No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 1

発現解析関連特集
今回は発現解析に関連する様々な商品を一挙にご紹介いたします。
今、お使いの製品はいかがですか。この機会にぜひ一度お試しください。

Products
高正確性PCR用酵素

KOD -Plus- Ver.2
PCRパフォーマンスを向上。安定・確実な増幅を実感ください。
KOD -Plus-は正確性の高いHot Start PCR用酵素としてご好評いただいておりましたが、この度、本製品に改良を加えることにより、フィデリティー（正確性）は落とさず、
リライアビリティー（信頼性）を格段に向上させることに成功いたしました。この改良により、全般的にPCR増幅効率が向上し、また、RT-PCR時のRT反応溶液の持込による阻害も回避できるようになりました。

1

高いリライアビリティー

・増えにくい配列のテンプレートや長いテンプレートに

KOD-Plus- Ver.2

対するPCR成功率が向上しました。より確実に増幅産M

1 2 3 4

KOD-Plus-

A社高正確性PCR用酵素1 2 3 4 1 2 3 4物を取得いただけます。

2

RT溶液持込による阻害を低減

・KOD -Plus-に比べ、逆転写溶液の持込による阻害の低減に成功いたしました。RT-PCRでの増幅に力を発揮します。
Template：HeLa total RNA reverse transcript.

3

高い正確性

反応液組成およびサイクル条件：各製品推奨条件（50μl、30cycles）

・従来のKOD -Plus-と同等の正確性を保持していま

1 : human transferrin receptor cDNA 3.5kb
2 : human tuberous scleosis cDNA 5.3kb
3 : human adaptin cDNA 5.7kb
4 : human polymerase εcDNA 6.8kb
M : λ/Hin d Ⅲマーカー

す。Taq DNAポリメラーゼの約80倍の正確性を有しており、PCR産物のクローニング等の用途に最適です。
KOD/KOD -Plus-用TAクローニングキット『TArget
CloneTM -Plus-』にも対応します。

品 名 及 び 内 容

各種cDNAをターゲットとした各社PCR用酵素増幅性能の比較

包

装

保存温度

Code No.

価

格

-20℃

KOD-211￥32,000

高正確性PCR用酵素

KOD -Plus- Ver.2
KOD -Plus- Ver.2
10×Buffer for KOD -Plus- Ver.2
25mM MgSO4
2mM dNTPs

200U
1ml
1ml
1ml

品 名 及 び 内 容
高正確性PCR用酵素

KOD -PlusKOD/KOD -Plus-用TAクローニングキット

TArget CloneTM -Plus1stストランドcDNA合成キット

ReverTra Ace® -α-（逆転写酵素＋dNTPs他）
逆転写酵素

ReverTra Ace®

80

200U×1本包装

Code No.

価200U×1本-20℃

KOD-201￥30,000

1-10

10回用

-20℃

TAK-201￥16,000

-

100回用

-20℃

FSK-101￥53,000

1-30

2,000U×1本-20℃

TRT-101T￥6,0005-77

1

格

２００４〜２００５
総合カタログ

保存温度

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 2

Products
PCR用酵素Blend Taq®／Blend Taq® -Plus増幅効率、伸長性に優れたTaqベースのブレンド型PCR用酵素です。
Blend Taq®はBarnesらの方法をベースに作られたPCR用酵素で、Taq DNA PolymeraseとProofreading活性を持つDNA
Polymeraseを混合することにより、増幅効率、伸長性に優れたPCRを実現します。

1

優れたDNA増幅効率

TAクローニング可能4・Blend Taq®およびBlend Taq® -Plus-のPCR産物は、・微量の鋳型からも効率良くPCRを行うことができます。

共にTAクローニングに使用可能です。

2

優れた伸長性ホットスタートPCR対応 Blend T

5・本酵素はBarnesらの方法をベースに作られた酵素であ

aq -P
®

lus-

・Blend Taq® -Plus-には、抗Taqモノクローナル抗体

り、PCRにおける伸長性が向上しています。

anti-Taq highを加えており、特別な操作無しにホット・human β-globin gene 17.5kbの増幅を確認しています。

スタートPCRが可能です。エキストラバンドを抑え、

3

簡単な条件設定

特異性の高いPCRを実現します。

・TaqベースのPCR用酵素のため、Taqと同じサイクル
条件でPCRを行うことができます。（実施例1）

1

他社ブレンド型PCR用酵素との検出感度の比較

human β-globin gene 3.6kbをターゲットにして

M

1

2

3

4

5

6

7

8

Blend Taq®、Blend Taq® -Plus-および他社ブレンド型酵

Lane
M : 1kbラダーマーカー
Lane 1、2 : ゲノム40ng
Lane 3、4 : ゲノム20ng
Lane 5、6 : ゲノム10ng
Lane 7、8 : ゲノム 5ng※以下、同様。

素を使用してPCRを行いました。5ngから40ngのゲノム
DNAと10pmolesのプライマーを用い、50μlの系で酵素を1.25U使用しました。
図1．Blend Taq®

その結果、Blend Taq®、Blend Taq® -Plus-はゲノム

M5ngにおいても良好な増幅が認められ（図1、2）、他社ブレ

1

2

3

4

5

6

7

8

M

1

2

3

4

5

6

7

8

6

7

8

ンド型酵素（図3）に比べ、優れた増幅効率を示しました。
PCRサイクル条件
94℃、 2min↓
94℃、30sec
55℃、30sec

図2．Blend Taq® -Plus-

図3．他社ブレンド型酵素

35 cycles

72℃、 3min2

他社ブレンド型PCR用酵素との伸長性の比較

human β-globin gene およびhuman Myosin heavy

1

2

3

4

5

6

7

8

1

2

3

4

5

chain geneの異なる長さのものをそれぞれ用意し、ターゲットとしました。PCR用酵素として、Blend Taq ® 、Blend Taq ®
-Plus-および他社ブレンド型酵素を使用してPCRを行いました。
種々の量のゲノムDNAと15pmolesのプライマーを用い、50μlの系で酵素を1.25U、他社ブレンド型酵素では各社推奨容量を使用しました。

図4．Blend Taq®

図5．A社ブレンド型酵素

Lane 1 : β-globin
1.3kb（100ng）
Lane 2 : β-globin
2.8kb（100ng）
Lane 3 : β-globin
3.6kb（100ng）
Lane 4 : Myosin h.c. 5.2kb（100ng）
Lane 5 : Myosin h.c. 6.2kb（100ng）

Lane 6 : β-globin 8.5kb（100ng）
Lane 7 : β-globin 17.5kb（200ng）
Lane 8 : β-globin 23.0kb（200ng）

その結果、Blend Taq®、Blend Taq® -Plus-はターゲット長が23.0kbでも良好な増幅が認められ、他社ブレンド型酵素に比べ、優れた伸長性を示しました。

2※（）内は使用template量を示す。

80

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 3

1

2

3

4

5

6

7

8

図6．Blend Taq® -Plus-

3

1

2

3

4

5

6

7

8
Lane 1 : β-globin
1.3kb（100ng）
Lane 2 : β-globin
2.8kb（100ng）
Lane 3 : β-globin
3.6kb（100ng）
Lane 4 : Myosin h.c.
5.2kb（100ng）
Lane 5 : Myosin h.c.
6.2kb（100ng）
Lane 6 : β-globin
8.5kb（100ng）
Lane 7 : β-globin
17.5kb（200ng）
Lane 8 : β-globin
23.0kb（200ng）※（ ）内は使用template量を示す。

図7．B社ホットスタートPCR用酵素

TAクローニング

human β-globin gene 582bpをターゲットにしてBlend Taq®、Blend Taq® -Plus-、rTaqを用いてPCRを行いました。
得られたPCR産物をP社TAクローニングキットを用いてライゲーション反応を行い（16℃、1時間）、Competent high DH5αを形質転換して選択培地上にプレーティングし、青白判定を行いました。
その結果、Blend Taq®およびBlend Taq® -Plus-のPCR産物もrTaqと同様75％以上のwhiteコロニーが得られました（図8）。
またコロニーダイレクトPCRにてインサートを確認したところ、いずれの酵素の場合もwhiteコロニーの90％以上が目的のインサートを有していました。

コロニー数（／1ngベクター）

350
300

Blend Taq®およびBlend Taq® -PlusはTaq DNA Polymeraseに比べ、3〜4倍の正確性を持っています（弊社データより）。
実施例3のように1〜2kb程度の比
較的短いターゲットならBlend Taq®、
Blend Taq ® -Plus-でクローニング可能です。これより長いインサートのクローニングには、正確性の高い
KOD -Plus-、KOD -Plus- Ver.2をお勧めいたします。

whiteコロニー250

blueコロニー
200
150
100
50
0
Blend Taq®

Blend Taq® -Plus-rTaq

図8．各酵素から得たPCR産物の形質転換効率（青白判定結果）

参考文献

1) Barnes, W. M., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 2216-2220（1994）
品 名 及 び 内 容

PCR用酵素Blend Taq ®
Blend Taq ® (2.5U/μl)
10×Buffer for Blend Taq®
2mM dNTPs

包

装

保存温度

Code No.

価

格50U×1本250U×1本
1,000U×1本
1,000U×3本-20℃

BTQ-101T
BTQ-101
BTQ-102
BTQ-103¥5,000¥19,000¥62,000¥170,000

50U×1本250U×1本-20℃

BTQ-201T
BTQ-201¥6,000¥21,000

ホットスタートPCR用酵素

Blend Taq ® -PlusBlend Taq ® -Plus-(2.5U/μl)
10×Buffer for Blend Taq ®
2mM dNTPs

品 名 及 び 内 容
1stストランドcDNA合成キット

ReverTra Ace -α-® （逆転写酵素＋dNTPs他）
逆転写酵素

ReverTra Ace®
RNase Inhibitor
Oligo(dT)20 Primer

包

保存温度

Code No.

価

100回用

-20℃

FSK-101¥53,000

1-30

-20℃

TRT-101T¥6,0005-772,500U×1本-20℃

SIN-101¥9,0005-85＊2,000U×1本＊格

２００４〜２００５
総合カタログ装

1nmole-20℃

FSK-201¥8,000（1-31）

Random Primer (9mer)

2.5nmoles-20℃

FSK-301¥8,000（1-31）

Nucleotides dNTPs Mixture (2mM)

各2μmoles-20℃

NTP-201¥8,0003-22、4-26

Nucleotides dNTPs Mixture (10mM)

各2μmoles-20℃

NTP-301¥8,0003-22、4-26

0.1ml×10本

液体窒素

DNA-903¥17,000

3-23

コンピテントセル

Competent high DH5α＊：この印のついた製品には、上記以外に他の容量でも販売しております。詳しくは、弊社までお問い合わせください。

803

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 4

Products

Realtime PCR Master Mix
多くのリアルタイムPCR装置に対応可能な、汎用性の高い試薬です。
rTaq DNA Polymeraseをベースとした汎用性の高いリアルタイムPCR用マスターミックスです。ガラスキャピラリーを使用する
リアルタイムPCRシステムや、パッシブリファレンスを使用するアッセイ系のどちらにも最適です。
います。未標識のプライマーをご用意していただくだけ

簡便な操作

1

で、インターカレーターアッセイ法による定量PCRを行う
ことができます。

・2×マスターミックスの状態ですので、後はプライマー、
プローブ、蒸留水、およびサンプルを混合していただくだ

・非特異反応を抑えるため、弊社のanti-Taq抗体を使用し

高い汎用性

2

抗体によるホットスタートテクノロジーを採用

4

けです。

たホットスタートPCRを採用しています。

・ロシュ・ダイアグノスティックス社のLightCycler TMなど、・化学修飾によるホットスタートと異なり、ブロッキングが素ガラスキャピラリーを使用するシステムに対応するため早くはずれ（90℃以上で30秒）、PCRがスタートします。

BSAを含有しています。

・弊社のcDNA合成キット「ReverTra Ace -α-®」(Codeどに対応したパッシブリファレンスも添加されており、設定の変更なしで使用できます。

No.FSK-101)の反応液をそのまま希釈してご使用いただけます。

多くのアッセイ系に対応

3

cDNA合成キットとのマッチング

5

・アプライドバイオシステムズ社のABI PRISM® 7700な

・「ReverTra Ace®」（Code No.TRT-101T,101,102）®

・Realtime PCR Master Mixは、TaqMan アッセイやと「RNase Inhibitor」（Code No.SIN-101,102）を本

その他のプローブアッセイにもご使用いただけます。

試薬に添加することにより、 1ステップ RT-PCR を実施

・SYBR® Green Realtime PCR Master Mixは、既にすることができます。

SYBR® GreenⅠ（Molecular Probes Inc.）を含有して

SYBR® Green Realtime PCR Master Mixを用いたインターカレーターアッセイ

1

ReverTra Ace -α- ®を使用し、HeLa total
LightCyclerTM Amplification Curve

RNA（100ng）を鋳型としてrandom primerにてFluorescence(F1)

10.00
1
2
3

1.00

4
5
6

0.10

7
D
3

5

7

スタートとして5倍ずつ段階希釈（1〜7）しました。
これをサンプルとしてβ-actin遺伝子配列をターゲット と す る P C R を 実 施 し ま し た 。装 置 はLightCyclerTMを使用しました。
その結果（図1）、いずれの濃度でも良好な増幅0.01
11st strand cDNA合成を行った後、10倍希釈を

9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39曲線を得ることができました。増幅していない曲線

Cycle Number

Dはブランク（蒸留水）です。
TM

図1．LightCycler におけるSYBR® Greenアッセイの増幅曲線

装＊

Code No.

価

QPK-101¥37,000

40回用（1ml×1本）

QPK-101T¥10,000SYBR® Green Realtime PCR Master Mix
200回用（1ml×5本）（×2濃度）
40回用（1ml×1本）

QPK-201¥37,000

QPK-201T¥10,000

品 名 及 び 内 容
Realtime PCR Master Mix（×2濃度）

包

保存温度

200回用（1ml×5本）

-20℃

-20℃

格

＊ 本製品は2倍濃度に調製されています。上記回数は50μl反応系の場合の回数です。装置などによって推奨容量は異なります。
※本製品は、F. Hoffmann-La Roche Ltd.、Roche Molecular Systems Inc.並びにThe Perkin-Elmer Corporationとのライセンス契約に基づき販売されるものです。
※LightCyclerTMは、Idaho Technology Inc.並びにRoche Molecular Systems Inc.の商標です。
※SYBR®は、Molecular Probes Inc.の登録商標です。
※TaqMan®は、The Perkin-Elmer Corporationの登録商標です。

480

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 5

！
！
！
これだっ！
本製品はすでに販売を中止しております。

核酸増幅リアルタイムモニタリング装置

LineGene

スリムに使える快適さ
もっと身近に新価格¥1,890,000

価格のスリム化
販売工程を徹底的にスリム化の上、生産ラインを合理化。

機器のスリム化
パソコンの附属なし。
任意選択可能。

反応系のスリム化
10μl反応系対応で、ランニングコストもお得。

機能のスリム化
必要な機能だけを厳選、だから使いやすい。

80

5

詳細はこちらNo.80 05.9.15 7:19 PM ページ 6

本製品はすでに販売を中止しております。

Products
Real Time Monitoring Fluorescent Quantitative Detection System

LineGene

新価格

核酸の増幅過程をリアルタイムモニタリング。コストパフォーマンスに自信あり。
本品は、核酸の増幅過程をリアルタイムにモニタリングする装置です。33フォーマットのパーソナルタイプで、再現性と精度の高いシ
ステムをご提供します。機器本体価格もさることながら、ランニングコストも安価です。
また、広範囲で未知試料を正確に定量したり、全ウェルを一度に解析するなど非常に高性能です。

1

優れたコストパフォーマンス

多様な系に対応

3・対応試薬は、SYBR ® Green Ⅰ、TaqMan® Probes（レポー タ ー 分 子：F A M 、ク エ ン チャー 分 子：T A M R A ）、
Hybridization Probes、Molecular Beaconなど、多様な系に対応します。
励起波長：470nm
検出波長：530nm 、640nm 、710nm

・測定に専用チューブやキャピラリーは不要で 、汎用
0.2ml PCR用チューブを使用できます。
・非常に少ない反応ボリューム（10μl〜）で安定した結果を実現します。
・試薬ランニングコストを低減※します。
※反応ボリューム10μlで…37円/チューブ（弊社キットSYBR ® Green
Realtime PCR Master Mixを用いた場合）

20

・GUI環境によりセットアップは簡単です。
・増幅曲線のリアルタイム表示により、反応の進行状況が一目瞭然です。また、ランニング中にグラフのスケールを拡大し反応初期の微小な蛍光をモニタリングすることも可能です。
・増幅の程度に合わせ、反応中にサイクルを追加、削除することも可能です。
・定量解析および融解曲線解析（SYBR® Green Ⅰアプリ
ケーション）のどちらも可能です。

・励起用光源は、発熱性が低く安定かつ長寿命のBlue
LEDを採用しています。
・検出器は、検出限界が高く高速応答低ノイズのPMTを採用しています。
・この光学系により、蛍光シグナル信号を高感度かつ高速に読み取り可能です。

性

ソフトウェア4

高感度オプティカルユニット

能■テンプレート濃度2倍差の検出
初期の鋳型濃度が2倍差のサンプルを、はっきりと区別して検出できます。
■ウェル間均一性
全ウェルにわたり同等の解析が可能です。

主な仕様■ダイナミックレンジ（図上・右）
広範囲かつ正確に未知試料を定量できます。
10コピー程度の低濃度での検出も可能です。

サンプル容量：0.2ml×33本

化

励起波長：

470nm

検出波長：

530nm

温度精度（設定温度）：≦±0.5℃（95℃）≦±0.3℃（72℃）≦±0.2℃（55℃）

640nm

710nm

温度均一性（設定温度）：

励起用光源： Blue LED≦±1.0℃（95℃）≦±0.5℃（72℃）≦±0.3℃（55℃）

蛍光検出器： フォトマルチプライヤーチューブ

し。

（PMT）

電源：

100V

50/60Hz

最大消費電力： 1000W

温度制御範囲： 30℃〜99℃

外形寸法：

W514×D456×H292（mm）

温度変化率： 最大4℃/sec

重量：

23㎏

（2ステップ，45サイクルの反応=約90分）※製品の性能および仕様、
外観は改良のため予告なく変更することがある。

品 名 及 び 内 容

包Real Time Monitoring Fluorescent Quantitative Detection System

装

Code No.

価

格

1式

BFFQD-33A

保存温度

Code No.

価

200回用（1ml×5本）
40回用（1ml×1本）-20℃

QPK-101
QPK-101T¥37,000¥10,000

4-43

200回用（1ml×5本）
40回用（1ml×1本）-20℃

QPK-201
QPK-201T¥37,000¥10,000

4-43

LineGene（本体 + ソフトウェア）¥1,890,000

Molecular Probes社の登録商標です。
※SYBR®は、※TaqMan®は、Roche Molecular Systems社の登録商標です。
※Hybridization ProbesはHoffman La Roche社の実施許諾が必要です。

包品 名 及 び 内 容
Realtime PCR Master Mix（×2濃度）®

SYBR Green Realtime PCR Master Mix（×2濃度）

装＊

格

２
０
０
４〜２
０
０
５
総合カタログ＊：50μl反応系の場合の回数です。装置などによって推奨容量は異なります。

680

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 7

Products

Can Get Signal ® immunostain
Immunoreaction Enhancer Solution
ご好評をいただいておりますCan Get Signal ® シリーズの免疫組織染色バージョンの登場です。
ウェスタンブロッティングやELISA用としてご好評をいただいておりますCan Get Signal ® に、新たに免疫組織染色専用の新バージョンが加わりました。組織や細胞の染色において、より鮮明な染色像を得られるよう最適化されています。

1

免疫染色のシグナルを増強

・Can Get Signal ® immunostainは、抗原と抗体との反応を促進する効果があり、従来法に比べS/N比の高い良好なシグナルを得ることができます。また、二次抗体の使用量を抑え、高いS/N比の像を得るといった使い方も可能です。抗体の使用量を全体的に抑えることが可能です。

2

さまざまな抗原・抗体に対応・Can Get Signal ® immunostainには、反応促進効果の異なるSolution AとSolution Bとがあります。ご使用の実験系に合わせ、それぞれの実験系により適した試薬を選択することができます。
・2種類の試薬がセットになったStarter Setもございます。お持ちの抗体に対して、Solution AとSolution Bのどちらが適しているのかは、こちらでご確認ください。

3

高い汎用性

・Can Get Signal ® immunostainは、化学発色、化学発光、蛍光などいずれの検出系にも使用することができます。
・ABC法やポリマーコンプレックス法などの増感システムとの併用も可能です。

4

使いやすいReady-to-Useタイプ

・Can Get Signal ® immunostainは、希釈せずにそのままご使用いただけます。

1

従来法との比較−免疫組織染色（ABC法）

ヒト皮膚組織モデルTESTSKINTM（東洋紡）パラフィン包埋切片を用い、一次抗体として抗PCNA・マウスモノクローナル抗体、二次抗体にビオチン標識抗マウスIgG抗体をそれぞれ用いて、免疫組織化学染色を行いました（ABC法）。抗体の希釈には、Can

Get Signal ® immunostain（Solution Aを使用）と、1.5%

Can Get Signal ® immunostain

従来法

ウマ正常血清を含むPBS（従来法）をそれぞれ用い、染色効率の比較を行いました。

Can Get Signal ® immunostainを用いた場合は、従来法と比較して高いシグナルが得られ、バックグラウンドも低く抑えられた明瞭な染色像を得ることができました。

図1．抗PCNA抗体による免疫組織染色品 名 及 び 内 容

保存温度

Code No.

価

各5ml×1本

4℃

NKB-401¥12,000

immunostain

20ml×1本
20ml×4本

4℃

NKB-501
NKB-502¥30,000¥70,000

immunostain

20ml×1本
20ml×4本

4℃

NKB-601
NKB-602¥30,000¥70,000

Can Get Signal ® immunostain Starter Set
Solution A
Solution B
Can Get Signal
Solution A®

Can Get Signal
Solution B

®

80

包

7

装

格

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 8

Products
MultiReporter Assay System -Tripluc®- in vivo アッセイ用試薬

D-luciferin（カリウム塩）
Tripluc®のルシフェラーゼのリアルタイム計測など、in vivoアッセイにご利用いただけます。
MultiReporter Assay System -Tripluc®-の3色のルシフェラーゼ（SLG、SLO、SLR）は、ホタルルシフェラーゼと同様にD-luciferinを基質としておりますので、培養液にD-luciferinを添加していただくことで、細胞を生きたまま非破壊的に測定することが可能です。

生細胞アッセイが可能

1

2

高純度

・HPLCにより98.0%以上であることを確認しております。

・本試薬は、ルシフェラーゼ遺伝子を導入した哺乳類細胞の培養液に添加し、ルシフェラーゼによる発光を確認しております。

概日時計遺伝子のプロモーターの下流に、SLG遺伝子を連結したレポーターベクターを繊維芽細胞
NIH3T3に導入しました。この細胞を100nMデキサメ
タゾンで処理後、200μMルシフェリンを含む培養液に置換し、連続発光測定装置で生物発光を非破壊的に5日間測定しました。
※本データは、産業技術総合研究所

中島芳浩先生よりご提供いただきました。

品 名 及 び 内 容

包MultiReporter Assay System -Tripluc®- in vivo アッセイ用試薬

D-luciferin（カリウム塩）

種類

プロモーター挿入用ベクター［20μg］
プロモーター挿入用
ス ベクターセット［各20μg］
タ SV40コントロールベクターンダ ［20μg］
ー SV40コントロールドタ ベクターセット［各20μg］
イ HSVtkコントロールベクター
プ［20μg］
ベクター フルセット［各20μg］
プロモーター挿入用Tベクター（TA
Cloning Kit）
［20回用］TAク
ロー 内容
ニ ・ベクターン ・T4 DNA Ligase
グ
タ ・2×Ligation Buffer
イ （・10×A-attachment Mix）
プ

装

20 mg
100 mg

保存温度

Code No.

価-20℃

MRL-101
MRL-102￥24,000￥92,000格

SLG（緑色）SLO（橙色）SLR（赤色）pSLG-test〈MRV-101 ￥80,000〉

pSLO-test〈MRV-102 ￥80,000〉

pSLR-test〈MRV-103 ￥80,000〉

SLG/SLO/SLR プロモーター挿入用ベクターセット〈MRV-111、￥200,000〉pSLG-test pSLO-test, pSLR-test
pSLG-SV40 control〈MRV-201 ￥80,000〉

pSLO-SV40 control〈MRV-202 ￥80,000〉

pSLR-SV40 control〈MRV-203 ￥80,000〉

SLG/SLO/SLR SV40コントロールプロモーターベクターセット〈MRV-211 ￥200,000〉
pSLG-SV40, pSLO-SV40, pSLR-SV40 control
pSLG-HSVtk control〈MRV-301 ￥80,000〉
SLG/SLO/SLR ベクター フルセット〈MRV-311、￥350,000〉
プロモーター挿入用各種：pSLG-test, pSLO-test, pSLR-test
コントロール各種：pSLG-SV40, pSLO-SV40, pSLR-SV40, pSLG-HSVtk control
SLO TA Cloning Kit
SLR TA Cloning Kit〈MRT-101 ￥65,000〉〈MRT-102 ￥65,000〉（MRV-102をTプラスミドベクター化） （MRV-103をTプラスミドベクター化）
SLR TA Cloning Kit for KOD
SLO TA Cloning Kit for KOD〈MRT-201 ￥69,000〉〈MRT-202 ￥69,000〉（MRT-101にA-attachment添付） （MRT-102にA-attachment添付）※特許の関係上、ご購入の際は別途申込書を提出していただきます。企業の方のご購入に関しては、別途ライセンス契約が必要です。詳しくは下記ホームページの「お知らせ」でご確認いただくか、弊社までお問い合わせください。
http://www.toyobo.co.jp/bio/※色分離機能を備えたルミノメーターについては、弊社よりカラフルックアナライザーTMを販売しています。

880

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 9

本製品はすでに販売を中止しております。

Products

Protein Ladder Marker

サンプル調製用DyeがセットになったSDS-PAGE用のラダーマーカーです。

シャープなラダーバンド

1

サンプル調製用Special Dye set付き

3・高度に精製したタンパク質を使用しており、シャープ

・SDS-Dye（-DTT）と1M DTTからなるサンプル調製なバンドを示します。分子量も一目瞭然です。

用のDyeが添付されています。

・それぞれのバンドのタンパク質量が分かっているため、容易にサンプル濃度を推定することができます。

・各バンドはHisタグ配列を保持しており、市販の抗Hisタグ

安定・便利

2

抗Hisタグ抗体で検出可能

4抗体によって検出することができます。

・室温でも2〜3ヶ月安定です。加熱や希釈の必要もなく、
いつでもそのまま使用できます。

他社タンパク質マーカーとの比較

1

250
150
100
80
70
60
50

CBB染色

kDa

1

2

銀染色

3

1

2

各バンドのタンパク量3

Protein（kDa）

μg/5μl

250

0.15

150

0.075

100

0.075

80

0.075

70

0.40

60

0.15

20

50

0.15

15
10

40

0.15

30

0.15

20

0.60

15

0.15

10

0.15

250

40

150
100
80

30

70
60

50
40

20

30

15
10
※70kDa、20kDaのバンドは増強して
いるので、
目印に
なります。
10-20％グラジアン
トゲルCBB染色、
アプライ量5μl

１：Protein Ladder Marker
２：A社Ladder Marker
３：B社Ladder Marker

１：Protein Ladder Marker 5μl
２：A社Ladder Marker
10μl
３：B社Ladder Marker
5μl
各メーカーの使用説明書に基づいて推奨量をアプライ

0.2μl
1μl
0.2μl

各メーカーの使用説明書に基づいて推奨量をアプライ

これらの結果よりProtein Ladder Makerは、他社マーカーに比べてエキストラバンドの少ないシャープなバンドであることが分かります。

品 名 及 び 内 容
Protein Ladder Marker
Broad range（100〜200回用）

包装

Broad range ladder markers
Special Dye set
・ SDS-Dye（-DTT）
・ 1M DTT

保存温度

Code No.

価

格

-20℃

APSP-2130¥21,000

500μl
450μl
50μl

※本製品は、
アプロサイエンス社からTOYOBO専用向けに製造されているものです。

品 名 及 び 内 容

包

装

保存温度

Code No.

価

格２００４〜２００５
総合カタログ

Sharpline SDS-PAGE用分子量マーカーセット
Low range （100〜200回用）

Low range markers
Special Dye set

500μl
1set

-20℃

PMW-101¥13,000−

Sharpline ® SDS-PAGE用分子量マーカーセット
Broad range （100〜200回用）

Broad range markers
Special Dye set

500μl
1set

-20℃

PMW-102¥19,000−

Sharpline ® SDS-PAGE用分子量マーカーセット
Prestained Low range （50〜100回用）

Prestained Low range markers
Special Dye set

250μl
1set

-20℃

PMW-201¥13,500−

Sharpline SDS-PAGE用分子量マーカーセット Prestained Broad range markers 250μl
Prestained Broad range （50〜100回用） Special Dye set
1set

-20℃

PMW-202¥19,500−-20℃

PMW-301¥12,000−®

®

Sharpline Special Dye set®

80

SDS-Dye（-DTT）
1M DTT

9ml
1ml

9No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 10

本製品はすでに販売を中止しております。

Te c h n i c a l R e v i e w

QTL LightSpeed® Assay Kitを用いたプロテインキナー
ゼ・プロテインホスファターゼ活性測定例のご紹介
はじめに

方法および結果

QTL LightSpeed® Assay Kitはスーパークエンチング法を用

1. 各種ホモジニアスアッセイ系との比較例
PKA（cAMP-dependent protein kinase）アッセイにおいたプロテインキナーゼ、プロテインホスファターゼ、およびプロテ
アーゼの迅速アッセイキットです。以下のような特長があります。

ける種々のホモジニアスアッセイ系との比較を行いました。

スーパークエンチング法は、各種酵素のハイスループットアッセ

Competitor #1

Competitor #2

イに最適な方法として現在注目されている技術です。
基質ペプチドKinaseリン酸基

クエンチャー

リン酸基結合担体
Phosphatase
MIII

QTLセンサー
（蛍光）

PO3-

MIII

QTL Sensor:
fluorescent

Fluorescencequenched

Competitor #3

原理図

従来の低分子同士の組み合わせでは、大変弱いクエンチングしか観察されませんでしたが、蛍光ポリマーを用いることにより約100
万倍の感度を実現しました。従来のクエンチング法に比べ、格段に広いダイナミックレンジかつ高い感度で検出することが可能となり

F R E T 法 ( # 1 ) 、お よ び A T P 測 定 法（ # 2 ) に 比 べ 、Q T L

ます 。この 原 理を 用 い たホモジニアスアッセイキットが「 Q T L

LightSpeed®では（橙）、感度・ダイナミックレンジともに優れる

LightSpeed® Assay Kit」です。プロテインキナーゼアッセイにお結果でした。HTRF法(#3)とはほぼ同等の感度・ダイナミックレン

いては、蛍光ポリマーを表面に結合させた微小ビーズ（QTLセンサ

ジでしたが、測定誤差が少ない傾向にありました。

ー）にクエンチャーを有する（蛍光の減少）リン酸化されたペプチドが結合することによる、ポリマー単位でのクエンチングを測定しま

2. 阻害剤のアッセイ例

す。一方、プロテインホスファターゼアッセイはその逆反応を測定しProtein kinaseおよびProtein phosphatase阻害剤の効果ます（原理図ご参照）。

を測定しました。

【特長】
1. 洗浄工程を一切必要としません。96,384 well plateを用いた迅速アッセイに最適です。
2. 一般的な蛍光リーダーを使用して解析が可能です。
3. 阻害剤スクリーニングアッセイ等に応用可能です。
4. 抗体を使用しないため様々なアッセイに幅広く応用することができます。
・Universal Assay Development kitを用いることで、自在にターゲット配列を選択可能です。
（プロテイ
ンキナーゼアッセイ）
・IP3KなどLipidを基質とするようなキナーゼの活性測定も可能です。
（近日発売予定）

Staurosporineの効果を種々のProtein kinase（PKCα、
Rsk2、およびAkt-1）を用いて調べた結果、それぞれに濃度依存的阻害効果を確認することができました。また、RK-682 のProtein phosphatase(PTP-1B)に対する阻害効果を認めることができました。Staurosporineはスペクトルの広い細胞浸透性プロテインキナーゼ阻害剤であり、RK-682は非膜透過性のPTPの特異的阻害剤です。

※以下のような商品を¥98,000 [100 well] 〜¥320,000 [800 well] で取り揃えております。
Protein Kinase : A b l 、 A k t 1 / P K B α 、 A u r o r a A 、 E r k 1 / E r k 2 、 F y n 、 I R A K 4 、 J n k 3 、 L y n 、
Msk1/Msk2、p38α、p70S6、PKA、PKCα、PKCβⅠ/Ⅱ、PKCε、PKCζ、Rsk-2、
Sgk、Src、Universal Assay Development Kit
Protein Phosphatase : PP2A、PTP-1B
Protease : CASPASE-3/7、β-SECRETASE、γ-SECRETASE
詳細につきましては、弊社下記ホームページをご覧ください。
URL:http://www.toyobo.co.jp/seihin/xr/product/qtl/lightspeed/index.html

1080

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 11

初代細胞スターティング培地

MF-startTM
繊維芽細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、間葉系幹細胞や組織からの分離培養効率を向上させます。
貴重な生体サンプルを入手しても思うように細胞培養が立上がらず、悔しい思いをしたことはございませんか。初代細胞の樹立には組織処理方法だけでなく初期培養にどの培地を使うかが重要です。
今までどの培地でもうまくいかなかった方、是非この培地をお試しください。

1

アウトグロース効率の向上

・分離培養直後のアウトグロース効率、コロニー形成効率が向上します。

2間葉系由来細胞の樹立に

・繊維芽細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、間葉系幹細胞などの間葉系細胞に最適です。
※血球系、上皮系には不適です。

3

簡単調製

・基礎培地に添付の1種類の添加剤を加えるだけで簡単に調製可能です。

使用方法
1. 細切方法、酵素処理方法などにより組織から目的とする細胞を調製します。
2. 分離した細胞、若しくは処理した組織をMF-startTMで培養します。
3. 4〜10日間 培地交換せず、本培地で培養します。
4. 細胞がコロニー様に増殖しはじめたら、所定の増殖培地で培地交換を行います。
増殖が緩慢な場合は引続き MF-startTMで培養します。
5. 以後、定法に従い細胞培養を行います。
※増殖培地としては弊社MF-medium®のご使用をお勧めいたします。

図1．ヒト関節軟骨からの細胞樹立

1

ラット胎児組織からの細胞樹立

ラット胎児組織をコラゲナーゼ消化後、回収した細胞を各培地で10日培養後、増殖した細胞をカウントしました。

MF-startMF-startTMでは優れた立上りを観察できました。

TM

10%FCS-DMEM
0

50

100

150

200

250

細胞（
胞（x10
x104個）

図2．ラット胎児組織からの分離増殖細胞数

80

11

300

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 122

マウス組織からの細胞樹立

マウスから繊維芽細胞、骨髄由来間葉系幹細胞を調製し各培地で培養しました。
10% FCS-DMEMではほとんど細胞が増えてきませTMMF-start

んがMF-startTMではいずれも十分な細胞数を得ることができました。

10%FCS-DMEM

0

50

100

150

200
20

250

3

細胞（x10 個）
繊維芽細胞

間葉系幹細胞

図3．マウス組織からの分離増殖細胞数3

組織培養への適用例

ヒト組織から各細胞を分離し、分離直後1週間MF-startTMで培養し、以後MF-medium®に切換え継代培養を行いました。
3週間で100倍と従来培地に比べ優れた増殖性を示しました。MF-startTMと弊社MF-medium®を組合わせることで短期間でより多くの初代細胞を得ることができました。

16

18

16

16

14

MF

14

MF

12
10
8

MF

Cell(log10)

14

Cell(log10)

Cell(log10)

ヒト前駆脂肪細胞

ヒト軟骨細胞

ヒト間葉系幹細胞

12
10
8

6

0

10

20

30

40

50

4

60

10
8
6

6

4

12

4

0

10

20

Day

30

40

50

60

0

10

20

30

40

50

60

Day

Day
TM

®

実線／ 培養１週間：MF-start →以後： MF-medium
破線／ 培養１週間：20%DMEM→以後：10%DMEMで培養品 名 及 び 内 容
初代細胞スターティング培地

MF-startTM

包

保存温度

装

250ml

培地

4℃、添加剤

Code No.
-20℃

価

TMMFS-001

格¥28,000※本培地はインビトロ研究用にのみ限定して販売しています。ヒト・動物への使用、臨床および体外診断には使用できません。

品 名 及 び 内 容
間葉系幹細胞増殖培地

MF-medium®

包

保存温度

装

500ml

培地

4℃、添加剤

Code No.
-20℃

TMMFM-001

価

格¥35,000

２００４〜２００５
総合カタログ−※本培地はインビトロ研究用にのみ限定して販売しています。ヒト・動物への使用、臨床および体外診断には使用できません。

1280

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 13

MultiReporter Assay System -Tripluc®- ベクターシリーズ 多色ルシフェラーゼベクター

SLO/SLR TA Cloning Kitを用いたプロモーター解析方法のご紹介
東洋紡績（株） 敦賀バイオ研究所 浅井 友実
はじめ にTA Cloning Kitは、解析の効率性をさらに向上させるものと期待しております。

TAクローニングは特別なプライマーを用いることなく、制限酵素等の処理も必要としませんので、PCR産物を効率的にクローニン

本稿では、複数の遺伝子プロモーター候補をDBTSS公開配列をグする方法として広く普及しております。弊社では、このTAクロー

もとにMultiReporter Assay System -Tripluc®- SLR TA

ニ ン グ 技 術 を プ ロ モ ー タ ー 解 析 に も ご 利 用 い た だくべ く、Cloning Kit for KODを用いてクローニングし、培養細胞で転写活

MultiReporter Assay System -Tripluc®- SLO/SLR TA性を確認した例をご紹介いたします。

Cloning Kitとしてご提供しております。さらに、MultiReporter

方Assay System -Tripluc®- SLO/SLR TA Cloning Kit for
KODは、高フィデリティ酵素としての特性上平滑末端産物を生じや法

1. プロモーター候補配列の検索およびクローニング

すく、TAクローニングを苦手とするKODシリーズにおいても、高フ

今回は、表1に示すハウスキーピング遺伝子として知られる10ィデリティ性を活かし、さらにTAクローニングを可能にするように工個の遺伝子について、DBTSSの情報より、RefSeqの5'末端を夫されたキットです。

基点に−1400bp〜＋100bpおよび−500bp〜＋100bpの

一方、プロモーター領域の単離や解析には、従来、S1マッピング

領域をプロモーター候補配列として抽出し、その5'末端、3'末端法、5'-RACE法によるmRNAの5'-UTR域（転写開始点近傍）の同に相補的なプライマーを設計しました（図１）。

定、さらにはこの配列をプローブとしたゲノムDNAライブラリーのPCRは、Jurkat細胞より抽出したGenomic DNAを鋳型としスクリーニングといった手法が用いられてきました。これらの手法て、High fidelity hot start PCR酵素KOD -Plus-を用いては煩雑な作業が必要で、多種類の遺伝子プロモーターを解析するに行いました。PCR増幅の成否結果は表1に記載します。

は非常な労力を要します。

続 い て 、P C R 増 幅 が 認 め ら れ た サ ン プ ル に つ い て 、

近年、
ヒトゲノムプロジェクトにより決定されたヒトゲノム配列、おMultiReporter Assay System -Tripluc®- SLR TA Cloning

よびNEDOの主導下で行われた「完全長cDNA構造解析計画」にKit for KODのプロトコールに従い、精製処理を行わずにA-

より蓄積された転写開始点に相当する5'末端情報をもとに、mRNA

attachment Mixを用いて3'末端にdAを付加し、pSLR-Tとラ

転 写 開 始 点データベ ースD B T S S（ h t t p : / / d b t s s . h g c . j p /イゲーション反応を行いました。その反応液を用いてコンピテン

index.html）が公開されています。今後、転写制御やシグナル伝達

トセルDH5αへ導入し、翌日、コロニーダイレクトPCRを行い、目などのプロセスを解析していく上で、このようなデータベースの公的産物が挿入されたポジティブクローンを単離しました。これら

開配列をプロモーター領域候補として利用していくことは効果的なポジティブクローンを培養し、プラスミドを精製しました。

手法のひとつとなるものと考えられます。このような手法を進めて

2. 培養細胞へのトランスフェクションおよびルシフェラーゼ活性の測定

いく上で、MultiReporter Assay System -Tripluc®- SLO/SLR

接着細胞であるHeLa S3細胞は前日、24ウェルプレートに0.75×105cells播種しました。浮遊細胞であ表1．プロモータークローニングを実施した遺伝子とプライマー
Gene Nam e
β -actinglyceraldehyde3-phosphate
dehydrogenase

α -tubulin

ubiquitin C

ribosomal
protein S9

ribosomal
protein L13

aminolevulinate,delta , synthase 1

Symbol
ACTB

GAPD

cDNA
TargetRefSeq. No. length

RPS9

RPL13

0.6 kb

ACTCCATGC
ACTC
CATGCCC
CCTCCAAGAGC
TCCAAGAGCTCYWHAZ NM̲003406

SV40

SV40
negative○○

るJurkat細胞はトランスフェクションの前に、
24ウェルプレートに5×105cells（0.5ml/1ウェル）ずつ播種しました。被験配列を挿入した
S L R ベ クタ ー 0 . 4 7 5μg 、p S L G - S V 4 0

GGTCAGGGACTGG
GGTCAGG
ACTGGAGTCCTGTG
AGTCCTGTGGGT
GGT
ACCGC
CGCAGAGCGCCTCGCTCGAGGAG
AGGAGAAG
AG○

control（Code No. MRV-201）0.025μgを

1.5 kbTGTATGCAAATTTGGATTTTG
TGT
ATGCAAATTTGGATTTTGAATC
AATC○

混合し、市販の試薬を用いてトランスフェクショ

0.6 kb

CACTGCCTTTAAAGG
CACTGCCTTT
AAAGGAACTG
AACTGAGAG○

ンし、37℃、24時間インキュベートしました。

1.5 kbTTTTTCAGTTGGTAGCCTCTTTTTC○GCCTTCAGGCCGTCCCTAGCCTCCC

AAAGCAGCCGGGAGCCGCACGGCTT×CGAAAGCCCCGGCCAGCCCAGCAGC

翌 日 、ル シ フェラ ー ゼ 活 性 を 検 出 試 薬

0.6 kbGTCAGGAGGGAGGGTCAGGAGGGGGGAGG
GGAGGGAGAC○

1.5 kbCGAGCTGTGCG
AGCTGTGGAGACAGCAGACCATCGC
CCATCGC○「MultiReporter Assay System -Tripluc®-

0.6 kbAAGGTTCTCCCTGGTTCTCCCTACTTCTTCTCAGG
TCAGG○

Detection Reagents」と色分離機能付チュ

1.5 kb

CATGCGCCACCACGCCCAGCTTTTT

×ーブ測定用ルミノメーター「カラフルックアナラ

0.6 kbCCACAAATGTTCTAAATGGATG
CCACAAATGTTCTAAATG
ATG○

1.5 kbACTCTGTCTCAAACAAACAAACACTCTGTCTCAAACAAACAAAC○

ATTTCTCGAAGGGTCTCCGCGGGGT

CCGCGTTGGCTGAAGCGCCAGGCCG

ALAS1 NM̲199166

tyrosine
3/tryptophan 5 monooxygenase

PCR
(1)

1.5 kbNM̲000977

PEX19

Reverse Primer

0.6 kbNM̲001013

peroxisomal
biogenesis
factor 19(1) ○、× はPCR増幅の有増幅の有 無を示します。

GAGCCGCCTGCCCCGGTCGGCTGGC

NM̲021009

endoG

80

ACACCT
CTACTAACTACGCGCGCTGCCGCTGCAAAG
AGAGC
AGC

NM̲002046

Endonuclease G,
precursor

negative

1.5 kbNM̲001101

KALPHA-1 NM̲006082

UBC

Forward Primer○細胞であるHeLa S3細胞は培地を除去後その×ままLysis Solutionを添加することによって細○胞を溶解しましたが、浮遊細胞であるJurkat細○胞については培養液をマイクロチューブに移GTCCAAACGAAACGCTCGTTGC
0.6 kbGCTGAGTG
GCTG
AGTGTCCCGCTTCTTCCG
CCGCTTCTTCCG

1.5 kbCTTATTTTCCTTAAAGGAAAAAAAAACTTATTTTCCTTAAAGGAAAAAA
AAA
TGC

0.6 kbGGCGCATGCCTGT
GGCGCATGCCTGTAATAATCCCAG
CCCAGC

1.5 kb

TTAGCTTT
AGCTACCTT
ACCTTACAGCAGCAGCAGGGG
GGGG

NM̲004435

NM ̲002857

CCCTTCCACTCACAAACACTGC

CTATGGGCTCTTACTTTCCAG
0.6 kbTTGAACCCGGGAGGCCAAGGCTG
TTG
AACCCGGGAGGCCAAGGCTG

1.5 kbTTTCTTTCTGCTACTG
TTTCTTTCTGCTCTGAAG
AGTTTCC
TTTCC○○
AGGTTTGAGGGACGTCGTAGTC

0.6 kb○

AAACCCACTAAACCCACTAAAATATAACTGGTCAAATATAACTGGTC

イザーTM」を用いて測定しました。この際、接着し、3,000rpmで5分間遠心した後、上清を除去し、Lysis Solutionを添加することによって細胞を溶解しました。

pSLR-SV40 control
未挿入プラスミド（pSLR-T
未挿入プラスミド（pSLR-T）

13

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 14

RefSeq 5'末端
末端
（転写開始点？）ゲノムDNA

-1400

-500

0

ます。この他、GAPDについては1.5kb、0.6kbに被験配列いずれも同等の活性が認められるのに対し、HeLa S3細胞では1.5kbにcDNA(RefSeq)

より強い活性が認められますので、HeLa S3細胞中に存在する転+100

写因子に関係するエレメントが上流域に存在する可能性が考えらます。K-ALPHA-1については今回選択した領域にはプロモーター活

被験配列とした領域

性がありませんでしたので、評価領域を広げる必要があります。あ図1．被験配列の抽出

るいは今回の検討ではRefSeqを基点としておりますので、オリゴキャップ法で得られたcDNAの5'末端を基点にすることでプロモー

結果及び考察ター活性を有する領域を取得できるかもしれません。KCIPについ

今回、PCR増幅を試みた20個のターゲットのうち、17個においてはHeLa S3細胞においては転写活性が検出できませんでしたて増幅が認められました。PCR増幅が認められなかったターゲット

が、Jurkat細胞では比較的大きな活性が認められましたので、については、プライマー配列の問題、ゲノムDNA中の繰り返し配列

Jurkat細胞に存在する転写因子に関係するエレメントが存在するや相同性の高い配列の存在等の影響などが考えられますので、プラ可能性が考えらます。

イマー設計部位を変更して再度PCR増幅を試みる必要があります。
実際に2種類の細胞系を用いた各被験配列のプロモーター活性

本稿では、MultiReporter Assay System -Tripluc ® -の評価結果について、ルシフェラーゼ活性を測定し色分離算出されSLO/SLR TA Cloning Kitをご利用いただくことによって、複数たデータを図2、3に示します。ここでは、各サンプルにおいて内部の遺伝子プロモーターの転写制御を効率的に比較できることが示

標準として添加したSLG値に対するSLR値の割合を算出し、プロッされました。
ご関心あるファミリーに属する複数の遺伝子の転写制御を解析しトしています。
個々のプロモーターの様子を見てみますと、例えば、Jurkat細胞たい場合、あるいは一つの遺伝子について複数の被験配列長あるではACTBプロモーターの転写活性が強く認められることが分かりいは異なる配列部位の転写活性を比較評価したい場合など、本キットを用いることによって効率的に実験を進め

HeLa S3

Jurkatていただくことができ

4.00

25.00

3.50

20.00

るのではないでしょう

3.00
2.50

15.00

か 。 是 非 、一 度

2.00

10.00

MultiReporter

1.50
1.00

5.00

Assay System -

0.50
0.00

Tripluc ®- SLO/SLRAC
TAC B 1
T .5k
G B0
AP .6
k
K- G D 1
AL AP .5k
K- PH D 0
AL A- .6
PH 1 1 k
A- .5k
1
U 0.6
BC k
R
PS 1.5k
R 91
PS .5
R 90 kPL .
1 6k
AL 3 0AS .5kAL 1
A .5
en S 0 kd.5
PE oG kX 1.5
PE 19 kX1 1.5YW 9 kH 0.6
YW AZ k
H 1.5
AZ k
0.
6
S k
ne V40
ga
tiv
e

AC
T
AC B 1
T .5k
G B0
AP .6
k
K- G D 1
AL AP .5
D k
K- PH 0.
A
6
AL k
PH 1 1A- .5k
1
U 0.6
BC k
R
PS 1.5k
R 91
PS .5
R 90 kPL .
1 6k
AL 3 0AS .5kAL 1.
A 5k
en S 0d.5PE oG kX1 1.5
PE 9 1 k.5
X
YW 19 kH 0.6
YW AZ k
H 1.5
AZ k
0.
6
S k
ne V40
ga
tiv
e

0.00

図2．Jurkat細胞における各被験配列の転写活性TA Cloning Kitシリー
ズをお試しください。

図3．HeLa S3細胞における各被験配列の転写活性品 名 及 び 内 容

装

保存温度

Code No.

価

20回用

-20℃

MRT-201¥69,000

20回用

-20℃

MRT-202¥69,000

20回用

-20℃

MRT-101¥65,000

20回用

-20℃

MRT-102¥65,000-80℃

MRA-101¥30,000-

CLX-101¥1,350,000

包格MultiReporter Assay System -Tripluc®-

SLO TA cloning kit for KOD
2×Ligation Buffer
pSLO-T
10×A-attachment Mix
T4 DNA Ligase
MultiReporter Assay System -Tripluc®-

SLR TA cloning kit for KOD
pSLR-T
2×Ligation Buffer
T4 DNA Ligase
10×A-attachment Mix
MultiReporter Assay System -Tripluc®-

SLO TA cloning kit
pSLO-T
T4 DNA Ligase

2×Ligation Buffer

MultiReporter Assay System -Tripluc®-

SLR TA cloning kit
pSLR-T
T4 DNA Ligase

2×Ligation Buffer

MultiReporter Assay System -Tripluc®- in vitro アッセイ用試薬

Detection Reagents
細胞溶解剤（Lysis Solution）
発光基質（Assay Reagent）

100回用

色分離機能付チューブ測定用ルミノメーター

1式

カラフルックアナライザーTM

品 名 及 び 内 容
高正確性PCR用酵素

KOD -PlusMultiReporter Assay System -Tripluc®- in vivo アッセイ用試薬
D-luciferin（カリウム塩）

＊

包

装

格

２００４〜２００５
総合カタログ

保存温度

Code No.

価200U×1本＊-20℃

KOD-201￥30,000

1-10

20mg＊

-20℃

MRL-101￥24,000-＊：この印のついた製品には、上記以外に他の容量でも販売しております。詳しくは、弊社までお問い合わせください。

1480

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 15

Can Get Signal® Immunoreaction Enhancer Solutionを用いたウェスタンブロッティングにおけるブロッキング条件の検討
東洋紡績（株） 敦賀バイオ研究所 川井 淳
はじめ に

結果及び考察ウェスタンブロッティングにおいて良好な結果を得るために

1. Can Get Signal によるシグナル増強効果の比較（図1）®

は、抗体濃度の至適化とともに、ブロッキング条件の検討が非常段階希釈したHis-ERK2タンパク質合成反応液を電気泳動しに重要な要素となっています。解析されるタンパク質や用いる抗たものから、抗Hisタグ抗体を用いてタンパク質を検出する系

体には、それぞれに多様な性質があり、最適なブロッキング条件

において、ブロッキング剤としてスキムミルクとBSAをそれも異なります。ブロッキング剤として主に用いられるものとしてぞれ用いたものについて、Can Get Signal ®によるシグナル

は、スキムミルク、カゼイン、ウシ血清アルブミン（BSA）、ゼ

増強効果を比較しました。

ラチン、正常血清等がありますが、万能といえるものはなく、まスキムミルクによりブロッキングを行った場合、従来法たそれらの添加濃度やインキュベート温度・時間によっても効果（TBS-T）で希釈してアッセイを行ったものでは、微弱なシグナが異なります。用いる抗体の種類によっては使用に適さないブロ

ルしか得られませんでしたが、Can Get Signal ®の使用によッキング剤もあります。従って、最も良好な結果を得るためには、

りバックグラウンドを低く抑えたままポジティブなシグナルのそれぞれの解析に最適なブロッキング条件をその都度決定するこみを増強することができました（図1上）。一方、BSAによりブとが好ましいと言えます。

ロッキングを行ったものでは、従来法でもある程度強いシグナ

Can Get Signal ® Immunoreaction Enhancer Solutionは、

ルは検出できた一方で非特異的なバンドが多数出現しました

ウェス タ ン ブ ロッティン グ や E L I S A（ e n z y m e - l i n k e dが、Can Get Signal ®の使用により非特異的なバンドを減らし、

immunosorbent assay）などの解析でしばしば問題になる、

なおかつ特異的なシグナルを増強することができました（図1

感度不足や高いバックグラウンドを改善するために開発された免下）。

疫アッセイ用の反応促進試薬です。Can Get Signal ®の使用法

このように、Can Get Signal ®は、ブロッキング剤としては非常に簡便で、従来ご使用されていた抗体希釈液の代替として

スキムミルク、BSAのどちらを用いた場合でも、より改善さ用いるだけで、現行の実験系をほとんど変えずに高いS/N比の結れた結果を得ることができることがわかりました。

果を得ることができます。ブロッキングにはいずれのブロッキン
グ剤を用いることも可能ですが、ブロッキング条件の至適化を行うことによって、より改善された結果が得られると期待されます。
®

本号では、Can Get Signal ®を用いたウェスタンブロッティ

Can Get Signal

ングにおいて、ブロッキング剤を変えた場合に得られる結果の違

1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32

従来法（TBS-T）
1/1

1/2

1/4

1/8 1/16 1/32

いを、最も頻繁に用いられるブロッキング剤であるスキムミルクとBSAを用いて比較検討した例についてご紹介いたします。

方法サンプル ＊を4×SDSサンプルバッファーに懸濁し、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）を行いました。
電気泳動を行ったゲルからPVDF膜へ、セミドライ法によりタンCan Get Signal

パク質をトランスファーし、ブロッキングバッファー（5%スキ1/1

ムミルク/TBS-Tまたは5% BSA/TBS-T）で室温で1時間ブロ®

1/2 1/4 1/8 1/16 1/32

従来法（TBS-T）
1/1

1/2

1/4

1/8 1/16 1/32

ッキング処理を行いました。一次抗体反応は、抗体＊をCan Get

Signal ® Solution 1で希釈した液を用いて、室温で1時間行いました。また同時に比較対照として、通常抗体の希釈に用いられる
TBS-T（TBS、0.1%Tween20）を用いて同様に実験を行いました（図1のみ）。二次抗体反応は、抗体＊をCan Get Signal ®
Solution 2またはTBS-Tを用いて希釈した液（図1のみ）で、室温で1時間行いました。検出は、ECL Plus【Amersham
Biosciences社】を用い、弊社微弱発光検出システムFAS-

図1．Can Get Signal ®によるシグナル増強効果の比較
上: 5%スキムミルク/TBS-T使用
下: 5%BSA/TBS-T使用

1000により撮影しました。
＊：次ページ掲載の表をご参照ください。

8015

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 16

サンプル

一次抗体

二次抗体

図1

His-ERK2無細胞タンパク質
合成反応液

抗His-probe抗体（rabbit polyclonal）（Santa Cruz社） 1000倍希釈

抗rabbit IgG-HRP（Santa Cruz社） 10000倍希釈

図2

A431細胞抗EGFR抗体（rabbit polyclonal）（Santa Cruz社） 1000倍希釈

抗rabbit IgG-HRP（Santa Cruz社） 10000倍希釈

図3

HeLa細胞

抗Actin抗体（goat polyclonal）（Santa Cruz社） 1000倍希釈

抗goat IgG-HRP（Santa Cruz社） 10000倍希釈

2. スキムミルクとBSAのブロッキング能の直接比較（Can Get

今回は、Can Get Signal ®を用いたウェスタンブロッティ

Signal 使用）（図2、図3）

ングにおいて、スキムミルク、BSAいずれのブロッキング剤

サンプルとしてA431細胞またはHeLa細胞抽出液を用い、を用いた場合でもそれぞれより改善された結果が得られるといそれぞれからEGFR、Actinを検出する系において、ブロッキ

うこと、またそれぞれのタンパク質・抗体に最適なブロッキン

ング剤としてスキムミルクまたはBSAを用いた場合に得られグ条件が異なり、条件検討により更に良い結果が得られることる結果の違いを、直接比較しました。

を示しました。Can Get Signal ®はウェスタンブロッティン®

A431細胞からEGFRを検出する系では、BSAよりスキムミ

グのシグナルを強化し、高いS/N比の結果を得るための強力なルクを用いた方がわずかに強いシグナルが得られ、またBSA

ツールですが、ブロッキング条件の最適化により更に明瞭な結を用いた場合には分子量マーカータンパク質に由来する非特異果を得ることができます。抗体濃度の条件検討でもなかなか結的シグナルが強力に検出されました（図2）。一方、HeLa細胞

果が改善しない場合などには、ブロッキング条件の至適化検討

からActinを検出する系では、BSAを用いた方がスキムミルクを強くお勧めします。

より全体的に強いシグナルが得られました。多少非特異的なシグナルも強くなってますが、S/N比はほぼ同等であり、BSAの方が検出感度が高いという結果になりました（図3）。

※ご注意

一般的に、BSAよりスキムミルクのほうが強力なブロッキ

ブロッキングバッファー調製時に、ブロッキング剤の希釈液としング効果がありますが、ここに示したように、ブロッキング剤てCan Get Signal ®を用いないでください。ブロッキング能がの効果はタンパク質・抗体により違いがあり、それぞれ最適な低下する場合があります。

ブロッキング条件は異なるということがわかりました。

5% Skim milk/TBS-T

5% BSA/TBS-T

5% Skim milk/TBS-T

5% BSA/TBS-T

1/1 1/2 1/4 1/16 1/32

1/1 1/2 1/4 1/16 1/32

1/1 1/2 1/4 1/16 1/32

1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32

図2．A431細胞におけるEGFRの検出品 名 及 び 内 容

Can Get Signal

図3．HeLa細胞におけるActinの検出

包

装

保存温度

Code No.

価

格各250ml
各50ml

4℃

NKB-101
NKB-101T¥30,000¥10,000

250ml

4℃

NKB-201¥17,000

250ml

4℃

NKB-301¥17,000

保存温度

Code No.

価

4℃

NKB-401¥12,000®

Immunoreaction Enhancer Solution

Solution 1 for primary antibody
Solution 2 for secondary antibody®

Can Get Signal
Solution 1 for primary antibody®

Can Get Signal
Solution 2 for secondary antibody

品 名 及 び 内 容

包装

免疫反応促進試薬

Can Get Signal ® immunostain
Immunoreaction Enhancer Solution

各5ml

＊

格

＊：この印のついた製品には、上記以外に他の容量でも販売しております。詳しくは本誌P.7をご参照ください。

1680

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 17

本製品はすでに販売を中止しております。

無細胞タンパク質合成システムを用いた SNAPTagTMの評価
東洋紡績（株） 敦賀バイオ研究所 黒板 敏弘
はじめ にSNAP-Tag

TMは Human

ンパク質は、SDS電気泳動後、BASシステム（FUJIFILM社製）

O 6- a l k y l g u a n i n e - D N Aを用いて検出を行いました。
3．タンパク質の蛍光ラベル・検出

alkyltransferase（hATG）を遺伝子工学的手法を用いて改良された約20kDaの酵素タグです。ベンジルグアニン基やクロロベ

SNAP-VistaTM Blue kit（Code No.:LK011）を用いて合成

ンジルピリミジン基を有する基質と反応して、図1、図2のようされたタンパク質の蛍光ラベルを行いました（本キットに用いな共有結合を形成する特徴を有しています。この特徴を利用して、られている蛍光色素はUV照射により検出することができまタンパク質の蛍光ラベリング、in vivoイメージング1）2）3）、バイす）。具体的には、無細胞タンパク質合成反応液（クルード）

ンディングアッセイ4）5）など様々な用途に応用することが可能で18μlにsubstrate stock solution（SNAP-VistaTM Blue

す。本タグは、目的タンパク質のN末端、C末端、さらにはタンkit）を2μl添加し、25℃で20分間反応させました。反応後、パク質配列中に付加することが可能です。また、他のタグと併用

それぞれ10、5、2.5μlをSDS電気泳動した後、FASシステ

することもできます。今回は、高効率コムギ胚芽無細胞タンパク

ム（東洋紡製）を用いてUV照射下、蛍光ラベルしたタンパク質

質合成システム：PROTEIOSTM Ver.2を用いてSNAPタグを付の検出を行いました。

加したタンパク質を合成し、合成の有無、蛍光ラベル、および溶結果及び考察解性の検討を行った事例をご紹介いたします。

まず、無細胞タンパク質合成を行ったタンパク質溶液、およびそれを蛍光ラベルしたタンパク質溶液をSDS電気泳動法を用いて解析しました。図3には、クルードタンパク質溶液それぞれ3μlを泳動後、CBB染色した結果を示しています。矢印の部分に、合成されたタンパク質が確認されます。また、蛍光ラベルされたタンパク質は若干分子量が増大していることが確認できます。バンドのシフトからほぼすべてのタンパク質がラベルされたことが示唆されます。

図1．蛍光基質との特異的結合
SNAP-tag TM（金色）を融合したタンパク質（青色）と蛍光基質（緑色）との反応図2．固相への特異的結合
SNAP-tag TM（金色）を融合したタンパク質（青色）のBG-Linkers
を介した固相への固定化

（kDa）

M 1 2

3

4

5

6

7

8

9 10 M

97
66

方

法
45

1．鋳型DNAの調製
SNAP-TagTM配列はSNAP-sourse plasmid pSS26mから必要な配列をPCR法を用いて増幅し、最終的に種々の遺伝

29

子との融合遺伝子として無細胞タンパク質合成用ベクター
pEU3-NⅡのマルチクローニングサイトにクローニングしまし20

た。今回、SNAPタグのみ（SNAP）、SNAP-6×His（SNAP6H）、Flag-SNAP-6×His（Flag-SNAP-6H）、および6×His

14.3

SNAP-Fyn（6H-SNAP-fyn）の4種類のクローンを作製しました。6×Hisはヒスチジンタグ、FlagはFlagタグを示します。
また、fynはhuman Src family kinaseの一種であり、無細胞合成した際に低い溶解性を示すことが知られています。
2．転写および翻訳
鋳 型 と な る m R N A は S c r i p t M A X TM T h e r m o T 7
Transcription kit（Code No.:TSK-101）を用いて合成した
後、簡易エタノール沈殿法によって精製し、翻訳に用いました。
また、必要に応じて翻訳反応中に35Sラベルされたメチオニン

図3．無細胞タンパク質合成にて合成されたタンパク質のSDS-PAGE解析像を添加し、翻訳産物の標識を行いました。35Sラベルされたタ80

1 :SNAP
2 :SNAP（Vista Blue）
3 :SNAP-6H
4 :SNAP-6H（Vista Blue）
5 :Flag-SNAP-6H
6 :Flag-SNAP-6H（Vista Blue）
7 :6H-SNAP-fyn
8 :6H-SNAP-fyn（Vista Blue）
9 :Control
10 :Control（Vista Blue）

17

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 18

図4には、蛍光ラベルしたタンパク質をSDS電気泳動した後に、UV照射下で撮影した結果を示します。図からも明らかなように、すべてのレーンにおいて目的のバンドのみが特異的に検出されま

M

1

2

3

4

（kDa）

した。この結果は、キレーティングを用いる蛍光ラベルに比べて97
66

格段にラベリングの特異性が向上していることを示しています。
これは、ラベリングが高い特異性をもった酵素反応を介して進行45した結果であると考えられます。fynタンパク質のラベリング効率が若干低いように感じますが、これは以下に述べますように、

29

溶解性に起因するものであると推察されます。
図5は、合成時にメチオニンラベルした各タンパク質を解析し20た結果を示しています。解析は、合成されたタンパク質の溶解性14.3を調べるために、合成後のタンパク質溶液（T：Total）と、それを15,000r.p.m.にて15分間遠心した上清（S：Sup.）について

1 :SNAP（10, 5, 2.5μl）
2 :SNAP-6H（10, 5, 2.5μl）
3 :Flag-SNAP-6H（10, 5, 2.5μl）
4 :6H-SNAP-fyn（10, 5, 2.5μl）

行いました。この結果より、SNAPタグ自体は大変溶解性に優れるタンパク質であることが示唆されました。各タンパク質のsolubility（%）は（Sup./Total×100）として算出しています。

図4．蛍光ラベルしたタンパク質のUV照射下における検出

また、fynの溶解性は本タグを融合することで、6%から12%に向上することが示されました。
今回は、基礎データのみの紹介ですが、種々の方法で合成した

P
SNA

SNAPタグタンパク質は、蛍光タンパク質として、また、固定化

T

S

n
P-fy
H
P-6
SNA
6Hfyn
SNA
T

S

T

S

T

S

タンパク質として、様々な用途に応用することが可能であると考えられます。また、本タグは培養細胞を用いたin vivoイメージ
ングやパルスチェース実験等にも力を発揮します。Covalys社は様々な励起波長、性質の蛍光基質、およびリンカーを取り揃えています。是非一度、SNAPタグをお試しください。

T: Total
S: Sup.

95

99

12

6

Solubility（%）

図5．RIラベルしたタンパク質のオートラジオグラム

参考文献
1）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(27): 9955-9959(2004)
2）Methods 32: 437-444 (2004)
3）Nature Biotechnology 21: 86-89(2003)
4）Anal. Biochem. 333(2): 280-288(2004)
5）J. Am. Chem. Soc. 125(26): 7810-11(2003)※ここで紹介させていただいた実施例に使用した製品をはじめ、その他の製品の詳細については下記弊社ホームページにて掲載しておりますので、是非ご覧ください。
http://www.toyobo.co.jp/seihin/xr/product/covalys/snaptag/index.html

製品紹介☆SNAP-CellTM Kits : in vivoイメージング用のキットです。緑（505）と赤（TMR）の2色を取り揃えています。
☆SNAP-VitroTM Kits : in vitro labeling用のキットです。異なる7つの波長で励起される蛍光色素基質を取り揃えています。
☆SNAP-VistaTM Kits : in vitro labeling用のキットです。SDS-PAGEによる解析を行うことができ、SNAP-tagTM の反応性の確認等に用いることができます。
※in vitro labeling用のキットは浸透性の関係上in vivo labelingには適しません。
☆BG-Linkers : 固相への固定など様々な用途に応用できる、基質を含むリンカーです。
☆SNAP-express plasmids: 大腸菌および動物細胞にてSNAP-tagTM融合タンパク質を発現させるための発現用プラスミドです。
☆Source plasmids : SNAP-tagTM 配列を含むソースプラスミドです。Codon usageの異なる2種類を揃えています。
発現用プラスミドではありません。
☆SNAP-BlockTM : 何も結合させていないBG基質です。SNAP-tagTMの酵素活性をブロックするのに使用します。

1880

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 19

蛍光相関分光法（FCS）によるペプチド抗原と抗ペプチド抗体の反応性評価

本製品はすでに販売を中止しております。

東洋紡績（株） 敦賀バイオ研究所 西矢 芳昭
はじめ に
蛍光相関分光法（FCS: Fluorescence Correlation
Spectroscopy）は、共焦点光学系とレーザ、および高感度検出器を用い、観測される蛍光の揺らぎから蛍光物質あるいは蛍光標
識された物質の運動状態とその数を測定できる実験手法です。この手法により、溶液中の分子間相互作用を1分子レベルで観測することが可能になります。一方の分子を固相化する必要がないた
め、生体内に近い状態で観測できるほか、少量のサンプルでも計測ができます。さらに､分子同士の結合・解離の状態が拡散時間により判別できるため、DNAチップやELISAのように結合していない分子を分離する必要がありません。 弊社では、FCS分析
を手軽に行うことができる装置、FCS-101を商品化いたしまし

図2．FCS-101測定部

た（図1）。今回、この装置を用いた分析例のひとつとして、ペプチド抗原と抗ペプチド抗体の反応性を評価した結果をご紹介いたします。

結果及び考察測定の一例として、各試料の平均化された実測データより自己相関関数を演算した結果を図3に示します。（A）が抗原である蛍光標識ペプチド単独での結果、（B）が抗原:抗体モル比率1:100
での結果、（C）が抗原:抗体モル比率1:5での結果になります。
このデータに対しフィッティングカーブをとることにより、分子の運動速度（並進拡散時間）が求まり、分子の大きさを推測することができます。（A）では0.078、（B）では0.30という拡散時間が求まりました。動きの速い分子（小さな分子）ほど拡散時間は短くなります。（A）の0.078は抗原だけの運動速度、（B）の0.30は抗原−抗体複合体の運動速度を表しているといえます。
また、（C）の結果は抗原単独と抗原-抗体複合体が混ざっている状
態（2成分）を表しています（抗体単独分子は蛍光がないので観察されません）。
さらに、（A）〜（C）の測定において測定領域での蛍光物質の分子数は約4分子と計測されました。

図1．FCS-101外観写真

次に、抗原と抗体のモル比率を変えた試料を調製し、（C）と同方法

様に抗原単独と抗原-抗体複合体の2成分状態と考えてデータの解抗原として、蛍光（tetramethylrhodamine-5-iodoacetamide

析を行いました。各抗原:抗体モル比率でのデータをノーマライ（Ex;543nm、Em;567nm））標識ペプチド（分子量約1.7KDa）

ズ、フィッティングした結果は、図4に示しています。また、（A）を、抗体はFab'化抗ペプチドモノクローナル抗体（分子量約および（B）より求めた拡散時間をそれぞれ抗原単独および抗原-

55KDa）を使用しました。

抗体複合体の拡散時間とし、抗原:抗体モル比率と抗体に結合し一定量の抗原8×10-8M/7.5μlに種々の濃度の抗体7.5μlをた抗原の率との関係を計算することができます。結果を表1に示します。

混合し、室温で30分間反応させ、PBSで150μlにメスアップ
して最終的な測定試料としました。この条件で、抗原の終濃度は添加した抗体のモル比率に対して、結合した抗原の率をプロッ

4×10 -9Mとなります。抗体濃度は、抗原と抗体のモル比率がトすることにより、解離定数（Kd）も算出することができます。

1:0〜100となるよう、段階的に調製しました。

本測定結果より、Kd=1.1nMが算出されました。
FCSは相互作用解析の手法として比較的新しく、さまざまな用

サンプル容器としてLab-Tek Chamber Slide（Nalge Nunc

途展開が期待されます。コンパクトで操作も簡便なFCS-101は、製）を用い、あらかじめ0.1%BSAでブロッキングしました。

基礎的検討に最適と考えております。

各試料の測定は、FCS-101にサンプル容器をセットし試料溶液を30μl滴下して測定開始ボタンを押すだけです（図2）。各試料は、繰り返し測定回数10回（約3秒/回）で計測しました。

80

19

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 20（B）抗原：抗体モル比率1：100での反応性（A）抗原単独での反応性

縦軸は分子数です。下へ行くほど増加していることを示します。
横軸は拡散時間です。右へ行くほど遅いことを示します。

：各試料の軸化された実測データ：フィッティングカーブ

図3. 測定例（C）抗原：抗体モル比率1：5での反応性表1．抗原:抗体モル比率と抗体に結合した抗原の率との関係

モル比率〔抗体/抗原〕

抗原結合率（%）

0

0

5

47.5

10

70.2

30
100

92.6
100

図4．分子数をノーマライズしたフィッティングデータ

品 名 及 び 内 容

包装

Code No.

1式

FCS-101

価

格

Fluorescence Correlation Spectroscopy

蛍光相関分光分析計測装置 FCS-101※
蛍光相関分光ユニット（本体 + 相関ボード）¥7,000,000※本製品にはパソコンは含まれておりません。別途、PCIバススロットに相関ボードを組み込むことのできるパソコンが必要です。

2080

No.80 05.9.15 7:19 PM ページ 21;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;Can Get Signal® Immunoreaction Enhancer Solution Q&A
TOYOBOテクニカルライン（TEL 06-6348-3888）へのお問い合わせの多い商品群ごとに、それらをまとめたQ&Aのコーナーです。今回は、ご好評いただいております、Can Get Signal ®について、多くいただくお問い
合わせ内容をまとめてお届けいたします。これらをご参考に、より一層効果的にご利用いただければ幸いです。

〈 商品の特長について 〉

お勧めします。

1

どんな免疫アッセイに使用できますか?

1

ELISA、
ドットブロッティング、
ウェスタンブロッティング等です。
また、使用条件を詳細に検討することで、他の免疫アッセイ系

用しても問題ありませんか?
10 可能ですが、本試薬には、あらかじめブロッキング作用を持つに使用できる場合もあります。
※免疫組織染色には、本誌P.7掲載の Can Get Signal

10 カゼイン、BSA等のブロッキング剤を加えて使成分が混合されているため、追添加により濃度過多になる場®

合がありますので、ご注意ください。

immunostainのご使用をお勧めします。

2

どのくらいシグナルが上がるのですか?

2

従来法に比べ数倍から数十倍の高いシグナルを得ることがで

11 アザイドを加えても問題ありませんか?
11 特に問題はございません。

きます。反応性が低い抗体で顕著な効果を示す傾向があるこ

12 ブロッキング反応に使用可能ですか?

とを確認しております。

12 ブロッキング能を低下させる可能性があるため、ご使用で3

なぜシグナルが上がるのですか?

3

抗原と抗体との反応を促進する効果があるためです。

きません。

13 ELISA法における抗原または抗体の固相化反応に〈 使用方法について 〉
44

使用可能ですか?
13 固相化能を低下させる可能性があるため、ご使用できません。

どのように使用するのですか?
通常、抗体の希釈に用いるTBS（TBS-T）、PBS（PBS-T）、
希釈ブロッキング液などの代わりに、本試薬で抗体を使用濃14 ブロッキング溶液のブロッキング剤としてはどのよ

うなものが良いですか?

度に希釈し、そのまま各種アッセイに用いてください。本試薬

14 スキムミルク、カゼイン、BSA、ゼラチン、正常血清等、いずれ自体は希釈せずにご使用ください。

のブロッキング剤もご使用できます（リン酸化タンパク質の特5
5Solution1が1次抗体希釈用、Solution2が2次抗体希釈用です。

6

抗体を一種類しか用いないアッセイ系（1次抗体に標識が付加されている場合など）ではSolution 1とSolution 2のどちらを使えばよいのですか?

6

異的検出やアビジン-ビオチン系を用いた検出系には、スキム

Solution 1とSolution 2があるが、どのように使い分けるのですか?

ミルクまたはカゼインの使用は避けてください）。
※ブロッキング剤の検討については、本誌P.15〜16をご参照ください。

15 うまくいかないのですが、どうすれば良いですか?
15 場合にもよりますが、抗体の濃度が高すぎて正常に反応でき

Solution 2をお勧めします。ただし、抗体の種類によっては、抗原の濃度、検出系の感度等に大きく依存しますので、抗体

Solution 1を用いた方が、より優れた効果を示す場合がありの供給元の推奨条件を参考にしてください。もし、最適な希ます。また、サンドイッチELISA法における固相化抗体と抗原釈倍率が分からない場合はドットブロッティングなどの予備検との反応には、抗原の希釈液としてSolution 1を用いること討を行うことにより、希釈倍率を決定することができます。

ができます。

7

どの標識酵素を使えば良いのですか?

7

ペルオキシダーゼやアルカリフォスファターゼなどの標識酵素ないことがあります。1次抗体の最適な希釈倍率は、抗体種、〈 保存方法について 〉
16 Can Get Signal ®で希釈した抗体は、4℃で保存可能ですか?

の活性に影響を与えない成分から構成されていますので、これ
らの標識抗体を用いたアッセイ系にも使用することができます。

16 従来ご使用されていたTBS（TBS-T）、PBS（PBS-T）、希釈
ブロッキング液などで保存可能な抗体であれば同様に保存できます。

8

検出系はどのようなものが良いのですか?

8

蛍光検出、発色検出、発光検出のいずれにも使用可能です。
また、他の増感システムと併用することもできます。

17 希釈液は使い回すことはできますか?
17 可能です。ただし、抗体の結合量が多くなるため、同じ希釈倍率

99でも今までより使い回せる回数が減る場合が予想されます。

検出にアマシャムバイオサイエンス社のECLシス
テムを 使 用して います が 、E C L P l u s や E C L
Advanceは使用可能ですか?

18 ウェスタンブロッティング後にストリッピングした

問題なくご使用できます。
また、
ECL Advanceご使用の際は、付属の専用ブロッキング剤を本液に添加して使用することを80

メンブレンを再利用することは可能ですか?
18 再利用することは可能です。

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本製品はすでに販売を中止しております。

●Terminal Deoxynucleotidyl Transferaseの代替品の販売開始のお知らせ

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase（Code No.TTF-101、TTF-102）は、原料入手の諸般の事情によりまして販売中止とさせていただきました。代替品として、原料を組換え体へ変更いたしました新製品を下記のごとく販売開始させていただくことになりました。新製品は従来品と同様にご使用いただくことが可能です。
新製品（保存温度：-20℃）
品名及び内容包装

Code No.

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, recombinant

300U×1本

TTF-201¥12,000

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, recombinant

1,500U×1本

TTF-202¥48,000

販売中止品（従来品）

価

格（保存温度：-20℃）
品名及び内容装

Code No.

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

300U×1本

TTF-101¥12,000

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

1,500U×1本

TTF-102¥48,000●BisulFast

包

価

格

本製品はすでに販売を中止しております。

TM

Methylated DNA Detection Kit-メチル化DNA検出用試薬- の製品名変更のお知らせ
好評発売中のBisulFastTM Methylated DNA Detection Kit -メチル化DNA検出用試薬-（CodeNo.MDD-101、MDD-101T）の製品名を変更いたしました。新しい名称は以下の通りです。
その他、Code No.や包装などには変更ございません。
新名称：BisulFastTM DNA Modification Kit for Methylated DNA Detection
旧名称：Reagent Analysis of DNA Methylation BisulFastTM Methylated DNA Detection Kit-メチル化DNA検出用試薬-●本ページ掲載の試薬類は全て一般研究用の目的にのみ販売しており、医薬品、診断用医薬品、化粧品、食品用等には使用できませんので、十分ご注意ください。誤用による事故については、当社は一切の責任を負いません。
●本ページ掲載商品にには消費税は含まれておりません。実際のご購入価格については弊社代理店へお問い合わせください。
●本ページ中の略号：毒 印は毒物および劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
劇 印は毒物および劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
危 印は消防法に基づく危険物です。

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