Trace Nutrients Research 34 : 89−93（2017）

原著

担癌マウスを用いたカキ抽出物の抗腫瘍作用の評価
五十嵐雅陽1），山 崎 則 之1），菊 田 麻朱美1），鈴松 井 博 之2），松 田 芳 和2）

木孝太郎1），

（1）株式会社新薬リサーチセンター＊，2）日本クリニック株式会社＊＊）
（受付 2017 年 8 月 28 日，受理 2017 年 9 月 28 日）

Evaluation of Oyster extracts on anti-tumor activities for murine tumor model
Masaharu Igarashi1）, Noriyuki Yamazaki1）, Masumi Kikuta1）, Kotaro Suzuki1）, Hiroyuki Matsuda2） and Yoshikazu Matsuda2）
1）
New Drug Research Center, Inc.
2）
Central Research Institute, Japan Clinic Co, Ltd.

Summary
Oyster (Crassostrea gigas) contains abundant nutritional elements, including glycogen, vitamins, zinc and taurine.
It is reported that Oyster extract exhibited several physiological activities．
In this study, we reported evaluation of Oyster extracts on anti-tumor activities for murine tumor model, colon 26,
based on the inhibition of tumor growth.
Tumor cells were inoculated with subcutaneous injection of BALB/c mice. Oyster extract powder or paste administrated for 14 days after inoculation. After termination of administration of test substance, tumor weight and plasma
tumor maker were measured.
Oyster extracts inhibited with tumor growth but not significantly different from control group. In the tumor growth
inhibition rate calculated based on the average tumor weight ratio (T/C%), the oyster extract paste 500 and 2000 mg/kg/days group and powder 200, 500 and 1000 mg/kg/days group was showed 30% or more, and had the antitumor
effect was suggested.

実験方法

真牡蠣（学名：Crassostrea gigas）は，グリコーゲン，脂溶性・水溶性ビタミン，亜鉛およびタウリンなどを多く含有しており，食経験も長く，世界各地で食されている1）。
2-4）1．被験物質，試薬および媒体

3-8）

カキ抽出物ペーストおよびパウダーを用いた。カキ抽出

血清亜鉛濃度増加作用 ，学習・記憶障害およびパーキン

物ペーストは黒色のペースト，カキ抽出物パウダーは，薄ソニズムに対する作用10），抗不安作用11），グルタチオン増茶色～茶色の粉末である。試薬として，生理食塩液（大塚

カキ抽出物に関しては，肝障害抑制作用，抗酸化作用，

9）

加作用4，12-13）などが報告されている。更に，抗腫瘍作用に関しては，培養細胞およびマウス腹水中への腫瘍細胞の移生食注，㈱大塚製薬工場）および媒体として，注射用水（大塚蒸留水，㈱大塚製薬工場）を使用した。

植モデルを用いた評価により，抗腫瘍作用を有することが2．腫瘍株

報告されている14-15）。
今回，真牡蠣を原料としたカキ抽出物の抗腫瘍作用につ

本試験で使用した Colon-26 腫瘍株は，マウス結腸癌由いて，固形腫瘍の移植モデルである，マウス結腸癌由来腫

来細胞株，BALB/c 系統を独立行政法人 理化学研究所 瘍細胞である Colon-26 を移植したマウスを用いて，腫瘍バイオリソースセンターより購入し，−80℃以下で凍結保の増殖抑制作用を指標に検討を行った。

存したものを BALB/c マウスを用いて継代維持したもの

全ての動物実験は，株式会社新薬リサーチセンターの動物倫理委員会の審議・承認を得た後に実施した。
である。なお，本腫瘍株は，固形癌として制癌剤スクリー
ニングに用いられており，臨床予測性に優れた株として知所在地：北海道恵庭市戸磯452-1（〒061-1405）
所在地：京都府京都市北区大将軍西町1（〒603-8331）＊＊＊― 89 ―られている。近年では，食品の抗腫瘍効果の検討にも繁用

2）体重測定されている株であるため選択した。

体重は，投与期間中 2 回／週の頻度で，更に，腫瘍摘出日に測定を行った。
3）採血および腫瘍摘出

3．使用動物
4 週齢の BALB/c Cr Slc（SPF）マウスを日本エスエル

最終投与日の翌日に採血および腫瘍の摘出を行った。

シー㈱より入荷した。動物は入荷から群分け日まで馴化しマウスをエーテル麻酔下で正向反射の消失を確認後，あらかじめへパリナイズを行った注射針および注射筒を用いた。ただし，入荷 7 日までの期間は検疫を行った。て腹部大静脈より血液を採取した。採血後放血致死させ，4．飼育条件

腫瘍を摘出して湿重量を測定した。
4）血中腫瘍マーカー

動物は温度 22±3 ℃，湿度 50±20％，換気回数 13 ～ 17回／時間，照明時間 8：00 ～ 20：00（明 12 時間，暗 12

採血後の血液については血漿を分取し，α1-acid glyco-時間）の環境下で，ステンレス製可動ラック（1790W×protein（ELISA 法，Cusabio）および fibrinogen（ELISA

470D×1650H mm） に ポ リ カ ー ボ ネ ー ト 製 ケ ー ジ（ 外法，Assaypro LLC）を測定した。

径：182W×260D×128H mm）を置き，動物を個別に収9．統計処理

容した。

統計処理は統計ソフト SPSS 14.0J（SPSS Inc.）を用い

飼料は固型飼料ラボ MR ストック（日本農産工業㈱）て，対照群とカキ抽出物ペースト群間あるいは，対照群とを，飲料水は水道水を試験期間を通じ自由に与えた。

カキ抽出物パウダー群間で，以下の方法で行った。すなわ
5．腫瘍の移植

ち，Bartlett 法により等分散性の検定を行い，等分散の場

継代維持動物より，細胞移植後 14 日目の Colon-26 腫瘍

合は更に一元配置分散分析を行い，有意な場合は Dunnett細胞を摘出し，生理食塩液を用いて懸濁した。この細胞懸法 に よ り 平 均 値 の 比 較 を 行 っ た。 不 等 分 散 の 場 合 は

5濁液を試験用マウスの腹側部皮下に 1×10 cells/0.05 mL/Kruskal-Wallis の H 検定を行い，有意な場合は Dunnettmouse の割合で移植した（0 日目）。

法により平均順位の比較を行った。
有意水準は Bartlett 法，一元配置分散分析，Kruskal-6．群分け

Wallis の H 検定では危険率 5 ％とした。Dunnett 法では危険率 5 ％および 1 ％とした。

腫瘍移植動物の体重を測定し，層別連続無作為化法によ

また，対照群に対するカキ抽出物各投与群の平均腫瘍重り各群に割り付けた。

量比（T/C％）および腫瘍増殖抑制率を次の数式により算群構成表を Table 1 に示す。

出した。
7．カキ抽出物の投与
平均腫瘍重量比（T/C％）

カキ抽出物ペーストおよびパウダーは，いずれも注射用＝ B ～ G 各投与群の平均腫瘍重量（T）／A 群の水に溶解させて投与液とした。投与回数は 1 日 1 回とし，平均腫瘍重量（C）×100

投与期間は 14 日間とした。
8．検査項目

腫瘍増殖抑制率（％）＝100－T/C（％）

1）一般状態観察（腫瘍増殖抑制率が
30％以上の時，腫瘍増殖抑制

生死についての観察を毎日行った。

効果ありと判定14））

Table 1  Test group of experiments.
GroupDose(mg/kg/day)

Administrated period
(day)

No. of animals

AControl (distilled water)

0148BCD

Paste low dose
Paste middle dose
Paste high dose

2005002000

141414888E
F
G

Powder low dose
Powder middle dose
Powder high dose

200
500
1000

141414888― 90 ―

結

果0.159 および 0.492±0.046 g であった。
カキ抽出物ペースト及びパウダーのいずれの投与量群に1．一般状態観察および体重推移も対照群と比較して有意な差は認められなかったものの減すべての群において，投与期間中に死亡動物は認められ少傾向がみられた。
平均腫瘍重量比（T/C％）では，ペースト 200，500 おなかった。
体重推移を Fig. 1 に示した。各群で体重は徐々に増加し，

よ び 2000 mg/kg/day 群 で そ れ ぞ れ 71.5，67.5 お よ び
67.1％，パウダー 200，500 および 1000 mg/kg/day 群でいずれの群でも同様な推移を示した。

はそれぞれ 50.7，55.5 および 50.3％を示した。腫瘍増殖抑2．腫瘍重量制率では，ペースト 200，500 および 2000 mg/kg/day 群腫瘍湿重量を Fig. 2 に，腫瘍増殖抑制率（％）を Fig. 3でそれぞれ 28.5，32.5 および 32.9％，パウダー 200，500
および 1000 mg/kg/day 群ではそれぞれ 49.3，44.5 およびに示した。
対照群の腫瘍湿重量は，0.978±0.238 g であった。

49.7％を示し，ペーストは 500 および 2000 mg/kg/day，カキ抽出物ペースト 200，500 および 2000 mg/kg/day

パウダーは 200，500 および 1000 mg/kg/day で腫瘍増殖

群の腫瘍湿重量では，それぞれ 0.699±0.137，0.660±0.134

抑制率が 30％以上を示した。

および 0.656±0.194 g であった。
カキ抽出物パウダー 200，500 および 1000 mg/kg/day

3．血中腫瘍マーカー
血 中 のα1-acid glycoprotein を Fig. 4 に，fibrinogen を投与群の腫瘍湿重量では，それぞれ 0.496±0.115，0.543±25Tumor growth inhibition rate (%)

60

Body weight (g)20
15

A：Control
B：paste low dose
C：paste middle dose
D：paste high dose
E：powder low dose
F：powder middle dose
G：powder high dose

10500123456789101112131415403020100

Day after inoculation

Fig. 1  Body weight changes of tumor bearing mouse administrated with oyster extract.
Each value represents with mean±SE of 8 mice.
Not significantly different from the control group by
Dunnett’s multiple comparison test.

50BCDEFG

Fig. 3  Tumor growth inhibition rate of tumor bearing mouseadministrated with oyster extract.
Each value calculated as follow
100 ― (Mean tumor weight of each group / Mean tumor
weight of control group)×100
B : paste low dose, C : paste middle dose, D : paste highdose, E : powder low dose, F : powder middle dose, G :powder high dose

1.4

800

Plasma αA1G (μg/mL)

Tumor weight (g)

1.2
1.0
0.8
0.6
0.4

600

400

200

0.2
0.00A

BCD

EF

GAFig. 2  Tumor weight of tumor bearing mouse administrated
with oyster extract.
Each value represents with mean ± SE of 8 mice.
Not significantly different from the control group byDunnett’s multiple comparison test.
A : control, B : paste low dose, C : paste middle dose, D :paste high dose, E : powder low dose, F : powder middle
dose, G : powder high dose

BCDEFGFig. 4  Plasma αA1G concentration of tumor bearing mouseadministrated with oyster extract.
Each value represents with mean±SE of 8 mice.
Not significantly different from the control group byDunnett’s multiple comparison test.
A : control, B : paste low dose, C : paste middle dose, D :paste high dose, E : powder low dose, F : powder middle
dose, G : powder high dose

― 91 ―いて，固形腫瘍の移植モデルである，マウス結腸癌由来腫

Plasma fibrinogen (mg/mL)3

瘍細胞である Colon-26 を移植したマウスにカキ抽出物を摂取させ，腫瘍の増殖抑制作用を指標に検討を行った。
BALB/c マウスの腹側部皮下に Colon-26 腫瘍細胞を移2植し，翌日からカキ抽出物ペーストおよびパウダーをそれ
ぞれ 1 日 1 回，14 日間連続で強制経口投与を行い，最終

1投与の翌日に腫瘍を摘出し湿重量を測定した。併せて腹大静脈より採血を実施し，分離した血漿の腫瘍マーカーを測定した。対照群として，注射用水を投与した群を設定した。

0A

BCDE

F

投与期間中に死亡動物は認められなかった。

GFig. 5  Plasma fibrinogen concentration of tumor bearing mouseadministrated with oyster extract.
Each value represents with mean±SE of 8 mice.
Not significantly different from the control group byDunnett’s multiple comparison test.
A : control, B : paste low dose, C : paste middle dose, D :paste high dose, E : powder low dose, F : powder middle
dose, G : powder high dose

体重は徐々に増加し，いずれの群でも同様な推移を示した。腫瘍の増殖を考慮しても対照群と比較して，カキ抽出物各投与群に差はみられなかった。腫瘍湿重量では，対照群と比較してカキ抽出物各投与群に有意な差はみられなかったものの減少傾向がみられた。平均腫瘍重量比（T/C％）をもとに算出した腫瘍増殖抑制率では，ペーストは500 お よ び 2000 mg/kg/day 群 で， パ ウ ダ ー は 全 群で 30％以上を示した。米国国立癌研究所（NCI）では，Fig. 5 に示した。
血漿中α1-acid glycoprotein については，対照群では100－T/C（％）が 30％以上を示した場合，その化合物の561.2±119.0 μg/mL であった。ペースト 200，500 および抗腫瘍活性は有効と評価している16）ことから，カキ抽出2000 mg/kg/day 群 で は， そ れ ぞ れ 492.9±37.4，542.5±

物ペーストおよびパウダーには抗腫瘍効果を有する可能性

53.6 および 530.5±77.2 μg/mL，パウダー 200，500 およびが示唆された。血漿の腫瘍マーカーについては，明確な差1000 mg/kg/day 群 で は， そ れ ぞ れ 531.6±43.8，580.9±は認められなかった。

40.7 および 600.4±57.4 μg/mL を示し，いずれの投与量群にも対照群と比較して有意な差は認められなかった。

松田らは，培養細胞および P388 の腹水腫瘍モデルを用いた評価において，カキ熱水抽出物が抗腫瘍活性を有する

血 漿 中 の fibrinogen に つ い て は， 対 照 群 で は 1.66±ことを報告している14）。また，タウリン17）やグリコーゲ

0.26 mg/mL で あ っ た。 ペ ー ス ト 200，500 お よ びン18）が抗腫瘍活性を示すことが報告されている。カキ抽2000 mg/kg/day 群では，それぞれ 1.53±0.20，0.70±0.20

出物はタウリンやグリコーゲンを多く含有することから，お よ び 1.79±0.43 mg/mL， パ ウ ダ ー 200，500 お よ び

これらの物質が抗腫瘍活性に関与した可能性も考えられる。

1000 mg/kg/day 群では，それぞれ 1.18±0.13，1.19±0.18以上より，カキ抽出物が，固形腫瘍の移植モデルに対しおよび 1.69±0.20 mg/mL を示し，いずれの投与量群にもも腫瘍の増殖抑制効果を示すことが認められ，抗腫瘍効果対照群と比較して有意な差は認められなかった。

を有することが示唆された。

考察

参考文献

真牡蠣（学名：Crassostrea gigas）は，グリコーゲン，

1）杉田浩一，平宏和，田島眞，安井明美，日本食品大事

脂溶性・水溶性ビタミン，亜鉛およびタウリンなどを多く

典，医歯薬出版株式会社，東京：pp. 415-416（2008）．

1）

含有している 。その真牡蠣を原材料としたカキ抽出物は，

2）久保道徳，松田秀秋，田村崇子，高津正雄（1980），

これまでに，様々な機能性を有することが報告されている。

バ ラ ン ス タ ー［ カ キ Crassosfrea gigas（THUN-

食品素材の抗腫瘍効果の検討については，担癌マウスのBERG）の肉エキス］の実験的肝障害に対する予防お腫瘍増殖抑制作用を指標に評価する方法が繁用されている。

よび肝機能改善作用，基礎と臨床，14，1437-1442．

本モデルは，米国国立癌研究所（NCI）で開発され，主に，

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井博之，松田芳和，福原育夫（2012），カキ肉エキス

腫 瘍 株 と し て は， 腹 水 腫 瘍 と し て は， マ ウ ス 白 血 病

12 週間摂取の軽度アルコール性肝障害をもつヒトボ

L-1210，P388，固形腫瘍としては，B16 メラノーマ，マウ

ランティアの肝機能への影響，微量栄養素研究，29，

ス結腸癌由来細胞 Colon-26 などが用いられている。これ

13-17．

らの腫瘍株を用いた評価で有効とされた物質は，制癌剤と

4）春松慎，福田卓，松井博之，松田芳和（2013）カキ肉して開発されており，いずれの腫瘍株も臨床予測性に優れエキスのアセトアミノフェンによる肝障害抑制作用の検討，30，41-43．ているとされている。
今回，真牡蠣を原料としたカキ抽出物の抗腫瘍作用につ5）T Yoshikawa, Y Naito, K Masui, T Fujii, Y Boku,― 92 ―S Nakagawa, N Yoshida, M Kondo（1997），Free亀井淳三（2012），マウスを用いたカキ肉エキス含有

radical-scavenging activity of Crassosfrea gigas ex-

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17）第 53 回日本癌学会総会記事（名古屋），1994．の評価，微量栄養素研究，30，48-51．

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