Trace Nutrients Research 39 : 17−20（2022）

原著

ペオノールとかき肉エキスまたはアデノシンの併用が乳酸菌増殖に与える影響について根來宗孝1），澤村弘美2），榎 原 周 平1），渡 邊 敏
松 井 博 之3），松 田 芳 和3）

明 1 ，2），石田達也3），（1）大阪青山大学健康科学部健康栄養学科＊，2）兵庫県立大学環境人間学部＊＊，3）日本クリニック株式会社中央研究所＊＊＊）（受付 2022 年 8 月 30 日，受理 2022 年 10 月 11 日）

The Effects of the combination of paeonol and oyster powder extract or adenosineon the growth of lactic bacteria (Lactobacillus plantarum)
Munetaka Negoro1），Hiromi Sawamura2），Shuhei Ebara1），Toshiaki Watanabe1 ，2），
Tatsuya Ishida3），Hiroyuki Matsui3），Yoshikazu Matsuda3）
1）
Department of Health and Nutrition, Faculty of Health Science, Osaka Aoyama University
2）
School of Human Science and Environment, University of Hyogo
3）
Central Research Institute, Japan Clinic Co, Ltd.

SummaryOysters (Crassostrea gigas) are a highly nutritious shellfish that are widely consumed worldwide, and their polysaccharides have been confirmed to have prebiotic properties through in vivo digestion. It has been demonstrated
that polysaccharides derived from oysters greatly increases Lactobacillus reuteri. We have previously reported on
the antioxidant activity of paeonol (2'-Hydroxy-4'-methoxyacetophenone)，which has the chemical structure of hydroxyacetophenone in this compound, and its oral administration showed therapeutic effect on ulcerative colitis in rats.
The absorption kinetics of paeonol in rat intestines has also been investigated. On the other hand, paeonol has beenreported to have an antibacterial effect, so we tried to examine the effect of this compound on lactic bacteria(Lactobacillus plantarum) in vitro when used in combination with oyster powder extract or adenosine. Adenosine
was used as a component confirmed in the oyster powder extract tested. As a result of this study, we found thatthe combined use of paeonol and oyster powder extract was effective in restoring the growth of lactic bacteria.
Specifically, the recovery rate of the growth was 92 % in the 1 % oyster powder extract containing 25 mM paeonolgroup compared to the 5 % DMF control group. We also confirmed the effect of the combination with paeonol andadenosine on lactobacillus proliferation, but the recovery rate of the combination with 0.125 mM adenosine containing
25 mM paeonol was only 69 %. Therefore, it is suggested that oyster powder extract may include something ingredients other than adenosine, indicating that can be expected to have the effect of increasing the growth of Lactobacillus
plantarum.

牡蠣（かき）は世界的に広く消費されている栄養価の高る可能性が指摘されている1）。さらに，かき由来の多糖類

い貝類の一種であり，含有される多糖類の中で，消化管でを経口投与することでアルコール性肝障害を予防し，腸内部分的にしか加水分解されない難消化性多糖類にはプレバの Lactobacillus reuteri を大幅に増加させることも報告さイオティクス的な特性が確認されている。消化過程で出現れている2）。われわれは，これまでにヒドロキシアセト

する難消化性多糖類の部分水解物は，微生物群の構成内容フェノンの化学構造を骨格にもつペオノール（2'-Hydroxy-と多様性を調節し，特に Bacteroides 属，Prevotella 属，4'-methoxyacetophenone）の抗酸化作用について報告を

Faecalibacterium 属などの有益な細菌の存在量を増加させ行ってきた3）。本化合物については，潰瘍性大腸炎ラット

所在地：大阪府箕面市新稲2-11-1（〒562-8580）
所在地：兵庫県姫路市新在家本町1-1-12（〒670-0092）＊＊＊所在地：京都市北区大将軍1（〒603-8331）
連絡先：E-mail：m-negoro@osaka-aoyama.ac.jp（根來）＊＊＊― 17 ―

結果と考察に経口投与すると治療効果が認められること4），ラットの腸における吸収動態5），抗菌作用6）が報告されている。特にその抗菌活性は，E. coli DH5α 株では 94 %，P.aerugi6）

ペオノール（Fig. 1）は，古くから牡丹の根由来の生薬として知られ，これまでに抗酸化作用，抗炎症作用7，8）おnosa PAO1 株では 92 % と強力である。
一 方， ペ オ ノ ー ル の 位 置 異 性 体 で あ る ア ポ シ ニ ン

よびオートファジーの促進効果9）などについて報告がある（4’-Hydroxy-3’-methoxyacetophenone）では NADPH と併ものの，乳酸菌に対するかき肉エキスやアデノシンとの併用することにより，脳卒中モデル実験動物の脳神経細胞に用効果は確認されていない。

対する保護作用が報告されている7）。このようなアポシニンと NADPH との併用効果から本実験ではペオノールのかき肉エキスとペオノール併用が乳酸菌増殖に及ぼす影響について検討した結果を Fig. 2 に示した。ペオノールを抗菌作用に着目し，かき肉エキスあるいは NADPH の構添加すると乳酸菌の増殖は大きく阻害されるが，かき肉エ成成分であるアデノシンとペオノールを併用した場合に，キスを同時に添加した場合には，培養 36 時間では 5 %in vitro で乳酸菌にどのような効果がもたらされるのか検DMFコントロール群に対して，1 % かき肉エキス＋ 25討を試みた。

mM ペオノール添加で 92 %，0.2 % かき肉エキス＋ 25mM ペオノール添加で 87 % にまで増殖が回復した。また

実験方法

培養 6 時間では，5 %DMF コントロール群に対して，0.2% かき肉エキス＋ 25 mM ペオノール添加群では有意（p <1．乳酸菌の培養0.01）な増殖促進が認められた。
Fig. 3 には 0.125 mM から 1 mM のアデノシン単独添加

乳 酸 菌 L. plantarum ATCC 8014 株 を 完 全 栄 養 培 地（MRS 培地：Fluka Analytical 社製）で培養した。このとの乳酸菌増殖に及ぼす影響について検討した結果を示した。

きジメチルホルムアミド（DMF）に溶解した 0.5 M のペ

今回検討した濃度範囲においては，アデノシンを単独添加オノール（東京化成工業株式会社製，東京都）を最終濃度しても，乳酸菌の増殖に有意な影響は認められなかった。
Fig. 4 に，0.125 mM か ら 1 mM の ア デ ノ シ ン と ペ オ

25 mM となるように培地に加えた。
かき肉エキス粉末（かき肉エキスサプリメント（オイスノールを併用した時の乳酸菌増殖を示した。0.125 mM ア

ター Z パウダー ®：日本クリニック株式会社，京都市））

デノシン＋ 25 mM ペオノール添加群では，他群と比較す0.15 g を生理食塩水 750 μL に溶解後，15,000 rpm × 10 分ると培養 6 時間および 15 時間で有意（p < 0.01）な増殖を間遠心分離し，得られた上清を 0.22 μm のフィルターでろ認めた。しかしながら 36 時間では 5 %DMF コントロール過したものをかき肉エキスとした。ペオノール添加培地に， 群に対して，0.1 25 mM アデノシン＋ 25 mM ペオノール
このエキスを最終濃度 0.2 または 1.0 ％になるように加え，添加群の乳酸菌の増殖は 69 % にとどまった。

増殖回復を検討した。調製したかき肉エキスにはアデノシ

このようにペオノール添加培地では，培養 6 時間目におンが 300 µmol/100 g（日本食品分析センター，東京）がける乳酸菌の増殖に関して，0.2 % かき肉エキス添加と含まれていたため，エキス 0.2 または 1％添加培地には，0.125 mM アデノシン添加は似たような効果を示した。しアデノシンがそれぞれ 6 µM または 30 µM のアデノシン

かし，0.2 % かき肉エキス添加培地でのアデノシン濃度はが含まれたことになる。

6 µM にすぎないことから，アデノシン以外のかき肉エキ

これらとは別に，アデノシン（富士フィルム和光純薬株

スに含まれる成分が，乳酸菌の増殖に影響を与えた可能性

式会社製，東京都）を最終濃度 0.125 mM から 1 mM を培が示唆された。従って，ペオノールとかき肉エキスを併用地に加え，増殖への影響を検討した。

することにより認められる乳酸菌の増殖効果については，乳酸菌の増殖はマイクロプレートリーダーのカイネッ

ペオノールとアデノシン併用のみでは説明ができず，かきティック測定プログラムを用いて，室温，OD 600 nm で由来の多糖類1，2）を含めたアデノシン以外の成分も複数の吸光度を経時的に測定した。

因子が関与している可能性がある。今後，ペオノールとか2．統計処理
かき肉エキス添加群においては，かき肉エキスを培地にCOCH3OH添加すると，添加量に依存して吸光度の違いが認められた
ため，コントロール培地を含め，測定 0 時間の吸光度で補正を行ったが，その他の実験系では実測値をそのまま用いた。これらの測定値の群間比較は，統計アプリケーション（Statcel 4: オーエムエス出版，東京都）を用いた，一元配置分散分析と，Scheffe による多重比較検定により実施した。

OCH3
Fig. 1. The
structureof PaeonolFig.chemical
1. The chemical
structureof Paeonol( 2'-Hydroxy- 4'-methoxyacetophenone ) .
( 2'-Hydroxy-4'-methoxyacetophenone ) .

― 18 ―

0.95
0.85

Optical density ( OD 600 )

0.75
0.65
0.55
0.45

5 % DMF Control

0.35

0.2 % Oyster powder extract containing
25 mM paeonol

かき⾁エキス0.2%25mMペオノール

0.25

1 % Oyster powder extract containing

25 mM
かき⾁エキス1%25mMペオノール
5%DMFpaeonol
Control**

0.15

DMF５％0.05

Cont0H-0.05

1.5H

6H15H24H36H

Cultivation time (h)Fig. 2. Exponential growth curves for L. plantarum ATCC 8014 strain. The cells were grown in 5 % DMF media in the absence ( ● )Fig. 2. Exponential growth curves for L. plantarum ATCC 8014 strain. The cells were grown in 5 % DMF media in the absence
and presence of 0.2 %( △ ) or 1 % ( □ ) oyster powder extract containing 25 mM paeonol, respectively. Each point represents(●) and presence of 0.2 % (△) or 1 % (□) oyster powder extract containing 25 mM paeonol, respectively. Each point
the mean of at three determinations. Error bars are SD. Significance ( p < 0.01, Scheffe’s F test ) is expressed as two asterisks.

represents the mean of at three determinations. Error bars are SD. Significance (p < 0.01, Scheffeʼs F test ) is expressed as twoasterisks.
1.4

Optical density ( OD 600 )1.21Control

Cont

0.8

0.125 mM Adenosine
アデノシン0.125mM

0.6

0.25 mM Adenosine
アデノシン0.25mM
0.4
0.5 mM Adenosine
アデノシン0.5mM
0.20

アデノシン1mM
1 mM Adenosine

0H

1.5H

6H

15H

24H

36HCultivation time (h)Fig. 3. Exponential growth curves for L. plantarum ATCC 8014 strain. The cells were grown in media in the absence ( 〇 ) and presFig. 3.ofExponential
growthcurves for L. plantarum8014strain. The cells
weregrownin mediathein theabsenceencefour adenosine
concentrations( 0.125 mMATCC-1 mM), respectively.
Eachpoint
represents
meanof at three determi(○) and presenceof fouradenosine concentrations (0.125 mM -1 mM), respectively. Each point represents the mean ofnations.
Error barsare SD.

at three determinations. Error bars are SD.

参考文献

き肉エキスを併用することにより，今回認められた乳酸菌の増殖効果をもたらすかき肉エキスに含まれる成分を明らかしたいと考えている。さらに実験動物にペオノールとか

1）Ma Y， Jiang S, Zeng M (2021) In vitro simulated

き肉エキスを含む混合物を経口投与し，腸内細菌叢に与え

digestion and fermentation characteristics of poly-る影響についても検討を加えたい。

saccharide from oyster (Crassostrea gigas)，and its
effects on the gut microbiota. Food Res Int 149:

利益相反110646.
2）Jiang S, Ma Y, Li Y, Liu R, Zeng M. (2021) Media-

本論文の発表に関して，申告すべき COI 状態にはない

tion of the microbiome-gut axis by oyster (Cras-が，著者に含まれる石田，松井，松田は牡蠣肉エキス粉末sostrea gigas) polysaccharides: A possible protectiveを供試した日本クリニックに所属している。

role in alcoholic liver injury. Int J Biol Macromol― 19 ―

10.9

Optical density ( OD 600 )0.8

5 % DMF Control
DMF５％

0.70.125 mM Adenosine containing
25 mM paeonol

アデノシン0.125mM ペオノール 30mM

0.60.25 mM Adenosine containing
25 mM paeonol

アデノシン0.25mM ペオノール 30mM

0.50.5 mM Adenosinecontaining
アデノシン0.5mM
ペオノール30mM

0.425 mM paeonol

0.3

**

0.2**

アデノシン1mM
ペオノール30mM
1 mM Adenosinecontaining25 mM paeonol

0.100H

1.5H

6H

15H

24H

36H

Cultivation time (h)Fig. 4. Exponential growth curves for L. plantarum ATCC 8014 strain. The cells were grown in 5 % DMF media in the absence ( ● )Fig. 4. Exponential growth curves for L. plantarum ATCC 8014 strain. The cells were grown in 5 % DMF media in the absence (●) andand presence of four adenosine concentrations ( 0.125 mM-1mM ) containing 25 mM paeonol, respectively. Each point reppresence of four adenosine concentrations (0.125mM -1 mM) containing 25 mM paeonol, respectively. Each point represents the mean of atresents the mean of at three determinations. Error bars are SD. Significances ( p < 0.01, Scheffe’s F test ) are expressed as
three determinations. Error bars are SD. Significances (p < 0.01, Scheffeʼs F test) are expressed as two asterisks.
two asterisks.

apocynin provides greater anti-inflammatory and182: 968-976.

neuroprotective effects in a mouse model of stroke.

3）根來宗孝，香西彩加，澤村弘美，榎原周平，渡邊敏明，

Free Radic Biol Med 104: 333-345.

前川隆嗣（2020）かつおだし及びその原材料等の抗酸

8）Tang H, Li K, Zhang S, Lan H, Liang L, Huang C,化能発現に関する研究 . 微量栄養素研究 37: 33-37.
4）Zong SY, Pu YQ, Xu BL, Zhang T, Wang B. (2017)

Li T (2021) Inhibitory effect of paeonol on apopto-

Study on the physicochemical properties andsis, oxidative stress, and inflammatory response inanti-inflammatory effects of paeonol in rats withhuman umbilical vein endothelial cells induced byTNBS-induced ulcerative colitis. Int Immunophar-high glucose and palmitic acid induced throughmacol 42: 32-38.

regulating SIRT1/FOXO3a/NF-κB pathway. J Interferon Cytokine Res 3: 111-124.

5）Hu RF, Fang CW, Zou AF, Mei KK, Tang J, Han
LL. (2008) Studies on absorption kinetics of paeonol

9）Choy KW, Mustafa MR, Lau YS, Liu J, Murugan D,and paeonol-beta-CD in rat’s intestines. Zhongguo

Lau CW, Wang L, Zhao L, Huang Y (2016) Paeo-Zhong Yao Za Zhi 33: 35-37.

nol protects against endoplasmic reticulum6）Jiao J, Sun L, Guo Z, Hou S, Holyst R, Lu Y, Fengstress-induced endothelial dysfunction via AMPK/X. (2016) Antibacterial and anticancer PDMS sur-PPARδ signaling pathway. Biochem Pharmacol 116:

face for mammalian cell growth using the Chinese

51-62.

herb extract paeonol (4-methoxy-2-hydroxyace-10）Dong Z, Xie X, Sun Y, Wu H, Dai M (2020) Paeonol prevents lipid metabolism dysfunction in pal-tophenone). Sci Rep 6: 38973.
7）Qin YY, Li M, Feng X, Wang J, Cao L, Shen XK,

mitic acid-induced HepG2 injury through promot-Chen J, Sun M, Sheng R, Han F, Qin ZH (2017)

ing SIRT1-FoxO1-ATG14-dependent autophagy.

Combined NADPH and the NOX inhibitor

Eur J Pharmacol 880: 173145.

― 20 ―