最近のトピックス

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最 近 の ト ピ ッ ク ス
た結果，それらの細菌種間に極めて大きな相違が認めら口腔由来の糖非分解性偏性嫌気性グラム陽性桿菌とその新しい分類
Oral Asaccharolytic Anaerobic Gram
Positive Rods (AAGPR) and thiertaxonomic positions
新潟大学歯学部口腔細菌学講座

中澤太,

星野悦郎

れることを報告している。同様にSprattらは，16S
rDNA sequence解析の結果から，Eubacterium属には遺伝学的に大きな隔たり(diversity)がある菌種が多数含まれれていることを明らかにした3）。このような研究結果は，口腔由来のAAGPRの多様性を示すと共に，従来とは異なる新しい分類基準の必要性を示している。
３．口腔内分布と病原性

Faculty of Dentistry, Niigata University

Hoshinoらは，う蝕病巣や根管壁感染象牙質に生息する主たる細菌種の一つがEubacterium属細菌であること

Futoshi Nakazawa and Etsuro Hoshino

を示し，それらの菌種がう蝕及びその進行に関与していDepartment of Oral Microbiology

ることを示唆している4-6）。又，Uematsuらは，厳密な偏性嫌気性菌取り扱い技術を駆使し，歯周病患者の歯周ポケット内の細菌叢を検討した結果，分離総数422株中177株，即ち総菌数の42％がgenus Eubacteriumに属する

１．はじめにAAGPRであることを報告し，歯周疾患とそれらの細菌
ヒトの身体にはウイルスや真菌の他に700種の細菌が種と強い相関性を示唆している7）。その他に，歯垢，乳住み着き，その中でも口腔内は最もその種類が多く，約

歯感染根管病巣，骨髄炎病巣，義歯付着歯垢など，ヒト350種以上にも及ぶと言われている。更にそれら細菌叢の口腔内の殆どの部位からAAGPRが分離され，種々のの大部分は口腔内固有の細菌種であると同時に偏性嫌気口腔内感染症に及ぼすその役割の重要性が指摘されてい性細菌種が圧倒的優勢菌であることが数多くの報告による８）。って明らかにされている。また，近年，偏性嫌気性細菌

1970年代の後半から80年代の後半にかけて，ある種のの取り扱い技術の進歩によって，従来は培養出来なかっグラム陰性桿菌が歯周病患者の歯周ポケットで優勢であた細菌種や，生育が極めて遅いためその存在が見落とさると言う報告を受けて，多くの研究者がその免疫学的，れていた（又は無視されていた）細菌種など，これまで遺伝学的研究を行い，種々の病原因子を明らかにしていの認識とは異なる新しい細菌種が多数報告されている。

る。一方，う蝕関連菌としても，幾つかのグラム陽性球その中でも，最も代表的なものが糖非分解性偏性嫌気性菌の病原因子が多数報告されている。それらの口腔感染グラム陽性桿菌(AAGPR)である。

症において，このような病原性や病原因子を無視するも本稿では，ヒト口腔由来のAAGPRについて，我々のデータを含め，現在得られている知見を概説する。のではないが，従来その培養が困難であったAAGPRが新しい技術によって検出可能になったこと，更にはそれを用いた最近の研究によって，特に歯髄炎，感染根管，２．多様性骨髄炎，歯周ポケットなどの感染病巣部位からのAAGPRの分離頻度が高いことが明らかにされたこと等

従来は，口腔由来のAAGPRの多くはEubacterium属の事実は，これらのAAGPRが持つ病原性に関する解明に分類されていた。しかし，その分類は，終末代謝産物は極めて重要となると考えられる。

を主たる基準としているために極めて曖昧であると同時に，このEubacterium属には性状が大きく異なる多種多４．新しい細菌種の発見様の細菌種が混在している可能性が指摘されていた。実際，Nakazawa & Hoshinoは，Eubacterium属細菌11種
Immuno-blottingによる免疫学的特異性 1） 及びDNA-

従来，糖非分解性 Eubacterium 属細菌種としては，Eubacterium timidum, E. lentum, E. nodatum, E.
brachy の4種が知られていた。しかし，その後，MooreDNA hybridizationによるDNA homology2）等を検討しら，Hillら，Wadeら， Hoshinoら，等多数の研究者が，を用いて，SDS-PAGEによる菌体構成蛋白，Western

既報の細菌種には合致しない新しいタイプのAAGPRが−71−

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新潟歯学会誌

ヒトの口腔からの分離されることを報告している。1993
年Uematsuらはアルギニン水解能においてE. nodatumと異なる新菌種のAAGPRとしてE. saphenumを報告している9）。更に1996年にはE. minutumとE. exiguumが30（1）：2000

は，今後は新菌属を含めた他の細菌属に移される可能性が高いことを示している。
６．検出Poco10-11）らによって，またE. tardumとE. infirmunがCheeseman12）らによって，それぞれ新しいAAGPR菌種

前述のように，近年の研究で，種々の口腔疾患部位かとして登録された。その後，16S rDNA sequence分析の結果から，E. exiguumはSlakia exiguaとして，またら，従来はその培養が困難であったAAGPRの新しい菌

E. lentumはEggenthella lentaとして，各々異なる新しは従来の表現形質の比較では不可能であることから，こいgenusに移された。そして，1999年から今年にかけて，終末代謝産物を全く産生しないCryptobacterium属（C.

れらの細菌群の検出・同定にはDNAレベルでの検討がcurtum）13）や，フェニール酢酸を唯一の終末代謝産物とSatoらは，PCR法によって増幅した16S rDNAを制限し，アルギニン水解と硝酸塩還元が共に陰性を示すMogibacterium属14）の２つの新しいAAGPRの細菌属が酵素で切断した際に得られるその分布パターンの比較提案され，M. pumilum, M. vescum, M. diversum, M.
neglectumの4菌種が登録された。また，これまでの E.

できることを報告している15）。一方，田村らは，軟化象種が次々に検出されるようになった。しかし，その区別必要であることが明らかにされた。

(PCR-RFLP法）によって，種々のAAGPRが容易に判別

timidumは，この新細菌属に移されM. timudumとされ牙質から分離され，これまで単一菌種とされてきたPseudoramibacter alactolyticus （旧 Eubacteriumた。このように新しい培養技術を用いた最近の研究によalactolyticum ）には，PCR-RFLP法によって区別されって，これまで培養が困難であった多数のAAGPRが新る３つのグループが存在することを明らかにしている。

菌属，新菌種として次々に報告されてきた。

また橋村らは，16S rDNA sequenceを比較し，代表的なAAGPRであるS. exigua, M. timidum, E. saphenum

５．現在の分類の３菌種について，それぞれの特異的配列に基づいた
species specific primerを用い，臨床試料から直接これ細菌の分類は新しい手法が導入され新しい知見が得らの細菌種を検出することに成功している。

られると，それに伴って変遷を繰り返してきた。従来，その形態観察や生化学的性状試験等の手法が，細菌分類

７．おわりにの主流であったが，その後DNAを使った手法が本格的に導入され，種々の細菌群に於いてその分類が再検討さAAGPRの多くは従来その培養が困難であったと同時れた。特にDNA-DNA hybridizationや16Sリボソームに，その生化学的反応性に乏しいが故にその同定も困難

RNA（16S rRNA）gene sequenceなどを用いた分類法であった。しかし，上記に示したようにDNAの増幅には，細菌の進化論的類縁性を指標にした優れた手法としよる遺伝情報の検索によって，それらAAGPRの検出及て認められている16,,17)。

び同定が比較的容易になったことから，今後ヒト口腔内現在知られているヒトの口腔から分離される主なに於ける感染症病巣部位からのAAGPRの検出頻度は更AAGPRを，その特徴的な性状と共にTable 1に列挙しに増加すると考えられる。現在，我々はこのAAGPRがた。これらの細菌種は，示した生化学的性状によって，口腔感染症に及ぼす病原性を解明すべく，本菌種の持つ細菌属（genus）レベルでの区別は概ね可能であるが，種々の病原因子の同定を進めている。

同一細菌属内を含め細菌種（species）レベルの判別は参不可能である。これらAAGPRの細菌種の同定は，

考

文

献

DNA-DNA homologyや16S rRNA gene sequencesimilarityなどの手法によって初めて可能になったのもである。Fig.1は，主なAAGPRとその近縁の細菌種の16S rRNA gene sequenceを比較したphylogenetic分析によって，相互の遺伝学的類縁関係を示したものである。
この進化論的系統樹は，これらのAAGPRが相互に異な

１）Nakazawa, et al. J.Gen.Microbiol., 139:2635-2640,
1993.
２）Nakazawa, et al. Int.J.Syst. Bacteriol., 44:787790,1994.
３）Spratt, et al. Oral Microbiol.Immunol., 14:56-59,
1999.

った幾つかの遺伝学的clusterを形成することを示すと同時に，従来のEubacterium属のtype speciesであるE.

４）Hoshino, et al. J.Dent.Res., 64:1195-1198, 1985.

limosumとは遺伝学的に大きく異なっていることから，

５）Hoshino, et al. Int.Endo.J., 25:2-5, 1992.

現在 Eubacterium 属に分類されている多くのAAGPR

６）Ando et al. Int.Endo.J., 23:20-27, 1990.

−72−

最近のトピックス

７）Uematsu, et al. J.Periodont.Res., 27:15-19, 1992.

73

13）Nakazawa, et al. Int.J.Syst.Bacteriol., 49:1193-８）星野悦郎 他, 新潟歯学会雑誌22:1-14, 1992.

1200, 1999

９）Uematsu, et al. Int. J. Syst. Bacteriol., 43:302-304,

14）Nakazawa, et al. Int.J.Syst.Evol.Microbiol., 50:679-1993.

688, 2000.

10）Poco, et al. Int.J.Syst. Bacteriol., 46:31-34, 1996.

15）Sato, et al. Oral Microbiol.Immunol., 13 : 23-29,

11）Poco, et al. Int.J.Syst.Bacteriol., 46:1120-1124.

1998.

1996.

16）中澤

12）Cheeseman, et al. Int.J.Syst.Bacteriol., 46:957-959,

太 他，新潟歯学会雑誌25 : 61-61, 1995.

17）Nakazawa, et al. Oral Microbiol. Immunol., 12 :1996.

189-192, 1997.

Table 1: Comparison of Asaccharolytic Anaerobic Gram PositiveRods (AAGPR)
End products
Taxon (1)from PYG (2)Mogibacterium diversum
phe-aArginine

NitrateG +Chydrolysis reduction

Fig.1 Evolutionary tree based on 16S rRNA genesequence comparison showing
the phylogenetic position of oral Asaccharolytic
Anaerobic Gram Positive Rods（AAGPR）

%

−

−

42

Mogibacterium neglectum

phe-a−−

42

Mogibacterium vescum

phe-a−−

46

Mogibacterium pumilum

phe-a−−

46

Mogibacterium timidum

phe-a−−50

Cryptobacterium curtum

−+

−

51

Slakia exigua

−+

−

60

Eubacterium saphenum
0.02K.nuc

Mogibacterium pumilum
Mogibacterium neglectum80

Mogibacterium diversum
Mogibacterium vescum

100(Eubacterium timidum)

Mogibacterium timidum96

Eubacterium infirmun
70

Clostridium aminobrachm(Eubacterium exiguum)
Eggenthella lenta

−++

62

Eubacterium brachy

70
100

Eubacterium nodatum(Ebacterium lentum)
Eubacterium minutum

B or b−−38

Eubacterium tardum

B or b−−45

Eubacterium infirmun

B or b−−38

Eubacterium nodatuma, B+−

41

Eubacterium saphenum

a, b

−

−

45

Eubacterium brachy

ib, ic, iv,−−

39

Eubacterium tardum

100
100
100

Eubacterium minutumClostridium sordellii

100

Eubacterium tenue
Acetobacterium bakii

100

phe-p

Eubacterium limosum
100（1）Data of the type strains.

Eubacterium callanderi
Slakia exigua（2）a: acetate, b: butyrate, ib: isobutyrate, ic: isocaproate, iv:isovalerate, phe-a: phenylacetate, phe-p: phenylpropionate.
Capital letters represent an amount of product equal or morethan10mM, and small letters represent less than10mM.

−73−100

Cryptobacterium curtum