ISSN

東海大学紀要 農学部

PROCEEDINGSOFSCHOOL OF AGRICULTURE
TOKAI UNIVERSITY
Vol. 392 0 2 0東海大学紀要 農学部
第 39 巻2

Gaining an Emic Perspective on Streamed Versus Mixed-level EFL Classes at the Tertiary Level in Japan

2432－7204020…………………………………………………………… Miki Rodriguez-Yagi・Michael J. Rupp……１
Clariﬁcation of origin location of Japanese lawn grass（Zoysia japonica）in Suizenji-joujuen

日本の大学における習熟度別英語クラスに関して学生の捉え方……………………………………… Tomoaki Miyachi・Naruhito Kawamoto・Athushi Morita・
Yoshikazu Hoshi・Yasushi Matsuda・Tatsuro Murata

……8

第三九巻

by Morphological and RAPD analysis approach

マイケル……１

水前寺成趣園のシバ（Zoysia japonica）における移植起源地推定のための形態学的および RAPD 分析によるアプローチ

The weight of leg bones increases by dietary supplementation of rice shochu distillery……………………………宮地伯明 ･ 川本成人 ･ 森田敦士 ･ 星

by-product to broiler chick.
……………………………………………… Toshiaki Inenaga・Hajime Torii・Shinnosuke Ishii・
Tomoka Amase・Rajibu Puradan…………………………………………………………ロドリゲス八木美樹・ラップ

良和 ･ 松田靖 ･ 村田達郎……8

ブロイラー初生ヒナへの米焼酎粕給与により脚骨重量が増加する……16…………………………… 稲永敏明 ･ 鳥居

孟 ･ 石井慎之助 ･ 天瀬智夏 ･ プラダン ラジブ……16

Behavioral analysis handling and response to human in Japanese Black
市場における褐毛和種の従順性と対人反応性に関する行動学的研究

and Brown cattle at the livestock market.

…………………………今井早希・関口瑠璃賀・松本大和・樫村……………………………………… Saki Imai・Rurika Sekiguchi・Kazuhiro Matsumoto・

敦・稲永敏明・森友靖生……21

Atsushi Kashimura・Toshiaki Inenaga・Yasuo Moritomo……21
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東海大農紀要
Gaining
39： 1an－Emic7（2020）Perspective on Streamed Versus Mixed-level EFL Classes at the Tertiary Level in Japan

Gaining an Emic Perspective on Streamed Versus Mixed-level EFL
Classes at the Tertiary Level in Japan
Miki Rodriguez-Yagi ・Michael J. Rupp＊＊

（Received 26 November 2019; accepted 7 January 2020）
Summary
At some universities in Japan, students are placed in streamed classes for required English courses based on theirperformance on proficiency exams. While this can have some obvious benefits such as allowing for more homogeneousclasses, in which the pacing and materials can better match the studentsʼ needs, it can also be argued that mixed-ability classes
have beneﬁts as well. The potential beneﬁts may include the promotion of peer assistance from higher ability students to lower,
improved classroom atmosphere due to having more students with a positive attitude towards language study in the classroom,
and a potentially decreased feeling of stigmatization among students who would have been placed in lower levels. This paper
reports on the results of a survey of students at a large private university in Japan, where the students were placed in bothstreamed and mixed-ability classes depending on the type of class it was, namely whether it was a reading-writing focusedclass or a listening-speaking focused class. The results showed that the only statistically signiﬁcant preference for streaming
occurred in the lowest level class, as compared with the highest-level class. The results also suggest that streaming can be more
appropriate for classes taught with a teacher-centered teaching style, such as tends to be the case at this particular university inthe reading-writing classes, whereas mixed-ability classes were potentially more suitable for the typically more studentcentered classes at this university, such as in the listening-speaking classes.

1.0

debates. The proponents of streaming argue that homogeneous

Introduction

classes are better for both the student and the teacher, whereas

Placing students into streamed second language learning

the opponents criticize streaming for causing students to lower

programs is often seen as the basis upon which many EFL

their expectations, leading them to having poorer（English as a Foreign Language）programs are organizedachievement, as well as lower self-esteem. Cooper（2013）（McMillan & Paul, 2011），although some problems involved

also points out that streaming can lead to issues ofwith streaming have been noted as well（Cooper, 2013）．

segregation, problems related to status and the development ofApart from the problem of students intentionally trying toinferiority complexes, which can further demotivate students

score low on placement tests in order to have an easier class,in the lower groups. The teachers may also bring their own

these problems can include the fact that even in streamed

preconceived notions about lower level groups, further

classes, differing student learning styles and abilities alreadyexacerbating these problems.

make those classes somewhat multi-level. Liu, Wang andParkins（2005）describe how education has come to be seen

Proponents of a mixed-level approach may argue for a

as more than just the impartment of knowledge and cognitive

Vygotskian social constructivist（Vygotsky, 1978）paradigm

skills, but also about helping children develop into mature andof learning, in which the “more knowledgeable other”（MKO）

motivated adults who possess self-esteem and learner

can transfer knowledge to their peers. This sort of peer-autonomy. Against this backdrop, the issue of streaming has

assisted learning can help scaffold the learning process andemerged as one of the most contentious in educational

create a more student centered, empowering atmosphere in theclass（Cooper, 2013）．Watanabe and Swain（2007）also＊

Kyushu Liberal Arts Education Center, Tokai University

describe how collaborative dialogue, such as when EFL
─1─

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learners engage in problem-solving and knowledge building,

Conversely, the freshman class 2 students had a streamed RW

is an extension of Swainʼs output hypothesis（Swain, 1985;

in spring and mixed-level LS in fall. Thus, all LS classes were

1995）
. The output hypothesis states that learning takes placetaught in mixed-ability groups, whereas the RW classes werewhen a learner encounters a gap in his or her linguistic

divided according to the studentsʼ levels, as assessed on theknowledge. Moreover, from the Vygotiskian view, the mere

GTEC test. Both the LS and RW courses were conducted

output or message is now transcended by the higher-levelconcurrently with four different teachers（4 LS and 4 RW

cognitive activity of the mediation of language learningteachers）each semester. As streaming had been the common

through dialogic collaboration. Van Lier（2014）claimed thatpractice at this university, there were no complaints from any

in teaching their peers, higher proficiency students benefitof the teachers regarding the streamed classes. However, asfrom working with lower proficiency peers. Storch（2001）

for non-streaming, there was one teacher who expressed somefound that pairs of students with the greatest proficiency

concern at having to teach a mixed-level class. As surveying

difference had the most collaborative interactions, while

the eight teachers about their opinions regarding thecloser proficiency levels tended to interact in a more non-respective benefits and deficiencies of streaming versus

collaborative manner. Studies comparing students in streamed

mixed-levels is an easy matter, the goal of this study was togroups have yielded inconclusive results, though there can beunderstand the emic viewpoint of the students, as a way tonegative stream effects on both the low and high level groups,

ensure the curriculum was meeting the needs of the students

such as with the lower level groups suffering from lower self-and creating an optimum learning environment. Thus, thisesteem, while the higher level groups can suffer from astudy attempts to take an in-depth look at the studentsʼ

negative big-ﬁsh-little-pond（BFLP）effect（Marsh, Kong, &feedback acquired through anonymous surveys（seeHau, 2000）. In other words, they can be intimidated by the

appendix）.

large number of more capable peers.
One argument potentially in favor of streaming in the

2.0 Design and Research Questions

Japanese context would be that in Japanese society there is a

At the end of the school year 2018, questionnaires were

well-known group-oriented bias, thus there can be cases

given to the four streamed RW classes and to the four mixed-

where higher proficiency students actually hide their truelevel LS classes. The RW classes were streamed using scores

ability, even going so far as to affect a strong katakana（L1on the GTEC Academic test. It has 21 listening multiple-

sound system based）accent in order to avoid appearing as an

choice questions and 16 reading multiple-choice questions.

outsider. In Japan the traditional proverb deru kui wa utareru

New students are required to take this test upon entering the（出る杭は打たれる），or “the nail that sticks out will beuniversity. The total test time is approximately 30 minutes.

hammered down” echoes this sentiment. The authors in fact

Both the listening part and the reading part have a maximum

have seen this in their own teaching contexts wherein students

score of 250 points; therefore, the test has a total maximum

who have returned from overseas switch to katakanascore of 500 points. The test is given on computers and is anpronunciation after being ostracized or teased by their peers

adaptive test, meaning that the test questions can becomefor being like a foreigner, or appearing to act more capably

harder or easier based on the responses. Both the four RW

than their peers.

classes and the four LS classes had different teachers, as theclasses were provided concurrently in the timetable. The

This study was conducted at a large private university inresearch questions were as follows:

Japan, in which the entering students are divided into tworoughly equally sized groups: class 1 and class 2. Students in

Research Question 1: Is there a difference between thea class will all take either an English Listening and Speaking

statistical means for the streamed classes and the statistical（LS）course, or an English Reading and Writing（RW）

means for the mixed-level classes in the data acquired fromcourse. In the 2018 school year, the freshman class 1 students

the student questionnaires?

had LS in a mixed-level format in the spring semester andResearch Question 2: Is there a difference between thesubsequently RW in a streamed format in the fall semester.

statistical means for each of the four streamed classes?

─2─

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3.0

classes, most students were at about the same level except for

Methoda few very low-level students, and an even smaller number of

The method for the study is presented in terms of thevery high-level students.

participants in the study（Section 3.1）and the procedures
undertaken（Section 3.2）.

3.2

Procedure

The questionnaire（see Appendix）was conducted at the
3.1

end of the fall semester, 2018. It had two question items. The

ParticipantsStudents from four RW classes and four LS classes

ﬁrst question asked about the streamed RW class as follows:

participated. All of them were from the School of Agriculture.

“RW is streamed. This is because teachers can translate

The RW students were streamed according to level of English

word to word, depending on the level of the class. If you

proﬁciency, and the LS students were not streamed. The LS

are very satisfied that RW is streamed, mark 5. If

students of the same department were to be placed in the same

satisfied, mark 4. If you are neither satisfied norclass, but there were three departments and four classes, thus

dissatisfied, mark 3. If dissatisfied, mark 2. If you are

one LS class had a mixture of students from two departments.

very dissatisﬁed, mark 1.”

RW Class 1（Teacher A）: Low Proficiency Group（25The second question item asked about the mixed-level LSclass as follows:

students）“LS is not streamed, and we tried to put the students of

RW Class 2（Teacher B）: Low-Intermediate Proficiency
Group（26 students）

the same department together. This is because there will

RW Class 3（Teacher C）: High-Intermediate Proficiency

be more communication among the students, and theyGroup（25 students）

will help one another. If you are very satisﬁed that LS is
not streamed, mark 5. If satisfied, mark 4. If you are

RW Class 4（Teacher D）: High Proficiency Group（24neither satisﬁed nor dissatisﬁed, mark 3. If dissatisﬁed,

students）

mark 2. If you are very dissatisﬁed, mark 1.”

LS Class 5（Teacher E）: Mixed-level Group（22 students）
LS Class 6（Teacher F）: Mixed-level Group（22 students）
LS Class 7（Teacher G）: Mixed-level Group（22 students）
LS Class 8（Teacher H）: Mixed-level Group（21 students）（Note: The levels are relative to the groups, and do notreference an external criterion）

For each question item, the students were instructed towrite the reason for the satisfaction.

4.0 Results
Research Question 1

GTEC scores

A Paired samples T-test was utilized to evaluate if there is aClass Class Class Class Class Class Class Class
2
3
4
5
6
7
8
1

difference between the statistical means for the streamed

Numberofstudents

25

26

25

24

22

22

22

21

Minimum

30

112

149

191

49

55

37

29

originally 179 students, but two values were missing. Thus,

Maximum

111

147

189

247

240

257

244

244

these were deleted.

Range

81

35

40

56

191

202

207

215

Average

83

130

166

212

153

162

147

152

classes and the statistical means for the mixed-level classes inthe data acquired from the student questionnaires. There were

There was no signiﬁcant difference in the scores for survey
responses measuring level of satisfaction for Streamed（M =Students were placed into the above RW classes using

3.89, SD = .886）classes, and level of satisfaction for Mixed-

results from the GTEC Academic test. The range of thelevel（M = 3.97, SD =.976）classes; t（176）= ⊖.952, p = 0.342

placement test results was 30⊖111（Class 1），112⊖147（Class（two-tailed）．The p value fell quite far above the alpha2），149⊖189（Class 3）and 191⊖247（Class 4）．These

threshold set for the study which was .05.

ranges were established when classes were created. In RW
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taken had been larger（which was difﬁcult to achieve because
Thus, it is possible to say that most students are satisﬁed in

in-tact classes had to be used）the ANOVA and subsequent

either case. The following comments support the above

Tukey HSD would have had more statistical power or

results.

sensitivity, thus detecting further differences between the

1．Reading and listening are individual activities, so

different means for the four conditions. This, however, canstreaming/mixed-levels does not matter.

only be conﬁrmed with more studies with larger samples, and2．I want to do speaking activities with my friend.

for this study, and with this sample, statistical inference
permits only a claim that there was a difference between thehighest streamed class（Advanced）and the lowest streamed

Research Question 2
One-way ANOVA（Analysis of Variance）was used toclass（Basic）．

evaluate if there is a difference between the statistical meansfor each of the four streamed classes. The test was run for a（nThus, it is possible to say that lower-level students= 92）subset of students whose level was known while

appreciate being streamed more than higher level students.

evaluating satisfaction with streamed class. There were four

The following comment supports the above result.

groups.
Comments on streaming:
Means were:

1．I am not good at English. However, I was able toTeacher A: 4.320（basic）

understand and was not left behind.

Teacher B: 3.863（lower intermediate）

2．The class was at the right level.

Teacher C: 3.695（upper intermediate）

3．The teacher explained thoroughly.

Teacher D: 3.590（advanced）

4．The class went at the right speed.
5．My classmates’ English level was like mine, so I felt

A One-way ANOVA between subjects was executed toat home.

compare the effect of streamed level on the level ofsatisfaction. There were four conditions for the streamed

Comments on non-streaming:

level: Teacher A, Basic Group; Teacher B, Lower Intermediate

1．I felt sorry for my partner because my English wasGroup; Teacher C, Upper Intermediate Group; and Teacher D,

not as good as his.

Advanced Group. There was a signiﬁcant effect of streamed

2．I don’t want to study with the students who are notlevel on the level of satisfaction with streamed classes at the pwilling to make efforts. Low-level students should be< .05 level for the four conditions [F（7.466, 78.219）= 2.800,

in the same class.

p = 0.045]. Given that the result was significant, a post-hoc
test（Tukey HSD）was run to determine which means weredifferent from each other, or put another way, to determine

5.0 Discussion

where the effect exists. This test assumes homogeneity of

There was little difference between the means between

variances and this assumption was tested using Levene's Test

studentsʼ evaluations of the streamed and mixed-level classes.

for Equality of Variances. The result for this was non-

Additionally, there were comments indicating that the students

significant [p = 0.115] indicating that the assumption was

did not really feel they were streamed. Even when the classes

satisﬁed. The Tukey HSD test indicated that only two means

were streamed, there was not much of a difference in level

were different at p < 0.05, and these were the means for theamong the students, except for the very low students in the

Basic Group and the Advanced Group [p = 0.047]. Thus,

basic class. The range was 81.

while means（examined at face-value）tend to decrease as theclass becomes more advanced, a difference only appears at a

There were quite a few comments not on the streaminglevel which is statistically significant（p < 0.05）when theversus mixed-levels issue but rather on the teacher or thelowest group（Basic）is compared with the highest groupclass. It appears that if the teacher makes the most of streamed（Advanced）．It is, of course, possible that if the sample

versus mixed-level style of class, the students are satisﬁed in

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Gaining an Emic Perspective on Streamed Versus Mixed-level EFL Classes at the Tertiary Level in Japaneither case. In the end, what mattered most was how a teacher

a teacher. Even in the streamed classes, there are differences

teaches the class, be it streamed or mixed-level. RW classes

in the studentsʼ English levels. Therefore, teachers have to bewere generally conducted in the teacher-centered fashion.

ﬂexible and have a wide range of teaching skills to meet theThus, streaming worked well for RW classes. On the otherdiversity of students in their class. This study seems tohand, LS classes were taught in a more student-centered,indicate that a good balance can be achieved when RW is

communicative and peer-based fashion, and in these classes

streamed and LS is not. Further investigations should bemixed-level format worked well. From the studentsʼ

conducted in order to examine if low-level students appreciatecomments, it is possible to say that having fun in class leads

streamed classes more than higher level students.

to satisfaction. It is also important to make it easy for students
to ask a teacher or a partner questions. Also, there were quite
a few students who were dissatisfied when they compared

References

their class with classes taught by other teachers. Both RW and

Cooper, A.（2013）．How Kawasaki Medical School Students

LS are required classes, and the students are placed into theHave Evaluated Recent Significant Program Changes

classes by the teachers. Even though this school has a uniﬁed

Taking Place Within the Small Class English Program.

curriculum, the different teaching methods employed by the

川 崎 医 学 会 誌． 一 般 教 養 篇 （Kawasaki medicalvarious instructors made each class seem very different fromjournal. Liberal arts & science course），39 , 27⊖37.

the others. There was also a comment that the content of the

Joyce, P., & McMillan, B.（2010）．Student perceptions ofclasses should be different if there are different levels.

their learning experience in streamed and mixed-ability

However, both RW and LS are required classes having theclasses. Language Education in Asia, 1（1），215－227.

same subject titles, and thus the syllabus has to be the same,

Liu, W. C., Wang, C. K. J., & Parkins, E. J.（2005）．A

in order to ensure fairness in assessment.

longitudinal study of studentsʼ academic self-concept in a
streamed setting: The Singapore context. British Journal

There seems to be a difference between the mean scoresof Educational Psychology, 75（4），567⊖586.

regarding evaluation of the streaming approach by streamed

Marsh, H. W., Kong, C. K., & Hau, K. T. （2000）．

level, especially between basic and advanced. The low-level

Longitudinal multilevel models of the big-ﬁsh-little-pond

students appreciated being streamed in the low level. This iseffect on academic self-concept: Counterbalancing

perhaps because low-level students were often left behind atcontrast and reflected-glory effects in Hong Kong

junior and senior high school. They most likely have spentschools. Journal of personality and social psychology,

most of their English classes merely daydreaming and78（2），337.

becoming more and more detached from the learning process.

McMillan, B., & Joyce, P.（2011）．Teacher perspectives on

Finally, when they were taught at their level, they indicatedstudent placement in university EFL programs. Journalsatisfaction.

of NELTA, 16（1⊖2），70⊖81.
Storch, N.（2001）．How collaborative is pair work? ESL
tertiary students composing in pairs. Language teaching

6.0 Concluding Remarks

research, 5（1），29⊖53.

There are merits and demerits for both streaming andvan Compernolle, R. A., & Williams, L.（2013）．Groupmixed-levels, and teaching styles and learning styles also vary

dynamics in the language classroom: embodied

to a great degree. If the teaching style, learning style and theparticipation as active reception in the collective Zone of

merits of streaming versus mixed-levels can be well-matched,

Proximal Development. Classroom Discourse, 4（1），42

it would be an ideal situation. However, at this school, the⊖62.

reality is that there are four different teachers each both in RW

Van Lier, L.（2014）．Interaction in the language curriculum:and LS. As both RW and LS are required, it is challenging to

Awareness, autonomy and authenticity. Routledge.

make the placement of students flexible. Therefore, it is

Vygotsky, L. S.（1978）．Socio-cultural theory. Mind inunlikely a teacher can choose whether they have a streamed or
mixed-level class, and it is impossible for a student to choose

society.
Watanabe, Y., & Swain, M.（2007）．Effects of proficiency

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differences and patterns of pair interaction on second

ESL learners. Language teaching research, 11（2），121language learning: Collaborative dialogue between adult⊖142.

Appendix
Questionnaire:
担当教員名に丸をしてください。
teacher A teacher B teacher C teacher D teacher E teacher F teacher G teacher H
英語リーディング＆ライティング・英語リスニング＆スピーキング
授業アンケート自由設定項目
質問①
英語リーディング＆ライティングは習熟度別クラスです。その理由は英語力に合わせて１語１語丁寧に訳すクラスを設けることができるからです。英語リーディング＆ライティングが習熟度別であったことにとても満足した場合は５、満足
は４、どちらでもない場合は３、不満は２、とても不満は１にマークして下さい。授業アンケートにも下記と同様にマー
クして下さい。
RW is streamed. This is because teachers can translate word to word, depending on the level of the class. If you are satisﬁed that
RW is streamed, mark 5. If satisﬁed, mark 4. If you are neither satisﬁed nor dissatisﬁed, mark 3. If dissatisﬁed, mark 2. If you are very
dissatisﬁed, mark 1.
とても満足very satisﬁed
５満足
satisﬁed
４

どちらでもないneither３

不満
dissatisﬁed
２

とても不満very dissatisﬁed
１

次にその理由を記述して下さい。Please write the reason of your evaluation.
質問②
英語リスニング＆スピーキングは習熟度別クラスではなく、出来る限り同じ学科の学生が集まるクラスにしています。
そうすることにより、学生間のコミュニケーションが促進され、お互いに助け合うことを期待しています。英語リスニン
グ＆スピーキングが習熟度別でなかったことにとても満足した場合は５、満足は４、どちらでもない場合は３、不満は２、
とても不満は１にマークして下さい。授業アンケートにも下記と同様にマークして下さい。
LS is not streamed, and we tried to put the students of the same department together. This is because there will be morecommunication among the students and they will help one another. If you are satisﬁed that LS is not streamed, mark 5. If satisﬁed,
mark 4. If you are neither satisﬁed nor dissatisﬁed, mark 3. If dissatisﬁed, mark 2. If you are very dissatisﬁed, mark 1.
とても満足very satisﬁed
５満足
satisﬁed
４

どちらでもないneither３

不満
dissatisﬁed
２

とても不満very dissatisﬁed
１

次にその理由を記述して下さい。Please write the reason of your evaluation.

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日本の大学における習熟度別英語クラス
に関して学生の捉え方
ロドリゲス八木
ラップ

美樹

マイケル

抄録
日本の大学において能力試験結果に基づいての習熟度別クラスを必修英語に取り入れることがある．このようなクラス分けには明らかな利点がある．例えば，クラスがより等質になり，授業の進度と教材が学生のニーズにより良く適合する．しかし，様々な英語能力が混在したクラスにもまた利点がある．レベルの高い学生が低い学生の学びを援助したり，英語に対して肯定的な態度を持つ学生がどのクラスにもいるために教室の学習雰囲気が改善される点や，低いレベルに分けられた学生の間に劣等感が起こることを防いだりする．本論では日本の大規模私立大学
での学生調査結果を報告する．英語リーディング＆ライティングは習熟度別，英語リスニング＆スピーキングは基
本的に学科別クラス分けで行った．結果として学生は習熟度別クラスと混合クラスの双方に満足し，どちらかを好む傾向は見られなかった．しかし，習熟度別で行った英語リーディング＆ライティングのレベルが一番低いクラスにおいては一番高いレベルのクラスと比べると習熟度別により満足していることが分かる．習熟度別クラスは英語
リーディング＆ライティングのように教師が一方的に教える授業に適し，混合クラスは英語リスニング＆スピーキ
ングのように学生中心の双方向的な授業に適していることも調査結果から分かる．

─7─

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水前寺成趣園のシバ（Zoysia
39：８－15（2020）
japonica）における移植起源地推定のための形態学的および RAPD 分析によるアプローチ

水前寺成趣園のシバ（Zoysia japonica）における移植起源地推定のための形態学的および RAPD 分析によるアプローチ
宮地伯明 ･ 川本成人 ･ 森田敦士 ･ 星良和
１

１

･ 松田靖

１，
２

･ 村田達郎１，
２

１，
２

Clariﬁcation of origin location of Japanese lawn grass（Zoysia japonica）in Suizenji-joujuen
by Morphological and RAPD analysis approach
1

1

Tomoaki Miyachi, Naruhito Kawamoto , Athushi Morita ,
1,2
1,2
1,2
Yoshikazu Hoshi , Yasushi Matsuda , Tatsuro Murata（Received 4 December 2019; accepted 29 January 2020）
ABSTRACT
Suizenji Joujuen in Kumamoto is one of the famous Japanese style traditional garden in Japan. It was established in 1600s
and all area is covered with Japanese lawn grass（Zoysia japonica）．It is handed down that this lawn grass was transferredfrom Aso region, but the detail is not clear. Therefore, we studied the morphological, histological observation and molecularanalysis（RAPD）to determine the origin location of transplanted lawn grass. As a result, line number Suizenji ③ and ④ werevery closely related with genetically and were classiﬁed in the same cluster with B147, B148 which collected from Namino by
genetic relationship using cluster analysis. It was difficult to classify with the analysis of morphological and histologicalobservation by parafﬁn selection method. In conclusion, it was suggested that the origin location of Japanese lawn grass in
Suizenji-Joujuen was Namino area in Aso by a genetic relationship evaluation.

緒

察によっても種の同定が可能なこともあり，変異検出の言方法としても使用されている（３）．また，近年の分子

日本に自生する Zoysia 属種であるシバ（Z. japonica），

生物学的手法の発達に従い，DNA レベルでの個体識別

コウシュンシバ（Z. matrella），コウライシバ（Z. pacifica）

ならびに遺伝的類縁関係の評価が多くの作物種で一般の３種は，日本芝と総称され，古くから放牧用牧草とし的 と な っ て い る． な か で も RAPD（Random Ampliﬁedてのみならず，庭園の緑化素材としても利用されている

Polymorphic DNAs）分析（４）は操作性が他の手法に比（１）．特にシバ（Z. japonica）は，やや粗いターフではべ迅速かつ容易で低コストであることから，多数の品あるものの，北海道南部まで自生するなど耐寒性を有し，種・系統を対象とする際に非常に有効な方法である．まさらに耐踏圧性，耐乾燥性等の様々なストレスに対するた本法は無作為な塩基配列を有するプライマーを使用す耐性も有することからその利用範囲は広く，現在も国内るため，ゲノム情報が不十分な作物種にも適用できるこの多くの地域において様々な用途での利用が認められてとから，ネピアグラスなどの草種においても利用されて

いる（２）
．

いる（５）．

日本芝３種は非常に近縁である一方，種内の変異も大熊本市にある古庭園の水前寺趣園は，1600年代後半にきいため．種の識別が困難な場合も少なくない．そのた

設立された大名庭園として全国的にも有名な回遊式庭園

め本属種の品種登録の際には，17の外部形態に関する項

であり，東海道を模したその庭園はシバ（Z. japonica）

目を調査し，これらの項目により登録個体の特徴を示しで構成されている．水前寺成趣園の庭園としての歴史的ている．さらに外部形態ばかりでなく，葉の組織学的観研究は報告されている（６）ものの，本庭園を構成する
シバの移植起源地については阿蘇から移植したと口伝さ１

東海大学農学研究科

れているのみで，判断可能な関連資料は存在しない（私２

東海大学農学部

信）．その一方で，阿蘇市波野（旧波野村）を中心に，
─8─

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宮地伯明 ･ 川本成人 ･ 森田敦士 ･ 星良和 ･ 松田靖 ･ 村田達郎
古くから自生するシバが熊本県内で利用されていたこと

葉の組織学的観察および RAPD により検出した DNA 断も知られている．

片の情報をもとに同庭園のシバの移植起源地探索を試みた．

そこで本研究では，水前寺成趣園採集系統と阿蘇地方（草千里および波野）で採集系統を対象として外部形態，

系統，対照品種として同一種の ʻMeyerʼ およびシバ（Z.

材料および方法

japonica）とコウシュンシバ（Z. matrella）の種間雑種で植物材料ある ʻ ビクトール ʼ を供試した（Table 1）．水前寺採集系

植物材料として水前寺成趣園（以下，水前寺と略記），

統（水前寺①～⑨）は，本実験の実施にあたり，2016年

波野地域および草千里で採集したシバ（Z. japonica）28

8月に同庭園内の異なる場所から採集した系統（Fig.1）

Table1．Leaf morphology of Z. japonica lines collected in Kumamot oprefecture

Line
Suizenji ①
Suizenji ②
Suizenji ③
Suizenji ④
Suizenji ⑤
Suizenji ⑥
Suizenji ⑦
Suizenji ⑧
Suizenji ⑨
B2
B4
B5
B21
B22
B24
B25
B78
B81
B82
B84
B85
B89
B90
B92
B93
B146
B147
B148

Collection
area
SuizenjiSuizenjiSuizenjiSuizenjiSuizenjiSuizenjiSuizenjiSuizenjiSuizenjiKusasenri
Kusasenri
Kusasenri
NaminoNaminoNaminoNaminoKusasenri
Kusasenri
Kusasenri
Kusasenri
Kusasenri
Kusasenri
Kusasenri
NaminoNaminoNaminoNaminoNaminoCollection
year
2016
2016
2016
2016
2016
2016
2016
2016
2016
1987
1987
1987
1987
1987
1987
1987
1993
1993
1993
1993
1993
1993
1993
1993
1993
2016
2016
2016

Leaf length（mm）

Leaf width（mm）

53.34±0.83 fgh
80.78±0.56 defgh
99.75±0.71 abcdefgh
35.52±0.35 h
68.03±0.37 efgh
63.83±0.55 efgh
83.13±1.11 cdefgh
92.09±0.38 bcdefgh
39.94±0.25 gh
107.31±1.00 abcdefgh
101.89±0.45 abcdefgh
89.28±0.32 bcdefgh
102.69±0.43 abcdefgh
113.47±0.84 abcdefgh
171.27±0.97 a
156.98±0.80 abcd
122.64±0.51 abcdef
163.65±0.45 ab
111.48±0.49 abcdefgh
161.38±0.29 abc
103.32±0.75 abcdefgh
116.77±0.65 abcdefg
100.73±0.52 abcdefgh
49.16±0.51 fgh
109.20±0.52 abcdefgh
99.32±0.69 abcdefgh
115.62±0.83 abcdefg
135.08±0.91 abcde

5.16±0.83 a
4.66±0.56 abc
4.05±0.71 abc
3.45±0.35 c
3.72±0.37 abc
3.55±0.55 bc
5.06±1.11 ab
4.23±0.38 abc
3.91±0.25 abc
3.49±1.00 c
3.74±0.45 abc
3.61±0.32 abc
3.49±0.43 c
4.32±0.84 abc
4.06±0.97 abc
4.55±0.80 abc
4.19±0.51 abc
4.30±0.45 abc
3.68±0.49 abc
4.09±0.29 abc
3.51±0.75 bc
4.45±0.65 abc
3.70±0.52 abc
4.17±0.51 abc
3.70±0.52 abc
4.87±0.69 abc
4.49±0.83 abc
4.68±0.91 abc

1）

Leaf length/leaf width
10.29±2.21 abcde
17.50±5.91 abcde
25.23±5.53 abcd
10.08±3.74 abcde
18.09±2.88 bcde
17.82±5.53 abcde
16.27±2.46 abcde
21.82±4.14 a
10.22±1.01 abc
31.37±7.57 e
26.94±10.56 cde
24.92±3.39 abcde
29.82±5.21 ab
27.17±6.77 abcd
44.97±15.59 abcde
34.39±7.08 abcde
29.66±12.67 e
38.77±11.78 cde
31.34±13.83 cde
39.01±14.21 cde
30.32±11.65 bcde
26.17±11.17 e
26.55±10.06 bcde
11.85±1.82 de
28.91±9.41 abcde
20.25±3.45 abcde
26.57±6.78 ab
28.95±2.28 abcd

1）No significant difference in the same letters on the calum by Tukey-Kramerʼs HSD test（P ＜ 0.05）

である．波野系統のうち B146～ B148の3系統は起源地

外部形態の比較による評価として推測される根子岳牧野組合から2016年7月に採集

外部形態の調査は2017年５月上旬から５月下旬で行っした系統であるのに対し，他の７系統は異なる年に採集た．調査項目は農林水産省で定められた Zoysia 属の特され，東海大学農学部で維持されている系統である．草

性審査基準（７）に基づき，草型，草高・草丈，出穂性，千里系統は，1987年および1993年に採集され，波野７系

穂数，出穂茎の太さ・長さ，穂長，穂の色，小穂の長統と同様に本学内で維持されていたものである．これら

さ・幅・数，ほふく茎の密度・太さ・長さ，葉長，葉幅，の個体は2016年８月に健苗で満たした５号の素焼き鉢に葉色，の17項目を調査した．その評価基準を以下に示す．

定 植 し， 自 然 条 件 下， 同 一 施 肥 条 件（2017年 ５ 月 に
N:P:K ＝8：8：8の化成肥料を20ｇ /㎡）で育成した．

調査項目（1）草型：極直立，直立，中間，ほふく，極ほふくの5段階
─9─

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水前寺成趣園のシバ（Zoysia japonica）における移植起源地推定のための形態学的および RAPD 分析によるアプローチ

Fig. 1

Collection points in Suizenji-joujuen

単位）（2）草高 ･ 草丈：平均的な草高・草丈ではなく , 鉢の中（17）葉色：第１展開葉から３番目の葉の葉色で最も高い葉の草高・草丈（3）出穂性：春季および秋季における出穂の有無

調 査 項 目 の う ち（5），（6），（7），（8）
，
（9）
，
（10）
，

（4）穂数：春および秋の出穂における単位面積当たりの（11），（13），（14），（15），（16），（17）項目は無作為に穂数（個 /㎡）（5） 出 穂 茎 の 太 さ： 出 穂 期 に お け る 出 穂 茎 の 直 径

５反復ずつ計測した．（2）は折れ尺，（5），（6），（7），（9），（10），（13），（14），（15），（16）はデジタルノギス（0.1mm 単位）（6）出穂茎の長さ：出穂期における地際より穂の基部まを使用して測定し，（17）は葉色カラースケール（水稲用）を用いて評価した．

での長さ（0.1mm 単位）（7）穂長：穂先より穂の基部までの長さ（0.1mm 単位）

パラフィン切片法による組織学的観察（8）穂の色：極淡，淡，中，濃，極濃の５段階

各系統３個体の第２葉をサンプルとし，F.A.A 固定液（9）小穂の長さ：小穂の長径（0.1mm 単位）（10）小穂の幅：小穂の幅（0.1mm 単位）（ ホ ル ム ア ル デ ヒ ド： 酢 酸：50 ％ エ タ ノ ー ル ＝5：5：（11）小穂数：１穂に着生する小穂の数90）にて24時間浸漬することで固定を行った．固定後，（12）ほふく茎の密度

常法に従って脱水処理およびパラフィン誘導を行い，サ（13） ほ ふ く 茎 の 太 さ： 先 端 よ り ４ ～ ５ 節 間 の 直 径

ンプルを包埋し，回転式ミクロトーム（RX⊖860大和光機工業社製）を用いて15μm 厚の横断切片を作製した．

（0.1mm 単位）（14） ほ ふ く 茎 の 長 さ： 先 端 よ り ４ ～ ５ 節 間 の 長 さ作製した切片は伸展器上で乾燥させた後，Safranin O と（0.1mm 単位）（15）葉長：第１展開葉から３番目のFast green（F.C.F）による二重染色で組織標本を作製し葉の葉長（0.1mm 単位）

た後，カナダバルサムで封入した．作成したプレパラー（16）葉幅：第１展開葉から３番目の葉の葉幅（0.1mm

トを光学顕微鏡（ECLIPSE Ni Nicon 社製）で検鏡し，

─ 10 ─

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宮地伯明 ･ 川本成人 ･ 森田敦士 ･ 星良和 ･ 松田靖 ･ 村田達郎
以下に示す各系統の中央大維管束，大維管束および小維⊖GTGAGGCGTC⊖3ʼ），OPC⊖04（5ʼ⊖CCGCATCTAC⊖3ʼ），

管束を調査した．さらに顕微鏡用デジタルカメラ（DS⊖O P C ⊖ 0 5 （ 5 ʼ ⊖ G AT G A C C G C C ⊖ 3 ʼ ）， O P C ⊖ 0 6 （ 5 ʼ ⊖L4 ニコン社製）のアプリケーションソフトを用いて細

GAACGGACTC），を用いた . PCR 反応液として，１サ胞の長さを測定した．

ンプルあたり，0.125μl TaKaRa EX Taq ポリメラーゼ，
2.5μl 10×EX Taq Buffer，2.5μl dNTP Mixture，2.5μl

調査項目

Primer，14.875μl H2O を混合した25μl に調整した．

（1）維管束の配列：中央大維管束を中心とした大維管束および小維管束の並び

増 幅 反 応 に は サ ー マ ル サ イ ク ラ ー（2720 Appliedbiosystems 社製）を用いた．PCR における増幅反応サイ（2）維管束鞘細胞の数：中央大維管束，大維管束および小維管束の維管束鞘細胞の数

クルは，95.0℃で20秒間のホットスタートの後，95.0℃
で30秒のデナチュレーション，37.0℃で30秒のアニーリ（3）維管束鞘細胞の長さ：中央大維管束，大維管束，小ング，および72.0℃で１分30秒のエクステンディングの維管束の維管束鞘細胞の上部，下部，縦の長さ（0.1サイクルを45サイクル行うことで増幅し，その後72℃でμm 単位）

７分のファイナルエクステンディングを経て4.0℃で保（4）内部維管束鞘細胞の長さ：中央大維管束鞘細胞，大存した．

維管束鞘細胞の内部維管束鞘細胞の縦と横の長さ
PCR 産物の電気泳動および可視化（0.1μm 単位）（5）木部の長さ：中央大維管束鞘細胞，大維管束鞘細胞，

電気泳動には1.0% アガロース（Agarose Type Ⅰ）で

小維管束鞘細胞の木部組織の縦と横の長さ（0.1μm

固化した0.5×TBE バッファーを含むアガロースゲルを単位）用いた．サイズマーカーとして100bp DNA Ladder を用（6）師部の長さ：中央大維管束鞘細胞，大維管束鞘細胞，

い，85V で１時間50分間電気泳動を行った．

小維管束鞘細胞の師部組織の縦と横の長さ（0.1μm
単位）

泳動後，ゲルを40分間0.005％エチジウムブロマイド（EtBr）溶液に浸漬することで染色し，紫外線照射装置（7）葉の厚さ：中央大維管束鞘細胞の縦の長さ（0.1μm
単位）（PrintgraphAE⊖6933FXES，ATTO 社製）下でポロライ

ドカメラを用いて撮影した写真により増幅断片を観察し（8）表皮の厚さ：葉の表面と裏面の表皮の厚さ（0.1μm

た．

単位）
クラスター分析による系統分類
調査項目のうち（2）
，
（3）
，
（5）
，
（6）項目の小維管束については無作為に4反復ずつ計測した．

RAPD 法によって検出された増幅 DNA 断片の有無を
1/0データに変換し，統計ソフト JMP を用いて各系統間

外部形態および組織学的観察から得られたデータは統における非類似度をユークリッド距離として算出し計ソフト（JMP）を用いて Tukey-Kuramer の HSD 法（P（８），得られた値を基に Ward 法によりクラスター分析＝0.05）によって検定した．

を実施した．

DNA 断片によるクラスター分析

結DNA 単離各系統から採取した新鮮な若い葉30～60㎎を供試した．

果

外部形態の比較による評価

これらのサンプルから DNA 簡易抽出バッファー（DNA

調査した16項目のうち13項目では系統間で差異が認め

すいすい－ S：株式会社リーゾ社製）を使用し，説明書られなかったのに対し，葉長，葉幅，葉長／葉幅の３項に従って DNA を単離した．得られた DNA ペレットを目では５％水準で有意な差が認められた．葉長を例に説50～100μl の TE buffer（1.0M Tris⊖HCL，0.5M EDTA

明すると，35.52mm（水前寺④）から171.27mm（B24）（pH ＝8.0），蒸留水）で溶解し，5.0℃で保存した．

まで変動し平均101.70mm となったが，本項目において特定の傾向は認められず，他の２項目についても同様で

DNA の増幅あった（Table １）．

PCR 反応には，ユーロフィン社製の５種類の10mer プ

そこで系統間ではなく採集地間で比較したところ，葉ライマー，OPC⊖01（5ʼ⊖TTCGAGCCAG⊖3ʼ），OPC⊖02（5ʼ長において，水前寺と草千里，波野の間で有意な差が認─ 11 ─

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水前寺成趣園のシバ（Zoysia japonica）における移植起源地推定のための形態学的および RAPD 分析によるアプローチ
められた．一方，葉幅では，波野と草千里の間で有意な

RAPD により増幅した DNA 断片を用いた遺伝的評価差が認められ，水前寺は両者の中間に位置したのに対し，予備実験の結果，良好な断片増幅が確認できた５種類

葉長／葉幅の値は水前寺，波野と草千里の間で有意な差のプライマーを用いて DNA 増幅と多型断片の検出をが認められた．
（Table 2）．

図 っ た． そ の 結 果， 供 試 し た す べ て の プ ラ イ マ ー でDNA 断片が得られ，合計91の断片はすべて多型であっ

Table 2．Comparison of leaf morphology between the Zoysia
japonica which collected from different area

た（Fig. 3）．各プライマーから得られた多型断片数は11Collection
Leaf length
Leaf width Leaf lengtharea/leaf width
（mm）
（mm）
1）
Suizenji 125.93±42.59 b 3.99±0.67 ab 32.00±11.25 a
Namino 110.07±46.83 a 3.82±1.12 b
24.85±8.58 b
Kusasenri 72.37±29.99 a 4.13±0.86 a
16.76±6.14 a1）No significant difference in the same letters on thecalum by Tukey-Kramerʼs HSD test（P ＜ 0.05）（OPC⊖04）から31（OPC⊖06）であり，平均は18.2となった．このことから今回使用した５種のプライマーは，シバ（Z. japonica）において効率的な DNA 断片の検出な
らびに多型検出に対し，有用であることが示された．そのため得られた DNA 断片データに基づき，遺伝的な類縁関係を評価することとした．
供試した系統における類縁関係を評価するため，多変

組織学的観察量解析ソフトを用いて，各系統間の非類似度をユーク

パラフィン切片を作成し，組織学的に８項目を測定しリッド距離として求めた．その結果，非類似度の平均値

た（Fig. 2）．しかし，いずれの項目においても系統間差は12.0であり，最大値は水前寺⑨と ʻ ビクトール ʼ で得異は認められなかった（Data not shown）．また採集地間られた22.9であった．一方，最小値は B22と B92，B93

で比較した場合も同様に差異は見られなかった（Table

間で得られた0.00であり，これら３系統は同一クローン

3）．

であった（Table 4）．
これらの各系統間における非類似度をもとに，Ward

Table 3．Histological Comparison of leaf between the Zoysia
japonica which collected from different area
Collection No. of large No. of small
vascular bundle vascular bundle
area
sheath法によりクラスター分析を行った結果，５つのクラス
ターが形成された．クラスターⅠは，水前寺成趣園内のLength of vascular bundle sheath cell（μm）

築山で採集した水前寺③，水前寺④および，B2，B146，

sheathupper part

middle partlower part

Suizenji

5.7±1.1 n.s.

32.2±5.9 n.s.

39.48±13.65 n.s.

105.92±19.18 n.s.

108.41±15.78 n.s.

Namino6.1±1.0

31.6±5.3

46.26±14.75

108.52±23.79

112.98±28.83

Kusasenri

5.8±1.231.4±6.3

41.54±15.58

103.88±27.36

114.58±31.73

1）

B147，B148の６系統で構成されており，これら２系統
は2016年に波野で採集した系統と遺伝的に類似度が高い
ことが示唆された（Fig. 4）．

1）no significant

Fig. 2

Transverse sections of Zoysia Japonica（Line NO. B146）

─ 12 ─

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宮地伯明 ･ 川本成人 ･ 森田敦士 ･ 星良和 ･ 松田靖 ･ 村田達郎
Table 4．Dissimirality Euclidean distance between Zoysia japonica lines
Line（1）B146（1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9）（10）（11）（12）（13）（14）（15）（16）（17）（18）（19）（20）（21）（22）（23）（24）（25）（26）（27）（28）（29）（30）
0.00（2）B147

10.51（3）B148

0.00

15.26 13.95

（4）B2

0.00

14.83 13.41 13.25

（5）B4

0.00

12.83 10.29 14.31 12.37（6）B5（7）B21（8）B22（9）B24（10）B25

0.00

13.12 11.08 14.88 12.98

4.95

0.00

12.96 10.89 14.74 12.82

4.52

2.01

0.00

14.79 12.68 15.82 14.40

7.97

6.84

7.13

0.00

14.09 12.22 15.46 13.96

7.15

5.99

6.31

5.42

0.00

16.32 15.58 16.80 15.83 12.88 12.61 12.77 13.13 11.96（11）B78（12）B81（13）B82

0.00

14.76 13.01 15.70 14.22

8.93

7.97

8.22

7.49

6.68 11.14

0.00

14.50 12.34 15.84 14.10

7.42

6.19

6.51

2.91

6.15 13.45

7.53

0.00

18.04 16.48 17.29 17.79 14.38 14.42 14.28 15.71 15.06 17.42 15.98 15.44（14）B84（15）B85（16）B89

0.00

14.29 11.95 15.23 13.44

7.81

7.25

7.52

9.04

9.40 13.66 10.38

8.56 13.77

0.00

15.15 13.10 16.16 14.77

8.62

7.58

7.85

3.28

6.33 13.53

4.38 15.36

9.61

8.17

0.00

16.95 14.83 16.03 15.10 11.89 12.25 12.09 13.05 12.60 15.10 12.43 13.08 15.46 13.94 13.45（17）B90（18）B92（19）B93（20）Victor（21）Meyer（22）Suizenji ①（23）Suizenji ②（24）Suizenji ③（25）Suizenji ④（26）Suizenji ⑤（27）Suizenji ⑥（28）Suizenji ⑦（29）Suizenji ⑧（30）Suizenji ⑨

0.00

14.47 12.30 15.28 13.91

8.14

7.60

7.86

7.72

8.07 13.70

7.98

7.15 16.04

9.71

8.39 11.49

0.00

14.79 12.68 15.82 14.40

7.97

6.84

7.13

0.00

5.42 13.13

7.49

2.91 15.71

9.04

3.28 13.05

7.72

0.00

14.79 12.68 15.82 14.40

7.97

6.84

7.13

0.00

5.42 13.13

7.49

2.91 15.71

9.04

3.28 13.05

7.72

0.00

0.00

22.44 20.89 21.86 21.30 18.67 18.69 18.79 19.23 19.39 20.53 19.89 19.00 20.62 18.50 19.50 20.09 19.55 19.23 19.23

0.00

18.38 16.37 17.53 17.05 14.28 14.59 14.45 15.27 15.18 17.61 15.82 14.99 17.79 15.08 14.92 16.61 15.29 15.27 15.27 19.15

0.00

14.10 10.47 16.16 15.00

9.01

8.51

8.27 10.14 10.03 14.96 11.28 10.10 16.50 11.18 10.65 14.07 11.02 10.14 10.14 19.63 15.67

0.00

13.91 11.64 14.84 13.80

6.82

7.31

7.03

8.55

8.25

8.58 14.03 10.02

8.21 15.21

9.02

8.88 13.38

9.73

8.25

8.25 18.85 15.09

0.00

12.92 14.16 15.32 14.38 12.70 12.99 12.83 14.41 13.70 15.20 13.80 14.39 17.13 14.59 14.78 15.36 14.36 14.41 14.41 22.15 18.35 14.46 13.50

0.00

14.77 14.56 15.08 13.84 13.47 13.75 13.60 14.81 14.42 15.79 15.04 14.78 19.01 14.71 15.17 16.48 15.16 14.81 14.81 20.77 17.31 14.07 13.31 13.54

0.00

13.85 12.82 16.22 14.81

9.20

9.79 10.70 10.96 14.87 11.77 10.67 16.56 11.68 11.20 14.74 11.53 10.70 10.70 19.80 16.03

9.84

8.78 14.05 13.01

0.00

14.47 12.97 15.90 14.94

9.88 10.62 10.43 11.29 11.54 15.75 12.31 11.26 16.95 12.22 11.76 14.71 12.08 11.29 11.29 19.70 16.43

9.64

9.49 14.18 13.16

5.19

9.99

0.00

16.42 14.13 17.62 15.42 11.49 12.13 11.97 13.03 13.24 17.04 13.92 13.00 18.07 13.10 13.44 15.74 13.43 13.03 13.03 20.93 17.41 11.76 11.51 16.08 16.07 12.59 12.06
13.37 10.98 14.23 12.58

5.58

6.21

5.88

8.30

8.17 13.48

9.23

8.26 15.17

9.10

8.93 12.49

8.91

8.30

8.30 19.26 15.05

8.17

6.31 12.94 13.38

8.83

0.00

9.54 11.20

0.00

17.66 16.22 17.99 16.96 13.98 14.23 14.09 14.74 14.61 18.02 15.10 14.71 19.86 15.72 15.10 17.16 14.08 14.74 14.74 22.90 18.36 14.95 13.85 16.86 17.24 15.08 15.21 15.91 13.57

0.00

Average：12.0

Fig. 3

RAPD proﬁle of Zoysia japonica collected Suizenji-joujuen andNamino lines

これに対して，水前寺③，水前寺④以外の水前寺成趣園で採集した７系統は，上述の３系統以外の波野，草千里採集系統とともに別のクラスターに分類された．またʻ ビクトール ʼ（ シバ（Z. japonica）×コウシュンシバ（Z. matrella）） は， 熊 本 県 内 で 採 集 し た シ バ（Z.
japonica）系統とは独立したクラスターを形成していた．

考察

本研究では，外部形態の比較による評価，組織学的観察および RAPD で増幅した DNA 断片によるクラスター

Ⅴ
Fig. 4

Dendrogram of Zoysia japonica collected lines

─ 13 ─

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水前寺成趣園のシバ（Zoysia japonica）における移植起源地推定のための形態学的および RAPD 分析によるアプローチ
分析を行うことによって，水前寺成趣園に植栽されてい認められた．またこのような場所ではコウシュンシバるシバ（Z. japonica）の移植起源地が，阿蘇市波野の根（Z. matrella）が混在している部分もあることから，芝生子岳牧野組合が有する原野である可能性が高いことを推維持のために近年補植された可能性がある．これらの系測した．

統に対し，庭園内の築山の上部および下部から採集した

外部形態による比較では，供試した系統間で有意に異水前寺③および④は，立ち入りのできない場所で維持さなる値を有することが示されたが一定の傾向は認められれていたことから，この２系統は今回の採集系統内で最なかった．そこで有意差が認められた葉長，葉幅，葉長も古い遺伝子型であると考えられる．

／葉幅の３項目において採集地間で比較したところ，有本種は栄養繁殖で増殖するため，比較的少数の遺伝子意差が認められた系統群が異なり，これらの形態を指標

型が大面積の集団を形成することがある．本実験においとした識別は困難であった．北村（１）は，Zoysia 属種ても類似した場所で異なる年（1987年および1993年）にが栽培環境によって葉の形態，特に葉長が変異すること採集された３系統（B22, B92, B93）の多型パターンが完を報告しており，比較的安定した形質である葉幅による全に一致し，クラスター分析においてもこれらの系統が本属種の分類を提唱している．葉幅のみに着目すれば，クローンであることが示されている．同一クラスターに

水前寺は3.99mm であるのに対し波野は3.82mm と類似

含まれながら，根子岳牧野組合から採集した B146，

した値を示したが，水前寺は他の２箇所の採集地のいず

B147，B148と水前寺系統が同一クローンではなかった

れとも有意差はなく，関係性を明らかにすることはでき

理由として，水前寺③，水前寺④が水前寺成趣園開設当なかった．また Ohki et al.（９）は，ゴルフ場において初に移植されたものであるなら，植栽後400年程経過し高頻度な刈り込みを受けた結果，イネ科雑草であるスズていることから，この期間内に生じた遺伝的変異の他，

メノカタビラ（Poa annua L.）の植物体が数年程度の期採取された当時の現地集団内の遺伝的多様性等が考えら間で矮小化したことを報告されている．このように同一れる．本研究で用いた RAPD 法は無作為な配列である種内における外部形態は，環境要因あるいは選抜圧にプライマーを使用していることから，本属種においてもよって変異することが知られている．水前寺成趣園採集

報告されている SSR 領域（10）や，イネの葉緑体 DNA

系統は，波野および草千里から採集した自生系統に比べ，領域（11）等を比較することで，さらに詳細な確証を得

刈り込みの頻度が高いことから形態の変化が生じているることができると考える．また本結果に基づき，これまと考えられた．実際，水前寺成趣園で採集した水前寺③，でに報告例のないシバ分布域の集団としての遺伝的構造

水前寺⑨は，他の系統に比べ有意に短い葉長を有していを解析する必要性が示された．
本研究の結果から，水前寺成趣園の築山に植栽されてた．
Zoysia 属種における葉の組織学的観察は，種を同定すいるシバは，開設当初に現在の阿蘇市波野に位置する根る手段の一つとして利用されている（２）．本実験では，

子岳の麓に自生している個体が採集され，移植された可葉の組織学的観察に関して維管束鞘の数の他，構成する能性が高いことが示唆された．文化財保護には，有形文細胞の長さなど８項目を調査したが，いずれの項目にお化財である建物や樹木等の保護は議論されるが，草本種いても採集地間および個体間で有意差は認められず，今はその対象から外れていることが多い．今後維持するう

回供試した材料においてこれらの調査項目による分類に

えで，庭園等に植栽されたと思われるシバ系統を遺伝的は至らなかった．このように，今回観察した葉組織におに解析し，増殖して利用することが望ましい．本研究は，ける調査項目で比較的近縁な同一種内の変異を検出する

国指定文化財の庭園における，芝草の維持管理においてことは，困難であることが示唆された．

新しい見解を示したものである．

そこで RAPD 法によって検出した DNA 断片を用いて遺伝的評価を行った結果，水前寺成趣園の築山から採集

謝した２系統は，2016年に根子岳牧野組合から採集した系

辞統と遺伝的に近縁であることが示された．一方，今回水本研究を実施するにあたり，貴重な材料を分譲いただ

前寺成趣園から採集した他の７系統は異なるクラスター

いた水前寺成趣園・出水神社および根子岳牧野組合に対に分類されたことから，起源地，移植時期等が異なるこ

し，ここに感謝の意を表する．

とが推測された．水前寺成趣園内は見学者が庭園内を回遊できるように遊歩道が設置されており，遊歩道近くの採集場所の多くで人の踏み込みによる芝草の擦り切れが─ 14 ─

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宮地伯明 ･ 川本成人 ･ 森田敦士 ･ 星良和 ･ 松田靖 ･ 村田達郎

要（４）Williams J.G., K.Kubelik, A.R. Livak, K.J.Rafalski, J.A.

約

Rafalski and S. V. Tingey（1990）: DNA polymorphisms

熊本市にある水前寺成趣園は1600年代後半に設立され，

amplified by arbitrary are useful as genotec markers.
Nucleic Acids Res. 18. 6531⊖6535.

大名庭園として全国的にも有名な回遊式庭園である．シバ（Z. japonica）によって構成されているが，この Z.

（５）霍田真一，明石良，川村修，沼口寛次（2002）：

japonica の起源地に関する記録は残されていない．熊本

RAPD（Random ampliﬁed polymorphic DNAs） 分 析

では古来，阿蘇市波野地域（旧波野村）のシバを移植しに よ る ネ ピ ア グ ラ ス（Pennisetum purpureumていたと語り継がれており，水前寺成趣園系統と採集起

Schumach.）の系統分類．日草誌．48（1）．37⊖42.

源地として予測した草千里・波野の採集系統を比較する

（６）北野

睦，川畑

博（1978）：

水前寺成趣園の歴史的研究，造園雑誌 41（3）．2⊖ことで起源地を推定した．外部形態の調査およびパラ

13.

フィン切片法を用いた組織学的観察による供試材料の分類は困難であった．一方，RAPD 法で検出した DNA 断隆，黒田正巳，塩田（７）農林水産省

品種登録ホームページ：http://www.

片により遺伝的類縁関係を評価した結果，水前寺成趣園

hinshu2.maff.go.jp/info/sinsakijun/kijun/1670.pdf③と④は非常に遺伝的に近縁であり，波野から採集した（ ８）Nei M.（1978）：Estimation of average heterozygosty

B147，B148とともに同一のクラスターを構成した．遺and genetic distance from small number of individuals.

伝的類縁関係の評価により，水前寺成趣園に使用されてGenetics. 89. 583⊖590.

いるシバは，波野から移植された系統である可能性が示（ ９）Ohki A., T.Abe and M.Ogasawara（2010）: Morphologicalcharacteristics of annual blue grass（Poe annua L.）

唆された．

inflorescence derived from a putting green. J.Jpn.Soc.
Turf Sci. 39（1）．21⊖23.

引用文献（10）Tsuruta S., M. Hashiguchi, M. Ebina, T. Matsuo, T.

（１）北村文雄（1970）：日本シバの園芸学的分類および

Yamamoto, M. Kobayashi, M. Takahara, H. Nakagawa and成立に関する研究．東京大学農学部園芸実験所報告．

R. Akashi（2005）: Development and characterization of3.

simple sequence repeat markers in Zoysia japonica. Stud.

1⊖60.

（２）青木孝一（1998）：芝草品種の歴史と動向
品種

ソフトサイエンス社（３）本多Grassland Science. 51（3）. 249⊖257

芝草と（11）Tang J.H.Xia, M.Cao, X.Zhang, W.Zeng, S.Hu, W.

101⊖116.

侔・河野通世（1971）：Zoysia 属芝草３種の比較形態学的研究

千葉大学園芸学部特別報告．５．

Tong, J.Wang, J.Wang, J. Yu, H.Yang, and L. Zhu（2004）: A Comparison of Rice Chloroplast Genomes. Plant
Physiol. 135（1）: 412⊖420.

1⊖80．

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東海大農紀要 39：16－20（2020）

ブロイラー脚骨への米焼酎粕給与の効果

ブロイラー初生ヒナへの米焼酎粕給与により脚骨重量が増加する
稲永敏明 ･ 鳥居孟 ･ 石井慎之助 ･ 天瀬智夏 ･ プラダン ラジブ
１

１

１

１

２

The weight of leg bones increases by dietary supplementation of rice shochu distillery
by-product to broiler chick.
Toshiaki INENAGA, Hajime TORII, Shinnosuke ISHII, Tomoka AMASE, Rajibu PURADAN（Received 30 November 2019; accepted 7 January 2020）
Abstract
Gait disturbance or lameness is widely observed in many commercial broiler farms. Broiler chicks with leg disorders can beculled before slaughter and bring economic losses. In addition to this, pain and locomotive disability are not desirable in pointof welfare. There are various causes inducing this disease and one of them is assumed to fragility of leg bones. In order tostrengthen them, we focus organic acids promoting intestinal absorption of minerals from feed digestions. Since rice shochu
distillery by-product（rSDBP）includes organic acids like citric acid or acetic acid, we fed broiler chicks with freeze-driedrSDBP from 3 days after birth to 21 days after birth. During these periods, we measured the birdsʼ weight at the ﬁxed time on
every day. On the 22 days after birth, we assessed the walking abilities of the birds and scored them. After this scoring, weeuthanized them by cervical dislocation and collected each chicksʼ tibia and femur. The sizes and weights of the collectedbones were measured and bones were dried and ashed. The contents of crude minerals were calculated after these processing.
The body weights and daily weight gains were similar between both chicks with or without rSDBP supplementation. But
weights of dried tibia, dried femur, ashed tibia and ashed femur were signiﬁcantly heavy in those of chicks fed rSDBP. Because
sizes and crude mineral contents of each bones were similar, it was suggested that rSDBP supplementation increased thedensity of bone tissue and quality of these bones without promoting the contents of bone calciﬁcation.

緒

とって生産性を低下させる要因となっている．また，痛言みがあることに加えて，飼料や水へのアクセスが制限さ

低コストで大量生産できる食肉の供給源として，ブロ
イラーは世界中で飼養されており，大規模な育種改良がれるなど（2），動物福祉の面からも問題となっている（3）．

行われている．また給与飼料の進化や飼養管理方法の精ブロイラーの脚弱が起こるメカニズムとして，大腿骨密化もあり，これらの結果，出荷日数の大幅な短縮がな

や脛骨の細菌性骨髄炎や，趾蹠皮膚炎などが報告されてされた．しかしその一方で，近年のブロイラー集団においるが（4⊖6），脚骨の石灰化の異常が見られることやいては，40日齢時において，27.6% 以上に歩行異常があ（7, 8），脛骨の軟骨異形成症など（9, 10），骨の成長異常り，3.3% は完全に歩行不能となっていることが報告さが起こることも原因となっており，このような骨病変のれている（1）．これらのニワトリは出荷を待たずに淘汰

発生や進行を防ぐことも，脚弱対策の一つになると考えされることが多いため，ブロイラーの脚弱は，農場にられる．そこで我々は食品製造残さの一つである焼酎粕
の効果に注目した．焼酎粕には焼酎を製造する際，麹による発酵過程（一次仕込み）で生成されるクエン酸が多１

東海大学農学部応用動物科学科 家畜管理学研究室

２

東海大学農学部応用動物科学科 家畜栄養生理学研究室

連絡先：稲永敏明

e-mail: inenaga-t@tsc.u-tokai.ac.jp

く含まれる．さらに，焼酎酵母による発酵過程（二次仕込み）では，さまざまな有機酸が生成され，それらは製

─ 16 ─

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稲永敏明・鳥居孟・石井慎之助・天瀬智夏・プラダン ラジブ
造残さである焼酎粕中にも含まれる（11）．熊本県の球×２回）暗期とした．
なお本研究は，東海大学動物実験委員会の承認（承認

磨地方では，米焼酎の製造が盛んであり，排出される焼酎粕は，酒造組合が設立したリサイクル工場で固液分離，

番号：181082）を得て実施した．

加熱乾燥後，水分約60% の濃縮液として製造され，飼料や肥料利用が行われている．この米焼酎粕濃縮液には２．採材および測定項目

乳酸，酢酸，酪酸などが含まれていることが報告されて供試鶏は３日齢以降，毎日定時に体重を測定した．一おり（12），我々が注目した理由はこの有機酸である．

晩の絶食後，22日齢で体重測定，歩様スコアを測定の後，ブロイラーに５日齢以降，プロピオン酸を食餌性に給与断頭屠殺のうえ放血し，解剖を実施した．歩様スコアはすることで，足根中足骨の強度，粗灰分含量やカルシウ

Garner らの報告にある０～５を参考に（Table 1）（15），

ム含量が有意に上昇することが報告されている（13）．

さらにそれぞれの中間段階を0.5刻みとした11段階評価

また乳酸菌の食餌性給与が，血中カルシウム濃度の上昇を行った．

を引き起こすことも報告されている（14）．これらの有右の大腿骨と脛骨を採材し，筋肉や靭帯を除去後，デ機酸もしくは有機酸を産生する菌類のニワトリへの給与

ジタルノギス（株式会社ミツトヨ，神奈川県川崎市）をは，腸管からのカルシウムの吸収の促進，骨へのカルシ

用いて長さと太さを測定した後，100℃ 24時間で乾燥し，ウム沈着の向上，さらに骨強度の上昇により，脚弱の予乾燥重量を測定．その後，電気炉（FO100，ヤマト科学

防効果が期待できる．

株式会社，東京都中央区）を用いて600℃ 24時間の灰化

本実験では，この米焼酎粕濃縮液をブロイラーの飼料を行い，灰化後重量を測定した．これらの重量についてに添加し，ブロイラーの脚骨の粗灰分含量と歩行能力には，解剖前の鶏の体重で割った相対重量の算出も行った．

及ぼす影響についての評価を行った．

Table 1．Criteria for estimating gait scores
Gait
Criteria
score
0 No impairment to stand up and smooth locomotion

材料および方法1

Almost normal, but infrequently, unsteady and wobbly to walkブロイラー（チャンキー種）オス10羽（株式会社山形2Frequent unsteady and wobbly locomotion, but the impact
seems to be minor

種鶏場，福岡県岡垣町）を０日齢で導入し，箱型育すう

3

Walk unsteady and squat after a while器（幅60×長さ175×高さ31cm，株式会社昭和フランキ，

4

Walk unsteady only for 1-3 steps and tend to sit down

5

Unable to stand up and walk even when nudged

１．供試鶏および飼養管理方法

埼玉県伊奈町）にて群飼した．０日齢より，基礎飼料として市販のブロイラー前期用飼料（粗たんぱく質23.0%
以上，代謝エネルギー3050kcal 以上）（スーパーブロ S

３．統計処理クランブル，日清丸紅飼料株式会社，東京都中央区）を本実験で得られたデータのうち，供試鶏の体重および自由採食となるよう給与し，水についても給水器で自由

一日増体量といった反復測定データについては，統計処飲水とした．

理ソフト「R」を用い，米焼酎粕粉末給与の有無（試験約３日間環境に馴化させたのち，３日齢で体重測定の区分），日齢およびそれらの交互作用を母数効果，個体

うえ，体重の平均およびばらつきが同程度になるようにを変量効果とした混合モデルによる分散分析を行い，差５羽ずつ２区（試験区および対照区）に分けた．育すうが見られた場合は，多重比較検定を実施した． 一方，器も金網で半分に区切り，試験飼料として，試験区には解剖時にのみ得られたデータについては，t 検定（歩様基礎飼料中の2.5％を米焼酎粕乾燥品の粉末で代替（米スコアのみ，順序変数の比較のため，マン・ホイット

焼酎粕乾燥品粉末2.5％＋ブロイラー前期用飼料97.5％）

ニーの U 検定）により，それぞれ有意水準を５％としした飼料を，対照区にはそのまま基礎飼料を給与した．

て統計処理を行った．このため，P<0.05を「有意差あり」，

米焼酎粕乾燥品は，購入した米焼酎粕濃縮液（球磨焼酎P<0.1を「傾向あり」として取り扱った．

リサイクリーン株式会社，熊本県人吉市）を凍結乾燥した後，粉砕して作製した．なお，飼育環境については，

結温度および湿度を Aviagen 社の公開しているマニュアル

果に従い管理し，光線についても，６日齢まで23時間明期，本実験は，2018年10月26日から11月16日にかけて実施

１時間暗期に，７日目以降20時間明期，４時間（２時間した．試験区を設定した３日齢以降の体重は区間で有意

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ブロイラー脚骨への米焼酎粕給与の効果差は認められなかったものの試験区が高い傾向を示した

22日齢における，歩様スコアの分布を Fig. 2 に，脚骨（P<0.1）．ただし，多重比較検定ではとくに傾向は認めのサイズおよび重量を Table 2 に示した．このうち，歩られなかった（Fig. 1）．両区ともばらつきはあるものの，様スコアについては，両区とも３未満と判定される供試

21日 齢 で の 平 均 体 重 は， 本 品 種 の 育 種 を 行 っ て い る

鶏はおらず，通常の出荷日齢の半分未満という今回の日

Aviagen 社の公開している目標体重と比較して遜色のな

齢においても，すでに歩様に異常をきたしており，米焼

い値であり，試験期間中の飼養管理等に問題はないもの
1

酎粕の給与による歩様異常の改善はとくに認められなと考えられる．なおデータは示していないが，一日増体かった．脚骨のサイズについては，脛骨の長さが試験区

2
量に有意差は認められなかった．

図表・説
明文
で長い傾向が認められたものの，大腿骨の長さおよび両

3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Figure 1

Average body weights were similar between each groups.

13

Figure 1

114

Av e r a g e b o d y w e i g h t s w e r e s i m i l a r b e t w e e n e a c h g r o u p s .

125

3
4
5
6
7
8
Figure 2

Distributions of gait score assessed on the day 22. There was no difference between both groups.

9

Figure 210Distributions of gait score assessed on the day 22. There was no difference

11

between both groups.

─ 18 ─

12
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稲永敏明・鳥居孟・石井慎之助・天瀬智夏・プラダン ラジブ
Table 2．Effects of rice shochu distillery by-product supplementation on sizes and weights of leg bones

LengthWidth
Dried weight
Ashed weightrSDBPControl

Units

Femur

52.30±0.8552.70±2.05mm

Statisticalanalysis
NS ＊

Tibia

75.14±2.2272.20±2.70

mm

P<0.1

Femur

7.28±0.65

6.76±0.57

mm

NS

Tibia

7.30±2.24

6.24±0.81

mm

NS

Femur

3.75±0.45

3.11±0.24

gP<0.05Tibia

4.28±0.64

3.50±0.25

gP<0.05Femur

2.88±0.40

2.36±0.19

g

P<0.05Tibia

1.32±0.12

1.12±0.11

g

P<0.05

Dried weight

Femur

0.37±0.03

0.31±0.02

P<0.05(relative value)Tibia

0.42±0.04

0.36±0.04

P<0.1

Ashed weight

Femur

0.28±0.02

0.24±0.02

P<0.05(relative value)Tibia

0.13±0.01

0.11±0.01

P<0.05

Datas are mean ± Standard Deviation：Not Significant＊

方の脚骨の太さに区間の有意差は認められなかった．一

石灰化の量的な差ではなく，結晶構造化などの質的な差方，試験区のヒナの脚骨の乾燥重量と灰化後重量およびである可能性も考えられる．ただし，今回脚骨重量に有それぞれの相対重量共に，対照区に比べ有意に大きな値

意差はあったものの，歩様スコアに差が見られなかったを示した．ただし，それぞれの乾燥重量中に占める灰化ことから，ブロイラーの脚弱の原因は，脚骨強度の低下

後重量を脚骨中の粗灰分含量として算出したところ，両以外にも，関節など他の要因が考えられることを示唆し区間に有意差は認められなかった．

ている．実際に，ブタなどでは関節軟骨の変性が原因である骨軟骨症が脚弱の主要因として挙げられる（17）．

考

今後は関節病変の評価も行う必要があると考えられる．

察

上記のとおり，今回の実験では米焼酎粕による脚弱の今回の実験では，ブロイラーへの３日齢から21日齢ま予防効果は認められなかった．しかし，ブロイラーの骨での米焼酎粕給与による歩様の改善効果は認められな強度を強くすることは，捕鳥時や食鳥処理時における手かったものの，22日齢での脚骨の重量が有意に増加した

羽折れや脚折れの防止にもつながる可能性があり，これことから，脚骨の成長が促進された可能性が示唆された．

により鶏肉の商品価値の低下を防ぐことはもちろん，動ただし，脚骨の粗灰分含量には差が見られなかったため，物福祉にもつながると考えられる．

骨の石灰化には量的な差はないと考えられる．肉用鶏に

最後に，今回は飼育スペースの関係で，ブロイラーのおいて，成長速度で選抜された系統では，未選抜の系統

標準的な飼育期間の半分以下の期間しか飼育ができず，に比べると，骨形成と石灰化には差がないものの，多孔米焼酎粕の給与期間も同様であることから，ブロイラー性であることが報告されている（7, 16）．また，ブロイの標準的な出荷日齢まで給与を続け，歩様スコアに対すラーの脚骨の発育について調査した報告によると，長軸る効果の有無を確認する必要があると考えられた．

方向の長さについては，体重の増加と同様に10日齢以降
急速に伸びるが，この頃は骨の成長に石灰化が追いつい

要ておらず多孔性の構造となっており，その後，石灰化が約進むものの，ブロイラーでは結晶構造化の程度が出荷日

ブロイラーの生産農場において，生産性の観点からだ

齢近くになっても低く，これにより脚骨の強度が低くけでなく，動物福祉の観点からも問題となっている脚弱なっていると考えられている（8）．本研究では組織学的を予防する技術の開発を目指し，腸管からのミネラル吸

な検索や，詳細なミネラル含有量の測定，結晶構造解析，収促進効果のある有機酸を含む食品製造副産物である米

骨密度や骨強度の測定等を行なっていないため，これ以焼酎粕濃縮液を，ブロイラーの初生ひなに給与した．米

上の考察はできないが，今回認められた骨重量の差は，焼酎粕濃縮液は凍結乾燥し，粉砕したものを用い，市販

─ 19 ─

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ブロイラー脚骨への米焼酎粕給与の効果のブロイラー用スターター飼料の2.5% を代替するかた

６）Granquist, E.G., Vasdal, G., de Jong, I.C., Moe, R.O.,
2019, Animals, 13（10）, 2365⊖2372.

ちで，３日齢から21日齢まで飼料に配合した．この期間
中，毎日体重を測定し，22日齢時に歩様スコアを測定し７）Williams, B., Solomon, S., Waddington, D., Thorp, B.,

た後解剖を実施し，大腿骨および脛骨を採取した．大腿Farquharson, C., 2000, Br. Poult. Sci., 41, 141⊖149.

骨および脛骨は長さや太さを測定後，乾燥および灰化処

８）Sanchez-Rodriguez, E., Benavides-Reyes, C., Torres, C.,理を行い，それぞれの処理後重量および灰分含量の測定

Dominguez-Gasca, N., Garcia-Ruiz, A.I., Gonzalez-を行った．その結果，増体，歩様スコアおよび脚骨のサ

Lopez, S., Rodriguez-Navarro, A.B., 2019, Poult. Sci.,

イズに有意差は認められなかったものの，米焼酎粕の給98, 5215⊖5225.

与により脚骨の乾燥後重量および灰化後重量の有意な増

９）Lynch, M., Thorp, B.H., Whitehead, T.C., 1992, Avian
Pathol., 21（2）, 275⊖285.

加が認められた．一方，灰分含量に差は認められなかった．これらのことから，ブロイラー初生ひなへの米焼酎10）Farquharson, C., Jefferies, D., 2000, Poult. Sci., 79, 994⊖
1004.

粕の給与により，脚骨の石灰化の程度に差はないものの，
結晶構造化などの質的な差が起こっている可能性が示唆

11）林国興 , 2012, 日本暖地畜産学会報 , 55（2）, 101⊖107.

された．

12）鈴木知之，服部育男，田中正仁，神谷裕子，神谷充，
佐藤健次，地下和志，福山満生，板谷真積，西岡俊
一郎，濱本修，2011，九州沖縄農業研究センター報

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─ 20 ─

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東海大農紀要 39：21－26（2020）

褐毛和種の行動特性解明

市場における褐毛和種の従順性と対人反応性に関する行動学的研究
今井早希 ・関口瑠璃賀 ・松本大和 ・樫村１

１

１

敦 ・稲永敏明 ・森友靖生
１

１

１

Behavioral analysis handling and response to human in Japanese Blackand Brown cattle at the livestock market.
Saki IMAI, Rurika SEKIGUCHI, Kazuhiro MATSUMOTO, Atsushi KASHIMURA,TOSHIAKI INENAGA, Yasuo MORITOMO（Received 28 November 2019; accepted 20 January 2020）
Abstract
Cattle behavioral traits during handling and response for human are important from human safety and farm efficiency.
Excitable temperament in cattle has generally adverse effects on handling efﬁciency and production. Some studies showed thatthe relationship of handling temperament with growth rate, carcass weights and feed efﬁciency. The objective of this study wasto assess temperament of Japanese Brown cattle（Brown）that have been calm temperament and handling ease compered toJapanese Black cattle（Black）. Cattle behavior was evaluated as score on（1）human handling for trading and（2）response tohuman in pen at livestock market.（1）Behavioral trait during handling was showed Brown assessed Score 1（calm）was
higher with 50.1% than Black 33.2% from front-view position（***P<0.001）. Score 4 and 5（excitable）was not signiﬁcantdifference between Brown and Black. Similar results were obtained the assessment from exist-view position. Moreover, breed
difference was detected in Brown that 2 of 8 breeds showed lower score average during handling.（2）Score response to humanapproach in pen showed that 75 of 239 Brown assessed score 1（Snifﬁng and Licking human hands）was signiﬁcantly morethan 44 of 240 Black. Number of cattle showed ﬂight distance from human as score 4 was 26 of 239 Brown less than 46 of 240
Black. We determine part of temperament of Brown showed that behavioral trait was calm and tame on both assessmentscompered Black in livestock market.

緒

（１，2）
．近年，ウシにおけるこれらの気質評価が管理

言における効率性だけでなく経済形質や生理機能へも影響

野生動物を家畜化するにあたり経済形質と共に重要視を 及 ぼ す 可 能 性 が 示 唆 さ れ て い る． 肉 牛 に お い て，されてきた形質の一つに行動が挙げられる．人に逆らう

シュート内で興奮性の高い行動を示す牛は体重が低い傾ことなく扱いやすい形質や人を怖がることがないといっ

向にあることや（3），Bos indicus 及び Bos taurus いずれ

た形質は現在の畜産現場においても安全性・効率性に関においても成長率が低いことが複数の研究により報告さわる要素として位置付けられている．特に，畜産業の高れている（4，5，6）．また，シュートから出る速度は枝齢化や新規就農者が増加する日本において家畜の中でも肉重量や飼養効率と相関を示すとの報告がある（7，8）．

大型なウシを扱う現場では重要視されている．一方，攻これらのウシの気質は遺伝形質であることが Bos indicus

撃性が高いウシは体重測定や移動，分娩時における人の及び Bos taurus において報告されており（9，10），アミ

介入など日常的な管理の際に妨げとなり牧場運営にとっン類の合成に関わるチロシンヒドロキシラーゼおよびてマイナスの要因となりうる．一般的にウシの気質の評

ドーパミンβヒドロキシラーゼの SNP が気質の違いへ

価方法には逃避速度や時間の計測やシュート内に閉じ込

影響を及ぼす可能性が示唆されている（11）．しかし，められた際の反応をスコア化する方法が用いられている

これらの研究に用いられている品種はアンガス，シャロ

１

東海大学農学部応用動物科学科

連絡先：今井早希

e-mail: imais@tsc.u-tokai.ac.jp
─ 21 ─

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今井早希・関口瑠璃賀・松本大和・樫村敦・稲永敏明・森友靖生
レー，ネロールなどが中心であり和牛に関する報告は少と静止時（Fig. 1の2），およびセリ後直線経路におけるない．日本の食肉用和牛で一般的にも広く知られている

歩行時（Fig. 1の3）とした．セリ中における誘導時の反品種は黒毛和種であり，和牛全体の90％以上を占めてい応を５段階の基準（５点：激しい動きを示し，保持が困る．一方，熊本県や高知県を中心に生産されている褐毛難；４点：頭と尾の連続的な動きを示し，保持がやや困

和種は適度な霜降りが入る赤身肉生産に特化した品種と難；３点：頭と尾が頻繁に動き，誘導に逆らうことがあして近年需要が高まりつつある．褐毛和種の特徴は体格

る；２点：頭と尾が時折動くが誘導に従う；１点：全くが大きく飼料効率が良い，耐暑性耐寒性に優れており放ためらいがなく誘導に従う）に従ってスコア化した

牧飼養に適する，耐病性が高い，温厚で扱いやすいなど（Table. 1）．誘導時の扱いやすさの評価基準は先行研究が挙げられる．しかし，これら褐毛和種に関する形質はを基に作成した（12）．解析は目視またはビデオ記録に飼育者の経験的および感覚的な意見によるところが大きより各品種および血統による扱いやすさの違いを評価しく，実際に研究報告例は少ない．特に，気質に関する科た．

学的根拠は限定的であり科学的根拠に乏しい．先述した

対人反応試験ように，ウシの気質は成長率，枝肉重量などの形質との人への親和性を定量化するため対人反応性試験を行っ関連性が示唆されていることから生産面において効率的た．柵内に繋留されているウシの前方から人が接近し，な選抜育種の指標のひとつとして利用できる可能性があ

ゆっくり手を鼻鏡へ近づけ３秒間その位置に手を固定しる．本研究ではウシの日齢及び試験環境条件が統一できた．この時のウシの反応を４段階の基準（４点：非常にることから，家畜市場に出展された褐毛和種と黒毛和種高い反応を示す（激しく逃避，ロープが強く張る）；３

を対象とし，せり中の誘導時における扱いやすさ及び人

点：やや反応する（後退りまたは顔を背ける）；２点：が近づいた際に示す行動に焦点を絞り，行動をスコア化

反応しない（動かない，顔を背けない）；１点：自発的し品種間または血統間で比較検討した．

に接近する（匂いを嗅ぐ，舐める）に従ってスコア化した（Table. 1）．解析は目視またはビデオ記録をもとに各品種および血統による行動を評価した．

材料方法

Table 1．Scoring method on cattle behavior during handling at livestock
market and in the interpersonal response test.

材料
熊本県菊池郡大津町所在の熊本県家畜市場にて2018年

Score

Handling

Response to human1

No resistance

Active approach
Sniffing and Licking

2Move head and tail, occasionally
Easy handlingNo response

3

Move head and tail, frequently
Difficulties in handling

Step back, Turn away

4

Move head and tail, continuously
More difficulties in handling

Avoidance response

5

Resistance, Handler can't keep–

５月～10月にかけて試験を実施した．供試牛は市場に出展された215～394日齢の褐毛和種832頭，224～355日齢の黒毛和種776頭を対象とした．供試牛の性別は去勢，雄および雌を用いた．
行動試験
誘導時の扱いやすさ（従順性の評価試験）
セリ中，全てのウシは人の誘導に従い同じ順路を移動してゆく（Fig. 1）．出展されたウシは１から２へロープを引かれながら移動し，２で人の誘導に従って周回した
後に静止する．調査実施場所はセリ中正面における周回

図表

統計解析
上記２種類の行動試験においてスコア付けされたウシの割合はカイ二乗検定により統計解析を行った．黒毛和132

種および褐毛和種内における性差に基づく比較は twoway ANOVA with Tukey-Kramer post hoc test を用いた．また， 系 統 に 基 づ く 比 較 は one-way ANOVA with TukeyKramer post hoc test を用いて統計解析した．いずれも，

Livestock
Buyer

Fig. 1*：p < 0.05，**：p< 0.01，***：p< 0.001とした．

Moving route of cattle for trading and observation

Fig.positions
1. Movingrouteat the livestock
market.of cattle for trading and observation positions atthe─ 22 ─

livestock market.
(A)
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22Japanese
black (n=536)
BLACK(n=536)2020/03/16

19:49:48

褐毛和種の行動特性解明た（**p < 0.01）．スコア３では褐毛和種11.3%，黒毛和

結果および考察種12.9% とほぼ同程度の個体割合を示し品種間に有意差は認められなかった．スコア４および５と評価されたウ

誘導時の扱いやすさ（従順性の評価）
セリ中正面における行動解析の結果（Fig. 2⊖A），褐

シは両品種間で極めて少なく，褐毛和種0.5%，黒毛和

毛和種ではスコア１と評価された頭数は全体の50% を種1.7% であり，有意な差は認められなかった．以上の占めており，黒毛和種のスコア１と評価された割合

ことから，従順性の指標とした誘導時の扱いやすさにお33.2% と比較して有意に高かった（***p < 0.001）．一方，

いて，特に，スコア１と評価された個体数は褐毛和種全

スコア２と評価された褐毛和種は36.9% であったが黒毛頭のうち約半数と最も多い割合を占めた．スコアが高く

和種は44.0% と，黒毛和種が有意に高い割合を占めた

図表
なるに従い頭数割合が減少してゆく傾向が認められた．

（*p < 0.05）． 同 様 に， ス コ ア ３ に お い て も 褐 毛 和 種

一方，黒毛和種はスコア２の頭数割合が最も多く，褐毛

11.1% に対し黒毛和種21.5% と黒毛和種が有意に高い割和種と比較するとピークの違いが検出された．この傾向

合を占める結果が得られた（***p < 0.001）．スコア４おは出口の直線通路における誘導時においても同様の結果

よび５と評価されたウシの割合は褐毛和種1.9%，黒毛が得られた．品種間および性別によるスコアへの影響を

和種1.3% と，両品種共に極めて少なく，品種間に有意検討した結果，品種と性差における交互作用の有意差はLivestock
な差は認められなかった．

認められなかったが，品種間差においては有意差が認め

1

3

2

Buyer

出口における直線経路の誘導における結果は（Fig. 2⊖られた（***p < 0.001，Fig. 3）．さらに，各品種内におB），スコア１と評価された褐毛和種の割合は46.9% に対ける系統間比較を行った結果，黒毛和種の系統間では有し黒毛和種では34.7%
Fig. 1.と，正面の周回時と同様に褐毛和Moving route of cattle for 意差は認められなかったが，褐毛和種では８系統のうちtrading and observation positions at
種で有意に高い割合を示した（***p < 0.001）．一方で，２系統（K 及び M 系統）は他の系統よりスコア平均がthe
スコア２と評価されたウシの割合は黒毛和種50.7%，褐

有意に低く，K 系統と M 系統の間においても有意な差

毛和種41.3% であり，黒毛和種が有意に高い割合を占めが認められた（スコア平均1.30±0.98 vs. スコア平均1.85

livestock market.

(A)
Japanese
black (n=536)
BLACK(n=536)Percentage (%)

BROWN(n=593)
Japanese
black (n=593)

Score

(B)

Percentage (%)

BLACK(n=536)
Japanese
black (n=536)
BROWN
Japanese(n=593)black (n=593)

Score

Fig. 2

Score on cattle behavior during handling at the livestock market. The distribution of score on behavioral

Fig. 2.assessment
Scorefromonfront-view
cattlebehavior
handling
at**P<0.01,
the livestock
market.
（A）andfrom exit-viewduring（B）. Chi-square
test, *P<0.05,***P<0.001.
The distribution of score ─on23 ─
behavioral assessment from front-view(A)and from exit-view (B).
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23

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19:49:48

今井早希・関口瑠璃賀・松本大和・樫村敦・稲永敏明・森友靖生
(B)

Score

Score

(A)

Male・

FemaleCastration

Japanese black

Fig. 3

Male・

Male・

FemaleFemaleCastration

Castration

Japanese black

Japanese brown

Male・

FemaleCastration

Japanese brownSex differences in the behavioral response of cattle during handling from front-view（A）and from exit-view（B）.
Two-way ANOVA with Tukey-Kramer post hoc analysis, ***P < 0.001.
Tukey-Kramer post hoc analysis, ***P < 0.001.

Fig. 3. Sex differences in the behavioral response of cattle during±0.07，** p < 0.01，Table. 2）．品種改良の歴史が古い

0.1）のサンプルを褐毛和種内の他系統または黒毛和種

handling
イヌにおいて行動特性に関する研究が盛んに行われておと比較することで気質に関連する遺伝的要因の解明が期

り，気質に関連する因子としてドーパミン受容体 DRD4待できる．以上の結果から，黒毛和種と褐毛和種におけやセロトニン受容体 5⊖HTR1B などの特定配列の繰り返る従順性には品種間差が存在し，褐毛和種は黒毛和種よし数の違いや SNP が挙げられているため（13，14），特り誘導時に扱いやすい傾向が強いことが明らかとなった．

にスコアの低い個体が多い K 系統（平均スコア1.3±

また，褐毛和種では系統間にも違いが認められたことかfrom front-view (A) and from exit-view (B).

Number of cattle

Table 2．The strain differences of livestock handling in Japanese blackand Japanese brown cattle from front-view（A）and from exitview（B）. Different letters indicate signiﬁcant differences from
One-way ANOVA with Tukey-Kramer post hoc test.
（A）

Japanese（N）black

ら誘導時の扱いやすさには遺伝的背景が影響を及ぼす可能性が示唆された．
Japanese black (n=240)
対人反応性試験

Japanesebrown (n=239)
BROWN (n=239)

対人反応テストにおけるスコアごとの頭数を比較した結果（Fig. 4），スコア 1 と評価された褐毛和種は239頭

24Japanese
Score
（N）
brown
2.00 ± 0.18
J32 1.84 ± 0.15

25

1.84 ± 0.16K30

1.73 ± 0.15

31

2.00 ± 0.14

L38

1.71 ± 0.13

D82

2.02 ± 0.08

M

110

1.78 ± 0.08E27

1.70 ± 0.14

L65

1.51 ± 0.07

毛和種92頭（**p < 0.01），スコア４では褐毛和種24頭，黒毛和種46頭（**p < 0.01）と，黒毛和種の頭数が有意

A
B
C

F
G
H
I

Score

中75頭に対し黒毛和種は240頭中44頭であり，褐毛和種が有意に高い割合を示した（**p < 0.001）．スコア２においても褐毛和種81頭，黒毛和種58頭であり（*p < 0.05），
同様の結果が得られた．スコア３では褐毛和種59頭，黒74

1.81 ± 0.09

F

26

1.81 ± 0.20Score

24

2.17 ± 0.16

G27

1.70 ± 0.14

Fig.
4. The21 2.00 ± 0.17

distributionofH
176 1.61 ± 0.06

34–

1.94 ± 1.12–

interpersonal response–に多い結果が得られた．褐毛和種ではスコア１および２

score

on

cattlebehavioroftheと評価された個体が同程度で最も多い一方で，黒毛和種
ではスコア３と評価された頭数が最も多く，スコアの偏りにおいて品種間に違いが認められた．対人反応性試験

（B）

test.
Japanese
Score
（N）
black

において褐毛和種は黒毛和種比べ有意に低いスコアを示

A

24

Japanese
Score
（N）
brown
ab
1.71 ± 0.15
J32 1.59 ± 0.13

B25

2.12 ± 0.20

K30 1.30 ± 0.10b

いを嗅ぐまたは舐める個体が多く，逃避行動を示す個体C311.71 ± 0.12

L

38 1.61 ± 0.10abは黒毛和種と比較し少ない傾向にあり，人への親和性に

110 1.85 ± 0.07

a65 1.54 ± 0.07

ab

本研究では，ウシの従順性および人への親和性に焦点

26 1.77 ± 0.14

abを絞り，行動学的側面から品種間または系統間差を多角

27 1.63 ± 0.14

ab

的に比較検討した．両試験において褐毛和種は黒毛和種

abと比べ低いスコアを示す個体割合が有意に多い結果が得

D
E
F
G

82
27
74
24

1.79 ± 0.08
1.78 ± 0.12
1.81 ± 0.88
1.625 ± 0.13

M
L
F
G

H

21

2.00 ± 0.14

H

176 1.69 ± 0.06

I34

1.71 ± 0.12

–

–

–

したことから，褐毛和種は人が接近した際には接近し匂おいても品種間差があることが示唆された．

られ，ウシにおけるこれらの形質には品種間差，系統間─ 24 ─

p21-26 imai.indd

24

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Fig. 3. Sex differences in the behavioral response of cattle during
handlingfrom front-view (A) and from exit-view (B).
褐毛和種の行動特性解明
Japanese black (n=240)

Number of cattle

Japanesebrown (n=239)
BROWN (n=239)

Score

Fig.

4.

Fig. 4The

The distribution of score on cattle behavior of the interpersonal response test.
distributionof **P<0.01,
score
on cattle behavior
Chi-square test, *P<0.05,***P<0.001.

interpersonal response

of

the

差があることが示唆された．本研究で用いた和牛と同様維持されていることから，褐毛和種の放牧生産体系は持test.
の Bos taurus であるアンガス，ジャーマン，シンメン

続可能な肉生産においても期待されている．さらに，本タールなど他の品種を用いた気質に関する研究において研究において，褐毛和種は従順性や人への親和性が高いも品種間差が報告されているが，必ずしも一貫した結果形質を有することが明らかとなり，畜産現場における安が得られているわけではない（15，16，17）．本試験に全性・生産効率における育種選抜においても有用な品種

おいて対象としたウシは様々な牧場から出展されており，であることが示唆された．しかし，同じ和牛である褐毛

飼養管理方法が多様で環境要因が大きく異なる．げっ歯

和種においては黒毛和種と比較して認知度や消費率が極類やヒトにおいて幼少期の環境要因が成長後の行動へ継めて少なく，18カ月齢以上の繁殖雌牛頭数は平成元年に続的な影響を及ぼすことから（18），環境要因がウシのは３万頭以上いたものの，平成29年において6,647頭ま行動へ大きく影響を及ぼす可能性が高い．ウシは遺伝的で減少している（平成 30 年度熊本県畜産統計）．今後，背景の多様性が高いことを考慮すると，今後，さらにサ

褐毛和種の特性を科学的に明らかにすることで付加価値

ンプル数を収集する必要がある．さらに，げっ歯類ではを高め，日本の食肉用和牛の持続的生産の選択肢の多様

早期離乳や単飼が攻撃性や不安様行動，コルチコステロ化に貢献してゆきたい．

ン分泌量へ影響を及ぼすことから（19，20），ウシにおいても環境要因を考慮した行動解析が必要である．ウシ

要が出展されるまでに晒された環境要因（人工保育の経験，

約

離乳時期，放牧経験の有無，群飼または単飼など）に基動物の気質は家畜管理における生産効率の観点から経づき行動を比較検討することで，従順性や人への親和性

済形質と共に重要視されてきた．ウシは大型家畜であるといった形質において有用な環境因子を検出し現場へ還ため従順性（扱いやすさ）や人への親和性は安全性や生元してゆきたい．

産効率へ影響を及ぼす．近年，ウシの気質は成長率や飼現在，日本における肉用牛の飼養頭数の約97 % は黒

料効率と相関することが報告されているが和牛における毛和種が占めており，霜降り肉生産に適した品種として報告例は少ない．熊本県で飼養されている褐毛和種は体肥育されている．霜降り肉は高値で取引されるが，その格が大きく気質が温厚で扱いやすいと言われているが，生産は輸入した濃厚飼料が中心であるため諸外国の気候

生産者の経験によるところが大きく飼養環境も均一でな

変動や経済状況の影響を受けやすい脆弱性を孕んだ生産

いため詳細は不明である．そこで，本研究では褐毛和種体系が課題となっている．さらに，現代のヘルシー志向の気質を明らかにすることを目的とし，家畜市場に出展が高まる社会的背景を踏まえると，霜降り生産に偏ったされたウシを対象として行動学的評価を行った．気質の生産土壌は肉の多様化する需要に答えることが困難であ指標としてセリ中の人の誘導に対する従いやすさ及び人る．海外の気候変動や社会情勢に左右されにくい価格おが接近した際の反応（対人反応性試験）をスコアに基づよび生産基盤においても持続的な牛肉生産には国内飼料き評価した．

を基礎とした生産体系が求められる．熊本系褐毛和種はセリ正面と出口の２視点から誘導時の扱いやすさを評

阿蘇地方において伝統的な放牧を中心とした飼養形態で価した結果，正面におけるスコア１（誘導に従い扱いや─ 25 ─

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今井早希・関口瑠璃賀・松本大和・樫村敦・稲永敏明・森友靖生
Roeche R., 2011, J. Anim. Sci. 89, 4239⊖4248.

すい）と評価された個体は黒毛和種33.2% に対し褐毛和
種50.1% と，褐毛和種で有意に高い割合を示した．出口

７）Nkrumah J. D., Crews D. H. Jr., Basarab J. A., Price M.

においてもスコア１の割合は黒毛和種34.7%，褐毛和種

A., Okine E. K., Wang, Z., Li C. and Moore S. S., 2007,

46.9% と品種間で有意な差が認められた．さらに，褐毛

J. Anim. Sci., 85, 2382⊖2390.

和種８系統のうち２系統は他系統比較し平均スコアが有８）Cafe L. M., Robinson D. L., Ferguson D. M., McIntyre

意に低く扱いやすい個体が多い結果から，褐毛和種の扱

B. L., Geesink G. H. and Greenwood P. L., 2011, J.

いやすさには遺伝的偏りが存在する可能性が示唆された．

Anim. Sci., 89, 1452⊖1465.

また，対人反応性試験においても人の接近に対し匂いを

９）Beckman D, Speidel S, Brigham B, Garrick D. and Enns

嗅ぐまたは手を舐める行動を示しスコア１と評価された

R., 2005, Proc. Western Section Am. Soc. Anim. Sci., 56,

割合を比較したところ，黒毛和種44/240頭に対し褐毛和109⊖111.

種75/239頭と，褐毛和種で有意に高い結果が得られた．

10）Schmidt S. E., Neuendorff D. A., Riley D. G., Vann R. C.,

以上の結果から，ウシの気質，特に，誘導時の扱いやすWillard S. T., Welsh T. H. and Rendel R. D., 2014, J.

さ及びヒトの接近に対する反応においては品種間差が存

Anim. Sci., 92, 3082⊖3087.

在し，黒毛和種と比較すると褐毛和種は扱いやすく人へ

11）Lourenco-Jaramillo D. L., Sifuentes-Rincón A. M.,の親和性が高い行動形質を有することが明らかとなった．

Parra-Bracamonte G. M., de la Rosa-Reyna X. F. SeguraCebrera A., and Arellano-Vera W., 2012, Genet. Mol.

謝Biol., 35, 435⊖440.

辞12）Takeda K., Uchida H. and Inoue K., 2017, Animal
Science Journal, 88, 10, 1475-1481.

本研究を実施するにあたり，供試牛の調査にご協力いただいた熊本県家畜市場の皆様および生産者の皆様へ感

13）Niimi Y., Innoue-Murayama M., Kato K., Matsuura N.,

謝いたします．本研究の一部は東海大学総合農学研究所

Murayama Y., Ito S., Momoi Y., Konno K. and Iwasaki

プロジェクト研究の資金援助により実施されたものです．

T., 2001, J. Hered. 92. 5. 433-435.
14）Masuda K., Hashizume C. and Mori Y. 2004, J. Vete.
Med. Sci., 66, 8, 965-972.

引用文献15）Gauly M., Mathiak H., Hoffmann K., Kraus M. andErhardt, G., 2001, Appl. Anim. Behav. Sci., 74, 109⊖119.

１）Burrow H. M., Seifert G. W. and Corbet N. J., 1988,

16）Hoppe S., Brandt H. R., Konig S., Erhardt G. and Gauly

Proc. Aust. Soc. Anim. Prod. 17, 154⊖157.

M., 2010, J. Anim. Sci., 88, 1982⊖1989.

２）Grandin T., 1993, Appl. Anim. Behav. Sci. 36, 1⊖9３）Reinhardt C. D., Busby W. D. and Corah L. R., 2009, J.

17）Boissy A., Fisher A. D., Bouix J., Hinch G. N. and Le
Neindre P., 2005, Livest. Prod. Sci. 93, 23⊖32.

Anim. Sci. 87, 3030⊖3042.
４）Sant'Anna A. C., Paranhos da Costa M. J. R., Baldi F.,18）Nishi M., Horii-Hayashi N. and Sasagawa T., 2014,
Front. Neurosci., 17, 8, 166.

Rueda P. M., and Albuquerque L. G., 2012, J. Anim. Sci.

1 9 ） K i k u s u i T. , I c h i k a w a S . a n d M o g i Y. , 2 0 0 9 ,90, 3427⊖3432.

Psychoneuroendocrinology, 34, 762⊖72.

５）Müller R. and von Keyserlingk M. A. G., 2006, Appl.

20）Ferrari P.F., Palanza P., Parmigiani S. and Rodgers R.J.,

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６）Turner S. P., Navajas E. A., Hyslop J. J., Ross D. W.,

1998, Physiology & Behavior, 63, 5, 821⊖827.

Richardson R. I. and Prieto N., Bell M., Jack M.C. and─ 26 ─

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紀

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委 員 長
委
員

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員
本
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田

会
大
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隆
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和
児
大
也

EDITORIAL COMMITTEE OF PROCEEDINGS
Chairman

Hirokazu Matsumoto

MemberRyuji Nagai
Takahiro Kawanabe
Shinya Masuda

Published by
School of Agriculture, Tokai University
9⊖1⊖1 Toroku, Higashi-ku, Kumamoto-shi, Kumamoto,862⊖8652, Japan

東 海 大 学 紀 要
第39巻

農 学 部

2 0 2 02020年３月18日発行
発 行 所

東海大学農学部〒862－8652
電話

印 刷 所

096
（382）
－1141
（代）

有限会社ベストプロセス〒861－8038
電話

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熊本県熊本市東区渡鹿９－１－１

熊本県熊本市東区長嶺東8丁目13－17

096
（388）
－0889

2020/03/16

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ISSN

東海大学紀要 農学部

PROCEEDINGSOFSCHOOL OF AGRICULTURE
TOKAI UNIVERSITY
Vol. 392 0 2 0東海大学紀要 農学部
第 39 巻2

Gaining an Emic Perspective on Streamed Versus Mixed-level EFL Classes at the Tertiary Level in Japan

2432－7204020…………………………………………………………… Miki Rodriguez-Yagi・Michael J. Rupp……１
Clariﬁcation of origin location of Japanese lawn grass（Zoysia japonica）in Suizenji-joujuen

日本の大学における習熟度別英語クラスに関して学生の捉え方……………………………………… Tomoaki Miyachi・Naruhito Kawamoto・Athushi Morita・
Yoshikazu Hoshi・Yasushi Matsuda・Tatsuro Murata

……8

第三九巻

by Morphological and RAPD analysis approach

マイケル……１

水前寺成趣園のシバ（Zoysia japonica）における移植起源地推定のための形態学的および RAPD 分析によるアプローチ

The weight of leg bones increases by dietary supplementation of rice shochu distillery……………………………宮地伯明 ･ 川本成人 ･ 森田敦士 ･ 星

by-product to broiler chick.
……………………………………………… Toshiaki Inenaga・Hajime Torii・Shinnosuke Ishii・
Tomoka Amase・Rajibu Puradan…………………………………………………………ロドリゲス八木美樹・ラップ

良和 ･ 松田靖 ･ 村田達郎……8

ブロイラー初生ヒナへの米焼酎粕給与により脚骨重量が増加する……16…………………………… 稲永敏明 ･ 鳥居

孟 ･ 石井慎之助 ･ 天瀬智夏 ･ プラダン ラジブ……16

Behavioral analysis handling and response to human in Japanese Black
市場における褐毛和種の従順性と対人反応性に関する行動学的研究

and Brown cattle at the livestock market.

…………………………今井早希・関口瑠璃賀・松本大和・樫村……………………………………… Saki Imai・Rurika Sekiguchi・Kazuhiro Matsumoto・

敦・稲永敏明・森友靖生……21

Atsushi Kashimura・Toshiaki Inenaga・Yasuo Moritomo……21
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