学位研究紹介

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学 位 研 究 紹 介
についても検索した。

慢性炎症性歯周疾患におけるVβ６T細胞レセプター発現T細胞の集積
Clonal accumulation of T cells
bearing Vβ６T-cell receptor in chronic
inflammatory periodontal disease【材料と方法】
被検者は新潟大学歯学部附属病院第二保存科を受診し，インフォームドコンセントの得られた中等度から高度の歯周炎患者10名。
歯周外科処置時に歯肉組織と末梢血を採取し，AGPC

新潟大学医歯学総合研究科摂食環境制御学講座
歯周診断再建学分野

大澤豊，山崎和久

法でRNAを抽出，M-MLV逆転写酵素とrandomhexamerによりcDNAを合成後，Vβ６特異的primerとCβ primerによりTCR β鎖Vβ６-Cβ領域をPCR増幅

Division of Periodontology, Department ofした。PCR産物を２％アガロースゲル電気泳動したのち，Oral Biological Science,ゲルからバンドを切り出しDNAを精製。精製したDNA

Niigata University Graduate school ofをOriginal TA Cloning Kit（Invitrogen）にてサブクロ

Medical and Dental Sciencesーニングを行い，１サンプルにつき20〜30のコロニーをYutaka Ohsawa, Kazuhisa Yamazaki

無作為に選択した。アルカリ-SDS法でplasmid DNAを精製後，ALF express DNA sequencer （Pharmacia

慢性炎症性歯周疾患は一群の歯周病関連細菌により発症することが明らかにされているが，病態の違いや発症Biotech）でCDR３領域の塩基配列を決定し，アミノ酸配列を推定した。

時期，進行のスピードを規定するのは主として宿主の免SSCP解析は，同様に増幅させたPCR産物を１本鎖疫応答と考えられている。T細胞は抗原の認識，それにDNAに熱変性させ，４％アクリルアミドゲルに展開し，伴うサイトカインの産生を通して免疫応答を調節し，歯メンブレンに転写します。その後ビオチン化Cβプロー周炎の成立に深く関与している。Ｔ細胞はT細胞レセプブをハイブリダイズし，Phototope star detection kitにター（TCR）を介して抗原認識を行うが，その多様性て，X線フィルムに感光させた。

はgerm lineのV，（D），J，C領域遺伝子の再構成と再構【結果と考察】成の過程でV-（D）-J間に生ずる塩基の付加や欠失によって生み出される。この領域はcomplementarity
determining region３（CDR３）と呼ばれ，抗原ペプチ

その結果，患者個々における末梢血と歯周炎組織でのドの結合部位と考えられている。CDR３領域が共通の比較では，歯周炎組織で特定のクローンの集積が認めら

Ｔ細胞は一つのクローンに由来するのでこの領域を検索れたのに対して，末梢血ではクローンの集積がほとんどすることでＴ細胞応答の特異性を知ることができる。

認められなかった。またシークエンス解析で集積していわれわれはこれまで，TCRレパトアをRT-PCR法によたクローンの数はSSCP解析で示されたバンドの数とほり検索し，患者の病変部局所に浸潤しているT細胞のぼ一致していた（Table１）。これらのことは歯周炎組TCR β鎖V領域遺伝子は末梢血のそれと比較して偏り織に浸潤しているT細胞は抗原特異的に反応しているこがあり，特にVβ６での上昇とVβ16での減少があることを強く示唆する。さらに集積したクローンのCDR３とを示した。このことはこれらのレセプターを発現して領域のアミノ酸配列において共通のモチーフと考えられいるT細胞クローンが歯周炎の病態と深く関与しているる配列が数人の患者で認められた（Table２）。また歯ことを示唆する 。

周炎組織において集積した群と集積しなかった群ではJβ１）

そこで，本研究では炎症歯肉組織において発現の高か遺伝子の使用頻度に偏りが認められた。これらのことはったVβ６遺伝子を発現しているT細胞に注目し，歯周歯周ポケット内には約300種以上の細菌が棲息している炎患者10名について歯周炎組織と末梢血とのclonalityのことにもかかわらず，比較的限られた種類の抗原とそれ違いを明らかにする目的でSingle strand conformationを認識するT細胞が病態形成に関わっていることを示唆

polymprohysms（SSCP）解析を行い，さらにCDR３領する。

域のアミノ酸配列をシークエンシングにより検索した。
またCDR３領域の３'末端側にあるJβ遺伝子の使用頻度−75−

204

新潟歯学会誌

31（2）
：2001

Gingival tissue

Patient
P1P2P3P4P5P6P7P8P9P10

Number of bands
on SSCP gel
1303001
101

Peripheral blood
Number ofexpanded clones
Number of bands
by sequencing
on SSCP gel
00110011002332001000

Number ofexpanded clones
by sequencing
4436032223Table 1. Comparison of SSCP analysis and nucleotide sequencing for detection of T-cell clones
Patient

Vβ6N-D-N

Jβ family

Frequency

P1CASS
CASS
CASS
CASS

LSSGDSLSGALASGGFYWKTTSGRAF

NQPQHFGDGTRLSILDTQYFGPGTRLTVL
EQFFGPGTRLTVLYNEQFFGPGTRLTVL

Jβ1.5
2.3
2.1
2.17/38
3/38
2/38
2/38

P2CASS
CASS
CASS
CASS

FGGGSHGRGQELGLRSKGFALSGASSYGYTFGSGTRLTVV
EQYFGPGTRLTVTYEQYFGPGTRLTVTYEQYFGPGTRLTVT

1.22.72.7
2.7

4/39
2/392/392/39P3CASS
CASS
CASS

GEAG
RWREG
SNPGIT

DTQYFGPGTRLTVLTGELFFGEGSRLTVLGELFFGEGSRLTVL

2.32.22.22/302/302/30P4CASS
CASS
CASS
CASS
CASS
CASS

LAVGAQG
RTGGTELTGGLAGA
LTGTPKILTSDK

NQPQHFGDGTRLSILDTQYFGPGTRLTVLNTGELFFGEGSRLTVL
EQYFGPGTRLTVTNTGELFFGEGSRLTVL
NYEQYFGPGTRLTVT

1.5
2.3
2.2
2.7
2.2
2.7

6/33
4/33
3/33
2/33
2/33
2/33

P6CASSCASSCASSLEAEYSLSLAGSLISDTQYFGPGTRLTVLGNTIYFGEGSWLTVVYEQYFGPGTRLTVT

2.31.32.72/272/272/27P7CASS
CASS

PRDSD
LAGLV

YEQYFGPGTRLTVTGQYFGAGTRLSVL

2.72.44/30
2/30

P8CASSCASSTGVGLDPGRGTGELFFGEGSRLTVL
QPQHFGDGTRLSIL

2.21.5

7/23
2/23P9CASSCASSQIAGGRGLTWAVDTQYFGPGTRLTVLQETQYFGPGTRLLVL

2.32.54/222/22P10CASS
CASS
CASS

LARSGDRS
LGQN
YRGGY

NQPQHFGDGTRLSILTEAFFGQGTRLTVVTEAFFGQGTRLTVV

1.51.1
1.1

2/23
2/23
2/23

Table 2. Expanded amino acid sequences of T cells bearing Vβ6 gene in periodontitis lesion

periodontitis patients. Clin. Exp. Immunol. 1996

【参考文献】

106：329−335.

１）Yamazaki K, Nakajima T, Hara K. et al. Biased
expression of T cell receptor Vβ genes in−76−