2017 OCTOBER
No. 6052017 年（平成 29 年）10 月号

第 63 巻 第 4 号（通巻 605 号）

挨拶・巻頭言源流. .............................. 朱通市次郎（ 2 ）レビュー
動物由来耐性菌をめぐる国際情勢とわが国の現状.................. 田 村
豊（ 3 ）

文献紹介
ジカウイルス感染症に対する修飾 mRNA
ワクチンプロジェクト.... 小 野 浩 輝（ 7 ）学会参加記
66th Western Poultry Disease....永 野 哲 司（14）Conference（WPDC）
The 8th Asian Pig Veterinary Society
Congress......................大 嶋篤（16）日生研たより

2（48）

源流
朱通市次郎
今夏の北九州はじめ各地の記録的な豪雨による土砂崩れ、浸水等の災害に遭われた皆様および関係者の皆様には、心からのお見舞いを申し上げますとともに、一刻も早い復旧、生活の立て直しをお祈り申し上げます。
さて、7 年ほど前、メタボ状態の私を見かねた先輩から日帰りトレッキングに誘われ、連れて行って頂いたのが初秋の笠取山でした。慣れない山行に膝は悲鳴を上げ、靴ずれに苦しみましたが、森林と清流に触れながら十二分にトレッキングを楽しむことが出来、帰りの気分は爽快であったことが思い出されます。
笠取山（標高 1,953 ｍ）は、奥秩父山塊の主脈の一つで埼玉県秩父市と山梨県甲州市の境にあり、最終盤に挑む山頂までの一直線の急坂とその手前の草原、更に荒川、富士川及び多摩川の分水嶺を示す小さな石柱がある大変印象深い山であります。弊所のある青梅市のほぼ中央を多摩川が西から東へ貫流しておりますが、多摩川の源流こそ笠取山の山頂南側直下にある水干で、ここから一ノ瀬川、丹波川、奥多摩湖を経て、多摩川となり東京湾に注ぎ込んでおります。また、笠取山南斜面の山林一帯は東京都の水源涵養林としてよく管理されており、登山道等の整備状況から窺うことが出来ます。弊所創業時の立川市曙町の研究・製造施設が老朽化し、手狭となった折、移転先候補地の第一条件はワクチン製造に適する良い水が出ることであり、何ヶ所かのボーリング調査の結果、青梅の現在地に決定したものと聞いております。移転後、半世紀を経ますが今も大切に利用しております。
お陰様で、本年、弊所は創業 70 周年を迎えることが出来ました。弊所の発展に尽力されている役職員はもとより草創以来の先輩の方々、また、日頃よりご指導とご鞭撻を賜っております関係諸機関・取引先の皆様に心から御礼申し上げます。
弊所は昭和 22 年 3 月に東京都の認可を得て社団法人日本生物科学研究所として発足、その後、昭和 34 年に文部科学省および農林水産省共管の財団法人に改組（収益部門は日生研株式会社として承継）、平成 24 年から一般財団法人に移行し、今日に至っております。
社団法人の設立発起人は、戦後の学術研究の衰退を危惧し、畜産業の振興と公衆衛生の向上に資する人畜衛生、特に伝染病の予防に関わる民間研究機関の必要性を痛感した学界および産業界有識者の方々でありますが、設立発起人会の発足日が昭和 21 年 10 月 1 日であったことから、この日を創立記念日として、毎年式典を催し、意義を留めております。
草創期以来、民間研究所として幾多の財政的苦境や困難な障害を役職員が一丸となって団結し乗り越えて来られたのは、「学術の振興及び畜産の発達並びに公衆衛生の進歩に寄与する」という創立理念にあると思います。大先達の方々の社会貢献への志しの高さと学術研究に対する情熱の強さを実感いたします。来し方の 1 年を改めて振り返り、創立の志しを自らに問いつつ、企業倫理と行動規範を見つめ直し、社会との信頼関係を再構築してまいる所存です。何卒、皆様には倍旧のご支援とご指導を賜りますようお願い申し上げます。
（注）水干；沢の行き止り（常務理事）

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，2017

3（49）

レビュー

動物由来耐性菌をめぐる国際情勢とわが国の現状
田村豊（酪農学園大学

獣医学群

動物薬教育研究センター）

いが、科学的な根拠は明らかでないとされてきた。
はじめにしかし、2003 年に開催された WHO、FAO（国連食医療における耐性菌の地球規模での蔓延が深刻な

料農業機関）、OIE（国際獣疫事務局）共催の国際事態となっている。2013 年にアメリカ疾病予防管会議では、食用動物に使用される抗菌薬によって耐理センターは、年間 200 万人以上が耐性菌感染症に性菌が選択・増加し、それがヒトに伝播してヒトの罹患し、23,000 人以上が死亡すると推定している。

健康に影響する十分な証拠が蓄積されていると結論

また、英国政府はこのまま何ら耐性菌対策を取らな付けられた [2]。したがって、この会議以降、国際

ければ、2050 年までに 1,000 万人が耐性菌感染症で

機関では食用動物由来耐性菌のヒトに対するリスク

死亡し、死亡者の多くはアジアとアフリカであるこは明らかであり、そのリスク低減のためのリスク管とを警告した。このように現在、薬剤耐性菌は人類理の時代に移行した。

に対する最も大きな脅威となっている。

先にも述べたように医療における耐性菌の蔓延をこのような耐性菌を選択する要因である抗菌薬は、 背 景 と し て 耐 性 菌 対 策 が 大 き く 動 い た の は、医学のみならず獣医学分野でも盛んに利用されてお2015 年 5 月の WHO 総会において国際行動計画がり、特に安価で安全な畜産物の安定的な生産に大き採択されたことである。この基本的な考えが One

く貢献している。しかし、抗菌薬が畜産分野で汎用

Health approach であり、その一角を担う獣医領域されることに伴い、薬剤耐性菌が選択・増加したこも無関心ではいられない状況となっている。戦略的とも事実である。近年、食用動物に使用される抗菌目標として、①普及啓発・教育、②サーベイラン

薬により選択された耐性菌が、食物連鎖を介してヒス・モニタリング、③感染予防・管理、④抗微生物

トの健康に影響することが懸念され、その封じ込め薬適正使用、⑤研究開発・創薬の各項目が掲げられ対策を検討する多くの国際会議が開催されているている。また 6 月に開催された G7 エルマウ（ドイ[1]。最近、WHO（世界保健機関）総会において採ツ）サミットでも WHO の方針が支持され首脳宣言択された WHO Global Action Plan on Antimicrobialの附属書に「薬剤耐性（AMR）と闘う共同の努力」

resistance（WHO 国際行動計画）は耐性菌対策のが記載されている。首脳宣言の中で AMR に関する＊基本的な考えを One Health approach とし、その記載は初めてのことと思われ、いまや AMR は世界後開催された G7 サミットでも支持されたことから経済や国際紛争に匹敵する課題ということであろう。

世界的な活動へと進展した。

2016 年 5 月に開催された G7 伊勢志摩サミットでもそこで今回は、進展が著しい動物由来耐性菌に関

耐性菌対策は重要な課題とされ、国際保健のためのする国際動向とそれに伴うわが国の動きを紹介する

G7 伊勢志摩ビジョンの中で AMR 対策の強化が示とともに、動物由来耐性菌の現状を紹介したい。

されている。さらに耐性菌問題は G7 諸国のみの問One Health とは、ヒト･動物･環境の健康を維持していく

題でないことから、2016 年 9 月の第 71 回国連総会
において薬剤耐性に関する High – level Meeting がには、どの一つの健康も欠かすことができないとの認識に開催され、耐性菌対策が地球規模での課題となった。

立ち、それぞれの健康を担う関係者が緊密な協力関係を構WHO 国際行動計画の採択に伴って、2 年以内に築することにより、これらの 3 者の健康を維持・推進して加盟各国で行動計画を策定することが義務付けられ

いこうとするものである（山田章雄，2010．日獣会誌

た。そこで厚生労働省を中心に取りまとめ作業が行

63 : 556 – 557.）。

われ、2016 年 4 月に「薬剤耐性対策アクション･プ
ラン（2016 – 2020）」（行動計画）が内閣府から発出＊された。内容は WHO 国際行動計画に記載された 5
Ⅰ. 薬剤耐性菌をめぐる国際情勢

項目に関する具体的な内容が記載されるとともに、従来、食用動物への抗菌薬の使用により出現した

わが国独自に⑥国際協力が追加された。今後 AMR

耐性菌がヒトの健康に影響する可能性は否定できな対策に対して日本はアジアのリーダーシップを取る

日生研たより4（50）との強い意志を示したことになる。また、通常は努ニタリングも実施することになっている。

力目標を示す傾向が強いものの、今回設定した行動
計画には数値による成果指標についても記載されており、毎年の評価とともに 2020 年までの達成が国

2. 食品媒介性健康影響評価の実施際約束することになった。具体的に動物に対しては、

現在、内閣府の食品安全委員会において、農林水

最も使用量が多く耐性菌も多い大腸菌のテトラサイ

産省から諮問されている飼料添加物として指定されクリン耐性率を現在の 45％から 33％以下に低下すている抗菌薬およびそれと同系統の動物用医薬品のることと、医療に対する影響が大きいと考える大腸使用により選択される耐性菌と、新規の抗菌薬であ菌の第 3 世代セファロスポリンおよびフルオロキノ

る動物用医薬品の承認又は再審査に際しての食品媒

ロン耐性率を G7 各国の数値と同程度とすることで介性健康影響評価が実施されている [5]。これは、ある。したがって、今後、使用量の削減や使用法のいわゆるリスク評価といわれるもので、食品を介し制限のための方策など規制強化は免れないと思われてヒトに対し危害因子となる食用動物由来耐性菌をる。

ハザードとして特定し、それについて農場での発生評価、ヒトへの曝露評価、それに影響評価を行って、ヒトの健康に対するリスクを推定している。これまⅡ. わが国の食用動物由来耐性菌に対する対応
食用動物由来耐性菌のヒトの健康に対する影響が次第に明らかになるにつれ、国際機関で耐性菌の封でモネンシンナトリウムなどの抗菌性飼料添加物
14 成分と抗菌性の動物用医薬品 10 成分の評価が終了している。

じ 込 め 対 策 が 盛 ん に 議 論 さ れ る よ う に な っ た。
WHO（1998）は食用動物由来耐性菌対策として以下の 4 点を勧告した [6]。つまり、①研究の推進、

3. リスク管理措置の設定②薬剤耐性モニタンリングの実施、③リスク評価の

食品安全委員会によるリスク評価が終了すれば、実施、④抗菌薬の慎重使用の励行である。そこで農農林水産省によりリスクの低減化対策が実施される

林水産省は、WHO の勧告に従って全ての項目につことになる。食用動物に使用されるフルオロキノロ

いて対応している。以下に簡単に農林水産省の各項

ン薬のリスク評価が終了したことを受け、農林水産目に対する対応状況について説明したい。

省は「動物用抗菌性物質製剤のリスク管理措置策定
指 針」を 発 出 し た（http://www.maff.go.jp/nval/

1. 家畜衛生分野における薬剤耐性モニタンリング
体制（JVARM）の設立

risk/title.html）。その目的は、畜水産動物に対する有効性と安全性の確保と、科学的知見に基づくリス

農林水産省は 1999 年から動物医薬品検査所を中ク管理措置を策定することとされている。特に、ヒ心に全国の家畜保健衛生所とネットワークを構築し、トの健康に対する悪影響を低減化することを最優先

家畜衛生分野における全国的な薬剤耐性モニタリンとすることである。このリスク管理策定指針に基づグを開始した。本モニタリング体制は、開始から 18

いて、牛・豚用フルオロキノロン薬のリスク管理措

年を経過し、国内外に JVARM（Japanese Veterinary

置について公表されている。具体的には、第二次選Antimicrobial Resistance Monitoring Program）とし択薬として使用することを徹底すること、投与後一て広く知られている（http://www.maff.go.jp/nval/

定期間内（3 日程度）に効果判定を実施し効果が無

tyosa_kenkyu/taiseiki/index.html）。JVARM で は、

い時は抗菌薬を変更すること、国および製造販売業

大きく 3 つのモニタリングを実施している。まず、者が実施する薬剤耐性モニタリングを充実すること

食用動物における抗菌薬の使用量の調査として、毎とされている。

年、実際の使用量ではないものの有効成分の純末換
算量による製造量または輸入量を明らかにし、動物種ごとの推定販売割合について調査し公表している。 4. 慎重使用のガイドラインの制定
また、病原細菌や健康動物由来食品媒介性病原細菌

薬剤耐性菌の出現要因として最も重要なことは、（サルモネラとカンピロバクター）や指標細菌（大抗菌薬の過剰使用と誤用にあるとされている。した腸菌と腸球菌）に関する耐性調査を実施している。

がって、抗菌薬の使用に関しては、OIE や CODEX

また、2016 年の行動計画に基づいて、近い将来、などの国際機関や多くの国で慎重使用の指針が作成

水産分野あるいは伴侶動物分野に関する薬剤耐性モされている。OIE では、「獣医療における動物用抗63（4）
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5（51）

菌薬の責任ある慎重使用」[4] を定めている。また
CODEX では、責任ある慎重使用を推進するため、ガイダンス「抗菌薬耐性の最小化及び抑制のための実施規範」[7] を定めている。ここでいう慎重使用とは、抗菌薬を使用すべきかどうかを十分に検討した上で、抗菌薬の適正使用により最大限の治療効果を上げ、耐性菌の選択を最小限に抑えるように使用することである。つまり、従来の適正使用より、さらに注意して抗菌薬を使うことを意味する。農林水産省は、2013 年に畜産分野において抗菌薬を使用する際の獣医師及び生産者を中心とした責任ある慎重使用ガイドラインに相当する「畜産物生産におけ

図 1 動物用抗菌薬の販売量（純末換算量 ）る動物用抗菌性物質製剤の慎重使用に関する基本的な 考 え 方」を 発 出 し た（http://www.maff.go.jp/j/

一方、経時的な治療用抗菌薬の販売量の推移をみshouan/tikusui/yakuzi/pdf/prudent_use.pdf）。これ

ると明らかに減少傾向が認められ、2001 年の 1,000によると、適切な飼養衛生管理による感染症予防、トンから 2011 年の 750 トンに低下している（図 1）。

適切な病性の把握及び診断、抗菌剤の選択及び使用、関係者間の情報の共有を基本とすることが示されている。

2. 食用動物由来大腸菌の薬剤耐性状況
薬剤耐性菌対策を進展させるためには、先に述べⅢ. わが国における抗菌薬の使用量と食用動物由来耐性菌の現状たわが国の各種対策の効果を検証する必要がある。

JVARM が開始されることによって、食用動物にし、同じ方法で薬剤感受性を調べていることから、おける耐性菌の検出状況が次第に明らかになってき

健康動物由来大腸菌を用いた経時的な薬剤感受性のた（http://www.maf f.go.jp/nval/tyosa_kenkyu/

推移により検証した。図 2 は 2000 年から 2011 年にtaiseiki/index.html）。そこで今回、動物における治全国各地の外見上健康な食用動物（牛、豚、ブロイ

療用抗菌薬の使用量とともに、健康食用動物由来大ラー、レイヤー）の糞便から分離した大腸菌を用い腸菌の各種薬剤に対する大まかな耐性状況についてたものである。動物種により抗菌薬の種類によって紹介したい。

耐性率に高低があるものの、動物種に関わらず右肩JVARM は発足以来同じ方法でサンプリングを実施

下がりで減少傾向にあることが認められる。したがって、抗菌薬の使用量に反映した結果であり、現
1. 抗菌性物質の使用量

在の耐性菌対策が有効に機能していることを示して2001 年と 2002 年の平均によると純末換算量としいる。ただし、動物種や抗菌薬によって高い耐性率て人体用抗菌薬は 509 トン使用されているに対し、を示していることも認められていることから、更な動物では医薬品として 994 トン、成長促進を目的とる使用量の低下が望まれる。

した抗菌性飼料添加物が 168 トン、農薬として 371

一方、概ね多くの抗菌薬に対する耐性率が減少しトンが使用されている。つまり、人体用の 2 倍強のているのに対し、ブロイラー由来株の第三世代セ

抗菌薬が動物に使用されていることになる。動物種

ファロスポリンに対する耐性率は上昇傾向が伺える

別に使用量を見ると、医薬品としての抗菌薬の約（図 3）。この傾向は牛、レイヤーや豚由来大腸菌に500 トンが豚に使用され、ついで養殖魚、ブロイ

比べても極めて特異的な傾向にあった。鶏に用いる

ラーが続いている。また、抗菌薬の系統別に見るとセファロスポリン薬は承認されておらず、一般的に350 〜 400 トンがテトラサイクリンであり、次いで高価であることから経済性からも使用は考えにくい。

いるサルファ剤の 100 トンに比べ圧倒的に多い。しそこで耐性菌増加の原因を調査したところ、利便性

たがって、動物に使用される抗菌薬の約 50％が豚から汎用されているワクチンの卵内自動接種システに主にテトラサイクリンが使用されていることにな

ムにおいて、消毒薬代わりにワクチンに動物用第三る。今後、行動計画に従ってテトラサイクリンの使世代セファロスポリン薬のセフチオフルを混入する用等の規制の強化は避けられない。

実態が明らかにされた [3]。そこで 2012 年 3 月に日生研たより

6（52）

図 2 大腸菌における薬剤耐性率の推移（2000 年 - 2011 年）

農林水産省の指導により養鶏団体が自主的に使用をことは特筆に値することである [5]。このリスク評規制した。その結果、2013 年にはベースラインで価結果を基に農林水産省で設定されたリスク管理方

ある約 5％まで耐性率が低下している。

策についても紹介した。幸いに使用制限がかかることなく今後も使用できることは、獣医療にとって抗菌化学療法の “最後の砦” を残せた意義は大きい。

おわりに治療用の抗菌薬の販売量はこの 10 年間で 25％の低2015 年の WHO 国際行動計画の採択を契機に、下を認められ、それに伴って健康な食用動物由来大地球規模で One Health に基づく耐性菌対策の強化

腸菌の耐性率も低下傾向にあることを示した。これにシフトしている現状を紹介した。その流れの中ではこれまでのリスク管理方策が有効に機能している

現在、わが国も One Health による耐性菌対策を構ことを示したものであると考えられる。ただし、依築しようと厚生労働省を中心に農林水産省や環境省が活発に活動している。わが国が策定した行動計画
は 5 年間での成果指標が定められており、進捗状況が毎年評価されることになっている。したがって、
これまで以上に動物における抗菌薬の使用は規制強化の方向に進めことは間違いない。今後は抗菌薬の使用量の低下措置を実践するとともに、ワクチン等の感染症の予防対策の推進がクローズアップされるものと思われる。
これまで農林水産省は、WHO の勧告に対して真摯に対応し、耐性菌を制御するためのあらゆる方策を講じてきた。今回紹介したように、先進国から遅れたものの、JVARM を設立し畜産現場における耐性菌の出現動向を監視するシステムを確立した。また、食品安全委員会では、抗菌性飼料添加物や治療用抗菌薬の食品媒介性健康影響評価を順次進めている。特に最近、牛、豚、鶏用フルオロキノロン薬の評価を終了し、リスクの程度は「中程度」とされた

図3 食 用動物由来大腸菌のセファロスポリン耐性の推移

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然として抗菌薬の種類によっては高い耐性率を維持しており、更なる低減化対策が求められる。
今回、耐性率の推移の中で、例外としてブロイ
テー由来大腸菌の第三世代セファロスポリン耐性率の急激な増加を紹介した。原因としてワクチンの自動卵内接種システムに消毒薬代わりに抗菌薬が使用されていたことだった。今回の事例は JVARM を稼動するに当たって二つの教訓を我々に示してくれた。

参考文献
1. 浅井鉄夫，2010. 家畜を介した耐性菌汚染 日本と世界・現状と対策，臨床と微生物．37：635 –639．
2. FAO/OIE/WHO, 2003. Joint FAO/OIE/WHO
expert workshop on non – human antimicrobial

まずは同じ方法で耐性菌をモニタリングすることにusage and antimicrobial resistance: scientificassessment, Geneva, December 1 – 5.

より異常値を早期に検出し、改善することによって

3. Hiki M, Kawanishi M, AboH, Kojima A, Koike R,

耐性率をベースラインまで低下することができたことである。これは介入（intervention）といわれる

Hamamoto S, and Asai T. 2015. Decreased
resistance to broad – spectrum Cephalosporin in

もので異常値が検出されたら直ぐに対策を講じるこEscherichia coli from healthy broilers at farms inとで JVARM の有用性を示すことができた。また、Japan after voluntar y withdrawal of Ceftiofur,
Foodborne Pathogens and Diseases 12 : 639 – 643.

抗菌薬の適応外使用を中止することにより、短期間で耐性率をベースラインまで押し下げることができ、抗菌薬の慎重使用が極めて重要であることを示した。
したがって、臨床獣医師はどのような抗菌薬であっ

4. OIE, 2003.OIE inter national standards on
antimicrobial resistance. p. 17 – 27.

ても、使用すれば必ず耐性菌を選択することを念頭

5. 大倉尚子，2017．薬剤耐性菌の食品健康影響評
価．日獣会誌 . 70 : 84 – 88.

に、抗菌薬の治療効果を最大限にし、耐性菌の出現

6. WHO, 1998. Use of quinolones in food animals

を最小化する投与を考えるべきである。その意味で、農林水産省が抗菌薬の責任ある慎重使用のガイドラ

and potential impact on human health, Report andproceedings of a WHO meeting, Geneva, June 2 –インを提示したことは適時を得た対応であり、新規5.

の抗菌薬が開発されにくい現在において、既存抗菌

7. WHO, 2000. WHO Global principals for the

薬を末長く使用するためにも、全ての臨床獣医師がcontainment of antimicrobial resistance in animals
intended for food, Geneva, June 5 – 9.

抗菌薬の使用に当たってこの考え方を順守することをお願いしたい。

文献紹介

ジカウイルス感染症に対する修飾 mRNA
ワクチンプロジェクト
小野浩輝
Modified mRNA Vaccines Protect against Zika Virus Infection.
Justin M. Richner., Sunny Himansu., et al.
Cell 2017. 186（6）: 1114 – 1125.

概要

ワクチンを開発し、マウスを用いてその免疫原性と防御性を試験した。prM – E mRNA を被包する LNP

ジカウイルス（Zika virus : ZIKV）感染症の出現から形成されたウイルス様粒子を 2 回投与すること

以降、安全で効果的なワクチンの開発が世界的に取で、ZIKV に対する高い中和抗体価（〜1/100,000）

り組まれてきた。我々は、野生型もしくは変異型を示し、感染ウイルスを消滅させる免疫を獲得させ

ZIKV 構造遺伝子をコードした脂質ナノ粒子（Lipid

た。デングウイルス（Dengue virus : DENV）へのnanoparticle : LNP）被 包 型 mRNA（mRNA LNP）

交差反応性抗体を誘導する ZIKV ワクチンの理論上日生研たより

8（54）の非構造タンパク質［NS1、NS2A、NS2B、NS3、
NS4A、NS4B、NS5］に分節されるポリタンパク質を産生する。ZIKV は、正二十面体に整列した 60 のprM – E ヘテロ三量体で構成される未成熟なウイル
ス粒子の状態で小胞体内腔へと出芽する。ウイルスは分泌経路を通過する際、ゴルジネットワークにおける酸性環境が prM 中のフーリン切断領域の露出を引き起こす。prM が切断されて細胞外に放出さ概要図

れた pr ペプチドは、表面に格子状に配置するホモ2 量体のエンベロープ蛋白に配置され、成熟した感染性粒子となる。ZIKV の E タンパク質は 3 つの外の懸念を除外するため、我々は E タンパク質中の部ドメイン［DI、DII、DIII］から構成され、これフュージョンループ（Fusion loop : FL）エピトープの保存領域を欠損させる変異型 prM – E RNA をデらが中和抗体のターゲットとなる。ZIKV に対する

ザインした。この変異型は、培養細胞もしくはマウ

mAb）は、E タンパク質領域の外部ドメイン 3 つ全スにおいて ZIKV を防御し、さらに DENV 感染をてのエピトープのみならず、四次構造を構築する多増 強 さ せ る 抗 体 の 産 生 を 減 少 さ せ た。変 異 型

重領域内部あるいは二量体連結部をも認識している。

モ ノ ク ロ ーナ ル 抗 体（Monoclonal antibodies :mRNA ワクチンは ZIKV 感染症を防ぐことが可能で、 ZIKV の中和抗体は、感染性ウイルスもしくは不活ワクチン接種後に懸念される DENV 感染を増強するリスクを減少させた。

化ウイルス粒子によって誘導されるが、それに加えて、M – E ま た は prM – E を コ ード す る DNA プ ラ
スミドを免疫することでも誘導される。後者では、分泌型サブウイルス粒子（Subviral particles : SVP）

はじめにが産生される場合があることが報告されている。

ZIKV は 1947 年にウガンダのジカ森林に生息す

ZIKV の遺伝子型は African 型と Asian/American

るアカゲザルより同定された。もともと ZIKV はヤ型の 2 つの系統が存在するが、抗体の中和能にはな

ブカ属の蚊とヒトを除く霊長類の間で循環していたんら影響を及ぼさないことから、ZIKV は単一の血ものが、偶発的にアフリカとアジアの一部のヒトへ清型として分類されている。ZIKV は、DENV や黄と 溢 流 し た と 考 え ら れ て い る。2010 年 以 前 は、

熱 ウ イ ル ス（YFV）、ウ エ ス ト ナ イ ル ウ イ ル ス

ZIKV 感染症は頭痛、発疹、結膜炎、筋痛を伴う自（WNV）、日本脳炎ウイルス（Japanese encephalitis

己限定的な熱病とされていたが、特に西半球におけvirus : JEV）、ダニ媒介性脳炎ウイルス（TBEV）とる ZIKV の拡散状況においては、年々重篤な臨床症

いった病原体と関連があり、中でも特に DENV の状が観察されるようになってきた。妊娠期間中に胎4 つの血清型と最も近縁で、ウイルス E タンパク質

児へと感染すると、胎盤機能不全、大脳石灰化や小中のアミノ酸配列相同性は 54〜59％を示す。

頭症といった先天性奇形、流産などを引き起こす。

胎児や新生児に対する感染や先天的障害を与える

成人が ZIKV に感染すると、麻痺や多発性神経炎を危険性から、ZIKV に対する予防対策を緊急に確立

特徴とする自己免疫疾患であるギラン・バレー症候する必要がある。いくつかのの研究グループは、マ群へと繋がる。男女間もしくは男性間での性行為感

ウスおよびヒト以外の霊長類において ZIKV 血症を染に関して報告があり、感染後 6 か月間持続的に精液や精子、膣分泌液から ZIKV が検出されたとする

防御する性質を有する中和抗体を誘導するサブユ
ニット［prM – E、M – E DNA プラスミド、アデノ報告がある。現在、ZIKV 感染症はアメリカ、アフウイルスベクター］もしくは不活化ワクチンプラッ

リカ、アジアにおける国際的な疾患となっている。

トフォームを開発した。これら候補ワクチンの中に

ZIKV はフラビウイルス属フラビウイルス科のエは、既にヒトでの臨床試験が予定もしくは開始されンベロープを有する RNA ウイルスで、11 kb 程度のプラス鎖 RNA を有する。細胞質内での RNA 翻ているものもある。
ZIKV と DENV 間の遺伝子配列類似性に起因する訳によって、3 つの構造タンパク質［カプシド（C）、 抗 ZIKV ヒト抗体の DENV に対する交差反応は、
膜前駆 / 膜（prM/M）、エンベロープ（E）］と 7 つワクチン開発における争点となっている。交差反応63（4）
，2017

9（ ）
9（55）

性抗体は、防御に貢献する可能性が限られており、ることは無く、変異原性や発がん性のリスクはない。

それは培養細胞試験における多くの広域反応性抗フ

最近、非増殖型もしくは自己増殖型の mRNA ベー

ラビウイルス mAb の中和活性限界と一致する。

スのワクチンが、マウスにおける A 型インフルエ

DENV に初感染すると、ホモ血清型に対する抗体

ンザや、霊長類における HIV に対する液性免疫反反 応 を 誘 導 す る が、そ の 一 方 で ヘ テ ロ 血 清 型 の応の誘導に用いられている。我々の修飾非自己増幅

DENV に二次感染すると致死的ショック症候群を型 mRNA ワクチンは、目的の抗原をコードする翻引き起こす。このことは少なくとも一部は抗体依存性 感 染 増 強（Antibody – dependent enhancement of

訳領域、翻訳効率と細胞内安定性を最適化する 5ʼ

infection : ADE）に起因する。すなわち、最初に感抑制する独自のヌクレオチドを含む、最適化された
mRNA を有する。mRNA は Toll – like 受容体と RIG染した血清型のウイルスで誘導された交差反応性抗および 3ʼ の非翻訳領域、非特異的自然免疫活性を体は、その後に感染した異なる血清型の病態を Fc– γ受容体を発現する細胞内で増強する。この現象

免疫を刺激するアジュバント効果は、タンパク質ワ

は DENV と ZIKV が非常に密接な関係にあり、まクチンのアドバンテージであるが、その一方で非特た ZIKV 流行域でのワクチン接種者や流行域への旅

異的免疫反応は mRNA の翻訳も阻害し、mRNA ワ

行者の年間凡そ 3 億 9 千万人がその後 DENV に暴

クチンの抗原発現と免疫原性を減少させるこのことはウリジンヌクレオチドをシュードウリジンや 5 –露されることなどから、ZIKV のワクチン接種にとって重要な課題になるであろう。事実、ZIKV の自然感染に由来する E タンパク質中の高度に保存– I – like 受容体を通して自然免疫を刺激する。自然メチルシチジンのような自然発生の塩基の修飾と置換することで克服できる。そこで、ZIKV の prM –された DII ドメインにおけるフュージョンループ
（Fusion loop in DII of E : E – DII – FL）に対する交差

E をコードした修飾 mRNA を 2 遺伝性もしくは獲反 応 性 抗 体 は、培 養 細 胞 お よ び マ ウ ス に お い て

重篤感染を防御する高い中和抗体を誘導した。実質

DENV の感染性を増強させることが出来る。これ
らの実験室データは確定的なものではなく、ZIKV

的に mRNA ワクチンはいかなる遺伝子配列でも組み込むことが出来るため、E – DII – FL における免疫の液性免疫が DENV の病理発生に及ぼす影響を証

優勢交差反応性エピトープを無効にするような変異明するためには年単位の期間がかかる疫学調査が求をコードする修飾 mRNA 免疫原を作製した。これめられる。交差反応性抗体の誘導を減少させるようらの mRNA はマウスにおいて ZIKV に対する防御なワクチン戦略は、患者を重篤な DENV 感染症へ抗体を誘導し、かつ、培養細胞において DENV 感

感作させるリスクを最小化するかもしれないし、染を増強させる交差反応性抗体の産生と、マウスにDENV 感染症の病理発生に関わる ZIKV の免疫の臨おける DENV の病原性を最小化することができた。

得性の自然免疫不全マウスに 2 回免疫したところ、床的関連を証明するであろう。
我 々 は、LNP に 野 生 型（Wild – type : WT）も し
くは変異型 ZIKV の構造遺伝子をコードした修飾

結果

mRNA を 包 含 さ せ た 汎 用 性 ワ ク チ ン プ ラ ット

ZIKV に対する mRNA ワクチンプラットフォーム

フォームを開発した。DNA プラスミドベースのワ

in vivo でタンパク質発現を高度に誘導する、筋肉

クチンとは異なり、mRNA は染色体中に統合され内投与用の修飾 mRNA を被包化した最適化 LNP を作出するためのワクチンプラットフォームを作製した（図 1）。原理証明のため、type 1（N7mGpppGm）
cap、最適化した 5ʼ および 3ʼ の非翻訳領域、ヒト

図1

LNP ワクチン作出法

図2

ZIKV 遺伝子（上）および IgEsig-prM-E（下）日生研たより10（56）

IgE のシグナル配列、ZIKV Asian 株（America 株とのアミノ酸配列同等性 99％ <）の全長 prM および
E 遺伝子をコードした修飾 mRNA をデザインした（図 2）。修飾 mRNA は酵素処理で統合した後、LNPに 被 包 化 し た。293T も し く は HeLa 細 胞 と IgE
signal – prM – E（IgEsig – prM – E）mRNA を 含 む

C57BL/6 でのワクチン有効性
免疫正常マウスで IgEsig – prM – E LNPs ワクチンの免疫原性および有効性を評価するために、8 週齢の C57BL/6 WT マウスの筋肉内に 10 µg の IgEsig –prM – E LNP を投与した。これらの動物は接種後 4

LNP を イ ン キ ュベ ート す る こ と で、約 30 nm の週目（追加免疫前）、8 週目および 18 週目（攻撃後）

SVP の効率的な発現と分泌が得られた。これらはに静脈切開を行い、中和抗体価を測定した。中和抗電子顕微鏡や培養上清中 ZIKV の構造タンパク質に体価は追加免疫前の血清では比較的低値を示したが、対するウエスタンブロット、マススペクトロメト

追 加 免 疫 後 4 週 で 抗 体 価 は ピ ーク の 値［EC50 :リーなどで確認された。

1/10,000］を示し、1 回目のワクチンを接種してから 18 週まで上昇し続けた。致死性の攻撃モデルを
作 製 す る た め に、2 mg の ブ ロ ッキ ン グ 用 anti –AG129 マウスにおけるワクチン有効性
IgEsig – prM – E LNP の免疫原性と防御性について

ifnar1 抗体を攻撃前日に受身投与した後、マウス感
受 性 ZIKV African 株 106 focus – form – unit（FFU）

はまず、type I および II IFN シグナル反応を欠いた
免 疫 不 全 マ ウ ス で 評 価 し た。8 週 齢 の Ifnar1 – / –で攻撃した。IgEsig – prM – E LNP ワクチンで免疫さ

Ifngr – / – AG129 マウスの雄雌を 5 群に分け、IgEsig– prM – E LNP の 2 µg あるいは 10 µg を、陰性対照のに対して、非免疫対照群の生存率は 30％であった。
IgEsig – prM – E mRNA LNP で免疫されたマウスは体として非翻訳 RNA LNP（プラセボ）の 10 µg を投重減少を示さず、攻撃後 5 日目の血清中でウイルス与した。群 1、3、5 はワクチン投与後 21 日目に等血症は認められなかった。

れた全てのマウスは致死性の ZIKV 感染に防御した量の追加免疫を実施したが、群 2 および 4 では実施しなかった（表 1）。免疫後 42 日目にマウスの静脈切開を行い、中和抗体価を測定した。IgEsig – prM –免疫優勢 E–DII–FL 欠損修飾ワクチンの抗 ZIKV
防御反応の誘導E LNP を追加免疫した群では、ZIKV の中和抗体価

フラビウイルス E タンパク質領域の DII ドメイ

は高値［EC50 : 1/10,000、EC90 : 1/1,000］を示し、ンに存在する FL エピトープは高度に保存されてお追加免疫を行っていない群の抗体価は低値を示した。 り、ヒトにおいて免疫優性である。ZIKV の感染、免疫後 42 日目に、ZIKV P6 – 740 株で攻撃を行ったも し く は ZIKV の 構 造 タ ン パ ク 質 を 免 疫 す る と
結果、陰性対照群は ZIKV 感染によって全頭が死亡し た。IgEsig – prM – E LNP ワ ク チ ン を 2 µg も し く

DENV との交差反応性抗体を誘導することが出来は 10 µg 投与して追加免疫を行った群および、10を増強する可能性がある。このリスクを最小化するµg 単回投与した群は 1 頭を除いて感染耐過した。

ために、FL 特異抗体の抗体活性を失活させる 4 つの 変 異［T76R、Q77E、W101R、L107R］を E – DII

一方で、2 µg 単回投与したマウスは 60％の生存率

るが、一方で ADE によって DENV 感染および病態で中間表現型を示した。体重変化と死亡率には相関が見られ、IgEsig – prM – E LNP ワクチンを投与した

また、IgE リーダー配列を JEV の配列（JEVsig）とマウスでは異常は見られなかったが、一方で陰性対置換することで mRNA LNP の別系列を作製し、宿照群は攻撃後 10 日目頃から体重減少が見られた。

主シグナルペプチターゼ切断有効性を高める他のフラビウイルスの prM – E DNA ワクチンを、最適化

表1
群

したコドンを使用して作製した（表 2）。ウエスタ

AG129 マウスを用いた免疫群の設定

ワクチン

dose 抗原刺激 追加免疫– FL 内あるいはその近位（prM – E FL）に導入した。

ZIKV

n

ンブロットによる分析では WT および FL ミュータ

1 IgEsig–prM-E 10 µg

Day 0

Day 21

Day 42

10

ント mRNA を HeLa 細胞にトランスフェクション

2 IgEsig–prM-E 10 µg

Day 0

NA

Day 42

10した後の培養上清における SVP の分泌レベルは同

3 IgEsig–prM-E 2 µg

Day 0

Day 21

Day 4210

4 IgEsig–prM-E 2 µg

Day 0

NA

Day 4210

5 プラセボDay 0

Day 21

Day 4210NA等であることが示され、FL エピトープを認識する
mAb（WNV E60）を 使 用 す る こ と で prM – E FL
mRNA の FL の消失が確認された。
免 疫 応 答 性 が 正 常 な 8 週 齢 の BALB/c マ ウ ス

63（4），201711（57）（雌）へ、IgEsig – prM – E も し く は JEVsig – prM – E

スの脾臓と脳からウイルス RNA が検出された。

LNP（WT もしくは FL ミュータント）を 2 µg およこのモデルにおける ZIKV の完璧な防御と免疫とび 10 µg 投与し、投与後 4 週目に追加免疫を実施しの相関を証明するために、mRNA LNP ワクチンかた。初回免疫から 8 週後、ZIKV レポーターウイル

らの EC50 値とマウスの血清と脾臓から回収したウス粒子（Reporter virus particles : RVP）を用いて中和 活 性 を 解 析 し た。IgEsig – prM – E LNP も し く は

イルス RNA 量を比較した。この解析によって、中IgEsig – prM – E FL LNP を 2 µg あるいは 10 µg 投与量が逆相関すること、また、ウイルス血症と組織内し た マ ウ ス で は、同 様 の 中 和 抗 体 価［EC50 : 〜
1/5,000］を 示 し た。WT JEVsig – prM – E LNP を 2

ウイルス拡散を完全に防ぐ EC50 カットオフ値が〜µg および 10 µg 投与したマウスは高い中和抗体価

ス血症および組織への感染をほぼ完全に防御した
JEVsig – prM – E LNP ワクチンが感染ウイルスを消滅［EC50 : 〜1/100,000、EC90 : 〜1/10,000］を示した。
しかし、ミュータント JEVsig – prM – E FL LNP を投和抗体価と血清および組織から回収した ZIKV RNA

1/10,000 であることを明らかにした。次に、ウイル与した群では、中和抗体価は低値［EC50 : 1/10,000、させる免疫を獲得できるのかを試験した。JEVsig –prM – E mRNA ワクチンを 2 µg もしくは 10 µg dose

EC90 : 〜1/500］を示した。

免疫したマウスのほとんど（80 – 90％）が、感染性初回のワクチン接種後から 13 週目までに、anti –infar1 blocking 抗体をあらかじめ投与した後、ZIKV
Dakar 41519 株で攻撃した。攻撃後 3 日目の血清でウ イ ル ス 血 症 の 検 査 を 実 施 し た。JEVsig – prM – E
LNP を 2 µg もしくは 10 µg 投与した群では、高い

ZIKV 攻撃後 1 週間目の中和抗体価の上昇は認められなかった。これに対して、IgEsig – prM – E もしくは JEVsig – prM – E FL ワクチンを投与し、破綻的なウイルス血症と組織負荷を示したほとんどの動物（82 – 100％）は、既往反応の誘導と一致して攻撃後中和抗体価と一致して、ウイルス血症は測定限界値以下であった。すべてのワクチン群（IgEsig – prM –に EC50 および EC90 の顕著な上昇を持続した。

E LNP（WT お よ び FL）お よ び JEVsig – prM – E FL

DII フュージョンループエピトープの変異は培養細胞およびマウスにおいて ADE を減少させる

LNP）では、いくらかの動物ではウイルス血症に耐え た が、そ れ ら の レ ベ ル は プ ラ セ ボ の 10〜100 –fold 以下であった。マウスは攻撃後 7 日目で安楽殺
し、脾臓、子宮、脳から ZIKV の RNA 含有量を測定した。prM – E LNP で免疫したほとんどのマウスの脾臓で、ZIKV の RNA 含有量は顕著に低値［>100– fold］を示し、子宮および脳からは RNA は検出されなかったが、非免疫対照群では、組織 1 g あたり
105 か ら 106 FFU の ZIKV が 検 出 さ れ た。IgEsig –FL 変異ワクチンが、交差反応増強抗体の誘導を減少させるかどうかを評価するため、DENV 血清
型 1（DENV – 1）RVP を免疫してから 8 週後に得た血清を希釈してインキュベートし、活性化ヒト Fc– γreceptor IIA（D32A）を発現する K562 細胞での感 染 を 評 価 し た。WT IgEsig – prM – E も し く は
JEVsig – prM – E LNP を免疫したマウスから得られた

prM – E FL LNP もしくは JEVsig – prM – E FL LNP を

血清全てが鐘型の正の準抗体増強曲線を示す一方で、IgEsig – prM – E FL も し く は JEVsig – prM – E FL LNP

2 µg 免疫したマウスでは防御がやや下がり、非免から得た血清を免疫したマウスから得た血清の多く

疫対照群よりもはるかに低値ではあるが数匹のマウは、高濃度時のみ増強したものの有効性は大幅に低

表2

BALB/c マウスを用いた免疫群の設定下した。実際に、最高増強力価（Peak enhancement
titer : PET）は FL 変異体で免疫したマウスの 100 –

群

ワクチン

dose

fold 以下であった。同様の増強効果における減少あ1

IgEsig–prM–E

10 µg

るいは PET 時の感染細胞の分画が観察された。以2

IgEsig–prM–E

2 µg

上の培養細胞を用いた試験から判断すると、ZIKV

3

IgEsig–rM–E FL

10 µg

E 遺伝子への FL 変異の導入は、DENV への増強抗4IgEsig–prM–E FL

2 µg

体の産生を減少させた。

5

JEVsig–prM–E

10 µg

これらの結果の生理的意義を判定するために、

6

JEVsig–prM–E

2 µg

7

JEVsig–prM–E FL

10 µg

AG129 マ ウ ス で 確 立 さ れ て い る DENV に 対 す る
ADE 受動導入モデルを用いて、IgEsig – prM – E およ8

JEVsig–prM–E FL

2 µg

9

プラセボ

NA

び IgEsig – prM – E FL、もしくは JEVsig – prM – E および JEVsig – prM – E FL を免疫したマウスの血清を調12（58）日生研たよりべた。始めに、Raji – DCSIGNR 細胞にて確立され律に高値（50％中和抗体価 : 〜1/10,000）を示した。

た RVP 法 を 用 い て、プ ール し た ZIKV 血 清 の
DENV 血清型 2（DENV – 2）の相対中和活性を評価

mRNA LNP ワクチンによって誘導された防御反応した。FL 特異的 mAb を用いた試験と一致して、IgEsig – prM – E もしくは JEVsig – prM – E を免疫した

撃されたマウスは ZIKV に罹患および死亡を示さなには持続性があり、追加免疫から 14 週間でも、攻かった。さらに、prM のシグナル配列とコドンの使用を適正化した JEVsig – prM – E を用いることで、マウスから得たプール血清は、IgEsig – prM – E FL
もしくは JEVsig – prM – E FL を免疫した動物とは異大多数のマウスにおいて感染ウイルスが消滅するよなり、培養細胞において DENV – 2 の感染を防ぐこ

うな、より強力な免疫応答（EC50 : 〜 1/100,000、とができた。このことは、交差反応抗体（FL 特異

EC90 : 〜1/10,000）を 誘 導 す る こ と が で き た。
JEVsig – prM – E が IgEsig – prM – E mRNA よりも高いのような）は WT で免疫したマウスからのみ産生
されて FL ミュータントワクチンで免疫したマウスからは産生されず、活性化 Fc – γ受容体を欠損する

免疫原性を示した要因はこの時点では不明であった。

Raji – DCSIGNR 細胞における感染を中和出来るこを IgG 価〜1/2,000 で防御を示していたが、これらとを示している。次に、プール血清を AG129 マウスに非致死量の DENV – 2 で攻撃する 1 日前に投与の内いくつかの試験は、IFN シグナリングの拮抗作した。WT の IgEsig – prM – E もしくは JEVsig – prM –免疫応答マウスを攻撃試験に用いていた。ヒト以外

E LNP を免疫したマウスから得た血清 1 µL、10 µL
もしくはポジティブコントロールとして anti – prMの霊長類での DNA プラスミドあるいは不活化ワク

mAb（2H2）を AG129 マウスに投与した結果、一ZIKV 感染動物のウイルス血症を防御するのにマイ様に ADE による重篤な病態と致死的な感染を引き起こした。IgEsig – prM – E FL もしくは JEVsig – prM

ク ロ 中 和 試 験 で 1/100 も し く は RVP 法 で 1/1,000– E FL LNP を免疫したマウス血清を投与した場合

しかしながら、標的組織中からウイルスが検出されでは、罹患率および致死率が顕著に低下した。

ず、既往性の液性免疫応答の形跡がないことから判他の ZIKV ワクチン候補がマウスでウイルス血症

用が種特異的に欠損し効率的に ZIKV 感染をしないチンを用いた受動伝達および攻撃試験では、大半のの中和抗体価が必要であることが示唆されている。

断されるように、完全排除型免疫に関して評価した報告はない。ワクチン開発において、最重要な問題
考察
ZIKV の出現により、その感染をコントロールするための対応策を早急に確立する必要が出てきた。
我々は prM – E タンパク質をコードした修飾 mRNAは妊娠時の防御と、胎盤および胎児感染に伴う傷害を防御し得る完全排除型免疫が必要かどうかの相互関連性が問題として残っている。anti – ifnar1 処理を施した感受性マウスにおいては、完全排除型免疫

を LNP に 被 包 化 し た ZIKV ワ ク チ ン プ ラ ットを獲得するのに必要な中和抗体価は、ウイルス負荷

フォームを開発した。近年、mRNA ベースのワク

もしくは死亡率を抑えるのに必要な中和抗体価よりチンはマウスにおいて A 型インフルエンザあるはも実質的に 100〜1,000 倍高値だった。母子感染をヒト以外の霊長類において HIV に対する液性免疫完全に防ぐ免疫防御の相互関連を証明するために、の誘導に用いられたが、それらが自己増殖 RNA や妊娠動物における免疫試験が計画された。

プロタミン複合型 mRNA を用いている点は、我々が開発したプラットフォームとは異なる。我々は修プラットフォームに多用途性があるため、保存され た E – DII – FL 領 域 に 対 す る mAb お よ び ポ リ ク

飾 mRNA の 輸 送 に LNP を 選 択 し た が、そ れ は

ローナル抗体の活性を消失させる変異を導入した

siRNA のデリバリーが臨床試験にて検証されて来mRNA LNP ワ ク チ ン を デ ザ イ ン し た。FL 変 異ており、他の非ウイルスデリバリーシステムと比較

mRNA ワクチンは非妊娠 BALB/c マウスに中和抗して耐容性が優れているためである。原理証明試験

体反応を誘導し、脳および子宮へのウイルス播種をとして、LNP でデリバリーされた修飾 mRNA が致防御した。さらに、FL 変異 ZIKV ワクチンは血清抗体反応を誘導し、培養細胞において DENV – 1 感

死的な ZIKV 感染に対する IFN シグナルを遺伝的もしくは後天的に欠損した数種類のマウス［129 Sv、
BALB/c、C57BL/6］において中和抗体を誘導することを示した。IgEsig – prM – E LNP によって誘導された中和抗体価は、これら 3 種のモデルマウスで一染における ADE を低減させ、AG129 マウスにおいては DENV – 2 感染における免疫増強をもたらした。
我々の結果は、G106R と L107D の変異を導入する
ことで FL エピトープを変化させた DENV – 1 DNA

63（4），2017

13（59）

プラスミドワクチンを用いた過去の試験の結果と類感染や疾患を増強する可能性がある。一方で、in似している。その試験では、交差反応性を低減させた一価 DENV – 1 DNA ワクチンを免疫されたマウ

vitro やマウスで証明することが出来る DENV の感スでは、DENV – 2 感染に対する免疫増強を減じて的な懸念となるかどうかについて検討されなければいた。我々の FL 変異 mRNA LNP ワクチンは ADEならない。疫学的な証明が無い中で、ヒトでの交差を 最 小 化 し た が、一 方 で 各 WT LNP と 比 較 し て
JEVsig – prM – E – FL LNP での中和抗体価は低値（〜反応を軽減した変異体ワクチンの評価を正当化することは、特に我々の WT JEVsig – prM – E コンストラ

染および疾患の増強が ZIKV ワクチンに対する臨床

7 – fold decrease in EC50）であった。しかしながら、 クトによって誘導される非常に強力な反応と比較しIgEsig – prM – E WT および IgEsig – prM – E FL ワクチ
た場合、免疫原性の低下という観点から見て難しい
ン間で、中和抗体の顕著な違いは認められなかった。 かもしれない。しかしながら、修飾 mRNA プラッ
さらなる研究が求められるが、FL を変異させたトフォームは緊急の疫学的データに素早く対応でき

mRNA LNP の誘導する中和反応は弱い可能性がある点で良い立ち位置にある。

る。原因としては、（a）産生する SVP に安定性が

我々は、中和能を最適化し、不要な交差反応の制ない、（b）FL を欠損することによって中和エピトー

限を容易に操作できる LNP 被包型修飾 mRNA を利プが変化する、（c）ZIKV SVP 中の FL の変異によって、EDE 抗体で観察されるような FL に近接したエ

用した ZIKV ワクチンの作出に関して記載した。
JEVsig – prM – E mRNA LNP は、種 々 の 動 物 で 完 全

ピトープに結合する中和抗体の産生を妨げる、と排除型免疫を付与する顕著な中和抗体価を誘導した。

い っ た こ と が 考 え ら れ る。こ の よ う に、FL 変 異

我々の結果と同様に、最近 ZIKV 感染症に対する候LNP を 用 い る こ と に は ト レ ード オ フ が あ る。

補ワクチンとして prM および E 遺伝子をコードし

DENV 感染の交差反応および ADE を軽減させられ

た LNP 被包化 mRNA の有用性が報告されている。

る一方で、中和活性および完全排除型免疫を付与す

このプラットフォームの持つ柔軟性は、今後他のフる可能性も減少する。FL 保存領域内を改変させ交

ラビウイルスで防御反応あるいは免疫優勢ヘルパー

差性反応を減少させた第二世代の FL 変異 LNP は

CD4 T 細胞エピトープを増強することが出来るタ

より一層免疫原性であろう。

ンパク質（NS1 など）をコードした mRNA をさら我 々 の mRNA LNP ZIKV ワ ク チ ン プ ラ ットに 導 入 す る こ と が 可 能 に な る。今 後、こ れ ら のフォームは、サブユニットベースもしくは不活化ウ

mRNA ワクチンの免疫原性と防御効果を、妊娠マ

イルス粒子を用いたアプローチに焦点が集まる増大

ウス、ヒト以外の霊長類、そして最終的にヒトで評するパイプラインに加わるものである。3 つの研究

価する試験を実施していくことになる。

グループが、マウスおよびヒト以外の霊長類において中和抗体を誘導させ、ウイルス血症と致死的なウ
イルス攻撃を防御することが出来る ZIKV M – E もしくは prM – E 遺伝子をコードした DNA プラスミ
ドワクチンを報告した。ZIKV M – E 遺伝子をコー

参考文献は割愛させていただきます。

所感

ドしたアカゲザルアデノウイルスベクターワクチン

生ワクチンや不活化ワクチンといったスタンダー

は、4 頭のアカゲザルに 1 回投与後に中和抗体を誘ドとは異なる、mRNA ワクチンプラットフォーム

導した。アルミニウムアジュバント加不活化 ZIKVという新たな可能性に期待させられる内容だと感じ

ワクチンを 2 回接種した BALB/c マウスもしくはた。ジカ熱は海外ではアジアを中心に広く浸透してアカゲザルは中和抗体と細胞性免疫を誘導し、さらいるが、国内においても 2014 年に海外から帰省しにウイルス血症および尿、脳脊髄液、結腸直腸粘液、 た日本人が発症したという事例があった。さらに同
頸膣部分泌液中のウイルス RNA 産生を抑制した。

年、ZIKV の近縁である DENV が都内で流行した報可溶性 E タンパク質三量体を産生するヒトアデノ

道はまだ記憶に新しい。温暖化と同時に蚊の分布域

ウイルスベクターワクチンは中和抗体を産生し、1が拡大することで、ZIKV が国内に再び侵入してく

週齢のマウスにおいて ZIKV の攻撃を防御した。こる危険性は大いにあると思う。動物の感染症も含め、れら全てのワクチンプラットフォームでは有効性の未だ有効なワクチンの無い感染症が、こういった新見込みはあるものの、いずれも理論的に交差反応性しい技術で感染防御できると新たな可能性が開けて抗体の産生については評価されておらず、DENVくると思う。

日生研たより

14（60）

学会参加記

66th Western Poultry Disease Conference（WPDC）
場所：アメリカ、カリフォルニア州
会期：2017 年 3 月 20 日～ 22 日
永野哲司
2017 年 3 月 20 日から 22 日にかけてアメリカ・がありました。引き続き「診断（続き）」では、Dr.

カリフォルニア州サクラメントで開催された 66th

Leumg が次世代 DNA シーケンシングの鶏病診断へ

Western Poultry Disease Conference（WPDC）に参の 応 用 に つ い て 講 演 を し ま し た。そ の 他 に は、加しましたので、その概要について紹介します。
会 議 は、Dr. Gabriel Senties – Cue [Turlock

Salmonella Enteritidis（SE） 不活化ワクチンの副反Laboratory, California Animal Health & Food Safety,

いこと、発育停止卵の原因には腸球菌が関与してい応が IB ワクチンのテイクには深刻な影響を与えな

UC DAVIS] の主催でサクラメント市内のダウンタ
ウンにある Holiday Inn Capitol Plaza（図 1）で 2 日半にかけて開催されました（図 2、3）。招待講演 5
題及び口頭発表 57 題はそれぞれのトピックス毎に10 のセッションに分かれて発表され、ポスター発
表 14 題は開催期間中ずっと休憩室に掲示されながら、2 日目午前中のコーヒーブレイクの時にディス
カッションタイムが設けられていました。各セッ
ションのトピックス及び全体的なプログラムを表 1
で紹介していますので、そのセッション毎に概要を紹介していきます。
◇第一日目：「診断」では、Dr.Hoerr が招待講演で今後の診断方法の改良について独自の見解を紹介して い た。そ の 他 に は、1 つ の ス ワ ブ 検 体 か ら
Mycoplasma gallisepticum（MG）・M. synoviae（MS）・伝染性喉頭気管炎（ILT）ウイルスを同時に検出できる PCR 法、検出時間 30 秒で検出感度が101CFU/mL のサルモネラ検出法、より効率的な伝染性気管支炎（IB）ワクチンのテイク確認方法、IB
ウイルス抗体をより高感度に検出するキットの紹介

図1

Holiday Inn Capitol Plaza

図2 6
 6th Western Poultry Disease Conference
Proceeding

図3

学会会場

63（4），2017

15（61）

ることを MALDI/TOFMS で証明したこと、サンプ

れ ま し た。WPDC AWARDS の 昼 食 会 後 の 午 後 のル中に 10 コピーの遺伝子が存在すれば検出できるセッションは初めにセッション I「ワクチネーショ

鳥インフルエンザ （AI）ウイルス検出用のリアル

ン、飼養管理」を、その後セッションⅡ「細菌感染タ イ ム PCR キ ット、California Animal Health and症」を聴講しました。
「ワクチネーション、飼養管

Food Laboratory における診断サービスの内容につ理」では、Ceva 社の IBron ワクチン（Ga08 株）の

い て 紹 介 が あ り ま し た。
「AI、ニ ューカ ッス ル 病

テイク確認は気管スワブよりも Cloanal Cleft スワブ（ND）」では、メリーランド州及びミネソタ州でのが高感度であることが紹介されました。さらに、シ

高病原性 AI 発生事例について詳細な報告がなされデロフォアレセプターとポリンを抗原とした家きんました。さらに、高病原性 AI と低病原性 AI の薬剤

コレラに対するオイルアジュバントワクチンの有効感受性に関する報告、ND ウイルスの HN タンパク性と、シデロフォアレセプターを抗原としたサルモ

は多様性が高くウイルスの増殖にも関与しているこ

ネラオイルアジュバントワクチンの有効性が紹介さとが紹介されました。
「ND、IB、伝染性ファブリキれました。
「細菌感染症」では、ミネソタ州で分離

ウス嚢病（IBD）、ILT、マレック病（MD）」では、されたカンピロバクター分離株が薬剤耐性と分子疫

ND ウイルスの F タンパク、HN タンパク、L タン学で幾つかのグループに分けられたこと、オースト

パク及び NP タンパクと病原性との関連性が紹介さラリアのコマーシャルブロイラーでは 14 日齢及びれ、IB ウイルスに感受性又は抵抗性を示す鶏で IgA

21 日齢でカンピロバクターの汚染が広がっているの分泌に差が認められること、インディアナ州におこと、ミシシッピ州のブロイラー農場で分離された

いてブロイラーで発生した ILT がレイヤーに拡大

サルモネラの多くの株が 5 〜 9 薬剤に耐性であった

した事例、MD ワクチンが鶏貧血ウイルス（CAV）

こと、バチルス属菌を含有する生菌製剤 Gallipro をに汚染されていたことを発端としたアルゼンチンでin ovo で投与してもヒナに対して安全で孵化後はエの CAV 感染事例などについて発表がありました。

ンテロコッカスの腸管内定着を抑制する効果を示す◇第二日目：「封入体肝炎（IBH）、アストロウイル

ことが発表されました。また、庭先養鶏などで飼育

ス」では、Dr.Cardona が疾病予防と生産効率をバされるペット鶏を診療する獣医師の業務などについランス良く維持させることが生産現場では如何に難ても紹介されました。

しいかを詳細に講演しました。さらに、ジョージア◇第三日目：「寄生虫、疫学」では、Dr. Mullens が州での IBH 発生事例を調べると血清型 7 及び 11 主吸血原虫の生態について詳細で総説的な講演を行い

体から 8a 及び 8b 主体に流行ウイルスが移行してました。その他には、コクシジウムワクチン投与方いること、アデノウイルス血清型 8b 及び 11 で作法の改良として新しい組成のゲルを用いた方法がよ製した生及び不活化ワクチンがホモ血清型だけでなり効果的にワクチンテイクさせることが紹介され、くヘテロ血清型に対しても有効であったこと、アスまたオレガノ抽出物を飼料添加することでコクシジ

トロウイルス B 群の特定のサブグループが White

ウムの糞便中 OPG を低減することに成功した事例

Chick 病に関係していることが ELISA を用いた種が紹介されました。

鶏の調査で示唆されたことなどが発表されました。

◇ポスター発表：ブロイラーでの食塩中毒事例、メ「栄養学、レオウイルス」では Dr.Mireles が、有機キシコでの封入体肝炎事例、ND 及び IB ワクチン農法の定義やガイドラインについて講演し、幾つかを投与した鶏の IgA の定量解析、ウズラにおいて致の問題点を提起しました。その他には、ワクチンを死性が高かった大腸菌症事例、核酸を卵内接種した

投与していた種鶏群で発生したカリフォルニア州に

ヒナの孵化後のマクロファージの反応性に関する検おける変異株を原因としたレオウイルス感染事例、討、強毒株に対する Vectormune ND の有用性、庭

カナダのブロイラーから分離されるレオウイルスを先養鶏に関する幾つかの情報などが紹介されました。

クラスター解析した結果、クラスター 2、4、5 及び 6の野外ウイルスは現行ワクチンでは防除できないことが判明したこと、近年ジョージア州で分離される

所感

レオウイルス野外株が S1 タンパクのシーケンスで私自身が WPDC に参加するのは、56th のラスベ

6 つに分類されてそれぞれの抗原性も異なっている

ガス開催、58th のサクラメント開催を含めて 3 回

こと、カリフォルニア州で分離されたレオウイルス

目となりました。8 年前にサクラメントで開催されを分子遺伝学的に解析したところ細かく幾つかのクた時と同じ会場だったので、当時ポスター発表したラスターや遺伝子型に分類されたことなどが報告さ時に英語での質疑応答が大変だった事を思い出しま日生研たより16（62）

した。当時もそうでしたが、WPDC はアメリカ、カナダ及びメキシコを中心とした鶏病・養鶏獣医師の集まりで、学会と言うよりも顔見知り獣医師が情報交換に集まった勉強会の様なアットホームな雰囲
気を感じます。発表される演題も、最先端の研究や解析ではなく、現地調査の報告やより実践的な検討に関する紹介が中心で、臨床的な知識・情報の収集には良い機会だと思います。次回 67th WPDC は、
2018 年 4 月 15 〜 18 日の日程でアメリカ・ユタ州・
ソルトレイクシティのソルトレイクシティ・マリ
オット・シティ・センターで開催されます。

表 1 プログラム全体と各セッション名
月 日
時 間
テーマ
3 月 20 日 7:50
Welcome ; Opening Remarks
8:00-9:45
診断
10:15-12:00 診断（続き）
13:30-15:00 鳥インフルエンザ、ニューカッスル病
15:30-16:45 ニューカッスル病、伝染性気管支炎、伝染性ファブリキウス嚢病、伝染性喉頭気管炎、マレック病
18:00
Welcome Reception
3 月 21 日 8:00-9:45
封入体肝炎、アストロウイルス
10:15-12:00 栄養学、 レオウイルス
12:00-13:30 WPDC Awards Luncheon
Session I
Session II
13:30-15:00 症例報告、
ワクチネーション、
細菌感染症
飼養管理
15:30-16:45 細菌感染症
飼養管理、
防疫対策
3 月 22 日 8:00-10:45 寄生虫、疫学
10:45
Concluding Remarks; Adjourn

学会参加記

The 8th Asian Pig Veterinary Society Congress
場所：中国、武漢
会期：2017 年 5 月 12 日～ 5 月 15 日
大嶋概要
2017 年 5 月 12 日から 15 日に中華人民共和国（中国）の武漢市で開催されたアジア養豚学会（The
8th Asian Pig Veterinary Society Congress（APVS））に参加する機会を得ましたので、その概要について紹介いたします。
武漢市は中国、湖北省の東部に位置しており、経済的重要性から大幅な自治権を持つ副省級市に指定されている。日本からの渡航に際しては、成田空港から武漢天河国際空港まで約 4 時間（時差は約 1 時間）と、移動の負担はほとんど感じない近さであった。武漢天河国際空港に到着後、東湖付近にある学会会場まで約 40 km をタクシーで移動した。その途中、揚子江（長江）を渡す二七長江大橋の上から見たその川の大きさと雄大さは、自分が今中国にいるということを強く感じさせる印象的なできごとであった。学会で用意してもらったホテル（インターナショナルホテルチューティアンガンドン）から会場までは約 1.5 km の距離にあり、会場とホテル間
はシャトルバスが運行されていた。周辺の治安も良
く、会場からホテルまでの緑豊かな道のりを毎日歩
いて移動することが可能であった（写真 1）。
学会会場は、東湖国際会議場中心（写真 2）で行篤

われ、中国全土から参加者が集まったこともあり、
参加者約 1,200 人と非常に活気のある学会であった。
学会会場での実質的運営については華中農業大学の学生が中心となって運営されている様であった。個人的な印象としては約 7 割が中国からの参加者であり、残りが他のアジアやヨーロッパからの参加者という印象であった。企業ブースは、日本でも聞きなれた海外企業から中国の国内企業まで 20 程度の企業が出展しており、期間中を通して多くの人で賑わっていた。
講演会場は約 1,200 人収容可能な大ホールが 1 つと 400 人程度収容可能な小ホールが 3 つ用意されて

写真1

学会会場とホテルの間の道のり63（4），2017

17（63）

ち直したものの、農家数は、減少傾向にあり養豚の大規模化が進んでいるとのことであった。韓国内で消費される肉としては豚肉が最も多いこともあり、韓国内の 1 人当たりの豚肉消費量は年々増加している（2011 年 の 約 1.2 倍）。疾 病 と し て は、PRRS が最も注目されており、年間でかなりの損失を生じてい る。細 菌 性 疾 病 で は、浮 腫 病 や Actinobacillus
pleuropneumoniae（App）の 情 報 提 供 が 行 わ れ、
写真2

East Lake International Conference Center（学会会場）の入口

おり、朝は大ホールのみで講演が行われ、昼食後に小ホールで並行してセッションが行われた。ポス
ター発表は 235 題であり、発表会場はメインの講演が行われている会場の上の 2 階に設置されていた。
学会では、養豚に関する様々な報告が行われ、主には微生物由来の疾病であり、その疾病に対するワクチン及び抗生物質の利用について報告されていた（表 1）。
学会初日にリージョンレポートとして中国、日本、
大韓民国（韓国）、フィリピン、タイ、ベトナム及
び台湾から発表された各国の疾病状況や、養豚ある
いは豚肉に関する経済情報について、本稿でその概要（特に中国、韓国、フィリピン、ベトナム及び台湾）を紹介する。

App については、分離株中の血清型の割合が 2008
年〜 2010 年頃は 5 型、2 型、1 型の順で分離率が高かったのに対して、近年では 1 型が非常に多く認められる様になったという発表が個人的に興味深かった。また、記憶に新しいこととして、2017 年に口蹄疫の再発があり、韓国内での伝播の経緯等が発表された。
フィリピンでは、豚肉の需要は高く、生産量は年々増加傾向にあり、その増加に関するロードマッ
プが示されていた。疾病としてはやはり、PRRS が注目されており、次いで、CSF や PCV2 といったウ
イルス性疾病があがっていた。また、発表の多くを薬剤耐性菌の問題にさいており、その対策に力を入れていることが伺われた。
ベトナムでは、肉製品（鶏、豚及び牛）全体の消費量が増加傾向にあり、豚肉の消費量はその半分を占める割合であった。一方、その kg 当たりの生産
表 1 プログラムの概要
月日

学会内容紹介中国では、豚の飼養頭数は 2015 〜 2016 年で約 4億頭であり、若干減少傾向にある様であった。疾病
としては、狂犬病、豚コレラ（CSF）、豚繁殖呼吸障害症候群（PRRS）、豚流行性下痢（PED）、豚伝
染性胃腸炎（TGE）、豚ロタウイルス（PoRV）及び豚サーコウイルス 2 型（PCV2）等のウイルス性の疾病についての発表に多くの時間が割かれていた。
PCV2 については遺伝子型の情報も提供され、2015〜 2016 年にかけて割合の変化はあるものの、2b 及
び 2d が 70％以上の割合で検出されていた。また、新たな遺伝子型である PCV3 が 2017 年に検出された こ と も 報 告 さ れ た。細 菌 性 疾 病 と し て は、Streptococcus suis（S. suis） 及 び Haemophilus
parasuis（Hps）の血清型の分布について述べられ、
S. suis では血清型 2 が最も多く、次いで 7、9、3、1
及び 5 が認められ、Hps では血清型 5 が最も多く、次いで 4、13、12、14、10 及び 1 が認められるとのことであった。
韓国では、2011 年の口蹄疫によって、農家数及
び豚の飼養頭数が減少し、その後豚の飼養頭数は持

時間

テーマ

5 月 12 日 15:30-17:30 APVS 委員会
18:30-20:30 ウェルカムディナー
5 月 13 日 9:00-12:00 オープニングセレモニー
キーノートプレゼンテーション
カントリー / リージョンレポート（中国、日本、韓国、フィリピン、タイ、ベトナム、台湾）
13:30-15:30 パラレルセッション
トピック 1：呼吸器疾病
トピック 2：消化器疾病トピック 3：繁殖疾病
16:00-18:00 サテライトミーティング
5 月 14 日 8:30-12:00 プレナリーセッション
1. PRRS（中国での現状）
2. S. suis（疫学と病原性について）
3. PCV（拡大と変化について）
4. 疾病管理の改善について
13:30-15:30 トピック 1：ウイルス性疾病
トピック 2：細菌性疾病
トピック 3：豚寄生虫疾病及びその他
16:00-18:00 サテライトミーティング
5 月 15 日 9:30-11:50 プレナリーセッション
1. PED の制御について
2. 狂犬病の予防及び制御
3. 人獣共通感染症の出現と再興
4. バイオセキュリティーを用いた疾病制御と予防
13:30-16:00 1. 食用動物への抗生物質の使用
2. バイオセキュリティーを利用した抗菌剤使用量の削減
3. 中国での養豚産業の拡大
16:20-17:30 クロージングセレモニー
18:00-19:00 ファラウェルディナー

日生研たより

18（64）

コストは他国と比べて高く、今後の課題であると思われる。養豚産業においても 10 頭程度のバック
ヤード養豚から、小〜中規模（母豚 5 〜 20 頭、肥育豚 30 〜 100 頭）の養豚へとシフトしている様であり、豚肉の消費量の推移から考えても、今後の養豚産業は他国同様の大規模養豚へとシフトして行くと考えられる。疾病については、2016 年の口蹄疫のアウトブレイク（政府からの補助によってワクチン接種が行われた）、PRRS（ヨーロッパ型及び北米型）、PED 及び TGE ウイルスの陽性率、PCV2 の陽性率等のウイルス性疾病について現状が報告された。
PCV2 では、その陽性率がベトナムの北部（少ない）と南部（多い）で異なるといった発表であった。

PoRV、育成豚では PRRS、PCV2、マイコプラズマ
等に加え、それらの複合疾病としての豚呼吸器病症
候群、豚コレラ、口蹄疫等が挙げられた。

台湾では、1 人当たりの肉製品（豚肉含む）の消費量に大きな変化はなく、豚の飼養頭数は近年減少している様であった。豚の生産性に影響を与える疾病として繁殖に関するものでは PRRS、パルボウイ
ルス及び日本脳炎、子豚では TGE、大腸菌、PED、手厚い対応をして頂いたことをこの場を借りて御礼申し上げたいと思います。
次回の APVS は 2019 年に韓国、釜山で行われる予定であり、すでにホームページがアップされています。

所感本学会の開催において、私自身は App ワクチンに関する研究成果をポスター発表する機会を得ることができ、その発表準備、外国への渡航、発表と普段経験することができない、非常に刺激的な時間を過ごすことができました。学会初日の登録の際には自分自身の不備もあり、運営の方々（おそらく華中
農業大学の学生の方と思われる）に非常に丁寧且つ、お詫びと訂正日生研たより 2017 年 7 月号の記載に誤りがありました。正しくは以下の通りです。
P.8（誤）mAbs 及び Apx Ⅰを組み合わせた（正）Mabs 及び Apx Ⅰを組み合わせたP.9（誤）
Shimatsu Y1）, Horii W1）, Nunoya T1）, Iwata A1）, Fan J1）, Ozawa M1）.
1）Nippon Institute for Biological Science, 9 – 2221 – 1 Shinmachi, Ome, Tokyo 198 – 0024, Japan.
（正）Shimatsu Y1）, Horii W1）, Nunoya T2）, Iwata A2）, Fan J3）, Ozawa M4）.
1）NIBS Laboratory Animal Research Station, Nippon Institute for Biological Science, 3331 – 114
Kamisasao, Kobuchisawa, Hokuto, Yamanashi 408 – 0041, Japan
2）Headquarters, Nippon Institute for Biological Science, 9 – 2221 – 1 Shinmachi, Ome, Tokyo 198 –0024, Japan3）Department of Molecular Pathology, Interdisciplinary Graduate School of Medicine and Engineering,
University of Yamanashi, 1110 Shimokato, Chuo, Yamanashi 409 – 3898, Japan4）Department of Biochemistry and Molecular Biology, Graduate School of Medical and Dental
Sciences, Kagoshima University, 8 – 35 – 1 Sakuragaoka, Kagoshima – city, Kagoshima 890 – 8520, Japan
P.17（誤）藤原哲夫（正）藤井哲夫
読者の皆様ならびに関係各位にご迷惑をおかけしましたことをお詫びするとともに、ここに訂正させて頂きます。

日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（年 4 回発行）

（通巻 605 号） 平成 29 年 9 月 25 日印刷
発行所〒 198–0024

生命の「共生・調和」を理念とし、生命体の豊かな明日と、研究の永続性を願う

平成 29 年 10 月 1 日発行（第 63 巻第 4 号）

一般財団法人 日本生物科学研究所
東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL：0428（33）1520（企画学術部） FAX：0428（33）1036
http://nibs.lin.gr.jp/

気持ちを快いリズムに整え、視覚化したものです。カラーは生命の源、水を表す「青」としています。

編集室

表紙題字は故中村稕治博士の揮毫

印刷所

発行人

草薙公一

委

員／近内将記（委員長）、手島香保、小野浩輝

事務／企画学術部

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