The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.2 No.1 2013

IMMUNEACTIVATION AND DISEASE PREVENTION EFFECT OF
SanSTAGETM FOR CALVES

原著論文

ホルスタイン子牛に対するクマイザサ抽出物（SanSTAGETM）の免疫活性作用および疾病予防効果
松田敬一 1 ＊） 坂井 靖 1） 大塚浩通 2） 村松由記子 3） 原 英郎 3） 八木勇三 4） 原 高明 3）1）宮城県農業共済組合連合会
3）株式会社ユニアル

中央家畜診療センター

4）株式会社ハクジュ・ライフサイエンス＊連絡担当者：松田敬一 〒 989-6251
TEL：0229-28-2581［要2）北里大学獣医学部

宮城県大崎市古川小野字嵐山 26-1

FAX：0229-28-3070

E-mail：matsuda@nosaimiyagi.or.jp

約］

生後 1 ヶ月前後で酪農家から育成農家へ移動される雄のホルスタイン子牛には、下痢や肺炎等の感染症が多発しており、効果的な疾病発生予防対策の確立が求められている。本研究では、人において NK
細胞活性などの免疫活性化作用が認められているクマイザサ抽出物（SanSTAGETM）が、雄のホルス
タイン種子牛に与える免疫活性作用および疾病予防効果を調査した。移動直後の健康な雄のホルスタイ
ン子牛 32 頭のうち、移動当日より SanSTAGETM（30mg/kg/ 日）を 2 週間継続して代用乳に混ぜて給与した 16 頭を投与群、非給与の 16 頭を対照群とした。0（投与前）、7、14 および 21 日に身体測定および採血を行い、血液生化学検査、白血球サブポピュレーションおよびサイトカイン遺伝子反応量の解析を行った。また、調査期間中の疾病発生頭数を調査した。0 日に比べ、体重は投与群で 14 および 21
日に増加、Tcho および TG は対照群で 7、14 および 21 日に減少、CD3 陽性細胞および CD4 陽性細胞数は両群共に 7、14 および 21 日で増加した。投与群では対照群と比較して、7 日の MX2 遺伝子反応量および 21 日の MHCclass Ⅱ陽性 CD14 陰性細胞数が高値を示し、疾病発生頭数は 21 日で少なかった。
結果より、移動直後のホルスタイン子牛に対する SanSTAGETM の 2 週間継続投与は、子牛に対する免疫活性作用があり疾病予防対策として活用可能と示唆された。
キーワード：子牛、SanSTAGETM、疾病予防効果、免疫活性作用［緒や肺炎等の感染症が多発している。育成農家で

言］

半年程度飼育されたのちに移動される、肥育農

牛は移動ストレスにより免疫機能が低下する

家では感染症予防のため、導入時に抗生物質投事が知られており［12，15，27］、繁殖農家か

与［8］およびワクチン接種［10，19］などのら肥育農家への移動が免疫機能の低下を引き起病原体に対する予防対策を行っているが、必ずこし、呼吸器病などの感染症を発症する牛が散しも期待した効果が得られているわけではな

見される［4，25］。特に雄のホルスタイン子牛

く、導入時における牛の免疫状態が問題であるは、生後 1 ヶ月前後の若齢で繁殖農家である酪可能性が示唆されている［8，12］。

農家から家畜市場を経由して育成農家へ移動さ育成期の子牛の免疫機能の低下を防ぐためにれるため、育成農家において導入直後から下痢

は、栄養状態や環境を適切にしてストレスを少なくすることが重要であるが［9］、輸送直後に新しい環境で群飼される雄のホルスタイン子牛

受付：2012 年 6 月 13 日
受理：2012 年 8 月 31 日

において、子牛に与えるストレスを無くすのは－ 17 －

家畜感染症学会誌
2 巻 1 号 2013

子牛に対する SanSTAGETM の免疫活性作用および疾病予防効果

困難である。そのため、子牛の免疫機能を活性

養 状 態 の 指 標 と し て、 総 コ レ ス テ ロ ー ル

化させ、効果的に疾病発生を予防する方法の確（Tcho）、トリグリセリド（TG）および尿素窒立が求められている。

素（BUN） を 測 定 し た。Corti、Tcho、TG お

牛において免疫活性作用のある物質として

よび BUN は酵素法により、ディスクリート方

は、バナナ［16］、活性卵白末［26］、および植式臨床化学自動分析装置（Dade Behring, Inc.,物多糖体［31］などいくつか報告されており、Illinois, U.S.A.）用いて測定した。

経口用インタフェロンα製剤［11］、および天白血球サブポピュレーションの解析：白血球

然ハーブ・マンナンオリゴ糖配合飼料［17］の表面抗原の解析は間接蛍光抗体法を用い、報告

ように様々な疾病予防対策として活用されていされている方法［21］に準じてフローサイトメーるものもある。また、導入子牛の免疫機能の低ター（FACScan, Becton Dickinson, U.S.A.）で下を防ぐ手段として免疫活性作用のあるイソマ

測定・解析した。使用した一次抗体は、抗ウシ

ルトオリゴ糖を投与して疾病を予防する試みがCD3 抗 体（MMIA, VMRD, U.S.A.： 成 熟 総 T

報告されている［18］。

細胞）、抗ウシ CD4 抗体（CACT183B, VMRD,

今回我々は、ヒトにおいて NK 細胞活性など

U.S.A.： ヘ ル パ ー T 細 胞 ）、 抗 ウ シ CD8 抗 体の免疫活性作用が認められているクマイザサ抽（9ACT80C, VMRD, U.S.A.： キ ラ ー T 細 胞 ）、出物［14］の、雄のホルスタイン子牛に対する抗ウシ CD14 抗体（MY-4、ベックマンコール

免疫活性作用の有無を調査し、加えて導入子牛

タ ー ㈱、 東 京： 単 球 ）、 抗 ウ シ CD335 抗 体の疾病予防対策として活用可能かを調査した。

（MCA2365, AbDserotec, U.S.A.：NK 細 胞 ）、
抗 ウ シ WC1-N1 抗 体（B7A1, VMRD, U.S.A.：［材料と方法］γδT 細胞）、および抗ウシ MHC class- Ⅱ抗体（TH14B, VMRD, U.S.A.：単球、B 細胞等の調査対象牛：宮城県内の酪農家から家畜市場
を経由して管内 3 ホルスタイン子牛育成農家に抗原提示細胞）である。算定はこれまでの報告導入されてきた、健康で外見上疾病等の罹患が［21］を参考に、FACScan 解析により得られた認められない雄のホルスタイン子牛 32 頭を用

サイトグラム中の単核球および顆粒球の割合、いた。導入日より 2 週間継続して、クマイザサ

単核球中の各抗原の陽性割合および白血球数か抽出物である SanSTAGE （㈱ハクジュライ

ら下記の計算式をもちいて各細胞の実数値を算

フサイエンス、東京）を 30mg/kg/ 日の用量で

出した。

TM

代用乳に混ぜて給与した 16 頭を投与群（平均

細胞数（× 102/μℓ）＝単核球中の対象細胞

日齢：34.5 ± 1.9 日）、SanSTAGE 非投与で代陽性率×白血球数×［単核球割合 /（単核球割用乳のみを給与した 16 頭（平均日齢：36.5 ± 2.2

合＋顆粒球割合）日）を対照群と群分けした。なお、3 農家共に末梢血単核球におけるサイトカイン遺伝子反同一組合に所属し飼養管理法は同一規格で行っ応量の解析：ヘパリン血 5ml を 5ml の 1/15Mており、代用乳以外に水、乾草、人工乳の給与

リン酸緩衝液（PBS、pH7.4）で希釈し、4.2mlを行っていた。

のリンホセパールⅠ（免疫生物研究所㈱、群馬）
TM

調査方法：導入当日の SanSTAGE

給与前（0に重層した。重層後、1800rpm、30min で遠心日）、給与 7 日後（7 日）、給与 14 日後（14 日）

し、単核球を分離した。分離した単核球を数回および給与終了 7 日後（21 日）に体重、体温、PBS で洗浄後 5 × 106 個 /ml となるように調整

心拍数および呼吸数の身体測定を行った。加えし た。 単 核 球 は 10μg/ml の Phytohemagglu-て頸静脈より採血し、血球数算定、血液生化学

tin-P（PHA：J-OIL MILLS, TOKYO）を加え、検査、末梢血白血球サブポピュレーションおよ

37℃、5％ CO2 湿潤の条件下で 12 時間培養した。

びサイトカイン遺伝子反応量の解析に供した。

培養細胞にクロロホルム（関東化学㈱、東京、

また、調査期間中の肺炎および腸炎の発生状況

日本）0.2ml を加え、激しく混和した。これをを調査した。

氷上に 5 分間静置後、4℃で 15,000rpm、15 分

血液生化学検査：ストレス状態の指標として、

間遠心後した。遠心後、分離した水層を新しい

コルチゾール（Corti）を測定した。また、栄マイクロチューブに移した。これにイソプロパ－ 18 －

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Vol.2 No.1 2013

IMMUNEACTIVATION AND DISEASE PREVENTION EFFECT OF
SanSTAGETM FOR CALVES

Table. 1　Sequence for primers of the genes
Forward Primer(5’-3’)

Reverse Primer(5’-3’)

Product
LengthIL-4

GCCCCAAAGAACACAACTGAGAGATTCCTGTCAAGTCCGC

117

IL-17ATGTCTACAGTGAACTGGAAGGAAC

CCACCAGACTCAGAAGCAGTAG

83

IFN-γ

TCAAATTCCGGTGGATGATCTCTTCTCTTCCGCTTTCTGAGG

108

MX-2

CCTACAAGTGCACAGGTGACAAC

CTCTACGCTTCCACGGGAGA

80

Perfolin

ACTCCGAGGATGCCAACTTCTGTGCACCAGGTGAAAACTGTA

105

TGF-β

TGACCCGCAGAGAGGAAATAGGTTCATGCCGTGAATGGTG

140

Gene of interest

ノール（関東化学㈱）を 0.5ml 加えて激しく混後の採材ポイントとの比較は一元配置分散分析

和 後、 氷 上 に 15 分 間 静 置 し た。 次 に 4 ℃ でをおこない Tukey の方法による多重比較を実

15,000rpm、15 分間遠心後、上清を除去し 70％施した。疾病発生頭数の比較は、Fisher の直エタノール（関東化学㈱）を 1ml 加えリンス接確立計算法を用いた。各統計結果において、した後、15,000rpm、5 分間遠心後、上清を除

危険率 5％未満となったものを有意差ありとし

去 し 風 乾 さ せ た。 こ れ を RNA を 分 解 す る

た。

RNase を 失 活 さ せ た Rnase フ リ ー 水（ultra［結PURE Distilledd water DNase Rnase Free, In-果］

vitrogen Corp）12μl に溶かし、総 RNA 溶液

身体測定：体重は、投与群の 14 および 21 日とした。この溶液から、Nano Drop ND-1000

で 0 日に比べ有意に増加した。また、21 日に分光光度計（エル・エム・エス㈱、東京、日本）は同日の対照群に比べ有意な高値を示した。心を用いてサンプルの RNA 濃度を測定した。抽拍数は、投与群の 7、14 および 21 日、および出した RNA を定法［22］により、cDNA の合対照群の 7 日で 0 日に比べ有意に減少した。呼成（逆転写反応）およびリアルタイム PCR に

吸数は、対照群の 21 日で同日の投与群に比べ供した。リアルタイム PCR においては、表 1

有意な高値を示した。体温には有意な変化は認に 示 し た プ ラ イ マ ー に よ り、IL-4、IL17A、められなかった（表 2）。

INF-γ、MX2 および Perfolin の、また、内部

血液生化学検査：Tcho は、対照群の 7、14標準遺伝子としてβ-actin の反応量を測定しおよび 21 日で 0 日に比べ有意に減少した。TGた。 な お、 リ ア ル タ イ ム PCR は Step One

は、対照群の 7、14 および 21 日で 0 日に比べ

PlusTM Real Time PCR System（Applied

有意に減少した。また、対照群の 7 日で同日のBiosystems, U.S.A.） を 用 い て、 そ れ ぞ れ の投与群に比べ有意な低値を示した。Corti およPCR 産物について融解曲線を求め、結果の定び BUN に有意な変化は認められなかった（表量は、比較 Threshold Cycle（Ct）法を用いて

3）。
白血球サブポピュレーション：成熟総 T 細行った。反応量比較のために用いた⊿⊿ CT 値
は、下記の式を用いて算出した。

胞を示す CD3 陽性細胞数は、両群の 7、14 お⊿ ⊿ CT 値 ＝ PHA 添 加 で の ⊿ CT 値 － Con-

よび 21 日で 0 日に比べ有意に増加した。ヘルtrol の⊿ CT 値

パー T 細胞を示す CD4 陽性細胞数は、両群の⊿ CT 値＝対象遺伝子の CT 値－βactin の CT

7 日、14 日、21 日で 0 日に比べ有意に増加した。

値

B 細胞を示す MHCclass Ⅱ陽性 CD14 陰性細胞数は、投与群の 21 日で同日の対照群に比べ有サイトカイン遺伝子反応量＝ 2（－⊿⊿ CT）

統計方法：統計解析には SPSS 13.0（エス・

意な高値を示した。キラー T 細胞を示す CD8

ピー・エス・エス株式会社、東京）を用いた。

陽性細胞、NK 細胞を示す CD335 陽性細胞数、得られた結果は平均値±標準誤差で示した。同γδ型 T 細胞を示す WC1-N1 陽性細胞数およじ採材ポイントの各群間の比較は、F 検定を用

び単球を示す CD14 陽性細は、両群ともに数にいて等分散とされたものには student の t 検定、有意な変化は認められなかった（表 4）。

非等分散とされたものには Welch の t 検定を

末梢血単核球におけるサイトカイン遺伝子反用いて行った。また、各群における 0 日とその応量：PHA 刺激による末梢血単核球サイトカ－ 19 －

家畜感染症学会誌
2 巻 1 号 2013

子牛に対する SanSTAGETM の免疫活性作用および疾病予防効果

Table. 2　Change of physical examination findings before and after the administration of SanSTAGETM.
0day

7days

14days21daysBody weight（kg）

Treated group
Control group70.7 ± 1.8
73.5 ± 1.2

75.2 ± 2.1
72.7 ± 1.7

78.6 ± 1.9 ＊
74.4 ± 1.9

83.6 ± 1.9 ＊＊※77.4 ± 2.1

Body temperatue（℃）

Treated group
Control group39.2 ± 0.1
39.1 ± 0.1

39.3 ± 0.1
39.4 ± 0.2

39.3 ± 0.2
39.6 ± 0.2

39.4 ± 0.2
39.2 ± 0.2

Pulse rate
（number/min）

Treated group
Control group105.6 ± 5.5
101.4 ± 7.4

80.6 ± 3 ＊＊78.1 ± 5.5 ＊81.6 ± 5.1 ＊＊84.5 ± 5.3

87.5 ± 3.5 ＊86.6 ± 5.1

Respiration rate
（number/min）

Treated group
Control group38.0 ± 2.5
40.3 ± 2.5

37.3 ± 1.4
39.4 ± 3.4

34.9 ± 2.6
34.1 ± 2.7

36.9 ± 3.1 ※47.9 ± 3.8

Data are expressed as the mean ± S.E.
＊
；P ＜ 0.05 vs. 0day., ＊＊；P ＜ 0.01 vs. 0day.
※；P ＜ 0.05 vs. control group.

Table. 3　Change of blood biochemical findings before and after the administration of SanSTAGETM.
0day

7days

14days21daysCorti（μg/dℓ）Treated group
Control group0.78 ± 0.27
0.74 ± 0.11

0.59 ± 0.15
0.50 ± 0.10

0.50 ± 0.11
0.45 ± 0.07

0.56 ± 0.08
0.62 ± 0.11

Tcho
（mg/dℓ）Treated group
Control group111.6 ± 6.9
116.8 ± 10.8

85.1 ± 8.1
79.0 ± 8.5 ＊85.1 ± 6.1
72.9 ± 7.5 ＊＊86.5 ± 7.5
63.3 ± 8 ＊＊TG
（mg/dℓ）Treated group
Control group31.9 ± 4.1
33.1 ± 7.1

17.2 ± 2.5 ※   9.6 ± 0.9 ＊＊22.1 ± 5.9
12.1 ± 1.8 ＊＊17.9 ± 3.8
11.8 ± 1.5 ＊＊BUN（mg/dℓ）Treated group
Control group8.74 ± 0.59
9.05 ± 0.70

10.07 ± 0.94
11.67 ± 1.70

10.45 ± 0.93
11.16 ± 0.61

10.56 ± 2.51
10.50 ± 0.98

Data are expressed as the mean ± S.E.
＊
；P ＜ 0.05 vs. 0 day., ＊＊；P ＜ 0.01 vs. 0day.
※；P ＜ 0.05 vs. control group.

Table. 4　Change of the number of leukocytes before and after the administration of SanSTAGETM.
0day

7days

14days＊＊21days+＊CD3 cell（cells/μℓ）

Treated group
Control group1716.8 ± 104.2
1879.5 ± 200.6

2754.5 ± 210.4
2633.4 ± 186.4 ＊2491.9 ± 151.4
2672.0 ± 175.1 ＊2636.0 ± 233.1 ＊＊2600.7 ± 203.1 ＊CD4+cell（cells/μℓ）

Treated group
Control group531.7 ± 42.5
495.2 ± 51.5

930.2 ± 93.9 ＊＊919.6 ± 69.4 ＊＊808.5 ± 50.4 ＊
811.2 ± 59.0 ＊＊924.6 ± 73.8 ＊＊763.6 ± 68.0 ＊CD8+cell（cells/μℓ）

Treated group
Control group469.7 ± 34.4
494.1 ± 62.8

610.6 ± 43.5
649.2 ± 39.9

583.3 ± 38.0
629.4 ± 39.3

595.5 ± 46.0
583.8 ± 43.5

CD335+cell（cells/μℓ）

Treated group
Control group376.2 ± 38.1
361.6 ± 39.2

403.8 ± 47.5
447.8 ± 49.0

371.5 ± 32.5
344.9 ± 42.9

343.9 ± 35.7
305.3 ± 31.1

WC1-N1+cell（cells/μℓ）

Treated group
Control group774.6 ± 72.6
824.5 ± 92.7

1138.1 ± 105.5
1038.1 ± 102.3

968.6 ± 93.7
970.5 ± 106.4

1140.0 ± 150.3
1037.3 ± 127.2

MHCclassⅡ +CD14-cell（cells/μℓ）

Treated group
Control group

1805.2 ± 157.4
1677.3 ± 153.0

2433.9 ± 164.0
2086.3 ± 200.7

2539.3 ± 290.0
2075.4 ± 142.0

2579.0 ± 232.1 ※1913.8 ± 226.5

CD14+cell（cells/μℓ）

Treated group
Control group1445.1 ± 124.1
1667.2 ± 112.3

1272.6 ± 164.6
1628.2 ± 157.5

1428.9 ± 220.7
1595.3 ± 118.9

1375.0 ± 137.6
1572.7 ± 166.4

Data are expressed as the mean ± S.E.
＊
；P ＜ 0.05 vs. 0 day., ＊＊；P ＜ 0.01 vs. 0 day.
※；P ＜ 0.05 vs. control group.

Table. 5　Change in level of cytokine genes ( ⊿⊿ Ct value) in peripheral blood mononuclear cells before and after theadministration of SanSTAGETM.
0day

7days

14days21daysIL-4 mRNA

Treated group
Control group

512.6 ± 310.6
854.1 ± 286.4

774.8 ± 356.8
280.0 ± 83.7

447.9 ± 113.5
349.3 ± 163.4

473.2 ± 146.2
533.0 ± 216.5

IL-17 mRNA

Treated group
Control group127.8 ± 56.5
321.5 ± 100.3

345.3 ± 75.5
266.2 ± 54.8

196.5 ± 102.2
112.1 ± 35.7

363.8 ± 135.6
260.5 ± 65.3

TGF-β mRNA

Treated group
Control group1.07 ± 0.32
1.66 ± 0.52

1.55 ± 0.33
1.42 ± 0.43

1.75 ± 0.63
1.52 ± 0.32

1.47 ± 0.28
1.08 ± 0.14

IFN-γ mRNA

Treated group
Control group173.1 ± 81.6
113.4 ± 53.2

132.7 ± 49.0
189.3 ± 72.9

51.0 ± 15.5
114.3 ± 51.5

130.6 ± 35.7
176.3 ± 41.8

Perfolin mRNA

Treated group
Control group1.75 ± 0.65
2.00 ± 0.35

2.87 ± 0.81
2.17 ± 0.46

3.04 ± 0.64
1.62 ± 0.36

1.68 ± 0.35
1.23 ± 0.22

MX2 mRNA

Treated group
Control group1.60 ± 0.42
2.04 ± 0.60

3.07 ± 0.63 ※1.43 ± 0.37

2.96 ± 0.58
2.48 ± 0.60

3.03 ± 0.44
2.55 ± 0.48

Data are expressed as the mean±S.E.
※；P ＜ 0.05 vs. control group.

－ 20 －

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Vol.2 No.1 2013

IMMUNEACTIVATION AND DISEASE PREVENTION EFFECT OF
SanSTAGETM FOR CALVES

イン遺伝子反応量は、MX2 遺伝子反応量が、とから、本試験で認められた、投与群における投与群の 7 日目で同日の対照群に比べ有意な高MHC class Ⅱ陽性 CD14 陰性 B 細胞数の高値

値 を 示 し た。IL-4、IL-17、TGF-β、INF-γ おは、対照群の栄養状態悪化による B 細胞の分化・

よび Perfolin 遺伝子反応量に有意な変化は認め

増殖応答の低下および投与群に対する p-Cou-

られなかった（表 5）。

maric acid のリンパ球増殖作用が関与している

疾病発生頭数：7 日では、投与群 3 頭（肺炎と考えられた。B 細胞は病原体の抗原を捕らえ

2 頭、腸炎 1 頭）、対照群 6 頭（肺炎 2 頭、腸Th2 細胞に提示し、Th2 細胞は IL-4 や IL-5 を

炎 4 頭）。14 日では、投与群 4 頭（肺炎 3 頭、産生し、B 細胞を活性化する［3］。活性化した腸炎 1 頭）、対照群 8 頭（肺炎 4 頭、腸炎 4 頭）。

B 細胞は増殖し、抗体産生細胞へと分化して、21 日では、投与群 4 頭（肺炎 2 頭、腸炎 2 頭）、抗体産生が誘導される。産生された抗体は病原

対照群 9 頭（肺炎 4 頭、腸炎 5 頭）に疾病が確

体や毒素を直接中和し、その感染性や毒性を消認され、各採材日における腸炎の発生頭数は、失させる［9］。そのため、B 細胞数が少ないこ

投与群が対照群に比べ少なく、21 日の疾病発とは、免疫機能の低下に繋がる。これらのこと

生頭数は、投与群が対照群に比べ有意に少なから、SanSTAGETM には子牛の免疫機能を高かった。

める作用があるものと示唆された。
［考

牛は輸送ストレスが加わると T 細胞数が低察］下することが報告されている［15］。本試験で本試験の結果より、投与群は対照群に比べて認 め ら れ た 7 日 以 降 の CD3 陽 性 細 胞 お よ び

7 日から 21 日での肺炎および腸炎の発生頭数

CD4 陽性細胞数の増加は、輸送直後にみられ少なく推移し、特に 21 日目での疾病発生頭数た T 細胞数の減少が、その後回復したものとが有意に少なかったことから、導入後のホルス考えられた。

タイン子牛に対する SanSTAGE

TMの投与には、

クマイザサ抽出物である SanSTAGETM は、

子牛における疾病予防効果があるものと考えら

ヒトにおける NK 細胞の活性化［14］、腸内菌TMれた。ヒトに SanSTGEを投与すると腸内細叢の改善［14］、ストレスの緩和［13］、抗炎症菌叢が改善されることが報告されており［14］、作用［28］、モルモットにおける抗アレルギー

本試験において腸炎の発生頭数が投与群で少な作用［6］、およびラットにおけるエンドトキシ

TMの腸

ン誘発炎症性サイトカインの抑制［7］など様々

内細菌叢の改善効果があるものと考えられた。

な生理作用があることが報告されている。本研

この投与群における肺炎や腸炎の発生数減少

究の結果では、投与群において MX2 遺伝子反により、食欲が維持され、栄養状態の指標であ

応量が 7 日から 21 日の間で対照群に比べて高る Tcho や TG が安定推移して、順調な体重のい値で推移し、特に SanSTAGETM の投与期間増加に繋がったものと考えられた。反対に対照中である 7 日に、対照群に比べ有意な高値を示群では、Tcho と TG が減少し、体重の増加もした。7 日では、対照群が他の測定ポイントに認められないことから、疾病の発生により食欲比べて低値を示しており、投与群との有意差をや栄養吸収能力が低下して、栄養状態が悪化し示す要因となっていると考えられる。牛は移動たものと示唆される。

ストレスにより免疫機能が低下し［12，27］、かった要因の一つとして、SanSTAGE

末梢 MHCclass Ⅱ陽性 CD14 陰性 B 細胞数は、

その低下は移動後 7 日程度持続するとの報告

新生子牛で著しく少ないが、成長に伴って増加［15］がある。また、本試験の結果では、対照する［21］。いっぽう低栄養状態にある子牛で群の 7 日で栄養状態の指標である Tcho およびは末梢リンパ球の減少や機能の低下が観察さ

TG が有意に減少していることから、本研究のれ、B 細胞の分化・増殖応答が劣っていること

結 果 で 認 め ら れ た、 対 照 群 に お け る 7 日 のが報告されている［20，23］。また、クマイザ

MX2 遺伝子反応量の低値は、移動ストレスやサから抽出された物質の一つである p-Coumar-

栄養状態の悪化が影響したものと示唆される。

ic acid は、リンパ球の増殖を促進する作用が投与群では、MX2 遺伝子反応量は、7 日で低あることが報告されている［30］。これらのこ下することなく、比較的高い値で推移したこと－ 21 －

家畜感染症学会誌
2 巻 1 号 2013

子牛に対する SanSTAGETM の免疫活性作用および疾病予防効果

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はⅠ型 IFN（IFNα/β）にのみ誘導され、他のサイトカイン因子では誘導されないと報告されている［29］。しかし、IFNαと IFNγが共に作用すると、相乗的に MX2 遺伝子を増加させるという報告もあり［24］、MX2 遺伝子反応
量の増加には、Ⅰ型 IFN のみならず IFNγも関与をしている可能性がある。本試験の結果では、IFNγ遺伝子反応量の増加は認められなかったが、クマイザサから抽出された物質の一つである p-Coumaric acid は、INFγの分泌量を増加させるとの報告があり［2］、本試験で認められた投与群における MX2 遺伝子反応量の増加には、p-Coumaric acid の IFNγ分泌増加作用が関与している可能性がある。今後、Ⅰ型
IFN の遺伝子反応量の測定などの調査が必要と考えられた。MX 蛋白質はウイルスの増殖を阻害することによる抗ウイルス作用を有しており、ウイルス感染初期における生体の抗ウイル
ス状態の確立に関与している［5］。特に MX2
蛋白質は、牛や水牛において高い抗ウイルス活性を有することが報告されており［1］、本試験で認められた、SanSTAGETM 投与による MX2
遺伝子反応量の増加は、子牛の抗ウイルス活性を 高 め た 可 能 性 が 示 唆 さ れ る が、 投 与 群 のMX2 遺伝子反応量増加の程度は微少であるため、今後子牛における MX2 遺伝子反応量と抗ウイルス活性について検討する必要があると考えられた。
本試験の結果より、SanSTAGETM には子牛においても人と同様に免疫活性作用があり、疾病予防対策として活用可能と示唆された。しかし、子牛では SanSTAGETM が作用する免疫細胞やサイトカインがヒトの報告とは異なるため、SanSTAGETM が子牛の免疫機能に及ぼす影響を今後詳細に検討する必要があると考えられた。
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The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.2 No.1 2013

IMMUNEACTIVATION AND DISEASE PREVENTION EFFECT OF
SanSTAGETM FOR CALVES

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家畜感染症学会誌
2 巻 1 号 2013

子牛に対する SanSTAGETM の免疫活性作用および疾病予防効果

Immune Activation Effect and Disease Prevention Effect of Sasa senanensis Extract(SanSTAGETM) for Holstein Calves.
Keiichi MATSUDA1), Yasushi SAKAI1), Hiromichi OHTSUKA2), Yukiko MURAMATSU3),
Hideo HARA3), Yuzo NAKAGAWA-YAGI4), Takaaki HARA3)1) Miyagi Prefecture Federation of Agricultural Mutual Aid Associations Central Veterinary Clinical Center
26-1 Arashiyama, Kono, Furukawa, Osaki, Miyagi 989-6251, Japan
2) School of Veterinary Medicine, Kitasato University 3) UNIAL Co.Ltd 4) Hakuju Life science Co., Ltd.

[Abstract]
Male Holstein calves are transported from the dairy farms to cattle feedlot about one month old. Infectious diseases such as pneumonia and diarrhea are frequently observed after the transport. As aresult, it is required to establish the preventive measures against the spread of those diseases. In thisstudy, we investigated the effect of the extract of Sasa senanensis (SanSTAGETM) administration to
Holstein calves on immune activation and disease prevention. Thirty-two healthy male calves were
evenly divided into two groups. The calves in the treatment group (n=16) were given substitute milkwith SanSTAGETM (30mg/kg/day) for two weeks after transportation. Other calves in the control
group (n=16) were given substitute milk without SanSTAGETM. On Day 0 (before the administration),
Day 7, Day 14, Day 21, physical examination and blood sampling to analyze the blood biochemistry,
leukocyte subpopulation and cytokine DNA response were conducted. The body weight in treatmentgroup increased on Day 14 and Day 21 compared to those in Day 0. Tcho and TG in control group decreased on Day 7, Day 14 and Day 21 compared to those in Day 0. The number of CD3 positive cells
and CD4 positive cells increased on Day 7, Day 14 and Day 21 compared to those in Day 0. The MX2
gene response and number MHCclass Ⅱ + CD14- cells in treatment group were higher than those incontrol groups on Day 21. The number of cases of the disease in treatment group was lower thanthat in control group on Day 21. The results showed that continuous administration of SanSTAGETM
for two weeks immediately after transport has immuneactive effect in Holstein calves, and it might
be effective preventive measures against diseases
Key words: Calves, Disease Prevention Effect, Immune Activation Effect, SanSTAGETM－ 24 －