A**2013年 4月改訂（第 3版）*2009年 8月改訂（第 2版）
2007年 4月作成

HISTOFINE

ラi.
ffl6式卦ヒヒストファイン
製造販売元

第一抗体

杭カルレチこンウサギモ Jクローナ）け社本 (SP13)（動物種：ウサギ ）
包装 ： 50テスト (6ml)‑rJ(=‑(オサイエンス株式会社ニチレ〒104‑8402
東 京 都 中 央 区 築 地 6 ‑19‑20T
E
L.03(3248)2208FAX.03(3248)2243

Code:413561■特異性および抗原分布： ヒ ト組織中の 31.5kDaのカルレチニンと特異的に反応する。カルレチニンは、カルシウム結合能を持つ EFハンド領域を有する トロポニン Cスーパーファミ リーに属するタンパクである。 正常では、中枢神経組織、末梢神経組織等神経細胞、発育した小脳皮質に存在するプルキンエ細胞、籠細胞、すべての漿膜にある正常および反応性の中皮細胞の細胞質と核に反応がみられる。腫瘍では、多くの中皮腫やいくつかの肺腺癌で反応が見られる。中皮腫と腺癌の区別に有用であるが、他のマーカー と組合わせて使用することが望ましい。
クローン名： SP13抗体のサブクラス： ウサギ lgG
免疫原： マウスカルレチニンの全長リコンビナントタンパク
製法： ハイブリドーマの培養上清より得ている。

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1.内容
第一抗 体 ・・・抗カルレチニンウサギモノクローナル抗体 (SP13)（動物種：ウサギ）。
液状。
ウシ血清アルブミン (BSA)と 0.1％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水(PBS)にて、即時使用可能な抗体濃度に希釈済み。
1バイアル中に 6mLを含む。
2．
使用目的
組織・細胞中のヒトカルレチニンの染色。
**3．
使用方法
パラフィン包埋切片の免疫組織化学染色および免疫細胞化学染色に使用できる第一抗体である。
パラフィン包埋切片の場合、弱めの前処理（抗原賦活化） として lOm
M クエン酸緩衝液(pH6.
0)を用いたマイク
ロウェーブ処理（照射 1回のみ）が必要である（裏面の操作手順参照）。
スライド上の組織切片が完全に覆われるように第一抗体を 2滴 (lOOμL)滴下し、常温(15‑25℃)
で 30分〜 1時
間インキュベー トする。＊＊
この反応時間は、ヒストファイン シンプルステイ ン M心 C‑PO(R)を使用する場合の目安であり、他のキッ トを使用する場合は、研究者自身が至適反応時間を調べる必要がある。

■注意 ：組織の固定状況等により lOmM クエン酸緩衝液(pH6.0)を用いたマイクロウェ ーブ処理の照射を 2回以上行うと良好な染色結果が得られない場合がある 。
＊■参考：組織の固定状況等により弱めの前処理（抗原賦活化） ：lOmM クエン酸緩衝液(pH6.0)を用いたマイク ロウェ ーブ処理（照射 1回のみ）の替わりに、ヒストファインプロテアーゼ溶液 (Code:415231)
にて 5‑15分間 (25℃)処理またはヒストフ
ァイン 抗原賦活化液 pH9(Code:415201または Co
de:415211)を用いたオートクレーブ処理をすることで、より良好な染色結果が得られる場合があ る⑭罪即） ■参考参照） 。

4.
貯法
2‑8℃保存。
5．
使用上又は取扱上の注意
ヒト由来の検体は、取扱者に感染をひき起こす危険性がある。従って、適切な取扱および廃棄法を用いるとともに、この免疫組織（細胞）化学染色法を施行するに際し、関連技術および操作法に充分習熟しておかなければならない。

■研究用としてのみ使用す ること 。

免
疫
染色における操作
手順
および前処理（杭原賦活化）
＊
＊
■

操作手順
［切片 の 準 備 ］
l. 50℃ で 十 分 に 湯 伸 ば し し た 切 片 (3‑4μm厚）をシランなどのコーティングスライド上に貼り付け、 37℃の恒温器内で16時 間 以 上 乾 燥 さ せ る 。
2. 脱 パ ラ フ ィ ン → 親 水 化 → PBS
3. 前処理（抗原賦活化）：マイクロウェーブ(MW)処 理(1回のみ）① 緩 衝 液（下記記載）
を耐 熱 性バットに入れ、 M W
照 射 し沸騰させる。
②沸騰した緩衝液に切片を浸し、 M Wを5分 間照射する 。
③ バ ッ ト ご と 切 片 を 常 温(15‑25℃)に 20分 間以上放置し、ゆっくり熱を冷ます。
※M W
処理後は、バットおよび緩衝液等が高温になっている。これら を取り扱う際は、手袋等を使用し火傷に注意する 。
④ ス ラ イ ド を 緩 衝液から取り 出 し、 PBS
でよく す す ぐ (3分 間 ず つ 容 器 を 2度 か え る か 、 ま た は 洗 浄 ビ ン を 使用する）。
［染 色 手 順］ ＜ ヒ ス ト フ ァ イ ン シ ン プ ル ス テ イ ン M心 <‑PO(R)使 用 の 場 合 ＞
4. 内因 性ペ ル オ キ シ ダー ゼ の 除 去 10 15分 間／ 常 温 → PBS洗 浄
5. 第 一抗 体 の 添 加 ・ 反 応 30分〜1時 間／ 常 温 → PBS
洗 浄＊＊
6. シ ン プ ル ス テ イ ンM心 <‑PO(R)の 添 加 ・反応
30分 間／ 常 温 → PBS洗浄7. 基 質 溶 液 の 添 加 ・反応

DAB発 色 → 水 洗

8. 対 比 染 色 核染（ヘマトキシリン） → 封 入→乾燥→検鏡■注 意「PBS洗 浄 」 はPBSに浸し、 5分 間 ず つ3回放置する。
4．の プ ロ セ ス は 3．の 前 に 行 っ て も よ い。
ヒ ス ト フ ァ イ ン SABキ ッ ト を 使 用 す る 場 合 は 上 記 l. 4
ま で 行 い SABキ ッ ト の 操 作 方 法 に 従 っ て 染 色 を 行 う 。

lOmM ク エ ン 酸 緩 衝 液 (pH6.
0)の作 り方A液 9mL+B液 41mL＋精 製 水 450mL （用 時 調製）
A液： O.lM クエ ン 酸 水 溶 液 ： 常 温 で 保 存 可 能ク エ ン 酸ー 水 和 物 (C6比 07• Hゆ ） 2.
lg/精 製水 lOOmL
B液 ：O.lMクエ ン 酸 ナ トリ ウ ム 水 溶 液 ： 常 温 で 保 存 可 能
ク エ ン 酸 三 ナ ト リ ウ ム ニ水 和 物 (C6H
ぬ ぶa3• 2Hゆ） 1
4.
7g／精製水 500mL
ここから必要な時に調製する。

■参考： ヒストファイン 抗原賦活化液pH9(Code:415201またはCode:415211)、オートクレープ処理を用いる場合（おもて面の ■参考参照）①緩衝液（下記記載）を耐熱性バットに入れ、切片を浸す。
②バットに蓋をする。蓋が取れないように輪ゴムでとめる 。
③120℃、 20分間オートクレープ処理する。
④圧力が十分下がった後、バットごと切片を取り出す。
⑤バッ トの蓋をはずし、バットごと切片を常温に 20分間以上放習し、ゆっくり熱を冷ます。
※オートクレープ処理後は、バットおよび緩衝液等が高温になっている。これらを取り扱う際は、手袋等を使用し火傷に注意する。
⑥スライドを緩衝液から 取り出し、 PBSでよくすすぐ (3分間ずつ容器を 2度かえるか、または洗浄ビンを使用する）。
．抗原賦活化液pH9の作り方
・Cod
e:415201 抗原賦活化液pH9（調製済）は、そのまま用いる。
・Cod
e:415211 抗原賦活化液 pH9(10倍澄縮）は、精製水で10倍希釈する。