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Bedienungsanleitung

miniPERM®

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Bedienungsanleitung miniPERM®
Inhaltsverzeichnis
Einleitung ............................................................................................................................................................4
Konstruktion und Funktion des miniPERM® Bioreaktors
Arbeitsanleitung ..................................................................................................................................................6
Am Beispiel einer Hybridomzellkultur
Anhang.............................................................................................................................................................12
Hochzelldichte-Kulturmethode 6DXHUVWRĳEHGDUIYRQ+\EULGRP]HOOHQ
Produktionsrate
Mediumwechsel
Handling des miniPERM® Bioreaktors
Troubleshooting ................................................................................................................................................13
Problemstellung und Lösung
Literatur ............................................................................................................................................................17
Publikation/Anwendungsberichte
Zubehör............................................................................................................................................................18%HVWHOOLQIRUPDWLRQ .............................................................................................................................................19
Kurzanleitung....................................................................................................................................................20*LOWIĞUHQWVSUHFKHQGJHNHQQ]HLFKQHWH3URGXNWH%HLEHVFKËGLJWHU9HUSDFNXQJQLFKWYHUZHQGHQ%HL:LHGHUYHUZHQGXQJ.RQWDPLQDWLRQVJHIDKU

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Bedienungsanleitung miniPERM®
Einleitung
Konstruktion des miniPERM® Bioreaktors
miniPERM®LVWHLQDXV]ZHLPLWHLQDQGHUYHUEXQGHQHQ
0RGXOHQDXIJHEDXWHU%LRUHDNWRU]XU.XOWLYLHUXQJYRQ
Hybridomzellen und anderen Zellen in hoher Dichte+RFK]HOOGLFKWH.XOWXUPHWKRGH (UEHVWHKWDXV

Funktion des miniPERM® Bioreaktors
1. Dialysemembran
Die semipermeable Dialysemembran im miniPERM®
%LRUHDNWRUNąQQHQZHGHUGLH=HOOHQQRFKGLHYRQGHQ
=HOOHQIUHLJHVHW]WHQKRFKPROHNXODUHQ3URGXNWHZLH
z.B. die sezernierten monoklonalen Antikörper, passieren.

• dem ProduktionsmodulHLQHUQXUHLQPDOYHUZHQG
 EDUHQVFKHLEHQIąUPLJHQ=HOONXOWXUNDPPHUPLWPO RGHUPO PLQL3(50®FODVVLFRGHU+'& 
Volumen und• dem VersorgungsmodulHLQHPDXWRNODYLHUEDUHQ PHKUIDFKYHUZHQGEDUHQRGHUVWHULOHQHLQPDO YHUZHQGEDUHQ0HGLXPEHKËOWHUDXV.XQVWVWRĳ 3RO\FDUERQDW PLWPO9ROXPHQGDVPLWGHP
 3URGXNWLRQVPRGXOYHUEXQGHQZLUG

1ËKUVWRĳH *OXNRVH$PLQRVËXUHQ 9LWDPLQH,RQHQ
und im Medium physikalisch gelöste Gase (O2, CO2)
können dagegen aus dem Versorgungsmodul nahezu
XQJHKLQGHUWLQGDV3URGXNWLRQVPRGXOGLĳXQGLHUHQ:HJHQGHVPHKUDOVIDFKHQ¶EHUVFKXVVHVDQ
9HUVRUJXQJVPHGLXPNąQQHQGLH=HOOHQĞEHUHLQHQ
ODQJHQ=HLWUDXPYHUVRUJWZHUGHQ

Das Produktionsmodul ist an der dem VersorgungsPRGXO]XJHZDQGWHQ6HLWHYRQHLQHUDialysemembran
0:&2N' DEJHVFKORVVHQ6LQGEHLGH0RGXOH
PLWHLQDQGHUYHUEXQGHQELOGHWGLHVHPLSHUPHDEOH
Dialysemembran eine Trennwand zwischen beiden.
Die nach außen gerichtete Seite des ProduktionsPRGXOVEHVWHKWDXVHLQHUGĞQQHQJDVGXUFKOËVVLJHQ
Silikonmembran.

*OHLFK]HLWLJNąQQHQGLHYRQGHQ=HOOHQDEJHJHEHQHQsauren (z.B. Milchsäure), toxischen (z.B. Ammonium,RQHQ XQGDQGHUHQ0HWDEROLWHĞEHUGLH'LDO\VHPHPEUDQGDV3URGXNWLRQVPRGXOYHUODVVHQXQGLQGHP
wesentlich größeren Volumen des Versorgungsmoduls
DXIJHIDQJHQXQGQHXWUDOLVLHUWZHUGHQ'LH(QWVRUJXQJYRQ&22 aus dem miniPERM®
%LRUHDNWRUZLUGGDGXUFKJHIąUGHUWGDVVVRZRKOSK\VLNDOLVFKDOVDXFKLQ)RUPYRQ1D+&23 im
Medium gelöstes CO2 die Dialysemembran passieren
XQGVRYRP3URGXNWLRQVPRGXOLQGDV9HUVRUJXQJV
modul gelangen kann.

'HU6FKUDXEYHUVFKOXVVGHV9HUVRUJXQJVPRGXOVLVW
mit einer integrierten Gasaustauschmembran
ausgestattet.

Versorgungsmodul

Produktionsmodul

Silikondichtungsring

Versorgungsmodul

Zellprodukt
Glukose6WĞW]JLWWHU

LaktatDialysemembran

NH4+
CO2

Produktionsmodul

Zelle

Silikonmembran

O2

RahmenSchraubkappen
Silikonmembran
Dialysemembran

6FKUDXEYHUVFKOXVV
mit integrierter Gasaustauschmembran

Versorgungsmodul

4

8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJ9

9RUGHU'LDO\VHPHPEUDQEHıQGHWVLFKDXIGHUGHP
9HUVRUJXQJVPRGXO]XJHZDQGWHQ6HLWHHLQ6WĞW]JLWWHU
'LHVHV*LWWHUVFKĞW]W]XPHLQHQGLH'LDO\VHPHPEUDQYRUPHFKDQLVFKHQ9HUOHW]XQJHQ=XPDQGHUHQVRUJW
HVIĞUHLQH9HUZLUEHOXQJGHV0HGLXPVDQGHU0HP
EUDQREHUĲËFKHXQGYHUEHVVHUWGLH'LĳXVLRQYRQ1ËKUVWRĳHQXQG0HWDEROLWHQ

Bedienungsanleitung miniPERM®
2. Silikonmembran'HU6DXHUVWRĳEHGDUIZLUGGXUFK(LQGLĳXQGLHUHQYRQDWPRVSKËULVFKHP6DXHUVWRĳDXVGHU,QNXEDWRUDWPRsphäre durch die Silikonmembran in das ProduktiRQVPRGXOJHGHFNW$XIJOHLFKHP:HJYHUOËVVWGDVLQHQWVSUHFKHQGJURĔHQ0HQJHQYRQGHQ=HOOHQSURGXzierte CO2 das Produktionsmodul.
,QIROJHGHUJXWHQ&22-Durchlässigkeit der Silikonmembran steht das im Medium des Produktionsmoduls
enthaltene NaHCO3 mit dem CO2GHU,QNXEDWRUDWPRsphäre im Gleichgewicht.

4. Universaldrehvorrichtung
8PHLQHQRSWLPDOHQ6WRĳDXVWDXVFKDQGHU0HPEUDQ
und somit eine optimale Versorgung der Zellen zu
erreichen, muss sowohl das Versorgungsmedium als
auch die Zellsuspension im Reaktionsmodul ständig
umgewälzt werden.
$XIJUXQGGHUKRKHQ=HOOGLFKWHQGLHLPPLQL3(50®
%LRUHDNWRUHUUHLFKWZHUGHQVROOWHIĞUGLH.XOWXUHLQH
KąKHUH8PGUHKXQJVJHVFKZLQGLJNHLWDOVEHLĞEOLFKHQ)ODVFKHQGUHKYRUULFKWXQJHQ PD[8S0 HLQJHVWHOOW
werden.

3. Schraubverschluss mit Gasaustauschmembran
Die Gasaustauschmembran der Schraubkappe desVersorgungsmoduls ermöglicht den Druckausgleich]ZLVFKHQGHP%LRUHDNWRUXQGGHU,QNXEDWRUDWPR
sphäre.

Bedienungsanleitung miniPERM®
Arbeitsanleitung$OOH$UEHLWHQPĞVVHQ
in der sterilen WerkEDQNYRUJHQRPPHQ
werden. Die Zellen werden
unter den im jeweiligen LaERUĞEOLFKHQ%HGLQJXQJHQNXOWLYLHUW]HQWULIXJLHUWXQG
DXIGLHDQJHJHEHQH'LFKWH
eingestellt.

¶EHUSUĞIHQ6LHGLH
Schnapphaken am
Produktionsmodul ob
GLHVHHLQJHUDVWHWVLQGJJI
HLQ]HOQQDFKIDVVHQ

Das VersorgungsPRGXOGDUIEHLPD[121°C und nichtKËXıJHUDOV[DXWRNODYLHUW
werden, höhere TemperatuUHQIĞKUHQ]XU9HUIRUPXQJ
GHV.XQVWVWRĳPDWHULDOV

8PHLQHQ¶EHU
druck im Versorgungsmodul zu
YHUKLQGHUQVROOWHGHU
6FKUDXEYHUVFKOXVVGHV
Versorgungsmoduls während
des Zusammenbaus desBioreaktors gelockert sein.

¶EHUSUĞIHQ6LHGLH
Schnapphaken am
Produktionsmodul ob
GLHVHHLQJHUDVWHWVLQGJJI
HLQ]HOQQDFKIDVVHQ

1. Vorbereitung der Zellen für den miniPERM®
Bioreaktor am Beispiel einer Hybridomzellkultur)ĞUGHQ6WDUWHLQHU.XOWXULPPLQL3(50® classic
3URGXNWLRQVPRGXOZHUGHQFDPOHLQHU
=HOOVXVSHQVLRQPLWHLQHU'LFKWHYRQFD[6=HOOHQPO JHVDPW[6 Zellen) benötigt
$EE ,QGHU5HJHOUHLFKWKLHU]XGHU,QKDOWYRQJXWEHZDFKVHQHQFP2=HOONXOWXUĲDVFKHQ

1

Bei der Verwendung des miniPERM®+'&3URGXNWLRQVPRGXOVZHUGHQ[6=HOOHQPOLQPO
0HGLXPYRUEHUHLWHW
2. Vorbereitung des miniPERM® Bioreaktors
2.1 miniPERM® komplett steril
Produktions- und Versorgungsmodul sind miteinanGHUYHUEXQGHQXQGVWHULOLVLHUW'HU%LRUHDNWRUZLUG
DOV(LQPDODUWLNHOJHOLHIHUWXQGLVWQLFKWDXWRNODYLHUEDU
Der miniPERM®%LRUHDNWRULVWVRIRUWJHEUDXFKVIHUWLJ
(Abb. 2).
2.2 miniPERM® mehrfach verwendbar
Die Produktionsmodule werden als Einmalartikel
HLQ]HOQVWHULOYHUSDFNW $OXEHXWHO JHOLHIHUW'DVPHKUIDFKYHUZHQGEDUH9HUVRUJXQJVPRGXOPXVVYRU
*HEUDXFKGXUFK$XWRNODYLHUHQVWHULOLVLHUWZHUGHQš 'DV9HUVRUJXQJVPRGXOZLUGLQHLQHP$XWRNODYHQ EHXWHOYHUSDFNW $EE XQGPLQEHLPD[ Ɠ&RKQH6FKUDXEYHUVFKOXVVDXWRNODYLHUW VLHKH
auch Punkt 7).
• Der Alubeutel des Produktionsmoduls wird so DXIJH]RJHQGDVVGDV3URGXNWLRQVPRGXODXIGHQ
 6FKUDXENDSSHQGHU/XHU/RFN$QVFKOĞVVHVWHKW 'DV0RGXOQLFKWDXVGHUQRFKYHUEOHLEHQGHQ
 .XQVWVWRĳYHUSDFNXQJQHKPHQš 'DVDXWRNODYLHUWH9HUVRUJXQJVPRGXOZLUGPLWOHLFK WHP'UXFNDXIGDVLQGHUJHąĳQHWHQ9HUSDFNXQJ
 OLHJHQGH3URGXNWLRQVPRGXOJHGUĞFNW $EE 
 'DEHLPĞVVHQGLHYLHU6FKQDSSKDNHQGHV3URGXN WLRQVPRGXOVLQGLHYLHU$XVVSDUXQJHQDP5DQG
 GHV9HUVRUJXQJVPRGXOVDXIJHVHW]WXQGKąUEDU
eingerastet werden (Abb. 4a).
Das Versorgungsmodul wird dabei gegen den im
Produktionsmodul liegenden Silikonring gepresst.
š 'LH.XQVWVWRĳYHUSDFNXQJGHV3URGXNWLRQVPRGXOV ZLUGMHW]WHQWIHUQWš 'HUVRYRUEHUHLWHWHPLQL3(50® Bioreaktor ist jetzt
 JHEUDXFKVIHUWLJ

2

1,2 bar
121°C/250°F
20 min

3

4

4a

6

Bedienungsanleitung miniPERM®

3. Befüllen des miniPERM® Bioreaktors
3.1 Einfüllen der Zellsuspension in das Produktionsmodul
Das %HIĞOOHQ des Produktionsmoduls mit der ZellsusSHQVLRQJHVFKLHKWPLWWHOV6SULW]HĞEHUHLQHGHUGUHLĳQXQJHQPLW/XHU/RFN$QVFKOXVV%HLP(LQIĞOOHQGHU
Zellsuspension ist
JOHLFK]HLWLJIĞU(QWOĞIWXQJ]XVRUJHQ+LHUIĞUPXVV
eine 2. Schraubkappe am
3URGXNWLRQVPRGXOJHąĳQHW
werden.

0HGLXPUHVWHDXIGHP
5DQGGHUĳQXQJPĞVVHQYRUGHP9HUschließen abgesaugt werden.

• Der zusammengesetzte miniPERM® Bioreaktor
wird mit dem Produktionsmodul nach oben so DXIGHQ6WËQGHUJHVWHOOWGDVVVLFKHLQHGHUGUHL
 6FKUDXENDSSHQDPKąFKVWHQ3XQNWEHıQGHW $EE š 'LHYRUEHUHLWHWH=HOOVXVSHQVLRQ RGHUPO  ZLUGPLWHLQHU(LQPDOVSULW]H ƉPO ĞEHUHLQ VWHULOHV(LQIĞOOUąKUFKHQ (LQIĞOOWXEXV DXIJH]RJHQ $EE %HYRUGLH=HOOVXVSHQVLRQ HLQJHIĞOOWZLUGHYHQWXHOOH/XIWEODVHQDXVGHU
 6SULW]HHQWIHUQHQš 'LHREHUH6FKUDXENDSSH $ ZLUGHQWIHUQWXQG
 GLH6SULW]H RKQH(LQIĞOOWXEXV DXIGHQ/XHU/RFN
Anschluss gedreht (Abb. 7).
• Der miniPERM® Bioreaktor wird gedreht, bis sicheine der beiden anderen Schraubkappen am KąFKVWHQ3XQNWEHıQGHW• Eine 2. Schraubkappe (C) am höchsten Punkt
wird zum Druckausgleich gelockert und die
Zellsuspension langsam in das Produktionsmodul
hineingespritzt (Abb. 8).
š (QWOĞIWXQJVąĳQXQJ & PLWHLQHU6FKUDXENDSSH YHUVFKOLHĔHQ $EE • Den miniPERM® Bioreaktor so drehen, dass sich
 GLH%HIĞOOXQJVąĳQXQJ $ PLWGHUGDUDQEHıQGOLFKHQ 6SULW]HDPKąFKVWHQ3XQNWEHıQGHW $EE š 'LH6SULW]HZLUGDEJHVFKUDXEW,P3URGXNWLRQV PRGXOHQWVWDQGHQH/XIWEODVHQVROOWHQGXUFKleichten Druck mit den Fingerspitzen gegen die 6LOLNRQPHPEUDQHQWIHUQWZHUGHQ• Danach wird das Produktionsmodul durch
 $XIVFKUDXEHQHLQHUGULWWHQ6FKUDXENDSSHRGHU HLQHV6HSWXPYHUVFKOXVVHVDXIGHQ/XHU/RFN $QVFKOXVV $ YHUVFKORVVHQ $EE 

5

6

7

8

9

10

11

7

Bedienungsanleitung miniPERM®

Nicht mehr als 400
PO0HGLXPHLQIĞOOHQ
Das Vorhandensein
einer Gasphase im Versorgungsmodul ist VorrausVHW]XQJIĞUGHQ(UIROJGHU
Kultur.
Die UmdrehungsgeVFKZLQGLJNHLWLVWYRQ
GHPYHUZHQGHWHQ=HOOW\SXQGGHUYHUZHQGHWHQ=HOOOLQLHDEKËQJLJ
• murine Hybridomzellen 8S0
• humane Hybridom- und WUDQVı]LHUWH=HOOHQ
2 - 10 UpM.
Der miniPERM® Bioreaktor dreht sich mit
GHU+ËOIWHGHUDQGHU
Steuereinheit eingestellten
Umdrehungsgeschwindigkeit, da der Durchmesser
des miniPERM® Bioreaktors
doppelt so groß ist wie derDurchmesser der AntriebsUROOHGHU8QLYHUVDOGUHKYRUrichtung (Abb.14).

8

3.2 Befüllen des Versorgungsmoduls'DV9HUVRUJXQJVPRGXOZLUGGXUFKGLHJURĔHĳQXQJZLHIROJWEHIĞOOWš'HU6FKUDXEYHUVFKOXVVGHU%HIĞOOXQJVąĳQXQJGHV 9HUVRUJXQJVPRGXOVZLUGDEJHQRPPHQXQG POWHPSHULHUWHV0HGLXP Ɠ& HLQJHIĞOOW(Abb. 12).
š8PHYWOHQWVWDQGHQHQ'UXFNLP%LRUHDNWRU]X HQWIHUQHQZLUGPLWHLQHU+DQGJHJHQGLH
 6LOLNRQPHPEUDQLP3URGXNWLRQVPRGXOJHGUĞFNW(Abb. 13).
š'LH%HIĞOOXQJVąĳQXQJZLUGPLWHLQHP6FKUDXEYHU VFKOXVVIHVWYHUVFKORVVHQ• Der miniPERM®%LRUHDNWRUZLUGDXIGLH8QLYHUVDO GUHKYRUULFKWXQJLP,QNXEDWRUJHOHJWXQGGLH
Umdrehungsgeschwindigkeit zwischen 0.1 und
40.0 UpM eingestellt.

350 bis 400 ml Medium

12

13

14

Die tatsächliche Drehgeschwindigkeit desminiPERM® Bioreaktors bei einer Einstellung von 10.0 auf der
Steuereinheit der Universaldrehvorrichtung
beträgt 5 UpM.

Bedienungsanleitung miniPERM®

,VWGLH6LOLNRQPHPbran nach außen
DXIJHEOËKWGĞUIHQDXINHLQHQ)DOOGLH6FKUDXEkappen an den Luer-Lock$QVFKOĞVVHQGHV3URGXNWLRQVPRGXOVJHąĳQHWZHUGHQ$XIJUXQGGHVLP9HUVRUgungsmodul herrschenden¶EHUGUXFNVZĞUGHEHLPĳQHQGLH=HOOVXVSHQVLRQherausspritzen und den
Bioreaktor kontaminieren.
'HVKDOEPXVVYRUKHUIĞU
Druckausgleich gesorgt
werden.

Bei der VerwenGXQJYRQ6HUXPLP
Medium kann es zu
Schaumbildung im BioreakWRUNRPPHQ'DEHLPĳnen der Schraubkappe desProduktionsmoduls Schaum
DXVGHUĳQXQJWUHWHQXQG
dieser eine Kontamination
YHUXUVDFKHQNDQQLVWHV
ratsam, dem Medium im
Versorgungsmodul ein Antischaummittel zuzusetzen(siehe Troubleshooting).

0HGLXPUHVWHDXI
dem Rand der(QWQDKPHąĳQXQJPĞVVHQYRUGHP9HUVFKOLHßen abgesaugt werden.

$EKËQJLJYRPHQWnommenen ProbenYROXPHQVROOWHGDV
9ROXPHQGXUFKIULVFKHV
Medium ersetzt werden.

4. Probennahme3UREHQQDKPHĞEHUHLQHGHUGUHLĳQXQJHQ
am Produktionsmodul• Der miniPERM® Bioreaktor wird in die sterile
Werkbank gebracht.
š(VZLUGIĞU'UXFNDXVJOHLFKJHVRUJW+LHUIĞUZLUG GHU%LRUHDNWRUPLWHLQHU+DQGIHVWJHKDOWHQPLW GHQ)LQJHUQZLUGHLQOHLFKWHU'UXFNDXIGLH
 6LOLNRQPHPEUDQLP3URGXNWLRQVPRGXODXVJHĞEW 0LWGHUDQGHUHQ+DQGZLUGGHU6FKUDXEYHUVFKOXVVdes Versorgungsmoduls gelockert (nicht
 DEVFKUDXEHQ GHU¶EHUGUXFNNDQQHQWZHLFKHQ $EED $QVFKOLHĔHQGGHQ6FKUDXE YHUVFKOXVVZLHGHUYHUVFKOLHĔHQš'HU%LRUHDNWRUZLUGVRDXIGHQ6WËQGHUJHVWHOOW GDVVHLQHGHUGUHLĳQXQJHQGHV3URGXNWLRQV
moduls am höchsten Punkt (A) liegt. Die
 6FKUDXENDSSHGLHVHUĳQXQJZLUGDEJHVFKUDXEW
(Abb. 16).
š$XIVFKUDXEHQHLQHU6SULW]HJHHLJQHWHU*UąĔH MH QDFK3UREHQYROXPHQFDPO DXIGHQ/XHU/RFN
Anschluss (A).
• Der Bioreaktor wird so gedreht, dass die (QWQDKPHąĳQXQJXQWHUKDOEGHV)OĞVVLJNHLWV
spiegels liegt (Abb. 17).
 'LH3UREHNDQQDXIJH]RJHQZHUGHQ• Vor Abnahme der Spritze wird der Bioreaktor so JHGUHKWGDVVVLFKGLH(QWQDKPHąĳQXQJ $ 
 ZLHGHUDPKąFKVWHQ3XQNWEHıQGHW $EE • Nach Abnahme der Spritze sollten im 3URGXNWLRQVPRGXOHQWVWDQGHQH/XIWEODVHQGXUFKleichten Druck mit den Fingerspitzen gegen die 6LOLNRQPHPEUDQHQWIHUQWZHUGHQš'LH(QWQDKPHąĳQXQJZLUGPLWHLQHUVWHULOHQ 6FKUDXENDSSHYHUVFKORVVHQ $EE XQGGHU
 %LRUHDNWRUZLHGHULQGHQ,QNXEDWRUJHOHJW

3/4

15
3/4

15a

16

17

18

19

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Bedienungsanleitung miniPERM®

Bei der Verwendung
YRQ6HSWXPYHUVFKOĞVVHQVROOWHQ.DQĞOHQ *[5/8’’) mit
geringem Durchmesser
YHUZHQGHWZHUGHQXPGDV
Einstichloch so klein wie
möglich zu halten. NachELVPDOLJHP(LQVWHFKHQPXVVGHU6HSWXPYHUschluss gegen einen sterilen
Verschluss ausgetauscht
werden.
'LH(QWQDKPHYRQ
Proben oder das
Ernten muss schnell
GXUFKJHIĞKUWZHUGHQXPHLQ
Sedimentieren und VerklumSHQGHU=HOOHQ]XYHUKLQdern.

0HGLXPUHVWHDXI
dem Rand der(QWQDKPHąĳQXQJ
absaugen.

10

4.2 Probennahme über einen Septumverschluss(LQHUGHUGUHL/XHU/RFN$QVFKOĞVVHDP3URGXNWLRQVPRGXONDQQGXUFKHLQHQ6HSWXPYHUVFKOXVV
ersetzt werden, wodurch das Kontaminationsrisikoreduziert wird.
• Der miniPERM® Bioreaktor wird wie unter 4.1
 EHVFKULHEHQYRUEHUHLWHWš'DV(LQVWLFKORFKGHV6HSWXPYHUVFKOXVVHVZLUG
mit einem alkoholgetränkten (70% pharma ]HXWLVFKHU$ONRKRO VWHULOHQ7XSIHUDEJHZLVFKWš(LQHVWHULOH.DQĞOHPLW6SULW]H ƉPO ZLUGLQGDV
 (LQVWLFKORFKGHV6HSWXPYHUVFKOXVVHVJHVWHFNW
und der miniPERM® Bioreaktor so gedreht, dass
 GHU6HSWXPYHUVFKOXVVXQWHUKDOEGHV)OĞVVLJNHLWV
spiegel liegt (Abb. 21).
š'LH3UREHZLUGDXIJH]RJHQš'LH.DQĞOHDXVGHP(LQVWLFKORFKHQWIHUQHQš'DV(LQVWLFKORFKGHV6HSWXPYHUVFKOXVVHVPLW
einem alkoholgetränkten (70% pharmazeutischer
 $ONRKRO VWHULOHQ7XSIHUDEZLVFKHQ
5. Ernte'LH(UQWHLQWHUYDOOHXQGGDV9ROXPHQVLQGDEKËQJLJYRQGHUHUUHLFKWHQ=HOOGLFKWHXQGGHUYRQGHQ
=HOOHQSURGX]LHUWHQ3URGXNWPHQJH,P'XUFKVFKQLWW
werden 1 - 2 x wöchentlich 2/3GHV=HOONXOWXUĞEHUstandes geerntet. Die Ernte wird analog zur ProbenQDKPHGXUFKJHIĞKUW• Der miniPERM® Bioreaktor wird wie unter 4.1
 EHVFKULHEHQYRUEHUHLWHWš8P]XYHUKLQGHUQGDVVVLFKEHLP$XI]LHKHQHLQ
 8QWHUGUXFNLP3URGXNWLRQVPRGXODXIEDXWLVWHV
notwendig eine zweite Schraubkappe an
Position B (Abb. 22) zu lockern.
š'DV]XHUQWHQGH9ROXPHQZLUGDXIJH]RJHQš9HUVFKOLHĔHQGHU]ZHLWHQĳQXQJ % PLWHLQHU
sterilen Schraubkappe.
• Anschließend wird der Bioreaktor so gedreht,
 GDVVVLFKGLH(QWQDKPHąĳQXQJ $ DPKąFKVWHQ 3XQNWEHıQGHW'LH6SULW]HZLUGDEJHVFKUDXEWš'DVHQWQRPPHQH(UQWHYROXPHQZLUGGXUFK IULVFKHV0HGLXPHUVHW]W'LH%HIĞOOXQJHUIROJW
genauso wie unter 3.1 beschrieben.
$EKËQJLJYRQGHUHUUHLFKWHQ=HOOGLFKWHNąQQHQGLH
HQWQRPPHQHQ=HOOHQLPIULVFKHQ0HGLXPUHVXVSHQGLHUWXQGZLHGHULQGDV3URGXNWLRQVPRGXO]XUĞFNgegeben werden.

20

21

22

Bedienungsanleitung miniPERM®

Sauberes Arbeiten beim
0HGLXPZHFKVHOLVWYRQ
größter Wichtigkeit.
'LH6FKUDXEYHU
VFKOĞVVHQXUPLW
destilliertem WasserVSĞOHQ.HLQ(WKDQRO3URSDQRORGHUDQGHUH'HVLQIHNWLRQVPLWWHO
Lösungsmittel mit alkoholhaltigen
9HUELQGXQJHQYHUZHQGHQ'HU
6FKUDXEYHUVFKOXVVHQWKËOWHLQH
Filtermembran, deren Funktion
durch Alkohol beeinträchtigt wird.

6. Wechsel des Versorgungsmediums%HLP0HGLXPZHFKVHOHUIROJWGLH%HIĞOOXQJPLWIULVFKHP0HGLXPQDFKGHP$XVJLHĔHQGHVYHUEUDXFKWHQ0HGLXPVJHQDXVRZLHXQWHUIĞUGLH
(UVWEHIĞOOXQJEHVFKULHEHQ• Der Bioreaktor wird unter die sterile Werkbank
gebracht.
š'HU6FKUDXEYHUVFKOXVVGHU%HIĞOOXQJVąĳQXQJDPVersorgungsmodul wird abgeschraubt.
š'DVYHUEUDXFKWH0HGLXPZLUGLQHLQHQGHVLQı]LHUWHQ $EIDOOEHKËOWHUHQWOHHUW $EE šPOIULVFKHVWHPSHULHUWHV0HGLXP Ɠ& 
 ZLUGHLQJHIĞOOW $EE š8PHYWOHQWVWDQGHQHQ'UXFNLP%LRUHDNWRU]X HQWIHUQHQZLUGZLHXQWHUEHVFKULHEHQIĞU
Druckausgleich gesorgt.
š'LH%HIĞOOXQJVąĳQXQJZLUGPLWHLQHPVWHULOHQ 6FKUDXEYHUVFKOXVVIHVWYHUVFKORVVHQ

Der Ausgießrand der%HIĞOOXQJVąĳQXQJDPVersorgungsmodul ist
VRNRQVWUXLHUWGDVVHLQWURSIHQIUHLHV$XVJLHĔHQGHV0HGLXPV
möglich ist. Falls es doch einmal
YRUNRPPWGDVVHLQ0HGLXPUHVW
DP6FKUDXEJHZLQGHE]ZDXI
dem Rand hängen bleibt oder
GDUDQKHUXQWHUOËXIWVROOWHGLHVHU
Mediumrest abgesaugt werdenoder mit einem alkoholgetränkten(70% pharmazeutischer Ethanol)
VWHULOHQ7XSIHUHQWIHUQWZHUGHQ
1LFKWDEĲDPPHQ

7. Reinigung und Sterilisation des mehrfach
verwendbaren Versorgungsmoduls'DVPHKUIDFKYHUZHQGEDUH9HUVRUJXQJVPRGXONDQQ[DXWRNODYLHUWZHUGHQ'DQDFKNDQQHV]X
0DWHULDOYHUËQGHUXQJHQ]%9HUIRUPXQJXQG5LVVELOGXQJNRPPHQ8P%HVFKËGLJXQJHQGHV.XQVWVWRĳPDWHULDOV]XYHUPHLGHQVROOWHGDV9HUVRUJXQJVPRGXOIUHL QLFKWJHTXHWVFKW LP$XWRNODYHQSRVLWLRQLHUWZHUGHQ'LH7HPSHUDWXUGHV$XWRNODYHQGDUIPD[121°C betragen.
• Nach Beendigung der Kultur werden die beiden
 0RGXOHYRQHLQDQGHUJHWUHQQWLQGHPGLH6FKQDSS KDNHQGHV3URGXNWLRQVPRGXOVPLW+LOIHGHV PLWJHOLHIHUWHQĳQHUVYRQGHP9HUVRUJXQJVPRGXO
gelöst werden. Hierzu wird die Seite mit dem
 +DNHQHLQJHVHW]W $EE 
Bei der Verwendung
YRQ'HVLQIHNWLRQVPLWWHOQ• Das Versorgungsmodul wird mit heißem Wasser
VROOWHIROJHQGHVEHDFKWHW
und mit neutraler Laborreinigungslösung (z.B. RBSZHUGHQ'HUPLQL3(50® Biore 1HXWUDO&5RWK*PE+ JHUHLQLJWXQGPLW$TXD
DNWRUXQGGHUIĞUGLH.XOWLYLHUXQJ  GHVWQDFKJHVSĞOW1LFKWLQGHU6SĞOPDVFKLQH
YHUZHQGHWH,QNXEDWRUVROOWHQwaschen.
ausschließlich mit 70% pharma• Das Versorgungsmodul wird anschließend]HXWLVFKHP(WKDQRO,VRSURSDQRO
20 Minuten bei max. 121°C ohne
RGHUPLW+DXWGHVLQIHNWLRQVPLW
6FKUDXEYHUVFKOXVVDXWRNODYLHUWWHOQZHOFKHDXI(WKDQROEDVLHUHQ(VGDUINHLQDONDOLVFKHU.RUURVLRQVSURWHFWRULP
NXU]]HLWLJGHVLQı]LHUWZHUGHQ$XWRNODYHQZDVVHUYHUZHQGHWZHUGHQ$QGHUH'HVLQIHNWLRQVPLWWHOLQVEHVRQGHUHVROFKHGLHTXDUternäre Ammoniumsalze (z.B.
Baricidal, Biocidal) oder ionische
Tenside enthalten, können Risse
XQG%UĞFKHDP.XQVWVWRĳPDWHULDOYHUXUVDFKHQXQGVRPLW]X
Undichtigkeiten im BioreaktorIĞKUHQ

23

350 bis 400 ml Medium

2425

8. Reinigung der Universaldrehvorrichtung'LH8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJVROOWHPLWHLQHPPLW
SKDUPD]HXWLVFKHQ(WKDQRORGHU,VRSURSDQROJHWUËQNWHQ7XFKREHUĲËFKHQGHVLQı]LHUWZHUGHQ1LFKWDXWRNODYLHUHQ

11

Bedienungsanleitung miniPERM®
Kultivierung hoher Zelldichten im miniPERM®
Hochzelldichte-Kulturmethode$XIJUXQG GHU NRQVWUXNWLYHQ 0HUNPDOH GHV PLQL3(50®
Bioreaktors ist es möglich, Zellen zu wesentlich höheren'LFKWHQ +RFK]HOOGLFKWH.XOWXUPHWKRGH ]XNXOWLYLHUHQDOVGLHVHVLQGHUNRQYHQWLRQHOOHQ6WDQGNXOWXUPąJOLFKLVWEHL
GHUGHU6DXHUVWRĳEHGDUIGHU=HOOHQOHGLJOLFKĞEHUGLH9HUschlusskappe gedeckt werden kann. Daher ist es mögOLFKDXFKGLHYRQGHQ=HOOHQVH]HUQLHUWHQ3URGXNWHLQZHsentlich höherer Konzentration zu produzieren als in einer
NRQYHQWLRQHOOHQ6WDQGNXOWXUNaHCO3 (DMEM 3,78 g/l) ist in den meisten Medien soJHZËKOWGDVVHUHLQH3XĳHUNDSD]LWËWIĞUHLQHQ=HLWUDXP
YRQELV]X:RFKHQJHZËKUOHLVWHQNDQQ$XIJUXQGGHVRSWLPDOHQ*DVDXVWDXVFKHVLPPLQL3(50®
%LRUHDNWRU ZĞUGH VLFK EHL GHU +RFK]HOOGLFKWH
Kulturmethode im miniPERM® zuerst die Mediumkapa]LWËWLP*OXNRVHJHKDOWHUVFKąSIHQEHYRUGHUS+,QGLNDWRU HLQHQ )DUEXPVFKODJ GHV 9HUVRUJXQJVPHGLXPV YRQURWQDFKJHOEDQ]HLJWXQGVRPLWGLH3XĳHUNDSD]LWËWGHV
,P 9HUJOHLFK ]XU 6WDQGNXOWXU  - max. 106 Zellen/ml) 0HGLXPV 0HWDEROLWH ]X QHXWUDOLVLHUHQ XQG DE]XSXĳHUQ
können im miniPERM® %LRUHDNWRU =HOOGLFKWHQ YRQ HUVFKąSIWLVW
107 Zellen/ml und mehr erreicht werden. Die hohen ZellGLFKWHQ VLQG DXI GLH =XIXKU JURĔHU 0HQJHQ YRQ 1ËKU ,Q$EKËQJLJNHLWGHU=HOOOLQLHXQGGHV0HGLXPVPXVVPLW]XVWRĳHQ XQG 6DXHUVWRĳ VRZLH DXI GLH (QWVRUJXQJ YRQ QHKPHQGHU=HOOGLFKWHGDV9HUVRUJXQJVPHGLXPKËXıJHU
0HWDEROLWHQXQGGLHŚ$EDWPXQJŗYRQ&22 angewiesen.
JHZHFKVHOW ZHUGHQ :LU HPSIHKOHQ  [ SUR :RFKH
$OV ,QGLNDWRU IĞU KRKH =HOOGLFKWHQ 7 Zellen/ml im®
Die im miniPERM Produktionsmodul integrierte Dialyse- miniPERM®  LVW HLQH 2UDQJH*HOEIËUEXQJ GHV 0HGLXPVPHPEUDQWUHQQWGLH=HOOHQXQGGDV=HOOSURGXNWYRQGHQ im Produktionsmodul zu beobachten.
1ËKUVWRĳHQXQGGHQ0HWDEROLWHQXQGJHZËKUOHLVWHWVRPLW
eine optimale Versorgung der Zellen und Entsorgung der Handling des miniPERM® Bioreaktors
Metabolite. Eine im Produktionsmodul integrierte Silikon- 'DV 9HUVRUJXQJVPHGLXP VROOWH YRU GHP (LQIĞOOHQ DXIPHPEUDQVRUJWIĞUHLQHDXVUHLFKHQGH22-Versorgung und Ɠ& WHPSHULHUW ZHUGHQ GHQQ QDFK GHP %HIĞOOHQ XQGCO2-Entsorgung der Zellen.
Verschließen des Versorgungsmoduls und dem Einbringen des miniPERM® %LRUHDNWRUV LQ GHQ ,QNXEDWRU ZLUG
6DXHUVWRĳEHGDUIYRQ+\EULGRP]HOOHQ
VLFKGLHĞEHUGHP0HGLXPEHıQGOLFKH*DVSKDVH HWZD'HU 6DXHUVWRĳEHGDUI YRQ +\EULGRP]HOOHQ OLHJW LQ GHU PO HUZËUPHQXQGDXVGHKQHQ3URƓ&EHWUËJW*UąĔHQRUGQXQJYRQƐJ22 pro 106 Zellen pro Stunde.
die Volumenzunahme 1/273 des Volumens bei 0°C. Bei
HLQHU*DVSKDVHYRQPOXQGEHL9HUZHQGXQJYRQƓ&
%HL HLQHU =HOOGLFKWH YRQ 7 =HOOHQPO EHL ]%  PO kaltem Medium, also bei einem Temperaturunterschied
total) wie sie in dem miniPERM® Bioreaktor leicht erreicht YRQƓ&ZĞUGHGDV9ROXPHQGHU*DVSKDVHXPHWZDZHUGHQNDQQEHWUËJWGHU6DXHUVWRĳEHGDUIGHU[7 24 ml zunehmen und zu einem beträchtlichen Druck=HOOHQLQGHQPO6XVSHQVLRQGHV3URGXNWLRQVPRGXOV anstieg (ca. 0,1 bar) im miniPERM® %LRUHDNWRU IĞKUHQ
(miniPERM®FODVVLF HWZDPJ6WXQGH
'LHV NąQQWH ]XU $XIEOËKXQJ GHU 6LOLNRQPHPEUDQ LP
3URGXNWLRQVPRGXOIĞKUHQ
Produktionsrate
Um eine bestimmte Menge an Zellprodukt (Hybridomzel- (VNRPPWQRFKHLQDQGHUHU(ĳHNWKLQ]XGHUW\SLVFKIĞU
OHQPRQRNORQDOH$QWLNąUSHU ]XHU]HXJHQEHQąWLJWPDQ GLH .XOWLYLHUXQJ LQ 1D+&23JHSXĳHUWHQ 0HGLHQ LQ JHHLQHHQWVSUHFKHQGH$Q]DKOYRQ=HOOHQ:LHYLHOH=HOOHQ]XU VFKORVVHQHQ*HIËĔHQLVWXQG]XHLQHPZHLWHUHQ$QVWLHJ(U]HXJXQJ HLQHU EHVWLPPWHQ 0HQJH YRQ PRQRNORQDOHQ GHV 'UXFNV LP 9HUVRUJXQJVPRGXO IĞKUW 'D VLFK LQ GHU$QWLNąUSHUQEHQąWLJWZHUGHQKËQJWYRQGHQLQGLYLGXHOOHQ Gasphase des Versorgungsmoduls zu Beginn der Kultur(LJHQVFKDIWHQGHUMHZHLOLJHQ=HOOOLQLHDE+\EULGRP]HOOHQ LPDOOJHPHLQHQ/XIWXQGQLFKWGLH&22KDOWLJH,QNXEDWRUDWSURGX]LHUHQ QDFK )D]HNDV GH 6W *URWK - ,PPXQRO PRVSKËUHEHıQGHWVWHKWGHP1D+&23 im Medium nicht
0HWKRGV LQ6WGW\SLVFKHUZHLVH]ZL- der entsprechende CO23DUWLDOGUXFNJHJHQĞEHU,QIROJHschen 4 x 107 und 7 x 108$QWLNąUSHUPROHNĞOHSUR=HOOH
dessen wird NaHCO3GHV0HGLXPV]HUIDOOHQXQG&22 an
die Gasphase abgegeben werden. Dadurch kommt es
Mediumwechsel
zu einem weiteren Druckanstieg, sowie zur Alkalisierung
Unter den Stressbedingungen jeder Hochzelldich- des Mediums.
WH.XOWXUPHWKRGH VLQG GLH =HOOHQ DXI HLQ EHVRQGHUVJXWHV0HGLXPEH]ĞJOLFK*OXNRVHXQG1D+&23-Gehalt 'XUFK gTXLOLEULHUXQJ PLW GHU ,QNXEDWRUDWPRVSKËUH ĞEHU
angewiesen. Der Glukosegehalt sollte nicht weniger als GLH *DVDXVWDXVFKPHPEUDQ GHV 6FKUDXEYHUVFKOXVVHV
4,0 g/l betragen oder das Medium sollte zusätzlich des Versorgungsmoduls wird sich jedoch innerhalb wemit Glukose supplementiert werden. Der Gehalt an niger Stunden wieder der richtige CO2-Partialdruck unddamit auch der physiologische pH-Wert einstellen.

12Bedienungsanleitung miniPERM®
Troubleshooting
Problem

LösungKeine Erhöhung der Zelldichte• Erhöhung der Startzelldichte.
(nach wenigen Tagen liegt der Anteil • Die Start-Zellsuspension aus 1/3 selbstkonditioniertem Medium aus
GHUWRWHQ=HOOHQEHLĞEHU GHU=HOONXOWXUIODVFKHXQG2/3IULVFKHP0HGLXPKHUVWHOOHQ• Erhöhung des Serumanteils im Medium.
• Herabsetzen der Umdrehungsgeschwindigkeit (bei sehr
 HPSILQGOLFKHQ=HOOHQ]%KXPDQH+\EULGRP]HOOHQELVDXI8S0 š 9HUZHQGXQJYRQ$GGLWLYHQLP0HGLXP]XU5HGX]LHUXQJGHU
 6FKHUNUËIWHš 1LFKWPHKUDOVPO0HGLXPLQGDV9HUVRUJXQJVPRGXOIĞOOHQXP
die notwendige Gasphase im Bioreaktor zu erhalten.
Es werden nur mittlere Zelldichten
YRQ7 Zellen/ml erreicht• Es gibt Zelllinien, bei denen die Zellen nicht in extrem hohen Dichten
wachsen, wie z.B. 2 x 107 Zellen/ml und mehr. Wenn es gelingt, dieZellen durch regelmäßigen Mediumwechsel im Versorgungsmodul in PLWWOHUHU'LFKWHXQGKRKHU9LWDOLWËWĞEHUHLQHQODQJHQ=HLWUDXP]X NXOWLYLHUHQZHUGHQHEHQIDOOVKRKH$QWLNąUSHUNRQ]HQWUDWLRQHQHUUHLFKW=HOOHQYHUNOXPSHQXQGVWHUEHQDEš =HOOHQPĞVVHQVWËQGLJLQ6XVSHQVLRQJHKDOWHQZHUGHQ:LUGGHU
 %LRUHDNWRU]XP0HGLXPZHFKVHO(UQWHRGHU3UREHQHQWQDKPHYRQ GHU8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJJHQRPPHQXQGDXIGLH:HUNEDQN JHOHJWEHJLQQHQGLH=HOOHQVRIRUW]XVHGLPHQWLHUHQ6LHNąQQHQ YHUNOXPSHQXQGHYWODEVWHUEHQZHQQGLHHLQ]HOQHQ$UEHLWVVFKULWWH
 DP%LRUHDNWRUĞEHUHLQHQVHKUODQJHQ=HLWUDXPGXUFKJHIĞKUWZHUGHQ

6FKDXPELOGXQJ
,P9HUVRUJXQJVPRGXOXQGLP
Produktionsmodul bildet sich sehr
YLHO6FKDXPVRGDVVGHU
Druckausgleich nicht ohne
$XVWUHWHQYRQ6FKDXPGXUFKJHIĞKUWZHUGHQNDQQ
Dauer der Kultur im miniPERM®
Bioreaktor• Verwendung eines Anti-Schaummittels• Herabsetzen des Serumanteils im Medium des Versorgungsmoduls
 XQGHYWOLP3URGXNWLRQVPRGXO
š 8PGUHKXQJVJHVFKZLQGLJNHLWDQGHU8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJ
reduzierenš ,Q$EKËQJLJNHLWYRQGHU:DFKVWXPVNLQHWLNGHV=HOONORQVNDQQGHU
miniPERM® Bioreaktor bei regelmäßigem Mediumwechsel, Kontrolle GHU=HOOGLFKWHXQGGDUDXIDEJHVWLPPWHQ(UQWHLQWHUYDOOHQĞEHUHLQHQ =HLWUDXPYRQPHKUHUHQ:RFKHQEHWULHEHQZHUGHQ

13

Bedienungsanleitung miniPERM®

Problem

Lösung8QGLFKWLJNHLWHQš 1DFKGHP=XVDPPHQEDXYRQ3URGXNWLRQVXQG9HUVRUJXQJVPRGXO
kontrollieren, ob die Schnapphaken des Produktionsmoduls
 YROOVWËQGLJĞEHUGHU5LQJZXOVWDP5DQGGHV9HUVRUJXQJVPRGXOV VLW]HQ'D]XGLH6FKQDSSKDNHQQRFKHLQPDOHLQ]HOQQDFKIDVVHQELV
sie hörbar einrasten.
š 'DVZLHGHUYHUZHQGEDUH9HUVRUJXQJVPRGXOEHLPD[Ɠ&XQG
 QLFKWKËXILJHUDOV[DXWRNODYLHUHQDQGHUQIDOOVNRPPWHV]X 9HUIRUPXQJHQXQG5LVVELOGXQJHQGHV.XQVWVWRIIPDWHULDOVš 'DV9HUVRUJXQJVPRGXOEHLP$XWRNODYLHUHQQLFKWTXHWVFKHQ 4XHWVFKXQJHQIĞKUHQ]XU9HUIRUPXQJš $XVVFKOLHĔOLFKSKDUPD]HXWLVFKHV(WKDQRORGHU,VRSURSDQRO]XU
 'HVLQIHNWLRQYHUZHQGHQ$XINHLQHQ)DOOYHUJËOOWHQ$ONRKRORGHU 'HVLQIHNWLRQVPLWWHO]%PLWTXDUWHUQËUHQ$PPRQLXPVDO]HQRGHU LRQLVFKHQ7HQVLGHQ %DULFLGDO%LRFLGDO ]XU'HVLQIHNWLRQGHV
miniPERM®%LRUHDNWRUV,QNXEDWRUVXQGGHU8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJ YHUZHQGHQ'LHVHNąQQHQ]X5LVVELOGXQJHQXQG]XP%UXFKGHV .XQVWVWRIIPDWHULDOVIĞKUHQš 'LH%HIĞOOXQJVąIIQXQJGHV9HUVRUJXQJVPRGXOVPLWGHP
 6FKUDXEYHUVFKOXVVIHVWYHUVFKOLHĔHQš 6WHULOH(LQPDO6FKUDXEYHUVFKOĞVVHVLQGQLFKWDXWRNODYLHUEDUš 'LH%HIĞOOXQJVąIIQXQJGHV9HUVRUJXQJVPRGXOVXQGGHQ6FKUDXE YHUVFKOXVVQLFKWDEIODPPHQ'LHVIĞKUW]XU9HUIRUPXQJGHV .XQVWVWRIIPDWHULDOVš 1DFKGHPIIQHQGHV9HUVRUJXQJVPRGXOVHLQHQQHXHQ6FKUDXE YHUVFKOXVVIĞUGDV9HUVRUJXQJVPRGXOYHUZHQGHQ

1. An der Grenze zwischen
Produktions- und
Versorgungsmodul%HLP=XVDPPHQEDXYRQ
Produktions- und
9HUVRUJXQJVPRGXOPĞVVHQGLH
Schnapphaken desProduktionsmoduls in die
Aussparungen des Versorgungsmoduls hörbar eingerastet werden.
'LH0RGXOHGĞUIHQDXINHLQHQ)DOOPLWHLQDQGHUYHUGUHKWZHUGHQ$QGHP6FKUDXEYHUVFKOXVVGHU
 %HIĞOOXQJVąIIQXQJGHV
Versorgungsmoduls'UXFN

š 'LHUHODWLYH/XIWIHXFKWLJNHLWLP,QNXEDWRULVW]XJHULQJ(VLVWHLQH
 UHODWLYH/XIWIHXFKWLJNHLWYRQPLQGHVWHQVQRWZHQGLJDie Silikonmembran desš 1ËKUPHGLXPYRUGHU%HIĞOOXQJGHV9HUVRUJXQJVPRGXOVDXIƓ&
3URGXNWLRQVPRGXOVLVWVWËQGLJDXI-  WHPSHULHUHQ%HLGHU9HUZHQGXQJYRQNDOWHP0HGLXP Ɠ& NRPPWJHEOËKW,PPLQL3(50® Bioreaktor
 HVQDFKGHP(LQEULQJHQGHV%LRUHDNWRUVLQGHQ,QNXEDWRU]XU
baut sich nicht nur nach dem
 (UZËUPXQJXQG$XVGHKQXQJGHU*DVSKDVHĞEHUGHP0HGLXPXQG
0HGLXPZHFKVHO'UXFNDXIVRQGHUQ  VRPLW]XU$XIEOËKXQJGHU6LOLNRQPHPEUDQ
DXFKZËKUHQGGHU.XOWLYLHUXQJš )ĞU'UXFNDXVJOHLFKVRUJHQ'HQ6FKUDXEYHUVFKOXVVDP 9HUVRUJXQJVPRGXOORFNHUQ ž'UHKXQJ DQVFKOLHĔHQGZLHGHUIHVWDie Silikonmembran im YHUVFKOLHĔHQ
Produktionsmodul zieht sich nachš (VKDQGHOWVLFKXPHLQHHYWOQRFKQLFKWVLFKWEDUH%DNWHULHQRGHU
innen.
Pilzkontamination im Versorgungsmodul oder Produktionsmodul.

14

Bedienungsanleitung miniPERM®

Problem

Lösung.RQWDPLQDWLRQHQ

=XQËFKVWVROOWHDXVJHVFKORVVHQZHUGHQGDVVGLH.RQWDPLQDWLRQHQYRQ
GHQYHUZHQGHWHQ$XVJDQJVPDWHULDOLHQ =HOONXOWXUDQVDW]0HGLXP=HOONXOWXUJHIËĔ,QNXEDWRUXVZ VWDPPHQ$EVROXWVWHULOHV$UEHLWHQLVW
EHLP0HGLXPZHFKVHO3UREHQQDKPHRGHU(UQWHHUIRUGHUOLFK,P3URGXNWLRQVPRGXO

,P9HUVRUJXQJVPRGXO

š 3UREHQQDKPHĞEHU6HSWXPYHUVFKOXVV$QVWHOOHGHU6FKUDXENDSSHQ ZLUGGDV3URGXNWLRQVPRGXOPLWHLQHPVWHULOHQ6HSWXPYHUVFKOXVV YHUVFKORVVHQ %HVWHOOQXPPHUVLHKH6HLWH š 1DFKGHU3UREHQQDKPHRGHU(UQWHĞEHUHLQHGHUGUHLIIQXQJHQDP 3URGXNWLRQVPRGXOPĞVVHQ0HGLXPUHVWHDXIGHP5DQGGHU
 (QWQDKPHąIIQXQJDEJHVDXJWZHUGHQš 1DFKMHGHPIIQHQVROOWHHLQHQHXHVWHULOH6FKUDXENDSSHYHUZHQGHW
werden.
š $QWLVFKDXPPLWWHOYHUZHQGHQGHQQEHLGHU9HUZHQGXQJYRQ6HUXP
im Kulturmedium kann es zu Schaumbildung im Bioreaktor kommen.
 %HLGHU(QWQDKPHYRQ3UREHQRGHU(UQWHQDXVGHP
Produktionsmodul oder beim Mediumwechsel im Versorgungsmodul
 NDQQ6FKDXPDXVGHUIIQXQJWUHWHQXQGVRPLWHLQ.RQWDPLQDWLRQVrisiko darstellen.
š %HLP$XVJLHĔHQGHV0HGLXPVDXVGHP9HUVRUJXQJVPRGXOPĞVVHQ 0HGLXPUHVWHDXIGHP5DQGRGHULP*HZLQGHGHU%HIĞOOXQJVąIIQXQJ
abgesaugt werden.
š 1DFKMHGHP0HGLXPZHFKVHOHLQHQVWHULOHQ6FKUDXEYHUVFKOXVVIĞU GDV9HUVRUJXQJVPRGXOYHUZHQGHQš %HL.RQWDPLQDWLRQHQGLHVLFKDXIGDV9HUVRUJXQJVPRGXO
beschränken, kann der Kulturansatz gerettet werden, indem die =HOOHQLQHLQHQVWHULOHQ%LRUHDNWRUĞEHUIĞKUWZHUGHQ

Welche Umdrehungsgeschwindigkeit wird eingestellt,Q$EKËQJLJNHLWYRQ=HOOW\SXQG=HOOOLQLHZLUGGLH8PGUHKXQJVgeschwindigkeit gewählt.
š *HQHUHOOVROOWH]X$QIDQJGHU.XOWXUHLQHHWZDVQLHGULJHUH
Umdrehungsgeschwindigkeit eingestellt werden, mit steigender
Zelldichte wird die Umdrehungsgeschwindigkeit erhöht.
 %HLVSLHOPXULQH+\EULGRP]HOOHQ8S0 'LVSOD\ KXPDQH+\EULGRP]HOOHQWUDQVIL]LHUWH=HOOHQ8S0
(Display 4 - 20)
Auf dem Display der Steuereinheit wird der doppelte Wert
eingestellt, da der Durchmesser des miniPERM® Bioreaktors
doppelt so groß ist wie der Durchmesser der Antriebsrolle
der Universaldrehvorrichtung.

8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJš ¶EHUSUĞIHQREGLH8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJULFKWLJ]XVDPPHQ
gebaut ist.
š %HLKËXILJHUHU5HLQLJXQJPLW$ONRKROVROOWHQGLH/DJHUGHU5ROOHQ QDFKJHIHWWHWZHUGHQ$FKWXQJ1LFKWGDV*XPPLPDWHULDOGHU5ROOHQ IHWWHQ'LHVNąQQWHGLHPLQL3(50® Bioreaktoren zum Rutschen
bringen.
š 8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJDXINHLQHQ)DOODXWRNODYLHUHQ$XVVFKOLHĔOLFK SKDUPD]HXWLVFKHV(WKDQRORGHU,VRSURSDQROYHUZHQGHQš .HLQQ3URSDQROYHUZHQGHQDie Rollen der
8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJEOHLEHQ
stehen.

Bedienungsanleitung miniPERM®

Problem

LösungMedium• Unter den Bedingungen jeder Hochzelldichte-Kulturmethode sind
 GLH=HOOHQDXIHLQEHVRQGHUVJXWHV0HGLXPEH]ĞJOLFK*OXNRVHXQG
NaHCO3-Gehalt angewiesen. Die Zellen können in den gleichen
NaHCO3DEKËQJLJHQ0HGLHQNXOWLYLHUWZHUGHQGLHĞEOLFKHUZHLVHLQ GHU=HOONXOWXUYHUZHQGHWZHUGHQ'DV0HGLXPVROOWHQLFKWZHQLJHU DOVJ*OXNRVHOHQWKDOWHQDQGHUQIDOOV*OXNRVHHUJËQ]HQš %HLGHU3URGXNWLRQYRQ3URWHLQHQ ]%PRQRNORQDOH$QWLNąUSHU VROOWH LQ$EVWËQGHQYRQELV]X7DJHQEHLGHU3URGXNWLRQYRQ%LRPDVVH LQ$EVWËQGHQELV]X7DJHQGDV0HGLXPJHZHFKVHOWZHUGHQš 'DV0HGLXPLP9HUVRUJXQJVPRGXOGDUIDXINHLQHQ)DOOJHOE ZHUGHQ6REDOGHLQH9HUËQGHUXQJGHU0HGLXPIDUEHYRQODFKVURWnach lachsrot-gelblich zu sehen ist, ist die Kapazität, Metabolite
 DXI]XQHKPHQXQGDE]XSXIIHUQHUVFKąSIW

Mediumwechsel

Serum

16

• Unter den Bedingungen der Hochzelldichte-Kulturmethode ist eine DXVUHLFKHQGH6XSSOHPHQWLHUXQJGHV.XOWXUPHGLXPVPLW6HUXPYRQ JUąĔWHU%HGHXWXQJ'HU6HUXPDQWHLOVROOWHIĞUGLH.XOWLYLHUXQJLP
miniPERM®%LRUHDNWRUDXINHLQHQ)DOOJHULQJHUVHLQDOVLQGHU
Standkultur.
• Bei der Produktion monoklonaler Antikörper oder anderer Proteine VROOWHGLH6HUXPNRQ]HQWUDWLRQLP3URGXNWLRQVPRGXOELV
 EHWUDJHQ%HLGHU3URGXNWLRQYRQ%LRPDVVHLVWLQGHQPHLVWHQ)ËOOHQ HLQH6HUXPNRQ]HQWUDWLRQYRQELV]XDXVUHLFKHQG
š ,PPLQL3(50® Versorgungsmodul kann die Serumkonzentration
 KDOELHUWRGHUVRJDUDXIUHGX]LHUWZHUGHQ6HUXPEHVWDQGWHLOHGHUHQ PROHNXODUH*UąĔHPHKUDOVN'DEHWUDJHQNąQQHQGLH
Dialysemembran nicht passieren.
• Es ist ebenso möglich, Hybridomzelllinien oder andere Zelllinien im
miniPERM®%LRUHDNWRULQVHUXPRGHUSURWHLQIUHLHP0HGLXP]X NXOWLYLHUHQ'LH=HOOHQVROOWHQYRUGHU.XOWLYLHUXQJLPPLQL3(50®
 %LRUHDNWRUDXIGLHVHUXPE]ZSURWHLQIUHLHQ0HGLXPEHGLQJXQJHQ DGDSWLHUWZHUGHQ$GDSWLRQVPHWKRGHEHDFKWHQ

Bedienungsanleitung miniPERM®
Publikationen
Bruce, M.P; Boyd, V.; Duch, C; White, J.R.
Dialysis-based bioreactor systems for the productionof monoclonal antibodies -alternatives to ascites
production in mice.
-RXUQDORI,PPXQRORJLFDO0HWKRGV1R  &DXOıHOG--)HUQDQGH]0+6RXVD$5/DQH6-/HH
T.H.;Hawrylowicz, C.M.
Regulation of major histocompatibility complex
class II antigens on human alveolar macrophages by
granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in
the presence of glucocorticoids,PPXQRORJ\  
Falkenberg, F.W.
Production of monoclonal antibodies in theminiPERM® bioreactor: comparison with otherhybridoma culture methods
5HV,PPXQ  
)DONHQEHUJ)::HLFKHUW+.UDQH0%DUWHOV,3DOPH
M.; Nagels, H.-O.; Fiebig, H.
In vitro production of monoclonal antibodies in highconcentration in a new and easy to handle modular
minifermenter-,PPXQ0HWK  

.RQVWDQWLQRY00LQGRYD0*RVSRGLQRY3*HQRYD3
Three-Dimensional Bioreactor Cultures: A Useful
Dynamic Model for the Study of Cellular Interactions1<$FDG6FL Dewar, V.; Voet, P.; Denamur, F.; Smal, J.
Industrial Implementation of in Vitro Production of
Monoclonal Antibodies,/$5-RXUQDO9ROXPH1XPEHU Berlin, V.; Rousselle, P.
Production of a recombinantly expressed laminin
fragment by HEK293-EBNA cells cultured insuspension in a dialysis-Based Bioreactor
3URWHLQ([SU3XULI  

Anwendungsberichte
Vollmers, H.P.; Wozniak, E.
Kultivierung von humanen Hybridomzellen im
miniPERM® Bioreaktor
8QLYHUVLWËW:ĞU]EXUJ'HXWVFKODQG
Tutas, M.
Kultivierung von Maus-Hybridomzelln im miniPERM®
Bioreaktor mit proFree mab
Cell Diagnostica GmbH, Deutschland
Lingnau, A.
Kultivierung IgM-produzierender Hybridome im
miniPERM® Bioreaktor
VM-PRO GmbH, Luckenwalde, Deutschland

Kagan, E.; Vieira, E.; Petrie, H.T.
&RPSDULVRQRIKROORZıEHUELRUHDFWRUVDQGPRGXODU
Schliephacke, T.; Käppel, S.
minifermentors for the production of antobodies
Langzeitproliferation von CHO-Zellen im miniPERM®
&$$72355:RUNVKRSRQ$OWHUQDWLYHVLQ0RQRFORQDO$QWLERG\Bioreaktor
Production, 9/1997, Haborplace Hotel Baltimore, MD
L2Q*HQ$*,QYLWUR6\VWHPV6HUYLFHV*PE+'HXWVFKODQG/LWWOH0.LSUL\DQRY60/H*DOO)0ROGHQKDXHU*
0ĞOOHU6
Of mice and men: hybridoma and recombinant
Kultivierung von HEK-U293 Zellen als Suspensionskultur
antibodies
im miniPERM® Bioreaktor
5HYLHZ,PPXQRORJ\7RGD\  .QROO$*/XGZLJVKDIHQ'HXWVFKODQG
0HW]JHU-1LFNOLVFK16FKPLGW%.XIHU33HVFKHO&
Prestle, J.; Ott-Gebauer, S.
Bernhard, H.
Produktion von rekombinanten Adenoviren im
Induction of a T helper cell response against the tumor miniPERM® Bioreaktor
associated antigen HER-2 using monocyte-derived
8QLYHUVLWËW*ąWWLQJHQ'HXWVFKODQG
dendritic cells
Sponaas, A.; Anding, P.
ESACT-Meeting 09/2001, Sweden
Kultivierung einer murinen makrophagenähnlichen
5DXOI+HLPVRWK06DQGHU,=KLSLQJ&K%RURZLW]NL*
Zelllinie (J774) im miniPERM® Bioreaktor'LHZDOG.YDQ.DPSHQ9%DXU;
0D[3ODQFN,QVWLWXWIĞU,QIHNWLRQVELRORJLH%HUOLQ'HXWVFKODQG
Development of a monoclonal antibody-based sandwich
Dobner, T.
ELISA for detection of the latex allergen Hev b Int.
Kultivierung von Insektenzellen (SF9 Zellen $UFK$OOHUJ\,PPXQRO  
Baculovirussystem) im miniPERM® Bioreaktor
6FKĞWW&)ĞUOO%6WHOWHU)-DFN56:LWW6
8QLYHUVLWËW5HJHQVEXUJ'HXWVFKODQG
CHO transfectants produce large amounts ofSchillo, M.; Meyer, N.; Bentrop, J.
recombinant protein in suspension culture
Kultivierung von Insektenzellen (Drosophila-RXUQDORI,PPXQRORJLFDO0HWKRGV  Schneiderzellen [S2]) im miniPERM® Bioreaktor
9ROOPHUV+3'ËPPULFK-:R]QLDN(%LHU'0ĞOOHU
8QLYHUVLWËW.DUOVUXKH*HUPDQ\
Hermelink, H.K.
Wuppermann, F.
Apoptotic in vitro and in vivo activity of the human
Kultivierung einer murinen Hybridom-Zelllinie im
monoclonal antibody SC-1 on stomach cancer cells®
®
QG,QWHUQDWLRQDO*DVWULF&DQFHU&RQJUHVV0XQLFK*HUPDQ\ miniPERM classic and miniPERM HDC 50 Bioreaktor/&7HFK*PE+'RUIHQ'HXWVFKODQG
04/199717

Bedienungsanleitung miniPERM®
miniPERM® Zubehör

➄
➃

5

➀

➁

)ROJHQGHV=XEHKąUZLUGIĞUGLHHLQIDFKH+DQGKDEXQJ
des miniPERM®%LRUHDNWRUVDQJHERWHQ

➀ Sterile 2 ml und 50 ml Einmalspritzen mit Luerund Luer-Lock-Anschluss➂

GDV3URGXNWLRQVPRGXOGDEHL]XąĳQHQ1DFKELVPDOLJHP(LQVWHFKHQVROOWHGHU6HSWXPYHUVFKOXVV
gegen einen neuen Verschluss ausgetauscht werden.

➄ miniPERM® Ständer

'LH(LQPDOVSULW]HQHLJQHQVLFK]XPHLQIDFKHQXQGVLFKHUHQ$QLPSIHQGHV%LRUHDNWRUVPLWGHU=HOOVXVSHQVLRQPO VRZLHIĞUGLH(QWQDKPHYRQ3UREHQXQG(UQWHQ
Die Probenentnahme sollte mit der 2 ml Einmalspritze
XQGHQWVSUHFKHQGHU.DQĞOHGXUFKJHIĞKUWZHUGHQ

Der miniPERM®6WËQGHUGLHQWGHUHLQIDFKHQ+DQGKDEXQJZËKUHQGGHV$QLPSIHQVGHU3UREHQHQWQDKPH
und der Ernte.

➁ Steriles Einfüllröhrchen 5"

Zubehör zum Starten der Kultur, zur Probenentnahme
XQG]XU(UQWH%HVWHKHQGDXV

8PGLHYRUEHUHLWHWH=HOOVXVSHQVLRQDXVGHP=HQWULIXJHQUąKUFKHQLQHLQH(LQPDOVSULW]HDXI]XQHKPHQZLUG
GDVKDOEĲH[LEOH(LQIĞOOUąKUFKHQDXIGHQ/XHU/RFN$QVFKOXVVGHU(LQPDOVSULW]H PO JHVWHFNWXQGGLH
=HOOVXVSHQVLRQLQGLH(LQPDOVSULW]HDXIJHQRPPHQ'LH
ĳQXQJGHV(LQIĞOOUąKUFKHQVLVWJURĔJHQXJVRGDVVNHLQH6FKHUNUËIWHHQWVWHKHQNąQQHQGLHGLH=HOOHQVFKËdigen könnten.

š(LQPDOVSULW]HPO/XHU/RFNVWHULO [• Einmalspritze, 2 ml Luer, steril (20x)š(LQIĞOOUąKUFKHQ (LQIĞOOWXEXV VWHULO [š.DQĞOH/XHU *[/8 VWHULO [š6HSWXPYHUVFKOXVVVWHULO [• miniPERM® Ständer (1x)

➂ Kanüle Luer 25G x 5/8"
'LH.DQĞOHPLWJHULQJHU/ËQJHHLJQHWVLFKLQ9HUELQGXQJPLWHLQHU(LQPDOVSULW]H PO ]XU3UREHQHQWQDKPHĞEHU
HLQHQ6HSWXPYHUVFKOXVVRKQHGDEHLGLH'LDO\VHPHPEran zu beschädigen.

➃ Septumverschluss (IN-Stopfen)
Um die Handhabung zur Probenentnahme zu erleichtern
XQGGDV.RQWDPLQDWLRQVULVLNR]XYHUULQJHUQNąQQHQHLQ
bis zwei der Schraubkappen des Produktionsmoduls/XHU/RFN JHJHQVWHULOH6HSWXPYHUVFKOĞVVHDXVJHtauscht werden.
'HU6HSWXPYHUVFKOXVVHUPąJOLFKWGDV+LQ]XIĞJHQYRQ)OĞVVLJNHLWHQRGHUGLH(QWQDKPHYRQ3UREHQDXVGHP
Produktionsmodul mittels steriler Einmalspritze, ohne

18

Start-up Support Kit

Bedienungsanleitung miniPERM®
%HVWHOOLQIRUPDWLRQBestell-Nr.


Verpackung
Stück/Karton

Beschreibung
miniPERM® classic

Bioreaktor, steril12

miniPERM classic

Produktionsmodul, steril

12

94.6077.121

miniPERM +'&

Bioreaktor, steril

12

94.6077.017

miniPERM®+'&

Produktionsmodul, steril

12

®

®

%HVWHOOLQIRUPDWLRQ=XEHKąU
Bestell-Nr.

Verpackung
Stück/Karton

Beschreibung

9HUVRUJXQJVPRGXOIĞUPLQL3(50®DXWRNODYLHUEDU

4

®

6WËQGHUIĞUPLQL3(50494.6001.036

6FKUDXENDSSHQIĞU3URGXNWLRQVPRGXOVWHULO

6

94.6077.037

6FKUDXEYHUVFKOXVVIĞU9HUVRUJXQJVPRGXOVWHULO

16



.DQĞOH/XHU*[ŷ8Ř [PP VWHULO

100

94.6077.136

Einmalspritze, 2 ml Luer, steril

100

94.6077.137(LQPDOVSULW]HPO/XHU/RFNVWHULO

60

94.6077.138(LQIĞOOWXEXVŘVWHULO

100

94.6001.094

Start-up Support Kit

6WĞFN]DKOš(LQPDOVSULW]HPO/XHU/RFNVWHULO

8• Einmalspritze, 2 ml Luer, steril20

š(LQIĞOOWXEXVŘ/XHUVWHULO

8

š/XHU.DQĞOH*[ŷ8”, steril20š6HSWXPYHUVFKOXVVVWHULO

6

®

1

• miniPERM Ständer

1%HVWHOOLQIRUPDWLRQş8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJ=XEHKąU
Bestell-Nr.
94.6001.061

Beschreibung
8QLYHUVDOGUHKYRUULFKWXQJ9

Verpackung
Stück/Karton
119Bedienungsanleitung miniPERM®
Kurzbedienungsanleitung
Am Beispiel des miniPERM® FODVVLF 3URGXNWLRQVPRGXOV PLW  PO =HOOVXVSHQVLRQ %HL GHU 9HUZHQGXQJ GHVminiPERM®+'&3URGXNWLRQVPRGXOVZHUGHQ[6=HOOHQPOLQPO0HGLXPYRUEHUHLWHW
Vorbereitung der Zellen

35 ml
frischesMediumVorbereitung des miniPERM® Bioreaktors(Der Bioreaktor steril kann ohne Vorbereitung eingesetzt werden)$XWRNODYLHUEDUHV9HUVRUJXQJVPRGXO
1,2 bar
121°C/250°F
20 minBefüllen des miniPERM® Bioreaktors

350 - 400 ml Medium

Konditionierung
3/4

UpM

20

3/4

35 ml
(1-5 x 106 Zellen/ml)

Bedienungsanleitung miniPERM®
Mediumwechsel

350-400 ml Medium

Probenentnahme
3/4

3/4

Ernte

600 x g
10 min4°C

21

7HFKQLVFKHgQGHUXQJHQYRUEHKDOWHQ

Bedienungsanleitung miniPERM®

SARSTEDT AG & Co. KG
Sarstedtstr. 1
D-51588 Nümbrecht
www.sarstedt.com

EN

User Manual

miniPERM®

User Manual - miniPERM®

24

User Manual - miniPERM®
Contents,QWURGXFWLRQ ......................................................................................................................................................26
 'HVLJQDQGIXQFWLRQRIWKHPLQL3(50® bioreactor
Operating instructions .......................................................................................................................................28
 ([DPSOHRIK\EULGRPDFHOOFXOWXUHHigh density cell culture in the miniPERM® bioreactor .......................................................................................34
High density cell culture 2[\JHQUHTXLUHPHQWRIK\EULGRPDFHOOVProduction rate
Changing the medium
 +DQGOLQJRIWKHPLQL3(50® bioreactor
Troubleshooting ................................................................................................................................................
Problems and solutions
Literature ..........................................................................................................................................................39
Publications and application notes
Accessories ......................................................................................................................................................40
2UGHULQJLQIRUPDWLRQ .........................................................................................................................................41%ULHILQVWUXFWLRQPDQXDO ....................................................................................................................................42$SSOLHVWRODEHOOHGSURGXFWV'RQRWXVHLISDFNDJHLVGDPDJHG,QFDVHRIUHXVHULVNRIFRQWDPLQDWLRQUser Manual - miniPERM®
Function of the miniPERM® bioreactor
1. Dialysis membrane
Neither the cells nor high molecular weight products
released by the cells, e.g. secreted monoclonal antibodies, can pass through the semi-permeable dialysis
membrane.
+RZHYHUQXWULHQWV JOXFRVHDPLQRDFLGV YLWDPLQV
• a disposable production moduleZKLFKVHUYHVDVD ions, and gases (O , CO GLVVROYHGLQWKHPHGLXPFDQ
22
 FXOWXUHFKDPEHUZLWKDYROXPHRIPORUPOGLĳXVHIURPWKHQXWULHQWPRGXOHLQWRWKHSURGXFWLRQ
(miniPERM®FODVVLFRU+'& DQG
PRGXOH'XHWRPRUHWKDQDIROGH[FHVVRIQXWULHQW
• DQDXWRFODYDEOHUHXVDEOHRUVWHULOHGLVSRVDEOH
PHGLXPWKHFHOOVDUHSURYLGHGZLWKVXEVWDQFHV
nutrient modulePDGHRISODVWLF SRO\FDUERQDWH 
QHFHVVDU\IRUFXOWLYDWLRQRYHUDORQJSHULRGRIWLPH ZKLFKVHUYHVDVDPHGLDUHVHUYRLUZLWKPO YROXPHWKDWLVDWWDFKHGWRWKHSURGXFWLRQPRGXOH
Simultaneously, acidic (e.g. lactic acid), toxic (e.g.
ammonium ions) and other low molecular mass
To separate the two modules, the production module
SURGXFWVRIWKHFHOOPHWDEROLVPGLĳXVHIURPWKH
LVıWWHGZLWKDVHPLSHUPHDEOHdialysis membrane
production module through the dialysis membrane
0:&2N'D RQWKHVLGHIDFLQJWKHQXWULHQW
into the nutrient module where they are diluted andmodule, when the two modules are connected.
QHXWUDOLVHGLQWKHODUJHH[FHVVRIPHGLXPIntroduction
Design of the miniPERM® bioreactor
miniPERM®LVDELRUHDFWRUPDGHRIWZRFRQQHFWHG
PRGXOHVGHVLJQHGIRUWKHFHOOFXOWXUHRIK\EULGRPD
and other cells in high densities (“high density culture”).
,WFRQVLVWVRI

7KHRXWHUSDUWRIWKHSURGXFWLRQPRGXOHLVPDGHRID
thin, gas-permeable silicone membrane.
7KHVFUHZFDSRIWKHQXWULHQWPRGXOHKDVDQLQWHJUDWed gas-exchange membrane.

7KHGLVFKDUJHRI&22IURPWKHPLQL3(50®LVIXUWKHUSURPRWHGE\WKHIDFWWKDW&22 GLVVROYHGLQWKHFXOWXUHPHGLXPERWKSK\VLFDOO\DQGLQWKHIRUPRI1D+&23)
FDQSDVVWKURXJKWKHGLDO\VLVPHPEUDQHIURPWKH
production module to the nutrient module.

Nutrient module

Production module

Cell product
Glucosesilicone sealing ring

nutrient
moduleLactatesupport gridNH4+

dialysismembraneproduction
modulesrew cap with integrated
gas-exchange
membranenutrient module

26

CO2
Cell

siliconemembrane
IUDPH
srew caps

O2

Silicone membrane
Dialysis membrane

8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFH

7KHGLDO\VLVPHPEUDQHLVFRYHUHGZLWKDVXSSRUWJULGIDFLQJWKHQXWULHQWPRGXOH7KLVJULGKDVWZRIXQFWLRQV9,WSURWHFWVWKHGLDO\VLVPHPEUDQHIURPPHFKDQLFDO
GDPDJHDQGSURYLGHVDPHDQVRIVZLUOLQJWKHQXWULHQWPHGLXPDWWKHGLDO\VLVPHPEUDQHVXUIDFHOHDGLQJ
WRDQLPSURYHGGLĳXVLRQRIQXWULHQWVDQGPHWDEROLF
products.

User Manual - miniPERM®
2. Silicone membrane
2[\JHQUHTXLUHPHQWVDUHIXOıOOHGE\22GLĳXVLQJIURPthe incubator atmosphere into the production module
through the silicone membrane. The CO2 produced
E\WKHFHOOVLQFRUUHVSRQGLQJTXDQWLWLHVOHDYHVWKH
SURGXFWLRQPRGXOHYLDWKHVDPHURXWH7KHKLJK&22
SHUPHDELOLW\RIWKHVLOLFRQHPHPEUDQHLQWKHSURGXFWLRQ
module means the NaHCO3 in the medium is at
HTXLOLEULXPZLWKWKH&22 in the incubator atmosphere.
3. Screw cap with gas-exchange membrane
7KHJDVH[FKDQJHPHPEUDQHLQWKHVFUHZFDSRIWKHQXWULHQWPRGXOHHQDEOHVHTXLOLEUDWLRQRISUHVVXUH
EHWZHHQWKHELRUHDFWRUDQGWKHRXWHUHQYLURQPHQW

4. Universal Turning Device)RURSWLPDOVXSSO\RIQXWULHQWVDQGUHPRYDORI
metabolic waste products through the membranes,
cells and the medium must be circulated continuously.
7KHUHIRUHWKHPLQL3(50® bioreactor is rolled in a
8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFHGXULQJFXOWLYDWLRQDue to the exceptionally high cell densities producedin the miniPERM®, a higher than usual turning speed
LVUHTXLUHG)RUWKLVUHDVRQZHUHFRPPHQGHGWKHXVH
RIWKH8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFHZKLFKFDQURWDWHWKH
miniPERM®IURPWRUSPFRPSDUHGWRVWDQGDUG
WXUQHUVWKDWXVXDOO\KDYHDPD[LPXPVSHHGRIUSP

27

User Manual - miniPERM®
Operating Instruction
All the operations
described below
must be carried out
LQDVWHULOHKRRG&HOOVDUHFXOWLYDWHG
under normal laboratory
FRQGLWLRQVFHQWULIXJHGDQG
DGMXVWHGWRWKHVSHFLıHG
density.

Ensure the
FOLSVRIWKH
production
module are completely
VQDSSHG

,WLVYHU\LPSRUWDQW
that the nutrient
PRGXOHLVDXWRFODYHG
WRDPD[LPXPRIƓ&and no more than 10times. Higher temperatures
OHDGWRGHIRUPDWLRQRIWKH
polycarbonate.

%HIRUHFRQQHFWLQJthe two modules,
unscrew the screw
FDSRIWKHQXWULHQWPRGXOHWRSUHYHQWSUHVVXUHEXLOGXS Ensure the
FOLSVRIWKH
production
module are completely
VQDSSHG

1. Preparation of cells for culturing in theminiPERM® bioreactor using hybridoma
cells as example
The miniPERM® classic culture can be started withDERXWWRPORIDFHOOVXVSHQVLRQFRQWDLQLQJDSSUR[LPDWHO\WR[6FHOOVPO WR[6
FHOOVWRWDO  ıJ ,QPRVWFDVHVWKHFRQWHQWVRIWRZHOOJURZQFP2FHOOFXOWXUHĲDVNVDUHVXĴFLHQW
IRUWKLVSXUSRVH1

For using the miniPERM®+'&SURGXFWLRQ
module the cell suspension contains
WR[6FHOOVPOLQPO
2. Preparation of the miniPERM® bioreactor
2.1 Pre-assembled miniPERM® sterile,QWKLVYHUVLRQWKHPLQL3(50® has been assembled
IURPWKHWZRPRGXOHVDQGVWHULOL]HG7KLVUHSUHVHQWVDVLQJOHXVHSURGXFW,WLVQRWDXWRFODYDEOH,WFDQEH
XVHGZLWKRXWIXUWKHUWUHDWPHQW ıJ 
2.2 Multiple-use miniPERM®
The production modules are supplied as disposables
in an alu pouch. The reusable nutrient module must
EHVWHULOL]HGE\DXWRFODYLQJWRDPD[LPXPRIƓ&
prior to use.
š3DFNWKHQXWULHQWPRGXOHLQDQDXWRFODYLQJEDJ ıJ DQGDXWRFODYHLWZLWKRXWWKHVFUHZFDSIRU PLQWRDPD[LPXPRIƓ& DOVRUHIHUWR
item 7).
š 7KHDOXSRXFKRIWKHSURGXFWLRQPRGXOHLVRSHQHG
to ensure the production module is resting on
 WKHVFUHZFDSVRIWKH/XHU/RFNFRQQHFWRUV 7KHSURGXFWLRQPRGXOHVKRXOGEHOHIWLQWKH
 SODVWLFSDFNš 7KHDXWRFODYHGQXWULHQWPRGXOHLVQRZSXVKHG
 DJDLQVWWKHVHDOLQJULQJRIWKHSURGXFWLRQPRGXOH
 ıJVDQGD XQWLOWKHVQDSSHUFOLSVRIWKH
production module are snapped audibly into the LQGHQWDWLRQVRQWKHULPRIWKHQXWULHQWPRGXOH
š 7KHSODVWLFSDFNRIWKHSURGXFWLRQPRGXOHFDQ QRZEHUHPRYHG
• The assembled miniPERM®LVQRZUHDG\IRUXVH

2

1,2 bar
121°C/250°F
20 min

3

4

4a

28

User Manual - miniPERM®

When the cellsuspension is
introduced the air
displaced by the medium
must be released through
RQHRIWKHRWKHUSRUWV
7KHUHIRUHDVHFRQGVFUHZ
cap should be loosened.

Medium at the rim
RIWKHıOOLQJSRUW
must be thoroughly
UHPRYHG E\GUDZLQJXSZLWKDQH[KDXVWHUEHIRUH
closing the port).

3. Filling the miniPERM® bioreactor
3.1 Introducing the cell suspension into the
production module
The cell suspension is introduced into the production
PRGXOHZLWKDV\ULQJHWKURXJKRQHRIWKHWKUHHSRUWVHTXLSSHGZLWK/XHU/RFNFRQQHFWRUV• Mount the miniPERM® bioreactor on the stand ZLWKWKHSURGXFWLRQPRGXOHRQWRSVRWKDWRQHRI
the three Luer Lock connectors is positioned at
 WKHKLJKHVWSRLQW ıJ š 'UDZXSWKHSUHSDUHGFHOOVXVSHQVLRQ  RUPO WKURXJKDVWHULOHıOOLQJWXEH Ř XVLQJD GLVSRVDEOHV\ULQJH ƉPO 5HPRYHDLUEXEEOHV IURPWKHV\ULQJHEHIRUHLQMHFWLQJWKHFHOO VXVSHQVLRQ ıJ š 5HPRYHWKHVFUHZFDSDWWKHXSSHUPRVWSRLQW $ 
 6FUHZWKHV\ULQJH ZLWKRXWWKHıOOLQJWXEH RQWRWKH
 /XHU/RFNFRQQHFWRU ıJ • Turn the miniPERM®ELRUHDFWRUVRWKDWRQHRIWKH
other screw caps is positioned at the highest
point.
• Loosen a second screw cap at the uppermost SRLQW & ,QMHFWWKHFHOOVXVSHQVLRQVORZO\LQWRWKH
 SURGXFWLRQPRGXOH ıJ š &ORVHWKH/XHU/RFNFRQQHFWRURIWKHSRUWDW SRVLWLRQ&WLJKWO\ZLWKDVFUHZFDS ıJ • Turn the miniPERM® bioreactor back so that theport (A) to which the syringe has been attached is SRVLWLRQHGDWWKHXSSHUPRVWSRLQWDJDLQ ıJ š 5HPRYHWKHV\ULQJH$LUEXEEOHVVKRXOGEH UHPRYHGE\SUHVVLQJWKHVLOLFRQHPHPEUDQH
• Close the production module by tightly screwing
a screw cap or a septum cap (see Troubleshooting) RQWRWKH/XHU/RFNFRQQHFWRURIWKHWKLUGSRUWLQ SRVLWLRQ$ ıJ 

5

6

7

8

9

10

11

29

User Manual - miniPERM®

'RQRWıOOPRUH
than 400 ml
into the nutrient
module. An air space
PXVWEHPDLQWDLQHGDERYH
WKHQXWULHQWPHGLXPIRU
VXFFHVVIXOFXOWLYDWLRQThe rolling speed
must be selectedaccording to the
UREXVWQHVVRIWKHFHOOVHJšPXULQHK\EULGRPDFHOOV WRUSP• human hybridoma and WUDQVIHFWHGFHOOV
2 to 10 rpm

Since the diameter
RIWKHPLQL3(50®
bioreactor is twice
WKHVL]HRIWKHUROOVRIWKH
8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFH
miniPERM®URWDWHVDWKDOI
the set speed.

30

3.2 Introducing the medium into the nutrient
module7KHQXWULHQWPRGXOHLVıOOHGZLWKPHGLXPWKURXJKWKH
ODUJHQHFNRSHQLQJZKLFKLVıWWHGZLWKDVFUHZFDS
DVIROORZVš5HPRYHWKHVFUHZFDSIURPWKHQHFNRSHQLQJRI WKHQXWULHQWPRGXOHDQGSRXULQWRPORI WHPSHUHGQXWULHQWPHGLXP ıJ 
š7RUHPRYHSUHVVXUHLQWKHPLQL3(50® bioreactor,
 SUHVV\RXUKDQGDJDLQVWWKHVLOLFRQHPHPEUDQHRI WKHSURGXFWLRQPRGXOH ıJ • Close the neck opening with the screw cap.
Tighten the screw cap applying a slight pressure
only.
• Place the miniPERM®ELRUHDFWRURQWRWKH8QLYHUVDO 7XUQLQJ'HYLFHDQGVHWWKHVSHHGDWWKH&RQWURO
Unit on 0.1 to 40 rpm.

350 to 400 ml medium

12

13

14

The above rolling
speeds referto the display
on the Control
Unit. miniPERM®
actually rotates at
half this speed.

User Manual - miniPERM®

Under nocircumstances
should the screw
FDSVRIWKHWKUHH/XHU
/RFNFRQQHFWRUVRIWKH
production module beopened when the silicone
PHPEUDQHLVH[WHQGHG
The excess pressure in
the nutrient module would
cause the cell suspension
to spurt out and be lost.
,QDGGLWLRQWKHRXWVLGHRI
the miniPERM® bioreactor
would be contaminated.

6KRXOGIRDP
accumulate in the
production module
ZKLFKLVRIWHQWKHFDVH
when FCS is used as a
medium supplement, it isGLĴFXOWWRORRVHQWKHVFUHZFDSRIWKHSURGXFWLRQPRGXOHZLWKRXWJHWWLQJIRDPLQWRWKHWKUHDG7RVROYH
this problem, an antiFOAM®
agent can be used in
the nutrient module (seeTroubleshooting).

4. Taking samples
4.1 Taking samples through a port of the
production module• Place the miniPERM® bioreactor in a sterile hood.
• Ensure that pressure is released. Hold theminiPERM® bioreactor with one hand applying
light pressure to the silicone membrane. With
the other hand loosen (do not unscrew) the screw FDSRIWKHQXWULHQWPRGXOHVRH[FHVVSUHVVXUHLV UHOHDVHG VHHıJVD &ORVHWLJKWO\DJDLQ• Position the miniPERM® bioreactor on the stand VRWKDWRQHRIWKHSRUWVRIWKHSURGXFWLRQPRGXOH LVDWWKHKLJKHVWSRLQW $ DQGUHPRYHWKHVFUHZ FDSRIWKLVFRQQHFWRU ıJ š)LWDV\ULQJHRIVXLWDEOHVL]H DSSUR[PO GHSHQGLQJRQWKHVDPSOHYROXPHWREHWDNHQ RQWR WKH/XHU/RFNFRQQHFWRULQSRVLWLRQ$ ıJ • Turn the miniPERM® bioreactor so that the
sampling port (A) with the attached syringe LVSRVLWLRQHGEHORZWKHOHYHORIWKHOLTXLGLQWKH
 SURGXFWLRQPRGXOH ıJ 'UDZXSWKHVDPSOH
into the syringe.
š%HIRUHUHPRYLQJWKHV\ULQJHPLQL3(50®
bioreactor must be turned so that the sampling
port with the attached syringe is positioned at the XSSHUPRVWSRLQW ıJ š$IWHUUHPRYLQJWKHV\ULQJHDLUEXEEOHVVKRXOGEH UHPRYHGE\SUHVVLQJWKHVLOLFRQHPHPEUDQHZLWK WKHıQJHUVš&ORVHWKH/XHU/RFNFRQQHFWRURIWKHVDPSOLQJ SRUWZLWKDVWHULOHVFUHZFDS ıJ DQGUHWXUQthe miniPERM® bioreactor to the incubator.

3/4

15
3/4

15a

16

17

Medium at the rim
RIWKHKDUYHVWSRUW
must be thoroughly
UHPRYHG E\GUDZLQJXSZLWKDQH[KDXVWHU EHIRUH
closing the port.
18

19

31

User Manual - miniPERM®

Small diameter
QHHGOHV *[5/8”)
should be used inorder to retain the sterile
barrier. The septum caps
VKRXOGEHUHSODFHGDIWHU
WKH\KDYHEHHQSLHUFHGRU
6 times.

+DUYHVWLQJPXVWEH
TXLFNWRSUHYHQWWKHFHOOVIURPVHWWOLQJ
and clumping.

Medium at the rim
RIWKHKDUYHVWSRUW
must be thoroughly
UHPRYHG E\GUDZLQJXSZLWKDQH[KDXVWHU 

32

4.2 Taking samples through a septum
2QHRIWKHWKUHHSRUWVFDQEHUHSODFHGZLWKDVHSWXPFDSZKLFKPDLQWDLQVWKHVWHULOHEDUULHUIRU
VDPSOHUHPRYDO
• Prepare the miniPERM® bioreactor as described in
4.1.
š&OHDQWKHKROHRIWKHVHSWXPFDSZLWKDSDG
soaked in 70% pharmaceutical ethanol.
š3LHUFHDVWHULOHQHHGOHZLWKV\ULQJH ƉPO LQWKH
 KROHRIWKHVHSWXPFDS
• Turn the miniPERM® bioreactor so that the
septum cap with the attached syringe is SRVLWLRQHGEHORZWKHOHYHORIWKHOLTXLGLQWKH
 SURGXFWLRQPRGXOH ıJ • Draw the sample into the syringe.
š5HPRYHWKHQHHGOHIURPWKHVHSWXPFDS
š&OHDQWKHKROHRIWKHVHSWXPFDSZLWKDVWHULOH
pad soaked in 70% pharmaceutical ethanol.
5. Harvesting
7KHLQWHUYDODQGYROXPHRIKDUYHVWLQJGHSHQGRQ
WKHFHOOGHQVLW\DQGWKHDPRXQWRISURGXFWZKLFKthe cells produce. Once or twice a week on an
DYHUDJH2/3RIVXSHUQDWDQWLVKDUYHVWHG+DUYHVWLQJis done essentially the same way as sampling.
• Prepare the miniPERM® bioreactor as described in
4.1.
š,QRUGHUWRSUHYHQWDQHJDWLYHSUHVVXUHLQWKH
 SURGXFWLRQPRGXOHZKLOVWGUDZLQJXSWKHKDUYHVW
with a syringe, it is necessary to loosen a second
 VFUHZFDSDWSRVLWLRQ% ıJ š'UDZWKHKDUYHVWLQWRV\ULQJH
• Close the second port (B) with a sterile screw cap.
š7XUQWKHELRUHDFWRUVRWKDWWKHKDUYHVWLQJSRUW $ with the attached syringe is positioned at the XSSHUPRVWSRLQWDQGUHPRYHWKHV\ULQJH
š7KHYROXPHH[WUDFWHGVKRXOGEHUHSODFHGE\IUHVK
medium, see 3.1.
Depending on the cell density reached the
KDUYHVWHGFHOOVFRXOGEHUHVXVSHQGHGLQIUHVK
media and reinjected into the production module.

20

21

22

User Manual - miniPERM®

&OHDQOLQHVVLVRI
utmost importancewhen changing the
medium.
5LVNRIFRQWDPLQDWLRQ
Care must be taken
WRHQVXUHWKDWQRWUDFHVRIWKHPHGLXPKDYHEHHQOHIWRQWKHWKUHDGRIWKHıOOLQJ
port or run down the sides
RIWKHQXWULHQWPRGXOH
6KRXOGWKLVRFFXUUHPRYH
YLDDQH[KDXVWHURUZLWKD
sterile pad soaked with 70%
pharmaceutical ethanol. Do
QRWĲDPH

)RUGLVLQIHFWDQWVRI
the screw cap do notuse ethanol, propanol
RUGLVLQIHFWDQWVVROYHQWVWKDW
contain alcohol as their use
ZLOOLPSDLUIXQFWLRQRIWKH
PTFE membrane. Rinse with
distilled water only.

)RUGLVLQIHFWLRQuse only 70%
pharmaceutical grade
HWKDQRORULVRSURSDQROIRUWKH
miniPERM® bioreactor, the
8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFHWKH
incubator and water bath.
All other chemicals,
HVSHFLDOO\TXDWHUQDU\ammonium complexes may
cause microcracks.
'RQRWXVHQSURSDQRO

6. Changing the medium in the nutrient module
5HSODFLQJWKHVSHQWPHGLXPZLWKIUHVKPHGLXPIROORZVWKHVDPHSURFHGXUHDVGHVFULEHGLQIRU
WKHıUVWıOOLQJRIWKHQXWULHQWPRGXOH
• Place the miniPERM® in a sterile hood.
š8QVFUHZWKHVFUHZFDSRIWKHQHFNRSHQLQJRQ
the nutrient module.
š3RXUWKHXVHGPHGLXPLQWRDGLVLQIHFWHGZDVWH
 ERWWOH ıJ š)LOOWRPORIIUHVKWHPSHUHG Ɠ& 
 PHGLXPLQWRWKHQXWULHQWPRGXOH ıJ š5HPRYHSUHVVXUHLQWKHPLQL3(50®IROORZLQJWKH
 VDPHSURFHGXUHDVGHVFULEHGLQIRUSUHVVXUH HTXLOLEUDWLRQ• Close the neck opening with a sterile screw cap.
Tighten the screw cap applying a slight pressureonly.
7. Cleaning and sterilisation of the nutrient module(multiple-use nutrient module)
7KHUHXVDEOHQXWULHQWPRGXOHFDQEHDXWRFODYHGDW
least ten times without changes to the material. To
DYRLGGDPDJHWRWKHSRO\FDUERQDWHWKHQXWULHQWPRGXOHVKRXOGEHSODFHGIUHHO\LHQRWVXEMHFWHGWR
SUHVVXUHLQWKHDXWRFODYH7KHPD[LPXPDXWRFODYH
temperature is 121°C.
š7KHPRGXOHVDUHVHSDUDWHGDWWKHHQGRIWKH FXOWXUHXVLQJWKHKRRNHQGRIWKHRSHQHU SURYLGHGWRJHQWO\SULVHRSHQWKHVQDSSHUFOLSVThe production module can then be easily
 UHPRYHGIURPWKHQXWULHQWPRGXOH ıJ • Clean the nutrient module only with hot waterand neutral or weak acid or alkaline detergent
without rinsing agents. Rinse with ample water WRFRPSOHWHO\UHPRYHWKHGHWHUJHQW'RQRWXVH
an automatic dish washer.
š$XWRFODYHWKHQXWULHQWPRGXOHZLWKRXWWKHVFUHZ FDSIRUPLQWRDPD[LPXPRIƓ&'R
not use any alkaline-based corrosion protector in DXWRFODYHERLOHUZDWHU

23

350 to 400 ml medium

2425

8. Cleaning the Universal Turning Device
7KH8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFHFDQEHGLVLQIHFWHG
with a cloth soaked in 70% pharmaceutical grade
ethanol or isopropanol. Do not use n-propanol. Do
QRWDXWRFODYHWKH8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFH

33

User Manual - miniPERM®
High density cell culture in miniPERM®
'High density cell culture'
7KH GHVLJQ RI WKH PLQL3(50® bioreactor makes it
possible to culture cells to considerably higher densities
KLJKGHQVLW\FHOOFXOWXUH WKDQLQFRQYHQWLRQDOVWDWLRQDU\FXOWXUH LQ ZKLFK WKH R[\JHQDWLRQ RI WKH FHOOV FDQRQO\ EH DFKLHYHG YLD JDV H[FKDQJH WKURXJK WKH FDS&RQVHTXHQWO\WKHFHOOXODUSURGXFWVDUHVHFUHWHGLQPXFKKLJKHUFRQFHQWUDWLRQVFRPSDUHGWRFRQYHQWLRQDOFXOWXUHV&HOOVFXOWXUHGLQKLJKGHQVLW\DUHYHU\PXFKGHSHQGHQWRQ
RSWLPDOFXOWXUHVRWKH\DUHPRUHVHQVLWLYHWRGLVWXUEDQFHVWKDQFHOOVLQFRQYHQWLRQDOVWDWLRQDU\FXOWXUHDWGHQVLWLHVRI
10 to 106 cells/ml.
Due to the high density (107 cells/ml and greater) the
FHOOV DUH GHSHQGHQW RQ WKH FRQWLQXRXV VXSSO\ RI ODUJH
TXDQWLWLHVRIQXWULHQWVDQGR[\JHQDQGRQWKHUHPRYDORI
metabolic waste products and CO2.
2[\JHQUHTXLUHPHQWRIK\EULGRPDFHOOV
7KHR[\JHQFRQVXPSWLRQUDWHRIK\EULGRPDFHOOVLVLQWKH
RUGHURIƐJSHU6 cells per hour.

7KHLQWHUYDORIWKHPHGLXPFKDQJHGHSHQGVRQWKHFHOOOLQHWKHPHGLXPDQGWKHLQFUHDVHRIWKHFHOOGHQVLW\:H
suggest 1 to 2 times per week. An orange-yellow colour
RIWKHPHGLXPLQWKHSURGXFWLRQPRGXOHLVLQGLFDWLYHRID
high cell density (> 107 cells/ml).
+DQGOLQJRIWKHPLQL3(50® bioreactor
7KH WHPSHUDWXUH RI WKH QXWULHQW PHGLXP VKRXOG DOZD\V
EH EURXJKW WR Ɠ& EHIRUH WKH PRGXOH LV ıOOHG $IWHU
miniPERM®LVıOOHGZLWKQXWULHQWPHGLXPDQGLQWURGXFHG
WR WKH LQFXEDWRU WKH DLU DERYH WKH PHGLXP KHDWV DQGH[SDQGV7KLVH[SDQVLRQFDQEHVXEVWDQWLDOSHUƓ&LQ
WHPSHUDWXUHWKHLQFUHDVHLQYROXPHLVRIWKHYROXPHDW Ɠ& 7KXV WKH YROXPH LQFUHDVHV E\ DERXW  PO LI
WKHWHPSHUDWXUHLQWKHVSDFHDERYHWKHPHGLXPLQWKH
QXWULHQWPRGXOHULVHVIURPƓ&WRƓ&7KLVLQFUHDVHLQYROXPHZRXOGFDXVHDVXEVWDQWLDOULVHLQSUHVVXUH PRUHWKDQEDU LQWKHQXWULHQWPRGXOHRIWKHPLQL3(50®.
7KLVZRXOGOHDGWRH[SDQVLRQRIWKHVLOLFRQHPHPEUDQHRI
the production module.

7KHUHLVDQRWKHUHĳHFWW\SLFDOIRUFXOWXUHVZLWK1D+&23EXĳHUHG PHGLD LQ D FORVHG ELRUHDFWRU ZKLFK FDXVHV DIXUWKHU ULVH RI SUHVVXUH LQ WKH QXWULHQW PRGXOH :KHQ D
culture is started, there is usually atmospheric air rather
than the CO2 containing incubator atmosphere in the
DLU VSDFH DERYH WKH PHGLXP RI WKH QXWULHQW PRGXOH
7KHUHIRUHWKH1D+&23 in the medium decomposes, andProduction rate
the CO2LVUHOHDVHGLQWRWKHVSDFHDERYHWKHPHGLXPRI
7R SURGXFH D FHUWDLQ DPRXQW RI SURGXFW PRQRFORQDO WKHQXWULHQWPRGXOH7KHUHVXOWLVDIXUWKHUULVHLQSUHVVXUH
DQWLERGLHV LQ WKH FDVH RI K\EULGRPD FHOOV  D FHUWDLQ LQWKHQXWULHQWPRGXOHDQGDONDOLQLVDWLRQRIWKHPHGLXPQXPEHURIFHOOVDUHQHHGHG7KHQXPEHURIFHOOVUHTXLUHG
GHSHQGVRQWKHLQGLYLGXDOSURSHUWLHVRIWKHFHOOVFXOWXUHG 7KHVH GLĳHUHQFHV LQ RYHUDOO DQG &22 partial pressure$FFRUGLQJWR)D]HNDVGH6W*URWK -,PPXQRO0HWKRGV ZLOO EH OHYHOOHG Rĳ E\ GLĳXVLRQ RI JDVHV WKURXJK WKH K\EULGRPDFHOOVW\SLFDOO\SURGXFHEHWZHHQ JDVH[FKDQJHPHPEUDQHRIWKHVFUHZFDSIRUWKHQXWULHQW
4 x 107 and 7 x 108 antibody molecules per cell in a PRGXOH&RQVHTXHQWO\WKHS+YDOXHZLOOEHUHDGMXVWHGWR
24-hour period.
SK\VLRORJLFDOOHYHOVZLWKLQDIHZKRXUV:LWKDFHOOGHQVLW\RI7 cells/ml, (which is easily attainable
in the miniPERM® ELRUHDFWRU  WKH R[\JHQ UHTXLUHPHQWRIWKH[7FHOOVFXOWLYDWHGLQWKHPO PLQL3(50®
FODVVLF  RI WKH SURGXFWLRQ PRGXOH LV DSSUR[LPDWHO\PJKRXU

Changing medium
7KHVWUHVVIXOFRQGLWLRQVRIKLJKGHQVLW\FHOOFXOWXUHPHDQVWKHFHOOVUHTXLUHDPHGLXPRISDUWLFXODUO\KLJKTXDOLW\ZLWKUHVSHFW WR WKH FRQWHQW RI JOXFRVH DQG 1D+&23. The
FRQWHQWRIJOXFRVHVKRXOGQRWEHOHVVWKDQJO,IOHVV
the medium should be supplemented with additional
JOXFRVH0RVWPHGLDKDYHDQ1D+&23 content (DMEMJO ZKLFKHQVXUHVDEXĳHUFDSDFLW\XSWRZHHNVDue to the optimal gas exchange in the miniPERM®
bioreactor and the high cell density the initial glucose
FRQWHQWZRXOGEHH[KDXVWHGEHIRUHWKHS+FRORXUFKDQJH
RI WKH QXWULHQW PHGLXP LV LQGLFDWHG IURP UHG WR \HOORZ
7KXVWKHEXĳHUFDSDFLW\RIWKHPHGLXPWRQHXWUDOL]HDQG
WREXĳHUPHWDEROLFZDVWHSURGXFWVLVH[KDXVWHG

34

User Manual - miniPERM®
Troubleshooting
Problem

Solution

The cells are not growing
DIWHUDIHZGD\VWKHSHUFHQWDJH
RIGHDGFHOOVLVDERYHš,QFUHDVHWKHLQLWLDOFHOOGHQVLW\š3URGXFHWKHVWDUWHUFHOOVXVSHQVLRQIRUWKHPLQL3(50® culture with1
/3POFRQGLWLRQHGPHGLXPIURPDFHOOFXOWXUHIODVNDQG2/3 ml
IUHVKPHGLXPš,QFUHDVHWKHSHUFHQWDJHRIWKHVHUXPVXSSOHPHQWLQWKHPHGLXPš'HFUHDVHWKHUROOLQJVSHHGZKHQXVLQJVHQVLWLYHFHOOVHJRIKXPDQ K\EULGRPDFHOOOLQHV6HWWKHUROOLQJVSHHGWRMXVWUSPš8VHRIDGGLWLYHVLQWKHPHGLXPWRUHGXFHVKHDUIRUFHVš'RQRWILOOPRUHWKDQPOPHGLXPLQWRWKHQXWULHQWPRGXOH$QDLU
 VSDFHPXVWEHPDLQWDLQHGDERYHWKHQXWULHQWPHGLXPLQWKH
bioreactor.

The cells do not reach high
GHQVLWLHV [7 cells/ml)

š&HOOVRIVRPHOLQHVGRQRWJURZWRKLJKGHQVLWLHV OHVVWKDQ[107FHOOVPO ,ILWLVSRVVLEOHWRFXOWLYDWHWKHFHOOVDWDYHUDJHFHOO GHQVLWLHVDQGKLJKYLDELOLW\RYHUDORQJWLPHSHULRGE\UHJXODUFKDQJHV RIWKHPHGLXPLQWKHQXWULHQWPRGXOHKLJKDQWLERG\FRQFHQWUDWLRQ
can be obtained.

Cells aggregate and dieš7KHFHOOVPXVWDOZD\VEHNHSWLQVXVSHQVLRQ,IWKHPLQL3(50®
 ELRUHDFWRULVUHPRYHGIURPWKH8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFHDQGSODFHGLQ WKHVWHULOHKRRGWKHFHOOVZLOOLPPHGLDWHO\EHJLQWRVHWWOH,QWKLVFDVH
 WKH\PD\IRUPFOXVWHUVDQGSRVVLEO\GLH7RDYRLGVXFKDQ
occurrence, all necessary manipulations must be carried out as TXLFNO\DVSRVVLEOH

$FFXPXODWLRQRIIRDP
,IWRRPXFKIRDPLQJRFFXUVLQWKH
nutrient and production modules, it
is not possible to release the
SUHVVXUHZLWKRXWJHWWLQJIRDPRQ
the screw caps.
'XUDWLRQRIWKHPLQL3(50® cultureš8VHDQDQWLIRDPDJHQW• Reduce the serum concentration in the medium contained in the QXWULHQWPRGXOHDQGLISRVVLEOHDOVRLQWKHSURGXFWLRQPRGXOH
š5HGXFHWKHUROOLQJVSHHGDWWKH8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFH
š7KLVGHSHQGVRQWKHJURZWKNLQHWLFVRIWKHFHOOFORQH%\UHJXODUO\ FKDQJLQJWKHPHGLXPDQGUHJXODUO\KDUYHVWLQJWKHFHOOVWKH
miniPERM® bioreactor culture can be operated in a continuous
 ZD\RYHUVHYHUDOZHHNV7KHWLPLQJRIWKHPHGLXPH[FKDQJHDQG
 FHOOKDUYHVWLQJZLOOYDU\IURPFHOOOLQHWRFHOOOLQHUser Manual - miniPERM®

Problem

Solutionš$IWHUDVVHPEO\HQVXUHWKDWDOOWKHVQDSSHUFOLSVDUHIXOO\VQDSSHG
 ZLWKWKHLUFRUUHVSRQGLQJLQGHQWDWLRQVRQWKHULPRIWKHQXWULHQWPRGXOHA second check will ensure that nutrient and production modules are
1. Between production and nutrient
located correctly.
moduleš7KHUHXVDEOHQXWULHQWPRGXOHVKRXOGEHDXWRFODYHGWRDPD[LPXP'XULQJDVVHPEO\RIWKHPLQL3(50®,  WHPSHUDWXUHRIƓ&,WVKRXOGEHXVHGQRPRUHWKDQWLPHV
the snapper clips on the production  RWKHUZLVHWKLVOHDGVWRGHIRUPDWLRQDQGFUDFNLQJRIWKH
module are snapped audibly into
polycarbonate.
WKHLQGHQWDWLRQVRQWKHULPRIWKH
š7RDYRLGGDPDJHWRWKHSRO\FDUERQDWHWKHQXWULHQWPRGXOHVKRXOGEH
nutrient module. Do not attempt to SODFHGLQWRWKHDXWRFODYHLQDZD\DVWREHFRQWDFWIUHHIURP
twist the two modules together.
any other item.
• To sterilize the miniPERM® bioreactor, use only 70% pharmaceuticalgrade ethanol or isopropanol. DO NOT USE any other chemicals; HVSHFLDOO\TXDWHUQDU\DPPRQLXPFRPSOH[HVPD\FDXVHPLFURFUDFNV
$WWKHVFUHZFDSRIWKHQHFNš7LJKWHQWKHVFUHZFDSRIWKHQHFNRSHQLQJRIWKHQXWULHQWPRGXOH
 RSHQLQJRIWKHQXWULHQWPRGXOH
applying slight pressure only.
š7KHVWHULOHVLQJOHXVHVFUHZFDSVDUHQRWDXWRFODYDEOH
š'RQRWIODPHWKHQHFNRSHQLQJRIWKHQXWULHQWPRGXOHDQGWKHVFUHZ FDSV7KLVZLOOOHDGWRGHIRUPDWLRQRIWKHSRO\FDUERQDWH• Each time the nutrient module is opened, reclose with a newscrew cap.
/HDNDJH

3UHVVXUH
7KHVLOLFRQHPHPEUDQHRIWKH
• The humidity inside the CO2 incubator may be too low.
production module is always
Make sure that the humidity is at least 90%.
expanded outwards, due to a build- š 7KHWHPSHUDWXUHRIWKHQXWULHQWPHGLXPVKRXOGDOZD\VEHEURXJKWWRXSRISUHVVXUHLQWKHELRUHDFWRU Ɠ&EHIRUHWKHPRGXOHLVILOOHG,IWKHQXWULHQWPRGXOHKDVEHHQILOOHG
with cold medium (4°C) and the miniPERM® bioreactor has been
 SODFHGLQWRWKHLQFXEDWRUWKHDLUDERYHWKHPHGLXPKHDWVXSDQG
 H[SDQGV7KLVZLOOOHDGWRH[SDQVLRQRIWKHVLOLFRQHPHPEUDQHRIWKH
production module.
š (TXLOLEUDWLRQRISUHVVXUH)RUWKLVORRVHQWKHQXWULHQWPRGXOH
 VFUHZFDSE\žWXUQDQGDIWHUZDUGVWLJKWHQDSSO\LQJVOLJKW
pressure only.
7KHVLOLFRQHPHPEUDQHRIWKH
š 7KLVPD\EHGXHWRDEDFWHULDORUIXQJDOFRQWDPLQDWLRQLQWKHQXWULHQW
production module is pulled inward.
or production modules.

36

User Manual - miniPERM®

Problem

Solution&RQWDPLQDWLRQ)LUVWFKHFNWKHFRPSRQHQWV FHOOVXVSHQVLRQPHGLXPFXOWXUHYHVVHOVLQFXEDWRUHWF IRUVWHULOLW\&OHDQOLQHVVLVRIXWPRVWLPSRUWDQFHZKHQWDNLQJVDPSOHVKDUYHVWLQJFHOOVRUFKDQJLQJWKHPHGLXP

,QWKHSURGXFWLRQPRGXOH• Use a septum port to take samples. Replace one screw cap on
 WKHSURGXFWLRQPRGXOHZLWKDVHSWXP 2UGHULQJ,QIRUPDWLRQVHH
page 41).
š )ROORZLQJVDPSOLQJRUFHOOKDUYHVWLQJWKHDFFHVVSRUWVPXVWEHIUHH
 RIFXOWXUHPHGLXPEHIRUHFORVLQJZLWKWKHVFUHZFDSVš $OZD\VXVHDQHZVFUHZFDSIRUHDFKVDPSOLQJKDUYHVWSRUWZKLFK
has been opened.
š 8VHRIDQDQWLIRDPDJHQW,IIRDPKDVDFFXPXODWHGLQWKHSURGXFWLRQ PRGXOH ZKLFKLVRIWHQWKHFDVHZKHQ)&6LVXVHGDVDPHGLXP VXSSOHPHQW LWLVGLIILFXOWWRORRVHQWKHVFUHZFDSVRIWKHSURGXFWLRQ RUQXWULHQWPRGXOHVZLWKRXWJHWWLQJIRDPLQWRWKHWKUHDGV7KLVFRXOG EHDSRWHQWLDOULVNRIFRQWDPLQDWLRQš $IWHUH[FKDQJLQJWKHFXOWXUHPHGLXPWKHQHFNRSHQLQJPXVWEHIUHH
 IURPDQ\VXFKPHGLXPSULRUWRFORVLQJZLWKDVFUHZFDSš $OZD\VXVHDQHZVFUHZFDSIRUWKHQXWULHQWPRGXOHDIWHUFKDQJLQJ
the medium.
š ,IFRQWDPLQDWLRQLVOLPLWHGWRWKHQXWULHQWPRGXOHWKHFXOWXUHFDQEH VDYHG5HPRYHWKHFHOOVIURPWKHSURGXFWLRQPRGXOHDQGWUDQVIHU
them to another sterile miniPERM® bioreactor.

,QWKHQXWULHQWPRGXOH

Rotation speed

The turning speed must be selected according to the robustness
RIWKHFHOOV• Generally, the bioreactor has to be rotated at low speed at the EHJLQQLQJRIWKHFXOWXUH:LWKDQLQFUHDVHRIFHOOGHQVLW\WKHUROOLQJ
speed can be increased concomitantly.
 ([DPSOHVšPXULQHK\EULGRPDFHOOVWRUSP 'LVSOD\ šKXPDQK\EULGRPDDQGWUDQVIHFWHGFHOOVWRUSP
(Display 4-20)
7KHUROOLQJVSHHGVUHIHUWRWKHGLVSOD\RQWKH&RQWUROXQLWPLQL3(50®
DFWXDOO\URWDWHVDWKDOIWKLVVSHHG

7KHUROOHUVRIWKH8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFHVWRSZRUNLQJš (QVXUHWKDWWKH8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFHLVFRUUHFWO\DVVHPEOHG
š $IWHUFOHDQLQJWKHWXUQLQJGHYLFHZLWKSKDUPDFHXWLFDOJUDGHHWKDQRO
or isopropanol you must oil the bearings.
Do not use n-propanol.
 &DXWLRQ.HHSWKHUXEEHUPDWHULDORIWKHUROOHUVIUHHIURPRLOLQRUGHU WRSUHYHQWWKHELRUHDFWRUVIURPVOLSSLQJIURPWKHGHYLFHš 'RQRWDXWRFODYHWKH8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFH

37

User Manual - miniPERM®

Problem

Solution

Mediumš 8QGHUFRQGLWLRQVRIVWUHVVLQHDFKKLJKGHQVLW\FHOOFXOWXUHWKHFHOOV UHTXLUHDPHGLXPRISDUWLFXODUKLJKTXDOLW\ZLWKUHJDUGWRWKHFRQWHQW RIJOXFRVHDQG1D+&23,QWKHPLQL3(50® bioreactor, the cells can EHFXOWLYDWHGZLWKWKHVDPH1D+&23-dependent media normally XVHGLQWLVVXHFXOWXUH7KHFRQWHQWRIJOXFRVHVKRXOGEHQRWOHVV
than 4 g/l, otherwise the medium should be additionallysupplemented accordingly.
š )RUWKHSURGXFWLRQRISURWHLQVWKHPHGLXPVKRXOGEHFKDQJHGLQ LQWHUYDOVRIXSWRGD\V)RUWKHSURGXFWLRQRIELRPDVVWKHPHGLXP VKRXOGEHFKDQJHGLQLQWHUYDOVRIXSWRGD\V• The medium in the nutrient module should be replaced as soon as WKHUHLVDVOLJKWFKDQJHLQFRORXUIURPVDOPRQSLQNWRD\HOORZLVK SLQN7KLVVLJQLILHVWKDWWKHEXIIHULQJFDSDFLW\RIWKHPHGLXPLV UHDFKLQJWKHSRLQWRIH[KDXVWLRQ

Changing the medium

Serum

38

• Under high density cell culture conditions, serum concentration can EHFULWLFDO,QWKHPLQL3(50® bioreactor the serum concentration
 VKRXOGEHQRWOHVVWKDQWKDWXVHGLQDVWDWLRQDU\FXOWXUHRIWKH
same cell line.
š )RUWKHSURGXFWLRQRIPRQRFORQDODQWLERGLHVRURWKHUSURWHLQVD VHUXPFRQFHQWUDWLRQEHWZHHQWRVKRXOGEHXVHG)RUWKH
 SURGXFWLRQRIELRPDVVDVHUXPFRQFHQWUDWLRQRILVJHQHUDOO\ VXIILFLHQWš ,QWKHPLQL3(50® nutrient module the serum concentration can be KDOYHGDQGLQVRPHFDVHVLWFDQEHUHGXFHGWR]HURš ,WLVDOVRSRVVLEOHWRFXOWLYDWHK\EULGRPDRURWKHUFHOOW\SHVLQWKH
miniPERM® bioreactor. The cells must be adapted to a serum or SURWHLQIUHHHQYLURQPHQWUser Manual - miniPERM®
Publications & Application Notes
Bruce, M.P; Boyd, V.; Duch, C; White, J.R.
Dialysis-based bioreactor systems for the productionof monoclonal antibodies -alternatives to ascites
production in mice.
-RXUQDORI,PPXQRORJLFDO0HWKRGV1R  &DXOıHOG--)HUQDQGH]0+6RXVD$5/DQH6-/HH
T.H.;Hawrylowicz, C.M.
Regulation of major histocompatibility complex
class II antigens on human alveolar macrophages by
granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in
the presence of glucocorticoids,PPXQRORJ\  
Falkenberg, F.W.
Production of monoclonal antibodies in theminiPERM® bioreactor: comparison with otherhybridoma culture methods
5HV,PPXQ  
)DONHQEHUJ)::HLFKHUW+.UDQH0%DUWHOV,3DOPH
M.; Nagels, H.-O.; Fiebig, H.
In vitro production of monoclonal antibodies in highconcentration in a new and easy to handle modular
minifermenter-,PPXQ0HWK  

Three-Dimensional Bioreactor Cultures: A Useful
Dynamic Model for the Study of Cellular Interactions1<$FDG6FL Dewar, V.; Voet, P.; Denamur, F.; Smal, J.
Industrial Implementation of in Vitro Production of
Monoclonal Antibodies,/$5-RXUQDO9ROXPH1XPEHU Berlin, V.; Rousselle, P.
Production of a recombinantly expressed laminin
fragment by HEK293-EBNA cells cultured insuspension in a dialysis-Based Bioreactor
3URWHLQ([SU3XULI  

Application notes
Vollmers, H.P.; Wozniak, E.
Cultivation of human hybridoma cell line in theminiPERM® bioreactor
8QLYHUVLW\RI:ĞU]EXUJ*HUPDQ\
Tutas, M.
Cultivation of mouse hybridoma cells in theminiPERM® bioreactor
Cell Diagnostica GmbH, Germany
Lingnau, A.
Cultivation of IgM producing hybridoma cells in theminiPERM® bioreactor
VM-PRO GmbH, Luckenwalde, Germany

Kagan, E.; Vieira, E.; Petrie, H.T.
&RPSDULVRQRIKROORZıEHUELRUHDFWRUVDQGPRGXODU
minifermentors for the production of antobodies&$$72355:RUNVKRSRQ$OWHUQDWLYHVLQ0RQRFORQDO
Antibody Production, 9/1997, Haborplace Hotel Baltimore, MD

Schliephacke, T.; Käppel, S.
Long-term proliferation of CHO cells in the miniPERM®
bioreactor
L2Q*HQ$*,QYLWUR6\VWHPV6HUYLFHV*PE+*HUPDQ\/LWWOH0.LSUL\DQRY60/H*DOO)0ROGHQKDXHU*
Of mice and men: hybridoma and recombinant
antibodies
5HYLHZ,PPXQRORJ\7RGD\  

0ĞOOHU6
HEK-U293 cells cultivated in suspension in theminiPERM® bioreactor.QROO$*/XGZLJVKDIHQ*HUPDQ\

0HW]JHU-1LFNOLVFK16FKPLGW%.XIHU33HVFKHO&
Bernhard, H.
Induction of a T helper cell response against the tumor
associated antigen HER-2 using monocyte-derived
dendritic cells
ESACT-Meeting 09/2001, Sweden

Prestle, J.; Ott-Gebauer, S.
Production of recombinant adenoviruses in theminiPERM® bioreactor
8QLYHUVLW\RI*ąWWLQJHQ*HUPDQ\

5DXOI+HLPVRWK06DQGHU,=KLSLQJ&K%RURZLW]NL*'LHZDOG.YDQ.DPSHQ9%DXU;
Development of a monoclonal antibody-based sandwich
ELISA for detection of the latex allergen Hev b Int.
$UFK$OOHUJ\,PPXQRO  
6FKĞWW&)ĞUOO%6WHOWHU)-DFN56:LWW6
CHO transfectants produce large amounts ofrecombinant protein in suspension culture-RXUQDORI,PPXQRORJLFDO0HWKRGV  9ROOPHUV+3'ËPPULFK-:R]QLDN(%LHU'0ĞOOHUHermelink, H.K.
Apoptotic in vitro and in vivo activity of the humanmonoclonal antibody SC-1 on stomach cancer cells
QG,QWHUQDWLRQDO*DVWULF&DQFHU&RQJUHVV0XQLFK*HUPDQ\
04/1997.RQVWDQWLQRY00LQGRYD0*RVSRGLQRY3*HQRYD3

Sponaas, A.; Anding, P.
Cultivation of a murine macrophage like cell line (K774)
in the miniPERM® bioreactor
0D[3ODQFN,QVWLWXWIRU,QIHFWLRQV%LRORJLH%HUOLQ*HUPDQ\
Dobner, T.
Cultivation of insect cells (SF9 cells - baculovirus
system) in the miniPERM® bioreactor
8QLYHUVLW\RI5HJHQVEXUJ*HUPDQ\
Schillo, M.; Meyer, N.; Bentrop, J.
Cultivation of insect cells (Drosophila Schneider cells[S2]) in the miniPERM® bioreactor
8QLYHUVLW\RI.DUOVUXKH*HUPDQ\
Wuppermann, F.
Cultivation of a murine hybridoma cell line in miniPERM®
classic and miniPERM® HDC 50 bioreactors/&7HFK*PE+'RUIHQ*HUPDQ\

39

User Manual - miniPERM®
miniPERM® Accessories

➄
➃

5

➀

➁

7KHIROORZLQJDFFHVVRULHVDUHDYDLODEOHIRUFRQYHQLHQW
KDQGOLQJGXULQJFXOWLYDWLRQ➀ Sterile single-use 50 ml Luer Lock and 2 ml
Luer syringes)RUVLPSOHDQGVDIHFHOOVXVSHQVLRQLQRFXODWLRQVDPSOLQJDQGKDUYHVWLQJ➁6WHULOHıOOLQJWXEH
7KHVWHULOHıOOLQJWXEHRĳHUVDVLPSOHVROXWLRQWRFHOOVXVSHQVLRQWUDQVIHU HJIURPFHQWULIXJHWXEHVWRVLQJOH
XVHV\ULQJH $ıOOLQJWXEHLVVOLJKWO\ĲH[LEOHFRQQHFWVGLUHFWO\WRDPO/XHUV\ULQJHDQGKDVDVXĴFLHQWO\large inner diameter to minimize shear-stress induced
cell damage.

➂ Luer syringe needles 25G x 5/8"
For sampling and supplementing the medium in the
SURGXFWLRQPRGXOHYLDVHSWXPSRUWV➃ Septum ports
7RVLPSOLI\VDPSOLQJDQGVXSSOHPHQWLQJSURFHGXUHVDQG
WRIXUWKHUUHGXFHFRQWDPLQDWLRQULVNVDUHSODFHPHQW
RIRQHRUWZRRIWKHWKUHHVWDQGDUGVFUHZFDSVRQWKH
production module with sterile septum ports is possible.
7KHUXEEHUVHSWXPSRUWVRĳHUWKHSRVVLELOLW\IRUDGGLWLRQRIĲXLGVWRRUUHPRYDORIVDPSOHVIURPWKHSURGXFWLRQPRGXOHXVLQJVWHULOHVLQJOHXVHV\ULQJHQHHGOHVRIVPDOO
diameter. There is no need to open the module. The
VHSWXPSRUWVVKRXOGEHUHSODFHGDIWHUWKH\KDYHEHHQSLHUFHGRUWLPHV

40➂➄ miniPERM® standFor mounting the miniPERM® bioreactor during
LQRFXODWLRQVDPSOLQJDQGKDUYHVWStart-up Support Kit$FFHVVRULHVWRLQRFXODWHVDPSOHDQGKDUYHVW&RQVLVWVRIš6LQJOHXVHPO/XHU/RFNV\ULQJHVWHULOH [• Single-use 2 ml Luer syringe, sterile (20x)š)LOOLQJWXEHŖŖVWHULOH [š/XHUV\ULQJHQHHGOHV *[/8 VWHULOH [• Septum ports, sterile (6x)• miniPERM® stand (1x)

User Manual - miniPERM®
2UGHULQJLQIRUPDWLRQ
Order no

Packagingunit/case

Description
miniPERM® classic

Bioreactor, sterile12

miniPERM classic

Production module, sterile

1294.6077.121

miniPERM +'&

Bioreactor, sterile

1294.6077.017

miniPERM®+'&

Production module, sterile

12

®

®

2UGHULQJLQIRUPDWLRQ$FFHVVRULHV
Order noPackagingunit/case

Description

1XWULHQWPRGXOHIRUPLQL3(50®DXWRFODYDEOH

4

6WDQGVIRUPLQL3(50494.6001.036

6FUHZFDSVIRUSURGXFWLRQPRGXOHVWHULOH

694.6077.037

6FUHZFDSIRUQXWULHQWPRGXOHVWHULOH

16

/XHUV\ULQJHQHHGOHV*[ŷ8ŗ [bPP VWHULOH

100

94.6077.136

6LQJOHXVHbPO/XHU6\ULQJHVWHULOH

100

94.6077.137

6LQJOHXVHbPO/XHU/RFN6\ULQJHVWHULOH

60

94.6077.138)LOOLQJWXEHŗVWHULOH

100

94.6001.094

Start-up support kit®

Quantityš6LQJOHXVHbPO/XHU/RFN6\ULQJHVWHULOH

8

š6LQJOHXVHbPO/XHU6\ULQJHVWHULOH

20š)LOOLQJWXEHŗ/XHUVWHULOH

8š/XHUV\ULQJHQHHGOH*[ŷ8“, sterile20• Septum port, sterile6š6WDQGIRUPLQL3(50

®

1

1

2UGHULQJLQIRUPDWLRQş8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFHDFFHVVRULHV
Order no94.6001.061

Description
8QLYHUVDO7XUQLQJ'HYLFH9

Packagingunit/case1

41

User Manual - miniPERM®
Brief instructions for use)RUH[DPSOH3UHSDUDWLRQRIFHOOVIRUFXOWLYDWLRQLQPLQL3(50®FODVVLFSURGXFWLRQPRGXOHZLWKPOYROXPHFor using the miniPERM®+'&SURGXFWLRQPRGXOH[6FHOOVPOLQPOPHGLXPDUHSUHSDUHG
Preparation of cells

35 ml
fresh
mediumminiPERM® preparation
7KHVWHULOHELRUHDFWRURSWLRQLVUHDG\IRUXVHZLWKRXWIXUWKHUSUHSDUDWLRQ $XWRFODYDEOHQXWULHQWPRGXOH
1,2 bar
121°C/250°F
20 minFilling

350 - 400 ml medium

Conditioning
3/4

UpM

42

3/4

35 ml
(1-5 x 106 cells/ml)

User Manual - miniPERM®
Medium change

350-400 ml medium

Sampling
3/4

3/4

Harvesting

600 x g
10 min4°C

43*%E
*
*%

E


7HFKQLFDO
7HFKQLFDOPRGLILFDWLRQVUHVHUYHG
PRGLILFDWLRQV UHVHUYHG

User manual - miniPERM®

SARSTEDT AG & Co. KG
Sarstedtstr. 1
D-51588 Nümbrecht
www.sarstedt.com