・ます口号 27頁
均 7
化一ふ oc

サ第き土北研サケ・マス類の 卵 および精子の 保存に関する 研究― ]サケ (Oncorhynchus keta)来受精卵の保存にっいて高 野 和

貝uテStudies On広井末武十峯ナ

敏* 安川雅夫 **夫**the Retention 0f Gametes

Of Salmonid Fishes‑1.

0n the Fertilityof ChumSalmon Eggs

after Storage

Kazunori TAKANO* Osamu

HIROI** Masao

YASUKAWA"

andTOshio SUETAKE**

Eggs of the chum salmon (Oncorhynchusketa), captured in the Chitose River, HOkkaid0, werestored in coelomic fluid or physiological saline, and examined their fertility by inseminating withfresh milt at various periods of storage.
1) Eggs stored in the coelomic fluid under darkness at 8 13, showed fertilization rate over 90% after 48 hours of storage.
From 48 hours to 96 hours their fertilization rate declined slowly(76.8%), and dropped suddenly t0 less than 30% after 120 hours of storage, and to 10% at 168
hour retention.
Under the same conditions mentioned above, eggs
kept in the physiological saline

droppedfor24hours
suddenly
showedtoabout
fertility
4%,@andof97.2%.
remained
Afterlowduring
48hours
theofperiod
storage,
betweenhowever,thefertilization
retention
ofrate48
hours and of 240 hours except
for the case of 96 hours where it was 47.8%.
2) Fertilized eggs stored in the physiological saline, under daylight at 8 'C, declined
to about 3%
after 24 hours of storage.
No fertilization wastaken place in the egg kept

hours.

Between 24 and 192 hours of storage,the proportionof deadrapidly
tor 72

eggs increased gradually

fromabout 25% to 70%.
3) Chum salmon eggs stored in the physiological saline, under darkness at high temperature(19 @C), lost their fertility completely for 24 hours.
All the eggs stored beyond 72 hours under
the same conditions died before insemination.

北海道さけ・ますふ
化 均研究業筒 第 233 号"北海道大学水産学部(Faculty Of F@sheries, HOkkai山 Univers@ty, Hakodate)
八水産庁北海道さけ・ますふ
化 場千黄支均(Chitose Branch

Of HOkk 血小 Sal@ 何n Hatche ，y， Fishe 。y 小@ency ，31山itose)北海道さけ・ますふ
化場 :研究報告第 27 号

はじめに成熟親魚から採取した配偶子が．未受精状態でどの位受精方を保持し得るかは生理学的．あるいは育種学的に興味探ぃ 問題として古くから
圧目きれ・持にサケ・マス類ではその増殖技術の向上改善のための研空と相まって今日まで多くの研究がなされている。

見られ．様々の手法を用いて，その保存期雌雄配偶子のうち，精子の保存に関する研究には近年著しい進歩が間は次第に長期に及びっつある(Blaxter 1969 参照L これに対し，未受精卵の保存に関しては． これまでの研究
・のぼとんどが体腔液による湿式保存法 (中野・野沢，1925;Jll 尻， 1927;Barrett&HumphreyS， 4951;FOerster， 1965;With@er， 1967)'を用いており，この他では． わずかに等張 塩類溶液に浸漬保存した結果にっいての知見(Runnstrom,1920:1949; 岡田ら ． 195 勺 が得られているのみで．保存法，保存条件の検討は極めて不十分

山本・である。

サケ・マス類で 1萬 子の的確な保存法を確立することは，単に長期保存のためのみならず，近年とみに著しい
乙巳

増養殖環境の劣悪化に伴なう採卵・運搬上の諸制約，あるいは増養殖における雌雄親魚の成熟時期の不 ―致など，種苗生産上の問題解決にも資するところが多い。

，体腔保存条件に いて検討した結果について述べる。

併せて二，三の稿を進め に先立ち．
御指導と御助言を賜 った北海道大学山本喜―郎教授に深謝の意を表する。
また，実験に除して種々f 配慮と激励を賜った北海道さけ・ますふ
化場千歳支場弔畑匡鉄之 支場長と場員各位および木研究に用この報告では液および生理的塩類溶液に保存したサケ
来受精卵の受精力について調べいた材料の 集に多大の便宜を与えられた北海道さけ・ます増殖事業協会三原健夫会長，同西越捕獲場布施智常・氏と場員各位に厚く御礼申し上げる。

材料および方法
サケ (Oncorhynchus

止eta) の 熟卯は1972 年iim13 日に石狩川水系千歳川の北海道さけ・ます増殖事業協会西越捕獲場で捕られた
3 年魚 I 尾 (尾叉長55.8on．体重I ， 600e ) から開腹法によって採集した。
その卵数は，約2 300 粒，生卵の平均卵径は6 ． 8mm ，平均卵重は 0.I7e であった。
・

未受精卵の保存液として体腔液と生理的塩類溶液の2 種類を用いた。
体腔液は上記の採卵に用いた個体から・
以下に述べる方法で採取した。
供試魚を捕獲槽から取上げた後・直ちに塊を切断して除血 した。 魚は腹部を上向きに 静置し．生殖孔とその周辺をよく拭った後，駒込ピ ぺット (5 杣 ) を正確に生殖孔に挿入して体腔液を可能

液な限り 吸出した。採取された液は約 40m0 で，やや粘性を帯び透明な薄飴色を呈していた。
この方法で体腔 の大部分が採取され．
採即時に採取された残存液は．わずか4me 程度であった。 生理的塩類溶液は山本 u947) の方法に準じて作製した L1M NaCl.1M
CO ， でpH?.0にKCl,%MCaCl各溶液を100:2 ． 8:3 ． 4 の体積比に混合し， XOM

NaH@調製]。

供試卵はI 群60‑70粒 (生卵で約10g) に分け，予め体腔液または生理的塩類溶液
5m@ を入れた乾燥した共栓(200me)．予 軽く栓をした。5ガラス
け際 茸瓶する目的でに収容
め生理的塩類溶液
し・でに浸潰した。卵は，卯回洗っ生理外塩類溶液に莫‑後に保存 液 保存する

完了するま
ア に約I 時間を要し・この間の室温はI0+i

採 卵から保存に付着した体腔液を液 へ収容する操作を出来るだでであった。この 後・保存用の瓶は箱詰めして・さけますふ化場午歳支場へ運搬し．以後の実験はすべて同場で行なった。
実験は保存条件を違えた次の4 区に分けて行なった。

8@C に保存。
実験―i : 体腔液中，暗黒状態で実験―2 : 生理的塩類溶液中．暗黒状態で8V に保存。
実験―3 : 生理的塩類溶液中．屋外の自然光下で 8Lに保存。

実験―4 : 生理的塩類溶液中，暗黒状態で19 でに保存。
各実験区共，所定の日数後に¥ 瓶づっ取出し．保存液を取除いて全卵を媒精 した。 吸水後 卯は8@C のふ化用水・32

サケ・マス類の卵および精子の保存に関する研究―lに収容した。なお． 媒楕に用いた精液は・
酉越捕獲場で毎日採取した新鮮なものを用い， 更にその都度精子活性を確認した。
保存期間が5 日以上に亘るものには，4 日目にそれぞれ同質，同温度の保存液を2 ． 5@M つつ追加した保存卵の受精の成否を半ll別するために・
広井ら(1973) の観察結果に基づいて，毎回媒精後2L侍 問で全卵をBOuin液で固定し・卵膜を除去して胚盤部を顕微鏡観察した。

結@) 暗黒下，

果

8 でで体腔液に保存した場合(実泉―l)

媒精役2L椅 @問で確認した白濁不透明な死卵は 3 日， 5 日および6 日間保存した群にのみ見られ それぞれ色2・%

3． 0% および4 ． 4%・山)と極めて少なかった(表― 1L

Table 1. Percentage of fertility andexperimental conditions

salmonN皿kT Of e既 S

0 (0)% Fertility

at 兜Exp1.2

昭S

NmkMf

Physio1.
indarkness
saline%MOrtali
けat TO% Fertility

Expl.3

Number o@ eggs

underPhysio1.
daylight
saline % MOrtality
at 兜% Fer 血けExpt.4

Number of eggs

Phy卜心如rkness
s 血e% MOrtali
け・l兜% Fertility

0 (0)stored under variouseggs

s忙 r出Days

姉血 。。 。

atmortality of chum

65

69

67

68

70

69

6.2(4)0 (0)3.0(2)

4.4(3)

0 (0)

0 (0)

97.0(65)95.8(68)89.2(58)76.8(53)26.9(18)26.5(18)10.0(?) 10.1(?)
72

1.4(1) 0 (0) 2.9(2) 1.5(1) 2.9(2) 1.4(1) 1.4(1) 0 ( 0) 0 ( 0) 4.2(3)97.2(70) 4.3(3) 2.9(2) 47.8(32) 1.4(l) 8.7(6) 2.9(2) 9.0(6) 12.7(9) 4.2(3)
7067

田67

田

69

0 (0) 25.4(18) 32.9(23@ 32z8(22@ @5@2(24) 29.9(刀 @ 壮 .6(31) 69.6(仏)
1 1

1 11m

1 11Q(山俺伊%@mfi7

69

伍

1 1

140.0(26) 72.1(49) 100 (66) 100 (67) 100 (69) 100 (65)1)

( 11 11 11）

1

Numfrals 市 pare 冊e$es indicate number Of 瑠S．

―方，各群の受精率について見ると．保存1 日および2 日後のもので． それぞれ97.0%,95.8% で・通常採卯時とほとんど変らない結果を示した (表 ― 1 ， 図 ― 1n その後も4 日間保存群の76.8% まで比較的良好な状態を保つが，5 日後に26 ． 9% と受精率は急に低くなり．
7 日後にはすでに保存液がやや腐臭を発する様になって・
受
浸漬 した流水の水温は8 土 0.2 でと・精率も10% 程度に減じた。なお．実験期間中，瓶をほとんど変化がなかった

2) 暗黒下 8L で生理的塩類落液に保存した場合(実残― 2)媒精20 時間後に見られた死卵の発現状況は実験―1 の場合とぼほ同様で・
・

あ り ．

4． 2% を示した10 日保存群が最高でいずれも極めて低い値を示した(表 ― 1 ， 図― 2k

I 日保存後の卵は97 ． 2% と高い受精率を示したが．2 日後にはこれが4 ． 3%0 と激減した。3 日以降では，4 日後の卵 群が47.8q%と 幾分受精力を保持していたものの． 他はすべて1.4‑12.7%し実験期間中．受精率が0 となることはなかった(表 ― 13) 自然光下・と極めて低い値を示した。しか図― 1L 保存温度の条件は実験―1 と同様である。

8 でで生理的塩類溶液に保存した場合 (実賎― 引静旨し．自然光に云 した。 実験期間中．外気温は最低―7c ・最来受精卵を収納した瓶は， ふ化室外の水路に
高 26L で．日間変動も著しかったが． 瓶を浸した流水の水温はほとんど変化なく，8 でを保った。
I 日保存後の卵群には死卵が全く認められなかったが，受精卵も極めて少なく・

33

6S粒@中 わずかに2 粒のみであ北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告 第 27 号

I0DAYS

Text‑fig. 1. Changes in fertilization rate of chumor physiological saline (0)at 8@! .

salmonSTORED

stored in coelomiceggsfluidC)

100Q口50

I0DAYS

Text‑fig. 2. Percentage
Obtainedof deadin darkness

eggs
atin

physiological saline.

I9'C , (0)at 8@C , and34

The(A)

markSTORED(@)

tn daylightshows
at8f .

the resultサケ・マス類の卵および精子の保存に関する研究―Iり，不受精卵がぼとんどを占めた (表 ― 1)@ 2 日後のものでは死卵が乃 4% 現われ，残りはわずかI 粒の受精卵・を除いて，全て不受精卵であった。3 日以降，死卵の出現率は経時的に増大し．8 日後では69.6% を示した(図― 20

また，この間，受精卵は全く見られなかった。

4) 暗黒下， l9 でで生理的塩類溶液に保存した場合 (実験―4)
保存瓶を浸潰したが槽水の温度は，実験期間を通じて19 0@1.5・

この 群では，ったでに保たれた。

I 日後の卵 ですでに受精カ は全く失われ．以後6 日間保存したものに至るまで受精卵は皆無であ(表― 1L しかも死卵の出現率はI 日後で40% を占め，3 日以上保存した卵には生卵が全く認められなかった (図― 2¥察考

サケ・マス類の未受精卵の受精
カ 保持にっいての研究は，これまでサクラマス．
0ncorLWc
野沢・1925; 川尻． 1927) ，カラフトマス．
O gor&u$C・1%8) ，べ二ザケ，O ． nw ぬ (FOerSter ， 1965;WiO ． ん eta(Barrett,1951;岡田ら・ 1956)

而 (With@er 5 HumphreyS

止 ler & HumphreyS方， 1967;Wi， 1967;Withler

us m 仏伽(中野・十 ler 55 MOHeyMOHey，， 1968) ．サケ，など多くの種類について行なわれている。
これらの結果は． それぞれの実験条件が異なるところから，直接比較することは難かしい。しかし， ―般に受精カ は保存期間が長期に亘るに征って低減しまた 保存温度が高い程低率となることを示している。川尻 (1927) は木崎湖産サクラマスについて，受精能カ持続時間 (T)と貯蔵温度 (6) の関係をTe"p 二 C (a ， C はマス固有の常姥のとして表わしている。今，サケについて見ると，岡田ら(1956) は未受精卵を10 ． 5 でに保存した結果，その受精率は5 時間で77%，I 日で35% ，2 日で28%と低減し．3 日後にばすでに受精卵が得られなかった。
―方．

保存した本研究の場合では，その受精率が2 日まで95% 以上．

3 日で約89% ．

8 でで体腔液に浸漬

4 日で77%0 と 漸減し．5 日以降は30% 以下に下ったが，岡田らの結果に 較すると受精カは遥かに良く持続された。
さらにBarrett(1951) は同上ヒ

じサケ 卯を2 5‑5・・8 むの低温で保存した
結果．3 日まで90% 以上．妙4 日まで約80% ，7 日で30% 以上の高い受精率を得ている。これらの結果を直接比較することにはやや難はあるが・サケにおいても未受精卵の受精
カ 持続時間は保存温度が低い程長くなることを示す―つの証左となるであろう。

上記の研究は・未受精卵の保存液として全て体腔液を用いている。また，これらのぼとんどが単に卵の乾燥を防ぐ程度に体腔液を加えた，いわゆる湿式保存法をとっている。
保存期間が短い
場合には これらの方法と本実・験で用いた浸漬法との問に大きな差異はないと思われるが・なお，通気性．乾燥などの点については検討を要する。 今回の実験で7 日後に体腔液が腐臭を発する様になったことは・
保存液として無処理の体腔液を用いる方法の限界を示すと同時に，これが受精カ 保持期間と保存温度との関係を支配する要因の―つになっていることを示唆している。
体腔液に代る保存液として生理的塩類溶液を用いる方法は， 古く

RunnStrびmは 920)

が試み・

s ． $0JUeJinu$

では未受精卵が3 日間その受精方を変えないことを報告している。しかし，その後この方法は余り注目きれず，
わずかにサケで
山本 u949)と岡田ら (1956) が実験しているに過ぎない。本研究で8@C の 生理的塩類溶液に保存したサケ来受精卵は，前述の通りt 日後に約W?% と高い受精率を示したが・その後は 4 日に 48% とやや高い値を示した以外はいずれもその受精率は極めて低かった。
岡田ら u956)は 10 ． 5f の M/6

平衡食塩水に未受精卵を保存した結果について報告している; それによると未受精卵は5 時間後では祈鮮な卵と変らない受精率を示したが，I 日後には26% 。 ，2 日後で¥9% と低減した。しかし3 日後に受精率は急に96% を示し さらにその後の4・日， 5 日にば受精卵が皆拉という極めて不安定な結果に終った。これら2 つの実験に共通する・
生理的塩類溶液中での受精カの不安定な保持結果についてはさらに綿密な検討を要する興味深い問題である。 生理的塩類溶液
・， 媒楕せずに水中に浸潰した不受精卵(岡田， 1954a,での保存後に多発した不受精卵はb) と同様，胚盤を形成していたことから，これらの卵は接水によって賦活された可能性がある。 征って・生理的E 類溶液中の来受精卵は，保存中に少くとも媒精後の正常な受精現象を妨げる何らかの変化を引起したものと考えられる。
多くの佳 類について，その卵門部で精子の凝着と賦活が行なわれる事実がよく知られている (MOnroy,1965 参照)oYanagimach パ 1957)

は二シンで卵門部に存在する精子賦活要素の生理学的特性について調べ，35報。 "。

北海亡さけ ます ふ 止場: 研究嵌 ト南 L・， L 液 @pH7L． 6@ 中でもれ時間でこの要素が破壊きれることを示している。
―方 ，二ジマス体腔液から Sephadex

YOshida& NOmura(1972) はG‑25 によって精子活性化物質を分回抽出している。
これらの事実は少くとも体腔液中に含まれている．叩と精子の相互作
甲 に積極的に関与する要因が生理的塩類溶液には欠如していたことを甜示唆L ている，従って，今後来受精卵の高い受精方を@ 与しかつ長期保存を期するためには． これらの要因を解明L ながら保存花の開発を進めねばならない。

生理自刃 孟頼溶液を甲いて自然 光下 8 でおよび暗黒下 19 でで来受精卵を保存した場合，何れも多数の不受精・・卵を主じた，崖外保存のものに見られた不受精卵では盤の形成が認められたのに対し暗黒 下，高温に保った胚もL@ では胚盤形成が不完全であった。従って．前者では恐らく紫外線の影牟による受精接構の障害が また後者
・では高温による卵肉質の変性が考えられるが・その作用接序についてはさらに検討を加えねばならない。
いずれ
二 しても・来受精卵の受精ヵ 保持を計る際には自然光と高温を可能な限り避ける必要があることは明らかである。

要糸勺

k ， t") の未受精卵を体腔液および生理的塩類溶液に浸漬保

石符lll水系干黄川で捕度した
サケ (Oncorhvnchus

存 L て受精能方を調べ 併せて保存条件について検討を行なった。
・I ．暗黒下8f で体腔液に保存した未受精卵は2 日後まで90% 以上の高 い受精率を保持したが．その後 4 日ま・で受精率は漸減し・5 日以降は30% 以下に低減した。
同条件下で生理的塩類溶液に保存した卵では．I 日後に不したのみで，受精率は著しく低くその受精率は97% を示したが．2 日以降は．4 日 1:48% とやや高い値を・体腔液に比べて受精カの保持結果は極めて不安定であった。
2．

8 でで生理的塩類溶液に保存した来受精卵はI 日後にすでに約 3%

自然光下・と著しく低い受精率を示し，3 日以降．受精卵は全く得られなかった。
逆に死卵は実験期間中．経時的に増加した。

i9 での高温で生理的塩類溶液に保存した未受精卵はI 日後で受精方を全く失って，3 日以上経過し3 ・暗黒下，たもの:: は生卵が見られなかった。
4 ，体腔液に保存した未受糟卵の受精カ 持続期間と温度との関係および生理的塩類溶液に保存した場合に見られた受精カの不安定な保持結果について若干の考 京を行なった。

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献andsperm

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