RAS 遺伝子変異検出キット

OncoBEAM RAS CRCキット
Go Beyond Biopsy
with Blood

TM

大腸がん患者の血漿に含まれるRAS（KRAS及びNRAS）遺伝子変異を検出する
OncoBEAM RAS CRCキット
TM

使用目的

血漿から抽出したゲノムDNA中のRAS（KRAS及びNRAS）遺伝子変異の検出（セツキシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺伝子組換え）の結腸・直腸癌患者への適応を判定するための補助に用いる）

測定原理

本品は、BEAMing（Beads, Emulsions, Amplification and Magnetics）法を測定原理とする高感度デジタルPCRにより、血漿から抽出したcfDNA（血中循環DNA：cell free DNA）中のRAS遺伝子変異（KRAS及びNRAS遺伝子のエクソン2、3、4領域の変異）を検出するキットです。

検出対象変異遺伝子

エクソン
エクソン2（KR2）

KRAS

エクソン3（KR3）
エクソン4A（KR4A）
エクソン4B（KR4B）
エクソン2（NR2）NRAS

エクソン3（NR3）
エクソン4（NR4）02

OncoBEAMTM RAS CRCキット

コドン

コドン12
コドン13

コドン59
コドン61

コドン117

コドン146
コドン12
コドン13

コドン59
コドン61

コドン117

コドン146

遺伝子変異個所アミノ酸（塩基）G12S(g34a), G12R(g34c), G12C(g34t), G12D(g35a), G12A(g35c), G12V(g35t)
G13D(g38a)
A59T(g175a)
Q61L(a182t), Q61R(a182g), Q61H(a183c), Q61H(a183t)
K117N(a351c), K117N(a351t)
A146T(g436a), A146V(c437t)
G12S(g34a), G12R(g34c), G12C(g34t), G12D(g35a), G12A(g35c), G12V(g35t)
G13R(g37c), G13D(g38a), G13V(g38t)A59T(g175a)
Q61K(c181a), Q61R(a182g), Q61L(a182t), Q61H(a183c), Q61H(a183t)
K117N(g351c), K117N(g351t)
A146T(g436a)

OncoBEAMTM RAS CRCキット

検体条件

検体量：血漿3mL（推奨）採血管：Streck 採血管（Cell-Free DNA BCT® CE）

保

医療機器製造販売認証番号：301AFBZI00047000
外国特例認証取得者及び製造業者：Streck, Inc.（アメリカ）
選任製造販売業者：マイクレン・ヘルスケア株式会社 住所/東京都新宿区払方町19番地1 電話番号/03-3513-6641

管：常温（15℃以上25℃まで）

重要な基本的注意 詳細は添付文書をご参照ください。

1. 腫瘍由来DNAが血漿中にじゅうぶんに漏出していない患者では、腫瘍組織にRAS 遺伝子変異が存在しても、本検査で野生型と判定される可能性があります。特に肺転移のみを有する患者では、可能な限り腫瘍組織を用いた検査の実施を考慮してください。

2. 本検査でカットオフ値近傍において変異型と判定された患者では、腫瘍組織にRAS 遺伝子変異が存在しない可能性を否定できません。
このような患者では、腫瘍組織を用いた検査の実施についても考慮してください。

3. 上記を踏まえ、本検査は腫瘍組織を用いる検査と完全に置き換わらないことをじゅうぶんに理解した上で、本検査を実施してください。

全般的な注意1. 本キットは体外診断用医薬品です。
これ以外の目的には使用しないでください。

2. 本キットの検査の対象患者に対し、検査の目的・方法及び精度、特に不可避な偽陽性・偽陰性を含む性能限界などについて正確な情報を伝えてください。

3. 診断の際には、他の関連する検査結果や臨床症状等に基づいて総合的に判断してください。

4. 本キットをセツキシマブ（遺伝子組換え）及びパニツムマブ（遺伝子組換え）の適応を判定するための補助として用いる場
合には、当該薬剤の本邦における最新の添付文書を参照のうえ使用してください。

5. 野生型と判定された場合でも、偽陰性の可能性を考慮し、セツキシマブ（遺伝子組換え）及びパニツムマブ（遺伝子組換え）投与に際し、考えられる不利益についてじゅうぶんに説明してください。
また、投与後はじゅうぶんな経過観察を行ってください。

6. 本検査の選択とその結果の解釈の際には、日本臨床腫瘍学会が発出している大腸がん患者におけるRAS 遺伝子変異の測定に関するガイダンス等の最新の情報を参考にしてください。

OncoBEAMTM RAS CRCキット03臨床性能試験成績 詳細は添付文書をご参照ください。

進行・再発大腸癌の患者を対象として、国内8施設において臨床性能試験を実施しました。
主な選択基準●●●●切除不能進行・再発大腸癌

がん薬物療法未施行、もしくは薬物療法施行中PDと判断され、かつ次治療開始前である

OncoBEAM™ RAS CRCキットによる解析
血漿DNA

抗EGFR抗体薬もしくはレゴラフェ
ニブの治療歴がない組織検体（FFPE）が5年以内に採取されている腫瘍組織DNA

BEAMing法を用いたRAS 遺伝子変異検出法による解析■ 本品と比較対照法の判定一致率

有効解析対象の288例のうち、「RAS 不明」8例を除いた280例において本品と比較対象法との一致率は86.4％でした。
比較対照法（組織検体）

本品（血漿検体）RAS 変異型計

RAS野生型

RAS変異型

RAS野生型

計

11014※112424※2134

132156146

280
95％信頼区間

判定一致率

症例数

推定値

242/280

86.4％

81.9％

90.2％

陰性一致率

110/134

82.1％

74.5％

88.2％

132/146

90.4％

84.4％

94.7％

陰性的中率

110/124

88.7％

81.8％

93.7％

132/156

84.6％

78.0％

89.9％

陽性一致率
陽性的中率

下限

上限

※1 本品で変異型であり比較対照法で野生型であった14例について、血漿を用いて別法（次世代シークエンス法）による測定結果及び患者背景から考察を行いました。
その結果、6例については、別法の結果でも変異型と判定されており、血漿検体と組織検体の検体種間の乖離と考えられました。
残りの8例については、いずれも試験法のカットオフ値付近の検体でしたが、不一致の原因は特定できませんでした。
※2 本品で野生型であり比較対照法で変異型となった24例のうち、血漿が利用可能な18例について、別法（次世代シークエンス法）による測定結果及び患者背景から考察を行いました。
その結果、15例については、別法においても野生型と判定され、試験法の結果と一致しました。
なお、別法で変異型と判定されたたものが3例あり、この3例を除いた21例では、血漿検体と組織検体の検体種間の乖離又は腫瘍由来DNAが血漿中にじゅうぶんに漏出していない可能性が考えられました。

■ 肺のみ転移の症例における本品と比較対照法の判定一致率

有効性解析対象の288例から「RAS 不明」の8例を除いた280例のうち、肺のみに転移を有していた31 例における、本品と比較対照法との判定一致率は64.5％でした。

本品（血漿検体）

判定一致率陽性一致率

RAS 野生型

18101323171431

症例数

推定値

20/3164.5％

45.4％

RAS 変異型
計

計RAS 野生型

7下限

95％信頼区間

上限80.8％陰性一致率7/1741.2％

18.4％

67.1％

13/1492.9％

66.1％

99.8％

陰性的中率

7/887.5％

47.3％

99.7％

13/23

56.5％

34.5％

76.8％

陽性的中率

04

比較対照法（組織検体）

RAS 変異型

OncoBEAMTM RAS CRCキット

OncoBEAMTM RAS CRCキット
測定技術■ 血漿を用いたctDNAアッセイ

腫瘍形成の過程において、腫瘍細胞に遺伝子変異が生じることがあります。

腫瘍

このような腫瘍細胞が死滅すると変異遺伝子の断片（Circulating tumor
DNA : ctDNA）が血中に放出されます

1～9)。これらのctDNAを特異性の高いマーカーとして利用することにより、腫瘍の特性を調べることができます1O,11)。
ctDNAアッセイでは、腫瘍に生じた遺伝子変異がどのような状態であるかを血液リアルタイムで知ることができます。
また、Liquid biopsyは組織生検と比較し血中循環腫瘍DNA（ctDNA）

血中循環正常DNAて低侵襲であり、腫瘍組織の採取が困難な状況においても比較的簡便に実施できます。組織検体の採取には選択バイアスが伴いますが、Liquid biopsyは全身的なアプローチであるため、バイアスを気にすることなく腫瘍の遺伝子変異を把握することが可能です。

■ 高感度測定が可能なデジタルPCR法

デジタルPCR法は、各DNA分子を液滴中に分画して増幅することで分画ごとに充分なS/N比を確保でき、かつ1分子ずつカウントするため、微量な変異型でも正確に計数することが可能な技術です12)。

相対的シグナルの読み取り

（％）
100

通常のPCR法

デジタルPCR法

デジタルシグナル読み取り（％）
10080806060404020200

野生型DNA

変異型DNA

エマルジョン1個あたりDNA1分子以下となるように分画野生型DNA
変異型DNA0

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

野生型DNA

変異型DNA■ 臨床性能試験における有効性解析対象の288例のうち、本品を用いてRAS変異型と判定された124例におけるMAF（Mutant allele frequency）
血漿検体を測定すると検出された変異のうち約30％がMAF1％未満であった13)。

転移部位ごとのMAF

p =0.012*（％）
100

p =0.011*

p =0.024*

MAF

1010.1

0.01

Lung met.
alone
(n=8)

Liver met.
alone
(n =33)

LN met.
alone(n =9)

Multiplemet.
(n =72)*derived from Steel test
MAF: Mutant allele frequency

Bando H, Kagawa Y, et al. Br J Cancer. 2019; 120(10): 982-986

OncoBEAMTM RAS CRCキット

05

シスメックス独自の測定技術BEAMing法

本品で使用されているBEAMing法は、磁気ビーズ上でDNAを増幅し、フローサイトメトリーにて検出することにより、変異型DNAを高感度に確認する、デジタルPCR法をベースに開発された弊社独自の技術です。

BEAMingとは、Beads（ビーズ）、Emulsion（エマルジョン）、Amplification（増幅）、Magnetics（磁気）を意味します。

DNA抽出

野生型DNA

血漿検体

プレ増幅

目的領域のPCR増幅

dNTP
ポリメラーゼ
プライマー
Oli-Emulsifier混合物

変異型DNA

増幅したDNA

増幅前

エマルジョン
PCR
OncoBEAM 用
前処理自動化装置
TM

プライマーをコーティングした
磁性ビーズ
増幅後

Water-in-oil
エマルジョン

OL-10

CG
野生型

TA
変異型

CG
野生型

TA
変異型

野生型

ハイブリダイゼーション

フローサイトメトリー

変異型

蛍光プローブで標識したDNA

ユニバーサルプローブ

野生型DNA

OncoBEAM 用
フローサイトメーター
TM

変異型DNA

OF-500

測定原理■ 血漿から抽出したDNAを検体として、全てのターゲット領域を正確性の高いDNA合成酵素でプレ増幅を行います。

■ Water in Oil エマルジョンを作成します。
プライマーがコーティングされた磁性ビーズ上で検出対象領域のDNA増幅を行います。

■ エマルジョンを破壊し、磁性ビーズ上で増幅されたDNAと野生型検出用、変異型検出用、及びエマルジョンPCRによる磁性ビーズ上での増幅確認用に、それぞれ異なる蛍光色素で標識されたコドン毎の蛍光プローブとハイブリダイゼーションさせます。

■ 蛍光標識された磁性ビーズをフローサイトメトリーにより蛍光分離解析を行います。
06

OncoBEAMTM RAS CRCキット

OncoBEAMTM RAS CRCキット
製品概要
RAS遺伝子変異検出キット

OncoBEAMTM RAS CRC キット
体外診断用医薬品製造販売承認番号：30100EZX00010000

使用目的
貯蔵方法
有効期間
包装単位

構成品

血漿から抽出したゲノムDNA中のRAS（KRAS 及びNRAS ）遺伝子変異の検出（セツキシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺伝子組換え）の結腸・直腸癌患者への適応を判定するための補助に用いる）
Box1 -30～-15°C / Box2 2～8°C / Box3 15～25°C指定された温度で保存してください。

20カ月（使用期限は外箱の天面に表示しています。
）
下記構成試薬の有効期間
20カ月 : EmulsiFIRE
2 1 カ月 : Multiplex PCR Master Mix、Breaking Buffer 1 without Alcohols、Breaking Buffer 2 without Alcohols、Hybridization Buffer
30 テスト用

Box1
Positive Control Amplicon KRAS Exon 2
Positive Control Amplicon KRAS Exon 3
Positive Control Amplicon KRAS Exon 4A
Positive Control Amplicon KRAS Exon 4B
Positive Control Amplicon NRAS Exon 2
Positive Control Amplicon NRAS Exon 3
Positive Control Amplicon NRAS Exon 4
No Template Control（NTC）
Multiplex PCR Master Mix
Multiplex PCR Primer Mix
Multiplex PCR DNA PolymeraseEmulsion PCR Master Mix KRAS Exon 2Emulsion PCR Master Mix KRAS Exon 3Emulsion PCR Master Mix KRAS Exon 4A
Emulsion PCR Master Mix KRAS Exon 4BEmulsion PCR Master Mix NRAS Exon 2Emulsion PCR Master Mix NRAS Exon 3Emulsion PCR Master Mix NRAS Exon 4Emulsion PCR DNA Polymerase

OncoBEAMTM 用フローサイトメーター

OF-500医療機器製造販売届出番号：28B1X10014000004

使用目的

電源/消費電力寸法重量OncoBEAM アッセイ用の検体測定をおこなう医療機器
TM

AC100～240V（50/60Hz）/ 350VA以下※本体のみ
約590mm（W）×約540mm（D）×約585mm（H）

約55kg ※本体のみ

非体外診断用医薬品

OF Check
貯蔵方法
有効期間
包装単位

OncoBEAM 用フローサイトメーターの精度管理用物質
TM-15°C以下、融解後は2～8°C（再凍結禁止）

6カ月
開封後3カ月（但し開封前使用期限を超えない）
OF Check HighOF Check Low

Box3
Breaking Buffer 1 without Alcohols
Breaking Buffer 2 without Alcohols
Hybridization Buffer
EmulsiFIRE

OncoBEAMTM 用前処理自動化装置

OL-10

医療機器製造販売届出番号：28B1X10014000045

OncoBEAMTM 用フローサイトメーターの精度管理用物質
使用目的

Box2
Hybridization Probe Mix 1
Hybridization Probe Mix 2
Hybridization Probe Mix 3Hybridization Probe Mix 4
Hybridization Probe Mix 5
Hybridization Probe Mix 6Hybridization Probe Mix 7Hybridization Probe Mix 8Hybridization Probe Mix 9Hybridization Probe Mix 10Hybridization Probe Mix 11
Hybridization Probe Mix 12Emulsion PCR Beads

1.3mL × 1本（10テスト分）
1.3mL × 1本（10テスト分）

使用目的

電源/消費電力
寸法
重量

OncoBEAM アッセイ用の検体前処理をおこなう医療機器
TM

AC100～240V（50/60Hz）/450VA以下

約860mm（W）×約670mm（D）×約610mm（H）※本体のみ約87kg ※本体のみ

非体外診断用医薬品

CyFlowTM SHEATH
使用目的
貯蔵方法
有効期間
包装単位

フローサイトメーターに使用するシース液
2～35℃

18カ月、開封後2カ月

10L

非体外診断用医薬品

CyFlowTM CLEAN
使用目的

フローサイトメーターに使用する洗浄液

有効期間12カ月、開封後2カ月

貯蔵方法
包装単位

1～30°C
50mL

OncoBEAMTM RAS CRCキット07引用文献1）Delgado et al. Tumour Biol. 2013; 34: 983-9868）Schwarzenbach et al. Ann N Y Acad Sci. 2008; 1137: 190-1962）Hashad et al. J Clin Lab Anal. 2012; 26: 467-4729）Fleischhacker et al. Biochim Biophys Acta. 2007; 1775:181-232

3）No et al. Anticancer Res. 2012; 32: 3467-3471

10）Diaz et al. Nature. 2012; 486: 537-5405）Salvianti et al. PLoS One. 2012; 7: e49843

12）中村健一 臨床病理. 2016; 64（4）: 400-4064）Park et al. Oncol Lett. 2012; 3: 921-92611）Misale et al. Nature. 2012; 486: 532-5366）Schwarzenbach et al. Clin Cancer Res. 2009; 15: 1032-10387）Schwarzenbach et al. Mol Biosyst. 2011; 7: 2848-2854

13）Bando H, Kagawa Y, et al. Br J Cancer. 2019; 120（10）: 982-986

製造販売元

取扱店

本社 神戸市中央区脇浜海岸通 1-5-1 〒651-0073 www.sysmex.co.jp

支店

LS事業本部 LS市場開発部（東 京）Tel 03-5434-8569 Fax 03-5434-8557（神 戸）Tel 078-992-7221 Fax 078-992-7065

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仙大台 022-722-1710 北関東 048-600-3888 東阪 06-6337-8300 広 島 082-248-9070 福

札 幌 011-700-1090 盛
千 葉 043-297-2701 横京 都 075-255-1871 神
鹿児島 099-222-2788

岡 019-654-3331 長
浜 045-640-5710 静戸 078-251-5331 高

京 03-5434-8550 名古屋 052-957-3821
岡 092-687-5380

野 0263-31-8180 新
岡 054-287-1707 金
松 087-823-5801 岡

日本・東アジア地域本部
03-5434-8565
カスタマーサポートセンター 0120-413-034

www.sysmex.co.jp/products_solutions/

潟 025-243-6266
沢 076-221-9363
山 086-224-2605

注：活動及びサイトの適用範囲は規格により異なります。
詳細は www.tuv.com の ID 0910589004 を参照。
Note : Scopes of sites and activities vary depending on the standard.
For details, refer to the ID 0910589004 at www.tuv.com* 外観、仕様については改良のため予告なしに変更することがあります。

LSOncoRCSOD