Octet N1 System®

生体分子間相互作用解析システム

Simplifying Progress

Label-free Assays in a Drop
Octet N1 システムは、バイオレイヤー干渉法（ Bio-Layer Interferometry：BLI ）と Dip and Read アッセイによって、生体分子間の相®

互作用をラベルフリーかつリアルタイムに測定・解析が可能なパーソナルアッセイシステムです。手軽にカイネティクス解析、タンパク質の検出・定量、アッセイ開発を行うことを可能にします。
少量サンプル

4 μ L のサンプルで測定が可能です。これまで困難であった微量サンプルの解析、および高価なサンプルのコスト削減を実現します。

メンテナンスフリー

Octet N1 本体にサンプルが触れない測定系のため、®

面倒なメンテナンスおよびセットアップ・シャットダウン作業が不要です。

クルードサンプルの測定

コンパクトサイズ

細胞ライセート、ハイブリドーマ上清、血清などのクルードなサンプルをダイレクトに測定可能です。

Octet N1 本体は A4 サイズ以下のスペースで設置でき、®

限られたラボスペースを有効に活用することが可能です。

低価格低ランニングコスト

これまで高額であったカイネティクス解析の初期導入コストを抑えることが可能です。

ラベルフリーアッセイのため、ラベリングに必要な試薬と時間を抑えることが可能です。また専用のバイオセンサーはガラスファイバー製で低価格なため、ランニングコストを抑えることが可能です。

原理

バイオレイヤー干渉法（ Bio-LayerInterferometry: BLI ）カイネティクス解析において従来採用されていた SPR 法とは異なる、新しい検出テクノロジーです。

2 バイオセンサー先端の光学的厚みの変化によるスペクトルの波長シフト

13

1.0

反射光

Baseline

AssociationDissociation

リガンドの固相化

ベースライン

アナライトの結合

アナライトの解離

0.8レスポンス（⊿ λ）

干渉波の相対強度

白色光

Loading

0.6

オプティカルレイヤー
センサー表面修飾分子

リガンド（固相化分子）0.4

アナライト（相互作用分子）
夾雑物

0.2

時間（秒）

波長

センサーグラム

1. バイオセンサー上部から白色光を照射し、オプティカルレイヤーからの反射光と、分子が固相化されたレイヤーからの反射光による干渉パターンを各反応ステップで検出します。
2. 先端部分に分子が結合 / 解離した場合、分子が固相化されたレイヤーの光学的な厚みが変化することで、干渉パターンの波長シフト（⊿λ）が生じます。
3. 波長シフトを分子の結合 / 解離（縦軸：レスポンス）としてリアルタイムで計測し、センサーグラムを作成します。

Dip and Read アッセイ

カイネティクス解析において従来採用されていたマイクロ流路アッセイとは異なる、新しい測定方式です。

Drop Holder 内のサンプルにバイオセンサーを直接浸すだけのシンプルな測定法です。

測定方法
バイオセンサーマウント

Drop Holder
Tube Holder
スライダー

1. サンプルアプライ

マイクロピペットでサンプル 4 μ L を
Drop Holder に滴下します。

2. バイオセンサーセット

蓋のバイオセンサーマウントにバイオセンサーを取り付けます。

3. アッセイスタート

蓋 を 閉 め るとバ イオ セン サ ー がDrop Holder に浸かり、測 定 が始まります。

カイネティクス解析では、ベースラインおよび解離のステップでスライダーを動かし、Drop Holder から Tube Holder に切り替えて測定します。

2アプリケーション
カイネティクス解析

リアルタイムに生体分子間の相互作用を測定することにより、アフィニティデータ（K D ）だけではなく、経時的な変化とカイネティクスデータ（K a , K d ）も取得します。同程度のアフィニティを持つ相互作用でも、カイネティクス解析を行うことで全く異なる結合状態として見ることが可能になります。そのため、カイネティクスの違いを見ることは、生体内における分子間相互作用のメカニズムを把握する上で極めて重要です。

細胞培養上清中の特異的抗体のスクリーニングとキャラクタライズ

Streptavidin バイオセンサーにビオチン標識抗原を固相化後、未精製の細胞培養上
清 5 サンプルのスクリーニングを実施しました。最も高い結合活性と遅い off-rate を示したクローン 5（左図：赤）をターゲットに、2 倍の希釈系列でフルカイネティクス解析を実施し、
K a , K d , K D 値を算出しました。

培養クローンのスクリーニング結果（ 5 サンプル）とクローン５のフルカイネティクス解析

タンパク質の定量

夾雑物が多い溶液中において、吸光度測定などの一般的な定量法では特定のタンパ®
ク質の定量は困難です。Octet N1 システムはバイオセンサーを用いて、5-log の幅広いダイナミックレンジ、数μ g/mL の感度、低 %CV の精度で目的タンパク質の濃度定量が可能です。また、ゲル電気泳動、HPLC 、ELISA 等の既存の分析法で数時間かけて得られるデータを短時間で取得できるため、タンパク質発現およびバイオプロセスのモニタリングに有効です。

夾雑物存在下におけるタンパク質の定量

Protein A バイオセンサーを用いて、ウシ血清アルブミン（ BSA ）1 mg/mL 存在下におけるヒト IgG を定量しました。夾雑物の存在比率が高いサンプルにおいても、幅広い濃度で高い直線性が得られました。

タンパク質の検出

わずか一滴のサンプルから、活性タンパク質の有無の検出、未精製サンプル中の特定タンパク質の検出を短時間で行います。リアルタイムに結合曲線を示すことができ、Binding rate を測定することにより、サンプル中のタンパク質発現レベルを迅速にランク付けすることが可能です。

タンパク質の有無の検出と発現ランキング

Anti-GST バイオセンサーを用いて、CD-CHO-DG44 発現培地中での GST タグ融合タンパク質を検出しました。Anti-GST バイオセンサーの持つ特異性と Dip andRead アッセイにより、夾雑物の多い培地中においても特異的な検出、発現量のランク付けをすることができました。

ヒト IgG のリアルタイム結合曲線と検量線（ 4000, 2000, 1000, 500, 300, 100, 30, 10, 3, 1 , 0.5 μ g/mL 、N=3 ）Rank

Binding rate %CV

Sample 11.991

10.8%

Sample 7

1.646

2.4%

Sample 313.73

3.5%

Sample 90.864

3.2%

Sample 110.614

2.2%

Sample 60.230

3.7%

Sample 50.112

0.6%

Sample 120.031

4.3%

Sample 80.015

2.0%

Sample 100.004

4.3%

Sample 40.002

8.9%

Sample 20.000NA

GST タグ融合タンパク質のリアルタイム結合曲線とBinding rate による発現ランキング
12 サンプル、N=3 。左上から右方向に Sample 1 → 3,4 → 6,7 → 9,10 → 12 を表示

アッセイ開発最適な抗体の選定、アッセイ系構築のための至適パラメーターの検討を迅速に行うことが可能です。従来のイムノアッセイ法の開発で数日以上かけて得られるデータを短時間で取得します。

抗原に対するペア抗体の探索

Streptavidin バイオセンサーを用いて、IL-5 に結合するペア抗体（捕捉抗体 2 種類、検出抗体 2 種類）のスクリーニングを実施しました。ステップ 6 で検出抗体の結合の有無を測定することにより、効果的な抗体のペアを容易に決定することができました（左図：青、右図：緑）。また、ステップ 4 で捕捉抗体による IL-5 の結合の有無、ステップ 7で最終的な相対的相互作用の強さも同時に評価することができました。

IL-5 結合ペア抗体のスクリーニング結果
ステップ２でビオチン化補足抗体（ MAB205/MAB405 ）を固相化後、ステップ４で抗原（ 205-IL ）、ステップ６で検出抗体（ BAM6051/AF205 ）の結合を測定。
（ R&D Systems 社 PN ）3

バイオセンサーセレクションガイド

様々なサンプル・研究用途にご使用いただくことができるように、センサー表面修飾分子の異なる多種類のバイオセンサーをご用意しています。
バイオセンサーグレード *

Streptavidin (SA)K

ストレプトアビジン

High Precision Streptavidin (SAX)

K, Q

ストレプトアビジン

High Precision Streptavidin 2.0 (SAX2)

K, Q

ストレプトアビジン

Amine Reactive (AR2G)

K

カルボキシル基

Aminopropylsilane (APS)

K

アミノプロピル基

Ni-NTA (NTA)

K, Q

Anti-Penta-HIS (HIS1K)

K, Q

Anti-HIS (HIS2)

Q

Anti-GST (GST)K, Q

Anti-hIgG Fc Capture (AHC)K

Anti-hIgG Fc Capture (AHC2)

K, Q

Anti-mIgG Fc Capture (AMC)

K

Anti-Human IgG Fc (AHQ)

Q

Anti-Murine IgG Fv (AMQ)

Q

Anti-Human Fab-CH1 (FAB2G)

K, Q

センサー表面修飾

リガンド（結合様式、特徴）
ビオチン化分子（ビオチン - アビジン反応）
ビオチン化分子（ビオチン - アビジン反応、ロット内の高精度管理）
ビオチン化分子（ビオチン - アビジン反応、ロット間の精度管理）
タンパク質、ペプチド、オリゴ（アミンカップリング）

脂質、リポソーム、疎水性タンパク質

ニッケルチャージ Tris-NTA（疎水性および静電的な相互作用）

His タグ付タンパク質

抗 His タグ抗体

His タグ付タンパク質

抗 GST タグ抗体

GST タグ付タンパク質

抗 His タグ抗体

抗ヒト IgG Fc 抗体
抗ヒト IgG Fc 抗体

抗マウス IgG Fc 抗体

His タグ付タンパク質ヒト IgG 、ヒト Fc 融合タンパク質ヒト IgG 、ヒト Fc 融合タンパク質マウス IgG 、マウス Fc 融合タンパク質

抗ヒト IgG Fc 抗体

ヒト IgG 、ヒト Fc 融合タンパク質

抗ヒト Fab-CH1 抗体

ヒト IgG 、Fab 、F(ab')2
ヒトを含む生物種の IgG

抗マウス IgG (Fv) 抗体

Protein A (ProA)

Q

Protein G (ProG)

Q

Protein A

Protein G

Protein L (ProL)

Q

Protein L

マウス IgG 、マウス F(ab')2

ヒトを含む生物種の IgG

K 軽鎖を介した生物種の IgG* K：カイネティクスグレード、Q：定量グレード。各種バイオセンサーは表記グレードでバリデーションが実施されています。
検出原理
測定方式

分子ラベル化BLI

Dip and Read 方式
不要カイネティクス解析（K a , K d ）、解析項目

アフィニティ解析（K D ）、測定タイプ

手動

最大同時測定数

検出可能分子量

解離定数（ KD ）
レンジ
定量レンジ

必要サンプル量
分光器数

測定温度

測定容器フォーマット

ソフトウェア

特異性解析、定量、特性分析

1> 10,000 Da

1 μ M – 0.1 nM（ 10 – 10 M ）-10-6

0.5 – 4000 μ g/mL

（ Protein A Biosensor for hIgG ）4 μ L（ drop holder ）、250 μ L（ microtube ）1

温度制御無し1 drop holder, 1 microtube
Octet N1 software®

サイズ（幅 × 奥行 × 高さ） 15.3 × 22 × 17.4 cm
重量

消費電力

43.3 kg

100 – 240 V, 0.1 – 0.2 A, 8 W（最大 18 W ）ザルトリウス・ジャパン株式会社〒 140-0001 東京都品川区北品川 1-8-11

TEL : 03-6478-5200 FAX : 03-6478-5494
E-mail : hp.info@SARTORIUS.com

https://www.sartorius.com
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Status: 05 | 2021