マイグラソーム―総 説―

Migrasomes and migracytosis,
an emerging ﬁeld in cell biology
清華大学
北京大学
清華大学

Li Yu（俞立）Yang Chen（陈扬）Dongju Wang（王东锔）―注目の研究―二重機能性蛍光色素
（H-V）
を用いた
フェロトーシスの解明
株式会社同仁化学研究所

新 製 品

北村

エクソソーム蛍光染色キット P.4
細胞周期測定試薬 P.4
脂肪滴染色試薬・キット P.5
ミトコンドリア染色試薬 P.9

怜奈No.172(2020)

たか ぶ2020 No.172と やま

表紙撮影：熊本県天草 高舞登山
「戦国時代に、この地の武将が山頂で舞いを楽しんだ」という言い伝えから、「高舞登山」と命名された。
photo：永島俊介氏

ドージンニュース

CONTENTS
Review
Migrasomes and migracytosis,
an emerging ﬁeld in cell biology［1］●

清華大学 Li Yu（俞立）北京大学 Yang Chen（陈扬）清華大学 Dongju Wang（王东锔）Topics on Chemistry
二重機能性蛍光色素（H-V）を用いたフェロトーシスの解明 ●株式会社同仁化学研究所

［6］

北村 怜奈

Commercial［6］

細胞内鉄検出試薬 ●細胞内過酸化脂質検出試薬

［7］

●

［7］

グルタチオン測定キット ●［8］

ミトコンドリア研究用試薬 ●［10］
細胞内代謝測定キット ●実験例 ミトコンドリア電子伝達系の阻害実験 ●抗酸化能測定キット -DPPH ラジカル消去活性

［11］
［12］

●

［12］

抗酸化能測定キット -SOD 様活性 ●新製品
エクソソーム蛍光染色キット ●

［4］
［4］

細胞周期測定試薬 ●［5］脂肪滴染色試薬・キット ●ミトコンドリア染色試薬［9］●－関連アプリケーションの紹介－［7］
フェロトーシス研究 ●FAQ
DPPH Antioxidant Assay Kit ●

［13］

お知らせ
食品機能性評価・微生物検出試薬冊子

第二版 ●細胞機能解析冊子

［13］

第3版

販売中止製品のお知らせ ●

●

［12］
［13］

ツイッターはじめました※希望納入価格には消費税等は含まれておりません。

＠dojindoinfo

No.172(2020)

Migrasomes and migracytosis, an emerging field in cell biology

Abstract:
Li Yu（俞立）The State Key Laboratory of Membrane
Biology, Tsinghua University-Peking
University Joint Center for Life Sciences,
School of Life Sciences, Tsinghua
University.

Yang Chen（陈扬）Center for Precision Medicine Multi-Omics
Research, Peking University Health
Science Center, Peking University.

Dongju Wang（王东锔）The State Key Laboratory of Membrane
Biology, Tsinghua University-Peking
University Joint Center for Life Sciences,
School of Life Sciences, Tsinghua
University.

Migrasomes are newly discovered cellular organelles
generated through migracytosis. They function in active
intracellular communications which are essential for multiple
core biological processes. In this review, we summarize thecurrent research progress on migrasomes, including themolecular mechanisms involved in migrasome biogenesis andthe physiological significance of migrasomes. We also propose
the potential functions of migrasomes and the future directionsof this emerging field.

Main text:
Migrasomes are newly discovered cellular organelles, firstdescribed in 2015 by Liang Ma et al1, 2 (Figure 1). Migrasomes
are vesicles with diameters on the micron scale which containnumerous small vesicles inside. They are generated on the tips
or intersections of retraction fibers (RFs), the long membrane
projections left by cells when they migrate away. During
biogenesis, cytosolic components are actively transported tomigrasomes. Once the generation process is completed,migrasomes are either broken to release their contents into theextracellular space or taken up by incoming cells. The process of
migrasome release by migrating cells is called migracytosis.
Thus, migrasomes and migracytosis are proposed asmechanisms for spatial and temporal cell-cell communications.

1. Molecular mechanisms of migrasomebiogenesis
1.1. Integrins provide the adhesion force for migrasome
formation
Generation of migrasomes is dependent on cell migration.
The number of migrasomes increases when migration isenhanced and decreases when migration is inhibited 1. In
cultured cells, migrasomes adhere to the extracellular matrix(ECM) where they are formed, which indicates that adherent
molecules play a role in the process of migrasome formation.
Mass spectrometry analysis revealed that integrin α5β1 isenriched on migrasomes. Integrin α5β1 appears on retraction
fibers before the actual grow th of migrasome vesicles.
M o r e ove r, i n te g r i n α5β1 i s l o c a te d a t t h e b o t to m o f
migrasomes 3. These spatial and temporal distribution features
suggest that integrin α5β1 specifies the site of migrasome
formation. There are 18α and 8β integrins in mammals.
Different integrins bind to different ECM proteins. Interestingly,
we found that the pairing of integrins with their specific ECM
partners is a determinant for migrasome formation 3 . This

Figure 1. TSPAN4 is enriched on migrasomes.
L929 cells stably expressing TSPAN4-mcherry were plated on a glass dishcoated with fibronectin and observed by confocal microscopy.
Scale bar: 50 μm.

1

No.172(2020)

regulatable specificity provides great potential for migrasomes
to function in vivo as signal transmitters.

2. Physiological significance of
migrasomes

1.2. Tetraspanins regulate migrasome formation

2.1. Migrasomes are essential for zebrafish organ
morphogenesis

Tetraspanin 4 was found to be enriched on migrasomes andhas been used as a marker for migrasomes in previous studies1, 4.
There are 33 tetraspanins in the mouse genome. Overexpressionof 14 of these tetraspanins can enhance migrasome formation in
Normal Rat Kidney (NRK) cells, while knockout of the highest
expressed migrasome-forming tetraspanins blocks this process5.
In addition, tetraspanins and cholesterol form microdomains on
migrasomal membranes. Reducing the cellular cholesterol levelsignificantly impairs migrasome formation. Thus, tetraspanin andcholesterol are required for migrasome formation. To moreaccurately study the process of migrasome generation, we
designed an in vitro system. Using purified tetraspanin 4-GFP(TSPAN4-GFP), cholesterol and other lipids, we generated giant
unilamellar vesicles (GUVs). To mimic cell adhesion andmigration, we first attached GUVs with bioengineered biotin to
the bottom of a flow chamber coated with streptavidin. Then, byapplying directional liquid flow in the chamber, we provided amechanical force to move GUVs away from adherent spot. In
this way, we successfully reconstituted the formation of
migrasomes, and we found that both tetraspanin 4 andcholesterol colocalized on the reconstituted migrasomes.
Without tetraspanin 4 or cholesterol, migrasomes could not bereconstituted; instead, small clusters of tetraspanin 4 orcholesterol were observed to be randomly distributed5. To study
the dynamics of migrasome formation in vitro, we applied adirect pulling force using a glass needle attached to the GUV
instead of directional liquid flow. By pulling the GUV away with aneedle, we generated retraction fiber-like structures. In this way,
we observed that the initially evenly-distributed small tetraspanin
4 clusters self-organized into macrodomains, which eventuallyswelled to form migrasomes. Thus, the mechanical force drove
the formation of tetraspanin 4 macrodomains, which in turnshaped the migrasomes. We concluded that tetraspanin 4 andcholesterol are sufficient and necessary for migrasome
formation5. Moreover, the in vitro reconstitution system provided
us with an easily monitored platform to study migrasome
formation with single components and made it possible tomeasure and calculate biophysical parameters. This made it
possible to model migrasome formation. Our theoretical model
explained that the shaping of migrasomes by tetraspanin 4 andcholesterol-enriched macrodomains may be explained by twobiophysical properties: a high degree of bending stiffness of the
migrasomal membrane and the line tension that acts at theboundary between the migrasome and the retraction fiber. The
experimental parameters fit well with the calculated parametersfrom the modeling5. Thus, migrasome formation is mediated byassembly of micron-scale tetraspanin macrodomains. This work
established tetraspanins as the key regulators of migrasome
formation.

The zebrafish embryo is the first in vivo model system
documented to have migrasomes 6 . We found that during
zebrafish gastrulation, migrasomes are formed in theextracellular pockets of space between mesendodermal cells
and in the pockets between the blastodermal margin and theyolk syncytial layer. Tetraspanin 4a, tetraspanin 7, and integrin β
1b were found to regulate migrasome biogenesis in zebrafish.
Knockout of tetraspanins 4a and 7 resulted in organ laterality
defects including left-right reversal and bilateral duplication.
Injection of exogenous migrasomes partially rescues organ
morphogenesis in tspan4a and tspan7 mutants6. Quantitative
mass-spectrometry analysis showed that signaling molecules,
including chemokines, morphogens, growth factors andcytokines, are enriched in migrasomes. Among these, Cxcl12
plays an important role in organ morphogenesis. We found that
migrasomes were enriched around the embryonic shield andprovided a source of Cxcl12a. The regional chemoattractants
provided by migrasomes attract and hold dorsal forerunner cells(DFCs) at the front of the embryonic shield. The correct migrationof DFCs ensures the formation of Kupffer's vesicle (KV), which isessential in establishing the left-right body axis6. The study of
migrasomes in zebrafish embryonic development provides a newmechanism for establishing signaling cues, in which signaling
molecules are packed into membrane-bound compartments forrelease. The spatial and temporal control of signaling releaseadds another layer of regulation to the coordination of embryonicdevelopment2.

2.2. Identification of migrasomes in human serum
through specific protein markers
We employed tandem mass tag (TMT) labeling followed byquantitative mass spectrometry to identify proteins enriched on
migrasomes. By comparing the mass spectrometry data from
migrasomes and exosomes, we identified and verified a set of
specific protein markers that are enriched on migrasomes, but
not on exosomes. These markers allowed us to analyze humanserum samples biochemically7. We fractionated the serum andfound that a certain fraction is positive for all the migrasome
markers identified. Further electron microscopy analysis
confirmed the presence of migrasomes in the fraction. Thus,
migrasomes are present in human serum and can be detectedby western blotting using a set of protein markers 7 . The
identification of migrasome-specific protein markers will
potentially be important in disease-related studies.

3. Future perspectives on migrasome
research
Migrasomes are emerging as a new field in cell biology. So far,
we have dissected the role of integrins, TSPAN4 and cholesterol2

No.172(2020)in migrasome biogenesis. Moreover, we demonstrated theessential role of migrasomes in organ morphogenesis inzebrafish embryonic development, which is the first example ofthe physiological significance of migrasomes. Furthermore,migrasomes were detected in human serum, which suggests
their potential as vehicles for signal transduction in thecirculatory system. We have already developed protein markers
and a specific dye, WGA, for migrasome detection by imaging
and biochemical approaches8. However, we are still at an earlystage of migrasome research. The molecular mechanisms
involved in migrasome biogenesis, for example the detailed
regulatory mechanisms of migrasome biogenesis, themechanisms for sorting the enriched contents of migrasomes,
and the mechanisms of migrasome uptake by recipient cells,
await dissection. Moreover, we are still far from fully appreciating
the biological significance of migrasomes. More extensive
research to establish a deeper understanding the physiologicaland pathophysiological relevance of migrasomes is urgently
needed (Figure 2). One direction is to establish disease models
in migrasome-deficient mice to study the different phenotypes
caused by defective migrasome biogenesis. On the other hand,
multi-omics approaches, including proteomics, transcriptomics,
lipidomics, metabolomics, and post-translationomics analysis ofhuman biofluid samples ― for example, serum samples fromlarge disease cohorts accompanied by data mining ― is anotherway to unravel the link between migrasomes and disease. Last
but not least, more accurate migrasome detection methods are
required for both mechanistic research and translational researchin the migrasome field. Development of a highly specific, easily
manipulated dye with robust signals will be very muchappreciated.
Migrasomes, which are generated through migracytosis, canbe considered as signal vehicles for several core biologicalprocesses, including the regulation of immune responses,
embryonic cell migration, and establishment of the tumor
microenvironment.

［References］
1.
2.
3.
4.
5.
6.

7.
8.

L. Ma, Y. Li, J. Peng, D. Wu, X. Zhao, Y. Cui, L. Chen, X. Yan, Y. Du and L.
Yu, Cell Res., 2015, 25(1), 24-38.
B. da Rocha-Azevedo and S. L. Schmid, Cell Res., 2015, 25(1), 1-2.
D. Wu, Y. Xu, T. Ding, Y. Zu, C. Yang and L. Yu, Cell Res., 2017, 27(11),1397-1400.
Y. Chen, Y. Li, L. Ma and L. Yu, Methods Mol. Biol., 2018, 1749, 43-49.
Y. Huang, B. Zucker, S. Zhang, S. Elias, Y. Zhu, H. Chen, T. Ding, Y. Li, Y.
Sun, J. Lou, M. M. Kozlov and L. Yu, Nat. Cell Biol., 2019, 21(8), 991-1002.
D. Jiang, Z. Jiang, D. Lu, X. Wang, H. Liang, J. Zhang, Y. Meng, Y. Li, D.
Wu, Y. Huang, Y. Chen, H. Deng, Q. Wu, J. Xiong, A. Meng and L. Yu,
Nat. Cell Biol., 2019, 21(8), 966-977.
X. Zhao, Y. Lei, J. Zheng, J. Peng, Y. Li, L. Yu and Y. Chen, Cell Discov.,
2019, 5, 27.
L. Chen, L. Ma and L. Yu, Cell Discov., 2019, 5, 13.

［Contact］
Corresponding author:
Li Yu（俞立）, School of Life Sciences, Tsinghua University,
Beijing 100084, China.
Tel: +86-(0)10-62792880
Email: liyulab@mail.tsinghua.edu.cn
Graduation: Peking University: Ph.D
Current position: Professor in the School of Life Sciences,
Tsinghua University
Current interests: Migrasomes, a new organelle discovered in the
Yu labFirst author:
Yang Chen（陈扬）, Center for Precision Medicine Multi-Omics
Research, Peking University Health Science Center,
Beijing 100191, China
Tel: +86-(0)10-82805521
Email: chenyang1816185048@bjmu.edu.cn
Graduation: Peking University: Ph.D
Current position: Tenure Track Investigator in the Health Science
Center, Peking University
Current interests: Multi-omics of extracellular vesicles
Second author:
Dongju Wang（王东锔）, School of Life Sciences,
Tsinghua University, Beijing 100084, China.
Tel: +86-(0)10-62794552
Email: wangdj16@mails.tsinghua.edu.cn
Graduation: Tsinghua University: B.S.
Current position: Ph.D candidate in the School of Life Sciences,
Tsinghua University
Current interests: Migrasomes, a new organelle discovered in the
Yu labFigure 2. Potential roles of migrasomes in normal physiology andtumor pathogenesis.

3No.172(2020)

新製品

新製品

エクソソーム蛍光染色キット

細胞周期測定試薬

ExoSparkler Exosome
Membrane Labeling Kit-Green, Red, Deep Red
Protein Labeling Kit-Green, Red, Deep Red＜特長＞
・色素自身が凝集しない
・未反応色素を除くフィルトレーションチューブ同梱
ExoSparkler シリーズは、精製されたエクソソームの膜またはタンパク質を染色し、細胞に取り込まれるエク 既存製品との比較
細胞外輝点
ソソームをイメージングすることができます。
また、一般的なエクソソーム染色試薬の課題である色素自体の凝集を起こさず、染色前後でのエクソソームのサイズ分布や表面電荷状態を変化させないため、より正確にエクソソームの動態を可視化できます。
紫：Dojindo（EX03）,

Cell Cycle Assay Solution Blue
Cell Cycle Assay Solution Deep Red＜特長＞
・細胞の固定化、RNase 処理が不要で試薬を添加するだけ
・405 nm、633 nm のレーザーで励起が可能
一般的に使用される Propidium Iodide（PI）を用いた手法と比較して、本製品は高い細胞膜透過性と DNA 選択性を有する色素を使用しているため、細胞懸濁液に試薬を添加するだけで測定が可能です。

緑：S 社製品 P

＜操作＞

品名
容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
Cell Cycle Assay Solution Deep Red 50 tests
13,000
C548
Cell Cycle Assay Solution Blue 50 tests
13,000C549＜時間依存的なエクソソームの局在変化＞
超遠心法で精製したエクソソームを Membrane Labeling KitDeep Red（メーカーコード：EX03）で染色し、リソソーム染色
試薬で染色した HeLa 細胞に添加、1、4 時間後の蛍光画像を観察しました。

＜検出条件＞
EX03（紫）：Ex 640 nm / Em 640-760 nm
リソソーム染色試薬（緑）：Ex 488 nm / Em 490-540 nm

細胞老化誘導に伴う細胞周期とミトコンドリア膜電位の変化
細胞周期の G2/M 期に作用し細胞増殖を停止させ、細胞老化を誘導することが知られる Doxorubicin（DOX）を A549 細胞へ添
加 後、本 製 品 で 細 胞 周 期 の 変 化 と、細 胞 老 化［Cellular
Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal（メ ー カ ー コ ー ド：SG03）］お よ び ミ ト コ ン ド リ ア 膜 電 位 の 低 下［JC-1 MitoMP
Detection Kit（メーカーコード：MT09）］を確認しました。
細胞周期の変化

細胞老化の亢進

DOX 添加に伴う細胞周期の変化

DOX 添加に伴う SA- β -Gal 発現量の増加

その結果、時間経過に伴い EX03 の蛍光輝点（紫）はリソソー
ムの局在（緑）と重なり（白）、時間依存的にエクソソームの局在が変化している様子が確認されました。

品名
ExoSparkler Exosome Membrane
Labeling Kit -Green-Red-Deep Red
ExoSparkler Exosome Protein
Labeling Kit -Green-Red-Deep Red

容量※

希望納入価格（￥） メーカーコード

5 samples
5 samples
5 samples

25,00025,00025,000

EX01
EX02
EX03

5 samples
5 samples
5 samples

20,00020,00020,000

EX04
EX05
EX06

※精製済エクソソーム（超遠心法）として、タンパク質：1-10 μg/sample、粒子数：10-100 × 108 個 /sample）

4

Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER- β Gal

ミトコンドリア膜電位の低下
DOX 添加に伴う膜電位の低下

JC-1 MitoMP Detection Kit

No.172(2020)

新製品
脂肪滴染色試薬・キット
Lipi シリーズは、脂肪親和性の高い低分子蛍光試薬であり、疎水性環境下で蛍光が増強します。また、試薬を添加するだけで生細胞および固定化細胞中の脂肪滴を明瞭に観察することができます。
Lipi シリーズを用いて脂肪滴の量的変動を数値化できるキットもご用意しております。
蛍光顕微鏡用Lipi-Blue, Green, Red, Deep Red＜測定例＞
オレイン酸を添加した HeLa 細胞を生細胞の状態で、Lipi シリーズの各色素にて染色しました。
＜測定条件＞HeLa 細胞の培養液中に 200 μmol/l オレイン酸を添
加、一晩培養後に細胞を PBS で洗浄し、Lipi シリー
ズの各色素 Lipi-Blue/Green/Deep Red：0.1 μmol/l、
Lipi-Red：1 μmol/l にて 15 分間染色し観察。
上段 蛍光画像、下段 位相差像とのマージ画像＜検出条件＞
Lipi-Blue：405 nm（Ex）、450 - 500 nm（Em）
Lipi-Green：488 nm（Ex）、500 - 550 nm（Em）
Lipi-Red：561 nm（Ex）、565 - 650 nm（Em）
Lipi-Deep Red ：640 nm（Ex）、650 - 700 nm（Em）

スケールバー ：20 μm

フローサイトメーター、プレートリーダー用

Lipid Droplet Assay Kit - Blue, Deep Red＜測定例＞細胞にオレイン酸または脂肪滴の形成阻害剤である Triacsin C を添加し、Lipid Droplet Assay Kit を用いて脂肪滴の量的変動を数値化しました。その結果、コントロールならびに Triacsin C を加えた細胞と比較して、オレイン酸を添加した細胞で脂肪滴の量が増加していることを確認しました。

細胞：A549
Blue：Ex 376 - 386 nm、Em 435 - 455 nm
Deep Red ：Ex 623 - 633 nm、Em 649 - 669 nm

品名
容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
Lipi-Blue
10 nmol ＊ 1
18,000LD01
Lipi-Green
10 nmol ＊ 1
18,000LD02
Lipi-Red
100 nmol ＊ 1
18,000LD03
Lipi-Deep Red
10 nmol ＊ 1
18,000LD04
Lipid Droplet Assay Kit-Blue
1 set ＊ 2
25,000LD05
Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red
1 set ＊ 2
25,000LD06＊ 1 Lipi シリーズ色素：35 mm dish 10 ～ 50 枚分＊ 2 Assay Kit：96 well plate 1 枚分、フローサイトメトリー 40 アッセイ分細胞：HeLaBlue：Ex 405 nm、Em 425 - 475 nm
Deep Red ：Ex 640 nm、Em 650 - 670 nm

Lipi シリーズを使用した論文は小社 HP よりご覧いただけます。
脂肪滴

同仁

検索

5

No.172(2020)

Topics on Chemistry
二重機能性蛍光色素（H-V）を用いたフェロトーシスの解明
株式会社同仁化学研究所

北村怜奈

フェロトーシスは、アポトーシスともネクローシスとも異なる経路で起こる新たな細胞死である。2012 年に Stockwell らは、
鉄依存的な細胞死としてフェロトーシスを提唱し、その経路として活性酸素種（Reactive Oxygen Species: ROS）と二価鉄の反応により脂質の過酸化が増加することで細胞死へと誘導されることを報告している（図 1）1）。しかしながら、現在フェロトーシ
スの実行因子やその機構についてはまだ不明な点が多く、その解明のため非常に活発な研究が行われている。
本稿では、Li らが発見した ROS の一つであるヒドロキシラジ
カル及び細胞質の粘度変化に伴うフェロトーシスの研究について紹介する 2）。
Li らは、細胞内のヒドロキシラジカル並びに細胞質内の粘度変化を可視化するため、アニソールにビニル基を介しインドリウム
図 2 ヒドロキシラジカルと粘度に対する H-V の反応メカニズム
誘導体を導入した低分子蛍光プローブ（H-V）を開発した。H-V
は、細胞質の粘度上昇依存的に緑色蛍光（λem = 520 nm）が増加し、一方でヒドロキシラジカルにより酸化を受けた際には赤色
細胞内鉄検出試薬
蛍光（λem = 652 nm）を発する特徴も持つ（図 2）。グリセロー
ルを含むメタノールを試料として用いた In vitro 実験において、FerroOrange
H-V は検体の粘度増加に伴い約 50 倍の蛍光増大を示し、フェントン反応により生成させたヒドロキシラジカルを約 450 倍の高＜特長＞
感度で検出した。また Li らは、HT-1080 細胞にエラスチンを用・生細胞中の Fe2＋を高感度に検出
いてフェロトーシスを誘導すると、細胞質の粘度上昇に伴う 520
・96 穴マイクロプレートアッセイに対応
nm 蛍光増加（約 7 倍）と、ヒドロキシラジカル産生に伴う 652
nm 蛍光増加（約 26 倍）が起きることを確認している。この結本製品は、細胞内の二価鉄（Fe2＋）を選択的に検出するための果は、フェロトーシスにおいてヒドロキシラジカルの生成と共に蛍光プローブです。培養細胞に添加するだけで細胞膜を透過し、細胞質の粘度上昇が生じることを示している。興味深いことに、
細 胞 内 の Fe2＋ と 反 応 し て 強 い 蛍 光（λex：543 nm、λem：580
細胞質内粘度の増加に伴い脂肪滴の形成が加速されることも脂肪nm）を発します。
滴染色試薬を用いた実験で示唆されている。これは、鶴崎らが報告した NASH（非アルコール性脂肪肝炎）とフェロトーシスの関＜検出例＞
係性にも通ずる点である 3）。
細胞内に存在する Fe2＋ を確認するため、鉄キレート試薬 Bpy
今回は、Li らの研究成果をもとにフェロトーシスを紹介した（2,2'-bipyridine）または鉄（硫酸アンモニウム鉄（Ⅱ））を添加しが、前述したようにまだまだ未知な点が多い研究分野である。よた HeLa 細胞を用い、細胞内の Fe2＋ を検出しました。
り詳細な細胞内鉄（総量／二価鉄／三価鉄）の動態や量変化を検出できる技術が開発されることで更なる研究の発展が期待される。
イメージング解析
添加剤なし［参考文献］
1)
2)
3)

鉄キレート試薬添加 鉄添加

S. J. Dixon et al., Cell, 2012, 149, 1060.
H. Li et al., J. Am. Chem. Soc., 2019, 141, 18301.
S. Tsurusaki et al., Cell Death and Disease, 2019, 10, 449.

＜検出条件＞
Ex：561 nm、Em：570-620 nm

スケールバー： 20 μm

マイクロプレートアッセイによる数値化＜検出条件＞
Ex：543 nm、Em：580 nm

品名FerroOrange
図16

フェロトーシスの分子機構

容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
1 tube14,000F374
3 tubes
32,000※ 1 tube あたり 24μg の FerroOrange が含まれますNo.172(2020)－関連アプリケーションの紹介－
フェロトーシス研究
アミノ酸トランスポーター（xCT）
阻害
Erastin 刺激により、シスチン / グルタミン酸交換輸送体（xCT）を阻害すると、細胞内へのシスチンの取り込みおよび、細胞外へのグルタミン酸の放出が阻害されます。シスチンの細胞内取り込みが阻害されることにより、グルタチオンの生成が低下し、さらに、鉄に依存した脂質過酸化によるフェロトーシスが引き起こされます。

＜実験例＞
xCT が阻害された A549 細胞において、Glutamate 放出量および細胞内 GSH が減少し過酸化脂質が増大する結果が得られました。
過酸化脂質検出［Liperfluo］

細胞内過酸化脂質検出試薬

Glutamate 放出量［Glutamate Assay Kit-WST］

細胞内 GSH［GSSG/GSH
Quantification Kit］

グルタチオン測定キット

Liperfluo

GSSG/GSH Quantification Kit＜特長＞
・細胞内の過酸化脂質の検出ができる・過酸化脂質特異性が高い

＜特長＞
・酸化型
（GSSG）、還元型（GSH）グルタチオンの分別定量が可能
・比色によるマイクロプレートアッセイで多検体の測定が可能

Liperfluo は生細胞の過酸化脂質のイメージングやフローサイ
トメトリーによる過酸化脂質量の分析に使用することができます。

＜測定例＞
生細胞を用いたライブセルイメージング
細胞：L929
装置：
Zeiss LSM510META
フィルター：FITC（GFP, Alexa488）
wide filter
HFT UV/488、NFT490、BP505-550

フェロトーシス研究にて Liperfluo を用いた論文を続々公開！
詳細は小社 HP をご覧ください。
L248
品名Liperfluo

同仁
容量
50 μg × 5

キットには、GSH のマスキング剤が含まれており、酵素リサ
イ ク リ ン グ 法 を 用 い た DTNB［5,5’-dithiobis（2-nitrobenzoicacid）］発 色（λmax ＝ 412 nm）を 測 定 す る こ と で、GSSG のみを定量でき、別途測定した総グルタチオン量から GSSG 量を差し引くことで GSH 量を求めることができます。

＜操作＞①試料を添加

② Buffer solution を 加 え 37℃
1 時間インキュベート③酵素溶液および基質を加える④ 37℃で 10 分間インキュベー
ト後 412 nm の吸光度を測定

検索
希望納入価格（￥） メーカーコード
21,200
L248

品名GSSG/GSH Quantification Kit

容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
200
54,800
G257
tests

7

No.172(2020)

ミトコンドリア研究用試薬
小社では、ミトコンドリア研究用試薬を各種取り揃えています。
各製品の測定例やプロトコルについては、小社 HP にてご覧いただけます。

品名
Mitophagy Detection Kit
Mito-FerroGreen
MitoPeDPP
Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen lmaging
Lactate Assay Kit-WST
Glucose Assay Kit-WST
JC-1 MitoMP Detection Kit

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ミトコンドリア

容量
1 set
50μg × 2
5μg × 32μg
50 tests
200 tests
50 tests
200 tests
1 set

比較

希望納入価格（￥） メーカーコード
36,000 MD01
25,000M489
19,200M466
20,600MT05
29,000L256
68,00018,000G264
38,00023,000
MT09

同仁

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No.172(2020)

新製品
ミトコンドリア染色試薬
MitoBright LT Green, Red, Deep Red＜特長＞
・ミトコンドリアを長期間観察可能
・血清入り培地中で染色可能
・コラーゲンコートプレート上で培養した細胞のミトコンドリアを低バックグラウンドで検出可能

ミトコンドリアを長期間観察
HeLa 細胞を各 MitoBright LT または既存試薬で染色し、4 日間培養後ミトコンドリアを観察しました。その結果、既存試薬の蛍光強度は大きく低下したのに対し、MitoBright LT は蛍光強度が維持され、ミトコンドリアを明瞭に観察できました。
既存試薬（T 社）

MitoBright LT
Green

Red

Deep Red

Green

Red

Deep Red

染色直後＜検出条件＞
MitoBright LT Green、
既存試薬（T 社）Green：
Ex 488 nm / Em 500-560 nm

染色後 4 日間培養

MitoBright LT Red、
既存試薬（T 社）Red：
Ex 561 nm / Em 560-620 nm
MitoBright LT Deep Red、
既存試薬（T 社）Deep Red：
Ex 640 nm / Em 650-700 nm
スケールバー：20μm

タイムラプスイメージング

よくある質問HeLa 細 胞 を CCCP 処 理 し、マ イ ト フ ァ ジ ー 検 出 試 薬（MtphagyDye メーカーコード：MT02）及びミトコンドリア染色
試薬（MitoBright LT Green）にて共染色しタイムラプス撮影（6時間）しました。詳細は HP にてご覧いただけます。

Q．MitoBright LT で染色した後、脱分極をすると染色の度合いに影響はありますか？

マイトファジーのリアルタイム観察
緑：MitoBright LT Green
赤：MtphagyDye

データ提供＜検出条件＞
装 置：LSM-700 Laser scanning confocal
microscope (LSCM)(Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)
励起波長：MitoBright LT Green 488 nm
MtphagyDye 555 nm
対物レンズ：63 倍
拡大：1.5 倍撮影インターバル : 15 秒

A．脱分極条件や細胞種などにより影響は確認されます。また、
MitoBright LT の各色素で影響の度合は異なります。参考として小社では HeLa 細胞を各 MitoBright LT で染色し、下記条件
にて脱分極処理を行って蛍光染色の変化を観察しました。
＜染色条件＞HeLa 細 胞 を MitoBright LT（100μmol/l、30 分インキュベーション）に て 染 色 し HBSS に て 洗 浄
後 FCCP 処理（100μmol/l、60 分
イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン）し HBSSにて 2 回洗浄後観察した。
＜検出条件＞
MitoBright LT Green :Ex 488 nm/Em 500–560 nm
MitoBright LT Red :Ex 561 nm/Em 560–620 nm
MitoBright LT Deep Red :Ex 640 nm/Em 650–700 nm

タイムラプスビジョン

品名
MitoBright LT Green

MitoBright LT Red

MitoBright LT Deep Red

容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
20 μl × 1
6,000
400 μl × 1
12,000MT10400 μl × 3
30,00020 μl × 1
6,000
400 μl × 1
12,000MT11400 μl × 3
30,00020 μl × 1
6,000
400 μl × 1
12,000MT12400 μl × 3
30,000

さらに詳細な情報は小社 HP で！
✓各試薬の蛍光特性□✓タイムラプス動画□✓フローサイトメーターの検出例□

MitoBright LT

同仁

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細胞内代謝測定キット
細胞内の代謝システムである解糖系や TCA 回路、ペントース - リン酸経路の解析は、細胞状態を理解する上で重要であり、グルコー＋/NAD（P）H、グルタミン、グルタミン酸などの代謝産物を指標に評価されています。
ス、乳酸、NAD（P）

細胞内代謝マップと疾患サンプルの評価例で理解が深まる
はじめて代謝を測定される方へ
様々な疾患による細胞内代謝の変動を表やマップで紹介しております。また参考論文も掲載しておりますので、論文執筆時の引用文献としてもご活用頂けます。詳細は
小社 HP にてご覧ください。
細胞内代謝

品名
Glutamine Assay Kit-WST
Glutamate Assay Kit-WST
Glucose Assay Kit-WST
Lactate Assay Kit-WST
NAD/NADH Assay Kit-WST
NADP/NADPH Assay Kit-WST

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同仁

容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
100 tests
55,000G268
100 tests
50,000G269
50 tests
18,000G264
200 tests
38,00050 tests
29,000L256
200 tests
68,000100 tests
54,000N509
100 tests
54,000N510

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実験例
ミトコンドリア電子伝達系の阻害実験
Antimycin 刺激によりミトコンドリア電子伝達系を阻害すると、解糖系を強制的に維持しようとしピルビン酸から乳酸への代謝が亢
進し、NAD/NADH 比が低下します。また電子伝達系の阻害では、ミトコンドリア膜電位が低下し、活性酸素種（ROS）の増加に伴う
GSH の枯渇を引き起こすことが知られています。
下記の実験では、Jurkat 細胞に Antimycin 50 μmol/l を添加し 24 時間インキュベート後の培養上清または細胞を用いて小社キット
により測定を行いました。

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抗酸化能測定キット -DPPH ラジカル消去活性

抗酸化能測定キット -SOD 様活性

DPPH Antioxidant Assay Kit

SOD Assay Kit-WST＜特長＞
・必要な試薬が揃ったキット
・試薬調製の手間を大幅に削減
・マイクロプレートアッセイによる多検体分析が可能＜特長＞
・試薬添加だけの簡便な操作
・マイクロプレートアッセイによる多検体処理が可能

高 知 大 学 の 島 村 ら は DPPH
（2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl）を用いた施設間差の少ない抗酸化活性測定法を報告しています 1）。
本製品は島村らの方法をマイクロプレートアッセイに適用し、多検体分析を可能にしました。また ready-to-use 仕様であるため
試薬調製の煩雑さを低減できるとともに、ヒト間および施設間によるデータのバラツキを抑えることが可能になりました。

本キットでは、活性酸素種の一つであるスーパーオキシドの消去能を持つ SOD（superoxide dismutase）様活性を測定することができます。

＜操作＞
96 穴マイクロプレートを用い、サンプル調製から測定まで約1 時間で完了します。

1）T. Shimamura et al., Anal. Sci., 2014, 30, 717-721.

操作の手間を大幅に削減＜測定例＞
高知大学の島村らは碁
石茶（ゴイシチャ）の製
造工程毎に SOD 様活性をキットで測定しています。

時間と手間を大幅に削減

参照元：島村，日本食品科学工学会誌 , 55(12), 640.

試薬を添加するだけの簡便な操作本キットを使用した研究報告を小冊子に掲載しております。
はじめてプロトコル
品名①標準物質（Troiox）又はサンプルを添加②バッファー及び発色試薬（DPPH）
を添加③ 25℃で 30 分間インキュベート④マイクロプレートリーダーで測定（517 nm）

本キットを使用した論文が公開されました。
詳細は小社 HP をご覧ください。
DPPH

同仁

SOD Assay Kit-WST

同仁

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容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
100 tests
8,800
S311
500 tests
22,900

食品機能性評価・微生物検出試薬冊子 第二版
食品機能評価、微生物検出関連の製品を集約した冊子を改訂しました。

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よくある問い合わせは P13 をご覧ください。
品名
DPPH Antioxidant Assay Kit

容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
100 tests
6,400
D678
500 tests
19,000＊本品 1 セットあたり、100 tests：1-3 サンプル、500 tests：
8-15 サンプル測定できます。（n ＝ 3、8 段階希釈の場合）

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試薬パンフレット

同仁

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郵送をご希望の方は下記までお問合せ下さい。
info@dojindo.co.jp

No.172(2020)

FAQ
DPPH Antioxidant Assay Kit
Q． このキットでどのようなことができますか？

Q． DPPH Antioxidant Assay Kit の測定実績を教えてください。

A．農作物や食品、物質のスクリーニング測定を行うことで、機能性のある農産物や食品、物質などを見つけ出すことができます。

A．農作物や食品抽出物、食品添加物などの測定例があります。
前処理方法等は HP に掲載しております。
DPPH

同仁

検索

Q． 本キットを使用する利点を教えてください。

抗酸化能測定キット選択・前処理ガイド

A．本キットは、必要な試薬が揃っており、課題であったサンプ
ル溶液の pH や有機溶媒の濃度によるデータのばらつきの影
響を最小限に抑えるためのプロトコルと解析法を採用しています。また、時間と手間を大幅に削減することができます。
Q． DPPH ラジカル消去活性だけで抗酸化活性を評価していいでしょうか？
A．複数のサンプルの抗酸化活性を比較するには、同一の方法で測定する必要があり、他の方法で測定した値と比較することはできません。また、他の方法で測定すると同じサンプルでも抗酸化活性の程度が異なる場合があります。幾つかの測定方法で抗酸化活性を比較することをお勧めします。
Q． どんなサンプルでもこのキットで測定できますか？
A．本キットはエタノールが反応溶媒の 50％程度を占めるため、タンパク質を豊富に含む試料（例えば、牛乳など）はタンパ
ク質の凝集を起こします。サンプルを 50％エタノール水溶液に溶解し沈殿が生じる場合は、沈殿が生じない濃度まで希釈してください。希釈できない場合は、反応溶媒が水系である
SOD Assay Kit-WST での SOD 様活性での評価をおすすめします。
詳細は、右の選択ガイドを参照下さい。

細胞機能解析冊子

第3版

販売中止製品のお知らせ

最新の試薬情報と測定例を掲載した冊子を更新しました。

2020 年 2 月 1 日より販売中止となった製品がございます。

ダウンロードはコチラから
試薬パンフレット

大変ご不便をおかけしますが、同仁

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更新時に新しい版の郵送をご希望の方や複数部数郵送をご希望の場合は info@dojindo.co.jp までお問合せ下さい。

何卒ご了承頂けましたら幸いに存じます。
販売中止製品については、小社 HP よりご確認下さい。
販売中止品

同仁

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No.172(2020)

ホームページアドレス
URL：https://www.dojindo.co.jp/
E-mail：info@dojindo.co.jp

No.172
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フリーファックス
フリーダイヤル
ドージンニュース No.172

0120-021557
0120-489548

9：00 ～ 17：00（ 受付時間：平日）
土・日・祝日は除く

令和 2 年 3 月 6 日発行

株式会社同仁化学研究所 DOJINDO LABORATORIES
熊本県上益城郡益城町田原 2025-5 〒 861-2202
発行責任者 松野寛明 編集責任者 金子詩織 年４回発行 許可なくコピーを禁ず