Niigata Dent. J. 35（1）：11 − 18,2005

11−原著−
日本人家系における唇裂・唇顎口蓋裂に関する候補遺伝子（F13A1，D16S539，BCL3）の解析
大久保博

基，藤田一，高木律男

新潟大学大学院医歯学総合研究科
顎顔面口腔外科学分野（主任 : 高木律男教授）

Candidate gene analysis at F13A1, D16S539, and BCL3 loci regarding to
non-syndromic cleft lip with or without cleft palate in Japanese families
Hiroki Okubo, Hajime Fujita, Ritsuo Takagi
Division of Oral and Maxillofacial Surgery,Niigata University Graduate School of Medical and Dental Sciences(Chief: Prof. Ritsuo Takagi)
平成 17 年１月 24 日受付

６月９日受理Key words：cleft lip with or without cleft palate（ 唇 裂・ 唇 顎 口 蓋 裂 ），F13A1，D16S539，BCL3，linkage
disequilibrium analysis（連鎖不平衡解析）
Abstract： We have examined about the relationship between cleft lip with or without cleft palate and three
genetic loci of F13A1 (6p25. 3 − p24. 3), D16S539 (16q24) and BCL3 (19q13. 2). At first, we extracted genome
DNA from the 77 patients and their parents that were obtained written and oral informed consent. Secondly,
we amplified each DNA using the microsatellite marker of genetic loci. Then we detected alleles by 8 %polyacrylamide gel electrophoresis. Finally, we performed a transmission disequilibrium test (TDT) and anassociation test. The results of the TDT were P=0.995 (χ2=0.067) at F13A1, 0.167 (χ2=9.124) at D16S539 and 0.679(χ2=1.512) at BCL3. The empirical P values of three genetic loci were 0.379, 0.798 and 0.828, respectively. We
could not find a statistical significance either in each locus or any specific allele, so transmission disequilibrium
was not approved. However, the P value in D16S539 was comparatively low, and we got comparatively
high empirical P values in D16S539 and BCL3. The results of the association test were P=0.062 (χ2=7.33) atF13A1, 0.088 (χ2=10.99) at D16S539 and 0.061 (χ2=7.36) at BCL3. The P values were approximate to statisticalsignificance although we could not find a significant difference between patients and control subjects. These linesof evidence do not suggest a significant result, but are not the results that denied actively F13A1, D16S539 andBCL3 as candidate genes. We need to accumulate the case and analysis further more in the future.
抄録：唇裂・唇顎口蓋裂（CL/P）における F13A1（6p25.3-p24.3），D16S539（16q24），BCL3（19q13.2）の 3 つの遺伝子座と本疾患の関連について検討を行った。インフォームドコンセントの得られた CL/P 77 家系の患者および両親 231 名からゲノム DNA を抽出し，各遺伝子座のマイクロサテライトマーカーを用いて PCR 増幅後，8％ポリア
クリルアミドゲル電気泳動にてアリルを検出した。TDT の結果，F13A1 において P=0.995（χ2=0.067），D16S539
において P=0.167（χ2=9.124），BCL3 において P=0.679（χ2=1.512）であり，検出力はそれぞれ 0.379，0.798，0.828であり，各遺伝子座および特定のアリルにおいても統計学的有意差は得られず，伝達不平衡は成立しなかった。しかし，D16S539 における P 値は比較的小さく，検出力は D16S539 と BCL3 はともに比較的高い値が得られた。相関解析における結果は，F13A1 において P=0.062（χ2=7.33），D16S539 において P=0.088（χ2=10.99），BCL3 において P=0.061（χ2=7.36）であった。各遺伝子座において，健常人と患者およびその両親の間に相関を見いだすには及ばなかったが，P 値は有意確率に近い結果が得られた。以上から有意な結果は得られなかったものの，F13A1，− 11 −

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D16S539，BCL3 を候補遺伝子として積極的に否定する結果でもなく，今後，症例の蓄積と更なる分析の必要性が考えられた。

対象とした。なお，合併奇形を有する，症候群あるいは緒言

その疑いと診断される，従来から CL/P とは遺伝系統が異なる33） と考えられている口蓋裂単独の患者を含む家口唇・口蓋裂（CL ± P）の発生原因には，環境的要系は除外した。本研究を施行するにあたっては，新潟大

因と遺伝的要因が考えられており1），候補遺伝子に関す学歯学部倫理委員会の審査と承認を受け，対象家系にはる分子遺伝学的分析はこれまでにも国内外で多数報告

研究の主旨を十分に説明して同意書に署名をいただいた

されてきた 2 〜 29）。しかし確定的な報告はなく，未だに上で末梢血採血を行った。患者の裂型の詳細は，唇顎口原因遺伝子の同定には至っていない。私たちも，これま蓋裂 63 名，唇顎裂 12 名，唇裂 2 名で，孤発例が 71 家系，でに BCL3 および近傍の遺伝子座（19q13.2）について，片親もしくは同胞に同種疾患を有するものがそれぞれ 2

唇裂・唇顎口蓋裂（CL/P）多発家系の連鎖解析を行い，家系，4 家系であった（表 1）。

左側および両側裂を示す家系において二点連鎖解析で最大 LOD（logarithm of odds）スコア 1.70，多点連鎖解
表 1．患者裂型と家系について

析で 1.91 と比較的高い値を得たものの明らかな連鎖を2）示すには至らなかったと報告し ，今後の再検討が必要

患者裂型であると考えた。
疾患多発家系を対象として行う連鎖解析は，相対危

唇顎口蓋裂

63

左側37

両側20

険度の高い疾患遺伝子座については極めて有効な手段

右側である30） とされているが，日本人集団の中では CL/P

唇顎裂多発家系が少ないこと，本疾患は common disease と左側9同様に相対危険度が低いと予想されることなどの問題

両側1がある。これに対し，伝達不平衡解析（transmission

右側231）
disequilibrium test: TDT）
や相関解析などの連鎖不平

唇裂

衡解析は，多数の小家系を収集することにより，相対危6122

左側険度の低い遺伝子座でも分析が可能である32） という利家系点を有しており，今後は以上のような対象および遺伝統計学的手法にて分析を行っていく必要がある。
近年，ハイスループット解析技術の進歩により，本疾患のゲノムワイド分析に関する報告がなされるよう

2孤発例

71

家系内発現例

6片親2同胞4計77になってきた。2000 年 Prescott ら3）は，英国人 92 家系について罹患同胞対分析を行い，8 個の染色体上で関連を認めたと報告した。また 2002 年 Marazita ら4）は，中国人 36 家系について多点連鎖解析および TDT を行い，２．マイクロサテライトマーカー

それぞれ 7 個，10 個の染色体上で関連を認めたと報告

遺伝子マーカーには，F13A1（6p25.3-p24.3），D16S539した。そこで私たちは，これらの報告で関連の認められ（16q24），BCL3（19q13.2）の 3 つのマイクロサテライた染色体領域の中から，高い多型性を有する F13A1 おト を 用 い た。F13A1 と D16S539 は 4 塩 基 繰 り 返 し のよび D16S539 を選定し，BCL3 と合わせた 3 つの遺伝

tetranucleotide repeat marker，BCL3 は 2 塩基繰り返子座について，日本人家系における本疾患との関連につしの dinucleotide repeat marker であり，これらの各いて検討を行った。

遺伝子座について，既報告34 〜 36） または The GenomeDatabase（GDB）に登録されているゲノム情報をオン対象および方法

ライン検索（http://www.gdb.org/）し，プライマーを設定した（表２）。

１．患者および両親
新潟大学医歯学総合病院口腔外科顎顔面外科診療室を受診した CL/P 患者のうち，インフォームドコンセントの得られた患者およびその両親を含む 77 家系 231 名を− 12 −