A**201
3年 4月改訂（第 3版）*2008年 4月改訂（第 2版）
2005年 6月作成

HISTOFINE

研究用試薬

ヒストファイン
製造販売元

第一抗体

CD
15モノクローナル抗体 (MCS‑1)（動物種：マウス）
包装： 1mL （未希釈抗体）‑rJ（ヤオサイエンス

株式会社ニチレ〒104‑8402
東 京 都 中 央 区 築 地 6‑19‑20TEL.03(3248)2208FAX.03(3248)2243

Code:41347
1■特異性および抗原分布 ：糖鎖抗原であるヒト CD15抗原（x‑ハプテン、 LewisX、lacto‑N ‑fucopentaose ill)と特異的に反応する 。 CD15は血液型抗原、 分化抗原 に広く分布している。腫瘍では古典的ホジキンリンパ腫の 75・85%1、2、4ふ 6、7)、大腸癌、胃癌、肺癌、骨髄性白血病細胞に発現がみられる。 正常では成熟顆粒球、 骨髄系前駆細胞、単球お よび星状膠細胞に発現がみられるが、リンパ球、好塩基球にはみられない。結節性リンパ球著明ホジキンリンパ腫 2、6りには染まらないため古典的ホジキンリンパ腫との鑑別に有用である。
国際抗体分類： First, Third and F
ifthInternati
ona
lWorkshop and Conference on Human Leucocyte
Different
iationAntigens(l982,1986,1995)
で CD15に分類されている 。
クローン名： MCS・1抗体のサブクラス ：IgG3製法： ①免疫原 ・・・ ヒト急性骨髄性白血病細胞株 ML・l②免疫法 ・・ •免疫原で免疫した Balb/c マウスの牌細胞とマウスミェローマ細胞 NS·lとの融合細胞（ハイブリドーマ）から抗体産生クローンを得ている。
由来：ハイプリドーマの培蓑上清より、プロテイン Aアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製している。
1.内容■

■
■
■

■

第 一 抗体 ・・ • CDI5 モノクローナル抗体(MCS·l) （動物種 ： マウス）。

液状。
ウシ血清アルブミン(BSA)と、 0.
1％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水(PBS)にて、溶解された状態である 。
1バイアル中に未希釈抗体 lmLを含む。
2．使用目的組 織 ・細胞中の CD15陽性細胞の染色。
**3.使用方法
パラフィン包埋切片の免疫組織化学染色および免疫細胞化学染色に使用できる第一抗体である 。
抗体は、抗体希釈用緩衝液（例 0.1%BSA、0.
1%Na
応 を 含 む PBS) を用いて 25‑50倍 に希釈する 。
パラフィン包埋切片の場合、前処理（抗原賦活化） として IOmMクエン酸緩衝液(pH6.
0)を用いたオートクレーブ処理が必要である（裏面の操作手順参照）。
スライド上の組織切片が完全に授われるように第一抗体を 2滴(IOOμL)滴下し、常温(15‑25℃)で 30分〜 1時間インキュベートする 。＊＊
この反応時間は、ヒストファイン シンプルステイン MAX‑PO(M)を使用する場合の目安であり、他のキットを使用する場合は、研究者自身が至適反応時間を調べる必要がある。

■参考： lOmMクエン酸緩衝液(pH6.
0)の替わりにヒストファイン 抗原賦活化液 pH9(Code:415201または Code:415211)
を用いたオートクレープ処理をすることで良好な染色が得られる場合がある頃；面の ■参考参照） 。
4.貯 法‑20℃以下で保存。繰り返しの凍結殷解を避けるため小分け分注して凍結保存すること nが生じる＾があるが色にはがないとい‑ 咽を／―っている

5．使用上又は取扱上の注意
ヒト由来の検体は、取扱者に感染を引き起こす危険性がある。従って、適切な取扱および廃棄法を用いるとともに、この免疫組織（細胞）化学染色法を施行するに際し、関連技術および操作法に充分習熟しておかなければならない。

6．主要文献(1)SteinH etal:IntJCancer29:2
83・
290,1982(2)HsuSMetal:AmJC
linPathol82:29・32,1984(3)FaliniBetal:Histopathologyll(l・2):1229・1242,1987(4)AminiR Metal:IntJCancer71:5
10・516,1997(5)SteinH etal:WorldHealthO
rganizationC
lassificationofTumours;Patholog
yandG
eneticsof
TumoursofHaematopoieticandLymphoidTissues:2
44・253,2001(6) 田丸純一：新 WHO分類による白血病・リンパ系腫瘍の病態学： 245・257,2004(7) 田 丸 純 一 ： 血 液 ・ 腫 瘍 科 第 49巻： l73・ 178,2004■研究用としてのみ使用すること。

免疫
染色におt
Iる
操作手順
＊＊
■操 作 手 順［切片 の 準 備 ］
1. 50℃で十分に湯伸ばしした切片(3‑4μm厚）をシランなどのコーティングスライド上に貼り付け、 37℃の恒温器内で 16時間以上乾燥させる 。
2. 脱パラフィン → 親水化 → PBS
3. 前処理（抗原賦活化）：オートクレーブ処理①緩衝液（下記記載）を耐熱性バットに入れ、切片を浸す。
②バットに蓋をする。蓋が取れないように輪ゴムでとめる。
③120℃、 20分間オートクレーブ処理する。
④圧力が十分下がった後、バットごと切片を取り 出す。
⑤バットの蓋をはずし、バットごと切片を常温に 20分間以上放證し、ゆっくり熱を冷ます。
※オートクレーブ処理後は、バットおよび緩衝液等が高温になっている 。これらを取り 扱う際は、手袋等を使用し火傷に注意する。
⑥スライドを緩衝液から取り出し、 PBSでよくすすぐ (3分間ずつ容器を 2度かえるか、または洗浄ビンを使用する）。
［染色手順］ ＜ ヒ ス ト フ ァ イ ン シ ン プ ル ス テ イ ン MAX‑PO(M)使 用 の 場 合 ＞
4. 内因性ペルオキシダーゼの除去 10 15分間／常温 → PBS洗浄
5. 第一抗体の添加・反応 30分〜 1時間／常温 → PBS洗浄＊＊
6. シンプルステイン M心 <‑PO(M)の添加・反応
30分間／常温 → PBS洗浄

7. 基質溶液の添加・反応DAB発 色 → 水洗
8 対比染色核染（ヘマトキシリン） → 封 入 →・注意

乾燥→検鏡

「PBS洗浄」は PBSに浸し、 5分間ずつ 3回放置する 。
4．のプロセスは 3．の前に行ってもよい。
ヒストファイン SABキットを使用する場合は上記 l. 4
ま で 行 い SABキットの操作方法に従って染色を行う 。

lOmMクエン酸緩衝液 (pH6.
0) の作り方A液 9mL+B液 41mL＋精製水 450mL （用時調製）
A液： O.lM クエン酸水溶液：常温で保存可能
クエン酸ー水和物 (C6H807• H心） 2.
lg／精製水 lOOmL
B液： O.lMクエン酸ナトリウム水溶液：常温で保存可能
クエン酸三ナトリウムニ水和物 (C6H5QNa
3• 2H幻） 14.
7g／精製水 500mL
ここから必要な時に調製する。

■参考：ヒストフ ァイン 抗原賦活化液 pH9(Code:415201または Code:415211)、オートクレープ処理を用いる場合（おもて面の ■参考参照）．抗原賦活化液 pH9の作り方• Code:415201 抗原賦活化液 pH9（調製済）は、そのまま用いる。
• Code:415211 抗原賦活化液 pH9(10倍濃縮）は、精製水で 10倍希釈する 。