③「放流用サケ稚魚の原虫病総合的予防技術の開発」
北海道立総合研究機構さけます・内水面水産試験場・内水面資源部
サケ原虫病対策チーム
研究主幹 水野伸也【背景と目的】サケの孵化放流事業では、飼育過程の稚魚に発生する原虫病対策のため、感染稚魚に対して食酢食塩水浴が行われている。この水浴では、池から取り上げの際に稚魚が大きなストレスを受け弱る、作業の繁雑性から過大な労力がかかる等の問題が生じている。従来の原虫病対策は、発症後の対策に依存してきたが、予防技術がこれまで開発された例はない。本研究は、感染経路遮断および稚魚の抗病性向上による原虫病予防技術の開発を目的とした。

【 内 容 】道内孵化場のサケ稚魚に発症する原虫病の主な原因虫は、イクチオボドとトリコジナである。本研究では先ず、各稚魚の体表全体に寄生する両原因虫遺伝子の検出定量系を確立した。この系を用いて感染源および感染経路を探索した結果、イクチオボドの感染源は野生サケのみ、トリコジナの感染源は野生サケ科魚類全般であり、両原因虫は飼育用水を介して水平感染することを証明した。この感染経路遮断による予防技術として、食酢による飼育池の消毒と、中圧紫外線照射による用水の殺虫が有効であることを示した。また、抗菌性のあるハーブ7種それぞれの精油を添加した配合飼料を稚魚に与え、抗病性向上による原虫病予防効果を検討した結果、オレガノ精油が最も高い予防効果を示した。オレガノ精油の有効添加濃度と有効給餌期間を解明することにより、ハーブ給餌による予防技術を開発して特許を出願した。

【成果と波及効果】ハーブ給餌による予防技術について、2 件の特許を取得した。共同出願した民間企業の製品「サケ稚魚用天然飼料サーモンリキッド MM」を用いて 5 箇所の孵化場で実証試験を行い、6 例の飼育池で予防効果を証明した。この 6 例では、稚魚の飼育期間中、原虫病の発症が減少したことによって、食酢食塩水浴の作業回数が皆無、あるいは減り、従来課題とされた水浴作業の軽減につながった。平成 29 年度から製品の道内普及を目的とした道庁補助事業が採択され、本事業を通して製品の普及を進めている。現在までに、製品は道内複数の孵化場と東北の一部の孵化場で採用され、今後もさらなる普及が期待される。また、食酢による池消毒は、従前の塩素剤消毒に比べ流出事故の危険性が低いことから、道内一部の孵化場では既に、安心安全な原虫病予防技術として、採卵用サケ親魚蓄養後や稚魚の池換え時の飼育池消毒法に活用されている。

68

【背景と目的】

放流用サケ稚魚の原虫病総合的予防技術の開発

サケ人工孵化放流事業の概要について
人工採卵・受精
蓄 養

卵収容・管理親魚捕獲

地方独立行政法人 北海道立総合研究機構
さけます・内水面水産試験場 サケ原虫病対策チーム

検 卵

海洋生活

代表者 水野 伸也

孵化・仔魚飼育

稚魚放流【業績関連研究課題と実施年度】
北海道立総合研究機構 重点研究 「サケ稚仔魚の原虫病総合的予防技術開発」（平成26-28）

稚魚飼育

原虫病の発症によるサケ稚魚の死亡被害

原因虫とその病害性について

鞭毛虫 イクチオボド Ichthyobodo salmonis

繊毛虫 トリコジナ Trichodina truttae

・両原因虫が稚魚の体表に寄生して、上皮組織を損傷壊死させ、稚魚が死亡する
・イクチオボドが鰓に寄生すると、稚魚の海水適応能が低下し、稚魚が海に降りられない

白く見えるものが全て死亡した稚魚
北海道内の全孵化場（約120施設）のうち約3割の孵化場で、稚魚に原虫の寄生が確認されている(Mizuno et al. 2016a,b)

稚魚の体表に寄生した原虫を脱離させるための稚魚の食酢食塩水浴作業

原虫病対策（食酢食塩水浴）の課題【成果】

原虫の検出定量技術の確立

・池から取り揚げる際、稚魚が大きなストレスを受けて弱る・繁雑な作業になり、過大な労力がかかる

1. 稚魚の体表から全原虫の脱離2. トリコジナの計数

0.2%トリカイン水溶液に稚魚を10分間浸漬させ、稚魚の体表から全ての原虫を脱離トリカイン溶液をプランクトン計数盤に載せ、実体顕微鏡観察によりトリコジナを計数

3. 原因虫遺伝子の検出と定量

・原虫病の発見が手遅れになった場合、感染稚魚が食酢食塩水浴に耐えられないため、講じる対策がない
・従来の原虫病対策は、発症後の対策に依存してきたが、これまで予防技術が開発された例はない
プランクトン計数盤

原虫病予防技術を開発し、食酢食塩水浴の作業を軽減する必要性がある【研究目的】
本研究では、感染経路遮断および稚魚の抗病性向上により、原虫病予防技術の開発を行う

サーマルサイクラー

リアルタイムPCR

トリカイン溶液から抽出したDNA中のイクチオボドおよびトリコジナのリボゾーム
RNA遺伝子のコピー数を定量

本法は、稚魚の個体ごとに、トリコジナとイクチオボドの定量データをとることができる

69

サケからのイクチオボド遺伝子の検出例想定される原虫の水平感染の経路
河 川

野生サケ稚魚野生サケ稚魚
河川遡上サケ親魚

孵化場

イクチオボドイクチオボドリボソーム
RNA遺伝子由来
PCR産物

サクラマストリコジナ

放流用サケ稚魚
分子量マーカー

野生稚魚

孵化場稚魚

沿岸漁獲親魚陽性 分子量マーカー
対照

河川遡上親魚

河川遡上サケ親魚・感染源や媒体になる可能性のある検体（河川に生息する野生魚、河川の水及び底質、孵化場飼育池の水等）からイクチオボド及びトリコジナの遺伝子あるいは虫体の検出を行った

飼育用水の紫外線殺虫による原虫病予防技術の開発【水槽の各種消毒による原虫病予防効果】
消毒後飼育終了時

28
1.E+07

各種消毒飼育終了時稚魚
試験開始前稚魚・感染魚飼育水 サンプリング
サンプリングイクチオボドの感染魚飼育

紫外線照射装置
対照群

UV照射群【飼育用水の紫外線殺虫による原虫病予防効果】

1.E+06※寄生強度の値は平均値+標準偏差を示す

イクチオボド寄生強度

1.E+05
1.E+08

イクチオボドリボソーム
RNA遺伝子コピー数（コピー/g）

各種消毒後水槽を用いた止水飼育稚魚感染試験

イクチオボドリボソーム
RNA遺伝子コピー数（コピー/g）

感染魚
止水飼育1.E+04
1.E+03
1.E+02
1.E+01

NDND

ND

1.E+00

NDND

ND

ND

トリコジナ寄生強度
1.E+04

1.E+07

トリコジナ個体数（個体/g）

7

飼料の給餌ヘッドタンク【先行研究】 原虫の致死UV-C照射強度 (Mizuno et al. 2019)
イクチオボド：1.0x106µW·sec/cm2
トリコジナ：8.0x105μW·sec/cm2

イクチオボドの寄生強度または存在量
試験開始後
0
日数(Mizuno et al. 2017の図を改変)

降海直後サケ稚魚・沿岸回帰サケ親魚消毒を用いた感染経路遮断による原虫病予防技術の開発【試験の設定】海 洋？

・原虫が検出される場合、その検体と非感染サケ稚魚を同居させ、感染試験を行い、その検体が感染源になり得るか調べた

ニジマス

アメマス

1.E+06
1.E+05
1.E+04
1.E+03
1.E+021.E+01

ND

ND

1.E+00ND

1.E+03

1.E+02

1.E+01ND

1.E+00NDND※寄生強度の値は平均値+標準偏差を示す

飼育用水の紫外線殺虫は、原虫病予防技術として有効である

食酢水、塩素剤、ヨード剤、天日干（7日間）による消毒が、原虫病予防技術として有効である

原虫病予防効果をもつ植物抽出物の検索

抗病性向上による原虫病の予防技術【試験の設定】 飼育日数 0【先行研究】 植物抽出物添加飼料の給餌が、海産魚で大型寄生虫の予防に効果を示す【特許4530307号】ユーカリ油またはクローブ油を添加した飼料を、養殖トラフグに給餌すると、エラムシ症が予防される【特許5010809号】シナモンまたはクローブを添加した飼料を、養殖ブリに給餌すると、ハダムシ症が予防される

14

飼育試験全景水平感染試験

28

14日間の感染試験

イクチオボドリボソーム
RNA遺伝子コピー数（コピー/g）

発明技術を知財化し、この知財を活用した製品を使って、孵化場でサケ稚魚の事業飼育を行い、発明技術の実用性を証明する。
さらに、この製品を北海道内に普及させたい

イクチオボド寄生強度

9.E+078.E+07

7.E+07
6.E+07

5.E+07
4.E+07
3.E+072.E+07
1.E+070.E+00ND

トリコジナ寄生強度
3500※寄生強度の値は平均値+標準偏差を示す

3000
2500

2000
1500

1000
5000

飼料添加植物油

オレガノ（ハーブの一種）

稚魚サンプリング※寄生強度の値は平均値+標準偏差を示す

トリコジナ個体数（個体/g）

稚魚サンプリング

1.E+08【着想したこと】 植物抽出物添加飼料給餌により、サケ稚魚の原虫病を予防できないか

どの植物抽出物を給餌すれば、サケ稚魚の原虫病が予防できるか14日間予防給餌

飼料の給餌
感染試験

NDND

飼料添加植物油

検索した7つの植物のうち、最もオレガノ精油の給餌がイクチオボドとトリコジナの感染を予防した

70ハーブ添加飼料給餌による原虫病予防技術の実証

ハーブ添加飼料給餌による原虫病予防技術の開発

イクチオボドリボソーム
RNA遺伝子コピー数（コピー/g）

実証飼育試験の様子

1. 有効添加濃度の解明
最も0.02%オレガノ精油添加飼料の給餌が、稚魚へのイクチオボドとトリコジナの感染を予防した(Mizuno et al. 2018)

2. 有効給餌期間の解明(Mizuno 2019)

3. 稚魚への安全性証明
オレガノ精油添加飼料給餌は、飼料効率、稚魚の成長、生残、海水適応能、浸透圧調節能力、ストレス応答、免疫機能および嗅覚応答に悪影響を与えない(Mizuno et al. 2018)

12000

対照
オレガノ給餌稚魚累積死亡数

10000
8000
6000

160000

12日目対照群のみ食酢水浴

4000
2000

イクチオボド寄生強度
12日目対照群のみ食酢水浴※寄生強度の値は平均値±標準偏差を示す

140000120000100000

対照
オレガノ給餌

80000
60000
40000
20000

トリコジナ個体数（個体/g）

稚魚累積死亡数（尾）オレガノ精油添加飼料を稚魚に少なくとも連続7日間給餌すると、原虫病の予防効果が発揮される

1800000030252015102338523852

トリコジナ寄生強度※寄生強度の値は平均値+標準偏差を示す

12日目対照群のみ食酢水浴

1050001023385201023

飼育日数

飼育日数

・5箇所の孵化場で実施した延べ6例の実証試験で、オレガノ給餌による原虫病予防技術を実証した・オレガノ添加飼料給餌は原虫病の発症を予防し、従来課題であった食酢食塩水浴の作業を削減した【波及効果】

ハーブ添加飼料給餌による原虫病予防技術の実用化

食酢水消毒による原虫病予防技術の実用化

・塩素剤による消毒では、塩素の流出事故が発生する危険がある【発明技術の特許化】 ・特許第6351016号 2018「放流用サケ稚魚の感染症予防剤」

・気温の低い秋季から冬季にかけては、十分に天日干しができない可能性がある・特許第6508754号 2019「放流用サケ稚魚の感染症予防剤（分離出願） 」【発明技術の製品化】 製品名：
サケ稚魚用天然飼料
サーモンリキッドMM
販売単位：1ケース（16kgポリタンク）
さけます配合飼料40袋（800kg）
混合用
原虫病の発症した稚魚飼育池の消毒

採卵用親魚の蓄養池の消毒（蓄養後、稚魚飼育池として使用）

稚魚輸送用キャンバス水槽の消毒

稚魚の池入れ替え時の水平感染予防

親魚から稚魚への水平感染予防

輸送稚魚への水平感染予防【製品の活用】 ・北海道内及び東北地方の一部の孵化場の事業放流用稚魚飼育で採用されている・製品の道内普及を目的とした平成29年度～北海道庁補助事業「秋サケ資源回復緊急対策事業」が採択され、本事業を用いて普及を進めており、今後もさらなる普及が期待される。

安心安全な食酢水による消毒法が、北海道内の一部の孵化場で採用されている【まとめ】

サケ増殖事業における理想的な原虫病予防対策
蓄養池の消毒活魚タンクの消毒（食酢・塩素剤）（食酢・塩素剤）

採卵用具の消毒（食酢・塩素剤） 卵及び孵化槽の消毒

来年も、健康な稚魚が放流できますように（ヨード剤）
消毒

発眼卵消毒（ヨード剤）

ご清聴ありがとうございました（水野・浦和 2019の図を改変）

ハーブ添加飼料の給餌（食酢食塩水浴の回数削減）

飼育用水の清浄化（感染源のない用水選択）（用水の紫外線殺虫）

オレガノ精油添加飼料で飼育された放流用サケ稚魚71