遺伝子増幅検出装置RD-100i

Be One-Step Ahead

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Be One-Step Ahead
OSNATM法（One-Step Nucleic acid Amplification method）は、可溶化した検体をワンステップで遺伝子増幅反応に用いることができる技術です。

OSNATM法を用いることにより、リンパ節中の標的遺伝子を高精度、迅速、簡便に検出することが可能となります。

遺伝子増幅検出装置 RD-100i

RD-100iを用いて標的遺伝子の増幅・検出を自動で行います。
mRNAの精製・抽出不要

OSNA 法の特長
TM

リンパ節前処理装置 RP-10

1. 高精度6種のプライマーを用いて、標的遺伝子を特異的に増幅します。
また、リンパ節全体からの情報を基に転移の陽性又は陰性を判定するため、高い判定精度を得ることができます。
検体（リンパ節）を可溶化します。

2. 迅速性リンパ節の可溶化から結果判定までを約30〜50分で終えることができるため、術中迅速検査にも用いることができます。

3. 簡便性遺伝子増幅検出装置 RD-100iを用いることにより、簡便な操作で客観性の高い結果を得ることができます。

※OSNATMはシスメックス株式会社の登録商標です。

02 RD-100i

RD-100i

標的遺伝子の増幅・検出方法
リアルタイム濁度検出
OSNA TM法で採用しているRT-LAMP＊

法 では、標的遺伝子の増幅に伴い反応副産物としてピロリン酸マグネシウムが析出します。遺 伝 子 増 幅 検出装 置

RD-100iは、この反応副産物の析出による濁度の変化をリアルタイムに検出します。
増幅反応

透過光検出

＊当社はLAMP法の使用に関して栄研化学株式会社と2001年1月に実施権の許諾契約を締結しております。

反応副産物（ピロリン酸マグネシウム）の析出による白濁

標的遺伝子の増幅と立ち上がり時間
リアルタイム検出している濁度が、ある0.7閾値（ 0.1 ）に達するのに要した測定時0.6間を「立ち上がり時間」としています。

この相関関あります。OSNA 法では、
TM度と相関関係がのmRNA（ copies/μL ）0.5濁

この「立ち上がり時間」は標的遺伝子

2.5 102 copies/μL
2.5 103 copies/μL
2.5 104 copies/μL
2.5 105 copies/μL
2.5 106 copies/μL
2.5 107 copies/μL

0.40.3係を利用してmRNA 濃度の算出が可希釈溶液

0.2能です。

0.100481216

測定時間（分）mRNA濃度と立ち上がり時間の関係
mRNA 濃度と「立ち上がり時間」との間12には相関関係が成立します。
そのため、いて作成した検量線と測定サンプルの「立ち上がり時間」から、測定サンプル中のmRNA濃度が算出されます。

立ち上がり時間︵分︶既知濃度のmRNAキャリブレータを用

11●
●

10●
●

9●

8●

76102

103

104105106
mRNA濃度（copies/μL）

107108※実際には3点の既知濃度のキャリブレータを用いて検量線を作成します。

RD-100i 03乳癌­Breast Cancer
Marker Selection

CutOff

標的遺伝子マーカー：CK19mRNA

カットオフ値：2.5 102 copies/μL

ヒト遺伝子発現データベースより、乳腺組織、乳癌組織で発現量が高く、正常なリンパ節組織で発現量の低い45遺伝子を選択した後、定量RT-PCR法による検討を行い、転移陽性リンパ節において発現量が高く、転移陰性リンパ節において発現量が低い7候補遺伝子に絞り込みました。
さらに、7候補遺伝子のうち、転移陽性リンパ節と転移陰性リンパ節での発現量において大きな差を示し、かつ、転移陽性リンパ節における発現量が最も高いCK19mRNAを、乳癌リンパ節転移検査における最適なマーカー遺伝子として選択しました。

乳癌リンパ節転移のカットオフ値を設定する目的で、OSNATM法により転移陰性リンパ節・転移陽性リンパ節のCK19mRNAの濃度を測定し、比較しました。
その結果、転移陰性と転移陽性のカットオフ値を2.5 102copies/μLに設定しました。
また、2mm 角相当の転移巣中のCK19mRNA 発現量に基づいて、2mm角以上の転移巣を示唆するカットオフ値とし5.0 103copies/μLを設定しました。

1 107

CK19mRNA濃度（copies/μL）

Ct Value（サイクル数）

152025303540＋ ­1 106
1 104＋ ­＋ ­＋ ­＋ ­CK19FOXA1SPDEF

CEA

MGB1 TACSTD2 MUC15.0 103

1 103＋

2.5 102

1 102
1 101

­

1＜1

病理組織診断 ＋ ­＋＋1 105＋ ­転移陰性リンパ節

転移陽性リンパ節

OSNATMの判定基準

Clinical Performance
TM

OSNA 法と病理組織検査との比較による臨床試験の結果、高い特異度・判定一致率を示しました。
TM

病理組織検査により陰性と判定されたリンパ節をOSNA 法により測定し、陰性一致率（特異度）を評価しました。
●※ ブロックB 及びDから200μm 間隔で連続した1対の標本（厚さ5μm）を作製し、一方をHE 染色、他方を抗 CK19 抗体による免疫染色を行い、転移有無の判定を行いました。

A B C D

試験結果＊
病理組織検査N=104陰性03＋＋＋­※病理組織検査
HE染色 IHC染色（CK19）

101

特異度：97.1％（95％ C.I.：0.918〜0.994）
TM

164症例450リンパ節を用いて、3割面病理組織検査とOSNA 法との判定一致率を評価しました。
●※ ブロックB 及び D の割面から1 対の標本（厚さ5μm ）を作製し、一方をHE 染色、他方を抗CK19抗体による免疫染色を行い、転移有無の判定を行いました。

A B C DB

D

試験結果＊
病理組織検査N=450陽性
マクロ転移

3割面 病理組織検査※
HE染色 IHC染色（CK19）

陰性

ミクロ転移＋＋5420＋10422­

46348

一致率：92.9％（95％ C.I.：0.901〜0.951）

Clinical Performance after Primary Systemic Therapy
術前薬物療法受療症例＊＊を対象としたOSNA 法と病理組織検査の比較による臨床研究の結果、高い判定一致率を示しました。
TM＊＊ 主にアンスラサイクリン、タキサン、シクロフォスファミド、5-FU投与例
TM

80症例302リンパ節を用いて、2mm間隔病理組織検査とOSNA 法との判定一致率を評価しました。
●※ ブロックB 及び D の割面から1 対の標本（厚さ5μm ）を作製し、一方をHE 染色、他方を抗CK19抗体による免疫染色を行い、転移有無の判定を行いました。

A B C DB

D

2mm間隔病理組織検査※HE染色 IHC染色（CK19）

試験結果＊
病理組織検査

N=302

陽性

陰性

陽性

5320陰性7222

一致率：91.1％（95％ C.I.：0.873〜0.940）＊ リノアンプ BCの添付文書より引用
TM04 RD-100i

大腸癌­Colorectal CancerRD-100iMarker Selection

CutOff

標的遺伝子マーカー：CK19mRNA

カットオフ値：2.5 102 copies/μL

ヒト遺伝子発現データベースより、大腸組織、大腸癌組織で発現量が高く、正常なリンパ節組織での発現量の低い97遺伝子を選択した
後、定量RT-PCR法による検討とOSNATM法による検討を行い、転移陽性リンパ節における発現量が高く、かつ、転移陽性リンパ節と転移陰性リンパ節での発現量において大きな差を示したCK19mRNAを、大腸癌リンパ節転移検査における最適なマーカー遺伝子として選択しました。

大腸癌リンパ節転移のカットオフ値を設定する目的で、OSNATM法により、転移陰性リンパ節・転移陽性リンパ節中のCK19mRNAの濃度を測定し、比較しました。
その結果、転移陰性と転移陽性のカットオ
フ値を2.5 102copies/μLに設定しました。

ヒト・ゲノムライブラリー430万遺伝子からの検索

CK19mRNA濃度（copies/μL）〈1次スクリーニング〉

97遺伝子〈2次スクリーニング〉

大腸癌リンパ節を用いた定量RT-PCR法による検討

10遺伝子〈3次スクリーニング〉

大腸癌リンパ節を用いた定量RT-PCR法による検討

2遺伝子（KRT19：CK19、CEACAM5：CEA）〈4次スクリーニング〉

大腸癌リンパ節を用いたOSNATM法による検討

1 107
1 106
1 105＋

1 104
1 103

2.5 102

1 102
1 101

­

1＜1

転移陰性リンパ節転移陽性リンパ節最適マーカー遺伝子（CK19）OSNATMの判定基準

Clinical Performance
TM

OSNA 法と病理組織検査との比較による臨床試験の結果、高い特異度・判定一致率を示しました。
TM

病理組織検査により陰性と判定されたリンパ節をOSNA 法により測定し、陰性一致率（特異度）を評価しました。
●

試験結果＊
病理組織検査N=121
陰性

A B C D

病理組織検査※HE染色 IHC染色（CK19）

陽性0陰性

121

特異度：100％（95％ C.I.：0.976〜1.000）※ ブロックB及びDから100μm間隔で連続した1対の標本（厚さ5μm）を作製し、一方をHE 染色、他方を抗 CK19 抗体による免疫染色を行い、転移有無の判定を行いました。
TM

85症例385リンパ節を用いて、2mm間隔病理組織検査とOSNA 法との判定一致率を評価しました。
●

試験結果＊
病理組織検査N=385

A B C D
BD陽性陰性

陽性

797陰性

4295

2mm間隔病理組織検査※HE染色一致率：97.1％（95％ C.I.：0.950〜0.984）※ ブロックB及びDの割面から標本（厚さ5μm）を作製し、HE染色を行い、転移有無の判定を行いました。

＊ リノアンプ BCの添付文書より引用
TM

RD-100i 05

胃癌­Gastric Cancer
Marker Selection

CutOff

標的遺伝子マーカー：CK19mRNA

カットオフ値：2.5 102 copies/μL

ヒト遺伝子発現データベースより、胃組織、胃癌組織で発現量が高く、正常なリンパ節組織での発現が低い58 遺伝子を選択した後、定量
RT-PCR法による検討を行い、転移陽性リンパ節における発現量が高く、かつ、転移陽性リンパ節と転移陰性リンパ節での発現量において大きな差を示したCK19とCEAを候補遺伝子として選択しました。
さらに、2候補遺伝子について、原発巣中のタンパク質発現の検討により、より発現頻度の高いCK19mRNAを、胃癌リンパ節転移検査における最適なマーカー遺伝子として選択しました。

胃癌リンパ節転移のカットオフ値を設定する目的で、OSNATM法により、転移陰性リンパ節・転移陽性リンパ節中のCK19ｍRNAの濃度を測定し、比較しました。
その結果、転移陰性と転移陽性のカットオフ値を2.5 102copies/μLに設定しました。

ヒト・ゲノムライブラリー430万遺伝子からの検索

CK19mRNA濃度（copies/μL）〈1次スクリーニング〉

58遺伝子〈2次スクリーニング〉

胃癌リンパ節を用いた定量RT-PCR法による検討

6遺伝子〈3次スクリーニング〉

胃癌リンパ節を用いた定量RT-PCR法による検討

2遺伝子（KRT19：CK19、CEACAM5：CEA）〈4次スクリーニング〉 胃癌原発巣の免疫染色によるタンパク質の発現頻度調査

1 107
1 1061 105＋1 104
1 103

2.5 102

1 102
1 101­

1＜1

転移陰性リンパ節転移陽性リンパ節

OSNATMの判定基準

最適マーカー遺伝子（CK19）

Clinical Performance
TM

OSNA 法と病理組織検査との比較による臨床試験の結果、高い特異度・判定一致率を示しました。
TM

61症例394リンパ節を用いて、2mm間隔病理組織検査とOSNA 法との判定一致率を評価しました。
●

試験結果＊
病理組織検査N=394

A B C D
BD陽性陰性陽性

4514陰性9326

2mm間隔病理組織検査※HE染色（95％ C.I : 0.914〜0.963）
一致率：94.2％を作製し、HE染色を行※ ブロックB及びDの割面から標本（厚さ5μm）い、転移有無の判定を行いました。

上記61症例のうち、病理組織学的転移陰性例32症例のリンパ節について層別解析を行い、陰性一致率（特異度）を評価しました。

●

61症例

試験結果＊
病理組織検査＜対象＞

pN0 32症例

N=211
陰性211リンパ節陽性

2陰性

209

pN1以上 29症例

特異度：99.1％（95％ C.I : 0.966〜0.999）

TM＊ リノアンプ BCの添付文書より引用

06 RD-100i

非小細胞肺癌­Non-Small Cell Lung Cancer

RD-100i

CutOff

標的遺伝子マーカー：CK19mRNA

カットオフ値：2.5 102 copies/μL

ヒト遺伝子発現データベースより、肺癌組織と正常リンパ節におけるmRNA発現量の差が100倍以上であった遺伝子を探索、抽出し、22遺伝子を選択した後、定量RT-PCR法による検討を行い、転移陽性リンパ節における発現が高く、かつ、転移陽性リンパ節と転移陰性リンパ節での発現量において大きな差を示したCK19を、肺癌リンパ節転移検査における最適なマーカー遺伝子として選択しました。

肺癌リンパ節転移のカットオフ値を設定する目的で、OSNATM法により、転移陰性リンパ節・転移陽性リンパ節中のCK19mRNAの濃度を測定し、比較しました。
その結果、転移陰性と転移陽性のカットオフ値を2.5 102copies/μLに設定しました。

〈1次スクリーニング〉

CK19mRNA濃度（copies/μL）

Marker Selection

ヒトDNAマイクロアレイ遺伝子発現データベース
からの検索

22遺伝子
〈2次スクリーニング〉

肺癌リンパ節を用いた定量RT-PCR法による検討
最適マーカー遺伝子（CK19）

1 107
1 106
1 105＋

1 104
1 103

2.5 102

1 102
1 101

­

198

＜1

転移陰性リンパ節

転移陽性リンパ節

OSNATMの判定基準

Clinical Performance
TM

OSNA 法と病理組織検査との比較による臨床試験の結果、高い特異度・判定一致率を示しました。
TM

111症例410リンパ節を用いて、3割面病理組織検査とOSNA 法との一致率を評価しました。
●

試験結果＊
病理組織検査N=410

A B C D
BD陽性陰性陽性

4718陰性12333

3割面病理組織検査※
HE染色一致率：92.7％（95％ C.I : 0.897〜0.950）
を作製し、HE染色を行※ ブロックB及びDの割面から標本（厚さ5μm）い、転移有無の判定を行いました。

上記111症例のうち、病理組織学的転移陰性例63症例の227リンパ節について層別解析を行い、陰性一致率（特異度）を評価しました。

●111症例

試験結果＊
病理組織検査＜対象＞

pN0 63症例

N=227陰性

227リンパ節陽性

6陰性

221

pN1以上 48症例

特異度：97.4％（95％ C.I : 0.943〜0.990）

TM＊ リノアンプ BCの添付文書より引用

RD-100i 07

仕様
遺伝子増幅検出装置 RD-100i
処理能力
消耗品架設数測定項目／演算項目

所要試薬量
所要サンプル量CSVファイル出力
電源／消費電力
測定部寸法
測定部重量TM

サイトケラチン19mRNAキット リノアンプ

30 分/1バッチ（4サンプル＋コントロール2種）
ピペットチップ：最大72本、検出セル：最大 5 個
測定項目：サイトケラチン19定性判定値（CK19 Q ）演算項目：サイトケラチン19立ち上がり時間（CK19）
サイトケラチン19 濃度（CK19 C ）プライマー溶液：20μL/テスト、酵素溶液：3μL/テスト
2μL/テスト
測定結果リストをCSV 形式のファイルとして出力可能
100 〜240V（50Hz/60Hz）/ 700VA 以下（測定部）（W）約596mm （H）約548mm （D）約622mm
約66kg

BC

品目コード06428017

使用目的

摘出された乳癌、大腸癌、胃癌又は非小細胞肺癌所属リンパ節のCK19mRNAの検出(乳癌、大腸癌、胃癌又は非小細胞肺癌におけるリンパ節転移診断の補助に用いる）
有効期間：12ヵ月
貯蔵方法：­20℃、1ヵ月（240テスト用）
CK19プライマー溶液：720μL 8本酵素溶液：450μL 2本
キャリブレータレベル 1：110μL 4本
キャリブレータレベル2：110μL 4本
キャリブレータレベル3：110μL 4本
CK19陽性コントロール：110μL 4本
CK19陰性コントロール：110μL 4本

貯蔵方法及び有効期間
開封後の使用期間
包装単位

医療機器製造販売届出番号：28B1X10014000032

体外診断用医薬品製造販売承認番号：22000AMX01627000

TM

リンパ節前処理装置 RP-10

リノアーグ

05413410

ST010000
1分30秒/1パッチ（4検体）

品目コード
使用目的

遺伝子増幅検出装置RD-100i用測定試料の調製

消耗品架設数

ディスポーザブルブレード：最大4本、ホモジナイズ容器：最大4本

貯蔵方法及び有効期間

有効期間：12ヵ月
貯蔵方法：2〜8℃、開封後の使用期間

所要試薬量

リノアーグ：4mL/検体

所要検体量

リンパ節組織：50〜600mg/検体

2ヵ月
110mL 1本（24リンパ節分）

試薬と検体の保冷クラッシュアイスによる冷却

品目コード
処理能力

包装単位

電源／消費電力

100〜240V（50Hz/60Hz）/500VA 以下

寸法

500mm （D）267mm（W）391mm （H）

重量約23kg
医療機器製造販売届出番号：28B1X10014000037

リノプレップ ブレードセット/リノプレップ アダプターN
販売名ピペットチップ
品目コード
梱包単位
使用量

品目コード

内容量

リノプレップ ブレードセット

AK186696

ディスポーザブルブレード 12本
12本
ホモジナイズ容器
12個
キャップ（使用量：1リンパ節あたり1セット）

リノプレップ アダプターN＊BG667090

アダプター

検出セル05437711
36本/ラック 10個
1テストあたり、３本使用

品目コード
梱包単位
使用量

05437818
2穴/セル 50 個
1テストあたり、1穴使用1個＊ RP-10使用時は不要です。

リノプレップ ブレードセットTM

リノプレップ アダプターNTM※ リノアンプ BC、リノアーグ はシスメックス株式会社の登録商標です。

製造販売元

本社

取扱店
神戸市中央区脇浜海岸通 1-5-1 〒651-0073

LS事業本部 LS市場開発部 http://lifescience.sysmex.co.jp（東 京）Tel 03-5434-8569 Fax 03-5434-8557（神 戸）Tel 078-992-7221 Fax 078-992-7065
支店

営業所

仙大台 022-722-1710
阪 06-6337-8300

札 幌 0 1 1-700-1090
千 葉 043-297-2701
京 都 075-255-1 8 71
鹿児島 099-222-2788

日本・東アジア地域本部

0 3-5434-8565

北関東 048-600-3888
広 島 082-248-9070

東福

京 03-5434-8550 名古屋 052-957-3821
岡 092-4 1 1-4314

岡 019-654-3331
浜 045-640-5710
戸 078-2 51-5 331

長静
高野 0263-31-8180 新
岡 054-287-1707 金
松 087-823-5801 岡盛
横神

潟 025-243-6266
沢 076-2 2 1-9363
山 086-224-2605

注：活動及びサイトの適用範囲は規格により異なります。
詳細は www.tuv.com の ID 0910589004 を参照。

Note：Scopes of sites and activities vary depending on the standard.
For details, refer to the ID 0910589004 at www.tuv.com* 外観、仕様については改良のため予告なしに変更することがあります。
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