2024 APRIL
No. 631

第 70 巻 第 2 号（通巻 631 号）2024 年（令和 6 年）4 月

挨拶・巻頭言バランス、その徒然なるままに！
..................................... 山手丈至（ 2 ）レビュー
養蜂業で使用されている抗生物質と腐蛆病菌の薬剤耐性機構.................................. 髙 松 大 輔（ 3 ）アフリカ豚熱の血清診断法―p11.5 ELISA の開発―..................................渡 邉 瑞 季（12）記録
学会発表演題 ...................................（20）

おしらせ
編集後記 ..........................................（20）日生研たより 70（2），20242（18）バランス、その徒然なるままに！
山手丈至

食物連鎖は生命誕生後脈々と築かれてきた見事なまでの生態系のバランスといえる。環境の汚染・破壊、そして、残念ながら今も続くウクライナ戦争やあちこちで絶えない民族間の紛争など、バランスを欠く人間のエゴは地球規模での生態系を壊しつつある。地道ではあるが、SDGs の目標に向け個々人の意識の持ち方や取り組みが重要となる。インバランスを断ち切る叡智の結集が求められる。
「山路を登りながら、こう考えた。智に働けば角が立つ。情に棹させば流される。意地を通せば窮屈だ。とかくに人の世は住みにくい。
」夏目漱石の著書「草枕」の冒頭文である。人生哲学が込められている。古希が近づく私にとってこの意味するところは、拙い人生経験ではあるが、それとなく分かる。
「知性」
「感情」
「意志」という 3 つの精神、それらのバランス感覚を保つことの重要性が説かれている。
では、どのように生きればよいのだろうか。
「……住みにくいと悟った時、詩が生れて、画（え）が出来る。人の世を作ったものは神でもなければ鬼でもない。矢張り向う三軒両隣りにちらちらする唯（ただ）の人である。
」と続く。芸術や文学、そして人とのつながりや何気ない会話が、豊かな潤いのある人生を作りだすと解釈できる。このような創造力や想像力は、人類が進化の過程で発達させた大脳新皮質が司る。人が人らしい所以である。
転じて、私たち多細胞生物は、細胞個々の相互のコミュニケーションにより、体内外からの攪乱作用（ストレス）を受けても最小限の影響に留め、健常な生理的状態を保つバランス機能が備わっている。
これが「ホメオスタシス（恒常性）」である。私見ではあるが「知性」「感情」「意志」は、それぞれ恒常性に係わる「自律神経」「内分泌」「免疫」と置き換えることが出来るかもしれない。この 3 つのシス
テムの司令塔が「脳機能」である。ユニークな創造力を生み出し、他人を思う想像力を育む原動力は、
恒常的な精神活動による思惟力に依拠すると考える。あながち外れていないと思う。
しかし、私たちの生体機構において時にバランスの乱れが生じることがある。最近高校生を対象にし4 4 4 4 4た公開講座を依頼され、生物の多様な生命現象の「おもしろさ」について話すとともに、私が専門とする獣医学、特に病理学とからめて、病の成り立ちについて解説した。細胞負荷によりタンパク質の立体構造が壊れると小胞体ストレスが生じアポトーシスが誘導されたり、時にアルツハイマー病などの神経変性疾患の発症と関連すること。また、肝機能障害では黄疸や肝性脳症が、そして慢性腎臓病では尿毒症、線維性骨異栄養症や転移性石灰沈着症が生じるなど。その際、聴講していた生徒さんは背筋を伸ばし、前を向き、眼が輝きはじめた。
「病」のメカニズムを知ることは生物の授業がより魅力的に映るようだ。
「正常から異常の、異常から正常のメカニズム」を解明すること。そこに生命を科学する醍醐味がある。
すなわち、生物学は、生体イベントである「生老病死」の機序を明らかにし、生命現象の原理・原則をみつけ、有用な活用方法を探究する学術領域と捉えることができる。本研究所の定款第 3 条には「当法
人は、生物科学特に動物の生理及び病理についての研究調査を行うとともに、それらを応用した動物用医薬品等の研究を行い、学術の振興及び畜産の発達並びに公衆衛生の進歩に寄与することを目的とする。
」とある。まさに、生物学の神髄である「基礎から応用、そしてワクチン開発を通じた社会貢献」
が一つのバランス軸として明確に謳われている。
生命はまだまだ不可思議に満ち溢れている。
「生態学的バランスとは？」自問しながらあるべき未来の地球を創りだして欲しい。John Lennon の「imagine」を口ずさみながら……。若い研究者の意欲に期待したい。

（評議員）

日生研たより 70（2）
，2024

3（19）

レビュー

養蜂業で使用されている抗生物質と腐蛆病菌の薬剤耐性機構
たかまつだいすけ

髙松大輔（農研機構動物衛生研究部門 動物感染症研究領域）
ダメージにはならない。一方、蜂群の維持に必要なはじめに幼虫が大量に死んでしまうと、産卵以外の全ての仕ミツバチはハチミツ採取の目的だけではなく、多事を担う働き蜂の供給が途絶えてしまい、蜂群は一くの果物や作物の受粉に利用されている世界の農業

気に弱体化する。すなわち、幼虫や蛹などの蜂児のを支える重要な生物資源の一つである。従って、健健康に悪影響を与える要因は、蜂群全体の重大な健康な蜂群を維持し、健全な農業を守っていくために

康リスクとなる。

は、ミツバチの健康を脅かす一つ一つの要因についミツバチの健康を脅かす要因には様々なものがあて十分な調査・研究を行っていく必要がある。ミツるが、感染症も大きな問題の一つである。特に、蜂バチは、産卵を専門とする 1 匹の女王蜂、数千から児に感染死を引き起こし、蜂群崩壊の引き金にもな

数万匹の働き蜂、そして繁殖の季節にだけ出現するる細菌感染症「腐蛆病」は、最も重要な病気の一つ

雄蜂で 1 つのコロニー（蜂群）を形成している。女であり、家畜伝染病予防法で家畜伝染病に指定され王蜂に産み落とされた卵から孵化した幼虫は、働きている。死んだ幼虫や蛹が腐るという共通の症状の蜂に育てられて 3 週間程度で成虫になる。成虫とため、まとめて腐蛆病と呼ばれているが、この病気なった働き蜂は、初めは巣の中で、掃除、育児、巣にはアメリカ腐蛆病菌（Paenibacillus larvae）によ

作り、ハチミツの貯蔵などの仕事を行い、その後、る ア メ リ カ 腐 蛆 病 と ヨ ーロ ッパ 腐 蛆 病 菌

巣の外に出て餌を集める。すなわち、ミツバチの社（Melissococcus plutonius）によるヨーロッパ腐蛆病

会構造は、巣の内側から外側に蜂が溢れ出す構造にという 2 つの感染症が含まれている。いずれも細菌なっている。巣の外には捕食者をはじめ様々な危険感染症であるため、そのコントロールに抗生物質ががあり、餌集めの途中に命を落とす蜂も多い。しか使用される場合があるが、ハチミツへの残留の懸念

し、女王蜂の産卵が活発な蜂群では、毎日たくさんに加え、海外では薬剤耐性腐蛆病菌の出現も問題にの新しい幼虫が生まれ、たくさんの働き蜂が羽化しなっている。例えば、アメリカでは、オキシテトラて働き手が補充されるので、蜂群にとっては大きな

サイクリン（OTC）、タイロシン（TS）、リンコマ

表1

国内外で養蜂に使用されている主な抗生物質対象
疾病a

使われている／使われていた主な国

備考

ミロサマイシン

AFB

日本

1999 年に承認。現在は販売中止。
日本で本剤に耐性を示す M. plutonius
株の存在が確認されている［8］。

タイロシン

A F B,
EFB

アメリカ、カナダ、日本

日本では 2017 年 9 月に承認（対象疾病は AFB のみ）。
北米で本剤に耐性を示す P. larvae 株の存在が確認されている［3］。

リンコサミド系

リンコマイシン

AFB

アメリカ、カナダ

北米で本剤に耐性を示す P. larvae 株の存在が確認されている［3］。

テトラサイクリン系

オキシテトラサ
イクリン

AFB,
EFB

イギリス、アメリカ、カナダ、インド、アルゼン
チン、スロバキア、オーストラリア

複数の国で本剤に耐性を示す P. larvae
株の存在が確認されている［1 – 3, 9］。

抗生物質

マクロライド系

AFB, アメリカ腐蛆病、EFB, ヨーロッパ腐蛆病a日生研たより 70（2），2024

4（20）

イシン（LCM）がアメリカ腐蛆病のコントロール

れ、≤ 0.05 μg/mL 及 び ≤ 0.1 μg/mL）［7］。し か し、に使用されているが（表 1）、いずれの薬剤に対す

MRM 承認以降は、同様の調査は全く行われておらる耐性 P. larvae 株もすでに検出されている［1 – 4］。

ず、予防薬使用による P. larvae への影響は不明で一方、国内では、16 員環マクロライドであるミあった。MRM も TS も、日本ではアメリカ腐蛆病

ロサマイシン（MRM）がアメリカ腐蛆病の予防薬の予防薬として承認されているが、予防薬として症として 1999 年に承認され、アピテンという商品名

状のない蜂群に薬を使用した場合、そこにたまたまで販売されていた。しかし、アピテンが販売中止に居合わせた M. plutonius も薬に暴露されることにななったため、代わりに同じ 16 員環のマクロライド

る。したがって、アメリカ腐蛆病予防薬が標的でなである TS が 2017 年 9 月に承認され、現在、唯一

い M. plutonius へも何らかの影響を与える可能性がの承認アメリカ腐蛆病予防薬として使われている

あるが、日本では M. plutonius 株の薬剤感受性につ（表 1）。このように日本では、1999 年以降 20 年以

いても調査が行われていなかった。

上も養蜂にマクロライドが使用されてきたことにな

そこで著者らは、1993 年から 2017 年の間に日本るが、国内の腐蛆病菌株の中にこれらの薬剤に耐性

各地で分離された P. larvae 100 株と 1982 年以前かを示す株が存在するのかについては、著者らが腐蛆ら 2016 年までの間に分離された M. plutonius 79 株

病研究に取り組むまではほとんど調べられていな（国内分離株 77 株とイギリス及びパラグアイ由来株かった。本稿では、著者らの薬剤感受性調査結果を［各 1 株］）を用いて、MRM と TS に対する薬剤感

紹介するとともに、腐蛆病菌の薬剤耐性機構や耐性

受性試験を行った［5, 8］。その結果、供試した全て化リスクについて、研究データを紹介しながら考察の P. larvae 株はいずれの薬剤にも高い感受性を示したい。

し（MIC : ≤ 0.25 μg/mL）、耐性株は確認されなかった（図 1）［5］。調査時点で既に 20 年近くマクロラ

国内で分離される腐蛆病菌株の遺伝子型とマクロラ

イド系の薬剤が使用されていたにもかかわらず、耐イドに対する感受性性株がいなかった事実は少々驚きではあったが、養いずれの腐蛆病菌も菌株間で遺伝的な多様性がみ

蜂関係者にとっては良いニュースであった。一方、られ、遺伝子型別でいくつかのグループに分けられ

M. plutonius も全ての株が TS には高い感受性を示ている。2023 年 9 月現在、P. larvae 株は ERIC 型別したが（MIC : ≤ 2 μg/mL）、半数以上の国内分離株と い う 遺 伝 子 型 別 法 で I 型〜V 型 に、Multilocus

は MRM へ の 感 受 性 が 低 下 し て お り（MIC : 16 –sequence typing（MLST）で 48 種 類 の sequence

64 μg/mL）、耐性株とみなされた（図 1）［8］。

type（ST）に分けられており、日本では、ERIC 型
別では I 型と II 型、MLST では ST2、ST10、ST11、
ST15、ST18、ST24 に型別される株が分離されていM. plutonius の MRM 耐性化機構

る［5］。一方、M. plutonius 株には、2023 年 9 月現

マクロライド系抗生物質は、細菌のリボソーム

在、MLST で 40 種類以上の ST が報告されている。

50S サブユニットの構成要素である 23S rRNA に結こ れ ら の ST は、さ ら に 3 つ の グ ル ープ（CC3,

合し、タンパク質の合成を阻害して抗菌作用を示す。

CC12, CC13）に大別することができるが、日本でこれに対して細菌は、「薬剤の細胞外への排出」、「薬はいずれのグループの株も分離されている［6］。

剤の分解・修飾による不活性化」、「リボソームを構

一般的に、抗生物質を使用すれば、薬剤耐性菌の成するタンパク質や 23S rRNA の変異もしくは 23S

出現は避けられない。実際に海外では、薬剤耐性 P.

rRNA のメチル化による構造変化による薬剤の結合

larvae 株 が 複 数 の 国 で 確 認 さ れ て い る。一 方、阻害」などの手段を使い、マクロライドに対する耐MRM がアメリカ腐蛆病予防薬として承認される前性を獲得する（図 2A）。

に日本で行われた P. larvae 株の薬剤感受性調査に著者らは、日本の M. plutonius 株における MRM

よると、1987 年〜1994 年の間に分離された供試株

耐性メカニズムを解明するため、耐性株と感受性株

28 株は全て、MRM と TS のいずれにも高い感受性のゲノムの詳細な比較を行った。その結果、23Sを示していた（最小発育阻止濃度［MIC］はそれぞrRNA の 748 番目のグアニンをメチル化する酵素の日生研たより 70（2）
，2024

5（21）

図 1 P. larvae 株（100 株）と M. plutonius 株（79 株）の MRM と TS に対する感受性。
）、縦軸はその濃度で発育が阻止された菌
横軸は各薬剤の最小発育阻止濃度（MIC［µ g/mL］
株の数を示す。P. larvae 株は全て国内分離株。M. plutonius 株にはイギリス由来株（1 株）とパラグアイ由来株（1 株）も含まれるが、両株はともにいずれの薬剤にも感受性を示した。
一方、M. plutonius の国内分離株では、MRM に対して耐性を示す株が確認された。

遺伝子（rlmAII）が、耐性株では正常なのに対し、感受性株では 1 塩基の挿入によるフレームシフトによって偽遺伝子になっていることを発見した（図2B）。さ ら に、MRM 耐 性 M. plutonius 株（MIC,
32 μg/mL）から rlmAII 遺伝子を欠失させた結果、欠失株が MRM 感受性（MIC, 0.25 μg/mL）に変化したことから、M. plutonius における MRM への耐性には、RlmAII による 23S rRNA のメチル化が関与していることが明らかになった［8］。
MRM 感受性株では rlmAII は点変異でその機能を失ってはいたが、著者らが調べた、またはゲノム配列が公開されている全ての M. plutonius 株は、分離
国にかかわらず rlmAII 遺伝子を有していた［8］。このような普遍的な rlmAII の保有は、M. plutonius の祖先がもともと MRM に耐性であったことを示唆している（図 3）。しかし、興味深いことに、調査した全ての海外株の rlmAII は、今回発見されたも

図 2 マクロライド系抗生物質に対する主な耐性機構（A）と MRM 感受性 M. plutonius 株に見られたメチル基転移酵素遺伝子の変異（B）

日生研たより 70（2），2024

6（22）と MRM 感 受 性 株 が 存 在 す る が（図 1）、MRM 耐性株はすべて MRM が予防薬として承認された後に分離された株である［8］。従って、アメリカ腐蛆
病 予 防 薬 と し て の MRM の 使 用 は、日 本 の M.
plutonius 株の薬剤感受性に影響を与えた可能性がある（図 3）。

P. larvae の OTC 耐性機構
著 者 ら の 調 査 で は、日 本 で は 幸 い TS 耐 性 P.
larvae 株は見つからなかったが、北米では、これまでに使われてきた OTC、TS、LCM のいずれの薬剤に対しても耐性 P. larvae 株が見つかっている［3］。
また、海外で最も広く使われてきた OTC に対しては、北米以外でも耐性株が検出されている［1, 9］。
では、P. larvae はどのようなメカニズムで薬剤耐性を獲得したのだろうか？
図 3 M. plutonius 株の多様化とその過程で起こった
MRM への感受性の変化に関する仮説

TS と LCM に関しては、

まだその耐性機構は明らかにされていないが、OTC
耐性 P. larvae 株に関してはテトラサイクリン系薬
剤を排出するポンプの遺伝子（tet（L）/tet（K））を乗のと同じ一塩基挿入によって破壊されていた。これせた小型のプラスミドを獲得することによって耐性

ら の 海 外 株 は CC3 ま た は CC13 に 属 し、日 本 の化していることが明らかになっている［10 – 13］。

MRM 感受性株も全て CC3 または CC13 に属する。

そして興味深いことに、このプラスミド上の耐性遺一方、調査した CC12 株は全て MRM 耐性であった。

伝子と同じ tet（L）や tet（K）をハチミツ中に混入す

M. plutonius の 3 つ の グ ル ープ の う ち、CC3 とる腐蛆病菌ではない細菌が保有していたという報告

CC13 の株は互いに近縁であるのに対し、CC12 のもされている［14］。ハチミツは無菌のものではな

株は遺伝的にも表現型的にも CC3 や CC13 の株とく、多様な生きた菌が含まれている。そして著者らは異なる［6］。分離国を問わず、CC3 及び CC13 株も実際に、ハチミツ中の菌からテトラサイクリン耐

で rlmA に同一の点変異が存在することは、この性遺伝子を持つ小型のプラスミドを見つけている変異が CC3 株と CC13 株の共通祖先で起こり、そ

［15］。

II

の後、その子孫がこの変異を伴ったまま世界中に広P. larvae は、環境中では芽胞の状態で眠っている

がったことを示唆している（図 3）。一方、CC12 株

が、ミツバチの幼虫に経口的に摂取されると中腸内は、MRM 耐性の表現型を祖先から受け継いだままで発芽して栄養型の菌が腸内を埋め尽くすほど増殖維持し続けていると思われる（図 3）。

する。ミツバチの幼虫は自分で餌を獲れないため、

我々の知る限り、MRM は日本でのみ養蜂に使用

育児係の働き蜂（育児蜂）に餌を与えられて育つ。

されていた。調査株数は限られているものの、CC3働き蜂になる幼虫は、最初は育児蜂が分泌するミルの中で MRM 耐性株（すなわち、正常な rlmA をク（ローヤル／ワーカーゼリー）を与えられるが、持つ株）は日本でのみ見つかっている。MRM はア

3 日目以降はハチミツや花粉も与えられて育つ。そメリカ腐蛆病に対する薬剤であり、M. plutonius はのため、P. larvae は幼虫の腸内でハチミツ中の菌と標的病原体ではない。しかし、このマクロライドは出会う可能性があり、おそらくそこで耐性遺伝子を予防薬として使用されていたため、臨床上健康な蜂乗せたプラスミドを受け取り、OTC 耐性を獲得し群にたまたまいた M. plutonius が薬に暴露されていたと思われる。

IIた可能性がある。日本の CC3 株には MRM 耐性株

日生研たより 70（2）
，2024

7（23）

株が出現する可能性が考えられる。では、本当にそP. larvae の TS 耐性化リスクんなことが起こりうるのか？国産ハチミツの中には、上述の OTC 耐性化メカニズムの仮説が正しいと

P. larvae を TS 耐性化させる可能性のあるマクロラ

すると、同じようなメカニズムで TS 耐性 P. larvae

イド耐性遺伝子を持った菌は存在するのだろうか？

図 4 国産ハチミツ由来菌株の種類と性状。
（A）48 ロットの国産ハチミツから分離された計 209 株の細菌の分）、縦軸はその類。
（B）国産ハチミツ由来菌 209 株の TS 感受性。横軸は TS の最小発育阻止濃度（MIC［µ g/mL］
濃度で発育が阻止されたハチミツ由来菌株の数を示す。（C）国産ハチミツ由来 Oceanobacillus oncorhynchi subsp.
incaldanensis J18TS1 株に見つかったマクロライド耐性プラスミド pJ18TS1mac の構造。構造と保有遺伝子から、可動性プラスミドと考えられる。

日生研たより 70（2），20248（24）

これらの疑問に答えるため、著者らは 53 ロット［導入前］→ 1 μg/mL［導入後］）、ermC の導入ではの 市 販 の 国 産 ハ チ ミ ツ を 材 料 に し て、低 濃 度

大きく低下した（TS の MIC : 0.25 μg/mL［導入前］（1 μg/mL）の TS を添加した培地を用いてハチミツ→ 8 μg/mL［導入後］）。さらに、ermC が乗ってい中の TS 低感受性菌の分離を試みた。その結果、53

る プ ラ ス ミ ド pJ18TS1mac（図 4C）を 丸 ご と P.

ロット中 48 ロットのハチミツから合計 209 株の多larvae に導入すると、TS への感受性がさらに低下

様な（腐蛆病ではない）芽胞形成細菌が分離された

した（TS の MIC : 0.25 μg/mL［導入前］→ 16 μg/mL（図 4A）。これらの分離株のほとんどは、国内の P.

［導入後］）（表 2）［15］。

larvae 株（図 1）より TS への感受性が低く、中に日本では、成虫 1 万匹あたり 50 mg の TS を粉糖

は TS の MIC が 256 μg/mL 以 上 と い う 高 度 に TSに混ぜ、1 週間間隔で計 3 回、巣脾の上からふりか耐性化した菌もみられた（図 4B）［15］。これらのけることによって蜂群に予防薬を投与する。しかし、

TS 耐性ハチミツ由来菌がどのような耐性メカニズ

Bernal ら［16］や Reynaldi ら［17］の 実 験 で は、ムを有しているのかを明らかにするため、代表株

日本での用量と同程度またはそれ以上の TS を蜂群

50 株のゲノム解析をした結果、すべての株がマクに 与 え て も、幼 虫 体 内 で の TS 濃 度 は 最 大 で もロライド耐性遺伝子と予想される遺伝子を 1〜7 個

4 μg/mL 程度までしか上昇しなかった。この結果は、保有していた［15］。

も し、P. larvae が 他 の 菌 か ら ermC を 獲 得 し てしP. larvae 株が TS 耐性化する可能性を考えると、まった場合、少なくとも日本の用法用量では TS で特に危険なマクロライド耐性遺伝子は、プラスミド、幼虫内の P. larvae の増殖を抑えることができなく

バ ク テ リ オ フ ァージ、ICE（integrative andなることを示唆している。さらに、著者らが見つけ

conjugative element）などのある菌細胞から別の菌

た ermC を 保 有 す る プ ラ ス ミ ド pJ18TS1mac は、細胞へ伝達する可能性のある可動性遺伝因子

mob 遺伝子を持つことから可動性プラスミドと考え（mobile genetic elements［MGEs］）上 に あ る 遺 伝られる（図 4C）。可動性プラスミドは、接合伝達で子である。そこで、ゲノム解析で見つかったマクロ

他の菌に水平伝播できる MGEs が菌細胞内に共存

ライド耐性遺伝子の中に MGEs 上に位置しているしていると、その MGEs の力を借りて一緒に他の遺伝子がないか検索した結果、ICE 上にある遺伝子菌に伝播していく可能性があるプラスミドである。

が 2 つ（lsaB と oleC）、プラスミド上にある遺伝子し た が っ て、も し 幼 虫 の 腸 内 で P. larvae とが 2 つ（ermL – ermB と ermC）見つかった（表 2）

pJ18TS1mac を保有する菌が出会ったら、TS 耐性 P.

（注：ermL は耐性遺伝子である ermB の発現誘導に

larvae 株が生まれる可能性も否定できない。

関わる遺伝子）［15］。これらの遺伝子を PCR で増幅し、発現ベクターにクローニングして、P. larvae

国産ハチミツにおける腐蛆病菌とマクロライド耐性株に導入すると、ermL – ermB の導入では P. larvae

遺伝子の混入率株の TS 感受性が若干低下し（TS の MIC : 0.25 μg/mL

表2

国産ハチミツから検出された可動性遺伝因子（MGEs）上に存在していたマクロライド耐性遺伝子

遺伝子名

MGEs

lsaB

ICEa

oleC

ICEa

ermL – ermB

プラスミド
pJ45TS6

ermC

プラスミド
pJ18TS1mac

耐性遺伝子を保有していた菌

P. larvae に導入した時の影響

Paenibacillus
P. larvae の TS 感受性には影響しない［15］cineris J43TS9
Paenibacillus
未解析
cineris J43TS9
Paenibacillus sp.
P. larvae の TS 感受性を若干低下させる（TS の MIC : 0.25 μg/mL
J45TS6［導入前］→ 1 μg/mL［ermL – ermB のみ導入後］）［15］
Oceanobacillus
P. larvae の TS 感受性を大幅に低下させる（TS の MIC : 0.25 μg/mL
oncorhynchi subsp.
［導入前］→ 8 μg/mL［ermC のみ導入後］、16 μg/mL［pJ18TS1mac
incaldanensis導入後］）［15］J18TS1

ICE, integrative and conjugative elementa

上述の研究結果から、P. larvae がマクロライド耐

日生研たより 70（2），2024

性遺伝子を保有する菌と共存している環境下では、

9（25）

うか？

TS 耐性 P. larvae 株が生まれる可能性が高まると予養蜂場では、腐蛆病が発生する数年前にはハチミ想される。しかし、国産ハチミツ由来菌のゲノム解ツに腐蛆病菌が混入していると言われている［18］。

析では、P. larvae の TS 感受性を低下させた ermC

したがって、ハチミツは養蜂場の腐蛆病菌汚染状況

や ermB はそれぞれ 1 株の菌からしか見つかっていを調査する材料として適していると考えられる。そな い［15］。で は、実 際 に 日 本 の 養 蜂 場 で は、P.

こで著者らは、ハチミツから腐蛆病菌を直接検出でlarvae と マ ク ロ ラ イ ド 耐 性 遺 伝 子（特 に ermC ときるマルチプレックス PCR［19］と ermC と ermB

ermB）はどれくらいの割合で分布しているのだろを検出できるリアルタイム PCR［20］を開発し、

図5

国産ハチミツ 116 ロットにおける P. larvae とマクロライド耐性遺伝子の検出率

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10（26）

116 ロットの市販の国産ハチミツを用いて P. larvae

ス PCR に必要なプライマーと陽性コントロール及とマクロライド耐性遺伝子の混入率を調査した。そび詳細な検査マニュアルは、農林水産省の令和 4 年の結果、驚くべきことに、80.2％ のハチミツから P.

度戦略的監視・診断体制整備推進委託事業を利用しlarvae が 検 出 さ れ、ermC と ermB も そ れ ぞ れて病性鑑定を担当する家畜保健衛生所を中心に全て

86.2％ と 30.2％ のハチミツから検出された（図 5）。

の都道府県に配布済みである。

さらに、71.6％ のハチミツでは P. larvae と ermC の両者が共存していた（図 5）［19, 20］。市販のハチ
ミツのほとんどは、複数の蜂群の蜜を混ぜたバルク

謝辞のハチミツだと考えられる。したがって、個々の蜂本研究は、国立研究開発法人農業・食品産業技術

群を個別に調べた場合は、P. larvae と ermC の検出

総合研究機構において行われました。動物衛生研究

率は本調査結果より低くなる可能性がある。しかし、 部門の岡本真理子研究員をはじめとする研究に関本調査で得られた P. larvae と ermC の高い陽性率は、わった全ての皆様に深く感謝申し上げます。本研究

国内の養蜂場にはすでに腐蛆病菌と ermC を保有すは、農林水産省の「安全な農畜水産物安定供給のたる菌が広く分布しており、いつ TS 耐性 P. larvae 株

めの包括的レギュラトリーサイエンス研究推進委託が出現しても不思議ではない状況にあることを示唆

事業（動物用抗菌剤の使用によるリスクを低減するしている。

ための研究開発）」（JPJ008617.17935699）による助成を受けて行われました。また、腐蛆病菌検出用マ
ルチプレックス PCR に必要な試薬とマニュアルのおわりに

家畜保健衛生所等への配布は、農林水産省の令和 4

国内で腐蛆病予防に使用できる承認薬は TS のみ

年度戦略的監視・診断体制整備推進委託事業によるである。したがって、もし国内で TS 耐性 P. larvae

助成を受けて行われました。ここに謹んで感謝申し

株が蔓延するようなことになれば、腐蛆病の予防手上げます。

段を 1 つ失うことになる。幸い日本では、TS 耐性
P. larvae 株は確認されていないが、唯一の承認予防薬を長く有効に使うためには、抗生物質のより一層

引用文献の慎重利用が重要になる。Tian らは、抗生物質を

1. Miyagi, T., Peng, C. Y. S., Chuang, R. Y., Mussen, E. C.,

使用し続けた蜂場のミツバチの腸内細菌からは、抗Spivak, M. S. and Doi, R. H. 2000. Verification of oxy-

生物質を使用していない蜂場のハチの腸内細菌からtetracycline – resistant American foulbrood pathogen

よりも多くの薬剤耐性遺伝子が検出される（即ち、Paenibacillus larvae in the United States. Journal of

抗生物質を長期的に使うほど、ミツバチの腸内に薬Invertebrate Pathology 75 : 95 – 96.

剤耐性遺伝子が蓄積される）と報告している［21］。

2. Evans, J. D. 2003. Diverse origins of tetracycline re-

おそらく、抗生物質を使えば、ハチの腸内だけでな

sistance in the honey bee bacterial pathogen Paeniba-くハチミツの中などミツバチの生息環境中にも薬剤

cillus larvae. Journal of Inver tebrate Pathology

耐性遺伝子が蓄積されると思われる。このような環

83 : 46 – 50.

境下では、P. larvae 株が耐性遺伝子を獲得する可能

3. Krongdang, S., Evans, J. D., Pettis, J. S. and Chan-

性が高まると予想されるため、普段から不要な抗生tawannakul, P. 2017. Multilocus sequence typing, bio-

物 質 は で き る だ け 使 用 し な い こ と が TS 耐 性 P.

chemical and antibiotic resistance characterizations

larvae 株を出現させないためには重要である。上述

reveal diversity of North American strains of the hon-の腐蛆病菌検出用マルチプレックス PCR を用いれ

ey bee pathogen Paenibacillus larvae. PLoS One

ば、少量（5 mL 程度）のハチミツを材料に蜂群ま12 : e0176831.

たは蜂場の腐蛆病菌汚染を調査することができるた

4. Reybroeck, W., Daeseleire, E., De Brabander, H. F.

め、本検査法を予防薬投与の必要性を判断する目的

and Herman, L. 2012. Antimicrobials in beekeeping.

にも活用していただきたい。尚、本マルチプレック

Veterinary Microbiology 158 : 1 – 11.

日生研たより 70（2），2024

11（27）

5. Ueno, Y., Yoshida, E., Misumi, W., Watando, E., Suzu-

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日生研たより 70（2），2024

12（28）

otics has caused accumulation of resistance determi-

3 : e00377 – 12.

nants in the gut microbiota of honeybees. mBio

レビュー

アフリカ豚熱の血清診断法―p11.5 ELISA の開発―
わた なべ みずき

渡邉瑞季となっている。現在、一部の国で ASF ワクチンのはじめに使用が開始されてはいるものの、その有効性及び安ア フ リ カ 豚 熱（ASF）は、国 際 獣 疫 事 務 局

全性は十分とは言い難い。ASF のまん延を防ぐに（WOAH）のリスト疾病であるウイルス性疾患で、は、早期発見、サーベイランスの徹底と強化、疫学

豚を含むイノシシ科動物が罹患する海外悪性伝染病

調査、豚の追跡、感染家畜の駆除、水際対策、バイである。豚が ASF ウイルス（ASFV）に感染すると、オセキュリティ対策及び家畜の移動規制といった防ほとんどの場合は甚急性ないしは急性の経過をたど

疫措置の厳格な実施と遵守が不可欠である［4］。日る。病因となる ASFV は、正 20 面体の巨大な 2 本

本では現時点で ASF の発生は確認されていないが、鎖 DNA ウイルスで、節足動物によって媒介される

上述のとおり、アジアのほとんどの国で ASF の侵

唯 一 の DNA ア ル ボ ウ イ ル ス（arthropod – borne

入とまん延が見られ、国内への ASF 侵入は目の前

virus）である。

まで迫っている。本稿では万一の ASF の国内への1921 年、Montgomery によってケニア及びウガ

侵入に備えて、本病の診断法について概説し、我々ンダで ASF の発生が初めて報告され［1, 3］、ASFが開発した ASFV p11.5 タンパク質を抗原とする新は長らくアフリカ土着の風土病として知られてきた。

たな ASFV 血清間接 ELISA についても紹介する。

しかし、2007 年に黒海東岸のジョージアで ASF が突如発生し、その後コーカサス、ロシアから中央
ヨーロッパを中心に拡大した。さらに、2018 年にASF の病態は中国でアジア初となる ASF の発生が確認された

強毒型の ASFV によって引き起こされる臨床症状後、アジアでは日本、台湾及びスリランカを除く全は、発熱（41〜42℃）、食欲不振、沈鬱、呼吸困難、ての国で、その発生が報告された（2024 年 1 月現在。

皮膚の充血及び突然死であり、感染した個体は 1 週

なお、ブルネイは非養豚国であるため除外）。ASF

間程度でほぼ全頭が死に至る。上記の臨床所見に加は養豚産業並びに食料の持続的な供給に対する重大え、解剖時に脾臓や腸間膜リンパ節等に重度の暗赤な脅威となっており、例えば、世界の豚肉生産のお色化や腫大が認められる場合には、ASF 感染が強よそ半分を占める中国では、2018 年の ASF 発生後、 く疑われる。一方、甚急性の経過をたどった場合に1 年間で豚の飼養頭数が 41％ 減少した［5］。

は、明瞭な徴候を伴わず死亡することがあるため、本病が世界の養豚産業にとって脅威である理由と予断を持たずに検査を実施する必要がある。甚急性

して、有効で安全なワクチンが未開発であることが例では剖検所見も明瞭でない場合があり、診断には挙げられる。ASFV の複雑な粒子構造、分類学的なウイルス学的検査が必須である。弱毒型の ASFV や特性及び遺伝子型の多様性等がワクチン開発の障害

非病原性型の ASFV も存在し、その病原性に応じて、日生研たより 70（2），2024

13（29）

様々な程度で皮膚の多巣性壊死、関節炎、成長遅延、 クロファージやマクロファージ由来の細胞株等に接
体重減少、呼吸困難及び流産等の多様な病態を引き種するとウイルスが感染し、細胞内での複製及び増起こす［7］。また、豚に対するウイルスの病原性に殖過程を経て、細胞変性効果を示す［8］。また、例

関わらず、アフリカ固有のイノシシ科動物では本病外はあるものの、多くのウイルス株では赤血球の存は不顕性に推移することが知られており、動物にお在下で豚由来のマクロファージに感染すると赤血球ける病態の形成にはウイルス側の要因（病原性）にを吸着してロゼッタを形成する、いわゆる HAD が加えて、宿主側の要因が関与する。

認められ、これを指標にしてウイルスを分離同定す

ASF の臨床症状は豚熱（CSF）に酷似しており、ることも可能である。ただし、野生イノシシ等の検農場で豚群に発熱、沈鬱及び食欲不振を伴う致死率体では、遺伝子検査で陽性と判定された場合であっの 高 い 伝 染 病 の 発 生 を 認 め た 場 合 に は、ASF とても、環境中ですでにウイルスが不活化しており、CSF の両方の可能性が示唆される。両者は臨床症

ウイルス分離が困難な例も少なくない。ASF の特状による鑑別は難しいため、適切な検査機関で両疾徴と疾病の動態から、疫学的状況をリアルタイムに病を対象としたウイルス学的検査を実施する必要が把握するためには、診断施設における抗原（ウイルある［13］。

ス遺伝子及びウイルスそのもの）検出と抗体検出を並行して進めることが不可欠である。

ASF の診断法
WOAH マニュアルにおいて、ASFV の抗原若し

ASF 診断における血清学的検査の役割

くはウイルス遺伝子の検出方法としては赤血球吸着

血清学的検査は、その簡便さや比較的安価である

試験（HAD）、蛍光抗体法、コンベンショナル PCRこと等から、様々な疾病の診断に広く用いられてい法及びリアルタイム PCR 法が、血清学的診断法とる検査方法である。現在、世界的に流行している

しては ELISA、間接蛍光抗体法及びウェスタンブ

ASF は強毒型であり、感染した豚は抗体が産生さロット法が挙げられる。他の疾患と同様に 100％ のれる前に死亡する例がほとんどである。したがって感度と特異性を備えた検査法は存在しないため、有血清学的検査が診断目的で使用されることは少なく、効性が確認されている複数の検査で得られた成績に専ら清浄性確認を目的とするサーベイランスに利用加え、疫学情報、流行シナリオ及び臨床症状から得される。しかし、中国等では弱毒株の存在が確認さられた情報等を組み合わせて確定診断をする必要がれており［10］、弱毒株感染地域においては、抗体ある。そのため、流行するウイルス株の性状及び伝の消長は流行動態の把握に重要である。弱毒株に感播経路等に関する最新の知識の収集をしておくこと染した動物の多くは感染耐過し、長期間抗体陽性をは、本病の正確な診断にとって不可欠である［4］。

持続する。サーベイランスの際にこのような抗体陽

前項でも述べたように、ASF 急性例では感染か性の個体が検出された場合、現在進行中、又は過去

ら死亡までの期間が短く、抗体価の上昇が見られるのアウトブレイクを明らかにすることができる［9］。

ことは稀であるため、診断はウイルス遺伝子の検出

さらに、感染耐過豚の抗体陽転までの期間が明らかに重点が置かれる。急性又は亜急性の臨床経過をたとなった場合、農場へのウイルスの侵入時期を特定

どる感染動物では高レベルのウイルス血症が長期間したり、当該農場との疫学的につながりのある農場認められることから、PCR はサーベイランスのた（疫学関連農場）を推定したりすることが可能となめの基本的な診断ツールとしても有用である。一方、 るため、血清学的検査は適切なまん延防止対策に不
慢性又は不顕性感染の動物の診断では、PCR の結可欠な情報を提供しうるものと期待される［4］。ま果だけでなく、ELISA 等の血清学的検査が重要な役た、ベトナム等で使用が開始された弱毒生 ASF ワ

割を果たす。

クチン（日本国内では使用されていない）のサーベ

もちろん、検体からウイルスを分離することも、

イランスにおいても、抗体検査は重要と言える。

ASF の確定診断をするための重要な手がかりとな

これまで血清学的診断のために、ASFV p72、p62

る。ASFV 陽性検体に由来する乳剤等を豚の初代マ及び p32 タンパク質の混合物を用いた間接 ELISA日生研たより 70（2），2024

14（30）

ク質を同定するため、高病原性 ASFV genotype IIの AQS – C – 1 – 22 株（AQS 株）に対するマウスモノ
クローナル抗体（mAbs）を作製した［6］。同様に
高病原性の ASFV genotype II の Georgia 2007/1 株の予測オープンリーディングフレーム（ORF）192
個をそれぞれ個別に発現する遺伝子発現ベクターのパネルを用いて、作製したマウス mAbs をスクリーニングすることにより、それぞれの mAbs が検出する抗原を同定した。その結果、ASFV A137R 遺伝子
がコードするタンパク質である p11.5 は、強い抗原
図1

p11.5 ELISA の反応模式図性を有するウイルスタンパク質であることが明らかと な っ た。先 行 研 究 に よ り、p11.5 は ASFV の in

（ID Screen African Swine Fever Indirect ELISA、

vitro 複製途中で最も発現量の高いタンパク質であIDvet、フランス）、又は p30 タンパク質（SVANOVIR

ることが報告されており［2］、血清学的診断においASFV – Ab、INDICAL、スウェーデン）、p72 タンパて理想的な標的抗原となる可能性が示唆された。そク質を用いたブロッキング ELISA（INGEZIM PPA

こで、我々は p11.5 を用いる新たな間接 ELISA 系

COMPAC、Ingenasa、スペイン）、p32 タンパク質を構築し、血清診断法としての適合性を検討するとを 用 い た 競 合 ELISA（ID Screen African Swine

ともに、反応系の最適化を試みた（図 1）。

Fever Competition、IDvet、フラ ンス）等、異な る標的抗原を用いた血清 ELISA が世界中で市販されp11.5 タンパク質の作製ている。

ASFV Georgia 2007/1 株の p11.5/A137R 遺伝子を
ASFV p11.5 タンパク質を抗原とする新たな ASFV

クローニングして、p11.5 配列を単一、2 反復、若血清間接 ELISA の開発

しくは 3 反復で挿入した 3 種類の発現プラスミド

この度、我々が新たに開発した ASFV 血清間接（p11.5×1, p11.5×2, p11.5×3）を構築した（図 2）。

ELISA について、以下に紹介する。ELISA の開発

これらのプラスミドを大腸菌にそれぞれ形質転換しにあたり、市販されている ASFV ELISA（上述）よた後、タンパク質を発現させた。得られたタンパクり高感度なシステムの構築を目的とし、従来とは異質を精製した後、SDS – PAGE で分画し、クマシーなる抗原を使用した。ELISA 抗原に適したタンパ

ブリリアントブルー及びウェスタンブロット法によ

GSTタグ

リンカー配列図 2 作製した p11.5 候補抗原の構造
各タンパク質は、精製ために N 末端に GST タグを付加している。
1 行目，p11.5×1；2 行目，p11.5×2；3 行目，p11.5×3
p11.5× 2、p11.5×3 については複数の p11.5 をリンカー配列を介してタンデムに連結している。

日生研たより 70（2）
，2024

図3

15（31）

p11.5×1、p11.5×2、p11.5×3 タンパク質の作製

それぞれのタンパク質を大腸菌で発現させ、可溶化後、GSTrap カラムを用いてアフィニティー精製した。
A．溶出画分の半量を SDS – PAGE で展開し、クマシーブリリアントブルーで染色した
B．残り半量を SDS – PAGE で展開した後、抗 p11.5 抗体でウェスタンブロットを行った。

り、目的タンパク質の存在を確認した（図 3）。

であることが示された（図 5）。今後、OD 値による閾値を一般化する必要はあるが、市販 ELISA との

間接 ELISA における標的抗原としての p11.5 タン

比較から、相対感度及び相対特異度が共に高く、まパク質の評価

た、再現性も十分に高いことが示された（データは精製した上記 3 種類の p11.5 タンパク質について、
ELISA 用の標的抗原としての有用性を評価した。
その結果、p11.5 を 3 反復で連結した p11.5×3 タン
パク質の検出感度が最も高く、標的抗原として適していたことから（図 4）、p11.5×3 タンパク質を抗原として ELISA 系の構築を試みた（以下、本稿では「p11.5 ELISA」と記す）。

■

ASFV 陰性血清■

ASFV 陽性血清

p11.5 ELISA の最適化と精度の検証
p11.5 ELISA 系における反応条件を最適化するため、1 次血清（弱毒型 ASFV 実験感染豚由来血清）
及び 2 次抗体のボックスタイトレーションにより、最適条件を設定した。設定した反応条件に従い、166 頭の豚由来血清（非感染群 90 頭及び ASFV 実

図 4 3 種類の抗原候補タンパク質を標的抗原とした
ELISA の OD450 値の比較■，ASFV 陽性血清サンプル；■，ASFV 陰性血清サ
た OD 値をもとに ROC 曲線下面積（AUC）が最大
ンプル。抗原タンパク質は 5 µ g/mL の濃度で固相化しとなる判定の閾値を決定した。その結果、AUC＝た。血清サンプル及び二次抗体は、それぞれ 1 : 20 及
び 1 : 5000 で希釈して使用した。各データは 3 回の0.991［95％ 信頼区間（CI）＝0.982−0.999］となり、独立した実験の平均±標準誤差で示した。*, P ＜ 0.01
OD 値の閾値を 0.368 とした場合に最も “高精度”（Tukey の検定）; n.s., 有意でない。

験感染群 76 頭）を p11.5 ELISA で測定し、得られ日生研たより 70（2），2024

16（32）

図 5 p11.5 ELISA の精度の検証
A．‌p11.5 ELISA と市販 ELISA を用いて合計 166 頭の豚に由来する血清（ASFV 未接種群 90 頭、ASFV 接種群 76 頭）
中の ASFV 特異抗体を検出した。
p11.5 ELISA の ROC 曲線下面積（AUC）を ROC 解析によって求めた（AUC＝0.991 ; 95％ 信頼区間＝0.982－
0.999）。
B．‌カットオフ値を 0.368 に定めた場合、破線より上が陽性、下が陰性と判定されることを示す。

省略）。
p11.5 ELISA のまとめ
p11.5 タンパク質をコードする A137R 遺伝子では、
ASFV 感染動物における特異抗体検出時期の検討

ORF の塩基配列並びにアミノ酸配列が様々な遺伝

様々な ASFV 株を感染させた豚（LWD）やイノ

子型のウイルス株間でよく保存されており、高い免

シシから経時的に血清を採取し、ASFV 特異的な抗疫原性（抗体誘導能）を示すことから、遺伝子型横体 の 検 出 時 期（陽 転 時 期）を 市 販 ELISA と p11.5

断的な ASF の血清診断において理想的な抗原であELISA で 比 較 し た。図 6 に ウ イ ル ス 接 種 ス ケると推測される。上述のとおり、本研究で構築したジ ュール 及 び 市 販 ELISA と p11.5 ELISA で そ れ ぞp11.5 ELISA は、ASFV 感染動物の早期かつ信頼性れ初めて抗体が検出できた接種後日数を示した。その高い摘発が可能なだけでなく、複数の遺伝子型のれぞれのグループで初めて抗体陽性となる接種後日

ASFV 株に対する抗体を検出できることが明らかに数の平均を算出したところ、ASFV genotype I を接された。p11.5 ELISA は、弱毒株による ASF の血清種した Group 1 及び 2 では、いずれの ELISA でも診断法への活用だけでなく、野外サーベイランスの全頭で ASFV 抗体が検出されたが、市販 ELISA にツールとしても有望である。さらに ASF ワクチン

比べて、p11.5 ELISA はより早期に抗体を検出した。 が使用されるような場面においては、免疫状態のモ
ASFV genotype II を接種した実験感染豚群（Group

ニタリングにおいても有用性が期待できるだろう。

3 及び 4）では、最終的な ASFV 抗体の検出の有無は、 p11.5 ELISA に関する報告の詳細は、原著論文を参いずれの ELISA でも同様の結果となったが、市販照されたい［11］。

ELISA に比べて、p11.5 ELISA はより早期に抗体を検出した。ASFV genotype X を接種した実験感染豚
及びイノシシ群（Group 5）では、市販 ELISA では検出できなかった血清中の ASFV 特異抗体も p11.5
ELISA では検出することができた。

おわりに現在、ASF に対する十分な有効性と安全性を示
すワクチンや治療法が確立されておらず、その防疫は水際検疫、農場におけるバイオセキュリティ対策の徹底及び感染動物の迅速な摘発淘汰が中心である。
本稿では主に血清診断法としての p11.5 ELISA について言及したが、ASF の診断法にはこれ以外にも日生研たより 70（2），2024

17（33）

図 6 ASFV 接種後、市販 ELISA 及び p11.5 ELISA を用いた際に最初に抗体が検出されるまでの日数の比較
Group 1, OUR T88/3 株（genotype I）を接種；Group 2, Lisbon60V 株（genotype I）を接種；Group 3, 弱毒化
AQS（AQS – C – 1 – 22）株と野生型 AQS 株（genotype II）を接種；Group 4, Armenia 2007ΔMGF 株と野生型
AQS 株（genotype II）を接種；Group 5, Kenya05/Tk – 1 株（genotype X）感染豚にイノシシを同居させた。血清
サンプルは同居動物から採取した。同居試験では、ASFV を接種した動物は 9～13 日後に死亡し、血清サンプルが採取できなかったため、グラフから除外した。接種個体から非感染個体へのウイルス伝播の正確な時期は不明であったため、日数表記は豚への感染日を 0 日としている。グラフ中の各バーは 1 頭ずつを表す。白いバーは、血清中抗体がいずれの ELISA でも陰性であった期間、水色のバーは、血清抗体が市販 ELISA でのみ陽性であった期間、ピンク色のバーは、血清中抗体が p11.5 ELISA でのみ陽性であった期間、紫色のバーは、血清中抗体がいずれの ELISA
でも陽性であった期間である。＊, 市販 ELISA 及び＊＊, p11.5 ELISA で ASFV 抗体が初めて検出されるまでの時間を示す。黒矢印は弱毒型 ASFV の追加接種、赤矢印は野生型 AQS 株の追加接種、n.a. は抗体なし。死亡した動物については、死亡までの時間 ♰ 又はエンドポイントによる安楽殺 ♰♰ を示す。

日生研たより 70（2），2024

18（34）

様々な方法がある。これらの診断法の実施に当たっては、検査時点での ASF の発生及び流行状況を鑑

引用文献

みて、検査の優先順位を検討する必要がある。たと

1. Blome S., Franzke K. & Beer M. 2020. African swine

えば、ASF 未発生の日本で疑い事例が発生した場

fever – A review of current knowledge. Virus Research.

合 に は、コ ン ベ ン シ ョナ ル PCR や リ ア ル タ イ ム

287 : 198099.

PCR によるウイルス遺伝子検出検査を最優先で実

2. Cackett G., Matelska D., Sýkora M., Portugal R., Mal-

施し、併せてウイルス分離を進めるべきである。一ecki M., Bähler J., Dixon L. & Werner F. 2020. The

方、発生国において流行が収束し、根絶に向けて清African Swine Fever Virus Transcriptome. Journal of

浄性を確認する際には、ELISA 等を用いた血清学的

Virology. 94（9）: e00119 – 20.

検査も併用し、弱毒株による潜在的な ASF の存在までも想定した調査を行う必要がある。

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2018 年の中国での発生を皮切りに、アジアのほ

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とんどの国で ASF が発生している状況にあって、African swine fever（ASF）diagnosis, an essential tool

日本は今のところ清浄性を維持している。この幸運

in the epidemiological investigation. Virus Research.

は、我が国が置かれた地理的な要因や動物検疫にお271 : 197676.

ける肉類の違法持ち込みの摘発強化といった努力の

5. Juszkiewicz M., Walczak M., Woźniakowski G. &賜物であるが、それと同時に、新型コロナウイルス

Podgórska K. 2023. African Swine Fever : Transmis-

感染症の世界的パンデミックによるインバウンドの

sion, Spread, and Control through Biosecurity and

大幅な減少が影響した面も否めない。2023 年には、Disinfection, Including Polish Trends. Viruses. 15

日本を含めて多くの国で新型コロナウイルス感染症（11）: 2275.

に対する人流の規制が解除され、10 月には一か月

6. Kameyama K., Kitamura T., Okadera K., Ikezawa M.,

間の訪日外客数が 2019 年同月を超えた［12］。このMasujin K. & Kokuho T. 2022. Usability of Immortal-

ような統計データは、以前の日常が戻ってきている

ized Porcine Kidney Macrophage Cultures for the

ことを示す反面、ASF の侵入リスクの上昇を暗示

Isolation of ASFV without Affecting Virulence. Virus-

するものでもあると言えよう。

es. 14（8）: 1794.

現在、我が国では、産官学が連携して ASF 防除

7. Li Z., Chen W., Qiu Z., Li Y., Fan J., Wu K., Li X., Zhao

法及び診断法の開発に全力を挙げて取り組んでおり、

M., Ding H., Fan S. & Chen J. 2022. African Swine Fe-

本稿で紹介した p11.5 ELISA もその一環で開発されver Virus : A Review. Life. 12（8）: 1255.

たものである。我が国で ASF の発生が起こらぬこ

8. Masujin K., Kitamura T., Kameyama K. – ichiro,とを祈りつつ、ASF 根絶を目指して引き続き ASFVOkadera K., Nishi T., Takenouchi T., Kitani H. &研究に邁進していきたい。

Kokuho T. 2021. An immor talized porcine macrophage cell line competent for the isolation of Africanswine fever virus. Scientific Reports. 11（1）: 4759.

謝辞
本研究は農林水産省による安全な農畜水産物安定

9. OIE Terrestrial Animal Health Code. Chapter 15.1.
Infection with African swine fever virus. 2022.

供給のための包括的レギュラトリーサイエンス研究

10. Sun E., Zhang Z., Wang Z., He X., Zhang X., Wang L.,

推進委託事業「官民・国際連携による ASF ワクチ

Wang W., Huang L., Xi F., Huangfu H., Tsegay G.,

ン開発の加速化」において、農業・食品産業技術総

Huo H., Sun J., Tian Z., Xia W., Yu X., Li F., Liu R.,

合研究機構動物衛生研究部門で実施したものであり、Guan Y., Zhao D. & Bu Z. 2021. Emergence and prev-

ご指導賜りました海外病研究拠点の皆様に感謝いた

alence of naturally occurring lower virulent African

します。また、永田宏次先生（東京大学大学院農学swine fever viruses in domestic pigs in China in 2020.

生命科学研究科食品生物構造学研究室）には研究材

Science China Life Sciences. 64（5）: 752 – 765.

料をご提供いただきましたことを感謝いたします。

11. Watanabe M., Kitamura T., Nagata K., Ikezawa M.,日生研たより 70（2），2024

19（35）

Kameyama K., Masujin K. & Kokuho T. 2023. Devel-

12. 日本政府観光局．2023．訪日外客統計月別推計値．

opment of a Novel Indirect ELISA for the Serological

13. 農林水産省．2020．アフリカ豚熱に関する特定家畜

Diagnosis of African Swine Fever Using p11.5 Protein
as a Target Antigen. Pathogens. 12（6）: 774.

伝染病防疫指針．

（研究員）

日生研たより 70（2），2024

20（36）

学会発表演題（2023 年 4 月～2024 年 3 月）
●第 27 回獣医病理診断研究会 Veterinar y Pathology Diagnostic Conference
期
日：2023 年 7 月 21 日
開 催 地：リモート方式（東京大学）
発表演題：VP – 82（初乳未摂取豚における Streptococcus suis 血清型 2 型感染症（豚のレンサ球菌症））○伊藤宗磨（一般財団法人日本生物科学研究所）● Asian Pig Veterinar y Society Congress 2023
期
日：2023 年 7 月 30 日〜2023 年 8 月 2 日
開 催 地：Taipei International Convention Center（台湾）
発表演題：Comparison of Pathogenicity of Type – 2 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome
Virus Isolated in Japan, which is the Same Genetic Cluster〇Ryosuke Takai1, Tetsuo Sato1, Shizuka Hayashi1, Soma Ito1, Kazumoto Shibuya1,
Nobuyuki Tsutsumi1, Katsuaki Sugiura1, Chihiro Sasakawa1, 2（1Nippon Institute for Biological Science、2Medical Mycology Research Center, Chiba
University）●第 11 回日本獣医病理学専門家協会合同学術集会 第 64 回獣医病理学研修会（JCVP スライド
フォーラム）
期
日：2024 年 3 月 28 日〜2024 年 3 月 29 日
開 催 地：鹿児島県民交流センター
発表演題：ヤイトハタの皮膚および眼球〇伊藤宗磨（一般財団法人日本生物科学研究所）

編 集 後 記
春風が心地よく吹き抜ける季節がやって参りました。皆様におかれましてはいかがお過ごしでしょうか。今号は、令和 5 年度編集委員の最後の号となってしまいました。多大なご協力を賜りました関
係者の皆様には、この場をお借りして厚く御礼申し上げます。さて、令和 6 年度は、編集委員長を髙
井亮輔が引き継ぎ、編集委員は河島奈悠と伊藤宗磨が担当いたします。
寒暖の差が激しいこともございますので、どうかご自愛ください。今後とも、引き続き日生研たよりをご愛読賜りますよう、よろしくお願い申し上げます（編集委員長）。

日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（年 4 回発行）

（通巻 631 号） 令和 6 年 3 月 25 日印刷
発行所
生命の「共生・調和」を理念とし、生命体の豊かな明日と、研究の永続性を願う
気持ちを快いリズムに整え、視覚化したものです。カラーは生命の源、水を表す「青」としています。
表紙題字は故中村稕治博士による揮毫です。

令和 6 年 4 月 1 日発行（第 70 巻第 2 号）

一般財団法人日本生物科学研究所〒 198 – 0024 東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL：0428（33）1520（経営企画部） FAX：0428（31）6166
URL：https://nibs.or.jp
発行人
編集室
印刷所

土屋耕太郎

委

員／河島奈悠（委員長）、高橋真理、髙井亮輔

事

務／経営企画部

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