製品シート

クローニング済みオリゴプール仕様• 収量：プラスミド DNA50 ～ 250 µg、グリセロールストックの追加オプション• 長さ：最大 300 nt*• 完全長の割合：*☐ 100 nt ～：>95%☐ 101 ～ 300 nt：>90%• 納期（ベクター登録期間を除く）：☐ 長さ 100 nt まで：4 ～ 6 週間 *☐ 長さ 300 nt まで：6 ～ 8 週間 *主な利点

以下により、最適化されたクローニングプロセスを実現します• PCR 最適化およびプライマーデザイン• ご自身のベクターを用い、アプリケーションに合わせて最適化されたクローニング戦略• ミスマッチを許さない厳密な NGS 検証
標的遺伝子座の高精度な編集

オリゴプールの品質は、実験を成功に導くための基盤となります。合成時やクローニング時のエラーにより、オリゴプールの品質は容易に変化し、目的の配列に過不足が生じます。
エラーを補うことは可能ですが、費用と時間もかかります。
その代わりに、エラーを完全に回避してはいかがでしょうか？

Twist 社の業界トップの DNA 合成プラットフォームは、比類のない精度と均一性でオリゴプールを生産します。合成以外にも、最適化したクローニングプロセスを提供しており、PCR 増幅条件のテストや適切なポリメラーゼ／プライマーペアの選択、さらにはクローニングワークフローの設計に伴う苦労を大きく軽減できます。お客様に代わって、Twist のエキスパートが合成とクローニングを行いますので、お客様はその分、じっくり実験に取り組めます。

• キメラ率は 10% 未満• 合成からクローニングまで高い均一性の高いプール• 増幅およびクローニング後の QC により、精度および正確性を確保• オプションサービス：サンガーシーケンシング、グリセロール
ストック
スクリーニングに合わせた柔軟なプールサイズ• お客様のアッセイ計画に合わせてプールを設計• 必要に応じてプールサイズを変更可能

面倒な分子生物学的ステップは Twist に任せて、設計から実験まで一直線に進めることができます

当社にオリゴプールのクローニングをご依頼いただくことで、元のプールの均一性と高品質を維持した、信頼性の高いクローニングが実施でき、プールの均一性やドロップアウトに関する NGS 検証データも得られます。

オリゴヌクレオチドの設計

配列の設計・指定

増幅

合成およびクローニング
戦略

You provide your sequences,letにお任せください
Twist do the rest.
Twist
配列をご指定ください。あとはベクターのエンジニアリング

オリゴプールライブラリの構築・増幅

クローニングオリゴプールライブラリをベクターにクローニング

スケールアップ
およびプラスミド調製

品質管理

NGSによる
配列検証

実験へ

実験の開始

* クローニングと増幅を含むクローン済みオリゴプールの納期は、鎖長 100 ヌクレオチドまでが 4 ～ 6 週間、300 ヌクレオチドまでが 6 ～ 8 週間が基本納期となります。クローニング済みオリゴプールの鎖長に関係なく、新規ベクターの登録が必要な場合は、この基本納期に 2 週間追加されます。クローニング済みオリゴプールの長さは最長 300 nt であり、可変領域は最長 250 nt でクローニング用に 50 nt が保存されています。100 nt までのクローニング済みオリゴプールでは、希望の長さのオリゴヌクレオチド配列が 95% 以上得られます。101 ～ 300 nt の長さの場合は、希望の長さのオリゴヌクレオチド配列が90% 以上得られます。

クローニング済みオリゴプール | TWIST BIOSCIENCE

Twist クローニング済みオリゴプールの均一性

すべての鎖長で高い均一性と低エラー率を実現します。
等価線
クローニング済み
オリゴプール
ライブラリ

50

エラーの無いオリゴの割合

3500

500
0050

総オリゴの割合（%）

0100

0.0

1.0

存在比

2.0

1B.
300mer 均一性：デュアルガイド
CRISPR ライブラリ
クローニング済み
2. Cloned
300mer Uniformity:
Dual Guide CRISPR Library
等価線
線形増幅オリゴ
プールライブラリ0050

総オリゴの割合（%）

100

2.08

90/10
パーセンタイル値

1.7

完全長の割合99%

1. Cloned Oligo Pool Library Uniformity
96%1003500
等価線
ドロップアウト0.204%
クローニング済みエラーの無いオリゴの割合

1500

95/5
50
パーセンタイル値

500

90/10
パーセンタイル値

0オリゴプール
21,554
ライブラリ

多様性

2500

5015154

95/5
パーセンタイル値

総読取り率（%）

3500

オリゴ数

総読取り率（%）

1000%

多様性

1500

0.0

1.0

存在比

2.0

図 1：141 mer のクローニング済みオリゴプール（1A）および 300 mer のクローニング済みオリゴプール（1B）について、マッピングされた各バリアントの正規化されたリード数（X 軸）のグラフ。正規化された読取り数が1 に収束している場合、クローニング済みオリゴプールが均一に分布していることを示します。個々のバリアントのリード数をプールの平均リード数で除算しています。

96%

ドロップアウト

2500

オリゴ数

総読取り率（%）

100

完全長の割合
キメラ率

02500

オリゴ数

1. クローニング済みオリゴプールライブラリの均一性
Cloned Oligo Pool Library Uniformity
1A.

4.31

1500

2.92094.65%

50050

総オリゴの割合（%）
3.20%

10000.01.0

存在比

2.0

キー：
 ラーの無いオリゴの割合（%）：デザインしたオリゴプールと完全に一致するシーケンスの割合•エ ロップアウト：オリゴプールで検出されなかった設計済配列の割合•ド 様性：デザインしたオリゴプールにおける固有のシーケンスの総数•多高 GC プロファイルでも均一性を維持

正規化数

図 2：図 1 の 2 つのオリゴプールについての GCプロット。各オリゴの GC 含量（x 軸）および増幅とクローニング後の当該オリゴの正規化された値（y 軸）を示しています。いずれのオリゴプール（2A、2B）も GC 含量が高いものの、GC 含量に伴うオリゴの完全性へのバイアスは限定的で、ドロップアウト率が低く、均一性も高いことが示されています。

正規化数

長さのみならず、高 GC 含量であっても、完全な配列のバリアントおよび完全長の配列が高く、高い均一性を維持することができます。

GC%Figure
Oligo Pools that are comprised
2A.2A
GC 含量のfor141Cloned
mer の配列からなるクローニング
高Uniformityof sequences of 141 nucleotides in length with high GC content.
済みオリゴプールの均一性。
パーセンタイル：2.08、Percentile: 2.08, Dropouts: 1
ドロップアウト：1

TWIST BIOSCIENCE にご依頼いただけば、品質と均一性が標準装備されます。

詳しくは、twistbioscience.com をご覧になるか sales@twistbioscience.com までお知らせください。
これらの製品にはTwistの供給規約と条件（www.twistbioscience.com/supply-terms-and-conditions）に記載の特定の使用制限が適用されます。
DOC-001300 改訂3.0版

GC%Figure
2BGC
Uniformity
for Cloned
Oligo Pools that are comprised
2B. 高
mer の配列からなるクローニング
含量の 300of sequences of 300 nucleotides in length with high GC content.
済みオリゴプールの均一性。パーセンタイル：4.31、Percentile: 4.31, Dropouts: 77
ドロップアウト：77