user manual
vertical electrophoresis

Hoefer SE 600 Ruby
Standard Dual Cooled Vertical Unit
簡易操作マニュアルSE 600 Ruby

このマニュアルは、SE 600 Ruby電気泳動装置のものです。
また、詳細な取扱いについては英文マニュアルをご参照ください。
（本文中、読み易いように英文マニュアルと異なる名称を使⽤している箇所があります）
ご不明な点等がございましたら下記までお問い合わせくださいますようお願いいたします。

製品内容、使⽤方法等につきましては…

バイオダイレクトライン︓03-5331-9336
までご連絡ください。

2

SE 600 Ruby

A. 開梱
梱包を解きましたら全てのパーツがそろっていることをパッキングリストに照らし合わせてご確認ください。

B. 各部名称
電極コード（2）リッド
インターロックピン

陰電極付
上部バッファーチャンバー

陽電極付
ヒートエクスチェンジャー

カム 差し込み穴
クランプ

カム差し込み穴

キャスティング台
カム 差し込み穴

下部バッファーチャンバー
カム差し込み穴※各パーツのコード番号につきましては14〜15ページ、“パーツ、アクセサリー一覧”をご覧ください。

3

SE 600 Ruby

C. ゲルカセット組立て
1. キャスティング台の中央に水準器をおき、レベリングフィートを調節して水平をとります。
2. 図1のようにガラスプレートとスペーサーを重ね、両脇をクランプではさみます。（以下、このセットをゲルカセットと呼びます）（図1）

図13. ゲルカセットをテーブルの上へたて、底辺をそろえます。そろえた後、クランプのスクリューを均等にしっかり締めます。スペーサーがずれてしまう時、スペーサーメイトを使用するとずれません。
底辺がそろっていないと液もれしますのでしっかりそろえてください。また、ガラスプレートのエッジに傷があるときも液漏れしますので傷のないことを確認してください。

4. キャスティング台にガスケットをシリコンゴム面（固く、光沢のある面）を上にして敷きます。
5. キャスティング台にゲルカセットのクランプスクリューが外側に向くようにして設置します。
6. 柄の⻑い⽅を下にむけてカムをキャスティング台の両側に差込みます。
7. カムを互い違いに180度回転させ、ガスケットにゲルカセットを密着させます。回転後は、カムの柄の⻑い⽅が真上に向きます。（図2）

図24

SE 600 Ruby

D. ゲル作成
1. ゲル溶液を準備します。
ゲル厚、ゲル枚数に応じゲル溶液量を調節してください。

SE 600 Ruby 必要なゲル溶液量（2枚分）
ゲル厚

分離ゲル

濃縮ゲル

0.75 mm

30 ml

10 ml

1.0 mm

45 ml

15 ml

1.5 mm

60 ml

20 ml

※ バッファー組成、ゲル溶液の作成については9〜10ページをご覧ください。

2. 10%過硫酸アンモニウム、TEMEDを加えた分離ゲル溶液をゲルカセットに流し込みます。
液漏れをおこしてしまう場合はゲルシールをゲルカセット底部コーナーのみにうすく塗布してください。

3. n-ブタノール飽和溶液を静かに重層し、1時間以上、重合します（図3）。
4. 濃縮ゲルバッファーで分離ゲル面を洗います。
5. 10%過硫酸アンモニウム、TEMEDを加えた濃縮ゲル溶液を分離ゲルに重層します。
6. 気泡をかまないよう、静かにコームを差し込みます（図4）。

※ コームは多数取りそろえております。15ページをご参照ください。

7. 1時間以上重合します。

図3

図45

SE 600 Ruby

E. 泳動槽の準備
1. 下部バッファーチャンバーにスターラーバーを入れ、陽電極付ヒートエクスチェンジャーをセットします。

陽電極付ヒートエクスチェンジャー

冷却させない場合も陽電極付ヒートエクスチェンジャーの底部に陽極側電極線がはってあるので必ずセットしてください。

2. スターラーテーブル上に下部バッファーチャンバーをおきます。

3. 下部バッファーチャンバーに泳動バッファーを4リットル入れ、攪拌を始めます。

4. 陽電極付ヒートエクスチェンジャーと恒温循環装置をつなぎ、冷却を始めます。グラフ 1 から恒温循環装置の温度を設定します。

下部バッファー
チャンバー

アルコール類は恒温循環装置の冷媒に⽤いないでください。
図5

グラフ1. 恒温循環装置の温度の設定⽅法
例︓
泳動条件︓200 V, 0.05 A(50 mA)
1. 実際の電⼒（W）値から、グラフ1のbath setting correction（℃）
値を求めます。実際の電⼒値を表⽰しないパワーサプライの場合は下記の計算で電⼒値（W）を算出します。
W=V×A
10W = 200 V × 0.05 A
2. 泳動を⾏う時の設定温度から、グラフ1で求めた補正値を引いた数値を恒温循環装置に設定します。
10 Wの場合、グラフ1からbath setting correction（℃）は-1 ℃
23 ℃で泳動したい場合は、23℃-1=22 ℃を設定します。
4 ℃で泳動したい場合は、4℃-1=3 ℃を設定します。

F. サンプル添加
1. ウェルをくずさないようにコームを外します。
2. 泳動バッファーでウェルを洗い、ゲルカセットごと逆さにして、ウェル中のバッファーを除きます。
ゲルカセットはカムをキャスティング台から外さないと外れません。

3. ウェルに泳動バッファーを満たします。

6

SE 600 Ruby

4. サンプルを添加します（図6）。
ウェル深1 mmあたりのサンプル量（μl）
ウェル数

ゲル厚（mm）

0.75

1.0

1.5

106.2

8.3

12.4

125.8

7.7

11.5

15

4.3

5.7

8.6

20

3.1

4.1

6.2

28

2.1

2.7

4.1

1/1 (ref/prep)

4/90

6/121

9/183

1/2 (ref/prep)

4/85

6/112

9/171

図6

サンプルを添加しないウェルにはサンプルバッファーをサンプルと同量添加してください。
添加しないとレーンがゆがむことがあります。

G. 泳動
1. 上部バッファーチャンバー底部にゲルカセットガスケットをはめます。

2. キャスティング台上のゲルカセットの上に陰電極付上部バッファーチャンバーをおきます（図7）。

1枚しか泳動しない時はキャスティング台の一方にクランプをはめたバッファーダム（アクリル板）をおきます。

3. カムをキャスティング台脇より取り外し、上部バッファーチャンバー両脇の穴へ差し込み、180度回転させます（図8）。

カムの柄の⻑い方が真下を向くように回転してください。

4. 上部バッファーチャンバーに泳動バッファーを300 ml注ぎ

図7ます。

サンプルを乱さないようにチャンバーのコーナーから静かに注ぎます。上部バッファーの総量は450〜600 mlです。

5. バッファー漏れがないか確認します。
漏れがあった場合は、ピペット等で上部バッファーチャンバーの泳動バッファーを除き、もう一度上部バッファーチャンバーをセットしなおしてください。
図87

SE 600 Ruby

6. 下部バッファーの攪拌を止め、上部バッファーチャンバーごとゲルカセットを下部バッファーチャンバーにセットします。

上部、下部電極差込口を同じ側にそろえないとリッドがセットできません。

7. 上部、下部バッファーチャンバーに残りのバッファーを入れます。
8. 再度攪拌をはじめます。激しく攪拌してゲル下端にトラップされている気泡を除き、その後穏やかに攪拌してください。泳動中攪拌しつづけます。

9. リッドをかぶせ、電極コードをパワーサプライに接続します。
10.泳動をはじめます。
泳動条件（ゲル1枚あたり）
ゲル厚

設定電流値

0.75 mm12.5 mA1.00 mm

18.0 mA

1.50 mm25.0 mA

泳動は電流制御で⾏います。

H. 泳動終了
1. 泳動終了後（⾊素がゲル下端に到着した時点）、通電をとめ、バッファーの攪拌と恒温循環装置を止めます。

2. リッドをあけ、ゲルカセットごと陰電極付上部バッファーチャンバーを外し、上部バッファーを捨てます。

3. キャスティング台に陰電極付上部バッファーチャンバーごとゲルカセットをおき、カムを外して上部バッファーチャンバーを外します。

4. ゲルカセットよりクランプ、スペーサーを取外して、ゲルを傷つけないようにガラスプレートよりゲルをはがします。

ワンダーウェッジ（14ページ 図中M）を使うと簡単にはがせます。

5. ゲルを染⾊バットにうつし、染⾊をはじめます。
6. 各パーツはうすめた中性洗剤で洗浄後、蒸留水でよくすすいだ後、乾燥させ、保管してください。

8

SE 600 Ruby

I. 各種溶液の調製
Laemmli 不連続バッファーシステム
ここで使用する試薬につきましては12ページ“試薬リスト”をご覧ください。
ゲル溶液
分離ゲル

濃縮ゲル

X ml

X ml

4×分離ゲルバッファー（溶液2）2.50 ml―

4×濃縮ゲルバッファー（溶液3）―1.25 ml

10%SDS（溶液4）0.10 ml

0.05 ml

D.W.（蒸留水）

Y ml

Y ml

10%APS（溶液5）

50 μl

25 μl

TEMED

5 μl

2 μl

総溶液量

10 ml

5 ml

モノマーストック溶液（30%T 2.7%C）（溶液1）

X ml︓ アクリルアミド濃度に応じて調整してください。たとえば、ゲル濃度15 %の分離ゲルを作製する場合は、モノマーストック溶液を2倍希釈するのでX mlは、5 mlとし、他の溶液を加え、総溶液量10 mlにします。
Y ml︓ 溶液1（30%T 2.7%C）の量に応じて調整し、総溶液量にします。
作成するゲル溶液量はゲルの枚数、ゲル厚に応じて調節してください。
10%APS、TEMEDはゲルカセットに流しこむ直前に加えてよく混ぜてください。

溶液1モノマーストック溶液（30%T 2.7%C）＊
Acrylamide

60.0 g

N,N'-Methylene-bisacrylamide
D.W.で200 mlに調整

1.6 g＊ 作成後、遮光・4℃下で3ヶ月保存可能

溶液24×分離ゲルバッファー (1.5M Tris-Cl, pH8.8)
Tris
36.3 g
150 mlのD.W.に溶解し、HCIでpH8.8に調整後、D.W.で200 mlに調整

溶液34×濃縮ゲルバッファー (0.5M Tris-Cl, pH6.8)
Tris
3.0 g
40 mlのD.W.に溶解し、HCIでpH6.8に調整後、D.W.で50 mlに調整

溶液410% SDS
Sodium Dodecylsulphate (SDS)
D.W.で50 mlに調整

溶液510%過硫酸アンモニウム（APS）
Ammonium Persulphate（過硫酸アンモニウム）
D.W.で1 mlに調整

⽤時調製

5.0 g0.1 g

水を加えた時にパチパチと音がしない場合、新しいAPSを⽤いてください。

9

SE 600 Ruby
溶液6 n‐ブタノール飽和水溶液
イソブチルアルコールとD.W.を1︓1の比で混合し、よく攪拌します。上層、下層にわかれたところで下層の溶液を捨てます。上層の溶液をさらに攪拌して下層の溶液を捨てます。
この操作を数回繰り返し、上層を用います。

溶液7 サンプルSDS処理バッファー
1. 2×SDS処理バッファー＊1（0.125M Tris-Cl、pH6.8、4%SDS、20%グリセロール、10% 2-メルカプトエタノール）
4×濃縮ゲルバッファー（溶液3）10%Sodium Dodecylsulphate (SDS)（溶液4）PlusOne Glycerol
PlusOne Mercaptoethanol＊2
PlusOne Bromophenol Blue
D.W.で10 mlに調整

2.5 ml4.0 ml2.0 ml0.2 ml0.2 mg＊1 作成後、1 mlずつに分注し、－40℃〜－80℃で保存可能です。
＊2 2-メルカプトエタノールの代わりに0.13 gのジチオスレイトール（DTT）でも結構です。

ほとんどの場合、サンプル溶液に等量以上の2×SDS処理バッファーを加え、よく混合し、95℃、3〜4分ボイルしたものをサンプルとします。

2. 6×SDS処理バッファー＊（0.35M Tris-Cl、pH6.8、10%SDS、30%グリセロール、9.3%DTT）
4×濃縮ゲルバッファー
Sodium Dodecylsulphate（SDS）
GlycerolDithiothreitol (DTT)
Bromophenol Blue
D.W.で10 mlに調整

7.0 ml
1.0 ml3 ml
0.93 g
1.2 mg＊ 1 mlずつに分注し、－70℃以下で保存可能です。

サンプル量をより多くしたい場合に⽤います。
サンプル溶液5容量に対し、6SDS処理バッファーを1容量加えてよく混合し、95℃、3〜4分ボイルしたものをサンプルとします。

溶液8泳動バッファー (0.25M Tris-Cl、pH8.3、0.192Mグリシン、0.1%SDS)
TrisGlycine
Sodium Dodecylsulphate (SDS)
D.W.で4.0 Rに調整

pH調整は必要ありません。

1012.1 g
57.6 g
4.0 g

SE 600 Ruby
染色
● CBB染色＜染⾊液＞（0.1% CBB in 脱⾊液）

Coomassie Tablets, PhastGel Blue R-350 1錠に対しD.W.80 mlを加えて約10分強く攪拌します。
メタノール120 mlを加えて3分間攪拌した後ろ過し、これをストック溶液＊とします。
使用前にストック溶液容量に対し、20%酢酸を1容量混合します。
＊ このストック溶液は4℃で3週間保存可能です。

＜脱⾊液＞（30%メタノール、10％酢酸）
メタノール

300 ml100 ml600 ml酢酸

D.W.
よく混合します。

● 銀染色は、Silver Staining Kit, Protein中の使⽤説明書をご覧ください。

LMW Marker Kit（SDS-PAGE⽤低分⼦量マーカー）の調製法
LMW Marker Kit
タンパク質サブユニット分⼦量ホスホリラーゼb

97,000アルブミン

66,000

オブアルブミン

45,000

カーボニックアンヒドラーゼB

30,000トリプシンインヒビター

20,100α‐ラクアルブン

14,400

1バイアルに1×SDS処理バッファーを500 μl加えて溶解します。
1.5 mlチューブにマーカー溶液を移し、95℃、3〜4分ボイルします。
CBB染⾊の場合、1ウェルあたり8〜15 μl添加してください。
銀染⾊の場合、1×SDS処理バッファー＊1または1×濃縮ゲルバッファーでさらに50倍希釈したものを1ウェルあたり10〜15 μl＊2添加してください。
＊1 還元剤（2‐メルカプトエタノール、DTTなど）をぬいたものも使用可能です。
＊2 銀染⾊法により使用する試薬に感度差がありますので添加量を加減してください。

溶解、ボイル処理したマーカーは分注し、冷凍保存できます（3ヶ月間）。
添加量はゲル厚、泳動距離により加減してください。

11SE 600 Ruby

J. 試薬リスト
アクリルアミドゲル作製⽤試薬PlusOneシリーズ
製品名

包装

コード番号

250 g

17-1302-01

1 kg
1ℓ

17-1302-02
17-1303-01

250 g
1 kg
1ℓ
41.5 g17-1300-01
17-1300-02
17-1301-01
17-1309-01

1ℓ

17-1310-01

N,N'-Methylene-bisacrylamide
N,N'-Methylene-bisacrylamide
N,N'-Methylene-bisacrylamide 2% Solution

25 g
100 g
1ℓ

17-1304-01
17-1304-02
17-1306-01

Ammonium Persulphate
TEMED

25 g
25 ml

17-1311-01
17-1312-01

Acrylamide PAGE
Acrylamide PAGE
Acrylamide PAGE 40% Solution
Acrylamide IEF
Acrylamide IEF
Acrylamide IEF 40% Solution
ReadyMix IEF To make〜120 ml 30% T, 5% C
ReadySol IEF 40% T, 5% C

バッファー／添加剤／サンプル調製⽤試薬PlusOneシリーズ
製品名

包装

コード番号

Tris

500 g

17-1321-01

Boric Acid
EDTA, disodium salt
Glycine
Urea

500 g
100 g
500 g
500 g

17-1322-01
17-1324-01
17-1323-01
17-1319-01

添加剤／サンプル調製⽤試薬PlusOneシリーズ
製品名

包装

コード番号

Dithiothreitol（DTT）
Dithiothreitol（DTT）
Mercaptoethanol（2-ME）

1g

17-1318-01

5g
25 ml

17-1318-02
17-1317-01

Glycerol, 87%1ℓ17-1325-01

界面活性剤／着色剤PlusOneシリーズ
製品名

包装

コード番号

Sodium Dodecylsulphate（SDS）

100 g

17-1313-01

Bromophenol Blue

10 g

17-1329-01

タンパク質、ペプチド電気泳動⽤分⼦量マーカー
製品名

12

Peptide Marker Kit（2,512-16,949）

1 vial,LMW Marker Kit（53,000-220,000）
HMW SDS Marker Kit（14,400-97,000）
HMW Native Marker Kit（66,000-669,000）

10 vials,
10 vials,
10 vials,

包装

コード番号

2 mg/vial
575 μg/vial

80-1129-83

175 μg/vial
250 μg/vial

17-0446-01
17-0615-01
17-0445-01

SE 600 Ruby
LMW︓
HMW SDS︓
HMW Native︓

LMW MarkerKitを15%T、2.7% C
SDS-PAGEで泳動した結果。
HMW SDS Marker Kitを7.5% T、2.7% C SDS-PAGEで泳動した結果。
HMW Native Marker Kitを5〜12.5%
ポリアクリルアミドグラジエントゲ
ルで泳動した結果。
すべてのゲルは、PhastGel Blue Rで染⾊し、図中の数字は分⼦量（kDa）を表しています。

有色分⼦量マーカー
製品名

包装

コード番号

Full-Range Rainbow Molecular Weight Markers

500 μl

RPN800High-Range Rainbow Molecular Weight Markers
Low-Range Rainbow Molecular Weight Markers

250 μl250 μl

RPN756
RPN755Multiphor II 用プレキャストゲルExcelGel SDS
gradient 8-18を用いてSDS-PAGEを⾏った結果。
注 ︓ こ の ゲ ル 濃 度 で 泳 動 し た 場 合 、 Low-Range
Rainbow Moleculer Weight Makersでは検出されないバンド（2.5 kDa）があります。

蛍光染色⽤タンパク質電気泳動マーカー
製品名

Protein Molecular Weight Standards(6.5〜205 kDa)

包装

コード番号

400 μl

RPN5800

包装

コード番号

染色
製品名

Silver Staining Kit, Protein
Coomassie Tablets, PhastGel Blue R-350

10回分 (250 ml/回)
40 錠

17-1150-01
17-0518-01

蛍光染色
製品名

SYPRO Orange Protein Gel Stain
SYPRO Orange Protein Gel Stain
SYPRO Red Protein Gel Stain
SYPRO Red Protein Gel Stain
SYPRO Tangerine Protein Gel Stain
SYPRO Protein Gel Stain Kit＊

包装

コード番号

500 μl
10×50 μl
500 μl
10×50 μl
500 μl
1 kit

RPN5801
RPN5802
RPN5803
RPN5804
RPN5805
RPN5811＊ SYPRO Orange、Red、Tangerine Protein Gel Stain 50 μl 各1本、SYPRO Protein Gel Stain Photographic Filter 1枚13

SE 600 Ruby

K. パーツ、アクセサリー一覧
A. Lid assembly for SE 600 Ruby, 80-6476-34
B. Lower buffer chamber for SE 600 Ruby, 80-6476-15
C. Upper buffer chamber, 80-6176-33
D. Gel seal, 80-6421-43
E. Comb, various
F. Cams, 80-6174-24
G. Spacer, various
H. Clamp 16 cm, 80-6173-29
I. Glass plate 18×16 cm, 80-6178-99
J. Casting stand, 80-6175-00
K. Heat exchanger, 80-6183-74
L. Level, 80-6194-19
M. Wonder Wedge separator, 80-6127-88
N. Spacer-Mate, 80-6181-65
O. Buffer dam, 80-6175-19
P. Laminated rubber gasket, 80-6174-62
Q. Slotted rubber gasket, 80-6174-43
SE 600 Ruby Standard Vertical Unit Components

製品名

包装

コード番号

ガラスプレート 18×8 cm

280-6186-59

デバイダーガラスプレート 18×8 cm

180-6186-78

280-6178-99

低蛍光ガラスプレート 18×16 cm

280-6442-14

デバイダーガラスプレート 18×16 cm

180-6179-18

ガラスプレート 18×16 cm

図中記号

I

ワンダーウェッジ

M

180-6127-88

上部バッファーシール

Q

280-6174-43

ラミネートシリコンラバーガスケット

P

280-6174-62

バッファーダム

O180-6175-19

上部バッファーチャンバー

C180-6176-33

ケーブル付リッドA180-6476-34

180-6177-09

高電圧セーフティーリードセット
下部バッファーチャンバー

B180-6476-15

ヒートエクスチェンジャー

K

180-6183-74

ゲルシール

D

180-6421-43

水準器

L

180-6194-19

スペーサーメイトN

380-6181-65

クランプ （16 cm）

H

280-6173-29

クランプ （8 cm）

280-6187-35

クランプ＆カムキット

180-6173-67

カム

480-6174-05

480-6174-24

1280-6173-48

カムロング
クランプスクリュー

14F

SE 600 Ruby
スペーサー
製品名

包装

コード番号

0.75 mm厚、2 cm幅スペーサー（8 cm⻑）

280-6187-73

1.00 mm厚、2 cm幅スペーサー（8 cm⻑）

280-6187-92

1.50 mm厚、2 cm幅スペーサー（8 cm⻑）

280-6188-110.75 mm厚、2 cm幅スペーサー（16 cm⻑）

280-6180-51

1.00 mm厚、2 cm幅スペーサー（16 cm⻑）

280-6180-70

1.50 mm厚、2 cm幅スペーサー（16 cm⻑）

280-6180-89

1.00 mm厚、1 cm幅スペーサー（16 cm⻑）

280-6179-94

1.50 mm厚、1 cm幅スペーサー（16 cm⻑）

280-6180-13

コーム（包装︓1枚）
ウェル深1mmあたりにウェル数

ウェル幅

ウェル深コーム厚108.3 mm

25 mm

0.75 mm1010151515202020282828
1prep/1ref＊1
1prep/1ref＊1
1prep/1ref ＊1
1prep/2ref ＊1
1prep/2ref＊1
1prep/2ref ＊1

8.3 mm
8.3 mm
5.7 mm
5.7 mm
5.7 mm
4.1 mm
4.1 mm4.1 mm
2.7 mm
2.7 mm
2.7 mm

25 mm
25 mm
25 mm
25 mm
25 mm
25 mm
25 mm
25 mm
15 mm
15 mm
15 mm

121/6 mm121/6 mm121/6 mm
113/6 mm
113/6 mm
113/6 mm

25 mm
25 mm
25 mm
25 mm
25 mm
25 mm

1.00 mm1.50 mm0.75 mm
1.00 mm1.50 mm0.75 mm
1.00 mm1.50 mm0.75 mm
1.00 mm1.50 mm0.75 mm
1.00 mm1.50 mm0.75 mm
1.00 mm1.50 mm

コームバック＊2

添加できるサンプル量

6.2 μl8.3 μl12.4 μl
4.3 μl5.7 μl
8.6 μl3.1 μl
4.1 μl
6.2 μl2.1 μl
2.7 μl
4.1 μl90/4 μl120/6 μl183/9 μl
85/4 μl112/6 μl
171/9 μl

コード番号80-6159-99
80-6160-18
80-6160-37
80-6161-13
80-6161-32
80-6161-51
80-6161-70
80-6161-89
80-6162-08
80-6162-27
80-6162-46
80-6162-65
80-6164-17
80-6164-36
80-6164-55
80-6163-41
80-6163-60
80-6163-79
80-6163-22＊1 ウェルの深さが10、15、25 mmの3段階に調節できる分取用コームです。
＊2 全種類のコームウェル深を15 mmまたは10 mmに調節できます。

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総合お問合せ窓口

TEL：03-5331-9336（営業日の 9:00 〜 12:00、13:00 〜 17:30）

機器アフターサービス（音声案内にしたがい①を選択）

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製品技術情報に関して（音声案内にしたがい②を選択）

e-mail：Tech-JP@cytiva.com（常時受付）

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注）お問合せに際してお客さまよりいただいた情報は、お客さまへの回答、弊社サービスの向上、弊社からのご連絡のために利用させていただく場合があります。

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CytivaTokyo, Japan

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Cytiva（サイティバ）

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