For Research Use Only. Not for use in Diagnostic Procedures.

TechnologyThe Power of Precision

CESI-MS技术对生脉注射液成分的分析
Analysis of components in Shengmai injection by CESI-MS王文涛1，司丹丹1，陈泓序1，余河水2
Wentao Wang1、Dandan Si1、Hongxu Chen1、Heshui Yu2
1

1

CE & Biopharma，Sciex，China；2 天津中医药大学药学院

CE & Biopharma, Sciex, China 2 Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，college of pharmacy
1 前言Abstract
CESI-MS combines the advantages of eﬀicient separation of CE with中草药成分复杂，如何对其有效成分进行分析和质量控制一

the identiﬁcation function of MS. The connecting between CE and MS

直是研究的难点。生脉注射液是在我国传统中医中“益气复脉”

oﬀers ultra-low ﬂow rate so that CESI-MS can maximize the ionization

的著名古方“生脉散”的基础上用现代科学技术研制成功的中药

eﬀiciency and reduces the ion inhibition eﬀect, signiﬁcantly improves

制剂1，主要成分为人参、麦冬、五味子（如图1）等，其有效成分

the detection sensitivity. It is especially suitable for the analysis of具有多种药理作用。具有良好的扩张血管、保护心肌、增加冠状

polar components in traditional Chinese medicine and is a favorable

动脉血流量、调节血压、抗病毒等作用。因此，对于其中药成分

supplement of LC-MS. In this paper, CESI-MS was used to analyze the的深度分析对于研究生脉注射液的临床应用非常重要。

components of Shengmai injection. 32 compounds, including aminoacids, alkaloids, ﬂavonoids and organic acids, could be detectedunder the positive ion mode. While, under the anion mode, 10compounds can be detected, such as sugars, phenylpropanoids andorganic acids.

CESI-MS技术将CE高效分离的特性与MS的鉴定功能相结合，采用超低流速的无鞘液技术将CE和MS相连接。CESI-MS技术最大化离子化效率，减少离子抑制效应，并显著提升检测灵敏度，特别适合中药中极性活性成分的分析，是LC-MS技术的有力补充。本文展
示了CESI-MS技术对生脉注射液中成分的分析，在正离子模式下可以检测到32种化合物，主要包括氨基酸、生物碱、黄酮类、有机Key Words: Shengmai Injection; CESI-MS; MasterView;酸等；在负离子模式下可以检测到10种化合物，主要包括糖类、苯丙素类、有机酸类等。

图1. CESI-MS技术对生脉注射液成分的分析流程。
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2 实验材料
2.1 仪器与试剂200~2000III离子源（SCIEX），m/z
扫描范围
CESI 8000
plus（SCIEX），NanoSpray®
极性正、负离子模式检测
TripleTOF® 5600（SCIEX，数据处理软件：PeakView、MasterView
和LibraryView），OptiMS熔融石英毛细管卡盒（91cm×30 μm ID,Gas 10SCIEX）。冰醋酸（HAc，质谱纯，Sigma-Aldrich）；二次去离子
Gas 20水（Millipore）；甲醇（MeOH，质谱纯，Merck）。背景电解质

30 kV, 25 min进样电动进样：16s, 10kV

3.2 MS条件
质谱型号Triple TOF 5600+数据采集方法信息依赖采集（IDA）每个循环选择12个最强的离子进行MS/MS

Curtain Gas

5

扫描范围

200~2000 m/z

ISVF+1650 V/-1650 V

极性正、负离子模式检测

50 ℃

Gas 10Gas 20Curtain Gas

5ISVF+1650 V/-1650 V

毛细管温度

50 ℃

DP值

100

CE值

+40/-40（BGE）：10% HAc（含30% MeOH）。导电液（CL）：10% HAc。

毛细管温度
2.2 样品及前处理

100DP 值生脉注射液（市售某品牌），4℃保存；+40/-40CE 值

取1 mL生脉注射液样品，3000 rpm 离心15 min，取上清无需
稀释直接进样；4、结果与分析3 CE和MS方法设置
3.1 CESI条件
CE 类型分离条件基于 CE 对极性化合物高效的分离能力，本文使用了高灵敏度的CESI-MS 技
4 结果与分析CESI 8000 Plus

基于CE对极性化合物高效的分离能力，本文使用了高灵敏度术，对生脉注射液中成分进行了分析。采用SCIEX
公司的 MasterView 软件进行数μCE 卡盒OptiMS 熔融石英毛细管卡盒 (30 m ID×90 cm)
的CESI-MS技术，对生脉注射液中成分进行了分析。采用SCIEX公毛细管预处理新毛细管的预冲洗：MeOH,psi 5 min;MS/MS 高分辨质谱中药数据库对生脉注射液中据处理和鉴定。首先，利用100SCIEX
司的MasterView软件进行数据处理和鉴定。首先，利用SCIEX MS/Water, 100 psi 5 min; 1 N NaOH, 100 psi 5 min;MS高分辨质谱中药数据库对生脉注射液中的化合物进行鉴定。
的化合物进行鉴定。其次，在MasterView
中导入人参、麦冬、五味子中已知化合
0.1 N HCl, 100 psi 5 min; Water, 100 psi
5 min;
其次，在MasterView中导入人参、麦冬、五味子中已知化合物列
BGE, 100 psi 5 min。每针样品分析间的冲洗：物列表进行峰的提取，将结构式与二级图谱匹配，进行化合物结构鉴定，用于中药表进行峰的提取，将结构式与二级图谱匹配，进行化合物结构鉴
分离毛细管，BGE, 50 psi, 20 min；导电液毛细定，用于中药数据库中不存在的化合物的鉴定。使用以上两种鉴
数据库中不存在的化合物的鉴定。使用以上两种鉴定方法，在正离子模式下鉴定出
管，CL, 50 psi, 0.5 min。
定方法，在正离子模式下鉴定出32种化合物，主要包括氨基酸、
毛细管温度
25 ℃
32 种化合物，主要包括氨基酸、生物碱、黄酮类、有机酸等；在负离子模式下鉴生物碱、黄酮类、有机酸等；在负离子模式下鉴定出10种个化合BGE
10% HAc（含30%MeOH）
物，主要包括糖类、苯丙素类、有机酸类等（如表1），部分化CL
HAc
定出 1010%
种个化合物，主要包括糖类、苯丙素类、有机酸类等（如表1），部分化合合物的提取离子流图如图2。所有化合物的质量误差均在5 ppm以样品温度
10 ℃下，结果均经过数据库匹配和理论碎裂与实测MS/MS匹配进行鉴
物的提取离子流图如图 2。所有化合物的质量误差均在
5 ppm 以下，结果均经过数定，鉴定结果准确可靠。

据库匹配和理论碎裂与实测 MS/MS 匹配进行鉴定，鉴定结果准确可靠。

图 2 正离子模式下鉴定到的部分化合物的提取离子流图。
图2. 正离子模式下鉴定到的部分化合物的提取离子流图。
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表1. 鉴定结果列表。

序号

化合物名称

分子式理论质量

加和物精确质量

CESI-MS分析
实际质量质量偏差强度保留时间

1D-苏氨酸C4H9NO3

119.0582+H

120.0655

120.0659

2.92967286

20.75

2L-丝氨酸C3H7NO3

105.0426+H

106.0499

106.0504

52509169

20.4

3L-天门冬氨酸

C4H7NO4

133.0375+H

134.0448

134.0447-0.5338031

24.434C5H11NO2

117.079+H

118.0863

118.0864

1.42315438

19.67

5L-缬氨酸苯丙氨酸C9H11NO2

165.079+H

166.0863

166.0861-0.73793320

21.13

6

谷氨酸

C5H9NO4147.0532+H

148.0604

148.0603-0.7537881

21.447瓜氨酸

C6H13N3O3

175.0957+H

176.103176.1023-3.9516128

21.248精氨酸

C6H14N4O2

174.1117+H

175.119175.1189-0.4

14394433

16.14

9亮氨酸

C6H13NO2

131.0946+H

132.1019

132.1022

2.24905702

19.84

10

异亮氨酸

C6H13NO2

131.0946+H132.1019

132.1022

2.2490570219.84

11

组氨酸

C6H9N3O2

155.0695+H156.0768

156.0761-4.2326311

16.24

12

琥珀酸甲酯

C5H8O4132.0423+H133.0495

133.0497

125932

31.36

13

银杏内酯B

C20H24O10

470.1424+NH4488.1768

488.1773

1.134418

18.35

14

银杏内酯C

C20H24O11

440.1319+NH4458.1662

458.1674

2.633823

26.8

15

原儿茶醛

C7H6O3138.0317+H

139.039139.0389

-0.4

18310

31.0416

鸟苷

C10H13N5O5

283.0917+H284.099

284.0981-2.82259405

25.72

17

胡薄荷酮

C10H16O

152.1201+H153.1274

153.1276

115969

15.04

18

左旋香芹酮

C10H14O

150.1045+H

151.1117151.1117-0.511139

15.17

19

次黄嘌呤 6-C5H4N4O

136.0385+H

137.0458

137.0457-0.771331

26.07

20

腺嘌呤

C5H5N5135.0545+H

136.0618

136.0615-1.91300370

16.07

21

C6H6O3126.0317+H

127.039127.0389-0.977693

29.13

225-羟甲基糠醛樟脑

C10H16O

152.1201+H

153.1274

153.1276

1

15969

15.04

23

秦皮苷

C16H18O10

370.09+NH4388.1244

388.1244

0.117777

8.29

24

胡芦巴碱

C7H7NO2

137.0477+H138.055

138.055

0.4936929

21.4325

水苏碱

C7H13NO2

143.0946+H144.1019

144.1016-2.2238306

17.17

26

烟酰胺

C6H6N2O

122.048+H123.0553

123.0552-0.4842835

17.58

27

左旋肉碱

C7H15NO3

161.1052+H

162.1125

162.1126

0.9344644

16.95

28

D-氨基葡萄糖
γ-氨基丁酸C6H13NO5

179.0794+H

180.0867

180.0865-13381708

17.6

29

C4H9NO2

103.0633+H

104.0706

104.0711

4.72855767

15.51

30

六氢吡啶羧酸C6H11NO2

129.079+H

130.0863

130.0862-0.6742240

20.46

31

四氢嘧啶

C6H10N2O2142.0742+H143.0815143.0813-1.826463

19.0932

烟酸C6H5NO2

123.032+H

124.0393

124.0394

1117655

21.79

33

D-(-)奎宁酸
奎宁酸

C7H12O6

192.0634-H

191.0561

191.0553-435901

33.32

C7H12O6

192.0634-H

191.0561

191.0553-435901

33.32

3435

维生素C

C6H8O6176.0321-H

175.0248

175.0244-2.63105

23.4

36D-半乳糖

C6H12O6

180.0634-H

179.0561

179.0558-1.529091

33.537

D-甘露糖

C6H12O6

180.0634-H

179.0561

179.0558-1.529091

33.5

38D-无水葡萄糖

C6H12O6

180.0634-H

179.0561

179.0558-1.529091

33.5

39L-苹果酸莽草酸

C4H6O5134.0215-H

133.0143133.01430.5199301

32.74

C7H10O5174.0528-H

173.0456

173.0454-111298

33.69

41

柠檬酸

C6H8O7192.027-H

191.0197

191.019-3.6210896

32.16

42

异柠檬酸

C6H8O7192.027-H

191.0197

191.019-3.6210896

32.16

40

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5 结论
本文建立了CESI-MS方法对生脉注射液中的成分进行分析。高灵敏的CESI-MS方法可以有效保证低含量化合物获得较佳的MS/MS质谱数据，结合MasterView和MS/MS中药数据库可对分析物进行准确的鉴定。方法兼具了CE对极性化合物分析效率高和CESI-MS的超高灵敏度优势，适合氨基酸、生物碱、有机酸、糖类等极性化合
物的分析，为LC-MS方法提供了有力的补充。

参考文献
Drug Specifications Promulgated by the Ministry of Public Health，
P R China． Part 1，Vol 15 (卫生部药品标准一部第十五册). 1998.
170.

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