2020年第4巻4号（4月号）e00100

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原著

改変Ultrafast Papanicolaou染色を用いた
Rapid on site evaluationの紹介
石橋昌幸*1，鈴木明美*2，佐塚まなみ*1，野木森智江美*1
山田浩和*1，新井冨生*2，山本*1東京都健康長寿医療センター呼吸器内科（〒173-0015

寛*1

東京都板橋区栄町35-2），*2同病理診断科

要旨
Rapid on site evaluationは，気管支鏡検査中に実施する迅速細胞診として，有用性が報告されている。本邦で頻用されるrapid on site evaluationの染色法は，Diﬀ-Quik®染色またはUltrafastPapanicolaou染色であるが，検体処理で風乾に時間を要し，判定までの時間が一定しない点が，気管支鏡検査進行上の難点であった。この問題を解決するため，我々は，Ultrafast Papanicolaou染色に改変を加え，風乾を省略した染色法を考案した。本稿では，この改変Ultrafast Papanicolaou染色について紹介する。
症例1は82歳男性。気管支鏡下生検で非小細胞肺癌と診断され，rapid on site evaluationも陽性であった。症例2は74歳女性。経気管支穿刺吸引細胞診で非小細胞肺癌と診断され，rapid on siteevaluationも陽性であった。改変Ultrafast Papanicolaou染色は，多くの気管支鏡検査施設で実施可能な染色法と考えられた。
Keywords：迅速細胞診，オンサイトでの迅速細胞診，ディフ・クイック染色，迅速パパニコロウ染色，改変迅速パパニコロウ染色／immediate cytologic diagnosis，rapid on site evaluation，Diﬀ-Quik®staining，ultrafast Papanicolaou staining，modiﬁed ultrafast Papanicolaou
staining

はじめにた改変Ultrafast Papanicolaou染色（改変UFP

Rapid on site evaluation（ROSE）は，診染色）を考案した。本染色法を運用して気管断精度の向上や穿刺回数の軽減に寄与するこ支鏡検査を行った2症例における，DQ染色やとが複数の検討で報告されている，気管支鏡Pap染色，UFP染色と比較したその染色性の違中に迅速細胞診を実施する検査法である1)〜7)。

いや時間管理における有用性について報告す

ROSEの染色法では，Diff-Quik®（DQ）染色やる。

Ultrafast Papanicolaou（UFP）染色などが広く用いられているが，いずれの染色法も，採改変UFP染色手順

取直後に風乾を要する8)ため，風乾に要する時

試薬：95％エタノール，Rapid Fix®（武藤

間が長い場合，円滑な気管支鏡検査の進行に化学，Cat.20011，Tokyo），Hematoxylin2®

支障を来す可能性があり，我々は，UFP染色（ThermoFisher，Cat.7231JP，MA），Cyto-に改変を加え，検体採取直後の風乾を省略しStain ® （ThermoFisher，Cat.7511JP，

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表1

各染色法の染色手順と所要時間の比較

time(sec)

Diff-Quiktime(sec)UFPmodified UFPtime(sec)

Air dry

20

Air dry

20

95% Ethanol

2FixativeSolution

10

Normal saline

30

Rapid Fix®

5Stain Solution I

20

95% Ethanol

295% Ethanol

2Stain Solution II

20

Alcoholicformalin

10­WaterWater

Air dry

Hematoxylin2®

5Hematoxylin2®

5Watersubsequently
95% Ethanol

5Watersubsequently
95% Ethanol

5Cyto-Stain®

40Cyto-Stain®

4095% Ethanol
and Xylene

595% Ethanol
and Xylene

5Total70WaterTotalMA），キシレン。

117Total64

気管支鏡検査所見：左B10aへRadial EBUS

染色方法（表1）：採取検体をスライドガラを挿入し，withinを試みるもadjacent toでスへ塗抹し，95％エタノールで湿式固定（2あった。同部位でTBBを施行し，withinでな秒）した後，Rapid Fix®をスライドガラスへ数かったことから，#7リンパ節に対しての穿刺滴滴下する（5秒）。続いて，95％エタノール吸引細胞診（transbronchial needleへ 再 度 浸 漬 し （ 2 秒 ） ， 水 洗 して，

aspiration：TBNA）も並行して実施した（図Hematoxylin2®の染色液中へスライドガラス1b，c）。

を数回出入し核染する（5秒）。再度水洗して病理所見：TBB検体のH.E.染色では腫瘍細95％エタノールへ浸漬し（5秒），Cyto-Stain®

胞が充実性胞巣を形成して増殖しており（図の染色液中へスライドガラスを浸漬する（401d），p40染色陽性（図1e）で，CK5／6染秒）。Cyto-Stain®の染色後，95％エタノール色陽性（図1f）であった。Non-small cellとキシレンで脱水および透徹する（5秒）。

carcinoma，favor Squamous cell

当院では，気管支鏡検査室内で水洗も含め，すべての染色工程を完結している。

carcinomaと診断した。ブラシ擦過細胞診では，DQ染色で大小不同の核を有する大型の細胞集塊を認めたが（図2a），核と胞体の判

症例1（図1，2）

別やクロマチンなどの核内構造の観察は困難

症例：82歳，男性。

であった。一方，Pap染色では，N／C比が高

現病歴：糖尿病で通院中に，左下葉結節をく，核内部のクロマチンが粗造で核の大小不指摘され，当科紹介となった（図1a）。

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同も高度な類円型の核を有する異型細胞の集https://kokyurinsho.com/pathology/e00100/

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図1 症例1の臨床画像所見と病理組織所見
a .FDG-PET検査で左下葉と縦隔リンパ節に集積を認める。b. 左B10aへ挿入したRadial EBUS所見は “adjacent to”であった。c. #7リンパ節に対するEBUS-TBNA。d. 経気管支生検検体のH.E.染色，400倍。e. p40免疫染色，400倍。f. cytokeratin5／6免疫染色，400倍。

塊が認められた（図2b）。これに対し，改変症例2（図3）

UFP染色ではPap染色と同様の異型細胞が認

症例：74歳，女性。

められ，その核は明瞭で，核内構造の弁別も

現病歴：咳嗽と血痰で，当院へ緊急入院。

Pap染色と同様に可能であった（図2c）。

入院後肺腫瘤を指摘され，当科紹介となった

TBNA検体の細胞診所見も，ブラシ擦過細胞（図3a）。

診と同様であった（図2d：DQ染色，図2e：Pap染色，図2f：改変UFP染色）。
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気管支鏡検査所見：右上葉原発巣と一塊になった#2Rリンパ節に対して，TBNAを施行
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図2 症例1の細胞診所見
a. 経気管支生検検体のDQ染色，600倍，b. Pap染色，600倍，c. Modiﬁed UFP染色，600倍，d. TBNA検体のDQ染色， 600倍，e. Pap染色，600倍，f. Modiﬁed UFP染色，600倍。

した（図3b）。
病理所見：Pap染色，UFP染色のいずれに考察おいても，N／C比が高く，胞体の大小不同

ROSEは，気管支鏡検査中にブラシ擦過検と核の大小不同共に高度で，核内部のクロマ体やTBNA検体の塗抹，TBB検体の捺印を用チンも粗造な類円型の核を有する異型細胞がいて，短時間のうちに採取検体内の異型細胞多数認められた（図3c：Pap染色，図3d：の有無やTBNA検体の適正を評価する検査法

UFP染色）。一方，改変UFP染色においてもである。

同様の所見で，核内構造の弁別も可能であっ染色について，検査技師でなく医師が実施た（図3e：改変UFP染色）。TBNAコア検体する施設もあり，簡便で試薬管理が比較的容を用いたH.E.染色では，腫瘍細胞が充実性胞易なDQ染色は，ROSEの染色法としても広く巣を形成して増殖しており（図3f），TTF-1

普及している4)。しかしながら，Pap染色や染色陽性（図3g），Napsin A染色陽性（図UFP染色と比較して，核と胞体の判別やクロ3h）であった。Non-smallcell

マチンなどの核内構造の観察を行うには染色carcinoma， favor adenocarcinomaと診断性が不十分であり，採取検体内の異型細胞のした。

有無を評価する場合，細胞診断士であってもJpn Open J Respir Med 2020 Vol. 4 No. 4 article No. e00100

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図3 症例2の臨床画像所見と病理所見
a. FDG-PET検査で右上葉と#2Rリンパ節に集積を認める，b. #2Rリンパ節に対するEBUS-TBNA，c. TBNA検体のPap染色， 600倍，d. UFP染色，600倍，e. Modiﬁed UFP染色，600倍，f. H.E.染色，600倍，g. TTF-1免疫染色，600倍，h. Napsin A免疫染色，600倍。

その評価はときに難しく，一般の医師が判定性については，Bandohらが検討し報告してする際には判断を誤る可能性もある。

いる1)。この染色法はPap染色と同様に核内構UFP染色は，Yangらが乾燥標本でも迅速簡造の観察が可能で，気管支線毛上皮などの刷便にPap染色と同様の透明感を得られる染色

子縁も同定でき，異型細胞と反応性上皮細胞として考案した方法で8)，ROSEとしての有用の鑑別も可能であるが，DQ染色と比較してJpn Open J Respir Med 2020 Vol. 4 No. 4 article No. e00100

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使用する試薬の種類が多く，長い染色時間を間管理が極めて容易である。また，UFP染色要する（表1）。しかし，噴霧麻酔や鎮静剤と比較すると必要な試薬数も少なく，限られの作用時間を考慮すれば，可能な限り検査時た検査室内でも実行可能である。UFP染色が間は短縮すべきであり，時間管理を要する気

改変UFP染色に勝る点を挙げるとすれば，検管支鏡検査において，これは克服すべき課題

体塗抹処理が不適切であっても，UFP染色でと考えられる。

あれば，乾燥固定と再水和処理によって，胞DQ染色とUFP染色は，いずれも採取後の体の良好な染色性を得られることが挙げられ検体を乾燥固定するという点が共通している。しかしながら，改変UFP染色においてる。乾燥固定には一般に風乾が用いられるも，薄い塗抹を心がけることでこれは実現可が，これに要する時間はまちまちで，1分以能である。そして薄い塗抹はPapanicolaou染上を要することもある。

色用の検体処理においても重要な手技である

我々はこの採取検体の風乾に着目し，これため，通常の気管支鏡検査における検体処理を省略して95％エタノールによる湿式固定とに習熟している臨床医ならば，改変UFP染色する改変UFP染色を考案した。この染色法でにおいても染色性の問題は生じない9)。

は，固定時間が各回約2秒に大幅に短縮・統

もっとも，本報告は改変UFP染色をROSE一され，これにより風乾を要する染色法ではに用いた2例の報告に過ぎず，本染色法の診断困難であった気管支鏡検査の時間管理が極め精度と所要時間，およびその安全性について容易になった。症例1では，ブラシ擦過検て，前向きに検証することが望ましく，今後体・TBNA検体ともに，DQ染色よりも異型細の検討課題と考えられた。

胞の特徴が捉えやすい染色法であることが示

本邦における気管支鏡検査の現場では，医唆され，症例2では，UFP染色と同等の染色師がROSEを実施している施設も多い。その性であることが示唆された。表1に示すとおため，Pap染色やUFP染色と同等の染色性がり，改変UFP染色はDQ染色と比較して染色得られ，試薬の種類が少なく，湿式固定のた工程が多いが，これは水洗と95％エタノールめ時間管理が容易な，改変UFP染色によるへの浸漬が複数回あるためであり，また，一ROSEの導入は，気管支鏡検査における質の見改変UFP染色の方がDQ染色より所要時間向上に貢献し得ると考えられた。

が長いように見えるが，DQ染色の所要時間50秒には，風乾の工程が含まれておらず，こ結語

れに風乾に要する時間を加えれば，改変UFP

改変Ultrafast Papanicolaou染色は，染色の64秒よりも長時間におよぶことは明ら

Papanicolaou染色やUltrafast Papanicolaou

かであり，また所要時間も一定しない。一染色と同様に腫瘍細胞を評価することが可能

方，改変UFP染色は風乾工程がないため，染で，気管支鏡検査の時間管理が容易で，多く色所要時間が短縮され，しかもそれはおおむの施設で気管支鏡検査時に実行可能な，染色ね一定であり，気管支鏡検査全体における時法と考えられた。

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COI開示：本論文に関連する開示すべき利益相反関係にある企業等はない。

modified Ultrafast Papanicolaou staining issuitable for rapid on-site evaluation for
diagnostic bronchoscopy.

Abstract

文献

Introducing Rapid On site Evaluation byusing Modified Ultrafast Papanicolaou
Staining
Masayuki Ishibashi*1， Akemi Suzuki*2
Manami Sazuka*1， Chiemi Nogimori*1
Hirokazu Yamada*1， Tomio Arai*2
Hiroshi Yamamoto*1*1 Departmentof Respiratory Medicine, Tokyo
Metropolitan Geriatric Hospital, Tokyo*2Department of Pathology, Tokyo Metropolitan
Geriatric Hospital, Tokyo

Background: Rapid on-site evaluation ofcytologic smears plays an important role indiagnostic bronchoscopy. Although Diff-Quik®
staining and Ultrafast Papanicolaou staining arewidely used in Japan for rapid on-site
evaluation, they require a time-consuming “airdrying” step that can be an obstacle to smoothbronchoscopy. We developed a new staining
method that does not require air drying bymodifying the Ultrafast Papanicolaou staining
protocol. Here, we introduce our “modifiedUltrafast Papanicolaou staining” method.
Case: Case 1. An 82-year-old man wasdiagnosed with non-small cell lung carcinoma,
favor squamous cell carcinoma, bytransbronchial biopsy. The rapid on-site
evaluation result using our modified method
was positive. Case 2. A 74-year-old woman wasdiagnosed with non-small-cell lung carcinoma,
favor adenocarcinoma, by transbronchial needleaspiration. The rapid on-site evaluation result
using our method was positive.

1) Bandoh S, et al. Diagnostic accuracy andsafety of ﬂexible bronchoscopy withmultiplanar reconstruction images andultrafast Papanicolaou stain: evaluating
solitary pulmonary nodules. Chest. 2003; 124:
1985-92.
2) Bando K, et al. Utility of immediate cytologic
diagnosis of lung masses using ultrafast
Papanicolaou stain. Lung Cancer. 2011; 72:
172-6.
3) B o n i f a z i M , e t a l . T h e r o l e o f t h epulmonologist in rapid on-site cytologic
evaluation of transbronchial needle aspiration:a prospective study. Chest. 2014; 145: 60-5.
4) Hopkins E, et al. Accuracy of rapid on-site
evaluation of endobronchial ultrasound guided
transbronchial needle aspirates by respiratory
registrars in training and medical scientists
compared to specialist pathologists-an initial
pilot study. J Thorac Dis. 2018; 10: 3922-7.
5) Oki M, et al. Rapid on-site cytologic evaluation
during endobronchial ultrasound-guided
transbronchial needle aspiration for
diagnosing lung cancer: a randomized study.
Respiration; international review of thoracic
diseases. 2013; 85: 486-92.
6) Sehgal IS, et al. Impact of Rapid On-Site
Cytological Evaluation (ROSE) on thediagnostic yield of transbronchial needle
aspiration during mediastinal lymph node
sampling: systematic review and metaanalysis. Chest. 2018; 153: 929-38.
7) Uchida J, et al. Improved diagnostic eﬃcacy
by rapid cytology test in ﬂuoroscopy-guided
bronchoscopy. J Thorac Oncol. 2006; 1:314-8.
8) Yang GC, et al. Ultrafast Papanicolaou stain.
An alternative preparation for ﬁne needle
aspiration cytology. Acta Cytol. 1995; 39:55-60.
9) 児島宏哉, ほか. 気管支鏡検査ROSEにおけるUltrafast Papanicolaou染色検討. 日臨細胞会誌.
2019; 58: 288.

Conclusion: These cases support thatJpn Open J Respir Med 2020 Vol. 4 No. 4 article No. e00100

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受付日：2020年3月10日
掲載日：2020年4月28日© Masayuki Ishibashi, et al. 本論文はクリエイティ
ブ・コモンズ・ライセンスに準拠し，CC-BY-SA（原作者のクレジット[氏名，作品タイトルなど]を表示し，改変した場合には元の作品と同じCCライセンス[このライセンス]で公開することを主な条件に，営利目的での二次利用も許可されるCCライセンス）のライセンシングとなります。詳しくはクリエイティブ・コモンズ・ジャパンのサイト（https://creativecommons.jp/）をご覧ください。

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