2007 SEPTEMBER
No. 546

2007 年（平成 19 年）9 月号

第 53 巻 第 5 号（通巻 546 号）

挨拶・巻頭言今，倫理を口にするのは時代遅れか………………………………井 圡 俊 郎（ 2 ）獣医病理学研修会
第 46 回 No.921 イヌの肝臓………………岩手大学家畜病理学教室（ 3 ）第 46 回 No.923 ラットの鼡径部腫瘤………………
（財）
日本生物科学研究所（ 4 ）レビュー
幹細胞を用いた新しい鶏卵利用法の開発………………………………鏡 味裕（ 5 ）
アルゼンチン共和国・ウルグアイ東方共和国
出張記………………………井 圡 俊 郎（ 8 ）レビュー
体細胞クローンミニブタの作出………………………………石 川 孝 之（10）お知らせ
研修者・見学者受け入れ状況……………（12）http://nibs.lin.go.jp/

日生研たより

2（50）

今，倫理を口にするのは時代遅れか井圡俊郎
日生研は本年 10 月で創立 60 周年を迎える。戦後の混乱期に船出し，幾多の試練を乗り越えて今あるのも，皆様の支援・激励を受けながら共に歩んできたからに他ならない。「共生」は東洋的思想であり，社会を形成する最も基本的な倫理観を表現する言葉の一つである。永い時代を越えて蓄積されてきた優
れた日本文化も，国民に共通する価値観・倫理観を背景に築かれた「共生」の思想に裏打ちされたものである。
最近，犯罪を起こして容疑者として逮捕された者は，ニュ−スで見る限り，先ず第一声としてほとん
どの者が「自分は無関係です」あるいは「私はやっておりません」という。贈収賄事件，政治資金規制法違反事件，公安調査庁詐欺事件，食肉偽装事件などで逮捕された被疑者などがそうであり，例を挙げ
れば切りがない。
「政治資金規制法」に関しては今まで何回修正してきたか覚えはないが，立法する度に膨大な時間と経費をかけて出来た法律が最初から抜け穴だらけというのも情けない。国民の論理と議員の論理が乖離しているのだろうが，税金を使いながら何とか誤魔化そうとする態度は国民を欺く行為
で倫理観に乏しく，議員の品格も疑われる。酷い例では，事件直後は素直に認めていた事実を何年も経ってから否定する者も多い。彼らは法律の専門家と相談して法律の抜け道を研究し，処罰回避のための言い訳を考えて主張しているとしか考えられない。弁護側の論理は事件の真相を究明するとか，罪のな
い善良な市民の権利も守ると言うものとは思えない。単に弁護料のために犯人を庇う論理の構築に終始し，罪もないのに前途を奪われた被害者，遺族に対する思いやりは全く感じられないことが多い。社会の健全な発展を導くための法律の番人である弁護士の倫理観はどうなっているのであろうか。大多数の弁護士は健全な倫理観を持って事件・紛争の弁護を行っていると思うが，あまりにも倫理観の欠如した弁護士を見ると事件の寄生虫のように見えてくる。現在，日本の弁護士の数は人口約 5,000 人当たり 1人で，米国の約 250 人当たり 1 人に比べて 1/20 である。先般，米国でクリ−ニングで紛失したス−ツの慰謝料として約 40 億円の支払いを求めた訴訟があったが，それに類する事件は恐らく膨大な数に上るであろう。紛争解決が全て弁護士に委ねられ，その多くが金銭で解決されるという時代は決して一般
市民に幸福をもたらさない。「自由」とは言うものの，膨大な法規によって行動が規制されている社会の中で，法規の理念を忘れ，曲解に曲解を重ねればいずれ身動きが取れなくなる。
現在のように複雑化した社会では，考え方の違いから来る種々な軋轢，論理と論理の衝突に端を発する紛争が多発する。それを調停するための基準として次から次へと規則を制定し，それを運用すればそれに係わる社会的経費は際限なく拡大する。その膨大な経費とエネルギ−は，ほとんど浪費となる。法
律が出来ればその解釈がいかようにも出来るものでは困るが，一方で社会が激しく変動する現在，完全無欠な物も難しいと言われる。今，何を基準に行動の規範を考えたら良いのか。全ての人々が優れた倫理観をもち，紛争を全て双方の話し合いで，何のわだかまりもなく解決できれば，恐らく，個々の規則を制定する必要はない。近年，「倫理学」なるものの存在感が薄くなっている感があるが，いま我々に求められているのはこの「倫理観」の復活であろう。先般，NHK で，企業の寿命に関する番組を放送していた。世界的にみて日本の企業の寿命は桁違いに長寿という。それは商売・企業は社会に対する義
務・責任を持って経営され，社会がそれを認知しており，互恵の精神がその基礎にあるためであろう。
自由を標榜し，社会的責任は無いが如く「利己」の追求のみを経営指針とするような企業では恐らく長寿は望めないであろう。資源，環境および人口問題が重くのし掛かる中，今こそ，全ての人に「共生」を目指した「倫理観」が求められている。
（評議員）

53（5）
，2007

3（51）

イヌの肝臓
岩手大学家畜病理学教室

第 46 回獣医病理学研修会標本 No.921

1

3

2

4

動物：イヌ，シーズー，雄，15 歳齢。

4：マッソントリクローム染色）。また，血管内皮細胞や臨床事項：腹部膨満とのことで，某動物病院に来院。超リンパ管内皮細胞，嚢胞壁の一部の内張する細胞は，第音波検査にて肝臓腫瘍が疑われ，飼い主の希望により試Ⅷ因子関連抗原に対し陽性あった。

験的開腹術を実施。肝臓全体が嚢胞状になっており，部診断：血管肉腫 hemangiosarcoma

分摘出術を実施し閉腹した。術後，数日で死亡したが，考察：肉眼所見および増殖性の変化が乏しいことから

剖検は行われなかった。ホルマリン固定生検材料のみの「犬肝臓における多発性嚢胞性結節（紫斑病様）」を提唱

送付を受けたが，固定後の所見としては，径 1 cm にいしたが，腫瘍性の病変として捉えるべきであり，「血管たる多数の嚢胞が肝臓被膜面に密発していた（図 1）。

肉腫」という診断になった。肝細胞索が残存し壊死に向組織所見：大小様々な大きさの嚢胞状構造部の内腔には， かっている領域の腫大した内皮細胞は第Ⅷ因子関連抗原
血液あるいは漿液が充満していた（図 2：HE 染色）。肝に対し陰性であり，腫瘍細胞というよりも洞内皮細胞で細胞索が残存する領域では，腫大した洞内皮細胞が内張はないかと思われた。しかし，完全に嚢胞化した内張すしており，肝細胞は顆粒状となり凝固壊死に向かっている内皮細胞は，第Ⅷ因子関連抗原に対し陽性を示すことた（図 3：HE 染色）。部位によっては類洞が拡張し，富から血管系の腫瘍として捉えても良いのではないかと考脈斑様に拡張していた。嚢胞は一層の内皮細胞で内張さえられた。血液およびリンパ液の流れを考慮すると，正れており，肝細胞索に接しており，間質の結合組織はほ常構築を保ちながら徐々に嚢胞状組織が形成されていっとんど認められなかった。小葉間結合組織のリンパ管おたのではないかと推察された。（細野志野・御領政信）

よび血管は高度に拡張し，結合組織は増生していた（図日生研たより4（52）ラットの鼡径部腫瘤（財）
日本生物科学研究所

第 46 回獣医病理学研修会標本 No.923

動物：ラット，F344/DuCrj，雄，109 週齢。
50μm）など酸性ムコ多糖類の染色に陽性を示し，免疫
臨床事項：本症例は 104 週間のがん原性試験の背景資料
染色において collagen type Ⅰ，Ⅱ（図 5，bar＝50μm），
作成のための飼育試験として用いた動物である。4 週齢
ⅢおよびⅥ に陽性を，type Ⅹに陰性を示した。
時に入荷し，109 週齢まで当所のバリアーシステム下で診断：ヒト骨外性粘液型軟骨肉腫に類似したラット未分
飼育された。105 週齢時より右鼡径部皮下に腫瘤が触知化肉腫
され，症例は 109 週齢時に計画殺された。
考察：肉眼的に骨および関節との連続性がないこと，組剖検所見：剖検時，皮下腫瘤は境界明瞭で 55 × 45 ×
織学的に小葉構造を呈し，腫瘍細胞間に酸性ムコ多糖か
30 mm 大に達し，硬度軟で赤褐色を呈していた。他臓らなる豊富な粘液性間質が認められたこと，腫瘍細胞は器に本腫瘤と関連性のある異常所見はなかった。
vimentin および S100 蛋白に陽性を示したがその他のマ
組織所見：腫瘤内部および周囲組織に多数の出血巣が認ーカーには陰性であったこと，超微形態学的に未分化なめられた。腫瘤は線維性結合織に隔てられた不規則な小軟骨芽細胞様の形質を有していたことよりヒトの骨外性葉構造を呈していた（図 1，bar＝500μm）。小葉内には粘液型軟骨肉腫（EMC）に相当する腫瘍であると考え
豊富な粘液性間質に囲まれた腫瘍細胞の索状もしくは鎖られた。ヒトの EMC においては明らかな軟骨形成を認状配列が認められた。腫瘍細胞は大小不同で多型性を呈め る 症 例 は 稀 で あ る こ と，本 症 例 の 粘 液 性 間 質 がし，円形から卵円形の大型の核と弱好酸性の豊富な細胞
collagen type Ⅱに陽性で軟骨組織への分化傾向を示した質を有し（図 1 挿入図，bar＝100μm），有糸分裂像がこと，ならびにヒトの EMC と同様に collagen type Ⅰ，
多数認められた。免疫染色において腫瘍細胞は vimentin
Ⅲおよび Ⅵ に陽性を示したことなどより本症例はヒトおよび S100 蛋白（図 2，bar＝50μm）に陽性を示したが， の EMC に相当する腫瘍であることが示唆された。しかcytokeratin，α SMA，myoglobin，neurofilament，MBP， しながら獣医領域において EMC という診断名はまだ一
GFAP，lysozyme，ED1，von Willebrand factor お よ び
般的でないため、本症例は「ヒト EMC に類似したラッCD34 には陰性であった。電顕検索において腫瘍細胞はト未分化肉腫」とした。（中村圭吾）
多数のミトコンドリア，ゴルジ装置および粗面小胞体を
参考文献 :
有し，細胞表面に微絨毛様細胞突起が認められた（図 3， 1. Nakamura, K. et al., Toxicol Pathol, in press（2007）.
bar＝1μm）。粘液性間質はコロイド鉄法（図 4，bar＝ 2. Aigner, T. et al., Mod Pathol 17 : 214−221（2004）.

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，2007

5（53）

レビュー

幹細胞を用いた新しい鶏卵利用法の開発
鏡味序論

裕（信州大学農学部動物発生遺伝学研究室）

明域中央部に存在することが確定した。

鶏卵は理想的な栄養価を持つ食品として世界中で消費されているのみならず，ワクチン生産の場とし幹細胞の遺伝的特性ても極めて有用である。また最近のバイオテクノロ

遺伝子解析技術の進展によって，異種生物間の相ジーの進展によって鶏卵内で医薬品を生産する試み

同遺伝子の同定が容易に行える様になってきた。マ

や，疾病診断用の抗体を生産する試みが盛んに展開

ウスの生殖細胞の発生分化を制御する重要な遺伝子されている。本稿では鶏卵の初期胚中に存在する幹の一つに Vasa が挙げられる。ニワトリにおいても細胞の発生分化を制御し，鶏卵やニワトリの新たなVasa ホ モ ロ グ が 同 定 さ れ て い る。こ の ニ ワ ト リ

利用法を開拓する試みを紹介する。

Vasa 発現解析からも幹細胞が放卵直後の胚盤葉明

近年，マウス，ブタ，ウシ，ヒツジ，ヒト，等の域中央部に起源を持つことが確かめられた。また，

哺乳類においては多能性を保持する胚性幹細胞（ES幹細胞や PGC が局在する胚盤葉明域中央部では，細胞）の樹立が試みられている。人の ES 細胞の樹c-kit，DAZL，Oct の強い遺伝子発現が確認された。

立は再生医療や先端的生殖医療への実現性を示唆し胚発生が進行するにつれ，これらの遺伝子は生殖半た。鳥類幹細胞を培養し ES 細胞が樹立されれば，月環や生殖腺原器においても強く発現することが確

雌雄産み分け，遺伝子導入家禽の作出，クローンニ認された。幹細胞や PGC の局在する領域で，c-kit，

ワトリ作出，などに直結する。しかし現在に至るも

DAZL，Oct の強い遺伝子発現が確認されたことから，

家禽 ES 細胞は樹立されていない。このため当該研ニワトリ PGC の発生分化においてもマウス等の哺究は，米国ノースカロライナ州立大学，英国ロスリ

乳類の発生分化を制御する遺伝子と同様な遺伝子制ン研究所，ドイツ連邦政府畜産研究所，韓国ソウル

御機構が働くものと思われた。

大学，米国 Origen Therapeutics 社，等の研究機関
やベンチャー企業において極めて競合的に行われている。

幹細胞の培養幹細胞を長期間培養できれば ES 細胞の樹立に直結する。基礎培養液に LIF を添加して培養した方が鳥類幹細胞の発生基礎培養液のみで培養するより細胞の培養期間が伸幹細胞や生殖細胞の発生起源の同定が，鳥類にお張されたことから，サイトカイン LIF はニワトリのいて様々な研究手法を用いて試みられてきた。始原

培養細胞に対しても細胞増殖刺激および細胞分化抑

生殖細胞（PGC）は放卵直後の胚盤葉の上層部に同制の効果があると考えられた。マウスにおいて，定された。PGC の同定には主に PAS 染色や免疫組

LIF が細胞表面の gp130 と LIF レセプターからなる

織化学染色がおこなわれてきた。しかし，鳥類幹細二量体サブユニットに結合し，gp130 から細胞内の胞や PGC の発生起源を確定するには至らなかった。 JAK-STAT 系へのシグナル伝達が起こる。さらに，そこで，初期胚における幹細胞の発生起源を確定す

STAT3 が活性化することによって未分化状態が維るための研究戦略を構築した。胚盤葉明域中央部，持される。そして，STAT3 の活性化が LIF による

明域周辺部，暗域，から細胞塊を除去した後，操作マウス ES 細胞の未分化状態維持に必要かつ十分で胚を全胚培養した。明域中央部を除去した胚の平均あることが知られている。培養液にニワトリフィー

始原生殖細胞数は他の実験群より有意に減少したこ

ダー細胞を添加した場合も，基礎培養液のみの場合とから，鶏における生殖細胞の発生起源は，胚盤葉よりも未分化状態維持期間が延長した。このことか

日生研たより6（54）ら，ニワトリフィーダー細胞は幹細胞の増殖を維持された。初期胚の循環血中の PGC をドナーとしてする LIF などのサイトカインを産生している可能性

も，生殖細胞キメラが作出されている。これまで，が示唆された。最近ニワトリ LIF が単離され，ニワ

生殖細胞キメラの検定は主に羽色を遺伝的マーカー

トリ LIF は STAT3 を活性化するが，マウス LIF でとした後代検定によっておこなわれてきた。しかしは活性化が見られず，むしろ分化に働く MEK/ERK

この方法によるキメリズムの検定には性成熟に達す系が活性化されるという報告もある。しかし，ニワ

るまで長期間を必要とする。また配偶子を形成する

トリ ES 細胞はニワトリ LIF を使用しても未だ樹立

以前のキメラ個体や孵化する前の胚での検定が不可

されていない。このことからマウスとニワトリで能である。このため分子レベルでの生殖細胞キメリ

STAT3 の役割が異なると考察された。基礎培養液

ズムの検定が必須である。そしてミトコンドリアに LIF と SCF を添加した場合，細胞は細胞の増殖

DNA の一塩基置換を検出する SNP 解析によって各に伴って明瞭なコロニーを多数形成した。また培養

品種を判別し得ることが報告された。

継続可能期間も一層伸長した。これらの培養細胞で明確な ALP 陽性細胞が多く観察された。この培養

雌細胞由来の精子作出条件においては他のいずれの培養条件よりも培養継現在の家禽生産や育種において最重要課題の一つ

続可能期間が延長したのみならず，およそ 3 日に 1は雌雄産み分けであろうと思われる。理論的には，回の割合で継代が必要になるほど細胞増殖性が増加

雌性細胞から受精能を持つ W 精子を作出できれはした。これらの培養細胞中で明確な ALP 陽性細胞

家禽の雌雄産み分けへ途を拓くこととなる。そこでのコロニーも確認された。以上の結果から，初期胚

我々は雌幹細胞（ZW）を雄レシピエント（ZZ）に由来の幹細胞の至適培養条件として LIF と SCF を移植し，キメラの精巣中に雌雄の細胞が混在する異共に添加した実験群が至適条件であろうと思われる。

性キメラ（ZW/ZZ）を作出した。雌ドナー細胞は雄キメラの精巣中で第一および第二減数分裂を経て幹細胞増殖因子の解析

W 精子へと発生分化し得ることが初めて確認され幹細胞の多能性解析には，増殖因子やサイトカ

た。W 精子の作出は，最初は Southern Hybridization

インを支配する遺伝子の同定やその発現制御機構のによって確認された。その後，鳥類における雌細胞解析が必須となる。このため，鳥類における細胞増由来の精子の作成の可否が内外の独立した研究機関

殖因子に関連する cDNAs がニワトリおよびウズラ

でも検討された。これらの結果，雌由来の W 精子

においてそれぞれ同定された。これらのアミノ酸配の作出が PCR，FISH によりそれぞれ確認された。

列は両者間で高い相同性（98％）を示した。またこもし受精能を持った W 精子が効率的に生産できれれらの配列と各種哺乳類との間では比較的低い相同ば家禽の雌雄産み分けに途を拓くこととなる。

性（53％前後）が示された。今後は，哺乳類の ES細胞の培養において多能性の保持と細胞増殖の促進

鶏卵の生物工場としての活用に重要であろうと考えられている各種の増殖因子

家禽は哺乳類に比べ性成熟に要する時間が短く，（SCF，LIF，bFGF，IL-11，IGF-I）を精選し，これ

良質なタンパク質を卵黄や卵白として効率的に生産らを添加し最適の培養条件を決定することが鳥類できる。このため鶏卵やニワトリ個体を有用物質生

ES 細胞の獲得に必須であろうと思われる。

産のバイオリアクターと活用できれば家禽を用いた
新産業の創出に貢献し得る。残念ながら，今日にお生殖細胞キメラ作出

いても確実に遺伝子導入家禽を作出する方法はほと

黒色羽装のニワトリ品種（横斑プリマスロック）

んど開発されていない。これまで，レトロウイルスの幹細胞をドナーに，白色羽装のニワトリ品種（白ベクターを用い遺伝子導入が試みられてきた。しか

色レグホン）の胚盤葉をレシピエントとしてキメラ

し，レトロウイルスを扱うには特別な施設と高度なを作出した。性成熟後のキメラはドナー系の横斑プ技術が必要とされる。そこで雌雄の前核が融合した

リマスロックに戻し交配した。この結果，ドナー配直後の接合子に外来遺伝子を顕微注入し遺伝子導入

偶子由来の黒色雛が効率的に作出されることが確認

家禽の作出が試みられた。しかし家禽の胚発生は巨53（5）
，2007

7（55）

大な卵黄上で進行し接合子の位置を正確に観察できない。始原生殖細胞や幹細胞に外来遺伝子を導入後，
レシピエント胚に導入し，生殖細胞キメラを介した遺伝子導入家禽の作出が試みられた。この方法によっても外来遺伝子が導入され得ることが確認された。
今後，遺伝子導入技術の一層の改善によって非ウイ
ルス系ベクターでも確実に遺伝子導入家禽が生産され，また，卵または個体内に医薬品として使用可能
なタンパク質が生産されれば家禽バイオリアクターとしての活用が実現するであろうと期待される。

ノースカロライナ州立大学大学院ホスト教官の Petitte
教授（写真中央の男性）とその研究室メンバーと共に。
Petitte 教授は米国における鶏幹細胞の分化制御に関する研究の第一人者である。（右から三人目が著者）

幹細胞による再生
参考文献

ES 細胞や体性幹細胞（骨髄細胞等）を分化制御し，臓器，器官，個体の再生を試みる研究が展開されて

1. Yamamoto Y., Usui F., Nakamura Y., Ito Y., Tagami

いる。再生医療の可能性と相まって，ヒトやマウス

T., Nirasawa K., Matsubara Y., Ono T., and Kagami

等の哺乳類では再生研究が活発に展開されている。

H. A novel method to isolate primordial germ

再生研究の主な学問的基盤である発生学や遺伝学のcells and its use for the generation of germline

研究においてニワトリを始めとした家禽の受精卵やchimeras in chicken. Biol Reprod., 77 : 115−119

胚は最も重要な研究材料として古くから利用されて（2007）.

きた。ニワトリの全胚培養系の確立によってニワト

2. Lillico SG, Sherman A, McGrew MJ, Robertson

リ胚の利用性は拡大した。ヒトやマウスの細胞を鶏CD, Smith J, Haslam C, Barnard P, Radcliffe PA,

胚中で培養できれば極めて有用なバイオリアクター

Mitrophanous KA, Elliot EA, Sang HM. Oviduct-となるであろうと期待される。これらのことから，

specific expression of two therapeutic proteins in

臓器または個体の再生研究モデルとしてニワトリは，

transgenic hens. Proc Natl Acad Sci USA.,

今後ますます重要になるものと思われる。これまで

104 : 1771−1776（2007）.

に我々は幹細胞を用いて，烏骨鶏の脚を完全に再生

3. Petitte JN, Mozdziak PE. The incredible, edible,

することに成功した。現在，初生雛の骨髄細胞を用

and therapeutic egg. Proc Natl Acad Sci USA.,いて血管内皮等への分化転換能の解析を試みている。

104 : 1739−1740（2007）.

今後はニワトリ幹細胞を用いて各種の組織，器官，

4. van de Lavoir MC, Diamond JH, Leighton PA,

臓器，また個体を完全に再生することが期待される。

Mather-Love C, Heyer BS, Bradshaw R, Kerchner

これらの実験系は，再生医学においても有用な基礎

A, Hooi LT, Gessaro TM, Swanberg SE, Delany

的知見を提供し得ると思われる。

ME, Etches RJ. Ger mline transmission ofgenetically modified primordial germ cells.
展望

Nature., 441 : 766−769（2006）.

欧米各国の先導的研究機関において，幹細胞の発5. Fujiwara A., Mizutani M., Ono, T. and Kagami, H.

生分化を制御し再生医療や医薬品生産に活用する研Introduction of genes relating to muscular

究が極めて競合的に行われている。今後これらの研

dystrophy into chimeric chickens by embr yo

究の進展によって，遺伝子導入鳥類作出の作出，希engineering. In : Anim Cell Technol, Basic &少鳥類の再生，クローン個体作出，新規家禽育種戦Applied Aspects.（Iijima S. and Nishijima K. eds.）,

略の開拓に貢献することが期待されている。またこ

Springer, pp. 127−133（2006）.

れらの新知見の集積と新たな技術開発によって，鶏6. Ster n CD. The chick; a great model system

卵の新しい利用法が開発されるものと期待される。

becomes even greater. Dev Cell., 8 : 9−17（2005）.

日生研たより

8（56）アルゼンチン共和国・ウルグアイ東方共和国出張記
井圡俊郎（評議員）
平成 19 年 3 月 8 日から 3 月 20 日までの 13 日間，で，市内は厳しい警戒態勢が敷かれていた。随行員

国際協力機構の「広域協力を通じた南米南部家畜衛

1,700 名中，300 名が警察官という物々しい護衛団

生改善のための人材育成プロジェクト」に係わる短を引き連れた大統領は，招かれざる客というべきか，

期専門家として，アルゼンチン共和国のラプラタ大

市内には「ブッシュ帰れ」と書かれた多くの垂れ幕

学（ラプラタ市）およびウルグアイ東方共和国のウが見られた。国際社会，とりわけ南米における米国

ルグアイ東方共和国大学（モンテビデオ市）に派遣の信用，地位が失墜している中とは言え，「何のたされた。出張目的は「ウルグアイ東方共和国及びアめに来たのだ」と言う手荒い歓迎には少々驚いた。

ルゼンチン共和国でのセミナーを通じた鳥インフル3 月 12 日（月）はウルグアイ東方共和国大学側

エンザ等の新興・再興感染症に関する技術指導」との 受 け 入 れ 責 任 者 で あ る Dr. GUARINO (Prof.

いうことであったが，今回の出張は突然決定したた

Agregado Area Virologia) と JICA ウルグアイ東方共めに，準備期間が 3 週間足らずと日程的には非常に

和国出張所の石浜由実子氏との打ち合わせを簡単に厳しいものであった。

済ませ，9 時から大学関係者，学生等を前に，30 分

3 月 8 日（木）夕刻，成田を発ち，ニューヨーク， の休憩時間を挟んで約 3 時間「高病原性鳥インフル
サンパウロを経由して現地時間で 3 月 9 日（金）午

エンザとその診断・予防対策：特に日本における発後 2 時過ぎにブエノスアイレスへ到着した。プロジ

生例と防疫対策」について講演した。質疑応答ではェクトの現地スタッフである鈴木邦昭氏の出迎えを石浜氏にスペイン語通訳をお願いして何とか意見交

受け，JICA 事務所で古屋年章事務所長に挨拶した後， 換ができた。講演終了後，約 30 分間，報道機関（テラプラタ入りした。2 年半前の出張の際に滞在した

レビ , 新聞）からのインタビューの時間が設けられ

ラプラタ市内中心部のサンマルコホテルに到着したており，ここでも石浜氏の通訳に助けられた。ウルのは夕刻であった。自宅を出て 48 時間以上，地球

グアイ東方共和国ではまだ高病原性鳥インフルエンの真反対までの道程はやはり長いと改めて感じた。

ザの発生はないが，世界的に汚染地が拡大している

翌 日，3 月 10 日（土）は ラ プ ラ タ 大 学 の Dr.

中，本病が何時侵入するか解らないという状況にあNOSETTO（獣医学部長），Dr. PONS（プロジェク

るという強い危機感を防疫関係者が持っていると感ト責任者・前学部長），Dr. PECORARO（プロジェじられた。この日の午後からは診断技術研修として，クトの実質的中心人物・ウイルス学講座准教授）おDr. PECORALO が PCR 法に関する原理・基本的操

よび鈴木氏と翌日から始まるウルグアイ東方共和国

作法に関する講義を行った。

およびアルゼンチン共和国における，高病原性鳥イ

3 月 13 日（火）の午前中はラプラタ大学のスタ

ンフルエンザの診断・予防に関するセミナーの日程

ッフにより，PCR 法に関する操作法実習が行われ，について打ち合わせを行った。

これに立ち会った。午後は石浜由実子氏に同行し，

3 月 11 日（日）は早朝，一旦ホテルをチェック

在ウルグアイ日本国大使館を表敬訪問し，久山慎一

ア ウ ト し，同 行 す る ラ プ ラ タ 大 学 の Dr.

特命全権大使及び一等書記官櫻井健二氏（前農水省

PECORARO, Dr. SQUAZZA, Dra. GALOSI の 3 人 と消費安全局動物衛生管理課）と面談した。大使とは共にブエノスアイレス市内の Aero Parque 空港から

鳥インフルエンザ，食糧問題など種々な話題についウルグアイ東方共和国へ移動した。モンテビデオ空て，20 分の予定時間を 1 時間以上超過して面談した。

港へは川幅 70 km というラプラタ川を斜めに越え

日本とは異なる時間の流れの中に身を置き，改めてて 40 分余の飛行であった。この日はたまたま米国

日本について考えると，生きる指標の不明確さ，物のブッシュ大統領がウルグアイ東方共和国を訪問中事を深く考える精神的・時間的余裕の無さなど，日53（5）
，2007

9（57）

本人のやや異質な国民性が見えてくるという。普段る。しかし，耕地の利用度は非常に低いと思われ，あまり考える機会のない種々な話題について示唆にこれを生産性の高い農地に変換できれば，迫りつつ富んだお話しを頂いた。

ある食糧危機に際しては世界の食料庫になりうる潜3 月 14 日（水）の午前中，ウルグアイ農務省を在能力を持っている。1 万円／ 1ha という地価の放表敬訪問した。12 日に行われた高病原性鳥インフ

牧地で昼夜放牧されている肉牛の生産費は，我が国

ルエンザの講演会に出席出来なかったということで， における肉牛の生産費と比べてどの位だろうか。見石浜由実子氏の通訳で畜産局次長及び衛生担当者 5

える範囲が全て自分の土地というような広大な土地

名と 2 時間半程度，高病原性鳥インフルエンザの診で牛を飼育しているとそんな勘定高いことなど考え

断・予防対策等について話し合った。北半球を中心る必要がないのかも知れない。北の空を移動する太に急速に汚染地域が拡大していることを考えると，

陽に地球の真裏にいることを実感しながらそんなこ

今から具体的な対策を考えておく必要があるというとを考えていた。

ことであった。午後はウルグアイ東方共和国大学の学長（Dr. KREMER）及び副学長（Dr. KRAMER），

SEMINARIO SOBRE INFLUENZA AVIAR

それに Dr. PECORARO の 4 人で昼食会の後，研修

Fecha : 16 de Marzo de 2007

修了証書の授与があり，3 日間の研修プログラムをLugar : Hotel Corregidor, La Plata

終了した。半数以上が女性であったが，将来，彼女

Preside : M.V.Eduardo Rafael PONS

達の何％が家畜の防疫業務に携わるだろうか。

9 : 00 〜

3 月 15 日（木）午前中の便でアルゼンチンに戻り， Palabras de bienvenida a cargo del Decano de la
筆者のみブエノスアイレスの JICA 事務所で 16 日

FCV-UNLP y Gerente de Proyectoのラプラタで行われる高病原性鳥インフルエンザに

Dr. Edgardo NOSETTO. A continuacion, hablaran a

PROVETSUR,

関するセミナーの打ち合わせを行った。そこで急遽， los concurrentes representantes de la Agencia de
講演用の英語スライドをスペイン語版に翻訳して使Cooperacion Inter nacional del Japon（JICA）,

用することになったため，スライドをコピーし，

Embajada del Japon y Cancilleria.

KUMABE 氏に翻訳をお願いし，翌日の 10 時からの講演に間に合わせた。
3 月 16 日（金）のセミナーのプログラムは右記の通りであった。
今のところ，アルゼンチンでも高病原性鳥インフルエンザの発生はないが，関係者は侵入に対する不9 : 30 〜"Influenza Aviar Altamente Patogenica"
A cargo de Dr. Toshiro IZUCHI, Experto de Corto
Plazo de JICA,
Instituto Japones de Ciencias Biologicas, Tokio,
JAPON.

安があり，高い関心を持っていた。講演終了後のパ

11 : 45 〜ーティーでも種々質問を受けた。どうして南米に流"Acciones de la FAO sobre Influenza Aviar en

行が波及していないか，明確な答えはないようであSudamerica "るが，渡り鳥の経路が関係している可能性が考えら

A cargo de Dr. Ernesto SPATH, Coodinador Regional

れる。ダイナミックに変化する自然を捉えることはContra la Influenza Aviar, FAO.

容易ではないし，自然界の現象に関して我々が知っ

12 : 15 〜ていることはまだほんの一部に過ぎないと思われる。

Acciones previstas por SENASA ante la presencia

今回の高病原性鳥インフルエンザに関するセミナー

de Influenza Aviar a nivel nacional”

が盛会裏に終わったことは非常に喜ばしい事であっA cargo de Dr.Marcelo DE LA SOTA, Director de

たが，更にこれが両共和国における本症防疫対策を

Luchas Sanitarias, SENASA.

考える上で少しでも役に立つことが出来れば幸いである。
アルゼンチン共和国はラプラタ川流域を中心に数千 km にもおよぶ平坦で肥沃な，日本の耕地面積の50 倍以上の広大な耕地面積を持つ恵まれた国であ

12 : 45 〜
Comentarios y cierre a cargo del M.V.Eduardo R.
PONS, Coordinador General PROVETSUR（Universitad Nacional de La Plata）

日生研たより10（58）

レビュー

体細胞クローンミニブタの作出
石川孝之
はじめに

1. NIBS 系（ミニブタ）についてして以来，NIBS 系は，ピットマンムーア系ミニブタ，台湾

ウシ 2），マウス 3）など様々な動物種において体細胞

小耳種およびゲッチンゲンミニブタの 3 元交配によクローンが作出されている。家畜ブタに関しては，って造成された白毛色の小型ブタ（成体重およそ2000 年に 3 つの研究グループがほぼ同時に体細胞20kg）であり，性質は温順で安定した繁殖成績（表クローン作出に成功した 4-6）。この手法の優位性は，1）を維持している。繁殖コロニーに対しては，年

核ドナー細胞が容易に確保できるうえに凍結保存や

間 4 回の定期検査で 22 項目の微生物モニタリング

遺伝子操作を施すことが比較的簡単な点である。そを実施している。

体細胞クローン羊・ドリーが誕生

1）のため畜産領域では，この技術を優良種，希少品種

遺伝学的には，主要組織適合性遺伝子 (SLA) クの保存方法として，あるいは遺伝子改変家畜を利用

ラス II 領域の DRB I（D/D），DQA（D/D），DQR（S9した動物工場を実現する手段として大きな期待を寄あるいは S10/ S10）の各座位がホモに固定していせている。一方で医学領域においては，生物学的特るという特徴がある。詳細な生物学的背景データと性がヒトに類似するブタあるいはミニブタの遺伝子

微生物モニタリング項目は，既に日生研たより 7）を改変して，異種移植や再生医療へ応用する試みがに紹介しているので参照されたい。

なされている。実際に超急性拒絶反応の抑制を目的としたα 1,3-Galactosyltransferase 遺伝子ノックア
ウトブタが作出され，注目されている。

2. NIBS 系への生殖工学技術の応用
2-1. NIBS 系の発情同期化とホルモン投与量の検討

近年，動物愛護の観点からイヌ（愛玩動物）やサ

ウマ絨毛性性腺刺激ホルモン（eCG）とヒト絨毛ル（ヒトと同じ霊長類）の実験動物としての使用が性性腺刺激ホルモン（hCG）を併用した家畜ブタの厳しく制限され始めている。これに対してブタは，発情同期化法 8）を参考に NIBS 系における発情同期

食用として長い歴史を持つために実験動物としても化条件，個体あたりの排卵数ならびに排卵卵子の発

社会的に受け入れられ易い。特にミニブタは，取り生能を調べた。プロスタグランジン（PGF2α）で扱いが容易で有望な中型実験動物として期待されて流産誘起した妊娠 25 日以上，40 日以下の未経産ミいる。当実験動物研究所においても 3 系統の小型ブ

ニブタについて，性腺刺激ホルモンの投与量が異なタから独自に NIBS 系ミニブタ（以下，NIBS 系）

る 2 つ の グ ル ープ（グ ル ープ I：PGF2 0.15ｇ＋を造成し，維持・繁殖している。この NIBS 系の付

eCG 500 IU および hCG 150 IU 投与，グループ II：

加価値をさらに高め，先端医療など新たな研究分野

PGF2 0.15ｇ＋ eCG 250 IU および hCG 120 IU 投与）

において有効に利用され得るミニブタを開発するたを設定した。その結果，いずれのグループも全個体

めに，2003 年度から明治大学農学部生殖工学研究の発情が同調し，ホルモン量による成績の差は認め室と共同で体細胞クローンミニブタの作出に取り組られなかった（図 1 および表 2）。

んで来た。本稿では，その研究の一部を紹介する。

53（5），2007

11（59）

表13. 体細胞クローンミニブタの作出

NIBS 系の繁殖成績

項目

動物数

発情周期（日）8

20.5 ± 2.3

産子数（匹）

40

4.4 ± 1.5

離乳個体数（匹）

40

3.4 ± 1.3

出生時体重（ｇ）

♂

32

♀

32

核ドナー細胞として，妊娠 25 日齢の NIBS 系雌から摘出した雄胎児由来の線維芽細胞を，レシーピ

452.0 ± 95.5
403.0 ± 75.3
（平均値±標準偏差）

図1
日数
処置

発情同期化のスケジュール

－5

－4

－1

0

1

PGF2α &PGF2αの
hCG の投与
採卵
eCG の投与（10 : 00 ～ 11 : 00） 排卵日 （9 : 00）
投与（16 : 00）
（16 : 00）

PGF2α: プロスタグランジン

eCG：ウマ絨毛性性腺刺激ホルモン
hCG：ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン

表2

NIBS 系の排卵成績
動物数

体重（Kg）＊

排卵数＊

グループⅠ
グループⅡ

9
8

30.4 ± 3.0
30.9 ± 2.5

15.1 ± 5.2
9.4 ± 3.0

自然排卵628.7 ± 2.6

7.3 ± 0.5＊：平均値±標準偏差
グループⅠ：PGF2α0.3 g 投与⇨（24 時間）⇨ PGF2α0.15 g ＋ eCG 500
IU 投与⇨（68 時間）⇨ hCG 150 IU を投与
グループⅡ：PGF2α0.3 g 投与⇨（24 時間）⇨ PGF2α0.15 g ＋ eCG 250
IU 投与⇨（68 時間）⇨ hCG 120 IU を投与

エント卵には，屠場由来の家畜ブタ卵巣から体外成熟させた未授精卵を除核して用いた。核ドナー細胞
は，血清飢餓培養によって細胞周期を G0 期に同調した後，電気融合法によって核移植を行なった。ク
ローン胚の再活性化条件は黒目らの方法 9）を参照
した。
体細胞クローンミニブタを作出するために 1,121
個のクローン胚を 12 頭のレシーピエント雌の卵管へおよそ 100 個ずつ移植した。その結果，妊娠した
10 頭から自然分娩で合計 11 頭の体細胞クローンミ
ニブタが誕生した（写真 1）。体細胞クローンの作
出効率は，およそ 1％であった（表 4）。産子は全て雄で，出生時体重の平均値（±標準偏差）は 370 g（± 9.7 g）であり，NIBS 系新生子に比べてやや小一方で 1 個体あたりの排卵数は，グループ I がさかった。また，核ドナー細胞とのゲノムの同一性

15.1 ± 5 個（平均値±標準偏差）であったのに対しを 20 個のマイクロサテライトマーカーを用いて確てグループ II では，9.4 ± 3 個だった。排卵数から認した。

推察してグループ II の個体の卵巣がより自然排卵に近い状態を呈していると考えられた。
また，卵管灌流法で採取した未受精卵の一部に電気刺激による単為発生を誘起して，体外培養を試みたところ，供試卵 24 個のうち 8 個（33％）が胚盤
胞期胚へと発生した。
2-2. NIBS 系未経産ミニブタを用いた胚移植試験
NIBS 系のレシーピエント（授卵）雌としての能力を評価するために，グループ II の条件で発情を同期化し
写真 1

た 3 頭の未経産ミニブタに卵管移植法で単為発生卵をNIBS 系体細胞クローンミニブタ

移植した。妊娠 25 日目に開腹して妊娠の有無を調べた
ところ，全頭が妊娠しており 1 個体あたりおよそ 4 頭

表4の着床胎児が確認された（表 3）。

12

表3NIBS 系未経産ミニブタに対する胚移植試験

レシーピエント
頭数
3

体細胞クローンミニブタ作出成績

レシーピエント 総移植クローン 妊娠雌数
総産子数
作出効率
頭数
胚数
（妊娠率％）（平均値±標準偏差） （%）
1,121

10

11

0.98

核ドナー細胞：NIBS 系胎児線維芽細胞
移植クローン拝趨 / レシピエント：約 100 個 (63 ～ 115 個 )移植単為発生胚数 /
妊娠頭数
着床胎児数
レシーピエント（妊娠率 %） （妊娠 25 日 )約 100 個3（100）

4.7 ± 3.1 ＊＊：平均値±標準偏差

おわりに本研究を通じて様々な生殖工学技術を応用し，日生研たより

12（60）NIBS 系体細胞クローンミニブタを作出することがった明治大学農学部 長島比呂志教授に深謝致しまできた。しかしながらその効率は，およそ 1％程度す。

に止まっている。他の研究グループの成績もほぼ同
参考文献

程度であり，体細胞クローンの実用化において，この効率の低さが大きなネックになっている。原因の1）Wilmut, I. et al., Nature 385 : 810−813（1997）.

1 つと考えられるドナー核のエピジェネティックな

2）Kato, Y. et al., Science 282 : 2095−2098（1998）.

修飾を初期化するために，核ドナー細胞に組織幹細3）Wakayama, T. et al., Nature 394 : 369−374（1998）.

胞を用いたり 10），連続核移植によってドナー核の4）Betthauser, J. et al., Nat. Biotechnol 18 : 1055−
1059（2000）.

初期化を促す方法が試みられて成果をあげつつある。
こうした新技術の蓄積によって，我々が目標とし

5）Onishi, A. et al., Science 289 : 1188−1190（2000）.

ている遺伝的背景が同一なミニブタの大量生産や遺6）Polejaeva, I.A. et al., Nature 407 : 86−90（2000）.

伝子改変ミニブタの作出が，一層容易になることが

7）斉藤敏樹 日生研たより，527 号 : 8−12（2004）.

期待される。

8）ブタの胚移植マニュアル（1996），農林水産省
家畜改良センター
9）Kurome, M. et al., Cloning Stem Cells 5（ 4）:

謝辞

367−378（2003）.

本研究の遂行にあたり多くのご指導，ご助言を賜

10）Inoue, K. et al., Stem Cells 25（4）: 157−163（2007）.

研修者・見学者受け入れ状況（平成 18 年 1 月～平成 18 年 12 月）
来 所 日 ・期 間

所属機関・人数

研修・見学内容

1 月 10 日

高知県西部家畜保健衛生所

1 名 豚慢性疾病対策

4 月 6 日～ 4 月 7 日

株式会社

ピグレッツ

2名

豚のウイルス感染症に関する遺伝子検査
技術

6月1日

株式会社

ピグレッツ

1名

豚のウイルス感染症に関する遺伝子検査技術

7 月 5 日～ 7 月 6 日

武蔵村山市立第一中学校

1 名 職場体験学習

7 月 31 日～ 8 月 28 日

北里大学獣医畜産学部獣医学科

1 名 学外実習

8月9日

埼玉県坂戸保健所管内
飯能・日高狂犬病予防協会

12 名 狂犬病予防事業視察研修

10 月 31 日

大阪府立大学大学院

10 名 JICA 研修

千葉県中央家畜保健衛生所
千葉県東部家畜保健衛生所
10 月 11 日～ 10 月 12 日
千葉県北部家畜保健衛生所
千葉県南部家畜保健衛生所
11 月 1 日～ 12 月 28 日

1名
1名
豚の細菌感染症に関する抗体検査技術
1名
1名

東京大学大学院農学生命科学研究科

日生研たより

2 名 正常プリオン蛋白の検出技術

昭和 30 年 9 月 1 日創刊（隔月 1 回発行）

（通巻 546 号） 平成 19 年 8 月 25 日印刷
発行所〒 198-0024

生命の「共生・調和」を理念とし，生命体の豊かな明日と，研究の永続性を願う
気持ちを心よいリズムに整え，視覚化したものです。カラーは生命の源，水を表す「青」としています。
表紙題字は故中村稕治博士の揮毫

平成 19 年 9 月 1 日発行（第 53 巻第 5 号）

財団法人 日本生物科学研究所
東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL0428（33）1056（企画学術部） FAX0428（31）6166
発行人
編集室
印刷所

長井伸也

委

員／小山智洋（委員長），中村圭吾，川原史也

事務／企画学術部

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