③錦鯉の穴あき病防除対策に関する研究
新潟県内水面水産試験場・錦鯉穴あき病研究グループ 病理環境課長 的山央人
【背景と目的】1996 年末から養殖錦鯉に発生した穴あき病は、体表に潰瘍患部を形成し、錦鯉の商品価値を下げるとともに、高い致死性によって錦鯉産業に大きな被害を与えた。従来使用されていた抗菌剤が効かず、感染力が非常に強かったため「新しいタイプの穴あき病」と称された。本研究は、錦鯉における穴あき病の診断法を提唱し、防疫対策の基礎となる保菌検査法の確立等、穴あき病防除対策を総合的に指導することを目的に技術開発行った。
【内 容】
本症の原因は非定型 Aeromonas salmonicida であることを確認したが、本菌は雑菌の多い体表患部のみに局在し、培地による単離が難しい上に発育が極めて遅いため早期診断ができなかった。
対策として、せっそう病のプライマーを錦鯉に応用し PCR 法による迅速確定診断法を確立した。また、本症の治療は獣医師の処方のもと動物用医薬品が投与されていたが、水産試験場での対応･指導を可能とするため、水産用医薬品の薬剤感受性を調査し、フロルフェニコールの経口投与が極めて効果的であることを証明した。また、経口投与のできない状況に対処するため、観賞魚に利用している薬浴剤により本症を軽減できることを確認した。
一方で、池内での水平感染の最大の要因が病魚との接触であることを確認し、症状のある魚を隔離することが、まん延防止策として非常で有効であることを明らかにした。さらに、愛好家や生産者の池で由来の異なる魚が混じりあう錦鯉飼育において、より効果的な防疫対策を実施するため、外見上異状のない魚の体表粘液中から本菌を検出する方法を開発し、KHV や SVC と同様の防疫対策を施せるようにした。
【成果と波及効果】
一連の技術開発は、錦鯉養殖における穴あき病の被害防止に大きく貢献してきた。特にフロルフェニコールの経口投与による治療は錦鯉業界に普及し、本症の治療の一助として効果をあげている。また、市場流通や外国への活魚輸出において、錦鯉の衛生証明が求められている中で、すでに定着している KHV、SVC 等の検査と並ぶツールとして、体表粘液からの原因菌検出法の活用が期待される。

59

地方水試の役割・できること…錦鯉の特殊性
現場の声を聞く

魚病の発生
原因究明

検査法の開発･改良治療･予防法の開発

錦鯉の穴あき病防除対策に関する研究

地方水試…予算・技術に限度

その他のアプローチ

飼育環境
育種等…

できることをやる！

錦鯉…

新潟県内水面水産試験場 病理環境課
錦鯉穴あき病研究グループ
代表者 的山 央人【背景】

生産者のみならず愛好家も視野に入れた技術開発が必要

新しいタイプの穴あき病が抱える問題点…

穴あき病とは？

＜穴あき病＞〇コイやキンギョなどの体表に潰瘍患部が形成される疾病。
〇1971年頃、キンギョを中心に、フナ、コイの養魚場等で発生。
〇原因は非定型Aeromonas salmonicida（Elliott andShotts,1980b)。
〇1975年頃をピークにその後下火に。

●強い感染力・高い死亡率●発生すると被害甚大

患部からのみ原因菌検出（菌分離・PCR）

患部がないと検査できない＜新しいタイプの穴あき病＞〇1996年末、ニシキゴイの養魚場を中心に発生。
〇これまで治療に用いられていた水産用抗菌剤に効果がないことから、「新しいタイプの穴あき病」と呼称。
〇原因は非定型A. salmonicida。ただし、キンギョの穴あき病とは異なる菌型（加来ら(1999)、的山ら(1999))。

検査に１～２日必要

検査は体を傷つける:破壊検査（患部の切り出し）
未発症魚（患部なし） 検査不可
KHV病のような検査態勢（ｻｰﾍﾞｲﾗﾝｽ）できず
感染未発症魚の出荷 出荷先（愛好家）での発症 4

穴あき病は、コイ科魚類で発生する非定型A.salmonicidaによる感染症【目的】

検査は可能だが課題あり

新潟県内水面水産試験場の役割分離された菌の性状①〇錦鯉に関する指導を行っている機関は、国内でも非常に少ないため、県内の生産者、販売者のみならず、全国の愛好家からの相談への対応が必要。

県内で発生した穴あき病の菌型と薬剤耐性の傾向（菌分離に成功した31件のみの結果）
菌型
オキソリン酸
フロルフェニコール
年度
ﾆｼｷｺﾞｲ型 ﾏｺﾞｲ型
感受性 耐性
感受性 耐性
1996
1997
61998
1999
2000-2003
20042005
2006
2007-2008
2009
2010
2011
2012
2013
2014
2015
2016-2017201820192020〇生産者から愛好家まで、様々な飼育形態が想定される中で、穴あき病対策のための手段を多く用意し、状況に応じた指導が必要。
◎生産者や愛好家が「穴あき病に対する防疫」を行うための方法の提示が必要。

12161252424222

1122522511 111 1

1 11 11112251
1 1221 1
ニシキゴイ型
マゴイ型

11

ニシキゴイ型／マゴイ型は加来ら、1999年により分類試験場としてこれらの課題に対応することを目的とする。

これらの検査結果をもとに感染実験により対策を検証

160分離された菌の性状②

実施した感染試験の基本的な方法

培養温度別のコロニー出現比（対20℃比）
15℃

20℃

30℃

32℃

34℃

T1031株

1.43

1.000.710.41

ndB10731株

1.201.00

0.970.80nd※ｎd:コロニーの形成なし

10尾収容した２Lの容器内に非定型A.salmonicdia を0.1～0.5mg/Lの濃度で投入
1hr 浸漬後

メチレンブルー処理による消毒効果
メチレンブルー処理濃度

T141株
二酸化塩素処理による消毒効果

0.1ｐpm

1ppm

10ｐpm

46.67%

99.60%>99.999%※処理時間は1hr

二酸化塩素処理濃度
B10731株

0.06ppm

0.6ppm6ppm

92.55%>99.999%>99.999%

供試魚
ニシキゴイ当才魚30～40g※処理時間は1hr

浸漬液は廃棄し、供試魚のみ ・水温設定がないかぎり、水温は20℃に維持。
投入・上面濾過装置付き60cmガラス水槽

これらの試験結果をもとに感染実験により対策を検証【成果】

水温が感染に与える影響について

病魚の隔離による水平感染の防除

仕切り無（感染魚と接触有）

仕切り有（感染魚と接触無）

互いの接触を防ぐ簡易隔離により水平感染の防除が可能。

穴あき病は34℃では感染しない。

飼育用水の消毒による穴あき病予防技術の開発

水産用抗菌剤を用いた治療技術の開発①
弱感染（菌体0.5mg/L浸漬）

強感染（菌体2.5mg/L浸漬）

二酸化塩素による飼育水の消毒はまん延防止に効果あり。

フロルフェニコール100mg/魚体重kg(規定量)、５日間の経口投与は治療効果あり。

261

水産用抗菌剤を用いた治療技術の開発②

水産用抗菌剤を用いた治療技術の開発③

フロルフェニコールによる治療は投薬量と投薬期間を厳守する必要あり。

フロルフェニコールによる治療は感染後の投与開始が早いほど効果が高い。

メチレンブルー薬浴による穴あき病防除効果

軟膏の塗布による穴あき病防除効果

・各区、患部に１日１回14日間塗布
・抗菌剤軟膏はテラマイシン軟膏(成分名：塩酸ｵｷｼﾃﾄﾗｻｲｸﾘﾝ)を使用

メチレンブルー20ppm、１時間の薬浴は体表消毒効果あり。

抗菌剤軟膏を１日１回14日間患部に塗布することは効果あり。

保菌検査のためのプライマーの選定
プライマー名

報告者

検出限界DNA量

外観症状のない魚からの保菌検査法の確立

県内分離株検出

PAAS

Hiney et al. (1992)

500fg

AP

Gustafson et al. (1992)

50pg<－ISAsa4

Nilsson et al .(2006)

50fg

25株/25株(100%)

Fer

Beaz-Hidalgo et al. (2008)

5pg

－Asg

Beaz-Hidalgo et al. (2008)

50pg－23株/25株(92%)

人為感染魚に治療（フロルフェニコール投与）を施し、菌との接触歴はあるが、症状のない魚を作製

綿棒で粘液を回収（背中側およそ2cm四方）

体表粘液から検出可能か？

PCR検査

核酸抽出

表１ 人為的感染魚における体表粘液からの穴あき病原因菌の検出状況
0日後
無処理群

投薬群Ａ
(7日後投薬)

27日後

41日後

55日後

69日後

84日後

97日後

体表粘液

・・・

6/10

4/6

4/5

4/4

2/2

2/2

飼育水＋＋＋＋＋＋＋

体表粘液

3/10

6/10

4/10

1/10

2/10

1/10

0/10

飼育水＋

投薬群Ｂ 体表粘液(14日後投飼育水薬)

4/9＋＋＋＋－

127日後 131日後
0/1＋－

7/9

2/9

1/9

4/9

4/90/9－＋＋＋＋－

外観症状のない魚から検出－－－※陽性個体の数値は粘液陽性個体数／生残個体数

保菌検査のためにはISAsa4プライマーが適当。

体表粘液のPCR検査により、保菌魚の検出が可能に。

362開発した技術の普及【まとめ】

穴あき病の防除対策

ニシキゴイの穴あき病に有効な対策

現在、県内の民間検査機関で検査可能な錦鯉の疾病

措置

メニュー

蔓延防止 病魚の隔離
飼育水の殺菌・ＫＨＶ（コイヘルペスウイルス病）
・ＳＶＣ（コイ春ウイルス病）
・ＣＥＶ（眠り病、浮腫症）

治＋・Aeromonas salmonicida（穴あき病）

経口投与による治療法については、「全日本錦鯉振興会」を通じて錦鯉生産者たちに周知

防自主的な保菌検査は、県内民間検査機関に手法を指導することにより、生産者、愛好家が利用可能

療 飼育水の昇温方法

生産者愛好家 効果 難易度

取り上げ、仕切り〇〇

中低二酸化塩素〇〇低中32～34℃

高〇〇

高

水産用抗菌剤の経口投与 フロルフェニコール

〇×高低消毒剤による薬浴

メチレンブルー〇〇

中中

抗菌剤の患部塗布

塩酸オキシテトラサイクリン〇〇

中中疫 外観症状の有無の確認

目視

〇

〇

低低個体の保菌検査

粘液のPCR検査〇△

高高飼育水の保菌検査

飼育水のPCR検査（ 実用 性を評価 中）※上記のほか、獣医師の処方による動物用医薬品の注射あるいは経口投与も可能

可能なかぎり多くの対策ツールを用意し、より多くの状況に対応できるように！

安全な錦鯉を世界へ！

R1新潟県錦鯉品評会全体総合優勝

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