2009 SEPTEMBER
No. 558

2009 年（平成 21 年）9 月号

第 55 巻 第 5 号（通巻 558 号）

挨拶・巻頭言どうあるべきか........................................梅 村 孝 司（ 2 ）獣医病理学研修会
第 48 回 No. 969 イヌの眼窩腫瘤................ 日本大学獣医病理学研究室（ 3 ）第 48 回 No. 970 マウスの小脳腫瘤............... 東京農工大学獣医病理学教室（ 4 ）レビュー
リポソームワクチンによる粘膜免疫の誘導〜ウシ乳房炎に対するリポソーム
ワクチン〜 .......................渡 来仁（ 5 ）
58th Western Poultry Disease
Conference & American College ofPoultry Veterinarians Work Shop
参加報告 .......................... 永 野 哲 司（12）お知らせ
新人紹介 .................................................... （15）

http://nibs.lin.go.jp/

2（56）

日生研たよりどうあるべきか梅村孝司
還暦を迎えました。干支が 5 巡し，人生の中締めだそうです。振り返れば大学に職を得て 30 年近くになり，この間は「自分は何をしたいのか」よりも「自分はどうあるべきか」を優先させて生きて来たし，今後もこの呪縛から逃れられそうにありません。そんなコチコチ頭が研究と人生についての独断を以下に綴ります。
「ピカピカの新車を運転することが目的で，それを運転してどこへ行くのかは二の次という風潮が近頃は強くなった」と尊敬する先輩教授が嘆いておられました。確かに，ゲノム，レセプター，サイトカイン，アポトーシス，再生医療などのキーワードが卒業論文の中に入らないと学部学生にさえ納得されない時代です。
一方で，最先端研究，（動物や自然との）触れ合い，地球に優しい，サステナビリティ，生物の保全などの流行語で思考が止まっており，その先で何を目指すのかという意識が恐ろしく希薄な，手段と目的を取り違えている若者が多いように思われます。いつの時代も，理想は高く，具体の道筋には暗いのが若者だから，我々が特段に憂慮する必要はないのかも知れませんが，この傾向はやはり心配です。
私達が研究する場合はまず仮説を立て，それを証明するために最も効率的な手法と手順を考えます。同様に，論文作成においても，まず論文を発表する目的（帰着点，メッセージ）を考え，そこから遡ってディス
カッションを組み立てます。日常生活においても，様々な問題や課題に対して我々はこのように対応しています。状況が混沌とすればするほど，どこを目指すべきかをまず真剣に考え，それに向かって漕ぎ出す方策を考えます。最も重要なのは正しい仮説あるいは目標を立てることであり，次いでそれを証明するあるいはそこに至る道筋を比較検討して最善を選択することであり，どの道を行きたいという判断が先に来るのではありません。これは誰にとっても当たり前の手順だと思いますが，流行に流されて目的意識の希薄な若者の将来構想を聞くたび，何が目的でこの研究（実験）をしたのか，ディスカッションでは何が言いたいのかよ
く分からない研究論文を見かけるたび，インパクトファクターの高い雑誌に論文を掲載することを至上目的としている研究者に出会うたび，諸々の将来が心配になります。
私達は何のために研究するのか？

何のために生きるのか？

25 年ほど前に故越智勇一先生から「人間の本性は金銭欲や食欲や性欲などではない。全ての人間に共通した本性は真美善に対する憧れで，真は科学，
美は芸術，善は宗教に現れている。
」とお聞きし，感動しました。私はこの言葉の語源を未だ知りませんが，「真」は真理を明らかにすること，「美」は美しいもの，素晴らしいものを創造すること，「善」は人の役に立つことだと思います。因みに，クラーク博士の「青年よ大志を抱け」は有名ですが，それは以下のように続 い て い ま す。Boys, be ambitious! Be ambitious not for money or for selﬁsh aggrandizement, nor for thatevanescent thing which men call fame. Be ambitious for knowledge, for righteousness, and for the uplift of yourpeople. Be ambitious for the attainment of all that a man ought to be.（青年よ大志を抱け。金銭や自己の栄達や名声と呼ばれる儚いものに憧れるのではなく，知識や正義，そして人々を向上させることに意欲的であれ。
そして，人のあるべき姿を具現するために大志を抱け）。明治時代のアメリカ人教師も「真美善」と全く同じ理想を語っています。この様に，「真美善」は洋の東西を問わず，時代や民族を超えて人間の普遍の理想であり，それを具現した人は真の尊敬を集めます。我々のささやかな研究や日常生活もどこかで，いつかこの理想に適うものであって欲しいものですし，そうでなくては，まず自分自身が結局は満足できないと思います。
人は誰も，空より生じ，空に帰る。
人の一生に貴賤無く，勝ち負けもない。
ただ，己が生きた意味を知ることができた人は幸せである。
還暦を迎えた私の決意です。
（北海道大学大学院獣医学研究科 教授，日本生物科学研究所 評議員）

55（9），20093（57）

イヌの眼窩腫瘤
日本大学獣医病理学研究室

第 48 回獣医病理学研修会 No. 969

動物：イヌ，ミニチュアシュナウザー，雄，3 歳 6 ヶ月齢， 沿って付着するような配列が認められた（図 2：マッソ
体重 9.2 kg。

ントリクローム染色）。一部の細胞において伸長する好臨床事項：1 週間ほどで急速に右眼が腫脹。同居の猫に

酸性細胞質内に PTAH 染色で染色される横紋が証明さ引掻かれた可能性を考慮し抗生物質にて治療。4 日後，れた（図 3：矢印）。免疫染色において腫瘍細胞はビメ改善しないためスタンプ標本を作製したところ悪性腫瘍

ン チ ン，デ ス ミ ン，ミ オ グ ロ ビ ン（図 4）で 陽 性，を疑う所見を認める。11 日後，右眼球全摘出手術。手

αSMA では間質のみ陽性を示した。

術時に眼窩の骨融解と右側顎下リンパ節の腫脹を認める。 診 断：横 紋 筋 肉 腫，多 形 型（Pleomorphic rhabdomyo術後 23 日目，手術部位に腫瘤が再発。

sarcoma）

肉眼的所見：腫瘤は右眼球後部に発達し，眼球は突出，考察：過去の研修会においてグリア系および髄膜系起源

偏在。視神経を確認できなかったため腫瘤内に巻き込まの犬の眼窩内腫瘍が報告されている。今回も視神経を巻れていると推測した。腫瘤の大きさは 4.5 × 5 × 4 cm。

き込んで発達していることより同様の腫瘍が疑われたが，割面は白色，充実性，中等度の硬度。眼球との境界は明

デスミンおよびミオグロビンの免疫組織化学的所見より瞭。

横紋筋肉腫と診断した。横紋筋肉腫の好発部位として口組織所見：腫瘍と眼球との連続性はなく結合組織で区画

腔内領域（特に舌，硬口蓋）が挙げられているが，眼窩されていた。N/C 比の高い大型，多角形あるいは紡錘内における発生は非常に稀である。今回の症例は標本作

形の腫瘍細胞がび漫性に増殖し（図 1），辺縁部では浸製部位により横紋が明瞭な細胞も示されたが，形態学的潤像が認められた。腫瘍細胞の核は大小不同，多形で，に多形型の腫瘍細胞が優勢の場合，他の腫瘍との鑑別が異型核や多核細胞が多数存在し，核分裂像も豊富であっ重要と考えられた。

た。腫瘍細胞が線維性結合組織からなる胞巣状の隔壁に

（渋谷

久）

4（58）

日生研たよりマウスの小脳腫瘤
東京農工大学獣医病理学教室

第 48 回獣医病理学研修会標本 No. 970

動物：p53 ホモ欠損マウス，雄，19 週齢。
臨床事項：本マウスは，無処置飼育 19 週目に神経症状を示したため，殺処分した例である。
剖検所見：剖検で小脳底部にφ 5 〜 7 mm の白色腫瘤が確認された。
組織所見：本腫瘤は小脳原発（図 1）で，卵円〜楕円形
で辺縁不整な核と乏しい胞体を持つ異型性を伴った細胞の充実性増殖を特徴としていた。多くの細胞が 1 個の核小体を容れ，アポトーシス及び有糸分裂像は多数認める
も，壊死巣はなかった。リボン状配列やロゼットといった特定の分化を示す所見は認められなかった（図 2）。
免 疫 染 色 で は，一 部 の 細 胞 で Synaptophysin（図 3），
MAP2（図 4），及び S–100 は陽性であったが，GFAP 及
び Vimentin 等のグリア細胞マーカーは陰性であった。
神経外胚葉幹細胞マーカーの Nestin（図 5）は陽性であった。
診断：小脳神経芽腫（Cerebellar neuroblastoma）
考察：本症例は組織学的所見と Nestin 陽性所見から，異型性の強い胎児性腫瘍であると考えられた。Nestinは神経幹細胞のみならず，発達途上の放射状グリア細胞やバーグマングリア細胞での発現も知られている。しかし本症例の場合，Nestin 陽性細胞は GFAP や Vimentin
陽性ではなかったことから，グリア細胞ではなく幹細胞の性格を示すものと考えられた。また，Synaptophysin
や MAP2 の陽性細胞も出現しており，神経細胞への分化傾向が窺えた。p53 ホモ欠損マウスでは，更に PARP
等の遺伝子改変を行った場合では髄芽腫が高率に発生するが，p53 ホモ欠損のみでは小脳胎児性腫瘍の発生は稀である。以上より，本来であれば同じ遺伝子改変マウスに発生する複数の小脳腫瘍でその生物学的特性を検討して総合的に判断すべきであり，ラット・マウスの誘発脳腫瘍では GFAP の反応性が悪いという問題点が残るものの，本症例を検討した限りでは，産業動物における神経腫瘍の WHO 分類に従った場合，小脳神経芽腫と診断するのが適切であると考える。
（吾郷恭平，渋谷 淳）
参考文献：
1. Koestner, A. et al. 1999. Histological Classification ofTumors of the Nervous System of Domestis Animals. pp.
25 – 26. In : World Health Organization, Inter national
Histological Classification of T umors of Domestic
Animals, 2nd series（Shulman, F. Y. ed.）, The Armed
Forces Institute of Pathology, Washington, D. C.
2. Wetmore, C. et al. 2000. Cancer Res. 60 : 2239–2246.
3. Burger, P. C. and Scheithauer, B. W. 2007. Tumors of
the Central Nervous System. pp. 251–294. In : AFIP Atlasof Tumor Pathology, 4th series（Silverberg, S. G. and
Sobin, L. H. eds.）, American Registr y of Pathology,
Washington, D. C.
4. Wang, X. et al. 2007. Mol. Cell. Biol. 27 : 7935–7946.
5. Tong, W. M. et al. 2003. Am. J. Pathol. 162 : 343–352.
6. Yan, C. T. 2006. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103 : 7378–
7383.

55（9），2009

5（59）

レビュー

リポソームワクチンによる粘膜免疫の誘導〜ウシ乳房炎に対するリポソームワクチン〜
渡来

はじめに

仁（大阪府立大学）

粘膜免疫

感染症の多くは粘膜を介して感染する。そのため動物において粘膜は，生体が直接外界と接し無数

粘膜感染を防止できる粘膜ワクチンは感染症を予防の病原微生物や外来抗原などの異物と直接接触する

する上で特に有効である。従来から行われている注

最前線である。外部環境と接する界面の粘膜は，同射によるワクチンは，全身免疫を効率よく誘導でき

じく外界と接する皮膚に比べて数百倍の表面積を有るが，病原微生物の感染部位である粘膜局所には免しており，さまざまな病原微生物にとって動物体内疫応答を誘導できない。粘膜局所に免疫応答を誘導に侵入する主要な経路となっている。そのため，あするための粘膜ワクチンを開発するためには，粘膜らゆる異物の体内への侵入を阻止する上で，粘膜面免疫誘導組織へ効率よくワクチン抗原をデリバリーにおける免疫防御機構が重要な役割を果たしている。

できるシステムの構築が重要となる。しかしながら， 例えば，消化管や呼吸器などの粘膜は，絶えず暴露
粘膜局所の免疫機構を刺激し，粘膜上に抗原特異的されているウイルス，細菌などの微生物，異物の侵な免疫応答（粘膜免疫）を誘導できるデリバリーシ入を阻止するために，粘膜免疫を誘導する誘導組織

ステムはまだ開発されていない。

と実際に粘膜免疫が機能する実行組織からなる共通

近年，粘膜免疫誘導組織にワクチン抗原を送達さ

粘膜免疫機構（common mucosal immune system：

せるシステムとしてリポソームが注目されている。

CMIS）を形成し，粘膜局所において生体防御を営

リポソームは脂質二重層から成る人工マイクロカプ

んでいる（図 1）［9, 10］。消化器・呼吸器の粘膜面セルである。そのため種々の病原体の抗原決定基をに存在する粘膜関連リンパ組織（mucosa–associat-

もつ物質をその膜上に再構成することができるだけed lymphoid tissue：MALT）はその中核をなし，ほでなくカプセル内に封入することもできる。この様

乳 類 で は 鼻 咽 頭 関 連 リ ン パ 組 織（nasophar ynx –なリポソームは，免疫担当細胞への抗原の提示をよ

associated lymphoid tissue：NALT），気 管 支 関 連

り有効なものとするように働くため，ワクチンキャ

リンパ組織（bronchus–associated lymphoid tissue：

リアーとしてのリポソームの応用研究が多くなされ

BALT），腸管関連リンパ組織（gut–associated lym-ている。しかしながら，これまでのワクチンキャリ

phoid tissue：GALT）がある。また鳥類では，ハーアーとしてのリポソームでは免疫応答の誘導が不十ダー腺も MALT として機能している（図 1）。これ分であり問題があった。そこで筆者は，効率の良い

らいずれかの MALT の粘膜面を介して侵入してき免疫誘導能をリポソームに持たせるために新たにた抗原は，粘膜免疫誘導組織の上皮細胞層に存在す

pH 感受性膜融合高分子を構築した。新規 pH 感受

る M 細胞によって取り込まれ，その後，下層に存性膜融合高分子を修飾したリポソームは高い免疫応

在するマクロファージや樹状細胞などの抗原提示細答を誘導できることから，家畜における感染症予防

胞へ効率的に抗原が送達され，抗原特異的な粘膜免のための新規リポソームワクチンとして応用が可能

疫が誘導される［1, 4, 7］。

である。今回，ウシ乳房炎予防のための粘膜ワクチ

このように，粘膜免疫が誘導されるためには，粘ン（経鼻ワクチン）開発のために新規 pH 感受性膜

膜面を介した抗原の取り込みが必要であり，従来行

融合高分子修飾リポソームを応用したので，その概われている筋肉内や皮下へのワクチン接種では誘導要を紹介する。

されない。感染症の多くは粘膜を介して起こる。そ6（60）

日生研たより

図1

粘膜免疫システムのため，効果的な予防法の手段として，粘膜免疫がソームが，樹状細胞に取り込まれた後，エンドソー重要となっている。さらに，粘膜面を介した免疫誘ム膜と融合することが重要である。そのため筆者ら導は，粘膜局所のみならず全身における免疫も活性は，エンドソームの持つ特殊環境である弱酸性の環化できることから，感染症予防において臨床への応

境下で膜融合を起こす pH 感受性膜融合高分子［サ用が期待されている。

クシニル化ポリグリシドール（SucPG）ならびにメ
チルグルタリル化ポリグリシドール（MGluPG）：
図 2］を構築し，これらの高分子を修飾した新規

pH 感受性膜融合高分子修飾リポソーム
1）pH 感受性膜融合高分子

pH 感受性膜融合リポソームを考案した（図 2）。
図 2 に示すように，pH 感受性膜融合高分子であ

粘膜免疫を効率よく誘導するためには，粘膜免疫る SucPG ならびに MGluPG はいずれもカルボキシ

誘導組織にワクチン抗原を送達させる必要がある。

ル基（R–COOH）を有している。カルボキシル基（R近年，ワクチン抗原のキャリアー［抗原デリバリー–COOH）は，中性環境下ではプロトン（H＋）が電

システム，
（ADS）
］として人工マイクロカプセルで離してカルボキシラートアニオン（R–COO−）とあるリポソームが注目されており，多くの応用研究なる。そのため，pH 感受性膜融合高分子を修飾しがなされている［2, 3, 5, 6, 8, 12–14］。

たリポソーム膜表面は，中性下においてはカルボキ

リポソームの ADS としての有用性を高めるため

シラートアニオン（R–COO−）を発現し，陰性にには，リポソームに新たな機能を与え，しかも，高荷電し安定化する。陰性に荷電したリポソームは樹いパフォーマンスを実現することが重要となる。リ

状細胞の持つスカベンジャーレセプターを介して細ポソームに新たな機能とパフォーマンスの向上を持

胞内に特異的に取り込まれる事が知られている。取たせるためには，温度，pH，光など，さまざまなり込まれた後，樹状細胞のエンドソーム内において刺激や環境変化に対して感受性を有する高分子を修

リポソームを修飾している pH 感受性高分子のカル

飾 し 機 能 化 す る 必 要 が あ る。ADS と し て の リ ポ

ボキシラートアニオン（R–COO−）がプロトン（H

ソームを考えた場合，高い免疫応答を誘導するため＋）化され，再度カルボキシル基（R–COOH）が構には樹状細胞内に効率よく封入抗原をデリバリーす成される。エンドソームの酸性環境下で形成されたる必要がある。そのためには，抗原を封入したリポ

リポソームの pH 感受性膜融合高分子のカルボキシ

55（9），2009

7（61）

図2

pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームによる樹状細胞内への抗原の搬送

ル基（R–COOH）は，エンドソーム膜のリン酸極きることを示唆するものである。

性基と水素イオン結合し，リポソ−ム膜とエンド2）pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームによるソーム膜が膜融合を引き起こす。その結果，リポ

粘膜免疫誘導ソーム内に封入された物質（抗原）が樹状細胞内へ

そこで，pH 感受性膜融合高分子修飾リポソーム

移行し，効率の良い免疫応答（液性免疫，細胞性免が粘膜ワクチンの ADS として機能し，免疫応答を疫）を誘導する。この様に，リポソームへの pH 感

誘導するかについて明らかにするために，モデル抗受性膜融合能の賦与は，樹状細胞内に効率よく封入

原として卵白アルブミン（OVA）を SucPG を修飾

抗原をデリバリーし，免疫誘導するうえで重要な機した pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームに封入

能となる。
実際に pH 感受性膜融合高分子である SucPG を修飾した pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームに

SucPG リ ポ ソ ーム に よ る ウ シ マ ク ロ フ ァージ 細 胞
MP3 内へのカルセインの導入蛍光物質であるカルセインを封入し，ウシマクロファージ細胞株である MP3 細胞を用いて細胞質内へのカルセインのデリバリーについて調べて見ると，pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームによりカルセインが MP3 細胞に導入され，細胞質内にカルセインの蛍光が観察された（写真 1）。この結果は，
カルセインが pH 感受性膜融合高分子修飾リポソー
ムにより効率よく MP3 細胞の細胞質に導入されていることを示しており，pH 感受性膜融合高分子修
飾リポソームをワクチンの ADS として使用した場
合，樹状細胞内に効率よく封入抗原をデリバリーで

写真 1 pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームを用いた細胞内への物質の搬送8（62）

日生研たより図3

pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームによる免疫応答

さ せ，マ ウ ス に 経 鼻 免 疫 を 行 っ た。そ の 結 果，を用いて経鼻免疫した場合においても認められた。

SucPG を修飾したリポソームは，SucPG を修飾し

特に，MGluPG 修飾リポソームは SucPG 修飾リポていないリポソームで免疫した場合に比べ血清ならソームに比べ高い免疫応答を誘導できることが示さ

びに腸液中に有意に高い抗 OVA 抗体（IgG，IgA）

れた（論文投稿準備中）。これらの結果は，pH 感受を誘導した（図 3）。IgE 抗体の誘導はなかった。さ

性膜融合高分子（SucPG あるいは MGluPG）修飾リ

らに，血清中の抗 OVA–IgG 抗体のサブクラスにつポソームを応用した経鼻ワクチンは，全身免疫ならいて解析した結果，SucPG を修飾していないリポびに粘膜局所免疫を効率よく誘導でき，しかも，誘ソームで免疫した場合においては，Th2 タイプのサ導される免疫応答は，液性免疫，細胞性免疫の両者

ブ ク ラ ス で あ る IgG1 の み 誘 導 さ れ て い た が，であることを示している。

SucPG を修飾したリポソームでは Th2 タイプのサブクラスである IgG1 のみならず，Th1 タイプのサブクラスである IgG2a ならびに IgG3 の誘導を認めウシ乳房炎用リポソームワクチン

た（図 3）。さらにサイトカインの mRNA について

1）ウシにおける免疫誘導効果

RT–PCR 法により解析した結果，SucPG を修飾し上述した免疫誘導能に優れる pH 感受性膜融合リ

た pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームで免疫しポソームが，ウシにおいてもマウスと同様に粘膜ワたマウスの脾臓リンパ球においてインターフェロン

クチンとして機能することを明らかにするためにウ（IFN）–γならびに IL–4 の mRNA の発現が認めら

シを用いて解析を行なった。具体的には，高い免疫れた（図 3）。同様の免疫応答の結果は，MGluPG

応答を誘導できる pH 感受性膜融合高分子（MG-を修飾した pH 感受性膜融合高分子修飾リポソーム

luPG）を修飾したリポソーム（MGluPG リポソー

55（9）
，2009

9（63）

図4

黄色ブドウ球菌（SA）抗原封入 MGluPG リポソーム経鼻免疫牛における免疫応答ム）に黄色ブドウ球菌（SA）の破砕抗原を封入し，液性免疫のみならず細胞性免疫も誘導できることを

7 〜 10 歳の乳牛（1 群 3 頭）に 2 週間間隔で 3 回経示唆するものである。さらに，SA 抗原封入 MGlu-

鼻免疫を行い，全身ならびに乳房局所における免疫

PG リポソームのウシへの経鼻投与による免疫誘導

誘導効果について調べた。経鼻免疫の抗原量は，1

効果は，ウシ乳房炎に対する新規リポソーム経鼻ワ

頭 1 回当たり 5 mg（破砕抗原のタンパク量）とした。

クチン開発の可能性を示すものである。

図 4 に示すように，SA 抗原封入 MGluPG リポソー
ムを乳牛に経鼻免疫した結果，免疫前に比べ，免疫2）乳房炎発症防御効果

後 42 日目においては血清ならびに乳汁中に有意にウシにおいて，SA 抗原を封入した新規 pH 感受

高い抗 SA 抗体（IgG，IgA）の誘導が確認された。

性膜融合高分子修飾リポソーム（MGluPG リポソー

血清中では，IgA 抗体に比べて高い IgG 抗体が誘導

ム）の経鼻免疫により，全身ならびに乳房局所におされたのに対して，乳汁中においては，IgG 抗体にいて SA に対して高い免疫応答が誘導できた（図 4）。

比べ，高い IgA 抗体が誘導された。一方，SA 抗原

そこで，SA に対する免疫誘導牛の乳房内へ SA をのみを経鼻免疫した場合においては，血清，乳汁中，接種し，SA 抗原封入 MGluPG リポソームワクチン

いずれにおいても抗 SA 抗体（IgG，IgA）の誘導が確認されなかった。この結果は，MGluPG 修飾リ
ポソームを応用したウシ経鼻ワクチンは，全身免疫ならびに粘膜局所免疫を効率よく誘導でき，粘膜ワクチンとして機能していることを示唆している。さらに，経鼻ワクチン接種牛の末梢血リンパ球を用いて Th1 サ イ ト カ イ ン で あ る イ ン タ ーフ ェロ ン
（IFN）– γの mRNA の発現について RT–PCR 法により解析した結果，免疫牛の全例においてインター
フェロン（IFN）– γの mRNA（77 bp）の発現が確認された（写真 2）。これらの結果は，MGluPG リ
ポソームを応用した経鼻ワクチンは，ウシにおいて

写真 2 黄色ブドウ球菌（SA）抗原封入 MGluPG リポ
ソーム経鼻免疫牛由来末梢血リンパ球におけるインターフェロン –γmRNA の発現解析

10（64）日生研たより表群*

黄色ブドウ球菌（SA）感染後の乳汁からの菌の分離
SA 陽性頭数 / 実験に供した頭数

感染前

1 日目

2 日目

3 日目

4 日目

5 日目

6 日目

7 日目

0/3

0/3

3/3

3/3

3/3

3/3

3/3

3/3

（0.0）

（0.0）

（100）

（100）

（100）

（100）

（100）

（100）

0/3

0/3

0/3

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0/3

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0/3

（0.0）

（0.0）

（0.0）

（0.0）

（0.0）

（0.0）

（0.0）

（0.0）

Cont.

Vac.
* Cont., コントロール群 ; Vac., ワクチン接種群
カッコ内は % を表す。

による乳房炎発症防御効果について，乳汁中からの数は，乳汁 1 ml 当たり 10 万以下で推移し，乳房炎

SA の分離，乳汁体細胞数の変化を指標に試験をの発症は認められなかった（図 5）。この結果は，行った。

SA 抗原封入 MGluPG リポソームワクチンにより乳まず，ワクチン接種群，ワクチン非接種群の乳牛

房内の粘膜局所に誘導された免疫応答が SA の感染の乳房内へ乳頭から 100 CFU の SA を感染させ，そ防御に有効に働いていることを示しており，今後のの後，乳汁から SA の分離を行った。その結果，ワ

ウシ乳房炎ワクチンの開発において，新規 pH 感受

ク チ ン を 接 種 し て い な い コ ン ト ロ ール 群（Cont.

性膜融合高分子修飾リポソームワクチンが有望であ群）の乳牛においては，接種後 2 日目から実験期間ることを示唆している。

中の間，実験に供した乳牛全例の乳汁から SA が分離された（表）。一方，ワクチン接種群（Vac. 群）
においては，実験期間中，いずれの乳牛の乳汁からおわりにも SA は分離されなかった（表）。さらに , 乳汁体細

今回，新たに構築した pH 感受性膜融合高分子を胞数の変化について調べた結果，コントロール群

修飾したリポソームのワクチンキャリアーとしての（Cont. 群）の乳汁においては，菌接種後 2 日目で高い免疫誘導能と，それを応用したウシ乳房炎粘膜

体細胞数が乳汁 1 ml 当たり 20 万を超え，3 日目以（経鼻）ワクチンの開発について概説した。pH 感受

降は乳汁 1 ml 当たり 30 万以上の高い値を示し，乳性膜融合高分子をリポソームに導入することにより，房炎を発症した（図 5）。しかしながら，ワクチン

抗原提示細胞である樹状細胞の細胞質内にワクチン

接種群（Vac. 群）においては，実験期間中，体細胞抗原を効率よく送達できる機能をリポソームに与え

図5

黄色ブドウ球菌（SA）抗原封入 MGluPG リポソーム経鼻免疫牛における免疫応答55（9），2009

11（65）

ることができた。この機能は，ワクチン抗原送達シ

1997. Application of liposomes for development of

ステムとしてのリポソームが，高い免疫応答を効果

oral vaccines : Study of in vitro stability of lipo-

的に誘導する上で重要な機能となる。リポソームの

somes and antibody response to antigen associated

pH 感受性膜融合能による樹状細胞の細胞質内へのwith liposomes after oral immunization. J. Vet.

封入抗原の内在化は，免疫誘導（液性免疫ならびにMed. Sci. 59 : 1109–1114.

細胞性免疫）に役立つ抗原搬送システムであり，感4. Hiroi, T., Iwatani, K., Iijima, H., Kodama, S., Yanag-

染防御に効果的なワクチン開発に不可欠の新技術とita, M. and Kiyono, H. 1998. Nasal immune system

いえる。pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームを: distinctive Th0 and Th1/Th2 type environments

応用したウシ乳房炎発症予防の新規経鼻ワクチンは，in murine nasal–associated lymphoid tissues and乳房内粘膜に IgA を中心とした免疫応答を効率よ

nasal passage, respectively. Eur. J. Immunol.

く誘導でき，誘導された免疫応答は原因菌の乳房粘28 : 3346–3353.

膜への定着阻止に有効に働くと考えられ，ウシ乳房

5. Irie, T., Watarai, S. and Kodama, H. 2003. Humoral炎ワクチンとして機能することが示唆された。そのimmune response of carp（Cyprinus carpio）in-

ため，pH 感受性膜融合高分子修飾リポソームを応

duced by oral immunization with liposome – en-

用したリポソームワクチンの技術は，実際の感染症

trapped antigen. Dev. Comp. Immunol. 27 : 413–421.

予防に効果的な免疫応答を誘導できる有用な技術で6. Irie, T., Watarai, S., Iwasaki, T. and Kodama, H.

あるといえる。また，封入抗原を樹状細胞の細胞質

2005. Protection against experimental Aeromonas

内へ内在化できる本技術は，感染防御に有効な細胞

salmonicida infection in carp by oral immunisation

性免疫応答を効率よく誘導できる。これまで生ワクwith bacterial antigen entrapped liposomes. Fish

チンでしか誘導することが出来なかった細胞性免疫

Shell. Immunol. 18 : 235–242.

応答が本技術を応用することにより不活化抗原でも誘導でき，より安全性の高いワクチン開発が可能と

7. Kunkel, E. J. and Butcher, E. C. 2003. Plasma–cellhoming. Nat. Rev. Immunol. 3 : 822–829.

なる。今後，pH 感受性膜融合高分子修飾リポソー

8. Li, W., Watarai, S., Iwasaki, T. and Kodama, H.

ムを応用したワクチンの技術が，多くの家畜感染症

2004. Suppression of Salmonella enterica serovarのワクチン開発のための新規技術として応用される

Enteritidis excretion by intraocular vaccination

ことを期待している。

with fimbriae incorporated in liposomes. Dev.
Comp. Immunol. 28 : 29–38.

キーワード：リポソーム，膜融合リポソーム，粘膜
免疫，粘膜ワクチン，ウシ，乳房炎

9. McDermott, M. R. and Bienenstock, J. 1979. Evidence for a common mucosal immunologic system.
I. Migration of B immunoblasts into internal, respiratory, and genital tissues. J. Immunol. 122 : 1892–

引用文献

1898.

1. Brandtzaeg, P., Farstad, I. N. and Haraldsen, G.

10. Mestecky, J. 1987. The common mucosal immune

1999. Regional specialization in the mucosal im-

system and current strategies for induction of im-

mune system: primed cells do not always homemune responses in external secretions. J. Clin.

along the same track. Immunol. Today 20 : 267–277.

Immunol. 7 : 265–276.

2. Fukutome, K., Watarai, S., Mukamoto, M. and Ko-

11. Tana, Watarai, S., Isogai, E. and Oguma, K. 2003.

dama, H. 2001. Intestinal mucosal immune re-

Induction of intestinal IgA and IgG antibodies pre-sponse in chickens following intraocular immuniza-

venting adhesion of verotoxin–producing Esche-tion with liposome–associated Salmonella Enterica

richia coli to Caco–2 cells by oral immunization

Serovar enteritidis antigen. Dev. Comp. Immunol.

with liposomes. Lett. Appl. Microbiol. 36 : 135–139.

25 : 475–484.
3. Han, M., Watarai, S., Kobayashi, K. and Yasuda, T.

12. Uemura, A., Watarai, S., Ohnishi, Y. and Kodama,
H. 2005. Protective effect of anti–ganglioside anti-12（66）

bodies against experimental Trypanosoma brucei
infection in mice. J. Parasitol. 91 : 73–78.

日生研たより14. Watarai, S., Tana, Inoue, K., Oguma, K., Naka, K.
and Kodama, H. 2000. Inhibitory effect of intesti-

13. Watarai, S., Han, M., Tana and Kodama, H. 1998.

nal anti–globotriaosylceramide IgA antibody on

Antibody response in the intestinal tract of miceverotoxin–induced cytotoxicity. Lett. Appl. Micro-

orally immunized with antigen associated with li-

biol. 31 : 449–453.

posomes. J. Vet. Med. Sci. 60 : 1047–1050.

58th Western Poultry Disease Conference &American College of Poultry Veterinarians Work Shop
参加報告
場所：Sacramento, California, USA
期間：2009 年 3 月 22 日〜 3 月 25 日
永野哲司
地になっていた。市街地には大きなショッピング
はじめにモールもあったが，不況の影響かシャッターが閉じ2009 年 3 月にアメリカ・カリフォルニア州サクられている店舗をいくつも見かけた。街全体として

ラ メ ン ト に お い て，58th Western Poultry Disease

治安は良いようであったが，滞在中に日本人の姿をConference（WPDC）及び American College of Poul-

見かけることはなく，一人での出張と拙い語学力もtry Veterinarians（ACPV）Work Shop が開催され，重なり，不安を感じずにはいられなかった。このよ

参加する機会を頂きましたのでその概要を報告いた

うに，一昨年に参加したカジノの街ラスベガスとはします。
成田よりサンフランシスコを経由して到着したサクラメント国際空港は想像していたよりも小さな空
港で，日本人観光客も訪れないアメリカ西部の偏狭な片田舎に着いた印象を受けた。しかし，そこから高速道路を使ってタクシーで 15 分程の市街地に入ると，多くのビルディングの中にカリフォルニア州の立派な州庁舎が建ち，Light Rail と呼ばれる路面
電車が街中を走る大きな都市であった。街の傍を流れるサクラメント川（写真 1）沿いには，ゴールド
ラッシュ時代の町並みを再現したオールドサクラメ
ントがあり，多くのアメリカ人観光客が訪れる観光

写真 1

55（9），2009

13（67）

一転したサクラメントの風景に少し戸惑いながら，ングを失ったことが数度となくあった。また，各国学会を迎えることとなった。

の鶏病専門家たちが，ポスター会場などで楽しくそして陽気に親交を深めつつも，真剣に最新情報の交

WPDC 及び ACPV ワークショップが開催された換を行っている姿を多く見かけた。

の は，前 述 の オ ール ド サ ク ラ メ ン ト の 傍 に 建 つ以下に，ワークショップ及び学会の概要について

Holiday Inn Capitol Plaza（写真 2）で，中規模なが簡単に紹介する。

ら立派な コンベンションホール（写真 3）を備える
ホ テ ル で あ っ た。ま ず 始 め，3 月 22 日 に ACPV
ワークショップが開催され，約 300 名が参加して終ACPV Work Shop について

了後に全員に修了証書が配布された。翌 23 日〜 25「Salmonella in Poultry: Epidemiology, Regulations,

日の 2 日間半にかけて WPDC が開催され，アメリ

Detection, and Interventions」と題して，14 題の教カ，カナダ，メキシコ，イタリア，イギリス，イス

育講演がなされた。現在のところ，アメリカでは採ラエル，ブラジル，オーストラリア，バングラデ

卵鶏よりもむしろ肉用鶏のサルモネラ汚染が問題視

シュ，中国，日本と国際色豊かな 182 名が参加した。

さ れ て い た。全 般 的 な 分 離 状 況 に つ い て は，講演や質疑応答は，ジョークが飛び交う和やかな雰

Thompson が最も高頻度に分離されること，ゲンタ

囲気の中で行われたが，突如として発せられるアメ

マイシン耐性株が高率に分離されること，長期的なリカンジョークの多くは理解しがたく，笑うタイミ

推移では Kentucky の分離率が上昇していることが示された。鶏卵に限ると Heidelberg が高率に分離されていることも示された。イギリスでは，ヒトのEnteritidis 食中毒の発生は減少したものの依然として問題であることが示された。イギリスでの菌分離状況では，最も高頻度に分離される血清型は Livingstone であることが示された。また，疫学情報として重要な指標とされているファージ型について，
以前から優位であったファージ型 4 が減少して他の様々なファージ型株が増えていること，培地での継代によって分離株のファージ型が変異してしまう問題を指摘していた。サルモネラワクチンについては，
USDA の P. Holt 博士から米国で使用されている生写真 2

ワクチン及び不活化ワクチンの紹介があった。その発表のなかで，不活化ワクチンは臓器への播種を抑えること，生ワクチンは侵入・増殖を抑えることでそれぞれ効果を発揮すると紹介していた。さらに，Heidelberg，Kentucky，Berta を抗原としたブロイ
ラー種鶏用 3 価ワクチンの有効性についても紹介していた。その他に，ナノテクノロジーを応用した新規サルモネラ検出方法や，食鳥処理工程でのサルモ
ネラ汚染の問題などについて講演があった。

58th WPDC について
演題は，サルモネラ，カンピロバクター，クロス
写真 3トリジウム，鳥インフルエンザ，伝染性喉頭気管炎，

14（68）日生研たよりあった。発生報告では，バングラディシュでの鳥イ
ンフルエンザ H9 発生事例，イタリアでの伝染性喉頭気管炎の発生状況，M. iowae 感染により背骨が変形する事例，北カリフォルニア州で流行している
高病原性 IBDV の事例，Enterococcus cecorum による骨髄炎及び関節炎，トリコモナス症などが発表された。研究発表では，IBV の RT–PCR 型別，Metapneumovirus 感染における CD8 陽性 T 細胞の働き，病原性の異なる IBDV 株の遺伝子系統樹解析などが発表された。鶏大腸菌症の事例報告では，非臨床的な感染が生産性に大きな影響を与えていることが紹
写真 4介された。鶏大腸菌生ワクチンについては，血清型
O1，O2 又は O18 株に対して有効性を示したデータ

コクシジウム，大腸菌症，マイコプラズマ，伝染性が紹介された。MS 生ワクチンについては，日本全気管支炎など多岐に亘り，病性鑑定報告を加えて，

薬工業株式会社の宗像氏から採卵鶏投与での成績が招待講演 8 題，口頭発表 45 題，ポスター発表 14 題発表された。

で 行 わ れ た。そ の 中 で，当 研 究 所 か ら は，「Fieldポスター発表では，前述の鶏大腸菌生ワクチンに

trials to test safety and efficacy of a live attenuated

ついて七面鳥でも有効であった成績が発表されたほ

vaccine using a mutant of avian pathogenic E.coli se-

かに，エルサルバドルの野外ブロイラーに用いたとrovar O78 in broiler chickens」の演題をポスターでころ，血清型 O5，O79，O143 感染に対して有効性発表した（写真 4）。

を示した成績が報告された。エルサルバドルの野外応用例では，実際に野外で効果を発揮するには，継招待講演では，淘汰と出荷制限を基本対策とした

続的に使用することや複数回投与が必須であるとコ

低病原性鳥インフルエンザの防除成功事例，養鶏関

メントしていた。また，イタリアでの Metapneu-

係者向けのマスコミ対策等が紹介された。興味深い

movirus 感染の報告などもあった。

症例として，ペンシルバニア地区から Enterococcus

最後に，来年度 59th WPDC は 2010 年 4 月 18 日

suis を原因とした骨髄炎及び関節炎，原因不明の結〜 21 日 に カ ナ ダ・バ ン ク ーバ ー の The Fairmont

膜炎，ブラキスピラ症，伝染性コリーザによる眼瞼

Hotel Vancouver で開催されることが告げられた。

浮腫，七面鳥の Mycoplasma iowae 感染症，狩猟鳥

さらに，2011 年にサクラメント，2012 年にフェニッのマイコプラズマ症が，カナダ西部地区から，サルクス，2013 年にサクラメント，2014 年にメキシコ

モネラ症，七面鳥の白血病，クロストリジウム症，
低病原性鳥インフルエンザ，鶏痘などの報告があった。Enterococcus 骨髄炎は一般演題でも発表があり，アメリカで近年問題となっているようである。
口頭発表では，ワクチンに関する演題が比較的多かった。七面鳥の皮膚炎に対するクロストリジウム
毒素ワクチン，インフルエンザ HA 抗原を組み込んだ組換えアデノウイルスワクチン，Fort Dodge Animal Health 社製の鶏大腸菌生ワクチン，Mycoplasma synoviae（MS）生ワクチン，インターベット /SPAH 社 製 の 組 換 え HVT ワ ク チ ン，Merial 社 のIBDV の VP2 遺伝子を組み込んだ組換え HVT ワクチンなどについて有効性を示したデータの発表が

写真 5

55（9），2009と開催地が予告され，今後しばらくは隔年でのサクラメント開催が決定したことも発表された。

15（69）

思いだす。
最後に，末筆で恐縮ですが，今回の学会発表の機会を与えてくださった関係者の方々，並びに発表
データの収集及びとりまとめについてご助力頂きまあとがきした諸氏に深謝いたします。
（主任研究員）

海外での様々な情報収集をするべく，出発前に本屋を数軒まわって観光ガイド本を捜したものの，サクラメント観光を紹介した情報誌を入手することができなかった。もともと時間的な余裕もなかったが，学会以外の情報収集は極めて乏しいものとなってしまった。その中で唯一，滞在期間中に州庁舎を見学したが，当然のようにアーノルド・シュワルツェ
ネッガー州知事の姿を見かけることはなかった（写真 5）。少しは期待していただけに残念であった。
また，学会終了後に訪れたオールドサクラメントの
町並みは開拓時代のアメリカの雰囲気を十分に感じることができるものであった（写真 6）。ただ，日本人の感覚で言えば日光江戸村か東映太秦村みたいなものかと考えながら，一人寂しく散策したことを

写真 6

新 人 紹 介個人情報保護のため、新人紹介欄は削除させていただきました（2010年9月）。

16（70）日生研たより日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（隔月 1 回発行）

（通巻 558 号） 平成 21 年 8 月 25 日印刷
発行所
生命の「共生・調和」を理念とし，生命体の豊かな明日と，研究の永続性を願う
気持ちを快いリズムに整え，視覚化したものです。カラーは生命の源，水を表す「青」としています。

〒 198 0024

東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL：0428（33）1056（企画学術部） FAX：0428（33）1036
発行人
編集室
印刷所

表紙題字は故中村⒥治博士の揮毫

平成 21 年 9 月 1 日発行（第 55 巻第 5 号）

財団法人 日本生物科学研究所

林

志鋒

委

員／竹山夏実（委員長），入江拓也，佐藤寛子

事務／企画学術部

株式会社 精ഛ社（無断転載を禁ず）