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PRODUCT INFORMATION

DynaMarker®
商品名 :Prestain Marker for RNA High
商品コード : DM260
分子量範囲 : 200 - 8,000 bases
内容量 : 180 µl (30 回分)
保存温度 : -80 ℃

特徴 :本製品は一本鎖 RNA 用の着色済み分子量マーカーで、青または紫色色素を修飾した 6 つの核酸バンド（見かけ分子量は 200、500、1,000、2,000、4,000、8,000 bases）から成っています。変性
アガロースゲル電気泳動のモニタリングやメンブレンへのトランスファー効率の確認に適しています。
本製品は変性アガロースゲル電気泳動において DynaMarker® RNA
High (商品コード DM160)と同じ移動度になるように調製されています（正確性＞90%。 表 1 および図 2 をご参照ください）。
本マーカーはそのまま使用できる、ready-to-use 製品です。加熱処理や変性剤の添加は必要ありません。

保存バッファー組成 :40 mM MOPS (pH 7.0), 10 mM AcONa, 1 mM EDTA・2Na,10 % Glycerol
品質検定 :
本マーカーを 37℃、24 時間インキュベートし、2.2 M ホルムアル
デヒド含有 1%アガロースゲル電気泳動にて分解が見られないことを確認しております。

base
8,000－
4,000－
2,000－
1,000－
500－
200－

DynaMarker®

Prestain Marker for RNA High

図 1. 本製品の電気泳動象 (6 µl)
1 % agarose – 2.2 M formaldehyde gel / 1 × MOPS

使用量 :
ウエル幅
4～6 mm>6 mm

使用量
4～6 µl>6 µl

注意 :・ 電気泳動による、より精度の高い分子量の概算には天然 RNA マーカーの DynaMarker® RNA High(code # DM160) もしくは DynaMarker® RNA High for Easy Electrophoresis (code # DM170)をご使用ください。
・ 本製品の見かけ分子量は 0.8～1.5%ホルムアルデヒド変性アガロースゲルにおいてよく一致するように最適化されています（表 1 を参照）。
・ 本マーカーはホルムアルデヒド変性アガロースゲル専用です。変性アクリルアミドゲルではご使用いただけません。
・ 凍結融解は避けてください。
-1ver.1.0

PRODUCT INFORMATION

(1)

(2)

base

RNA Highconcentration of agarose
8000 base
4000
2000
1000
500
200

0.8 %
96.5
98.5
104.4
103.4
106.4
102.7

1.0 %
94.8
100.0
102.8
103.2
102.0
100.0

1.5 %
90.4
92.2
101.6
101.4
103.1
108.7

base

8,000

8,000
4,000

4,000

2,000

2,000

(1)

(2)

1,000

1,000500500200200

1 % agarose

表 1: 本製品見かけ分子量の DynaMarker® RNA

図 2:DynaMarker®

1.5％ agarose

RNA High (1)と本製品(2)の電気泳動象

High (DM160)との一致率

推奨使用方法 :本マーカーはホルムアルデヒド変性アガロースゲル電気泳動のモニタリングやノーザンブロッティング時のメンブレンへの転写効率の確認に適しています。以下に一例を示します。
・電気泳動およびメンブレンへのトランスファー
1) 2.2M ホルムアルデヒド含有 0.8%アガロースゲルの調製
Agarose10 × MOPS
deionized formaldehyde
RNase free water
total

0.8 g
10 ml
18 ml
72 ml
100 mlRNase free water にアガロースを加え、電子レンジで加熱し融解させます。55℃程度まで冷えたら10×MOPS を 10 ml、ホルムアルデヒドを 18 ml 加えよく撹拌します。ドラフト内でアガロースゲル作製プレートに流し込みコームをセットします。ゲルが固まったらコームを抜き、ゲルを電気泳動槽にセットした後、1×MOPS バッファーをゲルが十分に浸るまで注ぎます。
2) 電気泳動
ご使用前に本製品が完全に融解していることを確認してください。
変性処理したお手持ちの RNA サンプルおよび本製品を 6µl アプライ(ウエル幅 4～6mm の場合)します。
そして 1×MOPS 泳動バッファーにて 4～5 V/cm の電圧で泳動を行います。

-2ver.1.0

PRODUCT INFORMATION

3) ポジティブチャージナイロンメンブレンへの転写
3-1) RNase free 処理をしたトレーにゲルを移し、脱イオン水にて数回リンスします（ホルムアルデヒドの除去を目的として）。
3-2) ゲル容積に対して 10 倍容量の 3 M NaCl / 10 mM NaOH （トランスファーバッファー）に 30 分間浸します。
3-3) ポジティブチャージナイロンメンブレンおよび複数枚のブロッティングペーパーをアクリルアミドゲ
ルよりも少し大きめに用意し、10×SSC に 5 分以上浸します。
3-4) キャピラリー方式の転写装置(図 3)において、サポートの土台をトレーに置き、十分なトランスファーバッファーを注ぎます。
3-5) サポート中央にブロッティングペーパー、ゲルの順に置きます。（ゲルは裏返して置きます）
3-6) ゲルの上にナイロンメンブレンを重ねます。その際ゲルとメンブレンの間に気泡が入らないように注意してください。
3-7) ナイロンメンブレンの上に浸したブロッティングペーパーを気泡が入らないように重ねます。
3-8) 適当な大きさにカットしたペーパータオルをブロッティングペーパーの上に 5～8cm の高さになるように重ねます。
3-9) ペーパータオルの上にガラスプレートを載せ、その上に適当な重し（400g 程度）を載せます。
3-10) 1 時間ほどトランスファーします。
3-11) メンブレンを 6×SSC で 5 分間リンスします。
3-12) 6×バッファー中からメンブレンを取り出し、ブロッティングペーパー上で過剰のバッファーを除去後、数分間乾燥します。
3-13) UV クロスリンカーで RNA をメンブレンに固定します。
3-14) マーカーレーンを切り取ります。
3-15) ノーザンハイブリダイゼーション実験を行います。

重しガラスプレート
ペーパータオルナイロンメンブレン
ゲル

ブロッティングペーパー

トランスファーバッファー
サポート

図 3: キャピラリートランスファー模式図-3ver.1.0

PRODUCT INFORMATION

(1)

(2)

Transfer

BPB

BPB- membrane -- agarose gel
図 4:

左: 本製品 (1) and RNA サンプル (2) をホルムアルデヒド変性 0.8 % アガロースゲルにて電気泳動した結果
右: メンブレンへトランスファーした結果

参考文献 :
・ Joseph Sambrook, and David W. Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., ColdSpring Harbor Laboratory Press.
・ Frederick M. Ausubel, Roger Brent, Robert E. Kingston, David D. Moore, J. G. Seidman, John A. Smith,and Kevin Struhl (1994－) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc.

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