The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.3 No.1 2014

INTRA FARM SPREAD OF PASTEURELLA AND MANNHEIMIA

原著論文

Pasteurella multocida と Mannheimia haemolytica の農場内伝播様式に関する考察
西清二 1）＊・木嶋友洋 1）・大久保雅人 1）・渕上新蔵 1）
天辰正秋 2）・東山拓也 3）・中馬猛久 3）1）かごしま中部農業共済組合（〒 899-6401
2）東亜薬品工業（〒 151-0073

東京都渋谷区笹塚 2-1-11）3）鹿児島大学共同獣医学部（〒 890-0024

鹿児島県鹿児島市郡元 1-21-24）＊連絡担当：西TEL：0995-59-2409

鹿児島県霧島市溝辺町有川 2013）

清二

FAX：0995-59-3215

E-mail：nosaiseibu15@gmail.com［要約］

呼吸器病の多発する一肥育農場において、Pasteurella multocida（P. multocida）と Mannheimiahaemolytica（M. haemolytica）の農場内での伝播感染様式について調査を行った。調査 1 として導入 1 ヵ月後、2 ヵ月、3 ヵ月の牛各 12 頭における保菌状況調査を行った。調査 2 として、導入牛 30 頭の導入時から導入 2 ヶ月後までの鼻腔スワブを継続採取し、同一牛における P. multocida、と M. haemolyticaの分離状況の変化について、遺伝子解析手法である PFGE（pulsed-field gel electrophoresis）により型別判定を行い農場内における動態を検討するとともに、呼吸器病の発生状況も調査した。調査 1 の結果、
導入 1 ヵ月後、2 ヵ月、3 か月において P. multocida は 8 頭、5 頭、7 頭から、M. haemolytica はそれぞれ 1 頭から分離された。調査 2 の PFGE 型別判定の結果、P. multocida は 20 種の PFGE 型（A～V）に分けられ、P. multocida は病原性が弱く臨床症状を示しにくいことから継続分離されやすいと考えられた。一方、M. haemolytica は 9 種の PFGE 型（A～J）に分けられ、導入直後にみられなかった特定の PFGE 型が優勢を占め、保菌牛からの水平感染、あるいは農場内の環境から伝播が起こっていることが示唆された。今回、新たに取り組んだ PFGE 型による型別判定は原因菌の伝播感染様式が把握でき、農場における防疫対策に有用であると考えられた。
キーワード：導入牛、Mannheimia haemolytica、Pasteurella multocida、PFGE［緒7，8］が原因となり BRDC を発症するとされ論］ている。そのため、BRDC の原因菌の調査お近 年、 大 型 農 場 を 中 心 に 牛 呼 吸 器 症 候 群

よび治療薬選択を目的として、多くの農場で鼻（BRDC）の発生が増加しており、死廃事故な腔スワブを用いた病原微生物の種類や薬剤感受どによる経済的損失が大きく問題となっている性について調べられている［3，5，6］。我々は、［9］。外部から導入牛を受け入れる肥育農場に一肥育農場にて無作為に抽出した導入牛を対象

おいては、輸送や環境変化からのストレス［1，に、呼吸器における病原微生物の調査を 2009年度から開始し、薬剤感受性結果に基づき感受性を有する薬剤を使用して治療を行ったが、呼受付：2013 年   9 月   9 日受理：2013 年 12 月 20 日

吸器疾患の再発が繰り返し認められ、治療件数－ 17 －

家畜感染症学会誌
3 巻 1 号 2014

パスツレラとマンヘミアの農場内伝播様式の減少は認められなかった。
これらの結果から、会社）の投与を行っていた。

当該農場 BRDC 対策を行うために 2 つの問題

2009 年度から事前に行った薬剤感受性試験（拡点が挙げられた。1 つ目は、呼吸器病の再発を散法）の結果では、農場より分離された Pasteu-

繰り返す症例では常に同種細菌が分離され、薬rella multocida（P. multocida）、と Mannheimia

剤耐性菌が出現している可能性が疑われた。2haemolytica（M. haemolytica） は 共 に ス ト レ

つ目は、原因菌の伝播経路が不明であり、呼吸プトマイシンの感受性が低く、その他の薬剤は器病の原因菌が外部からの導入牛の保菌株より感受性を有していることが確認された。そのた農場内に拡散しているのか、あるいは農場内にめ、農場における治療にはストレプトマイシン常在する株が導入牛に伝播しているのか把握でを使用しないよう、診療を担当する獣医師間できず、感染に対する有効な予防法を構築するこ取り決めを行った。Fig. 1 に薬剤感受性試験結とが困難であった。以上のことより、分離菌株果に基づき治療した 2011 年度における、導入の識別が必要であると考え、M. haemolytica

後 90 日間の呼吸器病治療回数を示した。病傷について調査の報告がある PFGE を用いた分件数は導入後 2 週間から 3 週間をピークに発症

子疫学調査方法［5］に注目し、肥育農場におが多くみられ、その後は徐々に減少していく傾

ける導入直後から導入 2 ヶ月後までの個体別の向に変化が認められなかった。感受性を有する保菌状況とその動態について調査を行った。

薬剤による治療を行っても、呼吸器疾患の発症パターンに大きな変化が認められず、導入牛管［材料と方法］

理舎内で繰り返し呼吸器疾患を発症しているこ①農場の概要とが示された。

調査を行った農場は、約 1,000 頭の牛を飼養する黒毛和種肥育農場で、導入は管内の家畜市②調査の概要場より、生後 8～11 ヶ月齢の去勢および雌牛を調査 1

月に一回 40～60 頭購入していた。導入牛管理

導入牛管理舎内における保菌状況を把握する舎 1 棟と仕上げ舎 4 棟を有しており、導入牛管目的で、農場内における P. multocida および M.

理舎は導入後 3～4 ヶ月間使用され、1 群 6 頭haemolytica の分離状況および分離株の調査を（25 m ）で飼育し、それ以降は仕上げ舎にて 1実施した。供試牛は 2010 年 8 月（導入後 3 ヶ月）、群 2 頭で飼育していた。BRDC 対策として、導2010 年 9 月（導入後 2 ヶ月）、2010 年 10 月（導入 時 に Mannheimia haemolytica1 型 感 染 症 不入後 1 ヶ月）に導入された牛 36 頭（各導入月

活化ワクチンの接種、およびアモキシシリン（ア12 頭ずつ）の鼻腔スワブを 2010 年 11 月に一モスタック LA 注、Meiji Seika ファルマ株式斉採取し、外部検査機関において P. multocida

2Figure 1 The number of cases of respiratory disease during 90 days after introduction for 2011－ 18 －The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.3 No.1 2014

INTRA FARM SPREAD OF PASTEURELLA AND MANNHEIMIAおよび M. haemolytica の分離および同定を実［結施した。

果］

調査 1：農場内株調査の分離状況
P. multocida は導入後 1 ヶ月の牛では 8 頭

調査 2間 隔 を あ け た 2 期 間 に お け る 導 入 牛 の P.

（67％）、2 ヶ月の牛では 5 頭（42％）、3 ヶ月のmultocida および M. haemolytica 保菌状況を把牛では 7 頭（58％）より分離され、M. haemo-

握する目的で、継続的な病原性細菌の種類およlytica は 各 時 期 に お い て そ れ ぞ れ 1 頭（8 ％）び 分 離 株 の 調 査 を 実 施 し た。 供 試 牛 と し てずつ分離された（Table 1）。両菌種が同時に分

2010 年 11 月に導入した牛 10 頭と、2011 年 7離された個体は、導入後 1 ヶ月の 1 頭（8％）

月に導入した牛 20 頭に対して調査を行い、導のみであった。

入直後、導入 1 ヶ月後、導入 2 ヶ月後に鼻腔スワブを採取して、P. multocida および M. hae-

調査 2：導入牛における保菌および追跡調査のmolytica の分離および同定を実施した。

分離状況
P. multocida は導入時に 7 頭より分離され、導入 1 ヶ月後には 13 頭、2 ヶ月後には 16 頭よ調査 3
調査 2 で用いた牛の導入後 90 日間の呼吸器り分離された（Table 2）。一方、M. haemolyt-病発症の有無および、保菌状況について調査を

ica は導入時に 3 頭より分離され、導入 1 ヶ月実施した（Table 1）。

後には 8 頭、2 ヶ月後には 12 頭より分離された。
両菌種が同時に分離された個体は導入時 1 頭、調査 4

導入 1 ヶ月後に 2 頭、導入 2 ヶ月後に 6 頭と増パルスフィールド電気泳動（PFGE）加した。

調査 1 および 2 で分離された P. multocida56 株、および M. haemolytica 26 株について、パルスフィールドゲル電気泳動法により PFGE

調査 3：導入牛保菌および追跡調査を行った供型の分類を行った。PFGE は Hotchkiss ら［6］

試牛の呼吸器病治療の有無の方法に従い、制限酵素 Apa Ⅰ、泳動条件 22

導入後 90 日間の呼吸器病における治療の有時間、パルスタイム 1～30 秒の条件で実施した。

無を調査した結果（Table 3）、2010 年 11 月に導入した牛においては、10 頭の供試牛に対し 5頭において治療経過があり、M. haemolytica 5株、P. multocida 3 株が分離された。導入後 90

Table 1 Change of P. Multocida and M. Haemolytica isolation in Research 1
検査頭数

導入 1 ヶ月後

導入 2 ヶ月後

導入 3 ヶ月後

12 頭

12 頭

12 頭

P. Multocida のみ分離

8頭

5頭

7頭

M. Haemolytica のみ分離

1頭

1頭

1頭

両菌分離

1頭

0頭

0頭

分離なし

4頭

6頭

4頭

Table 2 Change of P. Multocida and M. Haemolytica isolation in Research 2
導入直後

導入 1 ヶ月後

導入 2 ヶ月後

検査頭数

30 頭

30 頭

30 頭

P. Multocida のみ分離

7頭

13 頭

16 頭

M. Haemolytica のみ分離

3頭

8頭

12 頭

両菌分離

1頭

2頭

6頭

分離なし

21 頭

11 頭

8頭

－ 19 －家畜感染症学会誌
3 巻 1 号 2014

パスツレラとマンヘミアの農場内伝播様式Table 3 Isolation of P. Multocida and M. Haemolytica depend on treatment
分離頭数n＝30
TOTAL
治療あり

13TOTAL

治療なし

17

導入直後

導入 1 ヶ月後

導入 2 ヶ月後

菌種

3910M. haemolytica

2＊4＊

7＊

P. multocida

2＊6＊

6＊

菌種

61012M. haemolytica

14＊

5＊

P. multocida

57＊10 ＊＊ P. Multocida と M. Haemolytica の両菌種ともに分離

Table 4 PFGE types and number of cows isolated P. Multocida
PFGE 型

A

B

CEFGI

JKL

株数

18612161131PFGE 型

MNOPQRSTUV

総株数株数

161121111156

日間治療経過の無い牛 5 頭においても M. hae-Table 5 Change of PFGE types of P. Multocida
in Research 2molytica 3 株、P. multocida 4 株が分離された。
2011 年 7 月に導入した牛では、20 頭中 8 頭で呼吸器病に対する治療が行われており、M.
haemolytica 8 株、P. multocida 11 株が分離さ

供試牛

導入直後

導入 1 ヶ月後

導入 2 ヶ月後

1AA

A＊

2GGS3LNN＊れた。導入後 90 日間治療に治療 12 頭において4A

A＊

も、M. haemolytica 7 株、P. multocida 18 株

5ARが分離された。

6AU7B

B＊8BN

調査 4：PFGE 型による分類
P. multocida は全 56 株が 20 種の PFGE 型（A～V）に分けられ、A 型が 18 株（33％）、B、G、N 型が 6 株（11％）、K 型が 3 株（6％）
、E、Q

9ET10N

N＊11FV＊：前月と同一の PFGE 型が分離

型が 2 株（4％）
、残りの 13 種の型は 1 株（2％）
ずつであった（Table 4）。調査 1 では 9 種の型（Table 6）。 調 査 1 で は 3 種 の 型（A、B、C）（A、B、C、E、F、G、I、K、U）が分離された。

が分離され、調査 2 の 2010 年 11 月導入牛から調査 2 の 2010 年 11 月導入牛では、調査 1 と同は同じ PFGE 型が 2 種（A、C）に加え、新たじ PFGE 型が 3 種（A、B、G）に加え、新たに 4 種（D、F、G、H）が分離された。一方、に 1 種（J）が分離された。調査 2 の 2011 年 7

調査 2 の 2011 年 7 月導入牛では、調査 1 と同月導入牛では、調査 1 と同じ PFGE 型が 4 種（A、じ PFGE 型が 1 種（B）に加え、新たに 2 株（I、B、E、G）、に加え、新たに 10 株（L、M、N、J）が分離された。調査 2 において、同一個体

O、P、Q、R、S、T、V）が分離された。調査から継続的に M. haemolytica が分離された牛

2 において、同一個体から継続的に P. multoci-は 5 頭であったが、すべての牛で導入 2 か月後da が分離された牛は 11 頭で、そのうち 5 頭はには 1 種の PFGE 型（D）に収束した（Table 7）。

同じ型が分離された（Table 5）。

［考M. haemolytica は全 26 株が 9 種の PFGE 型

察］（A～J）に分けられ、D 型が 13 株（50％）に、本調査の結果では、調査 1 において導入 1 ヶJ 型は 3 株（11％）、A、C、H 型は 2 株（8％）、月後、2 ヶ月後、3 ヶ月後の牛において、農場

残 り の 4 種 の 型 は 1 株（4 ％） ず つ で あ っ た

内で P. multocida と M. haemolytica が分離さ－ 20 －The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.3 No.1 2014

INTRA FARM SPREAD OF PASTEURELLA AND MANNHEIMIA

Table 6 PFGE types and number of cows isolated M. heamolytica
PFGE 型ABCDFGHIJ

総株数株数212131121326

されることから、導入時に感受性のある抗生物

Table 7 Change of PFGE types of M. heamolityca in Research 2供試牛

導入直後質を投与することは、導入直後の呼吸器病の発導入 1 ヶ月後

導入 2 ヶ月後

IDA

D12B

D13D

D

子型であると考えて同一の抗生剤を用いて治療

14J

Dが行われ、再発が起こると薬剤の効果が認めら

911

H症抑制に効果があると考えられた。
従来、呼吸器病の治療では、一農場内で複数の牛から同一細菌が分離される場合、同じ遺伝れないと判断して薬剤の変更が行われている。
れ、両菌種では伝播感染様式に違いが確認され本調査の結果から、同じ牛の鼻腔から繰り返した。導入直後から 2 ヶ月後まで同一牛を追跡し同種細菌が分離されても、異なる遺伝子型に置た調査 2 では、P. multocida と M. haemolytica

き換わっていることが示され、呼吸器病が再発の分離率はそれぞれ増加したが、調査期間を通した牛についても耐性菌が出現していたわけでして P. multocida の分離率が高かった。これはなく、遺伝子型の異なる同種細菌の新規感染は Cravens らの報告［1］と一致し、肺病変とが起こっている可能性が示唆された。この結果は違って鼻腔スワブからは P. multocida の分から、農場に対し呼吸器病の原因となっている離頻度が高くなると思われた。P. multocida は細菌の動態について報告を行い、細菌感染に対同型が継続分離され、その後分離される頭数もする生体側の抵抗力を高めるとともに、畜舎消増加していたが、PFGE 型別分類の結果から農毒による衛生環境整備の重要性を再認識させら場に持ち込まれた型の伝播拡散も認められず、れた。

同居牛からの伝播拡散も確認されなかった。こ

今回は P. multocida と M. haemolytica の 2のことから P. multocida は病原性が弱く臨床種類の細菌に対して調査を行ったが、農場内で症状を示しにくいため、無治療で継続的に感染はより多くの細菌、ウイルス等の侵入があり、している可能性が示唆された。また、P. mul-

体内では複雑な免疫応答が行われていると考え

tocida は導入後 90 日間に治療を行われなかっられる。本調査と同様に鼻腔スワブを用いた細た牛からも多く分離されたことから、呼吸器の菌検査、薬剤感受性試験により、良好な呼吸器臨床症状の発現には大きな影響はないことが推病対策を行うことが可能な農場が多いと推察さ察された。

れるが、なかなか本調査の農場のように呼吸器

M. haemolytica は、常在菌として鼻腔内に病の減少に至らない農場があることも考えられ長期間検出されやすいと認識していたが、今回る。今回、新たに取り組んだ PFGE 型による型の調査では比較的短い期間で鼻腔から消失し、別判定は、呼吸器病の原因菌の伝播感染様式が伝播経路の特定には至らなかったが、PFGE 型把握できる［2］ことから、BRDC 対策を行う別分類の結果から導入から 2 ヶ月後、同じ型に上で有効な調査手段であることが示唆された。

集約さることが確認された。
これらの結果から、
M. haemolytica は農場内の環境、あるいは保菌牛からの水平感染で農場内伝播が起こってい［引用文献］
1． Cravens, L. R. 2004. 臨床獣医，22（6）：15-192． Hotchkiss, E. J., Hodgson, J. C., and Schmittvan de Leemput, E. 2011. Vet. Microbiol.,151(3-4): 329-335
3． 加藤敏英．2010．家畜診療，57：5-12
4． Katsuda, K., Kohmoto, M. and Kawashima, K.
2003. Epidemiol Infect., 131: 939-946.
5． 高 木 裕 子， 大 野 治．2011． 日 獣 会 誌，64：

ると考えられたが、日齢の経過とともに呼吸器病の発症数は減少して行く傾向にあるため、調査農場において BRDC 対策として行っている
M. haemolytica ワクチンは有効であると考えられた。また、導入時にはすでに P. multocidaと M. haemolytica を保菌している個体が散見－ 21 －家畜感染症学会誌
3 巻 1 号 2014

パスツレラとマンヘミアの農場内伝播様式

215-220
6． 田中秀和，井隼ミキ．2010．家畜診療，57：
471-478
7． 富永 潔．1997．臨床獣医，15（7）：17-22

8． 富永 潔．2004．臨床獣医，22（6）：10-14
9． 塚田祐介，更科進也．2006．家畜診療，53：
415-422

Consideration of intra-farm spread of
Pasteurella multocida and Mannheimia haemolytica
Seiji Nishi1), Tomohiro Kishima1), Masaaki Amatatsu1), Masato Ohkubo1),
Sinzou Fuchiue1), Takuya Higashiyama2) and Takehisa Chuma2)

1) Kagoshima Chubu Prefectural Federation of Agricultural Mutual Aid Associations
2) Joint Faculty of Veterinary Medicine, Kagoshima University[Abstract]
We investigated the farm which develop the respiratory disease caused by intra-farm spread ofPasteurella multocida (P. multocida) and Mannheimia haemolytica (M. haemolytica). Research 1: 12
cows were investigated the carrying status of P. multocida and M. haemolytica from 3 periods (1, 2and 3 months after introduction). Research 2: 30 cows were investigated the carrying situation andgenotypical classification by pulse field gel electrophoresis (PFGE) method about P. multocida and M.
haemolytica on 0, 1 and 2 months after introduction.
P. multocida at 1, 2 and 3 months after introduction were isolated from 8, 5 and 7 cows, respectively. M. haemolytica at 1, 2 and 3 months after introduction were isolated from one cows, respectively.
Results of genotypical classification by PFGE method, P. multocida were divided into 20 types (A～V),
and it was separated continuously. In contrast, M. haemolytica were divided into 9 types (A～J), andit was gathered by a specific type. These results indicated that genotypical classification by PFGE
method is useful for prevention of epidemics measures in the farm.
Key words: Introduction cow, Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida, PFGE method－ 22 －