平成 27 年度研究費助成 研究成果報告書集
研究成果報告書 目次■ 新規破骨細胞制御因子 DCL-1/CD302 の機能解明および CCN2 による制御機構の解明
岡山大学 大学院 医歯薬学総合研究科 助教 青山 絵理子･･･････

1■ メカニカルストレスを利用した心筋細胞のストレス応答能獲得のしくみ
岡山大学 大学院 医歯薬学総合研究科 助教 片野坂 友紀･･･････

3■ B 型肝炎ウイルス(HBV)の感染増殖を制御する分子機構の解明
岡山大学 大学院 医歯薬学総合研究科 助教 團迫 浩方･･･････

7■ 限られた帯域で複数動画を同時配信できるインターネット放送システムの構築
岡山大学 大学院 自然科学研究科 准教授 後藤 佑介･･･････

9■ 交流大電流通電を可能とする単相高温超電導変圧器を用いた小型・軽量電源の開発
岡山大学 大学院 自然科学研究科 准教授 七戸 希･･･････ 15■ 脱水素ケイ素化およびリン化反応を利用した新規求核分子触媒の創製
岡山大学 大学院 自然科学研究科 助教 村井 征史･･･････ 19■ 江戸期の巨石樋門・倉水門の撤去に関わる３Ｄレーザースキャナによる記録保存および文献調査
岡山大学 大学院 環境生命科学研究科 准教授 樋口 輝久･･･････ 23■ 河川堤防の安全な維持管理のための総合的照査方法の確立
岡山大学 大学院 環境生命科学研究科 助教 金 秉洙･･･････ 25■ 植物バイオマスからの骨成分合成
岡山大学 大学院 環境生命科学研究科･･･････ 35

准教授 永禮

英明■ トンネル覆工・空隙・地山の相互作用とロックボルトの効果
岡山大学 大学院 環境生命科学研究科 講師 柴田 俊文･･･････ 39■ 旭川感潮域のケレップ水制域における塩水流動の現地観測および数値解析
岡山大学 大学院 環境生命科学研究科 助教 赤穂 良輔･･･････ 43■ 難培養性乳酸菌を用いた乳牛用プロバイオティクス飼料の開発
岡山大学 大学院 環境生命科学研究科 准教授 西野 直樹･･･････ 49■ テンナンショウ属を用いた植物の性転換機構の解明
岡山大学 大学院 環境生命科学研究科 助教 宮崎･･･････ 53

祐子■ 腫瘍抗原糖鎖をカップリングさせた機能性糖鎖ポリマーの抗腫瘍抗体産生への応用
岡山大学 大学院 環境生命科学研究科 教授 木村 吉伸･･･････ 59■ 植物の生殖細胞における DNA メチル化動態に関する研究
岡山大学 資源植物科学研究所 助教 池田 陽子･･･････ 62■ オオムギ発芽時耐塩性 QTL の同質遺伝子系統作出と生活環横断的な塩ストレス応答機構の解明
岡山大学 資源植物科学研究所 助教 最相 大輔･･･････ 67■ 繰り返されるＣＳＲを巡る問題を発端として一競争戦略を公正概念の視点から考察
岡山大学 大学院 社会文化科学研究科 教授 北 真収･･･････ 70■ 「食品素材や化粧品素材」としての「高機能化ポリフェノール誘導体」の
環境に優しい「次世代型酵素的合成システム」の開発
岡山県立大学 保健福祉学部 准教授 中島 伸佳･･･････ 76

■ 人体近傍生気象現象の把握と温熱環境評価モデルの構築
岡山県立大学 情報工学部 助教 島崎 康弘･･･････ 78■ 超音波ニードルパンチ処理を施した CF/PA6 複合材料の衝撃特性の評価
岡山県立大学 情報工学部 助教 小武内 清貴･･･････ 83■ ステートマシン図を用いた Web アプリケーションの自動テスト環境の開発
岡山県立大学 情報工学部 助教 横川 智教･･･････ 87■ 実感を伴う水害用デジタル避難ガイドの開発（２）岡山県立大学 デザイン学部 講師 齋藤 美絵子･･･････ 93■ わが国との比較的視点で捉える台湾における歴史的町並み（老街）保存事業の分析研究
岡山県立大学 デザイン学部 准教授 西川 博美･･･････ 99■ 建築家ジェフリー・バワの建築言語に関する研究
岡山県立大学 デザイン学部 教授 岩本 弘光･･･････104■ 現代作家の陶磁器デザインと技法の集積
岡山県立大学 デザイン学部 教授 久保田 厚子･･･････110■ 微量の水を用いた高分子/疎水性イオン液体の相挙動の制御と機構解明
岡山理科大学 理学部 講師 大坂 昇･･･････116■ 高効率な発光を目指した有機蛍光材料の開発
岡山理科大学 理学部 講師 岩永 哲夫･･･････120■ 簡易な UAV を用いた斜面形状取得と斜面変状評価手法の開発
岡山理科大学 生物地球学部 准教授 佐藤 丈晴･･･････125■ 未利用バイオマス細胞壁分解における放線菌フェルラ酸エステラーゼの有用性評価
岡山県農林水産総合センター 生物科学研究所 流動研究員 裏地 美杉･･･････130■ 青枯病菌エフェクターの宿主植物因子による活性化機構の解明
岡山県農林水産総合センター 生物科学研究所 流動研究員･･･････134

向原隆文■ 死細胞から放出される組織リモデリング増悪化因子の分子機能ろ病態制御
就実大学 薬学部 教授 森 秀治･･･････140■ 小児精神疾患治療を指向した経鼻薬物送達法の可能性を探る薬物動態学的研究
就実大学 薬学部 准教授 井上 大輔･･･････144■ 鳥類アデノ随伴ウイルス(AAAV)ベクターの開発
就実大学 薬学部 准教授 工藤 季之･･･････148■ 高脂肪食摂取による肥満の形成は Gas6 阻害により抑制できるか？
倉敷芸術科学大学 生命科学部 講師 椎葉 大輔･･･････153■ 色素増感太陽電池を指向した含ケイ素化合物の合成
倉敷芸術科学大学 生命科学部 教授 仲 章伸･･･････157■ 効力に「はずれ」が生じない新規インフルエンザワクチン製造株の開発
川崎医科大学 微生物学教室 助教 内藤 忠相･･･････162■ HTLV-1 由来の HBZ 蛋白を標的とした新規 HTLV-1 関連疾患の発症予防・治療法に関する研究
川崎医科大学 微生物学教室 助教 塩浜 康雄･･･････164■ 非同期式直列演算器に基づいた超低消費電力デジタル補聴器の開発
川崎医療福祉大学 講師 近藤 真史･･･････167

海外渡航報告書 目次■ 岡山大学

工学部

助教

矢納 陽

･･･････173■ 岡山大学

大学院 環境生命科学研究科

准教授

吉田 圭介

･･･････175■ 岡山大学

理学部

助教

菅 倫寛

･･･････177■ 岡山大学

資源植物科学研究所

准教授 谷 明生･･･････178

教授 汪 達紘･･･････179

准教授 細谷 和範･･･････180■ 岡山理科大学

理学部■ 津山工業高等専門学校

電子制御工学科

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

新規破骨細胞制御因子 DCL-1/CD302 の機能解明および CCN2 による制御機構の解明
岡山大学大学院医歯薬学総合研究科

青山絵理子
（概要）
骨、軟骨組織の増殖、分化に関与することが知られている CCN 2 は他の様々な因子と結合してそれらの機能を制御することにより多機能性を発揮するものと考えられている。そこでその結合因子のスクリーニングから見いだされた CD302 は膜タンパク質の一種であり、マクロファージなどでの発現が知られている。今回我々が注目した破骨細胞はマクロファージ系の前駆細胞から分化するにも関わらず、 CD 302 の発現や機能は全く報告されていなかった。そこで我々は破骨細胞分化におけるこの因子の役割に注目し、CD302 が成熟破骨細胞において発現していることを見いだした。さらに破骨細胞の分化過程において si RN A を用いて CD302 の発現を抑制したところ、 TRAP 陽性の成熟破骨細胞数が減少し、アクチンリングが断片化する様子が見られた。同時に、骨吸収能も低下していた。また、免疫沈降法により CD302 はアクチンおよび CCN 2 のそれぞれと結合することも示された。これらの結果から、 CD302 、 CCN 2 およびアクチンの三者が協働してアクチンリングを形成している可能性が考えられる。

（本文）

アクチンおよび抗 DCL-1 抗体で染色し、両者がアク

1. 破骨細胞分化の過程におけるDCL-1発現の確認

チンリング上で共局在していることを確認した

マウス骨髄由来の破骨細胞前駆細胞を用いた破骨(Figure 2)。 また、siRNA によって DCL-1 の発現を抑制したところ TRAP 陽性かつ多核でアクチンリン

細胞誘導系においてウエスタンブロッティング法でグ を形成 する 成熟 破骨細 胞 の生 成が 減少 した

DCL-1 のタンパク質量を測定した。その結果、分化(Figure 3)。また、DCL-1 の siRNA で処理した成熟の初期からある程度存在しており、分化に伴ってや破骨細胞形成期の細胞をタイムラプス撮影し、そのや上昇することを確認した。さらに同時期の細胞か過程を詳細に観察した。その結果、DCL-1 の発現を

らRNAを回収してmRNAレベルでもDCL-1の発現が分化抑制された破骨細胞誘導系では成熟破骨細胞に特徴の後半にかけて上昇していることが分かった

的に見られるアクチンリングの形成および維持が阻(Figure 1 (A)) 。

害されていることが分かった（Data not shown）。さらに、DCL-1 の発現抑制は破骨細胞による骨吸収能

2. DCL-1とCCN2およびアクチンとの結合も阻害することが明らかになった(Figure 4) 。

DCL-1とCCN2の結合を確認するためDCL-1を発現してこれらの結果からCD302はRANKLにより誘導される破いる成熟破骨細胞の溶解物を用いて免疫沈降法およ

骨細胞において発現しており、アクチンリングに分びウエスタンブロッティング法を行った。
その結果、布していることや、その発現を阻害するとアクチン

DCL-1はCCN2と結合する可能性が高いことが分かっ

リングの異常が生じることから破骨細胞のアクチた。また、DCL-1はアクチンとも強く結合することをンリングの形成と維持にCD302 が関与していると考えられる。 今回、我々はCD302がCCN2およびアク同様の実験系を用いた解析から明らかにしたチンと結合する可能性を示したが、我々は以前に(Figure 1 (B)) 。

CCN2もアクチンと結合することを報告している1)。

3. 成熟破骨細胞におけるDCL-1の機能解明
マウス骨髄由来細胞から誘導した成熟破骨細胞を- 1 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

従ってCCN2はCD302と共にアクチンリング形成に関与している可能性がある。
参考文献1） Yosimichi et al. Biochem. Biophys.

Res. Commun., 299: 755-776(2002)

Figure 3. CD302 発現の抑制によるアクチンリング TRAP 陽性多核細胞の減少 (A) マウス骨髄由来の破骨細胞前駆細胞を M-CSF (100 ng/ml) と RANKL (50 ng/ml) で刺激後、4 日
後に siRNA を添加し、さら に 1 日間培養した後の細胞のアク
IP: Anti-CD302

IP: Anti-actin

チンと核を免疫染色した。(B) (A)と同様の条件で培養した

WB: Anti-His(CCN2-His)

WB: Anti-CD302

細胞を TRAP 染色し、TRAP 陽性 の成熟破骨細胞数を計数した。

Figure 1. CD302の破骨細胞における発現とCCN2およびアクチンとの結合 (A) マウス骨髄由来の破骨細胞前駆細胞を
M-CSF (100 ng/ml) とRANKL (50 ng/ml) で刺激し、3日後にCD302の siRNAを添加し、さらにその1日後に回収した細胞由来タンパク質およびRNAをウエスタンブロッティング法お

siRNA:

Control

CD302

よびreal time PCR法で解析した。(B) マウス骨髄中の前駆細胞から誘導した破骨細胞のタンパク質溶解物にrecombinant
CCN2-Hisを混和し、抗CD302抗体で免疫沈降させたものを抗
CCN2抗体でウエスタンブロッティング解析した。(C) マウ
ス骨髄中の前駆細胞から誘導した破骨細胞のタンパク質溶

Figure 4. CD302発現の抑制による骨吸収能の抑制 マウス骨解物を抗アクチン抗体で免疫沈降させたものを抗CD302抗髄由来の破骨細胞前駆細胞をリン酸カルシウムコートした

体でウエスタンブロッティング解析した。

培養プレート上に播種し、M-CSF (10 ng/ml) と RANKL (100ng/ml) で刺激後、2日後にsiRNAを添加し、さらに2日間培養した後にcalceinで染色した。リン酸カルシウ ム吸収面積と吸収窩の数を測定した。

DAPI

Actin

Merge

CCN2

CD302

Figure 2. 成熟破骨細胞におけるCD302とactinの局在 M-CSF(100 ng/ml) と RANKL (50 ng/ml) で刺激したマウス骨髄由来の破骨細胞前駆細胞を抗CD302抗体、抗 CCN2抗体、Phalloidin-Alexa488およびDAPIで染色した。

- 2 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

メカニカルストレスを利用した心筋細胞のストレス応答能獲得のしくみ
岡山大学大学院・医歯薬学総合研究科
片野坂友紀
心筋細胞は、生後ただちに分裂能を失った終末分化細胞であり、一生に渡って、体の成長や運動、妊娠や高血圧などの血行動態（メカニカルストレス）の変化に応じて形や機能を変化させながら、心臓ポンプ機能を一定に保つ
ことが知られている。しかしながら、心筋細胞がメカニカルストレスを感知する機構は、これまで不明であった。これまでの研究において、我々は、心筋細胞の介在板に発現するメカノセンサーTRPV2 が、心臓の生理機能の維持に欠かせない重要な分子であることを報告している（Katanosaka et al., 2014, Nature Communications）。しかしながら、心筋細胞がメカニカルストレスの変化に応じながら形や機能を維持する仕組みは未だ明らかになっていない。
本研究では、心筋細胞がメカニカルストレスの変化に応じながら形や機能を維持する仕組みを明らかにすることを目的として、TRPV2 ノックアウト（KO）マウスの肥大応答を解析した。この結果、メカノセンサーTRPV2 は、心筋細胞の生理的肥大およびメカニカルストレスによって引き起こされる病的肥大に欠かせない分子であることが明らかとなった。

【背景】

マウスを用いて、メカニカルストレスに起因する肥大心臓は、血行動態の変化に応じて、形や機能を変化

応答能を解析した。また、TRPV2KO マウスから単離させながら、ポンプ機能を一定に保とうとする大変ユした新生仔心筋細胞を用いて、心筋細胞の肥大応答能

ニークな特徴を持った臓器である。心筋細胞は、生後や拍動心筋細胞への成熟過程を、形態および生理レベ

速やかに分裂能を失うため、その後の成長や運動、あルで解析した。

るいは高血圧などによる血行動態の変化に対して、一
つ一つの細胞の大きさや形を変えて適応することとな【方法】

る。このしくみが破綻すると、心臓のポンプ機能は低① 動物

下し、心不全が発症する。心不全に至る疾患は多様で実験に使用するマウスは、岡山大学自然生命科学

あるが、多くの場合で、血行動態ストレス応答として研究支援センター・動物資源部門鹿田施設において、

2+心肥大が先行する。肥大応答の原因は、細胞内 Ca の

12 時間の明暗サイクル、温度制御下にて飼育した。

持続的な上昇であることが明らかになったが、そのすべての実験は、10 週令の♂マウス（体重：22－24

2+

Ca シグナルが、細胞内のどこで生じるか、どの分子グラム）を使った。これらのマウスは、遺伝的特徴

によって伝達されるかについては、未だ不明である。

を実験者に対して不明にして、かつランダムに取り我々は、正常心において介在板に局在する心筋メカ扱った。動物実験は、岡山大学動物実験委員会に承ノセンサーの候補分子 TRPV2 を発見し(1, 2)、
この分子認を受けて、ガイドラインに従って行った。

が心臓の形や機能の維持に必須であることを、ノック② 大動脈結紮モデルの作製

アウト(KO)マウスの作製・解析から明らかにしたところである(3)。興味深いことに、TRPV2 が欠損した心筋

左室に圧負荷を施すために、マウスの大動脈を結紮では、適応シグナルを生み出す IGF-1 受容体/PI3K/Akt

した。100 mg/kg ketamine と 5 mg/kg xylazineで麻酔し経路が顕著に減弱していたため、このような細胞ではた後、大動脈に27Gの注射針をあて、7-0のナイロン糸

適応的な肥大応答を引き起こすことができないのではで結紮した。

ないかと考えられた。そこで、本研究では、TRPV2KO- 3 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

き起こされる適応的な肥大応答には、TRPV2 が必須③ 新生仔培養心筋細胞の単離
生後 1 日の新生仔マウスをエーテル麻酔後、断頭であることが明らかとなった。

し、心臓を摘出した。左室を細かく刻み、0.2%トリ
プシン溶液中で、撹拌しながら 37 度で酵素処理を行い、上澄みを回収した。回収した上澄みは、10%FCS
含有の DMEM 培地を加えトリプシン活性を止め、遠心分離（1000 回転）にかけた。沈殿を 10%FCS 含
有の DMEM 培地にて培養した。
④ 組織学的解析
心臓を摘出後、4％パラホルムアルデヒドで固定した。PBS で洗浄後、パラフィンに包埋し、切片を（図 1）大動脈結紮による圧負荷応答作製した。切片は HE 染色およびマッソントリクロ

左室横断切片のマッソントリクロール染色像

ール染色した。新生仔培養細胞は、4%パラホルムア

左：正常心（圧負荷なし）の左室横断切片

ルデヒドで固定した後、PBS で洗浄し、0.1%Triton

中央：圧負荷後の正常心の左室横断切片

溶液に浸漬し、透過処理をおこなった。0.3%BSA で

右：圧負荷後の TRPV2KO マウス心臓の左室横断切ブロッキングした。1 次抗体に 45 分間浸漬後、30片（スケール：50 m）

分 PBS で洗浄し、2 次抗体（Alexa-labeled 抗ウサギ
抗体、あるいは抗マウス抗体）を 30 分間浸漬した。

心筋細胞の肥大応答を支えるシグナルの活性化状PBS で洗浄した後、ファロイジン染色および DAPI

況を調べるために、細胞内のサバイバル経路を担う染色をおこなった。オリンパス社製の LV1000 を用

Akt シグナルのリン酸化状況を調べた。この結果、

いて、観察した。

正常心を利用した大動脈結紮モデルでは、Akt シグ
ナルが亢進しているものの、TRPV2KO マウスを利

2+⑤ 細胞内 Ca イメージング

用した大動脈結紮モデルでは、Akt シグナルの活性

新生仔培養心筋細胞に、2 M Fura-2 を 37 度で 30化が見られなかった。このことは、TRPV2 を介した分ロードした。ロード後、細胞は、標準 Tyrode 溶液

メカニカルシグナルが、心筋細胞の肥大応答を支えに浸し、顕微鏡下で白金電極を用いて電気刺激を与ていることを示している。また、一方で、細胞死を

2+

え、電気刺激によって引き起こされる細胞内 Ca 濃

促すシグナルの一つである CaMKII シグナルは、正度の変化を記録した。

常心を利用した大動脈結紮モデルでは、亢進していなかったが、TRPV2KO マウスを利用した大動脈結【結果】

紮モデルでは、
亢進していることが明らかとなった。

大動脈結紮に対する TRPV2KO マウス心臓の応答

これらの結果は、TRPV2KO マウスでは、圧負荷に

正常心では、大動脈を結紮後、約 1 週間で、ひとよる肥大応答を示さないだけでなく、圧負荷によっつひとつの細胞が大きくなることによって心臓が肉て、心不全の発症や重篤化においてみられるような、厚になるという典型的な肥大応答をひきおこした筋細胞が壊死するシグナルが亢進してしまうことと(図 1 中央)。このような組織内には、マッソントリなることを示している。心臓がメカニカルストレス

クロール染色に陽性となる繊維化像はみられなかっを利用して恒常性を維持する機構には、TRPV2 を介た。一方で、TRPV2KO マウスでは、個々の細胞がしたシグナルが重要な役割を示しているらしいと考大きくなるような肥大応答はみられなかった(図 1

えられた。
我々は、これまでの研究において、大動脈結紮に右)。このことから、メカニカルストレスによって引- 4 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

よる圧負荷によって、負荷の経過時間に応じて、
TRPV2 発現が上昇してくるという実験的事実を得ている。このこともまた、心臓に備わったメカニカ
ルストレスに応じて筋細胞の形態や機能を変容する
メカニズムにおいて、TRPV2 が大きな役割を持つことを示唆している。
新生仔 TRPV2KO マウス心臓から単離した培養心筋細胞
新生仔マウスから単離した心筋細胞の培養実験系
では、介在板の形成過程や筋繊維の再構成の様子を観察することができる。図 2 は、培養 3 日後のコントロールおよび TRPV2KO 細胞の細胞形態・介在板
因子の局在・細胞骨格の様子を示している。コント（図 2）新生仔培養細胞の細胞形態および介在板局

ロール群では、発達したサルコメアが観察される。

在分子・細胞骨格の様子

また、介在板因子であるコネキシン 43 や N－カドヘ

上段：コネキシン 43(緑)、アクチン（赤）、核（青）リンが細胞同士の接着部位である介在板に局在しての三重染色。下段：N-カドヘリン(緑)、アクチン（赤）、いる。さらに、これらの細胞群は、周囲の細胞と同核（青）の三重染色。左；コントロール細胞、右：調拍動していた。しかしながら、TRPV2KO 細胞群

TRPV2KO 細胞、スケールバー、100 m。

では、隣り合う細胞間に隙間があいており、介在板が形成されていなかった。また、本来介在板に局在【考察】するはずのコネキシン 43 や N－カドヘリンが細胞

本研究では、心筋細胞がメカニカルストレスの変化

内に凝集していた。さらにこれらの細胞では、同調に応じながら形や機能を維持する仕組みを明らかにす

拍動がみられなかった。これらの結果は、心筋細胞ることを目的として、TRPV2 ノックアウト（KO）マが同調拍動を獲得した細胞へと分化するために、ウスの肥大応答を解析した。この結果、メカノセンサ

TRPV2 を介したメカニカルシグナルが必要である

ーTRPV2 は、心筋細胞の生理的肥大およびメカニカル

ことを示している。

ストレスによって引き起こされる病的肥大に欠かせな心筋細胞は、収縮機能を向上させる方向へと分化

い分子であることが明らかとなった。さらに、生理的するため、収縮機能に必要なサルコメアの充実と、な肥大応答のひとつである筋成熟過程において、

2+

これらを効率的に動かす細胞内 Ca ハンドリングのTRPV2 は、必須の分子であることが示唆された。今後充実が基礎となる。心筋細胞の成熟過程を、機能的TRPV2を介したメカノトランスダクションの詳細を解2+に評価するために、我々は、Fura-2 を用いた Ca イ

析することによって、心臓がメカニカルストレスをう

メージングによって、心筋細胞生理機能を評価した。

まく利用しながら形や機能を維持していく仕組みが明

この結果、TRPV2KO 細胞では、筋細胞の興奮収縮

らかになっていくだろう。

連関を担う Ca2+輸送体分子の発現が著しく低く、一本研究成果は、メカノセンサーを介した心不全発症

2+

定の時間が経過しても筋小胞体の Ca 含量が著しくメカニズムの解明に繋がると考えられる。現行の血管低いことも明らかにしている。このことは、形態的拡張薬や体液調節因子阻害による降圧薬に加えて、本にも、機能的にも筋細胞の成熟・分化において、研究の成果としてメカノセンサーをターゲットとした

TRPV2 が必須であることを示している。

心不全治療法を提案できれば、不全治療に新たな選択肢を供給することとなり、QOL を改善して国民を悩ま- 5 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

す病気の克服に役立つことから、保健医療への貢献は計り知れない。

【謝辞】
最後になりましたが、本研究を支援いただきましたウエスコ学術振興財団に深く感謝いたします。
【参考・引用文献】(1)

Yuko Iwata, Yuki Katanosaka, Yuji Arai, Kazuo
Komamura,

Kunio

Miyatake,

Munekazu

Shigekawa. A novel mechanism of myocyte
degeneration involving the Ca2+-permiable growth
factor-regulated channel.

J. Cell Biol. 2003,

161:957-967. Yuko Iwata and Yuki Katanosaka
contributed equally to this work.

(2)

Katuhiko Muraki, Yuko Iwata, Yuki Katanosaka,
Tomohiro

Ito,

SusumuOhya,

Munekazu

Shigekawa, Yuji Imaizumi. The vanilloid receptor
homolog

GRC

is

a

novel

componentofstreach-sensitive nonselective cation channel invascular smooth muscle cells. Cir. Res. 2003, 93:
829-838(3)

Katanosaka Y, Iwasaki K, Ujihara Y, Takatsu S,
Nishitsuji K, Kanagawa M, Sudo A, Toda T,
Katanosaka K, Satoshi M, Naruse K. TRPV2 iscritical for the maintenance of cardiac structure andfunction in mice. Nature Communications, 2014,10.1038/ncomms4932- 6 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

B 型肝炎ウイルス(HBV)の感染増殖を制御する分子機構の解明
岡山大学大学院医歯薬学総合研究科 腫瘍ウイルス学分野
團迫 浩方
B 型肝炎ウイルス（HBV）は、ウイルスゲノムとして不完全二本鎖 DNA を持つ DNA ウイルスである。HBV の持続感染は慢性肝炎を引き起こし、さらには肝硬変や肝がんなどの肝疾患を発症するとされている。肝硬変や肝がんの段階での治療は非常に難しいと考えられており、HBV の持続感染を抑制し、慢性肝炎を沈静化させることが肝硬変や肝がんを予防するためには重要である。現在、HBV の持続感染を抑制するために、インターフェ
ロン(IFN)あるいは核酸アナログ製剤が用いられているが、著効率の低さや耐性ウイルスの出現など問題が多い。
そのため、HBV の感染増殖機構を明らかにし、治療の標的となりうる新規宿主因子を同定することが重要である。2013 年に、単純ヘルペスウイルスやワクシニアウイルスなどの DNA ウイルスの感染を認識する宿主因子として、cyclic GMP-AMP synthase (cGAS)が同定された。本研究では、cGAS に着目し、HBV の持続感染に対する
cGAS の制御機構を解明することを試みた。内在性 cGAS をノックダウンさせたヒト肝がん細胞株 Li23 細胞は、
人工 HBV 二本鎖 DNA に対する自然免疫応答が消失した。一方、cGAS を恒常的に発現させた HepG2/NTCP-myc 細胞に HBV を感染させたところ、自然免疫応答を示した。これらの結果は cGAS が HBV の二本鎖 DNA を介して、HBV
感染を認識していることを示唆している。このように、cGAS は HBV の感染増殖を制御する宿主因子の一つであるものと考えられる。
ルス感染を認識することが報告された。
しかし、
cGAS
1. はじめには同じ DNA ウイルスに属する HBV 由来の二本鎖 DNA

我が国の B 型肝炎ウイルス(HBV)の感染者数はおも認識することができるかどうかは明らかではない。

よそ１５０万人であり、その約１０ １５％が慢性

本研究では cGAS に着目し、HBV の感染増殖に対する肝炎から肝硬変、肝がんなどの肝疾患を発症すると

cGAS の制御機構を解明することを目的とした。

されている。現在、HBV の治療にはインターフェロ
ン(IFN)あるいは核酸アナログ製剤が主に用いられ

2. 方法と結果ている。しかし、HBV 感染者の宿主ゲノム内に HBV（１）ヒト肝細胞株での cGAS 発現の確認

ゲノムの一部が組込まれることもあり、これらの薬

現在までに、肝細胞における cGAS に関する情報は剤による HBV の完全排除は期待できない。
とはいえ、ほとんどない。最初に、HBV 感染受容性を示す肝がHBV の持続的な感染増殖を抑制し、肝炎を沈静化さん細胞株 HepG2 細胞、その他の肝がん細胞株（HuH-7

せることが肝硬変や肝がんへの進行を予防するため細胞や Li23 細胞）及びヒト不死化肝細胞株（PH5CH8には最も重要なことである。しかし、IFN はその著細胞や NKNT-3 細胞）の cGAS 遺伝子の発現レベルを効率が３０％程度と低いこと、一方の核酸アナログ

リアルタイム PCR 法により測定した。興味深いこと

製剤は耐性株の出現や投薬治療の中断が肝炎の急性に、調べたヒト肝細胞株の中で cGAS 遺伝子の発現が増悪を引き起こすこと等、非常に問題が多い。

確認されたのは、Li23 細胞及び NKNT-3 細胞のみでHBV は DNA ウイルスに属し、複製中間体として二あった。また、cGAS のタンパク質レベルをウエスタ

本鎖 DNA を産生することが知られている。２０１３

ンブロット法により確認したところ、cGAS の遺伝子

年に、cyclic GMP-AMP synthase (cGAS)が単純ヘル発現の結果と同じであった。

ペスウイルスやワクシニアウイルス（いずれも DNA
ウイルスに属する）由来の二本鎖 DNA を介してウイ- 7 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】（２）cGAS による HBV DNA 認識の検討がある。すなわち、cGAS の発現量の違いが HBV の持次に、内在性 cGAS を発現している Li23 細胞を用

続感染を決定づけているかもしれない。この cGAS

いて、cGAS が HBV DNA を認識できるか検討した。人の発現を人工的に調節できれば、HBV 感染時の体内工的に HBV の二本鎖 DNA を作成し、Li23 細胞に導入の自然免疫応答を高めることも可能であり、HBV のしたところ、自然免疫応答があることを示す ISG56

排除も可能であると考えられる。
今後の課題として、（IFN による誘導される遺伝子群の一つ）の発現誘cGAS 発現を高めるような薬剤を探索することが必

導が確認された。一方、cGAS をノックダウンした要である。

Li23 細胞では、人工 HBV 二本鎖 DNA の導入によるISG56 の発現誘導は確認されなかった。これらの結4. 謝辞

果から、cGAS は HBV DNA を認識する可能性が示唆さ

本研究の遂行にあたり、ご助成いただいた公益財

れた。

団法人ウエスコ学術振興財団に深謝致します。

（３）HBV 感染受容性に対する cGAS の影響

5. 参考文献

次に、HBV 感染受容性に対する cGAS の影響を検討(1) Xia T, Konno H, Ahn J, Barber GN. Deregulation

した。HBV に感染受容性を示す HepG2/NTCP-myc 細胞

of STING signaling in colorectal carcinoma（HBV 受容体である宿主因子 NTCP を恒常的に発現さconstrains DNA damage responses and correlates

せている HepG2 細胞）は内在性 cGAS を発現していなwith tumorigenesis. Cell Rep. 14, 282-297 (2016)

いため、cGAS 遺伝子をレトロウイルスにより導入した。また、陰性コントロールとして、酵素活性を欠失 し て い る cGAS 変 異 体 を 恒 常 的 に 発 現 す る
HepG2/NTCP-myc 細胞も同様に準備した。これらの細胞に HBV を感染させたところ、恒常的に cGAS を発現するHepG2/NTCP-myc細胞でのみISG56が発現誘導された。これらの結果から、cGAS は HBV 感染を認識していることが示唆された。
3. 考察
本研究により、HBV は同じ DNA ウイルスに属する
単純ヘルペスウイルスやワクシニアウイルスと同様に、cGAS により認識されていることが示唆された。
cGAS は HBV の二本鎖 DNA を認識後、下流の自然免疫系（IFN 産生系）を活性化しているものと考えられる。
また、cGAS の発現量は由来の異なるヒト肝細胞間で異なっている結果が得られたことから、個人間でも異なっている可能性がある。最近、cGAS 遺伝子の転写調節領域がメチル化されていることにより、遺伝子発現が調節されていることが報告された (1)。
この研究成果はヒト大腸がん細胞で得られたものであるが、肝細胞でも同じことが起こっている可能性- 8 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

限られた帯域で複数動画を同時配信できるインターネット放送システムの構築
岡山大学大学院自然科学研究科
後藤 佑介
インターネットによる映像視聴方法の多様化にともない，複数動画を同時に視聴する環境への注目が高まっている．本研究課題では，複数動画の同時配信において，実際のネットワーク環境で想定される課題に対処したインターネット放送システムを構築し，有用性を評価した．本システムでは，(1) 配信時の伝送遅延，(2) 帯
域の揺らぎによるパケット欠損の影響， (3) 複数の仮想チャネル上で配信する動画の分割比率の決定方法，および (4) 複数動画の同時配信を実現する独自の映像配信プロトコルの 4 点を考慮した．次に，データ受信時の待ち時間を短縮する放送スケジューリングのアルゴリズムを構築し，スケジューリング手法を導入可能な分割放送型配信システムを実現し，ネットワークシミュレータを用いた評価実験を行った．評価では，システム上で複数動画に対応したスケジューリング手法を導入し，実際のネットワーク環境における待ち時間短縮効果の有用性を検証した．
1. はじめに割放送型配信システムを実現し，スケジューリング

インターネットによる映像視聴方法の多様化にと手法を用いた評価を行う．

もない，複数動画を同時に視聴する環境への注目が高まっている．動画データの配信方式として，Video

2. 放送型配信

on Demand (以下， VoD ) と放送型配信の二つがあ

放送型配信は，多くのクライアントが同じ動画デる．VoD では，サーバはクライアントの受信要求にータを受信する場合に用いられる配信方式である．

応じて帯域幅を確保して動画を配信する．
このため，即時性の高いスポーツ番組やコンサート映像のスト

同じ時間帯に動画を要求するクライアント数の増加

リーミング配信，および特定の番組を一つのチャネにともない，サーバが使用する帯域幅は比例して増ルで繰返し配信する CS デジタル放送といったサー

加する．一方，放送型配信では，サーバは一定の帯

ビスでの利用を想定している．サーバは一定の帯域

域幅で複数のクライアントに同じ動画データを繰返

幅で同じ動画データを繰返し配信し，クライアント

し配信するが，クライアントは要求した動画データ

は所望の契機で動画データを受信して再生する．サが配信されるまで待つ必要がある．この待ち時間をーバは，マルチキャストやブロードキャストといっ短縮するため，一続きの動画データを複数の部分にた通信方式を用いてクライアントに放送型で配信す分割して複数の通信路で配信する分割放送型配信がることで，VoD に比べてサーバの処理負荷や使用す提案されてきた．また，分割放送型配信において，る帯域幅の増加を抑制できる．一方で，クライアン

データ受信時に発生する待ち時間を短縮するスケジ

トは，動画データの受信を要求してから再生が開始ューリング手法が数多く提案されており，我々はスされるまでの間に待ち時間が発生する．

ケジューリング手法を導入可能な分割放送型配信シ

放送型配信において待ち時間が発生する様子を図

ステムを実現してきた．

1 に示す．チャネルの帯域幅を 3.0 Mbps，動画デー

これまでの研究で，複数動画を同時に視聴する場

タの再生レートを 1.5 Mbps，
再生時間を 1 分とする．

合を考慮したスケジューリング手法は提案されてい図 1 の場合，クライアントが動画データの受信を開るが，実際のネットワーク環境を考慮したシステム始する契機は動画データの先頭であり，クライアン

上での評価は行っていなかった．本研究課題では，

トは動画データの先頭部分を受信すると再生を開始

インターネットを介して複数動画を同期配信する分できる．クライアントが動画データを受信するとき- 9 -【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

30 sec.

Requesting to receive data
Channel(3.0Mbps)

Time・・・ Movie data Movie data Movie data ・・・
1 min.

Starting to receive data
User's playback(1.5Mbps)

20 sec.

Requesting to receive data

Movie data

Time

Channel 1(1.5 Mbps)

・・・ S 1

S1

S1

S1

S1

・・・

Channel 2(1.5 Mbps)

・・・ S 2

S3

S2

S3

S2

・・・

40 sec.

Starting to receive data

1 min.

Starting to play data

User's playback(1.5 Mbps)

Waiting time

図 1 : 放送型配信における待ち時間発生の様子

S1

S2

S3

Starting to play data
Waiting timeの待ち時間は，サーバが動画データの先頭部分を配

図 2 : 分割放送型配信における配信スケジュー

信した直後にクライアントが受信を要求した場合にル例（FB 法）最長となり，
動画データ一周期分の (60 * 1.5) / 3.0= 30 秒かかる．一方，サーバが動画データの先頭部

メントの分割比率を決定するスケジューリング手法

分を配信する直前にクライアントが受信を要求したが提案されてきた．

場合に待ち時間は最短となり，0 秒となる．以上よ

図 2 に，既存のスケジューリング手法である

り，図 1 の平均待ち時間は (30 + 0) / 2 = 15 秒

Fast Data Broadcasting and Receiving Scheme (以となる．

下，FB 法) [1] による配信スケジュール例を示す．
FB 法は，サーバが使用できる帯域幅を k 個のチャ

3. 複数動画の分割放送型配信

ネルに分け，動画データを 2k - 1 個のセグメントに

3.1 分割放送型配信の仕組み

等分割した上で，i 番目のチャネル Ci に連続した

分割放送型配信は，動画データを複数の部分（以2i-1 個のセグメントを配置する手法である．チャネ

下，セグメント）に分割して，最初のセグメントをルの帯域幅，動画データの再生レート，および再生頻繁に配信することで待ち時間を短縮する配信方式

時間は図 1 と同じとする．

である．例えば，図 1 で用いた動画データを二つの

図 2 の場合，サーバは使用できる帯域幅を 1.5

セグメント S1, S2 に等分割し，1.5 Mbps の二つ

Mbps の二つのチャネル C1, C2 に分割した上で，一のチャネル C1, C2 を用いて C1 で S1, C2 で S2 を続きの動画データを三つのセグメント S1, S2, S3

繰り返し配信する場合，クライアントは受信した S1,に分割して，C1 で S1, C2 で S2, S3 を繰り返し配信

S2 を途切れなく順番に再生できる．このとき，クラする．FB 法では，動画データを 2k - 1 個のセグメン

イアントの待ち時間は S1 の先頭が配信されるまで

トに等分割するため，S1, S2, S3 の分割比率は等しの時間であり，最長で (60 * 0.5 * 1.5) / 1.5 = 30

く，セグメントの再生時間は 20 秒となる．このと秒，最短で 0 秒となり，平均の待ち時間は (30 + 0)

き，
待ち時間は S1 の先頭が配信されるまでの時間と/ 2 = 15 秒となる．

なり，最長で (20 * 1.5) / 1.5 = 20 秒，最短で 0

分割放送型配信では，最初のセグメントのデータ

秒となり，平均待ち時間は (20 + 0) / 2 = 10 秒とサイズを小さくすることで再生開始までの待ち時間

なる．データを分割しない場合，およびデータを二をより短縮できるが，動画データの再生中にセグメ

つに等分割する場合の平均待ち時間はどちらも 15

ント間で途切れが発生する．この場合，再生中に途秒であり，スケジューリング手法を用いて分割する

切れが発生しないようにするため，途切れ時間分だ

ことで，待ち時間を約 33.3 % 短縮できる．以上よけ再生開始を遅らせる必要があり，全体の待ち時間

り，分割放送型配信において，セグメントの分割比は長大化する．そこで，動画データの再生中に途切率を決定するスケジューリング手法の導入は重要でれが発生しないようにした上で受信時の待ち時間をある．

短縮するため，動画データの配信条件に応じてセグ- 10 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

3.2 複数動画の同期配信の必要性
現在，サーバが複数動画をまとめて配信してクライアントが同時に視聴する環境は一般的になっている．例えば，通信カラオケの店舗で，ユーザの要望に応じて部屋の映像を撮影し，テレビ画面上に表示
するサービスが挙げられる．複数のカラオケ部屋でそれぞれ撮影された複数の映像を各部屋のテレビ画Time slot

T1

T2

T3

T7

T8

T9

T 10

Channel 1

S(1,1)

S(1,1)

S(1,1)

S(1,1)

S(1,1)

S(1,1)

S(1,1)

S(1,1)

S(1,1)

S(1,1)

Channel 2S(2,1)

S(2,1)

S(2,1)

S(2,1)

T4

S(2,1)

T5

S(2,1)

T6

S(2,1)

S(2,1)

S(2,1)

S(2,1)

Channel 3S(3,1)

S(3,1)

S(3,1)

S(3,1)

S(3,1)

S(3,1)

S(3,1)

S(3,1)

S(3,1)

S(3,1)

Channel 4S(4,1)

S(4,1)

S(4,1)

S(4,1)

S(4,1)

S(4,1)

S(4,1)

S(4,1)

S(4,1)

S(4,1)

Channel 5S(5,1)

S(5,1)

S(5,1)

S(5,1)

S(5,1)

S(5,1)

S(5,1)

S(5,1)

S(5,1)

S(5,1)

Channel 6

S(1,2)

S(2,2)

S(1,2)

S(2,2)

S(1,2)

S(2,2)

S(1,2)

S(2,2)

S(1,2)

S(2,2)

Channel 7S(3,2)

S(4,2)

S(3,2)

S(4,2)

S(3,2)

S(4,2)

S(3,2)

S(4,2)

S(3,2)

S(4,2)

Channel 8S(5,2)

idle

S(5,2)

idle

S(5,2)

idle

S(5,2)

idle

S(5,2)

idle

Channel 9S(1,3)

S(2,3)

S(3,3)

S(1,3)

S(2,3)

S(3,3)

S(1,3)

S(2,3)

S(3,3)

S(1,3)

Channel 10S(4,3)

S(5,3)

idle

S(4,3)

S(5,3)

idle

S(4,3)

S(5,3)

idle

S(4,3)

Channel 11

S(1,4)

S(2,4)

S(3,4)

S(4,4)

S(1,4)

S(2,4)

S(3,4)

S(4,4)

S(1,4)

S(2,4)

Channel 12S(5,4)

idle

idle

idle

S(5,4)

idle

idle

idle

S(5,4)

idle

Channel 13

S(1,5)

S(2,5)

S(3,5)

S(4,5)

S(5,5)

S(1,5)

S(2,5)

S(3,5)

S(4,5)

S(5,5)

Channel 14

S(1,6)

S(2,6)

S(3,6)

S(4,6)

S(5,6)

idle

S(1,6)

S(2,6)

S(3,6)

S(4,6)

Channel 15

S(1,7)

S(2,7)

S(3,7)

S(4,7)

S(5,7)

idle

idle

S(1,7)

S(2,7)

S(3,7)…

面上で同時に表示することで，ユーザは仮想的に一

図 3 : 複数動画の配信スケジュール例 (MV-B 法)

つのカラオケ部屋で他の部屋のユーザとカラオケをある．スケジューリング手順にもとづき，MV-B 法で楽しむことができる．

スケジューリングすると，セグメントがチャネルにサーバが周期ごとに複数動画を放送型でまとめてスケジューリングされない時間帯(以下，
アイドル時

配信する場合，一度に配信するデータサイズは大き間)が発生する．動画数を 5，チャネル数を 15 としくなり，再生開始までの待ち時間は長大化する．こた場合の配信スケジュール例を図 3 に示のため，待ち時間を短縮するスケジューリング手法

す．”idle”と表示されたタイムスロットがアイドの利用は，
複数動画の同期配信において重要である．

ル時間であり，チャネル 8，10，12，14，および 15
でアイドル時間が発生する．

3.3 複数動画の同期配信を考慮したスケジューリン

また，Multiple-video broadcasting scheme withグ手法

repairing (以下，MV-R 法) [2] は，MV-B 法で発生

これまでの分割放送型配信では，サーバはスケジするアイドル時間に他のセグメントを配信することューリング手法を用いて配信することで，クライア

で，MV-B 法より待ち時間を短縮する手法である．

ントの動画再生までの待ち時間を効率的に短縮していた．スケジューリング手法では，サーバが使用で4. 分割放送型配信システム TeleCaS

きる帯域幅，動画の再生単位，およびクライアント

4.1 概要の受信能力といった配信条件をもとに，各セグメン

これまでに提案されてきたスケジューリング手法

トをどのタイムスロットでどのチャネルから配信すの多くは，計算機上でのシミュレーション環境を想るかを決定する．一方で，分割放送型で複数動画を定している．このため，システムの処理負荷やパケ同期配信する場合，一度に配信するすべての動画デット損失による動画再生への影響を想定しておらず，ータについて待ち時間を短縮する必要があり，スケ

実際のネットワーク環境でスケジューリング手法をジューリングは複雑になる．

用いる場合に発生する影響を考慮していない．我々

複数動画の同期配信を考慮した既存のスケジューの研究グループでは，実際のネットワーク環境でス

リ ン グ 手 法 で あ る Basic multiple-video

ケジューリング手法を評価可能な分割放送型配信シ

broadcasting scheme (以下，MV-B 法) [2] は，複ステム Telecommunication and BroadCasting System

数動画の分割放送型配信において待ち時間を短縮す( TeleCaS ) [3] を提案してきた．しかし，TeleCaS

るスケジューリング手法である．動画数が m のとき，は，複数動画の同期配信や同時再生に対応しておらm 番目の動画の第 n セグメントは S(m, n) と表す．

ず，MV-B 法や MV-R 法を適用できない．そこで，また，j 番目のタイムスロット Tj までに I 番目のTeleCaS において，複数動画の同期配信および同時

動画の第セグメント S(i, j)を放送しなければなら再生を実現する．課題として，セグメントの配信契ない条件があり，この条件をスケジューリング条件

機を考慮した同期配信方式の実現，および複数動画とする．例えば，セグメント S(i, j) は Tj までにの同時再生方式の実現という二つの課題がある．

最低一つのチャネルにスケジューリングする必要が- 11 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

4.2 セグメントの配信契機を考慮した同期配信方式

Server computer

User computer

Server

分割放送型配信で提案されているスケジューリン

Segment 1

グ手法は，各チャネルで周期的にセグメントを配信

Segment 2

再生中に途切れ時間が発生する．例えば，遅延揺ら

Data flow

ぎの影響でセグメントの配信を同期できない場合，再生中に途切れ時間が発生する．
この課題に対処するため，我々の研究グループでReception function

HTTP server

Segment 3
・・・

する．
各セグメントの配信契機を同期できない場合，ClientUniquecommunication
protocolHTTP
threadHTTP
threadSegment

Process

Subsegment

ProtocolHTTP
Browser

複数動画の同期配信を実現する．この方法では，各FlashPlayer
・・・

・・・

Flash
Player

これまでに提案した配信契機の同期方法を用いて，・・・Function, plug-in

図 4 : 複数動画の分割放送型配信の構成

セグメントの配信契機を同期させることで，途切れ時間を短縮できる．また，複数の動画配信では動画を送信できず，複数の動画を同時に再生できない．

データを配信するチャネル数が増加するため，単一実現方式では，配信開始部を拡張して動画数およの動画配信と比べて配信開始時刻のずれによる影響

び動画識別子を追加することで，課題を解決した．

は大きくなる．そこで，複数の動画配信において，クライアントは，動画識別子を用いることで，各セ複数動画を分割した各セグメントを単一動画のセグ

グメントがどの動画に対応するかを識別できる．

メントとして処理する．これにより，複数の動画配信におけるセグメントの処理は単一の動画配信と同

4.3.2 複数動画の逐次再生方式の実現

様の処理となり，複数の動画配信におけるセグメン

従来の TeleCaS では，複数の再生プレイヤを同時トの配信契機の同期を実現できる．

に読み込むことができず，複数動画を同時に逐次再生できない問題がある．このため，受信した複数動4.3 複数動画の同時再生方式

画を同時に再生できず，複数の動画配信に対応した

TeleCaS で複数動画の同時再生に対応するため，

スケジューリング手法を TeleCaS に適用できない．

配信する複数動画の判別方法の提案，および複数動

この課題に対処するため，ブラウザと通信を行う

画の逐次再生方式の実現という二つの課題がある．

処理部をスレッド化する．TeleCaS における複数動
画の分割放送型配信の構成を図 4 に示す．
サーバは，4.3.1 複数動画の判別方式の提案

分割放送型配信の通信プロトコルを使用して，サブ

複数動画の配信において，サーバは一つのチャネ

セグメント単位でクライアントに動画データを送信

ルで複数の動画のセグメントを配信するようにスケする．クライアントは，ブラウザの読み込みから再ジューリングすることで，各動画の配信契機を同期

生プレイヤに動画データを転送するまでの部分をスできる．クライアントは，複数動画を同時に視聴すレッド化した上で，並列処理する．これにより，ブるため，複数のチャネルから同時に受信したセグメ

ラウザに埋め込まれた複数の再生プレイヤを同時にントを各動画に復元する必要がある．これまでの読み込むことができ，クライアントは複数の再生プ

TeleCaS のデータフォーマットは，配信開始部，おレイヤと同時に通信できる．また，配信開始部の動

よびセグメントを等分割した部分 (以下，サブセグ

画識別子をもとに各動画で先頭のサブセグメントをメント) をセグメントに復元する情報(以下，情報受信すると，クライアントは分割配信の通信プロト部)の二つで構成されていた．しかし，各セグメント

コルを逐次再生の通信プロトコルである HTTP に変がどの動画のどの部分かを示す情報はデータフォー

換して，対応する再生プレイヤにサブセグメントをマットに含まれていなかった．このため，クライア

送信することで，複数動画を同時に逐次再生できる．

ントは動画ごとに異なる再生プレイヤに動画データ- 12 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

Media data

ServerGigabit
Ethernet

Media data

Dummynet

Gigabit
Ethernet

Client

図 6 : 評価環境の構成

る待ち時間と途切れ時間の値を測定値とする．各ス
ケジューリング手法における待ち時間の理想値は，
第 1 セグメントの受信時間の半分とした．理想値の
図 5 : TeleCaS のスクリーンショット算出で必要となる第 1 セグメントのデータサイズは，4.4 実装スケジューリング手法にもとづき，評価に用いる各TeleCaS で複数動画の同期配信および同時再生に動画データを分割した第 1 セグメントのデータサイ

対応するように実装した．TeleCaS は，チャネル数，

ズの平均値とした．

帯域幅，およびセグメントの配信順序が異なるスケ

クライアントが一続きの動画データを再生終了まジューリング手法を導入できる．TeleCaS におけるで途切れなく再生するため，再生中に発生する途切

再生画面のスクリーンショットを図 5 に示す．
図 5

れ時間の分だけ動画の再生開始を遅らせる必要があ

は，3 種類の動画データを同時に再生している様子

る．そこで，待ち時間の測定値(以下，実待ち時間)を示す．
動画再生は，
Adobe Flash Player を用いた．

は，TeleCaS で測定する待ち時間と途切れ時間の合計値とした．また，TeleCaS で測定する待ち時間と

5. 評価

途切れ時間はクライアント計算機 3 台の平均値とし，5.1 評価環境

クライアントが動画データの受信をサーバに要求しTeleCaS の評価環境を図 6 に示す．実際のネットた時刻から測定を開始する．また，評価では，逐次ワーク環境を想定して，TeleCaS を導入した計算機

再生方式を用いることで，第 1 セグメントのうち先を複数台用いてネットワークを構成した．サーバ計

頭部分となるサブセグメントを受信すると再生を開算機とクライアント計算機は Gigabit Ethernet で始できる．

接続した．サーバ計算機とクライアント計算機の間
5.3 待ち時間に関する評価

は，帯域制御機能をもつ Dummynet を利用できる計算機を経由することで，ネットワークの帯域幅を制

複数動画の配信において，3 種類のスケジューリ

御する．本研究では，Dummynet により帯域幅を制御

ング手法を導入し，実際のネットワーク環境におけした上で，単位時間あたりに受信するデータ量を帯る実待ち時間の短縮効果を確認する．動画のデータ

域幅として算出する．また，マルチキャスト通信を

サイズを変化させた場合に発生する待ち時間の変化

用いることで，放送型による動画配信を実現した．

を図 7 に示す．横軸は動画のデータサイズ，縦軸はクライアント計算機で各動画の実待ち時間を同一条
件で 10 回求めた平均値とした．また，再生時間が異5.2 TeleCaS を用いた評価
実際のネットワーク環境でスケジューリング手法

なる動画データを使用して，動画のデータサイズをの有用性を確認するため，FB 法，MV-B 法，および変化させた．動画のデータサイズ以外の配信条件に

MV-R 法の 3 種類のスケジューリング手法を用いて，ついて，チャネルの帯域幅は 1.5 Mbps，動画の再生

TeleCaS 上で待ち時間および途切れ時間の評価を行

レートは 1.5 Mbps，ブラウザ内の再生プレイヤ数はう．計算機シミュレーションで算出される待ち時間

5 個，チャネル数は 15，および動画数は 5 種類とすの値を理想値とし，TeleCaS による配信で算出される．

- 13 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

40

Average waiting time (sec.)

35
30
25

6. おわりに

FB法(測定値)FB法(理想値)
MV-B法(測定値)
MV-B法(理想値)
MV-R法(測定値)
MV-R法(理想値)

本研究では，分割放送型配信システム TeleCaS において複数動画の同期配信を実現するため，セグメ

20

ントの配信契機を考慮した同期配信方式，および複15

数動画の同時再生方式を提案した．また，これらの

10
5
0
11.1

対処を TeleCaS で実装して評価を行い，実待ち時間
16.7

22.2
Data size of videos (MBytes)

27.8

33.3

の短縮効果を評価した．評価では，TeleCaS 上で複数動画に対応したスケジューリング手法を導入して，

図 7 : セグメントのデータサイズと平均待ち時間

待ち時間の短縮効果を確認した．
まず，理想値について説明する．図 7 より，FB

今後の予定として，動画再生中に発生する途切れ法と MV-B 法における平均待ち時間の理想値はどち

時間を短縮する方法の検討，およびパケット損失をらも等しい．15 個のチャネルで 5 種類の動画データ考慮したスケジューリング手法の導入がある．

を配信する場合，FB 法と MV-R 法の動画分割数は 7で同じであり，第 1 セグメントの大きさは等しいた【参考文献】

め，第 1 セグメントを受信する時間の半分である平[1] Juhn, L. and Tseng, L.: Fast Data Broadcasting

均待ち時間の理想値は一致する．一方で，MV-R 法のand Receiving Scheme for Popular Video Service,

動画分割数は 10 であり，
第 1 セグメントの大きさはIEEE Trans. on Broadcasting, Vol.44, No.1,

他の二つの手法より小さくなるため，MV-R 法におけpp.100-105 (1998).

る平均待ち時間の理想値は他の手法より短くなる．

[2] Chen, Y. and Huang, K.: Multiple Videos

次に，測定値の評価結果について説明する．図 7

Broadcasting Scheme for Near Video-on-Demandより，すべてのスケジューリング手法について，測Services, Proc. IEEE Int. Conf. on SITIS’08,

定値は理想値に比べて長大化する．例えば，動画デ

pp.52-58 (2008).

ータサイズが 22.2 Mbytes における FB 法の理想値[3] 木村明寛，後藤佑介，谷口秀夫：動画データをと測定値について考える．FB 法の理想値は，動画デ分割配信するシステムの実現と評価，電子情報通信

ータサイズが 22.2 Mbytes の第 1 セグメント (約学会論文誌 B，Vol.J96-B，No.10，pp.1217-1225

3.18 Mbytes) を受信する時間の半分であり，約 8.9(2013).

秒となる．一方，FB 法の測定値は，待ち時間が約 8.8秒，途切れ時間が約 11.0 秒であり，実待ち時間は合計で約 19.8 秒となる．この時間差は，シミュレーシ
ョン環境では考慮していない動画再生中の途切れ時間の影響によるものである．
また，動画データサイズが 22.2 MBytes の場合，
MV-R 法の測定値は，待ち時間が約 6.2 秒，途切れ時
間が約 15.5 秒であり，実待ち時間は合計で約 21.7秒となるため，FB 法より長い．一方，理想値では，
MV-R 法の待ち時間は FB 法より短い．測定値では，
動画再生中に発生する途切れ時間の影響により，ス
ケジューリングが FB 法に比べて複雑である MV-R 法の実待ち時間は大きく長大化する．

- 14 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

交流大電流通電を可能とする単相高温超電導変圧器を用いた
小型・軽量電源の開発
岡山大学 大学院自然科学研究科 産業創成工学専攻
七戸 希
高温超電導線は市販のものでも液体窒素温度 77K・自己磁場下で 1mm2 の断面積に 200A 以上の電流を電気抵抗ゼロで流すことができ，同線を用いた小型・高効率の電力機器の実現が期待されている。その機器開発のためには高温超電導線の通電特性を設計段階で十分把握しておく必要があり，その通電特性を把握するための試験には 1mm2 の断面積を持つ高温超電導線において 200A を超える通電が可能な大電流電源が必要となる。しかしながら，市販の特に交流電源では，一般に体積および重量が非常に大きく，設置場所の制約や設置後の移動の困難さなど利用性においてデメリットが大きい。よって，大学研究室等では導入が難しく，このことがひいては高温超電導電力機器の開発の妨げとなる。そこで，著者らは単相高温超電導変圧器を用いた小型・軽量かつ高効率の交流大電流電源の開発を行った。同変圧器の一次側に低電流電源を接続し，二次側にて 500A の電流を出力できる構成の電源であり，高温超電導変圧器を用いることで体積と重量を削減することができる。開発した電源の体積と重量は 0.02m3 と 16kg であり，それらは市販電源の約 1/12 となった。

1. まえがき

流電源を接続し，二次側にて最大 500A を通電可能な

低炭素社会の実現に貢献できる機器として，さら電源であり，高温超電導変圧器を用いることで体積にはスマートグリッドの主要構成機器として高温超と重量を削減することができる。なお，高温超電導[1]

電導電力機器の実用化が期待されている 。その機

変圧器を用いると冷却の必要性が生じるが，電源の器開発のためには同機器に用いられる高温超電導線

用途が高温超電導線の通電特性の測定であるため，の通電特性を設計段階で十分把握しておく必要があ

同線に冷却が必要であることから，並行して冷却する。同線は市販のものでも液体窒素温度・自己磁場ればよく，使用環境に適合した電源である。開発し2[2]

下で 200A/mm 以上の臨界電流密度を持っている た

た電源の体積と重量は 0.02m3 と 16kg であり，市販

め，1mm2 の断面積を持つ高温超電導線において通電

電源の約 1/12 となった。
以下に電源の構成と通電試験の結果について述べ特性を把握するためには 200A を超える通電が可能る。

な大電流電源が必要である。今後の高温超電導線の2特性向上や1mm 以上の断面積を持つ場合を考慮する
2. 電源の設計と，500A 程度の通電が可能な電源が望まれる。ところが，市販の特に交流電源は，体積および重量が非図 1 に電源の構成を示す。単相高温超電導変圧器

常に大きく，設置場所の制約や移動の困難さなど利

の一次巻線よりも二次巻線の巻数を小さくすること用性においてデメリットが大きく，小スペースしかで，一次側に接続した低電流電源の電流を二次側に持つことができない大学等の研究室では導入が難して増加させ，二次側で大電流を得る構成である。低い。このことは，ひいては超電導機器開発に関する

電流電源としては，高温超電導線の通電特性把握の基礎・応用研究の進捗に対して大きな妨げとなる。

ためには周波数可変型であることが必要である[4]た

そこで，本研究にて，交流大電流通電を可能とする

め，インバータを接続することを想定している。変単相高温超電導変圧器を用いた小型・軽量電源を開圧器の諸元を表 1 に示す。一次側定格値を 100V/30A

発した。本電源は，同変圧器の一次側に小型の低電とし，二次側で 6V/500A を出力するものである。一- 15 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

高温超電導変圧器

液体窒素
超電導試料

低電流電源

一次コイル
二次コイル

Z

鉄心

GFRPボビン
高温超電導線

大電流

低電流

冷却容器

図 1 電源構成

高温超電導変圧器

表 1 高温超電導変圧器の諸元
図 2 高温超電導変圧器の構成

一次コイル

二次コイル

内径

100 mm

83 mm

外径110 mm89 mm

らのコイルの中心に，図 2 右のように鉄心を通して

高さ

100 mm

100 mm

いる。鉄損低減のため，方向性電磁鋼板のカットコ

巻数

83

5

容量

100V/30A

6V/500A

アを用いている。
冷却容器には，図 2 右のように，巻線のみが冷却される構造の発泡スチロール容器を用いた。強度と次側定格値は，大学研究室等で容易に得ることがで断熱性を考慮し，発泡倍率 30 倍のものを使用し，厚きる電圧と電流値とし，これらの値を基準として，さはすべての箇所で 10mm である。
同容器に液体窒素

二次側に 500A が得られるようにした。

を入れることで巻線を冷却する。このとき鉄心は室

図 2 に高温超電導変圧器の構成を示す。同図左の温のままになるため，鉄心ごと冷却する場合と比較ように GFRP ボビンに高温超電導線をソレノイド状

して，冷却効率が高くなり，鉄損を低減することがに巻くことで一次コイルと二次コイルを作製した。

できる。

表 1 のように二次コイルの直径を一次コイルよりも

図 3 に作製した変圧器の写真を示す。一次側に接小さくし，図 2 右のように同軸に組み合わせた。こ続する低電流電源（インバータを想定）を含めた電のように作製することで，もれ磁場の低減をするとともに巻線への印加磁場も低減している。後者により，高温超電導線で生じる交流損失[3]の低減と，臨界電流の低下の抑制をすることができる。巻線に用い た高 温超電 導線は 住友 電気 工業の DI-BSCCO（Bi2223 線）であり，一次巻線には Type S を 1 本，
二次巻線には Type H を 5 本 1 束のケーブにしてそれぞれ用いた。どちらもテープ形状の線であり，Type S
は幅 2.4mm，厚さ 0.19mm，臨界電流 73A（77K，自己磁場），Type H は幅 4.3mm，厚さ 0.23mm，臨界電流190A（77K，自己磁場）である。一次巻線と二次巻線の臨界電流はともに定格電流の 2 倍程度となってお図 3 高温超電導変圧器の写真

り，安全のために余裕を持たせた設計とした。これ- 16 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

源全体の総体積と総重量は 0.02m3 と 16kg であり，同図(b)は変圧器二次側に発生した出力電圧である。

市販電源の約 1/12 となった。

一次電圧のピーク値は 83V，二次電圧は 5V となって

なお，本電源に用いられる高温超電導変圧器のよおり，表 1 の巻数比どおりの電圧になっていること

うに，高温超電導線を用いた電力機器には，通電中がわかる。同図(c)は一次側通電電流，同図(d)は 10mの電気抵抗の発生による焼損事故を防止するためにΩの抵抗器に流れる出力電流である。一次側電流の保護システムを取り付けることが必須である。これピーク値 30A に対して二次側電流のピーク値は 500Aについては著者に多くの開発実績[5]があり，これらとなっており，巻数比どおりの電流が流れているこを本変圧器に適用できるように改良することで安全とと目標値の 500A 通電を達成できたことがわかる。

性の確保も実現している（研究成果[6]）。

どちらの電流波形にもひずみが無く，交流電源として活用できることが見込まれる。

3. 通電試験作製した高温超電導変圧器を用いて，目標の 500A

4. まとめ本研究にて，高温超電導変圧器を用いた小型・軽た。試験では，図 1 の低電流電源としてスライダッ

量の交流大電流電源の開発を行った。一次巻線よりクを，二次側には超電導試料を想定して 10mΩの抵も二次巻線の巻数を小さくし，一次側に低電流を通抗器を接続して通電を行った。試験結果を図 4 に示電して二次側で大電流を出力する構成の電源であり，す。
同図(a)はスライダックにより印加した一次電圧，

ソレノイド形状の一次および二次コイルを Bi2223

100

6

50

3
v2 (V)

v1 (V)の通電が行えるかを検証するための通電試験を行っ

0
-50

-100
0

0
-3

0.05
Time (s)

-6
0

0.10

30

500

15

250

0

0

-15

-250

-30
0

-500
0

0.05
Time (s)0.10(b) 二次電圧

i2 (A)i1 (A)(a) 一次電圧

0.05Time (s)0.10(c) 一次電流

0.05Time (s)(d) 二次電流

図 4 通電試験結果- 17 -0.10

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

高温超電導線にて作製して同軸に組み合わせ，鉄心Student Symposium, No. B-28, 2015.11.21-22,を通すことで変圧器を構成し，液体窒素にて両コイ

岡山大学

ルのみが冷却され，鉄心は室温に保持される構造の[5] 岸 紀行, 七戸 希，
単相 Bi2223 高温超電導変圧冷却容器を作製した。一次側定格値を 100V/30A，二器のインバータ通電における損失特性，平成 27

次側定格値を 6V/500A として作製し，通電試験を行

年度（第 66 回）電気・情報関連学会中国支部連ったところ，二次側にひずみの無い電流を最大 500A

合大会, No. 3-1, 2015.10.17, 山口大学まで通電することができ，設計どおりの通電を達成[6] 小出 哲之, 七戸 希，有効電力法を用いた単相3できた。また，開発した電源の体積と重量は 0.02m

Bi2223 高温超電導変圧器の常電導転移保護シと 16kg となり，ともに市販電源の約 1/12 にするこ

ステム，平成 27 年度（第 66 回）電気・情報関とができた。

連学会中国支部連合大会, No. 3-1, 2015.10.17,

また，本研究に関係する研究として，現在，以下

山口大学を進めている。

[7] 中村 槙吾, 七戸 希，有効電力法を用いたハイ・一次コイルのみ銅コイルとしたハイブリッド変

ブリッド単相 Bi2223 高温超電導変圧器の常電圧器の検討

導転移保護システム，平成 27 年度（第 66 回）

・アモルファス鉄心の使用

電気・情報関連学会中国支部連合大会, No. 15-9,・高温超電導線として YBCO 線の使用

2015.10.17, 山口大学

・電源を周波数可変にすることを目的としたインバータの使用と通電特性解析

参考文献

以上の検討により，さらなる小型・軽量化，高効[1] 電気学会, 超電導電力機器とシステムの高性率化を行い，実用性の高い電源を開発していく。

能・多機能化, 電気学会技術報告，第 1290 号(2013)

研究成果[2] Tomohiro Kagiyama, et al., Recent R&D[1] 門脇 良, 七戸 希，有効電力法を用いたハイブ

progress on DI-BSCCO wires with high critical

リッド単相 YBCO 高温超電導変圧器の常電導転

current properties, Physics Procedia, Vol.

移保護システム，第 17 回 IEEE Hiroshima

27, pp. 256-259 (2012)

Student Symposium, No. A-29, 2015.11.21-22,[3] 仁田旦三，超電導エネルギー工学，オーム社，

岡山大学

pp.36-45 (2006)[2] 田中 雄飛, 岸 紀行, 七戸 希，単相 Bi2223 高[4] K. Wakasugi, S. Murase, F. Naito, S. Shimamoto,

温超電導変圧器のインバータ通電における電流

Effects of frequencies and temperatures on

ひずみ抑制，第 17 回 IEEE Hiroshima Student

self-field

Symposium, No. A-30, 2015.11.21-22, 岡山大Physica C, Vols. 357-360, pp. 1209-1212

学(2001)[3] 小野 孝晃, 小出 哲之, 七戸 希，単相 Bi2223

loss

for

Ag/Bi-2223

tapes,[5] For example, N. Nanato, Y. Kobayashi, Quench

高温超電導変圧器を用いた小型交流大電流電源

Detectionの開発，第 17 回 IEEE Hiroshima Student

Temperature Superconducting Transformers by

Symposium, No. A-31, 2015.11.21-22, 岡山大Using the Active Power Method, Physics

学

Procedia, Vol. 58, pp. 264-267 (2014)[4] 田中 慎一, 中村 槙吾, 七戸 希，
ハイブリッド単相 Bi2223 高温超電導変圧器を用いた小型交流大電流電源の開発，第 17 回 IEEE Hiroshima- 18 -

andProtection

for

High

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

脱水素ケイ素化およびリン化反応を利用した新規求核分子触媒の創製
岡山大学大学院 自然科学研究科
村井 征史
脱水素を伴う炭素 水素結合の触媒的な官能基化は、原子効率や環境調和性の観点から有用である。しかし、
ヘテロ原子を含む配位性補助基を持たない芳香環の官能基化法は限られており、これまでに報告されている手法では、高温や大過剰の芳香族化合物を用いることが必須であった。これに対し、本研究では、イリジウム錯体を用いることで、芳香族化合物の炭素 水素結合のケイ素化反応が、触媒的に効率よく進行することを見い出した。本反応により、水素を副生するだけで、酸化的ハロゲン化や玉尾酸化、檜山クロスカップリング反応
により、ハロゲンやヒドロキシ基、アリール基を始めとした多様な官能基へと容易に変換可能なシリル基を、芳香環に一段階で導入できた。詳細な検討により、反応は電子不足かつ縮環数の多い芳香環ほど、円滑に進行し、位置選択性は立体障害によってコントロールされることが分かった。すなわち、今回のケイ素化に基づく官能基化は、臭素化に代表される従来法とは完全に異なる反応性を示し、求核触媒を含む新規分子の開発に、非常に有用であることが明らかとなった。

研究申請の段階において、本申請者は、遷移金属には二座窒素配位子の使用が効果的であることや、触媒存在下、ヒドロシランをアズレンに作用させる

イリジウムと同じ 9 族の対応するロジウム錯体

ことで、脱水素を伴うアズレンの炭素 水素結合の[Rh(OMe)(cod)]2 を用いた場合、反応がほとんど進行

ケイ素化反応が起こることを見い出していた。ここ

しないことが分かった（entries 3-6）。

で導入されるシリル基は、酸化的ハロゲン化や玉尾Table 1. Optimization of reaction conditions

酸化反応、檜山クロスカップリング反応により、ハ
ロゲンやヒドロキシ基、アリール基を始めとした、多様な官能基へと容易に変換可能である。この知見を基に、本申請課題「脱水素官能基化を利用した求核分子触媒の開発」への第一歩として、まず、様々な芳香族化合物に適用可能な、汎用性の広い脱水素
ケイ素化反応の確立を目指すことにした。
触媒量のイリジウム錯体 [Ir(OMe)(cod)]2 と配位
子 3,4,7,8-テトラメチル-1,10-フェナントレン tmphen
存在下、
ナフタレンにトリエチルシランを作用させ、100 oC で 9 時間反応させると、2-シリルナフタレン
が収率 70%で得られた（Table 1, entry 1）。この時、
ナフタレン環の 1 位の炭素 水素結合のケイ素化による 1-シリルナフタレンは全く副生しなかった。本反応では、反応の進行に伴い水素が副生するが、そ[Ir(OMe)(cod)]2 触媒と tmphen 配位子存在下、様々の効率的な捕捉のために 3,3-ジメチル-1-ブテンの添な芳香族化合物のケイ素化を検討した（Table 2）。そ加が必須であった。また、円滑な反応の進行のため- 19 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

Scheme 1. Iridium-catalyzed dehydrogenative silylation
with benzyldimethylsilaneの結果、電子求引性および供与性の置換基を有する
種々のナフタレン誘導体がトリエチルシランと反応し、対応する -シリルナフタレンを与えることが分かった（entrirs 1-3）
。なお、電子不足な芳香族化合物のケイ素化は非常に速く進行し、ジシリルナフタ
レン誘導体の副生もわずかに確認された（entries 1
and 3）。本反応はヘテロ原子を含むイミド誘導体や興味深いことに、イリジウム触媒を用いる本反応

アントラセン、フェナントレン、ピレンに対しても条件下では、ベンゼンが共存していてもナフタレン

円滑に進行し、それぞれ対応する芳香族シランを中が選択的にケイ素化された（Scheme 2）。現段階では程度の収率で与えた（entrirs 4-7）。芳香環の電子的

この反応性の序列は、芳香族化合物とイリジウム活な性質に依らず、いずれの場合にもケイ素化は立体性種の相互作用の強さに依存すると考えている。す

障害の最も小さい位置で選択的に起こった。さらに

なわち、芳香族共鳴安定化エネルギーはベンゼン環

本反応には、檜山クロスカップリングに利用可能なの縮環に伴って低下するため、ナフタレンの二重結

ベンジルジメチルシランも適用できた（Scheme 1）。
Table 2. Iridium-catalyzed dehydrogenative silylation ofpolycyclic aromatic compounds

合の結合次数は、ベンゼンよりも高くなる。これによりイリジウム中心はベンゼンよりもナフタレンにより強く -配位し、選択的なケイ素化を起こしたと考えられる。
Scheme 2. Selective dehydrogenative silylation ofnaphthalene in the presence of benzene (Si = SiEt3)

以上の知見を踏まえ、反応の推定機構を Figure 1に示した。まず、tmphen が配位した [Ir(OMe)(cod)]2
錯体にヒドロシランが酸化的付加した後、還元的脱離を経てイリジウムヒドリド種が生成する。ここにヒドロシランが酸化的付加し、水素捕捉剤へ挿入、還元的脱離を順にすることで、イリジウムシリル種
A へと変換される。これが芳香環に -配位し、B に示すように環上で固定される結果、ケイ素化が効率よく進行したのだと考えられる。
一方、イリジウム触媒を用いる本反応条件下で、芳香族化合物にビスピナコラートジボロンを作用させると、炭素 水素結合の直接ホウ素化反応が進行することが分かった。この反応性を利用し、イリジ
ウム触媒存在下、ピレンにヒドロシランとジボロンを連続的に作用させたところ、ピレンの長軸方向に- 20 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

る位置で官能基化が選択的に起こり、化合物を見分けて選択的に官能基化をすることもできた。本反応
はこのような特異な位置および化学選択性の発現に加え、ヘテロ原子の配位を要さずに芳香族の炭素水素結合の官能基化を進行させた非常に珍しい例である。今後、本研究で得られた知見を応用し、新規
求核分子触媒の創製に取り組む予定である。
Figure 1. Plausible reaction mechanism (tmphen ligand
is omitted for clarity, and Si indicates SiR3)
位置選択的にシリル基とボリル基を一段階で導入することができた(Scheme 3)。これらの官能基は、パラジウム触媒を用いる鈴木・宮浦クロスカップリン
グ反応と、炭素 水素結合の直接アリール化反応により、それぞれ選択的に変換でき、ドナー部位とアクセプター部位を有する二官能性ピレンを短段階でFigure 2. Challenge in the functionalization of polycyclicaromatic compounds

合成することもできた。
Scheme 3. One-pot, site-selective silylborylation of
pyrene and its synthetic application to donor-acceptor
substituted pyrene

発表論文 (査読付き論文)(1) “Palladium-Catalyzed Direct Arylation of Azulene
Based on the Regioselective C H Bonds Activation”
Murai, M.*; Yanagawa, M.; Nakamura, M.; Takai,
K.* Asian Journal of Organic Chemistry 2016,
Accepted.
(2) “Synthesis of Sila[n]helicenes via Dehydrogenative
Silylation of C H Bonds under Rhodium Catalysis”
Murai, M.*; Okada, R.; Nishiyama, A.; Takai, K.
Under review.
(3) “Rhodium-Catalyzed Synthesis of Chiral Spiro-9-silabifluorenesvia

Dehydrogenative

Silylation:

Mechanistic Insights into the Construction of
Tetraorganosilicon

Stereocenters”

Murai,

M.*,

Takeuchi, Y.; Yamauchi, K.; Kuninobu, Y.; Takai,
K.* Chemistry –A European Journal 2016, 22,以上、本研究では、様々な芳香族化合物に適

6048-6058 (Selected as a Hot Paper).

用可能な、脱水素を伴う炭素 水素結合のケイ素(4) “Molybdenum-Catalyzed Stereospecific Deoxy-化反応を確立した。通常の芳香環の官能基化は臭

genation of Epoxides to Alkenes” Asako, S.; Sakae,

素化に代表されるように、芳香環の電子的要因に反T.; Murai, M.; Takai, K.* Under review.

応性や位置選択性が支配され、電子豊富な化合物に(5) “Short Synthesis of [5]- and [7]Phenacenes with Silylしか適用できない（Figure 2）。一方、今回のイリジ

Groups at the Axis Positions” Roy, D.; Maekawa, H.;

ウム触媒を用いる手法は、立体障害が最も小さくな- 21 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

Murai, M.*; Takai, K.* Chemistry –An Asian Journal,

gem-Biszinciomethane2015, 10, 2518-2524.

Nitrogen Ligands” Nishida, Y.; Hosokawa, N.; Murai,(6) “Rhodium-Catalyzed Synthesis of BenzosilolometalloBonds” Murai, M.*; Matsumoto, K.; Takeuchi, Y.; Takai,(15) “Iridium-Catalyzed Intermolecular Dehydrogenative
Silylation of Polycyclic Aromatic Compounds without

K.* Organic Letters, 2015, 17, 3102-3105.
(7) “Rhenium-Catalyzed Efficient Stereospecific Deoxy-

Directing Group” Murai, M.*; Takami, K.; Takai, K.*

genation of Unactivated Aliphatic Epoxides to Alkenes”

Chemistry -A European Journal, 2015, 21, 4566-4570.

Nakagiri, T.; Murai, M.*; Takai, K.* Organic Letters,
2015, 17, 3346-3349.
(8) “Acceleration Effects of Phosphine Ligands on the
Rhodium-Catalyzed Dehydrogenative Silylation andGermylation of Unactivated C(sp3) H Bonds” Murai,
M.*; Takeshima, H.; Kuninobu, Y.; Takai, K.* Journal of
Organic Chemistry, 2015, 80, 5407-5414 (Selected as a

Featured Article and ACS Editor’s Choice).
(9) “Iridium-Catalyzed Dehydrogenative Silylation of
Azulenes Based on the Regioselective C H Bonds
Activation” Murai, M.*; Takami, K.; Takeshima, H.;
Takai, K.* Organic Letters, 2015, 17, 1798-1801.
(10) “Rhenium-Catalysed Dehydrogenative Borylation ofPrimary and Secondary C(sp3) H Bonds Adjacent to a
Nitrogen Atom” Murai, M.*; Omura, T.; Kuninobu, Y.;
Takai, K.* Chemical Communications, 2015, 51,4583-4586.

(11) “Palladium-Catalyzed Synthesis of 3-Acyl-2-aminoThree-Component

Coupling

Reactions of 2-(Cyanomethyl)phenols with Aryl
Halides and CO” Murai, M.; Okamoto, K.; Miki, K.;
Ohe, K.* Tetrahedron 2015, 71, 4432-4437.
(12)“Transition Metal-Catalyzed Facile Access to

3,11-Dialkylfulminenes for Transistor Application”
Murai, M.*; Maekawa, H.; Hamao, S.; Kubozono, Y.;
Roy, D.; Takai, K.* Organic Letters, 2015, 17, 708-711.
(13)“Rhenium-Catalyzed anti-Markovnikov

Addition

Reaction of Methanetricarboxylates to UnactivatedTerminal Acetylenes” Hori, S.; Murai, M.*; Takai, K.*
Journal of American Chemical Society, 2015, 137,
1452-1457.
(14)“Isolation

andStructuralwith2015, 137, 114-117.

cenes via the Dehydrogenative Silylation of C(sp ) H

via

Stabilized

M.*; Takai, K.* Journal of American Chemical Society,2benzofurans

Complexes

Characterizationof- 22 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

江戸期の巨石樋門・倉水門の撤去に関わる３Ｄレーザースキャナによる記録保存および文献調査【経過報告】
岡山大学大学院環境生命科学研究科
樋 口 輝 久倉敷市亀山と帯高の間を流れる 2 級河川・六間川に位置する倉水門は，潮除け水門として宝永 4（1707）年に築造されたもので，全幅 10m（2 連），花崗岩の石梁を大胆に使用した典型的な岡山式の石造樋門であると同時に，岡山県内に現存する最古の巨石樋門でもあり，非常に貴重な土木遺産である．その倉水門が，岡山県の河川改修事業によって撤去されることになったが，地域住民による保存活動が行われたため，撤去はされるものの，解体された石材を保管し，倉敷市によって近くの公園で一部復元されることになった．そこで本研究では，貴重な土木遺産を 3D レーザースキャナ計測によって記録保存を行い，解体後の復元のために活用するとともに，関係する古文書を収集，分析する．当初，平成 26 年度に予定されていた撤去作業が，工事の遅れによって
平成 27 年度に延期されたが，さらに延期されたため，3D レーザースキャナ計測が実施できず，平成 28 年度に持ち越すこととなった．

１．研究の目的

２．研究の内容と進捗状況

倉水門の撤去に対して，地域住民が岡山県と倉敷

本研究では，記録保存のための実測調査と，関係

市に保存の要望書を提出したにもかかわらず，河川する古文書等の文献調査を実施する予定であった．

拡幅のため現位置での保存は不可能との判断で，移実測調査は，倉水門が撤去作業される際，上部構設についても予算的に不可能との結果であった．そ造（水面より上）について，固定レーザースキャナの後，倉敷市との協議によって，撤去される樋門のによる3D計測を行い，河川を締切り，水抜きをした石材の一部を付近の公園でモニュメントとして再利

後に，水面より下の部分と基礎構造を計測する予定

用し，残りは市の所有地に保管しておくことでまとであったが，撤去作業が当初の平成27年2～3月からまった．石材を丁寧に取り外し，保存しておくこと

平成27年12月～平成28年（本年）2月に延期され，そ

によって，
将来，
倉水門を復元する道筋が残された．

の後，さらにそれも延期された．

しかしながら，
倉水門は文化財に指定されておらず，

ところが，年度が明けた本年4月に，5月16日から

岡山県および倉敷市の教育委員会は記録保存の予算

出水期の6月15日までに撤去されることが示された．

すら確保できないため，代表研究者が将来の倉水門

事業主体である岡山県に対しては，将来の復元のた復元に向けた記録保存をしようとするものである．

めに実測調査を行う時間の確保と丁寧な石材の撤去

今，計測をして記録を残しておかなければ，二度とを，再三にわたって申し入れていたにもかかわらず，300年以上にわたって干復元できなくなるばかりか，

1ヶ月という短い工期では，いずれも充分な成果を得

拓地の生命線として機能し，地域で親しまれてきたるのが厳しい状況となった．

倉水門の存在そのものが忘れ去られてしまう．
また，

なお，解体の際は，将来の復元に備え，城郭石垣

歴史的構造物にとって，撤去は最悪の結果であるが，の解体復元の手順と同様に石材に番号を付して記録

江戸期の石造樋門が稀少となった今日，その撤去作する予定であったが．とてもそのような時間的な余業によって当時の築造技術，とりわけ基礎構造が明裕はなくなってしまった．さらに，再利用する一部

らかとなる貴重な機会でもあり，本研究の果たす学の石材以外は，重機によって強制的に撤去する旨も術的役割は高い．

示された．当然のことながら，水門本体の解体撤去- 23 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

後，土中の基礎部分を段階的に掘削し，当時の基礎構造，築造技術を確認しながら計測することは不可能となった．
３．今後の予定
水門の撤去作業が始まる直前（5 月中旬）に，施工業者と日程調整をしながら，上部構造（水面より上）の 3D レーザースキャナ計測を実施する．また，水面下の橋台，橋脚については，締切後，重機で石下流側橋梁部より積が撤去される前に，工事の進捗状況を確認しながら，右岸側（5 月下旬）
，左岸側（6 月上旬）を順次計測する．
残念ながら，いつの日かの完全復元は不可能となったが，新たな土地を生み出し，300 年以上にわたって地域のシンボルとして存在した倉水門の記録と合わせ，歴史的構造物の保存にむけた将来への教訓として今回の事業主の一連の対応を，計測結果がまとまり次第，報告したい．

上流側の梁と樋柱

左岸上流側より昭和 20 年の改修記念碑

六間川の上流より- 24 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

河川堤防の安全な維持管理のための総合的照査方法の確立
岡山大学大学院 環境生命科学研究科
金 秉洙

本研究では，河川堤防の地盤材料であるまさ土のみで細粒分含有率(Fc) 10%，25%，40%，50%を調整し，細粒分合有率による不飽和土力学特性及び浸透特性を定量的に評価した．まず，一定含水比圧縮試験結果により，細粒分含有率(Fc)が増加するほど，初期飽和度(Sri)が減少するほど，土のせん断強度が増加することが確認できた. この結果により，Fc= 25%以上になれば，降雨時の水位上昇に対して河川堤防が高い飽和状態(Sr=70%以上)でも効率的かつ安全に堤防の維持管理が期待されると考えられる．また，一定含水比圧縮試験の試験結果(pnet，
q)の関係に SSM により求めたサクション応力(ps)を有効拘束応力として適用し，その関係を評価した．そして，
理論式と実験結果から導いた見かけの粘着力(Δc)の比較により，細粒分含有率によるせん断強度の結果を評価した．これらの結果により，河川堤防の地盤材料において細粒分合有率の重要性が明らかになったと考えられる．
有率の提案を目指す．
１．はじめに
２．理論的背景

本研究では，まず試料となる高梁川堤防から採取

２.１ サクション(Suction，s)

したまさ土について物性試験を行ない，土の物性を把握する．その後，試料の細粒分含有率を減少させ

土塊の間隙空間が完全に水で満たされていない不ながら締め固め試験を行い，各細粒分含有率におけ飽和土には，メニスカス水が土粒子間に生じることる締め固め曲線を導き，各締固め度の結果が堤防設で飽和土の場合と異なり，間隙水圧(uw)だけではな

計の基準を満足しているかを評価する．次に変水位

く，間隙空気圧(ua)が作用する．マトリックサクショ

透水試験を行い，各細粒分合有率における保水性試

ン，s（以後，サクションと呼ぶ）は，これら間隙空験を行い，水分特性曲線を求めた．続いて，力学的

気圧と間隙水圧の差として定義される．よってサク特性に関しては，飽和状態での圧密非排水三軸圧縮

ションは，s=ua-uw で表される．

試験(CU)を行い，細粒分合有率による粘着力と内部摩擦角を把握する．また，不飽和状態での一定含水

２.２ 不飽和せん断強度に対するサクションの影響

比圧縮試験を行い，細粒分合有率による土の不飽和

水のメニスカスが生じて，土にサクションが作用

せん断強度の増減について調べ，土のせん断強度とすると，土粒子間に吸い込む力が生じる．この粒子

関連するサクションと細粒分合有率の関係を明らか

間力は，土粒子間の滑りに対する抵抗を増加させ，に す る ． 最 後 に ， SSM (Suction stress – SWRC

その結果，不飽和土のせん断強度を増加させる．一

Method：Kim et al. 2010)を適用により，細粒分合有

般的に，不飽和土せん断強度式は，Bishop and Blight率による各供試体のサクション応力(ps)を求め，有効(1963)の提案式を始め，飽和土せん断強度の理論を拘束圧力として適用する．これらの結果により，細拡張して提案されてきた．

粒分合有率による不飽和土せん断強度の変化と飽和状態の破壊線との関係を評価し提体材料の細粒分合τ- 25 -

c σtanc(1)

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

ここで，c：飽和粘着力，σ：鉛直全応力，φ：内部

表-1 物性試験結果

摩擦角，Δc：見かけの粘着力である．

項目

物理値

土粒子の密度（ρs）

2.58 (g/cm3)

不飽和土では，飽和土せん断強度式(τ=c+σtanφ)

液性限界(wL)

N.Pに見かけの粘着力(Δc) が加わることで，全体とし

塑性限界(wP)

24.6 (%)てせん断応力が大きくなる．また，代表的には，最大乾燥密度(ρdmax)

1.88 (g/cm3)

Fredlund et al. (1978)，軽部ら(1996)および Vanapalli etal. (1996)は，見かけの粘着力に対して，次式を提案

表-2 まさ土の粒度特性

した．

項目
c

Sr Sr 0s
1 Sr 0tan(2)

ここで， Sr : 現在の飽和度， Sr0 :残留状態の飽和度， s ：サクションである．

通過率

礫 分（75～2mm）

2.8（%）

砂 分（2～0.075mm)

78.8（%）

細粒分（0.075mm 以下）

18.4（%）

細粒分含有率(Fc)18.4（%）

平均粒径(D50)

0.38（mm）

100

Passing percentage (%)

２.３ 土中水の分布の影響およびサクション応力
平衡状態における土中の水分量とサクションの関
係は，水分特性曲線として知られている．乾燥過程と湿潤過程での水分特性曲線の差は，ヒステリシスと呼ばれている．よって，同じサクションでも，乾燥過程と湿潤過程では，異なる土中水の状態が存在する．土中水の状態が異なれば，その結果として間

80

60

40
Fc=18.42%
Fc=10%
Fc=25%
Fc=40%

200

隙水の分布状態が変わる．

0.01

0.1

1

10

100

Particle size, d (mm)

メニスカス水により生じるサクションは内部粒子間力を増加させて，それによって土骨格の剛性を増

図-1 細粒分合有率によるまさ土の粒度分布曲線加させる．一方，バルク水により生じるサクション
は土骨格の剛性を増加させて，同時に負の間隙水圧

軽部ら(1996)は，締固めたカオリン試料に対すると同じ作用によって土骨格を圧縮して体積を減少さ三軸試験の結果を解析した．その結果，せん断過程

せる．このような影響は負の間隙水圧の影響と同じ中 の試料 の最 大体 積圧縮 状 態で 同じ 拘束 圧力ものである．

( p netp s )に対して，せん断応力が一定の関係を示

軽部ら(1996)は，メニスカス水の影響で生じる応すことが分かった．加藤ら(2001)は，締固めたシル

力成分をメニスカス応力( p m )，バルク水の影響で生ト試料に対してサクションと体積変化を測定しながじる応力成分をバルク応力( p b )で名付けた．また，

ら一軸圧縮試験を行った．その結果から，拘束応力

二つの応力成分の和が次式のようにサクション応力に対する一軸圧縮強度の関係がユニークになること( p s )を構成するとした．また, 彼らはサクション応を示した．このようなサクション応力は Bishop

力として，次式を提案した．

の有効応力式のにより次式のように表されると考えられる．
psSr Sr0
s
1 Sr0

(3)

ps

- 26 -s(4)

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

3．試料および物理特性

2.0
3dmax= 1.88 g/cm

ze

wopt= 13.1%

d (g/cm3)

本研究では，高梁川堤防から採取したまさ土の物
理特性の把握のために，土粒子密度試験，液性・塑Dry density,性試験，締固め試験，粒度試験の 4 つの試験を行った. これらの結果は，表-1 と表-2, 図-1 と図-2 に示す．また，締固め試験(A-a 法)においては各細粒分含有率(Fc)による締固め特性を把握し，後述する圧密非

1.9

ro

rv

oi

ds

1.8

cu

rv

e

1.7

排 水 三 軸 圧 縮 試 験 (CU) や 一 定 含 水 比 圧 縮 試 験

F =18.42%c
F =10%c
F =25%c
F =40%c
F =50%c3
d=1.692 g/cm

1.6

1.5

6

8

10

12

14

Water content,(CWCC)での各細粒分含有率(Fc)において，締固め度

ai

16

18

20

(%)

図-2 細粒分合有率による締固め曲線(Dc)が 90%以上を満足していることが確認できる．
圧密非排水三軸圧縮試験(CU)により求められたモ

表-3 c と φ の関係

ール・クーロンの破壊基準からの粘着力(c)と内部摩擦角(φ)は，表-3 に示している．

４．保水性試験
保水性試験は，セル内の供試体に空気圧（正圧）Fc (%)c (kPa)

φ (°)

10
25
40
50

10.0
5.0
16.0

23.4
23.2
16.2

す曲線として不飽和地盤の固有特性を現わしており，を負荷し，供試体から排水される水分量を記録する

地盤の強度と挙動特性を決める非常に重要な基本物試験である．本研究では，加圧法を採用し，サクシ性である．これらの水分特性曲線をフィッティング

ョンと飽和度の関係である水分特性曲線(soil-water

するために，以下の Fredlund and Xing (1994)の提案

content(retention) curve: SWCC or SWRC)を求め，細粒式を用いた．

分含有率(Fc) 10%，25%，40%，50%による水分特性
曲線の変化を把握することが目的である．

θ C(ψ)

供試体は，一定含水比圧縮試験に用いる試料と同θsmln[e (ψ / a ) n ](5)

じまさ土を用いて静的締固め法によって作製した．
供試体サイズは，直径 60 mm であり，試験時間を短

ここに， θ ：体積含水率， ψ ：全サクション(kPa)，

縮するために供試体高さを 10 mm とした．細粒分合θs ：飽和体積含水率，e：ネイピア数(2.71828)，

有率による各供試体の初期条件は，乾燥密度(1.692

C(ψ ) ：修正関数である.

g/cm3，ρdmax の 90%)，初期飽和度，約 80%である．
試験手順としては，まず供試体を飽和させ，試験C(ψ)

を行った．本研究での保水性試験では，所定の鉛直応力を与えず，セル圧を段階的に増加させて排水過程を行った．供試体に与えるセル圧としての空気圧
は，段階的に 2

5

10

20

50

100

200

1

ln(1 ψ/ψr )ln(1 106 /ψ r )

(6)

Ψ：
ここに，
r 残留体積含水率に対応するサクション，

400

a：フィッティング変数(空気侵入値と密接な関係を

kPa まで加えられた．各空気圧での排水量が一定に持つ)，
n：フィッティング変数(水分特性曲線の勾配)，収束すると，次の段階に移った．

m：フィッティング変数(残留含水率と密接な関係を

細粒分含有率(Fc) 10%，25%，40%，50%において持つ)である．

保水性試験を行った．サクション(s) と飽和度 (Sr)の関係を示す水分特性曲線を図-3 にまとめている．
水分特性曲線は，含水量による吸水力の変化を現わ- 27 -

本 研究 に 用 い た 試 料 で は ， 浸 透 サ ク シ ョ ン

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

100でのトータルサクション( ψ )は，空気圧によるサク90ション(Matric suction)と等しいと仮定した．表-3 は，まさ土試料の試験結果に対して式(5)を適用して得られたフィッティング変数を示している．
図-3 では，細粒分合有率による水分特性曲線をそれぞれ示しており，それらフィッティングパラメーターは，表-4Degree of Saturation, Sr (%)(Osmotic suction)の影響がほとんどないと考え，式(5)

80
70
60
50
40
30

F&X model
F =10%c20

F =25%c1000.1にまとめた．図により，飽和度が減少と共にサクシ

F =40%c
F =50%
c

1

10

100

1000

10000

Suction, s (kPa)

ョンの値が増加していること分かる．つまり，供試体から排水量が発生するほど，飽和度が減少し，サ

図-3 細粒分合有率による水分特性曲線

クションの増加と繋がる．また，細粒分合有率(Fc)が高いほど，同じ飽和度の条件でサクションの値が表-4 フィッティングパラメーター

大きくなることが分かる．

Fc (%)

５．一定含水比圧縮試験
一定含水比圧縮試験とは，供試体を飽和させずに，

10
25
40
50

Fitting parameters
a
3.20
6.00
14.20
29.50

n
1.72
1.19
0.98
0.78

m
0.64
0.70
0.73
0.54

含水比を一定に保った状態で周りから有効拘束圧力をかけず，鉛直荷重のみを載荷し圧縮を行う試験のDial Gauge

ことである．そしてその際に，センサーによって一Air release valve

軸圧縮強度を測定し，圧縮によって排水した吸排水
Air release valve

量を二重管ビュレットで測定し，そこから体積ひず

Double burette

Load cell

みを計測し，一軸圧縮強度と体積ひずみの関係を求Filled fully
with water

める．大まかな実験の流れとしては，ふるい分け，Latex membrane

Specimen

試料準備，供試体の作製，供試体の設置，そしてせん断の順に実験を行う．

5.1 試験装置

Ceramic disk
(A.E.V.: 5 bar)
Pore water pressuretransducer (± 200kPa)

Air release valve

図-4 は，一定含水比圧縮試験の実験装置を示してDifferential pressuretransducer (10kPa)

いる．この実験装置は，ベロフラムタイプの三軸セ
図-4 一定含水比圧縮試験装置の概念図

ルであるペデスタルには，ポーラスストーンの代わりにセラミックディスク（AEV=500kPa）を装着し断時のピストン貫入に伴う摩擦力を考慮する必要のている．実験中はセラミックディスクに通じた水管ない構造になっている．

路端部に取り付けたセルに通じる排水経路の先にビュレットを接続して，ビュレット内の水位の変動を5.2 試験方法

差圧計により読み取り，セルからの吸排水量を測定した．吸排水量を測定することによって，体積ひず

本研究で用いる細粒分含有率(Fc) 10%，25%，40%，

みを計測した．セル上部には，軸変位計が取り付け50%の一定含水比試験の供試体の製作のため，2mmられており，せん断中の供試体の軸変位量を測定しふるいの下に 0.075mm ふるいを重ね，試料をふるいた．荷重計はセル内部に装着されているため，せん

分けした．
また，
0.075mm ふるいのものを水洗いし，- 28 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

乾燥させ，2～0.075mm と 0.075mm 以下の 2 種類の

表-5 各供試体の初期状態
Fc (%)

試料を用意した．この 2 種類の試料を目標の細粒分

ρdi (g/cm3)

Sri (%)

Srf (%)

psf (kPa)

1.699
1.696
1.706
1.704
1.699
1.695
1.692
1.670
1.707
1.701
1.692
1.679
1.702
1.701
1.708
1.694

49.73
60.85
68.14
78.57
50.18
61.21
71.83
78.05
48.60
65.10
72.09
82.35
46.89
56.27
66.12
78.85

47.52
53.35
63.30
73.06
48.14
52.43
66.47
75.71
46.89
63.60
69.00
76.56
47.03
55.65
64.92
74.33

9.50
7.36
5.13
3.87
27.20
21.08
10.83
7.12
96.59
34.22
25.25
16.69
－
103.5190.52
55.20

含有率(Fc)に混合し，目標の飽和度(Sr)になるように10

水を加え，十分に混ぜ合わせる．規定の質量を測った試料を 3 等分し，5cm × 10cm モールドに詰め，静的三層締め固めを行い，その後ジャッキを用いて，

25

直径 5 cm，高さ 10 cm 供試体を取り出した．各供試体の初期状態は，表-5 にまとめている．
作製した供試体をポーラスメタルの上に載せ，メ
ンブレーンを被せゴムリングを用いて固定させた．

40

その後，セルを組み立て供試体がすべて水に浸かるようにセル水を入れた．より正確な実験を行うために，セル水注入後，セル内の空気を完全に排除した．

50

荷重計，二重管ビュレットをセットし，鉛直荷重，
排水量を測定する準備を行った．せん断過程では，Note: ρdi：初期乾燥密度, Sri：初期飽和度，Srf：破壊時の飽和度, psf：破壊時のサクション応力

有効拘束圧力を掛けず，不飽和かつ含水比一定の状態で，排水条件で 0.1%/min のせん断速度でせん断を行った．その際，鉛直荷重，鉛直変位，排水量を測

240

定した．

200

(kPa)

Fc=50%
Sri=46.9%160aSri=56.3%

Axial stress,

5.3 試験結果
細粒分含有率(Fc) 10%，25%，40%，50%の結果が求められ，体表的に Fc=50%においてそれぞれ初期

12080

飽和度(Sri) 50%~80%に対する試験結果を示す．図0-5(a)は，軸ひずみ(εa)と一軸圧縮強度(qu)の関係の結果を示している．細粒分含有率(Fc)に関わらず，初期

Sri=78.9%

Sri=66.1%

40

0

1

4

5

Axial strain,

2

3

a (%)

6

7

(a) 軸ひずみ(εa)と体積ひずみ(εv)の関係

飽和度(Sri)が小さくなるほど一軸圧縮強度(qu)が大-10

Fc=50%(%)

きくなることが確認された．また，特に初期飽和度

Sri=56.3%

v(Sri) 50%，60%では, 細粒分含有率が大きくなるほど-8Volumetric strain,

急激に一軸増加し，早い段階で一軸圧縮強度がピーク値になることが観察された．
また，細粒分含有率(Fc) 50%においてそれぞれ初期飽和度(Sri) 50%~80%に対する軸ひずみ(εa)と体積ひずみ(εv)の関係を図-5(b)に示している．図により，軸ひずみが(εa)大きくなる程，体積ひずみ(εv)が大きくなり，膨張していることが確認された．初期飽和-6

Sri=46.9%-4-2
Sri=66.1%

0
2

0

1

2

3

Sri=78.9%

4

5

Axial strain,

a (%)

6

7

(b) 軸ひずみ(εa)と体積ひずみ(εv)の関係

度(Sri)が高い時に体積の膨張が少ないのは，細粒分

図-5 一定含水比圧縮試験結果（Fc =50%）の増加によりダイレタンシーが減少したことが原因だと考えられ，初期飽和度(Sri)が低くなるに従ってタンシーの減少よりも，サクションによるダイレタ

体積の膨張が大きいのは細粒分の増加によるダイレ- 29 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

240

Compressive strength, qu max (kPa)

ンシーの増加が大きくなったためであると考えられ
る．

６．細粒分含有率がせん断強度に及ぼす影響
６．１ 細粒分含有率によるせん断強度の比較
図-6 は，初期飽和度(Sri)と最大一軸圧縮強度(qu max)の関係を示している．その結果 Sri=50～80%の範囲

Fc=10%

200

Fc=25%
Fc=40%
Fc=50%

160
120
80
40
0
30

40

50

60

70

80

90

100

Initial degree of saturation, Sri (%)

では，初期飽和度(Sri)が減少するほど最大一軸圧縮
強度が増加することが確認された．そして，Fc =10%

図-6 細粒分含有率による初期飽和度と最大一軸圧と 25%の間には，わずかのせん断強度差が見られた

縮強度の関係が，Fc =25%と 50%の間には，大きなせん断強度差

Sr (%)が発生している．これは，細粒分合有率 Fc =10%では，サンクションによるせん断強度の増分が小さいと判断されるからである．細粒分合有率 Fc =50%のA

SrA

場合は，サクションによる大きな強度の増分があると考えられる．このことから，細粒分含有率 Fc=10%～50%の範囲では，細粒分含有率(Fc)が高くなるほど，

sA

サクションの影響が大きくなり，せん断強度が増加

図-7すると考えられる．

2010).

Suction, s (kPa)

SSM でのサクションの求め方(Kim et al.

Compressive strength, qu max (kPa)240

６．２ 堤防材料としての細粒分合有率(Fc)の提案
図-6 のように初期飽和度(Sri) =70%，80%の範囲で見てみると，Fc =10%と 25%ではほとんどせん断強度の差が発生していないが，Fc =25%と 50%では，
大きなせん断強度の差が発生している．このことか

Fc= 25%
Fc= 40%
Fc= 50%

773.7

160

120

Suction: 201.6

80

Suction: 56.0

287.5
53.0

Suction:19.0

40

13.3

50

110.7
36.8

40.2
40

0
30

ら，Fc =25%以上になれば，細粒分含有率(Fc)の影響

Fc= 10%

Suction: 2051.0

200

21.5

16.3
8.1

60

9.3
5.2

70

80

90

100

Degree of saturation at failure, Srf (%)

により大きなせん断強度の増分が期待できると考え

図-8 一軸圧縮強度と SSM によるサクションの比較られる．国土技術研究センターの河川土工マニュア
ル(2009)の規定や，一定含水比圧縮試験(CWCC)の結

和土の強度試験においてサクションがせん断応力と果から，現場で堤防の地盤材料を考える上で，地盤材料が細粒分合有率 Fc=25%以上 50%以下になれば，
降雨時の水位上昇に対して河川堤防が高い飽和状態

体積変化に及ぼす影響について水分特性曲線に基づいてせん断面におけるサクションを求め，飽和度とともにサクション応力を決定することで，不飽和土でも効率的かつ安全に堤防の維持管理が期待されるのせん断強度を推定するものである．

と考えられる．

せん断強度の差がサクションの影響によるものであるのかを確認するために，水分特性曲線から各細
６．３ Suction stress-SWRC Method (SSM)について

粒分含有率(Fc)において，破壊時における各飽和度

Suction stress - Soil water retention curve Method (以(Srf)のサクションの値を読み取った．図-8 は，この下，SSM；Kim et al.，2010)とは，図-7 のように不飽求めたサクションの値を破壊時における各飽和度- 30 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】(Srf)と最大一軸圧縮強度の関係のグラフに適用した

600

Fc=50%

Srf =47.03%

図である．この図により，最大一軸圧縮強度の値と500

サクションの値が対応していることが確認できる．

400

Srf =55.65%
Srf =64.92%
Srf =74.33%

q (kPa)

SSM により，求めたサクション応力の式は，以下のようになる．ここで，s* は，SSM により水分特性

p'+ps

Mp Line

p'+ps
p'+ps

300

p'+ps

200

曲線から求めたサクションである．

100

ps

Sr S r0 *s
1 S ro

0

(7)

0

100

200

300

400

p pnet ps (kPa)

図-9 サクション応力の適用（Fc =50%）
７ 不飽和土せん断強度に対するサクション応力の適用線から残留飽和度(Sr0)を求めている．しかし，シルトや粘土質の試料の場合，確実に決めるのが難しく

不飽和土のせん断強度は，サクションによる影響なる．よって，本研究では，農業工学分野での萎れが大きいことは一般的に知られている．本章では，点（wilting point，1500 kPa, 約 4.2 pF）に着目した．

一定含水比圧縮試験においてのサクションによるせ萎れ点の 1500kPa というサクションの値は，植物がん断強度の増分の関係を明らかにするため，細粒分

水分を引き上げる限界値として知られている

合有率(Fc)による各供試体のサクション応力(ps)を，( Meyer and Gee, 1999)．蒸発産量は，萎れ点と地盤

有効拘束圧力として適用し，細粒分合有率による不の能力の差と等しい．さらに，Gardner (1960)と Hillel

飽和土せん断強度の変化と飽和状態の破壊線の関係(1971)の研究によると，萎れ点，1500kPa よりサクシを評価する．また，式(2)から算定した見かけの粘着

ョンが大きくなると，メニスカス水が形成されにく力(Δc1)と飽和破壊線及び不飽和破壊線に基づいて

いということが判明された．よって，本研究では，求めた見かけの粘着力(Δc2)の値を比較する．

水分特性曲線において，1500kPa のサクションを基準に対する飽和度を残留飽和度(Sr0)に定めた．

７．１ 一定含水比圧縮試験でのp，qの関係
一定含水比圧縮試験の場合，せん断中に拘束圧を

７．３ サクション応力の適用及び考察かけない為側方応力がゼロとなる．したがって，三不飽和土と飽和土の関係を明らかにするため，不軸圧縮試験では軸差応力は，最大主応力(σ1)と最小飽和土を対象に行った一定含水比圧縮試験の試験結

主応力(σ2，σ3)の差であるが，一定含水比圧縮試験で果(pnet，q)の関係に SSM により求めたサクション応

は最大主応力(σ1 )のみとなる．そして、平均有効主力(ps)を適用し，図-9 で示しているように，三軸圧応力は，全有効主応力の平均であるが，一定含水比

縮試験の試験結果(p’，q)と比較をおこなった．その圧縮試験では，σ2= σ3= 0 となる．以下に，一定含水結果，(pnet+ps，q)の関係により，破壊時での応力点比圧縮試験の軸差応力(q)と平均基底応力(pnet)の式

が飽和状態の三軸圧縮試験の試験結果から求めた

を示す．
q
p net

1

1
3

1

Mp line とほぼ一致することが分かった．これは，サ(8)ua

クションにより増加したせん断応力の増分と，有効拘束応力としてのサクション応力の影響が一致して(9)いることを意味する．よって，本研究で行った細粒分合有率によって一定含水比圧縮試験から異なる結７．２ 残留飽和度(Sr0)の算定果が得られているが，サクション応力の適用により，それぞれのサクションとせん断強度の関係が解明で一般的に，図-3 で示しているように，水分特性曲- 31 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

きると考えられる．

300
Fc=50%

Srf= 47.03%
Srf= 55.65%

Shear stress, (kPa)250

７．４ 見かけの粘着力(Δc1，Δc2)の比較
Vanapalli ら(1996)の式(2)から求めた見かけの粘着力(Δc1)：一定含水比圧縮試験での各細粒分含有率(Fc)における破壊時の飽和度(Srf)と，図-3 の水分特性

Srf= 64.92%
Srf= 74.33%

200
150
100

F.L:Sr=100%50曲線から求めたサクション(s)，残留飽和度(Sr0)の値0から Vanapalli ら(1996)の式(2)を用いて見かけの粘着

0

50

100

150

200

Effective stress,

力(Δc1)を求めた．

250

300

(kPa)

図-10 一定含水比圧縮試験(CWCC)からの見かけの一方，一定含水比圧縮試験(CWCC)から求めた見粘着力(Δc2)

かけの粘着力(Δc2)：見かけの粘着力(Δc2)は，図-1070に示している通り，圧密非排水三軸圧縮試験(CU)かApparent cohesion, c (kPa)

Fc= 50%

ら求めた飽和破壊線の粘着力(c)と，一定含水比圧縮試験から求めた不飽和破壊線の粘着力(c)を比較し導く．その際，各供試体の不飽和破壊線は，一定含水比圧縮試験から得たモールの応力円に飽和破壊線の傾きを適用し求めた．
式 (6)，(7)で求めた見かけの粘着力(Δc)を表-3 に

c2

50
40
30
20
10
0
40

示している．細粒分含有率 Fc=10%における一定含

c1

60

50

60

70

80

90

Degree of saturation at failure, Srf (%)

水比圧縮試験(CWCC)から算定した見かけの粘着力

図-11 見かけの粘着力(Δc)の比較(Δc2)は，細粒分含有率 Fc=10%においての圧密非排
水三軸圧縮試験(CU)を今後行い，求める予定である．
また，二つの方法によって導いた細粒分含有率(Fc)

表-6 見かけの粘着力の比較
Fc(%)の見かけの粘着力(Δc)の差を図-11 に示している．
表-6 に示す通り，細粒分含有率(Fc) =25%では，見か10けの粘着力(Δc)の差は小さい．それに対して，細粒分含有率(Fc) =40%，50%の場合，破壊時の飽和度(Srf)が高い場合は見かけの粘着力(Δc)の差は小さいが，

25

破壊時の飽和度(Srf)が低くなるにしたがって，差が大きくなった．その原因として，破壊時の飽和度(Srf)40が低い時 Vanapalli らの式から推定した見かけの粘着力(Δc1)が小さくなったことが挙げられる．
Vanapalli らの式から推定する際，水分特性曲線か50

らサクションを読み取り用いた．その際，ポーラス

Srf(%)
47.52
53.35
63.30
73.06
48.14
52.43
66.47
75.71
46.89
63.60
69.00
76.56
47.03
55.65
64.92
74.33

c1

c2

4.0
3.4
2.7
2.1
7.3
6.2
3.7
2.6
19.2
10.2
8.2
5.8
－
29.3
25.6
15.6

－
－
－
－
12.4
6.5
4.3
2.3
39.8
27.6
17.4
12.3
－
48.1
31.5
18.6

メタルの上限値が 500 kPa であり，飽和度が低い状
態でのサクションは 500 kPa を超えており，読み取

水比圧縮試験(CWCC)から算定した見かけの粘着力

りに誤差があるのではないかと考えられる．また，(Δc2)が大きくなり，二つの方法によって導いた見か

細粒分含有率(Fc) =40%の場合，基準となる圧密非排けの粘着力(Δc)の差が大きくなったことも，要因の水三軸圧縮試験(CU)から求めた飽和破壊線の粘着一つとして挙げられる．このように，二つの方法に力が予想より低い値となった．これにより，一定含

よって導いた見かけの粘着力(Δc)に差がある部分- 32 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

もあるが，破壊時の飽和度(Srf)が低くなるにつれて有効拘束応力成分としてサクション応力(ps)を見かけの粘着力(Δc)が大きくなる傾向が全体を通適用し，三軸圧縮試験の試験結果(p’，q)と比較して見られる．

をおこなった．その結果，残留状態応力点が飽
和土を対象として行った三軸圧縮試験の試験結果から求めた Mp line とほぼ一致することが8．結論分かった．これは，サクションにより増加した
本論文では高梁川堤防のまさ土のみで調整した細粒

せん断応力の増分と，有効拘束応力としてのサ分含有率(Fc) 10%，25%，40%，50%についての物性

クション応力の影響が一致していることを意

試験，圧密非排水三軸圧縮試験(CU)，一定含水比圧

味する．よって，本研究で行った細粒分合有率

縮試験を行い，結果からサクションによる不飽和土によって一定含水比圧縮試験から異なる結果

せん断強度の増分の関係を明らかにした．また，細が得られているが，サクション応力の適用によ

粒分合有率がせん断強度に及ぼす影響について不飽り，それぞれのサクションとせん断強度の関係

和土力学理論に基づいて行い，得られた結論を以下が解明できると考えられる．

に示す．

(4) 最後に，理論式と試験結果によって導いた見かけの粘着力( c )には差のある部分もあるが，
破(1) 一定含水比圧縮試験の結果により，軸ひずみ(εa)壊時の飽和度(Srf)が低くなるにつれて見かけのと一軸圧縮強度(qu)の関係では，細粒分含有率

粘着力( c )が大きくなる傾向がある．また，破(Fc)に関わらず，初期飽和度(Sri)が小さくなるほ

壊時の飽和度(Srf)を固定し見かけの粘着力

ど一軸圧縮強度(qu)が大きくなることが確認さ( c )を比較すると，細粒分含有率(Fc)が高くなれた．一方，軸ひずみ(εa)と体積ひずみ(εv)の関るにしたがって，二つの方法で導いた見かけの係では，細粒分含有率(Fc)に関わらず，軸ひず

粘着力( c )はどちらも大きくなっている．
よっ

みが大きくなる程，体積ひずみが大きくなり，て，細粒分合有率(Fc)の増加と共に見かけの粘膨張していることが確認された．

着力( c )が大きくなり，
せん断強度の増加に繋(2) 初期飽和度(Sri)と最大一軸圧縮強度(qu max)の関がるということが明らかになった．

係の結果により，初期飽和度(Sri) 70%，80%の範囲で見てみると，Fc =10%と Fc =25%ではほと

参考文献

んどせん断強度の差が発生していないが，Fc=25%と Fc =40%では，大きなせん断強度の差が

1) 加藤正司，吉村優治，河井克之，寸田 亘：不飽発生した．このことから，Fc =25%以上になれ

和土の一軸圧縮試験時の強度特性に及ぼすサク

ば，細粒分含有率(Fc)の影響により大きなせん

ションの影響，土木学会論文集，No.687/Ⅲ-56,

断強度の増分が期待できると考えられる．した

pp.201-218, 2001.

がって，現場で堤防の地盤材料を考える上で，

2) 軽部大蔵，加藤正司，浜田耕一，本田道識：不地盤材料が細粒分合有率，
Fc=25%以上 50%以下

飽和土の間隙水の状態と土塊の力学的挙動の関になれば，降雨時の水位上昇に対して河川堤防係について，土木学会論文集，No.535，pp.83-92，が高い飽和状態でも効率的かつ安全に堤防の1996.
3) 財団法人国土技術研究センター：河川土工マニ

維持管理が期待されると考えられる．
(3) 細粒分含有率(Fc) 25%，40%，50%において，

ュアル，pp. 59-79, pp. 62-66, 2009.

不飽和土と飽和土の関係を明らかにするため，

4) Bishop, A.W. and Blight, G.E.:Some aspects of

不飽和土を対象に行った一定含水比圧縮試験

effective stress in saturated and partly saturated soils,の試験結果(pnet，q)の関係に SSM により求めた

Geotechnique, Vol.13, No.3, pp. 177-197, 1963.

- 33 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

5) Fredlund, D.G., Morgenstern, N.R. and Widger,
R.A.: The shear strength of unsaturated soils.
Canadian Geotechincal Journal, Vol.15, No.3,
pp.313-321, 1978.
6) Fredlund, D.G. and Xing, A.: Equations for the Soil Water Characteristic Curve. Canadian Geotechnicaljournal, Vol. 31, No. 4, pp. 521-532, 1994.
7) Gardner, W.R.: Dynamic aspects of water availability
to plants. Soil Science 89, 63-73, 1960.
8) Hillel, D.: Soil and water. Academic Press, New York,1971.
9) Kim, B.S., Shibuya, S., Park, S.W., and Kato, S.
Applicationof suction

stress for estimating

unsaturated shear strength of soils using direct shear
testing under low confining pressure. Canadian
Geotechnical Journal. Vol. 47, No. 9, pp. 955-970,
2010.
10) Meyer, P.D., and Gee, G.W.: Flux-based estimationof field capacity. Journal of Geotechnical andGeoenvironmental Engineering, ASCE 125(7),595-599, 1999.
11) Vanapalli,S.K., Fredlund, D.G., Pufahl, M.D. &Clifton, A.W.: Model for prediction of shear strengthwith respect to soil suction. Canadian Geotechnical
Journal, Vol.33, No.3 pp. 379-392, 1996.

- 34 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

植物バイオマスからの骨成分合成
岡山大学大学院環境生命科学研究科
永禮 英明
環境浄化とリン資源量減少とを背景に，土壌浄化用に栽培した植物からリンを抽出・回収する方法について検討した。本研究では，回収物の付加価値を高めるため，回収物を骨の主成分であるヒドロキシアパタイトに近づけることを目的に実施した。本研究で使用したバイオマス（飼料用デントコーン）に含まれるリンの 67～76%が 1 時間以内に溶液中に抽出された。抽出液にカルシウムを添加しリン酸カルシウム沈殿を生成させた。
このとき，添加するカルシウム量を変化させることで，溶液中に含まれるリンの沈殿率，ならびに生成した沈殿中のカルシウム／リン比が変化した。添加するカルシウム量を溶液中リン量の 1.3 倍（モル比）としたとき，リン沈殿率は 59～76%に低下したが，固形物中カルシウム／リン比としてヒドロキシアパタイトでの比 1.67 に近い値が得られた。また，この固形物を 600℃，30 分間灰化したところ，ヒドロキシアパタイトの生成が確認された。

1. はじめに筆者らの過去の研究から，乾燥バイオマスを水にリンは全ての生物に必須な元素であり，肥料の主浸漬することで速やかにリンが液中に溶出すること，成分でもある。しかし，人口が増加し，より多くの

また抽出液にカルシウムイオンを添加することでリ

食料と肥料とが必要とされている一方，将来的にはンを含む沈殿を得られることが分かっている。ただリン鉱石量減少に伴い肥料供給量が減少し，食料価

し，過去の研究ではリンの回収率を最大化すること格が高騰すると予想されている[1]。そのため，様々を目的としており，回収した固形物には多量のカルなルートでリンを回収・再利用するための技術が必

シウムが含まれていた。本研究では，回収率よりも要とされている。

回収固形物中を骨の成分であるヒドロキシアパタイ
トに近づけることを目的とする。

筆者らはこれまでに下水や植物バイオマスからリンを回収するための技術を開発し，それぞれ 70%，

2. 研究方法

80%の回収率を達成している[2-5]。しかし，問題は回収したリンの再利用価格である。将来の資源量減

実験は，(1) バイオマスからのリン抽出，(2) 抽出

少が予測されているにもかかわらず，リン鉱石の輸液からのリン回収，(3) 回収物の乾燥という手順で入価格は低い。そのため回収したリンの価格もこれ進めた。

に影響され，処理に要する費用を回収することがで

2.1 使用したバイオマス

きない。

農地浄化用に，2012 年 2 月から 3 月に高知大学でそこで，本研究では，回収したリンの一部を肥料栽培された飼料用デントコーンを乾燥させたものをより価値の高い物質に変換し，全体として処理費用使用した。
栽培期間が 50 日であるため結実しておらを回収するという視点から，植物バイオマス（トウず，葉と茎のみから構成されていた。

モロコシ）からリンを回収し，骨の成分であるヒド
ロキシアパタイトに加工する方法について検討した。

2.2 バイオマスからのリン抽出

日本では高齢化が進展し，骨に関する疾患が増加す

イオン交換水 1 L あたりに乾燥したバイオマス 20

ると見込まれている。ヒドロキシアパタイトを含む

g を入れた。1 時間，室温で浸漬したのち， 10 分間

人工骨の需要も増加することから，これへの適用を

ザルで水を切り，得られた液をメンブレンフィルタ

想定している。

ーでろ過し，これを抽出液とした。

- 35 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

2.3 抽出液からのリン回収抽出液に 1 mol/L NaOH を添加して pH を調整した
のち， 1 mol/L の CaCl2 溶液（以下，Ca 溶液とする）
としてカルシウムを添加し，沈殿を生成させた。pH
は 7.0～10 の範囲で，Ca 溶液添加率は抽出液 1 L あたり 40～80 mL の範囲で条件を設定した。静置した
のち上澄み水の一部を採取し，0.45 μm シリンジフ
ィルターでろ過し，分析用試料とした。
2.4 回収固形物の乾燥
沈殿物を遠心分離（3,500 rpm×10 min）し上澄み液を除去した。ここにアセトンを加え，さらに遠心分離をすることで沈殿を洗浄した。洗浄は 3 回行った。その後，沈殿をドラフト内で 24 時間乾燥させ，さらに 60℃で 24 時間乾燥させた。乾燥物の一部を採取し 1 mol/L 硝酸で溶かしたものを分析用試料とした。
2.5 分析方法

図 1 使用したバイオマス（上）と抽出液（下）抽出液，沈殿生成後の上澄み水について水質分析を行った。また，回収固形物を硝酸で溶解したもの

3.2 抽出液からのリン回収についても水質分析を行い，固形物中成分の分析を

抽出液中リンのうち沈殿に取り込まれた率を沈殿

行った。
基本的に，
金属成分ならびにリンは ICP-AES率と定義した。沈殿率を図 2 に示す。沈殿率は pH（SII Vista-Pro）で，イオン類はイオンクロマトグラ

による影響を強く受け，pH 7 では 67～72%にとどまフ（島津製作所 LC-10A）で測定した。

るが，pH 8.5 以上だと 90～94%に達した。ただし，回収した固形物に含まれる結晶を確認するため，

これは沈殿生成時のカルシウム／リン比を 10

X 線回折分析を実施した。使用した装置は Rigaku

mol/mol 以上とカルシウムを過剰に添加した場合でRint Ultima III で，X 線源は Cu Kα（40 kV/30 mA，の結果である。
この比が 2 mol/mol を下回った場合，

波長 154.18 pm），角度 5～60°の範囲を 0.02°刻み，pH 9 においても沈殿率は pH 7 の場合と同程度の 59

2°/min の速さでスキャン測定した。
また，固形物を走査型電子顕微鏡（JEOL JIB-4500）～76%となった。
100で観察した。

3. 結果・考察
リ ン 沈殿率 (%)

80

3.1 バイオマスからのリン抽出抽出に供したバイオマスと抽出液とを図 1 に示す。乾燥したバイオマスを 1 時間イオン交換水に浸

60
40

pH 7

20

pH 8.5pH 9
pH 10

漬するだけで，茶褐色の抽出液が得られた。
0

抽出液のリン濃度を測定した結果，バイオマスに

0

5

10

15

沈殿生成時Ca/P比 (mol/mol)

含まれていたリンの 67～76%のリンが抽出液中に溶出していることが確認された。

図 2 抽出液からのリン沈殿率- 36 -

20

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】に固有の 3 つのピーク（2θ= 31.8, 32.2, 32.9°）が検

3.3 回収固形物の性状
図 3 に回収した固形物中のカルシウム／リン比

出され，ヒドロキシアパタイトの存在が確認された（図 4 下図を参照）。

を示す。骨成分であるヒドロキシアパタイトにおける比は 1.67 mol/mol である。これに比べ，沈殿生成

1200

時にカルシウムを過剰に添加した場合，いずれの pH

1000

でも固形物中カルシウム／リン比は 1.9 mol/mol 以

800

強度

上となり，ヒドロキシアパタイトに比較してカルシ

600

ウムが過剰であった。しかし，カルシウム添加量を400抑制していくに従い固形物中での比も低下し，添加200

時カルシウム／リン比を 1.3 mol/mol 程度にするこ

0
0

10

20

30

とで，固形物中での比を 1.5～1.6 mol/mol と，ヒド
ロキシアパタイトのそれに近づけることができた。

1200

強度

3

固形物中Ca/P比 (mol/mol)

40

50

60

40

50

60

2θ (度)

2

1200

1000

800

800

400
0

600

30

31

32

33

34

35

400

1

pH 7

200

pH 8.5
pH 9

0
0

10

20

0
0

5

10

15

30

2θ (度)pH 10

図 4 X 線回折分析の結果

20

沈殿生成時Ca/P比 (mol/mol)（沈殿生成時 Ca/P=1.3 mol/mol，
上：灰化前，下：600℃ 30 分間灰化後）

図 3 回収固形物中カルシウム／リン比
3.3 灰化によるヒドロキシアパタイト結晶の生成
X 線回折分析を実施し，得られた固形物について，
ヒドロキシアパタイトの結晶の有無を確認した。本

灰化後の固形物を電子顕微鏡で観察した。灰化後の固形物，および電子顕微鏡での結果の一例を図 6に示す。ヒドロキシアパタイトは含まれているはず

分析では，ある結晶構造が含まれるとそれに固有のであるが，明確な結晶構造は確認できなかった。
図 4角度でピークが現れる。
沈殿物を 105℃で乾燥して得られた固形物の場合，明確なピークは現れ検出されなかった（図 4 上図をの結果から示唆されるように，複数の物質が混在していると考えられた。

参照）。そこで，この固形物をさらに 600℃で 30 分
間灰化し，再度分析を行った。なお，灰化によって重量の 31～39%が減少した。この減少は沈殿に含まれていた有機物を表している。リン酸カルシウムの沈殿が生成する際，バイオマスから溶出した有機物を取り込みながら沈殿していることを示している。
灰化した試料について X 線分析を実施した結果，乾燥したのみの場合と違い，複数のピークが検出された。ただし，ピークの位置は沈殿生成時のカルシ

図 5 灰化後の固形物

ウム／リン比によって異なっていた。カルシウム／（沈殿生成時 Ca/P=1.3 mol/mol）

リン比が 1.3 mol/mol のとき，ヒドロキシアパタイト- 37 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

た高度下水処理プロセスでのリン回収方法の
検 討 ," 環 境 工 学 研 究 論文 集 , vol. 46, pp.
469-475, 2009.
[3]

W. Saktaywin, H. Tsuno, H. Nagare, T. Soyama,
and J. Weerapakkaroon, "Advanced sewage
treatment process with excess sludge reduction andphosphorus recovery," Water Res, vol. 39, pp.
902-10, Mar 2005.

[4]

H. Nagare, T. Fujiwara, T. Inoue, S. Akao, K. Inoue,
M. Maeda, et al., "Nutrient recovery from biomass

図 6 灰化後固形物の電子顕微鏡写真

cultivated as catch crop for removing accumulated（沈殿生成時 Ca/P=1.3 mol/mol）

fertilizer in farm soil," Water Sci Technol, vol. 66,

4. 結論

pp. 1110-6, 2012.
[5]

本研究では，植物バイオマス（トウモロコシ）か永禮英明, 井上司, 藤原拓, 赤尾聡史, 前田守らリンを回収し，骨の成分であるヒドロキシアパタ

弘, and 山根信三, "トウモロコシからのリン抽

イトに加工する方法について検討した。

出法の検討," 環境工学研究論文集, vol. 47, pp.

トウモロコシから，最大約 70%の効率でリンを固459-464, 2010.

形物として回収することができた。ただし，回収率
は抽出液へのカルシウム添加率によって変化し，カルシウム／リン比が高いほど回収率は高く，固形物
中のカルシウム／リン比も高い。
カルシウム添加率を抑え，カルシウム／リン比を1.3 mol/mol として得た沈殿を 600℃で 30 分間灰化す
ることにより，ヒドロキシアパタイトを含み，カルシウム／リン比もヒドロキシアパタイトとほぼ同じ固形物を得ることができた。

謝辞
本研究は清水康友君の協力を得て実施しました。
X 線回折分析では岡山大学・河村雄行教授のご協力を得ました。電子顕微鏡は岡山大学ナノ構造解析・
分析ユニットに設置の機器を使用しました。

参考文献
[1]

D. Cordell, J.-O. Drangert, and S. White, "Thestory of phosphorus: Global food security and foodfor thought," Global Environmental Change, vol.
19, pp. 292-305, 2009.

[2]

永禮英明, 津野洋, W. Saktaywin, and 早山恒成,"オゾンによる汚泥減容化とリン回収を導入し- 38 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

トンネル覆工・空隙・地山の相互作用とロックボルトの効果
岡山大学大学院 環境生命科学研究科
柴田俊文
農業用水路トンネルは，大正・昭和時代に施工されたものが数多くあり，老朽化による劣化や機能低下の問題が指摘されている．そのため，補修工事費用も膨大になることが予想され，より経済的な補修（補強）方法の確立が望まれる．近年，農業用水路トンネルで見られる極小断面でのロックボルトによる補強技術が新たに開発され，施工事例も報告されてきている．これらのトンネルは，鉄道・道路トンネルとは断面寸法が相違するため，ロックボルトの最適な本数・長さや間隔が異なることが予想される．また，在来工法で施工されたトンネルに補強工法としてロックボルトを施工する場合，NATM 工法で用いる場合とは地山とロックボルトの相互挙動が相異なることが考えられる．本論文では，地山とロックボルトの挙動の把握，裏込注入工法との併用効果の検討を目的として載荷実験を行う．
1. はじめに 1, 2)
日本の農業用用排水路は約 400,000km におよび，そのうち農業用水路トンネル（図-1）は 2,000km 以
上に達する．これらの水路トンネルは用排水路の上流に位置することが多く，受益が非常に大きい反面，
老朽化によりその機能を失うと経済的な損失も甚大なものとなる．そのため，正確な機能診断と適切な維持補修により長寿命化をはかることが，喫緊の課題となっている．

図-1 農業用水路トンネル

ロックボルト工法による補修（補強）は，作業時間が短いため通水時に容易に適用でき，安価でピンに影響を及ぼす可能性も否定できない．そのため，ポイントの補強が可能である．そのため，長期的な補強に用いるロックボルトの最適な施工条件を把握

使用を条件に最適な設計条件を明らかにすれば，低するには，地山とトンネル覆工の相互作用を明白にコストで補強ができるため，その効果は非常に大きし，荷重と地山挙動との相関関係を明らかにする必なものとなる．その一方で，農業用水路トンネルは

要がある．

2

断面積 3m 未満の極小断面が多く，従来は広い作業

本論文では，地山とロックボルトの挙動の把握を領域が必要なロックボルト工法による補強は実施さ目的として実験を行う．また，矢板工法で見られる

れてこなかった．しかし，狭隘な場所で作業可能な

地山と覆工の間の空隙を考慮して，裏込注入工法とロックボルト工法の新技術が数年前に開発され，極の併用効果の検討を行う．具体的には，矩形形状に小断面のトンネルの補強に用いられるようになって作製したモルタルを，斜面をつけて二分割し，ロッ

3)

きている ．だが，その際の配置や寸法の決定は断クボルトを模擬した鉄棒をモルタル中に設置して載面スケールが大きい道路・鉄道トンネルの基準を参荷実験を実施する．

考になされているため，ロックボルトの設定条件

4, 5)が適切になっていない可能性がある．さらに，NATM

2. 供試体の作製工法の施工に用いるロックボルトを矢板工法の補強

図-2 に示すように，横×奥行き×高さが 100mm×に使用するため，トンネルの構造の違いが補強効果

100mm×200mm のモルタルを用いて載荷実験を行う．

- 39 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図-2 載荷実験

図-3 供試体

図-4 供試体作製に用いた型枠

図-5 全自動圧縮試験機

ここで地山および覆工を想定し，目標強度 5N/mm2
程度の低強度モルタルと，目標強度 20N/mm2 程度の高強度モルタルを使用する．それぞれのモルタルの配合は，低強度が早強ポルトランドセメント，砂，水が 800g，2,400g，800g，高強度のものが 1,400g，2,040g，630g を用い，目標強度より w/c はそれぞれ100%，45%となるよう設定した 6, 7)．裏込注入工法
およびロックボルト工法はグラウトの注入と直径5mm の鉄棒の挿入により模擬する．ここで，グラウ
トは 1～2N/mm2 程度の強度が確保できればよいた(a) 不連続面に対しめ，定着用グラウト材の水分量を増やし，流動性を垂直に配置高め施工しやすいように調整した．具体的には，充(b) 不連続面に対し傾斜をつけて配置

図-6 鉄棒を配置した供試体

填用グラウトの配合は，水／グラウトの重量比を0.184，鉄棒定着用では 0.276 として使用した．また

裏込注入の効果を検討するため，図-2，3 に示す供不連続面を作製するため，供試体作製時にプラスチ

試体の空隙にグラウトを充填したものにより比較をック製のスペーサーを型枠中央に配置し，その際に行う．鉄棒は，不連続面に対して垂直に配置する供傾斜を設けて供試体を二分し，角度は 30°，45°とし試体と傾斜を設けて配置する供試体の合計二ケース

た．図-3 に，分割した供試体を，図-4 に供試体作を想定した．図-6 に鉄棒を配置した供試体を示す．

製に用いた型枠を示す．

(a)が不連続面に対して垂直，(b)が不連続面に対して傾斜を設けるケースで，鉄棒の位置を直線で表示している．なお，(b)の場合は，鉄棒は荷重載荷方向に

3. 実験概要
作製した供試体に鉄棒を挿入して鉛直方向に載荷

垂直（上下面に対して水平）に配置しているため，して実験を行う．挿入した鉄棒の定着は，グラウト

不連続面に対しては，傾斜を有する形で位置していの注入によって行われ，鉄棒は不連続面の角度にかることとなる．ここで，不連続面に対して垂直に鉄かわらず，左右両端まで設置する．実験は，モルタ

棒を配置するパターンは，円形のトンネル断面にロル間の空隙・鉄棒の角度・2 種のモルタルの組み合ックボルトを配置した場合を想定しており，角度をわせをそれぞれ変化させて実施し，測定したデータ

つけて配置するパターンは，地山が有する不連続面から作成した応力-ひずみ曲線を比較する．なお載荷をロックボルトが貫入する場合と幌形や馬蹄形トン

は，全自動圧縮試験機（HI- ACTIS-2000；図-5）をネルのスプリングライン下部にロックボルトが配置用いて行っている．ここで，ロックボルト配置前のされることを仮定している．

- 40 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

9000.000
8000.000

応力（ｋPa)7000.000
6000.000
5000.000
4000.000

グラウト充填

3000.000

空隙

2000.000
1000.000
0.000
00.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03
ひずみ

図-8 補強工法の併用の効果

図-7 不連続面の角度の影響
30000.000

4. 実験結果

25000.000

図-7 に鉄棒を不連続面に傾斜配置し，角度を変化
応力（ ｋPa)

20000.000

させた際の結果を示す．ここで，供試体の上部に高強度モルタル，下部に低強度モルタルを組み合わせ

45°，密着15000.000

30°，密着45°，グラウト

10000.000

30°，グラウトたケースと，両方とも低強度モルタルを用いたケー

5000.000スについて実験を実施した．なお，不連続面はグラ

0.000
0

ウトを注入せず，二つのモルタルが接している状態

0.02

0.04

0.06

ひずみ

になっている．最大応力で比較すると，モルタルの図-9 鉄棒の垂直配置時の結果

組み合わせが同じ場合，不連続面の角度は 30°より45°の方が高い値を示した．モルタル強度の組み合わ変位が大きくなっている．そのため，鉄棒に直接載せで考察すると，低強度モルタル同士の方が高強度荷されたことにより，モルタルの応力の上昇が遅れモルタルと組み合わせた場合より高い最大応力が得たものと考えられる．

られた．これは，変位制御による実験のため，高強度モルタルに対してより大きな応力が作用し，全体５．まとめの強度が下がったことが考えられる．

本論文では，ロックボルト工法と裏込注入工法と図-8 にグラウトのみを用いた場合と鉄棒とグラの併用の効果を検討し，トンネル覆工と地山の境界

ウトの両方を用いた場合とで実験を行った結果を示部における角度の影響について載荷実験を実施して，す．ここで，不連続面の角度は 30°とする．最大応

その結果を比較した．ロックボルトは鉄棒で表し，力に大きな差異は確認できなかったが，同一応力にトンネル覆工および地山は高強度と低強度のモルタ

おいてはグラウトを充填した供試体の方が小さいひ

ルにより模擬して実験を実施した．供試体載荷実験

ずみの値を示している．このことから併用による補を通して，補強箇所のトンネル覆工と地山の角度お強の効果が確認できる．

よび地山強度の影響，ロックボルト工法と裏込注入工法の併用効果を示すことができた．

図-9 に上下に高強度モルタルを配置し，垂直に鉄棒を挿入した実験の結果を示す．ここで，図中凡例の「密着」とは，グラウトを充填させず上下のモル

参考文献

タルが接した状態を示す．グラウトで充填した方が

1) 森 充広，浅野 勇，渡嘉敷 勝，西原正彦，トン

角度に関わらず，高い最大応力と圧縮強度が得られネルの構造的安全性に関する研究動向～変状事

た．グラウトを充填した場合はモルタル同士が連続例に基づく考察～，農工研技法，214，pp.31-76，

している状態であるのに対し，密着した条件では僅

2013．
2) 森 充広，森 丈久，渡嘉敷 勝，中矢哲郎，藤原

かに隙間が空いて不連続になっており，両者の相対- 41 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

5) 公益財団法人鉄道総合技術研究所，変状トンネ

鉄朗，齋藤 豊，通水状態での農業用水路トンネ
ル調査・点検技術の開発，農業農村工学会論文

ル対策工設計マニュアル，1998．
6) 伊藤正憲，早川健司，瀬野康弘，鈴木祥三，ト集，Vo.278，pp.9-17，2012．
3) 山地宏志，中野陽一，清水則一，ロックボルト

ンネル覆工背面空洞充填用軽量モルタルの基本による極小断面水路トンネル補修の設計と施工

物性，土木学会第 56 回年次学術講演会講演概要

法，「建設施工と建設機械シンポジウム」論文集，集，pp.322-323，2001．
7) 野城一栄，小島芳之，宮林秀次，西藤 潤，朝倉pp.23-28，2009．
4) 吉田秀典，宇田圭一，平川芳明，森 聡，不連続

俊弘，竹村次朗，地質不良区間における新設山面の寸法とロックボルト導入効果に関する一考

岳トンネル用地震対策工の適用性，土木学会論

察，応用力学論文集，Vol.8，pp.443-450，2005．

文集 C，Vol.65，No.4，pp.1062-1080，2009．

- 42 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

旭川感潮域のケレップ水制域における塩分流動の現地観測および数値解析
岡山大学大学院環境生命科学研究科
赤穗 良輔

概要
感潮河川である旭川下流域には，ケレップ水制群が設置されており，多様な生物の生息・生育・繁殖環境となっている．水制域の良好な環境状態を維持するためには，水制周辺の流況を調査するとともに，長期的な塩水流動特性を把握する必要がある．本研究では，旭川ケレップ水制域における塩水流動の長期シミュレーションモデ
ルの構築への第一段階として，平水時の塩水流動特性の把握を目的とし，旭川本流における塩分の鉛直分布の定点観測および準三次元塩水流動解析モデルの開発を行った．観測結果より，ケレップ水制域では上層の塩分は潮汐によって流動する一方，下層の塩分は定常であることが明らかになった．さらに，得られた観測データを元に塩分の鉛直分布を仮定し，塩水流動解析を実施したところ，従来の平面二次元モデルでは表現できなかった下層
での塩分定常化の再現に成功した．ケレップ水制域では，水平渦により低水路と浅瀬での水の交換が発生するが，上層の低塩分水が交換するため，ケレップ水制間の浅瀬では低塩分状態で安定している可能性が示唆された．

ける塩分の鉛直分布を計測し，平水時の潮汐による塩1. 序論
感潮河川における水制域は，水草類が繁茂し，魚介

水流動の特性を把握した後に，二次元モデルと同程度類や鳥類の生息場所となるため，環境保全の観点からの計算負荷で，流動場の三次元性を考慮できる新たな非常に重要である．感潮河川では，平常時に底層に塩準三次元モデルの構築を行う．

水が侵入し汽水状態が形成されるとともに，潮汐によ2. 研究フィールドる非定常運動が存在し，水域の物質輸送や水質分布お図-1 に本研究で対象とする旭川下流域の概要を示

よび生活環境の基盤を形成している．したがって，水す．岡山県の中央を流れる旭川は，河口から約 12km

制域の良好な環境状態を維持するためには，水制周辺の岡山市三野において百間川と分派し，瀬戸内海に繋の流況を調べるとともに，感潮河川における長期的ながる児島湾に注いでいる．市街地から河口に向かって

塩水流動の特性を把握する必要がある．本研究では，舟運のための水深確保対策として，河口からの距離

感潮河川である旭川のケレップ水制域を対象とし，現地観測および数値シミュレーションを用いて，潮汐に三野

よる水制域への塩水流出入の特性について検討する．

旭川

塩分流動は基本的に三次元の現象だが，運動の空間
スケールを大局的にみると，密度成層に伴う傾圧の効
果と比較して，潮汐変動に伴う順圧の効果が支配的である．また，水制は潮汐に伴い水面からの露呈と水没を繰り返すため，順圧による流動について流速の鉛直

児島湾分布を考慮する必要がある．ただし，旭川感潮域にお3km

ける塩水流動の長期シミュレーションを三次元計算

瀬戸内海

モデルで実施するのは，計算コストの面から困難である．そこで本研究では，現地観測により旭川本流にお図-1 旭川下流域の概要図 1)- 43 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

8KP
桜橋（6.73kP)
6KP

写真-1 ケレップ水制
ブイ

ケレップ水制域(2.2KP～6.6KP)
4KP

上層
ロープ
中層

2m

2KP
水深
約4m

0KP
図-3 観測装置の設置位置 1)

下層
アンカー

宇野水位

三野水位

4
3
水位（T.P.m）

図-2 塩分計測器の設置方法の概念図

2.2km から 6.6km の区間の左岸側にケレップ水制群が210設置されている．ケレップ水制は写真-1 のような T 型-1構造の玉石積みの石水制で計 19 基が現存している．

-2
1/15 1/20 1/25 1/30 2/4

ケレップ水制周辺には干潟とヨシ原が広がっており，

Bottom2/9 2/14 2/19 2/24 2/29
Center

Top

20

2)

多様な生物の生息・生育・繁殖環境となっている ．

15
塩分（PSU）

3. 現地観測3.1 観測装置の概要および設置方法
図-2 に示すような塩分観測装置を旭川河道内に設10501/15 1/20 1/25 1/30 2/4

置し，塩分の定点観測を実施した．塩分測定器には、

2/9 2/14 2/19 2/24 2/29

HOBO 電気伝導率ロガーCO-U24-002C を使用し，
水面

図-4 水位および塩分の時間変化
点の桜橋においても海水と淡水の二層状態となって付近、河床付近、中層（水面より 2m）の 3 点の電気いることが明らかである．

伝導率を一時間おきに測定するように設定した．計測

河床付近（赤線）では，小規模な出水があった 1 月

された電気伝導率より塩分を換算し，各水深における

29 日および 2/20 以外では約 15PSU と海水の約半分程

塩分の時間変化を推定する．

度に希釈された塩水が侵入している．また，変動幅は

図-3 に設置位置を示す．本観測では，ケレップ水制

小さいものの大潮・小潮に相関が確認でき，小潮時に群の上流に位置する桜橋(河口からの距離 6.73km)よりやや高くなっている．一方，海面付近（青線）および20m 程度下流側に設置した．設置位置の平均水深は約

中層（緑線）における塩分は，満潮・干潮との相関が4m で，橋脚の後流の影響はほぼない位置にした．測高いことが確認できる．
また，1 月 29 日に発生した 100 m3/s 程度の出水後，定器は約１ヶ月ごとに回収し，データ収集後に再設置を行う．

河床付近では約 2 日，中層付近では約 8 日で出水前と3.2 観測結果

同程度の塩分に回復していることが確認できる．一図-4 に宇野の潮位観測データおよび三野（旭川）の方，水面付近は出水後には淡水となり，観測期間内で水位観測データ，図-6 に塩分の 2016 年 1 月 15 日からは回復に至らなかった．三野の水位観測データより 1

3 月 3 日における観測結果を示す．河口から 6.73km 地

月 29 日の出水前は 1 か月半ほど大きな出水がなく，- 44 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

塩水くさびが上流側へ侵入していたと考えられる．本では，水深方向流速分布を以下の線形モードと仮定

3

観測期間内では，2 月 20 日に約 60 m /s の出水が発生し，水深方向にGalerkin積分することで導出される最しており，塩水くさびが再度下流側へ流出し，回復しもシンプルかつ実用的な準三次元モデルを採用した．

なかったと推測できる．

ui ( x, y, z ) U i ( x, y ) u'i ( x, y) f i ( )本観測より，出水の少ない冬季における旭川下流域(1)の塩水くさびの挙動は，潮位が支配的であることが示

ここで，xi=(x，y) は水平方向のデカルト座標， z はされた．また，観測位置より下流側のケレップ水制域

鉛直方向の座標， ui=(u，v) は xi 方向の流速， Ui=(U，では海水の約半分程度の塩水が存在していると考えV)， u’i=(u’，v’) はそれぞれ xi 方向流速の水深平均成らえる．

分および水深平均成分からの偏差成分を表している．

4. 数値解析また h を水深，zb を河床高とした場合，ζ=(z-zb)/h は無4.1 計算モデル

次元水深を表し，流速分布関数を fi(ζ)= ζ-1/2 より与え塩水流動を生じさせる圧力勾配は性質上“順圧た．流速分布関数より主流および二次流は図-5 の様に(barotropic)”と“傾圧(baroclinic)”に分けられる．順圧表現することができる．

とは水位差による全層的な圧力勾配であり，これによ(2)塩分流動モデル 4)

る運動は浅水流方程式で記述できる．一方，傾圧は密

本研究では，塩分の鉛直分布を線形と仮定すること

度の鉛直分布の差異による断面内の圧力勾配である．

により，傾圧の効果を簡略に考慮できる二次元塩分流

前章で示した観測データによれば，ケレップ水制域

動モデルを用いた．塩分の鉛直分布の概念図を図の流量は，上流水位がほぼ一定であることから，河口-6(a)に示す．ここで，横軸は海水の塩分 S0 に対する水位（潮位）に概ね支配されている．このことから傾

相対塩分

S/S0 で定義される相対塩分の鉛直平均値(= S /S0， S :塩分の鉛直平均値)であり，左側が淡水圧に比べて順圧による流動が大きいものと考えられ= 0），右側が海水(= 1)である．また縦軸は水面る．また，ケレップ水制は潮汐に伴い水面からの露呈（と水没を繰り返すため，順圧による流動について流速からの深さ z，水深 h としたとき，ζ = z/h で定義されの鉛直分布を考慮する必要がある．

る相対水深である． 淡水と海水の場合には塩分は鉛
直方向に一様となる．一方，中間密度の場合は下層のそこで本研究では，浅水流方程式と同等のフレーム

塩分が上層に比較して大きくなる．

で三次元性が考慮できる準三次元モデルを用いて順本研究では，

圧的な流動を求めた後に，傾圧的流動による“分散のおよび上層と下層の相対塩分偏差

S/S0 を用いて，次式のように相対塩分の鉛直分効果”を加える塩分流動モデルを導入した．以下，各モデルの概要を示す．

布を仮定した．

(1)準三次元モデル 3)

1/ 2

準三次元モデルの基礎方程式は，静水圧近似および
平面流速場の水深方向の流速を異なる鉛直分布モー

また，とドを持った多成分連成で表現し，水深方向に積分する近似する（図-6(b)）．

(2)の関係の関係を式(2)のように放物線でことで導出され，比較的低い計算負荷で合理的に三次元性を考慮した流況を再現することが出来る．本研究(a) 淡水

(a)

水面 0
0
?
[
・
・
ﾎ
・
・

(b)

１
底面

相対塩分

海水
１

(b)
ﾌ ｷ
・
・ ﾎ
ﾊ
・ ｪ・
・ ・
ﾆ
・ ﾎ
ﾊ
・
・ ・
・ ・

0

0

１
平均相対塩分

図-5 準三次元モデルによる流速分布の概念図：

図-6 塩分の鉛直分布の概念図：（a）相対塩分の鉛直分布，(b)(a)主流方向，(b)二次流方向

水面と底面の相対塩分偏差の仮定- 45 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

4 0 (1)(3)

ここで，α0 は 0～1 の範囲の値をとる偏差係数であり，値が小さいほど水面と底面の塩分偏差が小さい，
すなわち混合が強い状態を表す．
塩分の輸送方程式は次式で書かれる．
t

hS

x

MS Fx

y

NS

Fy

0

(4)

ここで M S と N S がそれぞれ x，y 方向の順圧による塩分フラックスであり，準三次元モデルの結果を用いる．また，Fx，Fy は傾圧による塩分の付加的フラック
スであり，塩分の鉛直分布を式で近似した場合，それぞれ次式より求められる．

Fx

0

Fy

0

図-7 計算領域および標高

S( S0 S ) 2
h
6S 0

g 0
2 S0

x

S

(5)

S ( S0 S ) 2
h
6S 0

g 0
2 S0

y

S

(6)

4.2 離散化手法 3),4)
本研究では，三角形格子における有限体積法を用い

図-8 ケレップ水制周辺の計算格子て基礎方程式の離散化を行った．Godunov 系統の計算手法を採用しており，特性線に沿って波動方程式を分解し，波の風上方向を考慮した定式化を行うことで，安定かつ高精度に移流計算を行うことができる．またGPGPU を用いた高速並列計算プログラムを作成し，計算時間の短縮化を図った．
5. 再現計算
5.1 計算条件

図-9 に各境界条件を示す．
境界条件
より流量を求めた．図-9
初期条

図-7 に計算領域および地盤高を示す．下流端を児島

件には，1 月 23 日 8:00 における水位および流量を境湾の湾口，上流端を旭川の河口より 10 km とし，図-8界条件とした 5 時間の助走計算後の結果を与えた．まのように三角形非構造格子で分割した．また，ケレッ

た，塩分については，文献より児島湾での塩分は冬季

プ水制は三角形の辺が沿うように配置させ，越流量をでは海水の約半分程度に希釈されているという文献 5)

本間の越竜公式より与えた．本研究では，平水時の塩の結果および，塩水は新鶴見橋（河口から 9.55 km）

水挙動の特徴の再現を目的とし，計算期間は，出水前まで到達しているという知見に基づき，河口から 9.5の 1 月 23 日 8:00 から 20:00 までの 12 時間とした．境km より下流側で 18 PSU という初期条件のもと，上界条件として，上流端には北方水位・流量観測所の流記の助走計算を行い，得られた結果を塩分の初期値と量を与え，下流端には宇野潮位観測所の水位を与えして与えた．

た．ただし，上記期間の北方における水位データは未5.2 観測結果を用いた偏差係数の設定

公開であったので，三野水位観測所の水位データより

式(5), (6)に示すように，傾圧による塩分の付加的フ

北方水位観測所での水位を推定し，同観測所の H-Q 式- 46 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図-10 上層と下層の平均塩分と塩分差の関係

ラックスは，混合の強弱を表すパラメータ 0 を含んでいる．本研究では，第 3 章で示した桜橋での上層と下層の塩分(図-4)を用いて以下の様に α0 を求めた．上層と下層の平均塩分と塩分差の関係を整理すると図-10に示すようになる．塩分が 8 PSU でピークをとり 0
PSU および 16 PSU の両端でゼロとなる．そこで，本研究では，上記の２つの条件が成り立つように α0=2/3と設定した．
図-11 満潮時における塩分の縦断分布：(a)分散あり，(b)6. 結果と考察

分散なし

6.1 縦断的な塩分流動
図-11 および図-12 は，満潮時および干潮時における塩分の縦断分布を示す．ただし，塩分の鉛直分布は，澪筋における平均塩分を用いて式より算出した．また，(a)は本モデル，(b)は分散の効果を入れない場合(α0=0)の結果を示している．(a)の結果では，干潮時・満潮時ともに河口から約 2 km より上流側で二層化する特徴が表れている．また，塩水くさびの先端は，干潮時には河口から約 9.5km，満潮時には 9.8km に位置しており，(b)と比較し移動量が少ない．これは干潮時において，傾圧の影響（上流側への移流）と順圧の影響（下流側への移流）がバランスしていることを示している．以上のように，旭川における冬季の塩水くさびの特徴を概ね捉えられていることから，本解析モ
デルは良好に塩分の挙動を再現できていると考えられる．

図-12 干潮時における塩分の縦断分布：(a)分散あり，(b)6.2 ケレップ水制域周辺の流況

分散なし

図-13 に塩水遡上時におけるケレップ水制域周辺のを仮定している分散モデルでは，低水路で塩分が高く

水深平均流速ベクトルおよび塩分の分布図を示す．まなる一方で，浅瀬では塩分が低くなっている．これは，た，図-14，15 に図-13 内の赤線で示した横断面内の上層の低塩分の水が主に浅瀬へ流入しているためで塩分の鉛直分布を示す．ベクトル図より，ケレップ水あり，丸々らによる観測結果 6)の傾向とよく一致して制によって水平渦が生じており，低水路と浅瀬の間でいる．分散の効果を考慮しない従来のモデルでは，低水の交換が生じていることが分かる．塩分の鉛直分布

水路と浅瀬で塩分差か生じず，やや高い塩分の水が侵- 47 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図-14 満潮時における塩分の横断分布：(a)分散あり，(b)分散なし

図-13 塩水遡上時における水深平均流速ベクトルおよび塩分分布：(a)分散あり，(b)分散なし

入している．本研究では，ケレップ水制域の塩分分布について観測を実施していないが，今後詳細な塩分の挙動を計測し，より詳細な制度検証を行う予定である．
7. 結論
本研究では，旭川下流域のケレップ水制域における平水時の塩分流動特性について，現地観測および数値解析より検討を行った．本研究の結論を以下に示す．
(1)ケレップ水制域上流の桜橋において，塩分の鉛直分
布の定点観測を行った．上層・中層の塩分は潮汐により流動する一方，下層では出水時を除き高塩分となることが明らかとなった．
(2)流速および塩分の鉛直分布を線形仮定した塩分流

図-15 干潮時における塩分の横断分布：(a)分散あり，(b)動解析モデルを構築し，平水時における塩分流動の再分散なし
2)旭川水系河川整備計画，国土交通省中国地方整備局，平成25 年 3 月
3) 石川忠晴，赤穗良輔，新井奈々絵，田潤, 土木学会論文集
B1(水工学)，Vol.72, No.4, I_331-I_336, 2016.
4) 赤穗良輔，石川忠晴, 安河内美咲, 鶴田泰士, 土木学会論文集 B1(水工学), Vol．70, No. 4, pp. I_877-I_882, 2014．
5) 大久保賢治，汽水域研究会, Vol.20, pp.31-33, 2013.
6) 長縄眞吾，池田満之，藤岡賢哉, 川島明昌, 陸水雑，Vol.58,
pp.261-276, 1997.

現計算を行った．下層における高塩分水の停滞・など
従来の解析モデルと大きく異なる結果が得られた．今後モデルの再現性を検証するために，ケレップ水制域
での塩分計測を実施する予定である．
参考文献
1)国土地理院地図の電子地形図（色別標高図）- 48 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

難培養性乳酸菌を用いた乳牛用プロバイオティックス飼料の開発
岡山大学大学院環境生命科学研究科
西 野 直 樹発酵飼料から分離した Lactobacillus acetotolerans 及び Lactobacillus pontis を用い、乳房炎起因菌（Staphylococcus
aureus、Escherichia coli、Streptococcus uberis）及び飼料の好気的変敗に関わる細菌ならびに真菌（Bacillus subtilis、Asperigillus fumigatus、Candida krusei、Pichia anomala、Saccharomyces cerevisiae）に対する抗菌活性を測定した。
また、トウモロコシ発酵飼料（WCS）に単独及び混合添加する調製試験も行い、好気的変敗の抑制効果を検証した。腸内生残性はトウモロコシ WCS を生産、給与する酪農家 6 件の実態調査で評価し、乳牛計 30 頭の糞便
フローラを調べて L. acetotolerans と L. pontis の有無を調べた。L. acetotolerans は S. aureus、E. coli、A. fumigatus
及び B. subtilis に、L. pontis は S. aureus、E. coli、S.uberis 及び A. fumigatus に抗菌活性を示したが、培養上清を中和するといずれの効果も消失した。トウモロコシ WCS に対する L. acetotolerans の変敗抑制効果は単独添加でも確認されたが、L. pontis と混合添加すると抑制作用は顕著に高まった。腸内生残性の評価でも、L. acetotoleransは非常に優れた乳酸菌種であると判断された。ただし、発酵飼料中に 106 cfu/g レベルで存在しても糞便には 104
cfu/g レベルでしか検出されず、牛腸内で優勢菌種となることは難しいと考えられた。
べ、それらを品質制御に応用する研究を継続的に行

1．目的
発酵貯蔵は自給飼料の主要な貯蔵形態であり、牧ってきた。実規模サイロの実態調査も続けており、草、飼料作物、食品副産物など多種多様な飼料素材

発酵飼料乳酸菌の腸内生残性を評価する研究も行っが、ロールベール、バンカー、トランスバッグなどている。それらの取組みの中で、これまで発酵飼料

様々なサイロに密封・貯蔵されている。発酵飼料生から分離されたことがない Lactobacillus acetotolerans

産者の約 5 割は乳酸菌製剤を使用しており、効果がや Lactobacillus pontis が、乳牛腸内で生残しうるプロ

大きい新製品への期待及びその普及性は非常に高い。

バイオティクス候補となることを示してきた。これ

当初の乳酸菌製剤は、貯蔵中の栄養素損失と有害微らの乳酸菌を分離することにも成功しており、有用生物の生育を抑える目的で開発され、関係者の精力乳酸菌を発酵飼料調製過程で増菌し、動物の疾病予的な取組みにより、技術的に見ればそれらの目標は防及び健康増進につなげるという、次世代型添加剤

ほぼ達成された。一方、皮肉なことに、開封後の腐の開発に向けた研究の準備が整った。

敗や長期貯蔵時のカビ発生は、関連技術が進展した

本研究では、上記 2 菌種を中心に、1）乳房炎起

現代の方が解決困難な課題となった。空気の存在下

因菌及び飼料の好気的変敗に関わる細菌・真菌に対で乳酸を代謝する細菌、酵母及びカビは多く、乳酸する抗菌作用、2）実態調査に基づく L. acetotolerans

優勢のいわゆる良質発酵飼料は開封後かえって腐敗と L. pontis の腸内生残性解析を行った。

が進みやすい。当初の添加剤開発では、乳酸生成をいかに促進するかがキーポイントとされたが、近年

2．方法

は同時に酵母やカビを抑えるというマルチ機能が求2.1．乳房炎及び好気的変敗に関わる細菌及び真菌にめられている。Lactobacillus buchneri という 1 菌種が対する抗菌活性腐敗防止機能をもつ乳酸菌製剤として普及している

L. acetotolerans と L. pontis の純粋培養物を用い、が、多量の酢酸を生成する菌種であり、関係者の誰代表的な乳房炎起因菌（Staphylococcus aureus、

もがさらなる改良及び機能強化を求めている。

Escherichia coli、Streptococcus uberis）及び 好気的
変敗関連菌（Aspergillus fumigatus、Bacillus subtilis、

我々は、発酵飼料の貯蔵特性と細菌フローラを調- 49 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

Candida krusei 、 Saccharomyces cerevisiae 、 Pichia

い、
全細菌数の推定には E. coli の 16S RNA 遺伝子をanomala 及び Candida krusei）に対する抗菌作用を含むプラスミドを、L. acetotolerans の推定には L.

ソフトアガー重層法及びアガーウェル拡散法で調

acetotolerans の 16S RNA 遺伝子を含むプラスミド査した。アガーウェル拡散法は培養上清を用いてを用いた。L. pontis の qPCR も試みたが、L. pontis

行ったが、pH を 7.0 に調整した上清と無調整の 2だけを検出するプライマーの設計ができておらず、種類について調査した。

本報告にはデータを示していない。

2.2．発酵飼料の好気的変敗抑制効果
L. acetotolerans と L. pontis の好気的変敗抑制効果
1

は、トウモロコシ発酵飼料（WCS）を材料として

2

パ ウ チ サ イ ロ で 評 価 し た 。 MRS 培 地 で L.

3acetotolerans と L. pontis を培養し、滅菌生理食塩水

5で洗浄した乳酸菌を 105 cfu/g レベルで添加して、
2

46

ヶ月間室温で保存した。開封後、発酵生成物を1012

濃度勾配ゲル電気泳動法（DGGE）及びリアルタイ

Weissella cibaria
Lactobacillus plantarum
Lactobacillus brevis
Lactobacillus acetotolerans
Sphingobacterium sp.
Lactococcus lactis
Enterobacter sp.
Paenibacillus sp.
Clostridium sp.
Bacillus sp.
Lactobacillus casei
Lactobacillus casei
Lactobacillus casei
Acetobacter pasteurianus

11

7

HPLC で測定するとともに、細菌フローラを変性剤

8
9

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14

13
14

ム PCR（qPCR）で調べた。好気的変敗の有無は一Control
LA
LP
LA+LP
Control
LA
LP
LA+LP

部の発酵飼料を 7 日間空気にさらして評価し、7日後の細菌フローラを解析して、変敗抑制効果を検証した。

At siloAfter
opening spoilage test

2.3．乳牛腸内における L.. acetotolerans と L. pontis

図 1. L. acetotolerans (LA)及び L. pontis (LP)を添加したトウモロコシ WCS の細菌フローラ。2 ヶ月間嫌気的に貯蔵して開封し（at silo opening）、7 日間空気に曝して変敗させた（after spoilage test）。

の生残性評価
トウモロコシ WCS を生産及び給与している酪農
家計 6 件を訪問し、発酵飼料と糞便（直腸糞）を採取した。いずれもバンカーサイロでトウモロコ

3．結果と考察シ WCS を生産しており、給与飼料全体に占める発3.1. 及び好気的変敗に関わる細菌及び真菌に対す

酵飼料の割合（DM 当り）は 20～40%であった。発る抗菌活性L. acetotolerans は S. aureus、E. coli、A. fumigatus 及

酵飼料は代表的サンプルを、糞便は乳牛 5 頭からび B. subtilis に、L. pontis は S. aureus、E. coli、S.uberis

採取した。
細菌フローラの解析は、
DGGE と qPCR で行った。

及び A. fumigatus に抗菌活性を示した。乳房炎起因

市販キット（DNeasy Blood & Tissue Kit 及び QIAamp

菌及び好気的変敗関連菌のいずれにも有効という結DNA Stool Mini Kit）を用いて細菌 DNA を精製し、果であるが、培養上清を中和するといずれの効果も

16S rRNA遺伝子のV3領域を対象とするユニバーサ消失した。そのため、抗菌活性の主体は発酵過程でルプライマーを用いた DGGE 及び nested‐PCR を応生じた乳酸及び酢酸によるものと推察され、真菌の用した Lactobacillus 特異的 DGGE を行った。主要な抑制にも非解離型有機酸の抗菌力が作用していると

DNA バンドを切り出して TA クローニングを行い、考えられた。発酵飼料は pH 4.0 前後を示すことが多DNA の塩基配列を測定して BLAST による菌種同定

く、L. acetotolerans と L. pontis の抗菌活性がそのままを行った。

期待できるが、牛腸内は pH 6.0－7.0 に保たれており、糞便とともに排菌された場合でも敷料を含めた環境

qPCR は全細菌と L. acetotolerans を対象として行- 50 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

は pH 7.0－8.0 と酸性条件にはならない。環境性の乳も検出され、L. vini とともに検出頻度の高い乳酸菌

房炎起因菌を抑えるには中性域でも抗菌活性を示すと判断された。これらの結果は L. acetotolerans と L.

ことが望ましく、産業の場で疾病予防効果を発揮す

pontis がトウモロコシ WCS 中で生育・生残しやすい

ることは難しいと判断された。一方、真菌の生育をことを示しているが、3.2 で記載した添加実験の結果

乳酸で抑えることは容易ではなく、A. fumigatus に対では、
貯蔵 2 ヶ月後に L. pontis を確認できていない。

する抗菌活性は乳酸及び酢酸以外の代謝物が関与し

DGGE では 1 つのバンドに複数の細菌 DNA が重なっていると考えられる。そこで、抗真菌作用をもつフて存在することがあり、添加実験でも L. pontis は生ェニル乳酸の生成能を調べたところ、L. acetotolerans

残しているのかもしれない。

にその能力が確認された。定量的な評価を L. pontis
とともに進めており、抗菌活性の機序解明は今後も継続したい。

28
25

15
16

22

34

3.2．発酵飼料の好気的変敗抑制効果
トウモロコシWCSへの添加効果は、
L. acetotolerans

36

29 31

17
18
19
20

30

23
21

27

24 26

単独でも認められたが、L. acetotolerans と L. pontis

35
33

37
38

32

に伴う発熱が開封後 1 週間全く観察されなくなった。
L. pontis の単独添加は全く効果がなく、開封後 2 日

S1
F1
F2
F3
S2
F4
F5
F6
S3
F7
F8
F9
S4
F10
F11
F12
S5
F13
F14
F15
S6
F16
F17
F18

を混合添加すると（Figure 1 の LA+LP）、好気的変敗Farm1以内に発酵飼料は発熱して変敗した。細菌フローラを調べたところ、L. acetotolerans 及び L. pontis の添加に関わらず、Weissella cibaria、Lactobacillus plantarum、
Lactobacillus brevis、Lactococcus lactis といった多様な乳酸菌が確認された。L. acetotolerans はこれらと共

Farm2

Farm3

Farm4

Farm5

15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
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29
30
31
32
33
34
35
36
37
38

Lactobacillus acetotolerans
Lactobacillus pontis
Lactobacillus helveticus
Lactobacillus pontis
Lactobacillus vini
Lactobacillus reuteri
Uncultured bacterium
Uncultured bacterium
Lactobacillus pontis
Lactobacillus casei
Lactobacillus acetotolerans
Lactobacillus casei
Weissella paramesenteroides
Lactobacillus fermentum
Lactobacillus pontis
Lactobacillus pontis
Lactobacillus pontis
Lactobacillus diolivorans
Lactobacillus casei
Lactobacillus amylolyticus
Lactobacillus helveticus
Uncultured bacterium
Lactobacillus casei
Lactobacillus casei

Farm6

図 2. トウモロコシ WCS とそれを給与した乳牛糞便の細菌フローラ。バンカーサイロでトウモロコシ WCS を
調製・利用する 6 件の酪農家を訪問し、発酵飼料と乳牛糞便を採取して細菌フローラを調査した。
Lactobacillus 特異的プライマーを用いた nested PCR で
DGGE を行った。S は給与されていた発酵飼料を、F は
乳牛糞便のサンプルを示す。

存する形で検出されたが、L. pontis は変敗抑制効果を示した L. acetotolerans との混合添加でもその DNA

発酵飼料には認められないのに糞便中に確認されを確認することはできなかった。好気的変敗を起こた 乳 酸 菌 は Weissella paramesenteroides 及 び

した無添加及び L. pontis 添加発酵飼料では Bacillus sp.

Lactobacillus diolivorans であるが、L. casei と L. reuteri

及び Paenibacillus sp.が検出されたが、L. acetotoleransについても発酵飼料に存在するしないに関わらず糞を添加した発酵飼料ではそれらが見られず、抗菌活

便中に検出される事例が多かった。L. amylolyticus、性の情報が反映された結果となった。

L. fermentum、
L. helveticus は糞便中にまったく確認できず、牛腸内で消失したと判断された。これらに対3.3．乳牛腸内における L.. acetotolerans と L. pontis のし、L. acetotolerans の DNA は全ての糞便サンプルに生残性評価

明確に検出され、飼料由来の乳酸菌の中では最も生訪問した酪農家ではトウモロコシ WCS を全て添残する可能性が高いと考えられた。

加剤なし調製していた。
発酵飼料には L. acetotolerans、

qPCR で定量的な解析を行ったところ、発酵飼料中

L. pontis、Lactobacillus casei、Lactobacillus helveticus、の L. acetotolerans は 106 cfu/g レベルで全細菌数のLactobacillus vini、Lactobacillus reuteri、Lactobacillus

100 分の 1 程度であった。一方、糞便中の L.

fermentum、Lactobacillus amylolyticus が検出されたが、acetotolerans は 104 cfu/g レベルで全細菌数の 10,000

いずれのサンプルにも L. acetotolerans は安定して検分の 1 程度に過ぎず、Bacteroides spp.や Clostridium

出された。
Farm 1、
2、
4 及び 6 の発酵飼料には L. pontis

spp.が優勢の牛腸内で健康増進効果を期待すること- 51 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

a

10.0
b
8.0
c
6.0
4.0

d

2.0
Silage total bacteria
Silage L. acetotolerans
Feces total bacteria
Feces L. acetotolerans

Population (log10 gene copies g 1 )は容易ではないと考えられた。

図 3. トウモロコシ WCS とそれを給与した乳牛糞便の全細菌数と L. acetotolerans の菌数。発酵飼料は 6 サン
プルの平均値±標準偏差を、糞便は乳牛 30 頭から採取したサンプルの平均値±標準偏差を示す。異なるアルファベットを付した平均値の間には有意差（P<0.05）がある。

L. acetotolerans を添加したトウモロコシ WCS の給与試験は現在実施中であるが、発酵飼料中の割合を高めても糞便で検出される L. acetotolerans のレベルを 106 cfu/g 以上にすることは難しい。動物の疾病予防及び健康増進につなげる次世代の添加剤としては能力が残念ながら不十分である。しかし、実際に飼育される乳牛で生残性が示唆される有望な候補であることは間違いなく、今後も選抜を続ける予定である。

- 52 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

テンナンショウ属を用いた植物の性転換機構の解明

岡山大学大学院環境生命科学研究科
宮崎祐子
テンナンショウ属はサトイモ科に属する雌雄異株の多年生植物で、年によって個体の性表現が可塑的に変化する。テンナンショウ属の性転換には個体サイズが関係していると言われており、サイズが大きいと雌に、小さいと雄になる傾向がある。
しかしながら性決定の生理的および分子メカニズムは未だ明らかにされていない。
本研究ではカントウマムシグサを用いて花成制御および性決定に関与する遺伝子群、すなわちオス特異的およびメス特異的な遺伝子群を明らかにするため、雄花および雌花の網羅的遺伝子発現解析を行った。また、性決定に関与する栄養分を明らかにするため、球茎内の非構造体炭水化物量および窒素量を測定した。網羅的遺伝
子発現解析の結果、オス特異的およびメス特異的な遺伝子群が明らかとなった。球茎の養分量については、6月の値に対する 10 月の球茎の養分含有率を算出したところ、可溶性糖類のみにおいて有意にオスおよびメスで減少していた。このことから、無性から有性への性表現型の転換に関して可溶性糖類が関与している可能性が考えられた。今後、性決定に関与する遺伝子の発現量と可溶性糖類の関連について明らかにする必要がある。
はじめににより、個体サイズの変化を介した雌雄の性比に偏テンナンショウ属の植物は、地下に球茎を持つサりが生じ、交配様式が変化した結果、遺伝的多様性

トイモ科の多年草で、落葉樹林の林床やその周辺にが低下する、あるいは個体群が維持できなくなる恐生息する。日本はテンナンショウ属がもっとも多様れがある。テンナンショウ属には希少種や絶滅危惧化している地域のひとつで、60 の分類群（51 種 9種が含まれるため、それらの種の保全の観点からも、亜種）が分布している（邑田 2011)。これらの植物

テンナンショウ属の性がどのようにして決定するのは個体サイズに依存して可逆的に性表現を変化させかを明らかにすることは非常に重要である。

ることが知られており、個体サイズが比較的小さい

性表現型の決定は地下に存在する球茎上で、開花ときは葉のみを展開し有性繁殖を行わず（無性）、個の前年に行われる。テンナンショウ属は春に地上に体サイズが大きくなると雄花をつけ（オス）、さらに葉と花を同時に出し、夏から秋に地上部が枯れる。

大きくなると種によって雌花（メス）または両性花

その間、球茎の上では、翌年の葉や花になる芽が成をつけることが分かっている（Kinoshita 1986,

長する。この芽の形態の季節変化を、ユキモチソウ

1987）。
草本植物の個体サイズは一般的に光や土壌栄（ Arisaema sikokianum ）において調べた Fukai

養塩などの環境要因に影響を受けることが考えられ（2004）は、4 月および 5 月には発達する芽は無性

るが、それらの環境要因は容易に変化しやすい。近であり、6 月および 7 月に花序の原基が観察され、年では例えばシカによる食害や森林の都市近郊化な

10 月から 12 月には雌雄が形態的に識別可能になる

どにより、林床に生育するテンナンショウ属の生育と示している。このことから、無性と有性（オスお

環境は変化してきている。

よびメス）が分かれる花芽形成は 5 月から 6 月に、一方、雌雄異株植物にとって、雌雄の各個体がそ雌雄の決定は 10 月までに行われていると予測できれぞれの遺伝子を次世代に残し、種が存続していく

る。

ためには、
雌雄個体間で確実に交配する必要がある。

性表現は個体サイズに依存することが分かっていそのためには、個体群内の雌雄の比が非常に重要でるが、両者の間に見られる傾向は相関関係を検出すある。しかしながら、前述のような生育環境の変化

るにとどまっており、光合成同化産物の獲得量など- 53 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

が関連しているのではないかという示唆もある（濱2015 年 4 月から 5 月にかけて、小葉が 4 枚以上の

尾ら 2004）が、そのメカニズムに言及するものでは個体に個別番号を付与し、性別を記録した。個別番

なく、性の決定機構は未だ明らかにされていない。

号を付与した全ての個体に対し、5 月 8 日に地際偽さらに個体内の光合成同化産物量や窒素量など、個茎直径を 2 方向で記録し、平均値を偽茎直径とした。

体の栄養状態の指標となるような因子が性決定に関

偽茎直径は、個体サイズ（球茎重量、葉面積など）与すると仮定しても、個体の性が決定付けられるのを代表することが報告されており（Kinoshita 1986）、

は雌雄が形態的に判別可能となる時期より前であり、球茎の掘り取りを行う際に採取月ごとに偽茎直径にそれがいつなのかを正確に知ることには手段がなく、偏りがないよう調整するために用いた。

未だ不明なため、光合成同化産物量や窒素量などの個体の掘り取りを毎月 1 回、2015 年 6 月 22 日、7因子がいつ作用しているのかは未解明のままである。

月 21 日、8 月 19 日、9 月 18 日、10 月 26 日に行っ繁殖器官の誘導にどのような個体内養分が影響した。それぞれの月で無性 5-6 個体、オス 5-7 個体、得るのかという疑問に対し、他の植物種では、繁殖

メス 2-3 個体ずつ、地上部、球茎を含む個体全体を器官への投資が完了した後に最も減少した個体内養採取した。

分が最も重要であるとみなしている（Ichie et al.

■網羅的遺伝子発現解析

2005, Ichie & Nakagawa 2013）。この考え方を適用

オス花序およびメス花序をそれぞれ 3 個体からすれば、テンナンショウ属においては、無性よりも2015 年 4 月 27 日に採取した。採取した花序はそれ繁殖器官を産出するオスやメスのほうが、さらにオ

ぞれ CTAB 法(Chang et al. 1993)で RNA 抽出を行い、スよりも果実を産出するメスのほうが、より個体内

DNase 処理(TURBO DNA-free DNAse, Ambion) を行っ

養分を消費すると考えられるため、繁殖期間後に最たのち、カラム精製(RNeasy Mini Kit, Qiagen)を行も減少した養分の不足が、それぞれの性表現型を分った。その後クオリティチェック（2100 バイオアナ

ける要因の一つであると考えることができる。

ライザ, Agilent Technologies)を行った後、網羅的

そこで本研究では性が形態的に判別不可能な時期

遺伝子発現解析に供試した。

に雌雄を判別する材料として花成制御遺伝子に着目

網羅的遺伝子発現解析（RNA-seq）は次世代シーケ

し、花成および性決定を制御する遺伝子群を網羅的ンサー（HiSeq 2500, Illumina）を用いて行った。

遺伝子発現により特定することとした。さらに、個得られたデータはクオリティコントロールを行った体内の光合成同化産物量および窒素量を測定してそ後、de novo アセンブリを Trinity (Grabherr et al.

れらの関係を解析することで性転換の要因を解明し、2011)を用いて行った。得られたコンティグに対し、性転換を行う植物の生活史の理解および保全への基

Blastx を用いてアノテーションを行った。その後、

礎情報とすることをねらいとした。

コンティグに対しマッピングされたリードを用いてedgeR (Robinson et al. 2010)により発現解析を行材料と方法

い、雄花と雌花の間で発現に差のある塩基配列を抽■対象種と調査地出した。

対 象 種 は カ ン ト ウ マ ム シ グ サ (Arisaema■非構造体炭水化物量の測定

serratum)とした。調査およびサンプリングは岡山県

凍結乾燥させた球茎を QIAGEN Tissue Lyser II

岡山市龍ノ口山国有林（北緯 34°42’、東経 133°

（QIAGEN, Hilden, Germany）の Grinding Jar Steel

58’）
内の登山道沿いに行った。
本種は日本の本州、2×25ml を用いて粉砕した。1.5ml チューブの重量

四国、九州、韓国の済州島に分布する（邑田 2011）。

を電子天秤で測定した。1.5ml チューブに入れた粉

おもに有性生殖を行い、地下茎が分球し子芋が形成

砕済み球茎 3.0-4.0mg の電気オーブン 70℃で乾燥さされることはほとんどないとされている（Kinishita

せ、重量を測定した。前もって測定した 1.5ml チュ

1987）
。

ーブの重量を引き、乾燥後の重量を計算した。1.5ml- 54 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

チューブに入った乾燥済み球茎に 80％エタノール

た。デンプンをグルコースに変化させて測定してい500μl を注ぎ、攪拌した後 10000rpm で 10 分間高速

るため、デンプンの含有量を計算する際に、得られ遠心分離器にかけ、上澄みを回収した。エタノールた溶液中のグルコース量を 0.9 倍し、デンプン量とを注ぎ、上澄みを回収するまでの作業を 3 回繰り返して算出した。

した。回収した上澄みをヒートブロック 90-100℃で■全窒素量の測定

エタノールが飛ぶまで熱した後、チューブに 1.0ml

非構造体炭水化物量の測定に用いたものと同様のの超純水を加え、攪拌した。これを可溶性糖類抽出

粉砕した球茎サンプルを 3.5-4.0mg 秤量して錫箔に分画とした。

包んだ。連続フロー型同位体比質量分析計(Delta V

可溶性糖類抽出分画 500μl を試験管に取り、5%フェ

advantage, Thermo Fisher Scientific, Waltham,

ノール溶液 500μl を加えてよく攪拌した。ここに、USA)で全窒素量を測定した。

濃硫酸 2.5ml を、液面に直接あたるように注入した。

■球茎内の養分量の季節変化

よく攪拌した後、45℃の恒温槽中に 30 分置き、取り6 月から 9 月および 10 月の間の養分含有率の変化出した後、よく攪拌した。シッパーユニット（シッを性表現型ごとに比べるために、季節変化率を計算

パー160, SHIMADZU, Kyoto, Japan）付きの分光光度した。

計（UVMINI-1240, SHIMADZU, Kyoto, Japan）を用いて、490nm で吸光度を測定した。このシッパーユニ
ットのうち、しごきポンプ用塩ビ系チューブは濃塩
酸によって劣化するため、測定後取り替えた。0,

ここで、ΔN をある養分の季節変化率、Ni を 9 月ま

0.03125, 0.0325, 0.125,0.25 mg/ml のグルコース

たは 10 月のある養分の含有率、NJ をある養分の 6溶液を測定した検量線から、濃度を計算し、可溶性

月の平均値とする。季節変化を可溶性糖類、デンプ

糖含有率とそれに球茎乾燥重量を掛けた可溶性糖含

ン、窒素含有率で計テンナンショウ属の性表現型の有量を計算した。この検量線上に乗らなかったもの

決定に個体内養分が関与しているという仮説の下、は、倍に薄めてから測定した。

テンナンショウ属の性表現型の決定に個体内養分が可溶性糖類を抽出した残滓のエタノールを飛ばした

関与しているという仮説の下、算し、無性、オス、後、チューブに 0.2mol/L の水酸化カリウム溶液を加メスで比較した。

え、攪拌した。チューブをヒートブロック 100℃に■解析方法

30 分置いた。取り出したチューブを冷却した後、月ごとの偽茎直径の差について、一元配置分散分

1mol/L CH3COOH を 200μl 加えて溶液を中和した。

析を行い、有意差がないことを確認した。偽茎直径

Amyloglucosidase 溶液を 500μl 加えて攪拌、チュと葉面積、地上部乾燥重量、球茎乾燥重量の関係にーブを 55℃の恒温槽に１時間置き、取り出した後関し、葉面積、地上部乾燥重量、球茎乾燥重量を自100℃のヒートブロックに１分間置いた。冷却後

然対数変換した上で、単回帰分析を行った。地上部

10000rpm の高速遠心分離器 15 分かけ、得られた上

乾燥重量、球茎乾燥重量、養分含有率の季節変化に澄みを別のチューブに回収、これをデンプン抽出分

ついて、一元配置分散分析を行った。ある当年の性画とした。

表現型について、翌年の性表現型の違いによって差

デンプン抽出分画の定量はグルコース C II-テスト

があるかにどうかについては、t 検定を行った。以

（WAKO, Osaka, Japan）を用いた。デンプン抽出分

上 の 解 析 は す べ て

画 20μl を試験管に入れ、発色溶液 3.0ml を注ぎ、（https://www.r-project.org/） を使用した。

よく攪拌した。これを、分光光度計を用いて 505nm
で吸光度を測定した。0, 0.25, 0.5, 1.0, 1.5,

結果

2.0mg/ml のグルコース溶液を使って検量線を描い■偽茎直径と性表現- 55 -

R

version3.2.0

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

調査を行った全個体について、性表現型ごとの偽
茎直径の頻度分布を示した（図１）。無性、オス、メスの順に偽茎直径が大きくなっているが、明瞭な移行サイズがあるわけではなく、無性とオス、オスとメスにはある程度の移行幅が存在することがわかった(図 1)。

図 2. 球茎乾燥重量の季節変化.
図 1. 性表現別の偽茎直径の頻度分布.
横軸は偽茎直径、縦軸は頻度。白抜きの黒線は無性、青はオス、赤はメスを示す。

■網羅的遺伝子発現解析
雌花および雄花それぞれから、他種で報告されてメスの花序乾燥重量は、サンプル数が少ないためいる雄花および雌花に特異的な遺伝子と相同性のあ統計解析を行わなかったが、6 月から 9 月にかけてる遺伝子がそれぞれ特定され、塩基配列が得られた。

増加している傾向が見られた。

（＊詳細については論文化のため、詳細情報を非掲■個体内養分量の季節変化

載といたします。
）

可溶性糖含有率について、無性では有意な季節変化■地上部乾燥重量、球茎乾燥重量と偽茎直径との関。月ごとの平均値は 6 月からがみられた（P < 0.05）

係

9 月まで減少し、10 月には増加した。オス、メスで偽茎直径と対数変換した地上部乾燥重量の関係は、は有意な季節変化はなかった。

無性（P < 0.001）、オス（P < 0.001）、メス（P < 0.001）

デンプン含有率では、無性で有意な季節変化がみらで有意な正の相関がみられた。偽茎直径と対数変換れた（P < 0.01）。また、6 月から 9 月までは減少傾した球茎乾燥重量との関係は、無性（P < 0.01）、オ向を示していた。オス、メスでは有意な季節変化はス（P < 0.01）、メス（P < 0.001）で有意な正の相みられなかった。

関がみられた。

窒素含有率については、無性（P < 0.001）、オス■地上部乾燥重量、球茎乾燥重量、メスの花序乾燥（P < 0.001）、メス（P < 0.01）で有意な季節変化

重量の季節変化がみられた。

掘り取った個体のうち、地上部を採取できたもの■球茎内の養分量の季節変化

は、無性では 8 月 2 個体、9 月 3 個体、10 月 0 個体、養分含有率の季節変化の変化率は、可溶性糖類でオスでは 8 月 3 個体、9 月 0 個体、10 月 2 個体と、8は、10 月の値に有意な性表現型間の差があり（図 3,月以降に減少した。地上部乾燥重量の季節変化を見P < 0.05）、無性で大きく、オス、メスで小さい傾向

ると、無性、オス、メスで有意な季節変化はみられを示した。デンプン含有率では、9 月（P < 0.05）、

なかった（P > 0.05）。

10 月（P < 0.01）の値に有意に性差がみられ、無性

球茎乾燥重量の季節変化を見ると、無性、オス、メで小さく、オス、メスで大きい傾向を示した。

スで季節変化はみられなかった（図 2, P > 0.05）。

- 56 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

る。
可溶性糖類の含有率は6月から9月まで減少し、10 月に増加した。
地上部のサンプル数が 10 月には 0個体だったことからも分かるように、この時期には地上部がほとんど消失しており、球茎は休眠状態だったと考えられる。そのため、冬の気温低下の対策として、可溶性糖類を生産していた可能性がある。
窒素量の増加は、劣化する地上部からの転流が考えられる。
オスは、地上部乾燥重量、球茎乾燥重量、可溶性
糖類量、デンプン量で季節変化は認められなかった。
オスは無性よりも個体サイズが大きいということも図 3. 球茎内の 6 月の養分量に対する 9 月および 10 月

あり、無性より養分等の蓄積量が多く、蓄積量に対の養分量の変化率.

する消費量が小さいため、無性ほどの変化は見られない。窒素量は増加しているが、無性の増加と比較■翌年の性表現型

すると増加の割合は小さい。この要因もまた、劣化

9 月および 10 月の芽では、翌年の性表現型を形態していく地上部からの転流が考えられる。

的な観察から判別することができた。

メスは、地上部乾燥重量、球茎乾燥重量、可溶性

9 月および 10 月に採取した無性 11 個体のうち、5

糖類量、デンプン量で季節変化はみられなかった。

個体が翌年オスになることがわかった。当年無性の

メスは、無性やオスと違い、果実への投資などコス

うち、雄花序をつけた 5 個体は、すべて球茎乾燥重

トが大きいはずだが、それを含めても相対的には球量が 1g 以上だった。
翌年オス個体と翌年無性の個体

茎養分に影響が出ないほど蓄積量が大きいと考えらにおいて、球茎乾燥重量に有意差はなかった（P >れる。窒素量は増加しているが、無性やオスに比べ0.05）。翌年オス個体と無性の個体において、可溶性

ると増加の割合は小さい。これには、メスでは果実

糖類含有率、デンプン含有率、窒素含有率の差はみを成熟させるために地上部を維持しなければならなられなかった。

いことが関係していると考えられる。

当年オス 9 個体のうち、1 個体が雌花序をつけて■繁殖器官への資源分配

おり、ほかはすべて雄花序をつけていた。統計解析
は行わなかったが、翌年メス個体と翌年オス個体で、10 月の可溶性糖類含有率で有意に性表現型ごとに差があり、無性よりもオス、メスで小さくなって球茎乾燥重量、養分含有率に差はみられなかった。

いた。つまり、無性よりも、オスやメスで繁殖期間

当年メス 5 個体のうち、2 個体は雄花序をつけて中の消費量が大きかった養分であり、オスやメスのおり、他の個体は雌花序をつけていた。翌年オス個繁殖に対して、可溶性糖類が重要な養分である可能

体と翌年メス個体では、球茎乾燥重量や養分含有率性がある。したがって、性表現型の転換に関し、可に差はみられなかった（P < 0.05）。

溶性糖類が関与している可能性が考えられる。
■翌年の性表現型と養分量の関係

考察

9 月と 10 月に採取した球茎上の芽から、実際に性■性表現型別の季節変化

表現型が変化することが確認できた。また、繁殖の性表現型によって、地上部や球茎乾燥重量、養分終わった 9 月と 10 月に、翌年の性表現型による養分量の季節変化には違いが見られた。無性は、球茎乾の違いはないことが示された。

燥重量が減少傾向で、球茎のデンプン量が減少していた。これは、個体の維持や翌年の葉や花への投資のために、炭水化物が使われていたことを示してい- 57 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

tree, Dipterocarpus tempehes. Journal of

結論
当年の性表現型（無性、オス、メス）によって、Tropical Ecology, 21:237-241.

養分の季節変化に違いがあることがわかった。無性

Ichie T, Nakagawa M (2013) Dynamics of mineral

ではデンプンや可溶性糖類は減少し、オスやメスでnutrient storage for mast reproduction in theは変化しなかった。個体サイズに対する相対的な消

tropical emergent tree Dryobalanops aromatica.

費量が違いの要因であることが考えられた。窒素にEcological Research, 28: 151-158.

関しては、無性、オス、メスで増加していた。劣化

Kinoshita E (1986) Size-sex relationship andArisaema

する地上部からの転流が要因と考えられ、地上部のsexual

季節変化が球茎内の窒素量に影響する可能性が示唆(Araceae). Ecological Research, 1:157-171

された。

dimorphism

inJapanese

Kinoshita E (1987) Sex change and population

養分量の季節変化から、繁殖期間中にオスやメス

dynamics in Arisaema (Araceae) I. Arisaema

で最も減少していたのは、可溶性糖類であることがserratum (Thunb.) Schott. Plant Species示された。可溶性糖類が繁殖期間中に最もオスやメ

Biology, 2: 15-28.

スで消費される養分であり、オスやメスに性表現型

邑田仁(2011) 原色植物分類図鑑 日本のテンナンを決定する際にも影響する可能性が示唆された。

ショウ, 北隆館, 東京.

今後、網羅的遺伝子発現の結果明らかとなった性R Core Team (2015) R: A language and environment

決定に関与すると考えられる遺伝子の発現量と可溶

for statistical computing. R Foundation for性糖類の関連について明らかにすることで、養分量

Statistical Computing, Vienna, Austria. URL

が性決定に与える影響について明らかにすることがhttp://www.R-project.org/.

可能であると考えられた。

Robinson MD, McCarthy DJ, Smyth GK. (2010) edgeR:a Bioconductor package for differential

引用文献

expression

analysis

Chang S, Puryear J, Cairney J (1993) A simple andexpression

data.

efficient method for isolating RNA from pine

26:139 40.

trees. Plant Mol Biol Rep 11: 113 116.
Fukai S (2004) Floral initiation and developmentof the sex-changing plant Arisaema sikokianum(Araceae). International Journal of Plant
Sciences, 165: 739-744.
Grabherr MG, Haas BJ, Yassour M et al. (2011)
Full-lengthtranscriptome

assembly

from

RNA-Seq data without a reference genome.
Nature Biotechnology, 29: 644 652.
濱尾章二、成田佳紀、加藤英介、野崎貴史、佐野智彦（2004）性転換するマムシグサにおけるサイズと花序への投資量の関係. 日本植物園協会誌、
38: 113-118.
Ichie T, Kenta T, Nakagawa M, Sato K, Nakashizuka
T. (2005) Resource allocation to reproductive
organs during masting in the tropical emergent- 58 -

ofdigitalBioinforma

Oxf

gene
Engl.:

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

腫瘍抗原糖鎖をカップリングさせた機能性糖鎖ポリマーの抗腫瘍抗体産生への応用
岡山大学大学院 環境生命科学研究科 生物機能化学講座
木村 吉伸

（概要）
本研究は，ローヤルゼリー中に我々が見出した腫瘍抗原含有糖鎖を利用した抗腫瘍抗体の作成や腫瘍免疫療法への応用利用を目的としている。平成 27 年度は，ポリグルタミン酸とローヤルゼリータンパク質由来の糖鎖を用いた人工糖鎖ポリマーの調製と応用利用を目指した。その結果，多価数の糖鎖（糖ペプチド）をカップリングさせた腫瘍抗原糖鎖含有の人工糖鎖ポリマーの合成方法を確立するとともに，腫瘍抗原糖鎖の精製法に改良を加えて，逆相クロマトを用いた多量調製法を開発した。また，T 抗原の酵素合成に利用できる新規 1-3Gal転移酵素の遺伝子同定と発現系構築に成功した。

申請者らは， T-細胞増殖促進活性を持つローヤル

M., and Kimura, Y. (2014) Biosci. Biotechnol. Biochem.,

ゼリータンパク質 (RJGP) に結合する糖鎖の構造と78, 276-278）。しかしながら，人工糖鎖ポリマーを作

機能解析を行う過程で，腫瘍抗原の一つである T-抗成し，抗 T 抗原抗体作成等に利用するためには，ポ原 (Galβ1-3GalNAc) を有する新しいタイプの抗原

リマーへのカップリング効率を考慮すると， 50 mg

性糖鎖がローヤルゼリー中に存在することを世界に以上の T-抗原含有糖ペプチドが必要であることが判

先駈けて発見している (Kimura, Y., Ushijima, T.,

明し，既報の糖鎖調製方法に改良を加える必要が生

Maeda, M., et al. Biosci. Biotechnol. Biochem., 70,

じた。そこで，平成 27 年度には T-抗原含有糖ペプ

2583-2587 (2006), Kimura, Y., Nagai, H., Miyamoto, M.,

チドの調製法の再検討を行った。粗ローヤルゼリー

Kimura, M., and Yonekura, M. (2010) Biosci. Biotechnol.

凍結乾燥物（50g，茨城大学 農学部 米倉政実 教授

Biochem., 74, 2148-2150 (2010))。

より譲渡を受けた）を透析後，3%ギ酸中でペプシン（300 mg）消化した（37 ，72 時間）。反応終了後，アンモニア水で中和した後，減圧濃縮を行った。得
られた酵素消化物を脱塩水(5L)に対して透析し，糖ペプチドを透析外液に回収した。透析外液を減圧濃縮した後，Sephadex G-25 column (4.0 x 85 cm) で糖ペ

1. RJGP からの T-抗原含有糖ペプチドの調製と人プチドを部分精製した。得られた糖ペプチドを濃縮

工糖鎖ポリマー合成

乾固した後，蒸留水（23ml）に溶解し， Wako gel

本課題では，ローヤルゼリー糖タンパク質由来の100C18(Φ 3 x 20 cm)に供し、疎水クロマトにより糖T-抗原含有糖鎖を利用して，人工糖鎖ポリマーを調ペプチドの精製を行った。吸着した糖ペプチドは，製することにより，抗腫瘍抗体の作成や腫瘍免疫療

アセトニトリル濃度を 0% から 25% まで直線的に法への応用利用を目指した。

上昇させることで溶出させた。その結果，糖鎖構造

平成 26 年度迄に，ローヤルゼリー糖タンパク質及びペプチド構造の違いにより，図１に示すように(RJGP3)のヒドラジン分解物から，レクチン アフィ

数種類の糖ペプチドが分離された。それぞれの糖ペ

ニティークロマト，順相 HPLC を用いることで，T-

プチド画分について糖鎖構造解析を行ったところ，

抗原含有糖鎖を比較的多量 (5 mg 程度) に調製する

画分 II に，
T-抗原含有の複合型糖鎖を含む糖ペプチ方法を確立していた（Maeda, M., Tanaka, T., Kimura,

ドが特異的に回収されていることが明らかになった。

- 59 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

一方，画分 III には Man9GlcNAc2 構造からなるハ
イマンノース型糖ペプチドが溶出していた。
そこで，この２つの糖ペプチド画分を，人工糖鎖ポリマー合成に使用した。

り確認した。その結果，T-抗原糖鎖含有糖ペプチド（画分 II）は，T-抗原糖鎖を含まない複合型糖鎖が混在していることが分かったため，今後，T-抗原糖鎖のみを含む糖ペプチドの調製方法の確立が必要である。しかしながら，混在する糖鎖は哺乳動物にも存在する構造であるため，これらの糖鎖に対する抗体は生じない可能性もあるため，
平成 28 年度以降は，
この糖鎖ポリマーを用いた抗体作成に着手する予定
次いで，ペプシン消化で得られた T-抗原含有糖ペである。一方，画分 III から調製した人工糖鎖ポリ

プチド及びハイマンノース型 (Man9GlcNAc2)糖ペ

マーについては，Man9GlcNAc2 がほぼ均一構造としプチドから Asn-糖鎖への誘導を行った。上で得られて結合していることが分かった。 RP-HPLC によりた糖ペプチドをアクチナーゼ消化後，ゲルろ過とShodex NH2-P 樹脂を用いた親水性クロマトを組み合わせる方法（Maeda, M., Takeda, N., Kimura, M., andKimura, Y., Biosci. Biotechnol. Biochem., 77, 1269-1274(2013)）により，Asn-糖ペプチドを精製した。人工糖鎖ポリマーの合成に当たっては，ポリマー骨格として生

物分解性ポリマーである好塩古細菌由来 L 体 ポ
リグルタミン酸(L- PGA，平均分子量 75 万，
糖鎖ポリマーの合成は，
TOYOBO 社製)を用いた。
L- PGA と Asn-糖鎖を脱塩水に溶解後，縮合剤である 4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium Choloride n-Hydrate(DMT-MM)を添加し，室温で 4 時間撹拌した。反応終了後，ゲルろ過と逆相 HPLC を組み合わせることで合成糖鎖ポリマ
ーを精製した。L- PGA に対する Asn-糖鎖の結合率
は，アミノ酸組成分析により得られた L- PGA 由来
グルタミン酸(Glu)と Asn-糖鎖由来アスパラギン酸(Asp)のモル比から算出した。糖鎖構造は，糖鎖ポリマーをヒドラジン分解後，遊離糖鎖を N-アセチル化，ピリジルアミノ化し，HPLC 及び質量分析によ- 60 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

精製した人工糖鎖ポリマーのアミノ酸分析の結果から，

L- PGA

ハイマンノース型糖鎖-γPGA を用いた抗糖鎖抗体

1 分 子 当 た り 350 分 子 程 度 の作成は今後の検討課題であるが，多価数の糖鎖がカMan9GlcNAc2 糖鎖（糖ペプチド）が結合しているこップリングしているポリマーであるため，抗糖鎖抗とが明らかになった。

体の作成は可能であると思われる。これまでに，HIV

2. RJGP 由来の糖ペプチド (Man9GlcNAc2-Asn)含有

コートタンパク質に結合するハイマンノース型糖鎖

糖鎖ポリマーの免疫活性
T-抗原含有糖ペプチドをカップリングさせた人工に対するモノクローナル抗体が作成され，抗 HIV 抗

糖鎖ポリマーについては抗体作成に使用するため，体への利用が期待されている（Astronomo, R.D., Lee,平成 27 年度は，幾つかの免疫細胞（樹状細胞やマク

H.K., Scanlan, C.N., Pantophlet, R., et al. J. Virol., 82,

ロファージ等）表面に発現が確認されているレクチ

6359–6368 (2008)）。従って，今回作成した

ン様レセプターに注目し，ハイマンノース型糖鎖をMan9GlcNAc2-Asn を多価カップリングさせた糖鎖

コンジュゲートさせた人工糖鎖ポリマーの免疫活性ポリマーは，新たな抗 HIV 抗体作成への利用が期待を調べた。L-γPGA，ハイマンノース型糖鎖をカップされる。

リングさせた L-γPGA (0.5~100μg/mL) でヒト未熟樹

3. T-抗原含有 N-グリカンの酵素合成を目指した昆状 細 胞 (iDC) を 刺 激 後 ,iDC 上 に 発 現 さ れ る

虫 特 異 的 な β 1-3 ガ ラ ク ト ー ス 転 移 酵 素

CD80/86 量変化を解析した（下図）。

( 1-3GalT)の発現系構築。
天然の RJGP には T-抗原含有 N-グリカンの存在
量が少ないため，酵素合成法を利用した T-抗原含有
糖鎖の調製方法の確立に着手した。1-3GalT 遺伝子（ミツバチ，ショウジョウバエ）同定は既に完了しており(Yamamoto-Hino M, Yoshida H, Ichimiya T,，et al.
Genes Cells. 20, 521-42 (2015), Ichimiya T, Maeda M,
昆虫細Sakamura S, et al. Glycoconj J. 32, 141-51 (2015)) ，胞を用いた遺伝子発現系構築を行った。その結果，２

その結果，
L-γPGA 及び動物細胞で定常的に発現さ種のミツバチ

1-3GalT の発現系構築に成功し，T-れ て い る 複 合 型 糖 鎖 (NeuNAc2Gal2GlcNAc2Man3

抗原含有糖鎖の酵素合成法の端緒を開くことができ

GlcNAc2)をカップリングさせた L-γPGA は，iDC 上たと考えている（図４）。

の CD80/86 の発現量に影響を与えないのに対して，
ハ イ マン ノー ス型 糖鎖を カ ップ リン グさ せた
L-γPGA は，CD80/86 の発現量を顕著に抑制することが分かった。この結果は，異なる構造のハイマン
ノース型糖鎖 (Man8GlvcNAC2)をカップリングさせた人工糖鎖ポリマーによる刺激と同様であった。
この事実は，ハイマンノース型糖鎖-γPGA が免疫抑制剤として利用可能であることを示唆している。平成 28 年度以降は，RJGP 由来のハイマンノース型糖ペプチドをカップリングさせた糖鎖ポリマーを用いて，iDC 表面の CD80/86 の発現量抑制機構の解析

謝辞と免疫抑制活性の応用利用についての展開を図る予最後になりましたが，本研究課題の推進にご協力頂定である。

きましたウェスコ学術振興財団に感謝申し上げます。

- 61 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 62 -

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【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 64 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 65 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 66 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

オオムギ発芽時耐塩性 QTL の同質遺伝子系統作出と生活環横断的な塩ストレス応答機構の解明

岡山大学資源植物科学研究所
最相 大輔
（概要）
塩害は作土中の過剰な塩類による作物の生育阻害を引き起こす．地球規模の気象変動は，塩類集積
土壌をはじめとした耕地の劣化を拡大させている．
世界規模の人口拡大に伴い益々の食糧増産が求められる中，塩類集積土壌での作物の生産性拡大は育種的にも喫緊の課題である．我々はこれまでに岡山大学が保有するオ
オムギ遺伝資源を材料に，発芽時耐塩性の種内変異の網羅的調査と量的形質遺伝子座(QTL)マッピングに取り組み，東アジア在来系統に特徴的な耐塩性 QTL(3H および 7H 染色体)を同定している．本研究では，醸造用品
種「はるな二条」の遺伝背景に，東アジア在来系統の耐塩性 QTL 領域のみが組換わった同質遺伝子系統(Near
Isogenic Line; NIL)の作出に取り組んだ．
「はるな二条」を花粉親に 3 回の戻し交雑個体(n=325)を 3 世代自殖させた NILs 集団(B3F3 世代)を育成した．QTL マッピングに用いた連鎖地図を基に平均 5cM 間隔で SNP マーカ
ーを選定し，Amplicon-seq による一斉ジェノタイプ用のプライマー対（206 loci）を設計した．さらに，生活環横断的な塩ストレスに対する応答機構を遺伝学的，生理学的に解析するために，非破壊系で効率よく塩ストレス応答を評価するための評価系構築にも取り組んだ．

広い種内変異を有しており，発芽時耐塩性につい（研究の背景および目的）
地球規模の気象変動は，塩類集積土壌をはじめとては東アジアに耐性系統が分布する事が明らかとした耕地の劣化を世界的に拡大させている．塩害となっている(Mano et al. 1996)．醸造品種「はるな二条」

は，土壌中の過剰な塩類が引き起こす作物の生育阻と日本の在来系統「早木曽 2 号」の交雑に由来する害である．
2011 年には世界総人口が 70 億人を超え，組換え自殖系統集団 (F8 世代)110 系統を用いた量的将来的に 100 億人を超えるとも予想される中，耕地

形質遺伝子座(QTL)マッピングにより，東アジア在の劣化が進めば世界的な食糧難はさらに深刻になる

来系統に特徴的な耐塩性 QTL(3H および 7H 染色体)と予想されることから，塩類集積土壌でも生育するを同定している（最相ら 2014, 伊藤ら 2015）．耐塩

耐塩性作物の開発は喫緊の課題となっている．

性作物開発のためには，オオムギで見出された発芽

植物の耐塩性は多くの遺伝子が関わる複雑な形質

時耐塩性の原因となる遺伝子を明らかにすると共に，であると共に，生育ステージ毎に異なる制御を受け分子生理的に耐塩性機構の全貌が解明する事が必要ていると考えられている(Yamaguchi and Blumwaldとなる．

2005)．塩類ストレスに対する感受性は，発芽時が特本研究では，
発芽時耐塩性の応答機構を遺伝学的，に敏感であることから，発芽時の NaCl に対する生

生理学的に解析する上で有効な研究材料となる，耐理的，遺伝的応答機構を明らかにすることは重要な

塩性 QTL 領域の同質遺伝子系統(Near Isogenic Line;課題である．

NIL)の育成に取り組んだ．また，非破壊系で効率よく塩ストレス応答を評価するための評価系構築にもオオムギは，コムギ，イネ，トウモロコシに次ぐ4 番目の生産高を誇る重要な穀物の一つであるが，取り組んだ．

オオムギはイネ科作物の中で塩害に強いとされている (馬 2010)．オオムギは耐塩性に関する幅（材料および方法）- 67 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

2014-2015 シーズンの栽培実験は，岡山大学資源であった．オオムギの条性形質は Vrs1 遺伝子座がコ

植物科学研究所（倉敷市）の実験圃場にて行った．

ードする転写因子 HvHox1 遺伝子に支配されるメン「はるな二条」（OUJ247；二条性）と「早木曽 2 号」

デル形質である事が知られていることから(OUJ064；六条性)の F1 に対して，「はるな二条」を(Komatsuda et al. 2007)，本 B3F3 集団では，3 回の戻花粉親に3 回の戻し交雑したB3F1 個体(n=65)の自殖

し交雑によって任意の一遺伝子座の集団内頻度が種子から，各 5 個体を 3 世代自殖させた B3F3 世代

Vrs1 座と同程度にまで減少していることが示唆され(n=325)を実験に使用した．各系統 5 粒ずつを慣行法た．

に従って栽培した．各系統について圃場出穂日およ２．ゲノムワイド SNP マーカーの選抜

び芒穂型を調査した．
NIL の選抜に用いる genomic DNA は，B3F1 個体「はるな二条」および「早木曽 2 号」を材料にしおよびその後代個体の葉身から抽出した．QTL 領域

た RNA-seq により，オオムギのリファレンス・ゲノの導入とゲノム背景の均一性の評価には，RNA-seq

ム（Morex）に対してそれぞれ約 4 万，6 万の SNPsに よ っ て 取 得 し た 一 塩 基 多 型 (single nucleotideを検出している(Takahagi et al. under revision)．NIL を

polymorphisms; SNPs) を利用した (Takahagi et al.

選抜する過程では，標的領域以外のゲノム領域を戻

under

EnsemblPlants

し交雑親由来のゲノムで置換されていること（ゲノ(http://plants.ensembl.org/Hordeum_vulgare/Info/Index)

ム背景の均一性）を確認する必要がある．これを実から公開されているオオムギのリファレンス・ゲノ

現する方法として，NGS を利用した Amplicon-seq

ム配列を鋳型にして，各 SNP を含む領域 150~200bpが有効である事から，そのための実験環境の構築にを増幅するプライマー対をPrimer3 により設計した．

取り組んだ．RNA-seq により得られた SNPs をゲノ

これらの中から連鎖地図構築に用いた 653 SNPs を

ムリファレンス・ゲノム上に位置付け，両親間で多抽出した後に，約 5cM 間隔でゲノムを網羅する SNP型的なサイトを対象に SNP を含む150~200bp を特異

マーカーを選抜した．一方，QTL 領域の選抜のため的に増幅するプライマー対を Primer3 により設計しに，各 QTL に対してゲノム中の対象領域を挟む 2た．設計出来た 2,445 loci について，QTL 解析に用組の Cleaved Amplified Polymorphic Sequences (CAPS)

いた連鎖地図と相互に参照して約 5cM 間隔でゲノ

マーカーは GENETYX ver13.0.3 により設計した．

ムを網羅する SNP マーカーを選抜した．その結果，

revision)．

206 SNP loci を設定することに成功した．現在，こ（結果および考察）

れらのプライマーからランダムに PCR 実験を実施

１．はるな二条／早木曽 2 号 B3F3 集団の栽培

し，増幅の成否についてプライマーの品質確認を進B3F3 種子が採集できた 319 系統について圃場秋めている．

播栽培した結果，319 系統全てについて圃場出穂日
３．耐塩性 QTL 連鎖マーカーの開発

データを取得した．2014-2015 シーズンの倉敷市での慣行栽培条件下では，「はるな二条」「早木曽 2 号」

２．で設計した 206 プライマー・セットを用いたの出穂迄日数は，それぞれ 134.5±2.7，143.8±0.8

Amplicon-seq により，任意のゲノム領域が供与親

日 (mean±SD, n=6)であった．B3F3 集団全体の平（「早木曽 2 号」）型に置き換わった「はるな二条」

均は 137.8±1.6 日であり，集団全体が戻し交雑親でNILs 集団が構築できると期待される．この中から耐ある「はるな二条」に近い出穂性を示したことから，

塩性 QTL NILs を選抜するために必須となる QTL 連

3 回の戻し交雑によるはるな二条への NIL 化が集団鎖マーカーの構築にも取り組んだ．伊藤ら(2015)で全体で進んでいることが示唆された．両親系統間で検出した２つの QTL 領域を挟む SNP マーカーを探は，二条性 vs.六条性の異なる芒穂型をしめすが，索したところ，3H 染色体の QTL (122.6－134.1 cM)

B3F3 集団 319 系統の内，6 系統(1.9%)のみが六条性および 7H 染色体の QTL (67.4－73.5 cM)を挟む SNP- 68 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

マーカーを見出した．現在，これらの CAPS マーカ

some major genes on salt tolerance at the

ー化を進めている．

germination stage in barley. Breeding
Science 46 : 227 – 223.
4.

（今後の展望）伊藤大樹，最相大輔，本庄三恵，八杉公基，永野

2015-2016 シーズンには，はるな二条／早木曽 2

惇，高萩航太郎，持田恵一，佐藤和広 オオムギ

号 B3F4 集団を育成してゲノムのホモ化を進めて発芽時耐塩性の QTL 解析 日本育種学会第127いる．現在，２．で構築された 206 SNP loci セット

回講演会，平成 27 年 3 月 21・22 日 玉川大学を使った Amplicon-seq による一斉解読により，各々5.

最相大輔・堀江智明・木下俊則・馬 建鋒 ～の NIL が持つ供与親ゲノムの一斉同定を現在進めて

水 土壌 作物～ 環境ストレス突破の分子いる．その中から３．で開発している CAPS マーカ

生理基盤と育種との融合 育種学研究 17:

ー解析を実施することで，本研究の目的である耐塩

71–76 (2015)
6.

性 QTL の NIL が同定され，オオムギで見出された

Komatsuda T, Pourkheirandish M, He CF,

発芽時耐塩性の原因遺伝子探索が大いに進展するこAzhaguvel P, Kanamori H, Perovic D, Stein N,とが期待される．現在，SPAD 値を指標にした非破Graner A, Wicker T, Tagiri A, et al. 2007.

壊系による耐塩性試験の実験系構築にも着手していSix-rowed barley originated from a mutation in aる．非破壊系による耐塩性試験は，生育ステージを

homeodomain-leucine zipper I-class homeobox

追って塩ストレスに対する各系統の応答性を経時的gene. Proceedings of the National Academy ofに観察できることから，分子生理的に耐塩性機構のSciences of the United States of America 104(4):

全容解明が期待される．

1424-1429.

（謝辞）
本研究は公益財団法人ウエスコ学術振興財団の支援のもと実施されました．多大な支援に対し心より感謝致します． ゲノムワイド SNP マーカーの開発
は，理化学研究所環境資源科学研究センターの持田恵一博士，
高萩航太郎氏の支援の下実施されました．
非破壊系による耐塩性試験の開発は，岡山大学資源
植物科学研究所・且原真木博士との共同研究で行いました．これらの方々に深く感謝申し上げます．
（参考文献）
1.

Yamaguchi,

T.

and

Blumwald,E.

(2005)Developing salt-tolerance crop plants: challenges
and opportunities. Trends in Plant Science 10: 615- 620.
2.

馬 建鋒 (2010) 不良土壌に対する植物の応答.
間藤 徹 (編) 植物栄養学 第 2 版 文英堂出版
pp.199-233.

3.

Mano, Y., Nakazumi, H. and Takeda, K.
(1996) Varietal variation in and effects of- 69 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

専門サービスのオンライン取引による参入戦略―公正論の視角から―
岡山大学大学院社会文化科学研究科 教授
北 真収
本稿では、知識・情報格差が存在する専門サービス、その中でも無形資産を対象とする情報に作用するサービスに限定して、スタートアップ企業の市場参入の論点に新たにオンライン取引や公正論の視角を加えて考察を行ってきた。
先行研究を踏まえて、スタートアップ企業の市場参入の仮説を導出し、事例調査を行ってそれらの妥当性について検討を行った。その結果、以下の点を確認することができた。
１つは、専門サービスはシンプルで明解なサービス内容や、判断を手助けする情報の提供など公正要素を十分に含んだものであること、サービス提供者は顧客との間に信頼性、中立性、尊重性の側面から公正な関係を築くこと、この両者が相互に作用すれば顧客満足を高める。２つ目は、顧客満足は市場を切り開く鍵である。
公正感もその鍵に影響を及ぼす重要な要因である。
１．はじめに能が必要とされる。そのため、当該サービス提供者

本稿は、スタートアップ企業のオンライン取引にと顧客との間には知識・情報格差が存在する。このよる専門サービス市場への参入戦略に関して、公正ような市場への参入戦略を検討する場合は、一般的論の視点から考察する。

なサービスにおいて築かれた概念や理論を使いながサービスとは、顧客と従業員の間、物的資源ないらも新たな視点を加えて考察する必要がある。そこ

し財との間、サービスの提供者のシステムとの間ので、本稿では公正概念を適用することによって顧客相互作用において、生じる無形の性質の活動あるいの視点に立った参入のあり方、方法について議論をは一連の活動である。それは顧客の問題の解決とし深め、それらを明らかにすることを目的とする。

て提供される（Grönroos, 1990）。本稿でいう専門
２．仮説の提示サービスは、Lovelock（1983）に倣って無形資産を対象とする情報に作用するサービスをいう。幅広い

競争戦略上、市場参入においては市場を限定した分野の専門家が、知識を駆使して情報処理、情報提集中戦略が選択されやすい。集中戦略ではコスト集供を行うサービスを指している。

中や差異化集中が提唱されている（Porter, 1980）。

オンライン取引は、インターネット上で顧客が提しかし、これは基本形にすぎないし、実務上抽象的

供者と相互作用しながら、商品・サービスの注文・でもある。製品・サービスの特性やそのライフサイ

購入から決済までを行う方法である。果たして専門

クル、企業属性なども考慮されなければならない。

サービスはオンライン取引に適合するのかどうか、

実際、成熟した市場を細分化した上で、特定の顧客

理論的な検討が必要である。また、市場参入を企て

層だけのニーズに絞ったとしても、スタートアップ

るのは既存企業ではなく新たに設立された独立系の企業などが新規参入する場合は、特に顧客の知覚リ

スタートアップ企業とする。市場のライフサイクル

スクが大きな課題となる。

の位置によって参入の方法は異なるが、オンライン

公正感は信頼の一部の要素を構成する。また、顧取引という新たな方法による市場再構築の可能性の客満足とは正の相関があるという先行研究に基づけ追求という意味を含めて、成熟した専門サービス市

ば、参入における知覚リスクへの対処に公正概念を場を想定する。

適用し、信頼を築きながら顧客満足を高める方法が提起される。

専門サービスの提供や評価には、専門的知識や技- 70 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

オンライン取引は、顧客の参加の観点から見れば

ち上がり市場を開拓していく段階にフォーカスして手続き的公正が当てはまり、割安な価格である点は事実関係を記述している。

分配的公正に当たる。しかしながら、オンライン取＜ライフネット生命の事例＞

引、専門サービス、スタートアップのサービス提供

会社概要

者にはそれぞれ高い知覚リスクが存在する。参入に

ライフネット生命保険株式会社は、保険販売にイ当たっては、標的とする顧客層を定めてシンプルでンターネットを用いる点が特徴である。日本国内で明解なサービス内容や評価情報、詳細情報など顧客は戦後初、74 年ぶりに国内外の保険会社を親会社との判断を手助けする情報の提供、信頼性・中立性・しないで設立された独立系生命保険会社である。

尊重性の側面からみた企業と顧客間の関係作りが考東京都千代田区に本社を置き、資本金 105 億 40

慮されて、相互に作用する必要がある。つまり情報万円、経常収益 87 億円、保有契約件数約 21 万５千

的公正や手続き的公正の要素が十分に含まれ作用し件（2015 年３月期決算数値）、従業員数約 90 名。
2006 年、大手生命保険会社に長年勤務してきた合うことを意味する。

出口治明氏（現会長兼 CEO）は岩瀬大輔氏（現社

そこで、専門サービスのオンライン取引による参入戦略として、以下のような仮説を提示する。

長兼 COO）と準備会社を設立する。生命保険業免【仮説１】許を取得して 2008 年５月に営業を開始した。保険

専門サービスはシンプルで明解なサービス内容や、料半額、保険金の不払いゼロ、商品の比較情報の提判断を手助けする情報の提供など公正要素を十分に供を掲げ、「正直に、わかりやすく、安くて、便利に。
」

含んだものであること、サービス提供者は顧客とのをモットーにする。インターネットを活用して生命間に信頼性、中立性、尊重性の側面から公正な関係

保険サービスを提供する会社として、同時期に、SBIを築くこと、この両者が相互に作用すれば顧客満足

アクサ生命（現アクサダイレクト生命）も誕生してを高める。

おり、ライフネット生命は２番目になる。
2012 年に東京証券取引所マザーズ上場。開業間もない 2010 年にはオリコン顧客満足度ランキング

顧客満足は売上の伸びに影響を与えるという先行研究に基づくと、次の仮説が示される。

「医療保険部門」総合第１位に輝いた。最近でも、【仮説２】2014 年と 2015 年の２年連続でオリコン顧客満足度
ランキング「生命保険部門」総合第１位、2015 年に

顧客満足は市場を切り開く鍵である。公正感もそJ.D. パワー アジア・パシフィックによる生命保険の鍵に影響を及ぼす重要な要因である。

契約の顧客満足度がソニー生命と並んで第１位を獲得した。

図１ スタートアップ企業の市場参入
専門サービス

保険の契約件数は、2009 年８月には保有契約件
数１万件に達し、その後も 2010 年 12 月に５万件、公正なサービス内容
公正な情報提供
相互
作用

顧客満足

2011 年 12 月に 10 万件、2014 年２月に 20 万件を市場開拓突破し着実に成長を遂げている。１

公正な関係（信頼性、中立性、尊重性）
サービス提供者

３．事例調査オンライン取引、専門サービス、スタートアップという本稿の主旨に照らして、ライフネット生命を事例として取り上げる。事例調査は、主に事業が起- 71 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図２ 経常収益の推移払うことにあるという考え方に立って、支払いを５
営業日以内に行うことを公表してきた。
そのために、

10000

百万円

支払事由を死亡、入院、手術の３点に絞っている。

8000

迅速という点は手続き的公正に当たる。公表という点は情報的公正に当たる。

6000

保険外交員による対面販売方式に代わるセル

4000

フ・サービス方式のオンライン取引、商品の数・保2000

険金支払い事由の数・特約なし・解約返戻金なし・配当なしなど選択肢を絞り込んだ設計によって管理

0
2009

2010

2011

2012

2013

2014

2015 年

費用も削減でき割安な保険料を実現した。
たとえば、かぞくへの保険では、働き盛りの 20 歳～40 歳で、出所：ライフネット生命各年３月期決算資料をもとに作成

開業当時に業界で最低水準の保険料を設定した。保
険料はオリコン顧客満足度ランキングにおいても高

４．考 察
仮説１は、
「専門サービスはシンプルで明解なサーく評価されている。開業後の契約者アンケートによ

ビス内容や、判断を手助けする情報の提供など公正れば、見直し契約者の保険料は、毎月約 7,000 円の要素を十分に含んだものであること、サービス提供

節約で見直し前のほぼ半額になった。保障は保険外者は顧客との間に信頼性、中立性、尊重性の側面か交員を持つ先発大手とほぼ同じだが、保険料は先発ら公正な関係を築くこと、この両者が相互に作用す

大手のほぼ半額を実現した。割安な保険料は、分配

れば顧客満足を高める。
」

的公正に当てはまる。

まず、サービス提供システムがオンライン取引と開業６か月後、業界のタブーを破って手数料に当いうセルフ・サービスである。これは顧客自身が不たる付加保険料を開示し保険料の価格構造を公開し満の原因を作り出す面もあると言われるが、ウェブた。先発他社と比較しても十分低い付加保険料率でサイトはヘルプデスク協会が主催するサポートポーある。付加保険料はサービスに応じて定められるべ

タル格付けにおいて、４年連続（2012 年～2015 年）

きものなのでこれまで開示はタブーとされてきたので最高ランクを受賞、また、情報の分かりやすさ賞

だが、なぜ割安にできるのかを広く知らしめること（UCDA アワード）を受賞するなど操作や利用がしになった。
比較情報がほとんどなかった状況の中で、やすい。そうした環境の中では、顧客の参加意識が

顧客が生命保険を検討するの１つの判断材料を提供

高まりやすいところから、手続き的公正を実行してした。こうした透明性は情報的公正に当たる。

いる。

ライフネット生命の保険のコンセプトには、オン

分かりやすいという方針のもとで、専門サービス

ライン取引という顧客参加型、つまり手続き的公正としての生命保険が主契約のみの単品型で設計され感を高めやすい枠組みの下で、分かりやすさ、簡単、ている。保険初心者の多い子育て層にとって特約の透明、納得、迅速、割安など複数の公正要素が組みない、貯蓄性のない、掛け捨て保険であるため、そ合わさっている。つまり、情報的公正、分配的公正の内容や説明が分かりやすい。保険料が比較的簡単など分厚い層の公正が形成されている。これを整理に見積もれる。この点はオリコン顧客満足度ランキ

したものは表１に示している。

ングにおいて保険プランの分かりやすさが評価されている。業界の商慣習にとらわれないで約款や保険料表を公表している。分かりやすいこと、透明なこと、こうした点は情報的公正に当たる。
また、生命保険の本業は給付金を迅速、確実に支- 72 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

表１ 保険のコンセプト

オンラインだけでなく、会社を知ってもらうには項目
オンライン取引

特徴
顧客参加

公正
手続き的公正根拠

ウェブサイト

分かりやすい

情報的公正

単品型保険
見積もり
約款、保険料表の開示
他社比較情報給付金支払
給付金支払の公表
保険料
付加保険料の開示

分かりやすい
簡単作成
透明性
納得できる
迅速
透明性
割安
透明性

情報的公正
情報的公正
情報的公正
情報的公正
手続き的公正
情報的公正
分配的公正
顧客満足度第１位
情報的公正業界慣習を破る

リアルを組み合わせることが重要だという認識の下、経営陣はセミナーや講演会を活用し、講師を引き受

格付け最高ランク、
UCDAアワード
特約なし、貯蓄性なし
顧客満足度第１位
業界慣習を破る

けている。加えて、経営陣２人で 40 冊もの著書を精力的に執筆している。
外部による評価に関しては、すでに商品の関係は言及した通りだが、会社としては、開業後間もなくして、働きがいのある会社ランキング（Great Place

スタートアップ企業が専門サービス、それもオン

to Work® Institute Japan が実施）
、ビジネスモデ

ライン取引を用いて手掛けようとするならば、標的

ルのデザインのグッドデザイン賞受賞（日本デザイ顧客である子育て層に対して会社としてのより一層ン振興会主催）、スティービーアワードの国際ビジネの信頼性を築く必要がある。顧客がサービス提供者

ス賞などで高い評価を得ている。
2014 年のオリコンの手続き的公正を判断する関係性モデルの中では提顧客満足度ランキングでは、「会社の信頼性」項目が供者の信頼性、中立性や尊重性が重要である（Lind

第 2 位の評価を受けるまでに高まった。

& Tyler, 1988）。まず、信頼性から見ていこう。

外部評価に加えて、SNS や著書、講演を通じて経営陣が絶えず情報を発信していることは、顧客と相互扶助という生命保険の原点に戻り、「真っ正の信頼形成に少なからず好影響を与えている。

直に経営する」「わかりやすいものをつくる」などの経営方針をマニフェストで顧客に約束している。前

次に中立性について見ていこう。ウェブサイトで述の付加保険料の開示、約款の開示など業界の悪しは、公的な保障制度の仕組みや、生命保険のよくあき商慣習にとらわれない行動をとる一方で、オンラる誤解など、顧客が生命保険を理解し、納得できるイン取引だからこそ、なりすまし防止上本人確認を情報を提供している。生命保険販売のためのみに機厳格化し、また、契約時の健康状態はできるだけ詳能するものではなく、生命保険がわかるウェブサイ

しく聴くなど、原理原則に忠実な会社としての姿勢

トである。

を強く打ち出している。

顧客の声の継続的な開示にとどまらず、他の顧客

経営方針の約束やその行動は、保険業界に深く精の要望への賛同や、ライフネット生命の対応内容に通した創業者だからこそ、業界をよくしたいという対する忌憚のない評価を顧客に求めている点も我田

強い思いの表れであり、それが子育て層の共感を得

引水でなく偏っていない。ウェブサイトから見えてている。

くる中立的な部分などが子育て層に好意的な影響を与えている可能性がある。

オンラインビジネスに相応しく社長ブログを配信するなど経営陣がツイッターやフェイスブックで最後に尊重性を見てみよう。コンタクトセンター

積極的に情報を発信している。たとえば、経営陣がは、先発大手と比べて受付時間を長くしている。ヘ

日本アドバタイザーズ協会主催の「web 人賞」を受

ルプデスク協会が主催する問合せ窓口格付けにおい賞した。ソーシャルネットワーキング・サービスて、４年連続（2012 年～2015 年）で最高ランクを（SNS）などのオンライン・コミュニティは、イン受賞している通り、オペレーターは一件一件の問合

ターネットを介して参加者が共通の関心や問題意識

せに信頼のおける誠実な対応をしている。また、公を持って自発的に集まり、比較的対等な立場で日常的扶助や年金を含めて問い合わせに丁寧に答えていの役割を脱して自律的に相互作用をする場であり、る。

そこには何らかの共同性が存在すると定義されるがコンタクトセンターを基点に集められた意見・要（宮田, 2005）、ライフネット生命の経営陣は共通性

望、苦情等の「お客様の声」は、全社員が共有し、や共同性でのつながりを強く意識している。

業務の改善に役立てている。開業当初から、四半期- 73 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

ごとに、お客様の声の例と対応状況を公表している

ライフネット生命は、開業後わずか数年で外部機点も尊重や配慮の表れである。

関によって高い顧客満足度の評価を得たが、この評

ライフネット生命は、2008 年５月開業時に社長ブ価を支えるのは、実際に加入した 20 代、30 代の子

ログを配信、同年 11 月に付加保険料を開示、2009

育て層である。
開業後の契約者アンケートによると、

年にはコンタクトセンターを自前の運営に切り替え

契約者の８割が 20 代、30 代である。また、６割がるなど、開業後、一気に顧客との距離感を縮める手

新規加入および追加加入で、新たな市場の開拓につを打った。これらが、子育て層に信頼性、中立性、ながっている。一方、契約件数は、「開業 5 年以内

尊重性の側面から見た公正感を生んだと考えられる。

に保有契約件数 15 万件以上」という開業当初の経専門サービスであるライフネット生命の保険の営目標を半年早く達成した。サービスが標的にしたコンセプトには、
手続き的公正という枠組みの下で、顧客層に満足されることが、需要となり市場を開拓

複数の公正要素を組み合わせた分厚い層の公正が形していることがうかがえる。公正感が顧客満足に影成されている。一方、顧客がサービス提供者の手続響を与えている仮説１を踏まえると、公正感も市場き的公正を判断する中で、提供者の信頼性、中立性の開拓を担っていることが推察される。よって、仮や尊重性を重要視するが、同社は公正な関係を築き説２は妥当である。

つつある。
これを整理したものは表２に示している。
専門サービスのコンセプトに形成された公正、サ

５．結 論ービス提供者に求められる手続き的公正、この２つ

１つは、専門サービスはシンプルで明解なサービの公正を経営陣が社長ブログなどのウェブサイトとス内容や、判断を手助けする情報の提供など公正要講演などのリアルを組み合わせた情報発信を通じ相素を十分に含んだものであること、サービス提供者互に作用させることによって、市場や顧客の関心をは顧客との間に信頼性、中立性、尊重性の側面から集めてより一層大きな公正感を生み出したと考えら

公正な関係を築くこと、この両者が相互に作用すれれる。

ば顧客満足を高める。２つ目は、顧客満足は市場を切り開く鍵である。公正感もその鍵に影響を及ぼす

開業後すぐに雑誌の企画の「プロが入りたい保重要な要因である。

険」で第１位に選ばれ、また、開業後２年余りで顧客満足度総合第１位を獲得している。仮説の提示の本稿では、スタートアップ企業の参入戦略に注目

節でも述べた通り、公正感と満足度は正の相関があした。そして、専門サービスやその提供者と顧客のることから、顧客の知覚する公正感は高い顧客満足間の知覚リスク、社会的不確実性を低減する手掛か度へつながった可能性がある。よって、仮説１は妥りを公正理論に求める中で、参入のあり方と公正の当であると判断される。

関係を先発大手と対比させたコンテキストとともに明らかにしたことが１つの学術的貢献である。

表２ 顧客との関係づくり項目
マニフェスト
社長ブログ
講演
外部評価

特徴
顧客に約束
顧客と対等に相互作用
リアルなつながり
会社の組織、能力

公正
信頼性
信頼性
信頼性
信頼性

ウェブサイト

保険が理解できる

中立性

他社比較情報 乗り換えのリスクを負う
顧客の評価
対応内容の評価を求める
オペレーター 誠実、丁寧
顧客の声
対応状況を公表

中立性
中立性
尊重性
尊重性

根拠

注

web人賞
グッドデザイン賞
格付け最高ランク、
UCDAアワード
業界慣習を破る

１

格付け最高ランク

仮説２は、「顧客満足は市場を切り開く鍵である。
公正感もその鍵に影響を及ぼす重要な要因である。
」- 74 -

記述は次の文献を参考にした。出口治明（2009）『直球勝負の会社』ダイヤモンド社、ライフネット生命ホームページ（http://www.lifenet-seimei.co.jp/）、「ライフネット生命保険社長出口治明（１）（２）」『PRESIDENT Online』2013 年６月 27 日、28 日（http://president.jp/articles/-/9764）、「社長インタビュー第１回～第４回」『bizocean（ビズオーシャン）』（http://www.bizocean.jp/column/president/president45/）、ドリームゲートスペシャルインタビューMY BEST LIFE 挑戦する生き方
第 79 回ライフネット生命保険株式会社 岩瀬大輔
（http://case.dreamgate.gr.jp/mbl_t/id=776）

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

参考文献
Grönroos, C. (1990). Service management andmarketing: managing the moments of truth inservice competition. Jossey-Bass.
Lind, E. A., & Tyler, T. R. (1988). The social

psychology of procedural justice. Plenum Press.
Lovelock, C. H. (1983). Classifying Services toGain Strategic Marketing Insights. Journal ofMarketing, 47 (summer), 9-20.
宮田加久子（2005）『きずなをつなぐメディア：ネット時代の社会関係資本』NTT 出版.
Porter, M. E. (1980). Competitive Strategy. The
Free Press.

- 75 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】「食品素材や化粧品素材」としての「高機能化ポリフェノール誘導体」の環境に優しい「次世代型酵素的合成システム」の開発
岡山県立大学 保健福祉学部 栄養学科
中島 伸佳

１． はじめに花の色の多彩さや美しさを担う天然植物色素はフラボノイドを基本骨格（アグリコン）とした配糖体構造を有し，さらに糖の特定の水酸基が位置特異的にアシル化を受けている場合が多く，このような化
学構造的な修飾が植物色素の安定性や生理機能に深く関与しているといわれている。
天然植物色素は，それ自体が持つ抗酸化性などの生理機能から健康食品などとして注目される一方，それらの中には美白効果などを有する化合物も存在しており，化粧品素材や食品添加物などとしての利３． アシル化アルブチンの酵素合成用や研究も試みられている。
そこで，本研究では，まず美白効果があるとされている植物性成分のひとつであるアルブチンに各種の芳香族酸を導入したアシル化アルブチンを酵素的に合成（リパーゼのエステル交換反応を利用）し，さらに，９種類のリパーゼを用いてアルブチンへ

高機能で新規な食品素材や化粧品素材などを開発すの桂皮酸エステル化に関するスクリーニングを行っることを目的とした。

た。その結果，酵素としては CAL-B（Chirazyme L-2）が，溶媒は脱水していないアセトニトリルが最適で，

２． アシルドナーの合成

２日後に最大変換率（90%）を示した。同様に，アシリパーゼ触媒によるトランスアシル化には，通常,ルドナーとして p-クマール酸ビニル(3b)とフェル

芳香族酸ビニルがアシルドナーとして必要である｡

ラ酸ビニル(3c)を用いた場合も， 2 日後に最大変換

しかし，桂皮酸ビニル(3a)以外は市販されていない率（5b: 85%，5c: 70%）を示した。

ので以下のように化学的に合成した｡

次に，ビニルエステルを経由しない直接的な酵素
的アシル化も検討した。その結果，脱水した t-ブタ
ノール中で p-クマール酸，フェルラ酸，α-リポ酸
をアシルドナーとした場合に，それぞれのアシル化
生成物を確認できた。
アシル化の変換率については，
アシルドナーとしてα-リポ酸を用いた場合が最も高く（>90%），次いで p-クマール酸（65%），フェル

次に，フェノール性水酸基のアセチル基を脱保護するために，EtOH 存在下でのリパーゼによる位置選ラ酸（50%）の順であった。

択的な脱保護を行った｡- 76 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

アルブチンシンナメート（桂皮酸エステル），アル
ブチン p-クマレート，アルブチンフェルレート，ア
ルブチンα-リポ酸エステルについては抗酸化性を維持したままで，耐光性や耐熱性などの安定性が向上することが確認できた。
４．アシル化植物色素の酵素合成
最後に，下記の Fig.に示すように，変換率は，さほど高くはなかったが（単離収量：20%程度），生体触媒（リパーゼ）として CAL-B を，溶媒として脱水していないアセトンを用いて，50℃で，1 週間に渡り，p-クマール酸ビニル（3b）をアシルドナーとして，花弁などの植物性組織の色彩を担う天然植物色
素そのものであるイソクェルシトリンとクリサンテ
ミンのそれぞれのアシル化を行った。
この場合においても，それぞれのアグリコンが有する抗酸化性をほぼ維持したままで，安定化などの高機能化が達成できた｡
しかしながら，フラボノイド類のような天然植物
色素など比較的，高分子のアシルアクセプターのリ
パーゼによる酵素的・芳香族酸エステル化は，アシルドナーとして芳香族酸ビニルの利用が必要であった。

- 77 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

人体近傍生気象現象の把握と温熱環境評価モデルの構築
岡山県立大学 情報工学部
島﨑 康弘
人間生活を取り巻く温熱環境は悪化しており，暑熱障害の増加にみられるように今や温熱環境は健康や安全に関わる問題として広く認識されている．安全・快適な温熱環境を考える際に，その空間の現状や改善効果を定量的に表現する環境定量化ツールとして，温熱環境指標の構築に取り組んだ．人体温熱環境そのものの把握や人体生理反応を理解するうえで，人体への熱入力となる人体受熱量は重要であることから，皮膚‐衣服‐環境の系から構成される着衣伝熱モデルを構築し，実験的にその検証を行い，良い精度で予測できることを示した．
また，局所的な熱負荷への応答を理解するために被験者実験により，熱負荷，温冷感，快適感の関係性を探る
試みを行い，局所的な熱刺激は局所温冷感に寄与し，さらに全身温冷感へとつながることが明らかになった．
さらに，冷刺激と温冷刺激の感受レベルの違いや環境ごとに全身部位での感受性の違いを示した．本知見に加え環境の非一様性を表現し，人体の動的な状況把握を進めることでユニバーサルな屋外温熱環境指標の再構築が期待できる．
１．はじめに荷量は，人体を中心とした熱の授受を，代謝量，着気候変動や都市ヒートアイランドの影響を受けて衣という人的要素および正味ふく射量，顕熱損失，

夏季の屋外温熱環境は悪化しており，その対応に迫

潜熱損失という環境要素から算出した物理量である．

られている．温熱環境を改善するためには，現状をこの指標をともに，実空間に特有の熱環境や人体の把握し改善効果を客観的に示しうる温熱環境指標が非一様性および非定常性，および人間活動を考慮す必要である．このような背景から，これまでにもさることで，人体熱負荷指標を様々な環境下でも適用

まざまな温熱環境指標の研究がされてきた．温熱環できるユニバーサルな屋外温熱環境指標として再構

境決定には，環境側の温熱要素である気温，湿度，

築することを最終的な目標とする．

気流（風速），放射の 4 要素と，人体側の温熱要素である着衣量と代謝量の 2 要素が深く関わっており

２．方法[1]，PMV[2]や SET*[3]といった国際指標がある．

２．１ 局所熱負荷量の算出

言うまでもなく人体温熱状態予測においてこれら

人体温熱環境そのものの把握や人体生理反応を理の要素をできるだけ多く含有する必要があるが，こ解するうえで，人体への熱入力となる人体受熱量はれまでの評価法は人体側情報の欠如が指摘されてい重要となる．一方で，その値は実環境においては人る．従って，厳しい屋外環境に広く適用できる温熱

体部位でも異なり，また，とりわけ屋外環境におけ

環境指標が確立されているとは言えなく，モデル検る着衣の影響はこれまで考慮されていない．
そこで，証に足る被験者の生理量データも不足している．そ特定の着衣部位を想定した局所熱負荷把握モデルをこで，本研究では，環境熱負荷の様々な実空間にて検討した．

活動時の人体温熱生理情報および心理反応を実測し，皮膚‐衣服‐環境の系から構成される着衣伝熱モ

温熱環境が人体に与える影響を分析し，さらに，温デルを図 1 に示す．この系における熱移動式は定常

熱暑熱環境適応策検討に有効となる温熱環境の定量

かつ 1 次元的として捉えると以下の式(1)のように化ツールの提案を行う．

書ける．

筆者らは上述六要素全てを含有した「人体熱負荷

d 2T
dy 2

量」指標をこれまでに提案した[4]，[5]．人体熱負- 78 -q0(1)

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

技術総合研究所の人工気象室内，それ以外の実験は
岡山県工業技術センターの恒温恒湿槽内(PSL-4S)にて行った．なお，大阪府立産業技術総合研究所の人工気候室内には模擬太陽光源があり，67 個のメタル
ハライドランプが平面上に並べられている．模擬太陽照射面の面積は，2.0 m2 で，その真下で実験を行った．解析対象(測定系)の構成要素について説明す
図 1 1 次元皮膚‐衣服‐環境系伝熱モデル

る．模擬皮膚は，温度を一定に保つためにペルチェ素子で構成され，PID 制御を実装したクールプレー

ここで，T は温度，y は鉛直座標の変位，q は発熱量

ト(AS ONE SCP-85)を使用した．衣服内空気層と素材である． q はふく射伝熱による衣服表面での熱移動について，均一な衣服内空気層を設けるために木製を示し y = δ でのみ生じる．この系において衣服素材

スペーサー(縦 100 mm，横 100 mm，高さ δ mm) をは多孔質材料として扱うため，日射は衣服素材で吸用い，その上面に日射特性の異なる綿 100%の素材収されるほか，透過し，さらには皮膚表面で反射し(黒，白，赤，黄)をたるみなく張りつけた．また，た日射が更に衣服素材で吸収されうる．これらの日

本スペーサーは外部との断熱的役割をもつ．素材の射受熱は以下の式(2)のように書ける．

日射特性の違いが衣服内空気層と素材の温度場形成

q S ,clo

S

clo

S clo rskincloに与える影響を明らかにするために，日射特性の異(2)なる素材を用いた．
その中でも値に差が見られる黒，ここで，S は全天日射量，αclo は衣服素材の日射吸収

赤，着，白の 4 色を選定した．衣服内空気層厚さ δ率，τclo は衣服素材の日射透過率，rskin は皮膚の日射は 5.0，10.0，15.0 mm の 3 種類である．実際の着衣反射率である．他方，大気よりくる長波放射は衣服

空隙厚さの違いによって生じる自然対流の影響を考

素材で吸収される．同様に，皮膚表面より放射され慮するために，この 3 種類を選択した．

る長波放射も衣服素材で吸収される．同時，温度にふく射環境下の全天日射量(短波放射量)，大気か応じて衣服素材より，大気および皮膚へ長波放射がらの赤外放射量(長波放射量)，白金測温抵抗体は，起こり，最終的な衣服素材における長波による受熱

地面から 1.5 m に設置した長短波放射計(EKO MR-60)

は以下の式(3)のように書ける．

を用いて測定した．なお，模擬太陽照射面の中心点

q L,clo

clo

L

Tclo

4
clo

T

4

skin skin

を予め計測し，中心点の垂線上に長短波放射計と解4Tclo (3)

析対象を設置した．風速は，”日射あり”環境下でここで，L は大気放射量，σ は Stefan-Boltzman 定は超音波風速計(Young CYG-81000)，”日射なし”環数，ε は放射率，T は温度を表し，添え字 clo および境下では熱線式風速計(Kanomax Model6531)を用い

skin はそれぞれ衣服素材，皮膚における値を示してて測定した．気温と相対湿度はそれぞれサーミスタ

いる．従って，総合的な衣服素材でのふく射伝熱量(T&D TR-73U)，高分子湿度センサ(T&D TR-73U)で測は以下の式(4)のように書ける．

定した．なお，模擬皮膚表面，衣服内空気層(4 点)，q

q S ,cloq L ,clol(y = δ)素材表面の温度は被覆の無い T 型熱電対で測定した．

(4)

気象要素は NEDO 日射量データベースを基に，岡山市の快晴日を参考にした．

ここで，l は衣服素材の厚さである．
これにより求められる人体への伝熱量に基づき，

２．２ 局所熱負荷に対する応答

人体熱負荷計算へ適用が可能となる．
本モデルの検証として，素材の温度測定実験を行実環境で起こる局所的な熱負荷への応答を理解すった．日射あり環境下で行う実験は，大阪府立産業るための実験を行った．ペルチェ素子および PID コ- 79 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

ントローラにより温度制御可能な熱刺激プレートをえる場合を±10 ℃になるように設定した．なお，

もちいて人体主要七部位(前額，腹部，右上腕，右手

この熱刺激の設定温度は，熱流束値ができるだけ各甲，右大腿，右下腿，右足甲)へ熱刺激を与えた．こ

部位で一定になることも考慮した．

れらの部位は，温熱生理として重要である平均皮膚温の算出に用いられるものであり，全身への寄与が３．結果大きい箇所である．
刺激面積は 5 ×5 cm とした[6]．

３．１ 着衣を介した局所熱負荷モデル検証

実験は，30 分間で，開始 10 分後から 10 分間，局測定系の温度分布について，紙面の都合上実験値

所熱刺激を与えた．代謝の影響を小さくするためにとモデル解析結果のいくつかを整理して示す．
なお，

食後二時間以上空け，異なる実験を連続で行う際は実験値のデータは，3 回の測定における定常状態と前の実験の影響がないように十分な時間を空けた．

みなした時刻から 5 分間の測定値を平均化処理した測定項目は，表面皮膚温度・舌下温 (J 型熱電対)，結果である．

熱流束値 (CAPTEC 製 HF30 型)，心拍数 (POLAR 製

図 2 に示すのは，日射なし条件の黒色衣服の様々

RS800CX，アメアスポーツジャパン製 SUUNTO t3d，な環境における温度分布である．気温 10 ℃（283 K）

バイタルモニター 8726-GB)，室温・湿度及び大気圧と 23 ℃（296 K）では皮膚から素材にかけて温度は(T&D TR-73U)，全身・局所の温冷および快適感であ

下降し，36 ℃（309 K）では，皮膚から素材にかける．心理申告である温冷感，快適感は ASHRAEて温度は上昇する．この温度変化傾向は，どの空気(American Society of Heating，Refrigerating and

層厚さの数値解析結果でも概ねよく再現出来ている

Air-Conditioning Engineers)の基準に従い，温冷感と言える．日射がないため，衣服素材の色の違いにを-3 の｢寒い｣から+3 の「暑い」に，快適感を-2 のよる温度分布への影響はみられなかった．

「不快」から+2 の「快適」のスケールに変換して測60定した．申告表は，線形尺度を用いて 2 分毎に被験55

者自身が現在感じた温冷感・快適感に当たるポイン

Absolute temperature(K)
283
296
309

50
Temperature(℃)

トに縦線を記入してもらった．
暑熱環境･中立環境･寒冷環境の各条件下で実験を実施した．暑熱実験（気温 35 ℃）および寒冷実験(気温 5 ℃)は，大阪府立産業技術総合研究所の人工気4540Clothing

Skin
Air layer

35
30
25
20

象室で行った．また，中立実験（気温 20 ℃）は岡

15

山県立大学内に簡易的な人工気候室を作成し，行っ100

た．実験人数は，のべ 226 人であり，健康な大学生・

0.001

60

重は平均 58.8 kg，年齢は平均 21.2 歳であった．ま55

Temperature(℃)

た，着衣量を統一するため，同一の上下長袖のコン

熱刺激温度は皮膚上では 45 ℃または 15 ℃であり，
衣服上では 50 ℃および 10 ℃であった．
これは，それぞれの環境下での各部位の平均皮膚温から，コ

45
40
35

Skin

30
25

Air layer

20
Clothing

15
100

ンプレッションウェア上(腹部・上腕・大腿・下腿)

0.005

Absolute temperature(K)
283
296
309

50

0.33 であった．

0.004(a) 実験値

大学院生であった．被験者の身長は平均 1.68 m，体プレッションウェアにて行い，この時の clo 値は0.002 0.003
Distance(m)0.001

0.002 0.003
Distance(m)

0.004

0.005

から熱刺激を与える場合を±15 ℃になるように設(b) モデル計算値

定し，肌上(前額・手甲・足甲)から直接熱刺激を与図 2 日射なし条件における温度分布(δ=5 mm)- 80 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図 3 に示すのは，日射条件での白色衣服と黒色衣

衣人体受熱量が予測できるようになった．

服の様々な環境下における温度分布である．
実験値，
数値解析結果ともに測定点における温度は，どれも３．２ 局所熱負荷量と心理申告

黒色の方が白色に比べて高くなった．日射特性の中局所熱負荷量と局所温冷感の関係について，大腿でも日射吸収率の占める割合が高いことから，特に刺激の例を図 4 に示す．温・冷刺激，環境に関わら

日射吸収率の影響が大きいと考えられる．また同一ずおおむね両者には線形の関係があることが分かる．

黒色衣服に関して，“日射なし”と”日射あり”のさらに，図 5 には，局所温冷感と全身温冷感の関係

測定系における温度分布に着目すると，各測定点のについて，腹部刺激の例を示す．気温により局所温

温度は，どの空気層厚さにおいても”日射なし”よ

冷感の全身への寄与にやや違いが生じ，気温毎に整り”日射あり”の方が高かった．

理すると，両者には線形の関係が強く表れる．結果
的に，局所的な熱刺激は局所温冷感に寄与し，さらEnvironment
2

Cal.
Exp.

283K 550W/m
2283K 550W/m

2296K 700W/m
2
296K 700W/mに全身温冷感へとつながるということができる．

2308K 900W/m
2
308K 900W/m

340
Temperature (K)Regional thermal sensation (-)

White

330
320
310
300
290
280

3
2
1
0

-1

270
0

5
10
Distance (mm)Skin

Air layer

15-2

Clothing-3(a) 日射下での白色衣服

283K 550W/m

296K 700W/m 2
2296K 700W/m

308K 900W/m 2
2

Whole body thermal sensation (-)

Cal.
Exp.

308K 900W/m

340
Temperature (K)

330

Black

320
310
300
290
280
270
0

5
10
Distance (mm)

Skin

-500
0
500
2
Regional thermal load (W/m )図 4 局所熱負荷量と局所温冷感の関係

Environment
283K 550W/m 2
2

Warming (Warm)
Warming (Neutral)
Warming (Cool)
Cooling (Warm)
Cooling (Neutral)
Cooling (Cold)

Air layer

15
Clothing(b) 日射下での黒色衣服

3

Warming (Warm)
Warming (Neutral)
Warming (Cool)
Cooling (Warm)
Cooling (Neutral)
Cooling (Cool)

2
1
0
-1
-2
-3
-3

-2 -1
0
1
2
3
Regional thermal sensation (-)

図 5 局所温冷感と全身温冷感の関係

図 3 色違い衣服の温度分布(δ=15 mm)
ここで，図 4 において，局所熱負荷と局所温冷感
その他の条件を含め，実験値と数値解析結果を比較の間にある相関直線の傾きに着目すると，単位熱負

すると，どの色，空気層厚さ，気象条件においても荷量あたりの温冷感変動，つまり温冷感の感度を示

温度変化傾向は概ね定性的に一致しており，素材のすこととなる．図 4 同様に他の部位でも，局所熱負日射特性を考慮したモデルの有用性を示すことが出荷量と局所温冷感の間には相関関係がみられたため，来たと言える．

この温冷感の感度について考えることは，人体へのこれにより，屋外環境における部位毎に異なる着影響把握や温熱対応策へ有効であると考えられる．

- 81 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

そこで，各部位の感受性を比較したものが図 6 であ

人体熱負荷量を用いてユニバーサルな屋外温熱環る．一概に結果をまとめることは容易ではないが，境指標として再構築するためには，さらに環境の非冷刺激と温冷刺激の感受レベルの違いや環境ごとに一様性を表現し，人体の動的な状況把握を進めるこ

全身部位での感受性の違いを観察できる．本結果はとが求められる．

局所的な温熱環境に対する全身感受反応のデータベースとして使用できる可能性がある．

５．謝辞
本研究は，公益財団法人ウエスコ学術振興財団の支援を頂いた．ここに記して感謝の意を表する．

Forehead
PelvisUpper arm

６．参考文献Hand[1] 例えば，宇田川光弘ほか，建築環境工学，朝倉Warm
Neutral
Cool

Thigh
Leg

書店，2009．
[2] P．
O．
Fanger, Thermal comfort，
Danish TechnicalFoot
0Press，1970.

-3

4.0
2.0
6.0 [×10 ]Thermal sensitivity (m 2/W)

[3] A．
P. Gagge et al., A standard predictive index

図 6 温熱感受性の部位差

of human response to the thermal environment，
ASHRAE Trans. Vol.93，pp.709-731, 1987.

４．まとめと今後の展望[4] 島﨑康弘ほか，人体熱負荷量に基づく温熱快適

本研究は，悪化する温熱環境改善に向けて現状把性指標の提案，日本冷凍空調学会論文集，Vol.26,

握や改善の定量的評価に必要な温熱環境指標構築に

No.1, pp.113-120, 2009.

向けて，これまで欠如していた局所的な温熱効果の[5] Yasuhiro Shimazaki et al., Application of

検討を行ったものである．まず，人体近傍生気象現

human thermal load into unsteady condition for

象の把握として，屋外で想定される局所的な日射受

improvement of outdoor thermal comfort, Building

熱を再現できる着衣人体モデルを構築し，実験的にand Environment, Vol. 46, Issue 8, pp.1716-1724,

その検証を行った．次に，温熱環境評価モデルの構2011.

築として，上述のような局所熱負荷に対しての生理[6] 島﨑康弘ほか，接触熱刺激による局所冷却が温反応を心理申告によって求め，部位および環境毎に

冷 感 に 与 え る 影 響 ， Thermal Science and

整理した．

Engineering, Vol.20, No.40, pp.61-67, 2012.

- 82 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

超音波ニードルパンチ処理を施した CF/PA6 複合材料の衝撃特性の評価
岡山県立大学 情報工学部
小武内 清貴本研究の目的は，CF/PA6 からなる炭素繊維強化熱可塑複合材料の衝撃負荷に伴う変形および内部損傷に及ぼす超音波ニードルパンチ処理の影響を明らかにすることである．PAN 系平織炭素繊維布と PA6 シートから作製したプリプレグを積層し，[0-90°]14 の積層構成を有する積層板を作製した．これに対し，刺突間隔 2 mmの条件にて超音波ニードルパンチ処理を施し，試験片を作製した．作製した試験片に対し，落錘衝撃試験機を用いて面外方向に衝撃負荷を与え，積層板の面外変形量および内部に生じた層間剥離の長さを評価した．その結果，試験片の面外方向の最大変形量および変形部位の投影面積に及ぼす超音波ニードルパンチ処理の影響は少なかった．一方，試験片内部の損傷状態は，超音波ニードルパンチ処理の有無によって差異が見られた．超音波ニードルパンチ処理を施していない試験片では，内部に複数の層間剥離が観察され，またその長さも長かったのに対し，超音波ニードルパンチ処理を施した試験片内部の層間剥離部位の数は少なく，その長さも短かった．以上より，超音波ニードルパンチ処理は衝撃負荷に伴う層間剥離の抑制に有効であることが分かった．

1．緒言る，超音波ニードルパンチ処理を施すことにより，炭素繊維を強化繊維，熱可塑性樹脂を母材とする

CFRTP 面外方向に母材樹脂流れを誘起し，静的な面

炭素繊維熱可塑複合材料(CFRTP)は軽量，高強度を内特性及び層間特性が向上することを見いだした．

有し，従来の熱硬化性樹脂を母材とする炭素繊維強また，本手法は対象材の加熱が不要，小型・安価な化複合材料(CFRP)に比べ，使用後の炭素繊維の再資装置で実施可能など，その応用範囲は広い．
そこで本研究では，PAN 系炭素繊維を強化材，PA6

源化も容易なため，比較的製品寿命の短い輸送機器[1]を母材とする CF/PA6 複合材料に対し，超音波ニー等への応用が期待されている ．
輸送機器は，その製品寿命の間に破損，特に衝撃

ドルパンチ処理を施し，その衝撃特性を，落錘型衝による破損を生じる可能性が高く，衝撃後の特性(例

撃試験機を用いて定量的に評価した．具体的には，

えば CAI 強度)は，複合材料構造部材にとって重要

落錘衝撃後の試験片の変形量，および試験片内部にな指標の一つである．一般に高強度を有する織物強生じた層間剥離長さを定量的に評価した．

化複合材料は，衝撃によって層間剥離を生じること

2．材料および実験方法[2]が知られ ，本課題で対象とする CFRTP においても

2.1 供試材

例外ではない．層間剥離の抑制には，層間特性の向強 化 材 に 3K 平 織 炭 素 繊 維 布 (TORAY 製

上が有効である．CFRP においては，母材樹脂の高CO6343)，母材に PA6 樹脂ペレット (TORAY 製

[3]

[4]

CM1017) を用いた．試験片作製にあたっては，樹脂

じん化 や繊維と樹脂の界面の高強度化 等が試み
[5]

[6]

られてきた．また，三次元織物 やスティッチング

ペレットをヒートプレスにて厚さ 0.1 mm のシー等，厚み方向に強化した強化材を用いる方法や，ト状に成形したものを用いた．

[7]

Z-pinning 等，微小なピンを板厚方向に挿入する方

2.2 試験片作製方法

法等も模索されている．しかし，CFRTP では母材樹試験片作製に先立ち，本研究では CF/PA6 プリプ

脂の粘度が高く，これらの方法をそのまま CFRTP

レグを作製した．150 mm 角に切り出した平織炭素に応用することは難しい．申請者はこれまでに，特繊維布を，同じく 150 mm 角の PA6 シート 2 枚に殊な形状の針に超音波加振を行い，CFRTP に刺突すて挟み，240 ℃，2.5 MPa，3 min の条件にてヒート- 83 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

プレスを行い，CF/PA6 プリプレグを作製した．作
製したプリプレグを積層構成 [0-90°]14 にて積層し，テフロンシート製のバッグに入れ密閉した．バッグ
内の空気を真空ポンプにて吸引しつつ，240 ℃，2.5
MPa，4 min の条件にてヒートプレスを行い，厚さ約3.5 mm の CF/PA6 複合材料を作製した．作製した
CF/PA6 複合材料の繊維体積含有率は約 50% 程度であった．作製した CF/PA6 複合材料板から繊維
0° 方向を長手方向として 45×45 mm2 の矩形状にダ

Fig.1 Ultrasonic needle punching apparatus.

イヤモンドカッタを用いて切り出し，試験片とした．
2.3 超音波ニードルパンチ処理2

図 1 に本研究にて使用した超音波ニードルパンチ装置を示す．本装置は制御 PC によって駆動される

2

XYZ テーブルと超音波ウェルダ(超音波工業製，

45

UPW228)および直径 1 mm の半球状先端を有するニードルホーンから構成される．ニードルホーンを周
φ1

波数 28 kHz の超音波にて加振し，刺突速度 0.5
mm/s の条件にて，試験片表面から厚み方向に 3.0mm の深さまで刺突し，1 sec 保持した後，同速度

Fig.2 Configuration of needle punched specimen.

にて引き抜いた．本研究では，単位面積当たりのニードル刺突回数 (以下，NP 密度) が 15 /cm2 となるWeight3.166 kg

よう，図 2 に示すように 2 mm 間隔にてニードル刺突を行った．

Striker
Specimen

2.4 衝撃試験
図 3 に本研究にて使用した落錘型衝撃試験機を示

Fixtureす．本装置は先端に半径 8 mm の半球状の圧子を有するストライカを，所定の位置から自由落下させる
Φ30 mmことにより，試験機下部に固定された試験片に所定

Fig.3 Schematic illustration of impact tester.

の衝撃エネルギを与えることが可能である．本研究では試験片の単位厚さ当りの衝撃エネルギ G を 1.5，
3.0，4.5 J/mm の 3 条件にて実験を行った．

3．結果および考察

2.5 試験片観察

3.1 衝撃試験後の試験片変形量

衝撃を与えた試験片の面外方向の変形量を，非接

図 4 に 4.5 J/mm の衝撃を与えた試験片の変形形態

触式 3 次元測定器（Keyence 製，KS-1100）を用いてを示す．なお，比較のため超音波ニードルパンチ処測定した．試験片中央部の 40×40 mm2 の矩形領域

理を施していない試験片の結果も併せて示す．図よを 100 m 毎に測定した．また試験片内部の損傷状態

り，超音波ニードルパンチ処理の有無による圧子周を評価するため，圧子の落下点付近にて試験片を切辺の変形状態の差異は見られなかった．試験片の変断し，断面を研磨後，デジタルマイクロスコープ

形状態を定量的に比較するため，試験片の面外方向（Keyence 製，VHX-100）にて観察した．

への最大変位と，面外方向の変形が生じた部位の投影面積をそれぞれ評価した．なお，本研究では面外- 84 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

方向への変形が生じた部位とは，面外方向に 0.175
mm 以上の変位が生じた部位と定義した．図 5 および 6 に試験片の最大面外変位および面外変形部の投影面積を示す．図より，試験片の変形状態に及ぼす
超音波ニードルパンチ処理の影響は小さいことがわ
かった．

Fig.6 Projected area of out-plane deformation of specimen
after impact test.

3.2 試験片内部損傷状態
図 7 に 4.5 J/mm の衝撃を与えた試験片の断面を示(a) Without needle punching.

す．図中破線にて層間剥離を示す．図より，超音波
ニードルパンチ処理を施した試験片では，試験後の層間剥離部位の減少が見て取れた．また，それぞれの試験片で観察された層間剥離部位の長さの最大値を測定した結果を図 8 に示す．図より，超音波ニー
ドルパンチ処理を施した試験片では，衝撃によって生じた層間剥離部位の長さが減少していることが分かった．これは，層間剥離が進展する際，超音波ニードルパンチ処理を施した部位が抵抗となり，進展を妨げたものと考えられる．以上のことより，(b) With needle punching.

CF/PA6 複合材料への超音波ニードルパンチ処理は，Fig.4 Surface morphology of specimen

衝撃に伴う内部層間剥離の抑制に有効であるといえafter impact test (4.5 J/mm).

る．

(a) Without needle punching.

(b) With needle punching.
Fig.7 Cross section of specimen after impact test (4.5 J/mm).

Fig.5 Out-plane deformation of specimen after impact test.

- 85 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

Testing”, JSME Part A, Vol.62, No.596, pp.897-901 (1996).
[6]

Yutaka Iwahori, Takashi Ishikawa, Youichi Hayashi andNobuyuki Watanabe “Study of Interlaminar Fracture
Toughness Improvement on Stitched CFRP Laminates”,
Journal of the Japan Society for Composites Materials, Vol.26,
No.3, pp.90-100 (2000).

[7]Ivana K. Partridge and Denis D.R. Cartie “Delamination
Resistant Laminates by Z-Fiber pinning: Part I Manufacture
and Fracture Performance”, Composites Part A, Vol.36, No.1,
pp.55-64 (2005).

Fig.6 Maximum interlaminar delamination length of
specimen.

言

3．結CF/PA6 からなる複合材料に対し，超音波ニードルパ
ンチ処理を施し，衝撃負荷を与え，その損傷状態を評価した．その結果，超音波ニードルパンチ処理は衝撃負荷に伴う層間剥離の抑制に有効であることが
分かった．
参考文献
[1]

Jun TAKAHASHI: “Polymer Based Composite Materials forLightening Automobile”, Automotive technology, Vol. 59, No.
11(2005), pp.17-23.

[2]

Akira TODOROKI, Hideo KOBAYASHI and Jong Gi LEE:
“Micromechanism

andDelamination

Resistanceof

CF/PEEK”, Transactions of the Japan Society of MechanicalEngineers, Vol.60, No.573 (1994), pp.1272-1279.
[3]

J. K. Kim, C. Baillie, J. Poh and Y.W.Mai, Fracture
Toughness of CFRP with Modified Epoxy resinMatrices,
Composites Science and Technology, Vol.43 (1992),
pp.283-297.

[4]

Masaki Hojo, Satoshi Matsuda, Motosugu Tanaka, Shojiro
Ochiai and Atsushi Murakami, “Mode I Delamination
Fatigue Properties of Interlayer-Toughened CF/Epoxy
Laminates”, Composites Science and Technology, Vol.66,
No.5, pp.665-675 (2006).

[5]

Ming Ji, Haruo Ishikawa, Meiji Anahara and Yoshiharu Yasui,“The Estimation of Fracture Resistance of Orthogonal
Three-Dimensional Fiber-Reinforced Composite by DCB- 86 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

ステートマシン図を用いた Web アプリケーションの自動テスト環境の開発
岡山県立大学 情報工学部 情報システム工学科
横川 智教
本研究では，Web アプリケーションの自動テスト環境の構築を目的とした，ナビゲーション構造のモデル化手法を開発した．モデル化には，UML のステートマシン図を用いている．ステートマシン図によるモデル化を行うことで，既存の自動検証およびテスト生成のための技術を応用することが可能となる．本手法では，Web ナ
ビゲーションのページ移動と認証管理，そしてユーザによる操作をそれぞれ個別のステートマシン図によって表し，メッセージにより相互通信を行うことでユーザ層さや認証状況に依存したナビゲーションの振る舞いをモデル化することが可能である．本稿では，オンラインショッピングサイトの画面遷移仕様書を例題として，提案する枠組みに基づいてステートマシン図によりモデル化を行った結果を示している．そして，モデル解析
ツール SAL を用いて，Web ナビゲーションの振る舞い検証およびテストの自動生成を行った．その結果として，設計の誤りを正しく検出することができ，さらに所望の条件に対するテストケースを自動生成することができた．
には，対象となるシステムを実行可能な形式でモデ

1. 背景

ル化する必要があり，画面遷移図による設計をその近年のソーシャルネットワーキングサービスの普まま利用することは困難である．UML[2]のステートマ

及を始めとして，オンラインショッピングや Web バ

シン図は，実行可能なモデルであり，モデル駆動開ンキングなど，多くのサービスが Web アプリケーシ

発にも広く活用されている．

ョンとして実現されている．Web アプリケーション

本研究では，Web ナビゲーション構造をステート

は，Web ブラウザを通してユーザがビジネスロジッ

マシン図によってモデル化することで，検証およびクを実現するための枠組みであり，Web コンテンツ，

テスト生成の自動化を実現する．ステートマシン図

ユーザインタフェース，そして Web ナビゲーション

によるモデル化を行うことで，モデル検査[3]によるの 3 つによって実現される．中でも Web ページ間の検証[4]やテストの自動生成[5]のように，既存の様々移動を制御するための枠組みである Web ナビゲーシなモデルベースの技術を応用して検証やテスト生成

ョンの設計は，その構造の複雑さから開発に要するを行うことが可能である．本手法では，動的な Web

コストに対して大きな影響を与えている．Web アプ

ナビゲーションの振る舞いを表現するため，Web ナ

リケーションの開発コストの多くは検証とテストにビゲーションを構成する要素であるページ移動，認よって占められているため，その自動化により開発

証管理，そしてユーザ操作に加えて，ナビゲーショ

コストを削減するための試みが数多く報告されていンの制御に用いられるユーザの認証状況とフォーム

る．ソフトウェア開発を自動化するための技術の 1

部品の値とその変化を表現可能なモデルを提案してつとして，モデル駆動開発[1]と呼ばれるアプローチ

いる．本稿では，得られたモデルを用いて，遷移シが広く知られており，適用事例も報告されている．

ステムの統合解析環境 SAL (Symbolic Analysis

モデル駆動開発は，ソフトウェアの要求および設計

Laboratory)[6]による検証およびテスト生成を行っを実行可能な形式でモデル化することにより，モデた結果についても示している．

ル上でのシミュレーションおよび検証，そしてテス

2. Web ナビゲーション

トの自動生成を可能とする技術である．
Web ナビゲーションの設計には画面遷移図が広く

2.1 概要用いられているが，モデル駆動開発を適用するため

Web アプリケーションは，Web コンテンツ，ユーザ- 87 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図１ exApp の画面遷移図
インタフェース，そして Web ナビゲーションの 3 つートへと追加する．最後にオーダーボタンを押し，によって構成される．Web コンテンツは Web を通し注文を完了する．ここで，ユーザ認証(ログイン)をてユーザへと供給される文書や画像・音楽などのマ完了していなければ，注文を行うことはできない．

ルチメディアを指し，Web ナビゲーションは，Web

exApp の画面遷移図を図１に示す．このアプリケ

ページ間のページ移動を制御するための枠組みのこーションは，トップページ(TOP)，商品リストページとを指す．ユーザインタフェースは，ユーザが Web(LIST)，商品 A のページ(ITEM A)，商品 B のページ

ブラウザを通してアプリケーションに要求を送り，(ITEM B)，カート表示ページ(CART)，オーダー完了

コンテンツの提供を受けるための枠組みである．

ページ(ORDER)，ログインページ(LOGIN)，エラーペ

Web ナビゲーションに関しては，従来はハイパーージ(ERROR)，
そして個人ページ(MYPAGE)の 9 つから

リンクに代表されるような静的なナビゲーションが構成される．ページ間のナビゲーションを表１に示主流として用いられてきたが，近年の Web 技術の発す．例として，(1)のナビゲーションは，トップペー

展に伴って，スクリプトによって制御される動的なジにおいてリンク LIST がクリックされると，商品リナビゲーションの利用が一般的となっている．静的

ストページへと移動することを示している．

ナビゲーションではユーザの操作に対して必ず同じ

exApp において想定するユーザ操作を表２に示す．

ページ移動が行われるが，動的ナビゲーションでは

exApp におけるユーザ操作は，ハイパーリンクのク

同じ操作であっても，他の要因に従って異なるペーリック，ラジオボタンのチェック，ボタンの押下，ジ移動が行われる．ナビゲーションに影響を与える

そしてテキストボックスへの入力の 4 種類であり，要因には様々なものが考えられるが，本研究では，ページ毎に可能な操作が異なる．

ユーザの認証状況および Web ページ上のフォーム部

また，商品 A，B のページおよびログインページは品に入力された値に依存するものとする．

フォーム部品をもつ．フォーム部品とは，ラジオボ

2.2 例題アプリケーション

タンやテキストボックスなど，Web サーバに対して

ここでは，簡単なオンラインショッピングサイト

ユーザやクライアントがデータを送信するための機を実現する Web アプリケーション exApp を例題とし能である．各ページがもつフォーム部品およびそのて，提案法によりナビゲーション構造をモデル化し型と定義域を表３に示す．商品 A および B のページ

た結果について示す．アプリケーションの動作の概はラジオボタン SIZE をもち，取り得る値は S と M

要としては，まず商品リストへと遷移し，希望の商の 2 通りである．ログインページは 2 つのテキスト

品を選択する．そして，商品のサイズを選択してカボックス ID および PW をもつ．HTML で実装されたテ- 88 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

表１ exApp のナビゲーション
操作

表２ exApp のユーザ操作

No.

遷移元

遷移先

条件

認証

1

TOP

LIST

LIST をクリック

2

TOP

CART

CART をクリック

3

TOP

LOGIN

LOGIN をクリック

ログオフ状態

4TOP

MYPAGELOGIN をクリック

ログオン状態

5

LIST

TOP

6

LIST

7

No.
1

操作
TOP をクリック

ページ
LIST,ITEM A,ITEM B,
CART,ORDER,LOGIN,ERROR,MYPAGE

2

LIST をクリック

TOP,ITEM A,ITEM B

TOP をクリック

3

ITEM A をクリック

LIST

CART

CART をクリック

4

ITEM B をクリック

LIST

LIST

ITEM AITEM A をクリック

5

CART をクリック

TOP,LIST,8LIST

ITEM BITEM B をクリック

9

ITEM ATOP

TOP をクリック

6

LOGIN をクリック

TOP

10

ITEM A

LIST

LIST をクリック

7

S をチェック

ITEM A,ITEM B

11

ITEM ACART

CART をクリック

8

M をチェック

ITEM A,ITEM B

12ITEM A

CART

Add to Cart を押す

A SIZE が S

9Submit を押す

LOGIN

13

ITEM A

CART

Add to Cart を押す

A SIZE が M

10Order を押す

CART

14

ITEM BTOP

TOP をクリック11

Add to Cart を押す

ITEM A,ITEM B

15

ITEM B

LIST

LIST をクリック

12

正しい ID を入力

LOGIN

16

ITEM BCART

CART をクリック

13

正しい PW を入力

LOGIN

17

ITEM BCART

Add to Cart を押す

B SIZE が S

14

誤った ID を入力

LOGIN

18

ITEM BCART

Add to Cart を押す

B SIZE が M

15

誤った PW を入力

LOGIN

19

CART

TOP

TOP をクリック

20

CART

ORDER

Order を押す

ログオン状態

21

CART

LOGIN

Order を押す

ログオフ状態

22

ORDER

TOP

TOP をクリック

23

LOGIN

TOP

TOP をクリック

24

LOGIN

TOP

Submit を押す

ID と PW が正しい

25

LOGIN

ERROR

Submit を押す

ID か PW が誤り

26

ERROR

TOP

27

MYPAGETOP

ITEM A,ITEM B

表３ exApp のフォーム部品
No.

ページ

名前

型

1

ITEM A

A SIZE

ラジオボタン

S,M

2

ITEM BB SIZE

ラジオボタン

S,M

TOP をクリック

3

LOGIN

ID

テキスト

正,誤

TOP をクリック

4

LOGIN

PW

テキスト

正,誤

ログオン

定義域

キストボックスでは自由入力が可能であるが，画面し S がチェック済みであれば，商品 A(S)がカートへ遷移図を記述する際には定義域を抽象化して明示的と追加され，M がチェック済みであれば，商品 A(M)に与えることが一般的である．exApp では，ID およがカートへと追加される． (17)(18)も同様である．

び PW の定義域を，正常値(valid)と異常値(invalid)(24)および(25)では，正しい ID・PASS が入力されての 2 通りに抽象化して与えている．

いるか否かによって処理および遷移先が変化する．

ナビ ゲーション (12)(13) ， (17)(18) ，そして一方，(20)(21)は認証状況に依存するナビゲーショ(24)(25)は，フォーム部品に入力された値に依存すンである．
ボタン Submit を押下するという操作に対るナビゲーションである． (12)(13)では，ボタン

して，ユーザがログイン状態であればオーダー完了

Add to Cart を押下するという操作に対して，ラジページへと移動するが，非ログイン状態であればロオボタンの値に依存してその後の処理が異なる．もグインページへと遷移する．

- 89 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

3. ステートマシン図を用いたモデル化
ステートマシン図を用いて動的な Web ナビゲーシ
ョンをモデル化するためには，Web ナビゲーションを構成する要素であるページ移動，認証管理とユー
ザ操作の振る舞いに加え，ナビゲーションの制御に用いられるユーザの認証状況とフォーム部品の値を

(a)

(b)

(c)

(d)

表現する必要がある．
本手法では，ページ移動，認証管理，そしてユー
ザ操作をそれぞれ個別にステートマシン図としてモデル化する．ページ移動のステートマシン図では，

図２ 得られるステートマシン図の一般形

状態が Web ページを表し，遷移がページ間の移動を表す．認証管理のステートマシン図では，状態がユ

4. 適用実験ーザの認証状況を表し，遷移が認証状況の変化を表

4.1 モデル化されたステートマシン図

す．そして，ユーザ操作のステートマシン図では，状態はユーザの状況を表し，遷移はユーザによる操提案法により exApp をステートマシン図によりモ作の実行を表す．提案するモデルでは，ユーザ操作デル化した．図３に得られたステートマシン図を示

をメッセージとして表す．その上で，ユーザ操作をす．図３(a)は，ページ移動を表すステートマシン図表すメッセージをユーザ操作のステートマシン図かである．図１のトップページ(TOP)，商品リストペーらアクションとして送信し，ページ移動のステート

ジ(LIST)，商品 A のページ(ITEM A)，商品 B のペー

マシン図でイベントとして受信することで，ユーザジ(ITEM B)，カート表示ページ(CART)，オーダー完

操作に伴う Web ページ間の移動を表現する．ユーザ

了ページ(ORDER)，ログインページ(LOGIN)，エラーの認証状況は，前述の通り認証管理のステートマシ

ページ(ERROR)，
そして個人ページ(MYPAGE)の 9 つのン図において表す．フォーム部品の値はフォームがページは，それぞれ状態 TOP，LIST，ITEM_A，ITEM_B，所属する Web ページ内のみにおいて有効であるため，

CART，ORDER，LOGIN，ERROR，そして MYPAGE としてページ移動のステートマシン図において，Web ペー

モデル化される．
表１に示された 27 種のナビゲーションは，それぞジに対応する状態のサブ状態として表す．
得られるステートマシン図の一般形を図２に示す．

れ状態間の遷移としてモデル化されている．ナビゲ

図２(a)に示すように，
ページ移動のステートマシン

ーションを引き起こすユーザ操作をイベント，ナビ

図では Web ページの一つ一つを状態で表し，それらゲーションを行う条件をガード条件，そしてナビゲを遷移で接続することでページ間の移動を表す．
Webーションに伴って実行される処理をアクションとしページがフォーム部品をもつ場合，
図２(b)に示すよてモデル化を行う．また，ユーザ操作に伴うフォー

うに状態をフォーム部品ごとに領域へと区切り，領ム部品の値の変化も同様にユーザ操作をイベントと域内のサブ状態としてその値を表す．ユーザ操作のするサブ状態間の遷移としてモデル化している．

ステートマシン図は，図２(c)に示すように，ユーザ

表２に示された 15 種のユーザ操作は，メッセージの状況を表す一つの状態と，操作の実行を表す自身としてモデル化される．
リンク TOP，LIST，ITEM A，への遷移で構成される．また，認証管理のステート

ITEM B，CART，そして LOGIN のクリックは，メッセ

マシン図は，図２(d)に示すように，ユーザの認証状

ー ジ click_TOP ， click_LIST ， click_ITEM_A ，況を表す 2 つの状態と，その変化を表す遷移で構成

click_ITEM_B，click_CART，そして click_LOGIN とされる．

してモデル化される．ラジオボタン S および M のチ
ェックはメッセージ check_S および check_M として- 90 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

(a)

(b)

(c)
図３ exApp をモデル化したステートマシン図

モデル化される．ボタン Submit，Order，そして Add

つの遷移によってモデル化されている．

to Cart の 押 下 は メ ッ セ ー ジ push_Submit ，

4.2 動作検証およびテストパターン生成

push_Order，そして push_AddtoCart としてモデル化

Web ナビゲーションをステートマシン図によってされる．テキストボックスへの正しい ID および PW

モデル化する大きな利点の 1 つは，これまでに開発の 入 力 は メ ッ セ ー ジ input_ID_OK お よ び

されたステートマシン図を対象とした自動検証手法

input_PW_OK として，誤った ID および PW の入力はやテスト生成手法を利用することで，動作検証やテメッセージ input_ID_NG および input_PW_NG として

ストパターンの生成が可能となることである．

それぞれモデル化される．

まず，SAL の検証ツール sal-smc を用いて Web ナ

図３(b)は，認証管理を表すステートマシン図であビゲーションの動作検証を行った．まず，「未認証状

る．認証済みであることを表す状態 LOGON と未認証態のときはオーダー完了ページには到達できない」

であることを表す状態 LOGOFF をもつステートマシ

ことについて検証を行った．sal-smc による検証のン図によってモデル化される．

結果，この特性は満たされていることが証明された．

図３(c)は，ユーザ操作を表すステートマシン図で次に，「TOP から ORDER へと到達できるか」などといある．表３に示した 15 種のユーザ操作がそれぞれ 1った各ページ間の到達可能性についても検証を行っ- 91 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

た．sal-smc による検証の結果，「MYPAGE から LOGIN

を順番に実行することを表している．このテストケ

へ」「MYPAGE から ERROR へ」については到達不可能

ースを実行することで，
表１の 27 のナビゲーションという結果が出力された．この誤りの原因は，例題を全て実行することが可能である．

アプリケーションには認証解除を行うためのナビゲ5. おわりにーションが含まれていないことである．そのため，認証済みとなった後は未認証状態に戻ることができ

本研究では，Web アプリケーションの自動テスト

ず，未認証状態でのみ遷移が可能となるログインペ環境の構築を目的とした，UML のステートマシン図ージやエラーページには到達することができない．

によるナビゲーション構造のモデル化手法を開発し次に，
SAL のテスト生成ツール sal-atg を用いて，た．本手法では，Web ナビゲーションのページ移動

テストパターンの生成を行った．sal-atg では，SALと認証管理，そしてユーザによる操作をそれぞれ個プログラムに追加された補助変数に対して，指定さ別のステートマシン図で表し，メッセージによる相れた補助変数の値を全て真とするような入力値の組

互通信を行うことでユーザ操作や認証状況に依存しみ合わせをテストパターンとして生成する．したがたナビゲーションの振る舞いをモデル化できる．適って，例題アプリケーションの各ナビゲーションに用例として，オンラインショッピングサイトを提案

対して二値変数を定義し，ナビゲーションが実行さ法によるモデル化を行い，得られたモデルに対してれたときにその変数が真となるよう解析対象システ

解析ツール SAL を用いて検証およびテスト生成を行

ムを記述することで，全てのナビゲーションが実行

った結果について示した．また，本研究の成果を学されるようなテストパターンを生成できる．
sal-atg術論文へとまとめ，電気学会論文誌 C（電子・情報・による処理の結果，長さ 52 のテストケースが 1 つ生

システム部門誌）に投稿し，掲載されている[7]．

成された．テストケースの一部を図４に示す．テス

参考文献

トケースの変数はユーザ操作を表したイベントに対[1]

S. Mellor et al.: MDA Distilled, Principles of Model

応している．したがって，このテストケースは LOGIN

Driven Architecture, Addison-Wesley Pro-fessionalのクリック，TOP のクリック，…というユーザ操作(2004)[2]

1 tests generated; total length 52
All test goals discharged.
========================
Path========================
Step 0:--- Input Variables (assignments) --click_TOP = false
click_LIST = false
click_ITEM_A = false
click_ITEM_B = false
click_CART = false
click_LOGIN = true
check_S = false
check_M = false
push_Submit = false
push_Order = false
push_AddtoCart = false
input_ID_OK = false
input_PW_OK = false
input_ID_NG = false
input_PW_NG = false-----------------------Step 1:--- Input Variables (assignments) --click_TOP = trueclick_LIST = false-----------------------:
Step 2::

J. Rumbaugh, I. Jacobson and G. Booch: Unified
Modeling Language Reference Manual, The Pearson
Higher Education (2004)[3]

E. M. Clarke, O. Grumberg and D. Peled: Model
Checking, MIT press (1999)[4]

W. Chan et al.: Model Checking Large Software
Specifications, IEEE Trans. Softw. Eng., Vol.24,
No.7, pp.498-520 (1998)[5]

G. Hamon, L. D. Moura and J. Rushby: Generating
Efficient Test Sets with a Model Checker, Proc. of
SEFM 2004, pp.261-270 (2004)[6]

S. Bensalem et al.: An overview of SAL, Proc. of LFM
2000, pp.187-196 (2000)[7] 横川智教, 佐藤洋一郎, 有本和民: 検証およびテスト
生成の自動化を思考したステートマシン図による Web
ナビゲーションのモデル化, 電気学会論文誌 C,
Vol.136, No.3, pp.423-433 (2016)

図４ 得られたテストケースの一部- 92 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

実感を伴う水害用デジタル避難ガイドの開発（２）岡山県立大学デザイン学部
齋藤 美絵子AR 技術を活用したモバイル防災アプリの現状において、AR の役割や機能が明確にされていないという問題がある。本研究では、文献および事例調査により洪水における防災教育に有用な AR アプリの課題とその解決策について検討し、被験者実験により検証した。その結果、AR を用いたシミュレーション画像とそれに紐づく情報を同一画面に表示することで内容理解に効果があること、シミュレーション画像の表現によって内容理解や防災意識の向上に僅かな差が生じることが分かった。

になっていないという問題がある。

１、はじめにバーチャルリアリティ技術の一つである

本研究では、平常時に使用することを前提とした、Augmented Reality （以下 AR という）は、1990 年

災害対策や個人の自助力向上に有用な防災 AR アプには命名され*1 実現されていた技術ではあるが、そリについて必要な要素を明らかにすることが目的での特殊性のため一般社会の日常生活と直接関係するある。なお、災害の種類は洪水とする。

ことが少なかった。しかし、2000 年以降、スマート

以下本稿では、２章で既存の防災 AR アプリの問題

フォンの高性能化とその普及に比例するように一般点について述べ、３章では仮説として防災 AR アプリ

社会への普及が加速した。ユーザに特別な設備や能に必要な要素を挙げる。４章では、被験者実験につ力を求めることなく使用することができる「モバイいて説明し、
その解析を５章、結論を６章で述べる。

ル AR」が実現したことで人々の関心は急速に高まり
２、現状の防災 AR アプリとその問題点つつある。
そのような中、相次ぐ自然災害に対する国民一人

現在、iPhone 用に無料で公開されている防災 AR

ひとりの自助力と防災意識を向上するべく、防災のアプリ 23 個を対象に、誰が何のためにそのアプリをためのスマートフォンアプリが多数開発され無料で提供しているのか、どのような AR 技術と表現が使わ公開されている。近年では特に、AR の利点といわれれているのかを中心に、以下７項目について調査しる「直感的なわかりやすさ」に注目し、AR 技術を用た。

いた防災アプリが開発され始めている。現在、日本① 防災 AR アプリの目的で公開されている「防災」に関する iPhone アプリは

② AR 機能とその見せ方

300 個に迫り、そのうちの１割程度に AR 技術が活用③ AR の形式（ロケーションベース型、マーカ型、されている。

マーカレス型の別）

しかし、現時点では防災アプリにおける AR 活用は④ AR 機能の利用条件

まだ開発途上といえ、その役割や効果について整理⑤ シミュレーション画像の有無（災害想定画像が重されていないことから、必ずしも効果的な表現形態

畳されるかどうか）- 93 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】⑥ ナビゲーション機能の有無（エアタグによる情報
提示を含む）⑦ AR アプリの管理者や発行元

２ １、防災 AR アプリの特徴調査した防災 AR アプリの主な特徴をまとめると次の３点となる。
まず１つめは、平常時の利用を想定しているものが主流だということである。リアルタイムに気象情

図１ 浸水の表現

図２ 避難所の表示

報と連動するアプリや一部機能は存在するが、緊急時に実用性をもったものは株式会社島津ビジネスシ

２ ２、現状の問題点

ステムズが開発した『アメミル』のみであった。なお、このアプリは月額の有料会員に登録すると 1 時

これらの特徴から、現状の AR 災害アプリの主な問
題点は以下の２つと考えられる。

間先の雨量予測を見ることができるが、無料会員はまず１つめは、現状の多くのアプリが予想浸水深得られる情報が限られる。現状では、緊急時に実用の情報や避難所の場所や方向など、データを AR によ性をもつ AR アプリが無料で公開されていないことって可視化しているところで留まっており、避難時がわかった。

の行動に関する指示をはじめとする災害知識を得る

２つめの特徴は、ロケーションベース AR（当該地ためのコンテンツは AR 機能とは異なるページや階でのみ機能する、GPS など位置情報を利用したもの）

層で解説されていることである（図３）。この構造にである。その大きな理由は、防災 AR アプリのほとん

より、別々のページやメニューで得た情報および知どが自治体の発行するハザードマップの応用展開で識を紐付けて理解することは受け手に委ねられ、多あるからだと考えられる。任意の地点で「この場所

くのユーザにとって具体的な知識の習得やその後のは洪水時にどのくらいの浸水があるのか」という情行動に結びつけにくいことが問題といえる。

報を表示する機能であることから、GPS との連動は必然といえる。
３つめの特徴は、シミュレーション機能とナビゲーション機能の両方を備えていながら、それぞれの役割が曖昧なことである。まず、シミュレーション
機能として浸水を想定した画像がどのアプリも類似しており、水色透過画像をカメラファインダに重畳したもので、水害のリアリティは低い（図１）。そして、ナビゲーション機能とうたっているものも、エアタグを用いた避難場所表示のみで具体的な誘導指

図３ メニュー画面とノウハウ集の画面

示や誘導機能はない（図２）。
２つめの問題として、シミュレーションであるにも関わらず、リアリティが必ずしも高くない画像表- 94 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

現のみが用いられていることである。多くのシミュ

４、実験

レーション機能は氾濫水を表すのに実際とは異なる

解決策１と２の効果を検証することができる実験

水色の透過画像を用いている。これは浸水時に水中用コンテンツを作成し、それぞれの効果を評価する。

がどうなっているかを分かりやすく示すためである

まず、具体的なインストラクションの有無についと考えられる。しかしながら、実際の水は濁った泥てその効果を検証する。AR 画面にインストラクショ

色であり、水中の危険個所などが避難者からは分かンを付加するものとしないものとでは内容理解の効らない難しい状況になることが透過画像では伝わら果が異なるのか、別々の被験者群にそれぞれの実験ない。これら異なった表現法の防災教育への有効性

用教材を閲覧させ、実験後に実施するテストの得点が明らかになっておらず、表現として不適切な可能により評価を行う。
次に、解決策２については、AR で重畳するリアリ性がある。

ティ（CG 表現）の違いが①内容理解および②意識向上に与える効果を明らかにする。ここで、①の内容

３、防災 AR アプリに必要な要素
平時に防災教育目的で使用することを前提とした理解については、位置や深さに関する「知識情報」

防災 AR アプリの改善に向け、前章であげた問題に対と、状況把握のための「シミュレーション情報」とする解決策を提案する。

を大きく２つに分け、それぞれに対して水色画像と第一の問題に対しては、AR を用いて表示するシミ

泥水画像では理解に差が出るのか、また、情報と画ュレーション画像とそれに紐づく災害知識を関連づ

像の効果的な組み合わせがあるのかについて、実験

けて表示する構造にすることで解決を図る。さらに、後に実施するテストの得点により評価を行う。また、「現実の景色」→「AR による氾濫シミュレーション②の意識向上については実験前後に実施したアンケ画像」→「文字によるインストラクション」と段階ートの比較や自由記述の感想から分析する。

的に同一画面上に表示する構成とすることで、AR の利点といわれる「直感的なわかりやすさ」に「理解４ １、実験材料の確実性」を付加することができると考える。

国土交通省の「ハザードマップ作成の手引き」に

第二の問題に対しては、シミュレーション画像と記載されている住民へ周知されるべき情報から解説して現状の多くの防災 AR アプリで表示される水色が望まれる項目を選出して『洪水対策のための実験

透過画像の効果および実際の氾濫時に近い泥水画像用教材』を制作した。形態は AR アプリを模したウェの効果を明らかにすることで解決を図る。
「ドアが空

ブサイトで、内容は以下の６項目とした。なお、前けられなくなる水位は地面から 30cm」といった知識

半の３項目が「知識情報」、後半の３項目が「シミュ情報と、「浸水後の避難時は水中が見えないため脱げ

レーション情報」と分類する。

ない紐靴を選ぶこと」といったシミュレーション情（１）大人にとって歩行が難しくなる水位の目安は

報では同じ画像を用いて説明することが適切とは考50cm であること。

えにくいことから、「知識情報」は浸水時に水中がど（２）大人にとってドアが開けられなくなる水位の

うなっているかを視覚的に分かりやすく示す水色透

目安は 30cm であること。

過画像が効果的であり、「シミュレーション情報」は（３）用水路付近で冠水時に避難できる水位の目安

リアリティのある泥水の画像を提示することとする。

は 10cm であること。
（４）避難時の履物は脱げにくい紐靴を選ぶこと。

- 95 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】（５）避難時の服装は水を通す素材を選ぶこと。

験者でも表示内容について事前に心構えや想像がで（６）浸水後の避難時には足下を確認する長い棒をきるようにした。特に実験用教材 A にはインストラ

持っておくこと。

クションが無いため、何について考えるための AR

実験用教材は A

C の３種類を用意した。

画像なのかを知らせる役割となる（図７）。

A：現実の景色に水色の透過画像を重畳して見せる。

さらに、AR を模した CG 画像が重畳される前の通既存の防災 AR アプリに最も多い表現（図４）。

常の風景写真を事前に表示するようにした。つまり、

B：A の重畳画面に文字によるインストラクションを

実験材料は、［項目タイトル］→［通常の風景画像］

付加して見せる（図５）。

→［AR を模した CG 画像］→［インストラクション

C：B と同じ構成で、重畳する CG を水色透過画像で（B と C のみ）］という流れで閲覧させる。

はなく泥水不透過画像を用いて見せる（図６）。
４ ２、被験者
18 24 歳の大学生 78 名が参加した。これは、平成 27 年度に岡山県が実施した「県民満足度調査結果（防災対策編）」より、災害に対する備えを実施しているかという質問に「特に対策をしていない」と回答した年代は 20 歳代が４割程度（37.0％）と高くなっており、被験者の災害対策能力にばらつきが出にくいと考えたためである。

図４ 実験用教材 A

４ ３、実験手続き

図５ 実験用教材 B

課題１（学習課題）：被験者を AC の３群に分け、それぞれに対応する実験用教材 A

C を１回通り閲覧させた。閲覧時間に制限はないが閲覧回数は１回に限った。これは AR が「直感的な理解」を助けるツールとして期待されていることと、閲覧回数による
理解のばらつきを避けるためである。
課題２（計算課題）：課題１を終えた被験者は即座に 300 から 3 ずつ引いた答えを次々と計算する作業を１分間行った。これにより、単なる暗記であるか
図６ 実験用教材 C

内容を理解し知識習得に至っているかを区別する。

図７ 項目タイトル

インストラクションの有無による効果を検証する

課題３（再生課題）：課題２を終えた被験者は、そ際は A と B を比較、リアリティの効果を検証する際の内容を理解し記憶しているかどうかを確かめるたは B と C を比較するよう、検証する要素以外は統一

めのテストに取り組んだ。また、実験用教材に対すして作成した。

る主観的な評価に関するアンケートに回答した。

また、実験用教材 A

以上、この実験手続きについては、認知心理学のC すべての冒頭に目次を設けると共に各項目にタイトル画面を設け、どの群の被先行研究*2 を参考にした。

- 96 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

５、実験結果ない」という主旨の記述は無かった。さらに、「段階

５ １、インストラクションの有無による効果

的な情報提示が理解を助けた」という主旨の記述がまず、被験者 A 群と B 群の正答率を比較する。AB 群と C 群合計 8 名（30％）からあったこと、実験群は、６項目の正答率は平均で 27％であったことか

用教材６項目の閲覧時間が A は平均 1 分 57 秒、B はら、インストラクションなしで具体的な知識を得る

2 分 24 秒、C は 2 分 05 秒であったことから、B と Cことは困難であることがわかる。しかし、項目４のは文字を読まなければならなかったにも関わらず長「避難時の履物はどんな種類を選ぶべきか？」といい時間を要せず正解したという結果から、「直感的なう問いに正解することができた被験者が 17 名（65％）

わかりやすさ」に「理解の確実性」を付加できたとと６割を超えている点については、「脱げにくさ」をいえる。

根拠に正解した人が７名（27％）
、怪我の恐れを考慮して回答した人は４名（15％）であったことから、

５-２、リアリティの効果

インストラクション無しの水色透過画像でも水中でAR を用いたシミュレーション画像のリアリティ

履物が脱げる恐れを想像することができることが読について効果を調べるため、被験者 B 群の正答率とみ取れる。

C 群の正答率を比較する。被験者 B 群の６項目の正

B 群の正答率は、６項目の平均で 87％であった。

答率は平均で 87％であったのに対し、被験者 C 群の

しかも、A 群では項目によって正解にばらつきが見

６項目の正答率は平均で 89％と差は見られなかっられたが、B 群では項目による正解のばらつきは見た。さらに、前半３項目は知識情報、後半３項目はられなかった。これにより、AR 画像とインストラク

シミュレーション情報に関する質問であるので、ションを併用することで、項目を問わず内容理解に我々の仮説によれば、前半は水色透過画像、後半は効果があるといえる。

泥水画像の効果がそれぞれ高いことが予測されるが、次に、主観評価として「今回の画像を見ることは実験結果を見ると、前半である項目１と３について

水害対策を理解することに役立ちましたか？」といも泥水画像の C 群の正答率が平均 94％と B 群よりもう質問に「かなり役立った／やや役立った／あまり高く、後半である項目４については C 群よりも B 群

役立たなかった／全く役立たなかった」までの４段の方が僅か１名ではあるが正解者が多かった。よっ

階で評価させたところ、A 群は、「かなり役立った／て、テストの正答率からは立証できなかった。しかやや役立った」とポジティブに回答した人が合計でし、項目２の正答率について注目したい。項目２は21 名（80％）、「あまり役立たなかった」とネガティ「浸水時、大人の力でドアが開けられなくなる水位ブに回答した人が 4 名（15％）であったのに対し、Bは何センチ以上か？」という問いで、泥水画像を用

群はポジティブな回答が 26 名全員（100％）から得いた C 群で正解できた被験者は 15 名（57％）であっられた。

た。正答率に加えて、主観評価を得るための自由記

さらに、自身が閲覧した実験用教材について「気述においても、「浸水時の画像が重なった部分が全くに入った点」と「気に入らなかった点」について複わからなくなる」「もう少し透明にしてほしい」とい数回答可として自由記述させたところ、A 群から「画った、泥水が不透明であることを気に入らないと記像だけでは何を読み取れば良いのかわからない」と述した人が４名（15％）おり、不透明であることがいう主旨の記述が 12 名（46％）からあった。これに深さの目安や印象を妨げてしまう恐れがあると判断

対し、B 群からは「何を読み取ればよいのかわからできる。なお、前半３項目のうち項目２のみ不正解- 97 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

が突出しているのは、項目１と３には被験者にとっう」と回答をした人が B 群に比べて C 群の方が多かて水位の目安として利用できる大人と子どものシルった。それぞれ微増ではあるが、事前アンケートでエットを表示したが項目２には表示しなかったため、「水害対策で知っていること・実際に行っているこ

水位や深さに関する手がかりがなかったことが影響と」を記入させた結果、B 群の被験者は 17 名（65％）

していると推察できる。なお、項目２に人のシルエが記入をし、C 群の被験者は 15 名（57％）が記入しットを表示しなかったのは写真の構図がクローズアており、災害対策についての意識向上においては、Bップであったためである（図８）。

群は 17 名（65％）から 24 名（92％）へ増え、C 群は 15 名（57％）から 25 名（96％）へ増えたことになる。この結果から、ユーザの防災意識向上においては、リアリティのある AR 画像の方が効果的である
といえる。

６、結論
実験により、AR 画像とそれに紐づく情報を同一画面へ表示することで内容理解に効果があることがわかった。シミュレーション画像のリアリティによって内容理解を助ける情報の種類が異なるという仮説

図８ 浸水画像の透明・不透明の違い

においては、大きな差はみられなかったが、このよ
また、水色の透過画像を用いた実験用教材 A・B

うな AR 画像による比較実験を行った例は見当たらの被験者による主観評価では、「水にリアリティがなないため、この実験は有意義であったと考えている。

い」といった主旨の記述が合計で６名（23％）いた

また、水害をイメージしやすく、今後の災害対策にが、C 群にはリアリティがないという記述は見られたいする姿勢や意識の向上に効果があるのはリアリ

ず、「水の濁り具合が実際に近い」「水の表現が良い」

ティのある画像であるといえる。

といった記述や「実際の状況がイメージしやすかった」という主旨の記述が 10 名（38％）からあった。
これらの結果から、水位や深さについての目安を伴謝辞って理解したい情報は透過画像の方がユーザにとっ本研究を遂行するにあたり（財）ウエスコ学術振興て負担が少なく、水害をイメージしやすいのは泥水財団から研究経費を助成していただきました。ここ画像であるといえる。

に記して感謝いたします。

さらに、主観評価の項目で、「今回と同じような形
態（閲覧したもの）で他の内容について機会があれ

参考資料

ば見てみてもよいと思いますか？」、「今後、水害や*1

それ以外の災害に対する対策について知ろうと思い

技術の基礎・発展・実践』科学情報出版.

ますか？」という質問に「とてもそう思う／ややそ*2

う思う／あまり思わない／全く思わない」の４段階の内容理解を促進する挿絵の条件』2014 年度日本認知科で評価させたところ、「とてもそう思う／ややそう思学会第 31 回大会.

- 98 -

蔵田武志,清川清,大隈隆史（2015）『AR（拡張現実）林聖将,石井健太郎,開一夫（2014）『防災マニュアル

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

わが国との比較的視点で捉える台湾における歴史的町並み（老街）保存事業の分析研究
岡山県立大学 デザイン学部
西川 博美
台湾では「老街」と呼ばれ親しまれる日本統治時代に主に市区改正事業により形成された歴史的町並みを保存する事業が盛んである。それは地方都市の町並みにおいても盛んに町並み保存事業が実施され、「社区営造」と呼ばれるボトムアップのまちづくり政策が取られて、住民による主体的なまちづくり事業が強く反映されてきた。一方、わが国における町並み保存事業は、倉敷市の美観地区にも代表されるように、重要伝統建造物群保存地区といった保存政度で推進されてきた。台湾の町並みの最大の特徴は、店屋の立面にほどこされた濃密な装飾で、町並みの保存事業ではこれを修復することに注力されている。その立面装飾は、町並みの形成の経緯や年代により違いがあることがわかった。町並みの成立が、市区改正事業によるものではなく住民の主体的な建設であったものにも、立面に濃密な装飾を有していることがわかった。また一方で、1935年の台湾中部での大地震後に市区改正事業により建設された町並みでは、装飾が排除されていくが、それには建物の材料や構造の変化だけではなく、目指すべき町並みのイメージにも変化があったことを明らかにした。

１．はじめにそのことを明らかにするために、申請者は平成 27

日本統治時代の台湾では、亭仔脚と呼ばれる軒下

年度期間中に２つの着眼点から研究を行った。まず歩道を設置した店屋が連続する町並みが全島にわた

一つ目は、とりわけ現在に観光地として栄えているり建設されている。それは、日本統治時代の建築制

老街の町並みが、市区改正事業の中での建設ではな度である 1900 年に公布された「台湾家屋建築規則」

く、自主的に亭仔脚の町並みを形成していった地域

によって軒下歩道の設置が義務づけられ普及したとにもあることに着目し、その町並みの成立の経緯をされる。
申請者はこれまで、
実際の町並みの建設は、整理して示すこととした。二つ目は、老街としてガ1910 年以降、各地の市・街・庄で実施された市区改

イドブック等で紹介されながらも、観光地としては

正計画の事業により実現していった状況を明らかに

有名ではなく、店屋の改装が景観を優先する方法でしてきた。その町並みは、建築制度と市区改正事業はなく自由に行われているものが、1935 年以降に建（都市計画事業）により計画的に建設されてきたも設された町並みに多くあることに着目した。台湾でのと考えられる。

は繰り返し震災の被害を受けているが、それらの市

現在の台湾で、その町並みが「老街」と呼ばれ、区改正事業が、震災復興の過程で実施されているケ

さまざまな保存事業が講じられて、観光資源にもなースが多ことに着目し、町並みの形成において、こっている。申請者は、これまでその台湾の町並みのの震災への対応にどのような影響があったのかを検保存事業が、「社区営造」と呼ばれるボトムアップの証した。

まちづくり政策が取られて、また、住民による主体
的なまちづくり事業が強く反映されてきたことを明

２．市区改正計画によらない町並みの形成についてらかにしてきた。また、町並みの保存事業では、そ台湾総督府の市区改正計画ではなく実施された町の濃密とも言える独特な立面のデザインを保存修復

並み形成の事業の例を見てみると、現在も老街（歴することに注力されていることがわかった。

史的町並み）と呼ばれ観光地になっているものに３

その立面のデザインは建設当時の建築規則においつの町並みが存在する。
それは、
三峡老街
（新北市）
、

ても、市区改正事業計画においても、立面装飾を必

新化老街（台南市）、湖口老街（新竹市）の例である。

須のものとしての規定はなかった。ではなぜ、こう三峡老街では、1915 年に廳長に着任した達脇良太

した特徴ある立面デザインが、当時、波及したのか。

郎が、道幅の狭さ、建物の高さが不一致であること、- 99 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

排水溝などの下水整備が整っていないことを見て、では、市区改正は「従来幾回も試みられてきたが着

台湾総督府の市区改正計画とは別に、1916 年に街区手されなかった」とされる。市区改正の策定は台湾の建設・整備を実施し、街道沿いに亭仔脚をともな

総督府によるが、実際の事業実施は街や庄が担うこう店屋が連なる町並みが建設された。またその後にとになるが、財政事情が弱体な街や庄では、計画がも、鎮公所、農会や郵便局や学校といった公共施設

策定されても事業実施が後送りにされることが一般も建設していった。ここでの町並みが、市区改正計的だったとされるが、新化街では、市区改正計画が画によるものでないことは、その道路が緩やかに湾策定されずにいたために、総督府からの直接の無利曲していることからわかる。市区改正計画では、街息融資の支援が受けられ、町並みが実現したという区の整備にともない新たな道路を建設するのが一般ことが言えそうである。現在も新化の町並みが修的で、その場合はほとんどが直線的な道路となる。

復・保存され、地域住民が日常的に利用する商店とまた、道幅は市区改正事業の場合は車の往来が可能

して存続し続けている要因は、この町並みの成立がな 8ｍ程度には拡幅されるが、ここでは 4ｍに満たな

総督府によるものではなく、住民等の自助努力によい道幅のままである。これは総督府によるトップダ

るものであり、現在にも、そのまちづくり的な精神

ウンにより道路用地として寄付あるいは買収を行うが受け継がれていることによるのではないかと判断

方法ではなく、廳長が道路沿いの地主１軒１軒に掛できる。

け合い町並みを整備した事業であった。
結果的に、この道幅が広すぎず緩やかに湾曲した道沿いに、赤煉瓦造で 1 層建ての店屋が連なる町並
みの風景が、現在観光客を集める要素になっているのである。
現在の新化老街の町並み 1921 年林茂己の商店
そして、上述と同様の自主的な町並みの建設ではあるが、近隣都市の市区改正の影響によるものと判断できるのが、湖口街のケースである。湖口街は現在の新竹県に位置した扇状地の端にある台地である。
清の時代に台北から新竹まで鉄道が施設され、湖口に駅が設けられたことにより、街区が形成された。
三峡老街の町並み

三峡街と同じく 1916 年に地元の行政により街区の次に新化老街では、1920 年に街の中央を南北に貫改変が行われ、町屋の建設が進んでいった。
ただし、く道が倍の幅員に拡築され、沿道に亭仔脚を持った

ここでは市区改正事業と同様の整然とした街区形成

洋風立面の店屋が自主的に建てられていく。1921 年が見て取れる。ここでは、清の時代から日本統治時に林茂己という商店主が、3 階建ての店屋を建設し代の1918 年頃にかけて4段階に街区が形成されていたことが契機となり、その後、この建物の美観が評ったという。第一段階と第二段階で街の北東部の街判となり、これを模範建築として、次々と洋風意匠区が形成されている。この部分は既存の街路を拡張を持った店屋が建てられた。この建設事業が市区改したものと考えられる。それを基盤として、1916 年

正計画によるものではなかったため、総督府から農から 1918 年にかけ、西方向へ新たに道路が建設され、会を通じて店屋一軒あたり 2000 円の無利息融資が統一された店屋の街区が形成される。この整然とし実施された。なぜ新化街では市区改正計画が策定さた街区と街路の整備は、1913 年に隣接する新竹街でれなかったのか。1923 年 8 月 11 日の台湾日日新報

市区改正事業が決定・実施されており、その影響を- 100 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

うけたものであると判断できる。現在、湖口老街はみ景観が、震災復興の中で、どのような影響を受け、その統一的なデザインの店屋が連続して並ぶ風景がどのように変化していったかを考察した。

評価され、駅や市街地から離れた立地にもかかわら震災が市区改正事業に最も大きな影響を与えたとず、観光客を集めているが、ここにも住民らの自助考えられるのが、1935 年の 4 月 21 日に発生した新努力による町並みの形成の意思が現在にも引き継が

竹から台中にかけての大震災（台湾中部震災）では、れていると考えられる。

死者が 3294 名、被災民 26 万人にのぼった。建築物の被害も甚大であり、全壊家屋は 17,835 戸とされる。そのため、台湾総督府は、いち早く 4 月 29 日に、復興のために震災復興委員会を設置する。そして、その復興計画の中で、被災地において戸数 500戸以上で、危険家屋が５割を超え、かつ市区改正事
業施行の経済的能力を有する 19 の街・庄に対して、積極的に市区改正計画を策定し、実施した。さらにその費用について国庫および新竹州費からそれぞれ

湖口老街の町並み

１／３の補助を与えることを通達した。被災地が広市区改正計画によらないで亭仔脚の型式を基盤と範にわたったこともあり、大がかりな市区改正計画する町並みが形成された例は、数は限られるもののの促進と誘導が計られた。

上記の例だけにとどまらないと考えられる。
しかし、台湾における市区改正計画が、1937 年に公布され

現在も
「老街」
として親しまれるものの例としては、

る「台湾都市計画令」に向けて 1931 年ごろから、

この３例を挙げることができる。

街・区全体に一貫した計画性が求められるようにな

３例においては、街区の整備や道路の建設・整備

り、それにともない店屋は構造を煉瓦造から鉄筋コにおいて、その整備の程度に差があることが認めら

ンクリート造に改めながら建設されていく。台湾中れるが、それは市区改正計画のような統一的な計画

部震災を契機とした市区改正計画の促進政策濃密な標準が存在しなかったためであると理解できる。一洋風立面のデザインを有していることは、こうした方で３例とも、濃密な洋風立面のデザインを有して市区改正事業の変化をさらに促進するものであった。

いることが共通している。このことは、台北市に実この震災を契機として計画された市区改正計画は、現した亭仔脚の町並みデザインが、制度や事業計画

街区の修復ではなく、ほとんど新設に近いものであという枠組みを超えても広く波及していく要素であった。多くの家屋が倒壊被害を受けた状況もあり、ったことを示す事実であると言える。

市区改正計画の中核となる街路の整備において、従この３例は、現在にもその町並みの保存事業が活来とは異なる街路網が整備された。

発であり、建設当時においても、現在においてもま

それにともない、新設や大幅に改築される街路沿

ちづくりの要素が大きいことが伺えるのである。

いにおいては、被災家屋だけでなくすべての店屋が改築された。例えば、新聞報道によれば台中州の豊３．地震災害復興による町並みの形成

原街では、震災後１年経過した段階で、震災で大破

日本統治期に、台湾では繰り返し震災の被害を受した家屋 1,259 戸のうち復旧したのは 222 戸しかなけ、これらの震災の復興の過程で市区改正事業が実かったが、それは市区改正事業の実施のためだと説

施されているケースが多い。この地震を契機とした

明されている。つまり、市区改正事業として街路の市区改正事業からの町並みの形成において、この震改築が進む中で、まずは被害の有無にかかわらす店

災被害によりどのような影響があったのかを検証し屋を除却、あるいは道路に面する部分の一部を除却た。とりわけ、特徴ある亭仔脚（軒下歩道）の町並する作業が進められていた。

- 101 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

月１日に示した。これにより、亭仔脚はこの規則にしたがって新設された。同規則の規定にしたがい、
亭仔脚の材料・構造は、震災で壊滅的な被害となった土角は禁止されるのはもちろん、煉瓦造は平屋のものに限られ、２階建て以上のものは鉄筋コンクリート造にすることが義務づけられることとなった。
こうした材料・構造の規制により、煉瓦造が主流であったそれまでの亭仔脚をともなう町並みは、鉄豊原街の被害の様子

筋コンクリートの風貌へと変わっていった。

豊原街市区改正計画図

1935 年 市区改正後の鹿港の町並み

こうして、震災後の街・庄では、ほぼ新設に近い

かつて、地理学者の冨田芳郎は、1940 年代に台湾ような形で、新しい町並みが登場した。では、その全島で亭仔脚の町並みの調査を行い、
「明治型」
「大

町並みは、かつてのものとどのような違いがあるも正型」「昭和型」という３類型を提示した。1925 年のとなったのか。町並みの最も大きな特徴となる亭からの昭和期に入ると、町並みの姿は大きく変容す

仔脚（軒下歩道）の型式は、そのまま踏襲されるが、る。富田の観察によれば、「大正型」では煉瓦造のもその材料や構造については震災時の状況が脆弱なものが大半で赤い色を呈した町並みであったのに対し、のであると分析され、改善が求められていた。

「昭和型」では、コンクリート造のものとなり、グ『台湾建築会誌』に報告された分析によれば、店

レー色の町並みとなった。これは、「台湾家屋建築規

屋建築の被害は特に甚大なものであったとされ、そ則」の施工地が震災を契機に広げられ、その規制をの理由について、①亭仔脚部分の独立柱が脆弱なも受けて変化したものだったと理解できる。
「大正型」のであること、②母屋の壁と亭仔脚の壁（扶壁）がでは独立した扶壁が設けられ、そこに細密な装飾が構造的に一体化されていないこと、③その亭仔脚の施されていたのだが、「昭和型」ではそうした扶壁が扶壁が過重でありほとんどが倒壊していることなど設けられず、装飾も細密なものがほとんど見られなが指摘された。そこで、台湾総督府は、この状態をくなるとされた。

法令を使って改良しようとした。

亭仔脚の町並みは、現在「老街」と称され台湾で建築物の材料および構造を規定する法律としては観光地化されたり保存運動が取り組まれたりする「台湾家屋建築規則」が 1900 年に公布されていた例が多くなったが、その景観的に最も重要な要素は、が、これは台北城内の地域を対象に施行が始まった。

立面にほどこされた装飾である。擬洋風とも指摘さ

その法律を、この震災を契機にして、市区改正計画

れるその独自な装飾は、確かに台湾の町並みの特徴の策定を指示した地方の庄・街にも施行することとを示すものだが、それが鉄筋コンクリート造に変化した。具体的には、同規則の施行細則にある地方長することで姿を消していった。しかし、材料・構造官が同規則の施行地域を規定できる制度を使って、の変化だけで装飾が消失していくことになったのか。

州知事が州令として同規則の施行と施工地域を、７

そこには、装飾を排することを目的とした運動が- 102 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】あった。震災からの復興事業については、上記のよ

４．まとめ

うに市区改正計画策定の指示や、「台湾家屋建築規

日本統治時代の台湾では、亭仔脚と呼ばれる軒下則」の施行などの施策が取られたが、もう一つ重要

歩道を設置した店屋が連続する町並みが形成され、な施策が、国庫や州などによる低利資金の融通によ

それが現在、老街として親しまれ町並みの観光地とる財政的な援助であった。これは総額で６１３万円

なっている。その町並み景観の最大の特徴は亭仔脚という金額が、大蔵省により 7 月３１日に決定されの立面にほどこされた独特な装飾であるが、その装るが、その後この低利資金の申し込みが殺到したよ

飾は、地域によって、あるいは町並みが建設された

うすが新聞でも報じられている。

時期によって変化が伺える。

こうした政府による援助を受ける形で、被災民に

日本統治時代に台湾総督府による市区改正事業がよる自力更正運動がさまざまな形で呼びかけられる74 箇所で実施されている。しかし、現在に老街としようになる。その運動の中で、装飾を排することがて観光地になっているものには、その市区改正事業指摘されるようになったのである。台湾総督府は、が実施されずに町並みが形成されてきたものもある。

被災民の「精神的指導」を行い、「国民的教化」を図

それらの事例を検証してみると、町並みの形成の段ることで「復興精神」を強化するために、新竹、台階においても、現在の町並み保存事業においても、中の両州知事に対して、５月１７日付けで「震災地まちづくりの性格が濃いことがわかった。

住民の自力更正運動ニ関スル件」という依命通達をまた、日本統治時代の台湾では、度重なる地震災発した。そこには、指導方法としてさまざまな事項

害に見舞われた。その災害復興の中で実施された市が挙げられているが、その中で、住宅の改善として、

区改正事業の中で、店屋は、構造を煉瓦造から鉄筋「台湾家屋建築規則」により規制されている土角をコンクリート造に改めながら建設され、装飾が排除排すること等とともに、「前面屋上の装飾を廃するこされていった。しかし、材料・構造の変化だけで装と」とされている。つまり、亭仔脚の立面に装飾を飾が消失していったわけではなく、装飾を排するこ

ほどこすことは、震災復興の復興精神の中で否定さとを目的とした運動があった。煉瓦造で濃密な装飾れたのである。それは制度として規制されたのではは暗鬱なものとされ、鉄筋コンクリート造で装飾をなく、精神運動の中で好ましくないものとされた。

省いたものが明朗なものとして評価され、それまで

この通達の後、新聞報道でも復興精神の重要性にの町並みに特徴的であった装飾が省かれていった。

ついての報道が目立つようになり、「災いを一転してこのようにして町並みの建設の経緯・時代により明朗な自力更正」という見出しで復興していく新た

装飾の変化が見受けられた要因が明らかになった。

な店屋等について紹介した記事では、「従来のような

尚、２章の市区改正計画によらない町並みの形成

暗鬱な気分は全くけし飛んで了ひ極めて明朗な家屋については、2015年度日本建築学会大会[関東]にて、となったことは誠に喜ばしい」と指摘されている。

「台湾における市区改正計画によらない軒下歩道

ここからうかがえるのは、煉瓦造で濃密な装飾がついたファサードは暗鬱なものとされ、鉄筋コンクリート造で装飾を省いたものが明朗なものとして評価されるようになっていった状況である。

（亭仔脚）の町並み形成について」（西川博美、日本
建築学会大会[関東]学術講演梗概集、pp.59－60、2015年9月）で口頭発表を行った。また、３章の地震
災害復興による町並みの形成については、東アジア
建 築 文 化 国 際 会 議 EAAC2015 光 州 に て 、「 Theこのように、震災の復興における自力更正運動のEarthquake Disaster Reconstruction and the中で、暗鬱なものから明朗なものへという、目指す

Walk-Way under Eaves During Japanese Colonial

べきデザインイメージの変化を受け、それまでの町

Period in Taiwan」、（Hiromi NISHIKAWA、『EAAC 2015

並みに特徴的であった装飾が省かれていくことにな

GWANGJU 』 East Asian Architecture Cultural
International Conference 2015（韓国）、査読有、ったのである。

p.857-860、2015年11月）に掲載と口頭発表を実施し、研究の成果を発表した。

- 103 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

建築家ジェフリー・バワの建築言語に関する研究
岡山県立大学デザイン学部
岩 本 弘 光（概要）
本研究は現代建築の発展に大きな足跡を記した、スリランカ人建築家ジェフリー・バワ（Geoffrey Bawa：
以下、バワという。
）の建築作品に関する建築言語と空間構成原理に関する研究を行い、モンスーン気候、稲作、仏教文化など、スリランカと建築の成立基盤を共有する我が国の建築意匠、建築計画の発展に寄与することを目的とする。本研究の研究成果は当初の計画通り、「解読 ジェフリー・バワの建築」として平成 28 年 1 月 10日付で彰国社より刊行された。刊行図書の仕様は B5 版、338 頁、カラー印刷、現地写真、原設計図を掲載。

（本文）
成果物の刊行図書抜粋をもって本文とする。

- 104 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 105 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 106 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 107 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 108 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 109 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

現代作家の陶磁器デザインと技法の集積
岡山県立大学デザイン学部
久保田厚子
本研究の目的は現代日本陶芸の正当な評価を広く国内外に発信することで、芸術文化の振興に寄与することです。国内陶磁器産業の空洞化が進む我が国において吃緊に整備すべきは、陶芸家が恊働しその成果を発表する場です。その場として、公益財団法人からの助成によって焼成技術者を雇用し、大学外の研究者と共同で大学の壁を越えたガス炉還元焔焼成を実現しました。平成 27 年度内に 9 回の還元焔焼成を実施したことで、陶磁器研究が進むと共に、合わせて学生の作品も焼成したので、卒業制作や授業において教育上の大きな効果も得られました。平
成 27 年度は公益財団法人ウエスコ学術振興財団と、公益財団法人野村財団に採択され、東京藝術大学と岡山県立大学の共同研究として実施しました。本学の大型ガス炉２基を中心に陶芸家が協働した１年間の研究成果を、著作権と引用についてピュアレビューを行った後、ウェブサイト「現代日本陶芸のデザインと技法 2016」に、3 月 31
日にアップロードしました（http://cdatoma.tumblr.com/）。本研究計画は 4 年間継続し、最終の平成 30 年度に瀬戸内市立美術館で作品展を行います。
１.研究の目的2016」は、岡山県立大学造形デザイン学科新入生オリ

現代日本陶芸の正当な評価を広く国内外に発信す

エンテーションの資料として紹介した他、陶芸授業

ることで芸術文化の振興に寄与する本研究は、地方の教材としても活用されています。炉内容積 1.0の公立大学の設備が広く文化に貢献できるものです。

と 0.5

２.研究の特色炭素社会化にも貢献しています。

学外から助成をうけて焼成技術者を雇用することで、のガス炉に作品焼成を集約することは、低５.平成 27 年度焼成実績

共同研究者と共に定期的なガス炉還元焔焼成を実現

平成 27 年度の岡山県立大学ガス炉焼成日程しました。9 回に及ぶ還元焔焼成で、陶磁器研究が著2015 年 5 月 18 日 19 日、6 月 15 日 16 日、7 月 27

しく進むと共に、同時に学生作品を焼成したので、卒業

日 27 日、10 月 26 日 27 日、11 月 19 日 20 日、制作や授業に対して教育上の効果がありました。

12 月 16 日

平成 27 年度は公益財団法人ウエスコ学術振興財団

22 日 23 日、3 月 28 日 29 日、計 9 回。

7 日、2016 年 1 月 14 日 15 日、2 月と公益財団法人野村財団の助成を受け、東京藝術大

岡山県立大学の森下工業製シャトル式ガス炉は、

学と岡山県立大学の共同研究として実施しました。

高温焼成に耐える高断熱の密閉式で、ガスバーナー

３.研究方法に特許を持つ最高水準の焼成炉です。毎回の本焼成

岡山県立大学の大型ガス炉２基を中心に陶芸家がの一週間前に電気炉で素焼を実施し、ガス炉還元焔

協働した１年間の成果を、創造力と作品性を向上させ焼成と同時に電気炉で酸化焔焼成も実施しました。

る場としてのウェブサイト「現代日本陶芸のデザインと予め共同研究者とセラミックデザイン関係学生に

技法 2016」（http://cdatoma.tumblr.com/）に 2016 年 3焼成スケジュールを配信し、窯詰め前日までに作品

月 31 日、論文形式で 11 本をアップロードしました。本を岡山県立大学アトリエに集め、施釉を完成させま

研究は 4 年間継続し、最終の平成 30 年度に瀬戸内市

した（図 1）。窯炉焼成担当者、本学セラミックデザ

立美術館で作品展を行い、列品解説と研究会を開催しイン関係教員、本学在学生、学外の共同研究者で窯ます。

詰めを行いました（図 2 図 3）。
炉扉を密閉後に点火し、約 30 時間で還元焔焼成し、４.研究の効果

5 日間徐冷してから窯出しました（図 4 図 5）。

ウェブサイト「現代日本陶芸のデザインと技法- 110 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図1

窯詰め前の素焼施釉作品 （2015 年 12 月 7 日）
図 5 0.5

ガス窯出し (2015 年 6 月 21 日)

６.作品撮影論文に用いる為の作品を写真撮影しました。
日時／2016 年 1 月 23 日（土）13:00 23:00

場所／岡山県立大学 3212 演習室
撮影者／斎城卓
撮影方法／4×5 ポジフィルムビューカメラ
撮影参加者／8 名
撮影点数／14 点
図2

台車式 0.5

７.論文ピュアレビュー

ガス炉窯（2015 年 12 月 7 日）

2016 年 2 月１日から 3 月 31 日まで、共同研究メン
バーは、インターネット上の論文執筆サイトにアクセ
ス権を得て論文を執筆し、メンバー内に公開してピュアレビューを行いました。ピュアレビューは著作権と引用について行い、論文内容は各自の責任としました。

８.ウェブサイトアップロード
ウェブサイト「現代日本陶芸のデザインと技法 2016」を2016 年 3 月 31 日 23:55 にアップロードしました(図 6）。
http://cdatoma.tumblr.com/
図3 1

図 4 0.5

ガス炉窯 （2015 年 6 月 21 日）

ガス窯出し (2015 年 11 月 7 日)
図6- 111 -

http://cdatoma.tumblr.com/

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

９.ウェブサイト掲載の論文
1 ) 久保田厚子（研究代表者）「ハイブリッド青白磁技法１」
具象的な植物デザインの技法（図 7）と、抽象的な幾何学パターンの技法（図 8）を複合させ、固い磁器を柔らかい筆の細密な描画で立体的に彫り出す技法を考案しました（図 9、図 10）。

図 10 ハイブリッド青白磁技法１のウェブサイト

2 ) 難波敬恵「塩化コバルトを利用した色の濃淡の立体的変化」

塩化コバルトを筆に水溶液で含ませて塗布し、器

図 7 植物デザイン

面と内部の色の濃淡の変化を効果的に利用した作品を制作しました(図 11)。

図 8 幾何学パターン

図 11 φ２１０×１６０㎜

3 )木村知子「染付に対応するスケッチの考察」
スケッチと磁器作品を並べて表現の可能性を改めて考えました（図 12）。

図9

ハイブリッド青白磁技法１の大皿作品- 112 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

銀泥彩磁（図 14）は本焼の後に染色に使われる友禅染用の筆で銀を器の全面に打ち付けるようにして塗り、焼成温度のわずかな差で銀一色ではなく、黄や白が入り混じったような発色をするのが特徴です。

図 12 苧環角蓋物4 ) 眞嶋青「境界」
2 種類の異なる質感の粘土をグラデーションで繋げた作品です。陶磁器の粘土には様々な色や質感があり、混ぜ合わせることで別の表情を作り出すことができます。紐作りのように層を重ねて形を作る粘図 14 銀彩磁とうもろこし文鉢

土の特性を使って、磁器から陶器に変容していく紙

6 ）梶原香織 「テーブルウェアにおけるパターンのように薄い作品を制作しました（図 13）。

デザインの展開」
染付けとラスターカラーの対比を主体として研究を進めました（図 15）。

図 13 境界5 ）井戸川豊 陶磁器における装飾技法に研究

図１5 白磁春草文皿7 ) 今田拓士- 113 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】「マット釉と焼成温度の関係について」「造形遊びの要素を取り入れた青白磁制作」

かたち、色、質感、時間等の制約がある陶芸でしか高さを抑え広がりのある形状は表裏で世界観を変成し得ない作品に繋がる重要な要素を、マット釉とえるのではなく水を写し取った表現を試みた為です。

強還元焼成で追求しました。（図 16）。

裏側にも表面に準じた波紋様を施しています。この作品で強調したいのは、波紋の表現自体に造形遊びの要素を取り入れたことです（図 18）。

図 16 隔壁の陶

8 ) 三浦義広

図 18「小型マケットによる立体イメージの保存法」

10 ) 西村芳弘「詩の形」

本研究の目的は、イメージした立体のフォルムを、今を生きる人間として私なりの咀嚼（解釈・理解）

陶土を用いて瞬時に小型マケットにする方法を明らで現代の陶俑を作ろうと考えました。今後の課題としかにすることです（図 17）。

て、ガラスや金属など異素材を組み合わせ、深い表現になるか試みたい（図 19）。

図 17 作品 猿

9 ）栗原慶図 19- 114 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

11) 高見真紀子

ることができました。…こうしてさまざまな陶芸の技法が「緋襷デザインパターンの研究」

わかりやすく説明されて、とても意義のあるプロジェクト

着目した特徴は、緋襷の藁灰で覆われた部分のみがだと思います。これが英訳されるとさらによいですよね。

赤く発色する点です。緋襷の赤と地肌の白のコントラ…これからのご活躍も楽しみにしております！（ミシガストを使用してパターンデザインを持った備前焼制作

ン大学付属美術館長、在ミシガン州）。

を試みました (図 20)。

④ 4 月 6 日／とても発信力があるメディアで、素晴らしいですね。みなさん、製作の技法や手順のみならず、表現の狙いやコンセプトを文章化しているのにも、感嘆します。県立大の出身者は、こうしたホームページへの参加のなかで、在学時にはまだできなかったような高いレベルで、自身の考えを表明できている（特に文章で）と思います。…私も頑張らなくてはいけないと、励まされました(元岡山県立大学准教授，在神戸市)。
１１.ウェブサイトのアクセス数
ウェブサイトのアクセス数は、カウンターの不調のため
4 月 6 日からカウントを開始し、4 月 6 日 9 日までの 3日間は以下の状況でした。
セッション 19、ユーザー5、ページビュー92，ページセッション 4.84、平均セッション時間 00:05:58，直帰率36.84％、新規セッション率 26.32％、New Visitor73.7％、Returning Visitor26.3％

図 20

１０.ウェブサイトの反響

１２ まとめインターネット配信には著作権侵害や引用文マナー

一昨年までに研究代表者が延 350 人の陶芸家からについて徹底的に留意する必要がある反面、世界と直作品の主題・素材・技法について聴き取り調査を行

結し距離を飛び越えた反響があります。3 月 31 日にウった結果、陶芸家は新しい様々な技法を試みているェブサイト公開直後のメールの一部を報告します。

事が判りました。反面、日本の陶磁器産業は昭和 40① 4 月 1 日／…熱意に感動、やきものの技法につい年代をピークとして生産量は下落に転じ、製陶会社てアップロードしたものを拝見しました。モデルとする自の廃業や工場の国外移転が続き、人財である技術者

然を徹底的にデッサンするその姿勢に感動しました。こまで国外に流出しました。現在では 8 割のメーカー

こまでやるのか？と。…いろいろお話を聞かせてくださが廃業したと言われ、原材料で入手できないものがい（出版関係者、在東京）。

少なくありません。企業の研究開発の減少によって② 4 月 1 日／ご活躍お喜び申し上げます。アップロー

陶磁器実験の場は少なく、美術系大学の陶磁専攻コ

ド驚きました凄い内容ですね。それにこのホームペーースが縮小や廃止になっています。さらに陶芸家はジの出来栄えも内容と共に凄い感性を感じさせてくれ

口伝で伝承するため、陶芸は文化として継承されずます。これからも引き引き続き進展を拝見させて頂きまに作家の没後は失われる事すらあります。
その中で、す。大変楽しみです。ありがとうございました（地域創世本共同研究は独創的な試みです。前例がない為にウ

関係者、在岡山市）。

ェブサイト制作は手探りの状態で弌から構築しま③ 4 月 1 日／…技法、段階を細かく写真入りで説明しした。アップロードした結果、芸術文化振興はもとてくださっているので、素人にもとてもよくわかります。9より、１年間の研究成果がウェブサイトに配信され月の講演会のお手伝いをしたときにわかったつもりにた手応えは、研究者の作品性の向上と発信力を得るなっていましたが、この研究を見て、さらに深く理解す効果としても大変大きいものでした。

- 115 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

微量の水を用いた高分子/疎水性イオン液体の相挙動の制御と機構解明
岡山理科大学 理学部 化学科
大坂 昇
疎水性イオン液体への高分子の溶解に関する基礎的研究として、微量の水を添加した際の相分離温度の制御、及びその機構解明を行った。
高分子として poly(N-isopropylacrylamide)（PNIPA）、
疎水性イオン液体として（1-alkyl-3-methylimidazolium bis(trifluoromethylsulfonyl)imide）（[Cnmim][TFSA]）を用いた系では上限臨界共溶温度（UCST）
型の相分離が起きるが、1 wt%程度の水の添加で約 30 °C も相分離温度が上昇することが見出された。一方、高分子として polypropylene glycol（PPG）を用いた系では下限臨界共溶温度（LCST）型の相分離が起きるが、この系に 1 wt%程度の水を添加することでも相分離温度が約 20 °C も上昇することが見出された。
UCST 型、LCST
型のどちらの系においても疎水性イオン液体単独の系（約 2 wt%）よりも多量の水（10 wt%）を溶解させること、及び FT-IR 測定の結果から、水分子が選択的に高分子に水和することで相分離温度を上昇させていることが示唆された。また、LCST 型の系で見出された微量の水の添加による相分離温度の上昇は、高分子の溶解性の向上を意味する。このため、本研究の結果は相分離温度の連続的な制御だけでなく、従来疎水性イオン液体への溶解が困難であった高分子やたんぱく質を溶解させるための新規手法として期待できる。
1. はじめに
イオン液体は 100°C 以下で液体となる塩の総称で-3-methylimidazolium bis(trifluoromethylsulfonyl)imide）

あり、高い熱安定性や優れた導電性などの特徴をも（[Cnmim][TFSA]）との系に微量の水を添加し、そのつことから新規な機能性溶媒として電気化学デバイ

相分離温度の変化を明らかにすることを試みた。特ス用電解液や新規反応溶媒、各種材料などへの様々に、上限臨界共溶温度（UCST）型の相分離、及びな応用展開が可能であり、
ここ 10 年程で研究報告数

下限臨界共溶温度（LCST）型の相分離を示す系それが急増している。しかし、各々の用途に向けた適切ぞれに対して微量の水の添加を行った。

なイオン液体を新規にデザインすることは容易では2. 試料と実験操作ない。そのため、イオン液体同士、またはイオン液

UCST 系 と し て poly(N-isopropylacrylamide)

体と通常の液体との混合により、溶媒の機能・物性（ PNIPA ） /[Cnmim][TFSA] を 、 LCST 系 と し てを連続的に変化させる試みが行われている。

polypropylene glycol（PPG）/[Cnmim][TFSA]を用いた。

国内では大野らが、親水性イオン液体と水とを混

PNIPA は AIBN を開始剤として tert-ブチルアルコー

合して水和イオン液体を実現し、タンパク質の溶解

ル中でラジカル重合して合成した。MALDI 測定をや耐熱性、経時安定性が水溶液中に比べて格段に向行った結果、Mw = 4.0 × 103 g/mol であった。PPG は上することを明らかにしている [1, 2]。また、合成

Aldrich 製で、Mw = 3.4 × 103 /mol、 Mw/Mn = 1.01 の高分子を用いた研究では、Nayak らが親水性イオン

ものを用いた。[Cnmim][TFSA]は Merk 製で、純度

液体と水とを混合して PNIPA の溶解性を調べ、十分

99.0%のものを用いた。それぞれの試料は、溶液をPNIPA の UCST が 30°C
な量の水(50 vol%)の添加で、作成後、グローブボックス内にて 90 °C で 1 日真空程低下することを報告している [3]。

乾燥し、さらにその後 115 °C で 1 日真空乾燥した後

上記のように、親水性イオン液体においては、水に測定に用いた。乾燥後の水の添加などの操作はグとの混合溶媒としての研究が活発化しているが、疎

ローブボックス内にて窒素雰囲気下にて行った。

水性イオン液体においては研究例がない。そこで本

透過率測定は、紫外可視分光光度計を用いて波長研究課題では、高分子と疎水性イオン液体（1-alkyl

630 nm、1 ℃/min の条件で行った。示差走査熱量- 116 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

100

Transmittance / %80
60

た際に、約 3 wt%までの微量な範囲では TPS は大き2.0wt% PNIPA
0.0 wt%
0.2 wt%
0.6 wt%
1.0 wt%10.0 wt%

く上昇し、その後 TPS の変化はほとんど無い。また、[C2mim][TFSA]単独では約 2 wt%までの水しか溶解しないが、PNIPA/[C2mim][TFSA]では 10 wt%以上もの多量の水を溶解させることが明らかにされた。ま40

た、疎水性イオン液体に[C4mim][TFSA]を用いた場
20

合にも水に対する同様の傾向が見られた。しかし、
添 加 し た 水 に 対 す る TPS の 上 昇 の 程 度 は
20

40

60

80

[C2mim][TFSA]を用いた場合よりも大きかったが、Tempearture / °C

多量の水を添加した際には約 80 °C と同程度の TPS

Figure 1 水添加量に依存したPNIPA/[C2mim][TFSA]を示した。

（2.0 wt%）溶液の温度-透過率曲線

溶媒和構造を調べるために FT-IR 測定を行った結測定（DSC）は、1 ℃/min で温度を制御して測定果を Figure 3 に示す。
1650 cm-1 近傍に、
PNIPA の C=Oを行った。フーリエ変換赤外分光光度計（FT-IR）

基が[C2mim][TFSA]のカチオンの C2-H 基との間の水測定は、加熱透過セルを用いて種々の温度にて行っ素結合により生じる吸収ピークが観測されているた。
3. 結果と考察
UCST 系へ及ぼす水の効果
UCST 型の相分離を示す PNIPA/[C2mim][TFSA]に水を添加した際の温度-透過率曲線を Figure 1 に示す。
水 が 添 加 さ れ て い な い 系 で は 、
PNIPA/[C2mim][TFSA]の透過率は 40 °C 近傍で大きく減少した。この透過率が減少し始める温度を相分
離温度（TPS）と決定した。一方、1.0 wt%の微量の水を添加した系では TPS は 30 °C 近く上昇した。また、PNIPA/[C2mim][TFSA]は 10 wt%もの水を溶解させ、TPS は 80 °C 近傍まで上昇した。
Figure 2 に温度-透過率曲線から決定した、添加した水の量に依存した TPS の変化を示す。水を添加しFigure3

添 加 し た 水 に 依 存 し た

PNIPA/[C2mim][TFSA]（2.0 wt%）溶液の FT-IR ス
ペクトル

Figure 2 水添加量に依存したPNIPA/[Cnmim][TFSA]

Figure 4 水なし（左）、及び水あり（右）における（2.0 wt%）溶液の相分離温度の変化

溶液中の PNIPA の溶媒和構造のイメージ図- 117 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】[4]。しかし、水を添加すると 1620 cm-1 に PNIPA の上昇した。また、PPG/[C2mim][TFSA]は 6 vol%もの

C=O 基が水の O-H 基との水素結合により生じる吸水を溶解させ、TPS は 80 °C 近傍まで上昇した。
一方、収ピークが観測された。一方、PNIPA の N-H 基と添加した水が多量の 5.0 vol%近傍では Figure 6 に示[C2mim][TFSA]のアニオンとの間に生じる吸収ピー

すように降温時に透過率が減少したため、UCST 型

ク（3387 cm-1）に変化は見られなかった。

の相分離も起こすことが示された。以上の結果より

以上より、PNIPA/[C2mim][TFSA]に水が添加され得られた PPG/[C2mim][TFSA]の水に依存した相分離た際の溶媒和構造として Figure 4 の予備的なモデルが考えられる。水は PNIPA のアミド基の C=O 基に選択的に水和し、[C2mim][TFSA]のカチオンの C=O基との水素結合を妨げると考えられる。また、水和した水分子は周囲の[C2mim][TFSA]と上手く水素結合することができずエネルギー的に不利な状態となる。このために、水を添加することで UCST 系の TPSが上昇したと考えられる。一方、疎水性イオン液体に[C4mim][TFSA]を用いた系では、カチオンのアルキル側鎖が伸びることで、カチオンの C2-H 基と
PNIPA の C=O 基との水素結合の形成が抑制されており、水分子が PNIPA に容易に水和して TPS が大き

Figure 6 降温により得られた PPG/[C2mim][TFSA]（20vol%）溶液の温度-透過率曲線く増加したと考えられる。詳細な分光スペクトルの解析や溶媒和構造モデルの精密化は今後行っていく予定である。
LCST 系へ及ぼす水の効果
LCST 型の相分離を示す PPG/[C2mim][TFSA]に水を添加した際の温度-透過率曲線を Figure 5 に示す。
水が添加されていない系では、PPG/[C2mim][TFSA]の透過率は 30 °C 近傍で大きく減少した。この透過率が減少し始める温度を TPS と決定した。一方、1.0
vol%の微量の水を添加した系では TPS は 15 °C 近く

Figure 7 水添加量に依存した PPG/[Cnmim][TFSA]（20 vol%）溶液の相分離温度の変化

Figure 5 昇温により得られた PPG/[C2mim][TFSA]

Figure 8 水添加量に依存した PPG/[C2mim][TFSA]（20vol%）溶液の温度-透過率曲線（20vol%）溶液の DSC 曲線- 118 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

温度の変化を Figure 7 に示す。水添加量が 2 vol%以

水素結合して強く相互作用することで LCST が大き下では 0 °C 以上の相溶領域が拡大していることがく上昇したものと考えられる。

分かる。この結果は、微量の水を添加することで

4. まとめLCST 型の相分離挙動を示す高分子やたんぱく質な

疎水性イオン液体と高分子からなる溶液に水を添

どの系の溶解性を向上できることを示しており、従加し、その際の相分離温度の変化を UCST 系、およ

来溶解が困難であった物質の新規な溶解法になるこ

び LCST 系において調べた。興味深いことにどちらとが示された。

の系においても微量の水の添加で相分離温度が大きこの特異な TPS の変化を理解するために、まず、く上昇することが明らかにされた。また、DSC 測定

DSC 測定を行った。Figure 8 に見られるように、水や FT-IR 測定を行った結果、水分子が PNIPA に選択の添加量が増加するにつれ吸熱エンタルピーが 0.58

的に水和することで相分離温度を上昇していること

J/g から 3.3 J/g へと増加した。
この結果は LCST によが明らかにされた。特に LCST 系においては微量のる脱溶媒和量の増加を意味しており、水が選択的に水による相分離温度の上昇は相溶領域が上昇するこ

PPG に溶媒和したことを示唆している。さらに、とを意味していおり、疎水性イオン液体に溶解が困-1Figure 9 に FT-IR 測定を行った結果を示す。
3125 cm

難と思われていた高分子やたんぱく質を溶解させる付近の吸収ピークが水の添加により高周波数側にシ新規手法として今後詳細にその基礎的知見を深める

フトしていることが分かる。この吸収ピークは C4,必要があると考えられる。

C5 の C-H の伸縮振動を示すピークであることから[5]、
PPG の C-O-C と相互作用していているカチオン

5. 参考文献の割合が減少したことを示している。以上より、[1] Fujita, K., Ohno, H., Biopolymers, 93, 1093 (2010).

PPG/[C2mim][TFSA]に水和する水分子の溶媒和構造[2] Fujita, K., Ohno, H., Chem. Commun., 48, 5751

は Figure 10 のように図示できる。水分子が PPG と(2012).
[3] Nayak, P. K., et. al., Phys. Chem. Chem. Phys., 15,

0.0 vol%
0.50 vol%1.0 vol%1806 (2013).
[4] Wang, Z., Wu, P., J. Phys. Chem. B, 115, 10604,(2011).
[5] Dhumal, N. R., et. al., J. Phys. Chem. A, 118, 2547,(2014).
6. 謝辞
本研究を遂行するにあたり多大なご支援を頂いた
公益財団法人ウエスコ学術振興財団に心より感謝をFigure9

添 加 し た 水 に 依 存 し た

申し上げます。

PPG/[C2mim][TFSA]（20vol%）溶液の FT-IR スペク
トル

Figure 10 相溶領域（左）、及び LCST 領域（右）における溶液中の PPG の溶媒和構造のイメージ図- 119 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

高効率な発光を目指した有機蛍光材料の開発
岡山理科大学 理学部 化学科
岩永 哲夫
光や熱に安定であることが知られている芳香族ビスイミド類を基本ユニットに用いて，高効率な発光を目指した有機蛍光材料の開発を進めている．今年度も昨年度に引き続き，アントラセンビスイミド（ABI）ユニットを基盤とした有機蛍光材料の開発を行った． ABI ユニットは，イミド部位と芳香族部位に置換基を簡単に導入でき，分子の電子状態を簡便にチューニングできる．今回は，9-エチニル ABI ユニットを 1,8-アントリルス
ペーサーを介して，薗頭カップリングにより効率的に導入した．得られた化合物の分光学的性質を明らかにするために，吸収スペクトルと蛍光スペクトルをクロロホルム中で測定した．吸収スペクトルにおいて，２つの9-エチニル ABI ユニットを 1,8-アントリルスペーサーで連結した化合物は，長波長側に幅広い吸収帯が観測された．DFT 計算の結果に基づき，この吸収は ABI ユニットと 1,8-アントリルスペーサーとの分子内電荷移動相
互作用と帰属できた．また ABI ユニットと対面した位置に電子供与性置換基である 9-エチニルアントラセンをもつ化合物においても，長波長側に電荷移動相互作用に伴う幅広い吸収が確認された．

１．はじめに持つ長鎖アルキルを複数導入することで分子間の相現在，有望な有機蛍光性材料の基本ユニットとし互作用を強めたり，逆に嵩高い置換基を導入するこてアントラセンやペンタセンなどのアセン系芳香族とで分子間の相互作用を抑制するなど，分子間の相化合物などが使われている．アセン系芳香族化合物

互作用をたくみに操作して，新たな蛍光プロセスをは電子豊富な化合物として知られており，置換基の持った蛍光材料の開発を目指している(Chart 1)．

種類を変えることで色調をチューニングすることができる．同じ骨格をもった複数の誘導体を組み合わせることで RGB を達成しようとする研究も進められている．ところがアセン系芳香族化合物は光や空
気中の酸素などに不安定な側面をもち，多くの誘導体において取り扱いを注意しなければならない問題点を抱えている．
本研究では，そのようなアセン系芳香族化合物が持つ問題点を解決できるような蛍光性色素の開発を目指す．基盤ユニットとして利用するアントラセン
ビスイミド（ABI）は，アセン骨格を有しているにもかかわらず，イミド基を導入することで光や熱への安定性が高い．また様々な位置に置換基を簡単に導入でき，分子の電子状態を簡便にチューニングできる． 具体的な手法としては，イミド基の N 位や芳香族アセン部位に芳香族ドナーユニットを導入することで，電子的特性が異なる誘導体を合成するこ[1]とを計画した．
またイミドの N-位に自己集積能を- 120 -

Chart 1. （左）蛍光性芳香族ビスイミドの集積と電子移動プ
ロセス．
（右）アクセプター・ドナー・親媒ユニットの候補．

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

規則的にユニットを配置する手法が確立できれDurene を出発原料として，アセトニトリル中で N-ば，光誘起電子移動を妨げない集積体を構築するこ

ブロモコハク酸イミド（NBS）と反応させることでとが可能となる．今回，アリールスペーサーで連結

モノブロモ Durene 5 を得た．続けて，5 に臭素をラすることで，複数個の ABI ユニットを規則的に配置ジカル付加させることで，ヘプタブロモ体 6 を得た．

することを計画した．また ABI ユニットにドナーユ

ヘプタブロモ体 6 にオクチルマレイミドを Diels

ニットを空間的に近づける分子も設計したので，そAlder 反応させて付加環化体 7 を得たあとに，NBS

れら分子の合成と性質について，以下に報告するとトリエチルアミンで処理することで，9-ブロモ（Figure 1）．

ABI 4 を得ることができた（Scheme 1）
．

O
NRRN
NR

RN

OO

NBS

Br 2

CH 3CN

CCl 4

O

O

RN

NR

O

O

Br
Br
Br
Br
6 (66%)

5 (77%)
R = -C8H17

O

Mes =

O

Br

O H

N C 8H 17

Mes
1

Br
Br

h

r.t.

Durene

O

O

Br

Br

O

O
O

NaI

H O

C8H17 NDMF
85 oC

N C 8H17O H Br1) NBS
Benzoyl Peroxide
CCl 4

O

7

H O

Br

Br

O

9

C 8H17 N

2) Et 3NO

N C 8H 17
10O

4 (26% from 6)

Mes2

Scheme 1．9-ブロモ ABI 4 の合成

Mes
3

化合物 4 に対して，トリメチルシリルアセチレン

Figure 1．蛍光性アントラセンビスイミドの分子設計

を Sonogashira カップリングにより導入し，TBAF を用いて脱保護することで，9-エチニル ABI 9 を効率２．結果と考察
今年度は，昨年度開発した蛍光特性をもつ 9-エチ

よく得ることができた（Scheme 2）．

ニルアントラセンビスイミド（ABI）骨格を用いて，これを複数有する分子の合成と電荷移動相互作用のTMS

空間的な相互作用を観察するために新しいドナー／アクセプター型分子の開発を行った．[2] 芳香族ビス
イミド骨格を持つ分子は，溶解度が悪いことが知られているが，イミド基の N 位にオクチル基を導入す

TMS
Pd(PPh 3) 4, CuI
THF, Et 3N

R N

R = C 8H17

Oることで溶解度の向上を図った．アリールスペーサ

TBAF, AcOHーとして 1,8-アントリレン骨格を，芳香族ドナーにTHFはアントラセンを利用した．合成した分子の分光学的性質や電子構造について考察するために，電子ス

O

O

4
N R
8 (95%)

O

O

R N
O

O

N R
9 (<99%)O

Scheme 2．9-エチニル ABI 9 の合成

ペクトルの測定や DFT 計算を行った．
ABI 誘導体 1 と 2 を合成するために，対応する 9ブロモ ABI 4 を原料に用いた．9-ブロモ ABI 4 は，
当研究室で開発した方法を用いて合成した． [3]- 121 -

得られた 9-エチニル ABI 9 と 1,8-ジヨードアントラ
セン 10 を混合し，Pd(PPh3)4 と CuI を触媒として加えて，トリエチルアミン―トルエン中で反応させた

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

TMS

I

TMS
Pd(PPh 3) 4
CuII

THF, Et 3N
50°C

Mes

Pd(PPh 3) 4
CuI
toluene, Et 3N
reflux

Mes

RN

NR
9

O

R = C 8H17

O

Mes
2
(2step:90%)

NR
OO
O

10
Pd(PPh 3) 4
CuI

Pd(PPh 3) 4
CuI
toluene, Et 3N
reflux

O

O

O

10

NR

NRRN

RN

O

Mes

O

O

O

EtOH
reflux12 (97%)

O

O

RN
4
Pd(PPh 3) 4
CuI
toluene, Et 3N
refluxKF

11 (58%)

10

O

TMS
13

I

O

toluene, Et 3N
refluxMes
1 (52%)13Mes
3 (95%)

Scheme 3．化合物 1・2 と対照化合物 3 の合成

ところ，化合物 1 を収率 52%で得ることができた

算の結果から分子軌道を確認したところ，HOMO が（Scheme 3）．一方，非対称にアントラセンユニッ

9-エチニルアントラセンユニットに，LUMO が 9-エトと ABI ユニットを配置した化合物 2 の合成は，次チニルABIユニットに局在化していることがわかっの経路で行った．化合物 10 を出発原料として，た．この結果から長波長側の幅広い吸収は，化合物

Sonogashira カップリングによりモノエチニル化し，1 と異なり空間を介した分子内電荷移動相互作用に続けて 9-エチニルアントラセン 13 を導入した．そよる吸収であると示唆された．化合物 1 と 2 の長波の後，フッ化カリウムを用いて脱シリル化し，化合長側の吸光係数（ε）はほぼ同程度の値を示し，同じ物4 と再度Sonogashira カップリングすることで化合系統のユニット同士の分子内電荷移動吸収であるこ物 2 を中程度の収率で得ることができた．また対照とが支持される結果となった．また２つの 9-エチニ

化合物 3 についても 1,8-ジヨードアントラセン 10 とルアントラセンユニットを有する化合物 3 は，ABI9-エチニルアントラセン 13 から同様に合成した．合ユニットを含む化合物 1 と 2 に比べて，短波長側に113成した化合物 1 3 は， H NMR と C NMR スペク

最大吸収波長が観測され，吸光係数が増大している

トルおよび FAB マススペクトルにより同定した．

ことがわかった．これはアントラセン骨格の数に起化合物 1 3 の分光学的性質を明らかにするため

因して吸光係数が増大したものと考えられる．

に，吸収スペクトルと蛍光スペクトルをクロロホルム中で測定した（Figure 2&3）
．Table 1 には電子ス

20ペクトルのデータをまとめて記載している．
になだらかな幅広い吸収を有していた．この吸収について DFT 計算の結果から考察するために分子軌道を確認したところ，HOMO がスペーサーの 1,8-

15/104 L mol -1 cm-1

２つの ABI ユニットを持つ化合物 1 は，長波長側

10

1
2
3
5

アントリル部位に，LUMO が ABI ユニットに局在化していることが明らかになった（Figure 4）．このことから，この幅広い吸収はアントラセンスペーサー
からABIユニットへ結合を介した分子内電荷移動によるものと示唆された．一方，化合物 2 も長波長側に同様に幅広い吸収帯が観察された．これも DFT 計- 122 -

0
250

300

350

400
450
Wavelength /nm

500

550

600

Figure 2．アントラセンビスイミド誘導体の吸収スペクトル（クロロホルム中）【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

また HOMO-LUMO のバンドギャップについて，

る同種なユニット同士が分子内電荷移動相互作用を

DFT 計算の結果と比較するために，実際に測定した示すことによると推測される．今後，これまで合成

吸収スペクトルから HOMO-LUMO ギャップを算出した ABI 誘導体も含めて，構造と電子的性質の相関

したが再現性が悪かった．このため，より精度が高をさらに検討していく必要がある．

い計算レベル（M06/6-31G(d)レベルなど）で検討する必要がある．

３．まとめ
本研究の最終目標は，広いπ平面を有するアクセ

1.2"

プターユニットに超分子相互作用を発現する置換基1"を導入して，高効率な発光機能をもつ有機機能性材

Normalized Intensity

料の開発を行うことである．今年度の研究期間中に0.8"

は，1,8-アントリレンスペーサーを基盤とした新し

1

0.6"

2

いアントラセンビスイミド誘導体の合成方法を確立

3

0.4"

し，その電子的性質を明らかにした．今後は，基本

0.2"

骨格のイミド位に複数の長鎖アルキルをもつ置換基を導入し，集合状態での光特性を調べていく予定で

0"

400"

450"

500"

550"

600"

650"

700"

750"

ある．本研究で達成される芳香族ビスイミドユニッ

Wavelength /nm

Figure 3．アントラセンビスイミド誘導体の蛍光スペクトル（クロロホルム中）トを基盤とした蛍光材料の効率的な開発を通して，
従来にない分子構造と基本物性・性能を提示することで学際的分野のみならず，地域の素材メーカーや

LUMO

HOMO

薬品メーカーを活性化し，科学技術社会の発展に貢献をしていきたいと考えている．

1

４．謝辞
2.19 eV

5.32 eV

本研究は，
平成 27 年度公益財団法人ウエスコ学術振興財団の学術研究費助成事業の助成を受けて実施したものである．また本研究の遂行にあたり，東京

2

工業大学大学院理工学研究科・豊田真司教授，岡山3.04 eV

理科大学理学部化学科・山田晴夫教授，若松寛准教

5.97 eV

授に有益な助言を頂いた．ここに記して感謝申し上げます．
3

５．参考文献2.74 eV

5.52 eV[1] a) Jiang, W.; Ye, L.; Li, X.; Xiao, C.; Tang, F.; Zhao,

Figure 4．化合物 1 3 の分子軌道

W.; Hou, J.; Wang, Z. Chem. Commun. 2014, 50, 1024.

蛍光スペクトルをクロロホルム中で測定したところ，化合物 1 と 2 ともに発光ピークはシャープに観測され，その波長は 583 と 588 nm であった（Figure
3 & Table 1）．一方，蛍光量子収率はいずれも 3 割程度となった．
これまで合成したABI誘導体と比べて，著しく蛍光量子収率が低下している．これは対応す- 123 -b) Li, C.; Wonneberger, H. Adv. Mater. 2012, 24, 613. c)Yue, W.; Lv, A.; Gao, J.; Jiang, W.; Hao, L.; Li, C.; Li, Y.;
Polander, L. E.; Barlow, S.; Hu, W.; Di Motta, S.; Negri,F.; Marder, S. R.; Wang, Z. J. Am. Chem. Soc. 2012, 134,
5770. d) Gsänger, M.; Oh, J. H.; Könemann, M.; Höffken,
H. W.; Krause, A.-M.; Bao, Z.; Würthner,

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

物

Table 1. 化合

1 3 と 8 の分光学的データと HOMO・LUMO レベル

Compounds

λ max /nm (ε)λ em /nm (ΦF) b

HOMO /eV c

LUMO /eV c

1520 (11000)a583 (0.27)

5.32

2.19

2

490 (12000)a588 (0.28)

5.97

3.04

3

453 (40100)

490 (0.22)

5.52

2.74

8

434 (17200)

442 (0.46)——a) A shoulder band. b) Absolute quantum yields determined by a calibrated integrating
sphere system in chloroform. c) Calculated at M06/3-21G theory level for the N-Me
compounds.
F. Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 740. e) Chopin, S.;

６．研究成果Chaignon, F.; Blart, E.; Odobel, F. J. Mater. Chem. 2007,(1) T. Iwanaga, M. Ogawa, S. Toyota, 16th International

17, 4139.

Symposium on Novel Aromatic Compounds (ISNA-16),[2] a) Morris, J. L.; Becker, C. L.; Fronczek, F. R.; Daly,

Poster, PSA-125 (2015.7.5-10, Madrid, Spain).

W. H.; McLaughlin, M. L. J. Org. Chem. 1994, 59, 6484.

(2) 山本由樹，岩永哲夫，豊田真司，2015 年日本化b) Ilhan, F.; Tyson, D. S.; Meador, M. A. Chem. Mater.

学会中四国支部大会，ポスター，15P48（2015.11.14-15，

2004, 16, 2978. c) Wang, Z.; Kim, C.; Facchetti, A.;

岡山大学，岡山市）．

Marks, T. J. J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 13362. d) Usta,(3) T. Iwanaga, M. Ogawa, T. Yamauchi, S. Toyota, J.

H.; Kim, C.; Wang, Z.; Lu, S.; Huang, H.; Facchetti, A.;

Org. Chem. in press.

Marks, T. J. J. Mater. Chem. 2012, 22, 4459.
[3] T. Iwanaga, R. Tanaka, S. Toyota, Chem. Lett. 2014,
43, 105.

- 124 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 125 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 126 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 127 -

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【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 129 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

未利用バイオマス細胞壁分解における放線菌フェルラ酸エステラーゼの有用性評価
岡山県農林水産総合センター生物科学研究所

裏地美杉

放線菌由来フェルラ酸エステラーゼ（FAE、R18 および R43）は、米糠、トウモロコシおよびコムギふすまなどの未利用バイオマスからの FA 抽出に効果を示す酵素である。今回それらを用いた細胞壁分解への有用性を評価するため、脱脂米糠、トウモロコシ穂軸、サトウキビバガスを材料とし、FAE と放線菌由来糖加水分解酵素処理による生成糖類を分析した。その結果、脱脂米糠およびサトウキビバガスからは六炭糖から構成される３－６糖のオリゴ糖が生成されており、FAE の添加によってそれらの生成量が増加した。トウモロ
コシ穂軸からは、五炭糖で構成される２糖の生成が FAE の添加によって著しく増加した。また、サトウキビ
バガスではフェルラ酸の抽出にも、FAE と糖加水分解酵素の共処理が最も効果があり、共処理による相乗効果が見られた。
これらの結果より、
FAE によって細胞壁からフェルラ酸などの桂皮酸が取り除かれることで、細胞壁の分解が促進されており、さらに糖加水分解酵素と FAE が協調的に働くことで、フェルラ酸およびバ
イオ燃料用糖などのバイオマテリアル生産が促進されると考えられた。

フェルラ酸エステラーゼ（FAE）は、フェルラ酸やオマテリアル生産において、非常に有効な酵素でバイオ燃料用糖などのバイオマテリアル生産においあり、高機能 FAE の探索とその利用に注目されてて、重要な役割を持つ鍵酵素である。FAE によっている。FAE は、麹カビ由来のものが古くから数多

植物細胞壁から遊離するフェルラ酸は、主にイネ科

く研究されているが（５）、
放線菌由来の FAE（R18植物細胞壁成分ヘミセルロースに存在し(図 1)、抗および R43）は既存の FAE 遺伝子とは相同性を示

酸化活性および紫外線吸収作用を有する多機能物質である。食品や化粧品の添加物として利用されている他、近年では、アルツハイマー性認知症に抑制効
果を示すことが明らかにされ（１）、フェルラ酸を用いた機能性食品の開発が期待されている。フェルラ酸の生産方法としては、FAE などの微生物酵素を用
いて植物バイオマスからフェルラ酸を抽出する方法が研究されている（２，３）。 また一方でフェルラ酸は、ヘミセルロースで二量体（ジフェルラ酸）となって糖質ポリマー間の架橋を形成し、植物細胞壁の構造維持に重要な働きをしている。そのため、バイオエタノール生産の原料となる植物バイオマスの細胞壁分解にも、FAE によるフェルラ酸、ジフェル
ラ酸および桂皮酸類などリグニンの除去が有効であることが報告された（４）。
上記のように、FAE はバイオマスを用いたバイ- 130 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

さなかった。また、放線菌 FAE は、共にイネ科未利用バイオマスからフェルラ酸を抽出する能力

オリゴ糖類の分析を有していた（６）。放線菌 FAE は、エステラー

オリゴ糖類の分析にはアミドカラム（X Bridge

ゼモチーフを保持するものの、アミノ酸配列でもAmide 3.5 μm 2.1×50 mm, Waters）を用いた。

既存 FAE と相同性を示さず、新たな活性メカニズ

LC-MS 条件として、カラム温度 40℃、0.2% トリ

ムを持つことが予想されている。また、これまで

エチルアミン含有 80%アセトニトリルと 0.2% トの解析によって、放線菌 FAE は、既存の FAE の中リエチルアミン含有 30%アセトニトリルによるグで最も基質認識が広い FAE に分類された。そこで

ラジエントで有機溶媒比を0%から60%までを流速

今回の申請研究において、フェルラ酸生産以外の

0.5 ml/min、190 nm の UV 吸収で分析し、さらにバイオマス利用における放線菌FAEの特性を明らネガティブモードにて MS 分析を行った。質量分かにするため、バイオマス細胞壁成分の分解への

析には LCMS-2020 (Shimadzu) を使用した。

有用性を評価した。
結果と考察
実験方法

バイオマスからのオリゴ糖類の生成へのFAE の効

実験試料

果

実験試料にはイネ科バイオマスとして、脱脂米

R18 もしくは R43 の放線菌 FAE、および放線菌

ぬか、トウモロコシ穂軸、サトウキビバガスを粉

キシロースと放線菌 α-L-アラビノフラノシダー

砕し、使用した。放線菌酵素は、R18 と R43 の二ゼの糖加水分解酵素の３酵素共処理による脱脂

種類のフェルラ酸エステラーゼ（R18およびR43）、

米糠、トウモロコシ穂軸、サトウキビバガスから

キシラナーゼ、α-L-アラビノフラノシダーゼをの生成糖類を解析した。使用したキシラナーゼは、用いた。

セルラーゼ活性を併せ持っており、生成糖として、セルロースの主成分であるグルコース、およびヘ酵素反応

ミセルロースの主成分であるキシロース等の、六10 mg の粉砕バイオマスに、400 μl の 0.1M ト

炭糖と五炭糖の両方が検出されることが予想さ

リスマレイン酸バッファー (pH 7.0)を添加し、れた。脱脂米糠およびサトウキビバガスを材料と99 度で 5 分加熱後冷却した。
バイオマスサンプル

したとき、FAE の処理によって六炭糖から組成さに 20 mg の FAE、5mg キシラナーゼおよび α-L-れる３糖から６糖のオリゴ糖生成量が増加してアラビノフラノシダーゼの各酵素粉末を添加、総いた（図２）。また、脱脂米糠では五炭糖の生成

量 800 μl とし、反応液は 50 度で 24 時間振とうがほとんど見られないのに比較すると、サトウキ

した。反応後、遠心分離して上清を回収し、高速ビバガスでは、糖加水分解酵素の処理により、五液体クロマトグラフィー（HPLC）分析を行った。

炭糖で構成される2糖の生成量が増加していたが、その増加に FAE の効果は見られなかった。一方、

桂皮酸類の分析と定量

トウモロコシ穂軸を材料とした場合、FAE の処理

桂皮酸類の分析は C18 カラム (Symmetry C18

によって、六炭糖で構成されるオリゴ糖の増加は3.5 μm 2.1×50 mm, Waters) を用いた。HPLC

わずかであったが、五炭糖で構成される 2 糖の生条件として、カラム温度 40℃、0.1%ギ酸水溶液と産量が明らかに増加していた。以上の結果から、

0.1%ギ酸含有アセトニトリルによるグラジエン

脱脂米糠およびサトウキビバガスにおいて、放線トで有機溶媒比を 10%から 60%までを流速 0.3

菌 FAE の添加によって、セルロースの分解がヘミ

ml/min、322 nm の UV 吸収で分析した。HPLC 分析

セルロースの分解よりも促進されたと考えられには LCMS-2020 (Shimadzu) を使用した。

る。またトウモロコシ穂軸では、放線菌 FAE の添- 131 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

加によってヘミセルロースの分解が促進され、キおいて多様な構造をとっている（８）。今回材料

シロビオースと考えられる分子量282 の五炭糖かとして用いた、脱脂米糠およびサトウキビバガス

らなる2糖を生成した。
イネ科植物細胞壁内では、は、使用したキシラナーゼの基質としてヘミセル

セルロースはヘミセルロースの倍以上含まれてロースよりもセルロースが多く、そのためにセルおり(７）、さらに細胞壁構造はイネ科植物種間にロース由来オリゴ糖の生成が促進されたと考え- 132 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

られる。また、ヘミセルロースのみならず、セル

ネ科植物細胞壁に多く含まれるｐクマル酸も、フロースの分解にも放線菌FAE が寄与できることがェルラ酸と同様に遊離されており、FAE の共処理

明らかになった。

によって生成するｐクマル酸量は未処理および糖加水分解酵素処理の２～３倍程度であること

サトウキビバガスにおける桂皮酸類の遊離が分かった。これまでに、放線菌 FAE は桂皮酸エ

これまで脱脂米糠、トウモロコシふすま、小麦

ステル類のなかでもフェルラ酸に最も高い基質

ふすまについて、FAE および糖加水分解酵素（キ特異性を示す酵素であるという解析結果を得てシラナーゼおよびアラビノフラノシダーゼ）によいるが（６）、バイオマスからの遊離においては、るフェルラ酸の遊離を確認している（６）。その糖加水分解酵素と協調的に働くことでその能力なかでも、脱脂米糠を材料とした場合に、FAE とを発揮できたと考えられる。

糖加水分解酵素の共処理が、フェルラ酸の遊離にこれらの結果をまとめると、放線菌 FAE は植物相乗効果を示すという結果を得ている。サトウキ

種間の多様な細胞壁構造に対応し、糖加水分解酵

ビバガスは、FAE と糖加水分解酵素による共処理

素の働きを補助し細胞壁分解を促進させる酵素

において、オリゴ糖の生成パターンが脱脂米糠のであるといえる。さらに、今回の解析で見出したものと類似していた。サトウキビバガスの酵素処

バイオマス由来オリゴ糖は、バイオ燃料用糖とし

理上清中の遊離フェルラ酸を定量した結果、フェて供給できるだけでなく、生理活性をもつ機能性

ルラ酸の遊離は、酵素未処理のコントロールではオリゴ糖である可能性がある。今後はこれらのオほとんど見られず、糖加水分解酵素のみの処理でリゴ糖の機能性評価を行い、放線菌酵素を用いた

わずかに見られた（図３）。また、R18 もしくは

バイオマス利用への付加価値を示していきたい。

R43 と糖加水分解酵素を共処理した場合、遊離す
るフェルラ酸量が１０倍以上増加することが明

参考文献

らかとなった。このことは、放線菌 FAE のいずれ

1. Sultana

もが、サトウキビバガス細胞壁からのフェルラ酸R

et al., 2005, J Neurochem

92:749-758
2. Uraji et al., 2013 Appl Biochem Biotechnol

抽出に効果を持つことを示しており、また脱脂米
糠への効果と同様に、その働きは糖加水分解酵素

171:977-987,

3. Huang et al., 2011 Bioresource technology 102:との相乗効果によって得られたと考えられる（図３）。また、桂皮酸類で、フェルラ酸とともにイ

8117-8122

4. Agger et al., 2010 J Agric Food Chem 58:
6141-6148
5. Koseki et al., 2009 Appl Microbiol Biotechnol
84:803-810
6. Uraji et al., 2014 PLos One 9:e104584
7. 農研機構
http://www.naro.affrc.go.jp/project/results/laboratory/nics/2010/nics10-22.html
8. Yokoyama and Nishitani, BSJ-Review 5:46(2014)- 133 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

青枯病菌エフェクターの宿主植物因子による活性化機構の解明
岡山県農林水産総合センター生物科学研究所
向原隆文（概要）ナス科植物青枯病菌 Ralstonia solanacearum は多数のエフェクタータンパク質を宿主細胞内に注入して感染を成立させる。青枯病菌エフェクターを酵母で発現させたところ、酵母の増殖を著しく阻害するエフェク
ター（RipAY）が見いだされた。RipAY はグルタチオン（GSH）を分解する -グルタミルシクロトランスフェ
ラーゼと相同性を有しており、酵母で発現させると細胞内の GSH プールを枯渇させるほど強い GSH 分解活性を示した。GSH は植物の自然免疫系で重要な働きをしており、RipAY を発現させた植物では GSH プールの枯
渇に伴い病害抵抗反応の著しい抑制が観察された。興味深いことに RipAY は病原菌内では不活性型として発現するが、植物の細胞質型チオレドキシンによって活性化型となり、強力な GSH 分解活性を発揮した。GSH は病原菌の生育やストレス耐性においても重要であり、宿主チオレドキシンを介した GSH 分解活性の厳密な制
御は病原菌自身の GSH を守るための安全装置と考えられる。本研究から、RipAY は宿主 GSH のみを選択的に分解することで病害抵抗反応を抑制するという新奇作用機序を持つ病原因子であることが明らかとなった。

はじめに抵抗性（R）タンパク質を発達させた。R タンパク青枯病は植物病原細菌Ralstonia solanacearum によ質は細胞内でエフェクターを感知し、って引き起こされるナス科作物の最重要病害である。

effector-triggered immunity (ETI) と呼ばれる防御系を

青枯病菌の宿主範囲は非常に広く、ナス科を中心に起動する（Maekawa et al., 2011）。ETI によって誘導50 科 200 種以上の植物を加害する（Hayward, 1991）。

される病害抵抗反応は PTI と比較して非常に強く、本菌は植物の根や傷口から植物体内に侵入すると維

しばしばプログラム細胞死を伴うほど激烈である。

管束内で増殖しながら全身に広がり、最終的には植グラム陰性植物病原細菌の多くは Hrp タイプ III

物全体を枯死させる（Genin and Denny, 2012）。

分泌系と呼ばれる特殊なタンパク質分泌系を用いて植物は病原菌の感染から身を守るために二つの主植物にエフェクターを注入する（Alfano and Collmer,

要な防御系を発達させている（Jones and Dangl,

1997）。
今日までに植物免疫系を阻害するエフェクタ

2006）。一つは pathogen-associated molecular pattern

ーが複数同定されている。これらエフェクターの標(PAMP)-triggered immunity (PTI) と呼ばれ、様々な病的宿主因子のほとんどはパターン認識受容体やシグ原体が共通に持つ細胞成分（分子パターン）を受容ナル伝達に関わるタンパク質、植物ホルモンの生産体を介して認識・起動される防御系である（Bollerに関わるタンパク質等、病害抵抗反応の上流や下流

and Felix, 2009）。PTI が誘導された細胞では、MAP

で働く植物タンパク質である（Dou and Zhou, 2012；

キナーゼやカルシウム依存性プロテインキナーゼのMacho and Zipfel、2015）。一方、タンパク質以外の活性化、活性酸素種（ROS）の生成、防御関連遺伝

宿主細胞成分を標的とするエフェクターもわずかな子の発現、ホルモンやファイトアレキシンの合成、がら報告されている（Macho, 2015）。

カロース蓄積等の病害抵抗反応が連続的に誘導され、青枯病菌の Hrp タイプ III 分泌系は宿主植物に対病原菌の封じ込めを担う。一方、病原菌は宿主の PTIする病原性に必須である。（Boucher et al., 1987;

を乗り越えて感染を成立させるため、PTI を抑制す

Mukaihara et al., 2004）。このことから、本菌がエフェる病原因子（エフェクター）を発達させた。植物はクターを利用して植物免疫系を抑制し、感染を成立

エフェクターによる PTI 抑制に対抗するために病害させていることは明白である。筆者らは、日本産- 134 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

A

Glucose
VectorGalactose

B

RipA4

1

87

124

RipA5
RipI
RipAN
RipAY

C

296

121

Ec ChaC
Rs RSc0782
Sc YER163c
At ChaC2-1
Mm ChaC1
Hs ChaC1

51
50
5
1
31
72

D

411
C

（A）エフェクター発現抑制培地

E216Q

C328S

（Glc）及び誘導培地（Gal）でのCatalytic residue

LNYVPVFGYLSLRYKNFHELG-(11)-DWVPASLDNHALDF-VMSTQYRGHHQHPGVVAGLSQS--(2)-SAMDGVILKLPVGNAEEL--LARVIRRELLN· ·*** ** ·
·
· ·
*
**
** · ***· ·* **EGPVWIFGYGSLMWNPALEFT------ESCTGTLVGWHRAFCLRLTAGRGTAHQPGRMLALKEG------GRTTGVAYRLPEETLEQE--LTLLWKREMITGQDAWVFGYGSLIWNPMIFHT------EVARATVRGYHRGFYLYSRINRGTWDNPGLVLGLDRG------GSCSGVAFRVPRAHAERE--FRVLWRREMLTNSGIWVLGYGSLIYKPPSHYT------HRIPAIIHGFARRFWQSSTDHRGTPANPGRVATLIPY-(27)-LVTIGVVYYIPPEHAQEV--REYLNVREQNG-MVLWVFGYGSLIWNPGFDFD------EKLIGYIKDYKRVFDLACIDHRGTPEHPARTCTLEQS--(2)-AICWGAAYCVRGGPEKEKLAMEYLERRECEY
PQALWIFGYGSLVWKPDFAYS------DSRVGFVRGYSRRFWQGDTFHRGSDKMPGRVVTLLED--(2)-GCTWGVAYQVRGEQVNEA--LKYLNVREAVLPQALWIFGYGSLVWRPDFAYS------DSRVGFVRGYSRRFWQGDTFHRGSDKMPGRVVTLLED--(2)-GCTWGVAYQVQGEQVSKA--LKYLNVREAVL

Glucose

病菌エフェクターE

YGSL motif
Rs RipAY

図 1. 酵母の増殖を阻害する青枯

RipAY

219
137
136
118
90
119
160

酵母の増殖。
（B）RipAY エフェ
クターのタンパク質構造。
斜線は
（C）
様々
タイプ III 分泌シグナル。
な生物種由来の -グルタミルシ
クロトランスフェラーゼ

Galactose（ -GCT）と RipAY のアミノ酸
VectorYER163c配列の比較。特徴的な YGSL モ
チーフと触媒残基のグルタミン

RipAY

RipAY

E216Q

酸を矢印で示す。（D）RipAY,
RipAY E216Q 及び YER163c を発現する酵母の増殖。

青枯病菌 RS1000 株の全エフェクターレパートリー

RipA5, RipI, RipAN と RipAY）が見いだされた（図の解明に成功し、青枯病菌が植物病原細菌の中では

1A）。この中で筆者らはグルタチオン（GSH）分解

最も多い約 70 種類のエフェクターを持つことを報酵素である -グルタミルシクロトランスフェラーゼ

告している（Mukaihara et al., 2010）。現在、青枯病菌（ -GCT）と相同性を有する RipAY エフェクターにのエフェクターは Rip (Ralstonia injected protein)

着目した（図 1B）。RipAY の中央領域には全体的なと呼ばれているが、Rip エフェクターのタンパク質

相同性は低いものの -GCT 活性に重要な YGSL モチ

機能はほとんどが未解明であり、病原因子としてのーフと活性中心であるグルタミン酸（E）残基がよ役割も不明である。

。RipAY の 216 番目のグく保存されていた（図 1C）

酵母は病原菌エフェクターの宿主（真核）細胞内

ルタミン酸をグルタミンに置換した変異タンパク質での機能を知るための良いモデル生物と考えられる。

RipAY E216Q は酵母で発現させると増殖阻害活性が本研究では、青枯病菌エフェクターを酵母で発現さ完全に消失することから、RipAY の 216 番目のグル

せて表現型解析を行い、これまでに知られていない

タミン酸はエフェクター機能に重要なアミノ酸残基

興味深いエフェクター活性とその活性化に関わる宿であることが示された（図 1D）。一方、酵母由来の

主植物因子を明らかにしたので報告する。

-GCT（YER163c）を酵母で発現させても増殖阻害は全く観察されなかった。

結果と考察
1. 酵母の増殖を阻害する青枯病菌エフェクターの2. RipAY は酵母細胞内の GSH プールを枯渇させる
酵母の -GCT である YER163c は酵母で発現させ同定
RS1000 株の約 70 種類のエフェクター遺伝子を酵てもの増殖阻害効果を示さなかったが、RipAY の母発現ベクターに組み込んで酵母に形質転換し、

216 番目のグルタミン酸が酵母の増殖阻害に重要な

GAL1 プロモーターの制御下で誘導発現させた。エことは、RipAY が -GCT として機能する可能性を示

フェクター発現酵母の表現型解析から、酵母の増殖

唆する。そこで、RipAY の発現を誘導した酵母の細を著しく阻害する 5 つのエフェクター（RipA4,

胞内 GSH 量を経時的に測定した。その結果、RipAY- 135 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】を発現誘導すると速やかに細胞内の GSH 量が減少

RipAY 発現葉では GSH 量がベクターコントロール

しはじめ、誘導後 6 時間でコントロールの 1%以下の 5％以下にまで減少していた（図 3B）。
一方、
RipAYにまで GSH 量が低下することが明らかとなった（図

E216Q の発現葉では GSH 量の減少は観察されなか

2）。一方、 -GCT 活性に重要と考えられるグルタミった。この結果は、RipAY が植物細胞内でも -GCT

ン酸を変異させた RipAY E216Q を発現させた酵母を分解し、GSH 合成系が正常な場合でも GSH を枯では細胞内 GSH の減少は全く観察されなかった。

渇させられるほど強い分解活性を持っていることを

YER163c を発現させた酵母では GSH 量は緩やかに示している。

減少するもののコントロールの 50–60%まで低下す

RipAY が植物細胞のどこで働くかを明らかにするるのみであった。この結果から、RipAY は -GCT とために GFP との融合タンパク質を作成し、植物細胞して機能すること、その活性は既知 -GCT と比較し内での局在性を調べたところ、RipAY-GFP 及びてかなり強力であることが考えられた。酵母の GSH

RipAY E216Q-GFP は細胞質にのみ局在していた。こ欠損株は GSH 非存在下で増殖が停止することが知の結果から、RipAY が機能する場所は植物の細胞質られており、RipAY 発現酵母で観察される増殖阻害であると考えられた（図 3C）。

は GSH 枯渇に起因すると推察される。

GSH は植物の病害抵抗反応において多数の重要な役割を果たしており、GSH の合成量が低下したシ
ロイヌナズナの pad2-1 変異体では PTI の抑制や親和Relative GSH level (%)

120
120

性の病原菌に対する感受性の増大が報告されている

100
100

RipAY
E216Q

（Glazebrook and Ausubel, 1994）。
RipAY が植物の PTI8080

反応を抑制するかどうかを調べるために、ベンサミ

60
60

アタバコの本葉をフラジェリンタンパク質のN 末端

YER163c

側 22 アミノ酸断片（flg22）で処理した。flg22 は植4040

物に PTI を誘導するエリシターとして広く利用され20
20

る代表的な病原菌由来の分子パターン（PAMP）で
00

RipAY
0

2

4

6

8

10
10

ある。ベクターコントロールの本葉では flg22 処理

1212Time (hr)

後、数分から活性酸素種（ROS）の生成を示すシグ
ナルが検出され、処理後 20 分でピークを迎える（図図 2. エフェクター発現酵母の細胞内 GSH 量の変化

3D）
。しかしながら、RipAY を発現させた本葉ではRipAY（●）, RipAY E216Q（○）及び YER163c（▲）をROS 生成がコントロールと比較して著しく抑制さ発現する酵母の増殖を 2 時間毎に測定している。GSH のれた。一方、RipAY E216Q の発現葉では ROS 生成

相対量は同時に培養したベクターコントロールを 100％の抑制は全く観察されなかった。さらに、flg22 処理として比較算出した。

で誘導されることが知られている病害抵抗性関連遺伝子の発現を調べたところ、RipAY 発現葉では調べ

3. RipAY は植物細胞内の GSH プールを枯渇させ、た全ての PTI マーカー遺伝子の発現誘導が著しく抑植物の PTI を介した病害抵抗反応を抑制する制されていた（図 3E）。RipAY E216Q 発現葉では PTI

RipAY の植物細胞に対する効果を確認するため、マーカー遺伝子の発現抑制は全く観察されなかった。

ベンサミアナタバコでアグロインフェクション法に以上の結果から、青枯病菌の RipAY は植物細胞内より RipAY を一過的に発現させた。RipAY を発現さの GSH プールを枯渇させることで病害抵抗反応をせた本葉ではアグロインフェクション後 48 時間で抑制するという新奇作用機序を持つ病原因子であるは細胞死等の可視的な変化は観察されなかった（図ことが明らかとなった。

3A）。この時の植物細胞内 GSH 量を測定したところ、- 136 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

Mock

B

RipAY

GSH (μM)

A15

図 3. アグロインフィルトレーシ

10ョンにより RipAY を発現させたベ
ンサミアナ本葉の表現型

5（A）アグロインフィルトレーショ
0

Mock

RipAY
E216Q

VectorVectorRipAYンにより RipAY 及び RipAY E216Q

RipAY
E216Q

を発現させたベンサミアナタバコ
anti-HA

本葉。
。Mock はバッファーのみ。

C

GFP

Chlorophyll

MergedD（B）エフェ
接種後 48 時間で撮影。
12000

Vector
RipAY
RipAY E216Q

10000

Luminescence(random units)

GFP

GFPRipAY
GFPRipAY
E216Q

おけるエフェクターの発現。HA 標

8000
6000

識されたエフェクターをウエスタ

4000

ンブロットで検出している。
（C）

2000

GFP および GFP 融合エフェクター

0

0

20

40

60

80

100

120

Time (min)NbACRE132
16
12
8
4
0

15

NbPti520

Vector
RipAY
RipAY E216Q

Fold induction

Fold induction

20

30

Time (min)

16
12
8
4
0

15

8

ーコントロール及びエフェクター

Vector
RipAY
RipAY E216Qを発現させたリーフディスクを

6

100 M の flg22 で処理し、処理後

4120 分までの ROS 生成を発光モニ

2

ターした。
（E）flg22 処理葉におけ030の植物細胞内の局在性。
（D）flg22
処理葉における ROS 生成。ベクタ

NbWRKY22
10

Vector
RipAY
RipAY E216Q

Fold induction

E

クター発現葉の GSH 量。接種葉に15Time (min)る各 PTI マーカー遺伝子の発現。

30Time (min)4. RipAY の GSH 分解活性は未知の真核細胞因子に。しかしながら、報告されている（Coaker et al., 2005）

より活性化される

シクロフィリンを全て欠損した酵母変異株の粗抽出

RipAY の GSH 分解活性を in vitro で詳細に調べる液を加えても RipAY の GSH 分解活性は活性化されため、RipAY, RipAY E216Q 及び YER163c タンパクた。この結果から、RipAY の活性化には未知の真核質を大腸菌で発現させ、組換えタンパク質を得た。

細胞因子が関与することが示された。

酵母の -GCT である YER163c を in vitro で GSH と反応させると GSH が減少した（図 4）。しかしながら、RipAYなかった。いくつかの病原菌エフェクターでは酵素8

活性が真核細胞因子で活性化されることが知られている。そこで RipAY の反応液中に酵母及び植物の粗抽出液を加えたところ、GSH 分解活性が認められた。
一方、RipAY E216Q ではいずれの場合も GSH 分解

GSH (mM)

RipAY では様々な条件でも GSH の減少は観察され

10

RipAY E216Q

YER163c

6
4
2
0
None

は 観 察 さ れ な か っ た 。 Pseudomonas syringae のYeast
extract

Plant
extract

Yeast
extract(∆8 cyclophilins)

AvrRpt2 エフェクターでは酵母や植物由来のシクロ

図 4. RipAY の GSH 分解活性は未知の真核細胞因子にフィリンでプロテアーゼ活性が活性化されることがより活性化される- 137 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

6. RipAY は植物の細胞質型チオレドキシンによって

YER163c

ジスルフィド還元活性非依存的に活性化される

10

10

8

8

青枯病菌のエフェクターは Hrp から植物細胞内に6注入され、そこで病原因子としての機能を発揮する

GSH (mM)

GSH (mM)

RipAY

6
4
2

ため、RipAY は植物細胞内のチオレドキシンにより4活性化されると考えられる。植物ではチオレドキシ

20

ンの機能分化が進んでおり、アラビドプシスでは少000.05 0.2
15
0.02 0.1 0.5
210

Thioredoxin (μg)

0なくとも 20 のチオレドキシンが存在し、7 つのタイ

0.05 0.2
15
0.02 0.1 0.5
210

Thioredoxin (μg)

プ（f, m, x, y, z, o 及び h）に分類されている（Meyer
et al., 2002）。RipAY は植物細胞内では細胞質に局在図 5. RipAY 及び YER163c の GSH 分解活性に対する精製チするため、細胞質型のチオレドキシン h の効果を調

オレドキシンの効果

べたところ、細胞質に多量に存在するチオレドキシ

酵母チオレドキシン TRX2（●）及び大腸菌チオレドキシ

ン h1 から h5 で活性化されることが明らかとなった

ン TrxA（△）を反応液に添加し、GSH 量を測定した。

（図 6A）。一方、葉緑体にのみ存在するチオレドキ
シン m1, f1, x, y1 及び z では全く活性化されなかっ5. RipAY を活性化する真核細胞タンパク質の同定た（図 6B）。エフェクターの酵素活性が自身が働く

RipAY の GSH 分解活性を活性化する真核細胞因

場所にのみ局在する宿主因子で活性化されるよう上子を同定するため、試料の調整が容易な酵母の粗抽

手くチューニングされているのは大変興味深い。

出液を限外ろ過フィルターで分画したところ、活性

チオレドキシンはジスルフィド還元活性を介して化因子の分子量は 10–100 kDa と推定された。フィルタンパク質の活性を制御することが知られている。

ター分画液をゲル濾過クロマトグラフィーとイオン

しかし、RipAY の活性化に本活性は必要でなかった

交換クロマトグラフィーで分画し、RipAY の活性化

（データ示さず）。
このことはジスルフィド還元活性と相関するタンパク質の部分配列を質量分析で決定を有する原核型チオレドキシンが RipAY を活性化したところ、酵母チオレドキシン TRX2 であった。

しない事実と良く一致し、チオレドキシンによる未（以上、データ示さず）。TRX2 による RipAY の活知のタンパク質活性化機構の存在が強く示唆される。

性化を証明するために精製 TRX2 を用いて検証実験を行ったところ、TRX2 の量に応じて RipAY の GSH

A
GSH (mM)

分解活性は増大した（図 5）。一方、酵母の -GCT である YER163c の GSH 分解活性は TRX2 の添加によって全く変化しなかった。完全に活性化された

10
8
6
4
2
0

Vec
!" Rs h1
TrxA

RipAY は YER163c よりも 30 40 倍高い GSH 分解であることが明らかとなった。
チオレドキシンはほとんどの生物に共通に存在す
るタンパク質であるが、RipAY は大腸菌の粗抽出液では活性化されない（図 4）。RipAY は大腸菌の精製
チオレドキシンでも活性化されなかった（図 5）。

B
GSH (mM)

活性を示し、RipAY が非常に強力な GSH 分解酵素

h2

h3

h4
'"

h5 h7

h8 h9

Cytosolic TRX

10
8
6
4
2
0

Vec m1f1

xy1

Chloroplastic TRXzo1
Mitochondrial
TRX

RipAY は青枯病菌由来のチオレドキシンでも活性化されない（図 6A）ことから、病原菌細胞内では不活性型で発現・維持されると考えられる。

- 138 -

図 6. 植物チオレドキシンによる RipAY の活性化

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

6. GSH は青枯病菌の生育に必須である
Inactive

青枯病菌の細胞内で RipAY が不活性化型で発現

GSH

RipAY

することは、病原菌にとって GSH が重要なことをStresstolerance

Hrp

示唆する。細菌では GSH は二段階で合成され、各段階で働く酵素は gshA 及び gshB 遺伝子にコードさ“Suppression of PTI”

れている。青枯病菌の gshAB 変異株（RS1701 株）

Inactive“Active”

RipAY

RipAY

では GSH を合成できなくなっていた。興味深いことに、RS1701 株では H2O2 やメチルグリオキサール

GSH
Degradation

TRXに対する耐性が大きく低下しており、GSH が病原菌

Plant thioredoxin

5-OP + Cys-Glyの酸化ストレス応答や解毒経路で重要な働きをしていることが明らかとなった（ここまでデータ示さず）。

図 8. 植物と青枯病菌の相互作用における RipAY の役割

また、RS1701 株は GSH を含まない最少培地中では完全に生育が停止することから、病原菌の生育にGSH が必須であることも示された（図 7）
。以上の

謝辞

結果から、RipAY の活性は病原菌内の GSH を分解

本研究は岡山県農林水産総合センター生物科学研から守るために厳密に制御されていると考えられる。

究所の畑中唯史専門研究員、小田賢司専門研究員、
中野真人流動研究員との共同研究によるものです。
研究を支援していただいたウエスコ学術振興財団

RS1701(+ GSH)

2.0に感謝致します。

Cell density (OD600)

RS1002

1.5

引用文献
1

Alfano and Collmer (1997) J. Bacteriol. 179: 5655-5662.
Boller and Felix (2009) Annu. Rev. Plant Biol. 60:

0.5

379–406.

0
0

12

24

36

RS1701

Boucher et al. (1987) J. Bacteriol. 169: 5626–5633.

48

Coaker et al. (2005) Science 308: 548–550.
Dou and Zhou (2012) Cell Host Microbe 12: 484–495.

Time (hr)Genin and Denny (2012) Annu. Rev. Phytopathol.

図 7. GSH 合成変異株 RS1701 の最少培地における増殖

50:67–89.
Glazebrook and Ausubel (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. U
S A 91: 8955–8959.

おわりに本研究から、青枯病菌の RipAY エフェクターが植Hayward AC (1991) Annu. Rev. Phytopathol. 29: 65–87.

物チオレドキシンで活性化される強力な GSH 分解

Jones and Dangl (2006) Nature 444: 323–329.

酵素であり、植物の GSH プールを枯渇させて病害

Macho AP (2016) New Phytol. 210: 51-57.

抵抗反応を抑制するという新奇な作用機序を持つ病

Macho and Zipfel (2015) Mol. Cell 54:2 63–272.

原因子であることが明らかとなった（図 8 に作用モ

Maekawa et al. (2011) Nat. Immunol. 12: 817–826.

デルを示す）。
植物チオレドキシンに依存した RipAY

Meyer et al. (2002) Methods Enzymol. 347: 394–402.

の活性化機構は、病原菌自身にとっても重要な GSH

Mukaihara et al. (2004) Mol. Microbiol. 54: 863–875.

を RipAY による分解から守る安全装置として発達

Mukaihara et al. (2010) Mol. Plant-Microbe Interact. 23:

したと考えられる。

251–262.

- 139 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

死細胞から放出される組織リモデリング増悪化因子の分子機能と病態制御
就実大学 薬学部
森 秀治，豊村隆男，渡邊政博
近年，細胞死に伴って死細胞から免疫・炎症系を刺激する因子が放出され，これが「組織リモデリング」病
態形成にとっての共通基盤となっている事が明らかとなりつつある。組織リモデリング病態は，脳血管障害や糖尿病などの様々な難治性疾患の増悪化に関与し，これら疾患の重度後遺症に伴う医療負担は極めて甚大であるにもかかわらず，未だ有効な根治的治療の方策は確立していないのが現状である。我々は，組織リモデリン
グ病巣局所に出現して免疫炎症反応を過剰亢進し，病態増悪化を引き起こす因子（Damps）を見出した。しかしながら，現時点で，その病態生理学的意義に関しては不明な点が多いのが現状である。本研究では Damps の病態局所での存在様式を明らかにするために Damps 関連因子を結合させた不溶性担体を作成し，これを Damps 結合因子探索のための特異プローブとして適用した。生体組織から Damps 対して高親和性を示す結合因子の単離を試みた結果，数種の結合因子候補を検出することに成功した。このことは Damps が他因子と共に機能的複合体を形成し得ることを意味するものであり，組織リモデリング病態制御のための新たな治療標的の可能性を示
唆するものと考えられた。

1. はじめに

Damps による過剰刺激は典型的なサイトカイン血症

細胞死・炎症・創傷治癒などの生体の再生機構は，の惹起を示唆するものであった。加えて，Damps に

多種多様の生理活性因子群によって引き起こされる

対する単クローン抗体を採取して梗塞病態に対する極めて精巧な生命維持活動であり，その破綻は連鎖治療効果を検討した所，抗体投与は梗塞病巣に高い的な組織リモデリング病態（病的な組織構造と機能

結合指向性を有し，神経細胞死や運動麻痺などの症障害）を引き起こし，重篤な難治性疾患（動脈硬化状を著しく抑える事も明らかとなった（FASEB Jや線維化など）を招いてしまう。従って，組織リモ(2007)）。また，抗体による梗塞治療効果は，既知のデリングに関わる因子を見出し，その制御機構を解

いかなる市販治療薬（ラジカルスカベンジャー等）

明する事は，疾患の未然防止や新規治療法を開発しよりも優れ，発症後に投与しても有効性を発揮し得て行く上で極めて重要な課題と考えられる。

る驚くべきものであった。これらの知見は，Damps

我々は，
単球 / マクロファージの免疫制御機構にシグナルの遮断が脳梗塞をはじめとする多くの組織

関わっている活性因子研究の過程で，偶然にも脳梗

リモデリング病態の治療や予防に直結する事を示唆

塞発症時の過剰な生体応答に伴って梗塞巣局所に出するものであり，投与法や開発コストの面で，抗体現する病態増悪化因子（Damps）の存在を見出し，こ以外の活性分子（いわゆる Damps に対する低分子遮れが病巣の拡大・増悪化に大きく関与している事を断薬）を創成していくことが極めて重要であること発見した。

を裏付けるものであった。

驚くべき事に，この増悪化因子（Damps）は，細胞

また，Damps の病態局所での存在様式は，現時点

死に伴って細胞内から細胞外へと局在変化を起こし，で全く不明であり，生体内での Damps 相互作用因子

細胞外で周囲の免疫細胞や内皮細胞を刺激してサイの解明は，Damps が担う病態生理学的意義の解明とトカイン様活性（すなわち遊走活性亢進，細胞接着

共に，新規制御薬開発においても有益な情報を提供

因子発現亢進，炎症性サイトカインや活性酸素の産してくれるものと考えられた。

生亢進など）を発揮することが明らかとなり，特に- 140 -

このような背景の下，本研究では Damps 関連因子

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

結合担体を Damps 結合因子探索のための特異プロー

より結合因子のバンド確認を行う。

ブとして適用し，生体組織から Damps 関連因子に高親和性を示す結合因子の単離を試みた。

3. 結果と考察
0.5 M NaCl 入り冷 10 mM リン酸緩衝液（pH7.5）

2. 方法

を用いて溶出した画分の fr. 1～10 の SDS-PAGE パタ

A) Damps 関連因子をリガンドとした不溶性担体の作ーンを図 1 に示す。

製

Fraction
1 2 3 4 5 6 7 8 9 101) 不溶性担体（EAH セファロース 4B, 5 mL gel bed）
をファルコン管に取る。
2) 担体に，20 % EtOH 液（30 mL）を加え，転倒混和する。
3) 遠心（2,500 rpm，5 分，室温）する。
4) クリーンベンチ内で，無菌的に上清を取り除き，滅菌済のリン酸緩衝液（20 mL）で 3 回洗浄・平衡化する。
5) D-glyceraldehyde（0.18 g）を，リン酸緩衝液（pH7.4）20 mL に溶解する。

図16) 濾過滅菌後に，上記の無菌担体と混合する。

Damps 化担体を用いた肺臓由来 Damps
関連因子結合画分の電気泳動パターン

7) 37℃で，10 日間，ゆっくりと転倒混和させる。
8) 反応後の担体を純水で洗浄する。

Damps 化担体，およびコントロールとしての担体

9) PBS で洗浄後に，PBS に懸濁し，4℃で保存する。

のみを用いて同実験を行った比較検討から得られた
泳動パターンを図 2 に示す。

B) Damps 化担体を用いた生体内 Damps 結合因子の単Damps 化担体
結合因子

離

担体
結合因子

1) ブタ肺臓（約 100 g）を 3～4 個の断片に小分けする。
2) 小分けした肺臓（100 g）に，タンパク質分解酵
素阻害剤入り冷 PBS（200 mL）を加え，ホモジナ
イズする。
3) 遠心(9,000×g，10 分，4℃)し，上清（可溶性画分を回収する。
4) 上清に Damps 化担体を加え，4℃で一晩振とうする。

図25) グラスフィルターを用いて，Damps 化担体を回収

Damps 化担体結合因子と担体結合因子の泳動パターンの比較検討する。
6) Damps 化担体をカラムに詰め，
冷 PBS で洗浄する。

両者を比較し，Damps 化担体で調製した溶出試料

7) 0.5 M NaCl 入り冷 10 mM リン酸緩衝液（pH7.5），の低分子量画分のみに，複数個の特異的バンドを確

及び 1.0 M NaCl 入り冷 10 mM リン酸緩衝液

認することができた（図 3）。

（pH7.5）を用いて，結合因子を段階的に溶出する。

今回の研究から，Damps 関連因子と複合体を形成

8) 溶出した結合因子を SDS-PAGE にかけ，銀染色にし得る複数種の生体内結合因子が存在することが確- 141 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

認された。

2) 森 秀治 他 : 生活習慣病の増悪化因子「HMGB1，

今後は，Damps とその受容体から構成される in

AGEs RAGE 系」に対する創薬プラットフォーム

vitro 結合アッセイにおいて，これらの複数種の因構築．日本薬理学雑誌， 143 14-17 (2014)

子が結合に如何なる影響を及ぼすのかについて検討

3) 大熊祐 他 : 外傷性脳傷害に対する抗 HMGB1 抗を進めると共に，Damps が持つ免疫・炎症刺激作用体治療．岡山医学会雑誌，125 97-102 (2014)

に対する効果についても，RAW 細胞や THP-1 細胞な

4) Takahashi HK, et al : Role of cell-cell

どの免疫担当細胞を用いてサイトカイン産生能やinteractions in high mobility group box 1

NF-κB 活性化能などを検証していく必要性があり，

cytokine activity in human peripheral blood

今後の研究が大いに期待できるものと思われた。

mononuclear cells and mouse splenocytes．Eur
J Pharmacol, 701 (1-3) 194-202 (2013)
5) Takahashi HK, et al : Histamine inhibits highDamps 化担体
結合因子

mobility

group

box

1-induced

adhesionmolecule expression on human monocytes．Eur
J Pharmacol, 718 (1-3) 305-313 (2013)
6) Takahashi HK et al : Role of cell-cellinteractions in high mobility group box 1
cytokine activity in human peripheral bloodmononuclear cells and mouse splenocytes.
Eur J Pharmacol 701: 194-202 (2013)
図37) Shichida T et al : Peroxiredoxin family

Damps 化担体に特異的な結合画分

proteins are key initiators of post-ischemic（低分子量画分）の発見

inflammation in the brain. Nature Med 18:
911 917 (2012)

4. おわりに本研究を通じて，Damps 分子が生体内で機能的複8) Okuma Y, et al : Anti-high mobility group box-1

合体を形成し得る事を見出すことに成功した。このantibody therapy for traumatic brain injury.

知見は，将来的に Damps シグナルの抑制に働くペプ

Annal Neurol 72: 373-384 (2012)

チド配列の同定や新たな低分子型分子標的薬の創成

9) Zhang J, et al : Anti-HMGB1 monoclonal antibodyにもつながっていくものと考えられ，今後の研究展

protects blood-brain barrier from ischemia-

開が大いに期待されるものである。

induced disruption. Stroke 42: 1420-1428(2011)

5. 謝辞

10) Kanellakis P, et al : High-mobility group box

本研究を実施するに際して，ご助成いただきましprotein 1 neutralization reduces development

た公益財団法人ウエスコ学術振興財団の皆様に心よofり感謝申し上げます。

apolipoprotein

diet-induced

atherosclerosisE-

deficient

in
mice.

Arterioscler Thromb Vasc Biol 31: 313-319
6. 参考文献(2011)

1) Okuma Y, et al : Glycyrrhizin inhibits
traumaticbrain

injuryby11) Terada C, et al : Gene expression andreducing

localization of high-mobility group box

HMGB1-RAGE interaction. Neuropharmacology,

chromosomal protein-1 (HMGB-1) in human

85 18-26 (2014)

osteoarthritic cartilage. Acta Med Okayama- 142 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

65: 369-377 (2011)expression,cytokineproductionand12) Mori S, et al : Ciprofloxacin inhibits

lymphocyte proliferation in human peripheral

advanced glycation end products-induced

blood mononuclear cells. J Pharmacol Exp Theradhesion

331: 656-670 (2009)

molecule

monocytes.

expression

Brit J Pharmacol

on

human

61: 229-240(2010)

20) Liu R, et al : Establishment of in vitro
binding assay of high mobility group box-1

13) Takahashi HK, et al : Prostaglandin E2

andS100A12

toreceptorforadvancedinhibits advanced glycation end product-glycation endproducts: heparin's effect on

induced adhesion molecule expression onbinding. Acta Medica Okayama 63: 203-211

monocytes,(2009)

cytokineproduction

andlymphocyte proliferation during human mixed21) Wake H, et al : High mobility group box 1

lymphocyte reaction. J Pharmacol Exp Thercomplexed with heparin induced angiogenesis

334: 964-972 (2010)

in a matrigel plug assay. Acta Medica Okayama

14) Zhang J, et al : Histamine inhibits adhesion

63: 249-262 (2009)

molecule expression in human monocytes,22) Wake H, et al : Histamine inhibits advanced

induced by advanced glycation end products

glycation end products-induced adhesion

during the mixed lymphocyte reaction. Brit

molecule expression on human monocytes. J

J Pharmacol 160: 1378-1386 (2010)

Pharmacol Exp Ther 330: 826-833 (2009)15) Takahashi HK, et al : Effect of nicotine on
advanced glycation end products- induced
immune response in human monocytes.

J

Pharmacol Exp Ther 332: 1013-1021 (2010)16) Ohashi K, et al : Advanced glycation end
products enhance monocyte activation during
human mixed lymphocyte reaction.

Clin

Immunol 134: 345-353 (2010)17) Takahashi HK, et al : β2-adrenoceptor
stimulation inhibits advanced glycation end
products-induced

adhesionmolecule

expression and cytokine production in humanperipheral blood mononuclear cells. Eur J
Pharmacol 627: 313-317 (2010)18) Wake H, et al : Histidine- rich glycoprotein
inhibited high mobility group box 1 incomplex with heparin- induced angiogenesis
in matrigel plug assay. Eur J Pharmacol 623:
89-95 (2009)19) Takahashi HK, et al : Prostaglandins E2
inhibits

advanced

products-induced

glycationadhesionend

molecule- 143 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

小児精神疾患治療を指向した経鼻薬物送達法の可能性を探る薬物動態学的研究
就実大学 薬学部 薬物動態学研究室
井上 大輔
本研究では、有効な小児精神疾患治療法の確立を最終目的とし、直接的に脳内へ薬物送達が可能な経鼻経路を利用した薬物送達法の可能性を探るべく、薬物の中枢移行に関する薬物動態学研究を試みた。まず基礎的情報を得るために、caffeine をモデル薬物として静脈内投与後の体内動態を解析した。本検討で、麻酔処置によりcaffeine の体内動態が変動する可能性が示されたため、麻酔状態のラットにおける caffeine の体内動態及び脳移行性の変化を併せて評価した。ラットに静脈内投与後、caffeine は速やかに脳組織に移行し、制限を受けず広く脳内に分布することが示された。また、麻酔処置により caffeine の血中からの消失が遅くなることが明らかとなり、caffeine の血中消失の遅延が脳内動態を変動させる結果となった。血中濃度および脳組織中濃度の速度論的解析により、caffeine の血中濃度の影響を除外した薬物動態学的パラメーターを利用することで、麻酔による体内動態の影響を除外でき、正確な脳移行量の解析が可能であることが示された。今後、薬物動態学的解析を利用して、経鼻投与による薬物脳移行の有効性評価を行い、経鼻薬物送達法の確立に繋げたい。
現代社会において、精神神経疾患の患者数は急激が多々ある１）。即ち、有効な中枢神経疾患の薬物治に増加しており、国際的な臨床試験数は、「がん」に療戦略としては、薬物の全身移行を抑え、脳へ選択次いで２番目に多く１）、中枢神経疾患領域の医薬品的移行が可能な、効率的な脳内送達法の構築が重要

開発が活発であることが伺える。小児においては、なアプローチとなる。

注意欠如多動性障害（ＡＤＨＤ）や自閉症・アスペ

加えて、小児の場合は、ほとんどの医薬品で詳細

ルガー、うつ病、パニック障害、適応障害など、数な薬物動態が未知で、小児に対する有効性や安全性

多くの精神疾患が社会問題化しており、小児精神疾さえ不明な薬物も数多い。最近になり、日本におい患は急増の一途を辿っている。これら多くの精神疾ても小児製剤の詳細な研究開発に向けた取り組みが患では有効な治療薬はいまだ少なく、小児ではさら始まり、小児製剤の薬物動態学研究が大きく注目さに開発が困難を極める。うつ病や不安障害、統合失れ始めたところである。

調症、認知症など、様々な疾患が存在しており、病薬物の低い脳内送達率を克服するための有用な手

態メカニズムの解明や新しい創薬研究・開発が急速段として、近年、「経鼻経路」が注目され、脳組織へに進められている現在にあって、有効な薬理効果をの薬物送達法として経鼻投与が利用される研究が多示す薬物見出されても、一般的な注射剤や経口製剤

くなされている３）。においを感知する嗅神経が脳内では、全身性の副作用が問題となることも多い。中から鼻腔上部へと伸びており、鼻腔内投与された薬

枢神経疾患の薬物療法では、脳組織や神経組織内へ物はこの嗅神経領域（Olfactory region）を介してと薬物を送達する必要があるが、全身循環血と脳組

脳内へ直接的に移行することが知られている４）。
（図

織を隔てるバリアである血液脳関門（BBB）の存在に

１）この「鼻腔-脳経路」を利用することで、全身循より、薬物を含む物質の移行は極めて厳格に制限さ

環血を介さず、脳への直接的な薬物移行が可能とな２）れる 。従って、治療効果が得られる有効濃度域にるため、最大のバリアである BBB を回避でき、かつ達する程の高い脳内薬物濃度を維持するためには、脳組織へ選択的な薬物送達が可能となる。従って、高用量の薬物投与が必要となり、その結果として、「鼻腔-脳経路」を利用した薬物送達法は、全身性副

全身性の副作用が発現するか、副作用回避のため十作用の著しい軽減と、高い脳内薬物移行を可能とし、分量を投与できず、治療薬として成立しないケース

中枢神経疾患治療薬の有望な送達法となり得る。実- 144 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

際、経鼻投与経路を利用した動物及びヒトでの検討

脳組織中 caffeine 濃度の時間推移を測定した。

が報告され、注射剤や経口投与に比べ、投与薬物の脳移行性および治療効果が高いことが認められた研３）

麻酔による体内動態の影響究も多い 。さらに、近年の経鼻投与デバイスの発

Urethane 麻酔を施すことで、
caffeine の血中動態展により、簡便に一定量を鼻腔内噴霧できるようにが変動することが示唆されたため、麻酔によるなり、小児に対して保護者などの他者が容易に投与

caffeine の体内動態に及ぼす影響を、覚醒状態のラ

可能な点からも、経鼻製剤は小児精神疾患治療薬とットと比較検討することで評価した。覚醒群では、して優れた可能性を有しており、経鼻製剤化は小児

diethylether の吸入による一時的な麻酔下のラッに対する有能な治療戦略となり得るものと考えられ

トに、
薬物投与用カニューレを左大腿静脈に挿入し、る。そこで我々は、有効な小児精神疾患治療薬の開その後、覚醒させたラットに caffeine 溶液をカニュ

発を最終目標として、BBB を回避でき、直接的に脳ーレより静脈内投与し、上記の麻酔下ラット群と同内へ薬物送達が可能な「経鼻経路」を利用した薬物

様に、CSF、HI、OB 中の caffeine 濃度推移を測定し送達法の可能性を探るべく、精神疾患治療薬の経鼻た。

投与後の薬物動態学研究を試みることとした。
血中濃度推移の評価
Caffeine の血 漿中濃度 推移 を得る ために 、
urethane 麻 酔下 あるいは 覚醒 状態の ラット にcaffeine 溶液を静脈内投与後、右大腿動脈に挿入した採血用カニューレより経時的に血液を採取し、血漿中 caffeine 濃度の時間推移を測定した。
結果と考察
図２に、脳組織 CSF、HI、OB 中の caffeine 濃度5）推移を示した。いずれの組織においても投与初期（5図 1 鼻腔の構造（Illum L. より）分）より caffeine の移行が認められ、caffeine は方法

組織移行性が極めて高いことが確認された。また最Caffeine の脳内動態の評価

高血中濃度到達時間（Tmax）は CSF で 5－15 分、OB

本検討では、まず初期的検討として、薬物の脳移では 5 分と caffeine の移行が早い結果が得られた。

行性を正確に評価可能なシステムを確立するため、

これは、OB は脳表面に存在しており CSF と接する位

体内動態及び脳移行性を評価するためにモデル薬物

置に存在すること、
さらに OB は体積の小さい部位でとして caffeine を選択し、caffeine をラットに静あるために、caffeine 濃度の速やかな増大が得られ

脈内投与後の薬物動態に関する基礎的情報を得るこたと考えられた。HI では Tmax が 60 分と移行が緩やとを試みた。Urethane（1.2 g/kg, i.p.）により麻かであり、移行量も OB と比較して低く、HI は脳深酔を施したラットの左大腿静脈より caffeine 溶液部に位置することがこれらの相違の一因と考えられ（0.4 mg/kg）を静脈内投与し、一定時間経過後

た（表１）
。

（5,15,30,60,120 min）に、脳脊髄液（CSF）を採取

血漿中 caffeine 濃度推移を麻酔群及び覚醒群でし、氷冷 PBS を経心的灌流することで脱血した後、比較した結果、麻酔群では caffeine の消失が緩やか

脳組織を採取した。脳組織は、海馬（HI）、嗅球（OB）、になることが示された（図３）。従って、麻酔薬の大脳、小脳に分割した。本検討では CSF 及び HI、OB

影響により血液からの caffeine 消失が変動する可中の caffeine 濃度を LC/MS/MS を使用して定量し、能性が示唆された。脳組織では、CSF において麻酔- 145 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

群で有意に高いcaffeine濃度が120分以降も維持さが変動することが示されため（図２-a）、麻酔群とれており、血中濃度推移の影響を強く受けた可能性

覚醒群の血中濃度推移の相違の影響を除去するためが考えられた（図２）。一方、HI では、覚醒群と比に、各組織中濃度の AUC と血漿中濃度の AUC との比較して麻酔群の最高血中濃度（Cmax）が高く、麻酔に（ AUCtissue/plasma ） を 算 出 し た （ 表 ２ ）。 両 群 のより caffeine の移行量が増大した結果、血中濃度時

AUCtissue/plasma を比較した結果、脳組織の CSF 及び HI、間曲線下面積（AUC）が高くなったと考えられた（図OB では覚醒時の AUC 比に対する麻酔時の AUC 比（AUC

２-c, 表１）。さらに、OB では、麻酔群の AUC が覚

比 anesthetic /AUC 比 conscious）
がそれぞれ 0.98 及び 0.97、醒群と比較して 1.4 倍大きく、麻酔群でより高い

1.06 となった。いずれの脳組織においても 1 付近の

caffeine の移行が観察された（図２-d）。

値を示しており、本パラメーターを算出することで、

上記の通り、麻酔の影響により caffeine の血中動態

血中濃度推移の変動を除外した脳組織内への薬物移- 146 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

行を評価可能であることが示された。

示されたため、本結果を基に、今後は経鼻投与後のさらに本検討で血中濃度推移の影響を除外した解

薬物動態学的研究を進め、中枢神経疾患治療を目的析を行った結果、caffeine の脳移行は、麻酔の影響とした有用な経鼻薬物送達法の構築を目指したい。

を受けない結果となった。従って、麻酔により
caffeine の血中消失が遅延したことにより脳組織

参考文献

中 caffeine 濃度は上昇したが、血中濃度推移の変動

1) 日本における医薬品開発の現状と展望 精神神経疾患領域の臨床開発を中心に. 中林哲夫、
玉浦明美、近野健一、ファルマシア、vol. 47, No.
9 (2011).
2) In vivo methods to study uptake of nanoparticles
into the brain. van Rooy I, Cakir-Tascioglu S,
Hennink WE, Storm G, Schiffelers RM,
Mastrobattista E. Pharm. Res., 28 (3), 456-471(2011) .
3) Intranasal treatment of central nervous systemdysfunction in humans. Chapman CD, Frey WH
2nd, Craft S, Danielyan L, Hallschmid M, Schiöth
HB, Benedict C., Pharm. Res., 30 (10), 2475-2484,(2013).
4) Nanoparticles for direct nose-to-brain delivery ofdrugs. Mistry A, Stolnik S, Illum L. Int. J. Pharm.,
379 (1), 146-157, (2009).
5) Is nose-to-brain transport of drugs in man a reality?
Illum L., J. Pharm. Pharmacol., 56 (1), 3-17,(2004)を受けたのみで、麻酔処置が薬物の脳移行性自体に影響しないことを示唆している。これは、caffeine
は BBB による制限を受けることなく脳組織に移行可能であり、極めて高い膜透過性及び高い組織分布能を有することに起因すると考えられた。
結論
本検討では、薬物の脳移行性を薬物動態学的に解析するための基礎的情報を得るために、caffeine をモデル薬物として、静脈内投与後の体内動態を評価した。その結果、caffeine では、高い膜透過性と組織分布能により静脈内投与後、速やかに組織移行することが明らかとなった。Caffeine の脳組織への移行は、CSF や脳表面に存在する OB では速やかな移行が観察されたが、脳深部にある HI では移行が緩やかであり、caffeine のような高い組織分布能がある薬物であっても、組織移行性に脳内部位差が存在する
ことが示された。さらに、麻酔処置により血流が低下することで血中からの caffeine 消失が遅延する
結果が得られたが、AUC 比を指標とした動態学的パ
ラメーターを算出することで、脳組織移行性に対す
る血中動態の影響を除外できることが明らかとなった。本検討で使用した caffeine では、麻酔時には血流低下による脳移行量の変化がみられるが、脳組織への薬物移行能自体には影響を与えていないことが示された。
今後は、caffeine のような組織分布能が極めて高い薬物に加えて、様々な物理化学的性質を有する薬物を追加検討し、麻酔や睡眠時などの生理状態の差異が及ぼす脳移行性への影響を検討する必要性があると思われた。
本研究結果から、薬物動態学的パラメーターを利用することで、正確な脳移行性を評価できる可能性が- 147 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

鳥類アデノ随伴ウイルス（AAAV）ベクターの開発
就実大学 薬学部 薬学科
工藤 季之
鳥類、特にニワトリは、哺乳類とならぶ研究における重要なモデル動物である。しかしながら、哺乳類と異なり遺伝子改変技術は未だに確立されておらず、研究の障害となっている。アデノ随伴ウイルス（AAV）は、遺伝子導入効率が極めて高いウイルスベクターの中にあって、とりわけ安全性の高さが評価されている。一方、従来の遺伝子組換え技術とは異なるゲノム編集技術の開発が、近年急速に進展している。この技術は、従来の幹細胞を利用した遺伝子改変技術（ノックアウト法など）を凌駕するものになりつつある。そこで本研究では、これらの技術を組合わせることで、これまで鳥類では不可能と考えられていた個体レベルでの遺伝子改変技術の確立を目指した。2003 年に Bossis と Chiorini により構築された鳥類アデノ随伴ウイルス（AAAV）ベクター
pA3V-GFP をもとに欠損型ベクターを作製し、これに 2015 年に Ran らが報告したゲノム編集用の遺伝子発現ユニットを導入することで、新規な AAAV ベクターを構築した。これらについて、hSaCas9 遺伝子の発現およびウ
イルス産生能を確認した。
１．はじめに

２．材料と方法

ニワトリは発生学研究における優れたモデル動物（１）細胞の培養でありながら、
研究手法上、いくつかの欠点がある。

ヒト胎児腎細胞由来細胞株 HEK293 は、
ダルベッコ

1 つは、簡便に遺伝子を導入する方法が、未だに確による改変培地（DMEM, Sigma）に非働化したウシ胎

立されていない点である。哺乳類では、マイクロイ児血清（FBS、Hyclone）10%および抗生物質（最終濃ンジェクション法が確立されてから久しく、高い効

度：50 units/mL ペニシリン、50μg/mL ストレプト率でトランスジェニックマウスを作製することが可マイシン、Nacalai Tesque）を添加したもので培養能である。もう 1 つは、簡便に遺伝子を破壊する方した。また、培養にはブタ腱由来タイプⅠコラーゲ法が確立されていない点である。哺乳類では、胚幹ンでコートされたプラスチックディッシュ（Asahi（ES）細胞を利用したノックアウトマウスの作製手

Glass）を使用した。

法が確立されており、すでに研究における必須実験（２）鳥類アデノ随伴ウイルス（AAAV）ベクターのとみなされている。本研究では、これらの欠点を解構築消するため、CRISPR/Cas9 系が機能する鳥類アデノ

鳥類アデノ随伴ウイルス（AAAV）
ベクターpA3V-GFP、随伴ウイルス（AAAV）ベクターの確立を試みた。ア

カプシド発現ベクターpCA3V-RC、およびヘルパーベ

デノ随伴ウイルスベクターでは、導入された遺伝子

クターpSR449B は、Chiorini 博士（NIH）より譲渡いがゲノムに組み込まれる確率は必ずしも高くない。

ただいた 1,2) 。ゲノム編集用ベクターpX602 は

しかしながら、CRISPR/Cas9 法を利用した相同組換

Addgene 社から入手した 3)。

えによる遺伝子導入が極めて有効であることが示さ

欠損型鳥類アデノ随伴ウイルス（AAAV）ベクター

れている。これにより、単に遺伝子を導入するだけ

pA3V-GFPd4 および pA3V-GFPd5 は、pA3V-GFP をもとでなく、狙った場所に組込むことが可能になる。まに作製した 4)。ゲノム編集用鳥類アデノ随伴ウイル

た、CRISPR/Cas9 法はもともと遺伝子破壊に有効なスベクターは、以下の方法により構築した。hSaCas9

方法として開発されているため、遺伝子を破壊する

遺伝子および gRNA 発現ユニットは、
ゲノム編集用ベ

点でも、効果的に機能することが期待できる。

クターpX602 を制限酵素 AgeI(Nippongene)およびNotI(NEB)により切断して得られた約 4.5 kb の DNA- 148 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

断片を使用した。
pA3V-GFPd4 および pA3V-GFPd5 は、キングには PVDF Blocking Reagent for Can Get

制限酵素 BsmI(NEB)および NotI(NEB)で切断してSignal（TOYOBO）を、一次抗体および二次抗体の希NotI-SphI-XbaI-SpeI-BsmI リンカーを導入するこ釈には Can Get Signal Immunoreaction Enhancerとで、SV40 ポリ A シグナル配列を除いた。これらをSolution（TOYOBO）を使用した。一次抗体は、抗 HA

制限酵素 AgeI(Nippongene)および NotI(NEB)により抗体（Sigma）を 1,000 倍希釈で、二次抗体は、HRP

切断し、前記の DNA 断片を導入することで、標識抗マウス IgG 抗体（GE Healthcare）を 10,000

pA3Vd4-hSaCas9 および pA3Vd5-hSaCas9 を作製した。

倍希釈で使用した。検出には、ECL Prime Western

さらに、これらを制限酵素 BssHII(TOYOBO)で切断す

Blotting Detection Reagent（GE Healthcare）を使ることで、ゲノム編集用 AAAV 配列を含む DNA 断片を用し、ルミノ・イメージアナライザーLAS-1000 Plus

切り出した。これを、ゲノム編集用ベクターpX602（Fuji Film）により解析を行った。

を制限酵素 BssHII(TOYOBO)で切断して得られたベ（５）遺伝子組換えウイルスの調製

クターDNA の導入することで、制限酵素 BsaI の認識

HEK293 細胞は、遺伝子導入の前日に植え継ぎ、遺配 列 を 1 ヶ 所 取 り 除 い た pA3Vd41-hSaCas9 、伝子導入時にディッシュ表面を 70%程度おおうよう

pA3Vd42-hSaCas9 、 pA3Vd51-hSaCas9に調整した。遺伝子の導入には、遺伝子導入試薬

お よ び

pA3Vd52-hSaCas9 を作製した。

（PEImax、Polysciences、1 mg/mL、pH7.0）を使用

塩基配列の確認には、シーケンシングキット

した。10cm ディッシュの場合、使用するプラスミド（BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit、DNA（ウイルスベクター、カプシド発現ベクター，ヘApplied Biosystems）を使用し、3100-Avant Genetic

ルパーベクター）は 30μg、
PEImax は 30μL とした。

Analyzer（Applied Biosystems）により解析を行っ培養液に試薬で処理した DNA を添加した後、そのまた．

ま約 72 時間培養を続け、遺伝子組換えウイルスの調（３）細胞への遺伝子導入製を行った。培養液約 10 mL に、0.5M EDTA を 125

HEK293 細胞は、遺伝子導入の前日に植え継ぎ、遺μL 加えることで、細胞をディッシュ底面からはが伝子導入時にプレート表面を 70%程度おおうようにして回収した。ウイルス調製は、ウイルス抽出試薬調整した。遺伝子の導入には、遺伝子導入試薬（AAVpro Extraction Solution、Takara Bio）を使（HilyMax、Dojindo）を使用した。6 well プレート

用し、プロトコルに従って行った。ウイルス液は、の場合、1 well あたり使用するプラスミド DNA は 4使用時まで 4℃で保存した。

μg、HilyMax は 12μL とした。培養液に試薬で処理（６）遺伝子組換えウイルスの定量した DNA を添加した後、そのまま約 48 時間培養し、遺伝子の発現を検討した。

遺伝子組換えウイルスの定量は、リアルタイム
PCR 法により行った。ウイルス DNA の調製は、ウイ

プラスミド DNA は、プラスミド DNA 精製キット

ルス定量キット（AAVpro Titration Kit ver 2.0、（NucleoBond Xtra Midi、Macherey-Nagel）を使用

Takara Bio）を使用し、プロトコルに従って行った。

して調製した。

PCR は、CMV プライマー（CMV_F; 5’-CATGGTGATG（４）免疫ブロッティング

CGGTTTTGG-3’、CMV_R; 5’-CAATGGGGTGGAGACTTGGA

細胞を細胞溶解液（CelLytic-M、Sigma）で処理し-3’）を用い、 SYBR Premix ExTaq II（Takara Bio）て得られた試料は、5 分の 1 量の 6×サンプリングを使用し、プロトコルに従って行った。反応及び解バッファーと混合した。
これを 100℃2 分間熱処理し析には、Sequence Detection System PRISM 7000

た後、各試料 15μL を SDS ポリアクリルアミド電気（ Applied Biosystems ）を使 用した。定 量は、泳動（Mini-PROTEAN TGX Any kD 15 wells、Bio-Rad）

pA3V-GFP を鋳型として検量線を作成し、ウイルスゲに供した。泳動後は、タンパク質を PVDF メンブレン

ノム（vg）の絶対量を算出した。

（Trans-Blot Turbo、Bio-Rad）に転写した。ブロッ- 149 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図 1 pA3Vd4-hSaCas9 および pA3Vd5-hSaCas9 の制限酵素地図- 150 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

３．結果（１）ゲノム編集用 AAAV ベクターの構築
欠 損 型 AAAV ベ ク タ ー pA3V-GFPd4 お よ び
pA3V-GFPd5 は、ゲノム編集用の hSaCas9 遺伝子および gRNA 発現ユニットを導入するために、pA3V-GFP
から不要な配列を取り除いたものである。
pA3V-GFPd5 については、
pA3V-GFPd4 から CMV エンハ
ンサー配列も取り除くことで、プロモーター配列の最小化を行っている。さらに、これらのベクターにある SV40 ポリ A シグナル配列を除いて、複数の制限
酵素認識部位を挿入することで、遺伝子の構築を容易にした。これらのベクターから、GFP 遺伝子を除いて、ゲノム編集用の遺伝子を導入した
pA3Vd4-hSaCas9 および pA3Vd5-hSaCas9 を作製した（図 1）。これらについては、HEK293 細胞に導入し、
hSaCas9 タンパク質の一過性の発現を免疫ブロッテ
ィングで確認した（図 2）。
しかしながら、これらのベクターは本来、gRNA の配列を導入するための2ヶ所のBsaI 認識配列の他に、
アンピシリン耐性遺伝子上に1ヶ所のBsaI認識配列があるため、このままの状態では使用できない。そこで、
アンピシリン耐性遺伝子上に BsaI 認識配列を含まないゲノム編集用ベクターpX602 とプラスミド
ベクターのバックボーンを置換することとした。この際に、制限酵素 BssHII 認識部位を利用したため、挿入配列のバックボーンに対する方向性が異なる 2
種類のベクターが構築されることとなり、それぞれ
pA3Vd41-hSaCas9

お よ び

pA3Vd42-hSaCas9 、

pA3Vd51-hSaCas9 および pA3Vd52-hSaCas9 とした。
これらについても、HEK293 細胞に導入し、hSaCas9
タンパク質の一過性の発現を免疫ブロッティングで確認した（図 2）。

図 2 抗 HA 抗体による免疫ブロッティング

pA3Vd4-hSaCas9 、 pA3Vd41-hSaCas9

お よ び

pA3Vd42-hSaCas9 は、ITR を含むサイズが約 5.0 kb
であり、この上限を超えている（図 1）。一方、
pA3Vd5-hSaCas9 、 pA3Vd51-hSaCas9

お よ び

pA3Vd52-hSaCas9 は、ITR を含むサイズが約 4.7 kb
であり、上限内に収まっている（図 1）。実際に、これらのウイルス産生能を確認したところ、これらの元となった pA3V-GFPd4（ITR を含むサイズが約 2.0
kb）
および pA3V-GFPd5（ITR を含むサイズが約 1.6 kb）と比較し、pA3Vd5 系で 6 割程度、pA3Vd4 系でさらにその 6 割程度のウイルス産生が確認された（表 1）。

（２）遺伝子組換えウイルスの産生
hSaCas9 タンパク質の一過性の発現が確認できた
6 つのゲノム編集用 AAAV ベクターについて、遺伝子
組換えウイルスの産生能を検討した。アデノ随伴ウ
イルスは、そのゲノムサイズが約4.7 kb であるため、
ITR 配列を除いて、置換可能な DNA 断片のサイズは、
約4.5 kbがその上限となる。
このサイズを超えると、ウイルスの産生能及び感染効率が著しく低下する。

- 151 -

４．考察
pA3Vd4 系および pA3Vd5 系のゲノム編集用 AAAV ベ
クターでは、いずれも hSaCas9 タンパク質の発現が確認されており、遺伝子の構造には問題はないと考えられる。また、その発現量も大きな差は認められなかった（図 2）。pA3Vd4 系および pA3Vd5 系はプロ
モーター配列が異なっており、エンハンサー配列を【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

含まない pA3Vd5 系で、
hSaCas9 タンパク質の発現低下が懸念されたが、そのような傾向は認められなかった。また、同
じプロモーター配列を使用した鳥類細胞でのプロモーター活性の検討でも、これらの配列
間で、レポーター遺伝
子発現に大きな違いは認められなかった 5)。

表 1 ベクターのサイズとウイルス産生量
VectorSize(bp)*107 Vg/µL*107 Vg/µL*107 Vg/µL*107 Vg/µL

pA3V-GFPd4

4,861

14.1

14.7

1.40

ND

pA3V-GFPd5

4,520

12.7

12.1

3.23

ND

pA3Vd4-hSaCas9

7,889

5.0

5.4

0.50

ND

pA3Vd5-hSaCas9

7,548

8.0

9.2

0.90

ND

pA3Vd41-hSaCas9

7,730

ND

ND

ND

0.61

pA3Vd42-hSaCas9

7,730

ND

ND

ND

0.50

pA3Vd51-hSaCas9

7,389

ND

ND

ND

1.32

pA3Vd52-hSaCas9
7,389
ND
ND
ND
1.20
ND はデータなしを示す。ウイルスの産生量は vg(virus genome)のコピー数として、各 1 バッチでのデータを示している。遺伝子導入効率やウイルス DNA の調製法の違いにより、バッチ毎のウイルス産生量（定量値）が大きく異なる。

ウイルス産生能に関しては、サイズがより大きな pA3Vd4 系が pA3Vd5
系に較べて劣るという予想通りの結果になった（表引用文献1 ）。 元 の ベ ク タ ー で あ る pA3V-GFPd4 お よ び

1) Bossis I, Chiorini JA. Cloning of an avian

pA3V-GFPd5 との比較でウイルス産生能が低下した

adeno-associated virus (AAAV) and generationのは、そのサイズの違いによるだけでなく、使用しof recombinant AAAV particles. J Virol. 2003

た DNA のモル数の違いによるところも大きいと考え

Jun;77(12):6799-6810.

られる。DNA を導入するにあたっては、DNA の使用量

2) Smith RH, Afione SA, Kotin RM. Transposase

を一定に保っているため、ベクターのサイズが大き-mediated construction of an integrated adeno

くなると、相対的に使用するモル数が少なくなる。

-associated virus type 5 helper plasmid.

この違いがウイルス産生量に少なからず影響を与え

Biotechniques. 2002 Jul;33(1):204-211.

ていると推測される。pA3Vd4 系と pA3Vd5 系の比較

3) Ran FA, Cong L, Yan WX, Scott DA, Gootenberg

では、そのサイズの違いは 5％程度であり、モル数

JS, Kriz AJ, Zetsche B, Shalem O, Wu X, Makarova

への影響はほとんどないと考えられる。そのため、

KS, Koonin EV, Sharp PA, Zhang F. In vivo genome

ウイルス産生能の差は、サイズが上限を超えるか超

editing using Staphylococcus aureus Cas9.

えないかに依存してると推測される。

Nature. 2015 Apr 9;520(7546): 186-191.

これらの結果より、ゲノム編集用 AAAV ベクターと4) 工藤季之「鳥類アデノ随伴ウイルス（AAAV）ベク

しては、pA3Vd5 系がより優れていると考えられる。

ターによる鳥類のゲノム編集」2016 年、公益財団

今後は、これらのベクターに gRNA 配列を挿入し、ゲ

法人両備 園記念財団、生物学に関する試験研究

ノム編集活性を比較することで、最終的に最も優れ論叢（第三十一集）、印刷中

たベクター系の選別を行う予定である。

5) 工藤季之「鳥類細胞における一過性遺伝子発現のためのプロモーターの比較」2016 年、岡山実験動

謝辞

物研究会報第 32 号、印刷中

本研究にあたり、公益財団法人ウエスコ学術振興財団による研究助成を賜りましたことを、深く感謝
申し上げます。また、本研究を行うにあたりご協力頂きました近藤麻衣氏に、心から感謝いたします。

- 152 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

高脂肪食摂取による肥満の形成は Gas6 阻害により抑制できるか？
倉敷芸術科学大学 生命科学部 健康科学科
椎葉 大輔
[概要]
本研究では，「高脂肪食摂取による肥満形成にはGrowth-arrest specific gene 6 (Gas6)が関与する」との仮説のもと，高脂肪食摂取マウスに対するAxl-Fc投与による脂肪組織肥大抑制効果について，体重の変化から検討した。その結果，Axl-Fcを投与したマウスでは，対照物質であるIgG-Fcを投与したマウスに比べ，体重が低値を示す傾向が観察された。この結果は，Gas6の働きを阻害することにより，脂肪組織の肥大を抑制する可能性を示唆するものであった。

[緒言]ていることが知られている。この炎症性因子は，脂近年，経済発展による飽食化や便利な生活活動

肪組織に浸潤した免疫細胞のみならず，肥大した脂がもたらす身体運動不足などによる生活習慣病

肪細胞からも産生されることが知られている。この（life-style related diseases）が増加した。肥満症

ことは逆説的に，脂肪細胞（組織）の肥大を抑制す

は、
生活習慣病の初期に観察され，その後の糖尿病、ることが出来れば，これら炎症応答亢進を抑制し，脂質異常症、高血圧症、動脈硬化症などの発症に大重度生活習慣病への進展を阻害できる可能性を示唆

きく影響する。また、世界の肥満人口が先進国を中している。

心とした増加傾向であることが社会的な問題となっ脂肪組織の肥大は，構成する脂肪細胞自身の肥大ており，我が国も例外ではない。肥満症自身は，脂と脂肪細胞数の増加によりなされる。脂肪細胞の増

肪組織の肥大を除いて強い自覚症状はないものの，

殖は脂肪組織幹細胞や脂肪前駆細胞を中心とした細糖尿病や高血圧症等への進展を考えれば，患者自身

胞集団からなされていると考えられるが，その制御の QOL のみならず，医療費を含む社会保障の観点

機構は明らかではない。Gas6（Growth arrest -から鑑みても，早急に対処すべき課題である。

specific gene 6）は、分泌型のタンパク質であり、肥満の原因は、主に過食、運動不足であることが1977年、Schneiderらによって、NIH3T3細胞の増知られている。食事においては、特に脂質の過剰摂殖停止時に特異的に発現される遺伝子（growth

取が問題とされている。これは、脂質から得た摂取

arrest-specific gene）の一つとして発見された。先エネルギーが生活活動に必要な消費エネルギーを上行研究では、Gas6が標的細胞膜上のGas6受容体群回ることによって、余剰エネルギーが脂肪組織に蓄（Tyro3, Axl, Merの3種類で構成，TAM受容体群）

積されるからである。実 験 動 物 を 用 い た 研 究 でに作用して，細胞死を抑制する効果を示すことが報

は 、脂質エネルギー比の高いエサほど肥満を発症す

告されている。申請者は平成26年度ウエスコ学術振ることが報告されている。これにより、同量のエネ

興財団助成での成果として，高脂肪食を摂取させた

ルギーを摂取しても、脂質を過剰摂取することで肥マウスの脂肪組織におけるGas6遺伝子発現が，脂肪満になりやすいことが示されている。また，高脂肪組織において亢進する傾向を観察した。さらに，脂食摂取による肥満では、脂肪組織において、炎症反肪細胞株であるNIH-3T3-L1細胞を用いた検討にお応が観察される。これらの炎症応答にはTNF-αやいて，分化が進むことによりGas6産生が亢進するこ

MCP-1などの炎症性因子が関与していることが知と，Gas6阻害剤であるAxl-Fcを培養液中に添加するられている。
これらの応答は，インスリン抵抗性や，ことにより，死細胞割合が増加することを明らかとその結果引き起こされる糖尿病の発症に深く関与しした。このことから，Gas6の働きを生体内で阻害す- 153 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

ることにより，脂肪組織の肥大を抑制できる可能性

ス毎に算出した後，それぞれの群を t test にて分析が考えられた。

した。有意水準は 5％とした。

そこで，本研究では，マウス高脂肪食摂取性肥満
モデルマウスを用いて，Axl-Fcによる生体内Gas6

なお本研究は，倉敷芸術科学大学動物委員会の審査・承認を経て実施された。

阻害による脂肪組織肥大抑制効果について，体重変[結果および考察]

化から検討を行った。

すべてのマウスにおいて，高脂肪食摂取により摂[方法]

取期間に依存して，体重の増加が観察された。この動物実験プロトコール

ことは，先行研究および平成 26 年度成果と同様の

雄性 6 週齢の C57BL/6J マウスを同一ケージで結果を示しており，本研究が適切に実施されている

13 週間高脂肪飼料を摂取させ，高脂肪食性肥満マウことを示すものであった。

スを作成した。即ち，マウス 7 匹を 13 日間，予備Gas6 阻害剤投与の影響について，Axl-Fc 投与マ

飼育をした。予備飼育後，マウスに 13 週間高脂肪

ウスにおいて，対照群である IgG-Fc 投与群と比較

飼料を摂取させた。摂取飼料はカロリー当り 60%のして，体重が低値を示す傾向が観察された（図 1A）。

脂肪含有する高脂肪飼料（5.2kcal/g）とした。飼料

一方でこの差は統計学的に有意な水準ではなかった。

摂取および給水は、自由摂取とした。

さらに，この体重変動について曲線下面積（AUC）

阻害剤投与は，以下のプロトコールで行った。予について検討した（図 1B）。AUC は，ある物質の備飼育期間中に，マウスを Gas6 阻害剤である

曲線の積分値を示すものであり，薬剤の血中濃度のAxl-Fc を投与する群（Axl-Fc 群 : n=4）および対照評価等で用いられる。
その結果，体重実測値と同様，物質である IgG-Fc を投与する群（IgG-Fc 群 : n=3）

低値を示す傾向が観察された（図 1B）。

の 2 群に分け，マーキングを行った。その後，高脂本研究において，Axl-Fc による体重増加抑制効果

肪飼料負荷開始時に，Axl-Fc および IgG-Fc を投与が統計学的な有意差が観察される程には見られなかした。Axl-Fc および IgG-Fc の投与手法は，徐放性った理由については，以下の 2 点が考えられた。1

ゼラチンハイドロゲルに封入し，腹腔内へ投与する

つめとして，高脂肪食負荷の第 5 週目において観察方法を用いた。徐放性ゼラチンハイドロゲルは，生された，一過性の体重減少が関係している可能性で体内でゼラチンが分解される際に封入されている物ある。本研究で用いた 60%脂肪含有高脂肪飼料は，質が拡散することが知られており，長期間の阻害剤

飼料自体の酸化の影響から長期間交換をしない場合，投与などに用いられる徐放担体である。投与量は 1

摂食量が低下することが知られている。本研究では匹あたり Axl-Fc/IgG-Fc 5ug とし，2 週間に 1 回投週 2 回の割合で飼料の交換を行っていたが，古い飼与した。Axl-Fc/IgG-Fc 投与は第 6 週目までの計 3料の残存など，何らかの影響で一時的に摂食量が低回行った。体重は毎週行った。13 週間飼育した後に，下し，体重減少が引き起こされ，それまでに観察さ

EDTA 採血および安楽死処置ののち，組織を採取しれていた差がつぶれてしまった可能性が考えられた。

た。血液サンプルは遠心分離ののち，血漿を回収し実際に，体重低下が起こる前週（第 4 週）までの体て分析まで凍結保存した。採取した組織は液体窒素

重変動の解析を行ったところ，実測値体重およびで直ちに凍結させた後，分析まで-80 C で保存した。

AUC とも Axl-Fc 投与群が IgG-Fc 投与群に比べ，統計学的に有意に低値を示した（p<0.05, 図記載な
し）
。

統計処理
実験結果は平均値±標準値偏差で示した。体重の2 つめとして，
Axl-Fc 投与量の不足が考えられた。

比較は二元配置分散分析ののち、多重比較検定とし本研究においては，Axl-Fc および IgG-Fc ともゼラて Bonferroni test を行った。曲線下面積は各マウ

チンハイドロゲルとともに腹腔内投与し徐放させて- 154 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

いる。一方で，腹腔に投与（徐放）された水溶性物

S, Saitoh S, Murakami H, Takagawa Y,

質は，腹膜より吸収され全身循環系に乗ることが知Shimamoto K. Correlations of adiponectin level

られている。このことから，局所投与に比べ，全身with insulin resistance and atherosclerosis inに物質が拡散することから，十分量を投与しない場

Japanese male populations. Clin Endocrinol (Oxf).

合，生体内濃度が低くその効果が十分に観察されな

2004; 61: 753-9.

い可能性が考えられた。さらに高脂肪食摂取マウス
においては，著しく体重増加することから，通常成Hotamisligil, G. S.: Inflammation and metabolic

体マウスよりも，より多量の投与が必要となる可能

disorders. Nature, 444, 860-867 (2006)

性も考えられた。
上記 2 点については，飼料交換頻度や交換方法，

Dandona P, Aljada A, Bandyopadhyay A：

Axl-Fc 投与量および経路等を再検討する必要性な

Inflammation：the link between insulin

ど，本研究における解決すべき課題を示すものであresistance, obesity and diabetes. Trends Immunol

るものの，その一方では肥満に対する Gas6 の治療

2004, 25：4-7.

標的としての有効性を示す極めて興味深いデータでSchenk, S., Saberi, M. & Olefsky, J. M.: Insulinあると考えられた。
以上，本研究により生体内で Gas6 の働きを阻害

sensitivity: modulation by nutrients andすることにより，脂肪組織の肥大を抑制できる可能inflammation. J. Clin. Invest., 118, 2992-3002性が示唆された。現在，本研究で採取した血液およ(2008)

び組織の分析を進めるとともに，本研究結果を受けて Gas6 阻害剤の投与量増加や脂肪組織局所への投与など検討も進めており，今後さらに詳細で明確な
Gas6 の影響について報告できるものと，鋭意研究を進めている。
[謝辞]
本研究を遂行するにあたり，助成課題として採択いただいた，(財)ウエスコ学術振興財団 山地弘理
事長をはじめ、選考委員の先生方および関係各位に心より深謝する。
[参考文献]
Takahashi M, Ikemoto S, Ezaki O: Effect of fat/carbohydrate ratio in the diet onobesity and oral
glucose tolerance in C57BL/6J mice. J Nutr Sci
Vitaminol 45: 583-593,1999
下田 純一, 濱本 高義. 2001 , Gas6 Deficient
Mice. 血栓止血誌, 12 : 514-521.
Higashiura K, Ura N, Ohata J, Togashi N, Takagi- 155 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】- 156 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

色素増感太陽電池を指向した含ケイ素化合物の合成
倉敷芸術科学大学

生命科学部 生命科学科

仲章伸

本研究ではジシラニル置換されたドナー-アクセプター型化合物の合成法を開発し、合成した化合物の色素増感太陽電池への応用、評価実験を行うことを目的とした。まず、チエニル基上のヘキシル基の位置が違う 2種類の化合物の合成を行い、紫外可視吸収スペクトルおよび蛍光発光スペクトルの測定を行った。その結果、分子内のベンゾチアジアゾール部とヘキシル基を持つチオフェン部との平面性の違いが、紫外可視吸収スペク
トルに大きく影響を与えることを明らかにした。また、これらの化合物を用いて色素増感太陽電池のセルを組
み立て、光電変換効率の算出も行った。

１、はじめに近年、エネルギーの不足、地球温暖化、炭素資源

合成ターゲットとしており、その反応を利用すれば、の枯渇の問題は、人類の未来に深く影を落としてき

色素増感太陽電池の酸化チタンナノ粒子電極に色素ている。その中で、化石燃料に依存しないエネルギ

を化学的に接着させることができ、非常に安定で耐ーとして、太陽光を有効利用するシステムの開発が久性の高いものを作ることが出来ると考えた。また、急務になっている。その高まりの中で、旧来の太陽

ケイ素の特徴を生かし、うまく分子をデザインする電池に対し、低コストで耐久性の高い色素増感太陽ことが出来れば、これまでにない光電変換を実現す

電池ならびに有機薄膜太陽電池の開発が注目されてることができるようになるのではないかと考えた。

きている。特に、色素増感太陽電池は、材料が安価

地球上に豊富に存在する原子であり、環境にやさしであること、製造プロセスが簡単であることから、

いケイ素の性質を明らかにし、これまで以上に使用発電コストを大幅に下げる可能性があるとされていすることが出来るようになれば、資源の有効利用とる。しかし、実用化には、耐久性や光電変換効率のいう観点からだけでなく、持続可能な科学技術の発向上など、様々な課題が残されている。そこで本研展の実現に対してもたいへん有意義なことであると究は、地球上に無尽蔵に存在する元素であり、環境考えられる。

への負荷が少ないケイ素を利用することにより、新規な色素増感太陽電池の作成を行った。当研究室で２、結果と考察のケイ素-ケイ素結合を有する化合物に関する基礎

まず、窒素気流下で 3-ヘキシルチオフェンを THF

研究により、紫外線を当てるとケイ素-ケイ素結合が溶液中で LDA(リチウムジイソプロピルアミド)を反ラジカル的に解裂することが明らかにされている。

応させリチオ化したのち、トリブチルチンクロライ

本研究は、ケイ素-ケイ素結合を有している化合物をドを反応させ、化合物(1)を得た(Scheme 1)。

- 157 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

Scheme 1

反応させ、化合物(4)を得た(Scheme 4)。
Scheme 4
n-Hex
Br

n-Hex
n-BuLi
S

S

n-Hex
O
B
S
O

cat. PdCl2(PPh3)2
Cs2CO3
THF:H2O = 5:1

THF 溶液中で化合物(1)と 4,7-ジブロモベンゾ

Li

THF

-1,2,5-チアジアゾールをパラジウム触媒存在下で4

THF 溶液中で化合物(4)と 4,7-ジブロモベンゾ

Stille カップリング反応を行い、化合物(2)を得た(Scheme 2)。

-1,2,5-チアジアゾールをパラジウム触媒存在下でScheme 2

鈴木-宮浦カップリング反応を行い、化合物(5)を得た(Scheme 5)。
Scheme 5化合物(2)を THF 溶液中で NBS (N-ブロモスクシンイミド)と反応させ、化合物(3)を得た(Scheme 3)。
Scheme 3

また、化合物(5)を THF 溶液中で NBS (Ｎ-ブロモス
ク シ ン イ ミ ド ) と 反 応 さ せ 、 化 合 物 (6) を 得 た(Scheme 6)。
Scheme 6
n-Hex n-Hex
2 NBS
5

また、ヘキシル基の位置が違う同様の化合物の合

CHCl3

Br

S

S
N

成を次のように行った。3-ヘキシル-5-ブロモチオフ

Br

N
S
6

ェンを THF 溶液中で－80℃で n-ブチルリチウムを反応 さ せ リ チ オ 化 し た の ち 、 2- イ ソ プ ロ ポ キ シ

2,5-ジブロモチオフェンをジエチルエーテル溶液-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロランを中でｎ -ブチルリチウムを反応させリチオ化したの- 158 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

ち、ペンタメチルクロロジシランを反応させ、化合

窒素気流下、THF 溶液中で化合物(6)と化合物(8)を物(7)を得た(Scheme 7)。

パラジウム触媒存在下で Stille カップリング反応をScheme 7

行い、化合物(10)を得た(Scheme 10)。
Scheme 10

2,5-ジブロモチオフェンをジエチルエーテル溶液
中で ｎ -ブチルリチウムを反応させリチオ化したの
ち、トリブチルチンクロライドを反応させ、化合物(8) を得た(Scheme 8)。
Scheme 8

次に化合物(9)、(10)の紫外可視吸収スペクトル及び蛍光発光スペクトルを測定した。結果は下記のようになった。スペクトル溶媒は全て 1,4-ジオキサン
窒素気流下、THF 溶液中で化合物(3)と化合物(8)を用いた。

をパラジウム触媒存在下で Stille カップリング反応

化合物 (9)、(10) のヘキシル基の位置の違いが分子を行い、化合物(9)を得た(Scheme 9)。

内のベンゾチアジアゾール部とヘキシル基を持つチオフェン

Scheme 9部との平面性の違いに影響を与えたものと考えられる。立
n-Hex

n-Hex
Br

S

Br

S
N

体障害の少ない化合物(9)は分子の平面性が高まり化合+2 eq. 8物(10)と比べ共役が拡張され、紫外可視吸収スペクトルNの極大吸収がレッドシフトしたと考えられる(Table 1)。

S

Table 13
cat. Pd2(dba)3p(o-tol)

THF
n-Hex

n-Hex
Me3SiMe2Si

S

S

S
N

S

紫外可視吸収SiMe2SiMe3

N

クトル

9

- 159 -

化合物 (10)355,503 nm

343,456 nm

598 nm

600 nmスペクトル
蛍光発光スペS

化合物 (9)【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

紫外可視吸収スペクトル

Absorption

化合物 (9)化合物 (10)

1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
250

300

350

400

450

500

550

600

650

700

750

Wavelength (nm)

蛍光発光スペクトル
化合物 (9)化合物 (10)Emission

1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
400

450

500

550

600

650

Wavelength (nm)作成した。
化合物(9)、(10)を色素として用いた色素増感太陽電2)：化合物(9)、(10)を 11.9 mg を量りとり、蒸留し池を製作し評価実験を行った。太陽電池はそれぞれ 2 種類、たクロロホルム 6ml 加え 2g/L になるよう調製した。

用意した。一つは光反応を行うもの、もう一つは光反応と比3)：調製した色素溶液を光反応させた電極と反応さ較するために光を当てずに暗浸漬させたものを製作した。

せないものの 2 つを 3 ml ずつスクリュー管瓶にアル・色素増感太陽電池セルの製作

ゴン置換して用意した。

1)：FTO (フッ素ドープ酸化スズ)の付着した面へ、

4)Ⅰ：光反応させる電極は色素溶液に浸したのちドクターブレード法を用いてチタニアペーストを塗

TiO2 の光吸収がある 400nm 以下の光をカットした光った。その後、チタニアペーストを塗った電極を源を用いて 40 分間、光反応を行なった。反応後、ク

500℃で焼成し、チタニアコーティングの FTO 電極を

ロロホルムで洗浄し色素の吸着を確認した。その後、Table 2- 160 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

化合物 (9)化合物 (10)

光反応

暗浸漬

光反応

暗浸漬

光電変換効率 (PCE)

0.26％

0.38％

0.20 %

0.27%

解放電圧 (Jsc)

1.06 mAcm-2

1.61 mAcm-2

1.49mAcm-2

1.65mAcm-2

短絡電流 (Voc)

368 mV384 mV

255mV

291mV

フィルファクター (FF)

0.68

0.62

0.55

0.57

光が当たらないようにアルミホイルで覆って室温で物をデザインし、合成したいと考えている。

デシケーター中、真空乾燥させた。
Ⅱ：暗浸漬させる電極は色素溶液に浸した後、光が謝辞
本研究は、ウエスコ学術振興財団の助成により実当たらないよう直ちにアルミホイルで完全に覆い、
24 時間室温で浸漬させた。浸漬後、クロロホルムで施されたものである。ここに謝意を表します。

洗浄し色素の吸着を確認した。
5)：TiO2 に吸着した色素面を 5 mm×5 mm の大きさに参考文献カットした。

[1] R. West, A title, in: Z. Rappoport, Y. Apeloig (Eds.),

6)：Pt 電極が付いたガラスにパラフィルムで作った

The Chemistry of Organic Silicon Compounds, vol. 3,

スペーサーを貼り付け、そこへ電解液を入れ、上かWiley, New York, 2001 (chapter 9).

ら色素の付いた FTO 電極を気泡が入らないよう注意[2] D.Y. Son, A title, in: Z. Rappoport, Y. Apeloig (Eds.),

しながら挟んでセルを製作した。

The Chemistry of Organic Silicon Compounds, vol. 3,7)：製作したそれぞれの色素増感太陽電池の性能評

Wiley, New York, 2001 (chapter 13).

価を行った。結果は上記のようになった。(Table 2)
これらのことを踏まえ化合物(9)、(10) を光反応させた電池と暗浸漬させた電池の光電変換効率の差を生んだ原因の一つとして色素溶液のチタニアコー
ティングの FTO 電極への反応時間の違いが考えられる。チタニアコーティングの FTO 電極と色素が触れる時間が増えれば吸着量が増え、反応時間に比例した光電変換効率の差が生まれたと考えている。
今後は、さらに長波長領域に吸収極大を持つ化合- 161 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

効力に「はずれ」が生じない新規インフルエンザワクチン製造株の開発
川崎医科大学・微生物学教室
内藤 忠相
世界中で脅威をふるうインフルエンザは、水禽類を自然宿主とする人獣共通感染症であるため、天然痘ウイルスのように撲滅できないと考えられている。最も理想的なインフルエンザ対策は、感染および重症化を未然に予防するワクチン接種であるが、現行の HA ワクチンは万能ではない。その理由の一つとして、ワクチン製造時における抗原性変異の影響が挙げられる。
本研究の目的は、毎年のインフルエンザワクチンの効力に「はずれ」が生じない選定を可能にする「遺伝的安定性に優れた母体ウイルス株の開発」である。変異が入りにくいワクチン母体株が開発できれば、ウイルス
増幅時における抗原性変異を考慮せずに済み、最大限の効果が期待できるワクチン株を効率よく選択できる。
具体的には、ウイルスゲノム複製時において「忠実性が向上した改良型ポリメラーゼ」を単離して、変異導入
効率を低下させたワクチン母体株の開発を行った。その結果、ウイルスポリメラーゼの PB1 サブユニットを改変することによってウイルス増幅時における変異導入効率を低下させることに成功し、鶏卵を用いてウイルス
継代を繰り返しても HA タンパク質に変異が入りにくいワクチン製造株を作製することができた。

インフルエンザウイルスのゲノムは、８本に分節

一方で、インフルエンザウイルス RNA ポリメラー化された一本鎖マイナス鎖 RNA である。ウイルスゲ

ゼの高い変異導入効率は、ワクチン製造時においてノムからの転写および複製反応はウイルス RNA 依存

抗原性変異の問題を引き起こす。ワクチン株作製に性 RNA ポリメラーゼによって行われ、ウイルス mRNA

は、高増殖性のワクチン製造株が使用される。毎春

からタンパク質が翻訳されてウイルス増殖が進行すに次年度シーズンのウイルス流行予測が行われ、選る。ウイルスポリメラーゼは、PB2、PB1 および PA

定された流行ウイルスの抗原となる HA および NA との３つのサブユニットから構成されており、分節化呼ばれるウイルスタンパク質をワクチン製造株に組ゲノムの１番から３番のそれぞれにコードされてい込む事でワクチン種株が作製され、発育鶏卵で種株る。PB1 サブユニットにはポリメラーゼモチーフがを増幅し製品化されている。

備わっており、RNA 伸長反応を触媒するポリメラーゼ酵素の本体として機能している。

具体的には逆遺伝学的手法を用いて、現行のワクチン製造株である高増殖性 A 型インフルエンザウイ

インフルエンザウイルスを含むウイルス RNA ポリ

ルス PR8 株（A/Puerto Rico/8/1934 H1N1 型）に、メラーゼの性質として、ウイルスゲノム複製の際に次年度に流行予測されたウイルス株の HA と NA 遺伝

誤った塩基を取り込む効率が DNA ポリメラーゼと比子を組込むことでワクチン株を作製するが、株によ10較して非常に高い。DNA ポリメラーゼは、10 塩基内っては鶏卵内増殖に馴化し、HA や NA タンパク質のに数塩基の割合でエラーが起こるのに対して、イン抗原部位に変異が導入される場合がある。そのようフルエンザウイルスでは約１万塩基に 1 つの割合でなウイルスは、抗原性および増殖性が優良でもワクエラーが導入されると考えられている。ゲノム複製

チン候補株からは除外される。よって、ワクチン株

過程における RNA ウイルスのこのような高い変異導には、製造時に変異が入らず抗原性が変わらないこ

入効率はウイルスゲノムの多様性を生み出し、薬剤とが求められる。

耐性能の獲得や宿主免疫機構からの回避、および宿主特異性の拡大戦略に寄与している。

そこで本研究では、ウイルスゲノム複製時において「忠実性が向上した改良型ポリメラーゼ」を単離- 162 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

して、ウイルス増殖時において変異導入率を低下さ

アミノ酸置換が導入され抗原性変異が起きたが、せたワクチン製造株を開発する。ワクチン製造株のPB1-V43I ワクチン株では増殖馴化変異のみが導入

変異導入効率を低下させることができれば、抗原性

され抗原性は保たれていた。

変異の影響を考慮せずに済み、ワクチン開発および一方でウイルスの一般的な性質として、ポリメラ製造の迅速化に大いに貢献することが期待できる。

ーゼの忠実性を向上させるとウイルスの増殖能力は

申請者は、近年報告されたインフルエンザウイル

低下する。その理由は、ゲノム複製時において塩基ス RNA ポリメラーゼの結晶構造解析等の研究成果をを取り込む際の正確性が向上することで、RNA 鎖伸

基盤情報として、現行のワクチン製造株である高増長の速度が低下する事に起因する。そのため、高忠

殖性 PR8 ウイルスの高忠実化誘導を試みた（図１）。

実性ポリメラーゼをワクチン製造株に応用するには、

具体的には、PB1 タンパク質の 43 番目のアミノ酸でウイルスの高増殖性能を維持することが必要である。

あるバリン残基（Val）をイソロイシン（Ile）に置

PB1-V43I 置換を施したワクチン候補株の増殖能力換した改変ウイルス（PB1-V43I ウイルス）を作製しは元株と同程度であることを確認しており、現在はた。そして、発育鶏卵を用いて PB1 野生型ウイルス

高忠実性ワクチン製造株としてパンデミックワクチと PB1-V43I ウイルスを増幅させて変異導入効率のン開発への実用化を検討中である。

比較検討を行った。増幅後のウイルス粒子からウイ

近年 H7N9、H6N1、H9N2 および H10N8 などの亜型にルスゲノムを抽出し、次世代シーケンサーを用いて属するトリインフルエンザウイルスがヒトへ直接感

エラー頻度を算出した結果、PB1-V43I ウイルスの変染する事例が次々と報告されており、今後そのよう異導入効率は、非置換型の元株と比較して半分に低なウイルスがヒト－ヒト感染に関わる変異を獲得す下していた。すなわち、PB1-V43I ウイルスは変異のることでパンデミックを引き起こす可能性が懸念さ

入りにくい性質を獲得し、ワクチン製造の迅速化にれている。しかしながら、現状ではそのような新型

資する新規高忠実性ワクチン製造株と考えられた。

ウイルスの出現を事前に予測することはほぼ不可能

さらに、PB1-V43I ウイルスを母体として、2009

であり、パンデミックウイルスワクチンの製造は「流

年のパンデミック株である A(H1N1)pdm09 の HA と NA行後」に開始せざるを得ない。従って、パンデミッ

遺伝子を組込んだワクチン候補株を作製し性状解析

クワクチン株の作製を効率良く行うことは極めて重を行った。その結果、PR8 元株を用いて作製したワ要であり、高忠実性ワクチン製造株を応用すること

クチン株では増殖馴化変異と共に HA の抗原部位にでワクチン開発の迅速化が期待できる。

- 163 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

HHTLV-1 由来の HBZ 蛋白を標的とした新規 HTLV-1 関連疾患の発症予防・治療法に関する研究
川崎医科大学 微生物学教室
塩浜 康雄
ヒト T 細胞白血病ウイルス 1 型（Human T cell leukemia virus type 1: HTLV-1）のマイナス鎖にコードされる HBZ は、HTLV-1 感染症における発がん・慢性炎症形成双方の原因遺伝子であるが、従来は優れた抗体が存在しなかったため、生体内での発現量が極めて低い HBZ 蛋白の発現と病態との関連は不明であった。本研究では、新規に取得した抗 HBZ 単クローン抗体を用いて、患者生体内の HBZ 蛋白質発現量および抗 HBZ 抗体価を評価した。ATL 患者、HAM 患者、無症候性キャリアー（AC）の末梢血単核球（PBMC）中のHBZ 蛋白量及び血漿中の抗 HBZ 抗体価を測定し、HBZ mRNA 発現量との関連を解析した。急性型 ATL(n=5)の 3 検体で HBZ 蛋白の発現が検出可能であったが、HAM（n=10）および AC（n=4）の検体では検出できなかった。血漿中 HBZ 抗体は一部の検体でのみ陽性であった(ATL 16.7%, HAM 10.8%, AC 10.4%)。PBMC 中 HBZmRNA 発現量と HBZ 蛋白発現量、血漿中の抗 HBZ 抗体価との間に有意な相関は認められなかった。HBZ 蛋白
質の生体内における免疫原性は極めて低く、mRNA 発現量との相関がないことが明らかになった。HBZ 蛋白
発現が急性型 ATL 発症に関与する可能性については、さらなる検討が必要である。
1. 緒言の発症や病態形成には、HTLV-1 由来の転写制御因

HTLV-1（Human T cell leukemia virus type 1:子である Tax や HTLV-1 basic leucine zipper

HTLV-1）は、日本人によって発見され、世界で初(HBZ)が重要な働きをしていることが明らかとなめてヒト疾患との関連が示されたレトロウイルっている。HBZ は、その遺伝子発現が ATL 細胞のスである。HTLV-1 の主な感染経路は、母子感染（垂増殖に関与すること、HBZ を CD4 陽性 T リンパ球

直感染）
、性感染(水平感染)および輸血(現在はスに強発現するトランスジェニックマウスが、制御

クリーニングにより消滅)の 3 つであり、HTLV-1

性 T 細胞(Treg)を増加させてその機能を抑制する

感染者の約 5 %に成人 T 細胞白血病(Adult T-cellと共に、エフェクターT 細胞の機能をも阻害する

leukemia: ATL)、0.25 4 %に HTLV-1 関連脊髄症

ことで発がんと炎症形成の双方に関与すること(HTLV-1-associated myelopathy: HAM) お よ びなどから、ATL のみならず、HAM、HU 等の慢性炎

HTLV-1 ぶどう膜炎(HTLV-1 uveitis: HU)などの疾症性疾患の病態形成にも必須の遺伝子とされて患を引き起こす。我が国は先進国における唯一のいる。また、HAM/TSP 患者末梢血単核球（PBMC）

HTLV-1 浸淫国であり、その感染者数は国内に約における HBZ mRNA 発現量が、HTLV-1 プロウイル

108 万人と推定され、今後も持続した ATL や HAM

ス量、疾患重症度、および髄液中炎症マーカー濃の新規発症例の増加が予測されていることから、度と正の相関を示すことが報告されている。一方、

HTLV-1 の感染予防法、関連疾患の発症予防法・治HBZ 蛋白質については、生体内での発現がきわめ療法の確立は重要な課題である。また、全世界にて微量であり、HBZ 蛋白質と病態との関連は明らおける HTLV-1 感染者は、カリブ海諸国やアフリかにされていない。本研究では、HBZ 蛋白質の病

カ等の途上国を中心に約 2,000 万人以上にものぼ

因的意義を明らかにするために、独自の ELISA シることが推定されており、HTLV-1 に関する研究成ステムを用いて患者生体内の HBZ 蛋白質発現量お果は、国際的にも高い貢献が可能であると期待さ

よび抗 HBZ 抗体価について評価を行った。

れる。これまでの研究によって、HTLV-1 関連疾患

- 164 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

2. 材料と方法(1)細胞溶解液の調整
HTLV-1 感染細胞を PBS で 3 回洗浄し、1×108
cells/mL の濃度になるようにプロテアーゼ阻害剤（Thermo Fisher Scientific）を含む RIPA バッファー（Thermo Fisher Scientific）を加えて十分に懸濁し、バイオラプター（コスモバイオ）の推奨プロトコールに従ってソニケーション処
理を行った。14,000×g、4 ℃の条件で 15 分間遠
心操作を行い、上清を回収して細胞溶解液として使用した。

(3)ヒト血漿中抗 HBZ 抗体価測定 ELISAPBS で 1μg/mL 濃度に希釈した組換え HBZ 蛋白質
を、Nunc イムノプレート マキシソープ平底 96 ウェルプレート（Thermo Fisher Scientific）の各(2)HBZ 蛋白質検出・定量サンドイッチ ELISAPBS で 5μg/mL 濃度に希釈したラット由来の抗HBZ モノクローナル抗体を、Nunc イムノプレート
マキシソープ平底 96 ウェルプレート（Thermo
Fisher Scientific）の各ウェルへ 50μL 加えて、
室温で 1 時間、または 4℃で一晩インキュベーシ
ョ ン し て 固 相 化 し た 。 次 に 、 PBS-T （ 0.05 %Tween-20 を含む PBS）で各ウェルを 3 回洗浄した
後、5 % スキムミルク/PBS-T を 200μL 加えて、
室温で 30 分間ブロッキングを行った。さらに
PBS-T で各ウェルを 3 回洗浄し、0.1 % BSA/PBS-T
で 4 倍に希釈した細胞溶解液を 50 μL 加えて、
室温で 1 時間反応させた。再び、各ウェルを PBS-T
で 3 回洗浄し、HRP を標識したマウス由来の抗 HBZ
モノクローナルを 50μL 加えて室温で 1 時間反応させた。この時の抗体希釈液には、検出増感試薬（ TaKaRa 社 : Western BLoT Immuno Booster
solution1）を使用した。各ウェルを PBS-T で 5回洗浄した後、TMB 溶液（KPL）を 100μL 加えて、室温で遮光しながら 5 分間の発色反応を行った。
各ウェルへ 1N の H2SO4 を 50μL 加えて酵素反応を停 止した後 、吸光 マイク ロプレー トリー ダー（Thermo Fisher Scientific）を用いて 450 nm、
参考波長として 620 nm の吸光度を測定した。検量線を、HBZ 蛋白質をスタンダードに用いて作製し、得られた吸光度より、各細胞溶解液中の HBZ
蛋白質濃度を計算した。HBZ 蛋白質検出・定量サ
ンドイッチ ELISA の模式図を図 1 に示す。

- 165 -

ウェルへ 50μL 加えて、室温で 1 時間、または 4℃
で一晩インキュベーションして固相化した。次に、
PBS-T（0.05 % Tween-20 を含む PBS）で各ウェル
を 3 回洗浄した後、1 % スキムミルク/PBS-T を
200μL 加えて、室温で 1 時間ブロッキングを行った。さらに PBS-T で各ウェルを 3 回洗浄し、100倍に希釈したヒト血漿を 50 μL 加えて、室温で 1時間反応させた。再び、各ウェルを PBS-T で 3 回洗浄し、2 次抗体として HRP 標識抗ヒト抗体を 50
μL 加えて室温で 1 時間反応させた。ヒト血漿および 2 次抗体の希釈液には 1 % スキムミルク/PBS-T を使用した。各ウェルを PBS-T で 5 回洗浄した後、TMB 溶液（KPL）を 50μL 加えて、室温で遮光しながら 5 分間の発色反応を行った。各ウェ
ルへ 1N の H2SO4 を 50μL 加えて酵素反応を停止した後、吸光マイクロプレートリーダー（Thermo
Fisher Scientific）を用いて 450 nm、参考波長として 620 nm の吸光度を測定した。血漿中 HBZ
抗体価測定 ELISA の模式図を図 2 に示す。

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

3. 結果

低 い免疫原 性が明 らかと なった。 これま でに(1)HBZ 蛋 白 質 サ ン ド イ ッ チ ELISA を 用 い た

HTLV-1 感染者の生体内には、HBZ を標的とする細HTLV-1 関連疾患患者由来 PBMC における HBZ 蛋白

胞傷害性 T 細胞や抗体産生細胞が存在し、同種造質発現解析

血幹細胞移植を受けた患者において HBZ 反応性のHBZ 蛋白質検出・定量サンドイッチ ELISA を用い

CD4+ T 細胞が誘導されるとの報告もあることから、て、HTLV-1 関連疾患患者由来 PBMC における HBZ

HBZ 蛋白質を治療標的とした免疫療法により、蛋白質発現の解析を行った結果、ATL 患者由来

HTLV-1 関連疾患を効果的に予防または治療でき

PBMC の 3 検体(n=5)に HBZ 蛋白質発現が認められる可能性もある。今後、HBZ 抗体保有者と非保有た。一方、HAM（n=10）およびキャリア（n=4）由者の違いについて解析し、当研究室で独自に作製

来検体には HBZ 蛋白質の発現は認められなかった。

した抗 HBZ モノクローナル抗体や HTLV-1 感染ヒト化マウスモデル系により免疫療法の効果を検(2)ヒト血漿中抗 HBZ 抗体価測定 ELISA を用いた討することで、HTLV-1 関連疾患の新規発症予防

HTLV-1 関連疾患患者由来ヒト血漿中抗 HBZ 抗体法・治療法の開発を目指したい。

価の測定
ヒト血漿中抗 HBZ 抗体価測定 ELISA を用いて、

5. 謝辞

HTLV-1 関連疾患患者由来ヒト血漿中における抗本研究は、平成 27 年度ウエスコ学術振興財団

HBZ 抗体を測定した結果、ATL 由来血漿では 7 検

学術助成事業の助成を受けて実施しました。ここ体(n=42)、HAM/TSP 患者由来血漿では 13 検体に感謝申し上げます。

(n=120)、キャリア由来血漿では 5 検体(n=48)の血漿中に抗 HBZ 抗体が検出された（陽性率は ATL

6. 参考文献

16.7%, HAM 10.8%, AC 10.4%）。

1. Yasuo Shiohama, Tadasuke Naito, Toshio
Matsuzaki, Reiko Tanaka, Takeaki Tomoyose,
Hiroshi Takashima, Takuya Fukushima, Yuetsu

4. 考察
今回の HBZ 蛋白質サンドイッチ ELISA を用いた

Tanakaand

Mineki

Saito：

Absolute

HTLV-1 関連疾患患者由来 PBMC における HBZ 蛋白

quantification of HTLV-1 basic leucine zipper

質発現の解析により、HBZ 蛋白質発現 の ATL 病

factor (HBZ) protein and its plasma antibody

態への関与が示唆された。HTLV-1 プロウイルスのin HTLV-1 infected individuals with different

マイナス鎖にコードされる HBZ は、遺伝子のプロ

clinical status ． Retrovirology. 2016 Apr

モーター領域における欠損やメチル化は認めら

27;13:29.

れず、全ての ATL 症例においてその発現が認められ、HAM/TSP 患者の PBMC における HBZ mRNA の発
現量が HTLV-1 プロウイルス量および病態マーカ
ー濃度と相関を示すことかが報告されている。今後、HBZ mRNA 発現量と合わせて HBZ 蛋白質の生体内での発現を評価することにより、HBZ 蛋白質発
現が HTLV-1 関連疾患における発症・病態・予後予測の新規バイオマーカーとなる可能性がある。
また、ヒト血漿中抗 HBZ 抗体価測定 ELISA を用いた HTLV-1 関連疾患患者由来ヒト血漿中抗 HBZ 抗体価の測定により、生体内における HBZ 蛋白質の- 166 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

非同期式直列演算器に基づいた超低消費電力デジタル補聴器の開発
川崎医療福祉大学 医療技術学部 臨床工学科
近藤 真史
近年，高性能な信号処理回路 (DSP) を搭載したデジタル補聴器が普及しているが，その電池寿命は数日程度に留まっているのが現状である．この問題に対して報告者は，単一の全加算器のみを用いて逐次的に演算を行う直列乗算器を前提として，リングオシレータに基づいた動的な制御を導入することによる小面積かつ低消費電力な乗算器を提案している．しかし，この乗算器は正数演算のみを対象としているため，フィルタ回路等への応用・実装が困難である．そこで本研究では，既提案の直列乗算器を拡張し，負数演算機能を備えた直列積和演算器の構成法を提案する．
まず，積和演算器を構成する加算器と乗算器におけるビット単位の処理過程に着目し，ビットごとの加算を乗算処理に統合・隠蔽 (ビットシリアル化) することにより効率的かつ簡便に直列積和演算器を構成する．次に，2 の補数に基づいた負数乗算アルゴリズムが定数加算に帰着できる点を利用し，これをビットシリアル化と同様に乗算処理へ統合することにより，負数乗算に対応した積和演算を実現する．そして，以上に基づいた積和演算器を設計し，シミュレーションを通じて所望の動作を確認するとともに，FPGA を対象とした性能評価を以ってその有効性を示す．

1.まえがき用した際の回路構成やその性能については明らかにな

近年，高齢化社会の進展に伴って，デジタル信号処っていない．さらに，この直列乗算器は正数演算のみ

理回路 (Digital Signal Processor : DSP) を搭載したデジを対象としており，負数係数との乗算が含まれるフィタル補聴器 (以下，単に補聴器という) が広く普及してルタ回路には対応できないという問題がある．

いるが，その電池寿命は数日程度に留まっているのが[1]

そこで本研究では，負数演算に対応した小面積かつ現状である ．これに対する最も単純な解決法の一つ

低消費電力な直列積和演算器を提案する．まず，積和として電池の大容量化が挙げられるが，補聴器はその演算におけるビット単位の処理過程に着目し，ビット装着形態から搭載可能な電池容量に物理的な限界があごとの加算を乗算処理に統合・隠蔽 (ビットシリアル[2]る ．一方，DSP 周辺に配置されているアンプ等のア[3]処理) することにより演算時間の短縮化を図る．ここナログ回路に対する低電圧化 も検討されているが，で，2 の補数に基づいた乗算アルゴリズムは定数加算

低電圧環境下ではノイズ干渉が顕著となるためそれにに帰着できるため，これをビットシリアル処理と同様も限界がある．したがって，補聴器における電池寿命に乗算処理へ統合することで負数演算に対応した直列の改善するためには，DSP のアーキテクチャの観点か

積和演算器を構成する．以上の直列積和演算器を設計

ら低消費電力化を図ることに望みが残されている．

し，タイミングシミュレーションを通じてその動作を補聴器用 DSP は，
汎用 DSP と同様に信号処理を効率確認するとともに，既存の積和演算器との性能比較を的に展開するための積和演算器を内蔵している．ここ

通じてその有効性を示す．

で，人間の可聴域が 20Hz～20kHz 程度と特に低速な信2.補聴器用 DSP の低消費電力化

号を扱う点に着目し，一対の全加算器 (FA) とフリッ

デジタルフィルタによる雑音抑制処理など，補聴器にプフロップのみを用いて逐次的に演算を行う直列演算

おける様々な聴覚支援機能は DSP により実現され，器の応用が検討されつつある．特に，文献[4]の直列乗

この種のデジタル信号処理の多くは，積和演算 (w=w'+

算器は，リングオシレータを用いて演算時のみ動的に＋a×b，w：現在の演算結果，w'：直前の演算結果，a，クロックを生成・制御することで，小面積かつ低消費b：入力) に帰着される．このため，DSP では 1 クロッ

電力な乗算器を実現している．しかし，あくまでも乗ク (CLK) で積和演算を完了するために専用の積和演

算器の構成法に留まっており，これを積和演算器に応算器を内蔵している．特にこれを構成する乗算器は，- 167 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】“10...0”s
FA c

CLK・CS10SRc
p7 p6 p5 p4

SRd
0

DMX

aibj

MUX

SRa
a3 a2 a1 a0

1

CLK

SRb

p3 p2 p1 p0

time 1a0b0

End

CLK・CS

CLK・CS
Start
RO

CLK

Ctrl
CS

3
a2b0

4
a3b0

5
a0b1

6

7

a1b1

a2b1

8

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

a3b1

a0b2

a1b2

a2b2

a3b2

a0b3

a1b3

a2b3

a3b3

w'0 w'1 w'2 w'3 w'4 w'5 w'6 w'7

k

D-FF

b3 b2 b1 b0

2
a1b0

0

0

w0

1

0

w1

2

0

w2

3

0

w3

4

w4

5

w5

6

w6

7

CS = “11110111101111011110”

w7

ADD

MUL

(a)乗算と加算を独立処理する場合

図 1 直列乗算器の構成
time 1

加算器に比して回路面積および動作速度に係るコスト

a0b0

2
a1b0

3
a2b0

4
a3b0

5

6
a0b1

7
a1b1

8

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

a2b1

a3b1

a0b2

a1b2

a2b2

a3b2

a0b3

a2b3

a3b3 a1b3

kが大きいため，積和演算器の性能，すなわち DSP の性

0

w'0

w0

1

w'1

w1

能は乗算器のそれに強く依存する．

2

w'2

w2

3

w'3

w3

4

w'4

w4

5

w'5

w5

6

w'6

w6

7

w'7

乗算器は，被乗数 ai (0 <= i < n)と乗数 bj (0 <= j < n)を入力として積 pk (0 <= k < 2n) を求める回路であり，

w7

MUL・ADD

その動作は部分積 ai・bj (・は論理積を表す) を網羅的

(b)ビットシリアル処理の場合に足し合わせることにより実現される．通常この種の図 2 演算過程

乗算器は，高速化を指向して部分積の足し合わせを並3.リングオシレータを用いた直列積和演算器

列的に行う形態 (以下，並列乗算器) を採るが，それに3.1. 設計方針

伴って回路面積が O(n2)で拡大し，静的な消費電力も同上述した直列乗算器における FA は，部分積に対する様に増大することなる．これに対して報告者は，単一

n ビット加算器として機能しているため，単一の FA のの FA とシフトレジスタ (SR) を用いて逐次的に部分みを用いて加算を行う，いわゆる直列加算器も同様の積を足し合わせる直列乗算器に着目し，これにリング

枠組みで制御できる．したがって，これらリングオシ

オシレータに基づいた動的なクロック生成・制御手法

レータに基づいた直列乗算器と加算器を用いることにを導入することにより小面積かつ低消費電力な乗算器

より，補聴器用 DSP に適した小面積な積和演算器 (独の構成法を提案している[4]．これに基づいた直列乗算立型) を構成することができる．n=4 における独立型の器の構成を図 1 に示す．図中のリングオシレータ (RO)処理過程を図 2(a)に示す．ここで□および■は，積和

は，演算の開始を表す Start がアサートされてから演算

演算の乗算 (MUL) および加算 (ADD) におけるビッ完了を表す End がアサートされるまでの期間だけ，FA

ト単位の加算処理 (以下，FA 処理という) を表す．図の遅延に対応したクロックを生成する．
制御回路 (Ctrl)

2(a)より独立型では，部分積 ai・bj の FA 処理を n2 回繰

は CLK に同期してレジスタへの制御信号 (CS) を生成り返すことにより乗算が完了し，さらにその結果と w'

し，CS='1'ならば a0～a3・bj に関する部分積の足し合わを入力とする 2n 回の FA 処理を経て積和演算は完了す

せ結果が SRc へ，CS='0'ならばその時点で乗算結果がることとなる．

確定している SRc の最下位ビットの値が SRd へそれぞ

ここで，図 2(a)の下位ビット (k=0,1,...,n/2-1) におけ

れ格納される．これを n 回繰り返すことにより，SRc

る最初の FA 処理に着目すると，無効な零加算が行われおよび SRd にそれぞれ乗算結果の上位ビットおよび下ていることが分かる．さらに零加算であるため次段の位ビットが格納されることとなる．また，乗算完了のFA 処理に対する桁上げが生じることもない．したがっタイミングについては，上述の演算過程において SRdてこの零加算に係る FA 処理は完全に冗長ではあるもが n 回シフトされる点に着目し，予め SRd を信号列のの，直列乗算器において SR の共通制御を実現する"10…0"で初期化した上で，最下位ビットに'1'が出力さ上で構造的に生じることとなる．一方，図 2(a)の各ビ

れたタイミングを利用することで制御の簡略化を図っ

ットにおける w'の加算のタイミングは，乗算前後に関ている．

わらず最終的な積和演算器結果に影響しない．そこで本研究はこれらの事実に着目し，ビット単位で積和演- 168 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

SI
SO
PI
SRa
En

Selc
FAa
Seld
FAb
pp
BitSel BS
CLK
CSd
CS(1:0)
CNTn

A

‘1’

n
b

SI
SO
PI
SRb
En

(0)

A
S
B FA
X
C

1
0

D
Q
D-FFC

SI

SO
SRd
Reset
PO

CLR

WEn

SI
SO
Set SRc
Reset
PO

1

DMX

n

MUX

a

0

n

c

n
d

Reset

Start

Start
End

RO

CLK

En

CS1
Ctrl CS0
CS0
CS(1:0)En

CNTn
Counter
CNT0

2
Q
D
D-FFE

End

CLR

図 3 ビットシリアル型積和演算器の構成
算における乗算と加算の順序を入れ替えた上で，演算ア (CLR) 付のフリップフロップ．

結果の下位ビットに対する加算を上述の冗長な FA 処

D-FFE：演算の完了を表す信号 End を保持するための理に統合・隠蔽することで，より効率的な演算を可能

フリップフロップ．

とした積和演算器 (ビットシリアル型) を提案する．ビ

RO：演算期間中のみ擬似的なクロック (CLK) を生成

ットシリアル型の処理過程を図 2(b)に示す．図 2(b)よするリングオシレータ．

り，部分積当たりの FA 処理が 1 回分増加するものの，

Ctrl：RO からの CLK に同期して，各レジスタのシフ

積和演算全体では w'の加算に係る FA 処理回数が n/2 にトタイミングを制御するコントローラ．上述したよう削減されるため，演算時間の短縮効果とそれに伴う動にビットシリアル型の制御は文献[4]のそれと同様であ的な消費電力の低減効果を期待できる．

るため，リングカウンタを用いて制御信号 CS を生成す

3.2. 回路構成

る (図 2 参照)．CS1 および CS0 はそれぞれ SRa および

図 3 より，提案するビットシリアル型は，w'に対す

SRd のシフトタイミングを指示する信号であり，図 1

る FA 処理のタイミングと部分積当たりの FA 処理回数

より CS1=CLK・CS，CS0=CLK・CS である．また，ビが増加する点に注意すれば，既存の直列乗算器と同様

ットシリアル化に伴って，それぞれの部分積の算出過の制御で実現できる．そこで本研究では，文献[4]の回程で 1 段分の FA 処理が追加されるため，Ctrl を構成す

路構成を踏襲してビットシリアル型を構成する方針をるリングカウンタは 1 ビット拡張されて n+2 ビットと採る．これに基づいたビットシリアル型の構成を図 3なる点に注意する．

に示し，各構成要素の機能と意味を以下に記す．また，*Count：ビットシリアル型ではその演算過程で SRd のビットシリアル化に伴って追加された構成要素には*値を頻繁に更新するため，2.で述べたように SRd の初を付して区別している．

期化とシフトを利用して演算完了のタイミングを検出

SRa，SRb：被乗数 a および乗数 b を格納するシフトレ

することができない．したがって本研究では，SRb のジスタ．

シフト回数を数えるためのリングカウンタを別途設け

SRc，SRd：演算結果の上位ビット c および下位ビットることで演算の完了を検出する．

d を格納するシフトレジスタ．

*BitSel：SRc および SRd に格納されている w'を選択的

ここで，各レジスタの PI および PO は並列の入出力，に FA へ入力するための回路であり，その回路構成を図SI および SO は直列の入出力を表し，En のアサートに

4 に示す．pp は SRa および SRb によって生成された部より PI の値を保持する．

分積，Selc および Seld はそれぞれ SRc および SRd の最

FA：FA 処理に利用される全加算器．

下位ビットの値である．BitSel はこれら 3 つの信号か

D-FFC：FA 処理で生じた桁上げを保持する非同期クリら内 2 つを選択して FA への入力 FAa および FAb として- 169 -―

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

Selc
Seld
CNTn

MUX

1
0

FAa
BS

pp

MUX

1
0

(0)

CS(1:0)CSd

CLK

図 4 ビットシリアル化回路

a2

a1

a0

×

b3

b2

b1

b0
a0b0

1

a3b0

a2b0

a1b0

0

a3b1

a2b1

a1b1

a0b1

0

a3b2

a2b2

a1b2

a0b2

1

a3b3

a2b3

a1b3

a0b3

p7

p6

p5

p4

p3

FAb

(1)

a3

p2

p1

p0

図 5 負数乗算アルゴリズム

出力する．これらの選択に係る制御は，現在の演算状

DMX を介して，SRd (n-1) にシフトされる．

況，すなわち Ctrl の CS (1:0) と Count の値 CNT (1:0) に

手順 6．演算終了：手順 4～5 を n 回繰り返すと，SRc基づいて処理される．また，これに伴って SRd のシフと SRd に確定した演算結果が全て格納される．それにトタイミングと出力先が文献[4]のそれと異なるため，伴って，Count から出力される CNT (0) が，D-FFE に格

BitSel 内においてシフトタイミングを指示する信号

納され，演算の完了を表す End としてアサートされる．

CSd と出力先を選択する信号 BS を別途生成している．

そして，End を受けた RO は CLK の生成を停止し，そ3.3. 動作手順

れに伴って各構成要素も動作を停止する．最終的な演

SRa および SRb に対するデータの格納から演算の完算結果 w は c & d (&は結合演算子) として得られる．

了に至るまでの動作手順は以下の通りである．

4. 負数演算機能の拡張

手順 1．データの格納と初期化：演算に先立って WEn

4.1. 負数乗算アルゴリズム

がアサートされると，a および b がそれぞれ SRa およ

文献[4]の直列乗算器は正数演算を前提としているため，び SRb に格納される．

これを直接用いた独立型やビットシリアル型は負数を

手順 2．クロックの生成：初期化が完了して WEn がネ

含む積和演算には対応していない．しかし，デジタルゲートされた後，演算の開始を表す Start がアサートさフィルタなどの実際の信号処理においては係数の多くれると RO により CLK が生成される．

には負数が含まれるため，これらの積和演算器の実用

手順 3．制御信号の生成：Ctrl は，CLK の立下りエッ化を図る上では負数演算への対応が不可欠となる．こジに同期して CS を，立上りエッジに同期して CSa との種の負数演算に係るアルゴリズムは，対象とするデCSb をそれぞれ生成する．またこれに伴って BitSel がータ形式が実数型か整数型かに依って大きく異なるが，

CS に基づいて CSd を生成する．

高精度な信号処理を伴わない補聴器用 DSP では整数型

手順 4．積和演算処理：SRa (0)および SRb (0)から出力が一般的に用いられている．そこで本研究では，整数された ai と bj は，論理ゲート A と BitSel を経て FA に型データを前提として，ビットシリアル型積和演算器

入力され，その演算結果は SRc (n-1) にシフトされる．

の負数拡張を検討する．

なお，ここで加算される残りの 2 つの信号は，D-FFC

整数型データの加算処理においては，加数を 2 の補に格納されている直前の部分積の FA 処理で生じた桁数とすることで容易に負数演算を行うことができる．

上げ，SRc に格納されている途中結果である．この手

しかし，乗算処理では，部分積をビットごとにシフト

順を n 回繰り返すと，
bj に関する部分積が全て SRc に，しながら繰り返し加算を行う形態であるため，単に乗桁上げは D-FFC に格納される．ただし，演算開始時，数を 2 の補数とするだけでは負数演算を行うことはですなわち n=0 の際には，BitSel により SRd に格納されきない．したがって，この種の 2 の補数よる乗算処理ている w'の下位ビットが選択され，例外的にそれらとは，一般的に部分積の加算過程において適宜 2 の補数の FA 処理が行われる点に注意する．

に変換する手法が採られている[6]．2 の補数による乗算

手順 5．確定した演算結果の格納：BS='0'として MUX処理アルゴリズム (n=4) を図 5 に示し，各手順の説明とDMX が切り替ることによりSRc とSRd が接続され，を以下に記す．図 5 より，部分積の加算過程に着目す演算結果が確定している SRc の最下位ビットの値がると，規則的な定数加算とビット反転により 2 の補数- 170 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

転に置き換える必要がある．そこで，図 3 において単CNT(0)に部分積 pp を生成していた論理ゲート A に代えて，

Co
A

B

C

MUX

a

0
1

上述の負数拡張に伴う制御を担う負数演算回路を配置

pp

する．負数演算回路の構成を図 6 に示す．これにより

b
CS(3:2)(3)(2)

追加された論理ゲート B および C はそれぞれ an-1 おび

図 6 負数演算回路

bn-1 における部分積のビット反転を担い (an-1・bn-1 は除に基づいた乗算処理を実現できることが分かる．特にく) ，MUX によりこれと定数 Co が選択されて pp とし

この定数加算は，3.1 と同様に部分積の算出過程におけて出力される．

る FA 処理の 1 ビット拡張とみなすことができる．
そこ

5. 設計と評価

で本研究では，ビットシリアル型の部分積算出過程に5.1. シミュレーションによる動作確認

係る FA 処理をさらに 1 ビット拡張し，それによって上

負数演算に対応したビットシリアル積和演算器

述の定数加算を処理するとともに適宜その入力を反転(TC-MAC) を Xilinx ISE 14.6 により設計し，同社製することにより，負数演算に対応した積和演算器を直FPGA Spartan3E XC3C250E を対象としたタイミング

接的に実現する方針を採る．

シミュレーションを通じてその動作確認を行った．な4.2. 制御回路の拡張

お，設計時における RO の遅延については，配置配線

ビットシリアル型における負数拡張に伴って，部分制約を施したインバータチェーンとして試行錯誤的積の算出時にさらに1回分のFA処理を追加する必要がにその値を定め，RO には 7 段のインバータ遅延を設あるが，3.2 で述べたように単に FA 処理の追加であれけている．被乗数 a=''0101'' (5)，乗数 b=''1010" (-6)，前ば，回路構成の変更はシフトレジスタのタイミング制

積和演算結果 w'=''00111100'' (60)を入力した場合にお御に係る箇所に限定できる．以下，負数拡張に伴う図

けるシミュレーション結果を図 7 に示す．シミュレー

3 の変更点についてのみ述べる．

ション波形上の各信号名とその意味は，演算結果 c &コントローラの拡張：ビットシリアル化の際に Ctrl をd を dm と表記している点を除いて図 3 と同様である．

構成するリングカウンタは既に (n+2) ビットに拡張さStart のアサートに伴って CLK が生成され，
図 7 より，

れているが，定数加算に係る FA 処理を追加するためそれに基づいて CS1，CS0 および CSd がそれぞれ出力(n+3) ビットのリングカウンタとして構成する．また，されていることを確認できる．特に CSd に着目すると，後述する負数変換回路において CS (3:2) の信号を利用

w'の下位ビットの加算を先行して処理するためのパするため，
リングカウンタの下位4 ビットがCS (3:0) とルスが生成されていることが分かる．その後，積和演して出力される点に注意する．

算が完了すると，End がアサートされるとともに，CLK

定数メモリによる Count の置換：定数加算に必要なデとそれに関連する制御信号が停止している．このときータ列は，最上位および最下位ビットのみが'1'である nの演算結果 dm の値は''00011110'' (30)であり，所望の演ビット信号列''100...01''であり，部分積の算出が完了し算が行われていることを確認できる．

たタイミングで順にこれらの定数 Co を出力する必要

5.2. 消費電力と回路面積の解析がある．ここで，ビットシリアル型では演算の完了まXilinx XPower Analyzer を用いて FPGA 実装時におけるでに必要な SRb のシフト回数を数えるための Count を

消費電力の解析を行った．評価対象は上述の負数に対別途設けている．そこで本研究では，Count を上述のビ応したビットシリアル積和演算器 (TS-MAC) の他，ビット列を保持する n ビットのリングカウンタに置換しットシリアル型積和演算器 (BS-MAC)，Booth 型乗算

た上で，その下位 2 ビットが''11''となったタイミングと器に基づいた並列積和演算器 (Booth-MAC)の 3 種に対して演算の完了を検出する．

しても同様に設計・解析を行った．また，この種の演

負数演算回路の追加：負数演算を行うためには，BitSel

算器の消費電力はデータ依存性が強いが，被乗数に入力される部分積 pp を，適宜定数 (Co) やビット反

a=''0101...01''，乗数 b=''1010...10''，w'=''00...0011...11''とし- 171 -

【平成27年度研究費助成 研究成果報告書】

図 7 シミュレーション結果
表 1 評価結果てデータ内における'0'と'1'の割合を同数に設定している．各積和演算器の積和演算一回当たりにおける消費

Structure

電力と所要面積の解析結果を表 1 に示す．ここで，LUT
は FPGA 上で組み合わせ回路を構成する素子であり，Booth-MAC

FF は LUT と併せて順序回路を構成する D-FF である．
表 1 より，n の増加に伴って並列演算器である Booth-MAC の消費電力が急激に増大している．これは 2.でBS_MAC

述べたように並列演算器は O(n2) で所要面積が拡大し，それに伴って静的消費電力が増大した結果と考えられる．これに対して直列演算器である他 2 種の消費電力
は信号遷移回数に依る動的消費電力に依存するため，

TC_MAC

その消費電力は n に対して線形的な増加傾向を示している．一方，所要面積については，Booth-MAC の LUT
数は n に対して劇的に増加しており，上述した静的消費電力の増加要因を裏付ける結果となっている．特にBS-MAC およびTC-MAC は同程度の資源量となっており，負数演算機能の導入に伴うオーバーヘッドが極力抑えられていることは特筆すべき点と考えられる．

n [bit]Power [mW]

LUT

FF

4

0.2

73

16

8

2.28

228

32

16

12.94

728

64

4

0.72

27

30

8

1.28

35

54

16

1.62

51

102

4

0.6

31

33

8

1.19

39

57

16

1.7

53

105

参考文献
[1] 成沢良幸, "デジタル補聴器を解剖する," CQ 出版, インタ
フェース, Vol.6, pp.109-119 (June 2008)[2] J. DiCristina, "Introduction to Hearing Aids and Important Design Considerations,'' Maxim integrated (May 2010)[3] S. Kim, et al, "An Energy-Efficient Analog Front-End Circuit for6. あとがき本研究では，リングオシレータに基づいた直列乗算器[4]を積和演算器に拡張した上で，負数演算機能を備えたビットシリアル型直列積和演算器の構成法を提案した．本構成では，2 の補数表現をビット単位で加算処
理に導入・隠蔽することにより，既存の回路構成の大部分を変更することなく簡便に負数演算機能を実現している．そして，タイミングシミュレーションにより所望の動作を確認するとともに，消費電力および所要面積の解析を通じてその有効性を確認した．今後の課題としては，本構成に基づいたデジタルフィルタを設
計・実装し，より実用性を指向した評価を実施することが挙げられる．

- 172 -a Sub-1-V Digital Hearing Aid Chip," IEEE J. Solid-State Circuits, Vol.41, No.4, pp.876-882 (Apr. 2006)[4] 近藤真史，他, "デジタル補聴器用 DSP を対象とした非同期式直列乗算器の一構成法,'' 信学技報 CAS, Vol.114,
No.312, pp.11-16 (Nov. 2014)[5] 鈴木昌治, "ディジタル数値演算回路の実用設計," CQ 出版,
Design Wave Advance (Nov. 2006)

【平成27年度研究費助成 海外渡航報告書】

平成２７年度 海外渡航報告書
岡山大学工学部
矢納 陽

１．はじめに
このたび，国際会議にて研究発表する機会を本助成事業により与えていただきました．ありがとうございます．大変貴重な経験をすることが出来ました．以下では，国際会議への参加発表に対する報告を記します．
２．国際会議の概要
国際会議名：10th Asian Control Conference 2015 (ASCC 2015)
開催場所，期間： コタキナバル(マレーシア)，2015 年 5 月 31 日～6 月 3 日
主催団体： Asian Control Association，Universiti Teknologi Malaysia(Malaysia)
本国際会議は 1994 年に東京都立科学技術大学（現 首都大学東京）にて初開催された．その後ソウル（1997 年）
，上海（2000 年），シンガポール（2002 年），メルボルン（2004 年），バリ（2006 年），香港（2009
年），台湾（2011 年），イスタンブール（2013 年）での開催を経て，今回の会議に至った．なお，次回 2017年はオーストラリアで開催される予定である．今回の会議に対する投稿論文数は 868 件で 50 以上の国と地域から投稿されており,採択された論文数は 630 件で，採択率は 73%である．また，口頭発表セッショ
ン数が 95，ポスター発表セッション数が 5 で，各口頭発表セッションでは 5 件ほどの研究発表が行われた．国別ではマレーシア，日本，中国，韓国，オーストラリア，アメリカ，インド，シンガポール，インドネシアなどからの発表があった．

ASCC2015 開催会場

初日の基調講演の様子

３．研究発表の内容
1 件目の研究発表「A Design Method of On-demand Type Feedback Controller Using Coprime Factorization（既約分解を用いたオンデマンド型フィードバックコントローラの設計法）」は，会議 2 日目に Practical Adaptiveand Learning Controller Design というセッションの中で行った．この研究では，一般化最小分散制御則を既約分解によって拡張し，制御目的（目標値追従）を達成するという要求に応じてフィードバック信号が現れる制御則を提案した．この手法は制御対象が安定ならば事故等により運転中にフィードバック信号が切断されて 0 になった

- 173 -

【平成27年度研究費助成 海外渡航報告書】

としても出力値が発散せず，制御系がその安全性を保つという特徴を有する．質疑では外乱を想定した場合の応答や多入力多出力系への適用について質問を受けたが，本研究は基礎段階のものであるため，それらについては今後の課題として検討すると答えた．

制御量（実線）が目標値（点線）追従を達成している

目標値追従を達成するという要求に応じてフィードバック信号が現れ（赤丸），目標値追従を達成するとフィードバック信号が 0 になる（青丸）．

会議 3 日目に 2 件目の研究発表「Switching PID Control for an Underactuated Flying Object throughModel-based Prediction（モデルに基づく予測による劣駆動型飛翔体に対する切り換え型 PID 制御）」を行った．
発表したセッションは Biomimetic Intelligence and Control for Robots and Machines である．この研究では，出力変数の数よりも入力変数の数が少なく，しかも出力変数が互いに干渉するという非線形性の強い制御対象に対し，制御対象のモデルを利用してその出力値が目標値に対して将来どのように変化するのか仮想的に計算（予測）し，その結果に応じて PID 制御ゲインを適応的に切り換えるという手順を繰り返す制御則を提案した．劣駆動型
飛翔体に対する制御系設計法の提案はこれまでもなされているが，制御対象のモデルに基づく出力値の仮想的な計算と PID 制御ゲインの適応的な切り換えを制御ステップ毎に繰り返し行う手法は提案されていなかった．
質疑では PID 制御ゲインの切り換えルールについて質問を受け，制御誤差の予測値を利用してゲインの符号や大きさを調整する方法を説明した．今後はロール角の制御や目標値への収束時間を早めるような手法を検討する．

ゲインを適応的に切り換えることによって（赤丸），従来法（点線の青丸）と比較してピッチ角のオーバーシュートを低減させた（青丸）４．おわりに本助成事業のおかげで国際会議にて研究発表することができました．ありがとうございます．重ねてお礼申し上げます．自分の研究発表だけでなく，他の研究の聴講を通して多くの研究に触れることができ，大変良い刺激になりました．今後も研究領域を掘り下げるだけでなく，多分野との融合を図り，地域の発展に寄与できる研究を推進したいと思います．ありがとうございました．

- 174 -

【平成27年度研究費助成 海外渡航報告書】

平成２７年度 海外渡航報告書
岡山大学大学院 環境生命科学研究科
吉田圭介

講演題目：
NUMERICAL PREDICTION OF HYDRODYNAMIC FORCE ACTING ON A NATURAL STONE IN
OPENCHANNEL FLOWS(和訳：開水路流れにおいて自然石に作用する流体力の数値予測)
講演内容の概要：
近年，河川のインフラ整備では構造物の堅牢さに加えて自然環境への調和が要求されており，現地で調達した石や木などの自然素材を用いた構造物が河道に設置される場合がある．こうした構造物は川の流れに多様性をもたせて河川景観を創造したり，水生生物の生息環境を保全するといった効果がある．一方，従前のコンク
リート構造物とは異なり，自然石を用いた工法では材料の要素は必ずしも画一的ではなく，洪水時の治水機能を検討することは一般に困難である．現在，実務では技術者の経験や模型実験などに基づいて構造物の安全度を照査するのが通例であるが，労力や費用が多くかかる上，射流などの急変流場では計測そのものが困難であるため，設計の信頼性は必ずしも十分ではない．
そこで，本研究では近年，確立されつつある高精度な数値解析技術を利用して，自然石に作用する流体力を評価することとした．本研究では特に，抗力や揚力等の経験的な係数を用いずに高精度に流体力を計算する手法を提示しており，河川実務の課題を大きく克服する可能性を示唆している．
（研究発表 PPT スライドより研究内容の抜粋）

自然石を用いた河川構造物

実験水路，模型石および分力計
2.4

2.4

2.2

2.2

2.0

2.0
1.8

Simulation

1.6

Lift force [N]Drag force [N]1.8

Experiment

1.4
1.2
1.0
0.8

1.0
0.8
0.6
0.4

0.2

0.2
40

60

80

Discharge[l/s]

数値計算による模型石周辺の流体挙動の再現

1.2

0.4

20

100

Experiment

1.4

0.6

0.0

Simulation

1.6

0.0
20

40

60

80

Discharge[l/s]

抗力と揚力(実験と解析の比較)- 175 -

100

【平成27年度研究費助成 海外渡航報告書】（発表時の様子）

司会者からの質問に回答する申請者

研究発表する申請者（大会情報）

・参加会議名：第 36 回 国際水理学会 全世界会議 (36th IAHR WORLD CONGRESS)・主催団体名：国際水理学会(IAHR)
・開催期間：2015 年 6 月 29 日 ～ 2015 年 7 月 3 日
・開催地：オランダ，ハーグ
・会場：World Forum・会議での役割：口頭発表
・参加者数：約 1380 名（大会本部の情報）・論文発表件数：約 1800 件（大会本部の情報）申請者(左)と共に同行した社会人 Dr の学生

休憩時間にフロアで親交を深める参加者たち（渡航情報）
・渡航先：オランダ，ハーグ
・渡航日程：
2015 年 6 月 28 日 岡山→関西空港→アムステルダム→ハーグ ※オランダ航空 KLM 利用
2015 年 6 月 29 日～7 月 3 日 学会参加
2015 年 7 月 4 日（7 月 5 日） ハーグ→アムステルダム→関西空港→岡山 ※機内泊，含む- 176 -

【平成27年度研究費助成 海外渡航報告書】

平成 27 年度 海外渡航報告書
岡山大学異分野基礎科学研究所
菅 倫寛2015 年 6 月 28 日から 7 月 3 日の日程でアメリカの Bentley University にて行われた Photosynthesis の分野のゴードン会議 (Gordon Research Conference) に参加した。ゴードン会議は 90 年近く歴史のある権威ある国際会議
で、生物・化学・物理などの領域に分かれた会議が数年おきに開催される。ゴードン会議では自由な討論を通して研究者が最先端の情報交換や交流することを目的としており, この会議に参加できることは研究者にとって大変名誉あることである。 私は “Radiation damage free structure of photosystem II in the S1 state at 1.95Å
resolution” というタイトルでポスター発表を行った。
詳細は控えるが, 岡山大学の沈建仁教授の研究グループは 2011 年に光合成光化学系 II の結晶構造を高い解像度で決定し, その研究内容は世界的に高く評価されている 1。しかし, この結晶構造については立体構造を決定するために使用した強力な X 線によって損傷を受けた, 壊れたものであると考える研究者も少なくなかった。
そこで我々は新技術である X 線自由電子レーザーを用いて結晶構造解析を行い, 放射線損傷を受けていない,
結晶構造を決定した 2。この”無損傷”の構造に基づいて, 光化学系 II の反応機構についての詳細な議論が可能となった。今回我々が決定した結晶構造は, 人工光合成を可能とする人工触媒のモデルテンプレートともなり得るといえる。
ゴードン会議において私は X 線自由電子レーザーを用いて決定した無損傷の構造に関する内容を報告した。
当日の発表は最初こそ緊張したが, 話を進めるうちに研究者同士で盛り上がり, 気が付いたら議論が深夜に及んでいることも少なくなかった。
私の発表内容についておおいに盛り上がって, 最後に固い握手をしたとき, ふと相手の名札に目をやると, 祖父・実父がノーベル賞受賞者である Siegbahn 博士だったときには思わず息を呑んでしまったほどである。
ウエスコ学術振興財団の助成により, 本会議に参加することが可能となり, 多くの世界的に著名な研究者と情報交換することができた。最先端の情報を入手するとともに、国際的な共同研究に向けて研究打ち合わせもおこなった。この場をお借りして深くお礼申し上げる。
参考文献
1

Umena, Y., Kawakami, K., Shen, J. R. & Kamiya, N. Nature 473, 55-60, (2011).

2

Suga, M. et al. Nature 517, 99-102, (2015).

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【平成27年度研究費助成 海外渡航報告書】

平成 27 年度 海外渡航報告書
岡山大学資源植物科学研究所
谷 明生

2015 年 7 月 19 23 日にスイスのアスコナで開かれた 10th International Symposium on
Phyllosphere Microbiology に参加し発表を行ったので以下報告いたします。
植物の表面、特に葉の表面 <Phyllosphere>には様々な微生物が生息し、植物と相互作用している。あるものは病原性細菌であり、またあるものは共生細菌である。本学会では多くの発表が病原性細菌よりも共生細菌に焦点を当てており、その由来、構造、生態、機能、植物への働きか
け、代謝などに関する発表が多い。学会はこれらの研究成果を元にサステイナブルな農業の実現を目指している。参加者は 70 人、口頭発表は計 36 件、ポスターは 23 件であった。参加者はスイス、ドイツ、フランス、オーストリアが多く、イギリス、アメリカ、カナダ等、日本からは 2名であった。ほとんどが大学・研究機関に属しているが、農業において微生物製剤などを扱う会
社からも参加者があった。国際学会としては参加人数は多くないが、それだけ狭く深い研究領域に絞って研究発表・討議が行われた。
口頭発表ではこれまで本学術領域を牽引してきた Dr. Steven E. Lindow (UC.Berkeley)、Dr.
Julia E. Vorholt(ETH Zurich)などの長年にわたるこれまでの知見に加え、最新の解析・分析技
術に基づいた新しい知見について聴講できた。微生物だけでなく植物の研究者も参加しており、植物と微生物の間でやりとりされる化合物についてや、昆虫も含めた三者の相互作用などもあり、
多角的なアイデアを得ることが出来た。
自身の発表としては、直前に Chair の Dr. Vorholt からポスター発表(“Pyrroloquinoline quinone
opens plant stomata.”) だけでなく口頭発表の追加の要請があり、”Production of ergothioneine in
Methylobacterium species.“を追加した。前者に関しては病原性細菌と植物における、気孔を巡る攻防の分子メカニズムを研究していた Dr. Shen Yang He と深い議論を行い、一流科学雑誌に投稿するために足りないデータなどの指摘を頂いた。同じくスイスに滞在中に共同研究を行わせていただいた Dr. Vorholt とも近況報告と論文化のための細かい打ち合わせを行った。後者は植物葉圏で主要な細菌である Methylobacterium 属細菌における新しいアミノ酸の蓄積に関する新しい知見を紹介し、それが葉圏での生存に重要であることを示した。
学会は少ない参加人数、静かな環境、フレンドリーな空気が提供されており、新しい人脈の形
成と旧交を温める良い機会であった。
以上- 178 -

【平成27年度研究費助成 海外渡航報告書】

平成 27 年度 海外渡航報告書
岡山理科大学・理学部
汪 達紘
公益財団法人ウエスコ学術振興財団の海外渡航に関する助成をいただき、2015 年 8 月 29 日 ～ 9 月 4 日の間にオーストラリアのブリスベンにおいて開催された 「The 9th International Conference on Dietary
Assessment Methods (ICDAM9)」に出席し、「A comparative study of dietary assessment between the camera
phone-based assessment method and the conventional method」を題した研究結果を発表した（図 1、図 2）。
なお、申請者の渡航日程・概要を表 1 に示した。
ICDAM9 には 68 カ国から 437 名の研究者が出席された。３日間にわたって延べ 27 テーマのシンポジウムセッ
ション、および 184 演題のポスター発表が行われ、疫学における食事摂取評価方法論のみならず、疾病予防のための身体活動・運動療法、統計方法論など多岐にわたる話題であった。会期中に、各国の演者の最新の研究成果も聞き、参加者との討論・情報交換により今後の研究に役立つ知見を得ることができた。
また、会議前日に、共同研究者の小柏道子先生とブリスベン・クイーンズランド大学の敷地にある National
Research Centre for Environmental Toxicology を訪問し
（図3）、
Dr. Cheng Peng、
Dr. Wasantha Wickramasinghe、
Dr. Chris Paxman らスタッフ（センター責任者の Jack C. Ng 教授のご都合により留守）と交流を行い、オーストラリアにおける重金属による環境汚染の歴史・現状、および発展途上国の研究者との共同研究の現状について説明していただいた。また、申請者の研究内容についても説明させていただき、討論を行った。
最後に、渡航費助成を賜った公益財団法人ウエスコ学術振興財団および関係者各位には、心より感謝申し上げたい。
表 1．渡航日程および概要
日程

概要

2015 年 8 月 28～30 日

移動：岡山⇒関西国際空港⇒香港国際空港 ⇒ブリスベン

2015 年 8 月 31 日

National Research Centre for Environmental Toxicology を訪問

2015 年 9 月 1～3 日

The 9th International Conference on Dietary Assessment Methods (ICDAM9), Brisbaneにて出席・発表

2015 年 9 月 4 日

移動：ブリスベン⇒香港国際空港⇒関西国際空港 ⇒岡山

図１．ICDAM9 2015 の会場

図２．ポスター発表

図３．National Research Centre forEnvironmental Toxicology 訪問- 179 -

【平成27年度研究費助成 海外渡航報告書】

平成２７年度 海外渡航報告書
津山工業高等専門学校
細谷 和範
このたび，公益財団法人ウエスコ学術振興財団海外渡航助成からのご支援を頂き，韓国のソウル市で２０１
５年７月２６日から７月３１日の一週間にわたって開催された ASME-JSME-KSME Joint Fluids Engineering
Conference 2015 (AJK2015-FED)に参加させていただきました．ここに渡航の報告をさせていただきます．
この会議はアメリカ機械学会，日本機械学会，韓国機械学会による流体工学に関する合同会議で，３４ものテクニカルトラックから成る大変規模の大きい会議でした．
おりしも MERS コロナウイルスの拡大が心配された時期でしたが，会議開催日には沈静化し，通常通り会議が開催され，４９０件もの講演がなされました．講演は全て英語による口頭発表で，各セッションとも闊達な議論がなされていました．発表者は韓国からの参加者が最も多く，次いで日本，アメリカ，中国と続き，フランスやイランなど，国際色の豊かな会議となっており，多数のレベルの高い研究成果の発表と有意義な議論がそこらかしこで行われていました．
また Invited Speakerによる高い研究レベルの講演により，議論はより一層闊達になりました．
報告者が発表したセッションは“Forum on Fluid Measurements and Instrumentation”で，放射性元素を含むスラリーの管理や，音響ドップラー効果を利用した局所流れの計測など，計測が困難な流れを対象にした研究を発表する Forum で，報告者は“Flow visualization of pipe flows obtained by MR imaginary”と題した発表を行いました．この研究は流体機械内部の見えない流れを非侵襲性の医療用診断装置の一つである MRI を用いて調べるもので，簡単な教科書レベルの流れ場の観察から実用性を視野に入れた水車タービンの流れの観察を試みた内容を発表しました．このセッションでは発表内容がバラエティーに富んでいたため，深い議論は難しいかと思いましたが，チェアマンの先生が MRI の専門家であったため，非常に鋭いコメントを頂きました．
また併せて MRI で様々な流体実験を行う内容について非常に面白いと好意的な意見も頂きました．
今回の会議では発表した計測のセッション以外にも風車や水車など自然エネルギーの回収に関するセッショ
ンでも様々な議論ができ，今後の研究活動の活力源となる多くの知見と人との出会いがありました．このような貴重な機会を与えてくださった公益財団法人ウエスコ学術振興財団には大変感謝致しますとともに，より一層，研究活動に邁進する所存です．

写真―１ 会場の様子

写真―２ 登壇前の報告者（受付前にて）- 180 -