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特集

より長く、より確実に、をコンセプトに開発されたPCR試薬です。

Flexible KOD DNA polymerase

新発売

30％OFF キャンペーン
期間：2007年5月21日〜8月31日ご注文分

KOD FXは、高正確性PCR酵素KOD DNA
polymeraseをベースに開発された高性能PCR試薬です。
酵素自体が有する高い「正確性」に加え、優れた「伸長性」、「増幅効率」、「リライアビリティー」を示し、あらゆるPCRにおいて確実な結果を期待できます。

17.5kb

24kb

8.5kb

3.6kb

1.3kb

TOYOBO PCR酵素選択の目安

高正確、高効率に、幅広いPCRで応用可能
高正確性PCR
をしたい

高効率で汎用PCRをしたい

KOD FX
KODシリーズ(KOD Dash® 除く)

Blend Taq®シリーズ®

KOD Dash

正伸確

長性性A
A

ホットス
ター(/kb) ト増幅成
功率増幅末端S増幅
効率︵収量︶
S伸長時間S

BE １minCCC

BE ３０sec −KOD DNA PolymeraseSAAB

BE １min○

KOD -Plus-SAAA

BE １min○

KOD -Plus- Ver.2

CSSA

AO １min−Blend Taq®

CS

SS

AO １min○

Blend Taq® -Plus-CSS

A

AO ３０sec −○S: Best, A: Excellent, B: Good, C: Satisfactory, BE: Blunt end, AO: A over hung

KOD FX

KOD Dash®

※写真：ヒトゲノムDNA増幅例

No.86.qx 07.4.13 14:18 ページ 11特集Flexible KOD DNA polymerase

正確性、伸長性、増幅効率、そしてリライアビリティー、全ての性能を高い次元で備えた新規PCR試薬です。

抜KOD

Fidelity (Accuracy)

トップクラスの正確性

M

KOD FXのPCRエラーによるミス塩基の取り込み頻度（エラー率）は、実際にシーケンシングにて解析した144,535塩基中、わずか19塩基でした。このエラー率は、Taqや他社Long PCR用酵素の約10倍優れている値でした。
100,000塩基中のエラー個数

KOD -Plus-KOD FXPCRエラー率の測定方法
各酵素にてヒトゲノムDNAを鋳型にβ-globin領域2.4kbの増幅を行い、PCR産物をTAクローニング後、96クローンをピックしてシーケンシングを行い、配列を確認しました。

Pfu DNA polymerase
A社 Long PCR用試薬
Taq DNA polymerase
020406080100120140160

Mutation Frequency（×10-5）

鋳型ター高※KOD -Plus- Ver.2の正確性はKOD -Plus- とほぼ同等です。

GCLong Target Capability

優れた伸長性（増幅可能鎖長）

ヒト（GC含M1 1

KOD FXでは、λDNAを鋳型に40kb、ヒトゲノムDNAを鋳型に24kb、cDNAを鋳型に13.5kbの増幅が可能でした。

Template λDNA
M1 1234

Template ヒトゲノムDNA
M1 15 M22345 M2

鋳型：λDNA10ng／50μl 反応系

鋳型：ヒトゲノムDNA
50〜200ng／50μl 反応系

M1： 1kb DNA ラダー
1 ： 5kb
2 ：10kb
3 ：20kb
4 ：30kb
5 ：40kb
M2：λ／Hin dⅢ digest

M1： 1kb DNA ラダー
1 ：β-globin 1.3kb
2 ：β-globin 3.6kb
3 ：β-globin 8.5kb
4 ：β-globin 17.5kb5 ：tPA24.0kb
M2：λ／Hin dⅢ digest

鋳型：

全血K
Template 逆転写反応液（cDNA）
M1 12M

13 M2
鋳型：逆転写反応液（ヒトcDNA）
total RNA 100ng相当／50μl 反応系
M1：1kb DNA ラダー
1 ：Homo sapiens polymerase (DNA directed), epsilon [NM̲006231] 6.8kb
2 ：Homo sapiens insulin-like growth factor 2 receptor [NM̲000876] 8.9kb
3 ：Homo sapiens dystrophin [NM̲004006] 13.5kb
M2：λ／Hin dⅢ digest

M：1k
1 ：全血2：3：ターゲッNo.86.qx 07.4.13 14:18 ページ 12特集

Amplification Efficiency

抜群の増幅効率KOD FXでは、他社PCR酵素を圧倒的に上回る収量が得られ、少ない鋳型量からでも増幅が可能でした。
KOD -PlusVer.2

KOD FX
M

A社
Long PCR酵素（Taqベース）

B社
高効率・高正確性酵素

Ｃ社
高効率・
高正確性酵素Taq DNA pol.

1 2 3 4 M 1 2 3 4 M 1 2 3 4 M 1 2 3 4 M 1 2 3 4 M 1 2 3 4 M
M：1kb DNA ラダー
1 ：鋳型量 0.1ng
2：1ng
3：10ng4：100ng

鋳型：ヒトゲノムDNA 0.1ng〜100ng／50μl 反応系
ターゲット：β-globin 2.8kb

PCRサイクル条件：＊他社酵素については、製品
94℃ 2min.
添付のプロトコールに従い98℃ 10sec.
30サイクルにて実施しました。
30 cycles
68℃ 3min.

Reliability

高い信頼性

KOD FXでは、他社GC rich対応PCR試薬が増幅できないターゲットでも増幅が可能でした。

GC richターゲットの増幅
ヒト TGF-β 2.3kb

ヒト IGF2R遺伝子[NM̲000876] 8.9kb（GC含量約70%）
M1 123 4（GC含量約90%の領域を含むmRNA）

567 M2M1 123 456 M2

M1：1kb DNA ラダー
1 ：KOD FX
2 ：KOD -Plus3 ：KOD -Plus- +5% DMSO
4 ：A社Long PCR酵素（Taqベース）
5 ：B社高効率・高正確性酵素
6 ：C社高効率・高正確性酵素
7 ：Taq DNA pol.
M2：λ／Hin dⅢ digest

M1：1kb DNA ラダー
1 ：KOD FX
2 ：A社Long PCR酵素（Taqベース）
3 ：D社Long PCR酵素（Taqベース）
4 ：E社GCrich対応酵素（Taqベース）
5 ：F社GCrich対応高効率・高正確性酵素
6 ：G社GCrich対応高効率・高正確性酵素
M2：λ／Hin dⅢ digest

鋳型：ヒトゲノムDNA 10ng／50μl 反応系

鋳型：ヒトcDNA（HeLa Total RNA 50ng相当）／50μl 反応系

KOD FXでは、全血をサンプル（鋳型）とした場合、他社品に比べ良好な増幅を示し、最長で8.5kbの増幅が可能でした。

全血をサンプルとしたダイレクトPCR
Ｃ社
高効率・高正確性酵素

KOD FX
M

123M

123A社
Long PCR酵素（Taqベース）
M

123

D社
Long PCR酵素（Taqベース） Taq DNA pol.
M

123M

123KOD FX
M

M1 123 M2
鋳型：ヒト全血2μl／50μl 反応系

M：1kb DNA ラダー
1 ：全血 1μl／50μl 反応系2：2μl
3：4μl
ターゲット：β-globin 1.3kb

M1：1kb DNA ラダー
1 ：β-globin 1.3kb
2 ：β-globin 3.6kb
3 ：β-globin 8.5kb
M2：λ／Hin dⅢ digest
PCRサイクル条件：
94℃ 2min.
98℃ 10sec.
30 cycles
68℃ 1min./kb

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Flexible KOD DNA polymerase

使用例 DMD 遺伝子（13.5kb）のPCRクローニングに挑戦
ヒトジストロフィン（DMD）遺伝子は、真核細胞における最も長いmRNAの一つです。ここでは、KOD FXを用いて本遺伝子の全長クローニングを行った例をご紹介します。

Homo sapiens dystrophin (muscular dystrophy, Duchenne and Becker types) (DMD), transcript variant Dp427m, mRNA [NM_004006.1, 13993bp]

逆転写反応

1st Strand 合成キット：ReverTra Ace -α-®（Code No.：FSK-101）
RNA：Human Adult Skeletal Muscle total RNA（Code No.：CA1H60）1μg／20μl反応系
逆転写Primer：Oligo（dT）20 primer

KOD FXを用いたPCR

Primer F：C ATＧＧＣＣＴＴＧＴＴＧＧＣＣＴＡＣＴＧＧＡＧＣＡＡＴＡＡＡＧＴＴＴＧＡＡＧＡＡＣＴＴＴＴＡＣＣＡＧＧ
Primer R：ＧＡＣＧＧＣＣＴＡＴＧＴＧＧＣＣＡＣＡＡＣＡＣＧＡＡＡＴＡＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＴＡＡＴＴＡＴＧＣ（下線部はSfiⅠサイト）
PCRサイクル条件：94℃ 2min.
98℃ 10sec.
30 or 35 or 40 cycles
68℃ 14min.

アガロースゲル電気泳動による増幅産物の確認
M1 1 2

残りのPCR増幅産物（35サイクル）をMagExtractorTM -PCR & Gel Clean up（Code No.：NPK-601）を用いて精製
制限酵素SfiⅠ（Code No.：SFI-111）によるPCR産物の消化

3 M2
アプライ量：10μl
M1：1kb DNA ラダー
1 ：30サイクル
2 ：35サイクル
3 ：40サイクル
M2：λ／Hin dⅢ digest

13.5kb

アガロースゲル電気泳動による分離、切り出し、DNA回収
予めDra ⅢでカットしたPlasmid Vector pME13SFL3とligation
大腸菌コンピテントセルDH5α（Code No.：DNA-903）を形質転換
形質転換体5クローンのORF（約11kb）をシーケンシングにより配列確認

シーケンシングの結果、5クローン中1クローンにおいて、PCRエラーによる変異のないDMD遺伝子を取得することができました。
品名および内容
KOD FX
KOD FX（1U／μl）
2×PCR Buffer for KOD FX
2mM dNTP
高効率TAクローニングキット

TArget Clone™ -Plus-

保存温度

Code No.

価200U×1本-20℃

KFX-101￥35,000￥24,500

10回用-20℃

TAK-201￥16,000−包装格キャンペーン価格※KOD FXで増幅されたDNA断片は平滑化されているため、通常のTAクローニングはできません。TArget CloneTM -Plus-をお使いください。
NOTICE TO PURCHASER: LIMITED LICENSE
Purchase of this product includes an immunity from suit under patents specified in the product insert to use only the amount purchased for the purchaser s own
internal research. No other patent rights (such as 5 Nuclease Process patent rights) are conveyed expressly, by implication, or by estoppel. Further information onpurchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

製品及び原理等でご不明な点がございましたら。
下記問い合わせ先までお気軽にお問い合わせください。
（ウェブサイトをリニューアルして見やすくなりました）

ライフサイエンス事業部（大阪）〒530-8230 大阪市北区堂島浜二丁目2番8号
TEL.06-6348-3786 FAX.06-6348-3833
E-mail order̲lifescience@bio.toyobo.co.jp

ライフサイエンス事業部（東京）〒103-8530 東京都中央区日本橋小網町17番9号
TEL.03-3660-4819 FAX.03-3660-4951
E-mail order̲lifescience@bio.toyobo.co.jp

Toyoboテクニカルライン
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