東南アジアの畜産
衛生管理の現状、課題、展望• アジアの新興・再興動物感染症
• なに？
• なぜ？
• どうする？
乾 健二郎
FAO Lab Consultant
National Center for Veterinary Diagnosis, Vietnam

アジアの新動物感染症：21世紀の20年間
ホスト

発⽣

病名

ワクチン

⼈への感染

導⼊経路

Yes

Yes

中国

Yes

Yes

中国中国

東南アジア

⽇本

⾼病原性⿃インフルエンザ H５N x

1996

2004

2004

⿃インフルエンザ H７N ９

2013

⿃インフルエンザ H９N ２

1994

2002

Yes

Yes

中国？

⾼病原性PRRS

2006

2007

Yes

No

中国

豚インフルエンザ p H１N１

2009

2009

Yes

Yes

⼈から

アフリカ豚熱

2018

2019

No

No

ヨーロッパ

⽜

ランピースキン病

2019

2020

Yes

No

⻄・南アジア⾺アフリカ⾺疫

2020

Yes

No

アフリカ？

Yes

No

南アジア

⿃豚⽺、⼭⽺

PPR

2007

2009

アフリカ豚コレラ：一般情報• ウイルス：アスファウイルス科アスフィウイルス属• 宿主：豚、イノシシ• 伝搬様式• 豚同士の直接・間接の接触• 空気感染無し、近距離の飛沫感染有り• ベクター：ヒメダニ属の軟ダニ• 致死率（Genotype2 in Asia：急性型)• ９０％以上• 治療法は無い• ワクチンは無い（もうすぐ入手可能になるかも）• 人には感染しない• ウイルスは環境中で比較的長く生きるアフリカ豚コレラ：発生状況

農⽔省（https://www.maff.go.jp/j/syouan/douei/asf.html）

現状（2023年6月）

アフリカ豚コレラ発生現場（2019年２月）

アフリカ豚コレラ：早期確定診断のためにステップ

アクション

かかる時間（hr）
Min

Max

1

⽣産者が豚の異常に気づく

1

72

2

⽣産者が豚の異常を報告する

148

3

獣医が来る

124

4

獣医が臨床診断する

1

3

5

獣医が診断のためのサンプルを送る

1

24

7

ラボがサンプルを受け取る

8

ラボがサンプルを検査する

2

24

9

ラボが検査結果を報告する

118196

感染実験での臨床経過
Incubation period• 潜伏期間（３−１２日）• 無症状• ウイルス血症なし• ウイルス排泄なし

42.0• 発症前期（２−４日）• 発熱（４０度以上）• 食欲不振• 元気消失

40.0

41.5
41.0
40.5

39.5
39.0
38.5

• 発症後期（２−４日）
38.0• ずっと横臥して反応薄い• 皮膚のうっ血、紅斑（10−20％程度）• 斃死

Latestage

Early
stage

DPI0

Viremia

Neg

Oral fluid

Neg

0

1

23456789101112131213

ASF virus in Blood and Oral fluid (Ct value)
1234567Neg

Neg

26Neg

Neg

Neg

89101123181616163026252525Incubation period (DPI 3)
39.7C
Viremia: negative
Oral fluid: negative
NormalEarly stage (DPI 6)
40.7C
Viremia: Ct=26
Oral fluid: negative
Stop eating
Less active

Early stage (DPI 7)
41.2C
Viremia: 27
Oral fluid: 30

Late stage (DPI 9)
41.4C
Viremia: Ct=18
Oral fluid: Ct=26

Late stage 2 (DPI 12)
41.4C
Viremia: Ct=16
Oral fluid: Ct=25

Later dead (DPI 13)
40.3C
Viremia: Ct=16
Oral fluid: Ct=25

Clinical signs at early/late stage of the disease
Observation in more than 20 ASF casesEarly stage

Late stage

Fever

100%100%

Stop eating

100%100%

Clinical signs

Information kindly sharedby Prof. Bui Thi To Nga,
Vietnam National
Agriculture University(can move)(can not move)

Vomiting

60% (in sows)

Bleeding from nose & anal

40%

Skin hemorrhage+/-

40% (ear, abdomen, jaw)
16

なぜ？アジアに特徴的な問題？
• 技術的問題• （家畜衛生当局や大規模農場の技術は確実に改善されている中で）• 中規模以下の農場の知識と意識（衛生管理、Biosecurity）• 臨床獣医の知識・技術• ワクチンのアップデートシステムが無い• 技術的ではない問題• 動物数の急速な増加• 人間、動物、物の世界的な移動が増加• 感染症の発生を隠す、報告しない• 小農家が多い• ルールを守るという道徳意識が薄い人が結構いる？
• 中国＝エピセンター

ベトナムの養豚（by農場サイズ）

Commercial Large• 小農家が多い（170万戸）• 豚の50％は小農家と小農場で生産されている• アフリカ豚熱は主に小農家、小農場で発生している• 残りの50％は中、大農場で生産されているCommercial small

Small holder

Pig production in Viet Nam, Jan 2021 (DLP, MARD)ASF発生のあった小農家に聞きました• 前にも豚が全頭死んだことがあった（2ー3回）• Biosecurityが大切なのは知っているし、やっている。週1回は掃除してる• ウイルスどこから来たか見当つかない。周りもみんなやられているから、その誰かか？
• 養豚は生計の２０−７０％を占める• ほとぼり冷めたら、また養豚始める
友人の友人の小農家に聞きました。
• 豚が病気あるいは死んだらどうする？
• トレーダーを呼ぶ• 健康豚の３０％の値段で買ってくれるTraders are ready to buy sick/dead pigs
SNS postings

ASFウイルスの動き（仮説）Commercial small

トレーダー

Small holder

レストランなど

Local Market

ASF Market Monitoring
Preliminary results during Nov2021-Mar2022• 5 large markets, 7 small markets, 5 city markets were monitoredmonthly• Meat was purchased from 8 vendors at large market (>20vendors); 4 vendors at small and city markets• Meat juice was tested for ASF virus by real-time PCR

Large market(>20 vendors)

Small market

City market

ASF Market Monitoring
Collection and Processing of Meat Samples: Simple and Easy

Make a hole with tooth-pick

Squeeze meat juice out

1. Go to local market
2. Buy 100g of meat (10KVND = 0.5USD)

3. Put meat in zip-lock bag
4. Keep at 4C overnight

5. Collect meat juice
6. Test by real-time PCR forvirus(Test by ELISA forantibody)% ASF viral DNA positive in meat juice

ASF Market Monitoring Nov2021-Mar2022• ASF virus was detected in high ratio atlarge local markets

ASF virus detection at Markets
6050• Proposal: ASF market monitoring inSouth East, South, East Asian countries i40Large30

SmallCity

20
100
Nov-21

Dec-21

Jan-22

Feb-22Mar-22Meat Juice Club• Meat juice is used for various studies• Sharing of meat juice samples

25

Pig flow from producers to markets• Pigs of small/medium farms go to local markets• Meat at the market are the representative of pigs in the area
• Majority of ASF outbreaks are at small/medium farms• Pigs of non-reported ASF cases will go to local markets

Local Market

Pig production in Viet Nam, Jan 2021 (DLP, MARD)

City MarketSlaughterhouse with vet inspection

まとめ• 21世紀最初の20年間、アジアでは多くの動物感染症が出現し、⼈命を含む⼤きな被害をもたらした。
• アジアの畜産はワクチンに⼤きく依存している。
• 技術的な問題に関しては、多くの改善があった。
• 技術的でない問題に関しては、改善できるか不明。
• なので今後20年間も多くの動物感染症の出現が予想される。
• コロナ対応に学び、早期診断、グローバルな情報共有、ワクチンマッチングなど動物感染症領域でも応⽤が望まれる• ワクチン、診断、サーベイランス、衛⽣管理、などに新たなツールやノウハウの開発が待たれる。

For more details, please contact• ken.inui@gmail.com

National Center for Veterinary Diagnosis, Hanoi, Vietnam

Dr.カイン• 獣医• NCVDのスタッフ• 実家が小農家• 牛２頭、豚４頭、鶏20羽• 2019年 ASF発生• 2021年 LSD発生• 私の先生（小農家について）• 豚舎の掃除消毒を体験したCheck pH!!!

Meat exudate (juice) is the best sample

for testing ASF virus from the meat (muscle)• Keep 50g of meat in plasticbag. Leave it for 4 hrs at 4C.
You will get at least 100ulof meat juice.

AnimalID• ASF virus is detected moreconcentrated in meat juice(50-100 times) than theoriginal raw meat
homogenate

E1
E2
M2
A3
D1

Ct value for ASF virus
Muscle
Meat
Juice
19.2
20.2
22.9
24.3
21.3

Whole blood

Raw

Cooked

24.0
25.1
28.4
28.5
26.3

28.0
32.5

Spleen
16.4
18.9
19.3
18.8
17.7

Dead1-2 days
before death

15.1
16.7
16.4
15.7
16.4

• Meat juice is easy to obtainand easy to process for lab
testing• Meat juice is the choice ofsamples for testing ASFV inmuscles (meat) when highsensitivity is required such
as ASFV monitoring atmarkets

Meat juice

Raw meat

Cooked (boiled)

100ul of juice wasobtained from 50g ofmeat after 4hr at 4C

10% homogenate wasprepared

Boiled for 10 min, and
10% homogenate waspreparedNumber of samples in each range of CT value collected during series of experimental infectionOrgans
from animal killed on Day1 after
onset of fever

Clinical samples: Whole blood (O) and Oral fluid (X)Viral load invarioustissues andsamples atvarious stageof diseaseCt value

19-20

OOO

Plenty ofvirus inmuscles evenat Day 1 after
onset ofdisease

21-22

OOO

No fever-2-1

Days after onset of fever
Early stage
Day0

Day1Mid stage
Day2

Day3

15-16
OOOO
O

23-24

O

25-26

OO

OO

O
OO

O

33-34
35-36

O

OOOOOOO OOOOOO
OO
O
OO

XXXX

X

XXXXXX

XXX
X

O

X

X

O

X

X

X

X

XXX37-38
OOO OOO
Negative OOO OO XXXXX XXXX
OXXOO

X

X
X

Ct value

Lymph
Lymph
Node Tonsil Muscle Spleen
NodeTonsil Muscle(inguinal)(inguinal)

OO

OX

OO

Spleen

OO

OO

O

OOOO
OOO

OOOO

OO

OOOOOO

O

27-28
29-30

Dead

Day4 till
death
OOOO

17-18

31-32

Late stage

Organsfrom dead animal

OOO

O

O
OO

15-16
O

17-18

OOOO
OO

19-20

O

21-22

OO

23-24

OOO

25-26

OOOOO

27-28

O

29-30

O

31-32
33-34

X

35-36

XX

37-38

X

Negativeアフリカ豚コレラウイルスの感染源・経路どれが一番危ない・起こりやすいの？
• 目的：発生農家での感染源に関する疫学調査で感じる疑問に答える• 感染源••••

感染豚、発症豚
汚染した餌
汚染した人、物汚染した環境

Source and route of virus introduction/transmission
SourceInfected animals

Contaminated feed
Contaminated fomites
Contaminated environment

Route

Infected animals

Infection efficiency
Highcontact

1

air

2

needle3Lowswill feedingpellet food4

equipmentboots, clothes
contact

5

after disinfection

6

Timing of viurs transmission
SourceExpExpTimingIncubation period

Infection efficiency
High7Low

実験1：感染豚から同居豚への接触感染

同居同居• 目的： 感染豚から同居豚への接触感染の有無を調べる

感染同居同居同居• 方法： 豚4頭を同居させ、1頭にウイルスを筋注投与(106 HAD50)した。感染豚から同居豚のウイルス感染の有無とスピードを調べた• 結果• 接種豚は投与4日後に発症、7日後に斃死した• 同居豚は投与11〜12日後に発症、強い臨床症状、高いViremiaを示し、投与16日後に屠殺された• 考察• 感染豚から同居豚への接触感染は効率的に起こった• 感染豚の発症から同居豚の発症までの期間は7〜8日間だった。
接触感染の潜伏期間は5〜6日間と推察される• 発症豚の発見が遅れれば同居豚への感染は避けられない

発症

同居発症

発症

発症発症

実験2：感染豚舎における空気・長靴を介しての感染• 目的： 発症豚から空気を介して同じ豚舎内の他豚への感染の有無• 方法：• 豚舎の中央あたりにセンティネル豚1頭を配置する• 同じ豚舎内で2ヶ月間にわたりASFの感染実験を行う• 結果• センティネル豚は発症しなかった• 考察• 開放豚舎内での空気や長靴などによる感染は起こりにくい実験3：注射針を介しての感染• 目的： 発症豚から注射針を介しての感染の有無を調べる• 方法：• PBS3mlを注射器にとる。
• 発症豚(Viremia Ct 22)に1mlを筋注する• 他2頭の豚に同じ注射器を使ってPBSを1mlずつ筋注した

発症PBSを注射• 結果• 他2頭の豚は筋注4日後に発症した• 考察• 注射針を介しての感染は非常に効率的に起こった同じ針を使って注射• 同群の豚に同じ針を使って抗生物質などを注射するのは一般的である。発症豚に気づかずにこれを行うと一気に感染が拡がる
発症発症

実験4：汚染餌を介しての感染• 目的： 汚染餌を介しての感染の有無を調べる• 方法：• 餌に発症豚の血1ml(Ct22)を混ぜる• 2種類の汚染餌：ドライとウェット• 汚染餌を豚に投与する（ドライ、ウェットとも4頭づつ）• 結果• 汚染ウェット餌を投与された4頭の豚は投与5日後に同時発症した• 汚染ドライ餌を投与された4頭の豚は投与6日後に同時発症した• 考察• 汚染餌を介しての感染は効率的に起こった• 同時に多くの豚が発症するケースは汚染餌か汚染針か• 文献的にはウェットとドライでID50が大きく違うので今回も差がでるかと思ったが1日差だけ• ベトナムでの商業的残飯餌はウェットである

餌にウイルスを混ぜる

汚染餌を投与

発症

発症

5⽇後

6⽇後

実験5-1：発症・斃死豚により汚染した環境を介しての感染• 目的： 発症豚が斃死して汚染したペンからの感染の有無• 方法：• 発症斃死した豚のいたペンを洗浄せずに新しい豚を導入する• 2週間観察する• 結果• 導入豚は7日後に発症した• 考察• 自然に重度汚染した環境からの感染が起こった

実験5-2：人工的に汚染した環境を介しての感染• 目的： 量が既知のウイルスで人工的に汚染したペンからの感染• 方法：• 発症豚の血をPBSで希釈してCt25の汚染水を作る• 汚染水をペンの床と壁に塗る x4ペン
• 半日乾燥させてから豚を導入する (1頭/ペン)• 2週間観察する• 結果• 全4頭の豚が発症しなかった• 考察• 実験5-1では自然に重度汚染した環境からの感染が起こった• 今回はウイルスの排泄量などから想定した中程度の汚染環境を作ったが、感染は起こらなかった• Fomites（汚染した器具や長靴）が持ち込む程度のウイルス量では感染は成立しにくいのではないか• 注意はすべきであるが、、、

実験6：汚染した環境を消毒・洗浄・消毒して豚を導入• 目的： 消毒・洗浄・消毒の効果の検討• 方法：• 発症・斃死豚がいたペンを使用する（x2）• 消石灰（1kg/m2）を汚染された床にまく• 水をかける（1日2回）x3日 pHの確認• 3日後床・壁を洗浄する。1日乾燥させる• 消石灰（1kg/m2）を床にまく• 水をかける（1日2回）x10日 pHの確認• 消石灰をざっと水で流す。半日乾燥させる• 新しい豚を導入する

01234

• 結果
• 導入豚は感染しなかった• 考察• 糞など有機物の存在下でも有効• 全部で15日間で豚の再導入可能なまでの環境を整備できた• 一度感染の起こった豚舎への豚のリストッキングの方法

実験7：潜伏期間中の同居感染はあるか？
• 目的： 潜伏期間中の同居接触感染の有無を調べる

感染• 方法： 豚2頭を同居させ（4群）、1頭にウイルスを経口投与(106HAD50)した。感染豚が発熱すると同時に同居豚を移動し、感染の有無を調べた• 結果• 感染豚は投与5日後に発症• 同居豚は移動後21日間、臨床症状、Viremiaともに無かった• 考察• 潜伏期間中の感染は起こりにくい• 発生の際、Detect & Removeにより被害を最小限に食い止める方法が一般的に行われている。
• この結果を見る限りDetect & Removeも有りかと思われる• どれだけ早期にDetectできるかが問題ではあるが、、、同居

潜伏期間

発症

同居

感染無し

x4

実験8：感染から回復した豚に再度ウイルスを投与したら• 目的： 実験4で感染させた豚8頭のうち1頭が回復したので再感染の有無を調べるため、ウイルスを再投与した

感染6• 方法： 実験4と同じウイルスを同じ量（10 HAD50)、同じ経路（経口、餌に混ぜる）で投与した。
• 結果• 接種後28日間、発熱等、臨床症状は認められなかった。
• Viremia 陽性• Day:4, 7, 10, 14, 21, 28; Ct: n, 35, 32, 36, n, n)• ウイルス排泄(Oral fluid)陽性• Day:4, 7, 10, 14, 21, 28; Ct: n, n, 35, n, n, n)• 考察• 臨床症状は認められなかったが、再感染は有り• 症状無しでウイルス排泄有りの豚が存在しうる＝新たな感染源となるか？
• 実はこの後、もう1度筋注で再投与した。症状・Viremiaとも陰性でした。

発症

回復
再感染

症状無し
Viremia有り

まとめ
Source and route of virus introduction/transmission
SourceInfected animals

Contaminated feed
Contaminated fomites
Contaminated environment

Route
1air

2needle3

swill feedingpellet food

Infected animals

Infection efficiency
Highcontact

Low

X
X
X
X

4X

equipmentXboots, clothesX

contact

5

after disinfection

6

Timing of viurs transmission
SourceExpExpTimingIncubation period

X

X
Infection efficiency
High7X

LowX