催熟蓄 養中のサクラマ ス ならびにカラフトマス 親魚、に発生した細菌 性 疾病に関する 研究(委嘱 ) 木村喬久

U 海道大学水産学部微生物学教室)
ヒ

Studies 0n a Bacterial Disease
Occurred fu the Adult"Sakuramasu"(Oncorhynchus
masou) and Pink Salmon(0. gorbuschd) Rearing for Maturity
Takahisa KIMURA
Laboratory 0f Microbiology, Faculty 0f Fisheries,

HOkkaido University, Hakodate, HOkkaid0, Japan

In this study, the author relates a bacterial disease which occurred for the past several years among
the adult " Sakuramasu " [OncorhynchitS masou) and pink salmon (@0. gorbuchtt) reared for maturity at the
Shokotsu Station Of the HOkkaido
Salmon Hatchery. This study has been made to clarify the situations
Of the onset 0f the disease which seriously affected their artificial hatching, to investigate the specificsymptoms
0f the affected fish, t0 identify causative bacteria, and t0 establish diagnostic, prophylactic andtherapeutic

methods.

In the 1st chapter Of this report, the author makes a general account Of the history Of studies made so
far 0n the bacterial disease among
the fish, particularly salmonides, based On a number
Of references
available t0 date, anJ further more described 0n the present status Of studies some fish diseases andpinpointed several problematical points left yet for eventual study
rn the 2nd chapter, the author concludes from the results Of macroscopic and path0‑histologicalobserva
tions On the onset conditions 0f this disease aS well aS the affected fish that findings about such a disease
almost coincided with what can be observed On the s0‑called furunculosis Of the salmonide fish, and justifies
the diagnosis that this disease ;s a kind Of acute infectious one and concurrently that the infection mode
0f this disease is intraderma1, particularly through traumata
In the 3rd chapter, the process is described, tn which 4 out Of many isolates from affected " Sakura.
masu " can be presumed as the causative bacteria.
Thence, the pathogenicity 0f presumed causative" (0. Mas ,u var. fs'kawae),bacterium was investigated 0n goldfish (Carassiiis carassius auratus}, " Yamabe
rainbow trout (Saimo gairdnei'ff W'ideus), and edible frog [Bana catzriiana}, 0r mouse. The above‑mentioned

etiologicalagent was found Lo be the actual causative organism Of this disease because specific findings
in its artificial infection test using rainbow trout macroscopically and path0‑histologicallycoincided almost
perfectly with those in spontaneous
onset cases and because the inoculated bacteria could be recovered in
an almost pure state from the b100d Of the artificially infected fish. It was also clarified that many live
bacteria, i.e. at least 7x106 t0 7x107 cells, are required for artificial infection in the rainbow trout(intramuscularly inoculated). No pathogenicity was warranted by this bacterium @n frog Or mouse
北海道さけ・ますふ化場研究業統 第 2l6 号

北悔道さけ・ますふ化場 : 研究報告第 24 号
Furthermore, this bacterium was taxonomically checked, being based On its morphologica1, biochemica1,
biologica1, and seroloyical properties.
AS a result, the author proposes that the bacterium shall be named Aeromonas salmmicida subsp.
masoucida, because the author findes tt difficult to identify this bacterium as A. salmonicida and also finds
it adequate to identify the bacterium as a new subspecies Of A. salmonicida now that lt does not coincidewith A. salwivnicida subsp. achrc/rno genes; this bacterium has some difference from A. salmonicida ln terms

Of itsimportant properties ;n its taxonomical and serological properties, although

it is very closely related
A. salmonicida.
In the 4th chapter, the selective media Of this bacterium were investigated and selective media forenrichment and isolating the bacterium using bile salts were respectively prepared for trial purposes.
The studies 0n the behaviors Of this bacterium in water were also made, with the results that it survives
for a relatively prolonged period tn tap water Or river water, although it is readily annihilated in distilled
waterand physiological saline. HOwever, all the trials for isolating this bacterium from the water Of the
Shokotsu Station rearing pond
and the water Of rivers in the surrounding area immediately
after theOutbreak 0f this disease resulted negative when the above‑mentioned selective media prepared by the author
for trial purpose were employed.
Based On the above results, it is presumed that this bacterium ls not constantly existing in river water.
In the 5th chapter, the immunologicaland serological diagnostic methods 0f this disease and the resultsin the basic tests relative to possibilities 0f prophylactic immunization are described. First, the immunologi‑
cal responses Of rainbow trout t0 the thermally killed and formalin killed bacteria and the specificities
Uf the antiserum t0 them are both evaluated.
As a result, the rainbow trout indicates distinct immunologicalresponses by intramuscular inoculation
Of the vaccine Uf this bacterium.
It is clear here that the rate 0f the above responses and the specificities
coincide with those Uf rabbits.
Serum samples 0f I0 t0 30 fishes had been collected respectively from individual groups Uf " Sakura‑masu," each same group approx. 3 months after the outbreak Of this disease, and also pink salmon oftoa samegroupat the time

Of occurrence

Of this disease approximately 20 days

after the occurrence,some" Sakuramasu"
immediately
after catch and chum salmon (0. keta) both used for contro1, and some
" Sakuramasu " employed for artificial immunization with killed cells 0f this bacterium.
Using these serum
samples, the distribution Of agglutinin t0 this bacterium was investigated. From this investigation, it wasclarified tliat serologtcal diagnosis and ser0‑epidemical studies 0n the occasion Of epidemical infection of thisdisease were feasible with the fish both at the time Of the onset Of this disease and during a short period
Of time following its stamp‑0ut. Furthermore, assumptive studies were made On the possibility 0f artificial
prophylactic immunization
through vaccination, since " Sakuramasu"
and pink salmon, indicated sharp
immunological responses to this bacterium.
Studies 0n the stability Of the agglutinin Of antiserum in rainbow trout against heating were conducted.
As a result, it was pinpointed that the introduction Of serological technics to the diagnosis Of fish diseases
would require the establishment Of specific experimental measures, tn view 0f the facts that the regularmeans
for inactivating complementswith heating for 30 minutes at 50oC would not only induce coagula‑tion of the serum
but also (heating at over 40@C) would cause a dropping Of antibody values.
Basic experiments

werefurther madethe applicabilities 0f theOncomplement

fixation

test

to

the

diagnosis Of this disease.
By this means, it was made clear that the antigen t0 this bacterium preparedby thermal extraction was found clearly distinguishable from thermally extracted antigens t0 the etiologlcal
Oacteria of fish diseases t0 this disease but different from the A. salmonicida closely related taxonomicallyto this disease.

It wasfurther confirmed that, apart fromafew

exceptional

cases,

noanticomplement

effect, non‑specificantigenicity, Or inhibitory actions to the reaction wereobserved with the heat‑extracts Of muscles, b100d,and other primary organs Of rainbow trout, and that the diagnosis is feasible tn these cases using thecomplement fixation test involving the heat‑extracts Of affected parts and organs 0f the affected fish usedaS

antigens.

?0催熟蓄養中のサクラマス ならびにカラフトマス
親魚、に発生した細菌牲疾病に関する
研究
In the 6th chapter, the results Of basic investigations related to the use Of prophylactics and therapeutics
against bacterial fish diseases, involving this disease more particularly, are fully described.
Six kinds Of usual disinfectants such as phenol and 4 kinds Of conventional common
disinfectants tothe environments
0f fish rearing, for example, potassium permanganate,
were applied to evaluate theirsterilizing effects 0n the bacterium.
Of the former group, mercuric chloride, whereas, Of the latter group,
marachite green were respectively found as the most effective.
The sensitivity of this bacterium to thesechemicals was found nearly equal to that 0f the etiological bacteria 0f other fish diseases.
Thence, the specificities 0f this bacterium to 3 kinds 0f sulfa drugs and 8 kinds 0f antibiotics werealso evaluated to come to the fact that, although tetracycline was the most promising and most effective
therapeutic agent of all the antibiotics tested, sulfa drugs also proved t0 be promising therapeutic agents
due t0 their low toxicity to fish and their low cost.
In recent years, a sign has been sensed in the United States, 0f the increase Of bacterial strains resistantto sulfa drugs in A. salnwmcida, an etiological bacterium s0‑called frunculosis. Hence, nitrofuran derivatives
have come to be adopted as therapeutic agents tor fish diseases, because of their relatively smaller likeliho0d
Of inducing resistance; several varieties Of nitrofuran derivatives are commerciallyavailable at present
in the United States and Japan. In view of the present status, 6 varieties 0f drugs including nitrofuran
derivatives now marketed for control 0f fish diseases were tested for their in vitro bacteriostatic a5 wellbactericidal effects to this bacterium and other etiological agents related to fish diseases, along with
their toxicity using goldfish which were allowed tU pass through the drug baths. Of Z to 3 drugs out of
the above mentioned, studies were further made ln terms of their capacity to assume
resistance against
this bacterium as well as the etiological agents 0f analogous disease.
A$ 4 result, a part of nitrofuran derivatives thus tested was found to have applicabilities 4s prophylactic
and therapeutic agents to the bacterial disease ln fish. HOwever, it was also found out that the bacteriaasthus tested relatively easily acquired resistance t0 nitrofuran derivatives. It was therefore cautioned that
prolonged administration of nitrofuran derivatives needs careful consideration, and rather, it was pinpointed
that the drug bath method would be even safer and more effective for gaining bactericidal effects, and thata new nitrofuran derivative should be developed,
which would have improved properties taking the above
point into cosideration.
目

緒

12B

ぎ

第 l茸

魚類，特にサケ科 魚類の細菌性疾病研究の歴史
第 l 節 癩病病
第 2 節 潰瘍病
第 3節

ビプ リオ 病 c‑ ジマス)

第 4節

腎肢病

第 5節

カラ ム ナリス病および感染性

16fi
16fi
17iK
18A
18H

次
実験 I

金魚．に対する
病原住

芙験n

ヤマメに対する
病原性

実験皿

ニジマスに対する
病原住尖験w

クシガエル(食用ガェ/ )
レ

安鹸v
実験w

マウスに対する
病原性
ニジマスの人工感染試験に

第 6 節 その他の疾病
第 2 草 本病の概要
第 I 節 緒滑蓄養場の概要

2n 頁
70 頁

第 l項

20 頁
20 頁
24 頁
25X

箆， 2 項 血清学的性状

第 4節

柄魚の病理組織学的所見

第 5節 考第 3葦

察

原因菌に関する
研究

第 I節原因菌の分離第2 節推定原因菌の病原性の検討

第 3節

26

H

26H
3l 頁

原因菌の分類学的検討

形態学的，生化学的ならびに

36H
46 H

生物学的性状東験 I

原因菌の加熱死菌イーa‑l株に対するウサギの免疫応答ならぴに
抗血清の

25X
・

発生の状況
柄魚、 の肉眼的所見

34 頁
36 頁

おげる発症最少
菌量

l9 頁

第 3節

34 頁
34 頁

に対する病原住

えら病

第 2節

3l 頁
3l 頁
37 頁

47 頁

特異性
実験H

原因菌の加熱化菌抗血清に対する免疫抗原イーa‑株lおよび A ． 即I拠市小血北海道さけ・ますふ
化場 ;三研究報 舌 第 24 号
ATCC14174

東験m

イーa‑l

ならびにカラフトマス
集団に株の生菌によ48S.

る交 叉 吸収試験A

株 および ． sal

titc4』 hffATCCl4@74

おける凝集抗体の
分布

伽

第 3 節

反応の応用の可能性に関する

株のホ

ルマリン死菌@ご対するウサ

補体結合反応におげる
本店

49R

清 の特異性朴 原の特
原因苗 の加熱抽出

ホルマリリ死菌抗巾清に7 f

異性についての検言寸・する免疫抗原イーa‑

夫鹸H

l株

令反応におよぼす正常= ジ・・

1 問する検討
亡こ性 疾病予防治療剤に
関する

5l 頁

基礎的研究
sin@

第 l節

各種消毒剤の水病原因菌に
対

第 2 節

数種のサ ルフア剤ならびに抗する効果

本病原因菌 の選択培地についての 検討ならぴに
水試料からの菌

検索
防 l 節 検出培地についての
検討
芙険I

の 感受性
第 3 節

木 病原因菌の発育におよば二ト対する殺菌効果，
静菌効果な

文験H

選択増菌培地の試作

らびに任類に対する毒性にっ犬験m

選択分離培地の
試作

54 頁
55 頁

8l 貞
(1)

供試二トp フラリ誘導体なら

C2)

供試ニトロフラリ誘導体の殺血桔学的お断法ならびに(3)

供試二トp フラリ誘導体の静水病原因菌に対ずる二ジマスC4)

水試料からの
水病原因苗の 倹

びに供試閑

56H

筋ヨ如 水病原因甫の 各歴試水中にお

59 H
免疫・

歯 効果
苗効果

第

l節

の

免疫応答に閲する検 、r言

魚． に対する毒性

61H

H
64 @

ニジマスの凝集抗体の
熱 安定

第 2節

自然発生例の
苦養サク ヲ マス

82 頁

84H

本 病原因苗 ならぴに如縁魚病に対する耐性鹿 得について

・

62

(4)

8I a

原 W 菌の二トロフラリ誘導体

本菌に対する二ジマスの免疫
ニジマス抗血清の特異性

8t A

供試ニトロフラリ
誘導体の金

拍 4節

C2)

77 頁

因菌および煩縁魚病原因菌に
巳頁%， 5 茸

74 頁

p フヲソ誘導体の水病原

―ダの影留

索

74 頁

菌性物質に対する
本病原因菌

52 頁
W. 負

窒化ソ
すM ． 汁酸塩ならびに

第 2節

71 H

本病を中心とした，魚類の細南水病原因菌の 分碩に関する総合的考察
筑， 4 草第 6革細胞外 抗原 (EXtracellUlar
anti ば en)

第 3項

影智についての検討

49 頁

収 試験
実地v

マス各種舷器加熱抽出液の株に よる立叉
吸

l4l74

69 H

本菌加熱抽出抗原の補体結および 刀 sd7PWom@C@血 AT
CC

69 貝

検討
犬験 I

ギの免疫応答ならぴに
抗血

実験N

66 頁

木 病の診断における
補体結合

88 X
90H

参考文献

9in

謝
6ラ頁

緒

85X

辞

総括および結言口―近年，遠洋漁業における国際的漁場制約の増大や，資源の枯渇による旧岸漁業の衰微などに関連して，わが国における水産業の体質改善が大ぎな問題としてとりあ
げられてきて，「獲る漁業からつくる漁業へ」のスロ ―ガソのもとに養殖事業，いわゆる栽培漁業が急速に発展しつつある。 わが国においては，かなり古くより―部の淡
水魚の養殖事業が行な3つれてきたが， ここ数年来，悔産魚介類の養殖事業も
駕異的な進展をたどっている。

Tab 卜 l は第4l 次並びに第43 次農林省統計表(農林省農林経済局統計調査部，
l966, l967) を引用し，その
進
?2

親

養中のならびにカラフトマサクヲマス 性に発生した細菌疾柄に

蓄熟
催Table 1. Recent increase of aquicultural production
Kind

0f products

1961

S。 a p ，は@。。 tS
Pearl
MOther shell Of pearl
Shucked oyster

in Japan

Yield

Ratio Of increase

1961/1966

1966

72,976

I3O ， 296

.79

4， 032
23,352

10, 470

2． 60
I 09

Yellow tailOc ぬpus
Prawn
Other fish

2,579
I7
106

35.361
19,690187
384
356

出 @， ve 。

3， 884 ， 472

3， 957 ， 997

DH‥

w ，k，m 。 " ，。， w 。。 dproducts

・

3.36

l． 02

l022l

58

3,023

l5609
99Ol6

5， l42l， 5l5工

Crucian carp
Salmon fish
Eel
Other fish

243l5
84208

Carp

3 @0

46, 5767l

Fresh water

101

・

7.63
11.00

8， l05l， 099・

unit .Of yields ; pearl‑kg, 'Dried laver‑sheets, other‑tons
展状況を示したものであるが，今後の発展はさらに急速化することが予想される。
以上のように，いわゆる栽培漁業は産業的な見地から，わが国水産業の重要な地位をしめつつあるが，元来白
然状態における魚類が自由に海洋を遊泳し，あるいは清例な
河川に育ち，たえず適当な環境を求めて移動しているのに反し，人為的に―定の枠内に棲息することを強いられている
養殖魚の特殊な環境が，魚類の保健，衛生に重大な影轡をおよばしていることは容易に推察されることで，現に養殖魚の疾病による被害は
年 々 増加してくる傾向にあり，養殖事業の生産および経営
K@ 大きな支障を午えているが， ―部の寄生虫症に関する研究をのぞき，

わが国におげる魚病に関する組織的な研究ははなはだ少ない。
すなわち，これら疾病の基機的研究から養殖魚の疾病対策を確立することは，今後の栽培漁業の発展に随伴する最も緊急な問題といっても過言ではない。
魚類の疾病はおよそ次の6 種に大別される。
a．

細菌性疾病 "

2．

ウイルス性疾病

3．

寄生虫症

4．

植物寄生病

5．

栄養性疾病

6．

理化学的環境要因による
疾病

以上の種々の疾病のうち，ウイルス性疾病や細菌性疾病は，その急速な
伝播性，短期間内に大きな被害を与える点，診断の困難な点たどから
特に注日される。ウイルス性疾病に関しては，わが国で確認された例は未だまっ
たくないが，細菌性と推察される疾病は養殖魚の高密度飼育の傾向と相まって年々 多発する傾向にあり， しかも相当の被害が認められているにもかかわらず，それらの多くは原因不明のまま放置され，また
適確な診断なしに予防，治療などの処置がなされるなど多くの問題点が指摘され，養殖
魚疾病に関し提起される多くの問題の5 ち
でも，これら細菌侯病に関する基礎的な研究は特に重要な問題と思考される。
魚頽の細菌性疾病の研究史は第 l章において詳述することとするが，欧米諸国におげる
研究の歴史はかなり
古・く，すでに約l00 年前より研究されており，特に最近20 年間においてはきわめて多数の研究が推進されている。

それにもかかわらずわが国におげる研究の
歴史は比絞的浅く，2 ，43

3 の特定の疾病について検討がなされてきた北海道さけ・ますふ
化場 :研究報告第 24 月
Table 2. The

situationof artificial hatching

workof Pacific salmon t0 HOkkaid0, Japan

Year
1956
1957
1958
1959
1960
1961
1962
1963
1964
1965
1966

hatching places

Num

ヒrS Of

58
61
62
62

82
82
82
80

43
53
53
48

50
65
60
53

60
59
59
63
65
65

75
71
72
76
76
76
76

39
48
42
38
36
48
46

46

66

Table 3. The

Rivers of smolt
releasedrecord 0f hatching

operation Of Pacific salmon tn HOkkaido

60
49
44
43
55
52
SalmonHatchery, 1966

N0.Ofadult
fishes
N0.ofeggs
collected
N0.ofEggsused N0.
releasedofsmolts

SpeciesKOkanee

20,7188， 348 ， 000
2， 857 ， 000

348,469,000
13,622,000
8， z35 ， 000
I， %7 ， 000

TO ぬ l475,988374,458,000

371.713.000

chum

丸lmon

396,190348, 571,000

Pinksalmon49 ， 3I6

14,682,000

9， 764"" Sakuramasu

272,036,000
11,273,000
7 333 ， 000
I， l08 ， 000

291,695,000・にすぎない。
近年養殖事業の発展に伴い，潮時活発な研究活動が進められてきた。
しかし未だ細菌学ならぴに
免
疫血清学的な領域からの基礎的研究はきわめて少ない現状にある。
著者はこのよらな見地から魚病，特に細菌性魚病に関心をもち，数年来北海道北見地方において蓄養中のサク
ラマスならびにヵヲフ下マスに発生する
細菌性疾病について，細菌学ならびに免疫血清学的な基礎的研究を行なってきたが，その得られた知見の若干は，今後の魚類の細菌性疾病研究の基礎的資料として寄与し得るものと考え，

ここに報告する次第である。

北悔迫におけるサケ料魚類の人L ふ化事業は， 遠く明治lC@年 (l877) 北海道開拓使外人教師U ． S TREATの進言により，札幌市
借楽園内においてはじめて試みられて以来，潮時発展の―途をたどり昭和9 年 (l934)には

すでに約50 ヵ所余のふ化場が設置されていたと記録されているC高女 他， 1934) 。 最近約10 年間におけるふ化事業の状況を， " 海道さけ・ますふ化場事業成績書" (水産庁，l956‑l966) より集約するとTable2にみられる
プヒ

ごとく，全道におげる
約 60 の水系に設置された
約 80 ヵ所の捕獲場において
湖河親魚の捕獲・採卵が行なわれ，50‑60 ヵ所のふ化場で人エふ化された稚魚は4O‑50 におよぶ各水系に放流されている。
，rable3 は 1966 年度におげる魚種別のサケ・マス
増殖事業の実績であるが，総計50 万尾の親魚が捕獲され，人工ふ化稚魚の放流数は約3
億尾にもおよんでいる。
このような人工ふ化は，天然に成熟した親魚を捕獲し挟 卵，ふ化することが最も理想的であるが，近年入然
産卵場の荒廃や河川の汚染など
種々の理由から，比較的河口に近い地域で湖呵初期の親魚を捕獲してその日的に場合には湖河初期の捕獲魚は未成熟のため，相当長期間にわたって供しているのが現状である。 もちろん，多くの
生賀や薔養池に収容し催熟させているが， このような処置をいわゆる"蓄養" と祢している。
Table4はl966 年度

における魚種別総捕獲親魚に対する蓄養魚の比率をしめすものであるが，いずれの魚種においても80 九以上の掩獲親魚が催熟のため蓄養されている。
もちろん
蓄蚕期間は魚種によってかなり異なり，サクラマス(Ow枇む 廿0 @) はサケ (0 ．

たetd) やカラフトマス(0.

。 MJW/， M5% 加) などと異なった生態をしめし，産卵年に達した
親魚

gJr 比

Z4

Retaining

placesChum salmon
Pink salmon

66
29

"

22

Tabl* 5. The
Chum

1956
1957
1958
1959
1960
1961
1962
1963
1964
1965
1966

68,876
165,970
191,217130,205
111,252
180.092
140,307
149,728
162,185
352,079
140,300

1956

1957
1958
1959
1960
1961
1962
1963
1964
1965
1966

Fishescollected魚親record 0f retaining adult females for maturity

Species" Sakuramasu

養中のならびにカラフトマサクヲマス 性に発生した細菌研究疾

蓄
熱
催
The

Table. 4.

fn HOkkaido

Rate

171,088
16,268140,300
14, 5096， 4825， 890

82.0%
89 2
90 9

Pink

・

10,613
18,39819,890?.498?.431
11,61819,051
14,44726,756
67,03518, 148

15.0
11.0
10.4
5.8
6.7
6.4
13.6
9.6
16.5
19.0
12.9

42,536
12,27529,27021,3006， 65910,225
19,555
18,776
18,54816,877
14,059salmon

2,763
784
3,579
1.086
599
1,234
3,017
900

6. 0
6.0
12.2
5.1
9. 0
12.6
17.4
5.0

2,739
1,716
1,847

14.8
10.1
13. 1

Chum

Pink

794
1.338
3,433
1,943
2,246

・

loss of retaining females in HOkkaido Salmon Hatchery,salmonloss Of retaining females tn Shokotsu egg‑takingl， 27l1966

Fishesretained

Table 6. The

162
156
415
183
1.051

Salmon Hatchery,salmonl， 337
.0
、

338
700

l， 056
37
I5
I3
46
114
36
23

216

l， l07482

2， 00I396

l， 30743は早い地域では3 月頃より棚上がみられはじめ， 4‑5

5， 73l
4 ， 51l4， 246
4 ， 086

738
5l5
370
356
208

l3.o
l1.0
8. 7
8.7
6.6

2 ， 309l， 7372， 762

587

25.4

4.037

,154

421

24.2

476

l7.2

1.0l8
356
585

25.2

115
61

69

60

74

26
52

35
34

l， 048

129
89
189
624

60
28
34
60

275

120

44

482

102

21

2 ， 986
5， 890ll. 9
9.9

place,

salmon

74
42

I2

45
187
67
174

I8
31
I6

80
199
421

97
123
216

324
564
50
32

月に主群が河川に入り，9 月頃に至ってようやく成熟す

ることが知られている
佐野， 1964) 。 このため5 月中旬から各河川口において親魚の捕獲がはじめられ，以後9
月中旬・ないしく

10 月初旬にわたる
比較的長期間の蓄養が必要とされ， これについで
カテフトマスの薔養期間が 艮，サケの蓄養期間は最も短い。

薔養中は自然環境と異なる環境のところに多数の魚が収容されるため， 種々の原因によづ て多数の箆死魚を生， 薔養施設の改善は人工ふ化事業におげる
技術的な而での―つの大きな問題とされている。
ずることが多く.Table5 は最近約10 年間におげる親魚の蓄養期間中におげる魚種別の姥死状況を集計したものであるが，いずれの魚種においても
箆死は少ない年で6 ガ前後，多い年では2y/% にもおよぶことが記録されている。
これらの姥
死
Z5

北侮道さげ，ますふ
化場二研究報告第

24 号

については
種々の原因か推察され。 特にこれらのうちには
細菌性疾病によるものも相当数存在すると
考えらおる。

本論文は北侮道さけ・ますふ
化場 ・北見支場・
渚滑蓄養場において，蓄養サクラマス親魚ならびにカラフトマ
るか， 渚滑蓄養場における最近
約ICf年間のス親魚に発生した
細菌性疾病についての研究結果をまとめたものてあ
蓄養親魚の魚種別弊死状況はTable6 にしめすごとく， 他魚種に比較しサクラマスの姥死は特にめだち，多発年記録されている。これらの姥
死魚か明らかな細菌
性疾病の特異症状をしめすことかて約60% にも達することがら，著者は1963 年その究明方を依頼ざれ，木研究に着手した次第てある。 また同表にみられるごとく，その後のl964 午， 1965 年にはカラフトマス
親魚にも異状舞死かみられ，これらも前記したサクラマス
親魚の場合と同―の疾病によるものてあることか明らかとなったので， これについても併せて検討をおこなつた。

第]章

魚、 類，特にサケ科 魚類の細菌 性疾病研究の歴史

欧州諸国においてはかなり
古くより魚類の細菌性疾病に関する研究が始められ，すでに
w929 年にWIILLIAMSON

u929)により当時におげる
研究の総述がなされている。
それによれば水中に存在する病原細菌の多くは条件的病
原細菌 (facultativepathogen)で，また魚類など冷血動物の細菌性疾病は. 般に全身感染型をとるこ'とが指摘されている。

特に最近の数10 年間におけるドイツ，アメリカなどにおけるこの領域の研究はぎわめて
活発で，それらの研究(l953), RUCKER

et ．

a1. (1953). SNIESZKO(1953, 1964), PARJSOT・

成果についてはGRIFFIN(1958),BULLOCK(l964) らにより，また海産魚の疾病についてはS@NDERMAN(l966) により総説されている。
最近
POSTCl965) は過去lC@
年間におげる魚病研究全般に亘る総説中において，魚類疾病の研究におげる―般的水準はと
あ るいは家畜のそれに比べかなりおくれており，また研究層もきわめて薄いことを強調すると共に， ―方未ト

開発の問題が数多く存在することから，はなはだ興味ある研究分野であることを指摘している。
著者の研究対象魚のサケ科魚類は養殖魚としての歴史が比較的古く，したがってそれらの細菌性疾病に関する研究もかなり歴史が深い。

わが国においてぼ古くは鮭鱒ふ化放流事業に関連したTAK EDA(l936) のすぐれた研究があり，また近年急速く而

var ．わが r硲 感染症に関する(1956, 1957) ， SAJTOet.al. (1964)， 岸ら (1958) の報告，また保科 (1962) のウナギびれ
赤病に
EGUSA
(l965, 1966, 1967) らのウナギのフタヵブリ病ならびにドジ，ウのヵラム ナリス病に関関する研究，
する研究，楠田 (1965 ナの海産魚の潰瘍病に関する研究など注目すべき報告がみられる。しかし近年特に米国にな発展をたどっている
二ジマス養殖事業に関連して， 同 魚の Vibrio piscium

HOSHINA

おいてみられるこの種魚類の細菌性疾病研究のめざましい発展に比べ，わが国の研究水準はかなり低く ，未だ多くの問題が残されている。
以下，サケ科魚類の主なる
細菌性疾病研究の動向の概要について述べることとする。
第]節

癒

瘡

本病は EMMERISCH

病 (Furunculosis)&WEIBEL(l894) pC より発見，記載されたサケ科魚類Q 伝染性疾病で， 病魚の体去に魎唐が形成され，末期において出血性敗血症を惹起しついには 死の転帰をとるにいたる。
本病はその後欧州諸国や米国の各地で発見され，MCCRAW(l952)

により詳細な
総説がなされている。
わが国においても各地で観察されているようであるが，末だ原因菌の分離，同定に関する詳細な
報告はみあたらない。
本病は魚類の細菌性疾病のうちでも特に多くの研究が報吉され，原因菌として，非運動性で褐色の水浴性色素と命名されたが， 本菌種はその後B"cterium

WEIBEL

皿as
Cl963) はその生化学的性状がAftromnnas 属としてはかな

属 0l896)

属に移されて現在に至っている。なお最近 SMITH

仰Ol894) によりBacill 耶 Riirm @ぬ小 (l894)
・を産生するグラム険性桿菌が分離され， EMMERISCH&に，さらにGRIFFINet.

り異なる魚のあるところから， 本菌に対して Necromonasal. (1955@) により Aerom

なる新展を設定することを提唱している。

魚病原因菌の多くは前述のごとく
条件的病原菌(facultativepathogen)と考えられているが，このA ． 5HLAnm
脚□ ぬは後述の Hemo タ ihilitspiscium@とともに数少ない
絶対的病原菌(o0bligatepa小 oeen) と考えられている
CSNIESZK0.
1964) 。

J． 6

関マ
こする研究カラフト

養
サ
@
に
疾
性中
ク
発
病の
ヲ
生
にな
マ
しら
ス
たび
細菌

韮熟
崔

本菌は前述したように水溶性の特徴ある 禍色色素を産生し， 本菌分類の主要なKey とされているが(BULLOcKl964) ，その色素産生能に関してはGRIFFINetal C953 りによる詳細な研究がある。 DUFF

・

・

，

(l937) は木菌を集落の形態からR ， S および G の 3 型に分類し，またその後それらの血清学的検討から
2 血清群に科別してい， N39) 。

―方 BLAKE& ANDERsoN

Q 刀0) ほ本菌忙血清学剖 J C homogenEouS・る (DUFF

ライド凝集反応の応用について報告を行なっている。

DUFF(l962)

・

al Q964)・は本病の推定診断法としてスは本菌 ワクチソの経口投与により， 供試魚に強い免疫性が附与されることを報告したが，その後& mIDDLESNIESzKoであるとし，補体

廿結合反応による
診断の可能なことを報告しており，また最近 RABBet(l949) に追試されて否定的な結果が報告されている。
最近 KRANTz

et ．

a@ ． (l964" ，t964b) は本菌のアジュバソドワクチソの腹腔内 接種による予防免疫の可能性について報告し，またSPENcE
FRYER(1965) は能動免疫のみならず受動免疫についても検討を試みてい 。

&

・る

本病の予防・
治療剤に関する研究も数多く， 本菌に汚染されたサケ・マス
魚卵の消毒についてぼ Diaminomethyl
aCridium

Chl0 ， ide の応用に関するBLAKEet

比較検討を行なったGEE& SARLES，，l・(l942)

をはじめ多くの研究 (GUTSELLてもFLAMs(1950)(1930) ， SMITH

C942)

らの報告があり，また多数の薬剤のの報告もみられる。
また治療剤としてのサ ルファ剤の応用につい・

l946 ， l947 ， GUTSELL&SNIEszKo・

l949" ， SNIE%KO&、 1957 。) がみられるが，近年米国において本菌がサ ルフ / 剤に対する耐性を獲得する傾向のみられるこ

BULLOCKとから，
POST(D59) ， POST&KEISs

も同様の研究を行ない，LEAMAN(1962) によりFurazolidoneによる治療が検討され，
HAvELKA(1966)(l965) は予防・治療剤としての
ク p ラムフ，ニコールについての
検討を行な

っている。

(l968) は海産魚における本菌の病原性について注日すべき研究を報告している。

なお，最近文 OTTス ならびに； ラフトマスの
細菌性疾病は，水病にきわめて酷似するものであ
本論文で著者が報告するサクラマ

るが，その詳細については
後述する。
第2節

潰

瘍

病 (UICer dISeaSe)

本病は1899 年 CAT ，KTNs

により最初に報告されたサケ科魚類，特に米国北東部のふ化場において主としてヵヮ

マスの稚魚に
多大の被害をおよ ぼした伝染性疾病で，体表面に潰瘍状の患部を生ずることが特徴とされている(FIsH, 1935")。 その症状が―見前節で述べた櫛槍病とよく似ていることから，発見当初はその原因細菌にっいて多くの混乱した報告がなされている。
その後，MARSH(1905) によりはじめてmCerの報告した疾病や後に米国においてMO0RE

diSease なる病名が用いられ，欧州におけるHOFER(1924) ，

FIsH(1934) および woLF

(l939)

れた疾病ほ ， 本病とまったく同様の症状を呈することが明らかにされた。
しかし原因
菌 として FIsH片。
位俗 Ay ぱ r0 カ A@JM を分雑，報告し，DAvlS(1904)などにより報告さ

仰(l934) は(1946) は B ． sdfw @而血 に近似する―桿菌を分離，報告した。

しかしこれら
分離菌による芙験的感染試験においては問題点が残されていた。
その後 SNIESZKO&FRIDDLE(l950) は原因菌として―新菌種を分離し支験的感染試験において自然例とまったく同様の症状を何現し得た
UlCcr diSe"Se の原因菌としての本分離菌をM 柳川WM ク @sC而 川と命名し， (SNIEszKoe ． al ．
ことから，
D50) ようやく本病の本態が明らかにされた。
この R ・が 5C 仇川 は前述のごとく
魚 病原因 菌のうちで数少ない
Ohl;gate patho がn の ― つとされている(SNIE ぽKO ， 1964) 。 本菌はグラム険性の
両端浪染性桿菌で，発育困子
ヒとしていわゆるV 因子． X 因子に対する要求性は認められないが，培地へ魚肉ぺ プトリまたは
無力 n熱魚肉浸出液の 添in を必要とすることがSNIESZKO

COcarboxylase またはATP
する BULLOCK(l950) により報告されている。 その後 GRIFFlN(l965@) の 研究心報告されている。

・

本病の治療については，サルファ剤や抗生物質の応用が種々検討されているが叩ULLOCK
et

引

・

l95L

，

SNIESZKO(t95 刀 ，PIPERであることを指摘している。
また MCCRAw
い， SNIEszK0(l951, l952) はをも@@)て前二者の添加を置換し得ることをみいだした。
またその後本菌の培地に関・

l965 ， SNIEsZKoの総説はテラマイシソ ならびにク p 口 マイ セ チソの最も有効(1952) は本菌 と前述の魎瘡病との関連について
詳細な総説を行な(l958)(l 巧9) はヵヮ マスのStr ぬ n 間における愉瘡病ならびに本病に対する抵抗性の差異についても検討を行なった。
?7

北海道さけ・ますふ化場 : 研究報告第 24 号
わが国においては
本病に関する報告はまだみあ
たらないが，著者ら(l967) は北海道上川地方に発生した二ジマスの細菌性疾病が本病に近似していることを
報告した。
第3節

ビ 7? リオ病 (ニジマス ) (Vibrio

diseaseOf rainbow

trout)

第 l および第2 節において述べたサケ科魚類の2 種の細菌性疾病は，わが国におげるその発生が不明確であるのに比し ，水病は本邦においてはじめてみいだされたサケ科魚類，特に二ジマスにおける伝染性疾病で，第2 次， 岸 (l956J.
大戦後二ジマスの他中養殖事業が急速に発展した際に， この痩病による被害が 谷地で観察され

HOSHINA

C1956), SAITO 0l956) らにより本病のVihrho 属の細菌感染によることが明らかにされた。

水病の症状は前述の緬槍病にきわめて類似し，筋肉に櫛盾様の患部を形成し 末期には全身的感染症状を呈し(l957) はその後この疾病の原因菌を H けfo ptSC ル川 va ，・ね加
ni.r.%sと命名し，(l927) がコイおよびその他の魚類の流行性疾病の原因菌 として記載したVifbr， io piscium の―新変種として報告した。
その後，岸ら (l958), SAITOet.al u964) の分離した菌株も本菌 と同―種であることが明らかにされた。なお村江ら (l959) が鳥取県下の二ジマスより分離した菌株は ， Vibrio 属におげる HRIBRGの分類CWILSON&
仙 LES l964) によれば第 I 型に属し，岸ろ (1958) の分離菌株は第m 型に属す菌株であることがそれぞれ報告されている。また， SMITH (l961) は本菌はむしろ V brio aneuMillaru 川の変種と考えるべきであると提唱し， ―方． 林ら (1964) は滋賀県下におげる二ジマスの同 ―疾病の原因菌として，本菌とほほ同 ―性状をしめす細菌を分離したが，その種名についてはい卜i@ientゆ。
@holerag とすべきことを提唱している。
て死の転帰をとる。HOSHINA

・

DAVID

・

ぁ

SAITO et. al.(l964) は種ヵの魚類や変温動物に対する本菌の病原性について検討し，動物種により感受性がM L D ・を l0" 。me と報告し，林ら Cl964@0) @t100‑l50e の二ジマスにおける M ． L ． D ．を 5xl0' 個細胞と報告している。
また， SAITOet. al. (l964) によれば温血動物については
病
原住は認められなかったが， 村江ら (1959) は培養条件によっては温血動物にも明らかに毒性をしめす
物質が産異なり，ニジマスは最も感受性が高く・・，生‑され，その毒成分は比較的黙に安定なア，ソ様物質であると報告している
感染経路について， SAITOet・

al. 0l964) は経皮感染を主張しているが，内田 (l96l) は経口感染が最も自然的であると述べている。
林ら (l964b) はフク チソの筋肉内接種により強い予防免疫が獲得され，経口投宇 によってもかなりの免疫効果検討を行なっている。
SAITOet.
が認められると報告しており，遠藤 (1964) も経口免疫についての

at. (l964)

チソの筋肉内接種の
l4‑90 日後に血清中に凝集抗体が出現し約 3 ヵ月間持続することを観察しまた 保科(l968)
はワクはク F ―ム ワクチソの接種により，接種後l0ヵ月間は明らかに凝集抗体が保持されたと報告している。
治療剤としてのサ ルファ剤の有効性は保利ら [1957) および SAITO et al u964) により認められ
・

・

また テ

マイシンも有効であることが明らかにされている(保科ら 1957) 。 林ら Q964" ，D65) はフ ラリ誘導体の治
療効果について検討し，また池水の消毒についてはマラカイト
緑が有効であることも報告されている (SAITO
ラ

・

et ．

al. l964,

保利，干葉 l957) 。

第 4節

晋 肪 病 (Kidney disease)

本病は米国においてみいだされたサケ科魚類特有の疾病で， 特に養魚場に飼育される稚魚に発生し大ぎな被害を与える。本病は BELDING&MARRILLO1935)

により最初の記載がなされ，その後EARPet.all953 年までに報告された
本病に関する研究に@) いて総説がなされており，最近ではWOLFC1964)

・u953) によりの詳細な総説がみられる。
外見上の症状は―般に顕著ではないが，腎臓に白色の隆起した特徴ある病変が認められ，眼球突出などの症状もしばしば観察される。
・ヵヮマスなどでは体側に大きな腫脹性の患部がみられる
場合もあり，ニジマスやrhinnr.k s@lmon では体側に小さな吹出物様の宙 部が形成されることもある。 このような思部には赤色またはクリーム
色の膿汁が含まれている 。 また腹水の増量もしばしば観察される (WOLF，

1964) 。

原因菌はグラム陽性，
非運動性の双桿菌で，栄養要求性がきびしいことが知られている。
ORDAL&EARPu956)
は本菌検出用培地について検討を行ない，その組成にっいて報告している。本菌の詳網な性状にっいては末だ不48

WALLISet ．

じtitenum 属の細菌と考えられている。

は種々の paC 汁C Salmon

al ． (1953)(l955) は rhinock

salmon親

RUcKER

養中のサクラマならびにカラフト ス 性研究に発生した細菌疾病に関する蓄
崔@熟
明の点も多いが，その形態上の特徴から COryneba&

における本病の発生状況にっいて報告し，また WO0Dの親魚においても本病の発生をみているが， この観察は稚魚のみならず
親魚においても本疾病の発生することをみいだした
最初の報告である。 感染経路についても不明の点が多いが， 経
反感染が最も自然的であるといわれている(WOLF&

DUNBER ， l959L 。 また本病は特定の地方に多発し地力病(1963) は用水が軟水のふ化場に多発する傾向を認めている。
本病の治療に関してPIPER(1961) はエリスp マイシソ ，また RUCKER
et al(195l)， SNIESZKOet al(1955) ならびに ALLISON (l959) はサルファ剤の応用について検討しているが，両者はともに優れた治療剤とは認め難いとしている。
また， WOLF(l959) は34 樋の薬剤についてその効果の比較検討を行ない，前述のエリ
ス p マイシソ およびサルファ剤を含む
im種の薬剤の有効性を認めている。
なお，HUNN (l%4) はヵヮマスにおげる
本病の生理病理学的検討を行ない，EHLlNGER(l963)
は lake trout
的傾向がみられるが， WARREN・・・

における本疾病とりソバ
肉腫の合併症の発生例について報告している。
多くの魚類細菌性疾病はグラム険性菌の感染に起因するが，本疾病の原因菌がグラム陽性菌である点興味深
い 。 しかし，わが国においては未だ本病の発生に関する報告はみあたらない。

第 5 節 カラ ムナリス 病 および感染性えら 病(COlumnaris disease and Bacterial gill disease)
これらの疾病はいずれも粘液細菌(MxyobacteriumJの感染によるもので，最初サケ科魚類にみいだされたが，その後サケ科に限らず種々の淡水魚においても激しい流行の発生することが明らかにされた。
症状は，口部， 躯幹部，皮膚，ひれ，えらなどに灰白色あるいは淡黄色の病斑が発生し，病状が進行すると膵欄，崩壊，出血斑
などがみられるよ5 になる。
本病は DAVISOl922)

により発見され最初に記載されたが，原因菌が円柱あ
るいはドーム状の菌体集合体を形成することからRacill 硲 coluw 仰ris と命名された。
その後 ORDAL& RuJCKER

からはじめて単離され，種々の性状から粘液細菌のc 伽血roCocC%5co

ぬ肋仏小として記載された。
GARNJOBsT(l945) は Bullhead (Ameiurus(1944) によりサケ科の病煎、ne 防losiis) の 病角から，上述のChon@drococcus colu 仰如かにきわめて 類似した細菌を分離したが，その菌株はfruitingbodyの形成能を欠くことからCがtophaeacolu仰Mris として報告している。BORG(1960)

は粘液細菌感染によるサケ科魚類の種々の疾病に関して詳細な検討を行ない，
fuMngbHyの 形成能は培養条件により変化する点から，上記 GARNJOBSTC1945) の Cytop 肱w

しての問題がのこされていることを指摘している。 ， 方， BORG

はサケ科魚類病魚から発育温度域のきわめて
低くcoluw 仰れ5 はこの点に関，かつfru ぬngbody 形成能を欠く菌株を分離し，C ッ fop 匁U 力り。かOpAfJd と命名し，この菌種のある種のbiotype

はサケ科魚類のBacterial eilldisease の原因菌 となることを報告している。また， FISH (19351b) は米国南部に発生したサケ科魚類の感染性えら病の原因菌は DAVIS(1922) の記載とは異なることから，その疾病をWeStern
typegilldiseaseと呼ぶことを提唱した。

以上のように，いわゆるヵラムナリス病と感染性えら病の原因菌ならぴに両疾病の関連性については
末だ不明
確な点が多くのこされている(SNIESZKO ， l963 り。
本病の予防、治療に関してDAVID(l927) は硫酸銅溶液による薬浴消毒法を推奨し，KINCHELOE(l962)
Cl963 。 ) は， 特にカラムナリス病は．サルファ剤または抗生物質Q 投与が効果的であり，感染性えら病の予防・治療にはROcca@,Pyridylmercuricacetateならびに Lienasan による薬浴法を推奨している (SNIESZKO l963b, l949)o 更に後者のPyridylmercuricacetateのは 44 種Q 薬剤について比較検討を行なっている。
釦 IESZKO

・応用に関しては，・ RUCKER(1948) および BURROwS‥の 報告もある。

最近 ANAcKER． &LRDALに感染する ha 。 ほ ， iophage(l95l) の報告，LgnaSan(l955) ならびに KINGSBURY&ORDAL
に関して詐細な研究を，また ANACKER&ORDAL

については RUCKER(l956)(1966) は C 加wd ，， O印CCMCo

加仰叩
?@S
・

Cl959") は本菌種を 4 血清群に科別し得ることを報古し，また本菌種のある菌株は他の菌株を溶菌する hac 仕 ， ioflne 産成能を有することが報
古されており (ANACKER& ORDAL,l959b)，

これらの研究は両疾病の関連性についての解明上庄口すべきも?9北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
のと考えら
* ，る。
わが国においては
最近ドジ，ウにおけるC 肋ぬroCoCCMcolM

仰仰，心感染症にっいての若林・ 江草 (l966 ， l%8〃の報告がみられ， 江草は感染性えら病と考えられるウナギの柄魚からも該菌の分離に成功している(若林・江草

1967 ， 江草 l968)。 また，佐野(l966) はえ らに病変を有する
二ジマスから Chondroroccus様細菌の検出されたことを報告し，著者も最近原因不明のえら 病に罹病した養殖ヒメマス
から，
BORGu960) が報告したC がOp 加叩
psヅ 。乃 rop f/d と同様に，比較的発育温度域の低い粘液細菌を分離し日下検討を加えつつある (木村・坂井1968) 。
なお最近 AJMAL & HOBBS(l967) は英国におけるカラムナリス病についての報告を行なっている。
方第6節

その他の疾病所節までにサケ科魚類の主な細菌
件疾病の研究に関する歴史的経過を概説したが，その他に水中南 在 細菌のAeromonas

属，

あ るいは Pseudomonasている CSNIESZKO& BULLOK・属の感染病と考えられている二ジマスのred monthl965,

LI & FLEMMING・l967)oしかし最近ROSSet.

disease が知られal. (1966) ばこの疾病の原因菌として EnterobaCteriaceae科に属す細菌の分離を報告している。
また，サケ科魚類の抗酸菌感染症に関しても
古くからの研究(EARPet． al ． l953 ， ROSS

1960 ， ROSS&JOHNSON

け62 ， PARISOT&WO0D

1960) がみられ，サケ科に限らず魚類全般にわたる
抗酸菌感染肝に関するPARISOT(l958) ならびに CONROY

口先7) の総説があり， また最近却 IESzKo

CAMpBELL&MAcKELvIE(l968) はカヮ マスについてそれぞれNOCadia

その他わが国においてはTAKEDA

et ． al ．

(1964) は二ジマスについて，

感染症に関する
報告を行なってい(i936) (C ょ るふ化卵膜軟化症に関する古い報告があり， また西野・尾崎(l956) によるサケ稚魚における菌種不明のグラム険性桿菌感染症に関する報告がある。

本病の概要

第2草
第 ] 節 渚滑蓄芸 場の概要

木蓄養場は， Fie ． l および Fig.2 にしめすごとく， 北悔道東北部の渚滑任および北見富士山麓に源を発し，オ

ホーツク海に開口する長流渚滑川の河口より
約 2km

上流の地点において合流する支流無名川と，本流との分岐

この緒滑川はサケ・マスの繁殖場として北海道有数の河川である。
点に設置されており．

無名川 は延長約2km ，水源は湧水であるが水量はrt 校的少なく，ある程度本流の干満汐 の影響は受けるが催熟。
親魚の蓄養には好適の場所である。 蓄養地は Fie ． 3にしめすごとく渚滑川本流との合流点近くに 位 筒
し ，河中約5． 5mの場所を合成樹脂製" イプ格子

Okhotsk Sea(l964 年以前は木製)で 2 重に仕切り，いわゆる2 恥
留め蓄養池として利用されている。
長さ約l8m ，面

積約 100m‑ のもの2 面，水深約45 。 m である。

捕獲場は渚梢川と無毛川との合流魚より約l50 皿上流の本流に設置されており，ここで捕姓された親oKitami」魚は直ちに選別され， 魚体に担傷がなく蓄蚕に耐え

apan SeaoSappo得ると考えられる
健康雌魚の全部と雄魚の―部が萬「0

養池に収容される。

第2節

発生の状況

YakumoFie ． 4 は l963 年‑l967 年の本蓄養場におけるサク

Hak0 七ね
Pacific

ラマスの姥死状況を各月旬間ごとに集計して図示したものであるが，同日より明らかなごとく，いずれ

Fig. 1. The
20

Ocean

location 0f Shokotsu riverフトマ る研究

with

に
性中
発の
生サ
しク
たラ
細マ
菌な
疾ら
病び
にに
関ヵ
すラ ス
養

蓄
熟
@
崔
Map

ス 親魚

showing the surroundingb 0f the Shokotsu River

beach seine

Fi9. 3. Map showing the surround ings Of the Shokotsu rearing place
Fishing placewith fish trao

31

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
1963 N=67U

ST 564

一山ン比七つ︒
P
九レ ノのo二

さての PqT
巾
︒で一
hP
十円山

1ggm 1967

1 早0

@@J60

of

rearingaL
ilay

in mortality

tC dl lC u
3p

哀 PHo

Change" Sakuramasu " in Shokotsu rearing
from 1963 to 1967
[ ; start 0f rearingf ; start 0f egg collection' ' ; accident expect disease

June

Jul

Aug.

3ep.

乏 p‑0‑‑ 小ヨTO‑
口 ‑ 二 @ 寸

Date (June, 1965)
22

Fi9

MOrtality

Of rearing adult" Sakuramasu" @n Shokot&u

rearing place in 1965

親魚

k3
n6 @9
pl

dult

frOm

ectiOnsalmon in Shokotsu rearig place @n 1965

ta
l
aOu n
an

rk
ln

(1965)

蓄熟催

一山トオで二山 * 卜卜 ︒ト山二

ま仁山

トレで心

︒ で一

hP

︵ 日市 P ぃ ︒ 三

Date

Fig

MOrtality@of rearlngjadult pinkg3

養中のサクラマならびにカラフトマ ス に発生した細菌

Sept

Aug.

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号の 年も菩蚕開始の5 月から箆死がみられ，5 月 T 旬 より 6 月の間をピークとし， 7 月以降の弊死はほとんどみられない。なお姥死数の最も多い5‑6

月は生理的に脱鱗しやすい時期で，そのため捕獲，蓄養池への収容などにともなう機械的
刺戟による脱鱗など表皮の損傷の多い時期である。 また，この時期は水温の急激に上昇する時期でもある。
l956 年度におげる本蓄養場の水温変化とサクラマスの姥死状況をさらに詳細に図 示するとF@e 5 にしめすごと・くである。 すなわちこの
年は 6 月末までに累計311 尾のサクラマス
親魚が蓄養されたが，6 月 5 日より l8 日にかけ異状箆死が発生し，これらの
弊死魚の大部分において後に述べる細菌性疾病の定型的症状が認められた。
弊死
各日の館死魚の比率，すなわち弊死率のモ魚の累計はl29 尾で全蓄養魚の約40% に@‑ よび， 薔養現有数に対するードは同じく同図にしめすごとくであり，水病の発生状況はきわめて短期間内における
爆発的発生で，約2 週間
後には小康状態となり定型的な急性伝染性疾病の様相をしめした。
以上のような
蓄養初期における本病の大発生は，前記脱鱗や水温の急上昇などと密接な関連を有することが推定されるが，現在までの
研査結果のみからは末だ断定し得ない。
，毎年9 月下旬にも若十の姥死が観察されるが? この時期は採卵期に入り選別操
なお Fig.4 にみられるごとく作などが行なわれ， 蓄養魚に種々のストレスをあたえる可能性の多いことから，この時期の大部分の姥死はこれらの要因によるものと推察される。
スと 異なり毎年8 月上旬頃より捕獲・蓄養が開始され，サクラマスの場合に比―方，カラフトマスはサクラマ
し蕎養期間が短期間で，過去においては
蓄養親魚の異状駝死はほとんど記録されていなかった。
しかるにTable
6 にみられるごとく
i964 年ならびにl965 年度においては異状な弊死魚の増大が観察され，特に1965 年には総計約400 尾におよぶ塊死をみた。l963‑1967年におげる本苦養場のヵラフトマス
親魚の姥死状況を各月旬問に集計して 図 示するとFig ． 6 のごとくである。 同 図によりW ちかなように，この場台にもぎ わめて短期間内に異常弊死が―の症状が認められた。
発生し，かっ人部分の擁死魚において前記のサクテマス病魚どまったく同F 巾 ． 7: よ l965 年 8 月より9 月末までり水温の窒化ならびにカラフトマス
弊死率を図示したものであるが，8 月中

旬より水温の
急激な上外がみられたことも関連してか，前掲Fig.5 の サクラマスにおげる
疾病大発生に引き続き
9 月下旬よりl0 月上旬にかげ
大景の姥死が記録され，8L

より 9L にかげてのヵラフトマス
雌蓄養魚累計l， 307

尾の約30 ガに相当する42l 尾の姥死がみられ，サクラマスの場合と同様にきわめて激甚な裡古を与えた。

第 3 節 病魚の肉眼的所見
水病は後述するごとく，第l 章，第l 節において述べた
櫛眉柄の病原菌Aerom。nassalげ側 m@ci 血 に近似する細菌の感染に起因する
伝染性疾病で， 躯幹部筋肉にいわゆる魎宿様の病巣を形成し，末期には出血性の敗血症状をしめして死の転帰をとる。疾病の経過は種々の条件によって異るようであるが，‑ 般に病点の発見より
擁死までの経過はきわめて
短期間で急性経過をたどるものが
多い。
]．

―般的所見

感染魚は動作が次第に
鈍亜 ・緩慢となり，流れの弱い場所に寄って静止するようになる。
休色は惜色に 変化
し，末期には流れに抗しきれず
菩養地下流の格子に押し流されるよ5 になる。との時期には
多くの場合，所内の
魎瘡様患部の表皮組織が破れ， 中に充満する
血膿様の浸出液が漏出している状態が観察される。
2．

感染初期にみられる
表皮の点状赤斑とひれ基部にみられる
発赤

感染初期においては， Pl ． T‑Aにみられるごとく
体表，特に腹部の表皮に直径2‑3mmの 点状赤斑が多数みられる場合が多い。 時には捕獲時の魚にもこの赤斑が観察される場合もある。 また Pl. 1‑B にみら るごとく駒
わ・ひれ・腎びれ ・尾 びれやそめ基部に充血性の炎症がみられるものも多く存在する。
病状の進行につれPl. 1‑C:にみられるごとく体側にも赤褐色の大きな斑紋 ;現われ，次第に次に述べるようなヵ移行する。
定型的な病変に3．

拒幹部筋肉の定型的な病変

病息に最も普遍的に出現する病変は， 殖幹部のいわゆる締槍様の出血性腫脹で，病状の進行とともに上皮は暗色は変色し，
pl T‑n にみられるごとく
躯幹部の香所に変色即がみられるようになる。
この部分を指山すると弾力にとぼしく，血膿様浸出液を漏出し，また上皮組織の崩壊により日然に
内各物の漏出が観察される場合もあ
34

へ究

養
l
に
疾
性中
ス
発
研
病の
生
にサ
し
関ク
た
すラ
細
るマ
菌ならびにカラフ

畜熟
催

ス 親魚、

る 。 このような患部の皮下筋肉組織はP'l． T‑F. にみられるごとく明らかな崩壊が観察され，血恨様浸出液が充満
している。
4．

内庶諸挺器に出現する病変

定型的症状をしめす
病魚を開腹して観察すると， Pl. T‑F にみられるごとく筋肉にみられた
病巣は腹腔まで達し，腹腔内壁には多数の出血斑が認められ，時には腹壁に穿孔が観察される場合もある。 主要臓器にも著明な病変がみられ，定型的な出血性敗血症状が認められる。
特に脾臓は著しく咽濁腫脹し正常魚の数惜に肥大し，暗黄赤色を呈し，軟化脆弱となりしばしば崩壊し，亀裂をともな5 場合も観察される。
肝臓も黄変肥大し，多数の点状出血斑がみられる
場合もある。 以上のような
脾臓および肝臓の病変ほ Pl ． T‑G にみられる通りである。
腎臓の異状は末期のものに著しく，腫脹軟化し， 時には崩壊のみられる
場合もある。
消化管は一般に顕著な病変をしめさないが，時には肛門付近の腸管に強度の充血の観察される場合もある。 ―般に心臓，うきふくろ，生殖巣などには著明な病変は観察されない。
鯛葉は病状の進行と．ともに―般に
血液色が槌化して，著明な貧血症状を呈するようになり淡褐色に変化する。
時には躯幹部に定型的な病変の認められない
場合にも，以上のような内臓諸臓器におげる病変の著しい病魚も観察される。

第 4 節 病魚の病理 粗袴学的所見

前節において述べたごとき届魚の肉眼的観察を行なった
際， 同 ―材料より摘出した
種 々 の病理材料について，
常法のごとくプ アリ氏液による固定，メラフイン 包埋，へマ トキシリリ・ェオジン染色による組織標本を作製

し ，顕微鏡的観察を行なづた
所見は次のごとくである。
]．

筋肉における
出血性腫肚部

前節3 において述べたごとき
本病の定型的症状と考えられる病魚躯幹部の，いわゆる櫛槍様の腫脹部筋肉の組
織像は Pl. 11‑A にみられるごとく，血管壁の破壊にともなう筋繊維間の結合組織に浸潤性の高度の出血がみられ，また筋肉組織の融解もみられる。さらに悪化した部位では筋束組織の崩壊による空胞化も観察される。

2．

督

舷

定型的病魚の腎臓の組織像は川．
I1‑B にしめすごとくで， 腎細尿管上皮に繊維性の肥厚がみられ，また上皮細胞の融解や細胞侵潤も認められる。
腎統球体では極度の肥大ならびに毛細血管の怒張がみられ，時には BOwMAN
氏漿内におげる出血もみられる。
3．

肝

膵

像は vl. n1‑c にしめすごとくである。
定型的病魚の肝臓の組織
による

う

・般に

肝細胞索問毛細血管の拡張，血液充満血がみられ，それに起因すると考えられる肝細胞の萎縮，肝細胞索のみだれがみられ，また肝細胞核の偏在や， 肝細胞の融解，壊死などがみら
iT@@@)」また，―郡の病魚肝臓では肝細胞の著明な脂肪変性がみられる。
4．

脾

臓

， 疋型的病魚の脾臓ほ 肉眼的に顕著な
咽濁腫脹ならびに暗赤色化が観察されるが，前節においてのべたごとく
その組織像は pl ． n1‑n にしめすごとくである。 すなわち，高度のうつ血ないしは出血がみられ，いわゆる血の海 (炎性出血) と祢せられる状態をしめし， リン " 球の増加もみられる。
また脾実質組織の融解も著明で，定型的伝染脾，すなわち急性脾炎の組織像をしめす。
5．

表皮点状亦史邸

前節においてのべたごとく，本病の感染初期においては
腹部去皮に前掲Pl. T‑A にしめしたごとさ点状の赤斑が多数出現する場台があるが，その部位の組織像は頁技細胞の浸潤，肥厚がみられ， また繊維屑の破壊も認められ， そ十 @.らの部位には明瞭な出血斑がみられる。

第5節 者

察

前述のごとく，水病は催熟蓄養中のサクラマス ならびにカラフトマスに爆発的に発生する
急性の伝染疾病と推察され，罹柄魚の肉眼的症状は前章において述べたサケ科魚類の鹿槍病にきわめて近似する。すなわち，大部分の 柄魚の躯幹部筋肉にいわゆる魔瘡様の特異的出血件の腫脹がみら
hL ，その病巣部は時には腹腔まで達して腹腔
g5

北海道さけ・ますふ
化場 ; 研究報告第 24 号
壁に多数の出血斑を形成し，また腹腔壁に穿孔のみられる場台もある。 また，内部諸臓器にも著明な病変が認められ． 特に脾臓，腎臓，肝臓などは顕著で，それらの病理組織学的観察からも明らかな出血性敗血症の所見が観察され，こ十 しらは MCCRAW(1952) の総説における魚頑の 繍瘡病の特異的症状とまったく―致した。
すなわち，

水病は罹病魚の肉眼的ならびに病理組織学的所見から， A ． p@al@@mo@
血 cC@血の感染に起因するいわゆる
鹿槍病とまっ
たく同―の症状を示す
疾病と考えられる。

(l957) は二ジマスの魔瘡病棟病変の原因
菌 としてw かfopf7@Mwvar

・， HOSHNA
前章において述べたごとくね加ク F。於 を分離，命名し，また McCRAw(l952) は―般に魚類の細菌性疾病においては
鹿瘡病の症状にきわめて近似する
症状をしめす場合が多く， 特にある種の Vibrio

属細菌や，

PseMd 例砂仰5 刀幽wsCe ぬの 感染症は定型的癬瘡病と同様の出血性敗血症状をしめすことを指摘しており，水病例においてもMcCMwの指摘とまったく同様のことが認められた。
以上の観点から魚類の細菌性疾病の診断は，原因菌の分離固定や免疫学的力法などの導入なしには確診をなし得ないも
0@ と考えられる。
廊瘡病における菌の侵入門戸に関し， huirtunc.iilnS ねぬ nnm 而。 e は自然例における普通の経路を立証することは困難であるが，水を介して鯉，消化器，ある場台においては
休表の創傷から新宿主に侵入するものであろうとの 見解を述べているCMcCRAW

・

l952L 。 本病の発生の場合．すなわち
催熟蓄養中のサクラマスやカヲフトマスは 摂餌をまったく行なわないことが知られており， 廿つ前述のごとく感染初期においては
体表，特に腹部の表皮における多数の点状赤斑の出現，
鰭基部における充血性炎症等の認められるものが多いこと，また―般に消化器に著明な病変のみられることの少ない点などから，水病の感染様式は経口的と考えるよりむしろ
経皮感染，特に創傷感染と考えるのが至当であろう。
また，特に創傷の―因としては捕獲，蓄養時におげる機械的刺激による表皮の損傷が考えられるが，―方，これらの魚類はこの地方の近海で遊泳中に捕獲された
場合，ほとんど
例外なくP1 ． @‑Hり

数 l0 個体の外部寄生虫，すなわち栗倉 (ィ968)にみられるごとくI 尾あ たにより同定された携脚類のLepe0 ヵ ihtheirussalwumis(KRoYER

・l837) が寄生しており，その附看部位は腹部や鰭基部に多い傾向が認められている。
これらの寄生虫は概河と同時に脱落し，河川内で捕陵された魚の体表にはまったくその寄生がみられないが，このような
外部寄生虫による表皮の損傷も感染門戸として無視し得ないものと考えられる。
なお楠田 (l965) も海産魚，特にブリの細菌性潰瘍病の場合，外部寄生虫Bened@maseriolae の寄生による
体表の損傷が原因菌の感染を容易にしているものと推定している。
しかし以上のような感染経路に関しては更に詳細な調査が必要であろう。

要

約

本病の発生状況や罹病魚の肉眼的ならびに病理組織学的観察結果から，水病は催熟蓄養中のサクラマス ならびにカラフトマスに発生した，急性の伝染疾病で，その所見はサケ科魚類のいわゆる魔瘡病とほとんど完全に―致した。
また本病の感染様式については， 洲河前における外部寄生虫ぬ peop 材hei グnss 山川
mis(KROYERl837) の寄生による体表の損傷および捕獲，蓄養時における機械的刺戟による表皮の損傷，またこの時期は生理的に脱鱗 しやすい時期でもあり，更にほ
催熟蓄養中のサクラマス，カラフトマスは摂餌をまったく行なわず， 且つ罹病魚の消化器には殆んど病変の認められないことなどから，体病の感染は経口感染ではなくむしろ
経度感染，特に創傷感染と考えることの妥当性を推論した。

第3草
第 ]節

原因細菌に閲する 研究

原因細菌の分離前章に述べたごとく，異状搾死魚の肉眼的症状や病理組織学的所見ならびに発生状況の経日的観察による傾向
方法により推定原因
菌のなどから，本発生は定型的な細菌性疾病によることが推定されたので，まず次のよらな分離を試みた。
a6

親魚

養
ス
に中
発の
生サ
しク
たラ
細マ
菌な
性ら
疾び
病に
にカ
関ラ
すフ
るト
研マ
究

薔熟
崔

□ ) 分離材料

l964 年 6 月初旬，渚滑薔養場において定型的症状をしめしたサクラマス
病魚の (A) 心臓内血液C， b 爪)， (B)
皮下病巣部内容
物，ならびに同蓄養場に混接し， た立たまサクヲマス病魚の症状と近似する症状をしめしたウグイ (．Trfbolo 小%

hai如椎nび@is))の CC)

上皮病変部を，現地においてそれぞれ
普通プイヨソ培地に適当呈宛，可及的無菌的に接種し， 直ちにそれらを実験室 (函館 :北大水産学部) に持ちかえり分離材料とした。

C2) 分離 培技
1) 培麸 方法

上記の各分離材料を，普通寒天平板・3 ガ食塩添加普通寒天平板ならびに3% 食塩添加BTB 胆汁酸塩平板(北尾・1962) の 3 種の分離用培地にそれぞれ希釈塗抹し，
25 。C および37 。C で培養後，発生した集落の形態ならびに発育性状の異るものを可及的に多数釣菌し， 純培養菌を得た。
の 分離 苗株

分離材料 CA) から5 株，
以上のような方法により，Table? にしめすごとくら

l2株，総計20 株を分離し得た。

CB) から3 株および CC) かなお，これらの分離菌株中には普通寒天培地において発育の良好でないものが存在したので，以後の実験には
次のような組成の培地を主として用い

Table

Meterial

Proteose Pepton N0. 3 (Difco) log
Bact

Beef

Extract(Difco)NaCl
粉末寒天 (ニッサン)

3g

Hearts5K

infected "Sakuramasu"

pH

?.2‑7

b100d

Strainイーa‑ lイ□C □ l0f

13K Exudate of affected
1,000m/musclei 0tr@ cbakuramasui． 4mnsr 卜 ofdace

普通プ イヨン培地と称し，また特記しぺプト
ないかぎり他の培地に使用するン は常にProteose

PeptonN0. 3 (Difco)

l

a‑a‑

"

以後，上記の培地を普通寒天培地， EXudaLeofaHeCted
この組成から寒天を除いた液体培地を

SOurce Of isolates?.

l
ハー b‑2,― d‑ l― e‑ l
ノ

@

a‑

ノ

ノ卜

N0.

イーa‑2

イーb‑

l

P‑

l

イ□d □ lP‑

lb‑

， ,― a‑2ハー，、― d‑2―ノ卜C‑― b‑ lハー C‑ 2ノ ,― d‑3,― f ‑ l
/,

C‑

@

e‑

2

ノ

を使用した。

(3)

分離苗株の主要性状
上述の分離菌株はそれぞれ次のごとき方法により形態学的，生物学的ならびに生化学的主要件状を検査した。

1) 検査方法

分離菌株の主要性状は主として Manual Of Microbiological Methodl957). A Guide to IdentificationOf 止 。 Genera

Of Bacterla (SKERMAN,(SOciety OfAmericanBacterio@ogists,l959) ならびに水産微生物学(谷川・坂井，1960) 等を参照して，次のような方法によc 棟奄した。
グラム染色;普通寒天斜面培地における25 。 C ， 24 時間培養菌をHIuCKKRの 変法により染色，観察した。

運動性 : 上記と同様の斜面培養菌の 懸滴標本について常法通りの観察を行なづた。
25 。C ならびに37 。C における発育:普通寒天斜面培地およびぺ プトリ水のそれぞれ
25 。C ならびに37 。C ， 4R 時間培
蚕後におげる発育の有無を肉眼的に観察した。
ポテト培地における発育 : ポテト培地で25 。C ，
食塩耐容性 :腸炎ビブりオ
検査法 (藤野・ 福見，
トン水で?.5。 C ，? 日間培養後におげる
発育の有無を肉眼的に観察した。

1964) に準拠し ， 0， 3， ?%(w/v)の 割台に食塩を含むぺ フ

4R 時間培養後，発育の有無を肉眼的に観察した。

インドール産生: l%(w/v) Trypton

CDifco)培地で25 。C ， 48 時間培養後，KOVACSの方法によりインド―ル形成の有無を観察した。
硫化水素の産生:pH

6． 8 の普通ブ イヨン培地を用い，酢酸鉛試験紙による方法で w5 。 C ， 7 日間培養し，その間の硫化水素発生の有無を観察した。
硝酸塩の還元: 0.l%(w/v)

硝酸ヵ り添加ぺ プトン水で25 。 C ， 7 日間培養後，・ TlTTSLKR
27の方法 (TITTSLER

北悔迫さけま・すふイヒ 場 :研究報告第24 号

Table 8< Characteristics Of isolates

N0.

―

VI VII ‑VB

w

Group
Of isolates

Material
StrainA，for isolationBN0.

p‑a‑llイー b‑lイー d‑1

ハー a‑2，、‑C‑1

ハー d‑3

Tp ― b‑I

ノトー

d‑I

□ ―

ノトー

e ‑l

ハー

b‑2

ノ

MOrphological characteristics
FOrm
Gram stain

MOtility
Biochemical

characteristics

p ， 山。。 而n
HzS production
Indd。

― (士 )

十Nitrate reduction

+

+(@)

Gelatin liquefaction
COagulation of milk
Citrate utilization
KOvacs uxiclase
MR

test

VP reaction
Hugh & Leifson's
mediumopen

close
fish b100d

Hemolysis―

rabbit
b100d

AG

AG

―

++

Biological characteristics
GrowthaL

37@C

at 25 。 C

NaCltolerance

at 37@C

0%
3%
77

―

'

7ガ
Growth0npotato―ーmediummaterial for isolation:

A; heart'sB;

b100d 0f infected " Sakuramasu "exudate 0f affected muscle Of " Sakuramasu

C;

exudate0f affected muscle 0f daceform : X ; rod, Y ; cocci
Hugh & Leifson's medium : A; acid, G;
KOvacs oxidase : C+); delayed positive( ) ; weakly

gas,

38

"

+

,― d ‑l卜究

養中のサクラマならびにカラフ ス 研性に発生した細

蓄
熟
催

ス親匂

1930) により硝酸塩還元の有無を観察した。
穿刺して22 。C ， 23 日間培養し，その間のゼラチリ液化の有伽
ゼラチン液化: 25 九 w/v) ゼラチン高層培地にぐを観察した。
，ルク培地の変化 :BCP，ルク培地でy．y。 C ，

7 日間培養し，その間の培地 pH

ぴにべプトン化の状況を観察した。
クェソ酸塩の利用:SIMMONSの クェソ酸培地で9V 。C ，

MR 試験 : ブドウ糖添加リリ酸塩べ プトリ水で25 。 C ，を行なった。
VPの変化，カゼイソの凝固なら

l4 日間培養し，発育の有無を培地の変色により観察し3 日間培養後．メチルレッド
試薬により常法通りの観察

反応 : 上記と同様のブ トク 糖添加 りン 酸塩ぺ プトン水で25 。 C ， 3 日間培養後 O'MEARA

l93l)

でアセトイリ産生の有無を観察した。

オキシダーゼ
試験 : 普通寒天斜面培地で25 。C ， 24 時間培養後， KOVACSした。
ブドウ糖の酸化と酸
酵 :HUGH
糖添加 O F 培地 (Difco)&

LEIFSONの方法 (HUGHの力法CO'MEARAの方法 (KOVACS,& LEIFSON，，

1956) により観察

1953) にしたがい，0． C5O/@>/n
プドウを用い，好気的ならびに嫌気約条件下で25 。C ， 48 時間培養後，培地の変色およびヵ。ス・産生の有無を観察した。
溶血性 :無菌的に採取したヤマメ(0.masou)

およびウサギの血液をそれぞれ1% Cv/V)) の 割合に添加した
血液寒大平板培地面に塗抹し，25 。 C ， 48 時間‑72 時間培養し，集落周縁におげる
溶血環の出現の有無を観察した。

2) 検査結果

以上のよ5 な力法で各種の性状を検査した
20 株の分離菌を，その検査結果から整理するとTable8 にしめすご
とく 8 群に科別され，サクテ マス 病魚より得た分離材料(A)および CB)由来の8 株はすべて1 ―皿 群に， 特分離された3 株はいつれも第 I 群に包含された。
に分離材料 (B) すなわち病巣部内容から

C4)

金魚による病原性の推定試哀

金魚を本病の病原性確認のための実験動物として供試することに対しては，若干の疑姦がもたれるが， まず十備的試験として，前記8 菌群中から推定原因菌群を抽出する目的で，各菌群からl 株宛無作意に選出した代表菌株により，次のごとぎ
力法によって金魚に対する病原性を観察し，原因菌群の推定を行なった。

1) 試 裳方法
供試菌株 : TaMe8K

ハー a‑l

，

ハーC‑l

しめした各
菌群よりそれぞれ
代表菌株として， イーa‑l，ハー 。 ―2 ，ハー f‑l

ならびにハーb‑2

イーa‑2

，

，

イー・― l ，の計8 株を選出し供試した。

供試金魚 :体長約7cm の "和金" 各 3 尾宛を刀容 ガラス製水槽にそれぞれ用意し，通気により酸素の供給を充分に保ちながら，あらかじめl 週間予備飼育し 異状のないことを確認後供試した。なお水温の調節は特に行なわなかったが実験の期間を通じ約20"C 前後であった。

接歴力法 : 各供試菌株の普通安天斜面培地25 。 C ， 化時間培養菌の l 中金耳宛を，それぞれlml の滅菌生理的

食塩水に懸濁し ，その各0， lm/ を，それぞれ3 尾元の供試金魚の腹腔内に接種し ，以後l0 口問， 供試魚の異状および箆死の有無を観察した。
なお対照と して滅菌生理的食塩水の0． lm/ を 3 尾の供試魚に同様に腹腔内 接種し同様a@観察を行なった。また，接種に際しては各供試魚を l : l0,000 濃度の MS‑222
置 ・麻酔ののち接種した。

2) 試験結果

CSand ， ) 溶液中に5 分間放以上のような方法で各菌群の代表菌 8 株の金魚に対する病原性を観察した
結果は Table9 にしめす通りである。 すなわち，供試菌8 株中金魚に対し病原性の認められたのは第 I 群のイーa‑l株のみで，他の7 菌株および 生理的食塩水接種対照
魚には何らの異状も観察されなかった。
これに対しイーa‑l

株接種魚は接禰後 l 日日にすでに腹部筋肉の腫脹など異状が観察され， 3 日， ? 口 ，

8 日目に脊 I 尾宛すなわち全例が舞死した。 なお

Tab@e9 にしめす供試魚番号 NO ． l の金魚については
弊死後ただちに， 腹部腫脹筋肉，血液ならびに主要臓器の塗抹標本を作製し，ギムサ染色およびグラム染色により顕微鏡観察を行なったが，腹部筋肉の標本においては，明らかに形態上接種苗と同―菌と思考される
特徴ある両端濃染性のグラム険性短桿菌が濃厚に観察されると共29

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
Results Of the artificial infection ;n the goldfish inoculated withintraperitoneal injection of selected isolates

Table 9.

Group

Days
4 after
5 inoculation
6
7
10

inoculated
Strain N0.offish

A

+

A

A

A

A

A

+

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0
0
0

0
0
0

0

0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

000

000

000

000

000

000

000

000

000

l0

A

A

000

ハーa ‑ T

A

A

000

w

A

000

1

+

A

000

イーc‑

A

A

000

ffl

A

000

l

000

イーa‑

I2

000

90

000

工

工

22

W

000

678

C ノ, ︱w

25

Saline26
27(control)・+ : dieA : abnormal

0 '@ normalに， 同 ―病理材料および心血の培養からは，ほとんど純粋の状態に接種菌を回収し得た。

(5)

考

察

定型的症状をしめしたサクラマス
病魚の心血および
皮下病巣部内容ならびに混棲 ウグイの上皮病巣部より台計

2Q 株の細菌が分離され， これら分離菌株はその主要性状により8 群に科別されたが(Table8 参照)，金魚に対する病原性の観察結果から―
応魚類に対し病原性を有するのは第l群に属する分離菌株のみと推定された。第 l群に包含される4 抹はいずれもサクラマス
柄魚より分離され，特にその中の3 株はサクラマス
病魚の皮下病巣叩 より分離されたものであり， またこの分離材料からは
第 l 群に属するもの
以外は分離されなかった点も併せて考えて，

この病巣部位にはこの菌群に属する細菌がほとんど純粋の状態で存在したものと推察される。更にこの菌群の代表菌株イーa‑1株の接種により
麓死した供試金魚の腹部腫脹病変部の塗抹標本中には接種苗と考えられる細菌が濃厚に認められ，かつまた同―病理材料および心血からは，ほとんど純粋の状態に接種苗の回収ができ．
また接種魚 3 尾はいずれも同様の症状をしめして麓死したことから， これら第l 群に包含される菌株は本病の原
30

養中のサクラマならびにカラフトマ ス 性

安革
熟
催

ス 親魚、

因菌と推定された。
なお，病原性の詳細な検討結果については次節において述べる。

要

約

サクラマス病魚の心血および皮 F 病巣部ならびに混棲 ウグイの上皮病変部から合計20 株の細菌が分離され， こ

れらの分離菌株はその主要性状により8 群に群別されたが，そのうち金魚に対し病原性の認められたのは第 l群の 代表菌株のみであった。この 第 I群に包含される4 株はいずれもサクラマス
病魚より分離されたものであり，

また前記したような金魚に対する接種試験の結果から，本群に属す分離菌を本病の原因細菌と推定した。

第 2 節 推定原因 苗の病原性の検討

前 節において金魚を供試してサクラマス
病魚からの分離菌について，水病の原因綱菌推定のための予備的実験を試み，推定原因細菌について
若十の実験結果を述べたが，本節においては，更に金魚，ヤマメ(0.tnasW ，河川型)，

ニジマス(S 山仰mgaUi ，・ d艇;.@')，ウシカ 二ル (.Rm 川 。ates3e@a仰) およびマウス(NIH)るごとく推定原因
菌の病原性について検討を加えた。
実弍I

金魚に対する病原性を供試して次に述べ， 病魚からの分離菌の人工感染試験を行なった結果，8 群に分け
前節においては比較的小型の金魚を供試してられた分離菌株のうちのl群のみが病原性を有することを観察したが，供試魚が小型のヰめ症状の詳細な観察はなし得なかった。
そこで実験I において比較的大型の金魚を供試して金魚に対する
推定原因細菌の病原性の再検討，特に供試菌接種後の緒過ならびに催死魚の病理解剖上の肉眼内観察を行なった。

(] ) 試験方法
供試菌株 : イーa‑l 株ならびにp‑a‑l株の2 株を供試した (Tab@e8参照)。

供試魚 ;体長約 l2cm ， 体亜 25R 前後の "末文金" 各 2 尾宛を，約l0l 容のガラス製水槽に
約 l 遇間予備飼育し異状のないことを確認ののち供試した。その他の条件は
前節 (4) と同様である。
接種方法;供試菌株の25 。 C ， 24 時間培養菌体を lo 。 ce@l/m/ の 濃度に滅菌生理的食塩水に懸濁せしめ，その0． 5m/を腹腔内に接種した。
なお接種に際しての麻酔条件は前節 (4) と同様である。

(2)

試族結果および考察

株ならびに口― " ― l 株を接種した供試魚はいずれ
24 時間後に食欲および運動力の減退が観察され，48 時間後には立鱗症状，鱗基部の出血斑の出現，尾鰭血甘の供試菌接種後の経過: 以上のような方法によりイーa‑l
も怒張，呼吸困難，全身的衰弱などが観察され，イーa‑
宛弊死し，口 ― a‑lイーa‑l株接種魚では57‑68

株接種魚に比し口 ― a‑l

時間後にl 尾，t 株接種魚では50 時間および55 時間後にそれぞれ
各 l尾

74 時間後に他のl 尾が箆死した。また症状は― 般に株接種魚のカが軽度のよ5 であっだ。

勿諭対照の生理的食塩水接種
魚は96 時間後においても何らの異状も観察されなかった。
擁死魚の剖検所見 : は h のごとくして箆死した供試魚は個体により若干の相違は認められるが． ―般的剖伎所
見は次の通りである。□ ) きわめて脱鱗 しやすく，且っ体表を圧迫すると鱗基部よりの出血が認められる。
Cii)高(iii)高度の脾臓の肥大および実質の脆弱化。(iv) 軽度の肝臓肥大(v) 囲心腔の出血。l． vi)血液度の腎臓の肥大。
を混ずる腹水の増量。(vii)筋肉における血液の浸潤。Cviii) 胆姦の 黒変。 Cix) 消化管の異状を認めず。
なおいずれの
姥死魚においても心血の培養によりほとんど純粋の状態に接種苗の回収が行なわれた。
考察 : 以上のよ5 に推定原因菌の接種により供試金魚はいずれも出血性の敗血症の急性経過をとり，短期間内に死の転帰をとることが再確認されたが，金魚においては， 前節で述べたごとき目 然例のサクラマス
病魚にみられる本病の特異的症状，すなわち
筋肉における高度の病変が観察されなかった。
このことについては．
自然感染
様式と人工腹腔内 接種法の相違，またその他の多くの要因も考えられるが，根本的には原因紺菌の病原性におげ
思、る動物の種展特異性によるものと考えられ，水病の実験動物としての金魚の供試は必ずしも適当でないことが
考された。
実裳H

ヤマメに対する
病原性

実験 I において金魚は本病の人エ感染試験の供試魚として好適とはいいえない
結果を得た。勿諭水病の人工感染試験魚としてはサクラマス
或いはカラストマス
親魚が最適であることは当然のことであるが，それらは実験室

北海道さけ・ますふ化場 : 研究報告第 24 号
。 故に的規模での飼育が困難であり，また採卵用親魚の貿亜性からも実験に供することはほとんど不可能に近い本実験においては
サ クマスと同種河川型であるヤマメを供試魚として次のごとき観察を行なった。しかしながらヤマメの入手も甚だ困難のためI 尾宛供試し得たに過ぎない。
□)

試験方法

供試菌株 : イーa‑l

株

供試魚 :北海道大学水産学部
セ飯養魚場において飼育中の体長約18cm のヤマメl 年魚をI 尾宛同養魚場の小型流水飼育槽で実験I 同様予備飼育し，異状のないことを確認ののち供試した。
水温は本実験の期間を通じ14 。C 前後で，また実験期間中は投飼を中止した。
接種方法:供試魚2 尾中の―方には実験I の場台と同様に調製したイーa‑l

株懸濁液の 0 lm( を筋肉内に接・種し，他方は対照として滅菌生理的食塩水
0 lm/ を同様に筋肉内に接種した。なお接種に際しては
特に麻酔を行・

なわなかった。

C2)

試験結果ならびに
考察

供試菌接種後の経過:供試菌を接種したヤマメは
48 時間経過迄はほとんど異状を認めなかつたが， 72 時間経過
各所に自然例にみられるご後において接種部に腫脹が現われ，局所の上皮は黒色に変化し， 96 時間後には全身のとき黒褐色の斑点が観察され，特に接種部の腫脹は増悪し，全身症状としては極度の衰弱が観察され，弊死直前の状態をしめした。
これに対し対照の生理的食塩水接種
魚には何らの異状もみられなかった。
解剖所見 :上記の姥死直前の状態となった
96 時間経過後のヤマメについて
次のような剖検所見が得られた。
□ )接種部筋肉における高度の出血性潰瘍 (鹿瘡様病変J。

□) 肝臓，腎臓，脾臓の肥大腫脹，特に脾臓の高度oの肥大 (いわゆる感染脾)。 (Iii)少許の腹水の増量。(iv) 消化管は異状を認めず
なお血液，筋肉患部，肝臓，腎臓，脾臓などの培養からはほとんど純粋に接種苗の回収ができた。
勿論対照魚の内臓諸器管には何らの異状も認められず，血液の培養結果も険性であった。
，自然例に
考察 : 以上の結果から明らかなようにヤマメを供試魚とした推定原因
菌の 人エ感染試験においては定型的症状を再現し得られた。
すなわち，本病の人おけるサクラマス
或いはヵテフトマス 病魚にみられるごとき

エ感染試験供試魚としてヤマメはぎわめて適当な魚種と思考されるが，前述のごとくヤマメめ
入手もはなはだ困難であることから，供試魚としての常用には問題がある。
実験皿

ニジマスに対する
病原性

実験ITにおいて，供試魚としてのヤマメは推定原因菌の接種により自然例にきわめて酷似する症状を再現し得
供試には問題の存することをることが明らかにされたが，ヤマメの入手は内難であることから，実験魚、 としての同じ科 (family) の魚類で且つ比恢的指摘した。この点ニジマスは属 (genus) ほ異るが，サクヲ マスやヤマメと人手が谷易であるので，本実験においては供試菌の二ジマスに対する病原性についての検討を行なった。

(1 ) 試験方法
供試由 ; イーa‑l

株

供試魚・・函館近郊の 養鱒業者より購入した
体長約 17cm 前後，体重60K 前後の二ジマスを北海道大学水産学部の養魚池で2 週間以上予備飼育し，異状のないことを確認ののち実験室内のコンクリート
製流水飼育槽(130x30

x25cm) にそれぞれ5‑6

尾宛配分しその後さらに l 週間の予備飼育の後供試した。また供試菌接種後の外観上の変化を観察するために， 同―の供試魚l尾宛を約 20f 谷のガラス製流水飼育槽に用意した。なお飼育用水は，実験期間を通じて水温の変化はほとんど認められなか0 だ。 また玉険期間中は投餌を水温l6。 C 前後の井戸水で中止した。
接種方法: 実験H のヤマメの場合と同様の方法によったが，対照魚については，滅菌生理的食塩水以外に供試
菌懸濁波のio0 。C ，lQ 分間加熱殺菌したものO． lmr を筋肉内に接種した。
なおこの夫験は数回反復した。

観察方法: 前述の金魚やヤマメを供試した場合と異 ， 本茉験においては接種後の供試魚の外観上の変化を観り察するのみならず， 24 時間経過毎に供試菌接種魚ならびに対照魚の1 ‑2

尾をとり出し，肉眼的解剖検査を行ない， また解剖魚の壬要臓器について培養を行ない，接種苗の回収を試みると共に，結城 0l963) の方法による血液像の変化についても若干観察を行なった。
また症状の著しいものに
0 いて病理組織学的観察も
行なった。
32

試験楕果および考察

養中のサクラマならびにヵヲフトマス 疾

菩
熟
催
(2)

ス 親魚

供試菌接種後の経過: 供試魚の菌接種後の経過は前述のヤマメの場合と酷似し，接種24 時間後では末だ
異状は
ほとんど認められないが， 48 時間経過後には接種部位の上皮にかすかな変色が認められ， ?三時 @間後には接種部位に明瞭な腫脹が観察され，活動力の減退，全身的衰弱が伴い，96 時間後にはさらに腫脹は著しくなり上皮が破れ
Pl. 1I1‑A および III B にみられるような出血性潰瘍をしめすにいたり，局所から血液を含む浸出液の排出も親□察された。―郡の供試魚はこの時限で弊死，若しくは弊死直前の状態に至った。これに対し対照の死菌接種群や
生理的食塩水接種群には何らの異状も観察されなかった。

剖検所見 :供試菌接種後2W 時間経過毎の観察所見は次の通りである。 (i) 接種部筋肉は24 時間経過後にはわず
かに変色する程度であるが， 48 時間後には明らかな潰瘍状病変が認められ，以後経時的に増悪し筋組織の崩壊が観察される。Pl ． TTT‑C は接種後96 時間後に弊死した供試魚の接種部断面をしめす。
cii)脾臓は74 時間後にすでに肥大が観察され，以後経日的に増悪し暗赤色を呈し，実質の脆弱化が観察される。
Ciii)l肝臓の肥大ほ48時間後より著しくなり，以後経日的に増悪し， "楓濁腫脹黄疸色を呈し，末期にはPl TT1‑n にみられるごとく多数の点状

Civ) 腎臓には著変は認めがたいが， ―般に若干肥大の傾向が認めらか・る 。
出血が認められるようになる。
化管およびその他の臓器にはほとんど変化が認められないが ，
る。

(v) 消

まれに精巣などに点状の出血を認める場合があ

血液像の変化: 供試菌接種後の血液像の変化を観察した
結果は Table l0 にしめすごとくである。 すなわち，
供試菌接種後は経日的に香血液細胞の減少が観察され，末期には極度の貧血状態となるが， この時期に白血球系
細胞の急激な増加が観察された。

培養を行なった
結果，48時間経過以後は常にほとんど血液よりの接種苗の回収 ; 供試菌接種後佳日的に血液の純粋の状態で接種苗の回収ができた。
切論対照魚の血液からは菌の検出はできなかった。
なお Pl ． 1I1‑E は供試ニジマスの血液塗抹標本中に認められる接種苗の存在をしめしたものである。

病理組織学的変化: 供試菌を接種して120 時間経過後，接種部位に前述のごとき定型的な出血性潰瘍がみられ，
弊死直前の症状を呈した体長l九cm ，体重53K の 供試ニジマスについて，筋肉病変部ならびに腎臓，肝臓，脾臓
など主要臓器を摘出し，常法のごとく， ブ アン 氏液により固定し，バラフイソ
包埋切片，へマ トキシリリ・ェオジ

ン染色による
組織標本を作製し，顕微鏡内観察を行なった所見は次のごとくである。

(i) 潰瘍部筋肉の組織像は Pl. 1V‑A にしめすごとくで，筋繊維間の結合組織ならびに筋束組織内に著明な
浸潤性の出血がみられ，また筋肉組織の融解乃至は崩壊が観察される。
すなわち，前章第4 節において述べたサクラマスの自然病魚例における筋肉組織像の所見とまったく同 ―の所見が得られた。(ii) Pl ． 1V‑B

は腎臓の組織像であるが，大や，細胞融解がみられ， BOWMAN

自然例においてみられたごとく， 腎統毬体に高度の肥氏姦の肥厚ならびに褒内における出血，
立た腎細尿管上皮細胞の浸潤など， 自然例にみられた
腎細尿管上皮の繊維性肥厚は観察されなかった。 (iil) 肝腋 の組織 像はも認められるがPl ． TV‑Cにしめすごとくで， 白然例にみられたごとき
肝細胞の萎縮．細胞
索のみだれ，細胞核の偏在，細胞融Table 10.

Changes in b100d cell constituent Of artificial Infected rainbow
trout inoCulaは d ィーa‑lDays after
inoculation

StrainCOntrol

xl/mm"
T
XloVmm3xI/mm3 xl/mm3T
104.8

12,50012,00011,300
7,000

130.0

20,80030,5003， 700125.9

32,80021.30076.2
57.8 15,900
8,700
E ; Cells Of erythrocytic series
L; Celts Of leucocytic series
T ; Cells Of thrombocytic series

33北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号

・解ならびに壊死などがみられるが，顕著な細胞索間のうつ血や肝細胞の脂肪性変は観察されなかった。
(iv) 脾臓
の 組織像は Pl 1V‑D" にしめすごとくて; 自然例と同様に強度のうつ血刀圭は出血ならびにリソ，球の増加など
定型的伝染脾の組織像が認められるが， 脾実質組織の融解は明瞭には観察されなかった。
以上のごとく， 突験的人工感染魚の病理組織像は目然例のそれとほぼ同様の所見をしめし，水病の組織的変化
を人工的に再現し得られることを確認し得た。
考察 : 以上の結果から二ジマスを供試魚とした場台も，人工感染試験によりほとんど
自然例に近い
庁状の再現
出血性潰瘍状病が可能であり，筋肉内に接種した供試菌は急速に血流中に移行し内臓諸器官を冒 かし，接種部に変を起すと共に，全身的に急性の出血件敗血症を惹起して，ついには死の転帰をとるにi'@たらしめることが明か・であり， 供試菌は本病の原因菌 と結論して差し
支えないものと思考されると共に，ニジマスは本病研究の実験魚として好適な
魚種であることが確認、
された。
実験w

ウシガエル (食用ガエル) に対する病原性

あ る種の魚病原因菌，例えばAeromonaS
カエルの Red

属のある種の細菌は魚類のみでなくカエルに対しても病原性を有し

leg dlSeaSe の原因菌となることが知られている (REIcHENBACH‑KLINKE& ELMN， l965) 。

そこで本実験においては市販の " ウシ ガエル" を実験動物として
本病原因菌に対する病原性を検討した。

CD ) 試験方法
供試菌 : イーa‑l株

供試動物 :市販の体重 200R 前後の " ウシ ガエル" を 3 屋用意し，それぞれ金属製ケージ巾で l 週間予備飼育

し．異状のないことを確認ののち供試した。なお安験期間を通じ投餌は行なわず，また
特に飼育温度は調節せず
2O‑25。 C の室温に放置した。

接種方法 : 前述の実験に供試したものと同様の供試菌懸濁液をl尾ぼ脚部皮下に0． Im/ ， l 尾は腹腔内に0． 5ml
接種し， 他の l 尾は対照として滅菌生理的食塩水の0． Im/ を皮下，更に0． 5mr を腹腔内に接種した。

(2)

結果および考察

供試菌を接種した" ウシ ガエル" について接種
後lo 日間，異状の有無を観察したが，いずれも何らの異状が認められなかった。
以上の結果から供試菌は少く心 " ウシ ガェ/L@" に対する病原性を欠くものと考えられるが， 供

試尾数が少なく且つ飼育温度の影響などについての検討を行なわなかったので，カエルに対する
病原住@こ 関してはさらに詳細な検討が必要と思考される。
実験V

マウスに対する
病原性

多くの魚病原因菌は温血動物には病原性がないとされているが，ウナギのびれ赤病の原因菌 と考えられている
Aemonas加nctata が，肺炎患者の略淡や腸炎患者の糞便から分離された報告CGILARD1,1967) があ り，また

海産魚の潰瘍病の原因由として，ヒトの食中青の原因哺 Vih バ。 力 @trahaemolyt4cus iC 酷似する好塩性細菌が報告されている(楠田 ・赤沢， l963) 。 本実験においては本病の原因菌のマウスに対する病原性を次のような方法により検討し，温血動物に対する病原性の有無を推定した。
い)

試験方法

供試菌株 : イーa‑l， 口 ― a‑l
供試マウス:均―糸マウス (NIH)

，

口

― b‑l

およびp‑C‑lの 4株

を 2 尾宛ケージに用意し供試した。

接種方法 : 前述までの実験と同様各供試菌のloVm/ 濃度の懸濁液を調製し，各菌株について2 尾宛，それぞれ
0． 5m/ の腹腔内 接種を行ない，対照として
生理的食塩水0． 5mf を同様に接種した。

(2)

結果および考察有無について観察を行なったが，いずれの場合も
何らの異各供試菌を接種したマウスを接種後10 口問，異状の状も認められなかった。
実験VT‑=‑ジマスの人工感染試験における発症最少菌呈以上の実験結果から．
前節において本病の原因細菌と推定した分離菌は，推定通り本病の原因細菌と決定して差し支えなく，また二ジマスは
人エ感染試験において，サクラマスやカラフトマスの自然例にみられるごとき
特異症状を再現することが明らかにされた。
そこで本実験においては二ジマスを供試魚として，人工感染の成立に要する最少接種菌量を知るために次のごとき実験を
行なった。
34

魚
親
カラフトこマ 関する研究

試妓 方法

申
蓄
な
綱養
の
ら
閑び
サ
性@
ク
にス
ラ
発マ
生した疾病に

催熟CD)

供試菌 : イーa‑l 株の培養菌を数回二ジマスの生体通過により，いわゆる"若返えげを行なった 上で供試菌とした。

供試魚 : ニジマスをコ '@ クリート製流水水槽に3 尾宛用意し，供試魚とした。
水温は特に調節を行なわなかったが実験期間を通じ16 。 c 前後であった。

接種方法: あ らかじめ光電比濁計により供試菌懸濁液の生菌数と濁度との関係を求めておき，普通寒天斜面培
光電比濁法により7xlo8cell/Wmfの濃度になるように
生理的食塩水に懸濁せしめ，こ地25 。 C ， 24 時間培養の簡体を
懸濁液を原液としてlCh進稀釈法によりlcr'借 まで稀釈し 各稀釈波の0． lml 宛をそれぞれ3 早死の供試魚に筋肉の内接種した。
すなわち接種苗
昆が 7Xl0' ， 7X106 ， 7xl0，， 7x10 ・および
7x103

個となるように接種して，各供試魚におげる接種後の変化を観察した。
なお対照魚に対しては滅菌生理的食塩水を0． lmi 宛同様に接種した。

C2)

結果および考察供試魚のその後における経過を観察した
結果は Table 11 1C
こしめ
以上のごとく， 種々の接種苗量を接種されたす通りである。
すなわち供試菌の 7Xl0' 個接種群では，3‑4日の経過で3 尾 とも 麓死し， 7x10 。 個接種群でぼ2 尾が3 日後に弊死し残りの l 尾は―旦軽微に発症後耐過し得た。7xl05 個接種群でほ5 日後KLl 尾蜂死し， 他の 2 尾は
5 日後頃まで若干の異状が観察されたが，その後耐過し7X10t 個および7xl0' 個接種群においてほ何らの異状も観察されなかった。
なお，7xlo' 個接種群の I 尾は接種後 l 日日で確死したが， この 供試魚においては定型的病変がほとんど認められなかった。
おそらく接種による事故死ではないかと推定される。
以上の結果から，ニジマスを供試魚とした筋肉内接種による本痛の人エ感染試験には， 供試菌の l0 。 ―10" 個以上の面体接種が必要と推定された。

Table 11. Effect 0f dose 0f inoculam (@1'‑a@0f rainbow trout
0f

N0.

0n

the artificial infectionDays
4 after
5 inoculation
6
7
10

inoculamfish
DOse

1 strain)

Of

NOte
no

7x107

2

7x106

typicial

sypmtom0A+

typical symptom

0
0

A

+

typical sypmtom

A+
recover

7

0

0

0

八

typical sypmtom

十7x10''

ll 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
34=34
Saline

+

: die

A

: abnormal0: normal

35

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告 第

万
コ

要

約

以上の実験T‑VI(l)の結果を要約すると次のごとくである。

前節においてサクヲマス病魚より分離した
本病の推定原因菌は，金魚を供試した
人工感染試験においては，自然例にみられるごとき特異症状をしめさないが，ヤマメやニジマスにおいては，ほとんど自然例と同様の症状が再現し得られることから・
上記推定原因菌 は本病の原因菌 と決定して差し支えないものと考えられる。

(2)
C3)

本病の人エ感染試験魚としては入手および飼育管理の比較的容易な
二ジマスが好適と考えられる。
ニジマスを実験
魚とする筋肉接種による人エ感礫試験においては比較的多量の 生菌接種が必要で ，

7x10' ―7x107(4)個細胞以上の接種苗量が必要である。

本病原菌は " ウシガエル" (食用ガエル) やマウスに対する
病原住ほ認められなかった。

第3節

原因 苗 の分類学的検討

木章第l 節においてはサクラマス
病魚より分離した推定病原菌4 株 (イーa‑l

らびにp‑C‑l

，

p‑a‑l

，

F‑b‑l

な

株) について，また第2 節において，それらを本病の原因菌と結論した検討経過について述べた
本節においては，原因菌についての形態学的，生化学的，生物学的諸性状ならびに血清学的特異性の検討結果を基礎として， 本菌の分類学‑卜 の位置についての検索を試みたのでその結果について述べる。

第十項形態学的，生化学的ならびに生物学的性状(1 ) 実 裳方法
細菌学的諸性状の検査力法は逐次概述するが，主．として下記の著書を参照した。
ManualA

Of Microbiological

Guide

Laboratory

toMethod(SOciety

Of American

the Identificatlon Of the Genera Of Bacteria
Methodin Microbiology

Bacterlo@o小 sts, l957)(SKERMAN,& McCARCE,(HARRINGAN

1959)
1966)

医学細菌同定の手びき (坂崎 ・島崎， 1967)
水産微生物学(谷川・坂井，l960)
培地諸諭 (I) (坂崎， 1967)
なお特記しないかぎり，基礎培地として本章第 l 節において述べたごとく，次の組成の培地を使用した。
Proteose

Pepton N0.

Bact

Extract

Beef

3 (Difco)log
3g(Dlfco)NaCll， 000m@
pH

7． 2 ‑ 7． 4

また，その他の培地に使用する
ぺプ トソはすべてProteose Pepton

NO ． 3 CDiico)を用いた。

培養温度も特記しないかぎりすべて25 。C とした。

1) 形態学的性状検査
20‑24 時間培養菌について
細胞の形態，人きさ，運動性 (懸滴標本法ならびに
半流動寒基礎斜面培地における天法)，鞭毛の有無 (西沢 ・菅原法)，グラム染色性(HUCKER

また48 時間培養菌について
芽胞形成能の有無 (MOLLER変法)， 抗酸性 (ZIEHL・NEELSEN法) を観察し．

法) を観察した。

また，液体培地ならびに固形培地における培養性状は常法に従って観察した。
なお，

イーa‑l

株については，斜面培地24 時間培養菌のフォルマリリ
固定，

クロ―ム ・シャドウ法による標木について寛子顕微鏡像の観察を行なった。
幻 生化学的性状検査
イリドールの産生，硫化水素の産生・硝酸塩の還元，ゼラチン
液化性，，ルク培地の変化，クェン酸塩の利用，

MR 試験，VP 反応，オキシダーゼ
試験，プ ドウ 牌の酸化と駁酵ならびに溶血性の検査は，木章第I 節に述べた36

催熟蓄養中のサクラマ
ス ならびにヵヲフトマス親魚、に発生した細菌性疾病に関する
研究方法と同様の方法によった。またその他の性状検査法は次に述べるごとくである。
アリ斗二アの産生． : ぺプトン水に48時間培養後，ネスラー試薬r より，培地中のアンモニアの有無を判定した。
廿；ゼイソの消化:30%(v/v)

脱脂乳添加基礎培地平板に供試菌を点滴培養し， 4 日間培養後の集落周縁の透明環の有無により判定した。
凝固血清の液化: LOFFLERの凝固血清培地に
10 日間培養し・培地液化性の有無を観察した。

デンプンの分解:0 ． 2乃 Cw/v) 可溶性デンブン 添加基礎培地平板に供試菌を点滴培養し 4 日後にルゴール液を注加して集落周縁の非呈色帯の有無により判定した。
キ チソの分解: l% キ チリ末添加(w/v) 甚礎培地平板に供試菌を点滴培養し l0 日後の集落周縁の透明環の有無により判定した。
ウレアーゼ活性:CHRISTENSEN(l946) の培地を用い， 尿素の分解による
培地 pH の変化を観察した。

フ オスファターゼ
活性 : BARBER&KUPER

Cl95l ) の 培地に4 日間点滴培養後，アンモニア
蒸気による集落・の変色の有無により判定した。
リ。―ゼ活性 :SIERRA(l957)の培地に4 日間点滴培養後，集落周縁の不透明環の有無により判定した。

レシ チ ナー 七 活性 : l0%(v/v)

卵黄添加 l%(w/v)

べ プトン寒天培地の平板に4 日間点滴培養後・集落周縁の不透明環の有無により判定した。
ヵタ ラーゼ活性: 基礎斜面培地で24 時間培養後の菌体を，スライド・グラス
上で4 ガ過酸化水素水と混合し，発泡の有無により判定した。
コアグラーゼ活性 : l0 倍稀釈ウサギ血漿を用い，ブドウ
球菌のコ アグラーゼ試験法に準じ，血漿凝固能の有無を観察した。
Ol958)

・

リジリデ カルボキ シラーゼ活性: FALKOW

間培養し，培地pH の変動の有無を観察した。
フ ，二―ルアラニンデア，ナーゼ活性: SHAWの方法に準L ，市販培地 (日本栄養社製) を用いて2 日& CLARKE

Cl955 、) の 方法@こ 準じ，市販の培地 C 日本栄養社

製) に 2 日間培養後，塩化第2 鉄l0 お (w/v) 溶液添加による呈色の有無により判定した。
アルギニン試験: THORNLEY(l960)の方法で嫌気的条件下で，アルギニンより
アルヵリの産生の有無を観察した。
マ p ソ 酸塩の利用: SHAW

& CLARKE(1955)の方法に準し， 市販の培地 ( 日本栄養社勤に 2 日間培養後，培地 pH の変化により判定した。
プ ドウ 糖 よりの2 ， 3 ブ チレングリコール
産生 : ブドウ糖 リリ酸塩
ぺ プトリ水に2 日間培養後，
BULLOCKCl962) の方法により2 ， 3 ブチレソグリコール産生の有無を観察した。
メチレンブルー
還元住 : 基礎培地に24 時間培養後，常法によりメ チレンブルー
還元能の有無を観察した。
ろ 過性溶血素産生 :EDDY(1960)の記載に準じ
，基礎培地に2 日問培養後，培地をメソ ブランフイルターでろ過し， ろ液によるウマ 赤血球に対する溶血性の有無を観察した。

の改良培地を用い．各種炭水化物よりの酸およびガス産生の有無を，30 日間

炭水化物の分解性'.BARSIF.KOWの培養期間を通じて観察した。

3) 生物学的性状検査
SS 培地におげる発育 : 市販 W 口 本栄養社製) の SS 培地平板上における発育の有無を2 日間培養後観禁した。
デスオキシコレート
培地におげる発育 : 市販 ( 日本栄養社製) の デスオキシコレート
培地平板上における発育の有無を9 口問培養後観察した。
ポテト培地におげる
発育 ; 本草第 l 節において述べた方法でポテト培地におげる
発育の有無ならびにその色調を観察した。
確素に対する態度: 黄燐法により嫌気的条件下における発育の有無を基礎斜面培地に2・日間培養 後観察した。
食塩耐性: l%@<プトン水培地に0‑7

ガ (w/v) の種々の割合に食塩を添加した培地におげる
発育の程度を．

3 日間培養し肉眼的に観察した。
発育温度: 5 。 C‑AO

。C の各種の温度下で，基礎培地における発育の程度を， 2 日問培養後肉眼的に観察した。

発育 pH 域 :基礎培地のpHを 4 0 から l0 2 まで種々に変えた培地を用い (口止・ 堀場社製 F‑5 型硝子電極
・

・

3ア

北侮迫さけ・ますふ化場 ; 研究報告第 24 モ
pH 計により，滅菌後のpH を測定)， 種々の pH 下におげる発育の程度を，2 日間培養後肉眼的に観察した。
0れ29 に対する感受性: 感受性検査用培地として基礎培地平板を用い，CASELITE( ． 196l) の方法に準じて調製した 0/l29 デスクに
L よる パットプレ□ 法によりVibri0‑staticcompound0/l29
に対する態度を
観察した。
ト

(2)
1)

結

果

形態学的性状

供試菌4 株はいずれも病理材料よりの
分離当初はきわめて発育不良で，血液添加培地などで若干発育の増進が認められる状態であったが，継fに 培養により除々 に発育は良好となり
前述の基礎培地による培養も容易となった。
以下，主として実験室的条件に馴化した後の供試菌に99>いて観察した結果を述べる。
なお， 供試菌4 株はいずれもまったく同様の性状をしめした。
細胞形態:大きさは通常I． 2‑2 ． 0xo ． 8‑l ．如の両端鈍円の短桿菌で， 時には球状或いは長桿状の形態もみられる。
また培養条件により著しく形態が変化し， 例えば10 。 C のごとき比較的低温度で培養すると中等大の桿菌に，また 3% 食塩添カ n培地ではきわめて細長い糸状の形態をしめす。
病理材料の直接塗抹標本では明瞭な両端浪染性が観察される。
多くは単在するも， 対をなすものや，連鎖状配列をしめすものも観察される。
懸滴標本および半流動寒天法のいずれにおいても固有運動性は認められない。また鞭毛を有せず，グラム険性，
非抗酸性で，芽胞を形成しない。
基礎培地平板上におげる
発育 :24 時間培養で直径lmm
径 2‑3mmより小さい微小集落を形成し培養の 継続によって直の小型集落に成長する。集落は止円 ，止状，表向平滑，構造均質，辺縁正縁で，培養の初期は無色透明であるが，時間の経過とともに帯英白色， 半透明に変化する。
非粘枇性，水溶性色素を産生しない。
発育微弱で，培地の梱濁は認められず， 管底に沈澱状の液体基礎培地における発育性状: 分離当初はきわめて発育が認められるに過ぎないが，継代培養により発育は徐々 に良好となり，培地を―様に梱濁するようになると沈澱状発育の傾向は認められなくなる。
なお， 菌膜の形成は認められない。
血液寒大平板上における発育 :基礎培地平板上におげる集落と同様の性状をしめすが，明瞭なF 型溶血が観察される。
Pl‑ 1I1‑Fにイーa‑l株のウサギ血液寒天平板，
A8 時間培養の集落をしめした。

竜子顕微鏡像;前述の方法により観察したイーa‑l
めて長大なl ‑2

株の寛子顕微鏡像はPl.1I1‑Gに@しめすごとくで，きわ本の腺毛が観察される。

2) 生化学的性状る。 すなわち，
供
前述の方法による供試菌の生化学的性状検査の結果はTable l2 およびl3 に示すごとくであ
試菌の 4 株はほとんど同様の性状をしめし， BCP，ルク培地の変化，カゼイソの消化，凝固血清の液化，クエ ソ酸塩の利用，マ Tpン 酸塩の利用，ウレ ア ーゼ活性，レシ チ ナーゼ活性，コアグラー
七 活性，フェ二―ルアラ
二ソ・・

デア，ナ□ ゼ活性ならびにHUGH&LEIFSON

培地における
好気的条件でダルコースよりのガス
産生はいずれも険性で，ラフィノース，ラムノース，アド二 トール．

ズルシトール，イノシトール， ソルビトール，イヌリン

ならびに15 。C 培養におけるサリシソなどの炭水化物からは， 酸およびガスのいずれも産生されず，キシp ―スか

らは酸のみ産生する。
硫化水素の産生ほ明瞭な陽性株と疑陽性をしめす菌株があり， MRR 試験は疑陽性または陰性をしめした。ラクトースの分解は―般に微弱で，培養7 日後にようやく酸の産生が認められ，ガスを産生しないものが供
試菌4 株中の2 株において認められた。
サリシソは2． y。 C の場合も分解性は微弱で培養l2 日後にようやく酸の形成が認められたが，ガス形成の認められたものはl 株のみであった。
以上の性状の外，すなわち，インドール
産生，硝酸塩還元性，アリモニアの産生，溶血性， ゼヲチン液化，デ

ンプソ氷解，キチン
氷解，VP 反応，アルギニン
試験，，オキジダーゼ試験，カタラーゼ
活性，フ オスファター
ゼ 活性， リパーツ
活悔

リジリ・デ カルポキ シラーゼ活性，2 ， 3 ブチレソグリコール・デ ハイドロ ゲナーゼ活性，グルコースよりの
2 ， 3 プ チレングリコール産生などの諸性状はすべて陽性で，また，?

= クロ―スグルコース，
セ P ビ

トレハロ―ス，フラクトース，
ガラクトース，マリノース，アラビノース，
マ二 トール，グリセ
p ―ル，デキストリンならびにスターチなどの炭水化物からは
培養 1‑2
日
間で酸およびガスの産生が観察され，ギシp ―スはガスの産生は認められず酸のみが産生され，グリコーゲンでオース，・ ルトース，シ

アド二 トール，

お

Or

test

characteristics Of isolates

l

イーa‑

Indole production

HzS production

Ammoniumproduction
Nitrate reduction

Gelatin liquefaction
Casein digestion
LOeffler's

digestion

serum

S 血 rCh hydroIyslS

Chitin hydrolysis

MR testVP reaction
Citrate utilization
Malonate
Arginine

utilizationt口 t

KOvacs oxidase

test

Ca 血 l旺e

UreasePhosphatase
Lipase山 RgUlHS 。

Lecitfainase
Lysined。 。、， hxy@aS。

Phenylalanine deaminase
2, 3 butanediol dehydrogenase
2, 3 butanediol from glucose
MB reduction
Hemolysis fish b100d agar
rabbit b100d agar
Filtrable hemolysin
Hugh & Leifson's medium
open
close
A;

acid

G;

AG

gas

Table 13. Biochemical

Cleavage 0f

AG
AG

(AG)
AG
AG
AG
AG
AG
AG

A ，abinoSe

AG

Adonitol
DulcitolInositolMannitolAG

XyloseA

土 。 bitol

GlycerolDextrin

AG
AG
AG

S arch廿

InulinA (G)GlycogenA

Salicinat 25@Cat 15 。 C

: acid

G

: gas

(AG)

(

) : weakly(1)Strain N0.

l

H‑

口

AG

― b‑

l

口

―C‑ l

AG

AG

characteristics Of isolates (2)イーa‑GlucoseRaffinose
Cellobiose
LactoseMaltoseSucroseTrehalose
Fructose
Galactose
MarmoseRhamnosep‑

親魚︑Characteristics

養中のサクラマならびにカラフトマ ス に発生した細菌

蓄熟
催Table 12. Biochemical

l

39

□

Strain―a ‑ l

N0,

AG

― b‑
AG

AG

AG

AG
AG

AG
@G
AG
AG
AG
AG

AG

AG
AG
AG

口

l

1@@

―C
AG

(AG)
AG
AG
AG
AG
AG
AG

AG

AG

AG

AG

AG

AG
AG
AG

AG
AG
AG

AG
AG
AG

A (G)

A(G)

ACG)

(A)

‑

AG

(A)

l

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
は ガスの産生が微弱であった。またHUGH&LEIFSON

培地におけるダルコースの代謝形式は醗酵的であった。

なお，血液寒天平板培地上の溶血性はウサギ血球，ヤマメ
血球のいずれの場合も明瞭なF 型溶血が観察されたが．

ろ過性溶血素の存在は不明瞭であった。

の生物学的性状る。 なお，前述までの性供試菌の生物学的性状の観察結果はTablel4, l5, 16 および17 にしめすごとくであ状観察結果と同様に生物学的性状においても供試菌4 株はほとんど同様の性状をしめした。
発育と培養温度の関係 :Tablel4にしめすごとく供試菌4 株の発育適温は2O‑30 。 C にあり， 35 。C

・

24 時間でも発育は認められるが37 。 c 以上では48 時間培養でも発育はまったく認められず，―力低温度では比較的よく発育し， l0 。 C においても48 時間培養で明瞭な発育が観察され， 5 。C では48 時間で発育の認められる菌株と発育疑陽性の 菌株が存在し 培養時間の延長によりおそらく5 。 C でも充分発育可能なことが推察された。
以上を要約すると供試菌の発育適温ほ M) ―30 。C ，発育下限温度は5 。C 以下，上限温度は35 。 C と推定され，いわゆる通性低温細菌(facultativepsychrophile)の 範腐に入れられるべきものと考えられる。
発育と培地pH
酸性域では pHの関係 :Tahle

l5 にしめすごとく
供試菌4 株はいずれもpH

5． I まで48 時間培養により発育が認められたが， pH

Table 14. Effect Of temperature

On

6 0‑7
・

・

? で最も良好に発育し，4 0 ではまったく発育が認められず，また・

the growth Of isolates

24

24

24

W : especially go0d

一一 1丁
a

ra

ttt: especially go0d

growth‑]‑: go0d

Table 15‑

growth

growthEffect Of pH@4": go0d+ :growth+40@

the growth Of isolates

On

growth@ : scanty: growth@: negative: negative

口

l

26
48
96

―a‑ l

24
48
96

a‑

l

24
48
96

― c‑ I24
48
96

Ip1‑b‑□

4+ : go0d

growth廿十廿什廿廿Effect 0f Nad

廿
廿

廿
廿

廿

廿

廿

斗

斗

廿

廿

廿

廿

廿

廿

十 ト

刊
廿
廿
斗

+ : growth

Table 17.
Characteristics
Growthconcentration On

丑

七

廿

廿

廿

廿

甘

十

斗

@

: negative

biological charateristics Of isolates

イーa‑

l

on

SS agardesoxycholate agar
potato medium
anaerobic condition

Sensitivity to 0/129
アルカリ域ではpHpH

the growth Of isolates

仕‑h : scanty

SOme

親

イ

]6

養中のサクラマ ならびにカラフトマ ス 性に発生した細菌

蓄熟
催

Table

の上昇につれ徐々に発育は低下し pH

口

― 3‑

Strain N0.

l

a‑

b‑

l

VI

ルカリ域ではpHl‑9， 3 でも48 時間培養により発育が認められるが，9 5 以上での発育は認められなかった。以上の結果を要約すると，
供試菌の発育至適 pH・―C@ 6.0‑7は． 7，ア

9 附近まで，酸性域ではpH 5 附近まで発育可能と推定さ九る。

食塩耐性: Table l6 にしめすごとく
供試菌は@ 、 ずれも培地中の食塩濃度が0‑7@@@@/@ でほとんど同程度に発育し，3 ガにおいてはかなり発育が阻害され， 4%

以上で@／はとんど発育が認められなかった。

すなわち供試菌は食塩濃度3 ガ程度までは発育し得るが，それ以上では発育し得ず，食塩の要求性すなわち
好塩性状を有さぬものと推定される (non‑halophiles)n
その他の性状: その他の生物学的性状はTablel7K

しめすごとくで， 供試菌はいずれもSS 培地，デスオキシ

コレート培地に発育し得ず， ポテト培地には発育して帯黄白色の集落を形成するが培地の変色ほ認められない。
また黄燐法による嫌気培養法では充分発育し通性嫌気性菌(faCultative anaerobe)

StatiC COmNundと推定され，また vibrio

・

0/l29 には感受性をしめさ ぬことが観察された。

(3) 形態学的，生化学的ならびに生物学的性状による
分類学的考察" 第 l 章において述べたごとく，サケ科魚類の細菌性疾病原四菌としでは，
廊瘡病原因菌ぬ L 側皿 Fsd:w@/ ， ;C@ぬ，・ル

・

山 、 C CcM5C・

Q 叱低亡wf ダ市川 Sp ・，カラ ム ナリス病原因
菌 cAM

ル川M75

知られており，その外， 他種魚類との共通病原菌である運動性AeromonaS科に属する細菌，
MyCobaCt。。 ium属や NOCardia

・・菌
損傷病原因菌 He8nvp@.il
ぬ力ゐ。 luw，ニジマスのビブ リオ病原因由v/J@l J p泣 山川 var ． 也p 、 m;cus ，腎臓病原因を含む MyXobaCteIiaなどが古くから属 細菌，ある種のEnte 。Ob ，。te。i" ばae

属に属すある種の抗酸性菌，あるいはy/brfo 例g%@7f" %川なども知られている。
41

・・

北海道さけ・ますふ
化場 ; 研究報告第 24 号

‑4
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口 O 口

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ア□ト： ︒OハO山アト山の亡屯 の屯コ エO
東 一山 山O
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4 ょコ 一H三口□□口
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山 O 山Z せい
三
せ 口口口りく口口ト山
c 山の

養中のサクラマなら
催熟蓄

ス 親魚

北海道さけ 立すふ化場 : 研究報告第 24 号
・GRAM

CYTOCHROME

FLAGELLAPOLAR

AEROMONAS
ACTION

COMAMONASOXIDIZINGORRODSCYTOCHROME
FLAGELLAPOSITIVE
PRESENTOXIDASEPERITRICHOUS
PRESENTENTERICPSEUDOMONASVIBRIOCONTAININGNONEOXIDASE
WHEN

NEGATIVE

NEGATIVE
WHEN

GROUP

tN 0‑F MEDIUM
1% GLUCOSE――ALKLINEO@PSEUDOMONADFERMEN"I"A"rIVEOXIDATIVE
FLUORESCENT
MAY
BE

NON

PIGMENTPRODUCEDPSEUDOMONASNONMOTILE
AEROGENJC
GLUCOSEPARAPHENYLENEDIAMINEPOSITIVE
BROWN
PIGMENTFLUORESCENSMOTILEFERMENTATIONTESTPRODUCED

ANAERGENICGLUCOSEFERMENTATIONSPHEROPLASTSFORMEDGROWTHIN MEDIUM
WITH

AEROGENIC
OR ANAERQGENICGLUCOSEFERMENTATIONNO SPHEROPLASTSFORMEDNO GROWTHIN MEDIUM
WITH
3. 5% NACLNOTSENSITIVE
TU 0/129

3． 5万 NACLSENSITIVE
TO 0/129

VIBRIO sP.

LIQUEFACIENS

AEROMONAS
Fig. 10. Scheme

for identification andseparation 0f fish pathogenic

Pseudomonadales by Bullock (1964)
著老の分離した
供試祷 (供試菌4 株は前述のごとくまったく同 ―の性状をしめすので，以下―括して木菌と呼称する) は，グヲム険性，非抗酸性の杓閑で， また Myxobactenium
動性をしめさない
点などかも，COrynebac@eriurn

またばの叩力fiiluspiscium

属に持有な細胞の屈曲 (fRexion)による連属， 抗酸性菌あるいぼ Myxobactenlum

はグラム険性桿菌であるが， c0‑carboxylase

とも根本的に異る 。

など特有の発育必須要素を要求する点など，本菌とは可成りの相違点が認められる。
従来グラム険性桿菌，特に特定の温血動物病原菌を除くグラム険性 桿菌 の分類には不明確な 点が多く ，P se.ndnmnn"S 属 ， Vlhrln
・属， AeromonfaS属， Afhromohfacterの同定には種々の困難さがのこされているが， SHEWANlo

属， Alcaligenes 属ならびにそれらの近縁菌属

CSHEWAN& HODGKISS,l954) はこのような観点からl954 年 2， 3 の抗菌性物質に対する感受性の相違を利用してPsp.nnnmonas

属， V@brio 属， Achromnmacterなどを簡易に鑑別する新しい力法を提案，その後の 白 己の研究結果や， HUGH

& LEIFSON

炭水化物の代謝様式の相違を利用した分類法．あるいはKOVACS(l956) の十キシダーゼ試験を利用した
提案などをとり入れ， 1960 年， グラム険性
桿菌分頬の―新方式を提示(SHEWANet.al．， 1960) ，さらに最近
l964 年には多くの研究報告の知見をとり入れ， Fie ． 8 にしめすようなより詳細なグラム険性桿菌の同定に対するscheme
提示している (HENDMIE

et ． 引 ．， l964) 。 また BULLOCK

はl96C@年の SHEWANをの提案や従来の魚病原因菌に関する記載を総合して， F 巾 ． 9 にしめすごとき
魚病原因菌の推定分類法を提示 (BULLOCKには特に PSeudomonadaleS属(l953)の提案による， l962) ，さらに1964 年

目に属す
魚病原因菌の分類法としてFig ． l0 のごとき方法を提案した (BULLOcK，。 r， AlCaHgene，，

1964) 。
本 菌はグラム険性，
非運動性の桿菌である点から，
SHEwAN
44の分類法によればAChromobact

ならびに Cytophaga

魚親，ぬCeae ， FlW 。Mcter@um

養中のサクラマならびにカラフトマ ス 性に発生した細菌疾病に関菩熟催EnterobCte

非運動性桿菌の 諸属の何れなど―群のグラム・陰性，

培地においてグル， ―スをかに属すことが―応考慮されるが， 本菌はナキシダーゼ陽性，
且つHUGH&LEIFSON
醸酵的に代謝する
点から井運動性ACh0mobaCte， や AlCallgneS などと相違し ，オキシダ□ ゼ 陽性，且つグラム険SS 培地やデスオキシコレート
培地に発育し得ない点からもEnterobaCte ，iaCe 肚性腸内棚菌の選択・鑑別培地のに属すとも考えがたい。
また黄色あるいはオレソジ色色素の形成も認められない 点から FlavobaCteriumや

Cytophaga とも相違する。もし本菌の 井運動性である点を考慮外に置くならば，オキシダーゼ
陽性， HUGH&LEIFSON
培地においてダルコースを
甑酵的に代謝し止 つ vib ， i0‑StatiC mmWmd
0/l29 に非感受性である点から， AeromonaSと同定され，
Vibrio や Pseudomon ， s 属群とは相違する。
BERGEY， S M 皿 ual ， 7th ed ． (BREED
et ． al 。 l957) は Aeromon
卜属 を次のように定義している。
。 '短桿菌， 極毛で通常単鞭毛を持ち運動性を有する。しかし井運動性のものも存在する。グラム険性，種々の有機物を酸化する。
炭水化物を醸酵的に分解しH,,CO) ，， 2， 3 ブ チンソグリコールを産生する。MR

試験険性，乳塘を徐々 に 醗酵するか，あ
るいはまったく分解しない。
従来記載されているsp 。。 ies の大部分は水由来であるか，または海産・
淡水産動物，例えば魚類や両棲類に対し病原性があることが知れている"。

& STEEL

また COWAN
見をとり入h,(1965) は． EDDY

(l962, l964) ゃ EWING

1964 年に次のような Aeromonas(1960)の Aeromonas

属に関する知属の新しい定義を提示している。" グラム陰性桿菌，通常運動性，カタラ□ ゼ 陽性，オキシダーゼ
陽性，通性嫌気性，糖を醗酵的に分解しガスを産生するが，ガス
非産生のものも存在する。
通常アルギニンを分解する"。

さらに最近SCHUBERT(1968)

は後に述べるような自己の研究結果から
Aeromnnas

属を次のごとく定義した。

"短桿菌，芽胞を形成せず， 極毛により運動し―般的には単毛，まれに非運動性，グラム
険性，通性嫌気性，有機栄養性，種々の有機物を酸化する。
好気的あるいは嫌気的条件下で炭水化物を分解し 酸およびガス あ るいは酸のみを産生する。
チトクロ―ム オキシダーツ，オキジダーゼおよびカタ ラーゼ陽性。
ヂアスターゼ，リ" ―ゼ，"レシ チ ナーゼおよび
プ 。 ティナーゼを産生する。イノシトール
非分解。アルギ二ソ・デ イドロ

7 5% 食塩，ぺ プトリ培地に発育しない。
Vibri0‑staticcompound0/l29
・や両棲類に病・原性を有する"。

本菌は前述の性状検査の結果から明らかなように， 上記 BKRf;EY's
Aeromo0naS属の定義の条件を完全に満足しまた

SCHTIBKTRTManual

次に BERGEY'sのうち A

Manualは， Aeromonas

Saim/ 而おんば， Fie 9。 Fie. l0

・

・

属を A
の

および COWAN& STEELのの 定義についても。
レシ チ ナーゼ険性である点を除外すれば他の条件をすべてを満足する。この観点から本菌を Aeromonas
ものと考えられる。

ゲナーゼ陽性。

に非感受性。
多くは水より分離され魚類属と同定することには異論がない

仙@七 /血などの 4 species に分類しているが，それら

salm

・

BULLOCKの分類法にもしめされているごとく， 鞭モを有せず

運動性を欠く点において他の3 species と決定的な相異屯を有している。
本菌は非運動性である点から AA
ごとく，・

sal@onici血 に近縁な網菌と考えられるが， RULLOCK・の分類法に明らかなsalmon@wCidaの分類上の―つの大きな特性として，水溶性褐色色素産生能がとり上げられており，こ， SMITH(l963)の点本菌はその性状を欠いている。しかしながらは Bacter@umMsafmwonic@血 (二 A.salmonici 血)に関して詳網な
検討を行ない， 本菌種に非色素形成住，且つ "naeroeenic な変異菌の存在することを報告している。 またSCHUBELTi@l960

年―1964 年における―運のAeromonas

l96l. 1964" ， l964b) や前述の EDDY,EWING,

SMITH

属に関する白巳の研究 (SCHUBELTタ

Z帆 tata ， A ・ゆみ
ophila, Asalmonici

血の 3species

・・， ，なお，..SM41TH Ol963)

Near 。monas

L

は A

・

l967" ， 1967b), Aeromonas

、。

属中に
を設定し，

上な A.sal 脚 men 山 subsp ．の方 r0 佛@senes
・吻%rC.@.血 は非運動性である点などから，むしろ Aeromonas

sarn

なる新属を設定することを提案しているが， SCHUBERT

したがって，以上のSCHUBERT・をおき，各 species にそれぞれIsub‑species

A salnwntc@血の suh ド ppec@e，として非色素産生性で且つ anaerogenを設けている。

1960,など最近におげる
多くの研究結果を集約してAeromonas

属の species におげる分類について
新しい提案を 行ない (SCHUBERT

A・属 より除外し，は氏の分類でこの意見をとり上げていなの分類にしたがうならば，著老の菌が非色素産生性である点は，
A ． sal 捌w@i.f.t
血45

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
Table 18.

Differential characteristics of the isolates fromandAeromonas

A ． 却?側tわ iぬ subsp ． 叱Ar 側 ?* めsd ． 却f卿七 fぬI幻lateS

Characteristics(Schubert 1967)

salmmiicida

A ． s&lP仰 fCf ぬ subp
仰什卿咋彬 S
(Schubert 1967)

Br 叩， n pi 卯 ent produCtion
Hemolysis
Gelatin liquefaction

LOEFFLER'S

digestion

serum

Casein digestion
PhoSpha廿

ase

Lecithinase
Indole production(+)

HaS production
Lysine decarboxylase
MR testVP reaction
2,3 butanediol

from glucose

Cleavage 0f carbohydrate
SucroseArabinose
LactoseCellobiose
Salicin・

A : acid

AG
AG

(AG)
AG
(A)

G : gas(AAG) : weaklyと同定する上に大した問題とはならない。
さらに SCHTuBKRTは A ． salmon@ici血 たらびにそのsubbspecies は

37 。C において発育せず 他の species は 37 。C で良好に発育する点を重要視しているが， 本菌も37 。 C 以上で発育し・得ない点， AerrnnnnaR
Table18

属中，H. s00l棚 niCt 力に最も近縁なものと思考される。しかし本菌は他の性状において，の記載によるA ． @@i@伽mf.C@.
血ならびに A ． salm 仰ucidasubsp. acmonw 叩伴唯
sにしめすごとく， SCHTIBERTとかなりの相違点が認められる。なお Table 18 はそれぞれの相運点のみとり上げたもので，その他の多くの性状ではまったく十致している。
すなわち，Table18 にあげた諸性状のうち，本菌は褐色色素の産生，溶血性， ゼヲ チン液化性，凝固血清の液化性，フ オスファターゼならびにシュク
a ―ス，アヲピソースの分解性などにおいて，

A ． sal 肱@xM.C.f
血ならびにその ，ub‑species のいずれか―方と相違し ヵ ツインの消化性，
インドール産生性，・VP 反応ならびにセロ ビナースの分解性においては
両者の・性状とまったく異なる。また本菌V／ ラ クトースならびにザリシンを微弱ながら分解するが，対照の両菌種は険性である。 また， A ． salm
仰而血 sub，p．の片勿如がnes には記載がなく詳細は不明であるが，

A ． @s0l@
ゆ@mci 血はレシチ ナーゼ，MRR 反応が陽性，リジン・デ カルボキ シラーゼは陰性であり， 本菌はまったく逆の性状を右する。
特に細菌の分類上における重要性状と考えられるインド―ル産生ならびにVP
ぱル仰
F。Fw$

反応がまったく相反する点から， 本菌を A

・

MZmm@ 而血 あ るいはA sMM%・

心血 SubSp ．

と同定することは困難である。 しかし前述のごとく
他の多くの性状においてかなりよく―致することから，本菌をまったく 異なった SpeCieS と判定することも 困難である。 以上の観点から，著者は本菌をd ． wZm叩@ぬ血の new

SUb‑SpeCies と考えるのが最も妥当てあろうと思考する。
この点に関しては，次の血清学的検討の結果を併せて，後に諭ずることとする。
第 2 項 血清学的性状
本節第 l 項において，本菌の形態学的，生化学的ならびに生物学的性状の観察結果から
， 本菌をA ． 5d%'n@'C@小 lの I 新亜種と考えることが至当であろうと推論した。
次にこの推論の妥当性を本菌の免疫血清学的性状から検討

なお， 芙験方法については逐次概述するが，主として次の図書を参照した。
すべく次のごとき実験を行なった。

Immunological Method (ACKROYD,

1964)
46

細菌学実習提要(f 染病研究所学友会，
1955)

魚
親

Of Medicin (HUMPHREY

for Students

養中のサクラマ蓄ならびにカラフトマ ス 性に催熟

Immunology

免疫化学 (山村・石地，1963)& WHITE,1965)

原因苗の加熱死苗 (イーa‑] 株) に対するウサギの免疫反応答ならびに抗血清の特異性第 l章第 l 節において述べたごとく
，
BLAKE
&
ANDERSON(U30)
は， B? 川め s血 ?脚れぬ血 (二 A
MM 切ぬぬ) を ，そのウキギ抗血清における補体結合反応により血清学的均―性を認"め， また DUFF
(l939) は実挨 I

・

その S ， R および G 型集落のウサギ
抗血清における
凝集反応による
抗原分析の検討から多くの供試菌株を2 群，第l 群の R phaSe と第2 群の S phase は共通抗原(n) を有することを明らかにしている。
またに大別したが最近 RABBet ．

al ． (1964" ， l964b) は，ニワトリがA

・

MlWwjC@

血 抗原によく応答し，特異抗体を産生することを報告している。
ここでは先ず本菌の 加然死菌抗原に対するウサギの免疫応答，ならびに抗血清の特異性について次のような方法により検討した。

(1 ) 実験方法
免疫抗原: 木菌の代表株 イーa‑l 株を基礎斜面培地で25 。 C ，

24 時間培養し，その菌体を光電比濁法により約10 。 cell/Wmr の濃度に滅菌生理的食塩水に懸濁せしめ，これをIO0 。 C ， @io分間加熱して免疫抗原として使用した。

免疫法 :Fig. 1lic しめすごとく，―定日数毎に，免疫抗原量を漸次増量しながらウサギの
斗静脈内に頻回接種
し ，最終接種日より9 日後に全採血を行ない抗血清を分離採取した。
なお，この期間の途中において時々 ―部採血を行ない，抗体の産生状況を観察した。

抗体価測定法: 常法通り56 。C ， 30 分間の井動化を行なった
抗血清について，試験管内凝集反応(定量的凝集反応)。 により抗体価の測定および抗血清の特異性を観察した。
なお反応は37 。 C ，納置した後に判定した。

2 時間後，引き統き 4 。 CKL20 時間

反応抗原: ウサギの免疫応答の観察には，免疫抗原と同様にして調製した
イーa‑l

1

びに同濃度の
井加熱生菌懸濁液を， また抗血清の特異性の観察には， Table株の加熱死菌懸濁液なら19 にしめすごとき
本病の原因菌 4

A ． saA@mfm
戒r.f
血 および，その他の類縁
魚病原因菌 7 株の生菌懸濁液 (約 108cell/ml 濃株ならびに対照として
度) をそれぞれ反応抗原として供試した。なおそれぞれの 反応抗原は自発凝集性のないことを 確認のうえ
供試した。

Table 19. Specificity 0f agglutinin in the rabbit antiserum against theheat‑killed cell Of ‑¥‑a‑1
strain1

ィーa ‑ l

Oge

Aerm

d)en
test

e
n・
@
Rl
tu
Anti (agg

Isolates

Dilution口―a ‑ l口― b‑

lp ― C‑I

仰四 Aノ dr0 タ乃 frd IAM

A ． pMnnfdf& ATCC

Il163

A ． 5MM 仰わ fdd ATCC

14174

EFDL

A ． Fゅがばたぬ EFDL
Pseu.dmnonas fiuorescens EFDL

L 什バ o タ fお山川

NMc

1018

1

47

1

0f antiserum

1

1

(1

1

12800 25600

―

―

l ―

―

l ―

l ―

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
(2)

,240

結果および考察以上のごとき力法で本菌に対するウサギの免疫,560

応答を観察した
結果は，Fia. 11 にしめすごとく

免疫開始後9 日日に可
ぶ5T@20の凝集価が認められ・岩

l,280
640

たが，以後の追加接種による
凝集価の上昇はさほ 去

320

ど大きくなく， 26 日目にI :10240 ， 30 日目の全採 l60‑
石

杣

．

．

0 6杣 l 0加 l 5加・

l:5l20った。 す暮 80
400，43

血時の血清はやや
低下して
であ
なわち，
ウサギは本
菌の加熱死菌作抗原に対し
充

0． l杣

分応答し，換言すれば， 本菌はウサギに対し免疫原住を有することが明らかにされた。
なお，反応抗原が加熱死菌である場合，生菌の場合に比し，

Days

若干凝集価は低い傾向が認められた。

Fig‑ ]1

次に，抗血清の特異性を観察した
結果は Table
l9 にしめすごとく， 本血清は供試原四菌 4 株に対しまったく同程度の凝集価をしめし，血清学的均Immuneresponse Of rabbit against heat‑killedcel1 Of イーa‑1
StLain0‑0viable cell for tested antigen@‑@
heat‑killed cell for tested antigen
IV―性が推察されたが，対照菌株に対しては A

intravenous;s : intrasubcutaneous

sal@onjci血の 2 株においてのみ木菌とまったく同程度の凝集価が観察された。
すなわち．本菌と対照の カ

幻I川伽:而血とは駁築反応において同―特異性をしめすことが観察された。
実験H ・原因 苗の加熱死苗抗血清に対する免疫抗原 (イー。 ― ] 株) および A ． salmomcida

(ATCC

141 れ

株) の各生菌による交叉吸収試験
実験 T において，対照菌株のA ． 却I川例ici ぬは抗血清に対し，免疫抗原のイーa‑1

株とまったく同程度の交叉 凝集性をしめすことが明らかにされたので，さらに両者の耐熱性菌体抗原 co 抗原) の相似件を倹討するため，
次のような方法により交叉 吸収試験を試みた。

(1 ) 実験方法
実験 I において得られた 抗血清の 40 倍 稀釈液を 2 本の試験管に用意し，―方にイーa‑1

A ． salm(mici血 ATCC
した後4， O00rpm,

株，他方には

14l74 蛛の 25 。 C ， 24 時間基礎培地斜面培養
菌体を多量に懸濁せしめ， 37 。 C に 2 時間納置

15 分間遠心分離し， 得られた上清に再び，それぞれの菌体を濃厚に懸濁せしめ，
37 。 C に 2 時間

および4 。 C に20 時間納置後，再び4， O00rpm,

3@@分間遠心分離し，完全に清澄な上清を吸収血清として供試した。
@

なお対照血清として， 40借稀釈した同―血清を同温度で同時間
納置して供試した。その他の方法は
実験I と同様である。
□ ) 結果および考察
株および A ． 5dr7WPFCiぬ ATCC

以上の力法により調製した2 棟の吸収血清をそれぞれ 2 分し，イーa‑lTable 20. Absorption

test

Of agglutinin

the heat kiHed cell
・

0f

イーa‑

Antigen tested

Dilution Of
absorbed
serum
(1 :

l strainA. s@'w %‑'dda ATCC

(Agglutinogen)
Absorbed;n the rabbit antiserum against

wi 山

)

+

160
320
640
1280
2560
5120
10240
20480
48

l

―

14174 (B@

魚
親

V中
養
生
しの
たサ
艦ク
飾ラ
はマ
関蓄
すな
るら
研び
究に
甥カラフト スマ

熟催

l4174 株の各生菌懸濁液を反応抗原として吸収結果を観察した
成績はTabte20 にしめすごとくで，抗血清は何れ性抗の吸収抗原によっても完全に吸収されることが明らかにされた。
すなわち本病原菌と A ． salnvmK@i血の耐熱，

0原は共通抗原であることが推察された。
イー a‑]

実験皿株および A ． aalmo 市cida ATCC

答ならびに抗血清の特異性

14174 株のホルマリン死苗抗原に対するウサギの免疫応

切ic.f血とは耐熱性抗原において差異が認められなかった以上の実験結果より明らかなごとく， 本菌とA ． salm

ので，次にホルマリン
死菌の接種により得られた抗血清で両者の易 熱性抗原についての検討を行なった。ここでは先ず内者のホルマリン
死菌に対するウサギの
兜疫応答ならびにその抗血清の特異性について検討した。

(1 ) 実験方法

327680免疫抗原としてイーa‑l 株ならびにA 釦f川伽@.icida 163840
81920

ATCCl4l74

・

株の2.y。C ， 24 時間培養菌体を，実験I と同5ガの割合にホルマリソを添加し37 。C ， 24 時間納置後，生菌の残存しないことを確認の上，免疫抗原として
使用
・

40960

g 20480
‑卜仁
15120
0240

様にそれぞれ滅菌生理的食塩水に懸濁せしめ， これに

//

2560

毛

した。
ウサギに対するFig
l2‑ 1280320640
山山屯り実施し，その他の実験方法はすべて
実験I
に準じて行
接種は
にしめす日程によ・な 9o た。

(2)

結果および考察

0． 2M

O． 2M

l． 3M

f． 8mEコ

以上のような方法で両接種抗原に対するウサギの免疫応答を観察した
結果は Fie ． 12 にしめす通りで，免疫開始後 14 日目にして イーa‑lDays株の場合は I :20480.

A ，． 5必 @m@ 乃 fC@dd の 場台はI :40960 まで凝集価が上昇し，

Fi9 ]2・

Immun

・

生が懸念されるが，実験I の場合と同様にそれぞれの抗血清の特異性を観察した結果，Table21
本蔵とにしめすように，Of ， Jabbit ， against。eSponSe・(A) and A. salmonicida ATCCl : 327680 のごとききわめて
高カ価の抗血清が得られた。

このような高力価の抗血清においては非特異的抗体の産。

formaHL ょ HIed CeHof イー‑a‑‑ lStrain

全採血時の3l 日日の血清では
前者で l :8l920 ，後者でtested antigen

(A)

(A)
(A)
(B)
(B)

0‑O

"

14174 (B)inoculated antigen

(B)
(A)
(B)

―"

A ． salmwiiciぬの 両者間には，前述の耐熱性抗原の接種により得られた抗血清の場合と同様に交叉凝集性が認められたが，その他の対照
菌抗原に対してはま
0 た
交叉反応は認められず，明らかに特異性が観察された。

く

実験w

ホルマリン死苗抗血清に対する免疫抗原 (イー 。 ― ] 株) およびA salmonicida(ATCC14174
・株)

による交叉吸収試技
実験m の結果から，ホルマリリ死菌を接種したウサギ
抗血清においても， 本菌とA salm
・

例@ir.i
ぬ どはほとんど

同価の交叉凝集性をしめすことが明らかとなったので，両者の易熱性抗原について比較検討するために，次のよ
うな方法により
実験V の場合と同様の交叉吸収試験を試みた。

"(1)

実験方法

実験m において得られた
本菌抗血清のIOO 借稀釈液を用意し，生菌による吸収は実験D と同様の力法で，また耐熱性抗原 (、 O 抗原) による吸収試験は， 両菌株の25 。C ， 3 日間培養
菌体を生理的食塩水に懸濁せしめ，15 ポリド．

30 分間の乃 a熱により易熱性抗原物質を完全に破壊した
後， 3， O00rpm, l5分間遠心分離後上清をすて， 更に反復沈済を生理的食塩水で沈條し，これを吸収抗原として，上記の生菌の場合と同様の操作で吸収を行なった。反応用
抗原は実験I にのべた生菌抗原の外に，上述の吸収用耐熱性抗原と同様にして調製した菌体を光電比濁法により生菌抗原と同濃度になるように
生理的食塩水に懸濁せしめて供試した。その他の実験力法は
前述の実験と同様に行なった。
十の山女峰 L て実施した吸収試験の以
結果は Tahle22

49にしめすごとく，イーa‑・・(2) 結果および考案
・I 株の生菌による吸収血清

北海道・さけ・ますふ
化場 :研究報告第 24 号
Table 2] ，mnJ ︒十三
せdl
・
l ・
口

Specificity of agglutinin in the rabbit ami 父ra a叩inSt for 皿 Hn‑k 山ed@ぬぬ ATCC
l4l74
ceH Of イーa‑l 寸 rain and A 切J川伽・ぬtlgCH t。寸 Cd

Dilution Of antiserum (1 ;(agglutinogen)32806400128002560051200
1024BO
204800Isolates

14174

EFDL

l
I
l

o山
ち

eo

□
@

）

B

一一

ハ

・

‑

コ
つ山

A

test

十

v り ・ 寸 1 ヱ口せ士e foHmHn

Antigen tested(Agglutinogen)
Absorbed wi 止*白コ卜

Absorption

一一

Table 22.

‑ミ呈〜

A ．ぱ叫がw ぬ低EFDL
P ． 刀07P お C俗 EFDL
y ．が% 市 W NMC

一 ‑+

14l74

EFDL

‑十十

1018
II163

一州川一

一一冊川一一一IAM

d ．め仏ぽ fねZ& ATcC
d ． 切Z@れ川ば MQ ATCC

c‑

+ 十士廿

C3‑

十廿廿 井一l2‑

戸 ― b‑

A. hydrophila

一一

p‑

‑

l ―
イーa‑

Isolates

ト一

vせ
p@O@
十二 吉

d ． f叫びが低 叱応EFDL
P ． 刀仰化%C 瓜 EFDLy ． pf 比ぬM NMC

一斗

l1l63

一一土十

10l8

一一州川一一一ん

一冊川一一一d ． 方ヅイ化 p Ud IAM
A ．か*W 血仏 ATCC
A ． Mf 獅而力 ATCC

十十十 廿

l
l
l
l

イーa‑
戸 ― a‑
口 ― b‑□ ― C‑)

agglutinin @n the rabbit antiserum against

kmed

Cell

A

B

0f

イーa‑

A

A

l S仕 ain

B

AO
AO

BO

A

B

AO

BO

non

200
400
800
1600
3200
6400
12800
25600
51200
102400304800409600* A 二 ln 由 Ct cell 0f イ□a □ l Strain

仰B 二 intact cell Of A. salw m け icida ATCC

l4174

StrainA0 二 heat kiHed Cell 0f イーa‑l
BOD‑heatkilled cell Of A. 切伽仰市 fida ATCC
50

1417

親魚

蓄養中のサクラマならびにカラフトマ ス に発熟催は，・イー a‑l株は切論 A ． 却Inwmfcf力もまったく凝集しないが，これに反しA ． s@@lnwniC.i 血の生菌による吸

収血清は，
H

却lm
仰ぬぬ を凝集しないにもかかわらず
イーa‑l(イーa‑1株) の耐熱性抗原による 吸収血清においても同様に本菌抗原に対する凝集が観察された。
以上の株に対しては凝集性が残存した。また本 菌結果から，本菌の耐熱性抗原に対する抗体はA ． .@l 加
Wiifi 血 により完全に 吸収され， 本菌 の耐熱性抗原とA sal 肌mid@ 血のそれとは共通抗原であるが， 本菌の 易 熱性抗原に対する抗体は，A ． salmoniciぬ の生菌によっても吸収されないことから， A ． 切lmom@@r.t ぬは本 菌と共通する
易熱性抗原を有しないことが推察された。
・。@・実験 V

細胞外抗原 (E ，t，。 。 ellul 。 ， Antige。)

に関する検討LIU (196l) ほ ELEK

(l948) の寒天培地内沈降反応を応用したジフテリヤ 菌毒性株の簡易鑑別法を改良し，属細菌の細胞外抗原を比較検討した
結果，A ． 細unum@izr.i
ぬは他の A 。。nnionas 属細胞とほとんど
交

Aeromonas

叉しない特異的細胞外抗原を産生することを報告している。
本実験においては， 本菌について，
H

靭Invm@iciぬならびにその類縁菌を対照として，次のような
方法により何様め 検討を試みた。
CD)

C
―

実故 方法

供試抗血清 ; 実験皿 において得られたホルマリン死菌抗血清を供試した。
供試菌 ; イーa‑l 株の外，対照とし例 iC ぬ&Aて Fig ． 13 にしめすごとき パ&Jm

ATCC14174

株および4 種の類縁菌を供の試したo試験法 :LIU(196l)の方法にしたがいFi9 ． 13.

次の組成の平板培地を使用した。

Tryptose

0． lガ

Casamino acid

0． 3ガ

GlycerolNa,HPo4

0． 5ガ
0． 3ガ

NaCl

0． 2%

寒天

l． 2ガ

7． 4

pH

O

Extracellularantigenicre@ationshipbetween
イーa‑lstrain and other related organisms witl@modified Elek's
agar diffusion test
A:

Labbl

@

九

，，

4:

"
"
"

6:

tn anti@f @a @1 rabbit serum

SC で um廿2::dippeddisk dipped fn anti‑A salmonici'c@'A'TCC14174

I: Spot

づ

また試験
法は T‑HU の 原法を若干改変

disk

paper

B : paper

cuIture Of ィーa‑ l Strain@
A. salmmiwida ATCC

'"
"
"
"

14174

A ．ゆ小0力 Aff& ImH l0l8
A ．かがぽtataATCC
1116 牙A ． f叫び Pポ仏 たが EFDLノ

L か sC 研 Wvar

． 卯少肋 iC 硲 NMc

し次のごとき 方法により寒天内沈降反応を行なった。すなわち，培地の中央に供試血清中に葺準L た抗菌剤感をはりつげ， ―夜25 。C の恒温器内に納直して培地面を充分に乾燥せしめた
後，
Fie ． 13 にしめすごとく
デ イスクの周囲に中央から20mm はなして各供試菌を点滴し ， 25 。 c ， @5 日間培養の間にデ
受性試験用デイスク(直径 8mm)叩央少之集落の中間培地中に出現する沈降線の有無を観察した。
ぐzり

結果および考察以上のごとき方法で，本菌の細胞外抗原の存否を観察した結果はFie.13 にしめす通りで，先ず本菌の抗血清を供試した場合はFig.13Aのごとく，本菌集落とデ イスクとの間に2 本の明瞭な沈降線が出現し，対照菌においてはA ． salwum@Ac. 血のみに l 本の沈降線が観察され，その他の対照菌では沈降線の出現は全くみられなかつた。
タ

また―方，

A ． @@Ifnwm@ir.@d&の 抗血清を供試した
場台にはFig.13Bにしめすごとく， 本菌および A

saZwum@icfdaのいずれにおいてもl 本の沈降線が出現し， 他の対照菌においてはまったく沈降線の出現は認められなかつた。
以上の実験結果から， 本菌とA.saf 側mict 血 は少なくも―つの共通細胞外抗原を存し，また本菌はさらにもう―つの細胞外抗原を有することが推察された。

第屯項 本病原苗の分類に関する総合的考棄・， 芳餓第 1'項において，水病原菌の形態学的，生化学的ならびに生物学的話性状から， 本菌は Aeromonas属に属も， "本菌属中のA ． 幻fm@w@ fc.i.
血 に近似することを指摘したが，・
細菌分類上の重要性状である イ ツドール産生，
ぇ

府およびその他の若干の性状において相違点が認められることから， 本菌は完全にA 切lnW伽@
ぬ ぬと同苗51・

北海道さけ・ますふ
化場 ;研究報告第 24 号

低(1967b) の提案するA ． sal@ iwifcfぬ s@iibsp． % 什切如が%p.ss と種と同定することは困難であり，またSCHUBERTも相連することからCTablel8)， 本菌を A ．

5が汎而c.t血の― 新亜種 Cnew subsp )・と提案した。
また，本節第2 項における血清学的検討において， 本菌はAない耐熱性菌 体抗原 ((o 抗原) を有すると共に ，・と考えることが
至当である

切
@lPW
仰FCf 血と共通し且つ他の類縁菌に見出し得

A ． 却ぬ仰ぬぬ に欠如する 易 熱性抗原を有し ，またA ． 血加川@Cf血と共通する細胞外抗原の外に特異的細胞外抗原を産生することを明らかにした。
また後に本病の「血清学的診断に関する研究」の項において詳述するが， 本菌とA ． s&i ク仰FCf 血の加熱抽出抗原による補体結合反応においても両者間に共通抗原が認められる。
以上の血清学的抗原分析の結果か乙本菌 は他のA 叶OmonaS属細菌とは明らかに
異なり，
且つ A

と共通する抗原をもつことが明らかであるが，抗原構造において―部 d 5dMWM

ぬ血而此の―新亜種と考えたいとい5 著者の提案の妥当性が確認された。

P ごとき分類学的検討の結果，
本菌を A 5U@ル市ci 血 (LEHM
著者は，以上M@andNEUMAN

and FUDDLE

Of ぬCte ，ia (l%6)， 1953 の―新亜種 (SubSpecies)， l8%)

・・

SNIESZKO

却l川m@

山と異なり，前記したごとく・本菌をA ． wlW0%・と結論し Inte ，natioMl

COde

GUFpIN，Of NOmenClatu，eに準拠して次のごとく命名することを提案する。

すなわち，本菌はサクラマスOncw ゆw 乃ぬ肌収巾(BREVO0RT)

から最初に分離されたサケ科魚頬の病原菌種小名 (specific epithet) を本菌の亜種小名 (subspecinc epithet) に引用し，であることから，サクラマスの
これに英語のk川に相当するラテン語接尾動詞の ‑clda を付し，本菌をぬ 仙似仰LS @t m仰ntci 血 subsp P川smtcf ぬ， KIMURAA,
ム

l969.

・

nov. subsp.

と命名することを
提案する。

約

要

本病原因菌について，形態学的，生化学的，生物学的ならびに血清学的諸性状を検討し， 併せて分類学的考察を行なった結果，
本菌は Aeromonas

属に属し，

且つ A

・

salmo 威ci ぬ に極めて近縁することが推察されたが，

似
榊@mtci 山 subsp ・の 什のゆ 呼彬s とも相連することから， 本菌を A Sfil伽nici 血

分類上の重要性状において若干の相違点が認められることから， 本菌は完全にA sal@ @ifn 山と同苗種と同定す
・ることは困難であ
り，またA

・

sal

A

・

の ―新亜種とずることを提案し， sa ムv
ゅ袖ci ぬ subs・・す仰抑め fda ， mMURA,l%9.nov

・， ubsp ・と命名した(木村

1969'1, l@"),,

第4 章

水病原因 菌 (A ． salM 。nici血 subsp maso・肋 ) の 選択培地

ぴ。

についての検討ならびに 水試料からの 菌検 索
第 l 章， 第 I 節において述べたごとく， A ． Sd7W%

心血は他の AeromoMS

属細菌と異なりObligatepathogen

であることが知られており， また A ．

卸れれ切 而如 以外の AeromomS属細菌は養殖池や，河川水中に常在していることも周知のことである。 ―方 A 5M@W 布C@力 は天水や純水中では勿論，河川水や下水中でもわずか数日な・

いし10 数日間程度しか生存し得ないという報告もある (DUFF

et al ・， l940 ， SMTH・

， 1962) 。

著者は前節において
本病の原因菌をA‑s@If 似戒r.fぬの ―新亜種であると結論したが，本節では本菌の検出用培地について種々検討し，これにより病魚の発生をみた
蓄養地用水より本菌の検索を行ない，併せて純水や河川水中における本菌の生存能についても若干の検討を行なったのでその結果についてのべる。

第 ] 節 検出培地についての 検討
蓄養池用水や河川水中には， 種々の水棲常在菌のほか，絶えず
陸地や空気中から， 或いは流入水その他脊種の媒介物により各種各様の微生物が混入し，このような試料からの特定の細菌の検出は困難であるが，特に野外に種の作業における細菌学的作業においては，試料以外からの迷入微生物の防除も山難である。 したがって，このおいては選択増菌培地或いは選択鑑別培地が強く要望される。
DUFF
52

et a@. (1940)) は A setlmfm@ici
ぬの 分離培
・

・

蓄
熟
催
ス 親魚

地としてマルトース
血液寒天培地を考案し使用しているが，この培地にはまったく
選択性はない。また， SMITH

切デスオキシコレート
培地のうクトースを
マ二 トールに置き換えた培地を奨用して(l962) は選択分離培地としているが，著者のA SfIitJW
似@fCfぬ subsp. ma @c@i 血 は前節において指摘したごとく，市販のデスオキシコレート
・

培地には発育し得ない。そこで本菌の選択増菌或いは選択分離培地について
次のごときz ，
実験 I

3 の実験を試みた。

本病原因苗の尭育におよぼす
胆汁酸塩ならびに
窒化ソーダの影4

グラム険性菌
ほ―般に培地に添加された胆汁酸塩により影響を受けず，またグラム陽性菌でほ窒化ソーダの影応用して種々の選択培地が考案されている。
故に響を受けがたいことが知られており(坂崎， l965) ，この特性を先ず， 次のような方法により本菌の発育に対する胆汁酸塩ならびに
窒化ソーダの影響を観察した。

(1) 実験方法
供試菌株 : 水病原因菌の代表菌 としてイーa‑l

株を供試した。
試験培地:基礎培地として次のごとき組成の半合成培地を用いた。
Casamino

4． 0g

acid (Difco)

ダルコース

2.0g

NaCl

10. 0g

120

s?

ニコチリ酸

20mg @+‑>

ビタミ ソ Bl

Na;,HP0,‑12H20
KH;P0,

5 0g
・

0． 8g

巨

80

口

l， 000m7

水
PH

?.2

基礎培地に対し，種々の浪度に胆汁酸塩(胆汁酸
塩 NO 2 ，日本栄養) または窒化ソーダ(和光純薬)

40・を含む水溶液を等量混合し，滅菌の後供試培地としだ。なお木基礎培地の2 倍稀釈培地には供試菌はよ20く発育した。
また，上記基礎培地は
後述の第 6 章において治療・予防剤の検討の際に常用したものであるが，そCOncentrationの使用理由については後にのべる。

Fiq. 14.

発育におよ@ます影
弩の判定法: あ らかじめ前記の基礎培地の2 借稀釈培地で25 。 C ， 2U 時間，MOnnd

Effects of bile salts and sodium azide 0n theerow
nh Of A. salmonici血 subsp ．―
がぬ0‑0
bile salts (mg/m0
十SOldium azide (ァノ m7D
す‑式

L 型試験管中で振盤培養を行なった
供試菌を，L 型

試験管に―定量宛分注した各種濃度の供試選択剤を含む
培地に―滴宛接種し ， 20 時間振盤培養後供試菌の発育を
光電比濁法K より測定し，選択剤無添加の対照培地における咽濁度 (O ． D ． ) を l00% として各供試培地における発育率を求め比較検討した。

(2)

結果および考察

以上のような方法により，供試菌イーa‑l株の発育に及ばす
胆汁酸塩ならぴに
窒化ソーダの影響を観察した

結果は Fig ． 14 にしめすごとくである。

すなわち，本菌の発育は胆汁酸塩の存在によりむしろ促進される傾向がみられ，本実験の最高濃度
6ms/ml 程度の培地への添加でほ何ら阻害的影替は認められなか@。)だ。―力窒化ソーダは明瞭に発育を阻害し，l． 5r/Wmr の添加で約50% ，

2． 5r/m7 以上で完全に発育は阻止された。

以上の結果から，胆汁酸塩は本菌の選択培地におけるグラム陽性菌の選択的抑制物質として使用し得る可能性が推察された。
53

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
実鼓H

選択増苗培地の試作

実験I において，胆汁酸塩は本菌の選択培地に利用し得ることが推察されたので，次に述べるような方法により試作選択培地の効果について検討を行なった。

(1 ) 実験方法
基礎培地として，前章において常用した次の組成の培地を用いた。
Proteose

Pepton N0.

log
3g
5g

3 (Difco)

BactBeef Extract (Difco)NaCl

l.00 肺 l

水7． 2‑7pH

基礎培地に対し，胆汁酸塩N0.2． 4( 日本栄養) を 0． 2， 0． 4 および0． 6% の割に含む培地を調製し，供試菌として木病原因菌 4 株，対照菌として類縁のグラム険性菌7 株ならびにグラム陽性菌9 株を用い，上記3 種の培地における25 。C ， 24 時間および79 時間培養後の発育の程度を肉眼的に観察して選択増菌性の効果を判定した。

(2) 結果および考察
上述の3 種の培地における木病原因菌ならびに対照菌株の発育の程度を観察した
結果は Table23にしめすごとくである。
すなわち，本病原因菌 4 株は胆汁酸塩濃度
0． 2% および0． 4九の培地において培養24 時間後に明瞭な発育が観察され， 0． 6分培地では2 株が24 時間培養後に，また72 時間培養後には他の 2 株においても発育が認められた。
―
方対照菌株ではBacillus ぬnitr@fic仰6 において72 時間培養後に若干発育が認められるのを除き， 他のグラム陽Table

山 mpari 丸n Of 止 e growth

23 ．

and o小er various

COne.
0f
bile
salts24
Aer

イーa‑の― 叙I獅ぬ idfi

p‑a‑subsp. masoucida

n
p‑

ト

0
口

0 E
山
QL

B

L卜
OL

5

口

C‑

・

・

止e trial enrichment

MS・medium

O． 2 ガ0． 6 ガ

72

24

72

t
I
1
l

A ． 乃 /少Oタ乃 WO 1AM 1018
A ． 加@叱?ぬ 0ATCC
II163
A ． 5d 仰 fCf 血 ATCC
14l74
A ． Zw%g アの ぬ低 EFDL
y ． かぽ山川 Udr ． ルpo%fC ぬ TUF
P ． 刀低グめ Ce 於 EFDL
E ． COrf 0‑26@松。乃廿 。ノ 。

B. megaterium
山区

b @

On

士廿十廿士士廿

卜L
‑P
L O山d
o

@

A 細i杣け材 ci 血 subsp 加ぬa@JUCi@
血

among

Organlsms

B ． s妨が HS NRRL
B ． """"" 池雌B 伽 '。

NRRL

B739

558

・

M. roseus IAM
M. rubens IAM
M. al 仇仏

1295

1315

M 仰仰 '
・

WW+: esPeecially eのd gro 冊

廿 ; go0d ero

冊
5.4

+:

gro

冊

scantynegative魚親

養中のサクラマならびにカラフトマス に発生した細菌性疾病に

蓄
熟
催性菌の発育は完全に阻止された。
しかし，グラム
険性の対照菌では， A ． ゆかゆ柘山， K が%f%Wvar

・

ね加す市松

於 において若十発育が阻害される傾向が認められたが， 72 時間培養においては，いずれもおよび尺 刀仰w5Ce

0 6ガ胆汁酸塩培地においても発育が認められた。
・

すなわち，病魚材料や飼育用水などより本菌の分離を野外において試みる際，0． 2‑0 ． 4劣胆汁酸塩培地の使用
選択的K 増菌せしめるには
未だ問題点が残された。
はかなり有効と考えられるが．類縁のグラム険性菌から本菌を実裳皿 選択分離培地の試作

実験H において試作した培地は未だ完全な選択増菌培地とはいえないが， 或る程度実用に供し得ると考えられたので，これを基礎に次のような方法で選択分離培地の試作を試みた。

(1 ) 実験方法

仰*# 血 はその性状を欠く。

本菌は前章においてのべたごとくシュク
p ―スを分解して酸を産生するがA ． salm

また前述のごとく
本菌は胆汁酸塩により発育を阻害されない。
故にこの2 性状を考慮して，選択増菌培地を固形化し且つシュクp3 ― ス ならびに指示薬としてB ． T ． B ．を加えて次のごとき組成の培地を調製した。

Proteose

Pepton N0.

田 ct Beef Extract

3 (Difco)(Difco)NaCl

シュクロ―ス
胆汁酸塩 N0. 2 (日本栄養
)
B．T．B

・

寒天
水

COmparlson
the relative?.4

subsp.‑lCultual・

opaque,1018

light green, entire, translucent,moderate colony

A がれ
KtataATCCl1163

dark
moderateyellow,colonyentire,Opaque,1arge colony

A ． sofPWMfCflight brown, entire,
pinpoint colonytransparent,

light brownish blue, entire,translucent, small colony

lightopaque,blueish white, entire,

A. hydrophila

IAM・

止7 ATCC

A ． fけ雄ヵ低ぬ心

l4l74

EFDL

green,

entire,large colony

darkyellow, entire,large colony

opaque,cenlyellow, entire,translu ate,

― C‑

pp

dark

light
pinpoint
yellow,colonyentire,translucent,small colony

dent lOnycO

l48 hr. after incubation

light mOde

血口 ― b‑ぬ andcharacters'

24 hr. after incubation
イーa‑lp □a □ l

幻f脚 @c@ ぬ・棚Of 山 e cultura@ charac 忙 rs among
A. sal， 山九 ， subsp. ‑@organisms on the trial differential selective medium

Organism

刀

13el， 皿0mz

pH
Table 24.

log
3g
5g
log
3g
0.04g

opaque,light yellow, ent'ire, opaque,巾mvar ・ルタ 伽ゐ松TUF
y pzscparent,greenishmoderateyellow,@entire,colonytrails‑moderate colony

P ． 刀叩rg7P 松 EFDL

moderate colonydark yellow, entire, translucent,dark green, entire, translucent,large colony

E ． coL

light yellow, entire,opaque,moderate colony

dark

・

O‑26

55

yellow,large,colony

entire,opaque,北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
この培地の平板に， 本病原因菌 4 株および実験H に供試したグヲム陰性菌 7 株を対照菌として，それぞれ塗抹
し 25 。C ， 24 時間および48時間培養後に発生する集落についての観察を行な@Q だ。

(2) 結果および考察
上記選択分離培地におげる集落についての観察結果は Table 24 にしめすごとくで
本病原因菌 4 株は 24時間

培養後に明らかに他の対照菌株と異なる性状をしめした。
すなわち，本菌ほ24 時間培養で特徴ある 淡黄色の微る。 しかし48 時間後には浪黄色小型集落に成長し，若キA
細集落を形成し， 他の類縁菌との鑑別が可能であ・

加 nctata, V.pisciumvar． 仏加れ $CMS ならびに &. coF の集落に近似してくるが，注意深く観察するならば
判別は可能である。

以上の結果からこの試作培地ほ， 本菌の選択分離培地として充分実用に供し得るものと考えられる。
なお対照のAeromonas

7th ． Ed ．によればいずれもシュ70

属細菌は BERGEY'SManual― ス より酸を形成すると記載されているが，本実験においてはA ．ノ
M@Mcr 力 d のみに酸産生による
黄色集落の形成が認められた。こタのことはおそらく
本培地の有機窒素化合物含量が比較的多く，したがって
ア リモ二ヤなどアルカリ性分解産物の生成の多いことに起因するものと思考される。

要

約

実験T において，水病原因菌の発育は他のグヲム険性桿菌と同様に胆汁酸塩により阻害されないのみならず，
むしろ或る程度の濃度までは発育の促進されることがみいだされたので，この性状を考慮して実験@fにおいて選択増菌培地を試作し，その性状を検討した結果，若干選択性において今後の研究が要求されたが，選択増菌培地として或る程度実用に供し得るものと思考された。次に実験皿 において選択分離培地の検討を行ない，上記選択増菌培地における知見を基にして試作した培地は， 本菌の選択分離培地として実用に供し得るものと推論した。
る。
以上の培地の組成は次にしめすとおりであ(l)

選択増菌培地Proteose Pepton NO

Bact Beef Extract

3 (Difco)

10K
3K(bifco)

胆汁酸塩 N0. 2 (日本栄養
)
NaCl

2‑4g

5g
l,000m/水pH(2)?.2‑7 ． 4

選択分離培地Proteose

PeptonN0. 3 (Difco)

田 ct Beef Extractlog

CDifco)

3g
log
5g
3g

シュクロ―ス
NaCI

胆汁酸塩 N0. 2 (日本栄養)
B T ．B ．

0.04g

寒天

13g
l,000m7

・

水

山

7． 4

第 2 節水試料からの 芥病原因苗Q 検索
前節において本病原因酉の選択増菌培地ならびに選択分離培地について検討し，或る程度実用に供し得ると考えられる培地を試作した。本節ではそれらの培地を用いて， 渚消蓄養場におげる本病発生直後の蓄養他用水なら

本病原因菌の検索を試みた結果についてのべる。
ぴに周辺の河川水について(1 ) 実験方法
時期 :1965 年 6 月 25 日， 試水採取を行なづたが，第2 章第2 節で述べたごとく
本蓄養場では6 月初旬より中旬
56

魚
親

養中のサクラマならびにカラフトマス に発生した細菌性疾病に
蓄
熟
催

ご
に発抗
の方
点を
上
の
に
ま
旬
か
菌
乃
通
げ
川
支
に

北海道さけ・ますふ
化場 L 研究報告第 24 号
Table 25.

Sampling
四"t'0n(see Fig. 15)

StrainCharacteristics

with anti

g@of isolates fromg@water samples

MOtility

production
IndoleVP

reaction

B‑ 1
B‑2
B‑3
B‑4
C‑
C‑2

1

C‑3
C‑4
D‑

l

D‑2
D‑3

D ．― 4
E‑

l

E‑2
E‑‑3

E‑4
F‑

l

F‑2
F‑3
F‑4
G‑1
G‑2
G‑3

G‑4
G‑5

H

H‑
H‑2
H‑3
H‑4

I

" げ獅応初仰似ぬ，。低p．―
fぬ

なかったことは， 本 菌が他の多くの Aeromonas

属綱菌と異なり，有機栄養性が高く，換言すれば栄養要求性の厳しい細菌であ@O て ， 池水や河川水中では特別の環境以外では増殖性の低いものであ るか， また前述の
A salM
切ぬ 山と同様に比較的水中におげる
生存期間が長くないものであるか， 或いはきわめて多量の水による・高度の稀釈などによることが推察される。
なお，人の消化器系伝染病の流行も時として汚染井戸水や
河川水を介して伝播することが知られているが，このような場合も井戸水や河川水から直接病原菌を検出することははなはだ困難とされている。
本菌も河川水など
蓄養他用水からの直接分離はきわめて困に常在しない，いわゆるObligatepathogenであるとすれば，河川水や難であろうことが推察される。
58

魚
親

約

養
ス
に中
発の
生サ
しク
たラ
細マ
菌蓄
性な
疾ら
病び
にに
関カ
すラ
るフ
研ト
究マ

熟
催

要

著者の試作した
選択増菌培地ならひに選択分離培地を供試して，本病発生直後の蓄養他用水ならひに周辺の河川水からの本菌の 倹由に努めたが， 病魚体からは検出されるにもかかわらず，すべての試水において本菌を検出することができなか@@>だ。その結果から本菌は他の多くのAeromonas
ないことを推論した。

属細菌と異なり，河川水などの常在菌で第 3 節 本病原因 苗の各種試 水中における 消長

前節において，蓄養池用水や周辺の河川水から本菌を検出し得なかったことから， 本菌は河川水などに広く 常在する細菌でないことを推察した。―方魚類病原菌中数少ない obligate pathogen の ―つとして知られている
d ． 幻lr@伽而九は ，前述のごとく河川水中などては
比較的短期間内に消滅することも知られている。
， 本菌の水中におげる消長を検討した
結果にっいてのべる。
本節においては(1 ) 実験方法

供試菌株 : 代表菌株としてイーa‑l 株

E 5を選び供試した。

水 ; 次の4 種を供試したo

試験

口
山ト

1) 滅下燕溜水

2) 滅菌生理的食塩水 C0.85乃
NaCI

のlD

"ト

使用されている井戸水を滅菌したものの大谷地川の流水を滅菌した

養菌を滅菌生理的食塩水に怒濁し ，あらか二

6

貿し，―定時間ごとに常法どおりの混釈平岩

3板法により試験水中の生菌数を測定し， 各員

2

試験水中における菌数の変化を観察した。

寸

l本ずつ用意した
上記試験水中にlo 。 cell/mJ数の平均値から算出し，且つ谷実験は数回(days)

dist. water at

15"C

観察法 : 供試菌株の25 。 C ， 24 時間斜面培

平板で25 。 C ， 48 時間培養後に発生する集落

periodねp water, physiological saline andもの

なお菌懸濁液混合直後の菌数を0 時における生菌数とし，また菌数の測定M@2 枚宛のTncubation

Fi9.16A． V ， ah山tyofA ． 幻I川卯@cc.i
血 SU卜p 船mca 血 in4) 本学部付近を流れるJ川中約 5m

じめ300mJ 容三角フヲ スコに 200mr 宛 2

IBt

員

0

O‑0

tap wa@‑@dist. water

1

・

]5B

・

eer

x‑x

phs@ologlcal saline

30'C

2

3

1ncubation
Fi9

廿

viabmtyOf

period(days)

A ． sd 卿 @F ぬ su ぬp ． 雌MMa

intap water, physiological saline and dist. water at
30'C
O‑0
tap waterx‑xphysiological saline

反復し，結果の確実を期した。
C2) 結果および考察●

以上の方法により，先ず
千蒸溜水 ，生理的

‑

―

● dLt

， water

食塩水および
井戸水中における
生菌数の消長を観察した結果の―例を図示すると
FiK.16 (A およびB) にしめす
蒸溜水では15。 C および30 。 C いずれの場合においても急激に菌数はごとくである。 すなわち3 種の試験水中，特に減少し，最初10scell/mJ 程度存在した生菌数ほ l 日後にはほとんど認められなくなり， 9 日間の観察期間中において菌数の増加も認められなかった。
また，生理的食塩水では前者に比し若干
菌数の減少速度は遅くなる傾向が59

北海道さけ・ますふ
化場 ;研究報告第 24 号

口比

30'C

15C

山
O

o
山

7
1ncubation
Fi9

・

]丁ん

Of H

Viabmty

・

叩止仰fCf血 SubSp

mfsoucida ;n tap water
water

at

Incubation

period (days)
andFig. 17B.

river

15 。 C

period(days)

Viability of A. salnwmcida subsp.

御醐。 地 @n t，p w 血 ， ""d0‑0亡Uv 。 ，

at 30 。 C

water
ap

water

◆―● Uverwater

みられるが，l5。C においても2 日以後において供試菌の生存はほとんど認められなかった。
―方井戸水は前2 者と異なりl5 。C 保存の場合，12 日間の観察期間中ほほ実験開始時の生菌数が維持され， 30 。 C の場合も6 日目までは若十減少する傾向が認められたが，以後は徐々 にもとに復した。
次に，河川水中におげる
本菌の消長を井戸水中におげる場合と比較しながら同様の観察を行なった結果はF 巾・

l7 (A およびB) にしめすごとくである。 すなわち，河川水中における供試菌の消長は井戸水中におげる場合とよく相似し，
l5 。 C の場合ほとんど
生菌数に変化がみられず， 30 。 C の場合は―旦菌数は若干減少し，その後はきわめて徐々 に回復する傾向が認められた。
以上の観察結果から， 本菌は蒸溜水や生理的食塩水中では15 。 C および30 。 C のいずれの場合も
比較的すみやかに
死滅し; lF2

日後には生菌はほとんど残存しないが，これに反し井戸水や河川水中では特に低温度の場合．生菌数にほとんど変化がみられず，比較的長期間の生存の可能なことが推察された。この原因の―つとしては井戸
水や河川水中に溶存する微量の無機物や有機物，すなわち水質やその他の条件の如何によって， 本菌は水中にか， BIGGER(1937U
なり長期間生存し得るものと考えられる。
しかしながらは来源の異なる
各種天然水中における細菌の増殖について
実験室条件で検討し，試験水が加熱殺菌された場合，生の水の場合に比べ，その中に接種された細菌の増殖は著しく大きく， 且つ生存期間も延長されることをみている。
また自然界においては河川はその自浄作用により大きな殺菌効果をもつことが知られている。
試験水，すなわち井戸水および河川水中での実験結果はともに高圧滅
前述の Fig ． l7 にしめした実験における菌された水中におけるもので，これらの試験水は細菌側からすれば自然水そのものより増殖あるいは生存に対し好適条件であり，更に自然界におげる
河川の自浄作用を無視できる条件下での結果である。 しかるにFie.17 にみられるごとく，このような好適条件下でも， 木菌は比較的長期間生存し得ても，菌数の上昇はほとんど認められず， 併せて自然界においては， ぎ わめて大きな水量によって絶えず高度に稀釈されることを考慮するならば， 本
菌は河川水中において，ある―定期間は生存し得ても，ほとんど増殖し得る能力はないことが推察される。したがつて，本菌はA salm
i@nifiぬ のごとく河川水中の川常在菌でないとじた
前節での推論は妥当である 5 と考える。
・

なお; WARREN(1963) は サゲ科魚類の腎臓病は軟水の養魚池に多発する傾向のあることを報告しているが，本菌も水質あるいはその他の条件によっては水中に―定期間生存の可能性も考えられ， 本病の流行の予防の面から，今後さらに蓄養他用水に関しこの面からの検討が必要と考えられる。

要杓

本病原因菌の水中における消長について検討を行なった結果，本菌は蒸溜水や生理的食塩水中ではきわめてす60催熟蓄雫男器二久ゑ
晶韮箆嘉晶呈晶毛ゐゐ
アス斎魚
みやかに死滅するが，井戸水や河川水中でほ比較的長期間の生存が可能であることから，本節では
本病の流行予防の面から薔養地用水の水質の検討が必要であろうと推論し， また井戸水や河川水中では―定期間の
生存は可能
推論は
であっても，増殖はほとんど不可能と考えられる点から，前節のす菌は河川水中の常在細菌でないとした
妥当であろうと考察した。

第5章

免疫・血清学的診断法ならびに予防免疫に関する 基礎的研究， 第 I 章において述べた
種 々 のサケ科魚類におげる
細菌性疾病のみならず， ―般に魚類の細菌性疾病は症状がき

わめて類似しており，適確な診断のためには原因菌の分離同定をまたねばならぬことが多い。しかし原因菌の 分困難性を伴うこともあって ，―
般には確診を
離固定は長時日を要しまた野外における 網菌学的操作はかなりのまたずに治療・予防などの処置がとられることがはなはだ多い。
医学・獣医学の領域においては
伝染性疾病の診断や原因細菌の同定に血清学的手技が常套手段として活用され，また多くの疾病において人工的予防免疫が採用されている。しかし魚類の細菌性疾病においては実験上の困難さもあって， この方面の基礎的研究は比較的少ない。
BABES&LEGLERは P 。比硲p 而fCf血5 gl5 わ O/Or( 二 F0 ぬぬMrgu(1903)

ひ

バ$var

19 刃)

． rMbgr ， pUBRAM

P ．ひ
M ゅ "@s(1935) はウナギやコイが，人工免疫にB の川於刀匁げ
eSCg 硲 ( 二 R 幼也川杣め刀仰w5 此硲) に対する高い凝集価をしめし・

感染魚の血清にはその原因菌に対する
特異的凝集抗体が認められるが， 病魚の腸管内から分離したはその血清に対し凝集性をしめさないことをみており，また NYBELIN

H かfo 仰即川叶仰やより

ウサギ抗血清に四敵する特異性を有することをみている。
近年，魚病に関する研究の急激な発展にともない，この方面の研究もようやく活発となり，最近ではKRANTZ(1964" ， 1964b), SPENCE(1965), POST

(l966) などの 予防免疫に関する報告があり，またわが国においてもウナギびれ
赤病に関する保科 (1962)， 江草 (l%5) の報
告，ニジマスのビプ リオ病における保利 (1963) ，遠藤 (196l). SAITO

etal.(1964)

および林 (1964b)の報告が

あ り，また海産魚の潰瘍病に関する
禰田 (1965) の報告などにおいても免疫，血清学的面からの検討がみられる。
また，比較免疫学の分野においても魚類の免疫に関する多くの 研究がみられ (WO0DS& wo0DS

ENGLE
et al
et al

・

・

1962
1%4

・

1963

l957 ，
・

HILDEMMl964 ， UHPetal， FINSTADq al・

1964 ，

l958

・1962 ，

GO0D

1962 ， CLEM&SIGEL・FINSTAD& PAPERMISTER
1963 ，& GO0D

1964 ，

l961 ，HILDEMAN&co0PER

FINsTAD

1964 ， GO0D

& ENGLE
1964 ，

1957 ，

PAPERMISTER
1963 ，& FINSTAD

ASHBACH1964) ，

現在までの知見では
発生学上，円口類のヤッメウナギより高等な魚類においては
獲得免疫の成立することが知られており(松村，1966) ，このような観点から川津 (1968) は養殖漁業における大部分の対象魚は，哺乳類にみられるごとき獲得免疫の諸反応をほば観察し得ると考えている。
以上のごとく近年この方面の研究が徐々 ながら進展してきたが， 宋だ不明な点が多く，魚類の細菌性疾病の診断や予防における
免疫・血清学的方法はほとんど確立されていない
現状にある。 かかる観点から
著者は，本病の診断・予防，さらに寸般の魚類の細菌性疾病における血清学的診断或いは予防免疫の可能性を検討するために・
以下に述べるよ5 な種々 の基礎的実験を行なのだ。

第 ] 節本 病原因苗に対する二ジマスの 免疫応答に関する 検討
第 3 章第3 節第 2 項において，ウサギは
才 菌に対し明瞭な免疫応答をしめし 特異抗体を産生することを明らかにした。本節では魚類の本菌に対する免疫応答を検討するため，実験魚として入手ならびに
飼育管理の
比検的
容易な二ジマスを供試し次のごとき 検討を行なった。

(1 ) 健康二ジマスの正常抗体価
・人エ 免疫による免疫応答の検討にさきだち，まず次のような方法により健康二ジマスの正常抗体価を観察した。

1) 実珪 方法
養魚池で飼育中の体重約}l00‑20Qe
供試ニジマス: 北海道大学水産学部の
田郡七飯町の石井養鱒場で飼育中の体重約l50‑200Sの二ジマスl0 尾，ならぴに北海道亀の二ジマスlo 尾について，外見上まったく異状の認められないことを確認のうえ
供試した。
61

北海道さけ・ますふ化揚 ; 研究報告第 24 号
Table 26.

Di 苅 ibution Of natural agglutinin

for

A

止e

・

salmonicidasubsp.mastmcidain

two

pop@lations Of healthy

血清採取:供試魚の尾部を切断して採血し ，常法にしたがい血清を分離した。

rainbow

反応抗原 ; 本 病原因 菌 の代表 株 イー a‑

trout

NO

Weight

Titer

N0.0f

301

94

64

311

302
303

185
220

304
305
306
307
308
309
310

94
71
271
190
150
136
101

64
64
64
64
64
128
128
128
128

312
313
314
315
316
317
318
319
320

・

0f

Weightの濃度となるように
懸濁して反応抗原とした。

Tite 。

208
145
137
145
163
143
230
218
273

1 株の

128 抗体価の測定を行なった。なお，本節 C4) において
64
64
64
8

218

詳述するが，ニジマスの凝集抗体は40 。 C 以上の加熱により 矢活することが認められたので
，

供試
血清は常法

のごとき56 。C ， 30 分間の加熱による非動化を行なわ

8ず，生血清をそのまま供試した。反応は37 。C ， 2 時間，

8

4 。C に20時間納置した後に判定した。

の 結果および考察I6
64

以上のよ5 にして供試健康二ジマス20 尾の正常抗体

64価を観察した結果は Table26 にしめすごとくである。

NO ． 301‑310;rearinginHokkaidoUniversity
N0.
reaing in Ishii Fish Farm, Nanae,
HOkkaido
Average aggutlnlnlt@ter; l : 69

すなわち供試魚の体重や，飼育池の相違に
関係なく，
8‑i

: 128 の凝集抗体価をしめした。
供誠二ジマ

ス はいずれも外見上まったく健康であることを確認したものであり， 両養魚池において・
本実験実施時の前たものであり， 両養魚池において・
本実験実施時の前後において異状舞死などがまったく記録されていない点などから 1 : 128 以下の凝集価は正常抗体と判定してさしつかえないものと
思考した。

C2)

本苗に対する二ジマスの免疫応答

本節 (1) において二ジマスの本菌に対する正常抗体価を明らかにしたので，次に本菌の加熱死菌ならびにホルマリリ死菌の接種による二ジマスの免疫応答を
次のよ5 な方法で観察した。

]) 実験方法
供試魚 : 函館近郊の養鱒業者より購入した
体重約100‑200gの二ジマスを
北大水産学部の養魚池で7．週間以上予備飼育し異状のまったく認められないことを確認のうえ実験に供した。
，なお魚類の抗体産生は飼育水温の影響をうけることが知られており(BISSET,

1948) ，マス頬では10‑l5 。C が適温と考えられているOM 済 1968) 。

供試ニジマスの飼育地水は井戸水で，本実験の期間を通じl4 ァl7 。 C で極端な水温の変動は認められなかった。

また飼料は養
鱒用 N0. 6 p 育成用ぺLv ット (日本配合
飼糧KK)
接種抗原: あ らかじめ供試菌株 (イーa‑1を用いた。

株) を二ジマスに接種 し 接種魚から接種菌を分離するごとき操

作を反復くり返した後 (いわゆる魚体通過による若返えり
法)， 供試菌の 25 。C ， 24 時間培養菌体を，前章第3 節，約 10 。 cell/Wmf の濃度に滅菌生理的食塩水に懸濁せしめ，その懸濁液を2 分しのウサギの免疫の場合と同様にて， ―方は100 。C ， 30 分間の加熱を行なって加然死菌免疫抗原とし 他方には0． 5ガの割にホルマリンを加え，37 。 C ， 24 時間納置して生菌の残存せぬことを確認後，ホルマリン
死菌免疫抗原として供試した。
免疫法 : 2 群に分けた供試ニジマスに2 種の免疫抗原をそれぞれ
0． iml 宛筋肉内接種を行ない，更にI週間の行ない，―定日数毎に凝集抗体価の消長を観察しな。
後K， 0.2ml 宛同様追加免疫を抗体価測定法; 2 回の抗原接種を行なづた両群の供試魚を―定日数毎に， 5 尾宛，本節 (1) と同様の方法で，イー a‑l
採血し ，分離した血清について

株生菌を反応抗原とした凝集抗体価の測定を行なづた。

2) 結果および考察
本菌の加熱死菌ならびにホルマリン
死菌免疫抗原の接種後の供試 ニジマスにおける 凝集抗体価の消長は，
Tab@e27

ならびにTable28にしめすごとくである。

すなわち，両抗原に対する二ジマスの免疫応答のパターンは
近似し，3 週間後 (第 2 回接種後 2 週間) においてかなりの凝集抗体価の上昇が認められた。
加熱死菌接種群の免疫応答を， 各 5 尾宛の最高，最低および平均凝集価で図示すると Fig ． 18 にしめすごとく62TableA 却f伽た fぬ SubSp ．―
fd&
・

イーa‑

l

a
レ
峯卜妄睾ヌ
'‑ 。
1

2

3

4

上の ． 巳
O

ち

ヱ
山

卜

8

121
122
123

250
225
205

2048
4096
1024

101
102
103

l11
145
65

256
128
64

104
105

108
78

128
256

124
125

225
260

4096
4096

106
107
108

108
118
74

2048
4096
1024

90
140

1024
4096

308
342
276
244
205

2048
256
4096

109
I10

126
127
128
129
130

Ill

130

4096

131

525

128

112
113

86
132

4096
4096

132

350

1024

133

250

128

134
135

240
245

4096
4096

116
117
118
I19

105 1024
233 16384
167 4096
183 8l92

120

230

I2

I7

2048
2048

16384

4096

魚
親

Prevalence Of the serum
agglutinin@n rainbow trout after intramusclar
vaccination by the heat‑killed cell 0f

27.

サ
ヵ
に
研
性養
ク
ヲ
発
究中
フ
ヲ
生の
ト
マ
しマ
ス
たな
細ら
菌び
疾に
病に関する
蓄

熟
催

Table

28‑

Prevalence Of the serum agglutinin;n rainbow trout after intramusclar
vaccination by the formalin‑killed

一

)(
‑

cell Of A.

sal

棚@ift 血 subsp. 川仏似

卜血 イーR‑

I

0‑

(比

ナ
口

卜山ヰ斗て

1

2

3

二山屯

201
202

118
98

256
64

203
204
205

119
103
109

512
256
64

206
207
208
209
210

87
82
IN
73
133

2048
2048
1024
128
2048

211
212
213

96
99
95

4096
4096
4096

2048

8192

1024

回 抗原接種後 5 週間目で最高に達し最高
1 : l6384.

最低 1 : 1024. 平均 1 :4096 のごとぎ高い値をしめし以後は徐々 に下落する傾向が認められるも， lH週間後においWeeksても平均凝集抗体価1:2048 を維持した。

Fig. 18. Immune
response 0f rainbow trout against
heat‑killed cell Of A. sahnonicida subsp.

以上のごとく二ジマスの免疫応答は，第mascmcida

3 章第 3 節第 2 項において観察した
本菌抗

‑f @

a

@

1

原に対するウサギの免疫応答 (Fig II ， Fig 12 参照) に比較して特に緩慢な傾向は認められなかった。
KRANTz・(1964") は ウサギと マス類におげるA・・

如川wfCf ぬの アジュバント・ワクチンの腹腔内 接種後の免疫応答を比較しマス 頬ではウサギに比し応答速度はかなりおそく，抗原接種後 3 ヵ月にようやく最高に達したと報告している。 ―方，

SMTO

etal

・

(19G)

は y が如伽 var
・・

必加市cMs の 60 。 C ，

3Q分間の加熱死菌を二ジマスの筋肉内に接種した場合，l ヵ月後において凝集抗体価が最高に達することを認めている。更に，SIGEL&CLEM
が RK8(1965)

バイヲスを抗原として
サメ およびイ サキ頽を免疫して，血球凝集阻止抗体価の消長を観察した結果で63

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
は， サ k では30‑40

日， イ，サキ類では10 日後に最高値に達することを報告している。

魚種の相違や，飼育条件等の相違による影響も考えられるが，本実験の結果
や SAITO ならびに SIGEL
結架ヂ、 ら ，魚類の免疫応答速度は必らずしもおそいとは認められない。また， KRANTZ

らのは前述の実験結果から魚類の免疫においては， アジュバント・ワクチソの腹腔内 接種が最も適切な力法であることを主張し， POSTC1966)

は免疫抗原の接種力法と抗体形成の速度との関係についての検討において，加熱死菌の腹腔内 接種は抗体形成速
度が最も速く，またアジュメント・ワクチン
接種は最も長期間高い抗体価を維持せしめ得ることを報告している。
しかしながら
本実験の結果や前述 SATTO の結果は，筋肉内接種によっても充分短期間内に抗体を形成し また
アジュバント・ワクチソでなくとも相当長期間高い抗体価を維持せしめ得ることをしめしている。

(3)

ニジマス抗血清の特異性

本節 (2) において，ニジマスは加熱化菌ならびにホルマリン
死菌免疫抗原に対し明瞭な免疫応答をしめすことを観察した。
次にそれらの抗血清の特異性について棟討した結果について述べる。

1) 実検方法
供試抗血清 :Table27

ならびにTable28

における供試魚NO ． 106,

110, l21,

122,

206,

208,

2l0 から得られた ? 抗血清を供試血清としまた 対照として Table26 にしめした，抗原末接種魚の血清から4 血清を選出して供試した。
Table 29.

Specificity of agglutinin tn the rainbow

A ． M わ脚@ci 血 subsp ． 凧卿 fぬイー a‑Serum

山 nLr0l

N0.

trout

antiserum against

I
Anti

SeTum

serum

AntigenEscherichia coli 0‑26

P 叩比硲UM 低?バ s NCTC
Vibrio metschimkovi IAM

32

1039

64

帆ガ 切れs? 沿 EFDL64

狐乃ノ7yo タ AUUIAM

16

P5e ぴ みの
H

AermW

80

64
4l75

l0l8

80
40
40

A ． 加叱比fd ATCC
II163
A s&7H如れ@Cf70 ATcC
14174

128

160

1Q24

・

イーa‑l

4096

64 128 128 128 2048 5120 2048 1024 20482048 4096‑

Strain反応抗原 ; 前述の実験と同様に調製した
イ @a‑17 株の対照菌株の生菌懸濁液 (約 10。

株抗原のほかに， Table29 にしめす A/&alm(mir.i
血など
cell/ml) をそれぞれ反応抗原と:L@て供試した。

なお各反応抗原は日発凝集性のないことを確認のうえ供試した。

特異性の観察法 : 本節 (l) および (2) と同様の方法で， 各反応抗原に対する凝集価を測定して供試
血清の特異性の観察を行なった。

2) 結果および考察にしめすとおりである 。 すな・・

供試ニジマス抗血清ならびに正常血清の抗体特異性を観察した結果ぽ Table,29

わち，正常血清においてはま・つたく
特異性がみられず，いずれの反応抗原に対しても 1 :"64‑128 程度の凝集価をしめすに過ぎないが， 本菌の免疫血清においては
A sedmon@iciぬ との交叉凝集性を除き， 他の反応抗原に対し・ては正常抗体価と同程度の凝集価が認められたに過ぎず，明瞭な特異性が観察された。
すなわち本菌による二ジ勿マス抗体は，第3 章第3 節において観察したウサギ抗体に匹敵する
特異性をしめ,L ，またA 切@llm @n[c.rぬ との交・

叉反応についてもまったく同様の傾向が認められた。なお，H吻

却伽@m7ci ぬ との交叉反応について
ぼ，第3 章で本菌をA ． salm @iici
血の 新亜種と結論した理由により明らかである。 なお焦種によりかなり相違するという
報告(CLEM& SIGEL,・

1963) もあるが，少なくも二ジマスにおいて明瞭な特異性の観察される点から，キジマス或いは近縁のサケ科魚類に対しては，高い特異性をしめす
抗体が比較的短期間内に産生されるものと考えられる。
したがって，
本病の血清学的診断および血清疫学的調査の可能性は十分希望がもたれ，更に凝集抗体価の
観察の
64

催熟蓄
養中のサクラマス ならびにヵヲフトマス親魚に発生した細菌性疾病に関する
研究
みから速断することはできないが，予防免疫の可能性も推察された。

(4)= ジマスの凝集抗体の熱安定性

前にも述べたごとく，魚類における
免疫，血清学的研究は未だ進展途上にあり，標準的実験手技も確立されていない。例えば，SA@TOetal. (1964) は二ジマスの抗 L 力比る uw

var ．

F 仰@lCMS 血清が40‑56 。 C ， 30 分間の(l965) は抗 A ． sii@m
OniiCf ぬ二ジ

加熱により部分的に凝集抗体の失活することを報告しており，また SPENCE

は抗 d ． 却 wfofd

マス血清の凝集価の測定に52 。C ， 4 時間法を採用しており，また魚種は異なるが，
保科 Q962)

ウナギ血清の凝集価測定に56 。C ， 30 分間の加熱非動化血清を供試している。
故に，ここでは
本節 (2) において得た二ジマス
抗血清の本菌に対する凝集抗体に及ばす加熱の影響について観察した結果についてのべる。

])

実験方法

供試抗血清 : 本節 (2) において，イーa‑lの 供試魚 NO ． l21.

株の加熱死菌の接種により得られた二ジマス
抗血清中， Table27

l24 および123 の 3 血清を等量宛混合して供試血清とした。混合抗血清のイーa‑1

抗原に対する凝集価は 1 :4096 であった。

生菌反応: 4096

加熱による影群の観察 : 小試験管に0． 2ml
宛分注した供試血清を 56 。C ，50 。C ，

40。 C および37。 C の恒温水槽中に30分間侵漬し: 204845 。 C ，，その間―定時間毎に各温度の水槽からI

EPl:@024

本宛の血清をとり出し，急冷したのち前述の昌

方法に準じてイーa‑l

二生菌に対する凝集価の 変化を観察した。

め 結果および考察
供試抗血清の抗体価(l :4096) の加熱による影普を観察した結果はFig ． 19 にしめすと

l:5 は

ト山
:256

<<

I : 128
1 :64

おりである。 すなわち，37 。 C および40 。 C ， 30

分間の加熱供試血清においては，凝集抗体価の 低下は観察されなかったが， 45 。 C では15 分

後に抗体価はl/2 に， 50 。C では1(@分後に 1/2.

Fig. 19.

Heat

effectOn

Heatedtime(mil1.)
the anti‑A salmonicida subsp.
a @20‑30 分後には1/4 に低下し 56 。C の場合にmasouctda‑"f@

は 5 分間で 1/8,

of rainbow

trout

―
・

30 分後には 1/64 に低下し，

1 : 64 の凝集価をしめすに過ぎなかった。
な37 。 C―。
。。 。

お， 56 。 C の場台には約20 分の加熱により
血清

1 agglutinin& 40 。 CO‑"

fn the

―

""

serum

45 。 C'。 。 。

の凝固が親察され，それ以上の加然により凝集価の測定は困難となった。
以上の結果からも明らかなように，ニジマスの凝集抗体は加熱により失活することは明らかで，前述のSAITOの観察結果を肯定する結果を示した。したがって， 少なくも二ジマスや近縁のサケ科魚類の血清については，常法のごとき56 。C ， 30 分間の加熱による補体の非動化決は採用し得ないが，凝集
価は40 。c 以下において比較的安定と考えられることから，凝集反応は常法めごとく37 。C で実施し得られるものと考えられる。なお，血清の非動化

は血清中の易 熟成分，すなわち補体の不活性化の目的で行なわれるが，魚類血清の補体成分に関する研究は現在物質を迄にほとんど見当らず，また著者の試みた予備的実験においても，サクヲー ? ス 血清中に補体作用をしめす
未たみいだしていない。
このような観@点から，今後各種の魚類について血清抗体や補体に関する多くの基礎的研究がなされ，魚類における血清学的手技の確立が望まれる。

要

約

水病原因菌の加熱死菌ならびにホルマリン
死菌に対する二ジマスの免疫応答，抗血清の特異性などを検討した

結果，ニジマスは本菌免疫抗原の筋肉内接種により明瞭な免疫応答をしめし，その応答速度はウサギに比し特に， 且つ ウサギ抗血清に匹敵する特異性を有することを認めた。したがって，ニジマスや近縁
緩慢とは考えられず
65

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 54 号の サケ科魚類の細菌性疾病における血清学的診断や血清疫学的な集団の罹病状況の調査，或いは予防免疫等の可

脂性について推論した。また， ニジマス抗血清の凝集抗体の加熱による影響の観察から，少なくも二ジマスや近縁のサケ科魚類の血清学的実験に際しては，常法のw6 。 C ， 30 分間の加熱による補体の不油化は，血清の凝固を起すのみなら・ ず， 40 。 c 以上の加熱は抗体の消滅を招来すること，および特異的凝集反応の実施に37 。C の採用の可能なことを確認した。

第2郎

自然発生例の 蓄養サクラマ ス ならびにカラフトマス 集団における 凝集抗体の分布

前節において，水病原因菌に対する二ジマスの免疫応答ならびにその抗血清の特異性を検討し本病の 血清学
的診断および血清疫学的調査の可能なことを推諭した。本節では，1965 年 6 月水病の大発生をみた
催熟蓄養中の集団の本病原因菌に対サクラマス，ならびに同年8 月下旬より9 月上旬にかげ同様の大発生をみたカラフトマス
する凝集抗体の消長，ならびにその分布状況などを対照の魚集団と比較検討し，その結果から前述の推論の妥当性を検討した。

(1) 実験方法t) 供試 血清
供試血清の採取記録はTable30にしめすとおりである。 すなわち第2 章第 2 節において述べたごとく， 1965年 6 月 5 日より 18 日 たかけ北海道さけ・ますふ
化場 ，北見支場・
渚滑蓄養場において催熟蓄養中のサクラマスに
本病の大発生がみられ， 総蓄養魚の40 ガに及ぶ箆死が記録されたが(前掲 Fig ． 5 参照)，その流行が―応おさまってから約3 ヵ月後における同―集団中のサクラマス
21 尾 (A) ，および同年9 月下旬より10 月初旬の間に同 蓄養場のヵラフトマスに再び水病の大発生がみられ(前掲 Fie ． ? 参照) 総蓄養魚の30 ガにおよぶ弊死が記録された
際，疾病の発生中のヵラフトマス
集団から26 尾 (D) ，またそれより約?.0日間経過し疾病の殆んどおさまった
時期における同―集団のヵラフトマス
31 尾 (E) について，発症の有無に関係なく現地において灘血管切断法により採血
し ，血清分離後直ちに水冷して実験室(函館・北大水産学部) に持ち帰り供試した。また対照としては
第30 表にしめすごとく．
翌1966 年 6 月回―蓄養揚における外見上まったく異状の認められなかった
捕獲直後のサクヲマス
29 尾 CB) ，引きつづき1967 年 7 月 本病原因菌のホルマリン
死菌による人工免疫(l0 1 cell/mJ懸濁液 I Oml 筋肉・・内接種) を試みた際，ワクチン接種後約 l 月半経過したサクラマス
l0尾(C) および魚種は異なるが本病と類似の，北海道さけ・ますふ
化場 ・渡島支場・ユーラ
ヅプ川捕獲場において疾病の発生はま，@)たく記録されていない
・および12 月@ (19 尾， G) に捕獲したサケ (Onc 。 州ynch 松んeta) から同様に血清を採取し1965 年l1 月 (34 尾， E)
供試した。

Table 30.

Sampling
place

NumberPOpulation

SOurce of strain tested

employed

Date

of

NOte

sampling

l965.9.27 3mon
Of isd@小safterthenntbreak
翅 se"Sakuramasu"(A) 21@@017
4
Shokotsu
山凡早"Sakuramasu" (B) 29

River
Shokou"Sakuramasu" (C) 101967.?.12 vaccination
contro1,
1.5 monthafter
Shokotsu

Pink salmon

低

lL55
D
26 1 O??6
lI

（

1966.
6.I0 contro1,
Justaftercatch1965.

duringoutbreak）Pinksalmon (E)

，，

3I @@
0??<0
@i2
llo

9.27 20daysafter止eannve(F)341@O?60040
Yurappu
Riyer
Chumsalmon(G) 197L01@<0
4ir5， 12.15
Chum@

田 lmon

工工

l

66

11. 9

contro1,

just after catchOf various populations for A. salmcmicida subsp.

l 株) の 生菌懸濁液

川四MCMdを反応抗原として， 前節の二ジマスの場合と同様の方法で凝集価の測定を行なった。

(2) 結果および考察
Table30 にしめす各魚集団より採取した血清の 本病原因菌に対する凝集価の測定結果
は ， Table3l

Titer

I6

32
64

管において溶菌現象がみられ，凝集価の判定が不明確であったものの尾数をしめすが， 前

256

後の稀釈血清管における結果から，凝集価が少なくともその価以下と推定されたものであ

512
1024

5 (1)

2

溶菌する傾向がみられた。
本現象の本態にっいては日下検討申であるが，現在までのとこ

8l92
16384

0
0

ろ 不明である。

Tn由 l

2l

2l および 22 にしめすごとくである。 先ず，供試
サクラマスの各魚集団におげる凝集抗体の分布は

Fig 20 にしめすごとくで， 本病の大発生約3 ヵ月
・

および翌年
に

ついて比較観察するに，前者 (A) では供試血清の過半数がl:32‑I:64

1 (1)
2 (2)

0
2 (1)

0
0

26(26)II (9)

31

53

5

1

4096

同 表の結果を魚種別，集団別に図示するとFig ． 20 ，

的

C

0

2048

d

I

3

る 。 この血清の溶菌現象は成熟度の高い魚の試魚集団により凝集価の相違が認められる。

B
21

Plnk
D IlmonE Chumsalmon
F+G

"

7
2

128

向表の結果にみられるごとく，明らかに供I03 (1)

血清において特に顕著で，特定の菌種のみを同 ―蓄養場で捕獲した対照のサクラマス(B)POpulation

Aにしめすとおりである。 なお，(See Table 30)" Sakuramasu

80r<8

同 表中 ( ) 内の数字は血清
稀釈の低い試験経過後の同 ―集団のサクヲマス (A)魚親

本病原因菌 (イーa‑

養中のサクラマならびにカラフトマ ス 性に発生た細菌疾病に関蓄熟催2) 凝集価の測定法

0

0

29

10

26

): result is doutful with bacteriolytic
caused by serum component

phenomena

73の凝集価をしめしたので山
2に対し，後者(B) では殆んどの血清がl : 8 ま 卜川
たはそれ以下のきわめて低い凝集価をしめした。 右しかし，初節において観察したごとく二ジマスの 乞
平均正常抗体価はl:64 であり，また本菌の死菌巨
ワクチリ接種後約 l ヵ月半経過した
IO 尾のサクヲ

マス (C)

においては，すべてがl :256 以上の

8

凝集価をしめしていることを考慮するならば ，

5(A) 集団が (B) 集団に比し若干高い凝集価を4しめしたとしても，これを以て直ちに過去におけ3る同集団の疾病流行を推察することはやや
困難と

2

考えらi
てる。換言すれば，本病の発生後3 ヵ月以上も経過した
時期においては， 最早やその魚集団の過去における
疾病の発生状況を血清疫学的に推察することは困難のように考えらT る。
寸

次に，疾病大発生時(D) とそれが―応おさまった約20 日後 (E) における同―集団のカラフト
マスの血清の抗体分布は Fie.21 にしめすごとくFi9 ． 20 ．

67

256

Agglutinin
DiStribuHon

Of

ter

明日uHninagainStH ． 釦Jげ切れ f

Ctda subsp. 雌仰 がみ 'a in the population A, B
and C (Table 31) of " Sakuramasu "resultisphenomena

doubtfulwithcaused by serum

bacteriolytic
component

北海道さけ・ますふ化揚 : 研究報告第 24 号

>1=26

仁の
L の Lq

コ之

ト o
ト山
ハ白口之

@

lK

3@

64

Aggl

Fig. 21.

Distribution

lza

@56

tini

of

5l2

lo@4

卜

@l@@

agglutinin

A ． 翅l脚 7cf ぬ SubSp ． 川
population@側 4 6titer―

Fi9. 22.

against7dF

in

十D and E (Table 31) 0f pinkFig.

伽population
salmonsalmonsee

Distribution

A ． Mf

hC

20

see

Of

agglutinin

Cfd4 SubSp ．

F+G
Fig.

川

―f山

(Tableagainstin the31) Of chum20である。 すなわち，これらの集団における凝集価はきわめて高く， 特に疾病発生中の(D) においてはI : 4096以上をしめすものが過半数をしめ， 且つ 1 :256 以下のものは存在しなかった。

また，その時期より
約2) 日後 (E) においては，前者CD) に比し若干凝集価の低下したものが多い傾向はみられたが，全体的には高い凝集性をしめし， l :8‑16のような低い凝集価をしめしたものは
31 尾中3 尾のみであつた。

以上のようなカラフトマスの凝集抗体の分布から，疾病発生中においては血清学的診断が容易であ ． また，り

疾病が―応終后、した後でも比較的経過期間の短い時期においては， 同 ―集団における疾病の侵襲程度を血清学的に推測し得るものと考えられる。
すなわち，水病自然発生例のヵラフトマス
集団から発症の有無に関係なく無差別E 抽出した供試魚の血清について，水病原因菌に対する凝集抗体の分布を観察した
結果，供試血清の大部分が高い凝集価をしめしたことから，これら供試魚と同―集団の蓄養；ラフトマスは
不顕性感染ないしは潜伏性感染のものを含め，水病の侵襲を十分に推定することができた。
また，対照として供試した捕獲直後のサケ血清 (F+G)におげる本菌凝集抗体の 分布は Fig 22 にしめすごとくであるが，予想されるごとく
前述捕獲直後のサクラマス(B)・

凝集価は―般にきわめて低く，大部分の供試血清は 1 :32‑64の 場含と同様にの凝集価をしめすにすぎず，この程度の凝集価は正常抗体と判断してよいものと思考した。
魚類の細菌性疾病の発生に際し，原因菌の分離同定のごとき
長時日を要する検索をまたず，血清学的に疾病を診断し，また
血清疫学的方法により疾病流行の様相を推測することが可能であるならば，その後の対策の遂行止きわめて有効な手段と考えられる。
しかしながら
第 3 章第 3 節において明らかにしたごとく， 本菌は抗原構造上

A ． salmma@icw血ときわめて類似することから，両者の感染症を血清学的に鑑別することは困難で，またこのような方法を野外例に広く採用するためには， 種々の魚類病原菌相互におげる
血清学的性状の関連性をより明確にする必要がある。
68

養中のサクラマならびカラフトマス仁 性

蓄
熟
催

ス 親魚

なお前節において述べた二ジマスの
人工免疫の場合と同様， 自然感染例においてもサクラマスやカラフトマスが本菌に対し鋭敏に免疫応答をしめすことが推察されることから，水病の予防免疫の可能性も考えられる。
最近
川津 (l968) はウナギのワタ カムリ病におけるA ． Ziq 仰カ化 a6応に対する凝集価の比較的高い集団において疾病(1964b) はマス類のA sal 側刀fc@t
血 感染症において
人工免疫魚

流行の少ない傾向を認めている。
また KRANNTZ

・が起因菌に対し強い抵抗性をしめすことを明らかにしている。
すなわち，魚病におげる予防接種に関する研究@L
今後の養殖漁業におげる
重要な課題と考えられる。

要杓

水病発牛後3 ヵ月経過した同―集団のサクラマス，水病発生時ならびにその
約20 日後の同 ―集団のヵラフト
マス． および対照の浦穫直後のサクラマス，サケならびに
本病原因菌の 死菌接種により人エ免疫を試みたサクヲマ

ス などの各集団からそれぞれ
10‑30 尾宛採取した供試魚の血清について，水病原因菌に対する凝集抗体の分布を期間内においては本病の観察した結果，本病の自然発生例において
疾病発生時や
流行の終息後， 宋だ経過の短い
血清学的診断や，疾病流行の血清疫学的調査が可能であることを推諭し， 更にヵ ラプトマスやサクヲマスが本病原因菌に対し鋭敏に免疫応答をしめすことから， ワクチソによる人工的予防免疫の可能性を推察した。

第 3 節 本病の診断における 補体結合反応の 可能性に関する 検討
木章，第 I 節における本病原因菌に対する二ジマスの免疫応答についての検討，および
第 2 節における蓄養サ
クラマス ならびにカラフトマスの自然感染魚集団についての凝集抗体の分布の観察結果から，凝集反応による
本病の診断が可能であり， また感染魚集団における本病流行の実態を
血清疫学的に把握することも可能であろうと推諭した。

―般にサケ科魚類の催熟蓄養場は比鮫的僻地の湖呵魚の多い河川流域に設置されている。したがって，
薔養場
において―旦このような急性の疾病が発生した場合，技術者が直ちに現地におもむぎ
満足すべき条件下で採血．
血清の分離等を実施するには若干の困難性を伴うことが多い。

そこで本節においては， 倹体の採取が比較的容易で且つ確実な診断の可能な力法を検討する日的で補体結合反ystcinsitiveCOmplement

antigenantl@

lld@calo

「

sheep

「

abblt

応を取りあげ，その応用の可能性

systemhemolysin@ antigenについて基礎的実験を試みたので，その結果についてのべる。

診断におげる補体結合反応の
応
lysis

lysis

(C. 「 ． T ．―)

rabbit hemolysin

SelUm

Fig.23.

Diagrammaticalrepresentationofthecomplementfixation
reaction ;n this study

用は WASSERMANN

反応として有名で，Fie.23にしめすごとく
溶血系と抗原・抗体反応系との組合せにより，被倹材料の特異的抗原
或いは抗体の存在を証明する力法で， WASSERMAN@N

反応の場合は既知の抗原に対する被検血清中の特異的抗体の存在を検出することにより診断を行なう方法であ るが，本節では，本病原因菌の抗血清に対する病魚の患部や臓器中に存在する特異的抗原の検出を行なって， 本病の 診断を行なおうとする試みである。

魚類の細菌性疾病におけるこのよ5 な試みは寡聞にしてほとんど例をみず， 古く BLAK&ANDERSON(1930)
がA

SAITO

・

safmom@fctぬ が補体結合反応によっても血清学的に均―性を有することをみいだした
報告， ならぴに最近
et al Cl964)) が人工免疫を行なった二ジ十ス抗血清においても補体結合反応が成立することをみいだし・過ぎない。
た報告など．
2， 3 の報告がみられるに

実験 I

祐体結合反応における木病原因苗の加熱抽出抗原の特異性についての検討

先ず，本病原因菌ならぴに類縁の焦病原因菌の加熱抽出抗原について．
本病原因菌の抗血清との補体結合反応69

北海道さけ・ますふ
化場 :研究報告第 24 号
における特異性の観察を行なった。

い)株，対照菌株としてT"ble32にしめすごとき6 種， l0株の類縁魚類病原菌を
供試

A， ―

Aero@ 畑狐九 タイ r0タ AUd

l

‑ 2
‑ 3

供試菌株よりの抗原抽出法;前記各供試菌

14174

EFDL
TUF
TUF

"'"'"

アー 力 H低40fd

A0

Vibrio piscwm var, japmicus

NUM

幼伽狐刀 切れ%eP び

EFDL

□

4

‑

5

0， 6l7g ， 水
l， 000m/) で常法のごとく2 回洗椎後， 光奄比

PS

□ l2

・

ATCC
EFDL

7

V

8 5g， MgCl2

―加

1018
11163

‑

V

的食塩水 (NaCl" ぴ卿狐 sal 肌 ""' 血A び仰川
仏心 lゆび 叶仏ル沿

帆 M' 也
IAM
ATCC

AT

・生理

24 時間斜面培養菌体を Mg

ノー 60l 肌れaC@d0

Ae

Ar‑‑ Lq560H""

3(@分で非動化して供試血清とした。

株の25 。 C ，'"'Ag グのゆ狐加仰f7f4

A。 ― 4

本菌加熱死菌免疫抗原の接種により得たウサt'。'山 "ub"p ．

"""

Ar

供試抗血清 : 第 3 章第 4 節第 3 唄において

― 卿

イーa‑l
Ar

ギ抗血清を5f。 C ，

Org 卸iSm

Abbreviation

供試菌株 : 水病原因菌の代表株として
イー
a‑l

List 0f organisms employed

Table 32.

実挨 方法

濁法によりそれぞれ
約 10' 。 ce@l/mr の濃度となるよ5 に Mg

H 什fo か% ぬmVar

P5． ル力伽ぬ M

1
2

TUF

・生理的食塩水に再懸濁し，l00 。C ， 30 分間水浴中で加熱抽出を行ない，その後l0 ， 000rpm ， 30分間の遠心分離により得られる上澄液を加熱抽出抗原として株試した。
術式 ; 補体結合反応の術式はおおむね梅毒診断における緒方氏法 (伝研学友会，
1955 ．木村・t964) に準拠し ，
全実験を通じ5 単位溶血素感作血球2 ガ浮湖液ならびに2 単位の補体を使用し，稀釈液としてはすべてMg ・生
理的食塩水を用いた。反応は先ず稀釈抗原液0． 25mr ， 稀釈抗血清0． 25mJ の混合液に2 単位補体を含む0． 25mf
補体溶液を； nえ， 1‑4。 CK 二 3 時間納官後，引続き37 。C の恒温水槽中に15 分間おいた後，O． 25mJ の感作血球浮満液を添加して引続き37 。C で30 分間反応せしめ，直ちにまた1‑4。 C に20 時間純直後，溶血の程度から結果を判定した。 なお，結果はまったく溶血のみられない，すなわち補体結合反応陽性の場合を CO) とし，完全溶血，すなわち反応険性の場合を C3) とし，その間の種々の程度の不完全溶血をその程度により (1) および (2)として表示した。
(2) 結果および考察
以上のような方法により調製した
本病原因菌ならぴに対照菌株の加熱抽出抗原と本菌 ウサギ抗血清との
補体結
に

nl

ro
ge
fixa‑ anti
tn neod
oa
め‑3
︑3
山3
へ333333@

株抗原ではTable33

Oham

3
33

3L
b

70

3 T se3

ey l

On‑ w 03o
33寸
33333 3u
T ・ h イ ‑dol
OO ヘ 33@33︵3333334. e
gen iOn
血 ul
A 士

Ta

にしめすごとき結果を得た。先ず，イーa‑l

Oo
山‑︑
w‑
3333333333.
l; 千工 ︐ 3 mOst
22引

施樹而玉 Oo @の‑0000000033

Mu
lA
・dl

ble33 廿， Table33‑Table36
合反応を観察して@

8

1 rabbit serum

へ寸
へ
8

Serum
8

‑

dilution

S

@

S

8

ほ

3

・

control

0

3'

3'

1

2

3
3

3

0

0

0
0
O

O

2'

3'

3

3

0

0

0

1

3

0

0

0

0

0

1 : 64

0

0

0

0

0

3
3
3

3

3
3
3

3
3
3
3
3
3

1 : 128

0

0

0

0

0

3

3

3

3

1 :256

0

0

0

0

0

3

3

3

3

3

3

3

3

3

en 3

3

sign Of result;

see

Table 3300
0

1 : t60

1 : 32rSOegMuLm0l

0
0

A
tion

test

@@ @

a

with

@

fixa‑

Ar‑4 antigen and anti

1 rabbit serum

Serum

dilution

AC B
O0000000009'‑
sNOON
、の 00
00
'N‑
の、
へ，ハ 寸、つ ‑ つ心N Anten dilution

つ・

1: 2
1: 4
1: 8

魚
親

dilutiona @養中のサクラマならびにカラフトマ ス 性辰に発生した

蓄熟
催

Antigen‑@f@complement

Table 36‑ Tw0‑dimensional

Table 35‑ Tw0‑dimensional
complement fixa‑
tion test with Ar‑3 antigen and anti

3

3

へ

寸

山

寸

・の

の

山

・

control

1: 2
1: 4
1: 8
1 : I6

0
0
0

0
0
0

0

3'

0
0

0
0

3
3
3

3
3
3

3
3
3

3

3
3
3

0

0

0

0

3

3

3

3

3

1 : 32

0

0

0

0

3

3

3

3

1 : 64

0

0

0

0

0

3

3

1 : 128

0

0

0

0

0

3

3

1 :256Serum
control

0

0

0

3

3

3

1
3,

3

3

0
3

3

3

3
3
3
3
3

see

Table 33

sign of result;

みられるごとく抗原価 l :256 ，抗血清のl :3200 まで明瞭に反応陽性が認められたが，対照菌では
A

3
3

・

3
3
3
3

saM川mc@ 血の 2 株を除く他の8 菌株では，Table 34 にしめす A ．ゆdroph4la の場合と全く同様にすべて陰性の結果が得られた。また d ． salmmonicidad7
ハ株の抽出抗原ではTable 35 ならびKL

Table 3f にしめしたよ9 に，第3 草第 3

節第 2 項における凝集反応において観察されたごとき， 本菌との交叉反応が認められた。
すなわち，菌体の加熱

抽出抗原による補体結合反応においても， 本菌は近縁のA,salnwnici 血との交叉反応を除き特異性が観察され，以上のごとき補体結合反応の本菌と類縁菌による疾病との頬症鑑別への応用の可能性が推察された。
実験H

本菌加熱抽出抗原の補体結合反応におよぼす
正常ニジマス各種庶器加熱抽出液の影卒についての接討実験 I の結果から本菌加熱抽出抗原は
補体結合反応においても特異性をしめし， A salmon@cf血を除く他の類
・縁魚類病原菌加熱抽出抗原と明瞭に判別し得ることが明らかとなったが，実際上本法を診断に応用するに際して，この場合当然魚林組織中の可浴性
は，前述のよ5 に病魚の患部や臓器中に存在する特異抗原を抽出するわけで成分も同時に抽出されることはさけられない。
したがって，それらの可溶性成分が抗補体作用や， 非特果的抗原性や，反応阻止作用などを右することが懸念される。

供試魚として正常ニジマスを用い，その筋肉，血液ならびに各種主要臓器の加熱抽出そこで本実験においては液について，次のごとき検討を行なった。

(1 ) 実験方法
ニジマス抽出液調製法: 本学 (北大水産学部) 養魚池において数週間予備飼育を行ない，外見上まったく正常と考えられるTab@e 37 にしめすごとき3 尾の二ジマスについて，同 表にしめすごとき
重量の筋肉，血液およびその他の主要臓器材料を滅菌乳鉢中で充分に磨砕し，4 倍量の滅菌

MR ，生理的食塩水を加え乳剤とした後，滅菌試験管に移して水浴中で100。C ，

Organs 0f rainbow
for extraction

Fish employed
土二

MuscleB100d

なお，脾臓は得られた材料が僅少であったため9 倍量のLiver

MR ，生理的食塩水で同様に抽出を行ない，また供試魚3 尾中

KidneySpleen小型の2 尾については筋肉以外の材料を混合して供試した。
抽出液の抗補体作用の検討
法 : 実験 I においてのべた
反応系のうち抗原・抗体系のかわりに 上記各抽出液の段噺希釈
71* ; B and C werescantiness

trout

used

A

30分間のnn熱抽出を行ない， l0.000rpm， 30 0rg二丁‑‑‑‑WV
巳
600g

分間の遠心分離により得られた上澄液を各抽出液として供試した。

Table 37.

5.5g
96
5. 5
3 0
0． 4
・

・

190g
10.7g

190g

@ 12.3 g
7 6g 。
4 6
9
0 4
・

，

上 ・

・

mixed because Of

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
液0、 25mlとMgg ・生理的食塩水
0． 25ml の 混台液を0． 25ml の 2 単位補体溶液と先ず反応させ，以後の操作は
実験

I と同様に行ない抽出液の抗補体作用，すなわち補体作用におよばす
影替を観察した。
供試菌加熱抽出抗原を
上記の二ジマス抽出液にお抽出液の井特異的抗原性の検討法 : 実験 I の反応系における
きかえ，木菌抗血清200 借稀釈との非特異的反応の有無を観察した。
供試菌加熱抽出液の代り K@ ，イーa‑l
抽出液の反応阻止作用の検討法 ; 実験 I の反応系における

株加熱抽出

等量宛混合したものを供試し，本菌抗血清l00 借ならびにI， 000倍抗原と上記ニジマスの各種抽出液とをそれぞれ稀釈液との反応を，イーa‑l

抹加熱抽出液のみの場合と比較検討した。

(2) 結果および考察
以上のようにして調製した正常ニジマスの抽出液について，先ず抗補体作用の有無を観察した結果はTablc38にしめすごとくである。 向表の結果より明らかなごとく，ニジマスの各抽出液中，腎臓抽出液においては8 ―刃惜稀釈程度まで抗補体作用が観察されたが，他の抽出液においてはいずれもまったく抗補体作用は認められず，
このような結果はその他の供試魚においても同様であ
った。

へひ
‑

次に，各抽出液の本菌抗血清に対する非特異的抗原性について観察を行な0 た結果は Table39
・にしめすごとくで，上記の実験と同様腎臓抽出液において観察される抗補体作用以外にはすべて陰性の結果が得られた。
続いて本菌抗血清とイーa‑l
した結果はTable40

株加熱抽出抗原との特異反応におよばす
二ジマス
各抽出液の影響について
観察にしめすごとくである。 すなわち，200 借抗血清とイーa‑l3
wののTable 38. Anticomplementary
・

株加熱抽出抗原との反応に

actionOf the extracts of variousorgans0f rainbow trout

Extract dilution

3
0
0
3
3

Kidney (A)Kidney (B)SpleenMusclesign of result;

see

3
3
0

3
3
0

3
3
0

0

2'

2'

3
3

3
3

3

en

寸つ

山へ

‑

omN‑m No'‑
、の
o。へ
O。

3
3
3
3
3
3

3
3
3
3
3
3

3
3
3
3
3
3

寸

ヘ

寸

のす

つ小

3
3
3
3
3
3

3
3
3
3
3
3

3
3
3
3
3
3

3
3
3
3
3

trout

;n complement

山い

ヘ

‑山ヘ

‑寸

333333

3'

Liver

ハ

333330

B100d

7@

‑で

333330

Organ

3
3
3
3
3

3

Table 33

Table 39' Antigenlcity 0f extracts Of various organs 0f rainbow
rabbh 巽rum (X200)
6xaton teSt wi 小 ant イーa‑lAntigen dilution

Ccontrol)sign Of result; see

Table 33

72

・

ヘ

Oり山寸

の寸

・

33333333330

MuSC 卜NO 0‑333333

ヨ

L@vCr

KidneySpleen
イーa‑l

‑‑
‑
のヘ

333333T寸

333330へハ330330330330330330

ぬ:

Bl0

‑
山

330330Organ養中のならびにカラフトマサクフマス に

蓄熟催Table 40.

ぐ小つ寸Influence Of extracts 0f various
fixation

ス 親魚、

test

with

‑f @

a @

organs

1 antigenof rainbow

and

anti

@ @

trout

a @

complementOn

1 rabbit serum

ぬ t@gen dllutlon

Antigen(1 : 1)

つ卜‑Saline+，，・sign of result;

see

‑

‑

‑

‑

‑

‑

0
0
0
0

0
0
0
0

0
0
0
0

0
0
0
0

0

0

0

0

0

0

0

0

Table 33

0
0
0
.0
0
0

0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0

1
0
0
3

3
3
3
3
3
3

3
3
3
3

4

333333

Muscle+‑へ333333

Spleen+

のす

3
3
3
3

3
3
3
3

ヨ

3

3

3

333

L
U

Kidney+

（
十

ヨ

l

+

NO
。 o、
，

ト山

33

凹d 十 イーa‑

Liver

ヘ

333333

白O
コO
卜 へ d
︒
o
山0二
0つ
‑X
x

Bl

山

000000

臼てSaline +ハヘ

000000，，‑000000Muscle+

への000000"000000，，Spleen+000000り二

Kidney+‑000000"Liver+‑

すぐ

3
00CO00白コ卜︒

Rlnori+ イーa‑1

十

ヘハ

0

0

3

おいては何ら
各組織細胞抽出液の影響はみられず，対照とまったく
同価の抗原価が測定され，またl， 000 倍抗血清との反応においても
脾臓抽出液添加の場合の若干の抗原価の低下以外には注日すべき阻止作用は観察されなか@@@>た。

以上の結果から，すくなくも正常ニジマスの筋肉や各種臓器加熱抽出液中には， 本病原因菌の加熱抽出抗原と抗血清との補体結合反応に悪影饗をおよばす因子は，腎臓における
若干の抗補体作用を除き 存在しないことが確認され，おそらく
他のサケ科魚類においても同様の傾向を有することが予想ほれた。したがって実験
I の結果と併せ考え，病魚の患部や各種臓器の加熱抽出液をもって診断用抗原とする補体結合反応の成立することが推察される。すなわち，現地におげる
比較的操作の
簡易な病魚組織の加熱抽出液の作製により，以後の実験室作業で
本病の適確た診断の可能性が考えられる。

今後各種魚類病原菌についての同様の検討や，野外例についての実際的検討により，水病のみならず，魚類細或いは遠隔診断法としての本法の確立が期待され得るものと思考する。
菌性疾病の迅速診断法，

要約

本節実験1 において，補体結合反応による木病原因菌の加熱抽出抗原の特異性について検討を行なった
結果から， 本菌加熱抽出抗原は分類上ぎわめて近縁のA・叩lrmmici血 以外の他の類縁魚類病原菌加熱抽出抗原と明瞭に判別の可能であることをみいだし，また実験TTにおいて，ニジマスの筋肉や血液およびその他の主要臓器の加熱

抽出液について坑補体作用，非特異的抗原性ならびに反応阻止作用などの存在について検討した結果，
抗補体作用における若干の例外を除き，ニジマスの
各種組織抽出液にはそのような性状をしめす因子の存在しないことを明らかにした。

以上の実験結果から， 病魚の患部や臓器の加熱抽出液を診断片抗原とする
補体結合反応により，水病の遠隔診断が可能である 5 と推論した。

73

北海道さけ・ますふ化場 :研究報告第 24 号

第6 草

本病を中心とした ，魚類の細菌性疾病予防，治療剤に関する基礎的研究

本論文の冒頭において述べたごとく，近年淡水あるいは海産魚類の養殖事業の急激な進展と共に細菌性疾病による養殖魚の大量姥死が養殖事業の経営上重要問題とされ，その治療，予防剤の開発が広く望まれている。
しかし 魚類の疾病の予防・治療剤に関する―般の知見は，外部寄生病害生物の駆除K@関する面を除き， 特にわが国に少なく，適確な薬剤使用法が実おいては魚類の細菌性疾病の予防・治療剤の使用に関する甚礎的研究はきわめて施されている
例ははなはだ
少い 。

勿論，養魚の細菌性疾病による病害予防には，飼育管理や耐病種の育成など多くの留意されるべき車項が存在旦発生した時は，早期発見，確診ならびに適格な治療・予防処置等の緊急性がのぞまれる。
まするが，疾病が―たわが国におげる
魚類養殖の主なる目的は生鮮食料品としての魚類の供給にあり，薬剤の使用に際しては食品衛生上の問題にも留意されなければならない。
本疾病を中心とする
魚類の細菌性疾病の予防，治療剤の使用法に関し以上のような観点から，木章においてはて，

2，

3 の基礎的実験を
行なづた結果についてのべる。

第 ] 節 各種消毒剤の 本病原因苗に対する効果
すべての伝染病の根本的制肛対策は，伝染源の根絶と環境衛生の整備にあることは言をまたない。
本病の原因，例え河川水中では旺盛に増殖し得なくとも，長期間に亘 り生存
細菌は第4 章，第3 節において指摘したごとくし得ることが判断されることから， 本病の発生蓄養池におげる汚染は，水病予防対策上の最重要問題と思考される。 現に第2 章，第2 節において述べたごとく，水病の発生を経験した北海道さけ・ますゑ化場北見支場，渚滑
蓄養場においてほ数年間にわたり本病の続発が記録されている。
以上のような観点から，本節においては
従来古くより養魚環境の消毒剤として使用されている過マリガリ酸ヵ
リ，マラ； イトグリ□ ソ ，サラシ粉，硫酸銅ならびに―般常備消毒薬6 種について，本苗に対する消毒効果を観察した結果についてのべる。
(])

実験方法

供試菌 : 木病原因禽の代表菌株としてイーa‑l

株を供試した。

供試消毒剤: 下記にしめすごときI腫 の薬剤を供試した。
石炭酸 (試薬―級．和光純薬K ． K ． )9)エチルアルコー/i@ (試薬―級，和光純薬K ． K ． )10)メチルアルコー/@@ C試薬―級，和光純薬K ． K ， )

・

1)
2)
3)
4)
5)
6)
7)
8)

クレゾール
石ゲリ液 (局方，帝国製薬
K．K．)
塩化べ リザルコニウム(逆性石ケン) l0ガ w/vv 液 (局方，武田製薬K ． K )・

昇乖 (局方，日本水銀薬品
K． K．)
過マリガン酸カりて
試薬―級，昭和イヒオ K ． K
マラカイトグリーソ(試薬―級，関東化学K

・

り

K )
・

サラシ粉 (試薬用，関東化学
K，K．)

硫酸銅 (試薬―級，和光純薬K

・

K )
・

消毒効果の判定法:供試菌に対する供試薬剤の消毒効果の判定ほ，消毒薬の検定法，すなわち石炭酸係数測定法 (伝研学友会・1958)に準拠し次のような 方法により実施した。
上記各薬剤について固型薬剤は w/v ，液状薬剤@ v/v で滅菌蒸溜水で適宜段階稀釈液列を作り，滅菌試験管に9mz 宛分注，20 。 C に保持し，あらかじめす

25 。C ， 24 時間培養した供試菌の培養液のlmf と 20 ，C の恒温水槽中で混合しその後―定時間毎に各作用試験管より内径4mm の標準白金線により混合波の―白金
耳量を判定用 培地ti@移植，これを2ヂ C で48 時間培養し．培地の 個濁の有無により生存菌の有無を判定した。
ア4

催熟蓄養中のサクラマス ならびにカラフトマス
親魚に発生した魍菌性疾病に関する研究

Bactericidal activity of various disinfectants against
suh ，p ． ガ収切仁 a九Table 41.

40

―

80

―

l20

4+

―

160

4+

+

士

―

2凹

+

+

+

士

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卜
o山
OQ

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芝C

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―

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十

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+

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士

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20000

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白 口

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Q
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+

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白

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よ。
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―

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―

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士

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十

十

十

十

十

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+

10 凹

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―

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士

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30
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―

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40

―

3000

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十

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I0

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75

士
七

士

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ま
わ
分
卑
表
前
で
は
数
地
借
培
釈
用
稀
定
の
判
剤
に
梢
のも
︒
終
の前
た
後
ま
方︒
添た

コ用

北海道さけ・ますふ
化場 :研究報告第 24 号

ナ消4(5@o3L%ガ

催熟蓄養中のサクラマ
ス ならびにカラフトマス
親魚

に発生した
籾菌性
疾病に関する 研究
ち 8 薬剤中昇末の石炭酸係数は最も大で，次でマラカイトグリーソ，塩化べ リザルコ二ヴム，過マンガン酸カリ
サラシ粉，硫酸銅，クレゾール
石ケソ液の順に係数が小さい。なお，本実験に供試した塩化べ リザルコニウムは10%w/v であるのでその濃度を補正すると石炭酸係数は約430となり，供試薬剤中 消毒効果の最も大きいことが予想された。

禰田 (1965) は海産魚類の潰瘍病原因菌 H かfoSp・また保科 (1%2) は ウナギのびれ
赤病原因菌 A 力似
%fdfd
について同様の検討を行なっているが，いずれも本実験の結果とほほ同様の傾向を認めている。また GEE&・SARLES(l942) は A ． 5M@椛WfCf ぬを 10 分間の作用で死滅せしめ得る
種 々 の消毒剤の濃度を観察して，マラカ

報告しているが，水病原因菌では
6， 000惜@のイトグリーソでは
0． 034 ガ (l;2941) でその効果の認められることを渡度のIO分間作用により明瞭な消毒効果が認められた。塩化べ ンザルコニウムは淡水魚の細菌性えら病の予防治療剤として米国で奨用されている (SNIESZKO， l963b)
が，本実験の結果においても比較的強い消毒効果がみられ，水病の予防・治療剤としての利用の可能性が推察された。
要

約

6 種の常用消毒剤ならびに養魚環境の消毒剤として従来から常用されている
4 種の薬剤について， 本病原因菌に対する消毒効果を検索した結果，それらの消毒効果の順序は次の通りであった。
(l) 昇永， (2) マラカイトグリーソ， (3) 塩化べ リザルコニウム(逆性石ケソ) 液，(4) 過マンガリ酸

カリ， (5) サラシ粉， (6) 硫酸銅， (?) クレゾール
石ケソ液， (8) 石炭酸，(9) メチルアルコール， (10)

エチルアルコール

また他の研究者の報告と対照し ，これら消毒剤に対する本菌の感受性は他の魚類病原菌とほぼ同程度であることを推察した。

第 2 節 数 種の サルフ ? 剤ならびに抗 苗性物質に対する 本病原因 苗の感受性
魚類の細菌性疾病の治療剤として
最も組織的な研究が行なわれているのは
サ ルファ剤の利用
甲 関してであり，
米国においてSNIESZKO

et al

・

(195l

・

1952,

1955.

1957b) ゃ GUTSELL

et al. (1949

・

l948,

l949n

・

1949b)

により多くの基礎的研究が報告されている。また，わが国においても保科 (l957) ゃ SAITO et al. (@964) による二ジマスのピブリオ 病， 楠田 (1965) による海産魚の潰瘍病に関連した報告があり，また最近，
原 ・井上ら(1966,1967)により魚類への投与法に関する基礎的な研究が報告されている。
更に，近年多くの抗菌性物質が開発されるにつれ，それらの魚病治療剤としての応用に関する研究も活発となり，

ク

p3 ラムフェニコールやナキシテトラサイクリソの利用に関するSNIES2KO

et al

・

(1952), SNIESZKO&BULLOK
CONROY(1957b) の研究，エリスp マイシソに関する WOLF
& DUNBER(1959), PIPER (196l) ， また(1963) によるカナマイシソの利用に関する
報告等がある。
最近 WOLF& SNIESZKO(1963)
はそれらの研究について
総説を行ない，またわが国においても
l967 年11 月，

日本水産学会の
魚類の細菌性疾病に関するシンポジウムにおいて， 柄舌防除に関する問題がとり上げられた。
しかしながら， 個々の魚病におげるこの方面の基礎的研究は末だ比較的少なく，養殖事業の実際面においては，適切な治療剤の使用が行なわれていない
場合がはなはだ多い。
サルファ剤
前節において，
本病原因菌に対する
各種消毒剤の効果について検討を行なったが，本節では木面のならぴに抗菌性物質に対する感受性について検討を行ない， 本病の治療剤に関する若干の考察を行なった
結果についてのべる。

CD) 実験方法
供試菌株 ;前節の実験と同様に
本病原因菌の代表株として
イーa‑l
供試薬剤 :供試薬剤としてはTable43

株を供試した。

にしめす3 種のサルファ剤ならびに8 種の抗菌性物質を供試した。

感受性試験用基礎培地: サルプア剤の抗菌力は，培地素材中に含まれる微量成分の阻害を受げることが知られており，感受性試験のために半合成培地が奨用されている。
本実験においては岸本ら (196l) ならびに大島ろ(l962)がサルフア剤の試験に用いた培地を若干簡易にした次にしめす組成の半合成培地を全実験を通じ基礎培地として供試した。
77

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号
Casamino

4． Og
2.0g
10.0R

acid (Difco)

グルコース

NaCl

ニコチン酸
ビタミンB ，
Na,HPo4， 12H.0

KH,P0,
・pH

Drug

Abbreviation

20mg

SDM

20me
5.0g
0.8g

SMM
SIM

I 000m水

List of drugs employed

Table 43.

Sulfadimethoxin
Sulfamonomettioxin
Sulfisomidin
Tylosin lactate
Oleandomycin
Erythromycin
Tetracyclin‑HCl
Chloramphenicol
Kanamycin‑HzSoi
Streptomycin‑HaSoi

TY
OM
EM
TC
CM
KM

イ

7． 2

なお，この培地の2 借稀釈培地には供試菌が良好に発育した。

SM
PC

感受性試験法 :上述の基礎培地に対し，種々の濃度に供試薬剤を含む水溶液を等量宛混合して供試薬

Penicillin G‑Na剤を種々 の濃度に含む培地を調製しあ らかじめ2
倍稀釈基礎培地で25"c ， 20時間，MONOD

式振盤培養装置により培養を行なった
供試菌を I 白金耳量宛移植し．

前培養同様に25 。C ． 20時間振握培養後供試菌の発育の程度を光電比濁して薬剤無添加の対照培地の咽済度 (O ． DD
を 100 ガとして各薬剤含有培地における発育率を求めた。
なお，発育率10% 以下の場合は肉眼的にほとんど発育が認められなかったので，発育率10 ガ以下となる薬剤の濃度を供試菌に対する最小発育阻止濃度とした。
また供
試薬剤中 サルファ剤は水に不溶性のためN/20 NaoH
ンも同様に難溶性のためN/50 HClに溶解して原液としその稀釈液を用い，ェりスp マイシ

で原液の調製を行なった。また加熱に不安定と考えられる抗菌性物質の水溶液は可及的無菌
的操作により調製し 基礎培地との混合後は加熱滅菌を行なわずl 夜， 25 。 C で無菌試験を行なった後に供試した。

(2)

結果および考察

観察した結果は以上のような方法により，先ず供試菌の発育に及ぼす
供試 3 種のサ ルファ剤の影響について
F!g ． 24 にしめすごとくである。
すなわち，供試菌の感受性は供試サルファ剤中スルファモハメトキシン(SMM)

COncentration

Fig. 24.

Of

drug

mcg

に対し最も高く，培地中儂

/ml

Influence of sulfa drugs On the growth 0f A, salmonicida

"血 p

狐倣施

・

SIM

□・―

SDM

78

SMM

親魚

養
蓄
ス
性中
にの
発サ
生ク
しラ
たマ
細な
菌ら
疾び
病に
にカ
関ラ
すフ
るト
研マ
究

熟
催
度約l5rml

で完全に発育が阻止され，スルファ
ヂメ トキシリ(SDM)

次ぎ約20r/ml ，スルファイリ，ジン (SIM) は比較的感受性が低くによればこれらの
サルファ剤の各種魚類病原菌に対する MTCに比較し若干感受性の低いことが推察される。

の最小発育阻止濃度(MIC)

MTC

は約 30r/mml

は 0． 6‑5.0r/ml

はそれにであった。 井上 (1967)と報告しているが， 本菌ほそれ

次に供試抗菌性物質中エリスロマイシ
ソ ，オレアリドマイシン，クイロシンなどのマク

p ライド系抗菌性物質

ならびにストレプトマイシンに丸すす 供試菌の感受性を観察した
結果は Fig ． 25 にしめすごとくで， 供試3 種のマ
p ライド系抗菌性物質に対す供試菌の感受性は比較的低く， 3 者中最も高い抗菌力をしめしたタイロシリ

においても MIC

は約30r/mz

で，上述のサ ルファ制中最も抗菌力の低いス ルフアイソ; ジソ (SIM)

Cccentration

Of drug

mcg/mlFi9‑ 25. Influence of erythromycin, oleandomycin, tylosin and streptomycinOnthe growth Of 4. salmonicida subsp. masoucida.
@EM
耳T.@‑
‥ OM
‑
―
‑ " □‑ SM
TY

・COncentration

Fig. 26.

drug

mcg/ml

and

卿

KM

CM

．

79

of

，

Influence of kanamycin, chloramphenicolero 而 h Of A. sal
icida subsp. ‑7d@7‑ ― TC・ク(TY)

tetracyclin

oD

the

に

北海道さけ・ますふ
化揚 : 研究報告第 24 号相当した。―方ストレプトマイ
ジソ (SW) では供試菌の感受性が前3 者に比しきわめて高く

MIC

は約 4r/Wmf

であった。
カナマイシン， ク p ヲム フェニコールならびにテトラサイクリソに対する供試菌の感受性を観察した結果はFig ． 26 にしめすごとくで， 供試菌に対するこれらの抗菌力はきわめて高く，いずれも前述のストレプトマイシ
ン より低いMICをしめした。
特にテトヲサクリン(TC) に対する供試菌の感受性は高く， MIC

であ り， 次でクa ラムフェニコール(CM)では0． 3r/mf ，カナマイシソ(KM)

は約0 06 けmZ・では若干低く I 2r/ml であ・つた。
グヲム陽性菌に抗菌
スぺクトルを有するべ
二 シりソ (PC) に対する供試菌の感受性は当然低く， Table

観察結果より推定されるMIC

27 のは約801U/Wmf であった。

， 8 種の供試抗菌性物質に対する供試菌の感受性は種々異なったが，多くの魚類の病原細菌はグ
以上のごとく
ラム険性桿菌であることから，本菌の感受性も他の病原菌とやや同様の傾向をしめすもののごとく推察される。

由卜

COncentrati

Fig. 27. 'Influence 0f penicillin On the growth ofA
Table 44.

以上の結果から， 各供試薬剤の供試菌に対する定し，本菌に対する効果をしめすとTable 44 の論することはできないが， 供試薬剤中 テトラサイ

クロラムフェニコール
(CM)

ナマイシン (KM)，

p ． w の，% 。 fLね

50%tC*/ml MIC**
/ml

Drug

とおりである。 勿諭試験管内試験の結果のみで結，sensitivity Of A. sal 獅泡血

Drug
，ub ，

5O ガ発育阻害濃度ならびに最小発育阻止濃度を推クリン(TO)

salmonicida subsp. mosweida

8

Sulfadimethoxin

カ

Sulfamonomethoxin
Sulfisomidin

ならびにストレプトマイシン

5t3Tylosin lactate
Oleandomycin
Erythromycin

CSM) などは本病の治療剤としての利用が有望と考えられ，特にテトラサイクリ
ソ (TO) は最も期待され得るものと推察される。また，サルファ剤はそれらに比し若干抗菌力は劣るが比較的価格

I7

53
68

Tet。acyClin‑HCl
Ch lorampheni colの 低廉であることや，魚類に対してきわめて
低毒性である点 (井上・ i967)から，供試サルファ剤

Kanamycin‑H
Streptomycin‑H，SO， ，
凹，中比較的抗菌カの強いス ルフアモハメトキシリ

Penicillin G‑Na

20

r
r
T
r

30
30
75

r

120

I5

r
r
r
r
r
r

0 03r
0． L6
0． 85
r

0． 06
0． 35

25 IU

8O IU

・

丁

丁

ア

丁

3

(SMM)

なども本病の治療剤としてさらに検討されるべきものと思考する。

。 ;50 ガ gro 而hiMibitive

COnCentration** ; minimal inhibitive concentration
80

約

養
ト
疾中
マ
病の
ス
にサ
性
関ク
すラ
るマ
にな
発ら
生び
しに
たヵ
細ヲ
菌フ
研究

蓄
熟
催
要

ス 親魚、

3 種のサルフア剤ならびに8 種の抗菌性物質に対する本病原因菌の感受件について検討を行なった
結果，本菌
ソ CTC) ，に対する抗菌カは供試薬剤中 テトラサイクリ

ストレプトマイシ
ソ CSM)クp ラムフェニコール(CM)が比較的高く， 特にテトラサイクリン(TC)

最小発育阻止濃度は
約0． 06r/mJであった，，カナマイシン (KM)，の抗菌力がすぐれ，その本菌に対する供試サルフア剤の抗菌力 は前記供試抗菌性物質に比しかなり劣り，タイp シン (TY) ，オレアリドマイシン(OM)，エリスp マイシソ CEM)i などのマクロライド
系抗菌性物質やぺ ニシリ ソ (PC)をしめした。
以上の結果から，デトラ サイクリソ CTC)などは本病の治療剤として有望であり，

ではさらに低い
抗菌力

またサ ルフア剤ほ低価格であり五つ魚類に対して低毒性である点本病の治療剤として，さらに今後の検討の余地あるものと推論した。

第3節

二トロフラン 誘導体の 本病原因苗 および類縁 魚病原因苗 に対する殺菌効果， 静苗 効
果ならぴに魚類に 対する毒性について

前節において本病原因菌のサルフア剤ならびに抗菌性物質に対する感受性について
観察し，その結果からそれらの薬剤の水病治療剤としての応用の可能性について推論した。

従来，食品防腐剤あるいは家畜における疾病の治療・予防剤として利用されている二ト

p フラリ誘導体は， 他の抗菌剤のように比較的容易に耐性菌を誘発させないとする見解から，主として
米国においてサケ科魚類の鹿瘡
病治療剤としての検討が行なわれ(POST

・

l959

・

POST

l962.

の 化合物が魚病薬として市販されている。

& KEISS・l962) ，最近わが国においてもl，2

しかしながら，それらの個々の魚類細菌性疾病についての治療効果に関する基礎的研究はきわめて少なく，特にわが国においては二ジマスのビ ブリナ病における
林ら C1964 。，(l965)など2 ，3 の研究をみるにすぎない。

1965) ，海産魚の潰瘍病における
楠 田の報告そこで本節においては， 本病原因菌および頽縁魚病原因菌に対する数種の二トロフラリ
誘導体の殺菌効果．
静菌効果ならびに魚類に対する毒性について基礎的研究を行なった結果についてのべる。

(1)

供計二トロフラン誘導体ならびに
供試苗株

本節において供試した二トロフラリ
誘導体および菌株は， Tableる。 なお供試した6 種の二 ト a フラリ誘導体の5 ち 2 ，れているものである。 また， 供試菌株は本病原因菌 イーa‑

C2)

45 ならびK ． Table 46 にしめすとおりであ3 の化合物は，前述のごとくすでに
魚病薬として市販さ

供計二 a フラン誘車体の殺菌効果
トl 株の他，6 種 7 株の類縁魚類病原菌を供試した。

魚病薬の―応用法として，殺菌効果が期待される薬剤の比較的高濃度溶液による薬浴法がな
snられている。
そこで，供試ニトロフラン
誘導体の供試菌株に対する殺菌効果の観察を次のごとく実施した。

]) 実験方法

殺菌効果の判定は，木章第l 節におげる消毒剤の効果判定法と同様に，石炭酸係数測定法により，反応温度は25 。C を採用した。なお， 供試ニトロフラリ
誘導体はいずれも難水溶性であるため，各薬剤の原液の調製はすべてN‑N

ジ メチルホルムア，ドを用い，それを適宜滅菌蒸溜水に稀釈して供試した。

Table 45.

List Of nitrofuran

Abbreviation
NA
NF
BNA
NAO
FAA
NF‑308compounds

employed

COmpound5‑ NltLo‑2‑fuLylaCLyl

amlde

血0‑2‑fu ， fural Semic" 什azon
Bis (5‑nii‑0furfurylidene)acetoneguanylhydrazone hydrochloride
N‑ L5 n而0‑2‑fuLfuLyliden勺 3‑amino‑2‑0xazo4idone
2‑1,2‑Furyl)‑3‑(5‑iutr0‑2‑furyl) acrylamide
2‑C2‑(5‑Nitr0‑2‑furyl)‑vinyl)‑4‑aniinoquinoline
5‑N

□

8]

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 月
Table 46.
Abbreviation

l
l
― 2
‑
3
―
，
4
‑ 5

イーa‑

A
Ar
Ar

Ar
Ps

V

"""

‑

Ar
「

List Of organisms employed

―
―
仰雌幽
― 脚
ノー

""'伽。
'ぬ ""

Aer 山

'""

IAM
ATCC
ATCC
EFDL

ici 血

Ae/ の

salm

切ル脚わ
fぬ

Ae.r‑

tfヮ碓ポ化 @e 松

伽凧刀 Wesce

いかf0 タぬ 。iumw

刀 結

―

'"'"

Ae
PwM

"

・

乃ノぱ ro力 AH4

。""

‑ 2
‑ 5

Organism

var

EFDL
EFDL
TUF

瓜
ル加n@c 松

．

1018
11163
14174

果

供試
菌に対する殺菌効果を観察し，各供試薬剤の各種濃度溶液
以上の方法により6 種の二 p フラリ誘導体のトる。 すなわち，供試二トp フラン誘における完全殺菌に要する時間を求めると Table 47 にしめすとおりであ

導体の殺菌効果はそれぞれかなり相違 し ， NF

および NAO

ではそれぞれの溶解限界に近い50ppmの濃度でも全供試菌を120 分間の作用時間で殺菌し得ず，またNA

ppmであったが，―力 FAA

は感受性の高い菌株に対しては
50ppm

および BNAおよび 25の殺菌効果もほば
同程度

で2． 5分以内，感受性の低い偽株に対しても
l20分間の作用で完全な殺菌効果が観察され，特にNF‑308 では l0ppmの 浪吏で大部分の供試菌を 2． 5 分以内に完全に殺菌し得た。
なお， 供試菌による感受性の差異は―部の例外を除き，それ程大きくはなかった。

(a)

供計二トロフラン誘導体の計芦効果

次に魚病薬の使用法として，経口投与などの手段により焦林内濃度を高め，その静菌効果を期待する力法が考
Table

47

COmparison

uf bactericldal activity

0f nitrofuran compounds

employedagainst various causative organisms Of fish disease

山 mpound

COne

ノl20
I0
20
30
40
50

NF

BNA

l0
20
30
40
50

@ ノl20

ノl20

ン l20

フl20

二120

二l90

ンl20

ノl2o

ノl20

60

ク

</

ク

@

4

1
2
4
6
8

ノl20

二l20

ク

ク

タ

ク

10

60

ク

ク

ク

ク

二120

l 二l20

―
ノl20

ノl20

ク

120

―
82

‑@

ノl20

(min.) for complate bactericidal effect

ン 120

ノ120

I0
I5

NAO

20
25

120
I0
20
30

FAA

120
60

ノ l20
fi0

30

30

I5

I0

30
I5

40
50

<

2.5

</

ク

120
L0
く 2.5

NF‑308

000
l

30
I5

l0
<

ノl20

二l20

ノ120

ノl20

ノl20

l20
60

ノ120

ノl20

ク

2.5

<

ノl20

く

2． 5

<

30
20
I0
2.5

120

120

二l20

二l20 二l20
ク

魚
親

2． 5

time

養中のサクラマならびに ヵヲフトマス 性疾病に関するに発生し

蓄
熟
催
Min.

120

l

20
ク

l0
く 2． 5フl20 、 @ ノl20

4

I5

6O

<

ク

2.5

60

2． 5

< 2.5lえられる。そこで供試二トp フラン誘導体の供試菌株に対する静菌効果を次のごとき方法で観察した。

1) 実験方法

静菌効果の判定は，曲節における各種抗菌剤に対する本病原因菌の感受性の観察法に準拠 し ， 供試薬剤を種々の 濃度に含む培地における供試菌の発育の程度を肉眼的に観察し，その結果から
各二 ト p フラリ誘導体の供試菌に対する最低発育阻止濃度(MIC) を求めた。なお本美験は静置 培養法によった。

2) 結

果

以上の方法により各二 ト p フラリ誘導体の供試菌に対する MTCを求めた結果はTahle 4R にしめすごとくであ る。 すなわち，いずれの誘導体も前述の殺菌効果に比しきわめて低濃度で静菌効果が認められ，また菌株によTable 48.

COmparison Of bacteriostatic activity 0f nitrofuran compounds
employed against various causative organisms Of fish diseaseMin.

Organism

NA

NF

イーa‑l

0 65

2 5

l.l25

l0

Ar

‑

・

l

O． 875

0 3

83

・

O0

・

・

3 0

50

0 5
・

0.25

ノl0.0

ノ25.0

1l2. 5

20

ヨ． 0

2 5

0 25

O 25

・

・

・

23

3 75

・

50

00

0 75

20
・

NF‑30857

ノ125 0

・

0 l

72

ラ

75 0

o． 3753l‑，l

0． a75

55

V

7. 5

・

l0

50

12

0

2 5

FAA

22

‑

・

(ppm)

cone.

NAO

・

50

Ps

・

95

‑ 5

BNA

65

02

23

一一

AA

Ar

inhibitive

・

・

・

・

・

北海道さけ・ますふ
化場 : 研究報告第 24 号って感受性にかなりの相違がみられた。―般に FAA

および NF‑308の 静菌効果は顕著で，大部分の供試菌はlppm

以下の濃度で完全に発育が阻止され，次いでNAの効果が人であった。これに対しNF. BNA

NAOの 静菌効果は前3 者に比しかなり低かった。なお，水病原因
菌イーa‑

および

l株の感受性は他の菌株に比し―般に高い傾向がみられ，またPseu ぬ
nmwV@ 砂ぬ Oy p.@.p.@5 はいずれの薬剤に対しても特異的に強い
抵抗性をしめし・・．f@‑C4) 供計二トロフラン誘導体の金魚に対する毒性
本実験に供試した6 種の二 p フ ヲン誘導体のうち2，ト3 のものは，魚病原因菌に対する殺菌効果ならびに
静菌効果に可成り期待し得られる成槙をしめしたが，実際に魚病薬とし・てこれらを採用するに当り最も重要なこと
は，薬剤の魚類に対する毒性の如何にあることはい5 までもない。
そこで供試二トp フ テリ誘導体の
毒性について ，金魚を供試魚として次のような観察を行なった。

1) 実験方法
先ず，各二 p フラリ誘導体を
種 々 の濃度に含む
水溶液を9 1宛ガラス製水槽に用意し，予備飼育により健康・ト状態を確認した
体長約5cmの " 和金" をそれぞれ5 尾宛各水悟にとり，充分通気しながら
l0 日間薬浴せしめ，

その間に―定時間毎に供試金魚の状態を観察しながら， 箆死にいたる時間を測定した。なお．薬浴液は実験期間時間毎に更新し 水温は特に調節しなかったが約け ―20 。C であった。また実験期間中は餌料の投与は中を通r‑@48
止した。

ノ

2) 結

果

薬浴せしめた供試金魚5 尾中の最初のl尾が箆死し以上の方法により各種濃度の二 p フラリ誘導体水溶液にトた経過時間，ならびに
5 尾のすべてが鋒死するまで要したに時間を測定した
結果は Table 49 にしめすごとくであ る。

すなわち，供誠二

トおよび BNAp フラリ誘導体
中 NF

は最も毒性が低く，前者では50ppm ，後者では溶解限度に近い10ppmの濃度においても， 240 時間の薬浴後に全快試金魚に何らの異状も認められなかった。
次いでNA ， NA0.

NF 3308の順に毒性が高くなり．NF‑308 では @ppm のごとぎ低濃度においても2‑3

FAA,

□

時間の

薬浴後に全供試金魚5 尾が舞死した。

Table 49. COmparison Of bathing toxicity 0f various nitrofuran compounds
employed against gold fish

ぬH。

(ppm)

9
A
50 AB
ノ240 6‑7 25 B
l20‑l44
10 <A0=240
540O lCN
l
40 AB l0‑24>2407‑8 20 AB
l44 Acc 2400llc2
ノ240

8‑

3‑

4

10‑

24

ノ

l0‑24

ノ240

4‑

24‑

5

48

ン

A

@0‑24

A

24‑48

30 B
20 B
5
A

5 B
A

A
B

4― ラ

>240

24010‑22
15 B
240l0‑22
192 24048‑72 B
ノ

二192

>192

ノ240
二

5@

ノ240
ノ

24‑48

>240

72‑96

6

l92 ノ240 ンl44 CN5ノ; minimal lethal time
; minimal lethal time(hr.) for first dead fish(hr.) for all five fish84ノ二

l44 AB 240
2400‑ll‑9‑―>144 <AC 2400 @l 2
l44 ABD 240O llICM
l
ノ
二

ノ

ノl44

二
ノ

ノl44
ノ

二l44

ノ

144

ン
シ

A口=

2402‑
240
l@23

ノ
二

考

察

養中のサクラマ蓄ならびにカラ
熟
催

(5)

ス 親魚

細菌性魚病の予防・治療におげる
薬浴法の効果ぼ 第 l 義的には使用薬剤の病原菌に対する直接的な殺菌効果を期待することにある。 上記の供試ニトロフラリ誘導体の殺菌効果ならびに金魚に対する毒性に関する観察結果から，最もこの目的に期待し得るものは FAA である。 また薬浴法に期待される他の―面は，体表よりの薬剤の吸収，すなわち
体内濃度の上昇による静菌効果を期待することにある。 この点K@ ついて各供計二 p フヲソ誘導
体は殺菌効果に比しはるかに低濃度で静菌効果が認めらね．，特に FAA

ト

および NF‑308 ほ @ppm

， 特に本病原因菌に対しては FAA
おいて大部分の供試魚病原因菌の発育を阻止しppr

は0， 375ppm,

以下の濃度に

NF‑308 は 0 l・

で完全に発育の阻止がみられた。

なお; 体内濃度を上昇せしめる手段として餌料と同時に経口投与することが考えられるが，木研究の対象の催
熟蓄養中のサケ科親魚すなわち潮河サケ・マス親魚は， 湖河開始と同時に索餌活動を停止し 実際に蓄養中の数ヵ月間はまったく
投餌が行なわれない。また他の魚類においても病魚は―般に索餌活動の減退することが知られている。したがって
魚病の薬剤治療には薬浴法が最も有効な手段と考えられる。
， KAA
上記の殺菌効果，
静菌効果ならびに毒性試験の結果からなど―部のものの治療効果は相当高く評価され得たが，既に市販中の魚病薬中にあまり効果の期待し得られないものが存在し; 今後更に有効な薬剤の開発が望まれる。なお最近SHIMIZU&TAKASE

Cl967) はこのような目的で―新化合物について報告をしているが，本実験においてはこれを供試し得なかった。なお・以上のごとき
実験室内試験の結果を実際に野外に応用するには，野外における
種々 な環境因子と薬剤効果の関連注や魚種による毒性の相違など多くの基礎的実験や， 頻回にわたる半野外的芙験の結果をまたねばならないことは勿論である。

要

約

6 種の二 p フラリ誘導体について
本病原因菌ならびに頑縁魚病原因菌 6 種， 7 株に対する殺菌効果および散
ト

菌効果の試験管内試験ならびに
金魚に対する薬浴毒性を棟詞した結果，
FAA:2‑(2‑Furyl)‑3‑(5‑nitr0‑2‑furyl)
acrylamide など―部のものは，水病のごとぎ魚類の細菌性疾病の予防・治療のための薬浴剤として利用価値のあ ることを推察した。
―方，現在すでに魚病薬として市販されている
二ト

p フラン誘導体の中には効果に疑問の開発が望まれることを指摘した。
もたれるものも存在することから，今後さらに有効な新二 p フラリ誘導体のト

第 4 節 本病原因菌ならびに 類縁無、病原因 菌 の二トロフラン 誘導体に対する 耐性の技 得について

水病原因菌および類縁魚病原因菌に対する殺菌効果，静菌効果な
前節において・6 種の二 p ％ ラリ誘導体のト

らびK: 金魚に対する毒性を検討した
結果，供試薬剤の5 も ―部のものは細菌性魚病の予防，治療剤として応用し得る可能性のあることを推察した。
二ト p フラリ誘導体は
他の多くの抗菌剤のごとく容易に耐性菌を誘発させな
3 の化合物が魚病薬として市販されている。
しかし最近SMITH & HALLS
分離した大腸菌に伝達性の二 p フラリ誘導体耐性の存在することを報告しており，(l966) は人畜の糞便からまた ANDERSON(1967) も腸肉細菌間に二トロフラリ
誘導体耐性を包含する耐性伝達因子(R‑facto，) の 存在することを報告している。
また興津ら (1966) や川 巾 (1957)は大腸菌など数種の細菌を試験管内で長期間二トいとする見解のもとに，すでに2 ，

ト

ロフラリ誘導体と繰返し接触させることにより実験的に耐性の上昇することを報告している。

現象が魚病原因菌においても認められるならば，疾病予防のため長期間投薬を継続する場合，耐以上のような件国の出現を招来させることが杷憂される。阿部ら (l966) は赤痢菌から魚病原因菌の l種 A ゆかophtla へ，
・

あ るいはノ．ヵタ山 ゆん tla からコレラ菌へ多剤耐性が接合により伝達されることを報告している，このような観点に立てば耐性菌出現を誘発させるような薬剤の投与法は公衆衛生上からも無視し得ない。
以上のことから
本節においては， 本病原因菌ならびに数種の類縁魚病原因菌における二ト

p フラリ誘導体に対する耐性獲得能年ついて検討を行なった結果について述べる。

CD ) 実験方法

供試= 卜コフヲン誘導体; 前節の実験において供試二トp フラン誘導体のうち，最も魚病薬としての効果が期
85北海道さけ・ますふ
化場 ; 研究報告第 24 号
待された2(2‑Furyl)□3‑(5 n 血O 2 fury@) aCrylamide (FAA)□□□

2‑furfural SemLCarba 勿n (NF) ，および最近SHIMIzU
フラン誘導体6‑HydroXymethyl‑2‑(2‑(5‑n
供試菌株 :本病原因菌 (イーa‑A・

Salnvinた ,ida ATCC

，すでに魚病薬として市販されている5‑NHr0‑& TAKASE(1967) により開発された
魚病用新二血0‑2‑furyl)vinyl) pyHdinel 株) の他にA げのWw(P‑7D8)

はりか0pAf/&IAM

l4l74 ならびに A. 1iquefaciens EFDLトpの 3 種の誘導体を供試した。

l018 ，d

加叱地 4 ATCC

・

lll63

の 4 菌株を供試した。

耐性獲得能の観察法 : おおよそ興津ら (l966) の力法に準拠したが，先ず前節において静菌効果の判定を行な， 供試菌の二 p フラリ誘導体に対する感受性を観察して，各薬剤に対する最大耐量，
った際の方法にしたがい
トすなわち発育の可能な最大濃度にの 濃度で供試菌の発育のきわめて不良の場合にはその% ―月量) を求め，前節 (3) で用いた基礎培地に各供試菌の 各薬剤に対する最大耐量を含む培地を用意しその培地による 供試菌株の継代培養をAO 代累ね，その間 5 代日毎に各供試菌の最大耐量を測定し FAAする耐性，NF

含有培地に糊代後のFAA含有培地に継代後の FAAに対に対する耐性ならびにP‑7138 含有培地に継代後の P‑7l38 に対する耐性の変化をそれぞれ観察した。

AO 代目以降60 代目までは薬剤を含有しない基礎培地でさらに糊代を統げ，獲得された耐性の安定性
また，糊代
， また最大耐量を同様に5 代継代毎に最大耐量の変化を測定して観察した。なお培養は25 。 C の 静置培養法によりの測定には48 時間培養後の供試菌の発育の程度を肉眼的に観察して判定した。
交叉 耐性の変化を同様の方法
また各40 代継代後の供試菌について，供試 3 種の二 p フヲソ誘導体問におけるトで観察した。

(2)

結果および考察

以上の方法により， 各供試菌株の最大耐量の変化，すなわち耐性獲得能を観察してその結果を，下記の式により求めた最大耐量比により図示するとFie ． 28‑F

巾 ． 32 にしめすごとくである。

最大耐量比‑ 継糊代後の最大代前の局人耐量
耐最
先ず，本病原因苗代表株 イーa‑l

500 t

400t

株における二 p フラン誘ト

導体含有培地に継代培養後の耐性の変化は Fie.28にしめすごと

a@200T グ

くで， FAA

二含有培地に網代後のFAA

25f@@ 日に約480 倍に増加し，NFに耐する最大耐量は継代含有培地に継代後の FAA

に対

l00

L

yP 80
E 60

だ。 その他の4 種の供試菌株についても， Fie ． 29‑Fの山れぞれしめすごとく，程度にには相違がみられるが，いずれの場・する最大耐局は15代日で約8 倍に上昇し，またP‑7138含有培地に継代後の P‑7l38に対する最大耐局も30代日に約80倍に上井しぬ ． 32 にそ

<@'

L 卜
¥@@

合も同様に急激な最大耐量の上昇が観察され， 継代20‑30 代日でx‑‑x;‑x‑‑)<‑x‑x‑:<"い培地に引続き継代を統けても―旦獲得された耐性の
急激な低下

l0

20

はいずれの場合も観察されなかった。
以上の結果から， 本病原因菌や類縁の魚病原因菌は，すくなく

Fig"

28.

も試験管内の試験により比較的容易に耐件を獲得し， またその獲masoucidaconstant

次に，耐性獲得株すなわち継代40代目の各供試菌にっいて，供試 3 種の二 ト p フラリ誘導体間におげる交叉耐性を観察した結果にしめすごとくで・
供試菌株あるいは供試薬剤の相

o

‑

，―

いても明瞭な交叉耐性の上昇が観察さ aT だ。 以上の結果を総合的に考察するに， 本病原因菌や類縁の魚病原因菌においては，必ずしも二 p フラン誘導体に対する耐性株が出現しがたいとは
考え
ト

86

0‑0

50

60

subculture

‑i @

a

@

1 exposed

dose 0f FAA,to

NF and0 t;:L江elCvd toFAA afte「

exposed to FAA，

tole ，anCe,exposed

連によりそれぞれ
荏度の差は認められるが，いずれの供試菌にお40
0fChange ln maximum
tolerancelevel 0f 4. salnwnicida subsp.

得耐性は比較的安定であることが確認された。

ほ ，rab@e50

30

Generation

‑X@@

x@y@

・

最高に達した。また薬剤含有培地にW0 代継代後，薬剤を含有しな

level

to

FAA

， fte 。

to NF

t0leranCL level to P‑7138 after
exposed tU P‑7138
after 40th exposure, subculture
were continued tn basal medium

140t

CO UU
0
" '。 @
︵
P
山︵ 山
a

30

?0

Generation

‑F‑Y‑

山
C

十

50

40
subc

/，

X/

60

Iture

Generation

Change tn maximum
tolerancelevel Of 4. hydrophila IAM 1018
exposed to constant dose 0f
FAA, NF and P‑7138

0―‑0"

/

山

も もすて

ノ

"

．

V.

P

―"―か ト卜

l0

．

HQ

山
ぃ

Fig‑ 29.

‑十 ‑十 十 十

(40

see

Fig. 30'Ofsubcultur

Changefn maximum

levHofH． @ゆ仰はれ dATCCHl6

exposed to constant
FAA, NF and P‑7138

tolerance
dose

ヨ

of

Fig. 28

士

140

aL
口市

L山S
十︑

HCTO400@000Caa
r2o00t6>4C@J
11140

subculture

必

Of

十 ◆せ

へみ印

4 市卜

x‑x‑:.@‑:.‑ノ︵

Generation

Generati団

Fi9 ． 32 ．

Chan

1 Lureぽ in maXimum

toleranCelevel 0f 4. liquefaciens EFDL
exposed to constant dose 0f
FAA, NF and P‑7138

●
1

X

︒ □

Fig. 31. Change in maximum
tolerancelevel Of A. salmomcida ATCC
14174 exposed to constant dose Of
FAA, NF and P‑7138

20

。―。
/

see

Fig. 2830

られず，すくなくも実験的には容易に耐性を獲得せしめ得られ，またその耐性は比較的安定であづて，且っ当然のことながら同―系統の薬剤，すなわち二 ト p フラリ誘導体相互における
交叉 耐性も上昇することから，市販二トロフラン誘導体
魚病薬の使用にっいては，耐性菌出現防止の面からの配慮が必要で，その
適切な使用法が望まれる。特に長期間の経口投与は再考を要するものと思考される。
以上の観点からするならは， 前節において観空したごとく
二

87

ト

p フラリ誘導体の中には殺菌効果のぎわめて高北海道さけ・ますふ
化場 ; 研究報告第 24 号
T@ble J50. Change @n cross tolerance Of 5 strains Of causativefish disease against mtrofuran compounds after
constant dose Of the same after 40 times

organism
A

SM

・

FAA

strain

仰れわ ?d0 SubSpl

川醐が イロイ ー a‑l0l8

0 125*

2 5
70.0

・

initial strain
exposed to FAA

initial strain
exposed to FAA

NF

d ．わソM

ダカ UC

ぬれ 5 EFDL

initial strain

exposedtoNF
P‑7l38*; maximum

torelance level (ppm)** , relative

40.0 (16)> 100.0 (>40)

0． 75
50.0 (66)
8． 75(lIT
60.0 (80)l． 0
40.0 (40)45.0 (45)60.0 (60)

0.25

l.25

5.0 (20)
1.25(5)45.0 (180)40.0 C32)
40.0 (32)0.75
22.5 (30)>100.0 (>80)

60.0

0 l25
11.25(90)
7.5 (60)50.0̲(400)2 540.0 (16)ノl00.0 (ノ40)>100.0 C>40)

35.0 (35)22.5 (22.刀

・

FAA

(28)

2 5
30.0 (l2)ノl00.0 0二40)
ノ100.0 (ノ40)

11.25(90)60.0 (480)

P‑7138．

50.0

0. 12517.5 (140)

initial strain
exposed t0 FAA

P‑71383.75
35.0 (9)ノl00.0 (ノ26)
ノ l00.0 (ノ26)

11.25(45)40.0 (160)

P‑7138

l4¥7@

C480)

0.25
7.5 (30)

NF

A. scilmonicida A'tCC(480)"‑

l． 0 (8)60.0

P‑7l38

II163

NF

60.0

to FAANF

刀．か切
Cぬ加 ATCC

toinitial strain

P‑71381AMOf

exposure

eXwSedNF

刀 ． 乃ノみ ro 力乃 M0organisms

・

・

1.0

40.0 (40)30.0 (30)(50)

10.0 (13)
(80)
I0
・

60.0 (60)tolerance

いものもみられることから，無病薬としての利用法としてはむしろその殺菌効果を期待する薬浴法が最も効果的であろうと考える。

要

約

本病原因菌ならぴに
類縁魚病原因由の二トロフラン
誘導体に対する耐性獲得能について検討を行なった
結果，
すくなくも本実験に供試した魚病原因菌は供試3 種の二 ト p フラン誘導体の試験管内におげる
接触により容坊に高い耐性が獲得され， しかもその獲得耐性は比較的安定であり， また二ト p フラン誘導体相互における
交叉 耐性の上 も認められることをW らかにした。
以上の結果から， 魚煩細菌件疾病の予防法として推奨されている二トヂ・

ロフラリ誘導体の長期間経口投与法は再考を要し，むしろ殺弟効果を期待した
薬浴法が最も安全且つ効果的では
たかろ5 かと推諭しだ。

総括および結石
木研究は，北悔迫さけ・ますふ化場，北見支場・渚梢蓄蚕場において催熟のため蓄奄されたサクラマ
ス ならびに カラフトマス
親魚に発生し，過去数年来その人工ふ化事業に多人の被害を及ぼした細菌性疾病について，疾病発生の状況，病魚の特異的症状，原因細菌，診断方法ならびに予防・治療法などについて究明したものである。
魚頽の細菌性疾病に関してはかなり
古くから多くの研究がなされているが， ―部の特定の疾病をのぞき多くのものについては，末だ確実な
診断法や予防，治療法が確立しておらず，現在なおこの方面には多くの問題がのこされている。
88魚親

養中のサクラマならびに；ラフトマス に発生した細菌性疾病に関蓄熟催

著者は先ず第l章において，魚類特にサケ科魚類の細菌性疾病の研究史について，入手し得た多くの文献を
基
礎に総述を行ない，これら魚病研究の現状を述べ更にいくつかの問題点を指摘した。
検討し，また
罹病魚の肉眼的ならびに病理組織学的観察D 結果から，本病第 2 章においては本病の発生状況を

は急性の伝染性疾病で，その所見はいわゆるサケ科魚類の櫛瘡病とほとんど―致するものと診断した。なお，後に述べるごとく本病の原因
菌は鹿瘡病原因菌 Agrfmws@assal@onicfの診断の妥当性を証明することが出来た。

山の― 新亜種であることを明らかにし，上記

また， 本病の感染様式については， 催熟蓄養中のサクラマスやカラフトマスはその期間中まo たく 索餌を行な機械わないことから
経口的感染を否定し，糊河前におげる外部寄生虫の寄生による体表の損傷や捕獲時における的損傷などを考慮し本病の 感染様式を経度感染，特に創傷感染と考えることが最も妥当であるとした。
推定するに至第 3 章においては，先ずサクラマス
病魚より分離した
多くの菌株の5 ち， 4 菌株を本病原因由と， 次にこの推定原因
菌の金魚，ヤマノ， ニジマス，ウシ ガエル (食用ガエル) 或いはマウス等にった経過を述べ

対する病原性を検討した結果，ヤマハ
特に二ジマスを実験魚とした人工感染試験において，肉眼的にもまた
病理
組織学的にも自然例とほぱ完全に―致する特異的所見を再現することができ， 五つ人工感染魚の血液から接種苗をほとんど純粋の状態で回収し得られることなどから
前記推定原因菌を
本病原因菌と結論した。
また，この原因菌の形態学的，生化学的，生物学的ならびに血清学的話注状から本菌の分類学的検索を行なった結果，木菌は A ． salnwmz ぬぬ てきわめて近縁の細菌であるが，分類学上の重要・注状なちびに血清学的性状において若干の相違点の認められることから， 本菌を ノ ． sa:m@icidaと全く ―致するものと同定することは困難咋nf@s とも―致しないことから， A salnwnici血の―新亜種とすることが妥当であると考え，本菌を ノ．切/川仰@而血 subSp ．川の叩がぬと命名することを提案した。
なお，以上の如く ， 本柄は A ． sが @仰れiCfdd SubSp ． 川 め印F 山の感染による急性伝染病で，その症状はノパdf‑
Wnt;Cf 九 感染によるいわゆる
魔瘡病とほとんど―致することから，従来 A ． 叩/川叩ぬ血思染症として取扱われで，また同様にA ． salmon@iciぬ subs. achromo

・ていた疾病の中にも本型菌に起因するものの存在することが予想される，
次に，本病の案験魚として二ジマスは入手の容易な
点なども考恵してきわめて好適な魚種であると考えられるが，人工感染 (筋肉内接種) には比較的多量の生菌， すなわち少 くも@7

xl06‑7 個の細胞が必要であることを知った。 なお本菌はウシガエルやマウスに対する病原住は認められなかった。
検討し本 菌 の発育はグラム険性桿菌の選択培地に常用され第 4 章においては，先ず本菌の選択培地についてる胆汁酸塩により
m ．害されずむしろ促進されることから，旭川"酸塩を利用した選択増菌培地ならびに選択分離培
何培地は選択性において若干今後の検討が望まれるが，ほぱ実用K: 供し得ることが明らかにされ地を試作した。

たまた， 本菌の水中における消長を検討した結果，本菌は蒸溜水や生理的食塩水中ですみやかに死滅するが，井戸水や河川水中では比較的長期間生存し得ることが明らかにされた。
このことから
，随時蓄養他用水の細菌学的検査の必要性が指摘される。しかし著者の試川上だ上述の選択培地による
本病発生直後における蓄蚕他用水，ならびに周辺の河川水からのす菌 の分離はすべて陰性に終ったことに関して，―般に水試料からの水系伝染病原因

Ob@igate菌の分離はぎわめて困難なことであることが知られていると共に，本菌は栄正要求性の厳しいいわゆる
pathogenであることと併せ考え，本菌は他の AeromonaS

断して差支えないものと考えた。

属の諸菌と異なり河川水中などの， 幣在菌でないと判

予防免疫の可能性について検討した基礎的実験の結
第 5 章においては， 本病の免疫，血清学的診断法ならびに果を述べたが，先ず本菌の加熱死菌およびホルマリン
死菌に対する二ジー@? スの免疫応答，ならびにその抗血清の特異性を実験室的に検討した結束，ニジマスは
本 菌死弗の筋肉内接種により明瞭な免疫応答をしめし，その応答
速度や特異性はウサギ
0) それに匹適することが明らかにされ，水病の血清学的診断や血清疫学的な集団の罹病状

況の把握，或いは予防免疫の可能性も推察した。
‥

引きつづき木病発生後約3 ヵ月経過した同―集団のサクラマス， 本病発生時ならびにその
約20 日後の同 ―集団のヵラフトマスおよび対照の捕獲直後のサクラマス，サケならびに
本菌の死肉により
人エ免疫を試みたサクシマ
ス等，野外における各集団からそれぞれ
lo‑30 尾宛採取した血清について， 本菌に対する凝集抗体の
分布を調査

Sff

北悔道さけ・ますふ
化場 ; 研究報告第24 号

した結果，疾病発生時や終思後末だ経過の短い時期におけるものについては，血清学的診断や疾病流行の血清疫学的調査が可能であることが知られ，更にカラフトマスやサクヲマスは本菌に対し鋭敏に免疫応答をしめすことから，フク チソト之 ;よるノ 、 工的予防免疫の可能性のあることを重ねて推察し得た。
なお，ニジマス抗血清の凝集抗体の加熱に対する
安定性を検査した結果，常法のごとき56 。 C・

30 分間の山口熱による補体の不油化手段は血清の凝固を引起すのみならず， 40 。 C 以上の加熱は抗体価の低下を招来することが判明した。

しかし，凝集反応>t@ 実施における37 。 C0

反応温度は本反応に影響しないことが明らかにされた。
すなわち血清学的手技の魚病診断への導入には，独白の実験手技の確立が望まれる。
また， 木病の診断における補体結合反応の応用の可能性に関して基礎的安鹸を行ない，本反応において本菌 の加熱抽出抗原は，分類学L きわめて近縁の A ． salm0nir.tda以外の類縁魚病原因菌の加熱抽出抗原と明瞭に判別ることを明らかにし，更に，ニジマ
7> の 筋肉や血液およびその他の主要臓器の加熱抽出液にすることが可能であば若‑l‑tf)
例外を除き抗補体作用，非特異的抗原件ならびに反応阻害作用などの認められないことを確認した。すなわち，病焦、の患部や臓器の加熱抽出液を抗原とする補体結合反応による診断の可能性が確認された。

第 6 章においては，水病を中心として魚類細菌性疾病の予防・治療剤に関する
基礎的な検討を行なった結果について述べた。
先ず，石炭酸など6 種の―般的消毒剤ならびに養魚環境の消毒剤として従来から常用されている
過 ‑@ リガン酸カリなど4 種の薬剤の本菌に対する殺菌効果を検討した結果，前者では昇永，後者ではマラカイト

グリーンが最も効果的であり，また本菌のこれらの薬剤に対する感受性は
他の魚病原因菌 とほぼ同程度であ った。

次に，3 種のサ ルファ剤ならびに8 種の抗菌性物質に対する本菌の感受性を検討した
結果，供試抗菌性物質中テトラサイクリソの抗菌力が最もすぐれ
0． 06pp 山のごとぎ低濃度で発育は完全に岨止され，これに比しサルフ
ァ剤の効果は比較的低いがマク i@iライド系抗菌性物貿やぺニシリソのそれより高いことが認められた。すたわ

ち，水病の治療剤としてはテトラサイクリソが最も有望であるが，サルファ剤は魚頬に対して低毒性であり，また低価格であることから，これもまた有利な治療剤の―つと思考される。
なお近年，特に米国においていわゆる
櫛瘡病の原因菌

A ， 切lm
伽而ぬにおけるサ ルファ剤抵抗株の増加する傾向が認められる
二とから，比較的耐性誘発の危険性がないとみられている
二 ト p フラン誘導体の
魚病治療剤としての応用がとり上げられ，現在米国やわが国において数種の二トロフラン
誘導体が魚病薬として市販されている。 このような現状から
市販の魚病用エトp フラリ誘導体を含め 6 種の薬剤について， 本菌ならびに類縁の魚病

原因菌に対する
静菌 効果および殺菌効果の試験管内試験ならひに
金魚の薬浴による毒性倹査を行ない．またそのうちの 2,

3 の薬剤についでは木菌ならびに傾縁煎病原因菌 の耐性獲得能について検討した。その結果，供試ニ

トロフラン誘導体のうち‑ 舌 l;?)ものでは魚頬の細菌性疾病の予防・治療剤としての応用の吋首 自性を明らかにし
得・

たが，―方市販
二ト p フラン糸魚病薬中にも効果に疑問のもたれるものの存在することが知られ，また
本実験の供試菌株中では，
本病原因弟のみならず，その他のいずれも比較的容易に二ト

p フラン誘導体に対する耐性を獲得することが明らかにされ， 二ト p フラン誘導体の長期間投与は耐性菌誘発の血から再考を要し，むしろ殺菌効
果を期待する薬裕法が安全かつ効果的であり，またこのような点を考慮した新しい二トロフラン
誘導体の開発が望まれることを指摘した。
ス ならびに； ラフトマスに発生した細菌性疾病について
種々多方
以上のごとく，著者は催熟蓄養中のサクラマ山から検討した結果，本病はいわゆる櫛槍柄にほぼ，致する
症状をしめす急性伝染病で，その原因
菌は Aer
血の― 新亜種であることを発見，本原因菌に対し A

MS5&lMm@C/
1969 ， noV・・$&l ，切れぬ 此 SubSp ．

山ヤ如・

ガ松卯
0@ 血， KIMURA，SubSp ．と命名し本病の全貌をほ+ま 明らかにし得た。

また， 本病の研究に血清・免疫学的手技を導入しこの種魚類の 細歯性疾病の研究分野に血清・免疫学的診断，血清疫学的調査，予防免疫
或いは病原菌の血清学的理別等を導入する必要性を強調した。
また治療・予防に関し，いくつかの有効薬剤を朋 らかにし得た。
なお予防免疫の可能控にっいては突験てぼ，その基礎的安験結果から室内実験において抗体価の上昇など
免疫応答を確認し得たことから，今後ワクチリ
接種魚に対する病原菌の攻撃試験，更に野外実験等をかさねその確立を期す必要があるものと思考する。

90

魚
親

養中のサクラマならびに；ラフトマス に発生した細菌性疾病に関

蓄
熟
催
謝

辞
[

稿を終るに当り，終始御懇篤なる御指導と御鞭捷を賜わり，また厳密なる御校閲を頂いた北大水産学部坂井稔
教授に深甚なる
敬意と謝意を表すると共に，種々有益なる御助言と御指導を賜わった谷川英―教授ならびに山本喜―郎教授に衷心より感謝申し上げる。また病理組織標本の観察に御指導御援助を賜わった東大農学部日比谷
京教授および北大水産学部新山英二郎教授，組織標本の作成の労を頂いた
北大水産学部山崎文雄博士，血液像の観
察に御指導を頂いた函館水試結城了伍博士に鳴謝し，また本研究の遂行ならびに公表にあたり，積極的な御援助と御便宜を与えられた
北海道さけ・ますふ化場逸見文彦場長，研究遂行に終始御協力を賜った同場，根室支場
武田重秀場長 (元 ・北見支場長) および北見支場負の各位，紋別漁協上尾義郎氏および渚梢菩養場の各位に感謝申し上げる。また本研究に供した対照菌株の―部は東大店徴研飯塚広教授，東氷人保科別―教授，新潟大医学部斎
藤豊博士ならびに
米国東部魚病研究所 G ． L ． BULLOCK

博士の御好意により分与さすしたものであり， また研究費の―部は農林省 ・農林水産特別試験研究費，文部省・総合研究費， 北侮迫科学研究費ならびに水産庁・北海道

さけ・ますふ化場調査費，北海通鮭鱒保護協力会連合全試験調査費，紋別市鮭鱒保護協力会経費等の
御援助によ
るもので，
蚊に記して深甚なる謝意を表す次第である。 終 りに本研究遂行中終始御協方を頂いた北大水産学部
微鈴木満子氏に厚く御礼申し上げる。
生物学講座信渡晴雄， 絵面良男画学士ならびに参 考 文 献阿部久夫・
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性知音養中のサクラマ
ス ならびにカラフトマス
親魚．
に発生した邦菌性疾病に関する研究

A

F

三

H

G
: Microscopicalof infectedfish

A; PeLechia On the cutis of abdomenlnsymptoms

early

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of infection,

B;H武o刊宙賄 V低三man器巳 d*ebasilar
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: Lepeopktherirus satmonis generally .found on salmonides caught qp

7

the shore Qf the Okhotsk Sea,

北海道さけ・ますふ

化 場 :研究報告第

PLATE

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田 u@n'@and stained with Delafield's haematoxylin and eosin.
A
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C: Liver X400
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蓄養中のサクラマならびにヵヲプトマス に発
III

PLATE

99

北海通さけ・ますふ 化拐 :研究報告第 24 号
PLATE

IV

PhoTomicro graphs obtained from the sections o[ the organsof artificially infected rainbow
fixed ln BOurn's solution and stained with Delafield's haematoxylm and eosin
A: Muscle lesion x 100 B‑ Kidney x400
C. liver x 100 D. Spleen x 100
100

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