42（6）総 説

創傷治癒における亜鉛：
亜鉛トランスポーターの役割
鈴鹿医療科学大学

要

薬学部

免疫制御学研究室

西田圭吾

旨亜鉛は生体にとって必要不可欠な微量必須元素のひとつである．亜鉛欠乏により，免疫反応低下，精神障害，成長遅延といった多彩な症状を呈する．これらの症状は亜鉛が 300 種以上の酵素活性の中心元素として機能しているためと考えられている．しかしながら，亜鉛の炎症や免疫反応における分子機序に関しては不明な点が多い．一方，組織が損傷を受けると止血と炎症から始まる極めて複雑な一連の生体反応が起こる．その治癒にいたるまでの過程を創傷治癒という．この創傷治癒に，亜鉛がポジティブに制御していることは古くから知られていた．
しかしながら，亜鉛が具体的に創傷治癒のプロセスにどのような役割を担っているか未解決のままであった．今回，亜鉛が創傷治癒に関与する機序に関して，著者らの研究グループで得られた知見を中心に紹介する．

はじめに亜鉛恒常性の破綻によりこのように広範囲におよぶ機能障害が引き起こされるのは，亜鉛が 300

亜鉛は必須微量元素のメンバーのうちのひとつ種類以上におよぶ酵素の活性中心の形成や，亜鉛である．体重 60kg の成人生体内におよそ２g しフィンガーなど亜鉛イオン結合モチーフを持つ転か存在しないが，生存する上で不可欠な元素であ写因子やシグナル伝達分子の立体構造維持に関与ることが知られている．生体内の総亜鉛量は一定していることに起因していると考えられている．に保たれており，この恒常性が崩れた場合は，ささらに最近の研究によって，ヒトの全遺伝子の約まざまな疾患が引き起こされることが知られてい１割が何らかの亜鉛結合配列をコードしているこる．例えば，小腸からの亜鉛の吸収障害や，偏食，とが明らかになっている．従って，亜鉛は細胞のあるいは食品添加物による亜鉛のキレート作用な増殖・分化・機能発現・生存・運動性といった幅どが原因で亜鉛欠乏状態になると，軽度の場合は広い生物反応を司る分子群を制御することで，初味覚障害・夜盲症・生殖機能の低下，重度の場合期発生・免疫機能・ガン細胞の転移・創傷治癒なは免疫機能の低下・感染症・皮膚炎・下痢・脱毛・どの局面に役割を果たしていることが考えられ成長障害・精神障害が引き起こされることが示さる．しかしながら，亜鉛がどのような機序で上述れている．一方，多量の亜鉛が混入した飲食物をした生物現象を調節しているか不明な点が多かっ

介して亜鉛を過剰に摂取すると，即時的には金属た．本稿では，特に創傷治癒過程における亜鉛／中毒症状として嘔吐や下痢が引き起こされる．ま亜鉛トランスポーターの役割について解説する．

た，慢性的な過剰状態では鉄や銅など他の金属元素の吸収を妨げることで溶血性貧血症などを起こす事が報告されている．

43（7）―― 亜鉛栄養治療

4巻2号

201444（ 8）1．亜鉛供給とその細胞内調節機構

2．亜鉛トランスポーターの生物学的役割

ループでは SLC39A13/ZIP13 が成長遅延をはじ

４．創傷治癒における亜鉛トランスポーターの役割

これまでに亜鉛トランスポーターの異常と疾患

め，骨・歯・眼・皮膚等の硬組織および結合組織

微量必須元素の亜鉛は，飲食物に含まれる亜鉛

これまでに亜鉛トランスポーターの異常と疾患において異常を呈する新規エーラスダンロス症候が小腸から吸収され，一旦，小腸細胞に取り込まの関連を示した報告がなされてきている．腸性肢群の原因遺伝子の一つとして報告し 8），ZIP13 蛋

著者らの研究グループでは，これまでマスト細れる．そして，小腸細胞からアルブミンやトラン端皮膚炎（acrodermatitis enteropathica：AE）は，白質がホモ２量体の複合体として存在することを胞機能発現における亜鉛／亜鉛トランスポーター

スフェリンと結合した状態で血中を循環して各組小腸からの亜鉛吸収障害が原因で皮膚炎をはじめ見出した 9）．また，Slc39a14/ZIP14 遺伝子欠損マの役割について多数報告している 16-21）．マスト細織，各細胞へと運ばれて行く．細胞内における亜とする亜鉛欠乏による病態を呈する疾患で，亜鉛ウ ス の 解 析 か ら，ZIP14 が G protein–coupled

胞はアレルギー反応においてはアレルギー症状を鉛量は，亜鉛の取り込み・放出・貯蔵により調節

トランスポーター SLC39A4/ZIP4 が AE の原因

receptor（GPCR）のシグナル伝達が関わる全身成長増悪化する細胞として認知されている 22,23）．しか4）

10）されており，亜鉛の細胞膜内外における交換は亜遺伝子であることが明らかになっている ．ZIP4の制御に重要であることを見出した．すなわち，しながら，マスト細胞は創傷治癒において，ポジティ鉛トランスポーターにより行われていることが知は主に腸管上皮細胞に発現しており，AE が亜鉛亜鉛トランスポーターの遺伝子欠損マウスを用いブに制御していることが既に報告されている 24）．まられている（図１）．現在，細胞質の亜鉛を増加

トランスポーターによる亜鉛の取り込みの障害でて，亜鉛トランスポーターが細胞内シグナル伝達た，興味深いことに，マスト細胞のヒスタミン含す る 方 向 性 を 有 す 14 種 類 の Slc39/ZIP（Zrt-，起こる疾患であることが確認されている．また乳の制御を初めとする生体の様々な生物現象に関与

有顆粒に，微量必須元素の亜鉛が含まれており，Irt-like protein）
ファミリー亜鉛トランスポーター

汁中の亜鉛欠乏が原因で皮膚炎・脱毛・発育不全と，細胞質亜鉛を減少させる９種類の Slc30/ZnTを起こし離乳前に死亡する lethal milk マウスの（Zinc transporter）ファミリー亜鉛トランスポー

原因遺伝子は，Slc30a4/ZnT4 であることが明ら

1,2）

5）

していることが示されている

11）．

刺激に伴って細胞外に放出されることが知られている．この顆粒亜鉛はマスト細胞だけではなく，神経細胞のグルタミン酸含有シナプス小胞や膵β

3．創傷治癒と亜鉛．亜鉛

かになっている ．また，ヒトにおいても母親のトランスポーターのこのような膜上のトランス

SLC30A2/ZnT2 遺伝子の突然変異により乳児の低組織が損傷を受けると止血と炎症から始まる極いる．そこで，マスト細胞顆粒に含まれる亜鉛がポーターを介した取り込みと排出による亜鉛の制6）めて複雑な一連の生体反応が起こるが，その治癒創傷治癒に関与する可能性について検討すること

御に加えて，システイン残基を多く含むメタロチ

乳汁中に含まれる亜鉛が乳腺上皮に発現しているにいたるまでの過程は創傷治癒と呼ばれている12）．にした．マスト細胞では，亜鉛トランスポーター，オネインが細胞質において過剰な金属イオンを貯ZnT2 や ZnT4 を介して分泌されていることが示

一 般 に 創 傷 治 癒 過 程 は 大 き く 3 期（ 炎 症 期ZnT フ ァ ミ リ ー メ ン バ ー の な か で，Slc30a /蔵する役割を果たしている ．細胞内亜鉛はトラされている．さらにⅡ型糖尿病のリスク領域をゲ

inﬂammatory stage，細胞浸潤期 proliferative stage，

ZnT1, 2, 5, 6, 7 の発現が観察され，そのなかでンスポーターとメタロチオネインの発現量を制御ノムワイドスクリーニングした結果，膵臓のβ細再形成期 remodeling stage）に分けられ，それぞれSlc30a2/ZnT2 が，マスト細胞において高発現しする事で細胞内亜鉛濃度を一定に保たれていると胞の分泌顆粒膜上に発現してインスリンの産生おoverlap し，ヒトにおいては治癒過程終了には幾月て い た こ と か ら， 筆 者 ら の 研 究 グ ル ー プ で は考えられている．

よび貯蔵に関与することが知られている ZnT8 のもの歳月を要する｡ この過程には増殖因子をはじ

ZnT2 がマスト細胞を介する創傷治癒に関与する遺伝子をコードする領域が該当することが明らかめとした多くのサイトカインが複雑かつ多用に関のではないかと考え，研究を進めることにした．になっている 7）．さらに，最近，著者らの研究グ与し，いわゆるサイトカインネットワークを形成

さらに，ZnT2 抗体を用いて免疫電顕法を実施しして，極めて重要な役割を果たしていると考えらたところ，マスト細胞の顆粒膜に ZnT2 が局在しターが存在することが報告されている

3）

亜鉛症状が誘導されることが報告されており ，れている細胞のインスリン含有顆粒においても観察されて

13）｡

一方，亜鉛が皮膚の新陳代謝に作用し，創傷の図 1 細胞内亜鉛は亜鉛トランスポーターやメタロチオネインにより厳密に制御されている
細胞質における亜鉛濃度は亜鉛を増加させる方向性の輸送体として機能する ZIP ファミリータンパク質と，逆に細胞内亜鉛濃度を減少させる方向性をもつ輸送体として機能する ZnT ファミリータンパク質によって細胞内の亜鉛濃度は調節されている．また，細胞質内に発現している MTF1（Metal-regulatory transcription factor 1）は細胞内の亜鉛上昇によってメタロチオネイン（metallothionein 1/2：MT1/2）を誘導する．MT1/2 は過剰な亜鉛イオンに対する解毒作用や反応系へ金属イオンを供給する貯蔵体としての機能を果たしている．て い る こ と が 明 ら か と な っ た（ 図 ２）
． 次 に，ZnT2 がマスト細胞顆粒亜鉛の蓄積や放出亜鉛に修復促進作用があることが，古くから知られてい関与しているか検討する目的で，ZnT2 ノックア

る 14,15）．また，民間で湿疹や火傷の塗り薬としてウト（ZnT2 -KO）マウスを樹立し，ZnT2 -KO マ使われた歴史があり，亜鉛が皮膚の傷を治し，皮ウスからマスト細胞を調整し，亜鉛の局在や放出膚を正常に保つ働きがあることが経験的に知られ亜鉛の有無を調査したところ，ZnT2 -KO マウスていた．これまで，この亜鉛の創傷治癒における由来のマスト細胞では顆粒亜鉛の蓄積（図３），役割として，創傷治癒過程では蛋白合成が活性化刺激依存的な放出亜鉛が観察されなかった（図されており，蛋白質合成が起こるさいに大量の亜４）．以上のことから亜鉛トランスポーター鉛が消費される必要性があるという単純な解釈しZnT2 がマスト細胞の顆粒亜鉛蓄積の責任遺伝子かなされていなかった．

であることが明らかとなった．
そこで，この ZnT2 -KO マウスを用いて，創傷治癒と亜鉛の役割について検討していくことにした．ZnT2 -KO マウスでは創傷治癒が野生型のマ

45（9）―― 亜鉛栄養治療

4巻2号

2014

46（10）

ウスに比べ優位に遅延することが判明した（図さらに，ZnT2 -KO マウスで観察された創傷治５）．この結果は初めて，創傷治癒にかかわる亜癒の遅延が炎症期にかかわっているかサイトカイ鉛トランスポーターを同定できたことを意味す

ン活性化の測定を試みた．IL-6 は受傷後の早期る．さらにマスト細胞からの放出亜鉛が創傷治癒で活性化され，血管透過性の亢進，炎症性細胞のに関与するかどうか検討することにした．方法と遊走を促進する創傷治癒過程において重要なサイしてはマスト細胞欠損マウスである Kit

トカインの一つである．著者はマウスに受傷後，

/Kit

W-sh

W-sh

マウスを用いて，放出亜鉛が観察されない ZnT2 -１日目の傷周辺の IL-6 転写活性化の定量を実施

KO マウス由来マスト細胞とコントロールのマスしたところ，ZnT2 -KO マウスにおいて，優位にト細胞をそれぞれ Kit低下していることが示された．

/Kit

W-sh

W-sh

マウスに移植し，創傷治癒を観察した．コントロールのマスト細胞
図 2 亜鉛トランスポーター ZnT2 はマスト細胞顆粒膜に発現している
免疫電顕法を用いて，CD63（顆粒マーカー）と ZnT2 の局在を観察した．CD63 と ZnT2 ともに，マスト細胞内顆粒膜周辺にシグナルが認められた．N は核．

を移植した Kit

/Kit

W-sh

W-sh

マウスでは正常な創傷の炎症期 IL-6 の産生に関与していることを示唆治癒が観察されたが，ZnT2 -KO マウス由来マスしたものである．このように，マスト細胞から放ト細胞を移植した Kit

出される亜鉛が創傷治癒をポジティブに制御して

/Kit

W-sh

W-sh

マウスでは優位な創傷治癒の遅延が認められた（図６）．

図 3 亜鉛トランスポーター ZnT2 はマスト細胞顆粒内亜鉛の蓄積に関与している
ZnT2 -KO マウスと野生型マウスからマスト細胞を調整し，亜鉛検出プローブ FluoZin-3 を用いて，細胞内顆粒亜鉛を観察．野生型マウス由来マスト細胞では細胞質に顆粒構造様のシグナルが観察されたが，ZnT2 -KO マウス由来マスト細胞では FluoZin-3 のシグナルが検出できなかった．

図 4 亜鉛トランスポーター ZnT2 はマスト細胞からの亜鉛放出に関与している
ZnT2 -KO マウスと野生型マウスからマスト細胞を調整し，イオノマイシンで刺激後，上清中の亜鉛濃度をICP-AES で測定．上清中の亜鉛が野生型マウス由来マスト細胞で検出されたが，ZnT2 -KO マウス由来マスト細胞の上清では検出限界以下であった．

以上の結果はマスト細胞の放出亜鉛が創傷治癒いることを初めて明らかにした（図７）．

図 5 亜鉛トランスポーター ZnT2 はマウスの創傷治癒に関与している
ZnT2 -KO マウスと野生型マウスを用いて，創傷治癒アッセイを実施した．ZnT2 -KO マウスにおいて，創傷治癒の遅延が観察された．

図 6 マスト細胞からの放出亜鉛が創傷治癒に関与している
ZnT2 -KO マウスと野生型マウスからそれぞれマスト細胞を調整し，マスト欠損マウス（Kit W-sh/Kit W-sh ）に移植した．移植後，創傷治癒アッセイを実施した．野生型マウス由来マスト細胞を移植した Kit W-sh/Kit W-sh マウスではコントロールと同程度の創傷治癒が観察されたが，ZnT2 -KO マウス由来マスト細胞を移植した Kit W-sh/Kit W-sh
マウスでは創傷治癒が遅延していた．

47（11）―― 亜鉛栄養治療4巻2号

201448（12）Identiﬁcation of a mutation in SLC30A2 （ZnT-2）

second messenger. J Cell Biol 177, 637-645. 2007.

results in transient neonatal zinc deﬁciency. J Biol18）Nishida, K., et al. Zinc transporter Znt5/Slc30a5

Chem 281, 39699-39707. 2006.
7）Sladek, R., et al. A genome-wide association study
identiﬁes novel risk loci for type 2 diabetes. Nature445, 881-885. 2007.

translocation and mast cell degranulation. J

どの細胞質内亜鉛センサーによって精密に制御さ症を示唆する報告がなされてから 25），栄養素とれている．今後は亜鉛トランスポーター欠損マウして位置付けられ，栄養学を中心とした解析がな

スやそのマウス由来の免疫担当細胞を用いて解析されてきた．
これらヒトの亜鉛欠乏症と一致して，を遂行していくことにより，単純に，亜鉛欠乏にランスポーターやメタロチオネイン，MTF1 な

亜鉛欠乏餌を与えたマウスやラットを用いて，胸より生じる炎症・免疫反応や分化異常といった現腺の萎縮やヘルパー T 細胞の分化異常，ナチュ象論から，分子機構を中心とした研究にシフトしラルキラー細胞依存的な細胞障害活性の低下などていくにより，亜鉛と炎症・免疫・アレルギー反様々な免疫系の異常が報告されている 26,27）．今回，応の役割解明がさらに深まっていくものと思われ炎症反応のモデルの一つとして，創傷治癒と亜鉛る．

に関する作用機序に関しての解説を行った．上述

calcium channel alpha1D subunit as a gatekeeperhuman ZIP13 protein： a homo-dimerized zinc

for intracellular zinc signaling：zinc wave. PLoS

dysplastic Ehlers-Danlos syndrome. J Biol Chem.
2011.
10）Hojyo, S., et al. The zinc transporter SLC39A14/
ZIP14 controls G-protein coupled receptormediated signaling required for systemic growth.
11）Fukada, T., Yamasaki, S., Nishida, K., Murakami,

献1）Fukada, T. & Kambe, T. Molecular and genetic
features of zinc transporters in physiology andpathogenesis. Metallomics 3, 662-674. 2011.
2）Kambe, T. An overview of a wide range offunctions of ZnT and Zip zinc transporters in thesecretory pathway. Biosci Biotechnol Biochem
75,1036-1043. 2011.
3）Andrews, G.K. Cellular zinc sensors：MTF-1
regulation of gene expression. Biometals 14, 223-237. 2001.
Gitschier, J. A novel member of a zinc transporterfamily is defective in acrodermatitis enteropathica.
Am J Hum Genet 71, 66-73. 2002.
5）Huang, L. & Gitschier, J. A novel gene involved inzinc transport is deﬁcient in the lethal milk mouse.
Nat Genet 17, 292-297. 1997.
6）Chowanadisai, W., Lonnerdal, B. & Kelleher, S.L.

hard and connective tissue diseases, IOSPress,2011.
22）Galli, S.J., Nakae, S. & Tsai, M. Mast cells in thedevelopment of adaptive immune responses. NatImmunol 6, 135-142. 2005.

health and diseases ： Zinc signaling. J Biol Inorg& Kawakami, Y. Mast cells in atopic dermatitis.

Chem 16, 1123-1134. 2011.

Curr Opin Immunol 21, 666-678. 2009.

12）Grose, R. & Werner, S. Wound-healing studies in24）Weller, K., Foitzik, K., Paus, R., Syska, W. &transgenic and knockout mice. Mol Biotechnol 28,Maurer, M. Mast cells are required for normal

147-166. 2004.

healing of skin wounds in mice. FASEB J 20, 2366-13）Schafer, M. & Werner, S. Transcriptional controlof wound repair. Annu Rev Cell Dev Biol 23, 69-92.
2007.

2368. 2006.
25）Halsted, J.A. & Prasad, A.S. Zinc Deficiency inMan. Isr Med J 22, 307-315. 1963.

14）Pories, W.J., Henzel, J.H., Rob, C.G. & Strain, W.H.

26）Prasad, A.S. Effects of zinc deficiency on Th1

Acceleration of healing with zinc sulfate. Ann Surgand Th2 cytokine shifts. J Infect Dis 182 Suppl 1,165, 432-436. 1967.

S62-68. 2000.

15）Pories, W.J., Henzel, J.H., Rob, C.G. & Strain, W.H.

27）Fraker, P.J. & King, L.E. Reprogramming of theAcceleration of wound healing in man with zincimmune system during zinc deﬁciency. Annu Rev

sulphate given by mouth. Lancet 1, 121-124. 1967.

Nutr 24, 277-298. 2004.

1305. 2006.
4）Wang, K., Zhou, B., Kuo, Y.M., Zemansky, J. &M. & Hirano, T. Zinc in allergy,autoimmune, and23）Kawakami, T., Ando, T., Kimura, M., Wilson, B.S.

mediated mast cell activation. J Immunol 177, 1296-――――――――One 7, e39654. 2012.
21）Nishida, K., Fukada, T., Yamasaki, S., Murakami,

M. & Hirano, T. Zinc homeostasis and signaling in16）Kabu, K., et al. Zinc is required for FcepsilonRI◆文Immunol 187, 932-941. 2011.
20）Yamasaki, S., et al. A novel role of the L-type9）Bin, B.H., et al. Biochemical characterization ofPLoS One 6, e18059. 2011.

亜鉛は 1960 年代のプラサドのヒトの亜鉛欠乏

reaction. J Exp Med 206, 1351-1364. 2009.
19）Nishida, K., et al. Gab2, via PI-3K, regulates
ARF1 in FcepsilonRI-mediated granuletransporter involved in the Spondylocheiro

したように生体内亜鉛動態は 23 種類ある亜鉛ト

allergic reaction but not the immediate-type

SLC39A13/ZIP13 is required for connective tissue
signaling pathways. PLoS One 3, e3642. 2008.

おわりにis required for the mast cell-mediated delayed-type8）Fukada, T., et al. The zinc transporter
development; its involvement in BMP/TGF-beta

図 7 亜鉛が創傷治癒に機能する作用機序（モデル）
損傷を受けた組織からデンジャーシグナルが発生する．デンジャーシグナルは皮膚マスト細胞を活性化し，活性化されたマスト細胞は亜鉛を放出する．放出された亜鉛はマクロファージ，繊維芽細胞，樹状細胞に発現している亜鉛受容体 GPR39 を介して，サイトカイン産生を調節する．炎症性サイトカイン IL-6 は創傷治癒の炎症期を制御する．

17）Yamasaki, S., et al. Zinc is a novel intracellularin women with low milk zinc concentration that