Trace Nutrients Research 30 : 48−51（2013）

原著

マウスを用いたカキ抽出物の学習・記憶能力および□□
パーキンソニズムに対する作用の評価□□
1）
1）
1）
鈴 木 孝太郎 ，野々村（□□）徹 ，山 崎 則 之 ，1）2）2）
高 橋 尚 彰 ，松 井 博 之 ，松 田 芳 和（ 株式会社新薬リサーチセンター ，日本クリニック株式会社中央研究所
Aaa
1）

＊2）

）

＊＊

Aaaa on learning-memory skill andEvaluation of effect of Oyster extract
Parkinson’s disease in mice
Kotaro Suzuki , Toru Nonomura
Aaa, Noriyuki Yamazaki ,1）
2）
2）
Hisaaki Takahashi , Hiroyuki Matsui , Yoshikazu Matsuda
1）

Aaa

1）

1）

1）New Drug Research Center, Inc.

2）

Central Research Institute, Japan Clinic Co., Ltd.

SummaryOyster is an old worldwide food containing abundant nutritional elements including many kinds of minerals suchas zinc, nucleic acid, glycogen, and amino acids. It is reported that Oyster extract exhibits several physiological activities in experimental animals. Recently, we reported that Oyster extract enhanced hippocampus glutathione levels
in rats. In general, glutathione is known as an antioxidant. On the other hand, Oxidative stress is a key factor ofpathogenesis of dementia and Parkinson’s disease. This time, we investigated effect of Oyster extract by experimental Alzheimer-type dementia model of mouse and 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP)-induced experimental parkinsonism model of mouse.
As a result, on experimental Alzheimer-type dementia model, Oyster extract tended to exert moderation effect ondeficit memory in mice administered for 14 days or 28 days. Furthermore, on MPTP-induced experimental parkinsonism model, Oyster extract tended to exert moderation effect on parkinsonism in mice administered for 11 days.

真牡蠣（学名：Crassostrea gigas）は，グリコーゲン，ク株式会社）の作用を検討した。実験的アルツハイマー型

ビタミンなどを多く含有し，栄養が豊富であるといわれ，認知症モデルにおいては，βアミロイドタンパク（A β）食経験も長く，世界各地で食されている 。カキ抽出物にを脳室内投与することでモデルを作製した。また，MPTP

ついては，肝障害抑制作用 ，抗酸化作用

および血清誘発パーキンソン病モデルにおいては，MPTP を腹腔内

1）2）3-6）など様々な機能性が報告がされている。

投与することによりモデルを作製した。なお，A βおよまた，ラットにおいて，カキ抽出物が抗酸化物質であるグ

び MPTP は各モデルにおいて広く用いられている化学物ルタチオンを増強することが報告されている 。

質である。

亜鉛増加作用7）8）

一方，わが国は高齢化社会を迎え，老化に伴う疾患に対実験方法する対策が課題となっている。その中でも，アルツハイ
マー病やパーキンソン病は，患者数が増加傾向にあり，予防や治療についての対策が急がれているが，それらの発症

1．学習・記憶能力に対する作用の一部に酸化ストレスが関与していると考えられている。
以上のことより，今回，マウスを用いた実験的アルツハ
イマー型認知症モデル

6 週齢の ICR マウスに，カキ抽出エキス 75，150 および300 mg/kg/day を 14 日間経口投与，または基礎飼料 MF

お よ び 1-methyl-4-phenyl-（オリエンタル酵母工業株式会社）にカキ抽出物を 0.1 お

1,2,3,6-tetrahydropyridine（MPTP）誘発パーキンソン病

よび 0.3％混餌した飼料（100 および 300 mg/kg/day の投モデル

与量に相当）を 28 日間経口摂取させた。A βの投与は，11-13）

9, 10）

を用いて，カキ抽出物（提供：日本クリニッ
北海道恵庭市戸磯452-1（〒061-1405）
京都市右京区太秦開田町10-1（〒616-8555）＊＊＊― 48 ―

カキ抽出物の投与終了 7 日前に実施した。A β（β - アミ5．統計処理

ロイド 1-42，ABBIOTEC, LLC 製）は生理食塩液を用い得られた数値は各群で平均値および標準誤差を算出した。て，所定の濃度に溶解して調製した。投与経路は脳室内投対照群と各被験物質群間の比較については，Bartlett 法

与 と し た。 投 与 回 数 は 1 回， 投 与 量 は 3 nmol/4 µL/

により等分散性の検定を行い，等分散の場合は更に一元配mouse とした。なお，A βを投与しない群（無処置群）置分散分析を行い，有意な場合は Dunnett 法により平均については，媒体（生理食塩液）を同容量投与した。カキ値の比較を行った。不等分散の場合は Kruskal-Wallis の抽出物の投与終了翌日，学習・記憶能力についてステップH 検定を行い，有意な場合は Dunnett 法により平均順位

スルー型受動的回避学習試験により評価を行った。の比較を行った。
無処置群と対照群間の比較については，F 検定により等2．ステップスルー型受動的回避学習試験

分 散 性 の 検 定 を 行 っ た と こ ろ， 等 分 散 で あ っ た た め

獲得試行は，カキ抽出物の最終投与日に実施した。マウ

Student の t 検定を行った。
F 検定，Bartlett 法，一元配置分散分析および Kruskal-スをステップスルー型受動的回避反応装置（室町機械株式会社製）の明室に入れてから，60 秒後に暗室の扉を開き， Wallis の H 検 定 に つ い て は 有 意 水 準 を 危 険 率 5 ％，マウスが暗室に進入するまでの時間（潜時）を測定した。

Dunnett 法および t 検定については有意水準を危険率 5％測定後，暗室中のマウスに 0.25 mA の電流を 10 秒間与えおよび 1％とした。

続けた。なお，潜時は最大で 60 秒まで計測した。

実験結果

再生試行は，獲得試行実施の翌日に実施した。マウスに獲得試行と同様の操作を行い，潜時を測定した。ただし，暗室に進入したマウスに電流刺激は与えなかった。なお，

1．学習・記憶能力に対する作用潜時は最大で 300 秒まで計測した。

マウスに A βを投与したところ，無処置群と比較して，対照群において再生試行時の潜時が有意に低下したことよ3．パーキンソン病に対する作用

り，A β投与による学習・記憶能力への障害が確認され8 週齢の C57BL/6 マウスに，カキ抽出物 75，150 およた。また，対照群と比較して，カキ抽出物 300 mg/kg/

び 300 mg/kg/day を 11 日間経口投与した。MPTP の投

day を 14 日間経口投与した群および 0.3％飼料（300 mg/与は，カキ抽出物の投与 7 日目から 4 日間連続で実施した。 kg/day の投与量に相当）を 28 日間経口摂取させた群にMPTP（SIGMA 製）は生理食塩液を用いて，所定の濃度おいて，再生試行の潜時の延長傾向が認められた。に溶解して調製した。投与経路は腹腔内投与とした。1 日
1 回 4 日間連続で投与した。投与量は 30 mg/kg/day とし2．パーキンソン病に対する作用た。なお，MPTP を投与しない群（無処置群）についてマウスに MPTP を投与したところ，無処置群と比較しは，媒体（生理食塩液）を投与した。カキ抽出物の投与終て，対照群において Rota-rod に載せてから落下までの時

了翌日，運動機能についてローターロッド法により評価を間（潜時）が有意に低下したことより，MPTP 投与によ行った。さらに，ローターロッド法を実施した後，マウス200の脳を摘出し，ブレインマトリックスを用いて脳切片を作

A: Non-treatment製した。作製した脳切片より線条体相当部位を分取し，線

B: Control
C: Oyster extract 75 mg/kg/day

条 体 中 の DA（dopamine） お よ び HVA（homovanillic

8 週齢の雄性 C57BL/6 マウスを用いて，Rota-rod（有限会社シナノ製作所製）に対する馴化を 3 日間連続してLatency (sec)

4．ローターロッド法

D: Oyster extract 150 mg/kg/day

150acid）含有量を測定した。

E: Oyster extract 300 mg/kg/day

100*行った。最初は直径 3.0 cm の回転棒を低速（約 3 rpm）50に設定し，マウスを回転棒の上部に載せ，約 120 秒間保持した。さらに，段階的に高い速度を設定して同様に約 120秒間保持させ，最終的に 3 日間かけて 12 rpm で約 120 秒間保持するようにした。馴化終了翌日，直径 3.0 cm の回0転棒を 15 rpm に設定し，マウスを回転棒の上部に載せ，落下までの時間（潜時）を測定した。なお，カキ抽出物の投与終了翌日，馴化終了翌日と同様の条件にて潜時を測定した。

ABCDAcquisition trialEABCDE

Post-shock trial

Fig. 1 Effect of Oyster extract on memory-learning skill in thestep-through type passive avoidance test in A β -induced memory impairment mice. － 14 days repeatedadministration －Each data are expressed as mean ± S.E. of 10 mice.
＊p ＜ 0.05 A vs B by student t-test― 49 ―

る運動機能への障害が確認された。また，対照群と比較しパーキンソン病は脳内の黒質にあるドーパミン神経細胞のて，カキ抽出物 75 mg/kg/day を 11 日間経口投与した群減少によりドーパミンが不足し，その結果，アセチルコリにおいて，潜時の延長傾向が認められた。さらに，無処置ンが相対的に増加することで，動作緩慢（無動），手足の群と比較して，対照群において，線条体ドーパミン含量のふるえ（振戦），筋萎縮などを発症する神経変性疾患であ有意な低下が認められたが，カキ抽出物を 11 日間経口投る。ヒトにおけるパーキンソン病については様々な原因が与したいずれの群においても線条体ドーパミン含量および仮説として考えられているが，その中の一説に酸化ストレ線条体 HVA 含量には大きな変動は認められなかった。

ス説があり，フリーラジカルが黒質の神経細胞変性を引き起こす原因と考えられている。また，パーキンソン病では，

考察

フリーラジカルから組織を守る還元型グルタチオン（GSH）などの物質が低下することも知られている。そのアルツハイマー型認知症は記憶障害を主な症状とする進

一方で，ビタミン E などの抗酸化物質の摂取によりアル行性の神経変性疾患であり，そのひとつの原因として，βツハイマー型認知症の発生率が低下するという報告がある

アミロイドタンパク（A β）があり，それが脳内の組織14）にたまり重合・凝集することにより脳の神経細胞が死滅す

グルタチオン含量が増加することが報告されている 。

ることが考えられている。なお，A βの神経毒性は，酸

従って，カキ抽出物は，認知症およびパーキンソン症の予化ストレスが一部関与していると考えられている。また，防に有用であることが期待される。

8）

そこで，本実験では，カキ抽出物を用いて，学習・記憶

200

能力およびパーキンソニズムに対する作用に関する検討を

A: Non-treatment
B: Control

行った。なお，今回の試験で用いたカキ抽出物は日本クリ

C: Oyster extract 75 mg/kg/day

ニック株式会社より提供されたものであり，瀬戸内，主にD: Oyster extract 150 mg/kg/day

150

Latency (sec)。さらには，カキ抽出物を投与したラットにおいて海馬

E: Oyster extract 300 mg/kg/day

広島で収穫された生牡蠣を使用し，独自の製法でカキのエ
7100

A: Non-treatment
B: Control

6

C: Oyster extract 75 mg/kg/day

DA(ng/mg tissue)*500

D: Oyster extract 150 mg/kg/day

5

E: Oyster extract 300 mg/kg/day

432ABCDEAAcquisition trial

BCD

**
**

E

1Post-shock trial

Fig. 2 Effect of Oyster extract on memory-learning skill in thestep-through type passive avoidance test in A β -induced memory impairment mice. － 28 days repeatedadministration －Each data are expressed as mean ± S.E. of 10 mice.
＊p ＜ 0.05 A vs B by student t-test

1200A

C

A: Non-treatment

C: Oyster extract 75 mg/kg/day

B: Control

D: Oyster extract 150 mg/kg/day
E: Oyster extract 300 mg/kg/day**6040

C: Oyster extract 75 mg/kg/day

0.30
HVA(ng/mg tissue)

Latency (sec)

E0.40

B: Control

80

DFig. 4 Effect of Oyster extract on striatum dopamine contentin MPTP-induced parkinsonism mice.
Each data are expressed as mean ± S.E. of 8 mice.
＊＊p ＜ 0.01 A vs B by student t-test

A: Non-treatment

100

B

D: Oyster extract 150 mg/kg/day
E: Oyster extract 300 mg/kg/day

0.20

0.10

200A

BCDE

0.00

Fig. 3 Effect of Oyster extract on motor function in Rota-rod
test in MPTP-induced parkinsonism mice.
Each data are expressed as mean ± S.E. of 8 mice.
＊＊p ＜ 0.01 A vs B by student t-testABCDE

Fig. 5 Effect of Oyster extract on striatum homovanillic acidcontent in MPTP-induced parkinsonism mice.
Each data are expressed as mean ± S.E. of 8 mice.

― 50 ―

キスを抽出し，製品化されたものである。

extract (JCOE). Biomed Pharmacother 50: 149-153．

検討を行ったところ，実験的アルツハイマー型認知症モ7）安部麻美子，松田芳和，小邨奈未，吉田宗弘（2010）

デルにおいて，カキ抽出物をマウスに 14 日間または 28 日

カキ肉エキスを投与したラットの血清亜鉛濃度の変化．

間投与したところ，記憶障害を緩和する傾向が確認された。

微量栄養素研究 27: 56-59．

さらに，MPTP 誘発パーキンソンモデルにおいて，カキ

8）西堀頼史，鈴木陽子，岸浪昌礼，藤澤紘，永岡茂樹，抽出物をマウスに 11 日間投与したところ，パーキンソン

山崎則之，松井博之，松田芳和（2011）カキ抽出エキ症状を緩和する傾向が確認された。これら症状の緩和につスパウダーの安全性および機能性に関する報告．微量

いては，カキ抽出物の投与による酸化ストレスの軽減が一栄養素研究 28: 40-44.

部関与しているものと推察された。

9）Maurice T, Lockhart BP, Privat A (1996) Amnesia

以上の結果より，カキ抽出物が認知症およびパーキンソ

induced in mice by centrally administered beta-ン病の予防に有用である可能性が示唆された。今後は，作

amyloid peptides involves cholinergic dysfunction.

用機序を含めたより詳細な検討が必要であると考える。

Brain res 706: 181-93．
10）Yan JJ, Cho JY, Kim HS, Kim KL, Jung JS, Huh

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