenia wszystkich
grudek i uzyskania jednolitej zawiesiny wzbogacającej(7, 8).
a.

Czynniki takie jak przygotowanie próbki, w tym homogenizacja i mieszanie, postępowanie i techniki
laboratoryjne również mogą wpłynąć na wynik badania.

b. W przypadku próbek o wysokiej zawartości cząstek stałych zaleca się stosowanie worków z filtrem.

4

PL
c.

(Polski)W przypadku macierzy, które zwiększają swoją objętość w wodzie i są wysoce lepkie (np. zboża, skrobie), zaleca
się wykonanie dalszych rozcieńczeń (> 1:10) aż do odpowiedniego zmniejszenia lepkości lub dodanie sterylnej
1% (% obj.) alfa-amylazy do BPW (ISO)(8).

d. W przypadku dużych próbek kaszek powoli dodać kaszkę w proszku do płynu, często mieszając, aby
uniknąć grudek.
3. Inkubować w sposób podany w tabeli odpowiedniego protokołu (patrz Tabela 2, 3 lub 4).
Tabela 2. Ogólne protokoły wzbogacania
Wielkość
próbki1Objętość bulionu
wzbogacającego1, 2Temperatura
wzbogacania(± 1°C)Czas
wzbogacania(godz.)

Objętość
badanej
próbkiMleka w proszku dla niemowląt imateriały nieprzetworzone, takie jak
mleko w proszku, proszek sojowy,
serwatka w proszku, laktoza, mąkaryżowa i maltodekstryna

Próbka
1X g

9X ml BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Materiały nieprzetworzone, takie jaksole, minerały, aminokwasy, DHA(kwas dokozaheksaenowy) i witaminy

Probka
1X g

99X ml BPW (ISO)(1:100)

37

18–24

20 µl

Suche próbki środowiskowe, takie
jak kurz, zmiotki, brud zassany doodkurzacza

Próbka
1X g

9X ml BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Gąbka środowiskowa z 10 ml bulionu
Letheen lub bulionu neutralizującego
D/E1urządzenie
dopobierania
próbek90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Macierz próbki

1. Firma Neogen oceniła Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacter przy użyciu współczynników
rozcieńczenia podanych w Tabeli 2, do 300 g. Użytkownik ma obowiązek przeprowadzić walidację alternatywnych
protokołów i proporcji roztworów, aby sprawdzić, czy metoda badawcza spełnia kryteria określone przezużytkownika.
2. Jeśli objętość bulionu wzbogacającego jest większa niż 300 ml (np. próbka jest większa niż 30 g), należy stosować
wstępnie ogrzane podłoże BPW (ISO).
Specjalne instrukcje dotyczące zatwierdzonych metod
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
Certyfikat nr 101703 AOAC® Performance Tested SM (PTM)

W badaniach AOAC Research Institute OMASM i PTMSM Neogen Molekularny test do wykrywania 2 – Cronobacterokazał się być skuteczną metodą wykrywania bakterii Cronobacter. W Tabeli 3 przedstawiono macierze przetestowane
w ramach tego badania.

5

PL(Polski)Tabela 3. Protokoły wzbogacania zgodnie z AOAC® OMASM 2018.01 i PTMSM 101703
Wielkość
próbkiObjętość bulionu
wzbogacającego1

Temperatura
wzbogacania(± 1°C)Czas
wzbogacania(godz.)

Objętość
badanej
próbki

Mleko w proszku dla niemowląt ikaszka w proszku dla niemowląt

10 g

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Nieprobiotyczna kaszka w proszku dla
niemowląt

300 g

2700 ml BPW(ISO) (1:10)

Wstępnieogrzane 37

18–24

20 µl

Mleko w proszku dla niemowląt ikaszka w proszku dla niemowląt z
probiotykami

300 g

2700 ml BPW(ISO) + 10 mg/l
wankomycynyWstępnieogrzane 37

22–24

20 µl

Laktoza

10 g

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

1
urządzenie
dopobierania
próbek90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Macierz próbkiGąbka środowiskowa z 10 ml bulionu
neutralizującego D/E

1. Jeśli objętość bulionu wzbogacającego jest większa niż 300 ml, należy stosować wstępnie ogrzane podłoże BPW (ISO).
Certyfikacja NF VALIDATION instytutu AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Dodatkowe informacje na temat końca ważności można znaleźć w certyfikacie NF VALIDATION dostępnym na
wskazanej powyżej stronie internetowej.
Metoda certyfikowana według NF VALIDATION zgodnie z normą ISO 16140-2(9) w porównaniu do normy ISO 22964.
Zakres zatwierdzania: preparat w proszku dla niemowląt i kaszki w proszku dla niemowląt z probiotykami lub bez,materiały nieprzetworzone i próbki środowiskowe.
Przygotowanie próbki: próbki należy przygotować zgodnie z normą EN ISO 22694(2) i EN ISO 6887(7, 8).
Wersja oprogramowania: patrz certyfikat.

6

PL(Polski)Tabela 4. Protokoły wzbogacania zgodnie z metodą 3M 01/20-03/18 certyfikowaną według NF VALIDATION
Macierz próbki
•
•
•

•

•

Mleko w proszku
dla niemowląt
Kaszka w proszku
dla niemowląt
Składniki takie jak
mleko w proszku,
proszek sojowy,
serwatka w
proszku, laktoza,mąka ryżowa,maltodekstryna
Suche próbkiśrodowiskowe,
takie jak kurz,
zmiotki, brudzassany doodkurzaczaGąbka, woda
do płukania,
chusteczki

Mleko w proszku dla
niemowląt i kaszka w
proszku dla niemowląt
(nieprobiotyczne)

Mleko w proszku dla
niemowląt i kaszka w
proszku dla niemowląt
(z probiotykiem)

Wielkość
próbki

Temperatura
CzasObjętość
Objętość bulionu
Zalecany punkt
wzbogacania wzbogacania badanej
1
wzbogacającego
przerwania2, 3(± 1°C)(godziny)
próbki10 g

90 ml BPW (ISO)(1:10)

37

18–24

20 µl

Bulionwzbogacający
lub próbkę
lizatu można
przechowywać
w temperaturze
2–8°C przez
maksymalnie
72 godziny

1urządzenie
dopobierania
próbek lub
10 ml

Bulionwzbogacający
lub próbkę
lizatu można
przechowywać
w temperaturze
2–8°C przez
maksymalnie
72 godziny

30–300 g

BPW (ISO) (1:10)

37

18–24

20 µl

Bulionwzbogacający
lub próbkę
lizatu można
przechowywać
w temperaturze
2–8°C przez
maksymalnie
72 godziny

30–300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/l
wankomycyny(1:10)

37

22–24

20 µl

Żaden

1. Jeśli objętość bulionu wzbogacającego jest większa niż 300 ml (np. próbka jest większa niż 30 g), należy stosować
wstępnie ogrzane podłoże BPW (ISO).
2. Po wyjęciu bulionu wzbogacającego z magazynu należy wznowić testy od kroku 1 części Lizy. Po wyjęciu próbki
lizatu z magazynu należy wznowić testy od kroku 7 części Lizy.
3. Ponowne badanie przechowywanych lizatów poddanych obróbce termicznej – patrz Załącznik A.
Przygotowanie Tacy Neogen® urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej
1. Zmoczyć szmatkę lub jednorazowy ręcznik 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworem wybielacza do użytku domowego iprzetrzeć nim Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej.
2. Spłukać wodą Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej.

7

PL(Polski)

3. Osuszyć Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej za pomocą
jednorazowego ręcznika.
4. Przed rozpoczęciem użytkowania należy sprawdzić, czy Taca Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów dodiagnostyki molekularnej jest sucha.
Przygotowanie Wkładki Neogen® bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej
Wkładkę Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej należy umieścić bezpośrednio na blacie
laboratoryjnym. Taca Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej nie będzie potrzebna. Stosować blok w
temperaturze otoczenia w laboratorium (20–25°C).
Przygotowanie Wkładki Neogen® bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej
Wkładkę Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej należy umieścić w suchym podwójnym bloku
grzewczym. Włączyć suchy blok grzewczy i ustawić temperaturę pozwalającą Wkładce Neogen bloku grzewczego do
diagnostyki molekularnej osiągnąć i utrzymać temperaturę 100 ± 1°C.
UWAGA: W zależności od typu bloku grzewczego Wkładkę Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnejnależy zostawić na około 30 minut, by osiągnęła odpowiednią temperaturę. Używając odpowiedniego,skalibrowanego termometru (przykładowo częściowo zanurzanego termometru lub cyfrowego termometru z
termoogniwem, a nie całkowicie zanurzanego termometru) umieszczonego w wyznaczonym miejscu, sprawdzić, czytemperatura Wkładki Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C.
Przygotowanie Urządzenia Neogen® do diagnostyki molekularnej
1. Uruchomić oprogramowanie Neogen® do diagnostyki molekularnej i zalogować się. Skontaktować się z
przedstawicielem Neogen Food Safety, aby upewnić się, że dysponują Państwo najnowszą wersją oprogramowania.
2. Włączyć Urządzenie Neogen do diagnostyki molekularnej.
3. Utworzyć lub edytować serię z danymi dla każdej próbki. Szczegółowe informacje są dostępne w instrukcji obsługi
Systemu Neogen do diagnostyki molekularnej.
UWAGA: Przed włożeniem Tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej z
probówkami reakcyjnymi Urządzenie Neogen do diagnostyki molekularnej musi osiągnąć stan gotowości. Etap
nagrzewania trwa około 20 minut i sygnalizuje go POMARAŃCZOWA kontrolka na pasku stanu urządzenia. Kiedyurządzenie będzie gotowe do rozpoczęcia analizy, kolor paska stanu zmieni się na ZIELONY.
Liza
Za pomocą śrubokrętu wyjąć dolną część stojaka z probówkami z roztworem lizującym Neogen przed umieszczeniem
go we Wkładce Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.

1. Umożliwić ogrzanie probówek z roztworem lizującym Neogen (LS), pozostawiając stojak w temperaturze
otoczenia (20–25°C) na noc (16–18 godzin). Alternatywą dla równoważenia temperatury probówek z roztworem
lizującym Neogen do temperatury otoczenia jest pozostawienie probówek z roztworem lizującym Neogen na
stole laboratoryjnym na co najmniej 2 godziny, inkubacja probówek z roztworem lizującym Neogen w cieplarcenastawionej na 37 ± 1°C przez 1 godzinę lub umieszczenie ich w suchym podwójnym bloku grzewczym na 30
sekund w temp. 100°C ± 1°C.
2. Odwrócić probówki zamknięte korkiem w celu wymieszania ich zawartości. Przejść do następnego kroku w ciągu
4 godzin od odwrócenia.
3. Wyjąć bulion wzbogacający z cieplarki.
4. Dla każdej próbki oraz próbki KU (sterylnego podłoża wzbogacającego) wymagana jest jedna probówka z
roztworem lizującym Neogen.

8

PL(Polski)

4.1 Taśmy z probówkami z roztworem lizującym Neogen można dociąć do żądanej liczby probówek. Zależnie odsytuacji należy dobrać liczbę pojedynczych probówek z roztworem lizującym Neogen lub taśm złożonych z 8
probówek. Umieścić probówki z roztworem lizującym Neogen w pustym stojaku.
4.2 Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami z roztworem lizującym Neogen
pojedynczo i na każdym etapie przenoszenia stosować nową końcówkę pipety.
4.3 Wzbogaconą próbkę należy przenieść do probówek z roztworem lizującym Neogen w opisany poniżej sposób:
Najpierw przenieść każdą wzbogaconą próbkę do pojedynczej probówki z roztworem lizującym Neogen. Nakońcu przenieść KU.
4.4 Do zdejmowania korków taśmy z probówkami z roztworem lizującym Neogen (po jednej taśmie na raz) należy
wykorzystać Narzędzie Neogen® do zakładania/zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej –Liza.
4.5 Zdjąć korek probówki z roztworem lizującym Neogen – jeśli lizat będzie zachowany do celów ponownego
wykonania testu, umieścić korki w czystym pojemniku do ponownego założenia po wykonaniu lizy.
4.5.1. Odnośnie obróbki zachowanego lizatu patrz Załącznik A.
4.6 Wstrząsnąć worek z podłożem wzbogacającym przed pobraniem próbki od strony filtra podczas pracy z
próbkami lepkimi.
4.7 Przenieść 20 µl próbki do probówki z roztworem lizującym Neogen, o ile nie podano inaczej w protokole
zamieszczonym w tabeli.
5. Powtarzać kroki 4.4 do 4.7 do momentu dodania każdej indywidualnej próbki do odpowiedniej probówki z
roztworem lizującym Neogen w taśmie.

6. Po przeniesieniu wszystkich próbek przenieść 20 µl KU (jałowe podłoże wzbogacające, np. BPW) do probówki z
roztworem lizującym Neogen. Nie stosować wody jako KU.
7. Upewnić się, że temperatura Wkładki Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C.
8. Umieścić odkryty stojak na probówki z roztworem lizującym Neogen we Wkładce Neogen bloku grzewczego do
diagnostyki molekularnej i ogrzewać przez 15 ± 1 min. Podczas ogrzewania roztwór lizujący Neogen zmieni barwę zróżowej (chłodny) na żółtą (gorący).
Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie
biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu Neogen do diagnostyki molekularnej.
9. Wyjąć odkryty stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z bloku grzewczego Neogen do diagnostyki
molekularnej i umożliwić schłodzenie we Wkładce Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej przez
co najmniej 5 minut, a maksymalnie 10 minut. Wkładka Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej,
stosowana w temperaturze otoczenia bez Tacy Neogen® bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej, powinna
znajdować się bezpośrednio na stole laboratoryjnym. Po schłodzeniu roztwór lizujący Neogen ponownie przybierzeróżową barwę.
10. Wyjąć stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z Wkładki Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki
molekularnej.

9

PL(Polski)

00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplifikacja
1. Dla każdej próbki oraz KU wymagana jest jedna probówka reagenta Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2– Cronobacter.
1.1 Taśmy z probówkami można dociąć do pożądanej liczby probówek. Dobrać wymaganą liczbę pojedynczych
probówek z reagentem Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter lub taśm złożonych z 8
probówek.
1.2 Umieścić probówki z reagentem Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter w pustym
stojaku.
1.3 Nie wolno dopuścić do wstrząśnięcia granulek reagenta na dnie probówek.
2. Wybrać jedną probówkę Kontroli Neogen reagenta i umieścić ją w stojaku.
3. Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami z reagentem Neogen Molekularnego
testu do wykrywania 2 – Cronobacter pojedynczo i na każdym etapie przenoszenia stosować nową końcówkę pipety.
4. Przenieść poszczególne lizaty do probówki z reagentem Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 –Cronobacter oraz do probówki z Kontrolą Neogen reagenta w sposób opisany poniżej:Przenieść najpierw każdą próbkę lizatu do oddzielnej probówki z reagentem Neogen Molekularnego testu do
wykrywania 2 – Cronobacter, a następnie przenieść KU. Na końcu nawodnić probówkę z Kontrolą Neogen reagenta.
5. Do zdejmowania korków probówek z reagentem Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacternależy wykorzystać Narzędzie Neogen® do zakładania/zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej– Reagent – po jednej taśmie na raz. Wyrzucić korek.
5.1 Przenieść 20 µl próbki lizatu z górnej 1/2 płynu (unikać osadu) probówki z roztworem lizującym Neogen
do odpowiedniej probówki z reagentem Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter.
Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić do wstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając i
wypuszczając roztwór pipetą 5 razy.
5.2 Powtarzać krok 5.1, aż wszystkie pojedyncze próbki lizatu zostaną dodane do odpowiednich probówek z
reagentem Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter znajdujących się w taśmie.
5.3 Probówki z reagentem Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter należy zamknąć
załączonymi dodatkowymi korkami i za pomocą zaokrąglonej strony Narzędzia Neogen do zakładania/
zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej – Reagent wywołać nacisk ruchem w przód i w tył,
aby upewnić się, że korek został szczelnie nałożony.
5.4 Kroki 5.1 do 5.3 należy powtarzać zależnie od potrzeby dla wszystkich próbek poddawanych badaniu.
5.5 Po przeniesieniu wszystkich próbek lizatu powtórzyć kroki 5.1 do 5.3, aby przenieść 20 µl lizatu KU do probówki
z reagentem Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter.
5.6 Przenieść 20 µl lizatu KU do probówki z Kontrolą Neogen reagenta. Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić dowstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając roztwór pipetą 5 razy.
6. Zamknięte korkiem probówki należy umieścić na czystej i odkażonej tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania
testów do diagnostyki molekularnej. Zamknąć i zablokować pokrywę tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania
testów do diagnostyki molekularnej.

10

PL

(Polski)

7. W oprogramowaniu Neogen do diagnostyki molekularnej sprawdzić i potwierdzić konfigurację analizy.
8. Kliknąć przycisk Start w programie i wybrać używane urządzenie. Nastąpi automatyczne otwarcie pokrywy
wybranego urządzenia.
9. Aby rozpocząć analizę, należy umieścić Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki
molekularnej w Urządzeniu Neogen do diagnostyki molekularnej i zamknąć pokrywę. Na wyniki trzeba poczekać 60
minut, choć wyniki dodatnie można uzyskać wcześniej.
10. Po zakończeniu testu należy wyjąć Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki
molekularnej z Urządzenia Neogen do diagnostyki molekularnej i zutylizować probówki, namaczając je w 1–5%
(obj./obj., wodnym) roztworze domowego wybielacza przez 1 godzinę i usuwając z obszaru przygotowywania
testów.
WAŻNA INFORMACJA: Aby zminimalizować ryzyko otrzymania wyników fałszywie dodatnich w związku zzanieczyszczeniem krzyżowym, nie należy otwierać probówek reagenta zawierających DNA po amplifikacji. Dotyczy
to reagenta Neogen Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter, Kontroli Neogen reagenta oraz probówek
kontroli Neogen macierzy. Zanieczyszczone uszczelnione próbówki reagenta należy utylizować, namaczając je w 1–5%
(obj./obj.; wodnym) roztworze domowego wybielacza przez 1 godzinę i wynosząc poza obszar przygotowania testów.

Wyniki i interpretacja

Algorytm interpretuje krzywą strumienia świetlnego powstałego w wyniku wykrycia amplifikacji kwasu nukleinowego.
Oprogramowanie prowadzi automatyczną analizę wyników oraz koduje je odpowiednimi kolorami. Wynik dodatni
lub ujemny określa się przez analizę wielu określonych niepowtarzalnych parametrów krzywej. Domniemane wyniki
dodatnie przekazuje się w czasie rzeczywistym, natomiast wyniki ujemne wyświetlą się po zakończeniu testu.
UWAGA: Nawet próbka ujemna nie da odczytu zerowego, jako że system i odczynniki do amplifikacji Neogen
Molekularnego testu do wykrywania 2 – Cronobacter charakteryzują się swoistym poziomem tła w RLU.
Potwierdzenie• Potwierdzenie wyników zgodnie z certyfikowaną metodą NF VALIDATION
W kontekście walidacji NF VALIDATION, wszystkie domniemane dodatnie wzbogacenia próbek należy potwierdzić
stosując referencyjną metodę potwierdzania(2), począwszy od transferu z głównego podłoża wzbogacającego (BPW ISO
lub BPW ISO uzupełnione 10 mg/l wankomycyny).
•

Inny protokół potwierdzania

Domniemane dodatnie wzbogacenia próbek należy potwierdzić zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi
laboratorium lub stosując odpowiednią referencyjną metodę potwierdzającą(1, 2), począwszy od transferu z głównego
podłoża wzbogacającego (BPW ISO lub BPW ISO uzupełnione 10 mg/l wankomycyny) do drugorzędowego podłoża
wzbogacającego, a następnie wyizolowanie i potwierdzenie izolatów za pomocą stosownych metod biochemicznych,
serologicznych i/lub molekularnych.
W rzadkich przypadkach, przy wystąpieniu nietypowego światła wychodzącego, algorytm opisze je jako „Sprawdzić”(Inspect). Firma Neogen zaleca powtórzenie testów dla wszystkich próbek oznaczonych jako „Sprawdzić” (Inspect).
Jeżeli utrzymuje się wynik „Sprawdzić” (Inspect), należy przejść do testu potwierdzającego z zastosowaniem
preferowanej metody lub zgodnie z lokalnymi przepisami(1,2).
W przypadku niezgodności wyników (domniemany wynik dodatni w badaniu Neogen Molekularnym testem dowykrywania 2 – Cronobacter, brak potwierdzenia jedną z powyższych metod) laboratorium musi wykonać czynności
niezbędne do zapewnienia ważności uzyskanych wyników.

11

PL

(Polski)W przypadku pytań dotyczących konkretnych zastosowań lub procedur należy odwiedzić stronę
www.neogen.com lub skontaktować się z lokalnym przedstawicielem lub dystrybutorem firmy Neogen.
Załącznik A. Przerwanie protokołu: przechowywanie i ponowne badanie lizatów poddanych obróbce cieplnej
1. W celu przechowywania lizatu poddanego obróbce termicznej należy ponownie zamknąć probówkę lizatu czystym
korkiem (patrz część Liza, punkt 4.5).
2. Przechowywać w temp. 2 do 8°C maksymalnie przez 72 godziny.
3. Przygotować przechowywaną próbkę do amplifikacji przez odwrócenie 2–3 razy w celu zmieszania.
4. Otworzyć probówki.
5. Umieścić mieszane probówki lizatu we Wkładce Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej i ogrzewać
w temp. 100 ± 1°C przez 5 ± 1 min.
6. Wyjąć stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z bloku grzewczego i umożliwić schłodzenie wewkładce Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej przez co najmniej 5 minut, a maksymalnie 10 minut.
7. Kontynuować protokół od etapu Amplifikacji wyszczególnionego powyżej.

Bibliografia:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Należy odnieść się do aktualnych wersji wymienionych powyżej metod standardowych.

Objaśnienie symboli

info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

RU(Русский)Дата выпуска: 2024-01

Инструкции к препарату
Тест-набор 2 для молекулярного анализа - CronobacterОписание и предназначение продукта

Комплект «Neogen® Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» используется вместе с системой
молекулярной диагностики Neogen® для быстрого и точного обнаружения штаммов Cronobacter вобогащенных пробах пищевых продуктов и сред производства пищевых продуктов.
В комплекте «Neogen Тест-набор для молекулярного анализа» используется петлевая изотермическая
амплификация для быстрого расширения нуклеотидных последовательностей с высокой точностью ичувствительностью в сочетании с биолюминесценцией для выявления амплификации. Предположительно
положительные результаты отображаются в реальном времени, а отрицательные результаты — позавершении анализа. Результаты, которые можно считать положительными, следует подтверждать
предпочтительным для вас методом или в соответствии с местными нормативными требованиями(1, 2).
Комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» предназначен для применения влабораторных условиях и должен использоваться специалистами, прошедшими обучение лабораторным
методам работы. Компания Neogen документально не подтверждала возможность использования этого
продукта в других отраслях промышленности, кроме отрасли производства продуктов питания и напитков.
Например, компания Neogen не подтверждала документально возможность использования этого продуктадля тестирования фармацевтических, косметических, клинических или ветеринарных проб. Действие
комплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» не оценивалось в отношении
всех возможных пищевых продуктов, технологий производства пищевых продуктов, протоколов
тестирования и штаммов бактерий.
Как и в случае применения любого метода тестирования, на результаты исследования может
повлиять источник, состав и качество обогатительной среды. На результаты исследования могут
также повлиять такие факторы, как метод отбора проб, протоколы тестирования, подготовка проб,включая гомогенизацию и смешивание, способы обработки, а также методика лабораторной работы.
Чтобы гарантировать соответствие выбранного метода критериям пользователя, компания Neogenрекомендует оценить метод, включая обогатительную среду, непосредственно в лаборатории пользователяс применением достаточного количества проб, конкретных пищевых продуктов и (или) проб окружающей
среды, а также микробных провокационных проб.
Компания Neogen оценивала действие комплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа Cronobacter», используя в качестве обогатительной среды забуференную пептонную воду ISO.
Прибор для молекулярной диагностики Neogen® предназначен для использования вместе с пробами,прошедшими тепловую обработку на этапе лизиса, который проводится с целью уничтожения
присутствующих в пробе организмов. Пробы, которые не прошли надлежащую тепловую обработку наэтапе лизиса, могут представлять биологическую опасность. ЗАПРЕЩАЕТСЯ вставлять их в прибор длямолекулярной диагностики Neogen.
Процессы разработки и производства компании Neogen Food Safety прошли проверку и получили
сертификат ISO 9001 (Международная организация по стандартизации).
В комплекте «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» предусмотрено 96 тестов,описание которых содержится в таблице 1.

1

RU(Русский)Таблица 1. Компоненты комплекта «Neogen Тест-набор для молекулярного анализа»Элемент

Обозначение

Количество

Содержимое

Комментарии

Neogen® Раствор для лизиса
(LS)Розовый растворв прозрачных
пробирках

96(12 пластинок
по
8 пробирокна каждой)580 мкл растворадля лизиса в каждой
пробиркеВ штативеи готовы киспользованию

Оранжево-красные
пробирки

96Лиофилизированная
(12 пластинок
смесь дляГотовы кпоамплификации
использованию
8 пробироки обнаружения
штаммовна каждой)Запасные колпачки

Оранжево-красные
колпачки

96(12 пластинок
по
8 колпачковна каждой)Готовы киспользованию

Neogen® Контроль
реагентов (RC)Прозрачные
пробирки сконтрольногерметизирующими
крышками

16 (2 пакета
по
8 отдельных
пробирок вкаждом)Лиофилизированная
контрольная
ДНК, смесь дляГотовы камплификации
использованиюи обнаружения
штаммов

Neogen® Тест-набор 2 длямолекулярного анализа Cronobacter (Пробирки среагентом)Отрицательный контроль, не входящий в комплект, представляет собой стерильную обогатительную среду,например забуференную пептонную воду ISO. Не используйте воду в качестве среды для отрицательного
контроля.

Техника безопасности

Прочтите, примите к сведению и соблюдайте все правила техники безопасности, содержащиеся винструкциях по эксплуатации системы молекулярной диагностики Neogen и комплекта «Neogen Тестнабор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter». Сохраните инструкции по технике безопасности дляиспользования в дальнейшем.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Указывает на опасную ситуацию, которая, если ее не избежать, может привести ксмерти или тяжелой травме и (или) к повреждению имущества.
УВЕДОМЛЕНИЕ.

Указывает на потенциально опасную ситуацию, которая, если ее не избежать, может
привести к повреждению имущества.

W ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕНе используйте комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» придиагностировании заболеваний людей или животных.
Пользователь несет ответственность за обучение персонала соответствующим методикам
проведения тестирования, например описанным в своде правил «Надлежащая лабораторная
практика»(3), стандарте ISO/IEC 17025(4) или ISO 7218(5).
Для снижения рисков, связанных с выпуском зараженного продукта вследствие
ложноотрицательного результата, соблюдайте приведенные далее правила.
• Соблюдайте протокол и выполняйте тестирование в строгом соответствии с инструкциями к препарату.
• Храните комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» согласно указаниямна упаковке и инструкциям к продукту.
• Всегда используйте комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» доистечения срока годности.

2

RU
•
•
•

(Русский)Комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» следует использоватьдля исследования проб пищевых продуктов и сред производства пищевых продуктов, прошедших
внутреннюю или стороннюю валидацию.
Используйте комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» только на техповерхностях, с теми дезинфицирующими средствами, в соответствии с теми протоколами и для техштаммов бактерий, которые прошли внутреннюю или стороннюю проверку.
Пробу среды, содержащую нейтрализующий буферный раствор с арилсульфонатным комплексом,следует перед проверкой разбавить в пропорции 1:2 (1 часть пробы в 1 части стерильного
обогатительного бульона). Альтернативный вариант — перелить 10 мкл обогатительной среды
нейтрализующего буферного раствора в пробирки с раствором для лизиса Neogen. Средства подготовки
проб к анализу Neogen®, которые содержат нейтрализующий буферный раствор с арилсульфонатным
комплексом: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G и HS2410NB2G. Этотпротокол не тестировался во время исследования NF Validation.

Для снижения рисков, связанных с воздействием химических и биологически опасных веществ,соблюдайте приведенные далее правила.
• Выполняйте тестирование на патогены в оборудованной надлежащим образом лаборатории подконтролем обученного персонала. Инкубированные обогатительные среды, а также оборудование илиповерхности, которые контактировали с инкубированными обогатительными средами, могут содержать
патогены в количестве, достаточном для угрозы здоровью человека.
• Обязательно соблюдайте стандартные лабораторные меры обеспечения безопасности, в том числе
используйте защитную одежду и средства защиты глаз при работе с реагентами и загрязненными пробами.
• Избегайте контакта с обогатительной средой и пробирками с реагентом после амплификации.
• Утилизируйте обогащенные пробы и связанные загрязненные отходы в соответствии с действующими
местными, региональными, национальными и промышленными стандартами.
• Не превышайте рекомендованную температуру в нагревателе.
• Не превышайте рекомендованную продолжительность нагрева.
• Для проверки температуры внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики
Neogen® следует использовать соответствующим образом откалиброванный термометр (например,термометр частичного погружения или термопарный цифровой термометр, но не термометр
полного погружения). Термометр следует вставить в специально отведенное место на внутреннем
нагревательном блоке для молекулярной диагностики Neogen.
Для снижения рисков, связанных с перекрестным загрязнением при подготовке проб длядиагностики, соблюдайте приведенные далее правила.
• Обязательно надевайте перчатки (для защиты пользователя и во избежание введения нуклеаз).
Для снижения рисков, связанных с воздействием горячих жидкостей, соблюдайте приведенные
далее правила.
• Не превышайте рекомендованную температуру в нагревателе.
• Не превышайте рекомендованную продолжительность нагрева.
• Для проверки температуры внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики
Neogen® следует использовать соответствующим образом откалиброванный термометр (например,термометр частичного погружения или термопарный цифровой термометр, но не термометр
полного погружения). Термометр следует вставить в специально отведенное место на внутреннем
нагревательном блоке для молекулярной диагностики Neogen.

УВЕДОМЛЕНИЕДля снижения рисков, связанных с перекрестным загрязнением при подготовке проб длядиагностики, соблюдайте приведенные далее правила.
• Перед смачиванием осадка реагента меняйте перчатки.
• Рекомендуется использовать стерильные аэрозоль-устойчивые (фильтрующие) наконечники дляпипеток, применяемые в молекулярной биологии.
• Для переливания каждой пробы используйте пипетку с новым наконечником.
• При переливании пробы из обогатительной среды в пробирку с раствором для лизиса придерживайтесь
свода правил «Надлежащие лабораторные практики» (Good Laboratory Practices). Во избежание
загрязнения микродозатора можно добавить дополнительный этап переливания. Например,пользователь может переливать каждую обогащенную пробу в стерильную пробирку.
3

RU
•
•

(Русский)По возможности следует использовать установки для работ в области молекулярной биологии,оборудованные бактерицидными лампами.
Периодически проводите дезинфекцию лабораторных столов и оборудования (пипеток, инструментовдля запечатывания и распечатывания пробирок и т. д.) с помощью раствора бытового отбеливателя
(1–5 % в объемном отношении с водой) или раствора для удаления ДНК.

Для снижения рисков, связанных с получением ложноположительных результатов, соблюдайте
приведенные далее правила.
• Ни в коем случае не открывайте пробирки после амплификации.
• Всегда утилизируйте загрязненные пробирки путем погружения в раствор бытового отбеливателя (1–5 %в объемном соотношении с водой) на 1 час вдали от зоны подготовки проб для диагностики.
• Ни в коем случае не подвергайте пробирки с реагентом автоклавной обработке после амплификации.
• При подозрении на содержание высоких уровней ДНК штамма Cronobacter в пробах (например,ДНК из нежизнеспособных клеток Cronobacter, подвергающихся уничтожению или нейтрализации)перед началом этапа лизиса к предположительно положительным обогатительным средам следует
применить ДНКазу. Обратитесь к представителю компании Neogen за дополнительными инструкциями.
Этот протокол не тестировался во время исследования NF Validation.
Дополнительную информацию и местные нормативные требования в отношении утилизации отходов см. впаспортах безопасности.
Если у вас возникли вопросы по конкретным способам применения или процедурам, посетите наш веб-сайт поадресу www.neogen.com или обратитесь к местному представителю или дистрибьютору компании Neogen.

Ответственность пользователей

Пользователи несут полную ответственность за ознакомление с инструкциями и информацией обиспользовании препарата. Для получения более подробной информации посетите наш веб-сайт по адресу
www.neogen.com либо свяжитесь с вашим местным представителем или дистрибьютором Neogen.
При выборе метода исследования важно понимать, что на результаты исследования могут влиять внешние
факторы, например метод забора проб, протокол исследования, подготовка проб к исследованию, включая
гомогенизацию и смешивание, способы обработки проб во время исследования, а также используемое
оборудование.
За выбор метода исследования и исследуемого продукта отвечает пользователь. Пользователь должен наосновании исследования достаточного количества образцов с помощью надлежащих матриц и микробных
провокационных проб определить, отвечает ли выбранный метод исследования необходимым емукритериям.
Кроме того, пользователь обязан установить, отвечают ли методы и результаты проводимых им анализов
требованиям его клиентов и поставщиков.
Результаты, полученные с помощью продукта Neogen Food Safety (как и при использовании любого другого
метода исследований), не гарантируют качество матриц или технологических процессов, подвергавшихся
исследованиям.
Чтобы помочь клиентам оценить метод применительно к различным матрицам, компания Neogenразработала комплект «Контроль матрицы для молекулярной диагностики Neogen®». При необходимости
используйте контроль матрицы (MC), чтобы определить, может ли матрица повлиять на результаты тестовиз комплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter». При принятии метода Neogenили тестировании новых или неизвестных матриц либо матриц, материалы или методы обработки которых
подверглись изменениям, протестируйте несколько выборочных проб матрицы, т. е. проб различного
происхождения (в течение любого периода проверки).
Матрицу можно определить как тип продукта с характерными свойствами, такими как состав и метод
обработки. Различия между матрицами могут быть вызваны просто различиями в их обработке илисостоянии. Например, сырые или пастеризованные, свежие или высушенные и т. д.

Ограничение гарантий и средств судебной защиты

ЕСЛИ ИНОЕ ЯВНО НЕ УКАЗАНО В РАЗДЕЛЕ ОБ ОГРАНИЧЕННОЙ ГАРАНТИИ НА ИНДИВИДУАЛЬНОЙ УПАКОВКЕ
ПРОДУКТА, NEOGEN НЕ ПРИЗНАЕТ ПРЯМЫЕ ИЛИ КОСВЕННЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО
ПРОЧЕГО, ГАРАНТИЮ ТОВАРНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ИЛИ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СООТВЕТСТВИИ С УКАЗАННОЙ
ОБЛАСТЬЮ ПРИМЕНЕНИЯ. Если качество продукта отдела безопасности пищевой продукции компании
4

RU(Русский)Neogen не является надлежащим, компания Neogen или уполномоченный этой компанией дистрибьютор
обязуется по своему усмотрению заменить этот продукт или возместить стоимость покупки этого продукта.
Это единственный способ разрешения спора. По любым дополнительным вопросам обращайтесь кпредставителю или официальному дилеру Neogen.

Ограничение ответственности компании Neogen

NEOGEN НЕ НЕСЕТ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ ЗА УЩЕРБ ИЛИ ПОВРЕЖДЕНИЯ, ЯВЛЯЮЩИЕСЯ ПРЯМЫМИ,НЕПРЯМЫМИ, УМЫШЛЕННЫМИ, СЛУЧАЙНЫМИ ИЛИ КОСВЕННЫМИ, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО,УТРАЧЕННУЮ ПРИБЫЛЬ. Ответственность компании Neogen ни при каких обстоятельствах и несмотря нина какие требования не может превышать стоимость продукта.

Хранение и утилизация

Комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» следует хранить при температуре
2–8 °C. Не замораживайте продукт. Храните комплект вдали от источников света. После открытия
комплекта убедитесь в том, что пакет из фольги не поврежден. Если пакет поврежден, не используйте
продукт. Открытые неиспользуемые пробирки с реагентом следует хранить в повторно герметизируемом
пакете с влагопоглотителем. Это обеспечивает стабильность лиофилизированных реагентов. Повторно
герметизированные пакеты можно хранить при температуре 2–8 °C не более 60 дней.
Не используйте комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» по истечении
срока годности. Дата истечения срока годности и номер партии указаны на этикетке на наружной
поверхности коробки. После применения обогатительная среда и пробирки для проведения тестов изкомплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» могут содержать болезнетворные
микроорганизмы. По окончании тестирования утилизируйте загрязненные отходы согласно действующим
промышленным стандартам. Дополнительную информацию и местные нормативные требования вотношении утилизации отходов см. в паспортах безопасности.

Инструкции по применению

Строго соблюдайте все инструкции. В противном случае результаты могут быть неточными.
Периодически проводите дезинфекцию лабораторных столов и оборудования (пипеток, инструментов длязапечатывания и распечатывания пробирок и т. д.) с помощью раствора бытового отбеливателя (1–5 % вобъемном отношении с водой) или раствора для удаления ДНК.
Пользователь должен пройти обучение по вопросам аттестации функционирующего оборудования
применительно к системе молекулярной диагностики Neogen, как описано в документе «Аттестация
установленного оборудования (IQ) и аттестация функционирующего оборудования (OQ): протоколы иинструкции для системы молекулярной диагностики Neogen»(6).
Особые требования см. в разделе «Особые инструкции к утвержденным методам».
Таблица 3: протоколы обогащения согласно AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 и AOAC® Performance
TestedSM, сертификат № 101703.
Таблица 4: протоколы обогащения согласно сертификату NF VALIDATION Neogen 01.20–03.18.
Обогащение пробыВ таблицах 2, 3 и 4 приведены инструкции по обогащению проб пищевых продуктов и окружающей среды.
За проверку альтернативных протоколов отбора проб или обогащения или степеней разбавления дляобеспечения соответствия этого метода тестирования критериям пользователя несет ответственность сампользователь.
Пищевые продукты, пробы окружающей среды, пыль, смет и губки
1. Подождите, пока температура обогатительной среды не достигнет температуры окружающей среды
(20–25 °C), если в протоколе обогащения не указано иное (см. таблицы 2, 3 и 4).
2. Соедините среду обогащения и пробу в стерильных условиях и тщательно перемешайте дооднородности в смесителе, гомогенизаторе, вихревой мешалке или вручную в течение 2 ± 0,2 минутыили до полного растворения сгустков и однородности суспензии(7, 8).
А. На результаты исследования могут повлиять такие факторы, как подготовка проб, включая
гомогенизацию и смешивание, способы обработки, а также методика лабораторной работы.

5

RU(Русский)Б. В случае тестирования проб высокодисперсных материалов рекомендуется использовать мешочные
фильтры.
В. Для матриц, которые набухают в воде и являются высоковязкими (например, хлебные злаки иликрахмалы), рекомендуется выполнять разбавления (> 1:10) до подходящего уменьшения вязкостиили добавить стерильный 1%-ный раствор альфа-амилазы к BPW (ISO)(8).
Г.

В случае тестирования проб хлебных злаков, медленно добавляйте порошковые хлебные злаки вжидкость, часто помешивая, чтобы избежать образования комков.

3. Инкубируйте, как описано в таблице соответствующего протокола (см. таблицы 2, 3 и 4).
Таблица 2. Общие протоколы обогащения пробРазмер
пробы1ОбъемТемпература
Время
Объем
обогатительного обогащения обогащения анализа
бульона1, 2(±1 °C)(ч)пробПорошковая детская смесь исырьевые материалы, такиекак сухое молоко, соевый
порошок, сухая сыворотка,лактоза, рисовая мука имальтодекстрин

Проба 1X г

9X мл BPW (ISO)(1:10)

37

18—24

20 мкл

Сырьевые материалы,такие как соли, минералы,аминокислоты, ДГК(докозагексановая кислота) ивитамины

Проба 1X г

99X мл BPW (ISO)(1:100)37

18—24

20 мкл

Сухие пробы окружающей
среды, такие как пыль, смет,мусор, собранный пылесосной
системой

Проба 1X г

9X мл BPW (ISO)(1:10)

37

18—24

20 мкл

Губки для отбора проб,содержащие 10 мл летинового
бульона или нейтрализующего
бульона Ди-Ингли

1 устройстводля отбора
проб

90 мл BPW (ISO)(1:10)

37

18—24

20 мкл

Матрица пробы

1. Компания Neogen оценивала комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter»с применением степеней разбавления, указанных в таблице 2 до 300 г. За проверку альтернативных
степеней разбавления или протоколов для обеспечения соответствия этого метода критериям
пользователя несет ответственность сам пользователь.
2. Если объем обогатительного бульона больше 300 мл, используйте предварительно подогретую
забуференную пептонную воду ISO (например, вес пробы превышает 30 грамм).
Особые инструкции к утвержденным методам
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM), сертификат № 101703

В программах AOAC Research Institute OMASM и PTMSM комплект «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного
анализа - Cronobacter» оказался эффективным для обнаружения Cronobacter. Тестируемые во время
исследования матрицы показаны в таблице 3.

6

RU(Русский)Таблица 3. Протоколы обогащения согласно AOAC® OMASM 2018.01 AOAC PTMSM № 101703
Матрица пробы

Размер
пробыОбъемобогатительного
бульона1Температура
обогащения
(±1 °C)Порошковая детская смесьи порошковые детские
каши

10 г

90 мл BPW (ISO)(1:10)

37Порошковые детские кашибез пробиотиков

300 г

2700 мл BPW (ISO) Предварительно
(1:10)
подогретые 37Порошковая детская смесьи порошковые детские
каши с пробиотиками

300 г

2700 мл BPW(ISO) + 10 мг/лванкомицина

Лактоза

10 г
1 устройстводля отбора
пробГубки для отбора пробиз окружающей среды,содержащие 10 млнейтрализующего бульона
Ди-Ингли

Время
Объем
обогащения анализа
(ч)
проб
18—24

20 мкл

18—24

20 мкл

Предварительно
подогретые 37

22—24

20 мкл

90 мл BPW (ISO)(1:10)

37

18—24

20 мкл

90 мл BPW (ISO)(1:10)

37

18—24

20 мкл

1. Если объем обогатительного бульона больше 300 мл, используйте предварительно подогретую
забуференную пептонную воду ISO.
NF VALIDATION от AFNOR Certification

3M 01.20-03.18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/enБолее подробную информацию о сроке действия см. в сертификате NF VALIDATION, который доступен науказанном выше веб-сайте.
Метод с сертификатом NF VALIDATION, соответствующий стандарту ISO 16140-2(9), по сравнению состандартом ISO 22964.
Объект проверки: порошковая детская смесь и порошковые детские каши с пробиотиками или без,сырьевые материалы и пробы окружающей среды.
Подготовка образца: пробы следует готовить в соответствии со стандартами EN ISO 22694(2) и EN ISO 6887(7, 8).
Версия программного обеспечения: см. сертификат

7

RU(Русский)Таблица 4. Протоколы обогащения согласно методу с сертификатом NF VALIDATION 3M 01.20–03.18

Матрица пробы

•
•
•

•

•

Порошковая
детская смесь.
Порошковые
детские каши.
Такие ингредиенты,как сухое
молоко, соевый
порошок, сухая
сыворотка, лактоза,рисовая мука имальтодекстрин.
Сухие пробы
окружающей
среды, такиекак пыль, смет,мусор, собранный
пылесосной
системой.

Губка, промывная
вода, салфетки

Порошковая детская
смесь и порошковые
детские каши (безпробиотиков)Порошковые детские
каши и порошковая
детская смесь (включая
пробиотики)Размер
пробыТемпература
обогащения
(±1 °C)Объемобогатительного
бульона1ВремяОбъем Рекомендованная
обогаанализа
точка
щения
проб
прерывания2, 3(часов)10 г

90 мл BPW
(ISO) (1:10)

37

18—24

20 мкл

Обогатительный
бульон или лизат
пробы можно
хранить притемпературе 2–8 °C
в течение не более
72 часов

1 устройстводля отбора
проб или
10 млОбогатительный
бульон или лизат
пробы можно
хранить притемпературе 2–8 °C
в течение не более
72 часов

30–300 г

BPW (ISO)(1:10)

37

18—24

20 мкл

Обогатительный
бульон или лизат
пробы можно
хранить притемпературе 2–8 °C
в течение не более
72 часов

30–300 г

BPW (ISO)+ 10 мг/лванкомицина
(1:10)

37

22—24

20 мкл

Нет

1. Если объем обогатительного бульона больше 300 мл, используйте предварительно подогретую
забуференную пептонную воду ISO (например, вес пробы превышает 30 грамм).
2. После извлечения обогатительного бульона из хранилища продолжите тестирование с этапа 1,указанного в разделе Лизис. После извлечения лизата пробы из хранилища продолжите тестирование сэтапа 7, указанного в разделе Лизис.
3. Чтобы получить дополнительную информацию о хранении и повторном тестировании лизатов,подвергшихся термообработке, см. приложение А.
Подготовка лотка быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen®
1. Смочите кусок ткани или одноразовое полотенце в растворе бытового отбеливателя (1–5 % в объемном
отношении с водой) и протрите им лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen.
8

RU(Русский)2. Сполосните водой лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen.
3. Протрите лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen досуха одноразовым
полотенцем.
4. Перед использованием лотка быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen убедитесь в том,что он сухой.
Подготовка блока «Neogen® Молекулярная диагностика. Охладительный блок (вставной)»Поместите блок «Neogen Молекулярная диагностика. Охладительный блок (вставной)» на лабораторный
стол. При этом лоток «Neogen Молекулярная диагностика. Лоток для охладительного блока» неиспользуется. Блок следует использовать при температуре окружающей среды в лаборатории (20–25°C).
Подготовка внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики Neogen®
Поместите внутренний нагревательный блок для молекулярной диагностики Neogen в сухое двухблочное
нагревательное устройство. Включите сухое нагревательное устройство и установите температуру таким
образом, чтобы температура внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики Neogenдостигла постоянного значения 100 ± 1 °C.
ПРИМЕЧАНИЕ. Внутренний нагревательный блок для молекулярной диагностики Neogen достигает
нужной температуры примерно за 30 минут (в зависимости от типа нагревательного устройства).
Используя подходящий откалиброванный термометр (например, термометр частичного погружения,термопарный цифровой термометр, но не термометр полного погружения), размещенный в указанном
месте, убедитесь в том, что температура внутреннего нагревательного блока для молекулярной
диагностики Neogen составляет 100 ± 1 °C.
Подготовка прибора для молекулярной диагностики Neogen®
1. Запустите программное обеспечение для молекулярной диагностики Neogen® и войдите в систему.
Чтобы убедиться в наличии самой последней версии программного обеспечения, обратитесь кпредставителю Neogen Food Safety.
2. Включите прибор для молекулярной диагностики Neogen.
3. Создайте или отредактируйте цикл с данными относительно каждой пробы. Более подробные сведения
см. в руководстве пользователя системы молекулярной диагностики Neogen.
ПРИМЕЧАНИЕ. Прежде чем вставлять лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogenс реакционными пробирками в прибор для молекулярной диагностики Neogen, убедитесь в том, чтоприбор достиг состояния готовности. Прибор нагревается приблизительно за 20 минут. На процесс
нагрева указывает ОРАНЖЕВЫЙ световой индикатор на панели состояния прибора. Когда прибор будет
готов к запуску цикла, цвет панели состояния изменится на ЗЕЛЕНЫЙ.
ЛизисИзвлеките нижнюю часть штатива для пробирок с раствором для лизиса Neogen с помощью отвертки,прежде чем помещать его во внутренний нагревательный блок для молекулярной диагностики Neogen.

1. Пробирки с раствором для лизиса Neogen должны нагреться: для этого оставьте штатив в условиях
температуры окружающей среды (20–25 °C) на ночь (16–18 часов). Альтернативный способ довести
пробирки с раствором для лизиса Neogen до температуры окружающей среды: поместить пробирки сраствором для лизиса Neogen на лабораторный стол минимум на 2 часа, оставить их для инкубациив инкубаторе при температуре 37 ± 1 °C в течение 1 часа или поместить их на 30 секунд в сухое
двухблочное нагревательное устройство при температуре 100 ±1 °C.
2. Переверните запечатанные пробирки для смешивания содержимого. Перейдите к следующему шагучерез 4 часа после переворачивания.
9

RU(Русский)3. Извлеките обогатительный бульон из инкубатора.
4. На каждую пробу, а также пробу для отрицательного контроля (NC) (в стерильной обогатительной среде)требуется одна пробирка с раствором для лизиса Neogen.
4.1 Для получения необходимого количества пробирок пластинки с пробирками с раствором длялизиса Neogen можно разрезать. Выберите необходимое количество отдельных пробирок илипластинок по 8 пробирок с раствором для лизиса Neogen. Поместите пробирки с раствором длялизиса Neogen в пустой штатив.
4.2. Во избежание перекрестного загрязнения распечатывайте пластинки с пробирками с раствором длялизиса Neogen по одной за раз и для каждого этапа переноса используйте новый наконечник дляпипетки.
4.3. Перенесите обогащенную пробу в пробирки для лизиса Neogen согласно приведенному ниже описанию.
В первую очередь перенесите каждую обогащенную пробу в отдельную пробирку с раствором длялизиса Neogen. Пробы для отрицательного контроля переливайте в последнюю очередь.
4.4. Распечатайте пробирки с раствором для лизиса Neogen на одной пластинке с помощью инструмента
«Neogen® Молекулярная диагностика. Инструмент для запечатывания/распечатывания пробирок
(Лизис)». Пластинки с пробирками следует распечатывать по одной за раз.
4.5. Выбросьте колпачок от пробирки с раствором для лизиса Neogen. Если лизат необходимо
сохранить для повторного тестирования, поместите колпачки в чистый контейнер для повторного
использования после лизиса.
4.5.1. Процедура обработки сохраненного лизата описана в приложении А.
4.6 При работе с вязкими пробами взболтайте мешок для обогащения перед тем, как собрать пробу сфильтрованной стороны.
4.7 Перенесите 20 мкл образца в пробирку с раствором для лизиса Neogen, если другое не указано втаблице протокола.
5. Повторяйте шаги 4.4–4.7 до тех пор, пока каждая отдельная проба не будет перелита в соответствующую
пробирку с раствором для лизиса Neogen на пластинке.

6. После переноса всех проб перенесите в пробирку с раствором для лизиса Neogen 20 мкл среды дляотрицательного контроля (стерильной обогатительной среды, например ЗПВ). Не используйте воду вкачестве среды для отрицательного контроля.
7. Убедитесь в том, что температура внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики
Neogen составляет 100 ± 1 °C.
8. Поместите штатив с открытыми пробирками для лизиса Neogen во внутренний нагревательный блок длямолекулярной диагностики Neogen и нагревайте в течение 15 ± 1 минуты. Во время нагрева цвет растворадля лизиса Neogen изменится с розового (в холодном состоянии) на желтый (в горячем состоянии).
Пробы, которые не прошли надлежащую тепловую обработку на этапе лизиса, могут представлять
биологическую опасность. ЗАПРЕЩАЕТСЯ вставлять их в прибор для молекулярной диагностики Neogen.
9. Извлеките штатив с открытыми пробирками с раствором для лизиса Neogen из нагревательного блока
молекулярной диагностики Neogen и поместите его для охлаждения в блок «Neogen Молекулярная
диагностика. Охладительный блок (вставной)» на период от 5 до 10 минут. Блок «Neogen Молекулярная
диагностика. Охладительный блок (вставной)», используемый при температуре окружающей среды без лотка
«Neogen Молекулярная диагностика. Лоток для охладительного блока», должен находиться непосредственнона лабораторном столе. После охлаждения цвет раствора для лизиса Neogen снова станет розовым.
10

RU(Русский)10. Извлеките штатив с пробирками для лизиса Neogen из блока «Neogen Молекулярная диагностика.
Охладительный блок (вставной)».
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Амплификация
1. На каждую пробу, а также пробу для отрицательного контроля (NC) требуется одна пробирка с реагентом
«Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter».
1.1 Для получения нужного количества пробирок пластинки с пробирками можно разрезать. Выберите
необходимое количество отдельных пробирок или пластинок по 8 пробирок комплекта «Neogen Тестнабор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter».
1.2 Поместите Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter (Пробирки с реагентом) впустой штатив.
1.3 Не поднимайте осадок от реагента, который может образоваться на дне пробирок.
2. Выберите одну пробирку «Neogen Контроль реагентов» и поместите ее в штатив.
3. Во избежание перекрестного загрязнения распечатывайте одну пластинку с пробирками с реагентомиз комплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter» за раз и для каждого этапа
переноса используйте новый наконечник для пипетки.
4. Перенесите каждый лизат в пробирку с реагентом комплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного
анализа - Cronobacter» и пробирку «Neogen Контроль реагентов» согласно приведенному ниже описанию.
Перенесите лизат каждой пробы в отдельные пробирки с реагентом комплекта «Neogen Тест-набор
2 для молекулярного анализа - Cronobacter » в первую очередь, а затем — пробы для отрицательного
контроля (NC). Смочите пробирку «Neogen Контроль реагентов» в последнюю очередь.
5. Распечатайте пробирки с реагентом комплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа Cronobacter» с помощью инструмента «Neogen® Молекулярная диагностика. Инструмент длязапечатывания/распечатывания пробирок (Реагент)». Пластинки с пробирками следует распечатыватьпо одной за раз. Выбросьте колпачки.
5.1 Перенесите 20 мкл лизата пробы из верхней ½ части пробирки с раствором для лизиса
Neogen (не допуская попадания осадка) в соответствующую пробирку с реагентом комплекта
«Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter ». Переливать лизат в пробирку
следует под наклоном, чтобы не поднять осадок. Перемешайте лизат в пробирке: для этого
5 раз осторожно наберите и выпустите жидкость из пипетки.
5.2 Повторяйте этап 5.1 до тех пор, пока лизат каждой пробы не будет перелит в соответствующую
пробирку с реагентом «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter » на пластинке.
5.3 Закройте пробирки с реагентом комплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа Cronobacter » запасными колпачками и надавите скругленной стороной инструмента «NeogenМолекулярная диагностика. Инструмент для запечатывания/распечатывания пробирок (Реагент)»,совершая движения вперед-назад, чтобы обеспечить плотную посадку колпачков.
5.4 Повторите этапы 5.1–5.3 столько раз, сколько проб необходимо протестировать.
5.5 После переноса лизатов всех проб повторите действия 5.1–5.3, чтобы перенести 20 мкл лизатадля отрицательного контроля (NC) в пробирку с реагентом комплекта «Neogen Тест-набор 2 длямолекулярного анализа - Cronobacter».
5.6 Перенесите 20 мкл лизата для отрицательного контроля (NC) в пробирку «Neogen Контроль
реагентов». Переливать лизат в пробирку следует под наклоном, чтобы не поднять осадок.
Перемешайте лизат в пробирке: для этого 5 раз осторожно наберите и выпустите жидкость из пипетки.
11

RU(Русский)6. Загрузите запечатанные пробирки в чистый продезинфицированный лоток быстрой загрузки длямолекулярной диагностики Neogen. Закройте и зафиксируйте крышку лотка быстрой загрузки длямолекулярной диагностики Neogen.

7. Проверьте параметры настройки цикла в программном обеспечении для молекулярной диагностики
Neogen.
8. Нажмите кнопку запуска в программном обеспечении и выберите прибор, который необходимо
использовать. Крышка выбранного прибора откроется автоматически.
9. Поместите лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen в прибор для молекулярной
диагностики Neogen и закройте крышку, чтобы запустить анализ. Результаты появятся в течение
60 минут. Положительные результаты могут появиться раньше.
10. По завершении анализа диагностики извлеките лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики
Neogen из прибора для молекулярной диагностики Neogen и утилизируйте пробирки, поместив ихв раствор бытового отбеливателя (1–5 % в объемном отношении с водой) на 1 час вдали от области
подготовки проб для анализа.
УВЕДОМЛЕНИЕ. Для минимизации риска получения ложноположительных результатов вследствие
перекрестного загрязнения ни в коем случае не открывайте пробирки с реагентом, содержащие
амплифицированную ДНК. Это касается пробирки с реагентом комплекта «Neogen Тест-набор 2 длямолекулярного анализа - Cronobacter», пробирки «Neogen Контроль реагентов» и пробирок контроля
матрицы Neogen. Запечатанные пробирки с реагентами следует выдерживать в растворе бытового
отбеливателя (1–5 % в объемном отношении с водой) в течение 1 часа вдали от зоны проведения анализа.

Результаты диагностики и их интерпретация

Специальный алгоритм анализирует кривую светоотдачи, выводимую в результате обнаружения
амплификации нуклеотидных последовательностей. Программное обеспечение автоматически
анализирует полученные данные и снабжает их цветовыми кодами. Положительный или отрицательный
результат определяется путем анализа ряда уникальных параметров кривой. Предположительно
положительные результаты отображаются в реальном времени, а отрицательные результаты и данные,требующие изучения, — по окончании анализа.
ПРИМЕЧАНИЕ. Результаты анализа не могут быть нулевыми даже в случае исследования отрицательной
пробы, поскольку система и амплификационные реагенты из комплекта «Neogen Тест-набор 2 длямолекулярного анализа - Cronobacter» способны считывать показания «фоновой» RLU (относительная
световая единица).
Подтверждение
• Подтверждение результатов в соответствии с методом, получившим сертификат NF ValidationВ рамках NF VALIDATION все предположительно положительные обогатительные среды должны бытьподтверждены указанным далее эталонным методом(2). Для этого сначала выполняется переливание изпервичной обогатительной среды (BPW ISO или BPW ISO, дополненная 10 мг/л ванкомицина).
•Другой протокол подтверждения

Предположительно положительные обогатительные среды следует подтверждать в соответствии состандартными лабораторными процедурами или подходящим эталонным методом(1,2). Для этого сначала
выполняется переливание из первичной обогатительной среды во вторичную обогатительную среду (BPWISO или BPW ISO, дополненная 10 мг/л ванкомицина) с последующим культивированием и подтверждением
изолятов с использованием соответствующих биохимических, серологических и (или) молекулярных методов.
12

RU(Русский)В редких случаях получения необычных световых данных алгоритм заносит соответствующие результатыв категорию информации, требующей изучения. Компания Neogen рекомендует проводить повторный
анализ проб, требующих изучения. Если результат анализа не меняется, проверьте его предпочтительнымдля вас методом или в соответствии с местными нормативными требованиями(1, 2).
В случае противоречивых результатов (предположительно положительные после проведения тестов изкомплекта «Neogen Тест-набор 2 для молекулярного анализа - Cronobacter», не подтвержденные одним изописанных выше способов) сотрудники лаборатории должны придерживаться установленных стандартных
процедур, чтобы сообщать результаты.
Если у вас возникли вопросы по конкретным способам применения или процедурам, посетите наш веб-сайт поадресу www.neogen.com или обратитесь к местному представителю или дистрибьютору компании Neogen.
Приложение A. Прерывание выполнения протокола: хранение и повторное тестирование лизатов,подвергшихся термообработке
1. Для хранения лизатов, подвергшихся термообработке, снова запечатайте пробирку с раствором длялизиса чистым колпачком (см. раздел 4.5 Лизис).
2. Отправьте пробу на хранение при температуре от 2 до 8 °C на период до 72 часов.
3. Подготовьте сохраненную пробу для амплификации, перевернув пробирку 2–3 раза для перемешивания.
4. Распечатайте пробирки.
5. Поместите пробирки со смешанным лизатом во внутренний нагревательный блок для молекулярной
диагностики Neogen и подогрейте до температуры 100 ± 1 °C в течение 5 ± 1 минуты.
6. Извлеките штатив с пробирками с раствором для лизиса Neogen из нагревательного блока и поместитеего для охлаждения в блок «Neogen Молекулярная диагностика. Охладительный блок (вставной)» напериод от 5 до 10 минут.
7. Продолжите выполнение протокола в соответствии с разделом Амплификация, как описано выше.

Ссылки.

1. Руководство по бактериологическому анализу (BAM) Управления по санитарному надзору за качеством
пищевых продуктов и медикаментов США, гл. 29; МАРТ 2012 Г.
2. ISO 22964:2017 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод обнаружения штаммов
Cronobacter.
3. Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США. Сводфедеральных постановлений, статья 21, часть 58. Надлежащая лабораторная практика длядоклинических лабораторных исследований.
4. ISO/IEC 17025:2017. Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных
лабораторий.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие
требования и руководство по микробиологическому анализу.
6. Аттестация установленного оборудования (IQ) и аттестация функционирующего оборудования (OQ)
Neogen®: система молекулярной диагностики Neogen. Для получения копии этого документа обратитеськ представителю Neogen Food Safety.
7. ISO 6887-5:2010. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов дляанализа, исходная суспензия и десятикратное разбавление для микробиологического анализа. Часть 5.
Особые правила подготовки образцов молока и молочных продуктов.
8. ISO 6887-4:2017. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов дляанализа, исходная суспензия и десятикратное разбавление для микробиологического анализа. Часть 4.
Особые правила подготовки образцов разных продуктов.
9. ISO 16140-2:2016. Микробиология пищевой цепи. Проверка метода. Часть 2. Протокол проверки
альтернативных (запатентованных) методов в сравнении со стандартными методами.
См. текущие версии приведенных выше стандартных методов.

Пояснение символов
info.neogen.com/symbols

13

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

TR (Türkçe)
Yayınlanma Tarihi: 2024-01

Ürün Talimatları
Moleküler Tespit Analizi 2 - CronobacterÜrün Tanımı ve Kullanım Amacı

Neogen® Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter zenginleştirilmiş gıda ve çevresel gıda işleme numunelerinde
Cronobacter'ın hızlı ve spesifik Tespiti için Neogen® Moleküler Tayin Sistemi ile birlikte kullanılır.
Neogen Moleküler Tespit Analizi'nde, nükleik asit dizgelerinin yüksek özgüllük ve duyarlılıkla hızla amplifiye edilmesi
için döngü aracılı izotermal amplifikasyonun yanı sıra amplifikasyonun tespit edilmesi amacıyla biyoluminesans kullanılır.
Negatif sonuçlar test tamamlandıktan sonra gösterilirken, olası pozitif sonuçlar gerçek zamanlı olarak bildirilir. Olası
pozitif sonuçlar, tercih edilen yöntem kullanılarak veya yerel düzenlemelerde belirtildiği şekilde doğrulanmalıdır(1, 2).
Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter ürünü, laboratuvar ortamında, laboratuvar teknikleri konusunda eğitim
almış profesyonellerin kullanımına yöneliktir. Neogen, bu ürünü yiyecek veya içecek endüstrileri dışında kullanım içintescil ettirmemiştir. Örneğin Neogen bu ürünü farmasötik ürünler, kozmetik malzemeler, klinik veya veterinerlik amaçlı
numunelerin testlerinde kullanım için tescil ettirmemiştir. Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter, olası tüm
gıda ürünleri, işlenmiş gıdalar, test protokolleri veya mümkün olan tüm bakteri suşları ile değerlendirilmemiştir.
Tüm test yöntemlerinde olduğu gibi, zenginleştirme ortamının kaynağı, formülasyonu ve kalitesi sonuçları
etkileyebilir. Numune alma yöntemleri, test protokolleri, homojenleştirme ve karıştırma dahil numune hazırlamaişlemleri, taşıma ve laboratuvar tekniği gibi faktörler de sonuçları etkileyebilir. Neogen, yöntemin kullanıcının ölçütlerinikarşıladığından emin olmak için belirli gıdalar ve/veya çevresel numuneler ve mikrop uyarımlar ile birlikte yeterli sayıda
numune kullanılarak kullanıcının ortamında zenginleştirme ortamı dahil olmak üzere yöntemin değerlendirilmesini önerir.
Neogen, Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter'ı Tamponlanmış Peptonlu Su (ISO) zenginleştirme ortamı iledeğerlendirmiştir.
Neogen® Moleküler Tayin Cihazı, numune içinde var olan organizmaları yok etmek için tasarlanmış lizis test aşaması
sırasında ısıl işlemden geçen numuneler ile kullanım için tasarlanmıştır. Lizis tet aşaması sırasında doğru şekilde ısılişleme tabi tutulmayan numuneler, olası bir biyolojik tehlike olarak düşünülebilir ve Neogen Moleküler Tayin Cihazı'na
YERLEŞTİRİLMEMELİDİR.
Neogen Food Safety, ISO (Uluslararası Standardizasyon Teşkilatı) 9001 tasarım ve üretim sertifikasına sahiptir.
Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter test kiti, Tablo 1'de açıklanmış olduğu gibi 96 test içerir.
Tablo 1. Neogen Moleküler Tespit Analizi Kit Bileşenleri
MalzemeTanım

Miktarİçindekiler

Yorumlar

Neogen® Lizis Solüsyonu(LS)Şeffaf tüplerde
pembe solüsyon

96 (8 tüplük 12 şerit)Tüp başına 580 μL LS

Raflı vekullanıma
hazır

Neogen® Moleküler Tespit
Analizi 2 - Cronobacter
Reaktif Tüpleri

Turuncu-kırmızı
tüpler96 (8 tüplük 12 şerit)

Liyofilize spesifik
amplifikasyon ve
tespit karışımı

Kullanıma
hazırİlave kapaklar

Turuncu-kırmızı
kapaklar

96 (8 kapaklık 12 şerit)

Kullanıma
hazır

Neogen® Reaktif Kontrolü(RC)Şeffaf üstten
kapatmalı tüpler

16 (8 ayrı tüp içeren 2poşet)

Liyofilize kontrol
Kullanıma
DNA'sı, amplifikasyon
hazır
ve tespit karışımı

Kitle birlikte sunulmayan Negatif Kontrol (NC), BPW ISO gibi steril bir zenginleştirme ortamıdır. NC olarak su
kullanmayın.

1

TR (Türkçe)

Güvenlik

Kullanıcı, Neogen Moleküler Tayin Sistemi ve Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter ile ilgili talimatlarda yer alantüm güvenlik bilgilerini okumalı, anlamalı ve bunlara uymalıdır. Güvenlik talimatlarını ileride başvurmak üzere saklayın.
UYARI: Önlenmemesi halinde ölüm ya da ciddi yaralanma ve/veya mal zararı ile sonuçlanabilecek tehlikeli bir
durumu gösterir.
BİLDİRİM: Kaçınılmaması halinde maddi zarar ile sonuçlanabilecek olası tehlikeli bir durumu gösterir.

W UYARI
Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter'ı insanların veya hayvanların sağlık durumlarını tanılamak amacıyla
kullanmayın.
Kullanıcının güncel ve doğru test teknikleri konusunda personeline eğitim vermesi gerekir: örneğin İyi Laboratuvar
Uygulamaları(3), ISO/IEC 17025(4) veya ISO 7218(5).
Kontamine ürünün açığa çıkmasına yol açan yanlış bir negatif sonuçla ilişkili riskleri azaltmak için:• Tam olarak ürün talimatlarında belirtildiği şekilde protokolü uygulayın ve testleri gerçekleştirin.
• Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter'ı ambalaj üzerinde ve ürün talimatlarında belirtildiği şekilde saklayın.
• Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter'ı mutlaka son kullanma tarihinden önce kullanın.
• Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter'ı, firmamız veya bir üçüncü tarafça onaylanmış gıda ve çevreselgıda işleme numuneleri ile kullanın.
• Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 Cronobacter'ı sadece kurum içinde veya üçüncü bir tarafça onaylanmış yüzeyler,sanitizerler, protokoller ve bakteri suşları ile kullanın.
• Aril sülfonat kompleksiyle birlikte Nötrleştirici Tampon içeren çevresel bir numune için test etmeden önce 1:2 oranında
bir dilüsyon gerçekleştirin (1 miktar steril zenginleştirme sıvı besi yeri içine 1 miktar numune). Başka bir seçenek ise
Neogen Lizis Solüsyonu tüplerinde 10 μL NB zenginleştirme yöntemidir. Aril sülfonat kompleksli Nötrleştirici Tampon
içeren Neogen® Numune Tutma ürünleri: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G ve
HS2410NB2G. Bu protokol, NF Validation çalışması sırasında test edilmemiştir.
Kimyasallara ve biyolojik tehlikelere maruz kalma ile ilişkili riskleri azaltmak için:• Patojen testini doğru donanıma sahip bir laboratuvarda, eğitimli personelin kontrolü altında gerçekleştirin. İnkübe
edilmiş zenginleştirme ortamı ve inkübe edilmiş zenginleştirme ortamıyla temas etmiş ekipman veya yüzeyler, insansağlığı için risk oluşturmaya yetecek düzeylerde patojenler içerebilir.
• Reaktifler ve kontamine olmuş numuneler ile çalışırken, uygun koruyucu kıyafet ve gözlük kullanımı dahil olmaküzere, daima standart laboratuvar güvenlik uygulamalarını izleyin.
• Amplifikasyon sonrasında zenginleştirme ortamları ve reaktif tüplerin içeriği ile temastan kaçının.
• Zenginleştirilmiş numuneleri ve ilişkili kontamine atıkları, geçerli yerel/bölgesel/ulusal/sektörel standartlara göre
imha edin.
• Isıtıcıdaki önerilen sıcaklık ayarını aşmayın.
• Önerilen ısıtma süresini aşmayın.
• Neogen® Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası sıcaklığını doğrulamak için uygun ve kalibre edilmiş bir termometre
kullanın (örneğin tamamen daldırma tipi termometre değil, kısmi daldırma tipi termometre veya dijital sıcaklık
sensörlü termometre). Termometre, Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası'nda belirlenmiş olan konuma
yerleştirilmelidir.
Testi hazırlarken çapraz kontaminasyonla ilişkili riskleri azaltmak için:• Daima eldiven takın (kullanıcıyı korumak ve nükleazların girişini önlemek için).
Sıcak sıvılara maruz kalınmasıyla ilişkili riskleri azaltmak için:• Isıtıcıdaki önerilen sıcaklık ayarını aşmayın.
• Önerilen ısıtma süresini aşmayın.
• Neogen® Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası sıcaklığını doğrulamak için uygun ve kalibre edilmiş bir termometre
kullanın (örneğin tamamen daldırma tipi termometre değil, kısmi daldırma tipi termometre veya dijital sıcaklık
sensörlü termometre). Termometre, Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası'nda belirlenmiş olan konuma
yerleştirilmelidir.

BİLDİRİM
Testi hazırlarken çapraz kontaminasyonla ilişkili riskleri azaltmak için:• Reaktif pellet hidrasyonundan önce eldivenleri değiştirin.
• Steril, aerosol bariyerli (filtreli), moleküler biyoloji sınıfı pipet uçlarının kullanılması tavsiye edilir.
2TR (Türkçe)••••

Her numune aktarımı için yeni bir pipet ucu kullanın.
Numunenin zenginleştirilmiş besi yerinden lizis tüpüne aktarılması için İyi Laboratuvar Uygulamalarını kullanın.
Pipeti kullanacak kişinin kontaminasyona maruz kalmasından kaçınmak için kullanıcı ara bir aktarım adımı eklemeyi
seçebilir. Örneğin kullanıcı zenginleştirilmiş her numuneyi steril bir tüpe aktarabilir.
Mevcutsa germisidal lamba içeren bir moleküler biyoloji çalışma tezgahı kullanın.
Laboratuvar tezgahlarını ve ekipmanını (pipetler, kapak takma/kapak sökme araçları vb.) %1-5'lik (suda v:v) birçamaşır suyu çözeltisi veya DNA uzaklaştırma çözeltisi ile periyodik olarak dekontamine edin.

Yanlış pozitif sonuçlarla ilişkili riskleri azaltmak için:• Amplifikasyon sonrasında tüpleri asla açmayın.
• Kontamine olmuş tüpleri, her zaman %1-5'lik (suda v:v) bir çamaşır suyu solüsyonunda 1 saat süreyle bekleterek vetest hazırlık alanından uzakta imha edin.
• Amplifikasyon sonrasında reaktif tüplerine asla otoklav uygulamayın.
• Numunelerin yüksek düzeyde Cronobacter DNA'sı (ör. yok etme / etkisiz hale getirme adımına maruz bırakılmış
cansız Cronobacter hücrelerinden alınan DNA) içerdiğinden şüphelenilirse olası pozitif zenginleştirmelere Lizis
adımından önce enzim uygulanmalıdır. Ek talimatlar için Neogen Temsilcinizle iletişim kurun. Bu protokol, NF
Validation çalışması sırasında test edilmemiştir.
Ek bilgiler ve ürünün imha edilmesi ile ilgili yerel düzenlemeler için Güvenlik Veri Formu'na bakın.
Belirli uygulamalar veya prosedürler hakkında sorularınız varsa www.neogen.com adresindeki web sitemizi ziyaret edinveya yerel Neogen temsilcisi ya da distribütörü ile iletişim kurun.

Kullanıcının Sorumluluğu

Kullanıcılar ürün talimatları ve bilgileri hakkında bilgi edinmekle yükümlüdür. Daha fazla bilgi için
www.neogen.com adresini ziyaret edin ya da yerel Neogen temsilcinizle veya dağıtımcınızla iletişim kurun.
Bir test yöntemi seçilirken numune alma yöntemleri, test protokolleri, homojenleştirme ve karıştırma gibi numune
hazırlama işlemleri, taşıma ve laboratuvar tekniği gibi dış faktörlerin sonuçları etkileyebileceğinin bilinmesi gerekir.
Seçilen test yönteminin kullanıcının kriterlerini karşıladığı konusunda kullanıcıyı tatmin edecek uygun matrisler ve
mikrobiyal zorluklarla yeterli sayıda numuneyi değerlendirmek üzere herhangi bir test yönteminin veya ürününün
seçilmesi kullanıcının sorumluluğundadır.
Tüm test yöntemlerinin ve sonuçlarının müşteri ve tedarikçi gereksinimlerini karşılamasını sağlamak yine kullanıcınınsorumluluğundadır.
Tüm test yöntemlerinde olduğu gibi, herhangi bir Neogen Gıda Güvenliği ürününün kullanılmasından elde edilen sonuçlar
test edilen matrislerin veya süreçlerin kalitesi konusunda bir garanti oluşturmaz.
Çeşitli matrislere yönelik olarak yöntemin değerlendirilmesinde müşterilere yardımcı olmak için Neogen, Neogen®
Moleküler Tayin Matris Kontrolü kitini geliştirmiştir. Gerektiğinde, matrisin Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter
sonuçlarını etkileyip etkileyemediğini belirlemek üzere Matris Kontrolü (MC) olanağını kullanın. Neogen yönteminin adapte
edildiği ya da yeni veya bilinmeyen matrislerin ya da ham maddesi veya prosesi değişen matrislerin test edildiği herhangi bir
validasyon döneminde, matrisi temsil eden birkaç numuneyi, yani farklı kaynaktan alınan numuneleri test edin.
Matris; bileşim ve proses gibi yapısal özellikleri olan bir ürün türü olarak tanımlanabilir. Matrisler arasındaki farklılıklar,
proseslerindeki veya sunumlarındaki farklılıkların neden olduğu etkiler kadar basit olabilir (ör. pastörize ve ham, kuru ve taze vb.).

Garanti Sınırlaması/Yasal Yollara İlişkin Sınırlama

NEOGEN, HER BİR ÜRÜN AMBALAJININ ÜZERİNDEKİ SINIRLI GARANTİ KISMINDA AÇIKÇA BELİRTİLENLERHARİCİNDE, PAZARLANABİLİRLİK VEYA BELİRLİ BİR KULLANIMA UYGUNLUK GARANTİLERİ DAHİL ANCAKBUNLARLA SINIRLI OLMAMAK ÜZERE TÜM AÇIK VEYA ZIMNİ GARANTİLERİ KABUL ETMEMEKTEDİR. Herhangi
bir Neogen Gıda Güvenlik Ürünü'nün kusurlu olması durumunda, Neogen veya yetkili dağıtıcısı, tercihine göre ürünü
değiştirecek veya ürün satış tutarını iade edecektir. Tarafınıza münhasır çözümler bunlardır. Diğer her türlü sorunuz için
lütfen Neogen temsilciniz veya yetkili Neogen distribütörünüz ile iletişim kurun.

Neogen Sorumluluğunun Sınırlandırılması

NEOGEN DOĞRUDAN, DOLAYLI, ÖZEL, ARIZİ VEYA NETİCE KABİLİNDEN DOĞMUŞ, KAYBEDİLMİŞ KAZANÇLAR
DAHİL ANCAK BUNUNLA SINIRLI OLMAMAK ÜZERE HERHANGİ BİR KAYIP VEYA ZARARDAN SORUMLU
OLMAYACAKTIR. Hiçbir durumda Neogen'in herhangi bir hukuk kuramı altındaki sorumluluğu, kusurlu olduğu iddia
edilen ürünün satış fiyatını aşamaz.

3TR (Türkçe)

Saklama ve İmhaNeogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter'ı 2-8°C sıcaklıkta saklayın. Dondurmayın. Saklama sırasında kiti ışıktan
uzak tutun. Kiti açtıktan sonra, folyo poşetin zarar görmemiş olduğunu teyit edin. Poşet zarar görmüşse kullanmayın.
Açıldıktan sonra, kullanılmayan reaktif tüplerinin, liyofilize reaktiflerin stabilitesini sürdürmek amacıyla, içinde nem çekici
ile ağzı tekrar kapatılabilir poşet içinde saklanması gerekir. Yeniden mühürlenmiş poşetleri 60 günden uzun olmamak
kaydıyla 2-8°C sıcaklıkta saklayın.
Son kullanma tarihi geçen Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter'ı kullanmayın. Son kullanma tarihi ve lot
numarası kutunun dış yüzündeki etikette belirtilmiştir. Kullanım sonrasında, zenginleştirme ortamı ve Neogen Moleküler
Tespit Analizi 2 - Cronobacter tüpleri, potansiyel olarak patojenik materyaller içerebilir. Test tamamlandığında,kontamine atığın imha edilmesi için geçerli endüstri standartlarına uyun. Ek bilgiler ve ürünün imha edilmesi ile ilgili yereldüzenlemeler için Güvenlik Veri Formu'na bakın.

Kullanım Talimatları

Tüm talimatları dikkate izleyin. Bu uyarının dikkate alınmaması hatalı sonuçlara neden olabilir.
Laboratuvar tezgahlarını ve ekipmanını (pipetler, kapak takma/kapak sökme araçları vb.) %1-5'lik (suda v:v) bir çamaşır
suyu çözeltisi veya DNA uzaklaştırma çözeltisi ile periyodik olarak dekontamine edin.
Kullanıcı, “Neogen Moleküler Tayin Sistemi için Kurulum Yeterliliği (IQ) / Çalışma Yeterliliği (OQ) Protokolleri ve
Talimatlar” belgesinde(6) açıklanan şekilde Neogen Moleküler Tayin Sistemi operatör yeterliliği eğitimini tamamlamalıdır.
Özel gereksinimler için “Valide edilmiş yöntemler için özel talimatlar” bölümüne bakın:
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 ve Performance TestedSM Certificate 101703’e göre zenginleştirme
protokolleri için Tablo 3
NF VALIDATION sertifikası 3M 01/20-03/18’e göre zenginleştirme protokolleri için Tablo 4
Numune Zenginleştirme
Tablo 2, 3 veya 4’te gıda ve çevre numunelerine yönelik zenginleştirme protokollerinin yönergeleri verilmiştir.
Bu test yönteminin kullanıcı kriterlerini karşılamasını sağlamak üzere alternatif numune alma protokollerinin,
zenginleştirme protokollerinin veya seyreltme oranlarının valide edilmesi kullanıcının sorumluluğundadır.
Gıdalar, Çevresel Tozlar, Tozlar, Süprüntüler ve Süngerler
1. Zenginleştirme protokolünde aksi belirtilmediği takdirde (Bkz. Tablo 2, 3 veya 4), zenginleştirme ortamını ortam
sıcaklığına (20-25°C) eşitleyin.
2. Zenginleştirme ortamı ile numuneyi aseptik olarak birleştirin ve 2 ± 0,2 dakika boyunca harmanlama, hazmetme,
vorteksleme veya elle karıştırma yoluyla ya da tüm topaklar tamamen çözünü zenginleştirme süspansiyonu
homojen hale gelinceye kadar homojenize edin(7, 8).
a.

Homojenleştirme ve karıştırma dahil numune hazırlama işlemleri, taşıma ve laboratuvar tekniği gibi faktörler
sonuçları etkileyebilir.

b. Yüksek oranda partikül içeren numuneler için filtre torbalarının kullanılması önerilir.
c.

Suda şişen ve yüksek oranda kıvamlı olan matrisler için (ör. tahıllar, nişastalar), viskozite uygun şekilde azaltılana
kadar seyreltme (> 1:10) yapılması veya BPW’ye (ISO)(8) steril %1’lik (a/h) alfa-amilaz eklenmesi önerilir.

d. Büyük boyutlardaki tahıl numuneleri için topak oluşumunu önlemek üzere sık sık karıştırarak toz halindeki tahılıyavaşça sıvıya ekleyin.
3. İlgili protokol tablosunda özetlendiği gibi inkübe edin (Bkz. Tablo 2, 3 veya 4).

4

TR (Türkçe)
Tablo 2. Genel Zenginleştirme Protokolleri
Zenginleştirme
NumuneZenginleştirme
Sıcaklığı
AnalizSüresi (saat)(± 1°C)
Hacmi

Numune Matrisi

NumuneBoyutu1

Zenginleştirme
Besi Yeri Hacmi1, 2

Süt tozu, soya tozu, peynir altı suyu
tozu, laktoz, pirinç unu ve maltodekstrin
gibi toz bebek maması (PIF) ve ham
maddeler

1X gramnumune9X mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Tuz, mineraller, amino asitler, DHA(dokosaheksaenoik asit) ve vitaminler
gibi ham maddeler

1X gramnumune99X mL BPW(ISO) (1:100)

37

18-24

20 µl

Toz, süprüntüler ve vakum koleksiyonu
gibi kuru çevresel numuneler

1X gramnumune9X mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

10 mL Letheen Besi Yeri veya D/E
Nötrleştirici Besi Yerine sahip çevreselsünger

1 numunealma
cihazı

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

1. Neogen, 300 grama kadar Tablo 2'deki seyreltme oranlarını kullanarak Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 Cronobacter'ı değerlendirmiştir. Bu yöntemin kullanıcı kriterlerini karşılamasını sağlamak üzere alternatif seyreltme
oranlarının veya protokollerinin valide edilmesi kullanıcının sorumluluğundadır.
2. Zenginleştirme besi yeri hacmi 300 mL'den büyükse önceden ısıtılmış BPW (ISO) kullanın (ör. numune 30 gramdan
büyükse).
Valide Edilmiş Yöntemler İçin Özel Talimatlar
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certificate #101703

AOAC Research Institute OMASM ve PTMSM çalışmalarında, Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter’ın
Cronobacter tespitinde etkili bir yöntem olduğu bulunmuştur. Çalışmada test edilen matrisler Tablo 3'te gösterilmiştir.
Tablo 3. AOAC® OMASM 2018.01 ve PTMSM 101703’e göre zenginleştirme protokolleri
Zenginleştirme
Zenginleştirme
Sıcaklığı
Süresi (saat)(± 1°C)

NumuneAnaliz
Hacmi

NumuneBoyutuZenginleştirme
Besi Yeri Hacmi1

Toz Halinde İnfant Formül ve Toz
Halinde İnfant Tahıl

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Toz Halinde İnfant Tahıl non-probiyotik

300 g

2.700 mL BPW(ISO) (1:10)

Önceden
Isıtılmış 37

18-24

20 µl

Probiyotiklerle birlikte Toz Halindeİnfant Formül ve Toz Halinde İnfant Tahıl

300 g

2.700 mL BPW(ISO) + 10 mg/L
VankomisinÖnceden
Isıtılmış 37

22-24

20 µl

Laktoz

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

1 numune
90 mL BPW (ISO)alma(1:10)
cihazı

37

18-24

20 µl

Numune Matrisi

10 mL D/E Nötrleştirici Besi Yerinesahip çevresel sünger

1. Zenginleştirme besi yeri hacmi 300 mL'den büyükse önceden ısıtılmış BPW (ISO) kullanın.

5TR (Türkçe)
AFNOR Certification ile NF VALIDATION

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Validasyonun bitiş tarihi ve geçerliliği ile ilgili daha fazla bilgi için lütfen yukarıda bahsi geçen web sitesindeki NF
VALIDATION sertifikasına bakın.
ISO 22964 ile kıyaslandığında ISO 16140-2(9) uyarınca onaylı NF VALIDATION sertifikalı yöntem.
Validasyonun kapsamı: Probiyotikler, ham maddeler ve çevresel numuneler ile birlikte ve bunları içermeyen toz halinde
infant formül ve infant tahıllar.
Numune hazırlama: Numuneler EN ISO 22694(2) and EN ISO 6887(7, 8)'ye uygun şekilde hazırlanmalıdır.
Yazılım sürümü: Sertifikaya bakın.
Tablo 4. NF VALIDATION Sertifikalı 3M 01/20-03/18 Yöntemine Göre Zenginleştirme Protokolleri
Numune Matrisi•

NumuneBoyutuZenginleştirme
Besi Yeri
Hacmi1

Zenginleştirme
Sıcaklığı
(± 1°C)

Zenginleştirme Numune
Süresi
Analiz(saat)
HacmiÖnerilen
Kesme
Noktası2, 3

Toz halinde infant
formülToz halinde infanttahıllar
Kuru süt tozu, soya
tozu, peynir altı suyu
tozu, laktoz, pirinçunu, maltodekstrin
gibi malzemeler
Toz, süprüntüler vevakum koleksiyonu
gibi kuru çevresel
numuneler,

10 g

Sünger, durulama
suyu, mendiller

1 numunealma
cihazı
veya
10 mL

Zenginleştirme
besi yeri veya
numune lizatı
2-8°C'de 72
saate kadar
saklanabilir

Toz halinde infant formül
ve toz halinde infant tahıl 30-300 g(non-probiyotik)

BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µl

Zenginleştirme
besi yeri veya
numune lizatı
2-8°C'de 72
saate kadar
saklanabilir

Toz halinde infant tahıl ve
toz halinde infant formül(probiyotik içeren)

BPW (ISO)+ 10 mg/L
vankomisin(1:10)

37

22-24

20 µl

Hiçbiri••••

90 mL BPW
(ISO) (1:10)30-300 g

37

6

18-24

20 µl

Zenginleştirme
besi yeri veya
numune lizatı
2-8°C'de 72
saate kadar
saklanabilir

TR (Türkçe)
1. Zenginleştirme besi yeri hacmi 300 mL'den büyükse önceden ısıtılmış BPW (ISO) kullanın (ör. numune 30 gramdan
büyükse).
2. Zenginleştirme besi yerini saklama ortamından çıkardıktan sonra, Lizis kısmındaki 1. aşamadan itibaren teste devam
edin. Numune lizatını saklama ortamından çıkardıktan sonra, Lizis kısmındaki 7. aşamadan itibaren teste devam edin.
3. Isıl işlem görmüş saklanan lizatların yeniden test edilmesi için Ek A’ya bakın.
Neogen® Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi'nin Hazırlanması
1. Bir bezi veya tek kullanımlık havluyu %1-5 (suda v:v) çamaşır suyu çözeltisiyle ıslatın ve Neogen Moleküler Tayin Hızlı
Yükleyici Tepsisi’ni silin.
2. Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi'ni su ile durulayın.
3. Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi'ni silmek için tek kullanımlık bir havlu kullanın.
4. Kullanmadan önce, Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi'nin kuru olduğundan emin olun.
Neogen® Moleküler Tayin Soğutma Bloğu Ek Parçası'nın Hazırlanması
Neogen Moleküler Tayin Soğutma Bloğu Ek Parçası’nı doğrudan laboratuvar tezgahına yerleştirin: Neogen Moleküler
Tayin Soğutma Bloğu Tepsisi kullanılmaz. Bloğu laboratuvar ortam sıcaklığında kullanın (20-25°C).
Neogen® Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası'nın Hazırlanması
Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası'nı kuru, çift bloklu bir ısıtma ünitesine yerleştirin. Kuru blok ısıtıcı
ünitesini çalıştırın ve Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası'nın 100 ±1°C'lik bir sıcaklığa ulaşmasını ve bu
sıcaklığı korumasını sağlamak için sıcaklığı ayarlayın.
NOT: Isıtma ünitesine bağlı olarak, Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası'nın istenen sıcaklığa ulaşması içinyaklaşık 30 dakika bekleyin. Belirlenen yere yerleştirilmiş uygun, kalibre edilmiş bir termometre (ör. tamamen daldırmalı
termometre değil, kısmi daldırmalı termometre veya dijital sıcaklık sensörü termometre) kullanarak Neogen Moleküler
Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası'nın 100 ± 1°C'de olduğunu doğrulayın.
Neogen® Moleküler Tayin Cihazı'nın Hazırlanması
1. Neogen® Moleküler Tayin Yazılımı'nı başlatın ve giriş yapın. Yazılımın en güncel sürümüne sahip olduğunuzdan eminolmak için Neogen Food Safety temsilcisiyle temas kurun.
2. Neogen Moleküler Tayin Cihazı'nı çalıştırın.
3. Her bir numune için verilerin olduğu bir test oluşturun veya düzenleyin. Ayrıntılar için bkz. Neogen Moleküler Tayin
Sistemi Kullanım Kılavuzu.
NOT: Reaksiyon tüpleri ile birlikte Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi yerleştirilmeden önce, Neogen
Moleküler Tayin Cihazı Hazır duruma gelmelidir. Bu ısınma aşaması yaklaşık 20 dakika sürer ve cihazın durum çubuğunda
TURUNCU bir ışıkla gösterilir. Cihaz bir testi başlatmaya hazır olduğunda, durum çubuğu YEŞİL renge döner.
Lizis
Neogen Lizis Solüsyonu Rafını Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’na yerleştirmeden önce tornavida ile sökün.

1. Rafı bir gece boyunca (16-18 saat) ortam sıcaklığına (20-25°C) ayarlayarak Neogen Lizis Solüsyonu tüplerininısınmasını sağlayın. Neogen Lizis Solüsyonu tüplerini ortam sıcaklığına getirmek için alternatifler, Neogen Lizis
Solüsyonu tüplerini en az 2 saat laboratuvar tezgahına koymak, Neogen Lizis Solüsyonu tüplerini 1 saatliğine 37 ±1°C'de inkübe etmek veya kuru çift bloklu bir ısıtıcıya 100 ± 1°C’de 30 saniyeliğine yerleştirmektir.
2. Karıştırmak için kapaklı tüpleri ters çevirin. Ters çevirdikten sonraki 4 saat içinde sıradaki adıma geçin.
3. Zenginleştirme besi yerini inkübatörden çıkarın.
4. Her numune ve NC numunesi (steril zenginleştirme ortamı) için bir Neogen Lizis Solüsyonu tüpü gereklidir.

7

TR (Türkçe)
4.1 Neogen Lizis Solüsyonu tüp şeritleri, istenilen tüp sayısı kadar kesilebilir. İhtiyaç duyulan sayıda ayrı Neogen Lizis
Solüsyonu tüpü veya 8 tüplük şeritler seçin. Neogen Lizis Solüsyonu tüplerini boş bir rafa koyun.
4.2 Çapraz kontaminasyonu önlemek için Neogen Lizis Solüsyonu tüplerinin kapaklarını teker teker açın ve her
aktarım aşaması için yeni bir pipet ucu kullanın.
4.3 Aşağıda açıklandığı gibi, zenginleştirilmiş numuneyi Neogen Lizis Solüsyonu tüplerine aktarın:İlk olarak, her bir zenginleştirilmiş numuneyi ayrı bir Neogen Lizis Solüsyonu tüpüne aktarın. Son olarak NC'yi
aktarın.
4.4 Tek seferde bir şerit üzerinde çalışarak, Neogen Lizis Solüsyonu tüp şeridinin kapağını sökmek için Neogen®
Moleküler Tayin Kapak Takma / Kapak Sökme Aracı - Lizis'i kullanın.
4.5 Neogen Lizis Solüsyonu tüp kapağını atın; lizat tekrar test edilmek üzere tutulacaksa lizisten sonra tekrar
uygulama için kapakları temiz bir kaba koyun.
4.5.1. Elde bulunan lizatın işlenmesi için Ek A'ya bakın.
4.6 Kıvamlı numunelerle çalışırken numuneyi filtrelenmiş taraftan toplamadan önce zenginleştirme torbasını ajite edin.
4.7 20 µl numuneyi, protokol tablosunda aksi belirtilmedikçe Neogen Lizis Solüsyonu tüpüne aktarın.
5. Ayrı numune şeritlerinin her biri ilgili Neogen Lizis Solüsyonu tüpüne eklenene kadar 4.4 ile 4.7 arasındaki adımları
tekrarlayın.

6. Tüm numuneler aktarıldığında, 20 µL kadar NC’yi (BPW gibi steril zenginleştirme ortamı) Neogen Lizis Solüsyonu
tüpüne aktarın. NC olarak su kullanmayın.
7. Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası sıcaklığının 100 ± 1°C'de olduğunu doğrulayın.
8. Üstü açık Neogen Lizis Solüsyonu tüpleri rafını Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’na yerleştirin ve 15 ± 1
dakika boyunca ısıtın. Isıtma boyunca, Neogen Lizis Solüsyonunun rengi pembeden (soğuk) sarıya (sıcak) dönecektir.
Lizis tet aşaması sırasında doğru şekilde ısıl işleme tabi tutulmayan numuneler, olası bir biyolojik tehlike olarakdüşünülebilir ve Neogen Moleküler Tayin Cihazı'na YERLEŞTİRİLMEMELİDİR.
9. Neogen Lizis Solüsyonu tüplerinin açık rafını Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğundan çıkarın ve Neogen Moleküler
Tayin Soğutma Bloğu Ek Parçası'nda en az 5, en fazla 10 dakika soğumasını bekleyin. Neogen® Moleküler Tayin Soğutma
Bloğu Tepsisi olmadan oda sıcaklığında kullanılan Neogen Moleküler Tayin Soğutma Bloğu Ek Parçası, laboratuvar
tezgahına doğrudan yerleştirilmelidir. Soğuduğunda, Neogen Lizis Solüsyonunun rengi tekrar pembeye dönecektir.
10. Neogen Lizis Solüsyonu tüp rafını Neogen Moleküler Tayin Soğutma Bloğu Ek Parçası'ndan çıkarın.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

Amplifikasyon
1. Her bir numune ve NC için bir Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter Reaktif Tüpü gereklidir.
1.1 Tüp şeritleri istenilen tüp sayısı kadar kesilebilir. Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter Reaktif
Tüplerinin veya gereken 8’li tüp şeritlerinin sayısını seçin.
1.2 Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter Reaktif Tüplerini boş bir rafa yerleştirin.
8TR (Türkçe)
1.3 Tüplerin dip tarafındaki reaktif pelletlerini karıştırmaktan kaçının.
2. Bir adet Neogen Reaktif Kontrolü Tüpü seçin ve rafa yerleştirin.
3. Çapraz kontaminasyonu önlemek için tek seferde yalnızca bir Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter
Reaktif Tüpü şerit kapağını açın ve her aktarım aşaması için yeni bir pipet ucu kullanın.
4. Lizatların her birini Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter Reaktif Tüpü ile Neogen Reaktif Kontrolü
Tüpüne aşağıda açıklanan şekilde aktarın:
Her bir numune lizatını önce bir Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter Reaktif Tüpüne, ardından NC’yeaktarın. Neogen Reaktif Kontrolü Tüpünü en son hidratlayın.
5. Neogen® Moleküler Tayin Kapak Takma / Kapak Sökme Aracı - Reaktif’i kullanarak, Neogen Moleküler Tespit Analizi
2 - Cronobacter Reaktif Tüplerinin kapağını, aynı anda tek tüp şeridi olacak şekilde çıkarın. Kapağı atın.
5.1 20 µL lizat numunesini, Neogen Lizis Solüsyonu tüpündeki sıvının 1/2’lik üst kısmından (çökeltiyi önleyerek)
ilgili Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter Reaktif Tüpüne aktarın. Pelletlerin karışmasını önlemekiçin açılı olarak dökün. Yukarı ve aşağı 5 kez pipetleyerek nazikçe karıştırın.
5.2 Şeritte karşılık gelen Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter Reaktif Tüpüne tek lizat numunesi
eklenene kadar adım 5.1’i tekrarlayın.
5.3 Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter Reaktif Tüplerini, tedarik edilen ilave kapak ile kapatın vekapağın sıkı bir şekilde kapatıldığından emin olmak amacıyla, aşağı yukarı hareketle basınç uygulamak üzere
Neogen Moleküler Tayin Kapak Takma / Kapak Sökme Aracı - Reaktif'inin yuvarlak tarafını kullanın.
5.4 Test edilecek numune sayısı için 5.1 ila 5.3 adımlarını gerektiği şekilde tekrar edin.
5.5 Tüm lizat numuneleri aktarıldığında, adım 5.1 ila 5.3’ü tekrarlayarak 20 µL NC lizatı bir Neogen Moleküler Tespit
Analizi 2 - Cronobacter Reaktif Tüpüne aktarın.
5.6 20 µL NC lizatı bir Neogen Reaktif Kontrolü Tüpüne aktarın. Pelletlerin karışmasını önlemek için açılı olarak
dökün. Yukarı ve aşağı 5 kez pipetleyerek nazikçe karıştırın.
6. Kapağı takılmış olan tüpleri temiz ve dekontamine edilmiş bir Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi'ne
yükleyin. Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi kapağını kapatın ve mandalını kilitleyin.

7. Neogen Moleküler Tespit Yazılımı'nda yapılandırılmış testi gözden geçirin ve onaylayın.
8. Yazılımdaki Start (Başlat) düğmesine tıklayın ve kullanılacak cihazı seçin. Seçilen cihazın kapağı otomatik olarak açılır.
9. Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi'ni Neogen Moleküler Tayin Cihazı'na yerleştirin ve testi başlatmaküzere kapağı kapatın. Pozitif sonuçlar daha önce tespit edilebilmekle
beraber, sonuçlar 60 dakika içinde elde edilir.
10. Test tamamlandıktan sonra, Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi'ni Neogen Moleküler Tayin Cihazı'ndan çıkarınve tüpleri 1 saat süresince %1-5'lik (suda v:v) çamaşır suyu çözeltisine daldırarak test hazırlık alanından uzağa atın.
BİLDİRİM: Çapraz kontaminasyondan kaynaklanan yanlış pozitif sonuçların elde edilmesi riskini en aza indirmek
için amplifiye edilmiş DNA'yı içeren reaktif tüplerini hiçbir zaman açmayın. Buna Neogen Moleküler Tespit Analizi
2 - Cronobacter Reaktif, Neogen Reaktif Kontrolü ve Neogen Matris Kontrol Tüpleri dahildir. Mühürlü reaktif tüplerini
daima, 1 saat süresince %1-5'lik (suda v:v) çamaşır suyu çözeltisine daldırarak test hazırlık alanından uzağa atın.

Sonuçlar ve Yorumlama

Bir algoritma, nükleik asit amplifikasyonu tayininden kaynaklanan ışık çıkışı eğrisini yorumlar. Sonuçlar yazılım tarafından
otomatik olarak analiz edilir ve sonuca göre renk kodlamasına tabi tutulur. Benzersiz eğri parametreleri sayısı analiz
edilerek Pozitif veya Negatif bir sonuç belirlenir. Negatif sonuçlar ve Kontrol sonuçları test tamamlandıktan sonra
gösterilirken, olası pozitif sonuçlar gerçek zamanlı olarak bildirilir.
9TR (Türkçe)
NOT: Sistem ve Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter amplifikasyon reaktifleri bir "arka plan" bağıl ışıkbirimine (RLU) sahip olduğu için negatif bir numune bile sıfır okuma sonucu vermeyecektir.
Onay• NF Validation Sertifikalı Yönteme göre sonuçların doğrulanması
NF VALIDATION kapsamında, birincil zenginleştirme yönteminden (BPW ISO veya 10 mg/L vankomisin takviyeli
BPW ISO) aktarımla başlayarak tüm varsayıma dayalı pozitif zenginleştirmeler aşağıdaki referans yöntem onayı(2) ile
doğrulanmalıdır.
•Diğer onay protokolü

Varsayıma dayalı pozitif numunelerin doğrulanması, laboratuvarın standart işletme prosedürlerine uygun olarak veya
uygun referans yöntem onayı(1,2) ile, birincil zenginleştirmeden (BPW ISO veya 10 mg/L vankomisin takviyeli BPW ISO)
ikincil zenginleştirme ortamına aktarımla başlayıp, sonrasında uygun biyokimyasal, serolojik ve/veya moleküler yöntemler
kullanılarak izolatların kaplanması ve doğrulanmasıyla gerçekleştirilmelidir.
Nadir olarak olağan dışı ışık çıkışı durumunda, algoritma bu durumu Kontrol olarak etiketler. Neogen, tüm İnceleme
numuneleri için kullanıcının testinin tekrarlanmasını önerir. Kontrol sonucu almaya devam ederseniz tercih ettiğiniz
yöntemi kullanarak veya yerel düzenlemeler ile belirlendiği şekilde, doğrulama testine geçin(1,2).
Uyumsuz sonuçlar halinde (Neogen Moleküler Tespit Analizi 2 - Cronobacter ile varsayıma dayalı pozitif, yukarıda
tanımlanan yöntemlerden biri ile doğrulanmamış) laboratuvar, sonuçları bildirmek için yerleşik standart çalışma
prosedürlerini izlemelidir.
Belirli uygulamalar veya prosedürler hakkında sorularınız varsa www.neogen.com adresindeki web sitemizi ziyaret edinveya yerel Neogen temsilcisi ya da distribütörü ile iletişim kurun.
Ek A. Protokol Kesintisi: Isıl işlem görmüş lizatların saklanması ve yeniden test edilmesi
1. Isıl işlem görmüş lizatı saklamak için lizis tüpünü temiz bir kapakla kapatın (bkz. Lizis bölümü 4.5)
2. 72 saate kadar 2-8°C sıcaklıkta saklayın.
3. Saklanan numuneyi, karıştırmak üzere 2-3 kez ters yüz ederek amplifikasyon için hazırlayın.
4. Tüplerin kapaklarını çıkarın.
5. Karıştırılan lizat tüplerini Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası üzerine yerleştirin ve 5 ± 1 dakika 100 ± 1°C'de ısıtın.
6. Neogen Lizis Solüsyonu Tüplerinin rafını ısıtma bloğundan çıkarın ve Neogen Moleküler Tayin Soğutma Bloğu Ek
Parçası'nda en az 5, en fazla 10 dakika soğumasını bekleyin.
7. Protokole, yukarıda detayları verilen Amplifikasyon bölümünden devam edin.

Referanslar:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Yukarıda açıklanan standart yöntemlerin mevcut sürümlerine başvurun.
10

TR (Türkçe)

Sembollerin Açıklaması
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

JA （日本語）

発行日：2024-01

製品情報

病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用製品の概要および用途

Neogen® 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は、Neogen® 病原菌自動検出システムを用いて前培養した食品および食品工程中環境検体におけるクロノバクター属菌を迅速かつ特異的に検出するときに使用します。

Neogen 病原菌検出アッセイは、増幅した菌を検出するために、高い特異性と感度を持つ核酸配列を迅速に増幅するLAMP法と、生物発光を組み合わせています。推定陽性結果はリアルタイムに表示され、陰性結果は検査が完了してから表示されます。
結果が陽性と推定される場合は、任意の別の方法または行政の規制によって指定された通りに確認する必要があります（1,2）。

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は、検査技術の訓練を受けた技術者が検査室環境で使用することを想定しています。Neogenは、食品または飲料以外の産業における本製品の使用に関しては検証しておりません。例えば、Neogen
は、本製品を医薬品、化粧品、臨床または動物診断検体の検査で使用することについて検証しておりません。Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は、可能性のあるすべての食品や食品製造工程、検査プロトコル、あるいはすべての菌株について評価されたわけではありません。

すべての検査法と同様に、増菌培地のメーカーや組成、品質などの要因が結果に影響する場合があります。採取方法、検査プロ
トコル、均質化や混合などの検体の準備、取り扱い、および検査手技などの要因が結果に影響する場合もあります。Neogenは、お客様の基準を満たすように、お客様の環境において、特定の食材または環境検体および菌株を用いた十分な数の検体で、増菌培地を含む検査方法を評価することをお勧めします。
Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用と緩衝ペプトン水ISO（BPW ISO）増菌培地との併用における評価は実施されています。

Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用は、
アッセイのライシスステップ中に熱処理を行った検体を測定することを目的としており、検体中に存在する有機物を分解するように設計されています。アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハザードと考えられる可能性がありますので、Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用の装置内には入れないでください。
Neogen食品衛生管理製品は、設計と製造においてISO（国際標準化機構）9001の認証を得ています。

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用検査キットは、表1に記載のとおり96検体用となっています。

表1. Neogen 病原菌検出アッセイキットの内容
品目

特徴

数量

Neogen® ライシス液（LS溶液）

クリアチューブに入ったピンク色の液体96テスト分（8連チューブ
12セット）

予備キャップ赤褐色のキャップ

96検体分（8連キャップ12
セット）

Neogen® 病原菌検出アッセイ
2 - クロノバクター属菌用 試薬 赤褐色のチューブ
チューブ
Neogen® 試薬コントロール（RC）

フリップトップ式クリアチューブ

96テスト分（8連チューブ
12セット）

16（チューブ8本入り2パ
ウチ）

内容量

チューブ1本につきLS 580 μL

コメント

ラック入り、調整済み

凍結乾燥済み特異増調整済み
幅試薬および検出試薬

凍結乾燥済みコントロールDNA、増幅試薬および検出試薬調整済み

調整済み

陰性コントロール（キットには付属しません）は、BPW ISOなどの滅菌済増菌培地です。水は陰性コントロールとして使用しないでください。

安全性

Neogen 病原菌自動検出システムおよびNeogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用の製品情報に記載のすべての安
全情報を読み、理解し、遵守してください。また、これらの情報は大切に保管してください。

警告： 適切な危険予防措置が行われていない場合、死亡または重篤な傷害や、物的損害が発生する可能性があります。
注記： 適切な危険予防措置が行われていない場合、危険な状況により物的損害が発生する場合があります。

1

W 警告

JA （日本語）

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は、ヒトまたは動物の診断用に使用しないでください。

検査実施担当者に現行の適切な検査技術を身につけるように指導してください（例：GLP（3）、ISO/IEC 17025（4）、ISO 7218（5））。

汚染検体の偽陰性結果のリスクを回避するために：• プロトコルに従い、製品情報に記載のとおりに検査を行ってください。
• Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は、外装表示および製品情報に記載のとおりに保管してください。
• Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は使用期限までに必ず使用してください。
• Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は、社内または第三者による検証を行った食品、飼料、食品加工環境検体に使用してください。
• Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は、社内または第三者による検証を行った表面、殺菌剤、プロトコル、菌株のみに使用してください。
• アリルスルホン酸塩添加中和緩衝液を含む環境検体については、試験前に1:2の希釈（検体1に対して滅菌増菌培地1）を行ってください。別の方法としては、中和緩衝液増菌培地10 μLをNeogen ライシスチューブに滴下します。
Neogen® 検体処理製品のうち、アリルスルホン酸塩添加中和緩衝液を含む製品は、RS96010NB、RS9604NB、
SSL10NB、SSL10NB2G、HS10NB、HS10NB2G、HS2410NB2Gです。このプロトコルは、NF Validation検証で試験を実施しておりません。
化学物質およびバイオハザードへの暴露に伴う危険を回避するために：• 技能訓練を受けた検査実施担当者の管理下で、適切な設備のある検査室にて食中毒菌検査を行ってください。培養済み増菌培地および培養済み増菌培地と接触する機器または接触面には、人体に有害となりうる量の病原体が含まれている可能性があります。
• 試薬および汚染された検体を取り扱う際は、適切な保護衣、保護メガネの装着など、標準的な検査室の安全手順に常に従ってください。
• 増菌後の培地や、増幅後の試薬チューブ内容物には触れないでください。
• 現行の行政基準および産業基準に従って、増菌された検体や関連する汚染された廃棄物を廃棄してください。
• ヒーターの温度設定を推奨温度以上にしないでください。
• 推奨される加熱時間を超えないでください。
• 適切な較正済みの温度計を使用して、Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートの温度を確認してください（例：浸線付温度計またはデジタル熱電対温度計。
全浸没温度計は使用しないこと）。温度計は、必ずNeogen
測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートの指定の部位に設置してください。

アッセイ準備中の交差汚染に伴う危険を回避するために：• 手袋を必ず着用してください（ユーザー保護と遺伝子の混入を避けるため）。

高温の液体への暴露に伴う危険を回避するために：• ヒーターの温度設定を推奨温度以上にしないでください。
• 推奨される加熱時間を超えないでください。
• 適切な較正済みの温度計を使用して、Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートの温度を確認してください（例：浸線付温度計またはデジタル熱電対温度計。
全浸没温度計は使用しないこと）。温度計は、必ずNeogen
測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートの指定の部位に設置してください。

注記

アッセイ準備中の交差汚染に伴う危険を回避するために：• 試薬ペレットを水和する前に、手袋を交換してください。
• 滅菌済みのエアロゾルバリア材（フィルター付）、分子生物学グレードのピペットチップの使用を推奨します。
• 検体ごとに新しいピペットチップを使用してください。
• GLP（医薬品安全性試験実施基準）に従って検体を増菌培地からライシスチューブに移してください。ピペットの汚染を回避するため、中間的な滴下ステップを追加することもできます。例えば、増菌された各検体を滅菌チューブに滴下することができます。
• 利用可能な場合は、殺菌灯が装備された病原菌取扱エリアを使用してください。
• 検査室の作業台および備品（ピペット、
キャップ／デキャップツール等）は、1～5%（v/v in water）の家庭用漂白液またはDNA除去用液を使用して定期的に除染してください。

偽陽性の結果に伴う危険を回避するために：• 増幅後のチューブは絶対に開けないでください。
• 汚染されたチューブは、常に、1～5%（v/v in water）の家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離
して、廃棄してください。
2••JA （日本語）

増幅後の試薬チューブは絶対にオートクレーブで加熱滅菌処理しないください。
検体にクロノバクター属菌のDNA（例：殺菌／不活性化された成育不能なクロノバクター属菌細胞由来のDNA）が高濃度で含まれていることが疑われる場合は、ライシスステップに進む前に、陽性と推定される増菌培地をDNaseで処理してください。手順の詳細については、Neogen担当者までお問い合わせください。このプロトコルは、NF Validation検証で試験を実施しておりません。

廃棄に関する詳細および行政の規制については、製品安全データシートを参照してください。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト
（www.neogen.com）をご覧いただくか、Neogen販売担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。

お客様の使用責任

お客様には、
使用前に添付文書および製品情報を熟読し、情報に精通する責任があります。詳細につきましては、
当社ウェブサイト
www.neogen.comをご覧いただくか、
お近くのNeogen販売担当者または販売店にお問い合わせください。
検査方法を選択する際には、サンプリング方法、検査プロトコル、均質化や混合などの検体の準備、取り扱い、および検査手技な
どの外的要因が結果に影響することを認識することが重要です。

適切な食材及び菌株を用いて、試験法がお客様のご要求の基準を満たすかどうかの十分な事前確認、ご評価をお願いいたします。
また、その検査方法および結果が顧客あるいは供給業者の要求を満たしているかにつきましても、お客様のご判断となります。

どの検査方法を使用した場合でも、Neogen食品衛生管理製品を使用して得られた検査結果により、検査で確認した食材または工程中の品質を保証するものではありません。

各種マトリックスの検査方法の評価にご利用いただくため、NeogenではNeogen® マトリックスコントロール 病原菌検出システ
ム用キットをご用意しました。必要に応じて、
マトリックスコントロール（MC）を使用し、対象マトリックスがNeogen 病原菌検出ア
ッセイ2 - クロノバクター属菌用の検査結果に影響を及ぼすかどうかを判定してください。Neogenの検査法を採用する場合、
または新規や由来の不明なマトリックス、あるいは原材料を加工したマトリックスや加工工程に変化の生じたマトリックスを検査す
る場合は、検証期間中に、マトリックスの標準となる複数の検体（由来の異なる検体）を検査してください。
マトリックスは、成分や加工状態など固有の特性を備える製品の種類として定義されます。マトリックスは、加工や外観など（例：
未加工／滅菌済み、生食用／乾物等）の違いと同じように単純に区別できます。

保証の制限／限定的救済策

個々の製品パッケージの限定保証条項に明示されている場合を除き、NEOGENは明示または黙示を問わず、商品性または特定の目的への適合性に関する保証を含むがこれに限定されない、あらゆる種類の保証も負いかねます。Neogen食品衛生部門の製品に欠陥があった場合、Neogenまたは取扱販売店で交換あるいは返品処理をいたします。対応は上記のみとさせていただきます。ご不明な点がございましたら、Neogenの担当者またはNeogenの正規卸売業者にお問い合わせください。

Neogenの保証責任範囲

NEOGENは、直接的・間接的、特殊、偶発的または必然的を問わず、利益損失を含むあらゆる損失に対しての責任を負いません。
いかなる場合においても、あらゆる法的理論に対しても、Neogenの保証責任範囲は、欠陥と認められた製品の購入金額を超えることはありません。

保管と廃棄

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は2～8°Cで保管してください。冷凍しないでください。暗所で保管してください。キット開封後は、ホイルパウチが破損していないことを確認してください。パウチが破損している場合は、使用しないでください。開封後、使用しない試薬チューブは、凍結乾燥試薬の安定性を保つため、乾燥剤と共に再密閉可能なパウチ内に必ず保管してください。再密閉したパウチは2～8°Cで、60日間保存することができます。

使用期限を過ぎたNeogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用は使用しないでください。使用期限およびロット番号
は外箱ラベルに記載されています。使用後、増菌培地およびNeogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用には病原性の物質が含まれる可能性があります。検査終了後は、汚染廃棄物に関する現行の産業基準に従って廃棄してください。廃棄に関する詳細および行政の規制については、製品安全データシートを参照してください。

使用方法

すべての指示に、注意深く従ってください。従わない場合、正確な結果が得られないことがあります。

検査室の作業台および備品（ピペット、
キャップ／デキャップツール等）は、1～5%（v/v in water）の家庭用漂白液またはDNA除去用液を使用して定期的に除染してください。

（6）
ユーザーは、「Neogen 病原菌自動検出システムの設置資格（IQ）／操作資格（OQ）
プロトコルと手順」に記載のとおり、Neogen 病原菌自動検出システムのオペレーター資格トレーニングを受講する必要があります。

3

JA （日本語）

具体的な要件については、「妥当性確認された方法」の項を参照してください。

表3. AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01およびPerformance TestedSM 認証番号101703に基づく増菌プロトコル表4. NF VALIDATION 3M 01/20-03/18に基づく増菌プロトコル

検体の増菌
表2、3、4には、食品および環境検体を増菌する場合のガイドラインを示しています。

この検査法がお客様の基準に合致するかを確かめるため、十分な数の検体または増菌プロトコル、あるいは希釈率で事前確認いただき、お客様の責任で使用の可否をご判断ください。
食品、環境粉体、埃、ごみ、スポンジ
1. 増菌プロトコルに別途指定のある場合を除き、増菌培地を室温（20～25°C）に戻します（表2、3、4を参照）。

2. 増菌培地と検体を無菌的に混合します。
均一になるように、
ブレンダー、ストマッキング、撹拌機、手作業など、各種方法のいず
れかで2±0.2分間、
あるいはすべての塊が完全に溶解し、濃縮懸濁液が均質になるまで、よく撹拌（ホモジナイズ）
します（7,8）。
a. 均質化や混合などの検体の準備、取り扱い、および検査手技などの要因が結果に影響する場合があります。
b. 超微粒子検体に関しては、
フィルターバッグの使用を推奨します。

c.

水中で膨潤し、粘度の高い食材（例：シリアル、
でんぷん）については、粘度が適度に低下するまでさらに希釈（> 1:10）
するか、滅菌済みの1%（w/v）α-アミラーゼをBPW（ISO）に添加することを推奨します（8）。

d. 検体量が多いシリアルの場合、凝集しないよう、頻繁に混合しながら液体に粉末シリアルを徐々に加えます。

3. 該当するプロトコルの表に記載のとおり培養します（表2、3、4を参照）。
表2. 一般的な増菌プロトコル

検体マトリックス

検体量1

乳児用調製粉乳（PIF）および、粉乳、大豆
粉、
ホエイパウダー、
ラクトース、米粉、
マル
トデキストリンなどの原料

検体1X g埃、ごみ、掃除機による集塵などの乾燥した環境検体

検体1X g

塩、
ミネラル、
アミノ酸、DHA（ドコサヘキサ
エン酸）、
ビタミンなどの原料

リージンブロス10 mLまたはD/E希釈液を含ませた環境スポンジ

検体1X g
検体採取
装置1個増菌培地の量1, 2
BPW（ISO）
9X mL（1:10）

BPW（ISO）
99X mL（1:100）
BPW（ISO）
9X mL（1:10）
BPW（ISO）
90 mL（1:10）

増菌温度（±1°C）

増菌時間
（時間）

検体の
分析量

37

18～24

20 µL

37

18～24

20 µL

37

37

18～24

18～24

20 µL

20 µL

1. Neogenは、表2に掲載の希釈率を用いてNeogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用の評価（300 gまで）を実施
しています。この方法がお客様の基準に合致するかを確かめるため、事前に他の希釈率あるいはプロトコルでご確認いただ
いた上で、使用の可否をご判断ください。

2. 増菌培地の量が300 mLを超える場合（例：検体量が30 gを超える）は、あらかじめ加温したBPW（ISO）を使用してください。
妥当性確認された方法

AOAC® Official Method of AnalysisSM（OMA）2018.01
AOAC® Performance TestedSM（PTM）認証#101703

AOAC Research Institute OMASMおよびPTMSMを用いた試験において、Neogen 病原菌検出アッセイ2 クロノバクター属菌用は、クロノバクター属菌の検出に有効な方法であることが確認されています。上記試験において検査の対象となったマトリックス
を表3に掲載します。

4

表3. AOAC® OMASM 2018.01およびPTMSM 101703に基づく増菌プロトコル

JA （日本語）

検体マトリックス

検体量増菌培地の量1

増菌温度（±1°C）

増菌時間
（時間）

検体の
分析量

乳児用粉末シリアル（プロバイオティクスを含有しない）300 g

BPW（ISO）
2700 mL（1:10）

37°Cにあらかじ
め加温済み

18～24

20 µL

BPW（ISO）
90 mL（1:10）

22～24

20 µL

37

18～24

20 µL

37

18～24

20 µL

乳児用調製粉乳および乳児用粉末シリアル

10 g

乳児用調製粉乳および乳児用粉末シリアル（プロバイオティクスを含有する）

300 g

D/E中和ブロス10 mLを含ませた環境スポ
ンジ

検体採
取装置
1個

ラクトース

10 g

BPW（ISO）
90 mL（1:10）

37

BPW（ISO）
37°Cにあらかじ
2700 mL + バンコマ
め加温済み
イシン10 mg/L
BPW（ISO）
90 mL（1:10）

18～24

1. 増菌培地の量が300 mLを超える場合は、あらかじめ加温したBPW（ISO）を使用してください。
AFNOR CertificationによるNF VALIDATION

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
効力の失効についての詳細は、上記のWebサイト上で入手できるNF VALIDATION認証を参照してください。
NF VALIDATIONにより認証された方法は、ISO 22964よりもISO 16140-2（9）に準拠しています。

適応範囲：粉末乳児用調合乳および幼児用シリアル（プロバイオティクス含有／非含有）、原材料、環境検体。
検体の準備：検体は、EN ISO 22694（2）およびEN ISO 6887（7,8）に従って調製してください。

ソフトウェアバージョン：認定証を参照してください。

5

20 µL

表4. NF VALIDATIONにより認証された方法3M 01/20-03/18に基づく増菌プロトコル
検体マトリックス

•
•
•

•

•

乳児用調製粉乳
乳児用粉末シリアル
粉乳、大豆粉、
ホエイパ
ウダー、
ラクトース、米粉、
マルトデキストリンなどの原料
埃、ごみ、掃除機による集塵などの乾燥した環境
検体

検体量

10 g

増菌温度
（±1°C）

増菌培地の量1

BPW（ISO）
90 mL（1:10）

37

増菌時間
（時間）

18～24

JA （日本語）
検体の
分析量

20 µL

乳児用粉末シリアルおよび乳
児用調製粉乳（プロバイオ
ティクスを含有する）

30～300 g
30～300 g

増菌培地または検体
溶解物は、2～8°Cで最大72時間保管することができます増菌培地または検体
溶解物は、2～8°Cで最大72時間保管することができます

検体採取装
スポンジ、洗浄水、拭き取
置1個またはり用ワイプ
10 mL

乳児用調製粉乳および乳児用粉末シリアル（プロバイオ
ティクスを含有しない）

推奨される
中断ポイント2, 3

BPW（ISO）（1:10）BPW（ISO）+
バンコマ
イシン10
mg/L（1:10）

37

18～24

20 µL

増菌培地または検体
溶解物は、2～8°Cで最大72時間保管することができます

37

22～24

20 µL

なし

1. 増菌培地の量が300 mLを超える場合（例：検体量が30 gを超える）は、あらかじめ加温したBPW（ISO）を使用してください。

2. 増菌培地を保管場所から取り出したら、「ライシス」セクションのステップ1から再開してください。検体ライシスを保管場所から取り出したら、「ライシス」セクションのステップ7から再開してください。
3. 保管された加熱処理済み溶解物の再検査については、付録Aを参照してください。

Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダートレイの準備
1. 1～5%（v/v in water）の家庭用漂白液で湿らせた布か使い捨て用タオルを使って、Neogen 測定機器 病原菌自動検出シス
テム用スピードローダートレイを拭きます。

2. 水でNeogen 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダートレイを濯ぎます。

3. 使い捨てペーパータオル等で、Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダートレイを拭きます。

4. 使用前に、Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダートレイが乾燥していることを確認してください。

Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用チルブロックインサートの準備
Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用チルブロックインサートを作業台の上に直に置きます。Neogen 測定機器 病原菌
自動検出システム用チルブロックトレイは使用しません。ブロックは検査室の室温（20～25°C）で使用します。

Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートの準備
Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートをドライダブルブロックヒーターユニットに入れます。ドライブロックヒーターユニットをオンにして、温度を100±1°Cに設定します。
Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒート
ブロックインサートが設定温度に達したら、温度を保持します。
注：使用するヒーターユニットにより、Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートが設定温度に達するまでに約30分かかります。適切な較正済みの温度計（例：浸線付温度計またはデジタル熱電対温度計。
全浸没温度計は使用しないこと）を指定の部位に設置し、Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートが100±1°Cであることを確認します。

Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用の準備
1. Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用ソフトウェアを起動して、ログインします。お使いのソフトウェアが最新バー
ジョンであるかどうかを確認するには、Neogen食品衛生部門の営業担当者あるいは販売店までお問い合わせください。
2. Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用の電源を入れます。

6

JA （日本語）

3. 各検体のデータを含む検出結果を作成、編集します。詳細については、Neogen 病原菌自動検出システムユーザーマニュア
ルを参照してください。
注：Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用は、反応チューブと共にNeogen 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダートレイを入れる前に、待機状態になっている必要があります。この加熱ステップには約20分かかり、装置のステー
タスバーがオレンジ色に点灯します。装置の準備ができると、ステータスバーは緑色に変わります。

ライシス
Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートに入れる前に、ドライバーでNeogen ライシスチューブラックの底部を取り外します。

1. Neogen ライシスチューブは、
ラックに一晩（16～18時間）静置して、室温（20～25°C）に戻します。Neogen ライシスチューブ
を室温に戻す別の方法としては、Neogen ライシスチューブを作業台の上に2時間以上静置するか、Neogen ライシスチュー
ブを37±1°Cの培養器内で1時間保温するか、Neogen ライシスチューブをドライダブルブロックヒーターに入れて1°Cで30秒
間加熱します。

2. キャップを閉めた状態のライシスチューブを反転させて中の液を混合させます。反転後4時間以内に次のステップに進みます。

3. 培養器から増菌培地を取り出します。

4. 各検体およびNC検体（滅菌増菌培地）につきNeogen ライシスチューブ1本が必要です。

4.1 Neogen ライシスチューブのストリップは、必要な数に合わせてカットできます。各Neogen ライシスチューブまたは8連チ
ューブのストリップの数を選択してください。Neogen ライシスチューブを空のラックに置きます。
4.2 交差汚染を回避するため、Neogen ライシスチューブのキャップは一度に1ストリップずつ外し、滴下ステップごとに新しいピペットチップを使用してください。
4.3 以下に記載のとおり、増菌した検体をNeogen ライシスチューブに滴下します。

最初に、増菌した各検体を各Neogen ライシスチューブに滴下します。最後にNCを滴下します。

4.4 Neogen® 病原菌自動検出システム用キャップ／デキャップツール － 溶解を使用して、Neogen ライシスチューブのキャップを一度に1ストリップずつ外します。

4.5 Neogen ライシスチューブのキャップを廃棄します。
ライシス液を再検査用に保存する場合は、キャップを清潔な容器に入れておき、ライシス後に再度キャップを嵌めます。
4.5.1. 保存した溶解物の処理については、付録Aを参照してください。

4.6 粘度の高い検体を扱うときは、濾過された面から検体を採取する前に増菌バッグを撹拌します。

4.7 プロトコルの表に別の指示がある場合を除き、検体20 µLをNeogen ライシスチューブに移注します。

5. 各検体が、ストリップの対応するNeogen ライシスチューブに添加されるまでステップ4.4～4.7を繰り返します。

6. すべての検体を移注したら、NC（ネガティヴコントロール用滅菌増菌培地、例：BPW）20 µLをNeogen ライシスチューブに滴下します。水は陰性コントロールとして使用しないでください。
7

JA （日本語）

7. Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートの温度が100±1°Cであることを確認してください。
8. Neogen 測定機器病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサート内にカバーを外したNeogen ライシスチューブラックを入れて、15±1分間加熱します。加熱中、Neogen ライシス液はピンク色（低温）から黄色（高温）に変色します。

アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハザードと考えられる可能性があります
ので、Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用の装置内には入れないでください。

9. ヒートブロックからカバーを外したNeogen ライシスチューブラックを取り出し、Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム
用チルブロックインサート内で5分間以上（最大10分間）冷却します。Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用チルブ
ロックトレイを外して室温に戻されたNeogen 測定機器 病原菌自動検出システム用チルブロックインサートは、作業台の上に直に置いてください。冷却されると、ライシス液はピンク色に戻ります。

10. Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用チルブロックインサートからNeogen ライシスチューブラックを取り出します。
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

増幅
1. 各検体およびNCにつきNeogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用 試薬チューブ1本が必要です。

1.1 チューブのストリップは、必要な数に合わせてカットできます。各Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用
試薬チューブまたは8連チューブのストリップの数を選択してください。
1.2 Neogen® 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用 試薬チューブを空のラックに置きます。

1.3 チューブの底の試薬ペレットを撹拌しないでください。

2. Neogen 試薬コントロールチューブを1本選択して、ラックに置きます。

3. 交差汚染を回避するため、Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用の試薬チューブのキャップは一度に1ストリップずつ外し、分注ステップごとに新しいピペットチップを使用してください。
4. 下記のように、各溶解物を、Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用 試薬チューブおよびNeogen 試薬コント
ロールチューブに滴下してください。

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用の各試薬チューブに最初に各検体溶解物を滴下し、次にNCを滴下します。最後にNeogen 試薬コントロールチューブを水和します。

5. Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用キャップ／デキャップツール － 試薬を使用して、Neogen 病原菌検出アッセ
イ2 - クロノバクター属菌用 試薬
チューブのキャップを一度に1ストリップずつ外します。キャップを廃棄します。

5.1 検液20 µLをNeogen ライシスチューブの液体の上部1/2（沈澱物は避けてください）から取り、対応するNeogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用 試薬チューブに分注します。ペレットが撹拌されないよう、一定の角度で分注します。ピペッティングを上下5回やさしく行って混合します。
5.2 各検体溶解物が、ストリップの対応するNeogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用 試薬チューブに添加されるまでステップ5.1を繰り返します。

5.3 付属の予備キャップを使用してNeogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用 試薬チューブをカバー
し、Neogen® 測定機器 病原菌自動検出システム用キャップ／デキャップツール － 試薬の丸い方を使って、キャップがしっかりと嵌るよう前後に動かして圧力をかけます。

5.4 検査する検体数に応じて、
ステップ5.1～5.3を繰り返します。

5.5 すべての検体ライシス液を滴下したら、
ステップ5.1～5.3を繰り返してNCライシス液20 µLをNeogen 病原菌検出アッセ
イ2 - クロノバクター属菌用 試薬チューブに滴下します。

5.6 Neogen 試薬コントロールチューブにNC溶解物20 µLを滴下します。ペレットが撹拌されないよう、一定の角度で分注します。ピペッティングを上下5回やさしく行って混合します。

6. 清潔な、殺菌済みNeogen 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダートレイにキャップをしたチューブを装填します。Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダートレイを閉めて、留めがねをかけます。
8

JA （日本語）

7. Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用ソフトウェアで設定した検査内容を確認します。

8. ソフトウェアのスタートボタンをクリックして、使用する装置を選択します。選択された装置の蓋が自動的に開きます。

9. Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用装置内にNeogen 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダート
レイを置き、蓋を閉めてアッセイをスタートします。結果は60分ほどで判定されますが、陽性の場合はもっと早く検出されます。
10. アッセイ終了後、
Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用スピードローダートレイをNeogen 測定機器 病原菌自動検出システム用から取り出し、チューブは1～5%（v/v in water）の家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄してください。

注記：交差汚染による偽陽性の危険を最小限に抑えるため、増幅DNAの入った試薬チューブは絶対に開けないでください。
これには、Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用 試薬、Neogen 試薬コントロール、Neogen マトリックスコン
トロールチューブが含まれます。密閉された試薬チューブは必ず、1～5%（v/v in water）の家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄してください。

結果と解釈

アルゴリズムが核酸増幅の結果より得られた光出力曲線を解釈します。結果はソフトウェアが自動的に解析し、結果に応じて色分けされます。陽性または陰性の結果は、それぞれが持つ固有の曲線パラメータを解析することにより特定されます。結果が陽性と推定される場合はリアルタイムでレポートされますが、陰性および再検査が必要な場合は、その検査が完了した後に表示されます。
注：Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用の試薬は「バックグラウンド」相対発光量（RLU）を持っていますので陰性検体がシステム上のグラフ数値として0を示さない場合もあります。

確認• NF Validationにより認証された方法に基づく結果の確認

NF VALIDATIONに照らして陽性と推定される増菌培地はすべて、前培養培地（BPW ISOまたはバンコマイシン10 mg/Lを添加したBPW ISO）を滴下することから始まる以下の参照法（2）に従って確認する必要があります。
•

その他の確認方法

陽性と推定される増菌培地は、検査室の標準作業手順書、または適切な参照法（1,2）に従って確認する必要があります。
まず、前培養培地（BPW ISOまたはバンコマイシン10 mg/Lを添加したBPW ISO）を選択増菌培地に移動し、次にプレート接種と適切な生
化学的・血清学的手法を使用した釣菌を行って確認してください。

異常な光出力がみられるなどの稀なケースについては、
アルゴリズムがこれを「再検査してください」と表示します。Neogen社はお客様に、「再検査」検体に対して検査を再度行うことを推奨します。その結果が続けて再検査であった場合は、任意の別の方法
または行政の規制（1,2）によって指定されたとおりに確認検査を行ってください。
結果が一致しない場合（Neogen 病原菌検出アッセイ2 - クロノバクター属菌用で陽性と推定されたものの、上記の検査方法では確認できなかった場合）は、検査室の標準作業手順書に従って得られた結果を報告してください。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト
（www.neogen.com）をご覧いただくか、Neogen販売担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。
付録A. プロトコルの中断：加熱処理済み溶解物の保管と再検査
1. 加熱処理済み溶解物を保管するには、
ライシスチューブに清潔なキャップを嵌めます（「ライシス」セクション、4.5を参照）
2. 2～8°Cで最大72時間保管します。

3. 保管された検体を2～3回反転させて混合し、増幅用として準備します。
4. チューブのキャップを外します。

5. 混合したライシスチューブをNeogen 測定機器
病原菌自動検出システム用ヒートブロックインサートに置き、100±1°Cで5±1分間加熱します。
9

JA （日本語）

6. ヒートブロックからNeogen ライシスチューブラックを取り出し、Neogen 測定機器 病原菌自動検出システム用チルブロック
インサート内で5分間以上（最大10分間）冷却します。
「増幅」セクションに詳述されているプロトコルを継続します。
7. 上記の参考文献：

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012

2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.

3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements andguidance for microbiological examination.

6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.

7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initialsuspension and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of
miscellaneous products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
上述の標準試験法については、現行の最新版を参照してください。

記号の説明

info.neogen.com/symbols

10Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

ZH （简体中文）

发布日期：2024-01产品信息分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌产品说明及预期用途

Neogen® 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌与 Neogen® 分子检测系统一起使用，用于快速、专门检测增菌后的食品和食品加工
环境样品中的阪崎肠杆菌。

Neogen 分子检测试剂盒采用环介导等温扩增技术来快速扩增具有高特异性和高敏感性的核酸序列，结合使用生物发光特性来检测扩增。实时报告假定阳性结果，阴性结果将在分析完成之后显示。应该使用您喜欢的方法或按照当地法规指定的方法确
认假定阳性结果(1,2)。

Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌专供受过实验室技术培训的专业人员在实验室环境下使用。对于在食品或饮料以外的行业中使用此产品，Neogen 尚未有资料可证。例如，对于此产品用于检测制药、化妆品、临床或家畜样品，Neogen 尚未有资
料可证。尚未针对所有可能的食品产品、食品加工、检测方案或针对所有可能的细菌类型评估 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌。

对于所有检测方法，增菌培养基的来源、配方和质量都可能会影响结果。取样方法、检测方案、样品制备（包括均质及混合）、处
理和实验室技术等因素都可能会影响结果。Neogen 建议在用户环境中利用充足数量的样品以及特定的食品和/或环境样品以及微生物挑战性试验对包括增菌培养基在内的方法进行评估，确保相应的方法符合用户的标准。
Neogen 已评估 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌可与缓冲蛋白胨水 (ISO) 增菌培养基一起使用。

Neogen® 分子检测仪器专用于在分析裂解步骤中经过热处理的样品，该步骤旨在破坏样品中存在的有机物。未在分析裂解步骤中经过适当热处理的样品可以被视为潜在的生物危害，不应将其插入 Neogen 分子检测仪器。
Neogen 食品安全的设计和生产已经获得 ISO（国际标准化组织）9001 认证。

Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌检测盒包含 96 个测试，如表 1 所述。
表 1. Neogen 分子检测试剂盒构成项目标识

Neogen® 分子检测试剂盒 2 阪崎肠杆菌试剂管

橙色-红色管Neogen® 裂解溶液 (LS)附加盖子Neogen® 试剂对照 (RC)

数量

内容物

备注

96（8 管，每管 12 条）

特定扩增和检测混合物的冻干样

可以立即使用16（2 袋，每袋 8 根管）

对照 DNA、扩增和检测
可以立即使用混合物的冻干样

透明管中的粉红溶液96（8 管，每管 12 条）

橙色-红色盖

96（8 盖，每盖 12 条）

透明翻盖管每管 580 μL LS

已上架并可以使用
可以立即使用阴性对照是无菌增菌培养基（如 BPW ISO）
，未在检测盒中提供。请勿将水用作阴性对照。

安全用户应该阅读、理解并遵守 Neogen 分子检测系统和 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌说明中的所有安全信息。妥善保
存安全说明书，以备日后查阅。
警告： 表示危险情况，如果不注意避免，可能造成死亡或严重的人身伤害和/或财产损失。
注意： 表示潜在的危险情况，如果不注意避免，可能导致财产损失。

W 警告

请勿在人类或动物的各种诊断中使用 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌。

用户必须就当前适用的检测技术对其操作人员进行培训：例如，实验室良好操作规范(3)、ISO/IEC 17025(4) 或 ISO 7218(5)。
为了降低与假阴性结果关联的风险，避免释放出污染产品：• 遵守操作流程并按照产品信息中提供的方法执行检测。
• 请按照包装和产品说明中的指示存储 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌。
• 始终在过期日期之前使用 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌。
• 将 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌用于经内部或第三方验证的食品和食品加工环境样品。
• 仅将 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌用于经内部或第三方验证的表面、消毒剂、方案和菌株。
1

•ZH （简体中文）对于含有芳基磺酸酯复合物的中和缓冲液的环境样品，请在检测前按 1:2 比例进行稀释（1 份样品对 1 份无菌增菌肉汤）。
另一种选择是将 10 µL 的中和缓冲培养液转移至 Neogen 裂解溶液管内。Neogen® 采样产品中包含芳基磺酸酯复合物的中和缓冲液：RS96010NB、RS9604NB、SSL10NB、SSL10NB2G、HS10NB、HS10NB2G 和 HS2410NB2G。该方案尚未在
NF Validation 研究中进行检测。

为了降低与化学品和生物危害暴露相关的风险，请注意以下事项：• 在训练有素的工作人员的控制下，于妥善配备的实验室中执行致病菌检测。增菌培养基以及接触过增菌培养基的设备或
表面可能含有致病菌，足以对人体健康造成风险。
• 始终遵守标准实验室安全规范，包括在处理试剂和受污染样品时穿戴适当的防护服和眼睛防护装置。
• 扩增后避免接触增菌培养基和试剂管的内容物。
• 根据当前的当地/地区/国家/行业标准处理增菌后的样品。
.
• 不要超出建议的加热器温度设置。
• 不要超出建议的加热时间。
• 使用正确的经过校准的温度计检验 Neogen® 分子检测加热模块温度（如局浸温度计或热电偶数字温度计，而非全浸温度计）。温度计必须放置于 Neogen 分子检测加热模块中的指定位置。
为了在准备分析时降低与交叉污染相关联的风险，请注意以下事项：• 始终戴手套（保护操作者和防止引入核酸酶）。

为了降低与高温液体暴露相关的风险，请注意以下事项：• 不要超出建议的加热器温度设置。
• 不要超出建议的加热时间。
• 使用正确的经过校准的温度计检验 Neogen® 分子检测加热模块温度（如局浸温度计或热电偶数字温度计，而非全浸温度计）。温度计必须放置于 Neogen 分子检测加热模块中的指定位置。

注意为了在准备分析时降低与交叉污染相关联的风险，请注意以下事项：• 在进行试剂小球水化之前更换手套。
• 建议使用无菌喷雾屏障（带滤芯）分子生物级移液器吸头。
• 每次转移样品时使用新的吸头。
• 采用实验室良好操作规范将样品从培养基转移至裂解管。为了避免吸头污染，用户可以选择增加一个中间转移步骤。例如，用户可以将每个经过增菌的样品转移至无菌管中。
• 在适用的地方使用配有杀菌灯的分子生物工作站。
• 使用 1-5%（与水的比例为 v:v）家用漂白溶液或 DNA 去除溶液定期净化实验室工作台和设备（移液器、开盖器等）。

为了降低假阳性结果的相关风险，请注意以下事项：• 扩增后切勿打开试管。
• 处理污染的试管时始终将其在浓度为 1-5%（与水的比例为 v:v）的家用漂白溶液中浸泡 1 个小时，且始终远离分析准备区。
• 请勿在扩增后对试剂管进行高压灭菌。
• 如果怀疑样品含有高浓度阪崎肠杆菌 DNA（如来自无活性阪崎肠杆菌细胞的 DNA，这些细胞已经过灭活步骤），请在裂解步骤
之前使用 DNase 处置假定阳性培养液。联络您的 Neogen 代表获取其他指示。该方案尚未在 NF Validation 研究中进行检测。

请参考安全数据表了解其它信息和当地处置法规。

如果您对于特定的应用或程序存有疑问，请访问我们的网站 www.neogen.com，也可与您当地的 Neogen 代表或经销商联系以获得帮助。

用户责任

用户负责熟悉本产品的说明和信息。请访问我们的网站 www.neogen.com 或联系您当地的 Neogen 代表或经销商，以了解
更多信息。

选择检测方法时，务必认识到各种外部因素（如取样方法、检测方案、样品制备（包括均质及混合）、处理和实验室技术）都可能会
影响结果。
用户在选择检测方法时，应自行负责选用合适的基质和微生物挑战性试验对足够多的样品进行评估，以确保所选择的检测方法
符合用户的标准。
用户也应自行负责确定任何检测方法和结果符合其客户和供应商的要求。

同所有检测方法一样，使用任何 Neogen 食品安全产品得到的结果，并不保证受检基质或程序的质量。

Neogen 已开发出 Neogen® 分子检测基质对照检测盒用于帮助客户评估各种基质方法。在需要时，使用基质对照 (MC) 来确
定基质能否影响 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌结果。在采用 Neogen 方法或在检测新的或未知基质或者原材料或工艺发生变更的基质的任何验证期间，检测若干典型基质样品，即通过不同来源获取的样品。
2

ZH （简体中文）基质可定义为一种具备内源特性的产品（如化学成分或工艺）。基质间的差异是因加工或外观的不同而导致的差异，例如原材
料和经过巴杀处理间的差异以及新鲜和干燥之间的差异。

保证限制/有限补救措施

除非各个产品包装的有限保证部分明确声明，NEOGEN 就所有明示或默示保证做出免责声明，包括但不限于适销性及适合某种特定用途的保证。如果证明任何 Neogen 食品安全产品存在缺陷，Neogen 或其授权经销商可以进行换货或者由其决定是否为该产品进行退款。这些都是专门针对您而设计的解决方案。如有任何疑问，请联系 Neogen 代表或 Neogen 授权经销商。

Neogen 责任限制

NEOGEN 不会对任何损失或损害负责，无论造成的损害是直接、间接、特殊、偶然或随后产生的，包括但不限于利润损失。根据法律理论 Neogen 对所谓存在缺陷的产品的赔付不可能超过产品的购买价格。

存储和弃置

在 2-8°C 温度下存储 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌。请勿冰冻。避光存储试剂盒。打开试剂盒后，检查铝箔袋是否
破损。如果破损，请不要使用。打开之后，未使用的试剂管应始终存储在内部带有干燥剂的可重新密封铝箔袋中，以保持冻干试
剂的稳定性。将重新密封的铝箔袋存储在 2-8°C 温度下，但存储时间不能超过 60 天。
请勿使用过期的 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌。过期日期和批号注明在包装箱外侧的标签上。使用之后，增菌培养
基和 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌管可能会含有带菌材料。检测完成时，请遵照当前行业标准处置受污染废物。请
参考安全数据表了解其它信息和当地处置法规。

使用说明仔细遵循所有说明。否则，可能导致不准确的结果。

使用 1-5%（与水的比例为 v:v）家用漂白溶液或 DNA 去除溶液定期净化实验室工作台和设备（移液器、开盖器等）。

用户应当遵照“针对 Neogen 分子检测系统的安装合格 (IQ)/操作合格 (OQ) 方案和说明”文档中的规定接受 Neogen 分子检
测系统操作员资格验证培训(6)。

请参看“验证方法具体说明”部分，了解特定要求：

表 3：遵照 AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 和 Performance TestedSM 证书 #101703 实施的培养方案

表 4：遵照 NF VALIDATION 证书 3M 01/20-03/18 实施的培养方案样品培养
表 2、表 3 或表 4 提供了针对食品和环境样品的一般培养方案指导。

用户有责任验证备用取样或培养方案或者稀释率，以确保本检测方法符合用户的标准。

食品、环境粉末、灰尘、碎屑及海绵
1. 将培养基平衡至环境温度 (20-25°C)，除非培养方案另有规定（请参阅表 2、表 3 和表 4）。

2. 在无菌环境下将培养基和样品混合起来，并且采用混合、均质操作 (stomaching)、涡旋或手动混合进行混匀操作
2 ± 0.2 分钟，或者直至所有块状物彻底溶解及培养混悬液变均匀(7, 8)。
a. 样品制备（均质及混合）、处理和实验室技术等因素都可能会影响结果。
b. 对于微粒样品，建议使用过滤袋。
c.

对于在水中膨胀且高度黏性的基质（如谷物、淀粉），建议进一步稀释 (> 1:10)，直至黏性适当降低或者向 BPW (ISO)(8)中添加无菌的 1% (w/v) 淀粉酶。

d. 为了大样品量的谷物样品，将谷物粉慢慢加入液体中，频繁混合，避免结块。

3. 按照正确方案表的规定进行培养（请参阅表 2、表 3 和表 4）。

3

ZH （简体中文）

表 2. 通用培养方案

样品基质

样品大小1

婴儿配方乳粉 (PIF) 和原材料，如干奶粉、
1X 克样品
大豆粉、乳清粉、乳糖、米粉、麦芽糖糊精培养肉汤量1、2
9X mL BPW (ISO) (1:10)

培养温度 培养时间(± 1°C) （小时）
37

18-24

样品分析
量
20 µL

原材料，如盐、矿物质、氨基酸、DHA（二十二碳六烯酸）和维生素

1X 克 样品

99X mL BPW (ISO) (1:100)

37

18-24

20 µL

含有 10 mL 李氏肉汤或 D/E 中和肉汤的
环境海绵

1 套取样
设备

90 mL BPW (ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

干燥环境样品，如灰尘、碎屑、真空收集

1X 克样品

9X mL BPW (ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

1. Neogen 已使用表 2 中的稀释率（最多 300 克）评估 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌。用户有责任验证备用稀释
率或方案，以确保本方法符合用户的标准。

2. 如果培养肉汤量大于 300 mL（如样品大于 30g）
，使用预热 BPW (ISO)。
验证方法具体说明

AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) 证书 #101703

在 AOAC 研究机构OMASM 和 PTMSM 研究中，Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌被发现是用于检测阪崎肠杆菌的有效方法。研究中检测的基质显示在表 3 中。
表 3. 遵照 AOAC® OMASM 2018.01 和 PTMSM 101703 实施的培养方案
样品基质

样品大小

婴儿配方乳粉和婴儿谷粉

10 g培养肉汤量1培养温度(± 1°C)

培养时间
（小时）

样品分析
量

预热 37

18-24

20 µL

90 mL BPW (ISO) (1:10)

无益生菌婴儿谷粉

300 g

2700 mL BPW (ISO) (1:10)

乳糖

10 g

90 mL BPW (ISO) (1:10)

婴儿配方乳粉及婴儿谷粉（含益生菌）

含有 10 mL D/E 中和肉汤的环境海绵

300 g
1 套取样
设备

1. 如果培养肉汤量大于 300 mL，使用预热 BPW (ISO)。

37

18-24

20 µL

2700 mL BPW (ISO) + 10
mg/L 万古霉素

预热 37

22-24

20 µL

90 mL BPW (ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

37

AFNOR Certification 认证的 NF VALIDATION

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
有关有效性截止日期的详细信息，请参阅上述网站中提供的 NF VALIDATION 证书。
NF VALIDATION 认证方法遵循 ISO 16140-2(9)（与 ISO 22964 相比）。
4

18-24

20 µL

ZH （简体中文）验证范围：婴儿配方乳粉以及含/不含益生菌的婴儿谷物、原料及和环境样品。
样品制备：遵照 EN ISO 22694(2) 和 EN ISO 6887(7, 8) 来制备样品。

软件版本：参见证书。

表 4. 遵照 NF VALIDATION 认证方法 3M 01/20-03/18 实施的培养方案
样品基质

•
•
•
•

•

婴儿配方乳粉婴儿谷粉原材料，如干奶粉、大豆粉、乳清粉、乳糖、米粉、麦芽糖糊精干燥环境样品，如灰尘、碎屑、真空收集物
海绵、冲洗水、擦拭巾婴儿配方乳粉及婴儿谷粉（无益生菌）
婴儿谷粉和婴儿配方乳粉（含益生菌）

样品大小10 g
1 套取样设
备或
10 mL
30-300 g

30-300 g

培养温度(± 1°C)培养肉汤量1

培养时间
（小时）

样品分
析量

建议的中断点2, 3培养肉汤或样品裂解液可在 2-8°C 下储存
最长 72 小时

90 mL BPW
(ISO) (1:10)

37

BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

培养肉汤或样品裂解液可在 2-8°C 下储存
最长 72 小时

37

22-24

20 µL

无

BPW (ISO)+ 10 mg/L
万古霉素
(1:10)

18-24

20 µL

培养肉汤或样品裂解液可在 2-8°C 下储存
最长 72 小时

1. 如果培养肉汤量大于 300 mL（如样品大于 30g）
，使用预热 BPW (ISO)。

2. 在从储存处取出培养肉汤后，从裂解部分的步骤 1 重新开始检测。在从储存处取出样品裂解液后，从裂解部分的步骤 7 重
新开始检测。

3. 参阅附录 A，了解如何重新检测储存的热处理后溶菌液。

Neogen® 分子检测快速转移托盘的准备工作
1. 将一块干布或一次性纸巾用 1-5%（与水的比例为 v:v）家用漂白溶液浸湿，用来擦拭 Neogen 分子检测快速转移托盘。

2. 用清水清洗 Neogen 分子检测快速转移托盘。

3. 使用一次性纸巾擦干 Neogen 分子检测快速转移托盘。
4. 使用前确保 Neogen 分子检测快速转移托盘。

Neogen® 分子检测冷却架的准备工作
将 Neogen 分子检测冷却架直接置于实验室工作台上：无需使用 Neogen 分子检测冷却模块托盘。在实验室环境温度下使用
模块 (20-25°C)。
Neogen® 分子检测加热模块的准备工作
将 Neogen 分子检测加热模块放入双干燥块加热器中。开启干燥模块加热装置并设定温度，使 Neogen 分子检测加热模块达到并保持 100 ±1°C。

注意：根据不同的加热器，允许 Neogen 分子检测加热模块使用约 30 分钟来达到工作温度。使用指定位置中的正确的经过校
准的温度计（如局浸温度计或热电偶数字温度计，而非全浸温度计）检验 Neogen 分子检测加热模块温度是否达到 100 ±1°C。

Neogen® 分子检测仪器的准备工作
1. 启动 Neogen® 分子检测软件并登录。联络您的 Neogen 食品安全代表，确保拥有最新版软件。

2. 打开 Neogen 分子检测仪器。

3. 为每个样品创建或编辑一次运行检测。请参考 Neogen 分子检测系统用户手册了解详细信息。

注意：插入带反应管的 Neogen 干燥模块加热装置前，Neogen 分子检测仪器必须达到就绪状态。此加热步骤大概需要 20分钟，由仪器状态栏中的一个橙色灯进行指示。当仪器准备好启动检测时，状态栏将变为绿色。

5

裂解
置于 Neogen 分子检测加热模块中之前，用螺丝刀移除 Neogen 裂解溶液管架的底部。

ZH （简体中文）

1. 将管架置于室温 (20-25°C) 一整夜（16-18 小时），让 Neogen 裂解溶液管预热。使 Neogen 裂解溶液管平衡到室温的另一种方法是将 Neogen 裂解溶液管放在实验室工作台上至少 2 小时、在 37 ±1°C 培养设备中培养 Neogen 裂解溶液管 1 小时或将其置于双干燥块加热器，在 100 ± 1°C 下持续 30 秒。
2. 倒置封闭后的裂解液管进行混合。在倒置后 4 小时内继续下一步。

3. 从培养箱中取出培养肉汤。

4. 每个样品和每个 NC 样品（无菌增菌培养基）需要一根 Neogen 裂解溶液管。

4.1 可以将 Neogen 裂解溶液管条切割为需要管数。选择单个 Neogen 裂解溶液管的数量或需要的 8 管条。将 Neogen
裂解溶液管放在空管架中。
4.2 为了避免交叉污染，请一次只开一根 Neogen 裂解溶液管条的盖，并且每次转移时使用新的移液器吸头。

4.3 按如下所述将经过增菌的样本转移到 Neogen 裂解溶液管：

首先将每个经过增菌的样品转移到单个 Neogen 裂解溶液管。最后转移 NC。

4.4 使用 Neogen® 分子检测开盖器 - Lysis 打开 Neogen 裂解溶液管条的盖，一次只打开一条。

4.5 弃置 Neogen 裂解溶液管盖 – 如果保留裂解液以重新检测，请将管盖放入清洁容器，以备裂解后重新使用。
4.5.1. 如需处理保留的裂解液，请参阅附录 A。

4.6 在处理黏性样品时，搅动增菌袋，然后从过滤一侧收集样品。

4.7 将 20 µL 样品转移到 Neogen 裂解溶液管内，除非方案表中另有说明。

5. 重复步骤 4.4 到 4.7，直到将每个样品添加到条内对应的 Neogen 裂解溶液管为止。

6. 当转移完所有样品时，将 20 µL 的 NC（无菌增菌培养基，如 BPW）转移到一个 Neogen 裂解溶液管中。请勿将水用作 NC。
7. 检验 Neogen 分子检测加热模块的温度是否达到了 100 ± 1°C。

8. 将无盖 Neogen 裂解溶液管架放在 Neogen 分子检测加热模块中加热 15 ± 1 分钟。加热期间，Neogen 裂解溶液将从粉
红（冷）变为黄色（热）。
未在分析裂解步骤中经过适当热处理的样品可以被视为潜在的生物危害，不应将其插入 Neogen 分子检测仪器。

9. 从 Neogen 分子检测加热模块中取出无盖的 Neogen 裂解溶液管架，将其放进 Neogen 分子检测冷却架冷却最短 5 分钟，最长 10 分钟。Neogen 分子检测冷却架用于没有 Neogen® 分子检测冷却模块托盘的环境温度下，应直接置于实验室工作台之上。冷却后，Neogen 裂解溶液将恢复为粉红色。

10. 从 Neogen 分子检测冷却架上移除 Neogen 裂解溶液管架。

6

ZH （简体中文）
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

扩增
1. 每个样品和每个NC 需要一根 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管。

1.1 可以将管条切割为需要的管数。选择需要的单个 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管或 8 管条的数量。
1.2 将 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管放在空管架中。
1.3 请勿将试剂小球搅离管底。

2. 选择 1 根 Neogen 试剂对照管并放入管架。

3. 为了避免交叉污染，请一次只开一根 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管条的盖，并且每次转移时使用新的移液器吸头。
4. 按如下所述将每个裂解液转移到 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管和 Neogen 试剂对照管：先将每个样品裂解液转移到单个 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管，然后转移到 NC。水化，最后转移到
Neogen 试剂对照管。

5. 使用 Neogen® 分子检测开盖器 - Reagent 打开 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管的盖，一次只打开一条。丢
弃盖子。
5.1 将 Neogen 裂解溶液管液体上部 1/2 中的 20 µL 样品溶菌液（避免沉淀）转移到对应的 Neogen 分子检测试剂盒 2 阪崎肠杆菌试剂管。成角度注入，以避免搅动小球。轻轻地上下吸动 5 次，以充分混合。
5.2 重复步骤 5.1 ，直到将单个样品裂解液添加到条内对应的 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管为止。

5.3 使用附加盖盖住 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管并使用 Neogen 分子检测开盖器 - Reagent 较圆的
一侧以前后移动的方式加压，以确保将盖子盖紧。
5.4 根据需要对要进行检测的样品，重复步骤 5.1 到 5.3。

5.5 当转移完所有样品裂解液时，重复 5.1 到 5.3 以将 20 µL NC 溶菌液转移到 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂管。

5.6 将 20 µL NC 裂解液转移至 Neogen 试剂对照管。成角度注入，以避免搅动小球。轻轻地上下吸动 5 次，以充分混合。

6. 将加盖的管 装进干净和经过灭菌的 Neogen 分子检测快速转移托盘。关闭并锁定 Neogen 分子检测快速转移托盘盖。

7. 在 Neogen 分子检测软件中查看和确认配置的检测。

8. 在软件中单击“启动”按钮并选择使用的仪器。所选仪器的盖会自动打开。

9. 将 Neogen 分子检测快速转移托盘放入 Neogen 分子检测仪器并关闭盖，以启动分析。结果将在 60 分钟之内提供，但阳性结果可以更快检测到。

10. 分析完成后，从 Neogen 分子检测仪器中取出 Neogen 分子检测快速转移托盘，并通过将反应管浸入 1-5%（与水的比例为
v:v）家用漂白溶液 1 小时并远离分析准备区来处置反应管。

7

ZH （简体中文）

注意：为了将因为交叉污染而导致的假阳性结果风险降至最低，请勿打开包含扩增的 DNA 的反应管。这包括 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌试剂、Neogen 试剂对照和 Neogen 基质对照管。处理密封试剂管时始终将其在浓度为 1-5%（与水的比例为 v:v）的家用漂白溶液中浸泡 1 个小时，且始终远离分析准备区。

结果和说明一种解释来自核酸扩增检测的光输出曲线的算法。软件会自动分析结果并根据不同结果用不同颜色标记。通过分析一系列独一无二的曲线参数可以确定阳性结果或阴性结果。实时报告假定阳性结果，阴性结果和检查结果将在检测完成之后显示。
注意：因为系统和 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌扩增试剂带有“背景”相对光单位 (RLU) 读数，即使阴性样品也不会给出零读数。

确认• 依照 NF Validation 认证方法确认结果

在 NF VALIDATION 背景之下，所有假定阳性样品应当遵循参考方法进行确认(2)，开始从初步培养液转移（添加了 10 mg/L 万古霉素的 BPW ISO 或 BPW ISO）。
•

其他确认方案假定阳性样品应当遵循实验室标准操作规程或正确的参考方法进行确认(1,2)，开始从初步培养液（添加了 10 mg/L 万古霉素的BPW ISO 或 BPW ISO）转移至二次培养基，然后利用正确的生化、血清和/或分子方法对分离菌进行检测和确认。

在任何不正常光输出的极少情况下，该算法标签显示为“检查”。Neogen 建议用户对所有“检查”样品重新进行分析。如果结果仍为“检查”，请使用您喜欢的方法或按照当地法规指定的方法确认检测(1,2)。

如果出现结果不一致（采用 Neogen 分子检测试剂盒 2 - 阪崎肠杆菌的结果为假定阳性，未通过上述其中一种方法予以确认），实验室应当遵循既定标准操作程序来报告结果。
如果您对于特定的应用或程序存有疑问，请访问我们的网站 www.neogen.com，也可与您当地的 Neogen 代表或经销商联系以获得帮助。
附录 A. 方案中断：储存并重新检测热处理后的裂解液
1. 如需储存热处理后的裂解液，用干净盖子为裂解管重新盖上盖子（请参阅 4.5：
“裂解”）
2. 在 2 至 8°C 下存放 72 小时。

3. 倒置 2-3 次进行混合，借此准备用以扩增的储存样品。
4. 打开管盖。

5. 将混合后的溶菌液管置于 Neogen 分子检测加热模块并在 100 ± 1°C 温度下加热 5 ± 1 分钟。

6. 从加热块中取出 Neogen 裂解溶液管架，将其放进 Neogen 分子检测冷却架冷却最短 5 分钟，最长 10 分钟。
7. 继续执行上文详述的“扩增”部分的方案。

参考资料：

1. 美国食品药品监督管理局微生物分析手册 (BAM) Ch. 29；2012 年 3 月
2. ISO 22964:2017 食品供应链微生物 -- 检测阪崎肠杆菌 的水平方法。

3. 美国食品药品监督管理局。美国《联邦规章典集》(Code of Federal Regulations) 第 21 篇，第 58 部分。非临床实验室良好
研究规范。
4. ISO/IEC 17025:2017。用于检验和定标实验室能力的一般要求。

5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013。食品和动物饲料微生物 – 微生物检验用一般要求和指南。

6. 安装合格 (IQ)/操作合格 (OQ) Neogen® 分子检测系统。联络您的 Neogen 食品安全代表，获取本文档的副本。

7. ISO 6887-5:2010。食品和动物饲料微生物 – 用于微生物检验的检测样品、初始混合悬液和梯度稀释液的制备 -- 第 5 部
分：牛奶和奶制品制备特定规则。
8. ISO 6887-4:2017。食品和动物饲料微生物 – 用于微生物检验的检测样品、初始混合悬液和梯度稀释液的制备 -- 第 4 部
分：制备复杂产品的具体规则。
9. ISO 16140-2:2016。食品供应微生物 – 方法验证 – 第 2 部分：根据参考方法验证替代（专有）方法的方案。
请参考以上所列标准方法的现行版本。

符号说明info.neogen.com/symbols
8

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

TH （ภาษาไทย）วันทีอ
่ อก: 2024-01

ชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์

คำ�แนะนำ�การใช้งานผลิตภัณฑ์

รายละเอียดผลิตภัณฑ์และวัตถุประสงค์การใช้งาน

Neogen® ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ จะนำ�มาใช้กับระบบทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen®
สำ�หรับการตรวจหาเชื้อครอโนแบคเตอร์อย่างรวดเร็วและเฉพาะเจาะจงในตัวอย่างอาหารหลังเพิ่มจำ�นวนเชื้อและตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อม
จากกระบวนการแปรรูปอาหาร
ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen ใช้การเพิ่มขยายยีนแบบลูป (Loop-mediated isothermal) ที่อุณหภูมิเดียวเพื่อเพิ่มขยาย
ปริมาณกรดนิวคลีอิกด้วยวิธีที่มีความจำ�เพาะเจาะจงและความไวสูงผสานกับการเรืองแสงทางชีวภาพเพื่อตรวจจับการเพิ่มขยายจำ�นวน
ผลการทดสอบเบื้องต้นที่เป็นบวกจะได้รับการรายงานในทันที ขณะที่ผลการทดสอบที่เป็นลบจะแสดงผลภายหลังจากที่การทดสอบดัง
กล่าวเสร็จสมบูรณ์แล้ว ผลการทดสอบเบื้องต้นที่เป็นบวกควรได้รับการยืนยันโดยใช้วิธีการที่ท่านเห็นสมควรหรือตามที่ระบุไว้ในระเบียบ
ข้อบังคับต่าง ๆ ในท้องถิ่น(1, 2)ชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen มีจดุ มุง่ หมายให้ใช้ในสภาพแวดล้อมในห้องปฏิบตั กิ ารโดยผูเ้ ชีย่ วชาญด้าน
วิชาชีพทีผ่ า่ นการอบรมเทคนิคการปฏิบตั งิ านในห้องปฏิบตั กิ าร Neogen ยังไม่ได้จดั ทำ�เอกสารเกีย่ วกับการใช้ผลิตภัณฑ์นใ้ี นอุตสาหกรรม่ งดืม่ ตัวอย่างเช่น Neogen ยังไม่ได้ออกเอกสารเกีย่ วกับผลิตภัณฑ์นส้ี �ำ หรับการทดสอบตัวอย่างยาอืน่ ๆ นอกจากอุตสาหกรรมอาหารหรือเครือ
ตัวอย่างเครือ่ งสำ�อาง ตัวอย่างทางคลินกิ หรือตัวอย่างเกีย่ วกับสัตว์ Neogen ชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ ยังไม่ได้รบั การประเมินกับผลิตภัณฑ์อาหาร การแปรรูปอาหาร ระเบียบการทดสอบทีเ่ ป็นไปได้ทง้ั หมดหรือกับสายพันธุแ์ บคทีเรียทีเ่ ป็นไปได้ทง้ั หมดแหล่งทีม่ า สูตร และคุณภาพของอาหารสำ�หรับเพิม่ จำ�นวนเชือ้ สามารถส่งผลกระทบต่อผลการทดสอบทีไ่ ด้เช่นเดียวกับวิธกี ารทดสอบอืน่ ๆ นอกจากนี้ ปัจจัยต่าง ๆ เช่น วิธกี ารสุม่ เก็บตัวอย่าง วิธกี ารทดสอบ การเตรียมตัวอย่าง การทำ�ให้ตวั อย่างเป็นเนือ้ เดียวกันและ
การผสม รวมถึงการจัดการและเทคนิคทีใ่ ช้ในห้องปฏิบตั กิ ารอาจส่งผลกระทบต่อผลการทดสอบทีไ่ ด้ดว้ ยเช่นกัน Neogen ขอแนะนำ�ให้
ประเมินวิธกี ารทดสอบรวมทัง้ อาหารเพิม่ จำ�นวนเชือ้ ในสภาพแวดล้อมของผูใ้ ช้โดยใช้จ�ำ นวนตัวอย่างทีเ่ พียงพอกับอาหารแต่ละชนิดและ/หรือตัวอย่างสิง่ แวดล้อมและสภาวะทีม่ คี วามท้าทายกับการเจริญเติบโตของจุลนิ ทรีย์ เพือ่ ให้มน่ั ใจว่าวิธกี ารดังกล่าวเป็นไปตามเกณฑ์ของผูใ
้ ช้
Neogen ได้ประเมินชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen กับอาหารเพิม่ จำ�นวนเชือ้ ชนิดบัฟเฟอร์เปปโตนวอร์
เตอร์ (ISO)เครื่องมือสำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen® มีจุดมุ่งหมายในการใช้กับตัวอย่างที่ได้ผ่านกระบวนการให้ความร้อน
ในระหว่างขั้นตอนการไลซีสของการทดสอบซึ่งได้รับการออกแบบมาเพื่อทำ�ลายเชื้อที่มีในตัวอย่าง ตัวอย่างซึ่งไม่ได้รับความร้อนอย่าง
เหมาะสมในระหว่างขั้นตอนการไลซีสของชุดทดสอบอาจถือว่าเป็นสารที่อาจมีอันตรายทางชีวภาพ และไม่ควรใส่เข้าไปในเครื่องมือ
สำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogenชุดทดสอบอาหารปลอดภัย Neogen ได้รับการรับรองตามมาตรฐาน ISO (องค์การระหว่างประเทศว่าด้วยการมาตรฐาน) 9001 ด้านการ
ออกแบบและการผลิต
ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen มีทั้งหมด 96 ชุดทดสอบตามที่อธิบายไว้ในตารางที่ 1ตารางที่ 1 ส่วนประกอบของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogenรายการ

ลักษณะ

จำ�นวน

สิ่งที่บรรจุภายใน

ความคิดเห็น

หลอดสารละลายไลซีส
Neogen® (LS)สารละลายสีชมพู
ในหลอดใส

96 หลอด (12 แถวแถวละ 8 หลอด)ปริมาตร LS 580 ไมโครลิตรต่อหลอด

บรรจุอยู่ในที่
วางและพร้อม
ใช้งาน

หลอดรีเอเจนต์์ของชุดทดสอบ
เชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโน หลอดสีแดงส้ม
แบคเตอร์โดยวิธี Neogen®

96 หลอด (12 แถวแถวละ 8 หลอด)ส่วนผสมสำ�หรับการเพิ่มขยายและการ
ตรวจหาเชื้อโรคแบบเฉพาะเจาะจงที่
พร้อมใช้งาน
ทำ�แห้งเยือกแข็งแล้ว

ฝาสำ�รอง

96 หลอด (12 แถวแถวละ 8 ฝา)พร้อมใช้งาน

ฝาสีแดงส้ม

Neogen® รีเอเจ้นท์คอนโทรล หลอดใสชนิดเปิด
(RC)ฝาด้านบน

16 หลอด (2 ถุง ถุงละ
8 หลอด)1ส่วนผสมที่ทำ�แห้งเยือกแข็งแล้ว
สำ�หรับการเพิ่มและการตรวจหา DNA
สำ�หรับใช้เป็นมาตรฐานเทียบ

พร้อมใช้งาน

TH （ภาษาไทย）ชุดควบคุมผลลบหรือ Negative Control (NC) เป็นอาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อที่ปลอดเชื้อ เช่น BPW ISO ไม่ได้รวมอยู่ในชุดอุปกรณ์ ห้ามใช้
น้ำ�เป็นตัวแทนในการทำ�การควบคุมผลลบ

ความปลอดภัย

ผูใ้ ช้ควรอ่าน ทำ�ความเข้าใจและปฏิบตั ติ ามข้อมูลความปลอดภัยทัง้ หมดในคำ�แนะนำ� การใช้งานระบบทดสอบเชือ้ ก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี
Neogen และ Neogen ชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ เก็บคำ�แนะนำ�ด้านความปลอดภัยนีไ้ ว้ส�ำ หรับใช้อา้ งอิงในอนาคต
คำ�เตือน: แสดงสถานการณ์ที่เป็นอันตราย ซึ่งหากไม่หลีกเลี่ยง อาจก่อให้เกิดการเสียชีวิตหรือการบาดเจ็บรุนแรงและ/หรือความ
เสียหายต่อทรัพย์สิน
ข้อสังเกต: ระบุสถานการณ์ที่อาจเป็นอันตราย หากไม่หลีกเลี่ยง อาจก่อให้เกิดความเสียหายต่อทรัพย์สิน

W คำ�เตือน
ห้ามใช้ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ โดยวิธี Neogen ในการวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์
ผู้ใช้ต้องผ่านการฝึกอบรมบุคลากรที่เกี่ยวกับเทคนิคการทดสอบที่ถูกต้องและเหมาะสมในปัจจุบัน: ตัวย่างเช่น แนวปฏิบัติทาง
ห้องปฏิบัติการที่ด(3)ี , ISO/IEC 17025(4) หรือ ISO 7218(5)เพื่อลดความเสี่ยงที่เกี่ยวข้องกับผลลบปลอมซึ่งนำ�ไปสู่การปล่อยผลิตภัณฑ์ที่มีการปนเปื้อนไปขาย ให้ปฏิบัติดังนี้:• ปฏิบัติตามระเบียบการและดำ�เนินการทดสอบดังที่ระบุไว้อย่างชัดเจนในคำ�แนะนำ�การใช้งานผลิตภัณฑ์
• เก็บรักษา Neogen ชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ ตามทีร่ ะบุไว้บนบรรจุภณั ฑ์และในคำ�แนะนำ�การใช้งานผลิตภัณฑ์
• ใช้ Neogen ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ก่อนวันหมดอายุเสมอ
• ใช้ Neogen ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ กับตัวอย่างอาหารและตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อมในกระบวนการผลิต
อาหารซึ่งได้รับการพิสูจน์ยืนยันเป็นการภายในหรือโดยหน่วยงานภายนอกแล้ว
• ใช้ Neogen ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์เฉพาะกับพื้นผิว สารฆ่าเชื้อ วิธีการและสายพันธุ์แบคทีเรีย ซึ่งได้รับ
การพิสูจน์ยืนยันเป็นการภายในหรือโดยหน่วยงานภายนอกแล้วเท่านั้น
• สำ�หรับตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อมที่มีนิวทรอไรซิ่งบัฟเฟอร์ โดยมีสารประกอบเชิงซ้อนของเอริลซัลโฟเนต (Aryl sulfonate complex)อยู่ด้วย ให้ทำ�การเจือจางด้วยอัตราส่วน 1:2 ก่อนที่จะทดสอบ (เติมตัวอย่าง 1 ส่วนลงในอาหารเหลวเพิ่มจำ�นวนเชื้อที่ฆ่าเชื้อแล้ว 1ส่วน) อีกวิธีหนึ่ง คือถ่ายอาหารเหลวเพิ่มจำ�นวนเชื้อที่มี นิวทรอไรซิ่งบัฟเฟอร์ ปริมาตร 10 ไมโครลิตรลงในหลอดสารละลายไลซีส
Neogen ผลิตภัณฑ์เก็บตัวอย่างของ Neogen® ซึ่งประกอบด้วย นิวทรอไรซิ่งบัฟเฟอร์โดยมีสารประระกอบเชิงซ้อนของเอริลซัลโฟ
เนตมีดังนี้: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G และ HS2410NB2G วิธีนี้ยังไม่ผ่าน
การทดสอบในช่วงที่ทำ�การศึกษา NF Validationเพื่อลดความเสี่ยงที่เกี่ยวข้องกับการสัมผัสสารเคมีหรือสารอันตรายทางชีวภาพ ให้ปฏิบัติดังนี้:• ให้ทำ�การทดสอบเชื้อก่อโรคในห้องปฏิบัติการที่มีอุปกรณ์อย่างเหมาะสมภายใต้การควบคุมของบุคลากรที่ได้รับการอบรม อาหารที่
เพิ่มจำ�นวนเชื้อ หลังจากที่บ่มแล้ว หรือพื้นผิวที่มีการสัมผัสกับอาหาร หลังเพิ่มจำ�นวนเชื้อโดยบ่มแล้ว อาจจะมีเชื้อโรคในระดับเพียง
พอที่จะก่อให้เกิดความเสี่ยงต่อสุขภาพของมนุษย์ได้
• ปฏิบัติตามแนวปฏิบัติเพื่อความปลอดภัยทางห้องปฏิบัติการมาตรฐานทุกครั้ง โดยรวมถึงการสวมเครื่องแต่งกายเพื่อป้องกันและ
อุปกรณ์ปกป้องดวงตาในขณะที่ปฏิบัติงานกับ รีเอเจนต์์และตัวอย่างที่มีการปนเปื้อน
• หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับอาหารหลังบ่มเพิ่มจำ�นวนเชื้อและหลอดรีเอเจนต์ภายหลังการเพิ่มจำ�นวนดีเอ็นเอ
• กำ�จัดตัวอย่างอาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อและของเสียปนเปื้อนที่เกี่ยวข้อง ตามเกณฑ์มาตรฐานของท้องถิ่น/ภูมิภาค/ประเทศ/อุตสาหกรรม
ในปัจจุบัน
• ห้ามใช้อุณหภูมิสูงกว่าที่แนะนำ�ไว้บนเครื่องทำ�ความร้อน
• ห้ามใช้เวลาทำ�ความร้อนเกินที่แนะนำ�
• ใช้เทอร์โมมิเตอร์ที่ได้รับการสอบเทียบตามมาตรฐานและเหมาะสม เพื่อยืนยันอุณหภูมิของฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับ
โมเลกุล โดยวิธี Neogen (เช่น เทอร์โมมิเตอร์แบบจุ่มบางส่วน หรือเทอร์โมมิเตอร์แบบดิจิตอล ที่ไม่ใช่เทอร์โมมิเตอร์แบบจุ่มทั้งหมด)จะต้องวางเทอร์โมมิเตอร์ในบริเวณที่กำ�หนดไว้ของฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogenเพื่อลดความเสี่ยงจากการปนเปื้อนข้ามขณะเตรียมชุดทดสอบ ให้ปฏิบัติดังนี้:• สวมถุงมือตลอดเวลา (เพื่อปกป้องผู้ใช้งานและป้องกันการเกิดนิวคลีเอส)เพื่อเป็นการลดความเสี่ยงอันเกิดจากการสัมผัสโดนของเหลวร้อน ให้ปฏิบัติดังนี้:• ห้ามใช้อุณหภูมิสูงกว่าที่แนะนำ�ไว้บนเครื่องทำ�ความร้อน
• ห้ามใช้เวลาทำ�ความร้อนเกินที่แนะนำ�

2

TH （ภาษาไทย）•ใช้เทอร์โมมิเตอร์ที่ได้รับการสอบเทียบตามมาตรฐานและเหมาะสม เพื่อยืนยันอุณหภูมิของฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับ
โมเลกุล โดยวิธี Neogen® (เช่น เทอร์โมมิเตอร์แบบจุ่มบางส่วน หรือเทอร์โมมิเตอร์แบบดิจิตอล ที่ไม่ใช่เทอร์โมมิเตอร์แบบจุ่มทั้งหมด)จะต้องวางเทอร์โมมิเตอร์ในบริเวณที่กำ�หนดไว้ของฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogenข้อสังเกต
เพื่อลดความเสี่ยงจากการปนเปื้อนข้ามขณะเตรียมชุดทดสอบ ให้ปฏิบัติดังนี้:• เปลี่ยนถุงมือก่อนขั้นตอนการผสมสารละลายกับเม็ดรีเอเจนต์์
• แนะนำ�ให้ใช้ปิเปตทิป ระดับชีววิทยาโมเลกุลชนิดที่มีตัวกั้นละอองอากาศ (กรอง) ที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว
• ใช้ปิเปตทิปอันใหม่สำ�หรับการถ่ายตัวอย่างในแต่ละครั้ง
• ใช้ Good Laboratory Practices (การดำ�เนินงานของห้องปฏิบัติการที่ดี) เพื่อถ่ายตัวอย่างจากอาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อ หลังบ่มไป
ยังหลอดสายละลายไลซีส เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนในขั้นตอนไปเปตเตอร์ ผู้ใช้อาจเพิ่มขั้นตอนในการถ่ายตัวอย่างสารละลาย
ตัวอย่างเช่น ผู้ใช้อาจถ่ายตัวอย่างอาหารที่เพิ่มจำ�นวนเชื้อแต่ละตัวอย่างใส่ในหลอดที่ฆ่าเชื้อแล้ว
• ทำ�การทดสอบงานทางชีววิทยาโมเลกุลในพื้นที่ที่มีหลอดไฟฆ่าเชื้อหากทำ�ได้
• ลดการปนเปื้อนบนโต๊ะปฏิบัติงานและอุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการ (ปิเปต เครื่องมือเปิด/ปิดฝา ฯลฯ) อย่างสม่ำ�เสมอด้วยน้ำ�ยาฟอกขาวที่
ใช้ในครัวเรือนที่มีความเข้มข้น 1-5% (ผสมกับน้ำ�ตามอัตราส่วน) หรือสารละลายกำ�จัดดีเอ็นเอ
เพื่อลดความเสี่ยงจากผลบวกที่เป็นเท็จ ให้ปฏิบัติดังนี้
• ห้ามเปิดหลอดทดลองภายหลังการเพิ่มขยายจำ�นวนเชื้อ
• กำ�จัดหลอดทดลองที่ปนเปื้อนแล้วเสมอ โดยแช่ในน้ำ�ยาฟอกขาวที่ใช้ในครัวเรือนที่มีความเข้มข้น 1-5% (ผสมกับน้ำ�ตามอัตราส่วน)เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และให้อยู่ห่างจากพื้นที่จัดเตรียมชุดทดสอบทุกครั้ง
• ห้ามนึ่งฆ่าเชื้อหลอด รีเอเจนต์์ภายหลังการเพิ่มขยายจำ�นวน
• หากสงสัยว่าตัวอย่างมี DNA ของครอโนแบคเตอร์ ในปริมาณมาก (เช่น DNA จากเซลล์ครอโนแบคเตอร์ที่ผ่านขั้นตอนการฆ่า /ทำ�ลาย) ตัวอย่างที่ให้ผลการทดสอบเบื้องต้นเป็นบวก หลังจากขั้นตอนการเพิ่มจำ�นวนเชื้อควรผ่านการทำ�ปฏิกิริยากับ DNase ก่อนขั้นตอนไลซีส ติดต่อตัวแทน Neogen ของท่านเพื่อขอคำ�แนะนำ�เพิ่มเติม วิธีนี้ยังไม่ผ่านการทดสอบในช่วงที่ทำ�การศึกษา NF
Validationศึกษาข้อมูลเพิ่มเติมในเอกสารข้อมูลความปลอดภัยและระเบียบข้อบังคับการกำ�จัดทิ้งในประเทศ
หากท่านมีข้อสงสัยเกี่ยวกับการใช้งานหรือกรรมวิธีที่เฉพาะเจาะจงใด ๆ โปรดเยี่ยมชมเว็บไซต์ของเราที่ www.neogen.com หรือติดต่อ
ตัวแทนจำ�หน่ายหรือผู้จัดจำ�หน่ายของบริษัท Neogen ในท้องถิ่นของท่าน

ความรับผิดชอบของผู้ใช้

ผู้ใช้จะต้องทำ�ความเข้าใจในคู่มือการใช้งานผลิตภัณฑ์และข้อมูลเกี่ยวกับผลิตภัณฑ์ หากต้องการข้อมูลเพิ่มเติม สามารถเยี่ยมชมเว็บไซต์
ของเราได้ที่ www.neogen.com หรือติดต่อตัวแทนหรือผู้จัดจำ�หน่าย Neogen ในท้องถิ่นของท่าน
เมื่อจะเลือกวิธีทดสอบ สำ�คัญอย่างยิ่งที่จะต้องรู้จักปัจจัยภายนอกต่าง ๆ เช่น วิธีการสุ่มตัวอย่าง เกณฑ์วิธีในการทดสอบ การเตรียม
ตัวอย่างรวมถึงการทำ�ให้เป็นเนื้อเดียวกันและการผสม การจัดการ และเทคนิคที่ใช้ในห้องปฏิบัติการอาจส่งผลกระทบต่อผลการทดสอบได้
ผู้ใช้มีหน้าที่ในการเลือกวิธีการทดสอบ ผลิตภัณฑ์ตา่ ง ๆ รวมถึงจำ�นวนตัวอย่างที่เพียงพอเพื่อใช้ในการประเมินและตรวจสอบจุลินทรีย์ใน
สภาวะต่าง ๆ และในเมทริกซ์ที่เหมาะสม เพื่อให้ผู้ใช้มั่นใจได้วา่ วิธีการทดสอบที่เลือกนั้นเป็นไปตามเกณฑ์ของผู้ใช้
นอกจากนี้ ผู้ใช้จะต้องรับผิดชอบในการเลือกวิธีการทดสอบและผลลัพธ์ที่ได้ว่าเป็นไปตามข้อกำ�หนดของลูกค้าและของผู้จัดส่งสินค้า
เช่นเดียวกับวิธีการทดสอบอื่น ๆ ผลลัพธ์ที่ได้จากการใช้ผลิตภัณฑ์ของ Neogen Food Safety ใด ๆ ก็ตาม ไม่ได้รับประกันถึงคุณภาพขอ
งเมทริกซ์หรือขั้นตอนที่ใช้ทดสอบ
Neogen ได้พัฒนาชุดน้ำ�ยาควบคุมเพื่อทดสอบผลของส่วนประกอบในตัวอย่างแต่ละประเภท โดยวิธี Neogen® เพื่อช่วยให้ลูกค้าประเมิน
วิธีการสำ�หรับเมทริกซ์ต่าง ๆ ได้ ในกรณีจำ�เป็น ให้ใช้ชุดน้ำ�ยาควบคุมเพื่อทดสอบผลของส่วนประกอบในตัวอย่างแต่ละประเภท (MC)เพื่อทดสอบว่าเมทริกซ์นั้นสามารถส่งผลกระทบต่อผลการทดสอบของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogenหรือไม่ ทดสอบตัวอย่างหลาย ๆ ตัวอย่างที่เป็นตัวแทนของเมทริกซ์นั้น ๆ เช่น ตัวอย่างที่ได้จากแหล่งกำ�เนิดที่แตกต่างกัน ตัวอย่างที่ได้ใน
ระหว่างการตรวจสอบความใช้ได้ของวิธีทดสอบต่าง ๆ เมื่อนำ�วิธีการของ Neogen มาใช้ หรือเมื่อทำ�การทดสอบเมทริกซ์ใหม่หรือที่ไม่รู้จัก หรือเมทริกซ์ที่ผา่ นการเปลี่ยนแปลงวัตถุดิบหรือการแปรรูป
เมทริกซ์อาจอธิบายได้ว่าเป็นชนิดของผลิตภัณฑ์ที่มีคุณสมบัติตามธรรมชาติ เช่น องค์ประกอบและกระบวนการแปรรูป ความแตกต่าง
ระหว่างเมทริกซ์ตา่ ง ๆ อาจจะเป็นเพียงผลที่เกิดจากความแตกต่างในกระบวนการแปรรูปหรือสภาพลักษณะของเมทริกซ์ เช่น ดิบกับ
ผ่านการฆ่าเชื้อแบบพาสเจอไรซ์ สดกับแห้ง ฯลฯ

3

TH （ภาษาไทย）เงื่อนไขการรับประกัน

เว้นแต่จะระบุอย่างชัดแจ้งในข้อจำ�กัดการรับผิดเกี่ยวกับบรรจุภัณฑ์ของสินค้าแต่ละประเภท นีโอเจนขอสงวนสิทธิ์ในการรับ
ประกันใดๆ ไม่ว่าโดยชัดแจ้งหรือโดยปริยาย ซึ่งรวมถึงแต่ไม่จำ�กัดเพียง การรับประกันใดๆ ในความสามารถในการค้าขาย
ได้ (Merchantability) หรือ การใช้สอยสินค้าให้สมประโยชน์ตามความมุ่งหมายเฉพาะ (Fitness) หากสินค้าใดๆ ของนีโอเจน มีข้อ
บกพร่องในความปลอดภัยเกี่ยวกับอาหาร นีโอเจนหรือตัวแทนจัดจำ�หน่ายที่ได้รับอนุญาตจากนีโอเจนจะเลือกว่าจะเปลี่ยนสินค้าทดแทน
หรือคืนเงินค่าสินค้า ซึ่งเป็นการเยียวยาเฉพาะตัวแก่ลูกค้าหากมีคำ�ถามเพิ่มเติม กรุณาติดต่อตัวแทนของนีโอเจนหรือตัวแทนจัดจำ�หน่ายที่
ได้รับอนุญาตจากนีโอเจน

ขอบเขตความรับผิดชอบของ Neogen

NEOGEN จะไม่รับผิดชอบต่อการสูญเสียหรือความเสียหายใด ๆ ทั้งโดยตรง โดยอ้อม ความเสียหายจำ�เพาะที่เกิดขึ้นเนื่องจากการผิด
สัญญา หรือที่เป็นผลสืบเนื่อง รวมถึงแต่ไม่จำ�กัดเพียงการสูญเสียผลกำ�ไร ความรับผิดชอบของทาง Neogen ในทางกฎหมายจะต้องไม่
เกินราคาของผลิตภัณฑ์ที่เสียหายหรือบกพร่องไม่ว่ากรณีใด ๆ ก็ตาม

การเก็บรักษาและการกำ�จัด

เก็บ Neogen ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ที่อุณหภูมิ 2-8°C ห้ามแช่แข็ง เก็บชุดอุปกรณ์ให้พ้นแสงในระหว่างการ
เก็บรักษา หลังจากเปิดชุดอุปกรณ์แล้ว ให้ตรวจสอบว่าถุงฟอยล์ไม่ชำ�รุดเสียหาย หากถุงฟอยล์ชำ�รุดเสียหาย ห้ามใช้ผลิตภัณฑ์นั้น หลังจากเปิดแล้ว ควรเก็บรักษาหลอดรีเอเจนต์์ที่ยังไม่ได้ใช้ไว้ในถุงที่ซีลปิดซ้ำ�ได้โดยมีสารดูดความชื้นใส่อยู่ภายในเพื่อรักษาความคงตัวของ
รีเอรีเอเจนต์ที่ทำ�แห้งเยือกแข็งแล้ว เก็บรักษาถุงที่ซีลปิดซ้ำ�แล้วไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C เป็นเวลาไม่เกิน 60 วันห้ามใช้ชุดทดสอบเชื้อครอโนแบคเตอร์ระดับโมเลกุล 2 โดยวิธี Neogen ที่พ้นกำ�หนดวันหมดอายุแล้ว วันหมดอายุและหมายเลขล็อตจะ
แสดงไว้บนฉลากด้านนอกของกล่อง หลังใช้งาน อาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อและหลอด Neogen ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบค
เตอร์อาจมีสารก่อให้เกิดโรคอยู่ เมื่อการทดสอบเสร็จสมบูรณ์แล้ว ให้ปฏิบัติตามมาตรฐานอุตสาหกรรมในปัจจุบันสำ�หรับการกำ�จัดและทิ้ง
ขยะปนเปื้อน ศึกษาข้อมูลเพิ่มเติมในเอกสารข้อมูลความปลอดภัยและระเบียบข้อบังคับการกำ�จัดทิ้งในประเทศ

คำ�แนะนำ�สำ�หรับการใช้งาน

ปฏิบัติตามคำ�แนะนำ�ทั้งหมดอย่างละเอียดรอบคอบ หากไม่ปฏิบัติเช่นนั้น อาจให้ผลที่ไม่ถูกต้องแม่นยำ�ได้
ลดการปนเปื้อนบนโต๊ะปฏิบัติงานและอุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการ (ปิเปต เครื่องมือเปิด/ปิดฝา ฯลฯ) อย่างสม่ำ�เสมอด้วยน้ำ�ยาฟอกขาวที่ใช้
ในครัวเรือนที่มีความเข้มข้น 1-5% (ผสมกับน้ำ�ตามอัตราส่วน) หรือสารละลายกำ�จัดดีเอ็นเอ
ผู้ใช้ควรผ่านการฝึกอบรมเกี่ยวกับคุณสมบัติสำ�หรับผู้ปฏิบัติงานระบบทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen ตามที่ระบุใน
เอกสาร "แนวทางและระเบียบการด้านคุณสมบัติการติดตั้ง (IQ) / คุณสมบัติการปฏิบัติการ (OQ) สำ�หรับระบบการทดสอบเชื้อในระดับ
โมเลกุลโดยวิธี Neogen"(6)ดูในส่วน “คำ�แนะนำ�เฉพาะสำ�หรับวิธีการที่ได้รับการตรวจสอบความใช้ได้ของวิธี” สำ�หรับข้อกำ�หนดเฉพาะ:ตารางที่ 3 สำ�หรับเกณฑ์วิธีการเพิ่มจำ�นวนเชื้อตาม AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 และ Performance TestedSM
Certificate หมายเลข 101703
ตารางที่ 4 สำ�หรับเกณฑ์วิธีการเพิ่มจำ�นวนเชื้อตามใบรับรองของ NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
การเพิ่มจำ�นวนเชื้อในตัวอย่าง
ตารางที่ 2, 3 หรือ 4 แสดงคำ�แนะนำ�สำ�หรับเกณฑ์วิธีการเพิ่มจำ�นวนเชื้อทั่วไปสำ�หรับอาหาร และตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อม
ผู้ใช้มีหน้าที่รับผิดชอบในการพิสูจน์ยืนยันระเบียบการสุ่มตัวอย่างหรืออัตราส่วนการเจือจางแบบอื่นเพื่อให้ความเชื่อมั่นว่าวิธีการทดสอบ
นี้สอดคล้องกับเกณฑ์ของผู้ใช้งานเอง
อาหาร ฝุ่นผงจากสิ่งแวดล้อม ฝุ่นละออง เศษจากการปัดกวาดและดูดซับด้วยฟองน้ำ�
1. ปรับอุณหภูมิของอาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อให้มีอุณหภูมิเท่ากับอุณหภูมิห้อง (20-25°C) เว้นแต่ได้ระบุไว้ในเกณฑ์วิธีการเพิ่มจำ�นวนเชื้อ
(ดูตารางที่ 2, 3 หรือ 4)
2. การผสมแบบปลอดเชื้อระหว่างอาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อกับตัวอย่าง และทำ�ให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยผ่านการปั่นผสม การบด การผสม
แบบหมุนวนหรือการผสมด้วยมือเป็นเวลา 2 ± 0.2 นาที หรือ จนกระทั่งส่วนที่จับตัวเป็นก้อนทั้งหมดละลายจนหมดเป็นสาร
แขวนลอยในอาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อและผสมเป็นเนื้อเดียวกัน(7, 8)
ก. ปัจจัยต่าง ๆ เช่น การเตรียมตัวอย่าง รวมถึงการทำ�ให้เป็นเนื้อเดียวกันและการผสม การจัดการและเทคนิคที่ใช้ในห้องปฏิบัติการ
อาจส่งผลกระทบต่อผลการทดสอบ
ข. สำ�หรับตัวอย่างที่ลักษณะเป็นละอองอนุภาคขนาดเล็ก แนะนำ�ให้ใช้ถุงกรอง

4

TH （ภาษาไทย）ค. สำ�หรับเมทริกซ์ซึ่งพองตัวในน้ำ�และมีความหนืดสูง (เช่น ธัญพืช แป้ง) แนะนำ�ให้ทำ�การเจือจางเพิ่มขึ้น (> 1:10) จนกระทั่งความ
หนืดลดลงจนเหมาะสมหรือเติม 1% (น้ำ�หนัก/ปริมาตร) อัลฟา-อะไมเลสที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วลงใน BPW (ISO)(8)ง.

สำ�หรับตัวอย่างผงธัญพืช ให้เติมผงธัญพืชลงในของเหลวนัน้ อย่างช้า ๆ โดยใช้วธิ กี ารผสมอย่างต่อเนือ่ ง เพือ่ ไม่ให้จบั ตัวเป็นก้อน

3. บ่มตามที่กำ�หนดไว้ในตารางเกณฑ์วิธีที่เหมาะสม (ดูตารางที่ 2, 3 หรือ 4)ตารางที่ 2 ระเบียบการของอาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อทั่วไป
เวลาการเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ
(ชั่วโมง)ปริมาตร
สำ�หรับ
วิเคราะห์
ตัวอย่าง

เมทริกซ์ตัวอย่าง

ขนาดตัวอย่าง1ปริมาตรอาหารเหลว
เพิ่มจำ�นวนเชื้อ1, 2อุณหภูมิในการ
เพิ่มจำ�นวนเชื้อ
(± 1°C)นมผงดัดแปลงสำ�หรับทารก (PIF) และวัตถุดิบ เช่น นมผงแห้ง ผงถั่วเหลือง เวย์ผง
น้ำ�ตาลแลคโตส แป้งข้าวเจ้าและ
มอลโทเดกซ์ทริน

ตัวอย่าง
1X กรัมBPW (ISO) (1:10)
9X มล.

37

18-24

20
ไมโครลิตร

วัตถุดิบต่าง ๆ เช่น เกลือ แร่ธาตุ กรดอะมิโนDHA (กรดโดโคซะเฮกซะอีโนอิก) และวิตามิน

1X กรัม
ตัวอย่างBPW (ISO) (1:100)
99X มล.

37

18-24

20
ไมโครลิตร

ตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อมที่แห้ง เช่น ฝุ่นมูลฝอยจากการปัดกวาด ฝุ่นละอองจากการ
ดูดเก็บตัวอย่าง

ตัวอย่าง
1X กรัมBPW (ISO) (1:10)
9X มล.

37

18-24

20
ไมโครลิตร

ฟองน้ำ�เก็บตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อมที่มีอาหาร
เลี้ยงเชื้อ เลทีน บรอธ หรืออาหารเลี้ยงเชื้อ ดี/อี นิวทรอไลซิ่ง บรอธ 10 มล.

อุปกรณ์เก็บ
ตัวอย่าง 1
ชิ้นBPW (ISO) (1:10)
90 มล.

37

18-24

20
ไมโครลิตร

1. Neogen ได้ประเมินชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์ โดยใช้การเจือจางในระดับสูงสุด 300 ก.ตามตาราง 2 ผู้ใช้
มีหน้าที่รับผิดชอบในการพิสูจน์ยืนยันอัตราส่วนการเจือจางหรือระเบียบวิธีการแบบอื่นเพื่อให้มั่นใจว่าวิธีการทดสอบนี้สอดคล้องกับ
เกณฑ์ของผู้ใช้
2. ใช้ BPW (ISO) ที่ผา่ นการอุ่นไว้ล่วงหน้า ในกรณีที่อาหารเหลวเพิ่มจำ�นวนเชื้อมีปริมาตร > 300 มล. (เช่น ตัวอย่าง > 30 กรัม)คำ�แนะนำ�เฉพาะสำ�หรับวิธีการทดสอบที่ผา่ นการตรวจสอบความใช้ได้ของวิธี
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certificate #101703

จากการศึกษา OMASM และ PTMSM ของสถาบันวิจัย AOAC ชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen พบว่า
เป็นวิธีการที่มีประสิทธิภาพในการตรวจหาเชื้อครอโนแบคเตอร์ เมทริกซ์ที่ได้รับการทดสอบในการศึกษาดังกล่าวแสดงไว้ในตารางที่ 3

5

TH （ภาษาไทย）ตารางที่ 3 เกณฑ์วิธีการเพิ่มจำ�นวนเชื้อตาม AOAC® OMA

2018.01 และ PTM

101703ขนาดตัวอย่าง

ปริมาตรอาหารเหลว
เพิ่มจำ�นวนเชื้อ1อุณหภูมิในการ
เพิ่มจำ�นวนเชื้อ
(± 1°C)เวลาการเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ
(ชั่วโมง)10 ก.

BPW (ISO) (1:10)
90 มล.

37

18-24

20
ไมโครลิตร

300 ก.

BPW (ISO) (1:10)
2,700 มล.

ผ่านการอุ่น
ไว้ล่วงหน้าที่
อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส

18-24

20ไมโครลิตร

นมผงดัดแปลงสำ�หรับทารกและธัญพืชผง
สำ�หรับทารกชนิดที่มีโปรไบโอติก

300 ก.

ผ่านการอุ่นBPW (ISO) 2,700ไว้ล่วงหน้าที่
มล. + 10 มก./ล. แวนอุณหภูมิ 37 องศาโคมัยซิน
เซลเซียส

22-24

20ไมโครลิตร

แลคโตส

10 ก.

BPW (ISO) (1:10)
90 มล.

37

18-24

20
ไมโครลิตร

อุปกรณ์เก็บ
ตัวอย่าง 1
ชิ้นBPW (ISO) (1:10)
90 มล.

37

18-24

20
ไมโครลิตร

SMเมทริกซ์ตัวอย่าง
นมผงดัดแปลงสำ�หรับทารกและธัญพืชผง
สำ�หรับทารก
ธัญพืชผงสำ�หรับทารกชนิดปราศจาก
โปรไบโอติก

ฟองน้ำ�เก็บตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อมที่มีอาหาร
เลี้ยงเชื้อ ดี/อี นิวทรอไลซิ่ง บรอธ 10 มล.

SMปริมาตร
สำ�หรับ
วิเคราะห์
ตัวอย่าง

1. ใช้ BPW (ISO) ที่ผา่ นการอุ่นไว้ล่วงหน้า ในกรณีที่อาหารเหลวเพิ่มจำ�นวนเชื้อมีปริมาตร > 300 มล.
NF VALIDATION โดย AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/enหากต้องการข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับการสิ้นสุดการบังคับใช้ของผลจากการตรวจสอบความใช้ได้ของวิธีการ โปรดอ่านเอกสารรับรองของNF VALIDATION ที่พร้อมให้ใช้งานได้ตามเว็บไซต์ที่ระบุไว้ขา้ งต้นวิธีการที่ได้รับการรับรองมาตรฐานของ NF VALIDATION ตามมาตรฐาน ISO 16140-2(9) เมื่อเปรียบเทียบกับ ISO 22964
ขอบเขตของการตรวจสอบความใช้ได้ของวิธีการ มีดังต่อไปนี้: นมผงดัดแปลงสำ�หรับทารกและธัญพืชผงสำ�หรับทารกชนิดที่ม
ีโปรไบโอติกและปราศจากโปรไบโอติก วัตถุดิบและตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อม
การเตรียมตัวอย่าง: เตรียมตัวอย่างตาม EN ISO 22694(2) และ EN ISO 6887(7, 8)
เวอร์ชั่นซอฟต์แวร์: ดูใบรับรอง

6

TH （ภาษาไทย）ตารางที่ 4 เกณฑ์วิธีการเพิ่มจำ�นวนเชื้อตามวิธีการที่ได้รับการรับรองของ NF VALIDATION 3M 01/20-03/18

เมทริกซ์ตัวอย่าง
•
•
•

•

•

ขนาด
ตัวอย่าง

ปริมาตร
อาหารเหลว
เพิ่มจำ�นวน
เชื้อ1อุณหภูมิ
ในการเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ
(± 1°C)ระยะเวลา
ในการเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ
(ชั่วโมง)ปริมาตร
สำ�หรับ
วิเคราะห์
ตัวอย่าง

จุดที่หยุดการทดสอบ
ชั่วคราวตามที่
แนะนำ�2, 3นมผงดัดแปลงสำ�หรับทารก
ธัญพืชผงสำ�หรับทารก
ส่วนผสมต่าง ๆ เช่น นมผงแห้ง ผงถั่วเหลือง เวย์ผง น้ำ�ตาลแลคโตส แป้งข้าวเจ้า
และมอลโทเดกซ์ทริน
ตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อมที่
แห้ง เช่น ฝุ่น มูลฝอยจาก
การปัดกวาด ฝุ่นละอองจาก
การดูดเก็บตัวอย่าง

10 ก.

ฟองน้ำ� น้ำ�ชะล้าง วัสดุ
สำ�หรับเช็ดทำ�ความสะอาด

อุปกรณ์
เก็บตัวอย่าง 1ชิ้น หรือ
10 มล.

อาหารเหลวเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ หรือไลเซต
ตัวอย่างสามารถเก็บ
รักษาไว้ที่อุณหภูมิ
2-8°C ได้นานที่สุด
เป็นเวลา 72 ชั่วโมง

30-300ก.

BPW ISO(1:10)

37

18-24

อาหารเหลวเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ หรือไลเซต
ตัวอย่างสามารถเก็บ
20 ไมโครลิตร
รักษาไว้ที่อุณหภูมิ
2-8°C ได้นานที่สุด
เป็นเวลา 72 ชั่วโมง

30-300ก.

BPW (ISO)+ 10 มก./ล.
แวนโคมัยซิน
(1:10)

37

22-24

20 ไมโครลิตร

นมผงดัดแปลงสำ�หรับทารกและ
ธัญพืชผงสำ�หรับทารก (ชนิดปราศจากโปรไบโอติก)นมผงดัดแปลงสำ�หรับทารกและ
ธัญพืชผงสำ�หรับทารก (ชนิดมี
โปรไบโอติก)BPW (ISO)(1:10) 90
มล.

37

18-24

20 ไมโครลิตร

อาหารเหลวเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ หรือไลเซต
ตัวอย่างสามารถเก็บ
รักษาไว้ที่อุณหภูมิ
2-8°C ได้นานที่สุด
เป็นเวลา 72 ชั่วโมง

ไม่มี

1. ใช้ BPW (ISO) ที่ผ่านการอุ่นไว้ล่วงหน้า ในกรณีที่อาหารเหลวเพิ่มจำ�นวนเชื้อมีปริมาตร > 300 มล. (เช่น ตัวอย่าง > 30 กรัม)2. หลังจากนำ�อาหารเหลวเพิ่มจำ�นวนเชื้อออกจากที่เก็บ ให้ทำ�การทดสอบจากขั้นที่ 1 ในหัวข้อ ไลซีส หลังจากนำ�ไลเซตตัวอย่างออก
จากที่เก็บ ให้ทำ�การทดสอบจากขั้นที่ 7 ในหัวข้อ ไลซีส
3. โปรดดูภาคผนวก A หากต้องการทดสอบซ้ำ�ไลเซตที่เก็บไว้และผ่านความร้อนมาแล้ว
การเตรียมถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับเข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen®
1. จุ่มผ้าหรือกระดาษเช็ดมือแบบใช้แล้วทิ้งลงในน้ำ�ยาฟอกขาว 1-5% (ผสมกับน้ำ�ตามอัตราส่วน) และเช็ดถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับ
เข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen
2. ใช้น้ำ�ล้างถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับเข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen นี้
3. ใช้กระดาษเช็ดมือแบบใช้แล้วทิ้งเช็ดถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับเข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen ให้แห้ง
4. ตรวจสอบให้แน่ใจว่าถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับเข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen แห้งสนิทก่อนใช้งาน
การเตรียมชิลบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen®
วางชิลบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen บนโต๊ะปฏิบัติงานของห้องปฏิบัติการโดยตรง: ไม่ใช้ถาดวางชิลบล็อค
สำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen ใช้ชิลบล็อคที่อุณหภูมิห้องปฏิบัติการ (20-25°C)
การเตรียมฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen®
วางฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen ในเครื่องทำ�ความร้อนบล็อกคู่แบบแห้ง เปิดเครื่องทำ�ความร้อนบล็อค
แบบแห้งและตั้งอุณหภูมิเพื่อให้ฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen มีอุณหภูมิเพิ่มขึ้นจนถึง 100 ±1°C
7

TH （ภาษาไทย）หมายเหตุ: ให้ฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen มีอุณหภูมิตามที่กำ�หนดโดยทิ้งไว้ประมาณ 30 นาทีทั้งนี้ขึ้นอยู่กับการทำ�งานของเครื่องทำ�ความร้อน ใช้เทอร์โมมิเตอร์ที่ได้รับการสอบเทียบมาตรฐานและเหมาะสม (เช่น เทอร์โมมิเตอร์
แบบจุ่มบางส่วน เทอร์โมมิเตอร์แบบดิจิตอล ที่ไม่ใช่เทอร์โมมิเตอร์แบบจุ่มทั้งหมด) วางไว้ในบริเวณที่กำ�หนด ตรวจสอบให้อุณหภูมิของ
ฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen อยู่ที่ 100 ±1°Cการเตรียมเครื่องมือสำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen®
1. เปิดใช้ซอฟต์แวร์ทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen® แล้วเข้าสู่ระบบ ติดต่อตัวแทนแผนก Neogen Food Safety ของคุณ เพื่อให้แน่ใจว่าคุณมีซอฟต์แวร์เวอร์ชันที่อัปเดตล่าสุด
2. เปิดเครื่องมือสำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen
3. สร้างหรือแก้ไขชุดการทำ�งานที่มีข้อมูลสำ�หรับแต่ละตัวอย่าง ดูรายละเอียดเพิ่มเติมในคู่มือการใช้งานระบบทดสอบเชื้อก่อโรคระดับ
โมเลกุลโดยวิธี Neogenหมายเหตุ: ต้องรอให้เครื่องมือสำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen มีสถานะพร้อมใช้ ก่อนที่จะใส่ถาด ใส่หลอด
ทดสอบเข้าเครื่องทดสอบเชื้อระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen ขั้นตอนของการทำ�ความร้อนนี้ใช้เวลาประมาณ 20 นาทีและบ่งชี้ด้วยไฟสี
ส้มบนแถบบอกสถานะของเครื่อง เมื่อเครื่องมือพร้อมที่จะเริ่มต้นการทำ�งาน แถบบอกสถานะดังกล่าวจะเปลี่ยนเป็นสีเขียว
การไลซีส
ใช้ไขควงไขด้านล่าง ของทีว่ างสารละลายไลซิส Neogen ออก ก่อนวางลงบนฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบเเชือ้ ระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen

1. รอให้หลอดสารละลายไลซีส Neogen อุ่นขึ้นโดยนำ�ออกมาวางที่อุณหภูมิห้อง (20-25 °C) ข้ามคืน (16-18 ชั่วโมง) อีกวิธีหนึ่งใน
การปรับอุณหภูมิของหลอดสารละลายไลซีส Neogen ให้เท่ากับอุณหภูมิห้อง คือ วางหลอดไลซีส Neogen ไว้บนโต๊ะในห้องปฏิบัติ
การอย่างน้อย 2 ชั่วโมง หรือนำ�หลอดสารละลายไลซีส Neogen ไปบ่มในที่ตู้บ่มเชื้อที่อุณหภูมิ 37 ±1°C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง หรือวาง
หลอดสารละลายไลซีสบนเครื่องทำ�ความร้อนแบบแห้งเป็นเวลา 30 วินาทีที่อุณหภูมิ 100 ± 1°C
2. พลิกหลอดสารละลายไลซีสที่ปิดฝาอยู่ เพื่อผสมให้เข้ากัน ดำ�เนินการต่อในขั้นถัดไปไปภายใน 4 ชั่วโมง หลังจากพลิกหลอดแล้ว
3. นำ�อาหารเหลวเพิ่มจำ�นวนเชื้อออกจากตู้บ่มเชื้อ
4. ตัวอย่างแต่ละชนิดและตัวอย่าง NC (อาหารเลี้ยงเชื้อที่ปลอดเชื้อ) จะต้องใช้หลอดสารละลายไลซีส Neogen หนึ่งหลอดต่อหนึ่ง
ตัวอย่าง
4.1 แถวของหลอดสารละลายไลซีส Neogen สามารถตัดออกเพื่อให้มีจำ�นวนตามที่ต้องการได้ เลือกจำ�นวนหลอดสารละลายไลซีส
Neogen แต่ละหลอดหรือแถวที่มี 8 หลอด ตามความจำ�เป็น วางหลอดสารละลายไลซีส Neogen ลงในชั้นวางที่ว่างอยู่
4.2 เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม ให้เปิดฝาของหลอดสารละลายไลซีส Neogen ทั้งแถวในครั้งเดียว และใช้ปิเปตทิป อันใหม่
สำ�หรับถ่ายตัวอย่างในแต่ละขั้นตอน
4.3 ถ่ายตัวอย่างที่เพิ่มจำ�นวนเชื้อแล้วไปยังหลอดสารละลายไลซีส Neogen ตามคำ�อธิบายด้านล่างนี้:ถ่ายตัวอย่างที่เพิ่มจำ�นวนเชื้อแต่ละตัวอย่างลงไปในหลอดสารละลายไลซีส Neogen แต่ละหลอด เป็นอันดับแรก ถ่าย NC
เป็นอันดับสุดท้าย
4.4 ใชเครื่องมือ์เปิด/ปิดฝาหลอดสารละลายไลซีสโดยวิธี Neogen® ในการเปิดฝาหลอดสารละลายไลซีส Neogen ทีละแถว
4.5 ทิง้ ฝาหลอดสารละลายไลซีส Neogen – หากจะเก็บไลเซตเอาไว้เพือ่ ทดสอบซ้�ำ ให้วางฝาในภาชนะทีส่ ะอาดเพือ่ นำ�กลับมาใช้ซ�ำ้
4.5.1. หากต้องการดูข้อมูลเกี่ยวกับการดำ�เนินการเก็บไลเซต โปรดดูภาคผนวก A
4.6 เขย่าถุงตัวอย่างที่เพิ่มจำ�นวนเชื้อ ก่อนทำ�การดึงตัวอย่างจากด้านที่มีการกรอง สำ�หรับตัวอย่างที่มีความหนืด
4.7 ถ่ายตัวอย่าง 20 ไมโครลิตรลงในหลอดสารละลายไลซีส Neogen ยกเว้นว่าจะระบุไว้เป็นปริมาณอื่นตามตารางเกณฑ์วิธี
5. ทำ�ซ้ำ�ขั้นตอนที่ 4.4 ถึง 4.7 จนกว่าจะเติมตัวอย่างแต่ละตัวอย่างลงในหลอดสารละลายไลซีส Neogen ในแถวดังกล่าวเสร็จสิ้น
8

TH （ภาษาไทย）6. เมื่อถ่ายตัวอย่างทั้งหมดเสร็จแล้ว ให้ถ่าย NC (อาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อ ที่ปลอดเชื้อ เช่น BPW) ปริมาณ 20 ไมโครลิตร ลงในหลอด
สารละลายไลซีส Neogen ห้ามใช้น้ำ�เป็น NC
7. ตรวจสอบว่าอุณหภูมิของฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen อยู่ที่ 100 ±1°C
8. วางถาดใส่หลอดสารละลายไลซีส Neogen ที่ไม่มีฝาปิด ลงในฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen และทำ�ความร้อนเป็นเวลา 15 ± 1 นาที ระหว่างการอุ่นร้อน สารละลายในหลอดทดสอบไลซีส Neogen จะเปลี่ยนจากสีชมพู (เย็น) เป็นเหลือง (ร้อน)ตัวอย่างซึ่งไม่ได้รับความร้อนอย่างเหมาะสมในระหว่างขั้นตอนการไลซีสของชุดทดสอบอาจถือว่าเป็นสารที่อาจมีอันตรายทาง
ชีวภาพ และไม่ควรใส่เข้าไปในเครื่องมือสำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen
9. นำ�ถาดวางหลอดสารละลายไลซีส Neogen ทีไ่ ม่มฝี าปิด ออกจากฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen และปล่อยให้เย็นลงในชิลบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen อย่างน้อย 5 นาที แต่ไม่เกิน 10 นาที ควรวางชิลบล็อค
สำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen ทีจ่ ะใช้งานทีอ่ ณุ หภูมหิ อ้ ง โดยไม่มถี าดรองชิลบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับ
โมเลกุล โดยวิธี Neogen ควรวางลงบนโต๊ะในห้องปฏิบตั กิ ารโดยตรง เมือ่ เย็นลงแล้ว สารละลายไลซีส Neogen ก็จะเปลีย่ นกลับเป็นสีชมพู
10. นำ�เอาถาดวางหลอดสารละลายไลซีส Neogen ออกจาก ชิลบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

การเพิ่มขยาย
1. ต้องมีหลอด รีเอเจนต์์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen หนึ่งหลอดสำ�หรับตัวอย่างแต่ละตัวอย่าง
และ NC1.1 สามารถตัดแถวของหลอดออก เพื่อให้มีจำ�นวนหลอดตามที่ต้องการได้ เลือกจำ�นวนหลอดรีเอเจนต์ของชุดทดสอบเชื้อระดับ
โมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen แต่ละหลอด หรือแถวที่มี 8 หลอด ตามที่ต้องการ
1.2 วางหลอดรีเอเจนต์์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen ลงในถาดวางที่ยังว่างอยู่
1.3 หลีกเลี่ยงการรบกวนเม็ด รีเอเจนต์ที่ก้นหลอด
2. เลือกหลอด Neogen รีเอเจ้นท์คอนโทรลหนึ่งหลอดแล้ววางลงในถาดวาง
3. เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม ให้เปิดฝาหลอดรีเอเจนต์์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen ทีละแถว และใช้ปิเปตทิปอันใหม่ในการถ่ายตัวอย่างในแต่ละขั้นตอน
4. ถ่ายไลเซตแต่ละตัวอย่างไปยังหลอดรีเอเจนต์์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen และหลอด
Neogen รีเอเจ้นท์คอนโทรล ตามคำ�อธิบายด้านล่าง:ถ่ายไลเซตของแต่ละตัวอย่างลงในหลอด รีเอเจนต์์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen แต่ละ
หลอดเป็นอันดับแรก แล้วจึงถ่าย NC เติมสารละลายลงในหลอด Neogen รีเอเจ้นท์คอนโทรลเป็นลำ�ดับสุดท้าย
5. ใช้เครื่องมือเปิด/ปิดฝาหลอดทดสอบ-รีเอเจนต์ โดยวิธี Neogen® ในการเปิดหลอด รีเอเจนต์์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 ครอโนแบคเตอร์ โดยวิธี Neogen ทีละแถว ทิ้งฝาปิด

9

TH （ภาษาไทย）5.1 ถ่ายไลเซตของตัวอย่างปริมาณ 20 ไมโครลิตร จากด้านบน 1/2 ของของเหลว (หลีกเลีย่ งส่วนตะกอน) ในหลอดสาร
ละลายไลซีส Neogen ลงไปในหลอดรีเอเจนต์ข์ องชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - โครโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen ปล่อย
สารละลายด้านข้างหลอด เพือ่ หลีกเลีย่ งการรบกวนเม็ดรีเอเจนต์ทก่ี น้ หลอด ผสมโดยใช้ปเิ ปต ดูดขึน้ และลงเบา ๆ 5 ครัง้
5.2 ทำ�ซ้ำ�ขั้นตอนที่ 5.1 จนว่าจะเติมแต่ละไลเซตตัวอย่างลงไปในหลอดรีเอเจนต์์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 ครอโนแบคเตอร์ โดยวิธี Neogen ในแถวนั้น
5.3 ปิดหลอดรีเอเจนต์ข์ องชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen ด้วยเครือ่ งมือเปิด/ปิดฝาหลอดทดสอบ - รีเอเจนต์
ให้มา และใช้ดา้ นมนของเครือ่ งมือเปิด/ปิดฝา หลอดทดสอบ - รีเอเจนต์โ์ ดยวิธี Neogen กดซ้�ำ ไปซ้�ำ มา เพือ่ ให้แน่ใจว่าฝานัน้ ปิดสนิท
5.4 ทำ�ซ้ำ�ขั้นตอน 5.1 ถึง 5.3 ตามความจำ�เป็นสำ�หรับจำ�นวนตัวอย่างที่จะทดสอบ
5.5 เมื่อถ่ายไลเซตตัวอย่างทั้งหมดแล้ว ให้ทำ�ซ้ำ�ขั้นตอนที่ 5.1 ถึง 5.3 เพื่อถ่ายไลเซต NC ปริมาณ 20 ไมโครลิตร ลงไปในหลอดรี รีเอเจนต์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen
5.6 ถ่ายไลเซต NC ปริมาณ 20 ไมโครลิตร เข้าไปในหลอด Neogen รีเอเจ้นท์คอนโทรล ปล่อยสารละลายด้านข้างหลอด
เพื่อหลีกเลี่ยงการรบกวนเม็ดรีเอเจนต์์ที่ก้นหลอด ผสมโดยใช้ปิเปต ดูดขึ้นและลงเบา ๆ 5 ครั้ง
6. บรรจุหลอดที่ปิดฝาแล้วลงในถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับเข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen ที่สะอาดและขจัดการปน
เปื้อนแล้ว ปิดและล็อคฝาถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับเข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen

7. พิจารณาทบทวนและยืนยันการดำ�เนินการที่กำ�หนดค่าไว้ในซอฟต์แวร์ทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen
8. คลิกปุ่ม Start ในซอฟต์แวร์ แล้วเลือกเครื่องมือที่จะใช้ ฝาปิดของอุปกรณ์ที่เลือกจะเปิดโดยอัตโนมัติ
9. ใส่ถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับเข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen ในเครื่องมือสำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุล
โดยวิธี Neogen แล้วปิดฝาเพื่อเริ่มต้นการทดสอบ ระบบจะให้ผลการทดสอบภายในเวลา 60 นาที แม้ว่าผลที่เป็นบวกอาจจะตรวจจับ
ได้เร็วกว่านั้นก็ตาม
10. หลังจากการทดสอบเสร็จสมบูรณ์แล้ว ให้นำ�ถาดใส่หลอดทดสอบสำ�หรับเข้าเครื่องทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen ออกจาก
เครื่องมือสำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen แล้วกำ�จัดหลอดเหล่านั้นทิ้งโดยแช่ในน้ำ�ยาฟอกขาวที่ใช้ในครัว
เรือนที่มีความเข้มข้น 1-5% (ในน้ำ�ที่มีปริมาตรเท่ากัน) นาน 1 ชั่วโมง และปฏิบัติให้ห่างจากพื้นที่จัดเตรียมชุดทดสอบ
ข้อสังเกต: เพื่อลดความเสี่ยงในการได้ผลบวกปลอมอันเนื่องมาจากการปนเปื้อนข้าม ห้ามเปิดหลอดรีเอเจ้นท์ซึ่งบรรจุ DNA ที่เพิ่ม
ขยายแล้ว ซึ่งรวมถึงหลอดรีเอเจ้นท์ของชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen หลอดรีเอเจ้นท์คอนโทรล
Neogen และหลอดเมตริกซ์คอนโทรล Neogen กำ�จัดหลอดรีเอเจ้นท์เหล่านั้นทิ้งโดยแช่ในน้ำ�ยาฟอกขาวที่ใช้ในครัวเรือนที่มีความเข้ม
ข้น 1-5% (ในน้ำ�ที่มีปริมาตรเท่ากัน) นาน 1 ชั่วโมง และปฏิบัติให้ห่างจากพื้นที่จัดเตรียมชุดทดสอบ

ผลการทดสอบและการแปลความหมาย

อัลกอริธึมจะแปลความหมายเส้นโค้งของแสงที่ส่งออกมาอันเป็นผลมาจากการตรวจพบการเพิ่มขยายของกรดนิวคลีอิก ซอฟต์แวร์จะ
วิเคราะห์ผลการทดสอบนี้โดยอัตโนมัติและจะมีการเข้ารหัสสีตามผลที่ได้ดังกล่าว ผลการทดสอบที่ให้คา่ เป็นบวกหรือลบจะพิจารณาตัดสิน
โดยการวิเคราะห์พารามิเตอร์ของเส้นโค้งที่มีลักษณะเฉพาะตัวจำ�นวนหนึ่ง ผลการทดสอบเบื้องต้นที่เป็นบวกจะมีการรายงานในทันที
ขณะที่ผลที่เป็นลบและผลที่น่าสงสัยจะแสดงผลภายหลังการทดสอบเสร็จสมบูรณ์แล้ว
หมายเหตุ: ตัวอย่างที่ให้ผลเป็นลบก็จะไม่ให้คา่ ที่อ่านได้เป็นศูนย์ เนื่องจากรีเอเจ้นท์ในการเพิ่มขยายสำ�หรับชุดทดสอบเชื้อระดับ
โมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี Neogen จะมีคา่ พื้นหลังในหน่วยแสงสัมพัทธ์ (RLU)
การตรวจสอบยืนยัน
• การตรวจสอบยืนยันผลการทดสอบตามวิธีที่ได้รับการรับรองของ NF VALIDATION
ตามเนื้อหาข้อกำ�หนดของ NF VALIDATION ตัวอย่างที่ให้ผลการทดสอบเบื้องต้นเป็นบวกหลังจากการขั้นตอนการเพิ่มจำ�นวนเชื้อ
ทั้งหมดควรได้รับการตรวจสอบยืนยันโดยการตรวจสอบยืนยันวิธีการอ้างอิงดังต่อไปนี้(2) เริ่มจากการถ่ายเชื้อจากอาหารเพิ่มจำ�นวนเชื้อ
ขั้นแรก (BPW ISO หรือ BPW ISO ที่มีการเติม 10 มก./ล. แวนโคมัยซิน)10

TH （ภาษาไทย）•เกณฑ์วิธีการตรวจสอบยืนยันอื่น ๆตัวอย่างทีใ่ ห้ผลการทดสอบเบือ้ งต้นเป็นบวกหลังจากการขัน้ ตอนการเพิม่ จำ�นวนเชือ้ ควรได้รบั การตรวจสอบยืนยันตามมาตรฐานการปฏิบต
ั ิ
(1,2)
่ จากการถ่ายเชือ้ จากอาหารเพิม่ จำ�นวนเชือ้ ขัน้งานในห้องปฏิบตั กิ าร หรือโดยปฏิบตั ติ ามการตรวจสอบยืนยันวิธกี ารอ้างอิงทีเ่ หมาะสม เริมแรก (BPW ISO หรือ BPW ISO ทีม่ กี ารเติม 10 มก./ล. แวนโคมัยซิน) ลงในอาหารเพิม่ จำ�นวนเชือ
้ ขัน
้ ทีส
่ อง ตามด้วยการแยกเชือ้ ในจาน
เพาะเชือ้ ตามลำ�ดับและตรวจสอบยืนยันเชือ้ ทีแ่ ยกได้ โดยใช้วธิ กี ารทางชีวเคมี วิทยาเซรุม่ และ/หรือวิธกี ารระดับโมเลกุลตามทีเ่ หมาะสม
ในกรณีที่พบไม่บ่อยนัก แสงที่ส่งออกมานั้นจะมีลักษณะผิดปกติ อัลกอริธึมดังกล่าวจะส่งข้อมูลออกมาเป็นผลที่น่าสงสัย บริษัท Neogenแนะนำ�ให้ผู้ใช้ทำ�การทดสอบนี้ซ้ำ�สำ�หรับตัวอย่างที่ให้ผลที่น่าสงสัย หากผลการทดสอบยังคงเป็นที่น่าสงสัย ให้ทำ�การทดสอบเพื่อยืนยัน
โดยใช้วิธีการตามที่ต้องการหรือตามที่ระบุโดยหน่วยงานกฎระเบียบในประเทศ(1,2)หากผลที่ได้ไม่สอดคล้องกัน (การให้ผลการทดสอบเบื้องต้นที่เป็นบวกด้วยชุดทดสอบเชื้อระดับโมเลกุล 2 - ครอโนแบคเตอร์โดยวิธี
Neogen ไม่ได้รับการตรวจสอบยืนยันโดยวิธีการใดวิธีการหนึ่งดังที่ได้อธิบายไว้ข้างต้น) ห้องปฏิบัติการต้องปฏิบัติตามมาตรฐานการ
ปฏิบัติงานที่จัดทำ�ไว้ เพื่อรายงานผลการทดสอบที่ได้
หากท่านมีข้อสงสัยเกี่ยวกับการใช้งานหรือกรรมวิธีที่เฉพาะเจาะจงใดๆ โปรดเยี่ยมชมเว็บไซต์ของเราที่ www.neogen.com หรือติดต่อ
ตัวแทนจำ�หน่ายหรือผู้จัดจำ�หน่ายของบริษัท Neogen ในท้องถิ่นของท่าน
ภาคผนวก A การหยุดการทดสอบชั่วคราว: การเก็บรักษาและการนำ�ไลเซตมาทดสอบซ้ำ�
1. หากต้องการเก็บไลเซตที่ผา่ นความร้อนมาแล้ว ให้ปิดฝาหลอดสารละลายไลซิสด้วยฝาที่สะอาด (โปรดดูไลซีสส่วนที่ 4.5)
2. เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2 ถึง 8°C ไม่เกิน 72 ชั่วโมง
3. เตรียมตัวอย่างที่เก็บไว้ โดยพลิกหลอดสารละลายไลซิสไปมา 2-3 ครั้งเพื่อผสมตัวอย่างให้เข้ากัน
4. เปิดฝาหลอด
5. ใส่หลอดไลเซตทีผ่ สมตัวอย่างเข้ากันแล้วลงในฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen และให้ความร้อนที่
100 ±1°C เป็นเวลา 5 ±1 นาที6. นำ�ที่วางหลอดใส่สารละลายไลซีส Neogen ออกจากฮีทบล็อคและปล่อยให้เย็นลงในชิลบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล
โดยวิธี Neogen อย่างน้อย 5 นาทีแต่ไม่เกิน 10 นาที7. ดำ�เนินการทดสอบขั้นต่อไปในส่วนการเพิ่มจำ�นวนเชื้อตามรายละเอียดด้านล่าง

เอกสารอ้างอิง:1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance formicrobiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
โปรดอ้างอิงวิธีการมาตรฐานฉบับปัจจุบันที่แสดงรายการไว้ข้างต้น

คำ�อธิบายสัญลักษณ์

info.neogen.com/symbols
11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

KO （한국어）발행일: 2024-01

제품 설명서분자 검출 키트 2 - 크로노박터제품 설명 및 용도

Neogen® 분자 검출 키트 2 - 크로노박터는 Neogen® 분자 검출 시스템을 사용하여 증균된 식품 및 식품 가공 환경 시료에서크로노박터를 신속하고 명확하게 검출합니다.

Neogen 분자 검출 키트는 고리 매개 등온 증폭 방식으로 증폭 감지를 위한 생체발광이 결합되어, 높은 특이성과 민감도를 가진 핵산염기 서열을 빠르게 증폭시킵니다. 추정 양성 결과는 실시간으로 보고되는 반면, 음성 결과는 시험이 완료된 후 표시됩니다. 추정양성 결과는 원하는 방법을 사용하거나 현지 규정에 지정된 대로 확인되어야 합니다(1, 2).

Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터는 시험 기법에 대해 적절한 교육을 받은 전문가들이 실험실 환경에서 사용하도록
고안되었습니다. Neogen은 식품이나 음료가 아닌 다른 산업에서의 이 제품 사용을 문서화하지 않았습니다. 예를 들어 Neogen은 약품, 화장품, 임상 또는 수의학 시료 시험에 대해 이 제품을 문서화하지 않았습니다. Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터는가능한 모든 식품, 식품 가공, 시험 프로토콜 또는 가능한 모든 박테리아 변종에 평가되지는 않았습니다.

모든 시험 방법처럼 증균 배지의 원료, 제조법 및 특성은 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. 시료 추출 방법, 검사 계획서, 시료 준비(균질화 및 혼합 포함), 조작 및 실험 기법 또한 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. Neogen은 충분한 수의 특정 식품 시료 및/또는 환경시료와 미생물을 이용하여 사용자의 환경에서 사용자의 기준을 충족하는지 확인하기 위해 증균 배지를 포함한 해당 방법의 평가를권장합니다.
Neogen은 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터를 펩톤완충수(ISO) 증균 배지로 평가했습니다.

Neogen® 분자 검출기는 시료에 있는 유기체를 파괴하기 위한 Lysis 단계 중에 열처리를 거친 시료와 함께 사용하기 위한 것입니다.
Lysis 단계 동안 적절하게 열처리가 되지 않은 샘플은 잠재적인 생물학적 위험으로 간주되어 Neogen 분자 검출기에 절대로삽입하지 마십시오.
Neogen Food Safety는 설계 및 제조에 관한 ISO(International Organization for Standardization) 9001 인증을 받았습니다.
Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 시험 키트에는 표 1에 설명된 바와 같이 96회 시험분이 포함되어 있습니다.
표 1. Neogen 분자 검출 키트 구성요소
항목

ID

수량

내용물

설명

Neogen® 분자 검출 키트 2 크로노박터 Reagent 튜브오렌지-레드 색의 튜브

96개(8개들이 튜브 12개스트립)동결 건조된 특정 증폭및 검출 혼합물사용 준비됨

16개(8개들이 개별 튜브 2
개 파우치)

동결 건조된 컨트롤DNA, 증폭 및 검출혼합물사용 준비됨

Neogen® LS(Lysis Solution)예비 캡투명한 튜브의 분홍색용액오렌지-레드 캡

Neogen® Reagent 컨트롤(RC) 투명 플립톱 튜브

96개(8개들이 튜브 12개스트립)96개(8개들이 캡 12개스트립)튜브당 580μL의 LS랙에 꽂혀 있고바로 사용가능함사용 준비됨키트에 제공되지 않은 음성 대조군은 멸균 증균 배지(예: BPW ISO)입니다. 물을 음성 대조군으로 사용하지 마십시오.

안전사용자는 Neogen 분자 검출 시스템 및 Neogen 분자 검출 키트 2 -크로노박터와 관련된 지침의 안전 정보 일체를 숙지하고 따라야
합니다. 나중에 참조할 수 있도록 안전 지침을 보관하십시오.
경고: 피하지 못할 경우 사망이나 심각한 부상 및/또는 재산상의 손해를 초래할 수 있는 위험 상황을 의미합니다.
알림: 피하지 못할 경우 재산상의 피해를 초래할 수 있는 잠재적으로 위험한 상황을 나타냅니다.

W 경고

인간 또는 동물의 상태를 진단하는 데 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터를 사용해서는 안 됩니다.

담당자는 최신의 적절한 시험 기법에 대해 사용자에게 교육을 실시해야 합니다. 우수 실험실 관리기준(3), ISO/IEC 17025(4) 또는ISO 7218(5).
1KO （한국어）오염된 제품의 출고를 초래하는 위음성 결과와 관련된 위험을 줄이려면:• 계획서를 준수하고 제품 설명서에 명시된 대로 정확하게 시험을 수행하십시오.
• Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터를 보관할 때는 포장 및 제품 지침에 명시된 바를 따릅니다.
• Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터는 유효 기간까지만 사용해야 합니다.
• Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터는 내부 또는 제3자가 확인한 식품 및 식품 처리 환경 시료와 함께 사용합니다.
• Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터에는 내부적으로 또는 타사에 의해 검증된 표면, 멸균제, 프로토콜 및 박테리아 종만사용하십시오.
• 아릴설포네이트 화합물이 포함된 Neutralizing 버퍼를 함유하는 환경 시료의 경우 시험하기 전에 1: 2로 희석하십시오(시료 1을 동량의 멸균 증균액 1에 넣음). NB 증균액 10µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮기는 방법도 있습니다. 아릴설포네이트
화합물이 포함된 Neutralizaing 버퍼를 함유하는 Neogen® 샘플 핸들링 제품: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G,
HS10NB, HS10NB2G 및 HS2410NB2G. 이 프로토콜은 NF Validation 연구 중에 시험하지 않았습니다.
화학물질 및 생물학적 유해 물질 노출 관련 위험을 줄이려면:• 교육을 받은 사람의 통제하에 적절하게 준비된 실험실에서 병원성균 시험을 수행하십시오. 배양된 증균 배지 및 장비 또는배양된 증균 배지에 접촉한 표면에는 인체 건강에 위험을 초래할 수 있을 정도의 병원성균이 들어있을 수 있습니다.
• 시약 및 오염된 시료를 다룰 때는 적절한 보호복과 보안경 착용을 비롯하여 항상 표준 실험실 안전 방침을 준수하십시오.
• 증폭 후 증균 배지 및 Reagent 튜브의 내용물과 접촉하지 않도록 하십시오.
• 증균 시료와 관련 오염 폐기물은 현행 지역/국가/업계 표준에 따라 폐기하십시오.
• 권장 가열 온도를 초과하지 마십시오.
• 권장 가열 시간을 초과하지 마십시오.
• 적절한 눈금이 있는 온도계를 사용하여 Neogen® 분자 검출 히팅 블록 인서트 온도를 확인하십시오(예: 부분 침지 온도계 또는디지털 열전대 온도계. 전체 침지 온도계는 안됨). 온도계는 반드시 Neogen 분자 검출 히팅 블록 인서트의 지정된 장소에놓아야 합니다.
시험을 준비하는 동안 교차 오염과 관련된 위험을 줄이려면:• (사용자를 보호하고 뉴클레아제의 침투를 막기 위해) 항상 장갑을 착용해야 합니다.

뜨거운 액체에 노출된 경우 가능한 위험을 줄이려면:• 권장 가열 온도를 초과하지 마십시오.
• 권장 가열 시간을 초과하지 마십시오.
• 적절한 눈금이 있는 온도계를 사용하여 Neogen® 분자 검출 히팅 블록 인서트 온도를 확인하십시오(예: 부분 침지 온도계 또는디지털 열전대 온도계. 전체 침지 온도계는 안됨). 온도계는 반드시 Neogen 분자 검출 히팅 블록 인서트의 지정된 장소에놓아야 합니다.

참고시험을 준비하는 동안 교차 오염과 관련된 위험을 줄이려면:• 시약 펠릿 수화 전에 장갑을 교체하십시오.
• 미세입자를 차단하는(필터 사용) 멸균된 분자 생물학 등급의 피펫 팁을 이용하는 것이 좋습니다.
• 각 시료 이동 시 새 피펫 팁을 사용하십시오.
• 우수 실험실 관리기준을 적용하여 샘플을 증균에서 용해 튜브로 옮기십시오. 피펫 오염을 방지하려면 중간 분주 단계를추가해야 할 수도 있습니다. 예를 들어 사용자는 증균된 각 샘플을 멸균 튜브로 옮길 수 있습니다.
• 해당되는 경우 살균 램프가 있는 분자생물학 워크스테이션을 사용하십시오.
• 주기적으로 1-5%(v: v 물) 가정용 표백 용액 또는 DNA 제거 용액으로 실험실 벤치와 장비(피펫, 캡/디캡 도구 등)의 오염을제거하십시오.

위양성 결과가 발생할 위험을 줄이려면:• 증폭 후에는 절대 튜브를 열지 마십시오.
• 오염된 튜브는 항상 1-5% 농도(v:v 물)의 가정용 표백제에 1시간 동안 담가두었다가 키트 준비 구역과 멀리 떨어진 위치에폐기합니다.
• 증폭 후 Reagent 튜브는 절대 오토클레이브하지 마십시오.
• 시료에 크로노박터 DNA(살균/비활성화 단계를 거쳐 생존 불가한 크로노박터 세포의 DNA)가 다량 함유된 것으로 의심될 경우
Lysis 단계 전에 DNA 분해 효소로 추정 양성 증균 처리를 해야 합니다. 자세한 정보는 Neogen에 문의하십시오. 이 프로토콜은
NF Validation 연구 중에 시험하지 않았습니다.

폐기에 대한 추가 정보 및 현지 규정은 안전보건자료(SDS)를 참조하십시오.

구체적인 용도나 절차에 대하여 궁금한 점이 있으면 당사 웹 사이트(www.neogen.com)를 방문하거나 현지 Neogen 또는판매업체로 문의하십시오.

2

KO （한국어）사용자 책임

사용자는 제품 설명서와 정보를 숙지할 책임이 있습니다. 더 자세한 정보는 당사의 웹사이트 www.neogen.com를 참고하거나
현지 Neogen 또는 판매점에 문의하십시오.
시험 방법을 선택할 때, 시료 추출 방법, 시험 프로토콜, 시료 준비(균질화 및 혼합 포함), 취급, 실험 기법과 같은 외적 요인들이결과에 영향을 미칠 수 있음을 인식하는 것이 중요합니다.

시험 방법이나 제품을 선택할 때 선택된 시험 방법이 사용자의 기준을 충족할 수 있도록 적합한 매트릭스와 미생물 유발 시험을사용하여 충분한 수의 시료를 평가하는 것은 사용자의 책임입니다.
또한 사용자에게는 여느 테스트 방법 및 결과가 해당 고객 및 공급자의 요구 사항을 충족하는지 판단할 책임이 있습니다.

여느 테스트 방법과 마찬가지로 Neogen Food Safety 제품을 사용하여 얻은 결과가 테스트된 매트릭스나 프로세스의 품질을보장하는 것은 아닙니다.

Neogen에서는 다양한 매트릭스 방법 평가에 도움을 드리기 위해 Neogen® 분자 검출 매트릭스 컨트롤 키트를 개발했습니다.
필요한 경우 매트릭스 컨트롤(MC)을 이용하여 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 결과에 영향을 미칠 능력이 매트릭스에있는지 확인할 수 있습니다. 매트릭스를 대표하는 여러 시료를 시험하십시오(예: Neogen 방법 적용 시 또는 원료 또는 프로세스에변화가 있었던 신규/미상의 매트릭스 시험 시 유효성 검사를 하는 중에 다양한 원천에서 얻은 시료).

매트릭스는 구성이나 프로세스와 같은 내재적 성질이 있는 제품의 종류로 정의할 수 있습니다. 매트릭스 간의 차이점은 매트릭스의처리 방법 또는 모양(예: 비살균/저온 살균, 생제품/건조제품 등)이 미치는 영향처럼 간단합니다.

보증의 한계/제한적 구제개별 제품 포장의 제한적 보증 부분에 명시된 경우를 제외하고, NEOGEN은 상품성 또는 특정 용도 적합성에 대한 보증을 포함한어떤 명시적이거나 암묵적인 보증도 거부합니다. Neogen Food Safety 제품에 결함이 있을 경우, Neogen이나 그의 공식판매업체는 자체 판단에 따라 제품을 교체하거나 구매 금액을 환불해 드립니다. 다음은 귀하의 유일한 구제 방법입니다. 추가 질문이
있으면 Neogen 담당자 또는 Neogen 공인 대리점에 문의하십시오.

Neogen 책임의 한계

NEOGEN은 수익의 상실을 포함하여 어떤 직접적인, 간접적인, 특별한, 부수적인, 결과적인 손해나 손실에 대해서도 책임지지않습니다. 법 이론에 따른 Neogen의 책임은 어떤 경우에도 결함이 있다고 주장된 제품의 구매 대금을 초과하지 않습니다.

보관 및 폐기

Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터는 2-8°C에서 보관합니다. 동결시키지 마십시오. 보관 중 키트가 빛을 받지 않도록 하십시오.
키트를 열어 보고 호일 파우치가 손상되지 않았는지 확인합니다. 파우치가 손상된 경우 사용하지 마십시오. 개봉 후, 사용하지 않은
Reagent 튜브는 항상 다시 밀봉 가능한 파우치에 건조제와 함께 넣어 보관하여 건조 동결된 시약의 안정성을 유지해야 합니다. 다시밀봉한 제품은 최대 60일 동안 2-8°C에서 보관하십시오.

유효 기간이 지난 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터는 사용하지 마십시오. 유통기한과 품목 번호는 상자의 외부 라벨에기입되어 있습니다. 사용하고 난 증균 배지와 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터용 튜브에는 잠재적으로 병원성 물질이 들어있을 수 있습니다. 시험이 완료되면 현재 업계 표준에 따라 오염 폐기물을 폐기하십시오. 폐기에 대한 추가 정보 및 현지 규정은안전보건자료(SDS)를 참조하십시오.

사용 지침모든 지침을 주의 깊게 준수하십시오. 그렇지 않으면 부정확한 결과가 나올 수 있습니다.

주기적으로 1-5%(v: v 물) 가정용 표백 용액 또는 DNA 제거 용액으로 실험실 벤치와 장비(피펫, 캡/디캡 도구 등)의 오염을제거하십시오.

사용자는 "설치 적격성 평가(IQ)/작동 적격성 평가(OQ) 프로토콜 및 Neogen 분자 검출 시스템 지침" 문서(6)에 명시된 대로
Neogen 분자 검출 시스템 작업자 적격성 평가 교육을 완료해야 합니다.
특정 요건에 관해서는 "검증 방법 관련 상세 설명" 섹션을 참조하십시오.

표 3. AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 및 Performance TestedSM 인증서 101703에 따른 증균 프로토콜표 4. NF VALIDATION 인증서 3M 01/20-03/18에 따른 증균 프로토콜시료 증균
표 2, 3 또는 4는 식품과 환경 시료용 증균 프로토콜에 대한 안내입니다.

다른 시료 추출법, 증균 프로토콜 또는 희석 비율을 검증하여 이 시험 방법이 사용자의 기준을 충족하도록 하는 것은 사용자의책임입니다.

3

KO （한국어）식품, 환경 분말, 먼지, 이물질, 스펀지
1. 증균 배지는 증균 프로토콜에서 별도로 명시하지 않는 한 실온(20~25°C)으로 평형을 맞추십시오(표 2, 3 또는 4 참고).

2. 무균 방식으로 증균 배지와 시료를 조합하고 2±0.2분 동안 또는 모든 덩어리가 완전히 용해되고 배양액이 균질화될 때까지블렌딩 또는 스토마킹을 하거나, 휘젓거나 손으로 혼합하여 완전히 균질화합니다(7, 8).
a. 시료 준비(균질화 및 혼합 포함), 조작 및 실험 기법이 결과에 영향을 미칠 수 있습니다.
b. 입자가 매우 미세한 시료에 대해서는 필터 백을 사용하는 것이 좋습니다.
c.

물 속에서 부풀고 점성이 강한 매트릭스(예: 곡류, 녹말)의 경우 점성이 적절히 감소할 때까지 추가 희석하거나(> 1:10)
BPW(ISO)에 멸균 1%(w/v) 알파-아밀라아제를 추가하십시오(8).

d. 양이 많은 곡물 시료의 경우 덩어리가 생기지 않도록 자주 혼합하면서 액체에 분말 곡물을 천천히 추가하십시오.

3. 적절한 프로토콜 표에 명시된 바에 따라 배양하십시오(표 2, 3 또는 4 참고).

표 2. 일반 증균 프로토콜시료 매트릭스시료 크기1조제 분유(PIF) 및 건조 우유 분말, 대두 분말, 유청분말, 유당, 쌀가루 및 말토덱스트린 등의 원료

1X 그램 시료먼지, 이물질, 진공 흡수된 잔류물과 같은 건조환경 시료

1X 그램 시료염분, 미네랄, 아미노산, DHA(docosahexaenoicacid) 및 비타민 등의 원료

10mL Letheen Broth 또는 D/E Neutralizaing
Broth로 적신 환경 스펀지증균 온도(±1°C)

증균 시간
(hr)

시료
분석량

99XmL BPW(ISO)(1:100)

37

18-24

20µL

90mL BPW(ISO)(1:10)

37

37

18-24

20µL

증균액량1, 2

9XmL BPW(ISO)(1:10)

1X 그램 시료9XmL BPW(ISO)(1:10)

시료 추출 기기
1개

37

18-24

18-24

20µL

20µL

1. Neogen은 최대 300g까지 표 2의 희석 비율을 적용하여 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터를 평가했습니다. 다른 희석비율 또는 프로토콜을 검증하여 해당 방법이 사용자의 기준을 충족하도록 하는 것은 사용자의 책임입니다.
2. 증균액이 300mL보다 많을 시에는 미리 가열된 BPW(ISO)를 사용하십시오(예: 시료 > 30그램).
검증 방법 관련 상세 설명

AOAC® Official Method of AnalysisSM(OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM(PTM) 인증서 101703

AOAC Research Institute OMASM및 PTMSM 연구에서, Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터는 크로노박터 검출에 효과적인방법이라는 점이 밝혀졌습니다. 이 연구에서 실험된 매트릭스는 표 3에 나와 있습니다.
표 3. AOAC® OMASM 2018.01 및 PTMSM 101703에 따른 증균 프로토콜시료 매트릭스조제 분유와 유아용 분말 시리얼유아용 분말 시리얼 비생균제

증균액량1

증균 온도
(±1°C)

증균 시간
(hr)

시료
분석량

300g

2700mL BPW(ISO)(1:10)

미리 가열된 37

18-24

20µL

10g

90mL BPW(ISO)(1:10)

시료 크기
10g

조제 분유와 유아용 분말 시리얼(생균제 포함)

300g

10mL D/E Neutralizaing Broth로 적신 환경
스펀지

시료 추출
기기 1개

유당

90mL BPW(ISO)(1:10)

37

18-24

20µL

2700mL BPW(ISO) +10mg/L 반코마이신미리 가열된 37

22-24

20µL

90mL BPW(ISO)(1:10)

37

18-24

20µL

1. 증균액이 300mL보다 많을 시에는 미리 가열된 BPW ISO를 사용하십시오.
4

37

18-24

20µL

AFNOR Certification에 의한 NF Validation

KO （한국어）3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en유효기간 관련하여 상세 정보는 상기에 명시한 웹 사이트에 있는 NF VALIDATION 인증서를 참고하십시오.
ISO 22964 대비 ISO 16140-2(9)에 준한 NF VALIDATION 인증 방법검증의 범위: 조제 분유와 유아용 분말 시리얼(생균제 포함 또는 미포함), 원료 및 환경 시료.
시료 준비: 시료는 EN ISO 22694(2) 및 EN ISO 6887(7, 8)에 따라 준비해야 합니다.
소프트웨어 버전: 인증서 참고.

표 4. NF VALIDATION 인증 방법 3M 01/20-03/18에 따른 증균 프로토콜시료 매트릭스

•
•
•

•

•

조제 분유
유아용 분말 시리얼건조 우유 분말, 대두분말, 유청 분말, 유당,쌀가루, 말토덱스트린등의 성분먼지, 이물질, 진공 흡수된잔류물과 같은 건조 환경시료스폰지, 헹굼물, 닦개

시료 크기

10g

증균 온도
(±1°C)증균액량1

90mL
BPW(ISO)(1:10)

37

증균 시간
(hr)

18-24

시료
분석량

20µL

30-300g

유아용 분말 시리얼과 조제
분유(생균제 포함)

30-300g

증균액 또는 시료용해물은 최대 72시간까지 2-8°C에서보관할 수 있습니다.
증균액 또는 시료용해물은 최대 72시간까지 2-8°C에서보관할 수 있습니다.

시료 추출
기기 1개 또는10mL

조제 분유와 유아용 분말
시리얼(비생균제)권장 중단 시점2, 3

BPW(ISO)(1:10)BPW(ISO)+ 10mg/L반코마이신(1:10)

37

18-24

20µL

증균액 또는 시료용해물은 최대 72시간까지 2-8°C에서보관할 수 있습니다.

37

22-24

20µL

없음

1. 증균액이 300mL보다 많을 시에는 미리 가열된 BPW ISO를 사용하십시오(예: 시료 > 30그램).

2. 증균액을 보관소에서 꺼낸 후 Lysis 섹션의 1단계부터 시험을 다시 시작하십시오. 시료 용해물을 보관소에서 꺼낸 후 Lysis
섹션의 7단계부터 시험을 다시 시작하십시오.
3. 저장된 열처리 용해물의 재시험은 부록 A를 참조하십시오.

Neogen® 분자 검출 스피드 로더 트레이 준비
1. 1-5%(v:v 물) 가정용 표백 용액을 천 또는 1회용 타월에 적셔 Neogen 분자 검출 스피드 로더 트레이를 닦습니다.
2. 물로 Neogen 분자 검출 스피드 로더 트레이를 헹굽니다.

3. 1회용 타월을 사용하여 Neogen 분자 검출 스피드 로더 트레이를 닦아서 말립니다.

4. 사용하기 전에 Neogen 분자 검출 스피드 로더 트레이가 마른 상태인지 확인하십시오.
5

KO （한국어）Neogen® 분자 검출 냉각 블록 인서트 준비
Neogen 분자 검출 냉각 블록 인서트를 바로 실험실 벤치에 놓아야 합니다. Neogen 분자 검출 냉각 블록 트레이를 사용하지않습니다. 주변 실험실 온도(20-25°C)에서 블록을 사용합니다.

Neogen® 분자 검출 히팅 블록 인서트 준비건조 이중 블록 히터 장치에 Neogen 분자 검출 히팅 블록 인서트를 놓습니다. 건조 블록 히터 장치를 켜고 Neogen 분자 검출 히팅블록 인서트가 100±1°C를 유지할 수 있도록 합니다.

참고: 히터 장치에 따라, Neogen 분자 검출 히팅 블록 인서트가 온도에 도달하는 데 약 30분이 걸릴 수 있습니다. 적절한 눈금이있는 온도계(예: 부분 침지 온도계 또는 디지털 열전대 온도계. 전체 침지 온도계는 아님)를 지정된 위치에 놓아 Neogen 분자 검출히팅 블록 인서트의 온도가 100±1°C인지 확인합니다.

Neogen® 분자 검출기 준비
1. Neogen® 분자 검출 소프트웨어를 시작하고 로그인합니다. 소프트웨어가 최신 업데이트 버전인지 확인하려면 Neogen Food
Safety 담당자에게 문의하십시오.
2. Neogen 분자 검출기를 켭니다.

3. 각 시료에 대한 데이터를 포함하는 실행을 만들거나 편집합니다. 자세한 내용은 Neogen 분자 검출 시스템 사용 설명서를참조하십시오.

참고: 반응 튜브를 포함한 Neogen 분자 검출 스피드 로더 트레이를 삽입하기 전에 Neogen 분자 검출기는 준비 상태에 도달해야합니다. 이 가열 단계는 약 20분이 걸리며 완료되면 기기의 상태 표시줄에 주황색 등이 켜집니다. 기기가 실행할 준비가 되면 상태표시줄이 녹색으로 바뀝니다.

LYSIS
Neogen 분자 검출 히팅 블록 인서트에 부착하기 전에 스크루드라이버로 Neogen Lysis Solution 랙의 하단을 제거합니다.

1. 랙을 주변 온도(20~25°C)에서 하룻밤 동안(16~18시간) 두어 Neogen Lysis Solution 튜브를 예열합니다. Neogen Lysis
Solution 튜브를 주변 온도로 평형시키는 또 다른 방법은 최소 2시간 동안 실험실 벤치에 Neogen Lysis Solution 튜브를두거나, 37±1°C 배양기에 1시간 동안 Neogen Lysis Solution 튜브를 배양하거나 100±1°C의 건조한 이중 블록 히터에 30
초간 두는 것입니다.

2. 캡을 씌운 튜브를 뒤집어 섞습니다. 뒤집은 다음 4시간 이내에 다음 단계를 진행하십시오.
3. 배양기에서 증균 배지를 제거합니다.

4. 각 시료와 NC 시료(멸균 증균 배지)에 Neogen Lysis Solution 튜브 1개가 필요합니다.

4.1 Neogen Lysis Solution 튜브 스트립을 원하는 수로 자를 수 있습니다. 필요한 개별 Neogen Lysis Solution 튜브 또는 8튜브 스트립 수를 선택합니다. Neogen Lysis Solution 튜브를 빈 랙에 놓습니다.

4.2 교차 오염을 방지하기 위해 한 번에 하나씩 Neogen Lysis Solution 튜브 스트립의 캡을 벗기고 각 분주 단계에 새 피펫팁을 사용합니다.
4.3 아래 설명된 대로, 증균된 시료를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다.

각 증균된 시료를 개별 Neogen Lysis Solution 튜브로 먼저 옮깁니다. NC를 마지막으로 옮깁니다.

4.4 Neogen® 분자 검출 Lysis Cap/Decap Tool을 사용하여 한 번에 스트립 하나씩, Neogen Lysis Solution 튜브 스트립 1개의 캡을 벗깁니다.

4.5 Neogen Lysis Solution 튜브 캡 폐기 – 재시험을 위해 용해물을 그대로 둘 경우 캡을 깨끗한 용기에 두어 용해 후 다시사용할 수 있도록 합니다.
4.5.1. 보존된 용해물 처리에 대해서는 부록 A를 참조하십시오.

4.6 점성 있는 시료를 사용할 때는 여과된 쪽의 시료를 수집하기 전에 증균 백을 저어주십시오.

4.7 프로토콜 표에 별다른 표시가 없으면 20µl의 시료를 Neogen Lysis Solution 튜브에 옮기십시오.
6

KO （한국어）5. 각 시료가 스트립의 해당 Neogen Lysis Solution 튜브에 추가될 때까지 4.4~4.7단계를 반복합니다.

6. 모든 시료를 옮겼을 때 NC(멸균 증균 배지, 예: BPW) 20µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다. 물을 NC로 사용하지마십시오.
7. Neogen 분자 검출 히팅 블록 인서트의 온도가 100±1°C인지 확인합니다.

8. 덮개를 씌우지 않은 Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 Neogen 분자 검출 히팅 블록 인서트에 놓고 15±1분 동안가열합니다. 가열 중 Neogen Lysis Solution 용액은 분홍색(차가움)에서 노란색(뜨거움)으로 바뀝니다.

Lysis 단계 동안 적절하게 열처리가 되지 않은 샘플은 잠재적인 생물학적 위험으로 간주되어 Neogen 분자 검출기에 절대로삽입하지 마십시오.

9. 덮개를 씌우지 않은 Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 Neogen 분자 검출 히팅 블록에서 제거하고 Neogen 분자 검출 냉각블록 인서트에 최소 5분, 최대 10분 냉각시킵니다. Neogen® 분자 검출 냉각 블록 인서트는 Neogen® 분자 검출 냉각 블록트레이 없이 상온에서 바로 실험실 벤치에 놓아야 합니다. 식었으면 Neogen Lysis Solution이 분홍색으로 다시 바뀝니다.

10. Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 Neogen 분자 검출 냉각 블록 인서트에서 제거합니다.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

증폭
1. 각 시료와 NC를 위해 1개의 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브가 필요합니다.

1.1 튜브 스트립을 원하는 튜브 개수로 자를 수 있습니다. 개별 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브 또는 필요한
8-튜브 스트립 수를 선택합니다.
1.2 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브를 빈 랙에 놓습니다.
1.3 튜브 맨 아래 시약 알갱이를 휘젓지 마십시오.

2. 하나의 Neogen Reagent 컨트롤 튜브를 선택하고 랙에 놓습니다.

3. 교차 오염을 방지하기 위해 한 번에 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브 스트립 1개의 캡을 벗기고 각 분주단계마다 새 피펫을 사용합니다.

4. 아래 설명된 대로 각 용해물을 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브 및 Neogen Reagent 컨트롤 튜브로옮깁니다.

각 시료 용해물을 개별 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브로 먼저 옮긴 뒤 NC를 옮기십시오. 마지막에Neogen Reagent 컨트롤 튜브를 수화합니다.

5. Neogen® 분자 검출 Reagent Cap/Decap Tool을 사용하여 한 번에 Reagent 튜브 스트립 하나씩 Neogen 분자 검출 키트 2 크로노박터 Reagent 튜브를 벗깁니다. 캡을 버리십시오.

5.1 Neogen Lysis Solution 튜브에서 용액의 상부 1/2에서 시료 용해물 20µL를 침전되지 않도록 하여 해당 Neogen 분자검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브로 옮깁니다. 알갱이가 휘저어져 섞이지 않도록 기울여 붓습니다. 위아래로 가볍게
5번을 피펫팅하여 섞습니다.

5.2 개별 시료 용해물이 스트립의 해당 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브에 추가될 때까지 5.1단계를
반복합니다.
7

KO （한국어）5.3 제공된 여분의 마개로 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent 튜브를 덮고, Neogen 분자 검출 Reagent Cap/
Decap Tool을의 둥근 면을 사용하여 앞뒤로 압력을 가하여 캡이 단단히 닫혀 있는지 확인하십시오.

5.4 시험할 시료 수에 대해, 필요한 만큼 5.1~5.3단계를 반복합니다.

5.5 모든 시료 용해물을 옮긴 후 5.1~5.3단계를 반복하여 NC 용해물 20µL를 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent튜브로 옮깁니다.

5.6 NC 용해물 20µL를 Neogen Reagent 컨트롤 튜브로 옮깁니다. 알갱이가 휘저어져 섞이지 않도록 기울여 붓습니다.
위아래로 가볍게 5번을 피펫팅하여 섞습니다.

6. 캡이 씌워진 튜브를 깨끗하고 오염되지 않은 Neogen 분자 검출 간편 장착 트레이에 내려 놓습니다. Neogen 분자 검출 간편장착 트레이 뚜껑을 닫고 걸쇠로 잠급니다.

7. Neogen 분자 검출 소프트웨어에서 구성된 실행을 검토하고 확인합니다.

8. 소프트웨어에서 시작 버튼을 클릭하고 사용할 기기를 선택합니다. 선택한 기기의 뚜껑이 자동으로 열립니다.

9. Neogen 분자 검출 스피드 로더 트레이를 Neogen 분자 검출기에 놓고 뚜껑을 닫으면 시험이 시작됩니다. 결과는 60분 이내에제공되지만 양성 여부는 더 일찍 검출할 수 있습니다.
10. 시험이 완료되었으면 Neogen 분자 검출기에서 Neogen 분자 검출 스피드 로더 트레이를 꺼내고 1-5%(v: v 물) 가정용 표백
용액에 1시간 동안 담갔다가 시검 준비 영역에서 떨어진 곳에 폐기하십시오.

알림: 교차 오염으로 인한 위양성의 위험을 최소화하려면 증폭된 DNA를 함유한 Reagent 튜브를 절대 열지 마십시오. 여기에는Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 Reagent, Neogen Reagent 컨트롤 및 Neogen 매트릭스 컨트롤 튜브가 포함됩니다.
항상 밀봉된 시약 튜브를 1-5%(v: v 물) 가정용 표백 용액에 1시간 동안 담갔다가 시검 준비 영역에서 떨어진 곳에 폐기하십시오.

결과 및 해석

알고리즘은 핵산증폭을 탐지할 때 생성되는 빛 출력 곡선을 해석합니다. 결과는 소프트웨어에 의해 자동으로 분석되고 결과에기반하여 색상으로 구분됩니다. 양성 또는 음성 결과는 다양한 고유 곡선 매개변수의 분석으로 판별됩니다. 추정 양성 결과는실시간으로 보고되는 반면, 음성 결과는 실행이 완료된 후 표시됩니다.

참고: 시스템과 Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터용 증폭 시약은 "배경" RLU(Relative Light Unit)를 가지므로 음성 시료도
0을 기록값으로 제공하지 않습니다.

확정• NF Validation 인증 방법에 따른 결과 확정NF VALIDATION의 경우 모든 추정 양성 증균은 1차 증균(10mg/L 반코마이신으로 보완된 BPW ISO 또는 BPW ISO)에서 옮기는것에서 시작하여 다음의 참고 방법 확정(2)에 따라 확인해야 합니다.

•다른 확정 프로토콜추정 양성 증균은 1차 증균(10mg/L 반코마이신으로 보완된 BPW ISO 또는 BPW ISO)에서 2차 증균 배지로 옮기는 것에서시작하여 적절한 생화학, 혈청학적 및/또는 분자학적 방법으로 이후 플레이팅 및 분리균 확정을 실시하는 등 실험실 표준 운영 절차또는 적절한 참고 방법 확정(1, 2)에 따라 확인해야 합니다.
이례적인 빛 출력이 나타나는 경우, 알고리즘은 이를 검사(Inspect)로 분류합니다. 모든 검사 시료에 대해 시검을 반복하는 것이
좋습니다. 결과가 계속 검사인 경우, 기본 설정한 방법을 사용하거나 현지 규정에 따라 확정 시험을 진행하십시오(1,2).

결과가 불일치하는 경우(Neogen 분자 검출 키트 2 - 크로노박터 사용 시 추정 양성, 상기 방법 중 한 가지로 확인 불가 등) 실험실은확립된 표준 운영 절차에 따라 결과를 보고해야 합니다.
구체적인 용도나 절차에 대하여 궁금한 점이 있으면 당사 웹 사이트(www.neogen.com)를 방문하거나 현지 Neogen 또는판매업체로 문의하십시오.

8부록 A. 시험 계획서 중단: 열처리된 용해물 보관 및 재시험
1. 열처리된 용해물을 보관하려면 깨끗한 캡으로 용해 튜브를 다시 씌웁니다(Lysis 섹션 4.5 참조).

KO （한국어）2. 2-8°C에서 최대 72시간 동안 보관합니다.

3. 2-3번 뒤집어서 혼합하여 보관된 시료를 증폭하도록 준비합니다.
4. 튜브의 캡을 벗깁니다.

5. Neogen 분자 검출 히팅 블록 인서트에 혼합된 용해물 튜브를 놓고 100±1°C에서 5±1분 간 가열합니다.

6. Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 히팅 블록에서 제거하고 Neogen 분자 검출 냉각 블록 인서트에 최소 5분, 최대 10분냉각시킵니다.

7. 위에서 상세히 설명한 증폭 섹션의 프로토콜을 계속합니다.

참조:

1. 미국 식품의약국 박테리아 분석 매뉴얼(BAM) 29장, 2012년 3월

2. ISO 22964:2017 식품 사슬의 미생물학 -- 크로노박터 종의 수평 검출법

3. 미국 식품의약국. 미 연방 규정, 타이틀 21, 파트 58. 비임상 실험 연구에 대한 우수 실험실 기준.

4. ISO/IEC 17025:2017. 시험 및 캘리브레이션 실험실 역량에 대한 일반 요구 사항.

5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. 식품 및 동물 사료류의 미생물학 - 미생물학적 조사를 위한 일반 요건 및 지침.

6. 설치 적격성 평가(IQ)/작동 적격성 평가(OQ) Neogen® 분자 검출 시스템. 본 문서의 사본을 얻으려면 Neogen Food Safety담당자에게 문의하십시오.
7. ISO 6887-5:2010. 식품 및 동물 사료류의 미생물학 – 미생물학적 시험을 위한 시험 시료, 초기 현탁액 및 십진희석법 준비 -파트 5: 우유 및 유제품 준비 관련 특수 규정

8. ISO 6887-4:2017. 식품 및 동물 사료류의 미생물학 – 미생물학적 시험을 위한 시험 시료, 초기 현탁액 및 십진희석법 준비 -파트 4: 기타 제품 준비 관련 특수 규정.
9. ISO 16140-2:2016. 식품 사슬의 미생물학 – 방법 검증 – 파트 2: 참조 방법에 대한 대체(독점) 방법 검증 프로토콜.
위에 열거된 표준 방법의 최신 버전을 참고하십시오.

기호 설명

info.neogen.com/symbols

9Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A

ID(Bahasa Indonesia)
Tanggal Penerbitan: 2024-01

Petunjuk Produk
Deteksi Molekuler 2 - untuk Pengujian Cronobacter
Deskripsi Produk dan Maksud Penggunaan

Neogen® Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter digunakan dengan Sistem Deteksi Molekuler Neogen®
untuk mendeteksi Cronobacter secara cepat dan spesifik, dalam sampel makanan yang diperkaya, sampel lingkungan
pemrosesan pakan dan makanan.
Neogen Deteksi Molekuler untuk Pengujian menggunakan amplifikasi isotermal termediasi loop untuk menguatkan
secara cepat rangkaian asam nukleat dengan kekhususan dan kepekaan tinggi, dikombinasikan dengan bioluminesens
untuk mendeteksi amplifikasi. Hasil yang dianggap positif dilaporkan dalam waktu nyata sedangkan hasil yang negatifakan ditampilkan setelah pengujian selesai. Hasil yang diduga positif harus dikonfirmasi menggunakan metode pilihan
atau yang sesuai dengan peraturan setempat(1, 2).
Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter dimaksudkan untuk penggunaan dalam lingkunganlaboratorium oleh tenaga profesional terlatih dalam teknik laboratorium. Neogen tidak mendokumentasikan penggunaan
produk ini dalam industri selain makanan atau minuman. Misalnya, Neogen tidak mendokumentasikan produk ini untuk
menguji sampel farmasetikal, kosmetik, sampel klinis atau veteriner. Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian
Cronobacter belum dievaluasi untuk semua produk makanan, pemrosesan makanan, protokol pengujian atau semua
strain bakteri yang mungkin ada.
Seperti semua metode uji, sumber, formulasi dan kualitas medium pengayaan bisa memengaruhi hasil. Faktor
seperti metode pengambilan sampel, protokol pengujian, penyiapan sampel termasuk homogenisasi dan pencampuran,penanganan, dan teknik laboratorium juga dapat memengaruhi hasil. Neogen merekomendasikan untuk melakukan
evaluasi metode termasuk medium pengayaan, dalam lingkungan pengguna dengan menggunakan sejumlah sampel
yang memadai dengan uji makanan dan/atau sampel lingkungan dan mikroba tertentu untuk memastikan bahwa metodememenuhi kriteria pengguna.
Neogen telah mengevaluasi Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter dengan medium pengayaan
ISO Air Pepton Berpenyangga.
Instrumen Deteksi Molekuler Neogen® dimaksudkan untuk digunakan pada sampel yang telah mendapatkan perlakuan
pemanasan selama tahap pengujian lisis, yang dirancang untuk mematikan organisme yang ada di dalam sampel
tersebut. Sampel yang belum mendapatkan perlakuan pemanasan dengan benar selama tahap pengujian lisis dapat
dianggap sebagai potensi bahaya biologis dan TIDAK boleh dimasukkan ke dalam Instrumen Deteksi Molekuler Neogen.
Penguji Keamanan Makanan Neogen sesuai dengan sertifikasi ISO (International Organization for Standardization) 9001
dalam hal desain dan manufaktur.
Kit uji Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter berisikan 96 tes, diuraikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Komponen Neogen Deteksi Molekuler untuk pengujian
Alat

Identifikasi

Kandungan

Komentar

Larutan Lisis Neogen (LS)

Larutan merah muda 96 (12 strip kali 8dalam tabung bening tabung)

580 μL LS per tabung

Tersusundalam rakdan siap
digunakan

Tabung Reagen Neogen®
Deteksi Molekuler 2 - untuk
pengujian Cronobacter

Tabung berwarna
oranye-merah

96 (12 strip kali 8tabung)Campuran amplifikasiSiap
dan deteksi spesifik
digunakanterliofilisasi

Kapsul tambahan

Kasul oranye-merah

96 (12 strip kali 8 kapsul)

Kontrol Reagen Neogen®
(RC)

Tabung flip-toptransparan

16 (2 kantung dari 8
tabung tersendiri)®

Jumlah1

SiapdigunakanCampuran kontrol
DNA, amplifikasi dan
deteksi terliofilisasi

Siapdigunakan

ID(Bahasa Indonesia)

Kontrol Negatif, tidak disediakan dalam kit, merupakan medium pengayaan steril, yaitu BPW ISO. Jangan gunakan air
sebagai Kontrol Negatif.

Keselamatan

Pengguna harus membaca, mengerti dan mengikuti semua informasi keselamatan dalam petunjuk untuk Sistem Deteksi
Molekuler Neogen dan Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter. Simpanlah petunjuk keselamatan
untuk referensi mendatang.
PERINGATAN: Menandakan situasi berbahaya, yang, apabila tidak dihindari, dapat menyebabkan kematian ataucedera serius dan/atau kerusakan harta benda.
PERHATIAN:

Menandakan situasi yang berpotensi berbahaya yang, apabila tidak dihindari, dapat menyebabkan
kerusakan harta benda.

W PERINGATANJangan menggunakan Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter untuk mendiagnosis kondisi
manusia atau hewan.
Pengguna harus melatih personelnya dalam teknik pengujian yang benar: Misalnya, Praktik Laboratorium yangBaik(3), ISO/IEC 17025(4), atau ISO 7218(5).
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan hasil yang negatif salah yang dapat menyebabkan pelepasan
produk yang terkontaminasi:• Patuhi protokol dan lakukan pengujian dengan tepat seperti yang tercantum dalam petunjuk produk.
• Simpan Neogen Deteksi Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter sesuai yang tercantum pada kemasan
dan petunjuk produk.
• Selalu gunakan Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter sebelum tanggal kedaluwarsa.
• Gunakan Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter dalam sampel makanan dan sampel
lingkungan pemrosesan pakan yang sudah divalidasi secara internal atau oleh pihak ketiga.
• Gunakan Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter hanya pada permukaan, sanitiser, protokol
dan strain bakteri yang telah divalidasi secara internal atau oleh pihak ketiga.
• Untuk sampel lingkungan yang berisi Penyangga Penetral dengan kompleks aril sulfonat, lakukan pelarutan 1:2
sebelum pengujian (1 perbandingan sampel dilarutkan dengan 1 perbandingan agar pengaya steril). Opsi lain adalah
mentransfer 10 μL pengayaan NB ke dalam tabung Larutan Lisis Neogen. Produk Penanganan Sampel Neogen®
yang memuat Penyangga Penetral dengan kompleks aril sulfonat: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G,
HS10NB, HS10NB2G, dan HS2410NB2G. Protokol ini telah diuji selama studi NF Validation.
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan paparan terhadap bahan kimia dan bahaya biologis:• Lakukan pengujian patogen di laboratorium yang memiliki peralatan lengkap di bawah kontrol personel yang telah
terlatih. Media pengayaan terinkubasi dan perlengkapan atau permukaan yang telah bersentuhan dengan media
pengayaan terinkubasi dapat mengandung patogen pada tingkat yang cukup untuk menimbulkan risiko bagi
kesehatan manusia.
• Selalu patuhi praktik keselamatan standar laboratorium, termasuk memakai peralatan pelindung yang benar danpelindung mata saat menangani reagen dan sampel yang terkontaminasi.
• Hindari kontak dengan isi media pengayaan dan tabung reagen setelah amplifikasi.
• Buang sampel yang diperkaya dan limbah terkontaminasi yang terkait sesuai dengan standar lokal/regional/nasiona/industri yang berlaku.
• Jangan mengatur suhu pada alat pemanas melebihi batas yang direkomendasikan.
• Jangan melebihi waktu pemanasan yang direkomendasikan.
• Gunakan termometer yang dikalibrasi dan tepat untuk memverifikasi suhu Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler
Neogen® (misalnya, termometer yang dimasukkan sebagian atau termometer digital ganda, bukan termometer yangdimasukkan keseluruhan). Termometer harus ditempatkan pada lokasi yang ditentukan dalam Sisipan Blok Pemanas
Deteksi Molekuler Neogen.
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan kontaminasi silang saat persiapan pengujian:• Selalu gunakan sarung tangan (untuk melindungi pengguna dan mencegah timbulnya nuklease).
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan paparan terhadap cairan panas:• Jangan mengatur suhu pada alat pemanas melebihi batas yang direkomendasikan.
• Jangan melebihi waktu pemanasan yang direkomendasikan.

2

ID
•

(Bahasa Indonesia)

Gunakan termometer yang dikalibrasi dan tepat untuk memverifikasi suhu Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler
Neogen® (misalnya, termometer yang dimasukkan sebagian atau termometer digital ganda, bukan termometer yangdimasukkan keseluruhan). Termometer harus ditempatkan pada lokasi yang ditentukan dalam Sisipan Blok Pemanas
Deteksi Molekuler Neogen.

PERHATIAN
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan kontaminasi silang saat persiapan pengujian:• Ganti sarung tangan sebelum hidrasi pelet reagen.
• Dianjurkan untuk menggunakan ujung pipet halang aerosol ujung runcing (berfilter) dengan derajat molekuler biologi
yang steril.
• Gunakan ujung pipet yang baru setiap kali memindahkan sampel.
• Gunakan Praktik Laboratorium yang Baik untuk memindahkan sampel dari tabung pengayaan ke tabung lisis. Untuk
mencegah kontaminasi pipet, pengguna boleh memilih untuk menambahkan langkah perantara dalam proses
pemindahan. Misalnya, pengguna dapat memindahkan masing-masing sampel yang diperkaya ke dalam tabung steril.
• Gunakan stasiun kerja biologi molekuler yang memiliki lampu germisida, jika tersedia.
• Secara berkala bersihkan kontaminasi pada meja dan peralatan laboratorium (pipet, alat pembuka/penutup, dsb.)
dengan larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalam air) atau larutan penghilang DNA.
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan hasil yang positif salah:• Jangan pernah membuka tabung setelah amplifikasi.
• Buang tabung yang terkontaminasi dengan merendamnya ke dalam larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalamair) selama 1 jam dan jauhkan dari tempat persiapan pengujian.
• Jangan sekali-kali mengautoklaf tabung reagen setelah amplifikasi.
• Jika sampel diduga mengandung DNA Cronobacter dalam jumlah besar (yaitu DNA dari sel-sel Cronobacter yangsudah mati setelah melewati fase pelumpuhan/inaktivasi), pengayaan yang dianggap positif harus ditangani dengan
DNase sebelum langkah Lisis. Hubungi Perwakilan Neogen Anda untuk petunjuk tambahan. Protokol ini telah diujiselama studi NF Validation.
Baca Lembar Data Keselamatan untuk informasi tambahan dan peraturan setempat tentang pembuangan.
Apabila Anda memiliki pertanyaan yang spesifik tentang penerapan atau prosedur, silakan kunjungi situs web kami diwww.neogen.com atau hubungi perwakilan atau distributor Neogen setempat.

Tanggung Jawab Pengguna

Pengguna bertanggung jawab untuk memahami instruksi dan informasi produk. Kunjungi situs web kami diwww.neogen.com atau hubungi perwakilan atau distributor Neogen setempat untuk informasi selengkapnya.
Saat memilih metode pengujian, penting untuk diketahui bahwa faktor eksternal seperti metode pengambilan sampel,
protokol pengujian, penyiapan sampel termasuk homogenisasi dan pencampuran, penanganan, dan teknik laboratorium
dapat memengaruhi hasilnya.
Pengguna bertanggung jawab untuk memilih metode atau produk pengujian untuk mengevaluasi sejumlah sampel yang
memadai dengan matriks dan ketentuan mikrobial yang tepat untuk memastikan bahwa metode pengujian memenuhi
kriteria pengguna.
Pengguna juga bertanggung jawab untuk menentukan bahwa semua metode dan hasil pengujian memenuhi persyaratan
pelanggan dan pemasok.
Untuk semua metode pengujian, hasil yang diperoleh dari penggunaan produk Neogen Food Safety apa pun bukan
merupakan jaminan kualitas terhadap matriks atau proses yang diuji.
Untuk membantu pelanggan mengevaluasi metode untuk berbagai matriks, Neogen telah mengembangkan kit Kontrol
Matriks Deteksi Molekuler Neogen®. Jika diperlukan, gunakan Kontrol Matriks (KM) untuk menentukan apakah matriks
memengaruhi hasil Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter. Uji beberapa contoh sampel, yangmewakili matriks, yaitu sampel yang diperoleh dari sumber yang berbeda, selama periode validasi manapun bila
mengadopsi metode Neogen atau bila menguji matriks baru atau tidak dikenal atau matriks yang sudah mengalami
perubahan bahan mentah atau perubahan proses.
Matriks dapat didefinisikan sebagai suatu tipe produk dengan properti intrinsik seperti komposisi dan proses. Perbedaan
antara matriks bisa sama sederhananya dengan dampak yang ditimbulkan karena perbedaan tersebut dalam pemrosesan
atau presentasi, misalnya mentah vs. dipasteurisasi; segar vs. dikeringkan, dll.

3

ID

(Bahasa Indonesia)

Batasan Garansi / Penggantian Terbatas

KECUALI SEBAGAIMANA DITENTUKAN DI BAGIAN GARANSI TERBATAS UNTUK SETIAP KEMASAN PRODUK,NEOGEN TIDAK BERTANGGUNG JAWAB TERHADAP SEMUA GARANSI SECARA TERTULIS MAUPUN SECARATERSIRAT, TERMASUK NAMUN TIDAK TERBATAS PADA, JAMINAN KELAYAKAN JUAL ATAU KESESUAIAN UNTUKPENGGUNAAN TERTENTU. Apabila ada Produk Neogen Food Safety yang cacat, Neogen atau distributor resminya, sesuai
kebijakannya, akan mengganti atau membayar kembali harga pembelian produk. Penggantian ini ditawarkan kepada Anda
secara eksklusif. Silakan hubungi perwakilan Neogen Anda atau distributor resmi Neogen untuk pertanyaan lebih lanjut.

Batasan Pertanggungjawaban Neogen

NEOGEN TIDAK BERTANGGUNG JAWAB ATAS SEGALA BENTUK KEHILANGAN ATAU KERUSAKAN, BAIKKERUSAKAN SECARA LANGSUNG, TIDAK LANGSUNG, KHUSUS, INSIDENTAL MAUPUN KONSEKUENSIAL,TERMASUK NAMUN TIDAK TERBATAS PADA HILANGNYA KEUNTUNGAN. Bagaimanapun juga, sesuai teori hukum
mana pun, Neogen tidak bertanggung jawab melebihi dari harga pembelian produk yang dinyatakan sebagai cacat.

Penyimpanan dan Pembuangan

Simpanlah Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter pada suhu 2-8°C. Jangan dibekukan. Jauhkan
kit dari cahaya selama penyimpanan. Setelah membuka kit, periksa apakah kantung foil masih utuh. Jangan digunakanjika kantung tersebut rusak. Setelah dibuka, tabung reagen yang tidak digunakan harus selalu disimpan dalam kantung
yang dapat direkatkan kembali dan diberi penyerap kelembaban (desiccant) untuk menjaga stabilitas reagen terliofilisasi.
Simpan kantung yang telah dibuka pada suhu 2-8°C, selama tidak lebih dari 60 hari.
Jangan gunakan Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter setelah tanggal kedaluwarsa. Tanggal
kedaluwarsa dan nomor lot tercantum pada label di bagian luar kotak. Setelah penggunaan, medium pengayaan dan
tabung Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter berpotensi mengandung bahan patogen. Setelah
pengujian selesai, patuhi standar industri pembuangan limbah yang terkontaminasi yang berlaku saat ini. Baca Lembar
Data Keselamatan untuk informasi tambahan dan peraturan setempat tentang pembuangan.

Petunjuk Penggunaan

Patuhi semua petunjuk dengan saksama. kegagalan dalam mematuhinya dapat menyebabkan hasil tidak akurat.
Secara berkala bersihkan kontaminasi pada meja dan peralatan laboratorium (pipet, alat pembuka/penutup, dsb.)
dengan larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalam air) atau larutan penghilang DNA.
Pengguna harus menyelesaikan pelatihan kualifikasi operator (OQ) Sistem Deteksi Molekuler Neogen, sebagaimana
dijelaskan dalam dokumen “Protokol dan Instruksi Kualifikasi Pemasangan (IQ) / Kualifikasi Operasional (OQ) untuk
Sistem Deteksi Molekuler Neogen”(6).
Lihat Bagian “Instruksi Spesifik untuk metode tervalidasi” untuk persyaratan spesifik:
Tabel 3 untuk protokol pengayaan berdasarkan AOAC® Official Method of AnalysisSM 2018.01 dan Performance
TestedSM Nomor sertifikat 101703
Tabel 4 untuk protokol pengayaan sesuai dengan sertifikat NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
Pengayaan Sampel
Tabel 2, 3 atau 4 menyajikan panduan untuk protokol pengayaan untuk sampel makanan dan lingkungan.
Pengguna bertanggung jawab untuk memvalidasi protokol pengambilan sampel atau rasio pengayaan atau pengenceran
alternatif guna memastikan bahwa metode pengujian ini memenuhi kriteria pengguna.
Makanan, Bubuk Lingkungan, Debu, Apusan dan Spons
1. Ekuilibrasi medium pengayaan ke suhu ruangan sekitar (20-25°C) kecuali dinyatakan lain dalam protokol pengayaan(Lihat Tabel 2, 3, atau 4).
2. Campurkan media yang diperkaya dan sampel lalu homogenisasikan sepenuhnya dengan blender, stomaching, vorteks,atau tangan selama 2 ± 0,2 menit atau sampai semua gumpalan larut dan suspensi pengayaan homogen(7, 8).
a.

Faktor seperti penyiapan sampel termasuk homogenisasi dan pencampuran, penanganan, dan teknik
laboratorium juga dapat memengaruhi hasil.

b. Untuk sampel yang mengandung banyak partikel, disarankan untuk menggunakan kantung filter.
c.

Untuk matriks yang melayang di air dan sangat pekat (misalnya sereal, kanji), disarankan untuk melarutkan lagi(> 1:10) sampai viskositasnya berkurang atau tambahkan 1% (w/v) alpha-amylase steril ke BPW (ISO)(8).

d. Untuk sampel sereal berukuran besar, tambahkan bubuk seral secara perlahan ke dalam cairan dan seing diaduk
untuk mencegah gumpalan.
4

ID(Bahasa Indonesia)

3. Inkubasikan sebagaimana diuraikan dalam tabel protokol yang sesuai (Lihat Tabel 2, 3, dan 4).
Tabel 2. Protokol Pengayaan Umum
Matriks Sampel

UkuranSampel1

Suhu
Waktu
VolumeVolume Kaldu
Pengayaan
Pengayaan
AnalisisPengayaan1, 2(± 1°C)(jam)
SampelSusu formula bayi bubuk (PIF) dan bahanmentah seperti susu bubuk kering, kedelai
bubuk, bubuk whey, laktose, tepung beras danmaltodekstrin

1X gramsampel9X mL BPW
(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Bahan mentah seperti garam, mineral, asamamino, DHA (docosahexaenoic acid), dan vitamin

1X gramSampel/contoh

99X mL BPW(ISO) (1:100)

37

18-24

20 µL

Sampel lingkungan kering seperti debu,
apusan, debu hasil vakum

1X gramsampel9X mL BPW
(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Spons lingkungan dengan 10 mL Kaldu Letheen
atau Kaldu Penetral D/E

1 alatpengambil
sampel

90 mL BPW
(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

1. Neogen telah mengevaluasi Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter menggunakan rasio
pengenceran dalam Tabel 2 hingga 300 g. Pengguna bertanggung jawab untuk memvalidasi protokol atau rasio
pengenceran alternatif guna memastikan bahwa metode tersebut memenuhi kriteria pengguna.
2. Gunakan BPW yang telah dihangatkan (ISO) jika volume kaldu pengayaan > 300 mL (misalnya sampel > 30 gram).
Instruksi Spesifik untuk Metode Divalidasi
AOAC® Official Method of AnalysisSM (OMA) 2018.01
AOAC® Performance TestedSM (PTM) Certificate #101703

Dalam program AOAC Research Institute OMASM dan PTMSM, Neogen Deteksi Molekuler 2 untuk Pengujian Cronobacter diketahui sebagai metode yang efektif untuk mendeteksi Cronobacter. Matriks yang diuji dalam kajian
ditunjukkan dalam Tabel 3.
Tabel 3. Protokol pengayaan berdasarkan AOAC® OMASM 2018.01 dan PTMSM 101703
Matriks Sampel

UkuranSampelVolume Kaldu
Pengayaan1

Suhu
Pengayaan(± 1°C)

Waktu
Pengayaan(jam)VolumeAnalisis
SampelSusu Formula Bayi Bubuk dan Sereal
Bayi Bubuk

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Sereal Bayi Bubuk nonprobioti

300 g

2700 mL BPW (ISO)(1:10)

Prapemanasan
37

18-24

20 µL

Susu Formula Bayi Bubuk dan Sereal
Bayi Bubuk dengan probiotik

300 g

2700 mL BPW (ISO) +10 mg/L Vancomycin

Prapemanasan
37

22-24

20 µL

Laktosa

10 g

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

1 alatpengambil
sampel

90 mL BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Spons lingkungan dengan 10 mL
Kaldu Penetral D/E

1. Gunakan BPW ISO yang telah dihangatkan jika volume kaldu pengayaan > 300 mL.

5ID(Bahasa Indonesia)

NF VALIDATION dengan AFNOR Certification

3M 01/20-03/18

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Untuk informasi selengkapnya mengenai berakhirnya validitas, silakan merujuk pada sertifikat NF VALIDATION yangtersedia pada situs web yang disebutkan di atas.
Metode sertifikasi NF VALIDATION tunduk pada ISO 16140-2(9) dibandingkan dengan ISO 22964.
Ruang Lingkup validasi: Susu formula bayi bukuk dan sereal bayi dengan dan tanpa probiotik, bahan mentah, dansampel lingkungan.
Persiapan sampel: Sampel harus disiapkan sesuai dengan EN ISO 22694(2) dan EN ISO 6887(7, 8).
Versi perangkat lunak: Lihat sertifikat.
Tabel 4. Protokol Pengayaan Sesuai dengan Metode Sertifikasi NF VALIDATION 3M 01/20-03/18
Matriks Sampel
•
•
•

•

•

UkuranSampelVolume
Kaldu
Pengayaan1

Suhu
Pengayaan(± 1°C)

Waktu
Pengayaan(jam)VolumeAnalisis
SampelTitik Interupsi yang
Disarankan2, 3

Susu formula bayi
bubukSereal bayi bubuk
Bahan seperti susu
bubuk kering, bubuk
kedelai, bubuk
gandum, laktosa,
telung beras,
maltodekstrin
Sampel lingkungankering seperti debu,
apusan, debu hasil
vakum,

10 gSpons, air bilas, lap

1 alatpengambil
sampel atau
10 mL

Agar pengayaan
atau sampel lisat
dapat disimpan
pada suhu 2-8°C
sampai selama 72
jam

30-300 g

BPW (ISO)(1:10)

37

18-24

20 µL

Agar pengayaan
atau sampel lisat
dapat disimpan
pada suhu 2-8°C
sampai selama 72
jam

30-300 g

BPW (ISO)+ 10 mg/L
vancomycin(1:10)

37

22-24

20 µL

Nihil

Susu formula bayi bubuk
dan sereal bayi bubuk(nonprobiotik)

Susu formula bayi bubuk
dan sereal bayi bubuk(termasuk probiotik)

90 mL BPW
(ISO) (1:10)

37

18-24

20 µL

Agar pengayaan
atau sampel lisat
dapat disimpan
pada suhu 2-8°C
sampai selama 72
jam

1. Gunakan BPW yang telah dihangatkan (ISO) jika volume kaldu pengayaan > 300 mL (misalnya sampel > 30 gram).
6

ID(Bahasa Indonesia)

2. Setelah mengeluarkan kaldu pengayaan dari tempat penyimpanan, lakukan kembali pengujian mulai dari Langkah 1
pada bagian Lisis. Setelah mengeluarkan sampel lisat dari tempat penyimpanan, lanjutkan pengujian dari Langkah 7dalam bagian Lisis.
3. Lihat Apendiks A untuk pengujian ulang lisat tersimpan yang telah dipanaskan.
Persiapan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen®
1. Basahi kain atau handuk sekali pakai dengan larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalam air) dan seka Baki
Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen.
2. Bilas Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen dengan air.
3. Gunakan handuk sekali pakai untuk menyeka Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen hingga kering.
4. Pastikan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen dalam kondisi kering sebelum digunakan.
Persiapan Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen®
Tempatkan Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen langsung pada meja laboratorium: Baki Blok Pendingin
Deteksi Molekuler Neogen tidak digunakan. Gunakan blok pada suhu ruangan laboratorium (20-25°C).
Persiapan Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen®
Letakkan Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen dalam unit pemanas blok ganda kering. Nyalakan unit
pemanas blok kering dan atur suhu agar Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen dapat mencapai danmempertahankan suhu 100 ± 1°C.
CATATAN: Tergantung pada unit pemanas, tunggu selama sekitar 30 menit hingga Sisipan Blok Pemanas Deteksi
Molekuler Neogen mencapai suhu yang diinginkan. Gunakan termometer yang dikalibrasi dan tepat (misalnya,
termometer yang dimasukkan sebagian, termometer digital ganda, bukan termometer yang dimasukkan keseluruhan)yang diletakkan di lokasi yang ditentukan, lakukan verifikasi bahwa Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen
berada pada 100 ± 1°C.
Persiapan Instrumen Deteksi Molekuler Neogen®
1. Buka Perangkat Lunak Deteksi Molekuler Neogen® kemudian login. Hubungi perwakilan Neogen Food Safety Anda
guna memastikan Anda memiliki versi perangkat lunak paling mutakhir.
2. Hidupkan Instrumen Deteksi Molekuler Neogen.
3. Buat atau edit proses dengan data untuk setiap sampel. Baca Panduan Pengguna Sistem Deteksi Molekuler Neogen
untuk keterangan lengkap.
CATATAN: Instrumen Deteksi Molekuler Neogen harus mencapai dan tetap berada pada status Siaga sebelum
memasukkan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen dengan tabung reaksi. Tahap pemanasan ini
memerlukan waktu sekitar 20 menit dan ditandai dengan nyala lampu ORANYE pada bilah status instrumen. Setelah
instrumen siap digunakan, bilah status akan berubah menjadi HIJAU.
Lisis
Lepaskan bagian bawah Rak Larutan Lisis Neogen dengan obeng sebelum meletakkannya dalam Sisipan Blok Pemanas
Deteksi Molekuler Neogen.

1. Biarkan tabung Larutan Lisis Neogen hangat dengan menyetel rak pada suhu kamar (20-25°C) semalam (16-18 jam).
Alternatif untuk menyeimbangkan tabung Larutan Lisis Neogen pada suhu kamar adalah meletakkan tabung Larutan
Lisis Neogen di meja laboratorium sedikitnya selama 2 jam, inkubasi tabung Larutan Lisis Neogen dalam inkubator
37 ± 1°C selama 1 jam atau letakkan di dalam pemanas blok ganda kering selama 30 detik pada suhu 100 ± 1°C.
2. Balikkan tabung dalam kondisi tertutup untuk mencampur. Lanjutkan ke langkah berikutnya dalam waktu 4 jam
setelah dibalik.

7

ID(Bahasa Indonesia)

3. Buang kaldu pengayaan dari inkubator.
4. Satu tabung Larutan Lisis Neogen dibutuhkan untuk setiap sampel dan sampel NC (media pengayaan steril).
4.1 Strip tabung Larutan Lisis Neogen dapat dipotong sesuai jumlah yang diinginkan. Pilih jumlah tabung Larutan Lisis
Neogen tersendiri atau strip 8 tabung yang diperlukan. Letakkan tabung Larutan Lisis Neogen pada rak kosong.
4.2 Untuk menghindari kontaminasi silang, buka tutup satu strip tabung Larutan Lisis Neogen satu per satu dan
gunakan ganti ujung pipet untuk setiap tahap pemindahan.
4.3 Pindahkan sampel yang diperkaya ke tabung Larutan Lisis Neogen sesuai petunjuk di bawah ini:
Pindahkan setiap sampel yang diperkaya ke tabung Larutan Lisis Neogen tersendiri terlebih dahulu. Pindahkan
NC paling akhir.
4.4 Gunakan Alat Penutup/Pembuka Deteksi Molekuler Neogen®–Lisis untuk membuka tabung Larutan Lisis
Neogen - satu per satu strip.
4.5 Buang penutup tabung Larutan Lisis Neogen – Jika lisat akan disimpan untuk pengujian ulang, letakkan penutup
ke dalam wadah bersih untuk penggunaan ulang setelah lisis.
4.5.1. Untuk memroses lisat yang disimpan, lihat Apendiks A.
4.6 Kocok kantong pengayaan sebelum mengumpulkan sampel dari sisi yang difilter ketika bekerja dengan sampel
pekat.
4.7 Pindahkan 20 µL sampel ke dalam tabung Larutan Lisis Neogen kecuali diindikasikan lain dalam tabel protokol.
5. Ulangi langkah 4.4 hingga 4.7 sampai masing-masing sampel telah ditambahkan pada tabung Larutan Lisis Neogenyang sesuai dalam strip.

6. Setelah semua sampel dipindahkan, transfer 20 µL NC (media pengayaan steril, misalnya BPW) ke dalam tabung
Larutan Lisis Neogen. Jangan gunakan air sebagai NC.
7. Pastikan bahwa suhu Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen berada pada 100 ± 1°C.
8. Letakkan rak tabung Larutan Lisis Neogen yang tidak tertutup di dalam Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler
Neogen lalu panaskan selama 15 ±1 menit. Selama pemanasan, Larutan Lisis Neogen akan berubah dari merah
muda (dingin) menjadi kuning (panas).
Sampel yang belum mendapatkan perlakuan pemanasan dengan benar selama tahap pengujian lisis dapat dianggap
sebagai potensi bahaya biologis dan TIDAK boleh dimasukkan ke dalam Instrumen Deteksi Molekuler Neogen.
9. Keluarkan rak tabung Larutan Lisis Neogen yang tidak tertutup dari Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen lalu
biarkan sampai dingin di dalam Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen selama minimal 5 menit dan
maksimal 10 menit. Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen, yang digunakan pada suhu kamar tanpa Baki
Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen®, harus diletakkan langsung di meja laboratorium. Ketika dingin, larutan
Neogen lisis akan kembali berwarna merah muda.
10. Keluarkan rak tabung Larutan Lisis Neogen dari Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen.
00:15:00

99–101 ºC

20–25 ºC

00:05:00

8

ID(Bahasa Indonesia)

Amplifikasi
1. Satu Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter diperlukan untuk setiap sampel dan NC.
1.1 Strip tabung SR dapat dipotong sesuai jumlah tabung yang diinginkan. Pilih jumlah Tabung Reagen Neogen
Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter atau strip 8 tabung yang dibutuhkan.
1.2 Letakkan Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter di rak yang kosong.
1.3 Jangan sampai mengguncang pelet reagen di bagian bawah tabung.
2. Pilih satu Tabung Kontrol Reagen Neogen lalu letakkan di rak.
3. Untuk menghindari kontaminasi silang, buka tutup satu strip Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk
pengujian Cronobacter satu per satu dan gunakan ujung pipet baru untuk setiap tahap pemindahan.
4. Pindahkan setiap lisat ke Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter dan Tabung
Kontrol Reagen Neogen sebagaimana dijelaskan di bawah:
Transfer setiap sampel lisat ke masing-masing Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian
Cronobacter terlebih dahulu diikuti dengan NC. Basahi Tabung Kontrol Reagen Neogen paling akhir.
5. Gunakan Alat Penutup/Pembuka Deteksi Molekuler Neogen® - Reagen untuk membuka Tabung Reagen Neogen
Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter strip demi strip. Buang penutup.
5.1 Pindahkan 20 µL sampel lisat dari bagian atas 1/2 dari cairan (hindari pengendapan) dalam tabung Larutan
Lisis Neogen ke dalam Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter yangterkait. Semprotkan dengan kemiringan tertentu sehingga tidak mengganggu pelet. Campurkan dengan cara
menyedot dan menyemprotkan perlahan-lahan sebanyak 5 kali.
5.2 Ulangi langkah 5.1 sampai sampel lisat tersendiri telah ditambahkan ke Tabung Reagen Neogen Deteksi
Molekuler 2 untuk Pengujian Cronobacter dalam strip.
5.3 Tutup Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 - untuk pengujian Cronobacter dengan tutup tambahanyang tersedia dan gunakan sisi bulat pada Reagen-Alat Penutup/Pembuka Deteksi Molekuler Neogen untuk
memberikan tekanan dengan bergerak maju-mundur guna memastikan bahwa tutup sudah terpasang rapat.
5.4 Ulangi langkah 5.1 hingga 5.3 sesuai keperluan, sesuai jumlah sampel yang akan diuji.
5.5 Setelah semua sampel lisat dipindahkan, ulangi 5.1 sampai 5.3 untuk mentransfer 20 µL lisat NC ke dalam
Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 untuk Pengujian - Cronobacter.
5.6 Transfer 20 µL lisat NC ke dalam Tabung Kontrol Reagen Neogen. Semprotkan dengan kemiringan tertentu
sehingga tidak mengganggu pelet. Campurkan dengan cara menyedot dan menyemprotkan perlahan-lahan
sebanyak 5 kali.
6. Masukkan tabung tertutup ke dalam Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen yang bersih dan yang telahdidekontaminasi. Tutup dan segel tutup Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen.

7. Periksa dan konfirmasi proses yang telah dikonfigurasi di Perangkat Lunak Deteksi Molekuler Neogen.
8. Klik tombol Start di perangkat lunak dan pilih instrumen yang akan digunakan. Tutup instrumen yang dipilih akan
membuka secara otomatis.
9. Masukkan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen ke Instrumen Deteksi Molekuler Neogen dan tutup
dengan rapat untuk memulai pengujian. Hasilnya akan ditampilkan setelah 60 menit, meskipun hasil positif dapat
terdeteksi lebih cepat.
10. Setelah pengujian selesai, keluarkan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen dari Instrumen Deteksi
Molekuler Neogen dan buang tabung dengan merendamnya ke dalam larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:vdalam air) selama 1 jam dan jauhkan dari area persiapan untuk pengujian.
9

ID(Bahasa Indonesia)

PERHATIAN: Untuk meminimalkan risiko yang positif salah karena kontaminasi silang, jangan membuka tabung
reagen yang berisi DNA hasil amplifikasi. Ini termasuk Tabung Reagen Neogen Deteksi Molekuler 2 untuk Pengujian- Cronobacter, Tabung Kontrol Reagen Neogen, dan Tabung Kontrol Matriks Neogen. Buang tabung reagen yangtersegel dengan merendamnya ke dalam larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalam air) selama 1 jam dan jauhkan
dari tempat persiapan pengujian.

Hasil dan Interpretasi

Algoritma menginterpretasikan kurva keluaran cahaya yang dihasilkan dari deteksi amplifikasi asam nukleat. Hasil
dianalisis secara otomatis oleh perangkat lunak dan diberi kode warna berdasarkan hasil tersebut. Hasil yang Positif atau
Negatif ditentukan dari analisis sejumlah parameter kurva khusus. Hasil yang dianggap positif dilaporkan dalam waktu
nyata sedangkan hasil Negatif dan perlu Pemeriksaan akan ditampilkan setelah pengujian selesai.
CATATAN: Sampel yang negatif tidak akan memberikan hasil pembacaan nol karena sistem dan reagen amplifikasi
Neogen Deteksi Molekuler 2 untuk Pengujian Cronobacter memiliki pembacaan unit cahaya relatif (RLU) "latar belakang".
Konfirmasi• Konfirmasi hasil sesuai dengan Metode Sertifikasi NF VALIDATION
Dalam konteks NF VALIDATION, semua dugaan pengayaan positif harus dikonfirmasi dengan konfirmasi metodereferensi berikut(2), dimulai dengan transfer dari pengayaan primer (BPW ISO atau BPW ISO dengan suplemen 10 mg/L
vancomycin).
•

Protokol konfirmasi lainnya

Pngayaan yang dianggap positif harus dikonfirmasi sesuai dengan standar prosedur pengoperasian laboratorium atau
dengan mematuhi metode konfirmasi rujukan yang sesuai(1,2), dimulai dengan memindahkan dari pengayaan primer(BPW ISO atau BPW ISO dengan suplemen 10 mg/L vancomycin) hingga ke media pengayaan sekunder, dilanjutkan
dengan pengusapan dan konfirmasi isolat menggunakan metode biokimia, serologi, dan/atau molekuler.
Meskipun jarang terjadi, jika output cahaya tidak normal, algoritma akan memberi label perlu Pemeriksaan. Neogen
menyarankan pengguna mengulang pengujian untuk sampel yang perlu Pemeriksaan. Jika hasil tetap menunjukkan
perlu Pemeriksaan, lanjutkan ke pengujian konfirmasi dengan menggunakan metode pilihan Anda atau sebagaimana
ditentukan oleh peraturan setempat(1,2).
Dalam hal terjadi hasil yang tidak sesuai (dianggap positif dengan Neogen Deteksi Molekuler 2 untuk Pengujian
Cronobacter, yang tidak dikonfirmasi oleh salah satu cara yang diuraikan di atas), laboratorium harus mematuhi prosedur
operasi standar yang ditetapkan untuk melaporkan hasilnya.
Apabila Anda memiliki pertanyaan yang spesifik tentang penerapan atau prosedur, silakan kunjungi situs web kami diwww.neogen.com atau hubungi perwakilan atau distributor Neogen setempat.
Apendiks A. Interupsi Protokol: Penyimpanan dan pengujian ulang lisat yang dipanaskan
1. Untuk menyimpan lisat yang dipanaskan, tutup ulang tabung Lisis dengan penutup bersih (lihat bagian Lisis, 4.5)
2. Simpan pada 2 hingga 8°C sampai 72 jam.
3. Siapkan sampel yang disimpan untuk amplifikasi dengan membalik 2-3 kali untuk menyampur.
4. Lepas penutup tabung.
5. Letakkan tabung lisat campuran pada Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen dan panaskan pada suhu
100 ±1°C selama 5 ±1 menit.
6. Lepaskan rak tidak tertutup Tabung Larutan Lisis Neogen dari blok pemanasan dan biarkan dingin dalam Sisipan
Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen paling sedikit 5 menit dan maksimum 10 menit.
7. Lanjutkan protokol pada bagian Amplifikasi yang dijelaskan di atas.

10

ID

(Bahasa Indonesia)

Referensi:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual (BAM) Ch. 29; MAR 2012
2. ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain -- Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice forNonclinical Laboratory Studies.
4. ISO/IEC 17025:2017. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218:2007/Amd. 1:2013. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance
for microbiological examination.
6. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) Neogen® Molecular Detection System. Contact your
Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 6887-5:2010. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination-- Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk
products.
8. ISO 6887-4:2017. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination -- Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous
products.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation ofalternative (proprietary) methods against a reference method.
Rujuk ke versi terbaru metode standar yang dicantumkan di atas.

Penjelasan Simbol

info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
FS00879A