藻類 Jpn.J.Phyco
l.3
9:37‑42，March10，1
991

兵庫県内の池に発生したヒ力リモ(黄金藻)の観察
大石英明*・矢野 洋柿・伊藤裕之料・中原正展料*神戸市環境保健研究所 (650神戸市中央区港島中町4‑6)
神神戸市水道局水質試験所 (652 神戸市兵庫区禰谷町37‑
1)
to，H.andNakahara，M.1
991.Observ
ation
sonac
hrysophyte Hikarimo"inaOhishi，H.，Yano，H.，I
pondinHyogoP
refecture，Japan.Jpn.J.Phyco
l.3
9:37‑
42.
nJapanusuallyreferredtoasChromulinar
osano
伍iw
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nAnalga Hikarimo"irefecture，Japan. Itwascu¥
turedandexaminedw
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MikiC
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sChromulinarosanoffi
i. Statospores(chrysophyceancysts)werefoundamongt
heclumpedc
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ells.
KeylndexWor
ds: Chromulinarosanoffii‑ChりI
sophyceae‑cyst‑Ochromonasv
ischeri‑palmelloidstage‑
reducedjlagellum.
，PublicHealthResearchl
nstitute0/Kobeαty，Minatozima‑nakamachi4‑6，Chuo‑ku，Kobe，
HideakiOhishi650japan;
HiroshiYano，Hiroyukil
toandM 制， nobuNakahara，Wat宵，QualityLaboratory，KobeCity陥 terworks，Kusutani‑cho37‑1，Hyogo‑ku，Kobe，652japan
Bureauヒカリモは我国では 1913年千葉県竹岡の黄金窟から6日に行った。その時の水質を Table1に示す。試月11915)。その後， 1914

料はひしゃくを用い，池の表面水を 11のガラス瓶に初めて報告されている(三好年長野県下虎岩の横井戸(日比野1915)，1947年長

野県篠井山布施の横井戸(大田1947)， 1947年熊本

県八代高等学校の池(西村1948)より見い出されている。これらの報告ではヒカリモをChromulinarosanojJii(Woronin)Butschli と同定して L、る。

採取した。
2)培 養
1986年 2月26日の試料より本藻をピベット法(舘脇1979) で分離し単種培養を行った。培養は Ur‑l培養液 (KimuraandIshida1985)を 75ml入れた 100ml

著者らは兵庫県三木市の寺院の境内にある池の表面マイヤーフラスコにて行った。培養条件は 100C，白がヒカリモによって黄金色に悔いているとの報告を得

色蛍光灯 900Lux，光周期 8:16(明期:暗期)である。て調査した。このヒカリモを光学顕微鏡及び電子顕微鏡により観察した結果，本藻を Chromulina属に所属させることは適当でないとの結論に達した。また，浮遊する群体，及び大きさの異なった 2つのタイプのシストを観察したので報告する。

3)観 察
光学顕微鏡 (LM)観察は生きた試料と固定試料(ギムザ染色)の両方を用いた。
透過型電子顕微鏡 (TEM)観察試料作成法は以下のとおりである。コロジオン・カーボン膜張りグりッドに試料を滴下し，オスミュウム酸蒸気中で 1時間固定材料と方法した。次に自然乾燥した後，真空蒸着装置内で 20度の角度で白金パラジュウム合金を蒸着した。樹脂包埋は1) 調査場所及び調査方法

試料を 40C において， 2 %グルタールアルデヒド・池は兵庫県三木市志染町にある伽耶院の境内にあ0.
2M ，pH7.
4)により 30分間固定
カコジル酸緩衝液 (り，雑木林のなだらかな斜面の下に位置し，寺の建造し，同じ緩衝液で洗浄後，さらに 2 %オスミュウム酸物と木々に固まれている。池の大きさは 4X5m，水・カコジル酸緩衝液 (0.
2M ，pH7.4)により 1時間固深約 1mである。調査は池の表面にヒカリモが大増定した。次に緩衝液で洗浄後 50‑100%エタノール・殖し，黄金色を呈していた 1986年 2月26日
， 198
7年 4

シリーズにより脱水し， Spurr(1969)の樹脂に包埋し38Ohishi，H.，Yano，H.，Ito，H.andNakahara，M.
Table1. ChemicaJquaJityo
fwaterofthepond.

Watertemperature
pHElectri
cconductivity
COD(Mn)
NH.‑N
N0‑N
2N0N
3‑
Total‑
NTotal‑PTotalhardnessAlkaJinity(asCaC03)ChlorophyllaFeb.2
6，1986Apr.1
6，1
987。
C

6.
49.
2μS/cm

5.
9
64.
1

mg/
l
mg/
lmg/l/
lmg/
lmg/lmg
mg/
l
mg/
l
μg/
l

5.
92.
8

60.
0
3.
30.
000.
0000.
1
00.
0
0
20.
0
20.
3
10.
1
80.
1
40.
7
10.
0
7
45.
4

48.
3.
0
14.
242.

7.
2た。切片作成は Porter‑BlumMT‑2を用い，切片は酢出された。このことにより，浮遊相群体の中には鞭毛酸ウラニールと酢酸鉛 (Reynolds1963)による 2重染を持った遊泳細胞が存在することがわかる。浮遊相群・1200EXにて行った。
色を施した。 TEM観察は ]EM

走査型電子顕微鏡 (SEM)による浮遊相の群体及び体中にはシスト(スタトスポア)も観察された (Fig.
4)。シストは球形で，直径 5.1~6.2 f1m ， 表面は滑らか

シストの観察法は以下のとおりである。小さく切ったであり，直径1. 0~ 1. 2μm ，高さ 0.3μm の襟に固まれ

カパーグラスに試料を滴下し，自然乾燥をして水分がた直径 0.3μmの孔を持つ (Fig.5)。群体をカパーグラ無くなる頃にオスミュウム酸蒸気中で 1時間固定し，4個含んだ群体がス上で乾固させると，シストを最大 1乾燥後金蒸着を施した。遊泳細胞の観察は樹脂包埋試観察された (Fig.6)。

料と同様に固定し，脱水した後，酢酸イソアミルに置2) 遊泳相換して臨界点乾燥し，次に金蒸着を施した。 SEM観遊泳細胞を L Mにより観察すると細胞は球形もし察は ]SM・35CFにて行った。

くは卵形をしており，長さ 3~7μm ，幅 3~6μm であった。細胞内には 1個の黄褐色のカップ状ないし帯状結 果の色素体が存在する。限点は観察されなかった (
Fig.
7)
。

天然試料及び培養試料から 3つの異なる細胞相が観察された。
1)浮遊相

また，体長の 1~1.5倍の長さの長鞭毛だけが観察されたが，ギムザ染色を施すと約 1μm長の短鞭毛がFig.8)
0 TEM観察によると，長鞭毛は羽観察された (

光沢を発する天然試料をスライドグラスに滴下し，mastigonemes) は太い軸状鞭毛で，マスティゴネマ (カパーグラスを掛けないで観察を行うと，部分的に黄部と先端部から成り ，Chromulinaplacentula と同様に先褐色を帯びた大小の集塊が見られた。これらは 1~約

端部は 1本ないし 2本に分かれている (Belcher and

35個の浮遊細胞が疎水性の柄〔日比野 (1915) による

SwaJe 1967)。また，基部より 0.2μm付近で折れ曲が小管状体〕を持った袋状の構造に包まれて水面上に浮ることが多く，このことはマスティゴネマが遊しており，光を強く屈折するため気泡と同様に周縁Ochromonas や褐藻類の遊走細胞のそれと同様に基部が黒く見える。球形をした単細胞性のもので直径部，シャフト，先端の細毛という 3つの部分からなっ5~7.5μm ，多細胞性で不定形の群体は 30X90μm に969，1971)。短鞭ていることを示唆している (Bouck1達する。柄は単細胞性のものでは 1本，不定形の群体

毛は中央部に膨潤部を持ち，長さは1.2~1. 4μm で，には最大20本その周辺部に存在する (Fig.1)。群体をマスティゴネマなどの付属物はない (Fig.9)。切片観SEM 観察すると柄の長さは 0.8~ 1. 8 f1m，先端部はラ察より短鞭毛の膨潤部の中に電子密度の高い領域がみッパ状に広がっている (Figs.2，3)。ヵパーグラスを掛Fig.10)。また，この領域は蛍光顕微鏡によっられた (けると，浮遊相群体は壊れ，鞭毛を持つ遊泳細胞が放ても蛍光を発するのが観察された。 Kawai(1988)によObservationson Hikarimo" (Chrysophyc巴a巴)

39Figs.1‑6 Hikarimo"attfoatings
tage.F
ig.1.Clumpedcels(L M)
.F
ig.
2.
Clumpedcels(SEM).Fig
3.Detalio
faprojection(SEM). Fig.4.A cyst(arrow)amongt
hec
1umpedcels(SEM). Fig.5.A cyst(SE M)
Fig.6.Smearpreparationof1
4cystsa
mongc
1umpe
dcels(LM).(Scalebar
s:10μmf
orFigs.1，2，4，6;1pmforFigs.3，5)

れば ，この蛍光物質は黄金藻や褐藻類の限点を持つ遊(Fig.l1)。

走細胞の短鞭毛に存在すると いわれている。本藻で色素体はカード ルラメラをもち，カップ状で，そのは，限点がな L、が11t光が見 られ， この点で例外的な存

内部の窪みに核が配置している。そして核と築緑体は在である。 SEM 観察によ っても ，長線!毛が生じる部

核の外 1英と葉緑体 ERによってつながっている。ピレ分の横から短鞭毛が突き 出ているのが確認された

ノイドは核に面して位置し，チラコイドの賞入がなく

40O hishi，H.
，Yano，H.
，Ito，H.and Nakahara，M.

⑥Figs.7‑13Hikarimo"atmoti
Jestage. Fig.7.A motJ
ieceJ(LM). Fig.8.A moti
JeceJstai
nedw凶Giemsa(LM). Fi
g.9.LonglfageJ
Jumbeari咋 typicaJmastigonemesi
ntworows，
andshortoneJacki
咋 suchhai
rgeJum(SF)wit
heJectron‑densesubstance. Fig.1
1.TwomotJ
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ges(TEM). Fig.10.Shor
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g.12.Secti
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h凶Jo印r
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比cle凶u只s;P，p巧
yreno凶 PR，Pμen
刷μJpas叫t凶lda
剖J閃1e
♂
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旧on. Fig.は13.A vesiclec
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ngmastigonemes(TEM).(ScaJ
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:
10μmr
orFi
gs. 7，8; 1μml
orFigs.9‑13)

Obs
er
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ionson Hikarimo"(Chrysophyceae)

41"atpalme
loi
dstage. F
ig.14.Palme
lloidcelsi
nculture(L M).Fi
g.15.SectionofFigs.14‑
17 Hikarimocelsa
tpa
lmeloidstage(TEM). Fig.16.A cysl(arrow)andcelsa
tpa
lmeloidstage(LM).Fig.17.A cyst(SE M).(Scalebar
s:10μm forFigs.14，16; 1f.
lm forFigs.15，17)て，葉緑体膜が貫入してチュ ーブ;伏の窪みを作 ってい胞が球形の膜に包まれたノ勺レメロイドを形成 して お りる。その 中には電子密度の高 L、所が観察される。ピレ(Figs.14，1 5) ，大 きさは直径 1O ~ 48μm で あ っ た。 こノイドと核の間 (periplaslidalregion) の中に小胞が多れらは水面に浮遊して黄金色を呈するが，柄がなく，く観察される。コソレジ体は核の近くに位置し，数個 の光を強 く屈折しな い点で浮遊相 と異なる。また，パノレ

ミトコソ ドリア断面が観察 される (Fig.12)。 また，マメロイドより遊泳細胞が外の肢を破 って泳ぎ 出すのがスティゴ不マを 内在し た小胞がみられる (Fig.13)。

観察 された。 20日後には培養液の水面が一様 に賞褐色3)パノレメロイド相を呈した。 L Mにより観察するとパノレメロイドと共に

l現し， 天然、では観パ
ノレメロイド相の細胞は熔養で l:l:

球形をした直径 8 ~ 10μm のシストが混在していた

察されなか った。 培養を始めて 10日後にはヒカりそは(Fig. 16)。このシ ス トは ，SEM観察によると表蘭 は増殖し培養液の水面が微かに黄色を塁した。 L Mに滑 らかで，直径 1. 8 ~ 2.3μ m ， 高 さ 0 .4 ~ 0.9μm の 襟でより 観察すると 2， 4， 8， 16，32'(図の鞭毛を持つ紺￨閤まれた直径 0.
8μm の孔を持つ (Fig.1i)。

.，Yano，H.，Ito，H.andNakahara，M.
Ohishi，H42考察文

水面で黄金色に光る黄金藻は C
hromulinarosano.
fiiとOchromonasuischeriが知られている。これらの藻類の分類は混乱しており，次のような歴史を持っている。
Chromulinarosano.
fiiは Woronin(1880)が Chromゆ紗ton即時間ffiiとして記載した藻を Butschli(1889)が本種に組替えたものである (Huber‑Pestalozzi1941による)。
一方Ochromonas uischeri は， Vischer (1943) がChromothytonrosano.
fiiW oroninの名で短鞭毛を持つと記載した藻を Bourrelly(1957)が本種に組替えたものである。 Starmach (1985) も 2種を別属として取り扱っている。しかし従来 Chromulinarosano.
fiiの学名で呼ばれてきた藻は，観察する過程で短鞭毛の存在が見落とされてきた可能性がある。今回調査した伽耶院内の池のヒカリモは細胞のサイズ，形態その他の点でC
hromulinarosano.
fiiと Ochromonasuischeriの双方の記載によく一致しているが，短鞭毛の存在から O
chromonasuischeriと同定するのが妥当である。

本邦の各地に産するヒカリモは，短鞭毛を欠く遊泳hromulinarosano.
fii(Woronin)細胞が報告されており ，CButschli の名が当てられている(日比野1947，西村

1915，大田1948)。ヒカリモに Chromulina削 ano.
fiiとOchromonasuischeri の 2種が存在するのか，あるいは

L Mでは観察が困難な短鞭毛の存在が見落とされてきたのかを明らかにするために，タイプ種が記載された
hromulina
地方を含む多くの地点、から採集を行い Crosano.
fiiについての再調査を行う必要がある。

浮遊相群体中にみられるシスト，及び培養時にパノレ

献Belcher，J.H. and Swale，E.勘M.F. 1
967. C
hr叩o町，附m
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acellularmicrotubules. The
Bouck，G.B. 1origin，
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andattachmentoff
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mantherozoids. J.CellB
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ffiiWoronin. Ber.Schweiz.Bot.Gesell.5
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Woronin，M.1
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叩 mot
紗tonRosano.
fii. Bot.Zeitg
38:641‑648.
目

目

メロイドと混在しているシストの 2種類が観察された。前者は直径5.1~6.2μmに対し，後者は直径8~10μm である。形は共に球形で，表面は滑らかで，襟に固まれた孔があり黄金藻に典型的なスタト胞子である。大きさの差が有性あるいは無性の生殖の違いによるものかどうかまだ分からないが，今後この点も研究していきた L。
、

謝

辞

本研究のご指導を賜り，また原稿を御校閲してくださった筑波大学井上 勲博士に厚く御礼申し上げます。

固