学位研究紹介

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学 位 研 究 紹 介

ヒト口腔扁平上皮がん細胞株における血管内皮増殖因子 -C および -A の発現レベ
ルは , ヌードマウスの口腔へがん細胞を移植した時のリンパ節転移および血管新生とそれぞれ関連する
Expression level of vascularendothelial growth Factor -C and -A
in cultured human oral squamouscell carcinoma correlates with,respectively, lymphatic metastasis
and angiogenesis when transplanted
into nude mouse oral cavity【材料と方法】
実験には口腔扁平上皮がん細胞株 HSC 2，HSC 3，
HSC 4，OSC 19 および正常口腔扁平上皮細胞を用いた。各細胞とも 70 〜 100％の細胞密度に到達した時点
で total RNA を抽出し，ランダムプライマーと逆転写酵素を用いて cDNA を合成した。VEGFs mRNA の発現は，リアルタイム定量 RT-PCR 法により定量した。
さらに，これら４種類の口腔扁平上皮がん細胞をヌードマウスの舌へ移植し，移植後 21 日目に舌，頸部リンパ節，肺を摘出した。リンパ節転移，遠隔転移（肺転移）および MVD について検索を行い，VEGFs mRNA の発現との関連について統計学的に検討した。

【結果】

新潟大学大学院医歯学総合研究科
組織再建口腔外科学分野

中里隆之（１）口腔扁平上皮がん細胞株および正常口腔扁平上皮細胞における VEGFs mRNA の発現

Division of Reconstructive Surgery for Oral and Maxillofacial
Region, Niigata University Graduate School of Medical and

検討したすべての口腔扁平上皮がん細胞株ならびにDental Sciences

正常口腔扁平上皮細胞において VEGFs mRNA の発現

Takayuki Nakazatoが確認できた（図１）。HSC- ２および OSC-19 における VEGF-A, VEGF-C の 発 現 量 は VEGF-B, VEGF-D の発現量に比べて有意に高く（p ＝ 0.000），また HSC- ２【緒言】

および OSC-19 における VEGF-A, VEGF-C の発現量はHSC- ３および HSC- ４と比べて高かった（表１，２）。

がんの増殖・浸潤・転移には微小血管やリンパ管の増生が不可欠とされている。近年，血管やリンパ管に各細胞とも VEGFs の発現量は，VEGF-C > VEGF-A >VEGF-B > VEGF-D の順であった。

対 す る 種 々 の 増 殖 因 子 が 同 定 さ れ， 中 で も VascularEndothelial Growth Factors（VEGFs : VEGF

A,B,C, D）はその中心的役割を担っていることが解明されつつある。VEGF-A は強力な血管新生因子の一つであり，その発現が予後因子として有用であるとの報告がみられる。また近年，リンパ管新生因子である VEGF-Cの発現とリンパ節転移との相関を認めるとする報告もみられる。しかしながら，口腔扁平上皮がんにおけるVEGFs の発現についてはいまだ不明な点が多い。そこでわれわれは口腔扁平上皮がん細胞株および正常口腔扁平上皮細胞における VEGFs mRNA の発現をリアルタ
イム定量 RT-PCR 法を用いて定量し，さらにそのがん細胞をヌードマウスの舌へ移植してリンパ節転移，遠隔転移（肺転移）および腫瘍内微小血管密度（MVD）と図１の関連性について検討した．

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口 腔 扁 平 上 皮 が ん 細 胞 株 に お け る VEGF family（VEGF A, B, C, D）
mRNA の発現 .Lane.1: HSC 2,Lane.2：HSC-3, Lane.3：HSC 4, Lane.4：OSC 19,Lane.5：Normal epithelium.

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新潟歯学会誌表１36（1）：2006

The Expression of VEGFs at mRNA levels in OSCC cell lines

OSCC cell lines

VEGF-A

VEGF-B

VEGF-CVEGF-D

15276.074

3027.153

18216.515

2.251

HSC- ２（N ＝７）

Mean
SD

3061.183

892.4034010.157

2.528

HSC- ３（N ＝７）

Mean

6809.566

3240.827

8972.123

16.112

SD

3744.434

1050.986

3802.098

9.287

HSC- ４（N ＝６）

Mean

8125.705

3835.441

11093.447

21.857SD2753.539

2210.947

12701.276

10.921

OSC-19（N ＝６）

Mean

11956.277

5837.17120461.623

11.959SD5718.487

3235.023

2823.833

9.719

Mean5340.380

273.056

5827.416

4.388

SD2752.635

153.9127046.738

5.233

normal（N ＝６）

表２

Two-way Analysis of Variance

Source of variation

Sum of squares

Degrees of freedom

Mean square

F value

VEGF

3272102450.9

VEGF × OSCC cell lines

664974231.3

Random error（VEGF）

1164694860.9

8114378948.9

P value

31090700817.0

75.8540.000

1255414519.3

3.854

0.000

（２）VEGFs mRNA の 発 現 と MVD， リ ン パ 節 転 移，遠隔転移との関連
HSC- ２ お よ び OSC-19 に お け る MVD は，HSC- ３と HSC- ４に比べて有意に高かった（p ＝ 0.000）（図２，表３）。さらにリンパ節転移の発現率についても，HSC-

図２２と OSC-19 は HSC- ３と HSC- ４より高く，有意差がみられた（p ＝ 0.007）。肺転移は今回検索したすべてのCD34 免疫組織化学的染色（× 200）。腫瘍内微小血管密度（MVD）は , 光学顕微鏡× 200 の視野におけるCD34 抗体に反応した血管数を 3 視野について数え ,その平均を求めることによって算定した。

マウスに見られなかった。

【考察】

表３

Clinicopathological factors in vivo
MVD

本 研 究 で は，in vitro に お い て VEGF A お よ び
VEGF C の発現が高値を示した細胞株において in vivoにおける MVD ならびにリンパ節転移が高い結果であった。VEGF A は血管新生因子であること，VEGF C はリンパ管新生因子でありリンパ節転移はリンパ管への腫瘍浸潤により引き起こされることを考えると，VEGF A

L.N

Pulmonarymetastasis（％） metastasis（％）
HSC-2

22.95 ± 0.88

64.30OSC-1922.27 ± 1.4266.7

0HSC-310.95 ± 1.06

14.3

0HSC-414.08 ± 1.83

31.30の発現が MVD の増加に影響し VEGF C の発現がリンパ節転移に影響したものと考えられた。また in vitro とin vivo の結果に関連がみられたことから，腫瘍組織における VEGF-A および VEGF C の発現は腫瘍細胞の性格を反映するものと推察された。腫瘍組織におけるVEGF A および VEGF C の発現の検索は，リンパ節転移や予後を予測する有用な情報になりうると考えられた。

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