最 近 の ト ピ ッ ク ス

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最 近 の ト ピ ッ ク ス
人工口腔粘膜は，皮膚上皮細胞から作成したいわゆるよりクリーンな培養複合口腔粘膜の開発
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人工皮膚 の作成法をコピーしたもので，開発・臨床応用とも人工皮膚の方が早い。同じ人工 上皮だが患者へ応用する場合に皮膚と口腔粘膜の取り扱い基準は当然議論されるべき問題である。なぜなら形成外科，皮膚科で火傷の手術で扱う場合と口腔外科領域で扱う場合では手術の性格が異なるからである。口腔外科手術は選択手術であって救急救命手術ではない。上記２つの人工口腔粘膜作成過程には，２つ問題点があると我々は えて新潟大学歯学部口腔外科学第１講座

いる。

泉 健次
大分医科大学皮膚科学講座形成外科診療班

ひとつは，放射線をかけたマウスの細胞とヒト上皮細寺師浩人

胞が同じフラスコの中で培養されるということである。

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マウスの細胞（f）といっしょに培養すると上ee
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皮細胞はよく増える。その理由はマウスの細胞が放出するなんらかの成長因子によるが，正体は不明である。も

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うひとつは，ウシの血清を培養液中に加えるということ

HirotoTerashiである。マウスの細胞（f）もヒト線維芽細胞
eederlayerも血清がないと増えず，血清はこれらの培養方法には不

もし不幸にもあなたの口腔内に粘膜欠損が生じ，なん可欠であるが，血清は狂牛病をはじめとして外来性の汚らかの上皮組織を移植する必要があると口腔外科医に告染やウイルスの感染源となり得，細胞増殖に必要とはいげられたとしたら？いくつ選択肢が えられるであろう

え未知因子が多い。

か。

つまり，最終的に口の中へ戻されるのは自分の細胞とまず自家皮膚移植術が選択肢に上がることは間違いなはいえ，培養中に得体の知れない細胞や汚染物質かもしいが，欠点としては皮膚採取部にもう一つ傷ができるこ

れないものと一時的にしろいっしょに培養された細胞でと，皮膚と口腔粘膜の表面性状の違いから硬くざらつきある。喜んで「是非それを私の口の中へ移植して下さい」

感があり，毛が生えてくる可能性がある。という気持ちになれるであろうか。実用化された人工口

最近では，ウシやブタの抽出コラーゲンとシリコン膜腔粘膜に関して現在まで臨床上問題があった報告はないとを一体化させ，抗原性のほとんどない創面被覆材がよが，選択的手術である口腔外科の手術に用いる以上，過く用いられるようになってきた。これならば新たな傷も去に問題ないから大丈夫というレベルで論じるのではなできず，毛も生えてこない。材料中には細胞成分がない

く，あらゆる患者に不利益な可能性の有無を えた上でために減菌操作，保存なども非常に簡便である。しかし，の議論が重要ではないだろうか。この基準におけるヨー

この材料の欠点は上皮細胞がないことである。創辺縁のロッパ諸国の対応は寛容，アメリカは厳重である。日本

上皮細胞の移動・増殖により，治癒までには被覆材料表

でも施設によっては，火傷の患者に対する救命処置にお面がすべて上皮化される必要がある。

いてでさえも，ウシ血清を用いて培養した皮膚上皮シー

近年の細胞工学，培養技術の進歩は第３の選択肢をトは患者には移植しないという方針の施設もある。

作ってくれた。口腔粘膜の上皮細胞を培養系に移すと，今後当教室では，マウスの細胞とウシ血清を用いない細胞が短期間に増殖し，上皮細胞をシート状に増殖させクリーンな方法で上皮細胞を培養し新たな人工口腔粘膜ることができるようになった。すなわちフラスコ中で増を作成し，えた自分の上皮細胞を粘膜欠損部へ移植することが可能

よび補綴前処置等の臨床に用いていく予定である。このになった。この人工臓器の一簞を担う人工口腔粘膜は構方法には粘膜の強度というもうひとつ大きな利点があ造上２種類存在する。上皮細胞だけを培養した上皮細胞る。上皮シートも複合体もこんにゃくより軟らかく，脆シートおよびコラーゲンゲル中に線維芽細胞を混ぜて培い。口腔内のような複雑な形態をもつ組織に移植する場

養した粘膜下組織様組織上に培養上皮細胞を播いて複合合周囲組織との縫合は不可欠であるが，こんにゃく以下体としたものである。 共にすでに口腔外科領域で実用の強度では，縫合は困難であると言わざるを得ない。私化されている。

たちの開発した人工口腔粘膜は上皮細胞の増殖，分化の63外傷，腫瘍術後の粘膜欠損，口蓋裂手術お新潟歯学会誌

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写真１29(2):1999

培養４日目の単層培養複合口腔粘膜。

写真２ 培養18日目の重層化した培養複合口腔粘膜。

足場としてヒト新鮮屍体真皮を用いている。真皮組織ゆの後粘膜作成に18日を要するので合計38日で千円札大のえ非常に強 であり口腔内への運搬も周囲粘膜との縫合人工口腔粘膜ができあがる。
通常口腔内の移植術では100も容易である。
実際の作成法は，まず細胞培養に関しては，患者の口cm もあれば十分であるから，所要日数は若干少なくて約１ヶ月あれば作成可能な計算になる。すなわち手術の腔粘膜（角化，非角化）から punchbi
opsyを行う。採取約１ヶ月前に punc
hbi
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yを行なえば手術に使える人した粘膜をトリプシンに一晩つけておき，翌朝単離した

工口腔粘膜ができあがり，punc
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opsyの傷も小さく縫合可能ゆえ手術時には治癒している。移植面積が小さけ上皮細胞を初代培養に移す。使う培地は血清を含まない53培地（カルシウム濃度0.15MCDB1mM）。この培地にはハイドロコーチゾン，インスリン，EGFおよびウシ下ればもっと少ない日数で済むであろう。

垂体抽出物を加えてある。継代は細胞が70‑80％コンフ

腔粘膜作成法であるが，ウシ下垂体抽出物を培地に加えルエントになった状態で行なう。培養上皮細胞は癌とているため，完璧なクリーンさまでには至っていない。

違って無限には増えない。たいてい７回前後の継代が限しかし，このレベルのクリーンな条件であれば十分患者度である。継代１−３代目の細胞が最もよく増殖し，人に応用しても許されるクリーンさである。現在よりク工口腔粘膜作成に適すが，４代目以降は使いづらくなる。

リーンな条件を得るためには不使用がベストであるが，また年齢による増殖率の差は若い患者の方がよく増える

そうなると上皮細胞の増殖が鈍り培養期間が長くなりすという印象はあるが，データ的に有意差はなく年齢に関ぎる。対策としてブタ下垂体抽出物での代替が可能であ係なく増殖する。

る。最近ウシ下垂体抽出物中の何が上皮細胞の増殖因子

ところで，紹介してきたクリーンな方法による人工口次のステップは人工口腔粘膜の作成である。タイプ I
Vとなっているのか解明されつつあるので，その研究に期コラーゲンに浸したヒト新鮮屍体真皮（LifeCell, TX,5,000/cAlloDerm ）上に培養上皮細胞を12m の割合待している。

で播種する。培地のカルシウム濃度を1.
8mM に上げ４な御指導を頂いた米国ミシガン大学口腔外科 Dr.Fei
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日間 li
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faceで培養すると１層の上皮層が Al-および外科 Dr.Marceloに厚く謝意を表します。また御協力。この後，この材料
loDerm 上に形成される（写真１）を ai
日間培養を続けrliquidinterfaceに移し，さらに14頂いた口腔解剖学第２講座星野正明文部技官に深謝致しま稿を終えるにあたり，この研究の機会を与えて下さり，親切す。

る。４日めで１層だった上皮は重層化し始め計18
日間で錯角化を伴う上皮をもった人工口腔粘膜が完成する（写引真２）。
千円札大（115cm ）の人工口腔粘膜を作るシミュレーションをしてみる。AlloDe
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用文献1)Izumi,K.TakacsG.etal.
:Exvivodeve
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上に播種する培養上皮

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7,57
1‑577,199
9.
OralMaxi
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acSurg5細 胞 は1500万 あ れ ば 十 分 で あ る。約20mm の punc
h00万である。このbiopsyから採取できる上皮細胞は約1
うちフラスコ内で定着，増殖するのは10％以下であるが，2)Izumi,K.Teras
hiH.etal.
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早ければ２回の継代，遅くとも３回の継代で1500万の細Or
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胞が得られる。ここまでの培養日数は平 約20日で，こ64Char
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