2020年 10月作 成HISTOFINE
研究用試薬

ヒストファイン
製造販売元

第 一抗体

抗BAP1 モノクローナル抗体(C-4)(ヒストステイナー用)(動物 種：マウ ス)
包 装：

60 テ スト ( 12 mL)〒 1 0 4 -8 4 0 2
東京都中央区築地 6-19-20
TEL. 03(3248)2208 FAX. 03(3248)2243

Code：718341■ 本品は、自動染色装置ヒストステイナー用の試薬 第一抗体である。
■ 特異性および抗原分布： BAP1(BRCA1 associated protein 1)と特異的に反応する。BAP1は、3番染色体短腕(3p21.1)上のBAP1遺伝子によりコードされる核に局在する脱ユビキチン化酵素で、転写、クロマチンリモデリング、
細 胞 周 期 制 御 、 DNA修 復 /組 換 え な ど に 関 与 し て い る (1)~(4)(6)~(8) 。 生 殖 細 胞 系 列 に お け る BAP1 変 異 は 、 悪 性中 皮 腫 や ブド ウ 膜 悪 性黒 色 腫 な ど様 々 な 悪 性腫 瘍 の 素 因に な る と され て い る ため 、 BAP1 は が ん 抑 制遺 伝 子としても報告されている (2)(6)(7) 。正常では、中皮細胞、肺胞上皮細胞 (6) や血管内皮細胞、線維芽細胞、炎症性細胞 (6)~(8) などの核に反応がみられる。腫瘍では、肺癌、卵巣癌などで反応がみられる (6) 。悪性中皮腫(66％ (6))
では、免疫組織化学染色でBAP1の核からの消失(BAP1 loss)がみられるが、反応性中皮過形成ではBAP1 lossがみ られ ないこ とか ら、悪 性中 皮腫と 反応 性中皮 過形 成の判 別に おいて 有用 である と報 告され てい る (6) 。悪性中皮腫の組織型では、上皮型(70%)/二相型(60%)が、肉腫型(13%)/線維形成型(20%)と比較して、BAP1 lossが 高 率
で あ る と 報 告 さ れ て い る (6) 。 ブ ド ウ 膜 悪 性 黒 色 腫 (47%) (4) 、 肝 内 胆 管 癌 (26%) (7) 、 淡 明 細 胞 型 腎 細 胞 癌(10％ ) (5) な ど の悪性 腫瘍 でも、 BAP1 lossが みら れる。
注 1: BAP1が 発現し てい る細胞 では 、核の 他に 細胞質 に染 色がみ られ る場合 があ る。
注 2: BAP1 lossを 示 す細胞 では、 核の 染まり は消 失して いる が細胞 質に 染色が みら れる場 合が ある。
■クローン名：C-4■抗体のサブクラス：IgG1、κ
■免疫原：ヒト BAP1 のアミノ酸配列 430-729 番目に相当するタンパク質■製法：アフィニティー精製して得ている。
1.内容
第一抗体・・・抗 BAP1 モノクローナル抗体(C-4)（動物種：マウス）。
液状。
ウシ血清アルブミン(BSA)と 0.1％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水(PBS)にて、即時使用可能な抗体濃度に希釈済み。
1 バイアル中に 12mL を含む。
2.使用目的組織・細胞中の BAP1 の染色
3.切片の準備前処理(抗原賦活化)としてヒストファイン 抗原賦活化液 pH9 (Code:415201 または Code:415211)を用いた温浴処理が必要である(裏面参照)。
■参考：組織の固定状況等によりヒストファイン 抗原賦活化液 pH9(Code：415201 または Code：415211)の替わりに 10mM クエン酸緩衝液(pH6.0)を用いた温浴処理をすることで良好な染色結果が得られる場合がある (裏面の■参考参照)。

4.使用方法パラフィン包埋切片の免疫組織化学および免疫細胞化学染色に使用できる第一抗体である。
1） 他の試薬とともに試薬ラック(ヒストステイナー用)にセットし、染色を開始する。
2） 染色終了後、すみやかに2－8℃に保存する。
5.染色方法の設定
反応時間を30分間とする。
試薬バーコードラベルを使用する場合は、自動染色装置ヒストステイナーのプログラムにバーコードラベル情報を入力する必要がある。本製品が未登録の場合は、下記データを入力(漢字のみ全角、他半角入力)し、登録すること。
専用ボトルに貼付されているバーコードラベル内の情報
試薬名
抗 BAP1 ﾓﾉｸﾛｰﾅﾙ抗体(C-4)
試薬略称(10 文字) BAP1-MM
バーコード
BAP1-MM時間(分)306.貯法および使用上の注意
1. 2－8℃保存。
2. 使用期限はラベルに記載されているので使用前に確認すること。
3. 使用前に室温に戻すこと。
4. 使用後は速やかに冷蔵保存すること。
5. 異なるロットの試薬や他製品の試薬を混ぜたりしないこと。

7.取扱上(危険防止)の注意
1. 使用期限の過ぎた試薬は使用しないこと。
2. 本製品に関する安全情報は安全データシートを参照すること。
3. 本品を吸い込んだり、眼、口、皮膚、衣類などへの接触を避けること。
4. 本製品の廃棄の際には、各施設や地域および国のルールに従い、適切に廃棄すること。
5. 本品は、動物由来成分を含むので、取扱に注意が必要である。
6. アジ化ナトリウムは有毒化学薬品である。本製品の含有量は危険なものとして分類されないが、蓄積されたアジ化ナトリウムは爆発性の金属アジ化物として形成され、水道管に含まれる銅、鉛と反応する可能性がある。そのようなリスクを避けるために大量の水とともに洗い流すこと。
7. ヒト由来の検体は、取扱者に感染をひき起こす危険性がある。従って、適切な取扱および廃棄法を用いるとともに、この免疫組織（細胞）化学染色法を施行するに際し、関連技術および操作法に充分習熟しておかなければならない。

8.参考文献(1) Jensen DE, et al. BAP1: a novel ubiquitin hydrolase which binds to the BRCA1 RING finger and enhances BRCA1mediated cell growth suppression. Oncogene. 1998 Mar 5;16(9):1097-112.
(2) Testa JR, et al. Germline BAP1 mutations predispose to malignant mesothelioma. Nat Genet. 2011 Aug 28;43(10)1022-5.
(3) Ismail IH, et al. Germline mutations in BAP1 impair its function in DNA double-strand break repair. Cancer Res. 2014
Aug 15;74(16):4282-94(4) Koopmans AE, et al. Clinical significance of immunohistochemistry for detection of BAP1 mutations in uveal melanoma.
Mod Pathol. 2014 Oct;27(10):1321-30.
(5) Ho TH, et al. Loss of PBRM1 and BAP1 expression is less common in non-clear cell renal cell carcinoma than in clear cell renal cellcarcinoma. Urol Oncol. 2015 Jan;33(1):23.e9-23.e14.
(6) Cigognetti M, et al. BAP1 (BRCA1-associated protein 1) is a highly specific marker for differentiating mesothelioma from reactive
mesothelial proliferations. Mod Pathol. 2015 Aug;28(8):1043-57.
(7) Andrici J, et al. Loss of BAP1 Expression Occurs Frequently in Intrahepatic Cholangiocarcinoma. Medicine (Baltimore). 2016
Jan;95(2):e2491.
(8) Hida T, et al. BAP1 immunohistochemistry and p16 FISH results in combination provide higher confidence in malignant pleural
mesothelioma diagnosis: ROC analysis of the two tests. Pathol Int. 2016 Oct;66(10):563-570.

■ 研究用としてのみ使用すること。
■操作手順[切 片 の 準 備 ]1.

50℃で十分に湯伸ばしした切片(3－4μm厚)をシランなどのコーティングスライド上に貼り付け、37℃の恒温器内で16時間以上乾燥させる。

[脱パラフィン]2.

脱パラフィン →

親水化→

PBS

[抗原賦活化処理]
3.

前処理(抗原賦活化)：温浴処理①

温浴槽をあらかじめ95－99℃に温めておく。以下の操作を行うにあたり、手袋等を用いて高温による火傷に注意する。

②

調 製 し た 抗 原 賦 活 化 液 (下 記 記 載 )を 耐 熱 性 の 染 色 バ ッ ト に 入 れ 、 ゆ る く 蓋 を す る 。 こ れ を 恒 温 槽 に 入 れ 、 95－ 99℃ に 温 める。

③

抗原賦活化液の温度が95－99℃に達したら、スライドを抗原賦活化液に浸漬させ、ゆるく蓋をする。

④⑤

抗原賦活化液の温度が再び95－99℃まで上昇したことを温度計で確認してから、40分間、95－99℃でインキュベートする。
染 色 バ ッ ト を 温 浴 槽 か ら 取 り 出 し 、 蓋 を は ず す 。 ス ラ イ ド を 浸 し た ま ま 常 温 (15－ 25℃ )で 20分 間 放 置 し ゆ っ く り 熱 を 冷ます。

⑥

スライドを抗原賦活化液から取り出し、PBSで洗浄する(洗浄用容器を2度かえ3分間の洗浄操作を3回繰り返すか、または洗浄びんを使用する)。

・抗原賦活化液｢抗原賦活化液pH9」の調製方法
・Code：415201
・Code：415211

抗原賦活化液pH9 (調製済)は、そのまま用いる。
抗原賦活化液pH9 (10倍濃縮)は、精製水で10倍希釈する。

■参考：10mM クエン酸緩衝液（pH6.0）、温浴処理を用いる場合(おもて面の■参考参照)
・10mM クエン酸緩衝液（pH6.0）の作り方
A 液 9mL+B 液 41mL+精製水 450mL（用時調製）
A 液：0.1M クエン酸水溶液：常温で保存可能
クエン酸一水和物（C6H8O7・H2O）2.1g/精製水 100mL
B 液：0.1M クエン酸ナトリウム水溶液：常温で保存可能
クエン酸三ナトリウム二水和物（C6H5O7Na3・2H2O）14.7g/精製水 500mL
ここから必要な時に調製する。