XF リアルタイム ATP Rate キット
XF リアルタイム ATP Rate キット / XFp リアルタイム ATP Rate キッ
トは、⽣きた細胞のリアルタイムなミトコンドリア呼吸と解糖から ATP産⽣速度を定量することのできるアッセイキットです。
ミトコンドリア呼吸による酸素消費速度 (Oxygen Consumption Rates(OCR))と解糖系による細胞外酸性化速度 (Extra-Cellular Acidiﬁcation
Rates (ECAR)) から、検証済みのアルゴリズムを⽤いて mitoATP産⽣速度、glycoATP産⽣速度、および total ATP産⽣速度を算出することが可能です。解析は、ATP Rate Assay Report Generator※で容易に⾏うことができます。

Bioenergetic proﬁleATP Production Rate (pmol/min)

細胞のATPカイネティクスを評価する 新規のアッセイ

XF Real-Time ATP Rate Assay

25%

65%

Mito50%Total75%

Glyco50%35%※Wave2.4以上対応、Wave2.6以上を推奨利点
・エンドポイント総ATP計測では得られない、細胞機能とエネルギー需要に関するダイナミックな情報を提供
細胞は、ATP産⽣速度の変化を介してATP需要の変化に応答することができ、⽣理学的な条件において⼀定の細胞ATPレベルを維持しています。ATP産⽣のリアルタ
イムな計測により、遺伝⼦改変・化合物暴露等に対して応答したエネルギー代謝と細胞機能の関係を評価可能です (Fig.1)。

・代謝スイッチングと経路依存性の完全な定量

204015301020510XHC

innstroloneon
CFigure 1︓ A549細胞にモネンシン (Monensin; Na+イオノフォア(200μM)) を添加すると、Na+イオン取り込みとそれに続くNA+/K+ATPase 活性の増加のため、XF リアルタイム ATP Rate アッセイで計測される ATP 産⽣速度は25%上昇した。シクロヘキシミド (CHX; 翻訳中のペプチド伸⻑阻害剤 (10μM)) を添加すると、ATP需要の減少のため、ATP産⽣速度は〜20％ 低下した。
同様の条件の細胞において、CellTiter-Glo® Luminescent Cell
Viability Assay (Promega)を⽤いて計測した細胞のATPレベルは⼀定となった。
このことは、ATP産⽣速度の計測がエンドポイントのATP計測と⽐較して、細胞機能と代謝のダイナミクスをモニタリングするためのより優れた⽅法であることを証明する。

MHCnsientroonMConX0l0

ATP Level

ATP Production Rate

50pmol •1x103 cells-1

pmol • min-1 • 1x103 cells-1

代謝スイッチングは、細胞の活動に必要なエネルギー需要を満たすために1つの経路の減少した / 失われた機能を代替経路を通して補償する細胞の能⼒を明らかにします。
XF リアルタイム ATP Rate アッセイは、活性調節因⼦に応答した代謝スイッチングを定量し、経路/燃料依存性を明らかにします (Fig.2)。

Agilent社 White Paper ”Quantifying Cellular ATP Production Rate Using
Agilent Seahorse XF Technology” から引⽤

(裏⾯に続きます)ATP Production Rate
(pmol • min-1 • 1x103 cells-1)

50

mitoATPglycoATP403020100Vehicle Oligomycin UK5099(0.35 μM)

2-DG

UK5099
BPTES
Etomoxir

Figure 2︓ 異なる代謝阻害剤で処理されたMCF7細胞の XF リアルタ
イム ATP Rate アッセイ。Vehicle、0.35μMオリゴマイシン (ミトコンドリアATP合成を部分的に阻害する濃度)、UK5099 (mitochondrialpyruvate transporter 阻害剤 (2μM))、2-DG (解糖阻害剤 (50mM))
または UK5099 (2μM)・エトモキシル (遊離の⻑鎖脂肪酸酸化阻害剤(4μM))・BPTES (glutaminase 阻害剤 (3μM)) の混合物を添加してアッセイを⾏い、mitoATP産⽣速度、glycoATP産⽣速度を算出した。
オリゴマイシン、UK5099、3種類の阻害剤混合物 (UK5099・BPTES・エトモキシル) はミトコンドリアATP産⽣を阻害したが、解糖によるATP産⽣が補償的に増加し、総ATP産⽣における有意な変化はなかった。2-DGの添加については、MCF7が嫌気的解糖を維持することに加えてミトコンドリア呼吸のためのグルコース酸化に⾼度に依存するため、双⽅の経路を阻害した。
Agilent社 White Paper ”Quantifying Cellular ATP Production Rate Using
Agilent Seahorse XF Technology” から引⽤

XF リアルタイム ATP Rate キット (型式︓103592-100）
XFp⽤ リアルタイム ATP Rate キット (型式︓103591-100)
キット構成内容 ・オリゴマイシン (ATP 合成酵素阻害剤 )・ロテノン ( ミトコンドリア複合体Ⅰ阻害剤 ) /アンチマイシン A ( ミトコンドリア複合体Ⅲ阻害剤 )※ロテノンとアンチマイシンAは単⼀のチューブに混合されています

1 回分 (1 プレート分 ) ずつアルミパウチに⼊っています。(1 箱 6 袋⼊ )保存条件︓常温

使⽤期限︓製造より 18 カ⽉※ XF リアルタイム ATP Rate キットは XF96 / XFe24 / XFe96 / XF Proモデルに、XFp⽤ リアルタイム ATP Rate キットは XFp / XF HS Mini モデルに適⽤します。
XF24 および XF24-3 ではご利⽤いただけませんので、ご注⽂の際はご注意ください。
※ XFe96⽤スフェロイドマイクロプレート (型式︓102959-100 / 102978-100)、XF24/XFe24⽤膵島キャプチャマイクロプレート (型式︓101122-100) には対応していません。
※ 計測には別途、Phenol Redを含まず HEPESを含む培地が必要です。
XF ⽤ DMEM培地 (PhenolRed無/pH7.4/HEPES含) / RPMI培地 (PhenolRed無/pH7.4/HEPES含)(型式︓103575-100 または 103576-100、計測する細胞により選択) を推奨します。

ご注⽂情報
型式

製品名

XF対応モデル

103591-100

XFp リアルタイム ATP Rate キット

XFp, XF HS Mini

103592-100

XF リアルタイム ATP Rate キット

XF96, XFe24, XFe96, XF Pro

103575-100

XF⽤ DMEM 培地 (PhenolRed無/pH7.4/HEPES含/500ｍL)

XF96, XFe24, XFe96, XF Pro, XFp, XF HS Mini

103576-100

XF⽤ RPMI 培地 (PhenolRed無/pH7.4/HEPES含/500ｍL)

XF96, XFe24, XFe96, XF Pro, XFp, XF HS Mini

103577-100

XF 1.0 M グルコース溶液 (50mL)

全モデル

103578-100

XF 100 mM ピルビン酸塩溶液 (50mL)

全モデル103579-100

XF 200 mM グルタミン溶液 (50mL)

全モデル

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※ 有効使⽤期限が残り3ヵ⽉以上のものが出荷されます。予めご了承ください。

※本パンフレットに記載の製品は、すべて研究・実験用です。
人・動物の診断あるいは治療等の臨床用途に使用することはできません。
●お問合せ先 (Seahorse XFシリーズ 販売店)：

東京都文京区小石川 1-3-25 小石川大国ビル2F
Phone: [東京] 03-3816-0851 [大阪] 06-6310-8077
http://www.primetech.co.jp/ sales@primetech.co.jp●製造元：rev06 (202403M)