PREVALENCE OF AKABANE VIRUS AND PRESUMPTION OF ANTIGEN PROPERTY IN ISHIKAWA

総説

石川県における 2008 年のアカバネウイルスの流行と中和試験による流行株抗原性状の推定細川明香1) 村上俊明1)*南田中孝一1)

藤子1) 小前博文1) 長井早川裕二1)誠2)1) 石川県南部家畜保健衛生所 (〒920-3101 石川県金沢市才田町戊324-2)
2) 石川県畜産総合センター (〒929-1325 石川県羽咋郡宝達志水町坪山ナ部93-2)* 連絡担当者：村上俊明
TEL : 076-257-1262
FAX : 076-257-2122
e-mail : muraka-t@pref.ishikawa.lg.jp［要約］2008 年石川県において 10 年ぶりにアカバネウイルス (AKV) の流行が確認された。おとり牛を用いた調査の結果、2008 年 8 〜 9 月にかけ、能登地方を中心とした 57 頭中 11 頭 (19.3% ) に AKV 抗体の陽転が確認された。また、9 月〜 11 月採材アカバネ病ワクチン未接種牛 474 頭の保存血清を用いた疫学調査においても、26 頭に AKV に対する抗体保有が認められた。AKV はその抗原性状により大きく二つに分類されることから、2008 年石川県での流行株の把握を目的に、同時期採材された血液からの、ウイルス分離ならびに AKV 特異遺伝子の検出を試みたが全頭陰性であった。そこで流行株の抗原性状を推定するため、AKV 抗体の陽転が確認されたおとり牛血清について、プロトタイプのJaGAr-39 株ならびに同グループの 1998 年石川県分離株と、その変異株の代表とされる Iriki 株を用いた片側交差中和試験を行った。その結果、野外血清は JaGAr-39 株ならびに 1998 年石川県分離株に対し Iriki 株よりも 4 〜 64 倍高い抗体価を示し、2008 年に石川県で流行した AKV は 1998 年に石川県で流行した株と類似した抗原性状を有すると推察された。
【キーワード：アカバネウイルス、抗原性状、石川県、中和試験、流行】[はじめに]

ボウイルスで、ウシヌカカの仲間が本ウイルス

アカバネ病は牛に異常産や生後感染による脳の主要媒介種として知られている [2]。AKVは炎を引き起こし養牛経営に被害をもたらす疾病

1998〜1999年にかけての全国的な流行以降、である [3, 4]。アカバネ病の原因ウイルスであ九州・沖縄を中心とした西日本ではたびたび小るアカバネウイルス(AKV)はブニヤウイルス

規模な流行が確認されており、2006〜2007年

科オルソブニヤウイルス属に属するRNAウイにかけては九州地方を中心に生後感染による脳ルスである。吸血昆虫によって媒介されるアル炎型のアカバネ病の集団発生が確認されている− 55 −

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石川県におけるアカバネウイルスの流行と流行株抗原性状の推定[6]。石川県でも1998年には23年ぶりのAKVに血漿で、抗体検査によりAKV抗体の陽転がの流行があり、能登地方を中心にアカバネ病に確認された41検体ならびに、抗体陰性であっよる被害が発生したが[8]、以降2008年まで、た104検体について、ウイルス分離とAKVのAKVの流行は確認されなかった。

特異遺伝子の検出を試みた。

全国の家保では、家畜防疫対策要項（平成11(4)AKV特異遺伝子の検出

年4月12日付け11畜Ａ第467号農林水産省畜産

血清および血漿からTrizol LS (インビトロ局長通知）の監視伝染病のサーベイランス対策

ゲン、カナダ)を用いてRNAを抽出した。抽出指針に基づく検査の一環として、未越夏牛をしたRNAはRNA PCR Kit (AMV) Ver3.0(タ

おとり牛として管内全域に配置しアルボウイ

カ ラ バ イ オ、 滋 賀)を 用 い てRT-PCRを 行 っルス感染症のサーベイランスを実施している。

た。 プ ラ イ マ ー はAKAI172F (5’-CAG

2008年8月、石川県においておとり牛に10年

AAG AAG GCC AAG ATG GT-3’)およびぶりとなるAKVに対する抗体の陽転が認めら

AKAI560R (5’-AAG TTG ACA TCC ATTれた。そこで今回のAKVの流行を詳しく調査

CCA TC-3’) [6]を使用した。PCR産物は、2％するため、AKVの県内における浸潤状況をウ

アガロースゲルで電気泳動を行い、0.1μg／イルス分離、AKV遺伝子の検出および抗体検mlのエチジウムブロマイドで染色し、トラン査により調べた。さらにAKV代表株を用いたスイルミネーターで観察した。

片側交差中和試験による流行株の抗原性状の推(5)ウイルス分離察を試みた。

血 清 お よ び 血 漿 をHmLu-1細 胞 に 接 種 し、
37 ℃ で 回 転 培 養 を 実 施 し た。 細 胞 変 性 効 果[材料および方法](CPE)の有無を観察した。CPEが観察されな(1)おとり牛による流行状況調査材料

い場合、盲継代を3代繰り返した。

石川県の加賀地区(加賀市、白山市)に19頭、(6)AKVに対する抗体検査

口能登地区(羽咋市、宝達志水町、内灘町)15頭、被 検 血 清 を56 ℃ で30分 間 非 働 化 し、中能登地区(志賀町、中能登町、七尾市)9頭お

HmLu-1細胞を用いマイクロタイター法によよび奥能登地区(穴水町、輪島市、能登町、珠る血清希釈中和試験を行った。細胞変性効果洲市)に14頭、計57頭の未越夏のおとり牛を配(CPE)を抑制した血清の最高希釈の逆数を中和置し、2008年6、8、9および11月の４回採血抗体価とし、抗体価2倍以上を陽性とした。なを行い、ウイルス分離、ウイルス遺伝子の検出

お、中和試験には、AKV JaGAr-39株 [10]をおよびAKV抗体検査を実施した。

指示ウイルスとして用いた。

(2)浸潤状況調査材料(6)片側交差中和試験

9〜11月に県内7市町より採材されたアカバ

AKVに対する抗体が陽転したおとり牛11頭

ネ病ワクチン未接種牛474頭の保存血清を用の11月に採取した血清を用い、JaGAr-39株、い、抗体調査を実施した。なお、対象牛は石川1998年石川県分離株(Ishi-1)ならびにIriki株を県で最後にAKVの流行が確認された1998年以用いて片側交差中和試験を実施した。

降に生まれた牛とした。

[結果](3)ウイルス分離および遺伝子検査材料(1)おとり牛による流行状況調査

抗体陽転の認められたおとり牛材料に加え、2008年6月のウイルス分離および抗体検査

2008年7〜11月に採材された保存血清ならびは、移行抗体と考えられる抗体価が検出され日本家畜臨床感染症研究会誌
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PREVALENCE OF AKABANE VIRUS AND PRESUMPTION OF ANTIGEN PROPERTY IN ISHIKAWAた10頭以外は全頭陰性であったが、8月に口能体陽性率は、奥能登地区7頭/14頭(50%)、中登地区で1頭にAKV抗体の陽転が見られた。9

能登地区1頭/19頭(5%)、口能登地区3頭/15頭

月には、口能登地区でさらに1頭、中能登地区(20%)であった。一方、加賀地区(金沢市以南)で1頭、奥能登地区で7頭の抗体陽転牛が確認

では全期間を通して抗体陽転牛は確認されなされたが、11月には新たな抗体陽転牛は認めかった(Table1)。

られず、流行後(11月)におけるおとり牛の抗Table1. antibody titers against AKV of sentinel calves in ishikawa Prefecture from June toNovenber in 2008

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石川県におけるアカバネウイルスの流行と流行株抗原性状の推定

Table2. Comparison of neutralizing  antibody titers against representive AKV strains(2)浸潤状況調査
ワクチン未接種牛を対象に行ったAKV抗体[考察]検査による浸潤状況調査では、奥能登地区はアルボウイルスの流行をサーベイランスす194頭中11頭(5.7％)、中能登地区は69頭中2る目的で全国的に実施されているおとり牛の頭(2.9％) 、口能登地区は134頭中13頭(9.7％)

抗体調査の結果、2008年8月に中国、近畿おが抗体陽性だったが、加賀地区では77頭すべ

よび北陸地方で抗体陽性率の上昇が確認され、て抗体陰性であった。

11月までに22府県で抗体陽性牛が確認された(3)AKV特異遺伝子の検出およびウイルス分離（平成２０年度家畜衛生研修会（病性鑑定・ウ抗体陽転の認められたおとり牛ならびに、イルス部門）資料）。本県では、8月に口能登地

2008年7月 〜11月 採 材 の145検 体 に つ い て区、9月に口能登地区以北で抗体陽性牛が確認

AKV特異遺伝子の検出およびウイルス分離をされたが、それ以降陽転牛はみられなかった。

実施したが、全検体陰性であった。

このことから今回の流行は能登地方を中心に(4)片側交差中和試験

主に8月から9月にかけてあったものと推察さ

AKVに対する抗体が陽転したおとり牛11頭れた。1998年の流行時のAKV抗体陽性率は奥の血清を用いて実施した片側交差中和試験成績

能登地区で44.6%(246/552頭)、中能登地区をTable2に示した。JaGAr-39株に対する抗23.2%(95/410頭)、口能登地区8.3%(14/169

体価はIriki株に対するそれより4〜32倍高く、頭)および加賀0%(0/763頭)であったが、今回

Ishi-1株に対する抗体価はIriki株に対するそれは奥能登地区5.7％、中能登地区2.9％、口能登より4〜64倍高かった。幾何平均値はIshi-1株地区9.7％および加賀地区0%といずれも1998に対する抗体価が120.2倍と最も高く、Iriki株年よりも低率であり、2008年の本県におけるに対する抗体価との差は13.2倍であった。

流行は1998年より小規模であったと考えられ

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PREVALENCE OF AKABANE VIRUS AND PRESUMPTION OF ANTIGEN PROPERTY IN ISHIKAWAた。石川県では1998年のアカバネ病発生後ワおり、抗原性状の広い範囲に有効なワクチン開クチン接種率が一時上昇したが、近年接種率は発の必要性が示唆されている [6]。また、AKV低下し2008年の接種率は26.7%と1998年とほは抗原性状、病原性の変異を起こしやすいことぼ同等であり、石川県におけるアカバネ病ワクが示唆されており [9]、流行株がどんな抗原性チン接種はすでに1979年から始まっているこ状を有するかを確認することは重要と考えられとから牛群のAKVに対する抗体レベルは1998る。今回、ウイルス遺伝子検出およびウイルス年と差はなかったと考えられ、今回の流行が小分離は、いずれも陰性であったことから、流規模であった要因は牛側にないものと思われ行株の抗原性状の把握を目的に両グループのた。これまでわが国では冬季にAKVは確認さ代表株ならびに1998年石川県分離株(Ishi-1株;れておらず、より低緯度(熱帯地方あるいは亜JaGAr-39株と同じグループ [8])を用いて、お熱帯地方)の地域より媒介昆虫によって運ばれ、とり牛のAKV陽転血清による片側交差中和試繰り返し国内へ侵入していると考えられている験を実施した。その結果、おとり牛の血清は、[6] 。1975年および1998年のAKV流行も全国

Iriki株に対する抗体価は、JaGAr39株ならび的な流行であり、媒介昆虫の北上がAKVの流にIshi-1株に対してIriki株よりも幾何平均値で行に関わっているものと考えられている。しか10.3〜13.2倍高い値を示した。このことから、し、流行の確認された能登地区に比べて加賀今回の本県における流行株はプロトタイプのグ地区は低緯度にあるものの流行は確認されず、ループに属する株であると推察され、現行の市1998年も同様であることから[8]、石川県への販ワクチンは2008年の流行株に有効であった

媒介昆虫の侵入は北上によるのではなく、他のと考えられた。抗原性状の推定に用いた本手法経路があることが疑われた。1998年に比べては、ウイルスが分離されない事例において流行小規模であったことについては、1998年の奥株の抗原性状を推定するうえで有用であると考

能登地区は9月に1311.0mmの降水量を記録しえられた。ており、媒介昆虫の大量発生があったことが推

本県では2008年の流行開始以降、2009年春察されたのに対し、2008年の気象台のデータ

までAKVの関与が疑われる異常産の監視を続によると9月の降水量は2008年の16.7%に当けてきたが、アカバネ病の発生は確認されなたる219.5mmであり、媒介昆虫が発生しにくかったものの、他県では異常産等の報告がなさい状態であったことが推察され、このことが流れている(農林水産省消費・安全局

行が拡大しなかった理由の一つとして考えられ全管理課、動物衛生課：家畜衛生週報、2009た。

年、No.3071、229ページ)。今回石川県では、

近 年 のAKV遺 伝 子 解 析 に よ り、 わ が 国 の畜水産安流行規模が小さかったことが異常産の発生がな

AKVはプロトタイプであるJaGAr-39株やワかった要因と考えられた。

クチン原株であるOBE-1株を含むグループと石川県では1998年の発生時には媒介昆虫の調Iriki株で代表される変異株を含むグループに大査を実施し、ヌカカ類を捕虫しミヤマヌカカ、別されている [1, 5, 11]。2006年南九州地方

ホシヌカカ等を確認したが、その後媒介昆虫ので牛に生後感染による脳炎の大きな流行があ調査は行われていない。今後サーベイランスをり、Iriki株を含むグループに属するAKVが分さらに正確に行うためには媒介昆虫についての離された [6]。このグループとワクチン株とは調査も必要と思われた。

抗原性状に差異が認められることが報告されて− 59 −

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in Farm Animals Vol.5 No.2 2010

石川県におけるアカバネウイルスの流行と流行株抗原性状の推定[引用文献]

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PREVALENCE OF AKABANE VIRUS AND PRESUMPTION OF ANTIGEN PROPERTY IN ISHIKAWA

Prevalence of Akabane virus and presumption of antigenic property using
neutralization tests of the epidemic virus in Ishikawa Prefecture in 2008
Sayaka Hosokawa1), Toshiaki Murakami1)*, Takaichi Tanaka1),
Yuji Hayakawa1), Fujiko Minami1), Hirofumi Komae1) and Makoto Nagai2)
1) Ishikawa Nanbu Livestock Hygiene Service Center(Bo 324-2, Saida-cho, Kanazawa-shi, Ishikawa 920-3101)
2) Ishikawa Prefectual livestock research center(Bu 93-2, Tsuboyama, Hodatsushimizu-cho, Ishikawa 929-1325)* correspond to：Toshiaki Murakami
TEL : 076-257-1262
FAX : 076-257-2122
e-mail : muraka-t@pref.ishikawa.lg.jp
ABSTRACTPrevalence of Akabane virus was confirmed in Ishikawa Prefecture in 2008
for the first time in a decade. From August to September in 2008, a serologicalsurveillance of the Akabane virus (AKV) in Ishikawa Prefecture demonstrated
that 11 out of 57 (19.3 % ) sentinel calves mainly housed in Noto region exhibited
seroconversion to the virus. Furthermore, serological investigation using reserved
sera of unvaccinated cattle in Ishikawa Prefecture from September to November
indicated that 26 out of 474 cattle possessed the neutralizing antibody against AKV.
Since AKV was subdivided into two subgroups by antigenic difference, the antigenic
property of prevalence viruses is importance. However virus isolation and RTPCR of AKV from sera collected in the same period were negative. To estimate theantigenic property of epidemic AKV, we investigated the reactivity of neutralizing
antibodies of sentinel calves in Ishikawa Prefecture against representative strainsof AKV, prototype strain: JaGAr-39, strain of prototype group: Ishi-1, and typicalvariant strain: Iriki. The antibody titers of cattle in Ishikawa Prefecture against
Ishi-1 strain and JaGAr-39 strain were 4 to 64 folds higher than those against Irikistrain. Present finding suggests that the antigenic property of the epidemic virus
in Ishikawa Prefecture in 2008 is similar to that of virus, which was prevalent inIshikawa Prefecture in 1998.
【Key Word : Akabane virus, antigenic property, Ishikawa Prefecture, neutralization
test, Prevalence】− 61 −

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