2013 MARCH
No. 579

2013 年（平成 25 年）3 月号

第 59 巻 第 2 号（通巻 579 号）

挨拶・巻頭言思い出に浸りながら今を考えてみた........................................草 薙 公 一（ 2 ）獣医病理学研修会
第 52 回 No. 1046 ハクチョウの心臓.............北海道大学 比較病理学教室（ 3 ）第 52 回 No. 1053 ウサギの肝臓........................................... 摂南大学（ 4 ）研究報告
型特異的 PCR を用いた国内における豚サーコウイルス 2a、2b 型の検出........................................平修（ 5 ）

論文紹介
豚の肺炎病変における Torque teno sus
viruses の探索的研究 ......鈴 木 敬 之（ 8 ）一般財団法人 日本生物科学研究所
http://nibs.lin.gr.jp/

2（2）

日生研たより思い出に浸りながら今を考えてみた
草薙公一
正月気分も抜けかけた 1 月のある日曜日、ぼんやりと目的もなくテレビのリモコンを押しながら番組を変えているとラグビーの試合中継に目がとまった。全国大学ラグビー選手権決勝の中継番組であった。国立大学が決勝まで駒を進め、「初の選手権獲得」の懸かった試合であった。いつの間にか画面はそのままとなり私は試合に入り込んでいたようである。後で聞いた話であるが「観客のような、解説者のような、監督のよ
うな、または選手のような、とにかく何時になく熱い言葉を発し続けていた」とは傍らで一緒に見ていた家族からの少々驚きの感想であった。
フォワードの平均体重差 10 キログラムのハンディーをどのように克服するのかに興味がもたれた。一般
的にラグビーでは重いフォワードを有する側が有利である。押し込む力が強くなるためラックやモールでのボールコントロールに余裕が生まれ次のプレーが組み立てやすくなり、ボール支配率に歴然と差が生ずるからである。しかしながら、試合ではどのような展開であれ後半に入ると必ず動きが鈍くなる。そこをどのように凌ぐか、または攻めるかで勝敗が分かれることもあり、戦略とそれに伴った最後まで走り続ける「体力と気力」のスタミナが結果を左右する。この試合結果は結局のところ、「初の選手権獲得」とはならなかったが試合後半の成績はほぼ互角であり、10 キログラムのハンディーを縮めた事を物語っていた。ちなみに同じカードでの対抗戦グループ内成績は逆の結果となっていた。
久々の試合観戦に高揚感を覚えつつ、この時、ラグビーを経験した 40 年前の思い出にも浸っていた。私がまだ目標もはっきりと定まらず、貴重な時間をひたすら浪費していた頃である。高校時代の先輩が心配し、一風変わったラグビークラブに誘ってくれた。それがラグビーとの出会いであった。今ではすっかり遠ざ
かってしまい記憶も朧げになってしまったが、それはまだ日本では珍しいクラブ形式のチームであったと思う。当時、神田駿河台に校舎があった私立大学の体育授業に起源を発し、インターカレッジの大学生チームと社会人チームで構成されていた。ラグビーを楽しむという目的の下に、互いに考えるそしてフォローする
プレーを通して、更には人間関係や人生をも豊にしていきたいとの創立理念を持ったクラブであった。自主性と上級生・先輩の率先実行が重視され、如何にして不慣れな下級生・後輩をなじませ、気持ちよくチームにとけ込ませるかで上級生のリーダシップが問われていたと思う。通常の練習はもとより、合宿においても事前のグランド整備、食事・掃除を含めた一切が上級生の運営に任されていた。今話題になっている体育会系の暴力問題とは全く無縁の世界であり、スポーツを楽しむと共にすばらしい人間関係の中に身を置かせてもらっていたと思う。しかしながら、練習環境は厳しいものがあり、専用グランドが無いため、当時は練馬にあった大学の体育会グランドや他大学のグランドなどを借りながら、日曜日に週 1 回の合同練習を行っていた。それ以外は希望者のみのトレーニングを千駄ヶ谷の陸上トラックなどで行っていただけであった。このような状況ではあったが、真剣にトップを目指そうとする者からスポーツ愛好を求める者まで様々な考えを持った人間が集まっており、それぞれの思いに従って自主的に練習に励んでいた。「楽しむ」という同じ目的の下に集まり、互いの考えを尊重しあいながら切磋琢磨する雰囲気は非常に心地良いものであった。私などは冬になるとほとんど練習に参加せず 70％に届かない出席率であったため、ラガーマンと言うには本当におこがましく、恥ずかしい限りであったが、そんな自分をも受入れてくれるクラブであった。他大学の体育会クラブとの定期戦もあり、大学選手権で何度も優勝し今でもベスト 4 に顔を出す強豪校との定期戦も行われていた。当時は、一軍戦ではかなわなかったものの二軍戦では勝利していた記憶がある。練習時間、
練習場所、また資金も含め数々のハンディーを抱えていたクラブであったが、それを乗り越え確かな実績を積み重ねていた。昨今クラブスポーツの発展が注目され行政も力を入れ始めているが既に 40 年以上も前にその一つの萌芽が示され、確かな結果を残していたのだと思う。
目標を明確にし、それに向かう多様な人材や多様な考え方を受け入れる寛容さを養い、共に考え工夫していく。そして最後まで走り続ける力を持てば「10 キログラムのハンディー」、「時間や場所のハンディー」
も乗り越えられる。この時、そんな思いを感じていた。
取り留めもない思い出話になってしまったが、現実に戻って昨今の社会で起こる様々な変化への対応策を考える時、この中に様々なヒントが見えるように思えた。国内外では大きな動きの中で多様な方向が示され、私たちはその判断に窮する事もある。その中で捨てるもの、残すもの、そして新たに創り出すもの、その選択を誤ることはできない。盤石とは言い難い状況の中でも、前へと進むためにこの変化を乗り越える事が求められ、その方策を考えなければならない時もある。同じ様な状況は、政治、経済に限らず我々の関わる研究なども含めた様々な分野において生ずるであろう。こうした中でそれではどのようにして目標を持つか。
どのようにして多様な考えを一つにするか。どのようにして考え工夫するか。そしてどのようにして最後まで走り続けるか。
考えるに悩ましい事である。答えを得るまでには至らなかったが、当時は気づいていなかったこの思い出の中にその指標となる事柄が多く含まれているように思えた。
テレビの番組から過去の思い出へ、そして現実へと立ち返り、あれこれと考えを巡らした一日であった。
（副理事長）

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ハクチョウの心臓
北海道大学

比較病理学教室

第 52 回獣医病理学研修会 No. 1046

動物：野生オオハクチョウの幼鳥
臨床事項：本症例は 2011 年 1 月に北海道浜中町で衰弱しているところを発見され、安楽殺された。簡易検査
キットにて口腔スワブからインフルエンザウイルス陽性反応が得られたため、本学獣医学研究科 BSL3 室内に搬入し剖検された。
肉眼所見：剖検時、膵臓には最大径 8 mm の壊死巣が散在しており、肺には軽度の水腫が認められた。
組織所見：心室壁全域にかけて、多病巣性から癒合性の病巣が認められた（図 1）。病巣は心筋細胞の壊死とマ
クロファージ、リンパ球の浸潤により構成されていた（図 2）。また、心室壁内に線虫の成体が雌雄 1 対で寄生しており（図 3）、その子宮内には多数の子虫（ミクロフィラリア）が観察された（図 3、挿入図）。虫体に対する炎症性細胞反応は軽微であった。
診断：1. 非化膿性心筋炎、多病巣性から癒合性、重度
2. ミクロフィラリアを内包する線虫成体の寄生
考察：本症例では心筋炎に加えて壊死性膵炎および非化膿性脳炎も認められた。免疫組織化学的検索によりこ
れら病巣内にインフルエンザウイルス抗原が検出された（図 4）。また、気管、肺、結腸、脳から H5N1 型のイン
フルエンザウイルスが分離された。以上より、本症例はインフルエンザウイルスの全身感染を起こしていたことが判明した。線虫の寄生が認められた臓器は心臓のみであり、線虫の寄生部位および形態は過去に報告されている Sarconema eurycerca に一致した。本フィラリア線虫
はシラミの吸血によって媒介され、致死的感染例も報告されているが、病原性の詳細は不明である。本症例はイ
ンフルエンザウイルスの全身感染例であり、フィラリアの寄生は偶発所見であると推定した。集会において、配布切片の一部では心筋炎の病巣内にミクロフィラリアが確認されており、これらミクロフィラリアによる心筋炎
誘発の可能性も考慮するべきである点が指摘された。
（寸田祐嗣）
参考文献：
1. Irwin, J. C. 1975. Mortality in whistling swans at lale St.
Clair, Ontario. J. Wildl. Dis. 11 : 8 – 12.
2. Wobeser, G. A. 1981. Metazoan parasites. pp. 129 – 131.
In : Diseases of wild waterfowl. Plenum, New York.
3. Rebecca, A. C. 1999. Heartworm of swans and geese.
In : Field manual of wildlife diseases（Friend, M. andFranson, J.C. eds.）, USGS, National Wildlife HealthCenter, Madison.
4. Woo, G. H., Jean, Y. H., Bak, E. J., Kang, S., Roh, I. S.,
Lee, K. H., Hwang, E. K. and Lee, O. S. 2010. Myocarditisby nematodes infection, presumably Sarconema eurycerca,
in a wild whooper swan（Cygnus cygnus）in Korea. J. Vet.
Med. Sci. 72 : 1233 – 1235.

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日生研たよりウサギの肝臓摂南大学

第 52 回獣医病理学研修会 No. 1053

動物：ウサギ、ホーランドロップ、雌（未避妊）、2 歳8 ヶ月。
臨床事項：生後 10 ヶ月頃より GPT と ALP の高値を示し、肝障害の治療を続けていた。2 歳 6 ヶ月頃から軽度の黄疸と腹水の貯留を認めた。原因追及の為に肝生検が行われた。
組織所見：グリソン鞘周囲および小葉内において大小不同な胆管の増生が瀰漫性に認められた。グリソン鞘周囲
では、管腔および基底膜の明瞭な細胆管の増生が主体であり、これらは小型細胞で構成されていた（図 1）。グ
リソン鞘周囲以外の小葉内では、小葉を置換するように
大小不同、管腔や基底膜の不整な胆管様構造が瀰漫性に認められた。これら胆管様構造は、細胆管を構成しているものと同様の小型細胞と肝細胞に類する大型細胞で形成されていた（図 2）。その他、類洞や細胞周囲に沿って膠原線維の増生がみられた（図 3）。免疫染色を用いて胆管様構造の由来について検索した。CK7 において組織を全置換するほどの広範囲で胆管形成が確認された（図 4）。CK7 では、主に細胆管と胆管様構造を形成する
小型細胞で強陽性を示し、大型細胞では陰性であった。
CK8/18、CK19（図 5）、CK20 では、いずれの抗体でも細胆管と胆管様構造を形成する小型細胞で強陽性、大型細胞で陽性を示した。また、anti-Hepatocyte 抗体では、胆管様構造を形成しない弧在性の肝細胞にのみ強陽性を示した。以上より胆管様構造の小型細胞は細胆管と同様の染色性を示し、大型細胞は胆管上皮細胞と肝細胞の 2つの表現形質を有することが示唆された。
診断：類洞の線維化を伴う汎小葉性細胆管反応
考察：本例では、組織を全置換するほどの顕著な胆管増生が認められた。増生する胆管は、所見から既存の胆管による過形成と肝細胞からの胆管化生が混在していると考えられた。近年、細胆管反応という用語が用いられており、Desmet はこれを細胞の由来および形成部位から細分類している。これによると細胆管反応は、胆管過形成および胆管化生のいずれをも包括するとしている。
よって、本例の診断名は増生する胆管の 2 つの起源を考慮して、単なる胆管過形成ではなく、細胆管反応とする
ことが適当と考えられた。一方、細胆管反応の発生原因
としては多岐にわたる。本例では、胆管炎を示唆する明らかな所見はみられず、炎症も軽度であり非特異的であると考えられた。よって、本例の形成原因について確定するには至らなかった。
（鈴木 学）
参考文献：
1. Desmet, V. J. 2011. Ductal plates in hepatic ductularreactions. Hypothesis and implications. I. Types ofductular reaction reconsidered. Virchows Arch. 458 : 251 –259.

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5（21）

研究報告

型特異的 PCR を用いた国内における
豚サーコウイルス 2a、2b 型の検出平修[9]。今回我々は国内における PCV2 遺伝子型の浸潤状況並びに両者を型別する PCR 法の開発を試み

1. はじめに豚サーコウイルス 2 型（PCV2）は養豚産業に多たので、ここに報告する。

大なる損害を与えるウイルスとして知られており、
離乳後多臓器性発育不良症候群（PMWS）の起因の一つと考えられている [1]。PCV2 を起因とする

2. 材料及び方法

一連の病態（豚皮膚炎腎症症候群：PDNS、豚呼吸①野外検体

器複合感染症：PRDC 等）が多岐に渡る事より、近2006 年から 2008 年にかけて弊所にて実施した病

年では発育・呼吸器・繁殖障害等を呈する病態を豚性鑑定材料のうち、PMWS が疑われる 5 県（秋田サーコウイルス関連疾病（PCVAD）と呼称する動県 9 検体、茨城県 5 検体、千葉県 8 検体、愛媛県 2

きも見受けられる [2]。

検体および宮崎県 14 検体）、15 農場、38 検体の肺PCV2 はエンベロープの無い約 1.77 kb の小型一（30 – 60 日齢豚）を用いた。

本鎖環状 DNA ウイルスであり、レプリケーション② PCV2 ORF2 遺伝子検出を担う ORF1 とカプシド蛋白をコードする ORF2 の常法に従って 10％肺乳剤より DNA を抽出した後二つのゲノムが全体の 93％を占める [3]。分子系統に、表 1 に示した PCV2 ORF2 全域を増幅するプラ

樹解析により PCV2 は二つの遺伝子型に分かれ、イマー（939/33）を用いて PCR に供した [10]。検1768 塩 基 で 構 成 さ れ る PCV2a と 1767 塩 基 の出した 34 検体の内、10 検体のシークエンスを行い、PCV2b に大別される。両者は約 93％の遺伝子相同

参照遺伝子（PCV2a : AB072302, AY180397, AY256455

性を有しているが、その病原性との関連性は解って

and AY424401、PCV2b: AY321990, AY484407,

いない [4 – 7]。従来 PCV2a が流行していたアメリ

AY484413, AY556477 and AY691169）とともに分子

カ・カナダにおいて、流行株が PCV2b に置き換わ系統樹を作成した。

る現象が認められており、本事象と共に PMWS 被③型特異的 PCR

害が増大したため、PCV2b を強毒株とする報告も得られたシークエンスを元に PCV2a、PCV2b のあるが、病原性の差異は遺伝子型と関連するもので両者を区別する PCR プライマーを構築した。表 1は無いとの報告もある [8]。

に 示す 様に 両遺 伝子 型の 共通 上流 プラ イマ ーを

日本では PCV2a が流行株として定着していたが、PCV2AB – F、PCV2a 特異的下流プライマーとして近年になり急速に PCV2b の検出が報告されている

PCV2A – R、PCV2b 特 異 的 下 流 プ ラ イ マ ー と し て

表1

型別及びシークエンスプライマー

RegionPosition

PrimerSequence

ORF2

939‑958939

5̀‑ GCCGAGGTGCTGCCGCT ‑3̀

ORF2

33‑17

33

5̀‑ CAGTTCGTCACCCTTTCCCC ‑3̀

ORF2

975‑994

PCV2AB‑F

5̀‑ CCATATGAAATAAATTACTG ‑3̀

ORF2

1470‑1489

PCV2A‑R

5̀‑ TGATGAGATTTAATATTGAC ‑3̀

ORF2

1504‑1524

PCV2B‑R

5̀‑ AGGAGGGGGCTCAAACCCCC ‑3̀6（22）

日生研たよりPCV2B – R を用いた。増幅推測サイズはそれぞれ、
PCV2a が 550 bp、PCV2b が 515 bp であった。

3. 結果

図 2 型別プライマーを用いた PCV2a、PCV2b の検出① PCV2 ORF2 シークエンスおよび分子系統樹

プ ラ イ マ ーセ ット : PVC2AB-F/PCV2A-R（lane 1‑10）、PCV2AB‑F/PCV2B‑R（lane 11‑20）。lane 1, AB462383 ; lane 2,
AB462385 ; lane 3, AB462386 ; lane 4, AB462388 ; lane 5,
AB462382 ; lane 6, AB462384 ; l ane 7, AB462387 ; lane 8,
AB462389 ; lane 9, AB462390 ; lane 10, AB462391 ; lane 11,
AB462383 ; lane 12, AB462385 ; lane 13, AB462386 ; lane
14, AB462388 ; lane 15, AB462382 ; lane 16, AB462384 ; lane
17, AB462387 ; lane 18, AB462389 ; lane 19, AB462390 ; lane
20, AB462391 and lane 21, negative control.

PCV2 遺伝子は 38 検体中 34 検体で陽性（89.5％）となり、PCV1 遺伝子に関しては全ての検体から検出された。得られた陽性検体の中から 10 検体（秋田県：1 検体、茨城県：2 検体、千葉県：3 検体、
宮崎県：4 検体）を選出しシークエンスに供し、分子系統樹を作成した（図 1）結果、今回得られた
PCV2 遺伝子は PCV2a、PCV2b の遺伝子型に大別

別 さ れ た 検 体 は PCV2AB – F/PCV2B – R の プ ラ イ

される事が明らかとなった (accession numbers for

マーセットのみで増幅された。両プライマーセット

PCV/2a：AB462383, AB462385, AB462386 andは PCV1 遺伝子を検出しなかった。

AB462388, and for PCV/2b：AB462382, AB462384,
AB462387, AB462389, AB462390 and AB462391)。
②型別 PCR

4. 考察

両者を区別する型別プライマーの有用性を確認す

PMWS による養豚界への被害は世界中で根強いるため、分子系統樹で大別された各検体を用いて再問題となっている [1、11、12]。日本国内において度 PCR を 行 っ た。図 2 に 示 す 様 に 分 子 系 統 樹 でPCV2 関連の PMWS が報告されたのは 1997 年の事

PCV2a に区別された検体は PCV2AB – F/PCV2A – R

であり [13]、その後の血清学的調査によって 90％のプライマーセットのみで増幅され、PCV2b に区以上の豚が抗体を有している事が報告されている[14]。現在までに PCV2 遺伝子検出方法や診断法、ワクチン等、種々の報告がされてきており、Horlen
ら [3] によって PCV2 遺伝子型別 PCR 法も報告されているが、PCV2a、PCV2b 両者を増幅サイズによって区別することは出来ない。本研究は国内における PCV2b の浸潤状況を調査すると共に、両遺伝子型を簡便に検出できる PCR 法の開発を目的とした。
国内各地域より採取した PMWS が疑われる肺検体から 89.5％で PCV2 遺伝子が検出され、分子系統
樹から国内では大きく二つの遺伝子型（PCV2a、PCV2b）が浸潤している事が明らかとなった。系統
樹解析に用いた検体数が少数である事より、さらなる調査の必要性が生じるが、国内では北日本では
PCV2a が、西日本では PCV2b が浸潤し、関東付近
では両遺伝子型が浸潤している事が示唆された（図3）。従来日本国内では PCV2a がドミナントとして

図 1 PCV2 ORF2 領 域 の 分 子 系 統 樹（Japan, JP.,
Hungary, HG., Taiwan, TW., Netherlands, NL., Austria,
AS., China, CH., France, FR. Bootstrap values wereindicated > 50% values only.）

考えられてきたが、本結果からアメリカ・カナダ [7、15、16] 同様に国内でも PCV2b が浸潤し、両遺伝子型の PCV2 が存在する事が明らかとなった。Hor-

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7（23）

ger the development of porcine dermatitis andnephropathy syndrome : a case – control study.
Vet. Microbiol. 99 : 203 – 214.

Akita prefecture
AB462383 ; PCV‑2a3. Horlen KP. 2007. A cluster of farms experiencing

East JapanWest Japan

severe porcine circovirus associated disease :Ibaraki prefecture
AB462385, AB462386 ; PCV‑2aClinical features and association with the PCV2b
genotype. Journal of Swine Health and Production

Chiba prefecture
AB462382, AB462387; PCV‑2b
AB462388 ; PCV‑2a

15 : 270 – 278.
4. Dupont K, Nielsen EO, Baekbo P, Larsen LE.

Miyazaki prefecture
AB462384, AB462389,
AB462390, AB462391; PCV‑2b

2008. Genomic analysis of PCV2 isolates from

図3

trol study supports a shift in genotypes with time.

国内における PCV2 の検出

Danish archives and a current PMWS case – conVet. Microbiol. 128 : 56 – 64.

len ら [3] は PCV2a と PCV2b の異なる病原性に関

5. Grierson SS, King DP, Wellenberg GJ, Banks M.

して報告しており、PCV2b 自体が強毒とする説と、

2004. Genome sequence analysis of 10 Dutch por-

PCV2a 感染によって得られた免疫機構を PCV2b がcine circovirus type 2（PCV – 2）isolates from a

免れる事によって病原性が現れるとする二つの仮説

PMWS case – control study. Res. Vet. Sci. 77 : 265を掲げている。このように現状では遺伝子型と抗原– 268.

型の関連性に関して種々の報告がされているが、解明には至っていない。

6. Olvera A, Cortey M, Segalés J. 2007. Molecular
evolution of porcine circovirus type 2 genomes :PCV2 両遺伝子型は 93％以上の相同性を有し、両phylogeny and clonality. Virology 357 : 175 – 185.

者を区別する配列は ORF2 領域に 33 箇所、ORF1

7. Cheung AK, Lager KM, Kohutyuk OI, Vincent

領域に 13 箇所存在し、最も特徴的な配列として

AL, Henry SC, Baker RB, Rowland RR, Dunham

1486 – 1496 に位置する PCV2a：AcC/aac/AAA/AT、AG. 2007. Detection of two porcine circovirus

PCV2b：TcA/aac/ccc/CG モチーフをマーカーとすtype 2 genotypic groups in United States swine

る報告もある [6, 7]。我々はこれらの特徴的な配列

herds. Arch. Virol. 152 : 1035 – 1044.

を元に、両遺伝子型を増幅サイズ（PCV2a：975 –8. Wiederkehr DD, Sydler T, Buergi E, Haessig M,

1489, PCV2b：975 – 1524）によって区別する事が出

Zimmermann D, Pospischil A, Brugnera E, Sidler

来るプライマーを構築し、従来シークエンスの必要

X. 2009. A new emerging genotype subgroupがあった型別を簡便な PCR 法によって検出するこwithin PCV – 2b dominates the PMWS epizooty inとに成功した。

Switzerland. Vet. Microbiol. 136 : 27 – 35.

今回の得られた成績を基に、国内での PCV2 遺伝

9. Takahagi Y, Nishiyama Y, Toki S, Yonekita T,子が浸潤状況を解析し、遺伝子型と病原性との関連

Morimatsu F, Murakami H. 2008. Genotypic性の解明が期待される。

change of porcine circovirus type 2 on Japanese
pig farms as revealed by restriction fragment
length polymorphism analysis. J. Vet. Sci. 70 : 603

参考文献– 606.

1. Chae C. 2005. A review of porcine circovirus 2 –10. Yang Z – Z, Shuai J – B, Dai X – J, Fang W – H.

associated syndromes and diseases. Vet. J.

2008. A survey on porcine circovirus type 2 infec-

169 : 326 – 336.

tion and phylogenetic analysis of its ORF2 gene

2. Wellenberg GJ, Stockhofe – Zurwieden N, de Jong
MF, Boersma WJA, Elbers ARW. 2004. Excessive
porcine circovirus type 2 antibody titres may trig-

in Hangzhou, Zhejiang Province, China. J. Zhejiang Univ. Sci. B 9 : 148 – 153.
11. Allan GM, McNeilly F, Kennedy S, Daft B, Clarke

8（24）

日生研たよりEG, Ellis JA, Haines DM, Meehan BM, Adair

14. Kawashima K, Katsuda K, Tsunemitsu H. 2007.

BM. 1998. Isolation of porcine circovirus – like vi-

Epidemiological investigation of the prevalenceruses from pigs with a wasting disease in theand features of postweaning multisystemic wast-

USA and Europe. J. Vet. Diagn. Invest. 10 : 3 – 10.

ing syndrome in Japan. J. Vet. Diagn. Invest.

12. Sato K, Shibahara T, Ishikawa Y, Kondo H, Kubo

19 : 60 – 68.

M, Kadota K. 2000. Evidence of porcine circovirus

15. Ellis JA. 2006. Porcine circovirus disease in Cana-

infection in pigs with wasting disease syndrome

da : a circle within a wheel, in Proceeding. 19th

from 1985 to 1999 in Hokkaido, Japan. J. Vet. Sci.

Int Pig Vet Soc Cong. 23 – 34.

62 : 627 – 633.

16. Gagnon CA, Tremblay D, Tijssen P, Venne M – H,

13. Onuki A, Abe K, Togashi K, Kawashima K,

Houde A, Elahi SM. 2007. The emergence of por-Taneichi A, Tsunemitsu H. 1999. Detection ofcine circovirus 2b genotype（PCV – 2b）in swine

porcine circovirus from lesions of a pig with wast-

in Canada. Can. Vet. J. 48 : 811 – 819.

ing disease in Japan. J. Vet. Sci. 61 : 1119 – 1123.

論文紹介

豚の肺炎病変におけるTorque teno sus viruses の探索的研究
鈴木敬之
Exploratory study of Torque teno sus viruses in pulmonary inﬂammatory lesions in pigs
Veterinary Microbiology, Volume 162, Issues 2 ‒ 4, 23 March 2013, Page 338 – 344
Aramouni, M., Martínez, J., Nieto, D., Kekarainen, T. and Segalés, J.
この手法で解析するにあたり、肺凍結材料を用いた要約

結果と比較することで FFPE 組織の使用に最適化し豚トルクテノウイルス 1 型（TTSuV1）及び 2 型

た。試験材料の選択基準は豚サーコウイルス 2 型（TTSuV2）の病的役割や病変形成能については未だ（PCV2）、豚繁殖呼吸器症候群ウイルス（PRRSV）、

結論は出ていない。TTSuVs は豚サーコウイルス病

オーエスキー病ウイルス（ADV）及び豚インフル（PCVDs）に関与し、ノトバイオート豚で軽度な肺エンザウイルス（SIV）が陰性であることとした。

病変を引き起こすといわれている。さらに、豚呼吸本研究の結果から、どちらの型の TTSuVs も肺で検器複合病（PRDC）罹患豚で TTSuV の感染率の上出されることが示された。しかしながら、TTSuV2

昇が認められている。本研究では、異なる炎症性病

は TTSuV1 と比較してすべての試験群でより高い

変 像 を 示 す 肺 の ホ ル マ リ ン 固 定 パ ラ フ ィン 包 埋

ウイルス量と感染率を示した。TTSuV2 の平均ウイ（FFPE）材料における TTSuV1 及び TTSuV2 の感染

ルス量は正常の肺や細菌感染を背景とする肺炎（カ率について評価した。それらの測定は定量的リアル

タル性化膿性気管支肺炎、線維素性胸膜炎及び線維タイム PCR 法によるウイルスの検出により行った。

素壊死性胸膜肺炎）の肺と比較して、ウイルス感染

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を背景とする肺炎（間質性肺炎及び気管支間質性肺共感染による病因としての TTSuVs の正確な役割炎）の肺でより高い値となった。この結果はウイルは明らかではないが、多くのデータからは病気のトス感染による肺炎病変での病変形成機序において、リガー因子か日和見病原体としての役割が示されて

TTSuV2 が何らかの役割を果たしている可能性を示いる [1、3]。したがって、本研究の目的は異なる炎唆している。

症像を示す肺病変の形成機序への TTSuVs の関わりを調べることである。さらに同時にホルマリン固定
パラフィン包埋組織を用いた定量的リアルタイム

序論

PCR による TTSuVs の検出法の有用性を確認する。

トルクテノウイルス（TTVs）は小型でエンベロー
プを有しないウイルスで、環状一本鎖の DNA をゲ
ノムとして有する。それぞれ Iotatorquevirus 属と材料と方法

Kappatorquevirus 属に属する豚トルクテノウイルス

組織材料

1 型（TTSuV1）と 2 型（TTSuV2）は現在のところ、異なる炎症性病変像を示す肺のホルマリン固定パ

豚とイノシシを 含 む イ ノ シ シ 科 に お け る 二つのラフィン包埋（FFPE）組織 45 個を 1998 年から 2010

TTV 種である [12]。

年までに Veterinary Pathology Diagnostic Service of the

TTVs は非病原性と考えられているが、他の病原

Universitat Autonoma de Barcelona（Spain）で解剖体との複合感染における役割については未だ判然とされた合計 2401 頭の豚から選択した。パラフィン

していない。ヒト TTVs はいくつかの炎症性疾患やブロックは次の基準で選択された。
（a）8（± 3）腫瘍に関連し [20]、TTSuVs は離乳後多臓器性発育

週齢の豚、（b）臨床経過と呼吸器病を示す肺病変、不 良 症 候 群（PMWS）[1、5、13、19] や 豚 皮 膚 炎（c）in situ hybridization（ISH）での PCV2 陰性及び腎症症候群（PDNS）[15] などの豚サーコウイルス

免疫染色での豚繁殖呼吸障害症候群ウイルス

関連疾病（PCVDs）の発生に関与するといわれて（PRRSV）、オーエスキー病ウイルス（ADV）並びいる。またそれとは対照的に、近年では TTSuVs はに豚インフルエンザウイルス（SIV）陰性、（d）一PCVDs の病原因子である豚サーコウイルス 2 型感

つのタイプの顕微鏡学的病変がある肺。陰性対照と染による疾病の発生に寄与しないという研究報告もして、同週齢で病変のない 18 頭の豚の FFPE 肺組

ある [6、16]。これらより、TTSuVs の病原性は未織を選択した。

だ明らかではないといえる。

TTSuV2 の定量に対してホルマリン固定とパラ

TTSuV1 と TTSuV2 が豚で病変形成を起こすかど

フィン包埋が与える影響を評価するために、陰性対

う か に つ い て も 未 だ は っ き り と し て い な い。

照の豚から 13 個の肺凍結組織を選択し、DNA 抽出

Krakowka と Ellis ら（2008）は TTSuV1 を 投 与 しとウイルス定量を行った。

たノトバイオート豚における軽度の病変形成を報告した。それら病変は一時的な胸腺萎縮と膜性糸球体

病理組織学的研究

腎炎、肝臓における中等度のリンパ球・組織球浸潤

組織材料は 24 – 48 時間ホルマリンで保存され、

及 び 軽 度 の 間 質 性 肺 炎 で あ っ た。同 様 の 結 果 は続いて脱水とパラフィン包埋がなされた。5 つのSPF 豚に対して TTSuV2 が感染した肝臓乳剤を投4μm の厚さの連続切片を作製し、一つの切片は病与することでも得られた [18]。同じ様にごく近年、

理組織検査に、1 つは ISH による PCV2 の核酸検出

豚呼吸器複合病（PRDC）罹患豚において TTSuVsに、残りの切片は PRRSV、SIV、ADV 抗原を検出の 感 染 率 の 上 昇 が 認 め ら れ、そ の 結 果 か ら はする免疫染色にそれぞれ用いた。

TTSuV2 ではなく TTSuV1 がこの臨床的に多病因性

顕 微 鏡 学 的 肺 病 変 の 分 類 は Caswell と Williams

な状態と強く関連すると考えられた [21]。これら

ら（2007）及 び Grau – Roma と Segalés ら（2007）の著者は TTSuVs が PRDC の病態進行における補によって提案された基準に従った。カタル性化膿性因子であるという仮説を上述の結果によって支持す気管支肺炎（CPBP）では細気管支と肺胞が粘液、ることを示している。

好中球及びマクロファージで満たされていた。胸膜10（26）日生研たより炎では線維素性ないし線維素化膿性滲出液が胸膜をで清拭した。続いて組織を再水和し、小片に細切し覆い、中皮細胞の増殖や線維化を伴うこともあり、て 1.5 ml のマイクロチューブに集めた。続いて 1.5

肺実質の炎症を欠いていた。肺胞を囲む肺胞壁の肥ml のキシレンを入れ攪拌したのちに室温で 30 分間

厚を伴う細気管支性壊死が認められたときは気管支静置してパラフィンを溶解し、13,000 × g で 5 分

間質性肺炎（BIP）と判断した。間質性肺炎（IP）

間遠心した。上清を取り除き、ペレットに 1.5 ml

は 2 型肺胞上皮の増殖と肥厚を伴う肺胞壁のリンパのキシレンを加えて同様の手順を繰り返した。サン

球・組織球による間質性の炎症とした。線維素壊死

プルのペレット形成と水和を容易にするために、1.5性胸膜肺炎（FNP）は胸膜及び肺実質の広範な壊死

ml の 96％エタノールを加えた。攪拌後、サンプルを特徴とし、線維素の析出、水腫、好中球と少数のを 13,000 × g で 5 分間遠心し、上清を除去した。

マクロファージや多くの壊死性白血球の滲出に満た

その後ペレットを風乾し、DNA 抽出の手順へと進された胸膜、肺胞及び終末細気管支と時折の血管内んだ。

線維素性血栓を伴っていた [27]。CPBP、胸膜炎及DNA 抽出は 63 個全ての FFPE 肺組織と 13 の凍び FNP の重症度は肉眼的に肺炎ないし胸膜炎と結 肺 組 織 よ り NucleoSpin® Tissue Kit（Macherey –なっている病変の面積に基づいて 3 段階で評価し、Nagel）を用いて製品説明書に従い実施した。抽出

グ レ ード 1 は 30％以 下、グ レ ード 2 は 30 – 50％、手順は 19 サンプルを一単位として陰性対照（200グレード 3 は 50％以上とした。IP と BIP の重症度

μ l の PBS）と 一 緒 に 行 っ た。抽 出 し た DNA はも 3 段階で評価したが、これは肺胞壁の炎症細胞浸100 μl の溶出バッファー（5 mM Tris/HCl, pH8.5）

潤による顕微鏡的基準に従い、軽度（グレード 1）、に溶出し、Nanodrop ND – 1000 分光光度計を用い

中等度（グレード 2）、重度（グレード 3）で評価して定量した。DNA の純度は A260/280 比が 1.6 以上た。

で評価し、PCR による複製の質は豚のβラクトグロ
ブリンハウスキーピング遺伝子を 237 bp の複製産物を作るプライマー対を用いて増幅し、検定した。

In situ hybridization（ISH）及び免疫染色
既報にある 41 bp のジゴキシゲニン標識された
DNA プローブ（DIG – CCT TCC TCA TTA CCC TCC

DNA 量の少ない（125 ng/μl 以下）、ないし純度が低く、質の悪いサンプルについては再度 DNA 抽出を行った。

TCG CCA ACA ATA AAA TAA TCA AA）を 用 い てPCV2 を検出する ISH 法を実施した [22]。
免疫染色には、PRRSV、ADV 及び SIV に対する

TTSuVs を検出する定量的 real time PCR

モノクローナル抗体を用いて 3 つのアビジン−ビオ

FFPE 組織と凍結組織における TTSuV1 と TTSuV2

チン−パーオキシダーゼアッセイを実施した。手技のウイルス量の定量には既報の D – Lux based qPCR

は既報に従い [9]、PRRSV、SIV 及び ADV を検出す

法 [19] を本試験に最適化して実施した。反応は 96

るモノクローナル抗体はそれぞれ SDOW17（Rural

穴ウェルプレートを用いて行った。各サンプルと定Technologies, USA）、C65331M（T ib Molbiol,

量用スタンダードは 3 回計測し、陰性対照にはサンGermany）及び ICII（Dr.Hans Nauwynck, University

プル DNA の代わりに滅菌蒸留水を 3 つのウェルに

of Ghent, Belgium よ り 分 与）を そ れ ぞ れ TBS で入れた。各反応では 2μl のサンプル DNA（250 ng の

500 倍、200 倍及び 100 倍に希釈して使用した。

DNA）あるいは定量用スタンダード DNA、200 nM の各 プ ラ イ マ ー、10μl の Express qPCR Supermix
Universal ™（invitrogen）と 0.04 μl の Rox リファレ

DNA 抽出パラフィンを 60℃で加温して溶かし、20 mg のンス色素を容れ合計 20μl とした。増幅と定量は ABI®

7500 fast real time PCR システム（Applied Biosystems

肺組織をブレードでカットした。DNA のコンタミ™）を用いて以下の標準的条件で行った：95℃・10を防止するために、各サンプルには新しいブレード

分、50℃・2 分、95℃・15 秒 と 60℃・1 分 を 40 サを用い、全ての資材はキシレンと 100％エタノール

イクル。ホルマリン固定とパラフィン包埋が組織中59（2），2013

11（27）のウイルス量に与える影響を決定するために、またである：CPBP、17（37.8％）; 胸膜炎、8（17.8％）;

異なる方法で保存された同じ組織に対する定量的

FNP、6（13.3％）; IP、12（26.6％）、及び BIP、2（4.4％）。

PCR の効率を比較するために、同じ組織の FFPE

重症度の平均と標準偏差は以下の通り：CPBP、2.1

組織と凍結組織を解析した。

（0.8）; 胸膜炎、2.4（0.7）; FNP、2.8（0.4）; IP、1.5

定量的 PCR のプライマー特異性は既報により確（0.5）
、及 び BIP、1.5（0.7）
。31（68.9％）症 例 が 細認されており、各反応条件も良好であった [19]：

菌性因子に由来する病変群に分類され、14（31.1％）（1）同一サンプルを三回測定した標準偏差が 0.5 以

症例がウイルス性因子に由来する病変群に分類され下（2）検量線の相関係数が 0.97 より大きい（3）増た。

幅効率（検量線の傾き）は 3.2 から 3.7 の間。また、陰性対照が陽性となったときは反応をやり直した。
TTSuV のウイルス量は 250 ng の DNA より得られ定量的 PCR の最適化
FFPE 組織と新鮮組織におけるウイルス定量を比た。DNA 1 mg 当たりの遺伝子量を計算するために、 較したとき、TTSuV1、TTSuV2 それぞれのウイル
定量的 PCR より得られた個々の結果を 4000 倍した。 ス量の差は平均で 0.793（± 0.316）、0.887（± 0.228）
そして DNA 1 mg 当たりの平均 log10 コピーを平均
ウイルス量の比較に用いた。

log10 であった（Fig. 1）。
本試験の異なる反応で作成された検量線は大きな

TTSuV1 と TTSuV2 の定量的 PCR による検出限変動を見せず、アッセイ間の変動係数は 4％以内で界は 250 ng の DNA 当たり 20 コピー（1.301 log10）あった。また増幅効率（E）は 96.5％から 98.5％の4と 決 定 し、そ れ は 1 mg の DNA 当 た り 8 × 10 コ間であった。

ピー（4.903 log10）に相当した。
TTSuV ウイルス量及び肺病変
TTSuV ウイルス量と各々の肺の炎症性病変像、及びウイルス性あるいは細菌性といった病変の由来

統計解析®

統計解析は IBM SPSS 19 を用いた。病変は可能性のある病原因子によって二つに分類された。つまり、CPBP、胸膜炎及び FNP は細菌性の病原因子によるものと考えられ、BIP 及び IP はウイルス感
染によるものと考えられた。試験材料の選択基準はこれらの肺病変像を引き起こす可能性のある一般的なウイルス性病原因子（PCV2、PRRSV、SIV 及び
ADV）が陰性であることとした。確立した分類（細菌性 VS ウイルス性）と病変グループに基づき、
TTSuV の感染率と平均ウイルス量を評価し、異なる グ ル ープ 間 の 比 較 は 分 散 分 析（ANOVA）とstudent の t 検定を用いた。さらに、病変タイプ /グループ / 重症度と TTSuV のウイルス量との関連性はピアソンの積率相関係数 r を用いた。線形回帰
は動物の週齢と TTSuV1 及び TTSuV2 のウイルス量の間での相関性を棄却するために用いた。

結果
病理組織学検査
それぞれの肺病変の症例数及び割合は以下の通り

Fig. 1 凍結組織及び FFPE 組織における TTSuV1 及び TTSuV2 の DNA1mg あたりの log10 ウイル
ス量の線形回帰12（28）日生研たよりとの関連性を Table.1 にまとめた。また TTSuV1 と（10％）検 体 は TTSuV1 の み 定 量 的 PCR 陽 性、30

TTSuV2 の感染率と、単独感染ないし共感染の検出（48％）検体で TTSuV2 のみ定量的 PCR 陽性となっ

結果を Table.2 に示した。検査した肺病変を有するた。統 計 学 的 に、TTSuV2 は 全 て の グ ル ープ で

全 45 検 体 中 41 検 体（91％）で TTSuV は 陽 性 で

TTSuV1 よりも流行していた。TTSuVs の種の感染あった。肺病変を有する 45 検体中、17（38％）検率について病変の有無による差は見られず、病変像、体 で TTSuV1 の 定 量 的 PCR 陽 性 と な り、一 方 34

重症度及び細菌性あるいはウイルス性といった病変（76％）検体で TTSuV2 の定量的 PCR 陽性、TTSuV1/の由来についても同様であった。

TTSuV2 の共感染率は 24％（11/45）であった。細

全般的にみると、全ての試験サンプルにおける菌感染性の肺炎病変を有する 31 検体では、TTSuV1

TTSuV2 の平均ウイルス量は TTSuV1 のウイルス量が 13（42％）検体、TTSuV2 が 24（77％）検体で検よりも多く、病理組織学的特徴とは無関係であった

出され、共感染率は 9（29％）検体であった。ウイ（TTSuV2 : 6.592 log10/mg DNA, TTSuV1: 5.715 log10/

ルス感染性の肺炎病変を有する 14 検体からは、定mg DNA, p ＜ 0.01）。TTSuV1 の平均 log10 ウイルス量 的 PCR に よ り TTSuV1 が 4（29％）検 体、量は病変像、病変の由来及び重症度に関しては差がTTSuV2 が 10（71％）検体で検出され、共感染率はなく、FNP 及び BIP の全てのサンプルはこの手法

2（14％）検体であった。組織学的に正常な肺 18 検による検出限界以下であった。TTSuV2 の平均 log10体からは、11（61％）検体で TTSuV1 の定量的 PCR

ウ イ ル ス 量 は CPBP（6.102 ± 0.9 log10/mg DNA）

陽性、一方全ての検体（100％）で TTSuV2 の定量と IP（7.198 ± 1.3 log10/mg DNA）
（p = 0.038）、IP的 PCR 陽性となり、共感染率は 11（61％）検体とと病変の無いグループ（6.155 ± 0.8 log10/mg DNA）

なった。全ての 63 検体でみると、両方の TTSuVs（p = 0.019）間で差が認められた。包括的な病原因が 陰 性 と な っ た の は 4（6％）検 体 の み で あ り、6子について考えると、ウイルス感染を背景とする病Table. 1

VLL

VLO

細菌感染由来ないしウイルス感染由来の異なる肺炎像を示す肺における陽性サンプルの TTSuVs 平均
log10 ウイルス量。a、b は有意差（p ＜ 0.05）を意味する；udl は検出限界以下を意味する。
OriginBacterial（31）Lesion

CPBP
（17）

P（8）

FNP
（6）

IP（12）

BIP（2）TTSuV1

5.5

5.9

udl

5.0

udl

6.0

7.1

6.155a

a

Viral
（14）

b

Control（18）

TTSuV2

6.102

TTSuV1

5.7

5.0

6.0

TTSuV26.333a7.179b

6.155a

6.3

7.2

7.198

VLL：病変タイプに基づく平均ウイルス量VLO：病変の由来（細菌性 vs ウイルス性）でグループ分けした時の平均ウイルス量
Table. 2

肺の顕微鏡学的病変と肺組織における TTSuV の検出結果。病変分類の割合は括弧内に表す。

LesionLesion severity

TTSuV prevalence

Category

Mild

Moderate Severe

TTV1+ orTTSuV1+ TTSuV2+ TTV2+

TTV1+ and TTV1- and
TTV2+
TTV2-

TTV1+ and TTV1- andTTV2TTV2+

CPBP（n = 17）

4
（24）

7（41）

6（35）

7（41）
*

13
（76）
*

17
（100）

4（24）

0

3（18）

9（53）

P（n = 8）

1（13）

3（38）

4（50）

6（75）

7
（88）

8（100）

5（63）

0

1（13）

2（25）

5（83）

FNP（n = 6）

0

1
（17）

0*

4（67）
*

4（67）

0

2
（33）

0

4
（67）

Total Bacterial（n = 31）

5
（16）

11
（35） 15（48）13（42）*

24（77）*

29（94）

9（29）

2（6）

4（13）

15（48）

BIP（n = 2）

1
（50）

1（50）

0

0*

2（100）*

2（100）

0

0

0

2
（100）

IP
（n = 12）

6
（50）

6（50）

0

4
（33）*

8
（67）
*

10
（83）

2（17）

2（17）

2（17）

6（50）

Total Viral（n = 14）

7
（50）

7（50）

0

4（29）
*

10
（71）
*

12（86）

2（14）

2（14）

2（14）

8（57）

Total Lesions（n = 45）12（27） 18（40） 15（33）

*
17
（38）

34（76）*

41（91）

11（24）

4（9）

6（13）

23（51）

Controls（n = 18）

0

11
（61）
*

18（100）* 18（100）11（61）

0

0

7（39）

28
（44）*

52（83）*

22（35）

4（6）

6
（10）

30（48）

Total（n = 63）

0

0

59
（94）

* は TTSuV1 と TTSuV2 間の感染率に有意差があることを表す。

59（2），2013

13（29）

変 を 認 め る サ ン プ ル で は、対 照 群（6.155 ± 0.8が高く質の良い DNA を得る必要があり、最小限の（p = 0.014）や細菌感染に由来する
log10/mg DNA）

手技での効果的な DNA 抽出法が必須である。この（p = 0.048）
肺病変群（6.333 ± 1.0 log10/mg DNA）

タイプのサンプルからのゲノム DNA の抽出方法はより高いウイルス量（7.179 ± 1.25 log10/mg DNA）

いくつか報告されている。キシレン / エタノールであった。細菌感染に由来する肺病変群の TTSuV2に基づく手法が最も多く使われており [8、23、25]、の 平 均 log10 ウ イ ル ス 量（6.333 ± 1.0 log10/mg

1.18 kb までの DNA 断片を保存できることが示されDNA）は対照群と比較して差は認められなかった。

ている [24]。本研究では、キシレン / エタノール

同様に全例で検出されたウイルス量は変動が大きによる脱パラフィンに基づいた DNA 抽出方法を実く、TTSuV1 あるいは TTSuV2 の個々のウイルス量施しており、得られた DNA 量（ng）と純度は凍結と病変の原因、病変タイプあるいは病変の重症度と組織を用いた場合と比較して許容範囲にあるものの間に関連性は認められなかった（Fig. 2）。

だった。さらに、ハウスキーピング遺伝子の複製では本法がゲノム DNA を保存しサンプルから PCR
反応の阻害物質を除去することが示された。言うま考察でもなく、FFPE 組織からの DNA 抽出に基づく定世界中の病理部門や病院のアーカイブでは、病理量的検定法では凍結組織を用いた場合と比較してウ学的解析の標準的な保存方法のため非常に多くのイルスゲノム量の減少が見られる。それは既報にあFFPE 組織が貯蔵されている。これらのサンプルはるように [17]、保存時間に関連する DNA の劣化に多くの研究のための DNA バンクであると言える。

よるものかもしれない。しかしながら、そのような

このような有利な点があるものの、組織サンプルのゲノム量の減少と保存時間との関連性は本試験サン

ホルマリン固定は時間に依存した pH の低下によっプルにおいては認められなかった。

て DNA の保存への影響がみられる [7]。さらに、

FFPE 肺組織について、TTSuV 種の感染率とウイホルマリンは PCR や他の分子生物学的解析の妨げ

ルス量を FFPE 組織からの DNA の使用に最適化しとなり得る [26]。したがって、FFPE 組織を用いた

た既報の定量的 PCR 法 [19] を用いて解析した。肺

定量的検定法で信頼できる結果を得るためには純度の様々な病理学的状態を考慮し、可能性のある感染

Fig. 2病変の感染由来、病理組織タイプ及び重症度に対応する TTSuVs の log10 ウイルス量の箱髭図（ボックスプロット）。
* は平均ウイルス量の有意差。

14（30）日生研たより性因子に基づいて病変をグループ分けした。この方してあるいは他のウイルス病原性因子（PCV2、法では、3 つの病態（CPBP、胸膜炎及び FNP）をPRRSV）と共感染することによって病原性を発揮

細菌感染に由来するものとし、2 つの病態（IP 及びする可能性がある。これを証明する最初の報告では、BIP）はウイルス感染に由来するものとした。後者

TTSuV1 を暴露させたノトバイオート豚で軽度の間

では、PRRSV、ADV 及び SIV 抗原と PCV2 ゲノム質性肺炎を引き起こすことが示された [5、14、15]。

の存在は除外された。この選択基準は認められた病

その後、TTSuV2 でも同様に TTSuV2 を含む肝臓乳変がこれらウイルスの単独あるいは複合感染による剤を豚に接種することによって間質性肺炎を引き起ものであることを避けるために重要であった。した

こすことが示された [18]。これらの報告では肺やがって、本研究の目的は他でいわれているようにその他の臓器で病変が示されたが、それらは解剖時

TTSuV が呼吸器病の原因因子としての可能性があに臨床症状を示していなかった。これらの報告や本るかどうかを評価することである。豚の呼吸器病に研究結果に基づくと、TTSuV2 は単独あるいは複合

おける TTSuV 検出の最初の証明は日本で報告され、感染によって間質性肺炎の病変を引き起こすと思わいずれの TTSuV 種も PRDC 罹患豚の血清から広くれる。本研究結果によると、これは TTSuV1 では見検出された [28]。そののちに PRDC 罹患豚の肺でられないようである。また細菌感染を原因とする病の TTSuV1 の高率な感染が報告された [21]。本研

変における TTSuV2 の検出率は対照群と大差なく、究結果ではどちらの TTSuV も肺組織で検出され、肺において検出されたウイルス量は無症状で感染し試験サンプルでは特に TTSuV2 が優勢であった。

ている豚で予測される量かもしれないということを統計学的に、TTSuV2 は TTSuV1 と比較して全ての示している。

グ ル ープ で 高 い ウ イ ル ス 量 と 感 染 率 を 示 し た。

病変の重症度と切り離して、あるいは一緒に考え

TTSuV2 の平均ウイルス量は正常肺あるいは細菌感

たとき、TTSuV2 ウイルス量と病変との間に相関性

染を背景とする肺と比較してウイルス感染を背景とは見られなかった。これは TTSuV2 の病変形成にする肺において高い値を示した。この結果はこの対する影響が比較的限局されており、おそらく多く

TTSuV 種がウイルス感染による肺の炎症性病変ののサンプルでそのような潜在的な関連性を見積もる

形成機序において何らかの役割を果たしている可能必要があると思われた。

性を示している。

結 論 と し て は、本 研 究 で は TTSuV1 で は な く

TTSuVs の病変形成機序における役割については

TTSuV2 が豚に対して病原性を発揮する可能性が示

いくつかの研究で議論されているが、未だ検討の余され、特に間質性肺炎の原因となり得ることが示唆地がある。簡潔にまとめると、スペインの野外状況された。

下では TTSuV2 が TTSuV1 と比較してより PMWSTTSuV1 と TTSuV2 は遺伝的に異なるウイルスでに関与しており [1、13]、一方ノトバイオート豚をある。野外では両方のウイルスの共感染も一般的にもちいた PCV2、PRRSV それぞれとの共感染試験で認められ、抗原活性に対して交差反応性はない。こは、TTSuV1 が PMWS 及び PDNS 様病態の発生にれは病変形成能の違いや豚の他の病気への関連性の関連していた [5、14]。さらに、PMWS に関連する違いを説明し得る事象である。

豚では健常豚と比較して高いウイルス DNA 量と低い抗 TTSuV2 抗体の値が示された [10]。このような状態は TTSuV1 については起こらず、ウイルス量

Referenceと抗体レベルは PCVD 罹患豚と非罹患豚間での差

1. Aramouni, M., Segalés, J., Sibila, M., Martín –は見られなかった [11]。このように PCV2 感染によValls, G. E., Nieto, D. and Kekarainen, T. 2011.

る疾病への関連性が示される一方で、TTSuVs は豚

Torque teno sus vir us 1 and 2 viral loads inのウイルス性疾患の発生機序において何ら役割を果

postweaning multisystemic wasting syndrome

たさないと指摘する研究報告もある [6、16]。

（PMWS）and porcine dermatitis and

TTSuVs は肺病変を引き起こす可能性があると度々記述され、特に間質性肺炎では、一次病原体と

nephropathy syndrome（PDNS）affected pigs.
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59（2），2013

15（31）

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日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（隔月 1 回発行）

（通巻 579 号） 平成 25 年 2 月 25 日印刷
発行所〒 198 0024

生命の「共生・調和」を理念とし、生命体の豊かな明日と、研究の永続性を願う
気持ちを快いリズムに整え、視覚化したものです。カラーは生命の源、水を表す

東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL：0428（33）1056（企画学術部） FAX：0428（33）1036
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編集室「青」としています。

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表紙題字は故中村⒥治博士の揮毫

平成 25 年 3 月 1 日発行（第 59 巻第 2 号）

一般財団法人 日本生物科学研究所

林

志鋒

委

員／堤 信幸（委員長）、大嶋 篤、山下 龍

事務／企画学術部

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