Product Instructions
MDA2LMO96
Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes
FR Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes version 2
DE Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis
IT  Analisi molecolare di seconda generazione per il rilevamento
di Listeria monocytogenes
ES Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes
NL Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes
SV Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes
DA Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes
NO Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes
FI Molekyläärinen testisetti 2 - Listeria monocytogenes
PT Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2
EL Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes
PL Molekularny test do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes
RU Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes
TR Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2
JA 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用ZH 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌
ZH 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌
TH ชุดทดสอบเชือ้ ระดับโมเลกุล 2 - ลิสทิเรีย โมโนไซโตจิเนส
KO Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스ID Deteksi Molekuler untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2
EN2

Listeria Monocytogenes

EN(English)Issue Date: 2024-01

Product Instructions
Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes
Product Description and Intended Use

Neogen® Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes is used with the Neogen® Molecular Detection System
for the rapid and specific detection of Listeria monocytogenes in enriched food and environmental samples. The Neogen
Molecular Detection Assays use loop-mediated isothermal amplification to rapidly amplify nucleic acid sequences withhigh specificity and sensitivity, combined with bioluminescence to detect the amplification. Presumptive positive results
are reported in real-time while negative results are displayed after the assay is completed. Presumptive positive results
should be confirmed using your preferred method or as specified by local regulations (1, 2, 3).
The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes is intended for use in a laboratory environment byprofessionals trained in laboratory techniques. Neogen has not documented the use of this product in industries other thanfood or beverage. For example, Neogen has not documented this product for testing water, pharmaceutical, cosmetic,
clinical or veterinary samples. The Neogen Molecular Detection Assay - 2 Listeria monocytogenes has not been evaluatedwith all possible testing protocols or with all possible strains of bacteria.
As with all test methods, the source, formulation and quality of enrichment medium can influence the results. Factors suchas sampling methods, testing protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may also influence results.
Neogen recommends evaluation of the method including enrichment medium, in the user’s environment using a sufficientnumber of samples with particular foods and microbial challenges to ensure that the method meets the user’s criteria.
Neogen has evaluated the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes with Demi-Fraser Brothcontaining Ferric Ammonium Citrate and Fraser Broth containing Ferric Ammonium Citrate as needed. A typicalformulation of this medium follows below.
Demi-Fraser Broth Base Typical Formula(g/L)

Fraser Broth Base Typical Formula(g/L)

Sodium Chloride

20 g

Sodium Chloride

20 g

Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous*

9.6 g

Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous*

9.6 g

Beef Extract

5.0 g

Beef Extract

5.0 g

Pancreatic Digest of Casein

5.0 g

Pancreatic Digest of Casein

5.0 g

Peptic Digest of Animal Tissue

5.0 g

Peptic Digest of Animal Tissue

5.0 g

Yeast Extract

5.0 g

Yeast Extract

5.0 g

Lithium Chloride

3.0 g

Lithium Chloride

3.0 g

Potassium Phosphate, monobasic

1.35 gPotassium Phosphate, monobasic

1.35 gEsculin

1.0 g

Esculin

1.0 g

Acriflavin HCl

0.0125 g

Acriflavin HCl

0.025 gNalidixic Acid

0.01 gNalidixic Acid

0.02 g* Substitute: Sodium Phosphate, dibasic, dihydrate 12.0 g
Fraser Broth Supplement(Ingredients per 10 mL vial. One vial is added to one liter of basal medium.)
Ferric Ammonium Citrate

0.5g/10mL

Final pH

7.2 ± 0.2 at 25°C

The Neogen Molecular Detection Instrument is intended for use with samples that have undergone heat treatment during
the assay lysis step, which is designed to destroy organisms present in the sample. Samples that have not been properly
heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard and should NOT be inserted into the
Neogen Molecular Detection Instrument.
®

Neogen Food Safety is certified to ISO (International Organization for Standardization) 9001 for design and manufacturing.
The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes test kit contains 96 tests, described in Table 1.

1

EN(English)

Table 1. Neogen Molecular Detection Assay Kit Components
Item

Identification

Quantity

Contents

Comments

Neogen® Lysis Solution(LS)

Pink solution inclear tubes

96 (12 strips of 8 tubes)

580 μL of LS per tube

Racked andready to use

Neogen® Molecular
Detection Assay 2 - Listeria
Yellow tubes
monocytogenes
Reagent Tubes

96 (12 strips of 8 tubes)

Lyophilized specificamplification anddetection mix

Ready to use

Extra caps

Yellow caps

96 (12 strips of 8 caps)

Neogen® Reagent Control(RC)

Clear flip-top tubes

16 (2 pouches of 8
individual tubes)

Ready to use
Lyophilized control
DNA, amplification anddetection mix

Ready to use

The Negative Control, not provided in the kit, is sterile enrichment medium, e.g., Demi-Fraser Broth. Do not use water as a
Negative Control.

SafetyThe user should read, understand and follow all safety information in the instructions for the Neogen Molecular Detection
System and the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes. Retain the safety instructions for futurereference.
WARNING: Indicates a hazardous situation, which, if not avoided, could result in death or serious injury
and/or property damage.
NOTICE: Indicates a potentially hazardous situation which, if not avoided, could result in property damage.

W WARNING
Do not use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes in the diagnosis of conditions in humans
or animals.
The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes method may generate Listeria monocytogenes tolevels sufficient to cause stillbirths and fatalities in pregnant women and the immunocompromised, if exposed.
The user must train its personnel in current proper testing techniques: for example, Good Laboratory Practices,
ISO/IEC 17025(4), or ISO 7218(5).
To reduce the risks associated with a false-negative result leading to the release of contaminated product:• Follow the protocol and perform the tests exactly as stated in the product instructions.
• Store the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes as indicated on the package and in the
product instructions.
• Always use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes by the expiration date.
• Use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes for food and environmental samples that havebeen validated internally or by a third party.
• Use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes only for surfaces, sanitizers, protocols andbacterial strains that have been validated internally or by a third party.
• For an environmental sample containing Neutralizing Buffer with aryl sulfonate complex, perform a 1:2 dilution before
testing (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth). Another option is to transfer 10 μL of the NB enrichment
into the Neogen Lysis Solution tubes. Neogen® Sample Collection products which include Neutralizing Buffer with aryl
sulfonate complex: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G and HS2410NB2G.
To reduce the risks associated with exposure to chemicals and biohazards:• It is strongly recommended that female laboratory staff be informed of the risk to a developing fetus resulting from
infection of the mother through exposure to Listeria monocytogenes.
• Perform pathogen testing in a properly equipped laboratory under the control of trained personnel. Incubatedenrichment media and equipment or surfaces that have come into contact with incubated enrichment media may
contain pathogens at levels sufficient to cause risk to human health.
• Always follow standard laboratory safety practices, including wearing appropriate protective apparel and eye
protection while handling reagents and contaminated samples.
• Avoid contact with the contents of the enrichment media and reagent tubes after amplification.
• Dispose of enriched samples according to current industry standards.
• Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard
and should NOT be inserted into the Neogen Molecular Detection Instrument.

2

EN(English)

To reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:• Always wear gloves (to protect the user and prevent introduction of nucleases).
To reduce the risks associated with environmental contamination:• Follow current industry standards for disposal of contaminated waste.
To reduce the risks associated with exposure to hot liquids:• Do not exceed the recommended temperature setting on heater.
• Do not exceed the recommended heating time.
• Use an appropriate, calibrated thermometer to verify the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert temperature(e.g., a partial immersion thermometer or digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer.) The
thermometer must be placed in the designated location in the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert.

NOTICETo reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:• Change gloves prior to reagent pellet hydration.
• Use of sterile, aerosol barrier (filtered), molecular biology grade pipette tips is recommended.
• Use a new pipette tip for each sample transfer.
• Use Good Laboratory Practices to transfer the sample from the enrichment to the lysis tube. To avoid pipettor
contamination, the user may choose to add an intermediate transfer step. For example, the user can transfer eachenriched sample into a sterile tube.
• Use a molecular biology workstation containing germicidal lamp where available. Periodically decontaminate laboratory
benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1- 5% (v:v in water) household bleach solution or DNA
removal solution.
To reduce the risks associated with a false-positive result:• Never open reagent tubes post amplification.
• Always dispose of the contaminated tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution or equivalentsolution for 1 hour and away from the assay preparation area.
• Never autoclave reagent tubes post amplification.
Consult the Safety Data Sheet for additional information and local regulations for disposal.
If you have questions about specific applications or procedures, please visit our website at www.neogen.com or contact
your local Neogen representative or distributor.

User Responsibility

Users are responsible for familiarizing themselves with product instructions and information. Visit our website atwww.neogen.com, or contact your local Neogen representative or distributor for more information.
When selecting a test method, it is important to recognize that external factors such as sampling methods, testing
protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may influence results.
It is the user’s responsibility in selecting any test method or product to evaluate a sufficient number of samples with theappropriate matrices and microbial challenges to satisfy the user that the chosen test method meets the user’s criteria.
It is also the user’s responsibility to determine that any test methods and results meet its customers’ and suppliers’
requirements.
As with any test method, results obtained from use of any Neogen Food Safety product do not constitute a guarantee ofthe quality of the matrices or processes tested.
To help customers evaluate the method for various food matrices, Neogen has developed the Neogen® Molecular
Detection Matrix Control kit. When needed, use the Matrix Control (MC) to determine if the matrix has the ability to
impact the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes results. Test several samples representative of
the matrix, i.e., samples obtained from different origin, during any validation period when adopting the Neogen method orwhen testing new or unknown matrices or matrices that have undergone raw material or process changes.
A matrix can be defined as a type of product with intrinsic properties such as composition and process. Differences
between matrices may be as simple as the effects caused by differences in their processing or presentation for example,
raw vs. pasteurized; fresh vs. dried, etc.

Limitation of Warranties / Limited Remedy

EXCEPT AS EXPRESSLY STATED IN A LIMITED WARRANTY SECTION OF INDIVIDUAL PRODUCT PACKAGING,
NEOGEN DISCLAIMS ALL EXPRESS AND IMPLIED WARRANTIES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO, ANY
WARRANTIES OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR USE. If any Neogen Food Safety Product is
defective, Neogen or its authorized distributor will, at its option, replace or refund the purchase price of the product. These
are your exclusive remedies. Please contact your Neogen representative or authorized Neogen distributor for any further
questions.

3

EN(English)

Limitation of Neogen Liability

NEOGEN WILL NOT BE LIABLE FOR ANY LOSS OR DAMAGES, WHETHER DIRECT, INDIRECT, SPECIAL, INCIDENTAL
OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO LOST PROFITS. In no event shall Neogen’s liability
under any legal theory exceed the purchase price of the product alleged to be defective.

Storage and Disposal

Store the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes at 2-8°C. Do not freeze. Keep kit away from lightduring storage. After opening the kit, check that the foil pouch is undamaged. If the pouch is damaged, do not use. After
opening, unused reagent tubes should always be stored in the re-sealable pouch with the desiccant inside to maintainstability of the lyophilized reagents. Store resealed pouches at 2-8°C for no longer than 60 days.
Do not use Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes past the expiration date. Expiration date and lot
number are noted on the outside label of the box. After use, the enrichment medium and the Neogen Molecular Detection
Assay 2 - Listeria monocytogenes tubes can potentially contain pathogenic materials. When testing is complete, follow
current industry standards for the disposal of contaminated waste. Consult the Safety Data Sheet for additional informationand local regulations for disposal.

Instructions for Use

Follow all instructions carefully. Failure to do so may lead to inaccurate results.
Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1-5% (v:v in water)household bleach solution or DNA removal solution.
The user should complete the Neogen Molecular Detection System operator qualification (OQ) training, as described in the“Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen Molecular Detection
System” document(6).
See Section “Specific Instructions for validated methods” for specific requirements:
Table 3 for enrichment protocols according to AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 and AOAC® Performance
Tested MethodSM Certificate #081501.
Table 4 for enrichment protocols according to NF Validation certificate 3M 01/15-09/16.

Sample Enrichment

Tables 2, 3 or 4 present guidance for the enrichment of food and environmental samples. It is the user’s responsibility tovalidate alternate sampling protocols or dilution ratios to ensure this test method meets the user’s criteria.

Foods

1. Allow the Demi-Fraser Broth enrichment medium (includes ferric ammonium citrate) to equilibrate to ambientlaboratory temperature.
2. Aseptically combine the enrichment medium and sample according to Tables 2, 3 or 4. For all meat and highly
particulate samples, the use of filter bags is recommended.
3. Homogenize thoroughly by blending, stomaching, or hand mixing for 2 ± 0.2 minutes. Incubate at 37 ± 1°C according
to Tables 2, 3 or 4.
4. For raw dairy products (see Tables 2, 3 or 4), transfer 0.1 mL of the primary enrichment into 10 mL of Fraser Broth.
Incubate at 37 ± 1°C for 20-24 hours.

Environmental samples

Sample collection devices can be a sponge hydrated with a neutralizing solution to inactivate the effects of the sanitizers.
Neogen recommends the use of a biocide-free cellulose sponge. Neutralizing solution can be Dey-Engley (D/E)
Neutralizing Broth or Letheen Broth. It is recommended to sanitize the area after sampling.
WARNING: Should you select to use Neutralizing Buffer (NB) that contains aryl sulfonate complex as the hydrating
solution for the sponge, it is required to perform a 1:2 dilution (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth)of the enriched environmental sample before testing in order to reduce the risks associated with a false-negative
result leading to the release of contaminated product. Another option is to transfer 10 μL of the neutralizing buffer
enrichment into the Neogen Lysis Solution tubes.
The recommended size of the sampling area to verify the presence or absence of the pathogen on the surface is at least
100 cm2 (10 cm x 10 cm or 4” x 4”). When sampling with a sponge, cover the entire area going in two directions (left toright then up and down) or collect environmental samples following your current sampling protocol or according to the
FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) or ISO 18593(7) guidelines.
1. Allow the Demi-Fraser Broth enrichment medium (includes ferric ammonium citrate) to equilibrate to ambientlaboratory temperature.

4

EN(English)

2. Aseptically combine the enrichment medium and sample according to Tables 2, 3 or 4.
3. Homogenize thoroughly by blending, stomaching, or hand mixing for 2 ± 0.2 minutes. Incubate at 37 ± 1°C for 24-30
hours according to Tables 2, 3, or 4.
Table 2: General enrichment protocols at 37 ± 1 °C using Demi-Fraser Broth and Fraser Broth as needed.
Sample Matrix

SampleSize

Enrichment
Broth
Volume(mL)

Enrichment
Time (hours)

25 g

225

24-30

1 sponge

100 or 225

24-30

1 swab

10

24-30

25 g

475

28-32

Heat-processed,
cooked, cured
meats, poultry,
seafood and fish
Heat-processed /pasteurized dairy
products
Produce andvegetablesMulti-component
foods
Environmental
samples(a)Raw meat, poultry,
seafood, fish

Primary Enrichment (Demi-Fraser Broth)(a)Sample Matrix

Raw dairy products

SampleSize

25 gEnrichment
Broth
Volume(mL)

225

Secondary Enrichment(Fraser Broth)(a)Enrichment
Time (hours)

SampleSize

20-24

Transfer
0.1 mL
into
10 mL
FraserBroth

Enrichment Enrichment
Temperature
Time
(°C)
(hours)37 ± 1

20-24

SampleAnalysis
Volume(b)10 μL(a) Demi-Fraser and Fraser Broth should always be supplemented with Fraser Broth supplement (ferric ammonium citrate)during primary or secondary enrichment.
(b) Volume of sample transferred to the Neogen Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.6 of Lysis section.

Specific Instructions for Validated Methods
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

In AOAC Research Institute OMASM and PTMSM programs, the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria
monocytogenes was found to be an effective method for the detection of Listeria monocytogenes. The matrices tested in
the study are shown in Table 3.

5

EN(English)

Table 3. Enrichment protocols using Demi-Fraser Broth(a) at 37 ± 1 °C according to AOAC OMASM 2016.08 and PTMSM
Certificate #081501.
SampleSize

Enrichment Broth
Volume (mL)

Enrichment
Time (hours)

Beef hot dogs, queso fresco, vanilla ice
cream, 4% milk fat cottage cheese, 3%
chocolate whole milk, romaine lettuce,bagged raw spinach, cold smoked salmon

25 g

225

24-30

Raw chicken

25 g

475

28-32

Deli turkey

125 g

1125

24-30

Cantaloupe(b)

Whole
melon

Enough volume toallow melon to float

26-30

Stainless steel

1 sponge

225

24-30

Sealed concrete

1 sponge

100

24-30

Plastic(c)1 swab1024-30

Environmental
samples:

Sample Matrix

All samples for the AOAC validation were homogenized by stomaching unless otherwise noted.
(a)		Demi-Fraser and Fraser Broth should always be supplemented with Fraser Broth supplement (ferric ammonium citrate)during primary or secondary enrichment.
(b) Homogenize sample by hand mixing.
(c)		 Homogenize sample by vortexing.

NF VALIDATION by AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
For more information about end of validity, please refer to NF VALIDATION certificate available on the website
mentioned above.
NF VALIDATION certified method in compliance with ISO 16140-2(6) in comparison to ISO 11290(3)Scope of the validation: All human food and environmental samples (excluding primary production samples)
Sample preparation: Samples should be prepared according to EN ISO 11290-1(3) and EN ISO 6887(8)Software version: See certificate
Table 4: Enrichment protocols according to NF VALIDATION certified method 3M 01/15-09/16 at 37 ± 1°C using
Demi-Fraser Broth and Fraser Broth as needed.
General Protocol

Sample Size

All food samples(excepted raw meats,
raw seafood, and raw
dairy products

25 gEnvironmental samples

25 g, 1 swab,
or 1 wipe

Enrichment Enrichment Enrichment Sample
Broth Volume Temperature
Time
Analysis Accepted Interruption Point(mL)(±1°C)(hours)Volume(a)• Demi-Fraser Broth up to
72 hours
225

37

24-30

20 µL

• Lysate at -20°C• Lysate at 4°C up to
72 hours

6

EN(English)Primary Enrichment (Demi-Fraser Broth)(b)Secondary Enrichment (Fraser Broth)(b)Accepted
Enrichment
Specific
Enrichment Enrichment
Enrichment Enrichment Sample Interruption
Broth
SampleProtocol Sample
Temperature
Time
Temperature
Time
Analysis
Point
Size
VolumeSize(±1°C)(hours)(±1°C)(hours)Volume(c)(mL)• FraserBroth up
Raw
Transfertomeats,
0.1 mL
72 hours
raw
into
seafood,
25 g
225
37
20-24
37
20-24
10 µL • Lysate at
10 mL
and raw-20°C
Fraserdairy• Lysate at
Brothproducts
4°C up to
72 hours(a) Volume of sample transferred to the Neogen Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.6 of Lysis section.
(b) Demi-Fraser and Fraser Broth should always be supplemented with Fraser Broth supplement (ferric ammonium citrate)during primary or secondary enrichment.
(c) Volume of sample transferred to the Neogen Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.6 of Lysis section.
NOTE: Samples larger than 25 g have not been tested in the NF validation study.

Preparation of the Neogen® Molecular Detection Speed Loader Tray
1. Wet a cloth with a 1-5% (v:v in water) household bleach solution or equivalent solution and wipe the Neogen®
Molecular Detection Speed Loader Tray.
2. Rinse the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray with water.
3. Use a disposable towel to wipe the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray dry.
4. Ensure the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray is dry before use.
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Chill Block Insert
Place the Neogen® Molecular Detection Chill Block directly on the laboratory bench; Use the chill block at ambientlaboratory temperature (20-25°C).
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert
Place the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert in a dry double block heater unit. Turn on the dry block heater unit
and set the temperature to allow the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert to reach and maintain a temperature of
100 ± 1°C.
NOTE: Depending on the heater unit, allow approximately 30 minutes for the Neogen Molecular Detection Heat Block
Insert to reach temperature. Using an appropriate, calibrated thermometer (e.g., a partial immersion thermometer ordigital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer) placed in the designated location, verify that the
Neogen Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ± 1°C.
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Instrument
1. Launch the Neogen® Molecular Detection System Software and log in. Contact your Neogen Food Safety
representative to ensure you have the most updated version of the software.
2. Turn on the Neogen Molecular Detection Instrument.
3. Create or edit a run with data for each sample. Refer to the Neogen Molecular Detection System User Manual for
details.
NOTE: The Neogen Molecular Detection Instrument must reach Ready State before inserting the Neogen Molecular
Detection Speed Loader Tray with reaction tubes. This heating step takes approximately 20 minutes and is indicated by an
ORANGE light on the instrument’s status bar. When the instrument is ready to start a run, the status bar will turn GREEN.
Lysis
Remove the bottom of Neogen Lysis Solution Rack with a screwdriver or spatula before placing in in the Neogen Molecular
Detection Heat Block Insert.

7

EN(English)

1. Allow the lysis solution (Neogen Lysis Solution) tubes to warm up by setting the rack at room temperature (20-25°C)
overnight (16-18 hours). Alternatives to equilibrate the Neogen Lysis Solution tubes to room temperature are to set the
Neogen Lysis Solution tubes on the laboratory bench for at least 2 hours, incubate the Neogen Lysis Solution tubes in a
37 ± 1°C incubator for 1 hour or place them in a dry double block heater for 30 seconds at 100°C.
2. Invert the capped tubes to mix. Proceed to next step within 4 hrs.
3. Remove the enrichment broth from the incubator.
4. One Neogen Lysis Solution tube is required for each sample and the Negative Control (NC) sample (sterile enrichment
medium).
4.1 Neogen Lysis Solution tube strips can be cut to desired Neogen Lysis Solution tube number. Select the number ofindividual Neogen Lysis Solution tubes or 8-tube strips needed. Place the Neogen Lysis Solution tubes in an empty
rack.
4.2 To avoid cross-contamination, decap one Neogen Lysis Solution tubes strip at a time and use a new pipette tip foreach transfer step.
4.3 Transfer enriched samples to Neogen Lysis Solution Tubes as described below:
Transfer each enriched sample into an individual Neogen Lysis Solution tube first. Transfer the NC last.
4.4 Use the Neogen® Molecular Detection Cap/Decap Tool-Lysis to decap one Neogen Lysis Solution tube strip – one
strip at a time.
4.5 Discard the Neogen Lysis Solution tube cap – if lysate will be retained for retest, place the caps into a clean
container for re-application after lysis.
4.5.1 For processing of retained lysate, see Appendix A.
4.6 Transfer 20 µL of sample into a Neogen Lysis Solution tube unless otherwise indicated in Protocols from Tables 2, 3,
or 4 (e.g., raw dairy products or when using environmental samples with neutralizing buffer use 10 µL).
20 µl

5. Repeat step 4.4 to 4.6 until each individual sample has been added to a corresponding Neogen Lysis Solution tube in the
strip.
6. When all samples have been transferred, transfer 20 µL of NC (sterile enrichment medium, e.g., Demi-Fraser Broth) intoa Neogen Lysis Solution tube. Do not use water as a NC.
7. Verify that the temperature of the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ± 1°C.
8. Place the uncovered rack of Neogen Lysis Solution tubes in the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert and heatfor 15 ± 1 minutes. During heating, the Neogen Lysis Solution will change from pink (cool) to yellow (hot).
8.1 Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential
biohazard and should NOT be inserted into the Neogen Molecular Detection Instrument.
9. Remove the uncovered rack of Neogen Lysis Solution tubes from the heating block and allow to cool in the Neogen
Molecular Detection Chill Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes. The Neogen Molecular Chill Block
Insert used at ambient temperature should sit directly on the laboratory bench. When cool, the lysis solution will revert to apink color.
10. Remove the rack of Neogen Lysis Solution tubes from the Neogen Molecular Detection Chill Block Insert.

8

EN(English)00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplification
1. One Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tube is required for each sample and the NC.
1.1 Reagent tube strips can be cut to desired tube number. Select the number of individual Neogen Molecular
Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tubes or 8-tube strips needed.
1.2 Place Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tubes in an empty rack.
1.3 Avoid disturbing the reagent pellets from the bottom of the tubes.
2. Select 1 Neogen Reagent Control tube and place in rack.
3. To avoid cross-contamination, decap one Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tube
strip at a time and use a new pipette tip for each transfer step.
4. Transfer lysate to Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tubes and Neogen Reagent
Control tube as described below:
Transfer each sample lysate into individual Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent
Tubes first followed by the NC. Hydrate the Neogen Reagent Control tube last.
5. Use the Neogen® Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to decap the Neogen Molecular Detection Assay 2 Listeria monocytogenes Reagent Tubes –one Reagent tube strip at a time. Discard cap.
5.1 Transfer 20 µL of Sample lysate from the upper ½ of the liquid (avoid precipitate) in the Neogen Lysis Solution
tube into corresponding Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tube. Dispenseat an angle to avoid disturbing the pellets. Mix by gently pipetting up and down 5 times.
5.2 Repeat step 5.1 until individual Sample lysate has been added to a corresponding Neogen Molecular Detection
Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tube in the strip.
5.3 Cover the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tubes with the provided extra
caps and use the rounded side of the Neogen Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to apply pressure in aback and forth motion ensuring that the cap is tightly applied.
5.4 Repeat step 5.1 to 5.3 as needed, for the number of samples to be tested.
5.5 When all sample lysates have been transferred, repeat steps 5.1 to transfer 20 µL of NC lysate into a Neogen
Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tube.
5.6 Transfer 20 µL of NC lysate into a Neogen Reagent Control tube. Dispense at an angle to avoid disturbing thepellets. Mix by gently pipetting up and down 5 times.
6. Load capped tubes into a clean and decontaminated Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray. Close and latch
the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray lid.

20 µL

7. Review and confirm the configured run in the Neogen Molecular Detection System Software.
8. Click the Start button in the software and select instrument for use. The selected instrument’s lid automatically opens.
9. Place the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray into the Neogen Molecular Detection Instrument and close
the lid to start the assay. Results are provided within 75 minutes, although positives may be detected sooner.

9

EN(English)

10. After the assay is complete, remove the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray from the Neogen Molecular
Detection Instrument and dispose of the tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution orequivalent solution for 1 hour and away from the assay preparation area.
NOTICE: To minimize the risk of false positives due to cross-contamination, never open reagent tubes containing
amplified DNA. This includes Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes Reagent Tubes, Neogen
Reagent Control and Matrix Control tubes. Always dispose of sealed reagent tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water)household bleach solution or equivalent solution for 1 hour and away from the assay preparation area.

Results and Interpretation

An algorithm interprets the light output curve resulting from the detection of the nucleic acid amplification. Results areanalyzed automatically by the software and are color-coded based on the result. A Positive or Negative result is determinedby analysis of a number of unique curve parameters. Presumptive positive results are reported in real-time while Negativeand Inspect results will be displayed after the run is completed.
Presumptive positive samples should be confirmed as per the laboratory standard operating procedures or by following
the appropriate reference method confirmation (1, 2, 3), beginning with transfer from the primary enrichment to secondary
enrichment broth (if applicable), followed by subsequent plating and confirmation of isolates using appropriate biochemicaland serological methods.
NOTE: Even a negative sample will not give a zero reading as the system and Neogen Molecular Detection Assay 2 Listeria monocytogenes amplification reagents have a “background” relative light unit (RLU) reading.
In the rare event of any unusual light output, the algorithm labels this as “Inspect.” Neogen recommends the user to repeat
the assay for any Inspect samples. If the result continues to be Inspect, proceed to confirmation test using your preferred
method or as specified by local regulations.
Table 5: Result symbols for samples and interpretation as provided by the Neogen Molecular Detection System Software.
Well Type

Well Result Symbol

ResultInterpretation

SamplePositive

The sample is presumptive positive for the target pathogen.

SampleNegative

The sample is negative for the target pathogen.

SampleInhibited

The sample matrix was inhibitory to the assay. A re-test may berequired. Refer to the troubleshooting section and the assay kit
Product Instructions for more information.

SampleInspect

The presence or absence of the target pathogen was indeterminate. A
re-test may be required. Refer to the troubleshooting section and theassay kit Product Instructions for more information.

SampleError

No bioluminescence was detected. A re-test may be required. Referto the troubleshooting section and the assay kit Product Instructions
for more information.

Confirmation of Results According to the NF VALIDATION Certified Method
Option 1: Using the ISO 11290(3) standard starting from Demi-Fraser enrichment
Option 2: By isolation on PALCAM agar or on chromogenic agar forming part of a NF VALIDATION certified method for
detection of the Listeria monocytogenes. The presence of characteristic colonies is sufficient to confirm the presence ofListeria monocytogenes.
Option 3: Using nucleic acid probes as described in EN ISO 7218(5) standard, performed on isolated colonies, fromselective agar (see Options 1 or 2).
Option 4: Using any other method certified NF VALIDATION, the principle of which must be different from Neogen
Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes. The complete protocol described for this second validated method
must be used. All steps prior to the start of confirmation must be common to both methods.
In the event of discordant results (presumptive positive with the alternative method, non-confirmed by one of the means
described above) the laboratory must follow the necessary steps to ensure the validity of the result obtained.
In the event of discordant results (presumptive positive with the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Listeria
monocytogenes, non-confirmed by one of the means described above, the laboratory must follow the necessary steps toensure the validity of the results obtained.
If you have questions about specific applications or procedures, please visit our website at www.neogen.com or contact
your local Neogen representative or distributor.

10

EN

(English)Appendix A. Protocol Interruption: Storage and re-testing of heat-treated lysates.
1. To store a heat-treated lysate, re-cap the lysis tube with a clean cap (see “Lysis”, 4.5)
2. Store at 4 to 8°C for up to 72 hours.
3. Prepare a stored sample for amplification by inverting 2-3 times to mix.
4. Decap the tubes.
5. Place the mixed lysate tubes on Neogen Molecular Detection Heat Block Insert and heat at 100 ± 1°C for 5 ± 1
minutes.
6. Remove the rack of Neogen Lysis Solution tubes from the heating block and allow to cool in the Neogen Molecular
Detection Chill Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes.
7. Continue the protocol at the ‘Amplification’ section detailed above.

References:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Explanation of Product Label Symbols
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

FR(Français)Date de parution : 2024-01

Instructions relatives au produit
Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes version 2
Description et utilisation du produit

Le kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen® version 2 est utilisé avec le système de détection
moléculaire Neogen® pour la détection rapide et spécifique après enrichissement des Listeria monocytogenes dans desaliments enrichis et des échantillons environnementaux. Les kits de détection moléculaire Neogen utilisent la technique
LAMP (amplification isotherme médiée par des boucles) afin d’amplifier rapidement les séquences d’acide nucléique
de façon extrêmement spécifique et sensible, associée à la bioluminescence pour détecter l’amplification. Les résultats
présumés positifs sont visibles en temps réel tandis que les résultats négatifs sont affichés à la fin de l’essai. Les résultats
présumés positifs doivent être confirmés par la méthode de votre choix ou en utilisant une méthode conforme auxréglementations locales(1,2,3).
Le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 est destiné à être utilisé au sein de laboratoires,par des professionnels formés aux techniques s’y rapportant. Neogen n’a pas étudié l’utilisation de ce produit dans dessecteurs autres que l’alimentaire et les boissons. Par exemple, Neogen n’a pas étudié ce produit dans le cadre de tests
sur des échantillons d’eau, pharmaceutiques, cosmétiques, cliniques ou vétérinaires. Le Kit de détection moléculaire
Listeria monocytogenes Neogen version 2 n’a pas été évalué en utilisant tous protocoles de test ou toutes les souchesbactériennes possibles.
Comme avec toutes les méthodes de test, la source, la formulation et la qualité du milieu d’enrichissement peuvent
influencer les résultats. Des facteurs tels que les méthodes d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparationdes échantillons, la manipulation et les techniques de laboratoires peuvent également influencer les résultats. Neogen
recommande d’évaluer la méthode, notamment le milieu d’enrichissement, dans l’environnement de l’utilisateur à l’aide
d’un nombre d’échantillons suffisant et avec des charges microbiennes déterminées pour répondre aux critères del’utilisateur.
Neogen a évalué le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 avec du bouillon demi-Fraser
contenant du citrate d’ammonium ferrique et du bouillon Fraser contenant du citrate d’ammonium ferrique en fonction desbesoins. La formulation typique de ce milieu est indiquée ci-dessous.
Formule typique de la basse du bouillon
demi-Fraser(g/L)

Formule typique de la basse dubouillon Fraser(g/L)

Chlorure de sodium

20 g

Chlorure de sodium

20 g

Phosphate de sodium dibasique anhydre*

9,6 g

Phosphate de sodium dibasique anhydre*

9,6 gExtrait de bœuf5,0 g

Extrait de bœuf5,0 g

Digestat pancréatique de caséine

5,0 g

Digestat pancréatique de caséine

5,0 g

Digestat peptique de tissu animal

5,0 g

Digestat peptique de tissu animal

5,0 gExtrait de levure

5,0 gExtrait de levure

5,0 g

Chlorure de lithium

3,0 g

Chlorure de lithium

3,0 g

Phosphate de potassium, monobasique

1,35 gPhosphate de potassium, monobasique

1,35 gEsculine

1,0 g

Esculine

1,0 g

Hydrochlorure d’acriflavine

0,0125 g

Hydrochlorure d’acriflavine

0,025 gAcide nalidixique

0,01 gAcide nalidixique

0,02 g* Substitut : Phosphate de sodium, dibasique, dihydrate 12,0 g
Complément de bouillon Fraser(Ingrédients par flacon de 10 mL. Ajout d’un flacon par litre de milieu basal.)
Citrate d’ammonium ferrique

0,5 g/10 mL

pH final		

7,2 ± 0,2 à 25 °C

L’instrument de détection moléculaire Neogen® est conçu pour être utilisé avec des échantillons traités thermiquement
pendant l’étape de lyse, procédé qui détruit les organismes présents dans l’échantillon. Les échantillons qui n’ont pas
été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent être considérés comme potentiellement
dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection moléculaire Neogen.

1

FR(Français)Neogen Sécurité Alimentaire respecte la norme ISO (International Organization for Standardization) 9001 en matière deconception et de fabrication.
Le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 contient 96 tests, décrits dans le tableau 1.
Tableau 1. Composants du Kit de détection moléculaire Neogen
Élément

Identification

QuantitéContenu

Commentaires

Solution de lyse (LS)
Neogen®

Solution rose en
tubes transparents

96 (12 barrettesde 8 tubes)

580 µL de LS par tube

Placé surportoir et prêtà l’emploi

Tubes jaunes

96 (12 barrettesde 8 tubes)

Mélange spécifiquelyophilisé pourl’amplification etla détectionPrêts à l’emploi

Tubes de réactif du kit
de détection moléculaire
Listeria monocytogenes
Neogen® version 2

Bouchons supplémentaires Bouchons jaunes

96 (12 barrettesde 8 bouchons)

Contrôle de réactif
Neogen® (RC)

16 (2 poches de
8 tubes individuels)

Tubes « Flip-Top »transparentsPrêts à l’emploi
ADN témoin lyophilisé,mélange pourl’amplification etla détectionPrêts à l’emploi

Le témoin négatif, non fourni dans le kit, est un milieu d’enrichissement stérile, par exemple du bouillon demi-Fraser.
Ne pas utiliser d’eau comme témoin négatif.

Sécurité

L’utilisateur doit lire, comprendre et suivre toutes les informations de sécurité mentionnées dans les instructions relatives
au système de détection moléculaire Neogen et au Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2.
Conserver ces consignes de sécurité pour référence ultérieure.
AVERTISSEMENT : indique une situation dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner un décès,des blessures graves et/ou des dommages matériels.
AVIS : indique une situation potentiellement dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner desdommages matériels.

W AVERTISSEMENT
Ne pas utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 pour diagnostiquer despathologies chez les humains ou les animaux.
La méthode du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 peut générer des niveaux deListeria monocytogenes suffisants pour causer une mortalité in utéro chez les femmes enceintes et les personnes
immunodéprimées, en cas d’exposition.
L’utilisateur doit former son personnel aux techniques d’analyse actuelles appropriées, par exemple : les bonnes
pratiques de laboratoire, la norme ISO/CEI 17025(4) ou la norme ISO 7218(5).
Afin de réduire les risques associés aux faux négatifs, qui peuvent entraîner la diffusion de produits contaminés :• Se conformer au protocole et effectuer les tests en suivant exactement les instructions relatives au produit.
• Conserver le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 conformément aux indications surl’emballage et aux instructions relatives au produit.
• Toujours utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 avant la date de péremption.
• Utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 pour des aliments et des échantillons
environnementaux ayant été validés en interne ou par une tierce partie.
• N’utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 pour des surfaces, desdésinfectants, des protocoles et des souches bactériennes validés en interne ou par une tierce partie.
• En cas d’échantillon environnemental contenant un tampon neutralisant avec un composé d’aryle sulfonate, diluerl’échantillon dans un bouillon d’enrichissement stérile 1:2 avant l’analyse (1 volume d’échantillon pour 1 volume debouillon). Une autre option consiste à transférer 10 µL de l’enrichissement du tampon neutralisant dans les tubes
de solution de lyse Neogen. Produits pour le recueil des échantillons Neogen® comprenant un tampon neutralisantcontenant un complexe d’aryle sulfonate : RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G
et HS2410NB2G.

2FR(Français)Afin de réduire les risques associés à l’exposition aux produits chimiques et aux dangers biologiques :• Le personnel féminin du laboratoire doit être informé des risques sur le fœtus en développement dus à l’infection de lamère suite à une exposition à Listeria monocytogenes.
• Effectuer les analyses bactériologiques dans un laboratoire correctement équipé et sous la supervision deprofessionnels qualifiés. Les milieux et les équipements d’enrichissement incubés ou les surfaces ayant été en contact
avec des milieux d’enrichissement incubés peuvent contenir des agents pathogènes à des niveaux suffisamment élevéspour entraîner des risques pour la santé humaine.
• Toujours respecter les consignes de sécurité courantes du laboratoire, porter des tenues et lunettes de protection
adaptées lors de la manipulation de réactifs et d’échantillons contaminés.
• Éviter tout contact avec le contenu du milieu d’enrichissement et les tubes de réactifs après l’amplification.
• Éliminer les échantillons enrichis conformément aux normes du secteur actuelles.
• Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuventêtre considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection
moléculaire Neogen.
Afin de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’analyse :• Toujours porter des gants (afin de protéger l’utilisateur et de prévenir l’introduction de nucléases).
Pour réduire les risques associés à la contamination environnementale :• Respecter les normes en vigueur concernant l’élimination des déchets contaminés.
Afin de réduire les risques associés à l’exposition à des liquides très chauds :• Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chauffe.
• Ne pas dépasser le temps de chauffe recommandé.
• Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérifier la température du support de bloc chauffant pour système dedétection moléculaire Neogen® (p. ex. thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple numériqueet non un thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du support de bloc
chauffant pour système de détection moléculaire Neogen.

AVIS
Afin de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’analyse :• Changer de gants avant l’hydratation des pastilles réactives.
• Utiliser de préférence des pipettes de qualité conforme à la biologie moléculaire, stériles et munies d’embouts à filtre.
• Utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque transfert d’échantillon.
• Utiliser les bonnes pratiques de laboratoire pour transférer l’échantillon de l’enrichissement vers le tube de lyse.
Pour éviter toute contamination des pipettes, l’utilisateur peut choisir d’ajouter une étape de transfert intermédiaire.
Par exemple, l’utilisateur peut transférer chaque échantillon enrichi dans un tube stérile.
• Utiliser un poste de travail de biologie moléculaire disposant si possible d’une lampe germicide. Décontaminer
régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/de fermeture, etc.) avec
une solution d’eau de Javel à 1 et 5 % (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination de l’ADN.
Afin de réduire les risques associés à un résultat faux positif :• Ne jamais ouvrir les tubes de réactif après amplification.
• Toujours éliminer les tubes contaminés en les faisant tremper dans une solution d’eau de Javel concentrée à 1 et 5 %(v:v dans l’eau) ou une solution équivalente pendant 1 heure. Effectuer cette procédure à distance de la zone depréparation de l’analyse.
• Ne jamais stériliser à l’autoclave les tubes de réactifs après amplification.
Consulter la fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la réglementation
locale relative à la mise au rebut.
Pour toute question concernant des applications ou procédures spécifiques, consulter notre site Internet à l’adressewww.neogen.com ou contacter votre représentant ou distributeur Neogen local.

Responsabilité de l’utilisateur

Il incombe aux utilisateurs de prendre connaissance des instructions et des informations relatives au produit.
Consulter notre site Web www.neogen.com ou contacter votre représentant ou distributeur Neogen local pour obtenir deplus amples informations.
Lors du choix d’une méthode de test, il est important d’admettre que des facteurs externes comme les méthodesd’échantillonnage, les protocoles d’analyse, la préparation des échantillons, la manipulation et les techniques de laboratoire
peuvent influencer les résultats.
Il incombe à l’utilisateur de sélectionner une méthode ou un produit d’analyse adapté pour évaluer un nombre suffisantd’échantillons avec les matrices et les souches microbiennes appropriées, afin de garantir que la méthode d’analyse est
conforme à ses critères.

3

FR(Français)Il incombe également à l’utilisateur de déterminer si une méthode d’analyse et ses résultats répondent aux exigences deses clients ou fournisseurs.
Comme pour toute méthode d’analyse, les résultats obtenus avec un produit Neogen Sécurité Alimentaire ne constituent
pas une garantie de la qualité des matrices ou des processus testés.
Dans le but d’aider les clients à évaluer la méthode pour différentes matrices alimentaires, Neogen a élaboré le kit decontrôle de matrice pour système de détection moléculaire Neogen®. Lorsque cela est nécessaire, utilisez le contrôle dematrice (MC) pour déterminer si la matrice peut avoir un impact sur les résultats du Kit de détection moléculaire Listeria
monocytogenes Neogen version 2. Tester plusieurs échantillons représentatifs de la matrice, c.-à-d. des échantillonsd’origines différentes, au cours de toute période de validation lors de l’adoption de la méthode Neogen ou dans le cadred’analyses de matrices nouvelles, inconnues ou ayant subi des modifications de matières premières ou de processus.
Une matrice peut être définie comme un type de produit présentant des propriétés intrinsèques, telles que la compositionet le processus. Les différences entre les matrices peuvent être aussi simples que les effets causés par leurs différences detraitement ou de présentation, par exemple, cru/pasteurisé, frais/sec, etc.

Limitations de garanties/Limites de recours

SAUF SI EXPRESSÉMENT ÉTABLI DANS LA SECTION DE GARANTIE LIMITÉE D’UN EMBALLAGE DE PRODUITINDIVIDUEL, NEOGEN RENONCE À TOUTE GARANTIE EXPLICITE ET IMPLICITE, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER,
TOUTE GARANTIE DE COMMERCIALISATION OU D’ADAPTATION POUR UN USAGE SPÉCIFIQUE. En cas de défaut
de tout produit Neogen Sécurité Alimentaire, Neogen ou son distributeur agréé s’engage, à son entière discrétion, au
remplacement ou au remboursement du prix d’achat du produit. Il s’agit de vos recours exclusifs. Merci de contacter votre
représentant Neogen ou votre distributeur Neogen agréé pour toute autre question.

Limitation de responsabilité de Neogen

NEOGEN NE SERA PAS TENUE RESPONSABLE DES PERTES OU DES DOMMAGES ÉVENTUELS, QU’ILS SOIENTDIRECTS, INDIRECTS, SPÉCIFIQUES, ACCIDENTELS OU CONSÉCUTIFS, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER, LES
PERTES DE PROFITS. En aucun cas et en aucune manière, la responsabilité de Neogen ne sera engagée au-delà du prixd’achat du produit prétendu défectueux.

Stockage et mise au rebut

Conserver le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 à une température comprise entre
2 et 8 °C. Ne pas congeler. Conserver à l’abri de la lumière. Une fois le kit ouvert, vérifier que le sachet en aluminium est
intact. Si ce sachet est endommagé, ne pas utiliser le kit. Après ouverture, les tubes de réactif non utilisés doivent toujours
être conservés dans le sachet refermable, en laissant l’agent déshydratant à l’intérieur afin de maintenir la stabilité desréactifs lyophilisés. Conserver les poches refermées à une température comprise entre 2 et 8 °C. Ne pas conserver plus
de 60 jours.
Ne pas utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 après la date de péremption.
La date de péremption et le numéro de lot sont inscrits sur l’étiquette extérieure de la boîte. Après utilisation, il est
possible que les tubes de milieu d’enrichissement et du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen
version 2 contiennent des éléments pathogènes. Lorsque l’analyse est terminée, suivre les normes actuelles du secteur
pour l’élimination des déchets contaminés. Consulter la fiche de données de sécurité pour obtenir des informations
supplémentaires et connaître la réglementation locale relative à la mise au rebut.

Instructions d’utilisation

Suivre attentivement toutes les instructions. Dans le cas contraire, les résultats obtenus risquent d’être inexacts.
Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/de fermeture,etc.) avec une solution de 1 et 5 % d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination de l’ADN.
L’utilisateur doit suivre la formation de qualification de l’opérateur (OQ) du système de détection moléculaire Neogen,comme décrit dans le document intitulé « Protocoles et instructions relatifs à la qualification d’installation (IQ)/qualification
opérationnelle (OQ) pour le système de détection moléculaire Neogen »(6).
Se référer à la section « Instructions spécifiques pour méthodes validées » pour connaître les exigences spécifiques :Voir le tableau 3 pour les protocoles d’enrichissement selon l’AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 et l’AOAC®
Performance Tested MethodSM Certificat nº 081501.
Voir le tableau 4 pour les protocoles d’enrichissement selon la méthode de certification NF Validation 3M 01/15-09/16.

Enrichissement de l’échantillon

Les tableaux 2, 3 et 4 fournissent des indications pour l’enrichissement des échantillons d’aliments et environnementaux.
Il incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage ou des proportions de dilution différent(e)s pourgarantir que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.

4

FR(Français)Aliments

1. Laisser le milieu d’enrichissement bouillon demi-Fraser (contenant du citrate ferrique d’ammonium) s’équilibrer à latempérature ambiante du laboratoire.
2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon conformément au tableau 2, 3 ou 4.
Pour tous les échantillons de viande et à forte teneur en particules, il est recommandé d’utiliser des sacs avec filtre.
3. Homogénéiser soigneusement par homogénéisation mécanique, homogénéisation péristaltique ou mélange manuelpendant 2 ± 0,2 minutes. Incuber à 37 ± 1 °C conformément aux tableaux 2, 3 ou 4.
4. Pour les produits laitiers crus (voir les tableaux 2, 3 ou 4), transférer 0,1 mL de l’enrichissement primaire dans 10 mL debouillon Fraser. Incuber à 37 ± 1 °C pendant 20 à 24 heures.

Échantillons environnementaux

Le dispositif de prélèvement d’échantillons peut être une éponge hydratée avec une solution neutralisante pour désactiverles effets des désinfectants. Neogen recommande d’utiliser une éponge en cellulose sans biocide. La solution neutralisantepeut être un bouillon neutralisant Dey-Engley (D/E) ou un bouillon Letheen. Il est recommandé de désinfecter la zone
après l’échantillonnage.
AVERTISSEMENT : si vous choisissez d’utiliser un tampon neutralisant (NB) contenant un complexe d’aryle sulfonate
comme solution hydratante pour l’éponge, il sera nécessaire d’effectuer une dilution de 1:2 (1 volume d’échantillon
pour 1 volume de bouillon d’enrichissement stérile) avant l’analyse, afin de réduire les risques associés aux résultats
faux négatifs pouvant conduire à la libération de produit contaminé. Une autre option consiste à transférer 10 μL del’enrichissement du tampon neutralisant dans les tubes de solution de lyse Neogen.
La taille minimale recommandée pour la zone d’échantillonnage destinée à vérifier l’absence ou la présence du pathogène
à la surface est de 100 cm2 (10 cm x 10 cm ou 4 po x 4 po). Lors de l’échantillonnage avec une éponge, couvrez toutes
la zone dans les deux directions (de gauche à droite puis de haut en bas) ou prélevez des échantillons environnementaux
en suivant votre protocole d’échantillonnage actuel ou selon les directives de la FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2)ou ISO 18593(7).
1. Laisser le milieu d’enrichissement bouillon demi-Fraser (contenant du citrate ferrique d’ammonium) s’équilibrer à latempérature ambiante du laboratoire.
2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon conformément au tableau 2, 3 ou 4.
3. Homogénéiser soigneusement par homogénéisation mécanique, homogénéisation péristaltique ou mélange manuelpendant 2 ± 0,2 minutes. Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 à 30 heures, conformément aux tableaux 2, 3 ou 4.

5FR(Français)

Tableau 2 : Protocoles d’enrichissement généraux. À 37 ± 1 °C utilisant du bouillon demi-Fraser ou Fraser selon les besoins.
Matrice del’échantillon

Taille del’échantillon

Volume dubouillond’enrichissement(mL)

Durée d’enrichissement
(h)

25 g

225

24-30

1 éponge

100 ou 225

24-30

1 tampon

10

24-30

25 g

475

28-32

Viandes,volaille etpoissontransformés parla chaleur, cuits
ou séchésProduits laitierstransforméspar la chaleurou pasteurisés
Fruits etlégumes
Aliments multicomposantsÉchantillons
environnementaux(a)Viande, volaille,
fruits de mer,poissons crus

Enrichissement secondaire(bouillon Fraser)(a)Enrichissement primaire(bouillon demi-Fraser)(a)Matrice del’échantillon

Produits laitiers
crus

Taille del’échantillon

25 gVolume dubouillond’enrichissement
(mL)

225

Durée d’enrichissement(h)Taille del’échantillon

20-24

Transférez
0,1 mLdans
10 mL debouillon
FraserTempérature Durée d’end’enrichisserichissement (°C)
ment (h)37 ± 1

20-24

Volumed’échantillon d’analyse(b)10 μL(a) Les bouillons Fraser et demi-Fraser doivent toujours être supplémentés avec un supplément de bouillon Fraser(avec citrate ferrique d’ammonium) pendant l’enrichissement primaire ou secondaire.
(b) Volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse Neogen. Consulter l’étape 4.6 de la section Lyse.

Instructions spécifiques pour méthodes validées
Official Method of AnalysisSM de l’AOAC® 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

Dans les programmes OMASM et PTMSM de l’Institut de recherche de l’AOAC, il a été démontré que le Kit de détection
moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 était une méthode efficace de détection de Listeria monocytogenes.
Les matrices testées au cours de l’étude sont répertoriées dans le tableau 3.
6

FR(Français)

Tableau 3. Protocoles d’enrichissement utilisant du bouillon demi-Fraser Broth(a) à 37 ± 1 °C conformément à l’AOAC
OMASM 2016.08 et au certificat PTMSM nº 081501.
Matrice de l’échantillon

Taille del’échantillon

Volume du bouillond’enrichissement
(mL)

Durée
d’enrichissement(h)

Hot dogs de bœuf, fromage frais, glace àla vanille, fromage blanc au lait à 4 % dematières grasses, lait entier au chocolat
3 %, laitue romaine, épinards crus ensachet, saumon fumé froid

25 g

225

24-30

Poulet cru

25 g

475

28-32

Dinde préparée

125 g

1125

24-30

Melon entier

Assez de volume
pour permettre au
melon de flotter

26-30

Acier inoxydable

1 éponge

225

24-30

Béton verni

1 éponge

100

24-30

Plastique(c)1 tampon

10

24-30

Échantillons
environnementaux :Melon(b)Tous les échantillons pour la validation AOAC ont été homogénéisés par homogénéisation mécanique sauf
indication contraire.
(a)		Les bouillons Fraser et demi-Fraser doivent toujours être supplémentés avec un supplément de bouillon Fraser(avec citrate ferrique d’ammonium) pendant l’enrichissement primaire et secondaire.
(b) Homogénéiser l’échantillon en mélangeant à la main.
(c)		 Homogénéiser l’échantillon au vortex.

Méthode certifiée par AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
MÉTHODES ALTERNATIVES D’ANALYSE POUR L’AGROALIMENTAIRE
http://nf-validation.afnor.org/en
Pour plus d’information sur l’expiration de la validité, se reporter au certificat NF VALIDATION disponible sur le site Internet
cité ci-dessus.
Méthode de certification NF VALIDATION, conformément à la norme ISO 16140-2(6) par rapport à la norme
ISO 11290(3)Portée de la validation : tous aliments pour l’alimentation humaine et échantillons environnementaux (àl’exception des échantillons de production primaires)Préparation de l’échantillon : les échantillons doivent être préparés conformément aux normes EN ISO 11290-1(3) et
EN ISO 6887(8)Version logicielle : voir le certificat

7

FR(Français)

Tableau 4 : Protocoles d’enrichissement conformes à la méthode de certification NF VALIDATION certifiée
3M 01/15-09/16 à 37 ± 1 °C utilisant du bouillon demi-Fraser et Fraser selon les besoins.
Protocole général
Tout type d’échantillon
alimentaire(sauf viandes crues,
fruits de mer crus etproduits laitiers crus)
Échantillons
environnementaux

Volume duTempéraTaille debouillonture d’enril’échantillon d’enrichisse- chissement
ment (mL)(± 1 °C)

25 g

Volumed’échantillon d’analyse(a)

225

37

24-30

20 µL

• Lysat à -20 °C• Lysat à 4 °C
jusqu’à 72 heures

25 g,
1 écouvillon
ou 1 lingette

225

Point d’interruption
accepté• Bouillon demi-Fraser
jusqu’à 72 heures

25 g

Enrichissement primaire(bouillon demi-Fraser)(b)ProtoVolume du Tempéracole spé- Taille de bouillon ture d’enDurée
cifique l’échan- d’enrichisrichisd’enrichistillon
sementsement sement (h)(mL)(± 1 °C)
Viandescrues,
fruitsde mercrus etproduits
laitiers
crus

Durée
d’enrichissement (h)

37

20-24

Enrichissement secondaire(bouillon Fraser)(b)Taille del’échantillon

Transférer
0,1 mLdans 10 mLde bouillon
FraserVolumeTempéraDuréed’échanture d’enrid’enrichistillon
chissement
sement (h) d’ana(± 1 °C)
lyse(c)Point d’interruption
accepté• Bouillon
Fraserjusqu’à
72 heures

37

20-24

10 µL

• Lysat à-20 °C• Lysatà 4 °Cjusqu’à
72 heures(a) Volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse Neogen. Consulter l’étape 4.6 de la section Lyse.
(b) Les bouillons Fraser et demi-Fraser doivent toujours être supplémentés avec un supplément de bouillon Fraser (avec
citrate ferrique d’ammonium) pendant l’enrichissement primaire et secondaire.
(c) Volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse Neogen. Consulter l’étape 4.6 de la section Lyse.
REMARQUE : Les échantillons supérieurs à 25 g n’ont pas été testés dans le cadre de l’étude NF Validation.

Préparation du plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen®
1. Humidifier un chiffon à l’aide d’une solution de 1 et 5 % d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou une solution équivalente etnettoyer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen®.
2. Rincer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen à l’eau.
3. Utiliser un chiffon jetable pour sécher le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen.
4. S’assurer que le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen est sec avant
toute utilisation.
Préparation du support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen®
Plateau de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen® directement sur la paillasse de laboratoire,utiliser le bloc refroidissant à la température ambiante du laboratoire (20 à 25 °C).
Préparation du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen®
Placer le support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen® dans une unité de traitement
thermique à sec double bloc. Allumer l’unité de traitement thermique à sec et régler la température afin que le support debloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen atteigne et conserve une température de 100 ± 1 °C.

8FR(Français)REMARQUE : selon l’unité de traitement thermique utilisée, le support de bloc chauffant pour système de détection
moléculaire Neogen atteint la température souhaitée en 30 minutes environ. Utiliser un thermomètre étalonné adapté(p. ex., un thermomètre à immersion partielle ou un thermomètre à thermocouple numérique, et non un thermomètreà immersion totale) placé à l’endroit indiqué du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen
afin de vérifier que sa température est de 100 ± 1 °C.
Préparation de l’instrument de détection moléculaire Neogen®
1. Lancer le logiciel du Système de détection moléculaire Neogen® et ouvrir une session. Contacter votre représentant
Neogen Sécurité Alimentaire pour vous assurer d’avoir la version la plus récente du logiciel.
2. Mettre l’instrument de détection moléculaire Neogen sous tension.
3. Créer ou modifier une analyse en saisissant les données pour chaque échantillon. Pour plus de précisions, consulter lemanuel d’utilisation du système de détection moléculaire Neogen.
REMARQUE : l’instrument de détection moléculaire Neogen doit être prêt avant l’insertion du plateau de chargement
rapide pour système de détection moléculaire Neogen, dans lequel sont placés les tubes de réactif. Cette étape dechauffage prend environ 20 minutes ; pendant ce processus, un voyant lumineux ORANGE s’allume sur la barre d’état del’instrument. Lorsque l’instrument est prêt pour l’analyse, la barre d’état passe au VERT.
Lyse
Retirer le portoir pour tubes de solution de lyse Neogen avec un tournevis ou une spatule avant de le placer dans le support
de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen.

1. Laisser les tubes de solution de lyse Neogen se réchauffer en plaçant le support à température ambiante (20 et
25 °C) pendant une nuit (16 à 18 heures). Il est également possible d’amener les tubes de solution de lyse Neogen à
température ambiante en les plaçant sur le plan de travail du laboratoire pendant au moins 2 heures, en incubant les
tubes de solution de lyse Neogen dans un incubateur à 37 ± 1 °C pendant 1 heure ou en les plaçant dans une unité detraitement thermique à sec double bloc pendant 30 secondes à 100 °C.
2. Retourner les tubes recouverts d’un bouchon pour les mélanger. Passer à l’étape suivante dans un délai de 4 heures.
3. Retirer le bouillon d’enrichissement de l’incubateur.
4. Un tube de solution de lyse Neogen est nécessaire pour chaque échantillon et pour le témoin négatif (NC)(milieu d’enrichissement stérile).
4.1 Les barrettes de tubes de solution de lyse Neogen peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes
de solution de lyse Neogen souhaité. Sélectionner le nombre de tubes de solution de lyse Neogen ou de barrettesde 8 tubes nécessaire. Placer les tubes de solution de lyse Neogen dans un portoir vide.
4.2 Pour éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de solution de lyse Neogen à la fois et utiliser
un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.
4.3 Transférer les échantillons enrichis dans les tubes de solution de lyse Neogen comme indiqué ci-dessous :Transférer tout d’abord chaque échantillon enrichi dans des tubes de solution de lyse Neogen individuels.
Transférer le NC en dernier.
4.4 Ouvrir les barrettes de tubes de solution de lyse Neogen une à une à l’aide de l’outil d’ouverture/fermeture poursystème de détection moléculaire Neogen® - Lyse.
4.5 Jeter le bouchon du tube de solution de lyse Neogen. Si le lysat doit être soumis à un nouveau test, placer lesbouchons dans un récipient propre pour réapplication après la lyse.
4.5.1 Pour le traitement du lysat conservé, voir l’annexe A.
4.6 Transférer 20 µL d’échantillon dans un tube de solution de lyse Neogen, sauf indication contraire dans le tableau
du 2, 3 ou 4 (exemple : utiliser 10 µl avec les produits laitiers crus ou les échantillons environnementaux avec
tampon neutralisant).

9

FR(Français)20 µl

5. Répéter les étapes 4.4 et 4.6 jusqu’à ce que chaque échantillon individuel soit ajouté à un tube de solution de lyse
Neogen correspondant sur la barrette.
6. Une fois tous les échantillons transférés, transférer 20 µL de NC (milieu d’enrichissement stérile, p. ex. bouillon
demi-Fraser) dans un tube de solution de lyse Neogen. Ne pas utiliser d’eau comme NC.
7. Vérifier que la température du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen est de
100 ± 1 °C.
8. Placer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse Neogen dans le support de bloc chauffant pour systèmede détection moléculaire Neogen et chauffer pendant 15 ± 1 minutes. Lors du chauffage, la solution de lyse Neogen
passera de rose (froide) à jaune (chaude).
8.1 Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuventêtre considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’Instrument de détection
moléculaire Neogen.
9. Retirer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse Neogen du bloc chauffant et laisser refroidir dans lesupport de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen pendant une durée comprise entre 5 et
10 minutes. Le support de bloc refroidissant Neogen utilisé à température ambiante doit être posé directement sur leplan de travail du laboratoire. Une fois froide, la solution de lyse retrouvera une couleur rose.
10. Retirer le couvercle des tubes de solution de lyse Neogen du support de bloc refroidissant pour système de détection
moléculaire Neogen.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplification
1. Il est nécessaire d’utiliser un tube de réactif du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2
pour chaque échantillon et pour le NC.
1.1 Les barrettes de tubes de réactifs peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes souhaité.
Sélectionner le nombre nécessaire de tubes de réactif du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes
Neogen version 2 ou de barrettes de 8 tubes.
1.2 Placer les tubes de réactifs du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 dans un
portoir vide.
1.3 Éviter d’agiter les pastilles réactives se trouvant au fond des tubes.
2. Sélectionner 1 tube de contrôle de réactif Neogen et le placer dans le portoir.
3. Afin d’éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de réactif Kit de détection moléculaire
Listeria monocytogenes Neogen version 2 à la fois et utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.
4. Transférer le lysat dans des tubes de réactif du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2
et dans un tube de contrôle de réactif Neogen comme décrit ci-dessous :Transférer d’abord chaque lysat d’échantillon dans un tube de réactif du Kit de détection moléculaire
Listeria monocytogenes Neogen version 2 puis faites de même avec le NC. Hydrater le tube de contrôle de réactif
Neogen en dernier.
5. Utiliser l’outil d’ouverture/fermeture pour système de détection moléculaire Neogen® - Réactif pour ouvrir les tubes deréactif du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 un à un. Jeter le bouchon.
10

FR(Français)5.1 Transférer 20 μL de lysat d’échantillon prélevé au niveau de la moitié (½) supérieure du liquide (éviter leprécipité) dans le tube de solution de lyse Neogen du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes
Neogen version 2 correspondant. Incliner la pipette pour ne pas toucher les pastilles. Mélanger en effectuant
5 cycles d’aspiration/de refoulement avec la pipette.
5.2 Répéter l’étape 5.1 jusqu’à ce que chaque lysat d’échantillon individuel ait été ajouté au tube de réactif du Kit dedétection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 correspondant dans la barrette.
5.3 Placer le capuchon supplémentaire prévu à cet effet sur les tubes de réactif du Kit de détection moléculaire Listeria
monocytogenes Neogen version 2, puis prendre le bord arrondi de l’outil d’ouverture/fermeture pour système dedétection moléculaire Neogen - Réactif et appuyer dans un mouvement de va-et-vient afin de s’assurer que lecapuchon est fermement insérée sur le tube.
5.4 Répéter les étapes 5.1 à 5.3 pour tous les échantillons à analyser.
5.5 Lorsque tous les lysats d’échantillons ont été transférés, répéter les étapes 5.1 afin de transférer 20 µL de lysat de
NC dans un tube de réactif du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2.
5.6 Transférer 20 µL de lysat de NC dans un tube de contrôle de réactif Neogen. Incliner la pipette pour ne pas
toucher les pastilles. Mélanger en effectuant 5 cycles d’aspiration/de refoulement avec la pipette.
6. Charger les tubes recouverts d’un bouchon dans un plateau de chargement rapide pour système de détection
moléculaire Neogen propre et décontaminé. Fermer et verrouiller le couvercle du plateau de chargement rapide poursystème de détection moléculaire Neogen.

20 µL

7. Examiner et confirmer l’analyse configurée sur le logiciel du système de détection moléculaire Neogen.
8. Cliquer sur l’icône « Démarrer » du logiciel et sélectionner l’instrument à utiliser. Le couvercle de l’appareil sélectionné
s’ouvre automatiquement.
9. Placer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen dans l’instrument de détection
moléculaire Neogen et fermer le couvercle pour lancer l’essai. Les résultats sont obtenus en 75 minutes ; toutefois, lesrésultats positifs peuvent être détectés plus tôt.
10. Une fois l’analyse terminée, retirer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen del’instrument de détection moléculaire Neogen et tremper les tubes dans une solution d’eau de Javel à 1-5 % (v:v dansde l’eau) ou une solution équivalente pendant 1 heure, et ce, à l’écart de la zone de préparation des analyses.
AVIS : pour réduire le risque de résultats faux positifs dus à une contamination croisée, ne jamais ouvrir les tubesde réactif contenant de l’ADN amplifié. Ceci comprend les tubes de réactif du Kit de détection moléculaire Listeria
monocytogenes Neogen version 2, les tubes de contrôle de réactif Neogen et les tubes de contrôle de matrice. Toujours
éliminer les tubes de réactif fermés en les faisant tremper dans une solution d’eau de Javel concentrée à 1 et 5 % (v:v dansl’eau) ou une solution équivalente pendant 1 heure. Effectuer cette procédure à distance de la zone de préparation del’analyse.

Résultats et interprétation

Un algorithme interprète la courbe de résultats provenant de la détection de l’amplification de l’acide nucléique parbioluminescence. Les résultats sont automatiquement analysés par le logiciel et sont codés par couleur en fonction durésultat. Un résultat positif ou négatif est déterminé par l’analyse d’un nombre de paramètres des courbes individuelles.
Les résultats présumés positifs sont rapportés en temps réel, tandis que les résultats négatifs ou à vérifier sont affichés à lafin de l’analyse.
Les résultats présumés positifs doivent être confirmés selon les procédures standard des laboratoires ou en suivant
la confirmation de la méthode de référence appropriée(1,2,3), en commençant par effectuer un transfert du bouillond’enrichissement primaire vers le ou les bouillons d’enrichissement secondaires (si applicable), puis en effectuant la mise enculture et la confirmation des isolats à l’aide des méthodes biochimiques et sérologiques appropriées.
REMARQUE : même un échantillon négatif ne donnera pas de résultat égal à zéro, car le système et les réactifs
d’amplification du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2 effectuent une lecture d’unité
relative de lumière (RLU) « de base ».

11

FR

(Français)Dans le cas peu probable d’un résultat lumineux inhabituel, l’algorithme considérera l’échantillon comme « À vérifier ».
Neogen recommande à l’utilisateur de recommencer l’essai pour tout échantillon considéré comme « À vérifier ». Si lerésultat continue à être « À vérifier », passer au test de confirmation en utilisant la méthode de votre choix ou en utilisantune méthode conforme aux réglementations locales.
Tableau 5 : Symboles des résultats des échantillons et interprétation fournis par le logiciel du Système de détection
moléculaire Neogen.
Type de puits

Symbole durésultat du puits

Résultat

Interprétation

Échantillon

PositifL’échantillon est présumé positif pour le pathogène cible.

Échantillon

NégatifL’échantillon est négatif pour le pathogène cible.

Inhibé

La matrice de l’échantillon est inhibitrice pour le test. Un second
test peut être nécessaire. Consulter la section de dépannage et les
instructions relatives au produit du kit de détection pour obtenirplus de renseignements.

À vérifier

La présence ou l’absence du pathogène cible est indéterminée.
Un second test peut être nécessaire. Consulter la section dedépannage et les instructions relatives au produit du kit dedétection pour obtenir plus de renseignements.

ErreurAucune bioluminescence n’a été détectée. Un second test
peut être nécessaire. Consulter la section de dépannage et les
instructions relatives au produit du kit de détection pour obtenirplus de renseignements.

Échantillon

Échantillon

Échantillon

Confirmation des résultats selon la méthode de certification NF VALIDATION
Option 1 : utilisation de la norme ISO 11290(3) en commençant par l’enrichissement demi-Fraser.
Option 2 : par isolement sur une gélose PALCAM ou une gélose chromogène certifiée dans le cadre d’une méthode NF
VALIDATION pour la détection de Listeria monocytogenes. La présence de colonies caractéristiques est suffisante pourconfirmer la présence de Listeria monocytogenes.
Option 3 : utilisation de sondes nucléiques tel que décrit dans la norme EN ISO 7218(5), à partir de colonies isolées
provenant de gélose sélective (voir option 1 ou 2).
Option 4 : utilisation de n’importe quelle autre méthode certifiée NF VALIDATION, dont le principe doit être différent
du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes Neogen version 2. Il convient d’utiliser l’intégralité du protocole
décrit pour cette seconde méthode de validation. Toutes les étapes précédant le début de la confirmation doivent êtrecommunes aux deux méthodes.
En cas de résultats contradictoires (positif présumé avec l’autre méthode, non confirmé par l’un des moyens décrits
ci-dessus), le laboratoire doit suivre les procédures nécessaires pour garantir la validité du résultat obtenu.
En cas de résultats contradictoires (positif présumé avec le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes
Neogen version 2, non confirmé par l’un des moyens décrits ci-dessus), le laboratoire doit suivre les procédures
nécessaires pour garantir la validité des résultats obtenus.
Pour toute question concernant des applications ou procédures spécifiques, consulter notre site Internet à l’adressewww.neogen.com ou contacter votre représentant ou distributeur Neogen local.
Annexe A. Interruption du protocole : stockage et nouveau test des lysats soumis à un traitement thermique.
1. Pour conserver un lysat soumis à un traitement thermique, refermer le tube de lyse avec un bouchon propre(voir « Lyse », 4.5).
2. Stocker à une température comprise entre 4 et 8 °C jusqu’à 72 heures.
3. Préparer un échantillon conservé pour amplification en retournant 2 à 3 fois pour mélanger.
4. Ouvrir les tubes.
5. Placer les tubes pour lysats mélangés dans le support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire
Neogen et chauffer à 100 ± 1 °C pendant 5 ± 1 minutes.
6. Retirer le portoir de tubes de solution de lyse Neogen du bloc chauffant et laisser refroidir dans le support de bloc
refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen pendant une durée comprise entre 5 et 10 minutes.
7. Poursuivre le protocole à la section « Amplification » détaillée ci-dessus.

12

FR

(Français)Références :1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Explication des symboles des échantillons
info.neogen.com/symbols

13

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

DE(Deutsch)

Erscheinungsdatum: 2024-01

Gebrauchsanweisungen
Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis
Produktbeschreibung und Verwendungszweck

Der Neogen® Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis wird in Verbindung mit dem Neogen®
Molekularen Detektionssystem für den schnellen und spezifischen Nachweis von Listeria monocytogenes in angereicherten
Proben aus Lebensmitteln und deren Umgebungen verwendet. Die Neogen Molekularen Detektionsnachweise verwenden
die mittels einer „Loop“ initiierte isotherme Amplifikation, um in Kombination mit der Biolumineszenz die Amplifikation
von Nukleinsäuresequenzen mit hoher Spezifität, Sensitivität und Geschwindigkeit zu detektieren. Die vorläufig positiven
Ergebnisse werden in Echtzeit erstellt, während negative Ergebnisse erst nach Abschluss des Tests dargestellt werden.
Die vorläufig positiven Ergebnisse müssen mithilfe eines Testverfahrens Ihrer Wahl oder gemäß den jeweils geltenden
Richtlinien bestätigt werden(1,2,3).
Der Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis ist für den Gebrauch in Laboren bestimmt undmuss von Fachpersonal angewendet werden, das in Laborverfahren geschult wurde. Neogen verfügt über keine Daten
zur Anwendung dieses Produkts in anderen Industrien als der Lebensmittel- und Getränkeindustrie. Zum Beispiel verfügt
Neogen über keine Daten zur Verwendung dieses Produkts mit Wasser-, Pharmazeutika-, Kosmetika- oder klinischen undtiermedizinischen Proben. Der Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis wurde nicht für allemöglichen Testprotokolle oder für alle möglicherweise vorkommenden Bakterienstämme evaluiert.
Wie bei allen Testverfahren können die Ergebnisse durch die Quelle, Zusammensetzung und Qualität desAnreicherungsmediums beeinflusst werden. Faktoren wie Probennahme, Testprotokolle, Probenaufbereitung,Handhabung und Labortechnik können die Ergebnisse beeinflussen. Neogen empfiehlt die Beurteilung der Methodeeinschließlich Anreicherungsmedium in der Umgebung des Benutzers mit einer ausreichenden Anzahl an Proben mit
bestimmten Lebensmitteln und mikrobiellen Pathogenen, um sicherzustellen, dass die Methode den Anforderungen desBenutzers entspricht.
Neogen hat den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis je nach Bedarf mit Demi Fraser Basis
Bouillon mit Eisen-Ammonium-Citrat und Fraser Basis Bouillon mit Eisen-Ammonium-Citrat evaluiert. Nachfolgend ist eine
typische Formulierung dieses Mediums angegeben.
Typische Formulierung einer Demi Fraser
Basis Bouillon(g/l)

Typische Formulierung einer Fraser
Basis Bouillon(g/l)

Natriumchlorid

20 gNatriumchlorid

20 gNatriumphosphat, zweibasisch, wasserfrei*

9,6 g

Natriumphosphat, zweibasisch, wasserfrei*

9,6 g

Rindfleisch-Extrakt

5,0 g

Rindfleisch-Extrakt

5,0 g

Pankreatisch verdautes Casein

5,0 g

Pankreatisch verdautes Casein

5,0 g

Peptisch verdautes tierisches Gewebe

5,0 g

Peptisch verdautes tierisches Gewebe

5,0 g

Hefeextrakt

5,0 g

Hefeextrakt

5,0 g

Lithiumchlorid

3,0 g

Lithiumchlorid

3,0 g

Kaliumphosphat, einbasisch1,35 gKaliumphosphat, einbasisch1,35 gAesculin

1,0 g

Aesculin

1,0 g

Acriflavin-HCl

0,0125 g

Acriflavin-HCl

0,025 gNalidixinsäure

0,01 gNalidixinsäure

0,02 g* Ersatz: Natriumphosphat, zweibasisch, Dihydrat 12,0 g
Fraser Basis Bouillon-Ergänzung(Zutaten pro 10-ml-Fläschchen. Ein Fläschchen wird zu einem Liter Basismedium hinzugefügt.)Eisen-Ammonium-Citrat

0,5 g/10 ml

Finaler pH-Wert

7,2 ± 0,2 bei 25 °C

Das Neogen Molekulare Detektion – Gerät ist für die Verwendung mit Proben bestimmt, die während der Nachweis-Lyse
wärmebehandelt wurden, wodurch die in der Probe vorhandenen Organismen zerstört werden sollen. Proben, die während
der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein biologisches Risiko dar und sollten
NICHT in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät eingesetzt werden.
®

1

DE

(Deutsch)

Neogen Food Safety hat für die Bereiche Entwicklung und Fertigung die Zertifizierung ISO 9001 der Internationalen
Organisation für Normung (ISO) erhalten.
Das Testkit für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis enthält 96 Tests, die in Tabelle 1
beschrieben sind.
Tabelle 1. Komponenten des Neogen Molekularen Detektions Assays
ArtikelKennzeichnung

Stückzahl

InhaltKommentare

Rosafarbene
Lösung intransparenten
Gefäßen96 (12 Streifen mit je 8
Gefäßen)

580 µl LS pro Gefäß

Abgefüllt undgebrauchsfertig

Reagenzgefäße für den
Neogen® Molekulare
Detektion 2 – Listeria
monocytogenes Nachweis

Gelbe Gefäße

96 (12 Streifen mit je 8
Gefäßen)

Lyophilisierte
spezifische
Amplifikations- und
DetektionsmischungGebrauchsfertig

Zusätzliche Kappen

Gelbe Kappen

96 (12 Streifen mit je 8
Kappen)Neogen Lyselösung (LS)®

Neogen® Reagenzkontrolle Durchsichtige(RC)
Gefäße16 (2 Beutel mit 8
einzelnen Gefäßen)Gebrauchsfertig
Lyophilisierte KontrollDNS, Amplifikationsund Detektionsmatrix

Gebrauchsfertig

Die Negativkontrolle (nicht im Kit enthalten) ist ein steriles Anreicherungsmedium, z. B. Demi Fraser Bouillon.
Als Negativkontrolle kein Wasser verwenden.

Sicherheit

Der Anwender muss sämtliche in der Gebrauchsanleitung des Neogen Molekularen Detektionssystems und desNeogen Molekularen Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis aufgeführten Sicherheitshinweise gelesen undverstanden haben. Bewahren Sie diese Sicherheitshinweise auf, um später auf sie zurückgreifen zu können.
WARNUNG: Bezeichnet eine Gefahrensituation, die – wenn sie nicht vermieden wird – zum Tode oder zu schweren
Verletzungen und/oder Sachschäden führen kann.
HINWEIS: Bezeichnet eine potenzielle Gefahrensituation, die – wenn sie nicht vermieden wird – zu Sachschäden
führen kann.

W WARNUNG
Den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis nicht zur Diagnose von Erkrankungen bei
Menschen oder Tieren einsetzen.
Die bei der Methode mit dem Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis entstehenden
Mengen an Listeria monocytogenes können ausreichen, um bei schwangeren Frauen und immungeschwächten
Menschen Totgeburten und Todesfälle zu verursachen, wenn sie diesen ausgesetzt werden.
Der Anwender muss sein Personal in den entsprechenden Testmethoden unterweisen: z. B. laut den Grundsätzen derguten Laborpraxis, ISO/IEC 17025(4) oder ISO 7218(5).
Maßnahmen zur Reduzierung der mit einem falsch negativen Ergebnis verbundenen Risiken, die zur Freigabe eines
kontaminierten Produkts führen können:• Befolgen Sie das Protokoll und führen Sie die Tests genau wie in der Gebrauchsanweisung angegeben durch.
• Lagern Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis wie auf der Packung und in den
Gebrauchsanweisungen beschrieben.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis stets vor Ablauf desVerfalldatums.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis für Lebensmittel- undUmgebungsproben, die intern oder durch Dritte validiert wurden.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis nur für Oberflächen,
Desinfektionsmittel, Protokolle und Bakterienstämme, die intern oder durch Dritte validiert wurden.
• Wenn Sie eine Umgebungsprobe haben, die einen Neutralisationspuffer mit einem Acrylsulfonat-Komplex enthält,
dann müssen Sie vor dem Testen der Probe eine 1:2 Verdünnung (1 Teil Probe in 1 Teil steriler Anreicherungsbouillon)
vornehmen. Ebenso können Sie 10 µl Anreicherungsmedium mit Neutralisationspuffer (NB) in die Neogen Lysegefäßeübertragen. Neogen® Produkte zur Probennahme, die Neutralisationspuffer mit Acrylsulfonat-Komplex enthalten:
RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G und HS2410NB2G.

2DE(Deutsch)

Zur Verminderung der Risiken, die mit der Exposition gegenüber Chemikalien und biogefährlichen Stoffen
verbunden sind:• Es wird dringend empfohlen, das weibliche Laborpersonal über das Risiko für einen sich entwickelnden Fötus zu
informieren, das sich aus einer Infektion der Mutter durch Kontakt mit Listeria monocytogenes ergibt.
• Führen Sie die Testverfahren mit Pathogenen in einem entsprechend ausgerüsteten Labor und unter der Aufsicht vongeschultem Fachpersonal durch. Inkubierte Anreicherungsmedien und Arbeitsgeräte oder Oberflächen, die in Kontakt
mit inkubierten Anreicherungsmedien gekommen sind, können so stark mit Krankheitserregern belastet sein, dass ein
Risiko für die menschliche Gesundheit besteht.
• Befolgen Sie stets die üblichen Labor-Sicherheitsmaßnahmen und tragen Sie bei der Handhabung von Reagenzien und
kontaminierten Proben angemessene Schutzkleidung und geeigneten Augenschutz.
• Vermeiden Sie nach der Amplifikation den Kontakt mit dem Anreicherungsmedium und den Reagenzgefäßen.
• Die angereicherten Proben sind gemäß Branchenstandards zu entsorgen.
• Proben, die während der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein biologisches
Risiko dar und sollten NICHT in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät eingesetzt werden.
Zur Verminderung von Kreuzkontaminationsrisiken bei der Vorbereitung des Tests:• Tragen Sie stets Handschuhe (sowohl zum Schutz des Anwenders als auch, um ein Einbringen von Nukleasen
zu vermeiden).
Zur Verringerung der Risiken, die mit Umweltkontamination verbunden sind:
Bei der Entsorgung sind die aktuellen Industrienormen zur Entsorgung von kontaminiertem Abfall zu beachten.
Zur Verminderung der Risiken, die mit der Exposition gegenüber heißen Flüssigkeiten verbunden sind:• Achten Sie darauf, die empfohlene Temperatur des Heizgeräts nicht zu überschreiten.
• Achten Sie darauf, die empfohlene Anwärmdauer nicht zu überschreiten.
• Verwenden Sie ein geeignetes, kalibriertes Thermometer, um sicherzustellen, dass der Neogen® Molekulare
Detektion – Heizblockeinsatz die richtige Temperatur aufweist (z. B. ein Thermometer zum partiellen Eintauchen oderein Digitalthermometer, kein Tauchthermometer). Das Thermometer muss an der vorgesehenen Stelle des Neogen
Molekulare Detektion – Heizblockeinsatzes platziert werden.

HINWEIS
Zur Verminderung von Kreuzkontaminationsrisiken bei der Vorbereitung des Tests:• Wechseln Sie vor Hydratation der Reagenzpellets die Handschuhe.
• Es wird empfohlen, sterile, hochreine Pipettenspitzen mit Aerosolschutz (Filter) zu verwenden.
• Verwenden Sie für jede Probenübertragung eine neue Pipettenspitze.
• Wenden Sie die Grundsätze der Guten Laborpraxis bei der Übertragung der angereicherten Probe auf das Lysegefäß
an. Um eine Kontamination der Pipette zu vermeiden, sollte der Anwender bei der Übertragung einen Zwischenschritt
durchführen. Beispielsweise kann der Anwender jede angereicherte Probe auf ein steriles Gefäß übertragen.
• Sofern möglich, arbeiten Sie an einer molekularbiologischen Arbeitsstation mit Germizidlampe. Desinfizieren
Sie die Laborbänke und Arbeitsgeräte (Pipetten, Cap/Decap-Werkzeuge usw.) regelmäßig mit einer 1–5%igen
Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder DNS-Entfernungslösung.
Zur Verminderung der Risiken, die mit einem falsch positiven Ergebnis verbunden sind:• Öffnen Sie die Reagenzgefäße niemals nach der Amplifikation.
• Kontaminierte Gefäße immer aus dem Nachweis-Vorbereitungsbereich entfernen und für 1 Stunde in einer 1–5%igen(v:v in Wasser) Haushaltsbleichmittellösung oder einer gleichwertigen Lösung einweichen und dann entsorgen.
• Autoklavieren Sie die Reagenzgefäße niemals nach der Amplifikation.
Weitere Informationen sowie die jeweils vor Ort geltenden Richtlinien zur Entsorgung entnehmen Sie bitte dem
Sicherheitsdatenblatt.
Sollten Sie Fragen zu bestimmten Anwendungen oder Verfahren haben, besuchen Sie unsere Website unter
www.neogen.com oder wenden Sie sich an den lokalen Neogen-Verkaufsvertreter oder Händler.

Verantwortung des Anwenders

Anwender müssen sich auf eigene Verantwortung mit den Gebrauchsanweisungen und Informationen des Produkts
vertraut machen. Für weitere Informationen besuchen Sie unsere Website unter www.neogen.com oder wenden Sie sichan Ihren lokalen Neogen Verkaufsvertreter oder Händler.
Bei der Auswahl einer Testmethode ist zu beachten, dass externe Faktoren wie Probenentnahmemethoden, Testprotokolle,
Probenaufbereitung, Handhabung und Labortechnik die Ergebnisse beeinflussen können.
Es liegt in der Verantwortung des Anwenders bei der Auswahl einer Testmethode oder eines Produkts, diese mit einer
ausreichenden Anzahl von Proben und Kontrollen zu evaluieren, um sicherzustellen, dass die gewählte Testmethode seinen
Anforderungen entspricht.
Der Anwender trägt ebenfalls die Verantwortung dafür, dass die angewendeten Testmethoden und Ergebnisse den
Anforderungen seiner Kunden und Lieferanten entsprechen.

3

DE(Deutsch)

Wie bei allen Testmethoden, stellen die mit Neogen Lebensmittelsicherheitsprodukten erhaltenen Ergebnisse keine
Garantie für die Qualität der untersuchten Matrices oder Prozesse dar.
Als Unterstützung von Kunden bei der Validierung der Methode für verschiedene Lebensmittel-Matrices hat Neogen das
Set Neogen® Molekulare Detektion Matrixkontrolle entwickelt. Verwenden Sie bei Bedarf die Matrixkontrolle (MC), um zu
bestimmen, ob die Matrix in der Lage ist, die Ergebnisse der Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes
Nachweis zu beeinträchtigen. Testen Sie mehrere für die Matrix repräsentative Proben, d. h. Proben unterschiedlicher
Herkunft, während einer Validierungsphase, wenn die Neogen Methode zum Einsatz kommt oder beim Testen neuer oder
unbekannter Matrices oder Matrices, die Rohmaterial- oder Verfahrensänderungen durchlaufen haben.
Eine Matrix kann als eine Produktart mit spezifischen Eigenschaften, z. B. in Bezug auf ihre Zusammensetzung undVerarbeitung, definiert werden. Unterschiede zwischen Matricen können so einfach sein wie die Auswirkungen, die vonUnterschieden bei deren Verarbeitung oder deren Präsentation (z. B. roh im Vergleich zu pasteurisiert; frisch im Vergleich
zu getrocknet usw.) verursacht werden.

Haftungsbeschränkungen/Beschränkte Rechtsmittel

AUSSER ES WIRD AUSDRÜCKLICH ANDERS IM ABSCHNITT DER HAFTUNGSBESCHRÄNKUNGEN DER VERPACKUNGDES JEWEILIGEN PRODUKTS ANGEGEBEN, LEHNT NEOGEN ALLE AUSDRÜCKLICHEN UND STILLSCHWEIGENDENGARANTIEN, EINSCHLIESSLICH, JEDOCH NICHT BESCHRÄNKT AUF, DIE GEWÄHRLEISTUNG DER MARKTGÄNGIGKEIT ODER DER EIGNUNG FÜR EINEN BESTIMMTEN ZWECK AB. Sollte sich ein Produkt von Neogen Food Safety als
defekt herausstellen, wird es von Neogen oder einem autorisierten Vertragshändler nach eigenem Ermessen ersetzt oderder Kaufpreis zurückerstattet. Gewährleistungsansprüche bestehen nicht. Bei weiteren Fragen wenden Sie sich bitte an
Ihren Neogen-Vertreter oder autorisierten Neogen-Händler.

Haftungsbeschränkungen von Neogen

NEOGEN HAFTET NICHT FÜR VERLUSTE ODER SCHÄDEN, GANZ GLEICH OB MITTELBARE, UNMITTELBARE,
SPEZIELLE, NEBEN- ODER FOLGESCHÄDEN EINSCHLIESSLICH, ABER NICHT BESCHRÄNKT AUF ENTGANGENEN
GEWINN. In keinem Fall übersteigt die Haftung von Neogen den Kaufpreis des angeblich defekten Produkts.

Lagerung und Entsorgung

Lagern Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis bei 2–8 °C. Nicht einfrieren. Kit
lichtgeschützt lagern. Vergewissern Sie sich nach dem Öffnen des Sets, dass der Folienbeutel unbeschädigt ist. Verwenden
Sie das Set keinesfalls bei beschädigtem Beutel. Nach dem Öffnen sollten nicht verwendete Reagenzgefäße gemeinsam
mit dem Trockenmittel stets im wiederverschließbaren Beutel verwahrt werden, um die Stabilität der lyophilisierten
Reagenzien sicherzustellen. Wieder verschlossene Beutel können maximal 60 Tage bei 2–8 °C aufbewahrt werden.
Verwenden Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis nicht nach Ablauf desVerfalldatums. Das Verfalldatum und die Chargennummer sind auf dem äußeren Etikett der Packung angegeben. Nachdem Gebrauch können das Anreicherungsmedium und die Gefäße des Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria
monocytogenes Nachweises pathogene Stoffe enthalten. Beachten Sie nach Abschluss der Testverfahren die gültigen
Branchennormen für die Entsorgung von kontaminierten Abfällen. Weitere Informationen sowie die jeweils vor Ort
geltenden Richtlinien zur Entsorgung entnehmen Sie bitte dem Sicherheitsdatenblatt.

Gebrauchsanweisung

Befolgen Sie alle Anweisungen genau. Andernfalls werden möglicherweise ungenaue Ergebnisse erzielt.
Desinfizieren Sie die Laborbänke und Arbeitsgeräte (Pipetten, Cap/Decap-Werkzeuge usw.) regelmäßig mit einer
1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder DNS-Entfernungslösung.
Der Anwender sollte die Funktionsqualifizierung (Operational Qualification, OQ) für das Neogen Molekulare
Detektionssystem absolvieren wie im Dokument „Protokolle und Anweisungen für Installationsqualifizierung (IQ)/
Funktionsqualifizierung (OQ) für das Neogen Molekulare Detektionssystem“ beschrieben(6).
Spezifische Anweisungen finden Sie im Abschnitt „Spezielle Anweisungen für validierte Verfahren“:
Für Anreicherungsprotokolle gemäß AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 und AOAC® Performance Tested
MethodSM Zertifikat Nr. 081501 in Tabelle 3.
Für Anreicherungsprotokolle gemäß NF Validation-Zertifikat 3M 01/15-09/16 in Tabelle 4.

Probenanreicherung

Tabelle 2, 3 oder 4 enthalten Richtlinien zur Anreicherung für Lebensmittel- und Umgebungsproben. Der Anwender
ist selbst für die Validierung von alternativen Probennahmeprotokollen oder Verdünnungsverhältnissen verantwortlich,
durch die sichergestellt werden muss, dass dieses Testverfahren den Anforderungen entspricht.

Lebensmittel

1. Lassen Sie das Demi Fraser Basis Bouillon-Anreicherungsmedium (enthält Eisen-Ammonium-Citrat) auf die
Raumtemperatur des Labors aufwärmen.
2. Mischen Sie Anreicherungsmedium und Probe aseptisch gemäß den Tabellen 2, 3 oder 4. Bei der Handhabung vonFleisch- und partikelreichen Proben wird die Verwendung von Filterbeuteln empfohlen.
4

DE(Deutsch)

3. Homogenisieren Sie gründlich durch Verschneiden, Vermischung oder mischen von Hand für 2 ± 0,2 Minuten.
Inkubieren Sie bei 37 ± 1 °C gemäß der entsprechenden Zeit aus Tabelle 2, 3 oder 4.
4. Geben Sie bei Rohmilchprodukten (siehe Tabellen 2, 3 oder 4) 0,1 ml der Erstanreicherung in 10 ml der Fraser Bouillon.
Inkubieren Sie 37 ± 1 °C für 20–24 Stunden.

Umgebungsproben

Ein Instrument zur Probennahme kann ein Schwamm sein, der mit einer neutralisierenden Lösung hydriert ist,
um die Wirkung von Desinfektionsmitteln zu deaktivieren. Neogen empfiehlt die Verwendung eines Biozid-freien
Zelluloseschwamms. Bei der Neutralisierungslösung kann es sich um eine Dey-Engley (D/E)-Neutralisierungs- oder
Letheen-Bouillon handeln. Der Bereich muss nach der Probenahme desinfiziert werden.
WARNUNG: Sollten Sie einen Neutralisationspuffer (NB) mit Acrylsulfonat-Komplex als Hydrierlösung für den Schwamm
verwenden, müssen Sie vor dem Testen eine 1:2-Verdünnung (1 Teil Probe in 1 Teil steriler Anreicherungsbouillon) derangereicherten Umgebungsprobe vornehmen, um die mit einem falsch negativen Ergebnis verbundenen Risiken, die zur
Freigabe eines kontaminierten Produkts führen können, zu verringern. Ebenso können Sie 10 μL Anreicherungsmedium
mit Neutralisationspuffer in die Neogen Lysegefäße übertragen.
Die empfohlene Größe des Probenbereichs, mit dem die Anwesenheit oder Abwesenheit des Pathogens auf der
Oberfläche überprüft werden soll, liegt bei mindestens 100 cm2 (10 cm x 10 cm oder 4″ x 4″). Decken Sie bei derProbennahme mit einem Schwamm den gesamten Bereich in zwei Richtungen (links nach rechts oder oben nach unten)
ab oder sammeln Sie Umgebungsproben gemäß Ihrem aktuellen Probennahmeprotokoll oder gemäß den Richtlinien der
FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) oder ISO 18593(7).
1. Lassen Sie das Demi Fraser Basis Bouillon-Anreicherungsmedium (enthält Eisen-Ammonium-Citrat) auf die
Raumtemperatur des Labors aufwärmen.
2. Mischen Sie Anreicherungsmedium und Probe aseptisch gemäß den Tabellen 2, 3 oder 4.
3. Homogenisieren Sie gründlich durch Verschneiden, Vermischung oder mischen von Hand für 2 ± 0,2 Minuten.
Inkubieren Sie bei 37 ± 1 °C für 24–30 Stunden gemäß der entsprechenden Zeit aus Tabelle 2, 3 oder 4.
Tabelle 2: Allgemeine Anreicherungsprotokolle bei 37 ± 1 °C unter Verwendung der Demi Fraser Basis Bouillon und Fraser
Basis Bouillon, je nach Bedarf.
Probenmatrix

Probengröße

Anreicherungsbouillonvolumen (ml)Anreicherungszeit(Stunden)

25 g

225

24–30

1
Schwamm

100 oder 225

24–30

1 Tupfer

10

24–30

25 g

475

28–32

Wärmebehandeltes,
gekochtes,
gepökeltes
Fleisch, Geflügel,Meeresfrüchte
und Fisch
Wärmebehandelte/
pasteurisierte
Milchprodukte
Erzeugnisse
und Gemüse
Lebensmittel aus
mehreren Zutaten
Umgebungsproben(a)Rohes Fleisch,
Geflügel,
Meeresfrüchte,
Fisch

5

DE

Probenmatrix

Erstanreicherung(Demi Fraser Bouillon)(a)Zweitanreicherung(Fraser Bouillon)(a)Anreicherungsbouillonvolumen (ml)Anreicherungszeit(Stunden)

20–24

Probengröße

Rohmilchprodukte

25 g(Deutsch)Anreicherungszeit(Stunden)

Probengröße

Anreicherungstemperatur
(°C)

20–24

0,1 mlin 10 ml
FraserBouillongeben

37 ± 1

225

Probenanalysevolumen(b)10 μl(a) Die Demi Fraser Bouillon und die Fraser Bouillon sollten bei der Erstanreicherung oder Zweitanreicherung immer mit
Fraser Bouillon-Ergänzung (Eisen-Ammonium-Citrat) ergänzt werden.
(b) Volumen der Probe, das in Neogen Lysegefäße übertragen wird. Siehe Schritt 4.6 im Abschnitt Lyse.

Spezifische Anweisungen für validierte Verfahren
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

In den OMASM- und PTMSM-Programmen des AOAC Research Institute erwies sich der Neogen Molekulare Detektion 2 –Listeria monocytogenes Nachweis als wirksame Methode zur Detektion von Listeria monocytogenes. Die in der Studie
getesteten Matrices sind in Tabelle 3 aufgeführt.
Tabelle 3. Anreicherungsprotokolle mit Verwendung der Demi Fraser Bouillon(a) bei 37 ± 1 °C gemäß AOAC OMASM
2016.08 und PTMSM Zertifikat Nr. 081501.
Probenmatrix

Probengröße

Rindfleisch-Hotdogs, Frischkäse, Vanilleeis,
Hüttenkäse mit 4 % Milchfett, Schokolade
mit 3 % Vollmilch, Römersalat, roher Spinat
im Beutel, kalt geräucherter Lachs

25 gAnreicherungsbouillon- Anreicherungsvolumen (ml)zeit (Stunden)
225

24–30

Rohes Geflügelfleisch

25 g

475

28–32

Feinkost-Putenfleisch

125 g

1125

24–30

Ganze Melone

Soviel Volumen,dass die Melone
schwimmen kann

26–30

Edelstahl

1 Schwamm

225

24–30

Versiegelter Beton

1 Schwamm

100

24–30

1 Tupfer

10

24–30

Umgebungsproben:

Cantaloupe(b)Kunststoff(c)Sämtliche Proben für die AOAC-Validierung wurden, sofern nicht anders angegeben, mittels Mixer homogenisiert.
(a)		Die Demi Fraser Bouillon und die Fraser Bouillon sollten bei der Erstanreicherung oder Zweitanreicherung immer mit
Fraser Bouillon-Ergänzung (Eisen-Ammonium-Citrat) ergänzt werden.
(b) Probe durch Mischen per Hand homogenisieren.
(c)		 Probe mit dem Vortexmischer homogenisieren.
6DE(Deutsch)NF VALIDATION gemäß AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Für weitere Informationen zum Ablauf der Validierung siehe NF VALIDATION-Zertifikat unter der oben genannten Website.
NF VALIDATION zertifizierte Methode in Übereinstimmung mit der ISO 16140-2(6) im Vergleich zur ISO 11290(3)Einsatzgebiet der Validierung: Proben von allen für den Menschen vorgesehenen Lebensmitteln und deren Umgebung(außer Proben aus der Primärproduktion)
Probenaufbereitung: Die Proben müssen gemäß EN ISO 11290-1(3) und EN ISO 6887(8) vorbereitet werden
Softwareversion: Siehe Zertifikat
Tabelle 4: Anreicherungsprotokolle gemäß NF VALIDATION-zertifizierter Methode 3M 01/15-09/16 bei 37 ± 1 °C unter
Verwendung einer Demi Fraser Bouillon und Fraser Bouillon, je nach Bedarf.
Allgemeines Protokoll Probengröße
Alle
Lebensmittelproben(außer rohes
Fleisch, rohe
Meeresfrüchte undRohmilchprodukte)

25 g

Umgebungsproben

25 g, 1 Tupferoder 1 Tuch

Anreicherungsbouillonvolumen(ml)

Anreicherungstemperatur(± 1 °C)

Anreicherungszeit(Stunden)

Probenanalysevolumen(a)Akzeptierte
Unterbrechungspunkte• Demi Fraser Bouillon bis
zu 72 Stunden

225

37

24–30

20 µl

• Lysat bei –20 °C• Lysat bei 4 °C bis zu
72 Stunden

Erstanreicherung (Demi Fraser Bouillon)(b)Zweitanreicherung (Fraser Bouillon)(b)Akzeptierte
AnreicheSpeziAnreicheAnreicheProben- UnterbrerungsAnreicheAnreichefisches
ProbenrungstemProben- rungstemanalysechungsbouillonrungszeit
rungszeit
Protokoll
größe
peratur
größe
peraturvolupunktevolumen(Stunden)(Stunden)(± 1 °C)(± 1 °C)men(c)(ml)• Fraser
BouillonRohes
bis zu 72
Fleisch,0,1 mlStundenrohe
in 10 ml
• Lysat bei
Meeres25 g
225
37
20–24
Fraser
37
20–24
10 µl
–20 °Cfrüchte undBouillon• Lysat bei
Rohmilchgeben
4 °C bis
produkte
zu 72
Stunden(a) Volumen der Probe, das in Neogen Lysegefäße übertragen wird. Siehe Schritt 4.6 im Abschnitt Lyse.
(b) Die Demi Fraser Bouillon und die Fraser Bouillon sollten bei der Erstanreicherung oder Zweitanreicherung immer mit
Fraser Bouillon-Ergänzung (Eisen-Ammonium-Citrat) ergänzt werden.
(c) Volumen der Probe, das in Neogen Lysegefäße übertragen wird. Siehe Schritt 4.6 im Abschnitt Lyse.
HINWEIS: Proben von mehr als 25 g wurden in der NF Validation-Studie nicht getestet.
Vorbereitung der Neogen® Molekulare Detektion – Beladehilfe
1. Befeuchten Sie ein Tuch mit einer 1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder einer gleichwertigen
Lösung und wischen Sie die Neogen® Molekulare Detektion – Beladehilfe ab.
2. Spülen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit Wasser ab.
7

DE(Deutsch)

3. Trocknen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit einem Einmalhandtuch.
4. Vergewissern Sie sich, dass die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe vor dem Gebrauch trocken ist.
Vorbereitung des Neogen® Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatzes
Platzieren Sie den Neogen® Molekulare Detektion – Kühlblock direkt auf der Laborbank; verwenden Sie den Kühlblock bei
Laborraumtemperatur (20–25 °C).
Vorbereitung des Neogen® Molekulare Detektion – Heizblockeinsatzes
Legen Sie den Neogen® Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz in ein Trocken-Doppelblock-Heizgerät. Schalten Sie das
Trockenblock-Heizgerät ein und stellen Sie die Temperatur für den Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz auf
100 ± 1 °C ein.
HINWEIS: Warten Sie je nach Heizgerät etwa 30 Minuten, bis der Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die
geeignete Temperatur erreicht hat. Stellen Sie mit einem kalibrierten Thermometer (z. B. ein Thermometer zum partiellen
Eintauchen oder ein Digitalthermometer, kein Tauchthermometer) an der vorgesehenen Messposition fest, ob der
Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die erforderliche Temperatur von 100 ± 1 °C erreicht hat.
Vorbereitung des Neogen® Molekulare Detektion – Geräts
1. Starten Sie die Neogen® Molekulares Detektionssystem – Software und loggen Sie sich ein. Setzen Sie sichmit Ihrem Vertreter von Neogen Food Safety in Verbindung, um sicherzustellen, dass Sie über die aktuellste
Softwareversion verfügen.
2. Schalten Sie das Neogen Molekulare Detektion – Gerät ein.
3. Erstellen oder bearbeiten Sie für jede Probe einen Testdurchlauf. Weitere Details entnehmen Sie bitte dem
Benutzerhandbuch zum Neogen Molekularen Detektionssystem.
HINWEIS: Das Neogen Molekulare Detektion – Gerät muss bereit sein, bevor die Neogen Molekulare Detektion –Beladehilfe mit den Reaktionsgefäßen eingesetzt werden kann. Dieses Erwärmungsverfahren nimmt etwa 20 Minuten in
Anspruch und wird durch eine ORANGEFARBENE Leuchte auf der Statusleiste des Geräts angezeigt. Sobald das Gerät
einsatzbereit ist, wechselt die Leuchte der Statusleiste auf GRÜN.
Lyse
Entfernen Sie die Unterseite des Neogen Lyseträgers mit einem Schraubendreher oder Spatel, bevor Sie ihn im Neogen
Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz platzieren.

1. Lassen Sie die Lyselösung (Neogen Lyselösung) im Gefäß über Nacht (16–18 Stunden) bei Raumtemperatur(20–25 °C) aufwärmen. Um die Neogen Lysegefäße auf Raumtemperatur zu erwärmen, können Sie die Neogen
Lysegefäße auch für mindestens 2 Stunden auf die Laborbank stellen, für 1 Stunde bei 37 ± 1 °C inkubieren oder sie für
30 Sekunden bei 100 °C in ein Trocken-Doppelblock-Heizgerät setzen.
2. Mischen Sie die mit Kappen verschlossenen Gefäße. Fahren Sie innerhalb von 4 Stunden mit dem nächsten Schritt fort.
3. Nehmen Sie die Anreicherungsbouillon aus dem Inkubator.
4. Für jede Probe und die Negativkontrolle (NC) (steriles Anreicherungsmedium) wird jeweils ein Gefäß mit
Neogen Lyselösung benötigt.
4.1 Die Neogen Lyselösung-Gefäßstreifen können auf die gewünschte Neogen Lyselösung-Anzahl an Gefäßen zurechtgeschnitten werden. Wählen Sie die Anzahl der erforderlichen Neogen Lysegefäße oder 8er Gefäßstreifen aus.
Setzen Sie die Neogen Lysegefäße in einen leeren Gefäßträger.
4.2 Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, öffnen Sie jeweils nur einen Neogen Lysegefäßstreifen und verwenden
Sie bei jeder einzelnen Übertragung eine neue Pipette.
4.3 Übertragen Sie die angereicherten Proben wie unten beschrieben auf die Neogen Lysegefäße:Übertragen Sie zuerst die angereicherten Proben jeweils einzeln in ein Neogen Lysegefäß. Übertragen Sie die
NC zuletzt.

8DE(Deutsch)

4.4 Öffnen Sie jeden Neogen Streifen mit Lysegefäßen einzeln mit dem Neogen® Molekulare Detektion – Cap/DecapWerkzeug – Lyse.
4.5 Entsorgen Sie die Kappen der Neogen Lysegefäße – wenn noch Lysat für weitere Tests übrig bleibt, bewahren Sie
die Kappen in einem sauberen Container auf, um sie nach der Lyse wieder aufzusetzen.
4.5.1 Informationen zur Verarbeitung von nicht verwendetem Lysat finden Sie in Anhang A.
4.6 Übertragen Sie 20 µl Probe in ein Neogen- Lysegefäß, sofern in der Protokolltabelle 2, 3 oder 4 nicht anders
angegeben (z. B. bei Rohmilchprodukten oder wenn Sie Umgebungsproben mit Neutralisierungspuffer verwenden,sind 10 µl zu verwenden).
20 µl

5. Wiederholen Sie Schritt 4.4 bis 4.6, bis jede einzelne Probe in ein zugeordnetes Neogen Lysegefäße im Streifen
gegeben wurde.
6. Sobald Sie alle Proben übertragen haben, übertragen Sie 20 µl der NC (steriles Anreicherungsmedium, z. B., Demi
Fraser Bouillon) in ein Neogen Lysegefäß. Als NC kein Wasser verwenden.
7. Stellen Sie fest, ob der Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die erforderliche Temperatur von 100 ± 1 °C
erreicht hat.
8. Stellen Sie den Träger ohne Deckel mit Neogen Lysegefäßen in den Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz
und erwärmen Sie ihn 15 ± 1 Minuten lang. Dabei ändert sich die Farbe der Neogen Lyselösung von rosafarben (kalt) zu
gelb (heiß).
8.1 Proben, die während der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein
biologisches Risiko dar und sollten NICHT in das Neogen Molekulare Detektions – Gerät eingesetzt werden.
9. Nehmen Sie den Träger ohne Deckel mit den Neogen Lysegefäßen aus dem Heizblockeinsatz. Lassen Sie ihn maximal
5 bis 10 Minuten lang im Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz abkühlen. Der Neogen Molekulare
Detektion – Kühlblockeinsatz wird bei Raumtemperatur verwendet und sollte direkt auf die Laborbank gesetzt werden.
Wenn die Lyselösung abgekühlt ist, nimmt sie wieder eine rosa Farbe an.
10. Nehmen Sie den Träger mit den Neogen Lysegefäßen aus dem Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplifikation
1. Für jede Probe und ihre NC ist ein Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis-Reagenzgefäß erforderlich.
1.1 Die Gefäßstreifen können auf die gewünschte Anzahl der Reagenzgefäße zurechtgeschnitten werden. Wählen Sie
die Anzahl der erforderlichen Reagenzgefäße für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes
Nachweis oder den 8er Gefäßstreifen.
1.2 Stellen Sie die Reagenzgefäße für Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis in einenleeren Gefäßträger.
1.3 Vermeiden Sie es, die Reagenzkügelchen im unteren Teil der Gefäße aufzurühren.
2. Wählen Sie 1 Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle und stellen Sie es in den Gefäßträger.
3. Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, öffnen Sie jeweils nur einen Reagenzgefäßstreifen des Neogen
Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis und verwenden Sie bei jedem Übertragungsschritt eineneue Pipettenspitze.
9DE(Deutsch)

4. Übertragen Sie wie nachfolgend beschrieben die einzelnen Lysate in ein Reagenzgefäß für den Neogen Molekulare
Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis und in ein Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle:Übertragen Sie jedes Probenlysat zuerst in ein eigenes Reagenzgefäß für den Neogen Molekulare Detektion 2 –Listeria monocytogenes Nachweis, gefolgt von der NC. Hydrieren Sie das Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle
als letztes.
5. Öffnen Sie die Reagenzgefäße für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis mit dem
Neogen® Molekulare Detektion – Cap/Decap-Werkzeug – Reagenz, und zwar immer nur einen Reagenzgefäßstreifen
auf einmal. Werfen Sie die Kappe weg.
5.1 Übertragen Sie 20 µl des Probenlysats aus der oberen Hälfte der Flüssigkeit (Ablagerungen vermeiden) im
Neogen Lysegefäß in das entsprechende Reagenzgefäß für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria
monocytogenes Nachweis. Pipettieren Sie schräg in die Gefäße, um ein Aufrühren der Kügelchen zu vermeiden.
Mischen Sie anschließend den Gefäßinhalt, indem Sie ihn 5 Mal auf und ab pipettieren.
5.2 Wiederholen Sie Schritt 5.1, bis Sie jedes einzelne Probenlysat einem entsprechenden Reagenzgefäß für die
Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis im Streifen hinzugefügt haben.
5.3 Verschließen Sie die Reagenzgefäße für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis
mit den mitgelieferten zusätzlichen Kappen und üben Sie mit der abgerundeten Seite des Neogen Molekulare
Detektion – Cap/Decap-Werkzeugs – Reagenz in einer Vorwärts- und Rückwärtsbewegung Druck aus, um
sicherzustellen, dass die Kappe fest sitzt.
5.4 Wiederholen Sie bei Bedarf die Schritte 5.1 bis 5.3 bei allen zu prüfenden Proben.
5.5 Sobald Sie alle Probenlysate übertragen haben, wiederholen Sie Schritt 5.1, um 20 µl des NC-Lysats in ein
Reagenzgefäß für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis zu übertragen.
5.6 Übertragen Sie 20 µl des NC-Lysats in ein Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle. Pipettieren Sie schräg in die
Gefäße, um ein Aufrühren der Kügelchen zu vermeiden. Mischen Sie anschließend den Gefäßinhalt, indem Sie ihn
5 Mal auf und ab pipettieren.
6. Beladen Sie eine saubere und dekontaminierte Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit den mit Kappen
verschlossenen Gefäßen. Schließen und verriegeln Sie die Klappe der Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe.

20 µL

7. Überprüfen und bestätigen Sie die Konfiguration des Durchlaufs in der Neogen Molekulare Detektion – Software.
8. Klicken Sie auf die Schaltfläche „Start“ in der Software und wählen Sie anschließend das zu verwendende Gerät aus. Die
Klappe des gewählten Geräts öffnet sich automatisch.
9. Setzen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät und schließen
Sie die Klappe, um mit dem Test zu beginnen. Die Ergebnisse sind innerhalb von 75 Minuten verfügbar, obgleich
positive Ergebnisse möglicherweise schneller erfasst werden.
10. Nehmen Sie nach Abschluss des Tests die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe aus dem Neogen Molekulare
Detektion – Gerät und entsorgen Sie die Gefäße, indem Sie sie 1 Stunde lang in ausreichender Entfernung vom
Vorbereitungsbereich in einer 1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder einer gleichwertigen
Lösung einweichen.
HINWEIS: Um das Risiko eines falsch positiven Ergebnisses infolge einer Kreuzkontamination zu minimieren, öffnen Sie
niemals Reagenzgefäße, die amplifizierte DNS enthalten. Dies betrifft Reagenzgefäße für den Neogen Molekulare Detektion
2 – Listeria monocytogenes Nachweis sowie Gefäße mit Neogen Reagenzkontrolle und Matrixkontrolle. Entsorgen Sie dieverschlossenen Reagenzgefäße, indem Sie sie 1 Stunde lang in ausreichender Entfernung vom Vorbereitungsbereich in einer
1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder einer gleichwertigen Lösung einweichen.

Interpretation der Ergebnisse

Die durch die Detektion der Nukleinsäureamplifikation entstehende Lichtkurve wird anhand eines Algorithmus
ausgewertet. Die Ergebnisse werden automatisch von der Software analysiert und je nach Ergebnis farbcodiert.
Ein positives oder negatives Ergebnis wird durch die Analyse einer bestimmten Anzahl an eindeutigen Kurvenparameternbestimmt. Die vorläufigen positiven Ergebnisse werden in Echtzeit erstellt, während negative und zu überprüfende
Ergebnisse erst nach Abschluss des Testdurchlaufs dargestellt werden.
10

DE(Deutsch)

Vorläufig positive Ergebnisse sollten anhand der Standardarbeitsanweisung für Laboratorien oder durch dasanschließende Referenzverfahren(1,2,3) bestätigt werden, beginnend mit der Übertragung aus der Erstanreicherung in die
Zweitanreicherungsbouillon (sofern zutreffend), gefolgt von anschließendem Ausplattieren und Bestätigen von Isolatenmittels geeigneter biochemischer und serologischer Verfahren.
HINWEIS: Selbst ein negatives Ergebnis führt nicht zu einem Ergebnis von null, da das System und die Amplifikationsreagenzien des Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweises einen „Hintergrund“
aufweisen, der in relativem Verhältnis zur Lichteinheit (RLU) steht.
Falls es in seltenen Fällen zu einer ungewöhnlichen Lichtleistung kommt, wird diese vom Algorithmus als „Zu überprüfen“
gekennzeichnet. Neogen empfiehlt, den Nachweis der so gekennzeichneten Proben zu wiederholen. Falls das Ergebnis
weiterhin als „Zu überprüfen“ gekennzeichnet bleibt, bestätigen Sie das Ergebnis anhand Ihres bevorzugten Testverfahrens
oder gemäß den jeweils geltenden Richtlinien.
Tabelle 5: Ergebnissymbole für Proben und deren Interpretation in der Neogen Molekulares Detektionssystem-Software.
Vertiefungstyp

Vertiefungsergebnissymbol

ErgebnisInterpretation

Probe

Positiv

Die Probe wird vorläufig positiv für das
Zielpathogen betrachtet.

Probe

Negativ

Die Probe wird negativ für das Zielpathogen betrachtet.

Inhibiert

Die Probenmatrix hat den Nachweis gehemmt.
Ein neuer Test ist erforderlich. Weitere Informationen
finden Sie im Problemlösungsabschnitt und derGebrauchsanweisung des Testkits.

Zuüberprüfen

Das Vorhandensein oder Fehlen des Zielpathogens
war nicht ermittelbar. Ein neuer Test ist erforderlich.
Weitere Informationen finden Sie im Problemlösungsabschnitt und der Gebrauchsanweisung
des Testkits.

Probe

Probe

Probe

FehlerKeine Bioluminszenz festgestellt. Ein neuer Test ist
erforderlich. Weitere Informationen finden Sie im
Problemlösungsabschnitt und der Gebrauchsanweisung
des Testkits.

Bestätigung der Ergebnisse anhand der zertifizierten NF VALIDATION-Methode
Option 1: Nach ISO 11290(3) standardmäßig mit Demi Fraser-Anreicherung.
Option 2: Durch Isolation auf PALCAM-Agar oder auf chromogenem Agar als Bestandteil einer zertifizierten
NF VALIDATION-Methode zur Detektion von Listeria monocytogenes. Das Vorhandensein charakteristischer Kolonien ist
ausreichend für den Nachweis von Listeria monocytogenes.
Option 3: Verwenden Sie die in der Norm EN ISO 7218(5) beschriebenen Nukleinsäure-Sonden, die an isolierten Kolonien
von selektivem Agar angewendet werden (siehe Optionen 1 oder 2).
Option 4: Beim Verwenden einer anderen zertifizierten NF VALIDATION-Methode muss sich das grundsätzliche Verfahrenvon dem Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes Nachweis unterscheiden. Das gesamte für diesezweite gesicherte Methode beschriebene Protokoll muss befolgt werden. Vor dem Beginn der Bestätigung müssen alle
Schritte für beide Methoden allgemein bekannt sein.
Bei abweichenden Ergebnissen (mutmaßlich positiven beim der alternativen Methode, unbestätigten Ergebnissen eines derzuvor genannten Verfahren) muss das Labor die erforderlichen Maßnahmen befolgen, um die Richtigkeit der erhaltenden
Ergebnisse sicherzustellen.
Bei abweichenden Ergebnissen (vermutlich positiv mit dem Neogen Molekulare Detektion 2 – Listeria monocytogenes
Nachweis, nicht bestätigt durch eines der oben beschriebenen Verfahren) muss das Labor die erforderlichen Maßnahmen
befolgen, um die Richtigkeit der erhaltenen Ergebnisse sicherzustellen.
Sollten Sie Fragen zu bestimmten Anwendungen oder Verfahren haben, besuchen Sie unsere Website unter
www.neogen.com oder wenden Sie sich an den lokalen Neogen-Verkaufsvertreter oder Händler.
Anhang A. Protokoll-Unterbrechungen: Lagerung und erneutes Testen von wärmebehandelten Lysaten.
1. Um ein wärmebehandeltes Lysat zu lagern, setzen Sie eine neue, saubere Kappe auf das Lysegefäß (siehe „Lyse“,
Abschnitt 4.5).
2. Lagern Sie das Lysat bis zu 72 Stunden bei 4 bis 8 °C.
3. Bereiten Sie eine gelagerte Probe zur Amplifikation vor, indem Sie sie zum Mischen 2–3 Mal umdrehen.
4. Öffnen Sie die Gefäße.
11

DE(Deutsch)

5. Setzen Sie die gemischten Lysatgefäße in den Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz und erwärmen Sie sie
5 ± 1 Minuten lang bei 100 ± 1 °C.
6. Nehmen Sie den Träger mit den Neogen Lysegefäßen en aus dem Heizblockeinsatz und lassen Sie ihn maximal 5 bis
10 Minuten lang im Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz abkühlen.
7. Setzen Sie das Protokoll ab dem oben beschriebenen Abschnitt „Amplifikation“ fort.

Literaturnachweise:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of
Listeria monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Erklärung der Produktbeschriftungs-Symbole
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

IT(Italiano)

Data di pubblicazione: 2024-01

Istruzioni sul prodotto
Analisi molecolare di seconda generazione per il rilevamento
di Listeria monocytogenes
Descrizione del prodotto e uso previsto

L’Analisi molecolare Neogen® di seconda generazione per il rilevamento di Listeria monocytogenes è utilizzata con il
Sistema per l’analisi molecolare Neogen® per il rilevamento rapido e specifico di Listeria monocytogenes in campioni
di alimenti e ambientali arricchiti. Le analisi molecolari Neogen per il rilevamento dei microrganismi patogeni utilizzano
l’amplificazione isotermica mediata da loop per amplificare rapidamente le sequenze di acidi nucleici a elevata specificità esensibilità, combinata con la bioluminescenza per rilevare l’amplificazione. I risultati presunti positivi sono riportati in tempo
reale, mentre quelli negativi si visualizzano al completamento dell’analisi. I risultati presunti positivi vanno confermati
utilizzando il proprio metodo convenzionale o secondo quanto specificato dalle normative locali(1,2,3).
L’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes è destinata all’uso in unambiente di laboratorio da parte di professionisti formati in tecniche di laboratorio. Neogen non ha documentato l’utilizzodel presente prodotto in settori diversi da quello alimentare e delle bevande. Ad esempio, Neogen non ha documentato
il presente prodotto per l’analisi su campioni di acqua, di tipo farmaceutico, cosmetico, clinico o veterinario. L’Analisi
molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes non è stata valutata con tutti i
possibili protocolli di test o ceppi di batteri.
Come tutti i metodi analitici, i risultati possono essere influenzati dall’origine, dalla formulazione e dalla qualità delterreno di arricchimento. Anche fattori quali i metodi di campionamento, i protocolli di analisi, la preparazione delcampione, la manipolazione e le tecniche di laboratorio possono influenzare i risultati. Neogen consiglia la valutazione delmetodo, compreso il terreno di arricchimento, nell’ambiente dell’utente, utilizzando un numero sufficiente di campioni che
presentano particolari caratteristiche alimentari e microbiche, per assicurare che il metodo soddisfi i criteri dell’utente.
Neogen ha valutato l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes con
brodo Demi Fraser contenente citrato ferrico di ammonio e brodo Fraser contenente citrato ferrico di ammonio secondo
necessità. Di seguito è riportata una tipica formulazione di questo terreno.
Formula tipica della base per brodo Demi-Fraser(g/l)

Formula tipica della base per brodo Fraser(g/l)

Cloruro di sodio

20 gCloruro di sodio

20 g

Fosfato di sodio, bibasico, anidro*

9,6 g

Fosfato di sodio, bibasico, anidro*

9,6 g

Estratto di carne bovina

5,0 g

Estratto di carne bovina

5,0 g

Digerito pancreatico della caseina

5,0 g

Digerito pancreatico della caseina

5,0 g

Digerito peptico di tessuto animale

5,0 g

Digerito peptico di tessuto animale

5,0 g

Estratto di lievito

5,0 g

Estratto di lievito

5,0 g

Cloruro di litio

3,0 g

Cloruro di litio

3,0 g

Fosfato di potassio, monobasico

1,35 gFosfato di potassio, monobasico

1,35 gEsculina

1,0 g

Esculina

1,0 g

Acriflavina HCl

0,0125 g

Acriflavina HCl

0,025 gAcido nalidixico

0,01 gAcido nalidixico

0,02 g*Sostituito: fosfato di sodio, bibasico, biidrato

12,0 gSupplemento per brodo Fraser(Ingredienti per fiala da 10 ml. Viene aggiunta una fiala a un litro di terreno basale.)
Citrato ferrico di ammonio 0,5 g/10 ml
pH finale

7,2 ± 0,2 a 25 °C

Lo Strumento per l’analisi molecolare Neogen® è destinato all’uso su campioni sottoposti a trattamento termico durante
la fase di lisi dell’analisi, atto ad annientare gli organismi presenti nel campione. I campioni non correttamente trattati
termicamente durante la fase di lisi dell’analisi possono essere considerati un potenziale rischio biologico e NON devono
essere inseriti nello Strumento per l’analisi molecolare Neogen.

1

IT(Italiano)

Neogen Food Safety è certificata ISO (International Organization for Standardization) 9001 per la progettazione
e la produzione.
Il kit di prova per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes ècomposto da 96 test, descritti nella Tabella 1.
Tabella 1. Componenti del kit di analisi molecolare Neogen
Articolo

Identificazione

Quantità

Soluzione di lisi (LS)
Neogen®

Soluzione rosa in
96 (12 strisce daprovette trasparenti 8 provette)

Provette di reagente perl’Analisi molecolare diseconda generazione
Neogen® per il rilevamento
di Listeria monocytogenes

Provette gialle

96 (12 strisce da
8 provette)

Tappi supplementari

Tappi gialli

96 (12 strisce da 8 tappi)

Controllo reagente
Neogen® (RC)Provette trasparenti
16 (2 buste da
con apertura a
8 provette singole)
scattoContenuto

Commenti

580 μl di LS per provetta

In rastrelliera
e pronte all’uso

Miscela di rilevamento
e amplificazione
specifica liofilizzata

Pronte all’uso
Pronte all’uso

Miscela di rilevamento
e amplificazione DNA dicontrollo liofilizzato

Pronte all’uso

Il controllo negativo, non fornito nel kit, è terreno di arricchimento sterile, p. es. Brodo Demi Fraser. Non utilizzare l’acquacome controllo negativo.

Sicurezza

L’utente è tenuto a leggere, comprendere e seguire tutte le informazioni per la sicurezza contenute nelle istruzioni delSistema per l’analisi molecolare Neogen e dell’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Listeria monocytogenes. Conservare le istruzioni di sicurezza per poterle consultare in futuro.
AVVERTENZA: indica una situazione pericolosa che, se non evitata, potrebbe provocare la morte o lesioni gravi e/odanni materiali.
AVVISO: indica una situazione potenzialmente pericolosa che, se non evitata, potrebbe provocare
danni materiali.

W AVVERTENZA
Non utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes per ladiagnosi delle condizioni di soggetti umani o animali.
Il metodo dell’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes può
generare Listeria monocytogenes a livelli tali da provocare nati morti e decessi nelle donne in gravidanza e in soggetti
immunocompromessi, se esposti.
L’utente deve addestrare il proprio personale all’esecuzione corretta delle tecniche di prova: ad esempio, buone prassi
di laboratorio, ISO/IEC 17025(4), o ISO 7218(5).
Per ridurre i rischi associati a risultati falsi negativi che comportano l’emissione di un prodotto contaminato:• Attenersi al protocollo ed eseguire i test esattamente come descritto nelle Istruzioni sul prodotto.
• Conservare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes comeindicato sulla confezione e nelle istruzioni sul prodotto.
• Utilizzare sempre l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes
entro la data di scadenza.
• Utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes per
campioni ambientali e alimentari che sono stati validati internamente o da terzi.
• Utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes solo persuperfici, disinfettanti, protocolli e ceppi di batteri che sono stati validati internamente o da terzi.
• Per un campione ambientale contenente un tampone neutralizzante con il complesso di aril solfonato, eseguire una
diluizione in rapporto 1:2 prima di eseguire il test (1 parte di campione in 1 parte di brodo di arricchimento sterile).
Un’altra opzione consiste nel trasferire 10 μl di arricchimento del tampone neutralizzante all’interno delle provette per
Soluzione di lisi Neogen. Prodotti per la raccolta dei campioni di Neogen® che includono Tampone neutralizzante concomplesso aril solfonato: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G e HS2410NB2G.
Per ridurre i rischi associati all’esposizione a sostanze chimiche e a pericoli biologici:• Si raccomanda vivamente che il personale di laboratorio femminile sia informato del rischio per un feto in via di sviluppo
derivante dall’infezione della madre dovuta all’esposizione a Listeria monocytogenes.

2

IT(Italiano)• Eseguire un test per patogeni in un laboratorio adeguatamente equipaggiato, sotto la supervisione di personale
esperto. Il terreno di arricchimento incubato e le attrezzature o le superfici che sono venute in contatto con il terreno diarricchimento incubato potrebbero contenere patogeni a livelli sufficienti da comportare rischi per la salute umana.
• Durante la manipolazione di reagenti e campioni contaminati, seguire sempre le pratiche standard di sicurezza dilaboratorio, compreso l’utilizzo di abbigliamento protettivo e protezioni appropriate per gli occhi.
• Evitare il contatto con il contenuto delle provette di reagente e del terreno di arricchimento dopo l’amplificazione.
• Smaltire i campioni arricchiti in conformità degli standard di settore vigenti.
• I campioni trattati termicamente in modo non corretto durante la fase di lisi dell’analisi possono essere considerati unpotenziale rischio biologico e NON devono essere inseriti nello Strumento per l’analisi molecolare Neogen.
Per ridurre i rischi associati alla contaminazione crociata durante la preparazione dell’analisi:• Indossare sempre i guanti (per proteggere l’utente e prevenire l’introduzione di nucleasi).
Per ridurre i rischi associati a contaminazione ambientale:• Attenersi agli standard di settore vigenti per lo smaltimento di rifiuti contaminati.
Per ridurre i rischi associati all’esposizione a liquidi caldi:• Non superare l’impostazione di temperatura raccomandata sul riscaldatore.
• Non superare il tempo di riscaldamento raccomandato.
• Utilizzare un termometro calibrato e appropriato per verificare la temperatura dell'Inserto del blocco di calore per ilsistema di rilevamento molecolare Neogen® (p. es., un termometro a immersione parziale o con termocoppia digitale,
non un termometro a immersione totale). Il termometro deve essere collocato nella posizione indicata nell'Inserto delblocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen.

AVVISOPer ridurre i rischi associati alla contaminazione crociata durante la preparazione dell’analisi:• Cambiare i guanti prima di idratare le pastiglie di reagente.
• Si consiglia di utilizzare puntali di pipetta di grado biologico molecolare sterili con barriera contro gli aerosol (filtrate).
• Utilizzare un nuovo puntale di pipetta per ciascun trasferimento di campione.
• Adottare buone prassi di laboratorio per trasferire il campione dall’arricchimento alla provetta di lisi. Per evitare
la contaminazione della pipettatrice, l’utente può scegliere di aggiungere una fase di trasferimento intermedia.
Ad esempio, l’utente può trasferire ciascun campione arricchito in una provetta sterile.
• Utilizzare una stazione di lavoro di biologia molecolare contenente una lampada germicida, laddove disponibile.
Decontaminare periodicamente i banchi e l’attrezzatura di laboratorio (pipette, strumenti per chiudere/aprire i tappi, ecc.)
con una soluzione di candeggina per uso domestico all’1-5% (diluita in acqua v:v) o una soluzione per la rimozione del DNA.
Per ridurre i rischi associati a un risultato falso positivo:• Non aprire mai le provette di reagente dopo l’amplificazione.
• Gettare sempre le provette contaminate immergendole in una soluzione di candeggina per uso domesticoall’1-5% (diluita in acqua v:v) o in una soluzione equivalente per 1 ora lontano dall’area di preparazione dell’analisi.
• Non sterilizzare mai in autoclave le provette di reagente dopo l’amplificazione.
Per ulteriori informazioni, consultare la Scheda di sicurezza dei materiali e le normative locali per lo smaltimento.
Per qualsiasi domanda su applicazioni o procedure specifiche, visitare il nostro sito web all’indirizzo www.neogen.com,
oppure contattare il distributore o il rappresentante Neogen di zona.

Responsabilità dell’utente

Gli utenti sono tenuti a leggere e apprendere le istruzioni e le informazioni sul prodotto. Visitare il nostro sito web
all’indirizzo www.neogen.com, oppure contattare il distributore locale o rappresentante Neogen per ulteriori informazioni.
Nella scelta di un metodo di test, è importante considerare che fattori esterni quali i metodi di campionamento, i protocolli
di test, la preparazione del campione, la manipolazione e le tecniche di laboratorio possono influenzare i risultati.
È responsabilità dell’utente, nel selezionare un qualsiasi metodo di analisi o prodotto, valutare un numero sufficiente
di campioni con le matrici appropriate e con particolari caratteristiche microbiche per soddisfare i criteri relativi alla
metodologia di analisi scelta dall’utente.
L’utente ha inoltre la responsabilità di accertarsi che tutti i metodi di analisi utilizzati e i risultati ottenuti soddisfino i requisiti
dei propri clienti e fornitori.
Come per qualsiasi metodo di analisi, i risultati ottenuti grazie al prodotto di Neogen Food Safety non costituiscono una
garanzia della qualità delle matrici o dei processi sottoposti a prova.
Per aiutare i clienti nella valutazione del metodo per le varie matrici alimentari, Neogen ha elaborato il kit di Controllo dellamatrice di rilevamento molecolare Neogen®. Quando necessario, utilizzare il Controllo della matrice (MC) per determinare
se questa sia in grado di influenzare i risultati dell’Analisi molecolare Neogen di seconda generazione per il rilevamento
di Listeria monocytogenes. Durante il periodo di valutazione - in caso di adozione di un metodo Neogen - o durantel’esecuzione di test su matrici nuove o sconosciute o su matrici che hanno subito modifiche nelle materie prime o nella
lavorazione, analizzare numerosi campioni rappresentativi della matrice, cioè campioni di diversa origine.
3

IT(Italiano)

Si definisce matrice un tipo di prodotto con proprietà intrinseche quali la composizione e la lavorazione. Le differenze fra lematrici possono essere semplici come gli effetti causati dalle differenze nella loro lavorazione o presentazione, ad esempio:
crude o pastorizzate, fresche o secche, ecc.

Limitazione di garanzia/Rimedio limitato

SALVO NEI CASI ESPRESSAMENTE INDICATI IN UNA SEZIONE DI GARANZIA LIMITATA DELLA CONFEZIONE DEL
SINGOLO PRODOTTO, NEOGEN NON RICONOSCE ALCUNA GARANZIA ESPLICITA O IMPLICITA, INCLUSE, MA SENZA
LIMITAZIONI, LE EVENTUALI GARANZIE DI COMMERCIABILITÀ O DI IDONEITÀ A UNO SCOPO PARTICOLARE. Qualora un
prodotto della Neogen Food Safety sia difettoso, Neogen o il suo distributore autorizzato provvederanno, a loro discrezione, alla
sostituzione o al rimborso del prezzo d’acquisto del prodotto. Questi sono gli unici rimedi a disposizione del cliente. Per ulteriori
domande, contattare il rappresentante Neogen o il distributore autorizzato Neogen.

Limitazione di responsabilità da parte di Neogen

NEOGEN NON SARÀ RESPONSABILE DI PERDITE O DANNI, DIRETTI, INDIRETTI, SPECIALI, INCIDENTALI O
EMERGENTI, INCLUSA, MA NON IN VIA STRETTAMENTE LIMITATIVA, LA PERDITA DI PROFITTO. In nessun caso la
responsabilità legale di Neogen andrà oltre il prezzo d’acquisto del prodotto presunto difettoso.

Conservazione e smaltimento

Conservare l’Analisi molecolare Neogen di seconda generazione per il rilevamento di Listeria monocytogenes a 2-8 °C.
Non congelare. Conservare il kit lontano da fonti luminose. Dopo aver aperto il kit, verificare che la busta d’alluminio non risulti
danneggiata. Qualora la busta d’alluminio fosse danneggiata, non utilizzare i prodotti contenuti all’interno. Dopo l’apertura, leprovette di reagente inutilizzate dovranno essere sempre conservate in una busta richiudibile con essiccante all’interno permantenere la stabilità dei reagenti liofilizzati. Conservare le buste richiudibili a 2-8 °C per un periodo non superiore a 60 giorni.
Non utilizzare l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes oltre ladata di scadenza. La data di scadenza e il numero di lotto sono riportati sull’etichetta esterna della scatola. Dopo l’utilizzo,
il terreno di arricchimento e le provette per l’analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Listeria monocytogenes possono potenzialmente contenere materiali patogeni. Una volta completato il test, attenersi agli
standard di settore vigenti in materia di smaltimento di rifiuti contaminati. Per ulteriori informazioni, consultare la Scheda disicurezza dei materiali e le normative locali per lo smaltimento.

Istruzioni per l’uso

Seguire attentamente tutte le istruzioni. In caso contrario, si rischia di ottenere risultati non precisi.
Decontaminare periodicamente i banchi e l’attrezzatura di laboratorio (pipette, strumenti per chiudere/aprire i tappi, ecc.)
con una soluzione di candeggina per uso domestico all’1-5% (diluita in acqua v:v) o una soluzione per la rimozione del DNA.
L’utente è tenuto a completare la formazione di qualifica operatore (OQ) per il Sistema per l’analisi molecolare Neogen,come descritta nel documento “Protocolli di qualifica per l’installazione (IQ)/qualifica operativa (OQ) e istruzioni delSistema per l’analisi molecolare Neogen”(6).
Per i requisiti specifici, consultare la sezione “Istruzioni specifiche per metodi validati”:
Tabella 3 per i protocolli di arricchimento secondo AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 e AOAC® Performance
Tested MethodSM, Certificato n. 081501.
Tabella 4 per i protocolli di arricchimento secondo il certificato NF Validation 3M 01/15-09/16.

Arricchimento del campione

Nelle Tabelle 2, 3 o 4 sono riportate le indicazioni per l’arricchimento di campioni ambientali e alimentari. È responsabilità
dell’utente convalidare protocolli di campionamento o rapporti di diluizione alternativi, per assicurare che il presente
metodo di test soddisfi i propri criteri.

Alimenti

1. Lasciare che il terreno di arricchimento Brodo Demi Fraser (comprende citrato ferrico di ammonio) venga equilibrato
alla temperatura ambiente del laboratorio.
2. Unire asetticamente il terreno di arricchimento al campione in base alle tabelle 2, 3 o 4. Per tutti i campioni di carnee a elevato numero di particelle, si consiglia l’utilizzo di sacchetti con filtro.
3. Omogeneizzare con cura, miscelando con miscelatore o agitatore o a mano per 2 ± 0,2 minuti. Incubare a 37 ± 1 °C inbase alle tabelle 2, 3 o 4.
4. Per i prodotti lattiero-caseari crudi (vedi tabelle 2, 3 o 4), trasferire 0,1 ml del brodo di arricchimento primario in 10 ml
di brodo Fraser. Incubare a 37 ± 1 °C per 20-24 ore.

Campioni ambientali

I dispositivi di prelievo dei campioni possono essere spugne idratate con soluzione neutralizzante per disattivare gli effettidei disinfettanti. Neogen raccomanda l’utilizzo di spugne di cellulosa senza biocidi. La soluzione neutralizzante può essere
il brodo neutralizzante Dey-Engley (D/E) o il brodo Letheen. Si raccomanda di disinfettare l’area dopo il campionamento.
4

IT(Italiano)

AVVERTENZA: se si sceglie di usare un tampone neutralizzante (NB) che contiene complesso aril solfonato comesoluzione idratante per la spugna, è necessario eseguire una diluizione in rapporto 1:2 (1 parte di campione in 1 partedi brodo di arricchimento sterile) del campione ambientale arricchito prima di eseguire il test, al fine di ridurre i rischi
associati a risultati falsi negativi che comportino l’emissione di un prodotto contaminato. Un’altra opzione consiste nel
trasferire 10 μl di arricchimento del tampone neutralizzante all’interno delle provette per Soluzione di lisi Neogen.
L’estensione raccomandata dell’area di campionamento per verificare la presenza o l’assenza del patogeno sulla superficieè di almeno 100 cm2 (10 cm x 10 cm o 4” x 4”). Quando si effettua il campionamento con una spugna, coprire l’intera areain due direzioni (da sinistra a destra, quindi su e giù), oppure raccogliere campioni ambientali attenendosi al protocollo dicampionamento vigente o secondo le linee guida FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) o ISO 18593(7).
1. Lasciare che il terreno di arricchimento Brodo Demi Fraser (comprende citrato ferrico di ammonio) venga equilibrato
alla temperatura ambiente del laboratorio.
2. Unire asetticamente il terreno di arricchimento al campione in base alle tabelle 2, 3 o 4.
3. Omogeneizzare con cura, miscelando con miscelatore o agitatore o a mano per 2 ± 0,2 minuti. Incubare a 37 ± 1 °C
per 24-30 ore in base alle tabelle 2, 3 o 4.
Tabella 2: protocolli di arricchimento generici a 37 ± 1 °C con utilizzo di brodo Demi Fraser e brodo Fraser
secondo necessità.
VolumeDimensione
brodo diMatrice campione
campione arricchimento(ml)Tempo diarricchimento(ore)Carni, pollame,
frutti di maree pesce sottopostia trattamento
termico, cotti,
affumicati
Prodotti lattierocaseari sottopostia trattamento
termico/pastorizzati

25 g

225

24-30

1 spugna

100 o 22524-30

1 tampone

10

24-30

25 g

475

28-32

Verdure e ortaggi
Alimenti
multicomponente
Campioni
ambientali(a)Carne cruda,
pollame, frutti dimare, pesce

Arricchimento primario(brodo Demi Fraser)(a)Matrice campione

Prodotti
lattiero-casearicrudi

VolumeDimensione
brodo dicampione arricchimento
(ml)

25 g

225

Arricchimento secondario(Brodo Fraser)(a)Tempo diDimensione
arricchimento
campione(ore)

Temperatura diarricchimento
(°C)

Tempo
di arricchimento(ore)Trasferire
0,1 ml in
10 ml dibrodo
Fraser37 ± 1

20-24

20-24

Volumedell’analisidel campione(b)10 μl(a) Il brodo Demi-Fraser e il brodo Fraser devono essere sempre integrati con il supplemento per brodo Fraser(citrato ferrico di ammonio) durante l’arricchimento primario o secondario.
(b) Volume di campione trasferito alle provette per Soluzione di lisi Neogen. Fare riferimento al punto 4.6 della sezione Lisi.
5

IT(Italiano)

Istruzioni specifiche per metodi validati
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

Nei programmi OMASM e PTMSM dell’Istituto di ricerca AOAC, l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per ilrilevamento di Listeria monocytogenes è risultata essere un metodo efficace per il rilevamento di Listeria monocytogenes.
Le matrici testate nello studio sono riportate nella Tabella 3.
Tabella 3. Protocolli di arricchimento che usano brodo Demi Fraser(a) a 37 ± 1 °C secondo AOAC OMASM 2016.08 e PTMSM,
Certificato n. 081501.
Dimensione
campione

Volume brodo diarricchimento (ml)Tempo diarricchimento(ore)

Hot dog di manzo, formaggio fresco,
gelato alla vaniglia, formaggio fresco infiocchi al latte 4%, latte intero al cioccolato
3%, lattuga romana, spinaci crudi in busta,
salmone affumicato a freddo

25 g

225

24-30

Pollo crudo

25 g

475

28-32

Affettato di tacchino

125 g

1125

24-30

Cantalupo(b)MeloneinteroVolume sufficiente
per consentire al
melone di galleggiare

26-30

Acciaio inossidabile

1 spugna

225

24-30

Calcestruzzo sigillato

1 spugna

100

24-30

Plastica(c)1 tampone

10

24-30

Campioni
ambientali:

Matrice campione

Tutti i campioni per la validazione AOAC sono stati omogeneizzati mediante agitatore, se non diversamente specificato.
(a)		Il brodo Demi-Fraser e il brodo Fraser devono essere sempre integrati con il supplemento per brodo Fraser(citrato ferrico di ammonio) durante l’arricchimento primario o secondario.
(b) Omogeneizzare il campione miscelando a mano.
(c)		 Omogeneizzare il campione agitando al Vortex.

NF VALIDATION concessa dalla AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Per maggiori informazioni sulla scadenza, consultare il certificato NF VALIDATION, disponibile sul sito web menzionato
in precedenza.
Metodo certificato NF VALIDATION in conformità di ISO 16140-2(6) rispetto a ISO 11290(3)Ambito della validazione: tutti i campioni di alimenti per l’uomo e ambientali (esclusi i campioni di produzione primaria)
Preparazione del campione: i campioni devono essere preparati secondo EN ISO 11290-1(3) ed EN ISO 6887(8)Versione del software: vedere il certificato

6

IT(Italiano)

Tabella 4: protocolli di arricchimento secondo il metodo certificato NF VALIDATION 3M 01/15-09/16 a 37 ± 1 °C che
usano brodo Demi Fraser e brodo Fraser secondo necessità.
Protocollo generico

Dimensione
campione

Tutti i campioni
alimentari (eccetto
carni crude, frutti dimare crudi e prodotti
lattiero-caseari crudi)

25 gCampioni ambientali

25 g,
1 tampone o
1 salvietta

ProtoDimencollo
specifico sione
campione

Volumebrodo di arricchimento(ml)Temperatura di arricchimento(± 1 °C)

Tempo
di arricchimento(ore)Volumedell’analisidel campione(a)Punto di interruzione
accettato• Brodo Demi Fraser finoa 72 ore

225

37

24-30

20 µl

• Lisato a -20 °C• Lisato a 4 °C fino a
72 oreArricchimento primario
Arricchimento secondario(brodo Demi Fraser)(b)(brodo Fraser)(b)
Punto diVolumeTemperatuTempo
TemperaTempo
Volume interruzione
brodo diDimenra di arricdi arrictura di ardi arric- dell’analisi accettato
arricchisione
chimento
chimento
ricchimen- chimento del cammento
campione(± 1 °C)(ore)
to (± 1 °C)(ore)pione(c)(ml)• BrodoFraser fino
Trasferirea 72 ore
0,1 ml• Lisato a
225
37
20-24
in 10 ml
37
20-24
10 µl
-20 °Cdi brodo• Lisato a
Fraser
4 °C finoa 72 oreCarni
crude,
frutti dimarecrudi e25 gprodotti
lattierocaseari
crudi(a) Volume di campione trasferito alle provette per Soluzione di lisi Neogen. Fare riferimento al punto 4.6 della sezione Lisi.
(b) Il brodo Demi-Fraser e il brodo Fraser devono essere sempre integrati con il supplemento per brodo Fraser (citrato
ferrico di ammonio) durante l’arricchimento primario o secondario.
(c) Volume di campione trasferito alle provette per soluzione di lisi Neogen. Fare riferimento al punto 4.6 della sezione Lisi.
NOTA: i campioni superiori ai 25 g non sono stati testati nello studio NF Validation.

Preparazione del Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen®
1. Inumidire un panno con una soluzione di candeggina per uso domestico all’1-5% (diluita in acqua v:v) o una soluzione
equivalente e pulire il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen®.
2. Sciacquare con acqua il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen.
3. Utilizzare un panno usa e getta per asciugare il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento
molecolare Neogen.
4. Assicurarsi che il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen sia asciutto primadell’uso.
Preparazione del Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare Neogen®
Posizionare il Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare Neogen® direttamente sul bancodel laboratorio; utilizzare il pozzetto di raffreddamento alla temperatura ambiente del laboratorio (20-25 °C).
Preparazione dell'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen®
Posizionare l'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen® in un’unità riscaldante a secco con
doppio blocco. Accendere l’unità riscaldante a secco con blocco e impostare la temperatura per consentire all'Inserto delblocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen di raggiungere e mantenere una temperatura di 100 ± 1 °C.
NOTA: a seconda dell’unità riscaldante, attendere circa 30 minuti affinché l'Inserto del blocco di calore per il sistema
di rilevamento molecolare Neogen raggiunga la temperatura. Utilizzando un termometro adeguatamente calibrato (p.
es., un termometro a immersione parziale o un termometro digitale con termocoppia, non un termometro a immersione
totale) inserito nella posizione designata, verificare che l'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento
molecolare Neogen sia a 100 ± 1 °C.
7IT(Italiano)

Preparazione dello Strumento per l’analisi molecolare Neogen®
1. Avviare il software del Sistema per l’analisi molecolare Neogen® ed eseguire l’accesso. Contattare il proprio
rappresentante Neogen Food Safety per verificare che la versione del software in uso sia quella più aggiornata.
2. Accendere lo Strumento per l’analisi molecolare Neogen.
3. Creare o modificare un’esecuzione con i dati per ciascun campione. Fare riferimento al Manuale per l’utente delSistema per l’analisi molecolare Neogen per i dettagli.
NOTA: lo Strumento per l’analisi molecolare Neogen deve raggiungere lo stato Pronto prima di inserire il Vassoio per
caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen con provette di reazione. Tale fase di riscaldamento
dura 20 minuti circa ed è indicata da una spia ARANCIONE sulla barra di stato dello strumento. Quando lo strumento è
pronto per avviare l’analisi, la barra di stato diventa VERDE.
Lisi
Rimuovere la parte inferiore della rastrelliera per la soluzione di lisi Neogen con un cacciavite o con una spatola prima diposizionarla nell’Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen.

1. Far riscaldare le provette per la soluzione di lisi (Soluzione di lisi Neogen) lasciando la rastrelliera a temperatura
ambiente (20-25 °C) per una notte (16-18 ore). Le alternative per equilibrare i tubi per Soluzione di lisi Neogen atemperatura ambiente sono: posizionare i tubi per soluzione di lisi Neogen sul banco di laboratorio per almeno 2
ore; incubare i tubi per soluzione di lisi Neogen in un incubatore a 37 ± 1 °C per 1 ora oppure posizionarli in un’unitàriscaldante a secco con doppio blocco per 30 secondi a 100 °C.
2. Capovolgere le provette provviste di tappo per miscelare. Procedere con la fase successiva entro 4 ore.
3. Rimuovere il brodo di arricchimento dall’incubatore.
4. È necessaria una provetta per Soluzione di lisi Neogen per ciascun campione e per il campione Controllo Negativo(NC) (terreno di arricchimento sterile).
4.1 Le strisce di provette per Soluzione di lisi Neogen possono essere tagliate nel numero di provette per Soluzione dilisi Neogen desiderato. Selezionare il numero necessario di provette per Soluzione di lisi Neogen singole o di strisce
da 8 provette. Posizionare le provette per Soluzione di lisi Neogen in una rastrelliera vuota.
4.2 Al fine di evitare la contaminazione crociata, stappare una striscia di provette per Soluzione di lisi Neogen alla voltae utilizzare un nuovo puntale per pipetta per ciascuna fase di trasferimento.
4.3 Trasferire i campioni arricchiti nelle provette per Soluzione di lisi Neogen come descritto di seguito:
Trasferire innanzitutto ciascun campione arricchito in una singola provetta per Soluzione di lisi Neogen.
Trasferire l’NC per ultimo.
4.4 Utilizzare lo Strumento per chiudere/aprire i tappi dei pozzetti di lisi per il rilevamento molecolare Neogen® per
aprire il tappo di una striscia di provette per Soluzione di lisi Neogen, una striscia alla volta.
4.5 Gettare il tappo della provetta per Soluzione di lisi Neogen; se il lisato viene conservato per effettuare nuovamente
il test, posizionare i tappi in un contenitore pulito per consentirne nuovamente l’applicazione dopo la lisi.
4.5.1 Per l’elaborazione del lisato conservato, consultare l’Appendice A.
4.6 Trasferire 20 µl di campione in una provetta con Soluzione di lisi Neogen se non diversamente specificato nei
protocolli delle tabelle 2, 3 o 4 (p. es., prodotti lattiero-caseari crudi o quando si utilizzano campioni ambientali con
tampone neutralizzante, utilizzare 10 µl).

8

IT

(Italiano)
20 µl

5. Ripetere i punti da 4.4 a 4.6 finché ciascun singolo campione non è stato aggiunto alla provetta di Soluzione di lisi
Neogen corrispondente nella striscia.
6. Quando tutti i campioni sono stati trasferiti, trasferire 20 µl di NC (terreno di arricchimento sterile, p. es., brodo
Demi Fraser) in una provetta per Soluzione di lisi Neogen. Non utilizzare l’acqua come NC.
7. Verificare che la temperatura dell’Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare Neogen sia
a 100 ± 1 °C.
8. Posizionare la rastrelliera portaprovette per Soluzione di lisi Neogen, scoperta, nell’Inserto del blocco di calore per ilsistema di rilevamento molecolare Neogen e riscaldare per 15 ± 1 minuti. Durante il riscaldamento, la Soluzione di lisi
Neogen virerà dal rosa (freddo) al giallo (caldo).
8.1 I campioni non trattati termicamente in modo corretto durante la fase di lisi dell’analisi possono essere considerati
un potenziale rischio biologico e NON devono essere inseriti nello Strumento per l’analisi molecolare Neogen.
9. Rimuovere la rastrelliera portaprovette della Soluzione di lisi Neogen scoperta dal pozzetto di riscaldamento e lasciarlaraffreddare nel Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare Neogen per almeno 5 minuti
e per un massimo di 10 minuti. Il Supporto per il pozzetto di raffreddamento per il sistema di rilevamento molecolare
Neogen, utilizzato a temperatura ambiente, deve essere posto direttamente sul banco del laboratorio. Quando è fredda,
la soluzione di lisi torna a essere di colore rosa.
10. Rimuovere la rastrelliera portaprovette per Soluzione di lisi Neogen dal Blocco di raffreddamento estraibile per ilsistema di rilevamento molecolare Neogen.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplificazione
1. È richiesta una provetta di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di
Listeria monocytogenes per ciascun campione e per l’NC.
1.1 Le strisce delle provette di reagente possono essere tagliate nel numero di provette desiderato. Selezionare il
numero necessario di singole provette di reagente o di strisce da 8 provette per l’Analisi molecolare di seconda
generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes.
1.2 Posizionare le provette di reagente per l’Analisi molecolare Neogen di seconda generazione per il rilevamento di
Listeria monocytogenes in una rastrelliera vuota.
1.3 Evitare di spostare le pastiglie di reagente poste sul fondo delle provette.
2. Selezionare una provetta di Controllo reagente Neogen e posizionarla nella rastrelliera.
3. Al fine di evitare la contaminazione crociata, rimuovere i tappi da una striscia di provette di reagente per l’Analisi
molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes alla volta e utilizzare un nuovo
puntale per pipetta per ciascuna fase di trasferimento.
4. Trasferire il lisato in provette di reagente per l’Analisi molecolare Neogen di seconda generazione per il rilevamento di
Listeria monocytogenes e in una provetta di Controllo reagente Neogen come indicato di seguito:
Trasferire innanzitutto ciascun lisato campione in singole provette di reagente per l’Analisi molecolare di seconda
generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes, quindi trasferire l’NC. Idratare la provetta diControllo reagente Neogen per ultima.

9

IT(Italiano)

5. Utilizzare lo Strumento per chiudere/aprire i tappi dei pozzetti contenenti il reagente per il rilevamento molecolare
Neogen® per rimuovere i tappi dalle provette di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per ilrilevamento di Listeria monocytogenes; una striscia di provette di reagente per volta. Gettare il tappo.
5.1 Trasferire 20 μl di lisato campione dalla metà superiore del liquido (evitare il deposito) della provetta per
Soluzione di lisi Neogen nella provetta di reagente corrispondente per l’Analisi molecolare di seconda
generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes. Erogare con un’inclinazione per evitare lo
spostamento delle pastiglie. Miscelare pipettando delicatamente su e giù per 5 volte.
5.2 Ripetere il punto 5.1 finché ciascun lisato campione non è stato aggiunto alla provetta di reagente corrispondente
per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes nella striscia.
5.3 Chiudere le provette di reagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento
di Listeria monocytogenes con i tappi supplementari forniti e utilizzare il lato arrotondato dello Strumento per
chiudere/aprire i tappi dei pozzetti contenenti il reagente per il rilevamento molecolare Neogen al fine di applicarepressione con un movimento in avanti e all’indietro, accertandosi di stringere bene il tappo.
5.4 Ripetere i punti da 5.1 a 5.3 secondo necessità, per il numero di campioni da testare.
5.5 Quando tutti i lisati sono stati trasferiti, ripetere il punto 5.1 per trasferire 20 µl di lisato NC in una provetta direagente per l’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes.
5.6 Trasferire 20 µl di lisato NC in una provetta di Controllo reagente Neogen. Erogare con un’inclinazione per evitarelo spostamento delle pastiglie. Miscelare pipettando delicatamente su e giù per 5 volte.
6. Caricare le provette provviste di tappo su un Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare
Neogen pulito e decontaminato. Chiudere saldamente il coperchio del Vassoio per caricamento rapido per il sistema dirilevamento molecolare Neogen.

20 µL

7. Controllare e confermare l’esecuzione configurata sul software del Sistema per l’analisi molecolare Neogen.
8. Fare clic sul pulsante Start nel software e selezionare lo strumento da utilizzare. Il coperchio dello strumento selezionato
si apre automaticamente.
9. Posizionare il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare Neogen nello Strumento perl’analisi molecolare Neogen e chiudere il coperchio per avviare l’analisi. I risultati sono forniti entro 75 minuti, sebbene
quelli positivi possano essere rilevati prima.
10. Una volta completata l’analisi, rimuovere il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare
Neogen dallo Strumento per l’analisi molecolare Neogen e smaltire le provette immergendole in una soluzione dicandeggina per uso domestico 1-5% (diluita con acqua v:v) per 1 ora e lontano dall’area di preparazione dell’analisi.
AVVISO: per ridurre al minimo il rischio di falsi positivi dovuti alla contaminazione crociata, non aprire mai le provettedi reagente contenenti DNA amplificato. Queste includono le provette di reagente per l’Analisi molecolare di seconda
generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes, le provette di Controllo reagente Neogen e le provettedi Controllo della matrice Neogen. Gettare sempre le provette di reagente sigillate immergendole in una soluzione dicandeggina per uso domestico all’1-5% (diluita in acqua v:v) o in una soluzione equivalente per 1 ora lontano dall’area dipreparazione dell’analisi.

Risultati e interpretazione

Un algoritmo interpreta la curva di emissione luminosa risultante dal rilevamento dell’amplificazione degli acidi nucleici.
I risultati sono analizzati automaticamente dal software e codificati mediante un colore in base all’esito. Un risultato
positivo o negativo è determinato dall’analisi di un numero di parametri unici della curva. I risultati presunti positivi sono
riportati in tempo reale, mentre i risultati Negativi e Da esaminare sono visualizzati al completamento dell’analisi.
I campioni presunti positivi vanno confermati in base alle procedure operative standard del laboratorio o seguendo
il metodo di conferma appropriato(1, 2, 3), iniziando dal trasferimento dal brodo di arricchimento primario al brodo diarricchimento secondario (se pertinente), seguito dalla piastratura e dalla conferma degli isolati utilizzando metodi
biochimici e sierologici adeguati.

10

IT

(Italiano)

NOTA: anche un campione negativo non fornirà una lettura zero, poiché il sistema e i reagenti di amplificazione
dell’Analisi molecolare di seconda generazione Neogen per il rilevamento di Listeria monocytogenes riportano un valore
di “background” dell’unità di luce relativa (RLU).
Nel raro caso di emissione luminosa insolita, l’algoritmo la classifica come “Da esaminare”. Neogen consiglia all’utente diripetere l’analisi per qualsiasi campione da esaminare. Se il risultato continua a essere Da esaminare, procedere con il test
di conferma utilizzando il proprio metodo di elezione o come specificato dalle normative locali.
Tabella 5: simboli dei risultati per i campioni e interpretazione forniti dal software del Sistema per l’analisi molecolare
Neogen.
Tipo dipozzetto

Simbolo del risultatodel pozzetto

RisultatoInterpretazione

Campione

Positivo

Il campione è presunto positivo per il patogeno bersaglio.

Campione

Negativo

Il campione è negativo per il patogeno bersaglio.

InibitoLa matrice del campione è stata inibitoria dell’analisi. Può essere
richiesta una ripetizione del test. Per maggiori informazioni,
fare riferimento alla sezione relativa alla risoluzione dei problemi
e alle Istruzioni sul prodotto del kit di analisi.

Daesaminare

La presenza o l’assenza del patogeno bersaglio è stataindeterminata. Può essere richiesta una ripetizione del test.
Per maggiori informazioni, fare riferimento alla sezione relativa
alla risoluzione dei problemi e alle Istruzioni sul prodotto del kit
di analisi.

Campione

Campione

CampioneErroreNon è stata rilevata alcuna bioluminescenza. Può essere richiesta
una ripetizione del test. Per maggiori informazioni, fare riferimento
alla sezione relativa alla risoluzione dei problemi e alle Istruzioni sul
prodotto del kit di analisi.

Conferma dei risultati secondo il metodo certificato NF VALIDATION
Opzione 1: utilizzo dello standard ISO 11290(3) a partire dall’arricchimento in Demi Fraser.
Opzione 2: mediante isolamento su PALCAM agar o su agar cromogeno facente parte di un metodo certificato
NF VALIDATION per il rilevamento del Listeria monocytogenes. La presenza di colonie caratteristiche è sufficiente per
confermare la presenza di Listeria monocytogenes.
Opzione 3: utilizzo di sonde di acido nucleico come descritto nello standard EN ISO 7218(5), con esecuzione su colonie
isolate, da agar selettivo (vedere opzione 1 o 2).
Opzione 4: utilizzo di un altro metodo certificato NF VALIDATION, il cui principio deve essere differente da quellodell’Analisi molecolare Neogen di seconda generazione per il rilevamento di Listeria monocytogenes. Deve essere utilizzato
il protocollo completo descritto per questo secondo metodo validato. Tutti i passaggi precedenti all’inizio della conferma
devono essere comuni a entrambi i metodi.
Nel caso di risultati discordanti (presunto positivo con il metodo alternativo, non confermato da uno dei mezzi suindicati),
il laboratorio deve agire di conseguenza per garantire la validità dei risultati ottenuti.
Nel caso di risultati discordanti (presunto positivo con l’Analisi molecolare Neogen di seconda generazione per ilrilevamento di Listeria monocytogenes, non confermato da uno dei mezzi suindicati), il laboratorio deve agire diconseguenza per garantire la validità dei risultati ottenuti.
Per qualsiasi domanda su applicazioni o procedure specifiche, visitare il nostro sito web all’indirizzo www.neogen.com,
oppure contattare il distributore o il rappresentante Neogen di zona.
Appendice A. Interruzione del protocollo: Conservazione e ripetizione del test dei lisati termotrattati.
1. Per conservare un lisato termotrattato, richiudere la provetta di lisi con un tappo pulito (vedere la sezione “Lisi”, 4.5).
2. Conservare a 4-8 °C fino a 72 ore.
3. Preparare il campione conservato per l’amplificazione capovolgendolo 2-3 volte per miscelarlo.
4. Togliere il tappo alle provette.
5. Posizionare le provette di lisato miscelato sull'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare
Neogen e riscaldare a 100 ± 1 °C per 5 ± 1 minuti.

11

IT

(Italiano)

6. Rimuovere la rastrelliera portaprovette per Soluzione di lisi Neogen dal pozzetto di riscaldamento e lasciarlaraffreddare nel Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare Neogen per almeno 5
minuti e per un massimo di 10 minuti.
7. Proseguire con il protocollo descritto nella sezione “Amplificazione” di cui sopra.

Bibliografia:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Legenda dei simboli delle etichette dei prodotti
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

ES(Español)Fecha de emisión: 2024-01

Instrucciones del Producto
Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes
Descripción del producto y uso adecuado

El Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen® se utiliza con el Sistema de Detección
Molecular Neogen® para la detección rápida y específica y de Listeria monocytogenes en muestras enriquecidas dealimentos y ambientes. Los Análisis de Detección Molecular Neogen usan amplificación isotérmica mediada por asaspara amplificar rápidamente las secuencias de ácidos nucleicos con alta especificidad y sensibilidad, combinadas con
bioluminiscencia para detectar la amplificación. Los resultados presuntamente positivos se reportan en tiempo real,mientras que los resultados negativos se revelan una vez terminado el ensayo. Los resultados presuntamente positivos sedeben confirmar con su método de preferencia, o según se especifique en las regulaciones locales(1, 2, 3).
El Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen está previsto para el uso en laboratorios por
profesionales capacitados en el empleo de técnicas de laboratorio. Neogen no documentó el uso de este producto en
otras industrias que no sean la alimentaria o la de bebidas. Por ejemplo, Neogen no documentó este producto para elanálisis de muestras de agua, farmacéuticas, cosméticas, clínicas o veterinarias. El Ensayo de Detección Molecular 2para Listeria monocytogenes Neogen no ha sido evaluado con todos los protocolos de análisis ni con todas las cepas
bacterianas posibles.
Como con todos los métodos de prueba, el origen, la formulación y la calidad del medio de enriquecimiento pueden
influir sobre los resultados. Factores tales como los métodos de muestreo, los protocolos de análisis, la preparación dela muestra, la manipulación y la técnica de laboratorio también pueden afectar los resultados. Neogen recomienda laevaluación del método lo que incluye el medio de enriquecimiento usando un número suficiente de muestras en alimentos
representativos y con exposición a ciertas cepas o bacterias desafiantes para garantizar que el método satisface loscriterios del usuario en su propio entorno.
Neogen ha evaluado el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen con Base de Caldo Demi
Fraser que contiene citrato de amonio férrico y base de Caldo Fraser que contiene citrato de amonio férrico según sea
necesario. A continuación, se proporciona una formulación típica de este medio.
Fórmula típica de Base de Caldo Demi Fraser(g/L)

Fórmula típica de Base de Caldo Fraser(g/L)

Cloruro de sodio

20 gCloruro de sodio

20 g

Fosfato de sodio, dibásico, anhidro*

9,6 g

Fosfato de sodio, dibásico, anhidro*

9,6 gExtracto de carne

5,0 gExtracto de carne

5,0 g

Hidrolizado pancreático de caseína

5,0 gHidrolizado pancreático de caseína

5,0 gHidrolizado péptico de tejido animal

5,0 g

Hidrolizado péptico de tejido animal

5,0 gExtracto de levadura

5,0 gExtracto de levadura

5,0 g

Cloruro de litio

3,0 g

Cloruro de litio

3,0 g

Fosfato de potasio, monobásico

1,35 gFosfato de potasio, monobásico

1,35 gEsculina

1,0 g

Esculina

1,0 g

Acriflavina HCl

0,0125 g

Acriflavina HCl

0,025 gÁcido nalidíxico

0,01 gÁcido nalidíxico

0,02 g* Sustituir: fosfato de sodio, dibásico, dihidrato

12,0 gSuplemento de Caldo de Fraser(Ingredientes por vial de 10 mL. Se agrega un vial a un litro de medio basal).
Citrato de amonio férrico

0,5 g/10 mL

pH final

7,2 ± 0,2 a 25 °C

El Equipo de Detección Molecular Neogen® está previsto para ser utilizado con muestras que hayan sido tratadas con calor
durante el paso de lisis del ensayo, que se diseñó para destruir los microorganismos presentes en la muestra. Las muestras
que no se hayan tratado debidamente con calor durante el paso de lisis del ensayo pueden considerarse un posible riesgo
biológico y NO deben introducirse en el Equipo de Detección Molecular Neogen.
Neogen Food Safety cuenta con certificación de la Organización Internacional para la Estandarización (ISO) 9001 dediseño y fabricación.

1

ES(Español)El kit de prueba para el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen contiene 96 pruebas que
se describen en la Tabla 1.
Tabla 1. Componentes del kit para el Análisis de Detección Molecular Neogen
Artículo

Identificación

Solución de Lisis (LS)
Neogen®

CantidadContenido

Comentarios

Solución rosada en
96 (12 tiras de 8 tubos)
tubos transparentes

580 µL de LS por tubo

En gradilla ylista para usar

Tubos de reactivos parael Ensayo de Detección
Molecular 2 para Listeria
monocytogenes Neogen®

Tubos amarillos

96 (12 tiras de 8 tubos)

Mezcla de deteccióny amplificación
específica liofilizada

Listo para usar

Tapas adicionales

Tapas amarillas

96 (12 tiras de 8 tapas)

Control de Reactivos
Neogen® (RC)

Tubostransparentes con
tapa de bisagra

16 (2 bolsas de 8 tubos
individuales)

Listo para usar
Mezcla de detección yamplificación de control
liofilizado de DNA

Listo para usar

El Control Negativo, no provisto en el kit, es un medio de enriquecimiento estéril, p. ej., Caldo Demi Fraser. No use agua
como Control Negativo.

Seguridad

El usuario debe leer, comprender y seguir la información de seguridad incluida en las instrucciones para el Sistema de
Detección Molecular Neogen y el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen. Guarde las
instrucciones de seguridad para consultas futuras.
ADVERTENCIA: Indica una situación peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar la muerte o lesiones graves,o daños materiales.
ATENCIÓN: Indica una situación potencialmente peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar daños materiales.

W ADVERTENCIA
No utilice el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen para el diagnóstico de afecciones
en seres humanos ni animales.
El método de Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes puede generar Listeria monocytogenes
Neogen hasta los niveles suficientes para causar abortos y muertes de mujeres y personas inmunocomprometidas,
si están expuestas.
El usuario debe capacitar a su personal en lo que respecta a las técnicas de prueba adecuadas, por ejemplo,
Buenasprácticas de laboratorio, ISO/IEC 17025(4) o ISO 7218(5).
Para reducir los riesgos asociados con un resultado falso negativo que provoque la liberación de productos
contaminados:• Siga el protocolo y realice las pruebas exactamente como se indica en las instrucciones del producto.
• Almacene el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen como se indica en el empaque yen las instrucciones del producto.
• Utilice siempre el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen antes de su fecha devencimiento.
• Utilice el Análisis de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen con muestras de alimentos yambientales que hayan sido validadas internamente o por un tercero.
• Utilice el Análisis de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen solo con superficies, desinfectantes,
protocolos y cepas bacterianas que hayan sido validadas internamente o por un tercero.
• En el caso de muestras ambientales que contengan una solución de caldo neutralizante con complejo aril sulfonato,
prepare una dilución en una proporción de 1:2 (1 parte de muestra en 1 parte de caldo de enriquecimiento estéril)antes de realizar la prueba. Otra opción es transferir 10 µL de la muestra del caldo neutralizante de enriquecimiento a
los tubos de Solución de Lisis Neogen. Productos para la Recolección de Muestras Neogen® que incluyen una Soluciónde Caldo Neutralizante con el complejo aril sulfonato: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,
HS10NB2G y HS2410NB2G.
Para reducir los riesgos asociados con la exposición a productos químicos y riesgos biológicos:• Se recomienda enfáticamente informar al personal femenino de laboratorio sobre el riesgo, en caso de estar
embarazada, que se genera por la infección de la madre por exposición a Listeria monocytogenes.
• Realice las pruebas de patógenos en un laboratorio debidamente equipado, bajo la supervisión de personal capacitado.
El medio de enriquecimiento incubado y el equipo o las superficies que hayan entrado en contacto con el medio deenriquecimiento podrían contener patógenos en niveles suficientes para provocar un riesgo para la salud humana.
• Siempre proceda según las prácticas estándar de seguridad del laboratorio. Eso incluye usar la ropa de protección
adecuada y protección para los ojos al manipular reactivos y muestras contaminadas.
2

ES(Español)• Evite el contacto con el contenido del medio de enriquecimiento y de los tubos de reactivos después dela amplificación.
• Deseche las muestras enriquecidas conforme a los estándares de la industria.
• Las muestras que no se hayan tratado debidamente con calor durante el paso de lisis del ensayo pueden considerarse
un posible riesgo biológico y NO deben introducirse en el Equipo de Detección Molecular Neogen.
Para reducir los riesgos relacionados con contaminación cruzada mientras se prepara el ensayo:• Use siempre guantes (para proteger al usuario y evitar que se introduzcan nucleasas).
Para reducir los riesgos relacionados con la contaminación ambiental:• Proceda según los estándares de la industria para el desecho de residuos contaminados.
Para reducir los riesgos relacionados con la exposición a líquidos calientes:• No exceda la temperatura recomendada al configurar el calentador.
• No exceda el tiempo de calentamiento recomendado.
• Utilice un termómetro calibrado adecuado para verificar la temperatura del Bloque de Calor para el Sistema de
Detección Molecular Neogen® (p. ej., un termómetro de inmersión parcial o un termómetro digital termopar, y no un
termómetro de inmersión total). El termómetro debe colocarse en la ubicación designada en el Bloque de Calor para el
Sistema de Detección Molecular Neogen.

ATENCIÓN
Para reducir los riesgos relacionados con contaminación cruzada mientras se prepara el ensayo:• Cámbiese los guantes antes de hidratar los gránulos reactivos.
• Se recomienda usar puntas de pipetas estériles de calidad de biología molecular con barrera para aerosoles (con filtro).
• Use una nueva punta de pipeta para cada transferencia de muestra.
• Use las Buenas Prácticas de Laboratorio para transferir la muestra del enriquecimiento al tubo de lisis. Para evitar lacontaminación de la pipeta, el usuario puede elegir agregar un paso de transferencia intermedia. Por ejemplo, el usuario
puede transferir cada muestra enriquecida a un tubo estéril.
• Use una estación de trabajo de calidad para biología molecular con una lámpara germicida, siempre que disponga deuna. Descontamine periódicamente las mesas y el equipo de laboratorio (pipetas, herramientas para tapar/destapar,etc.) con una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5% (v:v en agua) o en una solución para eliminación de ADN.
Para reducir los riesgos relacionados con un resultado falso positivo:• Nunca abra los tubos de reactivos después de la amplificación.
• Siempre deseche los tubos contaminados dejándolos inmersos en una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5%(v:v en agua) durante 1 hora y lejos del área en que se prepara el ensayo.
• Nunca esterilice en autoclave los tubos de reactivos después de la amplificación.
Consulte la Hoja de Datos de Seguridad para obtener más información y conocer las normativas locales para el desechode materiales.
Si tiene preguntas acerca de los procedimientos o las aplicaciones específicas, visite nuestro sitio web en
www.neogen.com o comuníquese con su representante o distribuidor local de Neogen.

Responsabilidad del usuario

Los usuarios son responsables de familiarizarse con las instrucciones e información del producto. Visite nuestro sitio
web en www.neogen.com o póngase en contacto con su representante o distribuidor local de Neogen para obtener
más información.
Al seleccionar un método de prueba, es importante reconocer que factores externos, tales como los métodos de muestreo,
los protocolos de prueba, la preparación de la muestra, la manipulación y la técnica de laboratorio, pueden afectar
los resultados.
Al seleccionar cualquier método de prueba o producto, es responsabilidad del usuario evaluar un número suficiente demuestras con retos microbianos y matrices apropiadas para satisfacer al usuario en cuanto a que el método de prueba
cumple con los criterios del usuario.
Además, es responsabilidad del usuario determinar que cualquier método de prueba y sus resultados cumplen con losrequisitos de sus clientes y proveedores.
Como sucede con cualquier método de prueba, los resultados obtenidos del uso de cualquier producto de Neogen Food
Safety no constituyen una garantía de calidad de las matrices ni de los procesos analizados.
Para ayudar a los clientes a evaluar el método para varias matrices, Neogen ha desarrollado el kit de Control de Matriz para
Detección Molecular Neogen®. Cuando sea necesario, utilice el Control de Matriz (MC) para determinar si la matriz puede
afectar los resultados del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen. Analice varias muestras
representativas de la matriz, es decir, las muestras obtenidas de diferente origen, durante cualquier periodo de validación
al adoptar el método de Neogen, al analizar matrices nuevas o desconocidas, o matrices que hayan sido sometidas acambios en el proceso o la materia prima.

3

ES(Español)Una matriz se puede definir como un tipo de producto con propiedades intrínsecas, tales como composición yproceso. Las diferencias entre las matrices pueden ser tan simples como los efectos causados por las diferencias en su
procesamiento o presentación, por ejemplo, productos crudos versus pasteurizados; alimentos frescos versus secos, etc.

Limitación de garantía/Recurso limitado

SALVO LO EXPRESAMENTE ESTIPULADO EN UNA SECCIÓN DE GARANTÍA LIMITADA O EN EL EMBALAJE DE
UN PRODUCTO ESPECÍFICO, NEOGEN RENUNCIA A TODAS LAS GARANTÍAS EXPRESAS Y TÁCITAS INCLUIDA,ENTRE OTRAS, CUALQUIER GARANTÍA DE COMERCIABILIDAD O IDONEIDAD PARA UN USO EN PARTICULAR.
Si un producto de Neogen Food Safety es defectuoso, Neogen o su distribuidor autorizado reemplazará el producto oreembolsará el precio de compra del producto, a su elección. Estos son sus recursos exclusivos. Póngase en contacto con
su representante de Neogen o distribuidor autorizado de Neogen para que se le responda cualquier otra pregunta.

Limitación de responsabilidad de Neogen

NEOGEN NO SERÁ RESPONSABLE DE NINGUNA PÉRDIDA O DAÑO, YA SEA DIRECTO, INDIRECTO, ESPECIAL,DAÑOS ACCIDENTALES O CONSECUENCIAS, INCLUIDOS ENTRE OTROS, LA PÉRDIDA DE BENEFICIOS. En ningún
caso la responsabilidad de Neogen conforme a ninguna teoría legal excederá el precio de compra del producto
supuestamente defectuoso.

Almacenamiento y desecho

Almacene el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen a una temperatura entre 2 °C y 8 °C.
No lo congele. Durante el almacenamiento, mantenga el kit fuera del alcance de la luz. Después de abrir el kit, verifiqueque la bolsa de aluminio no esté dañada. Si la bolsa está dañada, no use el producto. Después de abrir el embalaje, lostubos de reactivo no utilizados se deberán guardar siempre en la bolsa resellable junto con el desecante para conservar laestabilidad de los reactivos liofilizados. Almacene las bolsas cerradas a una temperatura entre 2 °C y 8 °C durante 60 díascomo máximo.
No utilice el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen después de su fecha de vencimiento.
La fecha de vencimiento y el número de lote están impresos en la etiqueta externa de la caja. Después de utilizarlos,
el medio de enriquecimiento y los tubos del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen
podrían contener materiales patógenos. Una vez terminada la prueba, proceda según los estándares actuales dela industria para el desecho de residuos contaminados. Consulte la Hoja de Datos de Seguridad para obtener más
información y conocer las normativas locales para el desecho de materiales.

Instrucciones de uso

Siga todas las instrucciones atentamente. De lo contrario, los resultados obtenidos podrían llegar a ser incorrectos.
Descontamine periódicamente las mesas y el equipo de laboratorio (pipetas, herramientas para tapar/destapar, etc.)
con una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5% (v:v en agua) o en una solución para eliminación de DNA.
El usuario debe completar la capacitación de calificación del operador (OQ) del Sistema de Detección Molecular
Neogen según se describe en el documento “Protocolos de Calificación para la Instalación (IQ)/Calificación Operativa(OQ) e Instrucciones para el Sistema de Detección Molecular Neogen”(6).
Consulte la sección “Instrucciones específicas para métodos validados” para obtener requisitos específicos:
La Tabla 3 para los protocolos de enriquecimiento según el Official Method of AnalysisSM 2016.08 de AOAC® y elcertificado n.° 081501 del Performance Tested MethodSM de AOAC®.
La Tabla 4 para los protocolos de enriquecimiento según el certificado NF Validation 3M 01/15-09/16.

Enriquecimiento de la muestra

Las Tablas 2, 3 o 4 presentan una guía para el enriquecimiento de muestras ambientales y de alimentos. Es responsabilidad
del usuario validar protocolos alternativos de muestreo o proporciones de dilución para garantizar que este método deprueba satisface los criterios del usuario.

Alimentos

1. Deje el medio de enriquecimiento de Caldo Demi Fraser (adicionado con citrato de amonio férrico) equilibrar a latemperatura ambiente de laboratorio.
2. Combine asépticamente el medio de enriquecimiento y la muestra según las Tablas 2, 3 o 4. Para todas las muestras
con alto contenido de partículas y carne, se recomienda utilizar bolsas con filtro.
3. Homogenice cuidadosamente mediante un homogeneizador peristáltico, licuadora, o mezclado manual por
2 ± 0,2 minutos. Incube a una temperatura de 37 °C ± 1 °C según las Tablas 2, 3 o 4.
4. En cuanto a los productos lácteos crudos (consulte las Tablas 2, 3 o 4), transfiera 0,1 mL del enriquecimiento primario a
10 mL de Caldo Fraser. Incube a una temperatura de 37 °C ± 1° C entre 20 y 24 horas.

4

ES(Español)Muestras ambientales

Los dispositivos de recolección de muestras pueden ser esponjas hidratadas con una solución neutralizante paradesactivar los efectos de los desinfectantes. Neogen recomienda el uso de una esponja de celulosa sin biocidas. La
solución neutralizante puede ser el caldo neutralizante Dey-Engley (D/E) o el caldo Letheen. Se recomienda desinfectar elárea después de la toma de muestras.
ADVERTENCIA: Si decidiera utilizar una solución de caldo neutralizante (NB) que contenga el complejo aril sulfonato
como solución hidratante para la esponja, deberá preparar una dilución 1:2 (1 parte de muestra en 1 parte de caldode enriquecimiento estéril) de la muestra ambiental enriquecida antes de realizar la prueba para reducir los riesgos
asociados con un resultado falso negativo que resultará en la liberación del producto contaminado. Otra opción estransferir 10 μL de la solución de caldo neutralizante enriquecida a los tubos de Solución de Lisis Neogen.
El tamaño recomendado del área de muestra para verificar la presencia o ausencia del patógeno en la superficie es de100 cm2 (10 cm x 10 cm o 4 in. x 4 in.). Cuando realice el muestreo con una esponja, cubra toda el área en dos direcciones(de izquierda a derecha, luego, de arriba hacia abajo) o recolecte las muestras ambientales según el protocolo de muestreo
actual o con los lineamientos de FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) o la norma ISO 18593(7).
1. Deje el medio de enriquecimiento de Caldo Demi Fraser (adicionado con citrato de amonio férrico) equilibrar a latemperatura ambiente de laboratorio.
2. Combine asépticamente el medio de enriquecimiento y la muestra según las Tablas 2, 3 o 4.
3. Homogenice cuidadosamente mediante un homogeneizador peristáltico, licuadora, o mezclado manual por
2 ± 0,2 minutos. Incube a una temperatura de 37 °C ± 1 °C de 24 a 30 horas según las Tablas 2, 3 o 4.
Tabla 2: Protocolos generales de enriquecimiento a 37 °C ± 1 °C con Caldo Demi Fraser y Caldo Fraser, según
sea necesario.

Matriz dela muestra

Tamaño dela muestra

Volumendelcaldo deenriquecimiento(mL)

Tiempo deenriquecimiento(horas)

25 g

225

24-30

1 esponja

100 o 22524-30

1 hisopo

10

24-30

25 g

475

28-32

Procesados
térmicamente,cocinados, carnes
curadas, carnesde aves, mariscos
y pescados
Productos lácteos
pasteurizados,
procesados
por calor
Frutas, hortalizas
y vegetales
Alimentos
multicomponentes
Muestrasambientales(a)Carne de res cruda,carne de avescruda, mariscos ypescados crudos

5

ES

Enriquecimiento secundario(Caldo Fraser)(a)Enriquecimiento primario(Caldo Demi Fraser)(a)Matriz dela muestra

Productos
lácteos crudos

Tamaño dela muestra

25 gVolumendelcaldo deenriquecimiento(mL)(Español)TiempoTiempo deTemperaturadeenriqueci- Tamaño de de enriquecienriquecimiento
la muestra
mientomiento(horas)(°C)(horas)225

Transfiera
0,1 mLa 10 mLde Caldo
Fraser20-24

37 ± 1

20-24

Volumen deanálisis dela muestra(b)10 μL(a) El Caldo Demi Fraser o el Caldo Fraser siempre deben adicionarse con el suplemento de Caldo Fraser (citrato férrico
amoniacal) en el enriquecimiento primario o secundario.
(b) Volumen de muestra transferido a los tubos de Solución de Lisis Neogen. Consulte el Paso 4.6 de la sección Lisis.

Instrucciones específicas para métodos validados
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM n.° 081501

En los programas de AOAC Research Institute OMASM y PTMSM, se determinó que el Ensayo de Detección Molecular 2para Listeria monocytogenes Neogen es un método eficaz para la detección de Listeria monocytogenes. Las matrices
evaluadas en el estudio se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3. Protocolos de enriquecimiento en los que se utiliza Caldo Demi Fraser(a) a 37 °C ± 1 °C según AOAC OMASM
2016.08 y el certificado PTMSM n.° 081501.
Matriz de la muestra

Tamaño dela muestra

Volumen del caldode enriquecimiento(mL)

Tiempo deenriquecimiento(horas)Salchicha de carne de vaca, queso fresco,
helado de vainilla, queso cottage con 4%
de grasa, leche entera chocolatada con 3%
grasa, lechuga romana, espinaca cruda en
bolsa, salmón ahumado frío

25 g

225

24-30

Pollo crudo

25 g

475

28-32

125 g

1125

24-30

Melón cantaloupe(b)MelónenteroVolumen suficientepara que melón flote

26-30

Acero inoxidable

1 esponja

225

24-30

Concreto sellado

1 esponja

100

24-30

Plástico(c)1 hisopo

10

24-30

Muestrasambientales:

Embutidos de pavo

Todas las muestras para la validación de AOAC se homogeneizaron mediante homogeneizador peristáltico, a menos que se
indique lo contrario.
(a)		El Caldo Demi Fraser o el Caldo Fraser siempre deben adicionarse con el suplemento de Caldo Fraser (citrato férrico
amoniacal) en el enriquecimiento primario o secundario.
(b) Homogeneizar la muestra mediante mezclado manual.
(c)		 Homogeneizar la muestra mediante agitador eléctrico.
6

ES(Español)NF VALIDATION por AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Para más información acerca del final de la validez, consulte el certificado de NF VALIDATION disponible en el sitio web
mencionado anteriormente.
Método certificado de NF VALIDATION en cumplimiento de la norma ISO 16140-2(6), en comparación con la norma
ISO 11290(3) Alcance de la validación: todas las muestras ambientales y de alimentos para humanos (excluidas lasmuestras de la producción primaria)
Preparación de la muestra: las muestras deben prepararse según las normas EN ISO 11290-1(3) y EN ISO 6887(8)Versión de software: consulte el certificado
Tabla 4: Protocolos de enriquecimiento según el método certificado NF VALIDATION 3M 01/15-09/16 a 37 °C ± 1 °C en
los que se utiliza Caldo Demi Fraser y Caldo Fraser, según sea necesario.
VolumenTemperatura Tiempo dedel caldo deTamaño dede enriqueci- enriqueciProtocolos generales
enriquecila muestra
mientomientomiento(± 1 °C)(horas)(mL)
Todas las muestras
de alimentos(excepto carnes
25 gcrudas, mariscos
crudos y productos
225
37
24-30
lácteos crudos)
25 g,
Muestras ambientales 1 hisopoo 1 toalla

Volumen deanálisis de lamuestra(a)Punto deinterrupción aceptado• Caldo Demi Fraser
hasta 72 horas
20 µL• Lisado a –20 °C• Lisado a 4 °C hasta
72 horas

Enriquecimiento primario (Caldo Demi Fraser)(b) Enriquecimiento secundario (Caldo Fraser)(b)VolumenTemperaTemperaVolumen Punto dedelTiempo deTiempo deProtocolointerruptura deTamañotura dedeenriqueciespecífico Tamaño de caldo de enriqueci- enriquecide laenriquecianálisis ción acepla muestra enriquecimiento
mientotado
mientomuestramientode lamiento(horas)(horas)(c)(± 1 °C)(± 1 °C)
muestra(mL)• CaldoFraserCarneshasta
crudas,Transfiera
72 horasmariscos
0,1 mL• Lisado acrudos y
25 g
225
37
20-24
a 10 mL
37
20-24
10 µL
–20 °C
productos
de Caldo• Lisadolácteos
Frasera 4 °C
crudoshasta
72 horas(a) Volumen de muestra transferido a los tubos de Solución de Lisis Neogen. Consulte el Paso 4.6 de la sección Lisis.
(b) El Caldo Demi Fraser o el Caldo Fraser siempre deben adicionarse con el suplemento de Caldo Fraser (citrato férrico
amoniacal) en el enriquecimiento primario o secundario.
(c) Volumen de muestra transferido a los tubos de Solución de Lisis Neogen. Consulte el Paso 4.6 de la sección Lisis.
NOTA: Las muestras de más de 25 g no han sido sometidas a prueba en el estudio de NF Validation.

7

ES(Español)Preparación de la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
1. Humedezca un paño con una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5% (v:v en agua) y limpie la Bandeja de
Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen®.
2. Enjuague la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen con agua.
3. Utilice una toalla desechable para secar la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen.
4. Antes de utilizarla, asegúrese de que la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen
esté seca.
Preparación del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
Coloque la Bandeja para el Bloque de Frío del Sistema de Detección Molecular Neogen® directamente sobre la mesa delaboratorio. Utilice el Bloque de Enfriamiento a temperatura ambiente de laboratorio (20 °C-25 °C).
Preparación del Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
Coloque el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen® en la unidad calentadora seca de bloques
doble. Encienda la unidad calentedora seca de bloques y ajuste la temperatura para permitir que el Bloque de Calor para el
Sistema de Detección Molecular Neogen alcance y mantenga una temperatura de 100 °C ± 1 °C.
NOTA: Según la unidad de calentamiento, espere aproximadamente 30 minutos para que el Bloque de Calor para el
Sistema de Detección Molecular Neogen alcance la temperatura deseada. Con un termómetro calibrado adecuado(p. ej., un termómetro de inmersión parcial o un termómetro digital termopar, no un termómetro de inmersión total)
colocado en la ubicación designada, verifique que el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen se
encuentre a 100 °C ± 1 °C.
Preparación del Equipo de Detección Molecular Neogen®
1. Inicie el software del Sistema de Detección Molecular Neogen® e inicie sesión. Contacte a su representante de
Neogen Food Safety para asegurarse de que tiene la última versión del software.
2. Encienda el Equipo de Detección Molecular Neogen.
3. Cree o edite un ensayo con datos para cada muestra. Para obtener detalles, consulte el Manual del Usuario del Sistema
de Detección Molecular Neogen.
NOTA: El Equipo de Detección Molecular Neogen debe alcanzar el estado de Listo antes de insertar la Bandeja de Carga
Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen con los tubos de reacción. Este paso de calentamiento lleva
unos 20 minutos y aparece indicado por una luz NARANJA en la barra de estado del equipo. Una vez que el equipo estélisto para iniciar un ensayo, la barra de estado se cambiará a color VERDE.
Lisis
Retire la parte inferior de la Gradilla para Solución de Lisis de Neogen con un destornillador o una espátula antes decolocarla en el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen.

1. Deje que los tubos de solución de lisis (Solución de Lisis Neogen) se calienten colocando la gradilla a temperatura
ambiente (20 °C y 25 °C) durante toda la noche (16 a 18 horas). Las alternativas para que los tubos de Solución deLisis Neogen alcancen temperatura ambiente son colocar los tubos de Solución de Lisis Neogen sobre la mesa delaboratorio durante por lo menos 2 horas, incubar los tubos de Solución de Lisis Neogen en una incubadora a 37 °C± 1 °C durante 1 hora o colocarlos en una unidad calentadora seca dos bloques durante 30 segundos a 100 °C.
2. Invierta los tubos tapados para mezclarlos. Continúe con el paso siguiente dentro de las siguientes 4 horas.
3. Retire el caldo de enriquecimiento de la incubadora.
4. Se requiere un tubo de Solución de Lisis Neogen para cada muestra y uno como control negativo (NC) (medio deenriquecimiento estéril).
4.1 Las tiras de tubos de Solución de Lisis Neogen pueden cortarse para obtener la cantidad deseada de tubos de la
Solución de Lisis Neogen. Seleccione la cantidad de tubos de Solución de Lisis Neogen individuales o tiras de 8
tubos necesarias. Coloque los tubos de Solución de Lisis Neogen en una gradilla vacía.
4.2 Para evitar la contaminación cruzada, destape una tira de tubos de Solución de Lisis Neogen por vez y use una
nueva punta de pipeta para cada paso de transferencia.
8

ES(Español)4.3 Transfiera la muestra enriquecida a los tubos de Solución de Lisis Neogen como se describe a continuación:
Transfiera cada muestra enriquecida a un tubo de Solución de Lisis Neogen individual primero. Transfiera el NC
al final.
4.4 Utilice la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado del Sistema de Detección Molecular – Lisis Neogen®
para destapar una tira de tubos de Solución de Lisis Neogen, una tira a la vez.
4.5 Deseche la tapa del tubo de Solución de Lisis Neogen; si se conservará el lisado para repetir la prueba, coloque lastapas en un envase limpio para reutilizarlas luego de la lisis.
4.5.1 Para ver cómo procesar el lisado conservado, consulte el Apéndice A.
4.6 Transfiera 20 µL de la muestra en un tubo de Solución de Lisis Neogen a menos que se indique lo contrario en
los protocolos de las Tablas 2, 3 o 4 (p. ej., productos lácteos crudos o si se emplean muestras ambientales con
solución de caldo neutralizante, utilice 10 µL).
20 µl

5. Repita los pasos 4.4 al 4.6 hasta que cada muestra individual se haya agregado al correspondiente tubo de Solución deLisis Neogen de la tira.
6. Cuando se hayan transferido todas las muestras, transfiera 20 µL del NC (medio de enriquecimiento estéril, p. ej., Caldo
Demi Fraser) a un tubo de Solución de Lisis Neogen. No use agua como un NC.
7. Verifique que la temperatura del Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen sea de 100 °C ± 1 °C.
8. Coloque la gradilla sin cubrir de tubos de Solución de Lisis Neogen en el Bloque de Calor para el Sistema de Detección
Molecular Neogen y caliente durante 15 ± 1 minutos. Durante el calentamiento, la Solución de Lisis Neogen cambiaráde rosado (frío) a amarillo (caliente).
8.1 Las muestras que no se hayan tratado debidamente con calor durante el paso de lisis del ensayo pueden
considerarse un posible riesgo biológico y NO deben introducirse en el Equipo de Detección Molecular Neogen.
9. Retire la gradilla descubierta de tubos de Solución de Lisis Neogen del bloque de calor y deje que se enfríe en laInserción del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen al menos durante 5 minutos y por un
máximo de 10 minutos. Cuando se utiliza el Bloque de Frío Molecular Neogen a temperatura ambiente, debe colocarse
directamente sobre la mesa de laboratorio. Cuando esté fría, la solución de lisis revertirá a un color rosado.
10. Retire la gradilla de tubos de Solución de Lisis Neogen de la Inserción del Bloque de Frío para el Sistema de Detección
Molecular Neogen.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplificación
1. Se necesita un Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen por cadamuestra y uno para el NC.
1.1 Las tiras de tubos de reactivo pueden cortarse para obtener la cantidad de tubos deseada. Seleccione la cantidad
de Tubos de Reactivos del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen o tiras de
8 tubos, según sea necesario.
1.2 Coloque los Tubos de Reactivos del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen en una
gradilla vacía.
1.3 Evite mover las perlas de reactivo del fondo de los tubos.
9

ES(Español)2. Seleccione 1 tubo de Control de Reactivos Neogen y colóquelo en la gradilla.
3. Para evitar la contaminación cruzada, destape un Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria
monocytogenes Neogen a la vez y utilice una nueva punta de pipeta para cada paso de transferencia.
4. Transfiera el lisado a un Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen ya un tubo de Control de Reactivos Neogen como se describe a continuación:
Transfiera el lisado de cada muestra a los Tubos de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria
monocytogenes Neogen primero, seguido por el NC. Hidrate el Tubo de Control de Reactivos Neogen al final.
5. Utilice la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado del Sistema de Detección Molecular – Reactivo Neogen®
para destapar el Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen, una tira ala vez. Deseche la tapa.
5.1 Transfiera 20 µL del lisado de muestra de la ½ superior del líquido (evite el precipitado) en el tubo de Soluciónde Lisis Neogen al Tubo de Reactivo correspondiente del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria
monocytogenes Neogen. Dispense en un ángulo que evite movimientos en las perlas. Mezcle pipeteando
suavemente hacia arriba y hacia abajo 5 veces.
5.2 Repita el paso 5.1 hasta que se haya agregado una muestra individual del lisado a un Tubo de Reactivo
correspondiente del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen en la tira.
5.3 Cubra los Tubos de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen con lastapas adicionales provistas y utilice el lado redondeado de la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado delSistema de Detección Molecular – Reactivo Neogen para aplicar presión con un movimiento hacia adelante y hacia
atrás para asegurarse de que la tapa quede bien ajustada.
5.4 Repita los pasos 5.1 a 5.3, según sea necesario, para la cantidad de muestras que se deben analizar.
5.5 Cuando se hayan transferido todos los lisados de la muestra, repita el paso 5.1 para transferir 20 µL de lisado NC
a un Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen.
5.6 Transfiera 20 µL del lisado NC a un tubo de Control de Reactivos Neogen. Dispense en un ángulo que evite
movimientos en las perlas. Mezcle pipeteando suavemente hacia arriba y hacia abajo 5 veces.
6. Cargue los tubos tapados en una Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen limpia ydescontaminada. Cierre y trabe la tapa de la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen.

20 µL

7. Revise y confirme la corrida configurada en el software del Sistema de Detección Molecular Neogen.
8. Haga clic en el botón de inicio del software y seleccione el equipo que usará. La tapa del equipo seleccionado se
abrirá automáticamente.
9. Coloque la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen en el Equipo de Detección
Molecular Neogen y cierre la tapa para comenzar con el ensayo. Obtendrá los resultados al cabo de 75 minutos, aunquelos positivos pueden detectarse antes.
10. Después de completar el ensayo, retire la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogendel Equipo de Detección Molecular Neogen y deseche los tubos dejándolos inmersos en una solución de cloro de uso
doméstico del 1% al 5% (v:v en agua) durante 1 hora y lejos del área en que se prepara el ensayo.
ATENCIÓN: Para minimizar el riesgo de falsos positivos a causa de contaminación cruzada, nunca abra tubos de reactivo
que contengan DNA amplificado. Esto incluye un Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria
monocytogenes Neogen, el Control de Reactivos Neogen y los Tubos de Control de Matriz. Siempre deseche los tubos
contaminados dejándolos inmersos en una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5% (v:v en agua) durante 1 hora
y lejos del área en que se prepara el ensayo.

Resultados e interpretación

Un algoritmo interpreta la curva de producción de luz que se obtiene de la detección de ácido nucleico amplificado.
El software analiza automáticamente los resultados y se codifican por color según el resultado. Los resultados Positivoo Negativo se determinan mediante el análisis de una cantidad de parámetros característicos de la curva. Los resultados
10

ES(Español)presuntivos positivos se informan en tiempo real, mientras que los resultados Negativo e Inspeccionar se muestran una vez
terminado el análisis.
Las muestras con resultados presuntivos positivos deben confirmarse según los procedimientos operativos estándar
del laboratorio o mediante la confirmación del método de referencia apropiado(1, 2, 3), comenzando con la transferenciadel caldo de enriquecimiento primario al secundario (si corresponde), seguido del posterior sembrado en placa y laconfirmación de aislados, mediante métodos bioquímicos y serológicos apropiados.
NOTA: Incluso una muestra negativa no arrojará una lectura de cero, ya que los reactivos de amplificación del Ensayo
de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen tienen una lectura de unidades relativas de luz de fondo(RLU).
En el raro caso de que haya una interrupción inusual del suministro eléctrico, el algoritmo lo señalará como “Inspeccionar”.
Neogen recomienda al usuario repetir el ensayo para aquellas muestras etiquetadas como Inspeccionar. Si el resultado
sigue siendo Inspeccionar, continúe con la prueba de confirmación usando su método preferido o según se especifique enlas reglamentaciones locales.
Tabla 5: Símbolos de los resultados para las muestras y su interpretación, según se proporcionan por el software delSistema de Detección Molecular Neogen.
Tipo de pozo

Símbolo delresultado del pozo

Resultado

Interpretación

MuestraPositiva

La muestra es presuntamente positiva para el patógeno objetivo.

MuestraNegativa

La muestra es negativa para el patógeno objetivo.

Inhibida

La matriz de la muestra fue inhibidora para el ensayo. Es posible
que se requiera una repetición de la prueba. Para obtener más
información, consulte la sección de solución de problemas y las
instrucciones del producto del kit de ensayo.

Inspeccionar

No se pudo determinar la presencia o ausencia del patógeno
objetivo. Es posible que se requiera una repetición de la prueba.
Para obtener más información, consulte la sección de solución deproblemas y las instrucciones del producto del kit de ensayo.

Error

No se detectó bioluminiscencia. Es posible que se requiera una
repetición de la prueba. Para obtener más información, consulte lasección de solución de problemas y las instrucciones del productodel kit de ensayo.

MuestraMuestraMuestraConfirmación de los resultados según el Método Certificado de NF VALIDATION
Opción 1: siguiendo la norma ISO 11290(3) a partir del enriquecimiento de Caldo Demi Fraser.
Opción 2: mediante el aislamiento en agar PALCAM o en agar cromogénico que forman parte de un método certificado
NF VALIDATION para la detección de Listeria monocytogenes. La presencia de colonias características es suficiente para
confirmar la presencia de Listeria monocytogenes.
Opción 3: mediante uso de sondas de ácido nucleico, tal como se describe en la norma EN ISO 7218(5), en colonias
aisladas de agar selectivo (consulte las Opciones 1 o 2).
Opción 4: mediante el empleo de cualquier otro método certificado NF VALIDATION, cuyo principio debe ser diferentedel Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes Neogen. Se debe utilizar el protocolo completo descrito
para este segundo método validado. Todos los pasos previos al comienzo de la confirmación deben ser comunes paraambos métodos.
En caso de resultados discordantes (presuntamente positivos con el método alternativo, no confirmados por alguno de losmedios descritos anteriormente), el laboratorio debe seguir los pasos necesarios para garantizar la validez del resultado
obtenido.
En caso de que haya resultados opuestos (supuestamente positivos con el Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria
monocytogenes Neogen, no confirmados por alguno de los medios descritos anteriormente, el laboratorio debe seguir los
pasos necesarios para garantizar la validez de los resultados obtenidos.
Si tiene preguntas acerca de los procedimientos o las aplicaciones específicas, visite nuestro sitio web en
www.neogen.com o comuníquese con su representante o distribuidor local de Neogen.

11

ES

(Español)Apéndice A. Interrupción por protocolo: Almacenamiento y repetición de pruebas de lisados tratados térmicamente.
1. Para almacenar un lisado tratado térmicamente, vuelva a tapar el tubo de lisis con una tapa limpia (consulte “Lisis”,
sección 4.5).
2. Almacene entre 4 °C y 8 °C por hasta 72 horas.
3. Prepare la muestra almacenada para amplificación invirtiéndola 2 a 3 veces para mezclar.
4. Destape los tubos.
5. Coloque los tubos de lisado mezclados en el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen ycaliéntelos a 100 °C ± 1 °C durante 5 ± 1 minutos.
6. Retire la gradilla de tubos de Solución de Lisis Neogen del bloque de calor y deje que se enfríe en la Inserción delBloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen al menos durante 5 minutos y por un máximo de 10
minutos.
7. Siga el protocolo en la sección “Amplificación” que se detalla arriba.

Referencias:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Explicación de los Símbolos de la Etiqueta del Producto
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867ANL(Nederlands)

Datum van uitgifte: 2024-01

Productinstructies
Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes
Productbeschrijving en beoogd gebruik

De Neogen® Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes wordt samen met het Neogen® Moleculaire
Detectiesysteem gebruikt voor een snelle en specifieke detectie van Listeria monocytogenes in verrijkte voedsel- en
voedingsmonsters. De Neogen Moleculaire detectie assays maken gebruik van lusgebonden isothermische amplificatievoor de snelle amplificatie van nucleïnezuurschakels met een hoge specificiteit en gevoeligheid, in combinatie met
bioluminescentie om de amplificatie te detecteren. Vermoedelijk positieve resultaten worden onmiddellijk gerapporteerd,
terwijl negatieve resultaten pas worden weergegeven nadat de analyse voltooid is. Vermoedelijk positieve resultaten
moeten door middel van een door u gewenste methode of conform de lokale wet- en regelgeving(1, 2, 3) worden bevestigd.
De Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes is bestemd voor gebruik in een laboratoriumomgeving
door professionals die zijn geschoold in laboratoriumtechnieken. Neogen heeft het gebruik van dit product niet
gedocumenteerd in andere sectoren dan de voedings- of drankensector. Neogen heeft dit product bijvoorbeeld niet
gedocumenteerd voor het testen van water-, farmaceutische, cosmetische, klinische of veterinaire monsters. De Neogen
Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes is niet geëvalueerd met alle mogelijke testprotocollen of allemogelijke bacteriestammen.
Zoals bij alle testmethoden, kunnen de bron, de formulering en de kwaliteit van het verrijkingsmedium deresultaten beïnvloeden. Factoren als bemonsteringsmethoden, testprotocollen, monstervoorbereiding, hantering enlaboratoriumtechniek kunnen tevens de resultaten beïnvloeden. Neogen beveelt evaluatie van de methode aan, met inbegrip
van het verrijkingsmedium, in de omgeving van de gebruiker aan de hand van een voldoende aantal monsters met specifieke
voedingsmiddelen en microbiële uitdagingen om ervoor te zorgen dat de methode aan de criteria van de gebruiker voldoet.
Neogen heeft de Neogen Moleculair detectie assay 2 Listeria monocytogenes aan de hand van Demi Fraser bouillon
met ijzerammoniumcitraat en Fraser bouillon met ijzerammoniumcitraat zoals vereist geëvalueerd. Hieronder wordt een
gebruikelijke samenstelling van dit medium gegeven.
Gebruikelijke samenstelling Demi Fraserbouillon (basis)(g/l)

Gebruikelijke samenstelling Fraser bouillon(basis)(g/l)

Natriumchloride

20 g

Natriumchloride

20 g

Natriumfosfaat, dibasisch, watervrij*

9,6 g

Natriumfosfaat, dibasisch, watervrij*

9,6 g

Rundvleesextract

5,0 g

Rundvleesextract

5,0 g

Pancreatisch verteringsproduct van caseïne

5,0 g

Pancreatisch verteringsproduct van caseïne

5,0 g

Peptisch verteringsproduct van dierlijk weefsel 5,0 g

Peptisch verteringsproduct van dierlijk weefsel

5,0 g

Gistextract

5,0 g

Gistextract

5,0 g

Lithiumchloride

3,0 g

Lithiumchloride

3,0 g

Kaliumfosfaat

1,35 gKaliumfosfaat

1,35 gAesculine

1,0 g

Aesculine

1,0 g

Acriflavine HCl

0,0125 g

Acriflavine HCl

0,025 gNalidixinezuur

0,01 gNalidixinezuur

0,02 g* Vervangende stof: Natriumfosfaat, dibasisch, dihydraat 12,0 g
Fraser bouillon-supplement(Ingrediënten per buisje van 10 ml. Per liter basismedium wordt één buisje toegevoegd.)
IJzerammoniumcitraat

0,5 g/10 ml

Definitieve pH-waarde

7,2 ± 0,2 bij 25 °C

Het Neogen Moleculair Detectieinstrument is bedoeld voor gebruik bij monsters die tijdens de lyseanalysestap een
warmtebehandeling hebben ondergaan, die ontwikkeld is om de in het monster aanwezige organismen te vernietigen.
Monsters die tijdens de lyseanalysestap niet de juiste warmtebehandeling hebben ondergaan, kunnen als een potentieel
biologisch gevaar worden beschouwd en mogen NIET in het Neogen Moleculaire Detectieinstrument worden geplaatst.
®

Neogen Food Safety is ISO (Internationale Organisatie voor Standaardisatie) 9001-gecertificeerd voor het ontwerp ende productie.
De Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes-testset bevat 96 tests, vermeld in tabel 1.
1

NL(Nederlands)

Tabel 1. Onderdelen Neogen Moleculaire detectie assay-set
ArtikelIdentificatie

Hoeveelheid

InhoudOpmerkingen

Neogen® Lyse-oplossing(LS)

Roze oplossing
in doorzichtige
buisjes

96 (12 stroken van
8 buisjes)

580 μl LS per buisje

In rek en klaar
voor gebruik

Neogen® Moleculairedetectie assay 2 Listeria
monocytogenesreagensbuisjes

Gele buisjes

96 (12 stroken van
8 buisjes)

Gevriesdroogde
specifieke amplificatieen detectiemix

Klaar voor
gebruik

Extra doppen

Gele doppen

96 (12 stroken van
8 doppen)

Neogen® Reagenscontrole(RC)

Doorzichtige
buisjes met
kliksluiting

16 (2 zakjes met 8
individuele buisjes)

Klaar voor
gebruik
Gevriesdroogd controleDNA, amplificatieen detectiemix

Klaar voor
gebruik

De negatieve controle, die niet in de set is meegeleverd, is een steriel verrijkingsmedium, zoals Demi Fraser bouillon.
Gebruik geen water als negatieve controle.

Veiligheid

De gebruiker moet alle veiligheidsinformatie in de instructies van het Neogen Moleculaire Detectiesysteem ende Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes lezen, begrijpen en in acht nemen. Bewaar deveiligheidsinstructies om deze later te kunnen raadplegen.
WAARSCHUWING: Geeft een gevaarlijke situatie aan die, indien deze niet wordt vermeden, de dood, ernstig letsel
en/of materiële schade tot gevolg kan hebben.
KENNISGEVING: Geeft een mogelijk gevaarlijke situatie aan die, indien deze niet wordt vermeden, materiële schadetot gevolg kan hebben.

W WAARSCHUWING
Gebruik de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes niet voor het diagnosticeren van
aandoeningen bij mensen of dieren.
Met de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes-methode kan mogelijk een hoeveelheid Listeria
monocytogenes worden geproduceerd die indien zwangere vrouwen hieraan worden blootgesteld doodgeboorten
en miskramen tot gevolg kan hebben.
De gebruiker moet zijn personeel scholen in de huidige en juiste testtechnieken, zoals goede laboratoriumpraktijken(GLP), ISO/IEC 17025(4), of ISO 7218(5).
Op de volgende wijze kunt u de risico's beperken van een vals negatief resultaat dat tot vrijgave van een besmet
product leidt:• Volg het protocol en voer de tests exact uit zoals aangegeven in de productinstructies.
• Bewaar de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes volgens de instructies op de verpakking en inde productinstructies.
• Gebruik de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes altijd voordat de vervaldatum verstreken is.
• Gebruik de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes voor voedsel- en voedingsmonsters die internof door een derde partij zijn gevalideerd.
• Gebruik de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes alleen voor oppervlakken, reinigingsmiddelen,
protocollen en bacteriestammen die intern of door een derde partij zijn gevalideerd.
• Voor een omgevingsmonster dat een neutraliserende bufferoplossing bevat met een arylsulfonaatcomplex, verdunt
u 1:2 voorafgaand aan het testen (1 deel monster op 1 deel steriele verrijkingsbouillon). Ook kan 10 μl van deneutraliserende bufferverrijking naar de buisjes met Neogen Lyse-oplossing worden overgebracht. Neogen® producten
voor monsterverzameling, waaronder een neutraliserende buffer met arylsulfonaatcomplex: RS96010NB, RS9604NB,
SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G en HS2410NB2G.
Op de volgende wijze kunt u de risico's van blootstelling aan biologische en chemische gevaren beperken:• Het wordt ten zeerste aanbevolen om vrouwelijke laboranten op de hoogte te stellen van het risico dat blootstelling aan
Listeria monocytogenes voor een foetus in de ontwikkelingsfase kan vormen als gevolg van een infectie van de moeder.
• Voer de pathogeentests uit in een goed uitgerust laboratorium onder het toezicht van opgeleid personeel.
Geïncubeerde verrijkingsmedia en -apparatuur of oppervlakken die met geïncubeerde verrijkingsmedia in contact zijn
gekomen, bevatten mogelijk voldoende pathogenen om een gevaar voor de menselijke gezondheid te vormen.
• Volg bij de hantering van reagentia en besmette monsters altijd de standaard veiligheidsvoorschriften voor laboratoria
op, met inbegrip van het dragen van toepasselijke beschermende kleding en oogbescherming.
• Vermijd contact met de inhoud van de verrijkingsmedia en reagensbuisjes na amplificatie.
2

NL(Nederlands)• Voer verrijkte monsters af conform de in de branche geldende normen.
• Monsters die tijdens de lyseanalysestap niet de correcte warmtebehandeling hebben ondergaan, kunnen als een
potentieel biologisch gevaar worden beschouwd en mogen NIET in het Neogen Moleculaire Detectieinstrument
worden geplaatst.
Op de volgende wijze kunt u tijdens de voorbereiding van de test het risico op kruisbesmetting beperken:• Draag altijd handschoenen (om de gebruiker te beschermen en de introductie van nucleases te voorkomen).
Op de volgende wijze kunt de risico's van milieuverontreiniging beperken:• Volg de van kracht zijnde industrienormen betreffende de afvoer van besmet afval.
Op de volgende wijze kunt u de risico's van blootstelling aan hete vloeistoffen beperken:• Overschrijd de aanbevolen temperatuurinstelling op de verwarmer niet.
• Overschrijd de aanbevolen verwarmingstijd niet.
• Gebruik een geschikte, gekalibreerde thermometer om de temperatuur van het Neogen® Moleculaire Detectie- Verwarmingsblokinzetstuk te controleren (zoals een gedeeltelijk ondergedompelde thermometer of digitale
thermokoppelthermometer, geen volledig ondergedompelde thermometer). De thermometer moet op deaangewezen locatie in het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk worden geplaatst.

KENNISGEVINGOp de volgende wijze kunt u tijdens de voorbereiding van de test het risico op kruisbesmetting beperken:• Verwissel uw handschoenen alvorens reagenspellets te hydrateren.
• Het gebruik van steriele pipettips geschikt voor moleculaire biologie met spuitbusbarrière (gefilterd) wordt aanbevolen.
• Gebruik een nieuwe pipettip bij elke monsteroverdracht.
• Maak gebruik van goede laboratoriumpraktijken (GLP) bij de monsteroverdracht van de verrijking naar het lysebuisje.
Ter voorkoming van pipetbesmetting kan de gebruiker ervoor kiezen een extra overdrachtsstap toe te voegen.
De gebruiker kan bijvoorbeeld elk verrijkt monster naar een steriel buisje overbrengen.
• Gebruik waar mogelijk een moleculair biologiewerkstation met een kiemdodende lamp. Ontsmet regelmatig
laboratoriumtafels en apparatuur (pipetten, Cap/Decap gereedschap, enz.) met een bleekwateroplossing van 1-5%
(volumeconcentratie in water) of DNA-verwijderingsoplossing.
Op de volgende wijze kunt u het risico op fout-positieve resultaten beperken:• U dient reagensbuisjes nooit na amplificatie te openen.
• Voer de verontreinigde buisjes altijd af door ze gedurende 1 uur onder te dompelen in een
huishoudbleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) of een vergelijkbare oplossing, uit de buurt
van de testbereidingsruimte.
• U dient reagensbuisjes nooit na amplificatie te autoclaveren.
Raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor aanvullende informatie en lokale wet- en regelgeving inzake afvalverwerking.
Als u vragen hebt over specifieke toepassingen of procedures, kunt u onze website www.neogen.com bezoeken of contact
opnemen met uw plaatselijke vertegenwoordiger of distributeur van Neogen.

Verantwoordelijkheid van de gebruiker

Gebruikers worden geacht zich vertrouwd te maken met de productinstructies en -informatie. Bezoek onze website
www.neogen.com of neem contact op met uw plaatselijke Neogen-vertegenwoordiger of -distributeur voor
meer informatie.
Bij het kiezen van een testmethode is het belangrijk om te erkennen dat externe factoren zoals bemonsteringsmethoden,
testprotocollen, monstervoorbereiding en -behandeling en laboratoriumtechniek invloed op de resultaten kunnen hebben.
De gebruiker is verantwoordelijk voor de selectie van een testmethode of product waarbij een voldoende aantal monsters
met gepaste matrices en microbiële uitdagingen wordt onderzocht, zodat de gekozen testmethode aan de criteria van degebruiker voldoet.
Het is ook de verantwoordelijkheid van de gebruiker om te bepalen of testmethoden en resultaten aan de vereisten van
klanten en leveranciers voldoen.
Zoals bij elke testmethode vormen de verkregen resultaten van het gebruik van een Neogen Food Safety-product geen
garantie voor de kwaliteit van de geteste matrices of processen.
Om klanten te helpen bij het evalueren van de methode voor verschillende matrices heeft Neogen de Neogen® Moleculaire
Detectie Matrix-controleset ontwikkeld. Gebruik indien nodig de Matrix controle (MC) om te bepalen of de matrix
de resultaten van het Neogen Moleculair detectie assay 2 Listeria monocytogenes kan beïnvloeden. Test meerderemonsters die representatief zijn voor de matrix, zoals monsters met een verschillende oorsprong, tijdens een willekeurige
validatieperiode bij het aannemen van de Neogen-methode of bij het testen van nieuwe of onbekende matrices of matrices
die grondstof- of procesveranderingen hebben ondergaan.

3

NL(Nederlands)

Een matrix kan worden gedefinieerd als een soort product met intrinsieke eigenschappen, zoals samenstelling enproces. Verschillen tussen de matrices hangen af van hun verwerking of presentatie, bijvoorbeeld rauw ten opzichte van
gepasteuriseerd; vers ten opzichte van gedroogd enzovoort.

Beperkte garantie / beperkt verhaal

BEHALVE WAAR UITDRUKKELIJK VERMELD IN EEN SECTIE MET BETREKKING TOT DE BEPERKTE GARANTIE VAN EEN
AFZONDERLIJKE PRODUCTVERPAKKING, WIJST NEOGEN ALLE UITDRUKKELIJKE EN IMPLICIETE GARANTIES AF,
MET INBEGRIP VAN, MAAR NIET BEPERKT TOT, ELKE GARANTIE MET BETREKKING TOT DE VERHANDELBAARHEIDEN DE GESCHIKTHEID VOOR EEN BEPAALD DOEL. Als een Neogen Food Safety-product gebrekkig is, zal Neogen of
zijn gevolmachtigde distributeur naar eigen keuze het product vervangen of de aankoopprijs van het product terugbetalen.
Dit is het enige rechtsmiddel waarover u beschikt. Neem contact op met uw Neogen-vertegenwoordiger of erkende
Neogen-distributeur voor verdere vragen.

Beperking van Neogen aansprakelijkheid

NEOGEN IS NIET AANSPRAKELIJK VOOR ENIG(E) VERLIES OF SCHADE, ONGEACHT OF HET GAAT OM DIRECTE,
INDIRECTE, SPECIALE, INCIDENTELE OF GEVOLGSCHADE, MET INBEGRIP VAN, MAAR NIET BEPERKT TOT
WINSTDERVING. In geen geval zal de wettelijke aansprakelijkheid van Neogen onder om het even welke juridischetheorie de aankoopprijs van het vermeend gebrekkige product overschrijden.

Opslag en afvalverwerking

Sla de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes op tussen 2-8 °C. Niet invriezen. Bewaar de set tijdens
opslag uit het licht. Controleer na het openen van de set of het foliezakje niet beschadigd is. Gebruik het product niet als
het zakje beschadigd is. Na opening moeten de ongebruikte reagensbuisjes altijd worden bewaard in de hersluitbare zak
met droogmiddel om de stabiliteit van de gevriesdroogde reagentia te behouden. Bewaar opnieuw verzegelde zakjes
tussen 2-8 °C en niet langer dan 60 dagen.
Gebruik de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes niet nadat de vervaldatum verstreken is.
De vervaldatum en het batchnummer zijn terug te vinden op het etiket aan de buitenzijde van de doos. Na gebruik kunnen
het verrijkingsmedium en de buisjes van de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes mogelijk
pathogeen materiaal bevatten. Zodra de tests zijn afgerond, dient u de van kracht zijnde industrienormen betreffende deafvoer van besmet afval op te volgen. Raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor aanvullende informatie en lokale weten regelgeving inzake afvalverwerking.

Gebruiksaanwijzingen

Volg alle instructies zorgvuldig op. Wanneer dit niet gebeurt, kan dit onnauwkeurige resultaten tot gevolg hebben.
Ontsmet regelmatig laboratoriumtafels en apparatuur (pipetten, Cap/Decap gereedschap, enz.) met een
bleekwateroplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) of DNA-verwijderingsoplossing.
De gebruiker dient de kwalificatietraining voor de bediener van het Neogen Moleculair Detectiesysteem te voltooien,
zoals beschreven in het document 'Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols andInstructions for Neogen Molecular Detection System'(6).
Raadpleeg voor de gedetailleerde eisen het gedeelte 'Specifieke instructies voor gevalideerde methoden':Tabel 3 voor verrijkingsprotocollen conform AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 en AOAC® Performance
Tested MethodSM, certificaatnr. 081501.
Tabel 4 voor verrijkingsprotocollen conform het NF Validation-certificaat 3M 01/15-09/16.

Monsterverrijking

Tabel 2, 3 of 4 biedt advies voor de verrijking van voedings- en omgevingsmonsters. Het is de verantwoordelijkheid vande gebruiker om alternatieve bemonsteringsprotocollen of verdunningsverhoudingen te valideren om ervoor te zorgen dat
deze testmethode aan de criteria van de gebruiker voldoet.

Voedingsmiddelen

1. Laat het verrijkingsmedium, de Demi Fraser bouillon, (met inbegrip van ijzerammoniumcitraat) tot deomgevingstemperatuur van het laboratorium opwarmen.
2. Voeg het monster op steriele wijze aan het verrijkingsmedium toe en neem monsters volgens de aanwijzingen in tabel
2, 3 of 4. Voor alle vlees- en hoge-partikelmonsters is het gebruik van filterzakken aanbevolen.
3. Homogeniseer gedurende 2 ± 0,2 minuten zorgvuldig met een blender of Stomacher, of mix met de hand. Incubeer op
37 ± 1 °C zoals vermeld in tabel 2, 3 of 4.
4. Breng bij rauwe melkproducten (zie tabel 2, 3 of 4) 0,1 ml van de primaire verrijking over naar 10 ml Fraser bouillon.
Incubeer gedurende 20-24 uur bij een temperatuur van 37 ± 1 °C.

4

NL(Nederlands)

Omgevingsmonsters

Voor het verzamelen van een monster kan een spons met neutraliserende oplossing worden gehydrateerd om het
effect van de reinigingsmiddelen te inactiveren. Neogen raadt het gebruik van een biocodevrije cellulosespons aan.
Als neutraliserende oplossing kan Dey-Engley (D/E) neutraliserende bouillon of letheenbouillon worden gebruikt.
Het wordt aanbevolen om na gebruik de ruimte te reinigen.
WAARSCHUWING: Mocht u gebruik maken van een neutraliserende buffer (NB) die arylsulfonaatcomplex bevat
als hydraterende oplossing voor de spons, verdunt u het verrijkte omgevingsmonster 1:2 voorafgaand aan het testen(1 deel monster op 1 deel steriele verrijkingsbouillon) om de risico's te beperken van een fout-negatief resultaat dat
tot vrijgave van een besmet product leidt. Ook kan 10 μL van de neutraliserende bufferverrijking naar de buisjes met
Neogen Lyse-oplossing worden overgebracht.
Het wordt aanbevolen een monstergebied van ten minste 100 cm2 (10 cm x 10 cm of 4 in x 4 in) aan te houden om deaan- of afwezigheid van een pathogeen op het oppervlak te verifiëren. Als u aan de hand van een spons een monster
neemt, dient u het volledige gebied in twee richtingen met de spons af te nemen (van links naar rechts en vervolgens van
boven naar beneden) of omgevingsmonsters te nemen in overeenstemming met uw huidige bemonsteringsprotocollen ofde FDA richtlijnen BAM(1), USDA FSIS MLG(2), of ISO 18593(7)-richtlijnen.
1. Laat het verrijkingsmedium, de Demi Fraser bouillon, (met inbegrip van ijzerammoniumcitraat) tot deomgevingstemperatuur van het laboratorium opwarmen.
2. Voeg het monster op steriele wijze aan het verrijkingsmedium toe en neem monsters volgens de aanwijzingen in tabel
2, 3 of 4.
3. Homogeniseer gedurende 2 ± 0,2 minuten zorgvuldig met een blender of Stomacher, of mix met de hand. Incubeer
gedurende 24-30 uur op 37 ± 1 °C zoals vermeld in tabel 2, 3 of 4.
Tabel 2: Algemene verrijkingsprotocollen bij 37 ± 1 °C die gebruikmaken van Demi Fraser bouillon en Fraser bouillon,
indien nodig.
Monstermatrix

Monstergrootte

Volumeverrijkingsbouillon(ml)

Verrijkingstijd
(uur)

25 g

225

24-30

1 spons

100 of 225

24-30

1 staafje

10

24-30

25 g

475

28-32

Verhit(te),gekookt(e) ofgezouten vlees,
gevogelte,
zeevruchten en vis
Verhitte/
gepasteuriseerde
melkproducten
Verse productenen groenten
Samengesteldevoedingsmiddelen
Omgevingsmonsters(a)Rauw(e) vlees,
gevogelte,
zeevruchten, vis

5

NL

Secundaire verrijking(Fraser bouillon)(a)Primaire verrijking(Demi Fraser bouillon)(a)Monstermatrix

MonstergrootteRauwemelkproducten(Nederlands)

Volumeverrijkingsbouillon(ml)

VerrijkingsVerrijkingstijd Monstertemperatuur(uur)
grootte(°C)

Verrijkingstijd (uur)

225

Breng
0,1 mlover naar
10 ml
Fraserbouillon

20-24

25 g

20-24

37 ± 1

Volumemonsteranalyse(b)10 μl(a) Demi Fraser en Fraser bouillon dienen tijdens de primaire of secundaire verrijking te worden aangevuld met een Fraserbouillon-supplement (ijzerammoniumcitraat).
(b) Volume van het monster dat naar de buisjes met Neogen Lyse-oplossing wordt overgebracht. Raadpleeg stap 4.6 'Lyse'.

Specifieke instructies voor gevalideerde methoden
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM nr. 081501

Uit de OMASM- en PTMSM-programma's van het AOAC Research Institute blijkt dat de Neogen Moleculaire detectie assay
2 Listeria monocytogenes een effectieve methode is om Listeria monocytogenes op te sporen. De in de studie geteste
matrices die worden getoond in Tabel 3.
Tabel 3. Verrijkingsprotocollen waarbij wordt gebruikgemaakt van Demi Fraser bouillon(a) bij 37 ± 1 °C, conform AOACOMASM 2016.08 en PTMSM, certificaatnr. 081501.
Monstergrootte

Volumeverrijkingsbouillon (ml)Verrijkingstijd(uur)

Rundvleeshotdogs, queso fresco(verse kaas), vanille-ijs, cottage cheese
met 4% melkvet, chocolademelk
met 3% vet, bindsla, rauwe spinazie,
koud gerookte zalm

25 g

225

24-30

Rauwe kip

25 g

475

28-32

Kalkoenvleeswaren

125 g

1125

24-30

Hele meloen

Voldoende volume
om de meloen
te laten drijven

26-30

Roestvrij staal

1 spons

225

24-30

Afgedicht beton

1 spons

100

24-30

Kunststof(c)1 staafje

10

24-30

Monstermatrix

Omgevingsmonsters:

Cantaloupe(b)6

NL(Nederlands)

Alle monsters voor de AOAC-validatie werden aan de hand van een Stomacher gehomogeniseerd, tenzij
anders aangegeven.
(a)		Demi Fraser en Fraser bouillon dienen tijdens de primaire of secundaire verrijking te worden aangevuld met een Fraserbouillon-supplement (ijzerammoniumcitraat).
(b) Homogeniseer het monster door met de hand te mixen.
(c)		 Homogeniseer het monster in de vortexmixer.

NF VALIDATION door AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Voor meer informatie over het einde van de geldigheid kunt u het NF VALIDATION-certificaat op de hierboven
vermelde website raadplegen.
Door NF VALIDATION gecertificeerde methode conform ISO 16140-2(6) vergeleken met ISO 11290(3)Toepassingsgebied van de validatie: Alle monsters van voedingsproducten voor menselijke consumptie enomgevingsmonsters (met uitzondering van primaire productiemonsters)
Monstervoorbereiding: Monsters moeten worden voorbereid conform EN ISO 11290-1(3) en EN ISO 6887(8)Softwareversie: Zie certificaat
Tabel 4: Verrijkingsprotocollen conform de door NF VALIDATION gecertificeerde methode 3M 01/15-09/16 bij 37 ± 1 °C
waarbij wordt gebruikgemaakt van Demi Fraser bouillon en Fraser bouillon.
Algemeen protocol

Monstergrootte

Alle voedselmonsters(met uitzondering
van monsters van
rauw vlees, rauwe
zeevruchten en
rauwe melkproducten)

25 g

Omgevingsmonsters

25 g,
1 staafje,
of 1 doekje

Volume ver- Verrijkingsrijkingsbouil- temperatuurlon (ml)(± 1 °C)

Verrijkingstijd(uur)

Volumemonsteranalyse(a)Geaccepteerd
onderbrekingspunt• Demi Fraser bouillon
maximaal 72 uur
225

37

24-30

20 µl

• Lysaat bij -20 °C• Lysaat bij 4 °C maximaal
72 uurPrimaire verrijking
Secundaire verrijking (Fraser bouillon)(b)(Demi Fraser bouillon)(b)Specifiek proVolume
VerrijVolume
MonVerrijMonVerrijkingsVerrijtocol
verrijkingstemmonsterkingsster- temperatuur kingstijd
kingsbouil- peratuur
steranagrootte
tijd (uur) grootte(± 1 °C)(uur)lon (ml)(± 1 °C)lyse(c)Rauw vlees,
rauwe
zeevruchten
en rauwemelkproducten

25 g

225

37

Breng
0,1 ml
over
naar
10 ml
Fraserbouillon

20-24

7

Geaccepteerd
onderbrekingspunt• Fraserbouillon
maximaal
72 uur

37

20-24

10 µl

• Lysaat bij-20 °C• Lysaatbij 4 °C
maximaal
72 uurNL(Nederlands)(a) Volume van het naar de buisjes met Neogen Lyse-oplossing overgebrachte monster. Raadpleeg stap 4.6 'Lyse'.
(b) Demi Fraser en Fraser bouillon dienen tijdens de primaire of secundaire verrijking te worden aangevuld met een Fraserbouillon-supplement (ijzerammoniumcitraat).
(c) Volume van het naar de buisjes met Neogen Lyse-oplossing overgebrachte monster. Raadpleeg stap 4.6 'Lyse'.
OPMERKING: Monsters groter dan 25 g zijn niet getest in de NF validation-studie.

Voorbereiding van de Neogen® Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray
1. Maak een doek vochtig met een bleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) of een vergelijkbare
oplossing en reinig de Neogen® Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray.
2. Spoel de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray met water.
3. Veeg de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray met een wegwerpdoekje droog.
4. Zorg ervoor dat de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray droog is voor gebruik.
Voorbereiding van het Neogen® Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk
Plaats het Neogen® Moleculaire Detectie - Koelblok rechtstreeks op de laboratoriumtafel. Gebruik het koelblok op deomgevingstemperatuur van het laboratorium (20-25 °C).
Voorbereiding van het Neogen® Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk
Plaats het Neogen® Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk in een droge dubbelblokverhitter. Schakel de droge
blokverwarmer in en stel de temperatuur zo in dat het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk 100 ± 1 °C
kan bereiken en aanhouden.
OPMERKING: Afhankelijk van de verhitter laat u het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk
ongeveer 30 minuten op temperatuur komen. Gebruik een geschikte, gekalibreerde, op de aangewezen locatie
geplaatste thermometer (zoals een gedeeltelijk ondergedompelde thermometer of digitale thermokoppelthermometer,
geen volledig ondergedompelde thermometer) om te controleren of het Neogen Moleculaire Detectie Verwarmingsblokinzetstuk zich op 100 ± 1 °C bevindt.
Voorbereiding van het Neogen® Moleculair Detectieinstrument
1. Start de Neogen® Moleculair Detectieysteem-software en meld u aan. Neem contact op met uw vertegenwoordigervoor Neogen Food Safety om ervoor te zorgen dat u de nieuwste versie van de software hebt.
2. Zet het Neogen Moleculaire Detectieinstrument aan.
3. Maak of bewerk een run met de gegevens van elk monster. Raadpleeg de handleiding van het Neogen Moleculair
Detectiesysteem voor meer informatie.
OPMERKING: Het Neogen Moleculaire Detectieinstrument moet de status Klaar bereiken voordat u de Neogen
Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray met reagensbuisjes invoert. Deze verwarmingsstap duurt ongeveer 20 minuten
en wordt met een ORANJE lampje op de statusbalk van het instrument aangeduid. Wanneer het instrument klaar is voor
een run, wordt de statusbalk GROEN.
Lyse
Verwijder de bodem van het rek met Neogen Lyse-oplossing met een schroevendraaier of spatel voordat u het in het
Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk plaatst.

1. Laat de buisjes met lyseoplossing (Neogen Lyse-oplossing) opwarmen door het rek een nacht lang gedurende 1618 uur op kamertemperatuur (20-25 °C) te plaatsen. U kunt de buisjes met Neogen Lyse-oplossing eveneens op
kamertemperatuur brengen door de buisjes ten minste 2 uur lang op de laboratoriumtafel te plaatsen, de buisjes 1 uurlang op een temperatuur van 37 ± 1 °C in een incubator te incuberen of ze 30 seconden lang op een temperatuur van
100 °C in een droge dubbelblokverhitter te plaatsen.
2. Keer de buisjes met dop om om ze te mengen. Ga binnen 4 uur verder met de volgende stap.
3. Haal de verrijkingsbouillon uit de incubator.
8

NL(Nederlands)

4. Er is een buisje met Neogen Lyse-oplossing vereist voor elk monster, evenals het negatieve controle-monster(NC; steriel verrijkingsmedium).
4.1 Stroken met buisjes met Neogen Lyse-oplossing kunnen worden afgesneden tot het gewenste aantal buisjes met
Neogen Lyse-oplossing. Selecteer het benodigde aantal individuele buisjes met Neogen Lyse-oplossing of stroken
met 8 buisjes. Plaats de buisjes met Neogen Lyse-oplossing in een leeg rek.
4.2 Haal de stroken van de buisjes met Neogen Lyse-oplossing één voor één uit de verpakking en gebruik een nieuwe
pipettip voor elke overdrachtsstap om zo kruisbesmetting te voorkomen.
4.3 Breng de verrijkte monsters over naar de buisjes met Neogen Lyse-oplossing zoals hieronder wordt beschreven:
Breng eerst elk verrijkt monster over naar een individueel buisje met Neogen Lyse-oplossing. Breng de NC alslaatste over.
4.4 Gebruik de lyse van het Neogen® Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Lyse om één voor één een strookvan een buisje met Neogen Lyse-oplossing open te maken.
4.5 Gooi de dop van het buisje met Neogen Lyse-oplossing weg – als er lysaat voor een hertest wordt bewaard, dienende doppen in een schone bak te worden geplaatst om deze na de lyse opnieuw aan te brengen.
4.5.1 Zie Appendix A voor de verwerking van bewaard lysaat.
4.6 Breng 20 µl van het monster over in een buisje met Neogen Lyse-oplossing, tenzij in de protocoltabellen
2, 3 en 4 anders wordt aangegeven (bij monsters van rauwe melkproducten of omgevingsmonsters met een
neutraliserende buffer moet bijvoorbeeld 10 µl worden gebruikt).
20 µl

5. Herhaal stap 4.4 tot 4.6 totdat elk individueel monster aan het bijhorende buisje met Neogen Lyse-oplossing in destrook toegevoegd is.
6. Wanneer alle monsters overgebracht zijn, brengt u 20 µl NC (steriel verrijkingsmedium, zoals, Demi Fraser bouillon) overnaar een buisje met Neogen Lyse-oplossing. Gebruik geen water als NC.
7. Controleer of de temperatuur van het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk zich op 100 ± 1 °C
bevindt.
8. Plaats het onbedekte rek met buisjes met Neogen Lyse-oplossing in het Neogen Moleculaire Detectie Verwarmingsblokinzetstuk en verwarm gedurende 15 ± 1 minuten. Tijdens de verwarming verandert de Neogen Lyseoplossing van roze (koel) naar geel (heet).
8.1 Monsters die tijdens de lyseanalysestap niet de juiste warmtebehandeling hebben ondergaan, kunnen als een
potentieel biologisch gevaar worden beschouwd en mogen NIET in het Neogen Moleculaire Detectieinstrument
worden geplaatst.
9. Haal het onbedekte rek met buisjes met Neogen Lyse-oplossing uit het verwarmingsblok en laat het minimaal 5 minutenen maximaal 10 minuten afkoelen in het Neogen Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk. Het Neogen Moleculaire
Detectie - Koelblokinzetstuk wordt op omgevingstemperatuur gebruikt en moet rechtstreeks op de laboratoriumtafel
geplaatst zijn. Zodra de lyse-oplossing koel is, krijgt deze een roze kleur.
10. Haal het rek met buisjes met Neogen Lyse-oplossing uit het Neogen Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

9NL(Nederlands)

Amplificatie
1. Er is één Neogen Moleculair detectie assay 2 Listeria monocytogenes-reagensbuisje vereist voor ieder monster en de NC.
1.1 Reagensbuisstrookjes kunnen tot op het gewenste aantal buisjes worden afgesneden. Selecteer het aantal vereiste
individuele Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes -reagensbuisjes of 8-buisstroken.
1.2 Plaats de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes -reagensbuisjes in een leeg rek.
1.3 Zorg ervoor dat het reagens op de bodem van de buisjes niet wordt verstoord.
2. Selecteer 1 buisje voor Neogen Reagenscontrole en plaats dit in het rek.
3. Open de stroken van de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes -reagensbuisjes een voor een en
gebruik een nieuwe pipettip voor elke overdrachtsstap om zo kruisbesmetting te voorkomen.
4. Breng alle lysaten over naar Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes-reagensbuisjes en een buisje
voor Neogen Reagenscontrole zoals hieronder beschreven:
Breng als eerste elk lysaatmonster over naar individuele Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria
monocytogenes-reagensbuisjes, gevolgd door de NC. Hydrateer het buisje voor Neogen Reagenscontrole alslaatste.
5. Gebruik het Neogen® Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Reagens om de reagensbuisstroken van de
Neogen Moleculair detectie assay 2 Listeria monocytogenes een voor een open te maken. Gooi de dop weg.
5.1 Breng 20 µl van het lysaatmonster uit de bovenste laag van de vloeistof (voorkom bezinksel) in het buisje met
Neogen lyse-oplossing over naar het bijbehorende Neogen Moleculair detectie assay 2 Listeria monocytogenes-reagensbuisje. Laat het mengsel in een hoek uitlopen om de pellets niet te verstoren. Meng het mengsel
door voorzichtig 5 keer op en neer te pipetteren.
5.2 Herhaal stap 5.1 totdat elk afzonderlijk monsterlysaat aan het bijbehorende Neogen Moleculair detectie assay 2
Listeria monocytogenes -reagensbuisje in de strook is toegevoegd.
5.3 Bedek de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes-reagensbuisjes met de bijgeleverde extra
doppen en gebruik de afgeronde zijde van het Neogen Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Reagens
om in een voor- en achterwaartse beweging druk uit te oefenen om ervoor te zorgen dat de dop goed vastzit.
5.4 Herhaal stap 5.1 tot 5.3, indien nodig, voor alle monsters die moeten worden getest.
5.5 Zodra alle monsterlysaten zijn overgebracht, herhaalt u stap 5.1 om 20 µl NC-lysaat naar een Neogen Moleculair
detectie assay 2 Listeria monocytogenes-reagensbuisje over te brengen.
5.6 Breng 20 µl NC-lysaat over naar een buisje voor Neogen Reagenscontrole. Laat het mengsel in een hoek uitlopenom de pellets niet te verstoren. Meng het mengsel door voorzichtig 5 keer op en neer te pipetteren.
6. Plaats de buisjes met dop in een schone en ontsmette Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray. Sluit envergrendel het deksel van de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray.

20 µL

7. Controleer en bevestig de geconfigureerde run en start de Neogen Moleculaire Detectiesysteem-software.
8. Klik op de startknop van de software en selecteer het te gebruiken instrument. Het deksel van het geselecteerde
instrument wordt automatisch geopend.
9. Plaats de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray in het Neogen Moleculaire Detectieinstrument en sluit het
deksel om de analyse te beginnen. De resultaten zijn binnen 75 minuten beschikbaar, maar positieve resultaten kunnen
sneller worden gedetecteerd.
10. Nadat de test is afgerond, haalt u de Neogen Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray uit het Neogen Moleculaire
Detectieinstrument en verwijdert u de buisjes door ze eerst gedurende 1 uur in een bleekmiddeloplossing van 1-5%
(volumeconcentratie in water) of een vergelijkbare oplossing te dompelen, uit de buurt van de testbereidingsruimte.

10

NL

(Nederlands)

KENNISGEVING: Om het risico op fout-positieve resultaten door kruisbesmetting te beperken, mag u nooit
reagensbuisjes met geamplificeerd DNA openen. Dit geldt voor Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria
monocytogenes-reagensbuisjes, buisjes voor Neogen Reagenscontrole en Matrix-controlebuisjes. Voer de verzegelde
reagensbuisjes altijd af door ze gedurende 1 uur onder te dompelen in een huishoudbleekmiddeloplossing van 1-5%
(volumeconcentratie in water) of een vergelijkbare oplossing, uit de buurt van de testbereidingsruimte.

Resultaten en interpretatie

Een algoritme interpreteert de lichtuitvoercurve die het resultaat is van de nucleïnezuuramplificatie. De software analyseertde resultaten automatisch en deze worden op basis van het resultaat met een kleurencode aangegeven. Een positief ofnegatief resultaat wordt bepaald door de analyse van een aantal unieke curveparameters. Vermoedelijk positieve resultaten
worden onmiddellijk gerapporteerd, terwijl de negatieve- en inspectieresultaten pas na de afronding van de analyse
worden weergegeven.
Vermoedelijk positieve monsters moeten worden bevestigd aan de hand van de standaard werkmethoden van het
laboratorium of door de gepaste methode voor bevestiging te volgen(1, 2, 3), te beginnen met de overdracht van de primairenaar de secundaire verrijkingsbouillon (indien van toepassing), gevolgd door een lagenkweek en verificatie van isolaten met
gebruik van toepasselijke biochemische en serologische methoden.
OPMERKING: Zelfs een negatief monster heeft geen nulmeting tot gevolg, want het systeem en de Neogen Moleculairedetectie assay 2 Listeria monocytogenes-amplificatiereagentia geven een relatieve lichteenheid (RLU) achtergrondlezing.
In het onwaarschijnlijke geval van ongebruikelijke lichtuitvoer definieert het algoritme dit als 'Inspecteren.' Neogen
beveelt de gebruiker aan om de test voor de te inspecteren monsters opnieuw uit te voeren. Als het resultaat nog steeds'Inspecteren' is, voert u een bevestigingstest uit aan de hand van uw voorkeursmethode of volgens de lokale wet- enregelgeving.
Tabel 5: Symbolen die de resultaten en interpretatie van monsters aangeven, zoals deze door de software van het Neogen
Moleculair Detectiesysteem worden verstrekt.
Type well

Symboolwell-resultaat

Resultaat

Interpretatie

Monster

Positief

Het monster van het doelpathogeen is vermoedelijk positief.

Monster

Negatief

Het monster van het doelpathogeen is negatief.

GeremdDe monstermatrix heeft een remmend effect op de assay. Er dientmogelijk een hertest te worden uitgevoerd. Raadpleeg het gedeelte'Problemen oplossen' en de bij de assay-set meegeleverde
productinstructies voor meer informatie.

Monster

Monster

Monster

De aan- of afwezigheid van een doelpathogeen kon niet worden
vastgesteld. Er dient mogelijk een hertest te worden uitgevoerd.
Inspecteren
Raadpleeg het gedeelte 'Problemen oplossen' en de bij de assay-set
meegeleverde productinstructies voor meer informatie.
Fout

Er is geen bioluminescentie gedetecteerd. Er dient mogelijk een
hertest te worden uitgevoerd. Raadpleeg het gedeelte 'Problemen
oplossen' en de bij de assay-set meegeleverde productinstructies
voor meer informatie.

Verificatie van resultaten conform de met NF VALIDATION gecertificeerde methode
Optie 1: Pas de ISO-norm 11290(3) toe en begin met de Demi Fraser-verrijking
Optie 2: Isolatie op PALCAM-agar of chromogeen agar, onderdeel van een door NF VALIDATION gecertificeerde
methode voor de detectie van Listeria monocytogenes. De aanwezigheid van karakteristieke kolonies is voldoende
om de aanwezigheid van Listeria monocytogenes vast te stellen.
Optie 3: Maak gebruik van nucleïnezuursondes zoals beschreven in EN ISO-norm 7218(5), uitgevoerd op geïsoleerde
kolonies vanaf een selectief agar (zie optie 1 of 2).
Optie 4: Maak gebruik van een andere met NF VALIDATION gecertificeerde methode, waarvan het principe moet
verschillen van de Neogen Moleculaire detectie assay 2 Listeria monocytogenes. Het volledige protocol van deze tweede
gevalideerde methode moet nauwkeurig worden gevolgd. Alle stappen voorafgaand aan de bevestiging moeten voor
beide procedures hetzelfde zijn.
In geval van tegenstrijdige resultaten (vermoedelijk positief met de alternatieve methode, niet geverifieerd met een vande hierboven beschreven methoden), moet het laboratorium de noodzakelijke stappen nemen om de validiteit van het
verkregen resultaat te garanderen.

11

NL

(Nederlands)

In geval van tegenstrijdige resultaten (vermoedelijk positief met de Neogen Moleculair detectie assay 2 Listeria
monocytogenes, niet geverifieerd met een van de hierboven beschreven methoden) moet het laboratorium denoodzakelijke stappen nemen om de validiteit van de verkregen resultaten te garanderen.
Als u vragen hebt over specifieke toepassingen of procedures, kunt u onze website www.neogen.com bezoeken of contact
opnemen met uw plaatselijke vertegenwoordiger of distributeur van Neogen.
Appendix A. Protocolonderbreking: Warmtebehandelde lysaten opslaan en hertesten.
1. U kunt een warmtebehandeld lysaat opslaan door opnieuw een schone dop op het buisje met lyse-oplossing teplaatsen (zie hoofdstuk 4.5, 'Lyse').
2. Sla maximaal 72 uur op bij een temperatuur van 4 tot 8 °C.
3. Bereid een opgeslagen monster voor op de amplificatie door het 2-3 keer om te keren om het te mengen.
4. Verwijder de doppen van de buisjes.
5. Plaats de gemengde lysaatbuisjes op het Neogen Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk en verwarm
gedurende 5 ± 1 minuten op een temperatuur van 100 ± 1 °C.
6. Haal het rek met buisjes met Neogen Lyse-oplossing uit het verwarmingsblok en laat het minimaal 5 minuten en
maximaal 10 minuten afkoelen in het Neogen Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk.
7. Ga verder met het protocol in het hierboven beschreven gedeelte 'Amplificatie'.

Referenties:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Uitleg over de symbolen op productlabels
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

SV(Svenska)

Datum för utgåva: 2024-01

Produktinformation
Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes
Produktbeskrivning och avsedd användning

Neogen® Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes används med Neogen® Molekylärt
Detektionssystem för snabb och specifik detektion av Listeria monocytogenes i prover från anrikade livsmedel och
livsmedelsbearbetningsmiljöer. Neogen Molekylära Detektionsanalyser använder LAMP-teknik (Loop-Mediated
Isothermal Amplification) för att snabbt amplifiera nukleinsyrasekvenser med hög specificitet och sensitivitet kombinerat
med bioluminiscens för att detektera amplifieringen. Presumtivt positiva resultat rapporteras i realtid medan negativa
resultat visas när analysen har slutförts. Presumtivt positiva resultat bör bekräftas med hjälp av egen vald metod eller som
specificeras av lokala föreskrifter(1, 2, 3).
Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes är avsedd att användas i laboratoriemiljö av yrkespersoner
som är utbildade i laboratorietekniker. Neogen har inte dokumenterat användningen av denna produkt inom andra
industrier än livsmedels- och dryckesindustrin. Till exempel har Neogen inte dokumenterat denna produkt för testning
av vatten-, läkemedels-, kosmetiska, kliniska eller veterinärprover. Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria
monocytogenes har inte utvärderats med alla möjliga testprotokoll eller med alla möjliga bakteriestammar.
Precis som för alla testmetoder kan källan, beredningen av och kvaliteten på anrikningsmediet påverka resultaten.
Faktorer som provtagningsmetoder, testprotokoll, provpreparering, hantering och laboratorieteknik kan också påverka
resultaten. Neogen rekommenderar att metoden, inklusive anrikningsmediet, utvärderas i användarens miljö med
tillräckligt många prover av särskilda livsmedel och mikrobiella utmaningar för att säkerställa att metoden uppfyller
användarens kriterier.
Neogen har utvärderat Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes med Demi-Fraser-buljong
innehållande ferriammoniumcitrat och Fraser-buljong som innehåller ferriammoniumcitrat efter behov. En typisk
formulering av detta medium följer nedan.
Demi-Fraser buljongbas typisk sammansättning (g/l)

Fraser-buljong typisk sammansättning(g/l)

Natriumklorid

20 gNatriumklorid

20 gNatriumfosfat, dibasiskt, vattenfritt*

9,6 g

Natriumfosfat, dibasiskt, vattenfritt*

9,6 g

Oxköttsextrakt

5,0 g

Oxköttsextrakt

5,0 g

Pankreasmassa av kasein

5,0 g

Pankreasmassa av kasein

5,0 g

Peptisk matsmältning av djurvävnad

5,0 g

Peptisk matsmältning av djurvävnad

5,0 g

Jästextrakt

5,0 g

Jästextrakt

5,0 g

Litiumklorid

3,0 g

Litiumklorid

3,0 g

Kaliumfosfat, monobasiskt

1,35 gKaliumfosfat, monobasiskt

1,35 gEskulin

1,0 g

Eskulin

1,0 g

Acriflavin HCl

0,0125 g

Acriflavin HCl

0,025 gNalidixinsyra

0,01 gNalidixinsyra

0,02 g* Ersättning: Natriumfosfat, dibasiskt, dihydrat

12,0 gFraser buljongersättning(Ingredienser per 10 ml injektionsflaska. En injektionsflaska tillsätts till 1 liter basalt medium.)
Ferriammoniumcitrat

0,5 g/10 ml

Slutligt pH-värde

7,2 ± 0,2 vid 25°C

Neogen Molekylärt Detektionsinstrument är avsett att användas med prover som har värmebehandlats under analysens
lyseringssteg, vilket är utformat för att förstöra organismer i provet. Prover som inte har värmebehandlats korrekt
under analysens lyseringssteg bör betraktas som en potentiell biologisk fara och ska INTE föras in i Neogen Molekylärt
Detektionsinstrument.
®

Neogen Food Safety är certifierat enligt den internationella standardiseringsorganisationen (ISO) 9001 avseende
konstruktion och tillverkning.
Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes testsats innehåller 96 tester, som beskrivs i tabell 1.

1

SV(Svenska)

Tabell 1. Komponenter i Neogen Molecular Detection testsats
ArtikelIdentifikation

Antal

Innehåll

Kommentarer

Neogen® Lyseringslösning(LS)

Rosa lösningi genomskinliga rör

96 (12 remsor om 8 rör)

580 μl LS per rör

I ställ och klara
att användas

Neogen® Molecular
Detection Assay 2 –Listeria monocytogenes
Reagensrör

Gula rör

96 (12 remsor om 8 rör)

Specifik frystorkad
amplifierings- ochdetektionsblandning

Klara att
användas

Extra lock

Gula lock96 (12 remsor om
8 lock)Neogen® Reagenskontroll(RC)

Genomskinliga rör
med knäpplock

16 (2 påsar om
8 enskilda rör)

Klara att
användas
Frystorkad kontroll-DNA,
amplifierings- ochdetektionsblandning

Klara att
användasDen negativa kontrollen, som inte tillhandahålls i satsen, är ett sterilt anrikningsmedium, t.ex. Demi-Fraser-buljong.
Använd inte vatten som negativ kontroll.

SäkerhetAnvändaren ska läsa, förstå och följa all säkerhetsinformation i anvisningarna till Neogen Molekylärt Detektionssystem och
Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes. Behåll säkerhetsanvisningarna för framtida bruk.
VARNING: Indikerar en farlig situation som, om den inte undviks, kan resultera i dödsfall eller allvarliga personskador
och/eller materiella skador.
OBSERVERA: Indikerar en potentiellt farlig situation som, om den inte undviks, kan resultera i materiella skador.

W VARNING
Använd inte Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes för diagnostisering av tillstånd hos
människor eller djur.
Metoden Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes metoden kan generera Listeria
monocytogenes till nivåer som är tillräckliga för att orsaka dödfödda barn och dödsfall hos gravida kvinnor med
reducerats immunförsvar, om de utsätts för bakterien.
Användaren måste utbilda sin personal i aktuella korrekta testmetoder: exempelvis Good Laboratory Practices,
ISO/IEC 17025(4) eller ISO 7218(5).
För att minska riskerna som förknippas med ett falskt negativt resultat som leder till utgivning av
kontaminerad produkt:• Följ protokollet och utför testerna exakt så som anges i produktinformationen.
• Förvara Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes enligt föreskrifterna på dess förpackning ochi dess produktinformation.
• Använd alltid Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes före utgångsdatumet.
• Använd Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes för livsmedels- och miljöprover som harvaliderats internt eller av en tredje part.
• Använd endast Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes på ytor, desinficeringsmedel, protokoll
och bakteriestammar som har validerats internt eller av tredje part.
• För miljöprov innehållande neutraliseringsbuffert med arylsulfonatkomplex, späd till 1:2 innan testet utförs (1 del prov
till 1 del steril anrikningsbuljong). Ett annat alternativ är att föra över 10 µl av neutraliserande buffertanrikning i
Neogen Lyseringslösningsrören Neogen® Sample Collection products som inkluderar neutraliseringsbuffert med
arylsulfonatkomplex: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G och HS2410NB2G.
För att minska riskerna som förknippas med exponering för kemikalier och biologiska smittorisker:• Det rekommenderas starkt att kvinnlig laboratoriepersonal informeras om risken för fosterskador till följd av infektion
hos modern genom exponering för Listeria monocytogenes.
• Utför tester av patogener i ett välutrustat laboratorium under överinseende av utbildad personal. Inkuberat
anrikningsmedium och utrustning eller ytor som har haft kontakt med inkuberat anrikningsmedium kan innehålla
patogener vid nivåer som är tillräckliga för att utgöra en hälsorisk för människor.
• Följ alltid praxis för standardiserad laboratoriesäkerhet, inklusive användning av lämpliga skyddskläder och
skyddsglasögon vid hantering av reagenser och kontaminerade prover.
• Undvik kontakt med innehållet i anrikningsmediet och reagensrören efter amplifiering.
• Kassera de anrikade proverna enligt gällande branschstandarder.
• Prover som inte har värmebehandlats korrekt under analysens lyseringssteg bör betraktas som en potentiell biologisk
fara och ska INTE föras in i Neogen Molekylärt Detektionsinstrument.

2

SV(Svenska)

För att minska riskerna för korskontaminering vid analysförberedelserna:• Bär alltid handskar (för att skydda användaren och förhindra införsel av nukleaser).
För att minska riskerna som är förbundna med miljöföroreningar:• Följ gällande branschstandarder för kassering av förorenat avfall.
För att minska riskerna som förknippas med exponering för heta vätskor:• Överskrid inte rekommenderad temperaturinställning på uppvärmningsanordningen.
• Överskrid inte den rekommenderade uppvärmningstiden.
• Använd en lämplig, kalibrerad termometer (t.ex. en termometer för delvis nedsänkning eller en digitalvärmeelementtermometer, inte en termometer för fullständig nedsänkning) för att kontrollera temperaturen i Neogen®
Molekylär Detektions nsats för värmeblock. Termometern måste placeras på anvisad plats i Neogen Molekylär
Detektion, Insats för värmeblock.

OBSERVERA
För att minska riskerna för korskontaminering vid analysförberedelserna:• Byt handskar innan reagens-pelletarna väts.
• Användning av sterila pipettspetsar med aerosolbarriär (filtrerade) för molekylärbiologiskt bruk rekommenderas.
• Använd en ny pipettspets för varje provöverföring.
• Följ god laboratoriepraxis vid överföringen av provet från anrikningsröret till lyseringsröret. För att undvika
kontaminering av pipetten kan användaren välja att lägga till ett mellanliggande överföringssteg. Exempelvis kan
användaren föra över varje anrikat prov till ett sterilt rör.
• Använd en arbetsstation avsedd för molekylärbiologi med bakteriedödande lampa om sådan finns tillgänglig.
Dekontaminera laboratoriebänkar och utrustning (pipetter, verktyg för att fästa och ta av lock o.s.v.) regelbundet med
en 1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning eller DNA-borttagningslösning.
För att minska riskerna som förknippas med ett falskt positivt resultat:• Öppna aldrig reagensrör efter amplifieringen.
• Kasta alltid de förorenade rören genom att blötlägga i en 1–5 % (volym i vatten) hushållsblekmedel eller motsvarande
lösning i 1 timme på avstånd från analysberedningsområdet.
• Autoklavera aldrig reagensrör efter amplifieringen.
Se säkerhetsdatabladet för ytterligare information och lokala föreskrifter för kassering.
Om du har frågor om specifika tillämpningar eller procedurer kan du besöka vår hemsida på www.neogen.com eller
kontakta din lokala representant eller återförsäljare för Neogen.

Användaransvar

Det åligger användarna att bekanta sig med produktinstruktioner och produktinformation. Besök vår hemsida på adressen
www.neogen.com eller kontakta din lokala Neogen-representant eller -leverantör för mer information.
Vid val av testmetod är det viktigt att känna till att externa faktorer som provtagningsmetod, testprotokoll, provpreparering,hantering och laboratorieteknik kan påverka resultat.
Det åligger användaren att vid val av testmetoder utvärdera tillräckligt många prover med lämpliga matriser ochutmaningar, för att övertyga användaren att den valda metoden uppfyller kraven.
Det åligger också användaren att fastställa att en testmetod och dess resultat uppfyller kraven från dennes kunderoch leverantörer.
Liksom med alla testmetoder utgör inte resultat som erhållits från användning av någon produkt från Neogen
Livsmedelshygien en garanti för kvaliteten hos de matriser eller processer som testats.
För att hjälpa kunder att utvärdera metoden för olika livsmedelsmatriser har Neogen utvecklat satsen Neogen® Molekylär
Detektion Matris Kontroll. Vid behov kan Matriskontroll (MC) användas för att avgöra om matrisen förmår påverka
resultaten hos Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes resultat. Testa flera prover som ärrepresentativa för matrisen, dvs. prover som inhämtats från olika källor, vid varje valideringstillfälle när Neogen-metoden
används eller när nya eller okända matriser eller matriser som har genomgått råmaterial- eller bearbetningsändringar testas.
En matris kan definieras som en typ av produkt med särskilda egenskaper, såsom sammansättning eller bearbetning.
Skillnaderna mellan matriser kan orsakas av något så enkelt som effekter av skillnader i bearbetning eller utformning,till exempel rå kontra pastöriserad, färsk kontra torkad, osv.

Garantibegränsningar/begränsad ersättning

MED UNDANTAG AV VAD SOM UTTRYCKLIGEN ANGES I AVSNITT OM GARANTIBEGRÄNSNING FÖR INDIVIDUELLAFÖRPACKNINGAR, FRÅNSÄGER SIG NEOGEN ALLA UTTRYCKLIGA OCH UNDERFÖRSTÅDDA GARANTIER, INKLUSIVE,
MEN INTE BEGRÄNSAT TILL, ALLA GARANTIER BETRÄFFANDE SÄLJBARHET ELLER LÄMPLIGHET FÖR ETT VISST
ÄNDAMÅL. Om någon produkt från Neogen Livsmedelshygien är defekt kommer Neogen eller dess auktoriserade leverantör
att efter eget gottfinnande ersätta produkten eller återbetala produktens inköpspris. Detta är den enda ersättning som ges.
Kontakta din Neogen-representant eller en godkänd Neogen-distributör om du har fler frågor.
3

SV(Svenska)

Begränsning av Neogen:s ansvar

NEOGEN KOMMER INTE ATT PÅTA SIG NÅGOT ANSVAR FÖR FÖRLUST ELLER SKADOR, VARE SIG DIREKTA,
INDIREKTA, SÄRSKILDA, TILLFÄLLIGA ELLER EFTERFÖLJANDE SKADOR, INKLUSIVE, MEN INTE BEGRÄNSADE TILL,FÖRLORADE VINSTER. Under inga omständigheter ska Neogen:s ansvar i något som helst lagrum överskrida inköpspriset
för den påstått defekta produkten.

Förvaring och kassering

Förvara Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes vid 2–8°C. Får inte frysas. Förvara satsen på enmörk plats. Kontrollera att foliepåsen är oskadad när satsen har öppnats. Använd inte om påsen är skadad. Efter att påsen
har öppnats ska oanvända reagensrör alltid förvaras i den återförslutningsbara påsen med torkmedlet inuti för att bevara de
frystorkade reagensernas stabilitet. Förvara återförslutna påsar vid 2–8°C i högst 60 dagar.
Använd inte Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes efter utgångsdatumet. Utgångsdatum ochpartinummer anges på etiketten på lådans utsida. Efter användning kan anrikningsmedlet och rören till Neogen Molecular
Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes eventuellt innehålla patogena material. Följ gällande branschstandarder för
kassering av kontaminerat avfall när testen har genomförts. Se säkerhetsdatabladet för ytterligare information och lokala
föreskrifter för kassering.

Bruksanvisning

Följ alla anvisningar noggrant. Underlåtenhet att göra detta kan leda till felaktiga resultat.
Laboratoriebänkar och utrustning (pipetter, verktyg för att fästa och ta av lock o.s.v.) regelbundet med en 1–5 %(volym i vatten) blekmedelslösning eller DNA-borttagningslösning.
Användaren måste genomgå utbildningen i driftkvalifikation (OQ) för Neogen Molekylärt Detektionssystem, enligt
beskrivningen i dokumentet ”Protokoll för installationskvalifikation (IQ)/driftkvalifikation (OQ) och anvisningar för
Neogen Molekylärt Detektionssystem”(6).
Se avsnittet ”Specifika anvisningar för validerade metoder” för särskilda krav:
Tabell 3 för anrikningsprotokoll enligt AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 och AOAC® Performance Tested
MethodSM Certifikat 081501.
Tabell 4 för anrikningsprotokoll enligt NF Validation-certifikatet 3M 01/15-09/16.

Provanrikning

I tabell 2, 3 eller 4 visas en vägledning till anrikning av livsmedels- och miljöprover. Användaren ansvarar för att
validera alternativa provtagningsprotokoll eller spädningsförhållanden för att säkerställa att testmetoden uppfyller
användarens kriterier.

Livsmedel

1. Låt anrikningsmediet för Demi-Fraser-buljong (inklusive järnammoniumcitrat) balanseras till omgivande temperatur
i laboratoriet.
2. Kombinera anrikningsmediet och provet aseptiskt enligt tabellerna 2, 3 eller 4. För prover med kött och som innehåller
en stor mängd partiklar rekommenderas att filterpåsar används.
3. Homogenisera noggrant genom att mixa, använda stomacher eller blanda manuellt i 2 ± 0,2 minuter. Inkubera vid
37 ± 1°C enligt tabell 2, 3 eller 4.
4. För råa mejeriprodukter (se tabell 2, 3 eller 4), för över 0,1 ml av den primära anrikningen till 10 ml Fraser-buljong.
Inkubera vid 37 ± 1°C i 20-24 timmar.

Miljöprover

Provinsamlingsenheter kan vara en svamp som hydrerats med en neutraliserande lösning för att inaktivera effekterna hos
desinficeringsmedlen. Neogen rekommenderar att man använder en biocidfri cellulosa-svamp. Neutraliseringslösningen
kan vara Dey-Engley (D/E) neutraliseringsbuljong eller Letheen-buljong. Det är rekommenderat att man sanerar området
efter provtagning.
VARNING: Om du väljer att använda neutraliseringsbuffert (NB) som innehåller arylsuffonatkomplex som
hydrerande lösning för svampen måste man ha en 1:2-spädning (1 del prov i 1 del steril anrikningsbuljong) för
anrikningsmiljöprovet innan det testas för att minska riskerna som förknippas med ett falskt negativt resultat somleder till utsläpp av kontaminerad produkt. Ett annat alternativ är att överföra 10 μl neutraliserande buffertanrikning till
Neogen Lyseringslösningsrören.
Den rekommenderade storleken på provtagningsområdet för att verifiera förekomsten eller frånvaron av patogenener påytan är minst 100 cm2 (10 cm x 10 cm eller 4”x 4”). När du provtar med en svamp, svabba över hela området i två riktningar(vänster till höger och sedan upp och ner) eller samla miljöprover enligt ditt nuvarande provtagningsprotokoll eller enligt
riktlinjerna i FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) eller ISO 18593(7).

4SV(Svenska)

1. Låt anrikningsmediet för Demi-Fraser-buljong (inklusive järnammoniumcitrat) balanseras enligt laboratoriets
omgivande temperatur.
2. Kombinera anrikningsmediet och provet aseptiskt enligt tabellerna 2, 3 eller 4.
3. Homogenisera noggrant genom att mixa, använda stomachereller blanda manuellt i 2 ± 0,2 minuter. Inkubera vid
37 ± 1°C i 24–30 timmar enligt tabell 2, 3 eller 4.
Tabell 2: Allmänna anrikningsprotokoll vid 37 ± 1°C med användning av Demi-Fraser-buljong och Fraser-buljong
efter behov.
Provmatris

Provstorlek

Anrikningsbuljongvolym (ml)Anrikningstid
(h)

25 g

225

24–30

1 svamp

100 eller
225

24–30

1 svabb

10

24–30

25 g

475

28–32

Värmebehandlat,
kokt, marinerat
kött, fågel, skaldjur
och fisk
Värmebehandlade/pastöriserade
mejeriprodukter
Produkter och
grönsaker
Flerkomponentslivsmedel
Miljöprover(a)Rått kött, fågel,skaldjur, fisk

Primäranrikning(Demi-Fraser-buljong)(a)Provmatris
ProvstorlekRåa
mejeriprodukter

25 gAnrikningsbuljongvolym (ml)225

Sekundär anrikning(Fraser-buljong)(a)Anrikningstid(h)Provstorlek

Anrikningstemperatur(°C)

Anrikningstid (h)20–24Överför
0,1 mltill 10 ml
Fraserbuljong

37 ± 1

20–24

Volym
provanalys(b)10 μl(a) Demi-Fraser och Fraser-buljong bör alltid kompletteras med Fraser-buljongtillskott (ferriammoniumcitrat) under den
primära eller sekundära anrikningen.
(b) Provvolym överförd till Neogen Lyseringslösningsrören. Se steg 4.6 i avsnittet om lysering.

Specifika anvisningar för validerade metoder
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

I AOAC Research Institute OMASM och PTMSM studier, fann man att Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria
monocytogenes är en effektiv metod för att upptäcka Listeria monocytogenes. Matriserna som testades i studien visas
i tabell 3.
5

SV(Svenska)

Tabell 3. Anrikningsprotokoll med Demi-Fraser-buljong(a) vid 37 ± 1°C enligt AOAC OMASM 2016.08 och PTMSM
Certifikat nr. 081501.
Provmatris

Provstorlek

Anrikningsbuljongvolym(ml)

Anrikningstid(h)Nötköttskorvar, färskost, vaniljglass,cottage cheese med 4 % fetthalt, choklad
med standardmjölk med 3 % fetthalt,romansallat, rå spenat i påse, kallrökt lax

25 g

225

24–30

Rå kycklig

25 g

475

28–32

Delikatesskalkon

125 g

1125

24–30

Hel melon

Tillräcklig volym för att låtamelonen flyta

26–30

Rostfritt stål1 svamp

225

24–30

Förseglad betong

1 svamp

100

24–30

Plast(c)1 svabb

10

24–30

Miljöprover:Cantaloupe-melon(b)Alla prover för AOAC-valideringen homogeniserades med stomacher om inte annat anges.
(a)		Demi-Fraser och Fraser-buljong bör alltid kompletteras med Fraser-buljongtillskott (ferriammoniumcitrat) under den
primära eller sekundära anrikningen.
(b) Homogenisera provet med manuell blandning.
(c)		 Homogenisera provet genom att vortexa det.

NF VALIDATION av AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
För ytterligare information om valideringsslut, läs NF VALIDATION-certifikatet som finns tillgängligt på ovan
angivna webbsida.
NF VALIDATION-certifierad metod i enlighet med ISO 16140-2(6) jämfört med ISO 11290(3)Valideringsomfång: Alla livsmedels- och miljöprover (exklusive prover för primärproduktion)
Provberedning: Prover bör beredas enligt EN ISO 11290-1(3) och EN ISO 6887(8)Programversion: Se certifikat
Tabell 4: Anrikningsprotokoll som utförs enligt NF VALIDATION certifierad metod 3M 01/15-09/16 vid 37 ± 1°C med
användning av Demi-Fraser-buljong och Fraser-buljong efter behov.
Allmänt protokoll
Alla matprover(utom rått kött, råaskaldjur och råa
mejeriprodukter
Miljöprover

Provstorlek

Anrikningsbuljongvolym (ml)AnrikningsAnriktemperaturningstid (h)(± 1°C)

Volym
provanalys(a)• Demi-Fraser Buljong upp
till 72 timmar

25 g
25 g,
1 svabb eller
1 torkduk

Accepterad avbrottspunkt

225

37

24–30

20 µl

• Lysat vid -20°C• Lysera vid 4°C upp till
72 timmar

6

SV(Svenska)

Primäranrikning (Demi-Fraser-buljong)(b)
Sekundär anrikning (Fraser-buljong)(b)AnrikSpecifikt
AnrikningsAnrikningsVolym
ProvningsbulAnrikProvAnrikprotokoll
temperatur
temperatur
provastorlek jongvolym
ningstid (h) storlek
ningstid (h)(± 1°C)(± 1°C)nalys(c)(ml)

Råttkött, råaskaldjuroch råa
mejeriprodukter

25 g

225

37

Överför
0,1 mltill 10 ml
Fraserbuljong

20–24

Accepterad avbrottspunkt• Fraser
Buljong
upp till
72 timmar

37

20–24

10 µl

• Lysat vid-20°C• Lyseravid 4°C
upp till
72 timmar(a) Provvolym överförd till Neogen Lyseringslösningsrören. Se steg 4.6 i avsnittet om lysering.
(b) Demi-Fraser och Fraser-buljong bör alltid kompletteras med Fraser-buljongtillskott (ferriammoniumcitrat) under den
primära eller sekundära anrikningen.
(c) Provvolym överförd till Neogen Lyseringslösningsrören. Se steg 4.6 i avsnittet om lysering.
ANMÄRKNING: Prover större än 25 g har inte testats i NF VALIDATION-studien.

Förberedelse av Neogen® Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda
1. Vät en trasa med en 1–5 % (volym i vatten) hushållsblekmedel eller motsvarande lösning och torka av Neogen®
Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda.
2. Skölj Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda med vatten.
3. Torka av Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda med en pappershandduk.
4. Säkerställ att Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda är torr innan den används.
Förberedning av Neogen® Molekylär Detektion, Insats för kylblock
Placera Neogen® Molecular Detection Kylblock direkt på laboratoriebänken. Använd kylblock med omgivande temperatur
i laboratoriet (20–25°C).
Förberedelse av Neogen® Molekylär Detektion, Insats för värmeblock
Lägg Neogen® Molekylär Detektion, Insats för värmeblock i en torr dubbelblocksvärmare. Aktivera den torra
blockvärmaren och ställ in temperaturen så att Neogen Molekylär Detektion, Insats för värmeblock tillåts uppnå ochbibehålla en temperatur på 100 ± 1°C.
ANMÄRKNING: Beroende på värmaren tar det cirka 30 minuter för Neogen Molekylär Detektion, Insats för värmeblock
att uppnå rätt temperatur. Använd en lämplig, kalibrerad termometer (t.ex. en termometer för delvis nedsänkning eller
en digital värmeelementtermometer, inte en termometer för fullständig nedsänkning) placerad på den avsedda platsen
och kontrollera att Neogen Molekylär Detektion insats för värmeblock har en temperatur på 100 ± 1°C.
Beredning av Neogen® Molekylärt Detektionsinstrument
1. Starta Neogen® Molekylär Detektionssystem-programvara och logga in. Kontakta din Neogen-representant för
livsmedelssäkerhet för att säkerställa att du har den senaste versionen av programvaran.
2. Aktivera Neogen Molekylärt Detektionsinstrument.
3. Skapa eller redigera en datakörning för varje prov. Se användarhandboken till Neogen Molekylärt Detektionssystem för
detaljerad information.
ANMÄRKNING: Neogen Molekylärt Detektionsinstrument måste försättas i redotillstånd innan Neogen® Molekylär
Detektion, Snabbladdningslåda med reagensrör förs in. Detta uppvärmningssteg tar cirka 20 minuter och indikeras av en
ORANGE lampa i instrumentets statusfält. När instrumentet är redo att starta en körning blir statusfältet GRÖNT.
Lysering
Avlägsna nedre delen av Neogen Provrörsställ för lyseringslösning med en skruvmejsel eller spatel innan du placerar det
i Neogen Molekylär Detektion, Insats för värmeblock.

7

SV(Svenska)

1. Låt rören med lyseringslösningen (Neogen Lyseringslösning) värmas upp genom att placera stället i rumstemperatur(20–25°C) över natten (16–18 timmar). Alternativa metoder för att värma Neogen Lyseringslösningsrören till
rumstemperatur är att ställa Neogen Lyseringslösningsrören på laboratoriebänken i minst 2 timmar, inkubera Neogen
Lyseringslösningsrören vid 37 ± 1°C i 1 timme eller placera dem i en torr dubbelblockvärmare i 30 sekunder vid 100°C.
2. Invertera de lockförsedda rören för att blanda. Fortsätt till nästa steg inom 4 tim.
3. Ta ut anrikningsbuljongen från inkubatorn.
4. Ett Neogen Lyseringslösningsrör krävs för varje prov samt det negativa kontrollprovet (NC) (sterilt anrikningsmedium).
4.1 Remsor med Neogen Lyseringslösningsrör kan klippas för önskat antal Neogen Lyseringslösningsrör. Välj det antal
individuella Neogen Lyseringslösningsrör eller remsor om 8 rör som behövs. Placera Neogen Lyseringslösningsrören
i ett tomt ställ.
4.2 Undvik korskontaminering genom att öppna ett lock på en remsa med Neogen Lyseringslösningsrör i taget ochanvänd en ny pipettspets vid varje överföringssteg.
4.3 För över det anrikade provet till Neogen Lyseringslösningsrören enligt beskrivningen nedan:
För över varje anrikat prov till ett enskilt Neogen Lyseringslösningsrör först. Överför NC sist.
4.4 Använd Neogen® Molekylär Detektion, Cap/Decap Redskap – Lysering för att öppna en remsa med
Neogen Lyseringslösningsrö – en remsa i taget.
4.5 Kassera locket till Neogen Lyseringslösningsröret – om lysatet ska behållas för omprov ska locken placeras i en renbehållare för återanvändning efter lysering.
4.5.1 Se bilaga A för information om behandling av förvarat lysat.
4.6 Överför 20 µl prov till ett Neogen Lyseringslösningsrör såvida inte annat anges i protokollen i tabell 2, 3 och 4(t ex. råa mejeriprodukter eller då man använder miljöprover med neutraliseringsbuffer på 10 µl).
20 µl

5. Upprepa steg 4.4 till 4.6 tills varje enskilt prov har tillsatts i ett motsvarande Neogen Lyseringslösningsrör i remsan.
6. När alla prover har överförts ska 20 µl NC (sterilt anrikningsmedium, t.ex. buffrad Demi-Fraser-buljong) överföras till ett
Neogen Lyseringslösningsrör. Använd inte vatten som NC.
7. Kontrollera att temperaturen på Neogen Molekylär Detektion insats för värmeblock är 100 ± 1°C.
8. Placera det oövertäckta stället med Neogen Lyseringslösningsrör i Neogen Molekylär Detektioninsats för värmeblockoch värm i 15 ± 1 minuter. Under uppvärmningen kommer Neogen Lyseringslösningen att ändra färg från rosa (kall) tillgul (varm).
8.1 Prover som inte har värmebehandlats korrekt under analysens lyseringssteg bör betraktas som en potentiell
biologisk fara och ska INTE föras in i Neogen Molekylärt Detektionsinstrument.
9. Ta ut det oövertäckta stället med Neogen Lyseringslösningsrör från värmeblocket och låt det svalna i Neogen Molekylär
Detektion -insats för kylblockunder minst 5 minuter men högst 10 minuter. Neogen Molekylär insats för kylblock som
används vid omgivningstemperatur ska placeras direkt på laboratoriebänken. När lyseringslösningen svalnar återgår
dess färg till rosa.

8

SV(Svenska)

10. Ta ut stället med Neogen Lyseringslösningsrör från Neogen Molekylär Detektion insats för kylblock.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplifiering
1. Ett Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes reagensrör krävs för varje prov samt för NC-provet.
1.1 Reagensrörens remsor kan klippas till önskat antal rör. Välj antalet enskilda Neogen Molecular Detection Assay 2 –Listeria monocytogenes reagensrör eller remsor om 8 rör som behövs.
1.2 Placera Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes Reagensrör i ett tomt ställ.
1.3 Undvik att röra upp reagens-pelletarna från provrörens botten.
2. Välj ett rör för Neogen Reagenskontroll och placera det i stället.
3. Undvik korskontaminering genom att öppna ett lock på en remsa med Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria
monocytogenes reagensrör i taget och använd en ny pipettspets vid varje överföringssteg.
4. För över lysat till ett Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes reagensrör och ett rör för
Neogen Reagenskontroll enligt beskrivningen nedan:Överför varje provlysat till enskilda Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes reagensrör
först, följt av NC. Hydrera rör för Neogen Reagenskontroll sist.
5. Använd Neogen® Molekylär Detektion, Cap/Decap Redskap – Reagens för att öppna Neogen Molecular Detection
Assay 2 – Listeria monocytogenes reagensrör - en rörremsa i taget. Kassera locket.
5.1 För över 20 µl av provlysat från den övre ½ av vätskan (undvik utfällning) i Neogen Lyseringslösningsröret tillmotsvarande Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes reagensrör. Dispensera i en vinkel
för att undvika att pelletsarna rörs upp. Blanda genom att pipettera upp och ned 5 gånger.
5.2 Upprepa steg 5.1 tills enskilda provlysat har lagts till i ett motsvarande Neogen Molecular Detection Assay 2 –Listeria monocytogenes reagensrör i remsan.
5.3 Täck Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes reagensrör med medföljande extralock och
använd den rundade sidan av Neogen Molekylär Detektion Cap/Decap Redskap - Reagens och pressa fram ochtillbaka för att stänga locket ordentligt.
5.4 Upprepa efter behov steg 5.1 till 5.3 för det antal prover som ska testas.
5.5 När alla provlysat har överförts upprepar du steg 5.1 för att föra över 20 µl NC-lysat i ett Neogen Molecular
Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes reagensrör.
5.6 För över 20 µl av NC-lysat i ett rör för Neogen Reagenskontroll. Dispensera i en vinkel för att undvika attpelletsarna rörs upp. Blanda genom att pipettera upp och ned 5 gånger.
6. Ladda de förslutna provrören i en ren och dekontaminerad Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda. Stäng
och lås locket på Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda.

20 µL

7. Granska och bekräfta den konfigurerade körningen i programvaran förNeogen Molekylärt Detektionssystem.
8. Klicka på startknappen i programmet och välj vilket instrument som ska användas. Det valda instrumentets locköppnas automatiskt.

9

SV(Svenska)

9. Placera Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda i Neogen Molekylärt Detektionsinstrument och stäng locket
för att starta analysen. Resultaten ges inom 75 minuter, men positiva resultat kan detekteras tidigare.
10. Ta ut Neogen Molekylär Detektion, Snabbladdningslåda från Neogen Molekylärt Detektionsinstrument när
analysen har slutförts och kassera rören genom att blötlägga dem i en 1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning förhushållsanvändning i 1 timme på avstånd från analysberedningsområdet.
OBSERVERA: För att minimera risken för falskt positiva resultat på grund av korskontaminering ska reagensprovrör med
amplifierad DNA aldrig öppnas. Detta inkluderar rör för Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes
reagens, Neogen Reagenskontroll och matriskontroll. Kassera alltid förslutna reagensrör genom att blötlägga dem i en
1–5 % (volym i vatten) blekmedelslösning eller motsvarande i 1 timme på avstånd från analysberedningsområdet.

Resultat och tolkning

En algoritm tolkar ljusutstrålningskurvan som genereras genom detektion av nukleinsyraamplifiering. Resultaten analyseras
automatiskt av programmet och färgkodas baserat på resultatet. Ett positivt eller negativt resultat fastställs genom analys
av ett antal unika kurvparametrar. Presumtivt positiva resultat rapporteras i realtid medan resultat som är negativa ochsådana som är märkta Inspektera visas när körningen har slutförts.
Presumtivt positiva resultat bör konfirmeras enligt laboratoriets standardrutiner eller genom referensmetod(1,2,3), börjar medöverföring från den primära anrikningen till den sekundära anrikningsbuljongen (om tillämpligt), följt av utspridning och
bekräftelse av isolat med användning av lämpliga biokemiska och serologiska metoder.
ANMÄRKNING: Ett negativt prov ger inte ett noll-resultat vid avläsning eftersom systemet och Neogen Molecular
Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes förstärkningsreagens ger en ”bakgrund” relativ ljusenhet (RLU) vid avläsning.
Skulle ovanlig ljusutstrålning förekomma, vilket är sällsynt, märker algoritmen detta med ”Inspektera”. Neogen
rekommenderar att användaren upprepar analysen av prover som resulterar i Inspektera. Om resultatet fortsätter att vara
Inspektera ska du gå vidare till testbekräftelse med den metod du föredrar eller så som anges i lokala föreskrifter.
Tabell 5: Resultatsymboler för prover och tolkning som tillhandahålls av Neogen Molekylärt Detektionssystem-programvaran.
BrunnstypBrunnresultatsymbol

ResultatTolkning

Prov

Positiv

Provet är antagligen positivt för målpatogenen.

Prov

Negativ

Provet är negativt för målpatogenen.

Prov

SpärradProvmatrisen hämmade analysen. Ett omtest kan behövas.
Se avsnittet felsökning och produktinstruktioner för
analyspaketet för mer information.

Prov

Inspektera

Närvaron eller frånvaron av målpatogenen var obestämd.
Ett omtest kan behövas. Se avsnittet felsökning och
produktinstruktioner för analyspaketet för mer information.

Prov

Fel

Ingen bioluminescens detekterades. Ett omtest kan behövas.
Se avsnittet felsökning och produktinstruktioner för
analyspaketet för mer information.

Bekräftelse av resultat enligt NF VALIDATION-certifierad metod
Alternativ 1: Använda ISO 11290(3)-standarden från Demi-Fraser-anrikningen.
Alternativ 2: Genom isolering på PALCAM-agar eller på kromogen agar som ingår i en NF VALIDATION-certifierad metod
för detektion av Listeria monocytogenes. Förekomsten av karakteristiska kolonier är tillräcklig för att bekräfta förekomsten
av Listeria monocytogenes.
Alternativ 3: Använda nukleinsyrasonder som beskrivs i EN ISO 7218(5) standarden och som utförs på isolerade kolonier,från selektiv agar (se alternativ 1 eller 2).
Alternativ 4: Använd någon annan certifierad NF VALIDATION-metod, vars princip måste vara annorlunda än den som
används i Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes. Hela protokollet för denna andra validerade
metod måste användas. Alla steg före starten av bekräftelsen måste vara gemensamma för båda metoderna.
I fall av icke överensstämmande resultat (presumtivt positiva med den alternativa metoden, ej bekräftade med någon
av de beskrivna metoderna ovan) måste laboratoriet följa de obligatoriska stegen för att säkerställa validiteten för deerhållna resultaten.
I fall av icke överensstämmande resultat (presumtivt positiva med Neogen Molecular Detection Assay 2 – Listeria
monocytogenes, som inte bekräftas med någon av de ovan beskrivna metoderna) måste laboratoriet följa de obligatoriska
stegen för att säkerställa validiteten för de erhållna resultaten.

10

SV

(Svenska)

Om du har frågor om specifika tillämpningar eller procedurer kan du besöka vår hemsida på www.neogen.com eller
kontakta din lokala representant eller återförsäljare för Neogen.
Bilaga A. Protokollavbrott: Förvaring och omprovning av värmebehandlade lysater.
1. För att lagra ett värmebehandlat lysat, täck lyseringsröret igen med ett rent lock (se ”Lysering”, 4.5).
2. Förvara vid 4 till 8°C i upp till 72 timmar.
3. Förbered ett förvarat prov för amplifiering genom att vända det upp och ned 2–3 gånger så att det blandas.
4. Avlägsna locken från rören.
5. Placera de blandade lysatrören i Neogen Molekylär Detektion, Insats för värmeblock och värm vid 100 ± 1°C
i 5 ± 1 minuter.
6. Ta bort stället med Neogen Lyseringslösningsrör från värmeblocket, och låt det svalna i Neogen Molekylär Detektion,
insats för kylblock i minst 5 minuter och högst 10 minuter.
7. Fortsätt enligt protokollet i avsnittet ”Amplifiering” som beskrivs ovan.

Referenser:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Förklaring av produktetikettsymbolerna
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

DA(Dansk)Udstedelsesdato: 2024-01

Produktvejledning
Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes
Produktbeskrivelse og tilsigtet brug

Neogen® Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes bruges sammen med Neogen® Molekylær Detektions
System til hurtig og præcis detektion af Listeria monocytogenes i opformerede fødevareprøver og miljøprøver. Neogen
Molekylær Detektions Analyser bruger loop-medieret, isotermisk amplifikation til hurtigt at forstærke nukleinsyresekvenser
med høj specificitet og følsomhed kombineret med bioluminescens for at afsløre amplifikationen. Formodede positive
resultater bliver rapporteret i realtid, mens negative resultater bliver vist, når analysen er gennemført. Formodede positive
resultater bør verificeres ved hjælp af din foretrukne metode eller som angivet i de lokale vedtægter(1, 2, 3).
Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes er beregnet til brug i laboratorieomgivelser af
professionelle, der er uddannet i laboratorieteknikker. Neogen har ikke dokumenteret brugen af dette produkt i andre
brancher end føde- og drikkevarer. For eksempel har Neogen ikke dokumenteret dette produkt til test af vandprøver,medicinalvareprøver, kosmetikprøver, kliniske prøver eller veterinære prøver. Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 Listeria monocytogenes er ikke blevet evalueret med alle mulige testprotokoller eller med alle mulige bakteriestammer.
Som for alle testmetoder kan kilden, sammensætningen og kvaliteten af opformeringsmediet påvirke resultatet.
Faktorer såsom prøvetagningsmetoder, testprotokoller, prøveforberedelse, håndtering samt laboratorieteknik kan ligeledespåvirke resultaterne. Neogen anbefaler evaluering af metoden inklusive opformeringsmediet i brugerens omgivelser
ved hjælp af et tilstrækkeligt antal prøver med specifikke fødevarer og mikrobielle udfordringer for at sikre, at metoden
opfylder brugerens kriterium.
Neogen har evalueret Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes med Demi Fraser Bouillon
med ferriammoniumcitrat og Fraser Bouillon med ferriammoniumcitrat efter behov. En typisk sammensætning af dette
medie er angivet nedenfor.
Typisk sammensætning af Demi Fraser
Basis Bouillon(g/l)

Typisk sammensætning af Fraser
Basis Bouillon(g/l)

Natriumklorid

20 gNatriumklorid

20 gNatriumfosfat, dibasisk, vandfri*

9,6 gNatriumfosfat, dibasisk, vandfri*

9,6 g

Oksekødsekstrakt

5,0 g

Oksekødsekstrakt

5,0 g

Pankreatisk fordøjelse af casein

5,0 g

Pankreatisk fordøjelse af casein

5,0 g

Peptisk fordøjelse af animalsk væv

5,0 g

Peptisk fordøjelse af animalsk væv

5,0 gGærekstrakt

5,0 gGærekstrakt

5,0 g

Lithiumklorid

3,0 g

Lithiumklorid

3,0 g

Kaliumfosfat, monobasisk

1,35 gKaliumfosfat, monobasisk

1,35 gEsculin

1,0 g

Esculin

1,0 g

Acriflavin HCl

0,0125 g

Acriflavin HCl

0,025 gNalidixinsyre

0,01 gNalidixinsyre

0,02 g* Erstatning: Natriumfosfat, dibasisk, dihydrat

12,0 gSuppleret med Fraser Bouillon(Ingredienser pr. 10 ml glas. Ét glas tilsættes til én liter basismedie).
Ferriammoniumcitrat

0,5 g/10 ml

Slut-pH7,2 ± 0,2 ved 25°C

Neogen Molekylær Detektions Instrument er beregnet til brug sammen med prøver, der har gennemgået
varmebehandling under analysens lysinbehandlingstrin, der er designet til at destruere organismer, der optræder i prøven.
Prøver, som ikke er blevet korrekt varmebehandlet under analysens lysinbehandlingstrin, kan udgøre en væsentlig
miljørisiko og bør IKKE sættes ind i Neogen Molekylær Detektions Instrument.
®

Neogen Food Safety er ISO 9001-certificeret (International Organisation for Standardisering) med hensyn til designog produktion.
Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes testkittet indeholder 96 tests, beskrevet i tabel 1.

1DA(Dansk)Tabel 1. Neogen Molekylær Detektions Analyse-kittets komponenter
ArtikelIdentifikation

Kvantitet

Indholdsfortegnelse

Kommentarer

Neogen® Lysinopløsning(LS)

Lyserød opløsningi klare reagensglas

96 (12 strimler med
8 reagensglas)

580 μl LS pr. reagensglas

På holder ogklar til brug

Neogen® Molekylær
Detektions Analyse 2 Listeria monocytogenes
reagensglas

Gule reagensglas

96 (12 strimler med
8 reagensglas)

Frysetørret, specifik
amplifikations- og
detektionsblanding

Klar til brug

Ekstra hætter

Gule hætter

96 (12 strimler med
8 hætter)

Neogen® Reagens Kontrol(RC)

Klare reagensglas
med flip-top

16 (2 poser med
8 individuellereagensglas)

Klar til brugFrysetørret kontrolDNA, amplifikationsog detektionsblanding

Klar til brug

Den negative kontrol, som ikke medfølger i kittet, er et sterilt opformeringsmedie, f.eks. Demi Fraser Bouillon. Brug ikke
vand som en negativ kontrol.

Sikkerhed

Brugeren skal læse, være indforstået med og følge alle sikkerhedsoplysninger i vejledningen til Neogen Molekylær
Detektions System og Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes. Gem sikkerhedsvejledningen til
fremtidig reference.
ADVARSEL: Indikerer en farlig situation, som kan resultere i dødsfald eller alvorlig personskade og/eller skade på
ejendele, hvis den ikke undgås.
BEMÆRK: Indikerer en potentielt farlig situation, som udgør en risiko for beskadigelse af ejendom, hvis den
ikke undgås.

W ADVARSEL
Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes må ikke anvendes til diagnosticering af sygdomme
på mennesker eller dyr.
Metoden med Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes kan generere Listeria monocytogenes
på niveauer, der er tilstrækkelige til at medføre dødfødsel og dødsfald hos gravide kvinder og personer med nedsat
immunforsvar, hvis de eksponeres.
Brugeren skal uddanne sit personale i aktuelle korrekte prøveteknikker: for eksempel god laboratoriepraksis,
ISO/IEC 17025(4) eller ISO 7218(5).
For at reducere risiciene forbundet med et falsk-negativt resultat, der fører til frigørelse af kontaminerede produkter:• Følg protokollen, og udfør tests præcist som angivet i produktvejledningen.
• Opbevar Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes som angivet på pakken og
i produktvejledningen.
• Anvend altid Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes inden udløbsdatoen.
• Anvend Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes til fødevare- og miljøprøver, der er blevet
godkendt internt eller af en tredjepart.
• Anvend udelukkende Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes med overflader,desinfektionsmidler, protokoller og bakteriestammer, der er blevet evalueret internt eller af en tredjepart.
• For at lave en miljøprøve, der indeholder neutraliserende buffer med arylsulfonatkompleks, foretages fortynding
1:2 inden testning (1 del prøve til 1 del steril opformeringsbouillon). En anden mulighed er at overføre 10 μl af
NB-opformeringsmediet til Neogen LS-reagensglassene. Neogen®-prøveindsamlingsprodukter, som inkluderer
neutraliserende buffer med arylsulfonatkompleks: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,
HS10NB2G og HS2410NB2G.
For at reducere risiciene forbundet med eksponering med kemikalier og biologiske farer:• Det anbefales kraftigt, at kvindeligt laboratoriepersonale informeres om risikoen for fosterets udvikling som følge af
infektion hos moderen ved eksponering med Listeria monocytogenes.
• Foretag patogentestning i et korrekt udstyret laboratorium under uddannet personales kontrol. Inkuberet
opformeringsmedie og udstyr eller overflader, der har været i kontakt med inkuberet opformeringsmedie, kan indeholde
patogenniveauer, der er tilstrækkelige til at udgøre en risiko for menneskelig sundhed.
• Følg altid sikkerhedspraksis for et standardlaboratorium, inklusive brug af passende beskyttelsesudstyr og
beskyttelsesbriller under håndtering af reagenser og kontaminerede prøver.
• Undgå kontakt med indholdet af opformeringsmediet og reagensglas efter amplifikationen.
• Bortskaf opformerede prøver i overensstemmelse med gældende branchestandarder.
• Prøver, som ikke er blevet korrekt varmebehandlet under analysens lysinbehandlingstrin, kan udgøre en væsentlig
miljørisiko og bør IKKE sættes ind i Neogen Molekylær Detektions Instrument.
2

DA(Dansk)Overhold følgende forholdsregler for at reducere risiciene i forbindelse med krydskontaminering under klargøring
af analysen:• Brug altid handsker (for at beskytte brugeren og undgå introduktion af nukleaser).
For at reducere risici forbundet med miljøkontaminering:• Følg de gældende branchestandarder for bortskaffelse af kontamineret affald.
For at reducere risici forbundet med eksponering med varme væsker:• Overskrid ikke den anbefalede temperaturindstilling på varmeelementet.
• Overskrid ikke den anbefalede opvarmningstid.
• Brug et passende, kalibreret termometer til at verificere temperaturen for Neogen® Molekylær Detektions VarmeblokIndlæg (f.eks. et termometer til delvis nedsænkning eller et digitalt termoelementtermometer, ikke et termometer
til hel nedsænkning). Termometeret skal anbringes på det dertil indrettede sted i Neogen Molekylær Detektions
Varmeblok Indlæg.

BEMÆRK
Overhold følgende forholdsregler for at reducere risiciene i forbindelse med krydskontaminering under klargøring
af analysen:• Skift handsker før reagenskuglehydrering.
• Der anbefales brug af sterile, aerosol-barriere (filtrerede), molekylærbiologiske pipettespidser.
• Brug en ny pipettespids til hver prøveoverførsel.
• Anvend god laboratoriepraksis til overførsel af prøven fra opformeringsglasset til lysinreagensglasset. For at undgå
kontaminering af pipetterne kan brugeren vælge at tilføje et mellemliggende overførselstrin. For eksempel kan brugeren
overføre hver enkel opformerede prøve til et sterilt reagensglas.
• Anvend om muligt en molekylærbiologisk arbejdsstation, der inkluderer en bakteriedræbende lampe. Dekontaminer
med jævne mellemrum laboratoriets arbejdsborde og udstyr (pipetter, luknings-/åbningsredskaber osv.) med en 1-5 %(v:v i vand) husholdningsklorinopløsning eller DNA-renseopløsning.
For at reducere risiciene i forbindelse med et falsk-positivt resultat:• Reagensglas må aldrig åbnes efter amplifikation.
• Før bortskaffelse af de kontaminerede reagensglas skal de altid iblødlægges i en 1-5 % (v:v i vand)husholdningsklorinopløsning eller en tilsvarende opløsning i 1 time og holdes væk fra området for analyseforberedelse.
• Reagensglas må aldrig autoklaveres efter amplifikation.
Se sikkerhedsdatabladet for yderligere oplysninger og lokale vedtægter for bortskaffelse.
Hvis du har spørgsmål til specifikke anvendelser eller procedurer, bedes du besøge vores websted på www.neogen.com
eller kontakte din lokale Neogen-repræsentant eller -distributør.

Brugerens ansvar

Brugeren er ansvarlig for at gøre sig bekendt med produktvejledninger og -oplysninger. Besøg vores hjemmeside på
www.neogen.com, eller kontakt din lokale Neogen-repræsentant eller -distributør for at få yderligere oplysninger.
Når der vælges en testmetode, er det vigtigt, at man er klar over, at eksterne faktorer såsom prøveudtagningsmetoder,
testprotokoller, prøveforberedelse, håndtering samt laboratorieteknikker kan påvirke resultaterne.
Det er brugerens eget ansvar at vælge en testmetode eller et produkt, som evaluerer et tilstrækkeligt antal prøver med
de passende matricer og mikrobielle udfordringer for derved at sikre brugeren, at den valgte testmetode lever op til
brugerens krav.
Det er også brugerens eget ansvar at kontrollere, at alle testmetoder og resultater lever op til kundernes og leverandørernes
krav.
Som med alle andre testmetoder gælder det, at de resultater, der opnås med dette Neogen Food Safety-produkt, ikke giver
garanti for kvaliteten af de testede matricer og processer.
For at hjælpe kunder med at evaluere metoden til flere forskellige fødevarematricer har Neogen udviklet Neogen®
Molekylær Detektions Matrix Kontrol-kit. Efter behov kan Matrix Kontrol (MC) anvendes til at afgøre, om matricen har
evnen til at påvirke resultaterne af Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes. Test flere forskelligerepræsentative prøver fra matricen, dvs. prøver hentet fra forskellige kilder, fra enhver valideringsperiode under anvendelse
af Neogen-metoden eller under testning af nye eller ukendte matricer eller matricer, der har gennemgået ændringer iråmaterialet eller i processen.
En matrice kan defineres som en produkttype med iboende egenskaber såsom sammensætning og proces.
Forskelle mellem matricer kan være så simple som effekterne forårsaget af forskelle i deres bearbejdning ellerpræsentation, f.eks. rå vs. pasteuriseret, frisk vs. tørret osv.

3

DA

(Dansk)Begrænsning af garantier/begrænset retsmiddel

BORTSET FRA HVAD DER ER UDTRYKKELIGT ANFØRT I DEN BEGRÆNSEDE GARANTI PÅ DEN INDIVIDUELLEPRODUKTEMBALLAGE, FRASIGER NEOGEN SIG ALLE UDTRYKKELIGE OG UNDERFORSTÅEDE GARANTIER,HERUNDER, MEN IKKE BEGRÆNSET TIL, ENHVER SALGBARHEDSGARANTI ELLER EGNETHED TIL EN BESTEMTANVENDELSE. Hvis et Neogen Food Safety-produkt er behæftet med fejl eller mangler, vil Neogen eller en af dennes
autoriserede distributører efter dennes eget skøn erstatte produktet eller refundere købsprisen. Dette er det eneste
til rådighed værende retsmiddel. Kontakt venligst din Neogen-repræsentant eller autoriserede Neogen-distributør foryderligere spørgsmål.

Begrænsning af Neogen's ansvar

NEOGEN KAN IKKE HOLDES ANSVARLIG FOR NOGEN TAB ELLER SKADER, UANSET OM DET DREJER SIG OMDIREKTE, INDIREKTE, SÆRSKILT DOKUMENTEREDE, HÆNDELIGE SKADER ELLER FØLGESKADER, HERUNDER, MEN
IKKE BEGRÆNSET TIL MISTET FORTJENESTE. Under ingen omstændigheder skal Neogen's erstatningsansvar kunne
overstige købsprisen for det produkt, der efter sigende er behæftet med fejl.

Opbevaring og bortskaffelse

Opbevar Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes ved 2-8°C. Undlad frysning. Opbevar kittet
på et mørkt sted. Efter åbning skal det kontrolleres, at folieposen er intakt. Hvis posen er beskadiget, må produktet ikke
anvendes. Efter åbning bør ubenyttede reagensglas altid opbevares i den genlukkelige pose med tørremidlet indeni for
at opretholde de frysetørrede reagensers stabilitet. Opbevar de forseglede poser ved temperaturer mellem 2-8°C i højst
60 dage.
Anvend ikke Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes efter udløbsdatoen. Udløbsdato
og varepartinummer findes på æskens udvendige mærkat. Efter brug kan det berigede medie og reagensglas med
Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes muligvis indeholde sygdomsfremkaldende materialer.
Når testning er fuldført, bedes du følge de gældende branchestandarder for bortskaffelse af kontamineret affald.
Se sikkerhedsdatabladet for yderligere oplysninger og lokale vedtægter for bortskaffelse.

Brugsanvisning

Følg omhyggeligt alle vejledninger. Hvis dette ikke overholdes, kan det medføre unøjagtige resultater.
Dekontaminer med jævne mellemrum laboratoriets arbejdsborde og udstyr (pipetter, luknings-/åbningsredskaber osv.)
med en 1-5 % (v:v i vand) husholdningsklorinopløsning eller DNA-renseopløsning.
Brugeren skal fuldføre undervisningen til Neogen Molekylær Detektions System brugerkvalifikation (OQ) som beskrevet
i dokumentet “Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System”(6).
Se afsnittet “Specifikke instruktioner for validerede metoder” for specifikke krav:
Tabel 3 for opformeringsprotokoller ifølge AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 og AOAC® Performance
Tested MethodSM Certificate #081501.
Tabel 4 for opformeringsprotokoller ifølge NF Validation-certifikat 3M 01/15-09/16.

Prøveopformering

Tabel 2, 3 og 4 viser retningslinjer for opformering af fødevare- og miljøprøver. Det er brugerens ansvar at evaluere
alternative prøveprotokoller eller blandingsforhold for at sikre, at denne testmetode imødekommer brugerens kriterier.

Fødevarer

1. Lad Demi Fraser Bouillon opformeringsmedie (med ferriammoniumcitrat) stabilisere til laboratorietemperatur.
2. Kombiner opformeringsmediet og prøven aseptisk iht. tabel 2, 3 eller 4. Til alle kødprøver og højpartikelprøver
anbefales brug af filterposer.
3. Homogeniser grundigt ved blendning, centrifugering eller håndmiksning i 2 ± 0,2 minutter. Inkuber ved 37 ± 1°C iht.
tabel 2, 3 eller 4.
4. For rå mejeriprodukter (se tabel 2, 3 eller 4) overføres 0,1 ml af den primære opformering til 10 ml Fraser Bouillon.
Inkuber ved 37 ± 1°C i 20-24 timer.

Miljøprøver

Prøveindsamlingsanordningen kan være en svamp fugtet med en neutraliserende opløsning til inaktivering af
desinfektionsmidlerne. Neogen anbefaler brug af en biocidfri cellulosesvamp. Den neutraliserende opløsning kan væreDey-Engley (D/E) neutraliserende bouillon eller Letheen bouillon. Det anbefales at desinficere området efter prøvetagning.

4(Dansk)DA

ADVARSEL: Hvis I vælger at bruge neutraliserende buffer (NB) med arylsulfonatkompleks til hydreringsopløsningen
til svampen, skal der foretages fortynding 1:2 (1 del prøve i 1 del steril opformeringsbouilllon) af den opformerede
miljøprøve inden testning for at reducere risiciene forbundet med et falsk-negativt resultat, der fører til frigørelse af
kontaminerede produkter. En anden mulighed er at overføre 10 μL af den neutraliserende opformeringsbuffer til Neogen
LS-reagensglassene.
Den anbefalede størrelse på prøvetagningsområdet til bekræftelse af forekomst eller fravær af patogenet på overfladen
er mindst 100 cm2 (10 cm x 10 cm eller 4 x 4 tommer). Ved prøvetagning med en svamp skal hele området dækkes ved
at bevæge den i to retninger (venstre mod højre og derefter op og ned) for at tage miljøprøver ifølge den gældende
prøvetagningsprotokol eller iht. retningslinjerne i FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) eller ISO 18593(7).
1. Lad Demi Fraser Bouillon opformeringsmedie (med ferriammoniumcitrat) stabilisere til laboratorietemperatur.
2. Kombiner opformeringsmediet og prøven aseptisk iht. tabel 2, 3 eller 4.
3. Homogeniser grundigt ved blendning, centrifugering eller håndmiksning i 2 ± 0,2 minutter. Inkuber ved 37 ± 1°C
i 24-30 timer iht. tabel 2, 3 eller 4.
Tabel 2: Generelle opformeringsprotokoller ved 37 ± 1°C ved brug af Demi Fraser Bouillon og Fraser Bouillon efter behov.
Prøvematrice

Prøvestørrelse

Opformeringsbouillonens volumen (ml)Opformeringstid(timer)

25 g

225

24-30

1 svamp

100 eller
225

24-30

1 podepind

10

24-30

25 g

475

28-32

Varmebehandlet,
tilberedt, konserveret
kød, fjerkræ, skaldyrog fisk
Varmebehandlede/pasteuriseredemælkeprodukter
Landbrugsprodukterog grøntsager
Fødevarer med
flere komponenter
Miljøprøver(a)Råt kød, fjerkræ,skaldyr, fisk

Sekundær opformering(Fraser Bouillon)(a)Primær opformering(Demi Fraser Bouillon)(a)PrøvematriceRå mælkeprodukter

Prøvestørrelse

25 g

Opformeringsbouillonens volumen (ml)225

Opformeringstid(timer)Prøvestørrelse

Opformeringstemperatur (°C)

Opformeringstid(timer)20-24

Overfør
0,1 mltil 10 ml
FraserBouillon

37 ± 120-24

Prøveanalysevolumen(b)10 μl(a) Demi Fraser og Fraser Bouillon skal altid suppleres med Fraser Bouillon (ferriammoniumcitrat) under primær eller
sekundær opformering.
(b) Prøvevolumen overført til Neogen LS-reagensglassene. Se trin 4.6 i afsnittet Lysinbehandling.

5

DA(Dansk)Specifikke instruktioner for validerede metoder
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

I OMASM- og PTMSM-programmer udført af AOAC Research Institute har Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 Listeria monocytogenes vist sig at være en effektiv metode til detektion af Listeria monocytogenes. Matricerne, der er testet
i denne undersøgelse, er vist i Tabel 3.
Tabel 3. Opformeringsprotokoller med Demi Fraser Bouillon(a) ved 37 ± 1°C iht. AOAC OMASM 2016.08 og
PTMSM-certifikat nr. 081501.
Prøvematrice

Prøvestørrelse

Opformeringsbouillonens
volumen (ml)Opformeringstid(timer)Hotdogs med oksekød, queso fresco,
vanilleis, hytteost med 4 % mælkefedt,sødmælkskakaomælk 3 %, romainesalat, rå
spinat i pose, koldrøget laks

25 g

225

24-30

Rå kylling

25 g

475

28-32

Kalkunpålæg

125 g

1125

24-30

Hel melon

Tilstrækkelig volumen til at
melonen kan flyde

26-30

Rustfrit stål1 svamp

225

24-30

Forseglet beton

1 svamp

100

24-30

Plast(c)1 podepind

10

24-30

Miljøprøver:Cantaloupemelon(b)Alle prøver til AOAC-valideringen blev homogeniseret med centrifugering, medmindre andet er angivet.
(a)		Demi Fraser og Fraser Bouillon skal altid suppleres med Fraser Bouillon (ferriammoniumcitrat) under primær eller
sekundær opformering.
(b) Homogeniser prøven ved håndmixning.
(c)		 Homogeniser prøven i en vortex-blander.

NF VALIDATION med AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
For yderligere oplysninger om validering henvises der til NF VALIDATION-certifikatet, der er tilgængeligt på det ovenfornævnte websted.
NF VALIDATION-certificeret metode i overensstemmelse med ISO 16140-2(6) i sammenligning med ISO 11290(3)Valideringsområdet: Alle prøver af humane fødevarer samt miljøprøver (med undtagelse af prøver fra primær produktion)
Prøveforberedelse: Prøver bør forberedes i henhold til EN ISO 11290-1(3) og EN ISO 6887(8)Softwareversion: Se certifikat

6

(Dansk)

DA

Tabel 4: Opformeringsprotokoller iht. NF VALIDATION-certificeret metode 3M 01/15-09/16 ved 37 ± 1°C med Demi
Fraser Bouillon og Fraser Bouillon efter behov.
Generel protokol

Prøvestørrelse

Alle fødevareprøver(undtagen råt
kød, rå skaldyr ogrå mælkeprodukter)25 g

Råt kød,rå skaldyrog rå mælkeprodukter

Accepteretafbrydelsespunkt• Demi Fraser Bouillon op
til 72 timer

225

25 g,
1 podepind
eller 1 serviet

Miljøprøver

Specifikprotokol

OpformeOpformeOpforme- Prøveanaringsbouilloringstemperingstid
lysevolunens voluratur (±1°C)(timer)men(a)men (ml)

37

24-30

20 µl

• Lyser ved -20°C• Lyser ved 4°C i op til
72 timer

Sekundær opformering (Fraser Bouillon)(b)Primær opformering (Demi Fraser Bouillon)(b)OpformePrøvePrøve- ringsbouil- Opforme- Opforme- PrøveOpforme- Opformeanalystørrellonens
ringstempe- ringstid størrel- ringstempe- ringstid
sevoluse
volumen ratur (±1°C)(timer)se
ratur (±1°C)(timer)men(c)
(ml)

25 g

225

37

Overfør
0,1 mltil 10 ml
FraserBouillon

20-24

Accepteret afbrydelsespunkt• Fraser
Bouillon
op til72 timer

37

20-24

10 µl

• Lyser ved-20°C• Lyserved 4°C
i op til
72 timer(a) Prøvevolumen overført til Neogen LS-reagensglassene. Se trin 4.6 i afsnittet Lysinbehandling.
(b) Demi Fraser og Fraser Bouillon skal altid suppleres med Fraser Bouillon (ferriammoniumcitrat) under primær eller
sekundær opformering.
(c) Prøvevolumen overført til Neogen LS-reagensglassene. Se trin 4.6 i afsnittet Lysinbehandling.
BEMÆRK: Prøver større end 25 g er ikke testet i NF validation-undersøgelsen.

Forberedelse af Neogen® Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning
1. Fugt en klud med en 1-5 % (v: v i vand) husholdningsklorinopløsning eller en tilsvarende opløsning, og aftør
Neogen® Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning.
2. Skyl Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning med vand.
3. Brug et engangshåndklæde til at aftørre Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning.
4. Sørg for, at Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning er tør inden brug.
Forberedelse af Neogen® Molekylær Detektions Køleblok Indlæg
Anbring Neogen® Molekylær Detektions Køleblok direkte på laboratoriebordet. Brug køleblokken ved
laboratorietemperatur (20-25°C).
Forberedelse af Neogen® Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg
Anbring Neogen® Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg på en tør dobbelt varmeenhed. Tænd for den tørre
varmeenhed, og indstil temperaturen, så Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg kan nå og opretholde en
temperatur på 100 ± 1°C.
BEMÆRK: Afhængigt af varmeenheden skal man påregne ca. 30 minutter, før Neogen Molekylær Detektions VarmeblokIndlæg opnår temperaturen. Ved hjælp af et passende, kalibreret termometer (f.eks. et termometer til delvis nedsænkningeller et digitalt termoelementtermometer, men ikke et termometer til fuld nedsænkning) anbragt på det dertil indrettede
sted skal det verificeres, at Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg er på 100 ± 1°C.

7

DA

(Dansk)Forberedelse af Neogen® Molekylær Detektions Instrument
1. Start softwaren til Neogen® Molekylær Detektions System, og log på. Kontakt din Neogen Food Safety-repræsentant
for at sikre, at du har den mest opdaterede version af softwaren.
2. Tænd for Neogen Molekylær Detektions Instrument.
3. Opret, eller rediger en kørsel med data for hver prøve. Se brugsanvisningen til Neogen Molekylær Detektions System
for flere oplysninger.
BEMÆRK: Neogen Molekylær Detektions Instrument skal opnå Klar-tilstanden inden der indsættes reagensglas
i Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning. Dette opvarmningstrin varer ca. 20 minutter og bliver angivet
med et ORANGE lys på instrumentets statussøjle. Når instrumentet er klar til en kørsel, lyser statussøjlen GRØNT.
Lysinbehandling
Fjern bunden af holderen til Neogen Lysinbehandlingsopløsning med en skruetrækker eller en spatel, før den placeresi Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg.

1. Lad LS-reagensglassene (Neogen Lysinbehandlingsopløsning) varme op ved at indstille holderen til stuetemperatur(20-25°C) natten over (16-18 timer). Alternativer til at stabilisere Neogen LS-reagensglassene til stuetemperatur er
at sætte Neogen LS-reagensglassene på arbejdsbordet i mindst 2 timer, inkubere Neogen LS-reagensglassene i en
inkubator ved 37 ± 1°C i 1 time eller stille dem i en tør, dobbelt varmeblok i 30 sekunder ved 100°C.
2. Vend de lukkede reagensglas på hovedet for at blande. Gå til næste trin inden for 4 timer.
3. Fjern opformeringsbouillonen fra inkubatoren.
4. Et Neogen LS-reagensglas er påkrævet til hver prøve og til den negative kontrolprøve (NC) (sterilt opformeringsmedie).
4.1 Neogen LS-reagensglasstrimler kan skæres til det ønskede antal reagensglas til Neogen Lysinbehandlingsopløsning.
Vælg antallet af individuelle Neogen LS-reagensglas eller -strimler med 8 reagensglas efter behov. Sæt
Neogen LS-reagensglas i en tom holder.
4.2 Åbn én Neogen LS-reagensglasstrimmel ad gangen for at undgå krydskontaminering, og brug en ny pipette til
hvert overførselstrin.
4.3 Overfør opformerede prøver til Neogen LS-reagensglas som beskrevet nedenfor:
Overfør hver opformeret prøve til et individuelt Neogen LS-reagensglas først. Overfør NC til sidst.
4.4 Brug Neogen® Molekylær Detektions Værktøj til Cap/Decap (lukning/åbning) – Lysin-behandling til at åbne én
Neogen LS-reagensglasstrimmel ad gangen.
4.5 Smid Neogen LS-reagensglassets låg væk – hvis lysat skal gemmes til gentestning, så placer lågene i en renbeholder til genpåsætning efter lysinbehandlingen.
4.5.1 Ved behandling af gemt af lysat, se bilag A.
4.6 Overfør 20 µl prøve til et Neogen LS-reagensglas, medmindre andet er angivet i protokollerne fra tabel 2, 3 eller 4(ved f.eks. rå mælkeprodukter eller ved brug af miljøprøver med neutraliserende buffer anvendes 10 µl).
20 µl

5. Gentag trin 4.4 til 4.6, indtil hver enkelt prøve er blevet tilføjet til et tilsvarende Neogen LS-reagensglas i strimlen.
6. Når alle prøver er blevet overført, skal der overføres 20 µl of NC (sterilt opformeringsmedie, f.eks. Demi Fraser Bouillon)
til et Neogen LS-reagensglas. Brug ikke vand som en NC.
8

DA(Dansk)7. Kontroller, at Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg har en temperatur på 100 ± 1°C.
8. Anbring den utildækkede holder med Neogen Lysinbehandlingsreagensglas i Neogen Molekylær Detektions VarmeblokIndlæg, og opvarm i 15 ± 1 minutter. I løbet af opvarmningen vil Neogen Lysinopløsningen skifte farve fra lyserød (kølig)til gul (varm).
8.1 Prøver, som ikke er blevet korrekt varmebehandlet under analysens lysinbehandlingstrin, kan udgøre en væsentlig
miljørisiko og bør IKKE sættes ind i Neogen Molekylær Detektions Instrument.
9. Fjern den utildækkede holder med Neogen Lysinbehandlingsreagensglas fra varmeblokken, og lad den køle i Neogen
Molekylær Detektions Køleblok Indlæg i mindst 5 minutter og i højst 10 minutter. Neogen Molekylær Køleblok Indlæg
brugt ved stuetemperatur bør stå direkte på laboratoriebordet. Når det er koldt, skifter lysinopløsningen farve tilbage tillyserød.
10. Fjern holderen med Neogen Lysinbehandlingsreagensglas fra Neogen Molekylær Detektions Køleblok Indlæg.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplifikation
1. Et Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes -reagensglas er påkrævet til hver prøve og NC.
1.1 Reagensglasstrimler kan skæres til det ønskede antal reagensglas. Vælg antallet af individuelle Neogen Molekylær
Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes -reagensglas eller strimler med 8 reagensglas efter behov.
1.2 Placer Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes-reagensglas i en tom bakke.
1.3 Undgå at forstyrre reagenskuglerne på bunden af reagensglassene.
2. Vælg ét Neogen Reagens Kontrol-reagensglas, og anbring det i holderen.
3. For at undgå krydskontaminering åbnes én Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenesreagensglasstrimmel ad gangen, og der bruges en ny pipettespids til hvert overførselstrin.
4. Overfør lysat til Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes-reagensglas og et Neogen Reagens
Kontrol-reagensglas som beskrevet nedenfor:
Overfør hver prøvelysat til individuelle Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenesreagensglas først, efterfulgt af NC. Hydrer Neogen Reagens Kontrol-reagensglasset sidst.
5. Brug Neogen® Molekylær Detektions Værktøj til Cap/Decap (lukning/åbning) - Reagens til at åbne Neogen Molekylær
Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes-reagensglas - én reagensglasstrimmel ad gangen. Bortskaf hætten.
5.1 Overfør 20 µl prøvelysat fra den øverste halvdel af væsken (undgå præcipitat) i Neogen
lysinbehandlingsreagens-glasset til et tilsvarende Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria
monocytogenes-reagensglas. Doser med en skrå hældning for at undgå at forstyrre kuglerne. Bland forsigtigt
ved at pipettere op og ned 5 gange.
5.2 Gentag trin 5.1, til individuelt prøvelysat er blevet tilføjet til et tilsvarende Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 Listeria monocytogenes-reagensglas i strimlen.
5.3 Dæk Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes-reagensglassene med de medfølgende
ekstra hætter, og brug den runde side af Neogen Molekylær Detektions Værktøj til Cap/Decap (lukning/åbning) Reagens til at påføre tryk i en frem- og tilbagegående retning, og sørg for, at låget sidder fast.
5.4 Gentag trin 5.1 til 5.3 efter behov for det antal prøver, der skal testes.
5.5 Når alle prøvelysater er blevet overført, gentages trin 5.1 for at overføre 20 µl NC-lysat til et Neogen Molekylær
Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes-reagensglas.
5.6 Overfør 20 µl NC-lysat til et Neogen Reagens Kontrol-reagensglas. Doser med en skrå hældning for at undgå atforstyrre kuglerne. Bland forsigtigt ved at pipettere op og ned 5 gange.
6. Sæt reagensglassene med låg påsat i en ren og dekontamineret Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtigpåfyldning. Luk og lås låget til Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning.

9DA(Dansk)20 µL

7. Gennemgå og bekræft den konfigurerede kørsel i softwaren Neogen Molekylær Detektions System.
8. Klik på startknappen i softwaren, og vælg det instrument, du vil bruge. Det valgte instruments låg åbnes automatisk.
9. Anbring Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning i Neogen Molekylær Detektions Instrument, og
luk låget for at påbegynde analysen. Resultaterne fremkommer inden for 75 minutter, skønt positive resultater kan
fremkomme hurtigere.
10. Når analysen er færdig, fjernes Neogen Molekylær Detektions Bakke til hurtig påfyldning fra Neogen Molekylær
Detektions Instrument, reagensglassene bortskaffes ved at lade dem ligge i blød i en 1-5 % (v:v i vand)husholdningsklorinopløsning eller en tilsvarende opløsning i 1 time og på god afstand af analyseklargørelsesområdet.
BEMÆRK: For at minimere risikoen for falsk-positiver pga. krydskontaminering må reagensglas, der indeholder
forstærket DNA, aldrig åbnes. Dette omfatter Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenesreagensglas samt Neogen Reagens Kontrol- og Matrix Kontrol-reagensglas. De forseglede reagensglas skal altidbortskaffes ved at iblødlægge dem i en 1-5 % (v:v i vand) husholdningsklorinopløsning eller en tilsvarende opløsning i 1time og på god afstand af analyseklargørelsesområdet.

Resultater og aflæsning

En algoritme fortolker lyseffektkurven, der er et resultat af detektionen af nukleinsyreamplifikation. Resultaterne bliver
automatisk analyseret af softwaren og bliver farvekodet baseret på resultatet. Et positivt eller negativt resultat bliver
fastslået ved at analysere et antal unikke kurveparametre. Formodede positive resultater bliver rapporteret i realtid, mens
negative resultater og inspektionsresultater bliver vist, efter kørslen er gennemført.
Formodede positive prøver skal bekræftes ifølge sikkerhedspraksis for et standardlaboratorium eller ved at følge denrelevante referencemetodebekræftelse(1, 2, 3), der begynder med overførsel fra den primære opformeringsbouillon til den
sekundære opformeringsbouillon (hvis relevant) efterfulgt af udpladning og bekræftelse af isolater ved hjælp af passende
biokemiske og serologiske metoder.
BEMÆRK: Selv en negativ prøve vil ikke give en nulaflæsning, idet systemet og Neogen Molekylær Detektions Analyse
2 - Listeria monocytogenes amplifikationsreagenser har en "baggrundsmæssig" relativ lysenhed (RLU)-læsning.
I sjældne tilfælde af en usædvanlig lyseffekt vil algoritmemærkaterne kategorisere dette som Inspektion. Neogen anbefaler
brugeren at gentage analysen for alle inspektionsprøver. Hvis resultatet fortsat markeres til Inspektion, skal du fortsætte tilbekræftelsestest ved brug af din foretrukne metode eller som specificeret i lokale forskrifter.
Tabel 5: Resultatsymboler for prøver og aflæsning, der visers af Neogen Molekylær Detektions System-softwaren.
Brøndtype

Symbol for
brøndresultat

ResultatAflæsning

Prøve

Positiv

Prøven er formodet positiv for målpatogenet.

Prøve

Negativ

Prøven er negativ for målpatogenet.

PrøveHæmmetPrøvematricen var hæmmende for analysen. En ny test kan værenødvendig. Se afsnittet om fejlfinding og produktvejledningen til
analysesættet for at få flere oplysninger.

Prøve

Inspicer

Forekomst eller fravær af patogenet kunne ikke fastslås.
En ny test kan være nødvendig. Se afsnittet om fejlfinding og
produktvejledningen til analysesættet for at få flere oplysninger.

Prøve

Fejl

Der blev ikke registreret bioluminescens. En ny test kan værenødvendig. Se afsnittet om fejlfinding og produktvejledningen til
analysesættet for at få flere oplysninger.

10

DA

(Dansk)Bekræftelse af resultater ifølge NF VALIDATION-certificeret metode
Mulighed 1: Brug af ISO 11290(3)-standarden fra opformeringen med Demi Fraser Bouillon.
Mulighed 2: Ved isolering på PALCAM-agar eller på kromogen agar, som udgør en del af den NF VALIDATIONcertificerede metode til detektion af Listeria monocytogenes. Forekomsten af karakteristiske kolonier er tilstrækkelig til atbekræfte forekomst af Listeria monocytogenes.
Mulighed 3: Brug af nukleinsyreprober som beskrevet i EN ISO 7218(5)-standarden udført på isolerede kolonier fra selektiv
agar (se mulighed 1 eller 2).
Mulighed 4: Brug af en anden NF VALIDATION-certificeret metode med et andet princip end Neogen Molekylær
Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes. Den komplette protokol, der er beskrevet for denne anden validerede
metode, skal anvendes. Alle trin før bekræftelsen startes skal være fælles for begge metoder.
I tilfælde af uoverensstemmende resultater (formodede positive med den alternative metode, som ikke er bekræftet med
en af metoderne beskrevet ovenfor), skal laboratoriet anvende den nødvendige procedure for at sikre valideringen af det
opnåede resultat.
I tilfælde af uoverensstemmende resultater (formodede positive med Neogen Molekylær Detektions Analyse 2 Listeria monocytogenes, som ikke er bekræftet med en af metoderne beskrevet ovenfor), skal laboratoriet anvende den
nødvendige procedure for at sikre valideringen af de opnåede resultater.
Hvis du har spørgsmål til specifikke anvendelser eller procedurer, bedes du besøge vores websted på www.neogen.com
eller kontakte din lokale Neogen-repræsentant eller -distributør.
Bilag A. Protokolafbrydelse: Opbevaring og gentestning af varmebehandlede lysater.
1. Til opbevaring af varmebehandlet lysat påsættes en ren hætte på lysisreagensglasset (se afsnit 4.5 "Lysinbehandling").
2. Opbevar ved 4-8°C i op til 72 timer.
3. Forbered en opbevaret prøve til amplifikation ved at vende den på hovedet 2-3 gange for at blande.
4. Tag lågene af reagensglassene.
5. Placer de blandede lysatreagensglas på Neogen Molekylær Detektions Varmeblok Indlæg, og varm op til
100 ± 1°C i 5 ± 1 minutter.
6. Fjern holderen med Neogen Lysinbehandlingsreagensglas fra varmeblokken, og lad den køle i Neogen Molekylær
Detektions Køleblok Indlæg i mindst 5 minutter og i højst 10 minutter.
7. Fortsæt protokollen i afsnittet "Amplifikation" som angivet ovenfor.

Litteraturhenvisninger:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Beskrivelser af symboler til produktmærkning
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

NO(Norsk)Utgivelsesdato: 2024-01

Produktveiledning
Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes
Produktbeskrivelse og tiltenkt bruk

Neogen® Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes brukes sammen med Neogen® System formolekylær deteksjon for rask og spesifikk deteksjon av Listeria monocytogenes i oppformerte mat- og miljøprøver.
Neogen Molekylære deteksjonstester bruker sløyfe-mediert isotermisk amplifikasjon for hurtig amplifikasjon av
nukleinsyresekvenser med høy spesifisitet og sensitivitet, kombinert med bioluminescens for å registrere amplifikasjonen.
Antatte positive testresultater rapporteres i sanntid, mens negative resultater vises etter at testen er fullført. Antatte
positive resultater skal bekreftes ved hjelp av din foretrukne metode eller som spesifisert av lokale forskrifter(1, 2, 3).
Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes er ment for bruk i et laboratoriemiljø av fagpersoner medopplæring i laboratorieteknikker. Neogen har ikke godkjent dette produktet for bruk i andre industrier enn mat og drikke.
Neogen har for eksempel ikke godkjent dette produktet for testing av vann, farmasøytiske, kosmetiske og kliniske prøver
eller veterinærprøver. Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes er ikke evaluert med alle mulige
testprotokoller eller med alle mulige bakteriestammer.
Som for alle testmetoder kan kilden, formuleringen og kvaliteten til anrikningsmediet påvirke resultatene. Faktorer
som prøveinnsamlingsmetoder, testprotokoller, prøveforberedelse, håndtering og laboratorieteknikk kan også påvirke
resultatet. Neogen anbefaler å evaluere metoden, inkludert anrikningsmediet, i brukerens miljø ved bruk av et tilstrekkelig
antall prøver ved spesielle matutfordringer og mikrobielle utfordringer for å sikre at metoden oppfyller brukerens kriterier.
Neogen har evaluert Neogen molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes med Fraser 1/2 buljong som
inneholder jernammoniumsitrat, og Fraser buljong som inneholder jernammoniumsitrat etter behov. En typisk formel for
dette mediet følger nedenfor.
Typisk formel for Fraser 1/2 buljong base(g/L)

Typisk formel for Fraser buljong base(g/L)

Natriumklorid

20 gNatriumklorid

20 gNatriumfosfat, dibasisk, vannfritt*

9,6 g

Natriumfosfat, dibasisk, vannfritt*

9,6 g

Storfekjøttekstrakt

5,0 g

Storfekjøttekstrakt

5,0 g

Pankreatisk sammendrag av kasein

5,0 g

Pankreatisk sammendrag av kasein

5,0 g

Peptisk sammendrag av dyrevev

5,0 g

Peptisk sammendrag av dyrevev

5,0 gGjærekstrakt

5,0 gGjærekstrakt

5,0 g

Litiumklorid

3,0 g

Litiumklorid

3,0 g

Kaliumfosfat, monobasisk

1,35 gKaliumfosfat, monobasisk

1,35 gEskulin

1,0 g

Eskulin

1,0 g

Akriflavin HCl

0,0125 g

Akriflavin HCl

0,025 gNalidixinsyre

0,01 gNalidixinsyre

0,02 g* Erstatning: Natriumfosdat, dibasisk, dihydrat

12,0 gFraser buljong-supplement(Ingredienser per 10 mL flaske. En flaske tilsettes en liter basalt medium.)
Jernammoniumsitrat

0,5 g/10 mL

Endelig pH

7,2 ± 0,2 ved 25 °C

Neogen Instrument for molekylær deteksjon er ment for bruk med prøver som har gjennomgått varmebehandling itestens lyseringstrinn, som er konstruert for å ødelegge organismer som finnes i prøven. Prøver som ikke har blitt ordentlig
varmebehandlet under testlyseringstrinnet, kan vurderes som en potensiell biologisk fare og skal IKKE settes inn i
Neogen Instrument for molekylær deteksjon.
®

Neogen Food Safety er ISO (International Organization for Standardization) 9001-sertifisert for utforming og produksjon.
Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes inneholder 96 tester, beskrevet i tabell 1.

1

NO(Norsk)Tabell 1. Komponenter i Neogen Molekylær deteksjonskit
Artikkel

Beskrivelse

Innhold

Kommentarer

Neogen®
Lyseringsoppløsning (LS)Rosa oppløsning
96 (12 rekker med 8 rør)i gjennomsiktige rør

Mengde580 μL LS per rør

Plassert i stativ
og klar til bruk

Reagensrør for Neogen®
Molekylær deteksjonstest
2 for Listeria
monocytogenes

Gule rør

96 (12 rekker med 8 rør)

Lyofilisert spesifikk
amplifikasjon og
deteksjonsblanding

Klar til bruk

Ekstra lokk

Gule lokk

96 (12 rekker med
8 lokk hver)

Neogen® Reagenskontroll(RC)

Gjennomsiktige rør
med vippelokk

16 (2 poser med 8
individuelle rør hver)

Klar til brukLyofilisert kontrollDNA, amplifikasjon og
deteksjonsblanding

Klar til brukDen negative kontrollen, som ikke medfølger i kittet, er et sterilt anrikningsmedium, for eksempel Fraser 1/2 buljong.
Ikke bruk vann som negativ kontroll.

Sikkerhet

Brukeren må lese, forstå og følge all sikkerhetsinformasjon i instruksjonene for Neogen System for molekylær deteksjon
og Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes. Behold sikkerhetsveiledningen for fremtidig referanse.
ADVARSEL: Indikerer en farlig situasjon som, om den ikke unngås, kan resultere i død eller alvorlig personskade
og/eller materielle skader.
MERKNAD: Indikerer en potensielt farlig situasjon som, om den ikke unngås, kan føre til materielle skader.

W ADVARSEL
Ikke bruk Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes i diagnostisering av tilstander hos mennesker
eller dyr.
Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes-metoden kan generere Listeria monocytogenes
til nivåer som er tilstrekkelig til å forårsake dødfødsler og dødsfall hos gravide kvinner, og de som har dårlig
immunforsvar, hvis de eksponeres.
Brukeren må gi opplæring i korrekte testteknikker til sitt personell: for eksempel Good Laboratory Practices,
ISO/IEC 17025(4) eller ISO 7218(5).
For å redusere risikoene forbundet med et falskt negativt resultat som kan føre til utslipp av kontaminert produkt:• Følg protokollen og utfør testene akkurat slik de beskrives i produktveiledning.
• Oppbevar Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes slik som beskrevet på pakning og
i produktveiledning.
• Bruk alltid Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes før utløpsdatoen.
• Bruk Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes for mat- og miljøprøver som er godkjent internteller av en tredjepart.
• Bruk kun Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes til overflater, desinfeksjonsmidler, protokoller
og bakteriestammer som har blitt validert internt eller av en tredjepart.
• For en miljøprøve som inneholder nøytraliserende buffer med arylsulfonat-kompleks, skal du utføre en 1:2 fortynningfør testing (1 del prøve i 1 del steril anrikningsbuljong). Et annet alternativ er å overføre 10 μL av NB-anrikningen inn i
Neogen lyseringsoppløsningsrørene. Prøvetakingsprodukter fra Neogen® som inkluderer nøytraliserende buffer med
arylsulfonatkompleks: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G og HS2410NB2G.
For å redusere risikoene forbundet med eksponering for kjemikalier og biologiske farer:• Det anbefales sterkt at kvinnelig laboratoriepersonell blir informert om risikoen for et foster i utvikling som resultat av
infeksjon hos moren gjennom eksponering for Listeria monocytogenes.
• Utfør patogentesting i et laboratorium som er korrekt utstyrt, under oppsyn av fagopplært personell.
Inkubert anrikningsmedium og utstyr eller overflater som har vært i kontakt med inkubert anrikningsmedium,kan inneholde patogener på et nivå som kan innebære helserisiko for mennesker.
• Følg alltid standard praksis for laboratoriesikkerhet, inkludert bruk av egnet personlig verneutstyr og øyevern vedhåndtering av reagensrør og kontaminerte prøver.
• Unngå kontakt med innholdet i anrikningsmediet og reagensrør etter amplifikasjon.
• Kast anrikede prøver i henhold til gjeldende industristandarder.
• Prøver som ikke har blitt ordentlig varmebehandlet under testlyseringstrinnet, kan vurderes som en potensiell biologisk
fare og skal IKKE settes inn i Neogen Instrument for molekylær deteksjon.

2

NO(Norsk)For å redusere risikoene forbundet med krysskontaminering ved klargjøring av test:• Bruk alltid hansker (for å beskytte brukeren og forhindre innføring av nukleaser).
For å redusere risikoen forbundet med miljøforurensning:• Følg gjeldende industristandarder for avhending av kontaminert avfall.
For å redusere risiko forbundet med eksponering for varme væsker:• Ikke overstig den anbefalte temperaturinnstillingen på varmeblokken.
• Ikke overstig den anbefalte oppvarmingstiden.
• Bruk et passende, kalibrert termometer til å kontrollere temperaturen på Neogen® Varmeblokkinnsats for molekylær
deteksjon (f.eks. delvis nedsenket termometer eller digitalt termoelement-termometer, ikke et helt nedsenket
termometer). Termometeret må plasseres på det angitte stedet på Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon.

MERKNADFor å redusere risikoene forbundet med krysskontaminering ved klargjøring av test:• Skift hansker før hydrering av reagens-pellet.
• Det anbefales å bruke pipettespisser med sterile, spraybaserte barrierer (filtrerte), av molekylærbiologi-karakter.
• Bruk en ny pipettespiss for hver prøveoverføring.
• Bruk god laboratoriepraksis til å overføre prøven fra anrikningen til lyseringsrøret. For å unngå kontaminering av pipetterkan brukeren velge å legge til et mellomtrinn under overføring. Brukeren kan for eksempel overføre hver anriket prøve til
et sterilt rør.
• Dersom tilgjengelig, bør brukeren bruke en arbeidsstasjon for molekylær biologi som har en bakteriedrepende lampe.
Utfør periodisk dekontaminering av benker og utstyr (pipetter, verktøy for lukking/åpning, osv.) i laboratoriet med en
1-5 % (volumandel i vann) oppløsning av husholdningsblekemiddel eller oppløsning for fjerning av DNA.
For å redusere risikoene forbundet med falskt positivt resultat:• Åpne aldri reagensrørene etter amplifikasjon.
• Kast alltid de kontaminerte rørene ved å bløtlegge dem i en 1-5 % (volumandel i vann) oppløsning av eller tilsvarendei 1 time og borte fra testens forberedelsesområde.
• Autoklaver aldri rørene etter amplifikasjon.
Se HMS-databladet for ytterligere informasjon og lokale forskrifter for avhending.
Hvis du har spørsmål om spesifikke bruksområder eller prosedyrer, kan du besøke vårt nettsted på www.neogen.com eller
ta kontakt med en lokal Neogen-representant eller -forhandler.

Brukeransvar

Brukere er ansvarlige for å sette seg inn i produktveiledningen og informasjon om produktet. Besøk nettsiden vår,www.neogen.com, eller kontakt din lokale Neogen-representant eller -distributør for mer informasjon.
Ved valg av testmetode er det viktig å ta hensyn til at eksterne faktorer som metoder for stikkprøver, testprotokoller,
preparering av prøver, håndtering og laboratorieteknikk kan påvirke resultatene.
Ved valg av testmetode er det brukerens ansvar å vurdere et tilstrekkelig antall prøver med passende matriks og mikrobielle
utfordringer for å tilfredsstille brukeren om at den valgte prøvemetoden oppfyller brukerens kriterier.
Det er også brukerens ansvar å fastslå at alle prøvemetoder og resultater tilfredsstiller kundens og leverandørens krav.
Som med alle testmetoder utgjør ikke resultatene som oppnås ved bruk av noe Neogen Food Safety-produkt, noen garanti
om kvaliteten av matriksene eller prosessene som testes.
For å hjelpe kunder med å evaluere metoden for forskjellige matmatriks, har Neogen utviklet Neogen® Matrisekontrollsett
for molekylær deteksjon. Bruk matrikskontroll (MC) ved behov for å avgjøre om matrikset har evne til å påvirke resultatene
for Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes. Test flere prøver som representerer matrikset, dvs.
prøver innhentet fra forskjellige opphav, i løpet av en hvilken som helst valideringsperiode når Neogen-metoden brukes,
ved testing av nye eller ukjente matriks, eller matriks som har gjennomgått endringer i råvaremateriale eller prosess.
Et matriks kan defineres som en produkttype med indre egenskaper, slik som sammensetning og prosess.
Forskjeller mellom matriks kan være så enkle som effekter som skyldes forskjeller i prosessering eller presentasjon,for eksempel rå i forhold til pasteurisert, fersk i forhold til tørket osv.

Begrensing av garantier / begrensede rettigheter

MED MINDRE DET ER UTTRYKKELIG SKREVET I EN BEGRENSET GARANTI PÅ EN PRODUKTPAKNING, FRASKRIVER
NEOGEN SEG ALLE DIREKTE OG INDIREKTE GARANTIER, INKLUDERT MEN IKKE BEGRENSET TIL, ENHVER GARANTIOM SALGBARHET ELLER ANVENDELSE TIL ET BESTEMT FORMÅL. Hvis noe Neogen Food Safety-produkt er defekt, vil
Neogen eller dets autoriserte distributør erstatte eller refundere produktets kjøpesum etter eget skjønn. Dette er dineubetingede rettigheter. Kontakt Neogen-representanten din eller den autoriserte Neogen-distributøren hvis du har flere
spørsmål.

3

NO(Norsk)Begrensning av Neogens ansvar

NEOGEN VIL IKKE VÆRE ANSVARLIG FOR NOE TAP ELLER SKADE, DIREKTE ELLER INDIREKTE, SPESIELL, TILFELDIG
ELLER FØLGESKADE, INKLUDERT, MEN IKKE BEGRENSET TIL, TAPT FORTJENESTE. Ikke under noen omstendighet skal
Neogens ansvar, under noen juridisk teori, overstige kjøpesummen for et produkt som antas å være defekt.

Oppbevaring og avhending

Oppbevar Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes ved 2-8 °C. Må ikke fryses. Hold kitet borte
fra lys under oppbevaring. Etter at kitet er åpnet, skal folieposen undersøkes for skader. Må ikke brukes dersom posener skadet. Etter åpning skal ubrukte reagensrør alltid oppbevares i den gjenlukkbare posen med tørkemiddelet inni, for å
opprettholde stabiliteten til de lyofiliserte reagensene. Ikke oppbevar reforseglede poser ved 2-8 °C i mer enn 60 dager.
Ikke bruk Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes etter utløpsdatoen. Utløpsdato og partinummer
er angitt på etiketten på utsiden av esken. Etter bruk kan rørene med anrikningsmediet og Neogen Molekylær
deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes inneholde potensielt patogent materiale. Når testingen er fullført, følger
brukeren gjeldende industristandarder for avhending av kontaminert avfall. Se HMS-databladet for ytterligere informasjonog lokale forskrifter for avhending.

Bruksanvisning

Følg alle instruksjonene nøye. Dersom dette ikke blir gjort, kan det føre til unøyaktige resultater.
Utfør periodisk dekontaminering av benker og utstyr (pipetter, verktøy for lukking/åpning, osv.) i laboratoriet med en
1-5 % (volumandel i vann) oppløsning av husholdningsblekemiddel eller oppløsning for fjerning av DNA.
Brukeren må fullføre opplæringen for operatører av Neogen System for molekylær deteksjon (OQ), som beskrevet
i dokumentet «Installasjonskvalifikasjon (IQ) / Driftskvalifikasjon (OQ) Protokoller og instruksjoner for Neogen System formolekylær deteksjon»(6).
Se avsnittet «Spesifikke veiledninger for validerte metoder» for spesifikke krav:
Tabell 3 over anrikningsprotokoller i henhold til AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 og AOAC® Performance
Tested MethodSM sertifikat #081501.
Tabell 4 for anrikningsprotokoller i henhold til NF Validation-sertifikat 3M 01/15-09/16.

Prøveanrikning

Tabell 2, 3 eller 4 viser veiledning for anrikning for mat- og miljøprøver. Det er brukerens ansvar å validere alternative
prøveprotokoller eller fortynningsforhold for å sikre at testmetoden møter brukerens krav.

Mat

1. La anrikningsmediet Fraser 1/2 buljong (inneholder jernammoniumsitrat) stabiliseres til laboratoriets romtemperatur.
2. Kombiner anrikningsmediet og prøven aseptisk i henhold til tabell 2, 3 eller 4. For alt kjøtt og svært oppdelte prøver
anbefales det å bruke filterposer.
3. Homogeniser grundig ved å blande, knuse eller blande for hånd i 2 ± 0,2 minutter. Inkuber ved 37 ± 1 °C i henhold tiltabell 2, 3 eller 4.
4. For rå meieriprodukter (se tabell 2, 3 eller 4), overføres 0,1 mL av den primære anrikningen inn i 10 mL av Fraser
buljong. Inkuber ved 37 ± 1 °C i 20-24 timer.

Miljøprøver

Prøvetakingsutstyr kan være en svamp fuktet med en nøytraliserende løsning for å motvirke effektene av
desinfeksjonsmidlene. Neogen anbefaler å bruke en giftfri cellulosesvamp. Nøytraliseringsløsningen kan være Dey-Engley(D/E) nøytraliserende buljong eller letheen-buljong. Det anbefales å desinfisere området etter prøvetakingen.
ADVARSEL: Hvis man velger å bruke nøytraliserende buffer (NB) som inneholder arylsulfonatkompleks, må man blande
ut den berikete miljøprøven i forholdet 1:2 (1 part prøve til 1 del steril anrikningsbuljong) før testing, for å kunne redusere
risikoer forbundet med falskt negativt resultat som fører til at det kontaminerte produktet slippes ut. Et annet alternativ erå overføre 10 μL av den nøytraliserende buffer-anrikningen inn i Neogen lyseringsoppløsningsrørene.
Den anbefalte størrelsen på prøvetakingsområdet for å kontrollere nærværet eller fraværet av patogenet på overflaten,
er minst 100 cm2 (10 cm x 10 cm or 4” x 4”). Ved prøvetaking med en svamp må hele området dekkes, ved bevegelse i toretninger (fra venstre mot høyre og deretter ovenfra og ned) eller ved innsamling av miljøprøver i samsvar med gjeldende
prøvetakingsprotokoll eller i henhold til retningslinjene fra FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) eller ISO 18593(7).
1. La anrikningsmediet Fraser 1/2 buljong (inneholder jernammoniumsitrat) stabiliseres til laboratoriets romtemperatur.
2. Kombiner anrikningsmediet og prøven aseptisk i henhold til tabell 2, 3 eller 4.
3. Homogeniser grundig ved å blande, knuse eller blande for hånd i 2 ± 0,2 minutter. Inkuber ved 37 ± 1 °C i 24-30 timer
i henhold til tabell 2, 3 eller 4.

4

NO(Norsk)Tabell 2: Generelle anrikningsprotokoller ved 37 ± 1 °C ved bruk av Fraser 1/2 buljong og Fraser buljong etter behov.
Prøvematriks

Prøvestørrelse

AnrikningsAnrikningstid
buljong volum(timer)(mL)

Varmebehandlet,
tilberedt, røkt kjøtt,fjærfe, skalldyrog fisk
Varmebehandlede/ pasteurisertemeieriprodukter

25 g

225

24-30

1 svamp

100 eller 225

24-30

1 svaber

10

24-30

25 g

475

28-32

Jordbruksprodukterog grønnsaker
Matvarer med
flere komponenter
Miljøprøver(a)Rått kjøtt, fjærfe,skalldyr, fiskPrimær anrikning (Fraser 1/2 buljong)(a)Prøvematriks

Rå meieriprodukter

Prøvestørrelse

25 gAnrikningsAnrikningstid
buljong volum(timer)
(mL)
225

20-24

Sekundær anrikning(Fraser buljong)(a)Prøvestørrelse

Anrikningstemperatur (°C)

Anrikningstid (timer)

Overfør
0,1 mLi 10 mL
Fraserbuljong

37 ± 120-24

Prøveanalysevolum(b)10 μL(a) Fraser 1/2 buljong og Fraser buljong må alltid suppleres med Fraser- buljongsupplement (jernammoniumsitrat) underprimær eller sekundær anrikning.
(b) Volum av prøve overført til Neogen lyseringsoppløsningsrørene. Se trinn 4.6 i lyseringsdel.

Spesifikke veiledninger for validerte metoder
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

I AOAC Research Institute OMASM- og PTMSM-programmene ble Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria
monocytogenes funnet å være en effektiv metode for å påvise Listeria monocytogenes. Matriksene som ble testet i studien,
er vist i tabell 3.

5NO(Norsk)Tabell 3. Anrikningsprotokoller som brukte Fraser 1/2 buljong(a) ved 37 ± 1 °C i henhold til AOAC OMASM 2016.08 og
PTMSM-sertifikatet #081501.
Prøvematriks

Prøvestørrelse

Anrikningsbuljong
volum (mL)

Anrikningstid(timer)Grillpølse av storfekjøtt, queso fresco,
vaniljeiskrem, 4 % cottage cheese med
melkefett, 3 % sjokolademelk av helmelk,romanosalat, rå spinat i pose, kaldrøkt laks

25 g

225

24-30

Rå kylling

25 g

475

28-32

Delikatessekalkun

125 g

1125

24-30

Hel melon

Nok volum til at
melonen flyter

26-30

Rustfritt stål1 svamp

225

24-30

Forseglet betong

1 svamp

100

24-30

Plast(c)1 svaber

10

24-30

Miljøprøver:Kantalupp(b)Alle prøvene til AOAC-validering ble homogenisert ved knusing hvis ikke annet er oppgitt.
(a)		Fraser 1/2 buljong og Fraser buljong må alltid suppleres med Fraser- buljongsupplement (jernammoniumsitrat) underprimær eller sekundær anrikning.
(b) Homogeniser prøven ved blanding for hånd.
(c)		 Homogeniser prøven ved virvelbevegelse.

NF VALIDATION av AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
For mer informasjon om utløp av validitet, henvises det til NF VALIDATION-sertifikat tilgjengelig på nettstedet nevnt over.
NF VALIDATION sertifisert metode i samsvar med ISO 16140-2(6) sammenlignet med ISO 11290(3)Omfang av godkjenningen: Alle prøver av human mat og alle miljøprøver (unntatt prøver fra primær produksjon)
Prøvepreparering: Prøver skal klargjøres i henhold til EN ISO 11290-1(3) og EN ISO 6887(8)Programvareversjon: Se sertifikat
Tabell 4: Anrikningsprotokoller i henhold til NF VALIDATION sertifisert metode 3M 01/15-09/16 ved 37 ± 1 °C ved bruk
av Fraser 1/2 buljong og Fraser buljong ved behov.
Generell
protokoll

Prøvestørrelse

Alle prøver av
human mat(unntatt rått kjøtt,rå skalldyr og råmeieriprodukter

25 gMiljøprøver

AnrikningsAnrikningstem- Anriknings- Prøveanalybuljong
peratur (±1 °C)
tid (timer)
sevolum(a)volum (mL)Akseptert
avbrytelsespunkt• Fraser 1/2 buljong inntil
72 timer

225

37

24-30

20 µL

• Lysat ved -20 °C• Lysat ved 4 °C inntil
72 timer

25 g,
1 svaber,eller 1 klut

6

NO

(Norsk)Primær anrikning (Fraser 1/2 buljong)(b)
Sekundær anrikning (Fraser buljong)(b)
AnAnAnAnAnSpesifikk
PrøveVolum
Prøverikningsrikningstemrikningsrikningstemrikningsprotokoll
størrelprøvestørrelse
buljongperaturtidperaturtid
seanalyse(c)volum (mL)(±1 °C)(timer)(±1 °C)(timer)Rått kjøtt,rå skalldyr og råmeieriprodukter

25 g

225

37

Overfør
0,1 mLi 10 mL
Fraserbuljong

20-24

Akseptert
avbrytelsespunkt• Fraserbuljong
inntil72 timer

37

20-24

10 µL

• Lysat ved-20 °C• Lysatved 4 °C
inntil72 timer(a) Volum av prøve overført til Neogen lyseringsoppløsningsrørene. Se trinn 4.6 i lyseringsdel.
(b) Fraser 1/2 og Fraser buljong må alltid suppleres med Fraser buljongsupplement (jernammoniumsitrat) under primær
eller sekundær anrikning.
(c) Volum av prøve overført til Neogen lyseringsoppløsningsrørene. Se trinn 4.6 i lyseringsdel.
MERK: Prøver som er større enn 25 g er ikke blitt testet i NF validation-studien.

Klargjøring av Neogen® Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon
1. Væt en klut med 1-5 % (volumandel i vann) husholdningsblekemiddel eller tilsvarende oppløsning, og tørk av
Neogen® Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon.
2. Skyll Neogen Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon med vann.
3. Bruk en engangsklut til å tørke Neogen Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon.
4. Sørg for at Neogen Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon er tørt før bruk.
Klargjøring av Neogen® Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon
Plasser Neogen® Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon rett på laboratoriebenken; bruk kjøleblokken ved laboratorietsromtemperatur (20-25 °C).
Klargjøring av Neogen® Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon
Plasser Neogen® Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon i en tørr, dobbelblokkvarmeenhet. Slå på den tørre
blokkvarmeenheten og still inn temperaturen slik at Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon når og
opprettholder en temperatur på 100 ± 1 °C.
MERK: Avhengig av varmeenheten, skal Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon bruke omtrent
30 minutter på å nå temperaturen. Bruk et passende, kalibrert termometer (f.eks. et delvis nedsenket termometereller et digitalt termoelement-termometer, ikke et helt nedsenket termometer) plassert på angitt sted og kontroller at
Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon er ved 100 ± 1 °C.
Klargjøring av Neogen® Instrument for molekylær deteksjon
1. Start programvaren for Neogen® System for molekylær deteksjon og logg inn. Kontakt Neogen Food Safetyrepresentanten for å få bekreftet at du har den nyeste versjonen av programvaren.
2. Slå på Neogen Instrument for molekylær deteksjon.
3. Opprett eller endre en gjennomkjøring med data for hver prøve. Se brukermanualen for Neogen System for molekylær
deteksjon for mer informasjon.
MERK: Neogen Instrument for molekylær deteksjon må nå klar tilstand før innsetting av Neogen Hurtiglastebrett formolekylær deteksjon med reagensrør. Dette varmetrinnet tar omtrent 20 minutter og indikeres av et ORANSJE lys på
instrumentets statuslinje. Når instrumentet er klart for å starte en gjennomkjøring, vil statuslinjen lyse GRØNT.
Lysering
Fjern bunnen av stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør med en skrutrekker eller spatel før du plasserer den i
Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon.

7

NO(Norsk)1. La lyseringsoppløsningsrørene (Neogen lyseringsoppløsning) varmes opp ved å sette stativet i romtemperatur(20-25 °C) over natten (16-18 timer). Alternativer til å stabilisere Neogen lyseringsoppløsningsrørene tilromtemperatur er å sette Neogen lyseringsoppløsningsrørene på laboratoriebenken i minst 2 timer, inkubere Neogen
lyseringsoppløsningsrørene i en inkubator ved 37 ± 1 °C i 1 time, eller plassere dem i en tørr dobbelblokkvarmeenhet i
30 sekunder ved 100 °C.
2. Vend rørene med hetten på for å blande. Fortsett til neste trinn innen 4 timer.
3. Fjern anrikningsbuljongen fra inkubatoren.
4. Ett Neogen lyseringsoppløsningsrør kreves for hver prøve og Negativ kontroll (NC)-prøve (sterilt anrikningsmedium).
4.1 Rekker med Neogen lyseringsoppløsningsrør kan klippes til ønsket antall Neogen lyseringsoppløsningsrør.
Velg nødvendig antall enkeltstående Neogen lyseringsoppløsningsrør eller rekker med 8 rør. Plasser Neogen
lyseringsoppløsningsrørene i et tomt stativ.
4.2 For å unngå krysskontaminering skal kun én rekke med Neogen lyseringsoppløsningsrør åpnes om gangen og en ny
pipettespiss brukes for hvert overføringstrinn.
4.3 Overfør anrikede prøver til Neogen lyseringsoppløsningsrørene som beskrevet under:
Overfør hver anriket prøve til enkeltstående Neogen lyseringsoppløsningsrør først. Overfør NC-prøven til sist.
4.4 Bruk Neogen® Verktøy for lukking/åpning av lyseringsrør for molekylær deteksjon for å åpne én rekke med
Neogen lyseringsoppløsningsrør – én rekke om gangen.
4.5 Kast lokket på Neogen lyseringsoppløsningsrøret - dersom lysatet skal oppbevares for ny test, plasseres lokkene i
en ren beholder for å sette dem på igjen etter lysering.
4.5.1 Se vedlegg A for prosessering av tilbakeholdt lysat.
4.6 Overfør 20 µL av prøven inn i et Neogen lyseringsoppløsningsrør hvis ikke annet er oppgitt i protokollene fra tabell
2, 3 eller 4 (bruk f.eks. 10 µL for rå meieriprodukter eller ved bruk av miljøprøver med nøytraliserende buffer).
20 µl

5. Gjenta trinn 4.4 til 4.6 til alle individuelle prøver er lagt til et korresponderende Neogen lyseringsoppløsningsrør i rekken.
6. Når alle prøvene er overført, overføres 20 µL av NC (sterilt anrikningsmedium, f.eks. Fraser 1/2 buljong) i et
Neogen lyseringsoppløsningsrør. Ikke bruk vann som NC.
7. Verifiser at Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon har en temperatur på 100 ± 1 °C.
8. Plasser det utildekkede stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør i Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær
deteksjon og varm opp i 15 ± 1 minutter. Under oppvarmingen vil Neogen lyseringsoppløsningen endre farge fra rosa
(kald) til gul (varm).
8.1 Prøver som ikke har blitt tilstrekkelig varmebehandlet under testlyseringstrinnet, kan vurderes som en potensiell
biologisk fare og skal IKKE settes inn i Neogen Instrument for molekylær deteksjon.
9. Fjern det utildekkede stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør fra varmeblokken og la det avkjøles i
Neogen Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon i minst 5 minutter og maksimum 10 minutter. Når Neogen
Molekylær kjøleblokkinnsats brukes ved romtemperatur, skal det plasseres direkte på laboratoriebenken. Når den er
avkjølt, vil lyseringsoppløsningen endre farge tilbake til rosa.
10.Fjern stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør fra Neogen Kjøleblokkinnsats for molekylær deteksjon.
8

NO(Norsk)00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplifikasjon
1. Det kreves ett reagensrør for Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes for hver prøve og for NC.
1.1 Rekker med rør kan klippes til ønsket antall rør. Velg det nødvendige antallet enkeltstående reagensrør eller rekker
med 8 rør for Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes.
1.2 Plasser reagensrørene for Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes i et tomt stativ.
1.3 Unngå å forstyrre reagenspelletene i bunnen av rørene.
2. Velg 1 Neogen Reagenskontroll-rør og plasser det i stativet.
3. For å unngå krysskontaminering, ta av lokket på én rørrekke for Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria
monocytogenes om gangen, og bruk ny pipette ved hver prøveoverføring.
4. Overfør lysat til reagensrør og Neogen reagenskontroll-rør for Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria
monocytogenes som beskrevet nedenfor:
Overfør hvert prøvelysat til individuelle Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes-reagensrør først etterfulgt av NC. Hydrer Neogen Reagenskontroll-røret til sist.
5. Bruk Neogen® Verktøy for lukking/åpning av reagensrør for molekylær deteksjon for å åpne én rekke med reagensrør for
Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes - én rørrekke om gangen. Kast lokket.
5.1 Overfør 20 µL av prøvelysatet fra den øverste halvdelen av væsken (unngå presipitat) i Neogen lyseringsoppløsningsrøret inn i det korresponderende reagensrøret for Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria
monocytogenes. Hold i vinkel under overføring for å unngå å forstyrre pelletene. Bland ved å bevege pipetten
forsiktig opp og ned 5 ganger.
5.2 Gjenta trinn 5.1 til individuelt prøvelysat har blitt lagt til i et korresponderende reagensrør for Neogen Molekylær
deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes i rekken.
5.3 Dekk til reagensrørene for Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes med de medfølgende
ekstra lokkene, og bruk den avrundede siden av Neogen Verktøy for lukking/åpning av reagensrør for molekylær
deteksjon til å presse i en fram-og-tilbake-bevegelse slik at lokket festes godt.
5.4 Gjenta trinn 5.1 til 5.3 som nødvendig, for antall prøver som skal testes.
5.5 Når alt prøvelysatet er overført, gjentas trinn 5.1 for å overføre 20 µL med NC-lysat inn i et reagensrør for
Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes.
5.6 Overfør 20 µL NC-lysat inn i et Neogen Reagenskontroll-rør. Hold i vinkel under overføring for å unngå å forstyrrepelletene. Bland ved å bevege pipetten forsiktig opp og ned 5 ganger.
6. Sett lukkede rør over i et rent og dekontaminert Neogen Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon. Lukk og lås lokket til
Neogen Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon.

20 µL

7. Se igjennom og bekreft den konfigurerte gjennomkjøringen i programvaren for Neogen System for molekylær deteksjon.
8. Klikk på startknappen i programvaren og velg instrumentet som skal brukes. Det valgte instrumentets lokkåpnes automatisk.

9

NO(Norsk)9. Plasser Neogen Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon inn i Neogen Instrument for molekylær deteksjon og lukk
lokket for å starte testen. Resultatene er klare innen 75 minutter, mens positive resultat kan bli oppdaget raskere.
10. Etter at testen er fullført, fjern Neogen Hurtiglastebrett for molekylær deteksjon fra Neogen Instrument for molekylær
deteksjon og kvitt deg med rørene ved å senke dem i en 1-5 % (volumandel i vann) husholdningsblekemiddel eller
tilsvarende oppløsning i 1 time og borte fra testens forberedelsesområde.
MERKNAD: For å minimere risikoen for falske positive resultater på grunn av krysskontaminering skal aldri reagensrør
som inneholder amplifisert DNA, åpnes. Dette inkluderer Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes
reagensrør, Neogen Reagenskontroll-rør og matrikskontrollrør. Kast alltid de forseglede reagensrørene ved å bløtlegge
dem i en 1-5 % (volumandel i vann) oppløsning av husholdningsblekemiddel eller tilsvarende oppløsning i 1 time og borte
fra testens forberedelsesområde.

Resultater og tolkning

En algoritme tolker lyseffektskurven som er resultatet av deteksjonen av nukleinsyre-amplifikasjon. Resultatene analyseres
automatisk av programvaren og er fargekodet basert på resultatet. Et positivt eller negativt resultat fastslås av analysen
av flere unike kurveparametere. Antatt positive resultater rapporteres i sann tid, mens negative og «Inspect» (inspiser)resultater vil vises etter at gjennomkjøringen er fullført.
Antatte positive prøver må bekreftes i henhold til laboratoriets standard operasjonsprosedyrer eller ved å følge den
aktuelle referansemetoden for bekreftelse(1, 2, 3), som begynner med overføring fra den primære anriknings- til sekundær
anrikningsbuljong (hvis relevant), etterfulgt av påfølgende inokulering og bekreftelse av isolater ved hjelp av egnede
biokjemiske og serologiske metoder.
MERK: Ikke engang en negativ prøve vil gi et null-resultat ettersom systemet og amplifikasjonsreagensene til
Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes har en «bakgrunns»-, relativ lysenhet (RLU).
I et sjeldent tilfelle av eventuelle uvanlige lyseffekter, merker algoritmen dette som «Inspect». Neogen anbefaler brukerenå gjenta testen for alle «Inspect»-prøver. Dersom resultatet fortsatt er «Inspect», fortsett til bekreftelsestesten og bruk din
foretrukne metode eller som oppgitt av lokale forskrifter.
Tabell 5: Resultatsymboler for prøver og tolkning som angitt av programvaren for Neogen System for molekylær deteksjon.
Brønntypee

Symbol for
brønnresultat

ResultatTolkning

Prøve

Positiv

Prøven er antatt positiv for målpatogenet.

Prøve

Negativ

Prøven er antatt negativ for målpatogenet.

Prøve

HemmetPrøvematriksen var hemmet til testen. Det kan bli nødvendig med enny test. Se feilsøkingsdelen og produktveiledningen for analysesettet
for mer informasjon.

Prøve

InspiserNærvær eller fravær av målpatogenet var ubestemmelig.
Det kan bli nødvendig med en ny test. Se feilsøkingsdelen og
produktveiledningen for analysesettet for mer informasjon.

Prøve

Feil

Ingen bioluminescens ble detektert. Det kan bli nødvendig med enny test. Se feilsøkingsdelen og produktveiledningen for analysesettet
for mer informasjon.

Bekreftelse av resultatene i henhold til sertifiseringsmetoden NF VALIDATION
Alternativ 1: Bruke ISO 11290(3)-standarden som starter fra Fraser 1/2 anrikningen.
Alternativ 2: Ved isolasjon på PALCAM agar eller på kromogent agar, som inngår i en NF VALIDATION-sertifisert metodefor deteksjon av Listeria monocytogenes. Nærværet av karakteristiske kolonier er tilstrekkelig til å bekrefte nærværet av
Listeria monocytogenes.
Alternativ 3: Bruk av nukleinsyre-prober som beskrevet i EN ISO 7218(5)-standarden, utført på isolerte kolonier fra selektivt
agar (se alternativ 1 eller 2).
Alternativ 4: Ved bruk av enhver annen sertifisert metode NF VALIDATION må det være et annet prinsipp enn
Neogen Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes. Hele protokollen som er beskrevet for denne andre
validerte metoden må brukes. Alle trinnene før start av bekreftelse må være felles for begge metodene.
I tilfelle forskjellige resultater (antatt positiv med den alternative metoden, ikke bekreftet av én av metodene beskrevet
ovenfor) må laboratoriet følge de nødvendige trinnene for å sikre validitet til resultatene som er oppnådd.
I tilfelle forskjellige resultater (antatt positiv med Neogen molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes, ikke
bekreftet av én av metodene beskrevet ovenfor) må laboratoriet følge de nødvendige trinnene for å sikre validitet til
resultatene som er oppnådd.
10

NO(Norsk)Hvis du har spørsmål om spesifikke bruksområder eller prosedyrer, kan du besøke vårt nettsted på www.neogen.com eller
ta kontakt med en lokal Neogen-representant eller -forhandler.
Vedlegg A. Avbrytelse av protokoll: Oppbevaring og ny testing av varmebehandlede lysater.
1. For å oppbevare et varmebehandlet lysat, sett lokket på lyseringsrøret igjen, bruk et rent lokk (se “Lysering”, 4.5).
2. Oppbevar ved 4 til 8 °C i opptil 72 timer.
3. Bland en oppbevart prøve ved å vende den 2-3 ganger for å forberede den på amplifikasjon.
4. Åpne rørene.
5. Plasser de blandede lysatrørene på Neogen Varmeblokkinnsats for molekylær deteksjon og varm ved 100 ± 1 °C
i 5 ± 1 minutter.
6. Fjern stativet med Neogen lyseringsoppløsningsrør fra varmeblokken og la det avkjøles i Neogen Kjøleblokkinnsats formolekylær deteksjon i minst 5 minutter og maksimum 10 minutter.
7. Se delen ‘Amplifikasjon’ beskrevet ovenfor for å fortsette protokollen.

Referanser:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Forklaring på produktetikettsymboler
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

FI(Suomenkielinen)
Julkaisuajankohta: 2024-01

Molekyläärinen testisetti 2 - Listeria monocytogenes

Tuoteseloste

Tuotteen kuvaus ja käyttötarkoitus

Neogen® Molekyläärinen testisetti 2 - Listeria monocytogenes on tarkoitettu käytettäväksi yhdessä Neogen®
Molekyläärisen testijärjestelmän kanssa Listeria monocytogenesin nopeaan ja täsmälliseen tunnistamiseen rikastetuista
elintarvike- ja rehunäytteistä. Neogen Molekylääriset testisetit perustuvat nukleiinihapposekvenssien nopeaan,
täsmälliseen ja herkkään silmukkavälitteiseen isotermiseen monistamismenetelmään ja käyttävät monistuksen
havaitsemiseen bioluminesenssia. Oletetut positiiviset tulokset ilmoitetaan reaaliaikaisesti, kun taas negatiiviset tulokset
näytetään testin valmistumisen jälkeen. Oletetut positiiviset tulokset on vahvistettava käyttämällä itse parhaaksi katsottua
tai paikallisten määräysten mukaista menetelmää(1, 2, 3).
Neogen Molekyläärinen testisetti 2 - Listeria monocytogenes on tarkoitettu laboratoriotekniikoihin koulutettujen
ammattilaisten käytettäväksi laboratorioympäristössä. Neogen ei ole osoittanut tuotetta käytettäväksi muillakuin elintarvike- ja juomateollisuuden aloilla. Neogen ei esimerkiksi ole osoittanut tuotetta vesi-, lääke- tai
kosmetiikkanäytteiden testaamiseen eikä kliinisten tai eläinlääketieteellisten näytteiden testaamiseen. Neogen
Molekylääristä testisettiä 2 - Listeria monocytogenes ei ole arvioitu kaikkien mahdollisten testauskäytäntöjen eikä kaikkien
mahdollisten bakteerikantojen suhteen.
Kuten kaikkien testausmenetelmien tapauksessa, rikastusalustan lähde, koostumus ja laatu voivat vaikuttaa tuloksiin.
Esimerkiksi näytteenottomenetelmät, testausprotokollat, näytteiden valmistus, käsittely ja laboratoriotekniikka saattavat
myös vaikuttaa tuloksiin. Neogen suosittelee menetelmän sekä rikastusalustan arviointia käyttäjän ympäristössä käyttäen
riittävän suurta näytemäärää ja tiettyjä elintarvikenäytteitä ja mikrobisisältöjä sen varmistamiseksi, että menetelmät
vastaavat käyttäjän vaatimuksia.
Neogen on arvioinut Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes käyttäen ferriammoniumsitraattia
sisältävää Demi Fraser -lientä ja ferriammoniumsitraattia sisältävää Fraser-lientä tarpeen mukaan. Tämän alustan tyypillinen
koostumus on kuvattu seuraavassa.
Demi Fraser Elatusainejauheen tyypillinen
kaava

(g/l)

Fraser Elatusainejauheen tyypillinen kaava(g/l)

Natriumkloridi

20 gNatriumkloridi

20 g

Dinatriumfosfaatti, vedetön*

9,6 g

Dinatriumfosfaatti, vedetön*

9,6 g

Naudanlihauute

5,0 g

Naudanlihauute

5,0 g

Kaseiinin pankreaattinen digesti

5,0 g

Kaseiinin pankreaattinen digesti

5,0 g

Eläinkudoksen peptinen digesti

5,0 g

Eläinkudoksen peptinen digesti

5,0 g

Hiivauute

5,0 g

Hiivauute

5,0 g

Litiumkloridi

3,0 g

Litiumkloridi

3,0 g

Monokaliumfosfaatti

1,35 gMonokaliumfosfaatti

1,35 gEskuliini

1,0 g

Eskuliini

1,0 g

Akriflaviinihydrokloridi

0,0125 g

Akriflaviinihydrokloridi

0,025 gNalidiksiinihappo

0,01 gNalidiksiinihappo

0,02 g* Korvike: Dinatriumfosfaattidihydraatti

12,0 gFraser-liemen rikastussuplementti(Valmistusaineet 10 ml:n ampulliin. Yksi ampulli lisätään litraan peruselatusainetta.)
Ferriammoniumsitraatti

0,5 g / 10 ml

Lopullinen pH

7,2 ± 0,2 lämpötilassa 25 °C

Neogen Molekyläärinen testi-instrumentti on tarkoitettu käytettäväksi sellaisten näytteiden kanssa, jotka on
lämpökäsitelty testin lyysivaiheen aikana näytteessä olevien organismien tuhoamiseksi. Jos näytteitä ei ole asianmukaisesti
lämpökäsitelty testin lyysivaiheen aikana, ne saattavat muodostaa biologisen vaaratekijän, jolloin niitä EI saa asettaa
Neogen Molekylääriseen testi-instrumenttiin.
®

Neogen Food Safety -osaston suunnittelu- ja valmistusmenetelmät on ISO (International Organization for Standardization)
9001 -sertifioitu.
Neogen Molekyläärinen testisetti 2 - Listeria monocytogenes sisältää 96 testiä, jotka on kuvattu taulukossa 1.
1

FI(Suomenkielinen)

Taulukko 1. Neogen Molekyläärisen testisetin osat
NimikeTunnusmerkki

Määrä

SisältöKommentit

Neogen® Lyysiliuos (LS)

Vaaleanpunainen
liuos läpinäkyvissä
putkissa

96 (12 kpl 8 putken
liuskoja)

580 μl lyysiliuosta/putki

Telineessä jakäyttövalmis

Neogen® Molekyläärisen
testisetin 2 Listeria monocytogenes-reagenssiputket

Keltaiset putket

96 (12 kpl 8 putken
liuskoja)

Lyofilisoitu spesifi
monistus- ja
tunnistusyhdistelmä

Käyttövalmis

Lisäsuojukset

Keltaiset suojukset

96 (12 kpl 8 suojuksenliuskoja)

Neogen® Reagenssin
valvonta (RC)

Läpinäkyvät
flip-top-putket

16 (2 pussia,
joissa kummassakin
8 yksittäistä putkea)

Käyttövalmis
Lyofilisoitu kontrolliDNA, monistus- ja
tunnistusyhdistelmä

Käyttövalmis

Negatiivinen kontrolli, jota ei toimiteta paketin mukana, on steriili rikastusalusta, esim. Demi Fraser -liemi. Älä käytä vettä
negatiivisena kontrollina.

Turvallisuus

Käyttäjän on luettava ja ymmärrettävä kaikki Neogen Molekylääristä testijärjestelmää ja Neogen Molekylääristä testisettiä
2 - Listeria monocytogenes koskevat turvallisuusohjeet ja noudatettava niitä. Säilytä turvallisuusohjeet myöhempää
käyttöä varten.
VAROITUS: Osoittaa vaarallisen tilanteen, joka saattaa johtaa kuolemaan tai vakavaan loukkaantumiseen ja/tai
omaisuusvahinkoon, jos tilannetta ei vältetä.
HUOMAUTUS: Osoittaa mahdollisesti vaarallisen tilanteen, joka saattaa johtaa aineelliseen vahinkoon, jos tilannetta
ei vältetä.

W VAROITUSÄlä käytä Neogen Molekylääristä testisettiä 2 - Listeria monocytogenes ihmisten tai eläinten diagnosointiin.
Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes menetelmä saattaa tuottaa siinä määrin
Listeria monocytogenesiä, että se riittää aiheuttamaan raskaana oleville naisille sikiökuolleisuutta ja
immuunipuutteisille kuolemantapauksia altistumisen yhteydessä.
Käyttäjän on järjestettävä henkilökunnalleen koulutusta asianmukaisista testausmenetelmistä, joita ovat esimerkiksi:
hyvät laboratoriokäytännöt, ISO/IEC 17025(4) tai ISO 7218(5).
Väärien negatiivisten tulosten vuoksi markkinoille voi päästä kontaminoituneita tuotteita. Voit vähentää tähän liittyvä
riskejä toimimalla seuraavasti:• Noudata käytäntöä ja tee testit täsmälleen tuoteselosteessa esitetyllä tavalla.
• Säilytä Neogen Molekylääristä testisettiä 2 – Listeria monocytogenes pakkausmerkintöjen ja tuoteselosteen mukaan.
• Käytä Neogen Molekyläärinen testisetti 2 – Listeria monocytogenes aina ennen viimeistä käyttöpäivää.
• Käytä Neogen Molekylääristä testisettiä 2 – Listeria monocytogenes sellaisiin ympäristönäytteisiin, jotka on validoitu
sisäisesti tai ulkopuolisen tahon toimesta.
• Käytä Neogen Molekylääristä testisettiä 2 – Listeria monocytogenes vain sellaisten pintojen, puhdistusaineiden,
käytäntöjen ja bakteerikantojen kanssa, jotka on hyväksytty sisäisesti tai kolmannen osapuolen toimesta.
• Laimenna ympäristönäytteet, joissa käytetään aryylisulfonaattikompleksia sisältävää neutraloivaa puskuria,
suhteessa 1:2 ennen testausta (1 osa näytettä 1 osaan steriiliä rikastusliuosta). Toinen vaihtoehto on siirtää 10 µl
neutraloivaa puskuririkastusliuosta Neogen-lyysiliuosputkiin. Neogen®-näytteiden keräystuotteet, jotka sisältävät
aryylisulfonaattikompleksia sisältävää neutraloivaa puskuria, ovat seuraavat: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB,
SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G ja HS2410NB2G.
Kemikaaleille ja biologisille vaaratekijöille altistumiseen liittyvien riskien vähentäminen:• On erittäin suositeltavaa, että naispuoliselle laboratoriohenkilöstölle tiedotetaan, että kehittyvälle sikiölle aiheutuu
vaaraa äidin Listeria monocytogenes -altistuksen aiheuttamasta tartunnasta.
• Testaa taudinaiheuttajat asianmukaisesti varustetussa laboratoriossa koulutetun henkilöstön valvonnassa. Inkuboitu
rikastusaine ja laitteet tai pinnat, jotka ovat joutuneet kosketuksiin inkuboidun rikastusaineen kanssa, saattavat sisältää
taudinaiheuttajia määrän, joka riittää aiheuttamaan vaaran ihmisten terveydelle.
• Noudata aina laboratorioiden vakioturvallisuuskäytäntöjä, joihin kuuluu asianmukaisten suojavaatteiden ja
silmäsuojainten käyttäminen reagensseja ja kontaminoituja näytteitä käsiteltäessä.
• Vältä kosketusta rikastusalustan ja reagenssiputkien sisällön kanssa monistuksen jälkeen.
• Hävitä rikastetut näytteet alan voimassa olevien standardien mukaisesti.
• Jos näytteitä ei ole asianmukaisesti lämpökäsitelty testin lyysivaiheen aikana, ne saattavat muodostaa biologisen
vaaratekijän, jolloin niitä EI saa asettaa Neogen Molekylääriseen testi-instrumenttiin.
2

FI(Suomenkielinen)

Testisetin valmistelun aikana tapahtuvaan ristikontaminaatioon liittyvien riskien vähentäminen:• Käytä aina suojakäsineitä (käyttäjän suojaamiseksi ja nukleaasien siirtymisen estämiseksi).
Ympäristön kontaminoitumiseen liittyvien riskien vähentäminen:• Noudata hävittämisessä voimassa olevia kontaminoituneen jätteen hävittämistä koskevia alan standardeja.
Jotta voit vähentää kuumille nesteille altistumisesta aiheutuvia riskejä, noudata seuraavia ohjeita:• Älä ylitä lämmityslaitteeseen merkittyä suositeltua lämpötila-asetusta.
• Älä ylitä suositeltua kuumennusaikaa.
• Tarkasta Neogen® Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämpötila tarkoituksenmukaisella kalibroidulla
lämpömittarilla (esim. osittain upotettavalla lämpömittarilla tai digitaalisella termoparimittarilla, ei kokonaan
upotettavalla lämpömittarilla.) Lämpömittari on asetettava sille määrättyyn paikkaan Neogen Molekyläärisen
testilämpölohkon pistokkeessa.

HUOMAUTUS
Testisetin valmistelun aikana tapahtuvaan ristikontaminaatioon liittyvien riskien vähentäminen:• Vaihda käsineet ennen reagenssipelletin kastelemista.
• Steriilien aerosoliesteen muodostavien molekyylibiologiaan soveltuvaa laatua olevien pipetinkärkien (suodatinkärkien)
käyttö on suositeltavaa.
• Käytä jokaisen näytteen siirtämiseen uutta pipetinkärkeä.
• Käytä näytteiden siirtämiseen rikastamisesta lyysiputkeen hyviä laboratoriokäytäntöjä. Pipetoijan kontaminoitumisen
välttämiseksi käyttäjä voi halutessaan lisätä ylimääräisen siirtovaiheen. Jokaisen rikastetun näytteen voi esimerkiksi
siirtää steriiliin putkeen.
• Jos mahdollista, käytä molekyylibiologista työasemaa, jossa on bakteerintuholamppu. Steriloi laboratorion työtasot
ja välineet (pipetit, sulku- ja avaustyökalut jne.) säännöllisesti 1–5-tilavuusprosenttisella (veteen laimennetulla)
talouskäyttöisellä valkaisuaineliuoksella tai DNA:n poistoliuoksella.
Vähennä vääriin positiivisiin tuloksiin liittyviä riskejä toimimalla seuraavasti:• Älä koskaan avaa reagenssiputkia monistuksen jälkeen.
• Hävitä kontaminoituneet putket aina liottamalla niitä 1–5-tilavuusprosenttisessa (veteen laimennetussa)
valkaisuaineliuoksessa 1 tunnin ajan etäällä testin valmistelualueelta.
• Älä koskaan autoklavoi reagenssiputkia monistuksen jälkeen.
Katso lisätietoja hävittämisestä ja paikallisista määräyksistä käyttöturvallisuustiedotteesta.
Jos sinulla on jotain tiettyä sovellusta tai menetelmää koskevia kysymyksiä, käy verkkosivuillamme osoitteessa
www.neogen.com tai ota yhteyttä paikalliseen Neogen-edustajaan tai -jälleenmyyjään.

Käyttäjän vastuu

Käyttäjän vastuulla on tutustua tuoteselosteeseen ja -tietoihin. Lisätietoja saat verkkosivustolla osoitteesta
www.neogen.com tai ottamalla yhteyttä paikalliseen Neogen-edustajaan tai -jälleenmyyjään.
Testausmenetelmää valitessa on tärkeää ottaa huomioon, että ulkoiset tekijät, kuten näytteenottomenetelmät,
testausprotokollat, näytteiden valmistus, käsittely ja laboratoriotekniikat, voivat vaikuttaa testaustuloksiin.
Käyttäjä on aina testausmenetelmää tai tuotetta valitessaan vastuussa siitä, että hän arvioi riittävän määrän näytteitä
kyseisistä elintarvikkeista ja mikrobialtistuksista käyttäjän kriteerien täyttymisen varmistamiseksi.
Käyttäjän vastuulla on myös varmistaa, että testausmenetelmät ja tulokset täyttävät hänen asiakkaidensa tai toimittajiensa
vaatimukset.
Kuten kaikkien testausmenetelmien kohdalla, minkä tahansa Neogen Food Safety -tuotteen käytöstä saavutetut tulokset
eivät ole takuu matriisien tai testattujen prosessien laadusta.
Voidakseen auttaa erilaisten elintarvikematriisien arvioinnissa Neogen on kehittänyt Neogen® Molekyläärisen testitaulukon
valvontasarjan. Määritä tarvittaessa testitaulukon hallinnan avulla, vaikuttaako matriisi Neogen Molekyläärisen testisetin
2 - Listeria monocytogenes tuloksiin. Testaa validointivaiheiden aikana useita matriisia edustavia näytteitä, ts. eri lähteistä
saatuja näytteitä, kun olet ottamassa käyttöön Neogen-menetelmää tai kun olet testaamassa uusia tai tuntemattomia
matriiseja tai matriiseja, joiden raaka-aineita tai valmistustapoja on muutettu.
Matriisi voidaan määrittää tuotetyypiksi, jolla on sisäisiä ominaisuuksia, kuten koostumus ja valmistustapa. Matriisienväliset erot voivat johtua niinkin yksinkertaisista tekijöistä kuin eroista niiden käsittelyssä tai jalostusasteessa, esim. raaka tai
pastöroitu, tuore tai kuivattu.

Takuun rajoitus / rajoitettu korvausvelvollisuus

NEOGEN KIISTÄÄ KAIKKI NIMENOMAISET JA EPÄSUORAT TAKUUT, MUKAAN LUKIEN KAIKKI TAKUUTKÄYPYYDESTÄ TAI SOPIVUUDESTA TIETTYYN KÄYTTÖTARKOITUKSEEN, PAITSI JOS TUOTEPAKKAUKSENTAKUUOSIOSSA TOISIN MAINITAAN. Jos mikä tahansa Neogen Food Safety -tuote on viallinen, Neogen tai sen
valtuutettu jälleenmyyjä joko korvaa tuotteen tai palauttaa sen ostohinnan. Nämä ovat ainoat myönnetyt korvaukset. Ota
yhteyttä Neogen-edustajaasi tai valtuutettuun Neogen-jälleenmyyjään, jos sinulla on kysyttävää.
3

FI(Suomenkielinen)

Neogen:n vastuun rajoitukset

NEOGEN EI OLE VASTUUSSA MENETYKSISTÄ TAI VAHINGOISTA, OLIVAT NE SITTEN SUORIA, EPÄSUORIA,
ERITYISLAATUISIA, SATUNNAISIA TAI VÄLILLISIÄ, MUKAAN LUKIEN VOITONMENETYKSET. Missään tapauksessa
Neogen:n vastuu ei minkään laillisen perusteen mukaan ole suurempi kuin vialliseksi väitetyn tuotteen hinta.

Säilytys ja hävittäminen

Säilytä Neogen Molekylääristä testisettiä 2 - Listeria monocytogenes 2–8 °C:n lämpötilassa. Suojattava jäätymiseltä.
Säilytä paketti valolta suojattuna. Kun olet avannut paketin, tarkista, että foliopussi on ehjä. Ei saa käyttää, jos pussi on
vahingoittunut. Avaamisen jälkeen käyttämättömät reagenssiputket on aina säilytettävä uudelleensuljettavassa pussissa,
jonka sisällä on kuivausainetta lyofilisoitujen reagenssien stabiliteetin ylläpitämiseksi. Säilytä uudelleensuljettuja pusseja
2–8 °C:n lämpötilassa enintään 60 päivän ajan.
Älä käytä Neogen Molekylääristä testisettiä 2 - Listeria monocytogenes viimeisen käyttöpäivän jälkeen. Viimeinen
käyttöpäiväys ja eränumero on merkitty pakkauksen ulkopuolelle. Käytön jälkeen rikastusaine ja Neogen Molekyläärisen
testisetin 2 - Listeria monocytogenes putket voivat sisältää mahdollisesti patogeenisia aineita. Kun testi on suoritettu
loppuun, noudata saastuneen jätteen hävittämisessä alan nykykäytäntöjä. Katso lisätietoja hävittämisestä ja paikallisista
määräyksistä käyttöturvallisuustiedotteesta.

Käyttöohjeet

Noudata huolellisesti kaikkia ohjeita. Jos ohjeita ei noudateta, tulokset saattavat olla epätarkkoja.
Steriloi laboratorion työtasot ja välineet (pipetit, sulku- ja avaustyökalut jne.) säännöllisesti 1–5-tilavuusprosenttisella(veteen laimennetulla) talouskäyttöisellä valkaisuaineliuoksella tai DNA:n poistoliuoksella.
Käyttäjän on suoritettava Neogen Molekyläärisen testijärjestelmän käyttäjäkoulutus, kuten asiakirjassa ”Installation
Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen Molecular Detection System”(6)kuvataan.
Katso erityisvaatimukset kohdasta Erikoisohjeet validoituja menetelmiä varten:
Taulukko 3 sisältää rikastuskäytännöt seuraavien mukaisesti: AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 ja AOAC®
Performance Tested MethodSM -sertifikaatti #081501.
Taulukko 4 sisältää NF Validation -sertifikaatin 3M 01/15-09/16 mukaisen rikastuskäytännön.

Näytteiden rikastus

Taulukossa 2, 3 tai 4 on rikastuskäytäntöjen ohjeet elintarvike- ja ympäristönäytteille. Käyttäjän vastuulla on vahvistaa
vaihtoehtoisten näytteenottokäytäntöjen ja laimennussuhteiden soveltuvuus sen varmistamiseksi, että testimenetelmä
vastaa käyttäjän kriteereitä.

Elintarvikkeet

1. Anna (ferriammoniumsitraattia sisältävän) Demi Fraser -rikastusalustan lämmetä laboratorion ilman lämpötilaan.
2. Yhdistä rikastusalusta ja näyte aseptisesti taulukoiden 2, 3 tai 4 mukaisesti. Kaikkien lihanäytteiden ja erittäin
hiukkaspitoisten näytteiden yhteydessä suositellaan käyttämään suodatinpusseja.
3. Homogenoi huolellisesti sekoittamalla, vatsasekoituksella tai käsin sekoittamalla 2 ± 0,2 minuuttia. Inkuboi
37 ± 1 °C:ssa taulukoiden 2, 3 tai 4 mukaisesti.
4. Raakoja maitotuotteita varten (katso taulukot 2, 3 tai 4) siirrä 0,1 ml ensisijaista rikastuslientä 10 ml:aan Fraser-lientä.
Inkuboi 37 ± 1 °C:ssa 20–24 tunnin ajan.

Ympäristönäytteet

Näytteenkeräyslaitteena voidaan käyttää puhdistusaineiden vaikutusten kumoamiseksi neutraloivalla liuoksella kosteutettua
sientä. Neogen suosittaa käyttämään biosiditonta selluloosasientä. Neutraloivana liuoksena voidaan käyttää neutraloivaa
Dey-Engleyn (D/E) -lientä tai Letheen-lientä. Suosittelemme puhdistamaan alueen näytteenoton jälkeen.
VAROITUS: Mikäli päätät käyttää sienen hydratointiliuoksena aryylisulfonaattikompleksia sisältävää neutraalia puskuria,
rikastettu ympäristönäyte on laimennettava suhteessa 1:2 (1 osa näytettä 1 osaan steriiliä rikastusliuosta) ennen testausta
sellaisten väärien negatiivisten tulosten riskien vähentämiseksi, joiden vuoksi markkinoille voi päästä kontaminoituneitatuotteita. Toinen vaihtoehto on siirtää 10 μL neutraloivaa puskuririkastusliuosta Neogen-lyysiliuosputkiin.
Näytteenottoalueen suositeltava koko patogeenin esiintymisen tai puuttumisen havaitsemiseksi pinnalla on vähintään
100 cm2 (10 cm x 10 cm tai 4 tuumaa x 4 tuumaa). Sienellä näytettä ottaessasi käy läpi koko alue kahdessa suunnassa(vasemmalta oikealle ja sen jälkeen ylhäältä alas) tai kerää ympäristönäytteet voimassa olevia näytteenottokäytäntöjä
noudattaen tai asiakirjojen FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) tai standardin ISO 18593(7) ohjeiden mukaisesti.
1. Anna (ferriammoniumsitraattia sisältävän) Demi Fraser -rikastusalustan lämmetä laboratorion ilman lämpötilaan.
2. Yhdistä rikastusalusta ja näyte aseptisesti taulukoiden 2, 3 tai 4 mukaisesti.
3. Homogenoi huolellisesti sekoittamalla, vatsasekoituksella tai käsin sekoittamalla 2 ± 0,2 minuuttia. Inkuboi
37 ± 1 °C:ssa 24–30 tunnin ajan taulukoiden 2, 3 tai 4 mukaisesti.
4

(Suomenkielinen)FI

Taulukko 2: Yleiset rikastuskäytännöt 37 ± 1 °C:ssa Demi Fraser -lientä ja Fraser-lientä tarpeen mukaan.
Näytematriisi

Näytteenkoko

Rikastusliemen
tilavuus (ml)Rikastusaika
(h)

25 g

225

24–30

1 sieni

100 tai 225

24–30

1
tossunäyte

10

24–30

25 g

475

28–32

Lämpökäsitelty,keitetty, suolattu
tai savustettu
liha, siipikarja,äyräiset ja kala
Lämpökäsitellyt/
pastöroidut
maitotuotteet
Hedelmät ja
vihannekset
Monikomponenttielintarvikkeet
Ympäristönäytteet(a)Raaka liha,
siipikarjanliha,äyriäiset ja kala

Ensisijainen rikastusliemi(Demi Fraser -liemi)(a)Näytematriisi

Raa’atmaitotuotteet

Näytteen
koko

25 g

Rikastusliemen
tilavuus (ml)225

Toissijainen rikastusliemi(Fraser-liemi)(a)Rikastusaika(h)Näytteenkoko

Rikastuslämpötila
(°C)

Rikastusaika
(h)

20–24

Siirrä
0,1 ml10 ml:aanFraserlientä

37 ± 1

20–24

Näytteen
analyysitilavuus(b)10 μl(a) Demi Fraser- ja Fraser-liemiin on aina lisättävä Fraser-liemen rikastussuplementtia (ferriammoniumsitraattia) ensi- tai
toissijaisen rikastuksen aikana.
(b) Neogen-lyysiliuosputkiin siirrettävä näytteen tilavuus. Katso Lyysi-osion vaihe 4.6.

Erikoisohjeet validoituja menetelmiä varten
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

Tutkimuslaitos AOAC:n OMASM- ja PTMSM -ohjelmissa Neogen Molekyläärinen testisetti 2 - Listeria monocytogenes
todettiin tehokkaaksi Listeria monocytogenesin havaitsemismenetelmäksi. Tutkimuksessa testatut matriisit näkyvät
taulukossa 3.

5FI(Suomenkielinen)

Taulukko 3. Rikastuskäytännöt, joissa käytetään Demi-Fraser -lientä(a) 37 ± 1 °C:ssä AOAC OMASM 2016.08 ja PTMSM-sertifikaatin #081501 mukaisesti.
Näytematriisi

Näytteenkoko

Rikastusliemen
tilavuus (ml)Rikastusaika (h)Hot dogit naudanlihasta, queso fresco,
vaniljakermajäätelö, 4-prosenttinen
tuorejuusto maidosta, 3-prosenttinen
kaakao täysmaidosta, romaine-sidesalaatti,
pakattu tuore pinaatti, kylmäsavulohi

25 g

225

24–30

Raaka broileri

25 g

475

28–32

Kalkkunaleike

125 g

1125

24–30

Koko meloni

Riittävästi, jotta
meloni kelluu

26–30

Ruostumaton teräs

1 sieni

225

24–30

Pinnoitettu betoni

1 sieni

100

24–30

1 tossunäyte

10

24–30

Ympäristönäytteet:

Cantaloupenmeloni(b)Muovi(c)Kaikki AOAC-validointiin tarkoitetut näytteet homogenoitiin vatsasekoituksella, jollei muuta mainita.
(a)		Demi Fraser- ja Fraser-liemiin on aina lisättävä Fraser-liemen rikastussuplementtia (ferriammoniumsitraattia)
ensi- tai toissijaisen rikastuksen aikana.
(b) Homogenoi näyte sekoittamalla käsin.
(c)		 Homogenoi näyte vortex-sekoituksella.

AFNOR Certificationin myöntämä NF VALIDATION -sertifikaatti

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Lisätietoja validointiajan päättymisestä on NF VALIDATION -sertifikaatissa, joka on saatavissa edellä mainitulta
verkkosivustolta.
NF Validation -sertifioitu ISO 16140-2(6) -standardin mukainen menetelmä verrattuna ISO 11290(3) -standardiin
Validoinnin soveltamisala: Kaikki ihmisravinnoksi tarkoitetut elintarvikenäytteet ja ympäristönäytteet (ensisijaisentuotannon näytteitä lukuun ottamatta)
Näytteen valmistus: Näytteiden valmistamisessa on noudatettava standardeja EN ISO 11290-1(3) ja EN ISO 6887(8)Ohjelmistoversio: Katso sertifikaatista
Taulukko 4: Rikastuskäytännöt NF VALIDATION -sertifioidun menetelmän 3M 01/15-09/16 mukaisesta 37 ± 1 °C:ssa
käyttäen Demi Fraser- ja Fraser-liemiä tarpeen mukaan.

6

FI
Yleinen käytäntö

RikastuslieNäytteen koko men tilavuus(ml)

Kaikkielintarvikenäytteet(paitsi raaka liha,
raa’at äyräiset ja
raa’at maitotuotteet)

25 g

Ympäristönäytteet

25 g, 1
tossunäyte tai
1 pyyhintänäyte

Rikastuslämpötila
(± 1 °C)

Raakaliha, raa’atäyräiset ja
raa’at maitotuotteet

Rikastusai- Näytteen anaka (h)lyysitilavuus(a)Hyväksyttävä
keskeytyspiste• Demi Fraser -liemellä
enintään 72 tunnin
ajan

225

37

24–30

20 µl

• Lysaatti -20 °C:ssa• Lysaatti 4 °C:ssa
enintään 72 tunnin
ajan

Ensisijainen rikastusliemi (Demi Fraser -liemi)(b)Erityinen
käytäntö(Suomenkielinen)

Toissijainen rikastusliemi (Fraser-liemi)(b)

Rikastuslie- RikastusRikastus- Rikatus- Näytteen
Näytteen
Rikastus- Näytteen
men tilavuus lämpötila
lämpötila
aika
analyysikoko
aika (h)koko(ml)(± 1 °C)(± 1 °C)(h)tilavuus(c)

25 g

225

37

Siirrä
0,1 ml10 ml:aanFraserlientä

20–24

Hyväksyttävä keskeytyspiste• Fraserliemellä
enintään
72 tunnin
ajan

37

20–24

10 µl

• Lysaatti-20 °C:ssa• Lysaatti
4 °C:ssa
enintään
72 tunninajan(a) Neogen-lyysiliuosputkiin siirrettävä näytteen tilavuus. Katso Lyysi-osion vaihe 4.6.
(b) Demi Fraser- ja Fraser-liemiin on aina lisättävä Fraser-liemen rikastussuplementtia (ferriammoniumsitraattia) ensi- tai
toissijaisen rikastuksen aikana.
(c) Neogen-lyysiliuosputkiin siirrettävä näytteen tilavuus. Katso Lyysi-osion vaihe 4.6.
HUOMAUTUS: Yli 25 g:n näytteitä ei ole testattu NF validation -tutkimuksessa.

Neogen® Molekyläärisen testinopeuden latausalustan valmistelu
1. Kostuta liina 1–5-tilavuusprosenttisella (veteen laimennetulla) talouskäyttöisellä valkaisuliuoksella tai vastaavalla
liuoksella ja pyyhi Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta.
2. Huuhtele Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta vedellä.
3. Pyyhi Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta kuivaksi kertakäyttöisellä liinalla.
4. Varmista ennen käyttöä, että Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta on kuiva.
Neogen® Molekyläärisen testijäähdytyslohkon pistokkeen valmistelu
Aseta Neogen® Molekyläärinen testijäähdytyslohko suoraan laboratorion työtasolle; käytä jäähdytyslohkoa laboratorion
ilman lämpötilassa (20–25 °C).
Neogen® Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen valmistelu
Aseta Neogen® Molekyläärisen testilämpölohkon pistoke kaksilohkoiseen kuivalämmityslaitteeseen. Kytke
kuivalohkolämmitin päälle, aseta lämpötila ja anna Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämmetä
100 ± 1 °C:n lämpötilaan niin, että saavutettu lämpötila pysyy samana.
HUOMAUTUS: Anna Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämmetä asetuslämpötilaan noin 30 minuuttia
lämmityslaitteen mukaan. Varmista tarkoituksenmukaisen kalibroidun lämpömittarin avulla (esim. osittain upotettava
lämpömittari tai digitaalinen termoparimittari, ei kokonaan upotettava lämpömittari), joka on asetettu sille määrättyyn
paikkaan, että Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämpötila on 100 ± 1 °C.
Neogen® Molekyläärisen testi-instrumentin valmistelu
1. Käynnistä Neogen® Molekyläärisen testijärjestelmän ohjelmisto ja kirjaudu sisään. Varmista Neogen Food Safety-edustajaltasi, että käytössäsi on ohjelmiston uusin versio.
7

FI(Suomenkielinen)

2. Kytke Neogen Molekyläärinen testi-instrumentti päälle.
3. Luo tai muokkaa ajo kunkin näytteen tiedoille. Katso tarkemmat tiedot Neogen Molekyläärisen testijärjestelmän
käyttöoppaasta.
HUOMAUTUS: Neogen Molekyläärisen testi-instrumentin on saavutettava Valmis-tila ennen Neogen Molekyläärisen
testinopeuden latausalustan ja reaktioputkien asettamista laitteeseen. Lämmitysvaihe kestää noin 20 minuuttia, ja sen
merkiksi instrumentin tilarivillä palaa ORANSSI valo. Kun instrumentti on valmis ajon käynnistämistä varten, tilarivin valo
muuttuu VIHREÄKSI.
Lyysi
Poista Neogen Lyysiliuostelineen pohja ruuvimeisselillä tai lastalla, ennen kuin asetat sen Neogen Molekyläärisen
testilämpölohkon pistokkeeseen.

1. Anna lyysiliuosputkien (Neogen Lyysiliuos) lämmetä jättämällä teline huoneenlämpöön (20–25 °C) yön yli(16–18 tunnin ajaksi). Neogen Lyysiliuosputket voi lämmittää huoneenlämpöön myös asettamalla ne laboratorion
työtasolle vähintään 2 tunniksi, inkuboimalla Neogen Lyysiliuosputkia inkubaattorissa 37 ± 1 °C:ssa 1 tunnin ajan tai
asettamalla Neogen Lyysiliuosputket kaksilohkoiseen kuivalämmittimeen 100 °C:n lämpötilaan 30 sekunniksi.
2. Sekoita suljetut putket kääntämällä ne ylösalaisin. Siirry seuraavaan vaiheeseen 4 tunnin kuluessa.
3. Poista rikastusliemi inkubaattorista.
4. Jokaiselle näytteelle ja negatiiviselle kontrollinäytteelle (NC) (steriili rikastusaine) tarvitaan yksi Neogen Lyysiliuosputki.
4.1 Neogen Lyysiliuos-putkiliuskat voidaan leikata haluttuun Neogen Lyysiliuoksen putkimäärään. Valitse tarvittava
yksittäisten Neogen Lyysiliuosputkien tai 8 putken liuskojen määrä. Aseta Neogen Lyysiliuosputket tyhjään telineeseen.
4.2 Ristikontaminaation välttämiseksi poista suojus yhdestä Neogen Lyysiliuosputkiliuskasta kerrallaan ja käytä
jokaiseen siirtovaiheeseen uutta pipettiä.
4.3 Siirrä rikastetut näytteet Neogen Lyysiliuosputkiin seuraavien ohjeiden mukaisesti:
Siirrä jokainen rikastettu näyte ensin erilliseen Neogen Lyysiliuosputkeen. Siirrä negatiivinen kontrolli (NC) viimeiseksi.
4.4 Käytä Neogen® Molekyläärisen testin cap/decap-työkalua – Lysis yhden Neogen Lyysiliuosputkiliuskan avaamiseen– yksi liuska kerrallaan.
4.5 Heitä Neogen Lyysiliuosputken suojus pois – jos lysaatti säilytetään uudelleentestausta varten, laita suojukset
puhtaaseen astiaan lyysin jälkeistä uudelleenkäyttöä varten.
4.5.1 Säilytetyn lysaatin käsittelyyn liittyvät ohjeet ovat liitteessä A.
4.6 Siirrä 20 µl näytettä Neogen Lyysiliuosputkeen, jollei näytteenottokäytäntötaulukoissa 2, 3 tai 4 muuta mainita(esim. raa’at maitotuotteet tai käytettäessä ympäristönäytteitä ja neutraloivaa puskuririkastusliuosta, käytä 10 µl).
20 µl

5. Toista vaihe 4.4–4.6, kunnes kukin yksittäinen näyte on lisätty vastaavaan Neogen Lyysiliuosputkeen liuskassa.
6. Kun kaikki näytteet on siirretty, siirrä 20 µl negatiivista kontrollia (steriiliä rikastusainetta, Demi Fraser -liuosta)
Neogen Lyysiliuosputkeen. Älä käytä vettä negatiivisena kontrollina.
7. Varmista, että Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeen lämpötila on 100 ± 1 °C.
8. Aseta peittämätön Neogen Lyysiliuosputkiteline Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeeseen ja kuumenna
15 ± 1 minuuttia. Kuumennuksen aikana Neogen Lyysiliuoksen väri muuttuu vaaleanpunaisesta (viileä) keltaiseksi (kuuma).
8FI(Suomenkielinen)

8.1 Jos näytteitä ei ole asianmukaisesti lämpökäsitelty testin lyysivaiheen aikana, ne saattavat muodostaa biologisen
vaaratekijän, jolloin niitä EI saa asettaa Neogen Molekylääriseen testi-instrumenttiin.
9. Poista peittämätön Neogen Lyysiliuosputkiteline lämmityslohkosta ja anna sen viilentyä Neogen Molekyläärisen
testijäähdytyslohkon pistokkeessa vähintään 5 minuuttia ja enintään 10 minuuttia. Neogen Molekyläärisen
testijäähdytyslohkon pistoke, jota käytetään ympäristön lämpöisenä, asetetaan suoraan laboratorion työtasolle.
Viileänä lyysiliuoksen väri palaa vaaleanpunaiseksi.
10. Poista Neogen Lyysiliuosputkiteline Neogen Molekyläärisen testijäähdytyslohkon pistokkeesta.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Monistaminen
1. Jokaiselle näytteelle ja negatiiviselle kontrollinäytteelle tarvitaan yksi Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria
monocytogenes -reagenssiputki.
1.1 Reagenssiputkiliuskat voidaan leikata haluttuun määrään putkia. Valitse tarvittava yksittäisten Neogen
Molekylääristen testisettien 2 - Listeria monocytogenes -reagenssiputkien tai 8 putken liuskojen määrä.
1.2 Aseta Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes -reagenssiputket tyhjään telineeseen.
1.3 Vältä liikuttamasta reagenssipellettejä putkien pohjalta.
2. Valitse 1 Neogen Reagenssin valvontaputki ja aseta telineeseen.
3. Ristikontaminaation välttämiseksi poista suojus yhdestä Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes-reagenssiputkinauhasta kerrallaan ja käytä uutta pipetin kärkeä jokaisessa siirtovaiheessa.
4. Siirrä lysaatti Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes -reagenssiputkeen ja Neogen Reagenssin
valvontaputkeen seuraavasti:
Siirrä jokainen näytelysaatti yksittäiseen Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes-reagenssiputkeen ensin ja sitten negatiivinen kontrolli. Hydratoi Neogen Reagenssin valvontaputki viimeisenä.
5. Avaa Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes -reagenssiputki käyttämällä Neogen®
Molekyläärisen testin cap/decap-työkalua - Reagenssi. Avaa yksi reagenssiputkeen putkiliuska kerrallaan. Heitä suojus
pois.
5.1 Siirrä 20 µl näytelysaattia Neogen Lyysiliuosputkessa olevan nesteen ylemmästä puoliskosta (vältä sakkaa)
vastaavaan Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes -reagenssiputkeen. Annostele vinossa
kulmassa, jotta et liikuta pellettejä. Sekoita pipetoimalla varovasti ylös ja alas 5 kertaa.
5.2 Toista vaihe 5.1, kunnes kaikki yksittäiset näytelysaatit on lisätty vastaavaan Neogen Molekyläärisen testisetin 2 Listeria monocytogenes -reagenssiputkeen liuskassa.
5.3 Peitä Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes -reagenssiputket mukana toimitetuilla
lisäsuojuksilla ja varmista, että ne ovat tiukasti paikoillaan, painamalla niitä Neogen Molekyläärisen testin cap/
decap-työkalun - Reagenssi pyöristetyllä puolella eteen- ja taaksepäin suuntautuvalla liikkeellä.
5.4 Toista tarvittaessa vaiheet 5.1–5.3 testattavien näytteiden määrän mukaan.
5.5 Kun kaikki näytelysaatit on siirretty, siirrä 20 µl negatiivista kontrollilysaattia Neogen Molekyläärisen testisetin
2 - Listeria monocytogenes -reagenssiputkeen toistamalla vaiheet 5.1.
5.6 Siirrä 20 µl negatiivista kontrollilysaattia Neogen Reagenssin valvontaputkeen. Annostele vinossa kulmassa, jotta
et liikuta pellettejä. Sekoita pipetoimalla varovasti ylös ja alas 5 kertaa.
6. Aseta suojuksella suljetut putket puhtaaseen ja steriloituun Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalustaan. Sulje
ja lukitse Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalustan kansi.

9FI(Suomenkielinen)

20 µL

7. Tarkasta ja vahvista määritetty ajo Neogen Molekyläärisen testijärjestelmän ohjelmistossa.
8. Napsauta ohjelmiston Start (Käynnistä) -painiketta ja valitse käytettävä instrumentti. Valitun instrumentin kansi
aukeaa automaattisesti.
9. Aseta Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta Neogen Molekylääriseen testi-instrumenttiin ja aloita testi
sulkemalla kansi. Saat tulokset 75 minuutin kuluessa, positiiviset tulokset saatetaan kuitenkin havaita jo aikaisemmin.
10. Kun testi on suoritettu loppuun, ota Neogen Molekyläärisen testinopeuden latausalusta Neogen Molekyläärisestä
testi-instrumentista ja hävitä putket liottamalla niitä 1–5-tilavuusprosenttisessa (veteen laimennetussa)
talouskäyttöisessä valkaisuaineliuoksessa tai vastaavassa liuoksessa 1 tunnin ajan ja etäällä testin valmistelualueelta.
HUOMAUTUS: Jotta ristikontaminaation aiheuttamien väärien positiivisten riski olisi mahdollisimman pieni, älä koskaan
avaa monistettua DNA:ta sisältäviä reagenssiputkia. Tämä koskee Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria
monocytogenes -reagenssiputkia, Neogen Reagenssin valvonnan putkia ja testitaulukon valvonnan putkia. Hävitä
kontaminoituneet putket aina liottamalla niitä 1–5-tilavuusprosenttisessa (veteen laimennetussa) valkaisuaineliuoksessa
tai vastaavassa liuoksessa 1 tunnin ajan etäällä testin valmistelualueelta.

Tulokset ja tulkinta

Algoritmi tulkitsee nukleiinihappojen monistuksen tunnistuksesta saatavaa valon sirontakäyrää. Ohjelmisto analysoi tulokset
automaattisesti, ja tulokset värikoodataan tuloksen mukaan. Positiivinen tai negatiivinen tulos määritetään analysoimalla
useita yksilöllisiä käyräparametreja. Oletetut positiiviset tulokset ilmoitetaan reaaliaikaisesti, kun taas negatiiviset ja
tarkastettavat tulokset näytetään ajon valmistumisen jälkeen.
Oletetut positiiviset näytteet on vahvistettava laboratorion vakiotoimintamenetelmien mukaisesti tai noudattamalla
asianmukaista vertailumenetelmää(1, 2, 3) aloittamalla näytteen siirrosta ensisijaisesta rikastusliemestä toissijaiseenrikastusliemeen (jos käytössä), mitä seuraa kasvatusalustaan asettaminen ja isolaattien vahvistaminen asianmukaisillabiokemiallisilla ja serologisilla menetelmillä.
HUOMAUTUS: Negatiivinenkaan näyte ei anna nollalukemaa, sillä järjestelmällä ja Neogen Molekyläärisen testisetin
2 - Listeria monocytogenes -monistusreagensseilla on tausta-RLU-lukema (suhteellinen valoyksikkö).
Joissain harvoissa tapauksissa valon sironta voi olla epätavallinen, jolloin algoritmi merkitsee sen tarkastettavaksi.
Neogen suosittelee testin uusimista tarkastettavaksi merkittyjen näytteiden osalta. Jos tulokseksi tulee jatkuvasti
Inspect (Tarkasta), tee varmistustesti käyttämällä itse parhaaksi katsomaasi menetelmää tai paikallisten määräysten
mukaista menetelmää.
Taulukko 5: Neogen Molekyläärisen testijärjestelmän ohjelmistossa käytetyt näytteiden tulossymbolit ja niiden tulkinta.
PutkentyyppiPutkentulossymboli

Tulos

Tulkinta

Näyte

Positiivinen

Oletettu positiivinen näyte kohdepatogeenin osalta.

Näyte

Negatiivinen

Negatiivinen näyte kohdepatogeenin osalta.

Näyte

Estetty

Näytematriisi inhiboi testin. Uusintatestaus voi olla välttämätön.
Katso lisätietoja vianmäärityskohdasta ja testisetin tuoteselosteesta.

Näyte

Tarkasta

Kohdepatogeenin esiintymistä tai sen puuttumista ei voitu
määritellä. Uusintatestaus voi olla välttämätön. Katso lisätietoja
vianmäärityskohdasta ja testisetin tuoteselosteesta.

Näyte

Virhe

Bioluminesenssia ei havaittu. Uusintatestaus voi olla välttämätön.
Katso lisätietoja vianmäärityskohdasta ja testisetin tuoteselosteesta.

10

FI

(Suomenkielinen)

Tulosten vahvistaminen NF VALIDATION -sertifioidun menetelmän mukaisesti
Vaihtoehto 1: Käyttämällä ISO 11290(3) -standardia aloittaen Demi Fraser -rikastamisesta.
Vaihtoehto 2: Eristäminen PALCAM-agarilla tai kromogeenisella agarilla osana NF VALIDATION -sertifioitua Listeria
monocytogenes -bakteerin havaitsemismenetelmää. Tunnusomaisten pesäkkeiden esiintyminen riittää vahvistamaan
Listeria monocytogenes -bakteerien esiintymisen.
Vaihtoehto 3: Käyttämällä EN ISO 7218(5)-standardissa kuvattuja DNA-koettimia selektiiviseltä agarlevyltä eristettyihin
pesäkkeisiin (katso vaihtoehdot 1 tai 2).
Vaihtoehto 4: Käyttämällä jotain muuta NF VALIDATION -sertifioitua menetelmää, jonka periaatteen on oltava erilainenkuin Neogen Molekyläärisessä testisetissä 2 - Listeria monocytogenes. On käytettävä tälle toiselle validoidulle menetelmälle
kuvattua koko käytäntöä. Kaikkien vahvistamisen alkua edeltävien vaiheiden on oltava kummallekin menetelmälle yhteisiä.
Jos tulokset ovat ristiriitaisia (vaihtoehtoisella menetelmällä saatu oletettu positiivinen tulos, jota ei saada vahvistettua
jollakin edellä kuvatuista tavoista), laboratorion on tehtävä tarvittavat toimenpiteet saadun tuloksen validoimiseksi.
Jos tulokset ovat ristiriitaisia (Neogen Molekyläärisen testisetin 2 - Listeria monocytogenes saatu oletettu positiivinen
tulos, jota ei saada vahvistettua jollakin edellä kuvatuista tavoista), laboratorion on tehtävä tarvittavat toimenpiteet saadun
tuloksen validoimiseksi.
Jos sinulla on jotain tiettyä sovellusta tai menetelmää koskevia kysymyksiä, käy verkkosivuillamme osoitteessa
www.neogen.com tai ota yhteyttä paikalliseen Neogen-edustajaan tai -jälleenmyyjään.
Liite A. Käytännön keskeytys: Lämpökäsiteltyjen lysaattien säilyttäminen ja uudelleentestaus.
1. Säilytä lämpökäsitelty lysaatti sulkemalla lyysiputki uudelleen puhtaalla suojuksella (katso ”Lyysi”, 4.5).
2. Säilytä 4–8 °C:ssa enintään 72 tuntia.
3. Valmistele säilytetty näyte monistamista varten kääntelemällä sitä 2–3 kertaa, jotta se sekoittuu.
4. Poista suojukset putkista.
5. Aseta sekoitetut lyysiputket Neogen Molekyläärisen testilämpölohkon pistokkeeseen ja kuumenna 100 ± 1 °C:ssa
5 ± 1 minuuttia.
6. Poista Neogen Lyysiliuosputkiteline lämmityslohkosta ja anna sen viilentyä Neogen Molekyläärisen
testijäähdytyslohkon pistokkeessa vähintään 5 minuuttia ja enintään 10 minuuttia.
7. Jatka käytäntöä edellä olevasta kohdasta ”Monistaminen”.

Viitteet:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Tuotteen tarrasymbolien selitykset
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

PT(Português)Data de emissão: 2024-01

Instruções do produto
Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2
Descrição e uso recomendado do produto

O Neogen® Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 é usado com o Neogen® Sistema de Detecção
Molecular para a detecção rápida e específica de Listeria monocytogenes em amostras enriquecidas de alimentos
e ambientais de processos de alimentos. O Neogen Ensaio para Detecção Molecular utiliza amplificação isotérmica
mediada por alça para amplificar rapidamente sequências de ácidos nucleicos com alta especificidade e sensibilidade,combinadas com bioluminescência para detectar a amplificação. Os resultados positivos presuntivos são relatados em
tempo real enquanto os resultados negativos são exibidos após a conclusão do ensaio. Os resultados positivos presuntivos
devem ser confirmados através do seu método preferencial ou conforme especificado pelos regulamentos locais(1, 2, 3).
O Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 destina-se ao uso em ambiente laboratorial
por profissionais treinados em técnicas laboratoriais. A Neogen não documentou o uso deste produto em outros setoresque não o de alimentos e bebidas. Por exemplo, a Neogen não documentou este produto para testar amostras de água,produtos farmacêuticos, cosméticos, clínicas ou veterinárias. O Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria
monocytogenes 2 não foi avaliado com todos os possíveis protocolos de teste nem com todas as linhagens de bactérias
possíveis.
Assim como em todos os métodos de teste, a fonte, a formulação e a qualidade do meio de enriquecimento podem
influenciar os resultados. Fatores como métodos de amostragem, protocolos de teste, preparação de amostras, manuseio
e técnica de laboratório também podem influenciar os resultados. A Neogen recomenda a avaliação do método, incluindo
meio de enriquecimento no ambiente do usuário, usando um número suficiente de amostras com alimentos específicose desafios microbianos para garantir que o método atenda aos critérios do usuário.
A Neogen avaliou o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 com Demi Fraser Caldo
contendo citrato férrico amoniacal e Fraser Caldo contendo citrato férrico amoniacal conforme necessário. Uma
formulação típica desse meio pode ser vista abaixo.
Fórmula típica de Demi Fraser Caldo Base(g/L)

Fórmula típica de Fraser Caldo Base(g/L)

Cloreto de sódio

20 gCloreto de sódio

20 g

Fosfato de sódio, dibásico, anidro*

9,6 g

Fosfato de sódio, dibásico, anidro*

9,6 gExtrato de carne

5,0 gExtrato de carne

5,0 g

Digestão pancreática de caseína

5,0 g

Digestão pancreática de caseína

5,0 g

Digestão péptica de tecido animal

5,0 g

Digestão péptica de tecido animal

5,0 gExtrato de levedura

5,0 gExtrato de levedura

5,0 g

Cloreto de lítio

3,0 g

Cloreto de lítio

3,0 g

Fosfato de potássio, monobásico

1,35 gFosfato de potássio, monobásico

1,35 gEsculina

1,0 g

Esculina

1,0 g

Cloridrato de acriflavina

0,0125 g

Cloridrato de acriflavina

0,025 gÁcido nalidíxico

0,01 gÁcido nalidíxico

0,02 g* Substituto: Fosfato de sódio, dibásico, di-hidrato 12,0 g
Suplemento de Fraser Caldo(Ingredientes por frasco de 10 mL. (Um frasco é adicionado a um litro de meio basal.)
Citrato férrico amoniacal

0,5 g/10 mL

pH final

7,2 ± 0,2 a 25 °C

O Neogen Equipamento de Detecção Molecular destina-se ao uso com amostras que passaram por tratamento térmico
durante a etapa de lise do ensaio, projetado para destruir organismos presentes na amostra. Amostras que não foram
tratadas com aquecimento de forma adequada durante a etapa de lise do ensaio podem ser consideradas um risco
biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no Neogen Equipamento de Detecção Molecular.
®

A Neogen Food Safety é certificada pela Organização Internacional de Normalização (ISO) 9001 para projeto e fabricação.
O kit de testes do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 contém 96 testes, descritos na
Tabela 1.
1

PT(Português)Tabela 1. Componentes do kit Neogen Ensaio de Detecção Molecular
Item

Identificação

Neogen® Solução de Lise(LS)

Quantidade

Conteúdo

Comentários

Solução rosa em
96 (12 tiras de 8 tubos)
tubos transparentes

580 µL de LS por tubo

Armazenados
no rack
e prontos parao uso

Neogen® Ensaio para
Detecção Molecular deListeria monocytogenes
2 Tubos de reagentes

Tubos amarelos

96 (12 tiras de 8 tubos)

Mistura de detecção
e amplificação
específica liofilizada

Prontopara uso

Tampas adicionais

Tampas amarelas

96 (12 tiras de 8 tampas)

Neogen® Controle deReagentes (RC)

Tubostransparentes com
tampa articulada

16 (2 embalagens de
8 tubos individuais)

Prontopara uso
Mistura de DNA decontrole, amplificação
e detecção liofilizada

Prontopara uso

O Controle Negativo, não fornecido no kit, é um meio de enriquecimento estéril, por exemplo, Demi Fraser Caldo. Não
utilize água como Controle Negativo.

Segurança

O usuário deve ler, compreender e seguir todas as informações de segurança presentes nas instruções do Neogen Sistema
de Detecção Molecular e do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2. Guarde as instruções
sobre segurança para consulta posterior.
ADVERTÊNCIA:
AVISO:

Indica uma situação de perigo que, se não evitada, pode resultar em morte ou ferimentos graves
e/ou danos materiais.
indica uma situação potencialmente perigosa que, se não evitada, pode resultar em danos materiais.

W ADVERTÊNCIA
Não use o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 no diagnóstico de problemas desaúde em humanos ou animais.
O método Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 pode gerar Listeria monocytogenesa níveis suficientes para causar a ocorrência de natimortos e morte em mulheres grávidas e imunocomprometidos,
case sejam expostos.
O usuário deve treinar sua equipe com técnicas de testes atuais apropriadas: por exemplo, Boas Práticas deLaboratório, ISO/IEC 17025(4), ou ISO 7218(5).
Para reduzir os riscos associados a um resultado falso-negativo levando à liberação do produto contaminado:• Siga o protocolo e realize os testes exatamente conforme especificado nas instruções do produto.
• Armazene o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 conforme indicado na embalagem e
nas instruções do produto.
• Sempre use o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 antes do vencimento.
• Utilize o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 para amostras de alimentos eambientais que tenham sido validadas internamente ou por um terceiro.
• Utilize o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 somente para superfícies, desinfetantes,
protocolos e linhagens de bactérias que tenham sido aprovados internamente ou por um terceiro.
• Para uma amostra ambiental que contém um tampão neutralizante com complexo de sulfonato de arila, faça uma
diluição de 1:2 antes de testar (1 parte da amostra em 1 parte do caldo de enriquecimento estéril). Outra opção
é transferir 10 µL do enriquecimento do tampão neutralizante (NB) para os tubos de Neogen Solução de Lise. Produtos
Neogen® Sample Collection que incluem tampão neutralizante com complexo de sulfonato de arila: RS96010NB,
RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G e HS2410NB2G.
Para reduzir os riscos de exposição a produtos químicos e agentes biológicos nocivos:• É altamente recomendável que a equipe de mulheres do laboratório seja informada sobre o risco parao desenvolvimento do feto resultante da infecção da mãe pela exposição a Listeria monocytogenes.
• Execute testes de agentes patogênicos em um laboratório adequadamente equipado, sob o controle de pessoal
bem treinado. O meio de enriquecimento incubado e equipamentos ou superfícies que tenham entrado em contato
com o meio de enriquecimento incubado podem conter patógenos em níveis suficientes para apresentar riscos
à saúde humana.
• Sempre adote as práticas de segurança padrão em laboratórios, como usar trajes de proteção adequados e óculos deproteção ao manipular reagentes e amostras contaminadas.

2

PT(Português)• Evite o contato com o conteúdo do meio de enriquecimento e dos tubos de reagentes após a amplificação.
• Descarte amostras enriquecidas de acordo com as normas vigentes do setor.
• Amostras que não foram tratadas com aquecimento de forma adequada durante a etapa de lise do ensaio podem serconsideradas um risco biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no Neogen Equipamento de Detecção Molecular.
Para reduzir os riscos de contaminação cruzada ao preparar o ensaio:• Sempre use luvas (para proteger o usuário e evitar a introdução de nucleases).
Para reduzir os riscos associados à contaminação ambiental:• Siga as normas vigentes do setor referentes ao descarte de resíduos contaminados.
Para reduzir os riscos de exposição a líquidos quentes:• Não exceda a temperatura recomendada ao ajustar o aquecedor.
• Não exceda o tempo de aquecimento recomendado.
• Utilize um termômetro calibrado adequado para verificar a temperatura do Neogen® Bloco de Aquecimento para
Detecção Molecular (por exemplo, um termômetro de imersão parcial ou termômetro termopar digital, e não umtermômetro de imersão total). O termômetro deve ser colocado no local indicado do Neogen Bloco de Aquecimentopara Detecção Molecular.

AVISO
Para reduzir os riscos de contaminação cruzada ao preparar o ensaio:• Troque de luvas antes da hidratação do pellet dos reagentes.
• Recomenda-se o uso de ponteiras de pipeta estéreis, com barreira aerossol (filtros) e nível de biologia molecular.
• Utilize uma nova ponteira de pipeta para cada transferência de amostra.
• Utilize Boas Práticas Laboratoriais para transferir a amostra do meio de enriquecimento para o tubo de lise. Para evitar
a contaminação da pipeta, o usuário pode decidir adicionar uma etapa de transferência intermediária. Por exemplo,
o usuário pode transferir cada amostra enriquecida para um tubo estéril.
• Utilize uma estação de trabalho de biologia molecular contendo lâmpada germicida sempre que possível.
Periodicamente, descontamine as bancadas e os equipamentos do laboratório (pipetas, ferramentas de tampar/
destampar etc.) com uma solução de 1–5% (v:v em água) de água sanitária ou solução de remoção de DNA.
Para reduzir os riscos de um resultado falso-positivo:• Nunca abra tubos de reagentes após a amplificação.
• Sempre descarte os tubos contaminados mergulhando-os em uma solução de água sanitária de 1-5% (v:v em água)ou solução equivalente por 1 hora, longe da área de preparação de ensaio.
• Nunca submeta os tubos de reagentes a autoclave após a amplificação.
Consulte a Planilha de Dados de Segurança para obter informações adicionais e informações sobre os regulamentos locais
para descarte.
Em caso de dúvidas sobre aplicações ou procedimentos específicos, acesse nosso site www.neogen.com ou entre em
contato com o seu representante ou distribuidor local Neogen.

Responsabilidade do usuário

Os usuários são responsáveis por se familiarizar com as informações e instruções do produto. Visite nosso sitewww.neogen.com ou entre em contato com o representante ou distribuidor Neogen mais próximo para obter
mais informações.
Ao selecionar qualquer método de teste, é importante considerar que fatores externos, como métodos de amostragem,
protocolos de teste, preparo de amostras, manipulação e técnica laboratorial utilizada, podem influenciar os resultados.
É de responsabilidade do usuário, ao selecionar qualquer método de teste ou produto, avaliar um número suficiente deamostras com as matrizes e testes microbiológicos que permitam assegurar que o método escolhido atenda aos critérios
por ele estabelecidos.
Também é de responsabilidade do usuário determinar se o método de teste e os resultados atendem às exigências de seusclientes e fornecedores.
Como em qualquer outro método de teste, os resultados obtidos com qualquer produto da Neogen Food Safety não
constituem garantia de qualidade das matrizes ou processos com eles testados.
Para ajudar os clientes a avaliar o método para diversas matrizes de alimentos, a Neogen desenvolveu o kit Neogen®
Controle de Matriz para Detecção Molecular. Quando necessário, utilize o Controle de Matriz (MC) para determinar sea matriz pode influenciar os resultados do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2. Testediversas amostras representativas da matriz, ou seja, amostras obtidas a partir de diferentes origens, durante qualquer
período de validação quando adotar o método da Neogen, ou quando testar matrizes novas ou desconhecidas ou matrizes
que tiverem passado por mudanças de processo ou matéria-prima.
Uma matriz pode ser definida como um tipo de produto com propriedades intrínsecas, tais como composição
e processamento. As diferenças entre matrizes podem ser tão simples quanto os efeitos causados pelas diferenças em seu
processamento ou apresentação; por exemplo, cru vs. pasteurizado, fresco vs. desidratado, etc.
3

PT

(Português)Limitação de garantias/recurso limitado

SALVO CONFORME DECLARADO EXPRESSAMENTE EM UMA SEÇÃO DE GARANTIA DE EMPACOTAMENTO
DE PRODUTO INDIVIDUAL, A NEOGEN REJEITA TODAS AS GARANTIAS EXPRESSAS E IMPLÍCITAS, INCLUINDO,ENTRE OUTRAS, QUAISQUER GARANTIAS DE COMERCIALIZAÇÃO OU ADEQUAÇÃO PARA UM DETERMINADO
USO. Se ficar provado que qualquer produto da Neogen Food Safety se encontra defeituoso, a Neogen ou seu distribuidor
autorizado procederá à respectiva substituição ou, se assim o decidir, restituirá o dinheiro da compra do produto. Estes
são os seus únicos termos de recurso. Entre em contato com seu representante da Neogen ou distribuidor autorizado da
Neogen para qualquer dúvida adicional.

Limitações de responsabilidade da Neogen

A NEOGEN NÃO SE RESPONSABILIZARÁ POR QUAISQUER DANOS, SEJAM DIRETOS, INDIRETOS, ESPECIAIS,ACIDENTAIS OU SUBSEQUENTES, INCLUINDO, ENTRE OUTROS, PERDA DE LUCROS. Em nenhuma circunstância nem
ao abrigo seja de qualquer teoria jurídica, a responsabilidade da Neogen deverá exceder o preço de compra dos produtos
supostamente defeituosos.

Armazenamento e descarte

Armazene o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 a 2–8 °C. Não congele. Mantenhao kit longe de luz durante o armazenamento. Após abrir o kit, verifique se a embalagem de alumínio não está danificada.
Se a embalagem estiver danificada, não utilize. Após a abertura, os tubos de reagentes não utilizados devem sempre
ser armazenados na embalagem resselável, juntamente com o dessecante para manter a estabilidade dos reagentes
liofilizados. Armazene as embalagens resseladas a 2–8 °C por, no máximo, 60 dias.
Não utilize o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 após o vencimento. A data devalidade e o número do lote estão anotados no rótulo externo da caixa. Após o uso, o meio de enriquecimento e os
tubos do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 podem conter materiais potencialmente
patogênicos. Quando o teste for concluído, siga os regulamentos padrão vigentes da indústria para descarte de resíduos
contaminados. Consulte a Planilha de Dados de Segurança para obter informações adicionais e informações sobre os
regulamentos locais para descarte.

Instruções de uso

Siga todas as instruções com atenção. Caso contrário, pode haver resultados imprecisos.
Periodicamente, descontamine as bancadas e os equipamentos do laboratório (pipetas, ferramentas de tampar/destamparetc.) com uma solução de 1–5% (v:v em água) de água sanitária ou solução de remoção de DNA.
O usuário deve concluir o treinamento de qualificação do operador (QO) do Sistema de Detecção Molecular Neogen,conforme descrito no documento "Protocolos e Instruções de Qualificação de Instalação (QI)/Qualificação Operacional(QO) para o Neogen Sistema de Detecção Molecular"(6).
Consulte a seção "Instruções específicas para métodos comprovados" para obter os requisitos específicos:
Tabela 3 para protocolos de enriquecimento de acordo com o AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
e Certificado AOAC® Performance Tested MethodSM #081501.
Tabela 4 para protocolos de enriquecimento conforme o certificado NF Validation 3M 01/15-09/16.

Enriquecimento de amostra

As Tabelas 2, 3 e 4 oferecem diretrizes sobre enriquecimento para alimentos e amostras ambientais. É responsabilidade do
usuário validar os protocolos de amostragem alternativos ou diluição para garantir que este método de teste atenda aos
critérios do usuário.

Alimentos

1. Deixe que o meio de enriquecimento Demi Fraser Caldo (incluindo o citrato férrico amoniacal) equilibre à temperatura
ambiente do laboratório.
2. Misture assepticamente o meio de enriquecimento e a amostra conforme as Tabelas 2, 3 ou 4. Para carnes e amostras
altamente particuladas, recomenda-se o uso de sacos de amostra com filtro.
3. Homogeneíze totalmente por mistura, esmagamento (no stomacher) ou mistura manual por 2 ± 0,2 minutos. Incube
a 37 ± 1 °C conforme as Tabelas 2, 3 ou 4.
4. Para laticínios crus (consulte 2, 3 ou 4), transfira 0,1 mL do enriquecimento primário para 10 mL de Fraser Caldo.
Armazene a 37 ±1 °C por até 20–24 horas.

Amostras ambientais

Os dispositivos de coleta de amostra podem ser uma esponja hidratada com uma solução neutralizante para desativar
os efeitos dos desinfetantes. A Neogen recomenda o uso de uma esponja de celulose livre de biocidas. A solução
neutralizante pode ser Caldo Neutralizante Dey-Engley (D/E) ou Caldo Letheen. Recomenda-se desinfetar a área após aamostragem.

4

PT(Português)ADVERTÊNCIA: Caso escolha utilizar tampão neutralizante (NB) que contém complexos de sulfonato de arila comoa solução hidratante para a esponja, será necessário que você execute uma diluição de 1:2 (1 parte da amostra em
1 parte do caldo de enriquecimento estéril) da amostra ambiental enriquecida antes de testar para reduzir os riscos
de um resultado falso-negativo que levaria à liberação de produtos contaminados. Outra opção é transferir 10 μL do
enriquecimento do tampão neutralizante para os tubos de Neogen Solução de Lise.
O tamanho recomendado da área de amostragem para confirmar a presença ou ausência do patógeno na superfícieé de, no mínimo, 100 cm2 (10 cm x 10 cm ou 4” x 4”). Caso a amostragem seja realizada com uma esponja, toda a áreadeve ser coberta em duas direções (esquerda e direita, depois para cima e para baixo) ou as amostras ambientais devem
ser coletadas em conformidade com o protocolo de amostragem vigente ou de acordo com as diretrizes do FDA BAM(1),USDA FSIS MLG(2) ou ISO 18593(7).
1. Deixe que o meio de enriquecimento Demi Fraser Caldo (incluindo o citrato férrico amoniacal) equilibre à temperatura
ambiente do laboratório.
2. Misture assepticamente o meio de enriquecimento e a amostra conforme as Tabelas 2, 3 ou 4.
3. Homogeneíze totalmente por mistura, esmagamento (no stomacher) ou mistura manual por 2 ± 0,2 minutos. Incube
a 37 ± 1 °C por 24–30 horas conforme as Tabelas 2, 3 ou 4.
Tabela 2: Protocolos gerais de enriquecimento a 37 ± 1 °C usando o Demi Fraser Caldo e o Fraser Caldo
conforme necessário.
Matriz de amostra

TamanhodaamostraVolume do
Tempo deCaldo deEnriquecimenEnriquecito (horas)
mento (mL)

Carnestermoprocessadas,
cozidas, curadas,aves, pescados
e peixes
Produtos lácteos
termoprocessados/
pasteurizados

25 g

225

24–30

1
esponja

100 ou 225

24–30

1 swab

10

24–30

25 g

475

28–32

Hortifruti e vegetais
Alimentos
compostos
Amostrasambientais(a)Carnes cruas, aves,pescados e peixes

Enriquecimento secundário(Fraser Caldo)(a)Enriquecimento primário(Demi Fraser Caldo)(a)Matriz de amostra

Laticínios crus

Tamanhodaamostra25 gVolume do
Tempo deCaldo deEnriquecimenEnriquecito (horas)
mento (mL)
225

20–24

Tamanhoda amostra

Temperaturade enriquecimento (°C)

Tempo deEnriquecimento(horas)Transfira0,1 mLpara 10 mL
de Fraser
Caldo

37 ± 1

20–24(a) O Demi Fraser Caldo e o Fraser Caldo devem sempre ser suplementados com suplemento de Fraser Caldo(citrato férrico amoniacal) durante o enriquecimento primário ou secundário.
(b) Volume de amostra transferido para tubos de Neogen Solução de Lise. Consulte a etapa 4.6 da seção Lise.

5

Volumede análise daamostra(b)

10 μL

PT

(Português)Instruções específicas para métodos comprovados
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM Nº 081501

Nos programas OMASM e PTMSM do Instituto de Pesquisa AOAC, o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria
monocytogenes 2 foi constatado como um método eficiente para a detecção de Listeria monocytogenes. As matrizes
testadas no estudo são apresentadas na Tabela 3.
Tabela 3. Protocolos de enriquecimento usando o Demi Fraser Caldo(a) 37 ± 1 °C de acordo com AOAC OMASM 2016.08
e PTMSM Certificado Nº 081501.
Tamanhoda amostra

Volume do Caldode Enriquecimento(mL)

Tempo deEnriquecimento(horas)

Salsicha de carne bovina, queijo fresco,
sorvete de baunilha, queijo cottage deleite com 4% de gordura, achocolatado deleite integral 3%, alface romana, espinafre
cru ensacado, salmão defumado a frio

25 g

225

24–30

Carne de frango crua

25 g

475

28–32

Embutido de peru

125 g

1125

24–30

Melão(b)MelãointeiroVolume suficientepara o melão flutuar

26–30

Aço inoxidável

1 esponja

225

24–30

Concreto selado

1 esponja

100

24–30

Plástico(c)1 swab10

24–30

Amostrasambientais:

Matriz de amostra

Todas as amostras para a validação da AOAC foram homogeneizadas no stomacher, salvo indicação em contrário.
(a)		O Demi Fraser Caldo e o Fraser Caldo devem sempre ser suplementados com suplemento de Fraser Caldo(citrato férrico amoniacal) durante o enriquecimento primário ou secundário.
(b) Homogeneíze a amostra por mistura manual.
(c)		 Homogeneíze a amostra por vórtex.

NF VALIDATION da AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Para obter mais informações sobre o término da validade, consulte o certificado NF VALIDATION disponível no sitesupracitado.
Método certificado NF VALIDATION em conformidade com ISO 16140-2(6) em comparação com ISO 11290(3)Escopo da validação: Amostras de todos os alimentos humanos e ambientais (com exceção de amostras de produção
primária)
Preparo da amostra: As amostras devem ser preparadas conforme EN ISO 11290-1(3) e EN ISO 6887(8)Versão do software: Consulte o certificado

6

(Português)PT

Tabela 4: Protocolos de enriquecimento conforme o método certificado NF VALIDATION 3M 01/15-09/16 a 37 ± 1 °C
usando Demi Fraser Caldo e Fraser Caldo conforme necessário.
Protocolo geral

Tamanho daamostraAmostras detodos os alimentos(exceto carnes
cruas, pescados crus
e laticínios crus)

25 g

Amostras ambientais

25 g,
1 swab,1 lenço

Volume do
Caldo deEnriquecimento (mL)225

Temperatura de Enriquecimento(± 1 °C)

37

25 g

225

Volume deanálise daamostra(a)

24–30

20 µL

Ponto de interrupção
aceitável

• Demi Fraser Caldo até
72 horas• Lisado a -20 °C• Lisado a 4 °C até 72 horas

Enriquecimento primário (Demi Fraser Caldo)(b)Volume do
ProtocoTemperatu- Tempo deTamaCaldo delo espera de EnriEnriquenho da
Enriquecífico
quecimento cimento
amostra cimento(± 1 °C)(horas)(mL)
Carnescruas,
pescados
crus elaticínios
crus

Tempo deEnriquecimento(horas)37

Enriquecimento secundário (Fraser Caldo)(b)TemVolume
TemperatuTamapo dede anára de Enrinho da
Enrique- lise daquecimento
amostracimentoamos(± 1 °C)(horas)tra(c)
Transfira0,1 mLpara
10 mL
de Fraser
Caldo

20–24

Ponto
de interrupção
aceitável
• FraserCaldo
até
72 horas

37

20–24

10 µL

• Lisado a-20 °C• Lisado a
4 °C até
72 horas(a) Volume de amostra transferido para tubos de Neogen Solução de Lise. Consulte a etapa 4.6 da seção Lise.
(b) O Demi Fraser Caldo e o Fraser Caldo devem sempre ser suplementados com suplemento de Fraser Caldo(citrato férrico amoniacal) durante o enriquecimento primário ou secundário.
(c) Volume de amostra transferido para tubos de Neogen Solução de Lise. Consulte a etapa 4.6 da seção Lise.
NOTA: Amostras mais pesadas que 25 g não foram testadas no estudo NF Validation.

Preparo da Neogen® Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular
1. Umedeça um pano em uma solução de 1–5% (v:v em água) de água sanitária ou solução equivalente e limpea Neogen® Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular.
2. Enxágue a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular com água.
3. Utilize uma toalha descartável para secar a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular.
4. Certifique-se de que a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular esteja seca antes de utilizá-la.
Preparação do Neogen® Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular
Coloque o Neogen® Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular diretamente sobre a bancada do laboratório;utilize o bloco de resfriamento à temperatura ambiente do laboratório (20–25 °C).
Preparo do Neogen® Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular
Coloque o Neogen® Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular em uma unidade de aquecimento com bloco seco
duplo. Ligue a unidade de aquecimento de bloco a seco e defina a temperatura para permitir que o Neogen Bloco deAquecimento para Detecção Molecular alcance e mantenha a temperatura de 100 ± 1 °C.
NOTA: dependendo da unidade de aquecimento, aguarde aproximadamente 30 minutos até que o Neogen Bloco
de Aquecimento para Detecção Molecular alcance a temperatura. Utilizando um termômetro calibrado adequado(por exemplo, um termômetro de imersão parcial ou um termômetro digital de termopares, não um termômetro deimersão total) colocado no local indicado, verifique se o Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular está a
100 ± 1 °C.

7

PT(Português)Preparo do Neogen® Equipamento de Detecção Molecular
1. Inicie o Software Neogen® Sistema de Detecção Molecular e faça log in. Entre em contato com o representante
Neogen Food Safety para garantir que você possui a versão mais atualizada do software.
2. Ligue o Neogen Equipamento de Detecção Molecular.
3. Crie ou edite uma execução com dados para cada amostra. Consulte o Manual do Usuário do Neogen Sistema de
Detecção Molecular para obter mais detalhes.
NOTA: o Neogen Equipamento de Detecção Molecular deve estar pronto para o uso antes de inserir a Neogen Bandeja
de Carga Rápida para Detecção Molecular com os tubos de reação. Esta etapa de aquecimento leva aproximadamente
20 minutos e é indicada por uma luz LARANJA na barra de status do instrumento. Quando o equipamento estiver prontopara iniciar uma execução, a barra de status ficará VERDE.
Lise
Remova o fundo do Neogen Rack de Solução de Lise com uma chave de fenda ou espátula antes de inserir o Neogen
Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular.

1. Deixe que os tubos de solução de Lise (Neogen Solução de Lise) cheguem à temperatura ambiente (20–25 °C),deixando as racks fora de refrigeração de um dia para o outro (16–18 horas). A alternativa para equilibrar os tubos
Neogen Solução de Lise à temperatura ambiente é posicioná-los na bancada do laboratório durante pelo menos 2
horas, incubá-los em uma incubadora de 37 ± 1 °C por 1 hora ou colocá-los em um aquecedor com bloco seco duplo
por 30 segundos a 100 °C.
2. Inverta os tubos com tampa para misturar. Prossiga para a próxima etapa em até 4 horas.
3. Remova o caldo de enriquecimento da incubadora.
4. Um tubo de Neogen Solução de Lise é necessário para cada amostra e para a amostra do Controle Negativo (NC)(meio de enriquecimento esterilizado).
4.1 As tiras de tubos Neogen Solução de Lise podem ser cortadas para obter o número desejado de tubos. Selecioneo número de tubos de Neogen Solução de Lise individuais ou as tiras de 8 tubos necessárias. Coloque os tubos de
Neogen Solução de Lise em um rack vazio.
4.2 Para evitar contaminação cruzada, destampe uma tira de tubo Neogen Solução de Lise de cada vez e utilize uma
nova ponteira de pipeta para cada etapa da transferência.
4.3 Transfira as amostras enriquecidas para os tubos Neogen Solução de Lise conforme descrito abaixo:
Primeiro, transfira cada amostra enriquecida para um tubo Neogen Solução de Lise individual. Por último,transfira o NC.
4.4 Utilize a Neogen® Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção Molecular – Lise para destampar uma tira detubos Neogen Solução de Lise – uma tira de cada vez.
4.5 Descarte a tampa do tubo Neogen Solução de Lise – se o lisado for mantido para novo teste, coloque as tampas em
um recipiente limpo para reutilização após a lise.
4.5.1 Para processar o lisado mantido, consulte o Apêndice A.
4.6 Transfira 20 µL de amostra em um tubo Neogen Solução de Lise, exceto se indicado de outro modo nos protocolosdas tabelas 2, 3, ou 4 (por exemplo, laticínios crus ou quando as amostras com tampão neutralizante usarem 10 µL).

8

PT

(Português)20 µl

5. Repita da etapa 4.4 à 4.6 até que todas as amostras individuais tenham sido adicionadas a um tubo Neogen Solução deLise correspondente na tira.
6. Quando todas as amostras tiverem sido transferidas, transfira 20 µL de NC (meio de enriquecimento estéril,por exemplo, Demi Fraser Caldo) para um tubo Neogen Solução de Lise. Não use água como um NC.
7. Verifique se a temperatura do Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular está a 100 ± 1 °C.
8. Coloque a rack descoberta de tubos Neogen Solução de Lise no Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção
Molecular e aqueça por 15 ± 1 minutos. Durante o aquecimento, a Neogen Solução de Lise mudará da cor rosa (frio)para amarelo (quente).
8.1 Amostras que não foram tratadas com aquecimento de maneira adequada durante a etapa de lise do ensaio
podem ser consideradas um risco biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no Neogen Equipamento de
Detecção Molecular.
9. Retire a rack descoberta de tubos Neogen Solução de Lise do bloco de aquecimento e deixe esfriar no Neogen Bloco
de Resfriamento para Detecção Molecular por pelo menos 5 minutos e no máximo 10 minutos. O Neogen Bloco
de Resfriamento para Detecção Molecular, usado em temperatura ambiente, deve ser colocado diretamente sobrea bancada do laboratório. Quando resfriada, a Solução de Lise voltará à cor rosa.
10. Retire o rack de tubos Neogen Solução de Lise do Neogen Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplificação
1. É necessário um Tubo de Reagente de Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 para cadaamostra e para o NC.
1.1 As tiras de tubos de reagentes podem ser cortadas para obter o número de tubos desejado. Selecione o número deTubos de Reagente individuais ou de tiras de 8 tubos necessárias para Neogen Ensaio para Detecção Molecular deListeria monocytogenes 2.
1.2 Coloque os Tubos de Reagente Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 em uma
rack vazia.
1.3 Evite agitar os pellets reagentes da parte inferior dos tubos.
2. Selecione um tubo Neogen Controle de Reagentes e coloque-o na rack.
3. Para evitar contaminação cruzada, destampe uma tira de Tubo Reagente para Neogen Ensaio de Detecção Molecularde Listeria monocytogenes 2 de cada vez e utilize uma nova ponteira de pipeta para cada etapa da transferência.
4. Transfira o lisado para Tubos de Reagente Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 e tubo
Neogen Controle de Reagentes conforme descrito abaixo:
Primeiro, transfira cada amostra de lisado para Tubos de Reagentes individuais de Neogen Ensaio de Detecção
Molecular de Listeria monocytogenes 2 seguido do NC. Por último, hidrate o tubo Neogen Controle de Reagentes.
5. Use a Neogen® Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção Molecular – Reagente para destampar o Tubo deReagente para Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 uma tira de cada vez. Descartea tampa.

9

PT(Português)5.1 Transfira 20 µL de amostra de lisado da ½ superior do líquido (evite o precipitado) do tubo de Neogen Solução
de Lise para o Tubo de Reagente do Neogen Ensaio de Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2
correspondente. Dispense em um ângulo que evite a agitação dos pellets. Misture pipetando gentilmente
5 vezes.
5.2 Repita a etapa 5.1 até que a amostra de lisado individual tenha sido adicionada a um Tubo de Reagente para
Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 correspondente na tira.
5.3 Cubra os Tubos de Reagentes para Neogen Ensaio de Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 com as
tampas extras fornecidas e utilize o lado arredondado da Neogen Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção
Molecular – Reagente para apertar com um movimento de vai e vem, garantindo que a tampa fique bem apertada.
5.4 Repita as etapas 5.1 a 5.3, conforme necessário, para o número de amostras a serem testadas.
5.5 Quando todas as amostras de lisado tiverem sido transferidas, repita as etapas de 5.1 para transferir 20 µL de lisado
do NC para o Tubo Reagente de Neogen Ensaio de Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2.
5.6 Transfira 20 µL de lisado NC para um tubo Neogen Controle de Reagentes. Dispense em um ângulo que evitea agitação dos pellets. Misture pipetando gentilmente 5 vezes.
6. Carregue os tubos tampados em uma Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular limpa edescontaminada. Feche e trave a tampa da Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular.

20 µL

7. Analise e confirme a execução configurada no Software do Neogen Sistema de Detecção Molecular.
8. Clique no botão Iniciar do software e selecione o instrumento a utilizar. A tampa do instrumento selecionado
abre automaticamente.
9. Posicione a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular no Neogen Equipamento de Detecção
Molecular e feche a tampa para iniciar o ensaio. Os resultados são fornecidos em 75 minutos, embora os positivos
possam ser detectados ainda mais cedo.
10.
Depois que o ensaio estiver concluído, remova a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular do
Neogen Equipamento de Detecção Molecular e descarte os tubos mergulhando-os em uma solução de 1–5% (v: v emágua) de água sanitária ou solução equivalente por 1 hora, fora da área de preparação do ensaio.
AVISO: para minimizar o risco de falso-positivos por contaminação cruzada, nunca abra tubos de reagentes que
contenham DNA amplificado. Isto inclui Tubos de Reagente para Neogen Ensaio para Detecção Molecular deListeria monocytogenes 2, Neogen Controle de Reagentes e Tubos de Controle de Matriz. Sempre descarte os tubos dereagentes selados mergulhando-os em uma solução de 1–5% (v:v em água) de água sanitária por 1 hora, fora da área depreparação do ensaio.

Resultados e Interpretação

Um algoritmo interpreta a curva de saída de luz que resulta da detecção da amplificação do ácido nucleico. Os resultados
são analisados automaticamente pelo software e são codificados em cores de acordo com o resultado. Um resultado
é determinado positivo ou negativo pela análise de diversos parâmetros exclusivos das curvas. Resultados positivos
presuntivos são relatados em tempo real, enquanto resultados Negativos e Inspecionar serão exibidos após a conclusão
da execução.
Amostras positivas presuntivas devem ser confirmadas de acordo com os procedimentos operacionais padrão delaboratório, ou seguindo o método de confirmação de referência apropriado(1, 2, 3), começando com a transferência
do enriquecimento primário para caldo de enriquecimento secundário (se aplicável), seguida pelo plaqueamentoe a confirmação dos isolados usando métodos bioquímicos e sorológicos adequados.
NOTA: Até mesmo uma amostra negativa não resultará em leitura zero uma vez que o sistema e os reagentes deamplificação do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2 têm uma leitura de unidade deluz relativa (RLU) em "plano de fundo".
Em casos raros de saída de luz fora do comum, o algoritmo rotula o caso como "Inspecionar". A Neogen recomenda queo usuário repita o ensaio para qualquer amostra Inspecionar. Se o resultado continuar a ser Inspecionar, prossiga com
o teste de confirmação utilizando o método de sua preferência ou conforme especificado pelos regulamentos locais.
10

PT(Português)Tabela 5: Símbolos de resultado para amostras e interpretação conforme fornecidos pelo software do Neogen Sistema de
Detecção Molecular.
Tipo depoço

Símbolo de
resultado do poço

Resultado

Interpretação

AmostraPositivo

A amostra é positiva presuntiva para o patógeno alvo.

AmostraNegativo

A amostra é negativa presuntiva para o patógeno alvo.

AmostraInibidoA matriz da amostra foi inibitória para o ensaio. Pode ser necessário
um novo teste. Consulte a seção de resolução de problemas e o kit
de Instruções do Produto do ensaio para obter mais informações.

AmostraAmostraA presença ou ausência do patógeno alvo foi indeterminada.
Pode ser necessário um novo teste. Consulte a seção de resolução
Inspecionarde problemas e o kit de Instruções do Produto do ensaio para obter
mais informações.
ErroNão foi detectada bioluminescência. Pode ser necessário um
novo teste. Consulte a seção de resolução de problemas e o kit deInstruções do Produto do ensaio para obter mais informações.

Confirmação de resultados segundo o método certificado NF VALIDATION
Opção 1: Uso da norma ISO 11290(3) a partir do enriquecimento de Demi Fraser.
Opção 2: Por isolamento em Ágar PALCAM ou ágar cromogênico formando parte do método do certificado
NF VALIDATION para a detecção da Listeria monocytogenes. A presença de colônias características é suficiente para
confirmar a presença de Listeria monocytogenes.
Opção 3: Utilização de sondas de ácido nucleico conforme descrito na norma EN ISO 7218(5), em colônias isoladas,ágar seletivo (consulte as Opções 1 ou 2).
Opção 4: Utilização de algum outro método certificado pelo NF VALIDATION, cujo princípio seja diferente do Neogen
Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2. Deve ser usado o protocolo completo descrito para esse
segundo método comprovado. Todas as etapas anteriores ao início da confirmação devem ser comuns a ambos osmétodos.
Na ocorrência de resultados divergentes (positivo presuntivo com o método alternativo, não confirmado por um dos meios
acima descritos) o laboratório deve seguir as etapas necessárias para garantir a validade dos resultados obtidos.
Na ocorrência de resultados divergentes (positivo presuntivo com o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Listeria
monocytogenes 2, não confirmado por um dos meios acima descritos) o laboratório deve seguir as etapas necessárias paragarantir a validade dos resultados obtidos.
Em caso de dúvidas sobre aplicações ou procedimentos específicos, acesse nosso site www.neogen.com ou entre em
contato com o seu representante ou distribuidor local Neogen.
Apêndice A. Interrupção de protocolo: armazenamento e reteste de lisados tratados termicamente.
1. Para armazenar um lisado tratado termicamente, tampe novamente o tubo de lise com uma tampa limpa(consulte "Lise", 4.5).
2. Armazene entre 4 e 8 °C por até 72 horas.
3. Prepare uma amostra armazenada para amplificação invertendo de 2 a 3 vezes para misturar.
4. Destampe os tubos.
5. Coloque os tubos de lisado misturados no Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular e aqueça a 100± 1 °C por 5 ± 1 minuto.
6. Retire a rack de tubos Neogen Solução de Lise do bloco de aquecimento e deixe esfriar no Neogen Bloco de
Resfriamento para Detecção Molecular por pelo menos 5 minutos e no máximo 10 minutos.
7. Continue o protocolo na seção "Amplificação", detalhada acima.

11

PT

(Português)Referências:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Explicação dos símbolos dos rótulos de produtos
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

EL(Ελληνικά)Ημερομηνία έκδοσης: 2024-01

Πληροφορίες προϊόντος
Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes
Περιγραφή του προϊόντος και σκοπός χρήσης

Η Neogen® Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes χρησιμοποιείται με το Neogen® ΣύστημαΜοριακής Ανίχνευσης για τη γρήγορη και εξειδικευμένη ανίχνευση του Listeria monocytogenes, σε εμπλουτισμένα
δείγματα τροφίμων και περιβαλλοντικά δείγματα. Οι Neogen Δοκιμασίες Μοριακής Ανίχνευσης χρησιμοποιούν
ισοθερμικό πολλαπλασιασμό με μεσολάβηση βρόχου για τον γρήγορο πολλαπλασιασμό αλληλουχιών νουκλεϊνικών
οξέων με υψηλή ειδικότητα και ευαισθησία, σε συνδυασμό με βιοφωταύγεια για την ανίχνευση του πολλαπλασιασμού.
Τα υποθετικά θετικά αποτελέσματα αναφέρονται σε πραγματικό χρόνο, ενώ τα αρνητικά αποτελέσματαεμφανίζονται μετά την ολοκλήρωση της δοκιμασίας. Τα υποθετικά θετικά αποτελέσματα πρέπει να επιβεβαιώνονταιχρησιμοποιώντας τη μέθοδο που προτιμάτε ή όπως καθορίζεται από τους τοπικούς κανονισμούς(1, 2, 3).
Η Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes προορίζεται για χρήση σε εργαστηριακό
περιβάλλον από επαγγελματίες, εκπαιδευμένους στις εργαστηριακές τεχνικές. Η Neogen δεν έχει τεκμηριώσει τηχρήση αυτού του προϊόντος σε βιομηχανίες άλλες από εκείνες των τροφίμων και ποτών. Για παράδειγμα, η Neogenδεν έχει τεκμηριώσει αυτό το προϊόν για τον έλεγχο δειγμάτων νερού, φαρμακευτικών προϊόντων, καλλυντικών,κλινικών ή κτηνιατρικών δειγμάτων. Η Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes δεν έχειαξιολογηθεί με όλα τα πιθανά πρωτόκολλα ελέγχου ή με όλα τα πιθανά στελέχη βακτηριδίων.
Όπως και με όλες τις δοκιμαστικές μεθόδους, η προέλευση, η σύνθεση και η ποιότητα του μέσου
εμπλουτισμού μπορεί να επηρεάσει τα αποτελέσματα. Παράγοντες όπως οι μέθοδοι δειγματοληψίας,τα πρωτόκολλα ελέγχου, η προετοιμασία των δειγμάτων, ο χειρισμός και η εργαστηριακή τεχνική μπορούν επίσης
να επηρεάσουν τα αποτελέσματα. Η Neogen συνιστά την αξιολόγηση της μεθόδου, συμπεριλαμβανομένου τουμέσου εμπλουτισμού, στο περιβάλλον του χρήστη με τη χρήση επαρκούς αριθμού δειγμάτων με συγκεκριμένα
τρόφιμα και μικροβιακές προκλήσεις ώστε να διασφαλιστεί ότι η μέθοδος πληροί τα κριτήρια του χρήστη.
Η Neogen αξιολόγησε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes με Ζωμό Demi-Fraserπου περιείχε Εναμμώνιο Κιτρικός Σίδηρο και με Ζωμό Fraser που περιείχε Εναμμώνιο Κιτρικός Σίδηρο, βάσει τωναπαιτήσεων. Μια τυπική σύνθεση αυτού του μέσου ακολουθεί παρακάτω.
Τυπική σύνθεση Βάσης Ζωμού Demi-Fraser(g/L)Τυπική σύνθεση Βάσης Ζωμού Fraser(g/L)Χλωριούχο νάτριο

20 gΧλωριούχο νάτριο

20 g

Φωσφορικό νάτριο, διβασικό, άνυδρο*9,6 gΦωσφορικό νάτριο, διβασικό, άνυδρο*9,6 gΕκχύλισμα βόειου κρέατος

5,0 gΕκχύλισμα βόειου κρέατος

5,0 g

Παγκρεατική πέψη Καζεΐνης

5,0 g

Παγκρεατική πέψη Καζεΐνης

5,0 g

Πεπτική πέψη Ζωικού ιστού

5,0 g

Πεπτική πέψη Ζωικού ιστού

5,0 gΕκχύλισμα Ζύμης

5,0 gΕκχύλισμα Ζύμης

5,0 g

Χλωριούχο λίθιο

3,0 g

Χλωριούχο λίθιο

3,0 g

Φωσφορικό κάλιο, μονοβασικό

1,35 gΦωσφορικό κάλιο, μονοβασικό

1,35 gΕσκουλίνη

1,0 g

Εσκουλίνη

1,0 gΥδροχλωρική ακριβλαβίνη

0,0125 gΥδροχλωρική ακριβλαβίνη

0,025 gΝαλιδιξικό οξύ

0,01 gΝαλιδιξικό οξύ

0,02 g* Υποκατάστατο: Φωσφορικό νάτριο, διβασικό, διυδρικό

12,0 gΣυμπλήρωμα Ζωμού Fraser(Συστατικά ανά φιαλίδιο 10 mL. Ένα φιαλίδιο προστίθεται σε ένα λίτρο βασικού θρεπτικού υλικού.)Εναμμώνιος κιτρικός σίδηρος 0,5 g/10 mLΤελικό pH		7,2 ± 0,2 στους 25°C

Το Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης προορίζεται για χρήση με δείγματα που έχουν υποβληθεί σε θερμική
επεξεργασία κατά τη διάρκεια του σταδίου λύσης της δοκιμασίας, το οποίο είναι σχεδιασμένο για την καταστροφή
των οργανισμών που είναι παρόντες στο δείγμα. Δείγματα που δεν έχουν υποβληθεί στην κατάλληλη θερμική
®

1

EL

(Ελληνικά)επεξεργασία κατά τη διάρκεια του σταδίου λύσης της δοκιμασίας μπορούν να θεωρηθούν ως πιθανός βιολογικός
κίνδυνος και ΔΕΝ πρέπει να εισάγονται στο Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης.
Η Neogen Food Safety φέρει πιστοποίηση σύμφωνα με το πρότυπο του Διεθνούς Οργανισμού Τυποποίησης (ISO)
9001 για σχεδιασμό και παραγωγή.
Το κιτ ελέγχου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes περιέχει 96 δοκιμαστικά τεστπου περιγράφονται στον Πίνακα 1.
Πίνακας 1. Επιμέρους στοιχεία του κιτ Neogen Δοκιμής Μοριακής ΑνίχνευσηςΕίδοςΤαυτοποίηση

ΠοσότηταΠεριεχόμενα

ΣχόλιαNeogen® Διάλυμα Λύσης
(LS)Ροζ διάλυμα
σε διαφανείς
δοκιμαστικούς
σωλήνες96 (12 σειρές των
8 δοκιμαστικών
σωλήνων)580 μL LS ανάδοκιμαστικό σωλήνα

Σε στατώ καιέτοιμο προς
χρήση

Neogen® Δοκιμασία
Μοριακής Ανίχνευσης
2 – Listeria monocytogenesΔοκιμαστικοί Σωλήνες
Αντιδραστηρίων

Κίτρινοιδοκιμαστικοί
σωλήνες96 (12 σειρές των
8 δοκιμαστικών
σωλήνων)Λυοφιλοποιημένο
ειδικό μείγμα
πολλαπλασιασμού καιανίχνευσης

Έτοιμο προςχρήσηΕπιπλέον πώματα

Κίτρινα πώματα

96 (12 σειρές των
8 πωμάτων)Neogen® Έλεγχος
Αντιδραστηρίου (RC)Διαφανείς
δοκιμαστικοί
σωλήνες μεαρθρωτό πώμα16 (2 σακουλάκια
των 8 ατομικών
δοκιμαστικών
σωλήνων)Έτοιμο προςχρήσηΛυοφιλοποιημένος
έλεγχος DNA, μείγμα
πολλαπλασιασμού καιανίχνευσης

Έτοιμο προςχρήσηΟ Αρνητικός Έλεγχος, που δεν παρέχεται στο κιτ, είναι ένα στείρο μέσο εμπλουτισμού, π.χ. Ζωμός Demi-Fraser.
Μη χρησιμοποιείτε νερό ως Αρνητικό Έλεγχο.

ΑσφάλειαΟ χρήστης πρέπει να διαβάσει, να κατανοήσει και να ακολουθήσει όλες τις πληροφορίες ασφαλείας στις οδηγίες
για το Neogen Σύστημα Μοριακής Ανίχνευσης και την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria
monocytogenes. Φυλάξτε τις οδηγίες ασφάλειας για μελλοντική αναφορά.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Υποδεικνύει μια επικίνδυνη κατάσταση, η οποία, εάν δεν αποφευχθεί, ενδέχεται να έχει ωςαποτέλεσμα θάνατο ή σοβαρό τραυματισμό ή/και υλική ζημιά.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Υποδεικνύει μια δυνητικά επικίνδυνη κατάσταση, η οποία, εάν δεν αποφευχθεί, ενδέχεται ναέχει ως αποτέλεσμα υλική ζημιά.

W ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗΜη χρησιμοποιείτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes για τη διάγνωση
καταστάσεων σε ανθρώπους ή ζώα.
Η Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes ενδέχεται να παράξει Listeria
monocytogenes σε επίπεδα επαρκή για την πρόκληση θνησιγένειας και θνησιμότητας σε εγκύους και άτομα
σε ανοσοκαταστολή, σε περίπτωση έκθεσης.
Ο χρήστης πρέπει να εκπαιδεύσει το προσωπικό του στις τρέχουσες κατάλληλες τεχνικές ελέγχου: γιαπαράδειγμα, Καλές Εργαστηριακές Πρακτικές, ISO/IEC 17025(4) ή ISO 7218(5).
Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με ένα ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα που οδηγεί στηναποδέσμευση μολυσμένου προϊόντος:• Ακολουθείτε το πρωτόκολλο και διενεργείτε τους ελέγχους ακριβώς όπως περιγράφεται στις πληροφορίες
του προϊόντος.
• Φυλάσσετε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes όπως υποδεικνύεται στησυσκευασία και στις πληροφορίες προϊόντος.
• Χρησιμοποιείτε πάντοτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes μέχρι τηνημερομηνία λήξης της.
• Χρησιμοποιείτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes για περιβαλλοντικά
δείγματα που έχουν επικυρωθεί εσωτερικά ή από τρίτο μέρος.
• Χρησιμοποιείτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes μόνο για επιφάνειες,
αποστειρωτικά μέσα, πρωτόκολλα και βακτηριακά στελέχη που έχουν επικυρωθεί εσωτερικά ή από τρίτο μέρος.

2EL(Ελληνικά)• Για ένα περιβαλλοντικό δείγμα που περιέχει Ρυθμιστικό Διάλυμα Ουδετεροποίησης με αρυλ-σουλφονικό
σύμπλοκο, πραγματοποιήστε αραίωση 1:2 πριν τον έλεγχο (1 μέρος δείγματος σε 1 μέρος στείρου ζωμού
εμπλουτισμού). Μια άλλη επιλογή είναι να μεταφέρετε 10 μL εμπλουτισμού NB μέσα στους δοκιμαστικούς
σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης. Προϊόντα Συλλογής Δειγμάτων της Neogen® που περιέχουν Ρυθμιστικό
Διάλυμα Ουδετεροποίησης με αρυλ-σουλφονικό σύμπλοκο: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G,
HS10NB, HS10NB2G και HS2410NB2G.
Για να μειώσετε τον κίνδυνο που σχετίζεται με την έκθεση σε χημικές ουσίες και βιολογικούς κινδύνους:• Συστήνεται έντονα το γυναικείο εργαστηριακό προσωπικό να ενημερωθεί σχετικά με τον κίνδυνο γιααναπτυσσόμενα έμβρυα που προκύπτει από λοίμωξη της μητέρας μέσω έκθεσης στο Listeria monocytogenes.
• Διενεργείτε τον έλεγχο παθογόνων σε κατάλληλα εξοπλισμένο εργαστήριο υπό τον έλεγχο εκπαιδευμένου
προσωπικού. Επωασμένα μέσα εμπλουτισμού και εξοπλισμός ή επιφάνειες που έχουν έρθει σε επαφή με
επωασμένα μέσα εμπλουτισμού μπορεί να περιέχουν παθογόνα σε επίπεδα επαρκή ώστε να προκαλέσουν
κίνδυνο για την ανθρώπινη υγεία.
• Τηρείτε πάντοτε τις σύνηθες πρακτικές εργαστηριακής ασφάλειας, όπως χρήση κατάλληλης προστατευτικής
ενδυμασίας και προστασίας ματιών, όταν χειρίζεστε αντιδραστήρια και μολυσμένα δείγματα.
• Αποφεύγετε την επαφή με τα περιεχόμενα των μέσων εμπλουτισμού και με τους δοκιμαστικούς σωλήνες
αντιδραστηρίου μετά τον πολλαπλασιασμό.
• Απορρίπτετε τα εμπλουτισμένα δείγματα σύμφωνα με τα τρέχοντα πρότυπα της βιομηχανίας.
• Δείγματα που δεν έχουν υποβληθεί στην κατάλληλη θερμική επεξεργασία κατά τη διάρκεια του σταδίου λύσηςτης δοκιμασίας μπορούν να θεωρηθούν ως πιθανός βιολογικός κίνδυνος και ΔΕΝ πρέπει να εισάγονται στο
Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης.
Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με διασταυρούμενη μόλυνση κατά την προετοιμασίατης δοκιμασίας:• Φοράτε πάντοτε γάντια (για την προστασία του χρήστη και την πρόληψη εισαγωγής νουκλεασών).
Για τη μείωση των κινδύνων που σχετίζονται με τη μόλυνση του περιβάλλοντος:• Ακολουθείτε τα τρέχοντα πρότυπα της βιομηχανίας για την απόρριψη μολυσμένων αποβλήτων.
Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με την έκθεση σε καυτά υγρά:• Μην υπερβαίνετε τη συνιστώμενη ρύθμιση θερμοκρασίας στον θερμαντήρα.
• Μην υπερβαίνετε τον συνιστώμενο χρόνο θέρμανσης.
• Χρησιμοποιείτε ένα κατάλληλο, βαθμονομημένο θερμόμετρο για να επαληθεύσετε τη θερμοκρασία του
Neogen® Ένθετου για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρος Μοριακής Ανίχνευσης (π.χ. θερμόμετρο μερικής
εμβύθισης ή ψηφιακό θερμόμετρο θερμοστοιχείου, όχι θερμόμετρο ολικής εμβύθισης). Το θερμόμετροπρέπει να τοποθετείται στην προβλεπόμενη θέση στο Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα
Μοριακής Ανίχνευσης.

ΣΗΜΕΙΩΣΗΓια να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με διασταυρούμενη μόλυνση κατά την προετοιμασίατης δοκιμασίας:• Αλλάξτε γάντια πριν από την ενυδάτωση των σφαιριδίων αντιδραστηρίου.
• Συνιστάται να χρησιμοποιούνται αποστειρωμένα, με φραγμό για αερολύματα (με φίλτρο), ρύγχη πιπέτας
κατηγορίας μοριακής βιολογίας.
• Χρησιμοποιείτε νέο ρύγχος πιπέτας για κάθε μεταφορά δείγματος.
• Χρησιμοποιείτε Καλές Εργαστηριακές Πρακτικές για τη μεταφορά του δείγματος από τον δοκιμαστικό σωλήνα
εμπλουτισμού στον δοκιμαστικό σωλήνα λύσης. Για να αποφευχθεί η μόλυνση της πιπέτας, ο χρήστης μπορεί
να επιλέξει να προσθέσει ένα ενδιάμεσο βήμα μεταφοράς. Για παράδειγμα, ο χρήστης μπορεί να μεταφέρει κάθεεμπλουτισμένο δείγμα μέσα σε έναν αποστειρωμένο δοκιμαστικό σωλήνα.
• Χρησιμοποιείτε σταθμό εργασίας μοριακής βιολογίας που να περιέχει μικροβιοκτόνο λυχνία, όπου είναι
διαθέσιμη. Απολυμαίνετε περιοδικά τους πάγκους και τον εξοπλισμό του εργαστηρίου (πιπέτες, εργαλεία
σφράγισης/αποσφράγισης κτλ.) με διάλυμα οικιακής χλωρίνης 1-5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) ή με διάλυμα
απομάκρυνσης DNA.
Για να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με ψευδώς θετικό αποτέλεσμα:• Μην ανοίγετε ποτέ τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίου μετά τον πολλαπλασιασμό.
• Απορρίπτετε πάντοτε τους μολυσμένους δοκιμαστικούς σωλήνες μουλιάζοντάς τους σε διάλυμα οικιακής
χλωρίνης ή αντίστοιχο διάλυμα 1-5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) για 1 ώρα και μακριά από την περιοχή
προετοιμασίας της δοκιμασίας.
• Μην κλιβανίσετε ποτέ τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίου μετά τον πολλαπλασιασμό.
Για επιπλέον πληροφορίες συμβουλευθείτε το Φύλλο Δεδομένων Ασφαλείας και τους τοπικούς κανονισμούς
σχετικά με την απόρριψη.
Εάν έχετε ερωτήσεις σχετικά με συγκεκριμένες εφαρμογές ή διαδικασίες, παρακαλούμε επισκεφθείτε την ιστοσελίδα
www.neogen.com ή επικοινωνήστε με τον τοπικό σας αντιπρόσωπο ή διανομέα της Neogen.
3EL(Ελληνικά)Ευθύνη του χρήστηΟι χρήστες είναι υπεύθυνοι να εξοικειωθούν με τις οδηγίες και τις πληροφορίες του προϊόντος. Επισκεφθείτε
την ιστοσελίδα μας στο www.neogen.com ή επικοινωνήστε με τον τοπικό σας αντιπρόσωπο ή διανομέα της
Neogen για περισσότερες πληροφορίες.
Κατά την επιλογή μίας μεθόδου ελέγχου, είναι σημαντικό να αναγνωρίζετε ότι εξωτερικοί παράγοντες, όπωςμέθοδοι δειγματοληψίας, πρωτόκολλα ελέγχου, προετοιμασία και χειρισμός δειγμάτων και η εργαστηριακή τεχνική
μπορούν να επηρεάσουν τα αποτελέσματα.
Αποτελεί ευθύνη του χρήστη η επιλογή οποιασδήποτε μεθόδου ή προϊόντος ελέγχου, για να αξιολογήσει ένανεπαρκή αριθμό δειγμάτων με κατάλληλα είδη τροφίμων και μικροβιακές προκλήσεις, ώστε η επιλεγμένη μέθοδος ναικανοποιεί τα κριτήρια του χρήστη.
Αποτελεί επίσης ευθύνη του χρήστη να καθορίσει ότι όλες οι μέθοδοι δοκιμασίας και τα αποτελέσματαανταποκρίνονται στις απαιτήσεις των πελατών και των προμηθευτών του.
Όπως και με κάθε μέθοδο ελέγχου, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από τη χρήση οποιουδήποτε προϊόντος
Neogen Food Safety δεν συνιστούν εγγύηση της ποιότητας των σχετικών τροφίμων ή των διαδικασιών πουυποβάλλονται σε έλεγχο.
Για να βοηθήσει τους πελάτες να αξιολογήσουν τη μέθοδο για τις διάφορες μήτρες τροφίμων, η Neogen έχειαναπτύξει το κιτ Neogen® Πίνακας Ελέγχου Μοριακής Ανίχνευσης. Όταν χρειάζεται, χρησιμοποιήστε τονΠίνακα Ελέγχου (MC) για να προσδιορίσετε εάν η μήτρα έχει τη δυνατότητα να επηρεάσει τα αποτελέσματα απότην Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes. Ελέγξτε διάφορα δείγματα που είναι
αντιπροσωπευτικά της μήτρας, δηλ. δείγματα που λαμβάνονται από διαφορετική προέλευση, κατά τη διάρκεια
οποιασδήποτε περιόδου επικύρωσης όταν υιοθετείτε τη μέθοδο της Neogen, ή όταν ελέγχετε νέες ή άγνωστες
μήτρες ή μήτρες που έχουν υποβληθεί σε αλλαγές στις πρώτες ύλες ή στην επεξεργασία.
Μια μήτρα μπορεί να οριστεί ως ένας τύπος προϊόντος με ενδογενείς ιδιότητες όπως σύνθεση και επεξεργασία.
Οι διαφορές μεταξύ των μητρών μπορεί να είναι απλές, όπως οι επιδράσεις που προκαλούνται από διαφορές
στην επεξεργασία ή στην παρουσίασή τους, για παράδειγμα, ακατέργαστο έναντι παστεριωμένου, φρέσκο έναντιαποξηραμένου κτλ.

Περιορισμός εγγυήσεων / Περιορισμένη αποκατάστασηΕΚΤΟΣ ΕΑΝ ΔΗΛΩΝΕΤΑΙ ΡΗΤΑ ΣΤΟΝ ΟΡΟ ΤΗΣ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΕΝΗΣ ΕΓΓΥΗΣΗΣ ΣΤΗΝ ΑΤΟΜΙΚΗ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΤΟΥ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ, Η NEOGEN ΠΑΡΑΙΤΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΟΛΕΣ ΤΙΣ ΡΗΤΕΣ ΚΑΙ ΕΝΝΟΟΥΜΕΝΕΣ ΕΓΓΥΗΣΕΙΣ,ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΜΕΝΩΝ ΕΝΔΕΙΚΤΙΚΑ ΑΛΛΑ ΟΧΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΤΙΚΑ, ΟΠΟΙΩΝΔΗΠΟΤΕ ΕΓΓΥΗΣΕΩΝΕΜΠΟΡΕΥΣΙΜΟΤΗΤΑΣ Ή ΚΑΤΑΛΛΗΛΟΤΗΤΑΣ ΓΙΑ ΜΙΑ ΣΥΓΚΕΚΡΙΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ. Εάν οποιοδήποτε προϊόν Neogen
Food Safety είναι ελαττωματικό, η Neogen ή ο εξουσιοδοτημένος διανομέας της, σύμφωνα με την κρίση τους,θα αντικαταστήσουν ή επιστρέψουν την αξία αγοράς του προϊόντος. Αυτοί είναι οι αποκλειστικοί τρόποι
αποκατάστασης. Επικοινωνήστε με τον αντιπρόσωπο της Neogen ή τον εξουσιοδοτημένο διανομέα της Neogen γιαπεραιτέρω ερωτήσεις.

Περιορισμός της ευθύνης της Neogen

Η NEOGEN ΔΕΝ ΕΥΘΥΝΕΤΑΙ ΓΙΑ ΟΠΟΙΑΔΗΠΟΤΕ ΑΠΩΛΕΙΑ Ή ΖΗΜΙΑ, ΕΙΤΕ ΑΜΕΣΗ, ΕΜΜΕΣΗ, ΕΙΔΙΚΗ, ΣΥΜΠΤΩΜΑΤΙΚΗΉ ΑΠΟΘΕΤΙΚΗ ΖΗΜΙΑ, ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΜΕΝΩΝ ΕΝΔΕΙΚΤΙΚΑ, ΑΛΛΑ ΟΧΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΤΙΚΑ, ΔΙΑΦΥΓΟΝΤΩΝ ΚΕΡΔΩΝ.
Η ευθύνη της Neogen δεν υπερβαίνει σε καμία περίπτωση και υπό καμία νομική θεωρία την αξία αγοράς τουπροϊόντος που εικάζεται ότι είναι ελαττωματικό.

Αποθήκευση και απόρριψη

Φυλάσσετε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes στους 2-8°C. Μην καταψύχετε.
Αποφεύγετε την έκθεση του κιτ στο φως κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης. Αφού ανοίξετε το κιτ, ελέγξτε ότι τοαλουμινένιο σακουλάκι είναι άθικτο. Εάν το αλουμινένιο σακουλάκι έχει υποστεί ζημιά, μην χρησιμοποιήσετε
το προϊόν. Μετά το άνοιγμα, οι αχρησιμοποίητοι δοκιμαστικοί σωλήνες αντιδραστηρίων πρέπει πάντοτε ναφυλάσσονται στο επανασφραγιζόμενο σακουλάκι με το αφυγραντικό μέσο, ώστε να διατηρείται η σταθερότητατων λυοφιλοποιημένων αντιδραστηρίων. Φυλάσσετε τα επανασφραγισμένα σακουλάκια στους 2-8°C για χρονικό
διάστημα όχι μεγαλύτερο από 60 ημέρες.
Μην χρησιμοποιείτε την Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes μετά την ημερομηνία
λήξης. Η ημερομηνία λήξης και ο αριθμός παρτίδας επισημαίνονται στην εξωτερική ετικέτα του κουτιού. Μετά τηχρήση, το μέσο εμπλουτισμού και οι δοκιμαστικοί σωλήνες της Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 –Listeria monocytogenes μπορεί ενδεχομένως να περιέχουν παθογόνα υλικά. Μετά την ολοκλήρωση του ελέγχου,τηρείτε τα τρέχοντα βιομηχανικά πρότυπα για την απόρριψη μολυσμένων αποβλήτων. Για επιπλέον πληροφορίες
συμβουλευθείτε το Φύλλο Δεδομένων Ασφαλείας και τους τοπικούς κανονισμούς σχετικά με την απόρριψη.

4EL(Ελληνικά)Οδηγίες χρήσης

Τηρείτε προσεκτικά όλες τις οδηγίες. Η μη τήρηση των οδηγιών μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή αποτελέσματα.
Απολυμαίνετε περιοδικά τους πάγκους και τον εξοπλισμό του εργαστηρίου (πιπέτες, εργαλεία σφράγισης/αποσφράγισης κτλ.) με διάλυμα οικιακής χλωρίνης 1-5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) ή με διάλυμα απομάκρυνσης DNA.
Ο χρήστης πρέπει να ολοκληρώσει την εκπαίδευση πιστοποίησης χειριστή (OQ) για το Neogen ΣύστημαΜοριακής Ανίχνευσης, όπως περιγράφεται στο έγγραφο «Πρωτόκολλα και οδηγίες πιστοποίησης εγκατάστασης(IQ) / πιστοποίησης λειτουργίας (OQ) για το Neogen Σύστημα Μοριακής Ανίχνευσης»(6).
Βλέπε την ενότητα «Ειδικές οδηγίες για επικυρωμένες μεθόδους» για τις ειδικές απαιτήσεις:Πίνακας 3, για πρωτόκολλα εμπλουτισμού σύμφωνα με AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 και AOAC®
Performance Tested MethodSM Πιστοποιητικό #081501.
Πίνακας 4 για τα πρωτόκολλα εμπλουτισμού σύμφωνα με το πιστοποιητικό NF Validation 3M 01/15-09/16.

Εμπλουτισμός του δείγματοςΟι Πίνακες 2, 3 ή 4 παρουσιάζουν οδηγίες για τον εμπλουτισμό δειγμάτων τροφίμων και περιβαλλοντικών
δειγμάτων. Αποτελεί ευθύνη του χρήστη η επικύρωση εναλλακτικών πρωτοκόλλων δειγματοληψίας ή αναλογιών
αραίωσης, προκειμένου να διασφαλιστεί ότι αυτή η μέθοδος ελέγχου πληροί τα κριτήρια του χρήστη.

Τρόφιμα1. Επιτρέψτε στο μέσο εμπλουτισμού Ζωμός Demi-Fraser (περιλαμβάνει εναμμώνιο κιτρικό σίδηρο) ναεξισορροπηθεί σε θερμοκρασία εργαστηριακού περιβάλλοντος.
1. Συνδυάστε άσηπτα το μέσο εμπλουτισμού και το δείγμα, σύμφωνα με τους Πίνακες 2, 3 ή 4. Για όλα ταδείγματα κρέατος και τα δείγματα με υψηλή περιεκτικότητα σε σωματιδιακή ύλη, συνιστάται η χρήση ασκών
φιλτραρίσματος.
1. Ομογενοποιήστε καλά με ανάμειξη, ομογενοποίηση ή ανάμειξη με το χέρι για 2 ± 0,2 λεπτά. Επωάστε στους
37 ± 1°C σύμφωνα με τους Πίνακες 2, 3 ή 4.
1. Για νωπά γαλακτοκομικά προϊόντα (βλ. Πίνακες 2, 3 ή 4), μεταφέρετε 0,1 mL του πρωτογενούς εμπλουτισμού σε
10 mL Ζωμό Fraser. Επωάστε στους 37 ± 1°C για 20-24 ώρες.

Περιβαλλοντικά δείγματαΟι συσκευές συλλογής δειγμάτων μπορεί να είναι ένα σφουγγάρι ενυδατωμένο με ένα διάλυμα ουδετεροποίησης
για την αδρανοποίηση της επίδρασης των απολυμαντικών. Η Neogen συνιστά τη χρήση σπόγγου κυτταρίνης χωρίς
βιοκτόνα. Το διάλυμα ουδετεροποίησης μπορεί να είναι ένας ουδετεροποιητικός ζωμός Dey-Engley (D/E) ή έναςζωμός Letheen. Συνιστάται η απολύμανση της περιοχής μετά τη δειγματοληψία.
ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Σε περίπτωση που επιλέξετε να χρησιμοποιήσετε Ουδετεροποιητικό Ρυθμιστικό Διάλυμα (NB)που περιέχει αρυλ-σουλφονικό σύμπλοκο ως ενυδατικό διάλυμα για τον σπόγγο, απαιτείται να πραγματοποιήσετε
αραίωση 1:2 (1 μέρος δείγματος σε 1 μέρος στείρου ζωμού εμπλουτισμού) του εμπλουτισμένου περιβαλλοντικού
δείγματος πριν από τον έλεγχο, έτσι ώστε να μειώσετε τους κινδύνους που σχετίζονται με ένα ψευδώς αρνητικό
αποτέλεσμα που θα μπορούσε να οδηγήσει σε αποδέσμευση μολυσμένου προϊόντος. Μια άλλη επιλογή είναι ναμεταφέρετε 10 μL ουδετεροποιητικού ρυθμιστικού διαλύματος εμπλουτισμού μέσα στους δοκιμαστικούς σωλήνες
Neogen Διαλύματος Λύσης.
Το προτεινόμενο μέγεθος της περιοχής δειγματοληψίας για επιβεβαίωση της παρουσίας ή απουσίας του παθογόνου
στην επιφάνεια είναι τουλάχιστον 100 cm2 (10 cm x 10 cm ή 4” x 4”). Κατά τη δειγματοληψία με χρήση σπόγγου,καλύψτε ολόκληρη την περιοχή προς δύο κατευθύνσεις (αριστερά προς δεξιά και, στη συνέχεια, επάνω και κάτω)ή συλλέξτε περιβαλλοντικά δείγματα σύμφωνα με το τρέχον πρωτόκολλο δειγματοληψίας σας ή βάσει των οδηγιών
FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) ή ISO 18593(7).
1. Επιτρέψτε στο μέσο εμπλουτισμού Ζωμός Demi-Fraser (περιλαμβάνει εναμμώνιο κιτρικό σίδηρο) ναεξισορροπηθεί σε θερμοκρασία εργαστηριακού περιβάλλοντος.
2. Συνδυάστε άσηπτα το μέσο εμπλουτισμού και το δείγμα, σύμφωνα με τους Πίνακες 2, 3 ή 4.
3. Ομογενοποιήστε καλά με ανάμειξη, ομογενοποίηση ή ανάμειξη με το χέρι για 2 ± 0,2 λεπτά. Επωάστε στους
37 ± 1°C για 24-30 ώρες, σύμφωνα με τους Πίνακες 2, 3 ή 4.

5EL

(Ελληνικά)Πίνακας 2: Γενικά πρωτόκολλα εμπλουτισμού στους 37 ± 1°C με χρήση Ζωμού Demi-Fraser και Ζωμού Fraser,βάσει των απαιτήσεων.
Πίνακαςδειγμάτων

Μέγεθος
δείγματος

Όγκος
ζωμού
εμπλουτισμού (mL)Χρόνος
εμπλουτισμού (ώρες)

25 g

225

24-30

1 σπόγγος

100 ή 225

24-30

1 μάκτρο

10

24-30

25 g

475

28-32

Επεξεργασμένα
με θερμότητα,μαγειρεμένα,αλίπαστακρεατικά,πουλερικά,θαλασσινά
και ψάρια
Επεξεργασμένα
με θερμότητα /παστεριωμένα
γαλακτοκομικά
προϊόνταΛαχανικά
Πολυ-τμηματικά
τρόφιμαΠεριβαλλοντικά
δείγματα(α)Νωπά κρέατα,πουλερικά,θαλασσινά,ψάριαΔευτερογενής εμπλουτισμός
(Ζωμός Fraser)(α)Πρωτογενής εμπλουτισμός
(Ζωμός Demi-Fraser)(α)Πίνακαςδειγμάτων

Νωπά
γαλακτοκομικά
προϊόνταΜέγεθος
δείγματος

25 g

Όγκος
ζωμού
εμπλουτισμού (mL)225Χρόνος
εμπλουτισμού (ώρες)Μέγεθος
δείγματος

Θερμοκρασία
εμπλουτισμού (°C)Χρόνος
εμπλουτισμού
(ώρες)20-24

Μεταφέρετε
0,1 mL σε
10 mL ΖωμόFraser37 ± 1

20-24

Όγκος
ανάλυσηςδείγματος(β)

10 μL(α) Ο Ζωμός Demi-Fraser και ο Ζωμός Fraser πρέπει πάντα να συμπληρώνονται με συμπλήρωμα Ζωμού Fraser(εναμμώνιος κιτρικός σίδηρος) κατά τη διάρκεια πρωτογενή ή δευτερογενή εμπλουτισμού.
(β)	Όγκος δείγματος μεταφερόμενου σε δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης. Ανατρέξτε στο βήμα4.6 της ενότητας «Λύσης».

Ειδικές οδηγίες για επικυρωμένες μεθόδους
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

6

EL(Ελληνικά)Στα προγράμματα του AOAC Research Institute OMASM και PTMSM, η Neogen Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης 2 –Listeria monocytogenes βρέθηκε ότι αποτελεί αποτελεσματική μέθοδο για την ανίχνευση του Listeria monocytogenes.
Οι μήτρες που ελέγχθηκαν στη μελέτη παρουσιάζονται στον Πίνακα 3.
Πίνακας 3. Πρωτόκολλα εμπλουτισμού με χρήση Ζωμού Demi-Fraser(α) στους 37 ± 1°C σύμφωνα με AOAC OMASM
2016.08 και PTMSM Πιστοποιητικό #081501.
Πίνακας δειγμάτων

Μέγεθος
δείγματοςΌγκος ζωμού
εμπλουτισμού
(mL)Χρόνος
εμπλουτισμού
(ώρες)Χοτ ντογκ βόειου κρέατος, queso fresco,
παγωτό βανίλια, τυρί κότατζ με
4% λιπαρά γάλακτος, πλήρες
σοκολατούχο γάλα 3%, μαρούλι ρωμάνα,φρέσκο σπανάκι σε σακούλα, ψυχρά
καπνιστός σολομός

25 g

225

24-30

Νωπό κοτόπουλο

25 g

475

28-32

Γαλοπούλα ντελικατέσεν

125 g

1125

24-30

Ολόκληροπεπόνι

Αρκετός όγκος
προκειμένου ναεπιπλέει το πεπόνι

26-30

Ανοξείδωτος χάλυβας

1 σπόγγος

225

24-30

Στεγανοποιημένο σκυρόδεμα

1 σπόγγος

100

24-30

Πλαστικό(γ)

1 μάκτρο

10

24-30

Περιβαλλοντικά
δείγματα:Πεπόνι(β)Όλα τα δείγματα για την επικύρωση AOAC ομογενοποιήθηκαν με ομογενοποίηση εκτός εάν σημειώνεται άλλως.
(α)		Ο Ζωμός Demi-Fraser και ο Ζωμός Fraser πρέπει πάντα να συμπληρώνονται με συμπλήρωμα Ζωμού Fraser(εναμμώνιος κιτρικός σίδηρος) κατά τη διάρκεια πρωτογενή ή δευτερογενή εμπλουτισμού.
(β) Ομογενοποιήστε το δείγμα με ανάμειξη με το χέρι.
(γ)		 Ομογενοποιήστε το δείγμα με αναδευτήρα.
NF VALIDATION από την AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/enΓια περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τη λήξη της επικύρωσης, παρακαλούμε ανατρέξτε στο πιστοποιητικόNF VALIDATION που διατίθεται στον ιστότοπο που αναφέρεται παραπάνω.
Μέθοδος πιστοποίησης NF VALIDATION σύμφωνα με το πρότυπο ISO 16140-2(6) σε σύγκριση με το πρότυπο
ISO 11290(3)Πεδίο εγκυρότητας: Όλα τα δείγματα ανθρώπινων τροφίμων και περιβαλλοντικά δείγματα (εκτός δειγμάτων
πρωτογενούς παραγωγής)Προετοιμασία δείγματος: Τα δείγματα πρέπει να προετοιμάζονται σύμφωνα με τα πρότυπα EN ISO 11290-1(3) και
EN ISO 6887(8)Έκδοση λογισμικού: Βλ. πιστοποιητικό

7EL(Ελληνικά)Πίνακας 4: Πρωτόκολλα εμπλουτισμού σύμφωνα με πιστοποιημένη από την NF VALIDATION μέθοδο 3M
01/15-09/16 στους 37 ± 1°C με χρήση Ζωμού Demi-Fraser και Ζωμού Fraser βάσει των απαιτήσεων.
Γενικό πρωτόκολλο

Μέγεθος
δείγματοςΌλα τα δείγματατροφίμων (εκτός
νωπών κρεάτων,νωπών θαλασσινών
και νωπών
γαλακτοκομικών
προϊόντων)25 g

Περιβαλλοντικά
δείγματαΕιδικό
πρωτόκολλο

Νωπά κρέατα, νωπά
θαλασσινά
και νωπά
γαλακτοκομικά
προϊόντα

Όγκος
ζωμού
εμπλουτισμού (mL)Θερμοκρασία
εμπλουτισμού (±1°C)Χρόνος
εμπλουτισμού
(ώρες)

Όγκοςανάλυσης δείγματος(α)Αποδεκτό σημείο
παρέμβασης• Ζωμός Demi-Fraser έως
72 ώρες
225

37

24-30

20 µL

• Διαδικασία λύματοςστους -20°C• Διαδικασία λύματοςστους 4°C έως 72 ώρες25 g, 1μάκτρο ή 1μαντηλάκι

Δευτερογενής εμπλουτισμός
(Ζωμός Fraser)(β)Πρωτογενής εμπλουτισμός
(Ζωμός Demi-Fraser)(β)ΘερμοΜέΌγκος
κρασίαγεθος
ζωμούεμπλουδείγ- εμπλουτιτισμού
ματος σμού (mL)(±1°C)

Χρόνος
εμπλουτισμού
(ώρες)

Μέγεθος
δείγματος

Θερμοκρασία
εμπλουτισμού
(±1°C)

Χρόνος
εμπλουτισμού
(ώρες)

Όγκοςανάλυσηςδείγματος(γ)Αποδεκτό
σημείο παρέμβασης• Ζωμός
Fraser έως
72 ώρες

25 g

225

37

20-24

Μεταφέρετε
0,1 mL σε
10 mL ΖωμόFraser

37

20-24

10 µL

• Διαδικασία
λύματος
στους
-20°C

• Διαδικασία
λύματος
στους
4°C έως
72 ώρες(α) Όγκος δείγματος μεταφερόμενου σε δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης. Ανατρέξτε στο βήμα4.6 της ενότητας «Λύσης».
(β) Ο Ζωμός Demi-Fraser και ο Ζωμός Fraser πρέπει πάντα να συμπληρώνονται με συμπλήρωμα Ζωμού Fraser(εναμμώνιος κιτρικός σίδηρος) κατά τη διάρκεια πρωτογενή ή δευτερογενή εμπλουτισμού.
(γ) Όγκος δείγματος μεταφερόμενου σε δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης. Ανατρέξτε στο βήμα4.6 της ενότητας «Λύσης».
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Δείγματα μεγαλύτερα των 25 g δεν έχουν ελεγχθεί στη μελέτη NF Validation.

Προετοιμασία του Neogen® Δίσκου Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης
1. Βρέξτε ένα πανί με διάλυμα οικιακής χλωρίνης ή αντίστοιχο διάλυμα 1-5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) καισκουπίστε τον Neogen® Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης.
2. Ξεπλύνετε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης με νερό.
3. Χρησιμοποιήστε μια πετσέτα μίας χρήσης για να στεγνώσετε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής
Ανίχνευσης.
4. Διασφαλίστε ότι ο Neogen Δίσκος Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης είναι στεγνός πριν τη χρήση.

8EL(Ελληνικά)Προετοιμασία του Neogen® Ένθετου Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης
Τοποθετήστε την Neogen® Υποδοχή Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης απευθείας στον εργαστηριακό πάγκο.
Χρησιμοποιήστε την υποδοχή ψύξης σε εργαστηριακή θερμοκρασία περιβάλλοντος (20-25°C).
Προετοιμασία του Neogen® Ένθετου για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρος Μοριακής Ανίχνευσης
Τοποθετήστε το Neogen® Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης σε μια διπλή μονάδα
υποδοχής σωλήνων ξηρής θέρμανσης. Ενεργοποιήστε τη μονάδα ξηρής θέρμανσης και ρυθμίστε τη θερμοκρασία
για να επιτρέψετε στο Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης να φθάσει και ναδιατηρήσει θερμοκρασία 100 ± 1°C.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ανάλογα με τη μονάδα θέρμανσης, αφήστε το Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα
Μοριακής Ανίχνευσης να φθάσει στην κατάλληλη θερμοκρασία για περίπου 30 λεπτά. Χρησιμοποιώνταςένα κατάλληλο, βαθμονομημένο θερμόμετρο (π.χ. θερμόμετρο μερικής εμβύθισης ή ψηφιακό θερμόμετροθερμοστοιχείου, όχι θερμόμετρο ολικής εμβύθισης) τοποθετημένο στην καθορισμένη θέση, επαληθεύστε ότι το
Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης βρίσκεται στους 100 ± 1°C.
Προετοιμασία του Neogen® Οργάνου Μοριακής Ανίχνευσης
1. Εκκινήστε το Neogen® Σύστημα Μοριακής Ανίχνευσης και συνδεθείτε. Επικοινωνήστε με τον τοπικό σαςαντιπρόσωπο της Neogen Food Safety ώστε να διασφαλίσετε ότι διαθέτετε την τελευταία έκδοση του λογισμικού.
2. Ενεργοποιήστε το Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης.
3. Δημιουργήστε ή επεξεργαστείτε μια διαδικασία με δεδομένα για κάθε δείγμα. Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης
του Neogen Σύστημα Μοριακής Ανίχνευσης για λεπτομέρειες.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης πρέπει να φθάσει σε κατάσταση Ετοιμότητας προτού
εισαχθεί ο Neogen Δίσκος Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης με τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντίδρασης.
Αυτό το στάδιο θέρμανσης διαρκεί περίπου 20 λεπτά και υποδεικνύεται με ένα ΠΟΡΤΟΚΑΛΙ φως στη γραμμή
κατάστασης του συστήματος. Όταν το σύστημα είναι έτοιμο για να ξεκινήσει μια διαδικασία, η γραμμή
κατάστασης θα γίνει ΠΡΑΣΙΝΗ.
Λύση
Αφαιρέστε τον πυθμένα του στατώ Neogen Διαλύματος Λύσης με ένα κατσαβίδι ή μια σπάτουλα πριν τοτοποθετήσετε στο Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης.

1. Αφήστε τους δοκιμαστικούς σωλήνες διαλύματος λύσης (Neogen Διάλυμα Λύσης) να θερμανθούν αφήνοντας
το στατώ σε θερμοκρασία δωματίου (20-25°C) κατά τη διάρκεια της νύχτας (16-18 ώρες). Εναλλακτικές λύσεις
για την εξισορρόπηση των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης σε θερμοκρασία δωματίου είναι
να αφήσετε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης επάνω στον πάγκο του εργαστηρίου γιατουλάχιστον 2 ώρες, να επωάσετε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης σε επωαστήρα
37 ± 1°C για 1 ώρα ή να τους τοποθετήσετε σε διπλή μονάδα υποδοχής σωλήνων ξηρής θέρμανσης για30 δευτερόλεπτα στους 100°C.
2. Αναστρέψτε τους πωματισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες για να αναμίξετε. Προχωρήστε στο επόμενο στάδιο
εντός 4 ωρών.
3. Βγάλτε τον ζωμό εμπλουτισμού από τον επωαστήρα.
4. Απαιτείται ένας δοκιμαστικός σωλήνας Neogen Διαλύματος Λύσης για κάθε δείγμα και δείγμα Αρνητικού
Ελέγχου (NC) (στείρο μέσο εμπλουτισμού).
4.1 Οι σειρές των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης μπορούν να κοπούν στον επιθυμητό
αριθμό δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης. Επιλέξτε τον αριθμό των μεμονωμένων
δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης ή τις απαιτούμενες σειρές των 8 δοκιμαστικών σωλήνων.
Τοποθετήστε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης σε ένα κενό στατώ.
4.2 Για να αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση, αποσφραγίζετε μία σειρά δοκιμαστικών σωλήνων
Neogen Διαλύματος Λύσης κάθε φορά, και χρησιμοποιείτε νέο ρύγχος πιπέτας για κάθε βήμα μεταφοράς.
4.3 Μεταφέρετε τα εμπλουτισμένα δείγματα στους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Διαλύματος Λύσης όπωςπεριγράφεται παρακάτω:9EL(Ελληνικά)Μεταφέρετε κάθε εμπλουτισμένο δείγμα σε μεμονωμένο σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης πρώτα.
Μεταφέρετε τον NC τελευταίο.
4.4 Χρησιμοποιήστε το Neogen® Εργαλείο Σφράγισης / Αποσφράγισης – Λύσης Μοριακής Ανίχνευσης για νααποσφραγίσετε μία σειρά δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης – μία σειρά κάθε φορά.
4.5 Απορρίψτε το πώμα του δοκιμαστικού σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης – Εάν το λύμα πρόκειται ναδιατηρηθεί για επανέλεγχο, τοποθετήστε τα πώματα μέσα σε ένα καθαρό δοχείο, για εκ νέου εφαρμογή μετάτη λύση.
4.5.1 Για την επεξεργασία του διατηρημένου λύματος, βλ. Παράρτημα A.
4.6 Μεταφέρετε 20 µL δείγματος μέσα σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης, εκτός εάναναφέρεται διαφορετικά στα Πρωτόκολλα από τους Πίνακες 2, 3 ή 4 (π.χ. νωπά γαλακτοκομικά προϊόντα ή κατάτη χρήση περιβαλλοντικών δειγμάτων με ουδετεροποιητικό ρυθμιστικό διάλυμα, χρησιμοποιείτε 10 μL).
20 µl

5. Επαναλάβετε τα βήματα 4.4 έως 4.6 μέχρι το κάθε επιμέρους δείγμα να έχει προστεθεί σε έναν αντίστοιχο
δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης της σειράς.
6. Όταν έχουν μεταφερθεί όλα τα δείγματα, μεταφέρετε 20 µL NC (στείρο μέσο εμπλουτισμού, π.χ. Ζωμός
Demi-Fraser) μέσα σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης. Μην χρησιμοποιείτε νερό ως NC.
7. Επαληθεύστε ότι η θερμοκρασία του Neogen Ένθετου για Υποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης
βρίσκεται στους 100 ± 1°C.
8. Τοποθετήστε το ακάλυπτο στατώ δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης στο Neogen Ένθετο γιαΥποδοχή Σωλήνων Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης και θερμάνετε για 15 ± 1 λεπτά. Κατά τη διάρκεια τηςθέρμανσης, το Neogen Διάλυμα Λύσης θα αλλάξει από ροζ (ψυχρό) σε κίτρινο (θερμό).
8.1 Δείγματα που δεν έχουν υποβληθεί στην κατάλληλη θερμική επεξεργασία κατά τη διάρκεια του σταδίου
λύσης της δοκιμασίας μπορούν να θεωρηθούν ως πιθανός βιολογικός κίνδυνος και ΔΕΝ πρέπει να εισάγονταιστο Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης.
9. Αφαιρέστε το ακάλυπτο στατώ των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης από το ένθετο
θέρμανσης και αφήστε το να κρυώσει στο Neogen Ένθετο Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης
για τουλάχιστον 5 λεπτά και μέγιστο 10 λεπτά. Το Neogen Ένθετο Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής
Ανίχνευσης, όταν χρησιμοποιείται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος, πρέπει να τοποθετηθεί απευθείας επάνω
στον πάγκο του εργαστηρίου. Όταν κρυώσει, το διάλυμα λύσης θα αποκτήσει ξανά ροζ χρώμα.
10. Αφαιρέστε το στατώ των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης από το Neogen Ένθετο Υποδοχής
Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Πολλαπλασιασμός
1. Απαιτείται ένας δοκιμαστικός σωλήνας αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 –Listeria monocytogenes για κάθε δείγμα και τον NC.
1.1 Οι σειρές των δοκιμαστικών σωλήνων αντιδραστηρίων μπορούν να κοπούν στον επιθυμητό αριθμό
δοκιμαστικών σωλήνων. Επιλέξτε τον απαιτούμενο αριθμό των μεμονωμένων δοκιμαστικών σωλήνων
αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes ή τις απαιτούμενεςσειρές των 8 δοκιμαστικών σωλήνων.
10EL(Ελληνικά)1.2 Τοποθετήστε τους δοκιμαστικούς σωλήνες Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria
monocytogenes σε ένα κενό στατώ.
1.3 Αποφύγετε να διαταράξετε τα σφαιρίδια του αντιδραστηρίου από τον πάτο των δοκιμαστικών σωλήνων.
2. Επιλέξτε 1 δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Έλεγχος Αντιδραστηρίου και τοποθετήστε τον στο στατώ.
3. Για να αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση, αποσφραγίζετε μία σειρά δοκιμαστικών σωλήνων
αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes κάθε φορά, καιχρησιμοποιείτε νέο ρύγχος πιπέτας για κάθε βήμα μεταφοράς.
4. Μεταφέρετε τα λύματα σε δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίων Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης
2 – Listeria monocytogenes και δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Έλεγχος Αντιδραστηρίου, όπως περιγράφεται
παρακάτω:Μεταφέρετε κάθε λύμα δείγματος στους επιμέρους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίου NeogenΔοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes πρώτα και στη συνέχεια τον NC. Ενυδατώστε
τον δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Έλεγχος Αντιδραστηρίου τελευταίο.
5. Χρησιμοποιήστε το Neogen® Εργαλείο Σφράγισης / Αποσφράγισης – Αντιδραστηρίου Μοριακής Ανίχνευσης γιανα αποσφραγίσετε τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 –Listeria monocytogenes – μία σειρά δοκιμαστικού σωλήνα αντιδραστηρίου κάθε φορά. Απορρίψτε το πώμα.
5.1 Μεταφέρετε 20 µL του λύματος δείγματος από το επάνω ½ του υγρού (αποφύγετε το ίζημα)του δοκιμαστικού σωλήνα Neogen Διαλύματος Λύσης στον αντίστοιχο δοκιμαστικό σωλήνα
αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes. Χορηγήστε υπόγωνία για να αποφύγετε να διαταράξετε τα σφαιρίδια. Αναμίξτε πιπετάροντας προσεκτικά πάνωκάτω 5 φορές.
5.2 Επαναλάβετε το βήμα 5.1 μέχρι το επιμέρους λύμα δείγματος να έχει προστεθεί σε έναν αντίστοιχο
δοκιμαστικό σωλήνα Αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenesστη σειρά.
5.3 Καλύψτε τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίου Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria
monocytogenes με τα παρεχόμενα επιπλέον πώματα και χρησιμοποιήστε τη στρογγυλεμένη πλευρά του
Neogen Εργαλείου Σφράγισης / Αποσφράγισης – Αντιδραστηρίου Μοριακής Ανίχνευσης για να ασκήσετε
πίεση με μια κίνηση εμπρός-πίσω, διασφαλίζοντας ότι το πώμα έχει εφαρμοστεί σφιχτά.
5.4 Επαναλάβετε τα βήματα 5.1 έως 5.3 όπως απαιτείται, για τον αριθμό των δειγμάτων που είναι προς έλεγχο.
5.5 Όταν έχουν μεταφερθεί όλα τα λύματα δείγματος, επαναλάβετε το βήμα 5.1 για να μεταφέρετε 20 µL τουλύματος NC μέσα σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria
monocytogenes.
5.6 Μεταφέρετε 20 µL του λύματος NC μέσα σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Έλεγχος
Αντιδραστηρίου. Χορηγήστε υπό γωνία για να αποφύγετε να διαταράξετε τα σφαιρίδια. Αναμίξτε
πιπετάροντας προσεκτικά πάνω-κάτω 5 φορές.
6. Φορτώστε τους σφραγισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες σε έναν καθαρό και απολυμασμένο Neogen Δίσκο
Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης. Κλείστε και ασφαλίστε το καπάκι του Neogen Δίσκου Ταχείας
Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης.

20 µL

7. Επιθεωρήστε και επιβεβαιώστε τη διαμορφωμένη διαδικασία μέσα στο λογισμικό του Neogen ΣυστήματοςΜοριακής Ανίχνευσης.
8. Κάντε κλικ στο κουμπί Έναρξη στο λογισμικό και επιλέξτε το όργανο που θα χρησιμοποιηθεί. Το καπάκι τουεπιλεγμένου οργάνου ανοίγει αυτόματα.
9. Τοποθετήστε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης μέσα στο Neogen Όργανο Μοριακής
Ανίχνευσης και κλείστε το καπάκι για να ξεκινήσετε τη δοκιμασία. Τα αποτελέσματα παρέχονται εντός 75 λεπτών,αν και τα θετικά μπορεί να ανιχνευθούν νωρίτερα.

11

EL

(Ελληνικά)10.Αφού ολοκληρωθεί η δοκιμασία, αφαιρέστε τον Neogen Δίσκο Ταχείας Φόρτωσης Μοριακής Ανίχνευσης απότο Neogen Όργανο Μοριακής Ανίχνευσης και απορρίψτε τους δοκιμαστικούς σωλήνες μουλιάζοντάς τους σεδιάλυμα οικιακής χλωρίνης ή αντίστοιχο διάλυμα 1-5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) για 1 ώρα και μακριά από τηνπεριοχή προετοιμασίας της δοκιμασίας.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για την ελαχιστοποίηση του κινδύνου ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων λόγω διασταυρούμενηςμόλυνσης, ποτέ μην ανοίγετε τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίων που περιέχουν πολλαπλασιασμένο
DNA. Αυτό περιλαμβάνει τους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίων Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης
2 – Listeria monocytogenes, τον δοκιμαστικό σωλήνα Neogen Έλεγχος Αντιδραστηρίου και τον δοκιμαστικό
σωλήνα Πίνακας Ελέγχου. Απορρίπτετε πάντοτε τους σφραγισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες αντιδραστηρίων
μουλιάζοντάς τους σε διάλυμα οικιακής χλωρίνης ή αντίστοιχο διάλυμα 1-5% (όγκο κατ' όγκο σε νερό) για 1 ώρακαι μακριά από την περιοχή προετοιμασίας της δοκιμασίας.

Αποτελέσματα και ερμηνεία

Ένας αλγόριθμος ερμηνεύει την καμπύλη παροχής φωτός που προκύπτει από την ανίχνευση του πολλαπλασιασμού
των νουκλεϊνικών οξέων. Τα αποτελέσματα αναλύονται αυτόματα από το λογισμικό και κωδικοποιούνται
χρωματικά με βάση το αποτέλεσμα. Ένα Θετικό ή Αρνητικό αποτέλεσμα καθορίζεται μέσω ανάλυσης ενός αριθμού
μοναδικών παραμέτρων της καμπύλης. Τα υποθετικά θετικά αποτελέσματα αναφέρονται σε πραγματικό χρόνο,ενώ τα Αρνητικά και τα αποτελέσματα Προς Επιθεώρηση εμφανίζονται μετά την ολοκλήρωση της διαδικασίας.
Τα υποθετικά θετικά δείγματα πρέπει να επιβεβαιώνονται σύμφωνα με τις σύνηθες διαδικασίες λειτουργίας τουεργαστηρίου ή ακολουθώντας την κατάλληλη επιβεβαίωση μεθόδου αναφοράς(1, 2, 3), αρχίζοντας με τη μεταφοράαπό τον πρωτογενή εμπλουτισμό σε δευτερογενή ζωμό εμπλουτισμού (όπου ισχύει) και στη συνέχεια επίστρωση
και επιβεβαίωση των απομονώσεων χρησιμοποιώντας τις κατάλληλες βιοχημικές και οροδιαγνωστικές μεθόδους.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ακόμα και ένα αρνητικό δείγμα δεν θα δώσει μηδενική ένδειξη, καθώς το σύστημα και τααντιδραστήρια πολλαπλασιασμού Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes έχουν μιασχετική μονάδα φωτός (RLU) «υπόβαθρου».
Στη σπάνια περίπτωση ασυνήθιστου φωτισμού, ο αλγόριθμος το επισημαίνει ως «Προς Επιθεώρηση».
Η Neogen συνιστά στον χρήστη να επαναλάβει τη δοκιμασία για όλα τα δείγματα Προς Επιθεώρηση. Εάν τοαποτέλεσμα συνεχίζει να είναι Προς Επιθεώρηση, προχωρήστε στον έλεγχο επιβεβαίωσης χρησιμοποιώντας τημέθοδο που προτιμάτε ή όπως καθορίζεται από τους τοπικούς κανονισμούς.
Πίνακας 5: Σύμβολα αποτελεσμάτων για δείγματα και ερμηνεία, όπως παρέχονται από το λογισμικό του
Neogen Συστήματος Μοριακής Ανίχνευσης.
Τύποςυποδοχής

Σύμβολοαποτελέσματοςυποδοχής

ΑποτέλεσμαΕρμηνεία

ΔείγμαΘετικό

Το δείγμα είναι υποθετικά θετικό για το στοχευόμενο παθογόνο.

ΔείγμαΑρνητικό

Το δείγμα είναι αρνητικό για το στοχευόμενο παθογόνο.

ΔείγμαΔείγμαΔείγμαΟ πίνακας δειγμάτων ήταν ανασταλτικός για τη δοκιμασία.
Ενδέχεται να χρειάζεται εκ νέου εξέταση. Ανατρέξτε στηνΑνασταλτικό
ενότητα «Αντιμετώπιση προβλημάτων» και τις Πληροφορίες
προϊόντος του κιτ δοκιμασίας για περισσότερες πληροφορίες.
Προςεπιθεώρηση

Δεν ήταν δυνατός ο καθορισμός της παρουσίας ή της απουσίας
του στοχευόμενου παθογόνου. Ενδέχεται να χρειάζεται εκ νέουεξέταση. Ανατρέξτε στην ενότητα «Αντιμετώπιση προβλημάτων»και τις Πληροφορίες προϊόντος του κιτ δοκιμασίας γιαπερισσότερες πληροφορίες.

ΣφάλμαΔεν ανιχνεύθηκε βιοφωταύγεια. Ενδέχεται να χρειάζεται εκ νέουεξέταση. Ανατρέξτε στην ενότητα «Αντιμετώπιση προβλημάτων»και τις Πληροφορίες προϊόντος του κιτ δοκιμασίας γιαπερισσότερες πληροφορίες.

Επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων σύμφωνα με τη μέθοδο πιστοποίησης NF VALIDATIONΕπιλογή 1: Χρησιμοποιώντας το πρότυπο ISO 11290(3), ξεκινώντας από τον εμπλουτισμό Demi-Fraser.

12

EL

(Ελληνικά)Επιλογή 2: Με απομόνωση σε άγαρ PALCAM ή σε χρωμογόνο άγαρ που αποτελεί μέρος μεθόδου πιστοποίησηςNF VALIDATION για την ανίχνευση Listeria monocytogenes. Η παρουσία χαρακτηριστικών αποικιών επαρκεί για τηνεπιβεβαίωση της παρουσίας Listeria monocytogenes.
Επιλογή 3: Χρησιμοποιώντας ανιχνευτές νουκλεϊνικών οξέων, όπως περιγράφεται στο πρότυπο EN ISO 7218(5),σε απομονωμένες αποικίες, από επιλεκτικό άγαρ (βλ. Επιλογή 1 ή 2).
Επιλογή 4: Χρησιμοποιώντας οποιαδήποτε άλλη μέθοδο πιστοποίησης NF VALIDATION, η αρχή της οποίας
πρέπει να διαφέρει από αυτήν της Neogen Δοκιμασίας Μοριακής Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes. Πρέπει
να χρησιμοποιείται το πλήρες πρωτόκολλο που περιγράφεται για αυτήν τη δεύτερη μέθοδο επικύρωσης. Όλα ταβήματα πριν από την έναρξη της επιβεβαίωσης πρέπει να είναι κοινά και στις δύο μεθόδους.
Στην περίπτωση ασυμφωνίας των αποτελεσμάτων (υποθετικά θετικά με την εναλλακτική μέθοδο, που δεν έχουν
επιβεβαιωθεί με έναν από τους τρόπους που περιγράφονται παραπάνω), το εργαστήριο πρέπει να ακολουθήσει τααπαραίτητα βήματα για να διασφαλίσει την εγκυρότητα του αποτελέσματος που λαμβάνεται.
Στην περίπτωση ασυμφωνίας των αποτελεσμάτων (υποθετικά θετικά με τη Neogen Δοκιμασία Μοριακής
Ανίχνευσης 2 – Listeria monocytogenes που δεν έχουν επιβεβαιωθεί με έναν από τους τρόπους που περιγράφονται
παραπάνω), το εργαστήριο πρέπει να ακολουθήσει τα απαραίτητα βήματα για να διασφαλίσει την εγκυρότητα τωναποτελεσμάτων που λαμβάνονται.
Εάν έχετε ερωτήσεις σχετικά με συγκεκριμένες εφαρμογές ή διαδικασίες, παρακαλούμε επισκεφθείτε την ιστοσελίδα
www.neogen.com ή επικοινωνήστε με τον τοπικό σας αντιπρόσωπο ή διανομέα της Neogen.
Παράρτημα A. Διακοπή πρωτοκόλλου: Αποθήκευση και επανέλεγχος θερμικά επεξεργασμένων λυμάτων.
1. Για να αποθηκεύσετε ένα θερμικά επεξεργασμένο λύμα, επαναπωματίστε το δοκιμαστικό σωλήνα λύσης με ένακαθαρό πώμα (βλ. «Λύση», 4.5).
2. Αποθηκεύστε στους 4 έως 8°C για έως 72 ώρες.
3. Προετοιμάστε ένα αποθηκευμένο δείγμα για πολλαπλασιασμό αναστρέφοντας 2-3 φορές για να αναμίξετε.
4. Αφαιρέστε το πώμα από τους δοκιμαστικούς σωλήνες.
5. Τοποθετήστε τους δοκιμαστικούς σωλήνες με το αναμεμιγμένο λύμα στο Neogen Ένθετο για Υποδοχή Σωλήνων
Θερμαντήρα Μοριακής Ανίχνευσης και θερμάνετε στους 100 ± 1°C για 5 ± 1 λεπτά.
6. Αφαιρέστε το στατώ των δοκιμαστικών σωλήνων Neogen Διαλύματος Λύσης από το ένθετο θέρμανσης καιαφήστε το να κρυώσει στο Neogen Ένθετο Υποδοχής Σωλήνων για Ψύξη Μοριακής Ανίχνευσης για τουλάχιστον
5 λεπτά και μέγιστο 10 λεπτά.
7. Συνεχίστε το πρωτόκολλο στην ενότητα «Ενίσχυση» που περιγράφεται λεπτομερώς παραπάνω.

Παραπομπές:1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of
Listeria monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identificationof Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniquesfrom surfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination.

Επεξήγηση Συμβόλων ετικετών προϊόντων
info.neogen.com/symbols

13

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

PL(Polski)

Data wydania: 2024-01

Informacje o produkcie
Molekularny test do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes
Opis i przeznaczenie produktu

Molekularny test Neogen® do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes stosuje się razem z Systemem do Diagnostyki
Molekularnej Neogen® w celu szybkiego i swoistego wykrywania bakterii Listeria monocytogenes w próbkach żywności oraz
w wymazach środowiskowych. Molekularny test Neogen do wykrywania wykorzystuje metodę izotermicznej amplifikacji
DNA do szybkiego namnażania specyficznych sekwencji kwasów nukleinowych z zachowaniem wysokiej swoistości i
czułości, w połączeniu z pomiarem bioluminescencji w celu wykrycia produktów amplifikacji. Domniemane wyniki dodatnie
pokazywane są w czasie rzeczywistym, zaś wyniki ujemne wyświetlą się po zakończeniu testu. Domniemane wyniki dodatnie
wymagają potwierdzenia preferowaną metodą lub metodą wynikającą z lokalnych przepisów(1, 2, 3).
Molekularny test Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes jest przeznaczony do stosowania w środowisku
laboratoryjnym przez specjalistów przeszkolonych w zakresie praktyk laboratoryjnych. Firma Neogen nie udokumentowała
zastosowania tego produktu w gałęziach przemysłu innych niż żywność i napoje. Przykładowo firma Neogen nie
udokumentowała zastosowania tego produktu do badania próbek wody, leków, kosmetyków, próbek klinicznych ani
weterynaryjnych. Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes nie oceniono w przypadku
wszystkich możliwych protokołów testowych ani w przypadku wszystkich dostępnych szczepów bakterii.
Podobnie jak w przypadku wszystkich innych metod badawczych, skład i jakość podłoża wykorzystanego podczas
etapu przednamnażania mogą mieć wpływ na otrzymywane wyniki. Czynniki takie jak metody pobierania próbek,protokoły przeprowadzania badań, przygotowanie próbki, postępowanie i techniki laboratoryjne również mogą wpłynąć
na wynik badania. Firma Neogen zaleca ocenienie metody wykorzystującej podłoże przednamnażające w środowiskuużytkownika, stosując wystarczającą liczbę próbek konkretnej żywności oraz próbek problematycznych pod względem
rozwoju drobnoustrojów, aby zapewnić, że dana metoda spełnia potrzeby użytkownika.
Firma Neogen dokonała oceny Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 —Listeria monocytogenes z
wykorzystaniem bulionu pół-Frasera zawierającego cytrynian amonowo-żelazowy oraz bulionu Frasera zawierającego
cytrynian amonowo-żelazowy. Standardowy skład tego podłoża przedstawiono poniżej.
Bulion pół-Frasera — standardowy skład(g/l)

Bulion Frasera — standardowy skład(g/l)

Chlorek sodu

20 g

Chlorek sodu

20 g

Fosforan sodu, dwuzasadowy, bezwodny*

9,6 g

Fosforan sodu, dwuzasadowy, bezwodny*

9,6 g

Ekstrakt wołowy

5,0 g

Ekstrakt wołowy

5,0 g

Trzustkowy hydrolizat kazeiny

5,0 g

Trzustkowy hydrolizat kazeiny

5,0 g

Hydrolizat z tkanki zwierzęcej

5,0 g

Hydrolizat z tkanki zwierzęcej

5,0 g

Ekstrakt drożdżowy

5,0 g

Ekstrakt drożdżowy

5,0 g

Chlorek litu

3,0 g

Chlorek litu

3,0 g

Fosforan potasu, jednozasadowy

1,35 gFosforan potasu, jednozasadowy

1,35 gEskulina

1,0 g

Eskulina

1,0 g

Akryflawina HCl

0,0125 g

Akryflawina HCl

0,025 gKwas nalidyksowy

0,01 gKwas nalidyksowy

0,02 g* Substytut: Fosforan sodu, dwuzasadowy, diwodzian

12,0 gSuplement bulionu Frasera(Składniki na fiolkę o pojemności 10 ml. Jedna fiolka jest dodawana do jednego litra podłoża podstawowego.)
Cytrynian amonowo-żelazowy 0,5 g/10 ml
Ostateczny odczyn pH		7,2 ± 0,2 przy 25°C

Urządzenie Neogen do diagnostyki molekularnej należy stosować z próbkami poddanymi obróbce cieplnej na etapie lizy,
której zadaniem jest zniszczenie organizmów obecnych w próbce. Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej
na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu Neogen do
diagnostyki molekularnej.
®

Firma Neogen Food Safety uzyskała certyfikat ISO (Międzynarodowej Organizacji Normalizacyjnej) 9001 dotyczący
projektowania i produkcji.

1

PL(Polski)Zestaw testów Molekularny test Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes zawiera 96 testów opisanych w Tabeli 1.
Tabela 1. Elementy zestawu testów Neogen Molekularny test do wykrywania
Element

Charakterystyka

Liczba sztuk

Zawartość

Komentarze

Roztwór lizujący Neogen®
(LS)Różowy roztwór w
przezroczystych
probówkach

96 (12 pasków
z 8 probówkami)

580 μl LS na probówkę

Ustawione
w statywie
i gotowedo użycia

Probówki reagentowe
Molekularnego testu
Neogen® do wykrywania 2— Listeria monocytogenesŻółte probówki

96 (12 pasków
z 8 probówkami)

Liofilizowana swoista
Gotowemieszanina do amplifikacji
do użycia
i wykrywania

Dodatkowe korkiŻółte korki

96 (12 pasków
z 8 korkami)

Kontrola Neogen®
reagenta (RC)Przezroczyste
16 (2 woreczki
probówki z korkiem po 8 oddzielnychzatrzaskowym
probówek)

Gotowedo użycia
Liofilizowane DNA
kontrolne, mieszanina do
amplifikacji i wykrywania

Gotowedo użycia

Kontrola ujemna, niebędąca częścią zestawu, to jałowe podłoże przednamnażające, np. bulion pół-Frasera. Nie stosować
wody jako kontroli ujemnej.

Bezpieczeństwo

Użytkownik powinien dokładnie zapoznać się ze wszystkimi informacjami dotyczącymi bezpieczeństwa zawartymi
w instrukcji dotyczącej Systemu do Diagnostyki Molekularnej Neogen oraz Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2— Listeria monocytogenes i się do nich stosować. Instrukcję bezpieczeństwa należy zachować do przyszłego
wykorzystania.
OSTRZEŻENIE: Oznacza niebezpieczną sytuację, której skutkiem, w razie braku podjęcia środków
zapobiegawczych, mogą być poważne obrażenia ciała lub śmierć i/lub uszkodzenie mienia.
WAŻNA INFORMACJA: Oznacza potencjalnie niebezpieczną sytuację, której skutkiem, w razie niepodjęcia środków
zapobiegawczych, może być uszkodzenie mienia.

W OSTRZEŻENIE
Nie należy stosować Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes do diagnozowania
stanu zdrowotnego ludzi ani zwierząt.
Procedura badawcza Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes może wytworzyć
zagrożenie bakterią Listeria monocytogenes na poziomie wystarczającym do spowodowania ciąży obumarłej i śmierci
u kobiet w ciąży oraz osób mających obniżoną odporność w przypadku narażenia na ich działanie tej bakterii.
Obowiązkiem użytkownika jest przeszkolenie personelu w zakresie aktualnych, odpowiednich technik badań:na przykład w zakresie dobrych praktyk laboratoryjnych, ISO/IEC 17025(4), lub ISO 7218(5).
Aby zmniejszyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie ujemnym prowadzącym do wydania zanieczyszczonego
produktu:• Należy postępować zgodnie z protokołem i wykonywać testy zgodnie z zaleceniami podanymi w Informacjacho produkcie.
• Molekularny test Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes należy przechowywać w sposób podany na
opakowaniu i w informacjach o produkcie.
• Molekularny test Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes należy stosować wyłącznie przed upływem
terminu ważności.
• Molekularny test Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes należy stosować w odniesieniu do próbekspożywczych i środowiskowych poddanych walidacji wewnętrznej lub przez osoby trzecie.
• Molekularny test Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes należy stosować wyłącznie w połączeniu
z powierzchniami, środkami odkażającymi, protokołami i szczepami bakterii poddanymi walidacji wewnętrznej lub
przez osoby trzecie.
• W przypadku próbki środowiskowej zawierającej bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu, przed
rozpoczęciem badania należy przygotować roztwór rozcieńczony w stosunku 1:2 (1 część próbki w 1 części
jałowego bulionu przednamnażającego). Inną możliwością jest przeniesienie 10 µl buforu neutralizującego po etapie
przednamnażania do probówek z roztworem lizującym Neogen. Produkty firmy Neogen® do pobierania próbek, które
zawierają bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G,
HS10NB, HS10NB2G i HS2410NB2G.

2

PL(Polski)Aby zmniejszyć ryzyko związane z narażeniem na substancje chemiczne i zagrożenia biologiczne:• Zaleca się poinformowanie żeńskiego personelu laboratoryjnego o ryzyku związanym z zaburzeniem rozwoju płodu na
skutek infekcji u kobiet w ciąży spowodowanej kontaktem z bakteriami Listeria monocytogenes.
• Badania patogenów należy prowadzić w odpowiednio wyposażonym laboratorium pod kontrolą przeszkolonego
personelu. Inkubowane podłoże przednamnażające oraz sprzęt lub powierzchnie, które mogły mieć kontakt
z inkubowanym podłożem przednamnażającym, mogą zawierać patogeny na poziomie zagrażającym
ludzkiemu zdrowiu.
• Należy zawsze przestrzegać standardowych laboratoryjnych praktyk bezpieczeństwa, łącznie z noszeniem
odpowiedniej odzieży i okularów ochronnych przy pracy z reagentami i skażonymi próbkami.
• Należy unikać kontaktu z zawartością probówek z podłożem przednamnażającym oraz reagentem po amplifikacji.
• Przednamnożone próbki należy utylizować zgodnie z obowiązującymi normami branżowymi.
• Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie
biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu Neogen do diagnostyki molekularnej.
Aby zmniejszyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem krzyżowym podczas przygotowania testu:• Należy zawsze nosić rękawiczki (aby chronić użytkownika i zapobiegać wprowadzaniu nukleaz).
Aby ograniczyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem środowiska:• Należy postępować zgodnie z bieżącymi normami branżowymi dotyczącymi utylizacji zanieczyszczonych odpadów.
Aby zmniejszyć ryzyko związane z narażeniem na gorące płyny:• Nie przekraczać zalecanych ustawień temperatury w bloku grzewczym.
• Nie przekraczać zalecanego czasu ogrzewania.
• Stosować odpowiedni, skalibrowany termometr do potwierdzenia poprawności temperatury wkładu Neogen® do bloku
grzewczego do diagnostyki molekularnej (np. termometr zanurzeniowy zanurzany częściowo lub cyfrowy termometr
z termoogniwem, ale nie termometr zanurzeniowy zanurzany całkowicie). Termometr należy umieścić w wyznaczonymmiejscu Wkładki Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.

WAŻNA INFORMACJA
Aby zmniejszyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem krzyżowym podczas przygotowania testu:• Zmienić rękawiczki przed nawodnieniem osadu reagenta.
• Zaleca się stosowanie jałowych końcówek pipet do biologii molekularnej z (filtrowaną) barierą aerozolową.
• Do każdego przeniesienia próbki używać nowej końcówki pipety.
• Przy przenoszeniu próbek z probówki przednamnażania do probówki lizującej należy przestrzegać zasad dobrej
praktyki laboratoryjnej. Aby uniknąć skażenia pipetora, użytkownik może zdecydować się dodać etap transferupośredniego. Przykładowo można przenieść przednamnożoną próbkę do jałowej probówki.
• W miarę możliwości należy używać stanowiska badawczego biologii molekularnej z lampą bakteriobójczą.
Należy okresowo dezynfekować stoły i sprzęt laboratoryjny (pipety, narzędzia do zakładania/zdejmowania korków itp.)
za pomocą 1–5% (obj./obj., wodnego) roztworu domowego wybielacza lub roztworu do usuwania DNA.
Aby ograniczyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie dodatnim:• Nie otwierać probówek reagenta po procesie amplifikacji.
• Zanieczyszczone probówki należy utylizować zanurzając je w 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworze domowego
wybielacza lub jego odpowiednika przez 1 godzinę i wynosząc poza obszar przygotowania testów.
• Nie umieszczać probówek reagenta w autoklawie po procesie amplifikacji.
Dodatkowe informacje oraz lokalne przepisy dotyczące utylizacji zawiera karta charakterystyki produktu.
W przypadku pytań dotyczących konkretnych zastosowań lub procedur należy odwiedzić stronę www.neogen.com lub
skontaktować się z lokalnym przedstawicielem lub dystrybutorem firmy Neogen.

Obowiązki użytkownikaUżytkownicy są zobowiązani do zapoznania się z instrukcjami oraz informacjami o produkcie. W celu uzyskania dalszych
informacji należy odwiedzić stronę internetową www.neogen.com lub skontaktować się z lokalnym przedstawicielem lub
dystrybutorem firmy Neogen.
Przy wyborze metody testowania należy pamiętać, że takie czynniki zewnętrzne jak metody próbkowania, protokoły
testowania, przygotowanie próbki, dalsze postępowanie i technika laboratoryjna mogą wpływać na uzyskiwane wyniki.
Obowiązkiem użytkownika przy wyborze jakiejkolwiek metody testowania lub produktu jest poddanie ocenie dostatecznej
liczby próbek z właściwymi macierzami i z uwzględnieniem zagrożeń powodowanych przez mikroorganizmy, tak aby
zastosowana metoda mogła spełnić oczekiwania użytkownika i ustalone przez niego kryteria.
Obowiązkiem użytkownika jest również dopilnowanie, aby zastosowane metody testowania i uzyskane wyniki spełniały
wymagania klienta i dostawcy.
Podobnie jak w przypadku każdej metody testowania wyniki uzyskiwane za pomocą produktu firmy Neogen Food Safety
nie stanowią gwarancji jakości testowanych macierzy ani procesów.

3

PL(Polski)Aby pomóc klientom ocenić metodę różnych macierzy spożywczych, firma Neogen opracowała zestaw Kontroli
Neogen® macierzy do diagnostyki molekularnej. W razie potrzeby należy użyć zestawu Kontroli macierzy (MC)do ustalenia, czy dana matryca badawcza może wpływać na wyniki Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 —Listeria monocytogenes. Należy przetestować kilka próbek reprezentujących daną matrycę badawczą, czyli na przykład
próbki pozyskane z różnych źródeł, podczas dowolnego okresu walidacji przy stosowaniu metody firmy Neogen, atakże podczas testowania nowych lub nieznanych matryc albo macierzy, które zostały poddane zmianom (w zakresie
procesowym lub surowcowym).
Macierz można zdefiniować jako typ produktu o nieodłącznych właściwościach, takich jak skład i proces wytwarzania.
Różnice pomiędzy macierzami mogą być łatwo zauważalne, jak np. efekty spowodowane różnicami w procedurach
obróbki lub prezentacji, przykładowo surowe lub pasteryzowane, świeże lub suszone itd.

Wyłączenia gwarancji / Ograniczone środki zaradczeJEŚLI NIE ZOSTAŁO TO WYRAŹNIE OKREŚLONE W ROZDZIALE DOT. OGRANICZONEJ GWARANCJI
POJEDYNCZYCH OPAKOWAŃ PRODUKTÓW, FIRMA NEOGEN WYŁĄCZA WSZELKIE GWARANCJE WYRAŹNEI DOROZUMIANE, W TYM MIĘDZY INNYMI WSZELKIE GWARANCJE ZGODNOŚCI Z PRZEZNACZENIEM I
PRZYDATNOŚCI DO OKREŚLONEGO CELU. W razie wad jakiegokolwiek produktu firmy Neogen Food Safety firma
Neogen lub jej autoryzowany dystrybutor wymieni taki produkt lub, wedle własnego uznania, zwróci koszty zakupu tego
produktu. Są to jedyne przysługujące środki zaradcze. W przypadku dalszych pytań prosimy o kontakt z przedstawicielem
firmy Neogen lub autoryzowanym dystrybutorem firmy Neogen.

Ograniczenie odpowiedzialności firmy Neogen

FIRMA NEOGEN NIE BĘDZIE ODPOWIEDZIALNA ZA JAKIEKOLWIEK SZKODY ANI STRATY, ZARÓWNO BEZPOŚREDNIE,POŚREDNIE, SZCZEGÓLNE, UBOCZNE LUB NASTĘPCZE, W TYM MIĘDZY INNYMI ZA UTRACONE ZYSKI. W żadnym
wypadku odpowiedzialność firmy Neogen z mocy prawa nie może przekroczyć ceny zakupu rzekomo wadliwego produktu.

Przechowywanie i utylizacja

Molekularny test Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes należy przechowywać w temperaturze 2–8°C.
Nie zamrażać. Podczas przechowywania chronić zestaw przed światłem. Po otwarciu zestawu należy sprawdzić,
czy woreczek foliowy nie jest uszkodzony. Nie używać zestawu, jeżeli woreczek jest uszkodzony. Po otwarciu nieużywane
probówki z reagentem należy przechowywać w woreczku wielokrotnego zamknięcia z pochłaniaczem wilgoci wewnątrz,co pozwoli zachować stabilność liofilizowanych reagentów. Ponownie zamknięte woreczki można przechowywać
w temperaturze 2–8°C maksymalnie przez 60 dni.
Nie stosować Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes po upływie daty ważności.
Data ważności i numer partii podano na zewnętrznej etykiecie pudełka. Po użyciu podłoże przednamnażające
i probówki Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes mogą zawierać materiały
patogenne. Po zakończeniu badania należy stosować się do aktualnych standardów branżowych dotyczących
utylizacji zanieczyszczonych odpadów. Dodatkowe informacje oraz lokalne przepisy dotyczące utylizacji zawiera karta
charakterystyki produktu.

Instrukcja użycia

Należy dokładnie przestrzegać wszystkich instrukcji. W przeciwnym razie wyniki mogą być niedokładne.
Należy okresowo dezynfekować stoły i sprzęt laboratoryjny (pipety, narzędzia do zakładania/zdejmowania korków itp.)
za pomocą 1–5% (obj./obj., wodnego) roztworu domowego wybielacza lub roztworu do usuwania DNA.
Użytkownik powinien ukończyć szkolenie kwalifikacyjne dla użytkowników Systemu Neogen do diagnostyki molekularnej(OQ), tak jak opisano to w dokumencie „Instrukcje i protokoły dotyczące wymagań instalacji (IQ) / kwalifikacji operacyjnej(OQ) systemu Neogen do diagnostyki molekularnej”(6).
Szczegółowe wymagania opisano w części „Specjalne instrukcje dotyczące zatwierdzonych metod”:
Tabela 3 — protokoły przednamnażania według AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 oraz AOAC® Performance
Tested MethodSM, certyfikat nr 081501.
Tabela 4 — protokoły przednamnażania zgodnie z certyfikatem NF Validation 3M 01/15-09/16.

Przednamnażanie próbki

W Tabelach 2, 3 lub 4 można znaleźć wytyczne dotyczące ogólnych protokołów przednamnażania próbek spożywczychi środowiskowych. Użytkownik ma obowiązek przeprowadzić walidację alternatywnych protokołów próbkowania lub
proporcji roztworów, aby sprawdzić, czy dana metoda badawcza spełnia kryteria określone przez użytkownika.

Żywność

1. Poczekać na zrównoważenie temperatury podłoża przednamnażającego w postaci bulionu pół-Frasera(zawierającego cytrynian amonowo-żelazowy) do temperatury otoczenia w laboratorium.
2. Aseptycznie połączyć podłoże do przednamnażania z próbką zgodnie z Tabelą 2, 3 lub 4. W przypadku wszystkich
próbek produktów mięsnych i o wysokiej zawartości cząstek stałych zaleca się stosowanie worków z filtrem.

4

PL(Polski)

3. Dokładnie zhomogenizować przez zmieszanie, wytrząsanie lub mieszanie ręczne przez 2 ± 0,2 minuty.
Inkubować w temperaturze 37 ± 1°C zgodnie z Tabelą 2, 3 lub 4.
4. W przypadku surowych produktów mlecznych (patrz Tabela 2, 3 lub 4) przenieść 0,1 ml głównego podłoża
przednamnażającego do 10 ml bulionu Frasera. Inkubować w temperaturze 37 ± 1°C przez 20–24 godzin.

Próbki środowiskoweUrządzenia do pobierania próbek mogą być nawadniane gąbką z użyciem roztworu neutralizującego w celu
unieszkodliwienia skutków działania środków odkażających. Firma Neogen zaleca stosowanie gąbki celulozowej
niezawierającej środków biobójczych. Roztworem neutralizującym może być bulion Dey-Engley (D/E) Neutralizing lub
bulion z lecytyną. Po pobraniu próbek zaleca się odkażenie otoczenia.
OSTRZEŻENIE: W przypadku stosowania buforu neutralizującego z kompleksem sulfonianu arylu jako roztwór
nawilżający gąbkę, przed rozpoczęciem badania należy przygotować roztwór rozcieńczony w stosunku 1:2(1 część próbki w 1 części jałowego bulionu przednamnażającego) próbki pochodzącej z przednamnożonegośrodowiska, aby zmniejszyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie ujemnym. Inną możliwością jest przeniesienie
10 μl przednamnożonego buforu neutralizującego do probówek z roztworem lizującym Neogen.
Zalecany rozmiar obszaru próbkowania do weryfikacji obecności lub braku patogenu na powierzchni wynosi co najmniej
100 cm2 (10 cm × 10 cm lub 4” × 4”). W przypadku pobierania próbki za pomocą gąbki, należy pokryć cały obszar
w dwóch kierunkach (od strony lewej do prawej, a następnie z góry do dołu) lub pobrać próbki środowiskowe zgodnie
z obowiązującym protokołem próbkowania lub według wytycznych FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) lub ISO 18593(7).
1. Poczekać na zrównoważenie temperatury podłoża przednamnażającego bulionu pół-Frasera, (zawierającego
suplement - cytrynian amonowo-żelazowy) do temperatury otoczenia w laboratorium.
2. Aseptycznie połączyć podłoże do przednamnażania z próbką zgodnie z Tabelą 2, 3 lub 4.
3. Dokładnie zhomogenizować przez zmieszanie, wytrząsanie lub mieszanie ręczne przez 2 ± 0,2 minuty. Inkubować
w temperaturze 37 ± 1°C przez 24–30 godzin zgodnie z Tabelą 2, 3 lub 4.
Tabela 2: Ogólne protokoły przednamnażania przy temperaturze 37 ± 1°C z wykorzystaniem bulionu pół-Frasera i bulionu
Frasera.

Macierz próbki

Wielkość
próbkiObjętość
bulionu
do przednamnażania
(ml)

Czas
przednamnażania (godz.)

25 g

225

24–30

1 gąbka

100 lub 225

24–30

1 wacik

10

24–30

25 g

475

28–32

Poddane obróbce
cieplnej, gotowane
i peklowane mięsa,drób, owoce morzai rybyPoddane obróbce
cieplnej /pasteryzowane
produkty mleczne
Produkty rolne
i warzywa
Żywność
wieloskładnikowa
Próbkiśrodowiskowe(a)Surowe mięso,drób, owoce morzai ryby5

PL
Główne podłoże przednamnażające
(bulion pół-Frasera)(a)Macierz próbki

Wielkość
próbki

Surowe produkty
mleczneObjętość
bulionu
do przednamnażania
(ml)

25 g

(Polski)Dodatkowe podłoże przednamnażające
(bulion Frasera)(a)Czasprzednamnażania (godz.)

Wielkość
próbki

Temperatura przednamnażania
(°C)

Czas przednamnażania
(godz.)

20–24

Przenieść
0,1 mldo 10 mlbulionu
Frasera37 ± 1

20–24

225Objętość
analizowanej
próbki(b)10 μl(a) Podczas etapów inkubacji bulion pół-Frasera i bulion Frasera powinny być kompletne i zawierać dedykowany
suplement (cytrynian amonowo-żelazowy).
(b) Objętość próbki przenoszona do probówek z roztworem lizującym Neogen. Patrz krok 4.6 w części „Liza”.

Specjalne instrukcje dotyczące zatwierdzonych metod
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

W programach AOAC Research Institute OMASM oraz PTMSM Molekularny test Neogen do wykrywania 2 — Listeria
monocytogenes okazał się skuteczną metodą wykrywania bakterii Listeria monocytogenes. W Tabeli 3 przedstawiono
macierze przetestowane w ramach tego badania.
Tabela 3. Protokoły przednamnażania wykorzystujące bulion pół-Frasera(a) w temperaturze 37 ± 1°C zgodnie z metodą
AOAC OMASM 2016.08 oraz PTMSM, certyfikat nr 081501.
Macierz próbki

Wielkość
próbkiObjętość bulionu do
przednamnażania
(ml)

Czas
przednamnażania
(godz.)

Hot dogi z wołowiną, świeży ser,lody waniliowe, twaróg o 4% zawartości
tłuszczu, mleko pełnotłuste
o 3% zawartości czekolady, sałata
rzymska, surowy szpinak paczkowany,
łosoś wędzony na zimno

25 g

225

24–30

Surowy kurczak

25 g

475

28–32

Indyk peklowany

125 g

1125

24–30

Cały melonObjętość
wystarczająca
aby melon mógłsię unosić na
powierzchni

26–30

Stal nierdzewna

1 gąbka

225

24–30

Zabezpieczony beton

1 gąbka

100

24–30

Tworzywo sztuczne(c)1 wacik

10

24–30

Próbkiśrodowiskowe:

Kantalupa(b)Wszystkie próbki w ramach walidacji metodą AOAC były homogenizowane poprzez wytrząsanie, o ile nieokreślono inaczej.

6

(Polski)PL(a)		Podczas etapu przednamnażania stosowane buliony pół-Frasera i Frasera powinny być zawsze kompletne i zawierać
dedykowany suplement (cytrynian amonowo-żelazowy).
(b) Próbkę należy zhomogenizować poprzez ręczne mieszanie.
(c)		 Próbkę należy zhomogenizować poprzez wytrząsanie.

Certyfikacja NF VALIDATION instytutu AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Dodatkowe informacje na temat końca ważności można znaleźć w certyfikacie NF VALIDATION dostępnym na wskazanejpowyżej stronie internetowej.
Metoda certyfikowana według NF VALIDATION zgodnie z normą ISO 16140-2(6) w porównaniu z normą ISO 11290(3)Zakres walidacji: Wszystkie próbki produktów żywnościowych przeznaczonych dla ludzi oraz próbki środowiskowe(z wyjątkiem próbek z produkcji pierwotnej)
Przygotowanie próbki: Próbki należy przygotować zgodnie z normą EN ISO 11290-1(3) i EN ISO 6887(8)Wersja oprogramowania: Patrz certyfikat
Tabela 4: Protokoły przednamnażania zgodnie z metodą certyfikowaną według NF VALIDATION 3M 01/15-09/16
w temperaturze 37 ± 1°C z wykorzystaniem bulionu pół-Frasera i bulionu Frasera.

Ogólny protokół

Wielkość próbki

Wszystkie próbkispożywcze(z wyjątkiem
surowych mięs,surowych owoców
morza oraz
surowych produktów
mlecznych)

25 g

Próbki środowiskowe

25 g, 1 wymazówka
lub 1 ściereczkaObjętość
bulionu
do przednamnażania
(ml)

Zatwierdzony
moment przerwania• Bulion pół-Frasera
do 72 godzin
225

37

24–30

20 µl

• Lizat przytemperaturze -20°C• Lizat przytemperaturze 4°C do
72 godzin

Główne podłoże przednamnażające
(bulion pół-Frasera)(b)OkreObjętość
TempeCzasślony
Wielbulionu
raturaprzedprotokół kośćdo przedprzednamnapróbki namnaża- namnażażania
nia (ml)nia (± 1°C) (godz.)
Surowemięsa,
surowe
owoce
morza
oraz
suroweprodukty
mleczneObjęTemperaCzastośćtura przedprzedanalizonamnaża- namnażawanej
nia (± 1°C) nia (godz.)
próbki(a)Dodatkowe podłoże przednamnażające
(bulion Frasera)(b)TempeObjęCzas
raturatość
Wielkość
przedprzedanalizopróbki
namnażanamnażawanej
nia (godz.)nia (± 1°C)
próbki(c)Zatwierdzony
moment przerwania• Bulion Frasera
do 72 godzin

25 g

225

37

20–24

Przenieść
0,1 mldo 10 mlbulionu
Frasera

37

20–24

10 µl

• Lizat przytemperaturze-20°C• Lizat przytemperaturze
4°C do72 godzin(a) Objętość próbki przenoszona do probówek z roztworem lizującym Neogen. Patrz krok 4.6 w części „Liza”.
7

PL(Polski)(b) Podczas etapu przednamnażania stosowane buliony pół-Frasera i Frasera powinny być zawsze kompletne i zawierać
dedykowany suplement(cytrynian amonowo-żelazowy).
(c) Objętość próbki przenoszona do probówek z roztworem lizującym Neogen. Patrz krok 4.6 w części „Liza”.
UWAGA: Próbki o masie przekraczającej 25 g nie były podczas NF Validation.

Przygotowanie Tacy Neogen® urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej
1. Zmoczyć ściereczkę 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworem wybielacza do użytku domowego lub jego odpowiednikiem
i przetrzeć nim Tacę Neogen® urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej.
2. Spłukać wodą Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej.
3. Osuszyć Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej za pomocą
jednorazowego ręcznika.
4. Przed rozpoczęciem użytkowania należy sprawdzić, czy Taca Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów dodiagnostyki molekularnej jest sucha.
Przygotowanie Wkładki Neogen® bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnejUmieścić Tacę Neogen® bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej bezpośrednio na stole laboratoryjnym; użyć wkładu
chłodzącego w temperaturze otoczenia w laboratorium (20–25°C).
Przygotowanie Wkładki Neogen® bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej
Wkładkę Neogen® bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej należy umieścić w suchym podwójnym bloku
grzewczym. Włączyć suchy blok grzewczy i ustawić temperaturę pozwalającą Wkładce Neogen bloku grzewczego do
diagnostyki molekularnej, osiągnąć i utrzymać temperaturę 100 ± 1°C.
UWAGA: W zależności od typu bloku grzewczego Wkładkę Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnejnależy zostawić na około 30 minut, by osiągnąć odpowiednią temperaturę. Używając odpowiedniego, skalibrowanego
termometru (przykładowo częściowo zanurzanego termometru lub cyfrowego termometru z termoogniwem, a nie
całkowicie zanurzanego termometru) umieszczonego w wyznaczonym miejscu, sprawdzić, czy temperatura Wkładki
Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C.
Przygotowanie Urządzenia Neogen® do diagnostyki molekularnej
1. Uruchomić oprogramowanie Systemu Neogen® do diagnostyki molekularnej i zalogować się. Skontaktować sięz przedstawicielem Neogen Food Safety, aby upewnić się, że dysponują Państwo najnowszą wersją oprogramowania.
2. Włączyć Urządzenie Neogen do diagnostyki molekularnej.
3. Utworzyć lub edytować serię z danymi dla każdej próbki. Szczegółowe informacje są dostępne w instrukcji obsługi
Systemu Neogen do diagnostyki molekularnej.
UWAGA: Przed włożeniem Tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej
z probówkami reakcyjnymi Urządzenie Neogen do diagnostyki molekularnej musi osiągnąć stan gotowości. Etap
nagrzewania trwa około 20 minut i sygnalizuje go POMARAŃCZOWA kontrolka na pasku stanu urządzenia. Kiedyurządzenie będzie gotowe do rozpoczęcia analizy, kolor paska stanu zmieni się na ZIELONY.
Liza
Za pomocą śrubokrętu lub szpatułki wyjąć dolną część stojaka z probówkami z roztworem lizującym Neogen przed
umieszczeniem go we Wkładce Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.

1. Umożliwić ogrzanie probówek z roztworem lizującym Neogen, pozostawiając stojak w temperaturze pokojowej(20–25°C) na noc (16–18 godzin). Alternatywą dla równoważenia temperatury probówek z roztworem lizującym
Neogen do temperatury pokojowej jest pozostawienie probówek z roztworem lizującym Neogen na stole
laboratoryjnym na co najmniej 2 godziny, inkubacja probówek z roztworem lizującym Neogen w inkubatorze
nastawionym na 37 ± 1°C przez 1 godzinę lub umieszczenie ich w suchym podwójnym bloku grzewczym na 30 sekund
w temperaturze 100°C.
2. Odwrócić probówki zamknięte korkiem w celu wymieszania ich zawartości. Przejść do następnego kroku w ciągu
4 godzin.
8

PL(Polski)

3. Wyjąć bulion przednamnażający z inkubatora.
4. Dla każdej próbki oraz próbki Kontroli ujemnej (NC) (sterylnego podłoża do przednamnażania) wymagana jest jedna
probówka z roztworem lizującym Neogen.
4.1 Taśmy z probówkami z roztworem lizującym Neogen można dociąć do żądanej liczby probówek z roztworem
lizującym Neogen. Zależnie od sytuacji należy dobrać liczbę pojedynczych probówek z roztworem lizującym
Neogen lub taśm złożonych z 8 probówek. Umieścić probówki z roztworem lizującym Neogen w pustym stojaku.
4.2 Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami z roztworem lizującym
Neogen pojedynczo i na każdym etapie przenoszenia stosować nową końcówkę pipety.
4.3 Wzbogaconą próbkę należy przenieść do probówek z roztworem lizującym Neogen w opisany poniżej sposób:
Na początku przenieść każdą wzbogaconą próbkę do pojedynczej probówki z roztworem lizującym Neogen.
Na końcu przenieść kontrolę negatywną NC.
4.4 Do zdejmowania korków taśmy z probówkami z roztworem lizującym Neogen (po jednej taśmie na raz) należy
wykorzystać Narzędzie Neogen® do zakładania/zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej — Liza.
4.5 Zdjąć korek probówki z roztworem lizującym Neogen — jeśli lizat ma zostać zachowany do celów ponownego
wykonania testu, umieścić korki w czystym pojemniku do ponownego założenia po wykonaniu lizy.
4.5.1 Odnośnie obróbki zachowanego lizatu patrz Załącznik A.
4.6 Przenieść 20 µl próbki do probówki z roztworem lizującym Neogen, jeśli nie określono inaczej w protokołachz Tabeli 2, 3 lub 4 (np. w przypadku surowych produktów mlecznych lub stosowania próbek środowiskowych
z buforem neutralizującym użyć 10 µl).
20 µl

5. Powtarzać kroki od 4.4 do 4.6 do momentu dodania każdej indywidualnej próbki do odpowiedniej probówki
z roztworem lizującym Neogen w taśmie.
6. Po przeniesieniu wszystkich próbek przenieść 20 µl kontroli negatywnej NC (jałowe podłoże przednamnażające,np. bulion pół-Frasera) do probówki z roztworem lizującym Neogen. Nie stosować wody jako kontrolę negatywną NC.
7. Upewnić się, że temperatura Wkładki Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C.
8. Umieścić odkryty stojak na probówki z roztworem lizującym Neogen we Wkładce Neogen bloku grzewczego do
diagnostyki molekularnej i ogrzewać przez 15 ± 1 min. Podczas ogrzewania roztwór lizujący Neogen zmieni barwę zróżowej (chłodny) na żółtą (gorący).
8.1 Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie
biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu Neogen do diagnostyki molekularnej.
9. Wyjąć odkryty stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z bloku grzewczego i umożliwić schłodzenie
we wkładce Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej przez co najmniej 5 minut, a maksymalnie 10
minut. Wkładka Neogen bloku schładzania do diagnostyki molekularnej powinien znajdować się bezpośrednio na
stole laboratoryjnym w temperaturze otoczenia (pokojowej) . Po schłodzeniu roztwór lizujący ponownie przybierzeróżową barwę.
10. Wyjąć stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z Wkładki Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki
molekularnej.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

9

PL(Polski)

Amplifikacja
1. Dla każdej próbki oraz kontroli negatywnej NC wymagana jest jedna probówka reagentowa Molekularnego testu
Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes.
1.1 Taśmy z probówkami reagentowymi można dociąć do żądanej liczby probówek. Dobrać wymaganą liczbę
pojedynczych probówek reagentowych Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes
lub taśm złożonych z 8 probówek.
1.2 Umieścić probówki reagentowe Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes
w pustym stojaku.
1.3 Nie wolno dopuścić do wstrząśnięcia granulek reagenta na dnie probówek.
2. Wybrać 1 probówkę Kontroli Neogen reagentu i umieścić ją w stojaku.
3. Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami reagentowymi Molekularnego testu
Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes pojedynczo i na każdym etapie przenoszenia stosować nowąkońcówkę pipety.
4. Przenieść lizat do probówki reagentowej Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes
oraz do probówki z Kontrolą Neogen reagentu w sposób opisany poniżej:Przenieść najpierw każdą próbkę lizatu do oddzielnej probówki reagentowej Molekularnego testu Neogen do
wykrywania 2 — Listeria monocytogenes, a następnie przenieść kontrolę negatywną NC. Na końcu nawodnić
probówkę Kontroli Neogen reagentu.
5. Do zdejmowania korków probówek reagentowych Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria
monocytogenes należy wykorzystać Narzędzie Neogen® do zakładania/zdejmowania korków probówek do diagnostyki
molekularnej — Reagent, po jednej taśmie na raz. Wyrzucić korek.
5.1 Przenieść 20 µl próbki lizatu z górnej części probówki (unikać osadu) z roztworem lizującym Neogen do
odpowiedniej probówki reagentowej Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes.
Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić do wstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając
i wypuszczając roztwór pipetą 5 razy.
5.2 Powtarzać krok 5.1, aż wszystkie pojedyncze próbki lizatu zostaną dodane do odpowiednich probówek
reagentowych Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes znajdujących się
w taśmie.
5.3 Probówki reagentowe Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes należy
zamknąć załączonymi dodatkowymi korkami i za pomocą zaokrąglonej strony Narzędzia Neogen do zakładania/
zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej — Reagent wywołać nacisk ruchem w przód i w tył,
aby upewnić się, że korek został szczelnie nałożony.
5.4 Kroki od 5.1 do 5.3 należy powtarzać zależnie od potrzeby dla wszystkich próbek poddawanych badaniu.
5.5 Po przeniesieniu wszystkich próbek lizatu powtórzyć kroki w punkcie 5.1, aby przenieść 20 µl lizatu NC do
probówki reagentowej Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes.
5.6 Przenieść 20 µl lizatu NC do probówki Kontroli Neogen reagentu. Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić dowstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając roztwór pipetą 5 razy.
6. Zamknięte korkiem probówki należy umieścić na czystej i odkażonej Tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania
testów do diagnostyki molekularnej. Zamknąć i zablokować pokrywę Tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania
testów do diagnostyki molekularnej.

20 µL

7. W oprogramowaniu Systemu Neogen do diagnostyki molekularnej sprawdzić i potwierdzić konfigurację analizy.
8. Kliknąć przycisk Start w programie i wybrać używane urządzenie. Nastąpi automatyczne otwarcie pokrywy
wybranego urządzenia.
9. Aby rozpocząć analizę, należy umieścić Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki
molekularnej w Urządzeniu Neogen do diagnostyki molekularnej i zamknąć pokrywę. Na wyniki trzeba poczekać 75
minut, choć wyniki dodatnie można uzyskać wcześniej.
10

PL(Polski)

10. Po zakończeniu testu należy wyjąć Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnejz Urządzenia Neogen do diagnostyki molekularnej i zutylizować probówki, namaczając je w 1–5% (obj./obj., wodnym)
roztworze domowego wybielacza lub jego odpowiedniku przez 1 godzinę i usuwając z obszaru przygotowywania
testów.
WAŻNA INFORMACJA: Aby zminimalizować ryzyko otrzymania wyników fałszywie dodatnich w związku
z zanieczyszczeniem krzyżowym, nie należy otwierać probówek reagenta zawierających DNA po amplifikacji. Dotyczy toprobówek reagentowych Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes, probówek Kontroli
Neogen reagentu oraz probówek Kontroli macierzy. Uszczelnione probówki reagentowe należy utylizować, namaczając
je w 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworze domowego wybielacza lub jego odpowiedniku przez 1 godzinę i wynosząc
poza obszar przygotowania testów.

Wyniki i interpretacja

Algorytm interpretuje krzywą strumienia świetlnego powstałego w wyniku wykrycia amplifikacji kwasu nukleinowego.
Oprogramowanie prowadzi automatyczną analizę wyników oraz koduje je odpowiednimi kolorami. Wynik dodatni lub
ujemny określa się przez analizę wielu określonych niepowtarzalnych parametrów krzywej. Domniemane wyniki dodatnie
przekazuje się w czasie rzeczywistym, natomiast wyniki ujemne wyświetlą się po zakończeniu testu.
Domniemane wyniki dodatnie próbek należy potwierdzić zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi
laboratorium lub stosując odpowiednią referencyjną metodę potwierdzającą(1,2,3), począwszy od transferu z głównego
podłoża przednamnażającego do kolejnych bulionów przednamnażających (jeśli dotyczy), a następnie wyizolowanie
i potwierdzenie typowych kolonii za pomocą stosownych metod biochemicznych i serologicznych.
UWAGA: Nawet próbka ujemna nie da odczytu zerowego, ponieważ system i odczynniki do amplifikacji Molekularnego
testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes charakteryzują się swoistym poziomem tła w RLU.
W rzadkich przypadkach, przy wystąpieniu nietypowego strumienia światła wychodzącego, algorytm opisze je jako
„Sprawdzić”. Firma Neogen zaleca powtórzenie testów dla wszystkich próbek oznaczonych jako „Sprawdzić”. Jeżeli
utrzymuje się wynik „Sprawdzić”, należy przejść do testu potwierdzającego z zastosowaniem preferowanej metody lub
zgodnie z lokalnymi przepisami.
Tabela 5: Symbole wyników dotyczące próbek oraz interpretacja zgodne z oprogramowaniem Systemu Neogen do
diagnostyki molekularnej.
Rodzajstudzienki

Symbol wyniku
dla studzienki

Wynik

Interpretacja wyników

PróbkaDodatni

Domniemanie wyniku dodatniego próbki pod kątem
docelowego patogenu.

PróbkaUjemnyWynik ujemny próbki pod kątem docelowego patogenu.

PróbkaBlokadaMacierz próbki była niedostępna dla testu. Konieczne może być
powtórzenie testu. Więcej informacji można znaleźć w części
Rozwiązywanie problemów oraz w Informacjach o produkcie.

PróbkaSprawdzić

Brak możliwości oznaczenia obecności lub braku patogenu
docelowego. Konieczne może być powtórzenie testu.
Więcej informacji można znaleźć w części Rozwiązywanie
problemów oraz w Informacjach o produkcie.

PróbkaBłąd

Nie wykryto bioluminescencji. Konieczne może być powtórzenie
testu. Więcej informacji można znaleźć w części Rozwiązywanie
problemów oraz w Informacjach o produkcie.

Potwierdzenie wyników zgodnie z certyfikowaną metodą NF VALIDATION
Opcja 1: Zastosowanie normy ISO 11290(3), począwszy od podłoża przednamnażającego w postaci bulionu pół-Frasera.
Opcja 2: Poprzez izolację na agarze PALCAM lub na agarze chromogennym będącym częścią metody certyfikowanej
NF VALIDATION służącej do wykrywania bakterii Listeria monocytogenes. Obecność charakterystycznych kolonii jest
wystarczająca do potwierdzenia wykrycia bakterii Listeria monocytogenes.
Opcja 3: Wykorzystanie sond kwasu nukleinowego w sposób opisany w normie EN ISO 7218(5) zastosowanych na
wyizolowanych koloniach z selektywnego agaru (patrz Opcja 1 lub 2).
Opcja 4: Zastosowanie innej metody zgodnie z certyfikatem NF VALIDATION, której zasada musi się różnić od
Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 — Listeria monocytogenes. Należy stosować kompletny protokół opisany
dla tej drugiej metody poddanej walidacji. Wszystkie kroki poprzedzające rozpoczęcie potwierdzania muszą być wspólne
dla obu metod.

11

PL

(Polski)W przypadku niezgodności wyników (domniemany wynik dodatni z zastosowaniem alternatywnej metody,
brak potwierdzenia jedną z powyższych metod) laboratorium musi wykonać czynności niezbędne do zapewnieniaważności uzyskanych wyników.
W przypadku niezgodności wyników (domniemany wynik dodatni z zastosowaniem Molekularnego testu Neogen do
wykrywania 2 — Listeria monocytogenes, brak potwierdzenia jedną z powyższych metod) laboratorium musi wykonać
czynności niezbędne do zapewnienia ważności uzyskanych wyników.
W przypadku pytań dotyczących konkretnych zastosowań lub procedur należy odwiedzić stronę www.neogen.com lub
skontaktować się z lokalnym przedstawicielem lub dystrybutorem firmy Neogen.
Załącznik A. Przerwanie protokołu: Przechowywanie i ponowne badanie lizatów poddanych obróbce cieplnej.
1. W celu przechowywania lizatu poddanego obróbce termicznej należy ponownie zamknąć probówkę lizatu czystym
korkiem (patrz część „Liza”, punkt 4.5).
2. Przechowywać w temp. od 4 do 8°C maksymalnie przez 72 godziny.
3. Przygotować przechowywaną próbkę do amplifikacji przez odwrócenie 2–3 razy w celu zmieszania.
4. Otworzyć probówki.
5. Umieścić wymieszane próbki lizatu we Wkładce Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej i ogrzewać
w temp. 100 ± 1°C przez 5 ± 1 min.
6. Wyjąć stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z bloku grzewczego i umożliwić schłodzenie we wkładce
Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej przez co najmniej 5 minut, a maksymalnie 10 minut.
7. Kontynuować protokół od etapu Amplifikacji wyszczególnionego powyżej.

Bibliografia:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Objaśnienie symboli na etykiecie produktu
info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

RU(Русский)Дата выпуска: 2024-01

Инструкции к препарату
Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenesОписание продукта и его назначение

Тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen® используется вместе с системой
молекулярной диагностики Neogen® для быстрого и точного обнаружения Listeria monocytogenes вобогащенных пробах пищевых продуктов и окружающей среды. В тест-наборах для молекулярного анализа
Neogen используется петлевая изотермическая амплификация для быстрого расширения нуклеотидных
последовательностей с высокой точностью и чувствительностью в сочетании с биолюминесценцией длявыявления амплификации. Предположительно положительные результаты отображаются в реальном
времени, а отрицательные результаты — по завершении анализа. Результаты, которые можно считать
положительными, следует подтверждать предпочтительным для вас методом или в соответствии с местными
нормативными требованиями(1, 2, 3).
Тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen предназначен для примененияв лабораторных условиях и должен использоваться специалистами, прошедшими обучение лабораторным
методам работы. Компания Neogen документально не подтверждала возможность использования этого
продукта в каких-либо отраслях промышленности, кроме отрасли производства продуктов питания инапитков. Например, компания Neogen не подтверждала документально возможность использования этого
продукта для анализа проб воды, а также фармацевтических, косметических, клинических или ветеринарных
образцов. Работа тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen не оценивалась вотношении всех возможных протоколов анализа, а также всех возможных штаммов бактерий.
Как и в случае применения любого метода анализа, на результаты исследования может повлиять
источник, состав и качество обогатительной среды. На результаты исследования могут также повлиять
такие факторы, как метод отбора образцов, протоколы анализа, подготовка образцов, обращение с ними,а также методика, применяемая в лаборатории. Чтобы гарантировать соответствие выбранного метода
критериям пользователя, компания Neogen рекомендует оценить метод, включая обогатительную среду,непосредственно в лаборатории пользователя с применением достаточного количества образцов,конкретных пищевых продуктов, а также микробных провокационных проб.
Компания Neogen оценивала работу тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogenпри использовании бульона Фрейзера половинной концентрации, содержащего цитрат железа-аммония,и бульона Фрейзера, содержащего цитрат железа-аммония, по мере необходимости. Ниже приводится
стандартный состав этой среды.
Стандартный состав основы бульона
Фрейзера половинной концентрации

(г/л)Стандартный состав основы бульона
Фрейзера

(г/л)Натрия хлорид

20 гНатрия хлорид

20 гНатрия фосфат, двухосновный, безводный*9,6 гНатрия фосфат, двухосновный,безводный*9,6 гМясной экстракт

5,0 гМясной экстракт

5,0 гПанкреатический гидролизат казеина

5,0 гПанкреатический гидролизат казеина

5,0 гПептический перевар животной ткани

5,0 гПептический перевар животной ткани

5,0 гДрожжевой экстракт

5,0 гДрожжевой экстракт

5,0 гЛития хлорид

3,0 гЛития хлорид

3,0 гКалия фосфат, одноосновный

1,35 г

Калия фосфат, одноосновный

1,35 г

Эскулин

1,0 гЭскулин

1,0 гАкрифлавин HCl

0,0125 гАкрифлавин HCl

0,025 гНалидиксовая кислота

0,01 г

Налидиксовая кислота

0,02 г

* Замена: Натрия фосфат, двухосновный, двуводный

12,0 г

1

RU(Русский)Добавка к бульону Фрейзера
(Ингредиенты на флакон 10 мл. Один флакон добавляется к одному литру базовой среды.)Цитрат железа-аммония 0,5 г/10 млКонечный уровень pH

7,2 ± 0,2 при 25 °CПрибор для молекулярной диагностики Neogen® предназначен для использования в сочетании собразцами, прошедшими на этапе лизиса тепловую обработку, которая проводится с целью уничтожения
присутствующих в образце организмов. Образцы, которые не прошли надлежащую тепловую обработкуна этапе лизиса, могут представлять биологическую опасность. ЗАПРЕЩАЕТСЯ вставлять их в прибор длямолекулярной диагностики Neogen.
Процессы разработки и производства Neogen Food Safety прошли проверку и получили сертификат ISO 9001
(Международная организация по стандартизации).
Тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen содержит 96 тест-систем, описание
которых см. в таблице 1.
Таблица 1. Компоненты тест-набора для молекулярного анализа NeogenЭлемент

Обозначение

Количество

Содержание

Комментарии

Раствор для лизиса (LS)
Neogen®

Розовый
раствор впрозрачных
пробирках

96 (12 пластинок
по 8 пробирокна каждой)580 мкл растворадля лизиса в каждой
пробиркеВ штативеи готовык использованию

Neogen®
Молекулярный анализ
2 - Listeria monocytogenes(пробирки с реактивом)Желтые
пробирки

96 (12 пластинок
по 8 пробирокна каждой)Лиофилизированная
смесь дляамплификациии обнаружения
штаммов

Готовык использованию

Запасные колпачки

Желтые
колпачки

96 (12 пластинок
по 8 колпачковна каждой)Neogen® Контроль
реагентов (RC)Прозрачные
пробирки соткидными
крышками

16 (2 пакетика по
8 пробирок в каждом)Готовык использованию
Лиофилизированный
контроль ДНК, смесьдля амплификациии обнаружения
штаммов

Готовык использованию

Отрицательный контроль, не входящий в набор, представляет собой стерильную обогатительную среду,например бульон Фрейзера половинной концентрации. Не используйте в качестве отрицательного
контроля воду.

Техника безопасности

Прочтите, примите к сведению и соблюдайте все правила техники безопасности, содержащиесяв инструкциях по использованию системы молекулярной диагностики Neogen и тест-набора «Молекулярный
анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen. Сохраните инструкции по технике безопасности для использованияв дальнейшем.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Указывает на опасную ситуацию, которая, если ее не избежать, может привестик смерти, тяжелой травме и (или) повреждению имущества.
УВЕДОМЛЕНИЕ. Указывает на потенциально опасную ситуацию, которая, если ее не избежать,может привести к повреждению имущества.

W ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ!
Не используйте тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen для диагностики
заболеваний людей и животных.
При использовании методики анализа «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes»
Neogen возможно повышение количества Listeria monocytogenes до концентраций, воздействие
которых может приводить к рождению мертвого плода, а также к смерти у беременных женщин илиц с ослабленным иммунитетом.

2

RU(Русский)Пользователь отвечает за обучение персонала надлежащим современным методикам анализа,например описанным в документе «Надлежащая лабораторная практика», ISO/IEC 17025(4) или
ISO 7218(5).
Для снижения рисков, связанных с выпуском зараженного продукта вследствие получения
ложноотрицательного результата, следуйте изложенным ниже правилам.
• Соблюдайте протокол и выполняйте процедуры анализа в строгом соответствии с инструкциямик препарату.
• Храните тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen согласно указаниям наупаковке и в инструкции к продукту.
• Всегда используйте тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen до истечения
срока годности.
• Используйте тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen для исследования
образцов продуктов питания и окружающей среды, прошедших внутреннюю или стороннюю проверку.
• Используйте тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen только на техповерхностях, с теми дезинфицирующими средствами, а также в соответствии с теми протоколами и длятех штаммов бактерий, которые прошли внутреннюю или стороннюю проверку.
• Образец среды, содержащий нейтрализующий буферный раствор с арилсульфонатным комплексом,следует перед проверкой разбавить в пропорции 1 : 2 (1 часть образца на 1 часть стерильного
обогатительного бульона). Альтернативный вариант — перенести 10 мкл обогатительной среды длянейтрализующего буферного раствора в пробирки с раствором для лизиса Neogen. Средства для забора
проб Neogen®, которые содержат нейтрализующий буферный раствор с арилсульфонатным комплексом:RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G и HS2410NB2G.
Для снижения риска, связанного с воздействием химических и биологически опасных веществ,следуйте изложенным ниже правилам.
• Настоятельно рекомендуется информировать лабораторный персонал женского пола о риске дляразвивающегося плода при инфицировании матери в результате контакта с Listeria monocytogenes.
• Выполняйте анализ на патогены в оборудованной надлежащим образом лаборатории под контролем
обученного персонала. Инкубированные обогатительные среды, а также оборудование или поверхности,которые контактировали с инкубированными обогатительными средами, могут содержать патогеныв количестве, достаточном для угрозы здоровью человека.
• Обязательно соблюдайте стандартные лабораторные меры обеспечения безопасности, в том числе
используйте защитную одежду и средства защиты глаз при работе с реактивами и загрязненными
образцами.
• Избегайте контакта с обогатительной средой и пробирками с реактивом после амплификации.
• Утилизируйте обогащенные образцы в соответствии с действующими отраслевыми стандартами.
• Образцы, которые не прошли надлежащую тепловую обработку на этапе лизиса, могут представлять
биологическую опасность. ЗАПРЕЩАЕТСЯ вставлять их в прибор для молекулярной диагностики Neogen.
Для снижения рисков, связанных с перекрестным загрязнением при подготовке образцов длядиагностики, следуйте изложенным ниже правилам.
• Обязательно надевайте перчатки (для защиты пользователя и во избежание введения нуклеаз).
Для снижения рисков, связанных с загрязнением окружающей среды, придерживайтесь
перечисленных ниже рекомендаций.
• Утилизируйте зараженные отходы в соответствии с действующими отраслевыми стандартами.
Для снижения рисков, связанных с воздействием горячих жидкостей, следуйте приведенным
далее правилам.
• Не превышайте рекомендованную температуру в нагревателе.
• Не превышайте рекомендованную продолжительность нагрева.
• Для проверки температуры внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики Neogen®
следует использовать подходящий откалиброванный термометр (например, термометр частичного
погружения или термопарный цифровой термометр, но не термометр полного погружения.) Термометр
следует вставить в специально отведенное место на внутреннем нагревательном блоке для молекулярной
диагностики Neogen.

УВЕДОМЛЕНИЕДля снижения рисков, связанных с перекрестным загрязнением при подготовке образцов длядиагностики, следуйте изложенным ниже правилам.
• Перед смачиванием осадка реагента меняйте перчатки.
• Рекомендуется использовать стерильные аэрозоль-устойчивые (фильтрующие) наконечники для пипеток,применяемые в молекулярной биологии.
• Для переноса каждого образца используйте пипетку с новым наконечником.
3

RU(Русский)• При переносе образца из обогатительной среды в пробирку с раствором для лизиса придерживайтесь
свода правил «Надлежащие лабораторные практики» (Good Laboratory Practices). Во избежание
загрязнения микродозатора можно добавить промежуточный этап переноса. Например, пользователь
может переносить каждый обогащенный образец в стерильную пробирку.
• По возможности следует использовать установки для работ в области молекулярной биологии,оборудованные бактерицидными лампами. Периодически проводите дезинфекцию лабораторных столови оборудования (пипеток, инструментов для запечатывания и распечатывания пробирок и т. д.) с помощью
раствора бытового отбеливателя (1–5 % в объемном отношении с водой) или раствора для удаления ДНК.
Для снижения рисков, связанных с ложноположительными результатами, необходимо соблюдать
следующие правила.
• Ни в коем случае не открывайте пробирки после амплификации.
• Всегда утилизируйте загрязненные пробирки путем погружения в раствор бытового отбеливателя
(1–5 % в объемном соотношении с водой) или аналогичный раствор на 1 час вдали от зоны подготовки
материалов для анализа.
• Ни в коем случае не подвергайте пробирки с реактивом автоклавной обработке после амплификации.
Дополнительную информацию и местные нормативные требования в отношении утилизации отходов см.
в паспортах безопасности.
Если у вас возникли вопросы по конкретным способам применения или процедурам, посетите наш веб-сайтпо адресу www.neogen.com или обратитесь к местному представителю или дистрибьютору компании Neogen.

Ответственность пользователей

Пользователи обязаны ознакомиться с информацией и инструкциями к препарату. Для получения более
подробной информации посетите наш веб-сайт по адресу www.neogen.com либо свяжитесь с местным
представителем или дистрибьютором Neogen.
При выборе метода исследования важно понимать, что на результаты исследования могут влиять внешние
факторы, например метод забора проб, протокол исследования, подготовка проб к исследованию, способы
обработки проб во время исследования, а также используемое оборудование.
За выбор метода исследования и исследуемого продукта отвечает пользователь, который долженна основании исследования достаточного количества образцов с помощью надлежащих матриц имикробных провокационных проб определить, отвечает ли выбранный метод исследования необходимымему критериям.
Пользователь также обязан установить, что выбранный им метод анализа, а также полученные результаты
отвечают требованиям его клиентов или поставщиков.
Результаты, полученные с помощью продукта Neogen Food Safety (как и при использовании любого другого
метода исследований), не гарантируют качество матриц или технологических процессов, подвергавшихся
исследованиям.
Чтобы помочь клиентам оценить метод применительно к различным матрицам пищевых продуктов,компания Neogen разработала набор «Контроль матрицы для молекулярной диагностики Neogen®».
При необходимости используйте контроль матрицы (MC), чтобы определить, может ли матрица повлиятьна результаты анализа с использованием тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes»
Neogen. При внедрении в практику метода Neogen или анализе новых или неизвестных матриц либо матриц,материалы или методы обработки которых подверглись изменениям, проведите выборочный анализ
нескольких образцов, характерных для матрицы, т. е. образцов различного происхождения (на любом этапе
проверки).
Матрицу можно определить как тип продукта с характерными свойствами, такими как состав и метод
обработки. Различия между матрицами могут быть обусловлены просто различиями в их обработкеили состоянии (например, сырые или пастеризованные, свежие или высушенные и т. д.).

Ограничение гарантий и средств правовой защиты

ЕСЛИ ИНОЕ ЯВНО НЕ УКАЗАНО В РАЗДЕЛЕ ОБ ОГРАНИЧЕННОЙ ГАРАНТИИ НА ИНДИВИДУАЛЬНОЙ УПАКОВКЕ
ПРОДУКТА, NEOGEN НЕ ПРИЗНАЕТ ПРЯМЫЕ ИЛИ КОСВЕННЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО,ГАРАНТИИ ТОВАРНОЙ ПРИГОДНОСТИ ИЛИ ПРИГОДНОСТИ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ОПРЕДЕЛЕННЫХ
ЦЕЛЯХ. В случае обнаружения в изделии компании Neogen Food Safety дефектов компания Neogen илиуполномоченный ею дистрибьютор обязуются по своему усмотрению заменить это изделие или возместитьего стоимость. Это единственный способ правовой защиты для вас. По любым дополнительным вопросам
обращайтесь к представителю или официальному дилеру Neogen.

4

RU(Русский)Ограничение ответственности компании NeogenКОМПАНИЯ NEOGEN НЕ НЕСЕТ ОТВЕТСТВЕННОСТИ ЗА УЩЕРБ ИЛИ ПОВРЕЖДЕНИЯ, ЯВЛЯЮЩИЕСЯ ПРЯМЫМИ,НЕПРЯМЫМИ, ФАКТИЧЕСКИМИ, СЛУЧАЙНЫМИ ИЛИ КОСВЕННЫМИ, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО,УПУЩЕННУЮ ПРИБЫЛЬ. Ответственность компании Neogen ни при каких обстоятельствах и несмотряни на какие требования не может превышать стоимость изделия.

Хранение и утилизация

Хранить тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen при температуре 2–8 °C.
Не замораживать. Хранить вдали от воздействия прямых солнечных лучей. После открытия комплекта
убедитесь в том, что пакет из фольги не поврежден. Если пакет поврежден, не используйте продукт.
Открытые неиспользуемые пробирки с реактивом следует хранить в повторно герметизируемом
пакете с влагопоглотителем. Это обеспечивает стабильность лиофилизированных реактивов.
Повторно герметизированные пакеты можно хранить при температуре 2–8 °C не более 60 дней.
Не используйте тест-набор «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen по истечении срока
годности. Дата истечения срока годности и номер партии указаны на этикетке на наружной поверхности
коробки. После применения обогатительная среда и пробирки для проведения анализа с использованием
тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen могут содержать патогенные
материалы. После завершения анализа следуйте действующим отраслевым стандартам по утилизации
зараженных отходов. Дополнительную информацию и местные нормативные требования в отношении
утилизации отходов см. в паспортах безопасности.

Инструкции по применению

Строго соблюдайте все инструкции. В противном случае результаты могут быть неточными.
Периодически проводите дезинфекцию лабораторных столов и оборудования (пипеток, инструментов длязапечатывания и распечатывания пробирок и т. д.) раствором бытового отбеливателя (1–5 % в объемном
соотношении с водой) или раствором для удаления ДНК.
Пользователь должен пройти квалификационное обучение для операторов (OQ) применительно к системе
молекулярной диагностики Neogen, как описано в документе «Установочная квалификация (IQ)/рабочая
квалификация (OQ): протоколы и инструкции для системы молекулярной диагностики Neogen»(6).
Особые требования см. в разделе «Особые инструкции к утвержденным методам»:таблица 3, «Протоколы обогащения по официальной методике анализа AOAC® Official Method of AnalysisSM
2016.08 и согласно сертификату AOAC® Performance Tested MethodSM № 081501»;
таблица 4, «Протоколы обогащения согласно сертификату NF Validation 3M 01/15-09/16».

Обогащение пробВ таблицах 2, 3 и 4 содержатся инструкции по обогащению проб пищевых продуктов и окружающей среды.
За проверку альтернативных протоколов отбора образцов и пропорций разведения для обеспечения
соответствия этого метода анализа критериям пользователя отвечает сам пользователь.

Пищевые продукты

1. Доведите обогащающую среду — бульон Фрейзера половинной концентрации (содержит цитрат
железа-аммония) — до комнатной температуры.
2. Асептически объедините обогащающую среду и образец в соответствии с таблицами 2, 3 или 4.
При анализе любого вида мяса и проб высокодисперсных материалов рекомендуется использовать
мешочные фильтры.
3. Тщательно гомогенизируйте материал путем измельчения, растирания или ручного перемешиванияв течение 2 ± 0,2 мин. Инкубируйте при 37 ± 1 °C согласно табл. 2, 3 или 4.
4. При анализе сырых молочных продуктов (см. табл. 2, 3 или 4) перенесите 0,1 мл первичной
обогатительной среды в 10 мл бульона Фрейзера. Инкубируйте при температуре 37 ± 1 °C в течение
20–24 часов.

Пробы окружающей среды

Забор проб возможен с помощью губки, смоченной нейтрализующим раствором для инактивации
дезинфицирующих средств. Компания Neogen рекомендует использовать губку из целлюлозы, несодержащей биоцидов. В качестве нейтрализующего раствора можно использовать нейтрализующий бульонпо Ди-Ингли (D/E) или летиновый бульон. После забора пробы рекомендуется продезинфицировать зону еезабора.

5

RU(Русский)ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Если вы решите использовать в качестве гидратирующего раствора для губки
нейтрализующий буфер (NB), содержащий арилсульфонатный комплекс, необходимо до анализа развести
обогащенный образец окружающей среды в пропорции 1 : 2 (1 часть образца на 1 часть стерильной
среды обогащения), чтобы снизить риски, связанные с получением ложноотрицательного результата,которое приведет к выпуску загрязненного продукта. Альтернативный вариант — перенести 10 мклобогатительной среды для нейтрализующего буферного раствора в пробирки с раствором для лизиса
Neogen.
Рекомендуемый размер зоны отбора проб для проверки присутствия либо отсутствия патогена наповерхности — не менее 100 см2 (10 см x 10 см или 4 дюйма x 4 дюйма). При отборе проб с помощью губки
охватывайте всю зону, перемещая губку в двух направлениях (горизонтальном, а затем вертикальном),или берите пробы окружающей среды согласно действующему протоколу отбора проб или согласно
рекомендациям FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) либо ISO 18593(7).
1. Доведите обогащающую среду — бульон Фрейзера половинной концентрации (содержит цитрат
железа-аммония) — до комнатной температуры.
2. Асептически объедините обогащающую среду и образец в соответствии с таблицами 2, 3 или 4.
3. Тщательно гомогенизируйте материал путем измельчения, растирания или ручного перемешиванияв течение 2 ± 0,2 мин. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24–30 часов согласно табл. 2, 3 или 4.
Таблица 2. Общие протоколы обогащения при 37 ± 1 °C с использованием бульона Фрейзера половинной
концентрации и бульона Фрейзера по мере необходимости

Матрица образца

Объемобразца

Объем
Время
среды дляобогащеобогащения (ч)ния (мл)Термически
обработанные,приготовленные,консервированные
мясные
продукты, птица,морепродуктыи рыба
Термически
обработанные/пастеризованные
молочные
продукты

25 г

225

24–30

1 губка

100 или
225

24–30

1 мазок

10

24–30

25 г

475

28–32

Сельскохозяйственные продуктыи овощи
Многокомпонентные пищевые
продукты
Пробыокружающей
среды(a)Сырые мясо, птица,морепродукты,
рыба

6

RU
Первичная обогатительная
среда (бульон Фрейзера
половинной концентрации)(a)Матрица образца
Объемобразца

Сырые молочные
продукты

25 г

Объем
Время
среды дляобогащеобогащения (ч)ния (мл)

225

20–24

(Русский)Вторичная обогатительная
среда (бульон Фрейзера)(a)Объемобразца

Температура обогащения
(°C)

Время
обогащения
(ч)Перенесите
0,1 мл
в 10 мл
бульона
Фрейзера

37 ± 1

20–24Анализируемый объем
пробы(b)10 мкл

(a) Бульон Фрейзера половинной концентрации или бульон Фрейзера следует всегда дополнять добавкойк бульону Фрейзера (цитратом железа-аммония) при первичном или вторичном обогащении.
(b) Объем образца, переносимый в пробирки с раствором для лизиса Neogen. См. этап 4.6 в разделе о лизисе.

Особые инструкции к утвержденным методам
Официальная методика анализа AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
Проверенная на эффективность методика AOAC® Performance Tested MethodSM № 081501

В исследованиях, проведенных исследовательским институтом AOAC (Ассоциация химиков-аналитиков,работающих в государственных организациях) в рамках программ OMASM и PTMSM, методика анализа сиспользованием тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen была признана
эффективной методикой обнаружения Listeria monocytogenes. Тестируемые во время исследования
матрицы показаны в таблице 3.
Таблица 3. Протоколы обогащения с использованием бульона Фрейзера половинной концентрации(a)при 37 ± 1 °C согласно AOAC OMASM 2016.08 и сертификату PTMSM Certificate № 081501.
Объемобразца

Объем среды дляобогащения (мл)Времяобогащения (ч)Говяжьи сосиски, творожный
сыр, ванильное мороженое,творог 4 % жирности, цельное
шоколадное молоко 3 %, салат ромэн,сырой шпинат в пакетах, семга
холодного копчения

25 г

225

24–30

Сырая курица

25 г

475

28–32

Нарезка из индейки

125 г

1125

24–30

(b)

Канталуп

Целая
дыня

Объем,
достаточныйдля того, чтобы
дыня плавала

26–30

Нержавеющая сталь

1 губка

225

24–30

Гидроизолированный бетон

1 губка

100

24–30

Пластмасса(c)1 мазок

10

24–30

Пробы
окружающей
среды:

Матрица образцаВсе образцы, предназначенные для валидации AOAC, гомогенизировались путем растирания, если неуказано иное.
7

RU(Русский)(a)		Бульон Фрейзера половинной концентрации или бульон Фрейзера следует всегда дополнять добавкойк бульону Фрейзера (цитратом железа-аммония) при первичном или вторичном обогащении.
(b) Гомогенизируйте образец путем ручного перемешивания.
(c)		 Гомогенизируйте образец путем вихревого перемешивания.
NF VALIDATION от AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/enБолее подробную информацию о сроке действия см. в сертификате NF VALIDATION, который доступен науказанном выше веб-сайте.
Сертифицированная NF VALIDATION методика, соответствующая стандарту ISO 16140-2(6), по сравнениюсо стандартом ISO 11290(3)Объект валидации: все пищевые продукты, предназначенные для человека, и образцы окружающей среды
(исключая образцы первичной продукции)Приготовление проб: пробы следует готовить в соответствии со стандартами EN ISO 11290-1(3) и EN ISO 6887(8)Версия программного обеспечения: см. сертификат
Таблица 4. Протоколы обогащения по сертифицированной NF VALIDATION методике 3M 01/15-09/16 при
37 ± 1 °C с использованием бульона Фрейзера половинной концентрации и бульона Фрейзера по меренеобходимости
Общий протокол

ОбъемОбъем среды дляобразца обогащения (мл)Все образцы пищевых продуктов
(исключая сырое
мясо, сырые морепродукты и сырые
молочные продукты)25 гПробы окружающей
среды

25 г,
1 мазок
или
1 смыв

225

Температура обогащения
(±1 °C)37ВремяАнализируемый
обогащения
объем пробы(a)
(ч)

24–30

20 мкл

Допустимая
точка прерывания
• Бульон
Фрейзера
половинной
концентрации
до 72 часов
• Лизат при–20 °C• Лизат при 4 °C
до 72 часов

8

RUСпециальный
протокол

Сыроемясо, сырые морепродуктыи сырые
молочные
продукты

Первичная обогатительная среда
(бульон Фрейзера половинной
концентрации)(b)ОбъемТемпера- Время
среды
Объем
тура обо- обогадля обообразца
гащения щения
гащения
(±1 °C)
(ч)
(мл)

25 г

225

37

20–24

(Русский)Вторичная обогатительная среда
(бульон Фрейзера)(b)Объемобразца

Перенесите
0,1 мл
в 10 мл
бульона
Фрейзера

Температура
обогащения
(±1 °C)Допустимая точка
Время Анализи- прерываобога- руемый
ния
щения
объем
(ч)
образца(c)• Бульон
Фрейзера
до72 часов

37

20–24

10 мкл

• Лизат при–20 °C• Лизат при
4 °C до
72 часов
(a) Объем образца, переносимый в пробирки с раствором для лизиса Neogen. См. этап 4.6 в разделе олизисе.
(b) Бульон Фрейзера половинной концентрации или бульон Фрейзера следует всегда дополнять добавкойк бульону Фрейзера (цитратом железа-аммония) при первичном или вторичном обогащении.
(c) Объем образца, переносимый в пробирки с раствором для лизиса Neogen. См. этап 4.6 в разделе олизисе.
ПРИМЕЧАНИЕ. Пробы объемом более 25 г не тестировались в валидационном исследовании NF.
Подготовка лотка быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen®
1. Смочите кусок ткани в растворе бытового отбеливателя 1–5 % (в объемном соотношении с водой) илианалогичном растворе и протрите им лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen®.
2. Ополосните водой лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen.
3. Вытрите лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen досуха одноразовым полотенцем.
4. Перед использованием лотка быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen убедитесь в том,что он сухой.
Подготовка блока «Neogen® Молекулярная диагностика. Охладительный блок (вставной)»Поместите блок «Neogen Молекулярная диагностика. Охладительный блок» прямо на лабораторный стол;используйте охладительный блок при комнатной температуре (20–25 °C).
Подготовка внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики Neogen®
Поместите внутренний нагревательный блок для молекулярной диагностики Neogen® в сухое двухблочное
нагревательное устройство. Включите сухое нагревательное устройство и установите температуру таким
образом, чтобы температура внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики Neogenдостигла постоянного значения 100 ± 1 °C.
ПРИМЕЧАНИЕ. Внутренний нагревательный блок для молекулярной диагностики Neogen достигает
нужной температуры примерно за 30 минут (в зависимости от типа нагревательного устройства). Используя
подходящий откалиброванный термометр (например, термометр частичного погружения или термопарный
цифровой термометр, но не термометр полного погружения), размещенный в указанном месте, убедитесьв том, что температура внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики Neogenсоставляет 100 ± 1 °C.
Подготовка прибора для молекулярной диагностики Neogen®
1. Запустите программу «Система молекулярной диагностики Neogen®» и войдите в систему. Чтобы
убедиться в наличии наиболее свежей версии программного обеспечения, обратитесь к представителю
Neogen Food Safety.
2. Включите прибор для молекулярной диагностики Neogen.
3. Создайте или отредактируйте цикл анализа с данными для каждого образца. Подробную информацию см.
в руководстве пользователя прибора для молекулярной диагностики Neogen.
9

RU(Русский)ПРИМЕЧАНИЕ. Прежде чем вставлять лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики
Neogen с реакционными пробирками в прибор для молекулярной диагностики Neogen, убедитесь в том,что прибор достиг состояния готовности. Данная стадия нагрева занимает около 20 минут и обозначается
ОРАНЖЕВЫМ светом в строке состояния прибора. Когда прибор будет готов к запуску цикла, цвет панели
состояния изменится на ЗЕЛЕНЫЙ.
ЛизисИзвлеките нижнюю часть штатива для пробирок с раствором для лизиса Neogen с помощью отверткиили лопаточки, прежде чем помещать его во внутренний нагревательный блок для молекулярной
диагностики Neogen.

1. Пробирки с раствором для лизиса (раствором для лизиса Neogen) должны нагреться: для этого оставьте
штатив при комнатной температуре (20–25 °C) на ночь (16–18 часов). Альтернативный способ довести
пробирки с раствором для лизиса Neogen до температуры окружающей среды: поместить пробиркис раствором для лизиса Neogen на лабораторный стол минимум на 2 часа, оставить их для инкубациив инкубаторе при температуре 37 ± 1 °C в течение 1 часа или поместить их на 30 секунд в сухое
двухблочное нагревательное устройство при температуре 100 °C.
2. Переверните запечатанные пробирки для смешивания содержимого. Перейдите к следующему шагучерез 4 ч.
3. Извлеките обогатительный бульон из инкубатора.
4. На каждый образец, а также образец для отрицательного контроля (NC) (в стерильной обогатительной
среде) требуется одна пробирка с раствором для лизиса Neogen.
4.1 Для получения необходимого количества пробирок пластинки с пробирками с раствором для лизиса
Neogen можно разрезать. Выберите необходимое количество отдельных пробирок или пластинок по
8 пробирок с раствором для лизиса Neogen. Поместите пробирки с раствором для лизиса Neogen напустой штатив.
4.2 Во избежание перекрестного загрязнения распечатывайте пластинки с пробирками с раствором длялизиса Neogen по одной за раз и для каждого этапа переноса используйте новый наконечник дляпипетки.
4.3 Перенесите обогащенные пробы в пробирки с раствором для лизиса Neogen, как описано ниже.
Сначала перенесите каждый обогащенный образец в отдельную пробирку с раствором для лизиса
Neogen. Образцы для отрицательного контроля переливайте в последнюю очередь.
4.4 Распечатайте пробирки с раствором для лизиса Neogen с помощью инструмента «Молекулярная
диагностика Neogen®. Инструмент для запечатывания/распечатывания пробирок (лизис)»; пластинкис пробирками следует распечатывать по одной.
4.5 Удалите в отходы колпачок от пробирки с раствором для лизиса Neogen; если лизат необходимо
сохранить для повторного тестирования, поместите колпачки в чистый контейнер для повторного
использования после лизиса.
4.5.1 Процедура обработки сохраненного лизата описана в приложении А.
4.6 Перенесите 20 мкл образца в пробирку с раствором для лизиса Neogen, если иное не указанов протоколах из табл. 2, 3 или 4 (напр., для сырых молочных продуктов или при анализе пробокружающей среды без нейтрализующего буфера используйте 10 мкл).

10

RU

(Русский)
20мкл
µl
20

5. Повторяйте шаги от 4.4 до 4.6 до тех пор, пока каждая отдельная проба не будет перелитав соответствующую пробирку с раствором для лизиса Neogen на пластинке.
6. После переноса всех образцов перенесите в пробирку с раствором для лизиса Neogen 20 мклобогатительной среды для отрицательного контроля (стерильной обогатительной среды, например
бульона Фрейзера половинной концентрации). Не используйте в качестве отрицательного контроля воду.
7. Убедитесь в том, что температура внутреннего нагревательного блока для молекулярной диагностики
Neogen составляет 100 ± 1 °C.
8. Поместите штатив с открытыми пробирками для лизиса Neogen во внутренний нагревательный блок длямолекулярной диагностики Neogen и нагревайте в течение 15 ± 1 мин. Во время нагрева цвет раствора длялизиса Neogen изменится с розового (в холодном состоянии) на желтый (в горячем состоянии).
8.1 Образцы, которые не прошли надлежащую тепловую обработку на этапе лизиса, могут представлять
биологическую опасность. ЗАПРЕЩАЕТСЯ вставлять их в прибор для молекулярной диагностики Neogen.
9. Извлеките открытый штатив с пробирками с раствором для лизиса Neogen из нагревательного блокаи поместите его для охлаждения в блок «Молекулярная диагностика Neogen. Охладительный блок(вставной)» на период от 5 до 10 минут. Блок «Молекулярная диагностика Neogen. Охладительный
блок (вставной)», используемый при комнатной температуре, должен находиться непосредственно налабораторном столе. После охлаждения цвет раствора для лизиса снова станет розовым.
10. Извлеките штатив с пробирками для лизиса Neogen из блока «Молекулярная диагностика Neogen.
Охладительный блок (вставной)».
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Амплификация
1. На каждую пробу, а также отрицательный контроль (NC) требуется одна пробирка с реактивом изтест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen.
1.1 Для получения необходимого количества пробирок пластинки с пробирками с реактивом можно
разрезать. Возьмите необходимое количество отдельных пробирок или пластинок по 8 пробирокс реактивом из тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen.
1.2 Поместите пробирки с реактивом из тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes»
Neogen на пустой штатив.
1.3 Не встряхивайте осадок от реагента, который может образоваться на дне пробирок.
2. Возьмите 1 пробирку Neogen «Контроль реагентов» и поместите ее на штатив.
3. Во избежание перекрестного загрязнения распечатывайте пластинки с пробирками с реагентом изтест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen по одной и для каждого этапа
переноса используйте новый наконечник для пипетки.
4. Перенесите лизат в пробирки с реактивом тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes»
Neogen и пробирку Neogen «Контроль реагентов», как описано ниже.
Перенесите лизат каждого образца в отдельные пробирки с реактивом тест-набора «Молекулярный
анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen в первую очередь, а затем — отрицательные контроли (NC).
Смочите пробирку Neogen «Контроль реагентов» в последнюю очередь.
11

RU(Русский)5. Распечатайте пробирки с реактивом тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes»
Neogen с помощью инструмента «Neogen® Молекулярная диагностика. Инструмент для запечатывания/распечатывания пробирок (Реагент)»; пластинки с пробирками с реактивом следует распечатыватьпо одной. Удалите колпачок в отходы.
5.1 Перенесите 20 мкл лизата образца из верхней ½ части жидкости в пробирке с раствором длялизиса Neogen (не допуская попадания осадка) в соответствующую пробирку с реактивом
тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen. Переливать лизат впробирку следует под наклоном, чтобы не поднять осадок. Перемешайте лизат в пробирке: дляэтого 5 раз осторожно наберите жидкость в пипетку и выпустите ее обратно.
5.2 Повторяйте этап 5.1 до тех пор, пока лизат каждого образца не будет перелит в соответствующую
пробирку с реактивом тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen напластинке.
5.3 Закройте пробирки с реактивом тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes»
Neogen запасными колпачками, входящими в комплект поставки, и при этом надавливайте наколпачки скругленной стороной инструмента «Neogen Молекулярная диагностика. Инструмент длязапечатывания/распечатывания пробирок (Реагент)», совершая движения вперед-назад, чтобы
обеспечить плотную посадку колпачков.
5.4 Повторите этапы 5.1–5.3 столько раз, сколько проб необходимо исследовать.
5.5 После переноса лизатов всех образцов повторите действия начиная с этапа 5.1, чтобы перенести
20 мкл лизата отрицательного контроля (NC) в пробирку с реактивом тест-набора «Молекулярный
анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen.
5.6 Перенесите 20 мкл лизата отрицательного контроля (NC) в пробирку Neogen «Контроль
реагентов». Переливать лизат в пробирку следует под наклоном, чтобы не поднять осадок.
Перемешайте лизат в пробирке: для этого 5 раз осторожно наберите жидкость в пипетку и выпуститеее обратно.
6. Загрузите запечатанные пробирки в чистый продезинфицированный лоток быстрой загрузки длямолекулярной диагностики Neogen. Закройте и зафиксируйте крышку лотка быстрой загрузки длямолекулярной диагностики Neogen.

20 мкл

20 µL

7. Проверьте и подтвердите настроенный цикл анализа в программе «Система молекулярной
диагностики Neogen».
8. Нажмите кнопку «Пуск» в программном обеспечении и выберите инструмент для использования.
Крышка выбранного прибора откроется автоматически.
9. Поместите лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogen в прибор для молекулярной
диагностики Neogen и закройте крышку, чтобы запустить анализ. Результаты появятся в течение 75 минут.
Положительные результаты могут появиться раньше.
10. По завершении анализа извлеките лоток быстрой загрузки для молекулярной диагностики Neogenиз прибора для молекулярной диагностики Neogen и утилизируйте пробирки, поместив их в раствор
бытового отбеливателя (1–5 % в объемном отношении с водой) или аналогичный раствор на 1 час вдалиот области подготовки образцов для анализа.
УВЕДОМЛЕНИЕ. Для минимизации риска получения ложноположительных результатов вследствие
перекрестного загрязнения ни в коем случае не открывайте пробирки с реактивом, содержащие
амплифицированную ДНК. Это касается пробирок с реактивом тест-набора «Молекулярный анализ 2 Listeria monocytogenes» Neogen, пробирок Neogen «Контроль реагентов» и пробирок контроля матрицы.
Всегда утилизируйте герметично закрытые пробирки путем погружения в раствор бытового отбеливателя
1–5 % (в объемном соотношении с водой) или аналогичный раствор на 1 час вдали от зоны подготовки
материалов для анализа.

12

RU

(Русский)Результаты диагностики и их интерпретация

Специальный алгоритм анализирует кривую светоотдачи, выводимую в результате обнаружения
амплификации нуклеотидных последовательностей. Программное обеспечение автоматически анализирует
полученные данные и снабжает их цветовыми кодами. Положительный или отрицательный результат
определяется путем анализа ряда уникальных параметров кривой. Предположительно положительные
результаты отображаются в реальном времени, а отрицательные результаты и данные, требующие
изучения, — по окончании анализа.
Предположительно положительные результаты следует подтверждать по стандартным лабораторным
технологиям или подходящим стандартным методом(1, 2, 3); начать необходимо с переноса образцов изпервичной обогатительной среды во вторичную (если применимо) с последующим посевом на чашках
Петри и проверкой изолятов с использованием надлежащих биохимических, микроскопическихи серологических методов.
ПРИМЕЧАНИЕ. Результаты анализа не могут быть нулевыми даже в случае исследования отрицательного
образца, поскольку система и амплификационные реактивы из тест-набора «Молекулярный анализ 2 Listeria monocytogenes» Neogen обеспечивают выдачу «фоновых» показаний в относительных световых
единицах (RLU).
В редких случаях получения необычных световых данных алгоритм заносит соответствующие результаты вкатегорию информации, требующей изучения. Компания Neogen рекомендует проводить повторный анализ
образцов, требующих изучения. Если результат анализа не меняется, проверьте его предпочтительным длявас методом или в соответствии с местными нормативными требованиями.
Таблица 5. Символы для обозначения результатов анализа проб в программном обеспечении системы
молекулярной диагностики Neogen и их интерпретация
Тип
лунки

Обозначение
результатадля лунки

Результат

Интерпретация

ПробаПоложительный

Проба предположительно положительна поцелевому патогену.

ПробаОтрицательный

Проба предположительно отрицательна поцелевому патогену.

ПробаИнгибировано

Матрица образца оказала ингибирующее действие нареакцию в ходе анализа. Возможно, необходим повторный
анализ. Подробнее см. в разделе о поиске и устранении
неполадок, а также в инструкциях к препарату.

ПробаТребуется
проверка

Неопределенный результат в отношении присутствия
либо отсутствие целевого патогена. Возможно, необходим
повторный анализ. Подробнее см. в разделе о поискеи устранении неполадок, а также в инструкциях к препарату.

ПробаОшибка

Биолюминесценция не обнаружена. Возможно, необходим
повторный анализ. Подробнее см. в разделе о поискеи устранении неполадок, а также в инструкциях к препарату.

Подтверждение результатов в соответствии с методом, получившим сертификат NF VALIDATION
Вариант 1. Используя стандарт ISO 11290(3), начиная с обогащения бульоном Фрейзера половинной
концентрации.
Вариант 2. Путем выделения агара PALCAM или хромогенного агара в рамках сертифицированнойNF VALIDATION методики обнаружения Listeria monocytogenes. Для подтверждения присутствия Listeria
monocytogenes достаточно установить присутствие характерных колоний.
Вариант 3. С помощью зондов на основе нуклеиновых кислот, как описано в стандарте EN ISO 7218(5),на изолированных колониях, из селективного агара (см. варианты 1 или 2).
Вариант 4. Любым другим методом, сертифицированным NF VALIDATION, принцип которого должен
отличаться от принципа работы тест-набора «Молекулярный анализ 2 - Listeria monocytogenes» Neogen.
Используйте полный протокол, описанный для второго валидированного метода. Все этапы до начала
подтверждения должны быть одинаковыми для обоих методов.
В случае несоответствующих результатов (предположительно положительных с использованием
альтернативного метода, не подтвержденных одним из способов, описанных выше) лаборатория должна
принять необходимые меры, чтобы обеспечить достоверность полученных результатов.
13

RU(Русский)В случае расхождения результатов (получения при использовании тест-набора «Молекулярный анализ 2 Listeria monocytogenes» Neogen предположительно положительных результатов, не подтвержденных
одним из способов, описанных выше) лаборатория должна принять необходимые меры для обеспечения
достоверности результатов анализа.
Если у вас возникли вопросы по конкретным способам применения или процедурам, посетите наш веб-сайтпо адресу www.neogen.com или обратитесь к местному представителю или дистрибьютору компании Neogen.
Приложение A. Прерывание выполнения протокола. Хранение и повторный анализ лизатов,подвергшихся термообработке.
1. Для хранения лизатов, подвергшихся термообработке, снова запечатайте пробирку с раствором длялизиса чистым колпачком (см. раздел «Лизис», 4.5).
2. Отправьте образец на хранение при температуре от 4 до 8 °C на период до 72 часов.
3. Подготовьте сохраненный образец для амплификации, перевернув пробирку 2–3 разадля перемешивания.
4. Распечатайте пробирки.
5. Поместите пробирки со смешанным лизатом во внутренний нагревательный блок для молекулярной
диагностики Neogen и подогрейте до температуры 100 ± 1 °C в течение 5 ± 1 минуты.
6. Извлеките штатив с пробирками с раствором для лизиса Neogen из нагревательного блока и поместитеего для охлаждения в блок «Молекулярная диагностика Neogen. Охладительный блок (вставной)» напериод от 5 до 10 минут.
7. Продолжите выполнение протокола в соответствии с разделом «Амплификация», как описано выше.

Ссылки.

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Пояснения к символам на этикетках
info.neogen.com/symbols

14

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

TR(Türkçe)Yayınlanma Tarihi: 2024-01

Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2

Ürün TalimatlarıÜrün Tanımı ve Kullanım Amacı

Neogen® Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2, zenginleştirilmiş gıda ve çevre numunelerinde Listeria
monocytogenes’in hızlı ve spesifik tespiti için Neogen® Moleküler Tayin Sistemi ile kullanılır. Neogen Moleküler Tayin
Testlerinde, nükleik asit dizgelerinin yüksek özgüllük ve duyarlılıkla hızla amplifiye edilmesi için döngü aracılı izotermal
amplifikasyonun yanı sıra amplifikasyonun tespit edilmesi amacıyla biyoluminesans kullanılır. Negatif sonuçlar test
tamamlandıktan sonra gösterilirken, olası pozitif sonuçlar gerçek zamanlı olarak bildirilir. Olası pozitif sonuçlar, tercih edilen
yöntem kullanılarak veya yerel düzenlemelerde belirtildiği şekilde doğrulanmalıdır(1, 2, 3).
Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 ürünü, laboratuvar ortamında, laboratuvar teknikleri konusundaeğitim almış profesyonellerin kullanımına yöneliktir. Neogen, bu ürünü yiyecek veya içecek endüstrileri dışında kullanım içintescil ettirmemiştir. Örneğin Neogen bu ürünü su, farmasötik ürünler, kozmetik malzemeler, klinik veya veterinerlik amaçlı
numunelerin testlerinde kullanım için tescil ettirmemiştir. Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 olası tüm
test protokolleri veya mümkün olan tüm bakteri suşları ile değerlendirilmemiştir.
Tüm test yöntemlerinde olduğu gibi, zenginleştirme ortamının kaynağı, formülasyonu ve kalitesi sonuçları etkileyebilir.
Numune alma yöntemleri, test protokolleri, numune hazırlama, taşıma ve laboratuvar tekniği gibi faktörler de sonuçları
etkileyebilir. Neogen, yöntemin kullanıcının ölçütlerini karşıladığından emin olmak için belirli gıdalar ve mikrobiyal
zorluklarla yeterli sayıda numune kullanılarak kullanıcının ortamında zenginleştirme ortamı dahil olmak üzere yöntemindeğerlendirilmesini önerir.
Neogen, Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2’yi Amonyum Ferrik Sitrat içeren Half Fraser Broth ve
Amonyum Ferrik Sitrat içeren Fraser Broth ile gerektiği şekilde değerlendirmiştir. Bu ortamın tipik bir formülasyonu aşağıda
verilmiştir.
Toz Half Fraser Broth Tipik Formülü(g/L)

Toz Fraser Broth Tipik Formülü(g/L)

Sodyum Klorür

20 gSodyum Klorür

20 gSodyum Fosfat, dibazik, susuz*

9,6 g

Sodyum Fosfat, dibazik, susuz*

9,6 gDana Eti Özütü

5,0 g

Dana Eti Özütü

5,0 g

Kazeinin Pankreatik Dijesti

5,0 g

Kazeinin Pankreatik Dijesti

5,0 g

Hayvan Dokusunun Peptik Dijesti

5,0 g

Hayvan Dokusunun Peptik Dijesti

5,0 g

Maya Özütü

5,0 g

Maya Özütü

5,0 g

Lityum Klorür

3,0 g

Lityum Klorür

3,0 g

Potasyum Fosfat, monobazik

1,35 gPotasyum Fosfat, monobazik

1,35 gEskulin

1,0 g

Eskulin

1,0 g

Akriflavin HCl

0,0125 g

Akriflavin HCl

0,025 gNalidiksik Asit

0,01 gNalidiksik Asit

0,02 g* İkame: Sodyum Fosfat, dibazik, dihidrat

12,0 gFraser Broth Supplementi(10 mL flakon başına içerik. Bir flakon bir litre bazal ortama eklenir.)
Amonyum Ferrik Sitrat

0,5 g/10 mL

Nihai pH7,2±0,2, 25°C’de

Neogen® Moleküler Tayin Cihazı, numune içinde var olan organizmaları yok etmek için tasarlanmış lizis test aşaması
sırasında ısıl işlemden geçen numuneler ile kullanım için tasarlanmıştır. Lizis test aşaması sırasında doğru şekilde ısılişleme tabi tutulmayan numuneler, olası bir biyolojik tehlike olarak düşünülebilir ve Neogen Moleküler Tayin Cihazı’na
YERLEŞTİRİLMEMELİDİR.
Neogen Gıda Güvenliği, ISO (Uluslararası Standardizasyon Teşkilatı) 9001 tasarım ve üretim sertifikasına sahiptir.
Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 test kiti, Tablo 1’de açıklanmış olduğu gibi 96 test içerir.

1

TR(Türkçe)Tablo 1. Neogen Moleküler Tayin Testi Kit Bileşenleri
MalzemeTanım

Miktarİçindekiler

Yorumlar

Neogen® Lizis Solüsyonu(LS)Şeffaf tüplerde
pembe solüsyon

96 (8 tüplük 12 şerit)Tüp başına 580 μL LS

Raflı vekullanıma hazır

Neogen® Moleküler
Tayin Testi Listeria
monocytogenes-2 Reaktif
Tüpleri

Sarı tüpler

96 (8 tüplük 12 şerit)

Liyofilize spesifik
amplifikasyon ve tespitkarışımı

Kullanıma
hazırİlave kapaklar

Sarı kapaklar

96 (8 kapaklık 12 şerit)

Neogen® Reaktif Kontrolü(RC)Şeffaf üstten
kapatmalı tüpler

16 (8 ayrı tüp içeren 2poşet)

Kullanıma
hazır
Liyofilize kontrol DNA’sı,
amplifikasyon ve tespitkarışımı

Kullanıma
hazır

Kitle birlikte sunulmayan Negatif Kontrol, Half Fraser Broth gibi steril bir zenginleştirme ortamıdır. Negatif Kontrol olarak
su kullanmayın.

Güvenlik

Kullanıcı, Neogen Moleküler Tayin Sistemi ve Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 ile ilgili talimatlarda
yer alan tüm güvenlik bilgilerini okumalı, anlamalı ve bunlara uymalıdır. Güvenlik talimatlarını ileride başvurmak üzere
saklayın.
UYARI: Önlenmemesi halinde ölüm ya da ciddi yaralanma ve/veya mal zararı ile sonuçlanabilecek tehlikeli bir
durumu gösterir.
BİLDİRİM: Kaçınılmaması halinde maddi zarar ile sonuçlanabilen olası tehlikeli bir durumu gösterir.

W UYARI
Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2’yi insanların veya hayvanların sağlık durumlarını tanılamak
amacıyla kullanmayın.
Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 yöntemi, maruz kalındığında ölü doğumlara ve gebe kadınlarda
ve bağışıklık yetmezliği olan kişilerde ölüme neden olmaya yetebilecek düzeylerde Listeria monocytogenes üretebilir.
Kullanıcı, personelini geçerli ve doğru test teknikleri konusunda eğitmelidir; örneğin, İyi Laboratuvar Uygulamaları,
ISO/IEC 17025(4) veya ISO 7218(5).
Kontamine ürünün açığa çıkmasına yol açan yanlış bir negatif sonuçla ilişkili riskleri azaltmak için:• Tam olarak ürün talimatlarında belirtildiği şekilde protokolü uygulayın ve testleri gerçekleştirin.
• Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2’yi ambalaj üzerinde ve ürün talimatlarında belirtildiği
şekilde saklayın.
• Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2’yi mutlaka son kullanma tarihinden önce kullanın.
• Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2’yi kurum içinde veya üçüncü bir tarafça onaylanmış gıda veçevre numuneleri ile kullanın.
• Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2’yi sadece kurum içinde veya üçüncü bir tarafça onaylanmış
yüzeyler, sanitizerler, protokoller ve bakteri suşları için kullanın.
• Aril sülfonat kompleksiyle birlikte Nötrleştirici Tampon içeren çevresel bir numune için test etmeden önce 1:2 oranında
bir dilüsyon gerçekleştirin (1 ölçek steril zenginleştirme sıvı besiyeri içine 1 ölçek numune). Başka bir seçenek ise
Neogen Lizis Solüsyonu tüplerine 10 μL NB zenginleştirme aktarmaktır. Aril sülfonat kompleksli Nötrleştirici Tampon
içeren Neogen® Numune Toplama ürünleri: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G ve
HS2410NB2G.
Kimyasallara ve biyolojik tehlikelere maruz kalma ile ilişkili riskleri azaltmak için:• Kadın laboratuvar personelinin, fetüs gelişiminde annenin Listeria monocytogenes’e maruziyeti sonucunda meydana
gelen enfeksiyondan kaynaklanan risk konusunda bilgilendirilmesi kesinlikle önerilir.
• Patojen testini doğru donanıma sahip bir laboratuvarda, eğitimli personelin kontrolü altında gerçekleştirin.
İnkübe edilmiş zenginleştirme ortamı ve inkübe edilmiş zenginleştirme ortamıyla temas etmiş ekipman veya yüzeyler,insan sağlığı için risk oluşturmaya yetecek düzeylerde patojenler içerebilir.
• Reaktifler ve kontamine olmuş numuneler ile çalışırken, uygun koruyucu kıyafet ve gözlük kullanımı dahil olmak üzere,
daima standart laboratuvar güvenlik uygulamalarını izleyin.
• Amplifikasyon sonrasında zenginleştirme ortamları ve reaktif tüplerinin içeriği ile temastan kaçının.
• Zenginleştirilmiş numuneleri, geçerli endüstri standartlarına göre imha edin.
• Lizis test aşaması sırasında doğru şekilde ısıl işleme tabi tutulmayan numuneler, olası bir biyolojik tehlike olarakdüşünülebilir ve Neogen Moleküler Tayin Cihazı’na YERLEŞTİRİLMEMELİDİR.

2

TR(Türkçe)Testi hazırlarken çapraz kontaminasyonla ilişkili riskleri azaltmak için:• Daima eldiven takın (kullanıcıyı korumak ve nükleazların girişini önlemek için).
Çevresel kontaminasyonla ilişkili riskleri azaltmak için:• Kontamine atıkların atılması ile ilgili geçerli endüstri standartlarına uyun.
Sıcak sıvılara maruz kalınmasıyla ilişkili riskleri azaltmak için:• Isıtıcıdaki önerilen sıcaklık ayarını aşmayın.
• Önerilen ısıtma süresini aşmayın.
• Neogen® Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası sıcaklığını doğrulamak için uygun ve kalibre edilmiş bir termometre
kullanın (örneğin tamamen daldırma tipi termometre değil, kısmi daldırma tipi termometre veya dijital sıcaklık sensörlü
termometre.) Termometre, Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’nda belirlenmiş olan konuma yerleştirilmelidir.

BİLDİRİM
Testi hazırlarken çapraz kontaminasyonla ilişkili riskleri azaltmak için:• Reaktif pellet hidrasyonundan önce eldivenleri değiştirin.
• Steril, aerosol bariyerli (filtreli), moleküler biyoloji sınıfı pipet uçlarının kullanılması tavsiye edilir.
• Her numune aktarımı için yeni bir pipet ucu kullanın.
• Numunenin zenginleştirilmiş besiyerinden lizis tüpüne aktarılması için İyi Laboratuvar Uygulamalarını kullanın.
Pipetör kontaminasyonunu önlemek için kullanıcı ara bir aktarım adımı eklemeyi seçebilir. Örneğin kullanıcı
zenginleştirilmiş her numuneyi steril bir tüpe aktarabilir.
• Mevcutsa germisidal lamba içeren bir moleküler biyoloji çalışma tezgahı kullanın. Laboratuvar tezgahlarını ve ekipmanını(pipetler, kapak takma/kapak sökme araçları vb.) %1-5’lik (suda v:v) bir çamaşır suyu çözeltisi veya DNA uzaklaştırmaçözeltisi ile periyodik olarak dekontamine edin.
Yanlış pozitif sonuçlarla ilişkili riskleri azaltmak için:• Amplifikasyon sonrasında reaktif tüplerini asla açmayın.
• Kontamine olmuş tüpleri, her zaman %1-5’lik (suda v:v) bir çamaşır suyu solüsyonunda veya eşdeğer bir solüsyonda
1 saat süreyle bekleterek ve test hazırlık alanından uzakta imha edin.
• Amplifikasyon sonrasında reaktif tüplerine asla otoklav uygulamayın.
Ek bilgiler ve ürünün imha edilmesi ile ilgili yerel düzenlemeler için Güvenlik Veri Formu’na bakın.
Belirli uygulamalar veya prosedürler hakkında sorularınız varsa www.neogen.com adresindeki web sitemizi ziyaret edinveya yerel Neogen temsilcisi ya da distribütörü ile iletişim kurun.

Kullanıcının Sorumluluğu

Kullanıcılar ürün talimatları ve bilgileri hakkında bilgi edinmekle yükümlüdür. Daha fazla bilgi için www.neogen.com
adresindeki web sitemizi ziyaret edin veya yerel Neogen temsilcinizle ya da dağıtımcınızla iletişime geçin.
Bir test yöntemi seçilirken, numune alma yöntemleri, test protokolleri, numunenin hazırlanması, işlem yapılması velaboratuvar tekniği gibi dış faktörlerin sonuçları etkileyebileceği bilinmelidir.
Seçilen test yönteminin kullanıcının kriterlerini karşıladığı konusunda kullanıcıyı tatmin edecek uygun matrislerve mikrobiyal zorluklarla yeterli sayıda numuneyi değerlendirmek üzere herhangi bir test yönteminin seçilmesi
kullanıcının sorumluluğundadır.
Tüm test yöntemlerinin ve sonuçlarının müşteri ve tedarikçi gereksinimlerini karşılamasını sağlamak yine
kullanıcının sorumluluğundadır.
Tüm test yöntemlerinde olduğu gibi, herhangi bir Neogen Gıda Güvenliği ürününün kullanılmasından elde edilen sonuçlar
test edilen matrislerin veya süreçlerin kalitesi konusunda bir garanti oluşturmaz.
Çeşitli gıda matrislerine yönelik olarak yöntemin değerlendirilmesinde müşterilere yardımcı olmak için Neogen, Neogen®
Moleküler Tayin Matris Kontrolü kitini geliştirmiştir. Gerektiğinde, matrisin Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria
monocytogenes-2 sonuçlarını etkileyip etkileyemediğini belirlemek üzere Matris Kontrolü (MC) kullanın. Neogen yönteminin
adapte edildiği ya da yeni veya bilinmeyen matrislerin ya da ham maddesi veya prosesi değişen matrislerin test edildiği
herhangi bir validasyon döneminde, matrisi temsil eden birkaç numuneyi, yani farklı kaynaktan alınan numuneleri test edin.
Matris; bileşim ve proses gibi yapısal özellikleri olan bir ürün türü olarak tanımlanabilir. Matrisler arasındaki farklılıklar,
proseslerindeki veya sunumlarındaki farklılıkların neden olduğu etkiler kadar basit olabilir (ör. pastörize ve ham, kuru vetaze vb.).

Garantilerin Sınırlandırılması/Sınırlı Çözüm

NEOGEN, HER BİR ÜRÜN AMBALAJININ ÜZERİNDEKİ SINIRLI GARANTİ KISMINDA AÇIKÇA BELİRTİLENLERHARİCİNDE, PAZARLANABİLİRLİK VEYA BELİRLİ BİR KULLANIMA UYGUNLUK GARANTİLERİ DAHİL ANCAKBUNLARLA SINIRLI OLMAMAK ÜZERE HERHANGİ BİR AÇIK VEYA ZIMNİ GARANTİYİ KABUL ETMEMEKTEDİR.
Herhangi bir Neogen Gıda Güvenlik Ürünü’nün kusurlu olması durumunda, Neogen veya yetkili dağıtımcısı, tercihine göreürünü değiştirecek veya ürün satış tutarını iade edecektir. Tarafınıza münhasır çözümler bunlardır. Diğer her türlü sorunuz
için lütfen Neogen temsilciniz veya yetkili Neogen distribütörünüz ile iletişim kurun.
3

TR(Türkçe)Neogen’in Sınırlı Sorumluluğu

NEOGEN DOĞRUDAN, DOLAYLI, ÖZEL, ARIZİ VEYA NETİCE KABİLİNDEN DOĞMUŞ, KAYBEDİLMİŞ KAZANÇLAR
DAHİL ANCAK BUNUNLA SINIRLI OLMAMAK ÜZERE HERHANGİ BİR KAYIP VEYA ZARARDAN SORUMLU
OLMAYACAKTIR. Hiçbir durumda Neogen’in herhangi bir hukuk kuramı altındaki sorumluluğu, kusurlu olduğu iddia edilenürünün satış fiyatını aşamaz.

Saklama ve Atma

Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 ürününü 2-8°C’de saklayın. Dondurmayın. Saklama sırasında kitiışıktan uzak tutun. Kiti açtıktan sonra, folyo poşetin zarar görmemiş olduğunu teyit edin. Poşet zarar görmüşse kullanmayın.
Açıldıktan sonra, kullanılmayan reaktif tüplerinin, liyofilize reaktiflerin stabilitesini sürdürmek amacıyla, içinde nem çekici
ile ağzı tekrar kapatılabilir poşet içinde saklanması gerekir. Yeniden kapatılmış poşetleri 60 günden uzun olmamak kaydıyla
2-8°C sıcaklıkta saklayın.
Son kullanma tarihi geçen Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2’yi kullanmayın. Son kullanma tarihi ve
lot numarası kutunun dış yüzündeki etikette belirtilmiştir. Kullanım sonrasında, zenginleştirme ortamı ve Neogen Moleküler
Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 tüpleri, potansiyel olarak patojenik materyaller içerebilir. Test tamamlandığında,kontamine atığın imha edilmesi için geçerli endüstri standartlarına uyun. Ek bilgiler ve ürünün imha edilmesi ile ilgili yereldüzenlemeler için Güvenlik Veri Formu’na bakın.

Kullanım Talimatları

Tüm talimatlara dikkatle uyun. Bu uyarının dikkate alınmaması hatalı sonuçlara neden olabilir.
Laboratuvar tezgahlarını ve ekipmanını (pipetler, kapak takma/kapak sökme araçları vb.) %1-5’lik (suda v:v) bir çamaşır suyu
çözeltisi veya DNA uzaklaştırma çözeltisi ile periyodik olarak dekontamine edin.
Kullanıcı, “Neogen Moleküler Tayin Sistemi için Kurulum Yeterliliği (IQ) / Çalışma Yeterliliği (OQ) Protokolleri ve Talimatlar”
belgesinde(6) açıklanan şekilde Neogen Moleküler Tayin Sistemi operatör yeterliliği (OQ) eğitimini tamamlamalıdır.
Özel gereksinimler için “Valide edilmiş yöntemler için özel talimatlar” bölümüne bakın:
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 ve AOAC® Performance Tested MethodSM Certificate #081501’e göre
zenginleştirme protokolleri için Tablo 3.
NF Validation sertifikası 3M 01/15-09/16’ya göre zenginleştirme protokolleri için Tablo 4.

Numune Zenginleştirme

Tablo 2, 3 veya 4, gıda ve çevresel numunelerin zenginleştirilmesine yönelik rehberlik sunar. Bu test yönteminin kullanıcı
kriterlerini karşılamasını sağlamak üzere alternatif numune alma protokollerinin veya dilüsyon oranlarının valide edilmesi
kullanıcının sorumluluğundadır.

Gıdalar

1. Half Fraser Broth zenginleştirme ortamının (amonyum ferrik sitrat içerir) laboratuvar ortam sıcaklığında dengeyegelmesini sağlayın.
2. Aseptik olarak zenginleştirme ortamını ve numuneyi Tablo 2, 3 veya 4’e göre birleştirin. Tüm et ve yüksek oranda
partikül içeren numuneler için filtre torbalarının kullanılması önerilir.
3. 2±0,2 dakika boyunca harmanlayarak, sindirerek veya elle karıştırarak homojenize edin. Tablo 2, 3 veya 4’e göre
37±1°C’de inkübe edin.
4. Ham süt ürünleri için (bkz. Tablo 2, 3 veya 4), birincil zenginleştirmeden 0,1 mL’yi 10 mL Fraser Broth’a aktarın.
20-24 saat boyunca 37±1°C’de inkübe edin.

Çevresel numuneler

Numune toplama cihazlarına, sanitizerlerin etkilerini devre dışı bırakmak için nötrleştirici çözelti ile spançla hidratlama
uygulanabilir. Neogen, biyosit içermeyen bir selüloz spancın kullanılmasını önermektedir. Nötrleştirici çözelti, Dey-Engley(D/E) Nötrleştirici Sıvı Besiyeri veya Letheen Sıvı Besiyeri olabilir. Numune alma sonrasında alanın sanitize edilmesi önerilir.
UYARI: Spanç için hidratlayıcı çözelti olarak aril sülfonat kompleksi içeren Nötrleştirici Tampon (NB) kullanmayı
seçtiyseniz, kontamine ürünün açığa çıkmasına yol açan yanlış negatif bir sonuçla ilişkili riskleri azaltmak amacıyla,test öncesi zenginleştirilmiş çevresel numune için 1:2 oranında dilüsyon (1 ölçek steril zenginleştirme sıvı besiyeri içine
1 ölçek numune) gerçekleştirilmesi gereklidir. Başka bir seçenek ise Neogen Lizis Solüsyonu tüplerine 10 μL nötrleştirici
tampon zenginleştirme aktarmaktır.
Yüzeyde patojenin varlığını veya yokluğunu doğrulamak için numune alma alanının önerilen boyutu en az 100 cm2’dir(10 cm x 10 cm veya 4” x 4”). Bir spanç ile numune alınırken, alanın tamamını iki yönde (soldan sağa, ardından yukarıya veaşağıya) kapsayın veya çevresel numuneleri geçerli numune alma protokolünüze ya da FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) veya
ISO 18593(7) kılavuzlarına göre alın.
1. Half Fraser Broth zenginleştirme ortamının (amonyum ferrik sitrat içerir) laboratuvar ortam sıcaklığında dengeyegelmesini sağlayın.
2. Aseptik olarak zenginleştirme ortamını ve numuneyi Tablo 2, 3 veya 4’e göre birleştirin.
4

TR(Türkçe)3. 2±0,2 dakika boyunca harmanlayarak, sindirerek veya elle karıştırarak homojenize edin. Tablo 2, 3 veya 4’e göre
24-30 saat boyunca 37±1°C’de inkübe edin.
Tablo 2: 37±1°C’de Half Fraser Broth ve gerektiğinde Fraser Broth kullanılarak genel zenginleştirme protokolleri.
Numune Matrisi

NumuneBoyutuZenginleştirme ZenginleşBesiyerinin
tirme Süresi
Hacmi (mL)(saat)

Isıl işlem görmüş,pişirilmiş, kürlenmiş
etler, kümes
hayvanları, denizürünleri ve balık
Isıl işlem görmüş/pastörize edilmiş
süt ürünleri

25 g

225

24-30

1 spanç100 veya 225

24-30

1 svab

10

24-30

25 g

475

28-32

Tarım ürünleri
ve sebzelerÇok bileşenli gıdalarÇevreselnumuneler(a)Ham et, kümes
hayvanları, denizürünleri, balık

Birincil Zenginleştirme(Half Fraser Broth)(a)Numune Matrisi

Ham süt ürünleri

NumuneBoyutu25 gİkincil Zenginleştirme(Fraser Broth)(a)Zenginleştirme ZenginleşBesiyerinin
tirme Süresi
Hacmi (mL)(saat)
225

20-24

NumuneBoyutuZenginleştirme Sıcaklığı
(°C)

Zenginleştirme Süresi
(saat)

0,1 mL’yi
10 mL
FraserBroth’aaktarın

37±1

20-24

NumuneAnalizHacmi(b)10 μL(a) Half Fraser ve Fraser Broth birincil veya ikincil zenginleştirme sırasında daima Fraser Broth supplementi(amonyum ferrik sitrat) ile desteklenmelidir.
(b) Neogen Lizis Solüsyonu tüplerine aktarılan numune hacmi. Lizis bölümü Adım 4.6’ya bakın.

Valide Edilmiş Yöntemler için Özel Talimatlar
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

AOAC Research Institute OMASM ve PTMSM programlarında, Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes2’nin Listeria monocytogenes tespitinde etkili bir yöntem olduğu bulunmuştur. Çalışmada test edilen matrisler
Tablo 3’te gösterilmiştir.

5

TR(Türkçe)Tablo 3. AOAC OMASM 2016.08 ve PTMSM Certificate #081501’e göre 37±1°C’de Half Fraser Broth(a) kullanılan
zenginleştirme protokolleri.
Numune Matrisi

NumuneBoyutuZenginleştirme
Besiyerinin Hacmi(mL)

Zenginleştirme
Süresi (saat)

Dana eti sosisler, queso fresco (Meksika’yaözgü taze peynir/lor peyniri), vanilyalı
dondurma, %4 süt yağlı çökelek peyniri,%3 çikolatalı tam yağlı süt, marul, poşetteçiğ ıspanak, soğuk füme somon

25 g

225

24-30

25 g

475

28-32

Şarküteri hindi

125 g

1125

24-30

Kantalup kavunu(b)

Bütün
kavun

Kavunun yüzmesinisağlamak içinyeterli hacim

26-30

Paslanmaz çelik

1 spanç

225

24-30

Yalıtımlı beton

1 spanç

100

24-30

Plastik(c)1 svab1024-30Çevreselnumuneler:

Ham piliç

AOAC validasyonuna yönelik tüm numuneler, aksi belirtilmedikçe sindirme yoluyla homojenize edilmiştir.
(a)		Half Fraser ve Fraser Broth birincil veya ikincil zenginleştirme sırasında daima Fraser Broth supplementi(amonyum ferrik sitrat) ile desteklenmelidir.
(b) Numuneyi elle karıştırma yoluyla homojenize edin.
(c)		 Numuneyi vorteksleme yoluyla homojenize edin.

AFNOR Certification ile NF VALIDATION

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Validasyonun bitiş tarihi ve geçerliliği ile ilgili daha fazla bilgi için lütfen yukarıda bahsi geçen web sitesindeki
NF VALIDATION sertifikasına bakın.
ISO 11290(3) ile kıyaslandığında ISO 16140-2(6) uyarınca NF VALIDATION sertifikalı yöntem
Validasyonun kapsamı: Tüm insan yiyeceği numuneleri ve çevresel numuneler (birincil üretim numuneleri hariç)
Numune hazırlama: Numuneler EN ISO 11290-1(3) ve EN ISO 6887(8)’e uygun şekilde hazırlanmalıdır
Yazılım sürümü: Sertifikaya bakın

6

TR(Türkçe)Tablo 4: 37±1°C’de gerektiği şekilde Half Fraser Broth ve Fraser Broth kullanılan NF VALIDATION sertifikalı yöntem
Neogen 01/15-09/16’ya göre zenginleştirme protokolleri.
Genel Protokol

NumuneBoyutuTüm yiyecek
numuneleri (ham etler,
ham deniz ürünleri ve
ham süt ürünleri hariç)

25 gÇevresel numuneler

25 g, 1 svab
veya 1 tek
kullanımlık
havlu

SpesifikProtokol

Ham etler,
ham denizürünleri ve
ham süt
ürünleriZenginleştirZenginleş- Zenginleş- Numune
me Besiyetirme Sıcak- tirme Süre- Analiz
rinin Hacmilığı (±1°C)
si (saat)
Hacmi(a)
(mL)

225

37

225

20 µL

• 72 saate kadar Half
Fraser Broth• -20°C’de lizat• 4°C’de 72 saate kadar lizatİkincil Zenginleştirme (Fraser Broth)(b)Birincil Zenginleştirme (Half Fraser Broth)(b)ZenginZenginNuleştirme
Zenginleşleştirme
mune Besiyerinin tirme SıcakSüresi
BoyutuHacmi
lığı (±1°C)(saat)
(mL)

25 g

24-30

Kabul Edilen Kesinti
Noktası

37

NumuneBoyutu0,1 mL’yi
10 mL
FraserBroth’aaktarın

20-24

Zenginleştirme
Sıcaklığı
(±1°C)

Zenginleş- Numune
tirme Süre- Analizsi (saat)
Hacmi(c)Kabul
EdilenKesintiNoktası• 72 saate
kadar
Fraser
Broth

37

20-24

10 µL

• -20°C’delizat• 4°C’de
72 saatekadar lizat(a) Neogen Lizis Solüsyonu tüplerine aktarılan numune hacmi. Lizis bölümü Adım 4.6’ya bakın.
(b) Half Fraser ve Fraser Broth birincil veya ikincil zenginleştirme sırasında daima Fraser Broth supplementi(amonyum ferrik sitrat) ile desteklenmelidir.
(c) Neogen Lizis Solüsyonu tüplerine aktarılan numune hacmi. Lizis bölümü Adım 4.6’ya bakın.
NOT: 25 g’dan büyük numuneler NF validation çalışmasında test edilmemiştir.

Neogen® Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi’nin Hazırlanması
1. Bir bezi %1-5 (suda v:v) çamaşır suyu solüsyonuyla veya eşdeğer bir solüsyonla ıslatın ve Neogen® Moleküler Tayin Hızlı
Yükleyici Tepsisi’ni silin.
2. Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi’ni su ile durulayın.
3. Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi’ni kurulamak için tek kullanımlık bir havlu kullanın.
4. Kullanmadan önce, Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi’nin kuru olduğundan emin olun.
Neogen® Moleküler Tayin Soğutma Bloğu Ek Parçası’nın Hazırlanması
Neogen® Moleküler Tayin Soğutma Bloğu’nu doğrudan laboratuvar tezgahına koyun; Soğutma bloğunu laboratuvar ortam
sıcaklığında (20-25°C) kullanın.
Neogen® Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’nın Hazırlanması
Neogen® Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’nı kuru, çift bloklu bir ısıtma ünitesine yerleştirin. Kuru bloklu ısıtmaünitesini çalıştırın ve Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’nın 100±1°C’lik bir sıcaklığa ulaşmasını ve bu sıcaklığı
korumasını sağlamak için sıcaklığı ayarlayın.
NOT: Isıtma ünitesine bağlı olarak, Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’nın istenen sıcaklığa ulaşması içinyaklaşık 30 dakika bekleyin. Belirlenen yere yerleştirilmiş uygun, kalibre edilmiş bir termometre (ör. tamamen daldırmalı
termometre değil, kısmi daldırmalı termometre veya dijital sıcaklık sensörlü termometre) kullanarak Neogen Moleküler
Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’nın 100±1°C’de olduğunu doğrulayın.

7TR(Türkçe)Neogen® Moleküler Tayin Cihazı’nın Hazırlanması
1. Neogen® Moleküler Tayin Sistemi Yazılımını başlatın ve giriş yapın. Yazılımın en güncel sürümüne sahip olduğunuzdan
emin olmak için Neogen Food Safety temsilcisiyle temas kurun.
2. Neogen Moleküler Tayin Cihazı’nı çalıştırın.
3. Her bir numunenin verisiyle bir test oluşturun veya düzenleyin. Ayrıntılar için bkz. Neogen Moleküler Tayin Sistemi
Kullanım Kılavuzu.
NOT: Reaksiyon tüpleri ile birlikte Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi yerleştirilmeden önce, Neogen
Moleküler Tayin Cihazı Hazır Duruma gelmelidir. Bu ısınma aşaması yaklaşık 20 dakika sürer ve cihazın durum çubuğunda
TURUNCU bir ışıkla gösterilir. Cihaz bir çalışmayı başlatmaya hazır olduğunda, durum çubuğu YEŞİL renge döner.
Lizis
Neogen Lizis Solüsyonu Rafının alt kısmını Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’na yerleştirmeden öncetornavida veya spatula ile sökün.

1. Rafı bir gece boyunca (16-18 saat) oda sıcaklığında (20-25°C) bekleterek lizis solüsyonu (Neogen Lizis Solüsyonu)
tüplerinin ısınmasını sağlayın. Neogen Lizis Solüsyonu tüplerini oda sıcaklığına getirmek için alternatifler, Neogen Lizis
Solüsyonu tüplerini en az 2 saat laboratuvar tezgahında bekletmek, Neogen Lizis Solüsyonu tüplerini inkübatörde 1 saatboyunca 37±1°C’de inkübe etmek veya kuru çift bloklu bir ısıtıcıya 100°C’de 30 saniyeliğine yerleştirmektir.
2. Karıştırmak için kapaklı tüpleri ters çevirin. 4 saat içinde sıradaki adıma geçin.
3. Zenginleştirme besiyerini inkübatörden çıkarın.
4. Her numune ve Negatif Kontrol (NC) numunesi (steril zenginleştirme ortamı) için bir Neogen Lizis Solüsyonu tüpü gereklidir.
4.1 Neogen Lizis Solüsyonu tüp şeritleri, istenen Neogen Lizis Solüsyonu tüp sayısı kadar kesilebilir. İhtiyaç duyulan sayıda
ayrı Neogen Lizis Solüsyonu tüpü veya 8 tüplük şeritler seçin. Neogen Lizis Solüsyonu tüplerini boş bir rafa koyun.
4.2 Çapraz kontaminasyonu önlemek için Neogen Lizis Solüsyonu tüp şeritlerinin kapaklarını teker teker açın ve her
aktarım aşaması için yeni bir pipet ucu kullanın.
4.3 Aşağıda açıklandığı gibi, zenginleştirilmiş numuneleri Neogen Lizis Solüsyonu Tüpleri’ne aktarın:İlk olarak, her bir zenginleştirilmiş numuneyi ayrı bir Neogen Lizis Solüsyonu tüpüne aktarın. Son olarak NC’yi aktarın.
4.4 Tek seferde bir şerit üzerinde çalışarak, Neogen Lizis Solüsyonu tüp şeridinin kapağını sökmek için Neogen®
Moleküler Tayin Kapak Takma / Kapak Sökme Aracı - Lizis’i kullanın.
4.5 Neogen Lizis Solüsyonu tüp kapağını atın - lizat tekrar test edilmek üzere tutulacaksa lizisten sonra tekrar uygulama
için kapakları temiz bir kaba koyun.
4.5.1 Elde bulunan lizatın işlenmesi için Ek A’ya bakın.
4.6 Neogen Lizis Solüsyonu tüpüne, Tablo 2, 3 veya 4’teki Protokollerde aksi belirtilmedikçe 20 µL numune aktarın (ör.
ham süt ürünleri veya çevresel numuneleri nötrleştirici tamponla kullanırken 10 µL kullanın).
20 µl

5. Her bir ayrı numune şeritteki ilgili Neogen Lizis Solüsyonu tüpüne eklenene kadar 4.4 ila 4.6 adımlarını tekrarlayın.
6. Tüm numuneler aktarıldığında, 20 µL NC’yi (Half Fraser Broth gibi steril zenginleştirme ortamı) bir Neogen Lizis
Solüsyonu tüpüne aktarın. NC olarak su kullanmayın.
7. Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası sıcaklığının 100±1°C’de olduğunu doğrulayın.
8TR(Türkçe)8. Üstü açık Neogen Lizis Solüsyonu tüpleri rafını Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası’na yerleştirin ve 15±1
dakika boyunca ısıtın. Isıtma boyunca, Neogen Lizis Solüsyonunun rengi pembeden (soğuk) sarıya (sıcak) dönecektir.
8.1 Lizis test aşaması sırasında doğru şekilde ısıl işleme tabi tutulmayan numuneler, olası bir biyolojik tehlike olarakdüşünülebilir ve Neogen Moleküler Tayin Cihazı’na YERLEŞTİRİLMEMELİDİR.
9. Üstü açık Neogen Lizis Solüsyonu tüplerinin rafını ısıtma bloğundan çıkarın ve Neogen Moleküler Tayin Soğutma
Bloğu Ek Parçası’nda en az 5, en fazla 10 dakika soğumasını bekleyin. Ortam sıcaklığında kullanılan Neogen MolekülerSoğutma Bloğu Ek Parçası, laboratuvar tezgahına doğrudan yerleştirilmelidir. Soğuduğunda, lizis solüsyonunun rengi
tekrar pembeye dönecektir.
10. Neogen Lizis Solüsyonu tüp rafını Neogen Moleküler Tayin Soğutma Bloğu Ek Parçası’ndan çıkarın.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplifikasyon
1. Her bir numune ve NC için bir Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 Reaktif Tüpü gereklidir.
1.1 Reaktif tüpü şeritleri istenen tüp sayısı kadar kesilebilir. Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2
Reaktif Tüpleri veya gereken 8’li tüp şeritlerinin sayısını seçin.
1.2 Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 Reaktif Tüplerini boş bir rafa yerleştirin.
1.3 Tüplerin dip tarafındaki reaktif pelletlerini karıştırmaktan kaçının.
2. 1 adet Neogen Reaktif Kontrolü tüpü seçin ve rafa yerleştirin.
3. Çapraz kontaminasyonu önlemek için tek seferde yalnızca bir Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2
Reaktif Tüpü şerit kapağını açın ve her aktarım aşaması için yeni bir pipet ucu kullanın.
4. Lizatı Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 Reaktif Tüpü ile Neogen Reaktif Kontrolü tüpüne aşağıda
açıklanan şekilde aktarın:
Her bir numune lizatını önce her bir Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 Reaktif Tüpüne,
ardından NC’ye aktarın. Neogen Reaktif Kontrolü tüpünü en son hidratlayın.
5. Neogen® Moleküler Tayin Kapak Takma / Kapak Sökme Aracı - Reaktif’i kullanarak, Neogen Moleküler Tayin Testi
Listeria monocytogenes-2 Reaktif Tüplerinin kapağını, tek seferde tek Reaktif tüpü şeridi olacak şekilde çıkarın. Kapağı
atın.
5.1 20 µL Numune lizatını, Neogen Lizis Solüsyonu tüpündeki sıvının ½’lik üst kısmından (çökeltiyi önleyerek) ilgili
Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 Reaktif Tüpüne aktarın. Pelletlerin karışmasını önlemekiçin açılı olarak dökün. Yukarı ve aşağı 5 kez pipetleyerek nazikçe karıştırın.
5.2 Şeritte karşılık gelen Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 Reaktif Tüpüne tek Numune lizatı
eklenene kadar adım 5.1’i tekrarlayın.
5.3 Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 Reaktif Tüplerini, tedarik edilen ilave kapaklar ile kapatın
ve kapağın sıkı bir şekilde kapatıldığından emin olmak amacıyla, ileri geri hareketle basınç uygulamak üzere
Neogen Moleküler Tayin Kapak Takma / Kapak Sökme Aracı - Reaktif’in yuvarlak tarafını kullanın.
5.4 Test edilecek numune sayısı için 5.1 ila 5.3 adımlarını gerektiği şekilde tekrar edin.
5.5 Tüm numune lizatları aktarıldığında, adım 5.1’i tekrarlayarak 20 µL NC lizatı bir Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria
monocytogenes-2 Reaktif Tüpüne aktarın.
5.6 20 µL NC lizatı bir Neogen Reaktif Kontrolü tüpüne aktarın. Pelletlerin karışmasını önlemek için açılı olarak dökün.
Yukarı ve aşağı 5 kez pipetleyerek nazikçe karıştırın.

9

TR(Türkçe)6. Kapağı takılmış olan tüpleri temiz ve dekontamine edilmiş bir Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi’ne yükleyin.
Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi kapağını kapatın ve mandalını kilitleyin.

20 µL

7. Neogen Moleküler Tayin Sistemi Yazılımında yapılandırılmış çalışmayı gözden geçirin ve onaylayın.
8. Yazılımdaki Start (Başlat) düğmesine tıklayın ve kullanılacak cihazı seçin. Seçilen cihazın kapağı otomatik olarak açılır.
9. Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi’ni Neogen Moleküler Tayin Cihazı’na yerleştirin ve testi başlatmak üzere
kapağı kapatın. Pozitif sonuçlar daha önce tespit edilebilmekle beraber, sonuçlar 75 dakika içinde elde edilir.
10. Test tamamlandıktan sonra, Neogen Moleküler Tayin Hızlı Yükleyici Tepsisi’ni Neogen Moleküler Tayin Cihazı’ndançıkarın ve tüpleri 1 saat boyunca %1-5’lik (suda v:v) çamaşır suyu solüsyonuna veya eşdeğer bir solüsyona daldırarak
test hazırlık alanından uzakta imha edin.
BİLDİRİM: Çapraz kontaminasyondan kaynaklanan yanlış pozitif sonuçların elde edilmesi riskini en aza indirmek içinamplifiye edilmiş DNA’yı içeren reaktif tüplerini hiçbir zaman açmayın. Buna Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria
monocytogenes-2 Reaktif Tüpleri, Neogen Reaktif Kontrolü ve Matris Kontrol Tüpleri dahildir. Ağzı sızdırmaz bir şekilde
kapatılmış reaktif tüplerini her zaman %1-5’lik (suda v:v) bir çamaşır suyu solüsyonunda veya eşdeğer bir solüsyonda
1 saat süreyle bekleterek ve test hazırlık alanından uzakta imha edin.

Sonuçlar ve Yorumlama

Bir algoritma, nükleik asit amplifikasyonu tayininden kaynaklanan ışık çıkışı eğrisini yorumlar. Sonuçlar yazılım tarafından
otomatik olarak analiz edilir ve sonuca göre renk kodlamasına tabi tutulur. Benzersiz eğri parametreleri sayısı analiz edilerek
Pozitif veya Negatif bir sonuç belirlenir. Negatif sonuçlar ve Kontrol sonuçları çalışma tamamlandıktan sonra gösterilirken,
olası pozitif sonuçlar gerçek zamanlı olarak bildirilir.
Olası pozitif numuneler, birincil zenginleştirmeden ikincil zenginleştirme besiyerine (varsa) aktarılması, ardından kaplamave uygun biyokimyasal ve serolojik yöntemler kullanılarak izolatların onaylanması gibi işlemlerle başlayarak standart
laboratuvar prosedürlerine veya uygun referans doğrulama yöntemine(1, 2, 3) uygun şekilde doğrulanmalıdır.
NOT: Sistem ve Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 amplifikasyon reaktifleri bir “arka plan” bağıl ışıkbirimine (RLU) sahip olduğu için negatif bir numune bile sıfır okuma sonucu vermeyecektir.
Nadir olarak olağan dışı ışık çıkışı durumunda, algoritma bu durumu “Kontrol” olarak etiketler. Neogen, tüm Kontrol
numuneleri için kullanıcının testi tekrarlamasını önerir. Kontrol sonucu almaya devam ederseniz tercih ettiğiniz yöntemi
kullanarak veya yerel düzenlemeler ile belirlendiği şekilde, doğrulama testine geçin.
Tablo 5: Neogen Moleküler Tayin Sistemi Yazılımı tarafından sağlanan numuneler için sonuç sembolleri ve yorumlama.
Yuva Tipi

Yuva Sonucu
Sembolü

Sonuç

Yorumlama

NumunePozitif

Numune hedef patojen için olası pozitiftir.

NumuneNegatif

Numune hedef patojen için negatiftir.

Numuneİnhibeolmuş

Numune matrisi testi inhibe edici. Tekrar test etmek gerekebilir.
Daha fazla bilgi için sorun giderme bölümüne ve tayin kiti ÜrünTalimatlarına bakın.

Numune

Kontrol

Hedef patojenin varlığı veya yokluğu belirsiz. Tekrar test etmek
gerekebilir. Daha fazla bilgi için sorun giderme bölümüne ve tayinkiti Ürün Talimatlarına bakın.

NumuneHata

Biyoluminesans tespit edilmedi. Tekrar test etmek gerekebilir.
Daha fazla bilgi için sorun giderme bölümüne ve tayin kiti ÜrünTalimatlarına bakın.

10

TR

(Türkçe)NF VALIDATION Sertifikalı Yönteme göre Sonuçların Doğrulanması
1. seçenek: Half Fraser zenginleştirmesinden başlayarak ISO 11290(3) standardının kullanılması.
2. seçenek: PALCAM agarı veya Listeria monocytogenes tayini için bir NF VALIDATION sertifikalı yönteminin kromojenik
agar oluşturan kısmı üzerinde izolasyon yoluyla. Karakteristik kolonilerin varlığı Listeria monocytogenes varlığının
onaylanması için yeterlidir.
3. seçenek: Seçici agardan izole edilmiş kolonilerde uygulanan, EN ISO 7218(5) standardında tarif edilen şekilde nükleik
asit problarını kullanma (bkz. 1. veya 2. seçenek).
4. seçenek: Prensibi Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 ürününden farklı olması gereken başka
bir NF VALIDATION onaylı yöntemi kullanarak. Bu ikinci doğrulanmış yöntem için açıklanan tüm protokol kullanılmalıdır.
Doğrulamaya başlamadan önceki tüm adımlar her iki yöntemde de ortak olmalıdır.
Uyumsuz sonuçlar halinde (alternatif yöntem ile olası pozitif, yukarıda tanımlanan yöntemlerden biri ile doğrulanmamış)laboratuvar, elde edilen sonucun geçerliliğini doğrulamak için gerekli adımları izlemelidir.
Uyumsuz sonuçlar halinde (Neogen Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2 ile olası pozitif, yukarıda tanımlanan
yöntemlerden biri ile doğrulanmamış) laboratuvar, elde edilen sonucun geçerliliğini doğrulamak için gerekli adımları
izlemelidir.
Belirli uygulamalar veya prosedürler hakkında sorularınız varsa www.neogen.com adresindeki web sitemizi ziyaret edinveya yerel Neogen temsilcisi ya da distribütörü ile iletişim kurun.
Ek A. Protokol Kesintisi: Isıl işlem görmüş lizatların saklanması ve yeniden test edilmesi.
1. Isıl işlem görmüş lizatı saklamak için lizis tüpünü temiz bir kapakla kapatın (bkz. “Lizis”, 4.5).
2. 72 saate kadar 4-8°C sıcaklıkta saklayın.
3. Saklanan numuneyi, karıştırmak üzere 2-3 kez ters yüz ederek amplifikasyon için hazırlayın.
4. Tüplerin kapaklarını çıkarın.
5. Karıştırılan lizat tüplerini Neogen Moleküler Tayin Isıtma Bloğu Ek Parçası üzerine yerleştirin ve 5±1 dakika
100±1°C’de ısıtın.
6. Neogen Lizis Solüsyonu tüplerinin rafını ısıtma bloğundan çıkarın ve Neogen Moleküler Tayin Soğutma Bloğu Ek
Parçası’nda en az 5, en fazla 10 dakika soğumasını bekleyin.
7. Protokole, yukarıda detayları verilen ‘Amplifikasyon’ bölümünden devam edin.

Referanslar:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Ürün Etiketi Sembollerinin Açıklaması
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

JA （日本語）

発行日：2024-01

病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用製品の概要および用途

製品情報

Neogen®病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は、
Neogen®病原菌自動検出システムを用いて前培養した食品・
環境検体中のリステリ・
ア モノサイトゲネスを迅速かつ特異的に検出するために使用します。
Neogen 病原菌検出アッセイは、増幅した菌を検出するために、高い特異性と感度で核酸配列を迅速に増幅する遺伝子等温増幅法と、生物発光を組み合わせています。
推定陽性結果はリアルタイムに表示され、陰性結果は検査が完了してから表示されます。
結果が陽性と推定される場合は、別の望ましい方法または行政の規制によって指定された通りに確認する必要があります(1,2,3)。

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は、検査技術の訓練を受けた技術者が検査室環境で使用することを想定してます。
Neogenは、食品または飲料以外の産業における本製品の使用に関しては検証しておりません。
たとえば、Neogenは、
本製品を水、
医薬品、化粧品、
臨床または動物検体の検査に使用することについては検証しておりません。
Neogen病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は、可能性のあるすべての検査プロトコル、あるいはすべての菌株について評価されたわけではありません。

すべての検査法と同様に、増菌ブロスのメーカーや組成、品質などの要因が結果に影響する場合があります。
採取方法、
検査プロ
トコル、
検体の準備、
取り扱い、および検査手技などの要因も結果に影響する場合もあります。
Neogenは、検査方法がお客様の基
準を確実に満たすように、お客様の環境において、特定の食品および菌株を用いて十分な数の検体で、増菌ブロスを含む検査方法を評価することをお勧めします。
NeogenはNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用を、必要に応じてクエン酸鉄アンモニウムを含有するデミフレーザーブロスおよびクエン酸鉄アンモニウムを含有するフレーザーブロスを用いて評価しました。
このブロスの典型的な組成は以下の通りです。
デミフレーザーブロスベースの典型的な組成(g/L)

フレーザーブロスベースの典型的な組成(g/L)

無水二塩基性リン酸ナトリウム*

9.6 g

無水二塩基性リン酸ナトリウム*

9.6 g

塩化ナトリウム
牛肉エキス

カゼイン膵臓消化物

動物組織ペプシン消化物

20 g

塩化ナトリウム

5.0 g

牛肉エキス

5.0 g

カゼイン膵臓消化物

5.0 g

酵母エキス

5.0 g

酵母エキス

塩化リチウム

動物組織ペプシン消化物

3.0 g

一塩基性リン酸カリウム

塩化リチウム1.35 g

エスクリン

塩酸アクリフラビン

一塩基性リン酸カリウム

1.0 g

エスクリン

0.01 g

ナリジクス酸0.0125 g

ナリジクス酸* 代用物：二塩基性リン酸ナトリウム二水和物

12.0 g

塩酸アクリフラビン

20 g

5.0 g
5.0 g
5.0 g
5.0 g
3.0 g

1.35 g1.0 g0.025 g0.02 gフレーザーブロス添加剤（10 mLバイアル当たりの成分。
基本ブロス1 Lに対し1バイアルを追加）
クエン酸鉄アンモニウム
最終pH

0.5 g/10 mL

25℃で7.2 ± 0.2

Neogen®病原菌自動検出システムの装置は、アッセイのライシスステップ中に加熱処理を行った検体を測定することを目的としており、検体中に存在する微生物を溶菌するように設計されています。
アッセイのライシスステップ中に適切な加熱処理を行っていな
い試料液は、
潜在的バイオハザードとみなされる可能性がありますので、Neogen 病原菌自動検出システムの装置内には入れな
いでください。
Neogen食品衛生管理製品部門は、設計と製造についてISO（国際標準化機構）9001認証を取得しています。

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用検査キットは、表1に記載のとおり96検体用となっています。

1

表1. Neogen 病原菌検出アッセイキットの内容
品目

特徴

JA （日本語）
数量

Neogen®ライシス液（LS溶液）

クリアチューブに入ったピンク色の液体

96検査分（8連チューブ12
セット）

予備キャップ黄色のキャップ

96検体分（8連キャップ12
セット）

Neogen®病原菌検出アッセ
イ2 - リステリア・モノサイト
ゲネス用試薬チューブ

黄色のチューブ

96検査分（8連チューブ12
セット）

Neogen® リージェントコント フリップトップ式クリ 16検査分（チューブ8本入
ロール (RC)アチューブ
り2パウチ）

内容

チューブ1本につきLS 580 µL

凍結乾燥済み特異的増幅試薬および検出試薬

凍結乾燥済みコントロー
ルDNA、
増幅試薬および検
出試薬

コメント

ラック入り、
調整済み
調整済み
調整済み
調整済み

陰性コントロール（キットには付属しません）は、
デミフレーザーブロスなどの滅菌済増菌ブロスです。
水は陰性コントロールとして使用しないでください。

安全性

Neogen®病原菌自動検出システムおよびNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の製品情報に記載のすべての安全情報を読み、理解し、遵守してください。
また、今後参照できるように、
この安全性指示を保管しておいてください。
警告： 警告は、それを避けなければ死亡または重篤な傷害ないし物的損害が発生しうる危険な状況を示します。
注記： 回避しないと、物的損害が起こり得る危険な状況を示します。

W 警告

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は、ヒトまたは動物の病態診断に使用しないでください。

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用を用いた方法により、暴露されると妊婦の死産または死亡ならびに免疫不全状態の人の死亡を十分引き起こすレベルのリステリア・モノサイトゲネスが生じることがあります。
検査実施担当者に適切な検査技術を身につけるように指導してください（例：GLP、
ISO/IEC 17025(4)、ISO 7218(5)）。

汚染製品の出荷につながる偽陰性結果に伴うリスクを回避するために：• プロトコルに従い、製品情報に記載のとおりに検査を行ってください。
• Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は、
外箱表示および製品情報に記載のとおりに保管してください。
• Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は、必ず有効期限までに使用してください。
• Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は、
社内検証または第三者による検証が行われた食品検体および環境検体に使用してください。
• Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリ・
ア モノサイトゲネス用は、
社内検証または第三者による検証が行われた表面、殺菌剤、プロトコル、菌株のみに使用してください。
• アリルスルホン酸塩添加中和緩衝液を含む環境検体については、試験前に1:2の希釈（検体1に対して滅菌増菌ブロス1）を行ってください。
別の方法としては、
中和緩衝前増菌ブロス10 µLをNeogen ライシスチューブに滴下します。
Neogen®検体採取製品のうち、アリルスルホン酸塩添加中和緩衝液を含む製品は以下の通りです。
RS96010NB、
RS9604NB、
SSL10NB、
SSL10NB2G、
HS10NB、
HS10NB2G、HS2410NB2G。
化学物質およびバイオハザードへの暴露に伴う危険を回避するために：• リステリア・モノサイトゲネスへの暴露による母体回旋により発育中の胎児へのリスクが生じることを検査室の女性スタッフに伝えることを強く推奨します。
• 技能訓練を受けた検査実施担当者の管理下で、適切な設備のある検査室にて食中毒菌検査を行ってください。
培養済み増菌
ブロスおよび培養済み増菌ブロスと接触する機器または接触面には、人体に有害となりうる量の病原体が含まれている可能性があります。
• 試薬および汚染された検体を取り扱う際は、適切な保護衣、保護メガネの装着など、標準的な検査室の安全手順に常に従ってください。
• 増菌後のブロスや、増幅後の試薬チューブ内容物には触れないでください。
• 現行の業界基準に従って、増菌された検体を廃棄してください。
• アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハザードとみなされる可能性がありますので、Neogen 病原菌自動検出システムの装置内には入れないでください。

アッセイ準備中の交差汚染に伴う危険を回避するために：• 手袋を必ず着用してください（ユーザー保護と遺伝子混入防止のため）。
環境汚染に伴う危険を回避するために：• 汚染廃棄物の廃棄は現行の業界基準に従ってください。

2

JA （日本語）

高温の液体への暴露に伴う危険を回避するために：• ヒーターの温度設定を推奨温度以上にしないでください。
• 推奨される加熱時間を超えないでください。
• 適切な校正済みの温度計を使用して、Neogen® 病原菌検出ヒートブロックインサートの温度を確認してください（例：浸線付温度計またはデジタル熱電対温度計。
全浸没温度計は使用しないこと）。
温度計は、
必ずNeogen 病原菌検出ヒートブロックイン
サートの指定の部位に設置してください。

注記

アッセイ準備中の交差汚染に伴う危険を回避するために：• 試薬ペレットを水和する前に、手袋を交換してください。
• 滅菌済みのエアロゾルバリア材（フィルター付）、
分子生物学グレードのピペットチップを使用してください。
• 検体ごとに新しいピペットチップを使用してください。
• GLP（医薬品安全性試験実施基準）に従って検体を増菌ブロスからライシスチューブに移してください。
ピペッターの汚染を回避するため、
中間的な移注ステップを追加することもできます。
例えば、増菌された各検体を滅菌チューブに分注することができます。
• 利用可能な場合は、殺菌灯が装備された病原菌取扱エリアを使用してください。
検査室の作業台および備品（ピペット、
キャッ
プ / デキャップツール等）は、
水で1～5% (v/v) に希釈した家庭用漂白液またはDNA除去用液を使用して定期的に除染してください。
偽陽性の結果に伴う危険を回避するために：• 増幅後の試薬チューブは絶対に開けないでください。
• 汚染されたチューブは、
常に、
水で1～5% (v/v) に希釈した家庭用漂白液または同等品に1時間浸漬した後、アッセイの準備作
業領域から隔離して、廃棄してください。
• 増幅後の試薬チューブは絶対にオートクレーブで加熱滅菌処理しないでください。
廃棄に関する詳細および行政の規制については、
安全データシートをご参照ください。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト (www.neogen.com) をご覧いただくか、Neogen販売担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。

お客様の使用責任

お客様には、使用前に製品説明書および製品情報を熟知していただく責任があります。
詳細につきましては、
当社ウェブサイト
www.neogen.com をご覧いただくか、担当のNeogen販売担当者または販売店にお問い合わせください。

検査方法を選択する際には、検体採取方法、
検査プロトコル、検体の準備、
取り扱い、および検査手技などの外的要因が結果に影響する可能性があることを認識することが重要です。

検査方法または製品を選択する際に、適切なマトリックスおよび菌株を用いて十分数の検体を評価して、選択した試験方法がお客様の基準を満たすことをお客様の責任でご確認ください。

また、検査方法および結果が取引先または供給業者の要件を満たしているかについても、
事前にお客様の責任でご確認ください。
どの検査方法を使用した場合でも、Neogen食品衛生管理製品を用いて得られた結果は、検査を実施した食品マトリックスまたは工程の品質を保証するものではありません。

各種食品マトリックスの検査方法の評価にご利用いただくため、NeogenではNeogen® 病原菌検出マトリックスコントロールをご用意しました。
必要に応じて、
マトリックスコントロール (MC) を使用し、基質がNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイ
トゲネス用の検査結果に影響を及ぼすかどうかをご確認ください。
Neogenの検査法を採用する場合、または新規や由来の不明な
マトリックス、あるいは原材料を加工したマトリックスや加工工程が変更されたマトリックスを検査する場合は、検証期間中に、マト
リックスの標準となる複数の検体（由来の異なる検体）をご確認ください。
マトリックスは、成分や加工状態など固有の特性を備える製品の種類として定義されます。
基質間の違いは、加工や外観（例：生か滅菌済みか、
新鮮か乾物か、等）の違いに起因する作用と同じように単純な場合があります。

保証の範囲／賠償の制限

個々の製品パッケージの限定保証条項に明示されている場合を除き、NEOGENは明示または黙示を問わず、製品または特定の目的への適合性に関する保証を含むがこれに限定されない、
いかなる種類の保証も負いかねます。
Neogen食品衛生管理製品部門の製品に欠陥があった場合、Neogenまたは指定販売店で交換あるいは製品購入価格の払い戻しをいたします。
対応は上記のみとさせていただきます。
ご不明な点がございましたら、Neogenの担当者またはNeogenの正規卸売業者にお問い合わせください。

Neogenの保証責任範囲

NEOGENは、
直接的、間接的、特殊なもの、
偶発的または必然的であるかを問わず、利益損失を含むがこれに限定されないあらゆ
る損失または損害に対しての責任を負わないものとします。
いかなる場合も、
いかなる法的理論の下でも、Neogenの保証責任範
囲は、欠陥と申し立てられた製品の購入金額を超えないものとします。

保管と廃棄

Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は2～8℃で保管し、冷凍しないでください。
冷暗所で保管してください。
キット開封後は、ホイルパウチが破損していないことを確認してください。
パウチが破損している場合は、使用しないでください。
開封後、使用しない試薬チューブは、
凍結乾燥試薬の安定性を保つため、乾燥剤と共に再密閉可能なパウチ内に必ず保管してください。
再密閉したパウチは2～8℃で、60日間保存することができます。
3

JA （日本語）

使用期限とロット番号はNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用は必ず使用期限までに使用してください。
箱の外側のラベルに記載しています。
使用後、増菌ブロスおよびNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用には病原性の物質が含まれている可能性があります。
検査終了後は、汚染廃棄物に関する現行の業界基準に従って廃棄してください。
廃棄に関する詳細および行政の規制については、
安全データシートをご参照ください。

使用方法

すべての指示に、注意深く従ってください。
従わない場合、
正確な結果が得られないことがあります。

検査室の作業台および備品（ピペット、
キャップ / デキャップツール等）は、
水で1～5% (v/v) に希釈した家庭用漂白液またはDNA除去用液を使用して定期的に除染してください。

（6）
ユーザーは、「Neogen 病原菌自動検出システムの設置資格 (IQ)／操作資格 (OQ) プロトコルと手順」に記載のとおり、
Neogen®病原菌自動検出システムのオペレーター資格 (OQ) トレーニングを受講する必要があります。

具体的な要件については、「バリデート済みメソッドに関する具体的な指示」の項を参照してください：表3. AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08およびAOAC® Performance Tested MethodSM Certificate #081501に従う
前増菌プロトコル。
表4. NF Validation認定証3M 01/15-09/16に従う前増菌プロトコル。

検体の増菌

表2、
3、
4に、
食品および環境検体の増菌に関するガイダンスを示います。
この検査法がお客様の基準に合致するかを確かめるため、別の採取プロトコルまたは希釈率で事前にご確認いただき、お客様の責任で使用の可否をご判断ください。

食品

1. デミフレーザーブロス前増菌ブロス（クエン酸鉄アンモニウムを含む）を検査室の周囲の温度と平衡させてください。

2. 表2、
3、
4に従って、前増菌ブロスと検体を無菌的に混合します。
すべての肉検体および微粒子を多く含む検体に関しては、
フィ
ルター付きホモジナイザーバッグの使用を推奨します。

3. ブレンダー、
混合装置またはハンドミキサーで2 ± 0.2分ホモジナイズします。
表2、3、4に従って、
37 ± 1℃で培養します。

4. 生の乳製品については（表2、3、4を参照）、一次前増菌物0.1 mLを10 mLのフレーザーブロスに移します。
37 ± 1°Cで20～24
時間培養します。

環境検体

殺菌剤の効果を不活性化するために、検体採取装置として、中和溶液を染み込ませたスポンジを使用できます。
Neogenは、殺生物剤不使用のセルローススポンジを使用することを推奨します。
中和溶液には、デイエングレイ (D/E) 中和ブロスまたはリージンブ
ロスを使用できます。
採取後は、作業領域を殺菌することを推奨します。
警告：アリルスルホン酸複合体をスポンジの水和溶液として含む中和バッファーの使用を選択する場合には、汚染された製品の出庫につながる偽陰性の伴うリスクを回避するために、検査を行う前に増菌環境検体の1：2の希釈液（検体1に対し滅菌増菌ブ
ロス1）を行う必要があります。
別の方法としては、
中和緩衝液増菌ブロス10 μLをNeogenライシスチューブに移します。

2
表面上の病原体の有無を確認するための検体採取部分の推奨サイズは、
100 cm（10cm x 10 cmまたは4” x 4”）
です。
スポンジで
検体採取する場合には、採取部分全体をスポンジで2方向に拭くか（左から右、次に上向きから下向きに）、検査室の現行のプロト
コルまたはFDA BAM(1)、USDA FSIS MLG(2)またはISO 18593(7)に従って環境検体を採取します。

1. デミフレーザーブロス前増菌ブロス（クエン酸鉄アンモニウムを含む）を検査室の周囲の温度と平衡させてください。
2. 表2、
3、
4に従って、前増菌ブロスと検体を無菌的に混合します。

3. ブレンダー、
混合装置またはハンドミキサーで2 ± 0.2分ホモジナイズします。
表2、3、4に従って、
37 ± 1°Cで24～30時間培養します。

4

JA （日本語）

表2：必要に応じてデミフレーザーブロスおよびフレーザーブロスを使用して37 ± 1°Cで実施する一般前増菌プロトコル。
検体マトリックス

検体量

前増菌ブロ
ス量 (mL)

前増菌時間
（時間）

熱処理済み/低温殺菌済み乳製品

25 g

225

24～30

スポンジ1個100または
225

24～30

25 g

475

28～32

熱処理済み、調理済
みまたは塩漬けした肉、鶏肉、魚介類

果実および野菜
多成分食品
環境検体(a)

生の肉、鶏肉、魚介類

検体マトリックス

生の乳製品

スワブ1本

10

24～30

一次前増菌
（デミフレーザーブロス）(a)

検体量

前増菌ブロ
ス量 (mL)

前増菌時間
（時間）

25 g

225

20～24

二次前増菌
（フレーザーブロス添加剤）(a)

検体量0.1 mLを
10 mLの
フレーザ
ーブロス
に移す

前増菌温度
(℃)

前増菌時間
（時間）

37±1

20～24

検体の分
析量(b)

10 μL

(a) 一次または二次前増菌中に、デミフレーザーブロスおよびフレーザーブロスに必ずフレーザーブロス添加剤（クエン酸鉄アンモニウム）を添加します。
ライシスセクションのステップ4.6を参照。
(b) Neogenライシスチューブに移す検体量。

バリデート済みメソッドに関する具体的な指示

AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08

AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

AOAC Research Institute OMASMおよびPTMSMプログラムにおいて、
Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス
用は、
リステリア・モノサイトゲネスの検出に有効な方法であることが確認されています。
上記試験において検査の対象となったマ
トリックスを表3に掲載します。

5

JA （日本語）

デミフレーザーブロス(a)を使用し37 ± 1°Cで実施する前増
表3. AOAC OMASM 2016.08およびPTMSM Certificate #081501に従い、菌プロトコル。
検体マトリックス

ビーフホットドッグ、
ケソ・フレスコ、
バニラア
イスクリーム、
乳脂肪4％のカッテージチー
ズ、3％のチョコレート入り全乳、
ロメインレタス、
袋入り生ホウレンソウ、冷燻サーモン

検体量

前増菌ブロス量 (mL)

前増菌時間
（時間）

25 g

225

24～30

25 g

475

28～32

ホールメ
ロン

メロンが浮かぶ十分な量

26～30

スポンジ
1個

100

24～30

生鶏肉

ターキー総菜125 g

マスクメロン(b)スポンジ
1個

ステンレススチール

環境検体：

密封コンクリート

1125
225

スワブ1本

プラスチック(c)

10

24～30

24～30

24～30

特に記載がない限り、AOACバリデーションに使用した検体はすべてストマッキングによりホモジナイズしました。

(a)		一次または二次前増菌中に、デミフレーザーブロスおよびフレーザーブロスに必ずフレーザーブロス添加剤（クエン酸鉄アンモニウム）を添加します。
(b) ハンドミキサーで検体をホモジナイズします。

(c) ボルテックスにかけて検体をホモジナイズします。

AFNOR CertificationによるNF Validation

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en

有効性の終了についての詳細は、上記のウェブサイト上で入手できるNF Validation認定証を参照してください。

NF VALIDATIONにより認証された方法は、
ISO 11290(3)ではなくISO 16140-2(6)に準拠しています
バリデーションの適応範囲：すべての人用食品検体および環境検体（一次生産サンプルを除く）
検体の準備：検体はEN ISO 11290-1(3)およびEN ISO 6887(8)に従って調製してください
ソフトウェアバージョン：認定証を参照してください

表4：NF VALIDATIONにより認証されたメソッド3M 01/15-09/16（必要に応じてデミフレーザーブロスおよびフレーザー ブロスを使用して37 ± 1°Cで実施）に従う前増筋プロトコル。
一般プロトコル

検体量

すべての食品サンプル（生肉、生の魚介類、
生の乳製品を除く）

25 g

環境検体

25 gスワブ1本
またはワイプ
1枚

前増菌ブロス量 (mL)
225

前増菌温度
(±1℃)
37

6

前増菌時間 検体の分
（時間）
析量(a)
24～30

20 µL

許容される中断ポイント• デミフレーザーブロス、
最長
72時間• -20°Cでライセート• 4°Cで最長72時間ライセートJA （日本語）

一次前増菌（デミフレーザーブロス）(b)
具体的なプロト
前増菌ブロ 前増菌温度 前増菌時間
検体量
コル
ス量 (mL)
(±1℃)
（時間）
生肉、
生
の魚介
類、
生の
乳製品

25 g

225

37

20～24

二次前増菌（デミフレーザーブロス）(b)
検体量0.1 mLを10 mL
のフレー
ザーブロ
スに滴
下

前増菌温度
(±1℃)

37

許容され
る中断ポイ
前増菌時間 検体の分
ント
（時間）
析量(c)

20～24

(a) Neogenライシスチューブに移す検体量。
ライシスセクションのステップ4.6を参照。

10 µL• フレーザー
ブロス、
最
長72時間
• -20°Cでライセート• 4°Cで最長
72時間ラ
イセート

(b) 一次または二次前増菌中に、デミフレーザーブロスおよびフレーザーブロスに必ずフレーザーブロス添加剤（クエン酸鉄アンモニウム）を添加します。
(c) Neogenライシス液チューブに移す検体量。
ライシスセクションのステップ4.6を参照。
注：25 gを超える検体は、
NF VALIDATION検査で評価されていません。

Neogen® 病原菌検出スピードローダートレイ
1. 水で1～5% (v/v) に希釈した家庭用漂白液または同等の溶液で湿らせた布を使ってNeogen® 病原菌検出スピードローダー
トレイを拭きます。
2. 水でNeogen 病原菌検出スピードローダートレイを濯ぎます。

3. 使い捨てペーパータオルでNeogen 病原菌検出スピードローダートレイを拭きます。

4. 使用前に、
Neogen 病原菌検出スピードローダートレイが乾燥していることを確認してください。

Neogen® 病原菌検出チルブロックインサート
Neogen®病原菌検出チルブロックを検査室の作業台に直に置きます。
チルブロックは検査室の室温（20～25°C）
で使用します。

Neogen® 病原菌検出ヒートブロックインサート
Neogen® 病原菌検出ヒートブロックインサートをドライダブルブロックインサートヒーターユニットに入れます。
ドライブロックヒー
ターユニットをオンにして、温度を100 ± 1°Cに設定します。
Neogen 病原菌検出ヒートブロックインサートが設定温度に達したら、温度を保持します。
注：使用するヒーターユニットによっては、Neogen 病原菌検出ヒートブロックインサートが設定温度に達するまでに約30分かかります。
適切な校正済みの温度計（例：浸線付温度計またはデジタル熱電対温度計。
全浸没温度計は使用しないこと）を指定の部位に設置し、
Neogen 病原菌検出ヒートブロックインサートが100 ± 1°Cであることを確認します。

Neogen®病原菌自動検出システム用の準備
1. Neogen®病原菌自動検出システム用ソフトウェアを起動してログインします。
お使いのソフトウェアが最新バージョンであるかどうかを確認するには、
Neogen食品衛生管理製品の営業担当者までお問い合わせください。

2. Neogen 病原菌自動検出システムの装置の電源を入れます。

3. 各検体のデータを含む検出結果を作成または編集します。
詳細については、
Neogen 病原菌自動検出システムユーザーマニュ
アルを参照してください。
注：Neogen 病原菌自動検出システムは、反応チューブと共にNeogen 病原菌検出スピードローダートレイを入れる前に、スタンバイ状態になっている必要があります。
この加熱ステップには約20分かかり、
この間、装置のステータスバーがオレンジ色に点灯します。
装置の準備ができると、ステータスバーは緑色に変わります。

ライシス
Neogen 病原菌検出ヒートブロックインサートに入れる前に、ドライバーまたはスパーテルでNeogenライシスチューブラックの底部をドライバーまたはヘラで取り外します。

7

JA （日本語）

1. ライシス（Neogenライシス液）
チューブは、
ラックに入れ室温（20～25°C）
で一晩（16-18時間）静置し、室温まで暖めます。
Neogenライシスチューブを室温に戻す別の方法としては、
Neogenライシスチューブを作業台の上に2時間以上静置する
か、
Neogenライシスチューブを37 ± 1°Cのインキュベータ内で1時間保温するか、
Neogenライシスチューブをドライダブルブ
ロックヒーターに入れて100℃で30秒間加熱します。
2. キャップを閉めた状態のライシスチューブを反転させて中の液を混合させます。
4時間以内に次のステップに進みます。

3. インキュベータから前増菌ブロスを取り出します。

4. 各検体および陰性コントロール (NC) 検体（滅菌前増菌ブロス）
ごとにNeogenライシスチューブ1本が必要です。

4.1 Neogenライシスチューブのストリップは、必要なNeogenライシスチューブ数分にカットすることができます。
各Neogenライ
シスチューブ数または8連チューブのストリップ数を選択してください。
Neogenライシスチューブを空のラックに置きます。

4.2 交差汚染を回避するため、Neogenライシスチューブのキャップは一度に1ストリップずつ外し、移注ステップごとに新しいピ
ペットチップを使用してください。

4.3 以下に記載のとおり、前増菌した検液をNeogenライシスチューブに移します。

まず、前増菌した各検体を各Neogenライシスチューブに移します。
最後にNCを移します。

4.4 Neogen® 病原菌検出キャップ／デキャップツール －ライシスを使用し、Neogenライシスチューブのキャップを一度に1スト
リップずつ外します。
4.5 Neogenライシスチューブのキャップを廃棄します。
ライセートを再検査用に保存する場合は、キャップを清潔な容器に入れておき、ライシス後に再度キャップをはめます。
4.5.1 保存したライセートの処理については、
付録Aを参照してください。

4.6 プロトコルの表2、3、4に他の規定がない限り、検体20 µLをNeogenライシスチューブに移します（生の乳製品の場合、または環境検体を中和緩衝液とともに使用する場合などには10 µLを滴下します）。
20 µl

5. すべての検体がストリップの対応するNeogenライシスチューブに添加されるまで、
ステップ4.4～4.6を繰り返します。

6. すべての検体を移注したら、
20 µLのNC（デミフレーザーブロスなどの滅菌前増菌ブロス）をNeogenライシスチューブに移します。
水は陰性コントロールとして使用しないでください。

7. Neogen 病原菌検出ヒートブロックインサートの温度が100 ± 1°Cであることを確認してください。

8. Neogen 病原菌検出ヒートブロックインサート内にカバーを外したNeogenライシスチューブラックを入れて、15 ± 1分間加熱
します。
加熱中、
Neogenライシス液はピンク色（低温）から黄色（高温）に変色します。

8.1 アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハザードとみなされる可能性がありますので、Neogen 病原菌自動検出システムの装置内には入れないでください。

9. ヒートブロックからカバーを外したNeogenライシスチューブラックを取り出し、
Neogen 病原菌検出チルブロックインサート内
で5分間以上（最大10分間）冷却します。
室温で使用したNeogen 病原菌検出チルブロックインサートは検査室の作業台の上に直に置いてください。
冷却されると、ライシス液はピンク色に戻ります。
10. Neogen 病原菌検出チルブロックインサートからNeogenライシスチューブラックを取り出します。

8

JA （日本語）
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

増幅

1. 検体およびNCのそれぞれにつきNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬チューブ1本が必要です。

1.1 試薬チューブのストリップは、必要な数に合わせて切り離すことができます。
各Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・
モノサイトゲネス用の試薬チューブの数または8連チューブのストリップの数を選択してください。

1.2 Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬チューブを空のラックに置きます。

1.3 チューブの底の試薬ペレットを撹拌しないでください。

2. Neogen リージェントコントロールチューブを1本選択して、ラックに置きます。

3. 交差汚染を回避するため、Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬チューブのキャップは一度に1ストリップずつ外し、移注ステップごとに新しいピペットチップを使用してください。

4. 下記のように、ライセートをNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬チューブおよびNeogen リー
ジェントコントロールチューブに移してください。
Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬チューブのそれぞれにまず検体ライセートを移し、次にNCを移します。
最後にNeogen リージェントコントロールチューブを水和します。

5. Neogen®病原菌検出キャップ／デキャップツール － 試薬用を使用して、Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイト
ゲネス用の試薬チューブのキャップを一度に1ストリップずつ外します。
キャップを廃棄します。
5.1 検体ライセート20 µLをNeogenライシスチューブの液体の上部1/2（沈澱物は避けてください）から取り、対応する
Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬チューブに移します。
ペレットが撹拌されないよう、
一定の角度で分注します。
ピペット操作で5回静かに混合します。

5.2 すべての検体ライセートをストリップ内の対応するNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬
チューブに添加するまで、
ステップ5.1を繰り返します。
5.3 Neogen秒劇筋検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬チューブに同梱の予備キャップで蓋をし、Neogen病原菌検出キャップ／デキャップツール － 試薬用の丸い側を使用して前後に圧をかけ、キャップをしっかりと締めます。

5.4 検査する全検体について、
ステップ5.1～5.3を繰り返します。

5.5 すべての検体ライシスを移した後、ステップ5.1～5.1を繰り返してNCライシス20 µLをNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リス
テリア・モノサイトゲネス用の試薬チューブに移します。
5.6 Neogen リージェントコントロールチューブにNCライセート 20 µLを移します。
ペレットが撹拌されないよう、一定の角度で分注します。
ピペット操作で5回静かに混合します。

6. 清潔な、
殺菌済みNeogen 病原菌検出スピードローダートレイにキャップをしたチューブを装填します。
Neogen 病原菌検出ス
ピードローダートレイを閉めて、留めがねをかけます。

20 µL

7. Neogen®病原菌自動検出システム用ソフトウェアで設定した検査内容を確認します。

8. ソフトウェアのスタートボタンをクリックして、使用する装置を選択します。
選択した装置の蓋が自動的に開きます。

9. Neogen 病原菌自動検出システムの装置内にNeogen 病原菌検出スピードローダートレイを置き、蓋を閉めてアッセイをスタートします。
結果は75分以内に表示されますが、陽性の場合はさらに短時間で検出されることがあります。
9

JA （日本語）

10.アッセイ終了後、
Neogen 病原菌検出スピードローダートレイをNeogen 病原菌自動検出システムの装置から取り出し、チューブは水で1～5% (v/v) に希釈した家庭用漂白液または同等の溶液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄してください。
注記：交差汚染による偽陽性の危険を最小限に抑えるため、増幅DNAの入った試薬チューブは絶対に開けないでください。
これには、Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の試薬、Neogen リージェントコントロールチューブ、マトリックスコントロールチューブが含まれます。
密封されたチューブは、必ず水で1～5% (v/v) に希釈した家庭用漂白液または同等の溶液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄してください。

結果と解釈

核酸が増幅された菌の検出によって得られた光出力曲線がアルゴリズムによって解釈されます。
結果はソフトウェアが自動的に解析し、結果に応じて色分けされます。
陽性または陰性の結果は、多数の固有の曲線パラメータを解析することで決定されます。
結果が陽性と推定される場合はリアルタイムでレポートされますが、陰性およびInspect（検証が必要な結果）の場合は、その検査が完了した後に表示されます。

陽性と推定される検体は、検査室の標準作業手順または適切な参照法(1, 2, 3)に従って確認する必要があります。
まず、
一次前増菌
物を二次前増菌ブロスに移し（該当する場合）、
プレート接種したのち、適切な生化学的、血清学的手法を使用して単離菌を確認してください。
注：Neogen 病原菌自動検出システムおよびNeogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用の増幅試薬は「バックグラウンド」相対発光量 (RLU) を有することから、陰性検体でも結果はゼロとなりません。

異常な光出力がみられるなどの稀なケースについては、
アルゴリズムにより「再検査してください」と表示されます。
Neogen社は、「再検査」検体についてはアッセイを再度行うことを推奨します。
その結果が再度再検査であった場合は、別の望ましい方法または行政の規制によって指定された通りに確認検査を行ってください。
表5：Neogen®病原菌自動検出システムソフトウェアが示す検体の結果の記号および解釈。
ウェルタイプ

検体

ウェルの結果の記号

結果

判定

陽性

検体は標的病原体について陽性と推定されます。

検体

阻害

検体

検証が必要

検体マトリックスがアッセイを阻害しました。
再検査が必要な場合があります。
詳細については、
トラブルシューティングセクションおよびアッセイ
キット製品情報を参照してください。

検体

エラー

検体

陰性

検体は標的病原体について陰性と推定されます。

標的病原体の有無が確定できませんでした。
再検査が必要な場合があります。
詳細については、
トラブルシューティングセクションおよびアッセイ
キット製品情報を参照してください。
生物発光が検出されませんでした。
再検査が必要な場合があります。
詳細については、
トラブルシューティングセクションおよびアッセイキット
製品情報を参照してください。

NF VALIDATIONにより認証された方法に基づく結果の確認
デミフレーザーブロスによる前増殖から始める
オプション1：ISO 11290(3)基準を使用し、オプション2：NF VALIDATION認証リステリア・モノサイトゲネス検出法の一部として、
PALCAM寒天培地法または発色性寒天培地で単離する、
特徴的なコロニーが存在すれば、リステリア・モノサイトゲネスの存在の確認に十分です。

オプション3：EN ISO 7218(5)基準に記載の通りに、
選択寒天培地から単離したコロニーに対し核酸プローブを使用する（オプショ
ン1または2を参照）。

オプション4：NF VALIDATIONで認証済みのその他の方法を使用。
この場合、Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイ
トゲネス用とは原理が異なる必要があります。
この第2のバリデート済みの方法について記述した完全なプロトコルを必ず使用すること。
確認開始に先行するすべてのステップが、両方の方法に共通している必要があります。

結果が一致しない場合（この代替法で陽性と推定されたが、上記の方法のひとつでは確認されない場合）、検査室は必要な手順に従って得られた結果の有効性を確認してください。

結果が一致しない場合（Neogen 病原菌検出アッセイ2 - リステリア・モノサイトゲネス用で陽性と推定されたが、上記の方法のひ
とつでは確認されない場合）、検査室は必要な手順に従って得られた結果の有効性を確認してください。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト (www.neogen.com) をご覧いただくか、Neogen販売担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。

10

JA （日本語）

付録A. プロトコルの中断：加熱処理済みライシスの保管と再検査。
1. 加熱処理済みライセートを保管する場合、ライシスチューブに清潔なキャップをはめます（「ライシス」セクション、
4.5を参照）。

2. 4～8°Cで最大72時間保管します。

3. 保管された検体を2-3回反転させて混合し、増幅用として準備します。

4. チューブのキャップを外します。

5. 混合したライシスチューブをNeogen 病原菌検出ヒートブロックインサートに置き、100 ± 1°Cで5 ± 1分間加熱します。

6. ヒートブロックからNeogenライシスチューブラックを取り外し、
Neogen 病原菌検出チルブロックインサート内で5分間以上（
最大10分間）冷却します。
「増幅」セクションに詳述されているプロトコルを継続します。
7. 上記の参考文献：

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

製品ラベル記号の説明

info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

ZH （简体中文）

发布日期：2024-01产品信息单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌
产品说明及预期用途

Neogen® 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌旨在与 Neogen® 分子检测系统一起使用，用于快速、专一地检测增菌后的食品和环境样品中的单核细胞增生李斯特菌。
Neogen 分子检测分析试剂盒采用环介导等温扩增技术来快
速扩增核酸序列，其具有特异性强、
灵敏度高的特点，并结合生物发光特性来检测扩增反应。
假定阳性结果将实时报告，阴性结果则在分析完成后显示。
应使用您喜欢的方法或按照当地法规指定的方法确认假定阳性结果(1, 2, 3)。

Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌专供受过实验室技术培训的专业人员在实验室环境下使用。
对于在食品或饮料以外的行业中使用此产品，Neogen 尚未有资料可证。
例如，对于将此产品用于检测水、
药品、
化妆品、
临
床或家畜样品，Neogen 尚未有资料可证。
尚未针对所有可能的检测方案或针对所有可能的细菌类型评估 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌。
正如所有检测方法一样，增菌培养基的来源、配方和质量都可能会影响结果。
取样方法、
检测方案、
样品制备、
处理和实验室技术
等因素都可能会影响结果。
Neogen 建议在用户环境中利用充足数量的样品以及特定的食品和微生物激发试验对包括增菌培养
基在内的方法进行评估，确保相应的方法符合用户的标准。
Neogen 根据需要，使用含有柠檬酸铁铵的半 Fraser 肉汤和含有柠檬酸铁铵的 Fraser 肉汤对 Neogen 单核细胞增生李斯特菌
分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌进行了评估。
该培养基的典型配方如下。
半 Fraser 肉汤基础典型配方氯化钠无水磷酸氢二钠*
牛肉提取物
酪蛋白胰酶消化物
动物组织胃消化物
酵母提取物
氯化锂
磷酸二氢钾
七叶苷
盐酸吖啶黄
萘啶酸
* 替代物：
磷酸氢二钠二水合物

12.0 g

(g/L)
20 g
9.6 g
5.0 g
5.0 g
5.0 g
5.0 g
3.0 g
1.35 g1.0 g0.0125 g
0.01 gFraser 肉汤基础典型配方氯化钠无水磷酸氢二钠*
牛肉提取物
酪蛋白胰酶消化物
动物组织胃消化物
酵母提取物
氯化锂
磷酸二氢钾
七叶苷
盐酸吖啶黄
萘啶酸

(g/L)
20 g
9.6 g
5.0 g
5.0 g
5.0 g
5.0 g
3.0 g
1.35 g1.0 g0.025 g0.02 gFraser 肉汤补充物（10 mL 瓶所含成分。
将一瓶添加到一升基础培养基中。
）
柠檬酸铁铵
最终 pH 值0.5g/10mL

7.2 ± 0.2 @ 25℃

Neogen® 分子检测仪器专用于在分析裂解步骤中经过热处理的样品，该步骤旨在破坏样品中存在的微生物。
未在分析裂解步骤中经过适当热处理的样品可能会被视为具有潜在生物危害性，不应将其插入 Neogen 分子检测仪器。
Neogen 食品安全部的产品设计和生产已获得 ISO（国际标准化组织）9001 认证。

Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌检测试剂盒包含 96 次测试，如表 1 所述。

表 1. Neogen 分子检测试剂盒构成项目

Neogen® 裂解溶液 (LS)

标识

数量

内容物

透明管，粉红溶液 96（12 排，每排 8 管） 每管 580 μL 裂解溶液

Neogen® 单核细胞增生李斯
特菌分子检测分析 2 - 单核 黄色管细胞增生李斯特菌试剂管额外的盖黄色盖
Neogen® 试剂对照 (RC)透明翻盖管

96（12 排，每排 8 管） 特定扩增和检测试剂的冻干样96（12 排，每排 8 个盖）
16（2 袋，每袋 8 管） DNA、扩增和检测试剂的冻干对照品

阴性对照采用的是无菌增菌培养基（如半 Fraser 肉汤），未在检测试剂盒中提供。
请勿将水用作阴性对照。

1备注
已上架，即开
即用

即开即用

即开即用
即开即用

ZH （简体中文）

安全用户应该阅读、理解并遵守 Neogen 分子检测系统和 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌
说明中的所有安全信息。
妥善保存安全说明书，以备日后查阅。
警告： 表示危险情况，如果不注意避免，可能造成死亡或严重的人身伤害和/或财产损失。
注意： 表示潜在的危险情况，如果不注意避免，可能导致财产损失。

W 警告

请勿在人类或动物的各种诊断中使用 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌。

Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌方法可能会产生单核细胞增生李斯特菌，其水平足以让孕妇和免疫功能低下者在接触后出现死产和死亡。
用户必须就当前适用的检测技术对其人员进行培训，例如：优良实验室规范、
ISO/IEC 17025(4) 或 ISO 7218(5)。

为了降低与假阴性结果相关的风险，避免释放出受污染产品，请注意以下事项：• 遵守操作流程并按照产品信息中提供的方法执行检测。
• 按照包装和产品信息中的指示储存 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌。
• 始终在过期日期之前使用 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌。
• 将 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌用于经内部或第三方验证的食品和环境样品。
• 仅将 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌用于经内部或第三方验证的表面、
消毒剂、
方
案和菌株。
• 对于含有中和缓冲液和芳基磺酸酯复合物的环境样品，应在检测前按 1:2 的比例进行稀释（1 份样品对 1 份无菌增菌肉汤）。
另一种选择是将 10 μL 中和缓冲培养液转移至 Neogen 裂解溶液管内。
含有中和缓冲液和芳基磺酸酯复合物的 Neogen® 采样产品包括：
RS96010NB、
RS9604NB、
SSL10NB、
SSL10NB2G、
HS10NB、
HS10NB2G 和 HS2410NB2G。
为了降低与化学品和生物危害暴露相关的风险，请注意以下事项：• 孕妇接触单核细胞增生李斯特菌后，会发生感染，导致发育中的胎儿面临死亡风险，强烈建议将该事实告知实验室内的所有
女性工作人员。
• 在训练有素的工作人员的控制下，于妥善配备的实验室中执行致病菌检测。
增菌培养基以及接触过增菌培养基的设备或表面
可能含有致病菌，足以对人体健康造成风险。
• 始终遵守标准实验室安全规范，包括在处理试剂和受污染样品时穿戴适当的防护服和护眼装置。
• 避免接触增菌培养基和扩增后试剂管的内容物。
• 根据现行行业标准对经过增菌的样品进行废弃处理。
• 未在分析裂解步骤中经过适当热处理的样品可能会被视为具有潜在生物危害性，不应将其插入 Neogen 分子检测仪器。
为了在准备分析时降低与交叉污染相关的风险，请注意以下事项：• 始终戴手套（保护用户和防止引入核酸酶）。

为了降低与环境污染相关的风险，请注意以下事项：• 请根据现行行业标准弃置受污染的废弃物。

为了降低与高温液体暴露相关的风险，请注意以下事项：• 不要超出建议的加热器温度设置。
• 不要超出建议的加热时间。
• 使用正确的经过校准的温度计检验 Neogen® 分子检测加热模块的温度（例如，局浸温度计或热电偶数字温度计，而非全浸温度计）。
温度计必须放置于 Neogen 分子检测加热模块中的指定位置。

注意为了在准备分析时降低与交叉污染相关的风险，请注意以下事项：• 在进行试剂小球水化之前更换手套。
• 建议使用无菌的、带气溶胶屏障（带滤芯）的分子生物级移液吸头。
• 每次转移样品时使用新的吸头。
• 将样品从增菌培养基转移至裂解管时遵循实验室良好操作规范。
为了避免移液管污染，用户可以选择增加一个中间转移步骤。
例如，用户可以将每个经过增菌的样品转移至无菌管中。
• 使用配有杀菌灯的分子生物工作站（如可行）。
使用 1-5%（与水的体积比）家用漂白溶液或 DNA 去除溶液定期净化实验室工
作台和设备（移液管、开盖器等）。

为了降低与假阳性结果相关的风险，请注意以下事项：• 请勿在扩增后打开试剂管。
• 处理受污染的试管时，应先将其放在浓度为 1-5%（与水的体积比）的家用漂白溶液或同类溶液中浸泡 1 小时，且始终远离分
析准备区。
• 请勿在扩增后对试剂管进行高压灭菌。
请参考“安全数据表”了解其它信息和当地的弃置法规。

如果您对于特定的应用或程序存有疑问，请访问我们的网站 www.neogen.com，也可与您当地的 Neogen 代表或经销商联系以获得帮助。
2

ZH （简体中文）用户责任

用户有责任熟悉产品信息和说明。
请访问我们的网站 www.neogen.com 或联系您当地的 Neogen 代表或经销商，以了解更多信息。
选择检测方法时，务必认识到各种外部因素（如取样方法、
检测方案、
样品制备、
处理和实验室技术）都可能会影响结果。

用户在选择检测方法或产品时，应自行负责选用合适的基质和微生物激发试验对足够多的样品进行评估，以确保所选择的检测方法达到用户的标准。
检测方法及结果能否满足客户及供应商的要求也由用户负责。

同所有检测方法一样，使用任何 Neogen 食品安全部产品所得到的结果并不能保证受检基质或程序的质量。

为帮助客户评估各种食品基质方法，Neogen 开发了 Neogen® 分子检测基质对照试剂盒。
需要时，可以使用基质对照 (MC) 来确
定基质是否会影响 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌的结果。
在采用 Neogen 方法或在
检测新的或未知基质或者原材料或工艺发生变更的基质的任何验证期间，应对若干典型的基质样品进行检测，即通过不同来源获取的样品。
基质可定义为一种具备内源特性（如化学成分或工艺）的产品。
基质间的差异是因加工或外观的不同而导致的差异，例如原样和经过巴氏消毒处理之间的差异以及新鲜和干燥之间的差异。

有限保证/有限补救措施

除非各个产品包装的有限保证部分明确声明，否则，NEOGEN 将不提供任何明示或默示保证，包括但不限于适销性或特定用途
适用性保证。
如果证明任何 Neogen 食品安全部产品存在缺陷，Neogen 或其授权经销商可以自行决定是提供换货，还是对产品进行退款。
如有任何疑问，请联系 Neogen 代表或 Neogen 授权经销商。

Neogen 责任限制

对于任何损失或损害，无论是直接、
间接、
特殊、
偶然或非直接原因造成的损害，NEOGEN 概不承担任何责任，包括但不限于利润损失。
根据法律理论，Neogen 对所谓存在缺陷的产品的赔付不会超过产品的购买价格。

储存和弃置请将 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌储存在 2-8℃ 环境下。
请勿冷冻。
避光储存试剂盒。
打开试剂盒后，应检查铝箔袋是否破损。
如果铝箔袋破损，请勿使用。
打开之后，未使用的试剂管应始终储存在内部带有干燥剂的可重新密封铝箔袋中，以保持冻干试剂的稳定性。
将重新密封的铝箔袋储存在 2-8℃ 温度下，但储存时间不能超过 60 天。

请勿使用过期的 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌。
过期日期和批号注明在包装箱外侧的标签上。
使用之后，增菌培养基和 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试管可能含有致病物质。
完成检测后，应遵照当前的行业标准弃置受污染的废弃物。
请参考“安全数据表”了解其它信息和当地的弃置法规。

使用说明请仔细遵循所有说明。
否则，可能会导致结果不准确。

使用 1-5%（与水的体积比）家用漂白溶液或 DNA 去除溶液定期净化实验室工作台和设备（移液管、开盖器等）。

用户应当遵照“针对 Neogen 分子检测系统的安装合格 (IQ)/操作合格 (OQ) 方案和说明”文档(6)中的规定接受 Neogen 分子检
测系统操作员资格验证 (OQ) 培训。
请参见“验证方法具体说明”部分，了解特定要求：

表 3 - 遵照 AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 和 AOAC® Performance Tested MethodSM 证书 #081501 实施的增菌方案。
表 4 - 遵照 NF Validation 证书 3M 01/15-09/16 实施的增菌方案。

样品增菌

表 2、
表 3 或表 4 提供了针对食品和环境样品的增菌指导。
用户有责任验证备用取样方案或者稀释率，以确保本检测方法符合用
户的标准。

食品

1. 让半 Fraser 肉汤增菌培养基（含有柠檬酸铁铵）平衡至实验室环境温度。

2. 根据表 2、
表 3 或表 4，在无菌条件下混合增菌培养基和样品。
对于所有肉类和微粒样品，建议使用过滤袋。

3. 通过混合、均质操作或手动混合 2 ± 0.2 分钟，实现彻底均质。
根据表 2、
表 3 或表 4，在 37 ± 1℃ 温度下培养。

4. 对于原奶制品（请参见表 2、
表 3 或表 4），请将 0.1 mL 一步增菌物转移至 10 mL Fraser 肉汤中。
在 37 ± 1℃ 环境下培养
20-24 小时。

环境样品

样品采集工具可以是用中和溶液水化过（此过程可消除消毒剂的作用）的海绵。
Neogen 建议使用不含生物杀菌剂的纤维素海绵。
中和溶液可使用 Dey-Engley (D/E) 中和肉汤或李氏肉汤。
建议取样后对取样区进行消毒。

3

ZH （简体中文）警告：如果您选择使用含芳基磺酸酯复合物的中和缓冲液 (NB) 作为海绵的水化溶液，则必须在检测之前按 1:2 的比例（1 份样品对 1 份无菌增菌肉汤）稀释增菌的环境样品，以降低导致受污染产品释放的假阴性结果的相关风险。
另一种选择是将 10 μL
的中和缓冲培养液转移至 Neogen 裂解溶液管内。

2用于验证表面是否存在致病菌的取样区域的建议尺寸至少为 100 cm（10cm x 10 cm 或 4" x 4"）。
当用海绵取样时，从两个方向（从左到右，然后从上到下）覆盖整个区域，或按照您当前的取样方案或根据 FDA BAM(1)、USDA FSIS MLG(2) 或 ISO 18593(7) 指导方针收集环境样品。

1. 让半 Fraser 肉汤增菌培养基（含有柠檬酸铁铵）平衡至实验室环境温度。

2. 根据表 2、
表 3 或表 4，在无菌条件下混合增菌培养基和样品。

3. 通过混合、均质操作或手动混合 2 ± 0.2 分钟，实现彻底均质。
根据表 2、
表 3 或表 4，在 37 ± 1℃ 温度下培养 24-30 小时。
表 2：根据需要，在 37 ± 1℃ 温度下使用半 Fraser 肉汤和 Fraser 肉汤实施的一般增菌方案。
样品基质

经过热加工、烹饪、熏
制的肉类、家禽、海鲜和鱼类经过热加工/巴氏杀
菌的奶制品农产品和蔬菜含多种成分的食品

环境样品(a)

生的肉类、家禽、海
鲜、鱼类
样品基质

原奶制品

样品大小

增菌肉汤量
(mL)

增菌时间
（小时）

25 g

225

24-30

1 块海绵

100 或 225

24-30

25 g

475

28-32

1 支采样棒10

24-30

初步增菌（半 Fraser 肉汤）(a)
样品大小

增菌肉汤量
(mL)

增菌时间
（小时）

25 g

225

20-24

样品大小

将 0.1 mL转移至
10 mL
Fraser 肉汤

二次增菌（Fraser 肉汤）(a)增菌温度 (℃)

增菌时间
（小时）

37 ± 1

20-24

样品分析
量(b)
10 μL

(a) 初步或二次增菌过程中，应始终使用含 Fraser 肉汤补充物（柠檬酸铁铵）的半 Fraser 肉汤和 Fraser 肉汤。
(b) 转移到 Neogen 裂解溶液管的样品体积。
请参阅“裂解”部分的步骤 4.6。
验证方法具体说明

AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08

AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

AOAC 研究所 OMASM 和 PTMSM 计划显示，Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌是一种有效
的单核细胞增生李斯特菌检测方法。
研究中检测的基质显示在表 3 中。

4

ZH （简体中文）

表 3. 根据 AOAC OMASM 2016.08 和 PTMSM 证书 #081501，在 37 ± 1℃ 温度下使用半 Fraser 肉汤(a)实施的增菌方案。
样品基质

牛肉热狗、
墨西哥起司、香草冰淇淋、
4% 乳
脂白干酪、
3% 巧克力全脂牛奶、
长叶莴苣、
袋装生菠菜、
冷熏鲑鱼
生鸡肉

火鸡熟食

增菌肉汤量 (mL)增菌时间（小时）

25 g

225

24-30

125 g

1125

24-30

25 g

475

28-32

整个瓜

足以让瓜浮起的量

密封混凝土

1 块海绵

100

24-30

塑料(c)

1 支采样棒

10

24-30

不锈钢

1 块海绵

环境样品：

哈密瓜(b)样品大小225

用于 AOAC 验证的所有样品均进行了均质处理，除非另有说明。

26-30

24-30

(a)		初步或二次增菌过程中，应始终使用含 Fraser 肉汤补充物（柠檬酸铁铵）的半 Fraser 肉汤和 Fraser 肉汤。

(b) 通过手动混合对样品进行均质处理。
(c) 通过涡旋方式对样品进行均质处理。

AFNOR Certification 认证的 NF Validation

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en

有关有效性截止日期的详细信息，请参阅上述网站中提供的 NF VALIDATION 证书。

符合 ISO 16140-2(6) 的 NF VALIDATION 认证方法（与 ISO 11290(3) 相比）验证范围：所有人类食品和环境样品（初级生产样品除外）
样品制备：
遵照 EN ISO 11290-1(3) 和 EN ISO 6887(8) 制备样品
软件版本：
参见证书

表 4：根据需要，按照 NF VALIDATION 认证方法 3M 01/15-09/16 在 37 ± 1℃ 温度下使用半 Fraser 肉汤和 Fraser 肉汤实施的
增菌方案。
一般方案

样品大小

所有食品样品（生肉、生海鲜和原奶制品除外）

25 g

环境样品

25 g，1 支采样
棒或 1 个拭子

增菌肉汤量
(mL)

增菌温度
(±1℃)

225

37

5

增菌时间 样品分析
（小时）
量(a)
24-30

20 µL

接受的中断点• 半 Fraser 肉汤，最多72 小时• 裂解液 @ -20℃

• 裂解液 @ 4℃，最多 72 小时

专用方案

生肉、
生
海鲜和原
奶制品

样品
大小

25 g

初步增菌（半 Fraser 肉汤）(b)

增菌肉汤量
(mL)

225

增菌温度
(±1℃)

37

ZH （简体中文）

二次增菌（Fraser 肉汤）(b)

增菌时间
（小时）

样品大小

20-24

将
0.1 mL转移至
10 mL
Fraser 肉
汤

增菌温度
(±1℃)

增菌时间
（小时）

样品分析
量(c)

37

20-24

10 µL

(a) 转移到 Neogen 裂解溶液管的样品体积。
请参阅“裂解”部分的步骤 4.6。

接受的中断点
• Fraser 肉
汤，最多
72 小时

• 裂解液 @
-20℃
• 裂解液 @
4℃，最多
72 小时

(b) 初步或二次增菌过程中，应始终使用含 Fraser 肉汤补充物（柠檬酸铁铵）的半 Fraser 肉汤和 Fraser 肉汤。
(c) 转移到 Neogen 裂解溶液管的样品体积。
请参阅“裂解”部分的步骤 4.6。
注释: 多于 25 g 的样品尚未在 NF VALIDATION 研究中进行检测。

Neogen® 分子检测快速转移托盘的准备工作
1. 将一块干布用 1-5%（与水的体积比）家用漂白溶液或同类溶液浸湿，用来擦拭 Neogen® 分子检测快速转移托盘。
2. 用清水清洗 Neogen 分子检测快速转移托盘。

3. 使用一次性纸巾擦干 Neogen 分子检测快速转移托盘。
4. 使用前确保 Neogen 分子检测快速转移托盘保持干燥。

Neogen® 分子检测冷却架的准备工作
将 Neogen® 分子检测冷却模块直接放在实验室工作台上；在实验室环境温度 (20-25°C) 下使用冷却模块。

Neogen® 分子检测加热模块的准备工作
将 Neogen® 分子检测加热模块放入双干燥块加热器中。
开启干燥模块加热装置并设定温度，使 Neogen 分子检测加热模块达到并保持 100 ± 1℃。
注释：根据不同的加热器，允许 Neogen 分子检测加热模块在大约 30 分钟后达到工作温度。
使用放在指定位置的、
正确的、
经过校准的温度计（如局浸温度计或热电偶数字温度计，而非全浸温度计）检验 Neogen 分子检测加热模块的温度是否达到 100± 1℃。

Neogen® 分子检测仪器的准备工作
1. 启动 Neogen® 分子检测系统软件并登录。
请联系您的 Neogen 食品安全部代表，确保您使用的是最新版的软件。
2. 打开 Neogen 分子检测仪器。

3. 利用每个样品的数据为其创建或编辑一次运行检测。
请参考“Neogen 分子检测系统用户手册”了解详细信息。

注释：插入带反应管的 Neogen 分子检测快速转移托盘前，Neogen 分子检测仪器必须处于就绪状态。
此加热步骤大概需要 20分钟，由仪器状态栏中的一个“橙色”灯进行指示。
当仪器准备好启动检测时，状态栏将变为“绿色”。

裂解请用螺丝刀或抹刀移除 Neogen 裂解溶液管架的底部，然后再将其置于 Neogen 分子检测加热模块中。

1. 将管架置于室温 (20-25℃) 环境下一整夜（16-18 小时），让裂解溶液（Neogen 裂解溶液）管预热。
使 Neogen 裂解溶液管平衡到室温的另一种方法是将 Neogen 裂解溶液管放在实验室工作台上至少 2 小时、
在 37 ± 1℃ 培养设备中培养 Neogen
裂解溶液管 1 小时，或将其置于双干燥块加热器中在 100℃ 下持续加热 30 秒。
2. 倒置封盖的裂解溶液管，使其混合均匀。
在 4 小时内继续执行下一步。
6

ZH （简体中文）

3. 从培养设备中取出增菌肉汤。

4. 每个样品和每个阴性对照 (NC) 样品（无菌增菌培养基）都需要一支 Neogen 裂解溶液管。

4.1 可以根据所需的 Neogen 裂解溶液管的数量，对 Neogen 裂解溶液联排管进行切割。
选择所需数量的 Neogen 裂解溶液
管或 8 联排管。
将 Neogen 裂解溶液管放入空管架中。

4.2 为了避免交叉污染，请一次仅打开一排 Neogen 裂解溶液管的管盖，并且每次转移溶液时使用新的移液管吸头。
4.3 按如下所述将经过增菌的样品转移到 Neogen 裂解溶液管：

首先将每个经过增菌的样品转移到单个 Neogen 裂解溶液管中。
最后转移 NC。

4.4 使用 Neogen® 分子检测开盖器 - Lysis 打开 Neogen 裂解溶液联排管的管盖，一次仅打开一排。

4.5 丢弃 Neogen 裂解溶液管的管盖 – 如果要保留裂解液以重新检测，请将管盖放入干净的容器中，以备裂解后重新使用。
4.5.1 如需处理保留的裂解液，请参阅附录 A。

4.6 将 20 µL 样品转移到 Neogen 裂解溶液管内，除非方案的表 2、
表 3 或表 4 中另有说明（例如原奶制品，或使用含中和缓冲液的环境样品时，使用 10 µL）。
20 µl

5. 重复步骤 4.4 至 4.6，直到将所有样品添加到联排管对应的 Neogen 裂解溶液管为止。

6. 当转移完所有样品后，将 20 µL NC（无菌增菌培养基，如半 Fraser 肉汤）转移到一支 Neogen 裂解溶液管中。
请勿将水用作 NC。
7. 检验 Neogen 分子检测加热模块的温度是否达到了 100 ± 1℃。

8. 将未加盖的 Neogen 裂解溶液管架放入 Neogen 分子检测加热模块中加热 15 ± 1 分钟。
加热期间，Neogen 裂解溶液将从粉红色（冷）变为黄色（热）。

8.1 未在分析裂解步骤中经过适当热处理的样品可能会被视为具有潜在生物危害性，不应将其插入 Neogen 分子检测仪器。

9. 从加热模块中取出未加盖的 Neogen 裂解溶液管架，将其放入 Neogen 分子检测冷却架中冷却至少 5 分钟，最长 10 分钟。
在环境温度下使用的 Neogen 分子冷却架应直接置于实验室工作台上。
冷却后，裂解溶液将恢复为粉红色。

10. 从 Neogen 分子检测冷却架上移除 Neogen 裂解溶液管架。
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

扩增

1. 每个样品和每个 NC 都需要一支 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管。

1.1 根据所需的管数，对试剂联排管进行切割。
选择所需数量的 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞
增生李斯特菌试剂管或 8 联排管。
1.2 将 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管放入空管架中。

1.3 请勿将试剂小球搅离管底。

2. 选择一支 Neogen 试剂对照管并放入管架。

3. 为了避免交叉污染，请一次仅打开一排 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管的管盖，并且每次转移溶液时使用新的移液管吸头。

7

ZH （简体中文）

4. 按如下所述将裂解液分别转移到 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管和
Neogen 试剂对照管：

首先将各个样品裂解液转移到单个 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管，然后再转移 NC。
最后对 Neogen 试剂对照管进行水化。

5. 使用 Neogen® 分子检测开盖器 - Reagent 打开 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试
剂管的管盖，一次仅打开一排。
丢弃管盖。
5.1 将 Neogen 裂解溶液管液体上部 ½ 层的 20 µL 样品裂解液（避免沉淀）转移到对应的 Neogen 单核细胞增生李斯特菌
分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管。
成角度注入，以避免搅动小球。
轻轻地上下吸动 5 次，以充分混合。
5.2 重复步骤 5.1，直到将所有样品裂解液添加到联排管对应的 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞
增生李斯特菌试剂管为止。

5.3 使用额外的盖盖住 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管，并使用 Neogen 分子检测开盖器 - Reagent 较圆的一侧以前后移动的方式加压，以确保将盖子盖紧。

5.4 根据需要对待检测的样品重复步骤 5.1 到 5.3。

5.5 当转移完所有样品裂解液后，重复步骤 5.1，以将 20 µL NC 裂解液转移到 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析
2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管。
5.6 将 20 µL NC 裂解液转移至 Neogen 试剂对照管。
成角度注入，以避免搅动小球。
轻轻地上下吸动 5 次，以充分混合。

6. 将加盖的试管放入干净且经过净化处理的 Neogen 分子检测快速转移托盘中。
合上并锁定 Neogen 分子检测快速转移托盘
盖。

20 µL

7. 在 Neogen 分子检测系统软件中查看和确认配置的检测。

8. 在软件中单击“启动”按钮并选择要使用的仪器。
所选仪器的盖会自动打开。

9. 将 Neogen 分子检测快速转移托盘放入 Neogen 分子检测仪器并合上盖子，以启动分析。
结果将在 75 分钟内提供，但阳性结果可以更快检测到。

10. 分析完成后，从 Neogen 分子检测仪器中取出 Neogen 分子检测快速转移托盘，通过将试管浸入 1-5%（与水的体积比）家用
漂白溶液或同类溶液 1 小时并使其远离分析准备区，对试管进行废弃处理。
注意：为了将因为交叉污染而导致的假阳性结果风险降至最低，请勿打开包含扩增的 DNA 的试剂管。
这包括 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌试剂管、
Neogen 试剂对照和基质对照管。
对密封的试剂管进行废弃处理时，应始终将其放入浓度为 1-5%（与水的体积比）的家用漂白溶液或同类溶液中浸泡 1 小时，并确保其远离分析准备区。

结果和说明软件会使用一种算法对来自核酸扩增检测的光输出曲线进行解读。
软件会自动分析结果并根据不同结果用不同颜色进行标记。
通过分析一系列独一无二的曲线参数可以确定阳性结果或阴性结果。
“假定阳性”结果实时报告，“阴性”和“检查”结果则在检测
完成后显示。

假定阳性样品应当遵循实验室标准操作规程或正确的参考方法进行确认(1, 2, 3)，应首先将初步的增菌培养液转移到二次增菌肉汤（如适用），然后进行后续的平板培养，并利用正确的生化和血清方法对分离菌进行确认。
注释：因为系统和 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌扩增试剂带有“背景”相对光单位(RLU) 读数，即使阴性样品也不会出现读数为零的情况。

在极少数情况下，当存在异常光输出时，算法会显示“检查”标记。
Neogen 建议用户对所有“检查”样品重新进行分析。
如果结果
仍为“检查”，请使用您喜欢的方法或按照当地法规指定的方法进行确认试验。

8

表 5：Neogen 分子检测系统软件提供的样品和判读结果符号。
孔类型

样品

孔结果符号

样品
样品
样品
样品

结果

ZH （简体中文）判读阳性样品是目标致病菌的假定阳性样品。

抑制样品基质对分析有抑制作用。
可能需要重新检测。
有关更多信息，请参阅
故障排除部分和分析试剂盒产品信息。

错误

未检测到生物发光。
可能需要重新检测。
有关更多信息，请参阅故障排除
部分和分析试剂盒产品信息。

阴性检查样品是目标致病菌的阴性样品。

不确定目标致病菌是否存在。
可能需要重新检测。
有关更多信息，请参阅
故障排除部分和分析试剂盒产品信息。

依照 NF VALIDATION 认证方法确认结果
选项 1：
采用 ISO 11290(3) 标准，从半 Fraser 肉汤增菌液开始 。

选项 2：
作为 NF VALIDATION 认证方法的组成部分，通过在 PALCAM 琼脂或显色琼脂上执行分离操作，对单核细胞增生李斯特菌进行检测。
存在具有明显特征的菌落即证明存在单核细胞增生李斯特菌。

选项 3：
按照 EN ISO 7218(5) 标准所述，使用核酸探针对选择性琼脂中的隔离菌落执行操作（请参阅选项 1 或 2）。

选项 4：
可以使用任何其他 NF VALIDATION 认证方法，原理必须与 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞
增生李斯特菌不同。
在执行此第二种验证方法时，必须遵循所述的完整方案。
两个方法在开始确认前的所有步骤必须是相同的。

如果出现结果不一致（替代方法的结果为假定阳性，且并未通过上述其中一种方法予以确认），则实验室必须执行必要的步骤来确保所获得结果的有效性。

如果出现结果不一致（使用 Neogen 单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 - 单核细胞增生李斯特菌得出的结果为假定阳性，且并未通过上述其中一种方法予以确认），则实验室必须执行必要的步骤来确保所获得结果的有效性。
如果您对于特定的应用或程序存有疑问，请访问我们的网站 www.neogen.com，也可与您当地的 Neogen 代表或经销商联系以获得帮助。
附录 A. 方案中断：
储存并重新检测热处理后的裂解液。
1. 如需储存热处理后的裂解液，应使用干净的盖子为裂解溶液管重新封盖（请参阅 4.5“裂解”）。
2. 在 4 - 8℃ 温度下最多储存 72 小时。

3. 取出储存的样品以准备用于扩增，将其倒置 2-3 次进行混合。
4. 打开管盖。

5. 将混合后的裂解液管置于 Neogen 分子检测加热模块中并在 100 ± 1℃ 温度下加热 5 ± 1 分钟。

6. 从加热模块中取出 Neogen 裂解溶液管架，将其放入 Neogen 分子检测冷却架中冷却至少 5 分钟，最长 10 分钟。
7. 继续执行上文详述的“扩增”部分的方案。

参考资料：

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

产品标签符号说明

info.neogen.com/symbols
9Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

ZH （繁體中文）

發佈日期：2024-01

產品資訊分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌
產品描述及擬定用途

Neogen® 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌旨在與 Neogen® 分子檢測系統一起使用，用於快速、專門檢測增菌後的食品和環境樣
品中的單增李斯特菌。Neogen 分子檢測套組採用環狀恆溫擴增技術來快速擴增核酸序列，其具有特異性強、靈敏度高的特點，
並結合生物發光特性來檢測擴增反應。假定陽性結果將即時報告，陰性結果則在分析完成後顯示。應使用您喜歡的方法或按照當
地法規指定的方法確認假定陽性結果(1, 2, 3)。

Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌專供受過實驗室技術訓練的專業人員在實驗室環境下使用。對於在食品或飲料以外的
行業中使用此產品，Neogen 尚未有資料可證。例如，對於將此產品用於檢測水、藥品、化妝品、臨床或動物檢體，Neogen 尚未有
資料可證。尚未針對所有可能的檢測方案或針對所有可能的細菌類型評估 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌。

正如所有檢測方法一樣，增菌培養基的來源、配方和品質都可能會影響結果。取樣方法、檢測方案、樣品製備、處理和實驗室技術
等因素都可能會影響結果。Neogen 建議在使用者環境中利用充足數量的樣品以及特定的食品和微生物試驗對包括增菌培養基
在內的方法進行評估，確保相應的方法符合使用者的標準。
Neogen 根據需要，使用含有檸檬酸鐵銨的 Demi-Fraser 培養液和含有檸檬酸鐵銨的 Fraser 培養液對 Neogen 分子檢測套組
2 - 單增李斯特菌進行了評估。該培養基的典型配方如下。
Demi-Fraser 培養液基礎典型配方(g/L)

無水磷酸氫二鈉*

9.6 g

氯化鈉

牛肉提取物

酪蛋白胰酶消化物

牛肉提取物

七葉苷
萘啶酸

* 替代物：磷酸氫二鈉二水合物

12.0 g

5.0 g
5.0 g

動物組織胃消化物

5.0 g

酵母提取物

5.0 g

氯化鋰

1.35 g磷酸二氫鉀

0.0125 g

鹽酸吖啶黃

1.0 g

鹽酸吖啶黃

20 g

酪蛋白胰酶消化物

3.0 g

磷酸二氫鉀

9.6 g

5.0 g
5.0 g

氯化鋰

無水磷酸氫二鈉*

氯化鈉

5.0 g

酵母提取物

(g/L)

20 g

5.0 g

動物組織胃消化物

Fraser 培養液基礎典型配方

0.01 g3.0 g1.35 g七葉苷

1.0 g

0.025 g萘啶酸

0.02 gFraser 培養液補充物（10 mL 瓶所含成分。將一瓶添加到一公升基礎培養基中。）
檸檬酸鐵銨
最終 pH 值0.5g/10mL

7.2 ± 0.2 於 25℃

Neogen® 分子檢測設備專用於在分析裂解步驟中經過熱處理的樣品，該步驟旨在破壞樣品中存在的微生物。未在分析裂解步驟中經過適當熱處理的樣品可能會被視為具有潛在生物危害性，不應將其插入 Neogen 分子檢測設備。
Neogen 食品安全部的產品設計與生產已獲得 ISO（國際標準組織）9001 認證。

Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌檢測套組包含 96 個測試，如表 1 所述。

表 1. Neogen 分子檢測套組構成
項目

標識

數量

Neogen® 裂解溶液 (LS)

透明管，粉紅溶液

96（12 排，每排 8 管）

額外的蓋子

黃色蓋子

96（12 排，每排 8 個蓋子）

Neogen® 分子檢測套組 2 單增李斯特菌試劑試管
Neogen® 試劑控制組 (RC)

黃色管

透明翻蓋管

96（12 排，每排 8 管）

16（2 袋，每袋 8 管）內容物每管 580 μL 裂解溶液

特定擴增和檢測試劑的凍
乾物DNA、擴增和檢測試劑的凍
乾控制品

備註

已上架，即開即用
即開即用
即開即用

即開即用

陰性控制組採用的是無菌增菌培養基（如：Demi-Fraser 培養液）
，未在套組中提供。請勿將水用作陰性控制組。
1

ZH （繁體中文）

安全使用者應該閱讀、理解並遵守 Neogen 分子檢測系統和 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌說明中的所有安全資訊。妥善保
存安全說明書，以備日後查閱。
警告： 表示危險狀況，如果不注意避免，可能造成死亡或嚴重的人身傷害和/或財產損失。

注意事項： 表示潛在的危險狀況，如果不注意避免，可能導致財產損失。

W 警告

請勿在人類或動物的各種診斷中使用 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌。

Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌方法可能會產生單增李斯特菌，其水平足以讓孕婦和免疫功能低下者在接觸後出現死
胎和死亡。
使用者必須就目前適用的檢測技術對其人員進行訓練，例如：優良實驗室操作、ISO/IEC 17025(4) 或 ISO 7218(5)。

為了降低與偽陰性結果相關之風險，避免釋放出受污染產品，請注意以下事項：• 遵循方案並按照產品資訊中提供的方法執行檢測。
• 按照包裝與產品資訊中的指示儲存 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌。
• 始終在過期日期之前使用 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌。
• 將 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌用於經內部或第三方驗證的食品與環境樣品。
• 僅將 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌用於經內部或第三方驗證的表面、消毒劑、方案和菌株。
• 對於含有中和緩衝液和芳基磺酸酯複合物的環境樣品，應在檢測前按 1:2 的比例進行稀釋（1 份樣品對 1 份無菌增菌培
養液）。另一種選擇是將 10 μL 中和緩衝培養液轉移至 Neogen 裂解溶液管內。含有中和緩衝液和芳基磺酸酯複合物的
Neogen® 採樣產品包括：RS96010NB、RS9604NB、SSL10NB、SSL10NB2G、HS10NB、HS10NB2G 和 HS2410NB2G。

為了降低與化學品和生物危害暴露相關之風險，請注意以下事項：• 孕婦接觸單增李斯特菌後，會發生感染，導致發育中的胎兒面臨死亡風險，強烈建議將該事實告知實驗室內的所有女性工作
人員。
• 在訓練有素的工作人員的控制下，於妥善配備的實驗室中執行致病菌檢測。增菌培養基以及接觸過增菌培養基的設備或表面可能含有致病菌，足以對人體健康造成風險。
• 始終遵守標準實驗室安全規範，包括在處理試劑和受污染樣品時穿戴適當的防護服和護眼裝置。
• 避免接觸增菌培養基和擴增後試劑管的內容物。
• 根據現行行業標準對經過增菌的樣品進行廢棄處理。
• 未在分析裂解步驟中經過適當熱處理的樣品可能會被視為具有潛在生物危害性，不應將其插入 Neogen 分子檢測設備。
為了在準備分析時降低與交叉污染相關之風險，請注意以下事項：• 始終戴手套（保護使用者和防止引入核酸酶）。

為了降低與環境污染相關之風險，請注意以下事項：• 請根據現行行業標準棄置受污染的廢棄物。

為了降低與高溫液體暴露相關之風險，請注意以下事項：• 不要超出建議的加熱器溫度設定。
• 不要超出建議的加熱時間。
• 使用正確的經過校準的溫度計檢驗 Neogen® 分子檢測加熱模塊的溫度（例如，局浸溫度計或熱電偶數位溫度計，而非全浸溫度計）。溫度計必須放置於 Neogen 分子檢測加熱模塊中的指定位置。

注意事項

為了在準備分析時降低與交叉污染相關之風險，請注意以下事項：• 在進行試劑小球水化之前更換手套。
• 建議使用無菌的、帶氣溶膠屏障（帶濾芯）的分子生物級移液吸頭。
• 每次轉移樣品時使用新的吸頭。
• 將樣品從增菌培養基轉移至裂解管時遵循優良實驗室操作。為了避免移液管污染，使用者可以選擇增加一個中間轉移步驟。
例如，使用者可以將每個經過增菌的樣品轉移至無菌管中。
• 使用配有殺菌燈的分子生物工作臺（如可行）。使用 1-5%（與水的體積比）家用漂白溶液或 DNA 去除溶液定期淨化實驗室工作臺和設備（移液管、開蓋器等）。

為了降低與偽陽性結果相關之風險，請注意以下事項：• 請勿在擴增後打開試劑試管。
• 處理受污染的試管時，應先將其放在濃度為 1-5%（與水的體積比）的家用漂白溶液或同類溶液中浸泡 1 小時，且始終遠離分析準備區。
• 請勿在擴增後對試劑試管進行高壓滅菌。
請參考「安全資料表」了解其它資訊和當地的棄置法規。

如果您對於特定的應用程式或程序存有疑問，請造訪我們的網站 www.neogen.com，也可與您當地的 Neogen 代表或經銷商
聯絡以獲得幫助。

2

ZH （繁體中文）

使用者責任

使用者有責任熟悉產品資訊和說明。請造訪我們的網站 www.neogen.com 或聯絡您當地的 Neogen 代表或經銷商，以了解更多資訊。
採用檢測方法時，務必認識到各種外部要素（如取樣方法、檢測方案、樣品製備、處理和實驗室技術）都可能會影響結果。

使用者在選擇檢測方法或產品時，應自行負責選用合適的基質和微生物試驗對足夠多的樣品進行評估，以確保所選擇的檢測方
法達到使用者的標準。
使用者也應自行負責確定任何檢測方法和結果符合其客戶和供應商的要求。

同所有檢測方法一樣，使用任何 Neogen 食品安全部產品所得到的結果並不能保證受檢基質或程序的品質。

為協助客戶評估各種食品基質方法，Neogen 開發了 Neogen® 分子檢測基質控制套組。需要時，可以使用基質控制組 (MC) 來確
定基質是否會影響 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌的結果。在採用 Neogen 方法或在檢測新的或未知基質或者原材料
或工藝發生變更的基質的任何驗證期間，應對若干典型的基質樣品進行檢測，即透過不同來源獲取的樣品。
基質可定義為一種具備內在屬性（如組成或加工）的產品。基質間的差異是因加工或外觀的不同而導致的差異，例如原樣和經過巴氏消毒處理之間的差異以及新鮮和乾燥之間的差異。

有限擔保/有限補救措施

除非各個產品包裝的有限擔保部分明確聲明，否則，NEOGEN 將不提供任何明示或暗示擔保，包括但不限於適銷性或特定用途
適用性擔保。如果證明任何 Neogen 食品安全部產品存在缺陷，Neogen 或其授權經銷商可以自行決定是提供換貨，還是對產品
進行退款。如有任何问题，请联系您的纽勤销售代表或授权经销商。

Neogen 責任限制

對於任何損失或損害，無論是直接、間接、特殊、偶然或非直接原因造成的損害，NEOGEN 概不承擔任何責任，包括但不限於利潤損失。根據法律理論，Neogen 對所謂存在缺陷的產品的賠付不會超過產品的購買價格。

儲存和棄置

請將 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌儲存在 2-8℃ 環境下。請勿冷凍。避光儲存套組。打開套組後，應檢查鋁箔袋是否破損。如果鋁箔袋破損，請勿使用。打開之後，未使用的試劑試管應始終儲存在內部帶有乾燥劑的可重新密封鋁箔袋中，以保持凍乾試劑的穩定性。將重新密封的鋁箔袋儲存在 2-8℃ 溫度下，但儲存時間不能超過 60 天。
請勿使用過期的 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌。過期日期和批號註明在包裝箱外側的標籤上。使用之後，增菌培養基
和 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試管可能含有致病物質。完成檢測後，應遵照現行的行業標準棄置受污染的廢棄物。
請參考「安全資料表」了解其它資訊和當地的棄置法規。

操作指引

請仔細遵循所有指引。否則，可能會導致結果不準確。

使用 1-5%（與水的體積比）家用漂白溶液或 DNA 去除溶液定期淨化實驗室工作臺和設備（移液管、開蓋器等）。

使用者應當遵照「針對 Neogen 分子檢測系統的安裝合格 (IQ)/操作合格 (OQ) 方案和說明」文件(6)中的規定接受 Neogen 分子檢測系統操作員資格驗證 (OQ) 訓練。
請參見「驗證方法具體說明」部分，了解特定要求：

表 3 - 遵照 AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 和 AOAC® Performance Tested MethodSM 證書 #081501 實施的增菌方案。
表 4 - 遵照 NF Validation 證書 3M 01/15-09/16 實施的增菌方案。

樣品增菌

表 2、表 3 或表 4 提供了針對食品與環境樣品的增菌指導。使用者有責任驗證替代取樣方案或者稀釋率，以確保本檢測方法符合
使用者的標準。

食品

1. 讓 Demi-Fraser 培養液增菌培養基（含有檸檬酸鐵銨）平衡至實驗室環境溫度。

2. 根據表 2、表 3 或表 4，在無菌條件下混合增菌培養基和樣品。對於所有肉類和微粒樣品，建議使用過濾袋。

3. 透過混合、均質操作或手動混合 2 ± 0.2 分鐘，實現徹底均質。根據表 2、表 3 或表 4，在 37 ± 1℃ 溫度下培養。

4. 對於生乳製品（請參見表 2、表 3 或表 4），請將 0.1 mL 初步增菌物轉移至 10 mL Fraser 培養液中。在 37 ± 1℃ 環境下培養
20-24 小時。

環境樣品樣品採集工具可以是用中和溶液水化過（此過程可消除消毒劑的作用）的海綿。Neogen 建議使用不含生物殺菌劑的纖維素海
綿。中和溶液可使用 Dey-Engley (D/E) 中和培養液或 Letheen 培養液。建議取樣後對取樣區進行消毒。

3

ZH （繁體中文）

警告：如果您選擇使用含芳基磺酸酯複合物的中和緩衝液 (NB) 作為海綿的水化溶液，則必須在檢測之前按 1:2 的比例（1 份樣品對 1 份無菌增菌培養液）稀釋增菌的環境樣品，以降低導致受污染產品釋放的偽陰性結果之相關風險。另一種選擇
是將 10 μL 的中和緩衝培養液轉移至 Neogen 裂解溶液管內。

2用於驗證表面是否存在病原體的取樣區域的建議尺寸至少為 100 cm（10cm x 10 cm 或 4" x 4"）。當用海綿取樣時，從兩個方向（從左到右，然後從上到下）覆蓋整個區域，或按照您目前的取樣方案或根據 FDA BAM(1)、USDA FSIS MLG(2) 或 ISO 18593(7) 指導方針收集環境樣品。

1. 讓 Demi-Fraser 培養液增菌培養基（含有檸檬酸鐵銨）平衡至實驗室環境溫度。
2. 根據表 2、表 3 或表 4，在無菌條件下混合增菌培養基和樣品。

3. 透過混合、均質操作或手動混合 2 ± 0.2 分鐘，實現徹底均質。根據表 2、表 3 或表 4，在 37 ± 1℃ 溫度下培養 24-30 小時。
表 2：根據需要，在 37 ± 1℃ 溫度下使用 Demi-Fraser 培養液和 Fraser 培養液實施的一般增菌方案。
樣品基質

經過熱加工、烹飪、燻
製的肉類、家禽、海鮮
和魚類
經過熱加工/巴氏殺菌的乳製品
農產品和蔬菜含多種成分的食品
環境樣品(a)

生的肉類、家禽、海
鮮、魚類
樣品基質

生乳製品

樣品大小

增菌培養液量
(mL)

增菌時間
（小時）

25 g

225

24-30

1 塊海綿

100 或 225
10

24-30

24-30

25 g

475

28-32

1 支採樣棒初步增菌
（Demi-Fraser 培養液）(a)樣品大小增菌培養液量
(mL)

增菌時間
（小時）

25 g

225

20-24

樣品大小

將 0.1
mL 轉移
至 10 mL
Fraser 培
養液

二次增菌（Fraser 培養液）(a)增菌溫度 (℃)

增菌時間
（小時）

37 ± 1

20-24

樣品分
析量(b)

10 μL

(a) 初步或二次增菌過程中，應始終使用 Fraser 培養液補充物（檸檬酸鐵銨）對 Demi-Fraser 培養液和 Fraser 培養液進行
增補。
(b) 轉移到 Neogen 裂解溶液管的樣品體積。請參閱「裂解」部分的步驟 4.6。
驗證方法具體說明

AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08

AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

AOAC 研究所 OMASM 和 PTMSM 計劃顯示，Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌是一種有效的單增李斯特菌檢測方法。研究
中檢測的基質顯示在表 3 中。

4

ZH （繁體中文）

表 3. 根據 AOAC OMASM 2016.08 和 PTMSM 證書 #081501，在 37 ± 1℃ 溫度下使用 Demi-Fraser 培養液(a) 實施的增菌方案。
樣品基質

牛肉熱狗、墨西哥起司、香草霜淇淋、4% 乳
脂白乾酪、3% 巧克力全脂牛奶、長葉萵苣、袋裝生菠菜、冷燻鮭魚
生雞肉

火雞熟食

增菌培養液量 (mL)

增菌時間（小時）

25 g

225

24-30

125 g

1125

24-30

25 g

475

28-32

整個瓜

足以讓瓜浮起的量

密封混凝土

1 塊海綿

100

24-30

塑膠(c)

1 支採樣棒

10

24-30

不銹鋼

1 塊海綿

環境樣品：

哈密瓜(b)樣品大小225

用於 AOAC 驗證的所有樣品均進行了均質處理，除非另有說明。

26-30

24-30

(a) 初步或二次增菌過程中，應始終使用 Fraser 培養液補充物（檸檬酸鐵銨）對 Demi-Fraser 培養液和 Fraser 培養液進行
增補。

(b) 透過手動混合對樣品進行均質處理。

(c)		 透過渦旋震盪方式對樣品進行均質處理。
AFNOR Certification 認證的 NF Validation

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en

有關有效性截止日期的詳細資訊，請參閱上述網站中提供的 NF VALIDATION 證書。

符合 ISO 16140-2(6) 的 NF VALIDATION 認證方法（與 ISO 11290(3) 相比）驗證範圍：所有人類食品與環境樣品（初級生產樣品除外）
樣品製備：遵照 EN ISO 11290-1(3) 和 EN ISO 6887(8) 製備樣品軟體版本：參見證書

表 4：根據需要，按照 NF VALIDATION 認證方法 3M 01/15-09/16 在 37 ± 1℃ 溫度下使用 Demi-Fraser 培養液和 Fraser 培養
液實施的增菌方案。
一般方案

樣品大小

所有食品樣品（生肉、生
海鮮和生乳製品除外）

25 g

環境樣品

25 g，1 支採樣
棒或 1 個拭子增菌培養液量
(mL)

培養溫度
(±1℃)

增菌時間
（小時）

樣品分析
量(a)

225

37

24-30

20 µL

5

接受的中斷點
• Demi-Fraser 培養液，
最多 72 小時
• 裂解液於 -20℃

• 裂解液於 4℃，最多 72 小時

專用方案 樣品
大小

生肉、生
海鮮和生
乳製品

25 g

ZH （繁體中文）初步增菌（Demi-Fraser 培養液）(b)增菌培養液
量 (mL)

225

培養溫度
(±1℃)

二次增菌（Fraser 培養液）(b)

增菌時間
（小時）

樣品大小

20-24

將 0.1 mL轉移至
10 mL
Fraser 培
養液

37

培養溫度
(±1℃)

增菌時間
（小時）

樣品分析
量(c)

37

20-24

10 µL

(a) 轉移到 Neogen 裂解溶液管的樣品體積。請參閱「裂解」部分的步驟 4.6。

接受的中斷點• Fraser 培
養液，最多
72 小時
• 裂解液於-20℃• 裂解液於
4℃，最多72 小時(b) 初步或二次增菌過程中，應始終使用 Fraser 培養液補充物（檸檬酸鐵銨）對 Demi-Fraser 培養液和 Fraser 培養液進行
增補。
(c) 轉移到 Neogen 裂解溶液管的樣品體積。請參閱「裂解」部分的步驟 4.6。
備註：多於 25 g 的樣品尚未在 NF VALIDATION 研究中進行檢測。

Neogen® 分子檢測托盤的準備工作
1. 將一塊布用 1-5%（與水的體積比）家用漂白溶液或同類溶液浸濕，用來擦拭 Neogen® 分子檢測托盤。
2. 用清水清洗 Neogen 分子檢測托盤。

3. 使用一次性紙巾擦乾 Neogen 分子檢測托盤。

4. 使用前確保 Neogen 分子檢測托盤保持乾燥。

Neogen® 分子檢測冷卻模塊的準備工作
將 Neogen® 分子檢測冷卻模塊直接放在實驗室工作臺上；在實驗室環境溫度 (20-25°C) 下使用冷卻模塊。

Neogen® 分子檢測加熱模塊的準備工作
將 Neogen® 分子檢測加熱模塊放入雙乾燥模塊加熱器中。開啟乾燥模塊加熱裝置並設定溫度，使 Neogen 分子檢測加熱模塊達到並保持 100 ± 1℃。
備註：根據不同的加熱裝置，允許 Neogen 分子檢測加熱模塊在大約 30 分鐘後達到工作溫度。使用放在指定位置的、正確的、
經過校準的溫度計（如局浸溫度計或熱電偶數位溫度計，而非全浸溫度計）檢驗 Neogen 分子檢測加熱模塊的溫度是否達到
100 ± 1℃。

Neogen® 分子檢測設備的準備工作
1. 啟動 Neogen® 分子檢測系統軟體並登入。請聯絡您的 Neogen 食品安全部代表，確保您使用的是最新版的軟體。
2. 打開 Neogen 分子檢測設備。

3. 利用每個樣品的資料為其建立或編輯一次運行檢測。請參考「Neogen 分子檢測系統使用者手冊」了解詳細資訊。

備註：將反應管插入 Neogen 分子檢測托盤前，Neogen 分子檢測設備必須處於就緒狀態。此加熱步驟大概需要 20 分鐘，由設
備狀態列中的一個「橙色」燈進行指示。當儀器準備好啟動檢測時，狀態列將變為「綠色」。

裂解
請用螺絲刀或抹刀移除 Neogen 裂解溶液管架的底部，然後再將其置於 Neogen 分子檢測加熱模塊中。

1. 將管架置於室溫 (20-25℃) 環境下一整夜（16-18 小時），讓裂解溶液（Neogen 裂解溶液）管回溫。使 Neogen 裂解溶液管平
衡到室溫的另一種方法是將 Neogen 裂解溶液管放在實驗室工作臺上至少 2 小時、在 37 ± 1℃ 培養設備中培養 Neogen
裂解溶液管 1 小時，或將其置於雙乾燥模塊加熱裝置中在 100℃ 下持續加熱 30 秒。
6

ZH （繁體中文）

2. 倒置封蓋的裂解溶液管，使其混合均勻。在 4 小時內繼續執行下一步。
3. 從培養設備中取出增菌培養液。

4. 每個樣品和每個陰性控制組 (NC) 樣品（無菌增菌培養基）都需要一支 Neogen 裂解溶液管。

4.1 可以根據所需的 Neogen 裂解溶液管的數量，對 Neogen 裂解溶液聯排管進行切割。選擇所需數量的 Neogen 裂解溶液
管或 8 聯排管。將 Neogen 裂解溶液管放入空管架中。

4.2 為了避免交叉污染，請一次僅打開一排 Neogen 裂解溶液管的管蓋，並且每次轉移溶液時使用新的移液管吸頭。
4.3 按如下所述將經過增菌的樣品轉移到 Neogen 裂解溶液管：

首先將每個經過增菌的樣品轉移到單個 Neogen 裂解溶液管中。最後轉移 NC。

4.4 使用 Neogen® 分子檢測上蓋/開蓋工具 - Lysis 打開 Neogen 裂解溶液聯排管的管蓋，一次僅打開一排。

4.5 丟棄 Neogen 裂解溶液管的管蓋 – 如果要保留裂解液以重新檢測，請將管蓋放入乾淨的容器中，以備裂解後重新使用。
4.5.1 如需處理保留的裂解液，請參閱附錄 A。

4.6 將 20 µL 樣品轉移到 Neogen 裂解溶液管內，除非方案的表 2、表 3 或表 4 中另有說明（例如生乳製品，或使用含中和緩衝液的環境樣品時，使用 10 µL）。
20 µl

5. 重複步驟 4.4 至 4.6，直到將所有樣品添加到聯排管對應的 Neogen 裂解溶液管為止。

6. 當轉移完所有樣品後，將 20 µL Nc（無菌增菌培養基，如 Demi-Fraser 培養液）轉移到一支 Neogen 裂解溶液管中。請勿將水
用作 NC。

7. 檢驗 Neogen 分子檢測加熱模塊的溫度是否達到了 100 ± 1℃。

8. 將未加蓋的 Neogen 裂解溶液管架放入 Neogen 分子檢測加熱模塊中加熱 15 ± 1 分鐘。加熱期間，Neogen 裂解溶液將從
粉紅色（冷）變為黃色（熱）。

8.1 未在分析裂解步驟中經過適當熱處理的樣品可能會被視為具有潛在生物危害性，不應將其插入 Neogen 分子檢測設備。

9. 從加熱模塊中取出未加蓋的 Neogen 裂解溶液管架，將其放入 Neogen 分子檢測冷卻模塊中冷卻至少 5 分鐘，最長 10 分鐘。
在環境溫度下使用的 Neogen 分子冷卻模塊應直接置於實驗室工作臺上。冷卻後，裂解溶液將恢復為粉紅色。

10.從 Neogen 分子檢測冷卻模塊上移除 Neogen 裂解溶液管架。
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

7

ZH （繁體中文）

擴增

1. 每個樣品和每個 NC 都需要一支 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管。

1.1 根據所需的管數，對試劑聯排管進行切割。選擇所需數量的 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管或 8 聯排管。
1.2 將 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管放入空管架中。

1.3 請勿將試劑小球攪離管底。

2. 選擇 1 支 Neogen 試劑控制組管並放入管架。

3. 為了避免交叉污染，請一次僅打開一排 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管的管蓋，並且每次轉移溶液時使用
新的移液管吸頭。
4. 按如下所述將裂解液分別轉移到 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管和 Neogen 試劑控制組管：首先將各個樣品裂解液轉移到單個 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管，然後再轉移 NC。最後對 Neogen
試劑控制組管進行水化。

5. 使用 Neogen® 分子檢測上蓋/開蓋工具 - Reagent 打開 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管的管蓋，一次僅打
開一排。丟棄管蓋。
5.1 將 Neogen 裂解溶液管液體上部 ½ 層的 20 µL 樣品裂解液（避免沉澱）轉移到對應的 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管。成角度注入，以避免攪動小球。輕輕地上下吸動 5 次，以充分混合。
5.2 重複步驟 5.1，直到將所有樣品裂解液添加到聯排管對應的 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管為止。

5.3 使用額外的蓋蓋住 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管，並使用 Neogen 分子檢測上蓋/開蓋工具 Reagent 較圓的一側以前後移動的方式加壓，以確保將蓋子蓋緊。
5.4 根據需要對待檢測的樣品重複步驟 5.1 到 5.3。

5.5 當轉移完所有樣品裂解液後，重複步驟 5.1，以將 20 µL NC 裂解液轉移到 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑
試管。

5.6 將 20 µL NC 裂解液轉移至 Neogen 試劑控制組管。成角度注入，以避免攪動小球。輕輕地上下吸動 5 次，以充分混合。

6. 將加蓋的試管放入乾淨且經過淨化處理的 Neogen 分子檢測托盤中。合上並鎖定 Neogen 分子檢測托盤蓋。

20 µL

7. 在 Neogen 分子檢測系統軟體中查看和確認配置的檢測。

8. 在軟體中按一下「啟動」按鈕並選擇要使用的儀器。所選儀器的蓋會自動打開。

9. 將 Neogen 分子檢測托盤放入 Neogen 分子檢測設備並合上蓋子，以啟動分析。結果將在 75 分鐘內提供，但陽性結果可以更快檢測到。
10. 分析完成後，從 Neogen 分子檢測設備中取出 Neogen 分子檢測托盤，透過將試管浸入 1-5%（與水的體積比）家用漂白溶液
或同類溶液 1 小時並使其遠離分析準備區，對試管進行廢棄處理。
注意事項：為了將因為交叉污染而導致的偽陽性結果風險降至最低，請勿打開包含擴增的 DNA 的試劑管。這包括 Neogen 分
子檢測套組 2 - 單增李斯特菌試劑試管、Neogen 試劑控制組和基質控制組管。對密封的試劑管進行廢棄處理時，應始終將其
放入濃度為 1-5%（與水的體積比）的家用漂白溶液或同類溶液中浸泡 1 小時，並確保其遠離分析準備區。

結果和說明軟體會使用一種演算法對來自核酸擴增檢測的光輸出曲線進行解讀。軟體會自動分析結果並根據不同結果用不同顏色進行標記。透過分析一系列獨一無二的曲線參數可以確定陽性結果或陰性結果。
「假定陽性」結果即時報告，「陰性」和「檢查」結果則在檢
測完成後顯示。

假定陽性樣品應當遵循實驗室標準操作規程或正確的參考方法進行確認(1, 2, 3)，應首先將初步的增菌培養液轉移到二次增菌培養液（如適用），然後進行後續的平板培養，並利用正確的生化和血清方法對分離菌進行確認。
備註：因為系統和 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌擴增試劑帶有「背景」相對光單位 (RLU) 讀數，即使陰性樣品也不會
出現讀數為零的情況。

在極少數情況下，當存在異常光輸出時，演算法會顯示「檢查」標記。Neogen 建議使用者對所有「檢查」樣品重新進行分析。如果
結果仍為「檢查」，請使用您喜歡的方法或按照當地法規指定的方法進行確認試驗。
8

表 5：Neogen 分子檢測系統軟體提供的樣品和判讀結果符號。
孔類型

樣品

孔結果符號

樣品
樣品
樣品
樣品

結果

ZH （繁體中文）判讀

陽性樣品是目標病原體的假定陽性樣品。

抑制樣品基質對分析有抑制作用。可能需要重新檢測。有關更多資訊，請參閱
疑難排解部分和檢測套組產品資訊。

錯誤

未檢測到生物發光。可能需要重新檢測。有關更多資訊，請參閱疑難排解
部分和檢測套組產品資訊。

陰性檢查樣品是目標病原體的陰性樣品。

不確定目標病原體是否存在。可能需要重新檢測。有關更多資訊，請參閱
疑難排解部分和檢測套組產品資訊。

依照 NF VALIDATION 認證方法確認結果
選項 1：採用 ISO 11290(3) 標準，從 Demi-Fraser 培養液增菌液開始。

選項 2：作為 NF VALIDATION 認證方法的組成部分，透過在 PALCAM 瓊脂或顯色瓊脂上執行分離操作，對單增李斯特菌進行檢測。存在具有明顯特徵的菌落即證明存在單增李斯特菌。
選項 3：按照 EN ISO 7218(5) 標準所述，使用核酸探針對選擇性瓊脂中的隔離菌落執行操作（請參閱選項 1 或 2）。

選項 4：可以使用任何其他 NF VALIDATION 認證方法，原理必須與 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌不同。在執行此第二
種驗證方法時，必須遵循所述的完整方案。兩個方法在開始確認前的所有步驟必須是相同的。
如果出現結果不一致（替代方法的結果為假定陽性，且並未透過上述其中一種方法予以確認），則實驗室必須執行必要的步驟來
確保所獲得結果的有效性。

如果出現結果不一致（使用 Neogen 分子檢測套組 2 - 單增李斯特菌得出的結果為假定陽性，且並未透過上述其中一種方法予以
確認），則實驗室必須執行必要的步驟來確保所獲得結果的有效性。
如果您對於特定的應用程式或程序存有疑問，請造訪我們的網站 www.neogen.com，也可與您當地的 Neogen 代表或經銷商
聯絡以獲得幫助。
附錄 A. 方案中斷：儲存並重新檢測熱處理後的裂解液。
1. 如需儲存熱處理後的裂解液，應使用乾淨的蓋子為裂解溶液管重新封蓋（請參閱 4.5「裂解」）。
2. 在 4 - 8℃ 溫度下最多儲存 72 小時。

3. 取出儲存的樣品以準備用於擴增，將其倒置 2-3 次進行混合。

4. 打開管蓋。

5. 將混合後的裂解液管置於 Neogen 分子檢測加熱模塊中並在 100 ± 1℃ 溫度下加熱 5 ± 1 分鐘。

6. 從加熱模塊中取出 Neogen 裂解溶液管架，將其放入 Neogen 分子檢測冷卻模塊中冷卻至少 5 分鐘，最長 10 分鐘。
7. 繼續執行上文詳述的「擴增」部分的方案。

參考資料：

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

產品標籤符號說明

info.neogen.com/symbols
9Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

TH(ภาษาไทย)วันทีอ
่ อก: 2024-01

คำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์
ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุล 2 - ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส
รายละเอีียดผลิิตภััณฑ์์และวััตถุุประสงค์์การใช้้งาน

ชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen® จะนำำ�มาใช้้กับั ระบบทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดย
วิิธีี Neogen® สำำ�หรัับการตรวจหาเชื้้�อ ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส อย่่างรวดเร็็วและเฉพาะเจาะจงในตััวอย่่างอาหารที่่�ได้้รับั การเลี้้�ยงเชื้้�อ และในตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อม ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ใช้้การเพิ่่�มขยายยีีนแบบลููปที่่�อุุณหภููมิเิ ดีียว (Loop-mediatedisothermal amplification) เพื่่�อเพิ่่�มลำำ�ดัับกรดนิิวคลีีอิกิ ด้้วยวิิธีที่่�มีี คี วามจำำ�เพาะเจาะจงและความไวสููง ผสานกัับการเรืืองแสงทางชีีวภาพ
เพื่่�อตรวจจัับการเพิ่่�มขยายจำำ�นวน ผลการทดสอบเบื้้�องต้้นที่่�เป็็นบวกจะได้้รับั การรายงานในทัันทีี ขณะที่่�ผลการทดสอบที่่�เป็็นลบจะแสดงผ
ลภายหลัังจากที่่�การทดสอบดัังกล่่าวเสร็็จสมบููรณ์์แล้้ว ผลการทดสอบเบื้้�องต้้นที่่�เป็็นบวกควรได้้รับั การยืืนยัันโดยใช้้วิธีิ กี ารที่่�ท่่านเห็็นสมควร
หรืือตามที่่�ระบุุไว้้ในระเบีียบข้้อบัังคัับต่่าง ๆ ในท้้องถิ่่�น(1, 2, 3)ชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ออกแบบมาให้้ใช้้ในสภาพแวดล้้อมห้้องปฏิิบัติั กิ ารโดยเจ้้าหน้้าที่่�
ห้้องปฏิิบัติั กิ ารที่่�ผ่่านการอบรมเทคนิิคการปฏิิบัติั งิ านในห้้องปฏิิบัติั กิ าร Neogen ยัังไม่่ได้้จัดั ทำำ�เอกสารเกี่่�ยวกัับการใช้้ผลิิตภััณฑ์์นี้้�ในอุุตสาห
กรรมอื่่�นๆ นอกจากอุุตสาหกรรมอาหารหรืือเครื่่�องดื่่�ม ตััวอย่่างเช่่น Neogen ยัังไม่่ได้้ออกเอกสารเกี่่�ยวกัับผลิิตภััณฑ์์นี้้�สำ�ำ หรัับการทดสอบ
ตััวอย่่างน้ำำ�� ตััวอย่่างยา ตััวอย่่างเครื่่�องสำำ�อาง ตััวอย่่างทางคลิินิกิ หรืือตััวอย่่างด้้านสััตวแพทย์์ศาสตร์์ ชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเน
สระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ยัังไม่่ได้้รับั การประเมิินกัับระเบีียบการทดสอบที่่�เป็็นไปได้้ทั้้�งหมด หรืือกัับสายพัันธุ์์�แบคทีีเรีียที่่�เป็็นไปได้้
ทั้้�งหมด
เช่่นเดีียวกัับวิิธีที ดสอบทั่่�วๆ ไป แหล่่งที่่�มา สููตร และคุุณภาพของอาหารสำำ�หรัับเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อสามารถส่่งผลกระทบต่่อผลการทดสอบที่่�ได้้
นอกจากนี้้� ปััจจััยต่่างๆ เช่่น วิิธีกี ารสุ่่�มเก็็บตััวอย่่าง วิิธีกี ารทดสอบ การเตรีียมตััวอย่่าง การจััดการและเทคนิิคที่่�ใช้้ในห้้องปฏิิบัติั กิ ารอาจส่่ง
ผลกระทบต่่อผลการทดสอบที่่�ได้้ด้ว้ ยเช่่นกััน Neogen ขอแนะนำำ�ให้้ประเมิินวิิธีกี ารทดสอบ รวมทั้้�งอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อในสภาพแวดล้้อม
ของผู้้�ใช้้โดยใช้้จำ�ำ นวนตััวอย่่างที่่�เพีียงพอกัับอาหารแต่่ละชนิิดและสภาวะที่่�มีีความท้้าทายกัับการเจริิญเติิบโตของจุุลินิ ทรีีย์์ เพื่่�อให้้มั่่�นใจว่่า
วิิธีกี ารดัังกล่่าวเป็็นไปตามเกณฑ์์ของผู้้�ใช้้
Neogen ได้้ประเมิินชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen - ด้้วยเดมิิเฟรเซอร์์บรอทที่่�มีีเฟอร์์ริก
ิแอมโมเนีียมซิิเตรต และ เฟรเซอร์์บรอทที่่�มีีเฟอร์์ริกิ แอมโมเนีียมซิิเตรตตามที่่�จำำ�เป็็น สููตรทั่่�วไปของอาหารเลี้้�ยงเชื้้�อนี้้� มีีดังั ต่่อไปนี้้�
สููตรทั่่�วไปของเดมิิเฟรเซอร์์บรอทเบส

(กรััมต่่อลิิตร)สููตรทั่่�วไปของเฟรเซอร์์บรอทเบส

(กรััมต่่อลิิตร)โซเดีียมคลอไรด์์

20 ก.

โซเดีียมคลอไรด์์

20 ก.

ไดโซเดีียมฟอสเฟต ปราศจากน้ำำ�� *9.6 ก.

ไดโซเดีียมฟอสเฟต ปราศจากน้ำำ�� *9.6 ก.

สารสกััดจากเนื้้�อ

5.0 ก.

สารสกััดจากเนื้้�อ

5.0 ก.

เคซีีนย่่อยจากตัับอ่่อน

5.0 ก.

เคซีีนย่่อยจากตัับอ่่อน

5.0 ก.

เนื้้�อสััตว์์ย่อ่ ย

5.0 ก.

เนื้้�อสััตว์์ย่อ่ ย

5.0 ก.

สารสกััดยีีสต์์

5.0 ก.

สารสกััดยีีสต์์

5.0 ก.

ลิิเธีียมคลอไรด์์

3.0 ก.

ลิิเธีียมคลอไรด์์

3.0 ก.

สารโมโนเบสิิกโพแทสเซีียมฟอสเฟต

1.35 ก.

สารโมโนเบสิิกโพแทสเซีียมฟอสเฟต

1.35 ก.

เอสคููลิน
ิ

1.0 ก.

เอสคููลิน
ิ

1.0 ก.

อะคริิฟลาวิินไฮโดรคลอไรด์์

0.0125 ก.

อะคริิฟลาวิินไฮโดรคลอไรด์์

0.025 ก.

กรดนาลิิดิซิิ ก
ิ

0.01 ก.

กรดนาลิิดิซิิ ก
ิ

0.02 ก.

* ทดแทน: ไดเบสิิกโซเดีียมฟอสเฟต ไดไฮเดรต

12.0 ก.

ซััพพลีีเม้้นท์์สำ�ำ หรัับเฟรเซอร์์บรอท
(ส่่วนผสมต่่อขวดบรรจุุสารละลาย 10 มล. เพิ่่�มขวดบรรจุุสารละลายหนึ่่ง� ขวดต่่ออาหารเลี้้�ยงเชื้้�อเบส 1 ลิิตร)เฟอร์์ริกิ แอมโมเนีียมซิิเตรต

0.5 ก./10 มล.

pH สุุดท้้าย

7.2 ± 0.2 ที่่� 25°Cุ มุ่่�งหมายในการใช้้กับั ตััวอย่่างที่่�ได้้ผ่า่ นกระบวนการให้้ความร้้อน
เครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® มีีจุด
ในระหว่่างขั้้�นตอนการไลซีีสของการทดสอบ ซึ่่ง� ได้้รับั การออกแบบมาเพื่่�อทำำ�ลายเชื้้�อที่่�มีีในตััวอย่่าง ตััวอย่่างซึ่่ง� ไม่่ได้้รับั ความร้้อนอย่่าง
เหมาะสมในระหว่่างขั้้�นตอนการไลซีีสของชุุดทดสอบอาจถืือว่่าเป็็นสารที่่�อาจมีีอันั ตรายทางชีีวภาพ และไม่่ควรใส่่เข้้าไปในเครื่่�องมืือสำำ�หรัับ
ทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen
Neogen Food Safety ได้้รับั การรัับรองตามมาตรฐาน ISO (องค์์การระหว่่างประเทศว่่าด้ว้ ยการมาตรฐาน) 9001 ด้้านการออกแบบและการ
ผลิิตชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen มีีทั้้�งหมด 96 หลอดทดสอบตามที่่�อธิิบายไว้้ในตารางที่่� 11

TH(ภาษาไทย)ตารางที่่� 1 ส่่วนประกอบของชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogenรายการ

การคััดแยก

จำำ�นวน

สิ่่�งที่่�บรรจุุภายใน

ความคิิดเห็็น

หลอดสารละลายไลซีีส
Neogen® (LS)สารละลายสีีชมพูู
ในหลอดใส

บรรจุุอยู่่�ในที่่�วาง
96 หลอด (12 แถวปริิมาณ 580 ไมโครลิิตรต่่อหลอด
และพร้้อมใช้้งาน
แถวละ 8 หลอด)หลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ
เชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิ
หลอดสีีเหลืือง
เนสระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี
®
Neogenส่่วนผสมสำำ�หรัับการเพิ่่�มขยาย
96 หลอด (12 แถวและการตรวจหาเชื้้�อโรคแบบ
พร้้อมใช้้งาน
แถวละ 8 หลอด)เฉพาะเจาะจงที่่�ทำำ�ไลโอฟิิไลซ์์แล้้ว

ฝาสำ�รอง

96 ฝา (12 แถวแถวละ 8 ฝา)พร้้อมใช้้งาน

ส่่วนผสมที่่�ทำำ�ไลโอฟิิไลซ์์สำ�ำ หรัับ
16 หลอด (2 ถุุง ถุุงควบคุุม DNA การเพิ่่�มขยายและ
ละ 8 หลอด)การตรวจหา

พร้้อมใช้้งาน

ฝาสีเหลือง

Neogen® รีีเอเจนต์์คอนโทรล หลอดใสชนิิดเปิิด
ฝาด้้านบน
(RC)ชุุดควบคุุมผลลบหรืือ Negative Control เป็็นอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อที่่�ปลอดเชื้้�อ เช่่น เดมิิเฟรเซอร์์บรอท ห้้ามใช้้น้ำ��ำ เป็็นชุุดควบคุุมผลลบ

ความปลอดภััย

ผู้้�ใช้้ควรอ่่าน ทำำ�ความเข้้าใจ และปฏิิบัติั ติ ามข้้อมููลความปลอดภััยทั้้�งหมดในคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานระบบทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุล
โดยวิิธีี Neogen และ Neogen ชุุดทดสอบ เชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสระดัับโมเลกุุล 2 เก็็บคำำ�แนะนำำ�ด้้านความปลอดภััยนี้้�ไว้้สำ�ำ หรัับใช้้
อ้้างอิิงในอนาคต
คำำ�เตืือน
น:	บ่่งชี้้�ว่่า เป็็นสถานการณ์์ที่่�เป็็นอัันตราย ซึ่่ง� หากไม่่มีกี ารหลีีกเลี่่�ยง อาจก่่อให้้เกิิดการเสีียชีีวิติ หรืือการบาดเจ็็บรุุนแรงและ/หรืือ
ความเสีียหายต่่อทรััพย์์สินิ ได้้
	ข้้อสัังเกต:เกต ระบุุสถานการณ์์ที่่�อาจเป็็นอัันตราย หากไม่่หลีีกเลี่่�ยง อาจก่่อให้้เกิิดความเสีียหายต่่อทรััพย์์สิน
ิW คำำ�เตืือน
ห้้ามใช้้ Neogen ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุล 2 - ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสลิิในการวิิ
ในการวิินิจิ ฉััยโรคในมนุุษย์์ หรืือสััตว์์
วิิธีกี ารของ Neogen ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุล 2 - ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสอาจสร้้างลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสในระดัับที่่�จะทำำ�ให้้ทารก
ในหญิิงตั้้�งครรภ์์และผู้้�ที่่�มีีภาวะภููมิคุ้้�ิ มกัันบกพร่่องเสีียชีีวิติ ได้้ หากได้้รับั สารผู้้�ใช้้งานต้้องทำำ�การฝึึกอบรมบุุคลากรเกี่่�ยวกัับเทคนิิคการทดสอบที่่�เหมาะสมในปััจจุุบันั ตััวอย่่างเช่่น หลัักปฏิิบัติั ทิ างห้้องปฏิิบัติั กิ ารที่่�ดีี,ISO/IEC 17025(4) หรืือ ISO 7218(5)เพื่่�อลดความเสี่่�ยงที่่�เกี่่�ยวข้้องกัับผลลบปลอม ซึ่่ง� นำำ�ไปสู่่�การปล่่อยผลิิตภััณฑ์์ที่่�มีกี ารปนเปื้้อ� นไปขาย ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:นี้้�• ปฏิิบัติั ติ ามระเบีียบการและดำำ�เนิินการทดสอบดัังที่่�ระบุุไว้้อย่่างชััดเจนในคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์
• เก็็บชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ตามที่่�ระบุุไว้้บนบรรจุุภัณั ฑ์์และในคำำ�แนะนำำ�การใช้้งาน
ผลิิตภััณฑ์์
• ใช้้ชุดุ ทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ก่่อนวัันหมดอายุุเสมอ
• ใช้้ชุดุ ทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen สำำ�หรัับตััวอย่่างในสิ่่�งแวดล้้อมและตััวอย่่างอาหารที่่�ผ่่าน
การตรวจสอบภายในหรืือโดยบุุคคลที่่�สามแล้้วเท่่านั้้�น
• ใช้้ชุดุ ทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen เฉพาะกัับพื้้�นผิิว สารฆ่่าเชื้้�อ วิิธีกี ารและสายพัันธุ์์�แบคทีีเรีีย
ที่่�ผ่่านการตรวจสอบภายในหรืือโดยบุุคคลที่่�สามแล้้วเท่่านั้้�น
• สำำ�หรัับตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อมที่่�มีีบัฟั เฟอร์์สำ�ำ หรัับทำำ�ให้้เป็็นกลางโดยมีีสารประกอบเชิิงซ้้อนของเอริิลซััลโฟเนตอยู่่�ด้้วย ให้้ทำ�ำ การเจืือจาง
ด้้วยอััตราส่่วน 1:2 ก่่อนที่่�จะทดสอบ (เติิมตััวอย่่าง 1 ส่่วนลงในอาหารเหลวเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อที่่�ฆ่่าเชื้้�อแล้้ว 1 ส่่วน) อีีกหนึ่่ง� ตััวเลืือกคืือ ถ่่าย
บััฟเฟอร์์สำ�ำ หรัับทำำ�ให้้เป็็นกลางที่่�มีีการเพิ่่�มเชื้้�อปริิมาณ 10 ไมโครลิิตร เข้้าไปยัังหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ชุุดตััวอย่่างผลิิตภััณฑ์์
ของ Neogen® ซึ่่ง� ประกอบด้้วยบััฟเฟอร์์สำ�ำ หรัับทำำ�ให้้เป็็นกลางโดยมีีสารเชิิงซ้้อนของเอริิลซััลโฟเนตมีีดังั นี้้�: RS96010NB, RS9604NB,
SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G and HS2410NB2G.
เพื่่�อลดความเสี่่�ยงที่่�เกี่่�ยวข้้องกัับการสััมผััสสารเคมีีหรืือสารอัันตรายทางชีีวภาพ ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:นี้้�• ขอแนะนำำ�อย่่างยิ่่�งให้้เจ้้าหน้้าที่่�ห้อ้ งปฏิิบัติั กิ ารเพศหญิิงทราบถึึงความเสี่่�ยงต่่อการเจริิญเติิบโตของทารกในครรภ์์ ซึ่่ง� เป็็นผลมาจากการติิด
เชื้้�อของมารดาจากการสััมผััสลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส
• ให้้ทำ�ำ การทดสอบเชื้้�อก่่อโรคในห้้องปฏิิบัติั กิ ารที่่�มีีอุปุ กรณ์์อย่่างเหมาะสมภายใต้้การควบคุุมของบุุคลากรที่่�ได้้รับั การอบรม อาหารเลี้้�ยง
เชื้้�อเพื่่�อเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อที่่�บ่่มแล้้ว หรืือพื้้�นผิิวที่่�มีีการสััมผััสกัับอาหารเลี้้�ยงเชื้้�อหลัังเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อที่่�บ่่มแล้้ว อาจจะมีีเชื้้�อโรคในระดัับ
เพีียงพอที่่�จะก่่อให้้เกิิดความเสี่่�ยงต่่อสุุขภาพของมนุุษย์์ได้้
• ปฏิิบัติั ติ ามแนวปฏิิบัติั เิ พื่่�อความปลอดภััยทางห้้องปฏิิบัติั กิ ารมาตรฐานทุุกครั้้�งโดยรวมถึึงการสวมเครื่่�องแต่่งกายเพื่่�อป้้องกััน
และอุุปกรณ์์ปกป้้องดวงตาในขณะที่่�ปฏิิบัติั งิ านกัับรีีเอเจนต์์และตััวอย่่างที่่�มีีการปนเปื้้อ� น• หลีีกเลี่่�ยงการสััมผััสกัับอาหารหลัังบ่่มเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อและหลอดบรรจุุรีเี อเจนต์์ภายหลัังการเพิ่่�มจำำ�นวนดีีเอ็็นเอ
• กำำ�จััดตััวอย่่างหลัังเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อตามมาตรฐานอุุตสาหกรรมปััจจุุบันั• ตััวอย่่างซึ่่ง� ไม่่ได้้รับั ความร้้อนอย่่างเหมาะสมในระหว่่างขั้้�นตอนการไลซีีสของชุุดทดสอบอาจถืือว่่าเป็็นสารที่่�อาจมีีอันั ตรายทางชีีวภาพ
และไม่่ควรใส่่เข้้าไปในเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogenเพื่่�อลดความเสี่่�ยงจากการปนเปื้้อ� นข้้ามขณะเตรีียมชุุดทดสอบ ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:นี้้�:• สวมถุุงมืือตลอดเวลา (เพื่่�อปกป้้องผู้้�ใช้้งานและป้้องกัันการเกิิดนิิวคลีีเอส)2

TH(ภาษาไทย)ควรปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�เพื่่�อลดการปนเปื้้อ� นในสิ่่�งแวดล้้อมม:• ปฏิิบัติั ติ ามมาตรฐานการกำำ�จััดทิ้้�งตามข้้อกำำ�หนดอุุตสาหกรรมในปััจจุุบันั สำำ�หรัับของเสีียที่่�ปนเปื้้อ� นเพื่่�อเป็็นการลดความเสี่่�ยงอัันเกิิดจากการสััมผััสโดนของเหลวร้้อน ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:นี้้�• ห้้ามตั้้�งเครื่่�องทำำ�ความร้้อนอุุณหภููมิสูิ งู กว่่าอุณุ หภููมิที่่�ิ แนะนำำ�ไว้้
• ห้้ามทำำ�ความร้้อนเกิินเวลาที่่�แนะนำำ�
• ใช้้เทอร์์โมมิิเตอร์์ที่่�ได้้รับั การสอบเทีียบตามมาตรฐานและเหมาะสม เพื่่�อยืืนยัันอุุณหภููมิขิ องของฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับ
โมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen® (เช่่น เทอร์์โมมิิเตอร์์แบบจุ่่�มบางส่่วน หรืือเทอร์์โมมิิเตอร์์แบบดิิจิทัิ ลั ที่่�ไม่่ใช่่เทอร์์โมมิิเตอร์์แบบจุ่่�มทั้้�งหมด) จะต้้องวางเทอร์์โมมิิเตอร์์ในบริิเวณที่่�กำำ�หนดไว้้ของฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogenข้้อสัังเกต
เพื่่�อลดความเสี่่�ยงจากการปนเปื้้อ� นข้้ามขณะเตรีียมชุุดทดสอบ ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:นี้้�• เปลี่่�ยนถุุงมืือก่่อนขั้้�นตอนการผสมสารละลายกัับเม็็ดรีีเอเจนต์์
• แนะนำำ�ให้้ใช้้ปิเิ ปตต์์ทิปิ ระดัับชีีววิิทยาโมเลกุุลชนิิดที่่�มีีตัวั กั้้�นละอองอากาศ (ชนิิดมีีตัวั กรอง) ที่่�ผ่่านการฆ่่าเชื้้�อแล้้ว
• ใช้้ปิเิ ปตต์์ทิปิ อัันใหม่่สำ�ำ หรัับการถ่่ายตััวอย่่างในแต่่ละครั้้�ง
• ใช้้แนวปฏิิบัติั ที่่�ดีิ สำี �ำ หรัับห้้องปฏิิบัติั กิ าร เพื่่�อถ่่ายโอนตััวอย่่างจากอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อที่่�บ่่มแล้้วไปยัังหลอดสายละลายไลซีีส
เพื่่�อหลีีกเลี่่�ยงการปนเปื้้อ� นในขั้้�นตอนการปิิเปตต์์ ผู้้�ใช้้อาจเพิ่่�มขั้้�นตอนในระหว่่างการถ่่ายตััวอย่่างสารละลาย ตััวอย่่างเช่่น ผู้้�ใช้้อาจถ่่าย
โอนแต่่ละตััวอย่่างอาหารที่่�เพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อใส่่เข้้าไปในหลอดที่่�ฆ่่าเชื้้�อแล้้ว
• ปฏิิบัติั กิ ารทดสอบทางชีีววิิทยาโมเลกุุลบนโต๊๊ะที่่�มีีหลอดไฟฆ่่าเชื้้�อหากทำำ�ได้้ ลดการปนเปื้้อ� นบนโต๊๊ะปฏิิบัติั งิ านและอุุปกรณ์์ในห้้อง
ปฏิิบัติั กิ าร (ปิิเปต เครื่่�องมืือเปิิด/ปิิดฝา ฯลฯ) อย่่างสม่ำำ�� เสมอด้้วยน้ำำ�� ยาฟอกขาวที่่�ใช้้ในครััวเรืือนที่่�มีีความเข้้มข้้น 1-5% (ผสมกัับน้ำำ�� ตามอััตราส่่วน) หรืือสารละลายกำำ�จััดดีีเอ็็นเอ
เพื่่�อลดความเสี่่�ยงจากผลบวกปลอม ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�
• ห้้ามเปิิดหลอดรีีเอเจนต์์ภายหลัังการเพิ่่�มขยายจำำ�นวนเชื้้�อ
• กำำ�จััดหลอดทดลองที่่�ปนเปื้้อ� นแล้้วเสมอ โดยแช่่ในน้ำำ�� ยาฟอกขาวที่่�ใช้้ในครััวเรืือนหรืือเทีียบเท่่า ที่่�มีีความเข้้มข้้น 1-5% (ผสมกัับน้ำำ�� ตามอััตราส่่วน) เป็็นเวลา 1 ชั่่�วโมงและให้้อยู่่�ห่่างจากพื้้�นที่่�จััดเตรีียมชุุดทดสอบทุุกครั้้�ง
• ห้้ามนึ่่ง� ฆ่่าเชื้้�อหลอดรีีเอเจนต์์ภายหลัังการเพิ่่�มขยายจำำ�นวน
ศึึกษาข้้อมููลเพิ่่�มเติิมในเอกสารข้้อมููลความปลอดภััยและระเบีียบข้้อบัังคัับการกำำ�จััดทิ้้�งในประเทศ
หากท่่านมีีข้อ้ สงสััยเกี่่�ยวกัับการใช้้งานหรืือวิิธีกี ารที่่�เฉพาะเจาะจงใด ๆ โปรดเยี่่�ยมชมเว็็บไซต์์ของเราที่่� www.neogen.com
หรืือติิดต่่อตััวแทนจำำ�หน่่ายหรืือผู้้�จััดจำำ�หน่่ายของบริิษัท
ั Neogen ในท้้องถิ่่�นของท่่าน

ความรัับผิิดชอบของผู้้�ใช้้

ผู้้�ใช้้จะต้้องทำำ�ความเข้้าใจเกี่่�ยวกัับคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์และข้้อมููลเกี่่�ยวกัับผลิิตภััณฑ์์ หากต้้องการข้้อมููลเพิ่่�มเติิม สามารถเยี่่�ยมชม
เว็็บไซต์์ของเราได้้ที่่� www.neogen.com หรืือติิดต่่อตััวแทนหรืือผู้้�จััดจำำ�หน่่าย Neogen ในพื้้�นที่่�ของท่่าน
การเลืือกวิิธีที ดสอบ จะต้้องศึึกษาปััจจััยภายนอกต่่างๆ ที่่�อาจส่่งผลต่่อผลการทดสอบ เช่่น วิิธีกี ารสุ่่�มตััวอย่่าง ระเบีียบวิิธีกี ารทดสอบ
วิิธีกี ารเตรีียมตััวอย่่าง การจััดการควบคุุม และเทคนิิคของห้้องปฏิิบัติั กิ ารที่่�อาจกระทบต่่อผลการทดสอบได้้
ผู้้�ใช้้งานเป็็นผู้้�รัับผิิดชอบในการประเมิินความเหมาะสมสำำ�หรัับการเลืือกวิิธีกี ารทดสอบหรืือชนิิดผลิิตภััณฑ์์ เพื่่�อประเมิินจำำ�นวนเมทริิกซ์์ที่่�
เหมาะสมกัับความสามารถในการเหลืือรอดของจุุลินิ ทรีีย์์ เพื่่�อให้้ผู้้�ใช้้แน่่ใจว่่าวิธีิ กี ารทดสอบที่่�เลืือกนั้้�นเป็็นไปตามเกณฑ์์ของผู้้�ใช้้เอง
นอกจากนี้้� ผู้้�ใช้้จะต้้องรัับผิิดชอบในการเลืือกวิิธีกี ารทดสอบและผลลััพธ์์ที่่�ได้้ให้้เป็็นไปตามข้้อกำำ�หนดของลููกค้้าและของซััพพลายเออร์์
เช่่นเดีียวกัับวิิธีกี ารทดสอบอื่่�น ๆ ผลการทดสอบที่่�ได้้จากการใช้้ผลิิตภััณฑ์์ Neogen Food Safety ใดก็็ตาม ไม่่ได้้รับั ประกัันถึึงคุุณภาพของ
เมทริิกซ์์หรืือขั้้�นตอนที่่�ใช้้ทดสอบ
Neogen ได้้พัฒั นาชุุดน้ำำ�� ยาควบคุุมเพื่่�อทดสอบผลของส่่วนประกอบในตััวอย่่างแต่่ละประเภท โดยวิิธีี Neogen® เพื่่�อช่่วยให้้ลูกู ค้้าประเมิินวิิธีี
การสำำ�หรัับเมทริิกซ์์ต่า่ งๆ ของอาหารได้้ เมื่่�อจำำ�เป็็น ให้้ใช้้ชุดุ น้ำำ�� ยาควบคุุมเพื่่�อทดสอบผลของส่่วนประกอบในตััวอย่่างแต่่ละประเภท (MC)เพื่่�อทดสอบว่่าเมทริิกซ์์นั้้�นสามารถส่่งผลกระทบต่่อผลการทดสอบของ Neogen ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุล 2 - ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส
หรืือไม่่ ทดสอบตััวอย่่างหลาย ๆ ตััวอย่่างที่่�เป็็นตััวแทนของเมทริิกซ์์นั้้�น ๆ เช่่น ตััวอย่่างที่่�ได้้จากแหล่่งกำำ�เนิิดที่่�แตกต่่างกััน ตััวอย่่างที่่�ได้้ใน
ระหว่่างการตรวจสอบความใช้้ได้้ของวิิธีที ดสอบต่่าง ๆ เมื่่�อนำำ�วิิธีกี ารของ Neogen มาใช้้ หรืือเมื่่�อทำำ�การทดสอบเมทริิกซ์์ใหม่่หรืือที่่�ไม่่รู้้�จัก
ัหรืือเมทริิกซ์์ที่่�ผ่า่ นการเปลี่่�ยนแปลงวััตถุุดิบิ หรืือการแปรรููป
สามารถให้้คำ�ำ จำำ�กััดความของเมทริิกซ์์ได้้ว่า่ เป็็นชนิิดของผลิิตภััณฑ์์ที่่�มีคุี ณุ สมบััติที่่�ิ มาที่่�แตกต่่างกััน เช่่น องค์์ประกอบหลัักและกระบวนการ
แปรรููปที่่�ต่่างกััน ความแตกต่่างระหว่่างเมทริิกซ์์ต่า่ ง ๆ อาจจะเป็็นเพีียงผลที่่�เกิิดจากความแตกต่่างในกระบวนการแปรรููปหรืือสภาพลัักษณะ
ของเมทริิกซ์์ เช่่น ดิิบกัับผ่่านการฆ่่าเชื้้�อแบบพาสเจอไรซ์์ สดกัับแห้้ง ฯลฯเงื่่�อนไขการรัับประกััน/การชดเชยแบบจำำ�กััด

เว้้นแต่่จะระบุุอย่่างชััดแจ้้งในข้้อจำำ�กััดการรัับผิิดเกี่่�ยวกัับบรรจุุภัณั ฑ์์ของสิินค้้าแต่่ละประเภท นีีโอเจนขอสงวนสิิทธิ์์�ในการรัับประกัันใดๆ ไม่่ว่่าโดยชััดแจ้้งหรืือโดยปริิยาย ซึ่่ง� รวมถึึงแต่่ไม่่จำ�ำ กััดเพีียง การรัับประกัันใดๆ ในความสามารถในการค้้าขายได้้ (Merchantability) หรืือ การใช้้สอยสิินค้้าให้้สมประโยชน์์ตามความมุ่่�งหมายเฉพาะ (Fitness) หากสิินค้้าใดๆ ของนีีโอเจน มีีข้อ้ บกพร่่องในความปลอดภััยเกี่่�ยวกัับ
อาหาร นีีโอเจนหรืือตััวแทนจััดจำำ�หน่่ายที่่�ได้้รับั อนุุญาตจากนีีโอเจนจะเลืือกว่่าจะเปลี่่�ยนสิินค้้าทดแทนหรืือคืืนเงิินค่่าสินิ ค้้า ซึ่่ง� เป็็นการเยีียวยา
เฉพาะตััวแก่่ลูกู ค้้าหากมีีคำ�ำ ถามเพิ่่�มเติิม กรุุณาติิดต่่อตััวแทนของนีีโอเจนหรืือตััวแทนจััดจำำ�หน่่ายที่่�ได้้รับั อนุุญาตจากนีีโอเจน

3

TH(ภาษาไทย)ขอบเขตความรัับผิิดชอบของ Neogen

NEOGEN จะไม่่รับั ผิิดชอบต่่อการสููญเสีียหรืือความเสีียหายใดๆ ทั้้�งโดยตรง โดยอ้้อม ความเสีียหายจำำ�เพาะ ที่่�เกิิดขึ้้�นเนื่่�องจากการผิิด
สััญญา หรืือที่่�เป็็นผลสืืบเนื่่�อง รวมถึึงแต่่ไม่่จำ�ำ กััดเพีียงการสููญเสีียผลกำำ�ไร ความรัับผิิดชอบของทาง Neogen ในทางกฎหมายจะต้้องไม่่เกิิน
ราคาของผลิิตภััณฑ์์ที่่�เสีียหายหรืือบกพร่่องไม่่ว่า่ กรณีีใดๆ ก็็ตาม

การเก็็บรัักษาและการกำำ�จััด

เก็็บชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ไว้้ที่่�อุณุ หภููมิิ 2-8°C อย่่าแช่่แข็็ง เก็็บชุุดอุุปกรณ์์ให้้พ้น้ แสงใน
ระหว่่างการเก็็บรัักษา หลัังจากเปิิดชุุดอุุปกรณ์์แล้้ว ให้้ตรวจสอบว่่าถุุงฟอยล์์ไม่่ชำ�ำ รุุดเสีียหาย หากถุุงฟอยล์์ชำ�ำ รุุดเสีียหาย ห้้ามใช้้ผลิิตภััณฑ์์
นั้้�น หลัังจากเปิิดแล้้ว ควรเก็็บรัักษาหลอดรีีเอเจนต์์ที่่�ยังั ไม่่ได้้ใช้้ไว้้ในถุุงที่่�ซีีลปิิดซ้ำำ�� ได้้โดยมีีสารดููดความชื้้�นใส่่อยู่่�ภายใน เพื่่�อให้้รีเี อเจนต์์ที่่�
ทำำ�ไลโอฟิิไลซ์์แล้้วอยู่่�ในสภาวะคงตััว เก็็บรัักษาถุุงที่่�ซีีลปิิดซ้ำำ�� แล้้วไว้้ที่่�อุณุ หภููมิิ 2-8°C เป็็นเวลาไม่่เกิิน 60 วัันห้้ามใช้้ชุดุ ทดสอบ เชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ที่่�เลยวัันหมดอายุุแล้้ว วัันหมดอายุุและหมายเลขล็็อตจะ
แสดงไว้้บนฉลากด้้านนอกของกล่่อง หลัังใช้้งาน อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อและหลอดของชุุดทดสอบ เชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสระดัับโมเลกุุล
2 โดยวิิธีี Neogen อาจมีีสารจากเชื้้�อก่่อให้้เกิิดโรคอยู่่� เมื่่�อการทดสอบเสร็็จสมบููรณ์์แล้้ว ให้้ปฏิิบัติั ติ ามมาตรฐานอุุตสาหกรรมในปััจจุุบัน
ัสำำ�หรัับการกำำ�จััดและทิ้้�งขยะปนเปื้้อ� น ศึึกษาข้้อมููลเพิ่่�มเติิมในเอกสารข้้อมููลความปลอดภััยและระเบีียบข้้อบัังคัับการกำำ�จััดทิ้้�งในประเทศ

คำำ�แนะนำำ�การใช้้งาน

ปฏิิบัติั ติ ามคำำ�แนะนำำ�ทั้้�งหมดอย่่างละเอีียดรอบคอบ หากไม่่ปฏิิบัติั เิ ช่่นนั้้�น อาจให้้ผลที่่�ไม่่ถูกู ต้้องแม่่นยำำ�ได้้
ลดการปนเปื้้อ� นบนโต๊๊ะปฏิิบัติั งิ านและอุุปกรณ์์ในห้้องปฏิิบัติั กิ าร (ปิิเปต เครื่่�องมืือเปิิด/ปิิดฝา ฯลฯ) อย่่างสม่ำำ�� เสมอด้้วยน้ำำ�� ยาฟอกขาวที่่�ใช้้ใน
ครััวเรืือนที่่�มีีความเข้้มข้้น 1-5% (ผสมกัับน้ำำ�� ตามอััตราส่่วน) หรืือสารละลายกำำ�จััดดีีเอ็็นเอ
ผู้้�ใช้้ควรผ่่านการฝึึกอบรมคุุณสมบััติสำิ �ำ หรัับผู้้�ปฏิิบัติั งิ าน (OQ) ระบบทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ตามที่่�ระบุุในเอกสาร
“แนวทางและระเบีียบการด้้านคุุณสมบััติกิ ารติิดตั้้�ง (IQ) / คุุณสมบััติกิ ารปฏิิบัติั กิ าร (OQ) สำำ�หรัับระบบการทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุล
โดยวิิธีี Neogen”(6)ดููในส่่วน “คำำ�แนะนำำ�เฉพาะสำำ�หรัับวิิธีที่่�ผ่ี า่ นการตรวจสอบแล้้ว” สำำ�หรัับข้้อกำำ�หนดเฉพาะ:ตารางที่่� 3 สำำ�หรัับระเบีียบการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อตามมาตรฐาน AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 และ AOAC®
Performance Tested MethodSM Certificate #081501
ตารางที่่� 4 สำำ�หรัับระเบีียบการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อตามใบรัับรองของ NF Validation 3M 01/15-09/16

การเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อในตััวอย่่าง

ตารางที่่� 2, 3 หรืือ 4 แสดงคำำ�แนะนำำ�สำำ�หรัับการเพิ่่�มปริิมาณเชื้้�อในตััวอย่่างอาหาร และตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อม ผู้้�ใช้้มีหี น้้าที่่�รับั ผิิดชอบใน
การพิิสูจู น์์ยืนื ยัันระเบีียบการสุ่่�มตััวอย่่างหรืืออััตราส่่วนการเจืือจางแบบอื่่�นเพื่่�อให้้มั่่�นใจว่่าวิธีิ กี ารทดสอบนี้้�สอดคล้้องกัับเกณฑ์์ของผู้้�ใช้้งานเอง

อาหาร

1. ให้้อาหารสำำ�หรัับเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อเดมิิเฟรเซอร์์บรอท (รวมถึึงเฟอร์์ริกิ แอมโมเนีียมซิิเตรต) ปรัับสมดุุลกัับอุุณหภููมิห้ิ อ้ งปฏิิบัติั กิ ารโดยรอบ
2. ผสมอาหารเลี้้�ยงเชื้้�อเข้้ากับั ตััวอย่่างในลัักษณะปลอดเชื้้�อโดยเป็็นไปตามตารางที่่� 2, 3 หรืือ 4 สำำ�หรัับตััวอย่่างประเภทเนื้้�อสััตว์์และ
ตััวอย่่างที่่�มีีลักั ษณะเป็็นอนุุภาคขนาดเล็็กทั้้�งหมด แนะนำำ�ให้้ใช้้ถุงุ ที่่�มีีตัวั กรอง
3. ผสมให้้เข้้ากันั เป็็นอย่่างดีีด้ว้ ยวิิธีกี ารปั่่�นผสม การเขย่่า หรืือ การผสมด้้วยมืือเป็็นระยะเวลา 2 ± 0.2 นาทีี บ่่มเชื้้�อที่่�อุุณหภููมิิ 37 ± 1°C
ตามตารางที่่� 2, 3 หรืือ 4
4. สำำ�หรัับผลิิตภััณฑ์์นมดิิบ (ดููตารางที่่� 2, 3 หรืือ 4) ถ่่ายตััวอย่่างจากการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อขั้้�นต้้น 0.1 มล. ไปยัังเฟรเซอร์์บรอท 10 มล. บ่่มที่่�
อุุณหภููมิิ 37 ถึึง 1°C เป็็นเวลา 20-24 ชั่่�วโมง

ตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อม

อุุปกรณ์์เก็็บตััวอย่่างอาจเป็็นฟองน้ำำ�� ชุุบสารละลายที่่�ทำำ�ให้้เป็็นกลางเพื่่�อยัับยั้้�งฤทธิ์์�ของสารฆ่่าเชื้้�อ Neogen แนะนำำ�ให้้ใช้้ฟองน้ำำ�� เซลลููโลส
ที่่�ไม่่มีไี บโอไซด์์ สารละลายที่่�ทำำ�ให้้เป็็นกลางอาจเป็็นอาหารเลี้้�ยงเชื้้�อที่่�เป็็นกลาง Dey-Engley (D/E) หรืืออาหารเลี้้�ยงเชื้้�อเลทีีนบรอท ควรทำำ�การฆ่่าเชื้้�อในพื้้�นที่่�หลัังจากการเก็็บตััวอย่่าง
คำำ�เตืือน
น: หากคุุณเลืือกที่่�จะใช้้บัฟั เฟอร์์สำ�ำ หรัับทำำ�ให้้เป็็นกลาง (NB) ซึ่่ง� ประกอบด้้วยสารเชิิงซ้้อนของเอริิลซััลโฟเนตเป็็นสารละลายเพื่่�อ
ทำำ�ให้้ฟองน้ำำ�� ชุ่่�มชื้้�น ต้้องทำำ�การเจืือจางตััวอย่่างหลัังเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อแล้้วในอััตราส่่วน 1:2 (ตััวอย่่าง 1 ส่่วนในอาหารเหลวเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อ
ที่่�ฆ่่าเชื้้�อแล้้ว 1 ส่่วน) ก่่อนการทดสอบเพื่่�อที่่�จะลดความเสี่่�ยงอัันเกี่่�ยวข้้องกัับผลลบปลอมซึ่่ง� นำำ�ไปสู่่�การปล่่อยผลิิตภััณฑ์์ที่่�ปนเปื้้อ� นออกสู่่�
ภายนอกได้้ อีีกหนึ่่ง� ตััวเลืือกคืือถ่่ายบััฟเฟอร์์สำ�ำ หรัับทำำ�ให้้เป็็นกลางที่่�มีีการเพิ่่�มเชื้้�อปริิมาณ 10 ไมโครลิิตรเข้้าไปยัังหลอดสารละลายไลซีีส
Neogenขนาดพื้้�นที่่�เก็็บตััวอย่่างที่่�แนะนำำ�เพื่่�อตรวจสอบยืืนยัันการมีีอยู่่�หรืือการไม่่มีอี ยู่่�ของเชื้้�อก่่อโรคบนพื้้�นผิิวคืือขนาดอย่่างน้้อย 100 cm2 (10 ซม.
x 10 ซม. หรืือ 4” x 4”) เมื่่�อทำำ�การเก็็บตััวอย่่างด้้วยฟองน้ำำ�� ให้้ครอบคลุุมพื้้�นที่่�โดยรวมทั้้�งสองทิิศทาง (กล่่าวคืือ จากซ้้ายไปขวา และจาก
บนลงล่่าง) หรืือเก็็บตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อมตามขั้้�นตอนการเก็็บตััวอย่่างปััจจุุบันั ของคุุณ หรืือตามมาตรฐาน FDA BAM(1), USDA FSIS
MLG(2) หรืือแนวทางตามมาตรฐาน ISO 18593(7)1. ให้้อาหารสำำ�หรัับเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อเดมิิเฟรเซอร์์บรอท (รวมถึึงเฟอร์์ริกิ แอมโมเนีียมซิิเตรต) ปรัับสมดุุลกัับอุุณหภููมิห้ิ อ้ งปฏิิบัติั กิ ารโดยรอบ
2. ผสมอาหารเลี้้�ยงเชื้้�อเข้้ากับั ตััวอย่่างในลัักษณะปลอดเชื้้�อโดยเป็็นไปตามตารางที่่� 2, 3 หรืือ 4
3. ผสมให้้เข้้ากันั เป็็นอย่่างดีีด้ว้ ยวิิธีกี ารปั่่�นผสม การเขย่่า หรืือ การผสมด้้วยมืือเป็็นระยะเวลา 2 ± 0.2 นาทีี บ่่มเชื้้�อที่่�อุุณหภููมิิ 37 ± 1°C
เป็็นเวลา 24-30 ชั่่�วโมงตามตารางที่่� 2, 3 หรืือ 44

TH(ภาษาไทย)ตาราง 2: ระเบีียบการของอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อทั่่�วไปที่่� 37 ± 1 °C โดยใช้้เดมิิเฟรเซอร์์บรอทและเฟรเซอร์์บรอทตามที่่�จำำ�เป็็น
เมทริิกซ์์ตััวอย่่าง
เนื้้�อสััตว์์ สััตว์์ปีีก
อาหารทะเล
และปลาที่่�ผ่่าน
ความร้้อน ปรุุงสุุก
ผลิิตภััณฑ์์นมที่่�ผ่่าน
ความร้้อน / พาสเจ
อร์์ไรส์์

ขนาดตััวอย่่าง

ปริิมาตรอา
หารเหลว
เลี้้�ยงเชื้้�อ
(มล.)เวลาการเพิ่่�ม
จำำ�นวนเชื้้�อ
(ชั่่�วโมง)

25 ก.

225

24-30

ฟองน้ำำ�� 1 ชิ้้�น

100 หรืือ
225

24-30

ไม้้สวอปป้้าย
เก็็บตััวอย่่าง 1
อััน

10

24-30

25 ก.

475

28-32

ผลผลิิตและผััก
อาหารหลาย
องค์์ประกอบ
ตััวอย่่างจาก
สิ่่�งแวดล้้อม(a)เนื้้�อสััตว์์ดิิบ สััตว์์ปีีก
อาหารทะเล เนื้้�อปลา

การเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อขั้้�นต้้น
(เดมิิเฟรเซอร์์บรอทเบส)(ก)เมทริิกซ์์ตัวั อย่่าง

ผลิิตภััณฑ์์นมดิิบ

การเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อที่่�สอง
(เฟรเซอร์์บรอท)(ก)ขนาดตััวอย่่าง

ปริิมาตร
อาหารเหลว
เลี้้�ยงเชื้้�อ
(มล.)เวลาการเพิ่่�ม
จำำ�นวนเชื้้�อ
(ชั่่�วโมง)ขนาดตััวอย่่าง

25 ก.

225

20-24

ถ่่ายเฟรเซอร์์
บรอท 0.1 มล.
ไปยััง 10 มลปริิมาตรการ
อุุณหภููมิใิ นั อย่่าง(ข)เวลาการเพิ่่�ม วิิเคราะห์์ตัว
การเพิ่่�ม
จำำ�นวนเชื้้�อ
จำำ�นวนเชื้้�อ
(ชั่่�วโมง)(°C)
37 ± 1

20-24

10 ไมโครลิิตร(ก) เดมิิเฟรเซอร์์และเฟรเซอร์์บรอทควรเสริิมด้้วยซััพพลีีเม้้นท์์สำ�ำ หรัับเฟรเซอร์์บรอท (เฟอร์์ริกิ แอมโมเนีียมซิิเตรต) ในระหว่่างการเพิ่่�ม
จำำ�นวนเชื้้�อปฐมภููมิหิ รืือทุุติยิ ภููมิิ(ข) ปริิมาตรตััวอย่่างที่่�นำำ�ไปใส่่ไว้้ในหลอดสารละลายไลซิิส Neogen โปรดดููในขั้้�นตอนที่่� 4.6 ในหััวข้้อไลซิิส

คำำ�แนะนำำ�เฉพาะสำำ�หรัับวิิธีที่่�ผ่ี า่ นการตรวจสอบแล้้ว
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

จากโครงการ OMASM และ PTMSM ของสถาบัันวิิจัยั AOAC Research Institute พบว่่าชุดุ ทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับ
โมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen เป็็นวิิธีกี ารที่่�มีีประสิิทธิิภาพในการตรวจหาเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส เมทริิกซ์์ที่่�ได้้รับั การทดสอบใน
การศึึกษาดัังกล่่าวแสดงไว้้ในตารางที่่� 3

5

TH(ภาษาไทย)ตารางที่่� 3 ระเบีียบการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อโดยใช้้เดมิิเฟรเซอร์์บรอท ที่่� 37 ± 1 °C อิิงตามใบรัับรอง AOAC OMASM 2016.08 และ PTMSM
หมายเลข 081501(ก)เมทริิกซ์์ตัวั อย่่าง

ขนาดตััวอย่่าง

ปริิมาตรอาหารเหลวเลี้้�ยงเชื้้�อ
(มล.)เวลาการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อ
(ชั่่�วโมง)ฮอทดอกเนื้้�อ เควโซเฟรสโก ไอศกรีีม
วานิิลลา คอทเทจชีีสไขมััน 4% นมสดช็็อกโกแลต 3% ผัักกาดโรเมน ผัักโขม
สดบรรจุุถุงุ แซลมอนรมควัันเย็็น

25 ก.

225

24-30

25 ก.

475

28-32

ไก่่งวงสำำ�เร็็จรููป

125 ก.

1125

24-30

แคนตาลููป(ข)เมลอนทั้้�งลููก

ปริิมาณมากพอที่่�จะ
ทำำ�ให้้เมลอนลอย

26-30

เหล็็กสแตนเลส

ฟองน้�ำ 1 ชิน
้

225

24-30

คอนกรีีตแบบปิิดผนึึก

ฟองน้�ำ 1 ชิน
้

100

24-30

ไม้้สวอปป้้ายเก็็บตััวอย่่าง 1 อััน

10

24-30

ตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อม

ิเนื้้�อไก่่ดิบ

พลาสติิก(ค)ตััวอย่่างทั้้�งหมดในการตรวจสอบความถููกต้้องของ AOAC จะต้้องถููกผสมให้้เป็็นเนื้้�อเดีียวกัันโดยการเขย่่า เว้้นแต่่จะระบุุไว้้เป็็นอย่่างอื่่�น(ก)		เดมิิเฟรเซอร์์และเฟรเซอร์์บรอทควรเสริิมด้้วยซััพพลีีเม้้นท์์สำ�ำ หรัับเฟรเซอร์์บรอท (เฟอร์์ริกิ แอมโมเนีียมซิิเตรต) ในระหว่่างการเพิ่่�ม
จำำ�นวนเชื้้�อขั้้�นต้้นหรืือขั้้�นที่่�สอง(ข)	ทำำ�ให้้ตัวั อย่่างเป็็นเนื้้�อเดีียวกัันด้้วยการผสมด้้วยมืือ(ค)	ทำำ�ให้้ตัวั อย่่างเป็็นเนื้้�อเดีียวกัันด้้วยการกวนNF VALIDATION โดย AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/enหากต้้องการข้้อมููลเพิ่่�มเติิมเกี่่�ยวกัับการสิ้้�นสุุดการบัังคัับใช้้ของผลจากการตรวจสอบความใช้้ได้้ของวิิธีกี าร โปรดอ่่านเอกสารรัับรองของNF VALIDATION ที่่�พร้้อมให้้ใช้้งานได้้ตามเว็็บไซต์์ที่่�ระบุุไว้้ข้า้ งต้้น
วิิธีกี ารที่่�ได้้รับั การรัับรองมาตรฐานของ NF VALIDATION ตามมาตรฐาน ISO 16140-2(6) เมื่่�อเปรีียบเทีียบกัับ ISO 11290(3)ขอบเขตการตรวจสอบ: อาหารมนุุษย์์และตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อมทั้้�งหมด (ไม่่รวมตััวอย่่างการผลิิตขั้้�นต้้น)ขอบเขตการตรวจสอบ
การเตรีียมตััวอย่่าง:ง เตรีียมตััวอย่่างตาม EN ISO 11290-1(3) และ EN ISO 6887(8)เวอร์์ชันั ซอฟต์์แวร์์: ดููใบรัับรอง

6

TH(ภาษาไทย)ตารางที่่� 4: ระเบีียบการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อตามการรัับรองของ NF VALIDATION ตามวิิธีี 3M 01/15-09/16 และ 37 ± 1°C โดยใช้้
เดมิิเฟรเซอร์์บรอทและเฟรเซอร์์บรอทตามที่่�จำำ�เป็็น
ระเบีียบการทั่่�วไป

ขนาดตััวอย่่าง

ตััวอย่่างอาหาร
ทั้้�งหมด
(ยกเว้้นเนื้้�อสััตว์์ดิบ
ิอาหารทะเลดิิบ
และผลิิตภััณฑ์์
นมดิิบ

25 ก.

ตััวอย่่างจาก
สิ่่�งแวดล้้อม

ปริิมาตรอาหาร
เหลวเลี้้�ยงเชื้้�อ
(มล.)อุุณหภููมิใิ นการ
เพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อ
(±1°C)

225

37

เวลาการเพิ่่�ม
ปริิมาตรการ
จำำ�นวนเชื้้�อ วิิเคราะห์์ตัวั อย่่าง
(ชั่่�วโมง)(ไมโครลิิตร)(ก)

24-30

20 ไมโครลิิตร

จุุดหยุุดชะงััก
ที่่�ยอมรัับ
• เดมิิเฟรเซอร์์
บรอทสููงสุุด
72 ชั่่�วโมง
• ไลเซท ที่่� -20°C• ไลเซท ที่่� 4°C สููงสุุด
ถึึง 72 ชั่่�วโมง

25 ก., ไม้้สวอปป้้าย
เก็็บตััวอย่่าง 1 อัันหรืือการเช็็ดถูู 1 ครั้้�ง

การเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อขั้้�นต้้น(เดมิิเฟรเซอร์์บรอท)(ข)ปริิมาตร
อุุณหภููมิิ
อาหารเวลาการเพิ่่�ม
ขนาดในการเพิ่่�ม
เหลวจำำ�นวนเชื้้�อ
ตััวอย่่าง
จำำ�นวนเชื้้�อ
เลี้้�ยงเชื้้�อ
(ชั่่�วโมง)(±1°C)(มล.)การเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อขั้้�นที่่�สอง(เดมิิเฟรเซอร์์บรอท)(ข)อุุณหภููมิิ
ระเบีียบ
ในกาเวลาการเพิ่่�ม ปริิมาตรก จุุดหยุุดชะงััก
ขนาดตัั
การเฉพาะ
ที่่�ยอมรัับ
รเพิ่่�มจำำ�น จำำ�นวนเชื้้�อ ารวิิเคราะห์์
วอย่่าง
(ค)วนเชื้้�อ
(ชั่่�วโมง)ตััวอย่่าง
(±1°C)• เฟรเซอร์์
บรอทสููงสุุด
72 ชั่่�วโมง
ยกเว้้นเนื้้�อ
ถ่่ายเฟรเซอร์์
สััตว์์ดิบิ อาหาร
• ไลเซท ที่่�
บรอท 0.1
10ทะเลดิิบ
-20°C
25 ก.
225
37
20-24
37
20-24
มล.
ไมโครลิิตร
และผลิิตภััณฑ์์
• ไลเซท
ไปยััง 10 มลนมดิิบ
ที่่� 4°Cสููงสุุดถึึง
72 ชั่่�วโมง(ก) ปริิมาตรตััวอย่่างที่่�นำำ�ไปใส่่ไว้้ในหลอดสารละลายไลซิิส Neogen โปรดดููในขั้้�นตอนที่่� 4.6 ในหััวข้้อไลซิิส(ข) เดมิิเฟรเซอร์์และเฟรเซอร์์บรอทควรเสริิมด้้วยซััพพลีีเม้้นท์์สำ�ำ หรัับเฟรเซอร์์บรอท (เฟอร์์ริกิ แอมโมเนีียมซิิเตรต) ในระหว่่างการเพิ่่�ม
จำำ�นวนเชื้้�อขั้้�นต้้นหรืือขั้้�นที่่�สอง(ค) ปริิมาตรตััวอย่่างที่่�นำำ�ไปใส่่ไว้้ในหลอดสารละลายไลซิิส Neogen โปรดดููในขั้้�นตอนที่่� 4.6 ในหััวข้้อไลซิิส
หมายเหตุุ: ตััวอย่่างที่่�มีีปริิมาณมากกว่่า 25 กรััมไม่่ได้้นำ�ำ มาทดสอบในการศึึกษาของ NF VALIDATION
การเตรีียมถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen®
1. ชุุบผ้้าในน้ำำ�� ยาฟอกขาว 1-5% (ผสมกัับน้ำำ�� ตามอััตราส่่วน) และเช็็ดถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี
Neogen®
2. ใช้้น้ำ��ำ ล้้างถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen นี้้�
3. ใช้้กระดาษเช็็ดมืือแบบใช้้แล้้วทิ้้�งเช็็ดถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ให้้แห้้ง
4. ตรวจสอบให้้แน่่ใจว่่าถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen แห้้งสนิิทก่่อนใช้้งาน
การเตรีียมชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen®
ชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® ไว้้บนโต๊๊ะของห้้องปฏิิบัติั กิ าร ใช้้ชิลิ บล็็อคในอุุณหภููมิห้ิ อ้ งปฏิิบัติั กิ ารโดย
รอบ (20-25°C)
การเตรีียมฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen®
วางฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen® ในเครื่่�องทำำ�ความร้้อนบล็็อกคู่่�แบบแห้้ง เปิิดเครื่่�องทำำ�ความร้้อนบล็็อค
แบบแห้้งและตั้้�งอุุณหภููมิเิ พื่่�อให้้ฮีที บล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen มีีอุณุ หภููมิเิ พิ่่�มขึ้้�นจนถึึง 100 ± 1°C
หมายเหตุุ: ให้้ฮีที บล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen มีีอุณุ หภููมิติ ามที่่�กำำ�หนดโดยทิ้้�งไว้้ประมาณ 30 นาทีี ทั้้�งนี้้�
ขึ้้�นอยู่่�กัับการทำำ�งานของเครื่่�องทำำ�ความร้้อน ใช้้เทอร์์โมมิิเตอร์์ที่่�ได้้รับั การสอบเทีียบอย่่างเหมาะสม (เช่่น เทอร์์โมมิิเตอร์์แบบจุ่่�มบางส่่วน
เทอร์์โมมิิเตอร์์แบบดิิจิติ อล ที่่�ไม่่ใช่่เทอร์์โมมิิเตอร์์แบบจุ่่�มทั้้�งหมด) วางไว้้ในบริิเวณที่่�กำำ�หนด ตรวจสอบให้้อุณุ หภููมิขิ องฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่
หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen อยู่่�ที่่� 100 ± 1°C
การเตรีียมเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen®
1. เริ่่�มต้้นการใช้้งานซอฟต์์แวร์์ระบบทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® แล้้วลงชื่่�อเข้้าสู่่�ระบบ ติิดต่่อตััวแทนของ
Neogen Food Safety ของคุุณเพื่่�อให้้แน่่ใจว่่าคุณุ มีีซอฟต์์แวร์์เวอร์์ชันั ที่่�อััปเดตล่่าสุด
ุ
7

TH

(ภาษาไทย)2. เปิิดเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen
3. สร้้างหรืือแก้้ไขชุุดการทดสอบที่่�มีีข้อ้ มููลสำำ�หรัับแต่่ละตััวอย่่าง ดููรายละเอีียดเพิ่่�มเติิมในคู่่�มืือการใช้้งานระบบทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับ
โมเลกุุลโดยวิิธีี Neogenหมายเหตุุ: ต้้องรอให้้เครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen มีีสถานะพร้้อมใช้้ ก่่อนที่่�จะใส่่ถาดใส่่หลอดทดสอบ
เข้้าเครื่่�องทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ขั้้�นตอนของการทำำ�ความร้้อนนี้้�ใช้้เวลาประมาณ 20 นาทีี และบ่่งชี้้�ด้้วยไฟสีีส้ม้ บนแถบ
บอกสถานะของเครื่่�อง เมื่่�อเครื่่�องมืือพร้้อมที่่�จะเริ่่�มต้้นการทำำ�งาน แถบบอกสถานะดัังกล่่าวจะเปลี่่�ยนเป็็นสีีเขีียว
การไลซีีส
ใช้้ไขควงไขหรืือไม้้พายถอดด้้านล่่างของที่่�วางสารละลายไลซีีส Neogen ออก ก่่อนวางลงบนฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล
โดยวิิธีี Neogen

1. รอให้้หลอดสารละลายไลซีีส (สารละลายไลซีีส Neogen) อุ่่�นขึ้้�นโดยตั้้�งที่่�วางที่่�ระดัับอุุณหภููมิห้ิ อ้ ง (20-25°C) นานข้้ามคืืน (16-18
ชั่่�วโมง) ทางเลืือกอื่่�นๆ นอกเหนืือจากการวางหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ไว้้ในอุุณหภููมิห้ิ อ้ งได้้แก่่ การวางไว้้บนโต๊๊ะของห้้อง
ปฏิิบัติั กิ ารอย่่างน้้อย 2 ชั่่�วโมง การนำำ�หลอดสารละลายไลซีีส Neogen ไปบ่่มในที่่�ตู้้�บ่่มเชื้้�อที่่�อุุณหภููมิิ 37 ± 1°C เป็็นเวลา 1 ชั่่�วโมง หรืือ
วางหลอดสารละลายไลซีีสบนเครื่่�องทำำ�ความร้้อนแบบแห้้งเป็็นเวลา 30 วิินาทีีที่่�อุณุ หภููมิิ 100°Cั ดำำ�เนิินการต่่อในขั้้�นถััดไปภายใน 4 ชั่่�วโมง
2. พลิิกหลอดสารละลายไลซีีสที่่�ปิิดฝาอยู่่� เพื่่�อผสมให้้เข้้ากัน
3. นำำ�อาหารเหลวเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อออกจากตู้้�บ่่มเชื้้�อ
4. ตััวอย่่างแต่่ละชนิิดและตััวอย่่างชุุดควบคุุมผลลบ (NC) (อาหารเลี้้�ยงเชื้้�อที่่�ปลอดเชื้้�อ) จะต้้องใช้้หลอดสารละลายไลซีีส
Neogen หนึ่่ง� หลอดต่่อหนึ่่ง� ตััวอย่่าง
4.1 แถวของหลอดสารละลายไลซีีส Neogen สามารถตััดออกเพื่่�อให้้มีจำี �ำ นวนหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ตามที่่�ต้้องการได้้
เลืือกจำำ�นวนหลอดสารละลายไลซีีส Neogen แต่่ละหลอดหรืือแถวที่่�มีี 8 หลอด ตามความจำำ�เป็็น วางหลอดสารละลายไลซีีส
Neogen ลงในที่่�วางที่่�ว่่างอยู่่�
4.2 เพื่่�อหลีีกเลี่่�ยงการปนเปื้้อ� นข้้าม ให้้เปิิดฝาของหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ทั้้�งแถวในครั้้�งเดีียว และใช้้ปิเิ ปตทิิปอัันใหม่่สำ�ำ หรัับ
ถ่่ายตััวอย่่างในแต่่ละขั้้�นตอน
4.3	ถ่่ายตััวอย่่างที่่�เพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อแล้้วไปยัังหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ตามคำำ�อธิิบายด้้านล่่างนี้้�:ถ่่ายตััวอย่่างที่่�เพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อแต่่ละตััวอย่่างลงไปในหลอดสารละลายไลซีีส Neogen แต่่ละหลอด เป็็นอัันดัับแรก ถ่่าย NC เป็็น
อัันดัับสุุดท้้าย
4.4 ใช้้อุปุ กรณ์์เปิิด/ปิิดฝาหลอดสารละลายไลซีีสโดยวิิธีี Neogen® ในการเปิิดฝาหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ทีีละแถว
4.5	ทิ้้�งฝาหลอดสารละลายไลซีีส Neogen – หากจะเก็็บไลเซตเอาไว้้เพื่่�อทดสอบซ้ำำ�� ให้้วางฝาในภาชนะที่่�สะอาดเพื่่�อนำำ�กลัับมาใช้้ซ้ำ��ำ
4.5.1 หากต้้องการดููข้อ้ มููลเกี่่�ยวกัับการดำำ�เนิินการกัับไลเซตที่่�เก็็บไว้้ โปรดดููภาคผนวก A
4.6	ถ่่ายตััวอย่่างในปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร ไปยัังหลอดสารละลายไลซิิส Neogen เว้้นแต่่ระบุุไว้้เป็็นอย่่างอื่่�นในตารางแสดงระเบีียบ
การจากตางรางที่่� 2, 3, หรืือ 4 (เช่่น ผลิิตภััณฑ์์นมดิิบ หรืือเมื่่�อใช้้ตัวั อย่่างสิ่่�งแวดล้้อมที่่�มีีการทำำ�ให้้เป็็นกลางโดยใช้้บัฟั เฟอร์์ 10ไมโครลิิตร)20 µl

5.	ทำำ�ซ้ำำ�� ขั้้�นตอน 4.4 ถึึง 4.6 จนกระทั่่�งเติิมตััวอย่่างแต่่ละตััวอย่่างลงในหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ในแถวดัังกล่่าวเสร็็จสิ้้�น
6. เมื่่�อถ่่ายตััวอย่่างทั้้�งหมดเสร็็จแล้้ว ให้้ถ่า่ ย NC (อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อที่่�ปลอดเชื้้�อ เช่่น เดมิิเฟรเซอร์์บรอท) ปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร ลงในหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ห้้ามใช้้น้ำ��ำ เป็็น NC
7. ตรวจสอบว่่าอุณุ หภููมิขิ อง ของฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen อยู่่�ที่่� 100 ± 1°C

8TH(ภาษาไทย)8. วางที่่�วางหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ที่่�ไม่่มีฝี าปิิด ลงในฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen และเพิ่่�ม
ความร้้อนเป็็นเวลา 15 ± 1 นาทีี ระหว่่างการการให้้ความร้้อน สารละลายในหลอดทดสอบไลซีีส Neogen จะเปลี่่�ยนจากสีีชมพูู (เย็็น)เป็็นเหลืือง (ร้้อน)8.1	ตััวอย่่างซึ่่ง� ไม่่ได้้รับั การอุ่่�นร้้อนอย่่างเหมาะสมในระหว่่างขั้้�นตอนการไลซีีสของชุุดทดสอบ อาจถืือว่่าเป็็นสารที่่�อาจมีีอันั ตรายทาง
ชีีวภาพ และไม่่ควรใส่่เข้้าไปในเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen
9.	นำำ�ที่่�วางหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ที่่�ไม่่ได้้ปิดิ ฝาออกจากฮีีทบล็็อคและปล่่อยให้้เย็็นลงในชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบ
ระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen อย่่างน้้อย 5 นาทีีแต่่ไม่่เกิิน 10 นาทีี การใช้้งานชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี
Neogen ให้้วางไว้้ที่่�อุณุ หภููมิห้ิ อ้ ง โดยควรวางลงบนโต๊๊ะปฏิิบัติั งิ านของห้้องปฏิิบัติั กิ ารโดยตรง เมื่่�อเย็็นลงแล้้ว สารละลายไลซีีสก็็จะ
เปลี่่�ยนกลัับเป็็นสีีชมพูู
10.	นำำ�เอาที่่�วางหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ออกจาก ชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

การเพิ่่�มขยาย
1. หลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen หนึ่่ง� หลอดสำำ�หรัับตััวอย่่างแต่่ละชนิิดและ
NC
1.1 สามารถตััดแถวของหลอดสำำ�หรัับตััวอย่่าง เพื่่�อให้้มีจำี �ำ นวนหลอดตามที่่�ต้้องการได้้ เลืือกจำำ�นวนหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ
เชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen แต่่ละหลอด หรืือแถวที่่�มีี 8 หลอด ตามต้้องการ
1.2 วางหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ลงในที่่�วางที่่�ยัังว่่างอยู่่�
1.3 หลีีกเลี่่�ยงการรบกวนเม็็ดรีีเอเจนต์์ที่่�ก้น้ หลอด
2. เลืือกหลอด Neogen รีีเอเจนต์์คอนโทรลหนึ่่ง� หลอดแล้้ววางลงในที่่�วาง
3. เพื่่�อหลีีกเลี่่�ยงการปนเปื้้อ� นข้้าม ให้้เปิิดฝาของหลอดรีีเอเจนต์์ของ Neogen ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุล 2 - ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ทั้้�ง
แถวในครั้้�งเดีียว และใช้้ปิเิ ปตทิิปอัันใหม่่สำ�ำ หรัับถ่่ายตััวอย่่างในแต่่ละขั้้�นตอน
4.	ถ่่ายไลเซตไปยัังหลอดรีีเอเจนต์์และหลอด Neogen รีีเอเจนต์์คอนโทรลของชุุดทดสอบเชื้้�อ ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2โดยวิิธีี Neogen ตามคำำ�อธิิบายด้้านล่่าง:ถ่่ายไลเซตของแต่่ละตััวอย่่างไปยัังหลอดรีีเอเจ้้นท์์ของ Neogen ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุล 2 - ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส แต่่ละ
ชุุดก่่อน แล้้วจึึงถ่่าย NC เติิมสารละลายลงในหลอด Neogen รีีเอเจ้้นท์์คอนโทรลเป็็น ลำำ�ดัับสุุดท้้าย
5. ใช้้เครื่่�องมืือเปิิด/ปิิดฝารีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® ในการเปิิดหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบเชื้้�อ
ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ทีีละแถวรีีเอเจนต์์ ทิ้้�งฝาปิิด
5.1 ถ่่ายไลเซตของตััวอย่่างปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร จากด้้านบน ½ ของของเหลว (หลีีกเลี่่�ยงตะกอน) ในหลอดสารละลายไลซีีส
Neogen เข้้าไปในหลอดรีีเอเจนต์์ของ Neogen ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุล 2 - ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ปล่่อยสารละลายด้้าน
ข้้างหลอด เพื่่�อหลีีกเลี่่�ยงการรบกวนเม็็ดรีีเอเจนต์์ที่่�ก้น้ หลอด ผสมโดยใช้้ปิเิ ปต ดููดขึ้้�นและลงเบาๆ 5 ครั้้�ง
5.2	ทำำ�ซ้ำำ�� ขั้้�นตอนที่่� 5.1 จนกว่่าจะเติิมแต่่ละไลเซตตััวอย่่างลงไปในหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ เชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสระดัับ
โมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ในแถวนั้้�น
5.3	ปิิดหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ด้้วยฝาอีีกอัันที่่�ให้้มา และใช้้ด้า้ นมนของเครื่่�องมืือเปิิด/ปิิดฝาหลอดทดสอบ โดยวิิธีี Neogen กดซ้ำำ�� ไปซ้ำำ�� มาเพื่่�อให้้แน่่ใจว่่าฝาปิิดสนิิท
5.4	ทำำ�ซ้ำำ�� ขั้้�นตอน 5.1 ถึึง 5.3 ตามความจำำ�เป็็นสำำ�หรัับจำำ�นวนตััวอย่่างที่่�จะทดสอบ
5.5 เมื่่�อถ่่ายไลเซตตััวอย่่างทั้้�งหมดแล้้ว ให้้ทำ�ำ ซ้ำำ�� ขั้้�นตอนที่่� 5.1 เพื่่�อถ่่ายไลเซต NC ปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร เข้้าไปในหลอดรีีเอเจนต์์
Neogen ชุุดทดสอบเชื้้�อระดัับโมเลกุุล 2 - ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส
5.6	ถ่่ายไลเซต
ไลเซต NC ปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร เข้้าไปในหลอด Neogen รีีเอเจนท์์คอนโทรล ปล่่อยสารละลายด้้านข้้างหลอด เพื่่�อหลีีกเลี่่�ยง
การรบกวนเม็็ดรีีเอเจนต์์ที่่�ก้น้ หลอด ผสมโดยใช้้ปิเิ ปต ดููดขึ้้�นและลงเบาๆ 5 ครั้้�ง
6. บรรจุุหลอดที่่�ปิิดฝาแล้้วลงในถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ที่่�สะอาดและขจััดการปนเปื้้อ� นแล้้ว ปิิดและล็็อคฝาถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen

9TH(ภาษาไทย)20 µL

7.	พิิจารณาทบทวนและยืืนยัันการดำำ�เนิินการที่่�กำำ�หนดค่่าไว้้ในซอฟต์์แวร์์ระบบทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen
8.	คลิิกปุ่่�ม Start ในซอฟต์์แวร์์ แล้้วเลืือกเครื่่�องมืือที่่�จะใช้้ทดสอบ ฝาปิิดของอุุปกรณ์์ที่่�เลืือกจะเปิิดโดยอััตโนมััติิ
9. ใส่่ถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ในเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดย
วิิธีี Neogen แล้้วปิิดฝาเพื่่�อเริ่่�มต้้นการทดสอบ ระบบจะให้้ผลการทดสอบภายในเวลา 75 นาทีี
แม้้ว่า่ ผลที่่�เป็็นบวกอาจจะตรวจวััดได้้เร็็วกว่่านั้้�นก็็ตาม
10. หลัังจากการทดสอบเสร็็จสมบููรณ์์แล้้ว ให้้นำ�ำ ถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ออกจากเครื่่�อง
มืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen แล้้วกำำ�จััดหลอดเหล่่านั้้�นทิ้้�งโดยแช่่ในน้ำำ�� ยาฟอกขาวที่่�ใช้้ในครััวเรืือน หรืือ
เทีียบเท่่า ที่่�มีีความเข้้มข้้น 1-5% (ในน้ำำ�� ที่่�มีีปริิมาตรเท่่ากันั ) นาน 1 ชั่่�วโมง และปฏิิบัติั ใิ ห้้ห่า่ งจากพื้้�นที่่�จััดเตรีียมชุุดทดสอบ
ข้้อสัังเกต:เกต เพื่่�อลดความเสี่่�ยงในการได้้ผลบวกปลอมอัันเนื่่�องมาจากการปนเปื้้อ� นข้้าม ห้้ามเปิิดหลอดรีีเอเจนต์์ซึ่ง่� บรรจุุ DNA ที่่�เพิ่่�มขยาย
แล้้ว ซึ่่ง� รวมถึึงหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen, หลอด Neogen รีีเอเจ้้นต์์
คอนโทรล และหลอดเมทริิกซ์์คอนโทรล Neogen กำำ�จััดทิ้้�งหลอดรีีเอเจนต์์ที่่�ปิดิ ฝาแล้้วทุุกครั้้�งโดยล้้างในสารซัักฟอกในครััวเรืือน
ความเข้้มข้้น 1-5% (ต่่อปริิมาตรน้ำำ�� ) เป็็นเวลา 1 ชั่่�วโมง และห่่างจากบริิเวณเตรีียมการทดสอบ

ผลการทดสอบและการแปลความหมาย

อััลกอริิธึึมจะแปลความหมายเส้้นโค้้งของแสงที่่�ส่่งออกมาอัันเป็็นผลมาจากการตรวจพบการเพิ่่�มขยายของกรดนิิวคลีีอิกิ ซอฟต์์แวร์์จะวิิเคราะห์์
ผลการทดสอบนี้้�โดยอััตโนมััติแิ ละจะมีีการเข้้ารหััสสีีตามผลที่่�ได้้ดังั กล่่าว ผลการทดสอบที่่�ให้้ค่า่ เป็็นบวกหรืือลบจะพิิจารณาตััดสิินโดย
การวิิเคราะห์์พารามิิเตอร์์ของเส้้นโค้้งที่่�มีีลักั ษณะเฉพาะตััวจำำ�นวนหนึ่่ง� ผลการทดสอบเบื้้�องต้้นที่่�เป็็นบวกจะได้้รับั การรายงานในทัันทีี
ขณะที่่�ผลการทดสอบที่่�เป็็นลบและผลที่่�น่่าสงสััยจะแสดงผลภายหลัังการทดสอบเสร็็จสมบููรณ์์แล้้ว
ตััวอย่่างที่่�ให้้ผลบวกเบื้้�องต้้นควรได้้รับั การยืืนยัันตามขั้้�นตอนการปฏิิบัติั กิ ารตามมาตรฐานทางห้้องปฏิิบัติั กิ าร หรืือโดยปฏิิบัติั ติ ามการยืืนยััน
วิิธีกี ารอ้้างอิิงที่่�เหมาะสม(1,2,3) ที่่�เริ่่�มต้้นด้้วยการถ่่ายอาหารเลี้้�ยงเชื้้�อขั้้�นต้้นไปยัังอาหารเลี้้�ยงเชื้้�อเหลวขั้้�นที่่�สอง (หากมีี) ตามด้้วยการเลี้้�ยงเชื้้�อ
บนจานอาหารเลี้้�ยงเชื้้�อและการยืืนยัันการแยกเชื้้�อโดยใช้้วิธีิ กี ารทางชีีวเคมีีและและเซรุ่่�มวิิทยาที่่�เหมาะสม
หมายเหตุุ: ตััวอย่่างที่่�ให้้ผลเป็็นลบค่่าแสงที่่�อ่่านได้้ก็ไ็ ม่่ได้้มีค่ี า่ เป็็นศููนย์์ เนื่่�องจากระบบและรีีเอเจนต์์ในการเพิ่่�มขยายสำำ�หรัับชุุดทดสอบเชื้้�อ
ลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen จะมีี “ค่่าพื้้�นหลััง” ในหน่่วยแสงสััมพััทธ์์ (RLU)
ในบางครั้้�งอาจพบว่่าแสงที่่�ได้้จากปฏิิกิริิ ยิ านั้้�นมีีลักั ษณะผิิดปกติิ อััลกอริิธึึมดัังกล่่าวจะถููกตีีความออกมาว่่าเป็็น “ผลที่่�น่่าสงสััย” บริิษัท
ั
Neogen แนะนำำ�ให้้ผู้้�ใช้้ทำ�ำ การทดสอบซ้ำำ�� สำำ�หรัับตััวอย่่างที่่�ให้้ผลที่่�น่่าสงสััย หากผลการทดสอบยัังคงเป็็นที่่�น่่าสงสััย ให้้ทำ�ำ การทดสอบเพื่่�อ
ยืืนยััน โดยใช้้วิธีิ กี ารตามที่่�ต้้องการหรืือตามที่่�ระบุุโดยหน่่วยงานกฎระเบีียบในประเทศ
ตารางที่่� 5: สััญลัักษณ์์ผลลััพธ์์สำ�ำ หรัับตััวอย่่างและการตีีความตามที่่�กำำ�หนดโดยซอฟต์์แวร์์ระบบทดสอบเชื้้�อก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี
Neogenประเภทของหลุุมทด
ทดสอบสััญลัักษณ์์ผลการตรวจ
ที่่�ได้้จากหลุุมทดสอบ

ผลการตรวจ

การแปลผลการตรวจวิิเคราะห์์

ตััวอย่่าง

บวกตััวอย่่างนี้้�ในเบื้้�องต้้นให้้ผลเป็็นบวกสำำ�หรัับเชื้้�อก่่อโรคเป้้าหมาย

ตััวอย่่าง

ลบตััวอย่่างนี้้�ให้้ผลเป็็นลบสำำ�หรัับเชื้้�อก่่อโรคเป้้าหมาย

ตััวอย่่าง

ตััวอย่่าง

ตััวอย่่าง

ถููกยัับยั้้�ง

เมทริิกซ์์ตัวั อย่่างนี้้�มีีลักั ษณะยัับยั้้�งต่่อการตรวจวิิเคราะห์์
อาจจำำ�เป็็นต้้องทำำ�การทดสอบซ้ำำ�� สำำ�หรัับข้้อมููลเพิ่่�มเติิม โปรดดููใน
ส่่วนหััวข้้อการแก้้ไขปััญหาและคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์ของ
ชุุดทดสอบ

ตรวจสอบ

มีีความคลุุมเครืือไม่่แน่่ชัดั เกี่่�ยวกัับการมีีอยู่่�หรืือไม่่มีอี ยู่่�ของเชื้้�อก่่อ
โรคเป้้าหมาย อาจจำำ�เป็็นต้้องทำำ�การทดสอบซ้ำำ��
สำำ�หรัับข้้อมููลเพิ่่�มเติิม โปรดดููในส่่วนหััวข้้อการแก้้ไขปััญหาและคำำ�แ
นะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์ของชุุดทดสอบ

ข้้อผิิดพลาด

ไม่่ตรวจพบการเรืืองแสงทางชีีวภาพ
อาจจำำ�เป็็นต้้องทำำ�การทดสอบซ้ำำ�� สำำ�หรัับข้้อมููลเพิ่่�มเติิม โปรดดููใน
ส่่วนหััวข้้อการแก้้ไขปััญหาและคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์ของ
ชุุดทดสอบ

10

TH(ภาษาไทย)การตรวจสอบยืืนยัันผลการทดสอบตามวิิธีที่่�ี ได้้รับั การรัับรองของ NF VALIDATION(3)ตััวเลืือกที่่� 1: การใช้้มาตรฐาน ISO 11290 ที่่�เริ่่�มต้้นตั้้�งแต่่การใช้้อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้�อเดมิิเฟรเซอร์์
ตััวเลืือกที่่� 2: โดยการแยกบนวุ้้�น PALCAM หรืือบนวุ้้�น Chromogenic Agar ที่่�สร้้างขึ้้�นเป็็นส่่วนหนึ่่ง� ของวิิธีกี ารรัับรอง NF VALIDATION
เพื่่�อการตรวจหาลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส การปรากฏของลัักษณะโคโลนีีสามารถยืืนยัันการมีีอยู่่�ของลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนสได้้
ตััวเลืือกที่่� 3: การใช้้โพรบวััดกรดนิิวคลีีอิกิ ดัังที่่�อธิิบายไว้้ในมาตรฐาน EN ISO 7218(5) ซึ่่ง� ดำำ�เนิินการบนโคโลนีีที่่�ได้้แยกเชื้้�อจากวุ้้�นที่่�เลืือก
(ดููตัวั เลืือกที่่� 1 หรืือ 2)ตััวเลืือกที่่� 4: สำำ�หรัับการใช้้วิธีิ กี ารอื่่�นใดที่่�ได้้รับั การรัับรองจาก NF VALIDATION หลัักการของวิิธีกี ารทดสอบจะต้้องแตกต่่างจากหลััก
การของชุุดทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen จะต้้องใช้้ระเบีียบการแบบครบถ้้วนสมบููรณ์์ที่่�อธิิบายไว้้
สำำ�หรัับวิิธีกี ารที่่�สองที่่�ผ่่านการตรวจสอบความใช้้ได้้นี้้� ขั้้�นตอนทั้้�งหมดก่่อนการเริ่่�มต้้นการยืืนยัันจะต้้องเหมืือนกัันกัับทั้้�งสองวิิธีกี ารกรณีีผลการทดสอบไม่่สอดคล้้อง (ผลการทดสอบเบื้้�องต้้นที่่�เป็็นบวกในการทดสอบด้้วยวิิธีกี ารอื่่�นยัังไม่่ได้้รับั การยืืนยัันจากหนึ่่ง� ในเครื่่�องมืือที่่�
อธิิบายไว้้ข้า้ งต้้น) ห้้องปฏิิบัติั กิ ารจะต้้องปฏิิบัติั ติ ามขั้้�นตอนที่่�จำำ�เป็็นเพื่่�อตรวจสอบว่่าผลการทดสอบที่่�ได้้รับั ถููกต้้อง
กรณีีผลการทดสอบไม่่สอดคล้้อง (ผลการทดสอบเบื้้�องต้้นที่่�เป็็นบวกด้้วยการใช้้ชุดุ ทดสอบเชื้้�อลิิสทิิเรีีย โมโนไซโตจิิเนส ระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ที่่�ยัังไม่่ได้้รับั การยืืนยัันจากหนึ่่ง� ในเครื่่�องมืือที่่�อธิิบายไว้้ข้า้ งต้้น ห้้องปฏิิบัติั กิ ารจะต้้องปฏิิบัติั ติ ามขั้้�นตอนที่่�จำำ�เป็็นเพื่่�อตรวจสอบ
ว่่าผลการทดสอบที่่�ได้้รับั ถููกต้้อง
หากท่่านมีีข้อ้ สงสััยเกี่่�ยวกัับการใช้้งานหรืือวิิธีกี ารที่่�เฉพาะเจาะจงใด ๆ โปรดเยี่่�ยมชมเว็็บไซต์์ของเราที่่� www.neogen.com
หรืือติิดต่่อตััวแทนจำำ�หน่่ายหรืือผู้้�จััดจำำ�หน่่ายของบริิษัท
ั Neogen ในท้้องถิ่่�นของท่่าน
ภาคผนวก A การหยุุดการทดสอบชั่่�วคราว
การทดสอบชั่่�วคราว: การเก็็บรัักษาและการนำำ�ไลเซตมาทดสอบซ้ำำ��
1. หากต้้องการเก็็บไลเซตที่่�ผ่่านความร้้อนมาแล้้ว ให้้ปิดิ ฝาหลอดสารละลายไลซิิสด้้วยฝาที่่�สะอาด (โปรดดูู “ไลซีีส”, 4.5)
2. เก็็บไว้้ที่่�อุณุ หภููมิิ 4 ถึึง 8°C ไม่่เกิิน 72 ชั่่�วโมง
3. เตรีียมตััวอย่่างที่่�เก็็บไว้้ โดยพลิิกหลอดสารละลายไลซีีสไปมา 2-3 ครั้้�งเพื่่�อผสมตััวอย่่างให้้เข้้ากัน
ั
4. เปิิดฝาหลอด
5. ใส่่หลอดไลเซตที่่�ผสมตััวอย่่างเข้้ากันั แล้้วลงในฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen และให้้ความร้้อนที่่�
100 ± 1°C เป็็นเวลา 5 ± 1 นาทีี
6. นำำ�ที่่�วางหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ออกจากฮีีทบล็็อคและปล่่อยให้้เย็็นในชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี
Neogen อย่่างน้้อย 5 นาทีีแต่่ไม่่เกิิน 10 นาทีี
7. ดำำ�เนิินการทดสอบขั้้�นต่่อไปในส่่วนการเพิ่่�มขยายจำำ�นวนตามรายละเอีียดข้้างต้้น

เอกสารอ้้างอิิง:1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

คำำ�อธิิบายสััญลัักษณ์์ป้้ายผลิิตภััณฑ์์
info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

KO （한국어）발행일: 2024-01

제품 설명서
Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스제품 설명 및 용도

Neogen® Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스는 Neogen® Molecular Detection System을 사용하여증균된 식품 및 환경 시료에서 리스테리아 모노사이토제네스를 신속하고 명확하게 검출합니다. Neogen 분자 검출 키트는 높은특이성과 민감도로 핵산 염기 서열을 빠르게 증폭시키기 위해, 생체발광 검출이 결합된 LAMP 등온 증폭 방식을 사용합니다. 추정양성 결과는 실시간으로 보고되는 반면, 음성 결과는 시험이 완료된 후 표시됩니다. 추정 양성 결과는 원하는 방법을 사용하거나 현지규정에 지정된 대로 확정되어야 합니다(1, 2, 3).

Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스는 실험 기법에 대해 적절한 교육을 받은 전문가들이 실험실환경에서 사용하도록 고안되었습니다. Neogen은 식품이나 음료가 아닌 다른 산업에서의 이 제품 사용을 문서화하지 않았습니다.
즉, Neogen은 용수, 약품, 화장품, 임상 또는 수의학 시료 시험에 대해서는 이 제품을 문서화하지 않았습니다. Neogen Molecular
Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스는 가능한 모든 시험 프로토콜 또는 가능한 모든 박테리아 종에 평가되지는
않았습니다.

모든 시험 방법처럼 증균 배지의 원료, 제조법 및 특성은 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. 시료 추출 방법, 검사 계획서, 시료 준비,조작 및 실험 기법 또한 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. Neogen은 충분한 수의 특정 식품과 미생물 유발 시험을 이용하여 사용자의환경에서 사용자의 기준을 충족하는지 확인하기 위해 증균 배지를 포함한 해당 방법의 평가를 권장합니다.

Neogen은 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스를 Ferric Ammonium Citrate을 함유하는 Demi
Fraser Broth와 Ferric Ammonium Citrate을 함유하는 Fraser Broth를 이용하여 평가하였습니다. 해당 배지의 일반적인 구성은다음과 같습니다.
Demi Fraser Broth Base 성분표(g/L)

Fraser Broth Base의 성분표(g/L)

Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous*

9.6g

Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous*

9.6g

Beef Extract

5.0g

Beef Extract

5.0g

Pancreatic Digest of Casein

5.0g

Pancreatic Digest of Casein

5.0g

Peptic Digest of Animal Tissue

5.0g

Peptic Digest of Animal Tissue

5.0g

Yeast Extract

5.0g

Yeast Extract

5.0g

Lithium Chloride

3.0g

Lithium Chloride

3.0g

Potassium Phosphate, monobasic

1.35g

Potassium Phosphate, monobasic

1.35g

Esculin

1.0g

Esculin

1.0g

Acriflavin HCl

0.0125g

Acriflavin HCl

0.025gNalidixic Acid

0.01g

Nalidixic Acid

0.02g

Sodium Chloride* 대체: Sodium Phosphate, dibasic, dihydrate

20g

Sodium Chloride

20g

12.0g

Fraser Broth Supplement(10mL 바이얼당 성분. 기본 배지 1리터에 바이얼 1개를 추가합니다.)Ferric Ammonium Citrate

최종 pH

0.5g/10mL

25°C에서 7.2 ± 0.2

Neogen® Molecular Detection 장비는 시료에 있는 유기체를 파괴하기 위한 Lysis 단계 중에 열처리를 거친 시료와 함께 사용하기위한 것입니다. Lysis 단계 동안 적절하게 열처리가 되지 않은 시료는 잠재적인 생물학적 위험으로 간주되므로 Neogen Molecular
Detection 장비에 절대로 삽입하지 마십시오.
Neogen Food Safety는 설계 및 제조에 관한 ISO(International Organization for Standardization) 9001 인증을 받았습니다.

Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 시험 키트에는 표 1에 설명된 바와 같이 96회 시험분이포함되어 있습니다.

1

KO （한국어）표 1. Neogen Molecular Detection Assay 키트 구성요소
항목

수량

목차

설명

Neogen® Molecular
Detection Assay 2 노란색 튜브리스테리아 모노사이트제네스
Reagent 튜브

96개(8개들이 튜브 12개스트립)동결 건조된 특정 증폭 및검출 혼합물바로 사용가능함

Neogen® Reagent 컨트롤(RC)

16개(8개들이 개별 튜브
2개 파우치)동결 건조된 컨트롤 DNA,증폭 및 검출 혼합물

바로 사용
가능함

Neogen® Lysis Solution(LS)

예비 캡

ID

투명한 튜브의분홍색 용액노란색 캡투명 플립톱 튜브

96개(8개들이 튜브 12개스트립)96개(8개들이 캡 12개스트립)튜브당 580μL의 LS랙에 꽂혀 있고
바로 사용
가능함

바로 사용
가능함

키트에 제공되지 않은 음성 대조군은 멸균 증균 배지(예: Demi Fraser Broth)입니다. 물을 음성 대조군으로 사용하지 마십시오.

안전사용자는 Neogen Molecular Detection System 및 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스와관련된 지침의 안전 정보 일체를 숙지하고 따라야 합니다. 나중에 참조할 수 있도록 안전 지침을 보관하십시오.
경고: 피하지 못할 경우 사망이나 심각한 부상 및/또는 재산상의 손해를 초래할 수 있는 위험 상황을 의미합니다.
주의: 피하지 못할 경우 재산상의 피해를 초래할 수 있는 잠재적으로 위험한 상황을 의미합니다.

W 경고

인간 또는 동물의 상태를 진단하는 데 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스를 사용해서는 안됩니다.

Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스법은, 노출되는 경우 임산부 및 면역이 저하된 여성에게서사산 및 사망을 초래할 수 있는 수준으로 리스테리아 모노사이토제네스를 생성할 수 있습니다.

사용자는 반드시 적절한 최신 시험 기법의 적용에 있어 담당 직원의 교육을 실시해야 합니다. 예: 우수 실험실 기준, ISO/IEC 17025(4)또는 ISO 7218(5).
오염된 제품의 출고를 초래하는 위음성 결과와 관련된 위험을 줄이려면:• 프로토콜을 준수하고 제품 설명서에 명시된 대로 정확하게 시험을 수행하십시오.
• Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스를 보관할 때는 포장 및 제품 설명서에 명시된 바를따릅니다.
• Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스는 유효 기간까지만 사용해야 합니다.
• Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스는 내부 또는 제3자가 검증한 식품 및 환경 시료와 함께사용하십시오.
• Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스는 내부적으로 또는 제3자가 검증한 표면, 살균제,프로토콜 및 박테리아 종만 사용하십시오.
• 아릴설포네이트 화합물이 포함된 Neutralizing Buffer를 함유하는 환경 시료의 경우 시험하기 전에 1:2로 희석하십시오(시료 1을 동량의 멸균 증균액 1에 넣음). NB 증균액 10µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮기는 방법도 있습니다. 아릴설포네이트
화합물과 함께 Neutralizing Buffer를 함유하는 Neogen® 시료 채취 제품: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G,
HS10NB, HS10NB2G 및 HS2410NB2G.

화학물질 및 생물학적 유해 물질 노출 관련 위험을 줄이려면:• 여성 실험연구원에게 리스테리아 모노사이토제네스 노출로 감염된 산모의 경우 태아 발달 위험이 발생할 수 있음을 알리는 것을권장합니다.
• 교육을 받은 사람의 통제하에 적절하게 준비된 실험실에서 병원성균 시험을 수행하십시오. 배양된 증균 배지 및 장비 또는 배양된증균 배지에 접촉한 표면에는 인체 건강에 위험을 초래할 수 있을 정도의 식중독균이 들어있을 수 있습니다.
• 시약 및 오염된 시료를 다룰 때는 적절한 보호복과 보안경 착용을 비롯하여 항상 표준 실험실 안전 방침을 준수하십시오.
• 증폭 후 증균 배지 및 Reagent 튜브의 내용물과 접촉하지 않도록 하십시오.
• 증균 시료는 현행 업계 표준에 따라 폐기하십시오.
• Lysis 단계 동안 적절하게 열처리가 되지 않은 시료는 잠재적인 생물학적 위험으로 간주되므로 Neogen Molecular Detection장비에 절대로 삽입하지 마십시오.
시험을 준비하는 동안 교차 오염과 관련된 위험을 줄이려면:• (사용자를 보호하고 뉴클레아제의 침투를 막기 위해) 항상 장갑을 착용해야 합니다.
환경 오염과 관련된 위험을 줄이려면:• 현행 산업 표준에 따라 오염 폐기물을 폐기하십시오.

2

KO （한국어）뜨거운 액체에 노출된 경우 가능한 위험을 줄이려면:• 권장 가열 온도를 초과하지 마십시오.
• 권장 가열 시간을 초과하지 마십시오.
• 적절하게 교정된 온도계를 사용하여 Neogen® Molecular Detection 히팅 블록 인서트 온도를 확인하십시오(예: 부분 침지 온도계또는 디지털 열전대 온도계. 전체 침지 온도계는 사용해서는 안 됩니다). 온도계는 반드시 Neogen Molecular Detection 히팅 블록인서트의 지정된 장소에 놓아야 합니다.

주의시험을 준비하는 동안 교차 오염과 관련된 위험을 줄이려면:• Reagent 펠릿 수화 전에 장갑을 교체하십시오.
• 미세입자를 차단하는 (필터 사용) 멸균된 분자 생물학 등급의 피펫 팁을 이용하는 것이 좋습니다.
• 각 시료 이동 시 새 피펫 팁을 사용하십시오.
• 우수 실험실 관리기준을 적용하여 증균된 시료를 Lysis 튜브로 옮기십시오. 피펫 오염을 방지하려면 중간 분주 단계를 추가해야 할수도 있습니다. 예를 들어 사용자는 증균된 각 시료를 멸균 튜브로 옮길 수 있습니다.
• 해당되는 경우 살균 램프가 있는 분자생물학 워크스테이션을 사용하십시오. 주기적으로 1~5%(v:v 물)의 가정용 표백 용액 또는
DNA 제거 용액으로 실험실 벤치와 장비(피펫, 캡/디캡 도구 등)의 오염을 제거하십시오.

위양성 결과가 발생할 위험을 줄이려면:• 증폭 후에는 절대 Reagent 튜브를 열지 마십시오.
• 오염된 튜브는 항상 1~5%(v:v 물)의 가정용 표백제 용액 또는 유사 용액에 1시간 동안 담가 두었다가 키트 준비 구역과 멀리 떨어진위치에 폐기합니다.
• 증폭 후 Reagent 튜브는 절대 오토클레이브하지 마십시오.

폐기에 대한 추가 정보 및 현지 규정은 안전보건자료(SDS)를 참조하십시오.

구체적인 용도나 절차에 대하여 궁금한 점이 있으면 당사 웹사이트(www.neogen.com)를 방문하거나 현지 Neogen 또는 판매업체로
문의하십시오.

사용자의 책임

사용자는 제품 설명서와 정보를 숙지할 책임이 있습니다. 보다 자세한 정보는 당사의 웹사이트 www.neogen.com 를 참고하거나
현지 Neogen이나 영업 대리점으로 문의하십시오.

시험 방법을 선택할 때, 시료 추출 방법, 시험 프로토콜, 시료 준비, 취급, 실험 기법과 같은 외적 요인이 결과에 영향을 미칠 수 있음을인식하는 것이 중요합니다.
시험 방법이나 제품을 선택할 때 선택된 시험 방법이 사용자의 기준을 충족할 수 있도록 적합한 매트릭스와 미생물 유발 시험을사용하여 충분한 수의 시료를 평가하는 것은 사용자의 책임입니다.
또한 사용자는 모든 시험 방법 및 결과가 고객 및 공급자의 요구사항을 충족하는지 판단할 책임이 있습니다.

다른 시험 방법과 마찬가지로 Neogen Food Safety 제품을 사용하여 얻은 결과가 시험된 매트릭스나 프로세스의 품질을 보장하는것은 아닙니다.

Neogen에서는 다양한 식품 매트릭스 방법 평가에 도움을 드리기 위해 Neogen® Molecular Detection Matrix Control 키트를개발했습니다. 필요한 경우 매트릭스 컨트롤(MC)을 이용하여 매트릭스가 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아
모노사이토제네스의 결과에 영향을 미칠 수 있는지 확인할 수 있습니다. 매트릭스를 대표하는 여러 시료를 시험하십시오(예: Neogen시험법을 적용하거나 신규 혹은 미지의 매트릭스 또는 원료나 공정의 변화가 있었던 매트릭스들을 검사하는 유효성 검증기간 동안다양한 곳에서 채취한 시료).
매트릭스는 조성과 가공과 같은 내재적 특징을 포함한 제품의 종류로 정의할 수 있습니다. 매트릭스 간의 차이점은 매트릭스의 처리방법 또는 모양(예: 비살균 vs. 저온 살균, 생제품 vs. 건조제품 등)이 미치는 영향처럼 간단합니다.

보증의 한계/제한적 구제개별 제품 포장의 제한적 보증 부분에 명시된 경우를 제외하고, NEOGEN은 상품성 또는 특정 용도 적합성에 대한 보증을 포함한 어떤명시적이거나 암묵적인 보증도 거부합니다. Neogen Food Safety 제품에 결함이 있을 경우, Neogen이나 그의 공식 판매업체는 자체판단에 따라 제품을 교체하거나 구매 금액을 환불해 드립니다. 다음은 귀하의 유일한 구제 방법입니다. 추가 질문이 있으면 Neogen담당자 또는 Neogen 공인 대리점에 문의하십시오.

Neogen 책임의 제한

NEOGEN은 수익의 상실을 포함하여 어떤 직접적인, 간접적인, 특별한, 부수적인, 결과적인 손해나 손실에 대해서도 책임지지않습니다. 법 이론에 따른 Neogen의 책임은 어떤 경우에도 결함이 있다고 주장된 제품의 구매 대금을 초과하지 않습니다.

보관 및 폐기

Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스를 2~8°C에서 보관하십시오. 냉동하지 마십시오. 보관 중키트가 빛을 받지 않도록 하십시오. 키트를 열어 보고 호일 파우치가 손상되지 않았는지 확인합니다. 파우치가 손상된 경우 사용하지마십시오. 개봉 후, 사용하지 않은 Reagent 튜브는 항상 다시 밀봉 가능한 파우치에 건조제와 함께 넣어 보관하여 건조 동결된 시약의안정성을 유지해야 합니다. 다시 밀봉한 제품은 최대 60일 동안 2~8°C에서 보관하십시오.

3

KO （한국어）유효 기간이 지난 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스는 사용하지 마십시오. 유효기한과 품목번호는 상자의 외부 라벨에 기입되어 있습니다. 사용하고 난 증균 배지와 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아
모노사이토제네스 튜브에는 잠재적으로 병원성 물질이 들어 있을 수 있습니다. 시험이 완료되면 현재 업계 표준에 따라 오염 폐기물을폐기하십시오. 폐기에 대한 추가 정보 및 현지 규정은 안전보건자료(SDS)를 참조하십시오.

사용 지침모든 지침을 주의 깊게 준수하십시오. 그렇지 않으면 부정확한 결과가 나올 수 있습니다.

주기적으로 1~5%(v:v 물)의 가정용 표백 용액 또는 DNA 제거 용액으로 실험실 벤치와 장비(피펫, 캡/디캡 도구 등)의 오염을제거하십시오.

사용자는 "설치 적격성 평가(IQ)/작동 적격성 평가(OQ) 프로토콜 및 Neogen Molecular Detection System 지침" 문서(6)에 명시된대로 Neogen Molecular Detection System 작업자 적격성 평가(OQ) 교육을 완료해야 합니다.
특정 요건에 관해서는 "유효성 검증 방법 관련 상세 설명" 섹션을 참조하십시오:표 3. AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 및 AOAC® Performance Tested MethodSM 증명서 #081501에 따른 증균프로토콜.
표 4. NF Validation 인증서 3M 01/15-09/16에 따른 증균 프로토콜.

시료 증균

표 2, 3, 4는 식품 및 환경 시료용 일반 증균 프로토콜에 대한 안내입니다. 다른 시료 추출 프로토콜 또는 희석 비율을 검증하여 이 시험방법이 사용자의 기준을 충족하도록 하는 것은 사용자의 책임입니다.

식품

1. Demi Fraser Broth 증균 배지(ferric ammonium citrate 함유)를 주변 실험실 온도로 평형시킵니다.

2. 표 2, 3 또는 4에 따라 증균 배지와 시료를 무균 방식으로 혼합합니다. 모든 육류 및 입자가 매우 미세한 시료에 대해서는 필터 백을사용하는 것이 좋습니다.
3. 2 ± 0.2분간 혼합, 스토마킹 또는 손으로 혼합하여 완전히 균질화합니다. 표 2, 3, 4에 따라 37 ± 1°C에서 배양합니다.

4. 생유제품(표 2, 3 또는 4 참조)의 경우, 1차 증균액 0.1mL를 Fraser Broth 10mL로 옮깁니다. 37 ± 1°C에서 20~24시간 동안배양합니다.

환경 시료시료 수집 장치는 살균제 효과를 비활성화하는 중화 용액으로 수화한 스폰지일 수 있습니다. Neogen은 살균제가 없는 셀룰로오스
스폰지의 사용을 권장합니다. 중화 용액은 Dey-Engley(D/E) Neutralizing Broth 또는 Letheen Broth일 수 있습니다. 시료 추출 후 그구역을 살균하는 것이 좋습니다.
경고: 스폰지용 수화 용액으로 아릴설포네이트 화합물을 함유하는 Neutralizing Buffer(NB)를 사용하기로 선택하는 경우, 오염된제품 출고를 초래하는 위음성 결과와 관련된 위험을 줄이려면 시험 전에 증균된 환경 시료를 1:2로 희석해야 합니다(시료 1을 동량의멸균 증균 배지 1에 넣음). Neutralizing Buffer 증균액 10μL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮기는 방법도 있습니다.

표면의 식중독균 유무를 확인하기 위한 시료 추출 영역의 권장 크기는 적어도 100cm2(10cm x 10cm 또는 4” x 4”)입니다. 스폰지로시료를 추출하는 경우, 두 방향(왼쪽에서 오른쪽, 이어서 위쪽에서 아래쪽)으로 전체 영역을 덮거나, 현재의 시료 추출 프로토콜, 혹은
FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) 또는 ISO 18593(7) 가이드라인에 따라 환경 시료를 채취합니다.
1. Demi Fraser Broth 증균 배지(ferric ammonium citrate 함유)를 주변 실험실 온도로 평형시킵니다.
2. 표 2, 3 또는 4에 따라 증균 배지와 시료를 무균 방식으로 혼합합니다.

3. 2 ± 0.2분간 혼합, 스토마킹 또는 손으로 혼합하여 완전히 균질화합니다. 표 2, 3 또는 4에 따라 24~30시간 동안 37 ± 1°C에서배양합니다.

표 2: 필요에 따라 Demi-Fraser Broth 및 Fraser-Broth를 사용한 37 ± 1°C에서의 일반 증균 프로토콜.
시료 매트릭스

시료량증균 배양액량
(mL)

증균 시간
(hr)

열처리/살균한 유제품

25g

225

24~30

스폰지 1개

100 또는 225

24~30

10

24~30

25g

475

28~32

열처리, 조리, 절임 육류,가금류, 해산물 및 생선농산물 및 채소다성분 식품환경 시료(a)생고기, 가금류, 해산물, 생선

면봉 1개

4

KO （한국어）2차 증균 (Fraser Broth)(a)1차 증균(Demi-Fraser Broth)(a)시료 매트릭스시료량생유제품증균 배양액량
(mL)

증균 시간
(hr)

225

20~24

25g

시료량

증균 온도(°C)

0.1mL
를 Fraser
Broth
10mL로
옮기기

증균 시간
(hr)

37 ± 120~24시료분석량(b)

10μL(a) Demi-Fraser 및 Fraser Broth는 1차 또는 2차 증균 중에는 항상 Fraser Broth 보충제(ferric ammonium citrate)를 보충해야합니다.

(b) Neogen Lysis Solution 튜브로 옮긴 시료의 양. Lysis 섹션의 4.6단계 참조.
검증 방법 관련 상세 설명

AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08

AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

AOAC Research Institute OMASM 및 PTMSM 프로그램에서 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아
모노사이토제네스는 리스테리아 모노사이토제네스의 검출에 효과적인 방법이라는 사실이 밝혀졌습니다. 이 연구에서 실험된매트릭스는 표 3에 나와 있습니다.

표 3. AOAC OMASM 2016.08 및 PTMSM 인증서 #081501에 따라 Demi-Fraser Broth(a)를 37 ± 1°C에서 사용한 증균 프로토콜.
시료 매트릭스쇠고기 핫도그, 퀘소 프레스코, 바닐라아이스크림, 유지방 4% 코티지 치즈, 3% 초콜릿우유, 로메인 상추, 봉지에 담은 생시금치, 냉장
훈제 연어
생닭고기

델리 칠면조
캔틸로프(b)스테인리스 스틸환경 시료:

포장된 콘크리트
플라스틱(c)시료량증균 배양액량(mL)증균 시간(hr)

25g

225

24~30

25g

475

28~32

125g

멜론
(통째로)

1125

24~30

멜론이 뜰 정도의 양

26~30

스폰지 1개

225

24~30

100

24~30

면봉 1개

10

24~30

스폰지 1개

AOAC 유효성 검증에 쓰인 시료는 모두, 별도로 정하지 않는 한 스토마킹으로 균질화하였습니다.

(a)		Demi-Fraser 및 Fraser Broth는 1차 또는 2차 증균 중에는 항상 Fraser Broth 보충제(ferric ammonium citrate)를 보충해야합니다.

(b) 손으로 혼합하여 시료를 균질화합니다.
(c) Vortex하여 시료를 균질화합니다.

5

KO （한국어）AFNOR Certification에 의한 NF VALIDATION

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en유효 기간과 관련한 상세 정보는 상기에 명시한 웹 사이트에 있는 NF VALIDATION 인증서를 참고하십시오.

ISO 11290(3) 대비 ISO 16140-2(6)에 준하는 NF VALIDATION 인증 방법검증의 범위: 모든 식품 및 환경 시료(1차 생산 시료 제외)시료 준비: 시료는 EN ISO 11290-1(3) 및 EN ISO 6887(8)에 따라 준비해야 합니다.
소프트웨어 버전: 인증서 참고

표 4: NF VALIDATION 인증 방법 3M 01/15-09/16에 준하여 필요에 따라 37 ± 1°C에서 Demi-Fraser Broth Fraser Broth를사용한 증균 프로토콜.
일반 프로토콜

시료량모든 식품 시료(생고기,생해산물, 생유제품
제외)

25g

환경 시료
특별
프로토콜
모든
생고기,
생해산물,
생유제품
제외

증균 배양액량
(mL)증균 온도(±1°C)증균 시간(hr)시료분석량(a)

225

37

24~30

20µL

25g, 면봉 1개,
또는 와이프
1개

1차 증균(Demi-Fraser Broth)(b)
시료량

25g

증균
배양액량
(mL)

225

증균 온도
(±1°C)

37허용 중단 지점• Demi-Fraser Broth를최대 72시간
• Lysate를 -20°C에서

• Lysate를 4°C에서최대
72시간

2차 증균(Fraser Broth)(b)

증균 시간
(hr)

시료량

20~24

0.1mL를
Fraser
Broth
10mL로
옮기기

증균 온도
(±1°C)

37허용 중단 지점증균 시간시료분석량(c)(hr)• Fraser Broth
를 최대
72시간

20~24

10µL

(a) Neogen Lysis Solution 튜브로 옮긴 시료의 양. Lysis 섹션의 4.6단계 참조.

• Lysate를
-20°C에서

• Lysate를
4°C에서최대
72시간(b) Demi-Fraser 및 Fraser Broth는 1차 또는 2차 증균 중에는 항상 Fraser Broth Supplement(ferric ammonium citrate)를
보충해야 합니다.

(c) Neogen Lysis Solution 튜브로 옮긴 시료의 양. Lysis 섹션의 4.6단계 참조.
참고: 25g을 초과하는 시료는 NF Validation 연구에서 시험되지 않았습니다.

Neogen® Molecular Detection 스피드 로더 트레이 준비
1. 1~5%(v:v 물) 가정용 표백 용액을 천에 적셔 Neogen® Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 닦습니다.

2. 물로 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 헹굽니다.

3. 1회용 타월을 사용하여 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 닦아서 말립니다.

4. 사용하기 전에 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이가 마른 상태인지 확인하십시오.

Neogen® Molecular Detection 냉각 블록 인서트 준비
Neogen® Molecular Detection 냉각 블록을 실험실 벤치에 직접 놓습니다. 냉각 블록을 주변 실험실 온도(20~25°C)에서
사용합니다.
6

KO （한국어）Neogen® Molecular Detection 히팅 블록 인서트 준비건조 이중 블록 히터 장치에 Neogen® Molecular Detection 히팅 블록 인서트를 놓습니다. 건조 블록 히터 장치를 켜고 Neogen
Molecular Detection 히팅 블록 인서트가 100 ± 1°C를 유지할 수 있도록 합니다.

참고: 히터 장치에 따라, Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트가 온도에 도달하는 데 약 30분이 걸릴 수 있습니다.
적절한 교정된 온도계(예: 부분 침지 온도계 또는 디지털 열전대 온도계. 전체 침지 온도계는 사용해서는 안 됩니다)를 지정된 위치에놓아 Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트의 온도가 100 ± 1°C인지 확인합니다.

Neogen® Molecular Detection 장비 준비
1. Neogen® Molecular Detection System 소프트웨어를 실행하고 로그인합니다. Neogen Food Safety 담당자에게 문의하여 이소프트웨어가 최신 버전인지 확인하십시오.
2. Neogen Molecular Detection 장비를 켭니다.

3. 각 시료에 대한 데이터를 포함하는 실행을 만들거나 편집합니다. 자세한 내용은 Neogen Molecular Detection System 사용설명서를 참조하십시오.
참고: 반응 튜브를 포함한 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 삽입하기 전에 Neogen Molecular Detection장비가 준비 상태에 도달해야 합니다. 이 가열 단계는 약 20분이 걸리며 완료되면 기기의 상태 표시줄에 주황색 등이 켜집니다.
기기가 실행할 준비가 되면 상태 표시줄이 녹색으로 바뀝니다.

Lysis
Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트에 부착하기 전에 스크루드라이버나 스패튤라로 Neogen Lysis Solution 랙의하단을 제거합니다.

1. 랙을 실온(20~25°C)에서 하룻밤 동안(16~18시간) 두어 Lysis 용액(Neogen Lysis Solution) 튜브를 예열합니다. Neogen Lysis
Solution 튜브를 실온으로 평형시키는 또 다른 방법은 최소 2시간 동안 실험실 벤치에 Neogen Lysis Solution 튜브를 두거나, 37± 1°C 배양기에 1시간 동안 Neogen Lysis Solution 튜브를 배양하거나 100°C의 건조한 이중 블록 히터에 30초간 두는 것입니다.

2. 캡을 씌운 튜브를 뒤집어 섞습니다. 4시간 이내에 다음 단계를 진행하십시오.
3. 배양기에서 증균 배양액을 꺼냅니다.

4. 각 시료와 음성 대조군(NC) 시료(멸균 증균 배지)마다 Neogen Lysis Solution 튜브 1개가 필요합니다.

4.1 Neogen Lysis Solution 튜브 스트립을 원하는 Neogen Lysis Solution 튜브 수만큼 자를 수 있습니다. 필요한 개별 Neogen
Lysis Solution 튜브 또는 8개들이 튜브 스트립 수를 선택합니다. Neogen Lysis Solution 튜브를 빈 랙에 놓습니다.

4.2 교차 오염을 방지하기 위해 한 번에 한 줄씩 Neogen Lysis Solution 튜브 스트립의 캡을 벗기고 각 분주 단계에 새 피펫 팁을사용합니다.
4.3 아래 설명된 대로, 증균된 시료를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다.

각 증균된 시료를 개별 Neogen Lysis Solution 튜브로 먼저 옮깁니다. NC를 마지막으로 옮깁니다.

4.4 Neogen® Molecular Detection Lysis Cap/Decap Tool을 사용하여 한 번에 스트립 하나씩, Neogen Lysis Solution 튜브스트립 1개의 캡을 벗깁니다.

4.5 Neogen Lysis Solution 튜브 캡 폐기 – 재시험을 위해 lysate를 그대로 둘 경우 캡을 깨끗한 용기에 두어 용해 후 다시 사용할수 있도록 합니다.
4.5.1 보존된 Lysate 처리에 대해서는 부록 A를 참조하십시오.

4.6 표 2, 3 또는 4의 프로토콜에 별도로 기재되어 있지 않은 한 시료 20µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다(예: 생유제품이거나 환경 시료를 neutralizing buffer와 같이 사용할 경우, 10µL를 사용하십시오).

7

KO （한국어）20 µl

5. 각 시료가 스트립의 해당 Neogen Lysis Solution 튜브에 모두 추가될 때까지 4.4~4.6단계를 반복합니다.

6. 모든 시료를 옮겼을 때 NC(멸균 증균 배지, 예: Demi Fraser Broth) 20µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다. 물을 NC로
사용하지 마십시오.
7. Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트의 온도가 100 ± 1°C인지 확인합니다.

8. 덮개를 씌우지 않은 Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트에 놓고 15 ± 1분 동안가열합니다. 가열 중 Neogen Lysis Solution 용액은 분홍색(차가움)에서 노란색(뜨거움)으로 바뀝니다.
8.1 용해 단계 동안 적절하게 열처리가 되지 않은 시료는 잠재적인 생물학적 위험으로 간주되어 Neogen Molecular Detection장비에 절대로 삽입하지 마십시오.

9. 덮개를 씌우지 않은 Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 히팅 블록에서 제거하고 Neogen Molecular Detection 냉각 블록인서트에 최소 5분, 최대 10분 냉각시킵니다. 상온에서 사용하는 Neogen Molecular 냉각 블록 인서트는 바로 실험실 벤치에놓아야 합니다. 식으면 Lysis Solution이 분홍색으로 다시 바뀝니다.
10. Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 Neogen Molecular Detection 냉각 블록 인서트에서 제거합니다.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

증폭

1. 각 시료와 NC를 위해 1개의 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent 튜브가 필요합니다.
1.1 Reagent 튜브 스트립을 원하는 튜브 개수로 자를 수 있습니다. 개별 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아
모노사이토제네스 Reagent 튜브 또는 필요한 8개들이 튜브 스트립 수를 선택합니다.
1.2 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent 튜브를 빈 랙에 놓습니다.

1.3 튜브 맨 아래 시약 알갱이를 휘젓지 마십시오.

2. Neogen Reagent 컨트롤 튜브를 1개 선택하고 랙에 놓습니다.

3. 교차 오염을 방지하기 위해 한 번에 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 튜브 스트립 1개의
캡을 벗기고 각 분주 단계마다 새 피펫 팁을 사용합니다.

4. 아래 설명된 대로 lysate를 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent 튜브 및 Neogen
Reagent 컨트롤 튜브로 옮깁니다:각 시료 Lysate를 개별 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent 튜브로 먼저 옮긴 뒤NC를 옮기십시오. 마지막에 Neogen Reagent 컨트롤 튜브를 수화합니다.

5. Neogen® Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent를 사용하여 한 번에 Reagent 튜브 스트립 하나씩 Neogen
Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent 튜브의 캡을 벗깁니다. 캡을 버리십시오.

5.1 Neogen Lysis Solution 튜브에서 용액의 상부 ½에서 시료 Lysate 20µL를 침전되지 않도록 하여 해당 Neogen Molecular
Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent 튜브로 옮깁니다. 알갱이가 휘저어져 섞이지 않도록 기울여
붓습니다. 위아래로 가볍게 5번을 피펫팅하여 섞습니다.
5.2 개별 시료 Lysate가 스트립의 해당 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent 튜브에추가될 때까지 5.1단계를 반복합니다.

5.3 제공된 여분의 캡으로 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent 튜브를 덮고,
Neogen Molecular Detection Reagent Cap/Decap Tool의 둥근 면을 사용하여 앞뒤로 압력을 가하여 캡이 단단히 닫혀있는지 확인하십시오.
8

KO （한국어）5.4 시험할 시료 수에 대해, 필요한 만큼 5.1~5.3단계를 반복합니다.

5.5 모든 시료 Lysate를 옮긴 후 5.1단계를 반복하여 NC Lysate 20µL를 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아
모노사이토제네스 Reagent 튜브로 옮깁니다.

5.6 NC Lysate 20µL를 Neogen Reagent 컨트롤 튜브로 옮깁니다. 알갱이가 휘저어져 섞이지 않도록 기울여 붓습니다. 위아래로가볍게 5번을 피펫팅하여 섞습니다.

6. 캡이 씌워진 튜브를 깨끗하고 오염되지 않은 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이에 내려놓습니다. Neogen
Molecular Detection 스피드 로더 트레이 뚜껑을 닫고 걸쇠로 잠급니다.

20 µL

7. Neogen Molecular Detection System 소프트웨어에서 구성된 실행을 검토하고 확인합니다.

8. 소프트웨어에서 시작 버튼을 클릭하고 사용할 기기를 선택합니다. 선택한 기기의 뚜껑이 자동으로 열립니다.

9. Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 Neogen Molecular Detection 장비에 놓고 뚜껑을 닫으면 시험이시작됩니다. 결과는 75분 이내에 제공되지만 양성 여부는 더 일찍 검출할 수 있습니다.

10. 시험이 완료되었으면 Neogen Molecular Detection 장비에서 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 꺼내고
1~5%(v:v 물)의 가정용 표백제 용액 또는 유사 용액에 1시간 동안 담갔다가 분석 준비 영역에서 떨어진 곳에 폐기하십시오.

주의: 교차 오염으로 인한 위양성의 위험을 최소화하려면 증폭된 DNA를 함유한 Reagent 튜브를 절대 열지 마십시오. 여기에는Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 Reagent, Neogen Reagent 컨트롤 및 매트릭스 컨트롤튜브가 포함됩니다. 밀봉된 Reagent 튜브는 1~5%(v:v 물)의 가정용 표백제 용액 또는 유사 용액에 1시간 동안 담가 두었다가 키트준비 구역과 멀리 떨어진 위치에 폐기합니다.

결과 및 해석

알고리즘은 핵산 증폭을 탐지할 때 생성되는 빛 출력 곡선을 해석합니다. 결과는 소프트웨어에 의해 자동으로 분석되고 결과에기반하여 색상으로 구분됩니다. 양성 또는 음성 결과는 다양한 고유 곡선 매개변수의 분석으로 판별됩니다. 추정 양성 결과는실시간으로 보고되는 반면, 음성 결과는 실행이 완료된 후 표시됩니다.

양성으로 추정되는 시료는 1차 증균액에서 2차 증균액(적용 가능한 경우)으로 이전하는 것에서 시작하여 이후 적절한 생화학적 및혈청학적 방법으로 분리균 확인 및 플레이팅을 실시하는 등 실험실 표준 운영 절차 또는 적절한 참고 방법 확인(1, 2, 3)을 통해 확인해야합니다.
참고: 시스템과 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 증폭 시약은 "배경" RLU를 가지므로 음성
시료도 0을 기록값으로 제공하지 않습니다.

이례적인 빛 출력이 나타나는 경우, 알고리즘은 이를 "검사(Inspect)"로 분류합니다. Neogen은 모든 검사 시료에 대해 분석을반복하는 것을 권장합니다. 결과가 계속 검사인 경우, 기본 설정한 방법을 사용하거나 현지 규정에 따라 확정 시험을 진행하십시오.

표 5: Neogen Molecular Detection System 소프트웨어에서 제공하는 시료 및 해석에 대한 결과 기호.
웰 유형

시료

웰 결과 기호

결과

해석

양성

시료는 대상 식중독균에 대해 양성으로 추정됩니다.

시료

저해

시료

검사

시료 매트릭스가 시험에 대해 저해를 일으켰습니다. 재시험이 필요할수 있습니다. 자세한 내용은 문제 해결 섹션과 시험 키트 제품 설명서를참조하십시오.

시료

오류

시료

음성

시료는 대상 식중독균에 대해 음성입니다.

대상 식중독균의 존재 여부를 확인할 수 없습니다. 재시험이 필요할 수
있습니다. 자세한 내용은 문제 해결 섹션과 시험 키트 제품 설명서를참조하십시오.

감지된 생체발광이 없습니다. 재시험이 필요할 수 있습니다. 자세한 내용은문제 해결 섹션과 시험 키트 제품 설명서를 참조하십시오.
9

KO （한국어）NF VALIDATION 인증 방법에 따른 결과 확정방법 1: Demi Fraser 증균액부터 ISO 11290(3) 표준 사용.

방법 2: 리스테리아 모노사이토제네스를 검출하는 NF VALIDATION 인증 방법의 일부를 형성하는 PALCAM 한천 또는 발색한천의
분리. 특징적 집락의 존재로 리스테리아 모노사이토제네스의 존재를 확인할 수 있습니다.
방법 3: 분리된 집락에 수행된 EN ISO 7218(5) 표준에 명시된 대로 핵산 프로브 사용(방법 1 또는 2 참조).

방법 4: Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스와 다른 원리인 기타 NF VALIDATION 인증 방법
사용. 해당 2차 검증 방법에 대해 설명된 전체 프로토콜을 사용해야 합니다. 두 가지 방법에서 확인 시작 전의 모든 단계가 반드시동일해야 합니다.

결과가 불일치하는 경우(대체 방식 사용 시 추정 양성, 상기 방법 중 한 가지로 확인 불가), 실험실은 필요 단계를 따라 취득한 결과의유효성을 확인해야 합니다.

결과가 불일치하는 경우(Neogen Molecular Detection Assay 2 - 리스테리아 모노사이토제네스 사용 시 추정 양성, 상기 방법 중 한가지로 확인 불가), 실험실은 필요 단계를 따라 취득한 결과의 유효성을 확인해야 합니다.

구체적인 용도나 절차에 대하여 궁금한 점이 있으면 당사 웹사이트(www.neogen.com)를 방문하거나 현지 Neogen 또는 판매업체로
문의하십시오.
부록 A. 시험 계획서 중단: 열처리된 Lysate 보관 및 재시험.
1. 열처리된 lysate를 보관하려면 깨끗한 캡으로 용해 튜브를 다시 씌웁니다("Lysis" 4.5 참조).
2. 4~8°C에서 최대 72시간 동안 보관합니다.

3. 2~3번 뒤집어서 혼합하여 보관된 시료를 증폭하도록 준비합니다.
4. 튜브의 캡을 벗깁니다.

5. Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트에 혼합된 Lysate 튜브를 놓고 100 ± 1°C에서 5 ± 1분간 가열합니다.

6. Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 히팅 블록에서 제거하고 Neogen Molecular Detection 냉각 블록 인서트에 최소 5분, 최대
10분 냉각시킵니다.
7. 위에서 상세히 설명한 ‘증폭’ 섹션의 프로토콜을 계속합니다.

참고자료:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

제품 라벨 기호 설명

info.neogen.com/symbols

10Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A

ID(Bahasa Indonesia)
Tanggal Penerbitan: 2024-01

Petunjuk Produk
Deteksi Molekuler untuk pengujian Listeria monocytogenes 2
Deskripsi Produk dan Maksud Penggunaan

Deteksi Molekuler Neogen® untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 digunakan dengan Sistem Deteksi Molekuler
Neogen® untuk mendeteksi Listeria monocytogenes secara cepat dan spesifik dalam sampel makanan dan lingkunganyang diperkaya. Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian menggunakan amplifikasi isotermal termediasi loop untuk
secara cepat menguatkan rangkaian asam nukleat dengan kekhususan dan kepekaan tinggi, dikombinasikan dengan
bioluminesensi untuk mendeteksi amplifikasi. Hasil yang dianggap positif dilaporkan secara aktual, sedangkan hasil yangnegatif akan ditampilkan setelah pengujian selesai. Hasil yang diduga positif harus dikonfirmasi menggunakan metodepilihan atau yang sesuai dengan peraturan setempat(1, 2, 3).
Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 ditujukan untuk penggunaan di lingkunganlaboratorium oleh tenaga profesional yang terlatih dalam teknik laboratorium. Neogen tidak mendokumentasikan penggunaan
produk ini dalam industri selain makanan atau minuman. Contohnya, Neogen belum mendokumentasikan produk ini
untuk menguji sampel air, farmasi, kosmetik, klinis, atau veterinari. Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria
monocytogenes 2 belum dievaluasi dengan semua protokol pengujian, atau dengan semua strain bakteri yang mungkin ada.
Seperti semua metode uji, sumber, formulasi dan kualitas medium pengayaan bisa memengaruhi hasil. Faktor seperti
metode pengambilan sampel, protokol pengujian, persiapan sampel, penanganan, dan teknik laboratorium juga dapat
memengaruhi hasil. Neogen merekomendasikan untuk melakukan evaluasi metode, termasuk medium pengayaan, dalam
lingkungan pengguna dengan menggunakan sejumlah sampel yang memadai dengan uji makanan dan mikroba tertentu
untuk memastikan bahwa metode memenuhi kriteria pengguna.
Neogen telah mengevaluasi Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 menggunakan Larutan/
Media Cair Demi-Fraser yang mengandung Amonium Besi Sitrat dan Larutan/Media Cair Fraser yang mengandung
Amonium Besi Sitrat yang diperlukan. Formulasi khas dari medium ini adalah sebagai berikut.
Formula Khas Larutan/Media Cair Dasar
Demi-Fraser(g/L)

Formula Khas Larutan/Media Cair
Dasar Fraser(g/L)

Natrium Klorida

20 g

Natrium Klorida

20 g

Natrium Fosfat, dibasa, anhidrat *9,6 g

Natrium Fosfat, dibasa, anhidrat *9,6 g

Ekstrak Daging Sapi

5,0 g

Ekstrak Daging Sapi

5,0 g

Kasein Hasil Pencernaan Pankreatik

5,0 g

Kasein Hasil Pencernaan Pankreatik

5,0 g

Jaringan Hewan Hasil Pencernaan Peptik

5,0 g

Jaringan Hewan Hasil Pencernaan Peptik

5,0 g

Ekstrak Ragi

5,0 g

Ekstrak Ragi

5,0 g

Litium Klorida

3,0 g

Litium Klorida

3,0 g

Potasium Fosfat, monobasic

1,35 gPotasium Fosfat, monobasic

1,35 gEsculin

1,0 g

Esculin

1,0 g

Acriflavin HCl

0,0125 g

Acriflavin HCl

0,025 gAsam Nalidiksat

0,01 gAsam Nalidiksat

0,02 g* Pengganti: Natrium Fosfat, dibasa, dihidrat

12,0 gSuplemen Larutan/Media Cair Fraser(Bahan per botol 10 mL. Satu botol ditambahkan ke satu liter medium basal.)Amonium Besi Sitrat

0,5 g/10 mL

pH akhir

7,2 ± 0,2 pada suhu 25°C

Instrumen Deteksi Molekuler Neogen® bertujuan untuk digunakan pada sampel yang telah dipanaskan selama tahap
pengujian lisis, yang dirancang untuk mematikan organisme yang ada di dalam sampel tersebut. Sampel yang belum
dipanaskan dengan benar selama tahap pengujian lisis dapat dianggap sebagai potensi bahaya biologis dan TIDAK BOLEH
dimasukkan ke dalam Instrumen Deteksi Molekuler Neogen.
Penguji Keamanan Makanan Neogen sesuai dengan sertifikasi ISO (International Organization for Standardization) 9001
dalam hal desain dan manufaktur.
Kit uji Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 berisi 96 tes, yang diuraikan dalam Tabel 1.

1ID(Bahasa Indonesia)

Tabel 1. Komponen Kit Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian
Alat

Identifikasi

JumlahIsi

Komentar

Larutan Lisis Neogen® (LS)

Larutan merah
muda dalamtabung transparan

96 (12 strip kali
8 tabung)

580 μL LS per tabung

Tersusundalam rak dan
siap digunakan

Tabung Reagen Deteksi
Molekuler Neogen®
untuk Pengujian Listeria
monocytogenes 2

Tabung kuning

96 (12 strip kali
8 tabung)

Campuran amplifikasi
dan deteksi spesifik
terliofilisasi

Siapdigunakan

Kapsul tambahan

Tutup kuning

96 (12 strip kali 8 kapsul)

Kontrol Reagen Neogen®
(RC)

Tabung flip-toptransparan

16 (2 kantung dari
8 tabung tersendiri)SiapdigunakanCampuran kontrol DNA,amplifikasi, dan deteksi
terliofilisasi

Siapdigunakan

Kontrol Negatif, yang tidak disediakan dalam kit, merupakan medium pengayaan steril, yaitu Larutan/Media Cair
Demi-Fraser. Jangan gunakan air sebagai Kontrol Negatif.

Keselamatan

Pengguna harus membaca, memahami, dan mematuhi semua informasi keselamatan dalam petunjuk untuk Sistem
Deteksi Molekuler Neogen dan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2. Simpanlah petunjuk
keselamatan tersebut untuk referensi pada masa mendatang.
PERINGATAN: Menandakan situasi berbahaya, yang, apabila tidak dihindari, dapat menyebabkan kematian ataucedera serius dan/atau kerusakan harta benda.
PERHATIAN: Menandakan situasi yang berpotensi bahaya yang, apabila tidak dihindari, dapat menyebabkan
kerusakan harta benda.

W PERINGATANJangan gunakan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 untuk mendiagnosis kondisi
manusia atau hewan.
Metode Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 dapat menghasilkan jumlah Listeria
monocytogenes yang cukup untuk menyebabkan bayi lahir mati dan kematian pada wanita hamil, serta sistem imunyang terganggu, apabila terpapar.
Pengguna harus melatih personelnya mengenai penggunaan teknik pengujian yang tepat dan terkini; contohnya,
Praktik Laboratorium yang Baik, ISO/IEC 17025(4), atau ISO 7218(5).
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan hasil negatif palsu yang dapat menyebabkan pelepasan produkyang terkontaminasi:• Patuhi protokol dan lakukan pengujian dengan tepat seperti yang tercantum dalam petunjuk produk.
• Simpan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 sesuai yang tercantum pada kemasan dan
petunjuk produk.
• Selalu gunakan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 sebelum tanggal kedaluwarsa.
• Gunakan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 untuk sampel makanan dan lingkunganyang telah divalidasi secara internal atau oleh pihak ketiga.
• Gunakan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 hanya untuk permukaan, sanitiser,
protokol, dan strain bakteri yang telah divalidasi secara internal atau oleh pihak ketiga.
• Untuk sampel lingkungan yang berisi Penyangga Penetral dengan kompleks aril sulfonat, lakukan pelarutan 1:2 sebelum
pengujian (1 bagian sampel dilarutkan dengan 1 bagian larutan/media cair pengayaan steril). Opsi lain adalah dengan
memindahkan 10 μL pengayaan NB ke dalam tabung Larutan Lisis Neogen. Produk Pengumpulan Sampel Neogen®
yang berisi Penyangga Penetral dengan senyawa aril sulfonat: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G,
HS10NB, HS10NB2G, dan HS2410NB2G.
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan paparan terhadap bahan kimia dan bahaya biologis:• Sangat disarankan agar staf laboratorium wanita diberi tahu tentang risiko terhadap perkembangan janin pada ibu yangterinfeksi melalui paparan Listeria monocytogenes.
• Lakukan pengujian patogen di laboratorium yang memiliki peralatan lengkap di bawah kontrol personel yang telah
terlatih. Media dan perlengkapan pengayaan terinkubasi atau permukaan yang telah bersentuhan dengan media
pengayaan terinkubasi dapat mengandung patogen pada tingkat yang cukup untuk menimbulkan risiko bagi
kesehatan manusia.

2

ID(Bahasa Indonesia)• Selalu patuhi praktik keselamatan standar laboratorium, termasuk memakai peralatan pelindung yang benar danpelindung mata saat menangani reagen dan sampel yang terkontaminasi.
• Hindari kontak dengan isi media pengayaan dan tabung reagen setelah amplifikasi.
• Buang sampel yang telah diperkaya sesuai dengan standar industri yang berlaku saat ini.
• Sampel yang belum dipanaskan dengan benar selama tahap pengujian lisis dapat dianggap sebagai potensi bahaya
biologis dan TIDAK BOLEH dimasukkan ke dalam Instrumen Deteksi Molekuler Neogen.
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan kontaminasi silang saat persiapan pengujian:• Selalu gunakan sarung tangan (untuk melindungi pengguna dan mencegah timbulnya nuklease).
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan pencemaran lingkungan:• Patuhi standar industri pembuangan limbah terkontaminasi yang berlaku saat ini.
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan paparan terhadap cairan panas:• Jangan mengatur suhu pada alat pemanas melebihi batas yang direkomendasikan.
• Jangan melebihi waktu pemanasan yang direkomendasikan.
• Gunakan termometer yang dikalibrasi dan sesuai untuk memverifikasi suhu Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler
Neogen® (misalnya, termometer yang dimasukkan sebagian atau termometer digital ganda, bukan termometer yangdimasukkan keseluruhan.) Termometer harus ditempatkan pada lokasi yang ditentukan dalam Sisipan Blok Pemanas
Deteksi Molekuler Neogen.

PERHATIAN
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan kontaminasi silang saat persiapan pengujian:• Ganti sarung tangan sebelum hidrasi pelet reagen.
• Dianjurkan menggunakan ujung pipet halang aerosol ujung runcing (berfilter) dengan derajat molekuler biologi
yang steril.
• Gunakan ujung pipet yang baru setiap kali memindahkan sampel.
• Gunakan Praktik Laboratorium yang Baik untuk memindahkan sampel dari tabung pengayaan ke tabung lisis. Untuk
mencegah kontaminasi pipet, pengguna dapat memilih menambahkan langkah perantara dalam proses pemindahan.
Misalnya, pengguna dapat memindahkan setiap sampel yang diperkaya ke dalam tabung steril.
• Gunakan stasiun kerja biologi molekuler yang memiliki lampu germisida, jika tersedia. Secara berkala, bersihkan
kontaminasi pada meja dan peralatan laboratorium (pipet, alat pembuka/penutup, dsb.) dengan larutan pemutih rumah
tangga 1-5% (v:v dalam air) atau larutan penghilang DNA.
Untuk memperkecil risiko dalam kaitannya dengan hasil yang positif salah:• Jangan sekali-kali membuka tabung reagen setelah amplifikasi.
• Buang tabung yang terkontaminasi dengan merendamnya ke dalam larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalam air)atau larutan sejenis lainnya selama 1 jam dan jauhkan dari tempat persiapan pengujian.
• Jangan sterilkan tabung reagen dengan autoklaf setelah amplifikasi.
Baca Lembar Data Keselamatan untuk informasi lain dan peraturan setempat tentang pembuangan.
Apabila Anda memiliki pertanyaan yang spesifik tentang penerapan atau prosedur, silakan kunjungi situs web kami diwww.neogen.com atau hubungi perwakilan atau distributor Neogen setempat.

Tanggung Jawab Pengguna

Pengguna wajib memahami petunjuk produk dan informasi. Kunjungi situs web kami di www.neogen.com atau hubungi
perwakilan atau distributor Neogen setempat untuk mendapatkan informasi selengkapnya.
Saat memilih metode pengujian, Anda wajib mengetahui bahwa faktor eksternal, seperti metode pengambilan sampel,
protokol pengujian, penyiapan sampel, penanganan, dan teknik laboratorium, dapat memengaruhi hasil pengujian.
Pengguna bertanggung jawab memilih metode atau produk pengujian untuk mengevaluasi sejumlah sampel yang
memadai dengan matriks dan ketentuan mikrobial yang tepat untuk memastikan bahwa metode pengujian memenuhi
kriteria pengguna.
Pengguna juga wajib menentukan bahwa semua metode dan hasil pengujian memenuhi persyaratan pelanggan
dan pemasok.
Seperti halnya semua metode pengujian, hasil yang diperoleh dari penggunaan produk Neogen Food Safety apa pun bukan
merupakan jaminan kualitas terhadap matriks atau proses yang diuji.
Untuk membantu pelanggan mengevaluasi metode untuk berbagai matriks makanan, Neogen telah mengembangkan kit
Kontrol Matriks Deteksi Molekuler Neogen®. Jika diperlukan, gunakan Kontrol Matriks (MC) untuk menentukan apakah
matriks memengaruhi hasil Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2. Uji beberapa sampel,yang mewakili matriks, yaitu sampel yang diperoleh dari sumber yang berbeda, selama periode validasi mana pun bila
mengadopsi metode Neogen atau bila menguji matriks baru atau tidak dikenal atau matriks yang sudah mengalami
perubahan bahan mentah atau perubahan proses.

3

ID(Bahasa Indonesia)

Matriks dapat didefinisikan sebagai suatu tipe produk dengan properti intrinsik seperti komposisi dan proses.
Perbedaan antara matriks bisa sama sederhananya dengan dampak yang ditimbulkan karena perbedaan tersebut dalam
pemrosesan atau penyajiannya, misalnya mentah vs. dipasteurisasi; segar vs. dikeringkan, dll.

Batasan Garansi/Penggantian Terbatas

KECUALI SEBAGAIMANA YANG DITENTUKAN DI BAGIAN JAMINAN TERBATAS UNTUK SETIAP KEMASAN PRODUK,NEOGEN TIDAK BERTANGGUNG JAWAB TERHADAP SEMUA GARANSI SECARA TERSURAT MAUPUN TERSIRAT,TERMASUK TETAPI TIDAK TERBATAS PADA, JAMINAN KELAYAKAN JUAL ATAU KESESUAIAN UNTUK PENGGUNAANTERTENTU. Apabila ada Produk Neogen Food Safety yang cacat, Neogen atau distributor resminya, sesuai kebijakannya,
akan mengganti atau mengembalikan uang senilai harga pembelian produk. Hal-hal yang disebutkan di atas merupakan
sarana pemulihan hak yang tersedia bagi Anda. Silakan hubungi perwakilan Neogen Anda atau distributor resmi Neogen
untuk pertanyaan lebih lanjut.

Batasan Pertanggungjawaban Neogen

NEOGEN TIDAK BERTANGGUNG JAWAB ATAS SEGALA BENTUK KEHILANGAN ATAU KERUSAKAN, BAIK KERUSAKANSECARA LANGSUNG, TIDAK LANGSUNG, KHUSUS, INSIDENTAL, MAUPUN KONSEKUENSIAL, TERMASUK TETAPITIDAK TERBATAS PADA HILANGNYA KEUNTUNGAN. Bagaimanapun juga, sesuai teori hukum mana pun, Neogen tidak
akan memberikan penggantian melebihi harga pembelian produk yang diduga cacat.

Penyimpanan dan Pembuangan

Simpan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 pada suhu 2-8°C. Jangan dibekukan.
Jauhkan kit dari cahaya selama penyimpanan. Setelah membuka kit, periksa apakah kantung foil masih utuh. Jangan
digunakan jika kantung tersebut rusak. Setelah dibuka, tabung reagen yang tidak digunakan harus selalu disimpan dalamkantung yang dapat direkatkan kembali dan diberi desikan untuk menjaga stabilitas reagen terliofilisasi. Simpan kantong
yang telah dibuka pada suhu 2-8°C, selama tidak lebih dari 60 hari.
Jangan gunakan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 setelah tanggal kedaluwarsa.
Tanggal kedaluwarsa dan nomor lot tercantum pada label di bagian luar kotak. Setelah penggunaan, medium pengayaan
dan tabung Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 berpotensi mengandung bahan
patogen. Setelah pengujian selesai, patuhi standar industri pembuangan limbah yang terkontaminasi yang berlaku saat ini.
Baca Lembar Data Keselamatan untuk informasi lain dan peraturan setempat tentang pembuangan.

Petunjuk Penggunaan

Patuhi semua petunjuk dengan saksama. Karena jika tidak, hasilnya mungkin tidak akurat.
Secara berkala, bersihkan kontaminasi pada meja dan peralatan laboratorium (pipet, alat pembuka/penutup, dsb.)
dengan larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalam air) atau larutan penghilang DNA.
Pengguna harus menyelesaikan pelatihan kualifikasi operator (OQ) Sistem Deteksi Molekuler Neogen, sebagaimana
dijelaskan dalam dokumen “Protokol dan Petunjuk Kualifikasi Pemasangan (IQ)/Kualifikasi Operasional (OQ) untuk Sistem
Deteksi Molekuler Neogen”(6).
Baca Bagian “Instruksi Spesifik untuk metode tervalidasi” untuk persyaratan spesifik:
Tabel 3 untuk protokol pengayaan berdasarkan AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08 dan Sertifikat AOAC®
Performance Tested MethodSM #081501.
Tabel 4 untuk protokol pengayaan berdasarkan sertifikat NF Validation 3M 01/15-09/16.

Pengayaan Sampel

Tabel 2, 3, atau 4 berisi panduan pengayaan sampel makanan dan lingkungan. Pengguna bertanggung jawab memvalidasi
protokol pengambilan sampel atau rasio pengenceran alternatif guna memastikan metode pengujian ini memenuhi
kriteria pengguna.

Makanan

1. Biarkan medium pengayaan Larutan/Media Cair Demi-Fraser (termasuk amonium besi sitrat) menyesuaikan dengansuhu dalam laboratorium.
2. Campurkan sampel dan media pengayaan secara aseptis sesuai Tabel 2, 3, atau 4. Untuk semua sampel daging danyang mengandung banyak partikel, disarankan untuk menggunakan kantong filter.
3. Campurkan secara menyeluruh menggunakan blender, stomacher, atau dicampur secara manual selama 2 ± 0,2 menit.
Inkubasi pada suhu 37 ± 1°C sebagaimana tercantum pada Tabel 2, 3, atau 4.
4. Untuk produk-produk susu mentah (lihat Tabel 2, 3, atau 4), pindahkan 0,1 mL pengayaan primer ke dalam 10 mL
Larutan/Media Cair Fraser. Inkubasi pada suhu 37 ± 1°C selama 20-24 jam.

4

ID

(Bahasa Indonesia)

Sampel lingkungan

Alat pengumpulan sampel dapat menggunakan spons yang dibasahi dengan larutan yang menetralkan untuk
menonaktifkan efek dari sanitiser. Neogen merekomendasikan penggunaan spons selulosa bebas biosida. Larutan penetral
dapat berupa Kaldu Penetral Dey-Engley (D/E) atau Kaldu Letheen. Direkomendasikan untuk membersihkan area setelah
pengambilan sampel.
PERINGATAN: Apabila Anda memilih menggunakan Penyangga Penetral (NB) yang mengandung kompleks aril sulfonat
sebagai larutan hidrasi untuk spons, diperlukan pelarutan 1:2 (1 bagian sampel dilarutkan dengan 1 bagian larutan/
media cair pengayaan steril) pada sampel lingkungan yang diperkaya sebelum pengujian untuk memperkecil risiko dalamkaitannya dengan hasil negatif palsu yang dapat menyebabkan pelepasan produk yang terkontaminasi. Opsi lain adalah
dengan memindahkan 10 μL pengayaan penyangga penetral ke dalam tabung Larutan Lisis Neogen.
Ukuran area pengambilan sampel yang direkomendasikan untuk memverifikasi ada tidaknya patogen pada permukaan
yaitu minimal 100 cm2 (10 cm x 10 cm atau 4" x 4"). Saat mengambil sampel menggunakan spons, jangkaulah seluruh
area dengan dua gerakan (kiri ke kanan lalu naik turun) atau kumpulkan sampel lingkungan dengan mengikuti protokol
pengambilan sampel yang berlaku saat ini atau sesuai pedoman FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2), atau ISO 18593(7).
1. Biarkan medium pengayaan Larutan/Media Cair Demi-Fraser (termasuk amonium besi sitrat) menyesuaikan dengansuhu dalam laboratorium.
2. Campurkan sampel dan media pengayaan secara aseptis sesuai Tabel 2, 3, atau 4.
3. Campurkan secara menyeluruh menggunakan blender, stomacher, atau dicampur secara manual selama 2 ± 0,2 menit.
Inkubasi pada suhu 37 ± 1°C selama 24-30 jam sebagaimana tercantum pada Tabel 2, 3, atau 4.
Tabel 2: Protokol pengayaan umum pada suhu 37 ± 1°C menggunakan Larutan/Media Cair Demi-Fraser dan Larutan/
Media Cair Fraser sesuai keperluan.

Matriks Sampel

UkuranSampelVolumeLarutan/Media Cair
Pengayaan
(mL)

Waktu
Pengayaan
(jam)

25 g

225

24-30

1 spons

100 atau
225

24-30

1 swab

10

24-30

25 g

475

28-32

Daging, unggas,
makanan laut, dan
ikan yang diolah
dengan suhu panas,
dimasak, maupun
diawetkan
Produk susu yangdiolah dengan suhu
panas/dipasteurisasi
Hasil panen
dan sayuran
Makananmulti-komponen
Sampel lingkungan(a)Daging, unggas,
makanan laut,dan ikan mentah

5

(Bahasa Indonesia)

ID
Pengayaan Primer(Larutan/Media Cair Demi-Fraser)(a)Matriks Sampel

UkuranSampel

Produk susu mentah

25 gVolumeLarutan/Media Cair
Pengayaan
(mL)

225

Pengayaan Sekunder(Larutan/Media Cair Fraser)(a)Waktu
Pengayaan(jam)

UkuranSampelSuhu
Pengayaan
(°C)

Waktu
Pengayaan
(jam)

20-24

Pindahkan
0,1 mLke dalam
10 mL
Larutan/Media
Cair Fraser

37 ± 1

20-24

VolumeAnalisis
Sampel(b)10 μL(a) Larutan/Media Cair Demi-Fraser dan Fraser harus selalu disuplemen dengan suplemen Larutan/Media Cair Fraser(amonium besi sitrat) selama pengayaan primer maupun sekunder.
(b) Volume sampel yang dipindahkan ke tabung Larutan Lisis Neogen. Lihat langkah 4.6 pada bagian Lisis.

Instruksi Spesifik untuk Metode Tervalidasi
AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.08
AOAC® Performance Tested MethodSM #081501

Dalam program AOAC Research Institute OMASM dan PTMSM, Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria
monocytogenes 2 diketahui sebagai metode yang efektif untuk mendeteksi Listeria monocytogenes. Matriks yang diujidalam kajian ditunjukkan dalam Tabel 3.
Tabel 3. Protokol pengayaan yang menggunakan Larutan/Media Cair Demi-Fraser(a) pada suhu 37 ± 1°C menurut
AOAC OMASM 2016.08 dan Sertifikat PTMSM #081501.
Matriks Sampel

UkuranSampelVolume Larutan/
Media Cair Pengayaan
(mL)

Waktu
Pengayaan(jam)

Hot dog daging sapi, queso fresco, es krim
vanila, keju cottage dengan susu berlemak 4%,
susu murni cokelat 3%, selada romaine, bayam
mentah dalam kemasan, salmon asap dingin

25 g

225

24-30

Ayam mentah

25 g

475

28-32

Daging kalkun

125 g

1125

24-30

Melon utuh

Volume yang cukup
untuk mengapungkan
melon

26-30

Besi tahan karat

1 spons

225

24-30

Beton non-ekspos

1 spons

100

24-30

Plastik(c)1 swab10

24-30

Sampellingkungan:

Blewah(b)Seluruh sampel validasi AOAC dicampurkan menggunakan stomacher kecuali ada ketentuan lainnya.
(a)		Larutan/Media Cair Demi-Fraser dan Fraser harus selalu disuplemen dengan suplemen Larutan/Media Cair Fraser(amonium besi sitrat) selama pengayaan primer maupun sekunder.
(b) Mencampurkan sampel secara manual.
(c)		 Mencampurkan sampel menggunakan vortex.
6

ID(Bahasa Indonesia)

Známka NF Validation udělená organizací AFNOR Certification

3M 01/15-09/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Untuk informasi selengkapnya mengenai berakhirnya masa berlaku, lihat sertifikat NF VALIDATION dengan mengunjungi
situs web di atas.
Metode dengan sertifikasi NF VALIDATION yang memenuhi ISO 16140-2(6) dibandingkan dengan ISO 11290(3)Ruang lingkup validasi: Semua sampel makanan manusia dan sampel lingkungan (tidak termasuk sampel produksi primer)
Persiapan sampel: Sampel harus disiapkan sesuai dengan EN ISO 11290-1(3) dan EN ISO 6887(8)Versi perangkat lunak: Lihat sertifikat
Tabel 4: Protokol pengayaan sesuai metode dengan sertifikasi NF VALIDATION method 3M 01/15-09/16 pada suhu
37 ± 1°C menggunakan Larutan/Media Cair Demi-Fraser dan Larutan/Media Cair Fraser sesuai keperluan.

Protokol Umum

VolumeLarutan/Media Cair
Pengayaan(mL)

UkuranSampelSemua sampel
makanan(kecuali daging
mentah, makanan lautmentah, dan produksusu mentah

25 g

Sampel lingkungan

25 g, 1 swab,
atau 1 seka

Suhu
Pengayaan(± 1°C)

225

37

25 g

225

37

24-30

VolumeAnalisis
Sampel(a)20 µL

Titik Interupsi yang
Diterima• Larutan/Media Cair
Demi-Fraser hingga
72 jam• Lisat pada suhu -20°C• Lisat pada suhu 4°C
hingga 72 jamPengayaan Primer(Larutan/Media Cair Demi-Fraser)(b)VolumeProtokol
Larutan/
Suhu
Waktu
Khusus Ukuran
Media Cair Pengayaan Pengayaan
SampelPengayaan(± 1°C)(jam)(mL)

Dagingmentah,makananlautmentah,dan
produksusu
mentahWaktu
Pengayaan
(jam)

20-24

Pengayaan Sekunder(Larutan/Media Cair Fraser)(b)
UkuranSampelPindahkan
0,1 mL kedalam 10mL Larutan/
Media Cair
FraserSuhu
Waktu
VolumePengayaan Pengayaan Analisis(± 1°C)(jam)
Sampel(c)TitikInterupsi
yang
Diterima• Larutan/
Media
Cair
Fraserhingga 72
jam

37

20-24

10 µL

• Lisat pada
suhu
-20°C
• Lisat padasuhu 4°C
hingga 72jam(a) Volume sampel yang dipindahkan ke tabung Larutan Lisis Neogen. Lihat langkah 4.6 pada bagian Lisis.
(b) Larutan/Media Cair Demi-Fraser dan Fraser harus selalu disuplemen dengan suplemen Larutan/Media Cair Fraser(amonium besi sitrat) selama pengayaan primer maupun sekunder.
(c) Volume sampel yang dipindahkan ke tabung Larutan Lisis Neogen. Lihat langkah 4.6 pada bagian Lisis.
CATATAN: Pengujian sampel berukuran lebih dari 25 g belum dilakukan dalam studi NF validation.

7

ID(Bahasa Indonesia)

Persiapan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen®
1. Basahi kain dengan larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalam air) atau larutan sejenis lainnya dan seka Baki
Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen®.
2. Bilas Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen dengan air.
3. Gunakan handuk sekali pakai untuk menyeka Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen hingga kering.
4. Pastikan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen dalam kondisi kering sebelum digunakan.
Persiapan Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen®
Tempatkan Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen® di meja laboratorium; Gunakan blok pendingin dilaboratorium dengan suhu ruangan laboratorium (20-25°C).
Persiapan Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen®
Letakkan Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen® dalam unit pemanas blok ganda kering. Nyalakan unit
pemanas blok kering dan atur suhu agar Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen dapat mencapai danmempertahankan suhu 100 ± 1°C.
CATATAN: Tergantung pada unit pemanas, tunggu selama sekitar 30 menit hingga Sisipan Blok Pemanas Deteksi
Molekuler Neogen mencapai suhu yang diinginkan. Gunakan termometer yang dikalibrasi dan sesuai (misalnya,
termometer yang dimasukkan sebagian atau termometer digital ganda, bukan termometer yang dimasukkan keseluruhan)yang diletakkan di lokasi yang ditentukan, lakukan verifikasi bahwa Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen
berada pada 100 ± 1°C.
Persiapan Instrumen Deteksi Molekuler Neogen®
1. Buka Perangkat Lunak Sistem Deteksi Molekuler Neogen® kemudian login. Hubungi perwakilan Neogen Food Safety
Anda guna memastikan Anda memiliki versi perangkat lunak paling mutakhir.
2. Nyalakan Instrumen Deteksi Molekuler Neogen.
3. Buat atau edit proses dengan data untuk setiap sampel. Baca Panduan Pengguna Sistem Deteksi Molekuler Neogen
untuk keterangan lengkap.
CATATAN: Instrumen Deteksi Molekuler Neogen harus berada pada Status Siaga sebelum Baki Pemuat Kecepatan
Deteksi Molekuler Neogen dimasukkan dengan tabung reaksi. Tahap pemanasan ini memerlukan waktu sekitar 20 menit
dan ditandai dengan nyala lampu ORANYE pada bilah status instrumen. Setelah instrumen siap digunakan, bilah statusakan berubah menjadi HIJAU.
Lisis
Lepaskan bagian bawah Rak Larutan Lisis Neogen dengan obeng sebelum meletakkannya dalam Sisipan Blok Pemanas
Deteksi Molekuler Neogen.

1. Panaskan tabung Larutan Lisis (Larutan Lisis Neogen) dengan cara menyetel rak pada suhu ruangan (20-25°C) selamasatu malam (16-18 jam). Cara lain yang dapat digunakan untuk menyeimbangkan tabung Larutan Lisis Neogen padasuhu kamar adalah dengan meletakkan tabung Larutan Lisis Neogen di meja laboratorium sedikitnya selama 2 jam,inkubasi tabung Larutan Lisis Neogen dalam inkubator 37 ± 1°C selama 1 jam, atau meletakkannya di dalam pemanas
blok ganda kering selama 30 detik pada suhu 100°C.
2. Balikkan tabung dalam kondisi tertutup agar isinya tercampur. Lanjutkan ke langkah berikutnya dalam waktu 4 jam.
3. Buang larutan/media cair pengayaan dari inkubator.
4. Satu tabung Larutan Lisis Neogen dibutuhkan untuk setiap sampel dan sampel Kontrol Negatif (NC)(media pengayaan steril).
4.1 Strip tabung Larutan Lisis Neogen dapat dipotong sesuai jumlah tabung Larutan Lisis Neogen yang diinginkan. Pilih
jumlah tabung Larutan Lisis Neogen atau strip 8 tabung yang diperlukan. Letakkan tabung Larutan Lisis Neogen
pada rak kosong.
4.2 Untuk mencegah kontaminasi silang, buka tutup satu strip tabung Larutan Lisis Neogen satu per satu dan gunakan
ujung pipet baru untuk setiap tahap pemindahan.

8

ID(Bahasa Indonesia)

4.3 Pindahkan sampel yang diperkaya ke Tabung Larutan Lisis Neogen sesuai petunjuk di bawah ini:
Pindahkan setiap sampel yang diperkaya ke tabung Larutan Lisis Neogen tersendiri terlebih dahulu. Pindahkan
NC paling akhir.
4.4 Gunakan Alat Penutup/Pembuka Deteksi Molekuler Neogen®-Lisis untuk membuka setrip tabung Larutan Lisis
Neogen satu per satu.
4.5 Buang penutup tabung Larutan Lisis Neogen – jika lisat akan disimpan untuk pengujian ulang, letakkan penutup ke
dalam wadah bersih untuk penggunaan ulang setelah lisis.
4.5.1 Untuk memproses lisat yang disimpan, lihat Apendiks A.
4.6 Pindahkan 20 µL sampel ke dalam tabung Larutan Lisis Neogen kecuali ada ketentuan lainnya dalam Protokol padaTabel 2, 3, atau 4 (mis., produk susu mentah atau ketika memakai sampel lingkungan yang menggunakan 10 µL
penyangga penetral).
20 µl

5. Ulangi langkah 4.4 sampai 4.6 hingga setiap sampel telah ditambahkan ke dalam tabung Larutan Lisis Neogen yangsesuai dalam strip.
6. Setelah selesai memindahkan semua sampel, pindahkan 20 µL NC (media pengayaan steril, mis., Larutan/Media
Cair Demi-Fraser) ke dalam tabung Larutan Lisis Neogen. Jangan gunakan air sebagai NC.
7. Pastikan bahwa suhu Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen berada pada 100 ± 1°C.
8. Letakkan rak tabung Larutan Lisis Neogen yang tidak tertutup di dalam Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler
Neogen lalu panaskan selama 15 ± 1 menit. Selama pemanasan, Larutan Lisis Neogen akan berubah dari merah muda(dingin) menjadi kuning (panas).
8.1 Sampel yang belum dipanaskan dengan benar selama tahap pengujian lisis dapat dianggap sebagai potensi bahaya
biologis dan TIDAK BOLEH dimasukkan ke dalam Instrumen Deteksi Molekuler Neogen.
9. Keluarkan rak tidak tertutup berisi tabung Larutan Lisis Neogen dari blok pemanasan dan biarkan hingga dingin dalam
Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen selama 5 sampai 10 menit. Sisipan Blok Pendingin Molekuler
Neogen, yang digunakan pada suhu ruangan harus diletakkan langsung di meja laboratorium. Ketika dingin, larutan lisis
akan kembali berwarna merah muda.
10. Keluarkan rak tabung Larutan Lisis Neogen dari Sisipan Blok Pendingin Deteksi Molekuler Neogen.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

9

ID(Bahasa Indonesia)

Amplifikasi
1. Satu Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 diperlukan untuk setiap
sampel dan NC.
1.1 Setrip tabung reagen dapat dipotong sesuai jumlah tabung yang diinginkan. Pilih jumlah Tabung Reagen Deteksi
Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 atau strip 8 tabung yang dibutuhkan.
1.2 Letakkan Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 di rak yang kosong.
1.3 Jangan sampai mengguncang pelet reagen di bagian bawah tabung.
2. Pilih 1 tabung Kontrol Reagen Neogen lalu letakkan di rak.
3. Untuk menghindari kontaminasi silang, buka tutup strip Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian
Listeria monocytogenes 2 satu demi satu dan gunakan ujung pipet baru untuk setiap tahap pemindahan.
4. Pindahkan lisat ke Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 dan tabung
Kontrol Reagen Neogen sebagaimana dijelaskan di bawah ini:
Pindahkan setiap sampel lisat ke setiap Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria
monocytogenes 2 terlebih dahulu, diikuti dengan NC. Basahi tabung Kontrol Reagen Neogen paling akhir.
5. Gunakan Alat Penutup/Pembuka Deteksi Molekuler Neogen® - Reagen untuk membuka Tabung Reagen Deteksi
Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 strip demi strip. Buang penutup.
5.1 Pindahkan 20 µL Sampel lisat dari ½ atas cairan (hindari pengendapan) dalam Tabung Larutan Lisis Neogen
ke dalam Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 terkait.
Semprotkan dengan kemiringan tertentu sehingga tidak mengganggu pelet. Campurkan dengan cara menyedot
dan menyemprotkan perlahan-lahan sebanyak 5 kali.
5.2 Ulangi langkah 5.1 sampai setiap Sampel lisat telah ditambahkan ke Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen
untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 dalam strip.
5.3 Tutup Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 dengan tutup
tambahan yang tersedia dan gunakan sisi bulat pada Alat Penutup/Pembuka Deteksi Molekuler Neogen - Reagen
untuk memberikan tekanan dengan bergerak maju-mundur guna memastikan bahwa tutup sudah terpasang rapat.
5.4 Ulangi langkah 5.1 hingga 5.3 sesuai kebutuhan, sesuai jumlah sampel yang akan diuji.
5.5 Setelah semua sampel lisat dipindahkan, ulangi langkah 5.1 untuk memindahkan 20 µL lisat NC ke dalam Tabung
Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2.
5.6 Pindahkan 20 µL lisat NC ke dalam tabung Kontrol Reagen Neogen. Semprotkan dengan kemiringan tertentu
sehingga tidak mengganggu pelet. Campurkan dengan cara menyedot dan menyemprotkan perlahan-lahan
sebanyak 5 kali.
6. Masukkan tabung tertutup ke dalam Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen yang bersih dan yang telahdidekontaminasi. Tutup dan segel tutup Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen.

20 µL

7. Periksa dan konfirmasi proses yang telah dikonfigurasi di Perangkat Lunak Sistem Deteksi Molekuler Neogen.
8. Klik tombol Start di perangkat lunak dan pilih instrumen yang akan digunakan. Tutup instrumen yang dipilih akan
membuka secara otomatis.
9. Masukkan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen ke Instrumen Deteksi Molekuler Neogen dan tutup
dengan rapat untuk memulai pengujian. Hasilnya akan ditampilkan setelah 75 menit, meskipun hasil positif dapat
terdeteksi lebih cepat.
10.Setelah pengujian selesai, keluarkan Baki Pemuat Kecepatan Deteksi Molekuler Neogen dari Instrumen Deteksi
Molekuler Neogen dan buang tabung dengan merendamnya ke dalam larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalamair) atau larutan sejenisnya selama 1 jam dan jauhkan dari area persiapan pengujian.

10

ID

(Bahasa Indonesia)

PERHATIAN: Untuk meminimalkan risiko munculnya hasil positif palsu karena kontaminasi silang, jangan membuka
tabung reagen yang berisi DNA hasil amplifikasi. Ini termasuk Tabung Reagen Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian
Listeria monocytogenes 2, tabung Kontrol Reagen Neogen, dan tabung Kontrol Matriks. Buang tabung reagen yangtersegel dengan merendamnya ke dalam larutan pemutih rumah tangga 1-5% (v:v dalam air) atau larutan sejenisnyaselama 1 jam dan jauhkan dari tempat persiapan pengujian.

Hasil dan Interpretasi

Terdapat suatu algoritme yang menginterpretasikan kurva keluaran cahaya yang dihasilkan dari deteksi amplifikasi asam
nukleat. Hasil dianalisis secara otomatis oleh perangkat lunak dan diberi kode warna berdasarkan hasil tersebut. Hasil yang
Positif atau Negatif ditentukan dari analisis sejumlah parameter kurva khusus. Hasil yang dianggap positif dilaporkan secara
aktual sedangkan hasil Negatif dan Perlu Pemeriksaan akan ditampilkan setelah pengujian selesai.
Sampel yang dianggap positif harus dikonfirmasi sesuai dengan standar prosedur pengoperasian laboratorium atau dengan
mematuhi konfirmasi metode rujukan yang sesuai(1, 2, 3), dimulai dengan pemindahan dari pengayaan primer ke larutan/
media cair pengayaan sekunder (jika tersedia), dilanjutkan dengan pengusapan dan konfirmasi isolat menggunakan metodebiokimia dan serologi yang sesuai.
CATATAN: Sampel yang negatif tidak akan memberikan hasil pembacaan nihil karena sistem dan reagen amplifikasi
Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2 memiliki pembacaan unit cahaya relatif (RLU)“latar belakang”.
Meskipun jarang terjadi, jika output cahaya tidak normal, algoritme akan memberi label “Perlu Pemeriksaan”.
Neogen menyarankan pengguna mengulang pengujian untuk sampel yang berstatus Perlu Pemeriksaan. Jika hasil tetap
menunjukkan label Perlu Pemeriksaan, lanjutkan ke pengujian konfirmasi menggunakan metode yang Anda pilih atausebagaimana ditentukan oleh peraturan setempat.
Tabel 5: Simbol hasil untuk sampel dan interpretasi sebagaimana disediakan oleh Perangkat Lunak Sistem Deteksi
Molekuler Neogen.
Tipe Bagus

Simbol Hasil Bagus

Hasil

Interpretasi

SampelPositif

Sampel dianggap positif mengandung patogen target.

SampelNegatif

Sampel negatif mengandung patogen target.

SampelDihambatMatriks sampel menghambat pengujian. Mungkin diperlukan
pengujian ulang. Lihat bagian pemecahan masalah dan Petunjuk
Produk kit pengujian untuk informasi selengkapnya.

SampelPerlu
Pemeriksaan

Ada atau tidaknya patogen target tidak dapat ditentukan. Mungkin
diperlukan pengujian ulang. Lihat bagian pemecahan masalah dan
Petunjuk Produk kit pengujian untuk informasi selengkapnya.

SampelKesalahan

Tidak ada bioluminesensi yang terdeteksi. Mungkin diperlukan
pengujian ulang. Lihat bagian pemecahan masalah dan Petunjuk
Produk kit pengujian untuk informasi selengkapnya.

Konfirmasi Hasil Sesuai dengan Metode Bersertifikasi NF VALIDATION
Opsi 1: Menggunakan standar ISO 11290(3) yang dimulai dari pengayaan Demi-Fraser
Opsi 2: Mengisolasi agar PALCAM atau agar kromogenik yang membentuk bagian dari metode bersertifikat
NF VALIDATION untuk pendeteksian Listeria monocytogenes. Kehadiran koloni khas cukup untuk memastikan keberadaan
Listeria monocytogenes.
Opsi 3: Menggunakan probe asam nukleat sebagaimana dijelaskan dalam standar EN ISO 7218(5) yang dilakukan padakoloni terisolasi dari agar tertentu (lihat Opsi 1 atau 2).
Opsi 4: Menggunakan metode bersertifikasi NF VALIDATION lainnya, yang prinsipnya harus berbeda dari Deteksi
Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2. Protokol lengkap yang dijelaskan untuk metode tervalidasi
kedua harus dipakai. Semua langkah sebelum konfirmasi dimulai harus sama pada kedua metode.
Dalam hal terjadi hasil yang tidak sesuai (dianggap positif oleh metode alternatif, yang tidak dikonfirmasi oleh salah satu
cara yang diuraikan di atas), laboratorium harus mengikuti langkah-langkah yang diperlukan untuk memastikan keabsahan
hasil yang diperoleh.
Dalam hal terjadi hasil yang tidak sesuai (dianggap positif dengan Deteksi Molekuler Neogen untuk Pengujian Listeria
monocytogenes 2, yang tidak dikonfirmasi oleh salah satu cara yang diuraikan di atas, laboratorium harus mengikuti
langkah-langkah yang diperlukan untuk memastikan keabsahan hasil yang diperoleh.
Apabila Anda memiliki pertanyaan yang spesifik tentang penerapan atau prosedur, silakan kunjungi situs web kami diwww.neogen.com atau hubungi perwakilan atau distributor Neogen setempat.
11

ID(Bahasa Indonesia)

Apendiks A. Interupsi Protokol: Penyimpanan dan pengujian ulang lisat yang dipanaskan.
1. Untuk menyimpan lisat yang dipanaskan, tutup kembali tabung lisis dengan penutup bersih (lihat bagian “Lisis”, 4.5).
2. Simpan pada suhu 4 hingga 8°C sampai 72 jam.
3. Siapkan sampel yang disimpan untuk amplifikasi dengan membalik 2-3 kali agar tercampur.
4. Lepas penutup tabung.
5. Letakkan tabung lisat campuran pada Sisipan Blok Pemanas Deteksi Molekuler Neogen dan panaskan pada suhu
100 ± 1°C selama 5 ± 1 menit.
6. Keluarkan rak berisi tabung Larutan Lisis Neogen dari blok pemanasan dan biarkan hingga dingin dalam Sisipan Blok
Pendingin Deteksi Molekuler Neogen selama 5 sampai 10 menit.
7. Lanjutkan protokol pada bagian 'Amplifikasi' yang dijelaskan di atas.

Referensi:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identification of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples.
Effective Date: May 1, 2013.
3. NF EN ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs – Horizontal Method for the Detection andEnumeration of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. NF EN ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. NF EN ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.
7. NF EN ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal methods for sampling techniques fromsurfaces using contact plates and swabs.
8. NF EN ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension anddecimal dilutions for microbiological examination.

Penjelasan Simbol Label Produkinfo.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
FS00867A