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Can Get Signal®
Immunoreaction Enhancer Solution
Can Get Signal ® Immunoreaction Enhancer Solution（以下、Can Get Signal ®）は、ウェスタンブロッティングやELISAなど、抗原抗体反応を用いる解析でしばしば問題になる、感度不足や高いバックグラウンドを改善するための免疫アッセイ用反応促進試薬です。
特に、反応性が低い抗体で顕著な効果を示す傾向があり、抗リン酸化タンパク質抗体や抗His-tag抗体などの良い結果が得られにくい抗体の使用において優れた結果を発揮し、多くの先生方にご好評をいただいております。
今回は、Can Get Signal ®を、更に効果的かつ幅広くお使いいただくために、テクニカルラインで頻繁にお受けする質問を中心に、商品のご説明をいたします。

図1．Can Get Signal ®を用いるウェスタンブロット解析フロー

1

今使っている抗体では全く検出がうまく行かないのですが、そのような抗体でもCan Get Signal ®
で改善が可能ですか?

従来法

Can Get Signal ®

EGFR

1

非特異のバンドばかりが目立ち、目的のバンドがどれだか分からない右図（従来法）のような結果は、日常の実験における典型的な失敗の症状といえます。

Can Get Signal ®を用いることによって、これらの症状が劇的に改善されることがあります。
実験1はEGFR発現亢進株として知られるA431細胞をサンプルとして、EGFRタンパク質の検出を試みた実験です。
従来法では目的のバンドが非特異バンドに埋もれ、ほとんど検出できなかったのに対して、Can Get Signal ®を用いた場◆実験1◆

合では、非常に明瞭な検出が可能となりました。

サンプル：

A431細胞溶解液（2倍段階希釈）

ブロッキング：5% スキムミルク/TBS-T
一次抗体：

抗EGFR mouseモノクローナル抗体（1：2000, Dako）

二次抗体：

抗mouse IgG goatポリクローナル抗体-HRP標識（1：20000, Santa Cruz Biotechnology）

検14

出：

ECL Plus（GE Healthcare）

88No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 152

Can Get Signal ®を使わなくても十分に検出可能なのですが、そんな場合でもCan Get Signal ®を使うメリットはありますか?
2
従来法

Can Get Signal ®

1：10001：5000

多くの場合、Can Get Signal ®を用いることで、抗体の使用量を減らすことができ、かつ良好な結果を得ることができます。
実験2は、His-tagを融合したERK2タンパク質（無細胞タンパク質発現系で合成）のウェスタンブロッティングによHis-Tag
ERK2る検出を試みた実験です。従来法でも十分にシグナルは確認できるものの、バックグラウンドが高く、非特異バンドの出現も見られました。一方、Can Get Signal ®には抗原抗体反応を高める効果があり、同じ強さのシグナルを得るためでも、必要な抗体量を従来法より大幅に減らすことが可能でし◆実験2◆
サンプル：た。今回の実験では、Can Get Signal ®を使うことによってHis-tag ERK2無細胞タンパク質合成反応液（2倍抗体量を5分の1に減らすことができました。

段階希釈）

Can Get Signal ®を用いることで、貴重な一次抗体の使

ブロッキング: 5% スキムミルク/TBS-T
一次抗体：二次抗体：

抗His-Tag rabbitポリクローナル抗体（1:1000

用量を減らし、しかもS/N比の高いより明瞭な像を得ること

または1：5000, Santa Cruz Biotechnology）ができます。

抗rabbit IgG goatポリクローナル抗体-HRP標識（1：20000, Santa Cruz Biotechnology）

検出:

ECL Plus（GE Healthcare）

3

他社からもウェスタンブロッティング用反応促進試薬が販売されていますが、それらの試薬とCan Get Signal ®とは何が違うのですか?

3

Can Get Signal ®以外にも、ウェスタンブロッティングのシグナルを増強する試薬は従来法

Can Get Signal ®

A社試薬

他社から販売されていますが、それらの製品とCan Get Signal ®には根本的な違いがあります。
他社品では、タンパク質をブロットした膜を抗体反応前に前処理し、抗体との結合His-Tag
ERK2を容易にするなどの原理が使われているようです。その中には、従来法よりも作業ステップが増えてしまう上、改善効果も限定的であったり、ニトロセルロース膜にしか使用できないものもあるようです。
一方、

Can Get Signal ®は、抗原抗体反応に直接作用し、抗体の能力を最大限に引き出すことが特長であり、非常に幅広い系に対して効果的に作用します。膜の種類にも依存しません。

◆実験3◆
サンプル：
一次抗体：

実験3は、A社製シグナル増強試薬との比較例で、それぞれ推奨の手順に従って比二次抗体：

抗rabbit IgG goatポリクローナル抗体-HRP標識(1：20000,
Santa Cruz Biotechnology)

検出：

Signal では高いシグナル増強効果が認®

められました。

88

抗His-Tag rabbitポリクローナル抗体(1：2000, Santa CruzBiotechnology)

較を実施しました。A社製試薬の効果はわず か で あ っ た の に 対 し 、C a n G e t

His-Tag ERK2 無細胞タンパク質合成反応液(2倍段階希釈)

ブロッキング：5% スキムミルク/TBS-T

15

ECL Plus (GE Healthcare)No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 16

4ブロッキング条件などを変更することで、更に良い結果を得ることはできますか?

4

Can Get Signal ®を用いる解析では、今お使いいただいているブロッキング等の条件・試薬もそのまま用いることができま

5％スキムミルク/TBS-T

5％ BSA/TBS-T

すが、ブロッキング条件や検出反応などの条件を至適化することで、更に改善できる可能性があります。
実験4は、Can Get Signal ®を使用してHeLa細胞からActinタンパク質の検出を試みた実験ですが、ブロッキング剤

Actinを変更することにより、検出感度や特異性に違いが現れました。
一般的には、スキムミルクは安価でブロッキング能が高い一方、シグナル自体も弱めてしまう（マスキング効果）、リン酸化タンパク質の検出には使用できないといった欠点があるといわ※いずれもCan Get Signal ®使用れています。逆にBSAは、ブロッキング能や価格面では若干ス
キムミルクに劣りますが、強いシグナルを得たい場合には寧ろ◆実験4◆

適しています。また、リン酸化タンパク質の検出でのファーストサンプル：チョイスとしても用いられます。

ブロッキング：5% スキムミルク/TBS-Tまたは抗体反応以外にも実験の成功を左右する要素は大いに含ま

HeLa細胞溶解液（2倍段階希釈）
5% BSA/TBS-T

一次抗体：

れていますので、実験条件を綿密に検討することが肝要である

抗Actin goatポリクローナル抗体（1：2000, Santa Cruz Biotechnology）と思われます。
二次抗体：

抗goat IgG donkeyポリクローナル抗体-HRP

検ECL Plus（GE Healthcare）

標識（1：20000, Santa Cruz Biotechnology）

5

Can Get Signal ®が引用されている論文を知りたいのですが。

5

以下のような論文がございます。

出:・Proc Natl Acad Sci U S A, 104：7500-7505（2007）

・Proc Natl Acad Sci U S A. 102：11663-11668（2005）

・International Archives of Allergy and Immunology ,・The Plant Cell 17：389-403（2005）

141：322-330（2006）

・J. Biol. Chem., 280：39436-39447（2005）

・J. Neurochemistry, 98：20-33（2006）

・Cancer Research 65：2617-2625（2005）

・J. Cell Biol, 175：135-146（2006）

・Proc Natl Acad Sci U S A, 102：11663-11668（2005）

ここにご紹介しましたように、Can Get Signal ®は、低い抗体価によるシグナル不足を解決するだけでなく、特異性の改善にも大きな力を発揮します。ご存知でなかった方、知っていたけど使用したことがなかった方、是非一度お試しの上、その効果をご確認ください。
また、免疫組織染色や免疫細胞染色を実施されている先生方には、免疫染色用の姉妹品Can Get Signal ® immunostainもご用意しております。あわせてお試しください。

品 名 及 び 内 容

Can Get Signal ®
Solution 1 for primary antibody
Solution 2 for secondary antibody

包装

保存温度

各250mlCode No.

価

NKB-101¥30,000

格

NKB-101T¥10,000

4℃各50ml®

Can Get Signal
Solution 1 for primary antibody

250ml

4℃

NKB-201¥17,000

250ml

4℃

NKB-301¥17,000

各5ml

4℃

NKB-401¥12,000

NKB-501¥30,000

20ml×4本

NKB-502¥70,000

20ml×1本

NKB-601¥30,000

NKB-602¥70,000®

Can Get Signal
Solution 2 for secondary antibody®

Can Get Signal immunostain
Starter Kit Solution A
Solution B
Can Get Signal
Solution A®

Can Get Signal
Solution B®

immunostain

immunostain

20ml×1本

20ml×4本

164℃

4℃

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