2018 APRIL
No. 607

第 64 巻 第 2 号（通巻 607 号）
2018 年（平成 30 年）4 月

挨拶・巻頭言縁................................... 杉 浦 勝 明（ 2 ）発表論文紹介日本での採卵鶏種鶏における鶏大腸菌症生ワクチンの効果............... 魚 谷 勇 介（ 3 ）論文紹介アクチノバチラス・プルロニューモニエ攻
撃ブタにおける一次感染部位での宿主 – 病
原体相互作用.................. 昆
道 葉（ 5 ）コマーシャル鶏の農場で分離された薬剤耐性サルモネラの多様性について...................................横山かえで（12）記録
学会発表演題.................................. （19）お知らせ
編集後記......................................... （20）

日生研たより

2（18）

縁
杉浦勝明
先々月開催された平昌オリンピックでスピードスケート 500 m 金メダルに輝いた小平奈
緒選手は、レース翌日のインタビューで、「金メダルを取った今、ほかの選手と比べてこれだけは負けないと言えるものは何ですか」と聞かれていた。レースでだれにも負けなかった
選手に向けるには興味深い質問だと思った。500 m のスピードは誰にも負けません、と言われてしまえばそれまでだからだ。しかし、小平選手の答えは違った。彼女は、「人は自由に道を選べる、自分を信じて自分が選んだ道を進んでいくことに関しては今とても自信がある」と答えたのだ。
小平選手は信州大学を卒業後、大学時代のコーチから継続的に指導を受けることを希望して、自分だけでなく、自分とコーチをセットで支援してくれるスポンサーを探していたという。しかしコーチの分の給料まで面倒を見てくれる大手スポンサーはなかなかいなかった。
そこで、彼女は負傷時に治療受けた縁で懇意だった相澤病院に支援を依頼した。先方が彼女の願いを受け入れてくれて、数年後の金メダルにつながったという経緯があったのである。
確かに人との縁は運によるところも大きいが、誰でも、タイミングの違いはあれ、それなりの良縁に出会うように人生はできているように思う。ただ、その縁を信じて、自分の糧にできるかどうかは人それぞれなのかもしれない。信じるというのは孤独と隣り合わせの心だからだ。小平選手も相澤病院が支援の手を差し伸べるまでは、このまま自分の道を進んでいいか迷いもあったはずだ。どんな時も、他人が持つ強運をうらやむことなく、自分に与えられた縁を大切にするのは思っている以上に難しいことである。しかしこの良縁は人との出会いだけではない。日々浮かぶアイディアや、心をかすめる思い、一瞬抱く小さな目標、そういったものとの出会いを無視せず、それらをしっかり自分のものとして信じて、生きる指針にすることができれば、人生はもっと豊かで達成感があるものになるに違いない。
小平選手の座右の銘は「永遠に生きるかのように学び、明日死ぬかのように生きる」であるという。インド独立の父として知られるガンディーの言葉である。彼もまた、自分を信じ、与えられた縁を信じ、多くの困難を乗り越えたのであろう。
国家独立やオリンピック金メダルほどの偉業でなくとも、周囲の笑顔を生むことはできる
はずである。多少の孤独に耐え、一生懸命に学び、一日一日を大切に生きていればきっといいことがあるに違いない。たまにはゆっくりコーヒーでも飲みながら、周りの景色を楽しん
で、自分の道をしっかり歩んでいきたいものである。
（評議員）

64（2）
，2018

3（19）

発表論文紹介日本での採卵鶏種鶏における鶏大腸菌症生ワクチンの効果
魚谷勇介
Efficacy of an avian colibacillosis live vaccine for layer breeder in Japan
Yusuke Uotani et al. J. Vet. Med. Sci. 2017. 79 : 1215 – 1219.
大腸菌症対策には十分な換気を行うことが重要で背景あるが、鶏舎の換気量は温度や湿度、鶏舎構造と

鶏大腸菌症は肉用鶏において斃死率や淘汰の増加

いった複数の要因に左右されることから、適切に設だけではなく、屠場での解体禁止、全廃棄の原因に定することが非常に難しい。また、採卵鶏から分離

もなり、その経済被害は甚大である。一方、採卵鶏

された大腸菌の多くが複数の薬剤耐性を保有していでの大腸菌症は今まではほとんど報告されてこなることが報告されていることから、抗生物質によるかったが、近年日本を含む世界中で採卵鶏における治療に代わり飼養管理やワクチンによる予防が望ま

大腸菌症が増加しており、新たな問題となっている。 しい。抗生物質を使用する場合は、多剤耐性菌への大腸菌症では、感染は呼吸器や生殖器から起こり、対策として感受性のある薬剤を精査し、慎重に行う

卵管炎、卵墜、腹膜炎等の原因となって産卵率の低必要がある。

下、減耗を引き起こす。今までも採卵鶏で斃死率が

近年では大腸菌のワクチンを作出するにあたり、わずかながら増加することは頻繁に報告されてきた病原性に関与する様々な遺伝子が研究されている。

が、はっきりとした原因まで明らかになることは少すなわち、遺伝子組換微生物を用いて発現させたない。

iss（increased serum survival）遺伝子融合タンパク

鶏大腸菌症により多くの斃死または淘汰が起こるの利用やサルモネラに papA、papG、iutA、clpG 等のは、鶏にストレスがかかる産卵の立ち上がりの時の鶏大腸菌症抗原を発現させた経口ワクチン、ibeA期や産卵ピーク前後である。高度に汚染された農場

や pst 遺伝子の欠損による病原性の低下が報告されでない場合、HD（ヘンデイ）産卵率への影響は軽ている。また、aroA 遺伝子の欠損についての報告

微なことが多い。しかし、HH（ヘンハウス）産卵も多く、その有効性は広く認められている。しかし、率に基づく解析では、その経済損失が決して小さく安全性については弱毒化が十分ではないため luxSないことがわかる。

等他の遺伝子も併せて欠損させた方が良いとの報告

茶色系種鶏

100

試験群

対照群

100

95

85

％

80
75
70
65

白色系種鶏

試験群

対照群

マニュアル標準値※

16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80

週齢

白色系種鶏

100

※p<0.05
試験群

対照群

マニュアル標準値

80

90
85

％

※

60

※

40
20

70
65

マニュアル標準値

40※p<0.05

95

75

60

0

16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80

100

80

対照群

20

※
週齢

％

試験群

80

90

％

茶色系種鶏

マニュアル標準値

16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80

週齢※p<0.05

図 1 育成率の推移※カイ二乗検定により試験群と対照群に有意差が認められた期間（p<0.05）

016 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80

週齢※p<0.05

図 2 産卵率の推移※カイ二乗検定により試験群と対照群に有意差が認められた期間（p<0.05）

日生研たより

4（20）

茶色系種鶏

70

試験群

対照群

2100

65
55

対照群

マニュアル標準値

1900

g

g 50

1800

45
40

1700

35
16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80

1600

白色系種鶏

70

試験群

対照群

16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80

週齢

週齢

白色系種鶏

マニュアル標準値

1800

65

試験群

対照群

マニュアル標準値

1700

60
55

1600

g

g 50

1500

45
40

1400

35

30

試験群

2000

60

30

茶色系種鶏

マニュアル標準値

16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80

週齢

図3

1300

16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80

週齢

平均卵重の推移

図4もある。

平均体重の推移

日齢に噴霧（0.3 mL/ 羽）、64 日齢に散霧（0.5 mL/

既に鶏大腸菌血清型 O78 の crp 遺伝子欠損株の羽）で投与した。なお、噴霧には粒子径が 100 µm

有 用 性 に つ い て は 報 告 し て お り（永 野 ら、以下となるようニューコン 607（Thomas Industries

Microbiol. Immunol, 2012）、この株を用いた生ワク社）を用いて投与し、散霧には粒子径が 100 µm よチン（ガルエヌテクト CBL、日生研）を 2012 年より大きくなるようパナスプレー（パナソニック社）

り日本国内で販売している。肉用鶏では生ワクチンを用いて投与した。120 日齢に成鶏舎へ移動し、育の使用により生産性が改善することが示唆されてお

成率、産卵率、平均卵重、平均体重を記録し、成績

り、徐々に普及してきている。本報告では日本の採を比較した。また、HD 産卵率の成績では白色系と卵種鶏における生ワクチンの有効性について調査し茶色系で比較を行うために、白色系の成績を 4 千羽たのでその成績を紹介する。

に換算した。

試験方法

結果および考察試験は毎ロットで大腸菌症による育成率の悪化と試験群では両鶏種において育成率の改善が認めら

産卵ピークの遅れが問題となっていた九州にある開れ、さらに標準的な育成率をほぼ全ての産卵期間中

放鶏舎の農場で行った。当該農場の白色系採卵種鶏上回った（図 1）。特に、対照群では 56 〜 60 週齢

8 千羽（試験群 2 千羽、対照群 6 千羽）、茶色系採で 突 然 育 成 率 が 落 ち、78 週 齢 を 越 え る こ ろ に は

卵種鶏 8 千羽（試験群 4 千羽、対照群 4 千羽）を用

80％を下回っていたが、試験群では改善が認められいて実施した。ワクチンは生理食塩水に溶解し、28た。また、対照群の産卵率は産卵開始直後を除いて標準的な値を下回っていたが、試験群では産卵ピー
ク後も標準的な値を上回った（図 2）。65 〜 67 週齢

茶色系種鶏
4000

対照群

産卵個数

3500

試験群

3000
2000
1500

19 21 23 25

27 29 31 33

35 37 39

41 43 45

47 49 51

週齢

78 週齢においても標準的な値を上回った。なお、
53 55 57

59 61 63

68 70 72
74 76 78

大腸菌症発生の診断は、斃死率が増加した際の解剖で内蔵型大腸菌症を確認することにより判断した。

白色系種鶏
4000

対照群

産卵個数

3500

試験群

3000

一般的に大腸菌症の発生は前述のように産卵の立ち上がりの時期や産卵ピーク前後に多い。飼養マ

2500
2000

にかけて飲水器の故障によって一時的に産卵率は低下したが、問題の解決に伴い産卵率は再び上昇し、2500

19 21 23 25

27 29 31 33

35 37 39

41 43 45

47 49 51

週齢

図5

53 55 57

ニュアルによると、茶色系採卵種鶏の 50％産卵は59 61 63

HD 産卵成績の推移

68 70 72
74 76 78

143 日齢、産卵ピークは 26 〜 28 週齢、白色系採卵
種鶏の 50％産卵は 147 日齢、産卵ピークは 33 〜 36

64（2）
，2018

5（21）

週齢である。この高ストレス期に大腸菌症の発生をことにより、HD 産卵率の比較では生産性の向上が防いだ結果として、初期の育成率・産卵率が試験群顕著に認められた（図 5）。その結果として HH 産

では良好に推移したと考えられる。長期的な産卵率

卵個数では茶色鶏で 101,470 個、白色鶏で 108,183の改善は、鶏大腸菌症のコントロールにより、良好

個、それぞれ試験群で増加しており、ワクチン投与

な健康状態を維持したことによる二次的な効果であによる十分な費用対効果が見込まれた。

ると考えられた。卵重は両群間で差はなく（図 3）、以上より、鶏大腸菌症生ワクチンは日本の採卵種

平均体重は試験群の方がばらつきの少ない傾向に鶏場の生産性改善に寄与できる可能性が示唆された。
（研究員）

あった（図 4）
。また、育成率と産卵率が改善した

論文紹介

アクチノバチラス・プルロニューモニエ攻撃ブタにおける一次感染部位での宿主- 病原体相互作用
昆

道葉

Host – pathogen interplay at primary infection sites in pigs challenged with Actinobacillus pleuropneumoniae
Elena L. Sassu et al. BMC Vet. Res. 2017. 13 : 64
への定着が起こっている場合から、甚急性の死亡を
文献紹介の意図伴う重篤な肺感染症に及ぶ場合まで幅広い。重篤度

アクチノバシラス・プルロニューモニエ（App）

は、多様な血清型に関連する病原性や、ブタの飼養により引き起こされるブタ胸膜肺炎は、世界各国で環境における生物的・非生物的因子の影響を受ける。

多発しているブタの重要な呼吸器疾患のひとつです。 もしブタが急性感染を耐化した場合、慢性的な肺病
急性であれば食欲不振、元気消失にあわせて発咳や変や扁桃陰窩及び鼻腔に App を保菌する可能性が呼吸困難といった顕著な症状を示しますが、これをあ る。こ う し て 感 染 し た ブ タ は App の 持 続 的 な

耐化し屠畜検査時に初めて本症とわかるような慢性キャリアになる。ワルダイエル咽頭輪は吸入された症例も多くあります。この場合も飼料効率及び一日病原体が最初に直面する免疫学的・機械的バリアで平均増体量の低下等を引き起こします。保菌ブタのある。このバリアが不全となると、App のこの部位

移動が群間伝播の主因であることから、持続感染にへの定着を許し、さらに急性な再発を引き起こす。

ついての研究が進められています。今回紹介する論

呼吸器疾患に対する早期の自然免疫応答は一次感染

文では、App がブタに感染した際に起こる変化を、部位として肺だけに限定しておらず、周辺のリンパ各臓器に対してとその臓器から検出された App に組織、肝臓及び唾液腺まで及ぶ。急性の免疫応答は、対しての両面から解析しています。原文は PMC か

急性期タンパク質と炎症性サイトカインの持続的ならダウンロードすることができるので、興味を持た産生が特徴である。炎症性サイトカインとしてはれた方は原文も参考にして下さい。

IL – 6、TNF – α及び IL – 1 がよく知られているが、これらの産生は特に App のエンドトキシン（内毒素）と細孔形成型外毒素 Apx Ⅰ〜Ⅳの相乗効果に

背景
App はブタ胸膜肺炎の原因菌であり、世界の養豚産業において死亡率を高めている。
感染状態は、臨床症状がないものの菌の上気道部

よって増強される。したがって、これらの細菌学的病原因子は直接的には Apx の細胞毒性効果によって、間接的には炎症反応の増悪によって組織の損傷を引き起こす。

日生研たより

6（22）宿主‐病原体相互作用の初期段階での洞察を得るた

既報に従い FTIR 用として調製した。概説すると、め、著者らは実験的にブタへ気管内感染経路で App

1 白金耳分の細菌を 100 µL の滅菌蒸留水に浮遊し攻撃試験を行い、感染の最初の数時間について宿主た。次に、その菌浮遊液の 30 µL をセレン化亜鉛光と病原体を並行して研究した。肺、肝臓、唾液腺及学 プ レ ート（BrukerOptics GmbH, Ettlingen,

び扁桃における炎症性サイトカインと急性期タンパ

Germany）に移し、40℃で 40 分間乾燥させた。赤ク質に関する mRNA の発現を、気管支肺胞洗浄液

外 吸 収 ス ペ ク ト ル は、TENSOR II FTIR 装 置（BALF）、血清及び唾液サンプル中のタンパク質レ（BrukerOptics GmbH）に設置した HTS – XT（Highベルマーカーと共に調査した。病原性微生物の宿主

Throughput Screening eXTension）マイクロプレー

組織への影響を研究するため、フーリエ変換赤外分

トアダプターによって未充填因子 4 つとブラックマ

光法 （FTIR） を用いた。FTIR は確立した振動性

ン・ハリス窓 3 区間をアポダイズし、分解能 6 cm 1、

分光学的技術であり、幅広い範囲の生物学的材料をレ ン ジ を 4000 〜 500 cm 1 に 変 換 し 記 録 し た。ス

分光的に鑑別することができる。近年計量化学的補キャン干渉図 32 枚の平均スペクトルは、各スペクト

助式 FTIR は、病原微生物の宿主環境への代謝によルのバックグラウンドを差し引いて算出した。スペる適応を研究する上で有用なツールであることが明

クトラムデータを処理、解析し、続く計量化学解析

らかになった。例えば、FTIR はマウスから異なる

は OPUS ソ フ ト ウ ェア（Version 7.2 ; BrukerOptics

遺伝子型と共に再分離された Listeria monocytogenesGmbH）を用いて行った。ポリサッカライド領域の代謝において、遺伝子型特異的な宿主への痕跡を（1200 〜 900 cm 1）中のレンジ 1150 〜 1100 cm 1 は、

検 査 す る こ と に 成 功 し て い る。別 の 研 究 で は、

階層的クラスター解析（HCA）によって組織に関FTIR による分娩後乳牛の子宮排出物から再分離さ連する細菌代謝プロファイルを精査する際に最も特れた Streptococcus uberis の解析結果から、子宮の健徴的な情報を示す。細菌の莢膜に関する特異性を精康状態に関連する S. uberis の特定の生物型を明ら査する際に最も特徴的な波長領域は、ポリサッカラ

かにした。これらの成果は、FTIR が巨大分子かつ

イ ド 領 域（1200 〜 900 cm 1）と タ ン パ ク 質 領 域

代謝レベルでの細菌の宿主への適応を調査するのに（1800 〜 1500 cm 1）であった。二次微分スペクト

適した技術であり、ヒトだけでなく動物の病原体にル（9 ポ イ ン ト の Savitzky – Golay フ ィル タ ー）の対しても運用可能であることを示している。今回の系統樹は、再現レベル 30 に標準化したウォードの研究では、ブタが App に感染した初期段階で既にアルゴリズムを用いて作成した。粗製莢膜抽出物

臓器特異的な代謝異常を起こしていること、またそ（CEs）の測定は以前に発表した方法に微細な変更

れは宿主に検出された変化を反映していることを明を加えたもので実施した。

–

–

–

–

–

–

らかにした。
（材料と方法の項は一部割愛いたしました）
材料と方法
FTIR は、感染ブタの臓器及び組織から再分離した App の代謝が宿主に与える影響について調査す結果
臨床上及び剖検時の所見るために用いた。赤外スペクトルはタンパク質、核感染後 4 時間で全てのブタは実験的に App 感染

酸、多糖体及び脂肪酸の振動の伸展と屈曲を別々のし、呼吸困難、開口呼吸、発咳といった呼吸器症状

振動範囲に表すことで、生細胞の生化学的構成を反を示した。まれな症状として嘔吐があったが、感染映する。この仕組みによって FTIR は細菌の代謝プ群と対照群両方にみられたことから、これはおそら

ロファイルを作成できるため、宿主‐病原体相互作

く麻酔の副作用と考えられた。対照群は呼吸器症状用の研究にとって強力かつ非常に特徴的なツールにを全く示さなかった（表 1）。感染群のブタに対しなっている。代謝プロファイルを得るため、分離菌ては追加で肉眼的及び組織学的に肺の病理学的変化

それぞれを 1 白金耳分採取し、PPLO 寒天培地上にを確認した。全ての感染群の肺において、肝変化に37℃で 24 時間、菌叢として培養した。サンプルをよる赤色病巣と小葉間浮腫による多巣性出血性病変

64（2）
，2018
表1

7（23）
対照群及び感染群の臨床スコア（CS）、肺病変スコア（LLS）及び肺病変の組織学的評価

群

臨床スコア

肺病変スコア

組織学的評価対照（n=4）（0 – 0.75）
0（0 – 0.6）
0

好中球及びマクロファージの肺胞中隔への中等度浸潤

感染（n=6）（2.75 – 5.5）
4
**

7.39
（3.1 – 16.56）** 線維素性化膿性、壊死性及び出血性胸膜肺炎** p ≦ 0.01: ウィルコクソンの順位和検定
死亡時（8 hpi）より前の CS と剖検時の LLS は中央値（四分位数間領域）として表した。
太字：有意差ありが確認された。1 個体において、初期の胸膜炎を意

対照群と比較して顕著に低下していた。一方で、幼味する臓側胸膜上の孤立散在性フィブリン層がみら若顆粒球である桿状核球と後骨髄球について感染前れた。表 1 に示す通り、感染群における肺病変スコの感染群サンプルと比較したところ、その両方で細アは対照群のものと比較して顕著に高かった。

胞数に著しい上昇がみられた。感染後 5 時間で既に感染群における顕微鏡レベルでの肺組織の病変は、 感染群の桿状核球数は上昇していた。BALF の採取
重度の好中球の浸潤と同様に肺胞腔及び肺胞間中隔は感染後 8 〜 10 時間に、屠体から採材した肺からへの線維素滲出が主であり、これらは呼吸細気管支行った。感染群の BALF 中細胞数において、総白血の閉塞を招く。組織学的診断は線維素性化膿性、壊球数は有意に（p ≦ 0.01）高く、同様にリンパ球と死性及び出血性胸膜肺炎だった（表 1）。対照群は肺胞マクロファージも高い傾向（p=0.057）がみら

胸膜肺炎の病理学的兆候を見せなかった。

れた（表 2）。

血中の細胞学的所見

宿主組織における遺伝子発現

感染後はどの時点をとっても 2 群間における血中

炎症性サイトカイン（IL – 6、IL – 1 及び TNF – α）、

好中球数の差はみられなかった。それにも関わらず、 ケモカイン IL – 8 そして非炎症性サイトカイン IL –顆粒球分画では差異が検出された。感染後 8 時間に

10 について、肝臓、肺、唾液腺及び扁桃での遺伝おける感染群の成熟好中球である分葉核好中球数は、 子発現を評価した。iNOS（誘導型一酸化窒素合成
表2対照群と感染群の様々な体液中サイトカイン（IL-6, IL-1, TNF-α）、急性期タンパク質（CRP, ハプトグロビン）
濃度及び細胞数a
対照群 （n=4）

BALF 中BALF 中BALF 中血清中

唾液中サイトカイン
IL – 6（pg/mL）
IL – 1β（pg/mL）
TNF – α（pg/mL）
急性期タンパク質
CRP（ng/mL）
Hp（µg/mL）
細胞
白血球（× 109/L）
リンパ球（× 109/L）
肺胞マクロファージ（× 109/L）
急性期タンパク質
CRP（µg/mL）
Hp（mg/mL）
急性期タンパク質
CRP（ng/mL）
Hp（µg/mL）

感染群（n=6, cn=3）

ND
ND
129.5（ND – 410.4）

434.2（ND – 2491.5）
1166.8（ND – 2808.1）
ND

89.7（39.5 – 189.6）
6.7（5.2 – 9.1）

389.7（192.6 – 554.4）
89.7（39.5 – 189.6）

2.9（1.8 – 5.1）
0.1（0 – 0.3）
1.7（1.5 – 2.3）
感染群（感染前）b

11.4（7.8 – 16.9）**c
2.5（0.8 – 6.1）c
6.2（4.5 – 10.6）
感染群（8hpi）

49.7（18.4 – 71.5）
0.7（0.2 – 1.1）

202.2（93.9 – 3.9）*
0.7（0.5 – 1.3）

3（1.3 – 7.4）
0.4（0.2 – 1）

27.9（8.4 – 37.6）*
1.9（1.3 – 3.6）

群平均で表記（四分位数間範囲）* p ≦ 0.05 ** p ≦ 0.01 ウィルコクソン順位検定
a：感染直後の BALF は対照群と感染群で差あり。
b：感染群において最終採取時（8 hpi）と感染前に差あり。
c：感染群のうち 3 頭では BALF 中白血球と肺胞マクロファージが検出されなかった。
太字：有意差あり；ND：検出限界以下

日生研たより

8（24）

酵素）、HO1（ヘムオキシゲナーゼ）、IL – 2、IL – 4

中の CRP 及び Hp 濃度は感染群において上昇して及び INF – γは検出限界以下であったが、この理由いた。特に最終ポイントにおいて、Hp 濃度は有意については本研究では考察しなかった。対照群と比に（p ≦ 0.01）上昇していたが、一方で CRP 濃度

較して感染群では、IL – 6 の発現は肝臓（p ≦ 0.05）、は上昇傾向を示す（p=0.07）のみであった。対照群

肺と唾液腺（共に p ≦ 0.01）において顕著に高かっでは全ての項目において変化がなかった。

たが、扁桃においては傾向が認められるのみであった（p = 0.06）。感染群の肺組織においては、全ての宿主組織における App の代謝プロファイル

炎症性サイトカインと IL – 8 が有意に（p ≦ 0.05）

App は感染群 6 頭全ての肺、2 頭の扁桃及び 3 頭発現上昇していた。その上、感染群の唾液腺におけの外鼻孔から分離された（表 3）。血清型 2 型特異る IL – 1 の発現も有意に（p ≦ 0.05）上昇していた。

的 PCR（APPcps2 PCR）を用いて、分離株が攻撃

IL – 10 の発現についてはどの組織においても有意差に用いた App 血清型 2 型株であることを確認した。

が認められなかった。扁桃においては今回検討した分離株のクローン性及び遺伝的安定性は M13 – PCR

項目の変化が認められなかった。急性期タンパク質を用いて DNA フィンガープリント法にて確認した。

（CRP、HRP 及 び ASS）の mRNA 発 現 に つ い て も

全 て の 分 離 株 が M13 – PCR に て 同 一 の バ ン ド パ

同様の組織において検査した。血清アミロイド A

ターンを示し、これらの株は攻撃株が原株であるこ（SAA）発現は扁桃以外のすべての組織で有意に（pとを示していた。宿主組織から分離されたすべての≦ 0.01）発現上昇していた。唾液腺においては、全App の FTIR スペクトルを記録し、計量化学的解析ての急性期タンパク質の発現が有意に（p ≦ 0.01）に供した。

上昇していたが、扁桃では遺伝子発現における対照群との差はみられなかった。

標準化し前処理したスペクトルデータを階層的ク
ラスター解析（HCA）することで、分離株の明確な臓器特異的クラスターが明らかになった。これは血清、BALF 及び唾液中のタンパク質発現

宿主内で継代された App の代謝が臓器特異的な影

炎症性サイトカイン（IL – 6、IL – 1 及び TNF – α）

響を受けたことを意味している。

濃度は血清中及び BALF 中において、急性期タンパ

IR スペクトルによれば、ポリサッカライド領域

ク質（CRP と Hp）濃度は血清、BALF 及び唾液中となるスペクトル窓 1150 〜 1100 cm − 1 は、最も高において定量した。感染群の血清中においては炎症

い検出強度を示し、結果として 4 つの主要クラス

性サイトカインの有意な変化は認められなかったターが生じた（図 1）。クラスター a はすべての肺（データ未公表）。

由来株と攻撃株を包含するのに対して、上気道（扁興味深いことに、TNF – αは感染後の BALF から

桃及び外鼻孔）由来株のクラスターは、クラスターは検出されなかった。これに対して、IL – 6 及び IL

a から分かれて b 〜 d の 3 つのクラスターとなった– 1 濃度は対照群では検出限界以下だったが、感染（図 1）。さらに継代培養を重ねても、細菌の代謝順

群では濃度の中央値が上昇した。急性期タンパク質

応は初代から安定なままであった。実験室内環境下の発現状況は血清と BALF で類似していた。Hp 濃での連続培養の結果、代謝の変化は可逆的なことが度は試験を通して変化が認められず、CRP 濃度は

明 ら か と な っ た。実 験 室 内 で 5 代 継 代 し た 菌 の感染後 8 時間で顕著に上昇していた（表 2）。唾液

FTIR スペクトルデータにおける HCA は、上気道

表3
組織
肺
外鼻孔
扁桃

急性感染動物の様々な組織から再分離されたApp
I1

I2

I3

動物

I4

I5

I6

〇

〇

〇

〇

〇

〇

左

−

〇

−

〇

−

−

右

−

〇

−

−

〇

−

左

−

〇

−

〇

−

−

右

−

−

−

〇

−

−

64（2）
，2018

12

10

9（25）

8

多様性

6

4

2

多様性

0

9

8

7

6

5

4

3

2

1

0

I1 肺
I4 肺

a

I2 肺

a

I4 左扁桃I4 右扁桃

攻撃株
I3 肺

I1 肺

I5 肺
I6 肺

b
c

d

I3 肺

I2 左外鼻孔I2 左扁桃I2 肺

I4 右扁桃b

I2 左外鼻孔
I5 右外鼻孔攻撃株

I4 肺

I4 右外鼻孔I5 右扁桃図1

I6 肺

 染群のブタの異なる臓器から分離された App
感
血清型 2 型菌を FTIR スペクトル解析した結果から作成した階層的クラスター

図2 A
 pp 血清型 2 型菌の CE の FTIR スペクトル解析から作成した階層的クラスター

及び下気道由来菌は同一クラスターとなることを明タンパク質領域（1800 〜 1500 cm 1）及びポリサッ

らかにした。後者の結果は、臓器特異的な環境が代

カライド領域（1200 〜 900 cm 1）内における有意謝順応の引き金であり、実験室内環境下での連続培な変化が明らかとなった。肺由来株において 1637

養が原因で喪失したことを示している。

cm 1 に達する高い吸光度が記録されたが、このバ

–

–

–

ンドはβシート構造のアミドⅠバンドに該当する。
App の粗莢膜抽出物の解析

もう一つの扁桃由来株の特徴的な差は、肺由来株–

肺及び上気道（扁桃及び外鼻孔）由来 App の代の CE と比較して、吸光度 984 cm 1 にて検出された。

謝プロファイルは FTIR によって得られた。これら

このバンドはポリサッカロイド領域に該当することのポリサッカライド領域およびタンパク質領域におから、糖 C – O – P と P – O – P 構造が吸収する環振動

いて、著しい差が明らかになった。莢膜は App にが O – C、C – O 構造の優位を占めるスペクトル領域

おいて重要な病原因子であり、主成分はポリサッカに分類される。

ライドであるため、再分離株より CEs を抽出した。
CE 関連タンパク質を保持するため、後半ではそれ以上の精製を行わない低水溶性フェノール莢膜抽出

考察法を採用した。抽出した CE は、FTIR と計量化学

初期に誘導される免疫応答は App を含む一般微的解析に供試した。CEs に関する FTIR スペクトル

生物への最初の防御ラインである。これらによる病–1

原体の排除失敗は、結果として持続感染状態への発と 1200 〜 900 cm 領域（ポリサッカライド領域）

展を招くことになる。通常早期免疫応答が起こる急

を HCA することによって、2 つの主要クラスター

性期ブタ胸膜肺炎を本研究で検証したのはこのために分かれることが明らかになった : 一方のクラスである。急性期感染を誘導するため、気管内攻撃を

ターは攻撃株と感染群のブタ I1 〜 4 及び I6 の肺由採用した。本研究で実施した実験モデルは、結果と来株で構成され、もう一方は I4 の扁桃由来株からして両側に拡散した肺炎を引き起こし、臨床症状は構成された（図 2）。クラスター分けの基準となっ

LLS に反映されたため、感染の再現が確認された。

た再分離株 CE の微分 FTIR スペクトル解析は、宿これらの結果は、過去の他血清型 App における感データの 1800 〜 1500 cm 領域（タンパク質領域）–1

主器官特異的プロファイルを検索するために行った。 染実験の研究結果に沿うものである。この気管内攻つまり、分離 App の CE の二次微分、ベクトル正撃モデルは、病変が均等に分布したため、他の感染

規化後の平均 FTIR スペクトルを用いて、扁桃由来

経路では一般的に伴われるばらつきが少なくなった。

株のスペクトルから肺由来株のスペクトルを差し引

よってこの点において、本研究の検体数が少ないこくことで算出した。分離株間の CE の比較によって、 とによる問題はカバーできたといえる。

日生研たより10（26）

感染後 8 時間において、成熟好中球である分葉核

TNF – αの産生を低下させることが知られている。

好中球数の減少と同時に幼若好中球である桿状核好このことから LPS 誘導型 NF – κB の活性化も、対中球数及び後骨髄球数の増加がみられた。これは成照群と比較して感染群の BALF で TNF – αの発現量

熟好中球が血中から感染部位へ遊走されるのと同様低下がみられたことに関係するかもしれない。とはに、骨髄から血中へ未熟桿状核球が早期遊走される言うものの、これ以上の仮説のためにはさらなる実という、細胞性自然免疫応答の動態を明らかにして験が不可欠である。

いる。感染群の肺組織での急速な好中球の浸潤と高ワルダイエル咽頭輪は気管内感染経路を迂回してい IL – 8 の発現により、本疾患の病態形成におけるいるにも関わらず、自然免疫応答の検出結果は肺に好中球とケモカインの相互作用の重要な役割が確認

限局せず、むしろ上気道器官まで広がっていた。炎された。

症性サイトカインは全ての感染動物の肺組織から第血清においては、IL – 1 の濃度に変化はみられず、一に誘導されていたが、唾液腺が急性期タンパク質、

感染後最初の 8 時間においてわずかな濃度上昇がIL – 6 及び IL – 1 の主要発現部位であった。後者のIL – 6 と TNF – αに認められたのみであり、これは発見は予想外であった。なぜなら扁桃と唾液腺は病

過去の研究結果と一致している。Fossum らは、原体への接触が肺に続いてほぼ同時であるにも関わApp2 型感染後 20 時間で最も早く検出できた炎症性らず、扁桃組織においての免疫応答はむしろ欠如しサイトカインとして IL – 6 を報告していた。近年でていたからである。

は Wyns らが、感染実験後に全部で 3 つのサイトカ好発部位であるにも関わらず、唾液腺と扁桃は宿イ ン が 上 昇 し、血 中 TNF – αと IL – 6 の 平 均 値 が主免疫応答において真逆の様式を示した。扁桃組織

ピークを示すのはそれぞれ感染後 12 時間と 10 時間

では急性期タンパク質でも炎症性サイトカインのもであったことを明らかにした。これらの炎症性サイのでもない mRNA が発現していた。末梢リンパ組

トカインに対する知見に対して、本研究における血織での急性期タンパク質の肝外産生は、過去に急性中 CRP 濃度は感染後 8 時間で上昇した。血清中 Hp

App 感染における報告がある。しかしながら、唾液

濃度は今回の感染実験中影響を受けなかった。

腺での急性期タンパク質の肝外産生による効果はほ本研究にて得られた、感染後に血清中 CRP 濃度

とんど知られていない。免疫組織化学的知見としてが 4 倍上昇するという結果は、過去の報告にみられは、Gutierrez らが唾液腺の腺房と導管上皮細胞でた 2 〜 9 倍上昇の範囲と一致した。健康なブタ血漿の Hp 局在化を明らかにした報告がある。本研究で中の正常 CRP 濃度は、個体差が大きく 11 〜 77 µg/

は、App 感 染 ブ タ に お い て Hp と SAA に 限 ら ず

mL と変動があるが、本研究結果はこの範囲に含ま

CRP も有意な上昇を示した。感染群の唾液中の Hpれている。CRP 濃度に対して遅反応性急性期タン及び CRP 濃度が高い値に達していることから、こパク質 Hp の濃度は、両群共に血清中で生理学的レの発現上昇は転写レベルとタンパク質レベルの両面

ベル（0.29 〜 0.52 mg/mL）を保っていた。血清中において明白であった。この急性期の細菌感染におデータに対して BALF 中データでは、感染群におけける唾液腺への突出した影響が、唾液腺自体に App

る IL – 6 と IL – 1 の濃度が上昇した。この結果から、が存在していたことに関連するのかは今日まで解明

急性の細菌性気道感染は全身性よりむしろ局在性のされていない。とは言え、解剖学的に近接した扁桃

サイトカイン応答を引き起こすという仮説が導き出での細菌検出と、唾液腺に対する App のコロニーされた。しかしながら、TNF – αは感染群の肺にお形成への感受性に関する既報は、App が唾液腺に侵いて mRNA が高発現であるにも関わらず、そのタ襲できることを示唆している。興味深いことに、発ンパク質は検出できなかった。同様の結果は以前の咳や粘膜線毛エスカレーターの影響もあって扁桃組研究でも認められている。あるマウスでの研究結果

織からの再分離は可能であった。しかしながら、扁では、肺サーファクタントプロテイン A には分泌

桃におけるサイトカインや急性期タンパク質の発現

型白血球ペプチターゼ阻害物質（SLPI）の産生亢

上昇から示される宿主免疫応答は検出されなかった。

進能があることが示されている。SLPI は、LPS が

ここ 20 年で、FTIR は微生物の亜種レベルまで同誘導する NF – κB の活性を阻害することにより、定可能な技術として確立した。その高い識別能力に

64（2），201811（27）

よって、FTIR は細菌同定のためだけでなく例えばること、対する上気道由来株はそのクラスターに多非生物的ストレスまたは宿主遺伝子型といった、環様性をみせることが明らかになった（図 1）。後者

境からの影響を細菌の代謝プロファイル上で検証すの分離株にみられたこの多様性は、発咳といった急る た め の 採 用 が 増 加 し て い る。従 っ て、FTIR は性疾患症状それぞれの出現を反映しているのかもし

App の宿主への影響を探究すると同時に、App 感染れない。

に対する宿主の応答を解析するツールとして最適である。

細菌が宿主臓器に特異的に適応した際の代謝プロファイルに対する最も顕著な影響は、スペクトル領–

第一段階として、宿主の別々の組織から再分離さ

域 1150 〜 1100 cm 1 から分かった。この周波域はれた App を対象として分子生物学的解析を行い、ポリサッカライド領域（1200 〜 900 cm 1）であり、攻撃株と同一の遺伝子型か確認した。すべての分離

これは糖（C – O – C、C – O – P）の伸縮環振動に起株は App2 型特異的 PCR に陽性であり、M13 – PCR

因する複合配列のピークが優位である。扁桃由来株

特性も同様の結果を示した。しかし分子タイピングと肺由来株の CEs から記録された FTIR スペクトルの結果とは異なり、FTIR 解析の結果から分離株にを比較したところ、それぞれのタンパク質及びポリおける別々のクラスター形成が明らかになった。分

サッカライドの組成に大きな違いがあることが明ら離株の再分離された組織に応じたクラスターは（図かとなった。このことから、莢膜が細菌の宿主臓器

1）、それらの下気道から上気道への移動による生理ごとに特異的に代謝適応するのではないかという推的学代謝を反映している（図 1・2）
。これは App が測が導き出される。肺由来株の CEs においてβシー

コロニー形成または感染する体の部位に応じて、異ト構造が強く検出されていたことは、βシート輸送

なる適応戦略をとることを示しているのかもしれな

タンパク質がより高発現していたことを示している。

い。特に、攻撃株と肺由来株が一つのクラスターを

App が観察された宿主組織特有の適応に関与してい

形成しているのに対して、上気道由来株が別々のクる分子学的構造とその機序を解読するためには、莢

–ラスターを形成していることは注目すべき点である。 膜のポリサッカライド及びタンパク質を定量的及びこの知見から、本細菌は実に急速に上気道に適応す

定性的に解析することが必要とされるが、それは今るという仮説が導き出せる。この仮説は、上気道由

回の我々の研究範囲を明らかに越えている。現在進来株の代謝プロファイルが肺由来株及び攻撃株のも行形の研究（Frömbling ら未発表）においても、予のとは異なっていたことが反映されている。さらに備試験の結果から扁桃由来株の莢膜構成成分の産生

本研究の結果は、攻撃株における実験室での PPLO

は減少していることを指摘している。S. aureus に培地及び培養環境が、宿主内で細菌が直面する急性

ついては、莢膜発現の減少は動物（例えば慢性骨髄

肺感染環境をよく模倣できていることを明らかにし炎 , ウシ乳房炎）同様、人間における慢性感染を確た（図 1）。細菌の発育環境は病原性微生物の代謝立維持するために有利であるという報告が既にある。

と病原因子の発現に大きな影響を与えるため、感染本結果に基づけば、感染ブタにおける App 持続感実験に用いる攻撃菌調整の際には必ず考慮に入れな染を解読する第一段階として、莢膜組成がブタの扁ければならないのは既知の通りである。今回観察さ桃への適応に重要であることが推察される。

れた App の表現型の代謝適応は可逆的であった。
これは他の細菌について近年報告された、宿主環境に起因する記憶は時間をかけて失われるという知見

結論に沿っている。臨床症状を一切起こしていないブタ

全体を通し本研究における結果は、すでに感染後の扁桃及び外鼻孔から App が分離されることは一

8 時間で唾液腺が口腔内免疫において重要な役割を般的であるため、本病原体はこの部位にて持続感染持つことを示した。肺に対する場合と対照的に、すると考えらえている。従って、様々な宿主臓器でApp は扁桃の免疫応答へなんの刺激も与えなかった。

コロニー形成する場合、その代謝適応の違いは App

従って、代謝プロファイルで観察された App の特の持続感染を促進した可能性がある。実際に HCA

異的変化は、おそらくブタの扁桃への適応に重要での結果から、肺由来株は独自のクラスターを形成すある。App は慢性感染を起こし、定着するために宿日生研たより

12（28）

主に適応するが、その病原巣として扁桃が担う正確な役割と寄与を解明するためには、さらなる研究が必要である。

るのが現状です。
本論文から、ブタ胸膜肺炎における宿主であるブタの免疫応答と、病原体である App の宿主環境への適応戦略についての興味深い知見を得ることがで（参考文献は割愛いたしました）

きます。特に莢膜について、その組成は App のブ
タ扁桃への適応に関係する可能性を示唆しています。
莢膜の抗原性の違いは血清型にも関わり、現行のワ

所感

クチンは血清型特異的となっています。本論文でApp によるブタ胸膜肺炎に対するワクチンは、日FTIR による解析が行われたように、従来とは異な

生研株式会社を含む複数のワクチンメーカーから販る側面からの解析を試みることは、病原体の新しい売されていますが、完全に感染を防ぐことはできな

知見を明らかにします。今後、より効果の高いワク

いため本疾病は日本国内でも未だ継続して発生してチンを開発するためにも、新しいアイデアに挑戦しいます。抗生物質による治療は一定の効果を示しまていきたいと感じました。

すが、他の細菌と同様 App の薬剤耐性菌の報告は（副研究員）

増加しており、さらなる対策の研究が求められてい論文紹介

コマーシャル鶏の農場で分離された
薬剤耐性サルモネラの多様性について
横山かえでDiversity of antimicrobial resistance phenotypes in Salmonella isolated from commercial poultry farms
Karen A. Liljebjelke et al. Front. Vet. Sci. 2017 doi : 10.3389/fvets. 2017. 00096
原文は「Frontiers in Veterinary Science」から自由
文献紹介の意図
サルモネラによる食中毒は、2000 年頃と比較すにダウンロードできますので、興味を持たれた方はそちらもご覧下さい。

ると患者数は減少しているものの、未だに日本における主な食中毒の原因のひとつとなっています。厚生労働省の「平成 28 年（2016 年）食中毒発生状況」

要約によると、平成 28 年のサルモネラによる食中毒患

サルモネラは、依然として米国において食中毒の者数は 704 人であり、これは、ノロウイルス、カン

主な原因であり、食物連鎖による薬剤耐性サルモネ

ピロバクター、ウェルシュ菌の次に多い患者数になラの拡散はサルモネラ症の治療において重要な問題ります。サルモネラ症の感染源は鶏卵や、鶏肉等のである。我々は、統合されたブロイラー生産（ブロ

肉類が多いため、養鶏場や食鳥処理場でのサルモネ

イラーインテグレーション）における抗生物質感受ラによる汚染防止が重要です。しかし、現在国内だ性株および耐性株の伝播について理解するために、

けでなく、世界各地でサルモネラの薬剤耐性株が確

このシステムにおけるサルモネラの生態について調認されており、耐性株の疫学調査等の対策が求めら査した。米国食品医薬品局（FDA）が全米薬剤耐性れています。その参考として、米国のブロイラー農

菌監視システム（NARMS）によって実施した小売場における調査をまとめた上記の論文を紹介します。 鶏肉調査では、初年にブロイラー農場から薬剤耐性64（2），201813（29）

サルモネラを検出しており、これに焦点を当てたレ

フ ト リ ア キ ソ ン 耐 性 S. enterica 血 清 型 のトロスペクティブ研究（後ろ向き研究）によりデー

Heidelberg、Newport、Typhimurium の出現およびタを分析した。検出されたサルモネラの 63％は、

急速かつ世界的な拡散は、多種の薬剤耐性菌が畜産

NARMS のプログラムで使用されている 19 種の抗および人の健康に脅威をもたらすことを強調してい菌剤パネルに感受性であった。2 か所のブロイラー

る。薬剤耐性遺伝子は、病原菌、共生菌および環境

農場から分離されたサルモネラのうち、25 種の薬

細菌等の様々な菌が有している。さらに、一度薬剤剤耐性株が観察された。そのうち最も多い型は、ス耐性株が生態系に導入されると、抗生物質の選択的トレプトマイシンに単独あるいは他の抗生物質と組圧力を維持しなくても耐性株は広がり、持続するこ

み合わせて耐性を示した株であった（36.3％）。スとが知られている。また、薬剤耐性遺伝子のリザー

トレプトマイシンおよびスルファジメトキシンに対バーは以前考えられていたよりも多い。このようなする耐性は、トランスポゾン Tn 21 に関連している環境下では、治療用および非治療用の抗生物質を選ことが示唆された。ストレプトマイシン、ゲンタマ

択的に使用することで、鶏の常在微生物叢から薬剤

イシン、スルファジメトキシン、トリメトプリムお耐性遺伝子を獲得するサルモネラが出現する可能性

よびテトラサイクリンに対する薬剤耐性の組合せは、 がある。さらに、サルモネラが長い間、畜産農家のパルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）によって環境中に生存することで、耐性遺伝子を獲得する機同定された種々の Salmonella enterica 血清型および会が増えていく。

遺伝子型において観察された。サルモネラの抗生物

我々は、サルモネラ汚染および薬剤耐性株の出現

質感受性は、農場内および農場間で差があり、これに対する潜在的かつ重要な制御ポイントを特定するらの違いのうち、いくつかは特定の血清型に関連しために、家禽生産という統合された環境を利用し、ていた。しかし、農場間の違いに抗生物質の使用はブロイラー飼育下で検出された薬剤耐性サルモネラ

関連していなかった。農場固有のサルモネラ血清型を観察した。最終的には、薬剤耐性サルモネラによに対する時間的および空間的分布の分析は、薬剤耐る屠体汚染レベルの減少に関連した情報を提供する

性サルモネラの垂直伝播を防止することで、薬剤耐ことを目的としている。米国食品医薬品局（FDA）

性サルモネラによる屠体汚染、それに伴う人への感が全米薬剤耐性菌監視システム（NARMS）によっ染リスクを減少させることを示唆している。

て実施した小売鶏肉調査では、初年にコマーシャル
ブロイラー農場から薬剤耐性サルモネラを検出しており、これに焦点を当てたレトロスペクティブ研究

背景（後ろ向き研究）によりデータを分析した。薬剤耐

サルモネラは依然として米国で流行する胃腸炎の性プロファイルの多様性にも関わらず、2003 年に主な原因であり、家禽食品の消費がこれらの流行のこれらの農場から検出された家禽のサルモネラは、いくつかに関与しているのではないかと言われてい動物および人の健康に重要だと考えられる抗生物質

る。HACCP プログラムの実施以来、処理された鶏に対して、一般的に感受性があった。薬剤耐性サル

枝肉のサルモネラ汚染のレベルは改善されてきていモネラによる鶏の屠体汚染において、垂直伝播が最る。しかし、米国ワシントン DC 地域の小売肉調査も重要な要因であることが示唆された。

において、牛肉、豚肉および家禽製品に薬剤耐性サ
ルモネラが驚異的なレベルで汚染していることが明らかになった。食物連鎖を通じた薬剤耐性サルモネ

材料と方法

ラの伝播は、胃腸炎を発症した場合、特に医学的介ジョージア州北東部におけるコマーシャルブロイ

入が必要な小児、高齢者および免疫不全の患者におラー養鶏場 2 か所の抗生物質使用の説明

いて治療が失敗する可能性を考慮すると、公衆衛生

対象農場の選択および説明については前述のとお上重要な意義を有する。さらに、サルモネラを含むりである。約 1 万 7 千羽の雛を農場 1 の各鶏舎に配薬剤耐性細菌による感染は、より高い罹患率および置した。床敷きの交換は行わなかった。孵化場では、死亡率と関連している。

孵卵 17 日目にゲンタマイシン（0.1 mg/ 卵）を卵

畜産において、抗生物質の使用が食中毒の病原体内投与した。当研究中に、この農場では治療目的でにおける薬剤耐性株の出現の要因となっていること

抗生物質を使用しなかった。鶏には最初の 2 週間、は以前から指摘されている。多剤耐性 Salmonella

バージニアマイシン（10 g/t）
（25 g/t）を含有する

enterica Typhimurium ファージ型 DT104、そしてセ飼料を給餌した。最初の飼料には抗コクシジウム剤

日生研たより

14（30）

投与を以下の順序で実施した。1 群；ジクラズリル

性を MIC（µg/mL）で示した。試験に用いた抗生（1 g/t）、2 群；ナラシン（72 g/t）、3 群；モネンシ

物質は以下のとおりである。略語 3 文字とブレイクン（100 g/t）
、4、5 群；ニカルバジン（82 g/t）
、6、

ポイントの濃度をカッコ内に示した。

7 群；サリノマイシン（60 g/t）
。各群は次の 2 週間、アミカシン（AMI >64 µg/mL）、アモキシシリン

バシトラシン（25 g/t）を含有する育雛用飼料を給/ クラブラン酸（AUG >32/16 µg/mL）、アンピシリ

餌され、その飼料には抗コクシジウム剤投与を以下ン（AMP >32 µg/mL）、ア プ ラ マ イ シ ン（APRの順序で添加した。1 群；サリノマイシン（60 g/t）、

32 µg/mL）、セフトリアキソン（AXO >64 µg/mL）、

2、3 群；ナラシン（72 g/t）
、4、5 群；ラサロイド

セ フ ァゾ リ ン（CEF 32 µg/mL）、セ フ ォキ シ チ ン（82 g/t）、6、7 群；ジクラズリル（1 g/t）
。最後の（FOX >32 µg/mL）、セフチオフル（TIO > 8 µg/mL）、

飼料には抗コクシジウム剤投与は行わず、ビリギニ

セファロチン（CEP >32 µg/mL）、クロラムフェニ

アマイシン（15 g/t）を含有し、体重が市場基準に

コ ール（CHL > 32 µg/mL）、シ プ ロ フ ロ キ サ シ ン

なるまでの 1 〜 2 週間給餌した。出荷前の最後の 1（CIP >4 µg/mL）、カナマイシン（KAN 64 µg/mL）、

週間は抗生物質および抗コクシジウム剤を含まない

ゲ ン タ マ イ シ ン（GEN >16 µg/mL）、イ ミ ペ ネ ム

飼料を給餌した。出荷 16 時間前には飼料を回収し（IMP >4 µg/mL）、ナリジクス酸（NAL >32 µg/mL）、た。

ストレプトマイシン（STR >64 µg/mL）、スルファ

約 2 万羽の雛を農場 2 の各鶏舎に配置した。農場

ジメトキシン（SMX >512 µg/mL）、テトラサイクリ

2 においても床敷きの交換は行わなかった。孵化場

ン（TET >16 µg/mL）、トリメトプリム / スルファ

では、ゲンタマイシン（0.2 mg/ 雛）を初生雛に皮メトキサゾール（TMS > 4 /76 µg/mL）。

下注射した。雛には最初の 2 週間、バシトラシン

バシトラシンとビルギニアマイシンは、主にグラ（25 g/t）およびサリノマイシン（50 g/t）を含有す

ム 陽 性 菌 に 対 し て 活 性 が あ り、鶏 の Clostridium

る最初の飼料を給餌し、次の 2 週間はバシトラシン

perfringens 感染の予防に使用される。そのため、サ（25 g/t）およびサリノマイシン（50 g/t）を含む育

ルモネラに対するブレイクポイントがなく、このパ

雛用飼料を給餌した。その後、1 〜 2 週間成長促進

ネルには含まれていない。この試験は、2003 年の剤または抗コクシジウム剤を含まない飼料を給餌しFDA による小売肉から検出された薬剤耐性食物由た。出荷前の最後の 1 週間は抗生物質または抗コク来細菌の調査の初期に、当時 NCCLS が推奨していシジウム剤を含まない飼料を給餌した。出荷 16 時たものと同じ方法および薬剤耐性ブレイクポイント

間前には飼料を回収した。農場 2 における 3 群の 6を用いて実施された。

週目において、B 鶏舎で大腸菌性気管支炎が発生し、オキシテトラサイクリン 10.4 mg/kg/ 羽を 1 日、（材料と方法の項は一部割愛いたしました）

5.1mg/kg/ 羽を 4 日間飲水投与した。この作業では、育雛箱の床敷き、鶏舎の環境中および鶏の屠体をサンプリングした。

結果
家禽サルモネラにおける薬剤感受性および薬剤耐性

家禽サルモネラ分離株の遺伝子型および表現型解析

株の多様性

この研究で検討された 289 株のサルモネラは、以農場での抗生物質の使用に加え、床敷きが薬剤耐前記載した方法と同様に単離し、血清型、ファージ性遺伝子の重要な保有場所であることにより、養鶏型および株を同定した。aadA1 および merA の存在

場に薬剤耐性サルモネラが出現することは十分に考は、Bass らによって記述されている方法で決定しえられる。我々は、ジョージア州北東部のコマーた。

シャルブロイラー農場 2 か所から採材したサルモネ

サルモネラ分離株、計 289 株における薬剤感受性

ラの薬剤感受性について、農場での抗生物質の使用を特定した。試験に用いられた抗生物質の最小阻止と 比 較 し て 調 査 し た。サ ル モ ネ ラ 分 離 株 の 大 半濃度（MIC）は、自動化された薬剤感受性システム、 （62.6％、n=172）は、試験を行った 19 種の抗生物
Sensititre®（Treck Diagnostic Systems、Westlake、

質すべてに対し、感受性が認められた。残りの薬剤

OH、USA）を用いて測定し、米国臨床検査標準委

耐性が認められたものはストレプトマイシン

員会（NCCLS）のガイドラインに従い、微量液体（30.9％）、ゲンタマイシン（12.6％）、スルファジメ

希釈法によって解釈した。Sensititre® 感受性試験

トキシン（20.9％）、テトラサイクリン（13.9％）おを製造元の説明書に従って実施し、感受性および耐よ び ト リ メ ト プ リ ム / ス ル フ ァメ ト キ サ ゾ ール

64（2），2018

15（31）（8.6％）であった（表 1）。そのうち、ストレプトマ

イシンおよびテトラサイクリン耐性（8 株）、スト

イシン単独に対する耐性株（30.9％）が最も多い表

レプトマイシン、スルファジメトキシン、トリメト

現型であった（表 1 および 2）。

プリム / スルファメトキサゾールおよびトラサイ

コマーシャルブロイラー農場から分離したサルモ
ネラにおいて、多様な薬剤耐性型（n = 25）が観察された（表 2）。我々が分離した家禽サルモネラのクリン耐性（7 株）〕と比較して広範囲に分布していることを反映した結果かもしれない。
最もよく同定された薬剤耐性株であるストレプト

20％は 3 種類以上の抗生物質に耐性であった（表 1）。 マイシンおよびスルファジメトキシン耐性株は、ト同定されたうち最も共通してみられた薬剤耐性型は、 ランスポゾン Tn 21 と関連していることが知られてストレプトマイシン単独（36.28％）、ストレプトマいる。耐性遺伝子 merA および aadA1 は、この移

イシンおよびスルファジメトキシンの組み合わせや動性遺伝子エレメントに存在し、これらの遺伝子座

他の抗生物質を加えた組み合わせ（41.59％）であっの分布は検出された家禽からの分離株において、そた。また、ストレプトマイシン、スルファジメトキ

れぞれ 17.86％および 10.56％であった。これらの耐シンおよびゲンタマイシンの組み合わせや他の抗生性遺伝子とストレプトマイシンまたはスルファジメ

物質と合わせた組み合わせ（28.32％）も多く観察

トキシンに対する耐性との間には、有意な関連性がされた（表 2）
。ストレプトマイシンおよびスルファあった（カイ二乗検定：p<0.05）。

ジメトキシンに耐性を示すサルモネラ分離株間には統計的に有意な関連性があった（カイ二乗検定：p

家禽サルモネラの薬剤感受性における農場の変動<0.05）。ストレプトマイシン、スルファジメトキシ

サルモネラ分離株の薬剤感受性については農場内

ンおよびゲンタマイシンに耐性を示す分離株間でもおよび農場間で相違が認められた。農場 1 のサルモ

有意な関連性があった（カイ二乗検定：p<0.05）。

ネラ分離株は、農場 2 から検出された株と比較して薬剤耐性型の多様性は高い（相互シンプソン指数：

ストレプトマイシン、スルファジメトキシン、トリ

1.20）が、これらの表現型の分布の均一性は低かっ

メトプリム / スルファメトキサゾールに耐性を持た（0.26）。低い均一性のスコアは、ある特定の薬

つ傾向にあった（カイ二乗検定：p<0.05）（表 1）。

剤耐性型が他のもの〔ストレプトマイシン耐性（単また、農場間と同様に農場内の特定のサルモネラ

独、41 株）、ストレプトマイシン、スルファジメト

血清型間で薬剤感受性に差異があった。農場 1 から

キシンおよびゲンタマイシン耐性（17 株）、ルファ

分離された S. Typhimurium は、同農場から分離さジメトキシン、トリメトプリム / スルファメトキサ

れた S. Enteritidis よりも、この試験で使用した抗ゾールおよびテトラサイクリン耐性（11 株）、スト

生物質に対して感受性が低かった。農場 1 から分離

レプトマイシン、スルファジメトキシン、ゲンタマ

した Salmonella Kentucky は、同農場から分離した

表１

コマーシャルブロイラー計7 群の生産および処理過程で分離されたサルモネラ血清型および多く観察された
薬剤耐性型の割合

Salmonella enterica 血清型（n=）感受性（％）STR（％）GEN（％）SMX（％）TET（％）TMS（％）AMP（％）多剤耐性（％）
農場 1
S. Typhymurium（153）
66.6 ※ 2
36.6
9.8
12.4
5.9
1.9
0.6
11.1
S. Enteritidis（28）92.8 ※ 2
3.6
3.6
3.6
0
0
3.6
3.6
S. Montevideo（22）
40.9
18.2
0
54.5
59.1
59.1
0
53.8
S. Kentucky（13）23.1 ※ 1
61.5
61.5
76.9
7.7
7.7
0
53.8
S. Heidelberg（6）
33.3
50.0
33.3
33.3
16.7
16.7
16.7
66.7
全種（241）
60.7
35.4 ※ 1
13.8
23.4 ※ 1
13.3
10.4 ※ 1
0.9
22.7
農場 2
S. Kentucky（13）100 ※ 1
0
0
0
0
0
0
0
S. Mbandaka（9）
55.6
11.1
11.1
11.1
33.3
0
0
11.1
S. Typhymurium（13）
66.6
33.3
16.7
16.7
16.7
0
0
16.7
S. Ohio（5）
80
20
0
0
0
0
0
0
S. Senftenberg（4）
75.0
0
25.0
25.0
25.0
0
25.0
25.0
全種（48）
72.3
8.5 ※ 2
6.4
8.5 ※ 1
17.0
0※1
4.3
10.6
感受性：試験を行った 19 種すべての抗生物質に感受性がある株の割合
多剤耐性：3 種類以上の抗生物質に対する耐性がある株の割合※ 1 農場間の分離型または血清型における抗生物質感受性に有意差あり（カイ二乗検定、p <0.05）。
※ 2 サルモネラ血清型間の抗生物質感受性に有意差あり（カイ二乗検定、p <0.05）。

日生研たより

16（32）
表2

2 か所のコマーシャル養鶏場から分離された薬剤
耐性サルモネラの多様性割合
薬剤耐性型

鶏肉における薬剤耐性サルモネラの拡散に関与するのは水平あるいは垂直伝播であるか

株型

合計

STR

5

41 （36.28）

STR SMX GEN

5

17 （15.04）

SMX TMS TET

4

11（9.73）

型 は 農 場 1 か ら 頻 繁 に 分 離 さ れ た。血 清 型

STR SMX GEN TET

3

8（7.08）STR SMX TMS TET

57（6.19）

Typhimurium 分 離 株 は 大 方 汎 感 受 性 で あ っ た

STR SMX2

3（2.65）STR SMX GEN TMS TET

23（2.65）

CHL

2

2（1.77）

シン（12.4％）、ゲンタマイシン（9.4％）、テトラサ

STR SMX GEN CEP

1

2（1.77）STR TET CHL

12（1.77）

イクリン（6.4％）であった（表 3）。試験した他の

TET

2

2

（1.77）TET CEP CHL

2

2（1.77）

AMP

1

1（0.88）

は 3 種以上の抗生物質に対して耐性であった。よくSTR SMX CEP

1

1（0.88）STR SMX AXO FOX TIO AMI APR NAL

1

1（0.88）

観察された S. Typhimurium の薬剤耐性株はストレ

STR SMX GEN AMP

1

1（0.88）SMX GEN

1

1（0.88）STR GEN

1

1（0.88）

トラサイクリンに対する多剤耐性型（5.3％）であっ

STR SMX GEN TET AMP

1

1（0.88）SMX TET TMS CEP CHL KAN

1

1（0.88）た。PFGE に よ っ て 同 定 さ れ た 3 種 の S.

STR SMX TET TMS CHL

1

1（0.88）

CEP AMP1

1（0.88）SMX TMS

1

1（0.88）

イシン、ゲンタマイシン、スルファジメトキシンお

TMS TET1

1（0.88）

1

1（0.88）

よびテトラサイクリンに対する耐性の組み合わせは、

SMX“STR SMX”または他の抗生物質との組
み合わせ

47 （41.59）p<0.05 ※ 1“STR SMX GEN”または他の抗生物質との組み合わせ32 （28.32）p<0.05 ※ 2

多様性（相互シンプソン指数）=1.20
均一性 =0.26
株型：薬剤耐性を有する異なる S.enterica 血清型または株型の数「合計」の（）内：同定された薬剤耐性株の割合※ 1 STR および SMX に耐性を示すサルモネラ分離株間に有意な関連性あり（カイ二乗検定、p <0.05）。
※ 2 STR、SMX および GEN に耐性を示すサルモネラ分離株間に有意な関連性あり（カイ二乗検定、p <0.05）。

S. Typhimurium（n = 159）は、本 研 究 に お い て
最も広く存在が認められた血清型であり、この血清（66.6％）。一方で薬剤耐性株もみられ、代表的な型
はストレプトマイシン（6.6％）、スルファジメトキ

14 種の抗生物質に対する耐性はほとんど観察されなかった（≦ 5％）。 S. Typhimurium 分離株の 11％

プトマイシン単独（23.7％）およびストレプトマイ
シン、ゲンタマイシン、スルファジメトキシン、テTyphimurium 遺伝子型において、薬剤耐性型の多様性（n = 9）が認められた（表 3）。ストレプトマ

耐 性 株 の 85.3％を 占 め た（表 3）。PFGE タ イ プ
T1.3 はアンピシリン耐性が有意に高い（α= 0.05）
ことが示唆されたが、それを除くと農場 1 から分離された 3 種の S. Typhimurium 遺伝子型間の抵抗性に有意差はなかった。
農場 1 に存在する 3 種の S. Typhimurium 遺伝子型
（T1.1、T1.2 および T1.3）のうち、2 種（T1.1 T1.2）
がブロイラー農場の鶏およびこれらの群に由来する
鶏屠体から検出された例が 3 例みられた（表 4）。また、他の 3 例ではこれらの S. Typhimurium 遺伝子型が、農場の環境中および鶏屠体から分離された。

他 の サ ル モ ネ ラ お よ び 農 場 2 か ら 分 離 し た S.

鶏 の 屠 体 か ら 検 出 さ れ た 唯 一 の 薬 剤 耐 性 S.

Kentucky よりも著しい薬剤耐性を示した（表 1）。

Typhimurium 株は、農場に搬入した雛から分離され農場 2 でのテトラサイクリン処理の結果として、サたものと一致し、このことは耐性 S. Typhimurium 株

ルモネラ分離株は、テトラサイクリンに耐性を示さが種鶏群から垂直伝播したことを示唆している。

ない可能性が示唆された。これは、フィッシャーの
正確確率検定（α= 0.05、片側、p = 0.0046）によって示され、他の抗生物質に対しても同様であった

考察（コクラン＝マンテル＝ヘンツェル検定、p = 0.0046）。

2 か所の養鶏場から分離されたサルモネラの薬剤

テトラサイクリンを用いた大腸菌性気管支炎の治療

感受性およびプロファイルは、他の研究で報告され的処置は、その後の鶏群から分離されたサルモネラて い る 薬 剤 感 受 性 の デ ータ を 反 映 し て い た。

の薬剤耐性を増強させるわけではないことが示唆さ2001 年の NARMS の調査によると、サルモネラ分れた。さらに、2 つの養鶏場間で、テトラサイクリ

離株の大半（51.6％）は汎感受性であった。また、ンに耐性を示すサルモネラ分離株には、統計的に有最も共通して同定された薬剤耐性は、テトラサイク

意な差はなかった（カイ二乗検定：p = 0.34）。

リン（26.7％）、ストレプトマイシン（23.7％）、ス

64（2），2018

17（33）ル フ ァジ メ ト キ シ ン（9.1％）、ゲ ン タ マ イ シ ン

鶏肉から分離されたサルモネラは大半（66.6％）が（6.3％）およびアンピシリン（15.1％）に対する耐汎感受性であり、最もよく確認された薬剤耐性は、性であった。2002 年の NARMS の小売調査では、

スルファジメトキシン（18.7％）、ストレプトマイ
シン（32.3％）、ゲンタマイシン（3.4％）
、アンピシ

表3 コ
 マ ーシ ャル ブ ロ イ ラ ー農 場 か ら 分 離 さ れ た
Salmonella enterica 血清型の薬剤耐性および株型
サルモネラ血清型
PFGE 型
薬剤耐性型※1（ファージ型）
S. Enteritidis（PT8） E1.1 感受性
AMP
STR SMX GEN
E1.2 感受性
S. Typhimurium（DT193）（DT107）

T1.1

T1.2

（U302）

T1.3

（NT）

T2
T3
V1.1
V1.2
V1.3
V1.5

S. Montevideo

NT
S. Kentucky

NT

S. Senftenberg

S1

S. Gaminara

G1.1

S. Mbandaka

G1.2
G2.1
G3.1
M1
NT

S. Anatum

A1
A2
A3

S. Ohio
S. Tennessee

O1
NT
T1

S. California
S. Heidelberg

C1
H1

S. Jerusalem
S. Lille

J1
L1
NT

S. Muenchen

U1

分離株数
18
1
1
8

感受性
STR
STR SMXSTR SMX GEN TETSTR SMX TET TMSSTR SMX GEN TET TMS

50
16
1
3
1
2

感受性
STR
STR SMX CEPSTR SMX GENSTR SMX GEN TETSTR SMX AXO FOX TIO AMIAPR NAL
感受性
STR GEN SMX AMP
感受性
感受性
感受性
SMX TET TMS
SMX TET TMS
SMX TET TMSSTR SMX TET TMS
感受性
STR
CHL
感受性
STR SMXGEN SMXSTR SMX GENSTR SMX GEN TET TMS
感受性
STR GENSTR SMX GENSTR SMX GEN TET AMPSTR SMX GEN CEPSMX TET TMS CEP CHL
KANSTR TET CHL
STR SMX TET TMS CHL
感受性
CEP AMP
感受性
感受性
STR SMX GEN TET
感受性TETSTR SMX TET TMSSTR SMX TET TMS
SMX TET TMS
感受性
STR SMX TET TMS
STR
感受性
SMX TMSTET TMS
感受性
感受性
STR
STR SMX GENAMP CEP AUG FOXTETTET CEP CHLTET CEP CHL
CHL
SMX

47
21
1
5
3
1
5
1
1
1
6
3
1
6
3
1
1
1
16
2
1
6
1
3
1
4
1
2
1
2
1
2
1
1
4
2
1
1
1
1
1
1
1
1
3
1
1
1
3
2
1
1
1
1
1
1
1

感受性：試験を行った 19 種すべての抗生物質に感受性がある株
NT：ファージ型別または PFGE によって型別できない株※ 1ファージ型別は S . Enteritidis および S . Typhimurium 分離株のみに実施した。

リン（5.1％）、トリメトプリム / スルファメトキサ
ゾール（1.7％）およびテトラサイクリン（34.3％）に対する耐性であった。本研究のサンプリング時期と近時している 2003 年の NARMS の小売肉調査では、サルモネラ分離株の 47％が汎感受性であると報告された。また、テトラサイクリン（27.4％）、
ストレプトマイシン（26.2％）、スルファジメトキ
シン（14.3％）、ゲンタマイシン（6.0％）、アンピシ
リ ン（33.3％）で 耐 性 が 認 め ら れ た。最 近 の
NARMS の 小 売 肉 調 査（2015 年）で は、家 禽 の サ
ルモネラ分離株の 50％が 12 の抗生物質パネルに感受性であった。この調査では、小売肉から分離されたサルモネラは、テトラサイクリン（37.3％）、ス
トレプトマイシン（37.3％）、スルファジメトキシ
表4 コ
 マーシャルブロイラー計 7 群の生産において、
抗 生 物 質 に 感 受 性 ま た は 耐 性 を 示 す S.
Typhimurium 株型の時間的および空間的分布
農場 1 の群S .Typhimurium
PFGE 型

1

T1.1

2

T1.1
T1.2

T1.3
3

T1.1

T1.2

4

T1.3
T1.1

5

T1.1
T1.2

6

T1.1
T1.2

7

T1.1
T1.2

薬剤耐性型
感受性
STR
STR SMX TET TMSSTR SMX GEN TET TMS
感受性
感受性
STR
STR SMX GENSTR SMX GEN TET
感受性
STR SMX GEN AMP
感受性STR
STR SMX
感受性
STR
感受性
感受性
STR
感受性
STR
感受性
STR
感受性
STR
感受性
STR
STR SMX CEP
MDR
感受性
STR SMX GEN TET
感受性STR
STR SMX GENSTR SMX GEN TET

採材場所※ 1孵化場 鶏舎 屠体
2
2
1
2
5
3
16
2
1
1
2
1
4
1
1
4
1
1
3
5
1
4
1
1
3
14
1
8
1
2
4
1
5
2
2
2
9
1
1
7
3
15
2
3
2

感受性：試験を行った 19 種すべての抗生物質に感受性がある株
MDR：STR、SMX、FOX、AMI、AXO、NAL、TIO、APR に 対 す る 多剤耐性株※ 1 各場所で採材されたサルモネラ分離株の数日生研たより

18（34）ン（8.5％）、ゲンタマイシン（5.1％）およびアンピ

トキシン、テトラサイクリンおよびトリメトプリム

シリン（8.5％）に対して耐性であった。

/ スルファメトキサゾールの組み合わせ、ストレプ

我々の家禽サルモネラ分離株には、多様な薬剤耐

トマイシン、スルファジメトキシン、ゲンタマイシ

性型があることがわかった。この多様性にもかかわン、テトラサイクリンおよびトリメトプリム / スル

らず、ストレプトマイシンおよびスルファジメトキ

ファメトキサゾールの組み合わせが挙げられる。他

シン耐性または他の抗生物質を加えた耐性は、コの S. Typhimurium PFGE タ イ プ T1.2 お よ び T1.3

マーシャル養鶏場から分離されたサルモネラに多くは、それぞれ PT DT107 および PT U302 と同定さみられた。これらの薬剤耐性を付与する遺伝子は、れた。この研究から、S. Typhimurium PT DT107 お

自然界では薬剤耐性の広範な伝播の原因となる移動

よび PT DT193 は、PFGE によって決定されるよう性遺伝子エレメントに存在することが多い。トランに遺伝子的に関連していることが示唆される。また、

スポゾン Tn 21 は、水銀耐性遺伝子である merA や、他の研究では S. Typhimurium および S. Entertidis

ストレプトマイシン耐性遺伝子である aadA1、スルの異なる PT は、遺伝子的に近縁関係であることがファジメトキシン耐性遺伝子である sul1 を含む。

PFGE によって決定されたと報告されている。S.

このトランスポゾンは、しばしば自然界で水銀およTyphimurium DT107 分離株は、大部分が汎感受性

び抗生物質耐性の蔓延に関与しており、家禽のサル（59.6％）であり、最も多い薬剤耐性型がストレプ

モネラ菌および大腸菌が広く保持している。我々は、 トマイシンにのみ耐性（25.4％）であるという点で、耐性遺伝子 merA および aadA とストレプトマイシ

S. Typhimurium DT193 分離株と類似していた。

ン / スルファジメトキシン耐性との間に関連性が家禽の床敷きは、薬剤耐性遺伝子の大きなリザーあることを確認したが、ストレプトマイシンに耐性バーであるとも言える。我々は以前の研究で、家禽のあるサルモネラのうち、aadA1 を有しているのはの床敷きにおいて、これらの薬剤耐性遺伝子の多く

17.72％のみであった。これは、他の薬剤耐性遺伝が多様な細菌種間で共有されていることを示してき子がストレプトマイシン耐性の原因となっているこ

た（例：コリネバクテリウムとサルモネラの aadA1と、さらにこれらの分離株で観察された薬剤耐性型

遺伝子）。したがって、この環境下では、薬剤耐性の根底に多様性があることを表している。

が環境中からサルモネラに移行する可能性があり、これらの分離株における Tn 21 の高保有率にもか

それに伴い、新たなサルモネラの耐性株が家禽に水かわらず、2 か所のコマーシャルブロイラー農場に平伝播する可能性がある。農場の環境中から分離さおいて、薬剤耐性型はサルモネラ血清型間に均一にれた S. Typhimurium からは 8 種の薬剤耐性型が検分布していなかった。あるサルモネラ血清型は、そ出されたが、それらは処理済みの鶏屠体から分離され ら の 薬 剤 感 受 性 パ タ ーン と は 異 な っ て い た。

れた S. Typhimurium からは全く検出されなかった。

Salmonella Enteritidis は汎感受性である傾向があっこの発見は、ブロイラーの鶏舎環境に存在する薬剤

たが、S. Typhimurium は、多様な薬剤耐性型が観耐性 S. Typhimurium の多様性にもかかわらず、こ察 さ れ た。NARMS の 小 売 肉 調 査（2003 年、2015

れらの薬剤耐性株のいずれも、処理工場を通じて鶏年）お よ び HACCP 調 査（2003 年、2014 年）で 報の屠体に伝達されなかったことを示唆している。入

告されたこれらのサルモネラ血清型についても、同雛時の雛に存在する薬剤耐性株のみが加工時の鶏に様の傾向が観察されていた。S. Typhimurium の系

残っていた。したがって、我々のデータは、垂直伝

統間でも、薬剤感受性には違いがあった。農場 1 由

播経路が食物連鎖を通じた薬剤耐性サルモネラの伝

来の S. Typhimurium PFGE タイプ T1.1 は、ファー播に重要であることを示唆している。

ジタイプ（PT）193 として同定された。PT は一般的にヒトの病気に関連しているが、このサルモネラの PT は、牛、家禽、豚および犬からも分離されて結論

い る。S. Typhimurium の DT104 型 と 同 様 に、

テトラサイクリンの治療目的での使用は、サルモ

PT193 分離株は一般に 3 つ以上の抗生物質に対するネラに新たな薬剤耐性を引き起こす重要な指標では耐性を示すが、報告されている耐性型は様々である。 なかった。この結果は驚くべきことではない、なぜ
農 場 1 か ら 我 々 が 分 離 し た S. Typhimurium PT

なら、コマーシャル鶏の業界で取り入れているオー

DT193 株の大部分（68.0％）は汎感受性であったが、ルインオールアウトの生産方法は、病原体の感染サ

32％は以下の抗生物質に耐性を示した。ストレプト

イクルを断ち切るよう設計されており、群間におけ

マイシン単独、ストレプトマイシン、スルファジメ

る病原体の伝播が防止されている限り、薬剤耐性株

64（2），2018

19（35）の発育は最小限に抑えられるはずである。しかし、要な役割を果たすことが示唆された。もし、抗生物

薬剤耐性のリザーバーは、農場環境中に留まってい質の使用が薬剤耐性サルモネラの鶏肉への出現およる。治療を行った農場における薬剤耐性人獣共通細び拡散に関与するならば、問題は家禽生産のブロイ菌の今後の出現を防ぐために、床敷きの管理およびラーレベルではなく、種鶏レベルにあるのかもしれ

害虫駆除を伴うさらなる措置が必要となるかもしれない。薬剤耐性サルモネラの伝播を阻止する 1 つのない。さらに、ストレプトマイシンが家禽生産用に

方法は、種鶏レベルでの淘汰またはワクチン接種等はほとんど使用されず、これらの農場で使用されてを適用することである。農場 1 では、最近ブロイいなかったことを考慮すると、家禽サルモネラにおラー種鶏レベルでのサルモネラワクチン接種プログ

けるストレプトマイシン耐性率は、驚くほど高かっ

ラムを会社規模で開始した。この緩和的戦略が、特た。これは、ストレプトマイシン耐性遺伝子や他のに農場 1 において、ブロイラー養鶏場から分離され耐性遺伝子、あるいは競合的に有利な遺伝子（バクたサルモネラの薬剤耐性や家禽の価格を大きく変え

テリオシン、シデロボア等）が関与している、またたかどうかは興味深い。

は、それらの遺伝子がサルモネラのストレプトマイ
シン耐性を維持している染色体に組み込まれており、（参考文献は割愛いたしました）

抗生物質の非存在下においても耐性が生じるためであろう。一方で、ゲンタマイシンは鶏の腹膜炎に対する予防として卵内ワクチン接種で一般的に使用さ所感れているため、サルモネラの本抗生物質に対する耐当論文では、薬剤耐性サルモネラの疫学調査を通性レベルをある程度説明することができるかもしれ

して、サルモネラ汚染に対して重要な制御ポイントない。このことに加え、ストレプトマイシンまたはを特定することを目的としていました。サルモネラ

ゲンタマイシンに関連する薬剤耐性遺伝子の物理的の薬剤耐性型は多様であり、様々な薬剤耐性遺伝子なつながりが、ストレプトマイシンを使用していなが関与していることから、単純に使用した抗生物質

いにも関わらず、サルモネラが耐性を持続できる理に対して耐性が生じるというわけではない点が興味

由なのかもしれない。ゲンタマイシンは両方の養鶏深く、また、薬剤耐性サルモネラの制御は容易では会社で使用されていたため、サルモネラのゲンタマないと感じました。調査結果から米国で多く同定さイシン耐性がどの程度持続するかは定かではない。

れた耐性株は、ストレプトマイシン、スルファジメ

当研究において、養鶏場で使用された他の抗生物質

トキシンおよびテトラサイクリンに対するものでしであるバシトラシンおよびバージニアマイシンは、た。特に、S. Typhymurium は日本でも主なサルモ

家禽の C. perfringens 感染を制御するために使用さネラ食中毒の原因菌であるため、日本における耐性れている。これらの抗生物質はサルモネラまたは他菌の疫学調査や感染予防、抗生物質の適正使用等がのグラム陰性の腸内細菌には影響を与えないが、鶏重要だと考えられます。また、当論文で重要な制御のグラム陽性の腸内細菌叢に影響を及ぼす。バシト

ポイントとして挙げられたのは、垂直伝播経路でしラシンおよびバージニアマイシンに応答し、変化した。入雛時の雛に存在していた薬剤耐性株のみが加た鶏の腸内細菌叢が、どのようにサルモネラの有病

工時の屠体でも検出されたという点では、種鶏レベ

率、増殖または薬剤耐性パターンに影響するかは今ルでのワクチン接種等によるサルモネラ汚染防止をのところ不明である。

徹底する必要があるのではないかと考えられます。

環境からの水平伝播よりも、種鶏群からの垂直伝（副研究員）

播が薬剤耐性サルモネラによる屠体汚染において重学会発表演題（2017 年 4 月～ 2018 年 3 月）
● The 8th Asian Pig Veterinar y Society Congress会期：2017 年 5 月 12 日〜 5 月 15 日

開 催 地：中国、武漢
発表演題：Cross – protection ef ficacy of APM777 vaccine in pigs challenged with Actinobacillus

日生研たより

20（36）

pleuropneumoniae○ Oshima Atsushi1、Kamada Takashi1、To Ho1、Teshima Kaho1、Tsutsumi Nobuyuki1（1Nippon Institute for Biological Science）●第 160 回日本獣医学会学術集会
会期：2017 年 9 月 13 日〜 9 月 15 日

開 催 地：鹿児島大学 郡元キャンパス
発表演題：日本国内における豚サーコウイルス 2 型（PCV2）の分子疫学的解析および豚サーコウイ
ルス 3 型（PCV3）の検索○林志佳 1、佐藤哲朗 1、大島義之 1、古谷嘉章 1、長尾亜貴 1、小祿和希 1、堤信幸 1（1 日生研）●日本畜産衛生学会第 87 回大会
会

期：2017 年 12 月 15 日

開 催 地：Meiji Seika ファルマ（株）本社講堂
発表演題：豚胸膜肺炎ワクチン免疫血清への LPS ELISA の応用○手島香保 1、To Ho1、堤信幸 1、鎌田崇 1、小玉敏明 1、近藤朋美 1、眞柄麗 1、岩崎紗枝 1、
渋谷一元 1（1 日生研）●第 5 回獣医病理学専門家協会学術集会スライドフォーラム
会期：2018 年 3 月 29 日〜 3 月 30 日

開 催 地：いわて県民情報交流センター アイーナ
発表演題：ブタの肝臓○小野浩輝（日生研）

編 集 後 記
日増しに暖かになりましたが、皆様におかれましてはいかがお過ごしでしょうか。平成 29 年度の編集委員で行ってまいりました編集作業は、今号をもって終了させていただきます。関係者の皆様には不慣れな点から行き届かない部分が多々ありましたことをこの場をお借りして深くお詫び申し上げます。また、多大なるご協力を賜り、心より厚く御礼申し上げます。さて平成 30 年度より、小野浩輝（委員長）、安田早織、近内将記が編集を担当いたします。
読者の皆様におかれましては、季節柄どうかご自愛ください。今後とも、引き続き日生研たよりをご愛読賜りますよう、宜しくお願い申し上げます。

日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（年 4 回発行）

（通巻 607 号） 平成 30 年 3 月 25 日印刷
発行所〒 198–0024

生命の「共生・調和」を理念とし、生命体の豊かな明日と、研究の永続性を願う

東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL：0428（33）1520（経営企画部） FAX：0428（31）6166
URL：http://nibs.lin.gr.jp/

気持ちを快いリズムに整え、視覚化したものです。カラーは生命の源、水を表す「青」としています。

編集室

表紙題字は故中村稕治博士による揮毫で

印刷所

す。

平成 30 年 4 月 1 日発行（第 64 巻第 2 号）

一般財団法人日本生物科学研究所

発行人

土屋耕太郎

委

員／近内将記（委員長）、手島香保、小野浩輝

事務／経営企画部

株式会社 精案社（無断転載を禁ず）