2023年 3月 作成

HISTOFINE
研究用試薬

ヒストファイン

製造販売元

第一 抗 体抗 INSM1モノクローナル抗体(A-8)（動 物 種： マ ウス ）
包装 ： 50 テス ト （ 6 mL）〒 1 0 4 -8 4 0 2
東京都中央区築地 6-19-20
TEL. 03(3248)2208 FAX. 03(3248)2243

Code：418401■特異性及び抗原分布：INSM1(Insulinoma-associated protein 1)と特異的に反応する。INSM1 は染色体 20p11.2 上の INSM1 遺伝子にコードされる 510 アミノ酸からなる約 53kDa の転写因子であり(1)(2)、膵内分泌細胞の分化や神経の発生に重要な役割を果たす(3)(4)。正常では、INSM1 を発現する細胞は限定されており、消化管や呼吸器などの神経内分泌細胞、膵島細胞などの核に反応がみられる(5)(6)。腫瘍では、神経内分泌腫瘍(消化管: 95％、膵: 94.4％、肺: 95％、子宮頸部: 94％、乳腺: 82.5％)では高率に反応がみられるが、非神経内分泌腫瘍では低率であることから (6)~(10) 、神経内分泌分化の有用なマーカーである (7)(8) 。INSM1 は従来の神経内分泌マーカー(Chromogranin A、Synaptophysin、CD56)に比べ特異度及び感度が高いことが報告されており(11)、これらのマーカーとの併用が神経内分泌腫瘍の判別に有用である(6)。
注 1：INSM1 の細胞内発現パターンは核であるので(6)~(8)、核の染色を強拡大にて観察すること。
注 2：INSM1 が発現している細胞は、核の他に細胞質にも弱〜中程度の染色がみられることがある。

■クローン名：A-8■抗 体 の ク ラ ス /サ ブ ク ラ ス ： IgG1κ
■ 免 疫 原 ： ヒ ト INSM1の 81-125番 目 の ア ミ ノ 酸 配 列 か ら な る タ ン パ ク 質■製法：アフィニティー精製して得ている。
1.内容
第一抗体・・・抗 INSM1モノクローナル抗体(A-8) (動物種：マウス)。
液状。
ウシ血清アルブミン(BSA)と、0.1％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中にて、即時使用可能な抗体濃度に希釈済み。
1バイアル中に6mLを含む。
2.使用目的組織・細胞中の INSM1 の染色。
研究用としてのみ使用すること。
3.使用方法パラフィン包埋切片の免疫組織化学及び免疫細胞化学染色に使用できる第一抗体である。
パラフィン包埋切片の場合、前処理(抗原賦活化)としてヒストファイン 抗原賦活化液 pH9 (Code:415201 又は Code:415211)を用いた温浴処理が必要である(裏面の■操作手順参照)。
スライド上の組織切片が完全に覆われるように第一抗体を2滴(100μL)滴下し、常温(15－25℃)で30分～1 時間インキュベートする。
この反応時間は、ヒストファイン シンプルステインMAX-PO(M)を使用する場合の目安であり、他のキットを使用する場合は、研究者自身が至適反応時間を調べる必要がある。
■参考：組織の固定条件等により前処理(抗原賦活化)としてヒストファイン 抗原賦活化液 pH9(Code:415201 又は Code:415211)を用いたオートク
レーブ処理で良好な染色結果が得られる場合がある。(裏面の■参考参照)。
■ 組織の固定状況等が染色結果に影響を及ぼすため学会等が推奨する固定液や固定時間を遵守し、検体の取扱いには十分注意すること。
染色条件を変更することで良好な染色結果が得られる場合があるが、組織へのダメージや偽陽性化、偽陰性化が起こるおそれがあるた
め、研究者自身の責任において至適条件をよく検討すること。

4.貯法及び使用上の注意
1. 2－8℃保存。
2. 使用期限はラベルに記載されているので使用前に確認すること。
3. 使用前に室温に戻すこと。
4. 使用後は速やかに冷蔵保存すること。
5. 異なるロットの試薬や他製品の試薬を混ぜたりしないこと。
5.取扱い上(危険防止)の注意
1. 使用期限の過ぎた試薬は使用しないこと。
2. 本品に関する化学物質の安全情報は安全データシートを参照すること。
3. 本品を吸い込んだり、眼、口、皮膚、衣類などへの接触を避けること。
4. 本品の廃棄の際には、各施設や地域及び国のルールに従い、適切に廃棄すること。
5. 本品は、動物由来成分を含むので、取扱いに注意が必要である。
6. アジ化ナトリウムは有毒化学薬品である。本品の含有量は危険なものとして分類されないが、蓄積されたアジ化ナトリウムは爆発性の金属アジ化物として形成され、水道管に含まれる銅、鉛と反応する可能性がある。そのようなリスクを避けるために大量の水とともに洗い流すこと。
7. ヒト由来の検体は、取扱い者に感染をひき起こす危険性がある。従って、適切な取扱い及び廃棄法を用いるとともに、この免疫組織(細胞)化学染色法を施行するに際し、関連技術及び操作法に充分習熟しておかなければならない。

6.参 考 文 献(1) Lan MS, et al. Genomic organization, 5'-upstream sequence, and chromosomal localization of an insulinoma-associated intronlessgene, IA-1. J Biol Chem. 1994 May 13;269(19):14170-4.
(2) Goto Y, et al. A novel human insulinoma-associated cDNA, IA-1, encodes a protein with "zinc-finger" DNA-binding motifs. J Biol
Chem. 1992 Jul 25;267(21):15252-7.
(3) Chen C, et al. Insulinoma-Associated-1: From Neuroendocrine Tumor Marker to Cancer Therapeutics. Mol Cancer Res. 2019
Aug;17(8):1597-1604.
(4) Gierl MS, et al. The zinc-finger factor Insm1 (IA-1) is essential for the development of pancreatic beta cells and intestinal
endocrine cells. Genes Dev. 2006 Sep 1;20(17):2465-78.
(5) Yoshida A, et al. INSM1 expression and its diagnostic significance in extraskeletal myxoid chondrosarcoma. Mod Pathol. 2018
May;31(5):744-752.
(6) Rosenbaum JN, et al. INSM1: A Novel Immunohistochemical and Molecular Marker for Neuroendocrine and NeuroepithelialNeoplasms. Am J Clin Pathol. 2015 Oct;144(4):579-91.
(7) McHugh KE, et al. INSM1 Is a Highly Specific Marker of Neuroendocrine Differentiation in Primary Neoplasms of theGastrointestinal Tract, Appendix, and Pancreas. Am J Clin Pathol. 2020 May 5;153(6):811-820.
(8) Mukhopadhyay S, et al. Insulinoma-associated protein 1 (INSM1) is a sensitive and highly specific marker of neuroendocrine
differentiation in primary lung neoplasms: an immunohistochemical study of 345 cases, including 292 whole-tissue sections. ModPathol. 2019 Jan;32(1):100-109.
(9) Kuji S, et al. Immunosensitivity and specificity of insulinoma-associated protein 1 (INSM1) for neuroendocrine neoplasms of theuterine cervix. J Gynecol Oncol. 2023 Jan;34(1):e1.
(10) Metovic J, et al. INSM1 Expression in Breast Neoplasms with Neuroedocrine Features. Endocr Pathol. 2021 Dec;32(4):452-460.
(11) Rooper LM, et al. INSM1 Demonstrates Superior Performance to the Individual and Combined Use of Synaptophysin, Chromogranin
and CD56 for Diagnosing Neuroendocrine Tumors of the Thoracic Cavity. Am J Surg Pathol. 2017 Nov;41(11):1561-1569.

免疫染色における操作手順及び前処理(抗原賦活化)■操作手順[切 片 の 準 備 ]1. 50℃で十分に湯伸ばしした切片（3－4μm厚）をシランなどのコーティングスライド上に貼り付け、37℃の恒温器内で16時間以上乾燥させる。
[脱 パ ラ フ ィ ン ]2. 脱パラフィン → 親水化 → PBS[抗原賦活化処理]
3. 前処理(抗原賦活化)：温浴処理①温浴槽をあらかじめ 95－99℃に温めておく。以下の操作を行うにあたり、手袋等を用いて高温による火傷に注意する。
②調製した抗原賦活化液(下記参照)を耐熱性の染色バットに入れ、ゆるく蓋をする。これを恒温槽に入れ、95－99℃に温める。
③抗原賦活化液の温度が 95－99℃に達したら、スライドを抗原賦活化液に浸漬させ、ゆるく蓋をする。
④抗原賦活化液の温度が再び 95－99℃まで上昇したことを温度計で確認してから、40 分間、95－99℃でインキュベートする。
⑤染色バットを温浴槽から取り出し、蓋をはずす。スライドを浸したまま常温 (15－25℃)で 20 分間放置しゆっくり熱を冷ます。
⑥スライドを抗原賦活化液から取り出し、PBS で洗浄する(洗浄用容器を 2 度かえ 3 分間の洗浄操作を 3 回繰り返すか、又は洗浄びんを使用する)。
[染 色 手 順 ] ＜ ヒ ス ト フ ァ イ ン シ ン プ ル ス テ イ ン MAX－PO(M)使 用 の 場 合 ＞
4. 内因性ペルオキシダーゼの除去
10～15分間／常温→
PBS洗浄
5. 第一抗体の添加・反応
30分～1時間／常温→
PBS洗浄
6. シンプルステインMAX－PO(M)の添加・反応
30分間／常温→
PBS洗浄
7. 基質溶液の添加・反応
DAB発色→
水洗
8. 対比染色
核染（ヘマトキシリン） →封入 →乾燥 → 検鏡■注意・「PBS洗浄」は5分間ずつ容器を2度かえるか、又は洗浄びんを使用する。
・4.のプロセスは3.の前に行ってもよい。
・ヒストファインSABキットを使用する場合は上記1.～4.まで行いSABキットの操作方法に従って染色を行う。
・抗原賦活化液｢抗原賦活化液pH9」の調製方法
・Code：415201 抗原賦活化液pH9 (調製済)は、そのまま用いる。
・Code：415211 抗原賦活化液pH9 (10倍濃縮)は、精製水で10倍希釈する。
■参考：ヒストファイン 抗原賦活化液pH9 (Code:415201又はCode:415211)を用いたオートクレーブ処理を用いる場合
前処理(抗原賦活化)：オートクレーブ処理①調製した抗原賦活化液(上記記載)を耐熱性の染色バットに入れ、スライドを浸漬させる。
②染色バットに蓋をする。蓋が取れないように輪ゴムでとめる。
③120℃、20分間オートクレーブ処理する。
④圧力が十分下がった後、染色バットをオートクレーブから取り出し、蓋をはずす。スライドを浸したまま常温(15－25℃)で20分間放置しゆっくり熱を冷ます。
※オートクレーブ処理後は、染色バット及び抗原賦活化液等が高温になっている。これらを取り扱う際は、手袋等を使用して火傷に注意する。
⑤スライドを抗原賦活化液から取り出し、PBSで洗浄する(洗浄用容器を2度かえ3分間の洗浄操作を3回繰り返すか、又は洗浄びんを使用する)。