Notice d'utilisation

RCSP disponible sur EUDAMED

380236-D
Français

972000Compte-gouttes 30 µl····················· 1 x 18 compte-gouttesa) La Bst DNA polymerase dérivée de Bacillus stearothermophilus
est un ADN polymérase à déplacement de brin qui manqued'activité exonucléase 53.

Loopamp MTBC Detection Kitb) Amorces conçues dans la région gyrB et IS de l'ADN génomiquedu CMTB, purifiées à partir des oligonucléotides synthétisés par
HPLC.
c) Le PC MTB contient un produit résultant de l'amplification in vitro
d'un ADN génomique matrice provenant de Mycobacterium
tuberculosis H37Rv (GenBank no NC_000962).
Les abréviations des réactifs suivants et le numéro de lot ainsi que lefabricant (EKN) sont imprimés sur les récipients comme indiqué cidessous :DESTINATION
Le Loopamp MTBC Detection Kit est un test de diagnostic qualitatif
in vitro permettant de détecter l'ADN du complexe Mycobacterium
tuberculosis (CMTB) extrait des expectorations de patients présentant
tout symptôme indiquant une infection par le CMTB. Le kit aide audiagnostic de l'infection par le CMTB et est destiné à être utilisé dans leslaboratoires professionnels et les hôpitaux par un personnel dûment
formé. Le résultat peut être interprété soit par un turbidimètre automatisé,soit visuellement sous irradiation UV.

Réactifs

Étiquetage sur le tube Code sur le bouchon
PC MTB
PC
Contrôle positif MTB No de lot, EKNMTBNC MTB
NC
Contrôle négatif MTB No de lot, EKN
MTB

PRINCIPE DU TESTCe produit est basé sur la méthode d'amplification des acides
nucléiques, LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification),développée par Eiken Chemical Co., Ltd.
Les caractéristiques de la méthode LAMP sont les suivantes : (1) une
seule enzyme est nécessaire, la réaction d'amplification se déroule dansdes conditions isothermes1),2) ; (2) elle présente une spécificitéextrêmement élevée en raison de l'utilisation de quatre amorces
reconnaissant six régions distinctes sur la cible ; (3) elle présente une
efficacité d'amplification élevée et peut produire une concentrationélevée de produit amplifié en peu de temps, ce qui rend possible une
détection visuelle ou automatisée.3),4)
Les amorces fournies avec ce produit ont été conçues dans la région
de la sous-unité B (gyrB) de l'ADN gyrase et de la séquence d'insertion(IS) IS6110 de l'ADN génomique du CMTB. L'analyse de l'alignement
des séquences de bases sélectionnées du CMTB et des mycobactéries
non tuberculeuses a confirmé que cette séquence possède uneséquence de bases bien conservée dans le CMTB.
L'ADN des expectorations non traitées ou des expectorations traitées
au NALC-NaOH est extrait à l'aide du Loopamp PURE DNA Extraction
Kit (vendu séparément). Ensuite, la solution d'ADN est versée dans un
tube de réaction. L'ADN polymérase à déplacement de brin, lesdésoxynucléotides triphosphates (dATP, dCTP, dGTP et dTTP), lacalcéine, les tampons de réaction et les amorces spécifiques au CMTB
sont ensuite conservés sous forme séchée dans le bouchon du tube deréaction. Ce réactif LAMP séché (réactif de détection du CMTB (dMTB))
est dissous lorsque la solution d'ADN est ajoutée. Ensuite, le tube deréaction est incubé à 67,0 C et l'ADN est amplifié par catalyse par l'ADN
polymérase à déplacement de brin selon la réaction LAMP.
La détection des produits amplifiés est basée sur la mesure de laturbidité d'un sous-produit, le pyrophosphate de magnésium (précipité
blanc).3) Alternativement, à la place de la mesure de la turbidité, uneévaluation visuelle sous irradiation UV peut être utilisée. Avant laréaction, la calcéine dans le réactif est à l'état éteint en raison des ionsmanganèse qui lui sont liés ; cependant, une fois que la réaction LAMP
commence, des ions pyrophosphate sont générés et détachent les ionsmanganèse. La calcéine devient alors fluorescente.4)*Informations sur la traçabilité métrologique
Le contrôle positif est dérivé du produit d'amplification de l'ADN
génomique provenant de Mycobacterium tuberculosis H37Rv(GenBank no NC_000962). La région spécifique de Mycobacterium
tuberculosis H37Rv, qui est la cible d'intérêt, sert de modèle pourl'amplification du fragment d'ADN de PC MTB. Ce fragment est quantifié
à l'aide de la spectrophotométrie et sa concentration d'ADN est ajustéeà 1000 copies/μl.

AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS(1) Utilisation pour le diagnostic in vitro seulement.
(2) Ce produit est conçu uniquement pour le diagnostic clinique du
CMTB à partir d'échantillons d'expectorations d'origine humaine.
Ne pas l'utiliser à d'autres fins.
(3) Lors de l'utilisation de ce produit, toujours suivre cette notice.
(4) Ne pas congeler les réactifs.
(5) Ne pas utiliser de réactif périmé.
(6) Ne pas mélanger des lots différents.
(7) Ne pas reremplir les réactifs.
(8) Les performances du Loopamp MTBC Detection Kit dépendentde la compétence de l'opérateur et du respect des instructions deprocédure. Les tests doivent être effectués par du personnel forméen conséquence en suivant strictement les instructions fournies.
(9) Retirer le nombre requis de tubes de réaction de l'emballage avantde les utiliser et refermer immédiatement la pochette en aluminium.
(10) Ne pas retirer le dessiccateur de la pochette en aluminium. Un tauxd'humidité élevé peut détériorer le réactif LAMP séché dans lestubes de réaction.
(11) L'exposition à la chaleur, à l'humidité et à la lumière peut détériorer
le dMTB. Ainsi, ne retirer que le nombre requis de tubes deréaction (somme des échantillons et des contrôles) et refermer
immédiatement la pochette en aluminium.
(12) Lire le manuel d'instructions et s'assurer que l'équipement requis(turbidimètre ou incubateur) est disponible avant de commencer laprocédure.
(13) Les échantillons d'expectorations présentent un risque potentiel
d'infection. Prendre toutes les mesures préventives nécessaires
pour éviter les risques biologiques.5)(14) Le PC MTB et le NC MTB contiennent une petite quantité d'azide
de sodium comme conservateur. L'azide de sodium étant classé
comme toxique, éviter tout contact avec les yeux, la bouche ou lapeau.
(15) En cas de contact accidentel d'un réactif avec les yeux, la bouche
ou la peau, rincer immédiatement la région concernée à l'eau
courante et consulter un médecin.
(16) Ne pas diluer ou ajouter le PC MTB aux échantillons. N'utiliser le
PC MTB que de la manière décrite dans cette notice pour éviter
toute contamination de l'ADN.
(17) Conserver le PC MTB et tout échantillon d'expectorations positif
séparément des autres réactifs du kit.
(18) Le bouchon de chaque tube de réaction contient le dMTB sous
forme séchée. Ne pas toucher l'intérieur du bouchon.
(19) Avant d'utiliser les tubes de réaction, vérifier soigneusement qu'ils

CONTENU DU KIT
Les réactifs sont stables jusqu'à la date indiquée sur l'étiquette tantque le récipient n'est pas ouvert et qu’il est stocké à une température de
stockage de 2-30 C. Les réactifs sont également confirmés stables
après ouverture du récipient si ces instructions de procédure sontrespectées.
Réactif de détection du CMTB ······················· 2 x 48 tubes
Les réactifs suivants, sous forme séchée, sontcontenus dans chaque tube de réaction.
Bst DNA polymerase a)
Désoxynucléotide triphosphates
Sulfate de magnésium
Calcéine
Chlorure de manganèse
Amorces b)
Contrôle positif MTB (PC MTB) c) ······················ 1 x 0,4 ml
Contrôle négatif MTB (NC MTB) ······················· 3 x 0,5 ml

6Remarque : un contrôle négatif doit être utilisé à chaque fois.

ne présentent pas de fissures ou de rayures. Des tubes
endommagés peuvent donner de faux résultats et entraîner une
contamination de l'incubateur et de la zone de travail par l'ADN.
(20) Ne pas exposer les tubes de réaction à la lumière UV avant la finde la réaction LAMP. Une exposition prolongée à la lumière UV
peut endommager les tubes et entraîner de faux résultats.
(21) Lorsque la lumière UV est utilisée pour évaluer visuellement lafluorescence, ne pas la fixer directement. La lumière UV étant
nocive pour les yeux, la regarder même pendant une courte
période peut irriter les yeux et provoquer des symptômessimilaires à ceux de la conjonctivite. Utiliser plutôt un écran enverre ou porter des lunettes de protection ou un masque oculaireanti-UV lorsque vous regardez directement la lumière UV.
(22) Se référer au manuel de l'incubateur. Lorsque le HumaLoop T ou
le turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A est utilisé, retirer
soigneusement les tubes de réaction de l'incubateur pour éviter
les brûlures.

（3）Contrôle positif MTB（PC MTB）
Agiter (ou centrifuger) le tube pour recueillir le contenu au fonddu tube.

Remarque : le PC MTB doit être utilisé à chaque fois.

PROCÉDURE DE MESURE
Extraction de l'ADN
Pour extraire l'ADN de l'échantillon d'expectorations de 60 µl, suivre
les instructions du Loopamp PURE DNA Extraction Kit (vendu
séparément). Verser 60 µl d'échantillon d'expectorations dans le tube
chauffant et le placer dans le HumaHeat ou le bloc chauffantpréchauffé à 90 C. Dans la mesure du possible, utiliser les
expectorations les plus purulentes.
Mélange des réactifs et des échantillons(1) Mettre en marche le HumaLoop T ou le turbidimètre en temps réel
HumaTurb C+A.
(2) Déposer 30 µl de la solution d'échantillon dans un tube de réaction
à l'aide du Loopamp PURE DNA Extraction Kit et fermer le tube
avec le bouchon.

ÉLIMINATION DES DÉCHETS(1) Ne pas ouvrir les tubes après amplification de l'ADN. Laisser lebouchon fermé et éliminer les tubes usagés comme des déchets
médicaux par incinération ou après double ensachage avec dessacs plastiques scellables.
(2) Ne jamais autoclaver ou réutiliser les tubes de réaction, car les
produits amplifiés se disperseront et provoqueront une
contamination.
(3) Le matériau principal des tubes de réaction et des tubes de réactif
est le PP ; pour le plateau des tubes de réaction, le PET ; pour lapochette en aluminium, l’aluminium et pour l’emballage du kit, lepapier.
(4) Éliminer tout réactif, récipient ou matériel de laboratoire usagé
conformément aux réglementations locales.

Remarque : le volume entre les deux lignes du tube de réaction
correspond à environ 30 µl.
(3) Distribuer 30 µl de la solution de contrôle négatif dans un tube deréaction à l'aide du Loopamp PURE DNA Extraction Kit et fermer
le tube avec le bouchon.

Remarque : le volume entre les deux lignes du tube de réaction
correspond à environ 30 µl.
(4) Déposer 30 µl du PC MTB dans un tube de réaction à l'aide ducompte-gouttes fourni et fermer le tube avec le bouchon.
(5) Agiter (ou centrifuger) tous les tubes pour recueillir la solution au
fond des tubes.

Remarque : veiller à ce que le niveau de liquide se trouve au
milieu des deux lignes sur le tube de réaction afin de garantir
30 µl de pipetage.

PRÉLÈVEMENT D'ÉCHANTILLONS(1) Utiliser la partie la plus purulente de l'échantillon d'expectorations.
(2) Les échantillons d'expectorations doivent être utilisés
immédiatement après leur prélèvement.
(3) Prélever les expectorations dans une pièce séparée de la salled'amplification LAMP. Des aérosols contenant l'ADN du CMTB
peuvent être générés lors de la collecte d'expectorations etpeuvent entraîner une contamination.

(6) Reconstituer les réactifs séchés dans le bouchon en retournant les
tubes de réaction et en recueillant la solution d'ADN dans lebouchon. Laisser les tubes debout, tête en bas, pendant 2 minutes
pour reconstituer les réactifs séchés.
(7) Retourner les tubes de réaction cinq fois pour mélanger le contenu.
Faire attention à ce que les réactifs séchés dans le bouchon soiententièrement dissous.
(8) Agiter (ou centrifuger) tous les tubes pour recueillir la solution au
fond des tubes.

MATÉRIELS REQUIS MAIS NON FOURNIS
・ Loopamp PURE DNA Extraction Kit
・ Pipette-60 Set
Pour la détection visuelle de la fluorescence(pour HumaLoop T)
・ HumaLoop T

Amplification
Pour la détection visuelle de la fluorescence（pour HumaLoop T）(1) Vérifier que la température du HumaLoop T est de 67,0 C.
(2) Placer les tubes de réaction dans le HumaLoop T et appuyer sur
le bouton vert pour démarrer la réaction LAMP (40 minutes à
67,0 C). Se reporter au manuel d'instructions du HumaLoop T
pour plus de détails sur le fonctionnement de l'incubateur.
(3) Confirmer la fin de l'inactivation de la polymérase
(automatiquement réalisée par le HumaLoop T). Retirer tous lestubes de réaction du HumaLoop T.
（pour les autres incubateurs utilisant la lumière UV）(1) Régler la température de l'incubateur sur 67,0 C (avec latempérature du capot chauffant réglée 10 C au-dessus de latempérature de réaction ou aussi près de cette valeur que possible.
Précision de la température :  0,5 C).
(2) Placer les tubes de réaction, puis démarrer la réactiond'amplification (pendant 40 minutes à 67,0 C).
(3) Après 40 minutes, inactiver la polymérase en utilisant le
HumaHeat ou le bloc chauffant (pendant 5 minutes à 80 C ou
2 minutes à 95 C) pour terminer la réaction.

(pour les autres incubateurs utilisant la lumière UV)・ Incubateur (précision de la température :  0,5 C ; avec bonnet
chaud)
・ HumaHeat ou autre bloc chauffant
・ Lumière UV ou lumière LED bleue (longueur d'onde : 240-260 nm
et 350-370 nm)
・ Lunettes de protection ou masque oculaire anti-UV (facultatif)
Pour la détection de la turbidité en temps réel・ HumaTurb C+A・ HumaHeat ou autre bloc chauffant
Pour le mélange des réactifs et des échantillons
・ Centrifugeuse pour microtubes (facultatif)
・ Centrifugeuse pour huit tubes connectés (facultatif)
・ HuMax ITA, micro-centrifugeuse (facultatif)

PRÉPARATION DES RÉACTIFS（1）Réactif de détection du CMTB
Retirer le nombre requis de tubes de la pochette en aluminium etles placer sur le portoir (somme des échantillons et des contrôles).

Pour la détection de la turbidité en temps réel avec HumaTurb C+A(voir le diagramme de la procédure)(1) Configurer le turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A pour ladétection avec ce produit.
(2) Vérifier que la température affichée atteint 67,0 C (laisser leturbidimètre se réchauffer pendant 20 minutes avant de l'utiliser).
(3) Placer les tubes de réaction et commencer la mesure.
(4) Surveiller l'affichage du turbidimètre et vérifier l’augmentation de laturbidité dans les contrôles positifs et pas dans les contrôles
négatifs. Si la turbidité augmente dans le contrôle positif mais pas

Remarque : après avoir retiré les tubes nécessaires, refermer
immédiatement la pochette en aluminium avec les tubes nonutilisés.
（2）Contrôle négatif MTB（NC MTB）
Agiter (ou centrifuger) le tube pour recueillir le contenu au fonddu tube. Pipetter 60 µl du NC MTB dans le tube chauffant fourni
dans le Loopamp PURE DNA Extraction Kit. Suivre la noticed'utilisation pour traiter le NC MTB (le NC MTB extrait est appelé ciaprès « solution de contrôle négatif »).

7

dans le contrôle négatif, la réaction d'amplification se déroule
correctement (Fig. 1). En revanche, si une autre situation se
produit, la réaction d'amplification peut se dérouler de manière
incorrecte. Dans ce cas, retester les échantillons concernés.
(5) Confirmer la fin de l'inactivation de la polymérase
(automatiquement réalisée par le turbidimètre). Retirer tous lestubes de réaction du turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A et
les jeter sans les ouvrir.

PC MTB. Distribuer les échantillons et la solution de contrôle
négatif et fermer tous les tubes de réaction avant de distribuer le
PC MTB.
(12) Agiter (ou centrifuger) le tube de PC MTB avant de l'ouvrir pourrecueillir le contenu au fond du tube. Fermer le tube
immédiatement après avoir distribué le PC MTB.
(13) Lorsque le HumaLoop T ou le turbidimètre en temps réel
HumaTurb C+A est utilisé, l'inactivation de la polymérase est
effectuée automatiquement.
(14) Pour les autres incubateurs, lorsque l'évaluation visuelle de lafluorescence est choisie, inactiver la polymérase (pendant
5 minutes à 80 C ou 2 minutes à 95 C) avant de la lire, ou lesrésultats seront faussés.
(15) Pour les autres incubateurs, lorsque la lumière UV est utilisée, ne
pas la fixer directement. Utiliser plutôt un panneau en verre ou
porter des lunettes ou un masque oculaire lorsque vous regardez
les rayons UV.
(16) Ne jamais ouvrir les tubes de réaction une fois que la réaction
LAMP a commencé ou après son achèvement. Faire
particulièrement attention à ne pas ouvrir les tubes
accidentellement lors du déchargement des tubes de réaction del'incubateur.
(17) Ne pas réutiliser les produits amplifiés dans les tubes pourl'électrophorèse ou pour d'autres applications.

Graphiques d'amplification
Échantillon négatif
Échantillon positif 1
Échantillon positif 2

0,7

0,7

0,6

0,6

0,5

0,5

TurbiditéTurbiditéContrôle négatif
Contrôle positif

0,4
0,3

0,4
0,3

0,2

0,2

0,1

0,1

0
0

5 10

15 20 25 30 35 40

Temps (min)Fig. 1 : Graphique d'amplification pourles contrôles.

0
0

5 10

15 20 25 30 35 40

Temps (min)Fig. 2 : Graphique d'amplification
pour les échantillons.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
Pour la détection visuelle de la fluorescence(pour HumaLoop T)
Placer chaque tube de réaction dans l'unité de détection de lafluorescence, irradier et observer le tube de côté.
(pour les autres incubateurs utilisant la lumière UV)
Irradier le fond de chaque tube de réaction et observer de côté àtravers des lunettes ou un masque oculaire anti-UV.
Pour une exécution valide, les résultats suivants doivent êtreobtenus : Contrôle positif : une lumière fluorescente verte est émise.
 Contrôle négatif : aucune lumière fluorescente n'est émise.
Si l'un des contrôles n'est pas valide, tous les échantillons de lasérie doivent être signalés comme non valides et le test doit êtreréeffectué.
Après avoir confirmé que l'exécution est valide, évaluer leséchantillons comme suit : Échantillon positif : une lumière fluorescente verte estémise.
 Échantillon négatif : aucune lumière fluorescente n'estémise.
Pour la détection de la turbidité en temps réel avec le HumaTurb
C+A
Après avoir confirmé que la turbidité augmente dans le contrôle
positif mais pas dans le contrôle négatif, évaluer les échantillons selon
les critères suivants (Fig. 1 et 2).

NOTES DE PROCÉDURE(1) La réaction LAMP est très sensible et toute contamination, mêmepar de petites quantités du produit amplifié, peut entraîner desrésultats faussement positifs.
(2) Séparer les zones de prélèvement d’expectorations et de test
LAMP.
(3) Nettoyer les bancs avec plus de 0,5 % d'hypochlorite de sodium
avant et après la réalisation du dosage.
(4) Prendre toutes les mesures nécessaires pour éviter toutecontamination et en particulier, changer de gants après avoir
transféré les expectorations ou si les gants sont entrés en contact
avec la solution d'ADN.
(5) Lors de la manipulation de ce produit, éviter la contamination
microbienne et la contamination par les nucléases. Même unepetite quantité de DNase transmise par la sueur ou la salive dansle tube de réaction peut décomposer l'ADN et provoquer un fauxrésultat.
(6) Ne pas utiliser d'échantillons d'expectorations contenant une
grande quantité de sang, car cela peut affecter les mesures. Se
référer au « Manual of Clinical Microbiology, 12th edition »6) si unprétraitement de l'échantillon est nécessaire.
(7) La solution d'ADN doit idéalement être utilisée immédiatement
après sa préparation ; si cela est impossible, la solution d'ADN
peut être conservée à température ambiante et utilisée dans les
72 heures.
(8) Lors de la distribution de la solution dans le tube de réaction, éviter
tout contact entre le bouchon d'injection fourni dans le Loopamp
PURE DNA Extraction Kit et la paroi interne des tubes de réaction.
Tenir le porte-tubes à la verticale et remplir le tube jusqu'à ce que
le niveau de la solution d'ADN soit entre les deux lignes (30 µl). Si
le niveau est inapproprié (au-dessus de la ligne supérieure ou en
dessous de la ligne inférieure), cela peut influencer la performance
du test.
(9)（pour HumaLoop T ou un autre incubateur utilisant la lumière
UV）
Si des bulles sont présentes, tapoter (ou centrifuger) les tubes
pour les libérer.
（pour le turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A）
Comme les bulles dans la solution de réaction peuvent interférer
avec la mesure de la turbidité et provoquer un faux résultat, éviter
la formation de bulles lors du mélange du réactif et de la solutiond'échantillon. S'il y a des bulles, centrifuger ou tapoter le tube pourles éliminer.
(10) Le dMTB doit être entièrement dissous. Toute partie non dissoute
peut influencer les performances, par exemple en diminuant lasensibilité. Maintenir en particulier les tubes debout tête à l'envers
pendant 2 minutes.
(11) Le PC MTB contient un nombre élevé de copies de l'ADN decontrôle. Éviter toute contamination d'autres échantillons avec le Échantillon positif : une certaine augmentation de laturbidité est observée.
 Échantillon négatif : aucune augmentation de la turbidité
n'est observée.
Remarques :(1) La sensibilité minimale détectable de ce produit est de
0,38 génome équivalent par test. Même si le test est négatif, lespatients présentant un symptôme persistant indiquant une
infection par le CMTB doivent être réexaminés.
(2) Bien que les amorces aient été conçues pour cibler une région
contenant un nombre relativement faible de variations, le CMTB
peut acquérir d'autres variations dans cette région et devenir
moins sensible à ce produit. Ainsi, un test négatif n'exclut pas
toujours une infection par le CMTB.
(3) Les résultats des tests peuvent être affectés par le prélèvement etle transport des échantillons, la préparation des échantillons, lesinhibiteurs et d'autres erreurs de procédure de laboratoire. Un test
négatif n'exclut pas la présence du CMTB dans l'échantillon. Pourétablir un diagnostic clinique, il faut tenir compte de l'état cliniquedu patient et de tous les autres résultats de laboratoire disponibles.
(4) Ce produit est un kit pour la détection qualitative ; il n'est pas conçu
pour la mesure quantitative. Par conséquent, l'intensité de lalumière fluorescente observée ou le temps d'augmentation de la8

turbidité mesurée par le turbidimètre en temps réel HumaTurb C+An'est pas lié à la concentration d'ADN matrice.

Comme le montrent les tableaux ci-dessous, le taux deconcordance global était favorable : LAMP pour expectorations nontraitées vs. PCR : 91,5 % (291/318 sujets) ; LAMP pourexpectorations prétraitées vs. PCR : 92,1 % (293/318) ; LAMP pourexpectorations non traitées vs. TRC : 94,3 % (230/244) ; LAMP pourexpectorations prétraitées vs. TRC : 93,0 % (227/244). En outre, lesévaluations réalisées par détection de la turbidité en temps réel etpar détection visuelle de la fluorescence concordaient totalement, àl'exception d'un échantillon (cet échantillon était une expectoration
sanglante et a donné un résultat faussement négatif lors de ladétection visuelle de la fluorescence en raison de la perturbation parle sang). Ainsi, les deux types d'évaluation sont considérés comme
identiques l'un à l'autre. Les tableaux ci-dessous présentent lesrésultats des tests obtenus par la détection de la turbidité en temps
réel. Il est à noter que les résultats de la détection visuelle de lafluorescence par le HumaLoop T étaient les mêmes que ceux duturbidimètre en temps réel HumaTurb C+A.

SUBSTANCES INTERFÉRENTES
Nos études internes ont révélé que la mesure n'était pas affectée parla présence de bilirubine libre (91,0 mg/dl), de bilirubine conjuguée(101,0 mg/dl), de chyle (turbidité de la formazine : 7300) etd'hémoglobine hémolytique (2475 mg/dl).
Concernant les médicaments, nos études internes ont révélé que lamesure n'était pas affectée par la présence d'isoniazide (100 µg/ml),d'éthambutol (20 µg/ml), de rifampicine (100 µg/ml), de pyrazinamide(500 µg/ml), de kanamycine (20 µg/ml) et de streptomycine (500 µg/ml).

CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCES
1. ExactitudeLors des tests des échantillons suivants : échantillon négatif (concentration : 0 génome équivalent/test) échantillon positif 1 (1,875 génomes équivalents/test) échantillon positif 2 (125 génomes équivalents/test)
L'échantillon négatif doit être négatif, tandis que les échantillons
positifs 1 et 2 doivent être positifs.
2. Reproductibilité intra-cycle
Lors du test simultané de cinq échantillons négatifs etcinq échantillons positifs, les échantillons négatifs doivent êtrenégatifs tout au long du test, tandis que les échantillons positifs
doivent être positifs tout au long du test.
3. Limite de détection
0,38 génome équivalent/test.
4. Réactivité croisée
En ce qui concerne les mycobactéries non tuberculeuses(Mycobacterium asiaticum, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium

LAMP
Positif
Expectorations nontraitées
Négatif
Taux de concordance général
Sensibilité diagnostique
Spécificité diagnostique
Valeur prédictive positive
Valeur prédictive négative
Rapport de vraisemblance +(sensibilité/(1-spécificité))Rapport de vraisemblance ((1-sensibilité)/spécificité)

marinum, Mycobacterium simiae, Mycobacterium scrofulaceum,
Mycobacterium szulgai, Mycobacterium gordonae, Mycobacterium
xenopi, Mycobacterium avium, Mycobacterium intracellulare,
Mycobacterium gastri, Mycobacterium haemophilum, Mycobacterium
malmoense, Mycobacterium chelonae, Mycobacterium fortuitum,
Mycobacterium flavescens) (1,0 x 104 génomes équivalents par test)
et les bactéries des maladies respiratoires (Streptococcus
pneumoniae, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae,
Moraxella catarrhalis, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli,
Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa, Mycoplasma
pneumoniae（I）, Mycoplasma pneumoniae（II）) (1,0 x 105 génomes

LAMP
Positif
Expectorations
prétraitées
Négatif
Taux de concordance général
Sensibilité diagnostique
Spécificité diagnostique
Valeur prédictive positive
Valeur prédictive négative
Rapport de vraisemblance +(sensibilité/(1-spécificité))Rapport de vraisemblance ((1-sensibilité)/spécificité)équivalents par test), le système de mesure a été testé négatif pour
toutes les espèces bactériennes comme détaillé dans le tableau cidessous ; aucune réaction croisée n'a été observée.
5. Réactivité contre le CMTB
La réactivité contre Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium
bovis, et Mycobacterium africanum a été confirmée.
6. Informations sur le calibrateur
Pour le test de performance de ce produit, l'ADN plasmidiquecontenant la région gyrB et IS de l'ADN génomique deMycobacterium tuberculosis H37Rv (GenBank no NC_000962) a été
utilisé comme calibrateur.
7. Performances cliniquesÀ ce jour, la tuberculose reste l'une des plus grandes infections aumonde. Au niveau mondial, le nombre total estimé de nouveaux cas
de tuberculose est d'environ 10 millions, et celui des frottis
d'expectorations positifs d'environ 4,3 millions.7) Au Japon,
24 760 patients ont été nouvellement enregistrés comme atteints detuberculose en 2008, dont 2216 en sont décédés.8)
Ce produit a été examiné dans deux institutions médicalesdésignées pour les maladies infectieuses de classe 2 (institutions
médicales désignées disposant de lits réservés aux patients atteints
de tuberculose) pour ses performances dans le diagnostic despatients supposément atteints de tuberculose. Avec les kits PCR et
TRC, tous deux déjà approuvés au Japon, ce kit a été utilisé pourtester des échantillons d'expectorations collectés pendant 2 jours(320 échantillons provenant de 160 sujets) et les résultats ont été
comparés entre les kits. Les tests basés sur ce produit
particulièrement comprenaient des évaluations pour la solution
d'extrait d'ADN obtenue à partir d'expectorations non traitées (ciaprès LAMP pour expectorations non traitées) et pour la solution
d'extrait d'ADN obtenue à partir d'expectorations prétraitées par
NALC-NaOH et par d'autres procédés (ci-après LAMP pourexpectorations prétraitées).

LAMP
Positif
Expectorations nontraitées
Négatif
Taux de concordance général
Sensibilité diagnostique
Spécificité diagnostique
Valeur prédictive positive
Valeur prédictive négative
Rapport de vraisemblance +(sensibilité/(1-spécificité))Rapport de vraisemblance ((1-sensibilité)/spécificité)

LAMP
Positif
Expectorations
prétraitées
Négatif
Taux de concordance général
Sensibilité diagnostique
Spécificité diagnostique
Valeur prédictive positive
Valeur prédictive négative
Rapport de vraisemblance +(sensibilité/(1-spécificité))Rapport de vraisemblance ((1-sensibilité)/spécificité)

9

PCR
Positif
Négatif
196
7
20
95
91,5 % (291/318)
90,7 % (196/216)
93,1 % (95/102)
96,6 % (196/203)
82,6 % (95/115)
13,1
0,0999PCR
Positif
Négatif
194
3
22
99
92,1 % (293/318)
89,8 % (194/216)
97,1 % (99/102)
98,5 % (194/197)
81,8 % (99/121)
31,0
0,105

TRC
Positif
Négatif
163
5
9
67
94,3 % (230/244)
94,8 % (163/172)
93,1 % (67/72)
97,0 % (163/168)
88,2 % (67/76)
13,90,0451TRC
Positif
Négatif
157
2
15
70
93,0 % (227/244)
91,3 % (157/172)
97,2 % (70/72)
98,7 % (157/159)
82,4 % (70/85)
32,6
0,0895

INFORMATIONS POUR COMMANDER
CodeproduitNom du produit

972000Loopamp MTBC
96 tests
Detection Kit

980000

HuMax ITA

964000Loopamp PUREDNA Extraction Kit
Incubateur
HumaHeat971000

Pipette-60 Set

961000

HumaLoop T

963200

HumaTurb C+A

970000Confirmer la fin de l'inactivation de la polymérase (pendant 5 minutes
à 80 C ou 2 minutes à 95 C). Retirer tous les tubes de réaction duturbidimètre et les jeter sans les ouvrir. Ne pas endommager les tubes.

Contenu

TABLE DES SYMBOLES

Micro-centrifugeuse

Référence ducatalogue

Consulter la noticed'utilisation

Date d'expiration

90 tests

Dispositif médical
de diagnostic
in vitro

Fabricant

Limitation de latempérature

Numéro de lot

Contenu suffisantpour <n> tests

Bloc chauffant
1 pipette, 4 x 96 embouts

Représentant autorisé
dans la Communauté
européenne

1 unité principale
1 unité de détection de lafluorescence
1 unité de contrôle
1 unité d'amplification

AVIS
Veuillez signaler tout incident grave survenu avec le dispositif aureprésentant autorisé, au fabricant et à l'autorité compétente de l'État
membre dans lequel l'utilisateur et/ou le patient est établi.

BIBLIOGRAPHIE
1) Notomi T., et al.: Nucleic Acids Research 28, No. 12, e63 (2000)
2) Nagamine K., et al.: Clin. Chem. 47, No. 9, 1742–1743 (2001)
3) Mori Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 289, No. 1, 150–
154 (2001)
4) Tomita N., et al.: Nat. Protoc. 3, No. 5, 877–882 (2008)
5) The guideline for the bio-safety and bio-hazard (by the JapaneseSociety for Bacteriology): Japanese Journal of Bacteriology 54, No.
3, 667–715 (1999)
6) Isabella MGaby EP and Nicole P., et al.: Manual of ClinicalMicrobiology, 12th edition, ASM PRESS, 558–575 (2019)
7) WHO global TB database:https://www.who.int/teams/global-tuberculosis-programme/data
https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/336069/9789240
013131-eng.pdf
8) Kekkaku No Tokei 2009 (Statistics of TB 2009): Japan AntiTuberculosis Association

Diagramme
Procédure opérationnelle pour la détection de la turbidité
en temps réelPréparation de la solution d'échantillon et de la solution de contrôle
négatif
Pipetter 60 µl d'échantillon et de NC MTB.
À l'aide du Loopamp PURE DNA Extraction Kit,
extraire l'ADN des expectorations recueillies et du NC
MTB. Les solutions obtenues sont utilisées commesolution d'échantillon et solution de contrôle négatif,
respectivement.
Préparation des réactifs
Mélange du réactif et dela solution d'échantillon

Prendre le nombre requis de tubes deréaction du dMTB.
(Pour les échantillons et les contrôles
négatifs et positifs)

Transférer 30 µl de solution d'échantillon ou de contrôledans chaque tube de réaction.
Utiliser la solution de contrôle négatif comme contrôle
négatif. Utiliser le PC MTB comme contrôle positif.
(Le contrôle positif doit être préparé en dernier.)
Retourner les tubes de réaction pour recueillir la solution
dans le bouchon. Patienter 2 minutes.
Patienter 2 minutes avec les tubes de réaction à

Importateur

HUMAN Gesellschaft für Biochemica
und Diagnostica mbH

Retourner les tubes de réaction cinq fois pour mélanger
le contenu, puis les centrifuger à nouveau.
Amplification(Éviter la formation de bulles)

Max-Planck-Ring 21, 65205 Wiesbaden, Germany

Placer les tubes de réaction dans le bloc de réaction duturbidimètre.
https://www.eiken.co.jp/enComme indiqué dans la notice d'utilisation duturbidimètre, lancer la réaction, mesurer et évaluer laturbidité (pendant 40 minutes à 67,0 C).

*Date de révision : 2023-10-31

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