Trace Nutrients Research 24 : 71 − 75（2007）

マウス大腸前癌病変の発現におよぼすカキ肉エキス給餌の影響
細見亮太 1），松田芳和 2）
，石丸綾子 1）
，竹村沙織 1）
，福永健治 1）
，吉田宗弘 1）

（1）関西大学 化学生命工学部 生命・生物工学科＊，2）日本クリニック中央研究所＊＊）

Effect of Dietary Oyster Extract on the Colonic Aberrant Crypt Foci in Mice
Ryota HOSOMI1）, Yoshikazu MATSUDA2）, Ayako ISHIMARU1）,
Saori TAKEMURA1）, Kenji FUKUNAGA1）and Munehiro YOSHIDA1）
1）

Department of Life Science and Biotechnology, Faculty of Chemistry,
Materials and Bioengineering, Kansai University
2）

Central Research Institute, Japan Clinic Co., Ltd.

SummaryIn Japan, colorectal cancer demonstrates the third highest cancer mortality following lung cancer and gastric cancer. Western dietary habits symbolized by a high fat/low fiber diet are regarded as one of the risk factors on an epidemiological survey. The present study evaluated the preventive effects of oyster extract on the formation of chemically induced colonic aberrant crypt foci (ACF). Mice fed an AIN93G modified diet containing oyster extract (0.2 %,1.0 % and 5.0 %) were subcutaneously injected with 1, 2-dimetylhydrazine (DMH) (15 mg/kg body wt) once weeklyfor 6 weeks (Experiment 1). Mice that were were first administered DMH once weekly for 6 weeks, were then fed
an AIN93G modified diet-containing oyster extract (Experiment 2). The number of ACF was evaluated after 0.02 %methylene blue staining of the colon and was scored under a light microscope at 40 times magnification.
Experiment 1 demonstrated weight loss of 10−15 % in the Control group beginning one week after dosing withDMH. In the group receiving oyster extract powder, weight loss was slight. The mice fed the oyster extract diet+showed a decreased number of total colonic ACF with a multiplicity of 4 aberrant crypts compared with that inControl. In experiment 2, the mice fed an oyster extract diet did not show a change, total colonic ACF or a multiplic+
ity of 4 aberrant crypts compared with those in Controls. Oyster extract did not diminish or delay development

depression after precancerous manifestation, however we could expect suppression of the initiator action of the carcinogen routine consumption.

我が国における 3大死因は，悪性新生物，心疾患，脳血管疾患の順であり，1981 年以降悪性新生物が死因 1位である。
近年の癌年齢調整死亡率の変遷をみると，胃癌，子宮頸癌の減少と肺癌，大腸癌，乳癌といった欧米型癌の増加が顕著である。とくに，大腸癌は癌死亡順位で肺癌・胃癌に次ぐ第 3位に位置し，食生活の欧米化による影響が最も大きい。
大腸癌抑制効果を食品由来成分に求めた研究は多く，食物繊維や魚介類に特徴的な n-3 系多価不飽和脂肪酸といった1）

様々な食品成分について抗癌活性の検討が行われている 。本研究は，これまでに各種生活習慣病の予防をはじめ健康の維持・増進機能が確認されているカキ肉エキス

2, 3）について，大腸癌発現予防効果の作用機序を明らかにすることを＊＊所在地：大阪府吹田市山手町 3−3−35（〒 564−8680）＊＊所在地：京都府京都市右京区太秦開日町 10−1（〒 616−8555）― 71 ―

目的とする。すなわち本研究では，ヒトにおいても大腸癌前癌病変の生物学的指標として臨床応用が進んでいる異常腺4）窩巣 （Aberrant crypt foci ； ACF）の発現抑制効果を指標にし，1, 2-ジメチルヒドラジン（DMH）によるACF誘発と同時にカキ肉エキスを給餌して ACF 誘導抑制効果を検討し，さらに DMHによる ACF誘発後，カキ肉エキスの給餌を行い，ACF進展抑制効果を検討した。

実験方法
1．餌料および試薬
餌料調製に用いたα-トウモロコシ澱粉，β-トウモロコシ澱粉，ミルクカゼイン，ショ糖，セルロース粉末，AIN93G用
ミネラル混合およびビタミン混合はオリエンタル酵母工業㈱，L-シスチンは，シグマアルドリッチジャパン㈱，重酒石酸コリンおよび大豆油は和光純薬工業㈱から購入した。また，中性緩衝 10％ホルマリン溶液，メチレンブルーは和光純薬工業㈱，DMHは東京化成工業㈱から購入した。カキ肉エキス粉末は，日本クリニック㈱から供与されたものを用いた。
2．動物実験
実験 1

ACF 誘導抑制の評価

以下に示す動物実験条件は，カキ肉エキスの健康維持・増進機能について検討した研究

2, 3）を参考に設定した。カキ

肉エキス被験動物として 4 週齢雄 A/Jマウスを清水実験材料㈱から購入し，1 週間の対照群用餌料（AIN93G）給餌による予備飼育後，無作為に 4 群（1 群 10 匹）に分割した。実験群は，対照群用餌料に 0.2 ％，1 ％および 5 ％（w/w）のカキ肉エキス粉末を混合した 3 群と対照群とした。飼育期間中，室温 22± 1℃，湿度 50± 5％に保持し，水および試験餌料は自由摂取とした。試験餌料の給餌開始と同時に週 1回，大腸前癌病変誘起物質である DMHを生理食塩水に溶解し，5）背部皮下に投与（15 mg/kg B.W.）した 。試験餌料を給餌し，6週間飼育した。飼育期間終了後，エーテル麻酔下で大腸を摘出した。
実験 2

ACF 進展抑制の評価

4 週齢の雄 A/J マウスを無作為に 4群（対照群，0.2％群，1％群，5％群）にわけ，各群とも対照群用給餌による飼育を 6 週間行った。飼育開始 6 週目までは週 1 回 DMH（1週目5 mg/kg，2週目10 mg/kg，3週目以降15 mg/kg）を背部に皮下投与した。その後，実験 1 と同様の試験餌料を給餌した。飼育期間中，水および餌料は自由摂取とした。飼育開始
7週目より 6 週間試験餌料を給餌した。飼育期間終了後，エーテル麻酔下で採血し，大腸を摘出した。
3．ACF の発現評価摘出した大腸は，切開後，十分に生理食塩水で洗浄，内容物を除去し，濾紙に貼り付け，中性緩衝 10 ％ホルマリン溶液で 24時間固定した。固定した大腸を 0.02 ％メチレンブルー溶液で染色後，実体顕微鏡下（× 40）で大腸粘膜組織に6）形成された ACFを計測した 。ACF あたりの異型腺窩（Crypt）数 1，2，3および 4個以上に分類した。Fig. 1 にはCrypts 2 および Crypts 4 以上の実体顕微鏡の画像を示した。

Fig. 1 Typical magnifying view of a colonic aberrant crypt foci (ACF).
(a) ACF of Crypts 2(b) ACF more than Crypts 4― 72 ―

4．血清の分析＊
血清生化学指標であるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST），アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT），総脂質（Total Lipid），総タンパク質（Total Protein），尿素窒素（BUN）をオリンパスAU5431自動分析計によ＊り測定した。（ 実験 2 のみ）

結実験 1

果ACF 誘導抑制の評価

Fig. 2に本飼育期間中の各群の体重変化を示した。飼育開始 1 週から 2 週の間 10 ％〜 15 ％の体重減少がみられたが，その後体重は増加に転じた。カキ肉エキス含量の高い給餌群ほど体重減少は軽微であった。また，飼育開始 1週から 2週の間に対照群では 4 匹，0.2 ％群では 3 匹，1 ％群では 2匹の死亡が確認された。その後，対照群 n ＝ 6，0.2％群 n＝ 7，1％群 n＝ 8，5 ％群 n＝ 10 として実験を続けた。カキ肉エキス含量の高い給餌群ほど死亡数が少なかった。5％群では体重の減少も少なく，死亡例はみられなかった。
総 ACFおよび ACF を Crypt 数毎に分類して Table 1 に示した。総 ACFは，0.2％群と 5％群で有意に少なかった。
1％群では，有差はなかったものの少ない傾向にあった。また，ACFごとの Crypt 数はカキ肉エキス餌料中添加量が多いほどACF発生が抑制された。
実験 2

ACF 進展抑制の評価

Fig. 3に本飼育期間中の各群の体重変化を示した。実験餌料投与開始時に体重の差が確認されたが，その週以外各群とも体重変化は確認されなかった。総 ACF および ACFを Crypt数毎に分類して Table 2に示した。各群とも Crypt数 1，2，3，4以上および総 ACF について有意な差はなかった。Table 3に血清生化学指標である AST，ALT，Total Lipid，Total Protein，BUN を示したが，各群とも有意な差はみられなかった。

Fig. 2 Changes in body weight of mice. (Experiment 1)＊
Data are means ± SEM. Significantly different from Control group at p < 0.05.

Table 1 Effect of dietary oyster extract on ACF formation in mice colon (Experient 1)
Control group

0.2 % group

1.0 % group

5.0 % group

ACF-1 Crypts
ACF-2 Crypts
ACF-3 Crypts
ACF-4+ Crypts

3.0 ± 0.4
1.3 ± 0.6
1.5 ± 0.6
10.5 ± 0.3

1.8 ± 0.6
0.6 ± 0.3
0.5 ± 0.36.9 ± 0.6＊

2.4 ± 1.2
1.4 ± 0.3
1.3 ± 0.4
6.9 ± 0.6＊

1.3 ± 0.4＊
0.5 ± 0.27
0.4 ± 0.2＊
3.0 ± 0.6＊

ACF Total

16.3 ± 1.4

9.8 ± 2.2＊

12.0 ± 1.0

5.2 ± 0.8＊＊

Data are means ± SEM. Significantly different from Control group at p < 0.05.

― 73 ―

Fig. 3 Changes in body weight of mice. (Experiment 2)
Data are means ± SEM. ＊Significantly different from Control group at p < 0.05.

Table 2 Effect of dietary oyster extract on ACF formation in mice colon (Experient 2)
Control group

0.2 % group

1.0 % group

5.0 % group

ACF-1 Crypts
ACF-2 Crypts
ACF-3 Crypts
ACF-4+ Crypts

1.0 ± 0.2
1.1 ± 0.3
0.5 ± 0.2
4.6 ± 0.5

1.5 ± 0.3
1.6 ± 0.3
0.9 ± 0.4
5.7 ± 0.5

1.0 ± 0.2
1.5 ± 0.5
0.3 ± 0.1
4.9 ± 0.5

1.6 ± 0.3
1.9 ± 0.5
0.8 ± 0.3
4.3 ± 0.5

ACF Total

7.1 ± 0.6

9.7 ± 0.7

7.6 ± 0.6

8.5 ± 0.4＊

Data are means ± SEM. Significantly different from Control group at p < 0.05.

Table 3 AST, ALT, Total Lipid, Total Protein and BUN concentrations in serum of mice

ASTALT
Total Lipid
Total Protein
BUNControl group

0.2 % group

1.0 % group

5.0 % group59.6 ± 2.6
42.8 ± 1.9
297.4 ± 12.0
5.5 ± 0.2
26.4 ± 1.1

61.0 ± 3.7
45.4 ± 2.9
301.4 ± 9.7
5.5 ± 0.1
25.4 ± 0.960.2 ± 3.7
43.0 ± 2.9
293.4 ± 9.7
5.6 ± 0.1
25.2 ± 0.9

56.6 ± 3.5
42.3 ± 2.0
277.5 ± 8.9
5.2 ± 0.1
24.2 ± 1.6＊

Data are means ± SEM. Significantly different from Control group at p < 0.05.

考察

実験 1 では，DMH による ACF 誘発と同時に実験餌料であるカキ肉エキス給餌を行った。カキ肉エキス給餌量が多いほど飼育期間中の体重減少とマウス死亡数が少ないことから，DMHによる急性毒性発現の抑制作用，すなわち肝臓における DMHの解毒の促進が考えられる。カキ肉エキス給餌によって総 ACFが減少し，とくに大腸ガンに発展する可能性の高い Crypt 4 以上の ACF が少なく，5 ％群では顕著な抑制がみられた。総 ACFは，1％群だけ有意差はみられないものの減少傾向にあった。これは，個体差およびガンに発展する可能性の低い Crypt 数 3 個以下の ACF数が多かったためである。DMH 投与期間に平行してカキ肉エキスを給餌していることから，前述のようにカキ肉エキスは DMH の解毒作用によって ACF 抑制的に作用していると考えられるが，ガンに進展する可能性の高い ACF すなわち Crypt 4以― 74 ―

上の ACF増殖抑制が確認出来たことから，前癌病変発生後の進展抑制効果も期待できる。しかし，カキ肉エキス給餌が ACF 増殖のどの過程を抑制しているかは実験 1 の結果から明確ではない。
実験 2では，DMH による ACF 誘発後，カキ肉エキス給餌を開始した。飼育期間中に体重変化，各 Crypt数の ACF，血清生化学指標において有意な差は確認されなかったことから，前癌病変発生後にカキ肉エキスを投与した場合，ACFの進展抑制作用はないと考えられる。
実験 1 および実験 2 の結果から，カキ肉エキスには，大腸前癌病変である ACF発症後の進展抑制効果ないが，DMHによる急性毒性発現の抑制作用と肝臓での DMH の解毒の促進作用により，発癌物質によるイニシエータ作用の抑制効果が確認された。カキ肉エキスを日常的に摂取することで，発癌物質解毒による抗癌作用が期待できると考えられる。
カキ肉エキス給餌による大腸前癌病変の発現抑制効果は，アスピリンやスリンダックなど非ステロイド性消炎鎮痛剤（ NSAIDs）に み ら れ る シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ − 2 選 択 阻 害 作 用7）

や ビ タ ミ ン Dの Cytochrome P450， Family 3，Subfamily A，Polypeptide 4（CYP3A4）発現誘導を介した腸管内リトコール酸解毒作用を介した ACFのアポトーシス
8）誘導作用ではなく ，癌誘発物質の毒性軽減作用によることが示された。
今後，DMH 解毒促進作用機序，癌抑制機序解明についてさらに検討を進めたい。

本研究は，平成 19年度関西大学学術研究助成基金（共同研究）において，研究課題「水産廃棄物に含有される機能性食品成分の有効利用に関する研究」として研究費を受けたものの成果として公表するものである。

参考文献
1）Coleman LJ, Landstrom EK, Royle PJ, Bird AR, McIntosh GH（2002）A diet containing alpha-cellulose and fish oil
reduces aberrant crypt foci formation and modulates other possible markers for colon cancer risk inazoxymethane-treated rats. J Nutr 132（8）:2312−2318.
2）松田芳和，出田祐久，藤田忠義，村田道代，土井悦四郎，太田隆男，中塚正博，石津弘視，坪内凉子，柴田幸雄（1992）糖尿病患者における血小板凝集能と，血中ミネラル，核酸関連物質の変動に及ぼすかき肉エキスの影響．微量栄養素研究 9 ： 67−74.
3）松田芳和，高谷英子，山口雅子，太田隆男，真部真理子，河村幸雄，広石伸互，柴田幸雄（1998）カキ（Crassostreagigas）熱水抽出物の癌細胞増殖抑制作用および抗腫瘍作用の検討. 微量栄養素研究 15：121−128.
4）Pretlow TP, Barrow BJ, Ashton WS, O’Riordan MA, Pretlow TG, Jurcisek JA, Stellato TA（1991）Aberrant
crypts: putative preneoplastic foci in human colonic mucosa. Cancer Res 51（5）:1564−1567.
5）McLellan E, Bird RP（1991）Effect of disulfiram on 1,2-dimethylhydrazine- and azoxymethane-induced aberrant
crypt foci. Carcinogenesis 12（6）:969−972.
6）Roncucci L, Medline A, Bruce WR（1991）Classification of aberrant crypt foci and microadenomas in human colon.
Cancer Epidemiol Biomarkers Prev （1 1）:57−60.
7）Steinbach G, Lynch PM, Phillips RK, Wallace MH, Hawk E, Gordon GB, Wakabayashi N, Saunders B, Shen Y,Fujimura T, Su LK, Levin B（2000）The effect of celecoxib, a cyclooxygenase-2 inhibitor, in familial adenomatous
polyposis. N Engl J Med 342（26）:1946−1952.
8）Martinez ME, Giovannucci EL, Colditz GA, Stampfer MJ, Hunter DJ, Speizer FE, Wing A, Willett WC（1996）
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