The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.4 No.4 2015

ORAL RICE-BASED VACCINE INDUCED PASSIVE IMMUNITY IN PIG

総 説

CTB 発現組換えイネ（MucoRice-CTB）経口免疫による受動免疫の成立
竹山夏実 1, 2）*、堤信幸 1）、笹川千尋 1）、清野

1）

一般財団法人 日本生物科学研究所＊〒 198-0024

宏 2）、幸義和 2）

2）

東京大学医科学研究所

連絡担当：竹山夏実

東京都青梅市新町 9-2221-1
Tel: 0428-33-1001、Fax: 0428-31-6166
E-mail: n-takeyama@nibs.or.jp［要約］

腸管毒素原性大腸菌（Enterotoxigenic Escherichia coli: ETEC）は、早期および離乳期の豚に罹患し、毒素を原因とする水溶性下痢を引き起こす。大腸菌の産生する易熱性毒素である heat labile toxin（LT）に相同性の高い毒素であるコレラ毒素 B サブユニット（CTB）を発現させた組換え米（MucoRice-CTB）
が、肥育豚および妊娠豚の粘膜免疫を誘導するかについて調べた。2 ヶ月齢ミニブタへの 4 回経口投与することで筋肉内投与法と比較して高い血中 CTB 特異的 IgA の産生を認めた。次に、母豚からの移行
抗体により新生豚を早発性下痢から防御するワクチネーションプログラムに即し、妊娠豚に妊娠前に 3回、分娩後 5 日で 1 回 MucoRice-CTB の経口免疫を行った。免疫した母豚の初乳および経過 2 週間の常乳に CTB 特異的 IgG および IgA の分泌が認められ、乳汁抗体は CT 毒素に対して中和効果を示した。
また、産生された抗体の LT への交差性も確認された。以上のことから、MucoRice-CTB 経口ワクチン
による受動免疫が、豚 ETEC による早発性下痢の防御に有効である可能性が示された。
キーワード：豚、大腸菌症、経口免疫、受動免疫性に影響を及ぼすため、農場の衛生管理に加［緒言］

えてワクチンによる予防が有効となる。ETEC

腸 管 毒 素 原 性 大 腸 菌（Enterotoxigenicは宿主体内に侵入して増殖するのではなく、腸Escherichia coli: ETEC）は、易熱性毒素（Heat

管腔上皮に定着して増殖し、毒素を産生する。

Labile toxin: LT） お よ び 耐 熱 性 毒 素（Heat

新生豚は十分な抗体産生能力を持たず、獲得免

Stable toxin: ST）を産生し、豚に感染すると死疫が機能を始めるのは生後 3-4 週以降であるた

亡率は高くないが軟便や水溶性下痢を引き起こ

め、生後早期に感染する病原体に対する理想的す［5, 9］。農場などではロタウイルスやコクな防御方法は、母豚の乳汁から供給される抗体

シジウム症との複合感染症によって症状が深刻による受動免疫となる。

化、持続することもある［3］。ETEC の発症

抗体の胎盤移行システムを持たない豚では、は哺乳期から離乳直後の仔豚に見られ、下痢に

初乳中に含まれる抗体は仔豚小腸上皮に発現すよる発育初期の体重増加率低下は肉養豚の生産

る Fc レセプターを介して仔豚の血流 / 体内に移行するが、このシステムは生後 36 時間程度しか持続しない［10］。以降は常乳中に含まれ受理：2015 年 11 月 6 日－ 143 －

家畜感染症学会誌
４巻 4 号 2015

CTB 発現組換えイネ経口免疫による受動免疫の成立

る抗体が持続的に仔豚腸管腔に直接的に供給さユニット（LTB）は CTB と高い相同性があるれることで、病原体や毒素の中和に働く。初乳ため、本研究では MucoRice-CTB を豚へ経口に含まれる抗体量は、サブクラス別に IgG が投与した際の抗体産生誘導能および LTB との61.8mg/mL、IgA が 11.3mg/mL で あ る 一 方、交差性を調べ、更に妊娠豚を用いて受動免疫に

常乳中には、IgG が 1.6mg/mL、IgA が 4.1mg/

関わる乳汁への抗体誘導について測定した。

mL との報告がある［4］。図 1 に示すように、［材料と方法］

IgG は仔豚の生後約 1 日で、母乳中の相対含有量が急激に低下することに対し、IgA や IgM

免疫動物：肥育豚は 2 ヶ月齢、妊娠豚は 12 ヶは哺乳期間中は比較的安定して供給される［4］。

月齢の NIBS ミニブタ（メス）を使用した。ままた、分泌型 IgA（Secretory IgA: SIgA）はた、組換え CTB 筋肉内投与試験には野外 SPF

抗体が 2 量体を形成しており、かつ Secretory

農場より搬入した 2 ヶ月齢の肥育豚を用いた。

component が 2 量体に結合することで消化酵素に対して耐性を示すため、効率良く仔豚の腸抗原：MucoRice-CTB/N（アミノ酸非改変型）

管に到達する。そのため、SIgA 産生を促す母は［12］植物グロースチャンバー（Panasonic）

豚免疫が有効であると考えられる。

内で 12 時間明期（27℃）/12 時間暗期（22℃）

コレラ毒素 B サブユニット（Cholera toxinの周期で育成し、収穫乾燥した種子はマルチ

B subunit: CTB） を 発 現 さ せ た 組 換 え イ ネ

ビーズショッカー（安井器械）で微粉末に破砕（MucoRice-CTB） は 東 京 大 学 医 科 学 研 究 所、した。陰性対照群には MucoRice-CTB 作出時

清野教授らのグループにより開発されたものでの野生米である日本晴（非組換え体）の種子をある［6-8］（図 2）。イネ種子に目的抗原が発現、同様の条件で破砕して調整した。また筋肉内投蓄積する技術によるもので、得られたイネ種子

与試験には枯草菌発現精製 CTB を使用した。

には経口ワクチンとしての応用が期待され、先免 疫 方 法：2 ヶ 月 齢 ミ ニ ブ タ へ の MucoRice-の CTB 特異的 IgA を誘導することが確かめら

CTB/ 日 本 晴 経 口 投 与 は、0.67mg の 粉 末 をれている。豚 ETEC の産生する LT の B サブ

PBS 10 mL に懸濁させてカテーテルによる胃相対含有量

駆けたマウスやサルの経口免疫試験では血清中

時間

日数
出生後経過

図1．豚乳汁中に含まれる抗体各サブクラスの相対量（参考文献4より引用）

図 1： 豚乳汁中に含まれる抗体各サブクラスの相対量（参考文献 4 より引用）
分娩後1日を過ぎるとIgG量は低下していくが、IgMやIgAは安定して分泌
分娩後 1 日を過ぎると
IgG 量は低下していくが、IgM や IgA は安定して分泌される。

される。

－ 144 －

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Vol.4 No.4 2015

ORAL RICE-BASED VACCINE INDUCED PASSIVE IMMUNITY IN PIG

コレラトキシンB

B
A

B

Bサブユニット-5量体を形成(細胞膜と結合)

78.2%
コレラ
トキシン

CT

ヒト大腸菌 易熱性毒素

hLT

99.2%

臨床応⽤に向けた粘膜ワクチン
AサブユニットpLT（酵素活性部位）

ブタ大腸菌 易熱性毒素

MucoRice-CTB作出過程

カルスへ遺伝子を導入

閉鎖系システムでのイネ栽培・収穫

粉砕して医薬品化

図 2．本研究に用いたMucoRice-CTBに発現させたコレラトキシンBサブユニットの構造、ETEC毒素LTBとの交差性
図 2： 本研究に用いた MucoRice-CTB に発現させたコレラトキシン B サブユニットの構造、ETEC 毒およびMucoRice-CTBの作出法

素 LTB との交差性および MucoRice-CTB の作出法

内投与、あるいは粉末を餌に混合して与える混

anti pig IgG Fc（Nordic Immunology, The

餌投与とし、2 週間隔で 4 回の経口投与を実施

Netherlands）および HRP-conjugated anti pig

した。妊娠豚では 0.67mg の MucoRice-CTB 粉

IgA（ACRIS Antibodies GmbH, Germany）を末を出産予定日の約 6 週前に混餌投与により初用い、TMB による発色反応を行った。

回免疫し、出産予定日 4, 2 週前に 2, 3 回目の免疫行った。また、分娩後 5 日目に 4 回目の追Monosialotetrahexosylganglioside（GM1）結合加免疫を行った。枯草菌発現精製 CTB の筋肉阻害アッセイ：毒素に対する中和能を調べるた

内投与は 1 回 100µg/0.5 mL とし、これを等量

め血清、乳清サンプルを GM1-CT 結合阻害にの Freund’s complete（初回）/incomplete（2,より調べた。サンプルおよび 50ng/mL の CT

3 回目）adjuvant と混合して脚部筋肉内に投与を混合して 37℃で 1 時間反応させ、5µg/mLした。実験動物からは経時的に採血および搾乳（PBS）で一晩 4℃の条件で GM1 を固相化したを行い、血清および乳清を分離して抗体測定材

96 ウェルプレートに分注した。標識抗体とし料とした。

て HRP-Rabbit anti CTB 抗体を使用し、TMBによる発色反応を行った。

抗 体 測 定：ELISA 抗 原 に は D-Galactose カ ラ［結果］

ムで精製した組換え CTB および LTB を使用した。1µg/mL（PBS）で一晩 4℃の条件で固肥育豚に対する MucoRice-CTB 有効性試験

相 化 し た 後、3 ％ skim-milk/PBS に て ブ ロ ッ

5 頭の 2 ヶ月齢 NIBS ミニブタに 2 週間隔でキングを行った。血清は 3％ skim-milk/PBS-

4 回の MucoRice-CTB 経口投与を行った。No.

0.1％ Tween 20 にて希釈し、血清中 IgG、IgA

1-3 は強制胃内投与、No. 4, 5 は混餌投与を実

測定はそれぞれ 1:200、1:40 倍希釈して使用し施した。No. 6-8 は対照群として、日本晴（野た。乳清中抗体測定には IgG、IgA それぞれ生米）の粉末を経口投与した。初回免疫より

サ ン プ ル を 1:200、1:50 に 希 釈 し た。 標 識 抗

経時的に採血を行い、血中 CTB 特異的抗体価

体 は サ ブ ク ラ ス 特 異 的 抗 体 HRP-conjugatedを測定したところ、少なくとも 3 回以上の免－ 145 －

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CTB 発現組換えイネ経口免疫による受動免疫の成立

疫により MucoRice-CTB 免疫を行った全ての

ELISA で検証した（図 4）。その結果、個体間個体で CTB 特異的な IgG および IgA の産生、およびサブクラスにより多少のばらつきは認め上昇を認めた（図 3 上）。混餌投与にて免疫をられたが、全ての免疫個体の CTB-IgG および行った No. 4, 5 については強制胃内投与群とIgA は LTB 抗原に対して交差性を示すことが比較して CTB-IgA の上昇が高い傾向が認めら確かめられた。

れた。組換え CTB を筋肉内投与した豚（図 3下、No. S1-3； 免 疫 群、No. S4, S5；PBS 投 与

妊娠豚に対する MucoRice-CTB 有効性試験対照群）では高い CTB-IgG の応答があったに次に、妊娠期のミニブタを用いて肥育豚とも関わらず、血清中 CTB-IgA の上昇を伴わな同様に MucoRice-CTB の経口免疫試験を実施

かった。MucoRice-CTB を豚 ETEC 経口ワク

した。2 匹の妊娠豚に、それぞれ出産予定日 6

チンとしての使用することを目的としたため、週前より 670mg の MucoRice-CTB 粉末（CTB

MucoRice-CTB 免疫で得られたミニブタの血抗原含有量 1.9mg に相当）を餌と混合して与清（最終免疫後 1 週目）について、ETEC 由

えた。肥育豚を用いた試験の傾向に相関して、

来 LTB 抗原に対して交差性が認められるかを

No. 1 および 2 の妊娠豚で免疫 2 回後 1 週のポ

MucoRice-CTB

normalized OD450

1.2
1
0.8
0.6
0.4

1.2

1
2
3
4
5
6
7
8

1.4

MucoRice-CTB
経口免疫

IgG

日本晴
* P<0.01

1
2
3
4
5
6
7
8

0.8
0.6
0.4

日本晴
* P<0.01

0
0

1

2

3

4

5

6

7

0

1

2

1.2

1#S1
2#S2
3#S3
4#S4
5#S5
PBS

0.6

0.2

0.6

2wk

3wk

6

7

0.4
0.2
0.0

0.0
1wk

5

1#S1
2#S2
3#S3
4#S4
5#S5
PBS

0.8

0.4

0wk

4

rCTB

1.0

normalized OD450

0.8normalized OD450

1.2

rCTB

1.0

3

初回免疫後経過週数

初回免疫後経週数

組換えCTB
筋肉内免疫

IgA

0.2

0.2
0

MucoRice-CTB

1normalized OD450

1.6

4wk

初回免疫後経過週数

5wk

0wk

1wk

2wk

3wk

4wk

5wk

初回免疫後経過週数

図3．肥育豚におけるCTB経口投与(MucoRice-CTB)および筋肉内投与による血中抗体価の比較。
図 3： A,
肥育豚における
CTB 経口投与（MucoRice-CTB）
および筋肉内投与による血中抗体価の比較。A, B;
B; MucoRice-CTBを経口投与したミニブタのCTB特異的IgGおよびIgA。
MucoRice-CTBを経口投与したミニブタの
特異的 IgG および IgA。No.1-3;
MucoRice-CTB
No.1-3;
MucoRice-CTB強制胃内投与、No.
4, CTB
5; MucoRice-CTB混餌投与、No.
6-8; 日本晴強制胃内投与。
強制胃内投与、No.
4, 5; MucoRice-CTB 混餌投与、No. 6-8; 日本晴強制胃内投与。免疫は 0, 2, 4,
免疫は0,
2, 4, 6週で実施。
6 週で実施。初回免疫後 5 および 7 週目において免疫群の抗体価が対照群と比較して優位に高い
初回免疫後5および7週目において免疫群の抗体価が対照群と比較して優位に高い(P<0.01:
student’s t test)（P<0.01:
student’s t test）C, D; 組換え CTB
を筋肉内投与（Freund’s
Adjuvant 混合使用）した
C, D; 組換えCTBを筋肉内投与(Freund’s
Adjuvant混合使用)した豚のCTB特異的IgGおよびIgA。
豚のS1-S3;
CTB 特異的IgG およびS1-S3; 免疫群、No. S4, S5; 対照群。
No.
免疫群、No.
S4, IgA。No.
S5; PBS対照群。

－ 146 －

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Vol.4 No.4 2015

A
1.6

ORAL RICE-BASED VACCINE INDUCED PASSIVE IMMUNITY IN PIG

B

IgG

P<0.05**

IgA

P<0.05**0.8

normalized OD450

1.4normalized OD450

0.9

1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2

0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1

0

CTB

0

LTB

CTB

ELISA抗原LTB
ELISA抗原

図 4： MucoRice-CTB 免 疫 ミ ニ ブ タ 最 終 免 疫 後 1 週 目 の 血 清 を 用 い た LTB に 対 す る 交 差 性 確 認
ELISA。 図 4．MucoRice-CTB免疫ミニブタ最終免疫後1週目の血清を用いた

LTBに対する交差性確認ELISA

0.6

CTB-IgG

A

1.4
serum

0.5

normalized OD450

normalized OD450

0.2
0

1

3

5

0

3

5

7

C

0

1

3

normalized OD450

normalized OD450

0.4

0

3

分娩日

5

7

10 14

出産後経過日数

D
serum

1.2

whey
milk

5

免疫後経過週数

1.4

serum

0.5

0

10 14

出産後経過日数

分娩日

免疫後経過週数

milk
whey

1

0.8

0.3

0.6

0.2

0.4

0.1
0

1

0.4

0.1

妊娠豚2

milk
whey

0.6

0.2

0.6

serum

0.8

0.3

0

B

1.2

milk
whey

0.4

妊娠豚1

CTB-IgA

0.2
0

1

3

5

免疫後経過週数

0
分娩日

1

3

5

7 10 14

出産後経過日数

0

0

1

3

免疫後経過週数

5

0

1

分娩日

3

5

7 10 14

出産後経過日数

図 5： 妊娠豚におけるMucoRice-CTB 経口投与による血清中、乳汁中 CTB 特異的抗体応答。A, B; 母
図 5．妊娠豚におけるMucoRice-CTB経口投与による血清中、乳汁中CTB特異的抗体応答。
豚 No. A,
1, B;
C, D;
妊娠豚1,No.C,2。A,
C; CTB 特異的
IgG, B, D; CTB 特異的 IgA。
母豚No.
D; 妊娠豚No.
2。
A, C; CTB特異的IgG,

B, D; CTB特異的IgA。
－ 147 －

家畜感染症学会誌
４巻 4 号 2015

B
乳清GM1結合阻害効果

1.4

120

1.2

sow #2

1.0

80
OD450

GM1-CT
結合阻害度 (%)

100

sow #1

60

20

0.2

0

0.0

4
6
8
10
分娩後経過日数

12

14

CTB

1.4

乳清CTB/LTB-IgA
CTB

LTB

1.2
1.0

0.6
0.4

2

1.6

0.8

40

0

C

乳清CTB/LTB-IgG

OD450

A

CTB 発現組換えイネ経口免疫による受動免疫の成立

0.8
0.6
0.4
0.2

0

1

3

5

7

10

14

分娩後経過日数

0.0

0

1

3

5

7

10

14

分娩後経過日数

図 6： A; 妊娠豚乳清の CT 阻害効果と LTB への交差性。分娩後 5 日目（矢頭）に追加免疫を実施。
図6：A; 妊娠豚乳清のCT阻害効果とLTBへの交差性。
CTB 非免疫母豚乳清のGM1 結合阻害アッセイの OD 値を 0％として CT 結合阻害土（％）を算出。
分娩後5日目（矢頭）に追加免疫を実施。CTB非免疫母豚乳清のGM1結合阻害アッセイのOD値を0%としてB, C; 母豚No.
2
乳清の
LTB に対する交差性確認 ELISA。IgG（B）および IgA（C）サブクラス
CT結合阻害土(%)を算出。
を各々測定。
B, C; 母豚No. 2乳清のLTBに対する交差性確認ELISA。
IgG (B)およびIgA (C)サブクラスを各々測定。

イントより CTB 特異的な血清中 IgG および向が認められた。また、母豚 No. 2 の経過乳清

IgA の上昇が認められた（図 5）。分娩日よりについて LTB 交差性を確認するために CTB/

免疫母豚から経時的に搾乳を行い、乳清中のLTB-ELISA を実施したところ、IgG、IgA サ

抗体を調べた。分娩当日に採取された初乳中

ブクラス共に LTB に対する応答が確認されたには血清中よりも高い CTB-IgG、IgA が認め（図 6B、C）。

られることが分かった。分娩後 2 週までの母［考察］

豚抗体推移を追ったところ、CTB-IgG の血清中抗体価は安定して推移するが（図 5A および

仔豚の ETEC 感染による哺乳期、離乳期のC）、乳清中 IgG は分娩後 5 日目に向けて急激

下痢は農場でしばしば死亡率や生産性に悪影響に低下した。母豚 No. 2 では 10 日目まで継続を与える［5, 9］。ETEC の対策には、腸管腔

して CTB-IgG 量が低下した。一方、IgA サブに定着し増殖する細菌および産生される毒素にクラスは IgG に比べて異なる傾向が認められ対して有効な粘膜免疫を誘導できるワクチン開た。分娩後経過に伴う抗体価の減少は比較的ゆ発が望まれる。現在市販されている豚大腸菌症

るやかであり、ほぼ全ての測定ポイントで血ワクチンは、妊娠豚に対して不活化された大腸清中よりも高い値を持続した。分娩後 5 日目

菌の菌体を筋肉内投与するものが大多数であの MucoRice-CTB 追加免疫後、血清および乳る。筋肉内注射によって誘導される IgG は母

清ともに IgG 価に若干の上昇傾向が認められ豚の初乳より仔豚小腸 Fc レセプターを介してた。追加免疫による IgA の応答は IgG より顕血流に取り込まれ、仔豚体内に ETEC に対す著であり、母豚 No. 1 では 7 日目に、母豚 No.

る抗体を付与する。しかしながら、ETEC が腸

2 では 10 日目に、初乳と同程度まで CTB-IgA

管腔に分泌する毒素を中和するためには乳汁か量が回復することが分かった。GM1 結合阻害

らの抗体の安定供給が望ましいと考えられる。

アッセイにより乳清の CT 毒素中和能を調べた

これまで別報告において大腸菌を経口投与で腸（図 6A）。初乳中の抗体にはいずれの母豚でも管に定着させ、局所粘膜免疫を誘導する効果が80-90％の毒素中和効果が認められた。ELISA

知られているが［2］、大腸菌、ロタウイルスなにて測定された抗体価推移と相関し、中和能

どの腸管感染症の病原体を不活化させて投与しは 5-10 日まで低下するが、追加免疫によっててもこのような効果は認められない［1, 11］。

10, 14 日目に初乳と同程度まで回復しており、本研究ではイネに CTB を発現させた種子を特に ELISA による CTB-IgA の推移と近い傾粉砕して抗原とし、経口投与法により豚に粘膜－ 148 －

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Vol.4 No.4 2015

ORAL RICE-BASED VACCINE INDUCED PASSIVE IMMUNITY IN PIG

免疫を誘導できるかを検証した。肥育豚に対し［引用文献］て経口免疫および筋肉内免疫法を比較したところ、経口免疫により筋肉内注射では誘導できなかった IgA の誘導が認められた。誌面には示していないが、このとき腸管粘膜においても CTB 特異的 IgA の誘導が認められたことか
ら、MucoRice-CTB の経口免疫は優位に粘膜免疫、IgA の分泌を促すことが示された。また今回使用した抗原による経口免疫は大腸菌毒
素 LTB に対しても交差性を示すことを確認し、
MucoRice-CTB を豚大腸菌症に対する粘膜ワ
クチンとして利用できる可能性を確かめた。
哺乳期の豚を ETEC の感染から防御するためには乳汁からの抗体供給が必要不可欠であるため、実際に妊娠豚を用いた試験で乳汁中の抗体を調べたところ、妊娠期間中に 3 回、分娩後後 5 日目に母豚へ MucoRice-CTB を経口投与することで、2 週間継続して乳汁中に毒素中和活性を持つ抗体産生を促すことができたことから、MucoRice-CTB は母子移行免疫に有効な
乳汁中への抗体誘導も可能と示された。
世界的に農場からは F4 あるいは F18 線毛抗原を保有する株が多く分離され、また菌のうち約 60％が LT 遺伝子を持つ株であることが知られている［13］。大腸菌症の予防に線毛抗原が利用される例もあるが、下痢の直接的原因である毒素を中和する免疫は線毛の血清型に影響を受けずに、幅広い大腸菌株に有効であると考えられる。
タバコやシロイヌナズナ等、植物を応用したワクチンや治療用抗体は現在動物用にも応用されてきているが、家畜用ワクチンとして実用化するためには安価に製造できるシステムが望まし い。MucoRice-CTB は、 可 食 で き る 植 物 であるイネ種子に抗原を発現することで、精製工程を経ずにワクチンとして調整でき、またシリンジ等の医療用機器を用いず餌との混合のみで投与ができることから、安価かつ動物にやさしいストレスフリーのワクチンを実現できる可能性が高い。更に、MucoRice のシステムは、他の動物用ワクチンへの経口ワクチンへ発展させる技術として期待できる。

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家畜感染症学会誌
４巻 4 号 2015

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－ 150 －

The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.4 No.4 2015

ORAL RICE-BASED VACCINE INDUCED PASSIVE IMMUNITY IN PIG

Oral rice-based vaccine induces passive immunity against
enterotoxigenic E. coli-mediated diarrhea in pigs
Natsumi Takeyama1, 2）, Nobuyuki Tsutsumi1）, Chihiro Sasakawa1）, Hiroshi Kiyono2）, Yoshikazu Yuki2）
1）Research Department, Nippon Institute for Biological Science.
2）Division of Mucosal Immunology, The Institute of Medical Science, The University of Tokyo.
9-2221-1 Shin-machi, Ome, Tokyo 198-0024, Japan［Abstract］
Enterotoxigenic Escherichia coli（ETEC）causes severe diarrhea in both neonatal and weaned
pigs. Because the cholera toxin B subunit（CTB）has a high level of amino acid identity to the
ETEC heat-labile toxin（LT）B-subunit（LTB）, we selected MucoRice-CTB as a vaccine candidate
to induce maternal antibody against ETEC-induced neonatal pig diarrhea. Two-month-old minipigs
were orally immunized with MucoRice-CTB, and both CTB-specific IgG and IgA antibodies weresuccessfully induced, as well as CTB-specific intestinal SIgA. LTB-specific ELISA confirmed that theinduced antibodies by oral immunization of MucoRice-CTB crossreacted with LTB. When pregnant
sows were orally immunized with MucoRice-CTB, increased amounts of antigen-specific IgG and IgA
were produced in their sera. IgA antibodies in the colostrum and milk remained high with a booster
dose after farrowing. MucoRice-CTB could be a candidate oral vaccine for inducing passive immunity
to protect suckling piglets from ETEC diarrhea.
Key words: E. coli, oral immunization, passive immunity, pig－ 151 －