Jpn J Clin Ecol（Vol.24 No.1 2015）

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総説

シンポジウム３

室内環境中におけるダニアレルゲン対策阪口雅弘1） 白井秀治2）

1） 麻布大学獣医学部微生物第１研究室
2） 東京アレルギー・呼吸器疾患研究所

Countermeasures against mite allergens
in indoor environment
Masahiro Sakaguchi1）, Hideharu Shirai2）
1） School of Veterinary Medicine, Azabu University
2） Tokyo Allergy and Respiratory Disease Research Institute要約

世界中の多くの地域においてダニ、動物、および真菌は屋内環境において最も重要なアレルゲンである。
特にダニアレルゲンは喘息、鼻炎、アトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患の発症と強く関連しており、これまでに家内塵中のダニアレルゲン評価や回避に関する研究が多く報告されている。本研究では空中のダニアレルゲンへの曝露の程度を評価するために、アレルゲン特異抗体を用いた免疫測定法によって室内環境における主要なダニアレルゲンを測定した。さらに空中ダニアレルゲン量は微量なので、高感度の免疫測定法によって定量した。これらの結果から睡眠時において寝具からのダニアレルゲンへの曝露量が高いことが分かった。寝具はダニアレルゲンの主要な曝露源であることが推測された。また、古い寝具を新しいアレルゲンの存在しない寝具と交換した時に、空中のダニアレルゲン量が低下することも分かった。
ダニアレルゲンに汚染されていない新しい寝具を使用することが室内環境中のダニアレルゲンに対する対策として有効であると思われた。
（臨床環境 24：22－28，2015）《キーワード》アレルゲン、ダニ、室内、空中Abstract
In most areas of the world, house dust mites, animals and funguses are the most important sourcesof allergens in the indoor environment. Especially mite allergens are strongly associated with asthma,
perennial rhinitis, and atopic dermatitis. There have been many studies of house-dust mite allergen
control and avoidance. To evaluate the extent of exposure to airborne mite allergens, we measured
受付：平成27年5月25日 採用：平成27年8月21日
別刷請求宛先：阪口雅弘〒229-5201 神奈川県相模原市中央区淵野辺1-17-71 麻布大学獣医学部獣医学科微生物学第１研究室
Reprint Requests to Masahiro Sakaguchi, Department of Veterinary Microbiology, School of Veterinary Medicine, Azabu University, 1-17-71
Fuchinobe, Chuo-ku, Sagamihara, Kanagawa, 252-5201 Japan.

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major mite allergens in indoor environments with immunoassay using allergen-specific antibodies. Thelevels of mite allergens trapped by the sampler were measured with a highly sensitive immunoassay.
We found heavy exposure to mite allergens from bedding during sleeping. Bedding is likely one of themajor reservoirs of mite allergens. When the used bedding was replaced with new allergen-free bedding,
we detected a decrease in the airborne allergen levels. The use of new bedding seems to be an effective
countermeasure against airborne mite allergen exposure.
( Jpn J Clin Ecol 24 : 22－28, 2015)《Key words》Allergen, mite, indoor, airborne

1. はじめに

室内の環境アレルギーに対する対策として家庭内環境整備を行い、アレルゲン曝露を軽減することにより、アレルギーの予防や治療が行われてきた。同時に家庭内のアレルゲン量の測定を行うことで、患者が受ける曝露量を評価することができ、環境整備指導の指標に用いている。たとえば、環境中のダニアレルゲンの評価として、掃除機で集められた室内塵中のダニ数を、顕微鏡下で数えるという方法が以前から行われてきた。しかしながら、近年、ダニの主要アレルゲンが精製され、そのアレルゲンに対する特異的抗体が作製された。この抗体を用いることにより、ダニ主要アレルゲン量を免疫学的に定量することが可能になった。すなわち、実際にアレルギ−を引き起こす環境中アレルゲンをタンパクの絶対量として表わすことが可能になった。この免疫学的手法を用いたアレルゲンの定量法は、国際的標準法として定着してきた1）。空気中の浮遊粒子が不定形で、従来の方法において測定できなかったダニ以外のアレルゲンも、この免疫学的方法で測定ができるようになった。

2. 環境アレルゲンの種類

表１に環境アレルゲンを分類してみた。環境アレルゲンの１つしてとしては室内アレルゲンがある。室内アレルゲンには生物由来のダニ、ペット、カビ等と、化学物質であるホルマリン、トルエン等がある。環境アレルゲンにおいて室外で最も重要なものは花粉である。花粉に関してもいくつかの測定法があり、スギ花粉飛散シーズン中に、飛散花粉量に関してテレビやインターネットで見ら

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表１ 主な環境アレルゲンt~ AgT#=<*>

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れる情報は多い。また、食物アレルゲンも１つの環境アレルゲンとして考えられる。近年、加工食品に７種類のアレルゲンの表示義務が課されるようになって、食物中のアレルゲンの定量法も開発されてきた。

3. 室内アレルゲンの測定原理と利点特定のアレルゲン（蛋白）を認識する抗体を用いて、そのアレルゲン量を測定することが免疫学的定量法である。特定のアレルゲンを認識する抗体はそのアレルゲンのみ結合する。そのため、無数に存在するアレルゲンの中で、その抗体が結合するアレルゲンだけ認識することが可能になる（図１）。
この免疫測定法は従来のダニ数を数える方法に比べ、次のような長所を持っている（表２）。（1）
空気中のアレルゲン量が測定可能になった。ダニ
自身が空気中を浮遊しているわけでないので、従来の方法では空気中のダニアレルゲン量を測定することはできなかった。（2）存在するアレルゲンの絶対量（タンパク量）を正しく評価することができる。ダニアレルゲンはダニの虫体より、むし2015/11/27 10:41

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Ａ

図１

アレルゲンとそのアレルゲンに対する抗体の反応࿑䋲䌂Ｂ

特定のアレルゲンに対する抗体はそのアレルゲンだけと結合する
表２ 抗体を用いた免疫測定法のt ^C"iHjbYa

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ろダニの糞に多いため、従来法では正確にアレルゲン量を測定することができなかった。（3）簡便に再現性よくアレルゲン量が測定できるように

図２

空気中からアレルゲンを回収する
エア−サンプラ−

Ａ：低騒音携帯エア−サンプラ−、Ｂ：一般家庭でも安全に使用できるエア−サンプラ−なった。顕微鏡下でダニを数える方法は、かなりレルゲンを回収して、そのサンプルからアレルゲの熟練と時間が必要であった。（4）同じ抗体や標ンを抽出する3）。

準抗原を用いることにより、測定法の標準化が容空中浮遊塵からの測定試料の回収方法について
下記に説明する。室内での空気アレルゲン粒子の易になった。
上記のような利点を持つため、このような免疫回収は低騒音携帯エア−サンプラ−（KI-636、ダ学的手法を用いたアレルゲンの定量法は、国際的イレック社、日本）（図2A,B）を用いた3）。人が家標準法として定着した1）。特に空気中の浮遊粒子

庭内で生活している中でサンプリングを行うたが不定形で、従来の方法において測定できなかっめ、低騒音サンプラ−が必要となる。これは国立たダニ以外のアレルゲン（たとえば、ゴキブリや環境研究所が室内の浮遊粉塵を回収するために開ネコ、イヌ等のペットなど）も、この免疫学的方発されたもので安全性にも十分配慮されている。

法で測定ができるようになった 。

このサンプラー内のフィルター上に空中アレルゲ

2）

4. 環境中からのアレルゲンの回収法

アレルゲンの測定を行う場合、測定を行いたい場所からサンプルを回収し、アレルゲンを抽出、測定する必要がある。サンプルの収集は、床であれば、掃除機を用いてハウスダスト（室内塵）を回収する。そして、空中に浮遊しているアレルゲ
ンであればエアーサンプラーを用いて空気中のア1989_臨床環境医学_第24巻1号_本文.indb 24

ン粒子を捕集した後、このフィルターを抽出液に浸し、アレルゲンを抽出し、測定試料とした（図3）。その試料中のダニアレルゲンの定量は免疫学的測定法を用いて行った。

5. 免疫学的測定方法

ア レ ル ゲ ン の 測 定 法 に は ELISA 法 が あ る。

ELISA 法 と は、 酵 素 免 疫 測 定 法（ELISA:2015/11/27 10:42臨床環境医学（第24巻第１号）
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定量は、再現性が高い方法である。大量の試料中のアレルゲン測定も容易であることから、国際的にも標準法として定着している。また、高感度な測定が可能である蛍光法 ELISA も開発され、空中浮遊アレルゲン濃度の測定4）や皮膚表面や鼻腔内アレルゲン濃度の測定などの曝露量評価に用いられる。

6. 室内環境中のアレルゲン評価
図３

空中アレルゲン粒子の回収

上述した環境中のアレルゲンの測定法を用いる

ことにより、室内環境アレルゲンが測定可能に

エア−サンプラ−のフィルター上に空中アレルゲンが収集され、そのフィルター上のアレルゲンは溶液中に抽出される。

なった。室内環境改善の評価のためのダニアレル

Enzyme-linked Immunosorbent assay） の こ とダニの主要アレルゲンとして、ヒョウヒダニであり、上述したアレルゲンに対する抗体を用い（Dermatophagoides 属）から Der 1 と Der 2 が分離た測定法である。アレルゲンと結合する抗体を酵され、主に解析されている。また、それぞれ Der

素で標識する。アレルゲンと結合後に基質を反応

1 と Der 2 に対する抗体が作製され免疫学的測定させることにより、基質を発色させる。現在はが可能となっている4）。実用的には Der 1アレルゲ

色々な種類の微量蛋白の定量法として広く用いらンだけを測定し、ダニアレルゲン汚染度の指標とれている。既知の濃度の標準アレルゲンによる発している。

ゲン量の評価について紹介したい。
6-1 環境におけるダニアレルゲン色（吸光度）をもとに検量線を作製することで、また、アレルゲン量の臨床的指標として環境中試料中のアレルゲン濃度を定量することが可能とのダニアレルゲン量の測定とアレルギー発症の閾なる。

値が研究されている。すなわち、アレルギーの危ELISA 法の中で抗原に対して２つの抗体を用険因子として室内塵中のダニアレルゲン量の基準いる方法をサンドイッチ ELISA 法と呼び、サンが設定されている1）。人においては室内塵１ｇ中プルにおけるアレルゲン濃度の定量に用いられる

Der 1が 2μg 以上でダニアレルゲン感作の危険性（図4）。２つの抗体によってサンドイッチのようがあり、10μg を超えると喘息発作を誘発する危に抗原を両側から挟みこむことから、この名前が険性があるとされている（表3）。

付けられた。この ELISA 法によるアレルゲンの表３ 喘息の危険因子としてのダニアレルゲン量

図４

サンドイッチ ELISA の原理

異なるエピトープを認識する2種類の抗体を用いたサンドイッチ ELISA の原理

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6-2 家庭環境における空気中アレルゲン量の評価

著者らは寝具中にダニアレルゲン量が多いこと

ダニアレルゲンの場合、寝具が高濃度に汚染さに注目し、家庭内での人の生活の行動をダニのアれていることが、国内外の疫学調査で明らかにさ

レルゲンの曝露状態から次の３つに分けた3）。

れている。図5は一般家庭内の床および布団ゴミ（1）居間での生活、（2）布団の上げ下し中、（3）中のダニ主要アレルゲン量を比較したものであ睡眠中。それぞれの条件下において空気中のダニる。主要アレルゲンである Der 1, Der 2のアレル主要アレルゲン（Der 1および Der 2）量をエア−ゲンレベルにおいて布団のダニアレルゲン量は、サンプラ−で採取した。

床面よりも高濃度であることが分かる 。その他

図6は各条件下での空気中のアレルゲン量を示にベッド周り、敷物や布製のインテリア用品にもしている。居間における Der 1 および Der 2 の空高濃度のダニアレルゲン汚染が認められることが中アレルゲンは非常に低く、それぞれ 29.6 と 6.3多い。

pg/m3であった。それに比べ、布団の上げ下ろし

3）時における Der 1 と Der 2の空中アレルゲン量は
非 常 に 高 く、 そ れ ぞ れ30,900と12,600 pg/m3 であった。さらに睡眠中の Der1と Der 2の空気中の
ア レ ル ゲ ン 量 は、 そ れ ぞ れ 223と87.0 pg/m3であった。居間における空中 Der 1 アレルゲン量を他の条件と比較した時、布団の上げ下げ時における空中アレルゲン量は約1,000 倍、また、睡眠中

図５ 床および布団ゴミ中のダニ主要アレルゲン量Der 1, Der 2はダニ主要アレルゲンを表す。

図８ バーカードエラーサンプラーの仕組み
A: バーカードエラー、B：サンプラー通常のエアーサンプラー
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図６ 各条件における下における空中ダニ主要アレルゲン量࿑7䉻䊆䉝䊧䊦䉭䊮䈱ᦑ㔺⁁ᘒዬ㑆䈮䈍䈔䉎ⓨਛ䉻䊆䉝䊧䊦䉭䊮㊂Ꮣ࿅䈱਄䈕ਅ䉐䈚⌧⌁ਛ䋱䋱䋰䋰䋰䋱䋰Ꮣ࿅䉕ᣂ䈚䈒䈜䉎䈫⌧⌁ਛ䈱䉝䊧䊦䉭䊮㊂䈲ᷫዋ

図７

ダニアレルゲンの曝露状態

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図９

空中ダニアレルゲンの経時的変化

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27は約10倍となった（図7）5）。この研究によって寝具由来のダニアレルゲンが多いことが分かった。
6-3 ダニアレルゲンの経時的変化の測定
室内空中ダニ主要アレルゲンを経時的に、さらに肉眼で見える形で測定する目的で、バーカード（Burkard ）サンプラ−（図8）とイムノブロット法を用いて、室内空中ダニアレルゲンの評価を行った6）。すなわち、空中ダニアレルゲン粒子をバーカードサンプラ−のドラムに貼付した粘着テープ上に経時的に捕捉して、それをニトロセルロース膜に移したのち、抗ダニアレルゲン抗体で染色（イムノブロット法）して、ダニアレルゲン粒子を点として表した（図９）。本研究ではこのサンプラ−を居室兼寝室内に設置して、その家の図10 布団を新しくすることによるダニアレルゲン曝露量の減少効果

家族が布団の上げ下げや掃除など通常の生活におすることにより初めて可能になった。そこで布団いて発生ダニアレルゲンをスポットとして目に見を新しいものに変えた時の個人のダニアレルゲンえる方法で測定した（睡眠中はサンプラ−を止め曝露量の変化を、この測定法を用いて調べた10）。

た）。このような条件下で空中アレルゲンの測定６人（Ａ−Ｆ）の成人に帰宅後から翌日の朝、家を４日間行った。４日間を通して寝室内でのダニを出るまでの間、個人サンプラ−を携帯してもアレルゲンの飛散は、朝や夜の布団の上げ下ろしらった。このようなサンプリングを５日間、２回の時に著明に認められたが、それ以外の時はほと行った。この2回の測定値の平均を曝露量とした。

んど認められなかった（図9）。この様に室内空中次に新しい布団に変えて同様のサンプリングを実アレルゲンが肉眼で見える着色スポットとして確施した。

認でき、さらに経時的な評価が可能となった。

7. 環境アレルゲンへの対策

7-1室内環境改善としてのダニアレルゲン対策

図10に示すように古い布団（１年以上使用）を寝具として使用している時の2回の測定の平均空3中ダニ主要アレルゲン量は、30〜485 pg/m（幾何平均 102 pg/m3）であった。次に古い布団から新ダニアレルギー対策として積極的な室内環境改しい布団に変えると、空気中ダニアレルゲン量は善（ダニアレルゲンの回避）はアレルギー症状軽全例で低下し、2回の測定の平均アレルゲン量は減に効果があると報告されている。海外でもダニ6.0〜52 pg/m3であった（幾何平均 20 pg/m3）。家アレルギー対策として室内環境改善が行われてい庭内でのダニアレルゲン発生源として布団が、重る。ただし、室内環境改善が成功して大幅に室内要であることが再確認できた。このシステムを応アレルゲンが低下したときに患者の症状も改善す用することにより、家庭内での環境整備が個人のる傾向にある 。空気中のダニアレルゲンの大半ダニアレルゲン曝露量を、どの程度減らすことがが、布団を含む寝具由来であると考えると、網羅可能かを評価できるようになった。

7-9）

的なダニアレルゲン対策より、重点的に布団のアレルゲン管理を実施することが効果的な対策と思われる。
7-2個人におけるダニアレルゲン曝露量の評価

8. おわりにアレルゲンの定量による環境中のアレルゲンの評価について述べてきた。現在ではダニ以外の家庭内におけるダニアレルゲンの個人の曝露量色々なアレルゲンが同定され、それらに対する抗を測定することが、携帯用小型サンプラーを使用体が作製され、それを用いて多くの室内環境中の1989_臨床環境医学_第24巻1号_本文.indb 27

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アレルゲン量の測定が可能になった。筆者らの研9 ） Halken S, Høst A, et al. Effect of mattress and究室でもネコ、イヌ、ゴキブリ、実験動物（マウpillow encasings on children with asthma andス）などの多くの主要アレルゲンも測定できるようになった。今後、ダニアレルゲン同様にこれらの測定法を用いることにより、多くの室内環境中のアレルゲンの情報が得られるものと思われる。

house dust mite allergy. J Allergy Clin Immunol
111:169-176, 2003
10）Sakaguchi M, Inouye S, et al. Measurement of airborne mite allergen exposure in individual subjects. J Allergy Clin Immunol 97: 1040-1044, 1996

謝辞
資料を提供して頂いた独立行政法人相模原病院安枝浩先生に深謝いたします。本研究の一部は日本私立学校振興・共済事業団の私学助成および麻布大学研究推進・支援本部補助金の助成を受けたものである。

文献1）Platts-Mills TA, Vervloet D, et al. Indoor allergensand asthma: report of the Third International
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