2011 ＳＥＰＴＥＭＢＥＲ
No. 570

2011 年（平成 23 年）9 月号

第 57 巻 第 5 号（通巻 570 号）

挨拶・巻頭言大震災雑感........................................佐々木伸雄（ 2 ）獣医病理学研修会
第 50 回 No. 1016 ウサギの外耳道と中耳............................. 参天製薬株式会社（ 3 ）レビュー
インフルエンザワクチンの課題と新規品への期待.................堀 本 泰 介（ 4 ）文献紹介
実験的に感染させた豚群で調査した Appの診断検査法の評価 ..........李 知 恩（ 9 ）http://nibs.lin.gr.jp/

2（62）

日生研たより大震災雑感
佐々木伸雄
この 6 月から理事に任命され，この巻頭言の依頼を受けた。私自身の関連分野について書くように依頼されたのではあるが，どうしてもこの大震災について，雑感を書きたい衝動が勝っている。
高校生の頃，たまたまプレートテクトニクス理論，というものを読み，なるほど，だからアフリカ大陸西側と南米大陸東側はくっついていたのだ，と感動した。しかも，その証拠のひとつが，地質調査から得られた共通する古生物の存在に関するデータであることに非常に強い興味を引かれた。しかし，大学ではグータラやっていたおかげで，理学部地球物理学科には全く入れるレベルではなく，ついにデモシカで獣医さんになる以外の道はなかった（後悔している訳ではない）。プレートテクトニクス理論は，地球の内部を明らかにする素晴らしいものと思ったが，それはつまり，このようなとんでもない災害はいつでも起こりうることを説明するものでもあった。
今回の地震の規模は，9 世紀半ばに発生した貞観地震以上とされているが，その可能性は，2009 年から指摘されていた。これは地質調査により過去の津波の痕跡から出されていたものであり，従来想定されていた津波の高さ 4 〜 5 メートルよりずっと高い津波の来襲を予見していたものであった。いつ来るかわからない
津波であり，原発が対応する前に今回の津波が来襲したことは非常に大きな不幸ではあるが，その詳細は今後の検証に任せる以外にない。
昨年夏に高校時代の同級生が吉村昭のファンであり，彼からこれ読んでみない？

と渡されたのが「三陸海岸大津波」であった。全く偶然であり，その同級生とは，「まさか今回の津波が起こるとは」，とお互い絶句した。古老からの聞き取り調査を土台にしたこの本でも，津波の恐ろしさ，その高さについて記載されており，おそらくそのことも土台となって，例の高さ 10 メートルのスーパー堤防や防災策が練られていたものと思うが，今回の巨大地震はそれを超えてしまった。自然は人が想定する，浅はかな規模を簡単に越えてしまうが，同時に，人は数世代を経る中で，案外その出来事を継承できなかったり，忘れてしまうものなのかもしれない。
阪神大震災のときに，まだ存命であった吉村昭が文芸春秋に寄稿した論文が，この 6 月号に記載されている。その中で，関東大震災の 9 月 1 日の防災記念日に出た番組で，東京都の地震防災責任者が関東大震災後の調査報告書を全く目にしていないことに驚いたと記されている。関東大震災のもっとも重大な被害は火災によるものであろうが，その発火原因について，44 カ所は薬品の落下による，との調査結果が記載されているという。宮城県沖地震時に東北大から出火したが，その原因が薬品の落下であったことはかなりキチンと受け継がれ，現在は大学においても薬品の落下防止対策はかなり徹底されている。これは，過去の歴史から学んだよい例であろう。一方，江戸時代，火災の多かった江戸市中では，幕府により，大火のときに大八車を引き出したものは厳罰に処す，というおふれが出ていたという。しかし，関東大震災では，その教訓は生かされなかった。大八車が消火活動を阻み，またそれに引火して火災を広げたと記載されている。阪神大震災時にもおそらくこの教訓は生かされていなかったと思う。また，これも現在全く生かされていないが，緊急時のリュックサック（多分不燃性ではないと思う）も，これに引火すると危険である，と東京大空襲時に吉村昭は父親から怒鳴られたそうである。関東大震災時に食料は持ち出さなくとも，24 時間以内に多くの被災者は食料と水を手に入れたそうであり，少なくとも餓死者はいない。
三陸のある村落で，「これより下に家を建てるべからず」という石碑があり，そのため津波の被害を免れた，ということが吉村昭の本にも書かれ，また今回の津波に関する新聞記事でも目にした。おそらく，人間は歴史に学ばないのではなく，このような常に目にする形で記録を残さないと忘れられてしまう，ということなのかもしれない。
最近は大学の環境安全活動に関しても，常にリスクに関する文書化がはかられ，それはある意味ではばからしく，そのような書類の作成に関わるのは時間の浪費以外の何者でもない，と感じることがしばしばである。しかし，ある意味で，「文書化」は「見える化」であり，それが常に同じ考え，危険に対する備えを共有するのかもしれない。とすると，今までなんでこんなばからしい作業を我々に強いるのか，と文句を言っていたが，そろそろその考えを引っ込めるときがきたのかもしれない，と最近考えている。
（理事）

57（5）20113（63）

ウサギの外耳道と中耳
参天製薬株式会社

第 50 回獣医病理学研修会標本 No. 1016

動物：ウサギ（日本白色種，Kbl : JW），雄，2 歳 8 か月
齢，体重 3,771 g。
臨床事項：本症例は 2007 年 5 月に入荷後，点眼薬の薬効試験に供されていた。2008 年 3 月左斜頚に気づき，
その後徐々に斜頚の程度が顕著になり試験にも使われなくなった。 2009 年 11 月末に鑑定殺のためペントバルビ
タールの静脈内投与による麻酔下で，腹大動脈から放血し安楽死させた。
肉眼所見：左側外耳孔がオカラ状頽廃物によって閉塞しており，左側頭骨鼓室部が腫大していた。 その他の臓器に異常はなかった。 ホルマリン固定後外耳道に沿って側頭骨を縦断したところ，耳道のほぼ全長に亘って頽
廃物が充満し、鼓室は拡張していた（図 1）。
組織所見：耳道内には，剥離した表皮の角質や細胞屑などから成る好酸性頽廃物が蓄積していた（図 2）。 外耳道から鼓膜まで表皮はび漫性に過形成を起こし，偽好酸球などの炎症性細胞が浸潤していた。 鼓膜の皮膚側は部分的に基底膜が断裂し，鼓室にむけて膨張性にコレス
テロール肉芽腫が形成されていた（図 3）。 中耳粘膜は水腫性に肥厚していた。 鼓膜に近接した耳道では特に表皮棘細胞の過形成が目立ち（図 3），耳道腺の肥大も顕著であった。また，好酸性頽廃物内には PAS 反応陽性，グロコット染色陽性，グラム染色陰性，チールネル
ゼン染色陰性の桿菌が散在性に認められた。 走査電子
顕微鏡で観察すると 5 – 6μm 長のフィラメント状菌で，しばしば隔壁様構造（図 4 矢印）を有していた。よって，
細菌は緑膿菌と思われた。
診断：コレステロール肉芽腫を伴った慢性外耳炎
考察：出題症例以外の健常ウサギにおいても，外耳道皮膚には炎症性細胞浸潤を伴った表皮のびらんや痂皮形成がしばしば認められた。 ウサギでは耳道に炎症が生じやすいものと思われ，本症例は慢性炎症のため耳道内に頽廃物が蓄積したものと考えられる。 緑膿菌は日和見
感染したものと推察される。頽廃物によって耳道の内圧が高まったため，鼓膜表皮が破綻して中耳側に突出し肉芽腫を形成したものと思われる。 フロアからは，耳道腺の肥大や表皮棘細胞の過形成は腫瘍性の変化ではないかとの意見もあったが，本例では耳道内の炎症が強く，すべての組織変化をそれに対する反応とみて矛盾しないことから，腫瘍については否定的に考えている。
（勝田 修）

4（64）

日生研たよりレビュー

インフルエンザワクチンの課題と新規品への期待
堀本泰介（東京大学大学院農学生命科学研究科獣医微生物学研究室）
ウイルスの三種類が，季節性インフルエンザとしてはじめに人社会で流行を繰り返すと予想される。

インフルエンザは毎年流行する急性呼吸器疾患でインフルエンザの防御には抗ウイルス薬とワクチある。ウイルスの抗原性が頻繁に変化（抗原ドリフンが用いられる。特に，NA 阻害薬を中心とした抗ト）するものの，自然免疫力と過去の感染記憶やワ

インフルエンザ薬は有効な治療法である。しかし，クチン接種で誘導される交叉防御免疫により，通常

過去でそうであったように薬剤耐性ウイルスの出現は一過性に経過する。しかし，乳幼児や基礎疾患のと流行は避けられないと思われる。したがって，ワ

ある老年者における死亡例は珍しくない。対して，

クチンがインフルエンザ制御のための不可欠な武器

全く異なる抗原性（抗原シフト）のウイルスが出現である [12]。

すると免疫がナイーブであるため，世界的大流行（パンデミック）により多くの人が犠牲になる [11]。
前 世 紀 に は 3 度 の パ ン デ ミ ック，ス ペ イ ン 風 邪

1. 季節性インフルエンザワクチン（1918 年：H1N1 ウイルス），アジア風邪（1957 年：

現在，わが国では不活化ワクチンが用いられる。

H2N2 ウイルス），香港風邪（1968 年：H3N2 ウイ

ワクチン製造株を発育鶏卵で増殖させ，超遠心精製ルス）があった。また，1977 年のソ連風邪（H1N1した後，エーテルで膜脂質成分を取り除き，ホルマウイルス）では H1 抗体を持たない若年層で中規模リンにより不活化したものである。主要防御抗原での流行があった。そして，2009 年 6 月，WHO は今ある赤血球凝集素（HA タンパク質）を含む

世紀最初のパンデミックの発生を宣言した。ソ連型

リットタイプウイルスとは抗原性の異なるブタ由来の A/H1N1

イプ

ウイルスによるパンデミックである。今後しばらく

ク チ ン が 用 い ら れ て い る（図 1）。A 型（H1N1,

は，パンデミックウイルスに派生する A/H1N1 ウ

H3N2）および B 型の三種類の製造株が，WHO の

イルス，A 香港型（H3N2）ウイルス，および B 型

流行予測を基に毎年選定され，三価ワクチンとして

あるいは

スプ

である。国によっては， 全粒子タ
サブユニットタイプの不活化ワ

図 1 不活化ワクチン製造工程
ワクチン製造株を発育鶏卵に接種し、培養する。ウイルスを回収し精製後、不活化し、ワクチンとする。

57（5）2011

5（65）

図 2 リバースジェネティクスによる H5N1 ワクチン製造株の作製
WHO が推奨するヒト不活化ワクチン作製のため、ウイルス遺伝子分節を合成するプラスミドを 8 種類用意する。
この内、HA, NA 遺伝子は高病原性 H5N1 ウイルス由来であり、その他の遺伝子は発育鶏卵高増殖 PR8 株由来である。HA 遺伝子は、開裂部位コード配列を弱毒型に改変する（赤丸で示す）。ウイルス遺伝子分節の転写・複製に必
要な蛋白質（PR8 由来）を発現する 4 種類のプラスミドを用意する。合計 12 種類のプラスミドをワクチン作製用
Vero 細胞に導入する。培養上清にワクチン製造株が回収される。発育鶏卵で増殖させ、不活化後、ワクチンとする。

皮下接種（あるいは筋肉内接種）される。ウイルス

ルス由来の HA，NA 遺伝子と入れ換えた遺伝子交の侵入口である上部気道に粘膜免疫（分泌型 IgA 抗雑ウイルスを A 型（H1N1, H3N2）および B 型それ体）は誘導されないため，感染そのものを阻止する

ぞれで作製し，発育鶏卵で増殖させたものを混合し効果は低いものの，血中に中和抗体を誘導し，体内て用いる。重篤な副作用等の問題点は報告されておでのウイルスの広がりを抑えることにより症状の重らず，不活化ワクチン以上の有効性が示されている。

篤化を軽減させる。健康成人では，ワクチン株と流

しかし，これら季節性ワクチンの有効性には年によ行株の抗原性が一致した場合の発病防止効果は 70%

りばらつきが見られる。これは，頻繁な抗原変異を以上である。免疫の持続期間は短く，抗原変異に対伴うウイルスの性質上避けられない。現行システム

応して頻繁にワクチン株を更新する必要があり，さでワクチンの有効性を高める方法は，確実な流行予らに，交叉防御能をもつ細胞障害性 T 細胞は，標測に基づく適切な製造株の選択以外にはない。一方，的抗原（内部タンパク質由来ペプチド）が提示され発育鶏卵を基材とするワクチン製造は迅速で確実なないため誘導されない。しかし，作製が容易で，安ワクチン生産には障害となる。特に，最近の H3N2

全性が高く，保存性も悪くなく実用的である。現在，

ウイルス分離株は鶏卵での増殖性が概して芳しくな

世界中における鶏卵を用いた季節性ワクチンの生産

い。また，鶏卵での増殖中に抗原変異ウイルスが出

能力はおよそ 8 億ドーズに上る [2]。

現し，ワクチン効果が低くなる可能性も指摘されて一方，米国では鼻腔内噴霧型の弱毒生ワクチン

いる。

（FluMist : MedImmune）も 併 用 さ れ る（た だ し 2
歳から 49 歳を対象とする）。生ワクチンは自然感染を模倣する免疫応答を誘導するので効果が高い。鼻2. H5N1 プレパンデミックワクチン

腔内接種により粘膜および細胞性免疫も誘導され，

1996 年に中国で出現し，今なお問題となっていある程度の抗原変異にも対応できる。また，鼻へのる H5N1 鳥ウイルスはすべて高病原性であり，鶏卵噴霧接種は小児においてメリットである。このワク

胎児を早期に殺してしまうため，品質の高いウイル

チンは内部タンパク質に複数の変異をもつ低温馴化

ス液が回収できない。また，ワクチン製造者に対すの弱毒ウイルスを基にしている [10，14]。流行ウイる安全面や，高度な封じ込め生産施設の必要性から

6（66）

も，高病原性ウイルスをそのままワクチン製造株と日生研たよりみたい（表 1）。

して用いることは難しい。十分なワクチン効果を得るためには抗原性が流行株と同じである必要があり， 1）不活化ワクチン
なおかつ鶏卵で良く増殖するような弱毒ウイルスが2001 年にオランダで，MDCK 細胞を基材としたワクチン製造株として理想的である。しかし，そのサブユニットワクチンが承認され（Solvay）[17]，ような自然分離株は存在しないため，リバースジェ

また，2002 年には同じくオランダで Vero 細胞を基

ネティクスを用いてワクチン製造株が作製されてい材とした不活化全粒子ワクチンが承認されたる（図 2）。病原性を規定する HA 開裂部位コード（Baxter）。後者はその後の臨床試験で発熱などの副領域を低病原性型に改変（例えば RERRRKKR から反応が問題となり，剤形をスプリットタイプに変更

RETR に変更）した流行ウイルス由来の HA（H5）し，2010 年にオーストラリアで承認を取得している。

遺伝子と NA（N1）遺伝子，それ以外の遺伝子分節

2009 年には MDCK 細胞由来のアジュバント添加季（6 種類）は WHO が推奨する鶏卵高増殖性である

節性サブユニットワクチンがロシアで製造承認申請

PR8 株（ドナーウイルス）に由来する組換えウイル

さ れ て い る（Petrovax）。2007 年 に は 浮 遊 MDCKス（PR8/H5N1 遺伝子交雑体）である。このウイル細胞由来不活化サブユニットワクチンが承認された

スを製造株として作製された不活化ワクチンが，現（Novartis）[4]。同様に，MDCK 細胞由来の MF59

在 H5N1 プレパンデミックワクチンとして先進国

アジュバント添加のパンデミック H1N1 ワクチンを中心に備蓄されている [12]。

が欧州で承認され，日本でも特例承認された [1]。

各国で H5N1 プレパンデミックワクチンの臨床その他開発中では Per.C6 細胞由来不活化サブユ試験が行われたが，通常の季節性ワクチンと同様にニ ット ワ ク チ ン（季 節 性 お よ び H7N1）（Sanoﬁ

スプリットタイプでアジュバントを使用しない場合

Pasteur）や MDCK 細胞のマイクロキャリア培養法には，季節性ワクチンに比べ免疫原性が極めて低いによるアジュバント添加不活化全粒子ワクチン（季ことが報告された。そこで，ヨーロッパ，日本など

節性および H5N1）（Nobilon）が臨床試験に進んででは全粒子タイプにアジュバント（アルミニウムア

いる [8, 18]。まだ研究段階ではあるが，アヒル胚幹

ジュバントなど）を併用するという剤形を採用して細 胞 由 来 EB66 細 胞 を 用 い た ワ ク チ ン 開 発 が，いる。今後，H5N1 プレパンデミックワクチンが広GlaxoSmithKline，CSL，化血研などで進んでいる

く接種されるという状況にならないことを期待する。 [6]。他の国内メーカーでは，デンカ生研，阪大微研，
北里研究所が MDCK 細胞を用いたワクチン開発を進めている。
3. 組織培養インフルエンザワクチン
ワクチン製造基材としての発育鶏卵の弱点を克服

2）弱毒生ワクチンするため，分離，製造母体として培養細胞を用いた

FluMist を も つ MedImmune は，MDCK 細 胞 をワクチンの生産が期待されている。実際，一部はす用いた低温馴化弱毒生経鼻ワクチン（季節性およびでに承認されており，MDCK 細胞を製造基材とし

H5N1）の開発を進めている [15]。AVIR Green Hills

た H1N1 パンデミックワクチン（Novartis）が日本

Biotechnology は NS1 欠損弱毒生経鼻ワクチンの臨でも特例承認され，輸入されたことは記憶に新しい。 床 試 験 を 行 っ て い る。NS1 欠 損 ウ イ ル ス は イ ン
現時点では，組織培養ワクチンが安定供給されるま

ターフェロン産生のない Vero 細胞で効率良く増殖

でには至っていないものの，鶏卵の供給量にも左右するが，体内では弱毒化する特徴を利用したものでされず，卵アレルギーの問題も解決され，また，よある [20]。その他，EB66 細胞などを用いた弱毒生

り抗原性の近いワクチンの作製が期待できるため，ワクチンの開発も視野に入れている（Nobilon）。

今後はインフルエンザワクチン製造の主流となるのは確実である。用いる細胞としては，哺乳動物細胞

3）遺伝子組み換えワクチンなどのほかに，鳥由来細胞，昆虫細胞，植物細胞などがバキュロウイルス発現系を用いて昆虫細胞で HA検討されている。現在の開発状況についてまとめてタンパク質（や NA タンパク質）を発現させサブユ

57（5）2011

7（67）

表1
培養細胞
Vero 細胞（アフリカミドリザル腎臓由来）

組織培養インフルエンザワクチンの開発状況
種類

主な開発企業

不活化ワクチン Baxter

承認（欧）（季節性，H5N1）

弱毒生ワクチン AVIR Green Hills Biotechnology NS1 欠損（臨床試験中）
Solvay，Petrovax

承認（欧）（季節性）

Novartis

承認（季節性，新型 H1N1）（欧）特例承認（新型 H1N1）（日）Nobilon

臨床試験中

デンカ生研，阪大微研，北里研

研究中

不活化ワクチン

MDCK 細胞（イヌ腎臓由来）

Per.C6 細胞（ヒト胎児網膜由来）
EB66 細胞（アヒル胚幹細胞由来）

開発状況

弱毒生ワクチン MedImmune

低温馴化（季節性，H5N1）（臨床試験中）不活化ワクチン Sanoﬁ Pasteur

臨床試験中

不活化ワクチン GlaxoSmithKline，化血研

研究中

弱毒生ワクチン Nobilon

研究中

Protein Sciences，UMNファーマ 承認申請中（米），臨床試験中（日）昆虫細胞

組換えワクチンNovavax

植物細胞

VLP，臨床試験中

組換えワクチン iBioPharma, Fraunhofer USA

一部臨床試験中

ニットワクチンとする試みが米国で承認申請中であ法で作成し，ワクチンとして応用する方法である。

る（Protein Sciences）[19]。わ が 国 で も，UMN

生ワクチン同様，局所分泌型 IgA 抗体を含む液性ファーマが臨床試験を実施している。植物細胞で発免疫と細胞性免疫の両方を誘導するため高い免疫効

現させた組換え HA サブユニットワクチンの開発も果が期待できるのみならず，感染性ウイルスが産生進んでいる（iBioPharma，Fraunhofer）。

されないため安全性にも優れている。例えば，ウイ

ウイルス様粒子（VLP : virus-like particle）をワ

ルスの増殖に必須である HA タンパク質の開裂部位

クチンとする試みも一部は臨床試験段階に進んでいを欠損させた組換えウイルスを半生ワクチンとしてる。表面抗原（HA と NA）と M1 タンパク質をレ応用できないかと考え研究を進めている。この場合，ンチウイルスベクターやバキュロウイルスベクター

正常な HA タンパク質を発現する細胞で組換えウイでヒト細胞あるいは昆虫細胞で発現させた VLP や，ルスを増幅させる必要があり，発育鶏卵に匹敵する植物細胞で発現させた VLP などのワクチン効果がまでのウイルス量は期待できないものの，マウスモ調べられている [3, 7, 16]。

デルを用いた鼻腔内接種により高いワクチン効果が

その他，アデノウイルスをベクターとするワクチ

観察された。現時点では，浮遊細胞の活用などによンや，DNA ワクチン，M2 膜蛋白質の細胞外領域

り高力価のウイルス回収方法を改善する必要があるを標的とする

ものの，新規ワクチンの有望な戦略であると考えてユニバーサルワクチンなどの研究も展開されており [5, 9]，実験室レベルでの有効性いる。

は示されている。今後の進展に期待したい。
4）半生ワクチン
私たちの研究室では，東京大学医科学研究所（河最後にインフルエンザに限らず，理想のワクチンは効果，

岡義裕教授）と協力し，半生ワクチンの開発に取り安全性，経済性，ハンドリングなど全てに優れるも組んでいる。これは，細胞に一回だけ感染し防御抗のである。そのゴールを目指して様々な開発研究が原を発現するが，もはや感染性ウイルスは産生され展開されている。従来の発育鶏卵を基材とするワクない組換えウイルスをリバースジェネティクスの手チン製造に替わり，組織培養を基材とする方針は必8（68）

日生研たより至であり，早期に実用化可能な研究を優先的に進め

particle vaccines provide broad protection againstていく必要がある。その中でも，わが国で臨床試験

highly pathogenic avian influenza challenge.

段階にある粘膜免疫の誘導を目的とした経鼻接種不Vaccine 27 : 530–541.

活化ワクチンの開発 [13]，あるいは作用機序を鑑み

8. Heldens, J. G., Glansbeek, H. L., Hilgers, L. A.,

た新規アジュバントの開発などが優先課題であろう。

Haenen, B., Stittelaar, K. J., Osterhaus, A. D. and特に，培養細胞（迅速性・柔軟性から浮遊細胞系を

van den Bosch, J. F. 2010. Feasibility of single –使用）を用いて製造された高力価のウイルスや抗原

shot H5N1 inﬂuenza vaccine in ferrets, macaques

を高度に精製し，有効かつ安全なアジュバントを組

and rabbits. Vaccine 28 : 8125–8131.

み合わせた経鼻接種型のワクチンが，最も有望な次

9. Hoelscher, M. A., Garg, S., Bangari, D. S., Belser, J.

世代インフルエンザワクチンではないかと個人的に

A., Lu, X, Stephenson, I., Bright, R. A., Katz, J. M.,は考えている。

Mittal, S. K., and Sambhara, S. 2006. Developmentof adenoviral – vector – based pandemic influenza
vaccine against antigenically distinct human H5N1

参考文献

strains in mice. Lancet 367 : 475–481.

1. Clark, T. W., Pareek, M., Hoschler, K., Dillon, H.,

10. Hoffmann, E., Mahmood, K., Chen, Z., Yang, C. F.,

Nicholson, K. G., Groth, N. and Stephenson, I.

Spaete, J., Greenberg, H. B., Herlocher, M. L., Jin,

2009. Trial of 2009 inﬂuenza A（H1N1）monovalent

H. and Kemble, G. 2005. Multiple gene segments

MF59–adjuvanted vaccine. New Engl. J. Med. 361 :control the temperature sensitivity and2424–2435.

attenuation phenotypes of ca B /Ann Arbor /1 /66.

2. Collin, N., de Radiues, X. and World HealthJ. Virol. 79 : 11014–11021.

Organaization H1N1 Vaccine Task Force. 2009.

11. Horimoto, T. and Kawaoka, Y. 2005. Influenza :Vaccine production capacity for seasonal andlessons from past pandemics, warnings frompandemic（H1N1）2009 influenza. Vaccine 27 :current incidents. Nature Rev. Microbiol. 3 : 591–

5184–5186.

600.

3. D Aoust, M. A., Couture, M. M., Charland, N. et

12. Horimoto, T. and Kawaoka, Y. Strategies foral. 2101. The production of hemagglutinin – based

developing vaccines against H5N1 influenza A

virus – like particles in plants : a rapid, efﬁcient andviruses. Trend Mol. Med. 12 : 506–514.

safe response to pandemic influenza. Plant
Biotechnol. J. 8 : 607–619.

13. Ichinohe, T., Tamura, S., Kawaguchi, A.,
Ninomiya, A., Imai, M., Itamura, S., Odagiri, T.,

4. Doroshenko, A. and Halperin, S. A. 2009. Trivalent

Tashiro, M., Takahashi, H., Sawa, H., Mitchell, W.

MDCK cell culture – derived influenza vaccine

M., Strayer, D. R., Carter, W. A., Chiba, J., Kurata,

Optaﬂu（Novartis Vaccines）. Expert Rev. Vaccines

T., Sata, T. and Hasegawa, H. 2007. Cross –8 : 679–688.

protection against H5N1 inﬂuenza virus infection

5. Fiers, W., De Filette, M., El Bakkouri, K.,is afforded by intranasal inoculation with seasonal

Schepens, B., Roose, K., Schotsaert, M., Birkett, A.

trivalent inﬂuenza vaccine. J. Infect. Dis. 196 : 1313

and Saelens, X. 2009. M2e – based universal–1320.

inﬂuenza A vaccine. Vaccine 27 : 6280–6283.

14. Jin, H., Lu, B., Zhou, H., Ma, C., Zhao, J., Yang, C.

6. Genzel, Y. and Reichl, U. 2009. Continuous cellF., Kemble, G. and Greenberg, H. 2003. Multiplelines as a production system for inﬂuenza vaccines.

amino acid residues confer temperature

Expert Rev. Vaccines 8 : 1681–1692.

sensitivity to human influenza vir us vaccine

7. Haynes, J. R., Dokken, L., Wiley, J. A., Cawthon, A.
G., Bigger, J., Harmsen, A. G. and Richardson, C.
2009. Influenza – pseudotypes Gag vir us – likestrains（FluMist）derived from cold – adapted A /Ann Arbor /6 /60. Virology 306 : 18–24.
15. Liu, J., Shi, X., Schwartz, R. and Kemble, G. 2009.

57（5）20119（69）

inﬂuenza vaccines. Vaccine 19 : 2716–2721.

Use of MDCK cells for production of live
attenuated influenza vaccine. Vaccine 27 : 6460–

19. Treanor, J. J., Campbell, J. D., Zangwill, K. M.,

6463.

R o w e , T. a n d Wo l f f , M . 2 0 0 6 . S a f e t y a n d

16. Mahmood, K., Bright, R. A., Mytle, N., Carter, D.

Immunogenicity of an inactivated subvirion

M., Crevar, C. J., Achenbach, J. E., Heaton, P. M.,

inﬂuenza A（H5N1）vaccine. N. Eng. J. Med. 354 :Tumpey, T. M. and Ross, T. M. 2008. H5N1 VLP

1343–1351.

vaccine induced protection in ferrets against

20. Wacheck, V., Egorov, A., Groiss, F., Pfeiffer, A.,

lethal challenge with highly pathogenic H5N1

Fuereder, T., Hoeﬂmayer, D., Kundi, M., Popow–

inﬂuenza viruses. Vaccine 26 : 5393–5399.

Kraupp, T., Redlberger–Fritz, M., Mueller, C. A.,

17. Medema, J. K., Meijer, J., Kersten, A. J. andCinatl, J., Michaelis, M., Geiler, J., Bergmann, M.,

Hor ton, R. 2006. Safety assessment of Madin

Romanova, J., Roethl, E., Morokutti, A., Wolschek,

Darby canine kidney cells as vaccine substrate.

M., Ferko, B., Seipelt, J., Dick–Gudenus, R. andDev. Biol.（Basel）123 : 243–250.

Muster, T. 2010. A novel type of influenza

18. Pau, M. G., Ophorst, C., Koldijk, M. H., Schouten,

vaccine : safety and immunogenicity of replicationG., Mehtali, M. and Uytdehaag, F. 2001. The–deficient influenza virus created by deletion ofhuman cell line PER.C6 provides a new

the inter feron antagonist NS1. J. Infect. Dis.

manufacturing system for the production of

201 : 354–362.

文献紹介

実験的に感染させた豚群で調査した
App の診断検査法の評価
李知恩Evaluation of Actinobacillus pleuropneumoniae diagnostic tests using samples derived fromexperimentally infected pigs
Veterinary Microbiology, Volume 148, Issues 2‑4, 24 March 2011, Page 246-251
G.Costa , S. Oliveira , J. Torrison , S.Dee
Room 225 VMC, 1365 Gortner Ave, St Paul, MN 55108, United States
ELISA（モントリオール大学）で検査した。菌接種
後 49 日目に全ての豚を安楽殺した。咽頭および肺要約
Actinobacillus pleuropneumoniae（App）の 診 断 にの組織からは菌を分離培養，もしくは PCR で検出

おける新たな血清型検査法が近年導入されているが， した。Multi – APP ELISA は Swinecheck ® APP

これらの検査法で不顕性感染豚が検出可能であるか

ELISA に比べ，一週間早く陽転を検出した。最も早は不明である。そのため，80 頭の豚を無作為に，いものは感染（接種）後 1 週間（血清型 10），遅い

血清型 1, 3, 5, 7, 10, 12, 15 接種群および無接種の対ものは 3 週間（血清型 1）で抗体が陽転した。 感染

照群に分けて試験を行った。血液検体と口咽頭スワ

後 49 日目の抗体陽転率は血清型によって異なり，

ブ検体は接種前と接種後 7 週連続で採集した。血清血 清 型 10 で は 4 頭（44 %），血 清 型 15 で は 9 頭®

検体は Swinecheck APP ELISA および Multi –APP

（100 %）であった。感染後 49 日目の血清型反応で

10（70）日生研たよりは 31 頭がいずれかの血清型で陽転し，その中の 15である。

頭は咽頭スワブで PCR により App 菌が検出された。
Swinecheck® APP ELISA では血清型間で交差反応は認められなかった。肺炎を起こした 2 頭の豚の肺

2．材料および方法

組織から App 菌が分離できたが，扁桃からは常在動物

菌のため菌分離は不可能だった。本研究では App

試験には，病歴や PCR および血清検査（Chekit

菌の不顕性感染を検出するために，最近利用可能に

APP – ApxIV® ELISA）で App 菌陰性の豚（86 週齢）なった診断ツールを総合評価した。

を使用した。豚は無作為に 8 群に分けられ，１群あたり 10 頭とした。各群にはそれぞれ異なる血清型の App 菌を接種し，その内の一群は陰性対照群とした。接種後 49 日目で全ての豚を安楽殺し，解放1．背景
Actinobacillus pleuropneumoniae（App）は豚の胸後は病変を評価した。

膜肺炎の原因菌であり感染力が高く，世界的に養豚産業の経済的損失をもたらしている（Jessing et al.,2003 ; Gottschalk et al., 2003 ; Dreyfus et al., 2004）。

菌株
試験感染には，アメリカの野外で最も有病率が高

この病原体はほとんどのアメリカの豚群では存在しい App 菌株，American Type Culture Collection

ない。したがって，陰性状態のモニタリングは陽性（ATCC）から，血清型 1（4074），血清型 3（1421），

動物の輸入を阻止する非常に重要な役割を担ってい血清型 5（K17）および血清型 7（WF83）のレファ

る（Gottschalk et al., 2003）。

レンス株を接種した。また，血清型 10（22009），12

現在市販されている App ELISA は 3 種類知られ（1096）および 15（HS143）は提供されたものを接て お り，一 つ 目 は Biovet 社 の 血 清 型 特 異 的種した（Blackall et al., 2002）。血清型 10 の App 菌®

Swinecheck APP ELISA で，二つ目はモントリオー

は過去 6 年間検出されなかったが，今回の試験豚かル 大 学 の Multi–APP ELISA，そ し て 三 つ 目 はら Swinecheck® APP ELISA で抗体が検出されたの

IDEXX 社 の Checkit APP–ApxIV® ELISA で あ る。

で検討対象となった。

®

Swinecheck APP ELISA お よ び Multi–APP ELISA
は

類

似

し

た

原，App の long chain

抗lipopolysaccharides（LC–LPS）をターゲットとして®

接種およびチャレンジ
接種前にチャレンジ菌株の増殖曲線を作成した。

いる。Checkit APP–ApxIV ELISA は App 感染時に対数増殖期の急激な成長カーブ時期（PPLO 培地 6産生される種特異的毒素をターゲットとしている

時間培養）から菌液を採取し，PBS で 106 CFU /m（Schaller et al., 1999）。経験上，LC – LPS と ApxIV

L に濃度調整した。調整 2 時間以内の菌液を，それの検査結果はしばしば一致せず，これはターゲット

ぞれの鼻腔内に 1mL ずつ接種した。

としている抗原が異なることや感度・特異性の相違からと考えられる。予期せぬ結果や矛盾した結果は， 臨床症状
病歴や菌分離および PCR による保菌の検出によっ

チャレンジ菌の感染による臨床症状をモニターすて 解 決 で き る（Scaller et al., 2001 ; Fittipaldi et al.,るため，接種直後の 3 日間は連続で体温を測定し，

2003）
。

その後は週一回間隔で体温側定を行った。元気消失

不顕性感染の検出も含めて，どの様な App 感染

症状や明らかな呼吸器症状を示した豚および 41℃

診断検査が入手できるのか，もしくはどの様な診断

以上の発熱を示す豚にはセフチオフルナトリウム検査の組合せによって App 感染を正確に診断可能（セフェム系抗生物質）を二日間 3mg/kg で筋肉注かは現在のところ情報がない。今までの報告ではそ射した。

れぞれの App 診断検査を個々に評価しており，同時に複数の App 診断検査を比較検討した報告がな

血液検体

かった。今回の研究目的は，7 つの血清型の App を

チャレンジ菌接種前（0 日）から週一回間隔で 7

試験的に不顕性感染させた豚群に対して複数の App

週間，豚の採血を行い，血清を分離した。分離血清診断検査法を用いた感染の検出能力を評価することは Swinecheck® APP ELISA お よ び Multi – APP

57（5）201111（71）ELISA で 検 査 し た。Swinecheck® APP ELISA は 血的な所見（胸膜の出血や壊死）が認められた。血清

清型 1, 9, 11，血清型 2，血清型 3, 6, 8，血清型 4, 7，型 5（n=1），7（n=4），10（n=4）お よ び 15（n=2）

血清型 5，血清型 10，血清型 12 に対する抗体を感の接種群では接種後 49 日目で肺や胸腔壁の軽度な知するが，各血清型の鑑別は出来ない。また，血清

繊維素性癒着が認められた。血清型 1，3 および 12

型 15 に対する抗体は血清型 3, 6, 8 の抗原で感知さの接種群では病変は特に認められなかった。

れ る と 報 告 し て い る（Gottschalk, 2007）。一 方，
Multi – APP ELISA はすべての App LC – LPS 抗原に菌分離

対する抗体を検出するので血清型の鑑別は出来ない。

App 菌は一週間隔で採取した口咽頭スワブからは血清型間の交差反応は App 菌接種後 49 日目の血清

分離されなかった。唯一 App 菌が分離されたのは，®

から Swinecheck APP ELISA で検査した。

胸膜病変部位のスワブからで，感染 3 日目で死亡した血清型 10 接種群の 1 頭と，感染 21 日目で死亡した血清型 15 接種群の 1 頭の計 2 頭のみであった。

咽頭スワブ
咽頭のスワブは接種前（0 日）から週一回間隔で7 週間採取した。2 つのスワブを用意し，菌分離おPCR
咽 頭 の 菌 採 取 で 使 用 し た ス ワ ブ（BD BBL

よび DNA 抽出に用いた。

CultureSwab™）はケース底にゲルベースの培地があるため，これが PCR の効率を悪くしたと思われ剖検
全ての豚の肉眼所見を評価した。咽頭のスワブ，る。今回のスワブ検体の PCR 検査は不安定で再現

扁桃および肺のスワブを App 菌分離や PCR 用にそ性がなく，接種後 49 日目の扁桃の PCR 検査法のみ

れぞれ採取した。

が唯一信頼性があると考えられた。血清型 1, 3, 7,
10 および 15 接種群では App 菌が検出され，感染が成立した。また，血清型 5 および 12 の接種群や非統計解析®

抗体検査ツールである Swinecheck APP ELISA
および Multi – APP ELISA で感染豚の検出率（陽転接種群の PCR 検査で App 菌は検出されなかった（表 1）。

率）を比較検討し，その比較により生存分析を行った。
血清検査
表 1 に血清検査および PCR の結果をまとめた。
血清型 5, 12 の接種群や非接種群で陽転は検出され

3．結果
実験的感染

ず，ELISA でも検出されなかった。この結果は接種
6

App 菌濃度 10 CFU/m L で接種した結果，血清後 49 日目の扁桃の PCR 検出法の結果と同様だった。

型 1, 3, 7, 10 および 15 接種群では接種後 49 日目でMulti – APP ELISA は Swinecheck® APP ELISA に比血清検査および扁桃の PCR 検査により App 菌が検べ，血清型 1, 3 および 10 の接種群で一週間早く陽出され，感染が成立した。血清型 5 および 12 接種転を検出した。血清型 7 および 15 接種群の場合，群では同様の検査でどちらとも菌が検出されず，感両方の ELISA から接種後 2 週間目で陽転を検出し染は成立しなかった。

た（Fig. 1）。陽転率が最も高い（89％から 100％）
血清型 7 および 15 接種群に比べ，血清型 1, 3 およ

臨床症状および剖検所見
接種後 24 時間で呼吸困難や元気消失が血清型 10および 15 の接種群で現れた。また，血清型 10 の接び 10 接種群では最も陽転率が低かった。また，接種後 49 日目の扁桃の PCR 検出法の陽転率と比較時，
ELISA の陽転率は低い傾向であった（表 1）。

種群では発熱症状（直腸温度が 41℃以上）も認められ，抗生剤治療（セフチオフルナトリウム 3mg/kg）を二日間行ったが，1 頭が死亡し肺出血や壊死

生存分析
接種から抗体が陽転するまでの期間を time toの病変が認められた。一方，血清型 15 接種群では，

event

一頭が肢の負傷によって接種後 3 週間目で安楽殺さた時点を生存中央値とし，50％が陽転した時点としれ（感染の影響によるものではない），App の特徴

た（日にちで表している）。この時，陽転しなかっの変数とした。接種豚群中，半数が陽転し

12（72）

日生研たより表1

血清検査および PCR 反応結果のまとめ

Swinecheck® APP ELISA

血清型 N

Multi-APP ELISA

早期検出（週） +/ 疑い / 接種後 49 日目 早期検出（週）

1

10

5b

3

10

5

10

7

+/ 接種後 49 日目

PCR
（+）

5/5

1

4/1/5

3

3

1/4/5

2

5/5

3

‒

0/ 0/ 10

‒

0/0

0

9b

2

8/0/1

2

8/1

5

10

9b

2

1/3/5

1

4/5

3

12

10

‒

0/0/10

‒

0/0

0

15

9b

2

5/2/2

2

9/0

3

control

b

‒

0/0/9

‒

0/9

0

9

a 血清型 1, 5 および 7 では感染後 4 週間目のデータは得られなかった。
b 感染後 49 日目の豚群。 2 頭（血清型 10 および 15）が菌接種後 App 菌による肺炎で死亡。接種前、血清型 7 お
よび非接種群で各 1 頭、2 頭が死亡。

た検体は対象外とした。疑い検体（陽転がはっきり

生存中央値（28 日）は Swinecheck® APP ELISA のしないもの）を除外した時，Multi – APP ELISA の生存中央値（49 日）より有意に低く（p=0.04）（Fig.
2），疑い検体を陽性とした時の有意差は特に認められなかった。

4．考察
今回の研究目的は，7 つの血清型の App を試験的に不顕性感染させた豚群に対して，複数の App 診断検査法を用いて感染の検出能力を評価することである。App 菌を 106CFU/mL 濃度で接種することで試 験 的 な 不 顕 性 感 染 を 再 現 し た（Fittipaldi et al.,2003）
。血清型 1, 3, 7 および 15 の接種豚群では不顕性感染が成立した。しかし，血清型 5 および 12 接種豚群では感染が成立せず，血清型 10 の接種豚群
では接種後 24 〜 48 時間後に明らかな臨床症状を示した。すべての豚群を同じ濃度で接種しているが，Fig. 1 Multi-APP（MAPP）
お よ び serovar-apeciﬁc（SS）（Swinecheck® APP ELISA）
ELSA の陽転率。接種後の日にち別および接種後 49 日目の PCR も含む。

血清型によって病原性やコロニー形成は様々である
ことは，Frey や Jacobsen らによって報告されている（Frey, 1995 ; Jacobsen et al.,1996）。一 方，ア メ
リカの野外で主に検出される血清型 5 や 12 の接種群の感染が成立しなかったのは予期せぬ結果であった。血清型 12 は 106 CFU/mL の濃度で陽転検出す
る と 報 告 さ れ て お り（Grondahl – Hansen et al.,2003）
，血清型 5 は 108 〜 109 CFU/ mL で明らかな胸膜肺炎の病変が再現したと報告されている（Ueda
et al., 1995）。しかし，今回の血清型 5 および 12 接種群で不顕性感染を成立させるには接種濃度を高める必要があったと思われる。また，血清型 10 接種

Fig. 2

接種から陽性転換検出までの生存分析。MultiAPP お よ び serovar-speciﬁc（Swinecheck®
APP ELISA）を比較検討した。
（疑い検体は陰性とした。）

群で重度な臨床症状が現れたことも想定外で，実際，血清型 10 の App 菌感染による臨床症状は野外でも，試験的感染でも報告がない。

57（5）201113（73）

初 期 の 研 究 計 画 で は Biovet 社 の 血 清 型 特 異 的

リ ーニ ン グ 検 査 に 推 奨 す る。ま た，Swinecheck®

Swinecheck® APP ELISA とモントリオール大学のAPP ELISA は豚群で流行している App 菌の血清型

Multi – APP ELISA，そ し て IDEXX 社 の Checkit

を 診 断 す る 際 に 有 用 と 思 わ れ た。 ま た，Multi –®

APP – ApxIV ELISA を比較検討する予定であった

APP ELISA で陽性と判定された検体が Swinecheck

が，IDEXX 社から要求を拒否されたため，今回は®

二 つ の 検 査 の み で 研 究 を 行 う 事 に な っ た。

間後に検体を再採取し，Swinecheck® APP ELISA で

Swinecheck® APP ELISA と Multi – APP ELISA は再検査する事によって，感度の違いによる結果を解App 菌 の LC – LPS に 対 す る 抗 体 を 検 出 す る が，決出来ると考えた。

APP ELISA で陰性と判定された場合は，1 〜 2 週

Multi – APP ELISA は一週間前に陽転を検出した。
この ELISA は App 菌の全血清型に対する LC – LPS
を抗原としているため，より完全な形の抗原として

6．References

陽転を早期に検出したと考えられる。

1. Blackall, P. J., Klaasen, H. L., van den Bosch, H.,®

今回の Swinecheck APP ELISA の結果から血清

Kuhner t, P., Frey, J., 2002. Proposal of a new

型 3, 6, 8 抗原で血清型 15 に対する抗体を検出でき

serovar of Actinobacillus pleuropneumoniae :ることが明らかになり，Gottschalk ら（2007）の報

serovar 15. Vet. Microbiol. 84, 47–52.

告 と 一 致 し て い る。S / P 比（血 清・PCR 結 果 の

2. Dreyfus, A., Schaller, A., Nivollet, S., Segers, R. P.,比）では，血清型 3 に比べ，血清型 15 感染検体数

Kobisch, M., Mieli, L., Soerensen, V., Hussy, D.,が多かった（データは載せていない）。また，接種

Miserez, R., Zimmermann, W., Inderbitzin, F., Frey,

後 49 日目の試験感染させた血清型 1, 3, 7, 10 およびJ., 2004. Use of recombinant ApxIV in®

15 の血清を Swinecheck APP ELISA の抗原で交差

serodiagnosis of Actinobacillus pleuropneumoniae

反応を調べたところ，交差反応は認められなかった。

infections, development and prevalidation of the

一 週 間 隔 で 咽 頭 ス ワ ブ か ら App 菌 を 採 取 し，ApxIV ELISA. Vet. Microbiol. 99, 227–238.

PCR 検査で検出を試したが結果は得られず，これ3. Fr ey, J., 1995. V ir ulence in Actinobacillus

は菌採取時にスワブケースの底のゲルベース培地がpleur opneumoniae and R TX toxins. Trends

PCR の感度を干渉したと考えられた。また，菌分Microbiol. 3, 257–260.

離も常在菌のため厳しい結果となった。咽頭からの4. Fittipaldi, N., Broes, A., Harel, J., Kobisch, M.,

App 菌分離は Ueda らから報告されているが（Ueda

Gottschalk, M., 2003. Evaluation and field

et al., 1995），今回その再現は出来なかった。免疫validation of PCR tests for detection of

磁気による App 菌分離も報告されているが（GagnéActinobacillus pleuropneumoniae in subclinicallyet al., 1998），このような手法を持ち合わせていな

infected pigs. J. Clin. Microbiol. 41, 5085–5093.

かったため不可となった。一方，接種後 49 日目で

5. Gagneʼ, A., Lacouture, S., Broes, A., D Allaire, S.,

解放した豚の扁桃 PCR からは菌が検出された。こGottschalk, M., 1998. Development of anの結果は血清型 1, 3, 7, 10 および 15 の接種群の感染

immunomagnetic method for selective isolation of

確認や血清型 5 および 12 接種群の非感染確認に有Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 from

用であった。

tonsils. J. Clin. Microbiol. 36, 251–254.

咽頭 PCR から菌が検出された検体数は，接種後6. G o t t s c h a l k , M . , 2 0 0 7 . A c t i n o b a c i l l u s

49 日目の抗体が検出された血清数より下回ったがpleuropneumoniae serotypes, pathogenicity and

直接的な関連はないと思われる。この相違は血清検

virulence. In:Proc. AASV, Orlando, FL, pp. 381–

査では咽頭の App 菌が感知出来ず，実際陰性血清384.

にもかかわらず PCR では陽性の検体も検出され，鼻から鼻へ感染が成立したものと考えられた。

7. Gottschalk, M., Broes, A., Mittal, K. R., Kobisch,M., Kuhnert, P., Lebrun, A., Frey, J., 2003. Non–pathogenic Actinobacillus isolates antigenically andbiochemically similar to Actinobacillus

5．結論
今回の研究結果から，Multi – APP ELISA をスク

pleuropneumoniae : a novel species. Vet. Microbiol.
92, 87–101.

14（74）日生研たより8. Grondahl – Hansen, J., Bar fod, K., Klausen, J.,

12. Rayamajhi, N., Shin, S. J., Kang, S. G., Lee, D. Y.,

Andresen, L.O., Heegaard, P.M., Sorensen, V.,

Ahn, J. M., Yoo, H. S., 2005. Development and use

2003. Development and evaluation of a mixedof a multiplex polymerase chain reaction assay

longchainb lipopolysaccharide based ELISA for

based on Apx toxin genes for genotyping ofserological sur veillance of infection with

Actinobacillus pleuropneumoniae isolates. J. Vet.

Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 2, 6 andDiagn. Invest. 17, 359–362.

12 in pig herds. Vet. Microbiol. 96, 41–51.

13. Schaller, A., Djordjevic, S. P., Eamens, G. J.,

9. Jacobsen,M. J., Nielsen, J. P., Nielsen, R., 1996.

Forbes, W. A., Kuhn, R., Kuhnert, P., Gottschalk,

Comparison of virulence of different Actinobacillus

M., Nicolet, J., Frey, J., 2001. Identification andpleuropneumoniae serotypes and biotypes using an

detection of Actinobacillus pleuropneumoniae by

aerosol infection model. Vet. Microbiol. 49, 159–

PCR based on the gene apxIVA. Vet. Microbiol.

168.

79, 47–62.

10. Jessing, S. G., Angen, O., Inzana, T. J., 2003.

14. Schaller, A., Kuhn, R., Kuhnert, P., Nicolet, J.,

Evaluation of a multiplex PCR test forAnderson, T. J., MacInnes, J. I., Segers, R. P.,

simultaneous identification and serotyping ofFrey, J., 1999. Characterization of apxIVA, a new

Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 2, 5,

R TX determinant of Actinobacillus

and 6. J. Clin. Microbiol. 41, 4095–4100.

pleuropneumoniae. Microbiol.–UK 145, 2105–

11. Mittal, K. R., Higgins, R., Lariviere, S., 1983.

2116.

Deter mination of antigenic specificity and15. Ueda, Y., Ohtsuki, S., Nar ukawa, N., 1995.

relationship among Haemophilus

Ef ficacy of flor fenicol on experimental

pleuropneumoniae serotypes by an indirect

Actinobacillus pleuropneumonia in pigs. J. Med.

hemagglutination test. J. Clin. Microbiol. 17, 787–

Sci. 57, 261–265.

790.

（研究員）

日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（隔月 1 回発行）

（通巻 570 号） 平成 23 年 8 月 25 日印刷
発行所
生命の「共生・調和」を理念とし，生命体の豊かな明日と，研究の永続性を願う
気持ちを快いリズムに整え，視覚化したものです。カラーは生命の源，水を表す「青」としています。

TEL：0428（33）1056（企画学術部） FAX：0428（33）1036
発行人
編集室
印刷所

表紙題字は故中村⒥治博士の揮毫

平成 23 年 9 月 1 日発行（第 57 巻第 5 号）

財団法人 日本生物科学研究所〒 198–0024 東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1
林

員／平

事

務／企画学術部志鋒

委修（委員長），堤 信幸，黒田 丹株式会社 精ഛ社（無断転載を禁ず）