各種の特徴あるウェスタンやELISA用のブロッキング溶液

ウェスタンやELISAではブロッキング剤の選択が重要です。各種ニーズに対応すべくReady-to-Useの各種ブロッキング溶液を用意しました。
ウェスタンで日常的にSkim milkを使われている方、ELISAプレートのブロッキングでコーティング用抗原・抗体の高価な安定化試薬をご利用の方は是非、一度、お試し下さい。

【製品特長】
1．Ready-to-Useのブロッキング溶液
2．ウェスタン用とELISA用それぞれの専用ブロッキング剤を用意
3．ウェスタン用製品ではSkim milkを利用するより感度が上昇*
4．ELISA用製品ではプレコートプレートとして乾燥することで長期保存が可能***:当社保有の抗原・抗体セットによる検討結果 **：抗体や抗原が長期保存に耐えられないものは除きます。

【各製品の概要(ウェスタン用、ELISA用共通）】
c-Block： 100%化学成分のブロッキング液。ウェスタンや抗体検出ELISAでは非常に高い性能を示します。
h-Block： カゼインベースのブロッキング液です。汎用性が高く一般的に利用されるものです。
k-Block： 変性カゼインベースのブロッキング液です。安定した性能を示し、応用範囲が広い製品です。
b-Block： BSAベースのブロッキング液です。万能性が高い製品です。
Trial set： 上記ブロッキング溶液をセットしたトライアルキットです。スクリーニングにご利用下さい。

【製品番号】
領域

製品番号
製品名BCL-BKCW-01
c-Block-w
BCL-BKHW-01
h-Block-w
Western BCL-BKKW-01
k-Block-w
BCL-BKBW-01
b-Block-w
BCL-BKSW-01
Blocking solution Trial set (Western)
BCL-BKCE-01
c-Block-e
BCL-BKHE-01
h-Block-e
ELISA BCL-BKKE-01
k-Block-e
BCL-BKBE-01
b-Block-e
BCL-BKSE-01
Blocking solution Trial set (ELISA)
製品価格につきましては、HPまたはお問い合わせにて、ご確認ください。

容量500 mL
500 mL
500 mL
500 mL
20 mL×4
500 mL
500 mL
500 mL
500 mL
20 mL×4【関連製品】
製品番号

製品名BCL-SBN-02
BCL-125

Signal Booster Neo 250
Signal Booster

容量250 mL
250 mL set

概要
タンパク質フリーの抗原・抗体反応増強試薬
抗原・抗体反応増強試薬の定番

Signal Booster 及び Signal Booster Neoには別容量もあります。

【製造・販売元】【ご注文先】

株式会社ビークル〒606-8305
京都市左京区吉田河原町14－1
TEL: 075-762-5055
FAX: 075-762-3055
website: www.beacle.com
E-mail: information@beacle.com

注文先に販売店名が記載されていない場合は、㈱ビークルに直接ご注文いただくか、普段お使いの販売店にお問い合わせください。

使用例 （ウェスタン用とELISA用のブロッキング剤は使い分けています）
実験例 1. ブロッキング剤の比較
SMMkBSM実験例 2. リン酸化タンパク質検出におけるc-BockとSBNとの併用

GAPDHcBM

SMcB

TB

SB

S-T-NeM

Vimentinop53

EGFR(pY1173)

A431 cell lysate
1次Ab：anti-p53
2次Ab：anti-rabbit-HRP

HuH7 cell lysate
1次Ab：anti-vimentin
2次Ab：anti-mouse-HRP

A431 cell lysate
1次Ab：anti-GAPDH
2次Ab：anti-rabbit-HRP

実験例 3. Ephrin type-A receptor2の検出
skim milk
TBS-T

2

12

skim milk
SBN

12

1

c-Blockでブロッキング
SB-Neo: １・２次抗体をSB-Neoで希釈
TBST: １・２次抗体をTBS-Tで希釈

実験例 4. 抗原検出サンドイッチELISAにおけるブロッキング剤の比較c-Block
SBN

3.0

22.5

Absorbance1skim milk
SB,A&B

M: Marker
SM: 5% Skim MilkkB: k-BlockhB: h-BlockbB: b-BlockcB: c-Block2.0k-Blockc-Blockb-Blockh-Block
Product S

1.00.5

1: MDA-MB231 cell lysate

2: U-251 cell lysate

0.0

京都大学 生命科学研究科
根岸研
加藤裕教先生提供

実験例 5.抗体検出直接法におけるブロッキング剤比較

0102030
Antigen （ng/mL)40

実験例 6. 抗原検出サンドイッチにおける保存安定性

2.5

Half Maximal Abs *

120

2.0
Abs492nm

Capture Ab: anti-preS1 mouse mono-1
Blocking : as indicated(Dried plates were stored for 2 days.)
Antigen: HBsAg L-protein ST type
1st Ab: anti-preS1 mouse mono-2 in SB
２nd Ab: anti-mouse IgG-HRP for 1hr.

1.5

1.5
1.0k-Blockb-Block

0.5

HBsAg抗原測定用サンドイッ
チELISAにおける3ヶ月保存の結果

1008060
200c-Block

-10.0
0200

400

600

800

＊：検量線における最大濃度のにおける半分における吸光度を100倍した値をプロット。エラーバーはCV％値を示す。

b-Blockh-Block

4001000

12Time (month)34

Antibody Unit/mL

Capture Ag: Filaria antigen
Blocking : as indicated (Dried plates were stored for 3 days.)
Antibody sample: infected serum
Detection: MAD reagent (HRP)in SB.

略語の説明 SB: Signal Booster
SBN: Signal Booster Neo
Product,S: 市販ELISAプレート保存剤

ブロッキング剤の選択の目安
ブロッキング剤の選択の目安を記載します。あくまでも一般則を示していますので、ご自身でトライアルキットを利用して確認されることをお勧めします。
ウェスタンブロット： ブロッキング剤としてSkim milkを日常的に使っている研究者がかなり多いと思われます。 Skim milkは万能性が高いですが、シグナルが非常に弱くなる場合が多くあります。以下に選択すべきブロッキング剤を示しています。太字は特にお勧めするブロッキング剤です。
①感度が足りない（多少のバック上昇は容認）： k-Block, c-Block○ 検出する系にタンパク質を混入させたくない場合にはc-Blockを利用下さい。
○ 検出系を問わず感度を上げたい場合には、Signal Booster又はSignal Booster Neoの利用②バックを下げたい（感度は十分高い）：b-Block, h-Block （skim milk）が極めて有効です。
③日常的なブロッキング剤として使いたい：h-Block, b-Block④リン酸化タンパク検出に利用したい：
c-Block, b-BlockELISAの場合： 測定系毎に相性の良いブロッキング剤を示します。何れのブロッキング剤も長期保存が可能な成分を含んでいますので、固相化した抗原や抗体が不安定でない限り、固相化・ブロッキング後に、乾燥、遮光、冷蔵保存の状態で数ヶ月間は保存できます。
抗原検出ELISA： 直接法（プレートにサンプル吸着した抗原を抗体で検出）：
c-Block, b-Block, k-Block
抗体サンドイッチ法（固相化抗体に結合した抗原を抗体で検出）： k-Block, b-Block, h-Block
抗体検出ELISA： 直接法（抗原を固相化し結合した抗体を標識抗体で検出）：
c-Block, b-Block, k-Block
抗原サンドイッチ法（固相化抗原に結合した抗体を抗原で検出）： k-Block, b-Block, h-Block