2019 APRIL
No. 611

第 65 巻 第 2 号（通巻 611 号）
2019 年（平成 31 年）4 月

挨拶・巻頭言新元号の時代を迎えて..................................... 笹 川 千 尋（ 2 ）レビュー
牛ウイルス性下痢ウイルス感染症とその対策.................. 増 田 恒 幸（ 3 ）ヒト RSV ワクチン開発から学ぶ事................................... 加 藤篤（ 6 ）

文献紹介
アルビノモルモットにおける牛パライン
フルエンザウイルス 3 型遺伝子型 Cを用いた弱毒ワクチン候補株の評価...................................篠原みなみ（10）記録
学会発表演題....................................（16）

おしらせ
編集後記...........................................（16）日生研たより2（14）

新元号の時代を迎えて
笹川千尋
30 年ぶりに新元号の時代を迎える。それによって時代や世代に区切りがつき、あらたな時
代認識や社会通念も芽生える。また新元号の時代には、昭和の後半から平成にかけて誕生した世代（新世代人）がいよいよ社会の中心を担う。彼らが世界のあらゆる分野で活躍し、国や社会の将来のありかたについても深く考え、安全で安心な社会を引き続き発展させることを願っている。
彼らの時代も情報化社会とグローバル化は世界を席巻し、また第四次産業革命の到来による革新技術（例えば、AI、ロボット工学、自動運転システム、量子コンピュータ、ナノテクノロ
ジー、生物工学、IoT 等）が普及するであろう。その結果、次々と新たなビジネスモデルや産業が勃興し、同時に医療・福祉・教育等、身近なところにも大きな変革の波が押し寄せる。加
えて、我が国では人口減少と格差社会がさらに進み、また国外から大量の労働者を迎え入れるようになり、経済と科学技術の進歩のみでは、豊かで安全な社会は存続できなくなる。したがって「多様性社会の受容」、「女性と弱者の社会参画の推進」、「格差社会の是正」等、平成から持ち越された社会的な課題は、次の時代に解決できなければ、新世代人にさらなる社会的負担を強いることになる。
さて平成時代の国際社会に目をむけると、平成元年に起こったベルリンの壁崩壊を忘れることはできない。戦後長く続いた東西冷戦も終焉に向かい、世界に平和と共存の新たな時代が到来することへの期待が膨らんだ。しかし、ベルリンの壁崩壊を境に、世界秩序は次第に逆回転を始め、30 年後の現在は「自国第一主義」を掲げる国々の覇権争いが連日ニュースを賑わしている。一度夢見た理想の国際秩序はいつの間にか霧散し、次の時代が案じられる。
平成元年、日本は世界競争力ランキング総合で首位に輝いた。しかし、平成 3 − 5 年に「バブル崩壊」が起こり、平成 18 年にはそのランキングは 25 位へと低落した。平成 23 年には東日本大震災と福島原発災害という未曾有の災害があり、科学技術への信頼が根底より揺らいだ。
また平成の時代は、少子化が社会問題として度々クローズアップされ対策の好機は幾度も訪れた。しかし抜本的な対策はなされず、海外労働者に依存する時代を迎えている。
私の身近では、国立大学の独立法人化が平成 16 年に行われた。独法化に先立って「競争的環境の中で世界最高水準の大学を育成するため、国立大学法人化等の施策を通して大学の構造改革を進める」ことが閣議決定された。当時の大学教員は皆（私も）、独法化後の大学に期待を込め改革に奔走した。しかし法人化の本音は、少子化に伴う大学の量的縮小にあった。昨年
暮れに、日本経済新聞に「大学の研究力の低下」と題する特集記事が掲載され、さらに某経済雑誌には「科学技術立国の危機」と題した特集号も刊行された。読後の感想は申すまでもない。
この 15 年間、大学の幹（研究基盤）は腐食し、立ち枯れ寸前の林のように立ち尽くす地方大学の姿が目立つようになってきた。明治から平成の初期まで先人達が育んできた豊潤で多様な学問の森と知的中間層は、平成とともに姿を消すのであろうか。
多くの課題を一つの時代に解決することは難しい。しかし理念なき社会は、幾年月を経ても何も残せない。新元号を迎えるにあたり、新世代人の活躍に期待を込めてエールを送りたい。
（理事長）

65（2）
，2019

3（15）

レビュー

牛ウイルス性下痢ウイルス感染症とその対策
増 田 恒 幸（鳥取県農業振興戦略監畜産課）
体で発現しやすい。症状は多岐にわたり、白血球減
はじめに少、軽度の下痢や発熱、呼吸器症状などである。まBVD ウイルス（BVDV）はフラビウイルス科ペた BVDV 感染により、他の消化器及び呼吸器感染スチウイルス属のウイルスである。2018 年 9 月に症の発生を誘発したり増悪したりする場合がある。

国内で 26 年ぶりに豚コレラが発生したが、原因と（2）持続感染（PI）

なる豚コレラウイルスもこのペスチウイルス属に含

最近、PI 牛という言葉を耳にする機会が多いの

ま れ る。BVDV は 遺 伝 子 型 の 違 い か ら 大 き く

ではなかろうか。PI は BVDV の蔓延に最も重要と

BVDV – 1 と BVDV – 2 に分類される。さらに BVDVなる感染様式である。PI 牛が免疫を持たない牛群– 1 は そ の 塩 基 配 列 に 基 づ い て 少 な く と も 21、内に侵入すると、妊娠牛に BVDV が急性感染し、

BVDV – 2 は 4 の亜型に分類されている [1]。BVDV

子宮内感染により胎子が免疫寛容となり、結果とし感染症は、近年家畜の慢性疾病として注目されておて多くの PI 牛が産出される。預託育成牧場に PI 牛り、全国的に清浄化に向けた取り組みが進められてが侵入した場合、次に出生した PI 牛が入牧されるいるところである。本稿では BVDV 感染症についこともあるため、これらの負の連鎖が繰り返され、て述べると共に鳥取県で取り組んでいる清浄化対策

育成牧場及び出生農場を汚染し続けることになるについて述べる。

（図 1）。PI 牛は発育不良や下痢、肺炎などに罹患しやすいなどの特徴があるが、典型的な臨床症状を示さないこともある（表 1）。このため知らず知らず

1．BVDV 感染症の病態のうちに PI 牛が牛群内に潜み、急性感染が蔓延し（1）急性感染ていく [2、3]。著者の経験上、漠然と調子が悪くなった牛群には、結果として PI 牛が牛群に侵入し一過性に BVDV が感染した状態で、ワクチン未ていたケースが多い。

接種の個体など BVDV に免疫を保有していない個
預託育成牧場
PI牛

PI牛

流産など

①PI牛がウイルス排泄

②

①

③

⑤

胎盤感染

下牧

②免疫を持たない牛群⇒呼吸器病、流産等（急性感染）

⑤

PI牛

下牧
入牧

農場

④

分娩

農場

入牧

③胎齢120日以内に感染⇒PI牛として産出④PI牛の産子はPI牛⑤PI牛の入牧、
牧場汚染という負の連鎖

分娩
PI牛
図1

PI牛
預託育成牧場に PI 牛が存在すると…

日生研たより

4（16）表12016 年 1 月から 10 月に鳥取県内で摘発された PI 牛の個体情報

症例

生年月日

摘発日

月齢

種別 *

用途

臨床

1

2015/8/14

2016/1/8

4.8

Hol

肉用

発育不良，下痢2

2015/10/1

2016/4/19

6.6

Hol

乳用

著変なし

3

2015/9/2

2016/6/9

9.2

Hol

乳用

著変なし

4

2015/9/20

2016/7/1

9.3

F1

肉用

発育不良，被毛粗剛，肺炎

52015/7/26

2016/8/24

13.0

Hol

乳用

発育不良

6

2015/7/11

2016/10/27

15.5

Hol

乳用

発育不良

＊ Hol：ホルスタイン種

F1：交雑種（ホルスタイン種×黒毛和種）（3）粘膜病（MD）
MD は PI 牛にのみ発現する致死的な病態であり、急性症例では元気消失、食欲廃絶、水様性下痢を呈し、短時間に死亡する。口腔内粘膜に病変が形成され、中でも食道粘膜の潰瘍は発症牛の特徴的な所見である。MD の発現率は極めて低いと考えられており、2009 年以降、本県では 50 頭以上の PI 牛を摘発 し て い る が、MD 発 症 牛 は 2 頭 の み で あ る。
BVDV 感染症は家畜伝染病予防法において届出伝染病として定義されており、牛ウイルス性下痢・粘膜病（BVD – MD）の名称で記載されている。摘発した MD 未発症の PI 牛を BVD – MD として届出すべきか判断が分かれるところであるが、本県では摘発した PI 牛も BVD – MD として報告している。

表2 B
 VDV-2 の PI 牛血清に 2 倍階段希釈した抗体陽性
血清を混和した際の抗原 ELISA 結果
抗体陽性血清牛①牛②牛③牛④（4096）（1024） （16） （2048）
+/-*
該当なし
該当なし
1024
+/+/512

+/+

+/-

256
抗 KZ– 128
91CP
64
抗体価
（算定値） 32
16

+/+

+/-

+/+

+/-

+/+

+/+

+/+

+/+

+/+

+/+

+/+

+/+

8

+/+

+/+

+/+

+/+

4

+/+

+/+

+/+

+/+

1

+/+

+/+

+/+

+/+

+/該当なし

+/+
+/+

+/+

＊ RT–PCR/ 抗原 ELISA の成績をそれぞれ示す。
括 弧内は抗体陽性血清原液の KZ–91CP 株に対する抗体価を示す。
抗原 ELISA で陰性を示したものを四角で囲んで示す。

2．BVDV 感染症の診断
本病の診断はウイルス分離や RT – PCR がゴール症等の呼吸器病対策に使用されている。近年、国内

ドスタンダードとされているが、近年市販の抗原で は BVDV – 1b 及 び 2a が 中 心 に 分 離 さ れ て お り

ELISA を用いる方法［4］や牛の毛根を用いた抗原[6]、接種ワクチンと遺伝子型が異なると感染防御、検査方法［5］が紹介されている。抗原 ELISA は手

特に子宮内感染を防ぐことは難しい。また BVDV –技が簡単で多検体処理能力に優れているが、移行抗1a と 1b 亜型間において血清学的性状に差があるこ

体の影響を受けるため子牛の検査等には注意が必要とが知られているが［7］、国内には BVDV – 1b をである。表 2 では PI 牛の血清を BVDV 抗体陽性血含む生ワクチンはない。ワクチン接種は BVDV 感染

清で希釈した場合、抗原 ELISA で陰性となること予防に有効であるが、PI 牛の産出を完全に防止でを示している。本県では原則、3 週間隔をあけてきないため、本病の清浄化にはウイルスをまき散ら

BVDV 遺伝子または抗原が検出されることをもっす PI 牛の摘発淘汰が最も重要であると考えられる。

て PI 牛の確定診断としている。
4．鳥取県における清浄化対策
3．BVDV 感染症対策

鳥取県では県内の公共育成牧場へ BVDV – 2 の PI

混合生ワクチン、不活化 BVDV 混合生ワクチン

牛が導入されたため、育成牧場内で BVDV – 2 が流及び不活化ワクチンが市販されており、BVDV 感染

行し、多くの牧場感染由来の PI 牛が摘発された。

65（2），2019

このため、感染源となった育成牧場の清浄化対策、

5（17）

と考える。

入牧前の BVDV 検査及び接種ワクチンの変更、牧場内で摘発された PI 牛と同居していた妊娠牛の産子の検査を実施した。さらに摘発 PI 牛の円滑な淘

引用文献

汰による蔓延防止対策を実施するため、県独自の淘

1. Mao L, Li W, Yang L, Wang J, Cheng S, Wei Y,

汰助成制度を整備した。これらの取組みを開始した

Wang Q, Zhang W, Hao F, Ding Y, Sun Y, Jiang J :2012 年から 2015 年までの間に 22 頭もの育成牧場

Primar y sur veys on molecular epidemiology of

関連 PI 牛が摘発され、育成牧場の清浄性は維持さ

bovine viral diarrhea virus 1 infecting goats in

れている。

Jiangsu province, China, BMC Vet Res, 12, 181

2016 年には県外の育成牧場（A 牧場）へ預託し（2016）ていた牛の産子から 2 頭の PI 牛が摘発され、その2. Kozasa T, Tajima T, Yasutomi I, Sano K, Ohashi K,

後の調査で同時期に同じ A 牧場へ預託されていた

Onuma M : Relationship of bovine viral diarrhea

牛の産子からさらに複数の PI 牛が摘発された。こvirus persistent infection to incidence of diseases

れらの PI 牛から分離された株は BVDV – 1c に分類

on dairy farms based on bulk tank milk test by

され（図 2）、高い相同性を示したため、A 牧場に

RT – PCR, Vet Microbiol, 106, 41 – 47（2005）

おける同一株による BVDV の流行が強く疑われた。

3. 田島誉士 : 牛ウイルス性下痢ウイルス感染症 , 日

このように県外導入牛（その産子を含む）が県内へ

獣会誌 , 65, 111 – 117（2012）の BVDV 侵入リスクとなる場合があるため、県外

4. 増田恒幸 , 足羽朋子 , 山里比呂志 , 亀山健一郎 :導入牛の監視を強化しているところである。これら

新たに市販された抗原 ELISA を用いた牛ウイルの事例及び本県での清浄化対策についての詳細は過ス 性 下 痢 ウ イ ル ス 検 査 の 検 証 , 日 獣 会 誌 , 69,

去の報告［4、8］を参考にされたい。

187 – 191（2016）
5. 福成和博 , 八重樫岳司 , 亀山健一郎 : 毛包を用いた免疫ペルオキシダーゼ法による牛ウイルス性

5．おわりに
現在、国による PI 牛淘汰補助を始めとする対策

下痢ウイルス持続感染牛の簡易検出法 , 日獣会
誌 , 71, 179 – 184（2017）が開始され、国内では本病の蔓延防止対策がスムー

6. Abe Y, Tamura T, Torii S, Wakamori S, Nagai M,

ズに実施できる体制が整いつつある。本病の清浄化

Mitsuhashi K, Mine J, Fujimoto Y, Nagashima N,には農場を始めとする関係者の BVD についての意

Yoshino F, Sugita Y, Nomura T, Okamatsu M,

識を啓発し、国や他の地域と連携しながら、地域的Kida H, Sakoda Y : Genetic and antigenicな対策から全国的な対策へと繋げていくことが重要

characterization of bovine viral diarrhea viruses
isolated from cattle in Hokkaido, Japan, J. Vet.
Med. Sci, 78, 61 – 70（2016）
7. Nagai M, Ito T, Sugita S, Genno A, Takeuchi K,
Ozawa T, Sakoda Y, Nishimori T, Takamura K,
Akashi H : Genomic and serological diversity ofbovine viral diarrhea virus in Japan, Arch Virol,
146, 685 – 696（2001）
8. 増田恒幸 , 黒田萌黄 , 岩尾

健 , 池本千恵美 , 小

谷道子 , 増田康充 , 亀山健一郎 , 迫田義博 : 県外預託牛の産子から分離された牛ウイルス性下痢
ウイルスの疫学調査とその清浄化に向けた取組
図2

 農場の預託産子から分離された BVDV の分子A系統樹。該当ウイルス株を四角枠で囲んで示す。

み , 日獣会誌 , 70, 575 – 579（2017）

日生研たより

6（18）

レビュー

ヒトRSV ワクチン開発から学ぶ事
加藤篤

限られている。本総説は最近 Lancet Infect. Dis [1]
文献紹介の意図
ヒト RS ウイルス感染症は重要な疾病であるにもに掲載された hRSV ワクチンに関する論文をもとにまとめたものである。

かかわらず、未だにワクチン開発に成功していない

hRSV はヒトにのみ感染し、他の動物に病気を起疾病である。しかし、光明が見え始めている。世界

こすことはない。A 型と B 型の二つがあり、二つ中で行われているヒト RS ワクチン開発の現状を紹の型が同時期に重なって流行する特徴をもつ。A 型

介したい。

インフルエンザウイルスも冬期に流行し、毎年抗原的に若干異なったウイルスが流行する傾向があるが、我が国ではヒト RS （respiratory syncytial）ウイhRSV も A 型インフルエンザウイルス程でないが、ルス（hRSV）によって引き起こされる急性呼吸器

多少の抗原変異を起こしている。hRSV の近縁にウ感染症（RS ウイルス感染症）が毎年冬期に小児をシ RS ウイルス（bRSV）がある。こちらは既にワ中心に流行し、生後 1 ヶ月以上 1 歳未満の乳幼児にクチン開発が成功しており、日本国内でも bRSV ワ

重度の肺炎を引き起こし、小児の死亡原因の 6.7％

クチンを含むウシ混合不活化ワクチン（3 社）とウを占めるとされている。3 歳までにほとんどの子供

シ混合生ワクチン（1 社）が販売されている [2]。

が hRSV に感染して抗体陽性になるが、その後も何

一方、hRSV ワクチンは 1960 年代に米国で検討さ度か再感染を繰り返す。再感染時に重症化することれた。ホルマリンで不活化した hRSV を 2 ヶ月からは少ない。ただし、介護が必要な高齢者の感染は健7 歳の子供に対して 1 から 3 ヶ月の間隔で 2 から 3

康へのリスクが高い。RSV は呼吸器管 （respiratory回ワクチン接種を行う臨床試験が行われた。hRSV

tract）に感染し多核融合細胞（syncytium, 合胞体）の流行期に試作ワクチンを接種し、接種群と未接種を形成することから、この名前が付けられた。我が対照群を比較したが、両群で RSV の感染率に差が国では英語頭文字がアルファベットのままウイルス

認められなかった。それどころか、ワクチン接種前

名となっている。ちなみに中国で RS ウイルスは呼に抗体を持たなかった試験者は、試作ワクチンを接吸気道合胞病毒と呼ばれている。

種した事によりかえって流行時に RSV に感染する

世界保健機関（WHO）の試算では毎年世界中でと症状が悪化（enhanced respiratory disease, ERD）

3 千 4 百万人の子供が hRSV に感染して下気道炎をし、ワクチン非接種者に必要だった病院治療が 5％起こし、そのうち 3 百万人は重症化して入院治療がだったのに対してワクチン接種者は 80％に達し、行われており、とりわけ低所得国とされる国々では死亡者も出してワクチンの開発は失敗に終わった

6 万 6 千人から 23 万 4 千人の子供が hRSV 感染に[3]。ワクチンを接種するとなぜ ERD が起きるのか

より死亡し、多くの損失を出しているとしている。

については、不活化抗原によりウイルス抗原とア

そのため WHO は hRSV の予防治療薬の開発を最重フ ィニ テ ィー が 低 い 抗 体 が 誘 導 さ れ、そ れ ら が要課題の一つして位置づけ、世界に向けて取り組み

hRSV 感染時に Th2 ヘルパー細胞に偏った免疫反応、の強化を訴えている。現在に至るまで多くの試みがすなわち過剰なサイトカイン産生を誘導し、炎症反なされてきたが、未だ有効な hRSV ワクチンは実用

応を引き起こすとの説があるが、hRSV がヒトにし化されていない。唯一承認された予防・治療薬がヒか病気をおこさず適当な動物実験モデルが存在しな

ト 化 モ ノ ク ロ ーナ ル 抗 体 製 剤 Palivizumab

いため、明確な答えは出されていない。hRSV ワク（Synagis）である。この薬はたいへん高額であり、

チンと同様に bRSV のワクチンを開発中にも ERD

我が国では保険適応となる対象が早産児、慢性肺疾が起きたことが報告されているが、bRSV ではワク

患児童、先天性心疾患児童のハイリスクグループにチン化が可能で hRSV では困難な理由については明65（2）
，2019

7（19）

らかになっていない。

ニューモウイルス属内で比較すると hRSV の A 型

RSV は一本鎖のマイナス極性の RNA をゲノムとと B 型 で 81％、hRSV の A 型 ま た は B 型 と bRSV

して持つエンベロープウイルスである。当初 RSV

で 76 〜 75％、MPV とでは 50％程度になる。

はモノネガウイルス目のパラミクソウイルス科に分hRSV のワクチン、治療薬の開発は非営利 NGO

類されていたが、多くのメタニューモウイルスがである PATH （Program for Appropriate Technology

RSV の仲間として発見されたのに伴い、近年これin Health）のホームページに前臨床、臨床試験の段らの仲間といっしょにニューモウイルス科として独階毎に掲載され [5]、不定期的にリストが更新され立し、新たに RSV はオルソニューモウイルス属、ている（図 2）。2018 年 7 月 16 日時点で不活化ウイ

メタニューモウイルスはメタニューモウイルス属とルスワクチンの開発が 1 件、生（遺伝子組み換えキ

して新分類された（図 1）[4]。RSV には、hRSV とメラ）ワクチンの開発が 11 件、粒子固定及び粒子

bRSV に加えてマウスニューモウイルス（MPV）の状ワクチンが 9 件、サブユニットワクチンが 10 件、3 種類が知られている。bRSV の近縁の仲間として

核酸ワクチンが 2 件、組換えウイルスベクターワク

ヤギ、羊の RSV が、MPV の仲間として犬の呼吸器

チンが 4 件あることが示されている。このリストかウイルスが報告されている。RSV ゲノムには 10 個ら臨床試験段階のワクチンが 18 件、モノクローナの遺伝子がコードされ、その遺伝子の数と位置によ

ル抗体製剤が 2 件あることが判る。ちなみに 2015

りモノネガウイルス目の分類がなされている（図 1）。 年 12 月 15 日時点のリスト [6] で第二相段階にあっこのうち、ウイルスの宿主細胞への接着に関わるのた GlaxoSmithKline 社の高齢者用、母子免疫用 RSVが H、HN、G で示された糖タンパク質遺伝子であり、 F サ ブ ユ ニ ット ワ ク チ ン、第 三 相 段 階 に あ っ た
宿主細胞との膜融合に関わるのが F（fusion）で示

Novavax 社の高齢者用粒子固定 RSV F ワクチンのされた F タンパク質遺伝子である。モノネガウイ

開発は中止されリストから削除された。hRSV ワク

ルスによって異なるがこれら二つのタンパク質に対チン開発の困難さを物語っている。

する抗体の両方、あるいはどちらか一方にウイルス

hRSV の F タンパク質は Palivizumab の標的であ中和能を有するエピトープが含まれている。hRSVることから精力的に研究されている。F タンパク質用抗体製剤 Palivizumab の標的は F タンパク質であはウイルス粒子表面で 3 量体を形成し、ウイルスエ

る。RS ウ イ ル ス の F 遺 伝 子 の 相 同 性 を オ ル ソ

ンベロープ膜と宿主細胞膜を融合させてウイルスゲ

ウイルス名Canine distemper virus
Phocine distemper virus

属科
ウイルスゲノム

Morbillivirus

F

Measles virus
Rinderpest virus
Tupaia paramyxovirus
Hendra virus
Nipah virus
Bovine parainﬂuenza virus 3
Human parainﬂuenza virus 3

Unassigned
Henipavirus

F

Respirovirus
F

Human parainﬂuenza virus 1

Paramyxvirinae

Sendai virus
Newcastle disease virus

Avulavirus

Avian paramyxovirus 6
Porcine rubulavairus
Mumps virus)

Rubulavirus
F

Human parainﬂuenzavirus 2
Parainﬂuenzavirus 5
Human RS virus

Orthopnemovirus

Bovine RS virus
Murine pneumo
Human metapneumovirus
Avian metapneumovirus)

Metapnemovirus)

図1

Pnemovirinae

日生研たより

8（20）

図2

hRSV ワクチン、抗体製剤開発段階一覧

ノムを宿主細胞に注入する重要な役割を担っている。 ク質の相同性はアミノ酸レベルで 80％以上あり、2013 年 Science 誌に興味深い論文が発表された [7]。

hRSV の F タンパク質に対するモノクローナル抗体

hRSV F タンパク質はウイルスエンベロープ表面での 多 く が bRSV の F タ ン パ ク 質 と も 交 差 す る。

準安定状態（prefusion, pre – F）をとっているが、

bRSV を含むウシ混合不活化ワクチンは既にワクチ

宿主細胞に作用せずとも自然に構造変化を起こし安ンとして実績があるが、hRSV の F タンパク質で発定 状 態（postfusion, post – F）に な る こ と、こ の 構見された pre – F から post – F への構造変化が bRSV

造変化により F タンパク質上の最も重要な中和エでも起きており、pre – F 型ワクチンを使うと従来型

ピトープと言われる site φを含む多くのエピトープ

よりも効果が高いのか否かが注目される。

が消失することが示された（図 3）。加えて、構造昨 年、興 味 深 い 報 告 が あ っ た [9]。筆 者 ら は

学 的 解 析 を 行 い pre – F 構 造 を 安 定 化 す る 改 変 を

bRSV の F タンパク質遺伝子に pre – F の構造が安行って、これを抗原とすると効率的に中和抗体が誘導できることを示した。hRSV F タンパク質が容易

post‑F（安定状態）

pre‑F（準安定状態）に post – F になるという性質が不活化 hRSV ワクチンの開発を困難にしていた原因であったのであろう。
この発見を契機として F タンパク質を標的としたワクチンの開発は pre – F という新しい目標が示さ

Site φれ拍車がかかった。
hRSV はヒトにのみ病気を起こすウイルスであるが、マウス、コットンラット、霊長類をモデル動物とした hRSV の感染病理学的研究が行われている[8]。しかし、これらの動物ではヒトの病気の一部

hRSV Fタンパク質に対するモノク
ローナル抗体でbRSVと交叉する部
分を水色、青、緑、赤、ピンクで示す。

が再現されているにすぎず、モデル動物を用いた
hRSV ワクチンの開発には限界が指摘されている。

RSV Fタンパク質三量体構造(白、薄茶、茶が単体を示す)

そこで注目されているのが近縁の bRSV と牛を用いた感染実験研究である。bRSV と hRSV の F タンパ【引用文献9の図を改変】

図3

65（2）
，2019

9（21）

定化する改変を施し、細胞で発現させて培養液中か対して、post – F 接種群は PBS 接種群と比べてもあら回収できるように工夫した。対照として構造部分

まり大差がなく、抑制効果が少なかった（図 4 右）。

は未改変であるが、同じ様に培養液から回収できる

この結果、bRSV の post – F ワクチンは病気の程度ようにした F タンパク質を post – F とし、それぞれ（肺病変）を抑える効果があるが、ウイルス排泄（鼻50 μg を Montanide ISA 71G アジュバントと混合し内ウイルス量）には効果が薄いことが示された。こて 5 頭の子牛に筋肉内注射した（図 4 上）。陰性対の結果は、bRSV においても pre – F は非常に有効な照として PBS 接種群 4 頭を設けた。接種前血清かワクチンとなり得る事を示している。近縁の bRSVら PBS 接種群の 4 頭中 2 頭に母牛からと思われるで良好な成績が得られたことから、F タンパク質を

bRSV に対する中和抗体が認められたが、他は陰性標的としたヒト用 RS ワクチンの実用化も近いと推であった。pre – F 接種群では 2 週目で中和抗体陽測される。

性の牛が 2 頭、4 週目で 5 頭全部が陽性になった。
一方 post – F 接種群で 4 週目でも中和抗体陰性で所感あった。4 週目で初回と同量を追加免疫すると、
pre – F 接種群は 6 週目で中和抗体価がさらに上昇

産業動物用ワクチンは経済性の観点から単価を抑した。post – F 接種群も 6 週目で 3 頭が陽性になり、える必要があり、製品開発に大きな冒険ができない

bRSV では pre – F に比べて低い（およそ 1/100）も制約がある。しかし、一方で本来の宿主を使って大のの post – F でも中和抗体が誘導できることが示さ胆な仮説に基づいた感染実験が可能である。bRSV

4

れ た（図 4 左）。8 週 目 に 全 頭 bRSV Snook 株 10は世界中のウシの群れに感染していると言われていpfu で経鼻感染させて攻撃し、感染 6 日目に安楽殺るが、そもそも 1970 年に hRSV 近縁のウイルスとした。6 日目の肺病変を比較したところ PBS 接種

して我が国から報告されたウイルスである [10]。

群で病変が強かったのに比べて、pre – F 接種群もbRSV ワクチンを更に有効なものにし、ヒト用ワク

post – F 接種群も軽微な病変に留まっており、ERD

チンに革新をもたらす様な獣医領域からのチャレンも起こしていなかった。一方、鼻汁中のウイルス量ジに期待したい。

は、pre – F 接種群でほぼ完全に抑えられているのに免疫スケジュール
採血

採血

採血

採血

採血

週
追加免疫

初回免疫

免疫結果

bRSV攻撃攻撃結果**有意差99％*有意差95％

鼻汁中ウイルス量

肺病変スコア値

Pre-F

中和抗体価（EC50）

Post-F

PBS

Log pfu/ml

肺病変（％）

中央値

検出下限

検出下限

0週

2週

4週

6週

Pre‑F Post‑F PBS

8週

Pre‑F Post‑F PBS【引用文献9の図を改変】

図4

日生研たより10（22）

6. Neuzi KM : Progress towar d a respirator y
引用文献

syncytial virus vaccine, Clin. Vaccine Immunol,

1. Mazur N, Higgins D, Nunes MC, Melero JA,

23, 186 – 188（2016）

Langedijk AC, Horsley N, Buchholz UJ,

7. McLellan JS, Chen M, Joyce MG, Sastr y M,

Openshaw PJ, McLellan JS, Englund JA, Mejias A,

Stewar t-Jones GB, Yang Y, Zhang B, Chen L,

Karron RA, Simões EA, Knezevic I, Ramilo O,

Srivatsan S, Zheng A, Zhou T, Graepel KW, Kumar

Piedra PA, Chu HY, Falsey AR, Nair H, Kragten-

A, Moin S, Boyington JC, Chuang GY, Soto C,

Tabatabaie L, Greenough A, Baraldi E,

Baxa U, Bakker AQ, Spits H, Beaumont T, Zheng

Papadopoulos NG, Vekemans J, Polack FP, Powell

Z, Xia N, Ko SY, Todd JP, Rao S, Graham BS,

M, Satav A, Walsh EE, Stein RT, Graham BS, Bont

Kwong PD : Structure-Based Design of fusion

LJ : The respirator y syncytical vir us vaccine

glycoprotein vaccine for respirator y syncytial

landscape : lessons form the graveyard andvirus, Science, 342, 592 – 598（2013）

promising candidates, Lancet Infect. Dis, 18,30298 – 30295（2018）

8. Sacco RE, Durbin RK, Durbin JE : Animal modelsof respirator y syncytial vir us infection and2. 動物用ワクチン利用の手引き（牛用ウイルスワ

disease, Curr. Opin. Virol, 13, 117 – 122（2015）クチン編）公益社団法人日本動物用医薬品協会

9. Zhang B, Chen L, Silacci C, Thom M, Boyington

平成 30 年 3 月

JC, Druz A, Joyce MG, Guzman E, Kong WP, Lai

3. Dudas RA, Karron RA : Respirator y syncytial

YT, Stewart-Jones GBE, Tsybovsky Y, Yang Y,

virus, Clin. Microbiol. Rev, 11, 430 – 439（1998）

Z h o u T, B a x a U , M a s c o l a J R , C o r t i D ,4. ICTV Report, Available at <https://talk.ictvonline.

Lanzavecchia A, Taylor G, Kwong PD : Protectionorg/ictv-repor ts/ictv_online_repor t/negative-of caves by a prefusion-stabilized bovine RSV F

sense-r na-vir uses/mononegavirales/w/

vaccine, npj Vaccines, 2, 7（2017）, doi : 10.1038/

pneumoviridae> [accessed Aug. 31. 2018]s41541 – 017 – 0005 – 9

5. PATHRSV vaccine and mAbs snapshot, Available

10. Inaba Y, Tanaka Y, Sato K., Ito H., Omori T : Nomi

at <http://vaccineresources.org/details.

virus, a virus isolated from an apparently new

php?i=1562 > [accessed Sep.18.2018]

epizootic respirator y disease of cattle. Jpn J
Microbiol. 14, 246–248（1970）

文献紹介

アルビノモルモットにおける
牛パラインフルエンザウイルス 3 型
遺伝子型 C を用いた弱毒ワクチン候補株の評価
篠原みなみ
Evaluation of an attenuated vaccine candidate basedon the genotype C of bovine parainfluenza virus type
3 in albino guinea pigs

はじめに
牛呼吸器病症候群（BRDC）はウシの年齢を問わJournal of lntegrative Agriculture

ず発生し、治療費の増加や生産性の低下など、牛産

Volume 16, lssue 9, September 2017, Pages 2047 – 2054

業界で最も経済的被害が大きな疾病として知られて65（2），201911（23）いる。BRDC は様々な要因が複雑に絡み合うが、そて弱毒化継代株の更なる研究の必要性を示すものでの要因の一つである牛パラインフルエンザウイルスある。

3 型（BPIV3）は単独感染で呼吸器症状を引き起こすことに加え、他の細菌やウイルスとの複合感染に
よって重症化する場合があり、発症予防が重要視さ

1. 序論れている。BPIV3 の遺伝子型は A、B、および C にウシのパラインフルエンザウイルス3型

分類されており、これまで日本では遺伝子型 A の（BPIV3）は、若齢および成牛において最も重要なみが検出されていたが、2012 年に呼吸器病発症牛

呼吸器病原体の 1 つとして認識されており、牛呼吸から初めて遺伝子型 C が分離された。しかし、遺器症候群（BRDC）発生に関与している。近年、中伝子型 A に比べて遺伝子型 C に関する報告はまだ

国北部の 3 州で、中和試験により BPIV3 の抗体陽少なく流行状況や病原性など未だ不明な点が多い。

性率が高いことが確認され、陽性率は 91％に達した。

今回は BPIV3 遺伝子型 C をモルモットに実験感染

これは高レベルの BPIV3 感染が中国で起こっていさせ、モルモットが実験動物モデルとして理想的なることを示している。BRDC は一般に「輸送熱」に動物であることを示し、また生ワクチン候補株の評

関連しているとされ、古典的な臨床症状は、鼻汁排価を行った論文を紹介する。

出、眼漏、発咳、食欲不振、発熱、呼吸困難であり、時に下痢を起こす。BRDC は依然として世界的に大きな問題であり、牛肉産業と酪農産業で大きな経概要
BPIV3 は、若齢牛と成牛の両方で重要な呼吸器病

済的損失を引き起こしている。
BPIV3 は世界中のウシに分布している。2008 年

原体の 1 つであり、世界中のウシで認められている。 にはオーストラリアで 7 株が分離され、そのうち 4
BPIV3 は中国では 2008 年に最初に報告され、山東株は他の 3 つの株およびこれまでに報告されていた省にて分離された株のうち 4 株が遺伝子型 C

BPIV3 株と遺伝学的に異なることが報告された。

（BPIV3c）であった。また、更なる調査により、中この 4 株は遺伝子型 B（BPIV3b）と分類され、残国のウシでは BPIV3c 感染が一般的であることが判りの 3 株および既存株は遺伝子型 A（BPIV3a）と明した。BPIV3 は、遺伝的および系統学的解析に基分 類 さ れ た。一 方、2008 年 以 前 で は 中 国 で のづいて、遺伝子型 A、B および C に分類されている。 BPIV3 検出および分離の報告はされておらず、2008
加えて、血清学的調査の結果でも BPIV3 感染が中年に中国山東省の呼吸器疾患牛から採取した鼻腔ス

国で広まっていることが示されているものの、中国ワブから初めて検出され、遺伝学的分析をしたとこには BPIV3 予防のためのワクチンは存在しない。

ろ、これらの株は BPIV3 の遺伝子型 A および B と本 研 究 で は、BPIV3c SD0835 株 を Madin – Darby

大きく異なり、遺伝子型 C（BPIV3c）に分類された。

bovine kidney（MDBK）細 胞 で 209 代 目 ま で 連 続

その報告の直後、アルゼンチン、韓国、日本、アメ継代培養し、病原性を減弱させた株をワクチン候補

リカを含む多くの国でウシからの BPIV3c の分離が株として、モルモットに免疫した。その結果、2 回報告された。更なる調査で、BPIV3c 感染は中国でのワクチン接種が、T リンパ球の増殖と同時に優れ

一般的に認められていることが判明した。

た血清中和抗体を誘導し得ることを明らかにした。

BPIV3c SD0835 株の最初の分離後、SD0835 株のワクチン接種されたモルモットは、病原性を有する

病原性に関する研究は BALB/c マウスおよびアルBPIV3c SD0835 株の低継代株での攻撃に対して防ビノモルモットで行われている。SD0835 株の病原御 を 示 し た。ワ ク チ ン 接 種 群 の 末 梢 血 単 核 球

性は BALB/c マウスよりもモルモットの方が強く、（PBMC）中の T 細胞の割合が免疫後に増加した。

モルモットでは仔牛に野外分離株を実験感染させたワクチン接種群と対照群の両群で攻撃後 2 日目に T

時に認められる臨床症状および肉眼的肺病変を引き細胞が減少したが、ワクチン接種群のうち 4 匹の T起こした。これらの知見は、モルモットが BPIV3細胞の減少は、対照群のものと比べて緩やかであっの病原性やワクチン効果を評価するための理想的なた。これらのデータは、効果的なワクチン候補とし

実験動物感染モデルであることを示唆している。ま日生研たより12（24）

た、その間に BPIV3c SD0835 株を MDBK 細胞で約

量 注 射 し、3 週 間 後 に 再 び 接 種 し た。試 験 ス ケ

200 回継代培養して弱毒 BPIV3c ワクチン候補株をジュールを図 1 に示す。

作出し、モルモットにおいて 209 代目の毒性は減少

2.3. 攻撃していることが確認された。現在、中国では市販の2 回目ワクチン接種後 3 週目に、全てのモルモッ

BPIV3 ワクチンは入手できず、ウシの BPIV3 感染

トを 10％抱水クロラールの腹腔内注射により麻酔し、予防のための効果的なワクチンを開発する必要があ200μL（2 × 107.0 TCID50/mL）の BPIV3 SD0835 株る。本研究の目的は、モルモットにおける弱毒化ワの低継代株（継代 2 代目）を鼻腔内接種した。

ク チ ン 候 補 と し て 209 代 連 続 継 代 さ れ た BPIV3

2.4. ワ クチン接種および攻撃後の臨床症状の評価
および病理学的検査

SD0835 株の有効性を評価することである。

本試験では、モルモットの活動レベル、覚醒状態、
身体状態、および呼吸器疾患の臨床症状について観2. 材料と方法察した。直腸温度は、1 回目および 2 回目のワクチ

2.1. 細胞とウイルスン接種後 1 週間継続して毎日記録し、攻撃の 1 日前

MDBK 細胞は 10％ウシ胎仔血清（FBS）を添加から試験の終了までを毎日記録した。以前の研究で、した最小必須培地（MEM）を用いて 37℃にて培養

BPIV3c の実験感染後 2 日目または 3 日目で、肺およした。BPIV3c SD0835 株を単層となった MDBK 細び気管で高いウイルス力価が確認されていたため、

胞 に て 209 代 継 代 し て 弱 毒 化 BPIV3 株（BPIV3 –今回の実験では各群 4 匹のモルモットを攻撃後 2 日F209）を 作 出 し た。こ の BPIV3 – F209（10目に剖検した。各群の残り 3 匹は攻撃後 14 日目に剖TCID50/mL）をワクチン株候補として使用した。

検し、それぞれの肺の肉眼病変を観察し、評価した。

2.2. 動物およびワクチン接種手順

2.5. BPIV3 のウイルス分離およびウイルス力価測定

8.3

合計 14 匹の SPF 環境で生育したメスのアルビノ

モルモットの肺および気管の一部を無菌的に採取

モルモット（実験開始時に体重約 200 g）を市販のし、それぞれを 1.5 mL のエッペンドルフチューブ

育種業者から購入し、標準飼料および水を自由に与に入れ、それぞれのチューブに 0.75 mL の MEM をえ、十分に換気されたケージ内で個別に飼育した。

加えて乳剤を調製した。乳剤は 2 回凍結融解後に低無作為に 2 つのグループに群分けし、各グループ 7

速遠心分離によって得られた上清を回収し、 – 70 ℃匹とした。すべての動物実験手順は、中国黒龍江省で保存した。ウイルス分離およびウイルス含有量測

実験動物管理局によって承認された。BPIV3 – F209

定には MDBK 細胞を使用した。

は、MEM を用いて 10

2.6. 中和試験

5.3

TCID50/mL に調整した。

ワクチン接種群は、調整した 200μL のウイルス液

試験期間中の中和抗体価を測定するために、モルを前肢に筋肉内注射し、3 週間後に再度接種した。

モットの血液試料を、1 回目ワクチン接種時、1 回対照動物には、非感染 MDBK 細胞の培養上清を同目ワクチン接種後 21 日目、42 日目および攻撃後 14
1日2日

初回免疫後の週数（W） 0w
ワクチン接種・攻撃

1w

2w

1回目

3w

4w

2回目

病理学的検査

5w

6w

7w

攻撃

（4匹）

T細胞比率の測定
採血・抗体価測定
検温実施期間図1

試験スケジュール

8w（3匹）

65（2），201913（25）日目に心臓穿刺により採血し、実施した。

BPIV3 攻撃に対し優れた防御を示すことが明らか

2.7. 免疫期間中および攻撃後の T 細胞の応答となった。

1 回目ワクチン接種時、1 回目ワクチン接種後 213.2. 攻撃後の肉眼的病変

日目、42 日目および攻撃後 2 日目と 14 日目に採取攻撃後 2 日目および 14 日目の剖検時に、対照群した抗凝固処理を施した血液試料を用いて、末梢血のモルモットの肺において様々な程度の病変が観察

単核細胞（PBMC）中の T 細胞の比率を測定した。

された。攻撃後 2 日目に死亡した 2 匹の各肺葉は、本測定には 1.5 mL の血液が必要であり、採血によ暗赤色化し出血性病変が見られた。攻撃後 2 日目にる死亡を回避するため、各群のモルモット 3 〜 4 匹

安楽死させ剖検した 2 匹においては、肺葉の半分程から心臓穿刺により採血した。PBMC をリンパ球度の領域で硬化が見られた。攻撃後 14 日目でも依分離培地を用いて血液サンプルから分離し 1.5 mL然として萎縮性に硬化しており、病変が残存していのエッペンドルフチューブ中にて 1 mL の洗浄溶液

た。一方、ワクチン接種群では攻撃後 2 日目およびで 2 回洗浄した。1,500 × g で 5 分間遠心分離する

14 日目の肺葉に硬化は見られなかった。

こ と に よ り PBMC を 沈 殿 さ せ、100μL の PBS で3.3. 攻撃後の肺および気管内のウイルス力価

再懸濁した。抗 CD4 抗体および抗 CD8 抗体の各攻撃後 2 日目に対照群の 4 匹のモルモットを剖検

10μL を PBMC 懸濁液に添加し、遮光して室温でしウイルス力価を測定した。BPIV3 は、4 匹の対照

30 分間インキュベートした。反応後に PBMC 懸濁群全ての肺および気管から検出され、ウイルス力価

液サンプルを 1 mL の洗浄溶液で 2 回洗浄した後、は非常に高く、肺では 105.0 TCID50/mL に達し、気遠心分離により沈殿した PBMC を 500μL の PBS

管では 104.3 TCID50/mL に達する個体も存在した。

で再懸濁し、フローサイトメトリーによりモルモッ

このうち、攻撃後 2 日目に死亡していた 2 匹の肺おトの T リンパ球サブグループを検出し分析した。

よび気管から回収したウイルスの力価は、それぞれ

2.8. 統計分析

肺で 104.3 TCID50/mL および 103.4 TCID50/mL、気管Graphpad Prism Software を用いてデータを分析

内で 103.0 TCID50/mL および 102.3 TCID50/mL であっした。試験群間の T 細胞サブグループの平均パーた。攻撃後 14 日目に安楽殺した残りの 3 匹の対照

センテージをスチューデントの t 検定を用いて比較

動物の肺および気管サンプルからウイルスは回収さした。差異は、P 値が 0.05 未満である場合に有意れなかった。一方、ワクチン接種群の 4 匹のモルとみなした。

モットも接種後 2 日目に安楽殺したが、1 匹の肺のみからウイルスが回収された。このウイルス力価も非常に低く、10 倍希釈した肺乳剤を 96 ウェルプ

3. 結果

レートで培養した MDBK 細胞に接種し、細胞傷害

3.1. ワクチン接種後と攻撃後の臨床症状効果（CPE）が 1 つのウェルで観察されたのみでワクチン接種群、対照群共に 42 日間の免疫期間あった。攻撃後 2 日目に安楽殺した残りの 3 匹の動中に臨床症状は示さず、両群の直腸温は正常範囲で物の肺および気管サンプルからウイルスを検出するあり、38.7 〜 39.3℃であった。攻撃後 24 時間でワことはできなかった。従って、BPIV3 弱毒ワクチン

クチン接種群の 7 匹全てが高熱（≧ 39.5℃）を示し

候補の 2 回接種により、肺および気管内でのウイル

たが、攻撃後 2 日目には正常に戻り、以降は上昇しス複製が効率的に阻止されることが示された。攻撃なかった。一方、対照群のうち 2 匹は攻撃後 2 日目

後 14 日目に安楽殺したワクチン接種群の組織サンに直腸温の異常を示し、1 匹は 39.7℃の高熱がそのプルからウイルスは検出されなかった。

後 1 週 間 持 続 し た。残 る 1 匹 は 攻 撃 後 2 日 目 に

3.4. ワ クチン接種後および攻撃後のウイルス特異37.2℃を示し、この個体は攻撃後 2 日目に剖検した。

的血清中和抗体応答

更に、対照群のうち 2 匹のモルモットは攻撃後 2 日

試 験 開 始 前 は 全 て の モ ル モ ット の 血 清 中 に目に死亡し、残り 3 匹は臨床症状を示さなかった。

BPIV3 に対する中和抗体は存在しなかった。ワク

これに対して、ワクチン接種群は 1 匹も死亡しな

チン接種群における中和抗体価は、最初のワクチンかった。従って生ワクチンの候補株は、低継代の接種後 21 日目で 4 〜 16 倍に増加し、追加免疫後に日生研たより14（26）

128 〜 256 倍に増加した。更に、ワクチン群の中和を除いて異常は認めなかった。一方、対照動物の臨抗体価は、攻撃後 14 日目に 1,024 〜 2,048 倍に増加

床症状は、攻撃後の直腸温度の上昇が 1 週間持続し、した。一方、対照群では攻撃後 14 日目に中和抗体

更には死亡した。これは、過去のアルビノモルモッ

価は 16 〜 32 倍を示した。表 1 で両群の中和抗体応

トにおける BPIV3c の病原性に関する研究結果と同答を示す。

様であった。攻撃後 2 日目に行った剖検後の検査に3.5 PBMC 中の T 細胞サブグループの動態

おいて、対照群のモルモットの肺における硬化およTwo – Color flow cytometry にて、2 つの T 細胞表

び無気肺の領域の典型的な肉眼的病変は、ワクチン

面マーカー（CD4 および CD8）に対する特異抗体

接種群のものよりも深刻であることが明らかになっで標識した T 細胞を検出し PBMC 中の全 T 細胞のた。攻撃後 14 日目に各群の残り 3 匹を剖検した際存在割合を算出した。ワクチン接種前にはワクチンには、ワクチン接種群の肺は正常な色調および弾力

接種群と対照群との間に T 細胞の比率に有意差は性を示した一方で、対照群における肺の無気肺およ

認められなかった。ワクチン接種群で、1 回目ワク

び硬化は依然として観察された。

チン接種後 21 日目に対照群と比較して統計学的にワクチン接種群の上部気道および下部気道のウイ

有意に高く、2 回目ワクチン接種後も上昇し続けた。

ルス力価は、対照群のウイルス力価よりも有意に低一方、対照群は変動が認められなかった。この結果

く、ワクチン接種により気道における BPIV3 の複は、モルモットに対する 2 回のワクチン接種が T

製 が 抑 制 さ れ た こ と を 示 唆 し て い る。同 様 にリンパ球の増殖に寄与し得ることを示唆した。攻撃

BPIV3 の ヘ マ グ ル チ ニ ン – ノ イ ラ ミ ニ ダ ーゼ

後 2 日目および 14 日目に安楽殺した際にも、モル（HN）タンパク質または F タンパク質をコードす

モットの PBMC 中の T 細胞の比率を測定した。両るアデノウイルスで免疫したコットンラットでは、

群共に T 細胞の比率は攻撃後 2 日目に低下したが、攻撃後 3 日目のウイルスの複製が阻害されたとの報

ワクチン接種群の 4 匹の比率の低下は対照群に比べ告がある。また、コットンラットにヒトパラインフ

緩やかであった。両群の T 細胞の比率は、攻撃後ルエンザウイルス 3 型（HPIV3）HN タンパク質を

14 日目に正常に戻った。表 2 で両群の T 細胞の比発現する改変ワクチニアウイルスを免疫したところ、率の変動を示した。測定時期は図 1 内で示している。 肺において 3.4 log、鼻甲介で少なくとも 4.7 log ず
つウイルス力価を減少させ得ることを示している。
ウイルス特異的血清中和抗体も、BPIV3 – F209 で
4. 考察

ワクチン接種したモルモットで検出された。2 回のこの研究では、モルモットに BPIV3 – F209（継代ワクチン接種により、BPIV3 に対する中和抗体価は

209 代）を 2 回投与した場合、病原性を有する低継128 〜 256 倍に増加した。攻撃前の対照群では中和代の BPIV3 による攻撃を防御することを実証した。

抗体は観察されなかった。これらの結果は、BPIV3

ワクチン接種群は、攻撃後 1 日以内の一時的な発熱– F209 を用いた 2 回のワクチン接種が、モルモッ

表1

ワクチン接種後および攻撃後のウイルス特異的血清中和抗体価

測定時期

1 回目ワクチン
接種前

1 回目ワクチン接種後 3 週目

2 回目ワクチン接種後 3 週目
（攻撃前）

攻撃後 14 日目

ワクチン接種群

陰性

4 ～ 16 倍

128 ～ 256 倍

1,024 ～ 2,048 倍

対照群

陰性

陰性

陰性

16 ～ 32 倍

表2

末梢血単核細胞中の T 細胞比率の変動

測定時期

1 回目ワクチン
接種前

1 回目ワクチン
2 回目ワクチン
攻撃後 2 日目
接種後 3 週目 接種後 3 週目
（攻撃前）

ワクチン接種群

正常

増加

増加

減少

正常

対照群

正常

正常

正常

著しく減少

正常

攻撃後 14 日目

65（2），201915（27）

トにおいて優れた血清中和抗体応答を誘発し得るこ有用であると言える。遺伝子型 C の BPIV3 SD0835とを示した。更に、ワクチン接種群の攻撃後 14 日

株の最初の分離以来、BPIV3c の病原性に関する研目でも中和抗体価の有意な上昇が観察され、2 回の究は BALB/c マウスおよびモルモットにおいて行

ワクチン接種により免疫記憶が形成され二次応答がわれ、モルモットは BPIV3c を鼻腔内接種した後に起こっていることが示された。

観察可能な臨床徴候および肉眼的病変を示す理想的

これまでに BPIV3 ワクチンで免疫した動物におな動物モデルであることが示された。一方、BRDC

ける T 細胞サブグループの動態および比率に関すは複数の因子が関与しており、抗体陰性牛においてる研究は殆どない。この研究では、モルモットにおBPIV3 の弱毒生ワクチンの候補を評価することはける PBMC 中の T 細胞の比率を調査した結果、ワ

難しいと考えられることから、SPF モルモットにおクチン接種群の T 細胞の比率は、1 回目免疫後 21

ける実験的感染の実施が推奨される。以前、ウシお日目および 42 日目の対照群と比較して、各々統計

よびモルモットを用いた牛ウイルス性下痢ウイルス学的に有意に上昇していた。これは、弱毒化された（BVDV）ワクチンの評価が行われ、後者の動物モBPIV3c ワクチン候補株を用いたモルモットへの 2

デルがウシの代替動物となることが示された。更に、回のワクチン接種が、リンパ球の増殖に関与し得る

モルモットは牛伝染性鼻気管炎（IBR）ワクチンのことを示している。一方、低継代の BPIV3 は、攻評価を行う場合でも信頼性の高いことが報告され、

撃後 2 日目にワクチン接種群および対照群の両群でIBR 抗体陰性ウシの発見やコストの大幅削減など多T 細胞サブグループの割合が低下することが特徴的

くの問題を軽減した。また、BPIV3 においてもモルであった。ヒトメタニューモウイルス感染マウスでモットモデルでの検証が行われ、既に評価も終了しもこれと同様の結果が報告されている。その研究でている。これらの報告から、モルモットが BPIV3は、急性ウイルス性呼吸器感染が疲弊した CD8 陽の候補ワクチンを評価するための理想的な動物モデ

性 T 細胞を急速に誘導することを示した。ナイー

ルと考えることは合理的であり、モルモットにおけブ T 細胞は、免疫応答時に重要な役割を果たすヘ

る高継代 BPIV3 による弱毒化ワクチンの効果を評

ルパー T（Th）サブグループに分化することがで価することが可能となり、免疫賦与効果と感染防御きる。しかし、T 細胞サブグループに対する BPIV3

効果が確認された。

感染の影響に関する研究はほとんどなく、HPIV3に関連する細胞性免疫応答に関する研究は少ない。
HPIV3 は、活性化した T 細胞に感染することから

5. 結論

T 細胞の増殖を阻害する可能性がある。従って、この研究では、BPIV3 – F209 が弱毒ワクチン開発

HPIV3 は T 細胞の機能に著しく影響を与えることの た め の 有 力 な 候 補 と な り 得 る こ と を 示 し た。

で、HPIV3 感染に関連する免疫記憶を阻害し、リBPIV3 – F209 をモルモットに 2 回接種することによ

ンパ球増殖活性の低下を誘導することが指摘された。 り、病原性を有する低継代 BPIV3 攻撃に対し、肺更に、ノトバイオ―ト仔牛における CD8 陽性 T 細および気管において BPIV3 の複製を抑制し、強力胞の抑制は、BRSV 感染後のウイルス排出の持続期

な血清中和抗体応答ならびに T リンパ球の増殖を間の延長に関与し、CD4 陽性 T 細胞の抑制はより誘導することにより、感染を防御し得る。加えて、深刻な臨床症状を引き起こした。これらの研究は、

本 研 究 は、SPF ア ル ビ ノ モ ル モ ット が、BPIV3c

抗ウイルス免疫における T 細胞サブグループの重SD0835 株を由来とした弱毒ワクチン候補株の免疫要性を示したが、強毒 BPIV3 の攻撃後の T 細胞サ

原性および防御効果を評価するための理想的なモデ

ブグループの一時的な減少のメカニズムは不明であ

ル動物であり、ウシの代替動物となることを示した。

り、更に検討する必要がある。
ワクチン効果を検証するための実験動物モデルは、低コストであることや個体差が少ない点など多くの所感利点がある。ウシの BPIV3 血清陽性率が非常に高ウシのワクチン開発における実用的な研究だと感く、抗体陰性牛の選抜が非常に困難な中国では特にじた。実験動物としてのウシの使用は、スペースや

日生研たより

16（28）

コストの問題により維持が困難であること、また個デルを示している有用な報告と言えるだろう。

体差が大きく実験結果にブレが生じやすいことなど

BPIV3c は日本では 2012 年に広島で最初の分離問題点が多い。したがって、より円滑に研究を進めが報告がされており、その後北海道でも分離されてるためには、可能な限りウシ以外の代替動物での試いるが、全国的な流行状況はまだ把握されておらず

験実施が求められる。本文献で用いられたモルモッ

さらなる疫学的調査が求められる。また遺伝子型にトはコストの点でも飼育管理の容易さの点でも優れよる抗原性の違いについても、ある程度の交差性がており、理想的なモデルと言える。また、モルモッ

認められた例があるが、まだ報告数が乏しく断定はトであれば容易に SPF 動物を使用することができ、できない。今後症例が集まりさらなる検証が行われ微生物学的な側面から実験結果を保証することがでることを期待する。

きる。以上のことから本文献は大動物の代替動物モ（研究員）

学会発表演題（2018 年 4 月～ 2019 年 3 月）
●第 161 回日本獣医学会学術集会
会期：2018 年 9 月 11 日〜 9 月 13 日

開 催 地：つくば国際会議場
発表演題：apx Ⅱ CA 遺伝子を欠損した Actinobacillus pleuropneumoniae 血清型 15 の性状解析○手島香保、TOHO、昆道葉、藤野美由紀 、堤信幸、渋谷一元●第 6 回獣医病理学専門家協会学術集会スライドフォーラム
会期：2019 年 3 月 28 日〜 3 月 29 日

開 催 地：ルミエール府中
発表演題：ブタの腎臓○小野浩輝

編 集 後 記長いようで短かった平成も終わり、5 月 1 日から新たな元号へと移り変わります。皆様におかれま
しても、一つの節目の時期としてご多忙な日々をお過ごしかと存じます。平成 30 年度の編集作業は、今号をもって終了となります。関係者の皆様から多大なる御協力を賜り、不慣れながらも委員長を務めさせていただけたことを心より厚く御礼申し上げます。さて、新年度より編集委員長を安田早織へと引き継ぎ、編集委員を古澤貴章、小野浩輝が担当いたします。
今後とも、引き続き日生研たよりを御愛読賜りますよう、よろしくお願い申し上げます。

日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（年 4 回発行）

（通巻 611 号） 平成 31 年 3 月 25 日印刷
発行所
生命の「共生・調和」を理念とし、生命体の豊かな明日と、研究の永続性を願う
気持ちを快いリズムに整え、視覚化したものです。カラーは生命の源、水を表す「青」としています。
表紙題字は故中村稕治博士による揮毫です。

平成 31 年 4 月 1 日発行（第 65 巻第 2 号）

一般財団法人日本生物科学研究所〒 198–0024

東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL：0428（33）1520（経営企画部） FAX：0428（31）6166
URL：http://nibs.lin.gr.jp/
発行人
編集室
印刷所

土屋耕太郎

委

員／小野浩輝（委員長）、安田早織、古澤貴章

事務／経営企画部

株式会社 精案社（無断転載を禁ず）