使用方法
MicroSnap―Coliform and E. coli
部品番号
• MicroSnap 培養キット 環境表面、液体、食品サンプル用 (部品番号：MS1-CEC)• MicroSnap 培養液 液体試料フィルタろ過用 (部品番号：MS1-CEC-BROTH-2ML)• MicroSnap 大腸菌群(Coliform)培養キット (部品番号：MS2-COLIFORM)• MicroSnap 大腸菌(E. coli)検出キット (部品番号：MS2-ECOLI)

説明／用途：○ ペプトン加生理食塩水(MRD)

MicroSnap は特定の微生物を検出および計測するた○ バターフィールドのリン酸緩衝希釈

めの迅速生物発光法を用いた検査方法です。

水

MS2-COLIFORM および MS2-ECOLI での検査は８時○ ユーザー選定のバリデートされた他間以内に大腸菌群と大腸菌を特異的に検出するよう構成されています。の希釈液


検査は特異的増殖培地を含む培養キットと、小型のポ0.45μｍ無菌フィルタと濾過装置(大量の液体サンプルの場合のみ)

ータブルルミノメータで計測する為の生体発光基質



37℃±1℃の培養器を含む検出キットから構成されます。Step 1 (培養キルミノメータ：EnSURE またはット) では細菌数を増加させるために試料を培養液

SystemSURE Plusで培養します。細菌数が増加するとともに、生物発光反応に必要な診断酵素 (beta-galactosidase および測定手順：beta-glucuronidase) がより多く作り出されます。必

使用方法の動画：www.youtube.com/HygienaTV要とされる感受性のレベルによって試料の培養時間Step１：培養が決定されます。培養後、少量の試料を検出キットに培養手順を以下に示します。Step１の図も参照してく移します。Step 2 では、検出キットをアクティベートださい。

して 10 分間反応させます。この時間内において、光環境表面と製品試料：を作り出す診断酵素と特異的基質とが反応します。発1) 試料を採取し MicroSnap 培養キット（Part# :光はルミノメータを用いて秒単位で測定します。光のMS1-CEC）に入れます。

強さは初菌数に直接比例します。

試料は次のいずれかの方法で採取します。

MicroSnap は環境表面や製品試料、水、その他、ろ過

1.1 表面拭き取り - 表面を 10x10cm 拭き取るすることができる液体に用いることができます。

か、あるいは表面が平坦でない等それが困難

MicroSnap は肉、日配、野菜、飲料水や清涼飲料のよな場合はできる限り多くふき取れるようにうな主要食料品群を含む幅広い食品についてバリデします。

ートされています。

1.2 液体 - 1ｍL の飲料または水のサンプルをMicroSnap 培養キットに直接加えます。

必要器材(同梱されていません)：
1

1.3 製品 - 1ｍL の 10% w/v 食品ホモジネート

試料希釈液(例)を培養キットに直接加えます。食品ホモジネ○ 緩衝ペプトン水ートは工業的に推奨された希釈液を使い、微INS0118 SEP 2014Rev. H

使用方法

MicroSnap―Coliform and E. coli
生物学的に標準的な方法によるものとしまします。

す (例として AOAC のバリデーション試験で用いられる 450ml の希釈液に 50g の試料Step2：検出：を添加します)。他の試料数についてはユー検出の手順を以下に示します。Step2 の図も参照してザー毎にバリデートを行ってください。

ください。

2) スワブをスワブチューブに戻し、再度装着します。 1) MicroSnap 大腸菌群(Coliform)検出キット、あるキットの状態は最初に包装から取り出した時といは大腸菌(E. coli)検出キットを、室温 (22 –同じような外観にしてください。

26 °C で 10 分間) になじませます。検出キット

3) バルブを前後に折り曲げてキットをアクティベートします。

で手のひらを 5 回たたくか、一度強く下向きに振ってください。これはチューブ内部に拡散してい4) バルブとスワブチューブを互いに数 cm 離して内る抽出溶剤をチューブの底に集めるためです。抽部の圧を下げ、バルブを絞って液体培地を全てス

出溶剤はチューブ内の液体と培養済試料がチュワブチューブの底に放出します。液体培地の大部ーブ内でよく混和するために必要です。

分を完全にスワブチューブの底に落とします。バルブをスワブチューブに戻し、キットを確実に閉じます。
5) 試料と培養液が混ざるようにチューブをやさしく振ります。

2) 培養済試料を検出キットに移します。
2.1 培養キットから無菌操作で試料の一定分量（0.1mL または３滴が適量です）を取り出し検出キットに移します。培養キットをスポイトとして用いることもできます。バルブに吸い上

6) 37℃±0.5℃で培養します。定量判定には 6 時間

げ吐き出しを繰返し液を混合し、後にバルブ内培養します。陰陽性判定には８時間培養します。に吸い上げます。スワブをチューブから抜き、慎重に３滴（0.1mL）を検出キットの底部の大容量のフィルタろ過可能な液体試料：

Fill line まで入れます。培養済試料の残りは追1) 100mL までの液体試料を採取し、フィルタ直径加テスト用に培養キットに戻します。

25mm または 47mm の孔径 0.45um のメンブレンフィルタでろ過します。
2) 試料をろ過したフィルタを無菌操作で取り外し、47ｍｍ滅菌済ペトリ皿に入れます。
3) Enrichment Broth（MS1-CEC-BROTH-2ML）の容器から培養液を無菌的にペトリ皿に加えます。
4) ペトリ皿を 37°±0.5℃で培養します。定量判定には 6 時間培養します。陰陽性判定には８時間培養

22.2 フィルタろ過した試料の場合はペトリ皿から培養済み培養液 0.1ｍL を無菌的にピペットで吸い上げ検出キットに加えます。
3) バルブを折り曲げてスナップバルブを壊し、検出キットをアクティベートします。試薬を放出するためにバルブを３回絞ります。
4) 混合するため軽く 2 回振ります。
5) 検出キットを 10 分間（±0.2 分）、37°±0.5℃で反応させます。

INS0118 SEP 2014 Rev .H

使用方法

MicroSnap―Coliform and E. coli6) 10 分間反応させた後、キットを丸ごとルミノメ

定量的/計数的測定：ータに入れ、蓋を閉めます。測定器を垂直に保持

培養時間：6 時間したまま“OK”ボタンを押して測定を開始します。

測定結果の RLU 値は接種時に比例します。表１を用

15 秒のカウントダウンののちに結果が表示されいて、使用したルミノメータにおける RLU 測定値とます。

比較してください。このデータは AOAC Validation7) 測定結果は RLU（相対発光量）で表示されます。
お使いの機器に RLU 値に基づいた検査の合否判

study 2013 によるものです。従来法と MicroSnap による検査は 92%以上一致します。

定しきい値を設定してご使用ください。CFU レベ
ルとの相関関係“結果の解釈”のセクションを参照

表 1: 大腸菌・大腸菌群の CFU 値と MicroSnap RLUしてください。

値の関係
RLU 相当値

追加/確認検査：

CFU 推定値
SystemSURE Plus

EnSURE

MicroSnap 大腸菌群 (Coliform) 検査で陽性の結果<10<2<2が出た試料は、更に大腸菌 (E. coli) の陰陽性判定の<20<3<4ために前述の MS2-ECOLI 検出キットを使用して<50<6<7“Step 2: 検出”の手順を繰り返します。MicroSnap 大<100<8< 12<200< 12< 20<500< 25< 35<1000< 50< 60<5000< 85< 180<10,000< 150< 300

腸菌 (E. coli) 検出キットを用いた大腸菌 (E. coli)の検査だけを行った場合には、その後にさらなる確認検査を実施する必要があります。

結果の解釈：
結果は相対発光量 (RLU) として表示されます。表 1定性/陰陽性判定測定：に RLU 値に相当する colony forming unit (CFU) 値

培養時間：8 時間を示します。これにより本来の試料中に何 CFU の大定性的測定（陰陽性判定）は通常 10 CFU /g 以下の腸菌群または大腸菌が存在するかを知ることができ食物、または 1 CFU /100mL 以下の水のような低います。

汚染レベルの検出・判定に使われます。試料調製後、この検査用に認められている Hygiena 社製の 2 機種培養ステップへの接種試料が菌を全く含まないか、1のルミノメータはそれぞれ異なる動作特性と感度をCFU 以上の菌を含むかを判定します。

持っており、そのため RLU 値のスケールは機種ごと37℃で 8 時間培養した場合、1 CFU の種菌は検知すに異なります (表 1 を参照してください)。System

るに十分な酵素反応を起こします。陰陽性判定の判定

SURE Plus と EnSURE は 4 桁の RLU 値まで表示で値は、AOAC Validation study において 405 Coliform

き、10,000 以上の値は範囲外となります。と 315 E.coli を接種した食品試料を用いて算出しま

3

INS0118 SEP 2014 Rev .H

使用方法

MicroSnap―Coliform and E. coli
した。RLU 値による陰陽性判定の判定しきい値は以下の表 2 を参照ください。

表 4: バリデートされた食品
大腸菌群(Coliform)

大腸菌(E.coli)
6 時間培養6 時間培養

表 2: 定性的測定のためのしきい値

大腸菌群

大腸菌

(Coliform)(E.coli)

8 時間培養8 時間培養

牛ひき肉

牛ひき肉

牛ひき肉

牛ひき肉

BLT

BLT

サンドイッチサンドイッチ

生タラ

生タラ

生タラ

生タラ

調理済み鶏肉

調理済み鶏肉

調理済み鶏肉

調理済み鶏肉

レタス

レタス

－－牛乳

牛乳

牛乳

牛乳

ほとんどの大腸菌群および大腸菌は低い種菌量や汚

生鶏肉

生鶏肉生鶏肉

生鶏肉

染レベルであっても 8 時間培養で十分な酵素活性を産

RTE ハムRTE ハム

－－生エビ

生エビ

生エビ

生エビ

ミネラル

ミネラル

ミネラル

ウォーター

ウォーター

ウォーター

判定結果

SystemSURE Plus

EnSURE

陰性00

疑陽性

11陽性

≧2

≧2

生でき、検出が可能です。8 時間以上の培養は検出限界あるいは検出感度には特に影響しません。

－BLT
サンドイッチ－

結果が小さい RLU 値を示した場合 (例えば３あるいは 4) は汚染のレベルが低いことを示します。RLU 値

包括性/排他性：は 37℃での検出キット（Step2）の反応時間が 10 分

包括性および排他性試験のデータは検査の性能が微以上に延長すると徐々に増加します。反対に、汚染の生物検出性を基礎としたものであることを証明してない試料では RLU 値は増加しません (表 3 を参照しいます。包括性とは大腸菌群および大腸菌に属する細てください)。これは結果の解釈により大きな保証を菌を検出する能力を表します。排他性とは、大腸菌群与えます。

や大腸菌ではない他の細菌について、それらが高レベルの汚染であっても排除して検出しない能力を表し

表 3：反応時間の延長ます。MicroSnap は要求された標的レベルである

1 回目結果

2 回目結果（10 分培養後）（延長培養後）EnSURE

4RLU

4RLU

陰性

EnSURE

4RLU

10RLU

陽性

ルミノメータ

判定結果ます。包括性および排他性両者の微生物の全リストにAOAC 認証：
表 4 に示される食品に対する MicroSnap を用いた検査方法がバリデートされ、AOAC により認証されています。

41000 CFU/mL についてすべての細菌を正確に測定しついては Hygiena 社から入手することができます。
また MicroSnap は 10-100 CFU/mL という低レベルについても非常に高い検出確率を示します。(以下の表 5 を参照してください。) 感度 (<95%) は最少接種レベルを反映した値であり、検出対象細菌の検出不能性を示すものではありません。

INS0118 SEP 2014 Rev .H

使用方法

MicroSnap―Coliform and E. coli
表 5: 低レベル汚染の検出確率(10－100CFU / mL)
大腸菌群(Coliform)

大腸菌(E.coli)

8 時間培養8 時間培養(%)(%)

SystemSURE
Plus A

EnSURE B

SystemSURE
Plus Aことを防ぐため、上昇したバックグランドレベルに応
EnSURE B

949688100

特異性

100

100100100

100

100

100

100

92

10092

100

96

100

95

100

陽性的中率

陰性的中率
(NPV)
精度

じて、表 1 や 2 に示される最小限の検出しきい値を調整してください。しかし、これはあくまで注意喚起であり、ほとんどの食品においてこのような問題が無いこともご理解ください。
希釈されていない牛乳のような濃く不透明な試料は濁りにより検出結果に影響を与えることがあります。

A- AOAC validation study における SystemSURE Plus の取得デー
タに基づく(n = 30 Coliform( E. coli を除く), n = 30 E. coli)
B-検出を行ってバックグラウンドレベルをまず確認しておくことをお勧めします。偽陽性を検出してしまう

感度(PPV)

ついては、Step2 での反応時間の前後で Step2 によるCampden Food Laboratories での独自研究で得られた EnSUREの包括性データに基づく(n=45 Coliforms)

そのため、さらに試料の調製や検査のバリデーションが必要になることもあります。
Shigella sonnei 株の一部は時として偽陽性反応を示すことがあり、これは発色基質を含む培地においても同様で、診断原理上の限界でもあります。同様に管理：

Hafnia alvei 株も検出することができません。

GLP に準拠した陰性対照、陽性対照での管理を行うことを推奨します。Hygiena 社は次の対照品を提供して安全と注意：います。

MicroSnap 試薬の構成部品は正しく使用すれば健康

Calibration Control Kitに対するリスクとはなりません。陽性が確認された使(パーツ番号 PCD4000)

用済み試薬はバイオハザードとなり得るので、GLP やColiform Positive Controls

安全衛生の法令等に従い安全に処理されなければな(パーツ番号 MS-PC-COLIFORM)

りません。廃棄前に滅菌してください。MicroSnap キットはオートクレーブや 20%の漂白剤での 1 時間の食品試料の影響：処理で滅菌が可能です。

特定の酵素群を元来高いレベルで含有するある種の1.

試薬は使い捨てです。再使用しないでください

食品は、高いレベルのバックグラウンドノイズを含み、 2.

期限切れの試薬を使用しないでください。

偽陽性と誤判定されることがあります (例えば、いく交叉汚染をさけるため、検査は無菌操作で行って3.

つかの発酵乳製品やある種の緑葉サラダ野菜)。しかしこれらが試験の性能を阻害することはなく、低レベルの大腸菌群および大腸菌であっても高いバックグください。
4.

検査に応じた適切な培養温度と時間で実施くだ
さいラウンドノイズの上に検出されます。これらの食品に

5INS0118 SEP 2014 Rev .H

使用方法

MicroSnap―Coliform and E. coli
偶発的、必然的に生じた如何なる損害、喪失について保存方法と期限：責任を負いません。製品に不具合が認められた場合に試薬の包装は 2－8℃で保存してください。

本製品の製造者または販売者が負う義務は、製品の交試薬の保存期限は 12 か月です。有効期限は試薬に記換、あるいはその裁量においての返金を限度とします。

載されています。

不具合が疑われる場合には発見から 5 日以内に販売者にご連絡・返品をお願いいたします。その他について警告と免責事項：
1.

2.

は販売者にお問い合わせください。

MicroSnap キットは、すべての食物製品、食品加工工程、検査プロトコル、またはすべての大腸菌

お問い合わせ：群の系統についてテストされているわけではあより詳細な情報については www.hygiena.com またりません。

は www.nitta-monitoring.com をご覧いただくか、ヒトや動物の診断にこの検査を使用しないでく下記までご連絡下さい。

ださい。
3.

培地によって、培養される菌種、菌量は様々で一製造元：

つとして同じ結果を与えるものはありません。まHygiena USA

Hygiena-International Ltd

た、試料採取方法や検査プロトコル、ハンドリン

Phone: 805.388.8007

Phone: +44(0)1923 818821

Fax: 805.388.5531

Fax: +44(0)1923 818825

Email:info@hygiena.com

Email:enquiries@hygiena.com

グなどの外的要因によっても回収結果は影響されることがあります。
4.

検査方法がお客様の基準を満たすように、試料数や接種量など検査条件はお客様の責において適

5.

6.

販売元：
ニッタ株式会社

切に選択ください。

クリーンエンジニアリング事業部

他のあらゆる培地と同様に、MicroSnap はこの試

営業部

薬で検査された製品の品質を保証するものでは[大阪本社][東京支店]ありません。

TEL：06-6563-1235

TEL：03-6744-2740

FAX：06-6563-1265

FAX：03-6744-2741

検査者・作業者への適切な訓練をお客様の責におモニタリング営業課

いて実施ください。

製造者/販売者責任：
本製品の製造者(Hygiena International Ltd)または販売者(ニッタ株式会社)は、本製品の使用者またはその他の者に対し、本製品の使用によって直接、間接、

6INS0118 SEP 2014 Rev .H

使用方法

MicroSnap―Coliform and E. coli

Step:1 培 養
Step1: 環境表面ふき取り、液体、固体試料
環境表面ふき取り

または

7

固体試料

液体試料

または

INS0118 SEP 2014 Rev .H

使用方法

MicroSnap―Coliform and E. coli

Step1: 大容量のフィルタろ過可能な液体試料
シリンジろ過フィルタろ過培養液

ろ過試料

または滅菌済ペトリ皿

4. 定量的測定では 37°±0.5℃で 6時間、定性的測定では 8 時間培養する。これは培養した試料である。

ペトリ皿

ろ過試料

使用方法の動画：
www.youtube.com/HygienaTV

Step2 に進む。

8INS0118 SEP 2014 Rev .H

使用方法

MicroSnap―Coliform and E. coli

検出Step２: 検出拭き取り試料

ろ過試料
培養済試料
ピペット

または
Fill line
培養済試料

9検出キットFill line
検出キット

検出キット

INS0118 SEP 2014 Rev .H