2020 年 8 月 31 日

お知らせ
下記の通り、規格の改定がありましたので変更いたします。
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14 ページ

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変更後

9. 分 子 生 物 学 用

純度 99.7% 以上

純度 99.5% 以上

Good’s Buffer
品名：PIPES
規格
以上

販売中止のお知らせ
お客様各位

いつも小社製品をご愛顧頂きありがとうございます。
2020 年 2 月 1 日より下記製品は販売中止となりますため、本冊子に記載の製品に関してご注意頂きますようよろしくお願い申し上げます。
販売中止品目
製品コード

製品名

容量

A005

Agarose-III

25

g

A005

Agarose-III

100

g

E262

-Cellstain- EB

1

mg

E272

-Cellstain- EB solution

1

ml

GB73

ACES 分子生物学用

20

g

GB74

ADA 分子生物学用

20

g

GB75

BES 分子生物学用

20

g

GB76

Bicine 分子生物学用

20

g

GB77

Bis-Tris 分子生物学用

20

g

GB78

CAPS 分子生物学用

20

g

GB79

CHES 分子生物学用

20

g

GB82

TAPS 分子生物学用

20

g

GB83

TES 分子生物学用

20

g

GB84

Tricine 分子生物学用

20

g

GK03

Get pureDNA Kit-Cell, Tissue

200

samples

MB02

10x MESA

1

l

MB06

20x SSC

500

ml

MB07

20x SSPE

500ml

ご不明点等がございましたら、小社カスタマーサポートまでお問い合わせ下さい。フリーダイヤル 0120-489548

分子生物学関連試薬
分子生物学関連試薬

分子生物学関連試薬
Molecular Biology
http://www.dojindo.co.jp

http://www.dojindo.co.jp

分子生物学関連試薬
1. 遺伝子導入試薬
HilyMax       .........1

2. タンパク質定量キット          ........3-Proteostain-

Protein Quantification Kit - Rapid-Proteostain-

Protein Quantification Kit - Wide Range

3. 損傷遺伝子検出用試薬          ........5-Nucleostain-

DNA Damage Quantification Kit- AP site Counting ARP( Aldehyde Reactive Probe)

4. 核酸精製・抽出キット          ........7
Get pureDNA Kit - Agarose
Get pureDNA Kit - Cell, Tissue
Get pureRNA Kit

5. 核酸機能解析用試薬            .......10BABE
FeBABE

6. 核染色用試薬                     ........11-Cellstain-® AO-Cellstain-® EB-Cellstain-® PI-Cellstain-® DAPI-Cellstain-® Hoechst 33258-Cellstain-® Hoechst 33342

7. 分子生物学用 Agarose
Agarose 900.........13

Agarose 1500

8. 分子生物学用 Buffer
10x MESA.........13

10x TBE
10x TE
20x SSC
20x SSPE
1M Tris-HCl
0.5M EDTA

分子生物学用 Good's Buffer
ACES
ADA
BES
BicineBis-Tris
CAPS
CHES
EPPS
HEPES
MES
MOPS
PIPES
TAPS
TES
Tricine..........14

分子生物学関連試薬
分子生物学関連試薬

1. 遺伝子導入試薬
遺伝子導入試薬ー効率よく安価に遺伝子導入ー

1 ml ；同仁品コード (H357)

HilyMax

細胞内へ遺伝子導入する方法の 1 つにリポフェクション法がある。本法による遺伝子導入は、簡便な操作で高い導入率を実現でき、更には低コストであるため、多岐にわたる動物細胞への遺伝子導入法として汎用されている。HilyMax( ハイリーマックス ) は、陽イオ
ン性合成脂質を使用したリポフェクション法による遺伝子導入試薬である ( 特許出願 :PCT/JP2006/304514)。増殖培地中の血清の影響を殆ど受けないため、遺伝子導入時の面倒な培地交換をする必要がなく、多岐にわたる細胞種へ高効率に遺伝子導入することができる( 表 1-1 に HilyMax による DNA 導入実績を示す )。

GFP 発現 pDNA の導入例

(1) 試薬調製

HilyMax を用いて、CHO 細胞へ DNA(hsGFP) を導入し、発現した hsGFP を蛍光顕微鏡にて観察する方法を紹介する。
(24 ウェルプレート使用 )Lipoform Buffer 1.0 ml を HilyMax Reagent のチューブに添加し、ボルテックスにより 30 秒間撹拌し、HilyMax 溶液 ( リポソーム )を調製する。撹拌後は、チューブ底部のフィルム状の固体が消失したことを確認する。不溶物が残存している場合は、再度完全に溶解するまでボルテックスにより撹拌を行う。

1. 細胞の準備

遺伝子導入時に細胞密度が 80% になるよう調整した CHO
細胞懸濁液 (8 × 104 cells/well) をプレートへ播種し、CO2 インキュベーターにて一晩培養する。

(2) キット以外に必要なもの

2. DNA-HilyMax 複合体の調製
3. 細胞への添加

無血清培地、DNA、増殖培地、細胞、炭酸ガスインキュベーター、
クリーンベンチ、オートクレーブ、マイクロプレート、マイクロピペッター、マイクロチューブ

インキュベーション後の DNA-HilyMax 複合体を 1. で準備した CHO 細胞へ添加し、プレートを穏やかに振とうする。

4. 細胞の培養

CO2 インキュベーターにて細胞を 24 時間培養する。

5. 遺伝子導入評価

GFP 発現活性を蛍光顕微鏡下で観察する。

図 1-1 hsGFP を発現させた CHO 細胞の蛍光顕微鏡像（B 励起）

表 1-1

HilyMax によるプラスミド DNA 導入実績

* 最新情報はホームページをご覧ください。

動物細胞
細胞名

由来

細胞名

由来

細胞名

ヒト

子宮頸癌

PA-1

ヒト

テラトカルシノーマ

HeLa S3

ヒト

子宮頸癌

PC3

ヒト

前立腺癌

腎臓

HepG2

ヒト

肝臓・胆嚢

SH-SY5Y

ヒト

神経芽細胞腫

イヌ

腎臓

HFL-1

ヒト

胎児

T98G

ヒト

CHO

チャイニーズハムスター

脳グリオ
  プラストーマ

卵巣

HT29

ヒト

結腸癌

UtSMC

ヒト

子宮平滑筋

CEF

ニワトリ

胚

Human hepatic
Stellate

ヒト肝臓

3T3-L1

マウス

胚

COV

ニワトリ

卵巣

JHH-4

ヒト

肝臓、胆嚢癌

C2C12

マウス

骨芽

DT40

ニワトリ

血球・リンパ系

Jurkatヒト白血病性 T 細胞

L929

マウス

繊維芽

293T

ヒト

胎児腎臓

K562

ヒト

血球・リンパ系

MC3T3-E1

マウス

骨芽細胞様

A172

ヒト

グリア芽腫

KINGS1

ヒト

グリア細胞

Neuro2a

マウス

神経系

A549

ヒト

肺上皮癌

LNCap

ヒト

前立腺癌

NIH3T3

マウス

胎仔

AGS

ヒト

胃上皮

MCAS

ヒト

卵巣癌

L6

ラット

筋組織

Caco2

ヒト

腸管上皮

MCF-7

ヒト

哺乳器

RBL2H3

ラット

血球・リンパ系

DU145

ヒト

前立腺癌細胞Mesenchymal cell

ヒト

間葉系幹

VSMC

ラット

血管平滑筋

H1395

ヒト

肺癌

MG63

ヒト

骨肉腫

昆虫細胞

HaCaT

ヒト

皮膚角化細胞

MKN

ヒト

胃

HC

ヒト

胎児 肝臓

NB1

ヒト

神経芽細胞腫BMN

カイコ

HEK293ヒト

胎児 腎臓

NCI-H295R

ヒト

副腎腫瘍

Sf9

ヤトウガ

腎臓

HeLa

腎臓

Vero

アフリカ
ミドリザル
アフリカ
ミドリザル
アフリカ
ミドリザル

MDCK

COS-1
COS-7

1

肺

由来

細胞名

由来
卵巣

http://www.dojindo.co.jp●シグナル伝達系研究における遺伝子導入試薬の影響について
外部からの刺激が遺伝子を発現させる際のシグナル伝達メカニ
ズムの研究において、IL-8 によって遺伝子発現するように設計されたルシフェラーゼ発現プラスミドを遺伝子導入試薬を用いてA549 細胞に入れた場合、遺伝子導入試薬によってどのような違いがでてくるかを示すデータがある（表 1-2 参照）。

表 1-2

シグナル応答の比較

ラスミドを導入した場合、何らかの理由で IL-8 が産生されプロモーターが刺激を受け、ルシフェラーゼタンパクが発現したものと考えられる。
一方、HilyMax でプラスミドを導入した場合は、IL-8 の発現は殆ど見られず、TNF- α添加によって IL-8 が発現され、それがIL-8 プロモーターを介してルシフェラーゼタンパク発現を促した
結果として、発光量が大きく変化したものと考えられる。更に、
TNF- α刺激による IL-8 発現量とルシフェラーゼタンパク発現量1)を比較すると、互いに相関した結果が得られた 。
以上のことから、他社の遺伝子導入試薬の構成成分には、細胞のシグナル伝達に影響を与えるものが含まれている可能性がある。さらに、GFP を安定的に発現する HT1080 細胞へ、他社の導入試薬のみを添加すると、試薬濃度依存的に GFP 発現量が増2)加することが報告されており、上記の結果を支持している 。
したがって、他社の導入試薬に比べ、HilyMax はシグナル伝達に影響を与えにくいと考えられ、シグナル伝達が関わる研究に用いる際の遺伝子導入試薬として有用である。

TNF- α、刺激なし TNF- α添加 Dexamethasone
HilyMax
他社品

添加Luciferase 活性 (RLU)

835

シグナル応答Luciferase 活性 (RLU)

10313

12053

シグナル応答1753

12.4 倍↑

83% ↓1.7 倍↑

41% ↓

20890

12334

( データ提供 : 熊本大学大学院 生命科学研究部
薬物活性学分野 礒濱洋一郎先生 )HilyMax と他社品を比較した場合、IL-8 プロモーター領域を持つルシフェラーゼ発現プラスミドを他社の遺伝子導入試薬で導入した細胞では、TNF- αによる細胞刺激をしない場合でもルシフェラーゼ活性を示しており、刺激前後での発光強度比は 1.7 倍程度でしかないのに対し、HilyMax でプラスミドを導入した細胞では、刺激前のルシフェラーゼ活性は低く、TNF- α添加によって刺激されることによりルシフェラーゼが発現し、発光量比は約 12 倍以上となった。このことから、他社の遺伝子導入試薬を用いてプ

1) H. Takei, Y. Baba, A. Hisatsune, H. Katsuki, T. Miyata, K. Yokomizo, and
Y. Isohama, Glycyrrhizin Inhibits Interleukin-8 Production and Nuclear
Factor–κ B Activity in Lung Epithelial Cells, but Not Through Glucocorticoid Receptors, J Pharmacol Sci., 2008, 106, 460-468.
2) T. Tagami, K. Hirose, J. M. Barichello, T. Ishida, and H. Kiwada, Global
Gene Expression Profiling in Cultured Cells Is Strongly Influenced byTreatment with siRNA–Cationic Liposome Complexes, Pharmaceutical
Research, 2008, 25, 11.

CHO細胞用細胞用

HilyMax

最適遺伝子導入条件

Transfection Reagent

HilyMax

CHO
24
2

HilyMax

24
1 CHO
80%
30 l
1 g
3.0-5.0 l
15 minDNA
HilyMax

DNA-HilyMax

24
CHO
80%
24 hr

CO2

0.5 ml 24

DNA-HilyMax
DNA 1.0 g/well
HilyMax 3.0-5.0 l/well
15
CHO
DNA-HilyMax
CO2
18-48 hr

30 l/well

2

96 -well
24 -well
12 -well
6 -well
35 -mm
60 -mm
100 -mm

0.3 cm2
1.9 cm2
3.8 cm2
9.2 cm2
8.0 cm2
21.0 cm2
58.0 cm2

10 l
30 l
60 l
120 l120 l300 l900 l0.1 ml
0.5 ml
1.0 ml2.0 ml2.0 ml
5.0 ml15.0 ml

DNA-HilyMax
DNA
0.2 g1.0 g2.0 g
4.0 g
4.0 g10.0 g30.0 g

HilyMax
0.6-1.0 l
3.0-5.0 l
6.0-10.0 l12.0-20.0 l12.0-20.0 l30.0-50.0 l90.0-150.0 lLuciferase activity (RLU)

HilyMax
8000007000006000005000004000003000002000001000000

Cell Density 50%

Cell Density 80%

1. DNA(g):HilyMax(l)=1:6-1:8
2.
DNA
DNA(g):HilyMax(l)=1:3-1:5

1.
1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 3.0 4.5 6.0 7.5 9.0 10.5
DNA 0.5 g

DNA 1.0 g

HilyMax volume (l)

1. HilyMax Reagent

1

105 cells/well

80% 0.8

DNA
DNA(g):HilyMax(l)=1:3-1:7

DNA 1.5 g

24
CHO
pGL3 control
vector (Promega) HilyMax
24
Luciferase
HilyMax
CHO
10%FBS Gibco
Non-Essential Amino Acids Gibco
DMEM
Gibco
2
50% 0.5

1.5-2.0

2.
3.

。
ります
してお
た
い
載
ルを掲
l
ロトコ
い。
プ
ax.htmさ
毎だ
x/hilym
覧く
細胞種
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ご
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j/newp
是非そホーム
tsnewsah/w
po.jjindo.cww.do
http://w

105 cells/wellIssued March 18, 20072

分子生物学関連試薬
分子生物学関連試薬

2. タンパク質定量キット
試料中のタンパクの定量法としてこれまで様々な方法が開発され、また実用化されている。例えばタンパク質濃度を直接吸光度から求める吸光光度法、Biuret 試薬を用いた Biuret 法、フェノール試薬と Biuret 法を組み合わせた Lowry 法、1 級アミンと反応する蛍光試薬を用いた蛍光法、色素のメタクロマジーを利用した Bradford 法などが知られている。Bradford 法は、酸性溶液中、トリフェニルメ
タン系青色色素の Coomassie Brilliant Blue G-250 がタンパク質と結合することで、最大吸収波長が 465 nm から 595 nm にシフトすること（メタクロマジー）を利用してタンパク質を定量する方法である。吸収波長のシフトは色素とタンパク質との疎水性相互作用およびイオン相互作用に基づいている。
ー短時間でタンパク質を定量ー-Proteostain- Protein Quantification Kit- Rapid

本キットは Bradford 法を応用した方法であり、高感度かつ迅
速にタンパク質を定量することが可能である。
Coomassie Brilliant Blue G-250 はタンパク質に作用し、酸性条件で青色に呈色する（λmax=595 nm）。しかも呈色反応は 1 分以内に終了し、生じた色素は 30 分以上安定である。従ってこの方法を使うことにより数分でタンパク質の定量を行うことができる。
定量できるタンパク質の濃度範囲は Standard 法で 10 μg/ml～ 2,000 μg/ml、Micro 法で 1 ～ 50 μg/ml である。

Absorbance

0.8

O
NH

Na+
-

O3S

+

N

N

タンパク種による変動

このキットは検量線用のタンパク質として BSA を用いているが、すべてのタンパク種に対し、この検量線を使うことはできない。タンパク種による感度の変動を下に示す。

a)b)Protein/BSAa)
1
0.67
1.02
0.96

Protein

BSA
Chymotrypsinogen A
Transferrin
Human IgG

0.40.2a) 各検量線の傾きの比を示す
500

SO3-

図 2-3 Coomassie Brilliant Blue G-250

0.6

0500 tests ; 同仁品コード (PQ01)
2500 tests ; 同仁品コード (PQ01)

600

700

800

阻害物質の影響

Wavelength/ nm

このキットの測定原理はタンパク質の疎水性部位との相互作用を利用しているため、界面活性剤は正の誤差を生じ、その他の物質も高濃度であれば誤差を生じる。表 2-1 に標準法においての測定に影響を及ぼさない阻害物質の最大濃度を示す。

図 2-1 Coomassie Brilliant Blue G-250 の吸収スペクトルa) タンパク質なしb) BSA (500 μg/ml) 存在下

表 2-1 測定に影響を及ぼさない阻害物質の最大濃度 *Chemical
Detergent
Brij 35
Brij 56
Brij 58
Triton X-100
Triton X-114

Absorbance at 595 nm

1.0
0.8
0.6

0.2
  500

1,000

1,500

0.125%
0.025%
0.005%
0.125%
0.125%

Tween 20
Tween 80SDS
CHAPS
CHAPSO
MEGA-10n -Octyl- β -D-glucoside
Organic solvent
Ethanol
Isopropanol
DMSO
Chelating agent
EDTA
DTPA

0.4

00

Concentration

2,000

Concentration of BSA (μg/ml)
図 2-2 Standard BSA solution で作成した検量線(Standard 法 )

0.25%
0.1%
0.1%
4%
4%
4%
0.5%
10%
10%
10%

ChemicalConcentration
Salt
Sodium chloride
2 mol/lPotassium chloride
2 mol/lSodium acetate
0.4 mol/l
Sodium bicarbonate
0.1 mol/l
BufferCitrate pH 5.0
MES pH 6.1
Tris pH 7.4
PBS
HEPES pH 7.5
CHES pH 9.0
Reducing agent
GlucoseGlutatione
Ascorbic acid
Dithiothreitol

0.125 mol/l
0.125 mol/l
0.0625 mol/l
Undiluted
0.125 mol/l
0.125 mol/l
2 mol/l
0.04 mol/l
0.4 mol/l
0.01 mol/l

0.4 mol/l
0.4 mol/l* 無添加の BSA による検量線との誤差が 5% 以内の濃度を示す。
（開発元：Dojindo Molecular Technologies Inc.）3http://www.dojindo.co.jp
ータンパク質により還元発色ー-Proteostain- Protein Quantification Kit- Wide Range

本キットは塩基性条件での tetrazolium salt の還元反応を利用したものである。tetrazolium salt は、タンパク質により容易に還元され formazan dye を生成する。WST-8 formazan は中性域では黄色であるが、高 pH 域では青色を呈し、pH12.5 以上では 650
nm に極大吸収を持つ。本キットの測定レンジは 100 ～ 5,000 μg/
ml (BSA) である。

-

O2N
N

500 tests ; 同仁品コード (PQ02)
2500 tests ; 同仁品コード (PQ02)

SO3-

O3S

N

Na+

+
N N

reducing

O2N

b)

O2N

WST-8 formazan

Absorbance

a)

500

600

700

Wavelength/ nma) 各検量線の傾きの比を示す

図 2-4 WST-8 の吸収スペクトルa) タンパク質なし b) タンパク質あり (BSA 2,000 μg/ml)

表 2-2

Absorbance at 650 nm

1.5

Tween 20
Tween 80SDS
CHAPS
CHAPSO
MEGA-10n -Octyl- β -D-glucoside
Organic solvent
Ethanol
Isopropanol
DMSO

1.0
0.5

図 2-5

測定に影響を及ぼさない阻害物質の最大濃度 *Chemical
Detergent
Brij 35
Brij 56
Brij 58
Triton X-100
Triton X-114

2.0

0

0

1,000
2,000
3,000
4,000
Concentration of BSA ( μg/ml )Protein/BSAa)
1
0.75
0.97
0.37

Protein
BSA
Chymotrypsinogen A
Transferrin
Human IgG

0.2

400

WST-8 とその formazan の構造式

タンパク種による変動
このキットは検量線用のタンパク質として BSA を用いているが、すべてのタンパク種に対し、この検量線を使うことはできない。タンパク種による感度の変動を下に示す。

0.6

0

N
OCH3

WST-8

0.4

N

OCH3

図 2-6

0.8

SO3-

-O S
3
H N
N

O2N

5,000

Standard BSA solution で作成した検量線( マイクロプレート法 )Concentration
2%
1%
1%
1%
1%
0.5%
0.3%
1%
4%
2%
0.5%
0.5%
10%
10%
10%

ChemicalConcentration
Salt
Sodium chloride
0.5 mol/l
Potassium chloride
1 mol/lSodium acetate
0.2 mol/l
Sodium bicarbonate
6.25 mol/l
BufferCitrate pH 5.0
MES pH 6.1
Tris pH 7.4
PBS
HEPES pH 7.5
CHES pH 9.0
Chelating agent
EDTA
DTPA

0.6 mol/l
12.5 mol/l
2.5 mol/l
Undiluted
12.5 mol/l
12.5 mol/l
2.5 mol/l
0.625 mol/l* 無添加の BSA による検量線との誤差が 5% 以内の濃度を示す。
（開発元：Dojindo Molecular Technologies Inc.）

4

分子生物学関連試薬
分子生物学関連試薬

3. 損傷遺伝子検出用試薬
ー DNA の損傷を簡単に定量ー-Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit - AP Site Counting5 samples ; 同仁品コード (DK02)
20 samples ; 同仁品コード (DK02)

生物の遺伝情報を保持している DNA は、複製時の DNA polymerase のエラーに加えて、環境中の放射線や紫外線、またはアルキル化剤等の化学物質、生体内における活性酸素等の代謝産物により損傷を受ける。これらのエラーや損傷が正しく修復されなければ突然変異を誘発し、これが癌や老化の原因となる。
DNA 損傷部位には修復機構が働き、その一つとして塩基除去修復がある。この時 AP site (apurinic / apyrimidinic site) と呼ばれる塩基除去部位が出現する。つまり AP site の検出は DNA 損傷部位を測定し得る有効な方法となる。
-Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- は、AP site と特異的に結合する ARP [N'-(Aminooxy acetyl)-N'-biotinylhydrazine] を用いて DNA をビオチン化し、96 穴マイクロプレートに固相化して試料 DNA 中の AP site を簡便に定量できるキットである。
本キットには、AP site 数が既定された標準 DNA が含まれており、既存のビオチン検出法を用いることによって AP site の定量がで
きる。

O
O

base

O

O

O

HN

base

NH
H
N

S

O
-

O P O
O

O

O
-O P O

OH

OH

O

O
O P O

O

O

O P O

O

O

O

O

base

NH2
-O

O

O
P O

OH

O

O

-

base

N
H

O

ARP

H

O

-

O

O

O

H
N

O
-

base

O P O

O

O

O

HN

O
O

N
H

base

H
N

NH
S

O

O

AP siteBiotin-tagged abasic site

図 3-1 AP site と ARP との反応

キット内容

[5 samples 用 ]ARP-DNA standard solution
各 250 μl
(0 ,2.5, 5.0, 10, 20, 40 AP sites / 100,000 bp)
ARP solution
100 μl × 1
DNA binding solution
10 ml × 1
Washing buffer
1 pack
HRP-streptavidin
25 μl × 1
TE buffer
15 ml × 1
Substrate solution
10 ml × 1
Filtration tube
5 tubes
96-well Microplate/U bottom
1 plate[20 samples 用 ]   各 250 μl＊キット以外に必要な器具
・10 μl、200 μl マイクロピペッター
・8 連マイクロピペッター（50 〜 200 μl）
・低温恒温槽（37℃）
・マイクロプレートリーダー
・0.5 ml、1.5 ml 遠心チューブ・遠心機
・DNA 抽出キット
・TE Buffer

250 μl × 1
10 ml × 1
1 pack
25 μl × 1
40 ml × 1
10 ml × 1
20 tubes
1 plate

400 μl の反応溶液
TE buffer 380 μl
加える

試料 DNA 溶液 :10 μl
ARP solution:10 μl
37℃、1 時間インキュベーション

遠心遠心2,500 x g、15 分

2,500 x g、15 分

ろ液を捨て、400 μl のTE buffer を加える

メンブランを TE buffer 100 μl で2 回洗浄する

図 3-2 ARP-DNA の調製法

5

TE buffer 200 μl 加え、フィルター上に付着した DNA を溶解させた後、1.5 ml
チューブに移す。
この操作を 2 回繰り返す。

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注意事項

1.0

1) キットは 0 ～ 5℃で保存し、凍結させないこと。
2) AP-DNA は一般に不安定ですので、測定対象 DNA を単離精製
後は直ちに ARP 反応を行う。
3) Filtration tube での遠心分離後は、直ちに TE buffer を添加しDNA を溶解させる。長時間 DNA をメンブラン上で放置しておくと、DNA のメンブランへの吸着が起こり回収率にバラツキを生じる可能性がある。
4) γ線滅菌のチューブは DNA の吸着を生じる可能性があるた
め、チューブを使用の際は非滅菌チューブを必要に応じてオートクレーブ滅菌して使用することを推奨する。
5) 630 ～ 670 nm のフィルターを持ち合わせていない場合は、発色反応後、各 well より 50 μl 抜き取り新しいプレートに移す。
同量の 1 mol/l 硫酸を添加後、450 nm の吸光度で測定することができる。硫酸添加後、速やかに測定する。
6) well 洗浄後、残存する洗浄液により測定誤差を生じることがあるので完全に除くこと。

Absorbance at 650 nm

0.8

0.6

0.4

0.2
0
図 3-3

0

10
20
30
Number of AP sites/100,000 bp

40

参考文献

ARP-DNA standard solution を用いて作成した検量線

1) A. Sancar and G. B. Sancar, Annu. Rev. Biochem. , 1988, 57 , 29 .
2) T. Lindahl and B. Nyberg, Biochemistry, 1972, 11 , 3610.
3) M. Liuzzi and M. Talpaert-Borle, J. Biol. Chem. , 1985, 260 , 5252.
4) M. Weinfeld, M. Liuzzi, and M. C. Paterson, Biochemistry, 1990, 29 ,1737.
5) B. X. Chen, K. Kubo, H. Ide, B. F. Erlanger, S. S. Wallace, and Y. W.
Kow, Mutat. Res. , 1992, 273 , 253.

（開発元：Dojindo Molecular Technologies Inc.）

ー AP site と反応できるビオチンー

ARP(Aldehyde Reactive Probe)

10 mg 340-07611 ; 同仁品コード (A305)

ARP（Aldehyde Reactive Probe）は久保らにより、比較的簡単に AP site を定量できる試薬として開発された。ARP は APsite のアルデヒド基と特異的に結合する化学プローブで、AP siteに生じたアルデヒド基と反応するアミノキシル部位とアビジンと特異的に結合するビオチン部位からできている。
ビオチン／アビジンー酵素／発色基質の系で定量した場合
10,000 ヌクレオチド当たり 1 個程度の割合で含まれる AP site

ARPを定量することができる。

N-(Aminooxyacetyl)-N'-biotinyl-hydrazine
C12H21N5O4S = 331.39
CAS No.〔139585-03-8〕6分子生物学関連試薬
分子生物学関連試薬

4. 核酸精製・抽出キット
アガロース電気泳動後の目的 DNA の回収には、透析膜を用いた電気泳動濃縮法、アガラーゼのようなゲル分解酵素を用いた方法、シリカ担体を用いた方法等が汎用されている。中でもシリカ担体を用いた方法はキットとして市販されているが、1) 処理するゲルの使用量に制限がある、2) 高分子量の DNA では回収量が低い、という問題を抱えていた。Get pureDNA Kit-Agarose はゲル溶解剤、ゲル除去剤およびDNA 共沈剤で構成され、目的 DNA を簡便に高回収率で得ることができる。DNA はペレットで回収されるので、バッファーで目的濃度のDNA 水溶液に調製でき、PCR、ライゲーション等にそのまま使用することができる。
一方、ゲノム解析法の一つであるサザンブロット法、ゲノムライブラリーの作製および PCR には、高純度のゲノム DNA を簡便かつ短時間に抽出することが求められる。Get pureDNA Kit-Cell, Tissue は、①細胞・動物組織細胞を溶解する、②溶解液から RNA およびタンパク質を除く、③エタノール沈殿により DNA を回収する、という 3 ステップで、培養細胞および動物組織から高純度のゲノム DNA を簡便に抽出できる。また、多量のサンプルからゲノムを抽出する際は、各試薬を比例倍量使用することにより対応可能である。抽出した DNA は制限酵素反応、PCR 反応等にそのまま使用できる。
Get pureRNA Kit は、溶解液、タンパク除去液および DNase 溶液により構成されており、細胞・動物組織・血液から高純度の Total RNA
を短時間で抽出することができる。CsCl 超遠心法のような超遠心を必要とせず、またフェノール、クロロホルム等の有害な有機溶媒を使用しない。シリカベースのスピンカラム法の様にサンプル量の制限がなく、大量サンプルからの抽出も可能である。得られた RNA は RTPCR、ノーザンブロット解析、cDNA 合成等に使用することができる。

ーアガロースから高効率で DNA を回収ー

Get pureDNA Kit - Agarose

200 samples ; 同仁品コード (GK01)

アガロースゲルからの DNA 抽出

フローチャートGet pureDNA Kit-Agarose
1. キット内容

Gel slice
300 μl Gel lysis buffer
インキュベート（60℃, 10 分以上）

Gel lysis buffer
65 ml × 1
Precipitation solution
65 ml × 1
Co-precipitation solution (20 mg/ml glycogen)
0.5 ml × 1

室温 2 分間静置
300 μl Precipitation solution
転倒混和

2. キット以外に必要な試薬・機器類
・エタノール（100%、70%）
・1.5 ml 遠心チューブ・マイクロピペット及びチップ・遠心分離機・ボルテックスミキサー
・60℃恒温槽

室温で遠心分離（13,000 x g 以上、5 分間）＊上澄みに沈殿物が混入している際は再度遠心分離し、上澄みのみを回収してください。

上澄み
2 μl Co-precipitation solution
5 秒間 vortex
800 μl エタノール添加
5 秒間 vortex
室温で遠心分離（13,000 x g 以上、3 分間）

Lane 1: 23 kbp
Lane 2: 9.42 kbp
Lane 3: 6.56 kbp
Lane 4: 4.36 kbp
Lane 5: 2.32 kbp
Lane 6: 2.02 kbp
Lane 7: Original沈殿
1 ml 70% エタノール添加
5 秒間 vortex
室温で遠心分離（13,000 x g 以上、3 分間）

0.8% Agarose
100 V, 60 min

図 4-1

沈殿

λ DNA/Hind III のフラグメントの回収例（開発元：Dojindo Molecular Technologies Inc.）7

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ー細胞・組織から高純度 DNA を簡便抽出ー

Get pureDNA Kit - Cell, Tissue

200 samples ; 同仁品コード (GK03)細胞または動物組織からの DNA 抽出

フローチャート
例：動物組織 25 〜 30 mg を処理する場合

Get pureDNA Kit-Cell, Tissue
1. キット内容
Lysis buffer
Proteinase K solution
RNase solution
Precipitation solution I
Precipitation solution II

110 ml × 1
1.05 ml × 2
0.5 ml × 1
22 ml × 1
22 ml × 1

組織サンプル
400 μl Lysis buffer
10 μl Proteinase K solution
インキュベーション（55℃, 2 〜 3 時間）

2. キット以外に必要な試薬・機器類
・エタノール (100%、70%)

2 μl RNase solution
転倒混和もしくは 10 秒間 vortex
室温で 2 分静置

・PBS( 細胞サンプルを処理する場合 )・1.5 ml 遠心チューブ

80 μl Precipitation solution I
転倒混和もしくは 5 秒間 vortex
80 μl Precipitation solution II
転倒混和もしくは 5 秒間 vortex
室温で 2 分静置

・マイクロピペット及びチップ・遠心分離機・ボルテックスミキサー
・65℃恒温槽
・ホモジナイザー ( 動物組織を処理する場合 )   表 4-1細胞、組織からの DNA 回収量とその純度の例

サンプル
HeLa cell(1 x 107 cells)
HeLa cell(1 x 108 cells)
HL60 cell(1 x 107 cells)
HL60 cell(1 x 108 cells)mouse liver (25 〜 30 mg)
mouse brain (25 〜 30 mg)
mouse kidney (25 〜 30 mg)
mouse heart (25 〜 30 mg)
mouse tailrat liverrat brain
rat kidney
rat heart
rat tail(25 〜 30 mg)
(1 g)
(1 g)
(1 g)
(0.8 - 0.9 g)(10 cm)

回収量（μg）
80〜 120
1,000 〜 1,50040〜 60
500 〜 900
40
〜 100
20
〜 40
50
〜 60
20
〜 25
40
2,000
600
1,800
600
2,500

〜 60
〜 2,500〜 800〜 2,300〜 800〜 3,500

室温で遠心分離（13,000 x g 以上、5 分間）

上澄み

A 260/A280
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9

＊上澄みに沈殿物が混入している際は再度遠心分離し、上澄みのみを回収してください。

上澄みと同量のエタノール添加
転倒混和もしくは 5 秒間 vortex
室温で遠心分離（2,500 x g、2 分間）

沈殿
1 ml 70% エタノール添加
転倒混和もしくは 5 秒間 vortex
室温で遠心分離（2,500 x g 以上、2 分間）

1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9
1.7 〜 1.9

沈殿
（開発元：Dojindo Molecular Technologies Inc.）

1

図 4-2

2 3 4 5 6 7 8 9

マウス組織から抽出した DNA とその制限酵素消化反応後
  の電気泳動写真Lane 1: λ /Hind III
Lane 6-9: mouse kidney
Lane 3, 7: BamH I digested
Lane 5, 9: Pst I digested

Lane 2-5: mouse heart
Lane 2, 6: undigested
Lane 4, 8: EcoR I digested

8

分子生物学関連試薬
分子生物学関連試薬
ー Total RNA を短時間で抽出ー

Get pureRNA Kit

50 samples ; 同仁品コード (GK04)

細胞、組織、血液からの RNA 抽出
Get pureRNA Kit
1. キット内容

フローチャート
例：細胞 3x106 〜 1x107 cells を処理する場合
細胞懸濁液

13 ml × 2
13 ml × 1
8 ml × 1
0.55 ml × 1
12 ml × 1

Lysis buffer
Precipitation solution I
Precipitation solution II
DNase
DNase dilution buffer

500 μl PBS
室温で遠心分離（200 x g、5 分間）

沈殿
500 μl Lysis buffer,
5 μl β - メルカプトエタノール
2 〜 3 分ピペッティング

2. キット以外に必要な試薬・機器類

・β - メルカプトエタノール
・エタノール（100%、70%）
・DEPE 処理水
・PBS buffer（細胞サンプルを処理する場合）
・RNase Free マイクロチューブまたは遠心チューブ・マイクロピペット及びチップ・遠心分離機・ボルテックスミキサー
・ホモジナイザー（組織からの抽出の場合）
・37℃恒温槽またはインキュベーター

表 4-2 Total RNA 回収量とその純度の例

サンプル
回収量（μg）
HeLa cell(1 x 107 cells)
90〜 150
Balb3T3 cell (1 x 107 cells)90〜 150
HL60 cell(1 x 107 cells)
30
60〜
mouse liver(20 mg)60
75〜
mouse brain(30 mg)15
25〜
mouse kidney (30 mg)
40
55〜
mouse heart(30 mg)7
15〜
mouse liver(1 g)
3,800 〜 4,400
mouse brain
mouse blood(1 g)(5 ml)

700
700〜 1,000〜 1,200

100 μl Precipitation solution I
5 秒間 vortex
室温で遠心分離（13,000 x g 以上、5 分間）＊上澄みに沈殿物が混入している際は再度遠心分離し、上澄みのみを回収してください。

上澄み
上澄みと同量のエタノール添加
転倒混和もしくは 5 秒間 vortex
室温で遠心分離（13,000 x g、2 分間）

沈殿

A 260/A280
2.0 〜 2.2
2.0 〜 2.2
2.0 〜 2.2
2.0 〜 2.2
2.0 〜 2.2
2.0 〜 2.2
2.0 〜 2.2
2.0 〜 2.2

1 ml 70% エタノール添加
5 秒間 vortex
室温で遠心分離（13,000 x g 以上、2 分間）

沈殿
200 μl DNase working solution
インキュベーション（37℃,15 分間）

2.0 〜 2.2
2.0 〜 2.2

50 μl Precipitation solution I
5 秒間 vortex

50 μl Precipitation solution II
5 秒間 vortex
室温で遠心分離（13,000 x g 以上、5 分間）

上澄み
上澄みと同量のエタノール添加
転倒混和もしくは 5 秒間 vortex
室温で遠心分離（13,000 x g、2 分間）

沈殿
1 ml 70% エタノール添加
5 秒間 vortex
室温で遠心分離（13,000 x g 以上、2 分間）

沈殿（開発元：Dojindo Molecular Technologies Inc.）9http://www.dojindo.co.jp

5. 核酸機能解析用試薬
ータンパク質の同定、接点解析にー

BABE, FeBABE

10 mg ; 同仁品コード (B437)
1 mg ; 同仁品コード (F279)

BABE
FeBABEEDTA・Fe 錯体 (FeEDTA) は、還元条件下でラジカルを発生し、生体高分子を切断する性質を利用した「DNA フットプリンティング法」、「プロテインフットプリンティング法」が、生命科学では広く利用されている。タンパク質の特定部位に FeEDTA を結合し、その周辺の接触する核酸やタンパク質を同定し、また接触点を同定する目的で、タンパク結合性の EDTA である BABE や FeBABE が利用されている。
BABE は、放射性 111In3+ を結合させ、抗腫瘍性抗生物質であるブレオマイシン A2 の末端に結合し、その集積でマウスの腫瘍部位を同定するなどの利用が計られてきた。また FeBABE は、タンパクのペプチド結合と核酸ホスホジエステル結合の両方を選択的に、しかもアミノ酸配列・ヌクレオチド配列に関係なく、非特異的に切断する活性が注目されている。
BABE、FeBABE はタンパク質のシステイン残基の SH 基と温和な条件で反応する。FeBABE により、アスコルビン酸と過酸化水素から活性ラジカルを発生させ、ラジカル飛程距離内の核酸やタンパク質の主鎖の切断が起きる。FeBABE の分子構造から推定して、タンパク質システイン残基から 1.2 nm の位置に Fe イオンが配置されるため、切断部位はその周辺に限られる。そのため切断個所をヌク
レオチド配列やアミノ酸配列から解析することで、接触していた相手物質とその分子上の接触点を同定することが出来る。従って、タンパク質非結合型の切断試薬では得られない、タンパク質の三次元構造に関する情報を得ることができる。核酸の切断に関してはヒド
ロキシルラジカルを介した酸化的な反応、ペプチド結合切断の機構としては鉄に配位したペルオキソ中間体によるカルボニル炭素の求核攻撃説が提唱されている。
FeBABE の利点としては、1) ペプチドやタンパクへ温和な条件で結合できること、2) 温和な条件で開裂反応を行えること、3) 開裂
反応が速く、高収率であること、4) 核酸やタンパク質の主鎖が選択的に切断されるが、ヌクレオチドやアミノ酸配列に影響されないこと、などが挙げられる。なお、タンパク質のリジン残基や末端アミノ基に、2-iminothiolane (2-IT) を介在させることで、FeBABE を標識する応用法も開発されている。
FeBABE を利用した例としては、大腸菌チトクローム bd オキシダーゼのサブユニット I と II の接点の同定、大腸菌 RNA ポリメラー
ゼの α,β,β',σ サブユニット間の接点の同定、大腸菌 RNA ポリメラーゼの遺伝子プロモーター結合域の同定や、リボゾームタンパ
ク質の rRNA 結合点の同定などがある。

FeBABE

1-(p-Bromoacetamidobenzyl)ethylenediamine N,N,N',N'-tetraacetic acid, iron(III)C19H21BrFeN3O9=571.13

H
N
HOOC
HOOC

BABE

O
N

N

Br

COOH
COOH

1-(p-Bromoacetamidobenzyl)ethylenediamine N,N,N',N'-tetraacetic acid
C19H24BrN3O9=518.31
CAS No.[81677-64-7]

FeBABE によるペプチド結合の切断機構

1) L. H. DeRiemer, et al., J. Labelled Compd. Radiopharm., 1981, 18, 1517. 2) T. M. Rana et al., J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 2457. 3) T. M.
Rana, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 10578. 4) D. P. Greiner, et al., Bioconjugate Chem., 1997, 8, 44. 5) E. Platis, et al., Biochemistry,
1993, 32, 12761. 6) S. L. Traviglia, et al., Biochemistry, 1999, 38, 4259. 7) J. B. Ghaim, et al., Biochemistry, 1995, 34, 11311. 8) R. Miyake, et al.,Biochemistry, 1998, 37, 1344. 9) J. T. Owens, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, 95, 6021. 10) J. A. Bown, et al., J. Biol. Chem., 1999, 274, 2263.
11) F. Colland, et al., EMBO J., 1999, 18, 4049. 12) G. M. Heilek, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92, 1113. 13) G. M. Heilek, et al., Science,
1996, 272, 1659. 14) K. R. Lieberman, et al., J. Mol. Biol., 1998, 284, 1367.

10分子生物学関連試薬
分子生物学関連試薬

6. 核染色用試薬
ー DNA,RNA の蛍光染色、使い切りタイプー

AO-Cellstain-® AO-Cellstain-® AO solution(1 mg/ml H2O)

1 mg ; 349-07441 同仁品コード (A386)
1 ml ; 348-07911 同仁品コード (A430)

Acridine Orange (AO) は、dsDNA に結合して 526 nm の緑色の蛍光（励起波長 502 nm）を発し、ssDNA や RNA に結合して 650 nmの赤色の蛍光（励起波長 460 nm）を発する intercalator である。
二本鎖構造の核酸では、AO は、まずリン酸と静電的に結合して 3 塩基対に対し 1 個の割合で取り込まれる。この時、挿入された
AO は互いに隣接することなく単量体で存在するため AO 本来の蛍光スペクトル（526 nm）を示す。一方、一本鎖構造の核酸では、AO は、リン酸基と最大 1 対 1 の割合で静電的に結合し、隣接する AO 分子間で stacking や aggregation を起こす。その結果、単量体の場合と異なる蛍光（650 nm）を示す。このように AO のみで二本鎖、及び一本鎖型 DNA や RNA を分別染色することができ、Ar レーザーで励起することにより DNA と RNA の同時観察が、また、フローサイトメトリーを用いて同時定量解析ができるという特徴がある。
本製品は変異原性があるため、使いきりタイプとして製品化した。秤量する時の実験室内への粉末の飛散を防ぎ使いやすくなっている。
蛍光特性：(dsDNA) λex=502 nm, λem=526 nm、(ssDNA) λex=420 〜 460 nm, λem=630 〜 650 nm

図 6-1

AO

3,6-Bis(dimethylamino)acridine, hydrochloride
C17H20ClN3=301.81
CAS No.[65-61-2]

ー DNA の蛍光染色、使い切りタイプー

EB, PIAO による HeLa 細胞の染色(x200, B 励起 )-Cellstain-® EB-Cellstain-® EB solution

1 mg ; 346-07451 同仁品コード (E262)
1 ml ; 348-07891 同仁品コード (E272)-Cellstain-® PI-Cellstain-® PI solution

1 mg ; 343-07461 同仁品コード (P346)
1 ml ; 341-07881 同仁品コード (P378)(1 mg/ml H2O)
(1 mg/ml H2O)

Propidium iodide（PI）は ethidium bromide(EB) とともに phenanthridium 系染料に分類されるカチオン性の蛍光色素であり、DNA の二重らせん構造に intercalate することにより特有の赤色蛍光が増強される核酸染色色素である。一部は二本鎖構造の RNA とも結合するため、正確な DNA 染色のためには、二本鎖構造の RNA の除去が必要である。一般に生細胞の細胞膜は透過せず、死細胞にのみ入り込み核内のDNA に intercalate し赤色蛍光を発する。そのため死細胞染色色素として利用される。また、PI は Calcein-AM や FDA などの fluorescein
系の色素と共に用い、生死細胞の二重染色に数多く用いられ、またフローサイトメトリー への応用例も数多い。
本製品は変異原性があるため、使いきりタイプとして製品化した。秤量する時の実験室内への粉末の飛散を防ぎ使いやすくなっている。
EB 蛍光特性：λex=520 〜 525 nm, λem=615 nm
PI 蛍光特性：λex=530 nm, λem=620 nm
EB

3,8-Diamino-5-ethyl-6-phenylphenanthridinium bromide
C21H20BrN3=394.31
CAS No.[1239-45-8]

EB (x300, G 励起 )PI

3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide
C27H34I2N4=668.39
CAS No.[25535-16-4]

図 6-3

11

PI (x200, G 励起 )EB 及び PI による HeLa 細胞の染色http://www.dojindo.co.jp
ー DNA の蛍光染色、使い切り・高安定性タイプー

DAPI-Cellstain-® DAPI-Cellstain-® DAPI solution(1 mg/ml buffer)

1 mg ; 342-07431 同仁品コード (D212)
1 ml ; 340-07971 同仁品コード (D523)

DAPI は 1977 年、抗トリパノソーマ薬の探索のために Dann らによって合成された蛍光性の色素で、蛍光顕微鏡下、酵母のミトコ
ンドリア、葉緑素、ウイルス、マイコプラズマ、染色体中の DNA 検出に使用されている。460 nm に青色の蛍光を持ち（励起波長 360
nm）
DNA の AT 配列に特異的に結合する minor groove binder である。
DAPI の光耐性は高く、HBO 200 水銀ランプ、3 mm 厚の BG 12 フィ、ルタ − の下で Hoechst 33258 の約 2 倍と安定である。

本製品は変異原性があるため、使いきりタイプとして製品化した。秤量する時の実験室内への粉末の飛散を防ぎ使いやすくなっている。
DAPI は通常、溶液での長期保存は難しいとされているが、同仁の DAPI solution は独自の組成により数ヶ月単位での使用が可能である。
注意事項
DAPI 溶液を作成する場合には、水もしくは緩衝液を使用する。
なお、水に溶解したものは長期保存には適していない。
また、中性の PBS には溶解しにくい傾向があるため、最初に DAPI 粉末を溶解する際には中性の PBS 以外の溶液を使用する。
蛍光特性：λex=360 nm, λem=460 nm

DAPI

図 6-2

4',6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride
C16H17Cl2N5=350.25
CAS No.[28718-90-3]

DAPI による HeLa 細胞の染色(x200, U 励起 )ー DNA の蛍光染色、使い切りタイプー

Hoechst 33258
Hoechst 33342-Cellstain-® Hoechst 33258 solution(1 mg/ml H2O)
-Cellstain-® Hoechst 33342 solution(1 mg/ml H2O)

1 ml ; 343-07961 同仁品コード (H341)
1 ml ; 346-07951 同仁品コード (H342)

核染色剤として一般的に用いられる Hoechst 33258 および Hoechst 33342 を使いやすいように溶液にした製品。
Hoechst 33258 および Hoechst 33342 は DNA に結合する蛍光色素であるが、生細胞に容易に取り込まれる。また、DNA の AT 配列の副溝に結合し、染色体分析などにも用いられる。
本製品は変異原性があるため、溶液タイプとして製品化した。秤量する時の実験室内への粉末の飛散を防ぎ使いやすくなっている。
蛍光特性：
Hoechst 33258

λex=350 nm, λem=461 nm

Hoechst 33342

λex=352 nm, λem=461 nm

Hoechst 33258

2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5'-bi-1Hbenzimidazole, trihydrochloride
C25H27Cl3N6O=533.88
CAS No.[23491-44-3]

Hoechst 33342

2'-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1piperazinyl)-2,5'-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
C27H31Cl3N6O=561.93
CAS No.[23491-52-3]

図 6-4
Hoechst 33258 (WU 励起 )Hoechst 33342 (WU 励起 )12正常ヒト胎児由来細胞を 1% グルタルアルデヒド /PBS(-)
  で固定化した後に染色した。

分子生物学関連試薬
分子生物学関連試薬

7. 分子生物学用 Agarose
アガロースは電気泳動の支持体として広く使用されており、核酸（DNA, RNA）の分離・分析に用いられる。
分子生物学用として、DNase free , RNase free の規格品を用意している。

Agarose 900

25 g ; 341-07842
100 g ; 343-07841

同仁品コード (A426)
同仁品コード (A426)

一番汎用されるアガロースで 10 kbp 以下の DNA の分析に向いている。1% のアガロースで 1 〜 6 kbp の DNA を分析できると言わ
れている。

ゲル強度
凝固温度
融解温度

800 g/cm2 以上
35 〜 40℃
87 〜 91℃

DNase 活性RNase 活性不検出
不検出

Agarose 1500

25 g ; 344-07832
100 g ; 346-07831

同仁品コード (A427)
同仁品コード (A427)

アガロースゲルが通常の方法で分析し得る範囲はアガロースのポアサイズから考えて 20 kbp までであると言われているが、10 数
kbp の DNA についてもゲル強度の小さいアガロースゲルを用いると検出前にゲルが崩れてしまう危険性がある。Agarose 1500 はゲル
強度が 1500 g/cm2 であるために、低濃度のゲルでも崩れにくいアガロースである。
ゲル強度
凝固温度
融解温度

1,400 g/cm2 以上
35 〜 40℃
91 〜 95℃

DNase 活性RNase 活性不検出
不検出

8. 分子生物学用 Buffer
分子生物学研究において、緩衝液として何を用いるかということは重要な要素となる。
目的の核酸を分解させないためには核酸を分解する酵素（ DNase, RNase) が検出されないということも基本的な項目である。
分子生物学において汎用される液体 Buffer を各種取り揃えており、いずれの製品も DNase, RNase 不検出である。
品

名

容

量

コード

同仁品コード10x MESA

1L

344-07491

MB02

10x TBE1L

344-07511

MB04

10x TE

500 ml

344-07555

MB08

20x SSC

500 ml

340-07535

MB06

20x SSPE500 ml

347-07545

MB07

1M Tris-HCl

500 ml348-07575

MB10

0.5M EDTA

1L

347-07481

MB01

13

規

格

0.4 mol/l MOPS, pH 7.0(±0.1, 25°C),
0.1 mol/l sodium acetate, 10 mmol/l EDTA
性状 : 黄色液体
DNase, RNase: 不検出
0.89 mol/l Tris-borate, pH 8.3(±0.1, 25°C),
20 mmol/l EDTA
性状 : 無色液体
DNase, RNase: 不検出
0.1 mol/l Tris-HCl, pH 8.0(±0.1, 25°C),
10 mmol/l EDTA
性状 : 無色液体
DNase, RNase: 不検出
0.3 mol/l sodium citrate, 3.0 mol/l sodium
chloride
性状 : 無色液体
DNase, RNase: 不検出
0.2 mol/l phosphate, pH 7.4(±0.1, 25°C),
2.98 mol/l sodium chloride, 0.02 mol/l EDTA
性状 : 無色液体
DNase, RNase: 不検出
pH 8.0 (±0.1, 25°C)
性状 : 無色液体
DNase, RNase: 不検出
0.5 mol/l EDTA, pH 8.0(±0.1, 25°C)
性状 : 無色液体
DNase, RNase: 不検出
ファクター :0.95 〜 1.05

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9. 分子生物学用 Good's Buffer
生化学分野において優れた緩衝剤として幅広い研究に使用されている Good's Buffer を分子生物学用として商品化している。
高純度であり、全ての商品で DNase, RNase 不検出を確認している。エンドトキシン試験済みであり（* 一部商品を除く）、安心して使用いただきたい。
品

名

ACES
ADA
BES
BicineBis-Tris
CAPS
CHES
EPPS

容

量

コード

同仁品コード

20 g

342-08271

GB73

20 g

349-08281

GB74

20 g

346-08291

GB75

20 g

349-08301

GB76

20 g

346-08311

GB77

20 g

343-08321

GB78

20 g

340-08331

GB79

20 g

347-08341

GB80

HEPES

20 g
100 g
500 g

MES

20 g

344-08351

20 g
100 g
500 g
20 g
100 g
500 g

347-08243
341-08241
343-08245
344-08253
348-08251
340-08255
341-08361

GB82

20 g

348-08371

GB83

20 g

345-08381

GB84

MOPS
PIPES
TAPS
TES
Tricine340-08233
344-08231
346-08235

20 g

化合物		
MES		

5.5

6.46		

Bis-Tris		

5.7

6.60		

ADA		

5.8

6.80		PIPES		

6.17.56.90		

ACES		

6.0

7.5

7.15		

BES		

6.6

7.20		MOPS		

6.5

7.50		

TES		

6.8

7.55		HEPES		

6.8

8.0		

EPPS		

8.15		

Tricine		

7.8

8.35		

Bicine		

7.7

8.4		

TAPS		

7.7

9.5		

CHES		

10.40		CAPS		

URL: http://www.dojindo.co.jp
E-mail: info@dojindo.co.jp

株式会社 同仁化学研究所

Free dial:0120-489548
Free fax :0120-021557

5

純度 99.7% 以上
エンドトキシン試験済み
DNase, RNase 不検出
純度 99.5% 以上
エンドトキシン試験済み
DNase, RNase 不検出

GB816.15		

67

格

純度 99.5% 以上
エンドトキシン試験済み
DNase, RNase 不検出

GB70

pKa(20°C)

規GB71

純度 99.5% 以上
エンドトキシン試験済み
DNase, RNase 不検出

GB72

純度 99.7% 以上
DNase, RNase 不検出8

純度 99.5% 以上
エンドトキシン試験済み
DNase, RNase 不検出

9

10

11

7.0
7.3
7.4

8.0
7.9
8.2
8.2
7.5

8.5
8.8
9.1
9.1
8.6

10.0
9.7

11.1

* ご注意
○掲載内容（製品・包装など）はパンフレット編集時におけるものであり、予告無く変更することがあります。
○試験・研究用です。医薬品としては使用できません。

熊本県上益城郡益城町田原 2025-5 熊本テクノ・リサーチパーク
Tel.096-286-1515（代表） Fax.096-286-1525〒 861-2202

14

ドージン・イースト ( 東京）

東京都港区芝大門 2-1-17 朝川ビル 7F 〒 105-0012
Tel.03-3578-9651（代表） Fax.03-3578-9650

23. 06. 01