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株式会社 CUBICStars
2024 年 7 月 3 日

オルガノイド・スフェロイドに特化した研究用試薬を発売

全細胞の 3 次元イメージング技術「CUBIC」を用いた創薬支援事業を展開する株式会社 CUBICStars（本社：福岡県久留米市）は、オルガノイドおよびスフェロイドに特化した透明化試薬キットを発売いたします。
背景
動物実験の代替としての社会的要請が高まる中、オルガノイドとスフェロイドを用いた創薬スクリーニングの開発ニーズが増加しています。しかしながら、これまでの基本手法では、組織を一細胞解像度で詳細にイメージングする技術が十分に確立されておらず、この点がオルガノイド・スフェロイドを用いた創薬研究の普及における主要な課題の一つでした。このような課題を解決するため、当社は従来動物組織に適用されていた CUBIC 技術をオルガノイドおよびスフェロイドに最適化した新しい試薬を、7 月 3 日に販売開始いたします。
CUBIC 試薬を用いた腎臓オルガノイドの 3 次元イメージング例(提供：理化学研究所 生命機能科学研究センターヒト器官形成研究チーム 高里実先生)

CUBICStars について
「CUBIC 法」は、臓器や組織サンプルの脱脂・脱色、および屈折率調整を行い、サンプルを透明化することで知られています。この透明化したサンプルに対して免疫染色を施し、ライトシート顕微鏡または共焦点顕微鏡で撮影することにより、高解像度の 3 次元イメージングを実現しています。
CUBIC 技術のワークフロー



製品概要
1.

製品ラインナップ

製品コード
CSCR015
CSCR016

製品名

実験回数

CUBIC tissue clearing kit for Organoid, Spheroid and Embryo[CUBIC-Lf 50 mL/CUBIC-Rf 75 mL]

CUBIC tissue clearing Trial kit for Organoid, Spheroid and Embryo[CUBIC-Lf 25 mL/CUBIC-Rf 40 mL]

参考価格(税別・送料別）

48 test/kit 74,000円/kit
24 test/kit 50,000円/kit

製品イメージ2.

特徴

従来は主に動物組織の脱脂・脱色用として使用されていた試薬「CUBIC-L」と、屈折率調整用の「CUBICR+(N)」を、オルガノイドおよびスフェロイド用に応用しました。これにより、オルガノイド、スフェロイドに特化した水溶性の透明化試薬キットを世界で初めて発売することとなりました。



従来の CUBIC 製品と同様に、一般的な研究室設置の機材のみで実施可能で電気泳動装置等の特殊な専用機器は不要です。

光シート顕微鏡（LSFM）や共焦点レーザー顕微鏡（CLSM）を使用し、臓器・組織全体を細胞解像度で 3 次元にイメージングすることが可能です。

CUBICStars の創薬支援事業について
当社は、アカデミアや製薬会社を対象に、創薬の前臨床試験において臓器の細胞組織を透明化し、医薬品の内臓分布や細胞反応を包括的に三次元解析する製品「CUBIC」を提供しています。当社は試薬キットの製造・販売のほか、CRO サービスも展開しております。サステナブルな創薬プロセスの進化を支援するため、この度新たな試薬キットを発売すると共に、受託研究の範囲も拡大してまいります。



会社概要
社名：株式会社 CUBICStars（https://www.cubicstars.com/）

所在地：〒113-0033 東京都文京区本郷 7-3-1 東京大学アントレプレナープラザ 701〒839-0864 福岡県久留米市百年公園 1-1



福岡バイオイノベーションセンター 401

代表取締役：田中 義紀

設立年月：2019 年 7 月

事業内容：創薬支援事業（CRO サービス・試薬キット販売）

本件に関するお問い合わせ先株式会社 CUBICStars

経営企画室/竹内

Email： info@cubicstars.com

オルガノイド・スフェロイド・動物胚透明化試薬キット [CUBIC-Lf/Rf]
使用方法
1. 透明化・染色の基本工程

12〜24時間

1〜3日

1〜2時間

CUBIC-Lf

CUBIC-HVTM2CUBIC-Rf

脱脂・脱色

3D組織染色注2)

屈折率調整固定注1)

洗浄
保存d

洗浄

10分×3

洗浄10分×3

後固定洗浄

10分

10分×3

再透明化注4)防腐剤入PBS、4℃で防腐剤入PBS、4℃でサンプル保存可能

サンプル保存可能注3)※ 処理時間は径1mm前後のオルガノイドを24 wellで処理した場合の目安です。
注1) 固定液は4%パラホルムアルデヒド（pH7~7.5）を推奨します。固定条件は透明化に大きく影響します。パラホルムアルデヒド溶液を大量に調製し冷凍保存しておくなど、実験間の固定条件のぶれを最小限にすることが重要です。またpHがアルカリに調整されていると、過固定や黄色味の着色の原因となります。
注2) 染色条件についてはお問合せください。
注3) 透明化サンプルはアガロースゲルで包埋することもできます。この場合、ゲル中で長期間安定に保存することができます。
注4) 頻回の再透明化は組織ダメージの原因となります。

2. 透明化手順（オルガノイド/スフェロイド/初期胚透明化プロトコル）
工程

試薬温度時間備考

固定

4% PFA in PBS

RT30 min.~半日動物胚の場合、母体より摘出後に固定。

洗浄 x 3PBS

RT~ 10 min. x 3

穏やかに振とう(以下の工程も同様)。

脱脂・脱色

CUBIC-Lf

RT or 37℃

12~24 hr

洗浄 x 3PBS

RT~ 10 min. x 3

染色CUBIC-HVTM2、染色プローブ（抗体、染色剤）

RT

1~3 days

洗浄 x 3

HVTM2 washing buffer

RT~ 10 min. x 3

後固定

1% ホルムアルデヒドRT

10 min. ~抗体染色した場合に行う。37%ホルムアルデヒドをPBSで希釈したもの。

洗浄 x 3PBS

RT

10 min. x 3

染色した場合に行う。

前置換

50% CUBIC-Rf

RTまたは37℃

30 min.~CUBIC-Rfと水を当量混合したもの。サンプルのサイズに応じて時間を検討。

透明化

CUBIC-Rf

RTまたは37℃

30 min.~サンプルのサイズに応じて時間を検討、透明度が足りない場合は新しいCUBIC-Rfにもう一度交換。

組織の脆弱性や透明化の程度によって温度・時間を調節。
穏やかに振とう。
任意工程。
穏やかに振とう。

※ 3次元染色工程はサンプルや染色プローブごとに最適化が必要です。詳しくはお問合せください。

CUBICStars, Inc.
July 3, 2024
CUBICStars Launches Specialized Reagents for Organoids and Spheroids
CUBICStars, Inc., which is engaged in drug discovery support business using the 3D imaging technology"CUBIC" for all cells, is launching a clearing reagent kit specialized for organoids and spheroids.
Background

With the increasing social demand for alternatives to animal testing, the need for the developmentof drug discovery screening using organoids and spheroids is growing. However, traditional methods
have not yet established sufficient technology for detailed imaging of tissues at single-cellresolution, which has been a major challenge in the spread of drug discovery research using organoids
and spheroids. To address this challenge, we will start selling new reagents optimized for organoids
and spheroids, which apply the CUBIC technology traditionally used for animal tissues, on July 3.
Example of 3D Imaging of Kidney Organoids Using CUBIC Reagents(Provided by Dr. Minoru Takasato, RIKEN Center for Biosystems Dynamics Research)

About CUBIC Technology

The "CUBIC method" is known for clearing samples by removing lipids and pigments and adjusting therefractive index of organs and tissue samples. By applying immunostaining to these cleared samples
and imaging them with a light sheet microscope or confocal microscope, high-resolution 3D imaging isachieved.
CUBIC Technology Workflow

Product Overview
1.

Lineup
ProductProduct Name

Code

Tests/kitPrice(ExcludingTax,Transportaion)

CSCR015
CSCR016CUBIC tissue clearing kit for Organoid, Spheroid and Embryo[CUBIC-Lf 50 mL/CUBIC-Rf 75 mL]

CUBIC tissue clearing Trial kit for Organoid, Spheroid and Embryo[CUBIC-Lf 25 mL/CUBIC-Rf 40 mL]

48$740.00

24$500.00（Product Image）

2.

Features

We have adapted the "CUBIC-L" reagent, traditionally used for lipid and pigment removal inanimal tissues, and the refractive index adjusting "CUBIC-R+(N)" reagent for use withorganoids and spheroids. As a result, we are the first in the world to release a watersoluble clearing reagent kit specialized for organoids and spheroids.

As with conventional CUBIC products, these can be implemented using only common laboratory
equipment without the need for specialized equipment like electrophoresis apparatuses.

It enables 3D imaging of entire organs and tissues at cellular resolution using light sheet
fluorescencemicroscopy(LSFM)

orconfocallaser

scanning

microscopy(CLSM).

About CUBICStars' Drug Discovery Support

We provide products that clear cell tissues of organs in preclinical trials for drug discovery,
allowing comprehensive 3D analysis of drug distribution and cellular responses in organs. In addition
to manufacturing and selling reagent kits, we also offer CRO services. To support the evolution of asustainable drug discovery process, we are releasing new reagent kits and expanding the scope ofcontract research service
Company Overview

NameOfficesCEOBusiness activities
EstablishedHP

::::
:
:
:

CUBICStars, Inc.
701 Entrepreneur Plaza, 7-3-1 Hongo, Bunkyo-ku, Tokyo 113-0033
1-1 Hyakunen Park, Kurume City, Fukuoka Prefecture 839-0864
Yoshinori Tanaka
Drug discovery support business (CRO services, reagent kit sales)
July 5, 2019https://www.cubicstars.com/::

Corporate Planning Office, Kaoru Takeuchi (Mr.)
info@cubicstars.com

Contact Information

ContactEmailOrganoid, Spheroid and Animal Embryo Clearing Reagent Kit [CUBIC-Lf/Rf]
Usage Instructions
1. Basic Workflow for Clearing and Staining

12〜24 hours
CUBIC-LfFixation *1

Decolorizationand Delipidation

Wash
preserve

1〜3 days

1〜2 hours

CUBIC-HVTM2CUBIC-Rf

3D Staining*2

RI MatchingdWash
10min×3

Wash
10min×3

Post-fixation
10min

Wash
10min×3

Repeatclearing*4

Samples can be preserved

Samples can be preservedin preservative-addedin preservative-added

PBS at 4℃

PBS at 4℃*3

The processing time is estimated based on the treatment of a 24-well organoid with a diameter of about 1mm.
*Notes:1.It is recommended to use 4% paraformaldehyde (pH 7~7.5) for the fixative. Fixation conditions significantly affect transparency. It is
important to minimize variations in fixation conditions between experiments, for example, by preparing and storing large quantities ofparaformaldehyde solution frozen. If the pH is adjusted to alkaline, it can cause over-fixation and yellowish staining.
2.Please contact us for staining conditions.
3.Clearing samples can also be embedded in agarose gel. In this case, they can be stably stored in the gel for a long period.
4. Frequent re-clearing can cause tissue damage.

2. Initial Clearing Protocol (Organoid/Spheroid/Embryo)
StepReagent

Temperature

TimeNotes

Fixation

4% PFA in PBS

RT30 min.
~ 0.5 days

For animal embryos, fix immediately after collection.

Wash x3

PBS

RT~10 min. x3

Shake gently (applies to subsequent wash steps).

Decolorization/Delipidation

CUBIC-Lf

RT or 37°C

12~24 hours

Adjust temperature and time according to tissue fragility andtransparency level.

Wash x3

PBS

RT~10 min. x3

Shake gently.

Staining

CUBIC-HVTM2(antibody, dye)RT

1~3 days

Optional step.

Wash x3

HVTM2 washing buffer

RT~10 min. x3

Shake gently.

Post-fixation

1% paraformaldehyde

RT10 min.

Perform after immune staining, distribute 37%
paraformaldehyde with PBS.

Wash x3

PBS

RT

10 min. x3

Perform after staining.

Pre-treatment

50% CUBIC-Rf

RT or 37°C

30 min.

A mixture of equal parts CUBIC-Rf and water. Adjust thetime according to the size of the sample.

Clearing

CUBIC-Rf

RT or 37°C

30 min. ~Adjust according to sample size. If transparency is
insufficient, replace with new CUBIC-Rf and repeat.

Note: Optimal conditions may vary depending on the sample and the purpose of staining. For more details, please contact us.