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マルチリポーターアッセイ用1液アッセイ試薬

Tripluc® Luciferase Assay Reagent
Tripluc®システム専用の1液タイプのマルチリポーターアッセイ用試薬の登場です。
MultiReporter Assay System -Tripluc®（以下Tripluc®システム）は、緑色（SLG）、橙色（SLO）、赤色（SLR）の3色のルシフェラーゼを用いるマルチリポー
ターアッセイシステムです。1色を内部標準として、残りの2色を用いて、2種の被験配列（プロモーターなど）の転写活性の評価を同時に行うことができます。このアッセイ系を用いることにより、2種の被験配列の活性に関する厳密な比較が可能になります。
本試薬は、Tripluc®システムのルシフェラーゼアッセイ用に最適化された1液タ
イプの発光試薬です。従来の2液タイプに比べ、迅速簡便にレポーターアッセイを行うことができます。
図1．キット外観図3．SLG、SLO、SLRの発光®

図2．Tripluc®システムを用いた遺伝子発現解析のフロー

図4．SLG、SLO、SLRの発光スペクトル特長1 1ステップアッセイ
・従来の2液タイプの検出試薬では、細胞溶解と発光反応を別々に行うため、煩雑な操作が必要でした。本試薬では、培養液に試薬を添加し、10分間インキュベートするだけ
でアッセイが可能です。

特長2 安定した発光・試薬組成を最適化し、安定した発光反応が可能になりました（図5）。シングルチューブでのアッセイに加え、マルチ
ウェルプレートでのアッセイに最適です。
図5．SLG、SLO、SLRの発光持続性
96ウェルプレートのCHO細胞にpSLG/SLO/SLR-SV40 controlプラスミ
ドをそれぞれトランスフェクションし、翌日Tripluc ® Luciferase Assay
Reagentを加え、10分間インキュベートし、その後リピート計測を行いました。

881

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実施例

Tripluc® Luciferase Assay Reagentを用いた定量性の検討

96ウェル白色不透明プレートに培養したCHO細胞に、表1に示

表1．プラスミド混合条件（単位はμg/ウェル）

すように様々な比率で混合した pSLG/SLO/SLR-SV40

No.

SLG

SLO

controlプラスミド（0.2μg/ウェル）をトランスフェクションしま

A

0.01

0.19

した（n=6）。翌日、Tripluc® Luciferase Assay Reagentを

B

0.01

0.152

0.038

加え、10分間インキュベートした後、発光をプレートリーダー

C

0.01

0.114

0.076

D

0.01

0.076

0.114

E

0.01

0.038

0.152

F

0.01

を用いて、
①660nm±50 nm、
ARVOMX（パーキンエルマー社）②595±30 nm、③510±30nmの光学フィルター存在下で、

SLR

0.19

それぞれ測定しました。各ルシフェラーゼの各フィルター透過率を用いて、測定値から各ルシフェラーゼの活性を算出しました。
さらに、内部標準として一定量添加したSLGの活性値を用いて、
SLO、SLRの活性を標準化しました。
結果を図6に示します。この結果、各ルシフェラーゼについてプラスミドの添加量に比例した活性を確認することができました。
また、n=6のサンプル間でもバラツキの少ない結果を得ることができました。特に、n=6は96ウェル内の3つのcolumnに分けて配置しましたが、プレート内の位置によるバラツキは認められず、安定した測定を行うことが可能でした。

図6．測定結果
SLGで標準化したSLO、SLRの相対活性をプロットしています。

一口メモ
Tripluc®システムに用いられる3色のルシフェラーゼ
（図3、
4）
は、
いずれもD-luciferinを発光基質としますので、3つの酵素反応を1つのステップで行います。この発光
測定には、2ないし3種類のフィルターを搭載した発光測定装置を使用します。使用可能な発光測定装置は、専用のカラフルックアナライザー（チューブタイプ）のほか、パーキンエルマー社のARVOMXなどの光学フィルターの装着が可能なプレートリーダー（ルミノメーター）、などです。図4に示すように3色の発光は互いに重なりあっておりますが、測定に使用する光学フィルターに対する各ルシフェラーゼの透過率を利用することによって、各ルシフェラーゼの発光を算出することが可能です。
本システムでは3つのリポーターを使用することができますので、2つの異なった応答性や変動のタイミングなどを、より直接的に比較することが可能です。

品名および内容

包MultiReporter Assay System -Tripluc®-発光試薬

装

保存温度

Code No.

-80℃

MRA-301
MRA-301X5

10ml
10ml×5

Tripluc® Luciferase Assay Reagent

価

格￥23,000￥97,000※96ウェルプレートの場合、10mlは100反応に相当します。

品 名 及 び 内 容

包

装

保存温度

Code No.

価

格

プロモーター挿入用ベクター pSLG-test

20μg

-20℃

MRV-101¥80,000

プロモーター挿入用ベクター pSLO-test

20μg

-20℃

MRV-102¥80,000

プロモーター挿入用ベクター pSLR-test

20μg

-20℃

MRV-103¥80,000

SV40コントロールベクター pSLG-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-201¥80,000

SV40コントロールベクター pSLO-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-202¥80,000

SV40コントロールベクター pSLR-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-203¥80,000

HSVtkコントロールベクター pSLG-HSVtk control

20μg

-20℃

MRV-301¥80,000

プロモーター挿入用Tベクターキット SLO TA Cloning Kit

20回用

-20℃

MRT-101¥65,000

プロモーター挿入用Tベクターキット SLR TA Cloning Kit

20回用

-20℃

MRT-102¥65,000

プロモーター挿入用Tベクターキット（KOD用） SLO TA Cloning Kit for KOD

20回用

-20℃

MRT-201¥69,000

プロモーター挿入用Tベクターキット（KOD用） SLR TA Cloning Kit for KOD

20回用

-20℃

MRT-202¥69,000

1式−

CLX-101¥1,350,000

TM

色分離機能付チューブ測定用ルミノメーター カラフルックアナライザー※ベクターに関しては別途セット販売をしております。詳しくは、弊社までお問い合わせください。
上記のカラフルックアナライザーTM以外の商品につきまして、特許の関係上、ご購入の際には別途申込書を提出していただきます。企業の方のご購入に関しては、別途ライセンスが必要です。詳しくは弊社までお問い合わせください。

288

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高シグナル・長持続性発光リポーターアッセイシステム

Emerald Lucシステム
ヒカリコメツキムシ由来の新規ルシフェラーゼを用いたリポーターアッセイシステムです。
本品は、新規に開発されたルシフェラーゼを用いた高感度リポー
ターアッセイシステムであり、in vitro 及びin vivoアッセイ（図1）
で力を発揮します。本システムのブラジル産ヒカリコメツキムシ由来のルシフェラーゼ（Emerald Luc〈ELuc〉）は、従来のホタルルシ
フェラーゼに比べて安定で強い発光シグナルが得られます。低シグ
ナルやS/N比の改善、HTS解析のようにサンプル数が多く測定に長時間要する場合に有効です。
1液アッセイが可能

図1．Emerald Lucシステムアッセイフロー①Emerald Luc Luciferase Assay Reagent②Emerald Luc Lysis Solution

特長1 プレートアッセイにおける高いシグナル・長持続性の発光・ホタルルシフェラーゼと比べ、in vitro 測定において約3倍の発光強度を示し、高感度な測定が可能です。専用のAssay Reagentを用いることにより、簡便・迅速なアッセ
イが可能です。HTS解析に有用です。
図2．384プレートでの発光例

相対発光安定性比較

発光強度比較
強発光

安定発光

図3．in vitroアッセイにおけるルシフェラーゼ発光の比較

特長2 生細胞アッセイにおける高い発光・ホタルルシフェラーゼと比べ、生細胞において高い発光を示します。細胞培養液にD-ルシフェリンを添加することで、発光イメ
ージング解析やリアルタイム測定を行うことができます。Short lifeタイプのベクターと組み合わせることにより、時計遺伝子のリズム解析などの動的変動解析を行うことができます。
（aTechnical Reviewをp.17・18でお届けしております）
1）Viviani V. R. et al., Photochem. Photobiol. 70: 254-260（1999）
2）Viviani V. R. et al., Photochem. Photobiol. 76: 538-544（2002）
3）「動物実験代替のためのバイオマテリアル・デバイス」（シーエムシー出版）、235-243

参考文献

品

名

包

Emerald Lucシステム破壊系発光試薬

Emerald Luc Luciferase Assay Reagent

装

保存温度

Code No.

10ml
100ml

-80℃

ELA-101
ELA-102￥14,000￥78,000

100ml

-20℃

ELA-201￥8,00010μg-20℃

ELV-101￥35,000

10μg

-20℃

ELV-201￥35,000

20mg
20mg×5-20℃

MRL-101
MRL-101X5￥24,000￥92,000

Emerald Lucシステム細胞溶解剤（24穴以上大きさのプレートを用いる場合に使用）

Emerald Luc Lysis Solution
Emerald Lucプロモーター挿入用ベクター

pELuc-test
Emerald Luc-Short lifeタイプ-プロモーター挿入用ベクター

pELuc（PEST）-test
D-luciferin（カリウム塩）

価格※ヒカリコメツキムシ由来ルシフェラーゼ遺伝子を含むベクターは、弊社にて特許出願した技術です。当ベクター（Emerald Luc Vector Code No.;ELV-101,
ELV-201）の使用において、弊社の検出用試薬（Emerald Luc Assay Reagent Code No.;ELA-101, ELA-102 ,ELA-201, D-Luciferin Code No.; MRL101, MRL-101X5）を用いる場合は、営利・非営利団体に関らず、ライセンス契約は必要ございません。営利団体で弊社の検出用試薬を用いない場合は、ライセン
ス契約が必要となります。製品にライセンスポリシーが添付されておりますので、開封前に必ずご確認ください。ご不明な点は弊社までお問い合わせください。

883

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本製品はすでに販売を中止しております。

核酸増幅リアルタイムモニタリング装置

LineGene

核酸の増幅過程をリアルタイムモニタリング。コストパフォーマンスに自信あり。
本品は、核酸の増幅過程をリアルタイムにモニタリングする装置です。33フォーマットのパーソナルタイプですが、再現性と精度に優れるデータを取得可能です。機器本体価格もさることながら、ランニングコストも安価に設定されています。ソフトウェアが日本語対応となり、さらに使いやすくなりました。

特長1 優れたコストパフォーマンス

特長3 多様な系に対応・対応試薬は、SYBR ® GreenⅠ、TaqMan ® Probes

・測定に専用チューブやキャピラリーは不要で、汎用0.2ml
PCR用チューブを使用できます。

（レポーター分子：FAM、クエンチャー分子：TAMRA）、・非常に少ない反応ボリューム（10μl〜）で安定した結果

Hybridization Probes、Molecular Beaconなど、多様を実現します。

な系に対応します。

・試薬ランニングコストを低減※します。

励起波長：470nm
検出波長：530nm 、640nm 、710nm※反応ボリューム10μlで…37円/チューブ（弊社キットSYBR®
Green Realtime PCR Master Mixを用いた場合）

特長4 操作性重視

特長2 高感度オプティカルユニット

・日本語対応ソフトウェア搭載

・励起用光源は、発熱性が低く安定かつ長寿命のBlue

・操作性抜群（Ct値も簡単に求められます）

LEDを採用しています。

・増幅曲線のリアルタイム表示により、反応の進行状況が一・蛍光検出器は、検出限界が高く高速応答低ノイズのPMT

目瞭然です。また、ランニング中にグラフのスケールを拡を採用しており、蛍光シグナル信号を高感度かつ高速に大し反応初期の微小な蛍光をモニタリングすることも可能

読み取り可能です。

です。
・増幅の程度に合わせ、反応中にサイクルを追加、削除する

無料訪問デモを行っております。

ことも可能です。

弊社ウェブサイト（www.toyobo.co.jp/bio）〈お問い合せ・
ご請求コーナー〉からご依頼いただけます。

性・定量解析および融解曲線解析（SYBR® GreenⅠアプリ
ケーション）のどちらも可能です。

能■テンプレート濃度2倍差の検出
初期の鋳型濃度が2倍差のサンプルを、はっきりと区別して検出できます。
■ウェル間均一性
全ウェルにわたり同等の解析が可能です。

■ダイナミックレンジ（図上・右）
広範囲かつ正確に未知試料を定量できます。
10コピー程度の低濃度での検出も可能です。

主な仕様
3サンプル容量：0.2ml×33本
励起波長：

470nm

検出波長：

530nm 640nm 710nm

温度精度（設定温度）：≦±0.5℃（95℃）≦±0.3℃（72℃）≦±0.2℃（55℃）
温度均一性（設定温度）：

励起用光源：Blue LED≦±1.0℃（95℃）≦±0.5℃（72℃）≦±0.3℃（55℃）

蛍光検出器：フォトマルチプライヤー
チューブ（PMT）

電源：

100V 50/60Hz

最大消費電力： 1000W

温度制御範囲：30℃〜99℃

外形寸法：

W514×D456×H292（mm）

温度変化率：最大4℃/sec

重量：

23㎏

（2ステップ，45サイクルの反応=約90分）

品 名 及 び 内 容※製品の性能および仕様、外観は改良のため予告なく変更することがあります。

包

核酸増幅リアルタイムモニタリング装置

装

1式

＊
LineGene（本体 + ソフトウェア）

Code No.
BFFQD-33A

価

格¥1,890,000＊別途制御用のパソコンが必要です（現在お持ちのパソコンもお使いいただけます）。本体のパソコンの接続にはRS232Cポートを使用します。USB
ポートに本機を接続する際には、別途シリアルコンバーターが必要です。

488

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PCRクローニング用遺伝子プール

Human MosaicTM cDNA Template

本製品はすでに販売を中止しております。

66のソースに由来するcDNAが混合された理想的な遺伝子プールです。PCRによる遺伝子クローニングに最適です。
Human MosaicTM cDNA Templateは32のヒト組織、および34のヒト細胞株から調製されたcDNAライブラリーに由来するプラスミドDNAを混合したもので、PCRを用いるクローニングの際の鋳型として最適です。ヒトトランスクリプトームを幅広くカバーしています。

特長1 効率的なクローニングが可能
・66の様々なヒト細胞に由来するcDNAが混合された1

一口メモ

チューブで供給されます。組織から調製する手間を省くこと●タンパク質発現等に用いるDNA断片の増幅には、KOD-Plus-等の高正確性PCRポリメラーゼをご使用ください。
●通常のサイクルで増幅がみられない場合は、Nested PCR（2段階
PCR）
を行うか、
DMSOを5%程度添加する条件で検討されることをお薦めします。KOD系の酵素を用いる場合、
DMSOは酵素の正確性を落とさないことを確認しています。

ができます。
・組織特異的に発現しているような遺伝子でも効率的に増幅し、クローニングできる可能性があります。
・Nested PCR（2段階PCR）によりさらに感度・特異性を向上させ、クローニングの効率を向上させることができます。

特長2 高品質・cDNAライブラリーの調製にあたっては、PCR等の増幅反応は一切介しておらず、高品質です。

特長3 確実・レ ア 発 現 遺 伝 子 で あ る h u m a n a c t i v a t i n g
表1．遺伝子ソースリスト

transcription factor 2（ATF2）を増幅するためのPCRプライマーが添付されており、コントロール実験を行いつつ実験を進めることができます。

特長4 簡便・使用方法は、PCR系に本製品1μlを加えて50μlの反応液を調製し、増幅するだけです。

図1．インサート鎖長解析

M

図2．PCR結果

M

1

2

3

4.5kb insert
800bp insert

図1：NotⅠで直鎖化した本品の電気泳動結果。プラスミド（pT3）の約2.6kbを差し引くと、約0.8〜4.5kbの位置にインサートが確認されました。
図2：PCRによる増幅例。レア発現遺伝子がPCRで確認されました。
1：Human neutrophil cytosolic factor 4
2：Human activating transcription factor 2
3：Human general transcription factor ⅡE, polypeptideⅠ

品 名 及 び 内 容
PCRクローニング用遺伝子プール

Human MosaicTM cDNA Template
cDNA template
Control primer （ATF2遺伝子増幅用）

包

保存温度

100回用

Code No.

価格

GNHMT-100¥129,000

GNHMT-020¥49,000-20℃
20回用※詳しい情報に関しましては、www.genofi.com /をご参照ください。

88

装

5

No.88.qx 07.10.10 14:52 ページ 6

本製品はすでに販売を中止しております。

PCRクローニング用鋳型cDNA

PCR-Ready cDNA

様々な組織から作製したPCR鋳型用cDNA。遺伝子クローニング用のソースとして最適です。
PCR-Ready cDNAは、ヒト、マウス及びラットの各組織から抽出されたmRNAをOligo（dT）アンカープライマーで逆転写反応を行った後、2本鎖DNAを合成し、プラスミドに挿入されたcDNAプラスミドライブラリーです。全てのcDNAは、ハウスキーピング遺伝
子と低コピー遺伝子のPCRによって品質確認を行っています。
RT-PCRは、遺伝子発現を確認する有効な手法ですが、サンプルの入手、鋳型であるRNAの抽出、及び逆転写反応など煩雑な準備・操作が必要です。本製品は、入手が困難なヒトのサンプルのPCRによるcDNAクローニング等に最適です。
（保存：-20℃）
品 名 及 び 内 容

包装

Code No.

価

格●HumanPCR-Ready Human cDNA Kit, Adipose

30回用

MBPC40001¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Brain

30回用

MBPC40002¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Breast

30回用

MBPC40003¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Heart

30回用

MBPC40004¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Small intestine

30回用

MBPC40005¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Kidney

30回用

MBPC40006¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Liver

30回用

MBPC40007¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Lung

30回用

MBPC40008¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Lymph Node

30回用

MBPC40009¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Monocyte

30回用

MBPG40010¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Ovary

30回用

MBPC40011¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Pancrease

30回用

MBPC40012¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Placenta

30回用

MBPC40013¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Prostate

30回用

MBPC40014¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Skeletal Muscle

30回用

MBPC40015¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Spleen

30回用

MBPC40016¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Stomach

30回用

MBPC40017¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, T-cells（JURKAT）

30回用

MBPC40018¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Testis

30回用

MBPC40019¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Uterus

30回用

MBPC40020¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Leukemia Chronic Myelogenous K562

30回用

MBPC40021¥63,000

PCR-Ready Human cDNA Kit, Human Leukemia Promyelocytic, HL60

30回用

MBPC40022¥63,000

PCR-Ready Mouse cDNA Kit, Brain

30回用

MBPC40023¥63,000

PCR-Ready Mouse cDNA Kit, Heart

30回用

MBPC40024¥63,000

PCR-Ready Mouse cDNA Kit, Kidney

30回用

MBPC40025¥63,000

PCR-Ready Mouse cDNA Kit, Liver

30回用

MBPC40026¥63,000

PCR-Ready Mouse cDNA Kit, Lung

30回用

MBPC40027¥63,000

PCR-Ready Mouse cDNA Kit, Spleen

30回用

MBPC40028¥63,000

PCR-Ready Mouse cDNA Kit, Small Intestine

30回用

MBPC40029¥63,000

PCR-Ready Mouse cDNA Kit, Thymus

30回用

MBPC40030¥63,000

PCR-Ready Rat cDNA Kit, Bladder

30回用

MBPC40031¥63,000

PCR-Ready Rat cDNA Kit, Heart

30回用

MBPC40032¥63,000

PCR-Ready Rat cDNA Kit, Lung

30回用

MBPC40033¥63,000

PCR-Ready Rat cDNA Kit, Liver

30回用

MBPC40034¥63,000

PCR-Ready Rat cDNA Kit, Kidney

30回用

MBPC40035¥63,000

PCR-Ready Rat cDNA Kit, Brain

30回用

MBPC40036¥63,000

PCR-Ready Rat cDNA Kit, Spleen

30回用

MBPC40037¥63,000

PCR-Ready Rat cDNA Kit, lntestine

30回用

MBPC40038¥63,000●Mouse●Rat※詳しい情報に関しましては、www.toyobo.co.jp/bioをご参照ください。

688

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価格を変更しております。
現在の情報は、お問い合わせいただきますようお願いいたします。

CELL APPLICATIONS, INC. 正常動物細胞

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動物正常細胞（包装：1vial
キャンペーン
価格

キャンペーン
価格

Code No.

価

ウシ冠動脈内皮細胞（BCAEC）

CAB30005￥60,000 ￥48,000

マウス神経幹細胞（MNSC）,fetal

CAMS82020f ￥120,000￥96,000

ウシ肺動脈内皮細胞（BPAEC）

CAB30205￥60,000 ￥48,000

ブタ冠動脈内皮細胞（PCAEC）

CAP30005￥70,000￥56,000

ウシ大動脈内皮細胞（BAOEC）

CAB30405￥60,000 ￥48,000

ブタ肺動脈内皮細胞（PPAEC）

CAP30205￥70,000￥56,000

品

名

格

品

名

Code No.

保存：液体窒素）価格

ウシ冠動脈平滑筋細胞（BCASMC） CAB35005￥70,000 ￥56,000

ブタ大動脈内皮細胞（PAOEC）

CAP30405￥70,000￥56,000

ウシ肺動脈平滑筋細胞（BPASMC） CAB35205￥75,000 ￥60,000

ブタ冠動脈平滑筋細胞（PCASMC） CAP35005￥80,000￥64,000

ウシ大動脈平滑筋細胞（BAOSMC） CAB35405￥75,000 ￥60,000

ブタ肺動脈平滑筋細胞（PPASMC） CAP35205￥80,000￥64,000

ウシ腎動脈内皮細胞（BRAEC）

CAB90005￥95,000 ￥76,000

ブタ大動脈平滑筋細胞（PAOSMC） CAP35405￥80,000￥64,000

ウシ子宮内膜上皮細胞（BEnEpC）

CAB93205￥95,000 ￥76,000

ラット表皮角化細胞（REK）

CAR10205￥50,000￥40,000

ウシ腎動脈平滑筋細胞（BRASMC） CAB95005￥95,000 ￥76,000

ラット皮膚線維芽細胞（RDF）

CAR10605￥75,000￥60,000

ニワトリ大動脈平滑筋細胞（CAOSMC） CAC35405￥75,000 ￥60,000

ラット大動脈内皮細胞（RAOEC）

CAR30405￥114,000￥91,200

イヌ骨格筋細胞（CnSkMC）

CACn15005 ￥100,000 ￥80,000

ラット心線維芽細胞（RCF）,adult

CAR30605a￥97,000￥77,600

イヌ大動脈内皮細胞（CnAOEC）

CACn30405￥95,000 ￥76,000

ラット心線維芽細胞（RCF）,neonatal CAR30605n￥89,000￥71,200

イヌ肺動脈平滑筋細胞（CnPASMC） CACn35205￥85,000 ￥68,000

ラット大動脈平滑筋細胞（RAOSMC） CAR35405￥80,000￥64,000

イヌ大動脈平滑筋細胞（CnAOSMC） CACn35405￥95,000 ￥76,000

ラット骨芽細胞（ROb）

CAR40605￥80,000￥64,000￥95,000 ￥76,000

イヌ軟骨細胞（CnC）

CACn40205

ラット間葉系幹細胞（RMSC）

CAR49205￥80,000￥64,000

イヌ骨芽細胞（CnOb）

CACn40605 ￥100,000 ￥80,000

ラット肺線維芽細胞（RLF）

CAR50605￥75,000￥60,000

イヌ間葉系幹細胞（CnMSC）

CACn49205 ￥100,000 ￥80,000

ラット肝細胞（RH）

CAR78030￥60,000￥48,000

ネコ骨格筋細胞（FSkMC）

CAF15005￥100,000 ￥80,000

ラット脳微小血管内皮細胞（RBMVEC） CAR84005￥127,000 ￥101,600

ネコ軟骨細胞（FC）

CAF40205￥105,000 ￥84,000

ウサギ大動脈平滑筋細胞（RbAOSMC） CARb35405￥95,000￥76,000

ネコ骨芽細胞（FOb）

CAF40605￥105,000 ￥84,000

ラット神経幹細胞（RNSC）,adult

CARS82020a ￥120,000￥96,000

ネコ間葉系幹細胞（FMSC）

CAF49205￥100,000 ￥80,000

ラット神経幹細胞（RNSC）,fetal

CARS82020f ￥120,000￥96,000※1vialに含まれる細胞数は、マウス、ラット神経幹細胞：2×106cells、ラット肝細胞：3×106cells、他の細胞は、5×105cellsです。

動物正常細胞用培地
上でご紹介しております動物正常細胞に対応する増殖培地、分化培地を20% off でお届けします。対象品リストに関しましては、弊社ウェブサ
イト（www.toyobo.co.jp/bio）のキャンペーンコーナーをご覧ください。

887

No.88.qx 07.10.10 14:52 ページ 8

制限酵素35％OFFキャンペーン
ご好評いただいております下記制限酵素を期間中35%OFFにてご提供いたします。

期間：2007年11月6日〜2007年12月28日（ご注文分）

制限酵素（2006/2007総合カタログ P.5-6〜5-27 ご参照）品

Alw44ⅠBam HⅠ
Ban Ⅲ
BclⅠ
Bgl Ⅱ
BsmⅠ
Cfr 10Ⅰ
Cfr 9Ⅰ
CspⅠ
DdeⅠ
DpnⅠ
Eco105Ⅰ
Eco47Ⅰ
EcoRⅠ
EcoRⅤ
Hae Ⅱ
Hin1Ⅰ
Hinc Ⅱ
Hind Ⅲ
HpaⅠ
KpnⅠ
MroⅠ
MscⅠ
MvaⅠ
NaeⅠ
NarⅠ
NotⅠ
NruⅠ
PacⅠ
PpuMⅠ
PsiⅠ
PvuⅠ
Sau 96Ⅰ
Sac Ⅱ
SalⅠ
SbfⅠ
SfiⅠ
SmaⅠ
SpeⅠ
SphⅠ
TaqⅠ
TspEⅠ
XbaⅠ

名

包

装

400U×1本
12,000U×1本
2,000U×1本
500U×1本
6,000U×1本
100U×1本
50U×1本50U×1本
100U×1本
500U×1本
1,000U×1本
150U×1本
200U×1本
12,000U×1本
1,000U×1本
1,000U×1本
50U×1本2,000U×1本
12,000U×1本
200U×1本
10,000U×1本
40U×1本40U×1本1,000U×1本
250U×1本
200U×1本
1,000U×1本
400U×1本
50U×1本40U×1本
100U×1本
200U×1本
300U×1本
600U×1本
5,000U×1本
200U×1本
2,000U×1本
3,000U×1本
200U×1本
600U×1本
500U×1本
200U×1本
4,000U×1本

Code No.

保存温度

価

ALW-101
BAH-111
BAN-311
BCL-101
BGL-211
BSM-101
C10-101
CF9-101
CSP-101
DDE-101
DPN-101
E15-101
E47-101
ECO-111
ER5-101WT
HAE-201
HIN-101
HNC-211
HND-311
HPA-101W
KPN-111
MRO-101
MSC-101
MVA-101
NAE-101
NAR-101
NOT-111X
NRU-101W
PAC-101
PPM-101
PSI-101
PVU-101W
S96-101
SAC-211T
SAL-111
SBF-101
SFI-111
SMA-111SPE-101
SPH-111
TAQ-101
TSE-101
XBA-101W

-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃
-20℃

¥10,000¥6,000¥15,000¥9,000¥12,000¥11,000¥15,000¥10,000¥15,000¥10,000¥11,000¥12,000¥9,000¥6,000¥7,000¥11,000¥15,000¥15,000¥6,000¥9,000¥12,000¥10,000¥10,000¥10,000¥8,000¥10,000¥15,000¥11,000¥10,000¥10,000¥36,000¥10,000¥10,000¥8,000¥12,000¥30,000¥15,000¥12,000¥6,000¥12,000¥10,000¥11,000¥10,000

8

格

キャンペーン価格¥6,500¥3,900¥9,750¥5,850¥7,800¥7,150¥9,750¥6,500¥9,750¥6,500¥7,150¥7,800¥5,850¥3,900¥4,550¥7,150¥9,750¥9,750¥3,900¥5,850¥7,800¥6,500¥6,500¥6,500¥5,200¥6,500¥9,750¥7,150¥6,500¥6,500¥23,400¥6,500¥6,500¥5,200¥7,800¥19,500¥9,750¥7,800¥3,900¥7,800¥6,500¥7,150¥6,50088

No.88.qx 07.10.10 14:52 ページ 9

Flexib●KOD FX ●KOD -Plus- ●KOD -Plus- Ver.2

30％OFFキャンペーン

K

PC

日頃の感謝を込めまして下記KODシリーズを30%OFFにてご提供いたします。

期間：2007年11月6日〜2007年12月28日（ご注文分）
商品に関する詳細に関しましてはウェブサイト
www.toyobo.co.jp/bio
をご参照ください。

KOD FX（成功率No.1! 弊社比）
●高いPCR成功率を示します●Hot start法を採用しています●Taq DNA polymeraseの11倍の正確性を示します

品

Flexible KOD DNA polymerase

KOD FXa実施例特集を
p10〜13でお届けしております。

装＊

Code No.

保存温度

価

200U×1本（200回用）KFX-101-20℃¥35,000

名

包

他社酵
1回で
い ただ

格

キャンペーン価格

Flexible KOD DNA polymerase

KOD FX
KOD FX（1U/μｌ）
2×PCR Buffer for KOD FX
2mM dNTPs¥24,500＊50μl反応を行った時の使用回数を表示しています。

6名
実施
して

KOD -Plus-シリーズ（正確性No.1! 弊社比）
●Taq DNA polymeraseの約80倍の正確性を示します●Hot start採用で、効率もアップ
品

装＊

Code No.

保存温度

価

200U×1本（200回用）KOD-201-20℃¥30,000¥21,000

200U×1本（200回用）KOD-211-20℃¥32,000¥22,400

名

包格

キャンペーン価格

高正確性PCR酵素

KOD -PlusKOD -Plus-（1U/μｌ）
10×PCR Buffer for KOD -Plus2mM dNTPs
25mM MgSO4
高正確性PCR酵素（正確性をそのままにPCR成功率アップ）

KOD -Plus- Ver.2
KOD -Plus-（1U/μｌ）
10×PCR Buffer for KOD -Plus- Ver.2
2mM dNTPs
25mM MgSO4＊50μl反応を行った時の使用回数を表示しています。

88

9

P
C
R
が
う
ま
く
い
か
ず
に
困
っ
て
い
る
︒
︵
幅
広
い
P
C
R
で
力
を
発
揮
︶

高正
PC
した

高効
汎用
した

No.88.qx 07.10.10 14:52 ページ 10特集

Flexible KOD DNA polymerase

PCR実験の悩み、KOD FXが解決いたします。

KOD FX

KOD FXは、KOD DNA polymeraseをベースに開発された高性能PCR試薬です。優れた「増幅成功率」、「増幅効率」、「伸長性」を示し、幅広い
PCRにおいて確実な結果を期待できます。

大好評販売中PCRの新境地へ！
！
ットがかったターゲ
な
え
増
は
で
他社酵素
く
のご連絡を、多
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増
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回
1
ります。
い ただいて お

6名の先生方の実施例を掲載しております。

正
確
性

P
C
R
が
う
ま
く
い
か
ず
に
困
っ
て
い
る
︒
︵
幅
広
い
P
C
R
で
力
を
発
揮
︶

︵
ロ伸
ン長
グ性
性
能
︶

★★★★

高正確性
PCRを
したい

︵
収 増
量 幅
︶ 効
率

増
幅
成
功
率

サＧ
ンＣ
プリ
ルッ
チ

増
幅
末
端

伸
長
時
間

スホ
タッ
ート
ト

（/kb）

KOD FX （Taqの約１１倍） ★★★★★

★★★★★★

★★★★★★

★★★★★★

平滑末端

１min.

○

KOD DNA
Polymerase

★★

★★

★★

★★★★

平滑末端

３０sec.

ー

★★★★

★★★★

★★★

★★★★

平滑末端

１min.

○

★★★★

★★★★

★★★★

★★★★

平滑末端

１min.

○

★★★★★

★★★★★

★★★★

★★★

A付加あり

１min.

ー

★★★★★

★★★★★

★★★★★

★★★

A付加あり

１min.

○

★★★★★

★★★★★

★★★★

★★★★

A付加あり

３０sec.

ー

KOD -PlusKOD -PlusVer.2
Blend Taq®

高効率でBlend Taq®
汎用PCRを-Plusしたい
KOD Dash®

★★★★★
（Taqの約５０倍）★★★★★★
（Taqの約８０倍）★★★★★★
（Taqの約８０倍）★★
（Taqの約３倍）★★
（Taqの約３倍）★★
（Taqの約３倍）

No.88.qx 07.10.10 14:56 ページ 11

特集

Reliability

高い成功率

KOD FXでは、他社GC rich対応PCR試薬が増幅できないターゲットでも増幅できます。

GC richターゲットの増幅
ヒトTGF-β 2.3kb

ヒト IGF2R遺伝子［NM̲000876］8.9kb（GC含量約70%）

M1 1

2

3

4

5

6

7 M2

（GC含量約90%の領域を含む）

M1 1

2

3

4

5

6

7 M2

M1：1kb DNA ラダー
1 ：KOD FX
2 ：KOD -Plus3 ：KOD -Plus-+5% DMSO
4 ：A社汎用PCR酵素（Taqベース）
5 ：B社高正確性酵素
6 ：C社高正確性酵素
7 ：Taq DNA Pol.
M2：λ／Hin dⅢ digest
鋳型：ヒトゲノムDNA 10ng／50μl 反応系

M1：1kb DNA ラダー
1 ：KOD FX
2 ：A社汎用PCR酵素（Taqベース）
3 ：D社Long PCR酵素（Taqベース）
4 ：E社GCrich対応高正確性酵素
5 ：F社GCrich対応Long PCR酵素Ⅰ
6 ：G社GCrich対応Long PCR酵素Ⅱ
7 ：H社高効率Long PCR酵素
M2：λ／Hin dⅢ digest
鋳型：ヒトcDNA（HeLa Total RNA 50ng相当）／50μl 反応系

様々な先生方からKOD FXを使った実施例（実施例は弊社ウェブサイト：www.
c-mos遺伝子の増幅（変異導入のためのPCR）
1

BMP-2遺伝子の増幅
M

2

1

M

2

遺伝子名

プロトオンコジーンc-mos

遺伝子名

サンプル

Plasmid DNA 5ng

サンプル

ターゲット長ターゲット長約4.5kb

プライマー条件 32mer, 0.2μM（final）

Mouse genome BAC clone DNA 0.1μg
約2kb（GC-rich領域含む）

プライマー条件 20mer, 1μM（final）

サイクル

サイクル

KOD FX
95℃ 3min,（95℃ 30sec., 55℃ 1min., 72℃ 4min.）×20
72℃ 7min
A社高正確性酵素

KOD FX（98℃ 10sec., 68℃ 2min.）×35cycles
A社Long PCR酵素（94℃ 1min., 60℃ 30sec., 72℃ 2min.）×35

推奨条件

データご提供東京工業大学大学院
生命理工学研究科
生命情報専攻立花和則先生1：KOD FX
2：A社高正確性酵素

Mouse BMP-2

データご提供鳥取大学医学部
生命科学科 分子生物学
安永茉由先生、佐藤建三先生M：λ／Eco T14I DNA Markers
1：KOD FX
2：A社Long PCR酵素

先生からのコメント
これまで何回も失敗していたPCRが一度でうまく行った。ちなみに、A社の酵素で増幅した約2kbのバンドは、シーケンスの結果、別の遺伝子だった。

先生からのコメント
得られたコロ ニ ー 数 は 、KOD FXの方が圧倒的に多かった。

マウスゲノムDNAを用いたPGK neo遺伝子の検出
M

1

2

3

4

M

Chick GAD67プロモーター領域のクローン化
1

2

3

4

5

M

6

7

1, 2：A社Long PCR酵素
3, 4：KOD FX
1, 3： 遺伝子型（＋）
の遺伝子改変マウスゲノム
2, 4： 遺伝子型（−）
の遺伝子改変マウスゲノム（NC）
M：φX174／Hin cⅡ＋
λ／Hin dⅢ DNA Markers

遺伝子名

PGK neo

サンプル

Mouse genomic DNA 5〜10ng

ターゲット長1.5kb

プライマー条件 30mer, 0.4μM（final）
サイクル
KOD FX

94℃ 2min.,（98℃ 10sec., 68℃ 90sec.）×30

A社Long PCR酵素 94℃ 2min.,（94℃ 30sec., 60℃ 2min.）×30
72℃ 2min.

1：A社高正確性酵素
2：B社Long PCR酵素
3：C社Long PCR酵素
4：D社Long PCR酵素
5：E社Long PCR酵素
6, 7：KOD FX
M：1kb Ladder Markers（上から10kb, 8kb, 6kb）

遺伝子名
データご提供東京大学大学院医学系
研究科細胞分子薬理学教室（飯野研究室）金丸和典先生先生からのコメント
既存の製品では比較的困
難な検出が、KOD FXでは明瞭に検出できて驚いた。
さらに 、非 特 異 的 増 幅 が
KOD FXでは消失した。

サンプル
ターゲット長Chick GAD67プロモーター領域
Chick kidney genomic DNA 0.1μg6273bp

プライマー条件
F primer：T CA G G T T G G T G T T CT CT CA CT G
22mer
R primer：T C A G C G C G G G T T G A A A G G A A G C
22mer
サイクル
KOD FX （98℃ 10sec., 68℃ 7min.）×35
KOD FX以外 推奨条件

データご提供京都大学医学部神経生物学講座（第一生理学教室）
石井孝広先生先生からのコメント
全く増えなかったのが増えた。クローン化後、配列が合っていることも確認した。

No.88.qx 07.10.10 14:56 ページ 12

特集

Amplification Efficiency

抜群の増幅効率

KOD FXでは、少ない鋳型量からでも優れた増幅効率を示します。

KOD FX
M

1

2

3

4

A社
汎用酵素
（Taqベース）

KOD -PlusVer.2
M

1

2

3

4

M

1

2

3

4

B社
高正確性
酵素
M

1

2

3

Ｃ社
高正確性
酵素
4

M

1

2

3

Taq DNA pol.
4

M

1

2

3

4

M
M：1kb DNA ラダー
1：鋳型量 0.1ng
2：
1ng
3：
10ng
4：
100ng

鋳型：ヒトゲノムDNA 0.1ng〜100ng／50μl 反応系

PCRサイクル条件： 94℃

2min.

98℃

10sec.

68℃

3min.

ターゲット：β-globin 2.8kb

30 cyclesをお寄せいただきました。

基 本 条 件

toyobo.co.jp/bioでも公開しています）
Human転写因子（HNF3b, C/EBPβ, FTFおよびHNF6）
cDNAとmiR-17, 18, 19, 20, 92領域genomic DNAの増幅
M 1 2 3 4 5

M 1 2 3 4 5

M 1 2 3 4 5＊他社酵素については、製品添付のプロトコールに従い30サイクルにて実施しました。

M 1 2 3 4 5 M 1 2 3 4 5（1）反応液組成
2×PCR buffer for KOD FX 25μl
2mM dNTPs
10 μl
10pmol／μl Primer F
1.5μl
10pmol／μl Primer R
1.5μl
Genomic DNA〜200ngPlasmid DNA
〜50ng
cDNA
〜200ng（RNA相当）
KOD FX（1.0U／μl）
1μl
DW
up to 50μl

2ステップサイクル
94℃ 2min.
98℃ 10sec.
68℃ 1min.／kb

HNF3b
サンプル

サイクル

C/EBPβFTF

HNF6

HNF3b, C／EBPβ, FTF, HNF6：
ヒト肝癌由来細胞株HuH7由来cDNA（0.1μg Total RNA相当）
miR-17〜92：
ヒト肝癌由来細胞株HuH7由来Ｇｅｎｏｍｉｃ DNA 0.2μg
KOD FX

94℃ 2min.,（98℃ 10sec., 55℃ 30sec., 68℃ 2min.）×40cycles

他社酵素

推奨条件

miR-17〜92

1：KOD FX
2：A社高正確性酵素
3：B社高正確性酵素
4：B社高正確性酵素（GC buffer ＋ 3% DMSO）
5：B社高正確性酵素（GC buffer ＋ 6% DMSO）
M：500base Ruler

遺伝子名、
ターゲット長、及びプライマー配列¡HNF3b（ターゲット長：1.4kb）
プライマー 5'AC TCGAATT CCAGTATGCTGGGA G CG G TG A A G A 3
5'AAGGGGTA CCAGAGTTAGC CGG G CCTG A A 3 '¡C／EBPβ（ターゲット長：1.0kb）
プライマー 5'ATTAGAATT C GTTCATGC AACGCCTG G TG G CC 3 '5'CGCGGGTA CCGCGCTAGC AGTGG CCG G A G G A 3 '¡FTF（ターゲット長：1.6kb）
プライマー 5'C TATGAA TTC AC TAAGAATGTCTTCTA A TTC 3 '5'ATTC GATATCTTTAAAGC AAGTTTTTA A 3 '¡HNF6（ターゲット長：1.4kb）
プライマー 5'TCGCGAATTC CAC GATGAAC GCG CA G CTG A CCA T 3 '5'CTTTGGT AC CGAGGTTTTAGTTTG TG G TTCT 3 '¡ miR-17, 18, 19, 20, 92領域（ターゲット長：1.1kb）
プライマー 5'GGTTAC TAGTTGTTAGAGTTTGAG G TG TTA 3 '5'TATGAC TAGTCATATCGCAATAC TTA A CA G 3（赤字はhomologous sequenceを示します）

25〜40cycles

ステップダウンサイクル
94℃ 2min.
98℃ 10sec.
74℃ 1min.／kb
98℃ 10sec.
72℃ 1min.／kb
98℃ 10sec.
70℃ 1min.／kb
98℃ 10sec.
68℃ 1min.／kb
68℃ 7min.

5 cycles5 cycles5 cycles15〜25cycles

Q1:プライマー設計などに関して
何かコツはありますか?
A1: 10kbを超える長いターゲットの増
データご提供
金沢大学がん研究所
細胞情報調節
黒木和之先生先生からのコメント
容易に各種クローンを入手でき驚きました。

幅には、通常より長め(27mer以上）にPrimerを設計して特異性を上げると共に、アニーリング（及び伸長反応）を比較的高い温度に設定することで、より良い結果を得ることができます。特に、ステップダウンサイ
クルでの増幅が有効です。また、少なくともカートリッジ精製した精製度の高いプライマーを用いることによって、非特異バンドを減らすことが可能です。

No.88.qx 07.10.10 14:56 ページ 13

特集

優れた伸長性（増幅可能鎖長） Long Target Capability
KOD FXでは、λDNAを鋳型に40kb、ヒトゲノムDNAを鋳型に24kb、cDNAを鋳型に13.5kbの増幅が可能です。

M1 1

2

Long Targetの増幅

M：1kb Ladder Markers
1：KOD FX
2：A社Long PCR用酵素
3：A社高正確性酵素

Template:逆転写反応液（cDNA）
M1 1

2

植物発現プロモーターに連結させた
植物ウイルスcDNA増幅

3

3 M2
鋳型：逆転写反応液（ヒトcDNA）
Human total RNA100ng相当／50μl 反応系
M1：1kb DNA ラダー
1 ：Polymeraseε6.8kb
2 ：Insulin-like growth factor 2 receptor 8.9kb
3 ：Dystrophin 13.5kb
M2：λ／Hin dⅢ digest

遺伝子名

発現プロモーター＋植物ウイルスcDNA

サンプル

プラスミドDNA 0.2μg

ターゲット長11kb

プライマー条件 21 mer（GC=21%）サイクル
KOD FX 94℃ 2.5min.,（94℃ 15sec., 57℃ 15sec., 68℃ 7min.）×25
A社Long PCR酵素、高正確性酵素
94℃ 2.5min.,（94℃ 15sec., 57℃ 15sec., 72℃ 7min.）×25

データご提供日本大学生物資源科学部
植物病理学研究室
井村喜之先生先生からのコメント
KOD FXは、A社のLong PCR
酵素と比較して増幅効率がはるかに優れていた。また、A社
高正確性酵素ではどの条件でも増幅することができなかった。さらに、KOD FXは50μｌの系に対して1Uの使用で充分な結果が得られた。

Q2: PCR増幅時の正確性はどのくらいですか?
A2: Taq DNA polymeraseの約11倍です。KOD FXのPCRエラーによるミス塩基の取り込み頻度（エラー率）は、実際にシーケンシングにて解析した144,535塩基中、わずか19塩基でした。このエラー率は、他社Long PCR用酵素の約10倍優れている値でした。実際に、KOD FXで増幅した13.5kbのヒトジストロフィン（DMD）遺伝子をベクターにクローニングしたところ、5クローン中1クローンの割合でPCRエラーのないクローンを取得することができました。
PCRエラー率＜PCRエラー率の測定方法＞
各酵素にてヒトゲノムDNAを鋳型にβ-globin領域2.4kbの増幅を行い、PCR産物をTAクローニング後、96クローンをピックしてシーケンシングを行い、配列の確認を行いました。

KOD -PlusKOD FX
Pfu DNA Polymerase
A社Long PCR用試薬
Taq DNA Polymerase※KOD -Plus- Ver.2の正確性はKOD -Plus- とほぼ同等です。

0

20

40

100
60
80
Mutation Frequency（×10-5）

140

160

保存温度

Code No.

価200U×1本［200回用*］-20℃

KFX-101￥35,000（200U×1本）
×5［1,000回用*］-20℃

KFX-101X5￥140,000

10回用

-20℃

TAK-201￥16,000

品名および内容
KOD FX
KOD FX（1U/μl）
2×PCR Buffer for KOD FX
2mM dNTPs

120

包高効率TAクローニングキット

TArget Clone™ -Plus-

装*50μl反応を行った時の反応回数を表示しています。
※KOD FXで増幅されたDNA断片は平滑化されているため、通常のTAクローニングはできません。TArget Clone™ -Plus-をお使いください。

ライフサイエンス事業部（大阪）〒530-8230 大阪市北区堂島浜二丁目2番8号
TEL.06-6348-3786 FAX.06-6348-3833
E-mail order̲lifescience@toyobo.jp

ライフサイエンス事業部（東京）〒103-8530 東京都中央区日本橋小網町17番9号
TEL.03-3660-4819 FAX.03-3660-4951
E-mail order̲lifescience@toyobo.jp

Toyoboテクニカルライン
TEL.06-6348-3888（9：00〜12：00 13：00〜17：00（土・日・祝を除く））
FAX.06-6348-3833
E-mail tech̲osaka@toyobo.jp

Toyobo Web Site
［ http：//www.toyobo.co.jp/bio ]格

No.88.qx 07.10.10 14:56 ページ 14

Can Get Signal®
Immunoreaction Enhancer Solution
Can Get Signal ® Immunoreaction Enhancer Solution（以下、Can Get Signal ®）は、ウェスタンブロッティングやELISAなど、抗原抗体反応を用いる解析でしばしば問題になる、感度不足や高いバックグラウンドを改善するための免疫アッセイ用反応促進試薬です。
特に、反応性が低い抗体で顕著な効果を示す傾向があり、抗リン酸化タンパク質抗体や抗His-tag抗体などの良い結果が得られにくい抗体の使用において優れた結果を発揮し、多くの先生方にご好評をいただいております。
今回は、Can Get Signal ®を、更に効果的かつ幅広くお使いいただくために、テクニカルラインで頻繁にお受けする質問を中心に、商品のご説明をいたします。

図1．Can Get Signal ®を用いるウェスタンブロット解析フロー

1

今使っている抗体では全く検出がうまく行かないのですが、そのような抗体でもCan Get Signal ®
で改善が可能ですか?

従来法

Can Get Signal ®

EGFR

1

非特異のバンドばかりが目立ち、目的のバンドがどれだか分からない右図（従来法）のような結果は、日常の実験における典型的な失敗の症状といえます。

Can Get Signal ®を用いることによって、これらの症状が劇的に改善されることがあります。
実験1はEGFR発現亢進株として知られるA431細胞をサンプルとして、EGFRタンパク質の検出を試みた実験です。
従来法では目的のバンドが非特異バンドに埋もれ、ほとんど検出できなかったのに対して、Can Get Signal ®を用いた場◆実験1◆

合では、非常に明瞭な検出が可能となりました。

サンプル：

A431細胞溶解液（2倍段階希釈）

ブロッキング：5% スキムミルク/TBS-T
一次抗体：

抗EGFR mouseモノクローナル抗体（1：2000, Dako）

二次抗体：

抗mouse IgG goatポリクローナル抗体-HRP標識（1：20000, Santa Cruz Biotechnology）

検

14

出：

ECL Plus（GE Healthcare）

88No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 15

2

Can Get Signal ®を使わなくても十分に検出可能なのですが、そんな場合でもCan Get Signal ®を使うメリットはありますか?
2
従来法

Can Get Signal ®

1：10001：5000

多くの場合、Can Get Signal ®を用いることで、抗体の使用量を減らすことができ、かつ良好な結果を得ることができます。
実験2は、His-tagを融合したERK2タンパク質（無細胞タンパク質発現系で合成）のウェスタンブロッティングによHis-Tag
ERK2

る検出を試みた実験です。従来法でも十分にシグナルは確認できるものの、バックグラウンドが高く、非特異バンドの出現も見られました。一方、Can Get Signal ®には抗原抗体
反応を高める効果があり、同じ強さのシグナルを得るためでも、必要な抗体量を従来法より大幅に減らすことが可能でし

◆実験2◆
サンプル：

た。今回の実験では、Can Get Signal ®を使うことによってHis-tag ERK2無細胞タンパク質合成反応液（2倍抗体量を5分の1に減らすことができました。

段階希釈）

Can Get Signal ®を用いることで、貴重な一次抗体の使

ブロッキング: 5% スキムミルク/TBS-T
一次抗体：
二次抗体：

抗His-Tag rabbitポリクローナル抗体（1:1000

用量を減らし、
しかもS/N比の高いより明瞭な像を得ること

または1：5000, Santa Cruz Biotechnology）

ができます。

抗rabbit IgG goatポリクローナル抗体-HRP標識（1：20000, Santa Cruz Biotechnology）

検出:

ECL Plus（GE Healthcare）

3

他社からもウェスタンブロッティング用反応促進試薬が販売されていますが、それらの試薬とCan Get Signal ®
とは何が違うのですか?

3

Can Get Signal ®以外にも、ウェスタンブ
ロッティングのシグナルを増強する試薬は従来法

Can Get Signal ®

A社試薬

他社から販売されていますが、それらの製品とCan Get Signal ®には根本的な違いがあります。
他社品では、タンパク質をブロットした膜を抗体反応前に前処理し、抗体との結合

His-Tag
ERK2を容易にするなどの原理が使われているようです。その中には、従来法よりも作業ステップが増えてしまう上、改善効果も限定的であったり、ニトロセルロース膜にしか使用できないものもあるようです。
一方、

Can Get Signal ®は、抗原抗体反応に直接作用し、抗体の能力を最大限に引き出すことが特長であり、非常に幅広い系に対して効果的に作用します。膜の種類にも依存しません。

◆実験3◆
サンプル：
一次抗体：

実験3は、A社製シグナル増強試薬との比較例で、それぞれ推奨の手順に従って比二次抗体：

抗rabbit IgG goatポリクローナル抗体-HRP標識(1：20000,
Santa Cruz Biotechnology)

検出：Signal では高いシグナル増強効果が認®

められました。

88

抗His-Tag rabbitポリクローナル抗体(1：2000, Santa Cruz
Biotechnology)

較を実施しました。A社製試薬の効果はわず か で あ っ た の に 対 し 、C a n G e t

His-Tag ERK2 無細胞タンパク質合成反応液(2倍段階希釈)

ブロッキング：5% スキムミルク/TBS-T

15

ECL Plus (GE Healthcare)No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 16

4ブロッキング条件などを変更することで、更に良い結果を得ることはできますか?

4

Can Get Signal ®を用いる解析では、今お使いいただいているブロッキング等の条件・試薬もそのまま用いることができま

5％スキムミルク/TBS-T

5％ BSA/TBS-T

すが、ブロッキング条件や検出反応などの条件を至適化することで、更に改善できる可能性があります。
実験4は、Can Get Signal ®を使用してHeLa細胞からActinタンパク質の検出を試みた実験ですが、ブロッキング剤

Actinを変更することにより、検出感度や特異性に違いが現れました。
一般的には、スキムミルクは安価でブロッキング能が高い一方、シグナル自体も弱めてしまう（マスキング効果）、
リン酸化タ
ンパク質の検出には使用できないといった欠点があるといわ※いずれもCan Get Signal ®使用れています。逆にBSAは、ブロッキング能や価格面では若干ス
キムミルクに劣りますが、強いシグナルを得たい場合には寧ろ◆実験4◆

適しています。また、
リン酸化タンパク質の検出でのファーストサンプル：

チョイスとしても用いられます。

ブロッキング：5% スキムミルク/TBS-Tまたは抗体反応以外にも実験の成功を左右する要素は大いに含ま

HeLa細胞溶解液（2倍段階希釈）
5% BSA/TBS-T

一次抗体：

れていますので、実験条件を綿密に検討することが肝要である

抗Actin goatポリクローナル抗体（1：2000, Santa Cruz Biotechnology）と思われます。
二次抗体：

抗goat IgG donkeyポリクローナル抗体-HRP

検

ECL Plus（GE Healthcare）

標識（1：20000, Santa Cruz Biotechnology）

5

Can Get Signal ®が引用されている論文を知りたいのですが。

5

以下のような論文がございます。

出:・Proc Natl Acad Sci U S A, 104：7500-7505（2007）

・Proc Natl Acad Sci U S A. 102：11663-11668（2005）

・International Archives of Allergy and Immunology ,・The Plant Cell 17：389-403（2005）

141：322-330（2006）

・J. Biol. Chem., 280：39436-39447（2005）

・J. Neurochemistry, 98：20-33（2006）

・Cancer Research 65：2617-2625（2005）

・J. Cell Biol, 175：135-146（2006）

・Proc Natl Acad Sci U S A, 102：11663-11668（2005）

ここにご紹介しましたように、Can Get Signal ®は、低い抗体価によるシグナル不足を解決するだけでなく、特異性の改善にも大きな力を発揮します。ご存知でなかった方、知っていたけど使用したことがなかった方、是非一度お試しの上、その効果をご確認ください。
また、免疫組織染色や免疫細胞染色を実施されている先生方には、免疫染色用の姉妹品Can Get Signal ® immunostainもご用意しております。あわせてお試しください。

品 名 及 び 内 容

Can Get Signal ®
Solution 1 for primary antibody
Solution 2 for secondary antibody

包

装

保存温度

各250mlCode No.

価

NKB-101¥30,000

格

NKB-101T¥10,000

4℃
各50ml

®

Can Get Signal
Solution 1 for primary antibody

250ml

4℃

NKB-201¥17,000

250ml

4℃

NKB-301¥17,000

各5ml

4℃

NKB-401¥12,000

NKB-501¥30,000

20ml×4本

NKB-502¥70,000

20ml×1本

NKB-601¥30,000

NKB-602¥70,000®

Can Get Signal
Solution 2 for secondary antibody®

Can Get Signal immunostain
Starter Kit Solution A
Solution B
Can Get Signal
Solution A®

Can Get Signal
Solution B®

immunostain

immunostain

20ml×1本

20ml×4本

16

4℃

4℃

88

No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 17

高発光型ルシフェラーゼ（Emerald Luc）
を用いた、
イメージングによるプロモーターアッセイ
オリンパス株式会社 研究開発センター 基礎技術部
はじめ に
ルシフェリン−ルシフェラーゼ反応を用いた遺伝子発現のプロモ

カリコメツキムシに由来し、これまでのホタルルシフェラーゼに比べ、ーターアッセイは、発光計測における高い信号／ノイズ比、広いダイ

生細胞において安定で強い発光が観察されます。よって、このルシ

ナミックレンジ、定量性などの特性から、ルミノメーターを用いたフフェラーゼを用いることにより、生細胞での発光イメージングが容易ォトンカウント法によって行われています。この方法では、測定対象に行えるようになりました。

からの総発光量を計測するだけですので、画像としての情報は得ら

cAMPは細胞内セカンドメッセンジャーとして、細胞外からのシグナれません。プロモーター領域を決定するようなアッセイでは、
この測

ルを核内に伝える重要な役割を果たしています。cAMP濃度が上定で十分ですが、発生過程における遺伝子の発現パターンと形態形

昇するとcAMP依存性プロテインキナーゼが活性化され、転写因子成の様子や、神経細胞とグリア細胞など異種の細胞が混在する場合

で あ る CRE-Binding proteinがリン 酸 化 さ れ て cAMPの複数のプロモーターアッセイでは、細胞や組織を培養しながらイ

Response Element（ CRE）に結合し、一群の標的遺伝子の転写

メージングで解析する必要があります。

が誘導されます。ここでは、CREに制御されたELucを用いたイメー

高発光型ルシフェラーゼのEmerald Luc（ELuc）は、ブラジル産ヒジングによるプロモーターアッセイをご紹介します。

方法
して一晩培養後、培養液にルシフェリン（0.5mM）を添加して、（1）cAMP Response Element（CRE）アッセイ
pELuc（PEST）遺伝子の上流にCRE、HSVtkプロモーターを

LUMINOVIEWにて観察しました。露出時間は、それぞれ1分（核配置したプラスミドを構築し、HeLa細胞にトランスフェクションし局在）、2分（小胞体局在）、5分（ペルオキシソーム局在）としまました。このプラスミドで発現されるELucのC末端にはPEST配した。

列が付加されており、細胞内での半減期が短縮されるため変動する現象のモニターに適しています。細胞の観察は、培養液にルシ
フェリン（0.5mM）を添加し、Forskolin（10μM）で刺激後、発光イメージングシステムLUMINOVIEW（オリンパス社）を用いて行いました。撮影条件は、露出時間は5分、10分間隔で18時間撮影としました。
（2）Emerald Lucによる細胞内局在の観察
ELuc（PEST）のN末端に核移行シグナル（NLS）、もしくは小胞体シグナル（Calreticulin）を有するプラスミド、及びELucのC
末端にペルオキシ局在化シグナルを有する発現プラスミドを構築しました。これらのプラスミドをHeLa細胞にトランスフェクション

図1．発光イメージングシステム LUMINOVIEW（LV200）、オリンパス社製

結果及び考察（1）cAMP Response Element（CRE）アッセイ
図2は、刺激後1時間および7時間後の発光画像です。
図3は、図2右中で任意に選択した10細胞（領域）の発光強度の時間変化をグラフ化したものです。図4は、これら 1 0 細 胞 の 平 均 の 発 光 強 度 を 表し て い ま す 。
Forskolin刺激によるCREの応答は、1時間後には画像で撮れるほどになり、約4時間後にピークを迎え、徐々に回復しました。図4に示すように、各細胞の平均の発光
強度変化は、これまでのルミノメーターによる結果と一致しますが、画像で各細胞について解析してみると、全ての細胞が同じような応答をしているわけではないこと
図2．CREイメージングアッセイ
左：刺激1時間後の発光画像
右：刺激7時間後の発光画像。任意の10細胞の領域を指定が分かりました。本システムでは、それらの細胞に注目して、細胞周期や分化の程度などを追跡して解析するこ8817No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 18

とも可能です。このように、ELuc等のルシフェラーゼを用いてイメージングによるプロモーターアッセイを行うことによって、シグナル伝達
からその後の下流の遺伝子発現までを1細胞ごと効率的に追跡できることがわかりました。

図4．図2（右）で指定した10細胞平均の発光強度の経時変化

図3．図2（右）で指定した10細胞の発光強度の経時変化（2）Emerald Lucによる細胞内局在化の観察
高発光型のルシフェラーゼを用いることによって、緑色蛍光タンパク（GFP）のように細胞内での局在を観察することが可能でした（図5）。
細胞内局在が観察できれば、細胞質と核の間のシグナル移行と、その下流に当たる遺伝子発現のデータを組み合わせた1細胞レベルでの実験なども可能になります。また、発光観察は、蛍光観察のような励起光を必要としませんので、細胞へのダメージが少なく長期間のモニターにも適しているとも言えます。

核局在
10μm

小胞体局在
10μm

ペルオキシソーム
局在
10μm

明視野画像

発光画像

重ね合わせ画像

図5．ELucの各種細胞小器官への局在の観察
それぞれ細胞小器官への移行シグナルを融合したELucを用いました

品

名

包

装

保存温度

Code No.

10μg

-20℃

ELV-101￥35,000

pELuc（PEST）-test＊

10μg

-20℃

ELV-201￥35,000

D-luciferin（カリウム塩）

20mg
20mg×5-20℃

MRL-101
MRL-101X5￥24,000￥92,000

Emerald Lucプロモーター挿入用ベクター

pELuc-test＊
Emerald Luc-Short lifeタイプ-プロモーター挿入用ベクター

価格＊本製品を弊社の検出用試薬（Emerald Luc Luciferase Assay Reagent Code No.;ELA-101、102、D-Luciferin Code No.; MRL-101、101X5）を用い、研究目的で使用する場合はライセンス契約の手続きはございません。弊社以外の検出用試薬を用いる場合や、研究目的以外で使用する場合は、ライセンス契約が必要です。製品にライセンスポリシーが添付されていますので、開封前に必ずご確認ください。ご不明な点は弊社までお問い合わせください。

1888

No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 19

ReverTra Ace® qPCR RT Kitを用いた
レア発現遺伝子の検出比較例
東洋紡績（株）

敦賀バイオ研究所 川井 淳

はじめ にReverTra Ace® qPCR RT KitはリアルタイムPCRに用いるcDNAの合成に最適なキットとして開発されました。高効率逆転写酵素：ReverTra Ace ®をベースに、最適化された
Oligo dTとRandom primerのmixture、及び改良されたBuffer条件の採用により効果的な逆転写反応を実現しています。本キットを用いることにより、様々なRNAから効率良く
cDNA合成を行うことができ、リアルタイムPCR解析の感度を向上させることができます。
今回、HeLa細胞より精製したTotal RNAをサンプルとして、HeLa細胞中での発現量が低いと報告されている、TNF-α、IL-8、及びKRT(Keratin)10のmRNAの検出を各社キットを用いて行い、検出感度を比較しました。

方

法

まず、
ヒト由来細胞株であるHeLa細胞から精製したTotal RNA

cDNA合成の条件は、以下のとおりです。

100ngを各社の逆転写キットを用いて逆転写反応（10μl)を行いました。次に、合成したcDNA溶液がリアルタイムPCR反応液のReverTra Ace® qPCR RT Kit：37℃,15min

10%となるように添加し、リアルタイムPCR解析により、TNF-α、

A社：37℃,15min

IL-8、及びKRT(Keratin)10遺伝子の検出効率の比較を行いましB社：25℃,10minた。さらに、TNF-αに関しては、
リアルタイムPCR反応液の2%にな

C社：42℃,15min

るように添加したものに関して、検出限界付近での感度の比較を行

D社：25℃,10min→50℃,30min→37℃,2hr

いました（ n=5 ）。本実験において、リアルタイムPCR試薬は、
SYBR® Green Realtime PCR Master Mix（Code No.:QPK201）を、検出装置はLineGene（Code No.:BFFQD-33A）を用いました。

結果及び考察リアルタイムPCRによって測定されたCt値

表1．リアルタイムPCRによって測定されたCt値とｃDNA定量値

TNF-α（表1）と、算出されたcDNA定量値（図1）を以下に示します。cDNA定量値は、それぞれの遺伝子において、全キット間で最も高かった値を100とし、各キットでの相対値を示しています。

Ct

IL-8

cDNA定量値
（相対量）

Ct

KRT10

cDNA定量値（相対量）

Ct

cDNA定量値（相対量）

ReverTra Ace® qPCR RT Kit

31.60

100

28.97

100

18.56

100

A社キット

32.01

75.00

29.00

97.94

19.93

38.82

B社キット

32.61

49.65

29.78

56.84

20.60

24.32

C社キット

32.25

63.51

29.11

90.75

20.01

36.60

D社キット

33.42

28.32

28.98

99.31

18.96

76.05

結果より、ReverTra Ace ® qPCR RT
Kitを用いてcDNA合成した場合の相対量が最も高く検出され、高効率に逆転写されていることが示されました。
KRT10遺伝子はレア発現遺伝子という報告もあるようですが、今回の検討では発現量が比較的多いことを示す結果が得られました。これに関しては、培養条件等によって発現量が変化したことなどが理由として考えられます。
図1．レア発現遺伝子の検出における検出効率の比較

8819No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 20

×：検出できず

×× ×

××

××

×

図2．TNF-α遺伝子の検出における検出効率の比較

TNF-αについて逆転写反応溶液を2%持ち込んでn＝5で解析した結果を図2に示します。結果、TNFαはHeLa細胞において発現量が低く、全ての反応でCt値は30を超えましたが、弊社ReverTra Ace® qPCR RT Kitを用いた逆転写反応では、Ct値が最も小さく、高感度な検出が可能でした。また、行った5反応の成功率は100%でした。それに対し、他社キットの逆転写反応液を用いた場合は、PCR成功率自体も低く、また、Ct値も相対的に高い傾向にありました。

おわりに®

ReverTra Ace qPCR RT KitはcDNA合成効率が高く、さらに逆転写反応液をリアルタイムPCR試薬へ最大20%まで持ち込むことができるという利点もあり、発現量の低い遺伝子の定量にも適しています。また、本キットは、反応系が簡略化されており、短時間で反応を完了することができます。是非一度お試しください。

品 名 お よ び 内 容

包

装

保存温度

Code No.

価

格

-20℃

FSQ-101¥38,000

Realtime PCR用cDNA合成キット

ReverTra Ace® qPCR RT Kit
5×RT Buffer
Enzyme Mix
Primer Mix
Nuclease-free Water

＊

200回用

＊1反応を10μlで行った時の使用回数を表示しています。

過去に紹介した記事で、今号に関連のある記事をピックアップしてご紹介するコーナーです。

『Can Get Signal ®』（本誌p.14〜16掲載）
Can Get Signal ® Immunoreaction Enhancer Solution（以下Can

最近、Can Get Signal ®シリーズの試薬が増えたこともあり、どの試薬をど

Get Signal ）は、主にウェスタンブロット解析でお使いの先生方が多いかと思

ういうときに用いたら良いかという質問をお受けする回数が増えました。弊社®

いますが、ELISAなどの解析においても同じく威力を発揮します。ウェスタンブ

のウェブサイト(www.toyobo.co.jp/bio)の実験お助けコーナーに掲載中のロット解析と同じように、Kdの高い抗体や特性の甘い抗体などに有効であるこ「私にもできた！ ライフサイエンス実験シリーズ Vol.3」に分かりやすくまとめとが確かめられています。His-tag融合タンパク質の定量などに有効です。

ていますので、是非一度ご覧ください。

また、Can Get Signal ®の姉妹品であるCan Get Signal ® immunostain

また、本誌p14〜16のQ&Aのコーナーにも少しだけ掲載しましたが、Can

Immunoreaction Enhancer Solution（以下Can Get Signal ® immunostain）

Get Signal ®シリーズを引用していただいている論文の数が増えているようでは、免疫組織染色用に特化された試薬であり、発色や蛍光法における検出で力す。Googleで Can Get Signal （を発揮します。

今回ご紹介させていただいた以上の論文をご参照いただけます。

20

で囲んで）と入力してみてください。

88No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 21●Taqポリメラーゼの価格を大幅に改定いたしました。
品名

rTaq DNA Polymerase（Mg別添タイプ）
・rTaq DNA Polymerase
・10×Buffer
・25mM MgCl2・2mM dNTPs
rTaq DNA Polymerase（Mg含有タイプ）
・rTaq DNA Polymerase
・10×Buffer・2mM dNTPs

包装

Code No.

価

格

250U× 1 本

TAP-201¥25,000¥9,500

250U× 5 本

TAP-205¥99,000

販売中止

250U×11本

TAP-202¥200,000

販売中止

250U× 1 本

TAP-211¥25,000¥9,500

250U× 5 本

TAP-215¥99,000

販売中止

250U×11本

TAP-212¥200,000

販売中止

新価格

●バイオ機器カタログ2007秋号を発刊いたしました。
弊社ウェブサイトの、『お問い合わせ・ご請求』のコーナーからご請求いただけます。

●AFFINIX® Q シリーズの価格を改定いたしました。
価格改定［2007年8月20日（月）〜］1）AFFINIX® Q（Code：INQCM2000） 先着20台限定
標準価格：（旧価格）500万円 a（新価格）350万円 ※消費税別
2）AFFINIX® Q4（Code：INQCM2002） 限定なし
標準価格：（旧価格）1,000万円 a（新価格）780万円 ※消費税別●複数パック包装を開始しました。
ご好評いただいております下記商品複数パック包装での販売を開始いたしました。まとめてご注文いただくとお得です。お届けする商品は、通常包装を写真のようにまとめた形
態となります。
品

名

Flexible KOD DNA polymerase

KOD FX
高正確性PCR酵素

KOD −Plus- Ver.2
ホットスタート用抗Taq抗体

anti-Taq high
高効率逆転写酵素

ReverTra Ace®

1kb DNA Ladder

100bp DNA Ladder

Loading Quick® 100bp DNA Ladder

包

装

保存温度

Code No.

格-20℃

KFX-101（200U×1本）
×5-20℃

KFX-101X5¥140,000

200U×1本-20℃

KOD-211¥32,000（200U×1本）
×5-20℃

KOD-211X5

100μl×1本-20℃

TCP-101¥16,000（100μl×1本）
×5

-20℃

TCP-101X5¥64,000

10,000U×1本-20℃

TRT-101¥15,000（10,000U×1本）
×5

-20℃

TRT-101X5¥60,000（10,000U×1本）
×10

-20℃

TRT-101X10¥105,000

300回用（90μg）
×1本

-20℃

DNA-032¥22,000（300回用（90μg）
×1本）
×5

-20℃

DNA-032X5¥88,000

100回用（50μg）
×1本

-20℃

DNA-030X¥15,000（100回用（50μg）
×1本）
×5

-20℃

DNA-030XX5¥60,000

100回用（50μg）
×1本

-20℃

DNA-130¥15,000（100回用（50μg）
×1本）
×5

-20℃

DNA-130X5¥60,000※複数組みパックのご注文コードは、通常包装コードの末尾にX5（エックス5）もしくはX10を付けたものになります。

88

価

200U×1本

21¥35,000¥128,000

No.88.qx 07.10.10 14:58 ページ 22

実験川柳特集 4
皆様、沢山のご投句ありがとうございました。今回も力作ぞろいです。
「身につまされる！」とのご感想を多く戴いております。

【句評】「ライゲーション ハイ（Ligation high ）」ですか。
いつも宣伝ありがとうございます。ちなみに「Ligation highVer.2 」が出ましたよ！
●タイガース さんのコメント：東洋紡シリーズ2【句評】うーん、少し物騒な句ですね。研究室での一コマをリアルに切り取ったのでしょうか。ところで、どちらが飛びましたか？
●切り捨て御免 さんのコメント：そんな殺生な〜冗談ですよね、教授？？

【句評】 切捨て御免さん の句の結末と言った感じの句ですね。
先生方も日々苦悩しているのです。ご理解を！

【句評】タンパク質研究者なら必ず理解できるはずですね。
私も、指先を真っ青にして、一日中SDS-PAGEのゲルを眺めていたことがあります。

【句評】バッファーのpH 調整ですね。塩酸が過剰になりすぎて、後でトリスの粉を入れて現状回復した人、必ずいるはずです。
グッドバッファー系は温度にもご注意！

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http://www.toyobo.co.jp/seihin/xr/lifescience/tech/reader/contribute/index.html
採用になった方には、￥2,000の図書カードをご進呈いたします（詳しくはサイトをご覧下さい）。奮って投句ください。

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危 印は消防法に基づく危険物です。

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