TSKgel AFC系カラム

高性能アフィニティークロマトグラフィーカラム

TSKgel Protein A-5PW®

TSKgel Protein A-5PWは多孔性の親水性ポリマー基材に、遺伝子組換えProtein Aを導入した充塡剤を充塡したアフィニティークロマトグラフィーカラムで、IgGの高速・高精度分析が可能です。

特長● 粒子径20 µmの基材は機械的強度が高くIgGの高速分析が可能です（標準流速2.0 mL/minで分析時間が2 min、4.0 mL/minでの分析も可能）。
● IgGの吸着容量が高く、広い定量範囲を有します（IgG濃度：0.1 〜 10 g/L）。
● 耐久性が高いカラムです（CHO細胞培養液上清を2,000回以上連続注入してもカラム性能を維持します）。
● カラム部材にPEEKを用いており非特異的吸着が少ないカラムです。
● 分離精製担体TOYOPEARL® AF-rProtein A HC-650Fと同じリガンドを導入しているため同様の分離選択性を有します。
主な対象物質・用途

対象物質 ○ IgG
用途● CHO細胞培養液上清中のIgGの定量 ● 培養条件の検討 ● 製造工程管理
基本特性

製品一覧

● 充塡剤・カラムの特性○分析カラム
品番
品名0023483 TSKgel Protein A-5PW

粒子径
カラムサイズ価格
20 µm 4.6 mm I.D. × 3.5 cm 140,000 円※ガードカラムはありません。インジェクタとカラムの間にラインフィルタ（品名：ラインフィルタキットPEEK、品番：0018014）を取り付けることをお勧めします。

品名
基材

TSKgel Protein A-5PW
多孔性の親水性ポリマー

粒子径

20 µm

細孔径

100 nmリガンド
カラムサイズ

遺伝子組換えProtein A
4.6 mm I.D. × 3.5 cm

カラム部材

PEEK

応用例

● 図1 ポリクローナルIgGの分離
50IgG

40mAU30

CHO細胞由来の夾雑物201000（Ⅱ）（Ⅰ）

0.511.52 min＜測定条件＞カ ラ ム： TSKgel Protein A-5PW（4.6 mm I.D. × 3.5 cm）
溶 離 液 A ： 20 mmol/L りん酸ナトリウム緩衝液（pH 7.4）
B ： 20 mmol/L りん酸ナトリウム緩衝液（pH 2.5）
溶離液切替： 0 → 0.5 分 溶離液A
0.5 → 1.1 分 溶離液B
1.1 → 2.0 分 溶離液A（再平衡化）（ポンプとインジェクタとの間にスタティックミキサ（容量10 µL）を装着）
流速： 2.0 mL/min
検出： UV（280 nm）
温度： 25 ℃
注 入 量： 20 µL
試料：（Ⅰ）0.5 g/LポリクローナルIgG（溶離液Aに溶解）（Ⅱ）0.5 g/LポリクローナルIgGを含むCHO細胞培養液上清

CHO細胞培養液上清中のIgGが短時間で分離可能です（分析時間2分）。

応用例● 図2 IgGの検量線● 図3 分離に対する流速の影響
150

y = 10.416x − 3.4803
R² = 0.9996

2000

4.0 mL/min（吸着画分の相対面積：41 %）1500

3.0 mL/min（43 %）

TSKgel Protein A-5PWカラム
90mAU

ピーク面積

120

1000

2.0 mL/min（42 %）

60
A社カラム

500

1.0 mL/min（42 %）

300050

100

150

200

2500IgG負荷量（µg）＜測定条件＞（1）TSKgel Protein A-5PW（4.6 mm I.D. × 3.5 cm）【試料を除き、図1と同じ】
試料：0.1 〜 10 g/LポリクローナルIgG（溶離液Aに溶解）

流速
1.0 mL/min
2.0 mL/min
3.0 mL/min
4.0 mL/min（2）A社カラム（4.0 mm I.D. × 3.5 cm, PEEK）【溶離液と溶離液切替条件を除き（1）と同じ】
溶 離 液 A ： 20 mmol/L りん酸ナトリウム緩衝液 ＋ 0.15 mol/L NaCl（pH 7.4）
B ： 20 mmol/L りん酸ナトリウム緩衝液 ＋ 0.15 mol/L NaCl（pH 2.5）
溶離液切替：0 → 0.2 分 溶離液A
0.2 → 1.2 分 溶離液B
1.2 → 2.0 分 溶離液A（再平衡化）

123 min

溶離液A
0 → 1.00 分
0 → 0.50 分
0 → 0.33 分
0 → 0.25 分

溶離液B
1.00 → 2.20 分
0.50 → 1.10 分
0.33 → 0.73分
0.25 → 0.55 分

溶離液A
2.20 → 4.00 分
1.10 → 2.00 分
0.73 → 1.33 分
0.55 → 1.00 分

試料：モノクローナルIgG（0.5 g/L）を含むCHO細胞培養液上清【その他の条件は図1と同じ】

TSKgel Protein A-5PWは広い定量範囲と直線性を有します（IgG：0.1〜10 g/L、R2=0.999以上）。

● 図4 連続注入試験時のクロマトグラム0＜測定条件＞
流速と溶離液切替条件

高速分析が可能です（4.0 mL/minで分析時間1分）。

● 図5 連続注入試験前後のIgGの検量線

600

注入回数

500

#1600

試験前
y = 10.436x ＋ 17.108
R² = 0.9998

2000

#2009
1500

#1200

400

ピーク面積mAU

700

#800
#400

300

#51000
試験後（2,009 回注入後）
y = 10.028x ＋ 19.617
R² = 0.9999

200500100000.5

11.522.53 min＜測定条件＞【試料を除き、図1と同じ】
試料：10 g/LポリクローナルIgGを含むCHO細胞培養液上清

0050

100150200
試料負荷量（µg）

250＜測定条件＞【試料を除き、図1と同じ】
試
料：0.1 〜 10 g/LポリクローナルIgG（溶離液Aに溶解）耐久性が高いカラムです（試料の注入が2,000回以上でもクロマトグラム、検量線が変化しません）。

※ TSKgel 、 TOYOPEARL は日本における東ソー株式会社の登録商標です。
※掲載のデ−タ等はその数値を保証するものではありません。 お客様の使用環境・条件・判断基準に合わせてご確認ください。

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3604GX- 品番0994107 A