ウェスタン解析の抗体反応を自動化
ハンズフリーによる自動化プロセスを実現
実現
iBind / iBind Flex Western System

Invitrogen™ iBind™ / iBind™ Flex Western System は、ウェスタン解析のブロッキングから 2 次抗体反応後の洗浄までのプロセスを自動化したシステムです。 Sequential Lateral Flow（SLF）技術を使用し、反応の順に抗体液・洗浄液のリリースをコントロールします。
システムは外部電源を必要としないので、実験室のどこでも使えて、全くの無音で反応が進みます。ハンズフリーによる利便性に加え、マニュアル法よりも感度および再現性に優れたデータが得られます。

• 時間を節約 ：一晩かけていた抗体反応を約 2.5 時間に短縮
最初のセットアップ作業はたった 15 分

• 再現性

：自動化プロセスによりブロット間のバラツキを改善し再現性を高める• 柔軟性：抗体使用の最適化、フォーマットの変更、ハンドリング・煩雑な作業から解放されることで、他の実験・研究に使える新たな時間を確保
・研究スピードの加速・効率化
・人的ミスやバラつきを回避し、やり直しのリスクを低減

削減

Midi blot

Mini blot

Vertically cut strip ※ 1

同一の抗体条件のみ同一または異なる抗体条件が可能

同一または異なる抗体条件が可能

3 つの専用 Insert が付属されていて、実験用途に合わせてフォーマットを選択可能（iBind Flex Western System のみ※ 2）※ 1 メンブレンを細長く切り分け、1 度に複数抗体を使用可能※ 2 iBind は一度に 1 枚の Mini blot に対応

操作の流れ① Invitrogen™ iBind / iBind™ Flex Western Device にInvitrogen™ iBind / iBind™ Flex Card とメンブレンをセット
メンブレン② 装置の 4 つのウェルに抗体液・洗浄液をセット

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ウェルカバーiBind カード
1. 1次抗体3. 2次抗体
2. iBind Solution 4. iBind Solution

製品情報や使用方法のビデオはこちらをご覧ください

thermofisher.com/ibindflex③ 約 2.5 時間、静置
11 12 165④ メンブレンを取り出し、AP または HRP で検出
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少量の一次抗体で確実な結果
iBind Flex および iBind Western Systems による検出は、マニュアル法よりも感度が優れているため、より少ない抗体量で同様の結果を得ることができます。
A. マニュアル法C. マニュアル法

B. iBind Western Device

D. iBind Western Device

図1. iBind Deviceによる検出は少ない抗体量でマニュアル法と同等の感度を実現
全てのブロットは、Mini Gel Tank電気泳動システムを用いてタンパク質を分離し、Invitrogen™ iBlot™ 2 Dry Blotting Systemを用いてPVDF 膜に転写した。
全てのブロットで、Phospho-EGF receptor を検出するための処理を行った（マニュアル法A、C：5×一次抗体/5×二次抗体、iBind使用 B、D：1×一次抗体/5×二次抗体）（図A・B：蛍光検出、図C・D：化学発光検出）。

マニュアル法よりも優れたパフォーマンス
多くのモノクローナル抗体とポリクローナル抗体において、マニュアル法よりも高感度に検出が可能です（図 2、図 3）。特異的なInvitrogen™ Novex™ 一次抗体および二次抗体と組み合わせることで、目的の標的タンパク質のみが光るクリーンなウェスタンブロット。
を実現します。そして自動処理プロセスによりブロット間のバラツキを改善します（CV < 5％ vs マニュアル法：CV ＝ 13％）
A. マニュアル法

B. iBind Flex Western Device

A. iBind Western Device,
Alexa Fluor reagents

B. iBind Western Device,
IRDye reagents

C. Manual, Alexa Fluor reagents

D. Manual, IRDye reagentsc-JunPhospho-Stat3

図 2. ウェスタンブロッティングにおいて、 iBind Device による化学発光
検出はマニュアル法に比べてより優れた感度を実現 ウェスタンブロットを実施し、MOPS SDS ランニングバッファーを用いて、4 〜 12％ のInvitrogen™ NuPAGE™ ゲル上でサンプルを分離し、Invitrogen™ iBlot™
2 Dry Blotting System を用いてニトロセルロース膜に転写した。レーン 1 〜
5：80 ng 〜 5 ng の IKK- β；レーン 6 〜 10：120 ng 〜 7.5 ng の DDR2；
レーン 11 〜 15：40 ng 〜 2.5 ng の FLT1；レーン 16 〜 20：360 ng 〜
22.5 ng の HCK。 タンパク質は、ウサ ギ抗 GST 一次抗体およびヤギ抗ウサ ギ二 次 抗 体を用 いて検 出した。（A）マニュアル 法：そ れぞ れ
20 mL の iBind 溶液中で 40 µL の一次抗体、33.3 µL の二次抗体を使用。
（B）iBind device による検出：それぞれ 4 mL の iBind 溶液中で 8 µL の一次抗体、6.7 µL の二次抗体を使用。ウェスタン処理の完了後、ブロットを
Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura Substrate と 5 分間インキュベーションし、ChemiDoc™ システム（Bio-Rad）を用いて画像を取得した。

図 3．c-Jun および Phospho-Stat3 に対するウェスタンブロッティング
において iBind システムによる蛍光検出はマニュアル法に比べてより優れた感度を実現
Phospho-Stat3 および c-Jun に対してウェスタンブロットを実施（左レーンより 30 µg 〜 120 ng の細胞抽出物を泳動）

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製品名

サイズ

iBind Flex Western Starter Kit
iBind Flex Western Device
iBind Flex Cards
iBind Flex FD Solution Kit
iBind Flex Solution Kit

1 kit
1 device
10 cards
1 kit
1 kit

製品番号SLF2000S
SLF2000
SLF2010
SLF2019
SLF2020

製品名サイズ

iBind Western Starter Kit
iBind Western Device
iBind Window CoveriBind Cards
iBind Fluorescent Detection (FD) Solution Kit
iBind Solution Kit

1 kit
1 device
1 each10 cards
1 kit
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SLF1000S
SLF1000
SLF1001
SLF1010
SLF1019
SLF1020