京都府保環研年報第68号（2023）

高病原性鳥インフルエンザ発生時の防疫措置に用いられる陽イオン界面活性剤の吸光光度法の改良
多田哲子

中村昌子

金附宏明

Improvement of Absorptiometry for Cationic Surfactants Used asDisinfectants for Preventiveactivities of the Spread of Avian Influenza
Noriko TADA Masako NAKAMURA Hiroaki KANATSUKI

要旨
高病原性鳥インフルエンザ等発生時の防疫措置により大量に使用される消毒剤のうち、陽イオン界面活性剤（CS）のモノ,ビス（塩化トリメチルアンモニウムメチレン）‑アルキルトルエン、塩化ジデシルジメチルアンモニウムの測定に用いられるJIS K0102 付属書1‑VのオレンジⅡ法の高感度化と抽出溶媒の変更を目的として、オレンジⅡ法の改良を行った。CSとオレンジⅡのイオン会合体形成を妨害する陰イオン界面活性剤を除去するために、逆相‑弱陰イオン交換ミックスモードカラムを用いて試料を固相抽出することにより、試料に含まれる陰イオン界面活性剤の除去と同時にCSの濃縮も可能となり、定量下限値は0.02 mg/L未満と従来のオレンジⅡ法の10倍以上高感度となった。この濃度レベルは、CSの環境影響を評価する上で、ほぼ満足できるレベルであった。第２類特定化学物質に指定されているクロロホルムの代替溶媒として、安息香酸メチルと酢酸エチルを検討したが、CSとオレンジⅡのイオン会合体のみを選択的に抽出することができず、いずれも抽出溶媒として適さなかった。

キーワード：高病原性鳥インフルエンザ、環境影響調査、陽イオン界面活性剤、オレンジⅡ吸光光度法、固相抽出、逆相-弱陰イオン交換ミックスモードカラム、モノ,ビス（塩化トリメチルアンモニウムメチレン）‑アルキルトルエン、
塩化ジデシルジメチルアンモニウム
Keywords ：Highly pathogenic avian inﬂuenza, Environmental impact survey, Cationic surfactant, Orange II spectrophotometry,
Solid phase extraction, Mixed-mode weak anion-exchange column, Mono bis（trimethyl ammonium methylenechloride）alkyl toluene, Didecyl dimethyl ammonium chloride

業が行われた発生場所等の上流側と直下流側・下流側で水質はじめにに差がないこと（使用された消毒剤等が非検出であることを含む）、差があった場合は、下流側で測定された濃度が環境

本府では、2003年２月に国内３例目となる過去に例を見なや人の健康に影響がない程度の濃度であることのいずれかのい規模の高病原性鳥インフルエンザ等の発生を受け、家畜伝条件を満たすことが必要である。CSについては水道水質基染病予防法等に基づき患畜等となった鶏等の殺処分と死体や準や環境基準は設定されていないが、一般にCSは、強い殺汚染物の埋却処分、鶏舎等の消毒が行われた1, 2）。これらの菌力を持ち、基準値の設定されているASより、毒性が強い防疫措置による周辺環境への影響について府民の安心・安全と考えられている4, 5）。実際、水道水質基準や環境基準の定を確保するため、本府の「高病原性鳥インフルエンザ等に係められているASのドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムる防疫措置の周辺環境への影響調査実施要領」に基づき、当所において発生農場や埋却地周辺の河川水と地下水の水質調査と臭気調査が発生６か月経過後まで行われた。水質調査項
目のうち、消毒剤の陽イオン界面活性剤（CS）については、
JIS K0102 付属書１‑VのオレンジⅡ吸光光度法3）（JISオレンジⅡ法）により、試料中濃度を測定した。
JISオレンジⅡ法は、試料を陰イオン交換樹脂カラムに通して、CSと対をなす陰イオン界面活性剤（AS）を除去した後、陰イオン性のオレンジⅡと反応させて生じたイオン会合体をクロロホルムに抽出し、その吸光度を測定する方法であり、定量下限値は0.2 mg/Lとされている。防疫措置が環境や人の健康に影響を及ぼさないと評価するためには、防疫作（令和６年１月４日受理）

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図１．モノ（塩化トリメチルアンモニウムメチレン）アルキルトルエン（左上）、ジ（塩化トリメチルアンモニウムメチレン）アルキルトルエン（左下）及び塩化ジデシルジメチルアンモニウム（右）の構造式− 20 −

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について、Sigma-Aldrich 社の安全データシート（https://質に指定されたことを受け、クロロホルムに代わる抽出溶媒

www.sigmaaldrich.com/JP/ja/sds/aldrich/289957） で は、についても検討した。

ニジマスに対するLC50は3.2 5.6 mg/L（96 h）、オオミジン

材料と方法

コ に 対 す るEC50は6.3 9.5 mg/L（48 h） で あ る の に 対 し、JISオレンジⅡ法の標準物質となっているCSの塩化ベンジル
ジメチルテトラデシルアンモニウム（BAC-C14）（https://１．試薬等

www.sigmaaldrich.com/JP/ja/sds/sial/13401） で は、 そ れ

標準液、添加回収試験用試料、試薬調製にはすべて超純水

ぞれ0.79 mg/Lと0.016 mg/Lであり、ASに比べCSの毒性が（以下、水）を用いた。BAC-C14として塩化ベンジルジメチはるかに高い。

ルテトラデシルアンモニウム（富士フィルム和光純薬（株））、京都府で現在家畜防疫に使用されているCS製剤は、パコマとアストップ

で あ り、 有 効CS成 分 は そ れ ぞ れ モ

TAMCAと し て 動 物 用 医 薬 品 パ コ マ（科学飼料研究所（株））、DDACとして動物用医薬品アストップ（科学飼料ノ, ビス（塩化トリメチルアンモニウムメチレン）‑アルキ研究所（株））をそれぞれ水で、1,000 mg/L（CSとして）のルトルエン（TAMCA）（図１左）と塩化ジデシルジメチル濃度に調製し、検量線作成及び添加回収試験に用いた。ASア ン モ ニ ウ ム（DDAC）（ 図 １ 右 ） で あ る。DDACに つ いとして、AS混合標準液（アルキル鎖長10 14の直鎖アルキルて、Sigma-Aldrich 社の安全データシート（https://www.

ベンゼンスルホン酸ナトリウム各1 mg/mLの混合溶液）（富sigmaaldrich.com/JP/ja/sds/sial/34466）では、ゼブラフィッ

士フィルム和光純薬（株））を用いた。酢酸-酢酸ナトリウム

シュに対するLC50は0.49 mg/L（96 h）、オオミジンコに対緩衝液（pH3.5）は、酢酸6 mL、酢酸ナトリウム三水和物0.9

するEC50は0.029 mg/L（48 h）とされており、塩化ベンザgを水に溶かして１Lとした。塩化ナトリウム加酢酸‑酢酸ナ

ルコニウムと同程度の生態毒性を有する。TAMCAについ

トリウム緩衝液は、酢酸-酢酸ナトリウム緩衝液1 Lに塩化ナては、生態毒性に関するデータは見当たらないが、2017年トリウム100 gを溶かした。オレンジⅡ溶液は、
オレンジⅡ0.2

11月28日付けで食品安全委員会より評価書が出されておりgを水に溶かして100 mLとした。クロロホルムは吸光光度用（https://www.fsc.go.jp/fsciis/evaluationDocument/show/（富士フィルム和光純薬（株））、メタノールはLC‑MS用（富kya20170524033）、そこでは一日許容摂取量（ADI）を0.013

士フィルム和光純薬（株））、その他の試薬はすべての特級試

mg/kg 体重/dayとしている。日本人成人の水道水等飲料摂薬（富士フィルム和光純薬（株））を用いた。

取量は１人当たり平均１L/日程度とされており6, 7）、発生場

固相抽出カラムは逆相-弱陰イオン交換ミックスモード樹所等周辺の河川水や地下水が水道水源である場合は、体重50

脂カラムOasis WAX Plus（225 mg、Waters（株））を用いた。

kgの成人が飲用する場合、0.65 mg/L以下であれば、飲用しメタノール溶出後の一連の操作は、15 mL遠心管（ポリプロ続けても問題ないと考えらえる。

ピレン製）を用いて行った。

2003年２月の高病原性鳥インフルエンザ発生時の環境影響調査では、CS製剤としてパコマが使用されたが、すべて２．測定機器等
試料の固相抽出は、全自動固相抽出装置（ジーエルサイエの試料において、全期間を通してCS濃度は0.2 mg/L未満での有効成分であるTAMCAのADIからするとンス（株）AquaTrace ASPE899）により、溶出液の窒素乾

人の健康には影響のない濃度と考えられた。しかし、生態毒

固は、吹付け式試験管濃縮装置（東京理化器械（株）、MGS-あり、パコマ性の観点からすると、仮にTAMCA の生態毒性がBAC‑C143100）により行った。溶媒抽出時の攪拌には、タッチミキサーやDDACと同程度であるとすれば、JISオレンジⅡ法の0.2（（株）VORTEX、GENIE 2）もしくは溶出試験用振とう機（タmg/Lの定量下限値では、甲殻類に対する影響を評価するのイテック（株）、TS-20）を用いた。抽出液の吸光度の測定は、は難しく、さらに高感度な測定方法が求められる。

紫外可視分光光度計（（株）島津製作所、UV-1900i）により、CSの高感度測定方法として、すでにいくつかの液体クロ光路長10 mmの吸収セルを用いて行った。

マトグラフィー質量分析法が報告されているが、実際に高病原性鳥インフルエンザが発生したときに、高頻度で液体クロ３．方

マトグラフ質量分析計による測定を行うことは、他業務によ３‑１．伊藤・浅沼9）の方法による法
TAMCAとDDAC添加回収試験

る液体クロマトグラフ質量分析計の使用状況から難しい。そこで、今回、JISオレンジⅡ法を改良して高感度化をめざす

伊藤・浅沼9） は、Oasis WAX を使用して固相抽出を行ことにした。先行研究として劒持ら8） は、試料を逆相-弱陰い、オレンジⅡ法によるTAMCA測定の最適化を検討して、イオン交換ミックスモードカラムを用いて固相抽出した後、ほぼ100%の回収率を得、JIS改良法とした。そこで、彼らの液体クロマトグラフィー質量分析法によりTAMCAの高感JIS改良法に準じてTAMCAとDDACの添加回収率を調べた。

度測定を行い、伊藤・浅沼9） は上述の固相抽出カラムをJIS

まずDDACがTAMCA同様、BAC-C14を標準物質として測オレンジⅡ法の試料前処理に適用しTAMCA測定の高感度定できるかどうかを確認するために、固相抽出工程を省略し化を図った。そこで、我々も伊藤・浅沼9）の方法に準じて、て、以下の操作を行った。1,000 mg/L TAMCA溶液またはTAMCAとDDACのオレンジⅡ法による高感度測定法を検1,000 mg/L DDAC溶液を15 mL遠心管に40 µL添加し、酢酸討した。さらに、2014年にクロロホルムが第２類特定化学物‑酢酸ナトリウム緩衝液3 mL、塩化ナトリウム0.3 g、オレン− 21 −

京都府保環研年報第68号（2023）

ジⅡ溶液2.5 mLを添加して混合した。これにクロロホルム2.5抽出工程を１回にして２回抽出と同様の抽出効果が得られるmLを加えて３分間激しく振り混ぜた後、クロロホルム層をかどうか検討した。検討は、固相抽出工程を省略して行っ遠心分離した。この操作を２回繰り返して得られたクロロホた。すなわち、1,000 mg/L TAMCA溶液または1,000 mg/Lルム層を合わせて5 mLに定容し、硫酸ナトリウムで脱水後、DDAC溶液を15 mL遠心管に25 µL添加し、酢酸-酢酸ナトリクロロホルム層の一部を吸収セルに移し、クロロホルムを対ウム緩衝液3 mL、塩化ナトリウム0.3 g、オレンジⅡ溶液2.5照液として波長485 nmの吸光度を測定した。検量線は、1,000mLを添加して転倒混和後、クロロホルム4.5 mLを加えて、mg/L BAC-C14溶液を15 mL遠心管に、2、5、10、20、50、３分間激しく振り混ぜた。これと比較するために、２回抽出100 µL添加し、同様の操作を行って作成した。のクロロホルム添加量は１回目2.5 mL、２回目2.0 mLとし、次に、上記の操作に固相抽出工程を加えて、添加回収試験定容量を4.5 mLとした。この３分間振り混ぜ操作はタッチミを行った。すなわち、1,000 mg/L TAMCA溶液または1,000キサーで30秒×３回、または振とう機に遠心管を横置き横振

mg/L DDAC溶液を水1 Lに100 µL添加し、全自動固相抽出で10分間振とうする操作に置き換えても検討した。その後、装置を用いて250 mL通水し、CSを抽出した。固相抽出工程

3,000 rpmで５分間遠心し、オレンジⅡとのイオン会合体をを図２に示す。固相抽出操作により得られたメタノール溶液クロロホルム層に移した。パスツールピペットで水層を除去に窒素ガスを吹き付けて乾固させ、上述のクロロホルム抽出した後、クロロホルム層に硫酸ナトリウムを加えてタッチミ操作を行い、吸光度を測定した。

キサーで軽く攪拌し、3,000 rpmで１分間遠心した。クロロホルム層を吸収セルに移し、波長485 nmにおける吸光度を2DVLV:$;3OXVαϱυΡεϥωϱήϟνόʖϩP/@ਭP/

測定した。
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３‑４．陰イオン界面活性剤除去効果の検討

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オレンジⅡ法では、CSとオレンジⅡとのイオン会合体をʤP/PLQʥ

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クロロホルムで抽出するため、あらかじめCSとイオン会合体をつくるASを試料から除去する必要がある。界面活性剤の生産量から見て、実際の環境試料中には、ASがCSの10倍‫ݽ‬૮જ৞

程度存在すると考えられることから10）、水１Lに1,000 mg/LਭP/TAMCA溶液または1,000 mg/L DDAC溶液を80µL加えたも୦ਭのを２本ずつ準備し、各１本にAS混合標準液をASとしてCS஢ોΪηPLQの10倍量になるように加え、それぞれについて、上述の方法でCS濃度を測定した。

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３‑５．塩化ナトリウム添加方法の変更

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クロロホルム抽出液後の吸光度測定において、検量線を含஢ોΪηPLQ

め測定値にばらつきが出ることがあった。ばらつきは塩化ナ‫ݽף‬ʤ஢ોΪηʥ

図２．改良オレンジⅡ法の全自動固相抽出装置による陽イオン界面活性剤の固相抽出工程

トリウムが完全に溶解しきれていない時に生じたので、酢酸-酢酸ナトリウム緩衝液にあらかじめ塩化ナトリウムを加えて完全に溶解したものを塩化ナトリウム加酢酸‑酢酸ナトリ

３‑２．試料pHの検討

ウム緩衝液として用いた。

JISオレンジⅡ法や伊藤・浅沼9） の方法では、試料をpH7に調整して固相抽出に供しているが、後述するように、水３‑６．改良オレンジⅡ法の概略
上述より、最適と考えられた条件を合わせて、改良オレンにTAMCA、DDACを添加して固相抽出した時の回収率は著しく低かった。固相抽出操作を省いた場合にはTAMCA 、ジⅡ法とした。その概略を以下に述べる。

DDACともほぼ添加した濃度の値を示したので、固相抽出操①試料を塩酸でpH1.5に調整した後、全自動固相抽出装置

作に問題があると考えられた。そこで、以下の手順で試料pHを用いて250 mLを固相抽出し、得られたメタノール溶を変えて検討した。すなわち、水に（1+11）塩酸を添加し液を窒素ガスで乾固させる。て、pHを1.5、3、7に調整したものを試料とし、1,000 mg/L

②乾固させた試料に、塩化ナトリウム加酢酸‑酢酸ナトリ

TAMCA溶液または1,000 mg/L DDAC溶液を試料1 Lに100 µLウム緩衝液3 mLを加えて、タッチミキサーで軽く攪拌添加し、その後の操作に供した。

した後、オレンジⅡ溶液2.5 mLを加えて、穏やかに転倒混和する。

３‑３．クロロホルム抽出方法の変更③クロロホルム4.5 mLを加えて、タッチミキサーで30秒×JISオレンジⅡ法と伊藤・浅沼9） の方法は、いずれもクロ３回、または振とう機に遠心管を横置き横振で10分間振ロホルム抽出を２回行って、得られたクロロホルム層を合わとうした後、3,000 rpmで５分間遠心し、オレンジⅡとせて定容した後、吸光度を測定している。このクロロホルムのイオン会合体をクロロホルム層に移す。

− 22 −

京都府保環研年報

第68号（2023）④パスツールピペットで水層を除去した後、クロロホルムうことを考慮すると、測定対象のCSは特定されており、検層に硫酸ナトリウムを加えてタッチミキサーで軽く攪拌

量線作成に測定対象と同じ種類のCSを使用する方が合理的し、3,000 rpmで１分間遠心する。

であると考えられる。

⑤クロロホルム層を吸収セルに移し、波長485 nmにおけ２．固相抽出時の試料pHの影響る吸光度を測定する。

伊藤・浅沼9）は、pH7に調整した試料を固相抽出して良好以降の河川試料におけるCSの測定やクロロホルム代替抽な回収率を得ているので、水にTAMCA、DDACを添加して出溶媒の検討は改良オレンジⅡ法で行った。

pH調整せず（pH7）に固相抽出したが、回収率は著しく低かっ

３‑７．河川試料におけるCSの測定た。そこで、試料のpHを1.5、3に変えて検討した。その結果

京都府内の環境基準点10地点において採水した河川試料を表１に示す。TAMCA、DDACともにpHが低くなるほど、について、上述の改良オレンジⅡ法で、CS濃度を測定した。

添加回収率が良くなり、TAMCAはpH1.5で、DDACはpH3

京都府内家畜保健衛生所で近年使用されているCSはほぼ以下で回収率が70%を上回った。伊藤・浅沼9）と我々の固相DDACであることから、上記の河川試料300 mLに1,000 mg/L

抽出法では同じ逆相-弱陰イオン交換ミックスモード樹脂カ

DDAC溶液を30 µL添加したものについても、同様にCS濃度ラムを使用しているが、固相充填量と充填剤粒径が異なり、を測定し、それぞれの河川試料について、添加回収率を求め

伊藤・浅沼9）の使用したカラムはそれぞれ150 mgと30 µm、た。検量線用の標準物質にもDDACを用いた。

我々の使用したカラムは225 mgと60 µmであった。山崎ら13）はペルフルオロ化合物の固相抽出操作で充填剤粒径を小さく３‑８．クロロホルム代替抽出溶媒の検討

すると回収率が改善され、充填剤粒径による有効表面積の違クロロホルムに代わる抽出溶媒として、排水等のフェノー
11）いが吸着性能に大きな影響を与えたと報告している。我々がと充填剤粒径の大きいカラムを使用したことで、pH7では回収極性基を持つためクロロホルムより極性が高く、幅広い化合率が低い要因となった可能性がある。化合物の逆相系固相へ物を抽出できる酢酸エチルについて、クロロホルムの代替溶の吸着は、pHが低いほど強くなるものも多く、pHを低くす媒としての妥当性を検討した。1,000 mg/L BAC-C14溶液をることで、CSの充填剤への保持力が高まり回収率が改善さ15 mL遠心管に、2、5、10、20、50、100 µL添加し、改良オれた可能性がある。

ル測定で代替溶媒としての報告がある安息香酸メチル

レンジⅡ法のクロロホルムを安息香酸メチルまたは酢酸エチ
ルに替えて、クロロホルム抽出以降の操作を行い、検量線を

表１ཇ΢Ψϱֆ໚‫׈‬੓ࡐ

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結果と考察

陽イオン界面活性剤固相抽出時の試料pHの影響ԚԿζυεϩζϟοϩΠϱϠωΤϞ

１．TAMCA及びDDAC測定の標準物質としてのBAC-C14の妥当性
BAC-C14を標準物質として、クロロホルム抽出工程以降の

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操作を行い、TAMCA及びDDACを測定した。添加量40 µgに対して、TAMCAは36.2 µg、DDACは40.1 µgの値を示した。

３．クロロホルム抽出方法による違い

BAC-C14、DDACとオレンジⅡは、どちらも１価の化合物

クロロホルム１回抽出と２回抽出の結果に差は見られなであり、通常モル比１：１でイオン会合体を作ると考えられかった（表２）。１回抽出法は、上部の水層を除去するだける。BAC-C14の分子量は368.05、DDACのそれは362.08とほでクロロホルム層を別容器に移す工程がないので、クロロホぼ同じであることから、測定値もほぼ同じであったと考えら

ルム層の損失がなく、定容操作も不要であった。また、抽出れる。一方、TAMCAは１価のモノ体と２価のビス体から時の振り混ぜ操作について、タッチミキサー30秒×３回、ま構成され、その比は４：１とされている（https://www.fsc.

たは振とう機による10分間振とうに換えた結果にも差はな

go.jp/fsciis/evaluationDocument/show/kya20170524033）。

かった。以上から、検量線用試料も含めた複数試料のクロロ

また、モノ体とビス体はどちらも鎖長の異なるアルキル基をホルム抽出作業効率を考えると、クロロホルムの必要量を1持ついくつかの化合物で構成されており、分子量は、それぞ回で加え、振とう機により10分間振とうすることで十分な回れ325.96 410.12と433.54 517.70である。オレンジⅡ分子イオ収率が得られた。

ン２つと会合体を生成するビス体を約５分の１含むことから

表２ 陽イオン界面活性剤のクロロホルム抽出回数の比較添加量より高い値を示すと予想したが、平均的な分子量がཇ΢Ψϱֆ໚‫׈‬੓ࡐபड़յ਼‫ౕޭٷ‬BAC-C14の分子量を上回ったのか、測定値は添加量の90.5%

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の値であった。これらのことから、TAMCAとDDACは、いϱ ΌΠϩΫϩφϩΦϱ

ずれもBAC-C14を標準として測定することに問題はないとԚԿζυεϩζϟοϩΠϱϠωΤϞ

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考えられるが、実際に防疫措置に使用されたCSの測定とい− 23 −

京都府保環研年報第68号（2023）

４．固相抽出操作によるAS除去効果

表３

CSとCSの10倍量のASを添加した試料の測定結果を表３に示す。TAMCA のASを添加した試料と添加しなかった試料の回収率はそれぞれ63.4%と69.1%、DDACのそれらは82.3%と76.8%といずれのCSにおいても回収率にはほとんど差がなかったことから、Oasis WAX Plus を用いた固相抽出操作で、陰イオン界面活性剤添加の有無による回収率の差ӆ΢Ψϱֆ໚‫׈‬੓ࡐ͹శՅཇ΢Ψϱֆ໚‫׈‬੓ࡐϠόϑη ԚԿφϨϟοϩΠϱϠωΤϞ
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ASはほぼ除去できると考えられた。

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５．塩化ナトリウム添加方法の変更による定量下限値の改善

0.8

酢酸‑酢酸ナトリウム緩衝液に塩化ナトリウムが完全に溶で、あらかじめ塩化ナトリウムを添加した塩化ナトリウム加酢酸-酢酸緩衝液に替えて、以降の試験を行った。それにより‫ౕޭٷ‬解していない時に測定値にばらつきが出ることがあったの得られた検量線を図３に示す。相関係数は、0.9994と良好な

0.60.4\ [ U 0.2

直線性を示した。塩化ナトリウム加酢酸-酢酸緩衝液に替えたことで検量線の精度や併行試験の精度が上がり、10 µg/Lに00調製した試料の５併行試験から得られた本法の定量下限値はオレンジⅡ法の10分の1以下となった。得られた定量下限値
は、CSの環境影響を評価する上で、生態毒性の観点からみても必要な濃度条件をほぼ満たしていると考えられた。

20406080100ઊଲྖʤʅg/Lʥ

TAMCAとDDACで そ れ ぞ れ0.018 mg/Lと0.017 mg/LとJIS

図３．改良オレンジⅡ法による陽イオン界面活性剤（塩化ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム）の検量線

塩析には、目的成分の水への溶解度を減じることによって、有機溶媒層への分配比を大きくする効果があるが、それ以外

６．河川試料におけるCSの測定結果にも目的成分がイオン会合体の場合、水相の塩濃度が増加す

府内10河川で採水した試料について、CS濃度を測定した

ると誘電率が低下し、CSとオレンジⅡのイオン会合体生成

結果をDDAC添加回収率とともに表４に示す。結果の5に示は促進される12）。イオン間相互作用エネルギーは誘電率と相すようにDDACの定量下限値は0.017 mg/Lであったので、反する関係にあり、塩化ナトリウムが完全に溶解されていな定量下限値未満の値をNDとして示す。測定した10河川すい状況では塩濃度が低下し、イオン間相互作用エネルギーがべてでCS濃度は、定量下限値未満であった。添加回収率は小さくなり、イオン会合体が十分生成されなかった可能性が55.0‒73.1%と低めであった。河川試料中の夾雑物が充填剤にある。あらかじめ緩衝液に塩化ナトリウムを溶解することで、吸着し、CS疎水基が吸着されにくくなり回収率が低下した

塩濃度が一定し、安定した結果が得られることとなったと考可能性がある。伊藤・浅沼9）は、河川試料においても良好なえられた。また、この添加方法は、個々の試料に一定量の塩回収率を得ており、pHの結果と合わせるとやはり充填剤粒化ナトリウムを添加して攪拌する手間が省けるので、効率化径を小さいものに替えて吸着性能を高める必要があるのかもの点でも有益であった。

しれない。

表４京都府内10河川における陽イオン界面活性剤の測定結果と添加回収率

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− 24 −

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1.2
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図４．改良オレンジⅡ法のクロロホルム代替溶媒として安息香酸メチルを用いた時の陽イオン界面活性剤（塩化ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム）の検量線

図５．改良オレンジⅡ法のクロロホルム代替溶媒として酢酸エチルを用いた時の検量線用標準試料の抽出後の色調

７．クロロホルム代替溶媒の検討結果

引用文献

クロロホルムに代わる抽出溶媒として、安息香酸メチルで抽出した検量線について、図４に示す。クロロホルム抽出により得られた検量線に比べ、吸光度で約0.3、Cs

１）池博敏. 2004. 京都府における高病原性鳥インフルエ
ンザの発生と防疫措置. 鶏病研究会報, 40, 1 8.の絶対量で約40 µgに相当するブランクが見られたことか

２）寺石武史, 川島康成, 藤野日出海. 2009. 京都府におけらCSとイオン会合体を形成していない少量のオレンジⅡる高病原性鳥インフルエンザ発生時に埋却したも安息香酸メチル層に移行していると思われ、安息香酸処分鶏等の最終処理. 鶏病研究会報, 45, 1 8.

メチルはオレンジⅡ法の高感度化には適していないと考えられた。

３）日本規格協会. 2016. 付属書1（参考）補足V 陽イオ
ン界面活性剤.「工場排水試験法 JIS K 0102」（日

酢酸エチルで抽出した結果を、図５に示す。CS添加量

本規格協会 編）, 320 321.に関わらず、標準列の酢酸エチル層の色調はほぼ同じと４）奥村裕. 1998. 溶解助剤として難水溶性有害化学物質なり、オレンジⅡ自体が水層と酢酸エチル層に一定割合の水生生物に対する毒性試験で使用可能な有機で分配されたことが示唆された。したがって、酢酸エチ

溶剤、界面活性剤の種類と許容濃度. 中央水産研

ルは、オレンジⅡ法に適用できないことがわかった。

究所研究報告, 11, 113 134.

今回、安息香酸メチルと酢酸エチルについて検討したが、５）栁田一朱, 森脇洋, 松岡秀明, 鶴保謙四郎. 2005. クロー

いずれもクロロホルムに替わる抽出溶媒とならなかった。

バーを用いた界面活性剤の毒性試験. 生活衛生,49, 44 47.

謝辞６）Tani Y., Asakura K., Sasaki S., Hirota N., Notsu A.,
Todoriki H., Miura A., Fukui M., Date C. 2015.

逆相‑弱陰イオン交換ミックスモード樹脂カラムを用い

The influence of season and air temperature

たオレンジⅡ法について、数々の助言をいただいた岩手

on water intake by food groups in a sample of

県環境保健センターの伊藤朋子氏、防疫用消毒剤のパコ

free-living Japanese adults. Eur. J. Clin. Nutr.,

マ及びアストップを提供いただいた京都府南丹家畜保健69, 907 913.

衛生所の黒田洋二郎氏と山城家畜保健衛生所の一星暁美

７）Ohno K., Asami M., Matsui Y. 2018. Is the default of

氏、執筆にあたり助言いただいた当所の河嶋淳平氏に感2 liters for daily per-capita water consumption

謝いたします。

appropriate? A nationwide survey reveals
water intake in Japan. J. Water Health, 16,562 573.
８）劒持堅志, 浦山豊弘, 吉岡敏行, 中桐基晴, 藤原博一.
2007. 環境中超微量有害化学物質の分析，検索技術の開発に関する研究‒LC/MS を用いた鳥インフルエンザ関連消毒剤の分析‒. 岡山県環境保健センター年報, 31, 45 51.

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京都府保環研年報

第68号（2023）

９）伊藤朋子, 浅沼英明. 2021. 家畜防疫に使用される陽イオン界面活性剤の分析. 第48回環境保全・公害防止研
究発表会講演要旨集, 32 33.
10）経済産業省大臣官房調査統計グループ. 2020. 製品統計表（時系列）⑨油脂製品、石けん、合成洗剤等及び界面活性剤. 平成25年経済産業省生産動態統計年報化
学工業統計編, 120 134.
11）森田絵美, 中村栄子. 2010. 4-アミノアンチピリン発色‒安息香酸メチル抽出吸光光度法による排水のフェノール類の定量. 分析化学, 59, 917 920.
12）田中元治. 1959. 溶媒抽出法. 分析化学, 8, 689−695.
13）山﨑絵理子, 谷保佐知, 島村紘大, 佐々木俊哉, 山下信義.
2015. 外洋海水中ペルフルオロ化合物微量分析のための固相抽出法の開発. 分析化学, 64, 759 768.

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