試験研究用試薬

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（黄色ブドウ球菌用）

Cica Geneus® Staph POT KIT

メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）は医療関連感染の主な原因菌であり、この蔓延防止には菌体間の相同性などを解析し、適切な拡散予防策を講じる必要があります。
藤田医科大学の鈴木匡弘先生により開発されたPCR-based ORF Typing（POT法）は、マルチプレックスPCRを用いて複数の特定遺伝子を同時に増幅し、アガロース電気泳動で検出された増幅バンドパターンを解析し、菌体間の相同性を比較する方法です。
参考文献

1. Suzuki.M et.al. J.Appl.Microbiol. 101(4):938-947 (2006)
2. Suzuki.M et.al. J.Appl.Microbiol. 107(4):1367-1374 (2009)特長■最適化したマルチプレックスPCRなので、約4時間以内で分子疫学解析が可能です。
■パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）のように特殊な装置は不要です。
■解析結果を数値化（POT値）することで、菌体間の相同性を比較できます。

キットの構成（120回分）
個別名称

操作手順
容量試薬Ａ

AptaTaq DNA Master（5×Conc.）＊1

1.0mL ×1本

試薬Ｂ

PCRサプリメント

1.0mL ×1本

試薬Ｃ

プライマーミックスα0.5mL ×1本

試薬Ｄ

プライマーミックスβ0.5mL ×1本

試薬Ｅ

ポジティブコントロール

1.0mL ×1本

試薬Ｆ

6× ローディングバッファー

1.0mL ×1本

*1 AptaTaq DNA Master（5×Conc.）は、Roche Diagnostics K.Kの商品です。

黄色ブドウ球菌をDNA抽出＊2を行い単離する（培養） テンプレートDNAを調製

2種類のマルチプレックスPCR

アガロースゲルバンドパターンの電気泳動（別途準備）
読み取り

POT値の算出

各検体でのPOT値の比較解析*2 シカジーニアス® DNA抽出試薬は別売です。

解析例
表1 検出ORFの種類（ターゲット領域）とPCR増幅産物サイズ
増幅サイズ（bp）

POT No.

Reaction
mixture 1

図1 電気泳動パターンの実例（各n=2）
50 ︓50bpラダーマーカー、P︓ポジティブコントロール
1 ︓ATCC ® 700699（MRSA Mu50）
2 ︓ATCC ® BAA-1556（MRSA USA300）
3 ︓ATCC ® 43300（MRSA）
4 ︓ATCC ® 25923（MSSA）
5 ︓ATCC ® 29213（MSSA）
6,7 ︓集団感染事例1から得られた臨床分離株
8,9 ︓集団感染事例1から得られた臨床分離株

Reaction
mixture 2

POT 係数ターゲット領域
S. aureus positive control

femA

601

POT 1-1

530

64

mecA

POT 1-2

449

32

mec gene complex class B

POT 1-3355

16SCCmec type Ⅱa specific

POT 2-1304128

Tn554

POT 2-227164プロファージ

POT 2-3

228

32

プロファージPOT 2-4

197

16

プロファージPOT 2-5

161

8

プロファージPOT 2-6

131

4

プロファージPOT 2-7

106

2

プロファージPOT 2-8

81

1

Genomic Island

femA

601

POT 1-4477

8

cassette chromosome recombinase A2

POT 1-5388

4遺伝的バックグラウンド

POT 1-63202遺伝的バックグラウンド

POT 1-7273

1

mec gene complex class A

POT 3-1

243

64

プロファージPOT 3-2

197

32

プロファージPOT 3-3

171

16

プロファージPOT 3-4

140

8

プロファージPOT 3-5

115

4

プロファージPOT 3-695

2

プロファージPOT 3-7

78

1

プロファージS. aureus positive control①2つのマルチプレックスPCRの電気泳動結果（図１）からバンドパターン（表１）を読み取ります。
②この電気泳動のバンドの有無の結果を用いて、POT値解析用の計算シートに二進法で入力し、３つのカテゴリーのPOT値を算出します。
ⅰ femAが陽性の場合、その検体は黄色ブドウ球菌（S. aureus）であることが確認できます。また、MRSAの場合、POT 1の値の合計は64以上になります。
ⅱ 検体間のPOT値を比較することで、菌体間の相同性を客観的に推測出来ます。
ⅲ 集団感染から得られた菌体はPOT 1 ～ 3 のPOT値が全て同一になります。
（例︓図１の６と７、８と９）

解析結果
図1におけるサンプル番号

カテゴリー

123456789

POT193106956493937373

POT2255771361658190190156

156

POT3961136635112103103120120● POT値解析用の計算シートは弊社製品ホームページに掲載しております。

製品情報
製品名

包シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（黄色ブドウ球菌用）
シカジーニアス® DNA抽出試薬

装

120回分
30回分
120回分

保存

冷凍（-25～-20 ℃）
冷蔵（2 ℃～8 ℃）

希望価格（円）

製品番号87,00040,00024,00008180-96
08180-9708178-96

その他POTキットシリーズ
製品名

包装 希望価格（円） 製品番号

製品名

包装 希望価格（円） 製品番号

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（緑膿菌用） 50回分

67,00008187-96

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（C. ディフィシル用） 30回分

47,50008106-97

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（アシネトバクター属菌用） 30回分

44,00008062-96

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（E. クロアカ complex用） 30回分

47,50008376-97

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（大腸菌用） 30回分

44,00008362-97★上記の他に必要な試薬・機材などがございますので、弊社営業所もしくは販売店へお問合せください。
●藤田医科大学 鈴木匡弘先生のご厚意により、電気泳動パターンの実例データをご提供いただきました。
●本キットは愛知県から特許許諾を得て、製造販売しております。他メーカーの商品に関するライセンスについては、各メーカーにご確認ください。

● 本記載の製品は､試薬 ( 試験､研究用として用いる化学薬品 ) としての用途にご利用ください｡ ● 本記載価格に､消費税等は含まれておりません｡● 本記載の製品情報は予告なく変更する場合があります。 最新情報は､弊社ホームページ｢Cica-Web｣をご確認ください。

試薬事業本部〒103-0022

東京都中央区日本橋室町2丁目2番1号

TEL：03-6214-1090
HP：https://www.kanto.co.jp

BGa-01（202303）