Trace Nutrients Research 35 : 41−46（2018）

原著

カキ肉エキスの給餌によるラットの盲腸内細菌叢の変化
池田祐生1），細 見 亮 太1）†，松 田 芳 和2），新 井 博 文3），下 埜 敬神 田 靖 士4），西 山 利 正4），吉 田 宗 弘1），福 永 健 治1）（1）関西大学3）

北見工業大学

化学生命工学部

工学部生命・生物工学科＊，2）日本クリニック株式会社

地域未来デザイン工学科＊＊＊，4）関西医科大学

医学部紀 4），

中央研究所＊＊，

衛生・公衆衛生学講座＊＊＊＊）

（受付 2018 年 8 月 31 日，受理 2018 年 9 月 25 日）

Effects of Dietary Oyster Extract on the Gut Microbiome in Rats
Yuki Ikeda1）, Ryota Hosomi1）, Yoshikazu Matsuda2）, Hirofumi Arai3）, Takaki Shimono4）, Seiji Kanda4）, Toshimasa Nishiyama4）, Munehiro Yoshida1）, and Kenji Fukunaga1）
1）
Department of Life Science and Biotechnology, Kansai University
2）
Central Research Institute, Japan Clinic Co., Ltd.
3）
Department of Biotechnology and Environmental Chemistry, Kitami Institute of Technology
4）Department of Public Health, Kansai Medical University

Summary
The main components of oyster extract (Crassostrea gigas) include zinc, glycogen, and taurine, and oyster extract
powder is currently being marketed as a supplement. However, few studies have investigated the effects of dietary
oyster extract on the gut microbiome. The present study demonstrated the effects of oyster extract on the composition of bacteria in the cecal contents of rats fed a high-fat diet. Male Wistar rats were divided into three groups
and fed an AIN-93G diet (LF diet), AIN-93G modified high-fat diet (HF diet), and 5 % (w/w) oyster extract-containing
HF diet (HFOE diet) for four weeks. The composition of gut microbiome species were compared in samples using
high-throughput 16S rRNA gene amplicon sequencing with the Ion PGM system (Thermo Fisher Scientific). The
relative abundance of Lactobacillus in cecal contents was significantly lower with the HF diet than with the LF
diet, whereas no significant differences were observed between the HFOE and LF diets. Therefore, oyster extract
may increase the abundance of Lactobacillus, which was reduced by the HF diet. These results suggest the potential of oyster extract supplementation to improve the composition of gut bacteria.

カキ（Crassostrea gigas）は「海のミルク」と称され，近年，健康と腸内細菌叢の関連について注目が集まって亜鉛，グリコーゲン，タウリンなどの様々な機能性成分がいる。ヒトの消化管には 1013 個以上もの多種多様な細菌含まれている。そのため，カキの栄養・機能性成分を抽が在住しており，複雑な微生物生態系を形成している。腸出・濃縮したカキ肉エキスが健康食品の原料として用いら

内細菌は，難消化性多糖の分解，生体内・生体外成分の代れている。これまでにカキ肉エキス中に含まれる亜鉛の生謝，ビタミン類の生産，病原菌の増殖抑制といった様々な体利用性に関する研究報告が数多くなされている1-3）。ま生理機能を有している。これまで，腸内に存在する多くのた，カキ肉エキス摂取による生体への健康機能については， 嫌気性細菌は培養不可能であったために，大半が機能未知実験動物とヒトにおいて血小板凝集抑制効果4）や肝臓保護
5）効果 が報告されている。さらに我々も，薬物により惹起6）7）であった。しかし，ゲノム分析技術の発展によって，16Sリボソーム RNA（rRNA）系統解析やメタゲノム解析がした大腸前癌病変 と腎障害 モデル動物に対する有益な可能になったことで，著しい腸内細菌研究の進展が見られ効果を報告している。
るようになった。そのため，宿主の健康と腸内細菌叢の密所在地：大阪府吹田市山手町3-3-35（〒564-8680）
所在地：京都市北区大将軍西町1番地（〒603-8331）＊＊＊所在地：北海道北見市公園町165番地（〒090-8507）＊＊＊＊所在地：大阪府枚方市新町2丁目5番1号（〒573-1010）†連絡先（Corresponding Author），Tel: 06-6368-1765, E-mail: hryotan@kansai-u.ac.jp＊＊＊― 41 ―2．動物実験

接な関係が次々に明らかにされてきている。
腸内細菌叢に影響を及ぼす食事成分のうち，食物繊維や本実験は関西大学化学生命工学部実験動物実験委員会の脂肪といったファクターが注目されている。一例として，承認を受けて実施した。実験動物には 4 週齢 Wistar 系雄

高脂肪・低繊維食の摂取によって，腸内の Bacteroidetesラット（日本エスエルシー株式会社，静岡）を用い，18

門や Prevotella 属が増加することが報告されている8）。ま匹を 6 匹ずつ平均体重が同等になるように 3 群に分けた。

た，慢性的な高脂肪食の摂取は，腸内細菌の代謝物である

ラットは室温 22℃±1 ℃，明暗 12 時間サイクル（8：009）二次胆汁酸量の増加を引き起こすことが報告されている 。

〜 20：00）の条件下で飼育した。実験餌料および水は自このように腸内細菌叢と食事中の食物繊維や脂肪に着目し由摂取とし，28 日間飼育した。飼育期間終了後，ソムノた研究は多いが，様々な健康機能が報告されているカキ肉ペンチル（共立製薬株式会社，東京）による深麻酔下で下エキスと腸内細菌叢との関係に着目した研究は見あたらな

大静脈より採血し，肝臓，腎臓，脾臓，盲腸および白色脂い。そこで本研究では，カキ肉エキス粉末を添加した高脂肪組織（WAT）を採取した。血清は，血液を 2,000 × g，肪餌料をラットに給餌し，盲腸内細菌叢に及ぼす影響を評15 分間遠心分離して得た。肝臓および盲腸は液体窒素に価した。て急速凍結し，−80℃で保管した。

実験方法

3．血清分析
血清のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ

1．餌料調製（AST），アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT），中

カキ肉エキス粉末は，日本クリニック株式会社（京都）よ性脂肪（TG），リン脂質（PL），総コレステロール，高密り供与された。カキ肉エキスの一般成分組成は，炭水化物

度リポ蛋白（HDL）コレステロールの分析は日本医学株

61.0 g/100 g，タンパク質 22.4 g/100 g，脂肪 1.2 g/100 g，式会社（大阪）に依頼した。血清の非エステル型脂肪酸

水分 3.5 g/100 g，灰分 11.9 g/100 g であった。餌料は，米（NEFA）は，NEFA C テストワコー（富士フイルム和光

国国立栄養研究所により発表されたげっ歯類の実験動物用純薬株式会社，大阪）で分析した。血清コレステロールエ

10）

餌料のスタンダードである AIN-93G 組成に従った LF

餌料と，この組成を 20％高脂肪および 0.5％コレステロー

ステルヒドロペルオキシド（CE-OOH）は，逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフにて測定した11）。

ルに改変した餌料（HF）を調製した。さらに，HF 餌料に 5 ％カキ肉エキスを添加し，糖質，タンパク質および脂4．肝臓脂質分析
肝臓の総脂質は Bligh and Dyer法12）により抽出した。

肪量が HF 群と同等になるように HFOE 餌料を調製した。
各餌料の組成を，Table 1 に示した。

PL は，総脂質を湿式灰化後，遊離したリンをモリブデン酸アンモニウムにより発色し，分光光度計（UV-1800：株式会社島津製作所，京都）を用いて測定した。コレステ
ロールは 5 α- コレスタンを内部標準とし，ガスクロマト

Table 1  Composition of experimental diets

132397.5

Groups
HF
g/kg
92.1
271.4

1005020010050230

92.1
235.350100
50
216.8

32.535107032.53510701305132.5351070129.3
51LF
Dextrinized corn starchCorn starch
Oyster-extract
SucroseCellulose
Caseinl-Cystine

Choline bitartrate
AIN-93G mineral mixture
AIN-93 vitamin mixture
Soybean oil
Lard
Cholesterol
Cholic acid†

グラフ（GC-14B: 株式会社島津製作所）を用いて定量した。

HFOE

TG はトリグリセライド E- テストワコー（富士フイルム

Oyster-extract was provided by Japan Clinic Co., Ltd. (Kyoto,Japan).  The composition of oyster-extract was as follows (% w/w): carbohydrate, 61.0; protein, 22.4; fat, 1.2; moisture, 3.5; andash, 11.9.
AIN, American Institute of Nutrition.

和光純薬株式会社）を用いて測定した。
5．16S リボソーム RNA アンプリコンシークエンス
各個体の盲腸内容物を 20 mL の冷生理食塩水に完全に懸濁した。この各盲腸内容物懸濁液より，LF 群は 3 検体，
HF および HFOE 群は 5 検体を無作為に抽出し，QIAamp
DNA Stool Mini Kit（Qiagen, Venlo, Netherlands）を用いて総 DNA を抽出した。抽出した総 DNA から細菌の同定を行うために，16S リボソーム RNA（rRNA）遺伝子の V2-4-8 と V3-6, 7-9 領 域 を，Ion 16S Metagenomics
Kit（Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, USA） を用いて PCR により増幅させた。PCR 産物は AMPure XPビーズ（Beckman Coulter, California, USA）を用いて精製 し た。 精 製 し た PCR 産 物 は，Ion Plus Fragment
Library kit（Thermo Fisher Scientific） お よ び Ion
Xpress Barcode Adaptors 1-16 kit（Thermo FisherScientific）を用いて，Ion PGM system での解析に必要な― 42 ―

アダプター配列および個体識別のためのバーコード配列を

Prism ver. 7.0d（GraphPad Software, California, USA）付加させ，DNA ライブラリを作製した。再び AMPure XPを用いて行った。

ビーズを用いて DNA ライブラリを精製し，次いで各 DNA結果と考察

ラ イ ブ ラ リ 濃 度 を バ イ オ ア ナ ラ イ ザ ー（Agilent 2100:
Agilent Technologies, California, USA）により定量した。
各 DNA ライブラリを 10 pM に希釈し，エマルジョン PCR

Table 2 に成長パラメーターおよび解剖時臓器重量を示およびエンリッチメント処理をそれぞれ Ion OneTouch 2

した。初体重，摂餌量および水分摂取量については，各群（Thermo Fisher Scientific）と Ion OneTouch ES systems間で有意差は見られなかった。HF および HFOE 群にお（Thermo Fisher Scientific）で行った。調製した 16S rRNA

いて，LF 群と比較して終体重の増加傾向が見られた（そ遺伝子フラグメントライブラリのシークエンス解析には，

れぞれ p = 0.15 および 0.19）。HF および HFOE 餌料は，

Ion PGM System，Ion PGM 400 sequencing reagents，

LF 餌料よりも脂肪量が多いため単位重量あたりのエネル

Ion 318 v2 chips および Torrent Suit Software ver.5.6（すギー量が高いが，各群の餌料摂取量には違いが見られな

べて Thermo Fisher Scientific）を用いた。

かった。そのため HF 群および HFOE 群は飼育期間中の得られた配列データは，MicroSEQ 16S Reference Library

摂取エネルギー量が多かったため，終体重，体重増加量おv2013.1（Thermo Fisher Scientific）と Greengenes v13.5

よび餌料効率に増加傾向が見られたと考えられる。これま（The Greengenes Database Consortium, http://greengenes.

で に，Wistar ラ ッ ト に 高 脂 肪 餌 料（ 脂 質 エ ネ ル ギ ー 比secondgenome.com/） を 参 照 配 列 と す る Ion Reporter45％）を 17 週間給餌することで食餌誘導性肥満モデルのSoftware 16S Metagenomics Workflow ver.5.6（Thermo作製が報告されている13）。本研究では，高脂肪食として脂Fisher Scientific） を 用 い て 解 析 し た。Ion Reporter

質エネルギー比 30％の餌料を用いていることと，飼育期Software によって，各サンプルの門，科および属の分類間が 4 週間と短期間であったことから，終体重に差が現れ階級で同定された細菌とそのリード数のデータを得た。得るまでには至らなかったと考えられる。解剖時臓器重量にられたリード数を用いて，各分類階級での細菌の構成比率

おいて，HFOE 群の精巣上体周囲 WAT 重量は，LF 群とを求めた。

比較した場合，有意な増加が見られたが，HF 群と比較すると有意差は認められなかった。そのため，高脂肪餌料

6．統計処理（HF および HFOE 餌料）の摂取によって精巣上体周囲得られた測定値は平均値±標準誤差で示した。群間の差

WAT 重量が上昇したと考えられる。一方，肝臓，腎臓，については，Tukey’s multiple comparison test で検定を脾臓，盲腸，腎臓周囲 WAT および腸管膜 WAT 重量に行い，有意水準は p < 0.05 とした。統計解析は GraphPad

ついて，各群間で有意差は見られなかった。

Table 2  Growth parameters and organ weights in rats fed experimental diets for 4 weeks
Groups
HFLF
Growth parameters
Initial BW (g)Final BW (g)BW gain (g/day)Food intake (g/day)Food efficiency (g/g)†Water intake (mL/day)
Organ weights (g/100g BW)
LiverKidney
SpleenCecum‡Epididymal WAT
Mesentery WAT
Perirenal and retroperitoneal WAT

HFOE

82.1
295.2
7.10
15.1

±±±±1.6
8.4
0.27
0.9

82.4
320.0
7.92
15.3

±±±±2.9
9.5
0.28
0.8

82.0317.57.85
14.9±±±±2.0
8.4
0.25
0.9

0.447
33.9

±±0.017
1.70.495
34.9±±0.0182.20.500 ±34.3 ±0.016
2.1

5.39
0.72
0.18
1.14
1.32
1.45
1.21

± 0.43± 0.01± 0.01± 0.10± 0.07 a± 0.07± 0.13

6.06
0.67
0.21
0.91
1.58
1.49
1.47

±±±±±±±0.42
0.01
0.01
0.05
0.08 ab
0.05
0.14

6.75
0.70
0.21
1.01
1.79
1.68
1.35

0.40
0.01
0.01
0.04
0.12 b0.12
0.22±±±±±±±Data represent means±SEM (n = 6). Values in the same row not sharing a common superscript are significantly
different at p < 0.05 using Tukey’s multiple comparison test.
†Food efficiency (g/g) = BW gain (g/day) / food intake (g/day).
‡Cecum contains the cecal content.
BW, body weight; WAT, white adipose tissue.

― 43 ―

Table 3 に血清生化学検査値と肝臓脂質組成を示した。

PL を多く含むリポタンパク質である。HFOE 群で HDL-HFOE 群の血清 TG 濃度は，LF 群と比較した場合，有意コレステロール濃度の上昇が認められているため，HDLな増加が見られたが，一方 HF 群と比較した場合，有意差粒子の増加が HFOE 群の血清 PL 濃度の上昇に関与しては認められなかった。また，HFOE 群の血清総コレステいると考えられる。血清 NEFA 濃度は，高脂肪餌料を給ロールおよび HDL コレステロール濃度は，HF 群と比較餌している HF および HFOE 群で LF 群と比較して有意して，有意に増加した。これまでに私たちは，カキ肉エキに増加した。高脂肪食は血中 NEFA 濃度の上昇を招くこスを 5 % 含む高脂肪餌料（脂肪含量 20％ , コレステローとが知られているため15），HF および HFOE 群で見られたル非添加）をラットに給餌すると，高脂肪餌料と比較して， 血清 NEFA 濃度の上昇は，高脂肪餌料の影響と考えられ肝臓コレステロール濃度は低下するが，血清総コレステる。血清 AST，ALT および CE-OOH 値については，実ロールおよび HDL- コレステロール濃度は増加傾向にある

験群間で有意差は確認されなかった。肝臓の TG およびコ14）

ことを報告している 。本研究と既報14）

レステロール濃度において，高脂肪餌料である HF 群およから，カキ肉エキスの給餌は，ラットの血清総コレステロール濃度を増加さ

び HFOE 群で LF 群と比較して，有意な増加が見られた。

せる作用を有している可能性がある。今後，カキ肉エキス

一方，肝臓 PL 濃度は，各群間で有意な差は認められなの給餌による血清総コレステロール濃度上昇の作用機序をかった。

明らかにする必要がある。血清 PL 濃度について，HF 群

Fig. 1 に門および科の分類階級別の盲腸内細菌叢の構成と比較して，HFOE 群で有意に増加した。HDL 粒子は，比率を示した。門および科ともに，LF 群において構成比

Table 3  Serum and liver lipid parameters in rats fed experimental diets for 4 weeks
Groups
HF

LF
Serum components
AST (IU/L)
ALT (IU/L)
TG (mg/dL)

71.340.363.0±±±3.51.811.1 a
ab

70.3
39.0±±3.0
3.7

PL (mg/dL)
Total-cholesterol (mg/dL)
HDL-cholesterol (mg/dL)
NEFA (mEq/L)
CE-OOH (µmol/L)

145
74.5
53.0
217
1.04±±±±±42.1 a1.9 ab12 a
0.33

74.2 ± 5.7 ab
133 ± 5 a75.8 ± 3.1 a44.2 ± 2.9 a
370 ± 18 b0.77 ± 0.25

Liver lipid content (mg/g Liver)TG
PL
Cholesterol

45.8
11.7
5.19±±±4.7 a0.60.57 a191.3 ± 8.3 b11.6 ± 0.6
10.9 ± 0.59 b

HFOE
72.036.2±±5.1
1.9102.0 ± 10.5 b
163 ± 6 b97.0 ± 5.8 b55.3 ± 3.4 b368 ± 26 b0.88 ± 0.24

195.7 ± 10.6 b9.7 ± 0.6
12.47 ± 0.87 b

Data represent means±SEM (n = 6). Values in the same row not sharing a common superscript are significantly
different at p < 0.05 using Tukey’s multiple comparison test.
ALT, alanine aminotransferase; AST, aspartate aminotransferase; CE-OOH, cholesteryl ester hydroperoxides; HDL,
high-density lipoprotein; NEFA, non-esterified fatty acid; PL, phospholipid; TG, triacylglycerol.

Fig. 1  Relative abundance of gut bacteria in rat cecal contents at phylum and family levels
A) At the phylum level.  B) At the family level.
The numbers of rats in the LF, HF, and HFOE groups were 3, 5, and 5, respectively.  At the family level,families less than 0.1% were included in “Others”.
― 44 ―

率の高いものから積み上げて示した。また，科における構高脂肪餌料の給餌によって生じる Lactobacillaceae 科，特成比率では 0.1％未満の科は Others に含めた。門におけに Lactobacillus 属の構成比率の低下を抑制する働きがある構成比率を見ると，Firmicutes，Bacteroidetes およびると考えられる。これまでに，乳酸菌は抱合型胆汁酸の脱Proteobacteria 門で 95％が構成されていた。これまでに抱合を促進することによって胆汁酸の再吸収を抑制する働

高 脂 肪 餌 料 を マ ウ ス に 給 餌 す る と，Firmicutes ときをもつため，腸内の乳酸菌構成比率と血清総コレステ

Proteobacteria 門 に 分 類 さ れ る 腸 内 細 菌 が 増 加 し，ロール濃度は逆相関することが報告されている18, 19）。しかBacteroidetes 門に分類される菌が減少することが報告さし，HFOE 群は HF 群と比較して，血清総コレステローれている16）。高脂肪餌料を与えた HF 群では，LF 群と比ル濃度と Lactobacillus 属の構成比率ともに増加する結果較して，Proteobacteria 門の構成比率において有意な変化であり，既報19）の結果と異なっていた。そのため HFOEが見られたが，Firmicutes と Bacteroidetes 門の構成比率群で見られた Lactobacillus 属の構成比率の増加に寄与しには有意な変化は見られなかった。門における構成比率でた細菌が胆汁酸の脱抱合作用を有しているか調べるためには，HF および HFOE 群間の各細菌の構成比率に統計的種の同定を試みた。しかし，本研究で用いた 16S rRNA有意差は確認できなかった。

アンプリコンシークエンスでは，理論上の部分配列から種科における構成比率において，LF 群で最も高い科はを特定することは不可能であった。そのため，HEOE 群

Clostridiaceae 科（LF，HF，HFOE 群において，それぞれで見られた Lactobacillus 属の構成比率の増加に寄与した

24.0，19.0，14.3％）であった。しかし，各群間で有意な差は種の同定は叶わなかった。今後，16S rRNA 遺伝子の全長見られなかった。LF 群で次に多い科は Lactobacillaceaeの塩基配列を解析し，種の同定を行う必要がある。

科（LF，HF，HFOE 群において，それぞれ 14.0，1.1，21.6％）

以上のとおり，カキ肉エキスの給餌は，高脂肪餌料の給であった。Lactobacillaceae 科の構成比率は，LF 群と比餌によって低下する盲腸内 Lactobacillus 属の構成比率を較して，HF 群で有意な低下が見られたが，HFOE 群では上昇させる働きを有することが示唆された。

有意な差は見られなかった。Lecomte らは，ラットに高脂参考文献

肪餌料を与えた場合，通常餌料と比較して，Lactobacillaceae
1 7）科の構成比率が著しく低下することを報告している 。本研究においても，HF 群で LF 群と比較して，Lactobacillaceae

1）松田芳和（2008）牡蠣亜鉛の性質とその栄養有効性．

科の構成比率が有意に低下していた。一方，HF 餌料にカミネラルの科学と最新応用技術（糸川嘉則）．シーエ

キ肉エキスを混合した HFOE 餌料を給餌した場合，HF

ムシー出版，東京：pp. 124-135．

群で見られた Lactobacillaceae 科の構成比率の低下が見ら

2）吉田宗弘，平田登，木谷祥子，松田芳和（2002）牡蠣

れなかった。この Lactobacillaceae 科には，プロバイオから調製した亜鉛濃縮物の性質．微量栄養素 研究

ティクスとして用いられている Lactobacillus 属が含まれ19：43-46.ている。そこで Fig. 2 に，Lactobacillaceae 科に分類され

3）辻貴之，菊池祐子，中塚千晶，木谷祥子，福永健治，る Lactobacillus と Lactococcus 属の属における構成比率

西山利正，松田芳和，吉田宗弘（2001）牡蠣の酸可溶を示した。Lactobacillus 属の構成比率において，LF 群と性画分に含有される亜鉛の栄養有効性．微量栄養素研比較して，HF 群では有意に低下したが，HFOE 群では有究 18：63-66.

意な変化は見られなかった。一方，Lactococcus 属の構成4）久保道徳，松田秀秋，田村崇子，高津政雄（1980）バ

比率は，Lactobacillus 属よりも 2 桁小さく，さらに各群ランスター［カキ Crassostrea gigas（THUNBERG）間の変化も見られなかった。そのためカキ肉エキスには，の肉エキス］の実験的肝障害に対する予防および肝機

504030Lactobacillus
aa20
100b

LF

HF HFOE

Relative abundance (%)

Relative abundance (%)

能改善作用．基礎と臨床 14：1437-1442.
0.65）松田芳和，出田祐久，藤田忠義，太田隆男，中塚正博，Lactococcus

吉野昌孝，柴田幸雄（1994）糖尿病・肝臓病患者に対するかき肉エキスの影響．微量栄養素研究 12：91-0.497.
6）Hosomi R, Matsuda Y, Ishimaru A, Takemura S,0.2
0.0

Fukunaga K, Yoshida M (2007) Effect of dietary
oyster extract on the colonic aberrant crypt fociLF

HF HFOEin mice. Trace Nutrients Research 24: 71-75.

Fig. 2  Relative abundance of Lactobacillus and Lactococcus in
rat cecal contents
Data represent means±SEM. Values not sharing a common letter are significantly different at p < 0.05 using
Tukey’s multiple comparison test.
The numbers of rats for LF, HF, and HFOE groups are3, 5, and 5, respectively.

7）Hosomi R, Matsuda Y, Watanabe Y, Fukunaga K,Yoshida M (2008) Effect of dietary oyster extract
on the p-aminophenol-induced nephrotoxicity inrats. Trace Nutrients Research 25: 91-95.
8）Wu GD, Chen J, Hoffmann C, Bittinger K, Chen

― 45 ―YY, Keilbaugh SA, Bewtra M, Knights D, Walters

ductase mRNA Expression Level and Enhancing

WA, Knight R, Sinha R, Gilroy E, Gupta K, Baldas-Fecal Steroids Excretions in Rats Fed High-Fatsano R, Nessel L, Li H, Bushman FD, Lewis JD

Diet. Trace Nutrients Research 33: 43-48.

(2011) Linking long-term dietary patterns with gut15）Rebuffé-Scrive M, Anderson B, Olbe L, Björntorp
P (1990) Metabolism of adipose tissue in intraab-microbial enterotypes. Science 334: 105-108.

dominal depots in severely obese men and women.

9）Ridlon JM, Kang DJ, Hylemon PB, Bajaj JS (2014)

Metabolism 39: 1021-1025.

Bile acids and the gut microbiome. Curr Opin Gas-16）Hildebrandt MA, Hoffmann C, Sherrill-Mix SA, Kei-troenterol 30: 332-338.
10）Reeves PG, Nielsen FH, Fahey GC Jr (1993) AIN-lbaugh SA, Hamady M, Chen YY, Knight R, Ahi-93 purified diets for laboratory rodents: Final re-ma RS, Bushman F, Wu GD (2009) High-fat dietport of the American Institute of Nutrition ad hoc

determines the composition of the murine gut mi-writing committee on the reformulation of thecrobiome independently of obesity. Gastroenterolo-AIN-76A rodent diet. J Nutr 123: 1939-1951.

gy137: 1716-1724.

11）Arai H, Terao J, Abdalla DS, Suzuki T, Takama K17）Lecomte V, Kaakoush NO, Maloney CA, Raipuria M,(1996) Coulometric detection in high-performance

Huinao KD, Mitchell HM, Morris MJ. (2015) Chang-liquid chromatographic analysis of cholesteryl ester

es in gut microbiota in rats fed a high fat dietcorrelate with obesity-associated metabolic parame-hydroperoxides. Free Radic Biol Med 20: 365–371.

ters. PLoS One 10: e0126931.

12）Bligh EG, Dyer WJ (1959) A rapid method of total
lipid extraction and purification. Can J Biochem18）De Smet I, Van Hoorde L, Vande Woestyne M,
Christiaens H, Verstraete W (1995) Significance ofPhysiol 37: 911-917.

bile salt hydrolytic activities of lactobacilli. J Appl

13）Marques C, Meireles M, Norberto S, Leite J, Freit-Bacteriol 79: 292-301.

as J, Pestana D, Faria A, Calhau C (2015) High-fat
diet-induced obesity Rat model: a comparison be-19）Panasevich MR, Schuster CM, Phillips KE, Meers

tween Wistar and Sprague-Dawley Rat. Adipocyte

GM, Chintapalli SV, Wankhade UD, Shankar K,
Butteiger DN, Krul ES, Thyfault JP, Rector RS

5: 11-21.
14）Matsudo A, Nishimura N, Hosomi R, Harumatsu S,(2017) Soy compared with milk protein in a West-Fukuda S, Matsuda Y, Yoshida M, Fukunaga Kern diet changes fecal microbiota and decreases(2016) Dietary Oyster-Extract Decreases Cholester-

hepatic steatosis in obese OLETF rats. J Nutr Bio-

ol Content by Suppressing hepatic HMG-CoA Re-

chem 46: 125-136.

― 46 ―