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PRODUCT INFORMATION

商品名 : DynaMarker® Prestain Marker for Small RNA Plus
商品コード : DM253
分子量範囲 : 20 - 100 bases
内容量 : 150 µl (30 ロード分)
保存温度 : -20 ℃base

特徴 :本マーカーは 6 つの色素修飾された一本鎖核酸から構成されます（見かけ分子量は 20、30、40、50、75、100 bases）。尿素変性
アクリルアミドゲルにおける電気泳動のモニタリングやノーザンブロッティングにおけるメンブレンへのトランスファー効率の確認に最適です。
マーカーを構成する 6 つの色素修飾核酸バンドはそれぞれ 20、30、40、50、75、100 bases の天然 RNA の移動度と 95%の精度で一致します（表 1、図 2 を参照）。
本マーカーはそのまま使用できる、ready-to-use 製品です。加熱処理や変性剤の添加は必要ありません。

100－75－50－40－30－20－

DynaMarker®

Prestain Marker for Small RNA Plus

図 1. 本製品の電気泳動象 (5 µl)
10 % polyacrylamide – 7.5 M urea gel/ 1× TBE buffer

保存バッファー組成:
2 mM Tris-HCl (pH 8.0), 8 mM EDTA, 78% Formamide
品質検定:
本マーカーを 37℃、24 時間インキュベートし、7.5M 尿素含有 10%アクリルアミドゲル電気泳動にて分解が見られないことを確認しております。
使用量 :
ウエル幅
4-10 mm>10 mm

使用量
5-10 µl>10 µl

注意 :・ 電気泳動による、より精度の高い分子量の概算には天然 RNA マーカーの DynaMarker® Small RNA II(code # DM192) or DynaMarker® Small RNA II Easy Load (code # DM197)をご使用ください。
・ 本製品の見かけ分子量は 10～15%アクリルアミドゲルにおいてよく一致するように最適化されています（表 1 を参照）。
・ 本マーカーは尿素変性アクリルアミドゲル専用です。変性アガロースではご使用いただけません。

-1–ver. 1.0

PRODUCT INFORMATION

DynaMarker+ 75 base RNA

Small RNA II

acrylamide concentration(condition: acrylamide:bis = 29:1, 1× TBE)

5.0 %

7.5 %

10 %

12.5 %

15 %17.5 %

20 %100 base

105.6 %

105.6

101.6

98.4

97.2

93.6

92.6

75*

106.2

104.7

103.5

99.5

98.5

94.7

92.4

50

101.4

101.4

101.1

98.7

97.5

95.0

92.2

40

103.1

102.0

103.2

100.8

100.0

97.4

93.9

30

91.0

96.9

98.298.999.2

99.5

98.8

2089.8

95.8

98.2

100.3

101.6

101.4101.4

表 1： DynaMarker® Small RNA II との移動度一致率
DynaMarker®

Prestain Marker for Small RNA Plus の泳動に適しているアクリルアミドゲル濃を表している。
: 推奨: 可能（*75 base RNA は DynaMarker® Small RNA II に後から添加。DynaMarker® Small RNA II の製品には含まれておりません。）

base
100－75*－50－40－30－20－BPB→

10 % polyacrylamide – 7.5 M
urea gel

図 2. DynaMarker® Small RNA II (左) and 本製品(右)の電気泳動象

推奨使用方法 :本マーカーは尿素変性アクリルアミドゲルにおける電気泳動のモニタリングやノーザンブロッティング時のメンブレンへの転写効率の確認に適しています。以下に一例を示します。
・電気泳動およびメンブレンへのトランスファー
1) 7.5M 尿素含有 10%ポリアクリルアミドゲルの調製-2–ver. 1.0

PRODUCT INFORMATION

40 % acrylamide : bis solution
5.0 mlUrea
9.0 g
10 × TBE
2.0 ml
H2O
to 20 ml
尿素が完全に溶解したら、TEMED を 20 μl および 10%過硫酸アンモニウム(10% APS)を 160 µl 添加し速やかに混合します。その溶液をスラブゲルガラスプレート間に流し込み、コームをセットします。
2) 電気泳動
ご使用前に本製品が完全に融解していることを確認してください。
変性処理したお手持ちの RNA サンプルおよび本製品を 5µl アプライします。そして 1×TBE にて 20～40 V/cm の電圧で泳動を行います。ミニゲル(8～10cm)では 200V 程度を推奨します。
3) メンブレンへの転写
3-1) ポジティブチャージナイロンメンブレンおよび複数枚のブロッティングペーパーをアクリルアミドゲ
ルよりも少し大きめに用意し、0.5×TBE に浸します。
3-2) ブロッティングペーパー2 枚をブロッティング装置の陽極側に置きます。
3-3) ブロッティングペーパーの上にナイロンメンブレンを重ねます。
3-4) メンブレンの上に泳動したアクリルアミドゲルを載せます。その際、メンブレンとゲルの間の気泡を上から押さえつけるようにして押し出します。
3-5) ブロッティングペーパー2 枚をゲルの上に載せ、ブロッティング装置の陰極をセットします。
3-6) 2 mA/cm2 で 30～60 分通電します。
3-7) マーカーがメンブレンへ転写されていることを確認したのち、メンブレンを 2×SSC バッファーで洗浄します。
3-8) UV クロスリンカーで RNA をメンブレンに固定します。
3-9) マーカーレーンを切り取ります。
3-10)ノーザンハイブリダイゼーション実験を行います。

（1） （2）TransferBPB- Acrylamide gel -- Membrane -図 3. 左 : (レーン 1)本製品、 (レーン 2) RNA サンプルを 7.5M 尿素含有 10 % ポリアクリ
ルアミドゲルにて泳動した結果
右 : メンブレンへトランスファーした結果-3–ver. 1.0

PRODUCT INFORMATION

参考文献 :・ Joseph Sambrook, and David W. Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., ColdSpring Harbor Laboratory Press.
・ Frederick M. Ausubel, Roger Brent, Robert E. Kingston, David D. Moore, J. G. Seidman, John A. Smith,and Kevin Struhl (1994－) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc.
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