** 2023 年 7 月改訂（第 6 版）
* 2023 年 3 月改訂（第 5 版）
体外診断用医薬品*

この電子添文をよく読んでから使用してください。

製造販売承認番号 30100EZX00010000

RAS 遺伝子変異検出キット

OncoBEAMTMRAS CRC キット【重要な基本的注意】

Box1

1. 腫瘍由来 DNA が血漿中にじゅうぶんに漏出していない患者
では、腫瘍組織に RAS 遺伝子変異が存在しても、本検査で野生型と判定される可能性があります（性能参照）。特に肺転移のみを有する患者では、可能な限り腫瘍組織を用いた検査の実施を考慮してください（臨床性能試験成績参照）。
2. 本検査でカットオフ値近傍において変異型と判定された患者では、腫瘍組織に RAS 遺伝子変異が存在しない可能性を否定できません。このような患者では、腫瘍組織を用いた検査の実施についても考慮してください（臨床性能試験成績参照）。
3. 上記を踏まえ、本検査は腫瘍組織を用いる検査と完全に置き換わらないことをじゅうぶんに理解した上で、本検査を実施してください。
Box2【全般的な注意】
1. 本キットは体外診断用医薬品です。これ以外の目的には使用しないでください。
2. 本キットの検査の対象患者に対し、検査の目的・方法及び精度、特に不可避な偽陽性・偽陰性を含む性能限界などについて正確な情報を伝えてください。
3. 診断の際には、他の関連する検査結果や臨床症状等に基づいて総合的に判断してください。
4. 本キットをセツキシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺*伝子組換え）の適応を判定するための補助として用いる場合には、当該薬剤の本邦における最新の電子添文を参照のうえ使用
してください。
5. 野生型と判定された場合でも、偽陰性の可能性を考慮し、セツ
キシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺伝子組換え）投与に際し、考えられる不利益についてじゅうぶんに説明してください。また、投与後はじゅうぶんな経過観察を行ってください。
6. 本検査の選択とその結果の解釈の際には、日本臨床腫瘍学会が発出している大腸がん患者における RAS 遺伝子変異の測定に関するガイダンス等の最新の情報を参考にしてください。
* 7.8. 電子添文以外の使用方法については保証をいたしかねます。
測定に使用する機器の電子添文及び取扱説明書をよく読んで*から使用してください。

【形状・構造等（キットの構成）】
本キットは次の試薬より構成されています。
構成試薬（略号）
反応に関わる成分
Box1
Positive Control Amplicon KRAS Exon 2（PC1）
Positive Control Amplicon KRAS Exon 3（PC2）
Positive Control Amplicon KRAS Exon 4A（PC3）
Positive Control Amplicon KRAS Exon 4B（PC4）
Positive Control Amplicon NRAS Exon 2（PC5）
Positive Control Amplicon NRAS Exon 3（PC6）
Positive Control Amplicon NRAS Exon 4（PC7）No Template Control（NTC）
Multiplex PCR Master Mix
dNTPs 1
Multiplex PCR Primer Mix
MPx Primer 1, MPx Primer 2
MPx Primer 3, MPx Primer 4
MPx Primer 5, MPx Primer 6
MPx Primer 7, MPx Primer 8
MPx Primer 9, MPx Primer 10
MPx Primer 11, MPx Primer 12
MPx Primer 13, MPx Primer 14
Multiplex PCR DNA Polymerase
Phusion Hot Start DNA Polymerase
Emulsion PCR Master Mix KRAS Exon 2
dNTPs 2, EM Primer 1, EM Primer 2

Emulsion PCR Master Mix KRAS Exon 3
dNTPs 2, EM Primer 3, EM Primer 4
Emulsion PCR Master Mix KRAS Exon 4A
dNTPs 2, EM Primer 5, EM Primer 6
Emulsion PCR Master Mix KRAS Exon 4B
dNTPs 2, EM Primer 7, EM Primer 8
Emulsion PCR Master Mix NRAS Exon 2
dNTPs 2, EM Primer 9, EM Primer 10
Emulsion PCR Master Mix NRAS Exon 3
dNTPs 2, EM Primer 11, EM Primer 12
Emulsion PCR Master Mix NRAS Exon 4
dNTPs 2, EM Primer 13, EM Primer 14
Emulsion PCR DNA Polymerase
peqGOLD Taq DNA Polymerase
Hybridization Probe Mix 1
蛍光標識プローブ 1
蛍光標識プローブ 2
蛍光標識プローブ 3
蛍光標識プローブ 4
蛍光標識プローブ 5
蛍光標識プローブ 6
蛍光標識プローブ 7
蛍光標識プローブ 8
Hybridization Probe Mix 2
蛍光標識プローブ 1
蛍光標識プローブ 9蛍光標識プローブ 10
Hybridization Probe Mix 3
蛍光標識プローブ 11
蛍光標識プローブ 12
蛍光標識プローブ 13
Hybridization Probe Mix 4
蛍光標識プローブ 11
蛍光標識プローブ 14
蛍光標識プローブ 15
蛍光標識プローブ 16
蛍光標識プローブ 17
蛍光標識プローブ 18
Hybridization Probe Mix 5
蛍光標識プローブ 19
蛍光標識プローブ 20
蛍光標識プローブ 21
蛍光標識プローブ 22
Hybridization Probe Mix 6
蛍光標識プローブ 23
蛍光標識プローブ 24
蛍光標識プローブ 25
蛍光標識プローブ 26
Hybridization Probe Mix 7
蛍光標識プローブ 27
蛍光標識プローブ 28
蛍光標識プローブ 29
蛍光標識プローブ 30
蛍光標識プローブ 31
蛍光標識プローブ 32
蛍光標識プローブ 33
蛍光標識プローブ 34
Hybridization Probe Mix 8
蛍光標識プローブ 27
蛍光標識プローブ 35
蛍光標識プローブ 36
蛍光標識プローブ 37
蛍光標識プローブ 38
1
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Box2

Box3

Hybridization Probe Mix 9
蛍光標識プローブ 39
蛍光標識プローブ 40
蛍光標識プローブ 41
Hybridization Probe Mix 10
蛍光標識プローブ 39
蛍光標識プローブ 42
蛍光標識プローブ 43
蛍光標識プローブ 44
蛍光標識プローブ 45
蛍光標識プローブ 46
蛍光標識プローブ 47
Hybridization Probe Mix 11
蛍光標識プローブ 48
蛍光標識プローブ 49
蛍光標識プローブ 50
蛍光標識プローブ 51
Hybridization Probe Mix 12
蛍光標識プローブ 48
蛍光標識プローブ 52
蛍光標識プローブ 53
Emulsion PCR Beads
固相化用プライマー
Breaking Buffer 1 without Alcohols
Breaking Buffer 2 without Alcohols
Hybridization Buffer
EmulsiFIRE【使用目的】
血漿から抽出したゲノム DNA 中の RAS（KRAS 及び NRAS）遺伝子変異の検出（セツキシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺伝子組換え）の結腸・直腸癌患者への適応を判定するための補助に用いる）【測定原理】
本品は、BEAMing（Beads, Emulsions, Amplification and Magnetics）
法を測定原理とする高感度デジタル PCR により、血漿から抽出した cfDNA（血中循環 DNA: cell free DNA）中の RAS 遺伝子変異（KRAS及び NRAS 遺伝子のエクソン 2、3、4 領域の変異）を検出するキットです。

本品の検出対象変異は下表のとおりです。
遺伝子
エクソン
コドン
遺伝子変異箇所
アミノ酸（塩基）KRAS
G12S（g34a）
G12R（g34c）
G12C（g34t）
12
G12D（g35a）2
G12A（g35c）
G12V（g35t）
13
G13D（g38a）
59
A59T（g175a）
Q61L（a182t）
3
Q61R（a182g）
61
Q61H（a183c）
Q61H（a183t）
K117N（a351c）
4A
117
K117N（a351t）
A146T（g436a）
4B
146
A146V（c437t）
NRAS
G12S（g34a）
G12R（g34c）
G12C（g34t）
12
G12D（g35a）
G12A（g35c）
2
G12V（g35t）
G13R（g37c）
13
G13D（g38a）
G13V（g38t）
59
A59T（g175a）
Q61K（c181a）
Q61R（a182g）
361
Q61L（a182t）
Q61H（a183c）
Q61H（a183t）
K117N（g351c）
117
K117N（g351t）
4
146
A146T（g436a）

RAS 遺伝子変異の検出は、血漿から抽出した DNA を検体として、全てのターゲット領域を正確性の高い DNA 合成酵素でプレ増幅【操作上の注意】
し、油中水滴型エマルジョン中の磁性ビーズ上で検出対象領域を測定試料の性質，採取法
増幅させます。油中水滴型エマルジョンを破壊して（ブレーキン
1. 測定検体は血漿から抽出した DNA 以外は使用しないでくださグ）磁性ビーズ上で増幅された DNA と野生型検出用、変異型検出
い。
用、及びエマルジョン PCR によるビーズ上での増幅確認用（共通領域）に、それぞれ異なる蛍光色素で標識されたコドン毎の蛍光 ** 2. 指定された採血管（Streck 採血管もしくは BD Vacutainer K2
EDTA tubes）で採血後、15〜25 C で保存し、指定時間内（Streck
プローブとハイブリダイゼーションさせます。蛍光標識されたビ
採血管;
採血後 3 日以内、BD Vacutainer K2 EDTA tubes; 採血後ーズをフローサイトメトリー法で測定します。
4 時間以内）に血漿分離してください。
3. 血漿分離の遠心条件は 15〜25 C、1600
150
g、10 分間遠心を行い、上清を回収後、15〜25 C、
3000
150g 又は 6000
150
g、10 分間遠心を行ってください。
** 4. 血漿検体は-30〜-15 C もしくは-70 C 以下で保存した場合 6 カ
月間安定です。
5. 血漿（推奨の血漿量; 3 mL）から市販キット（QIAamp® Circulating
Nucleic Acid Kit 等）のプロトコルに従って DNA 抽出を行った
DNA は、2〜8 C で 24 時間、-30〜-15 C で 30 日間安定です。
妨害物質・妨害薬剤
1. 本品は抽出された DNA を試料として測定することから、ヘモ
グロビン、ビリルビン及び乳びの混入はないと考えられます。
従って、妨害物質の測定への影響はないものと考えられます。
2. 溶血した血液から血漿を調製した場合、測定結果に影響を与えることがあります。
その他
1. コントロールは測定毎にキットに添付のコントロール（NTC 及び PC1〜7）を使用し、検体と同時に測定し正しく判定されることを確認してください。
2. 本品の測定にはフローサイトメータ（CyFlow Cube 6i システム又は同等品）を使用し、消耗品は指定のものを必ずご使用ください。
3. コンタミネーションを防ぐために、増幅と検出するエリアは、
プレ増幅のためのマスターミックス調製を行うエリアとは異なるエリアで行ってください。

2
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【用法・用量（操作方法）】
試薬の調製方法
酵素以外の各試薬は、常温（15〜25 C）に戻してからボルテック
スで混合してから使用してください。
プローブミックスは光感受性のため、長時間の光への曝露は避けてください。
1. マスターミックスの調製(1) Multiplex PCR Master Mix の調製
1 検体分（PC 7 種類、NTC 1 種類を含む）
Multiplex PCR Master Mix
1871 μL
Multiplex PCR Primer Mix
772.2 μL
Multiplex PCR DNA Polymerase
59.4 μL(2) Emulsion working Mix の調製
1 反応分
Emulsion PCR Master Mix
13.2 μL
Emulsion PCR Beads
0.8 μL
Emulsion PCR DNA polymerase
1 μL(3) Hybridization Buffer probe Mix の調製
1 検体分
Hybridization buffer
328 μL
Hybridization probe
5 μL
必要な器具・器材・試料等＜器具・器材＞
1. マルチチャンネル電子ピペット（E12-200XLS+又は同等品）
2. マイクロピペット
3. フィルター付きピペットチップ（ヌクレアーゼフリー）
4. マイクロチューブ、96 ウェルプレート、8 連チューブ
5. 96 ウェルプレート用シール
6. リザーバー
7. QIAvac Connecting System 又は同等品
8. QIAvac 24 Plus System 又は同等品
9. 吸引ポンプ
10. サーマルサイクラー（Veriti Dx 又は同等品）
11. マグネットプレート（Alpaqua 96S Super Magnet Plate 又は同等品）
12. フローサイトメータ（CyFlow Cube 6i システム又は同等品）＜試薬＞
1. エタノール ≥ 99.8 %2. 1-プロパノール ≥ 99.8 %3. 2-プロパノール ≥ 99.8 %4. ミネラルオイル
5. 2-ブタノール ≥ 99 %6. Dulbecco's 1X リン酸緩衝生理食塩水（PBS）（Ca2+,Mg2+非含有
pH 7.4）
7. 1X TE Buffer, low EDTA（pH 8.0）
8. cfDNA 抽出試薬（QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit）
測定（操作）法＜測定方法の概略＞

1. プレ増幅（マルチプレックス PCR）
(1) Multiplex PCR Master Mix を必要検体数分調製し、287 μL ず
つ分注します。
(2) (1)に血漿から精製した cfDNA（以下、検体）とコントロール（NTC 及び PC1〜7）を 123 μL ずつ添加して混合します。混
合した検体を 6 ウェルに 65 μL ずつ PCR 用プレートに分注し、ミネラルオイルを重層し、アルミシートで蓋をします。
(3) サーマルサイクラー（Veriti Dx 又は同等品）でマルチプレッ
クス PCR によりプレ増幅を行います。
(4) マルチプレックス PCR の増幅産物を各ウェルから 15 μL ず
つ回収し一つにまとめます。
(5) 増幅領域毎に low EDTA TE バッファーで希釈します。1 段階
目の希釈は検体及びコントロール（NCT と PC）を low EDTA
TE バッファーで 1:20 希釈します。その後、下表の希釈倍率に従って low EDTA TE バッファーで希釈します。
※low EDTA TE バッファーは本品には含まれていません＜希釈倍率＞
増副産
コドン
物
KR2
12/13
KR3
59/61
KR4A
117
KR4B
146
NR2
12/13
NR3
59/61
NR4
117
NR4
146

希釈倍
率
1:100
1:100
1:350
1:300
1:100
1:150
1:50
1:100

TE
80 μL
80 μL
330 μL280 μL80 μL
130 μL
30 μL
80 μL

1 段階目の
希釈液
20 μL
20 μL
20 μL
20 μL
20 μL
20 μL
20 μL
20 μL

2. エマルジョン PCR(1) 96 ウェルプレートに検出するコドン分（12 種類）となるよ
うに各 Emulsion PCR working Mix を 1 検体もしくは 1 コント
ロール（PC、NTC）に対して 2 ウェルずつ各 15 μL 分注し（KRAS エクソン 4A 及び 4B は 1 ウェルずつ）、各コドンに対応した希釈倍率のマルチプレックス PCR 産物（5 μL）と混合します。
(2) 以下の設定を行ったマルチチャンネル電子ピペット（メトラートレド社製又は同等品）を用いて EmulsiFIRE（70 μL）を添加し、油中水滴型エマルジョンを作製します。
＜電子ピペットの設定（例示）＞項目
設定値
Aspirate volume (μL)
70
Aspiration speed
6
Dispense Volume (μL)
70
Dispense Speed
6
Mixing Volume (μL)
80
Mixing Cycles
30
Mixing Speed6(3) サーマルサイクラーでエマルジョン PCR を行います。
3. ブレーキング及びハイブリダイゼーション(1) エマルジョン PCR 終了後、以下の設定値（B）でマルチチャ
ンネル電子ピペット（メトラートレド社製又は同等品）を用いて Breaking buffer 1 100 μL で懸濁することにより油中水滴型エマルジョンを破壊し、マグネットプレートを用いて磁性ビーズを集磁します。上清を除去し、もう一度、Breaking
buffer 1 100 μL を添加して同様の操作を繰り返すことで洗浄します。
＜電子ピペットの設定（例示）＞
設定値 設定値 設定値
項目
(B)
(H)
(P)
Aspirate volume (μL)
100
70
80
Aspiration speed
444Dispense Volume (μL)
100
70
80
Dispense Speed444
Mixing Cycles
20
20
15
Mixing Speed
888(2) 設定値（B）の設定をしたマルチチャンネル電子ピペットを用いて Breaking Buffer 2 100 μL を添加して懸濁し、2 分間変性させた後、マグネットプレートで磁性ビーズを集磁して上清を除去します。
(3) 検 出 対 象 コ ド ン 毎 の プ ロ ー ブ 混 合 溶 液 （ 12 種 類 のHybridization Probe Mix）を対応するウェルに設定値（H）のマルチチャンネル電子ピペットを用いて 70 μL ずつ添加します。
(4) サーマルサイクラーでハイブリダイゼーション反応を行います。
(5) ハイブリダイゼーション反応後、マグネットプレートで集磁し、上清を 50 μL 除きます。設定値（P）のマルチチャン
ネル電子ピペットでリン酸緩衝生理食塩水（PBS）80 μL を添加して 2 回洗浄します。最後に 80 μL
2 の PBS を添加
して、添加の都度、懸濁します。
※PBS は本品には含まれていません
4. 検出
CyFlow Cube 6i システム又は同等のフローサイトメータを用いて、洗浄した磁性ビーズの粒子径（前方散乱光と側方散乱光）と各プローブ（野生型、変異型、共通配列）の蛍光強度を測定します。
※フローサイトメータ用試薬は本品には含まれていません

3
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5. 解析
フローサイトメータによる測定結果の解析方法の概要は、以下の通りです。
(1) 磁性ビーズの粒子径によりシングルビーズの集団を選択します。
(2) シングルビーズの中から、共通領域に結合したプローブの蛍光強度を指標として、磁性ビーズ上で増幅反応が起こっていた磁性ビーズの集団を選択して、最終的な解析対象とします。
(3) 最終的な解析対象となった磁性ビーズの集団の中から、野生型用検出プローブの蛍光強度を持つ集団と変異型用の検出プローブの蛍光強度を持つ集団に分離し、変異型の出現するエリア内に存在する磁性ビーズ数を計測します。

【測定結果の判定法】
判定法
変異型として検出された磁性ビーズ数をあらかじめ設定したカッ
トオフ値と比較することにより、変異陽性又は変異陰性の判定を
行います。
コドン
カットオフ値
KR2 Cd1240
KR2 Cd1348
KR3 Cd59
36
KR3 Cd61
32
KR4 Cd117
36
KR4 Cd146
54
NR2 Cd12
34
NR2 Cd1330
NR3 Cd59
30
NR3 Cd61
20
NR4 Cd117
22
NR4 Cd14624
判定上の注意コントロール; NTC と PC が正しく判定されていることを確認します。
検体; コントロールが正しく判定されていた場合に、変異型の出現するエリアに存在する磁性ビーズ数が、カットオフ値を上回るコ
ドンを Mutation Detected（変異陽性）、カットオフ値未満の結果となったコドンを No Mutation Detected（変異陰性）として、KRAS
及び NRAS 遺伝子のエクソン 2（コドン 12、13）、エクソン 3（コドン 59、コドン 61）、エクソン 4（コドン 117、146）のコドン毎に変異の有無を判定します。
コントロールが正しく判定されなかった場合は再測定を実施してください。

* 【臨床的意義】

進行・再発大腸癌の薬物療法におけるセツキシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺伝子組換え）は、多くの大腸癌患者の腫瘍組織で高発現が認められる EGFR に高い親和性で結合し、リガ
ンドの結合を阻害すること及び EGFR の内在化作用により抗腫瘍(1)〜(3)
効果を発揮するとされています。
なお、セツキシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺伝子組換え）は RAS（KRAS 及び NRAS）遺伝子変異がある場合には、治療効果が期待されないことが報告されており、セツキシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺伝子組換え）の電子添文の効能・効果に関連する使用上の注意には、「RAS（KRAS 及び NRAS）
遺伝子変異の有無を考慮した上で、適応患者の選択を行うこと」(4)(5)が記載されています 。また、日本臨床腫瘍学会は、大腸がん患者における RAS 遺伝子変異の測定に関するガイダンスを出して、(6)
適切な治療の提供のための情報提供を行っています 。本キットは、血漿から抽出したゲノム DNA 中の RAS（KRAS 及び NRAS）遺伝子変異の検出する体外診断用医薬品です。本品の血漿から抽出した
ゲノム DNA 中の RAS（KRAS 及び NRAS）遺伝子変異の検出は、セツキシマブ（遺伝子組換え）又はパニツムマブ（遺伝子組換え）による治療の適用の判断を補助することを目的として用います。

【性能】
性能
1. 感度
(1) 管理用検体 1 は変異型検出ビーズ（KRAS Codon 12, NRAS
Codon 12, 59, 117）の数が各カットオフ値以上を示します。
(2) 管理用検体 2 は変異型検出ビーズ（KRAS Codon 13, 59, 146,
NRAS Codon 13）の数が各カットオフ値以上を示します。
(3) 管理用検体 3 は変異型検出ビーズ（KRAS Codon 61, NRAS
Codon 146）の数が各カットオフ値以上を示します。
(4) 管理用検体 4 は変異型検出ビーズ（KRAS Codon 117, NRAS
Codon 61）の数が各カットオフ値以上を示します。
(5) 管理用検体 5 は変異型検出ビーズ（KRAS Codon 12, 13, 59, 61,
117, 146, NRAS Codon 12, 13, 59, 61, 117, 146）の数が各カットオ
フ値未満の値を示します。
2. 正確性(1) 管理用検体 1 を用いて試験するとき、KRAS 12, NRAS 12, 59,
117 は陽性を示し、変異陽性と判定されます。
(2) 管理用検体 2 を用いて試験するとき、KRAS 13, 59, 146, NRAS
13 は陽性を示し、変異陽性と判定されます。
(3) 管理用検体 3 を用いて試験するとき、KRAS 61, NRAS 146 は陽性を示し、変異陽性と判定されます。
(4) 管理用検体 4 を用いて試験するとき、KRAS 117, NRAS 61 は陽性を示し、変異陽性と判定されます。
(5) 管理用検体 5 を用いて試験するとき、KRAS 12, 13, 59, 61, 117,
146, NRAS 12, 13, 59, 61, 117, 146 は全て陰性を示し、変異陰性と判定されます。
3. 同時再現性(1) 管理用検体 1 を 3 回同時に測定するとき、KRAS 12, NRAS 12,
59, 117 が 3 回とも変異陽性と判定されます。
(2) 管理用検体 2 を 3 回同時に測定するとき、KRAS 13, 59, 146,
NRAS 13 が 3 回とも変異陽性と判定されます。
(3) 管理用検体 3 を 3 回同時に測定するとき、KRAS 61, NRAS 146
が 3 回とも変異陽性と判定されます。
(4) 管理用検体 4 を 3 回同時に測定するとき、KRAS 117, NRAS 61
が 3 回とも変異陽性と判定されます。
(5) 管理用検体 5 を 3 回同時に測定するとき、KRAS 12, 13, 59, 61,
117, 146, NRAS 12, 13, 59, 61, 117, 146 が 3 回とも変異陰性と判定されます。
4. 最小検出感度
健常人血漿から抽出した DNA に野生型ゲノム DNA を添加して、低濃度 DNA（5,000 GE/検体）、中濃度 DNA（23,000 GE/
検体）、及び高濃度 DNA 量（116,000 GE/検体）の 3 つの濃度のバックグラウンド DNA を調製後、検出対象物である変異型
KRAS 遺伝子及び NRAS 遺伝子を段階希釈して添加し、測定試料を調製しました。
各測定試料を 8 重測定し、各変異について、
プロビット回帰モデルを使用して LoD を計算した結果を下表に示しました。（GE: ゲノム当量）
DNA 濃度［コピー数/検体］
変異型
低濃度
中濃度
高濃度
5,000GE
23,000GE
116,000GE
KR2 Cd12 g35a
7
11
43
KR3 Cd61 a183c
7
11
44
KR4A Cd117 a351c
615
43
KR4B Cd146 g436a
612
37
NR2 Cd12 g35a
6
10
39
NR3 Cd61 c181a7
13
45
NR4A Cd117 g351t
7
12
43

4
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各コドンで決定した中濃度 DNA の LoD の 3x LoD 検体を調製し、全変異型で検証を行った結果を下表に示しました。
遺伝子
コドン
変異型
Hit Rate
KR2
12
g34a
100 %
g34c
100 %
g34t
100 %
g35a
100 %
g35c
100 %
g35t
100 %
13
g38a
100 %
KR3
59
g175a
100 %
61
a182t
100 %
a182g
100 %
a183c
100 %
a183t
100 %
KR4A
117
a351c
100 %
a351t
100 %
KR4B
146
g436a
100 %
c437t
100 %
NR2
12
g34a
100 %
g34c
100 %
g34t
100 %
g35a
100 %
g35c
100 %
g35t
100 %
13
g37c
100 %
g38a
100 %
g38t
100 %
NR 3
59
g175a
100 %
61
c181a
100 %
a182g
100 %
a182t
100 %
a183c
100 %
a183t
100 %
NR 4
117
g351c
100 %
g351t
100 %
146
g436a
100 %
(7)

※2 本品で野生型であり比較対照法で変異型となった 24 例のうち、血漿が利用可能な 18 例について、別法（次世代シークエンス法）による測定結果及び患者背景から考察を行いました。その結果、15 例については、別法においても野生型と判定され、試験法の結果と一致しました。なお、別法で変異型と判定されたものが 3 例あり、この 3 例を除いた 21 例では、血漿検体と組織検体の検体種間の乖離又は腫瘍由来
DNA が血漿中にじゅうぶんに漏出していない可能性が考えられました。
(3) 本品と既承認品検査との判定一致率
同意取得された 352 例のうち本品と既承認品検査（腫瘍組織から得られた DNA を用いる MEBGENTM RASKET キット）で結果が得られた 266 例における判定一致率は 84.6 %でした。
既承認品検査（組織検体）
計
RAS 変異型
RAS 野生型
RAS 変異型
109
15
124
本品
(血漿検体)RAS 野生型
26
116
142
計
135
131
266

判定一致率
陽性一致率
陰性一致率
陽性的中率
陰性的中率

症例数

推定値

225/266
109/135
116/131
109/124
116/14284.6 %
80.7 %
88.5 %
87.9 %
81.7 %

95 %信頼区間
下限
上限79.7 %
88.7 %
73.1 %
87.0 %
81.8 %
93.4 %
80.8 %
93.1 %
74.3 %
87.7 %(4) 肺のみ転移の症例における本品と比較対照法の判定一致率
有効性解析対象の 288 例から「RAS 不明」の 8 例を除いた
280 例のうち、肺のみに転移を有していた 31 例における、本品と比較対照法（腫瘍組織から得られた DNA を用いる
BEAMing 法を用いた RAS 遺伝子変異検出法）との判定一致
率は 64.5 %でした。
比較対照法（組織検体）
計
RAS 変異型
RAS 野生型
RAS 変異型
718
本品(血漿検体) RAS 野生型
10
13
23
計
17
14
31

5. 臨床性能試験成績
進行・再発大腸癌の患者を対象として臨床性能試験を実施し、国内 8 施設において 352 例の同意を取得しました。
95 %信頼区間
症例数
推定値(1) 本品の検査成功率
下限
上限
有効性解析対象の 288 例について、測定対象コドンの何れ
判定一致率
20/31
64.5 %
45.4 %
80.8 %
かで結果が得られなかった「RAS 不明」は 8 例（2.8 % : 8/288）
陽性一致率
7/17
41.2 %
18.4 %
67.1 %
でした。
陰性一致率
13/14
92.9 %
66.1 %
99.8 %(2) 本品と比較対照法の判定一致率
陽性的中率
7/8
87.5 %
47.3 %
99.7 %
有効性解析対象の 288 例のうち「RAS 不明」の 8 例を除いた
陰性的中率
13/23
56.5 %
34.5 %
76.8 %
280 例において、本品（血漿から得られたゲノム DNA を用いる本キット）と比較対照法（腫瘍組織から得られた DNA【使用上又は取扱い上の注意】を用いる BEAMing 法を用いた RAS 遺伝子変異検出法）との取扱い上（危険防止）の注意
判定一致率は 86.4 %でした。
1. 試薬には、毒劇物や感染の恐れのあるものは含まれていません。
2. 検査にあたっては感染の危険を避けるため使い捨て手袋等（パ
比較対照法（組織検体）
計
ウダーフリー）及びマスクを着用してください。
RAS 変異型
RAS 野生型
3. 感染を避けるために口によるピペッティングを行わないでく※1
RAS 変異型
110
14
124
本品
ださい。
※2
(血漿検体) RAS 野生型
24
132
156
4. 試薬が誤って目や口に入った場合は、直ちに水でじゅうぶんに
計
134
146
280
洗い流すなどの応急処置を行い、必要があれば医師の手当てなどを受けてください。
95 %信頼区間
使用上の注意
症例数
推定値
下限
上限
1. 正確な結果を得るために、遺伝子検査の熟練者あるいはその指
判定一致率
242/280
86.4 %
81.9 %
90.2 %
導のもとに試薬やサンプルの添加量、添加位置にじゅうぶんに
陽性一致率110/134
82.1 %
74.5 %
88.2 %
注意して測定を行ってください。
陰性一致率132/146
90.4 %
84.4 %
94.7 %
2. ヌクレアーゼフリーの実験器具（例えばピペット、ピペットチ
陽性的中率
110/12488.7 %
81.8 %
93.7 %ップ）を使用してください。
陰性的中率132/156
84.6 %
78.0 %
89.9 %
3. コンタミネーションに注意し、遺伝子検査に適した試験設備環境にて、使い捨て手袋等（パウダーフリー）及びマスクを着用※1 本品で変異型であり比較対照法で野生型であった 14 例につして測定を行ってください。試薬やサンプルが手袋等に付着しいて、血漿を用いて別法（次世代シークエンス法）による測た場合はただちに新しいものに取りかえてください。
定結果及び患者背景から考察を行いました。その結果、6 例
4. 使用期限を過ぎた試薬やコントロールは使用しないでくださについては、別法の結果でも変異型と判定されており、血漿い。
検体と組織検体の検体種間の乖離と考えられました。残り5. 指定外のコントロールは使用しないでください。
の 8 例については、いずれも試験法のカットオフ値付近の6. 試薬及び消耗品は使用する装置に適したものを使用してくだ検体でしたが、不一致の原因は特定できませんでした。
さい。

5
AE837356E

7. Box1 の構成試薬の酵素（Multiplex PCR DNA Polymerase、
Emulsion
PCR DNA Polymerase）は冷凍庫外で長時間放置されないように素早く調製・使用してください。また、冷凍試薬（Box1）の各
構成試薬及びそれらを用いて調製された試薬類は氷上で取り扱ってください。Breaking buffer 1、2 は長時間開封状態で放置しないでください。
8. プローブミックス（Hybridization Probe Mix 1〜12）の強い光への曝露は最小限にとどめてください。
9. 融解後のキットの各構成試薬及びそれらを用いて調製された試薬類は液が均一になるまで十分に攪拌し、蓋を開ける前にス
ピンダウンを行ってください。
10. 異なる製造番号の試薬又は残った試薬を注ぎ足して使用しな
いでください。
11. 測定装置については定期的に校正されたものを使用してください。また、測定装置は適切な設定を行い、装置に適した動作環境で使用してください。
12. 誤って試料をこぼした場合は、保護具を着用し試料が飛び散らないようにペーパータオルなどで静かに拭き取ってください。
拭き取った後は、次亜塩素酸ナトリウム溶液（有効塩素濃度
1.0 %以上）で浸すように拭き取り、その後水拭きしてください。
廃棄上の注意1. PCR 反応生成物は、コンタミネーションを避けるため、密閉できるビニール袋を 2 重に施し、廃棄物に関する規定に従って医療廃棄物として処理してください。
2. 検体及び本品を取り扱う際に使用した器具類は感染の可能性があるものとし、オートクレーブ等で滅菌処理するか又は 1 %次亜塩素酸等の消毒液に浸して処理し、各都道府県によって定められた規定に従って処理してください。
3. 廃液は水質汚濁防止法等の規制及び各都道府県の条例等に留意して廃液処理してください。

【保管方法・有効期間】
1. 保管方法
Box1-30〜-15 C
Box2
2〜8 C
Box3
15〜25 C指定された温度で保存してください。
2. キットの有効期間
20 カ月（使用期限は外箱の天面に表示しています。）
3. 下記構成試薬の有効期間
20 カ月: EmulsiFIRE
21 カ月: Multiplex PCR Master Mix、Breaking Buffer 1 without
Alcohols、Breaking Buffer 2 without Alcohols、Hybridization Buffer【包装単位】
30 テスト用【主要文献】(1) Fan Z et al. Antibody-induced epidermal growth factor receptor
dimerization mediates inhibition of autocrine proliferation of A431
squamous carcinoma cells. J Biol Chem. 1994; 269:27595-602.
(2) Goldstein NI et al. Biological efficacy of a chimeric antibody to theepidermal growth factor receptor in a human tumor xenograft model.
Clin Cancer Res. 1995; 1:1311-8.
(3) Yang XD et al. Eradication of established tumors by a fully humanmonoclonal antibody to the epidermal growth factor receptor
without concomitant chemotherapy. Cancer Res. 1999; 59:1236-43.
セツキシマブ（遺伝子組換え）製剤 電子添文
* (4)(5) パニツムマブ（遺伝子組換え）電子添文* (6) 日本臨床腫瘍学会, 大腸がん診療における遺伝子関連検査等のガイダンス(7) Bando H et al. A multicentre, prospective study of plasma circulating
tumour DNA test for detecting RAS mutation in patients withmetastatic colorectal cancer. Br J Cancer. 2019; 120:982-6

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神戸市西区室谷 1 丁目 3 番地の 2 〒651-2241
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神戸市中央区脇浜海岸通 1 丁目 5 番 1 号 〒651-0073
Tel 078-265-0500
6AE837356E