MicroSnapTM Total
一般生菌迅速判定
必須パーツ
Step 1：MicroSnap Total 培養キット，MS1-TOTAL (QYT 100)
Step 2：MicroSnap Total 検出キット，MS2-TOTAL (QYT 100)

説明書：

用例：

MicroSnap Total は一般生菌数の検出と計測結果が 7

MicroSnap Total 法は主要な測定基準として ATP 測

時間で得られる迅速生物発光法を用いた検査方法で定法に依拠します。MicroSnap Total は予想されるすす。MicroSnap Total は、特殊な成長培地を含む培養べての製品について評価されたわけではありません。

キットと、細菌の産生するバイオマーカーを小型のポ安全と注意をご確認ください。

ータブルルミノメータで計測する為の生体発光基質

MicroSnap は使用前に室温 (18- 25 °C) に戻しておを含む検出キットから構成されます。

くことが大切です。4°C の冷蔵状態から取り出したば検査は細菌の成長を促進する短時間の培養と検出の 2かりの試料で培養を開始すると、培養温度が 30 °C に段階で行います。培養液での培養中、細菌は増加し干達するまでにタイムラグが生じるため検出力が低下渉物質は減少します。細菌が増加することで、培地中することとなります。に成長源が無くなり、バイオマーカーを生成します。

MicroSnap Total 検査に使用する媒体または希釈液はサンプル内の細菌が増えるほど、バイオマーカーは増生物発光阻害物質を含まないものを使用することが加、その発光量も大きくなります。その後、培養した大切です。微生物検出に失敗する最も大きな原因は、サンプルの一部を検出キットへ適量移してアクティ媒体または希釈液中の阻害物質です。Hygiena 社は以ベートし、混合してルミノメータで測定します。光の下に記載した希釈液を推奨します。

強さは細菌量に比例します。
必要器材(同梱されていません)：
使用対象者：○30±0.5℃設定のインキュベーター

検査担当者は一般的な微生物検査の技術・知識がある○EnSURE ルミノメータ（器材番号：EnSURE)に越したことはありませんが、習熟者の指導のもとで試料作製用：使用方法を身につければ誰でも使用可能です。

○希釈液
・緩衝ペプトン水

適用性：・ペプトン加生理食塩水(MRD)

MicroSnap Total は食物、液体、環境表面で代謝的に・バターフィールドのリン酸緩衝希釈水

生存できる好気性菌の計測に使用することができま○サンプルバッグす 。 こ の 手 法 は AOAC Performance Tested○ホモジナイザー

MethodsSM (PTM) Program に基づき、食物に関し〇1ml 用のピペットおよびチップてバリデートされました。詳細については AOAC-RIPTM Certificate #031501 を参照してください。

１INS0126 APR 2015 Rev. G

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Step 1：MicroSnap Total 培養キット，MS1-TOTAL (QYT 100)
Step 2：MicroSnap Total 検出キット，MS2-TOTAL (QYT 100)

測定方法：

1mL を 抜き取って調製することができます。

使用方法の動画：www.youtube.com/HygienaTV

注: 比較試験を実施する場合、異なる検査法の間で同等の結果を得るためには 10 分以内に全Step１：培養ての試料の試験を開始する必要があります．採培養手順を以下に示します。Step１の図も参照してく取した試料は使用するまで 4°C で２日まで保存ださい。

できますが、MicroSnap と比較法とで試料を検1. 試料を採取し MicroSnap Total 培養キット（パー査する前に室温に戻しておく必要があります。

ツ番号 MS1-TOTAL）に入れます。

2. スワブをスワブチューブに戻し、再度装着します。

試料を以下の手順で採取します：

キットの状態は最初に包装から取り出した時と同i. 表面を 10x10cm 拭き取るか、あるいは表面がじような外観にしてください。

平坦でない等それが困難な場合はできる限り多くふき取れるようにします。
ii. 液 体 ： 1 ｍ L の 飲 料 ま た は 水 の 試 料 を3. しっかりとチューブを持ち、上部のスナップバル
ブを親指と人差指で前後に折り曲げて培養キットをアクティベートします。

MicroSnap Total 培養キットに直接加えます。

4. バルブとスワブチューブを互いに数 cm 離して内iii. 食材 ： 適当な懸濁液を 1ｍL、例えば 10% w/v

部の圧を下げ、バルブを絞って液体培地を全てスワ食品ホモジネートを培養キットに直接加えます。

ブチューブの底に放出します。液体培地の大部分が食品ホモジネートの調製は、食品の原試料をスワブチューブの底にあることを確認してくださ

10g または 50g ひょう量して、希釈液 (注:い。

AOAC PTM study でバリデートされた MRD :Maximum Recovery Diluent) を 90mL または 450mL 入れたストマッカーバッグに添加する方法で行うものとします。試料の未知の汚染については、新たに 90ml の希釈液に 10%の5. スワブをスワブチューブに戻し、しっかり装着して確実に閉じます。
6. 試料と培養液が混ざるようにチューブをやさしく振ります。
7. 30±0.5℃で 7 時間± 10 分間培養します。

10ml を添加する方法で 1% および 0.1%と繰2

り返して、さらに多くの 10%以下の希釈系列をStep2：検出作製しなければなりません。複数の試料が必要

検出の手順を以下に示します。Step2 の図も参照してであれば、引き続き原試料のバルクから新たにください。Step2 を始める前に EnSURE ルミノメー10g または 50g を採取して段階希釈を繰り返タを稼働させてください。場所がプログラムされていします。複数試料は、得られた RLU 値により、る場合はテストする場所を選択してください。

それぞれ 10%, 1%, 0.1% 希釈液の一部から

1. MicroSnap Total 検 出 キ ッ ト （ パ ー ツ 番 号
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MS-TOTAL）を室温 (22 – 26 °C で 10 分間) にップを３回絞ります。

なじませます。手のひらで 5 回たたくか、一度強

4. チューブをやさしく振ります。

く下向きに振ってください。これは抽出溶剤をチュ

5. ただちに検出キットをルミノメータに挿入します。

ーブの底部分へ集めるためです。
2. 培養済のサンプルを培養キットから検出キットに移します。培養キットのスワブはピペットとして使うことができます。

蓋を閉め、測定器を垂直に保持したまま“OK”ボタンを押して測定を開始します。15 秒のカウントダ
ウンののちに結果が表示されます。
6. 測定結果は RLU（相対発光量）で表示されます。

i. 試料を混ぜ、バルブ中に液を吸い上げます。

RLU 値に基づいた検査の合否判定しきい値を設定

ii. 培養キットのスワブをチューブから取り出しましてご使用ください。RLU 値に対応する CFU レベす。
iii. バルブをねじって引き上げて、検出キットを開ルについては“結果の解釈”のセクションを参照してください。

けます。手元に置いておきます。
a. 検出キットのチューブ上部に培養キットの検出限界:

スワブチップを挿入し (約 1 インチまたは検出限界とは、検査が正しく有効に実施された場合に3 cm)、培養キットのバルブを軽く絞って培

食品の原試料で検出可能な生存している好気性菌の養済試料を Fill line まで入れます。この際、最低レベルです。検出可能な細菌の最低レベルは培養

Fill line より培養液を入れないようにしてく時間の延長とともに減少します。7 時間培養時の検出ださい。これにより結果の値が左右します。

レベルは 10 CFU / mL で８時間培養時には 1 CFU /iv. 培養キットに残っている培養済試料は追加試mL になります。この化学量論の継続は食品における験のために残すこともできます。培養キットの細菌増殖の Baranyi- Roberts モデルと一致していまキャップをして元通りにインキュベーターに戻す。7 時間培養時では、CFU と RLU の関係は 1 対 1 、してください。

または Y=X の関係に似ています。EnSURE で測定し

注: 同じ培養済試料で追加試験を実施する場合、た場合の MicroSnap Total の 7 時間でのダイナミッ同等の結果を得るためには 10 分以内に全てのクレンジは、EnSURE で測定可能な RLU 値の実際の追加試験を実施する必要があります．

範囲と比例しています。下限である 10 RLU (7 時間v. 検出キットのキャップを元通りに閉めます。

培養時の<10 CFU/mL) は検査した滅菌済食品での3. しっかりとチューブを持ち、上部のスナップバル

自然のバックグラウンド値 (RLU の平均値 + 6 標準

ブを親指と人差指で前後に折り曲げ、検出キットを偏差)を基にしています。

アクティベートします。全ての試薬をスワブチューブの底に放出するために、上部のスポイト状のキャ3INS0126 APR 2015 Rev. G

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表 1：7 時間培養時のダイナミックレンジ
サンプルのタイプ

難です。100 CFU/g の検出下限は MicroSnap を 7時間培養した場合に使用可能です。

CFU 範囲環境表面

10-10,000 (CFU/スワブ)

この検査法は生菌数計測の比較参照法である ISO

液体 1mL10-10,000 (CFU/mL)

4833:2003, Microbiology of food and animal

固形物 10％ w/v

100-50,000（CFU/g）

feeding stuffs – Horizontal method for theenumeration of microorganisms – Colony-count

表 1 で詳細に示した範囲外の汚染がある食品については、以下の希釈系列を調製してルミノメータで測定す

technique at 30 °C (ISO 4833) (3) と良好な相関が認められました。

る必要があります:1,000 – 500,000 CFU 見当の 1% 懸濁液
10,000 – 5,000,000 CFU 見当の 0.1% 懸濁液
注: 複数濃度の希釈系列の検査で直線的な結果を得るには、全ての希釈液を用意して同時に検査を行う必要があります。

結果の解釈：
ルミノメータに表示される結果は相対発光量(RLU)です。数値化された光の強さは、検査時点での増殖している生菌から抽出された ATP 成分に比例します。この ATP 濃度は当初の細菌汚染と比例し、順次 ColonyForming Units (CFU)として表現されます。表３はAOAC PTM バリデーション：

30 °C で 7 時間の培養を行った場合に限ってのRLU 値と CFU 値の換算表を示しています。データは

表 2：種々の食品原試料を用いた ISO 法との相関に関する AOAC PTM バリデーション
食品の原試料様々な食品について検査した社内試験および AOACのバリデーション試験から引用しました。

2

ISO 法との相関(R )生の牛ひき肉

0.771

生の鶏肉

0.969

レタス

0.948

RLU

生クリームケーキ

0.987（EnSURE）

生乳

0.990

食品の原試料を生の状態で検査しました。菌の接種を行わずに測定を実施した結果、全ての試料が何れかの

表 3：30°C での RLU 値と CFU 値の換算表
等価 CFU
サンプル 1mL 直接添加固形サンプルの（or 表面ふき取り）

10%懸濁液<10<10<100/g<20<20<200/g<30<30<300/g<50<50<500/g

計数可能な範囲で示されました。このように低レベル<100<100<1000/g

であっても常に細菌が存在するため、実際の食品試料<1000<1000<10000/g

を真の陰性を調査する目的として使用することは困>5000

TNTCTNTC

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されなければなりません。検出キットは使い捨て
いくつかの希釈液を用意して汚染の検査を行う場合、です。再使用しないでください。

結果の CFU 値は対応する希釈倍率によって CFU/g か2.

期限切れの試薬を使用しないでください。

mL を換算します。

3.

交叉汚染をさけるため、検査は無菌操作で行ってください。

校正と管理：

4.

GLP に準拠した陽性対照および陰性対照の検査を推奨します。Hygiena 社は下記の対照品を提供していま試料の希釈濃度をルミノメータのダイナミックレンジ内の適切なものとして下さい。

5.

す:

用例に記載された適切な培養温度と時間で実施してください。

Calibration Control Kit (パーツ番号 PCD4000)6.

複数濃度の希釈系列の検査で直線的な結果を得るには、全ての希釈液を用意して同時に検査を行保管方法と有効期限：
2～8℃の冷蔵下で約 12 ヶ月保管できます。詳しくはう必要があります。
7.

ラベルの有効期限をチェックしてください。

同じ培養済試料で追加試験を実施する場合、同等の結果を得るためには 10 分以内に全ての追加試験を実施する必要があります．

処分の方法：

8.

比較試験を実施する場合、検査法間で同等の結果廃棄前に滅菌してください。MicroSnap キットはオーを得るためには 10 分以内に全ての試料の試験をトクレーブや 20%の漂白剤での 1 時間の処理で滅菌開始する必要があります．

が可能です。その後に廃棄してください。またMicroSnap キットはバイオハザード廃棄物処理施設

免責事項：に廃棄することもできます。

1. MicroSnap キットはすべての食品製品、食品加工工程、検査プロトコル、またはすべての微生物の系統についてテストされているわけではありません。
2. ヒトや動物の診断にこの検査を使用しないでくだ

安全と注意：
1.

MicroSnap の構成部品は正しく使用されれば健さい。
3. 培地によって、培養される菌種、菌量は様々で一康に対するリスクとはなりません。陽性が確認さつとして同じ結果を与えるものはありません。また、れた使用済み試薬はバイオハザードとなり得る

試料採取方法や検査プロトコル、ハンドリングなどので、GLP や安全衛生の法令等に従い安全に処理の外的要因によっても回収結果は影響されることがあります。

5

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4. 検査方法がお客様の基準を満たすように、試料数より詳細な情報については www.hygiena.com またや接種量など検査条件はお客様の責において適切

は www.nitta-monitoring.com をご覧いただくか、に選択ください。

下記までご連絡下さい。

5. 検査者・作業者への適切な訓練をお客様の責において実施ください。

製造者/販売者責任：
本製品は他の培地と同様に、検査された食物、飲料や製造プロセスの品質を保証するものではありません。

製造元：
Hygiena USA

Hygiena-International Ltd

Phone: 805.388.8007

Phone: +44(0)1923 818821

Fax: 805.388.5531

Fax: +44(0)1923 818825

Email:info@hygiena.com

Email:enquiries@hygiena.com

本製品の製造者(Hygiena International Ltd)または販売者(ニッタ株式会社)は、本製品の使用者またはその他の者に対し、本製品の使用によって直接、間接、販売元：

偶発的、必然的に生じた如何なる損害、喪失についてニッタ株式会社責任を負いません。製品に不具合が認められた場合にクリーンエンジニアリング事業部

本製品の製造者または販売者が負う義務は、製品の交換、あるいはその裁量においての返金を限度とします。
不具合が疑われる場合には発見から 5 日以内に販売者

営業部

モニタリング営業課[大阪本社][東京支店]

TEL：06-6563-1235

TEL：03-6744-2740

FAX：06-6563-1265

FAX：03-6744-2741にご連絡・返品をお願いいたします。その他については販売者にお問い合わせください。

お問い合わせ：6INS0126 APR 2015 Rev. G

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環境表面ふき取り、液体、固体試料の培養またはまたは10分間

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検出/測定

目盛線
培養済試料

検出試薬

検出試薬

使用方法の動画：

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