Product Instructions
MDA2SAL96
Molecular Detection Assay 2 - Salmonella
FR Kit de détection moléculaire Salmonella version 2
DE Molekulare Detektion 2 - Salmonellen Nachweis
ES Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella
PT Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2
PL Molekularny test do wykrywania 2 - Salmonella
JA 分子検出アッセイ2 - サルモネラ属菌
ZH  
沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌 (Simplified)TH ชุุดทดสอบเชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2
KO  Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라
EN

 

2

Salmonella

EN(English)Issue Date: 2024-01

Product Instructions
Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella®

Product Description and Intended Use

The Neogen® Molecular Detection Assay 2 - Salmonella is used with the Neogen® Molecular Detection System for the
rapid and specific detection of Salmonella in enriched food, feed and food process environmental samples.
The Neogen® Molecular Detection Assays use loop-mediated isothermal amplification to rapidly amplify nucleic acidsequences with high specificity and sensitivity, combined with bioluminescence to detect the amplification. Presumptive
positive results are reported in real-time while negative results are displayed after the assay is completed. Presumptive
positive results should be confirmed using your preferred method or as specified by local regulations(1, 2, 3).
The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella is intended for use in a laboratory environment by professionals
trained in laboratory techniques. Neogen has not documented the use of this product in industries other than food orbeverage. For example, Neogen has not documented this product for testing pharmaceutical, cosmetics, clinical orveterinary samples. The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella has not been evaluated with all possible foodproducts, food processes, testing protocols or with all possible strains of bacteria.
As with all test methods, the source, formulation and quality of enrichment medium can influence the results. Factors suchas sampling methods, testing protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may also influence results.
Neogen recommends evaluation of the method including enrichment medium, in the user’s environment using a sufficientnumber of samples with particular foods and microbial challenges to ensure that the method meets the user’s criteria.
Neogen has evaluated the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella with Buffered Peptone Water (BPW) ISO.
The Neogen® Molecular Detection Instrument is intended for use with samples that have undergone heat treatment during
the assay lysis step, which is designed to destroy organisms present in the sample. Samples that have not been properly
heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard and should NOT be inserted into the
Neogen Molecular Detection Instrument.
Neogen Food Safety is certified to ISO (International Organization for Standardization) 9001 for design and manufacturing.
The Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella test kit contains 96 tests, described in Table 1.
Table 1. Neogen Molecular Detection Assay Kit components
Item

Identification

Quantity

Contents

Comments

Neogen Lysis
Solution (LS)

Pink solution
in clear tubes

96(12 strips of 8 tubes)

580 µL of LS per tube

Racked and readyto useNeogen® Molecular
Detection Assay 2 Salmonella Reagent Tubes

Green tubes

96(12 strips of 8 tubes)

Lyophilized specificamplification anddetection mix

Ready to use

Extra caps

Green caps

96
(12 strips of 8 caps)

Neogen® Reagent
Control (RC)

Clear flip-top
tubes

16
(2 pouches of
8 individual tubes)®

Ready to use
Lyophilized control
DNA, amplificationand detection mix

Ready to use

The Negative Control (NC), not provided in the kit, is a sterile enrichment medium, e.g., BPW ISO. Do not use water as a NC.
SafetyThe user should read, understand and follow all safety information in the instructions for the Neogen Molecular Detection
System and the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella. Retain the safety instructions for future reference.
WARNING: Indicates a hazardous situation, which, if not avoided, could result in death or serious injury and/or
property damage.
NOTICE: Indicates a potentially hazardous situation which, if not avoided, could result in property damage.

1

EN(English)WARNING
Do not use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella in the diagnosis of conditions in humans or animals.
The user must train its personnel in current proper testing techniques: for example, Good Laboratory Practices,
ISO/IEC 17025(4), or ISO 7218(5).
To reduce the risks associated with a false-negative result leading to the release of contaminated product:• Follow the protocol and perform the tests exactly as stated in the product instructions.
• Store the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella as indicated on the package and in the product instructions.
• Always use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella by the expiration date.
• Use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella with food, feed and food process environmental samples
that have been validated internally or by a third party.
• Use the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella only with surfaces, sanitizers, protocols and bacterial strainsthat have been validated internally or by a third party.
• For an environmental sample containing neutralizing buffer with aryl sulfonate complex, perform a 1:2 dilution before
testing (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth). Another option is to transfer 10 µL of the neutralizing buffer
enrichment into the Neogen Lysis Solution tubes. Neogen® Sample Handling Products which include neutralizing buffer
with aryl sulfonate complex: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G
and HS2410NB2G.
To reduce the risks associated with exposure to chemicals and biohazards:• Perform pathogen testing in a properly equipped laboratory under the control of trained personnel. Incubatedenrichment media and equipment or surfaces that have come into contact with incubated enrichment media may
contain pathogens at levels sufficient to cause risk to human health.
• Always follow standard laboratory safety practices, including wearing appropriate protective apparel and eye
protection while handling reagents and contaminated samples.
• Avoid contact with the contents of the enrichment media and reagent tubes after amplification.
• Dispose of enriched samples according to current industry standards.
• Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard
and should NOT be inserted into the Neogen Molecular Detection Instrument.
To reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:• Always wear gloves (to protect the user and prevent introduction of nucleases).
To reduce the risks associated with environmental contamination:• Follow current industry standards for disposal of contaminated waste.
To reduce the risks associated with exposure to hot liquids:• Do not exceed the recommended temperature setting on heater.
• Do not exceed the recommended heating time.
• Use an appropriate, calibrated thermometer to verify the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert temperature(e.g., a partial immersion thermometer or digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer).
The thermometer must be placed in the designated location in the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert.

NOTICETo reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:• Change gloves prior to reagent pellet hydration.
• Use of sterile, aerosol barrier (filtered), molecular biology grade pipette tips is recommended.
• Use a new pipette tip for each sample transfer.
• Use Good Laboratory Practices to transfer the sample from the enrichment to the lysis tube. To avoid pipettor
contamination, the user may choose to add an intermediate transfer step. For example, the user can transfer eachenriched sample into a sterile tube.
• Use a molecular biology workstation containing germicidal lamp where available. Periodically decontaminate laboratory
benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1-5% (v:v in water) household bleach solution or DNA
removal solution.
To reduce the risks associated with a false-positive result:• Never open tubes post amplification.
• Always dispose of the contaminated tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour andaway from the assay preparation area.
• Never autoclave reagent tubes post amplification.
Consult the Safety Data Sheet for additional information and local regulations for disposal.
If you have questions about specific applications or procedures, please visit our website at www.neogen.com
or contact your local Neogen representative or distributor.

2

EN(English)User Responsibility

Users are responsible for familiarizing themselves with product instructions and information. Visit our website atwww.neogen.com, or contact your local Neogen representative or distributor for more information.
When selecting a test method, it is important to recognize that external factors such as sampling methods, testing
protocols, sample preparation, handling, laboratory technique and the sample itself may influence results.
It is the user’s responsibility in selecting any test method or product to evaluate a sufficient number of samples with theappropriate matrices and microbial challenges to satisfy the user that the chosen test method meets the user’s criteria.
It is also the user’s responsibility to determine that any test methods and results meet its customers’ andsuppliers’ requirements.
As with any test method, results obtained from use of any Neogen Food Safety product do not constitute a guarantee ofthe quality of the matrices or processes tested.
To help customers evaluate the method for various food matrices, Neogen has developed the Neogen® Molecular
Detection Matrix Control kit. When needed, use the Matrix Control (MC) to determine if the matrix has the ability to impact
the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella results. Test several samples, representative of the matrix, i.e.
samples obtained from different origin, during any validation period when adopting the Neogen method or when testing
new or unknown matrices or matrices that have undergone raw material or process changes.
A matrix can be defined as a type of product with intrinsic properties such as composition and process. Differences
between matrices may be as simple as the effects caused by differences in their processing or presentation for example,
raw vs. pasteurized; fresh vs. dried, etc.

Limitation of Warranties / Limited Remedy

EXCEPT AS EXPRESSLY STATED IN A LIMITED WARRANTY SECTION OF INDIVIDUAL PRODUCT PACKAGING,
NEOGEN DISCLAIMS ALL EXPRESS AND IMPLIED WARRANTIES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO, ANY
WARRANTIES OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR USE. If any Neogen Food Safety Product is
defective, Neogen or its authorized distributor will, at its option, replace or refund the purchase price of the product. These
are your exclusive remedies. You must promptly notify Neogen within sixty days of discovery of any suspected defects ina product and return it to Neogen. Please contact your Neogen representative or authorized Neogen distributor for any
further questions.

Limitation of Neogen Liability

NEOGEN WILL NOT BE LIABLE FOR ANY LOSS OR DAMAGES, WHETHER DIRECT, INDIRECT, SPECIAL, INCIDENTAL
OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO LOST PROFITS. In no event shall Neogen’s liability
under any legal theory exceed the purchase price of the product alleged to be defective.

Storage and Disposal

Store the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella at 2-8°C. Do not freeze. Keep kit away from light duringstorage. After opening the kit, check that the foil pouch is undamaged. If the pouch is damaged, do not use. After opening,
unused reagent tubes should always be stored in the re-sealable pouch with the desiccant inside to maintain stability of thelyophilized reagents. Store resealed pouches at 2-8°C for no longer than 60 days.
Do not use Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella past the expiration date. Expiration date and lot number are
noted on the outside label of the box. After use, the enrichment medium and the Neogen Molecular Detection Assay 2 Salmonella tubes can potentially contain pathogenic materials. When testing is complete, follow current industry standards
for the disposal of contaminated waste. Consult the Safety Data Sheet for additional information and local regulations for
disposal.

Instructions for Use

Follow all instructions carefully. Failure to do so may lead to inaccurate results.
Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1-5% (v:v in water)household bleach solution or DNA removal solution.
The user should complete the Neogen Molecular Detection System operator qualification (OQ) training, as described in the“Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen Molecular Detection
System” document(6).
See Section “Specific Instructions for validated methods” for specific requirements:
Table 3 for enrichment protocols according to AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01 and AOAC® Performance
TestedSM Certificate #091501.
Table 4 for enrichment protocols according to NF VALIDATION certificate 3M 01/16 -11/16.

3

EN(English)Sample Enrichment
Tables 2, 3 or 4 present guidance for general enrichment protocols for food, feed and environmental samples.
It is the user’s responsibility to validate alternate sampling protocols or dilution ratios to ensure this test method meets theuser’s criteria.
Foods
1. Allow BPW ISO enrichment medium to equilibrate to ambient laboratory temperature or 41.5 ± 1°C depending upon
matrices tested. See Tables 2, 3 or 4.
2. Aseptically combine the enrichment medium and sample.
3. Homogenize thoroughly by blending, stomaching, or hand mixing for 2 ± 0.2 minutes or until all lumps are completely
dissolved and the enrichment suspension is homogeneous(10-15).
a.

For all meat and highly particulate samples, the use of filter bags is recommended.

b. For matrices which swell in water and are highly viscous (e.g., cereals, starches), it is suggested to make further
dilutions (> 1:10) until viscosity is suitably reduced or add sterile 1% (w/v) alpha-amylase to BPW (ISO)(10-13).
c.

For large sample sizes of milk powder and cereals, add the sample slowly to the liquid with frequent mixing to
avoid clumps.

4. Incubate as outlined in the appropriate protocol table (see Tables 2, 3 or 4).
Environmental Samples
Sample collection devices can be a sponge hydrated with a neutralizing solution to inactivate the effects of the sanitizers.
Neogen recommends the use of a biocide-free cellulose sponge. Neutralizing solution can be Dey-Engley (D/E)
neutralizing broth or Letheen Broth. It is recommended to sanitize the area after sampling.
WARNING: Should you select to use neutralizing buffer that contains aryl sulfonate complex as the hydrating solution
for the sponge, it is required to perform a 1:2 dilution (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth) of the enrichedenvironmental sample before testing in order to reduce the risks associated with a false-negative result leading to therelease of contaminated product. Another option is to transfer 10 µL of the neutralizing buffer enrichment into the
Neogen Lysis Solution tubes.
The recommended size of the sampling area to verify the presence or absence of the pathogen on the surface is at least
100 cm2 (10 cm x 10 cm or 4” x 4”). When sampling with a sponge, cover the entire area going in two directions (left toright then up and down) or collect environmental samples following your current sampling protocol or according to the
FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) or ISO 18593:2018(7) guidelines.
It is the user’s responsibility to validate alternate sampling protocols or dilution ratios to ensure this test method meets theuser’s criteria.
1. Pre-warm BPW ISO enrichment medium to 41.5 ± 1°C depending upon matrices tested. See Tables 2, 3 or 4.
2. Aseptically combine the enrichment medium and sample. Homogenize thoroughly by blending, stomaching, or handmixing for 2 ± 0.2 minutes. Incubate as outlined in the appropriate protocol table. See Tables 2, 3 or 4.

4

EN(English)

Table 2. General enrichment protocols.
Sample Matrix

Sample Size

Enrichment Broth
VolumeEnrichment
Temperature(± 1°C)

Enrichment
Time (hours)

SampleAnalysis
Volume (µL)(a)Protocol 1
Processed food products (excluding
egg powders, and products specified
in the other protocols)(b)

25 g

225 mL BPW ISO

37

18-26

20

Protocol 2
Raw and unprocessed foods,
egg powders, animal feed, andenvironmental samples(c)25 g

225 mL BPW ISO(pre-warmed)

41.5

18-26

20

Protocol 3
Powdered dairy products (includes
infant formula, soy based infant
formula)25 g

225 mL BPW ISO

37

20-26

20

25 g

225 mL of sterile
100 g/L non-fat
dry milk with
0.002% brilliant
green dye(d,e,f)

37

24-30

20

25 g

235 mL 2X BPW
ISO with 0.5%
K2SO3 + 240 mLof sterile 100 g/L
non-fat drymilk(d,g,h)

37

24-30

10

25 g

225 mL of sterile
100 g/L non-fat
dry milk(d)

37

18-24

20

Protocol 4
Cocoa based products (powder,chocolates, confectionaries, etc.)
Protocol 5
Other including: spices, aromatic
herbs, concentrates, instant teas andcoffees, bouillon cubes
Protocol 6
Walnuts or nut mixes containing
walnuts (this protocol is appropriate
for other nuts including pecans,almonds, pistachios, cashews,
chestnuts, macadamia nuts, Brazil
nuts, soy nuts and peanuts)(a) Volume of sample transferred to Lysis Solution tubes. Refer to step 4.7 of Lysis section.
(b) Examples of products to be tested with Protocol 1: ready to use meals, deli salads, custard.
(c) Examples of products to be tested with Protocol 2: raw meats, frozen vegetables, all cheeses, fermented milk, raw
salad (lettuce, Batavia).
(d) Non-fat UHT milk can be substituted for non-fat dry milk.
(e) 0.45 mL of 1% aqueous brilliant green dye solution per 225 mL non-fat milk, resulting in a final concentration of 0.002%(0.02 g/L) brilliant green dye.
(f) To prepare sterile non-fat dry milk, suspend 100 g dehydrated non-fat dry milk in 1 L of distilled or purified water. Swirl
until dissolved. Autoclave for 15 minutes at 121°C. Store at 2-30°C(8).
(g) 5 g of K2SO3 per 1000 mL BPW ISO, resulting in a final concentration of 0.5% K2SO3.
(h) 240 mL 100 g/L sterile non-fat dry milk must be added to sterilized 235 mL 2X BPW ISO with 0.5% K2SO3.
If using an optional secondary enrichment step, e.g. Rappaport Vassiliadis Medium, it is required to perform a 1:2 dilution(1 part sample enrichment into 1 part sterile enrichment broth) or simply transfer 10 µL of the secondary enrichment to the
Neogen Lysis Solution tubes. If using Tetrathionate (TT) Broth, transfer 20 µL of the secondary enrichment to the Neogen
Lysis Solution tubes, and do not vortex TT enrichment or pipette from the bottom of enrichment tube to avoid transfer of any
precipitate.

5

EN(English)Specific Instructions for Validated Methods
AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
AOAC® Performance TestedSM Certificate #091501

In AOAC Research Institute OMASM and PTMSM programs, the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella wasfound to be an effective method for the detection of Salmonella. The matrices tested in the study are shown in Table 3.
Table 3. Enrichment protocols according to AOAC OMASM 2016.01 and AOAC PTMSM Certificate #091501. Volume ofsample transferred to Neogen Lysis Solution tubes is 20 µL.
Enrichment
Temperature(± 1°C)

Enrichment Time(hours)

41.5

10-24

225 mL BPW ISO(pre-warmed)

41.5

10-24

325 g

975 mL BPW ISO(pre-warmed)

41.5

14-24

325 g

2,925 mL BPW ISO

37

18-24

25 g

225 mL BPW ISO

375 g

1,500 mL BPW ISO

37

18-24

Black pepper, Raw whole shrimp,
Raw bagged spinach, Pasteurizedprocessed American cheese

25 g

225 mL BPW ISO

37

18-24

Chicken carcass rinse

30 mL

30 mL BPW ISO(pre-warmed)

41.5

18-24

Chicken carcass sponge

1 sponge

50 mL BPW ISO(pre-warmed)

41.5

18-24

Instant non-fat dry milk

25 g

225 mL BPW ISO

37

20-24

Cocoa powder

25 g

225 mL BPW ISO

37

24-28

Pasteurized liquid whole egg

100 mL

900 mL BPW ISO

37

18-24

Spent sprout irrigation water

375 mL

3,375 mL BPW ISO

37

18-24

25 g

225 mL BPW ISO

375 g

3,375 mL BPW ISO

37

18-24

10 g

90 BPW-ISO

41.5

28-32

Sealed concrete

1 sponge

225 mL BPW ISO(pre-warmed)

41.5

18-24

Stainless steel

1 swab

10 mL BPW ISO(pre-warmed)

41.5

18-24

Sealed ceramic tile

1 sponge

50 mL BPW ISO(pre-warmed)

41.5

18-24

Sample Matrix

Sample Size

Enrichment Broth
Volume25 g

225 mL BPW ISO(pre-warmed)

325 g

975 mL BPW ISO(pre-warmed)

25 g

Raw ground beef

Raw ground chicken
Cooked breaded chicken
Dry dog foodCreamy peanut butter

Environmental

Dried cannabis flower,
dried hemp flower(4)SampleMatrixRaw shrimp,
head onSample Size

Enrichment
Broth Volume

Enrichment
Temperature(± 1°C)

Enrichment
Time (hours)

Secondary
Enrichment
Medium (mL)

Secondary
Enrichment
Temperature(±1°C)

Secondary
Enrichment
Time (hours)

25 g

225 mL BPW
ISO

37

18-24

R-V R10:0.1 mL into
10 mL(a)

41.5

4-24

(a) Transfer 10 µL of enriched sample to Lysis Solution tubes. Refer to step 4.7 of Lysis section.

6

EN(English)NF VALIDATION by AFNOR Certification

3M 01/16 -11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
For more information about end of validity, please refer to NF VALIDATION certificate available on the website mentioned
above.
NF VALIDATION certified method in compliance with ISO 16140-2(7) in comparison to ISO 6579(3).
Scope of the validation: All human food products, production environmental samples (including primary production
samples), pet food and animal feed, by performing validation assays on a broad range of foods.
Sample preparation: Samples should be prepared according to EN ISO 6579(3) and EN ISO 6887(10-15).
Software version: See certificate.
Table 4. Enrichment protocols according to NF VALIDATION certified method 3M 01/16 -11/16.
Sample size

Enrichment
broth volume

Enrichment
temperature(+1°C)

Enrichment
Time (hours)

SampleAnalysis
Volume (µL)(a)Protocol 1:• Broad range processed foodproducts, (excluding egg powder,processed fruits and vegetables
and products specified in theother protocols)• All fish and raw seafood products• Pet food and animal feed
• Primary production (non-fecal)

25 g

225 mL BPW ISO

37

18 - 26

20

Protocol 2:• Broad range of raw andunprocessed food (excluding
raw fish and raw seafood, andproducts specified in the otherprotocols)• Egg powders• All fruits and vegetables• Food production environment
samples

25 g or 1
wipe or 1
swab

225 mLpre‑warmed BPW
ISO

41.5

18 - 2620

25 g

225 mL BPW ISO

37

20 - 2620

25 g

225 mL non-fat
UHT milk+ 0.002% Brilliant
green

37

24 - 3020

25 g

235 mL 2 x BPW
ISO +K2SO3 0.5% + 240
mL of non-fat
UHT milk

37

24 - 301025 g

225 mLpre‑warmed BPW
ISO

41.5

10 - 24

20

ProtocolProtocol 3:• Powdered dairy products
Protocol 4:• Cocoa based products containing
more than 20% cocoa
Protocol 5:• Spices, aromatic herbs,
concentrates, teas, coffees,
culinary preparation
Protocol 6:• Raw meat7

EN
Protocol 7:• Primary production (fecal)

Protocol 8:• Infant formula, infant cereals,
dairy powders withoutprobiotics(b)Protocol 9:• Infant formula, infant cereals,
dairy powders with probiotics(b)1 boot sock

100 mL
Tetrathionate
broth

25 g

225 mL
Tetrathionate
broth

375 g

375 g

(English)37

22 - 2420

3375 mL
pre-warmed BPW
ISO

37

20 - 2620

3375 mL
pre-warmed BPW
ISO + vancomycin(10 mg/L)

37

20 - 26

20(a) Volume of sample transferred to Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.7 of Lysis section.
(b) For large sample sizes of powders and cereals, add the sample slowly to the liquid with frequent mixing to
avoid clumps.
NOTES:• Samples larger than 25 g have not been tested except in protocol 8 and 9 in the NF VALIDATION study.
• The short protocols of detection are sensitive to conditions of incubation. It is required to follow the conditions oftemperature indicated in the technical specification. User must verify that pre-warming of the enrichment brothreaches the temperature required prior to incubation. The time of preparation of the samples, delay between the endof the step of pre-warming of the enrichment broth and the beginning of the step of incubation of the food sample,
should not exceed 45 minutes. Using a ventilated incubator for incubation is recommended.
• For transfer of sample from Tetrathionate (TT) Broth enrichments to Neogen Lysis Tube, do not vortex TT
enrichment or pipette from the bottom of enrichment tube to avoid transfer of any precipitate. Transferring of
precipitate can lead to invalid results.
• The recommended protocol interruption points are after enrichment or after sample lysis. Enrichment broth or
sample lysate can be stored at 2-8°C for up to 72 hours. After removing the enrichment broth from storage, resume
testing from Step 1 in the Lysis section. After removing the sample lysate from storage, resume testing from Step 8
in the Lysis section.
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Speed Loader Tray
1. Wet a cloth or disposable towel with a 1-5% (v:v in water) household bleach solution and wipe the Neogen® Molecular
Detection Speed Loader Tray.
2. Rinse the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray with water.
3. Use a disposable towel to wipe the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray dry.
4. Ensure the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray is dry before use.
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Chill Block Insert
Place the Neogen® Molecular Detection Chill Block Insert directly on the laboratory bench. Use the block at ambientlaboratory temperature (20-25°C).
Preparation of the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert
Place the Neogen® Molecular Detection Heat Block Insert in a dry double block heater unit. Turn on the dry block heater unit
and set the temperature to allow the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert to reach and maintain a temperature of
100 ± 1°C.
NOTE: Depending on the heater unit, allow approximately 30 minutes for the Neogen Molecular Detection Heat Block
Insert to reach temperature. Using an appropriate, calibrated thermometer (e.g., a partial immersion thermometer,
digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer) placed in the designated location, verify that the
Neogen Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ± 1°C.

8

EN

(English)Preparation of the Neogen® Molecular Detection Instrument
1. Launch the Neogen® Molecular Detection Software and log in. Contact your Neogen Food Safety representative toensure you have the most updated version of the software.
2. Turn on the Neogen Molecular Detection Instrument.
3. Create or edit a run with data for each sample. Refer to the Neogen Molecular Detection System User Manual for details.
NOTE: The Neogen Molecular Detection Instrument must reach Ready state before inserting the Neogen Molecular
Detection Speed Loader Tray with reaction tubes. This heating step takes approximately 20 minutes and is indicated by an
ORANGE light on the instrument’s status bar. When the instrument is ready to start a run, the status bar will turn GREEN.
Lysis
Remove the bottom of Neogen Lysis Solution Rack with a screwdriver or spatula before placing in in the Neogen Molecular
Detection Heat Block Insert.

1. Allow the Neogen Lysis Solution tubes to warm up by setting the rack at room temperature (20-25°C) overnight(16‑18 hours). Alternatives to equilibrate the Neogen Lysis Solution tubes to room temperature are to set the Neogen
Lysis Solution tubes on the laboratory bench for at least 2 hours, incubate the Neogen Lysis Solution tubes in a
37 ± 1°C incubator for 1 hour or place them in a dry double block heater for 30 seconds at 100 ± 1°C.
2. Invert the capped tubes to mix. Proceed to next step within 4 hours.
3. Remove the enrichment broth from the incubator.
4. One Neogen Lysis Solution tube is required for each sample and NC sample (sterile enrichment medium).
4.1 Neogen Lysis Solution tube strips can be cut to desired Neogen Lysis Solution tube number. Select the numberof individual Neogen Lysis Solution tubes or 8-tube strips needed. Place the Neogen Lysis Solution tubes in an
empty rack.
4.2 To avoid cross-contamination, decap one Neogen Lysis Solution tubes strip at a time and use a new pipette tip foreach transfer step.
4.3 Transfer enriched sample to Neogen Lysis Solution tubes as described below:
Transfer each enriched sample into an individual Neogen Lysis Solution tube first. Transfer the NC last.
4.4 Use the Neogen® Molecular Detection Cap/Decap Tool-Lysis to decap one Neogen Lysis Solution tube strip one strip at a time.
4.5 Discard the Neogen Lysis Solution tube cap – If lysate will be retained for retest, place the caps into a clean
container for re-application after lysis.
4.5.1 For processing of retained lysate, see Appendix A.
4.6 Agitate the enrichment bag before collecting the sample from the filtered side when working with viscous
samples.
4.7 Transfer 20 µL of sample into a Neogen Lysis Solution tube unless otherwise indicated in the protocol table(example protocol 5 and secondary enrichment in RVS or when using environmental samples with neutralizing
buffer).
20 µl

5. Repeat step 4.4 to 4.7 until each individual sample has been added to a corresponding Neogen Lysis Solution tube in
the strip.

9

EN(English)

6. When all samples have been transferred, transfer 20 µL of NC (sterile enrichment medium e.g. BPW) into a Neogen
Lysis Solution tube. Do not use water as a NC.
7. Verify that the temperature of the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ± 1°C.
8. Place the uncovered rack of Neogen Lysis Solution tubes in the Neogen Molecular Detection Heat Block Insert andheat for 15 ± 1 minutes. During heating, the Neogen Lysis Solution will change from pink (cool) to yellow (hot).
8.1. Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential
biohazard and should NOT be inserted into the Neogen Molecular Detection Instrument.
9. Remove the uncovered rack of Neogen Lysis Solution tubes from the heating block and allow to cool in the Neogen
Molecular Detection Chill Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes. The Neogen Molecular
Detection Chill Block Insert, used at ambient temperature, should sit directly on the laboratory bench. When cool, thelysis solution will revert to a pink color.
10. Remove the rack of Neogen Lysis Solution tubes from the Neogen Molecular Detection Chill Block Insert.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplification
1. One Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella Reagent Tube is required for each sample and the NC.
1.1 Tube strips can be cut to desired tube number. Select the number of individual Neogen Molecular Detection Assay
2 - Salmonella Reagent Tubes or 8-tube strips needed.
1.2 Place Reagent Tubes in an empty rack.
1.3 Avoid disturbing the reagent pellets from the bottom of the tubes.
2. Select one Reagent Control tube and place in rack.
3. To avoid cross-contamination, decap one Reagent Tube strip at a time and use a new pipette tip for each transfer step.
4. Transfer each of the lysates to a Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella Reagent Tube and Neogen Reagent
Control Tube as described below:
Transfer each sample lysate into individual Reagent tubes first followed by the NC. Hydrate the Neogen Reagent
Control tube last.
5. Use the Neogen® Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to decap the Neogen Molecular Detection Assay 2 Salmonella Reagent Tube – one tube strip at a time. Discard cap.
5.1 Transfer 20 µL of sample lysate from the upper 1/2 of the liquid (avoid precipitate) in the Neogen Lysis Solution
tube into corresponding Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella Reagent Tube. Dispense at an angle
to avoid disturbing the pellets. Mix by gently pipetting up and down 5 times.
5.2 Repeat step 5.1 until individual sample lysate has been added to a corresponding Neogen Molecular Detection
Assay 2 - Salmonella Reagent Tube in the strip.
5.3 Cover the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella Reagent Tubes with the provided extra caps and use
the rounded side of the Neogen Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to apply pressure in a back andforth motion ensuring that the cap is tightly applied.
5.4 Repeat steps 5.1 to 5.3 as needed, for the number of samples to be tested.
5.5 When all sample lysates have been transferred, repeat steps 5.1 and 5.3 to transfer 20 µL of NC lysate into a
Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella Reagent Tube.
5.6 Transfer 20 µL of NC lysate into a Neogen Reagent Control tube. Dispense at an angle to avoid disturbing thepellets. Mix by gently pipetting up and down 5 times.
6. Load capped tubes into a clean and decontaminated Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray. Close and latch
the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray lid.

10

EN

(English)

20 µL

7. Review and confirm the configured run in the Neogen Molecular Detection Software.
8. Click the Start button in the software and select instrument for use. The selected instrument’s lid automatically opens.
9. Place the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray into the Neogen Molecular Detection Instrument and close
the lid to start the assay. Results are provided within 60 minutes, although positives may be detected sooner.
10. After the assay is complete, remove the Neogen Molecular Detection Speed Loader Tray from the Neogen Molecular
Detection Instrument and dispose of the tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour
and away from the assay preparation area.
NOTICE: To minimize the risk of false positives due to cross-contamination, never open reagent tubes containing
amplified DNA. This includes Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella Reagent Tube, Neogen Reagent Control,
Reagent, and Neogen Matrix Control Tubes. Always dispose of sealed reagent tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water)household bleach solution for 1 hour and away from the assay preparation area.
Results and Interpretation
An algorithm interprets the light output curve resulting from the detection of the nucleic acid amplification. Results areanalyzed automatically by the software and are color-coded based on the result. A Positive or Negative result is determinedby analysis of a number of unique curve parameters. Presumptive positive results are reported in real-time while Negativeand Inspect results will be displayed after the run is completed.
Presumptive positive samples should be confirmed as per the laboratory standard operating procedures or by following theappropriate reference method confirmation(1,2,3), beginning with transfer from the primary Neogen BPW ISO enrichment tosecondary enrichment broth(s), followed by subsequent plating and confirmation of isolates using appropriate biochemicaland serological methods.
NOTE: Even a negative sample will not give a zero reading as the system and Neogen Molecular Detection Assay 2 Salmonella amplification reagents have a “background” relative light unit (RLU) reading.
In the rare event of any unusual light output, the algorithm labels this as “Inspect.” Neogen recommends the user to repeat
the assay for any Inspect samples. If the result continues to be Inspect, proceed to confirmation test using your preferred
method or as specified by local regulations.
Well Type

ResultInterpretation

SamplePositive

The sample is presumptive positive for the target
pathogen.

SampleNegative

The sample is negative for the target pathogen.

Inhibited

The sample matrix was inhibitory to theassay. A re-test may be required. Refer to thetroubleshooting section and the assay kit ProductInstructions for more information.

Inspect

The presence or absence of the target pathogen
was indeterminate. A re-test may be required.
Refer to the troubleshooting section and the assay
kit Product Instructions for more information.

Error

No bioluminescence was detected. A re-test may
be required. Refer to the troubleshooting section
and the assay kit Product Instructions for more
information.

SampleSampleSampleWell Result Symbol

11

EN

(English)Confirmation of Results According to the NF VALIDATION Certified Method
In the context of the NF VALIDATION, all samples identified as positive by the Neogen Molecular Detection Assay 2 Salmonella must be confirmed by one of the following tests:
Option 1: Using the ISO 6579(3) standard starting from the buffered peptone water(3) enrichment.
Option 2: Implementing a confirmation method consisting of the following: Transfer 0.1 mL of the BPW ISO(3) enrichment
or Tetra Thionate broth enrichments (primary production samples) into 10 mL of RVS broth. Incubate for 24 ± 3 hours at
41.5°C. Streak onto Xylose Lysine Deoxycholate (XLD)(3) agar or onto a chromogenic agar specific for Salmonella. Perform
a latex agglutination using Oxoid Salmonella latex test directly on isolated colonies.
Option 3: Using nucleic acid probes as described in the EN ISO 7218(5) standard, performed on isolated colonies, from XLD
or chromogenic agar (see Options 1 or 2). This test must not be performed using the Neogen Molecular Detection Assay
2 - Salmonella.
Option 4: Using any other method certified by NF VALIDATION, the principle of which must be different from Neogen
Molecular Detection Assay 2 - Salmonella. The complete protocol described for this second validated method must be
used. All steps prior to the start of confirmation must be common to both methods.
In the event of discordant results (presumptive positive with the Neogen Molecular Detection Assay 2 - Salmonella,
non-confirmed by one of the means described above, and in particular for the latex agglutination test), the laboratory must
follow the necessary steps to ensure the validity of the results obtained.
If you have questions about specific applications or procedures, please visit our website at www.neogen.com or contact
your local Neogen representative or distributor.

Appendix A. Protocol Interruption: Storage and re-testing of heat-treated lysates
1. To store a heat-treated lysate, re-cap the lysis tube with a clean cap (see Lysis section, 4.5).
2. Store at 4 to 8°C for up to 72 hours.
3. Prepare a stored sample for amplification by inverting 2-3 times to mix.
4. Decap the tubes.
5. Place the mixed lysate tubes on Neogen Molecular Detection Heat Block Insert and heat at 100 ± 1°C for 5 ± 1 minutes.
6. Remove the rack of Neogen Lysis Solution tubes from the heating block and allow to cool in the Neogen Molecular
Detection Chill Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes.
7. Continue the protocol at the Amplification section detailed above.

12

EN

(English)

References:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identificationof Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Effective Date: 2 January 2019.
3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping ofSalmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance for microbiologicalexamination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System. Contact your Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 18593. Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.
8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk
(Reconstituted). January 2011.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods against a reference method.
10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension anddecimal dilutions.
11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.
12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary
production stage.

Explanation of Symbols
info.neogen.com/symbols

13

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A

FR (Français)Date de parution : 2024-01

Instructions relatives au produit
Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen® version 2
Description et utilisation du produit

Le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen® version 2 est utilisé avec le système de détection moléculaire
Neogen® pour la détection rapide et spécifique après enrichissement des Salmonella dans des aliments enrichis, desaliments pour animaux et des échantillons environnementaux d’aliments transformés.
Les kits de détection moléculaire Neogen® utilisent la technique LAMP (amplification isotherme médiée par des boucles)
afin d’amplifier rapidement les séquences d’acide nucléique de façon extrêmement spécifique et sensible, associée à labioluminescence pour détecter l’amplification. Les résultats présumés positifs sont visibles en temps réel, tandis que lesrésultats négatifs sont affichés à la fin de l’analyse. Les résultats présumés positifs doivent être confirmés par la méthodede votre choix ou en utilisant une méthode conforme aux réglementations locales(1, 2, 3).
Le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 est destiné à être utilisé au sein de laboratoires, par desprofessionnels formés aux techniques s’y rapportant. Neogen n’a pas étudié l’utilisation de ce produit dans des secteurs
autres que l’alimentaire et les boissons. Par exemple, Neogen n’a pas étudié ce produit dans le cadre de tests sur deséchantillons de produits pharmaceutiques, cosmétiques, cliniques ou vétérinaires. Le Kit de détection moléculaire
Salmonella Neogen version 2 n’a pas été évalué en utilisant tous les produits et processus de transformation alimentaire,
tous les protocoles de test ou toutes les souches bactériennes possibles.
Comme avec toutes les méthodes de test, la source, la formulation et la qualité du milieu d’enrichissement peuvent
influencer les résultats. Des facteurs tels que les méthodes d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparationdes échantillons, la manipulation et les techniques de laboratoires peuvent également influencer les résultats. Neogen
recommande d’évaluer la méthode, notamment le milieu d’enrichissement, dans l’environnement de l’utilisateur à l’aide
d’un nombre d’échantillons suffisant et avec des charges alimentaires et microbiennes déterminés pour répondre auxcritères de l’utilisateur.
Neogen a évalué le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 avec eau peptonée tamponnée ISO.
L’instrument de détection moléculaire Neogen® est conçu pour être utilisé avec des échantillons traités thermiquement
pendant l’étape de lyse de l’analyse, procédé qui détruit les organismes présents dans l’échantillon. Les échantillons
qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent être considérés commepotentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection moléculaire Neogen.
Neogen Sécurité Alimentaire respecte la norme ISO (International Organization for Standardization) 9001 en matière deconception et de fabrication.
Le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 contient 96 tests, décrits dans le tableau 1.
Tableau 1. Composants du Kit de détection moléculaire Neogen
Élément

Identification

QuantitéTable des matières

Commentaires

Solution de lyse (LS) Neogen

Solution rose en
tubes transparents

96(12 barrettesde 8 tubes)

580 µL de LS par tube

Placé sur portoir etprêt à l’emploi

Tubes de réactif du Kitde détection moléculaire
Salmonella Neogen® version
2

Tubes verts

96(12 barrettesde 8 tubes)

Mélange spécifiquelyophilisé pourl’amplification etla détectionPrêts à l’emploi

Bouchons supplémentaires

Bouchons verts

96(12 barrettesde 8 bouchons)

Contrôle de réactif Neogen®
(RC)

Tubes « Flip-Top »transparents®

16
DNA témoin
(2 poches delyophilisé, mélange
8 tubes individuels) pour l’amplification etla détectionPrêts à l’emploiPrêts à l’emploi

Le témoin négatif (NC), non fourni dans le kit, est un milieu d’enrichissement stérile, par exemple BPW ISO. Ne pas utiliserd’eau comme NC.

1

FR (Français)Sécurité
L’utilisateur doit lire, comprendre et suivre toutes les informations de sécurité mentionnées dans les instructions relatives
au système de détection moléculaire Neogen et au Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2. Conserver
ces consignes de sécurité pour référence ultérieure.
AVERTISSEMENT : indique une situation dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner un décès, desblessures graves et/ou des dommages matériels.
AVIS : indique une situation potentiellement dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner desdommages matériels.

AVERTISSEMENT
Ne pas utiliser le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 pour diagnostiquer des pathologies chezles humains ou les animaux.
L’utilisateur doit former son personnel aux techniques d’analyse actuelles appropriées, par exemple : les bonnes
pratiques de laboratoire, la norme ISO/IEC 17025(4) ou ISO 7218(5).
Afin de réduire les risques associés aux faux négatifs, qui peuvent entraîner la diffusion de produits contaminés :• Se conformer au protocole et effectuer les tests en suivant exactement les instructions relatives au produit.
• Conserver le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 conformément aux indications sur l’emballage
et aux instructions relatives au produit.
• Toujours utiliser le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 avant la date de péremption.
• Utiliser le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 avec les échantillons d’aliments, d’aliments pouranimaux et des échantillons environnementaux de transformation alimentaire qui ont été validés en interne ou par une
tierce partie.
• N’utiliser le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 qu’avec des surfaces, des désinfectants, desprotocoles et des souches bactériennes validés en interne ou par une tierce partie.
• En cas d’échantillon environnemental contenant un tampon neutralisant avec un composé d’aryle sulfonate, diluerl’échantillon dans un bouillon d’enrichissement stérile 1:2 avant l’analyse (1 volume d’échantillon pour 1 volume debouillon). Une autre option consiste à transférer 10 µL de l’enrichissement du tampon neutralisant dans les tubes desolution de lyse Neogen. Produits pour la manipulation des échantillons Neogen® comprenant un tampon neutralisantcontenant un complexe d’aryle sulfonate : RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G et
HS2410NB2G.
Afin de réduire les risques associés à l’exposition aux produits chimiques et aux dangers biologiques :• Effectuer les analyses bactériologiques dans un laboratoire correctement équipé et sous la supervision deprofessionnels qualifiés. Les milieux d’enrichissement incubés et les équipements ou les surfaces ayant été en contact
avec des milieux d’enrichissement incubés peuvent contenir des agents pathogènes à des niveaux suffisamment élevéspour entraîner des risques pour la santé humaine.
• Toujours respecter les consignes de sécurité courantes du laboratoire, porter des tenues et lunettes de protection
adaptées lors de la manipulation de réactifs et d’échantillons contaminés.
• Éviter tout contact avec le contenu du milieu d’enrichissement et les tubes de réactifs après l’amplification.
• Éliminer les échantillons enrichis conformément aux normes du secteur actuelles.
• Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuventêtre considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection
moléculaire Neogen.
Afin de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’analyse :• Toujours porter des gants (afin de protéger l’utilisateur et de prévenir l’introduction de nucléases).
Pour réduire les risques associés à la contamination environnementale :• Respecter les normes en vigueur concernant l’élimination des déchets contaminés.
Afin de réduire les risques associés à l’exposition à des liquides très chauds :• Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chauffe.
• Ne pas dépasser le temps de chauffe recommandé.
• Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérifier la température du support de bloc chauffant pour système dedétection moléculaire Neogen® (p. ex. thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple numériqueet non un thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du support de bloc
chauffant pour système de détection moléculaire Neogen.

2

FR (Français)AVIS
Afin de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’analyse :• Changer de gants avant l’hydratation des pastilles réactives.
• Utiliser de préférence des pipettes de qualité biologie moléculaire, stériles et munies d’embouts à filtre.
• Utiliser une nouvelle pipette pour chaque transfert d’échantillon.
• Utiliser les bonnes pratiques de laboratoire pour transférer l’échantillon de l’enrichissement vers le tube de lyse.
Pour éviter toute contamination des pipettes, l’utilisateur peut choisir d’ajouter une étape de transfert intermédiaire.
Par exemple, l’utilisateur peut transférer chaque échantillon enrichi dans un tube stérile.
• Utiliser un poste de travail de biologie moléculaire disposant si possible d’une lampe germicide. Décontaminer
régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/de fermeture, etc.) avec une
solution de 1-5 % d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination du DNA.
Afin de réduire les risques associés à un faux positif :• Ne jamais ouvrir les tubes après amplification.
• Toujours éliminer les tubes contaminés en les faisant tremper dans une solution d’eau de Javel à 1-5 % (v:v dans l’eau)
pendant 1 heure. Effectuer cette procédure à distance de la zone de préparation de l’analyse.
• Ne jamais stériliser à l’autoclave les tubes de réactifs après amplification.
Consulter la fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la réglementation
locale relative à la mise au rebut.
Pour toute question concernant des applications ou procédures spécifiques, consulter notre site Internet à l’adressewww.neogen.com ou contacter votre représentant ou distributeur Neogen local.

Responsabilité de l’utilisateur

Il incombe aux utilisateurs de prendre connaissance des instructions et des informations relatives au produit. Consulter notresite www.neogen.com pour obtenir davantage d’informations ou contacter votre représentant ou distributeur Neogen.
Lors du choix d’une méthode d’analyse, il est important d’admettre que des facteurs externes comme les méthodesd’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des échantillons, la manipulation, les techniques de laboratoire etl’échantillon lui-même peuvent influencer les résultats.
Il incombe à l’utilisateur de sélectionner une méthode ou un produit d’analyse adapté pour évaluer un nombre suffisantd’échantillons avec les matrices et les souches microbiennes appropriées, afin de garantir que la méthode d’analyse est
conforme à ses critères.
Il incombe également à l’utilisateur de déterminer si une méthode d’analyse et ses résultats répondent aux exigences deses clients ou fournisseurs.
Comme pour toute méthode d’analyse, les résultats obtenus avec un produit Neogen Sécurité Alimentaire ne constituent
pas une garantie de la qualité des matrices ou des processus testés.
Dans le but d’aider les clients à évaluer la méthode pour différentes matrices alimentaires, Neogen a élaboré le kit decontrôle de matrice pour système de détection moléculaire Neogen®. Lorsque cela est nécessaire, utilisez le contrôlede matrice (MC) pour déterminer si la matrice peut avoir un impact sur les résultats du Kit de détection moléculaire
Salmonella Neogen version 2. Tester plusieurs échantillons représentatifs de la matrice, c.-à-d. des échantillons d’origines
différentes, au cours de toute période de validation lors de l’adoption de la méthode Neogen ou dans le cadre d’analyses
de matrices nouvelles, inconnues ou ayant subi des modifications de matières premières ou de processus.
Une matrice peut être définie comme un type de produit présentant des propriétés intrinsèques, telles que la compositionet le processus. Les différences entre les matrices peuvent être aussi simples que les effets causés par leurs différences detraitement ou de présentation, par exemple, cru/pasteurisé, frais/sec, etc.

Limitations de garanties/Limites de recours

SAUF SI EXPRESSÉMENT ÉTABLI DANS LA SECTION DE GARANTIE LIMITÉE D’UN EMBALLAGE DE PRODUITINDIVIDUEL, NEOGEN RENONCE À TOUTE GARANTIE EXPLICITE ET IMPLICITE, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER,
TOUTE GARANTIE DE COMMERCIALISATION OU D’ADAPTATION POUR UN USAGE SPÉCIFIQUE. En cas de défaut
de tout produit Neogen Sécurité Alimentaire, Neogen ou son distributeur agréé s’engage, à son entière discrétion, au
remplacement ou au remboursement du prix d’achat du produit. Il s’agit de vos recours exclusifs. Tout défaut supposé duproduit devra être notifié à Neogen dans un délai de soixante jours et le produit renvoyé au fournisseur. Merci de contacter
votre représentant Neogen ou votre distributeur Neogen agréé pour toute autre question.

Limitation de responsabilité de Neogen

NEOGEN NE SERA PAS TENUE RESPONSABLE DES PERTES OU DES DOMMAGES ÉVENTUELS, QU’ILS SOIENTDIRECTS, INDIRECTS, SPÉCIFIQUES, ACCIDENTELS OU CONSÉCUTIFS, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER, LES
PERTES DE PROFITS. En aucun cas et en aucune manière, la responsabilité de Neogen ne sera engagée au-delà du prixd’achat du produit prétendu défectueux.

3FR (Français)Stockage et mise au rebut

Conserver le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 à une température comprise entre 2 et 8 °C. Ne pas
congeler. Conserver à l’abri de la lumière. Une fois le kit ouvert, vérifier que le sachet en aluminium est intact. Si ce sachet est
endommagé, ne pas utiliser le kit. Après ouverture, les tubes de réactif non utilisés doivent toujours être conservés dans lesachet refermable, en laissant l’agent déshydratant à l’intérieur afin de maintenir la stabilité des réactifs lyophilisés. Conserver
les poches refermées à une température comprise entre 2 et 8 °C. Ne pas conserver plus de 60 jours.
Ne pas utiliser le Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 après la date de péremption. La date depéremption et le numéro de lot sont inscrits sur l’étiquette extérieure de la boîte. Après utilisation, il est possible que
les tubes de milieu d’enrichissement et du Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 contiennent deséléments pathogènes. Lorsque l’analyse est terminée, suivre les normes actuelles du secteur pour l’élimination des déchetscontaminés. Consulter la fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître laréglementation locale relative à la mise au rebut.

Instructions d’utilisation

Suivre attentivement toutes les instructions. Dans le cas contraire, les résultats obtenus risquent d’être inexacts.
Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/de fermeture,etc.) avec une solution de 1-5 % d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination du DNA.
L’utilisateur doit suivre la formation de qualification de l’opérateur (OQ) du système de détection moléculaire Neogen,comme décrit dans le document intitulé « Protocoles et instructions relatifs à la qualification d’installation (IQ)/qualification
opérationnelle (OQ) pour le système de détection moléculaire Neogen »(6).
Se référer à la section « Instructions spécifiques pour méthodes validées » pour connaître les exigences spécifiques :Voir le tableau 3 pour les protocoles d’enrichissement selon l’AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01 et l’AOAC®
Performance TestedSM Certificat nº 091501.
Voir le tableau 4 pour les protocoles d’enrichissement selon la méthode de certification NF VALIDATION
3M 01/16-11/16.
Enrichissement de l’échantillon
Les tableaux 2, 3 et 4 fournissent des indications pour les protocoles généraux d’enrichissement des échantillons
d’aliments, d’aliments pour animaux et environnementaux.
Il incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage ou des proportions de dilution différent(e)s pourgarantir que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.
Aliments
1. Préchauffer le milieu d’enrichissement BPW ISO pour l’amener à une température de 41,5 ± 1 °C selon les matrices
testées. Voir les tableaux 2, 3 ou 4.
2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon.
3. Homogénéiser soigneusement par homogénéisation mécanique, homogénéisation péristaltique ou mélange
manuel pendant 2 ± 0,2 minutes ou jusqu’à dissolution complète des agrégats et homogénéité de la suspension
d’enrichissement(10-15).
a.

Pour tous les échantillons de viande et à forte teneur en particules, il est recommandé d’utiliser des sacs avec filtre.

b. Pour les matrices qui gonflent dans l’eau et très visqueuses (p. ex., les céréales, les féculents), il est suggéré deprocéder à des dilutions supplémentaires (> 1:10) jusqu’à réduction convenable de la viscosité ou d’ajouter del’alpha-amylase stérile à 1 % (w/v) à la BPW (ISO)(10-13).
c.

Pour les échantillons de lait en poudre et de céréales de grande taille, ajouter lentement l’échantillon au liquide
en mélangeant fréquemment pour éviter les grumeaux.

4. Incuber comme précisé sur le tableau du protocole approprié (voir les tableaux 2, 3 ou 4).
Échantillons environnementaux
Le dispositif de prélèvement d’échantillons peut être une éponge hydratée avec une solution neutralisante pour désactiverles effets des désinfectants. Neogen recommande d’utiliser une éponge en cellulose sans biocide. La solution neutralisantepeut être un bouillon neutralisant Dey-Engley (D/E) ou un bouillon Lethee. Il est recommandé de désinfecter la zone aprèsl’échantillonnage.
AVERTISSEMENT : si vous choisissez d’utiliser un tampon neutralisant contenant un complexe d’aryle sulfonate
comme solution hydratante pour l’éponge, il sera nécessaire d’effectuer une dilution de 1:2 (1 volume d’échantillon
pour 1 volume de bouillon d’enrichissement stérile) avant l’analyse, afin de réduire les risques associés aux résultats
faux négatifs pouvant libérer du produit contaminé. Une autre option consiste à transférer 10 µL de l’enrichissement dutampon neutralisant dans les tubes de solution de lyse Neogen.

4

FR (Français)La taille minimale recommandée pour la zone d’échantillonnage destinée à vérifier l’absence ou la présence du pathogène àla surface est de 100 cm2 (10 cm x 10 cm ou 4 po x 4 po). Lors de l’échantillonnage avec une éponge, couvrez toutes la zone
dans les deux directions (de gauche à droite puis de haut en bas) ou prélevez des échantillons environnementaux en suivant
votre protocole d’échantillonnage actuel ou selon les directives de la FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) ou ISO 18593:2018(7).
Il incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage ou des proportions de dilution différent(e)s pourgarantir que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.
1. Préchauffer le milieu d’enrichissement BPW ISO à 41,5 ± 1 °C selon les matrices testées. Voir les tableaux 2, 3 ou 4.
2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon. Homogénéiser soigneusement parhomogénéisation mécanique, homogénéisation péristaltique ou mélange manuel pendant 2 ± 0,2 minutes. Incuber
comme précisé sur le tableau du protocole approprié. Voir les tableaux 2, 3 ou 4.
Tableau 2. Protocoles d’enrichissement généraux.
Matrice de l’échantillon

Taille del’échantillon

Volumedu bouillond’enrichissement

Températured’enrichissement(± 1 °C)

Protocole 1
Produits alimentaires
transformés (à l’exception
des poudres d’œuf et desproduits spécifiés dansd’autres protocoles)(b)

25 g

225 mL de
BPW ISO

37

18-26

20

Protocole 2
Aliments crus et nontransformés, poudresd’œufs, aliments pouranimaux et échantillons
environnementaux(c)25 g

225 mL de
BPW ISO(préchauffée)

41,5

18-26

20

Protocole 3
Produits laitiers en poudre(dont le lait maternisé et lelait maternisé à basede soja)

25 g

225 mL de
BPW ISO

37

20-26

20

25 g

225 mL de laitécrémé en poudre
stérile à 100 g/Lavec 0,002 %de coloration
vert vif(d,e,f)

37

24-30

20

Protocole 5
Autres, dont : épices,herbes aromatiques,concentrés, thé et café
instantanés, bouillon
en cube25 g

235 mL 2X BPW
ISO avec 0,5 %K2SO3 + 240 mLde lait écrémé en
poudre stérile à
100 g/L(d,g,h)

37

24-30

10

Protocole 6
Noix ou mélanges de fruits
à coque contenant des noix(ce protocole s’applique
aux autres fruits à coque, ycompris aux noix de pécan,amandes, pistaches, noixde cajou, châtaignes, noix
macadamia, noix du Brésil,graine de soja et cacahuète)

25 g

225 mL de laitécrémé en poudre
stérile à 100 g/L(d)

37

18-24

20

Protocole 4
Produits à base de cacao(en poudre, chocolats,
confiseries, etc.)

Durée
Volumed’enrichissement d’échantillon(h)d’analyse (µL)(a)(a) Volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse. Consulter l’étape 4.7 de la section Lyse.
(b) Exemples de produits à tester avec le protocole 1 : repas préparés, salades préparées, crème pâtissière.
(c) Exemples de produits à tester avec le protocole 2 : viandes crues, légumes surgelés, tous les fromages, lait fermenté,
salade crue (laitue, batavia).
(d) Le lait écrémé UHT peut remplacer le lait écrémé en poudre.

5

FR (Français)(e) 0,45 mL de coloration aqueuse vert vif à 1 % pour 225 mL de lait écrémé, pour obtenir une concentration de 0,002 %(0,02 g/L) de coloration vert vif.
(f) Pour préparer le lait écrémé en poudre stérile, réaliser une suspension de 100 g de lait écrémé en poudre déshydraté
dans 1 L d’eau distillée ou purifiée. Agiter jusqu’à dissolution. Passer à l’autoclave pendant 15 minutes à 121 °C.
Conserver entre 2 et 30 °C(8).
(g) 5 g de K2SO3 pour 1 000 mL de BPW ISO, pour obtenir une concentration finale de 0,5 % K2SO3.
(h) 240 mL de lait écrémé en poudre stérile à 100 g/L ajouté à 235 mL 2X de BPW ISO stérilisée avec 0,5 % K2SO3.
Si une deuxième étape d’enrichissement facultative est utilisée, par exemple du milieu Rappaport Vassiliadis, il
est nécessaire d’effectuer une dilution 1:2 (1 volume d’enrichissement de l’échantillon dans 1 volume de bouillond’enrichissement stérile) ou de transférer simplement 10 µL de l’enrichissement secondaire dans les tubes de solution
de lyse Neogen. Si du bouillon de tétrathionate (TT) est utilisé, transférer 20 µL de l’enrichissement secondaire dansdes tubes de solution de lyse Neogen et ne pas passer au vortex l’enrichissement TT et ne pas pipeter au fond du tube
d’enrichissement pour éviter de transférer le précipitat.
Instructions spécifiques pour méthodes validées
AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
AOAC® Performance TestedSM certificat nº091501

Dans les programmes OMASM et PTMSM de l’Institut de recherche de l’AOAC, il a été démontré que le Kit de détection
moléculaire Salmonella Neogen version 2 était une méthode efficace de détection de Salmonella. Les matrices testées aucours de l’étude sont répertoriées dans le tableau 3.
Tableau 3. Protocoles d’enrichissement selon l’étude OMASM 2016.01 de l’AOAC et le certificat PTMSM de l’AOAC nº 091501.
Le volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse Neogen est de 20 µL.
Températured’enrichissement(± 1 °C)

Durée
d’enrichissement
(h)

41,5

10-24

225 mL de
BPW ISO(préchauffée)

41,5

10-24

325 g

975 mL de
BPW ISO(préchauffée)

41,5

14-24

325 g

2 925 mL de
BPW ISO

37

18-24

25 g

225 mL de
BPW ISO
1 500 mL de
BPW ISO

37

18-24

375 g
Poivre noir, crevette entière crue,épinard cru en sachet, fromage
américain transformé pasteurisé

25 g

225 mL de
BPW ISO37

18-24

Rinçage de carcasse de poulet

30 mL

30 mL de BPW ISO(préchauffée)

41,5

18-24

Éponge passée sur une carcassede poulet

1 éponge

50 mL de BPW ISO(préchauffée)

41,5

18-24

Lait écrémé en poudre instantané

25 g

225 mL de
BPW ISO

37

20-24

Matrice de l’échantillon

Taille del’échantillon

Volumedu bouillond’enrichissement

25 g

225 mL de
BPW ISO(préchauffée)

325 g

975 mL de
BPW ISO(préchauffée)

25 gBœuf cru haché

Poulet cru haché

Poulet pané cuit

Aliments secs pour chien

6FR (Français)25 g

225 mL de
BPW ISO37

24-28

Œuf entier liquide pasteurisé

100 mL

900 mL de
BPW ISO37

18-24

Eau d’irrigation de chou utilisé

375 mL

3 375 mL de
BPW ISO

37

18-24

25 g

225 mL de
BPW ISO
3 375 mL de
BPW ISO

37

18-24

375 g
10 g

90 BPW-ISO

41.5

28-32

Béton verni

1 éponge

225 mL de
BPW ISO(préchauffée)

41,5

18-24

Acier inoxydable

1 tampon

10 mL de BPW ISO(préchauffée)

41,5

18-24

Carreau de céramique verni

1 éponge

50 mL de BPW ISO(préchauffée)

41,5

18-24

Poudre de cacao

Beurre de cacahuète crémeux

Environnemental

Fleur de cannabis séchée, fleur dechanvre séchée(4)Matrice del’échantillon

Taille del’échantillon

Volume dubouillond’enrichissement

Températured’enrichissement(± 1 °C)

Durée
d’enrichissement (h)Milieud’enrichissement
secondaire (mL)Température
de l’enrichissement secondaire (± 1 °C)

Durée d’enrichissement
secondaire(h)Crevette
crue, avecla tête25 g

225 mL de
BPW ISO

37

18-24

R-V R10 : 0,1 mL
dans 10 mL(a)

41,5

4-24

(a) Transférer 10 µL d’échantillon enrichi dans des tubes de solution de lyse. Consulter l’étape 4.7 de la section Lyse.
MÉTHODE CERTIFIÉE PAR AFNOR CERTIFICATION

3M 01/16 -11/16
MÉTHODES ALTERNATIVES D’ANALYSE POUR L’AGROALIMENTAIRE
http://nf-validation.afnor.org/en
Pour plus d’information sur l’expiration de la validité, se reporter au certificat NF VALIDATION disponible sur le site Internet
cité ci-dessus.
Méthode de certification NF VALIDATION, conformément à la norme ISO 16140-2(7) par rapport à la norme ISO 6579(3).
Portée de la validation : tous les produits alimentaires destinés aux humains, les échantillons environnementaux deproduction (dont les échantillons de production primaire), les aliments pour animaux domestiques et d’élevage, par dosage
de validation sur de nombreux aliments.
Préparation de l’échantillon : les échantillons doivent être préparés conformément aux normes EN ISO 6579(3) et
EN ISO 6887(10-15).
Version de logiciel : voir le certificat.

7

FR (Français)
Tableau 4. Protocoles d’enrichissement selon la méthode de certification NF VALIDATION 3M 01/16-11/16.
Protocole

Taille del’échantillon

VolumeVolumeTempérature
Duréed’échantillon
du bouillond’enrichissement d’enrichissementd’analysed’enrichissement(+1 °C)(h)(µL)(a)Protocole 1 :• Nombreux produits
alimentaires transformés(à l’exception de la poudred’œuf, des fruits etlégumes transformés etdes produits indiqués dansles autres protocoles)• Tous les produits depoisson et de fruits demer crus• Aliments pour animaux
domestiques et d’élevage• Production primaire(non fécale)

25 g

225 mL de BPW
ISO

37

18-26

20

Protocole 2 :• Nombreux aliments crus et
non transformés(à l’exception despoissons crus et desfruits de mer crus, et desproduits indiqués dans lesautres protocoles)• Poudre d’œuf• Tous les fruits et légumes• Échantillons
environnementaux de la
production alimentaire

25 g ou
1 lingette ou
1 tampon

225 mL de BPW
ISO préchauffée

41,5

18-26

20

Protocole 3 :• Produits laitiers en poudre

25 g

225 mL de BPW
ISO

37

20-26

20

25 g

225 mL de laitécrémé UHT+ 0,002 % devert vif

37

24-30

20

Protocole 5 :• Épices, herbes
aromatiques,concentrés, thés, cafés,
préparations culinaires

25 g

235 mL de 2 x
BPW ISO+ K2SO3 0,5 % +240 mL de laitécrémé UHT

37

24-30

10

Protocole 6 :• Viande crue

25 g

225 mL de BPW
ISO préchauffée

41,5

10-24

20

1 pédisac

100 mL enbouillon detétrathionate

37

22-24

20

25 g

225 mL debouillon detétrathionate

375 g

3375 mL de BPW
ISO préchauffée

37

20-26

20

Protocole 4 :• Produits à base de cacao
contenant plus de 20 %de cacao

Protocole 7 :• Production primaire(fécale)Protocole 8 :• Préparations pournourrissons, céréales pournourrissons, lait en poudresans probiotiques(b)8FR (Français)Protocole 9 :• Préparations pournourrissons, céréales pournourrissons, lait en poudre
avec probiotiques(b)375 g3375 mL de BPW
ISO préchauffée +vancomycine(10 mg/L)

37

20-26

20

(a) Volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse. Consulter l’étape 4.7 de la section Lyse.
(b) Pour les échantillons de poudres et de céréales de plus grande taille, ajouter lentement l’échantillon au liquide en
mélangeant fréquemment pour éviter les grumeaux.
REMARQUES :• Les échantillons supérieurs à 25 g n’ont pas été analysés dans le cadre de l’étude NF VALIDATION sauf dans leprotocole 8 et 9.
• Les protocoles de détection courts sont sensibles aux conditions d’incubation. Il est nécessaire de suivre lesconditions de température indiquées dans les caractéristiques techniques. L’utilisateur doit vérifier que lepréchauffage du bouillon d’enrichissement atteint la température requise avant l’incubation. La durée de préparationdes échantillons, le délai entre la fin de l’étape de préchauffage du bouillon d’enrichissement et le début de l’étape
d’incubation de l’échantillon alimentaire ne doivent pas dépasser 45 minutes. Il est recommandé d’utiliser un
incubateur ventilé durant l’incubation.
• Pour transférer l’échantillon des enrichissements du bouillon de tétrathionate (TT) vers des tubes de lyse Neogen,ne passer pas au vortex l’enrichissement TT et ne pas pipeter au fond du tube d’enrichissement pour éviter detransférer le précipitat. Le transfert du précipitat peut entraîner des résultats non valides.
• Les points d’interruption du protocole recommandés se situent après l’enrichissement ou après la lyse de l’échantillon.
Le bouillon d’enrichissement ou le lysat de l’échantillon peut être conservé à une température comprise entre
2 et 8 °C pendant une durée maximale de 72 heures. Après avoir retiré le bouillon d’enrichissement de son lieu deconservation, reprendre l’analyse à partir de l’étape 1 de la section Lyse. Après avoir retiré le lysat de l’échantillon deson lieu de conservation, reprendre l’analyse à partir de l’étape 8 de la section Lyse.
Préparation du plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen®
1. Humidifier un chiffon ou une serviette jetable à l’aide d’une solution de 1-5 % d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) et
nettoyer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen®.
2. Rincer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen à l’eau.
3. Utiliser un chiffon jetable pour sécher le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen.
4. S’assurer que le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen est sec avant
toute utilisation.
Préparation du support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen®
Poser le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen® sur le plan de travail du laboratoire.
Utiliser le bloc refroidissant à la température ambiante du laboratoire (20 et 25 °C).
Préparation du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen®
Placer le support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen® dans une unité de traitement
thermique à sec double bloc. Allumer l’unité de traitement thermique à sec et régler la température afin que le support debloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen atteigne et conserve une température de 100 ± 1 °C.
REMARQUE : selon l’unité de traitement thermique utilisée, le support de bloc chauffant pour système de détection
moléculaire Neogen atteint la température souhaitée en 30 minutes environ. Utiliser un thermomètre étalonné adapté(p. ex., un thermomètre à immersion partielle ou un thermomètre à thermocouple numérique, et non un thermomètre àimmersion totale) placé à l’endroit indiqué du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen
afin de vérifier que sa température est de 100 ± 1 °C.
Préparation de l’instrument de détection moléculaire Neogen®
1. Lancer le logiciel de détection moléculaire Neogen® et ouvrir une session. Contacter votre représentant Neogen
Sécurité Alimentaire pour vous assurer d’avoir la version la plus récente du logiciel.
2. Mettre l’instrument de détection moléculaire Neogen sous tension.
3. Créer ou modifier une analyse en saisissant les données pour chaque échantillon. Pour plus de précisions, consulter lemanuel d’utilisation du système de détection moléculaire Neogen.
REMARQUE : l’instrument de détection moléculaire Neogen doit être prêt avant l’insertion du plateau de chargement
rapide pour système de détection moléculaire Neogen, dans lequel sont placés les tubes de réactif. Cette étape dechauffage prend environ 20 minutes ; pendant ce processus, un voyant lumineux ORANGE s’allume sur la barre d’état del’instrument. Lorsque l’instrument est prêt pour l’analyse, la barre d’état passe au VERT.

9

FR (Français)Lyse
Retirer le portoir pour tubes de solution de lyse Neogen avec un tournevis ou une spatule avant de le placer dans le support
de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen.

1. Laisser les tubes de solution de lyse Neogen se réchauffer en plaçant le support à température ambiante (20 et
25 °C) pendant une nuit (16 à 18 heures). Il est également possible d’amener les tubes de solution de lyse Neogen à
température ambiante en les plaçant sur le plan de travail du laboratoire pendant au moins 2 heures, en incubant les
tubes de solution de lyse Neogen dans un incubateur à 37 ± 1 °C pendant 1 heure ou en les plaçant dans une unité detraitement thermique à sec double bloc pendant 30 secondes à 100 ± 1 °C.
2. Retourner les tubes recouverts d’un bouchon pour les mélanger. Passer à l’étape suivante dans un délai de 4 heures.
3. Retirer le bouillon d’enrichissement de l’incubateur.
4. Un tube de solution de lyse Neogen est nécessaire pour chaque échantillon et pour l’échantillon NC(milieu d’enrichissement stérile).
4.1 Les barrettes de tubes de solution de lyse Neogen peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes
de solution de lyse Neogen souhaité. Sélectionner le nombre de tubes de solution de lyse Neogen ou de barrettesde 8 tubes nécessaire. Placer les tubes de solution de lyse Neogen dans un portoir vide.
4.2 Pour éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de solution de lyse Neogen à la fois et utiliser
un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.
4.3 Transférer l’échantillon enrichi dans les tubes de solution de lyse Neogen comme indiqué ci-dessous :Transférer tout d’abord chaque échantillon enrichi dans des tubes de solution de lyse Neogen individuels.
Transférer le NC en dernier.
4.4 Ouvrir les barrettes de tubes de solution de lyse Neogen une à une à l’aide de l’outil d’ouverture/fermeture poursystème de détection moléculaire Neogen® - Lyse.
4.5 Jeter le bouchon du tube de solution de lyse Neogen. Si le lysat doit être soumis à un nouveau test, placer lesbouchons dans un récipient propre pour réapplication après la lyse.
4.5.1 Pour le traitement du lysat conservé, voir l’annexe A.
4.6 Agiter la poche d’enrichissement avant de recueillir l’échantillon à partir du côté filtré lors du travail avec deséchantillons visqueux.
4.7 Transférer 20 µL d’échantillon dans un tube de solution de lyse Neogen, sauf indication contraire dans le tableau duprotocole (exemple : protocole 5 et enrichissement secondaire dans de la RVS ou, lors de l’utilisation d’échantillons
environnementaux, avec du tampon neutralisant).
20 µl

5. Répéter les étapes 4.4 et 4.7 jusqu’à ce que chaque échantillon individuel soit ajouté à un tube de solution de lyse
Neogen correspondant sur la barrette.
6. Une fois tous les échantillons transférés, transférer 20 µL de NC (milieu d’enrichissement stérile, p. ex. BPW) dans un
tube de solution de lyse Neogen. Ne pas utiliser d’eau comme NC.
7. Vérifier que la température du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire Neogen est de
100 ± 1 °C.

10FR (Français)8. Placer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse Neogen dans le support de bloc chauffant pour systèmede détection moléculaire Neogen et chauffer pendant 15 ± 1 minutes. Lors du chauffage, la solution de lyse Neogen
passera de rose (froide) à jaune (chaude).
8.1. Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuventêtre considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection
moléculaire Neogen.
9. Retirer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse Neogen du bloc chauffant et laisser refroidir dans lesupport de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen pendant une durée comprise entre 5 et
10 minutes. Utilisé à température ambiante, le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire
Neogen doit être posé directement sur le plan de travail du laboratoire. Une fois froide, la solution de lyse retrouvera
une couleur rose.
10. Retirer le couvercle des tubes de solution de lyse Neogen du support de bloc refroidissant pour système de détection
moléculaire Neogen.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplification
1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
1.1 Les barrettes de tubes peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes souhaité. Sélectionner
le nombre de tubes de réactif du Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 ou de barrettes de
8 tubes nécessaire.
1.2 Placer les tubes de réactif dans un portoir vide.
1.3 Éviter d’agiter les pastilles réactives se trouvant au fond des tubes.
2. Sélectionner un tube de contrôle de réactif et le placer dans le portoir.
3. Pour éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de réactif à la fois et utiliser un nouvel embout depipette pour chaque étape de transfert.
4. Transférer chaque lysat dans un tube de réactif du Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 et dans
un tube de contrôle de réactif Neogen comme décrit ci-dessous :Transférer chaque lysat d’échantillon dans des tubes de réactif individuels en premier, puis dans le NC. Hydrater letube de contrôle de réactif Neogen en dernier.
5. Ouvrir les tubes de réactif du Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 un à un à l’aide de l’outild’ouverture/fermeture pour système de détection moléculaire Neogen® - Réactif. Jeter le bouchon.
5.1 Transférer 20 μL de lysat d’échantillon prélevé au niveau de la moitié supérieure du liquide (éviter le précipité)
dans le tube de solution de lyse Neogen du Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2. Inclinerla pipette pour ne pas agiter les pastilles. Mélanger en effectuant 5 cycles d’aspiration/de refoulement avec
la pipette.
5.2 Répéter l’étape 5.1 jusqu’à ce que chaque lysat d’échantillon individuel ait été ajouté au tube de réactif du Kit dedétection moléculaire Salmonella Neogen version 2 correspondant dans la barrette.
5.3 Placer la capsule supplémentaire prévue à cet effet sur les tubes de réactif du Kit de détection moléculaire
Salmonella Neogen version 2, puis prendre le bord arrondi de l’outil d’ouverture/fermeture pour système dedétection moléculaire Neogen - Réactif et appuyer dans un mouvement de va-et-vient afin de s’assurer que lacapsule est fermement insérée sur le tube.
5.4 Répéter les étapes 5.1 à 5.3 pour tous les échantillons à analyser.
5.5 Lorsque tous les lysats d’échantillons ont été transférés, répéter les étapes 5.1 et 5.3 afin de transférer 20 µL delysat de NC dans un tube de réactif du Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2.
5.6 Transférer 20 µL de lysat de NC dans un tube de contrôle de réactif Neogen. Incliner la pipette pour ne pas agiterles pastilles. Mélanger en effectuant 5 cycles d’aspiration/de refoulement avec la pipette.

11FR (Français)6. Charger les tubes recouverts d’un bouchon dans un plateau de chargement rapide pour système de détection
moléculaire Neogen propre et décontaminé. Fermer et verrouiller le couvercle du plateau de chargement rapide poursystème de détection moléculaire Neogen.

20 µL

7. Examiner et confirmer l’analyse configurée sur le logiciel de détection moléculaire Neogen.
8. Cliquer sur l’icône « Démarrer » du logiciel et sélectionner l’instrument à utiliser. Le couvercle de l’appareil sélectionné
s’ouvre automatiquement.
9. Placer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen dans l’instrument de détection
moléculaire Neogen et fermer le couvercle pour lancer l’analyse. Les résultats sont obtenus en 60 minutes ; toutefois,
les résultats positifs peuvent être détectés plus tôt.
10. Une fois l’analyse terminée, retirer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire Neogen del’instrument de détection moléculaire Neogen et tremper les tubes dans une solution d’eau de Javel à 1-5 % (v:v dansde l’eau) pendant 1 heure, et ce, à l’écart de la zone de préparation des analyses.
AVIS : pour réduire le risque de résultats faux positifs dus à une contamination croisée, ne jamais ouvrir les tubes deréactif contenant du DNA amplifié. Ceci comprend les tubes de réactif du Kit de détection moléculaire Salmonella
Neogen version 2, les tubes de contrôle de réactif Neogen, le réactif et les tubes de contrôle de matrice Neogen.
Toujours éliminer les tubes de réactif fermés en les trempant dans une solution d’eau de Javel à 1-5 % (v:v dans de l’eau)
pendant 1 heure, à l’écart de la zone de préparation des analyses.
Résultats et interprétation
Un algorithme interprète le signal lumineux et la courbe de résultats provenant de la détection de l’amplification de l’acide
nucléique. Les résultats sont automatiquement analysés par le logiciel et sont codés par couleur en fonction du résultat.
Un résultat positif ou négatif est déterminé par l’analyse d’un nombre de paramètres des courbes individuelles. Les
résultats présumés positifs sont rapportés en temps réel, tandis que les résultats négatifs ou à vérifier sont affichés à la fin
de l’analyse.
Les résultats présumés positifs doivent être confirmés selon les procédures standard des laboratoires ou en suivant laconfirmation de la méthode de référence appropriée(1,2,3), en commençant par effectuer un transfert du premier bouillond’enrichissement Neogen BPW ISO vers le ou les bouillons d’enrichissement secondaires, puis en effectuant la mise enculture et la confirmation des isolats à l’aide des méthodes biochimiques et sérologiques appropriées.
REMARQUE : même un échantillon négatif ne donnera pas de résultat égal à zéro, car le système et les réactifs
d’amplification du Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2 effectuent une lecture d’unité relative delumière (RLU) « de base ».

12

FR (Français)Dans le cas peu probable d’un résultat lumineux inhabituel, l’algorithme considérera l’échantillon comme « À vérifier ».
Neogen recommande à l’utilisateur de recommencer l’analyse pour tout échantillon considéré comme « À vérifier ». Si lerésultat continue à être « À vérifier », passer au test de confirmation en utilisant la méthode de votre choix ou en utilisantune méthode conforme aux règlementations locales.
Typede puits

Symbole du résultat
du puitsRésultat

Interprétation

Échantillon

PositifL’échantillon est présumé positif pour le pathogène cible.

Échantillon

NégatifL’échantillon est négatif pour le pathogène cible.

Inhibé

La matrice de l’échantillon est inhibée pour le dosage. Un
second test peut être nécessaire. Consultez la section dedépannage et les instructions relatives au produit du kit dedétection pour obtenir plus de renseignements.

Inspection

La présence ou l’absence du pathogène cible est
indéterminée. Un second test peut être nécessaire.
Consultez la section de dépannage et les instructions
relatives au produit du kit de détection pour obtenir plusde renseignements.

ErreurAucune bioluminescence n’a été détectée. Un second test
peut être nécessaire. Consultez la section de dépannage
et les instructions relatives au produit du kit de détection
pour obtenir plus de renseignements.

Échantillon

Échantillon

Échantillon

Confirmation des résultats selon la méthode de certification NF VALIDATION
Dans le cadre de la NF VALIDATION, tous les échantillons identifiés comme positifs par le Kit de détection moléculaire
Salmonella Neogen version 2 doivent être confirmés par l’un des tests suivants :Option 1 : utilisation de la norme ISO 6579(3) en commençant par l’enrichissement en eau peptonée tamponnée(3).
Option 2 : mise en place d’une méthode de confirmation consistant à effectuer les étapes suivantes : transférer 0,1 mL
de l’enrichissement en BPW ISO(3) ou l’enrichissement en bouillon au tétrathionate (échantillons de production primaires)
dans 10 mL de bouillon RVS. Incuber pendant 24 ± 3 heures à 41,5 °C. Étaler en série sur de la gélose Xylose-LysineDésoxycholate (XLD)(3) ou sur de la gélose chromogène spécifique à Salmonella. Effectuer une agglutination au latex àl’aide de l’Oxoid Salmonella Latex Test directement sur des colonies isolées.
Option 3 : utilisation de sondes nucléiques tel que décrit dans la norme EN ISO 7218(5), à partir de colonies isolées
provenant de gélose XLD ou chromogène (voir option 1 ou 2). Ce test ne doit pas être effectué à l’aide du Kit de détection
moléculaire Salmonella Neogen version 2.
Option 4 : utilisation de n’importe quelle autre méthode de certification NF VALIDATION, dont le principe doit êtredifférent du Kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2. Il convient d’utiliser l’intégralité du protocole
décrit pour cette seconde méthode de validation. Toutes les étapes précédant le début de la confirmation doivent êtrecommunes aux deux méthodes.
En cas de résultats contradictoires (positif présumé avec le kit de détection moléculaire Salmonella Neogen version 2, nonconfirmé par l’un des moyens décrits ci-dessus, et en particulier pour le test d’agglutination au latex), le laboratoire doit
suivre les procédures nécessaires pour garantir la validité des résultats obtenus.
Pour toute question concernant des applications ou procédures spécifiques, consulter notre site Internet à l’adressewww.neogen.com ou contacter votre représentant ou distributeur Neogen local.

13

FR (Français)Annexe A. Interruption du protocole : Stockage et nouveau test des lysats soumis à untraitement thermique

1. Pour conserver un lysat soumis à un traitement thermique, refermer le tube de lyse avec un bouchon propre(voir la section Lyse, 4.5).
2. Stocker à une température comprise entre 4 et 8 °C jusqu’à 72 heures.
3. Préparer un échantillon conservé pour amplification en retournant 2 à 3 fois pour mélanger.
4. Ouvrir les tubes.
5. Placer les tubes pour lysats mélangés dans le support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire
Neogen et chauffer à 100 ± 1 °C pendant 5 ± 1 minutes.
6. Retirer le portoir de tubes de solution de lyse Neogen du bloc chauffant et laisser refroidir dans le support de bloc
refroidissant pour système de détection moléculaire Neogen pendant une durée comprise entre 5 et 10 minutes.
7. Poursuivre le protocole à la section Amplification détaillée ci-dessus.

Références :1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identificationof Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Date d’entrée en vigueur : 2 janvier 2019.
3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping ofSalmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance formicrobiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System. Contacter un représentant de Neogen Sécurité Alimentaire pour obtenir un exemplairede ce document.
7. ISO 18593. Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.
8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk
(Reconstituted). January 2011.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods against a reference method.
10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension anddecimal dilutions.
11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.
12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary
production stage.

Explication des symboles
info.neogen.com/symbols

14

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A

DE (Deutsch)

Erscheinungsdatum: 2024-01

Gebrauchsanweisungen
Neogen Molekulare Detektion 2 - Salmonellen Nachweis®

Produktbeschreibung und Verwendungszweck

Der Neogen® Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis wird in Verbindung mit dem Neogen® Molekularen
Detektionssystem für den schnellen und spezifischen Nachweis von Salmonellen in angereicherten Proben aus
Lebens- und Futtermitteln sowie Umgebungen der Lebensmittelverarbeitung verwendet.
Die Neogen® Molekularen Detektionsnachweise verwenden die mittels einer „Loop“ initiierte isotherme Amplifikation,
um in Kombination mit der Biolumineszenz die Amplifikation von Nukleinsäuresequenzen mit hoher Spezifität, Sensitivität
und Geschwindigkeit zu bestimmen. Die vorläufig positiven Ergebnisse werden in Echtzeit erstellt, während negative
Ergebnisse erst nach Abschluss des Tests dargestellt werden. Die vorläufig positiven Ergebnisse müssen mithilfe eines
Testverfahrens Ihrer Wahl oder gemäß den jeweils geltenden Richtlinien bestätigt werden(1, 2, 3).
Der Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis ist für den Gebrauch in Laboren bestimmt und muss von inLaborverfahren geschultem Fachpersonal angewendet werden. Neogen verfügt über keine Daten zur Anwendung dieses
Produkts in anderen Industrien als der Lebensmittel- und Getränkeindustrie. Zum Beispiel verfügt Neogen über keine
Daten zur Verwendung dieses Produkts mit Pharmazeutika-, Kosmetika- oder klinischen und tiermedizinischen Proben.
Der Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis wurde nicht für alle möglichen Lebensmittelprodukte,
Lebensmittelverarbeitungsverfahren, Testprotokolle oder alle möglichen Bakterienstämme evaluiert.
Wie bei allen Testverfahren können die Ergebnisse durch die Quelle, Zusammensetzung und Qualität desAnreicherungsmediums beeinflusst werden. Faktoren wie Probennahme, Testprotokolle, Probenaufbereitung,Handhabung und Labortechnik können die Ergebnisse beeinflussen. Neogen empfiehlt die Beurteilung der Methodeeinschließlich Anreicherungsmedium in der Umgebung des Benutzers mit einer ausreichenden Anzahl an Proben mit
bestimmten Lebensmitteln und mikrobiellen Pathogenen, um sicherzustellen, dass die Methode den Anforderungen desBenutzers entspricht.
Neogen hat den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis evaluiert mit gepuffertem Peptonwasser (BPW) ISO.
Das Neogen® Molekulare Detektion – Gerät ist für die Verwendung mit Proben bestimmt, die während der Assay-Lyse
wärmebehandelt wurden, wodurch die in der Probe vorhandenen Organismen zerstört werden sollen. Proben, die während
der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein biologisches Risiko dar und sollten
NICHT in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät eingesetzt werden.
Neogen Food Safety hat für die Bereiche Entwicklung und Fertigung die Zertifizierung ISO 9001 der Internationalen
Organisation für Normung (ISO) erhalten.
Das Testkit für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis enthält 96 Testverfahren, die in Tabelle 1
beschrieben werden.
Tabelle 1. Komponenten des Neogen Molekularen Detektionsnachweises
ArtikelKennzeichnung

Stückzahl

InhaltKommentare

Neogen Lyselösung
(LS)

Rosafarbene Lösung
in transparenten Gefäßen

96(12 Streifen in
8 Gefäßen)580 µl LS pro Gefäß

Abgefüllt undgebrauchsfertig

Reagenzgefäße
für den Neogen®
Molekulare Detektion
2 – Salmonellen
Nachweis

Grüne Gefäße

96(12 Streifen in
8 Gefäßen)Lyophilisierte
spezifische
Amplifikations- und
DetektionsmischungGebrauchsfertig

Zusätzliche Kappen

Grüne Kappen

96(12 Streifen in
8 Kappen)

Neogen®
Reagenzkontrolle (RC)

Durchsichtige
Kippgefäße

16(2 Beutel mit 8
einzelnen Gefäßen)®

Gebrauchsfertig
Lyophilisierte KontrollDNS, Amplifikationsund Detektionsmatrix

Gebrauchsfertig

Die Negativkontrolle (NC), nicht im Kit enthalten, ist ein steriles Anreicherungsmedium, z. B. BPW ISO. Als NC kein
Wasser verwenden.

1DE (Deutsch)
Sicherheit
Der Anwender muss sämtliche in der Gebrauchsanleitung des Neogen Molekularen Detektionssystems und desNeogen Molekularen Detektion 2 – Salmonellen Nachweises aufgeführten Sicherheitshinweise gelesen und verstanden
haben. Bewahren Sie diese Sicherheitshinweise auf, um später auf sie zurückgreifen zu können.
WARNUNG: Bezeichnet eine Gefahrensituation, die – wenn sie nicht vermieden wird – zum Tode oder zu schweren
Verletzungen und/oder Sachschäden führen kann.
HINWEIS: Bezeichnet eine potenzielle Gefahrensituation, die – wenn sie nicht vermieden wird – zu Sachschäden
führen kann.

WARNUNGDen Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis nicht zur Diagnose von Erkrankungen bei Menschen oder
Tieren einsetzen.
Der Anwender muss sein Personal in den entsprechenden Testmethoden unterweisen: z. B. laut den Grundsätzen derguten Laborpraxis, ISO/IEC 17025(4) oder ISO 7218(5).
Maßnahmen zur Reduzierung der mit einem falsch negativen Ergebnis verbundenen Risiken, die zur Freigabe eines
kontaminierten Produkts führen können:• Befolgen Sie das Protokoll und führen Sie die Tests genau wie in der Gebrauchsanweisung angegeben durch.
• Lagern Sie den Neogen Molekularen Detektion 2 – Salmonellen Nachweis wie auf der Packung und in derGebrauchsanweisung beschrieben.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis stets vor Ablauf des Verfalldatums.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis mit Lebensmittel-, Futter- undLebensmittelverfahrensproben, die entweder intern oder von einem Dritten evaluiert worden sind.
• Verwenden Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis nur mit Oberflächen,
Desinfektionsmitteln, Protokollen und Bakterienstämmen, die intern oder durch Dritte validiert wurden.
• Wenn Sie eine Umgebungsprobe haben, die einen Neutralisationspuffer mit einem Acrylsulfonat-Komplex enthält,
dann müssen Sie vor dem Testen der Probe eine 1:2 Verdünnung (1 Teil Probe in 1 Teil steriler Anreicherungsbouillon)
vornehmen. Ebenso können Sie 10 µl Anreicherungsmedium mit Neutralisationspuffer in die Neogen Lyselösungsgefäßeübertragen. Neogen® Produkte zur Probenhandhabung, die Neutralisationspuffer mit Acrylsulfonat-Komplex enthalten:
RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G und HS2410NB2G.
Zur Verminderung der Risiken, die mit der Exposition gegenüber Chemikalien und biogefährlichen Stoffen
verbunden sind:• Führen Sie die Testverfahren mit Pathogenen in einem entsprechend ausgerüsteten Labor und unter der Aufsicht vongeschultem Fachpersonal durch. Inkubierte Anreicherungsmedien und Arbeitsgeräte oder Oberflächen, die in Kontakt
mit inkubierten Anreicherungsmedien gekommen sind, können so stark mit Krankheitserregern belastet sein, dass ein
Risiko für die menschliche Gesundheit besteht.
• Befolgen Sie stets die üblichen Labor-Sicherheitsmaßnahmen und tragen Sie bei der Handhabung von Reagenzien und
kontaminierten Proben angemessene Schutzkleidung und geeigneten Augenschutz.
• Vermeiden Sie nach der Amplifikation den Kontakt mit dem Anreicherungsmedium und den Reagenzgefäßen.
• Die angereicherten Proben sind gemäß Branchenstandards zu entsorgen.
• Proben, die während der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein biologisches
Risiko dar und sollten NICHT in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät eingesetzt werden.
Zur Verminderung von Kreuzkontaminationsrisiken bei der Vorbereitung des Tests:• Tragen Sie stets Handschuhe (sowohl zum Schutz des Anwenders als auch, um ein Einbringen von Nukleasen
zu vermeiden).
Zur Verringerung der Risiken, die mit Umweltkontamination verbunden sind:
Bei der Entsorgung sind die aktuellen Industriestandards zur Entsorgung von kontaminiertem Abfall zu beachten.
Zur Verminderung der Risiken, die mit der Exposition gegenüber heißen Flüssigkeiten verbunden sind:• Achten Sie darauf, die empfohlene Temperatur des Heizgeräts nicht zu überschreiten.
• Achten Sie darauf, die empfohlene Anwärmdauer nicht zu überschreiten.
• Verwenden Sie ein geeignetes, kalibriertes Thermometer, um sicherzustellen, dass der Neogen® Molekulare Detektion– Heizblockeinsatz die richtige Temperatur aufweist (z. B. ein Thermometer zum partiellen Eintauchen oder ein
Digitalthermometer, kein Tauchthermometer). Das Thermometer muss an der vorgesehenen Stelle desNeogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatzes platziert werden.

2

DE (Deutsch)

HINWEIS
Zur Verminderung von Kreuzkontaminationsrisiken bei der Vorbereitung des Tests:• Wechseln Sie vor Hydratation des Reagenzpellets die Handschuhe.
• Es wird empfohlen, sterile, hochreine Pipettenspitzen mit Feuchtigkeitsschutz (Filter) zu verwenden.
• Verwenden Sie für jede Probenübertragung eine neue Pipettenspitze.
• Wenden Sie die Grundsätze der Guten Laborpraxis bei der Übertragung der angereicherten Probe auf das Lysegefäß an.
Um eine Kontamination der Pipette zu vermeiden, sollte der Anwender bei der Übertragung einen Zwischenschritt
durchführen. Beispielsweise kann der Anwender jede angereicherte Probe auf ein steriles Gefäß übertragen.
• Sofern möglich, arbeiten Sie an einer molekularbiologischen Arbeitsstation mit Germizidlampe. Desinfizieren
Sie die Laborbänke und Arbeitsgeräte (Pipetten, Cap/Decap-Werkzeuge usw.) regelmäßig mit einer 1–5%igen
Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder DNS-Entfernungslösung.
Zur Verminderung der Risiken, die mit einem falsch positiven Ergebnis verbunden sind:• Öffnen Sie die Gefäße niemals nach der Amplifikation.
• Kontaminierte Gefäße immer aus dem Nachweis-Vorbereitungsbereich entfernen, in 1–5%iger (v:v in Wasser)
Haushaltsbleichmittellösung für 1 Stunde einweichen und dann entsorgen.
• Autoklavieren Sie die Reagenzgefäße niemals nach der Amplifikation.
Weitere Informationen sowie die jeweils vor Ort geltenden Richtlinien zur Entsorgung entnehmen Sie bitte
dem Sicherheitsdatenblatt.
Sollten Sie Fragen zu bestimmten Anwendungen oder Verfahren haben, besuchen Sie unsere Website unter
www.neogen.com oder wenden Sie sich an den lokalen Neogen-Verkaufsvertreter oder Händler.

Verantwortung des Anwenders

Anwender müssen sich auf eigene Verantwortung mit den Gebrauchsanweisungen und Informationen des Produkts
vertraut machen. Für weitere Informationen besuchen Sie unsere Website unter www.neogen.com oder wenden Sie sichan Ihren lokalen Neogen Verkaufsvertreter oder Händler.
Bei der Auswahl einer Testmethode ist zu beachten, dass externe Faktoren wie Probennahme, Testprotokoll,
Probenaufbereitung, Handhabung, Labortechnik und die Probe selbst die Ergebnisse beeinflussen können.
Es liegt in der Verantwortung des Anwenders bei der Auswahl einer Testmethode oder eines Produkts, diese mit einer
ausreichenden Anzahl von Proben und Kontrollen zu evaluieren, um sicherzustellen, dass die gewählte Testmethode seinen
Anforderungen entspricht.
Der Anwender trägt ebenfalls die Verantwortung dafür, dass die angewendeten Testmethoden und Ergebnisse den
Anforderungen seiner Kunden und Lieferanten entsprechen.
Wie bei allen Testmethoden, stellen die mit Produkten von Neogen Food Safety erhaltenen Ergebnisse keine Garantie für
die Qualität der untersuchten Matricen oder Prozesse dar.
Als Unterstützung von Kunden bei der Validierung der Methode für verschiedene Lebensmittel-Matrices hat Neogen das
Set Neogen® Molekulare Detektion Matrixkontrolle entwickelt. Verwenden Sie bei Bedarf die Matrixkontrolle (MC), um
zu bestimmen, ob die Matrix in der Lage ist, die Ergebnisse der Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis
zu beeinträchtigen. Testen Sie mehrere für die Matrix repräsentative Proben, d. h. Proben unterschiedlicher Herkunft,während einer Validierungsphase, wenn die Methode von Neogen zum Einsatz kommt oder beim Testen neuer oder
unbekannter Matricen oder Matricen, die Rohmaterial- oder Verfahrensänderungen durchlaufen haben.
Eine Matrix kann als eine Produktart mit spezifischen Eigenschaften, z. B. in Bezug auf ihre Zusammensetzung undVerarbeitung, definiert werden. Unterschiede zwischen Matricen können so einfach sein wie die Auswirkungen, die vonUnterschieden bei deren Verarbeitung oder deren Präsentation (z. B. roh im Vergleich zu pasteurisiert; frisch im Vergleich
zu getrocknet usw.) verursacht werden.

Haftungsbeschränkungen/Beschränkte Rechtsmittel

AUSSER ES WIRD AUSDRÜCKLICH ANDERS IM ABSCHNITT DER HAFTUNGSBESCHRÄNKUNGEN DER
VERPACKUNG DES JEWEILIGEN PRODUKTS ANGEGEBEN, LEHNT NEOGEN ALLE AUSDRÜCKLICHEN UND
STILLSCHWEIGENDEN GARANTIEN, EINSCHLIESSLICH, JEDOCH NICHT BESCHRÄNKT AUF, DIE GEWÄHRLEISTUNG
DER MARKTGÄNGIGKEIT ODER DER EIGNUNG FÜR EINEN BESTIMMTEN ZWECK AB. Sollte sich ein Produkt von
Neogen Food Safety als defekt herausstellen, wird es von Neogen oder einem autorisierten Vertragshändler nach eigenem
Ermessen ersetzt oder der Kaufpreis zurückerstattet. Gewährleistungsansprüche bestehen nicht. Sie sind verpflichtet,
Neogen umgehend innerhalb von sechzig Tagen, nachdem die mutmaßlichen Defekte am Produkt festgestellt wurden,
darüber zu informieren und das Produkt an Neogen zurückzusenden. Bei weiteren Fragen wenden Sie sich bitte an den
Neogen-Verkaufsvertreter oder autorisierten Neogen-Händler.

3DE (Deutsch)

Haftungsbeschränkungen von Neogen

NEOGEN HAFTET NICHT FÜR VERLUSTE ODER SCHÄDEN, GANZ GLEICH OB MITTELBARE, UNMITTELBARE,
SPEZIELLE, NEBEN- ODER FOLGESCHÄDEN EINSCHLIESSLICH, ABER NICHT BESCHRÄNKT AUF ENTGANGENEN
GEWINN. In keinem Fall übersteigt die Haftung von Neogen den Kaufpreis des angeblich defekten Produkts.

Lagerung und Entsorgung

Lagern Sie die Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis bei 2–8 °C. Nicht einfrieren. Lichtgeschützt
lagern. Vergewissern Sie sich nach dem Öffnen des Sets, dass der Folienbeutel unbeschädigt ist. Verwenden Sie das Set
keinesfalls bei beschädigtem Beutel. Nach dem Öffnen sollten nicht verwendete Reagenzgefäße gemeinsam mit dem
Trockenmittel stets im wiederverschließbaren Beutel verwahrt werden, um die Stabilität der lyophilisierten Reagenziensicherzustellen. Wieder verschlossene Beutel können maximal 60 Tage bei 2–8 °C aufbewahrt werden.
Verwenden Sie den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis nicht nach Ablauf des Verfalldatums. Das
Verfalldatum und die Chargennummer sind auf dem äußeren Etikett der Packung angegeben. Nach dem Gebrauch können
das Anreicherungsmedium und die Gefäße des Neogen Molekularen Detektion 2 – Salmonellen Nachweises pathogene
Stoffe enthalten. Beachten Sie nach Abschluss der Testverfahren die gültigen Branchennormen für die Entsorgung vonkontaminierten Abfällen. Weitere Informationen sowie die jeweils vor Ort geltenden Richtlinien zur Entsorgung entnehmen
Sie bitte dem Sicherheitsdatenblatt.

Bedienungsanleitung

Befolgen Sie alle Anweisungen genau. Andernfalls werden möglicherweise ungenaue Ergebnisse erzielt.
Desinfizieren Sie die Laborbänke und Arbeitsgeräte (Pipetten, Cap/Decap-Werkzeuge usw.) regelmäßig mit einer
1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) oder DNS-Entfernungslösung.
Der Anwender sollte die Funktionsqualifizierung (Operational Qualification, OQ) für das Neogen Molekulare
Detektionssystem absolvieren wie im Dokument „Protokolle und Anweisungen für Installationsqualifizierung (IQ) /Funktionsqualifizierung (OQ) für das Neogen Molekulare Detektionssystem“ beschrieben(6).
Spezifische Anweisungen finden Sie im Abschnitt „Spezielle Anweisungen für validierte Verfahren“:
Für Anreicherungsprotokolle gemäß AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01 und AOAC® Performance TestedSM
Zertifikat Nr. 091501 in Tabelle 3.
Für Anreicherungsprotokolle gemäß NF VALIDATION-Zertifikat 3M 01/16-11/16 in Tabelle 4.
Probenanreicherung
Tabelle 2, 3 oder 4 enthalten Richtlinien zu allgemeinen Anreicherungsprotokollen für Lebensmittelund Umgebungsproben.
Der Anwender ist selbst für die Validierung von alternativen Probennahmeprotokollen oder Verdünnungsverhältnissenverantwortlich, durch die sichergestellt werden muss, dass dieses Testverfahren den Anforderungen entspricht.
Lebensmittel
1. Lassen Sie das Anreicherungsmedium BPW ISO, je nach getesteter Matrix, auf die Raumtemperatur des Labors oder41,5 ± 1 °C aufwärmen. Siehe die Tabellen 2, 3 bzw. 4.
2. Vereinen Sie das Anreicherungsmedium und die Probe gemäß einem aseptischen Verfahren.
3. Homogenisieren Sie gründlich durch Verschneiden, Vermischung oder mischen von Hand für 2 ± 0,2 Minuten oder bisalle Klumpen vollständig aufgelöst und die Anreicherungssuspension homogen ist(10-15).
a.

Bei der Handhabung von Fleisch- und partikelreichen Proben wird die Verwendung von Filterbeuteln empfohlen.

b. Für Matrices, die in Wasser aufquellen und hochviskös sind (z. B. Zerealien, Stärken), wird empfohlen, weitere
Verdünnungen vorzunehmen (> 1:10), bis die Viskosität ausreichend verringert ist, oder geben Sie sterile 1 %ige(w/v) Alpha-Amylase zum BPW (ISO)(10-13).
c.

Große Milchpulver- und Zerealien-Proben sollten unter regelmäßigem Rühren langsam zur Flüssigkeit gegeben
werden, um eine Verklumpung zu vermeiden.

4. Inkubieren Sie wie in der entsprechenden Protokolltabelle beschrieben (siehe Tabellen 2, 3 oder 4).
Umgebungsproben
Ein Instrument zur Probennahme kann ein Schwamm sein, der mit einer neutralisierenden Lösung hydriert ist,
um die Wirkung von Desinfektionsmitteln zu deaktivieren. Neogen empfiehlt die Verwendung eines Biozid-freien
Zelluloseschwamms. Bei der Neutralisierungslösung kann es sich um eine Dey-Engley (D/E)-Neutralisierungs- oder
Letheen-Bouillon handeln. Der Bereich muss nach der Probenahme desinfiziert werden.

4DE (Deutsch)
WARNUNG: Sollten Sie einen Neutralisationspuffer mit Acrylsulfonat-Komplex als Hydrierlösung für den Schwamm
verwenden, müssen Sie vor dem Testen eine 1:2-Verdünnung (1 Teil Probe in 1 Teil steriler Anreicherungsbouillon) derangereicherten Umgebungsprobe vornehmen, um die mit einem falsch negativen Ergebnis verbundenen Risiken, die zur
Freigabe eines kontaminierten Produkts führen können, zu verringern. Ebenso können Sie 10 µl Anreicherungsmedium
mit Neutralisationspuffer in die Neogen Lyselösungsgefäße übertragen.
Die empfohlene Größe des Probenbereichs, mit dem die Anwesenheit oder Abwesenheit des Pathogens auf der
Oberfläche überprüft werden soll, liegt bei mindestens 100 cm2 (10 cm x 10 cm oder 4″ x 4″). Decken Sie bei derProbennahme mit einem Schwamm den gesamten Bereich in zwei Richtungen (links nach rechts oder oben nach unten)
ab oder sammeln Sie Umgebungsproben gemäß Ihrem aktuellen Probennahmeprotokoll oder gemäß den FDA BAM(1),USDA FSIS MLG(2) oder ISO 18593:2018(7) Richtlinien.
Der Anwender ist selbst für die Validierung von alternativen Probennahmeprotokollen oder Verdünnungsverhältnissenverantwortlich, durch die sichergestellt werden muss, dass dieses Testverfahren den Anforderungen entspricht.
1. Anreicherungsmedium BPW ISO je nach getesteten Matricen auf 41,5 ± 1 °C erwärmen. Siehe die Tabellen 2, 3 bzw. 4.
2. Vereinen Sie das Anreicherungsmedium und die Probe gemäß einem aseptischen Verfahren. Homogenisieren Sie
gründlich durch Verschneiden, Vermischung oder mischen von Hand für 2 ± 0,2 Minuten. Inkubieren Sie wie in derentsprechenden Protokolltabelle beschrieben. Siehe die Tabellen 2, 3 bzw. 4.
Tabelle 2. Allgemeine Anreicherungsprotokolle.
Anreicherungs- AnreicheProbenanalysetemperatur
rungszeit
volumen (µl)(a)(±1 °C)(Stunden)

Probenmatrix

Probengröße

Anreicherungsbouillonvolumen

Protokoll 1
Verarbeitete
Lebensmittelprodukte(außer Eipulver und Produkte,
die in anderen Protokolle
angegeben sind)(b)

25 g

225 ml BPW ISO

37

18–26

20

Protokoll 2
Roh und unverarbeitete
Lebensmittel, Eipulver,
Tiernahrung und
Umgebungsproben(c)25 g

225 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

18–26

20

Protokoll 3
Pulverisierte Milchprodukte(einschließlich Säuglingsnahrung,
Säuglingsnahrung auf Sojabasis)

25 g

225 ml BPW ISO

37

20–26

20

25 g

225 ml sterile 100 g/l
fettfreie Trockenmilch mit
0,002 % brillantgrünem
Farbemittel(d,e,f)

37

24–30

20

Protokoll 5
Sonstige wie: Gewürze,aromatische Kräuter,
Konzentrate, Instanttees und-kaffees, Bouillonwürfel

25 g

235 ml 2X BPW ISO mit
0,5 % K2SO3 + 240 ml
sterile 100 g/l fettfreie
Trockenmilch(d,g,h)

37

24–30

10

Protokoll 6
Walnüsse oder Nussmischungen,
die Walnüsse enthalten (dieses
Protokoll ist auch für andere
Nüsse wie Pekannüsse, Mandeln,
Pistazien, Cashewnüsse,Esskastanien, Macadamianüsse,Paranüsse, Sojanüsse undErdnüsse anwendbar)

25 g

225 ml sterile 100 g/l
fettfreie Trockenmilch(d)

37

18–24

20

Protokoll 4
Produkte auf Kakaobasis(Pulver, Schokolade,Süßwaren usw.)(a) Volumen der Probe, das in Lyselösungsgefäße übertragen wird. Siehe Schritt 4.7 im Abschnitt Lyse.
(b) Beispiele für Produkte, die mit Protokoll 1 getestet werden: Fertiggerichte, Feinkostsalate, Eiercreme.
(c) Beispiele für Produkte, die mit Protokoll 2 getestet werden: rohes Fleisch, gefrorenes Gemüse, alle Käsesorten,
fermentierte Milch, roher Salat (Kopfsalat, Bataviasalat).

5

DE (Deutsch)(d) Fettfreie UHT-Milch kann durch fettfreie Trockenmilch ersetzt werden.
(e) 0,45 ml 1 % wässrige brillantgrün Farbstofflösung pro 225 ml fettfreie Milch, was eine Endkonzentration von 0,002 %(0,02 g/l) brillantgrüner Farbe.
(f) Um sterile, fettfreie Milch vorzubereiten, 100 g dehydrierte, fettfreie Trockenmilch in 1 l destilliertem oder gereinigtem
Wasser lösen. Umrühren, bis alles aufgelöst ist. Bei 121 °C für 15 Minute autoklavieren. Bei 2–30 °C(8) lagern.
(g) 5 g K2SO3 pro 1000 ml BPW ISO, was zu einer Konzentration von 0,5 % K2SO3 führt.
(h) 240 ml 100 g/l sterile, fettfreie Trockenmilch muss zu 235 ml sterilisierter 2X BPW ISO mit 0,5 % K2SO3
hinzugefügt werden.
Wird ein optionaler, sekundärer Anreicherungsschritt eingesetzt, z. B. Rappaport Vassiliadis-Medium, muss eine
1:2-Verdünnung (1 Teil Probnanreicherung in 1 Teil sterile Anreicherungsbouillon) durchgeführt oder 10 µl sekundäre
Anreicherung in die Neogen Lyselösungsgefäße übertragen werden. Wird Tetrathionat- (TT) Bouillon verwendet,übertragen Sie 20 µl der sekundären Anreicherung in die Neogen Lyselösungsgefäße und verwirbeln oder pipettieren
Sie nicht aus dem unteren Bereich des Anreicherungsgefäßes, um die Übertragung von Ablagerungen zu vermeiden.
Spezifische Anweisungen für validierte Verfahren
AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
AOAC® Performance TestedSM Zertifikat Nr. 091501

OMASM- und PTMSM-Programme des AOAC Research Institute erwies sich der Neogen Molekulare Detektion 2 –Salmonellen Nachweis als wirksame Methode zur Detektion von Salmonellen. Die in der Studie getesteten Matrices sind inTabelle 3 aufgeführt.
Tabelle 3. Anreicherungsprotokolle gemäß AOAC OMASM 2016.01 und AOAC PTMSM Zertifikat Nr. 091501. Volumen derProbe, das in Neogen Lyselösungsgefäße übertragen wird, beträgt 20 µl.
Anreicherungstemperatur (±1 °C)

Anreicherungszeit(Stunden)

41,5

10–24

225 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

10–24

325 g

975 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

14–24

325 g

2.925 ml BPW ISO

37

18–24

25 g

225 ml BPW ISO

375 g

1.500 ml BPW ISO

37

18–24

Schwarzer Pfeffer, rohe ganze
Garnelen, roher Beutelspinat,
pasteurisierter verarbeiteteramerikanischer Käse

25 g

225 ml BPW ISO

37

18–24

Hühnerkörperspülung

30 ml

30 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

18–24

Hühnerkörperschwamm

1 Schwamm

50 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

18–24

Fettfreie Fertigtrockenmilch

25 g

225 ml BPW ISO

37

20–24

Kakaopulver

25 g

225 ml BPW ISO

37

24–28

Pasteurisiertes flüssiges Vollei

100 ml900 ml BPW ISO

37

18–24

Verbrauchtes
Bewässerungswasser
für Sprossen

375 ml3.375 ml BPW ISO

37

18–24

Probenmatrix

Probengröße

Anreicherungsbouillonvolumen

25 g

225 ml BPW ISO(vorgewärmt)325 g

975 ml BPW ISO(vorgewärmt)25 gRohes HackfleischRohes GeflügelhackfleischPaniertes Hähnchen
Hundetrockenfutter

6DE (Deutsch)
25 g

225 ml BPW ISO

375 g

3.375 ml BPW ISO

Getrocknete Cannabisblüten,getrocknete Hanfblüten(4)10 gVersiegelter Beton
UmweltCremige Erdnussbutter

Edelstahl
Versiegelte Keramikfliese

Probenmatrix

Probengröße

Rohe Garnele

25 g

37

18–24

90 BPW-ISO

41,5

28–32

1 Schwamm

225 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

18–24

1 Tupfer

10 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

18–24

1 Schwamm

50 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

18–24

AnreicherungsAnreicherungsbouillonvolumen temperatur (±1 °C)
225 ml BPW ISO

37

Anreicherungszeit(Stunden)

Sekundäres
Anreicherungsmedium (ml)Sekundäre
Anreicherungstemperatur (±1 °C)

Sekundäre
Anreicherungszeit(Stunden)

18–24

R-V R10: 0,1 ml
in 10 ml(a)

41,5

4–24

(a) 10 µl angereicherte Probe in die Lyselösungsgefäße übertragen. Siehe Schritt 4.7 im Abschnitt Lyse.
NF VALIDATION gemäß AFNOR Certification

3M 01/16 – 11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Für weitere Informationen zum Ablauf der Validierung siehe NF VALIDATION-Zertifikat unter der oben genannten Website.
Mit NF VALIDATION zertifizierte Methode in Übereinstimmung mit der ISO 16140-2(7) im Vergleich zur ISO 6579(3).
Einsatzgebiet der Validierung: Alle humanen Nahrungsprodukte, Umgebungsproben aus der Fertigung(einschließlich Primärproduktionsproben), Haustiernahrung und Tiernahrung, indem Validationsnachweise an einer Vielzahl
von Nahrungsmitteln durchgeführt werden.
Probenvorbereitung: Die Proben müssen gemäß EN ISO 6579(3) und EN ISO 6887(10-15) vorbereitet werden.
Softwareversion: Siehe Zertifikat.

7

DE (Deutsch)
Tabelle 4. Anreicherungsprotokolle gemäß NF VALIDATION-zertifizierter Methode 3M 01/16 – 11/16.
AnreicheAnreiche- Probenanarungstempe- rungszeit lysevolumen
ratur (+1 °C) (Stunden)(µl)(a)Probengröße

Anreicherungsbouillonvolumen

Protokoll 1:• Vielzahl von verarbeiteten
Nahrungsprodukten (ausgenommen
Eipulver, verarbeitetes Obst undGemüse und in den anderen
Protokollen angegebene Produkte)• Alle Fischprodukte und Produkte
aus rohen Meeresfrüchten• Haustiernahrung und Tiernahrung• Primärproduktion (nicht-fäkal)25 g

225 ml BPW ISO

37

18–26

20

Protokoll 2:• Vielzahl von rohen undunverarbeiteten Nahrungsmitteln(ausgenommen roher Fischund rohe Meeresfrüchte, undin den anderen Protokollen
angegebene Produkte)• Eipulver• Alle Obst- und Gemüsesorten• Umweltproben auf
der Nahrungsmittelfertigung

25 g oder
1 Tuch oder
1 Tupfer

225 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

18–26

20

25 g

225 ml BPW ISO

37

20–26

20

25 g

225 ml fettfreie
UHT-Milch+ 0,002 %Brillantgrün

37

24–30

20

Protokoll 5:• Gewürze, aromatische Kräuter,
Konzentrate, Tees, Kaffees,
Küchenhilfen

25 g

235 ml 2 x BPW
ISO + K2SO3 0,5 %+ 240 ml fettfreie
UHT-Milch

37

24–30

10

Protokoll 6:• Rohes Fleisch25 g

225 ml BPW ISO(vorgewärmt)

41,5

10–24

20

1
Probensocke

100 ml in
Tetrathionatbouillon
225 mlTetrathionatbouillon

37

22–24

20

25 g
375 g

3375 ml BPW ISO(vorgewärmt)

37

20–26

20

375 g

3375 ml BPW ISO(vorgewärmt)+ Vancomycin(10 mg/l)

37

20–26

20

Protokoll

Protokoll 3:• Pulverisierte Milchprodukte
Protokoll 4:• Kakaobasierte Produkte mit mehrals 20 % Kakao

Protokoll 7:• Primärproduktion (fäkal)Protokoll 8:• Säuglingsfertignahrung, Zerealien
für Kleinkinder, Milchpulver ohne
Probiotika(b)Protokoll 9:• Säuglingsfertignahrung, Zerealien
für Kleinkinder, Milchpulver mit
Probiotika(b)(a) Volumen der Probe, das in Lyselösungsgefäße übertragen wird. Siehe Schritt 4.7 im Abschnitt Lyse.
(b) Große Pulver- und Zerealien-Proben sollten unter regelmäßigem Rühren und langsam zur Flüssigkeit gegeben werden,
um eine Verklumpung zu vermeiden.

8DE (Deutsch)
HINWEISE:• Proben über 25 g wurden nicht getestet, außer in Protokoll 8 und 9 der NF VALIDATION-Studie.
• Die kurzen Protokolle der Detektion reagieren empfindlich auf Bedingungen der Inkubation. Die Temperaturbedingungen, die in den technischen Angaben angegeben sind, müssen befolgt werden. Der Benutzer mussverifizieren, dass die Vorwärmung der Anreicherungsbouillon die erforderliche Temperatur vor der Inkubation
erreicht. Die Vorbereitungszeit der Proben, Verzögerung zwischen dem Ende des Schritts zur Vorwärmung derAnreicherungsbouillon und dem Beginn des Schritts zur Inkubation der Lebensmittelprobe, darf 45 Minuten nichtüberschreiten. Die Verwendung eines belüfteten Inkubators zur Inkubation wird empfohlen.
• Zur Übertragung der Probe Tetrathionat- (TT) Bouillonanreicherungen in das Neogen Lysegefäß die TTAnreicherung nicht verwirbeln oder aus dem unteren Bereich des Anreicherungsgefäße pipettieren, um
die Übertragung von Ablagerungen zu vermeiden. Die Übertragung von Ablagerungen kann zu ungültigen
Ergebnissen führen.
• Die empfohlenen Protokoll-Unterbrechungspunkte sind nach Anreicherung oder nach Probenlyse. Die
Anreicherungsbouillon bzw. das Probenlysat kann bis zu 72 Stunden bei 2–8 °C gelagert werden. Fahren Sie mit dem
Testen ab Schritt 1 im Abschnitt Lyse fort, nachdem Sie die Anreicherungsbouillon aus der Lagerung genommen
haben. Fahren Sie mit dem Testen ab Schritt 8 im Abschnitt Lyse fort, nachdem Sie das Probenlysat aus der Lagerung
genommen haben.
Vorbereitung der Neogen® Molekulare Detektion – Beladehilfe
1. Befeuchten Sie ein Tuch oder ein Einwegtuch mit einer 1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) undwischen Sie die Neogen® Molekulare Detektion – Beladehilfe ab.
2. Spülen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit Wasser ab.
3. Trocknen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit einem Einmalhandtuch.
4. Vergewissern Sie sich, dass die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe vor dem Gebrauch trocken ist.
Vorbereitung des Neogen® Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatzes
Stellen Sie den Neogen® Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz direkt auf die Laborbank. Verwenden Sie den Block bei
Laborraumtemperatur (20–25 °C).
Vorbereitung des Neogen® Molekulare Detektion – Heizblockeinsatzes
Legen Sie den Neogen® Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz in ein Trocken-Doppelblock-Heizgerät. Schalten Sie das
Trocken-Blockheizgerät ein und stellen Sie die Temperatur für den Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz auf
100 ± 1 °C ein.
HINWEIS: Warten Sie je nach Heizgerät etwa 30 Minuten, bis der Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die
geeignete Temperatur erreicht hat. Stellen Sie mit einem kalibrierten Thermometer (z. B. ein Thermometer zum partiellen
Eintauchen oder ein Digitalthermometer, kein Tauchthermometer) an der vorgesehenen Messposition fest, ob der
Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die erforderliche Temperatur von 100 ± 1 °C erreicht hat.
Vorbereitung des Neogen® Molekulare Detektion – Geräts
1. Starten Sie die Neogen® Molekulare Detektion – Software und loggen Sie sich ein. Setzen Sie sich mit dem
Ihrem Neogen Food Safety Verkaufsvertreter in Verbindung, um sicherzustellen, dass Sie über die aktuellste
Softwareversion verfügen.
2. Schalten Sie das Neogen Molekulare Detektion – Gerät ein.
3. Erstellen oder bearbeiten Sie für jede Probe einen Testdurchlauf. Weitere Details entnehmen Sie bitte dem
Benutzerhandbuch zum Neogen Molekularen Detektionssystem.
HINWEIS: Das Neogen Molekulare Detektion – Gerät muss bereit sein, bevor die Neogen Molekulare Detektion –Beladehilfe mit den Reaktionsgefäßen eingesetzt werden kann. Dieses Erwärmungsverfahren nimmt etwa 20 Minuten in
Anspruch und wird durch eine ORANGEFARBENE Leuchte auf der Statusleiste des Geräts angezeigt. Sobald das Gerät
einsatzbereit ist, wechselt die Leuchte der Statusleiste auf GRÜN.

9

DE (Deutsch)
Lyse
Entfernen Sie die Unterseite des Neogen Lyselösungsträgers mit einem Schraubendreher oder Spatel, bevor Sie ihn im
Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz platzieren.

1. Lassen Sie die Neogen Lyselösung im Gefäß über Nacht (16–18 Stunden) bei Raumtemperatur (20–25 °C) aufwärmen.
Um die Neogen Lyselösungsgefäße auf Raumtemperatur zu erwärmen, können Sie sie für mindestens 2 Stunden
auf die Laborbank stellen, für 1 Stunde bei 37 ± 1 °C inkubieren oder sie für 30 Sekunden bei 100 ± 1 °C in ein
Trocken-Doppelblock-Heizgerät setzen.
2. Mischen Sie die mit Kappen verschlossenen Gefäße überkopf. Fahren Sie innerhalb von 4 Stunden mit dem nächsten
Schritt fort.
3. Nehmen Sie die Anreicherungsbouillon aus dem Inkubator.
4. Für jede Probe (steriles Anreicherungsmedium) und die Negativkontrolle (NC) wird jeweils ein Gefäß mit
Neogen Lyselösung benötigt.
4.1 Die Neogen Lyselösung-Gefäßstreifen können auf die gewünschte Neogen Lyselösung-Anzahl an Gefäßen
zurechtgeschnitten werden. Wählen Sie die Anzahl der erforderlichen Neogen Lyselösungsgefäße oder 8er
Gefäßstreifen aus. Setzen Sie die Neogen Lyselösungsgefäße in einen leeren Gefäßträger.
4.2 Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, öffnen Sie jeweils nur einen Neogen Lyselösungs-Gefäßstreifen undverwenden Sie bei jeder einzelnen Übertragung eine neue Pipette.
4.3 Übertragen Sie die angereicherte Probe wie unten beschrieben auf die Neogen Lyselösungsgefäße:Übertragen Sie zuerst die angereicherten Proben jeweils einzeln in ein Neogen Lyselösungsgefäß. Übertragen
Sie die NC zuletzt.
4.4 Öffnen Sie jeden Neogen Streifen mit Lyselösungsgefäßen einzeln mit dem Neogen® Molekulare Detektion –Cap/Decap-Werkzeug – Lyse.
4.5 Entsorgen Sie die Kappen der Neogen Lyselösungsgefäße. Wenn noch Lysat für weitere Tests übrig bleibt,
bewahren Sie die Kappen in einem sauberen Container auf, um sie nach der Lyse wieder aufzusetzen.
4.5.1 Informationen zur Verarbeitung von nicht verwendetem Lysat finden Sie in Anhang A.
4.6 Schütteln Sie den Anreicherungsbeutel, bevor Sie die Probe von der gefilterten Seite entnehmen, wenn Sie mit
zähflüssigen Proben arbeiten.
4.7 Übertragen Sie 20 µl Probe in ein Neogen-Lyselösungsgefäß, sofern nicht anderweitig in der Protokolltabelle
angegeben (wie Protokoll 5 und Sekundäranreicherung in RVS oder wenn Sie Umgebungsproben mit
Neutralisierungspuffer verwenden).
20 µl

5. Wiederholen Sie Schritt 4.4 bis 4.7, bis jede einzelne Probe in ein zugeordnetes Neogen Lyselösungsgefäß im Streifen
gegeben wurde.
6. Sobald Sie alle Proben übertragen haben, übertragen Sie 20 µl der Negativkontrolle (steriles Anreicherungsmedium,z. B. gepuffertes Peptonwasser BPW) in ein Neogen Lyselösungsgefäß. Als NC kein Wasser verwenden.
7. Stellen Sie fest, ob der Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die erforderliche Temperatur von 100 ± 1 °C
erreicht hat.

10

DE (Deutsch)
8. Stellen Sie den Träger ohne Deckel mit Neogen Lyselösungsgefäßen in den Neogen Molekulare Detektion –Heizblockeinsatz und erwärmen Sie ihn 15 Minuten ± 1 Minute lang. Dabei ändert sich die Farbe der Neogen
Lyselösung von rosafarben (kalt) zu gelb (heiß).
8.1. Proben, die während der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein
biologisches Risiko dar und sollten NICHT in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät eingesetzt werden.
9. Nehmen Sie den Träger ohne Deckel mit den Neogen Lyselösungsgefäßen aus dem Heizblockeinsatz und lassen Sie ihn
maximal 5 bis 10 Minuten lang im Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz abkühlen. Der Neogen Molekulare
Detektion – Kühlblockeinsatz wird bei Raumtemperatur verwendet und sollte direkt auf die Laborbank gesetzt werden.
Wenn die Lyselösung abgekühlt ist, nimmt sie wieder eine rosa Farbe an.
10. Nehmen Sie den Träger mit den Neogen Lyselösungsgefäßen aus dem Neogen Molekulare Detektion –Kühlblockeinsatz.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplifikation
1. Für jede Probe und ihre Negativkontrolle ist ein Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen NachweisReagenzgefäß erforderlich.
1.1 Die Gefäßstreifen können auf die gewünschte Anzahl der Gefäße zurechtgeschnitten werden. Wählen Sie die
Anzahl der erforderlichen Reagenzgefäße für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis oderden 8er Gefäßstreifen.
1.2 Setzen Sie die Gefäße mit Reagenzkontrolle in einen leeren Gefäßträger.
1.3 Vermeiden Sie es, die Reagenzkügelchen im unteren Teil der Gefäße aufzurühren.
2. Wählen Sie ein Gefäß mit Reagenzkontrolle und stellen Sie es in den Gefäßträger.
3. Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, öffnen Sie jeweils nur einen Gefäßstreifen mit Reagenzkontrolle undverwenden Sie bei jeder einzelnen Übertragung eine neue Pipette.
4. Übertragen Sie wie unten beschrieben die einzelnen Lysate in ein Reagenzgefäß für den Neogen Molekulare Detektion
2 – Salmonellen Nachweis und ein Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle:Übertragen Sie jedes Probenlysat zuerst in die einzelnen Reagenzgefäße und danach die NC. Hydrieren Sie das Gefäß
mit Neogen Reagenzkontrolle als letztes.
5. Öffnen Sie die Reagenzgefäße für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis mit dem Neogen®
Molekulare Detektion – Cap/Decap-Werkzeug – Reagenz, und zwar immer nur einen Streifen auf einmal. Entsorgen
Sie die Kappe.
5.1 Übertragen Sie 20 µl des Probenlysats aus der oberen Hälfte der Flüssigkeit (Ablagerungen vermeiden) im
Neogen Lyselösungsgefäß in das entsprechende Reagenzgefäß für den Neogen Molekulare Detektion 2 –Salmonellen Nachweis. Pipettieren Sie schräg in die Gefäße, um ein Aufrühren der Kügelchen zu vermeiden.
Mischen Sie anschließend den Gefäßinhalt, indem Sie ihn 5 Mal vorsichtig auf und ab pipettieren.
5.2 Wiederholen Sie Schritt 5.1, bis Sie jedes einzelne Probenlysat einem entsprechenden Reagenzgefäß für die
Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis im Streifen hinzugefügt haben.
5.3 Verschließen Sie die Reagenzgefäße für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis mit den
mitgelieferten zusätzlichen Kappen und üben Sie mit der abgerundeten Seite des Neogen Molekulare Detektion– Cap/Decap-Werkzeugs – Reagenz in einer Vorwärts- und Rückwärtsbewegung Druck aus, um sicherzustellen,
dass die Kappe fest sitzt.
5.4 Wiederholen Sie bei Bedarf die Schritte 5.1 bis 5.3 bei allen zu prüfenden Proben.
5.5 Sobald Sie alle Probenlysate übertragen haben, wiederholen Sie die Schritte 5.1 und 5.3, um 20 µl des NC-Lysats
in ein Reagenzgefäß für den Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis zu übertragen.
5.6 Übertragen Sie 20 µl des NC-Lysats in ein Gefäß mit Neogen Reagenzkontrolle. Pipettieren Sie schräg in die
Gefäße, um ein Aufrühren der Kügelchen zu vermeiden. Mischen Sie anschließend den Gefäßinhalt, indem Sie ihn
5 Mal vorsichtig auf und ab pipettieren.

11DE (Deutsch)
6. Beladen Sie eine saubere und dekontaminierte Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe mit den mit Kappen
verschlossenen Gefäßen. Schließen und verriegeln Sie die Klappe der Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe.

20 µL

7. Überprüfen und bestätigen Sie die Konfiguration des Testdurchlaufs in der Neogen Molekulare Detektion – Software.
8. Klicken Sie auf die Schaltfläche „Start“ in der Software und wählen Sie anschließend das zu verwendende Gerät aus.
Die Klappe des gewählten Geräts öffnet sich automatisch.
9. Setzen Sie die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe in das Neogen Molekulare Detektion – Gerät und schließen
Sie die Klappe, um mit dem Test zu beginnen. Die Ergebnisse sind innerhalb von 60 Minuten verfügbar, obgleich
positive Ergebnisse möglicherweise schneller erfasst werden.
10. Nehmen Sie nach Abschluss des Tests die Neogen Molekulare Detektion – Beladehilfe aus dem Neogen Molekulare
Detektion – Gerät und entsorgen Sie die Gefäße, indem Sie sie 1 Stunde lang in ausreichender Entfernung vom
Vorbereitungsbereich in einer 1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) einweichen.
HINWEIS: Um das Risiko eines falsch positiven Ergebnisses infolge einer Kreuzkontamination zu minimieren, öffnen Sie
niemals Reagenzgefäße, die amplifizierte DNS enthalten. Dies betrifft Reagenzien für den Neogen Molekulare Detektion
2 – Salmonellen Nachweis sowie Gefäße mit Neogen Reagenzkontrolle und Neogen Matrixkontrolle. Entsorgen Sie dieverschlossenen Reagenzgefäße, indem Sie sie 1 Stunde lang in ausreichender Entfernung vom Vorbereitungsbereich ineiner 1–5%igen Haushaltsbleichmittellösung (v:v in Wasser) einweichen.
Auslegung der Ergebnisse
Die durch die Detektion der Nukleinsäureamplifikation entstehende Lichtkurve wird anhand eines Algorithmus
ausgewertet. Die Ergebnisse werden automatisch von der Software analysiert und je nach Ergebnis farbcodiert. Ein
positives oder negatives Ergebnis wird durch die Analyse einer bestimmten Anzahl an eindeutigen Kurvenparameternbestimmt. Die vorläufigen positiven Ergebnisse werden in Echtzeit erstellt, während negative und zu überprüfende
Ergebnisse erst nach Abschluss des Testdurchlaufs dargestellt werden.
Vorläufig positive Ergebnisse sollten anhand der Standardarbeitsanweisung für Laboratorien oder durch das anschließende
Referenzverfahren(1,2,3) bestätigt werden, beginnend mit der Übertragung aus der Erstanreicherung mit Neogen BPW ISO in
die Zweitanreicherungsbouillon, gefolgt von anschließendem Ausplattieren und Bestätigen von Isolaten mittels geeigneter
biochemischer und serologischer Verfahren.
HINWEIS: Selbst ein negatives Ergebnis führt nicht zu einem Ergebnis von null, da das System und die Amplifikationsreagenzien der Neogen Molekularen Detektions 2 – Salmonellen Nachweis über einen „Hintergrund“ verfügen, derin relativem Verhältnis zur Lichteinheit (RLU) steht.

12DE (Deutsch)
Falls es in seltenen Fällen zu einer ungewöhnlichen Lichtleistung kommt, wird diese vom Algorithmus als „Zu überprüfen“
gekennzeichnet. Neogen empfiehlt, den Nachweis der so gekennzeichneten Proben zu wiederholen. Falls das Ergebnis
weiterhin als „Zu überprüfen“ gekennzeichnet bleibt, bestätigen Sie das Ergebnis anhand Ihres bevorzugten Testverfahrens
oder gemäß den jeweils geltenden Richtlinien.
Vertiefungstyp

Vertiefungsergebnissymbol

ErgebnisInterpretation

Probe

Positiv

Die Probe wird vorläufig positiv für das
Zielpathogen betrachtet.

Probe

Negativ

Die Probe wird negativ für das
Zielpathogen betrachtet.

Gehemmt

Die Probenmatrix hat den Nachweis gehemmt. Einneuer Test ist erforderlich. Weitere Informationen
finden Sie im Problemlösungsabschnitt und derGebrauchsanweisung des Testkits.

Zu überprüfen

Das Vorhandensein oder Fehlen desZielpathogens war nicht ermittelbar. Ein neuer
Test ist erforderlich. Weitere Informationen
finden Sie im Problemlösungsabschnitt und derGebrauchsanweisung des Testkits.

Probe

Probe

Keine Bioluminszenz festgestellt. Ein neuer
Test ist erforderlich. Weitere Informationen
FehlerProbefinden Sie im Problemlösungsabschnitt und derGebrauchsanweisung des Testkits.
Bestätigung der Ergebnisse anhand der zertifizierten NF VALIDATION-Methode
Alle im Rahmen der NF VALIDATION vom Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis als positiv
identifizierte Proben müssen durch einen der nachfolgenden Tests bestätigt werden:
Option 1: Nach ISO 6579(3) standardmäßig mit Anreicherung von gepuffertem Peptonwasser(3).
Option 2: Durchführung eines Bestätigungsverfahrens mit Folgendem: Übertragen Sie 0,1 ml BPW ISO(3) Anreicherungsoder Tetrathionatbouillon (Primärproduktionsproben) in 10 ml RVS-Bouillon. Inkubieren Sie für 24 ± 3 Stunden bei 41,5 °C.
Streichen Sie auf Xyloselysindeoxycholat (XLD)(3)-Agar oder ein chromogenes Agar speziell für Salmonellen. Führen Sie eine
Latexagglutination mithilfe von Oxoid Salmonellen-Latextest direkt auf den isolierten Kolonien durch.
Option 3: Verwenden Sie die in der Norm EN ISO 7218(5) beschriebenen Nukleinsäure-Sonden, die auf den isolierten
Kolonien des ausgeführt werden, von XLD oder chromogenem Agar (siehe Optionen 1 oder 2). Dieser Test darf nicht mit
der Neogen Molekularen Detektion 2 – Salmonellen Nachweis durchgeführt werden.
Option 4: Beim Verwenden einer anderen zertifizierten NF VALIDATION-Methode muss sich das grundsätzliche Verfahrenvon dem Neogen Molekularen Detektion 2 – Salmonellen Nachweis unterscheiden. Das gesamte für diese zweite
gesicherte Methode beschriebene Protokoll muss befolgt werden. Vor dem Beginn der Bestätigung müssen alle Schritte fürbeide Methoden allgemein bekannt sein.
Bei abweichenden Ergebnissen (mutmaßlich positiven beim Neogen Molekulare Detektion 2 – Salmonellen Nachweis,
unbestätigten Ergebnissen eines der zuvor genannten Verfahren und insbesondere für die Latexpartikel-Agglutination)muss das Labor die erforderlichen Maßnahmen befolgen, um die Richtigkeit der erhaltenden Ergebnisse sicherzustellen.
Sollten Sie Fragen zu bestimmten Anwendungen oder Verfahren haben, besuchen Sie unsere Website unter
www.neogen.com oder wenden Sie sich an den lokalen Neogen-Verkaufsvertreter oder Händler.

13DE (Deutsch)Anhang A. Protokoll-Unterbrechungen: Lagerung und erneutes Testen von wärmeb
ehandelten Lysaten

1. Um ein wärmebehandeltes Lysat zu lagern, setzen Sie eine saubere Kappe auf das Lysegefäß(siehe Lyse, Abschnitt 4.5).
2. Lagern Sie sie bis zu 72 Stunden bei 4 bis 8 °C.

3. Bereiten Sie eine gelagerte Probe zur Amplifikation vor, indem Sie sie zum Mischen 2 bis 3 Mal umdrehen.
4. Entkappen Sie die Gefäße.
5. Setzen Sie die gemischten Lysatgefäße in den Neogen Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz und erwärmen Sie sie
5 Minuten ± 1 Minute lang bei 100 ± 1 °C.
6. Nehmen Sie den Träger mit den Neogen Lyselösungsgefäßen aus dem Heizblockeinsatz und lassen Sie ihn maximal
5 bis 10 Minuten lang im Neogen Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz abkühlen.
7. Setzen Sie das Protokoll ab dem oben beschriebenen Abschnitt Amplifikation fort.

Literaturnachweise:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identificationof Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Effective Date: 2 January 2019.
3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping ofSalmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance formicrobiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System. Eine Kopie dieses Dokuments erhalten Sie über Ihren Neogen Food SafetyRepräsentanten.
7. ISO 18593. Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.
8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk
(Reconstituted). January 2011.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods against a reference method.
10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension anddecimal dilutions.
11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.
12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary
production stage.

Erklärung der Symbole
info.neogen.com/symbols

14

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A

ES(Español)Fecha de emisión: 2024-01

Instrucciones del Producto
Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen®
Descripción del producto y uso previsto

El Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen® se usa junto con el Sistema de Detección Molecular
Neogen® para la detección rápida y específica de Salmonella en muestras enriquecidas ambientales de procesos
alimentarios, alimentos y alimento para animales.
Los Ensayos de Detección Molecular Neogen® usan amplificación isotérmica tipo LAMP (por sus siglas en inglés)para amplificar rápidamente las secuencias de ácido nucleico con alta especificidad y sensibilidad, combinadas con
bioluminiscencia para detectar la amplificación. Los resultados presuntamente positivos se reportan en tiempo real,mientras que los resultados negativos se revelan una vez terminado el ensayo. Los resultados presuntamente positivos sedeben confirmar con su método de preferencia, o según se especifique en las regulaciones locales(1, 2, 3).
El Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen está previsto para el uso en laboratorios por profesionales
capacitados en el empleo de técnicas de laboratorio. Neogen no documentó el uso de este producto en otras industrias
que no sean la alimentaria o la de bebidas. Por ejemplo, Neogen no documentó este producto para el análisis de muestras
clínicas, veterinarias, cosméticas o farmacéuticas. El Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen no ha sido
evaluado con todos los productos alimenticios ni todos los procesos alimenticios, tampoco con todos los protocolos deevaluación ni con todas las cepas de bacterias posibles.
Como con todos los métodos de prueba, el origen, la formulación y la calidad del medio de enriquecimiento pueden
influir sobre los resultados. Factores tales como los métodos de muestreo, los protocolos de análisis, la preparación dela muestra, la manipulación y la técnica de laboratorio también pueden afectar los resultados. Neogen recomienda laevaluación del método lo que incluye el medio de enriquecimiento usando un número suficiente de muestras en alimentos
representativos y con exposición a ciertas cepas o bacterias desafiantes para garantizar que el método satisface loscriterios del usuario en su propio entorno.
Neogen ha evaluado el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen con Agua Peptonada Tamponada (BTW) ISO.
El Equipo de Detección Molecular Neogen® está previsto para ser utilizado con muestras que hayan sido tratadas con
calor durante el paso de lisis del ensayo, que se diseñó para destruir los organismos presentes en la muestra. Las muestras
que no se hayan tratado debidamente con calor durante el paso de lisis del ensayo pueden considerarse un posible riesgo
biológico y NO deben introducirse en el Equipo de Detección Molecular Neogen.
Neogen Food Safety cuenta con certificación de la Organización Internacional para la Estandarización (ISO) 9001 dediseño y fabricación.
El kit de prueba para el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen contiene 96 pruebas, que se describen
en la Tabla 1.
Tabla 1. Componentes del kit para el Ensayo de Detección Molecular Neogen
Artículo

Identificación

CantidadContenido

Comentarios

Solución de Lisis (LS) Neogen

Solución rosada
en tubostransparentes

96(12 tiras de 8 tubos)

580 µL de LS por tubo

En bastidor ylista para usar

Tubos de reactivos para el
Ensayo de Detección Molecular
2 para Salmonella Neogen®

Tubos verdes

96(12 tiras de 8 tubos)

Mezcla de deteccióny amplificación
específica liofilizada

Listas para usar

Tapas adicionales

Tapas verdes

96(12 tiras de 8 tapas)®

Control de Reactivos Neogen®
(RC)

Tubos
16
Mezcla de detección ytransparentes con (2 bolsas de 8 tubos amplificación de control
tapa de bisagra
individuales)
liofilizado de ADN

Listas para usar
Listas para usar

El Control Negativo (NC), no provisto en el kit, es un medio de enriquecimiento estéril, por ejemplo, BPW ISO. No use agua
como un NC.

1

ES(Español)Seguridad
El usuario debe leer, comprender y proceder con toda la información de seguridad incluida en las instrucciones para el
Sistema de Detección Molecular Neogen y el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen. Guarde las
instrucciones de seguridad para consultas futuras.
ADVERTENCIA: Indica una situación peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar la muerte o lesiones graves, y/odaños materiales.
ATENCIÓN: Indica una situación potencialmente peligrosa que, si no se evita, podría ocasionar daños materiales.

ADVERTENCIA
No use el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen para el diagnóstico de afecciones en seres
humanos ni animales.
El usuario debe capacitar a su personal en lo que respecta a las técnicas de prueba adecuadas, por ejemplo,
Buenas prácticas de laboratorio, ISO/IEC 17025(4) o ISO 7218(5).
Para reducir los riesgos asociados con un resultado falso negativo que provoque la liberación de productos contaminados:• Siga el protocolo y realice las pruebas exactamente como se indica en las instrucciones del producto.
• Almacene el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen como se indica en el embalaje y en las
instrucciones del producto.
• Siempre use el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen antes de su fecha de vencimiento.
• Use el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen con muestras enriquecidas ambientales de procesos
alimentarios, alimentos y alimento para animales que hayan sido validadas internamente o por un tercero.
• Use el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen solo con superficies, desinfectantes, protocolos y
cepas de bacterias que hayan sido validadas internamente o por un tercero.
• En el caso de muestras ambientales que contengan una solución amortiguadora neutralizante con un complejo de aril
sulfonato, prepare una dilución en una proporción de 1:2 (1 parte de muestra en 1 parte de caldo de enriquecimiento
estéril) antes de realizar la prueba. Otra opción es transferir 10 µL de la muestra de la solución amortiguadora
neutralizante enriquecida a los tubos de Solución de Lisis Neogen. Productos de manejo de muestras Neogen® que
incluyen una solución amortiguadora neutralizante con el complejo aril sulfonato: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB,
SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G y HS2410NB2G.
Para reducir los riesgos asociados con la exposición a productos químicos y riesgos biológicos:• Realice las pruebas de patógenos en un laboratorio debidamente equipado, bajo la supervisión de personal capacitado.
El medio de enriquecimiento incubado y el equipo o las superficies que hayan entrado en contacto con el medio deenriquecimiento podrían contener patógenos en niveles suficientes para provocar un riesgo para la salud humana.
• Siempre proceda de acuerdo con las prácticas estándar de seguridad del laboratorio. Eso incluye usar la ropa deprotección adecuada y protección para los ojos al manipular reactivos y muestras contaminadas.
• Evite el contacto con el contenido del medio de enriquecimiento y de los tubos de reactivos después de la amplificación.
• Deseche las muestras enriquecidas conforme a los estándares de la industria vigentes.
• Las muestras que no se hayan tratado debidamente con calor durante el paso de lisis del ensayo pueden considerarse
un posible riesgo biológico y NO deben introducirse en el Equipo de Detección Molecular Neogen.
Para reducir los riesgos relacionados con contaminación cruzada mientras se prepara el ensayo:• Use siempre guantes (para proteger al usuario y evitar que se introduzcan nucleasas).
Para reducir los riesgos relacionados con la contaminación ambiental:• Siga las normas de la industria vigentes para la eliminación de desechos contaminados.
Para reducir los riesgos relacionados con la exposición a líquidos calientes:• No exceda la temperatura recomendada al configurar el calentador.
• No exceda el tiempo de calentamiento recomendado.
• Use un termómetro calibrado adecuado para verificar la temperatura del Bloque de Calor para el Sistema de Detección
Molecular Neogen® (p. ej., un termómetro de inmersión parcial o un termómetro digital termopar, no un termómetro
de inmersión total). El termómetro debe colocarse en la ubicación designada en el Bloque de Calor para el Sistema de
Detección Molecular Neogen.

2

ES(Español)ATENCIÓN
Para reducir los riesgos relacionados con contaminación cruzada mientras se prepara el ensayo:• Cámbiese los guantes antes de hidratar los gránulos reactivos.
• Se recomienda usar puntas de pipetas estériles de calidad de biología molecular con barrera para aerosoles (con filtro).
• Use una nueva punta de pipeta para cada transferencia de muestra.
• Use las Buenas Prácticas de Laboratorio para transferir la muestra del enriquecimiento al tubo de lisis. Para evitar lacontaminación de la pipeta, el usuario puede elegir agregar un paso de transferencia intermedia. Por ejemplo, el usuario
puede transferir cada muestra enriquecida a un tubo estéril.
• Use una estación de trabajo de calidad para biología molecular con una lámpara germicida, siempre que disponga de una.
Descontamine periódicamente las mesas y el equipo de laboratorio (pipetas, herramientas para tapar/destapar, etc.)
con una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5% (v:v en agua) o en una solución para eliminación de DNA.
Para reducir los riesgos relacionados con un resultado falso positivo:• Nunca abra los tubos después de la amplificación.
• Siempre deseche los tubos contaminados sumergiéndolos en una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5%(v:v en agua) durante 1 hora y lejos del área en que se prepara el ensayo.
• Nunca ponga en autoclave los tubos de reactivos después de la amplificación.
Consulte la Hoja de Datos de Seguridad para obtener más información y conocer las normativas locales para el desechode materiales.
Si tiene preguntas acerca de los procedimientos o las aplicaciones específicas, visite nuestro sitio web en
www.neogen.com o comuníquese con su representante o distribuidor local de Neogen.

Responsabilidad del usuario

Los usuarios son responsables de familiarizarse con las instrucciones e información del producto. Visite nuestro sitio
web en www.neogen.com o póngase en contacto con su representante o distribuidor local de Neogen para obtener
más información.
Al seleccionar un método de prueba, es importante reconocer que factores externos tales como los métodos de muestreo,
los protocolos de prueba, la preparación de la muestra, la manipulación, la técnica de laboratorio y la muestra en sí pueden
afectar los resultados.
Al seleccionar cualquier método de prueba o producto, es responsabilidad del usuario evaluar un número suficiente demuestras con retos microbianos y matrices apropiadas para satisfacer al usuario en cuanto a que el método de prueba
cumple con los criterios necesarios.
Además, es responsabilidad del usuario determinar que cualquier método de prueba y sus resultados cumplen con losrequisitos de sus clientes y proveedores.
Como sucede con cualquier método de prueba, los resultados obtenidos del uso de cualquier producto de Neogen Food
Safety no constituyen una garantía de calidad de las matrices ni de los procesos analizados.
Para ayudar a los clientes a evaluar el método de varias matrices, Neogen ha desarrollado el kit de Control de Matriz
para Detección Molecular Neogen®. Cuando sea necesario, utilice el Control de Matriz (MC) para determinar si la matriz
puede afectar los resultados del Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen. Analice varias muestras
representativas de la matriz, es decir, las muestras obtenidas de diferente origen, durante cualquier periodo de validación
al adoptar el método de Neogen o al analizar matrices nuevas o desconocidas, o matrices que hayan sido sometidas acambios en el proceso o la materia prima.
Una matriz se puede definir como un tipo de producto con propiedades intrínsecas, tales como composición y proceso.
Las diferencias entre las matrices pueden ser tan simples como los efectos causados por las diferencias en su
procesamiento o presentación, por ejemplo, productos crudos frente a pasteurizados; alimentos frescos frente a
secos, etc.

Limitación de garantía/Recurso limitado

SALVO LO EXPRESAMENTE ESTIPULADO EN UNA SECCIÓN DE GARANTÍA LIMITADA O EN EL EMBALAJE DE UN
PRODUCTO ESPECÍFICO, NEOGEN RENUNCIA A TODAS LAS GARANTÍAS EXPRESAS Y TÁCITAS INCLUIDA, ENTREOTRAS, CUALQUIER GARANTÍA DE COMERCIABILIDAD O IDONEIDAD PARA UN USO EN PARTICULAR. Si un productode Neogen Food Safety es defectuoso, Neogen o su distribuidor autorizado reemplazará el producto o reembolsará
el precio de compra del producto, a su elección. Estos son sus recursos exclusivos. Deberá notificar inmediatamentea Neogen en un lapso de sesenta días a partir del descubrimiento de cualquier sospecha de defecto en un producto ydevolver dicho producto a Neogen. Póngase en contacto con su representante de Neogen o distribuidor autorizado de
Neogen si tuviera cualquier otra pregunta.

3

ES(Español)Limitación de responsabilidad de Neogen

NEOGEN NO SERÁ RESPONSABLE DE NINGUNA PÉRDIDA O DAÑO, YA SEA DIRECTO, INDIRECTO, ESPECIAL,DAÑOS ACCIDENTALES O CONSECUENCIAS, INCLUIDOS ENTRE OTROS, LA PÉRDIDA DE BENEFICIOS. En
ningún caso la responsabilidad de Neogen conforme a ninguna teoría legal excederá el precio de compra del producto
supuestamente defectuoso.

Almacenamiento y desecho

Almacene el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen entre 2 °C y 8 °C. No lo congele. Durante elalmacenamiento, mantenga el kit fuera del alcance de la luz. Después de abrir el kit, verifique que la bolsa de aluminio noesté dañada. Si la bolsa está dañada, no use el producto. Después de abrir el embalaje, los tubos de reactivo no utilizados
se deberán guardar siempre en la bolsa resellable junto con el desecante para conservar la estabilidad de los reactivos
liofilizados. Almacene las bolsas cerradas a una temperatura entre 2 °C y 8 °C durante 60 días como máximo.
No utilice el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen después de su fecha de vencimiento. La fecha
de vencimiento y el número de lote están impresos en la etiqueta externa de la caja. Después de usarlos, el medio deenriquecimiento y los tubos del Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen podrían contener materiales
patógenos. Una vez terminada la prueba, proceda de acuerdo con los estándares actuales de la industria para el desechode residuos contaminados. Consulte la Hoja de Datos de Seguridad para obtener más información y conocer las
normativas locales para el desecho de materiales.

Instrucciones de uso

Siga todas las instrucciones atentamente. De lo contrario, los resultados obtenidos podrían llegar a ser incorrectos.
Descontamine periódicamente las mesas y el equipo de laboratorio (pipetas, herramientas para tapar/destapar, etc.)
con una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5% (v:v en agua) o en una solución para eliminación de DNA.
El usuario debe completar la capacitación de calificación del operador (OQ) del Sistema de Detección Molecular
Neogen según se describe en el documento “Protocolos de Calificación para la Instalación (IQ)/Calificación Operativa(OQ) e Instrucciones para el Sistema de Detección Molecular Neogen”(6).
Consulte la Sección “Instrucciones específicas para los métodos validados” para obtener requisitos específicos:
Tabla 3 para los protocolos de enriquecimiento según el AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01 y el Certificado
AOAC® Performance TestedSM n.° 091501.
Tabla 4 para los protocolos de enriquecimiento según el Certificado NF VALIDATION 3M 01/16 -11/16.
Enriquecimiento de la muestra
En las Tablas 2, 3 o 4 se presenta una guía para los protocolos generales de enriquecimiento de muestras de alimentos,
alimento para animales y ambientales.
Es responsabilidad del usuario validar protocolos de muestreo o proporciones de dilución alternativos para garantizar que
este método de prueba satisface los criterios del usuario.
Alimentos
1. Permita que el medio de enriquecimiento (BPW ISO) alcance un equilibrio en la temperatura ambiente del laboratorio oa 41,5 ± 1 °C según la matriz analizada. Consulte las Tablas 2, 3 o 4.
2. Combine el medio de enriquecimiento y la muestra de forma aséptica.
3. Homogenice completamente en homogeneizador peristáltico o licuadora, o bien mezcle la preparación manualmentedurante 2 ± 0,2 minutos o hasta que los grumos se disuelvan por completo y la suspensión de enriquecimiento sevea homogénea(10-15).
a.

Para todas las muestras con alto contenido de partículas y carne, se recomienda utilizar bolsas con filtro.

b. Para matrices que aumentan de tamaño en agua y son altamente viscosas (p. ej.: cereales o almidón), se sugiere
hacer diluciones adicionales (>1:10) hasta que la viscosidad se reduzca adecuadamente o agregar alfa-amilasa
estéril al 1 % (p/v) al medio de enriquecimiento (BPW ISO)(10-13).
c.

Para muestras grandes de leche en polvo y cereales, agregue la muestra al líquido lentamente y mezcle con
frecuencia para evitar grumos.

4. Incube como se indica en la tabla del protocolo correspondiente (consulte las tablas 2, 3 o 4).

4

ES(Español)Muestras ambientales
Los dispositivos de recolección de muestras pueden ser esponjas hidratadas con una solución neutralizante paradesactivar los efectos de los desinfectantes. Neogen recomienda el uso de una esponja de celulosa libre de biocidas. La
solución neutralizante puede ser el caldo neutralizante Dey-Engley (D/E) o el caldo Letheen. Se recomienda desinfectar elárea después de la toma de muestras.
ADVERTENCIA: Si decidiera usar una solución amortiguadora neutralizante que contenga el complejo aril sulfonato
como solución hidratante para la esponja, deberá preparar una dilución 1:2 (1 parte de muestra en 1 parte de caldo deenriquecimiento estéril) de la muestra ambiental enriquecida antes de realizar la prueba para reducir los riesgos asociados
con un resultado falso negativo que provoque la liberación del producto contaminado. Otra opción es transferir 10 µL de lamuestra de la solución amortiguadora neutralizante enriquecida a los tubos de Solución de Lisis Neogen.
El tamaño del área de muestra recomendado para verificar la presencia o ausencia del patógeno en la superficie es deal menos 100 cm2 (10 cm x 10 cm o 4” x 4”). Cuando se toma la muestra con una esponja, cubra toda el área en dos
direcciones (de izquierda a derecha y de arriba a abajo), o tome las muestras ambientales de acuerdo con su protocolo
actual para la toma de muestras o según las directrices de FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) o ISO 18593:2018(7).
Es responsabilidad del usuario validar protocolos de muestreo o proporciones de dilución alternativos para garantizar que
este método de prueba satisface los criterios del usuario.
1. Caliente previamente el medio de enriquecimiento BPW ISO a 41,5 °C ± 1 °C según la matriz analizada. Consulte las
Tablas 2, 3 o 4.
2. Combine el medio de enriquecimiento y la muestra de forma aséptica. Homogenice completamente enhomogeneizador peristáltico o licuadora, o bien mezcle la preparación manualmente durante 2 ± 0,2 minutos. Incube
como se indica en la tabla del protocolo que corresponda. Consulte las Tablas 2, 3 o 4.
Tabla 2. Protocolos generales de enriquecimiento.
VolumenTemperatura deTiempo dedel caldo deenriquecimiento enriquecimiento
enriquecimiento(± 1 °C)(horas)Volumen deanálisis dela muestra(µL)(a)Matriz de muestra

Tamaño dela muestra

Protocolo 1
Productos alimentarios procesados(con excepción de polvos de huevo
y otros productos especificados en
otros protocolos)(b)

25 g

225 mL de
BPW ISO

37

18-26

20

Protocolo 2
Alimentos crudos y no procesados,
polvos de huevo, alimentos paraanimales y muestras ambientales(c)25 g

225 mL de
BPW ISO(precalentada)

41,5

18-26

20

Protocolo 3
Productos lácteos en polvo(incluida la leche maternizada
instantánea y la leche maternizada
a base de soya)

25 g

225 mL de
BPW ISO

37

20-26

20

25 g

225 mL de leche
descremada
en polvo estéril(100 g/L) con
0,002% detintura verde
brillante(d,e,f)

37

24-30

20

25 g

235 mL 2X
BPW ISO con
0,5% K2SO3 +240 mL de leche
descremada
en polvo estéril(100 g/L)(d,g,h)

37

24-30

10

Protocolo 4
Productos a base de cacao (cacao
en polvo, chocolates, productos deconfitería, etc.)

Protocolo 5
Otros incluyen: especias, hierbas
aromáticas, concentrados, tésy cafés instantáneos, spices,aromatic herbs, concentrates,
instant teas and coffees, cubosde caldo

5

ES
Protocolo 6
Nueces o mezclas de frutos secos
con nueces (este protocolo es
apropiado para otros frutos secos
tales como nueces pecanas,almendras, pistachos, castañas decajú y castañas)

25 g

225 mL de leche
descremada
en polvo estéril(100 g/L)(d)37(Español)

18-24

20

(a) Volumen de muestra transferido a los tubos de Solución de Lisis. Consulte el paso 4.7 de la sección Lisis.
(b) Ejemplos de productos que se deben analizar con el Protocolo 1: comidas listas para usar, ensaladas delicatessen, natilla.
(c) Ejemplos de productos que se deben analizar con el Protocolo 2: carnes crudas, vegetales congelados, leche
fermentada, salada cruda (lechuga, Batavia).
(d) La leche descremada UHT puede substituirse por leche descremada en polvo.
(e) 0,45 mL de 1% de solución colorante acuosa verde brillante por 225 mL de leche descremada, lo que dará como
resultado una concentración final de 0,002% (0,02 g/L) de solución colorante verde brillante.
(f) Para preparar leche descremada en polvo estéril, suspenda 100 g de leche descremada en polvo deshidratada en 1 L deagua destilada o purificada. Agitar hasta que se disuelva. Autoclave por 15 minutos a 121 °C. Almacene a 2 °C y 30 °C(8).
(g) 5 g de K2SO3 por 1000 mL BPW ISO, lo que dará como resultado una concentración final de 0,5% K2SO3.
(h) Deberá añadirse 240 mL 100 g/L de leche descremada en polvo estéril a 235 mL 2X BPW ISO esterilizado
con 0,5% K2SO3.
Si se usa un paso de enriquecimiento secundario opcional, por ejemplo Rappaport Vassiliadis Medium, se requiere realizar
una disolución de 1:2 (1 parte de enriquecimiento en 1 pate de caldo de enriquecimiento estéril) o simplemente transferir
10 µL del enriquecimiento secundario a los tubos de Solución Lysis Neogen. Si se utiliza Caldo de Tetrationato (TT),transfiera 20 µL del enriquecimiento secundario a los tubos de Solución Lysis Neogen, y no utilice un agitador eléctrico para
enriquecimiento TT ni utilice una pipeta desde el fondo del tubo de enriquecimiento para evitar transferir algún precipitado.
Instrucciones específicas para métodos validados
AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
AOAC® Performance TestedSM Certificate #091501

En los programas OMASM y PTMSM de AOAC Research Institute, se descubrió que el Ensayo de Detección Molecular 2para Salmonella Neogen era un método efectivo para la detección de Salmonella. Las matrices evaluadas en el estudio semuestran en la Tabla 3.
Tabla 3. Protocolos de enriquecimiento de acuerdo con el certificado #091501 de AOAC OMASM 2016.01 y AOAC PTMSM.
El volumen de muestra transferido a los tubos de Solución de Lisis Neogen es de 20 µL.
Matriz de muestra

Tamaño dela muestra

Volumendel caldo deenriquecimiento

Temperatura deenriquecimiento(± 1 °C)

Tiempo deenriquecimiento(horas)25 g

225 mL de
BPW ISO(precalentada)

325 g

975 mL de
BPW ISO(precalentada)

41,5

10-24

25 g

225 mL de
BPW ISO(precalentada)

41,5

10-24

325 g

975 mL de
BPW ISO(precalentada)

41,5

14-24

325 g

2925 mL de
BPW ISO37

18-24

Carne molida cruda

Carne de ave molida cruda

Carne de ave cocida congelada

6

ES
25 g

225 mL de
BPW ISO

375 g

1500 mL de
BPW ISO

Pimienta negra, camarón
entero crudo, espinaca cruda
empaquetada, queso americano
procesado pasteurizado

25 gEnjuague de carcasa de ave
Esponja de carcasa de ave

Alimento para perros seco

(Español)

37

18-24

225 mL de
BPW ISO

37

18-24

30 mL

30 mL de BPW ISO(precalentada)

41,5

18-24

1 esponja

50 mL de BPW ISO(precalentada)

41,5

18-24

Leche descremada en
polvo instantánea

25 g

225 mL de
BPW ISO37

20-24

Cacao en polvo

25 g

225 mL de
BPW ISO37

24-28

Huevo entero líquido pasteurizado

100 mL

900 mL de
BPW ISO

37

18-24

Agua de irrigación de brotes

375 mL

3375 mL de
BPW ISO

37

18-24

25 g

225 mL de
BPW ISO

37

18-24

375 g

3375 mL de
BPW ISO

10 g

90 BPW-ISO

41.5

28-32

Hormigón sellado

1 esponja

225 mL de
BPW ISO(precalentada)

41,5

18-24

Acero inoxidable

1 hisopo

10 mL de BPW ISO(precalentada)

41,5

18-24

Mosaico de cerámica sellado

1 esponja

50 mL de BPW ISO(precalentada)

41,5

18-24

Mantequilla de maní cremosa

Ambiental

Flor de cannabis seca, planta decannabis seca (4)Matrizde muestra
Camarón
crudo concabezaTamañoVolumenTemperatura dede ladel caldo deenriquecimiento
muestra enriquecimiento(± 1 °C)

25 g

225 mL de
BPW ISO

Tiempo deenriquecimiento(horas)Medio deenriquecimiento
secundario (mL)

Temperaturade enriquecimiento
secundaria(± 1 °C)

Tiempo deenriquecimiento
secundario(horas)

18-24

R-V R10: 0.1 mLen 10 mL(a)

41,5

4-24

37

(a) Transfiera 10 µL de la muestra enriquecida a los tubos de Solución de Lisis. Consulte el paso 4.7 de la sección Lisis.

7

ES(Español)NF VALIDATION por AFNOR Certification

3M 01/16 -11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Para más información acerca del final de la validez, consulte el certificado de NF VALIDATION disponible en el sitio web
mencionado anteriormente.
Método certificado de NF VALIDATION en cumplimiento de la norma ISO 16140-2(7) comparada con la norma ISO 6579(3).
Alcance de la validación: todos los productos de alimentos para humanos, las muestras ambientales de producción(incluidas las muestras de producción primaria) y los productos alimentarios para animales y mascotas mediante ensayos
de validación de alimentos de alto alcance.
Preparación de la muestra: las muestras se deben preparar según las normas EN ISO 6579(3) y EN ISO 6887(10-15).
Versión de Software: consulte el certificado.
Tabla 4. Protocolos de enriquecimiento según el Certificado NF VALIDATION 3M 01/16 -11/16.
Protocolo
Protocolo 1:• Amplio rango de alimentos
procesados (no se incluyen elhuevo en polvo, las frutas y las
verduras procesadas y productos
especificados en otros protocolos)• Todos los pescados ymariscos crudos• Comida para mascota y alimentopara animales• Producción primaria (no fecal)

Tamañode lamuestraVolumenTemperatura deTiempo dedel caldo deenriquecimiento enriquecimiento
enriquecimiento( +1 °C)(horas)Volumen deanálisis dela muestra(µL)(a)

225 mL de BPW
ISO

37

18-26

20

Protocolo 2:• Amplio rango de alimentos noprocesados (no se incluyen el
pescado crudo y los mariscos
25 g ocrudos, y los productos
1 toallita oespecificados en otros protocolos)
1 hisopo• Huevo en polvo• Todas las frutas y vegetales• Muestras ambientales de la
producción de alimentos

225 mL de
BPW ISO
precalentado

41,5

18-26

20

Protocolo 3:• Productos lácteos en polvo

25 g

225 mL de BPW
ISO

37

20-26

20

25 g

225 mL de leche
descremada
UHT + 0,002 %verde brillante

37

24-30

20

25 g

235 mL 2 x BPW
ISO + K2SO3
0,5 % + 240
mL de leche
descremada
UHT

37

24-30

10

Protocolo 4:• Productos a base de cacao que
contengan más del 20% de cacao
Protocolo 5:• Especias, hierbas aromáticas,
concentrados, tés, cafés,
preparaciones culinarias

25 g

8

ES
Protocolo 6:• Carne cruda
Protocolo 7:• Producción primaria (fecal)

Protocolo 8:• Leche maternizada, cereales para
bebés, productos lácteos en polvo
sin probióticos(b)Protocolo 9:• Leche maternizada, cereales para
bebés, productos lácteos en polvo
con probióticos(b)25 g

225 mL de
BPW ISO
precalentado

1hisopado
de botas

100 mL en caldode Tetrationato

25 g

225 mL de caldode Tetrationato

375 g

375 g

(Español)

41,5

10-24

20

37

22-24

20

3375 mL de
BPW ISO
precalentado

37

20-26

20

3375 mL de
BPW ISO
precalentado+ vancomicina(10 mg/L)

37

20-26

20

(a) Volumen de muestra transferido a los tubos de Solución de Lisis. Consulte el paso 4.7 de la sección Lisis.
(b) Para muestras grandes de productos en polvo y cereales, agregue la muestra al líquido y mezcle con frecuencia paraevitar grumos.
NOTAS:• Las muestras de más de 25 g no han sido sometidas a prueba, excepto en los protocolos 8 y 9 en el estudio de
NF VALIDATION.
• Estos protocolos de enriquecimiento breve son sensibles a las condiciones de incubación. Se requiere cumplir conlas condiciones de temperatura que se indican en las especificaciones técnicas. El usuario deberá verificar que elprecalentamiento del caldo de enriquecimiento alcance la temperatura requerida antes de la incubación. El tiempo depreparación de las muestras, la demora entre el final del paso de precalentamiento del caldo de enriquecimiento y elcomienzo del paso de incubación de la muestra de alimento, no debe superar los 45 minutos. Se recomienda utilizar
una incubadora ventilada durante la incubación.
• Para la transferencia de los caldos de enriquecimiento de Tetrationato (TT) a los tubos de Solución Lysis Neogen,no utilice un agitador eléctrico ni utilice una pipeta desde el fondo del tubo de enriquecimiento para evitartransferir algún precipitado. La transferencia de algún precipitado puede resultar en la obtención de resultados
inválidos.
• Los puntos de interrupción del protocolo recomendados corresponden a después del enriquecimiento o después dela lisis de las muestras. El caldo de enriquecimiento o el lisado de muestra se puede almacenar a 2 °C y 8 °C por hasta
72 horas. Después de extraer el caldo de enriquecimiento del almacenamiento, retome la prueba desde el Paso 1 enla sección Lisis. Después de extraer el lisado de muestra del almacenamiento, retome la prueba desde el Paso 8 en lasección Lisis.
Preparación de la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
1. Humedezca un paño o una toalla desechable con una solución de cloro de uso doméstico del 1% al 5% (v:v en agua)
y limpie la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen®.
2. Enjuague la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen con agua.
3. Utilice una toalla desechable para secar la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen.
4. Antes de utilizarla, asegúrese de que la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen
esté seca.
Preparación del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
Coloque el Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen® directamente sobre la mesa del laboratorio.
Use el bloque a temperatura ambiente del laboratorio (entre 20 °C y 25 °C).
Preparación del Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen®
Coloque el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen® en una unidad o plancha de calentamientoseca. Encienda la unidad de calentamiento de bloques seca y ajuste la temperatura para permitir que el Bloque de Calorpara el Sistema de Detección Molecular Neogen alcance y mantenga una temperatura de 100 °C ± 1 °C.
NOTA: Según la unidad de calentamiento, espere aproximadamente 30 minutos para que el Bloque de Calor para el
Sistema de Detección Molecular Neogen alcance la temperatura deseada. Con un termómetro calibrado apropiado(p. ej., un termómetro de inmersión parcial o un termómetro digital termopar, no un termómetro de inmersión total)
colocado en la ubicación designada, verifique que el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen se
encuentre a 100 °C ± 1 °C.

9ES(Español)Preparación del Equipo de Detección Molecular Neogen®
1. Inicie el software de Detección Molecular Neogen® e inicie sesión. Contacte a su representante de Neogen Food
Safety para verificar que tiene la última versión del software.
2. Encienda el Equipo de Detección Molecular Neogen.
3. Cree o edite una corrida con datos para cada muestra. Para obtener detalles, consulte el Manual del Usuario delSistema de Detección Molecular Neogen.
NOTA: El Equipo de Detección Molecular Neogen debe alcanzar el estado de Listo antes de insertar la Bandeja de Carga
Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen con los tubos de reacción. Este paso de calentamiento lleva
unos 20 minutos y aparece indicado por una luz NARANJA en la barra de estado del equipo. Una vez que el equipo estélisto para iniciar una corrida, la barra de estado se cambiará a color VERDE.
Lisis
Retire la parte inferior de la Gradilla para Solución de Lisis de Neogen con un destornillador o una espátula antes decolocarla en el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen.

1. Permita que los tubos de Solución de Lisis Neogen se calienten colocando la gradilla a temperatura ambiente(20 °C y 25 °C) durante la noche (16 y 18 horas). Las alternativas para que los tubos de Solución de Lisis Neogen
alcancen temperatura ambiente son colocar los tubos de Solución de Lisis Neogen sobre la mesa de laboratorio
durante por lo menos 2 horas, incubar los tubos de Solución de Lisis Neogen en una incubadora a 37 °C ± 1 °C durante
1 hora o colocarlos en una unidad de calentamiento de dos bloques seca durante 30 segundos a 100 °C ± 1 °C.
2. Invierta los tubos tapados para mezclarlos. Proceda con el paso siguiente dentro de 4 horas.
3. Retire el caldo de enriquecimiento de la incubadora.
4. Se requiere un tubo de Solución de Lisis Neogen para cada muestra y la muestra NC (medio de enriquecimiento estéril).
4.1 Las tiras de tubos de Solución de Lisis Neogen pueden cortarse para obtener la cantidad deseada de tubos de la
Solución de Lisis Neogen. Seleccione la cantidad de tubos de Solución de Lisis Neogen individuales o tiras de 8
tubos necesarias. Coloque los tubos de Solución de Lisis Neogen en una gradilla vacía.
4.2 Para evitar la contaminación cruzada, destape una tira de tubo de Solución de Lisis Neogen por vez y use una
nueva punta de pipeta para cada paso de transferencia.
4.3 Transfiera la muestra enriquecida a los tubos de Solución de Lisis Neogen como se describe a continuación:
Transfiera cada muestra enriquecida a un tubo de Solución de Lisis Neogen individual primero. Transfiera el NC
al final.
4.4 Utilice la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado del Sistema de Detección Molecular – Lisis Neogen®
para destapar una tira de tubos de Solución de Lisis Neogen, una tira por vez.
4.5 Deseche la tapa del tubo de Solución de Lisis Neogen; si se conservara el lisado para una repetición de prueba,
coloque las tapas en un envase limpio para su reaplicación luego de la lisis.
4.5.1 Para ver cómo procesar el lisato conservado, consulte el Apéndice A.
4.6 Cuando trabaje con muestras viscosas, agite la bolsa de enriquecimiento antes de recolectar la muestra dellado filtrado.

10

ES

(Español)4.7 Transfiera los 20 µL de muestra a un tubo de Solución de Lisis Neogen a menos que se indique lo contrario enla tabla de protocolos (por ejemplo, el protocolo 5 y el enriquecimiento secundario en RVS o cuando se utilizan
muestras ambientales con una solución amortiguadora).
20 µl

5. Repita los pasos 4.4 al 4.7 hasta que cada muestra individual se haya agregado al correspondiente tubo de Solución deLisis Neogen de la tira.
6. Cuando se hayan transferido todas las muestras, transfiera 20 µL del NC (medio de enriquecimiento estéril,por ejemplo, BPW) a un tubo de Solución de Lisis Neogen. No use agua como un NC.
7. Verifique que la temperatura del Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen sea de
100 °C ± 1 °C.
8. Coloque la gradilla descubierta de tubos de Solución de Lisis Neogen en el Bloque de Calor para el Sistema de
Detección Molecular Neogen y caliente durante 15 ± 1 minutos. Durante el calentamiento, la Solución de Lisis Neogen
cambiará de rosado (frío) a amarillo (caliente).
8.1. Las muestras que no se hayan tratado debidamente con calor durante el paso de lisis del ensayo pueden
considerarse un posible riesgo biológico y NO deben introducirse en el Equipo de Detección Molecular Neogen.
9. Retire la gradilla descubierta de tubos de Solución de Lisis Neogen del bloque de calentamiento y deje que se enfríe
en la Inserción del Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen al menos durante 5 minutos y
por un máximo de 10 minutos. Cuando se usa el Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen atemperatura ambiente, debe colocarse directamente sobre la mesa del laboratorio. Cuando esté fría, la solución delisis volverá a tomar un color rosado.
10. Retire la gradilla de tubos de Solución de Lisis Neogen de la Inserción del Bloque de Frío para el Sistema de Detección
Molecular Neogen.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplificación
1. Se necesita un Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 de para Salmonella Neogen por cada muestra
y el NC.
1.1 Las tiras de tubos pueden cortarse para obtener la cantidad de tubos deseada. Seleccione la cantidad de Tubos deReactivos del Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen o tiras de 8 tubos según sea necesario.
1.2 Coloque los tubos de reactivo en una gradilla vacía.
1.3 Evite mover las perlas de reactivo en el fondo de los tubos.
2. Seleccione un tubo de Control de Reactivos y colóquelo en la gradilla.
3. Para evitar la contaminación cruzada, destape una tira de tubo de reactivo por vez y use una nueva punta de pipeta
para cada paso de transferencia.
4. Transfiera cada uno de los lisados a un Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella
Neogen y a un Tubo de Control de Reactivos Neogen como se describe a continuación:
Transfiera el lisado de cada muestra a los tubos de reactivo primero y luego al NC. Hidrate el Tubo de Control deReactivos Neogen al final.

11

ES

(Español)5. Use la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado del Sistema de Detección Molecular – Reactivo Neogen®
para destapar el Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen, una tira a la vez.
Deseche la tapa.
5.1 Transfiera 20 µL del lisado de muestra de la ½ superior del líquido (evite el precipitado) en el tubo de Soluciónde Lisis Neogen que corresponde al Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella
Neogen. Aplique en un ángulo que permita evitar que se muevan los gránulos. Mezcle pipeteando suavemente
hacia arriba y hacia abajo 5 veces.
5.2 Repita el paso 5.1 hasta que se haya añadido una muestra individual del lisado a un Tubo de Reactivos del Ensayo
de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen en la tira.
5.3 Cubra los Tubos de Reactivos del Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen con las tapas
adicionales provistas y utilice el lado redondeado de la Herramienta para Encapuchado/Desencapuchado delSistema de Detección Molecular – Reactivo Neogen para aplicar presión con un movimiento hacia adelante yhacia atrás para asegurarse de que la tapa quede bien ajustada.
5.4 Repita los pasos 5.1 a 5.3 según sea necesario para la cantidad de muestras que se deben analizar.
5.5 Cuando se hayan transferido todos los lisados de la muestra, repita los pasos 5.1 a 5.3 para transferir 20 µL delisado NC a un Tubo de Reactivo del Ensayo Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen.
5.6 Transfiera 20 µL del lisado NC a un tubo de Control de Reactivos Neogen. Aplique en un ángulo que permita
evitar que se muevan los gránulos. Mezcle pipeteando suavemente hacia arriba y hacia abajo 5 veces.
6. Cargue los tubos tapados en una Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen limpia
y descontaminada. Cierre y trabe la tapa de la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular
Neogen.

20 µL

7. Revise y confirme la corrida configurada en el Software de Detección Molecular Neogen.
8. Haga clic en el botón de inicio del software y seleccione el equipo que usará. La tapa del equipo seleccionado se
abrirá automáticamente.
9. Coloque la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogen en el Equipo de Detección
Molecular Neogen y cierre la tapa para comenzar con el ensayo. Obtendrá los resultados al cabo de 60 minutos,
aunque los positivos pueden detectarse antes.
10. Una vez terminado el ensayo, retire la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular Neogendel Equipo de Detección Molecular Neogen y deseche los tubos sumergiéndolos en una solución de cloro de uso
doméstico del 1% al 5% (v:v en agua) durante 1 hora y lejos del área en que se prepara el ensayo.
ATENCIÓN: Para minimizar el riesgo de falsos positivos a causa de contaminación cruzada, nunca abra tubos dereactivo que contengan ADN amplificado. Esto incluye un Tubo de Reactivo del Ensayo de Detección Molecular 2 para
Salmonella Neogen, el Control de Reactivos Neogen y los Tubos de Control de Matriz Neogen. Siempre deseche lostubos de reactivo sellados sumergiéndolos en una solución de lejía de uso doméstico al 1% a 5% (v:v en agua) durante 1
hora y lejos del área en que se prepara el análisis.

12

ES

(Español)Resultados e interpretación
Un algoritmo interpreta la curva de producción de luz que se obtiene de la detección de ácido nucleico amplificado.
El software analiza automáticamente los resultados y los expresa en color según el resultado. Los resultados Positivo o
Negativo se determinan mediante el análisis de una cantidad de parámetros característicos de la curva. Los resultados
presuntivos positivos se informan en tiempo real, mientras que los resultados Negativo e Inspeccionar se muestran una vez
terminado el análisis.
Las muestras con resultados presuntivos positivos deben ser confirmadas de acuerdo con los procedimientos operativos
estándar del laboratorio o mediante la confirmación del método de referencia apropiado(1,2,3), comenzando con latransferencia del caldo de enriquecimiento primario Neogen BPW ISO al secundario, seguido del subsiguiente sembrado
en placa y la confirmación de aislados, utilizando métodos bioquímicos y serológicos apropiados.
NOTA: Incluso una muestra negativa no arrojará una lectura de cero, ya que los reactivos de amplificación del Ensayo
Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen contienen un nivel basal de unidades relativas de luz.
En el raro caso de que haya una interrupción inusual del suministro eléctrico, el algoritmo lo señalará como “Inspeccionar”.
Neogen recomienda al usuario repetir el ensayo para aquellas muestras etiquetadas como Inspeccionar. Si el resultado
sigue siendo Inspeccionar, continúe con la prueba de confirmación usando su método preferido o según se especifique enlas reglamentaciones locales.
Tipo dePocilloSímbolo del resultadodel pocillo

Resultado

Interpretación

MuestraPositivo

Se presume que la muestra dio positivo para elpatógeno estudiado.

MuestraNegativo

Se presume que la muestra dio negativo para elpatógeno estudiado.

Inhibido

La matriz de muestra fue inhibitoria al ensay. Puede quese requiera un nuevo estudio. Consulte la sección desolución de problemas y las Instrucciones del Productodel kit de ensayos para obtener más información.

Inspeccionar

Es indeterminada la presencia o ausencia del patógeno
estudiado. Puede que se requiera un nuevo estudio.
Consulte la sección de solución de problemas y las
Instrucciones del Producto del kit de ensayos paraobtener más información.

Error

No se detectó bioluminiscencia. Puede que se requiera
un nuevo estudio. Consulte la sección de solución deproblemas y las Instrucciones del Producto del kit deensayos para obtener más información.

MuestraMuestraMuestra13

ES(Español)Confirmación de los resultados según el Método Certificado de NF VALIDATION
En el contexto de NF VALIDATION, todas las muestras identificadas como positivas por el Ensayo de Detección Molecular 2para Salmonella Neogen deben ser confirmadas mediante una de las siguientes pruebas:
Opción 1: uso de la norma ISO 6579(3) a partir del enriquecimiento de agua peptonada tamponada(3).
Opción 2: mediante la implementación de un método de confirmación compuesto por lo siguiente: Transfiera 0,1 mLdel enriquecimiento BPW ISO(3) o los caldos de enriquecimiento de Tetatrionato (muestras de producción primaria) en
10 mL de caldo RVS. Incubar por 24 ± 3 horas a 41,5 °C. Realice un rayado en agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD)(3)o en un agar cromogénico específico para Salmonella. Realice una aglutinación de látex con usando la prueba de látex
Oxoid Salmonella directamente en las colonias aisladas.
Opción 3: mediante el uso de sondas de ácido nucleico tal como se describen en la norma EN ISO 7218(5), realizado sobrecolonias aisladas de XLD o agar cromogénico (consulte las Opciones 1 o 2). Esta prueba no debe realizarse mediante el uso
de Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen.
Opción 4: mediante el uso de cualquier otro método certificado NF VALIDATION, cuyo principio debe ser diferente al
Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella Neogen. Se debe utilizar el protocolo completo descrito para este
segundo método validado. Todos los pasos previos al comienzo de la confirmación deben ser comunes para ambos
métodos.
En caso de resultados discordantes (presuntamente positivos con el Ensayo de Detección Molecular 2 para Salmonella
Neogen no confirmados por alguno de los medios descritos anteriormente y, en particular, la prueba de aglutinación delátex), el laboratorio debe seguir los pasos necesarios para garantizar la validez de los resultados obtenidos.
Si tiene preguntas acerca de los procedimientos o las aplicaciones específicas, visite nuestro sitio web en
www.neogen.com o comuníquese con su representante o distribuidor local de Neogen.

Apéndice A. Interrupción por protocolo: Almacenamiento y repetición de pruebas de lisados
tratados con calor
1. Para almacenar un lisado tratado con calor, vuelva a tapar el tubo de lisis con una tapa limpia (consulte Lisis,
sección 4.5).
2. Almacene entre 4 °C y 8 °C por hasta 72 horas.
3. Prepare una muestra almacenada para amplificación invirtiéndola 2 a 3 veces para mezclar.
4. Destape los tubos.
5. Coloque los tubos de lisado mezclados en el Bloque de Calor para el Sistema de Detección Molecular Neogen ycaliéntelos a 100 °C ± 1 °C durante 5 ± 1 minutos.
6. Retire la gradilla de tubos Solución de Lisis Neogen del bloque de calentamiento y deje que se enfríe en la Insercióndel Bloque de Frío para el Sistema de Detección Molecular Neogen al menos durante 5 minutos y por un máximo de
10 minutos.
7. Siga el protocolo en la sección Amplificación que se detalla arriba.

14

ES

(Español)Referencias:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identificationof Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Effective Date: 2 January 2019.
3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotypingof Salmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance for microbiologicalexamination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System. Póngase en contacto con su representante de Neogen Food Safety para obtener una
copa de este documento.
7. ISO 18593. Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.
8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk
(Reconstituted). January 2011.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods against a reference method.
10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions.
11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.
12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary
production stage.

Explicación de los símbolos
info.neogen.com/symbols

15

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A

PT (Português)Data de emissão: 2024-01

Instruções do produto
Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2®

Descrição e uso recomendado do produto

O Neogen® Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 é usado com o Neogen® Sistema de Detecção Molecularpara a detecção rápida e específica de Salmonella em alimentos enriquecidos e amostras ambientais de processos derações e alimentos.
Os Neogen® Ensaios para Detecção Molecular utilizam amplificação isotérmica mediada por alça para amplificar
rapidamente sequências de ácidos nucleicos com alta especificidade e sensibilidade, combinadas com bioluminescência
para detectar a amplificação. Os resultados positivos presuntivos são relatados em tempo real, enquanto os resultados
negativos são exibidos após a conclusão do ensaio. Os aparentes resultados positivos devem ser confirmados por meio do
seu método preferido ou conforme especificado pelos regulamentos locais(1, 2, 3).
O Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 destina-se ao uso em ambiente laboratorial por profissionais
treinados em técnicas laboratoriais. A Neogen não documentou o uso deste produto em outros setores que não o dealimentos e bebidas. Por exemplo, a Neogen não documentou este produto para testar amostras farmacêuticas, decosméticos, clínicas ou veterinárias. O Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 não foi avaliado com todos
os possíveis produtos, processos alimentícios e protocolos de teste nem com todas as linhagens de bactérias possíveis.
Como acontece em todos os métodos de teste, a fonte, a formulação e a qualidade do meio de enriquecimento podem
influenciar os resultados. Fatores como métodos de amostragem, protocolos de teste, preparação de amostras, manuseio
e técnica de laboratório também podem influenciar os resultados. A Neogen recomenda a avaliação do método, incluindoo meio de enriquecimento no ambiente do usuário, usando um número suficiente de amostras com alimentos específicos e
desafios microbianos para garantir que o método atenda aos critérios do usuário.
A Neogen avaliou o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 com Água Peptonada Tamponada (BPW) ISO.
O Neogen® Equipamento de Detecção Molecular destina-se ao uso com amostras que passaram por tratamento térmico
durante a etapa de lise do ensaio, projetado para destruir organismos presentes na amostra. Amostras que não foram
tratadas com aquecimento de forma adequada durante a etapa de lise do ensaio podem ser consideradas um risco
biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no Neogen Equipamento de Detecção Molecular.
A Neogen Food Safety é certificada pela Organização Internacional de Normalização (ISO) 9001 para projeto e fabricação.
O kit de testes do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 contém 96 testes, descritos na Tabela 1.
Tabela 1. Componentes do kit Neogen Ensaio para Detecção Molecular
Item

Identificação

Quantidade

Conteúdo

Comentários

Neogen Solução de Lise(LS)

Solução rosa em
tubos transparentes

96(12 tiras de 8 tubos)

580 µL de LS
por tubo

Armazenada na racke pronta para uso

Tubos reagentes para
Neogen® Ensaio para
Detecção Molecular deSalmonella 2

Tubos verdes

96(12 tiras de 8 tubos)

Mistura de detecção
e amplificação
específica liofilizada

Pronto para uso

Tampas adicionais

Tampas verdes

96(12 tiras de 8 tampas)

Tubos
transparentes com
tampa articulada

16(2 sacos de
8 tubos individuais)®

Neogen® Controle deReagentes (RC)

Pronto para uso
Mistura liofilizada
de DNA de controle,para amplificação
e detecção

Pronto para uso

O Controle Negativo (NC), não fornecido no kit, é um meio de enriquecimento estéril, por exemplo, BPW ISO. Não useágua como um NC.

1

PT (Português)Segurança
O usuário deve ler, compreender e seguir todas as informações de segurança presentes nas instruções do Neogen Sistema
de Detecção Molecular e do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2. Guarde as instruções sobre
segurança para consulta posterior.
ADVERTENCIA: indica uma situação de perigo que, se não evitada, pode resultar em morte ou lesões graves e/ou
danos materiais.
AVISO: indica uma situação potencialmente perigosa que, se não evitada, pode resultar em danos materiais.

ADVERTÊNCIA
Não use o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 no diagnóstico de problemas de saúde em
humanos ou animais.
O usuário deve treinar sua equipe com técnicas de testes atuais apropriadas: por exemplo, Boas Práticas deLaboratório, ISO/IEC 17025(4) ou ISO 7218(5).
Para reduzir os riscos associados a um resultado falso-negativo que leve à liberação do produto contaminado:• Siga o protocolo e realize os testes exatamente conforme especificado nas instruções do produto.
• Armazene o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 conforme indicado na embalagem e nas
instruções do produto.
• Sempre use o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 antes do vencimento.
• Use o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 com alimentos e amostras ambientais de processos derações e alimentos que tenham sido aprovados internamente ou por um terceiro.
• Utilize o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 somente com superfícies, desinfetantes, protocolose linhagens de bactérias que tenham sido aprovados internamente ou por um terceiro.
• Para uma amostra ambiental que contém um tampão neutralizador com complexo de sulfonato de arila, faça uma
diluição de 1:2 antes de testar (1 parte da amostra em 1 parte do caldo de enriquecimento estéril). Outra opção étransferir 10 µL do enriquecimento do tampão neutralizante para os tubos de Neogen Solução de Lise. Produtos
Neogen® Manipulação de Amostras que incluem tampão neutralizador com complexo de sulfonato de arila:
RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G e HS2410NB2G.
Para reduzir os riscos de exposição a produtos químicos e agentes biológicos nocivos:• Execute testes de agentes patogênicos em um laboratório adequadamente equipado, sob o controle de pessoal
bem treinado. O meio de enriquecimento incubado e equipamentos ou superfícies que tenham entrado em contato
com o meio de enriquecimento incubado podem conter patógenos em níveis suficientes para apresentar riscos à
saúde humana.
• Sempre adote as práticas de segurança padrão em laboratórios, como usar trajes de proteção adequados e óculos deproteção ao manipular reagentes e amostras contaminadas.
• Evite o contato com o conteúdo do meio de enriquecimento e dos tubos de reagentes após a amplificação.
• Descarte amostras enriquecidas de acordo com as normas vigentes do setor.
• Amostras que não foram tratadas com aquecimento de forma adequada durante a etapa de lise do ensaio podem
ser consideradas um risco biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no Neogen Equipamento de Detecção
Molecular.
Para reduzir os riscos de contaminação cruzada ao preparar o ensaio:• Sempre use luvas (para proteger o usuário e evitar a introdução de nucleases).
Para reduzir os riscos associados à contaminação ambiental:• Siga as normas vigentes do setor referentes ao descarte de resíduos contaminados.
Para reduzir os riscos associados à exposição a líquidos quentes:• Não exceda a temperatura recomendada ao ajustar o aquecedor.
• Não exceda o tempo de aquecimento recomendado.
• Utilize um termômetro calibrado adequado para verificar a temperatura de inserção do Neogen® Bloco de Aquecimentopara Detecção Molecular (por exemplo, um termômetro de imersão parcial ou termômetro termopar digital, e não umtermômetro de imersão total). O termômetro deve ser colocado no local indicado do Neogen Bloco de Aquecimentopara Detecção Molecular.

2PT (Português)AVISO
Para reduzir os riscos de contaminação cruzada ao preparar o ensaio:• Troque de luvas antes da hidratação do pellet dos reagentes.
• Recomenda-se o uso de ponteiras de pipeta estéreis, com barreira aerossol (filtros) e grau de biologia molecular.
• Utilize uma nova ponteira de pipeta para cada transferência de amostra.
• Utilize Boas Práticas Laboratoriais para transferir a amostra do meio de enriquecimento para o tubo de lise. Para evitar acontaminação da pipeta, o usuário pode decidir adicionar uma etapa de transferência intermediária. Por exemplo,
o usuário pode transferir cada amostra enriquecida para um tubo estéril.
• Utilize uma estação de trabalho de biologia molecular contendo lâmpada germicida sempre que possível.
Periodicamente, descontamine as bancadas e os equipamentos do laboratório (pipetas, ferramentas de tampar/
destampar etc.) com uma solução de 1–5% (v:v em água) de água sanitária ou solução de remoção de DNA.
Para reduzir os riscos de um resultado falso-positivo:• Nunca abra os tubos após a amplificação.
• Sempre descarte os tubos contaminados mergulhando-os em uma solução de água sanitária de 1–5% (v:v em água)por 1 hora, longe da área de preparação de ensaio.
• Nunca submeta os tubos de reagentes a autoclave após a amplificação.
Consulte a Ficha de Dados de Segurança para obter informações adicionais e informações sobre os regulamentos locais
para descarte.
Em caso de dúvidas sobre aplicações ou procedimentos específicos, acesse nosso site www.neogen.com ou entre em
contato com o seu representante ou distribuidor local Neogen.

Responsabilidade do usuário

Os usuários são responsáveis por se familiarizar com as informações e instruções do produto. Visite nosso sitewww.neogen.com ou entre em contato com o representante ou distribuidor Neogen local para obter mais informações.
Ao selecionar um método de teste, é importante considerar que fatores externos, como métodos de amostragem,
protocolos de teste, preparo de amostras, manipulação, a técnica de laboratório utilizada e a própria amostra, podem
influenciar nos resultados.
É de responsabilidade do usuário, ao selecionar qualquer método de teste ou produto, avaliar um número suficiente deamostras com as matrizes e testes microbiológicos que permitam assegurar que o método escolhido atenda aos critérios
por ele estabelecidos.
Também é de responsabilidade do usuário determinar se o método de teste e os resultados atendem às exigências de seusclientes e fornecedores.
Como em qualquer outro método de teste, os resultados obtidos com qualquer produto da Neogen Food Safety não
constituem garantia de qualidade das matrizes ou processos com eles testados.
Para ajudar os clientes a avaliar o método para diversas matrizes de alimentos, a Neogen desenvolveu o kit Neogen®
Controle de Matriz para Detecção Molecular. Quando necessário, utilize o Controle de Matriz (MC) para determinar se amatriz pode influenciar os resultados do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2. Teste diversas amostras
representativas da matriz, isto é, amostras obtidas a partir de diferentes origens, durante qualquer período de validação
quando adotar o método da Neogen, ou quando testar matrizes novas ou desconhecidas ou matrizes que tiverem passado
por mudanças de processo ou matéria-prima.
Uma matriz pode ser definida como um tipo de produto com propriedades intrínsecas, tais como composição e processo.
As diferenças entre matrizes podem ser tão simples quanto os efeitos causados pelas diferenças em seu processamento ou
apresentação; por exemplo, cru vs. pasteurizado, fresco vs. desidratado, etc.

Limitação de garantias/recurso limitado

SALVO CONFORME DECLARADO EXPRESSAMENTE EM UMA SEÇÃO DE GARANTIA DE EMPACOTAMENTO DE
PRODUTO INDIVIDUAL, A NEOGEN REJEITA TODAS AS GARANTIAS EXPRESSAS E IMPLÍCITAS, INCLUINDO, ENTRE
OUTRAS, QUAISQUER GARANTIAS DE COMERCIALIZAÇÃO OU ADEQUAÇÃO PARA UM DETERMINADO USO. Se ficar
provado que qualquer produto da Neogen Food Safety se encontra defeituoso, a Neogen ou seu distribuidor autorizado
procederá à respectiva substituição ou, se assim o decidir, restituirá o dinheiro da compra do produto. Estes são os seusúnicos termos de recurso. A Neogen deverá ser prontamente notificada em até sessenta dias após a descoberta dequalquer defeito suspeito no produto, o qual deverá ser devolvido à Neogen. Entre em contato com o representante da
Neogen ou distribuidor autorizado da Neogen para quaisquer dúvidas adicionais.

Limitações de responsabilidade da Neogen

A NEOGEN NÃO SE RESPONSABILIZARÁ POR QUAISQUER DANOS, SEJAM DIRETOS, INDIRETOS, ESPECIAIS,ACIDENTAIS OU SUBSEQUENTES, INCLUINDO, ENTRE OUTROS, PERDA DE LUCROS. Em nenhuma circunstância nem
ao abrigo seja de qualquer teoria jurídica, a responsabilidade da Neogen deverá exceder o preço de compra dos produtos
supostamente defeituosos.

3

PT (Português)Armazenamento e descarte

Armazene o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 a 2–8 °C. Não congele. Mantenha o kit fora doalcance da luz durante o armazenamento. Após abrir o kit, verifique se a embalagem protetora de alumínio não estádanificada. Se a embalagem estiver danificada, não utilize. Após a abertura, os tubos de reagentes não utilizados devem
sempre ser armazenados na embalagem resselável, juntamente com o dessecante para manter a estabilidade dos
reagentes liofilizados. Armazene as embalagens resseladas a 2–8 °C por, no máximo, 60 dias.
Não utilize o Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 após o vencimento. A data de validade e o número
do lote estão anotados no rótulo externo da caixa. Após o uso, o meio de enriquecimento e os tubos do Neogen Ensaio
para Detecção Molecular de Salmonella 2 podem conter materiais patogênicos. Quando o teste for concluído, siga os
regulamentos-padrão da indústria vigentes para descarte de resíduos contaminados. Consulte a Ficha de Dados deSegurança para obter informações adicionais e informações sobre os regulamentos locais para descarte.

Instruções de uso

Siga todas as instruções com atenção. Caso contrário, pode haver resultados imprecisos.
Periodicamente, descontamine as bancadas e os equipamentos do laboratório (pipetas, ferramentas de tampar/destamparetc.) com uma solução de 1–5% (v:v em água) de água sanitária ou solução de remoção de DNA.
O usuário deve concluir o treinamento de qualificação do operador (OQ) do Sistema de Detecção Molecular Neogen,conforme descrito no documento “Protocolos e Instruções de Qualificação de Instalação (IQ)/Qualificação Operacional(OQ) para o Neogen Sistema de Detecção Molecular”(6).
Consulte a seção “Instruções Específicas para Métodos Comprovados” para obter os requisitos específicos:
Tabela 3 para protocolos de enriquecimento de acordo com o Certificado Nº 091501 de AOAC® Official Method ofAnalysisSM 2016.01 e AOAC® Performance TestedSM.
Tabela 4 para protocolos de enriquecimento conforme o certificado NF VALIDATION 3M 01/16 -11/16.
Enriquecimento de amostra
As Tabelas 2, 3 e 4 oferecem diretrizes sobre protocolos gerais de enriquecimento para alimentos, ração eamostras ambientais.
É responsabilidade do usuário validar os protocolos de amostragem alternativos ou diluições alternativas para garantir que
este método de teste atenda aos critérios do usuário.
Alimentos
1. Deixe que o meio de enriquecimento BPW ISO equilibre a temperatura ambiente do laboratório ou 41,5 ± 1 °C
dependendo das matrizes testadas. Consulte as Tabelas 2, 3 ou 4.
2. Combine, de forma asséptica, o meio de enriquecimento e a amostra.
3. Homogenize totalmente por mistura, esmagamento ou mistura manual por 2 ± 0,2 minutos ou até que todos os grumos
estejam completamente dissolvidos e a suspensão de enriquecimento esteja homogênea(10-15).
a.

Para carnes e amostras altamente particuladas, recomenda-se o uso de sacos de amostra com filtro.

b. Para matrizes que incham na água ou que são muito viscosas (por exemplo, cereais e amidos), recomenda-sefazer mais diluições (> 1:10) até viscosidade diminuir consideravelmente ou adicionar 1% alfa-amilase estéril (w/v)
à BPW (ISO)(10–13).
c.

Para amostras grandes de leite em pó e cereais, adicione aos poucos a amostra ao líquido enquanto os misturapara não empelotar.

4. Realize a incubação conforme a descrição na tabela do protocolo padrão (consulte 2, 3 ou 4).
Amostras ambientais
Os dispositivos de coleta de amostra podem ser uma esponja hidratada com uma solução neutralizante para desativar
os efeitos dos desinfetantes. A Neogen recomenda o uso de uma esponja de celulose livre de biocidas. A solução
neutralizante pode ser caldo neutralizante Dey-Engley (D/E) ou Caldo Letheen. Recomenda-se desinfetar a área após aamostragem.
ADVERTÊNCIA: caso escolha utilizar tampão neutralizador que contém complexos de sulfonato de arila como a solução
hidratante para a esponja, será necessário que você execute uma diluição de 1:2 (1 parte da amostra em 1 parte do caldode enriquecimento estéril) da amostra ambiental enriquecida antes de testar, para reduzir os riscos de um resultado
falso-negativo que levaria à liberação de produtos contaminados. Outra opção é transferir 10 µL do enriquecimento dotampão neutralizante para os tubos de Neogen Solução de Lise.
O tamanho recomendado da área de amostragem para confirmar a presença ou ausência do patógeno na superfícieé de, no mínimo, 100 cm2 (10 cm x 10 cm ou 4” x 4”). Caso a amostragem seja realizada com uma esponja, toda aárea deve ser coberta em duas direções (esquerda e direita, depois para cima e para baixo) ou as amostras ambientais
devem ser coletadas em conformidade com o protocolo de amostragem vigente ou de acordo com as diretrizes BAM(1),USDA FSIS MLG(2) ou ISO 18593:2018(7) da FDA.

4

PT (Português)É responsabilidade do usuário validar os protocolos de amostragem alternativos ou diluições alternativas para garantir que
este método de teste atenda aos critérios do usuário.
1. Preaqueça o meio de enriquecimento BPW ISO a 41,5 ± 1 °C dependendo das matrizes testadas. Consulte as
Tabelas 2, 3 ou 4.
2. Combine, de forma asséptica, o meio de enriquecimento e a amostra. Homogenize totalmente por mistura,esmagamento ou mistura manual por 2 ± 0,2 minutos. Realize a incubação conforme a descrição na tabela do
protocolo padrão. Consulte as Tabelas 2, 3 ou 4.
Tabela 2. Protocolos gerais de enriquecimento.
Matriz de Amostra

Tamanhoda
AmostraVolume do
Caldo deEnriquecimento

Protocolo 1
Produtos alimentícios processados(com exceção de ovos em pó
e produtos especificados nos
outros protocolos)(b)

25 g

225 mLde BPW ISO

37

18–26

20

Protocolo 2
Alimentos crus e nãoprocessados, ovos em pó, ração eamostras ambientais(c)25 g

225 mLde BPW ISO(preaquecido)

41,5

18–26

20

Protocolo 3
Laticínios em pó (incluindo fórmulainfantil e fórmula infantil à base de soja)

25 g

225 mLde BPW ISO

37

20–26

20

25 g

225 mL de
100 g/L deleite em pó
desnatado estéril
com 0,002% decorante verde
brilhante(d,e,f)

37

24–30

20

25 g

235 mL 2X BPW
ISO com 0,5%
K2SO3 + 240 mLde 100 g/L
de leite em
pó desnatado
estéril(d,g,h)

37

24–30

10

25 g

225 mL de
100 g/L de leite
em pó desnatado
estéril(d)

37

18–24

20

Protocolo 4
Produtos à base de cacau(chocolate em pó, produtos para
confeitaria, etc.)

Protocolo 5
Outros incluem: especiarias, ervasaromáticas, concentrados, cháse cafés instantâneos, temperos
prontos em tabletes
Protocolo 6
Nozes ou misturas de frutos secos
contendo nozes (esse protocolo éapropriado para outros frutos secos,
incluindo pecã, amêndoa, pistache,castanha-de-caju, castanhaportuguesa, macadâmia, castanhado-pará, soja e amendoim)

Temperatura deTempo deVolume da
Enriquecimento Enriquecimento
Análise de(± 1 °C)(horas)Amostra (μL)(a)(a) Volume de amostra transferido para tubos de Solução de Lise. Consulte a etapa 4.7 da seção Lise.
(b) Exemplos de produtos para serem testados com o Protocolo 1: refeições prontas, saladas gourmet, cremes.
(c) Exemplos de produtos para serem testados com o Protocolo 2: carnes cruas, vegetais congelados, todos os tipos dequeijo, leite fermentado, salada crua (alface, do tipo batávia).
(d) Leite UHT desnatado pode ser substituído por leite em pó desnatado.
(e) 0,45 mL de 1% de solução de corante verde brilhante por 225 mL de leite desnatado, resultando em uma concentração
final de 0,002% (0,02 g/L) de corante verde brilhante.
(f) Para preparar leite em pó desnatado estéril, realize uma suspensão de 100 g de leite em pó desnatado estéril em 1 L deágua destilada ou purificada. Gire até dissolver. Coloque em autoclave por 15 minutos a 121 °C. Armazene a 2-30 °C(8).
(g) 5 g de K2SO3 por 1.000 mL de BPW ISO, resultando em uma concentração final de 0,5% K2SO3.
(h) 240 mL de 100 g/L de leite em pó desnatado estéril deve ser acrescentado em 235 mL 2X de BPW ISO estéril com
0,5% K2SO3.

5

PT (Português)Caso seja utilizada uma etapa de enriquecimento secundária opcional, por exemplo, Rappaport Vassiliadis Medium, énecessário realizar uma diluição de 1:2 (1 parte de amostra de enriquecimento em 1 parte de caldo de enriquecimento
estéril) ou simplesmente transfira 10 µL do segundo enriquecimento para os tubos de Neogen Solução de Lise. Caso seja
utilizado Caldo Tetrationato (TT), transfira 20 µL do enriquecimento secundário para os tubos de Neogen Solução de Lisee não efetue agitação em vórtice de enriquecimento TT ou aplicação em pipeta do fundo do tubo de enriquecimento paraevitar a transferência de qualquer precipitado.
Instruções específicas para métodos comprovados
AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
Certificado N. 091501 do AOAC® Performance TestedSM

Nos programas OMASM e PTMSM do Instituto de Pesquisa AOAC, o Neogen Ensaio para Detecção Molecular deSalmonella 2 foi constatado como um método eficiente para a detecção de Salmonella. As matrizes testadas no estudosão apresentadas na Tabela 3.
Tabela 3. Protocolos de enriquecimento de acordo com o Certificado N. 091501 OMASM 2016.01 e PTMSM do AOAC.
O volume de amostra transferido para tubos de Neogen Solução de Lise é de 20 µL.
Temperatura de
Enriquecimento(± 1 °C)

Tempo deEnriquecimento(horas)

41,5

10–24

225 mL de BPW ISO(preaquecido)

41,5

10–24

325 g

975 mL de BPW ISO(preaquecido)

41,5

14–24

325 g

2925 mLde BPW ISO

37

18–24

25 g

225 mL de BPW ISO

375 g

1500 mLde BPW ISO

37

18–24

Pimenta-do-reino, camarão
inteiro cru, espinafre ensacado
cru, queijo americano
processado pasteurizado

25 g

225 mL de BPW ISO

37

18–24

Lavagem de carcaça de frango

30 mL

30 mL de BPW ISO(preaquecido)

41,5

18–24

Escovação de carcaça de frango
com esponja

1 esponja

50 mL de BPW ISO(preaquecido)

41,5

18–24

Leite em pó desnatado
instantâneo

25 g

225 mL de BPW ISO

37

20–24

Cacau em pó

25 g

225 mL de BPW ISO

37

24–28

Ovo integral líquido
pasteurizado

100 mL

900 mL de BPW ISO

37

18–24

Água usada na irrigação
de brotos

375 mL

3375 mLde BPW ISO

37

18–24

25 g

225 mL de BPW ISO

375 g

3375 mLde BPW ISO

37

18–24

10 g

90 BPW-ISO

41.5

28-32

Matriz de Amostra

Tamanhoda Amostra

Volume do Caldo de
Enriquecimento

25 g

225 mL de BPW ISO(preaquecido)

325 g

975 mL de BPW ISO(preaquecido)

25 gCarne moída crua

Carne de frango moída crua
Carne de frango
empanada cozidaRação seca para cãesCreme de manteigade amendoim
Flor de cannabis seca, flor decânhamo seca(4)6Ambiental

PT (Português)Concreto selado

1 esponja

225 mL de BPW ISO(preaquecido)

41,5

18–24

Aço inoxidável

1 swab

10 mL de BPW ISO(preaquecido)

41,5

18–24

Azulejo de cerâmica selado

1 esponja

50 mL de BPW ISO(preaquecido)

41,5

18–24

MatrizdeAmostraTamanhoda
AmostraVolume do
Caldo deEnriquecimento

Temperatura de
Enriquecimento(± 1 °C)

Tempo deEnriquecimento(horas)Camarão
cru, comcabeça25 g

225 mLde BPW ISO

37

18–24

Meio deTemperatura deTempo deEnriquecimento Enriquecimento Enriquecimento
Secundário
Secundário
Secundário(mL)(± 1 °C)(horas)R-V R10:0,1 mL em
10 mL(a)

41,5

4–24

(a) Transfira 10 µL da amostra enriquecida para tubos de Solução de Lise. Consulte a etapa 4.7 da seção Lise.
NF VALIDATION da AFNOR Certification

3M 01/16 -11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Para obter mais informações sobre o término da validade, consulte o certificado NF VALIDATION disponível nosite supracitado.
Método Certificado NF VALIDATION em conformidade com a ISO 16140-2(7) em comparação com a ISO 6579(3).
Escopo da validação: Todos os produtos alimentícios para consumo humano, amostras ambientais de produção
(incluindo amostras de produção primárias), ração para animais de estimação e alimentação animal, por meio de testes decomprovação em uma grande variedade de alimentos.
Preparo da amostra: As amostras devem ser preparadas de acordo com a EN ISO 6579(3) e a EN ISO 6887(10-15).
Versão do software: Consulte o certificado.

7

PT (Português)Tabela 4. Protocolos de enriquecimento conforme o método certificado NF VALIDATION 3M 01/16 -11/16.
Tamanhoda
AmostraVolume do
Caldo deEnriquecimento

Protocolo 1:• Grande variedade de produtos
alimentícios processados(com exceção de ovos em pó,
frutas e vegetais processados
e produtos especificados nos
outros protocolos)• Todos os tipos de peixes e
frutos do mar• Ração para animais deestimação e alimentação
animal• Produção primária (não fecal)

25 g

225 mL de BPW
ISO

37

18–26

20

Protocolo 2:• Grande variedade de alimentos
crus e não processados(com exceção de peixes
e frutos do mar crus e
produtos especificados nos
outros protocolos)• Ovos em pó• Todos os tipos de frutas
e vegetais,• Amostras ambientais daprodução de alimentos

25 g ou
1 wipeou 1
swab

225 mL de BPW
ISO (preaquecido)

41,5

18–26

20

Protocolo 3:• Laticínios em pó

25 g

225 mL de BPW
ISO

37

20–26

20

25 g

225 mL de leite
UHT desnatado +0,002% de coranteverde brilhante

37

24–30

20

25 g

235 mL de
2 x BPW ISO+ K2SO3 0,5%
+ 240 mL de leite
UHT desnatado

37

24–30

10

25 g

225 mL de BPW
ISO (preaquecido)

41,5

10–24

20

1 meiacano alto

100 mL em Caldo
tetrationato
225 mL em
Caldo tetrationato

37

22–24

20

25 g
375 g

3375 mL de BPW
ISO (preaquecido)

37

20–26

20

375 g

3375 mL de BPW
ISO (preaquecido)+ vancomicina(10 mg/L)

37

20–26

20

Protocolo

Protocolo 4:• Produtos à base decacau contendo mais de
20% de cacau
Protocolo 5:• Especiarias, ervas aromáticas,
concentrados, chás, cafés,
preparação culinária
Protocolo 6:• Carnes cruas
Protocolo 7:• Produção primária (fecal)

Protocolo 8:• Fórmula infantil, cereais
infantis, laticínios em pó sem
probióticos(b)Protocolo 9:• Fórmula infantil, cereais
infantis, laticínios em pó com
probióticos(b)Temperatura deTempo deVolume da
Enriquecimento Enriquecimento
Análise de(+1 °C)(horas)Amostra (µL)(a)(a) Volume de amostra transferido para tubos de Solução de Lise. Consulte a etapa 4.7 da seção Lise.
(b) Para amostras grandes de leite em pó e cereais, adicione aos poucos a amostra ao líquido enquanto os mistura paranão empelotar.

8PT (Português)NOTAS:• Amostras mais pesadas que 25 g não foram testadas, exceto no protocolo 8 e 9, no estudo NF VALIDATION.
• Os protocolos curtos de detecção são sensíveis a condições de incubação. É necessário seguir as condições detemperatura indicadas na especificação técnica. O usuário deve se certificar de que o preaquecimento do caldo deenriquecimento alcance a temperatura necessária antes da incubação. O tempo de preparação das amostras, o atraso
entre o término da etapa de preaquecimento do caldo de enriquecimento e o início da etapa de incubação da amostra
de alimento não devem ultrapassar 45 minutos. É recomendado o uso de uma incubadora ventilada para a incubação.
• Para realizar a transferência da amostra de enriquecimentos de Caldo Tetrationato (TT) para o Neogen Tubo deLise, não agite com vórtice o enriquecimento TT nem aspire com pipeta o fundo do tubo de enriquecimento paraevitar a transferência de qualquer precipitado. A transferência de precipitado pode gerar resultados inválidos.
• Os pontos de interrupção de protocolo recomendados ocorrem após o enriquecimento ou a lise da amostra.
Os caldos de enriquecimento ou lisados de amostra podem ser armazenados a 2–8 °C por até 72 horas. Após aremoção do caldo de enriquecimento do armazenamento, continue o teste a partir da Etapa 1, na seção Lise. Após aremoção do lisado de amostra do armazenamento, continue o teste a partir da Etapa 8, na seção Lise.
Preparo da Neogen® Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular
1. Umedeça um pano em uma solução de 1–5% (v:v em água) de água sanitária e limpe a Neogen® Bandeja de Carga
Rápida para Detecção Molecular.
2. Enxágue a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular com água.
3. Utilize uma toalha descartável para secar a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular.
4. Certifique-se de que a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular esteja seca antes de utilizá-la.
Preparação do Neogen® Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular
Coloque o Neogen® Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular diretamente sobre a bancada do laboratório. Utilize
o bloco na temperatura ambiente do laboratório: 20–25 °C.
Preparo do Neogen® Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular
Coloque o Neogen® Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular em uma unidade de aquecimento com bloco seco
duplo. Ligue a unidade de aquecimento de bloco a seco e defina a temperatura para permitir que o Neogen Bloco deAquecimento para Detecção Molecular alcance e mantenha a temperatura de 100 ± 1 °C.
NOTA: dependendo da unidade de aquecimento, aguarde aproximadamente 30 minutos até que o Neogen Bloco deAquecimento para Detecção Molecular alcance a temperatura. Utilizando um termômetro calibrado adequado(por exemplo, um termômetro de imersão parcial ou um termômetro digital de termopares, não um termômetro deimersão total) colocado no local indicado, verifique se o Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular estáa 100 ± 1 °C.
Preparo do Neogen® Equipamento de Detecção Molecular
1. Inicie o Neogen® Software de Sistema de Detecção Molecular e faça log in. Entre em contato com o representante
Neogen Food Safety para garantir que você possui a versão mais atualizada do software.
2. Ligue o Neogen Equipamento de Detecção Molecular.
3. Crie ou edite uma execução com dados para cada amostra. Consulte o Manual do Usuário do Neogen Sistema de
Detecção Molecular para obter mais detalhes.
NOTA: o Neogen Equipamento de Detecção Molecular deve estar pronto para o uso antes de inserir a Neogen Bandeja
de Carga Rápida para Detecção Molecular com os tubos de reação. Esta etapa de aquecimento leva aproximadamente
20 minutos e é indicada por uma luz LARANJA na barra de status do instrumento. Quando o equipamento estiver prontopara iniciar uma execução, a barra de status ficará VERDE.

9PT (Português)Lise
Remova o fundo do Neogen Rack de Solução de Lise com uma chave de fenda ou espátula antes de inserir o Neogen
Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular.

1. Deixe que os tubos de Neogen Solução de Lise cheguem à temperatura ambiente, 20–25 °C, deixando as racks
fora de refrigeração de um dia para o outro (16–18 horas). A alternativa para equilibrar os tubos Neogen Solução deLise à temperatura ambiente é posicioná-los na bancada do laboratório durante pelo menos 2 horas, incubá-los em
uma incubadora de 37 ± 1 °C por 1 hora ou colocá-los em um aquecedor com bloco seco duplo por 30 segundos a
100 ± 1 °C.
2. Inverta os tubos com tampa para misturar. Prossiga para a próxima etapa em até 4 horas.
3. Remova o caldo de enriquecimento da incubadora.
4. Um tubo Neogen Solução de Lise é necessário para cada amostra e amostra do NC (meio de enriquecimento
esterilizado).
4.1 As tiras de tubos Neogen Solução de Lise podem ser cortadas para obter o número desejado de tubos. Selecione onúmero de tubos de Neogen Solução de Lise individuais ou as tiras de 8 tubos necessárias. Coloque os tubos de
Neogen Solução de Lise em uma rack vazia.
4.2 Para evitar contaminação cruzada, destampe uma tira de tubo Neogen Solução de Lise de cada vez e utilize uma
nova ponteira de pipeta para cada etapa da transferência.
4.3 Transfira a amostra enriquecida para os tubos Neogen Solução de Lise conforme descrito abaixo:
Primeiro, transfira cada amostra enriquecida para um tubo Neogen Solução de Lise individual. Por último,transfira o NC.
4.4 Utilize a Neogen® Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção Molecular – Lise para destampar uma tira detubos Neogen Solução de Lise – uma tira de cada vez.
4.5 Descarte a tampa do tubo Neogen Solução de Lise – se o lisado for mantido para novo teste, coloque as tampas
em um recipiente limpo para reutilização após a lise.
4.5.1 Para processar o lisado mantido, consulte o Apêndice A.
4.6 Agite a bolsa de enriquecimento antes de coletar a amostra do lado filtrado ao trabalhar com amostras viscosas.
4.7 Transfira 20 µL de amostra em um tubo Neogen Solução de Lise, exceto se indicado de outro modo na tabela do
protocolo (por exemplo, protocolo 5 e enriquecimento secundário em RVS na utilização de amostras secundárias
com tampão neutralizador).
20 µl

5. Repita da etapa 4.4 à 4.7 até que todas as amostras individuais tenham sido adicionadas a um tubo Neogen Solução deLise correspondente na tira.
6. Quando todas as amostras tiverem sido transferidas, transfira 20 µL de NC (meio de enriquecimento estéril,por exemplo, BPW) para um tubo Neogen Solução de Lise. Não use água como um NC.
7. Verifique se a temperatura do Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular está a 100 ± 1 °C.

10PT (Português)8. Coloque a rack descoberta de tubos Neogen Solução de Lise no Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção
Molecular e aqueça por 15 ± 1 minutos. Durante o aquecimento, a Neogen Solução de Lise mudará da cor rosa (frio)para amarelo (quente).
8.1. Amostras que não foram tratadas com aquecimento de forma adequada durante a etapa de lise do ensaio
podem ser consideradas um risco biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no Neogen Equipamento de
Detecção Molecular.
9. Retire a rack descoberta de tubos Neogen Solução de Lise do bloco de aquecimento e deixe esfriar no Neogen Bloco
de Resfriamento para Detecção Molecular por pelo menos 5 minutos e no máximo 10 minutos. O Neogen Bloco de
Resfriamento para Detecção Molecular, usado em temperatura ambiente, deve ser colocado diretamente sobre abancada do laboratório. Quando resfriada, a Solução de Lise voltará à cor rosa.
10. Retire a rack de tubos Neogen Solução de Lise do Neogen Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplificação
1. É necessário um Tubo de Reagente de Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 para cada amostra
e para o NC.
1.1 As tiras de tubos podem ser cortadas para obter o número de tubos desejado. Selecione o número de Tubos deReagente individuais ou de tiras de 8 tubos individuais necessárias para Neogen Ensaio para Detecção Molecularde Salmonella 2.
1.2 Coloque os Tubos de Reagente em uma rack vazia.
1.3 Evite agitar os reagentes precipitados da parte inferior dos tubos.
2. Selecione um tubo Controle de Reagentes e coloque-o na rack.
3. Para evitar contaminação cruzada, destampe uma tira de Tubo de Reagente de cada vez e utilize uma nova ponteira depipeta para cada etapa da transferência.
4. Transfira cada um dos lisados a um Tubo Reagente para Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 etubo Neogen Controle de Reagentes conforme descrito abaixo:
Transfira cada amostra de lisado em tubos de Reagente individuais primeiro e, em seguida, o NC. Por último, hidrateo tubo Neogen Controle de Reagentes.
5. Use a Neogen® Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção Molecular - Reagente para destampar o Tubo deReagente para Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 – uma tira de cada vez. Descarte a tampa.
5.1 Transfira 20 µL de amostra de lisado da ½ superior do líquido (evite o precipitado) no tubo de Neogen
Solução de Lise para o Tubo de Reagente para Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2
correspondente. Dispense em um ângulo que evite a agitação dos pellets. Misture pipetando cuidadosamente
5 vezes.
5.2 Repita a etapa 5.1 até que a amostra de lisado individual tenha sido adicionada a um Tubo de Reagente para
Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 correspondente na tira.
5.3 Cubra os Tubos de Reagentes para Neogen Ensaio para Molecular de Salmonella 2 com a tampa extra fornecida
e utilize o lado arredondado da Neogen Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção Molecular – Reagente
para apertar com um movimento de vai e vem, garantindo que a tampa fique bem apertada.
5.4 Repita as etapas 5.1 a 5.3, conforme necessário, para o número de amostras a serem testadas.
5.5 Quando todas as amostras de lisado tiverem sido transferidas, repita as etapas de 5.1 a 5.3 para transferir 20 µL delisado do NC para o Tubo de Reagente para Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2.
5.6 Transfira 20 µL de lisado NC para um tubo Neogen Controle de Reagentes. Dispense em um ângulo que evite aagitação dos pellets. Misture pipetando cuidadosamente 5 vezes.

11PT (Português)6. Carregue os tubos tampados em uma Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular limpa edescontaminada. Feche e trave a tampa da Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular.

20 µL

7. Analise e confirme a execução configurada no Neogen Software do Sistema de Detecção Molecular.
8. Clique no botão Iniciar do software e selecione o instrumento a utilizar. A tampa do instrumento selecionado
abre automaticamente.
9. Posicione a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular no Neogen Equipamento de Detecção
Molecular e feche a tampa para iniciar o ensaio. Os resultados são fornecidos em 60 minutos, embora os positivos
possam ser detectados ainda mais cedo.
10. Depois que o ensaio estiver concluído, remova a Neogen Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular do
Neogen Equipamento de Detecção Molecular e descarte os tubos mergulhando-os em uma solução de 1–5% (v: v emágua) de água sanitária por 1 hora, fora da área de preparação do ensaio.
AVISO: para minimizar o risco de falso-positivos por contaminação cruzada, nunca abra tubos de reagentes que
contenham DNA amplificado. Isto inclui o Tubo de Reagente para Neogen Ensaio para Detecção Molecular deSalmonella 2, o Neogen Controle de Reagentes e o Neogen Tubos de Controle de Matriz. Sempre descarte os tubos dereagentes selados mergulhando-os em uma solução de 1–5% (v: v em água) de água sanitária por 1 hora, fora da área depreparação do ensaio.
Resultados e Interpretação
Um algoritmo interpreta a curva de saída de luz que resulta da detecção da amplificação do ácido nucleico. Os resultados
são analisados automaticamente pelo software e são codificados em cores de acordo com o resultado. Um resultado é
determinado positivo ou negativo através da análise de diversos parâmetros exclusivos das curvas. Resultados positivos
presuntivos são relatados em tempo real, enquanto resultados negativos e resultados de inspeção serão exibidos após aconclusão da execução.
As aparentes amostras positivas devem ser confirmadas de acordo com os procedimentos operacionais padrão delaboratório ou seguindo o método de confirmação de referência apropriado(1,2,3), começando com a transferência do
enriquecimento primário Neogen BPW ISO para o(s) caldo(s) de enriquecimento secundário, seguida do plaqueamento
subsequente e a confirmação de isolados usando métodos bioquímicos e sorológicos adequados.
NOTA: até mesmo uma amostra negativa não resultará em leitura zero uma vez que o sistema e os reagentes deamplificação do Neogen Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2 tenham uma leitura de unidade de luz relativa(RLU) em "plano de fundo".

12

PT (Português)Em casos raros de saída de luz fora do comum, o algoritmo rotula o caso como “Inspecionar”. A Neogen recomenda que ousuário repita o ensaio para qualquer amostra Inspecionar. Se o resultado continuar a ser Inspecionar, prossiga com o testede confirmação utilizando o método de sua preferência ou conforme especificado pelos regulamentos locais.
Tipo
de poço

Símbolo de resultado
do poço

Resultado

Interpretação

AmostraPositivo

A amostra é positiva presuntiva para o patógeno alvo.

AmostraNegativo

A amostra é negativa presuntiva para o patógeno alvo.

InibidoA matriz da amostra foi inibitória para o ensaio. Pode
ser necessário um novo teste. Consulte a seção deresolução de problemas e o kit de Instruções do
Produto do ensaio para obter mais informações.

Inspecionar

A presença ou ausência do patógeno alvo foi
indeterminada. Pode ser necessário um novo teste.
Consulte a seção de resolução de problemas e o
kit de Instruções do Produto do ensaio para obter
mais informações.

AmostraAmostraNão foi detectada bioluminescência. Pode sernecessário um novo teste. Consulte a seção de
Erro
Amostraresolução de problemas e o kit de Instruções do
Produto do ensaio para obter mais informações.
Confirmação de resultados segundo o método certificado NF VALIDATION
No contexto do NF VALIDATION, todas as amostras identificadas como positivas pelo Neogen Ensaio para Detecção
Molecular de Salmonella 2 devem ser confirmadas por um dos testes seguintes:Opção 1: Uso da norma ISO 6579(3) a partir do enriquecimento de água peptonada tamponada(3).
Opção 2: Implementação de um método de confirmação que consista em: Transfira 0,1 mL do enriquecimento BPW ISO(3)ou enriquecimentos de Caldo Tetrationato (amostras de produção primárias) para 10 mL de caldo RVS. Incube por
24 ± 3 horas a 41,5 °C. Distribua em ágar Xilose-Lisina-Desoxicolato (XLD)(3) ou em ágar cromogênico específico para
Salmonella. Realize uma aglutinação em látex usando o teste Oxoid Salmonella diretamente em colônias isoladas.
Opção 3: Utilização de sondas de ácido nucleico conforme descritas na norma EN ISO 7218(5), em colônias isoladas, de
XLD ou ágar cromogênico (consulte as Opções 1 ou 2). Esse teste não deve ser realizado com um Neogen Ensaio para
Detecção Molecular de Salmonella 2.
Opção 4: Utilização de algum outro método certificado pelo NF VALIDATION, cujo princípio seja diferente do Neogen
Ensaio para Detecção Molecular de Salmonella 2. Deve ser usado o protocolo completo descrito para esse segundo
método comprovado. Todas as etapas anteriores ao início da confirmação devem ser comuns a ambos os métodos.
Na ocorrência de resultados divergentes (positivo presuntivo com o Neogen Ensaio para Detecção Molecular deSalmonella 2, não confirmados por um dos métodos acima descritos, em particular para o teste de aglutinação em látex), olaboratório deve seguir as etapas necessárias para garantir a validade dos resultados obtidos.
Em caso de dúvidas sobre aplicações ou procedimentos específicos, acesse nosso site www.neogen.com ou entre em
contato com o seu representante ou distribuidor local Neogen.

13PT (Português)Apêndice A. Interrupção de protocolo: armazenamento e refaça o teste de lisados
tratados termicamente

1. Para armazenar um lisado tratado termicamente, tampe novamente o tubo de lise com uma tampa limpa(consulte a seção Lise, 4.5).
2. Armazene entre 4 e 8 °C por até 72 horas.
3. Prepare uma amostra armazenada para amplificação invertendo de 2 a 3 vezes para misturar.
4. Destampe os tubos.
5. Coloque os tubos de lisado misturados no Neogen Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular e aqueça a
100 ± 1 °C por 5 ± 1 minutos.
6. Retire a rack de tubos Neogen Solução de Lise do bloco de aquecimento e deixe esfriar no Neogen Bloco de
Resfriamento para Detecção Molecular por pelo menos 5 minutos e no máximo 10 minutos.
7. Continue o protocolo na seção Amplificação detalhada acima.

Referências:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identificationof Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Effective Date: 2 January 2019.
3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotypingof Salmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance formicrobiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System. Contate seu representante da Neogen Food Safety para obter uma cópia destedocumento.
7. ISO 18593. Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.
8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk
(Reconstituted). January 2011.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods against a reference method.
10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension anddecimal dilutions.
11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.
12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary
production stage.

Explicação dos símbolos
info.neogen.com/symbols

14

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869APL (Polski)

Data wydania: 2024-01

Informacje o produkcie
Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella®

Opis i przeznaczenie produktu

Molekularny test Neogen® do wykrywania 2 – Salmonella stosuje się razem z Systemem Neogen® do diagnostyki
molekularnej w celu szybkiego i swoistego wykrywania bakterii Salmonella w próbkach pochodzących z
przednamnożonego pokarmu, paszy oraz środowiska przetwarzania żywności.
Molekularny test Neogen® do wykrywania wykorzystuje metodę pętlowej amplifikacji izotermicznej do szybkiego
namnażania sekwencji kwasów nukleinowych z zachowaniem wysokiej swoistości i czułości, w połączeniu z
bioluminescencją do wykrywania amplifikacji. Domniemane wyniki dodatnie przekazuje się w czasie rzeczywistym, zaśwyniki ujemne wyświetlą się po zakończeniu testu. Domniemane wyniki dodatnie wymagają potwierdzenia preferowaną
metodą lub metodą wynikającą z lokalnych przepisów(1, 2, 3).
Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella jest przeznaczony do stosowania w środowisku laboratoryjnym
przez specjalistów przeszkolonych w zakresie praktyk laboratoryjnych. Firma Neogen nie udokumentowała zastosowania
tego produktu w gałęziach przemysłu innych niż żywność i napoje. Przykładowo firma Neogen nie udokumentowała
zastosowania tego produktu do badania próbek leków, kosmetyków, próbek klinicznych ani weterynaryjnych.
Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella nie oceniono w przypadku wszystkich możliwych produktówspożywczych, procesów przetwarzania żywności, protokołów testowych ani w przypadku wszystkich dostępnych
szczepów bakterii.
Podobnie jak w przypadku wszystkich metod testowych, pochodzenie, skład i jakość podłoża przednamnażającego
może mieć wpływ na otrzymywane wyniki. Czynniki takie jak metody pobierania próbek, protokoły przeprowadzaniabadań, przygotowanie próbki, postępowanie i techniki laboratoryjne również mogą wpłynąć na wynik badania. Firma
Neogen zaleca ocenę metody wykorzystującej podłoże przednamnażające w środowisku użytkownika przy zastosowaniu
wystarczającej liczby próbek konkretnej żywności oraz próbek problematycznych pod względem rozwoju drobnoustrojów
w celu zapewnienia, że dana metoda spełnia potrzeby użytkownika.
Firma Neogen dokonała oceny Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella z zastosowaniem buforowanej
wody peptonowej wg (BPW) wg ISO.
Urządzenie Neogen® do diagnostyki molekularnej należy stosować z próbkami poddanymi obróbce cieplnej na etapie lizy,
której zadaniem jest zniszczenie organizmów obecnych w próbce. Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej
na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu Neogen do
diagnostyki molekularnej.
Firma Neogen Food Safety została wyróżniona certyfikatem ISO (ang. International Organization for Standardization —Międzynarodowa Organizacja Normalizacyjna) 9001 w zakresie projektowania i wytwarzania.
Zestaw testów Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella zawiera 96 testów opisanych w tabeli 1.
Tabela 1. Elementy zestawu testów Molekularny test Neogen do wykrywania
Element

Charakterystyka

Liczba sztuk

Zawartość

Komentarze

Roztwór lizujący
Neogen® (LS)Różowy roztwór
w przezroczystych
probówkach

96 (12 taśmz 8 probówkami)

580 µl LS
na probówkę

Ustawione
w statywie i gotowe
do użytku

Probówki reagentowe
Molekularnego
testu Neogen® dowykrywania 2 –Salmonella

Zielone probówki

96 (12 taśmz 8 probówkami)

Liofilizowana swoista
mieszanina do
amplifikacji
i wykrywania

Gotowe do użycia

Dodatkowe korki

Zielone korki

96 (12 taśmz 8 korkami)

Kontrola Neogen®
reagenta (RC)Przezroczyste
probówki z korkiem
zatrzaskowym

16 (2 woreczki po 8
oddzielnych probówek)Gotowe do użycia
Liofilizowane DNA
kontrolne, mieszanina
do amplifikacji
i wykrywania

Gotowe do użycia

Kontrola ujemna (NC), niebędąca częścią zestawu, to jałowe podłoże przednamnażające, np. BPW wg ISO. Nie stosować
wody jako NC.

1PL (Polski)
Bezpieczeństwo
Użytkownik powinien dokładnie zapoznać się ze wszystkimi informacjami dotyczącymi bezpieczeństwa zawartymi
w instrukcji dotyczącej Systemu Neogen do diagnostyki molekularnej oraz Molekularnego testu Neogen do wykrywania
2 – Salmonella i się do nich stosować. Instrukcję bezpieczeństwa należy zachować do przyszłego wykorzystania.
OSTRZEŻENIE: Oznacza niebezpieczną sytuację, której skutkiem, w razie braku podjęcia środków
zapobiegawczych, mogą być poważne obrażenia ciała lub śmierć i/lub uszkodzenie mienia.
WAŻNA INFORMACJA: Oznacza potencjalnie niebezpieczną sytuację, której skutkiem, w razie niepodjęcia środków
zapobiegawczych, może być uszkodzenie mienia.

OSTRZEŻENIE
Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella nie należy stosować do diagnozowania stanu
zdrowotnego ludzi ani zwierząt.
Obowiązkiem użytkownika jest przeszkolenie personelu w zakresie aktualnych, odpowiednich technik badań:na przykład w zakresie dobrych praktyk laboratoryjnych, norm ISO/IEC 17025(4) lub ISO 7218(5).
Aby zmniejszyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie ujemnym prowadzącym do wydania zanieczyszczonego
produktu:• Należy postępować zgodnie z protokołem i wykonywać testy zgodnie z zaleceniami podanymi w Informacjacho produkcie.
• Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella należy przechowywać w sposób podany na opakowaniu
i w Informacjach o produkcie.
• Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella należy stosować wyłącznie przed upływem terminu ważności.
• Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella należy stosować w odniesieniu do próbek żywności, paszyi środowiska przetwarzania żywności poddanych walidacji wewnętrznej lub przez osoby trzecie.
• Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella należy stosować wyłącznie w połączeniu z powierzchniami,środkami odkażającymi, protokołami i szczepami bakterii poddanymi walidacji wewnętrznej lub przez osoby trzecie.
• W przypadku próbki środowiskowej zawierającej bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu przed
rozpoczęciem badania należy przygotować roztwór rozcieńczony w stosunku 1:2 (1 część próbki w 1 części jałowego
bulionu przednamnażającego). Inną możliwością jest przeniesienie 10 µl przednamnażającego buforu neutralizującego
do probówek z roztworem lizującym Neogen. Produkty firmy Neogen® do postępowania z próbkami, które zawierają
bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,
HS10NB2G i HS2410NB2G.
Aby zmniejszyć ryzyko związane z narażeniem na substancje chemiczne i zagrożenia biologiczne:• Badania patogenów należy prowadzić w odpowiednio wyposażonym laboratorium pod kontrolą przeszkolonego
personelu. Inkubowane podłoże do przednamnażania oraz sprzęt lub powierzchnie, które mogły mieć kontakt
z inkubowanym podłożem do przednamnażania, mogą zawierać patogeny na poziomie zagrażającym ludzkiemu zdrowiu.
• Należy zawsze przestrzegać standardowych laboratoryjnych praktyk bezpieczeństwa, łącznie z noszeniem
odpowiedniej odzieży i okularów ochronnych przy pracy z reagentami i skażonymi próbkami.
• Należy unikać kontaktu z zawartością probówek z podłożem przednamnażającym oraz reagentem po amplifikacji.
• Przednamnożone próbki należy utylizować zgodnie z obowiązującymi normami branżowymi.
• Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie
biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu Neogen do diagnostyki molekularnej.
Aby zmniejszyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem krzyżowym podczas przygotowania testu:• Należy zawsze nosić rękawiczki (aby chronić użytkownika i zapobiegać wprowadzaniu nukleaz).
Aby ograniczyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem środowiska:• Należy postępować zgodnie z bieżącymi normami branżowymi dotyczącymi utylizacji zanieczyszczonych odpadów.
Aby zmniejszyć ryzyko związane z narażeniem na gorące płyny:• Nie przekraczać zalecanych ustawień temperatury w bloku grzewczym.
• Nie przekraczać zalecanego czasu ogrzewania.
• Stosować odpowiedni, skalibrowany termometr do potwierdzenia poprawności temperatury Wkładki Neogen® bloku
grzewczego do diagnostyki molekularnej (np. termometr zanurzeniowy zanurzany częściowo lub cyfrowy termometr
z termoogniwem, ale nie termometr zanurzeniowy zanurzany całkowicie). Termometr należy umieścić w wyznaczonymmiejscu Wkładki Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.

2PL (Polski)WAŻNA INFORMACJA
Aby zmniejszyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem krzyżowym podczas przygotowania testu:• Zmienić rękawiczki przed nawodnieniem probówek reagentowych.
• Zaleca się stosowanie jałowych końcówek pipet do biologii molekularnej z (filtrowaną) barierą aerozolową.
• Do przeniesienia każdej próbki używać nowej końcówki pipety.
• Przy przenoszeniu przednamnożonych próbek do probówki lizującej należy przestrzegać zasad dobrej praktyki
laboratoryjnej. Aby uniknąć skażenia pipetora, użytkownik może zdecydować się dodać etap transferu pośredniego.
Przykładowo można przenieść przednamnożoną próbkę do jałowej probówki.
• W miarę możliwości należy używać stanowiska badawczego biologii molekularnej z lampą bakteriobójczą. Należy
okresowo dezynfekować stoły i sprzęt laboratoryjny (pipety, narzędzia do zakładania/zdejmowania korków itp.)
za pomocą 1–5% (obj./obj., wodnego) roztworu domowego wybielacza lub roztworu do usuwania DNA.
Aby ograniczyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie dodatnim:• Nie otwierać probówek po procesie amplifikacji.
• Zanieczyszczone probówki należy utylizować, namaczając je w 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworze domowego
wybielacza przez 1 godzinę i wynosząc poza obszar przygotowania testów.
• Nie umieszczać probówek reagentowych w autoklawie po procesie amplifikacji.
Dodatkowe informacje oraz lokalne przepisy dotyczące utylizacji zawiera karta charakterystyki produktu.
W przypadku pytań dotyczących konkretnych zastosowań lub procedur należy odwiedzić stronę
www.neogen.com lub skontaktować się z lokalnym przedstawicielem lub dystrybutorem firmy Neogen.

Obowiązki użytkownikaUżytkownicy są zobowiązani do zapoznania się z instrukcjami oraz informacjami dotyczącymi produktu. W celu
uzyskania dalszych informacji należy odwiedzić stronę internetową www.neogen.com lub skontaktować się z lokalnym
przedstawicielem lub dystrybutorem firmy Neogen.
Przy wyborze metody testowania należy pamiętać, że takie czynniki zewnętrzne, jak metody próbkowania, protokoły
testowania, przygotowanie próbki, dalsze postępowanie, technika laboratoryjna oraz sama próbka mogą wpływać na
uzyskiwane wyniki.
Obowiązkiem użytkownika przy wyborze jakiejkolwiek metody testowania lub produktu jest poddanie ocenie dostatecznej
liczby próbek z właściwymi macierzami i z uwzględnieniem zagrożeń powodowanych przez mikroorganizmy, tak aby
zastosowana metoda mogła spełnić oczekiwania użytkownika i ustalone przez niego kryteria.
Obowiązkiem użytkownika jest również dopilnowanie, aby zastosowane metody testowania i uzyskane wyniki spełniały
wymagania klienta i dostawcy.
Podobnie jak w przypadku każdej metody testowania wyniki uzyskiwane za pomocą produktu firmy Neogen Food Safety
nie stanowią gwarancji jakości testowanych macierzy ani procesów.
Aby pomóc klientom ocenić metodę dla różnych typów macierzy spożywczych, firma Neogen opracowała zestaw
Kontroli Neogen® macierzy do diagnostyki molekularnej. W razie potrzeby należy użyć zestawu Kontroli macierzy (MC) do
ustalenia, czy dana macierz może wpływać na wyniki Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella. Należy
przetestować kilka próbek reprezentatywnych dla danej macierzy, czyli na przykład próbki pozyskane z różnych źródeł,podczas dowolnego okresu walidacji przy stosowaniu metody firmy Neogen, a także podczas testowania nowych lub
nieznanych macierzy albo macierzy, które zostały poddane zmianom (w zakresie procesowym lub surowcowym).
Macierz można zdefiniować jako typ produktu o nieodłącznych właściwościach, takich jak skład i proces wytwarzania.
Różnice pomiędzy macierzami mogą być łatwo zauważalne, jak np. efekty spowodowane różnicami w procedurach
obróbki lub prezentacji, przykładowo surowe lub pasteryzowane, świeże lub suszone itd.

Wyłączenia gwarancji / Ograniczone środki zaradczeJEŚLI NIE ZOSTAŁO TO WYRAŹNIE OKREŚLONE W ROZDZIALE DOT. OGRANICZONEJ GWARANCJI
POJEDYNCZYCH OPAKOWAŃ PRODUKTÓW, FIRMA NEOGEN WYŁĄCZA WSZELKIE GWARANCJE WYRAŹNEI DOROZUMIANE, W TYM MIĘDZY INNYMI WSZELKIE GWARANCJE ZGODNOŚCI Z PRZEZNACZENIEM
I PRZYDATNOŚCI DO OKREŚLONEGO CELU. W razie wad jakiegokolwiek produktu firmy Neogen Food Safety firma
Neogen lub jej autoryzowany dystrybutor wymieni taki produkt lub, wedle własnego uznania, zwróci koszty zakupu tego
produktu. Są to jedyne przysługujące środki zaradcze. W ciągu 60 dni od wykrycia jakiejkolwiek podejrzewanej wadyproduktu należy niezwłocznie powiadomić firmę Neogen oraz zwrócić produkt. W przypadku dalszych pytań prosimy
o kontakt z przedstawicielem Neogen lub autoryzowanym dystrybutorem Neogen.

Ograniczenie odpowiedzialności firmy Neogen

FIRMA NEOGEN NIE BĘDZIE ODPOWIEDZIALNA ZA JAKIEKOLWIEK SZKODY ANI STRATY, ZARÓWNOBEZPOŚREDNIE, POŚREDNIE, SZCZEGÓLNE, UBOCZNE LUB NASTĘPCZE, W TYM MIĘDZY INNYMI ZA UTRACONEZYSKI. W żadnym wypadku odpowiedzialność firmy Neogen z mocy prawa nie może przekroczyć ceny zakupu rzekomo
wadliwego produktu.

3

PL (Polski)

Przechowywanie i utylizacja

Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella należy przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać.
Podczas przechowywania chronić zestaw przed światłem. Po otwarciu zestawu należy sprawdzić, czy woreczek foliowy
nie jest uszkodzony. Nie używać zestawu, jeżeli woreczek jest uszkodzony. Po otwarciu nieużywane probówki reagentowenależy przechowywać w woreczku wielokrotnego zamknięcia z pochłaniaczem wilgoci wewnątrz, co pozwoli zachować
stabilność liofilizowanych reagentów. Ponownie zamknięte woreczki można przechowywać w temperaturze 2–8°C
maksymalnie przez 60 dni.
Nie stosować Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella po upływie daty ważności. Termin ważności inumer partii podano na zewnętrznej etykiecie pudełka. Po użyciu podłoże przednamnażające i probówki Molekularnego
testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella mogą zawierać materiały patogenne. Po zakończeniu badania należy
stosować się do aktualnych standardów branżowych dotyczących utylizacji zanieczyszczonych odpadów. Dodatkowe
informacje oraz lokalne przepisy dotyczące utylizacji zawiera karta charakterystyki produktu.

Instrukcja użycia

Należy dokładnie przestrzegać wszystkich instrukcji. W przeciwnym razie wyniki mogą być niedokładne.
Należy okresowo dezynfekować stoły i sprzęt laboratoryjny (pipety, narzędzia do zakładania/zdejmowania korków itp.)
za pomocą 1–5% (obj./obj., wodnego) roztworu domowego wybielacza lub roztworu do usuwania DNA.
Użytkownik powinien ukończyć szkolenie kwalifikacyjne dla użytkowników Systemu Neogen do diagnostyki molekularnej(OQ), tak jak opisano to w dokumencie „Instrukcje i protokoły dotyczące wymagań instalacji (IQ) / kwalifikacji operacyjnej(OQ) Systemu Neogen do diagnostyki molekularnej”(6).
Szczegółowe wymagania opisano w części „Specjalne instrukcje dotyczące zatwierdzonych metod”:
Tabela 3 – protokoły przednamnażania według AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01 oraz
AOAC® Performance TestedSM, certyfikat nr 091501.
Tabela 4 – protokoły przednamnażania zgodnie z certyfikatem NF VALIDATION 3M 01/16 -11/16.
Przednamnażanie próbki
W tabelach 2, 3 lub 4 można znaleźć wytyczne dotyczące ogólnych protokołów przednamnażania próbek żywności,paszy i próbek środowiskowych.
Użytkownik ma obowiązek przeprowadzić walidację alternatywnych protokołów próbkowania lub proporcji roztworów,
aby sprawdzić, czy dana metoda badawcza spełnia kryteria określone przez użytkownika.
Żywność
1. Poczekać na zrównoważenie temperatury podłoża przednamnażającego BPW wg ISO do temperatury otoczenia
w laboratorium lub 41,5 ± 1°C w zależności od badanych macierzy. Patrz tabele 2, 3 lub 4.
2. Połączyć w warunkach aseptycznych podłoże przednamnażające i próbkę.
3. Dokładnie zhomogenizować przez zmieszanie, wytrząsanie lub mieszanie ręczne przez 2 ± 0,2 minuty lub
do czasu całkowitego rozpuszczenia wszystkich grudek i uzyskania homogenicznej zawiesiny podłoża
przednamnażającego(10-15).
a.

W przypadku wszystkich próbek produktów mięsnych lub innych o wysokiej zawartości cząstek stałych zaleca
się stosowanie worków z filtrem.

b. W przypadku macierzy zwiększających swoją objętość pod wpływem wody i wykazujących dużą lepkość
(np. płatki śniadaniowe, skrobia), zaleca się zastosować dodatkowe rozcieńczenia (> 1:10) do momentu, aż lepkość
wystarczająco spadnie lub dodać sterylny 1% roztwór (wagowo/objętościowo) alfa-amylazy do podłoża BPW(ISO)(10-13).
c.

W przypadku dużych próbek mleka w proszku i płatków śniadaniowych materiał należy powoli wprowadzać do
płynu, często go mieszając, by nie powstawały grudy.

4. Inkubować zgodnie z opisem w odpowiedniej tabeli z protokołem (patrz tabele 2, 3 i 4).

4

PL (Polski)
Próbki środowiskoweUrządzenia do pobierania próbek mogą być nawadniane gąbką z użyciem roztworu neutralizującego w celu
unieszkodliwienia skutków działania środków odkażających. Firma Neogen zaleca stosowanie gąbki celulozowej
niezawierającej środków biobójczych. Roztworem neutralizującym może być bulion neutralizujący Dey-Engley (D/E) lub
bulion z lecytyną. Po pobraniu próbek zaleca się odkażenie otoczenia.
OSTRZEŻENIE: Gdy bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu ma zostać użyty jako roztwór nawilżający
gąbkę, przed rozpoczęciem badania należy przygotować roztwór rozcieńczony w stosunku 1:2 (1 część próbki w
1 części jałowego bulionu przednamnażającego) przednamnożonej próbki środowiskowej, aby zmniejszyć ryzyko
związane z wynikiem fałszywie ujemnym prowadzącym do wydania zanieczyszczonego produktu. Inną możliwością jest
przeniesienie 10 µl przednamnażającego buforu neutralizującego do probówek z roztworem lizującym Neogen.
Zalecany rozmiar obszaru próbkowania do weryfikacji obecności lub braku patogenu na powierzchni wynosi co najmniej
100 cm2 (10 cm x 10 cm lub 4” x 4”). W przypadku próbkowania za pomocą gąbki należy pokryć cały obszar
w dwóch kierunkach (od strony lewej do prawej, a następnie z góry do dołu) lub pobrać próbki środowiskowe zgodnie
z obowiązującym protokołem próbkowania lub według wytycznych FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) lub ISO 18593:2018(7).
Użytkownik ma obowiązek przeprowadzić walidację alternatywnych protokołów próbkowania lub proporcji roztworów,
aby sprawdzić, czy dana metoda badawcza spełnia kryteria określone przez użytkownika.
1. Wstępnie ogrzać podłoże do przednamnażania BPW wg ISO do temperatury 41,5 ± 1°C w zależności od badanych
macierzy. Patrz tabele 2, 3 lub 4.
2. Połączyć w warunkach aseptycznych podłoże przednamnażające i próbkę. Dokładnie zhomogenizować przez
zmieszanie, wytrząsanie lub mieszanie ręczne przez 2 ± 0,2 minuty. Inkubować zgodnie z opisem w odpowiedniej
tabeli z protokołem. Patrz tabele 2, 3 lub 4.
Tabela 2. Ogólne protokoły przednamnażania.
Macierz próbki

Wielkość
Objętość bulionu
próbkiprzednamnażającego

Temperatura
przednamnażania
(± 1°C)

Czas
przednamnażania
(godz.)

Objętość
analizowanej
próbki (μl)(a)Protokół 1
Przetworzone produktyspożywcze (z wyjątkiem
proszków jajecznych oraz
produktów określonych
w innych protokołach)(b)25 g

225 ml BPW wg ISO

37

18–26

20

Protokół 2Surowa i nieprzetworzonażywność, proszki jajeczne,
pasza dla zwierząt oraz
próbki środowiskowe(c)25 g

225 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

41,5

18–26

20

Protokół 3
Sproszkowane produkty
mleczne (włącznie
z pokarmem dla niemowląt
i sojowym pokarmem
dla niemowląt)25 g

225 ml BPW wg ISO

37

20–26

20

25 g

225 ml sterylnego
odtłuszczonego mleka
w proszku 100 g/l
z 0,002% zieleni
brylantynowej(d,e,f)

37

24–30

20

25 g

235 ml 2X BPW
wg ISO z 0,5%
roztworem K2SO3+ 240 ml sterylnego
odtłuszczonego mleka
w proszku 100 g/l(d,g,h)

37

24–30

10

Protokół 4
Produkty kakaowe(proszek, czekolady,
wyroby cukiernicze itp.)
Protokół 5Pozostałe produkty,
takie jak: przyprawy,
zioła aromatyczne,
koncentraty, herbaty
i kawy rozpuszczalne,
kostki rosołowe

5PL (Polski)
Protokół 6
Orzechy włoskie lub
mieszanki orzechów
zawierające orzechy
włoskie (ten protokół jest
odpowiedni dla innych
orzechów, w tym orzechów
pekan, migdałów,
pistacji, orzechów
nerkowca, kasztanów,
orzechów makadamia,
orzechów brazylijskich,orzeszków sojowych orazorzeszków ziemnych)

25 g

225 ml sterylnego
odtłuszczonego mleka
w proszku 100 g/l(d)

37

18–24

20

(a) Objętość próbki przenoszona do probówek z roztworem lizującym. Patrz krok 4.7 w części Liza.
(b) Przykłady produktów badanych za pomocą protokołu 1: posiłki gotowe do spożycia, sałatki, sos angielski.
(c) Przykłady produktów badanych za pomocą protokołu 2: surowe mięso, mrożone warzywa, wszystkie sery,sfermentowane mleko, surowa sałatka (sałata, Batavia).
(d) Odtłuszczone mleko w proszku można zastąpić odtłuszczonym mlekiem UHT.
(e) 0,45 ml 1% wodnego roztworu zieleni brylantynowej na 225 ml odtłuszczonego mleka, co skutkuje uzyskaniem
roztworu zieleni brylantynowej o stężeniu końcowym 0,002% (0,02 g/l).
(f) Aby przygotować sterylne odtłuszczone mleko w proszku, należy zawiesić 100 g odwodnionego odtłuszczonego
mleka w proszku w 1 l wody destylowanej lub oczyszczonej. Mieszać do momentu rozpuszczenia. Umieścić
w autoklawie na 15 minut w temperaturze 121°C. Przechowywać w temperaturze 2–30°C(8).
(g) 5 g K2SO3 na 1000 ml BPW wg ISO, co skutkuje uzyskaniem roztworu K2SO3 o stężeniu końcowym 0,5%.
(h) 240 ml sterylnego odtłuszczonego mleka w proszku 100 g/l należy dodać do 235 ml 2X BPW wg ISO z roztworem 0,5%
K2SO3.
W przypadku stosowania opcjonalnego etapu przednamnażania dodatkowego, np. z użyciem podłoża Rappaport
Vassiliadis, należy wykonać rozcieńczenie w stosunku 1:2 (1 część przednamnażanej próbki w 1 części sterylnegobulionu przednamnażającego) lub po prostu przenieść 10 µl podłoża do przednamnażania dodatkowego do probówek z
roztworem lizującym Neogen. W przypadku stosowania bulionu tetrationianowego (TT) należy przenieść 20 µl podłoża do
przednamnażania dodatkowego do probówek z roztworem lizującym Neogen, przy czym nie wolno wytrząsać podłoża do
przednamnażania TT ani pipetować z dna probówki do przednamnażania, aby uniknąć przeniesienia osadów.
Specjalne instrukcje dotyczące zatwierdzonych metod
AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
Certyfikat AOAC® Performance TestedSM nr #091501

W programach AOAC Research Institute OMASM oraz PTMSM Molekularny test Neogen do wykrywania 2 – Salmonella
okazał się skuteczną metodą wykrywania bakterii Salmonella. W Tabeli 3 przedstawiono macierze przetestowane w
ramach tego badania.

6PL (Polski)
Tabela 3. Protokoły przednamnażania zgodnie z metodą AOAC OMASM 2016.01 oraz AOAC PTMSM, certyfikat nr 091501.
Objętość próbki przenoszona do probówek z roztworem lizującym Neogen wynosi 20 µl.
Temperatura
przednamnażania
(± 1°C)

Czas
przednamnażania
(godz.)

41,5

10–24

225 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

41,5

10–24

325 g

975 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

41,5

14–24

325 g

2925 ml BPW wg ISO

37

18–24

25 g

225 ml BPW wg ISO

375 g

1500 ml BPW wg ISO

37

18–24

Pieprz czarny, surowa cała
krewetka, pakowany surowy
szpinak, pasteryzowany
przetworzony ser amerykański

25 g

225 ml BPW wg ISO

37

18–24

Płukanka z tusz kurczaka

30 ml

30 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

41,5

18–24

Gąbka do wymazówz tusz kurczaka

1 gąbka

50 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

41,5

18–24

Błyskawiczne odtłuszczone
mleko w proszku

25 g

225 ml BPW wg ISO

37

20–24

Kakao w proszku

25 g

225 ml BPW wg ISO

37

24–28

Pasteryzowane całe jaja
w płynie

100 ml900 ml BPW wg ISO

37

18–24

Woda irygacyjna
po kiełkowaniu

375 ml3375 ml BPW wg ISO

37

18–24

25 g

225 ml BPW wg ISO375 g3375 ml BPW wg ISO

37

18–24

10 g

90 BPW-ISO

41.5

28-32

Zabezpieczony beton

1 gąbka

225 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

41,5

18–24

Stal nierdzewna

1 wacik

10 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

41,5

18–24

Zabezpieczona
płytka ceramiczna

1 gąbka

50 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

41,5

18–24

Czas przednamnażania
(godz.)

Podłoże do
przednamnażania
dodatkowego (ml)Temperatura
przednamnażania
dodatkowego(± 1°C)Czas przednamnażania
dodatkowego(godz.)

18–24

R-V R10: 0,1 ml
w 10 ml(a)

41,5

4–24

Macierz próbki

Wielkość próbkiObjętość bulionu
przednamnażającego

25 g

225 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

325 g

975 ml BPW wg ISO(wstępnie ogrzanego)

25 gSurowa mielona wołowina

Surowy mielony kurczak
Smażony kurczak panierowany
Sucha karma dla psów

Kremowe masło orzechoweŚrodowiskowe

Dried cannabis flower,
dried hemp flower(4)Macierz
próbki
Surowakrewetka,
z głową

Objętość
Temperatura
Wielkość
bulionu
przednamnażania
próbkiprzednamna(± 1°C)żającego
25 g

225 ml BPW
wg ISO37(a) Przenieść 10 µl przednamnożonej próbki do probówek z roztworem lizującym. Patrz krok 4.7 w części Liza.

7

PL (Polski)
Certyfikacja NF VALIDATION instytutu AFNOR Certification

3M 01/16 -11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en
Dodatkowe informacje na temat końca ważności można znaleźć w certyfikacie NF VALIDATION dostępnym na wskazanejpowyżej stronie internetowej.
Metoda certyfikowana według NF VALIDATION zgodnie z normą ISO 16140-2(7) w porównaniu do normy ISO 6579(3).
Zakres walidacji: Wszystkie produkty żywnościowe przeznaczone dla ludzi, próbki ze środowiska produkcyjnego(włącznie z próbkami z produkcji pierwotnej), karma i pasza dla zwierząt przez wykonanie testów walidacyjnych na
szerokiej gamie produktów spożywczych.
Przygotowanie próbki: Próbki należy przygotować zgodnie z normami EN ISO 6579(3) oraz EN ISO 6887(10-15).
Wersja oprogramowania: Patrz certyfikat.
Tabela 4. Protokoły przednamnażania zgodnie z metodą certyfikowaną według NF VALIDATION 3M 01/16 -11/16.
Wielkość
próbkiObjętość
bulionu przednamnażającego

Protokół 1:• Szeroka gama przetworzonych
produktów spożywczych(z wyłączeniem proszku
jajecznego, przetwarzanych
warzyw i owoców oraz
produktów określonych
w innych protokołach)• Wszystkie ryby i surowe
owoce morza• Karma i pasza dla zwierząt
• Produkcja pierwotna(bez odchodów)

25 g

225 ml BPW
wg ISO

37

18–26

20

Protokół 2:• Szeroka gama surowej
i nieprzetworzonej żywności
(z wyłączeniem surowych ryb
i surowych owoców morza,
a także produktów określonych
w innych protokołach)• Proszki jajeczne• Wszystkie owoce i warzywa• Próbki środowiskowe
z produkcji żywności

25 g,1
szmatkalub
1 wacik

225 ml wstępnie
ogrzanego podłoża
BPW wg ISO

41,5

18–26

20

25 g

225 ml BPW
wg ISO

37

20–26

20

25 g

225 mlw odtłuszczonym
mleku UHT
+ 0,002% zieleni
brylantynowej

37

24–30

20

ProtokółProtokół 3:• Sproszkowane
produkty mleczne
Protokół 4:• Produkty kakaowe zawierające
ponad 20% kakao

8

Temperatura
Czas
przednamnażania przednamna(+1°C)żania (godz.)Objętość
analizowanej
próbki (µl)(a)PL (Polski)
Protokół 5:• Przyprawy, zioła aromatyczne,
koncentraty, herbaty, kawy,
dodatki kulinarne
Protokół 6:• Mięso surowe
Protokół 7:• Produkcja pierwotna(z odchodami)Protokół 8:• Pokarm dla niemowląt, płatki
śniadaniowe dla niemowląt,sproszkowane produkty
mleczne bez probiotyków(b)Protokół 9:• Pokarm dla niemowląt, płatki
śniadaniowe dla niemowląt,sproszkowane produkty
mleczne z probiotykami(b)25 g

235 ml 2 x BPW
ISO + K2SO3
0,5% + 240 ml
odtłuszczonego
mleka UHT

37

24–30

10

25 g

225 ml wstępnie
ogrzanego podłoża
BPW wg ISO

41,5

10–24

20

1 zestawokładzinna buty

100 ml w bulionie
tetrationianowym

37

22–24

20

25 g

225 ml bulionu
tetrationianowego

375 g

3375 ml wstępnie
ogrzanego podłoża
BPW wg ISO

37

20–26

20

375 g

3375 ml wstępnie
ogrzanego podłoża
BPW wg ISO+ wankomycyna(10 mg/l)

37

20–26

20

(a) Objętość próbki przenoszona do probówek z roztworem lizującym. Patrz krok 4.7 w części Liza.
(b) W przypadku dużych próbek produktów w proszku i płatków śniadaniowych materiał należy powoli wprowadzać do
płynu, często go mieszając, by nie powstawały grudy.
UWAGI:• Próbki o wielkości przekraczającej 25 g nie były badane w badaniu według NF VALIDATION z wyjątkiem protokołu 8 i 9.
• Krótkie protokoły detekcji są wrażliwe na warunki inkubacji. Należy stosować się do warunków temperaturowychokreślonych w specyfikacji technicznej. Obowiązkiem użytkownika jest skontrolowanie, czy po wstępnym ogrzaniu
bulion przednamnażający osiągnie temperaturę wymaganą przed inkubacją. Czas przygotowywania próbek,czyli opóźnienie między końcem etapu wstępnego ogrzewania bulionu przednamnażającego a początkiem
etapu inkubacji próbki żywności, nie powinien przekroczyć 45 minut. Podczas inkubacji zaleca się stosowanie
wentylowanego inkubatora.
• Podczas przenoszenia próbki z przednamnażającego bulionu tetrationianowego (TT) do probówek
z roztworem lizującym Neogen nie wolno wytrząsać podłoża do przednamnażania TT ani pipetować z dna
probówki do przednamnażania, aby uniknąć przeniesienia osadów. Przeniesienie osadu może skutkować
uzyskaniem nieprawidłowych wyników.
• Zalecane momenty przerwania protokołu występują po etapie przednamnażania lub przed lizą próbki. Bulion
z przednamnożoną próbką lub próbkę lizatu można przechowywać w temperaturze 2–8°C przez maksymalnie
72 godziny. Po wyjęciu bulionu przednamnażającego z przechowywania należy wznowić testy od kroku 1 części Liza.
Po wyjęciu próbki lizatu z przechowywania należy wznowić testy od kroku 8 części Liza.
Przygotowanie Tacy Neogen® urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej
1. Zmoczyć szmatkę lub jednorazowy ręcznik 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworem wybielacza do użytku domowego
i przetrzeć nim Tacę Neogen® urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej.
2. Spłukać wodą Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej.
3. Osuszyć Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej za pomocą
jednorazowego ręcznika.
4. Przed rozpoczęciem użytkowania należy sprawdzić, czy Taca Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów dodiagnostyki molekularnej jest sucha.
Przygotowanie Wkładki Neogen® bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej
Wkładkę Neogen® bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej należy umieścić bezpośrednio na blacie laboratoryjnym.
Stosować blok w temperaturze otoczenia w laboratorium (20–25°C).
Przygotowanie Wkładki Neogen® bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej
Wkładkę Neogen® bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej należy umieścić w suchym podwójnym bloku
grzewczym. Włączyć suchy blok grzewczy i ustawić temperaturę pozwalającą Wkładce Neogen bloku grzewczego do
diagnostyki molekularnej osiągnąć i utrzymać temperaturę 100 ± 1°C.

9

PL (Polski)
UWAGA: W zależności od typu bloku grzewczego Wkładkę Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnejnależy zostawić na około 30 minut, by osiągnęła odpowiednią temperaturę. Używając odpowiedniego, skalibrowanego
termometru (przykładowo częściowo zanurzanego termometru lub cyfrowego termometru z termoogniwem, a nie
całkowicie zanurzanego termometru) umieszczonego w wyznaczonym miejscu, sprawdzić, czy temperatura Wkładki
Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C.
Przygotowanie Urządzenia Neogen® do diagnostyki molekularnej
1. Uruchomić oprogramowanie Neogen® do diagnostyki molekularnej i zalogować się. Skontaktować się z
przedstawicielem Neogen Food Safety, aby upewnić się, że dysponują Państwo najnowszą wersją oprogramowania.
2. Włączyć Urządzenie Neogen do diagnostyki molekularnej.
3. Utworzyć lub edytować serię z danymi dla każdej próbki. Szczegółowe informacje są dostępne w instrukcji obsługi
Systemu Neogen do diagnostyki molekularnej.
UWAGA: Przed włożeniem Tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej z
probówkami reakcyjnymi Urządzenie Neogen do diagnostyki molekularnej musi osiągnąć stan gotowości. Etap
nagrzewania trwa około 20 minut i sygnalizuje go POMARAŃCZOWA kontrolka na pasku stanu urządzenia. Kiedyurządzenie będzie gotowe do rozpoczęcia analizy, kolor paska stanu zmieni się na ZIELONY.
Liza
Za pomocą śrubokrętu lub szpatułki wyjąć dolną część stojaka z probówkami z roztworem lizującym Neogen przed
umieszczeniem go we Wkładce Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.

1. Umożliwić ogrzanie probówek z roztworem lizującym Neogen, pozostawiając stojak w temperaturze pokojowej(20–25°C) na noc (16–18 godzin). Alternatywą dla równoważenia temperatury probówek z roztworem lizującym
Neogen do temperatury pokojowej jest pozostawienie probówek z roztworem lizującym Neogen na stole
laboratoryjnym na co najmniej 2 godziny, inkubacja probówek z roztworem lizującym Neogen w inkubatorze
nastawionym na 37 ± 1°C przez 1 godzinę lub umieszczenie ich w suchym podwójnym bloku grzewczym na 30 sekund
w temperaturze 100 ± 1°C.
2. Odwrócić probówki zamknięte korkiem w celu wymieszania ich zawartości. Przejść do następnego kroku w ciągu
4 godzin.
3. Wyjąć bulion przednamnażający z inkubatora.
4. Dla każdej próbki oraz próbki NC (sterylnego podłoża przednamnażającego) wymagana jest jedna probówka
z roztworem lizującym Neogen.
4.1 Taśmy z probówkami z roztworem lizującym Neogen można dociąć do żądanej liczby probówek z roztworem
lizującym Neogen. Zależnie od sytuacji należy dobrać liczbę pojedynczych probówek z roztworem lizującym
Neogen lub taśm złożonych z 8 probówek. Umieścić probówki z roztworem lizującym Neogen w pustym stojaku.
4.2 Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami z roztworem lizującym
Neogen pojedynczo i na każdym etapie przenoszenia stosować nową końcówkę pipety.
4.3 Przednamnożoną próbkę należy przenieść do probówek z roztworem lizującym Neogen w opisany poniżej sposób:
Najpierw przenieść każdą przednamnożoną próbkę do pojedynczej probówki z roztworem lizującym Neogen.
Na końcu przenieść NC.
4.4 Do zdejmowania korków taśmy z probówkami z roztworem lizującym Neogen (po jednej taśmie na raz) należy
wykorzystać Narzędzie Neogen® do zakładania/zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej – Liza.
4.5 Zdjąć korek probówki z roztworem lizującym Neogen – jeśli lizat będzie zachowany do celów ponownego
wykonania testu, umieścić korki w czystym pojemniku do ponownego założenia po wykonaniu lizy.
4.5.1 Odnośnie postępowania z lizatem patrz Załącznik A.
4.6 W przypadku lepkich próbek przed pobraniem próbki od strony przefiltrowanej wymieszać torbę
do przednamnażania.
4.7 Przenieść 20 µl próbki do probówki z roztworem lizującym Neogen, jeśli nie określono inaczej w tabeli z
protokołami (przykładowy protokół 5 oraz przednamnażanie dodatkowe w RVS lub w przypadku stosowania
próbek środowiskowych z buforem neutralizującym).

10PL (Polski)
20 µl

5. Powtarzać kroki od 4.4 do 4.7 do momentu dodania każdej indywidualnej próbki do odpowiedniej probówki
z roztworem lizującym Neogen w taśmie.
6. Po przeniesieniu wszystkich próbek przenieść 20 µl NC (jałowe podłoże przednamnażające, np. BPW) do probówki
z roztworem lizującym Neogen. Nie stosować wody jako NC.
7. Upewnić się, że temperatura Wkładki Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C.
8. Umieścić odkryty stojak na probówki z roztworem lizującym Neogen we Wkładce Neogen bloku grzewczego do
diagnostyki molekularnej i ogrzewać przez 15 ± 1 min. Podczas ogrzewania roztwór lizujący Neogen zmieni barwę zróżowej (chłodny) na żółtą (gorący).
8.1. Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie
biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu Neogen do diagnostyki molekularnej.
9. Wyjąć odkryty stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z bloku grzewczego i umożliwić schłodzenie we
Wkładce Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej przez co najmniej 5 minut, a maksymalnie 10 minut.
Wkładka Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej, stosowana w temperaturze otoczenia, powinna
znajdować się bezpośrednio na stole laboratoryjnym. Po schłodzeniu roztwór lizujący ponownie przybierze różową barwę.
10. Wyjąć stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z Wkładki Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki
molekularnej.
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplifikacja
1. Dla każdej próbki oraz NC wymagana jest jedna probówka reagentowa Molekularnego testu Neogen do wykrywania
2 – Salmonella.
1.1 Taśmy z probówkami można dociąć do pożądanej liczby probówek. Dobrać wymaganą liczbę pojedynczych
probówek reagentowych Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella lub taśm złożonychz 8 probówek.
1.2 Probówki reagentowe należy umieścić na pustym stojaku.
1.3 Nie wolno dopuścić do wstrząśnięcia granulek reagentowych na dnie probówek.
2. Wybrać jedną probówkę Kontroli reagenta i umieścić ją w stojaku.
3. Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami reagentowymi pojedynczo i na każdym
etapie przenoszenia stosować nową końcówkę pipety.
4. Przenieść poszczególne lizaty do probówki reagentowej Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonellaoraz do probówki Kontroli Neogen reagenta w sposób opisany poniżej:Najpierw przenieść poszczególne próbki lizatu do osobnych probówek reagentowych, a następnie przenieść próbkę
NC. Na końcu nawodnić probówkę Kontroli Neogen reagenta.
5. Do zdejmowania korków probówek reagentowych Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonellanależy wykorzystać Narzędzie Neogen® do zakładania/zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej –Reagent, po jednej taśmie na raz. Wyrzucić korek.
5.1 Przenieść 20 µl próbki lizatu z górnej 1/2 płynu (unikać osadu) w probówce z roztworem lizującym Neogen do
odpowiedniej probówki reagentowej Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella. Pipetować
pod kątem, aby nie dopuścić do wstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając
roztwór pipetą 5 razy.

11

PL (Polski)
5.2 Powtarzać krok 5.1, aż wszystkie pojedyncze próbki lizatu zostaną dodane do odpowiednich probówek
reagentowych Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella znajdujących się w taśmie.
5.3 Probówki reagentowe Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella należy zamknąć załączonymi
dodatkowymi korkami i za pomocą zaokrąglonej strony Narzędzia Neogen do zakładania/zdejmowania korków
probówek do diagnostyki molekularnej – Reagent wywołać nacisk ruchem w przód i w tył, aby upewnić się,że korek został szczelnie nałożony.
5.4 Kroki od 5.1 do 5.3 należy powtarzać zależnie od potrzeby dla wszystkich próbek poddawanych badaniu.
5.5 Po przeniesieniu wszystkich próbek lizatu powtórzyć kroki od 5.1 do 5.3, aby przenieść 20 µl lizatu NC do
probówki reagentowej Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella.
5.6 Przenieść 20 µl lizatu NC do probówki Kontroli Neogen reagenta. Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić dowstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając roztwór pipetą 5 razy.
6. Zamknięte korkiem probówki należy umieścić na czystej i odkażonej tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania
testów do diagnostyki molekularnej. Zamknąć i zablokować pokrywę tacy Neogen urządzenia szybkiego ładowania
testów do diagnostyki molekularnej.

20 µL

7. W oprogramowaniu Neogen do diagnostyki molekularnej sprawdzić i potwierdzić konfigurację analizy.
8. Kliknąć przycisk Start w programie i wybrać używane urządzenie. Nastąpi automatyczne otwarcie pokrywy
wybranego urządzenia.
9. Aby rozpocząć analizę, należy umieścić Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki
molekularnej w Urządzeniu Neogen do diagnostyki molekularnej i zamknąć pokrywę. Na wyniki trzeba poczekać 60
minut, choć wyniki dodatnie można uzyskać wcześniej.
10. Po zakończeniu testu należy wyjąć Tacę Neogen urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnejz Urządzenia Neogen do diagnostyki molekularnej i zutylizować probówki, namaczając je w 1–5% (obj./obj., wodnym)
roztworze domowego wybielacza przez 1 godzinę i usuwając z obszaru przygotowywania testów.
WAŻNA INFORMACJA: Aby zminimalizować ryzyko otrzymania wyników fałszywie dodatnich w związku
z zanieczyszczeniem krzyżowym, nie należy otwierać probówek reagentowych zawierających DNA po amplifikacji.
Dotyczy to probówek reagentowych Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella, probówek Kontroli
Neogen reagenta, probówek reagentowych oraz probówek Kontroli Neogen macierzy. Zanieczyszczone uszczelnione
probówki reagentowe należy utylizować, namaczając je w 1–5% (obj./obj.; wodnym) roztworze domowego wybielaczaprzez 1 godzinę i wynosząc poza obszar przygotowania testów.
Wyniki i interpretacja
Algorytm interpretuje krzywą strumienia świetlnego powstałego w wyniku wykrycia amplifikacji kwasu nukleinowego.
Oprogramowanie prowadzi automatyczną analizę wyników oraz koduje je odpowiednimi kolorami. Wynik dodatni lub
ujemny określa się przez analizę wielu określonych niepowtarzalnych parametrów krzywej. Domniemane wyniki dodatnie
przekazuje się w czasie rzeczywistym, natomiast wyniki ujemne wyświetlą się po zakończeniu testu.
Domniemane wyniki dodatnie próbek należy potwierdzić zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi
laboratorium lub stosując odpowiednią referencyjną metodę potwierdzającą(1,2,3), rozpoczynając od transferu z głównego
podłoża przednamnażającego Neogen BPW wg ISO do drugorzędowych bulionów przednamnażających, a następnie
izolując i potwierdzając izolaty za pomocą stosownych metod biochemicznych i serologicznych.
UWAGA: Nawet próbka ujemna nie da odczytu zerowego, ponieważ system i odczynniki do amplifikacji Molekularnego
testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella charakteryzują się swoistym poziomem tła w RLU.
W rzadkich przypadkach, przy wystąpieniu nietypowego strumienia światła wychodzącego, algorytm opisze je jako
„Sprawdzić”. Firma Neogen zaleca powtórzenie testów dla wszystkich próbek oznaczonych jako „Sprawdzić”. Jeżeli
utrzymuje się wynik „Sprawdzić”, należy przejść do testu potwierdzającego z zastosowaniem preferowanej metody lub
zgodnie z lokalnymi przepisami.

12PL (Polski)
Typstudzienki

Symbol wyniku
dla studzienki

Wynik

Interpretacja wyników

PróbkaDodatni

Domniemanie wyniku dodatniego próbki pod kątem
docelowego patogenu.

PróbkaUjemnyWynik ujemny próbki pod kątem docelowego patogenu.

BlokadaMacierz próbki była niedostępna dla testu. Konieczne możebyć powtórzenie testu. Więcej informacji można znaleźć
w części Rozwiązywanie problemów oraz w Informacjacho produkcie.

Sprawdzić

Brak możliwości oznaczenia obecności lub braku patogenu
docelowego. Konieczne może być powtórzenie testu. Więcej
informacji można znaleźć w części Rozwiązywanie problemów
oraz w Informacjach o produkcie.

PróbkaPróbkaNie wykryto bioluminescencji. Konieczne może być
powtórzenie testu. Więcej informacji można znaleźć w części
Rozwiązywanie problemów oraz w Informacjach o produkcie.
Potwierdzenie wyników zgodnie z certyfikowaną metodą NF VALIDATION
W kontekście walidacji NF VALIDATION wszystkie próbki określone jako dodatnie w badaniu Molekularnym testem
Neogen do wykrywania 2 – Salmonella należy potwierdzić, wykonując jeden z następujących testów:
PróbkaBłąd

Opcja 1: Zastosowanie normy ISO 6579(3), począwszy od podłoża przednamnażającego w postaci buforowanej
wody peptonowej(3).
Opcja 2: Wdrożenie metody potwierdzającej, która polega na wykonaniu następujących czynności: Przenieść 0,1 ml
podłoża przednamnażającego BPW wg ISO(3) lub tetrationianowych bulionów przednamnażających (próbki produkcji
pierwotnej) do 10 ml bulionu RVS. Inkubować przez 24 ± 3 godziny w temperaturze 41,5°C. Umieścić na agarze XLD(ksyloza, lizyna, deoksycholan)(3) lub na agarze chromogenicznym specyficznym dla bakterii Salmonella. Wykonać
aglutynację lateksową za pomocą testu lateksowego Oxoid Salmonella bezpośrednio na wyizolowanych koloniach.
Opcja 3: Wykorzystanie sond kwasu nukleinowego w sposób opisany w normie EN ISO 7218(5) zastosowanych na
wyizolowanych koloniach z agaru XLD lub chromatycznego (patrz opcja 1 lub 2). Tego badania nie można wykonywać za
pomocą Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella.
Opcja 4: Zastosowanie innej metody zgodnie z certyfikatem NF VALIDATION, której zasada musi się różnić od
Molekularnego testu Neogen do wykrywania 2 – Salmonella. Należy stosować kompletny protokół opisany dla tej drugiej
metody poddanej walidacji. Wszystkie kroki poprzedzające rozpoczęcie potwierdzania muszą być wspólne dla obu metod.
W przypadku niezgodności wyników (domniemany wynik dodatni w badaniu Molekularnym testem Neogen do
wykrywania 2 – Salmonella, brak potwierdzenia jedną z powyższych metod, a w szczególności w przypadku testu
aglutynacji lateksowej) laboratorium musi wykonać czynności niezbędne do zapewnienia ważności uzyskanych wyników.
W przypadku pytań dotyczących konkretnych zastosowań lub procedur należy odwiedzić stronę
www.neogen.com lub skontaktować się z lokalnym przedstawicielem lub dystrybutorem firmy Neogen.

Załącznik A. Przerwanie protokołu: Przechowywanie i ponowne badanie lizatów poddanych
obróbce cieplnej

1. W celu przechowywania lizatu poddanego obróbce termicznej należy ponownie zamknąć probówkę lizatu czystym
korkiem (patrz część Liza, punkt 4.5).
2. Przechowywać w temp. od 4 do 8°C maksymalnie przez 72 godziny.
3. Przygotować przechowywaną próbkę do amplifikacji przez odwrócenie 2–3 razy w celu zmieszania.
4. Otworzyć probówki.
5. Umieścić mieszane probówki lizatu we Wkładce Neogen bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej i ogrzewać
w temp. 100 ± 1°C przez 5 ± 1 min.
6. Wyjąć stojak z probówkami z roztworem lizującym Neogen z bloku grzewczego i umożliwić schłodzenie we Wkładce
Neogen bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej przez co najmniej 5 minut, a maksymalnie 10 minut.
7. Kontynuować protokół od etapu Amplifikacji wyszczególnionego powyżej.

13

PL (Polski)

Bibliografia:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identificationof Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Effective Date: 2 January 2019.
3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping ofSalmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance formicrobiological examination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System. Skontaktować się z przedstawicielem firmy Neogen Food Safety, aby uzyskać
egzemplarz tego dokumentu.
7. ISO 18593. Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.
8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk
(Reconstituted). January 2011.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods against a reference method.
10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension anddecimal dilutions.
11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.
12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary
production stage.

Objaśnienie symboli

info.neogen.com/symbols

14

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A

JA （日本語）

発行日：2024-01

製品情報

Neogen® 分子検出アッセイ2 - サルモネラ
製品の概要および用途

Neogen®分子検出アッセイ2 - サルモネラは、
Neogen®分子検出システムを用いて前培養した食品、飼料および食品・飼料製造工
程環境検体中のサルモネラを迅速かつ特異的に検出するために使用します。

Neogen®病原菌検出アッセイは、増幅した菌を検出するために、高い特異性と感度で核酸配列を迅速に増幅するLAMP法と、生物発光を組み合わせています。
推定陽性結果はリアルタイムに表示され、陰性結果は検査が完了してから表示されます。
結果が陽性と推定される場合は、任意の別の方法または行政の規制によって指定された通りに確認する必要があります(1,2,3)。

Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラは、検査技術の訓練を受けた技術者が検査室環境で使用することを想定してます。
Neogenは、食品または飲料以外の産業における本製品の使用に関しては検証しておりません。たとえば、
Neogenは、
本製品
を医薬品、
化粧品、
臨床または動物診断検体の検査で使用することについて検証しておりません。
Neogen分子検出アッセイ2 - サ
ルモネラは、可能性のあるすべての食品や食品製造工程、検査プロトコル、あるいはすべての菌株について評価されたわけではありません。

すべての検査法と同様に、前増菌培地のメーカーや組成、品質などの要因が結果に影響する場合があります。
採取方法、
検査プロ
トコル、
検体の調製、
取り扱い、および検査手技などの要因が結果に影響する場合もあります。
Neogenは、検査方法がお客様の基
準を確実に満たすことを確認するために、お客様の環境において、特定の食品および微生物負荷生菌保存効力テスト（チャレンジテスト）を用いて十分な数の検体で、前増菌培地を含む検査方法を評価することをお勧めします。
Neogenは、
緩衝ペプトン水 (BPW) ISOを用いてNeogen病原菌検出アッセイ2 - サルモネラを評価しました。

Neogen®分子検出装置は、
アッセイのライシスステップ中に熱処理を行った検体を測定することを目的としており、検体中に存在する微生物を破壊するように設計されています。
アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、
潜在的バイオハザードとみなされる可能性がありますので、Neogen分子検出装置には入れないでください。
Neogen食品安全性部門は、設計と製造についてISO（国際標準化機構）9001認証を取得しています。
Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ検査キットは、表1に記載のとおり96検体用となっています。
表1. Neogen病原菌検出アッセイキットの内容
品目

Neogen®ライシス溶
液 (LS)

Neogen®分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬
チューブ
予備キャップ

Neogen®試薬コントロール (RC)

特徴

数量

クリアチューブに入った
ピンク色の溶液

96検体分（8連チューブ12セット）

緑のキャップ

96検体分（8連キャップ12セット）

緑のチューブフリップトップ式
クリアチューブ

96検体分（8連チューブ12セット）

内容

チューブ1本につきLS580 µL

凍結乾燥特異的増幅試
薬および検出試薬

16検体分
凍結乾燥コントロール（チューブ8本入り2パウチ） DNA、増幅試薬および検出試薬

コメント

ラック入り、
調製
済み
調製済み

調製済み

調製済み

陰性コントロール (NC)（キットには付属しません）は、
BPW ISOなどの滅菌済前増菌培地です。
水は陰性コントロールとして使用しないでください。

安全性
理解し、
Neogen分子検出システムおよびNeogen分子検出アッセイ2 - サルモネラの製品情報に記載のすべての安全情報を読み、遵守してください。
また、今後参照できるように、
この安全性指示を保管しておいてください。
警告： 警告は、それを避けなければ死亡または重篤な傷害ないし物的損害が発生しうる危険な状況を示します。
注記： 回避できない場合、物的損害が起こり得る危険な状況を示します。

1

警告

JA （日本語）

Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラは、ヒトまたは動物の病態診断に使用しないでください。

検査実施担当者に適切な検査技術を身につけるように指導してください（例：GLP、ISO/IEC 17025(4)またはISO 7218(5)）。

汚染製品の出荷につながる偽陰性結果に伴うリスクを回避するために：• プロトコルに従い、製品情報に記載のとおりに検査を行ってください。
• Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラは、
外箱表示および製品情報に記載のとおりに保管してください。
• Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラは、
有効期限までに必ず使用してください。
• Neogen病原菌検出アッセイ2 - サルモネラは、社内または第三者による検証を行った食品、飼料、食品加工環境検体に使用してください。
• Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラは、社内または第三者による検証を行った表面、
殺菌剤、プロトコル、菌株のみに使用
してください。
• アリルスルホン酸塩添加中和緩衝液を含む環境検体については、試験前に1:2の希釈（検体1に対して滅菌増菌ブロス1）を行ってください。
別の方法としては、
中和緩衝前増菌ブロス10 µL Neogenライシスチューブに滴下します。
アリルスルホン酸複合体含有中和緩衝液を含む製品は、Neogen®検体処理製品：RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,
HS10NB2GおよびHS2410NB2G。

化学物質およびバイオハザードへの暴露に伴う危険を回避するために：• 技能訓練を受けた検査実施担当者の管理下で、適切な設備のある検査室にて病原菌検査を行ってください。
培養済み前増菌培地および培養済み前増菌培地と接触する機器または接触面には、人体に有害となりうる量の病原菌が含まれている可能性があります。
• 試薬および汚染された検体を取り扱う際は、適切な保護衣、保護メガネの装着など、標準的な検査室の安全手順に常に従ってください。
• 前増菌後の培地や、増幅後の試薬チューブ内容物には触れないでください。
• 現行の業界基準に従って、増菌された検体を廃棄してください。
• アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハザードと考えられる可能性がありますので、Neogen分子検出装置内には入れないでください。

アッセイ準備中の交差汚染に伴う危険を回避するために：• 手袋を必ず着用してください（ユーザー保護と遺伝子の混入を避けるため）。
環境汚染に伴う危険を回避するために：• 汚染廃棄物の廃棄は現行の業界基準に従ってください。

高温の液体への暴露に伴う危険を回避するために：• ヒーターの温度設定を推奨温度以上にしないでください。
• 推奨される加熱時間を超えないでください。
• 適切な較正済みの温度計を使用して、Neogen®分子検出ヒートブロックインサートの温度を確認してください（例：浸線付温度計またはデジタル熱電対温度計。
全浸没温度計は使用しないこと）。
温度計は、
必ずNeogen分子検出ヒートブロックインサー
トの指定の部位に設置してください。

注記

アッセイ準備中の交差汚染に伴う危険を回避するために：• 試薬ペレットを水和する前に、手袋を交換してください。
• 滅菌済みのエアロゾルバリア材（フィルター付）、
分子生物学グレードのピペットチップの使用を推奨します。
• 検体ごとに新しいピペットチップを使用してください。
• GLP（医薬品安全性試験実施基準）に従って検体を前増菌ブロスからライシスチューブに移してください。
ピペットの汚染を回避するため、中間的な滴下ステップを追加することもできます。
例えば、前増菌された各検体を滅菌チューブに滴下することができます。
• 利用可能な場合は、殺菌灯が装備された分子生物取扱エリアを使用してください。
検査室の作業台および備品（ピペット、キャップ／デキャップツール等）は、
水で1～5% (v/v) に希釈したの家庭用漂白液またはDNA除去用液を使用して定期的に除染してください。
偽陽性の結果に伴う危険を回避するために：• 増幅後のチューブは絶対に開けないでください。
• 汚染されたチューブは、
常に、
水で1-5% (v/v) に希釈したの家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄してください。
• 増幅後の試薬チューブは絶対にオートクレーブで加熱滅菌処理しないください。

廃棄に関する詳細および行政の規制については、
安全データシートをご参照ください。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト (www.neogen.com) をご覧いただくか、Neogen販売担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。

2

JA （日本語）

お客様の使用責任

お客様には、使用前に製品説明書および製品情報を熟知していただく責任があります。
詳細につきましては、
当社ウェブサイト
www.neogen.comをご覧いただくか、
お近くのNeogen販売担当者または販売店までお問い合わせください。

検査方法を選択する際には、採取方法、検査プロトコル、検体の準備、取り扱い、検査手技、検体自体などの外的要因が結果に影響することを認識することが重要です。

検査方法または製品を選択する際に、適切な基質および微生物負荷を用いて十分数の検体を評価して、選択した試験方法がお客様の基準を満たすことをお客様の責任でご確認ください。

また、検査方法および結果が顧客または供給業者の要件を満たしているかについても、
事前にお客様の責任でご確認ください。

どの検査方法を使用した場合でも、Neogen食品安全性製品を用いて得られた結果は、検査を実施した食品基質または工程の品質を保証するものではありません。

各種食品基質の検査方法の評価にご利用いただくため、NeogenではNeogen®分子検出基質コントロールキットをご用意しました。
必要に応じて、
基質コントロール (MC) を使用し、基質がNeogen分子検出アッセイ2 - サルモネラの検査結果に影響を及ぼすかどうかを判定してください。
Neogenの検査法を採用する場合、または新規や由来の不明な基質、あるいは原材料または工程が変更された基質基質を検査する場合は、バリデーション期間中に、基質を代表する複数の検体（由来の異なる検体）を検査してください。
基質は、成分や加工など固有の特性を備える製品の種類と定義できます。
基質間の違いは、加工や外観（例：生か滅菌済みか、
新
鮮か乾物か、
等）の違いに起因する作用と同じように単純な場合があります。

保証の範囲 / 賠償の制限

個々の製品パッケージの限定保証条項に明示されている場合を除き、NEOGENは明示または黙示を問わず、商品性または特定の目的への適合性に関する保証を含むがこれに限定されない、
いかなる種類の保証も負いかねます。
Neogen食品安全性部門の製品に欠陥があった場合、Neogenまたは指定販売店で交換あるいは製品購入価格の払い戻しをいたします。
対応は上記のみとさせていただきます。
製品の欠陥が疑われる場合は、判明した時点から60日以内に速やかにNeogenに通知し、製品をNeogenに返品する必要があります。
ご不明な点がございましたら、Neogen の担当者または Neogen の正規代理店にお問い合わせください。

Neogenの保証責任範囲

NEOGENは、
直接的、間接的、特殊なもの、
偶発的または必然的であるかを問わず、利益損失を含むがこれに限定されないあらゆ
る損失または損害に対しての責任を負わないものとします。
いかなる場合も、
いかなる法的理論の下でも、Neogenの保証責任範
囲は、欠陥と申し立てられた製品の購入金額を超えないものとします。

保管と廃棄

Neogen病原菌検出アッセイ2 - サルモネラは2～8℃で保管し、冷凍しないでください。
暗所で保管してください。
キット開封後は、ホイルパウチが破損していないことを確認してください。
パウチが破損している場合は、使用しないでください。
開封後、
使用しない
試薬チューブは、
凍結乾燥試薬の安定性を保つため、乾燥剤と共に再密閉可能なパウチ内に必ず保管してください。
再密閉したパ
ウチは2～8℃で60日間保存することができます。

Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラは使用期限までに必ず使用してください。
使用期限とロット番号は箱の外側のラベルに記載しています。
使用後、増菌ブロスおよびNeogen分子検出アッセイ2 - サルモネラには病原性の物質が含まれている可能性があります。
検査終了後は、汚染廃棄物に関する現行の業界基準に従って廃棄してください。
廃棄に関する詳細および行政の規制については、
安全データシートをご参照ください。

使用方法

すべての指示に、注意深く従ってください。
従わない場合、
正確な結果が得られないことがあります。

検査室の作業台および備品（ピペット、
キャップ／デキャップツール等）は、
水で1～5% (v/v) に希釈したの家庭用漂白液またはDNA除去用液を使用して定期的に除染してください。

ユーザーは、「Neogen分子検出システムの設置資格 (IQ)／操作資格 (OQ) プロトコルと手順」(6)に記載のとおり、Neogen分子検出システムのオペレーター資格 (OQ) トレーニングを受講する必要があります。
具体的な要件については、「バリデート済みの方法」の項を参照してください：表3. AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01およびAOAC® Performance TestedSM認定証#091501に従う前増菌プロト
コル。
表4. NF VALIDATION 認定証3M 01/16 -11/16に従う前増菌プロトコル。

検体の前増菌
表2、
3、
4には、
食品、
飼料および環境検体の一般増菌プロトコルのガイドラインを示しています。

この検査法がお客様の基準に合致するかを確かめるため、別の採取プロトコルまたは希釈率でバリデートしていただき、お客様の責任で使用の可否をご判断ください。

3

JA （日本語）

食品
1. BPW ISO増菌培地を、試験済み基質に従って検査室周囲温度または41.5 ± 1°Cに平衡させます。
表2、3、4をご覧ください。
2. 増菌培地と検体を無菌的に混合します。

3. ブレンダー、混合器またはハンドミキサーで2 ± 0.2分間、
またはすべての塊が完全に分解するまで十分にホモジナイズし、前増菌懸濁液を均質にします(10-15)。
a. すべての肉検体および微粒子を多く含む検体に関しては、
フィルターバッグの使用を推奨します。

b. 水中で膨張し、高粘度の基質（シリアル、
でんぷんなど）は、粘度が適切に低下するまでさらに希釈を行うか（1:10以上）、
BPS (ISO)(10-13)に滅菌蒸留水で溶解した1% (w/v) αアミラーゼを追加します。

c.

検体量が大きい粉ミルクおよびシリアルに関しては、塊を崩すため良くかき混ぜながら、検体を液体にゆっくり追加します。

4. 適切なプロトコル表の概要に従って培養します（表2、3、4を参照）。

環境検体
殺菌剤の効果を不活性化するために、検体採取装置として、中和溶液を染み込ませたスポンジを使用できます。
Neogenは、殺菌剤不使用のセルローススポンジを使用することを推奨します。
中和溶液には、
Dey-Engley (D/E) 中和ブロスまたはリージンブロスを使用できます。
採取後は、作業領域を殺菌することを推奨します。
警告：アリルスルホン酸複合体をスポンジの水和溶液として含む中和緩衝液の使用を選択する場合には、汚染された製品の出庫につながる偽陰性の伴う危険を回避するために、検査を行う前に増菌環境検体の1：2の希釈液（検体1に対し滅菌増菌ブロス1）を行う必要があります。
別の方法としては、
中和緩衝前増菌ブロス10 µL Neogenライシスチューブに滴下します。

2
cm x 10 cmまたは4” x 4”）
です。
スポンジで
表面上の病原体の有無を確認するための検体採取部分の推奨サイズは、
100 cm（10
検体採取する場合には、採取部分全体をスポンジを2方向に拭くか（左から右、次に上向きから下向きに）、検査室現行のプロトコ
ルまたはFDA BAM(1)、USDA FSIS MLG(2)またはISO 18593:2018(7)に従って環境検体を採取します。

この検査法がお客様の基準に合致するかを確かめるため、別の採取プロトコルまたは希釈率でバリデートしていただき、お客様の責任で使用の可否をご判断ください。
1. BPW ISO前増菌培地を検査する基質によっては41.5 ± 1℃にあらかじめ加熱します。
表2、3、4をご覧ください。

2. 増菌培地と検体を無菌的に混合します。
ブレンダー、
混合装置またはハンドミキサーで2 ± 0.2分ホモジナイズします。
適切なプロトコル表の概要に従って培養します。
表2、3、4をご覧ください。

表2.一般的な前増菌プロトコル。
検体基質

プロトコル 1
食品製品（エッグパウダーおよび他のプロトコールで規定されている製品を除く）(b)プロトコル 2
生および未処理の食品、エッグパウダー、動物飼料および環境検体(c)プロトコル 3
パウダーにした乳製品（乳児用調製粉乳、大豆ベースの乳児用乳児用調製粉乳を含む）

プロトコル 4
ココアベースの製品（パウダー、
チョコレート、菓子類など）

プロトコル 5
その他：スパイス、
芳香ハーブ、
濃厚飼料、インスタントの茶およびコーヒー、
固形ブ
イヨンなど

プロトコル 6
クルミ、
またはクルミを含むミックスナッツ（このプロトコルは、
ピーカンナッツ、アー
モンド、
ピスタチオ、カシューナッツ、栗、マ
カデミアナッツ、
ブラジルナッツおよびピーナツなどの他ナッツ類にも有効）

増菌温度(± 1°C)

前増菌時間
（時間）

検体の分析
量 (µL)(a)225 mL BPW ISO（加温済み）

41.5

18～26

20

25 g

225 mL BPW ISO

37

20～26

20

25 g

ブリリアントグリーン色
素を0.002%含む滅菌した100 g/Lの無脂肪粉
ミルク225 mL(d,e,f)

37

24～30

20

25 g

0.5% K2SO3を含む2X
BPW ISO 235 mL + 滅菌した100 g/Lの粉ミル
ク240 mL (d,g,h)

37

24～30

10

25 g

滅菌した100 g/Lの無脂肪粉ミルク225 mL(d)

37

18～24

20

検体量

前増菌ブロス量25 g

225 mL BPW ISO

25 g

4

37

18～26

20

JA （日本語）(a) ライシス溶液チューブに移す検体量。
ライシスセクションのステップ4.7を参照。
(b) プロトコル1で検査する製品の例：調整済みの料理、
デリのサラダ、
カスタード。

(c) プロトコル2で検査する製品の例：生肉、冷凍野菜、すべてのチース、
発酵乳、
生サラダ
（レタス、
バタビアレタス）。
(d) 無脂肪UHT乳は無脂肪粉ミルクの代用となります。

(e) 無脂肪乳225 mLあたり1%水性ブリリアントグリーン色素溶液0.45 mLで、
ブリリアントグリーン色素の最終濃度が0.002% (0.02 g/L) となります。

(f) 滅菌無脂肪粉ミルクを調製するには、
100 gの無水無脂肪粉ミルク1 gを1 Lの蒸留水または精製水に懸濁させます。
溶解するまで渦巻状に撹拌します。
121℃のオートクレーブで15分処理します。
2～30℃で保存します(8)。
(g) 1000 mLのBPW ISOあたり5 gのK2SO3で、K2SO3で、最終濃度が0.5%となります。

(h) 滅菌した0.5% K2SO3を含む滅菌した2X BPW ISO 235 mLに、
100 g/Lの無脂肪粉ミルク240 mLを添加する必要があります。

オプションの二次前増菌ステップを使用する場合には（Rappaport Vassiliadis培地など）、
1:2の希釈（前増菌検体1に対し滅菌前増菌ブロス1）を行うか、単に二次増菌検体10 µLをNeogenライシス溶液チューブに移すことが必要となります。
テトラチオネート (TT)
ブロスを使用する場合には、二次前増菌検体20 µLをNeogenライシス溶液チューブに移しますが、このとき沈殿物をチューブに移さないようにＴＴ前増菌検体をボルテックスにかけたり前増菌検体チューブの底からピペットで吸い上げたりしないでください。
バリデートされた方法に関する具体的な指示

AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
AOAC® Performance TestedSM認定証#091501

AOAC Research Institute OMASMおよびPTMSMプログラムにおいて、
Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラは、
サルモネラの検出に有効な方法であることが確認されています。
上記試験において検査の対象となった基質を表3に掲載します。

表3.AOAC OMASM 2016.01およびAOAC PTMSM認定証#091501に基づく増菌プロトコル。
Neogenライシス溶液チューブに移す検体量は20 µLです。
検体基質生の牛ひき肉生ひきチキン
調理済みチキンカツ

ドライドッグフード

黒コショウ、
生のエビ全体、包装された生のホウレンソウ、
低温殺菌した米
国産チーズ

チキン洗浄液検体量10～24

225 mL BPW ISO（加温済み）

41.5

10～24

325 g

2,925 mL BPW ISO

37

18～24

375 g

1,500 mL BPW ISO

30 mL
25 g

325 g
25 g
25 g

25 g

クリーム状ピーナツバター

41.5

25 g

325 g

ココアパウダー

使用済みスプラウト灌漑用水

前増菌時間（時間）

225 mL BPW ISO（加温済み）

スポンジ1個低温殺菌液状全卵

増菌温度(± 1°C)

25 g

チキンスポンジ

インスタント無脂肪粉ミルク

前増菌ブロス量

100 mL

975 mL BPW ISO（加温済み）
975 mL BPW ISO（加温済み）

225 mL BPW ISO
225 mL BPW ISO

37

14～24

18～24

30 mL BPW ISO（加温済み）

37

18～24

41.5

18～24

225 mL BPW ISO

37

20～24

50 mL BPW ISO（加温済み）

225 mL BPW ISO

900 mL BPW ISO

375 mL

3,375 mL BPW ISO

375 g

3,375 mL BPW ISO

25 g

41.5

225 mL BPW ISO

5

41.5

18～24

37

24～28

37

18～24

37

37

18～24

18～24

環境検体

乾燥大麻の花、乾燥麻の花(4)10 g

90 BPW-ISO

密封コンクリート

スポンジ1個225 mL BPW ISO（加温済み）

密封セラミックタイル

スポンジ1個

50 mL BPW ISO（加温済み）

ステンレススチール

検体基質

検体量

生のエビ、頭
付き

25 g

スワブ1本

前増菌ブロ
ス量

225 mL BPWISO

JA （日本語）

増菌温度(± 1°C)

10 mL BPW ISO（加温済み）
前増菌時間
（時間）

37

18～24

41.5

28～32

41.5

18～24

41.5

18～24

41.5

二次前増菌培地 (mL)
R-V R10: 0.1
mLを10 mLへ(a)(a) 10 µLの前増菌検体をライシス溶液チューブに移す。
ライシスセクションのステップ4.7を参照。

18～24

二次前増菌温度 (±1°C)

二次前増菌時間
（時間）

41.5

4～24

AFNOR CertificationによるNF VALIDATION

3M 01/16 -11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en

有効性の終了についての詳細は、上記のウェブサイト上で入手できるNF Validation認証を参照してください。
NF VALIDATIONにより認証された方法は、
ISO 6579(3)よりもISO 16140-2(7)に準拠しています。

バリデーションの範囲：ヒト用食物製品、製造環境検体（一次製造検体を含みます）、ペットフードおよび動物飼料。
広範囲の植物のバリデーションアッセイの実施によります。
検体の調製：EN ISO 6579(3)およびEN ISO 6887(10-15)に従って検体を調製してください。

ソフトウェアバージョン：認定証を参照してください。

6

表4.NF VALIDATION 認定法3M 01/16 -11/16に従う前増菌プロトコル。
プロトコル

プロトコル 1：
• 広範囲の加工食物製品（エッグパウダー、加工した果物および野菜、他のプロトコルで規定される製品を除く）• すべての魚および生のシーフード製品• ペットフードおよび動物飼料• 一次生産（非糞便）プロトコル 2：
• 広範囲の生および未加工食品（鮮魚および生のシーフード、他のプロトコルで規定される製品を除く）• エッグパウダー• すべての果物および野菜• 食品生産環境検体

プロトコル 3：
• パウダーにした乳製品

プロトコル 4：
• ココア20%超を含むココアベースの製品

プロトコル 5：芳香ハーブ、
濃厚飼料、茶、• スパイス、
コーヒー、
刻んだ食品
プロトコル 6：
• 生肉

プロトコル 7：
• 一次生産（糞便）プロトコル 8：
• 乳児用調製粉乳、乳児用シリアル、
プロバ
イオティクス抜きパウダー状乳製品(b)プロトコル 9：
• 乳児用調製粉乳、乳児用シリアル、
プロバ
イオティクス入りパウダー状乳製品(b)JA （日本語）

検体量

前増菌ブロス量

増菌温度(+1°C)25 g

BPW ISO 225 mL

37

18～26

20

25 gまたは
加温済みBPW ISO
ワイプ1枚また
225 mLはスワブ1本

41.5

18～26

20

37

20～26

20

37

24～30

20

37

24～30

10

41.5

10～24

20

37

22～24

20

37

20～26

20

37

20～26

20

25 g

BPW ISO 225 mL
無脂肪UHT乳
225 mL + ブリリ
アントグリーン
0.002%

25 g

2 x BPW
ISO 235 mL+ K2SO3 0.5%
+ 無脂肪UHT乳
240 mL

25 g
25 g

加温済みBPW
ISO 225 mL

ブーツ拭き取り検体1本

テトラリオネートブ
ロスに100 mL

375 g

加温済みBPW
ISO 3375 mL

25 g

テトラリオネートブ
ロスに225 mL

加温済みBPW
ISO 3375 mL+ バンコマイシン(10 mg/L)

375 g

前増菌時間 検体の分析（時間）
量 (µL)(a)(a) ライシス溶液チューブに移す検体量。
ライシスセクションのステップ4.7を参照。

(b) 検体量が大きい粉ミルクおよびシリアルに関しては、塊を崩すため良くかき混ぜながら、検体を液体にゆっくり追加します。
注記：• 25 g以上の検体は、プロトコル8および9以外のNF VALIDATION検査で評価されていません。
• 短い検出プロトコルは培養条件の影響を受けやすくなります。
技術規格に示されている温度条件に従う必要があります。
ユー
ザーは前増菌ブロスの加温が培養前に必要な温度に達していることを確認しなければなりません。
検体調製の時間、前増菌
ブロスの加温ステップ終了と食品検体の培養ステップの開始との時間差が45分を超えないようにしてください。
培養中は、換
気装置つき培養器を使用することを推奨します。
• テトラチオネート (TT) ブロス前培養検体をNeogenライシスチューブに移す場合には、沈殿物をチューブに移さないように
ＴＴ前増菌検体をボルテックスにかけたり前増菌検体チューブの底からピペットで吸い上げたりしないでください。沈殿物を移すと、結果が無効になることがあります。
• 推奨されるプロトコル中断ポイントは、前増菌後または検体ライシス後です。
前増菌ブロスまたは検体ライセートは、
2-8℃で最大72時間保管することができます。
前増菌ブロスを保管場所から取り出したら、ライシスセクションのステップ1から再開してください。
検体ライシスを保管場所から取り出したら、ライシスセクションのステップ8から再開してください。

7

JA （日本語）

Neogen®分子検出スピードローダートレイの準備
1. 水で1～5% (v/v) に希釈したの家庭用漂白液で湿らせた布か使い捨て用タオルを使って、Neogen分子検出スピードローダー
トレイを拭きます。
2. 水でNeogen分子検出スピードローダートレイを濯ぎます。

3. 使い捨てペーパータオル等で、Neogen分子検出スピードローダートレイを拭きます。

4. 使用前に、
Neogen分子検出スピードローダートレイが乾燥していることを確認してください。

Neogen®分子検出チルブロックインサートの準備
Neogen® 分子検出チルブロックインサートを作業台の上に直に置きます。ブロックは検査室の室温 (20～25℃) で使用します。

Neogen®分子検出ヒートブロックインサートブロックインサートの準備
Neogen® 分子検出ヒートブロックインサートをドライダブルブロックインサートヒーターユニットに入れます。
ドライブロックヒータ
ーユニットをオンにして、温度を100 ± 1℃に設定します。
Neogen分子検出ヒートブロックインサートブロックインサートが設定温度に達したら、
温度を維持します。
注：使用するヒーターユニットによっては、Neogen分子検出ヒートブロックブロックインサートを約30分かけて設定温度に到達させます。
適切な較正済みの温度計（例：浸線付温度計またはデジタル熱電対温度計。
全浸没温度計は使用しないこと）を指定の部位に設置し、Neogen分子検出ヒートブロックインサートが100 ± 1℃であることを確認します。

Neogen®分子検出装置の準備
1. Neogen®病原菌検出ソフトウェアを起動してログインします。
お使いのソフトウェアが最新バージョンであるかどうかを確認す
るには、
Neogen食品安全性門の営業担当者までお問い合わせください。
2. Neogen分子検出装置の電源を入れます。

3. 各検体のデータを含む検出結果を作成または編集します。
詳細については、
Neogen分子検出システムユーザーマニュアルを参照してください。

注：Neogen分子検出装置自動検出システム用は、反応チューブと共にNeogen分子検出スピードローダートレイを入れる前に、待機状態になっている必要があります。
この加熱ステップには約20分かかり、装置のステータスバーがオレンジ色に点灯します。
装置の準備ができると、ステータスバーは緑色に変わります。

ライシス
Neogen分子検出ヒートブロックインサートに入れる前に、ドライバーまたはスパーテルでNeogenライシスチューブラックの底部を取り外します。

1. Neogenライシスチューブは、
ラックに一晩（16～18時間）静置して、室温 (20～25℃) に戻します。
Neogenライシスチューブを室温に戻す別の方法としては、
Neogenライシスチューブを作業台の上に2時間以上静置するか、Neogenライシスチューブを
37 ± 1℃の培養器内で1時間保温するか、
Neogenライシスチューブをドライダブルブロックヒーターに入れて100 ± 1℃で30秒間加熱します。
2. キャップを閉めた状態のライシスチューブを反転させて中の液を混合させます。
4時間以内に次のステップに進みます。

3. 培養器から前増菌ブロスを取り出します。

4. 検体およびNC検体（滅菌増菌ブロス）のそれぞれにつきNeogenライシスチューブ1本が必要です。

4.1 Neogenライシスチューブのストリップは、必要なNeogenライシスチューブ数分にカットすることができます。
各Neogenライ
シスチューブまたは8連チューブのストリップの数を選択してください。
Neogenライシスチューブを空のラックに置きます。
4.2 交差汚染を回避するため、Neogenライシスチューブのキャップは一度に1ストリップずつ外し、滴下ステップごとに新しい
ピペットチップを使用してください。
4.3 以下に記載のとおり、前増菌した検体をNeogenライシスチューブに滴下します：

最初に、増菌した各検体を各Neogenライシスチューブに滴下します。
最後にNCを滴下します。

4.4 Neogen®分子検出キャップ/デキャップツール － 溶解、
Neogenライシスチューブのキャップを一度に1ストリップずつ外します。
4.5 Neogenライシスチューブのキャップを廃棄します。
ライセートを再検査用に保存する場合は、キャップを清潔な容器に入れておき、ライシス後に再度キャップを嵌めます。
4.5.1 保存したライセートの処理については、
付録Aを参照してください。

8

JA （日本語）

4.6 粘性検体を扱う場合には、ろ過側から採取する前に、前増菌バッグを撹拌します。

4.7 プロトコル表に他の規定がない限り、検体20 µLをNeogenライシス溶液チューブに移します（プロトコル5およRVS中でのび二次前増菌または環境検体を中和緩衝液ととも使用する場合など）。
20 µl

5. 各検体が、ストリップの対応するNeogenライシスチューブに添加されるまでステップ4.4～4.7を繰り返します。

6. すべての検体を移注したら、NC（ネガティブコントロール用滅菌増菌ブロス、
例：BPW）20 µLをNeogenライシスチューブに滴下します。
水は陰性コントロールとして使用しないでください。
7. Neogen分子検出ヒートブロックインサートの温度が100 ± 1℃であることを確認してください。

8. Neogen分子検出ヒートブロックインサート内にカバーを外したNeogenライシスチューブラックを入れて、15 ± 1分間加熱します。
加熱中、
Neogenライシス液はピンク色（低温）から黄色（高温）に変色します。

8.1. アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハザードとみなされる可能性がありますので、Neogen分子検出装置には入れないでください。

9. ヒートブロックからカバーを外したNeogen ライシスチューブラックを取り出し、
Neogen 分子検出チルブロックインサート内
で5分間以上（最大10分間）冷却します。
室温で使用されたNeogen 分子検出チルブロックインサートは、作業台の上に直に置いてください。
冷却されると、
ライシス溶液はピンク色に戻ります。
10. Neogen分子検出チルブロックインサートからNeogenライシスチューブラックを取り出します。
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

増幅
1. 検体およびNCのそれぞれにつきNeogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬チューブ1本が必要です。

1.1 チューブのストリップは、必要な数に合わせてカットできます。
各Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬チューブまたは8連チューブのストリップの数を選択してください。
1.2 試薬チューブを空のラックに置きます。

1.3 チューブの底の試薬ペレットを撹拌しないでください。

2. 試薬コントロールチューブを1本選択して、ラックに置きます。

3. 交差汚染を回避するため、
試薬チューブのキャップは一度に1ストリップずつ外し、滴下ステップごとに新しいピペットチップを使用してください。

4. 下記のように、各ライセートをNeogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬チューブおよびNeogen試薬コントロールチューブに滴下してください：

最初に各検体ライセートを個々の試薬チューブに移し、次にNCを移します。
最後にNeogen試薬コントロールチューブを水和します。

5. Neogen®分子検出キャップ／デキャップツール － 試薬用を使用して、Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬チューブのキャップを一度に1ストリップずつ外します。
キャップを廃棄します。

5.1 検体レイセート20 µLをNeogenライシスチューブの液体の上部1/2（沈殿物は避けてください）から取り、対応する
Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬チューブに分注します。
ペレットが撹拌されないよう、一定の角度で分注します。
ピペット操作で5回で静かに混合します。

9

JA （日本語）

5.2 個々の検体ライセートをストリップ内の対応するNeogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬チューブに添加するまで、ス
テップ5.1を繰り返します。

5.3 Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬チューブに同梱の予備キャップで蓋をし、Neogen分子検出キャップ／デキャップツール － 試薬用の丸い側を使用して前後に圧をかけ、キャップをしっかりと締めます。

5.4 検査する検体数について、
ステップ5.1～5.3を繰り返します。

5.5 すべての検体ライシス液を滴下したら、
ステップ5.1～5.3を繰り返してNCライセート20 µLをNeogen分子検出アッセイ2 サルモネラ試薬チューブに滴下します。
5.6 Neogen試薬コントロールチューブにNCライセート20 µLを滴下しま\す。
ペレットが撹拌されないよう、一定の角度で分注します。
ピペット操作で5回で静かに混合します。

6. 清潔な、
殺菌済みNeogen分子検出スピードローダートレイにキャップをしたチューブを装填します。
Neogen分子検出スピー
ドローダートレイを閉めて、留めがねをかけます。

20 µL

7. Neogen病原菌検出用ソフトウェアで設定した検査内容を確認します。

8. ソフトウェアのスタートボタンをクリックして、使用する装置を選択します。
選択された装置の蓋が自動的に開きます。

9. Neogen分子検出装置にNeogen分子検出スピードローダートレイを置き、蓋を閉めてアッセイをスタートします。
結果は60分ほどで判定されますが、陽性の場合はこれより早く検出されます。

10. アッセイ終了後、
Neogen分子検出スピードローダートレイをNeogen分子検出装置から取り出し、チューブを水で1～5%(v/v) に希釈した家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄してください。

注記：交差汚染による偽陽性の危険を最小限に抑えるため、増幅DNAの入った試薬チューブは絶対に開けないでください。
これには、Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ試薬、
Neogen試薬コントロール、
Neogen基質コントロールチューブが含まれます。
汚染されたチューブは、
常に、
水で1～5% (v/v) に希釈した家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄してください。

結果と解釈
アルゴリズムが核酸増幅の結果より得られた光出力曲線を解釈します。
結果はソフトウェアが自動的に解析し、結果に応じて色分けされます。
陽性または陰性の結果は、それぞれが持つ固有の曲線パラメータを解析することにより特定されます。
結果が陽性と推定される場合はリアルタイムでレポートされますが、陰性およびInspect（検証が必要な結果）の場合は、その検査が完了した後に表示されます。
に従って確認する必要があります。
まず、一陽性と推定される検体は、検査室の標準作業手順書、または適切な参照法(1,2,3)、
次Neogen BPW ISO前増菌検体を二次前増菌ブロスに移し、プレート接種したのち、適切な生化学的、血清学的手法を使用して単離菌を確認してください。

注：陰性検体がシステムとして0を返さない場合でも、Neogen分子検出アッセイ2 - サルモネラ増幅試薬は「バックグラウンド」相
対発光量 (RLU) を有します。

異常な光出力がみられるなどの稀なケースについては、
アルゴリズムがこれを「再検査してください」と表示します。
Neogen社はお客様に、「再検査」検体に対して検査を再度行うことを推奨します。
その結果が続けて再検査であった場合は、任意の別の方法または行政の規制によって指定されたとおりに確認検査を行ってください。

10

ウェル
タイプ

ウェルの結果の記号

JA （日本語）

結果

判定

検体

陽性

検体な標的病原体について陽性と推定されます。

検体

陰性

検体な標的病原体について陰性と推定されます。

検体

阻害

検体
検体

検体基質がアッセイを阻害しました。
差異検査が必要な場合があります。詳細については、
トラブルシュー
ティングセクションおよびアッセイキット製品情報を参照してください。

検証が必要

標的病原体の有無が確定できませんでした。
差異検査が必要な場合があります。詳細については、
トラブ
ルシューティングセクションおよびアッセイキット製品情報を参照してください。
生物発光が検出されませんでした。
差異検査が必要な場合があります。詳細については、
トラブルシュー
ティングセクションおよびアッセイキット製品情報を参照してください。

エラー

NF VALIDATIONにより認証された方法に基づく結果の確認
NF VALIDATIONに照らしてNeogen病原菌検出アッセイ2 - サルモネラにより陽性と特定される検体はすべて、以下の検査のうちの一つにより確認する必要があります：
オプション1：緩衝ペプトン水(3)前増菌から始めて、
ISO 6579(3)基準を使用する。

オプション2：以下で構成される確認方法を実施します: BPW ISO(3)前増菌検体0.1 mLテトラチオネートブロス前増菌検体（一次生産検体）を10 mLのRVSブロスに移します。
41.5℃で24 ± 3時間培養します。
サルモネラに特異的なキシロース・リジン・デソキシコール酸 (XLD)(3)カンテン培地または色素生成カンテン培地にストリーキングします。
単離したコロニーに対し直接Oxoid
サルモネララテックス検査によりラッテクス凝集を行います。

オプション3：EN ISO 7218(5)基準に記載されている通り、
核酸プローブを使用して、XLDまたは色素生成カンテン培地から単離したコロニーに対して検査を実施します（オプション1または2を参照）。
この検査はNeogen分子検出アッセイ2 - サルモネラを使用して実施しないでください。
オプション4：Neogen病原菌検出アッセイ2 - サルモネラとは原理が異なる必要があるNF VALIDATIONで認証済みのその他方法
を使用します。
この第2のバリデート済みの方法について記述されている完全なプロトコルを必ず使用してください。
確認開始に先立つステップはすべて、両方の方法に共通している必要があります。
結果が一致しない場合（Neogen病原菌検出アッセイ2 - サルモネラで陽性と推定されたものの、
上記の方法、
特にラテックス凝集
検査では確認できなかった場合）は、検査室は必要なステップに従って、得られた結果の有効性を確認しなければなりません。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト (www.neogen.com) をご覧いただくか、Neogen販売担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。

11

付録A.プロトコルの中断：加熱処理済みライセートの保存と再検査

JA （日本語）

1. 加熱処理済みライセートを保存するには、
ライシスチューブに清潔なキャップを嵌めます（ライシスセクション、
4.5を参照）。
2. 4～8℃で最大72時間保管します。

3. 保存された検体を2-3回反転させて混合し、増幅用として準備します。
4. チューブのキャップを外します。

5. 混合したライシスチューブをNeogen分子検出ヒートブロックインサートに置き、100 ± 1℃で5 ± 1分間加熱します。

6. ヒートブロックからNeogenライシスチューブラックを取外し、Neogen分子検出チルブロックインサート内で5分間以上（最大10分間）冷却します。
7. 上記の増幅セクションに詳述されているプロトコルを継続します。

参考文献：

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.

2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identification of
Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Effective Date: 2 January 2019.

3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping ofSalmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.

4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance formicrobiological examination.

6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System.この文書のコピーが必要な場合には、Neogen食品安全性担当者にご連絡ください。
7. ISO 18593. Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.

8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk
(Reconstituted). January 2011.

9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods against a reference method.

10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension anddecimal dilutions.

11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.

12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the
primary production stage.

記号の説明

info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A

ZH （简体中文）

发布日期：2024-01

产品信息

Neogen® 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌产品说明及预期用途

Neogen® 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌与 Neogen® 分子检测系统一起使用，用于快速、专门检测增菌后的食品、
饲料和
食品加工环境样品中的沙门氏菌。

Neogen® 分子检测分析采用环介导等温扩增技术来快速扩增具有高特异性和高敏感性的核酸序列，结合使用生物发光特性来检测扩增反应。
将实时报告假定阳性结果，阴性结果则在分析完成后显示。
应使用您喜欢的方法或按照当地法规指定的方法确认
假定阳性结果(1, 2, 3)。

Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌专供受过实验室技术培训的专业人员在实验室环境下使用。
对于在食品或饮料以
外的行业中使用此产品，Neogen 尚未有资料可证。例如，对于将此产品用于检测制药、
化妆品、
临床或家畜样品，Neogen 尚未
有资料可证。
尚未针对所有可能的食品产品、
食品加工、
检测方案或针对所有可能的细菌类型评估 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌。
正如所有检测方法一样，增菌培养基的来源、配方和质量都可能会影响结果。
取样方法、
检测方案、
样品制备、
处理和实验室技术
等因素都可能会影响结果。
Neogen 建议在用户环境中利用充足数量的样品以及特定的食品和微生物激发试验对包括增菌培养
基在内的方法进行评估，确保相应的方法符合用户的标准。
Neogen 已通过缓冲蛋白胨水 (BPW) ISO 对 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌进行了评估。

Neogen® 分子检测仪器专用于在分析裂解步骤中经过热处理的样品，该步骤旨在破坏样品中存在的微生物。
未在分析裂解步骤中经过适当热处理的样品可能会被视为具有潜在生物危害性，不应将其插入 Neogen 分子检测仪器。
Neogen Food Safety 产品的设计和生产已经获得 ISO（国际标准化组织）9001 认证。

Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌检测试剂盒包含 96 个检测反应管，如表 1 所述。
表 1. Neogen 沙门氏菌分子检测分析试剂盒构成项目

Neogen® 裂解溶液 (LS)
Neogen® 沙门氏菌分子检测分析 2 -沙门氏菌试剂反应管附加盖Neogen® 试剂对照
(RC)

标识

透明管，粉红溶液
绿色管

绿色盖子

透明翻盖管

数量

96（12 排，每排 8 管）

内容物

每管 580 µL 裂解溶液

96（12 排，每排 8 管） 特定扩增和检测试剂的冻干样

96（12 排，每排 8 个盖）
16（2 袋，每袋 8 管）DNA、扩增和检测试剂
的冻干对照品阴性对照 (NC) 采用的是无菌增菌培养基（如 BPW-ISO），未在检测试剂盒中提供。
请勿将水用作 NC。

备注已上架，即开即用
即开即用

即开即用

即开即用

安全
妥
用户应该阅读、理解并遵守 Neogen 分子检测系统和 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌说明中的所有安全信息。
善保存安全说明书，以备日后查阅。
警告：表示危险情况，如果不注意避免，可能造成死亡或严重的人身伤害和/或财产损失。
注意：表示潜在的危险情况，如果不注意避免，可能导致财产损失。

警告请勿在人类或动物的各种诊断中使用 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌。

用户必须就当前适用的检测技术对其人员进行培训，例如：优良实验室规范、
ISO/IEC 17025(4) 或 ISO 7218(5)。

为了降低与假阴性结果相关的风险，避免释放出受污染产品，请注意以下事项：• 遵守操作流程并按照产品信息中提供的方法执行检测。
• 请按照包装和产品信息中的指示储存 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌。
• 始终在过期日期之前使用 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌。
• 将 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌用于经内部或第三方验证的食品、
饲料和食品加工环境样品。
• 仅将 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌用于经内部或第三方验证的表面、消毒剂、
方案和菌株。
• 对于含有中和缓冲液和芳基磺酸酯复合物的的环境样品，应在检测前按 1:2 的比例进行稀释（1 份样品对 1 份无菌增菌肉汤）。
另一种选择是将 10 µL 的中和缓冲培养液转移至 Neogen 裂解溶液管内。
含有中和缓冲液和芳基磺酸酯复合物的
Neogen® 采样产品包括：
RS96010NB、
RS9604NB、
SSL10NB、
SSL10NB2G、
HS10NB、
HS10NB2G 和 HS2410NB2G。

1

ZH （简体中文）

为了降低与化学品和生物危害暴露相关的风险，请注意以下事项：• 在训练有素的工作人员的控制下，于妥善配备的实验室中执行致病菌检测。
增菌培养基以及接触过增菌培养基的设备或表面
可能含有致病菌，足以对人体健康造成风险。
• 始终遵守标准实验室安全规范，包括在处理试剂和受污染样品时穿戴适当的防护服和护眼装置。
• 避免接触增菌培养基和扩增后试剂反应管的内容物。
• 根据现行行业标准对经过增菌的样品进行废弃处理。
• 未在分析裂解步骤中经过适当热处理的样品可能会被视为具有潜在生物危害性，不应将其插入 Neogen 分子检测仪器。
为了在准备分析时降低与交叉污染相关的风险，请注意以下事项：• 始终戴手套（保护用户和防止引入核酸酶）。
为了降低与环境污染相关的风险，请注意以下事项：• 请根据现行行业标准弃置受污染的废弃物。

为了降低与高温液体暴露相关的风险，请注意以下事项：• 不要超出建议的加热器温度设置。
• 不要超出建议的加热时间。
• 使用正确的经过校准的温度计检验 Neogen® 分子检测加热模块的温度（例如，局浸温度计或热电偶数字温度计，而非全浸温度
计）。
温度计必须放置于 Neogen 分子检测加热模块中的指定位置。

注意为了在准备分析时降低与交叉污染相关的风险，请注意以下事项：• 在进行试剂小球水化之前更换手套。
• 建议使用无菌的、带气溶胶屏障（带滤芯）的分子生物级移液管吸头。
• 每次转移样品时使用新的吸头。
• 将样品从培养基转移至裂解管时遵循实验室良好操作规范。
为了避免移液管污染，用户可以选择增加一个中间转移步骤。
例如，用户可以将每个经过增菌的样品转移至无菌管中。
• 使用配有杀菌灯的分子生物工作站（如可行）。
使用 1-5%（与水的体积比）家用漂白溶液或 DNA 去除溶液定期净化实验室
工作台和设备（移液管、开盖器等）。

为了降低与假阳性结果相关的风险，请注意以下事项：• 扩增后切勿打开试管。
• 处理受污染的试管时，应先将其放在浓度为 1-5%（与水的体积比）的家用漂白溶液中浸泡 1 个小时，且始终远离分析准备区。
• 请勿在扩增后对试剂反应管进行高压灭菌。
请参考“安全数据表”了解其它信息和当地的弃置法规。

如果您对于特定的应用或程序存有疑问，请访问我们的网站 www.neogen.com，也可与您当地的 Neogen 代表或经销商联系以
获得帮助。

用户责任

用户有责任熟悉产品信息和说明。
请访问我们的网站 www.neogen.com 或联系您当地的 Neogen 代表或经销商，以了解更多信息。
选择检测方法时，务必认识到各种外部因素（如取样方法、
检测方案、
样品制备、
处理、
实验室技术和样品本身）都可能会影响结果。

用户在选择检测方法或产品时，应自行负责选用合适的基质和微生物激发试验对足够多的样品进行评估，以确保所选择的检测方法达到用户的标准。
检测方法及结果能否满足客户及供应商的要求也由用户负责。

同所有检测方法一样，使用任何 Neogen Food Safety 产品所得到的结果并不能保证受检基质或程序的质量。

为帮助客户评估各种食品基质方法，Neogen 开发了 Neogen® 分子检测基质对照试剂盒。
需要时，可以使用基质对照 (MC) 来确
定基质是否会影响 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌的结果。
在采用 Neogen 方法或在检测新的或未知基质或者原
材料或工艺发生变更的基质的任何验证期间，对若干典型的基质样品进行检测，即通过不同来源获取的样品。
基质可定义为一种具备内源特性的产品（如化学成分或工艺）。
基质间的差异是因加工或外观的不同而导致的差异，例如原样和经过巴氏消毒处理之间的差异以及新鲜和干燥之间的差异。

有限保证/有限补救措施

除非各个产品包装的有限保证部分明确声明，否则，NEOGEN 将不提供任何明示或默示保证，包括但不限于适销性或特定用途适
用性保证。
如果证明任何 Neogen Food Safety 产品存在缺陷，Neogen 或其授权经销商可以自行决定是提供换货，还是对产品进行退款。
这是向您提供的唯一补救方案。
您必须在发现产品存在任何可疑缺陷的 60 天内立即通知 Neogen，并将该产品退还给
Neogen。
如有任何疑问，请联系 Neogen 代表或 Neogen 授权经销商。

Neogen 责任限制

对于任何损失或损害，无论是直接、
间接、
特殊、
偶然或非直接原因造成的损害，NEOGEN 概不承担任何责任，包括但不限于利润损失。
根据法律理论，Neogen 对所谓存在缺陷的产品的赔付不会超过产品的购买价格。

2

ZH （简体中文）储存和弃置请将 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌储存在 2-8℃ 环境下。
请勿冷冻。
避光储存试剂盒。
打开试剂盒后，应检查铝箔
袋是否破损。
如果铝箔袋破损，请勿使用。
打开之后，未使用的试剂反应管应始终储存在内部带有干燥剂的可重新密封铝箔袋中，
以保持冻干试剂的稳定性。
将重新密封的铝箔袋储存在 2-8℃ 温度下，但储存时间不能超过 60 天。

请勿使用过期的 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌。
过期日期和批号注明在包装箱外侧的标签上。
使用之后，增菌培
养基和 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌管可能含有致病物质。
完成检测后，应遵照现行的行业标准弃置受污染的废弃物。
请参考“安全数据表”了解其它信息和当地的弃置法规。

使用说明请仔细遵循所有说明。
否则，可能会导致结果不准确。

使用 1-5%（与水的体积比）家用漂白溶液或 DNA 去除溶液定期净化实验室工作台和设备（移液管、开盖器等）。

用户应当遵照“针对 Neogen 分子检测系统的安装合格 (IQ)/操作合格 (OQ) 方案和说明”文档(6)中的规定接受 Neogen 分子检
测系统操作员资格验证 (OQ) 培训。
请参见“验证方法具体说明”部分，了解特定要求：

表 3：
遵照 AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01 和 AOAC® Performance TestedSM 证书 #091501 实施的增菌方案。
表 4：
遵照 NF Validation 证书 3M 01/16-11/16 实施的增菌方案。

样品增菌
表 2、
3 或 4 提供了针对食品、饲料和环境样品的一般增菌方案指导。

用户有责任验证备用取样方案或者稀释率，以确保本检测方法符合用户的标准。

食品
1. 根据测试的基质，让 BPW ISO 增菌培养基平衡至实验室环境温度或 41.5 ± 1°C。
见表 2、
3 或 4。
2. 在无菌环境下将增菌培养基和样品进行混合。

3. 通过混合、均质操作或手动混合 2 ± 0.2 分钟或直到所有块状物完全溶解且浓缩悬浮液均匀，实现彻底均质(10-15)。
a. 对于所有肉类和微粒样品，建议使用过滤袋。

b. 对于会在水中膨胀且粘度很高的基质（例如谷类、
淀粉），建议进行进一步的稀释 (> 1:10)，直至粘度适当下降，或将无菌的 1% (w/v) α-淀粉酶加入 BPW (ISO)(10-13)。

c.

对于大量奶粉和谷类样品，请将样品慢慢加入液体中并多次混合，以避免出现结块。

4. 按照适用方案表所述进行培养（请参见表 2、
表 3 或表 4）。

环境样品
样品采集工具可以是用中和溶液水化过（此过程可消除消毒剂的作用）的海绵。
Neogen 建议使用不含生物杀菌剂的纤维素海绵。
中和溶液可使用 Dey-Engley(D/E) 中和肉汤或李氏肉汤。
建议取样后对取样区进行消毒。

警告：如果您选择使用含芳基磺酸酯复合物的中和缓冲液作为海绵的水化溶液，则必须在检测之前按 1:2 的比例（1 份样品对
1 份无菌增菌肉汤）稀释增菌的环境样品，以降低导致受污染产品释放的假阴性结果的相关风险。
另一种选择是将 10 µL 的中
和缓冲培养液转移至 Neogen 裂解溶液管内。

2用于验证表面是否存在病原体的取样区域的建议尺寸至少为 100 cm（10cm x 10 cm 或 4”x 4”）。
当用海绵取样时，向两个方向（从左到右，然后从上到下）覆盖整个区域，或按照您当前的取样方案或根据 FDA BAM(1)、USDA FSIS MLG(2) 或(7)
ISO 18593:2018 指导方针收集环境样品。

用户有责任验证备用取样方案或者稀释率，以确保本检测方法符合用户的标准。

1. 根据测试的基质，将 BPW ISO 增菌培养基预热到 41.5 ± 1°C。
见表 2、
3 或 4。

通过混合、
2. 在无菌环境下将增菌培养基和样品进行混合。
均质操作或手动混合 2 ± 0.2 分钟实现彻底均质。
按照适用方案表
所述进行培养。
见表 2、
3 或 4。

3

表 2. 一般增菌方案。

样品基质

ZH （简体中文）
增菌温度
(±1℃)

增菌时间
（小时）

样品分析量
(µL)(a)

225 mL BPW ISO
（预热）

41.5

18-26

20

25 g

225 mL BPW ISO

37

20-26

20

25 g

225 mL 无菌 100 g/L 脱脂奶粉，
含 0.002% 亮绿色染料(d,e,f)

37

24-30

20

37

24-30

10

37

18-24

20

样品大小

增菌肉汤量

25 g

225 mL BPW ISO

方案 3
粉状乳制品（包括婴儿配方奶粉、
大豆原料婴儿配方奶粉）

25 g

方案 5
其他，包括：
调味料、
草本香料植
物、
浓缩液、
速溶茶和咖啡、肉汤块

25 g

235 mL 2X BPW ISO，
含 0.5% K2SO3 + 240 mL
无菌 100 g/L 脱脂奶粉(d,g,h)

25 g

225 mL 无菌 100 g/L 脱脂奶粉(d)

方案 1
加工食品（不包括蛋粉以及其他方案中规定的产品）(b)
方案 2
生的和未加工的食物、
蛋粉、
动物饲料以及环境样品(c)方案 4可可原料产品（粉末、
巧克力、
糖
果等）

方案 6
核桃或含有核桃的坚果食品（该方案适用于其他坚果，包括山核桃、
杏仁、
开心果、
腰果、
栗子、
澳洲坚
果、
巴西坚果、
大豆坚果和花生）

37

18-26

20

(a) 转移到裂解液管的样品体积。
请参阅“裂解”部分的步骤 4.7。

(b) 将使用方案 1 测试的产品示例：
即食食品、
熟食沙拉、
奶油冻。

(c) 将使用方案 2 测试的产品示例：
生肉、
冷冻蔬菜、
所有奶酪、
发酵牛奶、
生食沙拉（巴达维亚生菜）。
(d) 脱脂超高温灭菌牛奶可以替代脱脂奶粉。

(e) 每 225 mL 脱脂牛奶中加入 0.45 mL 的 1% 亮绿染料水溶液，得到最终浓度为 0.002% (0.02 g/L) 的亮绿染料。

(f) 要制备无菌脱脂奶粉，将 100g 脱水脱脂奶粉悬浮在 1 L 蒸馏水或净化水中。
晃动直到溶解。
在 121°C 下高压灭菌 15 分钟。
在 2-30°C(8) 下储存。
(g) 在每 1000 mL BPW ISO 中加入 5 g 的 K2SO3，得到最终浓度为 0.5% 的 K2SO3。

(h) 必须将 240 mL 100 g/L 无菌脱脂奶粉添加到含 0.5% K2SO3 的 235 mL 2X BPW ISO 无菌溶液中。

如果使用可选的二次增菌步骤，例如 Rappaport Vassiliadis 培养基，则需要进行 1:2 稀释（将 1 份样品增菌成 1 份无菌增菌肉汤）或直接将 10 µL 二次增菌转移到 Neogen 裂解液管中。
如果使用连四硫酸盐 (TT) 肉汤，则将 20 µL 的二次增菌转移到
Neogen 裂解液管中，不要振荡 TT 增菌或从增菌管底部移液，以免转移任何沉淀物。
验证方法具体说明

AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
AOAC® Performance TestedSM 证书 #091501

AOAC 研究所 OMASM 和 PTMSM 计划显示，Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌是一种有效的沙门氏菌检测方法。
研究
中检测的基质显示在表 3 中。

4

ZH （简体中文）

表 3.遵照 AOAC OMASM 2016.01 和 AOAC PTMSM 证书 #091501 实施的增菌方案。
转移到 Neogen 裂解液管的样品体积为 20 µL。
样品基质

样品大小

生的碎牛肉

黑胡椒、
生全虾、
生袋装菠菜、巴氏杀
菌加工美国干酪

鸡胴体冲洗

鸡胴体海绵

41.5

10-24

325 g

2,925 mL BPW ISO

37

18-24

375 g

1,500 mL BPW ISO

30 mL

30 mL BPW ISO
（预热）

41.5

225 mL BPW ISO

37

975 mL BPW ISO
（预热）

25 g

225 mL BPW ISO
50 mL BPW ISO
（预热）

25 g

巴氏杀菌全蛋液

3,375 mL BPW ISO

375 g

3,375 mL BPW ISO

密封混凝土

1 块海绵

密封瓷砖

1 块海绵

25 g

奶油花生酱

干燥的大麻花、干燥的汉麻花(4)

样品大小

增菌肉汤量

带头生虾

25 g

225 mL BPW
ISO

18-24

41.5

18-24

20-24

37

24-28

37

18-24

37

18-24

18-24

225 mL BPW ISO
（预热）

41.5

28-32

41.5

18-24

50 mL BPW ISO
（预热）

41.5

18-24

10 mL BPW ISO
（预热）

增菌温度
(±1℃)

18-24

37

90 BPW-ISO

1 采样棒

样品基质

37

225 mL BPW ISO

10 g

不锈钢

18-24

900 mL BPW ISO

375 mL

14-24

37

225 mL BPW ISO

100 mL

发芽灌溉水

41.5

225 mL BPW ISO

25 g

可可粉

10-24

225 mL BPW ISO
（预热）

1 块海绵

速溶脱脂奶粉41.5

25 g

975 mL BPW ISO
（预热）

25 g

干狗粮

增菌时间（小时）

225 mL BPW ISO
（预热）

325 g

烹制炸鸡排

增菌温度
(±1℃)

25 g

325 g

生的碎鸡肉

环境的

增菌肉汤量

增菌时间
（小时）

37

18-24

(a) 将 10 µL 增菌样品转移到裂解液管。
请参阅“裂解”部分的步骤 4.7。

5

41.5

二次增菌培养
基 (mL)
R-V R10：0.1
mL 加入 10
mL(a)

18-24

二次增菌温度(±1°C)

二次增菌时间
（小时）

41.5

4-24

ZH （简体中文）

AFNOR Certification 认证的 NF Validation

3M 01/16 -11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en

有关有效性截止日期的详细信息，请参阅上述网站中提供的 NF VALIDATION 证书。
符合 ISO 16140-2(7) 的 NF VALIDATION 认证方法（与 ISO 6579(3) 相比）。

验证范围：所有人类食品、生产环境样品（包括初级生产样品）、
宠物食品和动物饲料，通过对各种食品执行验证分析。
样品制备：应遵照 EN ISO 6579(3) 和 EN ISO 6887(10-15) 制备样品。

软件版本：
参见证书。

表 4.遵照 NF VALIDATION 认证方法 3M 01/16-11/16 实施的增菌方案。
方案

方案 1：
• 各种加工食品（不包括蛋粉、
加工水果
和蔬菜以及其他方案中规定的产品）• 所有鱼类和生海鲜产品• 宠物食品和动物饲料• 初级生产（非粪便）
方案 2：• 各种生食品和未加工食品（不包括生鱼肉和生海鲜，以及其他方案中规定
的产品）
• 蛋粉
• 所有水果和蔬菜• 食品生产环境样品
方案 3：• 粉状乳制品

方案 4：• 可可含量超过 20% 的可可原料产品

方案 5：
草本香料植物、• 调味料、
浓缩液、
茶、
咖
啡、
烹饪制品

方案 6：
• 生肉

方案 7：
• 初级生产（粪便）

方案 8：
婴儿谷
• 不含益生菌的婴儿配方奶粉、
物、
奶粉(b)

方案 9：
• 含益生菌的婴儿配方奶粉、
婴儿谷物、
奶粉(b)

样品大小

增菌肉汤量

增菌温度
(+1°C)

增菌时间
（小时）

样品分析量
(µL)(a)25 g

225 mL BPW ISO

37

18 - 26

20

25 g 或 1 拭子
或 1 采样棒

225 mL，
预热 BPW ISO

41.5

18 - 2620

25 g

225 mL BPW ISO

37

20 - 26

20

37

24 - 30

20

37

24 - 3010

41.5

10 - 24

20

37

22 - 24

20

37

20 - 26

20

37

20 - 26

20

25 g
25 g
25 g

225 mL 超高温灭菌脱脂奶 + 0.002%
亮绿色
235 mL 2 x BPW
ISO + K2SO3 0.5%
+ 240 mL 超高温灭菌脱脂奶225 mL，
预热 BPW ISO

1 条长筒袜

100 mL，在连四硫
酸盐肉汤中

375 g

3375 mL预热 BPW ISO

25 g

375 g

225 mL 连四硫酸盐肉汤3375 mL 预热 BPW
ISO + 万古霉素
(10 mg/L)(a) 转移到裂解液管的样品体积。
请参阅裂解部分的步骤 4.7。

(b) 对于大量粉末和谷类样品，请将样品慢慢加入液体中并多次混合，以避免出现结块。

6

ZH （简体中文）注释：• 多于 25 g 的样品尚未在 NF VALIDATION 研究中进行检测（方案 8 和 9 除外）。
• 短时检测方案对培养条件敏感。
必须遵循技术规范中规定的温度条件。
用户必须验证增菌肉汤的预热达到规定温度，然后再开始培养。
样品制备时间、增菌肉汤预热步骤结束至食品样品培养步骤开始之间的延迟不得超过 45 分钟。
培养期间，建议使用通风良好的培养设备。
• 对于从连四硫酸盐 (TT) 肉汤增菌向 Neogen 裂解液管的转移，不要振荡 TT 增菌或从增菌管底部移液，以免转移任何沉淀物。转移沉淀物可能导致结果无效。
• 推荐的方案中断点为增菌后或样品裂解后。
增菌肉汤或样品裂解液可在 2-8℃ 下储存最长 72 小时。
从储存处取出增菌肉汤后，应从裂解部分的步骤 1 重新开始检测。
从储存处取出样品裂解液后，应从裂解部分的步骤 8 重新开始检测。

Neogen® 分子检测快速转移托盘的准备工作
1. 将一块干布或一次性纸巾用 1-5%（与水的体积比）家用漂白溶液浸湿，用来擦拭 Neogen® 分子检测快速转移托盘。
2. 用清水清洗 Neogen 分子检测快速转移托盘。

3. 使用一次性纸巾擦干 Neogen 分子检测快速转移托盘。
4. 使用前确保 Neogen 分子检测快速转移托盘保持干燥。

Neogen® 分子检测冷却架的准备工作
将 Neogen® 分子检测冷却架直接置于实验室工作台上。在实验室环境温度 (20-25℃) 下使用模块。

Neogen® 分子检测加热模块的准备工作
将 Neogen® 分子检测加热模块放入双干燥块加热器中。
开启干燥模块加热装置并设定温度，使 Neogen 分子检测加热模块达到并保持 100 ± 1℃。
注释：根据不同的加热器，允许 Neogen 分子检测加热模块在大约 30 分钟后达到工作温度。
使用放在指定位置的、
正确的、
经过校准的温度计（如局浸温度计或热电偶数字温度计，而非全浸温度计）检验 Neogen 分子检测加热模块的温度是否达到 100± 1℃。

Neogen® 分子检测仪器的准备工作
1. 启动 Neogen® 分子检测软件并登录。
请联系您的 Neogen Food Safety 代表，确保您使用的是最新版的软件。
2. 打开 Neogen 分子检测仪器。

3. 利用每个样品的数据为其创建或编辑一次运行检测。
请参考“Neogen 分子检测系统用户手册”了解详细信息。

注释：插入带反应管的 Neogen 分子检测快速转移托盘前，Neogen 分子检测仪器必须处于就绪状态。
此加热步骤大概需要 20分钟，由仪器状态栏中的一个橙色灯进行指示。
当仪器准备好启动检测时，状态栏将变为绿色。

裂解请用螺丝刀或抹刀移除 Neogen 裂解溶液管架的底部，然后再将其置于 Neogen 分子检测加热模块中。

1. 将管架置于室温 (20-25℃) 环境下一整夜（16-18 小时），让 Neogen 裂解溶液管预热。
使 Neogen 裂解溶液管平衡到室温的另一种方法是将 Neogen 裂解溶液管放在实验室工作台上至少 2 小时、
在 37 ± 1℃ 培养设备中培养 Neogen 裂解溶液管
1 小时，或将其置于双干燥块加热器中在 100 ± 1°C 下持续加热 30 秒。

2. 倒置封盖的裂解溶液管，使其混合均匀。
在 4 小时内继续执行下一步。
3. 从培养设备中取出增菌肉汤。

4. 每个样品和每个 NC 样品（无菌增菌培养基）都需要一支 Neogen 裂解溶液管。

4.1 可以根据所需的 Neogen 裂解溶液管的数量，对 Neogen 裂解溶液联排管进行切割。
选择所需数量的单个 Neogen 裂
解溶液管或 8 联排管。
将 Neogen 裂解溶液管放入空管架中。

4.2 为了避免交叉污染，请一次仅打开一排 Neogen 裂解溶液管的管盖，并且每次转移溶液时使用新的移液管吸头。
4.3 按如下所述将经过增菌的样品转移到 Neogen 裂解溶液管：

首先将每个经过增菌的样品转移到单个 Neogen 裂解溶液管中。
最后转移 NC。

4.4 使用 Neogen® 分子检测开盖器 - Lysis 打开 Neogen 裂解溶液联排管的管盖，一次仅打开一排。

7

ZH （简体中文）

4.5 丢弃 Neogen 裂解溶液管的管盖 – 如果要保留裂解液以重新检测，请将管盖放入干净的容器中，以备裂解后重新使用。
4.5.1 如需处理保留的裂解液，请参阅附录 A。

4.6 处理粘性样品时，在从过滤侧采集样品之前，先鼓起增菌袋。

4.7 将 20 µL 样品转移到 Neogen 裂解溶液管内，除非方案表中另有说明（示例方案 5 和 RVS 中的二次增菌，或使用含中和
缓冲液的环境样品时）。
20 µl

5. 重复步骤 4.4 至 4.7，直到将所有样品添加到联排管对应的 Neogen 裂解溶液管为止。

6. 当转移完所有样品后，将 20 µL 的 NC（无菌增菌培养基，如 BPW）转移到一支 Neogen 裂解溶液管中。
请勿将水用作 NC。
7. 检验 Neogen 分子检测加热模块的温度是否达到了 100 ± 1℃。

8. 将未加盖的 Neogen 裂解溶液管架放入 Neogen 分子检测加热模块中加热 15 ± 1 分钟。
加热期间，Neogen 裂解溶液将从粉红色（冷）变为黄色（热）。
8.1. 未在分析裂解步骤中经过适当热处理的样品可能会被视为具有潜在生物危害性，不应将其插入 Neogen 分子检测仪器。

9. 从加热模块中取出未加盖的 Neogen 裂解溶液管架，将其放入 Neogen 分子检测冷却架中冷却至少 5 分钟，最长 10 分钟。
如果 Neogen 分子检测冷却架在环境温度下使用，则应将其直接置于实验室工作台上。
冷却后，裂解溶液将恢复为粉红色。

10. 从 Neogen 分子检测冷却架上移除 Neogen 裂解溶液管架。
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

扩增
1. 每个样品和每个 NC 都需要一支 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管。

1.1 根据所需的试管数，对联排管进行切割。
选择所需数量的单个 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管
或 8 联排管。
1.2 将试剂反应管放入空管架中。

1.3 请勿将试剂小球搅离管底。

2. 选择一支试剂对照管并放入管架。

3. 为避免交叉污染，请一次仅打开一排试剂反应管的管盖，并且每次转移溶液时使用新的移液管吸头。

4. 按如下所述将相应的裂解液分别转移到 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管和 Neogen 试剂对照管：先将每个样品裂解液转移到单个试剂反应管中，然后转移到 NC 中。
最后对 Neogen 试剂对照管进行水化。

8

ZH （简体中文）

5. 使用 Neogen® 分子检测开盖器 - Reagent 打开 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管的管盖，一次仅打
开一排。
丢弃管盖。
5.1 将 Neogen 裂解溶液管液体上部 1/2 层的 20 µL 样品裂解液（避免沉淀）转移到对应的 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管。
成角度注入，以避免搅动小球。
轻轻地上下吸动 5 次，以充分混合。

5.2 重复步骤 5.1，直到将所有样品裂解液添加到联排管对应的 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管为止。

5.3 使用附加盖盖住 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管并使用 Neogen 分子检测开盖器 - Reagent
较圆的一侧以前后移动的方式加压，以确保将盖子盖紧。
5.4 根据需要对待检测的样品重复步骤 5.1 到 5.3。

5.5 当转移完所有样品裂解液后，重复步骤 5.1 到 5.3 以将 20 µL NC 裂解液转移到 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管。
5.6 将 20 µL NC 裂解液转移至 Neogen 试剂对照管。
成角度注入，以避免搅动小球。
轻轻地上下吸动 5 次，以充分混合。

6. 将加盖的试管放入干净且经过净化处理的 Neogen 分子检测快速转移托盘中。
合上并锁定 Neogen 分子检测快速转移托盘
盖。

20 µL

7. 在 Neogen 分子检测软件中查看和确认配置的检测。

8. 在软件中单击“启动”按钮并选择要使用的仪器。
所选仪器的盖会自动打开。

9. 将 Neogen 分子检测快速转移托盘放入 Neogen 分子检测仪器并合上盖子，以启动分析。
结果将在 60 分钟内提供，但阳性结果可以更快检测到。

10. 分析完成后，从 Neogen 分子检测仪器中取出 Neogen 分子检测快速转移托盘，通过将试管浸入 1-5%（与水的体积比）家用
漂白溶液 1 小时并使其远离分析准备区，对试管进行废弃处理。
注意：为了将因为交叉污染而导致的假阳性结果风险降至最低，请勿打开包含扩增的 DNA 的试剂反应管。
这包括 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌试剂反应管、
Neogen 试剂对照和 Neogen 基质对照管。
对密封的试剂反应管进行废弃处理
时，应始终将其放入浓度为 1-5%（与水的体积比）的家用漂白溶液中浸泡 1 小时，并确保其远离分析准备区。

结果和说明软件会使用一种算法对来自核酸扩增检测的光输出曲线进行解读。
软件会自动分析结果并根据不同结果用不同颜色进行标记。
通过分析一系列独一无二的曲线参数可以确定阳性结果或阴性结果。
将实时报告假定阳性结果，阴性结果和检查结果则在检测
完成后显示。
假定阳性样品应当遵循实验室标准操作规程或正确的参考方法进行确认(1,2,3)，应首先将初步的 Neogen BPW ISO 增菌培养液转
移到二次增菌肉汤，然后进行后续的培养，并利用正确的生化和血清方法对分离菌进行确认。
注释：因为系统和 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌扩增试剂带有“背景”相对光单位 (RLU) 读数，即使阴性样品也
不会出现读数为零的情况。

9

ZH （简体中文）在极少数情况下，当存在异常光输出时，算法会显示“检查”标记。
Neogen 建议用户对所有“检查”样品重新进行分析。
如果结果
仍为“检查”，请使用您喜欢的方法或按照当地法规指定的方法进行确认试验。
孔类型
样品

孔结果符号

结果

判读

阳性

样品是目标病原体的假定阳性样品。

样品阴性样品是目标病原体的阴性样品。

样品抑制样品基质对分析有抑制作用。
可能需要重新测试。有关更多信息，请参阅故障排除部分和分析试剂盒产品信息。

样品检查不确定目标病原体是否存在。
可能需要重新测试。有关更多信息，请参阅故障排除部分和分析试剂盒产品信息。

样品错误

未检测到生物发光。
可能需要重新测试。有关更多信息，请参阅故障排除部分和分析试剂盒产品信息。

依照 NF VALIDATION 认证方法确认结果
在 NF VALIDATION 背景下，必须通过以下其中一种检测对 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌鉴定的所有阳性样品进
行确认：
选项 1：
采用 ISO 6579(3) 标准，从缓冲蛋白胨水(3) 增菌液开始。
选项 2：
实施包含以下内容的确认方法：
将 0.1 mL BPW ISO(3) 增菌液或连四硫酸盐肉汤增菌液（初级生产样品）转移到
10 mL RVS 肉汤中。
在 41.5℃ 下培养 24 ± 3 小时。
在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐 (XLD)(3) 琼脂或沙门氏菌专用显色琼脂上划线培养。
用琼脂沙门氏菌乳胶直接对隔离的菌落执行乳胶凝集试验。

选项 3：
按照 EN ISO 7218(5) 标准所述，使用核酸探针对 XLD 或显色琼脂中的隔离菌落执行操作（请参阅选项 1 或 2）。
此测试不得使用 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌执行。

选项 4：
可以使用任何其他 NF VALIDATION 认证方法，原理必须与 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌不同。
在执行第
二个验证方法时，必须遵循所述的完整方案。
两个方法在开始确认前的所有步骤必须是相同的。

如果出现结果不一致（采用 Neogen 沙门氏菌分子检测分析 2 - 沙门氏菌的结果为假定阳性，且并未通过上述其中一种方法予以确认，尤其是乳胶凝集试验），则实验室必须执行必要的步骤来确保所获得结果的有效性。
如果您对于特定的应用或程序存有疑问，请访问我们的网站 www.neogen.com，也可与您当地的 Neogen 代表或经销商联系以获得帮助。

附录 A. 方案中断：储存并重新检测热处理后的裂解液

1. 如需储存热处理后的裂解液，应使用干净的盖子为裂解液管重新盖上盖子（请参阅 4.5 裂解部分）。
2. 在 4 - 8℃ 温度下最多储存 72 小时。

3. 取出储存的样品以准备用于扩增，将其倒置 2-3 次进行混合。
4. 打开管盖。

5. 将混合后的裂解液管置于 Neogen 分子检测加热模块中并在 100 ± 1℃ 温度下加热 5 ± 1 分钟。

6. 从加热模块中取出 Neogen 裂解溶液管架，将其放入 Neogen 分子检测冷却架中冷却至少 5 分钟，最长 10 分钟。
7. 继续执行上文详述的“扩增”部分的方案。

10

ZH （简体中文）参考资料：

1. 美国食品药品监督管理局微生物分析手册。
第 5 章：
沙门氏菌，第 C-24 节。
2018 年 11 月版。

2. 美国农业部 (USDA) FSIS 微生物实验室指南 4.10。
从肉、家禽、巴氏杀菌蛋、
鲶形目（鱼类）产品以及胴体和环境海绵中分离和鉴定沙门氏菌。
生效日期：2019 年 1 月 2 日。

3. ISO 6579-1。
食物链微生物 – 沙门氏菌检测、
计数和血清学分型的水平方法 - 第 1 部分：沙门氏菌属的检测。

4. ISO/IEC 17025。
用于检验和校准实验室能力的一般要求。

5. ISO 7218。
食品和动物饲料微生物 - 微生物检验用一般要求和指南。

6. 针对 Neogen 分子检测系统的 Neogen 安装合格 (IQ)/操作合格 (OQ) 方案和说明。
请联系您的 Neogen Food Safety 代表，
以获取本文档的副本。
7. ISO 18593。
食物链微生物 – 表面采样的水平方法。

8. 美国食品药品监督管理局 - 微生物分析手册，介质 M111：
脱脂奶粉（复原）。
2011 年 1 月。

9. ISO 16140-2:2016。
食物链微生物 - 第 2 部分：对照参考方法验证替代（专有）方法的方案。

10. ISO 6887-1:2017。
食物链微生物 - 用于微生物检验的检测样品、
初始混悬液和十倍稀释液的制备 - 第 1 部分：
制备初始悬浮液和十倍稀释液的一般规则。

11. ISO 6887-2:2017。
食物链微生物 - 用于微生物检验的检测样品、
初始混悬液和十倍稀释液的制备 - 第 2 部分：
制备肉和肉制品的专门规则。
12. ISO 6887-3:2017。
食物链微生物 - 用于微生物检验的检测样品、
初始混悬液和十倍稀释液的制备 - 第 3 部分：制备鱼和鱼产
品的专门规则。
13. ISO 6887-4:2017。
食物链微生物 - 用于微生物检验的检测样品、
初始混悬液和十倍稀释液的制备 - 第 4 部分：
制备其他产品的专门规则。
14. ISO 6887-5:2017。
食物链微生物 - 用于微生物检验的检测样品、
初始混悬液和十倍稀释液的制备 - 第 5 部分：
制备奶和奶制品的专门规则。
15. ISO 6887-6:2013。
食物链微生物 - 用于微生物检验的检测样品、
初始混悬液和十倍稀释液的制备 - 第 6 部分：
制备在初级生
产阶段取得的样品的专门规则。

符号说明info.neogen.com/symbols

11

Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A

TH （ภาษาไทย）วัันที่่อ
� อก: 2024-01

คำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์
ชุุดทดสอบเชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen®

รายละเอีียดผลิิตภััณฑ์์และวััตถุุประสงค์์การใช้้งาน

ชุุดทดสอบเชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen® จะนำำ�มาใช้้กับั ระบบทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® สำำ�หรัับ
การตรวจหาเชื้้อ� ซาลโมเนลล่่า อย่่างรวดเร็็วและเฉพาะเจาะจงในตััวอย่่างอาหารที่่ไ� ด้้รับั การเลี้้�ยงเชื้้อ� อาหารสััตว์์ และในตััวอย่่างจากสิ่่�ง
แวดล้้อมกระบวนการแปรรููปอาหาร
ชุุดทดสอบเชื้้อ� ระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® ใช้้การเพิ่่�มขยายยีีนแบบลููปที่่อุ� ณุ หภููมิเิ ดีียว (Loop-mediated isothermal amplification) เพื่่�อ
เพิ่่�มลำำ�ดับั กรดนิิวคลีีอิิกด้้วยวิิธีที่ี มีี�่ ความจำำ�เพาะเจาะจงและความไวสููงผสานกัับการเรืืองแสงทางชีีวภาพเพื่่�อตรวจจัับการเพิ่่�มขยายจำำ�นวน ผลการทดสอบเบื้้อ� งต้้นที่่เ� ป็็นบวกจะได้้รับั การรายงานในทัันทีี ขณะที่่ผ� ลการทดสอบที่่เ� ป็็นลบจะแสดงผลภายหลัังจากที่่ก� ารทดสอบดัังกล่่าวเสร็็จ
สมบููรณ์์แล้้ว ผลการทดสอบเบื้้อ� งต้้นที่่เ� ป็็นบวกควรได้้รับั การยืืนยัันโดยใช้้วิธีิ กี ารที่่ท่� า่ นเห็็นสมควรหรืือตามที่่ร� ะบุุไว้้ในระเบีียบข้้อบัังคัับต่่าง ๆในท้้องถิ่่น
� (1, 2, 3)ชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ออกแบบมาให้้ใช้้ในสภาพแวดล้้อมห้้องปฏิิบัติั กิ ารโดยเจ้้าหน้้าที่่ห้� อ้ งปฏิิบัติั ิการที่่ผ่� า่ นการอบรมเทคนิิคการปฏิิบัติั งิ านในห้้องปฏิิบัติั กิ าร Neogen ยัังไม่่ได้้จัดั ทำำ�เอกสารเกี่่ย� วกัับการใช้้ผลิิตภััณฑ์์นี้้ใ� นอุุตสาหกรรมอื่่�นๆ
นอกจากอุุตสาหกรรมอาหารหรืือเครื่่�องดื่่�ม ตััวอย่่างเช่่น Neogen ยัังไม่่ได้้ออกเอกสารเกี่่ย� วกัับผลิิตภััณฑ์์นี้้สำ� �ำ หรัับการทดสอบตัั/วอย่่างยา
ตััวอย่่างเครื่่�องสำำ�อาง ตััวอย่่างทางคลิินิกิ หรืือตััวอย่่างเกี่่ย� วกัับสััตว์์ ชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ยัังไม่่ได้้รับ
ัการประเมิินกัับผลิิตภััณฑ์์อาหาร การแปรรููปอาหาร ระเบีียบการทดสอบที่่เ� ป็็นไปได้้ทั้้ง� หมดหรืือกัับสายพัันธุ์์�แบคทีีเรีียที่่เ� ป็็นไปได้้ทั้้ง� หมดแหล่่งที่่�มา สููตร และคุุณภาพของอาหารสำำ�หรัับเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� สามารถส่่งผลกระทบต่่อผลการทดสอบที่่�ได้้เช่่นเดีียวกัับวิิธีกี ารทด
สอบอื่่�นๆ นอกจากนี้้� ปััจจััยต่่างๆ เช่่น วิิธีกี ารสุ่่�มเก็็บตััวอย่่าง ระเบีียบการทดสอบ การเตรีียมตััวอย่่าง การจััดการและเทคนิิคที่่ใ� ช้้ในห้้องปฏิิบัติั ิการอาจส่่งผลกระทบต่่อผลการทดสอบที่่ไ� ด้้ด้ว้ ยเช่่นกััน Neogen ขอแนะนำำ�ให้้ประเมิินวิิธีกี ารทดสอบรวมทั้้�งอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ในสภาพ
แวดล้้อมของผู้้�ใช้้โดยใช้้จำ�ำ นวนตััวอย่่างที่่เ� พีียงพอกัับอาหารแต่่ละชนิิดและสภาวะที่่มีี� ความท้้าทายกัับการเจริิญเติิบโตของจุุลินิ ทรีีย์์ เพื่่�อให้้
มั่่�นใจว่่าวิิธีกี ารดัังกล่่าวเป็็นไปตามเกณฑ์์ของผู้้�ใช้้
Neogen ได้้ประเมิินชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ด้้วยบััฟเฟอร์์เปปโตนวอร์์เตอร์์ (BPW) ISOเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® มีีจุุดมุ่่�งหมายในการใช้้กับั ตััวอย่่างที่่ไ� ด้้ผ่า่ นกระบวนการให้้ความร้้อนใน
ระหว่่างขั้้�นตอนการไลซีีสของการทดสอบซึ่่ง� ได้้รับั การออกแบบมาเพื่่�อทำำ�ลายเชื้้อ� ที่่มีี� ในตััวอย่่าง ตััวอย่่างซึ่่ง� ไม่่ได้้รับั ความร้้อนอย่่างเหมาะ
สมในระหว่่างขั้้�นตอนการไลซีีสของชุุดทดสอบอาจถืือว่่าเป็็นสารที่่อ� าจมีีอัันตรายทางชีีวภาพ และไม่่ควรใส่่เข้้าไปในเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบ
เชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen
Neogen Food Safety ได้้รับั การรัับรองตามมาตรฐาน ISO (องค์์การระหว่่างประเทศว่่าด้้วยการมาตรฐาน) 9001 ด้้านการออกแบบและการ
ผลิิตชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen มีีทั้้�งหมด 96 หลอดทดสอบตามที่่อ� ธิิบายไว้้ในตารางที่่� 1ตารางที่่� 1 ส่่วนประกอบของชุุดทดสอบเชื้้อ� ระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogenรายการ

สารละลายไลซีส Neogen(LS)®

หลอดรีเอเจนต์ของชุดทดสอบ
เชื้อซาลโมเนลล่าระดับ
โมเลกุล 2 โดยวิธี Neogen®
ฝาสำ�รอง
Neogen® รีเอเจ้นท์คอนโทรล
(RC)ลักษณะ

จำ�นวนสิง่ ทีบ่ รรจุ

ความคิดเห็น

สารละลายสีชมพูใน
หลอดใส

96 หลอด
(12 แถว แถวละ 8 หลอด)LS ปริมาณ 580 µL ตอ่หลอดบรรจุอยูใ่ นที่วาง
และพรอ้ มใช้งาน

หลอดสีเขียว

96 หลอด
(12 แถว แถวละ 8 หลอด)ส่วนผสมสำ�หรับการเพิม
่ขยายและการตรวจหาเชื้อ
โรคแบบเฉพาะเจาะจงที่ทำ�
แหง้ เยอื กแข็งแล้ว

พรอ้ มใช้งาน

ฝาเขียว

96 ฝา(12 แถว แถวละ 8 ฝา)หลอดใสชนิดเปิดฝา
ด้านบน

16 หลอด
(2 ถุง ถุงละ 8 หลอด)พรอ้ มใช้งาน
ส่วนผสมที่ทำ�ไลโอฟิไลซ์
สำ�หรับควบคุม DNA การเพิม่ ขยายและการตรวจหา

พรอ้ มใช้งาน

ชุุดควบคุุมผลลบหรืือ Negative Control (NC) เป็็นอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ที่่ป� ลอดเชื้้อ� เช่่น BPW ISO ไม่่ได้้รวมอยู่่�ในชุุดอุุปกรณ์์ ห้้ามใช้้น้ำ��ำ
เป็็น NCความปลอดภััย
ผู้้�ใช้้ควรอ่่าน ทำำ�ความเข้้าใจ และปฏิิบัติั ติ ามข้้อมููลความปลอดภััยทั้้�งหมดในคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานระบบทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดย
วิิธีี Neogen และ Neogen ชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 เก็็บคำำ�แนะนำำ�ด้า้ นความปลอดภััยนี้้�ไว้้สำ�ำ หรัับใช้้อ้า้ งอิิงในอนาคต
คำำ�เตืือน:	บ่่งชี้้�ว่า่ เป็็นสถานการณ์์ที่เ�่ ป็็นอัันตราย ซึ่่ง� หากไม่่มีีการหลีีกเลี่่ย� ง อาจก่่อให้้เกิิดการเสีียชีีวิิตหรืือการบาดเจ็็บรุุนแรงและ/หรืือ
ความเสีียหายต่่อทรััพย์์สินิ ได้้
ข้้อสัังเกต: ระบุุสถานการณ์์ที่อ�่ าจเป็็นอัันตราย หากไม่่หลีีกเลี่่ย� ง อาจก่่อให้้เกิิดความเสีียหายต่่อทรััพย์์สินิ

1

TH （ภาษาไทย）คำ�เตอื นห้้ามใช้้ชุดุ ทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ในการวิินิจิ ฉััยโรคในมนุุษย์์หรืือสััตว์์
ผู้้�ใช้้งานต้้องทำำ�การฝึึกอบรมบุุคลากรเกี่่�ยวกัับเทคนิิคการทดสอบที่่�เหมาะสมในปััจจุบัุ นั ตััวอย่่างเช่่น หลัักปฏิิบัติั ทิ างห้้องปฏิิบัติั กิ ารที่่�ดี,ี ISO/IEC 17025(4)หรืือ ISO 7218(5)เพื่่�อลดความเสี่่�ยงที่่�เกี่่�ยวข้้องกัับผลลบปลอมซึ่่ง� นำำ�ไปสู่่�การปล่่อยผลิิตภััณฑ์์ที่่มี� กี ารปนเปื้้อ� นไปขาย ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:• ปฏิิบัติั ติ ามระเบีียบการและดำำ�เนิินการทดสอบดัังที่่ร� ะบุุไว้้อย่่างชััดเจนในคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์
• เก็็บชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ตามที่่ร� ะบุุไว้้บนบรรจุุภัณั ฑ์์และในคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์
• ใช้้ชุดุ ทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ก่่อนวัันหมดอายุุเสมอ
• ใช้้ชุดุ ทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen กัับตััวอย่่างอาหารและตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อมในกระบวนการผลิิต
อาหารซึ่่ง� ได้้รับั การพิิสูจู น์์ยืืนยัันเป็็นการภายในหรืือโดยหน่่วยงานภายนอกแล้้ว
• ใช้้ชุดุ ทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen เฉพาะกัับพื้้น� ผิิว สารฆ่่าเชื้้อ� วิิธีกี ารและสายพัันธุ์์�แบคทีีเรีียที่่ผ่� า่ นการ
ตรวจสอบภายในหรืือโดยบุุคคลที่่ส� ามแล้้วเท่่านั้้�น
• สำำ�หรัับตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อมที่่มีีบั� ฟั เฟอร์์สำ�ำ หรัับทำำ�ให้้เป็็นกลางโดยมีีสารประกอบเชิิงซ้้อนของเอริิลซััลโฟเนตอยู่่�ด้้วย ให้้ทำ�ำ การเจืือจาง
ด้้วยอััตราส่่วน 1:2 ก่่อนที่่จ� ะทดสอบ (เติิมตััวอย่่าง 1 ส่่วนลงในอาหารเหลวเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ที่่ฆ่� า่ เชื้้อ� แล้้ว 1 ส่่วน) อีีกหนึ่่ง� ตััวเลืือกคืือถ่่าย
บััฟเฟอร์์ที่เ�่ ป็็นกลางที่่มีี� การเพิ่่�มเชื้้อ� ปริิมาณ 10 µL เข้้าไปยัังหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ผลิิตภััณฑ์์ควบคุุมตััวอย่่างของ Neogen®
ซึ่่ง� ประกอบด้้วยบััฟเฟอร์์สำ�ำ หรัับทำำ�ให้้เป็็นกลางโดยมีีสารเชิิงซ้้อนของเอริิลซััลโฟเนตมีีดัังนี้้�: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB,
SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G และ HS2410NB2Gเพื่่�อลดความเสี่่�ยงที่่�เกี่่�ยวข้้องกัับการสััมผััสสารเคมีีหรืือสารอัันตรายทางชีีวภาพ ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:• ให้้ทำ�ำ การทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคในห้้องปฏิิบัติั กิ ารที่่มีีอุ� ปุ กรณ์์อย่่างเหมาะสมภายใต้้การควบคุุมของบุุคลากรที่่ไ� ด้้รับั การอบรม อาหารเพิ่่�ม
จำำ�นวนเชื้้อ� ที่่บ่� ม่ แล้้ว และอุุปกรณ์์หรืือพื้้น� ผิิวที่่มีี� การสััมผััสกัับอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ที่่บ่� ม่ แล้้ว อาจจะมีีเชื้้อ� โรคในระดัับเพีียงพอที่่จ� ะก่่อให้้
เกิิดความเสี่่ย� งต่่อสุุขภาพของมนุุษย์์ได้้
• ปฏิิบัติั ติ ามแนวปฏิิบัติั เิ พื่่�อความปลอดภััยทางห้้องปฏิิบัติั กิ ารมาตรฐานทุุกครั้้�งโดยรวมถึึงการสวมเครื่่�องแต่่งกายเพื่่�อป้้องกัันและอุุปกรณ์์
ปกป้้องดวงตาในขณะที่่ป� ฏิิบัติั งิ านกัับรีีเอเจนต์์และตััวอย่่างที่่มีี� การปนเปื้้อ� น• หลีีกเลี่่ย� งการสััมผััสกัับอาหารหลัังบ่่มเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� และหลอดบรรจุุรีีเอเจนต์์ภายหลัังการเพิ่่�มจำำ�นวนดีีเอ็็นเอ
• กำำ�จัดั ตััวอย่่างหลัังเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ตามมาตรฐานอุุตสาหกรรมปััจจุุบันั• ตััวอย่่างซึ่่ง� ไม่่ได้้รับั ความร้้อนอย่่างเหมาะสมในระหว่่างขั้้�นตอนการไลซีีสของชุุดทดสอบอาจถืือว่่าเป็็นสารที่่อ� าจมีีอัันตรายทางชีีวภาพ
และไม่่ควรใส่่เข้้าไปในเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogenเพื่่�อลดความเสี่่�ยงจากการปนเปื้้อ� นข้้ามขณะเตรีียมชุุดทดสอบ ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:• สวมถุุงมืือตลอดเวลา (เพื่่�อปกป้้องผู้้�ใช้้งานและป้้องกัันการเกิิดนิิวคลีีเอส)ควรปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�เพื่่�อลดการปนเปื้้อ� นในสิ่่�งแวดล้้อม:• ปฏิิบัติั ติ ามมาตรฐานการกำำ�จัดั ทิ้้�งตามข้้อกำำ�หนดอุุตสาหกรรมในปััจจุุบันั สำำ�หรัับของเสีียที่่ป� นเปื้้อ� นเพื่่�อเป็็นการลดความเสี่่�ยงอัันเกิิดจากการสััมผััสโดนของเหลวร้้อน ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:• ห้้ามใช้้อุณุ หภููมิสูิ งู กว่่าที่่แ� นะนำำ�ไว้้บนเครื่่�องทำำ�ความร้้อน
• ห้้ามใช้้เวลาทำำ�ความร้้อนเกิินที่่แ� นะนำำ�
• ใช้้เทอร์์โมมิิเตอร์์ที่ไ�่ ด้้รับั การสอบเทีียบตามมาตรฐานและเหมาะสม เพื่่�อยืืนยัันอุุณหภููมิขิ องของฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับ
โมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen® (เช่่น เทอร์์โมมิิเตอร์์แบบจุ่่�มบางส่่วน หรืือเทอร์์โมมิิเตอร์์แบบดิิจิทัิ ลั ที่่ไ� ม่่ใช่่เทอร์์โมมิิเตอร์์แบบจุ่่�มทั้้�งหมด) จะต้้องวางเทอร์์โมมิิเตอร์์ในบริิเวณที่่กำ� �ำ หนดไว้้ของฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogenขอ้ สังเกต
เพื่่�อลดความเสี่่�ยงจากการปนเปื้้อ� นข้้ามขณะเตรีียมชุุดทดสอบ ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�:• เปลี่่ย� นถุุงมืือก่่อนขั้้�นตอนการผสมสารละลายกัับเม็็ดรีีเอเจนต์์
• แนะนำำ�ให้้ใช้้ปิเิ ปตทิิประดัับชีีววิิทยาโมเลกุุลชนิิดที่่มีีตั� วกั้้ั น� ละอองอากาศ (ชนิิดกรองแล้้ว) ที่่ผ่� า่ นการฆ่่าเชื้้อ� แล้้ว
• ใช้้ปิเิ ปตทิิปอัันใหม่่สำ�ำ หรัับการถ่่ายตััวอย่่างในแต่่ละครั้้�ง
• ใช้้แนวปฏิิบัติั ที่ิ ดีีสำ�่ �ำ หรัับห้้องปฏิิบัติั กิ ารเพื่่�อถ่่ายตััวอย่่างจากอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ที่่บ่� ม่ แล้้วไปยัังหลอดสายละลายไลซีีส เพื่่�อหลีีกเลี่่ย� งการ
ปนเปื้้อ� นในขั้้�นตอนการปิิเปต ผู้้�ใช้้อาจเพิ่่�มขั้้�นตอนระหว่่างกลางของการถ่่ายตััวอย่่างสารละลาย ตััวอย่่างเช่่น ผู้้�ใช้้อาจถ่่ายแต่่ละตััวอย่่าง
อาหารที่่เ� พิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� แต่่ละตััวอย่่างใส่่เข้้าไปในหลอดที่่ฆ่� า่ เชื้้อ� แล้้ว
• ปฏิิบัติั กิ ารทดสอบทางชีีววิิทยาโมเลกุุลบนโต๊๊ะที่่มีี� หลอดไฟฆ่่าเชื้้อ� หากทำำ�ได้้ ลดการปนเปื้้อ� นบนโต๊๊ะปฏิิบัติั งิ านและอุุปกรณ์์
ในห้้องปฏิิบัติั กิ าร (ปิิเปต เครื่่�องมืือเปิิด/ปิิดฝา ฯลฯ) อย่่างสม่ำำ�� เสมอด้้วยน้ำำ�� ยาฟอกขาวที่่ใ� ช้้ในครััวเรืือนที่่มีี� ความเข้้มข้้น
1-5% (ผสมกัับน้ำำ�� ตามอััตราส่่วน) หรืือสารละลายกำำ�จัดั ดีีเอ็็นเอ
เพื่่�อลดความเสี่่�ยงจากผลบวกที่่�เป็็นเท็็จ ให้้ปฏิิบัติั ดัิ งั นี้้�
• ห้้ามเปิิดหลอดทดลองภายหลัังการเพิ่่�มขยายจำำ�นวนเชื้้อ�• กำำ�จัดั หลอดทดลองที่่ป� นเปื้้อ� นแล้้วเสมอ โดยแช่่ในน้ำำ�� ยาฟอกขาวที่่ใ� ช้้ในครััวเรืือนที่่มีี� ความเข้้มข้้น 1-5% (ผสมกัับน้ำำ�� ตามอััตราส่่วน)เป็็นเวลา 1 ชั่่�วโมงและให้้อยู่่�ห่่างจากพื้้น� ที่่จั� ดั เตรีียมชุุดทดสอบทุุกครั้้�ง
• ห้้ามนึ่่ง� ฆ่่าเชื้้อ� หลอดรีีเอเจนต์์ภายหลัังการเพิ่่�มขยายจำำ�นวน
ศึึกษาข้้อมููลเพิ่่�มเติิมในเอกสารข้้อมููลความปลอดภััยและระเบีียบข้้อบัังคัับการกำำ�จัดั ทิ้้�งในประเทศ
หากท่่านมีีข้้อสงสััยเกี่่ย� วกัับการใช้้งานหรืือกรรมวิิธีที่ี เ�่ ฉพาะเจาะจงใดๆ โปรดเยี่่ย� มชมเว็็บไซต์์ของเราที่่� www.neogen.com หรืือติิดต่่อ
ตััวแทนจำำ�หน่่ายหรืือผู้้�จััดจำำ�หน่่ายของบริิษัท
ั Neogen ในท้้องถิ่น�่ ของท่่าน

2

TH （ภาษาไทย）ความรัับผิิดชอบของผู้้�ใช้้

ผู้้�ใช้้จะต้้องทำำ�ความเข้้าใจเกี่่ย� วกัับคำำ�แนะนำำ�การใช้้งานผลิิตภััณฑ์์และข้้อมููลเกี่่ย� วกัับผลิิตภััณฑ์์ หากต้้องการข้้อมููลเพิ่่�มเติิม สามารถเยี่่ย� มชมเว็็บไซต์์ของเรา www.neogen.com หรืือติิดต่่อตััวแทน Neogen ในพื้้น� ที่่ข� องท่่าน
เมื่่�อเลืือกวิิธีีทดสอบ การคำำ�นึึงถึึงปััจจััยภายนอกนั้้�นเป็็นสิ่่�งสำำ�คัญั เช่่น วิิธีกี ารสุ่่�มตััวอย่่าง วิิธีกี ารทดสอบ วิิธีกี ารเตรีียมตััวอย่่าง การจััดการ
ควบคุุม เทคนิิคของห้้องปฏิิบัติั กิ ารรวมถึึงตััวอย่่างเองที่่อ� าจส่่งผลกระทบต่่อผลลััพธ์์ได้้
ผู้้�ใช้้เป็็นผู้้�รัับผิิดชอบในการเลืือกวิิธีกี ารทดสอบหรืือวิิธีกี ารเลืือกตััวอย่่าง เพื่่�อประเมิินจำำ�นวนตััวอย่่างที่่เ� พีียงพอ โดยใช้้เมทริิกซ์์และการตรวจ
สอบความสามารถในการทำำ�ลายจุุลินิ ทรีีย์์ที่เ�่ หมาะสม เพื่่�อให้้ผู้้�ใช้้แน่่ใจว่่าวิิธีกี ารทดสอบที่่เ� ลืือกนั้้�นเป็็นไปตามเกณฑ์์ของผู้้�ใช้้เอง
นอกจากนี้้� ผู้้�ใช้้จะต้้องรัับผิิดชอบในการเลืือกวิิธีกี ารทดสอบและผลลััพธ์์ที่ไ�่ ด้้ให้้เป็็นไปตามข้้อกำำ�หนดของลููกค้้าและของผู้้�จััดส่่งสิินค้้า
เช่่นเดีียวกัับวิิธีกี ารทดสอบอื่่�นๆ ผลการทดสอบที่่ไ� ด้้จากการใช้้ผลิิตภััณฑ์์ Neogen Food Safety ใดก็็ตาม ไม่่ได้้รับั ประกัันถึึงคุุณภาพของเม
ทริิกซ์์หรืือขั้้�นตอนที่่ใ� ช้้ทดสอบ
Neogen ได้้พัฒั นาชุุดน้ำำ�� ยาควบคุุมเพื่่�อทดสอบผลของส่่วนประกอบในตััวอย่่างแต่่ละประเภท โดยวิิธีี Neogen® เพื่่�อช่่วยให้้ลูกู ค้้าประเมิินวิิธีี
การสำำ�หรัับเมทริิกซ์์ต่า่ งๆ ของอาหารได้้ เมื่่�อจำำ�เป็็น ให้้ใช้้ชุดุ น้ำำ�� ยาควบคุุมเพื่่�อทดสอบผลของส่่วนประกอบในตััวอย่่างแต่่ละประเภท (MC)เพื่่�อทดสอบว่่าเมทริิกซ์์นั้้น� สามารถส่่งผลกระทบต่่อผลการทดสอบของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen หรืือไม่่
ทดสอบตััวอย่่างหลายๆ ตััวอย่่างที่่เ� ป็็นตััวแทนของเมทริิกซ์์นั้้น� ๆ เช่่น ตััวอย่่างที่่ไ� ด้้จากแหล่่งกำำ�เนิิดที่่แ� ตกต่่างกััน ตััวอย่่างที่่ไ� ด้้ในระหว่่างการ
ตรวจสอบความใช้้ได้้ของวิิธีีทดสอบต่่างๆ เมื่่�อนำำ�วิธีิ กี ารของ Neogen มาใช้้ หรืือเมื่่�อทำำ�การทดสอบเมทริิกซ์์ใหม่่หรืือที่่ไ� ม่่รู้้�จักั หรืือเมทริิกซ์์ที่�่
ผ่่านการเปลี่่ย� นแปลงวััตถุุดิบิ หรืือการแปรรููป
สามารถให้้คำ�จำ
ำ �กั
ำ ด
ั ความของเมทริิกซ์์ได้้ว่า่ เป็็นชนิิดของผลิิตภััณฑ์์ที่มีีคุ�่ ณุ สมบััติที่ิ ม�่ าที่่แ� ตกต่่างกััน เช่่น องค์์ประกอบหลัักและกระบวนการ
แปรรููปที่่ต่� า่ งกััน ความแตกต่่างระหว่่างเมทริิกซ์์ต่า่ ง ๆ อาจจะเป็็นเพีียงผลที่่เ� กิิดจากความแตกต่่างในกระบวนการแปรรููปหรืือสภาพลัักษณะ
ของเมทริิกซ์์ เช่่น ดิิบกัับผ่่านการฆ่่าเชื้้อ� แบบพาสเจอไรซ์์ สดกัับแห้้ง ฯลฯเงื่่�อนไขการรัับประกััน/การชดเชยแบบจำำ�กััด

NEOGEN ปฏิิเสธการรัับประกัันทั้้�งหมดทั้้�งอย่่างชััดแจ้้งและโดยนััย รวมถึึงแต่่ไม่่จำ�กัำ ดั เพีียงการรัับประกัันใดๆ ถึึงความสามารถในการ
จำำ�หน่่าย หรืือความเหมาะสมสำำ�หรัับการใช้้งานโดยเฉพาะ เว้้นแต่่จะได้้อธิิบายไว้้อย่่างชััดแจ้้งในส่่วนการรัับประกัันแบบจำำ�กัดั ว่่าด้้วยบรรจุุ
ภััณฑ์์ของผลิิตภััณฑ์์แต่่ละชิ้้�น หากผลิิตภััณฑ์์ Neogen Food Safety ใดๆ มีีตำำ�หนิิบกพร่่อง บริิษัท
ั Neogen หรืือผู้้�จััดจำำ�หน่่ายที่่ไ� ด้้รับ
ัอนุุญาตของบริิษัทั จะใช้้ดุลุ ยพิินิจิ ของตนในการพิิจารณาเปลี่่ย� นแทนผลิิตภััณฑ์์หรืือคืืนเงิินค่่าผลิิตภััณฑ์์ดังั กล่่าว และถืือเป็็นการชดเชย
เพีียงอย่่างเดีียวเท่่านั้้�น หากสงสััยว่่ามีีข้้อบกพร่่องหรืือความเสีียหายกัับสิินค้้า ท่่านต้้องแจ้้ง Neogen ภายใน 60 วัันหลัังจากที่่พ� บ และทำำ�การ
คืืนสิินค้้าที่่เ� สีียหายให้้ทาง Neogen โปรดโทรติิดต่่อแผนกบริิการลููกค้้า (1-800-328-1671 ในสหรััฐอเมริิกา) หรืือตััวแทน Neogen Food
Safety เพื่่�อขอสิิทธิ์์�ส่ง่ คืืนผลิิตภััณฑ์์ โปรดติิดต่่อตััวแทน Neogen ของคุุณหรืือผู้้�จััดจำำ�หน่่าย Neogen ที่่ไ� ด้้รับั อนุุญาตหากมีีคำำ�ถามเพิ่่�มเติิม

ขอบเขตความรัับผิิดชอบของ Neogen

NEOGEN จะไม่่รับั ผิิดชอบต่่อการสููญเสีียหรืือความเสีียหายใดๆ ทั้้�งโดยตรง โดยอ้้อม ความเสีียหายจำำ�เพาะ ที่่เ� กิิดขึ้้�นเนื่่�องจากการผิิดสััญญา
หรืือที่่เ� ป็็นผลสืืบเนื่่�อง รวมถึึงแต่่ไม่่จำ�กัำ ดั เพีียงการสููญเสีียผลกำำ�ไร ความรัับผิิดชอบของทาง Neogen ในทางกฎหมายจะต้้องไม่่เกิินมููลค่่าของ
ผลิิตภััณฑ์์ที่เ�่ สีียหายหรืือบกพร่่องไม่่ว่า่ กรณีีใดๆ ก็็ตาม

การเก็็บรัักษาและการกำำ�จััด

เก็็บชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ไว้้ที่อุ�่ ณุ หภููมิิ 2-8°C อย่่าแช่่แข็็ง เก็็บชุุดอุุปกรณ์์ให้้พ้น้ แสงในระหว่่างการ
เก็็บรัักษา หลัังจากเปิิดชุุดอุุปกรณ์์แล้้ว ให้้ตรวจสอบว่่าถุุงฟอยล์์ไม่่ชำ�รุำ ดุ เสีียหาย หากถุุงฟอยล์์ชำ�รุำ ดุ เสีียหาย ห้้ามใช้้ผลิิตภััณฑ์์นั้้น� หลัังจาก
เปิิดแล้้ว ควรเก็็บรัักษาหลอดรีีเอเจนต์์ที่ยั�่ งั ไม่่ได้้ใช้้ไว้้ในถุุงที่่ซีี� ลปิิดซ้ำำ�� ได้้โดยมีีสารดููดความชื้้น� ใส่่อยู่่�ภายในเพื่่�อให้้รีีเอเจนต์์ที่ทำ�่ �ำ แห้้งเยืือก
แข็็งแล้้วอยู่่�ในสภาวะคงตััว เก็็บรัักษาถุุงที่่ซีี� ลปิิดซ้ำำ�� แล้้วไว้้ที่อุ�่ ณุ หภููมิิ 2-8°C เป็็นเวลาไม่่เกิิน 60 วัันห้้ามใช้้ชุดุ ทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ที่่เ� ลยวัันหมดอายุุแล้้ว วัันหมดอายุุและหมายเลขล็็อตจะแสดงไว้้บน
ฉลากด้้านนอกของกล่่อง หลัังใช้้งาน อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� และหลอดของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogenอาจมีีสารจากเชื้้อ� ก่่อให้้เกิิดโรคอยู่่� เมื่่�อการทดสอบเสร็็จสมบููรณ์์แล้้ว ให้้ปฏิิบัติั ติ ามมาตรฐานอุุตสาหกรรมในปััจจุุบันั สำำ�หรัับการกำำ�จัดั และทิ้้�ง
ขยะปนเปื้้อ� น ศึึกษาข้้อมููลเพิ่่�มเติิมในเอกสารข้้อมููลความปลอดภััยและระเบีียบข้้อบัังคัับการกำำ�จัดั ทิ้้�งในประเทศ

คำำ�แนะนำำ�การใช้้งาน

ปฏิิบัติั ติ ามคำำ�แนะนำำ�ทั้้ง� หมดอย่่างละเอีียดรอบคอบ หากไม่่ปฏิิบัติั เิ ช่่นนั้้�น อาจให้้ผลที่่ไ� ม่่ถูกู ต้้องแม่่นยำำ�ได้้
ลดการปนเปื้้อ� นบนโต๊๊ะปฏิิบัติั งิ านและอุุปกรณ์์ในห้้องปฏิิบัติั กิ าร (ปิิเปต เครื่่�องมืือเปิิด/ปิิดฝา ฯลฯ) อย่่างสม่ำำ�� เสมอด้้วยน้ำำ�� ยาฟอกขาวที่่ใ� ช้้ใน
ครััวเรืือนที่่มีี� ความเข้้มข้้น 1-5% (ผสมกัับน้ำำ�� ตามอััตราส่่วน) หรืือสารละลายกำำ�จัดั ดีีเอ็็นเอ
ผู้้�ใช้้ควรผ่่านการฝึึกอบรมคุุณสมบััติสำิ �ำ หรัับผู้้�ปฏิิบัติั งิ าน (OQ) ระบบทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ตามที่่ร� ะบุุในเอกสาร
"แนวทางและระเบีียบการด้้านคุุณสมบััติกิ ารติิดตั้้�ง (IQ) / คุุณสมบััติกิ ารปฏิิบัติั กิ าร (OQ) สำำ�หรัับระบบการทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุล
โดยวิิธีี Neogen”(6)ดููในส่่วน “คำำ�แนะนำำ�เฉพาะสำำ�หรัับวิิธีกี ารที่่ไ� ด้้รับั การตรวจสอบความใช้้ได้้ของวิิธี”ี สำำ�หรัับข้้อกำำ�หนดเฉพาะ:ตารางที่่� 3 สำำ�หรัับระเบีียบการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ตามมาตรฐาน AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01 และตามใบรัับรอง AOAC®
SM
Performance Tested Certificate #091501
ตารางที่่� 4 สำำ�หรัับระเบีียบการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ตามใบรัับรองของ NF VALIDATION 3M 01/16 -11/16
การเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ในตััวอย่่าง
ตารางที่่� 2, 3 หรืือ 4 แสดงคำำ�แนะนำำ�สำ�ำ หรัับระเบีียบการทั่่�วไปในการเพิ่่�มปริิมาณเชื้้อ� ในตััวอย่่างอาหาร อาหารสััตว์์ และตััวอย่่างจากสิ่่�ง
แวดล้้อม
ผู้้�ใช้้มีีหน้้าที่่รั� บั ผิิดชอบในการตรวจสอบระเบีียบการสุ่่�มตััวอย่่างหรืืออััตราส่่วนการเจืือจางแบบอื่่�นว่่าใช้้ได้้ เพื่่�อให้้มั่่น� ใจว่่าวิิธีกี ารทดสอบนี้้�

3

TH （ภาษาไทย）สอดคล้้องกัับเกณฑ์์ของผู้้�ใช้้งาน
อาหาร
1. ให้้อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ
� BPW ISO ปรัับสมดุุลเข้้ากัับอุุณหภููมิโิ ดยรอบในห้้องปฏิิบัติั กิ าร หรืืออุุณหภููมิริ ะดัับ 41.5 ± 1°C ซึ่่ง� ขึ้้�นอยู่้้�กั� บัแมทริิกซ์์ที่ท�่ ดสอบ โปรดดููตาราง 2, 3 หรืือ 4
2. ผสมอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� กัับตััวอย่่างเข้้าด้้วยกัันโดยใช้้วิธีิ กี ารแบบปลอดเชื้้อ
�
3. ผสมให้้เข้้ากัันเป็็นอย่่างดีีด้้วยวิิธีกี ารปั่่�นผสม การเขย่่า หรืือ การผสมด้้วยมืือเป็็นระยะเวลา 2 ± 0.2 นาทีี หรืือ จนกว่่าทุุกๆ ก้้อนจะละลาย
จนหมดและสารแขวนลอยของสารอาหารมีีลัักษณะเป็็นเนื้้อ� เดีียวกััน(10-15)
a.	สำำ�หรัับตััวอย่่างประเภทเนื้้อ� สััตว์์ทั้้ง� หมดที่่มีีลั� กั ษณะเป็็นละอองอนุุภาคขนาดเล็็ก แนะนำำ�ให้้ใช้้ถุงุ กรองb.	สำำ�หรัับเมทริิกซ์์ต่า่ งๆ ที่่จ� ะบวมในน้ำำ�� และมีีความหนืืดสููง (เช่่น ธััญพืืช แป้้งต่่างๆ) แนะนำำ�ว่า่ ให้้เจืือจางเพิ่่�ม (> 1:10) จนกว่่าความ
หนืืดจะลดลงในระดัับที่่เ� หมาะสมหรืือเพิ่่�มแอลฟาอะไมเลสปลอดเชื้้อ
� 1% โดยมวล/ปริิมาตรลงใน BPW (ISO)(10-13)c.	สำำ�หรัับตััวอย่่างนมผงและธััญพืืชที่่มีี� ปริิมาณมาก ค่่อยๆ เติิมตััวอย่่างลงในของเหลวโดยคนบ่่อยๆ เพื่่�อไม่่ให้้จับั ตััวกันั เป็็นก้้อน
4.	บ่่มเชื้้อ� ไว้้ดังั ที่่อ� ธิิบายไว้้ในตารางวิิธีกี ารที่่เ� กี่่ย� วข้้อง (ดููตาราง2 3 หรืือ 4)ตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อม
อุุปกรณ์์เก็็บตััวอย่่างอาจเป็็นฟองน้ำำ�� ชุุบสารละลายที่่ทำ� �ำ ให้้เป็็นกลางเพื่่�อยัับยั้้�งฤทธิ์์�ของสารฆ่่าเชื้้อ
� Neogen แนะนำำ�ให้้ใช้้ฟองน้ำำ�� เซลลููโลสที่่ไ� ม่่มีีไบโอไซด์์ สารละลายที่่ทำ� �ำ ให้้เป็็นกลางอาจเป็็นอาหารเลี้้�ยงเชื้้อ� ที่่เ� ป็็นกลาง Dey-Engley (D/E) หรืืออาหารเลี้้�ยงเชื้้อ
� Letheen ควรทำำ�การ
ฆ่่าเชื้้อ� ในพื้้น� ที่่ห� ลัังจากการเก็็บตััวอย่่าง
คำ�เตอ
ื น: หากคุณเลือกที่จะใช้บัฟเฟอร์ส�ำ หรับทำ�ให้เป็นกลาง (NB) ซงึ่ ประกอบด้วยสารเชิงซอ้ นของเอริลซัลโฟเนตเป็นสารละลายเพอ
ื่ทำ�ใหฟ้ องน้�ชำ มุ่ ชื้น ต้องทำ�การเจือจางตัวอย่างหลังเพิม่ จำ�นวนเชื้อแล้วในอัตราส่วน 1:2 (ตัวอยา่ ง 1 ส่วนในอาหารเหลวเพิม่ จำ�นวนเชื้อ
ที่ฆ่าเชื้อแล้ว 1 ส่วน) ก่อนการทดสอบเพอื่ ที่จะลดความเสยี่ งอันเกยี่ วขอ้ งกับผลลบที่เป็นเท็จซงึ่ นำ�ไปสูก่ ารปลอ่ ยผลิตภัณฑ์ที่ปนเปอื้ นออกสู่
ภายนอกได้ อีกหนงึ่ ตัวเลือกคือถ่ายบัฟเฟอร์ที่เป็นกลางที่มกี ารเพิม่ เชื้อปริมาณ 10 µL เขา้ ไปยังหลอดสารละลายไลซส
ี Neogenขนาดพื้้น� ที่่เ� ก็็บตััวอย่่างที่่แ� นะนำำ�เพื่่�อตรวจสอบยืืนยัันการมีีอยู่่�หรืือการไม่่มีีอยู่่�ของเชื้้อ� ก่่อโรคบนพื้้น� ผิิวคืือขนาดอย่่างน้้อย 100 cm2(10 ซม. x 10 ซม. หรืือ 4” x 4”) เมื่่�อทำำ�การเก็็บตััวอย่่างด้้วยฟองน้ำำ�� ให้้ครอบคลุุมพื้้น� ที่่โ� ดยรวมทั้้�งสองทิิศทาง (กล่่าวคืือ จากซ้้ายไปขวา และจากบนลงล่่าง) หรืือเก็็บตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อมตามขั้้�นตอนการเก็็บตััวอย่่างปััจจุุบันั ของคุุณ หรืือตามมาตรฐาน FDA BAM(1),(2)(7)
USDA FSIS MLG หรืือแนวทางตามมาตรฐาน ISO 18593:2018ผู้้�ใช้้มีีหน้้าที่่รั� บั ผิิดชอบในการตรวจสอบระเบีียบการสุ่่�มตััวอย่่างหรืืออััตราส่่วนการเจืือจางแบบอื่่�นว่่าใช้้ได้้ เพื่่�อให้้มั่่น� ใจว่่าวิิธีกี ารทดสอบนี้้�
สอดคล้้องกัับเกณฑ์์ของผู้้�ใช้้งาน
1.	อุ่่�นอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ
� BPW ISO ไว้้ก่อ่ นล่่วงหน้้าที่่ร� ะดัับอุุณหภููมิิ 41.5 ± 1°C ซึ่่ง� ขึ้้�นอยู่่�กัับเมทริิกซ์์ที่ท�่ ดสอบ โปรดดููตาราง
2, 3 หรืือ 4
2. ผสมอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� กัับตััวอย่่างเข้้าด้้วยกัันโดยใช้้วิธีิ กี ารแบบปลอดเชื้้อ� ผสมให้้เข้้ากัันเป็็นอย่่างดีีด้้วยวิิธีกี ารปั่่�นผสม การเขย่่า
หรืือ การผสมด้้วยมืือเป็็นระยะเวลา 2 ± 0.2 นาทีี บ่่มเชื้้อ� ไว้้ดังั ที่่อ� ธิิบายไว้้ในตารางวิิธีกี ารที่่เ� กี่่ย� วข้้อง โปรดดููตาราง 2, 3 หรืือ 4ตารางที่่� 2 ระเบีียบการของอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ทั่่�วไป
เมทริกซ์ตวั อย่าง

ขนาดตัวอย่าง

ปริมาตรอาหารเหลวเพิม
่จำ�นวนเชื้อ

ระเบียบการที่ 1ผลิตภัณฑ์อาหารที่ผ่านการแปรรูป
(ไมร่ วมไข่ผง และผลิตภัณฑ์ตา่ ง ๆ ที่ระบุไว้
ในระเบียบการอนื่ ๆ)(ข)อุณหภูมิ
ในการเพิม
่จำ�นวนเชื้อ
(±1°C)

เวลาการเพิม
่จำ�นวนเชื้อ
(ชั่วโมง)ปริมาตรการ
วิเคราะห์
ตัวอยา่ ง(ไมโครลิตร)(ก)

25 g

225 mL BPW ISO

37

18-26

20

ระเบียบการที่ 2อาหารดิบและอาหารทีไ่ ม่ผา่ นการ
แปรรูป ไข่ผง อาหารสัตว์ และตัวอย่าง
จากสิง่ แวดล้อม(c)25 g

225 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )

41.5

18-26

20

25 g

225 mL BPW ISO

37

20-26

20

25 g

นมผงพรอ่ งมันเนยแบบปลอด
เชื้อความเขม
้ ขน
้ 100 กรัมตอ
่ลิตรปริมาณ 225 มล. ที่ยอ้ มสีบริลเลยี นต์กรนี ความเขม
้ ขน
้
0.002%(ง,จ,ฉ)

37

24-30

20

ระเบียบการที่ 3ผลิตภัณฑ์นมชนิดผง (ได้แก่ นมผงสำ�หรับ
ทารก นมผงสำ�หรับทารกประเภทที่ทำ�จาก
ถั่วเหลือง)ระเบียบการที่ 4ผลิตภัณฑ์ที่ท�ำ จากโกโก้
(ชนิดผง ช็อคโกแลต ลูกกวาด ฯลฯ)4

TH （ภาษาไทย）ระเบียบการที่ 5อนื่ ๆ ได้แก่ เครอื่ งเทศ สมุนไพรที่มีกลิน
่หอม น้�ำ ผลไม้เข้มข้น ชาและกาแฟพร้อมชง ซุปก้อน
ระเบียบการที่ 6วอลนัทหรือถั่วเปลือกแข็งต่างๆ ที่ผสม
ด้วยวอลนัท (ขัน้ ตอนวิธีนเี้ หมาะสำ�หรับถั่ว
เปลอื กแข็งชนิดอนื่ ๆ ได้แก่ พีแคน อัลมอนด์ พิสตาชีโอ เม็ดมะม่วงหิมพานต์ เกาลัด
ถั่วแมคาเดเมีย ถั่วบราซิล ถั่วเหลือง และถั่วลิสง)25 g

2X BPW ISO 235 มล. ที่มี
K2SO3 0.5% + นมผงพรอ่ งมันเนยแบบปลอดเชื้อความเขม้ ขน
้ 100 กรัมตอ่ ลิตร
ปริมาณ 240 มล./L(ง,ช,ฌ)

37

24-30

10

25 g

นมผงพรอ่ งมันเนยแบบปลอด
เชื้อ ความเขม
้ ขน
้ 100 กรัมตอ่ ลิตร ปริมาณ 225 มล.(ง)

37

18-24

20

(ก) ปริิมาตรตััวอย่่างที่่นำ� �ำ ไปใส่่ไว้้ในหลอดสารละลายไลซิิส โปรดดููในขั้้�นตอน 4.7 ในหััวข้อ้ ไลซิิส(ข)	ตััวอย่่างของผลิิตภััณฑ์์ที่นำ�่ �ำ มาทดสอบในระเบีียบการที่่� 1: อาหารพร้้อมรัับประทาน สลััดที่่ข� ายในร้้านค้้า และคััสตาร์์ด(ค)	ตััวอย่่างของผลิิตภััณฑ์์ที่นำ�่ �ำ มาทดสอบในระเบีียบการที่่� 2: เนื้้อ� ดิิบ ผัักแช่่แข็็ง เนยแข็็งทุุกชนิิด นมเปรี้้�ยว ผัักสลััดดิิบ (ผัักกาดหอม,ผัักกาดหอมปััตตาเวีีย)(ง) นมยููเอชทีีพร่่องมัันเนยสามารถนำำ�มาใช้้แทนนมผงพร่่องมัันเนยได้้(จ) ปริิมาณ 0.45 มล. ของสีีย้้อมบริิลเลีียนต์์กรีีนชนิิดน้ำำ�� ที่่มีีค่� า่ ความเข้้มข้้น 1% ต่่อนมพร่่องมัันเนยปริิมาณ 225 มล. ซึ่่ง� ให้้ความเข้้มข้้นขั้้�น
สุุดท้้ายของสีีย้้อมบริิลเลีียนต์์กรีีนที่่ร� ะดัับ 0.002% (0.02 กรััมต่่อลิิตร)� ให้้แขวนลอยนมผงพร่่องมัันเนยปริิมาณ 100 กรััม ที่่ผ่� า่ นกระบวนการทำำ�ให้้แห้้งไว้้(ฉ) เพื่่�อเตรีียมนมผงพร่่องมัันเนยแบบปลอดเชื้้อ
ในน้ำำ�� กลั่่�นหรืือน้ำำ�� บริิสุทธิ์์�ุ ในปริิมาณ 1 ลิิตร คนไปมาจนกว่่าจะละลาย นึ่่ง� ฆ่่าเชื้้อ� เป็็นเวลา 15 นาทีีที่่อุ� ณุ หภููมิิ 121°C จััดเก็็บไว้้ที่�่
อุุณหภููมิิ 2-30°C(8)(ช) K2SO3 ปริิมาณ 5 กรััม ต่่ออาหารเลี้้�ยงเชื้้อ
� BPW ISO 1000 มล. ของ ซึ่่ง� จะทำำ�ให้้ได้้ค่า่ ความเข้้มข้้นขั้้�นสุุดท้้ายของ
K2SO3ที่่ร� ะดัับ 0.5%(ฌ)	ต้้องเติิมนมผงพร่่องมัันเนยแบบปลอดเชื้้อ� ที่่มีี� ความเข้้มข้้น 100 กรััม/ลิิตร ปริิมาณ 240 มล.ลงในอาหารเลี้้�ยงเชื้้อ
� 2X BPW ISO ปริิมาณ
235 มล. ที่่ผ่� า่ นการฆ่่าเชื้้อ� ที่่มีี
� K2SO3 0.5%หากใช้้ขั้้น� ตอนการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ทุุติยิ ภููมิแิ บบเผื่่�อเลืือก เช่่น อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ
� Rappaport Vassiliadis กรณีีนี้้�จำ�ำ เป็็นต้้องทำำ�การ
เจืือจางในอััตราส่่วน 1:2 (เติิมตััวอย่่างอาหารเลี้้�ยงเชื้้อ
� 1 ส่่วนลงในอาหารเหลวเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ที่่ฆ่� า่ เชื้้อ� แล้้ว 1 ส่่วน) หรืือ เพีียงแค่่ถ่า่ ยโอนอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ทุุติยิ ภููมิใิ นปริิมาณ 10 µL ไปยัังหลอดสารละลายไลซิิส Neogen หากใช้้อาหารเหลวเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ
� Tetrathionate(TT) ให้้ถ่า่ ยอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ทุุติยิ ภููมิใิ นปริิมาณ 20 µL ไปยัังหลอดสารละลายไลซิิส Neogen และห้้ามกวนอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ
� TTหรืือปิิเปตต์์จากก้้นหลอดอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนชื้้อ� เพื่่�อหลีีกเลี่่ย� งปััญหาการถ่่ายโอนตะกอนใด ๆ ที่่อ� าจเกิิดขึ้้�นได้้
คำำ�แนะนำำ�เฉพาะสำำ�หรัับวิิธีกี ารทดสอบที่่�ผ่า่ นการตรวจสอบความใช้้ได้้ของวิิธีี
AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01

AOAC® Performance TestedSM Certificate #091501

จากโครงการ OMASM และ PTMSM ของสถาบัันวิิจัยั AOAC Research Institute พบว่่าชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี
Neogen เป็็นวิิธีกี ารที่่มีี� ประสิิทธิภิ าพในการตรวจหา เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่า เมทริิกซ์์ที่ไ�่ ด้้รับั การทดสอบในการศึึกษาดัังกล่่าวแสดงไว้้ในตารางที่่� 3ตารางที่่� 3 ขั้้�นตอนปฏิิบัติั ใิ นการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ตามมาตรฐาน AOAC OMASM 2016.01 และตามใบรัับรอง AOAC PTMSM Certificate#091501 ปริิมาตรของตััวอย่่างที่่นำ� �ำ ไปใส่่ไว้้ในหลอดสารละลายไลซิิส Neogen คืือ 20 ไมโครลิิตร

5

TH （ภาษาไทย）เมทริกซ์ตวั อย่าง

อุณหภูมใิ นการเพิม
่จำ�นวนเชื้อ
(±1°C)

เวลาการเพิม่ จำ�นวน
เชื้อ (ชั่วโมง)

41.5

10-24

225 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )

41.5

10-24

325 g

975 mL BPW ISO่ ไว้ล่วงหนา้ )
(อุน

41.5

14-24

325 g

2,925 mL BPW ISO

37

18-24

37

18-24

ขนาดตัวอยา่ งปริมาตรอาหารเหลว
เพิม่ จำ�นวนเชื้อ

25 g

225 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )325 g

975 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )25 g

ื้ วัวดิบบด
เนอื้ ไก่ดบ
ิ บด
เนอ
เนอ
ื้ ไก่ชุบแป้งทอดสุก

25 g

225 mL BPW ISO

375 g

1,500 mL BPW ISOพริกไทยดำ� กุง้ ดิบทัง้ ตัว ผักโขมดิบ
บรรจุถงุ เนยแข็งอเมริกนั ที่ผ่านการพาส
เจอไรซ์แล้ว

25 g

225 mL BPW ISO

37

18-24

น�ำ้ ลา้ งซากเนอื้ ไก่

30 มล.

30 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )

41.5

18-24

ฟองน้�ำ 1 ชิน้

50 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )

41.5

18-24

นมผงพร่องมันเนยแบบพร้อมรับ
ประทาน

25 g

225 mL BPW ISO

37

20-24

ผงโกโก้

25 g

225 mL BPW ISO

37

24-28

่ บ
ิ ทัง้ ฟองที่ผ่านการพาสเจอร์ไรซ์
ไขด
แล้ว

100 มล.

900 mL BPW ISO

37

18-24

น�ำ้ รดต้นกล้าที่ใช้แล้ว

375 มล.

3,375 mL BPW ISO

37

18-24

25 g

225 mL BPW ISO

375 g

3,375 mL BPW ISO

37

18-24

ดอกกัญชาแห้ง ดอกกัญชงแห้ง(4)10 g

90 BPW-ISO

41.5

28-32

คอนกรีตแบบปิดผนึก

ฟองน้�ำ 1 ชิน้

225 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )

41.5

18-24

เหล็กสแตนเลส

ไม้ส�ำ ลีปา้ ยเก็บ
ตัวอย่าง 1 อัน

10 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )

41.5

18-24

กระเบอื้ งเซรามิกแบบปิดผนึก

ฟองน้�ำ 1 ชิน้

50 mL BPW ISO(อุน่ ไว้ล่วงหนา้ )

41.5

18-24

อาหารสุนขั ชนิดแห้ง

ฟองน�ำ้ ป้ายซากเนอื้ ไก่

จากสิง่ แวดลอ้ มเนยถั่วชนิดครีม

เมทริกซ์
ตัวอย่าง
กุ้งดิบแบบทั้งตัว

ขนาดตัวอย่าง

ปริมาตรอาหาร
เหลวเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ

อุณหภูมิในการ
เพิ่มจำ�นวนเชื้อ
(±1°C)

เวลาการเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ
(ชั่วโมง)อาหารเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ
ทุติยภูมิ (มล.)อุณหภูมิของ
อาหารเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อ
ทุติยภูมิ (±1°C)เวลาการเพิ่ม
จำ�นวนเชื้อขั้น
ที่สอง (ชั่วโมง)25 g

225 mLBPW ISO

37

18-24

R-V R10:0.1 mL ลงใน10 mL(ก)

41.5

4-24

(ก) ถ่่ายโอนปริิมาณ 10 µL ของตััวอย่่างที่่ใ� ห้้อาหารเลี้้�ยงเชื้้อ� แล้้วไปยัังหลอดสารละลายไลซิิส โปรดดููในขั้้�นตอน 4.7 ในหััวข้อ้ ไลซิิส

6

TH （ภาษาไทย）NF VALIDATION โดย AFNOR Certification

3M 01/16 -11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/enหากต้้องการข้้อมููลเพิ่่�มเติิมเกี่่ย� วกัับการสิ้้�นสุุดการบัังคัับใช้้ของผลจากการตรวจสอบความใช้้ได้้ของวิิธีกี าร โปรดอ่่านเอกสารรัับรองของNF VALIDATION ที่่พ� ร้้อมให้้ใช้้งานได้้ตามเว็็บไซต์์ที่ร�่ ะบุุไว้้ข้า้ งต้้น
วิิธีกี ารที่่ไ� ด้้รับั การรัับรองมาตรฐานของ NF VALIDATION ตามมาตรฐาน ISO 16140-2(7) เมื่่�อเปรีียบเทีียบกัับ ISO 6579(3)ขอบเขตของการตรวจสอบความใช้้ได้้ของวิิธีกี าร มีีดังั ต่่อไปนี้้�: ผลิิตภััณฑ์์อาหารสำำ�หรัับมนุุษย์์ทั้้ง� หมด ตััวอย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อมด้้านการ
ผลิิต (ที่่ร� วมถึึงตััวอย่่างการผลิิตขั้้�นปฐมภููมิ)ิ อาหารสััตว์์เลี้้�ยงและอาหารสััตว์์โดยจััดทำำ�การตรวจสอบความถููกต้้องในอาหารหลากหลายชนิิด
การเตรีียมตััวอย่่าง: ควรเตรีียมตััวอย่่างตามมาตรฐาน EN ISO 6579(3) และ EN ISO 6887(10-15)เวอร์์ชั่่น� ซอฟต์์แวร์์: ดููใบรัับรอง
ตารางที่่� 4 ระเบีียบการเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ตาม 3M 01/16 -11/16 ที่่เ� ป็็นวิิธีกี ารที่่ผ่� า่ นการรัับรองของ NF VALIDATION
ระเบียบการ
ระเบียบการที่ 1:• ผลิตภัณฑ์อาหารแปรรูปหลากหลาย
ชนิด (ไม่รวม ผงไข่ ผักและผลไม้
แปรรูป และผลิตภัณฑ์ที่ระบุไว้ใน
ระเบียบการอนื่ ๆ)• ผลิตภัณฑ์ปลาและอาหารทะเลแบบดิบ
ทุกชนิด
• อาหารสัตว์เลยี้ งและอาหารสัตว์
• การผลิตขัน้ ปฐมภูมิ (นอนฟิคล
ั )

ขนาด
ตัวอย่าง

ปริมาตรอาหารเหลวเพิม
่จำ�นวนเชื้อ

25 g

225 mL BPW ISOอุณหภูมิ
เวลาปริมาตรการ
ในการเพิม
่การเพิม
่วิเคราะห์ตว
ั อยา
่ ง
จำ�นวนเชื้อ จำ�นวนเชื้อ
(ไมโครลิตร)(ก)(+1°C)(ชั่วโมง)37

18 - 2620

ระเบียบการที่ 2:• อาหารดิบและอาหารที่ไมแ่ ปรรูปหลาก
หลายชนิด (ไม่รวมปลาดิบและอาหาร
25 กรัม หรอืทะเลดิบ และผลิตภัณฑ์ที่ระบุไว้ใน
การเช็ดถู
อาหารเลยี้ งเชื้อ BPW ISOระเบียบการอนื่ ๆ)
1 ครัง้ หรือแบบอุน่ ไว้ล่วงหนา้ ปริมาณ
• ผงไข่
การป้ายเก็บ
225 มล.
• ผักผลไม้ทุกชนิด
ตัวอย่าง 1 ครัง้
• ตัวอย่างจากสิง่ แวดล้อมของการผลิต
อาหาร

41.5

18 - 2620

ระเบียบการที่ 3:• ผลิตภัณฑ์นมผง
ระเบียบการที่ 4:• ผลิตภัณฑ์โกโก้ที่มีส่วนผสมของโกโก้
มากกว่า 20%ระเบียบการที่ 5:• เครอื่ งเทศ สมุนไพรที่มีกลิน่ หอม น้�ำผลไม้เข้มข้น ชา กาแฟ ส่วนผสม
สำ�หรับทำ�อาหาร
ระเบียบการที่ 6:• เนอื้ สัตว์ดบ
ิ

25 g

225 mL BPW ISO

37

20 - 2620

25 gนมยูเอชทีพรอ่ งมันเนย+ สบี ริลเลยี นต์กรนี ที่มี
ความเขม
้ ขน
้ 0.002%ปริมาณ 225 มล.

37

24 - 3020

25 gอาหารเลยี้ งเชื้อ 2 x BPW
ISO ปริมาณ 235 มล.
+ K2SO3 0.5% + นมยูเอ
ชทีพรอ่ งมันเนยปริมาณ
240 มล.

37

24 - 3010

25 gอาหารเลยี้ งเชื้อ BPW ISOแบบอุน่ ไว้ล่วงหนา้ ปริมาณ
225 มล.

41.5

10 - 2420

7

TH （ภาษาไทย）ระเบียบการที่ 7:• การผลิตขัน้ ปฐมภูมิ (ฟิคลั )ระเบียบการที่ 8:• นมผงสำ�หรับทารก ธัญพืชสำ�หรับ
ทารก ผลิตภัณฑ์นมในรูปแบบผงที่
ไม่มจ
ี ล
ุ น
ิ ทรียที่์ มีชีวิต(b)ระเบียบการที่ 9:• นมผงสำ�หรับทารก ธัญพืชสำ�หรับ
ทารก ผลิตภัณฑ์นมในรูปแบบผงที่มี
จุลนิ ทรียที่์ มีชีวิต(b)รองเท้าบูท
สำ�หรับเก็บ
ตัวอย่าง 1 ขา้ ง

100 mL ในอาหาร
เหลวเพิม่ จำ�นวนเชื้อ
Tetrathionate

25 g่ จำ�นวนเชื้อ
อาหารเหลวเพิม
Tetrathionate 225 mL

375 กรัม

375 กรัม

37

22 - 2420

อาหารเลยี้ งเชื้อ BPW ISOแบบอุน่ ไว้ล่วงหนา้ ปริมาณ
3375 มล.

37

20 - 2620

อาหารเลยี้ งเชื้อ BPW ISOแบบอุน่ ไว้ล่วงหนา้ ปริมาณ
3375 มล. + Vancomycin(10 มก.ตอ
่ ลิตร)37

20 - 2620(ก) ปริิมาตรตััวอย่่างที่่นำ� �ำ ไปใส่่ไว้้ในหลอดสารละลายไลซิิส โปรดดููในขั้้�นตอน 4.7 ในหััวข้อ้ ไลซิิส(ข)	สำำ�หรัับตััวอย่่างนมผงและธััญพืืชที่่มีี� ปริิมาณมาก ค่่อยๆ เติิมตััวอย่่างลงในของเหลวโดยคนบ่่อยๆ เพื่่�อไม่่ให้้จับั ตััวกันั เป็็นก้้อน
หมายเหตุ:• ตัวอย่างที่มีปริมาณมากกว่า 25 กรัมไม่ได้น�ำ มาทดสอบในการศกึ ษาของ NF VALIDATION ยกเว้นในระเบยี บการที่ 8 และ 9• ระเบียบการโดยย่อในการตรวจหาเชื้อนัน้ ไวต่อสภาวะของการบม่ เชื้อ จงึ จำ�เป็นตอ้ งปฏิบตั ติ ามเงอื่ นไขอุณหภูมที่ิ ระบุไว้ในขอ้ กำ�หนด
ทางเทคนิค ผูใ้ ช้ต้องตรวจสอบยืนยันว่าการอุน่ อาหารเหลวเพิม่ จำ�นวนเชื้อไว้ล่วงหนา้ นัน้ ถึงระดับอุณหภูมที่ิ กำ�หนดไว้กอ่ นทำ�การบม
่เชื้อ ระยะเวลาในการเตรียมตัวอย่าง กล่าวคือ ความลา่ ช้าระหว่างช่วงท้ายของขัน้ ตอนการอุน่ อาหารเหลวเพิม่ จำ�นวนเชื้อไว้ล่วงหนา้
จนถึงช่วงเริม่ ต้นของขัน้ ตอนการบ่มเชื้อของตัวอย่างอาหารนัน้ ไมค่ วรนานเกิน 45 นาที แนะนำ�ใหใ้ ช้ตูบ้ ม่ เชื้อที่มีช่องระบายอากาศ
สำ�หรับการบ่มเชื้อ
• ในการถ่ายโอนตัวอย่างจากอาหารเหลวเพิม่ จำ�นวนเชื้อ Tetrathionate (TT) ไปยังหลอดไลซิส Neogen นัน้ หา้ มกวนอาหาร
เลีย้ งเชื้อ TT หรือปิเปตต์จากก้นหลอดอาหารเลีย้ งเชื้อเพอื่ หลีกเลีย่ งปัญหาการถ่ายโอนตะกอนใด ๆ ทีอ่ าจเกิดขนึ้ ได้ การถ่าย
โอนตะกอนอาจทำ�ให้ได้ผลลัพธ์ทไ่ี ม่ถูกต้อง
• จุดขัดจังหวะระเบียบการที่แนะนำ�คือช่วงภายหลังการเลยี้ งเชื้อหรอื ภายหลังการแยกสลายตัวอยา่ ง (sample lysis) อาหารเหลวเพิม
่จำ�นวนเชื้อ หรือไลเซตตัวอย่างสามารถเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C ไดน้ านที่สุดเป็นเวลา 72 ชั่วโมง หลังจากนำ�อาหารเหลวเพิม
่จำ�นวนเชื้อออกจากที่เก็บ ให้ทำ�การทดสอบจากขัน้ ที่ 1 ในหัวขอ้ ไลซีส หลังจากนำ�ไลเซตตัวอยา่ งออกจากที่เก็บ ให้ทำ�การทดสอบจาก
ขัน้ ที่ 8 ในหัวข้อไลซีส
การเตรีียมถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen®
1. ชุุบผ้้าหรืือกระดาษเช็็ดมืือแบบใช้้แล้้วทิ้้ง� ในน้ำำ�� ยาฟอกขาว 1-5% (ผสมกัับน้ำำ�� ตามอััตราส่่วน) และเช็็ดถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้า
เครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen®
2. ใช้้น้ำ�ล้�ำ า้ งถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen นี้้�
3. ใช้้กระดาษเช็็ดมืือแบบใช้้แล้้วทิ้้ง� เช็็ดถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ให้้แห้้ง
4. ตรวจสอบให้้แน่่ใจว่่าถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen แห้้งสนิิทก่อ่ นใช้้งาน
การเตรีียมชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen®
วางชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen® บนโต๊๊ะปฏิิบัติั งิ านของห้้องปฏิิบัติั กิ ารโดยตรง ใช้้ชิลิ บล็็อคที่่อุ� ณุ หภููมิิ
ห้้องปฏิิบัติั กิ าร (20-25°C)
การเตรีียมฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen®
วางฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen® ในเครื่่�องทำำ�ความร้้อนบล็็อกคู่่�แบบแห้้ง เปิิดเครื่่�องทำำ�ความร้้อนบล็็อค
แบบแห้้งและตั้้�งอุุณหภููมิเิ พื่่�อให้้ฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen มีีอุุณหภููมิเิ พิ่่�มขึ้้�นจนถึึง 100 ± 1°C
หมายเหตุ: ให้ฮีทบล็อคสำ�หรับใส่หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen มอี ณุ หภูมติ ามที่กำ�หนดโดยทิง้ ไว้ประมาณ 30 นาที ทัง้ นี้ขนึ้ อยูก่ บั การทำ�งานของเครอื่ งทำ�ความร้อน ใช้เทอร์โมมิเตอร์ที่ไดร้ บั การสอบเทียบอยา่ งเหมาะสม (เช่น เทอร์โมมิเตอร์แบบจุม่ บางส่วน
เทอร์โมมิเตอร์แบบดิจติ อล ที่ไม่ใช่เทอร์โมมิเตอร์แบบจุม่ ทัง้ หมด) วางไว้ในบริเวณที่กำ�หนด ตรวจสอบใหอ้ ณุ หภูมขิ องฮีทบล็อคสำ�หรับใส่
หลอดทดสอบระดับโมเลกุล โดยวิธี Neogen อยู่ที่ 100 ± 1°C
การเตรีียมเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen®
1. เริ่่�มต้้นการใช้้งานซอฟต์์แวร์์สำ�ำ หรัับทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® แล้้วลงชื่่�อเข้้าสู่่�ระบบ ติิดต่่อตััวแทนของ
Neogen Food Safety ของคุุณเพื่่�อให้้แน่่ใจว่่าคุุณมีีซอฟต์์แวร์์เวอร์์ชันั ที่่อั� ปั เดตล่่าสุุด
2. เปิิดเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen
3. สร้้างหรืือแก้้ไขชุุดการทดสอบที่่มีีข้� อ้ มููลสำำ�หรัับแต่่ละตััวอย่่าง ดููรายละเอีียดเพิ่่�มเติิมในคู่่�มืือการใช้้งานระบบทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับ
โมเลกุุลโดยวิิธีี Neogenหมายเหตุ: ต้องรอให้เครอื่ งมือสำ�หรับทดสอบเชื้อก่อโรคระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen มสี ถานะพรอ้ มใช้ กอ่ นที่จะใส่ถาดใสห่ ลอดทดสอบ
สำ�หรับเข้าเครอื่ งทดสอบระดับโมเลกุลโดยวิธี Neogen ขัน้ ตอนของการทำ�ความรอ้ นนใี้ ช้เวลาประมาณ 20 นาทีและบง่ ชี้ด้วยไฟสสี ม้ บนแถบบอกสถานะของเครอื่ ง เมอื่ เครอื่ งมือพร้อมที่จะเริม่ ต้นการทำ�งาน แถบบอกสถานะดังกลา่ วจะเปลยี่ นเป็นสเี ขยี ว

8TH （ภาษาไทย）ไลซีีส
ใช้้ไขควงไขหรืือไม้้พายถอดด้้านล่่างของที่่ว� างสารละลายไลซิิส Neogen ออก ก่่อนวางลงบนฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล
โดยวิิธีี Neogen

1. รอให้้หลอดสารละลายไลซีีส Neogen อุ่่�นขึ้้�นโดยตั้้�งที่่ว� างที่่ร� ะดัับอุุณหภููมิห้ิ อ้ ง (20-25°C) นานข้้ามคืืน (16-18 ชั่่�วโมง) ทางเลืือก
อื่่�นๆ นอกเหนืือจากการวางหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ไว้้ในอุุณหภููมิห้ิ อ้ งได้้แก่่ การวางไว้้บนโต๊๊ะของห้้องปฏิิบัติั กิ ารอย่่างน้้อย 2ชั่่�วโมง การนำำ�หลอดสารละลายไลซีีส Neogen ไปบ่่มในที่่ตู้้�บ่� ม่ เชื้้อ� ที่่อุ� ณุ หภููมิิ 37 ± 1°C เป็็นเวลา 1 ชั่่�วโมง หรืือวางหลอดสารละลายไล
ซีีสบนเครื่่�องทำำ�ความร้้อนแบบแห้้งเป็็นเวลา 30 วิินาทีีที่่อุ� ณุ หภููมิิ 100 ± 1°C
2. พลิิกหลอดสารละลายไลซีีสที่่ปิ� ดิ ฝาอยู่่� เพื่่�อผสมให้้เข้้ากััน ดำำ�เนิินการต่่อในขั้้�นถััดไปไปภายใน 4 ชั่่�วโมง
3.	นำำ�อาหารเหลวเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ออกจากตู้้�บ่่มเชื้้อ
�
4. ใช้้หลอดสารละลายไลซีีส Neogen หนึ่่ง� หลอดต่่อตััวอย่่างและต่่อ NC (อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ที่่ป� ลอดเชื้้อ� )4.1 แถวของหลอดสารละลายไลซีีส Neogen สามารถตััดออกเพื่่�อให้้มีีจำ�ำ นวนหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ตามที่่ต้� อ้ งการได้้ เลืือก
จำำ�นวนหลอดสารละลายไลซีีส Neogen แต่่ละหลอดหรืือแถวที่่มีี
� 8 หลอด ตามความจำำ�เป็็น วางหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ลงในที่่ว� างที่่ว่� า่ งอยู่่�
4.2 เพื่่�อหลีีกเลี่่ย� งการปนเปื้้อ� นข้้าม ให้้เปิิดฝาของหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ทั้้�งแถวในครั้้�งเดีียว และใช้้ปิเิ ปตทิิปอัันใหม่่สำ�ำ หรัับ
ถ่่ายตััวอย่่างในแต่่ละขั้้�นตอน
4.3	ถ่่ายตััวอย่่างที่่เ� พิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� แล้้วไปยัังหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ตามคำำ�อธิิบายด้้านล่่างนี้้�:ถ่ายตัวอย่างที่เพิม่ จำ�นวนเชื้อแต่ละตัวอย่างลงไปในหลอดสารละลายไลซส
ี Neogen แตล่ ะหลอด เป็นอันดับแรก ถ่าย NC เป็นอันดับสุดท้าย
4.4 ใช้้อุปุ กรณ์์เปิิด/ปิิดฝาหลอดสารละลายไลซีีสโดยวิิธีี Neogen® ในการเปิิดฝาหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ทีีละแถว
4.5	ทิ้้�งฝาหลอดสารละลายไลซีีส Neogen – หากจะเก็็บไลเซตเอาไว้้เพื่่�อทดสอบซ้ำำ�� ให้้วางฝาในภาชนะที่่ส� ะอาดเพื่่�อนำำ�กลัับมาใช้้ซ้ำ��ำ
4.5.1 หากต้้องการดููข้อ้ มููลเกี่่ย� วกัับการดำำ�เนิินการเก็็บไลเซต โปรดดููภาคผนวก A
4.6 กรณีีทำำ�การเก็็บตััวอย่่างที่่มีีลั� กั ษณะเหนีียวหนืืด ให้้เขย่่าถุุงอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ก่่อนเก็็บตััวอย่่างจากส่่วนด้้านข้้างที่่ผ่� า่ นการกรอง
4.7	ถ่่ายโอนตััวอย่่างในปริิมาณ 20 µL ไปยัังหลอดสารละลายไลซิิส Neogen เว้้นแต่่ระบุุไว้้เป็็นอย่่างอื่่�นในตารางแสดงระเบีียบการ
(ระเบีียบการตััวอย่่างที่่� 5 และอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ทุุติยิ ภููมิใิ น RVS หรืือ กรณีีการใช้้ตัวั อย่่างจากสิ่่�งแวดล้้อมที่่มีีบั� ฟั เฟอร์์ที่เ�่ ป็็นกลาง)20 µl

5.	ทำำ�ซ้ำ�ขั้้�ำ น� ตอน 4.4 ถึึง 4.7 จนกระทั่่�งเติิมตััวอย่่างแต่่ละตััวอย่่างลงในหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ในแถวดัังกล่่าวเสร็็จสิ้้�น
6. เมื่่�อถ่่ายตััวอย่่างทั้้�งหมดเสร็็จแล้้ว ให้้ถ่า่ ย NC (อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ที่่ป� ลอดเชื้้อ� เช่่น BPW) ปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร ลงในหลอดสารละ
ลายไลซีีส Neogen ห้้ามใช้้น้ำ��ำ เป็็น NC
7. ตรวจสอบว่่าอุุณหภููมิขิ องฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen อยู่่�ที่่� 100 ± 1°C
8.	วางถาดใส่่หลอดสารละลายไลซีีส Neogen ที่่ไ� ม่่มีีฝาปิิด ลงในฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen และทำำ�ความร้้อนเป็็นเวลา 15 ± 1 นาทีี ระหว่่างการทำำ�ให้้ร้อ้ น สารละลายในหลอดทดสอบไลซีีส Neogen จะเปลี่่ย� นจากสีีชมพูู (เย็็น) เป็็น
เหลืือง (ร้้อน)8.1.	ตััวอย่่างซึ่่ง� ไม่่ได้้รับั ความร้้อนอย่่างเหมาะสมในระหว่่างขั้้�นตอนการไลซีีสของชุุดทดสอบอาจถืือว่่าเป็็นสารที่่อ� าจมีีอัันตรายทาง
ชีีวภาพ และไม่่ควรใส่่เข้้าไปในเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen
9.	นำำ�ที่่ว� างหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ที่่ไ� ม่่ได้้ปิดิ ฝาออกจากฮีีทบล็็อคและปล่่อยให้้เย็็นลงในชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับ
โมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen อย่่างน้้อย 5 นาทีีแต่่ไม่่เกิิน 10 นาทีี การใช้้งานชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี
Neogen ให้้วางไว้้ที่อุ�่ ณุ หภููมิห้ิ อ้ ง โดยควรวางลงบนโต๊๊ะปฏิิบัติั งิ านของห้้องปฏิิบัติั กิ ารโดยตรง เมื่่�อเย็็นลงแล้้ว สารละลายไลซีีสก็็จะ
เปลี่่ย� นกลัับเป็็นสีีชมพูู

9

TH （ภาษาไทย）10.	นำำ�ที่่ว� างหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ออกจากชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen
00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

การเพิ่่�มขยาย
1. หลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen หนึ่่ง� หลอดสำำ�หรัับตััวอย่่างแต่่ละชนิิดและ NC
1.1 สามารถตััดแถวของหลอดออก เพื่่�อให้้มีีจำ�ำ นวนหลอดตามที่่ต้� อ้ งการได้้ เลืือกจำำ�นวนหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนล
ล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen แต่่ละหลอด หรืือแถวที่่มีี
� 8 หลอด ตามต้้องการ
1.2	วางหลอดในที่่ว� างที่่ว่� า่ งอยู่่�
1.3 หลีีกเลี่่ย� งการรบกวนเม็็ดรีีเอเจนต์์ที่ก้�่ น้ หลอด
2. เลืือกหลอดรีีเอเจนต์์คอนโทรลหนึ่่ง� หลอดแล้้ววางลงในที่่ว� าง
3. เพื่่�อหลีีกเลี่่ย� งการปนเปื้้อ� นข้้าม ให้้เปิิดฝาของหลอดรีีเอเจนท์์หนึ่่ง� แถวในแต่่ละครั้้�งและใช้้ปิเิ ปตทิิปอัันใหม่่สำ�ำ หรัับถ่่ายตััวอย่่างในแต่่ละ
ขั้้�นตอน� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2
4.	ถ่่ายไลเซตแต่่ละตััวอย่่างไปยัังหลอดรีีเอเจนต์์และหลอด Neogen รีีเอเจ้้นท์์คอนโทรลของชุุดทดสอบ เชื้้อ
โดยวิิธีี Neogen ตามคำำ�อธิิบายด้้านล่่าง:ถ่ายโอนไลเซตแต่ละตัวอย่างไปไว้ในหลอดรีเอเจนท์แตล่ ะหลอดกอ่ นเป็น อันดับแรก ตามด้วยชุดควบคุม (NC) เติมสารละลายลงใน
หลอด Neogen รีเอเจ้นท์คอนโทรลเป็น ลำ�ดับสุดทา
้ ย
5. ใช้้เครื่่�องมืือเปิิด/ปิิดฝารีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen® ในการเปิิดหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ เชื้้อ
�ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ทีีละแถว ทิ้้�งฝาปิิด
5.1 ถ่่ายไลเซตของตััวอย่่างปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร จากด้้านบน 1/2 ของของเหลว (หลีีกเลี่่�ยงตะกอน) ในหลอดสารละลาย
ไลซีีส Neogen เข้้าไปในหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ปล่่อย
สารละลายด้้านข้้างหลอด เพื่่�อหลีีกเลี่่�ยงการรบกวนเม็็ดรีีเอเจนต์์ที่่ก้� น้ หลอด ผสมโดยใช้้ปิเิ ปต ดููดขึ้้�นและลงเบา ๆ 5 ครั้้�ง
5.2	ทำำ�ซ้ำ�ขั้้�ำ น� ตอนที่่� 5.1 จนกว่่าจะเติิมแต่่ละไลเซตตััวอย่่างลงไปในหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับ
โมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ในแถวนั้้�น

5.3	ปิิดหลอดรีีเอเจนต์์ของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ด้้วยฝาอีีกอัันที่่ใ� ห้้มา และใช้้ด้า้ นมนของ
เครื่่�องมืือเปิิด/ปิิดฝาหลอดทดสอบ โดยวิิธีี Neogen กดซ้ำำ�� ไปซ้ำำ�� มาเพื่่�อให้้แน่่ใจว่่าฝาปิิดสนิิท
5.4	ทำำ�ซ้ำ�ขั้้�ำ น� ตอน 5.1 ถึึง 5.3 ตามความจำำ�เป็็นสำำ�หรัับจำำ�นวนตััวอย่่างที่่จ� ะทดสอบ
5.5 เมื่่�อถ่่ายไลเซตตััวอย่่างทั้้�งหมดแล้้ว ให้้ทำ�ซ้ำำ �ขั้้�ำ น� ตอนที่่� 5.1 ถึึง 5.3 เพื่่�อถ่่ายไลเซต NC ปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร เข้้าไปในหลอดรีีเอ
เจนต์์ของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen
5.6	ถ่่ายไลเซต NC ปริิมาณ 20 ไมโครลิิตร เข้้าไปในหลอด Neogen รีีเอเจนท์์คอนโทรล ปล่่อยสารละลายด้้านข้้างหลอด เพื่่�อ
หลีีกเลี่่ย� งการรบกวนเม็็ดรีีเอเจนต์์ที่ก้�่ น้ หลอด ผสมโดยใช้้ปิเิ ปต ดููดขึ้้�นและลงเบา ๆ 5 ครั้้�ง
6. บรรจุุหลอดที่่ปิ� ดิ ฝาแล้้วลงในถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ที่่ส� ะอาดและขจััดการปนเปื้้อ� นแล้้ว ปิิดและล็็อคฝาถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen

20 µL

7.	พิิจารณาทบทวนและยืืนยัันการดำำ�เนิินการที่่กำ� �ำ หนดค่่าไว้้ในซอฟต์์แวร์์ทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen
8. คลิิกปุ่่�ม Start ในซอฟต์์แวร์์ แล้้วเลืือกเครื่่�องมืือที่่จ� ะใช้้ ฝาปิิดของอุุปกรณ์์ที่เ�่ ลืือกจะเปิิดโดยอััตโนมััติิ

10

TH （ภาษาไทย）9. ใส่่ถาดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ในเครื่่�องมืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดย
วิิธีี Neogen แล้้วปิดิ ฝาเพื่่�อเริ่่�มต้้นการทดสอบ ระบบจะให้้ผลการทดสอบภายในเวลา 60 นาทีี แม้้ว่า่ ผลที่่เ� ป็็นบวกอาจจะตรวจจัับได้้เร็็ว
กว่่านั้้�นก็็ตาม
10. หลัังจากการทดสอบเสร็็จสมบููรณ์์แล้้ว ให้้นำ�ถำ าดใส่่หลอดทดสอบสำำ�หรัับเข้้าเครื่่�องทดสอบระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen ออกจากเครื่่�อง
มืือสำำ�หรัับทดสอบเชื้้อ� ก่่อโรคระดัับโมเลกุุลโดยวิิธีี Neogen แล้้วกำ�จัำ ดั หลอดเหล่่านั้้�นทิ้้�งโดยแช่่ในน้ำำ�� ยาฟอกขาวที่่ใ� ช้้ในครััวเรืือนที่่มีี
�ความเข้้มข้้น 1-5% (ในน้ำำ�� ที่่มีี� ปริิมาตรเท่่ากััน) นาน 1 ชั่่�วโมง และปฏิิบัติั ใิ ห้้ห่า่ งจากพื้้น� ที่่จั� ดั เตรีียมชุุดทดสอบ
ขอ้ สังเกต: เพอื่ ลดความเสยี่ งในการได้ผลบวกปลอมอันเนอื่ งมาจากการปนเปอื้ นขา้ ม หา้ มเปิดหลอดรเี อเจนต์ซงึ่ บรรจุ DNA ที่เพิม่ ขยาย
แล้ว ซงึ่ รวมถึงหลอดรีเอเจนต์ของชุดทดสอบ เชื้อซาลโมเนลลา่ ระดับโมเลกุล 2 โดยวิธี Neogen, หลอด Neogen รเี อเจน้ ท์คอนโทรล และหลอดเมทริกซ์คอนโทรล Neogen กำ�จัดทิง้ หลอดรีเอเจนต์ที่ปิดฝาแล้วทุกครัง้ โดยลา้ งในสารซักฟอกในครัวเรอื นความเขม้ ขน
้ 1-5% (ตอ่ปริมาตรน้�ำ ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และห่างจากบริเวณเตรียมการทดสอบ
ผลการทดสอบและการแปลความหมาย
อััลกอริิธึึมจะแปลความหมายเส้้นโค้้งของแสงที่่ส่� ง่ ออกมาอัันเป็็นผลมาจากการตรวจพบการเพิ่่�มขยายของกรดนิิวคลีีอิิก ซอฟต์์แวร์์จะวิิเคราะห์์
ผลการทดสอบนี้้�โดยอััตโนมััติแิ ละจะมีีการเข้้ารหััสสีีตามผลที่่ไ� ด้้ดังั กล่่าว ผลการทดสอบที่่ใ� ห้้ค่า่ เป็็นบวกหรืือลบจะพิิจารณาตััดสิินโดยการ
วิิเคราะห์์พารามิิเตอร์์ของเส้้นโค้้งที่่มีีลั� กั ษณะเฉพาะตััวจำ�ำ นวนหนึ่่ง� ผลการทดสอบเบื้้อ� งต้้นที่่เ� ป็็นบวกจะได้้รับั การรายงานในทัันทีี ขณะที่่ผ� ลการทดสอบที่่เ� ป็็นลบและผลที่่น่� า่ สงสััยจะแสดงผลภายหลัังการทดสอบเสร็็จสมบููรณ์์แล้้ว
ตััวอย่่างที่่สั� นั นิิษฐานว่่าเป็็นบวกควรได้้รับั การยืืนยัันตามขั้้�นตอนการปฏิิบัติั กิ ารตามมาตรฐานทางห้้องปฏิิบัติั กิ าร หรืือโดยปฏิิบัติั ติ ามการ
ยืืนยัันวิิธีกี ารอ้้างอิิงที่่เ� หมาะสม(1,2,3) ที่่เ� ริ่่�มต้้นด้้วยการถ่่ายอาหารเลี้้�ยงเชื้้อ
� Neogen BPW ISO ปฐมภููมิไิ ปยัังอาหารเหลวทุุติยิ ภููมิติ ามด้้วยการ
เลี้้�ยงเชื้้อ� บนจานอาหารเลี้้�ยงเชื้้อ� และการยืืนยัันการแยกเชื้้อ� โดยใช้้วิธีิ กี ารทางชีีวเคมีีและและเซรุ่่�มวิิทยาที่่เ� หมาะสม
หมายเหตุ: ตัวอย่างที่ให้ผลเป็นลบค่าแสงที่อ่านได้กไ็ ม่ไดม้ คี า่ เป็นศูนย์ เนอื่ งจากระบบและรเี อเจนต์ในการเพิม่ ขยายสำ�หรับชุดทดสอบ
เชื้อซาลโมเนลล่าระดับโมเลกุล 2 โดยวิธี Neogen จะมี"คา่ พนื้ หลัง” ในหน่วยแสงสัมพัทธ์ (RLU)
ในบางครั้้�งอาจพบว่่าแสงที่่ไ� ด้้จากปฏิิกิริิ ยิ านั้้�นมีีลัักษณะผิิดปกติิ อััลกอริิธึึมดัังกล่่าวจะถููกตีีความออกมาว่่าเป็็น “ผลที่่น่� า่ สงสััย” บริิษัท
ั Neogenแนะนำำ�ให้้ผู้้�ใช้้ทำ�ำ การทดสอบนี้้�ซ้ำ�สำ�ำ �ำ หรัับตััวอย่่างที่่ใ� ห้้ผลที่่น่� า่ สงสััย หากผลการทดสอบยัังคงเป็็นที่่น่� า่ สงสััย ให้้ทำ�ำ การทดสอบเพื่่�อยืืนยััน โดยใช้้วิธีิ กี ารตามที่่ต้� อ้ งการหรืือตามที่่ร� ะบุุโดยหน่่วยงานกฎระเบีียบในประเทศ
ประเภท
ของหลุม
ทดสอบสัญลักษณ์ผลการตรวจที่
ได้จากหลุมทดสอบ

ผลการตรวจ

การแปลผลการตรวจวิเคราะห์

ตัวอย่าง

บวกตัวอย่างนี้ในเบื้องต้นให้ผลเป็นบวกสำ�หรับเชื้อก่อโรคเป้าหมาย

ตัวอย่าง

ลบตัวอย่างนี้ให้ผลเป็นลบสำ�หรับเชื้อก่อโรคเป้าหมาย

ตัวอย่าง

ตัวอย่าง

ถูกยับยั้ง

เมทริกซ์ตัวอย่างนี้มีลักษณะยับยั้งต่อการตรวจวิเคราะห์ อาจจำ�เป็นต้องทำ�การทดสอบซ้ำ� สำ�หรับข้อมูลเพิ่มเติม โปรดดูใน
ส่วนหัวข้อการแก้ไขปัญหาและคำ�แนะนำ�การใช้งานผลิตภัณฑ์
ของชุดทดสอบ

ตรวจสอบ

มีความคลุมเครือไม่แน่ชัดเกี่ยวกับการมีอยู่หรือไม่มีอยู่ของเชื้อ
ก่อโรคเป้าหมาย อาจจำ�เป็นต้องทำ�การทดสอบซ้ำ� สำ�หรับข้อมูล
เพิ่มเติม โปรดดูในส่วนหัวข้อการแก้ไขปัญหาและคำ�แนะนำ�การ
ใช้งานผลิตภัณฑ์ของชุดทดสอบ

ไม่ตรวจพบการเรืองแสงทางชีวภาพ อาจจำ�เป็นต้องทำ�การ
ทดสอบซ้ำ� สำ�หรับข้อมูลเพิ่มเติม โปรดดูในส่วนหัวข้อการแก้ไข
ปัญหาและคำ�แนะนำ�การใช้งานผลิตภัณฑ์ของชุดทดสอบ
การตรวจสอบยืืนยัันผลการทดสอบตามวิิธีที่่ี ไ� ด้้รับั การรัับรองของ NF VALIDATION
ในบริิบทของ NF VALIDATION ตััวอย่่างทั้้�งหมดที่่ร� ะบุุไว้้ว่า่ มีีผลเป็็นบวกในการทดสอบด้้วยชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับ
โมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen ต้้องได้้รับั การยืืนยัันจากหนึ่่ง� ในการทดสอบต่่อไปนี้้�:ตัวอย่าง

ข้อผิดพลาด

ตััวเลืือกที่่� 1: การใช้้มาตรฐาน ISO 6579(3) ที่่เ� ริ่่�มต้้นตั้้�งแต่่การใช้้อาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� บััฟเฟอร์์เปปโตนวอร์์เตอร์์(3)ตััวเลืือกที่่� 2: การใช้้วิธีิ กี ารยืืนยัันที่่ป� ระกอบด้้วยวิิธีกี ารต่่อไปนี้้�: ถ่่ายโอนปริิมาณ 0.1 mL ของอาหารเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ
� BPW ISO(3) หรืือ
อาหารเหลวเลี้้�ยงเชื้้อ
� Tetra Thionate (ตััวอย่่างการผลิิตขั้้�นปฐมภููมิ)ิ ไปไว้้ในอาหารเหลวเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� RVS ที่่มีี� ปริิมาณ 10 mL บ่่มเชื้้อ
�เป็็นระยะเวลา 24 ± 3 ชั่่�วโมงที่่อุ� ณุ หภููมิิ 41.5°C ขีีดเชื้้อ� ลงไปบนวุ้้�น Xylose Lysine Deoxycholate (XLD)(3) หรืือลงไปบนวุ้้�น
Chromogenic Agar ที่่ใ� ช้้จำ�ำ เพาะกัับ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่า ดำำ�เนิินการด้้วยเทคนิิค Latex Agglutination โดยใช้้ชุดุ ทดสอบ Oxoid Salmonella
LatexTest แบบโดยตรงบนโคโลนีีที่่แ� ยกเชื้้อ
�ตััวเลืือกที่่� 3: การใช้้โพรบวััดกรดนิิวคลีีอิิกดัังที่่อ� ธิิบายไว้้ในมาตรฐาน EN ISO 7218(5) ซึ่่ง� ดำำ�เนิินการบนโคโลนีีที่่ไ� ด้้แยกเชื้้อ� ที่่จ� ากวุ้้�น XLD หรืือวุ้้�น Chromogenic Agar (ดููตัวั เลืือกที่่� 1 หรืือ 2) ต้้องไม่่ทำ�ำ การทดสอบนี้้�ด้ว้ ยการใช้้ชุดุ ทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับ
โมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen11TH （ภาษาไทย）ตััวเลืือกที่่� 4: สำำ�หรัับการใช้้วิธีิ กี ารอื่่�นใดที่่ไ� ด้้รับั การรัับรองจาก NF VALIDATION หลัักการของวิิธีกี ารทดสอบจะต้้องแตกต่่างจากหลัักการ
ของชุุดทดสอบ เชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogen จะต้้องใช้้ระเบีียบการแบบครบถ้้วนสมบููรณ์์ที่อ�่ ธิิบายไว้้สำ�ำ หรัับวิิธีกี ารที่่�
สองที่่ผ่� า่ นการตรวจสอบความใช้้ได้้นี้้� ขั้้�นตอนทั้้�งหมดก่่อนการเริ่่�มต้้นการยืืนยัันจะต้้องเหมืือนกัันกัับทั้้�งสองวิิธีกี ารกรณีีผลการทดสอบไม่่สอดคล้้อง (ผลการทดสอบเบื้้อ� งต้้นที่่เ� ป็็นบวกด้้วยการใช้้ชุดุ ทดสอบเชื้้อ� ซาลโมเนลล่่าระดัับโมเลกุุล 2 โดยวิิธีี Neogenที่่ยั� งั ไม่่ได้้รับั การยืืนยัันจากหนึ่่ง� ในเครื่่�องมืือที่่อ� ธิิบายไว้้ข้า้ งต้้นและโดยเฉพาะอย่่างยิ่่�งสำำ�หรัับการทดสอบ Latex Agglutination) ห้้องปฏิิบัติั ิการจะต้้องปฏิิบัติั ติ ามขั้้�นตอนที่่จำ� �ำ เป็็นเพื่่�อตรวจสอบว่่าผลการทดสอบที่่ไ� ด้้รับั ถููกต้้อง
หากท่่านมีีข้้อสงสััยเกี่่ย� วกัับการใช้้งานหรืือกรรมวิิธีที่ี เ�่ ฉพาะเจาะจงใดๆ โปรดเยี่่ย� มชมเว็็บไซต์์ของเราที่่� www.neogen.com หรืือติิดต่่อ
ตััวแทนจำำ�หน่่ายหรืือผู้้�จััดจำำ�หน่่ายของบริิษัท
ั Neogen ในท้้องถิ่น�่ ของท่่าน

ภาคผนวก A การหยุุดการทดสอบชั่่�วคราว: การเก็็บรัักษาและการนำำ�ไลเซตมาทดสอบซ้ำำ��

1. หากต้้องการเก็็บไลเซตที่่ผ่� า่ นความร้้อนมาแล้้ว ให้้ปิดิ ฝาหลอดสารละลายไลซิิสด้้วยฝาที่่ส� ะอาด (โปรดดููไลซีีส ในข้้อ 4.5)
2. เก็็บไว้้ที่อุ�่ ณุ หภููมิิ 4 ถึึง 8°C ไม่่เกิิน 72 ชั่่�วโมง
3. เตรีียมตััวอย่่างที่่เ� ก็็บไว้้ โดยพลิิกหลอดสารละลายไลซิิสไปมา 2-3 ครั้้�งเพื่่�อผสมตััวอย่่างให้้เข้้ากััน
4. เปิิดฝาหลอด
5. ใส่่หลอดไลเซตที่่ผ� สมตััวอย่่างเข้้ากัันแล้้วลงในฮีีทบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี Neogen และให้้ความร้้อนที่่�
100 ± 1°C เป็็นเวลา 5 ± 1 นาทีี
6.	นำำ�ที่่ว� างหลอดสารละลายไลซีีส Neogen ออกจากฮีีทบล็็อคและปล่่อยให้้เย็็นในชิิลบล็็อคสำำ�หรัับใส่่หลอดทดสอบระดัับโมเลกุุล โดยวิิธีี
Neogen อย่่างน้้อย 5 นาทีีแต่่ไม่่เกิิน 10 นาทีี
7.	ดำำ�เนิินการทดสอบขั้้�นต่่อไปในส่่วน การเพิ่่�มจำำ�นวนเชื้้อ� ตามรายละเอีียดด้้านล่่าง

เอกสารอ้้างอิิง:1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identificationof Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Effective Date: 2 January 2019.
3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping ofSalmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218 Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance for microbiologicalexamination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen Molecular
Detection System. โปรดติิดต่่อตััวแทนของ Neogen Food Safety เพื่่�อรัับเอกสารนี้้�
7. ISO 18593 Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.
8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk (Reconstituted).
January 2011.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods
against a reference method.
10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions.
11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.
12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary
production stage.

คำำ�อธิิบายสััญลัักษณ์์

info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A

KO （한국어）발행일: 2024-01

Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라®

제품 설명서제품 설명 및 용도

Neogen® Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라는 Neogen® Molecular Detection System을 사용하여 증균된 식품 및 식품가공 환경 시료에서 살모넬라를 신속하고 명확하게 검출합니다.

Neogen® Molecular Detection Assay는 고리 매개 등온 증폭 방식으로 증폭 감지를 위한 생체발광이 결합되어, 높은 특이성과민감도를 갖고 핵산 염기 서열을 빠르게 증폭시킵니다. 추정 양성 결과는 실시간으로 보고되는 반면, 음성 결과는 시험이 완료된 후표시됩니다. 추정 양성 결과는 원하는 방법을 사용하거나 현지 규정에 지정된 대로 확정되어야 합니다(1, 2, 3).

Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라는 실험 기법에 대해 적절한 교육을 받은 전문가들이 실험실 환경에서 사용하도록
고안되었습니다. Neogen은 식품이나 음료가 아닌 다른 산업에서의 이 제품 사용을 문서화하지 않았습니다. 즉, Neogen은 약품,화장품, 임상 또는 수의학 시료 시험에 대해서는 이 제품을 문서화하지 않았습니다. Neogen Molecular Detection Assay 2 살모넬라는 가능한 모든 식품, 식품 가공, 시험 프로토콜 또는 가능한 모든 박테리아 종에 평가되지는 않았습니다.
모든 시험 방법처럼 증균 배지의 원료, 제조법 및 특성은 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. 시료 추출 방법, 시험 프로토콜, 시료 준비,조작 및 실험 기법 또한 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. Neogen은 충분한 수의 특정 식품과 미생물 유발 시험을 이용하여 사용자의환경에서 사용자의 기준을 충족하는지 확인하기 위해 증균 배지를 포함한 해당 방법의 평가를 권장합니다.
Neogen은 펩톤식염완충액(BPW) ISO로 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라를 평가했습니다.

Neogen® Molecular Detection 장비는 시료에 있는 유기체를 파괴하기 위한 Lysis 단계 중에 열처리를 거친 시료와 함께 사용하기위한 것입니다. Lysis 단계 동안 적절하게 열처리가 되지 않은 시료는 잠재적인 생물학적 위험으로 간주되므로 Neogen Molecular
Detection 장비에 절대로 삽입하지 마십시오.
Neogen Food Safety는 설계 및 제조에 관한 ISO(International Organization for Standardization) 9001 인증을 받았습니다.
Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 시험 키트에는 표 1에 설명된 바와 같이 96회 시험분이 포함되어 있습니다.

표 1. Neogen Molecular Detection Assay 키트 구성요소항목

Neogen® Lysis
Solution(LS)Neogen® Molecular
Detection Assay 2 - 살모넬라Reagent 튜브예비 캡

Neogen® Reagent 컨트롤(RC)ID

투명한 튜브의분홍색 용액녹색 튜브녹색 캡투명 플립톱 튜브

수량

96개
(8개들이
튜브 12개 스트립)

96개
(8개들이
튜브 12개 스트립)
96개
(8개들이
캡 12개 스트립)

16개
(8개들이
개별 튜브 2개 파우치)내용물

튜브당 580µL의 LS동결 건조된 특정 증폭 및검출 혼합물동결 건조된 컨트롤DNA, 증폭 및 검출혼합물설명랙에 꽂혀 있고 바로사용 가능함바로 사용 가능함바로 사용 가능함바로 사용 가능함키트에 제공되지 않은 음성 대조군(NC)은 멸균 증균 배지(예: BPW ISO)입니다. 물을 NC로 사용하지 마십시오.

안전사용자는 Neogen Molecular Detection System 및 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라와 관련된 지침의 안전 정보일체를 숙지하고 따라야 합니다. 나중에 참조할 수 있도록 안전 지침을 보관하십시오.
경고: 피하지 못할 경우 사망이나 심각한 부상 및/또는 재산상의 손해를 초래할 수 있는 위험 상황을 의미합니다.

주의: 피하지 못할 경우 재산상의 피해를 초래할 수 있는 잠재적으로 위험한 상황을 의미합니다.

1경고

KO （한국어）인간 또는 동물의 상태를 진단하는 데 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라를 사용해서는 안 됩니다.

사용자는 반드시 적절한 최신 시험 기법의 적용에 있어 담당 직원의 교육을 실시해야 합니다. 예: 우수 실험실 기준, ISO/IEC 17025(4)또는 ISO 7218(5).
오염된 제품의 출고를 초래하는 위음성 결과와 관련된 위험을 줄이려면:• 프로토콜을 준수하고 제품 설명서에 명시된 대로 정확하게 시험을 수행하십시오.
• Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라를 보관할 때는 포장 및 제품 설명서에 명시된 바를 따릅니다.
• Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라는 유효 기간까지만 사용해야 합니다.
• Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라는 내부적으로 또는 제3자가 검증한 식품, 사료 및 식품 공정 환경 시료와 함께사용합니다.
• Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라에는 내부적으로 또는 제3자가 검증한 표면, 살균제, 프로토콜 및 박테리아종만 사용하십시오.
• 아릴설포네이트 화합물이 포함된 Neutralizing Buffer를 함유하는 환경 시료의 경우 시험하기 전에 1:2로 희석하십시오(시료 1을
동량의 멸균 증균 배양액 1에 넣음). Neutralizing Buffer 증균액 10µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮기는 방법도 있습니다.
아릴설포네이트 화합물과 함께 Neutralizing Buffer를 함유하는 Neogen® 시료 채취 제품: RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB,
SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G 및 HS2410NB2G.
화학물질 및 생물학적 유해 물질 노출 관련 위험을 줄이려면:• 교육을 받은 사람의 통제하에 적절하게 준비된 실험실에서 식중독균 시험을 수행하십시오. 배양된 증균 배지 및 장비 또는 배양된증균 배지에 접촉한 표면에는 인체 건강에 위험을 초래할 수 있을 정도의 식중독균이 들어 있을 수 있습니다.
• 시약 및 오염된 시료를 다룰 때는 적절한 보호복과 보안경 착용을 비롯하여 항상 표준 실험실 안전 방침을 준수하십시오.
• 증폭 후 증균 배지 및 Reagent 튜브의 내용물과 접촉하지 않도록 하십시오.
• 증균 시료는 현행 업계 표준에 따라 폐기하십시오.
• Lysis 단계 동안 적절하게 열처리가 되지 않은 시료는 잠재적인 생물학적 위험으로 간주되므로 Neogen Molecular Detection장비에 절대로 삽입하지 마십시오.

시험을 준비하는 동안 교차 오염과 관련된 위험을 줄이려면:• (사용자를 보호하고 뉴클레아제의 침투를 막기 위해) 항상 장갑을 착용해야 합니다.
환경 오염과 관련된 위험을 줄이려면:• 현행 산업 표준에 따라 오염 폐기물을 폐기하십시오.

뜨거운 액체에 노출된 경우 가능한 위험을 줄이려면:• 권장 가열 온도를 초과하지 마십시오.
• 권장 가열 시간을 초과하지 마십시오.
• 적절하게 교정된 온도계를 사용하여 Neogen® Molecular Detection 히팅 블록 인서트 온도를 확인하십시오(예: 부분 침지 온도계또는 디지털 열전대 온도계. 전체 침지 온도계는 안됨). 온도계는 반드시 Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트의지정된 장소에 놓아야 합니다.

주의시험을 준비하는 동안 교차 오염과 관련된 위험을 줄이려면:• Reagent 펠릿 수화 전에 장갑을 교체하십시오.
• 미세입자를 차단하는 (필터 사용) 멸균된 분자 생물학 등급의 피펫 팁을 이용하는 것이 좋습니다.
• 각 시료 이동 시 새 피펫 팁을 사용하십시오.
• 우수 실험실 관리기준을 적용하여 증균된 시료를 Lysis 튜브로 옮기십시오. 피펫 오염을 방지하려면 중간 분주 단계를 추가해야 할수도 있습니다. 예를 들어 사용자는 증균된 각 시료를 멸균 튜브로 옮길 수 있습니다.
• 해당되는 경우 살균 램프가 있는 분자생물학 워크스테이션을 사용하십시오. 주기적으로 1~5%(v:v 물)의 가정용 표백제 또는 DNA
제거 용액으로 실험실 벤치와 장비(피펫, 캡/디캡 도구 등)의 오염을 제거하십시오.

위양성 결과가 발생할 위험을 줄이려면:• 증폭 후에는 절대 튜브를 열지 마십시오.
• 오염된 튜브는 항상 1~5%(v:v 물)의 가정용 표백제에 1시간 동안 담가 두었다가 키트 준비 구역과 멀리 떨어진 위치에 폐기합니다.
• 증폭 후 Reagent 튜브는 절대 오토클레이브하지 마십시오.
폐기에 대한 추가 정보 및 현지 규정은 안전보건자료(SDS)를 참조하십시오.

구체적인 용도나 절차에 대하여 궁금한 점이 있으면 당사 웹사이트(www.neogen.com)를 방문하거나 현지 Neogen 또는 판매업체로
문의하십시오.

2

KO （한국어）사용자의 책임

사용자는 제품 설명서와 정보를 숙지할 책임이 있습니다. 보다 자세한 정보는 당사의 웹사이트 www.neogen.com를 참고하거나
현지 Neogen이나 영업 대리점으로 문의하십시오.
시험 방법을 선택할 때, 시료 추출 방법, 시험 프로토콜, 시료 준비, 취급, 실험 기법, 시료 자체와 같은 외적 요인들이 결과에 영향을미칠 수 있음을 인식하는 것이 중요합니다.
시험 방법이나 제품을 선택할 때 선택된 시험 방법이 사용자의 기준을 충족할 수 있도록 적합한 매트릭스와 미생물 유발 시험을사용하여 충분한 수의 시료를 평가하는 것은 사용자의 책임입니다.
또한 사용자는 모든 시험 방법 및 결과가 고객 및 공급자의 요구사항을 충족하는지 판단할 책임이 있습니다.

다른 시험 방법과 마찬가지로 Neogen Food Safety 제품을 사용하여 얻은 결과가 시험된 매트릭스나 프로세스의 품질을 보장하는것은 아닙니다.

Neogen에서는 다양한 식품 매트릭스 방법 평가에 도움을 드리기 위해 Neogen® Molecular Detection Matrix Control 키트를개발했습니다. 필요한 경우 매트릭스 컨트롤(MC)을 이용하여 매트릭스가 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라의결과에 영향을 미칠 수 있는지 확인할 수 있습니다. 매트릭스를 대표하는 여러 시료를 시험하십시오(예: Neogen 방법을 적용하거나원료 또는 프로세스에 변화가 있었던 신규/미지의 매트릭스를 시험하는 유효성 검증의 기간 동안, 다양한 원천에서 얻은 시료).
매트릭스는 조성과 가공과 같은 내재적 특징을 포함한 제품의 종류로 정의할 수 있습니다. 매트릭스 간의 차이점은 매트릭스의 처리방법 또는 모양(예: 비살균 vs. 저온 살균, 생제품 vs. 건조제품 등)이 미치는 영향처럼 간단합니다.

보증의 한계/제한적 구제개별 제품 포장의 제한적 보증 부분에 명시된 경우를 제외하고, NEOGEN은 상품성 또는 특정 용도 적합성에 대한 보증을 포함한 어떤명시적이거나 암묵적인 보증도 거부합니다. Neogen Food Safety 제품에 결함이 있을 경우, Neogen이나 그의 공식 판매업체는 자체판단에 따라 제품을 교체하거나 구매 금액을 환불해 드립니다. 다음은 귀하의 유일한 구제 방법입니다. 제품에서 의심되는 결함이발견되면 발견일로부터 60일 이내에 Neogen으로 즉시 통지하고, 제품을 Neogen으로 반품해야 합니다. 추가 질문이 있으시면Neogen 담당자 또는Neogen 공인 대리점에 문의하시기 바랍니다.

Neogen 책임의 제한

NEOGEN은 수익의 상실을 포함하여 어떤 직접적인, 간접적인, 특별한, 부수적인, 결과적인 손해나 손실에 대해서도 책임지지않습니다. 법 이론에 따른 Neogen의 책임은 어떤 경우에도 결함이 있다고 주장된 제품의 구매 대금을 초과하지 않습니다.

보관 및 폐기

Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라를 2~8°C에서 보관하십시오. 냉동하지 마십시오. 보관 중 키트가 빛을 받지않도록 하십시오. 키트를 열어 보고 호일 파우치가 손상되지 않았는지 확인합니다. 파우치가 손상된 경우 사용하지 마십시오. 개봉 후,사용하지 않은 Reagent 튜브는 항상 다시 밀봉 가능한 파우치에 건조제와 함께 넣어 보관하여 건조 동결된 시약의 안정성을 유지해야합니다. 다시 밀봉한 제품은 최대 60일 동안 2~8°C에서 보관하십시오.

유효 기간이 지난 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라는 사용하지 마십시오. 유효기한과 품목 번호는 상자의 외부라벨에 기입되어 있습니다. 사용하고 난 증균 배지와 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 튜브에는 잠재적으로 병원성물질이 들어 있을 수 있습니다. 시험이 완료되면 현재 업계 표준에 따라 오염 폐기물을 폐기하십시오. 폐기에 대한 추가 정보 및 현지규정은 안전보건자료(SDS)를 참조하십시오.

사용 지침모든 지침을 주의 깊게 준수하십시오. 그렇지 않으면 부정확한 결과가 나올 수 있습니다.

주기적으로 1~5%(v:v 물)의 가정용 표백제 또는 DNA 제거 용액으로 실험실 벤치와 장비(피펫, 캡/디캡 도구 등)의 오염을제거하십시오.

사용자는 "설치 적격성 평가(IQ)/작동 적격성 평가(OQ) 프로토콜 및 Neogen Molecular Detection System 지침" 문서(6)에 명시된대로 Neogen Molecular Detection System 작업자 적격성 평가(OQ) 교육을 완료해야 합니다.
특정 요건에 관해서는 "유효성 검증 방법 관련 상세 설명" 섹션을 참조하십시오:표 3. AOAC® Official Method of AnalysisSM 2016.01 및 AOAC® Performance TestedSM 인증서 #091501에 따른 증균 프로트콜.

표 4. NF VALIDATION 인증서 3M 01/16-11/16에 따른 증균 프로토콜.

3시료 증균
표 2, 3 또는 4는 식품, 사료 및 환경 시료용 일반 증균 프로토콜에 대한 안내입니다.

KO （한국어）다른 시료 추출 프로토콜 또는 희석 비율을 검증하여 이 시험 방법이 사용자의 기준을 충족하도록 하는 것은 사용자의 책임입니다.

식품
1. BPW ISO 증균 배지를 시험할 매트릭스에 따라 주변 실험실 온도 또는 41.5±1°C로 온도 평형을 맞춥니다. 표 2, 3 또는 4 참조.

2. 증균 배지와 시료를 무균 방식으로 혼합합니다.

3. 2±0.2분간 혼합, 스토마킹 또는 손으로 충분히 혼합하거나 모든 덩어리가 완전히 녹아 증균 현탁액이 균질하게 될 때까지균질화합니다(10-15).
a.

모든 육류 및 입자가 매우 미세한 시료에 대해서는 필터 백을 사용하는 것이 좋습니다.

b.	물에서 부풀고 점성이 진한 매트릭스(예: 시리얼, 전분)의 경우 점도가 적당하게 줄어들 때까지 추가로 희석하거나(> 1:10)
멸균 1%(w/v) 알파-아밀라아제를 BPW (ISO)에 넣어줄 것을 권합니다(10-13).

c. 시료량이 많은 분유와 시리얼의 경우 뭉치지 않도록 자주 섞으면서 시료를 천천히 용액에 넣어줍니다.

4. 적절한 프로토콜 표(표 2, 3 또는 4 참조)의 설명에 따라 배양합니다.

환경 시료시료 수집 장치는 살균제 효과를 비활성화하는 중화 용액으로 수화한 스폰지일 수 있습니다. Neogen은 살균제가 없는 셀룰로오스
스폰지의 사용을 권장합니다. 중화 용액은 Dey-Engley(D/E) Neutralizing Broth 또는 Letheen Broth일 수 있습니다. 시료 추출 후 그구역을 살균하는 것이 좋습니다.
경고: 스폰지용 수화 용액으로 아릴설포네이트 화합물을 함유하는 Neutralizing Buffer를 사용하기로 선택하는 경우, 오염된 제품출고를 초래하는 위음성 결과와 관련된 위험을 줄이려면 시험 전에 증균된 환경 시료를 1: 2로 희석해야 합니다(시료 1을 동량의멸균 증균 배양액 1에 넣음). Neutralizing Buffer 증균액 10µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮기는 방법도 있습니다.

표면의 식중독균 유무를 확인하기 위한 시료 추출 영역의 권장 크기는 적어도 100cm2(10cm x 10cm 또는 4” x 4”)입니다. 스폰지로시료를 추출하는 경우, 두 방향(왼쪽에서 오른쪽, 이어서 위쪽에서 아래쪽)으로 전체 영역을 덮거나, 현재의 시료 추출 프로토콜 혹은
FDA BAM(1), USDA FSIS MLG(2) 또는 ISO 18593:2018(7) 가이드라인에 따라 환경 시료를 채취합니다.
다른 시료 추출 프로토콜 또는 희석 비율을 검증하여 이 시험 방법이 사용자의 기준을 충족하도록 하는 것은 사용자의 책임입니다.
1. 시험할 매트릭스에 따라 BPW ISO 증균 배지를 41.5±1°C로 미리 가열합니다. 표 2, 3 또는 4 참조.

2. 증균 배지와 시료를 무균 방식으로 혼합합니다. 2±0.2분간 혼합, 스토마킹 또는 손으로 혼합하여 완전히 균질화합니다. 적절한프로토콜 표의 설명에 따라 배양합니다. 표 2, 3 또는 4 참조.

4표 2. 일반 증균 프로토콜.

시료 매트릭스

프로토콜 1가공 식품(알가루 및 다른 프로토콜에명시된 제품 제외)(b)프로토콜 2날것 및 비가공 식품, 알가루, 동물 사료및 환경 시료(c)프로토콜 3분말 유제품(유아용 분유 및 유아용콩분유)프로토콜 4코코아계 제품(분말, 초콜릿, 과자 등)프로토콜 5
기타: 향신료, 방향성 허브, 농축물,인스턴트 차 및 커피, 부용 큐브프로토콜 6
호두 및 호두를 포함한 견과류 믹스(이 프로토콜은 피칸, 아몬드, 피스타치오,캐슈넛, 밤, 마카다미아, 브라질너트, 콩견과류 및 땅콩을 비롯한 기타 견과류에도
적합합니다)KO （한국어）시료량증균 배양액량

증균 온도(±1°C)

증균 시간(hr)시료 분석량
(µL)(a)25g

225mL BPW ISO

37

18~26

20

25g

225mL BPW ISO(미리 가열)

41.5

18~26

20

25g

225mL BPW ISO

37

20~26

20

25g

225mL의 멸균
100g/L 무지방 건조
우유와 0.002%
브릴리언트그린 염료(d,e,f)

37

24~30

20

25g

235mL의 2X
BPW ISO와 0.5%
K2SO3 + 240mL의멸균 100g/L 무지방건조 우유(d,g,h)

37

24~30

10

25g

225mL의 멸균
100g/L 무지방 건조
우유(d)

37

18~24

20

(a) Lysis Solution 튜브로 옮긴 시료의 양. Lysis 섹션, 4.7단계 참조.

(b) 프로토콜 1를 이용해 시험할 제품의 예: 간편 조리 식사, 델리 샐러드, 커스터드.

(c) 프로토콜 2를 이용해 시험할 제품의 예: 날고기, 냉동 야채, 모든 치즈, 발효유, 생샐러드(상추, 바타비아 상추).
(d) 무지방 UHT 우유는 무지방 건조 우유로 대체할 수 있습니다.

(e) 무지방 우유 225mL당 1% 수성 브릴리언트 그린 염료 0.45mL를 첨가하여, 최종 농도 0.002%(0.02g/L) 브릴리언트 그린 염료가되게 합니다.

(f) 멸균 무지방 건조 우유를 준비하기 위해 탈수 무지방 건조 우유 100g을 증류수 또는 정제수 1L에서 부유시킵니다. 녹을 때까지휘저어 줍니다. 121°C에서 15분간 오토클레이브합니다. 2~30°C에서 보관합니다(8).

(g) BPW ISO 1000mL당 K2SO3 5g을 첨가하여, 최종 농도 0.5% K2SO3가 되게 합니다.

(h) 100g/L 멸균 무지방 건조 우유 240mL는 0.5% K2SO3가 첨가된 235mL 2X BPW ISO에 넣어야 합니다.

선택적 2차 증균 단계(예: Rappaport Vassiliadis 배지)를 이용할 경우 1:2 희석(시료 증균액 1을 멸균 증균 배양액 1에 넣음)을 하거나
간단히 2차 증균액 10µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다. Tetrathionate(TT) Broth를 사용하는 경우 2차 증균액 20µL
를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮기고 침전물이 옮겨지지 않도록 TT 증균액을 vortex하거나 증균 튜브 바닥에서 피펫팅하지
마십시오.

5

KO （한국어）검증 방법 관련 상세 설명

AOAC® Official Methods of AnalysisSM 2016.01
AOAC® Performance TestedSM 인증서 #091501

AOAC Research Institute OMASM 및 PTMSM 프로그램에서, Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라는 살모넬라 검출에효과적인 방법이라는 점이 밝혀졌습니다. 이 연구에서 실험된 매트릭스는 표 3에 나와 있습니다.
표 3. AOAC OMASM 2016.01 및 AOAC PTMSM 인증서 #091501에 따른 증균 프로토콜. Neogen Lysis Solution 튜브로 옮긴시료량은 20µL입니다.
시료 매트릭스

생소고기 분쇄육증균 배양액량

25g

225mL BPW ISO(미리 가열)975mL BPW ISO(미리 가열)325g

225mL BPW ISO(미리 가열)25g생닭고기 분쇄육

975mL BPW ISO(미리 가열)325g

조리된 빵가루 입힌 닭고기닭고기 지육 스폰지인스턴트 무지방 건조 우유

10~24

41.5

14~24

37

18~24

37

18~24

1,500mL BPW ISO

25g

225mL BPW ISO

37

18~24

30mL

30mL BPW ISO(미리 가열)

41.5

18~24

41.5

18~24

25g

50mL BPW ISO(미리 가열)225mL BPW ISO

37

20~24

25g

225mL BPW ISO

37

24~28

100mL

900mL BPW ISO

37

18~24

375mL

3,375mL BPW ISO

37

18~24

25g

225mL BPW ISO

375g

3,375mL BPW ISO

37

18~24

10 g

90 BPW-ISO

41.5

28-32

스폰지 1개

225mL BPW ISO(미리 가열)

41.5

18~24

41.5

18~24

41.5

18~24

스폰지 1개크리미 땅콩 버터접착된 세라믹 타일

41.5

375g

사용된 발아식물 관개용수스테인리스 스틸10~24

225mL BPW ISO저온 살균 전란액포장된 콘크리트

41.5

25g

코코아 분말말린 대마초 꽃, 말린 대마 꽃(4)증균 시간(hr)2,925mL BPW ISO검은 후추, 생 통새우, 포장된생시금치, 저온 살균 처리된 미국산치즈닭고기 지육 세척증균 온도(±1°C)

325g

개 건조 식품

환경

시료량

면봉 1개

스폰지 1개시료 매트릭스

시료량증균 배양액량

생새우(머리
포함)증균 온도(±1°C)

25g

225mL BPW
ISO

37

10mL BPW ISO(미리 가열)50mL BPW ISO(미리 가열)증균 시간(hr)18~24(a) 증균 시료 10µL를 Lysis Solution 튜브로 옮깁니다. Lysis 섹션, 4.7단계 참조.

62차 증균 배지(mL)
R-V R10:0.1mL를
10mL로(a)2차 증균 온도(±1°C)

2차 증균 시간
(hr)

41.5

4~24

KO （한국어）AFNOR Certification에 의한 NF VALIDATION

3M 01/16 -11/16
ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS
http://nf-validation.afnor.org/en유효 기간과 관련한 상세 정보는 상기에 명시한 웹 사이트에 있는 NF Validation 인증서를 참고하십시오.
ISO 6579(3) 대비 ISO 16140-2(7)에 준한 NF VALIDATION 인증 방법.

검증의 범위: 광범위한 식품에 대한 유효성 검증 분석 수행을 통해 모든 인간의 식료품, 생산 환경 시료(일차 생산 시료 포함), 애완동물사료 및 동물 사료.
시료 준비: 시료는 EN ISO 6579(3) 및 EN ISO 6887(10-15)에 따라 준비해야 합니다.
소프트웨어 버전: 인증서 참고.

표 4. NF VALIDATION 인증 방법 3M 01/16 -11/16 따른 증균 프로토콜.
프로토콜프로토콜 1:• 광범위한 가공 식품(알가루, 가공과일 및 야채, 다른 프로토콜에명시된 제품 제외)• 모든 생선 및 생해산물• 애완동물 사료 및 동물 사료• 일차 생산(분변이 아닌)프로토콜 2:• 광범위한 날것 및 비가공 식품(날생선 및 생해산물, 다른프로토콜에 명시된 제품 제외)• 알가루• 모든 과일 및 야채
• 식품 생산 환경 시료프로토콜 3:• 분말 유제품

프로토콜 4:• 20% 이상 코코아를 함유한 코코아계제품프로토콜 5:• 향신료, 방향성 허브, 농축물, 차,커피, 요리 준비물프로토콜 6:• 날고기프로토콜 7:• 일차 생산(분변)

시료량

증균
배양액량

증균 온도
(+1°C)

증균 시간(hr)시료 분석량
(µL)(a)25g

225mL BPW ISO

37

18~26

20

25g 또는
225mL 미리 가열된
와이프 1개
BPW ISO또는 면봉 1개

41.5

18~26

20

25g

225mL BPW ISO

37

20~26

20

25g

225mL 무지방UHT 우유
+ 0.002%브릴리언트 그린

37

24~30

20

37

24~30

10

41.5

10~24

20

37

22~24

20

25g

235mL 2 x BPW
ISO +K2SO3 0.5% +240mL 무지방UHT 우유

25g

225mL 미리 가열된
BPW ISO

부츠 양말
1켤레

100mL
Tetrathionate
Broth

25g

225mL
Tetrathionate
Broth

7

프로토콜 8:• 유아용 분유, 유아용 시리얼,프로바이오틱스를 함유하지 않은유제품 분말(b)프로토콜 9:• 유아용 분유, 유아용 시리얼,프로바이오틱스를 함유한 유제품
분말(b)KO （한국어）375g

3375mL미리 가열된
BPW ISO

37

20~26

20

375g

3375mL미리 가열된 BPW
ISO + 반코마이신
(10mg/L)

37

20~26

20

(a) Lysis Solution 튜브로 옮긴 시료의 양. Lysis 섹션, 4.7단계 참조.

(b) 시료량이 많은 분말과 시리얼의 경우 뭉치지 않도록 자주 섞으면서 시료를 천천히 용액에 넣어줍니다.
참고:• 25g을 초과하는 시료는 NF VALIDATION 연구에서 프로토콜 8과 9를 제외하고 시험되지 않았습니다.
• 단기 검출 프로토콜은 배양 조건에 민감합니다. 기술 사양에 명시된 온도 조건을 따라야 합니다. 사용자는 증균 배양액을 미리가열하여 배양 전 필요한 온도에 도달하는지 반드시 확인해야 합니다. 증균 배지 사전 가열 단계 마지막과 식품 시료의 배양 단계시작 사이의 지연 시간을 포함한 시료 준비 시간이 45분을 초과해서는 안 됩니다. 배양에는 환기 장치가 있는 배양기를 사용하는것이 권장됩니다.
• 시료를 Tetrathionate(TT) Broth 증균액에서 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮기는 경우 침전물이 옮겨지지 않도록 TT증균액을 vortex하거나 증균 튜브 바닥에서 피펫팅하지 마십시오. 침전물을 옮기는 경우 잘못된 결과가 나올 수 있습니다.
• 권장 프로토콜 중단 지점은 증균 후 또는 시료 Lysis 후입니다. 증균 배양액 또는 시료 lysate는 최대 72시간까지 2~8°C에서보관할 수 있습니다. 증균 배양액을 보관소에서 꺼낸 후 Lysis 섹션의 1단계부터 시험을 다시 시작하십시오. 시료 lysate를보관소에서 꺼낸 후 Lysis 섹션의 8단계부터 시험을 다시 시작하십시오.

Neogen® Molecular Detection 스피드 로더 트레이 준비
1. 1~5%(v:v 물) 가정용 표백 용액을 천 또는 1회용 타월에 적셔 Neogen® Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 닦습니다.
2. 물로 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 헹굽니다.

3. 1회용 타월을 사용하여 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 닦아서 말립니다.

4. 사용하기 전에 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이가 마른 상태인지 확인하십시오.

Neogen® Molecular Detection 냉각 블록 인서트 준비
Neogen® Molecular Detection 냉각 블록 인서트를 바로 실험실 벤치에 놓아야 합니다. 실험실 실온(20~25°C)에서 블록을사용합니다.

Neogen® Molecular Detection 히팅 블록 인서트 준비건조 이중 블록 히터 장치에 Neogen® Molecular Detection 히팅 블록 인서트를 놓습니다. 건조 블록 히터 장치를 켜고 Neogen
Molecular Detection 히팅 블록 인서트가 100±1°C를 유지할 수 있도록 합니다.

참고: 히터 장치에 따라, Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트가 온도에 도달하는 데 약 30분이 걸릴 수 있습니다.
적절한 교정된 온도계(예: 부분 침지 온도계 또는 디지털 열전대 온도계. 전체 침지 온도계는 아님)를 지정된 위치에 놓아 Neogen
Molecular Detection 히팅 블록 인서트의 온도가 100±1°C인지 확인합니다.

Neogen® Molecular Detection 장비 준비
1. Neogen® Molecular Detection 소프트웨어를 실행하고 로그인합니다. Neogen Food Safety 담당자에게 문의하여 이소프트웨어가 최신 버전인지 확인하십시오.
2. Neogen Molecular Detection 장비를 켭니다.

3. 각 시료에 대한 데이터를 포함하는 실행을 만들거나 편집합니다. 자세한 내용은 Neogen Molecular Detection System 사용설명서를 참조하십시오.
참고: 반응 튜브를 포함한 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 삽입하기 전에 Neogen Molecular Detection장비가 준비 상태에 도달해야 합니다. 이 가열 단계는 약 20분이 걸리며 완료되면 기기의 상태 표시줄에 주황색 등이 켜집니다.
기기가 실행할 준비가 되면 상태 표시줄이 녹색으로 바뀝니다.

Lysis
Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트에 부착하기 전에 스크루드라이버나 스패튤라로 Neogen Lysis Solution 랙의하단을 제거합니다.

8

KO （한국어）1. 랙을 실온(20~25°C)에서 하룻밤 동안(16~18시간) 두어 Neogen Lysis Solution 튜브를 예열합니다. Neogen Lysis Solution튜브를 실온으로 평형시키는 또 다른 방법은 최소 2시간 동안 실험실 벤치에 Neogen Lysis Solution 튜브를 두거나, 37±1°C배양기에 1시간 동안 Neogen Lysis Solution 튜브를 배양하거나 100±1°C의 건조한 이중 블록 히터에 30초간 두는 것입니다.
2. 캡을 씌운 튜브를 뒤집어 섞습니다. 4시간 이내에 다음 단계를 진행하십시오.
3. 배양기에서 증균 배양액을 꺼냅니다.

4. 각 시료와 NC 시료(멸균 증균 배지)에 Neogen Lysis Solution 튜브 1개가 필요합니다.

4.1 Neogen Lysis Solution 튜브 스트립을 원하는 Neogen Lysis Solution 튜브 수만큼 자를 수 있습니다. 필요한 개별 Neogen
Lysis Solution 튜브 또는 8개들이 튜브 스트립 수를 선택합니다. Neogen Lysis Solution 튜브를 빈 랙에 놓습니다.

4.2 교차 오염을 방지하기 위해 한 번에 한 줄씩 Neogen Lysis Solution 튜브 스트립의 캡을 벗기고 각 분주 단계에 새 피펫 팁을사용합니다.
4.3 아래 설명된 대로, 증균된 시료를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다.

각 증균된 시료를 개별 Neogen Lysis Solution 튜브로 먼저 옮깁니다. NC를 마지막으로 옮깁니다.

4.4 Neogen® Molecular Detection Lysis Cap/Decap Tool을 사용하여 한 번에 스트립 하나씩, Neogen Lysis Solution 튜브스트립 1개의 캡을 벗깁니다.

4.5 Neogen Lysis Solution 튜브 캡 폐기 – 재시험을 위해 lysate를 그대로 둘 경우 캡을 깨끗한 용기에 두어 용해 후 다시 사용할수 있도록 합니다.
4.5.1 보존된 Lysate 처리에 대해서는 부록 A를 참조하십시오.

4.6 점성이 있는 시료로 작업하는 경우 여과면에서 시료를 채취하기 전에 증균 백을 저어줍니다.

4.7 프로토콜 표에 별다른 표시가 없으면(예: 프르토콜 5 및 RVS에서 2차 증균 또는 Neutralizing Buffer와 함께 환경 시료를사용할 경우) 시료 20µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다.
20 µl

5. 각 시료가 스트립의 해당 Neogen Lysis Solution 튜브에 모두 추가될 때까지 4.4~4.7단계를 반복합니다.

6. 모든 시료를 옮겼을 때 NC(멸균 증균 배지, 예: BPW) 20µL를 Neogen Lysis Solution 튜브로 옮깁니다. 물을 NC로 사용하지마십시오.
7. Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트의 온도가 100±1°C인지 확인합니다.

8. 덮개를 씌우지 않은 Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트에 놓고 15±1분 동안가열합니다. 가열 중 Neogen Lysis Solution 용액은 분홍색(차가움)에서 노란색(뜨거움)으로 바뀝니다.
8.1. Lysis 단계 동안 적절하게 열처리가 되지 않은 시료는 잠재적인 생물학적 위험으로 간주되므로 Neogen Molecular
Detection 장비에 절대로 삽입하지 마십시오.

9. 덮개를 씌우지 않은 Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 히팅 블록에서 제거하고 Neogen Molecular Detection 냉각 블록인서트에 최소 5분, 최대 10분 냉각시킵니다. Neogen Molecular Detection 냉각 블록 인서트는 상온에서 바로 실험실 벤치에놓아야 합니다. 식으면 Lysis Solution이 분홍색으로 다시 바뀝니다.
10. Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 Neogen Molecular Detection 냉각 블록 인서트에서 제거합니다.

9

KO （한국어）00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

증폭
1. 각 시료와 NC를 위해 1개의 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 Reagent 튜브가 필요합니다.

1.1 튜브 스트립을 원하는 튜브 개수로 자를 수 있습니다. 개별 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 Reagent 튜브또는 필요한 8개들이 튜브 스트립 수를 선택합니다.
1.2 Reagent 튜브를 빈 랙에 놓습니다.

1.3 튜브 맨 아래 시약 알갱이를 휘젓지 마십시오.

2. 하나의 Reagent 컨트롤 튜브를 선택하고 랙에 놓습니다.

3. 교차 오염을 방지하기 위해 한 번에 하나씩 Reagent 튜브 스트립의 캡을 벗기고 각 분주 단계에 새 피펫 팁을 사용합니다.

4. 아래 설명된 대로 각 Lysate를 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 Reagent 튜브 및 Neogen Reagent 컨트롤튜브로 옮깁니다.

각 시료 Lysate를 개별 Reagent 튜브로 먼저 옮긴 뒤 NC를 옮깁십시오. 마지막에 Neogen Reagent 컨트롤 튜브를 수화합니다.

5. Neogen® Molecular Detection Reagent Cap/Decap Tool을 사용하여 한 번에 스트립 하나씩 Neogen Molecular Detection
Assay 2 - 살모넬라 Reagent 튜브의 캡을 벗깁니다. 캡을 버리십시오.

5.1 Neogen Lysis Solution 튜브에서 용액의 상부 ½에서 시료 Lysate 20µL를 침전되지 않도록 하여 해당 Neogen Molecular
Detection Assay 2 - 살모넬라 Reagent 튜브로 옮깁니다. 알갱이가 휘저어져 섞이지 않도록 기울여 붓습니다. 위아래로가볍게 5번을 피펫팅하여 섞습니다.

5.2 개별 시료 Lysate이 스트립의 해당 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 Reagent 튜브에 추가될 때까지 5.1
단계를 반복합니다.

5.3 제공된 여분의 마개로 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 Reagent 튜브를 덮고, Neogen Molecular
Detection Reagent Cap/Decap Tool의 둥근 면을 사용하여 앞뒤로 압력을 가하여 캡이 단단히 닫혀 있는지 확인하십시오.
5.4 시험할 시료 수에 대해, 필요한 만큼 5.1~5.3단계를 반복합니다.

5.5 모든 시료 Lysate를 옮긴 후 5.1~5.3단계를 반복하여 NC Lysate 20µL를 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라Reagent 튜브로 옮깁니다.

5.6 NC lysate 20µL를 Neogen Reagent 컨트롤 튜브로 옮깁니다. 알갱이가 휘저어져 섞이지 않도록 기울여 붓습니다.
위아래로 가볍게 5번을 피펫팅하여 섞습니다.

6. 캡이 씌워진 튜브를 깨끗하고 오염되지 않은 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이에 내려놓습니다. Neogen
Molecular Detection 스피드 로더 트레이 뚜껑을 닫고 걸쇠로 잠급니다.

20 µL

7. Neogen Molecular Detection 소프트웨어에서 구성된 실행을 검토하고 확인합니다.

8. 소프트웨어에서 시작 버튼을 클릭하고 사용할 기기를 선택합니다. 선택한 기기의 뚜껑이 자동으로 열립니다.

9. Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 Neogen Molecular Detection 장비에 놓고 뚜껑을 닫으면 시험이시작됩니다. 결과는 60분 이내에 제공되지만 양성 여부는 더 일찍 검출할 수 있습니다.

10. 시험이 완료되었으면 Neogen Molecular Detection 장비에서 Neogen Molecular Detection 스피드 로더 트레이를 꺼내고
1~5%(v:v 물)의 가정용 표백 용액에 1시간 동안 담갔다가 분석 준비 영역에서 떨어진 곳에 폐기하십시오.

10

KO （한국어）주의: 교차 오염으로 인한 위양성의 위험을 최소화하려면 증폭된 DNA를 함유한 Reagent 튜브를 절대 열지 마십시오. 여기에는Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 Reagent, Neogen Reagent 컨트롤 및 Neogen 매트릭스 컨트롤 튜브가포함됩니다. 밀봉된 Reagent 튜브는 1~5%(v:v 물)의 가정용 표백제에 1시간 동안 담가 두었다가 키트 준비 구역과 멀리 떨어진위치에 폐기합니다.

결과 및 해석
알고리즘은 핵산 증폭을 탐지할 때 생성되는 빛 출력 곡선을 해석합니다. 결과는 소프트웨어에 의해 자동으로 분석되고 결과에기반하여 색상으로 구분됩니다. 양성 또는 음성 결과는 다양한 고유 곡선 매개변수의 분석으로 판별됩니다. 추정 양성 결과는실시간으로 보고되는 반면, 음성 결과는 실행이 완료된 후 표시됩니다.

양성으로 추정되는 시료는 Neogen BPW ISO 증균액에서 2차 증균 배양액으로 옮기는 것에서 시작하여 이후 적절한 생화학적 및혈청학적 방법으로 분리균 확인 및 플레이팅을 실시하는 등 실험실 표준 운영 절차 또는 적절한 참고 방법 확인(1,2,3)을 통해 확인해야합니다.
참고: 시스템과 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 증폭 시약은 "배경" RLU를 가지므로 음성 시료도 0을기록값으로 제공하지 않습니다.

이례적인 빛 출력이 나타나는 경우, 알고리즘은 이를 "검사(Inspect)"로 분류합니다. Neogen은 모든 검사 시료에 대해 분석을반복하는 것을 권장합니다. 결과가 계속 검사인 경우, 기본 설정한 방법을 사용하거나 현지 규정에 따라 확정 시험을 진행하십시오.
웰 유형시료웰 결과 기호

결과

해석

양성

시료는 대상 식중독균에 대해 양성으로 추정됩니다.

시료음성시료는 대상 식중독균에 대해 음성입니다.

시료저해시료 매트릭스가 시험에 대해 저해를 일으켰습니다.
재시험이 필요할 수 있습니다. 자세한 내용은 문제해결 섹션과 시험 키트 제품 설명서를 참조하십시오.

시료

검사

시료

오류

대상 식중독균의 존재 여부를 확인할 수 없습니다.
재시험이 필요할 수 있습니다. 자세한 내용은 문제해결 섹션과 시험 키트 제품 설명서를 참조하십시오.

감지된 생체발광이 없습니다. 재시험이 필요할 수
있습니다. 자세한 내용은 문제 해결 섹션과 시험 키트제품 설명서를 참조하십시오.

NF VALIDATION 인증 방법에 따른 결과 확정NF VALIDATION의 경우 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라에서 양성으로 식별된 모든 시료는 다음 중 하나의시험에 따라 확인해야 합니다:방법 1: 펩톤식염완충액(3) 증균액부터 ISO 6579(3) 표준 사용.

방법 2: 다음으로 구성된 확인 방법 실행: BPW ISO(3) 증균액 0.1mL 또는 Tetra Thionate Broth 증균액(일차 생산 시료)을 RVS Broth
10mL로 옮깁니다. 41.5°C에서 24±3시간 동안 배양합니다. Xylose Lysine Deoxycholate(XLD)(3) 한천 배지 또는 살모넬라에특화된 크로모제닉 한천 배지에 도말하십시오. Oxoid 살모넬라 라텍스 검사를 이용해 분리된 집락에 라텍스 응집 검사를 수행합니다.
방법 3: 분리된 집락(XLD 또는 크로모제닉 한천 배지)에 수행된 EN ISO 7218(5) 표준에 명시된 대로 핵산 프로브 사용(방법 1 또는
2 참조). 이 시험은 Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라를 이용해 수행해서는 안 됩니다.

방법 4: Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라와 다른 원리인 기타 NF VALIDATION 인증된 방법 사용. 해당 2차 검증방법에 대해 설명된 전체 프로토콜을 사용해야 합니다. 두 가지 방법에서 확인 시작 전의 모든 단계가 반드시 동일해야 합니다.

결과가 불일치하는 경우(Neogen Molecular Detection Assay 2 - 살모넬라 사용 시 추정 양성, 상기 방법 중 한 가지로 확인 불가 및특히 라텍스 응집 검사에 대해), 실험실은 필요 단계를 따라 취득한 결과의 유효성을 확인해야 합니다.

구체적인 용도나 절차에 대하여 궁금한 점이 있으면 당사 웹사이트(www.neogen.com)를 방문하거나 현지 Neogen 또는 판매업체로
문의하십시오.

부록 A. 시험 계획서 중단: 열처리된 Lysate 보관 및 재시험

1. 열처리된 Lysate를 보관하려면 깨끗한 캡으로 용해 튜브를 다시 씌웁니다(Lysis 섹션 4.5 참조).
2. 4~8°C에서 최대 72시간 동안 보관합니다.

3. 2~3번 뒤집어서 혼합하여 보관된 시료를 증폭하도록 준비합니다.
4. 튜브의 캡을 벗깁니다.

5. Neogen Molecular Detection 히팅 블록 인서트에 혼합된 Lysate 튜브를 놓고 100±1°C에서 5±1분간 가열합니다.

11

KO （한국어）6. Neogen Lysis Solution 튜브의 랙을 히팅 블록에서 제거하고 Neogen Molecular Detection 냉각 블록 인서트에 최소 5분, 최대
10분 냉각시킵니다.

7. 위에서 상세히 설명한 증폭 섹션의 프로토콜을 계속합니다.

참고자료:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 5: Salmonella., Section C-24.
November 2018 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 4.10. Isolation and identificationof Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, and siluriformes (fish) products and carcass and environmental
sponges. Effective Date: 2 January 2019.
3. ISO 6579-1. Microbiology of the food chain – Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping ofSalmonella – Part 1: Detection of Salmonella spp.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and guidance for microbiologicalexamination.
6. Neogen Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for Neogen
Molecular Detection System. Contact your Neogen Food Safety representative to obtain a copy of this document.
7. ISO 18593. Microbiology of the food chain – Horizontal methods for surface sampling.
8. US Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual, Medium M111: Nonfat Dry Milk
(Reconstituted). January 2011.
9. ISO 16140-2:2016. Microbiology of the food chain - part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary)
methods against a reference method.
10. ISO 6887-1:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 1: General rules for the preparation of the initial suspension anddecimal dilutions.
11. ISO 6887-2:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products.
12. ISO 6887-3:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products.
13. ISO 6887-4:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products.
14. ISO 6887-5:2017. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products.
15. ISO 6887-6:2013. Microbiology of the food chain – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination – part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary
production stage.

기호 설명

info.neogen.com/symbols

12Neogen Food Safety
Neogen Corporation
620 Lesher Place
Lansing, MI 48912 USA
Neogen.com
Neogen Europe Ltd.
The Dairy School
Auchincruive
Ayr, KA6 5HU
Scotland, UK
Neogen Ireland, Ltd.
Bray Business Park, Bray
Co. Wicklow
A98YV29, Ireland© Neogen Corporation 2024. All rights reserved.
Neogen is a trademark of Neogen Corporation.
All other trademarks are the property of their respective companies.

Neogen Corporation
620 Lesher Place Lansing, MI 48912 USA
www.neogen.com© 2024, Neogen. Tous droits réservés.
Neogen est une marque de commerce de Neogen.
Toutes les autres marques decommerce appartiennent à leur propriétaire respectif.
FS00869A