22-05

10x A-attachment mix(Code No. TAK-301)

取扱説明書
TOYOBO CO., LTD.
Bioproducts Sales and Marketing Department
OSAKA JAPANA4028K

１. はじめに10×A-attachment mix は、KOD シリーズ用高効率 TA クローニングキット TArget CloneTM-Plus-（Code No.:TAK-201）に付属の 10×A-attachment mix のパーツ別売品です。
一般的に KOD DNA polymerase などのα型 DNA polymerase によって増幅されたPCR 産物は、そのプルーフリーディング活性（3’→5’ エキソヌクレアーゼ活性）のため平滑末端となっています。従って、通常 TA クローニングを行うためには、PCR 産物を精製した後、改めて Taq DNA polymerase により、その 3’末端に dA を付加する必要があります。
10×A-attachment mix には、dA を付加するための Taq DNA polymerase に加えて、KOD DNA polymerase の 3’→5’ エキソヌクレアーゼ活性を抑える抗 KOD 抗体が含まれているため、KOD シリーズで増幅された PCR 産物を、精製することなく、3’末端に dA を付加することができます。
こうして dA が付加された PCR 産物は、高効率 TA クローニングキット TArget CloneTM（Code No.:TAK-101）、または TArget CloneTM -Plus-（Code No.:TAK-201）に含まれる Tベクター（pTA2）とライゲーション試薬を用いて直接クローニングできる他、任意の T ベクターとライゲーション試薬を用いてクローニングを行うことも可能です。
注 1）本製品は、弊社 KOD DNA polymerase / KOD -Plus- / KOD -Plus- Ver.2 / KOD -Plus-Neo/ KOD FX / KOD FX Neo による PCR 産物に有効です。KOD Dash による PCR 産物は、dAが付加されていますので、本製品を使用する必要はありません。
注 2) TArget CloneTM、または TArget CloneTM -Plus-付属のライゲーション試薬を用いない場合、TA クローニング効率に優れる Ligation high Ver.2（Code No.: LGK-201）のご使用をお勧めします。

特長
・簡便：

KOD シリーズにより増幅された PCR 産物に本製品を添加して 60℃、10 分間反応するだけです。PCR 産物の精製を必要としません。
・高効率： Taq DNA polymerase で増幅された PCR 産物を TA クローニングした場合とほぼ同等のクローニング効率が期待できます。

KOD

ご注意
本製品は､研究用試薬です。診断および臨床検査用試薬として使用しないでください。また､本製品の使用にあたっては､実験室での一般の注意事項を厳守し､安全に留意してください。

1２. 内容物
10×A-attachment mix25μL(本品は、-20℃にて保存してください。)

３. プロトコール＊反応は、可能な限り、Tベクターとのライゲーション反応の直前に行ってください。
(1)KODシリーズで増幅したPCR産物9μLを新しいチューブに分取します。
注）PCR産物は精製せずにそのままお使いください。もし、精製されたPCR産物をお使いの場合には、PCR増幅に用いたバッファー、dNTP、（マグネシウム）をPCR時の濃度となるように添加し、9μLとしてください。ポリメラーゼは加えないでください。

(2)10×A-attachment Mixを1μL添加してよく撹拌します。
(3)60℃で10分間インキュベートします。
注)効率が低い場合には、反応時間を30分間まで延長させてください（ほとんどの場合は10分間の反応で十分ですが、最大の付加効率は30分間の反応で得られます）。

(4)反応液の一部をTベクターとのライゲーション反応に使用します。
注1）反応液は、使用まで氷上または低温（2～10℃）で保存してください。
注2)ライゲーション反応は、TArget CloneTMシリーズ付属のライゲーション試薬を用いない場合、TAクローニング効率に優れるLigation high Ver.2（Code No.:LGK-201）のご使用をお勧めします。また、その場合、A-attachment処理液のライゲーション反応への添加量は2μL以下にし、16℃にて反応を行ってください。TArget CloneTM シリーズ試薬を用いる場合は、取扱説明書に従ってください。

４. 関連商品品 名<高正確性 PCR 酵素>
KOD DNA Polymerase<ホットスタート対応高正確性 PCR 酵素>
KOD -Plus<信頼性を向上させたホットスタート対応高正確性 PCR 酵素>
KOD -Plus- Ver.2<高正確・高効率・高速 PCR 酵素>
KOD -Plus- Neo<高成功率 PCR 酵素>
KOD FX<高成功率 PCR 酵素(KOD FX の改良品)>
KOD FX Neo<高効率 TA クローニングキット>
TArget CloneTM<KOD シリーズ用高効率 TA クローニングキット>
TArget CloneTM -Plus<高効率ライゲーション試薬>
Ligation high Ver.22包装

Code No.

250U×1 本(250U×1 本)×5
200U×1 本(200U×1 本)×5(200U×1 本)×10

KOD-101
KOD-101X5
KOD-201
KOD-201X5
KOD-201X10

200U×1 本(200U×1 本)×5

KOD-211
KOD-211X5

200U×1 本(200U×1 本)×5(200U×1 本)×10
200U×1 本(200U×1 本)×5(200U×1 本)×10
200U×1 本(200U×1 本)×5(200U×1 本)×10

KOD-401
KOD-401X5
KOD-401X10
KFX-101
KFX-101X5
KFX-101X10
KFX-201
KFX-201X5
KFX-201X10

10 回用

TAK-101

10 回用

TAK-201

750μL ×1 本

LGK-201

TAK-301

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