YourSeq (FT & 3’DGE) StrandNEW Specific mRNA Library Prep
迅速！柔軟！簡単！

RNA-Seq用ライブラリー調製キット

 RNAからのライブラリー調製がわずか4時間
 Full-transcript (FT) と3’-Digital Gene Expression (DGE) RNA-Seqに対応
 高いストランド特異性
 Combinatorial Dual Indexing (CDI) とUnique Dual Indexing (UDI) に対応

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NEW YourSeq (FT & 3’DGE) Strand-Specific mRNA Library PrepYourSeq Library Prep の特長

操作方法

DNA breathing (熱ゆらぎによってDNAが開閉する)という自然現象を利用することで、従来のRNAライブラリー調製プロトコルでは必要だったアダプター付加のステップを削減し、時間とコストの節約が可能になりました!
YourSeq Library Prep で は 、 フ ァ ー ス ト ス ト ラ ン ド cDNA 合 成 に 続 い て 、「Breath Capture」と呼ばれるプロセスにおいて、DNA:RNAハイブリッド分子の末端が開いているcDNAに5'アダプターを挿入します。 これにより、RNAの除去というステップを必要とせずに、DNAのセカンドストランドの合成が開始可能となります。アダプターはcDNA鎖のみをプライミングし、RNA鎖側をプライミングできないため、このワークフローにより方向性を維持したストランド特異性の高いRNA-Seq解析が可能となります。

mRNA (5-100 ng)
cDNAプライミング

mRNA + FT Priming mix or DGE Priming mix
incubate 94°C, 1.5 min >> cool

15 mincDNA合成100 min5’アダプターの追加
45 min

インデックスの追加
50 minライブラリー精製
40 min次世代シーケンス

add cDNA synthesis cocktail​incubate 42°C, 50 min > 50°C, 10 min > 70°C, 10 min​purify the cDNA by carboxyl beads
add 5’ adaptor + Breath Capture cocktail(DNA polII + Breath Capture mix)​
incubate 25°C, 15 min​purify the cDNA​
add index (CDI or UDI)
98°C, 30 sec > [98°C, 10 sec > 65°C, 30 sec> 72°C, 30 sec] (14 cycles) > 72°C, 5 min​purify the library with carboxyl beads​

わずか５ステップ 約４時間の簡単操作！

構成品
Catalog No.

23001

23002

23003

23004

Indexing

CDI

CDI

UDI

UDI

Reactions

2496

2496

Storage

Reagent

FTと3’DGE
Full Transcript (FT)3’-Digital Gene Expression (3’DGE)

従来からある一般的な全長転写産物RNA-SeqｍRNA

Coverage

Coverage

増幅される断片の分布

5’

転写産物の3’末端側のみのRNA-Seq

3’5’

・ジェノタイピングおよびエクソン多型の検出・スプライスバリアント解析
・融合遺伝子量の検出

用途

2000万-3000万 ペアエンドリード

SeqｍRNA

3’Carboxyl Beads

1.5 ml6 ml

1.5 ml6 ml

FT Priming Mix

75 μl

300 μl75 μl300 μlDGE Priming Mix

75 μl

300 μl75 μl300 μlControl mRNA

5 μl

5 μl

5 μl

5 μl

First Strand Mix

135 μl540 μl135 μl540 μlRT enzyme

15 μl

60 μl

15 μl

60 μl

Breath Capture Mix

175 μl690 μl

175 μl690 μl

5-Prime Adapter

120 μl

480 μl120 μl

480 μl4°C-20°C-20°C-20°C-20°C-20°C-20°C-20°C

DNA Pol I

10 μl

30 μl

10 μl

30 μl

PCR Mix

264 μl1056 μl

264 μl1056 μl

-20°C
-20°C

8 μl

24 μl

8 μl

24 μl

-20°C

Nuclease-Free Water

1.8 ml

1.8 ml

1.8 ml

1.8 ml10 mM Tris HCl

1.8 ml5 ml

1.8 ml

5 ml

-20°C
-20°C

Carboxyl Beads Buffer

1.8 ml6 ml

1.8 ml

6 ml

-20°C

YourSeq Index i5-A

30 μl

120 μlYourSeq Index i5-B

30 μl

120 μlPhusion PolYourSeq Index i5-C30 μl

120 μlYourSeq Index i5-D30 μl

120 μlYourSeq i7 1-24 Index Set

・遺伝子発現量の解析
・3’-UTRのジェノタイピングおよび多型の検出
・ポリA近傍配列の差異検出と同定

YourSeq i5 1-24 Index Set

300万-1000万 シングルエンドリード

YourSeq i5 1-96 Index Set

YourSeq i7 1-96 Index Set

1 plate

-20°C
-20°C
-20°C
-20°C
-20°C

1 plate1 plate

-20°C
-20°C

1 plate-20°C

1 plate1 plate

製品リスト

製品名
YourSeq (FT & 3’DGE) Strand-Specific mRNA Library Prep Kit 24 CDIYourSeq (FT & 3’DGE) Strand-Specific mRNA Library Prep Kit 96 CDIYourSeq (FT & 3’DGE) Strand-Specific mRNA Library Prep Kit 24 UDIYourSeq (FT & 3’DGE) Strand-Specific mRNA Library Prep Kit 96 UDI包装

商品コード定価

24 rxns
96 rxns
24 rxns
96 rxns

23001
23002
23003
23004

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