福岡県保健環境研究所年報第38号，62－65，2011

短報
稀なO血清群の志賀毒素産生性大腸菌検出におけるCHROMagarTM STECの有用性の検討
市原祥子・江藤良樹・濱﨑光宏・村上光一・竹中重幸・堀川和美
志賀毒素産生性大腸菌 (Shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC) O157、O26及びO111を藤色に発色させて鑑別することができる CHROMagarTM STECを用いて、O157、O26及びO111以外の稀なO血清群のSTECにおける CHROMagarTM STEC の有用性を確認するために、当所保有の稀なO血清群のSTEC 64株の発育状況を調査した。その結果、O103 (3株中3株)、O118 (1株中1株)、O121 (4株中4株)、O128(1株中1株)、O145 (3株中3株)、O150 (1株中1株) 及びOUT (4株中1株) の計14株 (21.9%) は発育し、藤色の集落を形成した。しかし、その他の STEC 50株は本培地では発育しなかった。このことから、
CHROMagarTM STEC は、特定のO血清群の STEC 分離については使用可能で、特にO103、O121、O145など集団発生事例の原因として比較的分離株数の多い STEC の検査において有用であると推察された。
［キーワード：稀なO血清群の志賀毒素産生性大腸菌、CHROMagarTM STEC］
１

はじめに各 STEC の発育状況の検討を行ったのでその概要を報告

志賀毒素産生性大腸菌 (STEC) 感染症は、公衆衛生、特する。に食品衛生上重要な感染症である。平成 20 年に、大量調理施設衛生管理マニュアル 1) が改正され、O157 だけでな

２

く、その他の O 血清群の STEC も検査対象となった。主要

２・１

材料と方法
供試菌株

菌株は、1996 年度から 2010 年度までに、福岡県内 (福な O 血清群の O157、O26、O111 に関しては、糖分解などの性状の違いを利用した種々の選択分離培地や、選択的に岡市、北九州市、大牟田市、2008 年度からは久留米市を濃縮するための免疫磁気ビーズが市販されており、食肉か除く) 在住者から分離された O157、O26、O111 以外の Oらの検査法も確立されている 2)、3)。しかし、その他の O血清群の STEC 64 株を試験に供した (表 1)。分離は、民血清群の STEC の性状に関しては不明な点も多く、志賀間検査施設、県内保健福祉環境事務所および当所で実施

毒素遺伝子保有を確認後に分離を行うなどの方法が一般された。

的であるが、分離の決め手となる性状が分かっていないた

２・２

35±1℃で一晩培養した培養菌液 10μl を CHROMagarTMの面から大きな負担となる。
O157、O26、O111 などの代表的な STEC を特徴的に藤色に発色させて鑑別することができる CHROMagar

培養方法

保存菌株を Tryptone soya broth (TSB) に接種し、め、多種類の培地を使用することとなり、経済性、操作性

TM

STEC に接種し、35±1℃で 20±2 時間培養後、発育の有無および発育集落の色調を観察した。比較のため、セフィ

STEC (クロモアガーSTEC、関東化学) が発売された 4)。

キシム・亜テルル酸ソルビトールマッコンキー培地

本培地は、O157、O26 及び O111 の場合、約 97% 以上の(CT-SMAC) における発育の有無も同様に観察した。

株が藤色集落を形成し、分離培養で迅速に志賀毒素産生

２・３

従来から使用されている培地との発育菌数を比較す性大腸菌を推定鑑別できるため、O157、O26 及び O111の分離には有効な培地であるとされる。しかし、その他発育菌数の比較

る た め に 、 CHROMagarTM
TM

STEC 、 CT-SMAC 、の O 血清群の STEC に対する有効性は不明な点が多い。

CHROMagar

その他の O 血清群の STEC を分離する能力が確認されを用いて、Miles & Misra 法 5)を応用し O157 Sakai 株の発れば、汎用性がさらに高まると期待される。そこで、O157、育菌数を確認した。O157 Sakai 株を TSB に接種し、O157 及び Brain heart infusion (BHI) 培地

O26 及び O111 以外の志賀毒素産生性大腸菌分離培養に35±1℃で 1 晩培養後、滅菌生理食塩水で 10 倍段階希釈し、おける CHROMagarTM STEC の有用性を確認するために、原液および各希釈液をそれぞれ 10μl ずつ培地に滴下し、福岡県保健環境研究所 (〒818-0135 太宰府市大字向佐野 39)―62―35±1℃ で一晩培養した。発育集落数を計測し、1ml あ

1.5×109 CFU/ml 及び 1.6×109 CFU/ml であったが、たりの菌数を算出した。

CHROMagarTM STEC に発育した集落数はその 5 分の 1程度の 3.5×108 CFU/ml であった。

表1供試菌株の O 血清群と株数

O血清群
STECO1（計64株） O8O25O41O63O76O91O103
O113
O115O118O119O121O128
O143
O145
O148
O150
O165
OUT*
*OUT：O血清群型別不能

株数211122253131141131164４考察
当所に保有する O157、O26 及び O111 以外の O 血清群の STEC の CHROMagarTM STEC での発育について検討した結果、今回検討した範囲では O103、O121、O128、O145、O118、O150 及び OUT の一部は、20±2 時間培養で藤色集落を形成し、これら以外の血清型の株は、集落を形成しないことが確認された(表 2) 。また CT-SMAC における発育状況と比較すると、CT-SMAC の方が集落を形成する株数が多かったが、そのほとんどが赤色集落を形成した。
CT-SMAC は O157 検出用培地であるため、白色集落が釣菌対象となる。そのため、通常の検査では見過ごされる可能性が示唆された。さらに、O157 Sakai 株を用いた菌数測定の結果から、CHROMagarTM STEC は今回検討した他の培地に比べ、発育抑制が強く、培地上に多くの標的コロニーを得るためには、検体量を多めに塗抹する必要があルと考えられた。O103、O121 及び O145 は集団発生事例の原因として比較的分離株数の多いが、分離培養時に釣菌の指標となる性状が不明であるため、釣菌に苦慮していたが、今回の検討結果から、本培地を用いることにより釣菌３効率が上昇し、省力化できるものと考えられた。一方、今結果

３・１

CHROMagar

TM

STEC と CT-SMAC における培回発育が認められなかった STEC に関しては、本培地のみでは検出が困難であることが考えられた。今後、他の O養結果
CHROMagarTM STEC と CT-SMAC に発育した株数を表2 に示す。CHROMagarTM STEC においては、64 株中 14血清群の STEC が検出できるよう CHROMagarTM STECの選択剤の工夫が望まれる。

株 (約 22%) が 20±2 時間で発育し、且つ藤色集落を形成した。発育した株の O 血清群は、今回検討した範囲では、謝辞
血清型別を実施していただきました、国立感染症研究

O103、O118、O121、O128、O145、O150 及び O 血清群
別不能 (OUT)の一部であった。他の 50 株については、
CHROMagar

TM

STEC 上では発育が認められなかった。

所細菌第一部

寺嶋 淳先生ならびに伊豫田 淳先生に深謝いたします。

一方、CT-SMAC においては、今回検討した範囲では、
O91、O165 の一部、O41 及び O113 は、発育しないか、

文献

釣菌不可能な極小集落を形成したが、これら以外の O 血1)

大量調理施設衛生管理マニュアル．平成 9 年 3 月 24

清群の STEC35 株 (約 55%) のうち、O1、O8、O25、O103

日衛食第 85 号別添．最終改正：平成 20 年 6 月 18 日食の一部、O115、O119、O121、O128、O143、O148、O165

安発第 0618005 号．の一部、O76、O118、O150 及び OUT は赤色集落を形成

2)

し、O63 及び O103 の一部は白色集落を形成した。

腸管出血性大腸菌 O157 及び O26 の検査法について．
平成 18 年 11 月 2 日食安監発第 1102004 号．

3) 腸管出血性大腸菌 O111 の検査法について．平成 23
３・２

発育菌数の比較CHROMagar

TMSTEC、CHROMagar

年 6 月 3 日．食安監発 0603 第 2 号．
TMO157、CT-SMAC

4)

及び BHI 培地における発育集落数及び算出した平均菌数(n=2) を図 1 に示す。CHROMagarTM O157、CT-SMAC 及

関東化学株式会社：クロモアガーTM STEC．
(http://www.kanto.co.jp/rinsyo/pdf/416.pdf)

5) 坂崎利一．新び BHI に発育した集落数は、それぞれ 2.6×109 CFU/ml、―63―

東京

細菌培地学講座・上 1978．近代出版、

表2

CHROMagarTM STEC と CT-SMAC における培養結果

CHROMagarTM STEC
発育あり発育なし(藤色集落)
STEC
O1
HStx1
11(計64株)
Stx2
11
Stx2
11O8NT**
O25
H51
Stx111O41
H51
Stx211O63
HStx211H6Stx211O76
HStx111H10Stx211O91
HStx111H10Stx111H21Stx155H42Stx111H51
Stx144***
Stx111HUT
H51
Stx1 + Stx211H14Stx1
1111O103
H11Stx1
11H2Stx1
11HUTStx1
11O113
HStx211O115
H10Stx122H1Stx1
11O118HStx1
11O119H7
Stx1
11O121
H19Stx2
33
H14
Stx2
11O128H2
Stx1
11O143
H9
Stx1
11O145
HStx2
33O148
H51
Stx111O150
H11Stx111O165
HStx111Stx1 + Stx222Stx2
11H14Stx122OUT
H16Stx111H18Stx1211H21Stx211
総計641450*CT-SMAC: セフィキシム・亜テルル酸ソルビトールマッコンキー培地**NT: Not tested***HUT: H血清型別不能****発育なし: 釣菌不可能な極小集落を認めたものを含む
O血清群

H血清型 志賀毒素型

供試
株数

CT-SMAC*における発育発育あり発育あり発育なし****（白色集落）（赤色集落）
1111111111151411111111211131113111111212132
329

10
菌数（log10/ml )98
CHROMagar
STECTMTM

CHROMagar
O157

CT-SMAC

BHI使用培地

図 1 各培地における STEC O157 Sakai 株の菌数(n＝2)―64―Utility evaluation of CHROMagarTM STEC for isolation ofnon-O157, non -O26, and non -O111 Shiga toxin-producing Escherichia coli
Sachiko ICHIHARA，Yoshiki ETOH，Mitsuhiro HAMASAKI，
Koichi MURAKAMI，Shigeyuki TAKENAKA and Kazumi HORIKAWA
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, Japan
In order to investigate the usefulness of CHROMagarTM STEC for isolation of non-O157, non-O26 and non-O111 Shiga
toxin-producing Escherichia coli (STEC), 64 strains of the minor serogroup were cultivated with this media.

As a result, aparticular serogroup STEC (O103、O121、O128、O145、O118 and O150) formed pale purple colonies. However, 50 strains of 64
STECs (84%) showed non-growth on the medium. Therefore, it could be difficult to detect other serogroup STECs (like O1, O8,O25, O41, O63, O76, O91, O113, O115, O119, O143, O148, O165 and OUT) using CHROMagarTM STEC.
[Key words; non-O157, -O26, and -O111 Shiga toxin-producing Escherichia coli, CHROMagarTM STEC]―65―