プロトコル
細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ細胞染色
ミトコンドリア
関連試薬
細菌研究用
試
薬
膜タンパク質可 溶 化 剤
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
イオン
電 極

生細胞数を測りたい(吸光測定)
使用製品

解析装置

Cell Counting Kit-8
Cell Counting Kit
MTT[CK04][CK01][M009]I はじめに
3

生細胞数を測定する方法として、コロニー法、[ H] チミジン
取り込み法、MTT 法等が汎用されている。中でも MTT 法は、放射性同位体を使用せずかつ短時間で結果が得られるため、細胞毒性および薬剤感受性試験等のスクリーニング試験に使用されている。MTT 法はテトラゾリウム塩化合物である MTT が脱水素酵素の基質となる性質を利用している。細胞膜透過性のMTT は膜透過後、ミトコンドリア内脱水素酵素により青色の色素 ( ホルマザン ) に還元される。ほとんどの動物細胞に適用可能であり、生成したホルマザン量は生細胞数に対応する。放射性同位元素を使用しないので、特別な施設を必要とせず、またマイクロプレートを用いることで、一度に多量の検体を処理することができる。生成するホルマザンは難溶性の沈殿物として析出するため、吸光度測定前に有機溶媒により溶解させる操作が必要である。再現性のよい結果を得るために、ホルマザンの溶解操作は重要なポイントとなる。
Cell Counting Kit ならびに Cell Counting Kit-8 は水溶性のホルマザンを生成するテトラゾリウム塩、WST-1 (Cell Counting

その他

-

O2N
N

機能性
有機材料

O3S

Kit) および WST-8 (Cell Counting Kit-8) を使用しているため
MTT 法とは異なり、ホルマザンの溶解操作を必要としない( 図 1 に Cell Counting Kit-8 の反応原理を示す )。細胞中の脱水素酵素により産生される NADH は 1-Methoxy PMS を介して WST-1 および WST-8 を橙色のホルマザンに還元する。このホルマザンの色素量は生細胞数に比例する。MTT 法ならび
3に [ H] チミジン取り込み法との相関は良好である ( 図 3 に Cell
3

Counting Kit-8 と [ H] チミジンとの相関性を示す )。また試薬の細胞に対する毒性が低いため ( 図 2 に試薬の細胞毒性を示す。
HeLa 細胞を試薬溶液に 24 時間暴露後、90% 以上生存 )、Cell
Counting Kit または CellCounting Kit-8 での評価後、その細胞を他の試験に使用することも可能である。
Cell Counting Kit は試薬 A、溶液 B の 2 液タイプ、また readyto-use タイプの Cell Counting Kit-8 は 1 液タイプとなっている。
いずれのキットも 1．検体へ試薬溶液添加 2．呈色反応 3．測定、の 3 ステップで結果が得られるため、マイクロプレートを用いた High-Throughput Screening に適用可能である。

SO3-

-O S
3
H N
N

O2N

N

+
N N

Na+

N

OCH3
O2N

N
OCH3

H

WST-8

SO3-

OCH3

OCH3

N

N

N
CH3

N
CH3

O2N

WST-8 formazan+

NADH, NADPH
dehydrogenase

Viable cell

NAD+, NADP+

図 1 Cell Counting Kit-8 による細胞増殖アッセイ原理

Without Reagent, 2 hrs

Without Reagent, 4 hrs

Without Reagent, 7 hrs

CCK-8, 2 hrs

CCK-8, 4 hrs

CCK-8, 7 hrs

Company R, 2 hrs

Company R, 4 hrs

Company R, 7 hrs

Company P, 2 hrs

Company P, 4 hrs

Company P, 7 hrs

HeLa Cell 0 hr

それぞれの試薬添加後、2, 4, 7 時間後の写真。CCK-8 添加細胞の生存率が高いことがわかる。

図 2 HeLa 細胞を用いた各試薬の細胞毒性

1

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在庫や価格(記載容量以外もしくは request)に関するお問い合わせ：マーケティング部 Tel:096-286-1515 Fax:096-286-1525(株)同仁化学研究所

プロトコル

HeLa cell
Absorbance

1.0

0.5

3

0.5

1.0

1.5

[ H]-Thymidine × 10 dpm

図3

b

c

d

0.1

2.0

-5

a

0.2

0

0

3

1

2

-5

3

[ H]-Thymidine × 10 dpm
3

Cell Counting Kit-8 と [ H]-thymidine 取り込み法との相関
Medium:Reagent:
Incubation:

MEM, 10% FBS (HeLa)
RPMI1640, 10% FBS (HL-60)
3
37 kBq/well[ H]-Thymidine
Cell Counting Kit-8
10 μ l/well
34h[ H]-Thymidine
Cell Counting Kit-8
4h

以下に、96 穴マイクロプレートを用いた Cell Counting Kit-8 、Cell Counting Kit および MTT の最適細胞数決定法ならびに薬剤感受性試験法について紹介する。

II Cell Counting Kit 法(Cell Counting Kit, Cell Counting Kit-8)
1. 最適細胞数決定法(1) 試薬・Cell Counting Kit (Code: CK01)※1
試薬 A に溶液 B を全量加える 。
＜ 500 回用＞
試薬 A: WST-1/HEPES ( 凍結乾燥品 )溶液 B: 1-Methoxy PMS 5 ml
・Cell Counting Kit‐8 (Code: CK04)＜ 500 回用＞

※1

WST-8/1-Methoxy PMS 溶液 5 ml(2) 装置
炭酸ガスインキュベーター、クリーンベンチ、プレートリーダー、
倒立顕微鏡、オートクレーブ、マイクロプレートミキサー、
8 あるいは 4 チャンネルマルチピペット、血球計算盤(3) 方法
Cell Counting Kit 混合溶液および Cell Counting Kit‐8 の使用容量および操作は同じであるため、以後“Cell Counting Kit 溶液”と表記する。
1) 対数増殖期にある細胞を血球計算盤で計数して細胞懸濁液
5(5 × 10 cells/ml) を調製する。
2) マルチピペットを用いて 96 穴マイクロプレートの各ウェルに100 μ l ずつ培地を分注し、細胞懸濁液を希釈しながら添加す※2る ( 図 4 a)。
※33) 炭酸ガスインキュベーター内で前培養する 。
※44) Cell Counting Kit 溶液を、各ウェルに 10 μ l ずつ添加する( 図 4 b)。
5) 炭酸ガスインキュベーター内に戻し、1 〜 4 時間呈色反応を※6行う ( 図 4 c)。
6) 発色むらがある場合は、プレートの側面を軽く叩き混合する。
※77) マイクロプレートリーダーで 450 nm の吸光度を測定する( 図 4 d)。
8) 上記の結果より、この後の薬剤感受性試験に使用する細胞数
及び呈色時間を決定する。
図 5 に HeLa 細胞と HL-60 を用いた場合の測定例を示す。比較として XTT、MTS、MTT でのデータも示す。

図 4 測定操作図
また、図 6 に代表的な細胞の細胞数と吸光度の関係を示す。細胞により、その関係は異なるためご注意いただきたい。

2. 薬剤感受性試験法(1) 試薬(2) 装置
前項を参照(3) 方法1) 80% コンフルエントの細胞を血球計算盤で計数して細胞懸※2濁液を調製する 。
2) マルチピペットを用いて 100 μ l ずつ、96 穴マイクロプレー
トの各ウェルに細胞懸濁液を分注する。ブランク ( バックグ
ラウンド値 ) 用のウェルには培地のみを 100 μ l 加える。
3) 炭酸ガスインキュベーター内で 48 〜 72 時間培養したのち、※3培地を吸引により除く 。浮遊細胞の場合には、吸引する
前に遠心操作により、細胞を沈澱させておく。新たに培地
100 μ l を各ウェルに加える ( 培地交換 )。ブランク用のウェ
ルには培地のみ 100 μ l 加える。
4) 培地で種々濃度に調製した被験物質液を 10 μ l ずつ添加する。ブランクおよび陰性対照のウェルには ､ 培地を 10 μ l ず※4つ加える 。
5) 37℃の炭酸ガスインキュベーター内で 24 〜 72 時間 ､ 培養
※5する 。
6) プレートを取り出し、Cell Counting Kit 溶液を各ウェルに※4
10 μ l ずつ添加する 。
3

0.3

HeLa cell

2

0.2

1

0

HL60 cell

Absorbance00

HL60 cell

Absorbance

1.5

Absorbance

0.3

0.1

0
5
10
15
20 25
3
Number of Cells (x10 cells/well)

図5

0

0
5
10
15
20 25
3
Number of Cells (x10 cells/well)

感度の比較

Detection:
MEM, 10% FBS (HeLa)
Cell Counting Kit-8
RPMI1640, 10% FBS (HL-60)
Incubation: 37℃ , 5% CO2, 2 h (HeLa)
XTT
37℃ , 5% CO2, 3 h (HL-60)
MTS
MTT
Medium:( ● ) 450 nm( ◆ ) 450 nm( ▲ ) 490 nm( ■ ) 570 nm

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2

細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ細胞染色
ミトコンドリア
関連試薬
細菌研究用
試
薬
膜タンパク質可 溶 化 剤
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
イオン
電 極
その他
機能性
有機材料

プロトコル

その他
機能性
有機材料

1.4

NIH3T3 cell

2.5

1.5
1.0
0.5
0

0
5
10
15
20
25
3
Number of Cells (×10 cells/well)

Absorbance

2.0

0.7

HepG2 cell

1.2

0.6

1.0

0.5

0.8

0.4

Absorbance

3.0

Absorbance細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ細胞染色
ミトコンドリア
関連試薬
細菌研究用
試
薬
膜タンパク質可 溶 化 剤
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
イオン
電 極

0.6
0.4

0.3
0.2

0.2

0.1

0

0

0
5
10
15 20 25
3
Number of Cells (×10 cells/well)Jurkat cell

0

5

10

15

20

25

3

Number of Cells (x10 cells/well)

細胞種により細胞数と吸光度の関係は異なる

図6

細胞数と吸光度の関係

7) 炭酸ガスインキュベーター内に戻し、1 〜 4 時間、呈色反応を※6行う 。
8) 発色むらがある場合は、プレートの側面を軽く叩き混合する。
※79) マイクロプレートリーダーで 450 nm の吸光度を測定する 。

※ 7 Cell Counting Kit の場合 400 〜 450 nm、Cell Counting
Kit-8 の場合 430 〜 490 nm の波長フィルターが使用可能です。また細胞培養液中の濁りによるバックグランドを排除する場合は、600 〜 650 nm の吸光度を測定し実測値から差し引いて下さい。

(4) 細胞傷害率の算定法
下記の式により細胞生存率を算出する。これを種々の被検物質濃度に対してグラフに表し、生存率が 50% になる値を IC50(50%3. Cell Counting Kit-8 を用いた毒性試験・増殖試
細胞傷害率 ) とする。
験例
細胞生存率 (%)=[(As − Ab)/(Ac − Ab)] × 100
A s: 検体の吸光度 ( 細胞、被検物質および Cell Counting Kit （1）Actinomycin D を用いた毒性試験例
溶液の入ったウェル )1）96 ウェルプレートの各ウェルに HeLa 細胞（3 × 105 cells/
Ac: 陰性対照の吸光度 ( 細胞および Cell Counting Kit 溶液のml）
を 100 μ l ずつ播種し、炭酸ガスインキュベーター（37℃）
入ったウェル 被検物質無し )内で 24 時間培養する。
Ab: ブランク吸光度 ( 培地および Cell Counting Kit 溶液の入っ 2）培地を吸引した後、種々の濃度の Actinomycin D (1.25, 0.63,
たウェル 細胞無し )0.32, …, 0 μ g/ml) を含む培地 100 μ l に交換し、炭酸ガスイ
ンキュベーター（37℃）内で 24 時間静置する。
(5) 注意事項
3）Cell Counting Kit-8 溶液 10 μ l 添加した後、炭酸ガスインキュ※ 1 Cell Counting Kit の混合溶液は、4℃で 3 日、-20℃で 1 ヶ月
ベーター（37℃）内で 4 時間呈色反応を行う。
安定です。混合溶液を長期に使用する場合は、溶液調製後分4）450 nm 吸光度を測定する。
注し -20℃で保存して下さい。Cell Counting Kit‐8 は 4℃で12 ヶ月安定です。長期に保存する場合は -20℃で保存して下 （2）IL-2 を用いた増殖試験例
さい。いずれの溶液も凍結・融解は繰り返さないで下さい。 1）96 ウェルプレートの各ウェルに培地 50 μ l ずつ添加する。
※ 2 ウェルあたりの細胞数は、細胞の種類や増殖度によって異な 2） 1 μ g/ml IL-2 溶液 50 μ l を一番左の列に添加し、倍々希釈る。HeLa,S3(sc) 細胞では、2,000 〜 3,000 cells 程度の播種（500 ng/ml 〜 5.96×10-5 ng/ml) し、各ウェルに添加する。
が適しています。
3）CTLL-2 細胞溶液（8 × 104 cells/ml）を各ウェルに 50 μ l ず-5※ 3 付着細胞を接着させるのに必要な前培養時間は、2 〜 4 時間
つ添加する。（IL-2 終濃度 250ng/ml 〜 2.98×10 ng/ml）です。付着細胞でも接着の必要がない場合あるいは浮遊細胞 4）炭酸ガスインキュベーター（37℃）内で 72 時間培養する。
の場合は前培養を省略することも可能です。
5） Cell Counting Kit-8 溶液 10 μ l 添加した後、炭酸ガスイン
多くの細胞は 48 〜 72 時間で対数増殖期に達します。
キュベーター（37℃）内で 4 時間呈色反応を行う。
※ 4 Cell Counting Kit 溶液や被験物質液の添加量が少ないため 6）450 nm 吸光度を測定する。
ウェルの側壁に付着することがあるのでプレートの底をたたいて培地と混合させて下さい。
図 7 に Actinomycin D による 細胞毒性試験の例を、図 8 に IL-2
※ 5 被験物質の処理時間は被験物質の性質および細胞の感受性に を用いた増殖試験の例を示す。
よって異なります。（一般には、細胞周期に依存した感受性変動も考慮して、少なくとも処理時間を細胞の１世代時間以上になるよう処理することが多い。）※ 6 細胞の種類によって生成するホルマザンの量が異なるため、発色が十分でない時は継続して培養し、発色条件を決定して下さい。特に血液細胞ではホルマザンの生成量が少ないため、
長時間 (5 〜 6 時間 ) の呈色反応が必要です。

3

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プロトコル

2.5

Absorbance at 450 nm

2
1.5
1

As: 検体の吸光度
Ab: 陰性対照の吸光度0.5

Ac: ブランク吸光度
100

0
0.01

0.1

MEM

90

1

FCeM-MEM

80

Concentration of Actinomycin D (μ g/ml)

70

細胞毒性試験（Actinomycin D)⏕Ꮡ⋡ (%)

図7

細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ細胞染色
ミトコンドリア
関連試薬
細菌研究用
試
薬
膜タンパク質可 溶 化 剤
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
イオン
電 極

5) 48 時間炭酸ガスインキュベーター（37℃）で培養する。
6) Cell Counting Kit-8 溶液 10 μ l を添加した後、炭酸ガスイ
ンキュベーター（37℃）で 2 時間呈色反応を行う。
7) 450 nm の吸光度を測定する。
8) 下記計算式より細胞生存率を算出する。
細胞生存率（％）＝ [（As － Ab）/（Ac － Ab）]×100

Cell line : HeLa
Culture medium : DMEM, 10% FBS
Drug : Actinomycin D
Exposure : 24 hours
Incubation : 37℃ , 5% CO2, 4 hours
Detection : 450 nm

60
50
40
30
20
10
0
0.00001

1.1

Absorbance at 450 nm

0.001

0.01

0.1

Mitomycin C (mmol/L)

0.9

図9
0.7
0.5
0.3
0.1
0.001

0.01

0.1

1

10

100

Concentration of IL-2 (ng/ml)

図80.0001細胞増殖試験（IL-2)
Cell line : CTLL-2
Culture medium : RPMI1640 ,10% FBS
Drug : Human Interleukin-2 (IL-2)
Exposure : 72 hours
Incubation : 37℃ , 5% CO2, 4 hours
Detection : 450 nm

V 日産化学工業株式会社、3 次元培養培地 FCeM
シリーズを用いた毒性試験®

(1) 試薬・Cell Counting Kit-8 (Code: CK04)®
・FCeM -MEM (wako code: 384-06375)
・Mitomycin C
・HeLa 細胞(2) 装置
炭酸ガスインキュベーター、クリーンベンチ、プレートリー
ダー、マルチチャンネルピペット、血球計算盤(3) 方法®
1）対数増殖期にある HeLa 細胞を培地で洗浄し、FCeM MEM 培地（10%FBS）中で 5 日間培養し、スフェア（細胞塊）を作成する。
®
2) 1) で前培養した HeLa 細胞を FCeM -MEM 培地で希釈し、1.0
5× 10 cells/ml の細胞懸濁液を調製する。
3) 96 ウェルプレートの各ウェルに 1) で調製した HeLa 細胞
懸濁液を 50 μ l ずつ播種する。
-64) 種々の濃度の Mitomycin C（終濃度 1 ～ 24×10 mmol/l）を含む培地 50 μ l を添加する。

細胞毒性試験（Mitomycin C）による細胞毒性試験の比較

VI MTT 法

その他

1. 最適細胞数決定法

機能性
有機材料

(1) 試薬・MTT (Code: M009)
・PBS(-)：力ルシウム、マグネシウムを含まないダルベッコリ
ン酸緩衝塩類溶液。1,000 ml の純水に以下の試薬を溶解する。
NaCl
8.00 gKCl
0.20 gNa2HPO4・12H2O
2.90 g
KH2PO40.20 g
溶解後、オートクレーブで滅菌する。
・MTT 溶液：
MTT 25 mg に 5 ml の PBS(-) を加え溶解する。必要に応じて0.22 μ m フイルターで濾過滅菌する。
・4 mol/l 塩酸：
濃塩酸を蒸留水または精製水で 4 mol/l に希釈する。
・0.04 mol/l HCl/ イソプロピルアルコール：
イソプロピルアルコールに 1/100 容量の 4 mol/l 塩酸を添加する。
(2) 装置
炭酸ガスインキュベーター、クリーンベンチ、プレートリー
ダー、倒立顕微鏡、オートクレーブ、マイクロプレートミキ
サー、8 あるいは 4 チャンネルマルチピペット、血球計算盤(3) 方法1) 対数増殖期にある細胞を血球計算盤で計数し、細胞懸濁液
5(5 × 10 cells/mI) を調製する。
2) マルチピペットを用いて 96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 μ l ずつ培地を分注し、細胞懸濁液を希釈しながら添
※1
加する 。
※2
3) 炭酸ガスインキュベーター内で前培養する 。
※34) MTT 溶液を各ウェルに 10 μ l ずつ添加する 。

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4

プロトコル
細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ細胞染色
ミトコンドリア
関連試薬
細菌研究用
試
薬
膜タンパク質可 溶 化 剤
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
イオン
電 極
その他
機能性
有機材料

5) 炭酸ガスインキュベーター内に戻し、2 〜 4 時間呈色反応を※5行う 。
6) 各ウェルに 200 μ l の PBS(-) を加え、1 分間ほど置いたのち、※6
液を吸引する 。
7) 0.04 mol/l HCl/ イソプロピルアルコールを 200 μ l ずつ加え
※7る 。
8) プレートをマイクロプレートミキサーにのせ、10 分間振動
させるか、もしくは超音波照射によりホルマザンを溶解さ
※8
せる 。
※9
9) マイクロプレートリーダーで 570 nm の吸光度を測定する 。
10) 上記の結果より、この後の薬剤感受性試験に使用する細胞数及び呈色時間を決定する。

2. 薬剤感受性試験法(1) 試薬(2) 装置
前項を参照(3) 方法1) 80% コンフルエントの細胞を血球計算盤で計数して細胞懸※1濁液を調製する 。
2) マルチピペットを用いて 100 μ l ずつ、96 穴マイクロプレー
トの各ウェルに細胞懸濁液を分注する。ブランク ( バックグ
ラウンド値 ) 用のウェルには培地のみを 100 μ l 加える。
3) 炭酸ガスインキュベーター内で 48 〜 72 時間培養したのち、※2培地を吸引により除く 。浮遊細胞の場合には、吸引する
前に遠心操作により、細胞を沈澱させておく。新たに培地
100 μ l を各ウェルに加える ( 培地交換 )。ブランク用のウェ
ルには培地のみ 100 μ l 加える。
4) 培地で種々濃度に調製した被験物質液を 10 μ l ずつ添加する。ブランクおよび陰性対照のウェルには、培地を 10 μ l ず※3つ加える 。
5) 37℃の炭酸ガスインキュベーター内で 24 〜 72 時間、培養※4する 。
6) プレートを取り出し、MTT 溶液を各ウェルに 10 μ l ずつ添※3加する 。
7) 炭酸ガスインキュベーター内に戻し、2 〜 4 時間、呈色反応※5を行う 。
8) 各ウェルに 200 μ l の PBS(-) を加え、1 分間ほどおいたのち、※6
液を吸引する 。
9) 0.04 mol/l HCl/ イソプロピルアルコールを 200 μ l ずつ加え※7る 。
10) プレートをマイクロプレートミキサーにのせ、10 分間振動させるか ､ もしくは超音波照射によりホルマザンを溶解
※8
させる 。
※9
11) マイクロプレートリーダーで 570 nm の吸光度を測定する 。

(5) 注意事項※ 1 ウェルあたりの播種細胞数は、細胞の種類や増殖度によって異なる。HeLa.S3(sc) 細胞では、2,000 〜 3,000 cells/
well 程度の播種が適しています。
※ 2 付着細胞を接着させるのに必要な前培養時間は、2 〜 4 時間です。付着細胞でも接着の必要がない場合あるいは浮遊細胞の場合は前培養を省略することも可能です。
多くの細胞は 48 〜 72 時間で細胞が対数増殖期に達します。
※ 3 MTT 溶液や被験物質液がウェルの側壁に付着することがあるのでプレートの底をたたいて振り落として下さい。
※ 4 被験物質の処理時間は被験物質の性質および細胞の感受性によって異なります。（一般的に、細胞周期に依存した感
受性変動も考慮して、少なくとも細胞の 1 世代時間以上になるよう処理することが多い。）※ 5 倒立顕微鏡で、細胞内に青紫色のホルマザン結晶が生成しているか否かを確認して下さい。細胞の種類によって生成するホルマザンの量が異なります。特に血液細胞ではホルマザンの生成量が少ないため、長時間 (5 〜 6 時間 )の呈色反応が必要です。
※ 6 MTT を加えた細胞はかなり剥がれやすいので、マルチピ
ペットを用いて手早く加えて下さい。また、吸引除去す
る際は、細胞を吸引しないよう注意して下さい。浮遊細胞の場台は、吸引除去の前に遠心して下さい。
※ 7 イソプロピルアルコールは生成したホルマザンを溶解するために用いますが、ウェルに多くの培養成分 ( とくに血清 )が残っていると不溶性の沈殿物が生じ、正確な吸光度が得られないことがあるため、培養成分は良く除いて下さい。溶解剤として DMSO を使用することが出来ます。
※ 8 超音波照射する場合は、マイクロプレートごと超音波振動
台に置くか、水を張った超音波槽の中にシールで密閉したマイクロプレートを浮遊させます。その際、超音波振動によってウェル内の液が飛び散ることがあるので注意して下さい。
※ 9 MTT ホルマザンを 0.04 mol/l HCl イソプロピルアルコー
ルで溶解した場合、570 nm 付近に極大吸収を示しますが、他の溶媒では吸収スペクトルが変化するので注意して下さい。その場合あらかじめ極大吸収を調べ、最適なフィルターを用いて吸光度を測定して下さい（DMSO の場合には 530 nm のフィルターが適しています）。

◆ 選択ガイド

細胞毒性 比較 同仁

検索

細胞毒性検出試薬・キットを一覧で掲載しています。

◆ プロトコル集(4) 細胞傷害率の算定法
下記の式により細胞生存率を算出する。これを種々の被検物質濃度に対してグラフに表し、生存率が 50% になる値をIC50(50% 細胞傷害率 ) とする。
細胞生存率 (%)=[(As − Ab)/(Ac − Ab)] × 100
As: 検体の吸光度 ( 細胞、被検物質および MTT 溶液の入ったウェル )
Ac: 陰性対照の吸光度 ( 細胞および MTT 溶液の入った
ウェ ル被検物質無し )Ab: ブランク吸光度 ( 培地および MTT 溶液の入ったウェ
ル細胞無し )

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細胞増殖測定細胞染色プロトコル
細 胞 増 殖 測 定 試 薬（Cell Counting Kit,
Cell Counting Kit-8 他）と細胞染色試薬（-Cellstain-）に関して操作の基礎からわか
りやすく解説。

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プロトコル
細 胞
増殖 / 毒性
酸
化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ細胞染色
ミトコンドリア
関連試薬
細菌研究用
試
薬
膜タンパク質可 溶 化 剤
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
イオン
電 極

参考文献
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その他
機能性
有機材料

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