ISSN

微生物遺伝資源探索収集調査報告書
第 20 巻平成 18（2006）年度

独立行政法人 農業生物資源研究所

0915-2830

編 集
独立行政法人
農業生物資源研究所
基盤研究領域 ジーンバンク
佐藤 豊三・青木 孝之
澤田 宏之・永井 利郎
富岡 啓介
http://www.gene.affrc.go.jp/

微生物遺伝資源の調査プロフィール

ブロッコリーに発生した細菌 Xanthomonas campestris pv. campestrisによる黒腐病（井上ら）

ニンジンこぶ病を引き起こす
細菌 Rhizobacter dauci のサンプリング（桑田・岩谷）250µm
Acaulospora morrowiae 様のアーバスキュラー菌根菌の胞子（小島）

糸状菌 Hypericum androsaemum による
ヒペリカム褐紋病（竹内ら）

― 1 ―

ま

え

が

き

わが国の農林業・食品産業のさらなる発展を図るためには，農作物・食品の改良やバイオテクノ
ロジー等の先端技術の利活用が不可欠であり，科学技術基本計画の中で示されているように，それらを支える生物遺伝資源の確保および利用等に係る知的基盤の整備が今後とも重要である．国際的にも，品種の均一化，熱帯林の減少，生態系の変化等により貴重な生物遺伝資源が急速に減失してしまう恐れがあるなどの理由から，生物遺伝資源の保全と持続的な利用の重要性がますます高まっているところである．一方，生物多様性条約の発効以来，人類共通の財産と言われていた生物遺伝資源に係る国際的な認識から原産国の主権的権利を尊重する方向に変化していることから，わが国も本条約に従いつつ国際的な協力関係を一層発展させ，生物遺伝資源の収集と保全に努める必要が生じている．
農業生物資源ジーンバンク事業では，以上の情勢に鑑みつつ，農林業・食品産業に関連する植物，
微生物，動物およびDNA遺伝資源の保存・配布に係る活動に取り組んでいる．微生物部門では，農作物の病原微生物や，キノコ，酵母，乳酸菌，納豆菌等の食品微生物などの貴重な微生物を収集・保存するとともに，それらの特性を調査・評価してデータベース化し，両者をリンクさせた形で広く公開してユーザーが検索・活用できるように提供している．
本報告書は，平成 18 年度に微生物部門において取り組んだ遺伝資源の国内探索収集・特性調査に係る委託課題の報告を取りまとめたものである．本報告書を今後の生物遺伝資源を利用した試験
研究，技術指導，事業の円滑な推進等に役立てていただければ幸いである．

平成 19 年 12 月

独立行政法人 農業生物資源研究所
ジーンバンク長

― 3 ―

河 瀨

眞 琴

目

次

まえがき

ジーンバンク長河瀨眞琴

1．キャベツ黒腐病菌及びファージの探索収集………………………………………………………
井上

康宏・松浦

貴之・畔上

1

耕児

農業・食品産業技術総合研究機構
中央農業総合研究センター

2．ニンジンこぶ病菌の探索収集………………………………………………………………………
桑田

博隆・岩谷

7

香緒里

青森県農林総合研究センター

3．島根大田と熊本阿蘇の草地におけるアーバスキュラー菌根菌の探索収集……………………
小島

17

知子

農業・食品産業技術総合研究機構
畜産草地研究所

4．東京都の園芸作物に発生した本邦初産属種を含む植物病原菌類の特性評価…………………
竹内

1

純 ・廣岡
1

2*

裕吏 ・堀江1**

博道 ・夏秋252

啓子

東京都農林総合研究センター・2東京農業大学（ *現

農業生物資源研究所・ **現

東京大学）

付録
これまでの探索収集調査実績……………………………………………………………………………

― 5 ―

35

Annual Report on Exploration and Introduction of
Microbial Genetic Resources
Vol. 20(April 2006 ― March 2007)
Contents

Makoto KAWASE

Preface

Director of Genebank

1． Collection of the pathogenic bacteria of cabbage black rot
and its bacteriophages in Japan ………………………………………………………………………

1

Yasuhiro INOUE , Takayuki MATSUURA and Koji AZEGAMI
National Agricultural Research Center,
National Agriculture and Food Research Organization

2． Collection of the pathogen causing carrot bacterial gall ……………………………………………

7

Hirotaka KUWATA and Kaori IWAYA
Aomori Prefectural Agriculture and Forestry Research Center3． Collection of arbuscular mycorrhizal fungi from grasslandsof Shimane and Kumamoto, Japan …………………………………………………………………… 17

Tomoko KOJIMANational Institute of Livestock and Grassland Science,
National Agriculture and Food Research Organization

4． Studies on some properties of newly recorded pathogenic
fungi of garden crops in Tokyo, Japan ……………………………………………………………… 25

Jun TAKEUCHI 1 , Yuuri HIROOKA 2* , Hiromichi HORIE 1** and Keiko T. NATSUAKI 2
1

Tokyo Metropolitan Agricultural and Forestry Research Center
2

Tokyo University of Agriculture(*National Institute of Agrobiological Sciences, **The University of Tokyo)

Appendix
Past Records ………………………………………………………………………………………… 35― 6 ―〔微探収報 20:1 – 5，
2007〕

キャベツ黒腐病菌及びファージの探索収集
井上

康宏・松浦

貴之・畔上

農業・食品産業技術総合研究機構［〒305-8666

耕児

中央農業総合研究センター

茨城県つくば市観音台3-1-1］

Collection of the pathogenic bacteria of cabbage black rot
and its bacteriophages in Japan
Yasuhiro INOUE，Takayuki MATSUURA and Koji AZEGAMI

National Agricultural Research Center,
National Agriculture and Food Research Organization
１．目的
現在，植物細菌病害の防除は主として化学農薬によって行われるが，自然環境下においてはその効果は必ずしも高くない．安全性への配慮から，その使用回数等は厳しく制限されているが，近年は環境への負荷軽減に配慮した持続的農業の確立が必要になっている．このため，薬剤防除法に代わりうる防除法の開発が求められている．
環境保全，食の安全・安心の考え方が広まる中で，生物機能を利用した病虫害防除資材や農薬の開発が盛んに行われるようになり，
微生物農薬，
フェロモン剤等が世に送り出されるようになった．
細菌病害防除においても，拮抗菌を利用した防除資材が開発されている．しかし，その防除対象となる細菌病は非常に限られているのが現状である．そこで，代表的細菌病の一つであるキャベツ黒腐病に関して，病原細菌であるXanthomonas campestris pv. campestris，および同細菌を溶菌するバ
クテリオファージ（ファージ）を探索・収集し，防除素材化のための基礎的知見を得る．

２．探索の概要
2006年９月から12月までの４か月間，関東および東海地方各県のキャベツ及びその他のアブラナ科野菜の栽培圃場を回り，病葉及び20～30ｇの土壌を収集した（表１，図１）．一部は現地から送付されたサンプルを供試した．また，2006年７月にレタス，８月にネギ，ナスの栽培圃場から採集した土壌からX. campestris を溶菌するファージの分離を試みた．

― 1 ―表１．試料の採集日，採集場所
採集日
2006.7.26
8.16
9.13
10.12

場
所
長野県軽井沢町
茨城県大子町，常陸大宮市
群馬県嬬恋村東京都立川市，国立市，瑞穂町

採集地点ａ
１
４
４
４

10.16
10.18

茨城県つくば市
茨城県八千代町

１
４

10.19

茨城県行方市

３

10.23
11.8
11.15

三重県伊勢市，玉城町
三重県鈴鹿市
静岡県磐田市，掛川市，袋井市

３
２
７

11.23
11.24

茨城県つくば市
静岡県三島市１１

11.25

静岡県富士市，富士宮市

２

12.5

岐阜県多治見市

２

採集植物

キャベツ
キャベツ
ブロッコリー
ブロッコリーキャベツ
ブロッコリーキャベツ
カリフラワー
ダイコン
キャベツ
キャベツ
キャベツ
メキャベツ
ハクサイ
ブロッコリー
ブロッコリーキャベツ
ブロッコリー
キャベツ
メキャベツ
ハクサイ
ブロッコリー
ブロッコリーａ

近隣の採集地は１か所とした

図１．アブラナ科植物黒腐病発病試料及び土壌試料の収集地点

― 2 ―

備
考
土壌のみ採集土壌のみ採集サンプル送付
サンプル送付

３．収集の具体的方法
１）細菌の分離とそれらの病原性ならびに細菌学的性質
採集した葉の，黄化あるいは褐変した病斑部にある黒変した葉脈１～２mm を切り取り，顕微鏡下で菌泥の噴出が確認できた試料より，YP寒天培地を用いて常法により細菌の分離を試みた．
30℃で２日間培養すると，ほぼ均一に黄色のコロニーを形成する細菌が分離された．分離菌の単集落を脇本処方ジャガイモ半合成培地 (PSA) に移植し，30℃で２日間培養した菌体を15％のグリセ
ロールを含む1/2NBY培地およびスキムミルク分散媒に懸濁し，-30℃で保存した．また，分離菌を滅菌水に１～５×108 cfu/mlの濃度に懸濁し，キャベツ（品種：アーリーボール）の葉の３箇所に針接種して病原性を確認した．分離菌の同定はAPI20NEを用いて行った．
２）ファージの分離
採集した土壌10ｇに20mlの滅菌水またはPBSバッファーを加えて攪拌し，上清を0.22µmのフィルターでろ過して原液とした．原液１ml，１～５× 108 cfu/mlの濃度に調整した指示菌の懸濁液
0.1ml，寒天濃度を１％としたPSA培地10mlを混ぜて平板にし，30℃で24時間培養後，生じたプラー
クをファージとして収集した．ファージは指示菌に感染させた状態で15％のグリセロールを含む
1/2NBY培地およびスキムミルク分散媒に懸濁し，-30℃で保存した．
指 示 菌 と し て， ア ブ ラ ナ 科 野 菜 黒 腐 病菌MAFF保 存 株（301151，301176，301958，301965，
301971，301984，302021)，非病原性 Xanthomonas campestris （MAFF 106642，106644）のすべてまたはいずれかの菌株を用いた．病原細菌が分離された地点から採集した土壌に関しては，その分離株も指示菌としてファージの分離を試みた．

４．結果
関東および東海地方で栽培されているキャベツ，
ブロッコリー，カリフラワー，ダイコン，ハクサ
イ，メキャベツより計58菌株の病原細菌を分離した．これらはいずれもPSA培地上で粘稠性のある黄色のコロニーを形成し，分離植物に関係なくいずれ
もキャベツ（品種：アーリーボール）に病原性を示した．これら菌株のAPI20NEにおけるプロファイル
イ ン デ ッ ク スは04723(1)41(0)で あ り，Xanthomonas

campestris pv. campestris（Xcc ）のプロファイルイン
デックスと一致した．以上のことから，これら58菌
株はいずれもXcc と同定した．本病の発病はこれまでの栽培歴に関わらず認められ，山地に造成された
初年度の圃場においても発病が認められた（図２，３）．
図２．メキャベツに発生した黒腐病症状― 3 ―ファージは計25株を分離した．このうち 4 株は非病原性 X. campestris MAFF 1006642にのみ感染した．病原細菌を分離した圃場の土壌からは，その分離株を溶菌するファージが分離されたが，山地に造成された初年度の圃場，非発病の圃場からはファージは分離できなかった．一方，アブラナ科植物が栽培されていない土壌（過去の栽培歴は不明）からも，本病原細菌を溶菌するファージが分離された．また，一圃場から宿主域の異なるファージが複数分離されることもあった．

図３．ブロッコリーに発生した黒腐病症状

５．所感
本探索では，関東東海地域の35地点において，アブラナ科野菜全般を対象として黒腐病菌ならびにファージの探索・収集を行った．黒腐病は，全般的には小発生であったが，多発生している圃場も散見された．このうち，特に収穫直後の圃場の残渣に多発生しているケースに関しては，収穫前に銅剤等の散布を中止したために，圃場内に生存していた黒腐病菌が感染して発病したものと考えられる．
黒腐病菌を溶菌するファージは，黒腐病の発病した畑土壌から容易に分離できた．一方で山地に造成された初年度の圃場では，病原菌は分離されたがファージは分離されなかった．
ここではファー
ジの侵入・定着がまだ起こっていない可能性がある．今後栽培を続けることによってファージの定着が起こる可能性もあり，継続して観察する必要がある．今後，ファージの圃場環境中での侵入・増殖・定着・残存等に関して詳細に研究を行う予定である．
本研究において収集した黒腐病菌株はMAFF 106752～106809，フ ァージ株はMAFF 106810～
106834としてジーンバンクに登録した．このうちのファージに関しては，黒腐病防除法開発のための素材として利用していく予定である．そのために，現在，分離したファージの宿主域の調査，分離したファージを用いた黒腐病菌のファージ感染型分化の調査，地域毎のファージ感染型分布調査を行っているところである．これらのデータがまとまり次第，論文として公表するとともに，ジー
ンバンクを通じてデータおよび遺伝資源の公開・配布を開始する予定である．

― 4 ―

６．謝辞
本研究では多くの方々のご支援とご協力を頂いた．長野県野菜花き試験場病害虫土壌肥料部

小木曽秀紀氏，茨城県農業総合センター農業研究所病虫研究室

渡邊

業局農政課

間庭慶典氏，東京都農林総合研究セ酒井ンター安全環境科宏氏，群馬県吾妻県民局吾妻農業事務所
竹内浩二氏，竹内究部循環機能開発研究課
センター環境部

健氏，青木一美氏，群馬県農純氏，嶋田竜太郎氏，三重県科学技術振興センター農業研

鈴木啓史氏，静岡県農業試験場病害虫部

太田光輝氏，岐阜県農業技術渡辺秀樹氏，岐阜県東濃地域土岐農業改良普及センター

日比野義昭氏，高相和

佳氏には採集に同行していただき，多大なご協力を頂いた．記して深く感謝の意を表する．

Summary

Nowadays, plant bacterial diseases are controlled mainly by agrichemicals. However, their efficacies
are not always high and the reduction of their consumption is expected for sustainable agriculture.
And the alternative control measures are needed to be developed. To explore the possibility of thedevelopment of phage-assisted control measures against bacterial diseases, the pathogen of black rotof cabbage, Xanthomonas campestris pv. campestris , and its phages were collected. As for bacteria, 58
isolates were obtained from cabbage, broccoli, cauliflower, radish, Chinese cabbage, and sprout cabbage
in Kanto and Tokai areas. All of them formed mucoid, convex, and yellow colonies on PSA medium, andwere pathogenic to cabbage. Their API20NE profile indices were 04723(1)41(0), coinciding with that of

Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc ). So, they were identified as Xcc . The occurrence of thedisease was found in newly developed fields in mountainous area as well as in old ones. As for phages, 25
isolates were obtained. Four of them infected only non-pathogenic X. campestris MAFF 1006642. Fromsoil where the pathogen was isolated, phage(s) lytic for the pathogen was/were isolated, whereas phage
was not isolated even if the pathogen was isolated in newly developed fields in the mountainous area andin the fields without the occurrence of the disease. On the other hand, phage lytic for the pathogen was
isolated from soil where cruciferous plants were not planted. Sometimes, some kinds of phages were foundto coexist in the same field.

― 5 ―〔微探収報 20:7 – 15，2007〕

ニンジンこぶ病菌の探索収集
桑田

博隆・岩谷

香緒里

青森県農林総合研究センター［〒036-0522

黒石市田中82-9］

Collection of the pathogen causing carrot bacterial gall
Hirotaka KUWATA and Kaori IWAYA
Aomori Prefectural Agriculture and Forestry Research Center
１．目的
ニンジンの根に大小種々のこぶを形成する病害の発生は，青森県をはじめ全国各地で古くから知られており，主に外部病徴のみに基づいて「根頭がんしゅ病」と見なされてきた．青森農試（現：青森県農林総合研究センター）では1985年より本病に関する研究に着手した．研究遂行の過程で，
当病害は「根頭がんしゅ病」とは全く異なる世界的にも未記載の新病害であり，また病原細菌の分類学的記載もなされていない可能性が高くなったことから，静岡大学との共同研究により分類学的検討を行った．
最終的に本病は新病害「ニンジンこぶ病」と記載され，また病原菌は新属・新種の細菌として，新たにRhizobacter daucus と命名された（Goto and Kuwata, 1988; 桑田・後藤，1987）．学名はその後，種形容詞がラテン語文法に照らして不正確であったことから，R. dauci と訂正された（Younget al.,1991）．新学名記載に際して，標準菌株を含む分離菌株の預託保存機関として，アメリカ合衆
国 ATCC 並びにニュージーランド国 ICMP が選択されたが，日本国内で保存する機関は，静岡大学
及び青森農試のみであった．その後，青森農試では本病の発生生態・薬剤防除などに関する研究を実施した（及川ら 1990a；及川ら 1990b）．
上記研究における菌株は，青森県内の２地点から採取されたものであったが，その後の調査により他地点でも発生することが確認されたことから，原記載菌株の分離地点及びその他の地点から新たに菌を分離し，原記載菌株とともにジーンバンクに保存するために，探索収集を行うこととした．

２．探索概要１）標本採取現地の概要
2005年度に本病発生が確認された３地点を選択し，2006年度に改めてニンジン栽培を実施し，標本採取現地とした．各現地の概要は下記のとおりで，また所在地は図１に示すとおりである．

― 7 ―

⑴

平川市大木平（ひらかわし・おおぼくたい）：現地農家圃場
標高650mの八甲田山系南方に位置し，十和田湖付近の湧水を水源とする浅瀬石川の浸食によって八甲田山麓地帯から分断された．太古以来原生林であったが，戦後の食料増産政策により昭和23年に入植して開墾された開拓地である．当時は多くが水田であったが，昭和40年代後半の減反政策によって野菜畑に転換され，今日に至っている．土性は粘土を多量に含む灰褐色火山灰土壌で，現在の主力品目はニンジンのほか，ダイコン，ハクサイ，レタスなどである．
1988年に病原菌を新属・新種の細菌として新学名を記載した研究（Goto and Kuwata,1988）において，標準菌株H6を含むH群菌の分離源地域でもある．
標本採取圃場は2006年６月20日にニンジン（品種：向陽二号）を播種した．
⑵

黒石市厚目内（くろいしし・あつめない）：現地農家圃場
標高450mの八甲田山系に連なる南方山麓地帯であり，開拓から転作までの経緯並びに土性は平川市と同様である．現在の主力品目はニンジンのほか，ダイコン，ホウレンソウなどである．
標本採取圃場は2006年５月20日にニンジン（品種：向陽二号）を播種した．
⑶

六戸町犬落瀬（ろくのへまち・いぬおとせ）：県畑作園芸試験場圃場
標高40mの丘陵地帯で，八甲田山系の噴火により黒色火山灰が堆積した土地である．古くから畑作・水田が混在する地域であったが，昭和12年に農林省指定試験地として発足し，その後昭和34年に青森県農業試験場古間木支場となり，周辺の山林を開墾して圃場造成を行って面積を拡大
し，その後も機構改革を繰り返しながら各種の畑作物・野菜類の栽培試験等を実施して今日に至っているが，水田となった経緯はない．
標本採取圃場は2006年５月15日にニンジン（品種：向陽二号）を播種した．

図１．探索地点の所在地― 8 ―２）探索収集の行程
2006年９月16日から10月10日までの５回，各地点で標本採取を行った．具体的な探索収集行程は
表１に示すとおりである．

表 1. 探索・収集行程表
年月日

行程及び行動内容

2006. 9.16.

黒石市境松→平川市大木平→黒石市厚目内→黒石市境松（出発） （標本採取） （標本採取） （帰着）2006. 9.19.

黒石市境松→六戸町犬落瀬→平川市大木平→黒石市厚目内→黒石市境松（帰着）（出発） （標本採取） （標本採取） （標本採取）

2006. 9.24.

黒石市境松→六戸町犬落瀬→黒石市境松
（帰着）
（出発）
（標本採取）

2006.10. 1.

黒石市境松→六戸町犬落瀬→平川市大木平→黒石市厚目内→黒石市境松
（帰着）
（出発）
（標本採取） （標本採取） （標本採取）

2006.10.10.

黒石市境松→平川市大木平→黒石市境松
（帰着）
（出発）
（標本採取）
注）移動はすべて乗用自動車（青森県公用車または私用自動車）
３）ニンジンこぶ組織からの細菌の分離⑴

供試培地組成以下の細菌の分離及び培養に供試した培地は，Goto（2005）に従ったDPPGA培地で，組成は以下のとおりである．ジャガイモ20ｇの煎汁1,000ml，ペプトン（Difco,Bacto-) １ｇ，グルコー
ス10ｇ，粉末寒天15ｇ，pH6.8．目的に応じ，直径90mmシャーレの平板培地または直径18mm 試
験管の斜面培地として供試した．
⑵

こぶ組織からの細菌の分離
現地圃場より採取した標本は，直ちに柔らかめのブラシを用いて水道水で丁寧に洗い，土塊その他の汚れを落とし，さらに殺菌蒸留水で洗浄した．分離は採取直後に行った場合もあれば，また作業日程の都合から一旦５℃暗所に保存した後に，分離に供した場合もあった．
植物病理学で常用される「表面殺菌」処理を行わなかったが，その背景は以下のとおりである．
本病では病原細菌の大半はこぶ組織表面上に集塊として存在し，同時に多数種の「雑菌」も生存する．またこぶ組織は複雑に寄り集まって多くの「隙間」ができ，その中にも病原菌・雑菌が多く生存する．これらのことから表面殺菌ができない，あるいは殺菌しても「隙間」までは処理効
果が到達しないという特殊事情があり，組織の水洗のみとした．
こぶ組織小片（0.2～0.5ｇ程度）を，火炎滅菌ガラス棒先端で10mlの滅菌水中で細かく砕き，
これをさらに滅菌蒸留水によって10-1倍ずつ段階希釈した．各々の0.2mlをDPPGA平板培地上に滴下し，火炎滅菌白金耳で平板全面に広げ，クリーンベンチ内の通風下において表面乾燥後に，25℃定温器内に静置培養した．培養５～７日後に，
R. dauci と判断されるコロニー単個を釣菌し，DPPGA 斜面培地に移植した．25℃定温器内に培養し，一定程度の発育を確認した後，５℃暗所に保存した．

― 9 ―４）分離菌株のニンジンへの接種試験⑴

接種植物
ニンジン（品種：向陽二号）は，人工培土（サカタ：スーパーミックス A）をつめた小型ポリポットで栽培し，
肥大根の直径２cm 程度の生育時に接種に供試した．
肥大根周辺の土を取り除き，蒸留水で洗浄し，菌懸濁液を接種し，覆土した．
⑵

接種菌液の調整及び接種方法
DPPGA平板培地または斜面培地の培養菌の少量をとり，火炎滅菌ガラス棒先端により少量の滅菌水中で砕き，任意濃度の菌懸濁液とした．本菌の大きな特徴の一つとして，発育菌体は堅い集塊となり，
これは水中に殆ど拡散することなく，ガラス棒で砕いても集塊が小さくなるのみ（一部菌体は単細胞または少数菌体からなる微小集塊として懸濁）であり，懸濁液中の菌濃度を調整・計測することは不可能である．したがって接種菌液の菌濃度は「任意濃度」と表記せざるをえな
かった．
各菌株の懸濁液に，火炎滅菌した７本束の木綿針を浸し，これでニンジン肥大根に１～２mm
程度の深さに穿刺接種した．
⑶

発病調査及び分離菌株の選定
接種３～４週間後に各接種ニンジンをポットより取り出し，根を水洗してこぶ形成の有無及び程度を肉眼観察により調査した．接種によって本病に関する原記載 (Goto and Kuwata，1988；桑田・後藤，1987) の症状並びに標本採取現地で確認された症状を示した菌株を，ニンジンこぶ病
菌 R. dauci と判断した．

３．収集成果１）罹病ニンジン標本の採取及び細菌の分離
2006年９月16日から10月10日にかけての合計５回，現地に赴き，罹病ニンジンを採取した．現地での発生状況は1985年とは大きく異なり，発生程度は極めて低く，３地点ともに発病株率１％にも満たない状況であったが，毎回とも複数標本を採取することができた（表２）．採取された標本の症状はいずれも原記載（Goto, 2005;Goto and Kuwata, 1988）の症状と一致した（図２）．
罹病ニンジンからの R. dauci の分離頻度は，採取回次により大きく異なり，３地点５回合計43標本のうち27標本から分離可能であった．分離ができなかった場合は，多くは雑菌による汚染程度が極めて高く，病原菌の発育が不可能な場合であった．
病原菌 R. dauci の培地上でのコロニーは極めて特徴的で（図３），習熟すれば容易に釣菌可能である．各分離菌株の人工接種により，ニンジン肥大根に自然発病同様のこぶ症状（図４）が再現された．
以上の結果により，１罹病ニンジン標本由来を１菌株とし，平川市大木平からは10菌株，黒石
市厚目内からは11菌株，六戸町犬落瀬からは６菌株，合計27菌株を分離することができた（表２）．

― 10 ―

表２．採取標本からの Rhizobacter dauci の分離頻度
採取地点名
平川市大木平黒石市厚目内

六戸町犬落瀬

採取年月日
2006. 9.16

採取標本数
３

R. dauci 分離標本数

2006. 9.19

２

１

H21

2006.10. 1

３

３

H22～H242006.10.10
2006. 9.16

６
５

６
１

H25～H30
A11

2006. 9.19

３

１

A12

2006.10. 1
2006. 9.19

９
２

９
２

A13～A21
R11, R12

2006. 9.24

７

４

R13～R16

2006.10. 1

３
43

０
27

合計

菌株番号※

０

各菌株は分離後にニンジンへの接種により肥大根にこぶ形成が確認されたもの※

図２．自然病徴図３．培地上の R. dauci

図４．接種病徴

図５．軟質コロニー― 11 ―

２）分離菌株の同定
病原菌 R. dauci は1988年の初記載（Goto and Kuwata,1988）以来，
現在まで１属１種である（Goto,
2005)．
分離菌27菌株はいずれも，分離源ニンジンの症状が原記載と一致し，接種により再現された症状も一致した．また寒天培地上でのコロニーは堅く盛り上がった皺のあるという特徴，並びに液体培地中では globular flock になるという特徴を呈し，これらの特徴は同時に供試した R. dauci のtype strain であるH6と一致するものであった．
したがって，分離菌27菌株はいずれも，R. dauci と同定された．
【注記１：病原菌のコロニー変異に関する一般的現象】
本菌の「野生型」は，寒天培地上で堅く盛り上がった皺のあるコロニーに発育するという際立った特徴を示すが，同時に培養中に表面平滑で柔らかい「軟質コロニー（図５）」に容易に変異する．
変異型の出現は，コロニー単個全体が培養の最初から軟質化する場合と，野生型に発達しつつあるコロニーの一部が軟質化する場合とがある．
変異型のニンジンに対する病原性には変化はない．
経験則では変異型が野生型に戻ることはない．
分離当初ではすべて野生型を示すが，継代培養を重ねるにつれて変異頻度が著しく高まる．
【注記２：本事業分離菌株群におけるコロニー変異】
本事業における各分離菌株は，罹病標本から分離し，DPPGA 斜面培地に移植した段階ではすべて野生型の性質と判断された．その後病原性試験を経て真空凍結乾燥処理の直前まで，斜面培地のままで５℃暗所（本菌は５℃でもゆっくりであるが増殖可能）に保管しておいたが，真空凍結乾燥処理の時点で軟質コロニーに変異していたものが幾つか認められた．それらを菌株別に整理したものを表３に示した．
表３．分離菌株の真空凍結乾燥処理時点でのコロニー変異
コロニー型

当該菌株番号野生型

H21，H22，H25，H26，H27，H28，H29
A16，A17，A18，A19
R11，R12

軟質化

H23，H24，H30
A11，A12，A13，A14，A15，A20，A21
R13，R14，R15，R16３）分離菌株の MAFF への登録
分離菌の中で，軟質コロニーに変異していた菌株は当面MAFFへの登録を見合わせることとした．採取年月日・採取地点別に，平川市・黒石市・六戸町からの各２菌株，計６菌株に合わせて，原記載に登録された type strain H6 を含む10菌株を，それぞれ MAFF に登録した．原記載に登録された15菌株のうち，５菌株は事故により死滅し，また２菌株は「軟質コロニー」に変異していた（ニンジンに対する病原性には変化なし）．青森県及び MAFF における菌株番号対照表を表４に示した．

― 12 ―

表４．ニンジンこぶ病菌の青森県菌株番号並びにMAFF登録番号対照表
採取地（青森県）

採取年月日

青森県番号

平賀町大木平（現平川市）

1984.10.13

H1 ※※MAFF番号

ATCC 43776,
ICMP 9398 ※H2 ※※※

211679H3211680H4211681
ATCC 43777 ※ ,ICMP 9399

H5 ※※
H6T

他保存機関登録番号211682ATCC 43778,
ICMP 9400

H7 ※※

黒石市境松

1985. 5. 1

H8211683H9211684N1 ※※※

211685

N2211686

N3211687

N4211688ATCC 43779,
ICMP 9401

ATCC 43780,
ICMP 9402

N5 ※※
N6 ※※
平川市大木平

2006. 9.19

H21211689（旧平賀町）

2006.10.10

H25211690黒石市厚目内2006.10. 1

A16211691

A17

211692

R11211693

R12211694

六戸町犬落瀬2006. 9.19

ATCC：American Type Culture Collection，USA.
ICMP：International Collection of Microorganisms from Plants，New Zealand.
※
原記載時点では表記登録番号を通告されたが，現段階では当該機関のリストに記載なし※※
これら５菌株は事故により死滅した※※※
これら２菌株は「軟質コロニー」に変異した（ニンジンに対する病原性には変化なし）
T
H6 ：type strain

４．所感
ニンジンこぶ病に関する研究に着手した1985年当時から，青森県以外にも類似の症状が見られるとの情報が他県からいくつか寄せられていたが，菌の分離・接種等の病原学的検討がなされた地域
は，青森県以外にはなかった．最近になって静岡県から同一の病害発生が確認されたとの報告（河原崎ら，2006）がなされた．

― 13 ―

往時は，本病は青森県内の至る所に発生がみられており，収穫物が外観を著しく損ねることから商品にはなりえず，被害が甚大となる圃場も随所に見られていた．その後，青森農試（現：青森県
農林総合研究センター）における防除法に関する研究（及川ら 1990a；及川ら 1990b）などの成果
により，土壌消毒が現場に広く普及し，本病は被害として大きく問題になることがなく現在に至っている．
2005年度に青森県農林総合研究センターへニンジンこぶ病の診断依頼の持ち込みがあり，この機会に改めて病原菌を分離し，原記載菌株と合わせてMAFFに登録する計画を立案した．20年以上経過した現在でも，少ないとはいえ未だに現地では発病が見られ，かつ同じ病原菌が分離できたこと
は，植物病理学研究が永遠に継続されるべきものであることを実感させられた．

５．謝辞
本ジーンバンク事業実施にあたり，20年前の共同研究者でもあり，現在は静岡大学名誉教授の後
藤正夫博士，並びに静岡県での発生報告を担当された微生物応用技術研究所河原崎秀志研究員には，現地調査及び標本採取に同行され，また実験遂行上の有益なご助言をいただいたことに深甚なる謝意を表する．

６．参考文献１）Goto, M.（2005）Genus IV. Rhizobacter Goto and Kuwata. In: Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology 2nd ed., Vol. 2, Part B. eds. Brenner, D.J., Krieg, N.R. and Staley, J.T. pp 404-406.
Springer, USA.
２）Goto, M. and Kuwata, H.（1988）Rhizobacter daucus gen.nov., sp.nov., the Causal Agent of Carrot
Bacterial Gall. International Journal of Systematic Bacteriology 38:233-239.
３）河原崎秀志・奈良吉主・勝倉充徳・横田克長・名倉かおり・木嶋利男・瀧川雄一・後藤正夫（2006）
ニンジン及び数種の雑草に認められたこぶ病について．日本植物病理学会報72:314．
４）桑田博隆・後藤正夫（1987）ニンジンこぶ病菌の分類，生態及び防除．日本植物病理学会第14回植物細菌病談話会講演要旨集:14-22．
５）及川健・桑田博隆・嶋田慶世（1990a）ニンジンこぶ病の品種間差．北日本病害虫研究会報 41:
62-63．
６）及川健・今井照規・桑田博隆・嶋田慶世・千葉順逸（1990b）ニンジンこぶ病の発生要因及び薬剤防除．青森県農業試験場研究報告31:29-41．
７）Young, J.M., F.bradbury, J., Davis, R.E., Dickey, R.S., Ercolani, G.L., Hayward, A.C. and Vidaver,A.K.（1991）Nomenclatural Revisions of Plant Pathogenic Bacteria and List of Names 1980-1988.
Review of Plant Pathology 70: 211-221.

― 14 ―

Summary

Rhizobacter dauci Goto and Kuwata 1988, the causal organism of carrot bacterial gall, was detected
at Hirakawa-shi, Kuroishi-shi and Rokunohe-machi of Aomori prefecture, Japan, in 2006. Twenty-sevenisolates obtained from 43 diseased samples revealed the same symptoms on carrot roots by artificial
inoculation tests. Six isolates from 3 districts were registered in MAFF Genebank being accompanied by
the originally described 10 isolates including the type strain H6.

― 15 ―

〔微探収報 20:17 – 24，
2007〕

島根大田と熊本阿蘇の草地における
アーバスキュラー菌根菌の探索収集
小島知子

農業・食品産業技術総合研究機構［〒329-2793

畜産草地研究所

栃木県那須塩原市千本松768］

Collection of arbuscular mycorrhizal fungi
from grasslands of Shimane and Kumamoto, Japan
Tomoko KOJIMANational Institute of Livestock and Grassland Science,
National Agriculture and Food Research Organization
１．目的
アーバスキュラー菌根菌（以下，菌根菌と略す）は宿主特異性がほとんどなく，多くの植物の根に共生することができる．土壌中の主にリンを吸収し宿主植物に供給する働きがあるため，植物の生育促進効果があり，農業への利用や植生回復などで最近特に注目されている１）．日本の草地の多
くは他の作物の栽培に適さない場所に立地している．宿主植物に養分を供給する菌根菌は，物質循
環に関わり，また植物の多様性に関係していることからも２），草地生態系において重要な役割を果たしていると考えられ，草地における菌根菌の動態について研究を行ってきた３，４）．また，国内唯一の菌根菌の保存・配布拠点は，畜産草地研究所（那須研究拠点：農業生物資源ジーンバンクのサブバンク）にあるが，絶対共生菌のため維持管理の難しさもあり，保存菌株の種数がまだ多くはない．
日本国内，北海道から九州までを対象として，草地の菌根菌の遺伝資源を探索し，また草地における菌根菌の生態を解明することを目的として研究を継続している．本課題では，島根県大田と熊本県阿蘇の草地を対象とし，新たな菌根菌の保存菌株を増やすことを目的とした．本探索・収集により，配布可能な菌根菌の遺伝資源が多様化し，ひいては今後の菌根菌研究の発展につながるものと期待される．

２．探索概要2006年５月と11月に近畿中国四国農業研究センター大田研究拠点（島根県大田市）の試験圃場のシバが優占する放牧草地と採草地（冬作にイタリアンライグラス栽培），
九州沖縄農業研究センターの阿蘇外輪山（熊本県阿蘇市）にある試験地，ススキ草地（火入れ有り，ススキが優占する放牧― 17 ―

草地），野草地（ネザサやススキなどが優占する放牧草地），人工草地（トールフェスクが優占する
放牧草地）の各草地内から離れた場所３か所（３試料）にて，植物と植物根圏土壌を採取した（表１，図１，２）．植物の根については，水道水で洗浄後，常法により染色を行い，菌根菌の感染を光学顕微鏡下で観察した５，６）．次に，根圏土壌を菌根菌接種源とした土壌トラップカルチャーを行った．採取した土壌を２mmの篩いに通した後，そのうちの100ｇをさらに106µmの篩いに通した土壌
篩別物を調製して菌根菌接種源とした．宿主植物には，イネ科草本植物（バヒアグラス，ススキ，またはシバ），とマメ科のシロクローバを用いた．1/10000aポットに土：砂：芝の芽土＝１：１：
１で混合した培土を充填し，各土壌篩別物を接種し，予め用意した苗を植えグロースキャビネット
で約５ヶ月間栽培した７）．栽培後の土壌中に新たに増殖した胞子を実体顕微鏡下で観察した．ここでは Glomeromycota 門５科７属の Morton（1988）８）と Morton & Redecker（2001）９）による分類に基づき，一部については Melzer 試薬による染色も行い，胞子の形態により菌根菌の属あるいは種の同定を行った 10）．
表１．探索・収集日程
年月日
H18.5.21

5.22

行程
H18.11.5

行動内容

那須塩原市→羽田

移動（陸路）

羽田→出雲

移動（空路）

出雲市→大田市

移動（陸路）

11.6

近畿中国四国研究センター内草地を調査
大田市→福岡市

5.23

11.7

福岡市→合志市

移動（陸路）
九州沖縄農業研究センター

5.24

11.8

阿蘇外輪山試験地を調査
熊本→羽田

移動（空路）

羽田→那須塩原市

移動（陸路）

図１．島根県と熊本県における探索収集地点― 18 ―

a

c

b

d

図２．採取地の様子（2006年５月）

ea 大田シバ草地
b 大田採草地
c 阿蘇ススキ草地
d 阿蘇野草地e 阿蘇人工草地

３．収集成果１）植物根中の菌根菌
菌根菌の感染率について，阿蘇と大田の草地の植物の中では，阿蘇の野草地に生えるネザサの菌根菌感染率が５月と11月ともに約80％程度であり高い値を示した（表２）．大田のシバ草地のシバと採草地のイタリアンライグラスについて感染率は10％以下であった．感染率に大きな変化が見られたのは阿蘇のススキ草地のススキで，今回調べた結果では５月と比べ11月に感染率が高くなる傾向を示した 11）．

２）菌株の単離・同定
土壌トラップカルチャーを行った結果，増殖した菌根菌の種類を表３に示す．胞子の形態，
色や大きさ，Melzer 試薬による染色特性などの観察により菌根菌の種の同定を行った（図３）．
大田の採草地を接種源とした場合は１種類の形態，すなわち Glomus clarum T.H. Nicolson et N.C.
Schenck と思われる種が増殖し，阿蘇の人工草地の土壌を接種源とした場合は根の菌根菌の感染は確認できたが，新しい胞子がほとんど増殖していなかった．他の土壌を接種源とした場合は２種類以上の菌根菌が増殖し，Acaulospora koskei Blaszk. と思われる種，Acaulospora morrowiae― 19 ―

Spain et N.C. Schenck と 思 わ れ る 種，Glomus clarum と 思 わ れ る 種，Gigaspora margarita W.N.
Becker et I.R. Hall，Scutellospora pellucida （T.H. Nicolson et N.C. Schenck）C. Walker et F.E.
Sanders，Archaeospora leptoticha （N.C. Schenck et G.S. Smith）J.B. Morton et D. Redecker などが増殖していた（表３）．
これらは採取した土壌中にときどき観察される胞子であった．
このように，
異なる５属に属する胞子を得ることができ，いくつかは農業生物資源ジーンバンクにはまだ登録されていない種であった．この中でトラップカルチャー中の胞子密度が比較的高く，なるべく異なる種になるように12菌株を選抜し（表４），同じ形態の胞子を集めて植継ぎを行った．１ポット中で同じ形態，つまり同じ種と思われる胞子を集めて菌根菌の接種源とし，宿主植物にはバヒ
アグラスとシロクローバを用い，他は土壌トラップカルチャーとほぼ同じ条件で培養し再度胞子を増殖中である．培養後，次世代の胞子密度がある程度高くなり胞子の安定した増殖が見られた
菌株を農業生物資源ジーンバンクに登録する予定である．

a

a2

b

250µm

100µm

250µm

c

c2

d

250µm

50µm

250µm

e

f

f2

250µm

250µm

100µm

g

g2

h

250µm

100µm

250µm

b
a

図３．土壌トラップカルチャーで増殖した菌根菌胞子
a: Acaulospora koskei- like, a2: Ac. koskei -like の Melzer 試薬染色，b: Acaulospora sp.-1, c: Acaulospora

morrowiae -like, c2: Ac. morrowiae -like の Melzer 試薬染色 , d: Glomus clarum -like, e: Gigaspora margarita , f:Scutellospora pellucida , f2: S. pellucida の Melzer 試薬染色 , g: Archaeospora leptoticha , g2: Ar. leptotichaの Melzer 試薬染色 , h: dark orange spore.

― 20 ―

表２．植物根の菌根菌感染率
植物種

感染率（％）

採取地

５月

11月

シバ

大田

シバ草地

8.3

7.1

イタリアンライグラス

大田

採草地

2.0

6.1

ネザサ

阿蘇

野草地

83.7

85.9

ススキ

阿蘇

ススキ草地

9.2

39.8

トールフェスク

阿蘇

人工草地

17.9

24.6

値は２～３試料の平均値

表３．土壌トラップカルチャーで増殖した主な菌根菌胞子接種源土壌の採取地

宿主植物１

大田

シバ草地

シバ，WC

大田

採草地

バヒアグラス，WC

阿蘇

ススキ草地

ススキ，WC

形態別胞子の種類２，３

Acaulospora koskei -like*, Gigaspora margarita *Glomus clarum -like*
Acaulospora koskei -like, Acaulospora sp.-1,

Pot No.
No.1
No.3
No.4

Acaulospora morrowiae -like, Archaeospora leptoticha *,dark orange spore*
ススキ，WC

Acaulospora sp.-1, Glomus clarum -like,

No.5

ススキ，WC

No.6

バヒアグラス，WC

Scutellospora pellucida *Glomus clarum -like, Scutellospora pellucida,
Acaulospora morrowiae -like, Glomus clarum -like

No.13

バヒアグラス，WC

Scutellospora pellucida *, Archaeospora leptoticha
Acaulospora morrowiae -like, Glomus clarum -like

No.14

Gigaspora margarita , Scutellospora pellucida,
阿蘇

阿蘇

野草地

人工草地

ススキ，WC

Archaeospora leptoticha
Acaulospora morrowiae -like, Gigaspora margarita ,No.7

ススキ，WC

Archaeospora leptoticha *Acaulospora koskei -like*, Gigaspora margarita *,No.8

ススキ，WC

Archaeospora leptoticha *Acaulospora morrowiae -like, Scutellospora cerradensis

No.9

バヒアグラス，WC

Archaeospora leptoticha
Acaulospora morrowiae -like*, Gigaspora margarita,

No.15

バヒアグラス，WC

Archaeospora leptoticha
Gigaspora margarita. , Archaeospora leptoticha

No.16

バヒアグラス，WC

none

No.10

WC：シロクローバ , ２Acaulospora sp.-1：pale orange-yellow 150-250µm, dark orange spore：250-400µm,

１

Acaulospora sp.(?), ３＊印は更に胞子の植継ぎをした菌株― 21 ―

表４．収集された菌根菌の新規 Working collection
種名

菌株の由来

菌株名

採取地

Pot No.１

Acaulospora koskei -like

OZ-1

大田

シバ草地

No.1

Gigaspora margarita

OZ-2

大田

シバ草地

No.1

Glomus clarum -like

OI-1

大田

採草地

No. 3

Archaeospora leptoticha

AM-1

阿蘇

ススキ草地

No.4

dark orange spore

AM-2

阿蘇

ススキ草地

No.4

Scutellospora pellucida

AM-3

阿蘇

ススキ草地

No.5

Scutellospora pellucida

AM-4

阿蘇

ススキ草地

No.13

Archaeospora leptoticha

AP-1

阿蘇

野草地

No.7

Acaulospora koskei -like

AP-2

阿蘇

野草地

No.8

Gigaspora margarita

AP-3

阿蘇

野草地

No.8

Archaeospora leptoticha

AP-4

阿蘇

野草地

No.8

Acaulospora morrowiae -like

AP-5

阿蘇

野草地

No.15

２

トラップカルチャーの pot No.
（表３）， dark orange spore：250-400µm，Acaulospora sp.(?)

１

２

４．所感
本探索・収集では，菌根菌の新たな菌株を増やすことを目的に，九州･中国地方の草地より植物の根圏土壌を供試した．これらの採取土壌を菌根菌接種源として植物に接種し，グロースキャビ
ネット内で栽培し胞子の増殖を試みた．その結果，採取した草地土壌中で最もよく観察される優占種よりも，ときどき観察されるような種類の菌根菌胞子がいくつかトラップカルチャーにより増殖した 11)．これは他の草地土壌のトラップカルチャーでも同様な結果が出ている12,13）．土壌中で最もよく観察される優占種の胞子が古いためなのか，はっきりとした理由はわからないが，トラップカ
ルチャーで増殖しなかった．例えば優占種である Glomus 属の赤褐色胞子が草地土壌ではよく観察されているが 12），同じような形態の胞子を持つ種は，海外の主要な菌根菌配布機関の配布菌株リストにないようである．
菌根菌の増殖では，宿主植物との共生を必要とするため一回の培養に約４～６ヶ月かかり，さらに次の接種には胞子の休眠期間が必要である．したがって，この課題期間以降にも系統確立作業を継続しており，単離・植継ぎにより増殖した胞子について再度培養し，さらに純化するとともに，増殖の安定性が認められた菌株については農業生物資源ジーンバンクに順次登録していく予定である．最近，菌根菌について新しい分類体系が提案されているがまだ流動的なため 14,15)，ここではMorton と Redecker による分類体系に基づき同定を行った８,９)．なお，互いに胞子の形態が非常に類似した種があるので，今後は必要に応じて rRNA 遺伝子の塩基配列に基づく分子系統解析を種同定の参考とすることも考えている．

― 22 ―

５．謝辞
本探索を行うに当たり，近畿中国四国農業研究センターの安藤貞氏，ならびに九州沖縄農業研究センターの小路敦氏には，草地からの試料採取の際に多大なるご協力をいただき，草地に関する情報の提供などで大変お世話になった．この場を借りて感謝の意を表する．

６．参考文献１）西尾道徳・大畑貫一（編）（1998）農業環境を守る微生物利用技術．pp164-185．家の光協会，
東京．
２）van der Heijden, M.G.A., Klironomos, J.N., Ursic, M., Moutoglis, P., Streitwolf-Engel, R., Boller, T.,
Wiemken, A. and Sanders, I.R.（1998）Mycorrhizal fungal diversity determines plant biodiversity,
ecosystem variability and productivity. Nature 396:69-72.
３）斎藤雅典・小島知子（1998）野草地におけるアーバスキュラー（VA）菌根菌の生態．草地の動態に関する研究（第５次中間報告）（太田顯・林治雄・高橋繁男･高橋俊・芝山道朗編）．pp
98-101．農林水産省草地試験場資料平成9-12，草地試験場，西那須野．
４）小島知子・林治雄・齋藤雅典（2003）アズマネザサ・ススキ優占草地の植生変化と菌根菌の動態．草地の動態に関する研究（第６次中間報告）（加納春平・板野志郎・坂上清一･中神弘詞編）．
pp97-102．畜産草地研究所資料平成 14-8，畜産草地研究所，つくば．
５）斎藤雅典（1992）菌根菌の観察，分離と同定．新編土壌微生物実験法（土壌微生物研究会編）．
pp297-311．養賢堂，東京．
６）McGonigle, T.P., Miller, M.H., Evans, D.G., Fairchild, G.L. and Swan, J.A.（1990）A new method
which gives an objective measure of colonization of roots by vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi.
New Phytol. 115: 495-501.
７）斎藤雅典（2001）微生物遺伝資源利用マニュアル（9）－継代培養によるアーバスキュラー菌根菌の保存―．pp 1-16．生物研資料 12（13），農業生物資源研究所，つくば．
８）Morton, J.B.（1988）Taxonomy of VA mycorrhizal fungi: classification, nomenclature, andidentification. Mycotaxon 32: 267-324.
９）Morton, J.B. and Redecker, D.（2001）Two new families of Glomales, Archaeosporaceae andParaglomaceae, with two new genera Archaeospora and Paraglomus , based on concordant molecularand morphological characters. Mycologia 93: 181-195.
10）小島知子・大場広輔（2006）アーバスキュラー菌根実験法（3）胞子の分離・観察．土と微生
物 60:63-69．
11）小島知子・安藤貞・小路敦・西脇亜也（2007）西日本の草地におけるアーバスキュラー菌根菌相．日草誌53（別）:202-203．
12）小島知子・安藤象太郎（2006）半自然草地における土壌中のアーバスキュラー菌根菌相．日草誌52（別1）:252-253．
13) Murakoshi, T., Tojo, M., Walker, C. and Saito, M.（1998）Arbuscular mycorrhizal fungi on adjacent― 23 ―

semi-natural grasslands with different vegetation in Japan. Mycoscience 39:455-462.
14）Schüβler, A., Schwarzott, D., and Walker, C.（2001）A new fungal phylum, the Glomeromycota:phylogeny and evolution. Mycol. Res. 105: 1413-1421.
15）Walker, C. and Schüßler, A.（2004）Nomenclatural clarifications and new taxa in the
Glomeromycota. Mycol. Res. 108: 981-982.

Summary

Soil samples of plant rhizosphere were collected from the several grasslands in Mt. Aso in Aso city,
Kumamoto Prefecture and the experimental grassland fields in National Agricultural Research Center
for Western Region in Ohda City, Shimane Prefecture, in order to find and collect the new species or
strains of arbuscular mycorrhizal fungi (AM fungi). New spores of AM fungi were tried to be propagatedby the trap culture method, using soil sieving as AM fungal inoculum, and grasses (Poaceae) and whiteclover as host plants. These plants were cultivated for about five months in growth cabinets. The new
AM fungal spores reproduced 1-5 species per pot and were identified based on their morphology. Those
AM fungal cultures were classified into five genera, Acaulospora , Glomus , Gigaspora , Scutellospora, andArchaeospora . Twelve of the cultures belonging to 7 taxa being purified and propagated with the hostplants will be deposited to NIAS Genebank.

― 24 ―

〔微探収報 20:25 – 34，
2007〕

東京都の園芸作物に発生した本邦初産属種を含む
植物病原菌類の特性評価
純１・廣岡

竹内

裕吏２＊・堀江博道１＊＊・夏秋

啓子２

１

東京都農林総合研究センター・２東京農業大学［１〒190-0013

東京都立川市富士見町3-8-1・２〒305-8602

東京都世田谷区桜丘1-1-1］

Studies on some properties of newly recorded pathogenic fungiof garden crops in Tokyo, Japan
Jun TAKEUCHI１，Yuuri HIROOKA２＊，
Hiromichi HORIE１＊＊ and Keiko T.NATSUAKI２¹ Tokyo Metropolitan Agricultural and Forestry Research Center² Tokyo University of Agriculture
１．目的
東京都では都市近郊の直売用の野菜と切り花，島嶼地域における様々な花き観葉植物等，極めて多種多様な作物が栽培されている．しかし，予期せぬ病害の発生により生産が困難になる場合が多い．東京都では生産阻害要因となる病害の防除対策を講じるため，植物病原菌類の発生状況調査を行っている．現在取組中の植物病原菌類の中には，わが国では初発生の属・種が認められている．
そこで，以下の新病害に係わる日本初産属種植物病原菌類の菌株を病原学的，菌学的データとともに農業生物資源ジーンバンクに寄託・提供する．本報ではヒペリカム褐紋病菌を中心に，サラセニ
ア褐斑病菌，ケンチャヤシ褐斑病菌，ツボサンゴ株枯病菌の 4 種植物病原菌の各種特性を明らかにし，診断および防除対策の基礎資料とした．

２．材料および方法⑴

各病害の生産圃場における発生状況および病徴を記録する．

⑵

各病原菌を分離，培養し，分離源宿主健全株への接種試験により病徴を再現し，再分離を行う．同様に各種植物に接種し，宿主範囲を解明する．

＊

現

＊＊

現

農業生物資源研究所 (National Institute of Agrobiological Sciences)
東京大学 (The University of Tokyo)〒113-8657〒305-8602

東京都文京区弥生1-1-1― 25 ―

茨城県つくば市観音台2-1-2

⑶各病原菌の各種寒天培地上における特性ならびに菌叢生育と温度との関係を調査する．

⑷

植物体上および培養上の形態を観察，測定し，分子生物学的特性と併せたデータに基づき各病原菌を同定する．

３．結果
１）ヒペリカム（Hypericum androsaemum ）褐紋病⑴

本病は2005年９月，東京都北多摩地域おいて露地の切り花生産圃場に初めて発生し，植栽された全株に発病が認められた．病徴は初め褐色の微小な小斑点を生じた後，不整同心円状に拡大融合して，大型の病斑となり，葉が枯死した．病斑上には多数の小黒点（分生子層）が散生した．発病は下位葉から順次，上位葉に進展し，半数以上の葉に病斑が認められた．
同圃場内の他の作物には同様の症状は観察されなかった（図１）．

⑵

病斑部からは同様の菌叢を呈する糸状菌が高率に分離された．分離菌を培養し，含菌寒天貼り付け接種，あるいは分生子の噴霧接種により原宿主で病徴が再現し，病斑部から接種菌が再分離された．本病原菌は６科９種植物への接種試験の結果，分離源宿主と同属のヒペリカム・インドアナ，ヒペリカム・
カリシナムおよびビョウヤナギに病徴が発現した．
しかし，カナメモチなど他科の植物には病原性を示さなかった（表１）．
図１

生産圃場における病徴表１．ヒペリカム褐紋病菌の病原性接種菌株ａ）

接種植物名（科名）

DiHy-an-050921-1

DiHy-an-050921-2

ヒペリカム・アンドロサエマム（オトギリソウ科）＋＋＋＋

ヒペリカム・インドアナ（オトギリソウ科）＋＋＋＋

ヒペリカム・カリシナム（オトギリソウ科）＋＋

ビョウヤナギ（オトギリソウ科）＋＋

イチゴノキ（ツツジ科）－－

カナメモチ（バラ科）－－

フッキソウ（ツゲ科）－－

ビョウヤナギ（オトギリソウ科）－－

ソヨゴ（モクセイ科）－－

アジサイ（ユキノシタ科）－－

ａ）＋：病斑が形成される，＋＋病斑が拡大する，－：病原性なし― 26 ―

⑶PDA培地上における本病原菌の生育は５～35℃で認められ，生育適温は25～30℃であった．５種の寒天培地により培養を試みた結果，PDA および PSA 培地において菌叢生育，分生子層形成とも良好であった（表２）．

表２．ヒペリカム褐紋病菌の５種寒天培地上における菌叢生育と分生子層形成培地

菌株

Czapek

DiHy-an-050921-1
DiHy-an-050921-2
DiHy-an-050921-1
DiHy-an-050921-2
DiHy-an-050921-1
DiHy-an-050921-2
DiHy-an-050921-1
DiHy-an-050921-2
DiHy-an-050921-1
DiHy-an-050921-2

CMA
PDA
PSA
V-8A

⑷

培養７日後
菌叢直径 (mm)
20.3
19.2
29.5
32.7
45.5
42.7
44.0
42.9
40.0
37.5

分生子層
形成状態
無
少
多
多
少

本菌は表皮下に偏球形～レンズ形の分生子層を形成する．分生子は，分生子層の底部子実層の無色円筒形の細胞からアネロ型に形成され，４細胞性，円筒形で湾曲し，中央２細胞は淡褐色，上下２細胞は無色，大きさ14.5～20×3.5～5.5µm，付属糸は無色糸状で，頂部と基部にそれぞれ１～３本（殆どが各２本），頂部10～22µm，基部6.5～
20µm
（図２，
表３）．
これらの形態は Nag Raj（1993）に よ る Diploceras hypericinum （Cesati）Diedic の

図２ 病原菌の分生子 （Bar:10µm）

記載とほぼ一致した．

表３． ヒペリカム分離菌株と既報の Diploceras hypericinum （Cesati） Diedicke との形態比較
菌株（分離源宿主）

分生子の大きさ（µm）
PDA培地上病斑上14.5-20×3.0-5.5
15-19.5×3.0-5.5（17.1×4.0）（17.0×3.5）
14.5-19×3.0-4.0
15-20×3.0-5.0（17.5×3.8）（16.8×4.0）
15-18.5 × 4.5-5.5

付属糸

長さ（µm）
本数
頂部：10-22
1-3（主に2)
DiHy-an-050921-1
基部：6.5-20
1-3（主に2)（ヒペリカム）DiHy-an-050921-2
頂部：11-20.5
1-3
（主に2)
（ヒペリカム）基部：7.5-18.5
1-3
（主に2)
Diploceras
頂部：12-172
hypericinum b)
基部：７-18
2
Diploceras
13-21 × 3-4
頂部：11-20
2-3(主に2)c)
hypericinum（17 × 3.5）基部：9-212-3(主に2)ａ）接種により病斑に形成された分生子の測定値，ｂ）Sutton（=Seimatosporium hypericinum ,1980），ｃ）Nag Raj（1993）a)― 27 ―

また，rDNA の internal transcribed spacer（ITS 領域）を利用して，NBRC に保存されている Diploceras hypericinum （NBRC 32647）との相同性比較を行った．DNA は，DNeasy Plant
Mini Kit（QIAGEN, Hilden, Germany) に よ り 抽 出 し，ITS1，ITS4 の プ ラ イ マ ー（White etal.,1990) を用いて PCR 反応を行った．塩基配列の決定には，Applied Biosystems 3130/3130xl
Genetic Analyzer（Applied Biosystem s, Foster City, CA, USA) を用いた．得られた DNA は，
はじめ Mac Vector 6.5 を用いて Clustal W の DNA 配列の整列（アライメント）を行った
後，pairwise alignment により塩基配列の相同性を検討した．その結果，ヒペリカム分離菌（DiHy-an-050921-1,DiHy-an-050921-2) と Diploceras hypericinum （NBRC 32647) の ITS 領域
における相同性は 100％であり形態学的同定結果が裏付けられた．

２） サラセニア （Heuchera sanguine ） 褐斑病⑴

本病は1999年５月，八丈島の露地圃場において養成中の株で初めて確認され，以降，継続して発生している．補虫葉に，褐色～暗褐色の大型，不整形の病斑が生じ，拡大したのちに葉柄が折れるなどして葉枯れが起きた（図３）．病斑上には白色，霜状の菌叢が生じた．地下部には病変は確認されなかった．

⑵

病斑部からは同様の菌叢を呈する糸状菌が高率に分離された．PDA により分離菌を培養し，含菌寒天貼り付け接種を行った
結果，原宿主で病徴が再現し，病斑部から接種菌が再分離された．分離菌は接種によりダイズなどに病徴を発現した（表５）．
⑶

菌叢は15～40℃で生育し，生育適温は25
図３～30℃であった．

生産圃場における病徴

表５．サラセニアおよびケンチャヤシ分離菌の病原性
接種菌株
CySa-99-5Y
CalHo-oo-12（サラセニア） （ケンチャヤシ）＋＋ａ）＋
サラセニア（サラセニア科）
接種植物名（科名）

ケンチャヤシ（ヤシ科）＋＋＋

ダイズ（マメ科）＋＋＋

チャ（ツバキ科）＋＋

レザーファン（オシダ科）＋＋＋

ストレリチア（バショウ科）＋＋＋

ａ）＋：病斑が形成される，＋＋：病斑の拡大が顕著― 28 ―

⑷CLA 上における分離菌の形態は，無色，長円筒形，1-3（主に３）隔壁，大きさ65～98

×4.6～6.5µmの大型分生子（図４）をフィアロ型に形成，分生子柄は先端に棍棒状の頂膨を形成し，大きさ19.5～90×5～7.8µm，ベシクルは無色で幅の細い棍棒形，4-7.5µm．数週
間培養しつづけると，褐色で類球形の厚壁胞子を集塊状に形成した（表６）．なお，PDA 上
では，分生子および分生子柄は観察されず，白色からやや灰白色の綿毛状菌糸のみを形成した．これらの形態的特徴は Crous（2002）による Cylindrocladium theae （Petch）Subram. の記載とほぼ一致した。よって本菌を本邦初産
種の不完全菌類 C. theae と同定した（竹内ら，2006)．
また，rDNA の internal transcribed spacer（ITS

図４ 病原菌の分生子（Bar:10µm）

領域 ） を 利 用 し て，DNA Data Bank of Japan（DDBJ) に登録されている Cylindrocladium theae （GenBank No.:AF231961) との相同性比較を行った．DNA は，DNeasy Plant Mini Kit（QIAGEN, Hilden, Germany) により抽出し，ITS1，
ITS4 のプライマー（White et al., 1990) を用いて PCR 反応を行った．塩基配列の決定には，Applied Biosystems 3130/3130xl Genetic Analyzer（Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)を用いた．得られた DNA は，
はじめ Mac Vector 6.5 を用いて Clustal W の DNA 配列の整列（ア
ライメント）を行った後，
pairwise alignment により塩基配列の相同性を検討した．その結果，サラセニア分離菌と C. theae （GenBank No.: AF231961) の ITS 領域における相同性は 98％であり，形態学的同定結果が裏付けられた．

表６．サラセニア分離菌株と既報の Cylindrocladium 属菌との形態比較

隔壁数（平均）

大きさ（µm)

形

幅（µm)

超大型
分生子
の有無

1-3（3）

65-107×4.5-6.5

幅の細い棍棒形

4-7.5

有り

1-3（3）

65-96×5-7

幅の細い棍棒形

4-6

有り

1-3（3）

30-75×4-7

幅の細い棍棒形

4-6

無し

1-7（1-3）

50-110×4-6

卵形

8-14

無し

大型分生子

ベシクル

菌株（分離源宿主）
サラセニア分離菌株

Cylindrocladiumtheae ａ）
Cylindrocladium
ptetidis ａ）
Cylindrocladium
vatum ａ）
ａ）Crous (2002)― 29 ―

３）ケンチャヤシ（Howea belmoreana ）褐斑病⑴

本病は2001年12月，八丈島の施設鉢栽培で発生した．葉身に水浸状，褐色，円形～楕円形の病斑が生じ，拡大して暗褐色～灰褐色で輪紋状の病斑となり，葉枯れが起きた（図５）．

⑵

病斑部からは同様の菌叢を呈する糸状菌が高率に分離された．分離菌の接種により原宿
主に病徴が再現し，接種菌が再分離された．
また，分離菌は接種によりダイズ，チャなどに病徴を発現した（表５）．
⑶

菌叢は15～35℃で生育し，生育適温は25℃
であった．

⑷

病原菌は PDA および PCA 培地上に多数の子のう殻を形成した．子のう殻は赤褐色，

図５

生産圃場における病徴

球形～卵形，KOHと乳酸染色＋，子のうは棍棒形，子のう胞子を不整２～３列に蔵した．子のう胞子は主に細長い紡錘形で（図６），1～3（主に1）
隔壁，大きさ36～57×4.5～8µm．
分生子は無色，長円筒形，1～3（主に3）隔壁，大きさ45～85
×4.5～7.5µm．ベシクルは Sphaeropedunculate 型，
幅6～9µ ｍ．
数週間培養しつづけると，褐色で類球形の厚壁胞子を集塊状に形成した（表７）．
図６

病原菌の子嚢胞子（Bar:50µm）

表７．ケンチャヤシ分離菌と既報の Calonectria ilicicola との形態比較
菌株（分離源宿主）
Calonectria ilicicola ａ）
CalHo-00-12（ケンチャヤシ）
子嚢殻色
大きさ（平均）µm
子嚢
大きさ（平均）µm
子嚢胞子
大きさ（平均）µm
隔壁数
分生子
大きさ（平均）µm
隔壁数

橙～赤褐
256-432 × 336-496（374 × 406.4)

橙～栗300-440 × 360-580

70-139 × 17-23（101.8 × 18.9)

76-126 × 13-22

32-61 × 4.5-8（45.3 × 6.4)
1-4（主に 3)30-80 × 4-7
1-6（主に 3)

62-81 × 6-8
60-120 × 5-8

3-7（主に 5)
1-6（主に 5)ａ）Crous(2002)― 30 ―

これらの形態的特徴は Crous（2002）による Calonectria ilicicola Boedijn & Reitsma（anamorph:

Cylindrocladium parasiticum Crous, M.J. Wingf. & Alfenas）の記載とほぼ一致した。以上より病原菌を C. licicola と同定した．また，多くのフィアロ型分生子形成菌類の系統分類で用いられる intron と exon を含むβ-tubulin の tub2 領域を利用して，DNA Data Bank of Japan（DDBJ）に 登 録 さ れ て い る Calonectria ilicicola （AF333412） と の 相 同 性 比 較 を 行 っ た．DNA は，
DNeasy Plant Mini Kit（QIAGEN, Hilden, Germany）により抽出し，T1 と T224 のプライマー（O’Donnell and Cigelnik, 1997）を用いて PCR 反応を行った．塩基配列の決定には，Applied
Biosystems 3130/3130xl Genetic Analyzer（Applied Biosystems, Foster City, CA, USA）を用いた．
得られた DNA は，
はじめ Mac Vector 6.5 を用いて Clustal W の DNA 配列の整列（アライメント）を行った後，pairwise alignment により塩基配列の相同性を検討した．その結果，サラセニア分離菌と Calonectria ilicicola（AF333412) のβ -tubulin（tub2 領域）における相同性は99.4％であり，形態学的同定結果が裏付けられた．

４） ツボサンゴ （Sarracenia sp.） 株枯病⑴

本病は1998年６月，東京都武蔵野市で切り

花用に露地栽培されていたツボサンゴに発生した．根部～地際茎部および下位葉基部が暗褐色となり，さらに葉にも褐色円形の斑点が生じ，後に株枯れが起きる（図７）．
罹病部からは Cylindrocladium 属菌が高率⑵に分離され，分離菌の接種により原宿主に原病徴が再現し，接種菌が再分離された．
⑶

菌叢は15～35℃で生育，生育適温は25℃

図７

生産圃場における病徴

であった．
⑷

CLA 上における分離菌の形態は，
無色，
長円筒形，
１隔壁，
45～68×4～6µmの大型分生子（図８）をフィアロ型に形成，分生子柄先端のベシクルは無色で洋梨～ Sphaeropedunculate 型，
幅5～11µm．数週間培養しつづけると，褐色で類球形の菌核と厚壁胞子を豊富に形成した．
なお，PDA 上では，分生子および分生子柄は観察されず，白色からやや灰白色の綿毛状菌糸体のみを形成した（表８）．これらの形態的特徴は Crous(2002)
による Cylindrocladium canadense J.C. Kang, Crous &C.L. Schoch の記載とほぼ一致した。以上より本菌を不完全糸状菌類C. canadense と同定した（竹内ら，
2007)．また，多くのフィアロ型分生子菌類の系統分類で用いられる intron と exon を含むβ -tubulinの tub2 領 域 を 利 用 し て，DNA Data Bank of Japan― 31 ―

図８

病原菌の分生子 （Bar:10µm）

（DDBJ) に登録されている Cylindrocladium canadense（AF348212) との相同性比較を行った．
DNA は，DNeasy Plant Mini Kit（QIAGEN, Hilden, Germany)により抽出し，T1 と T224 のプライマー（O’Donnell and Cigelnik, 1997) を用いて PCR 反応を行った．塩基配列の決定には，Applie Biosystems 3130/3130xl Genetic Analyzer（Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) を用いた．得られた DNA は，
はじめ Mac Vector 6.5 を用いて Clustal W の DNA 配列の整列（アライメント）を行った後，
pairwise alignment により塩基配列の相同性を検討した．その結果，サラセニア分離菌と Cylindrocladium canadense （AF348212）のβ-tubulin（tub2 領域）における相同性は99％であり，形態学的同定結果が裏付けられた．

表８．ツボサンゴ分離菌株と既報の Calonectria 属菌との形態比較
大型分生子のツボサンゴ

ベシクル

大きさ (µm）

形

45-68 × 4-6

洋なし形～

分離菌株

分生子柄の
幅 (µm） 最大分岐数

完全世代

5-11

3

観察されず

6-10

3

未記録

6-12

5

Calonectria

6kyotensis
C. morganii

Sphaeropedunculate

Cylindrocladium
canadense
Cy. floridanum a）

38-65 × 4-5

Cy. scoparium

a）

洋なし形～
Sphaeropedunculatea）35-55 × 3-5
40-66 × 3-5

Sphaeropedunculate
楕円形～洋なし形

6-8ａ）Crous 2002

４．考察
ヒペリカム褐紋病菌の属種名については以下のように判断した。現在，Seimatosporium

sensulato の系統解析と形態の相互性については，流動的である．そのため，現時点では属名は Nag Raj（1993）の分類体系に従い，分離菌が Type species である Diploceras 属を用いた．また種名については Nag Raj（1993）の Diploceras hypericinum の形態的特徴と一致すること，および D. hypericinum（NBRC 32647，海外産）の ITS 領域における相同性が 100% であったことから同種と同定した（竹内・堀江，2006）．本菌は日本新産属・種と考えられる。本菌は現在のところ，ヒペリカム・アン
ドロサエマムでのみ発生が確認されている．しかし，接種試験の結果，ビョウヤナギなど他のヒペ
リカム属植物にも病原性が確認されたため，他のヒペリカム属植物においても，生産および植栽で被害を生じる恐れがある．
サラセニア褐斑病菌は日本新産種の不完全糸状菌類 Cylindrocladium theae であった．本菌は接種試験の結果，広範囲の植物に病原性を有するため，今後，多くの農作物で発生が懸念される．
ケンチャヤシ褐斑病菌は Calonectria ilicicola と同定した．本菌も多犯性の植物病原菌であった．
ツボサンゴ株枯病菌は Cylindrocladium canadense と同定した．本菌はわが国では石川ら（2006）によるイチゴ苗立枯病の報告に続いて２報目の発生となる．
以上の植物病原菌による被害は現在のところ発生宿主植物，地域とも限られているが病原性は強― 32 ―

く，被害が拡大する可能性もある．各病原菌の発生生態を解明し，有効な防除対策を講じる必要がある．本課題の供試菌株は農業生物資源研究所ジーンバンクに寄託した（表９）．

表９． 供試菌株の MAFF 番号
菌株名

MAFF番号

学

名

CalHo-00-12

240098Cylindrocladium parasiticum

CySa-99-5Y

240099Cylindrocladium theae

CycHe-L1

240101

Cylindrocladium canadense

DipHyan 050912-M1

240103

Diploceras hypericinum

DipHyan 050912-M2

240104

Diploceras hypericinum

５．謝辞
本研究を行うにあたり，第一三共株式会社

創薬基盤研究所小野泰典氏には多くのご助言を頂いた．ここに記してお礼申し上げる．

６．引用文献
１）Crous, Pedro W.（2002)Taxonomy and Pathology of Cylindrocladium （Calonectria ）and Allied
Genera, 278p.
２）Nag Raj, T.R.（1993）Coelomycetous anamorphs with appendage-bearing conidia. Waterloo,
Canada: Mycologue Publications.1101p.
３）O’Donnell, K. and Cigelnik, E.（1997）Two divergent intragenomic rDNA ITS2 types within amonophyletic lineage of the fungus Fusarium are nonorthologous. Mol. Phyl. Evol. 7:103-116.
４）Sutton,B.C.（1980）The Coelomycetes. Commonwealth Mycol. Inst., Kew, 696p.
５）竹内純・廣岡裕吏・夏秋啓子・堀江博道（2005a）Cylindrocladium theae によるサラセニア褐

斑病（新称）．日植病報71（1）:32.
６）竹内 純・廣岡裕吏・夏秋啓子・堀江博道（2005b）Calonectria ilicicola （anamorph: Cylindrocladium

parasiticum ）によるケンチャヤシ褐斑病（新称）．日植病報71（3）:216-217.
７）竹内純・堀江博道・廣岡裕吏・夏秋啓子（2006）Diploceras hypericinum によるヒペリカム褐

紋病（新称）．日植病報72
（4）
:208.
８）竹内

純・廣岡裕吏・堀江博道・夏秋啓子（2007）Cylindrocladium canadense によるツボサン

ゴ株枯病（新称）．日植病報 73（3）
:179.
９）White, T.J., Bruns, T., Lee, S. and Taylor, J.（1990）Amplification and direct sequencing of fungal
ribosomal RNA genes for phylogenetics. In:PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications,eds. Innis, M.A., Gelfand, D.H., Sninsky, J.J. and White, T.J. pp. 315-322. Academic Press Inc, NewYork.

― 33 ―

Summary

The present study was conducted to clarify some properties of newly recorded pathogenic fungiof garden crops in Tokyo, Japan. Four new fungal diseases of the crops were examined. Diploceras

hypericinum （Cesati）Diedic., belonging to a genus new to Japan , was found on Brown Leaf Spot ofHypericum androsaemum in Musashino city. The pathogenicity of Diploceras hypericinum to leavesof H. androsaemum and to three other species of Hypericaceae was demonstrated by inoculations.
Cylindrocladium Brown Leaf Spot of Howea belmoreana and Sarracenia sp.（Pitcher Plant）caused byCalonectria ilicicola （anamorph : Cylindrocladium canadense ）and Cylindrocladium theae , respectively,
both occurred in Hachijojima Island. Each typical symptom was reproduced by artificial inoculations.
Pathogenicity of two isolates to five plants cultivated on Hachijojima Island was demonstrated byinoculations. A causal fungus of Cylindrocladium Blight on Heuchera sanguine was identified as

Cylindrocladium canadense J.C. Kang, Crous & C.L. Schoch based on morphological study and DNA
sequence homology. This is a second report of C. canadense from Japan. Single-conidium isolates offour pathogenic fungi examined in this study were deposited to the NIAS Genebank, National Institute ofAgrobiological Sciences, Tsukuba, Ibaraki, Japan.

― 34 ―

付録

これまでの探索収集実績

Appendix
Past Records

Ⅲ．これまでの探索収集調査実績
年度

調 査 課 題害虫防除に利用する微生物の探索および特性解明

対象微生物
昆虫寄生菌

担 当
果樹試験場

機

関

柳

担 当 者
沼 勝 彦

期
間
S62.07.27 ～ S62.07.29
S62.10.22 ～ S62.10.24
S62.12.07 ～ S62.12.08
S62.11.07 ～ S62.10.13

食品総合研究所派 遣 先
長野県
岩手県 青森県
静岡県
反 町
稔 香川県 愛媛県
佐 古浩
前 野 幸 男原 口 和 朋 千葉県

香川県および愛媛県における魚類病原菌およびウイルスの探索収集

魚類病原細菌
魚類病原ウイルス

養殖研究所

多糖類分解酵素の生産菌の探索および特性解明

多糖類分解菌北海道の各種飼料に着生する有用微生物の収集

飼料微生物

畜産試験場

原

慎一郎

S62.09.24 ～ S62.09.29

窒素固定菌の探索収集とその有効利用

窒素固定菌

農業生物資源研究所

蒲家畜寄生性原虫
植物病原菌
木材腐朽菌
植物病原ウイルス
植物病原細菌
カビ毒生産菌大型褐藻分解細菌

家畜衛生試験場
農業環境技術研究所

南佐

食品総合研究所
中央水産研究所

発酵微生物

昭62

― 35 ―

磨 タイ

S62.09.01 ～ S62.09.22
S62.11.29 ～ S62.12.19
S63.07.01 ～ S63.07.06

食品総合研究所

食用きのこ

森林総合研究所

根

田

仁

沖縄県

H01.10.13 ～ H01.11.19

糸状菌

食品総合研究所

岡

崎

博

宮崎県

H01.08.23 ～ H01.08.25

タイにおけるさび病菌の重複寄生菌の調査・収集

拮抗微生物

農業環境技術研究所

佐

藤

豊

三 タイ

H01.10.02 ～ H01.10.21

キオビエダシャクの病原糸状菌の探索収集

糸状菌

森林総合研究所

島

津

光

明

沖縄県

H02.12.18 ～ H02.12.21

ソルガム紫斑点病菌の交配用菌株等の探索
平２ 特殊環境微生物の探索と利用
ニュージーランドにおけるきのこ類の探索収集

糸状菌

草地試験場

月

星

隆

雄

九州

H02.09.09 ～ H02.09.12

特殊環境微生物
食用きのこ

川 澄 俊
根 田
宮 城
服 部

之 九州
仁 ニュージーランド
健
力 高知県

H02.10.15 ～ H02.10.18
H03.03.13 ～ H03.03.27

ネパール国における伝統的な発酵食品の調査および食品微
生物の調査
沖縄における食用きのこ遺伝資源の探索収集および特性解明
平元 都城市周辺圃場におけるアフラトキシン生産菌の探索収集

果樹試験場

卓

S62.10.13 ～ S62.10.24

哲 郎 インドネシア
藤 豊 三 小笠原諸島（父島 母島）今 田
準 岩手県 青森県
澤 田 宏 之 山形県 秋田県
鶴 田
理 沖縄県
中 山 昭 彦 北海道
内 田 基 晴新 国 佐 幸 ネパール

反芻家畜寄生性住血吸虫の探索および収集
小笠原諸島の亜熱帯農業環境における菌類遺伝資源の収集および特性解明
果樹の根頭がんしゅ病菌およびブドウウイルス病様症状の探索収集および特性解明
昭63 亜熱帯地域に生息する食品関連の特殊糸状菌の収集
北海道における大型褐藻分解細菌の探索収集

生

北海道

S63.06.20 ～ S63.06.23
S63.11.05 ～ S63.11.10
S63.07.04 ～ S63.07.06
S63.10.11 ～ S63.11.01

高知県における木材腐朽菌遺伝資源の探索収集

木材腐朽菌

食品総合研究所
森林総合研究所
沖縄県林業試験場
森林総合研究所

セルロース合成および分解真菌の探索収集および特性解明

鞭毛菌類・子嚢菌類

農業環境技術研究所

大久保

博

人

北海道

H03.09.24 ～ H03.09.28

平３ 北海道におけるコムギ植物体上微小菌類の収集

H03.11.12 ～ H03.11.15

微小菌類

農業生物資源研究所

青

木

孝

之

北海道

H03.07.08 ～ H03.07.12

米粒の品質劣化に影響する病原菌類相と侵害機作の解明

糸状菌

農業研究センター

内

藤

秀

樹

山口県

H03.09.23 ～ H03.09.25

タイにおける特殊環境微生物（好塩菌）の探索収集

特殊微生物

食品総合研究所

川

澄

俊

之 タイ

ナシ黒星病菌の DMI 剤感受性のモニタリング

糸状菌

果樹試験場

石

井

英

夫

佐賀県

H04.07.18 ～ H04.07.20

平４ 九州における樹木寄生糸状菌類の調査と収集

糸状菌

森林総合研究所金子繁

大分県・熊本県

H04.09.22 ～ H04.09.27

糸状菌

農業研究センター

内

藤

樹

中国

H04.09.19 ～ H04.09.29

中華人民共和国雲南省におけるイネいもち病菌の探索収集

秀H03.07.25 ～ H03.08.20

年度

調

査

課

題

小笠原諸島におけるさび病菌の重複寄生菌の調査・収集
九州地域におけるイネ白葉枯病菌各種レースの探索・収集
平５

対象微生物

担

当

機

関

糸状菌
植物病原細菌四国農業試験場
農業生物資源研究所

タイ国におけるサイレージ用高温性乳酸菌の探索・収集

乳酸菌

北海道に発生する植物病原 MLO の探索と収集
東北地方におけるナラタケ属菌の生態と分類学的検討

植物病原微生物
担子菌類

草地試験場
静岡県畜産試験場
農業研究センター
森林総合研究所

オーストラリアにおける Agrobacterium 属細菌の探索・収集

バイテク関連微生物スリランカ国におけるイネ病原微生物の探索収集

植物病原細菌

担
佐

藤

当
豊

者

派

遣

先

三

小笠原諸島
長崎県・熊本県
加 来 久 敏宮崎県
大 桃 定 洋 タイ
片 山 信 也
塩 見 敏 樹 北海道
長谷川 絵 里 青森県・岩手県
山形県・宮城県
福島県

平６

H05.08.25 ～ H05.09.13
H06.08.30 ～ H06.09.03
H06.09.12 ～ H06.09.13
H06.10.06 ～ H06.10.07
H06.10.11 ～ H06.10.12
H06.10.20 ～ H06.10.21
H06.10.24 ～ H06.10.25
H07.03.08 ～ H07.03.22

澤
牧
落
堀
宮
山

食品微生物

農業生物資源研究所
農業生物資源研究所
長野県中信農業試験場
食品総合研究所

九州地方におけるカメムシ類共生微生物の探索と収集

共生微生物

果樹試験場

土 屋 健 一横 山
正
村 上 敏 文
森
勝 美
知枝
山田
（伊豫）
中 島 博 文島純
三 代 浩 二ネパールにおける新規拮抗微生物の探索収集

拮抗微生物

長崎県福江島、壱岐及び対馬におけるカンキツかいよう病
菌の収集

細菌

農業生物資源研究所
兵庫県中央農業技術センター
果樹試験場

平９ タイ国でのカンキツトリステザウイルス弱毒、強毒系統の探索・収集
沖縄県での暖地型イネ科植物ミイラ穂病菌の探索・収集

ウイルス

果樹試験場

家

城

洋

之 タイ

H09.08.21 ～ H09.08.22
H09.09.25 ～ H09.09.26
H09.10.23 ～ H09.10.24
H09.08.27 ～ H09.09.11

糸状菌

草地試験場

月

星

隆

雄

H10.02.26 ～ H10.03.02

離島及び西日本地域のブナ帯における主要栽培きのこの野
生菌株の収集と特性評価
平10 奄美大島におけるサトウキビ上生息糸状菌類の収集と特性評価
台湾における VA 菌根菌の探索と収集

担子菌

森林総合研究所

糸状菌

農業生物資源研究所

馬場崎
宮 崎
青 木

勝
安
孝

沖縄本島
石垣島
彦 南九州・佐渡島
将 紀伊半島之 奄美大島

共生微生物

草地試験場

斉

雅

典

H11.01.16 ～ H11.01.24― 36 ―

平７ 南西諸島における拮抗性シュードモナス属細菌の探索と収集
中国におけるダイズ根粒菌等有用微生物の探索・収集に関する共同調査北海道における発酵食品微生物の収集

平８

窒素固定微生物
拮抗細菌
共生微生物

之 オーストラリア
宏
和 スリランカ
修
之
史 沖縄県

間

農業環境技術研究所
静岡県農業試験場
農業生物資源研究所
京都府立大学
北海道十勝農業試験場
森林総合研究所

沖縄における放線菌根菌（フランキア菌）の探査と収集

田 宏
野 孝
合 弘
野
島 邦
中 高

期

H05.12.08 ～ H05.12.15
H05.09.25 ～ H05.09.28

H07.09.18 ～ H07.09.21

沖縄県
中国

H07.11.25 ～ H07.12.04
H07.07.15 ～ H07.08.01

北海道

H08.11.26 ～ H08.11.30

福岡県・熊本県
大分県
堀 田 光 生 ネパール
相 野 公 孝塩 谷
浩 対馬・壱岐尾 崎 克 己 福江島

藤

H07.02.25 ～ H07.03.08

台湾

H08.10.14 ～ H08.10.19
H08.09.24 ～ H08.10.08

H10.10.26 ～ H10.11.20
H10.11.30 ～ H10.12.06

年度

調

査

課

題

沖縄における乳酸菌の収集と特性評価
東北地域におけるイチゴうどんこ病に対する拮抗微生物の平11 収集と特性評価
ロシア極東地域における Steinernema 属・Heterorhabditis 属
昆虫病原性線虫およびそれらの共生細菌の収集と特性評価
沖縄におけるいもち病菌の収集と特性評価

対象微生物

担

当

機

関

乳酸菌
拮抗微生物

畜産試験場
野菜・茶業試験場

線虫
共生細菌
糸状菌

農業環境技術研究所

担

当

者

派

遣

先

木 元 広 実 沖縄県
小板橋 基 夫 栃木県・福島県
青森県・岩手県
宮城県
吉 田 睦 浩 ロシア

H11.09.05 ～ H11.10.07

インドネシアにおける植物病原および共生シュードモナスの収集と特性評価
沖縄県における園芸作物病原菌等の収集と特性評価
沖縄県でのイネ科植物寄生性 Bipolaris , Curvularia ,Exserohilum 属菌の収集
平13
沖縄県におけるサトウキビから分離される細菌の収集と特性解明
南西諸島における植物病原細菌の探索収集
南九州におけるイネ科植物内生性窒素固定細菌の収集と評価

細菌
糸状菌
糸状菌

農業生物資源研究所
農業環境技術研究所

佐 藤 豊 三 沖縄県
月 星 隆 雄 沖縄県

H13.11.01 ～ H13.11.07
H14.02.18 ～ H14.02.22

細菌

農業環境技術研究所

篠H13.11.25 ～ H13.12.01

細菌
窒素固定細菌農業生物資源研究所
国際農林水産業研究センター

H14.01.23 ～ H14.01.30
H14.09.01 ～ H14.09.05

長野、群馬、新潟県におけるダイズシストセンチュウ並びにネコブセンチュウの収集

線虫

中央農業総合研究センター

糸状菌

花き研究所

堀 田 光 生 南西諸島
安 藤 康 雄 宮崎県
鹿児島県
相 場
聡 長野県・群馬県
水久保 隆 之 新潟県
伊 藤 賢 治築 尾 嘉 章 富山県

平12― 37 ―

平14 富山県におけるキク立枯れ性病害の収集と特性評価

担子菌

原

亮
勝
安
明
尚
健

弘

篤
一
彦
将
広
美
一

間

宮 坂
園 田
森林総合研究所
馬場崎
岩手県林業技術センター 宮 崎
青森県林業試験場
上 部
坂 本
農業環境技術研究所
土 屋

東北地方北部地域及び長野県におけるナメコ等食用きのこの収集と特性評価

中央農業総合研究センター

期

H11.08.25 ～ H11.09.01
H12.01.18 ～ H12.01.21

亮

沖縄県

H12.10.17 ～ H12.10.20

長野県・青森県
秋田県

H12.10.17 ～ H12.10.19
H12.10.30 ～ H12.11.02

インドネシアH12.11.19 ～ H12.12.03

沖縄県

H14.10.21 ～ H14.10.25
H14.11.12 ～ H14.11.13
H14.11.25 ～ H14.11.26

サトウキビ白すじ病菌の探索・収集

細菌

農業環境技術研究所

對

馬

誠

也

沖縄県

H14.12.09 ～ H14.12.13

北東北地域における発酵関連糸状菌の探索収集
冬期ベトナム北部における野菜発酵食品由来微生物の収集と特性評価
北海道でのイネ科植物寄生性 Bipolaris , Drechslera ,Exserohilum 属菌の収集

発酵関連糸状菌
発酵関連微生物食品総合研究所
食品総合研究所

柏
稲

木
津

康

豊 青森県
弘 ベトナムH14.12.18 ～ H14.12.20
H14.03.03 ～ H14.03.16

糸状菌

農業環境技術研究所

月

星

隆

雄

糸状菌

花き研究所

線虫

中央農業総合研究センター

伊 藤 陽
築 尾 嘉
相 場

卵菌類等

農業生物資源研究所

キク立枯れ性病害の病原菌の探索・収集
平15
富山県および新潟県におけるダイズシストセンチュウの収集
アメリカ合衆国の微生物遺伝資源保存機関の視察

竹
飯

内
田

香
元

北海道

子 香川県
章
聡 富山県
新潟県
純 アメリカ合衆国子

H15.08.25 ～ H15.08.29
H15.09.04 ～ H15.09.05
H15.11.04 ～ H15.11.05
H15.11.06 ～ H15.11.07
H15.10.07 ～ H15.10.09

年度

調 査 課 題特異な分布をとる新規アフラトキシン産生菌の探索（信越地方）
平16 屋久島、奄美大島における昆虫病原糸状菌の探索・収集

対象微生物
糸状菌

担 当
信州大学

関
後

担 当 者
藤 哲 久

先

糸状菌

果樹研究所

栁

乳酸菌

畜産草地研究所

蔡

植物内生酵母の探索と特性解析
実用栽培品種ダイズ根粒菌の探索収集

酵母
根粒菌

台湾・マレーシアにおけるチャもち病菌の探索収集

糸状菌

キャベツ黒腐病菌及びファージの探索収集

植物病原細菌ファージ

ニンジンこぶ病菌の探索収集

植物病原細菌島根大田と熊本阿蘇の草地における
アーバスキュラー菌根菌の探索収集
東京都の園芸作物に発生した本邦初産属種を含む
植物病原菌類の特性評価

菌根菌

北海道農業研究センター 斎 藤 勝 一 北海道
青森県農林総合研究センター 桑 田 博 隆 青森県
近 藤 伸 子
岩 谷 香緒里
農業生物資源研究所長 尾 英 幸 台湾
マレーシア
井 上 康 宏 長野県・茨城県
中央農業総合研究センター
松 浦 貴 之 群馬県・東京都
畔 上 耕 児 三重県・静岡県
岐阜県
青森県農林総合研究センター 桑 田 博 隆 青森県
岩 谷 香緒里
畜産草地研究所
小 島 知 子 島根県・熊本県

植物病原糸状菌

東京都農林総合研究センター― 38 ―

東京農業大学

竹
堀
廣
夏

沼

派 遣
長野県

中国における飼料作物・家畜腸内由来乳酸菌の収集と評価

平17

平18

機

内
江
岡
秋

期
間
H16.07.16 ～ H16.08.06

勝

彦

鹿児島県

H16.10.18 ～ H16.10.23

義

民

中国

H16.09.17 ～ H16.10.24

博
裕
啓

純
道
吏
子

H17.06 ～ H17.09
H17.03.15

H17.04.25 ～ H17.05.10
H18.01.24 ～ H18.02.09
H18.07.26 ～ H18.12.5

H18.09.16 ～ H18.10.10
H18.05.21 ～ H18.05.24
H18.11.05 ～ H18.11.08－

生物研資料
平成19年12月

平成18年度

編集兼発行者

微生物遺伝資源探索収集調査報告書
2007年12月25日

印刷

2007年12月26日

発行

第20巻

独立行政法人 農業生物資源研究所

National Institute of Agrobiological Sciences〒305-8602 茨城県つくば市観音台 2-1-2
http://www.gene.affrc.go.jp/

Annual Report on Exploration and Introduction of
Microbial Genetic Resources

Vol. 20

National Institute of Agrobiological Sciences