静医発第６２３号
令和４年７月５日

郡 市 医師 会 長

様
一般社団法人静岡県医師会
会 長

紀

平

幸

一

サル痘に関する情報提供及び協力依頼について（一部改正）「サル痘に関する情報提供及び協力依頼について（一部改正）」は、令和４年６月７日付静医発第463号にてご連絡申し上げたところです。
今般、日本医師会感染症危機管理対策室長より、別添のとおり一部改正された旨、通知がありました。
本改正は、主に各自治体の地方衛生研究所における検査体制の整備に関する改正となっており、改正箇所は別添の太字下線をご参照ください。
また、「病原体検出マニュアル サル痘（第１版）(令和４年６月国立感染症研究所）」 が作成されましたので、併せてご連絡いたします。
つきましては、貴職におかれましても本件についてご了知いただき、貴会会員への周知方ご高配賜りますようよろしくお願い申し上げます。

写
日医発第 602 号（健Ⅱ）
令和４年６月 21 日
都道府県医師会
感染症危機管理担当理事

殿

日本医師会感染症危機管理対策室長
釜萢敏サル痘に関する情報提供及び協力依頼について（一部改正）

本件については、令和４年６月２日付日医発第 471 号（健Ⅱ）をもってご連絡いたしました。
今般、厚生労働省より同事務連絡の一部を改正したことについて各都道府県等衛生主管部（局）宛て事務連絡がなされ、本会に対しても周知方依頼がありました。
本改正は、主に各自治体の地方衛生研究所における検査体制の整備に関する改正となっており、主な改正箇所は別添の太字下線をご参照ください。
また、「病原体検出マニュアル サル痘（第１版）（令和４年６月国立感染症研究所）」が作成されましたので、併せてご連絡いたします。
つきましては、貴会におかれましても本件についてご了知のうえ、郡市区医師会及び関係医療機関に対する周知方について、ご高配のほどよろしくお願い申し上げます。

事 務 連 絡
令 和 ４ 年 ５ 月 20 日
令和４年６月１7 日一部改正
公益社団法人 日本医師会

御中

厚生労働省健康局結核感染症課

サル痘に関する情報提供及び協力依頼について
今般、欧州や北米を中心に感染が確認されているヒトのサル痘については、現在、厚生労働省においても情報収集に努めているところです。
我が国では、サル痘については、感染症の予防及び感染症の患者に対する医療に関する法律（平成10年法律第114号。以下「感染症法」という。）に基づき、４類感染症に位置づけ、サル痘の患者を診断した医師は、都道府県知事等に対して直ちに届け出ることを義務づけています。
これまで我が国においては、ヒトのサル痘の発生事例は報告されていませんが、今般のヒトの感染事例については、アフリカ大陸以外の複数の国で、渡航歴のない
感染者が発生しており、市中感染の発生が示唆されることから、我が国における輸入例等の発生に注意する必要があります。
つきましては、感染症法に基づくサル痘の届出基準を改めてご確認いただくとともに、別添について貴会会員にご周知いただき、臨床症状からサル痘を疑う患者を診察した場合には、最寄りの保健所にご連絡をいただきますようお願いします。
また、同様の事務連絡を都道府県等に発出しておりますことを申し添えます。

本件に関して、別添を修正いたしました。
（主な改正箇所は太字下線）
病原体検出に使用する PCR プライマー・プローブの配布については、別途ご連絡いたします。

1

事

務

連

絡

令和４年５月20日
令 和 ４ 年 ６ 月 17日 最 終 改 正
都 道 府 県各 保 健 所 設 置 市 衛生主管部（局）御中
特別区
厚生労働省健康局結核感染症課
サル痘に関する情報提供及び協力依頼について
今般、欧州や北米を中心に感染が確認されているヒトのサル痘については、現在、厚生労働省においても情報収集に努めているところです。
我が国では、サル痘については、感染症の予防及び感染症の患者に対する医療に関する法律（平成10年法律第114号。以下「感染症法」という。）に基づき、４類感染症に位置づけ、サル痘の患者を診断した医師は、都道府県知事等に対して直ちに届け出ることを義務づけています。
これまで我が国においては、ヒトのサル痘の発生事例は報告されていませんが、今般のヒトの感染事例については、アフリカ大陸以外の複数の国で、渡航歴のない
感染者が発生しており、市中感染の発生が示唆されることから、我が国における輸入例等の発生に注意する必要があります。
貴職におかれましては、感染症法に基づくサル痘の届出基準を改めてご確認いた
だくとともに、別添について、管下の医療機関にご周知頂き、臨床症状からサル痘を疑う患者の対応についての相談や情報提供があった場合には、厚生労働省健康局
結核感染症課に情報提供をお願いします。また、サル痘の確定診断が実施可能な機関は、現時点で国立感染症研究所に限られることから、疑い事例が発生した場合には、国立感染症研究所への相談の上、検体搬送等についてご協力をお願いします。
また、本件に関しての積極的疫学調査や検体採取方法等については、追ってお示しする予定です。
なお、同様の事務連絡を公益社団法人日本医師会及び各検疫所宛てに発出しておりますことを申し添えます。
本件に関して、別添を修正いたしました。
（主な改正箇所は太字下線）
病原体検出に使用する PCR プライマー・プローブの配布については、別途ご連絡いたします。

1

別添
サル痘への対応について
１．各国の事例について
2022 年５月以降、欧州、北米等において、サル痘の感染例及び疑い例が報告されている。
世界保健機関（WHO）によると、６月 16 日時点で、2036 確定例がサル痘非常在国である 35 カ国から報告されている1。死亡例の報告はない。
英国保健安全保障省（UKHSA）は、英国内の症例の疫学調査においては、ゲイ・バ
イセクシャル・その他の男性間の性交渉を行う者（Gay, Bisexual and other Men
who have Sex with Men: GBMSM）での感染事例が多いことを指摘しているが2、WHO
は、報告例の全てが MSM ではないとしている 1。
２．サル痘について・ 概要・ サル痘はオルソポックスウイルス属のサル痘ウイルスによる感染症で、1970年にヒトでの感染が発見されて以来、中央アフリカから西アフリカにかけて流行している。我が国では感染症法上の４類感染症に指定されている。
・ 2017 年からナイジェリアで患者数が増加し、2018 年から英国等においてナイジェリアに疫学的リンクのある輸入例が発生している。
・ 症状
・ ウイルスに曝露後、通常６-13 日（最大５-21 日）の潜伏期間の後に発症。
・ 発熱、頭痛、リンパ節腫脹などの症状が０-５日程度持続し、発熱１-３日後に発疹が出現。
・ 皮疹は顔面や四肢に多く出現し、徐々に隆起して水疱、膿疱、痂皮となる。
・ 欧州疾病予防・管理センター(ECDC)の報告では、現在欧州等で発生が見られるサル痘症例について、男性間で性交渉を行う者（MSM: Men who have Sex
with Men）の間で報告されている症例では、外陰部に病変が集中していることを指摘している3。
・ 多くの場合２-４週間持続し自然軽快するものの、小児例や、あるいは曝露の程度、患者の健康状態、合併症などにより重症化することがある。
・ 皮膚の二次感染、気管支肺炎、敗血症、脳炎、角膜炎などの合併症を起こす
ことがある。
・ サル痘常在国における致命率は 1-11%程度とされている。

1

世界保健機関（WHO）. Multi-country monkeypox outbreak: situation update. 16 June 2022.

https://www.who.int/emergencies/disease-outbreak-news2

６月 10 日の UKHSA の報告によると、６月８日までの確定例（336 例）のうち、性別情報が得られた症例（341 例）の 99%は男性であり、詳細情報の得られた男性（152 例）のうち、99%（151 例）は、男性と接触があった男性であった。
3

欧州疾病予防管理センター（ECDC）. Risk assessment: Monkeypox multi-country outbreak 23 May 2022.
https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/risk-assessment-monkeypox-multi-country-outbreak2

（参考）サル痘による皮疹（UK Health Security Agency（UKHSA）, 14 May 2022）

・ 感染経路・ 主にアフリカに生息するリスなどのげっ歯類をはじめ、サル、ウサギなどウ
イルスを保有する動物との接触によりヒトに感染する。
・ サル痘はヒトからヒトに感染することがあり、主に接触感染、飛沫感染をするとされている。なお、理論的には空気感染も起こす可能性が指摘されているが実際に空気感染を起こした事例は確認されていない。
・ 発症後からすべての皮疹が消失し新しい正常な皮膚に覆われるまで感染予防策をとることが推奨されている。
・ 鑑別診断・ 同じく発疹を症状とする疾患が鑑別となり、水痘、麻疹、細菌感染、梅毒、
薬物アレルギーなどが代表的。既に根絶されている天然痘とは症状での区別は困難である。
・ サル痘の発疹は手掌と足底にも出現することが多く、水痘の鑑別に有用とされる。
・ 診断
・ 主に水疱や膿疱の内容液や蓋、あるいは組織を用いて PCR 検査で遺伝子を検出することが有用である。
・ その他、ウイルス分離・同定や、ウイルス粒子の証明、蛍光抗体法などの方法が知られている。
・ 抗原検査や抗体検査は交差反応が多く、特異的な診断には至らない。
・ 治療法
・ 我が国で利用可能な薬事承認された特異的な治療薬はない。
・ 欧州においては特異的治療薬として Tecovirimat が承認されている。このほ
か、実験室レベルでは、Cidofovir、Brincidofovir などの薬剤が有効な可能
性がある。
・ 予防法
・ 天然痘ワクチン4によって約 85%発症予防効果があるとされている。
・ 流行地では感受性のある動物や感染者との接触を避けることが大切である。
３．我が国における対応について

4

日本国内では 1976 年以降天然痘ワクチンの定期予防接種は行われていない。

3

サル痘は、我が国では感染症法上の４類感染症に指定されており、当該感染症の患者もしくは無症状病原体保有者を診断した医師、感染死亡者及び感染死亡疑い者の死体を検案した医師は、ただちに最寄りの保健所への届出を行う必要がある。
今般、欧米等において確認されているサル痘の流行については、その疫学的動向が既知の知見と異なっていることから、当面の間、本疾患を疑う患者（以下「疑い例」という。）及びその接触者に関する暫定症例定義、医療機関及び保健所・都道府県等における対応については、下記の通りとする。
（１）疑い例及び接触者に関する暫定症例定義
１）「疑い例」の定義：下記の①～③全てを満たす者を指す。
① 説明困難*１な急性発疹を呈している。
(*１) 水痘、風疹、梅毒、伝染性軟属症、アレルギー反応等のその他の急性発疹を呈する疾患によるものとして説明が困難であることをいう。
② 次の１つ以上の症状を呈している。
・発熱（38.5℃以上）
・頭痛・背中の痛み・重度の脱力感
・リンパ節腫脹
③ 次のいずれかに該当する。
・発疹等の発症の 21 日以内にサル痘常在国*２に滞在歴があった。
・発疹等の発症の 21 日以内にサル痘常在国以外のサル痘症例が報告されている国に滞在歴があり、滞在先で他者との濃厚接触（性的接触を含む。）があった。
・発疹等の発症の 21 日以内にサル痘常在国やサル痘症例が報告されている国5に滞在歴がある者と日本国内において濃厚接触（性的接触を含む。）があった。
・発疹等の発症の 21 日以内に複数または不特定の者と性的接触があった。
(*2) サル痘常在国 5：ベナン共和国、カメルーン、中央アフリカ共和国、コン
ゴ民主共和国、ガボン、ガーナ（動物のみで確認）、コートジボワール、リベリア、ナイジェリア、コンゴ共和国、シエラレオネ及び南スーダン
２）「接触者」の定義：サル痘の患者（確定例）又は疑い例と、表１に示す接触状況があった者を指す。
表１ 接触状況による感染リスクのレベル
サル痘患者等との接触の状況
創傷など
を含む粘
膜との接
触

5

寝食をと
もにする
家族や同
居人

正常な皮
膚のみと
の接触

1ｍ以内の
接触歴３）

1ｍを超え
る接触歴

サル痘の発生状況については、WHO Disease outbreak news Monkeypox を参照されたい。
https://www.who.int/emergencies/emergency-events/item/2022-e000121

4

適切な
PPE の
着用や
感染
予防策

な
し
あ
り

高１）

-

高２）

中１）

-

-

中

低

低

低

１）サル痘常在国でのげっ歯類との接触を含む
２）寝具やタオルの共有や、清掃・洗濯の際の、確定例の体液が付着した寝具・洋服等との接触を含む
３）接触時間や会話の有無等周辺の環境や接触の状況等個々の状況から患者の感染性を総合的に判断すること（２）医療機関における対応について
１）報告
・ 疑い例の症例定義に該当する者を診察した場合には、最寄りの保健所に相談すること。
・ 特に、最近の海外渡航歴を有する疑い例については、渡航歴、接触歴（性的接触歴を含む）、天然痘ワクチン接種歴等の詳細を可能な限り聴取すること。
・ 感染症法第 15 条による保健所の積極的疫学調査に協力すること。
・ 別紙１を参考に疑い例の検体を保存するとともに、保健所の求めに応じて、検体を提出すること。
２）臨床上の留意点
・ 疑い例に接する際には、接触及び空気予防策6を実施すること。入院が必要となる場合は、個室（陰圧個室が望ましい。）で管理を行うこと。
・ サル痘の患者については、全ての皮疹が痂皮となり、全ての痂皮が剥がれ落
ちて無くなるまで（概ね 21 日間程度）は周囲のヒトや動物に感染させる可能性がある。
・ サル痘については、常在国における致命率は高い一方で、非常在国における重症化率については不明であることから、入院での管理を行うことが考慮される。
・ これまで国内での発生がないことから、当面の間、特定感染症指定医療機関
及び第一種感染症指定医療機関においては、患者等の受入れや接触者の発症時の受診の受入れを優先的に検討されたい。
・ 外来においてフォローアップを行う場合には、自宅等における感染対策を徹底するとともに、自身の健康に注意を払い、症状が悪化する場合には入院治療を行うことができるよう、最寄りの保健所と連携をとること。

6

サル痘の主な感染経路は接触感染や飛沫感染であるが、水痘、麻疹等の空気感染を起こす感染症が鑑別診断に入ること、サル痘に関する知見は限定的であること、他の入院中の免疫不全者における重症化リスク等を考慮し、現時点では、医療機関内では空気予防策を実施することが推奨される。

5

・ サル痘患者が利用したリネン類を介した医療従事者の感染の報告があることから、リネン類を含めた患者の使用した物品の取り扱いには注意すること7。
・ 診断や治療等の臨床管理については、国立国際医療研究センター国際感染症センター（DCC）に相談を行うことが可能である。
連絡先：
国立研究開発法人 国立国際医療研究センター病院
国際感染症センター（DCC）
TEL: 03-3202-7181（代)Email: idsupport@hosp.ncgm.go.jp（３）保健所・都道府県等における対応について
１）報告
・ 疑い例を診療した医師からの相談があった場合には、以下の連絡先に相談されたい。メールで連絡する場合は、厚生労働省と国立感染症研究所の両方の連絡先を宛先に入れること。
連絡先：
厚生労働省健康局結核感染症課
TEL: 03-3595-2257 (平日)
TEL: 090-1532-3386（休日・夜間緊急連絡時）
Email: variants@mhlw.go.jp ※文頭に【サル痘】と入れること
国立感染症研究所 EOC
TEL: 03-4582-2602 ※平日日中のみ
Email: eoc@nih.go.jp

２）調査
・ 別紙２を参考に、感染症法第 15 条に基づく積極的疫学調査を実施すること。
・ 積極的疫学調査の実施にあたっては、国立感染症研究所の実地疫学専門家養成プログラム（FETP）の派遣を行うことができるので、積極的に活用を検討されたい。
・ 調査結果については、感染症法第 15 条に基づき、国立感染症研究所により調査票の分析を行うので、調査票を記入し第一報をした時点（記載可能な範囲）で、可能な限り電子ファイルで、上記メールアドレス（厚生労働省結核感染症課及び国立感染症研究所 EOC）に報告されたい（件名の文頭に【サル痘】と記載）。
・ なお、症例が他の自治体管轄の医療機関へ転院した場合などは、転院先の自治体に情報や検体確保状況を共有するなど、自治体間の情報共有や検体確保のための協力を円滑に実施すること。
・ 調査において疑い例や患者（確定例）に接する際には、接触及び飛沫感染予防策を実施すること。

7

厚生労働省健康局結核感染症課長通知「感染症法に基づく消毒・滅菌の手引きについて」（平成 30 年 12 月 27

日付け健感発第 1227 第１号厚生労働省健康局結核感染症課長通知別添）の「痘そう」を参照のこと。

6

３）検体
・ 地方衛生研究所において、「病原体検出マニュアル サル痘（第１版）（令和４年６月国立感染症研究所）」に基づく検査体制が整った場合については、
感染症法第 15 条に基づき、別紙１を参考に検体を収集し、地方衛生研究所に送付すること。検査体制が整うまでの間の検体については、国立感染症研究所に送付すること。検体採取・送付の具体的な調整については、上記、国立感染症研究所 EOC に相談されたい。
・ 検体の輸送に当たっては、「感染性物質の輸送規制に関するガイダンス
2013-2014 版（国立感染症研究所）」に基づき、適切に梱包・輸送を行うこと。
・ 本依頼により報告された症例については、後日、厚生労働省又は国立感染症研究所から都道府県等及び医療機関等に対し、検体の送付を依頼し、感染源等究明のための追加調査等を行うことがあるので、可能な限り、検体を６ヶ月間保存することにご協力を頂きたい。
４）患者等及び接触者への対応
・ 患者の発生に備え、患者等の受入れや接触者の発症時の受診について、管内の感染症指定医療機関等とあらかじめ協議を行い、受入れ体制を確保すること。なお、サル痘についてはこれまで国内での発生がないことから、当面の間、特定感染症指定医療機関又は第一種感染症指定医療機関において受け入れを優先することが望ましい。
・ サル痘は感染症法上の４類感染症であり、感染症法に基づく入院勧告等の措置が適用されないが、海外での感染が拡大していることを踏まえ、患者（確定例）及び疑い例、接触者に対して、「サル痘患者とサル痘疑い例への感染予防策（国立感染症研究所・国立国際医療研究センター国際感染症センター（DCC））」8で示されている感染対策を実施すること。
①患者（確定例）及び疑い例
・ サル痘の患者については、全ての皮疹が痂皮となり、全ての痂皮が剥がれ落
ちて無くなるまで（概ね 21 日間程度）は周囲のヒトや動物に感染させる可能性がある。
・ サル痘については、常在国における致命率は高い一方で、非常在国における重症化率については不明であることから、入院での管理を行うことが考慮される。
・ 入院しない場合には、以下の自宅等における感染対策*を徹底するとともに、別紙２を参考に自身の健康に注意を払い必要に応じてフォローアップを行うとともに、症状が悪化する場合には、受診中の医療機関とも連携の上、受け入れ医療機関への入院について調整されたい。
・ なお、個別の対応については、適宜、厚生労働省とも協議されたい。
*自宅等における感染対策について
・免疫不全者、妊婦、12 歳未満の小児との接触を控える。
8

国立感染症研究所・国立国際医療研究センター国際感染症センター（DCC）「サル痘患者とサル痘疑い例への感染予防策」https://www.niid.go.jp/niid/ja/monkeypox-m/2595-cfeir/11196-monkeypox-01.html

7

・発症中は他人の肌や顔との接触、性的接触を控える。また、サル痘については性的接触による感染が指摘されていることから、症状が消失した後も、コンドームの着用等、性感染のリスク回避を心がける。
・他者との寝具、タオル、食器の共用を避ける。
・アルコール等の消毒剤を使用した手指衛生を行う。
②接触者
・ 別紙２を参考に、患者（確定例）又は疑い例との接触後 21 日間は体調に注意
し、接触状況による感染リスクに応じて適切にフォローアップを行うとともに、発症時には速やかに医療機関を受診すること。
（４）地方衛生研究所における対応について
・ 検査体制が整った地方衛生研究所おいては、「病原体検出マニュアル サル痘
（第１版）（令和４年６月国立感染症研究所）」に基づき、疑い例から採取された検体の検査を実施されたい。なお、地方衛生研究所における検査費用については、感染症発生動向調査事業負担金の対象となることを申し添える。
・ 病原体が確認された場合には、その検査結果等について、保健所を通じて、３（３）に記載の厚生労働省と国立感染症研究所 EOC 連絡先に報告されたい。
・ 検体の輸送に当たっては、「感染性物質の輸送規制に関するガイダンス
2013-2014 版（国立感染症研究所）」に基づき、適切に梱包・輸送を行うこと。
４．参考資料・ サル痘の届出基準
https://www.mhlw.go.jp/bunya/kenkou/kekkaku-kansenshou11/01-04-13.html
・ 病原体検出マニュアル サル痘
https://www.niid.go.jp/niid/images/lab-manual/monkeypox20220617.pdf
・

国立感染症研究所ファクトシート：サル痘
https://www.niid.go.jp/niid/ja/kansennohanashi/408-monkeypox-intro.html

・ 国立感染症研究所「アフリカ大陸以外の複数国で報告されているサル痘について(第 1 報)」https://www.niid.go.jp/niid/ja/from-lab/2521-cepr/11166-monkeypox-ra0524.html
・ 国立感染症研究所・国立国際医療研究センター国際感染症センター（DCC）「サル
痘患者とサル痘疑い例への感染予防策」
https://www.niid.go.jp/niid/ja/monkeypox-m/2595-cfeir/11196-monkeypox01.html
・ 国立国際医療研究センター国際感染症センター（DCC）ファクトシート：サル痘

8http://dcc-irs.ncgm.go.jp/material/factsheet/
・ 検疫所（FORTH）海外感染症情報
・・・・

http://www.forth.go.jp/topics/fragment5.html
WHO Monkeypox
https://www.who.int/health-topics/monkeypox#tab=tab_1
CDC Monkeypox
https://www.cdc.gov/poxvirus/monkeypox/index.html
ECDC Monkeypox outbreakhttps://www.ecdc.europa.eu/en/monkeypox-outbreak
UK Health Security Agency latest findings into monkeypox outbreakhttps://www.gov.uk/government/news/ukhsa-latest-findings-into-monkeypoxoutbreak9

別紙１ 病原体検査のために必要な検体採取、保存方法について
サル痘の実験室診断（病原学的検査）には水疱、膿疱、痂皮等の皮膚病変（発痘部位）が最も適する。皮膚病変は病期（潜伏期及び前駆期 → 丘疹期及び紅斑期 → 水疱期 → 膿疱期 → 痂皮期 → 回復期）により性状が変化していき、水・膿疱の皮（上蓋）、水・膿疱内容物、水・膿疱内部のスワブ、痂皮が検査に適している。咽頭スワブも用いられることがあるが、検出感度は皮膚病変に劣ると考えられており、検査陰性の結果の解釈には注意が必要である。また、血液からもウイルスが検出される可能性があるがウイルス血症は初期に一時的に現れるのみであり、一般的に診断目的の検査には不向きと考えられている。また、ウイルス検査以外の診療目的で皮膚病変の生検が実施された場合、ホルマリン固定パラフィン包埋検体を用いた検査も可能である。
その場合の検査については、国立感染症研究所感染病理部に問い合わせること。実験
室診断のための具体的な採材の材料や方法、その保存方法については表 1 と図 1 を参照のこと。
表１. 検査に使用する検体
優先
順位

分類

検体種

採取方法

保管方法

生理食塩水（もしくはPBS）を 0.1～0.2ml 入れた注射針(26Ｇ)付きの１
ml の注射器を疱膜から挿入して、2～3 回ポンピン
グして内容液を採取。

滅菌スクリューキャップ
チューブ（2ml 以下）等に内容液を入れて密栓。
冷蔵保管。

病変内部のウイルスをスワブに吸着させるために病変内部を強く擦り、内容液・浸出液をスワブに吸着させる。

スワブをウイルス輸送用培地(Viral Transport
Medium, VTM)に浸して密封。冷蔵保管。
スワブを溶液に浸さず密封しドライスワブのまま冷蔵保管でも良い。

ピンセットを用いて痂皮を採取滅菌プラスチックチュー
ブに入れ密栓。冷蔵保管。

ピンセットと先の丸い鋏を用いて水疱・膿疱の上蓋を剥がして採取

滅菌プラスチックチュー
ブに入れ密栓。冷蔵保管。

皮膚生検検体ウイルス検査以外の診断目的で皮膚病変の病理組織検査が実施された場合
は、当該検体を病原体検査に使用することが可能

常法に則り、ホルマリン
固定パラフィン包埋し、常温保管。

咽頭スワブ＊

常法に則り採取

スワブを VTM に浸して密封。冷蔵保管。

水疱液・膿疱液

皮膚病変

１

２

・ ２箇所以上の皮膚病変から採取。
・ 同じ種類の検体は1 つのチューブに混合しても構わな
いが、異なる種類の検体を混合しない。
・ 適切な検体採取が実施されたかどうかの判断のため、検体採取前の病変部の肉眼写真と検体採取時の手技の詳細について検体送付時に添付することが望ましい。

非皮膚病変

病変部スワブ（水疱・膿疱内部）痂皮

水疱蓋・膿疱上蓋
（可能であれば採取）

10スワブを溶液に浸さず密封しドライスワブのまま冷蔵保管でも良い。

・ 皮膚病変に加えて採取を検討しても良いが、本検体のみでの検査は原則実施しない。

＊ 咽頭スワブ検体でもサル痘ウイルスが検出されればサル痘と診断可能であるが、皮膚病
変に比べて検出感度が低く、検査陰性でも感染を否定できないことに注意する。

【検体採取時の注意事項】
全ての検体について、採取時には、標準予防策に加えて、飛沫やエアロゾル感染の予防をする。具体的には、長袖ガウン、手袋、眼の防護具および N95 マスクを含む個
人防護具を適切に着用し実施すること。状況に応じて、靴カバーやキャップの着用も考慮する。検体採取には原則ディスポーザブルの器具を用いる。使用後の器具は汚染を広げないように適切に廃棄又は処理する。また、検体採取を行った診察室等は、リネン類の交換を含め、接触面の清拭などの清掃を行う。清掃担当する者も適切な個人
防護具の着用は必須である。
採取後の検体輸送については、「感染性物質の輸送規制に関するガイダンス
2014 版（国立感染症研究所）」を参照のこと。
https://www.niid.go.jp/niid/images/biosafe/who/WHOguidance_transport13-14.pdf
図１検査検体を採取する皮膚病変

11

2013-

図２皮膚検体の採取方法

局所の⽪膚病変別の検体の採取⽅法❶ ⽔疱が保たれている場合

⽔疱内容液を注射器で吸引して採取する➋ ⽔疱が⾃壊している場合❸ 痂⽪となっている場合

⽔疱内容液及び⾃壊組織をスワブで拭い、スワブごとｽｸﾘｭｰｷｬｯﾌﾟ ﾁｭｰﾌﾞ に⼊れる

痂⽪を採取する

スク リ ュ ーキャ ッ プの
2ml チューブに⼊れる
この⽅法が最もウイルスを検出しやすいことが予想される

⽔疱を切開した場合もこの⽅法を⽤いることができる

12

スク リ ュ ーキャ ッ プのプラ スチッ ク チュ ーブに
痂⽪を ⼊れる

別紙２ サル痘に対する積極的疫学調査実施要領
サル痘はオルソポックスウイルス属に属する、サル痘ウイルスによる感染症である。疫学情報や症状の経過については下記のリンクを参照されたい。
日本ではサル痘は４類感染症であり、これまで報告されたことはない。しかし、2022 年 5 月以降、常在国からの輸入症例以外でのヒト-ヒト感染例の報告が、欧州を中心に複数の国で相次いでいる。接触感染や飛沫感染を主体とする感染経路が考えられているが、国境を越えた交流での感染伝播も報告されているため、今後日本においても、サル痘を疑う患者が報告される可能性がある。そのため、サル痘の発生に備え、迅速かつ円滑な積極的疫学調査を実施できるよう、サル痘に対する積極的疫学調査実施要領を作成した。
（参照）
国立感染症研究所．サル痘とは
https://www.niid.go.jp/niid/ja/kansennohanashi/408-monkeypox-intro.html
厚生労働省．サル痘に関する情報提供及び協力依頼について
https://www.mhlw.go.jp/content/000942303.pdf
国立感染症研究所．アフリカ大陸以外の複数国で報告されているサル痘について(第 1 報)
https://www.niid.go.jp/niid/ja/from-lab/2521-cepr/11166-monkeypox-ra-0524.html
用語の定義
・「患者（確定例）」、「無症状病原体保有者」及び「感染症死亡者の死体」「感染症死亡疑い者の死体」：届出基準を参照のこと
・積極的疫学調査における「疑い例」：下記の全てを満たす者○ 説明困難*な急性発疹**を呈している*水痘、風疹、梅毒、伝染性軟属症、アレルギー反応等のその他の急性発疹を呈する疾患によるものとして説明が困難であることをいう。
**文末参考○ 次の１つ以上の症状を呈している・発熱（38.5℃以上）
・頭痛・背中の痛み・重度の脱力感
・リンパ節腫脹
○ 次のいずれかに該当する・発疹等の発症の 21 日以内にサル痘常在国***に滞在歴があった・発疹等の発症の 21 日以内にサル痘常在国以外のサル痘症例が報告されている国に滞在歴13があり、滞在先で他者との濃厚接触（性的接触を含む。
）があった・発疹等の発症の 21 日以内にサル痘常在国やサル痘症例が報告されている国に滞在歴がある者と日本国内において濃厚接触（性的接触を含む。
）があった者・発疹等の発症の 21 日以内に複数または不特定の者と性的接触があった者***サル痘常在国：ベナン共和国、カメルーン、中央アフリカ共和国、コンゴ民主共和国、ガ
ボン、ガーナ（動物のみで確認）、コートジボワール、リベリア、ナイジェリア、コンゴ共和国、およびシエラレオネ及び南スーダン
・「症例」：届出基準の検査方法等によりサル痘と診断されたもの（「患者（確定例）」「感染症死亡者の死体」「感染症死亡疑い者の死体」「無症状病原体保有者」）及び上記の「疑い例」
・「接触者」：サル痘の患者（確定例）又は疑い例と表 1 に示す接触の状況があった者
表１ 接触状況による感染リスクのレベル
サル痘患者等の接触の状況
創傷などを

寝食をとも

含む粘膜とのにする家族や

接触

同居人

高１）

高２）

正常な皮膚

1ｍ以内の

1m を超えるのみとの接触

接触歴３)

接触歴

中１）

中

低

低

低

適切な
PPE の着

なし

用や感染予
防策

あり

１）サル痘常在国でのげっ歯類との接触を含む
２）寝具やタオルの共有や、清掃・洗濯の際の、確定例の体液が付着した寝具・洋服等との接触を含む
３）接触時間や会話の有無等、周辺の環境や接触の状況等個々の状況から患者の感染性を総合的に判断すること。

調査対象
・積極的疫学調査の対象となるのは、「症例」、「疑い例」及びそれらの「接触者」である。
・接触者は、表１に示す感染リスクのレベルにより、潜伏期間中（患者との最終接触日から 21 日間）は以下の場合に応じて、それぞれ以下の留意点に注意して生活を送るよう協力を求める。
① 感染リスクのレベル：中～高の場合

朝夕 1 日 2 回、注意深く自身の健康をチェックし、サル痘を疑う臨床的特徴（発熱、発疹、リンパ節腫脹、頭痛、筋肉痛・背部痛等）の出現がないかを自己観察する。



健康状態に異常を認めた場合は、直ちに最寄りの保健所に相談をする。

14



感染リスクが高であって、接触者本人の同意が得られた場合は、保健所による積極的な健康状態の確認を検討する。積極的な健康状態の確認を実施する場合は 1 日 1 回実施することが望ましい。対面、電話、SMS、メール、オンライン面接等、使用可能な手段を用いて実施する。



潜伏期間中は、免疫不全者（ステロイド・免疫抑制剤使用、HIV 感染、担がん患者、非代償性腎不全・肝不全等）、妊婦、12 歳未満の小児との接触を可能な限り控える。



他者との寝具、タオル、食器の共用を避ける。

② 感染リスクのレベル：低の場合


健康状態に注意を払い、健康状態に異常を認めた場合は、直ちに最寄りの保健所に相談
をする。

調査内容
・「症例」及び「疑い例」については、基本情報・臨床情報・推定感染源・接触者等必要な情報を収集する。
・「症例」が受診した医療機関が複数あり、当該医療機関を管轄する保健所が複数にまたがる場
合は、それぞれの医療機関内の調査は当該医療機関を管轄する保健所が、保健所間で連携を図りながら実施する。

「接触者」への対応
・潜伏期間中にサル痘の臨床症状を認めた者は、保健所に連絡するよう説明する。保健所は「疑い例」として医療機関の受診、検査が必要か判断をしたうえで、その結果を踏まえ必要な調査と対応を行う。
・無症状の接触者は、サル痘診断のための検査の対象とはならない。
・無症状の接触者の家族、周囲の者（同僚等）については、特段の対応は不要である。

調査時の感染予防策
・症状を呈している疑い例または確定例に対する疫学調査においてはオンラインでの聞取り調査でもよい。対面での疫学調査においては、個人防護具の着脱に慣れた者が担当し、聞取りは適切に個人防護具を着用したうえで行う。
・無症状の接触者に対面調査を行う際、個人防護具の着用は不要である。

その他

15

・接触者の調査については、複数の保健所が関与する場合、初発の「患者（確定例）」の届出受理保健所、「患者（確定例）」の入院医療機関管轄保健所又は接触者の多くが居住する地域を管轄する
保健所が、状況に応じて適宜とりまとめる。保健所において接触者の積極的な健康状態の確認を行う場合は、居住地の管轄保健所又は勤務場所の管轄保健所のいずれかが実施する。
・患者（確定例）及び接触者及びその家族等への対応については、プライバシーや人権の保護、心情に十分に配慮する。公表については、事前に厚生労働省と十分調整を行う。
・調査員は、自身に発熱がないことなど、健康状態に問題がないことを確認した上で調査に携わる。
・「症例」及び「疑い例」の滞在場所等の消毒については、当面、厚生労働省健康局結核感染症課長通知「感染症法に基づく消毒・滅菌の手引きについて」（平成30年12月27日付け健感発第1227第１号
厚生労働省健康局結核感染症課長通知別添）の「痘そう」を参照する。

16参考）サル痘の皮疹の特徴と臨床経過
顔面（95％）、手掌、足底（75％）に好発する。発疹の経過は 10 日程度で、斑点状→小水疱→膿疱→痂皮と経過をたどる。発疹が多く発生する部位として、多い順に、顔 >脚 > 体幹 > 腕 >手掌 > 生殖器 > 足底が挙げられる１。口腔粘膜や結膜、角膜にも発症した例が報告されている。
痂皮は 3 週間は完全に消失しないことがあり、結痂（けつか）が乾燥して痂皮になり、剥がれ落
ちると感染力はなくなる２。

A：小水疱、B, C：手掌、足底の斑点状の皮疹、D：膿疱と爪下病変、E：爪下病変、F, G：小丘疹、
小水疱（文献１）

サル痘と鑑別が必要な発疹性疾患 （文献３ Table1 をもとに感染研で訳）
サル痘

天然痘

水痘

潜伏期間（日）

7-17

7-17

12-14

前駆症状期間（日）

1-4

2-4

0-2

発熱

中等度

重度

軽症またはなし

倦怠感

中等度

中等度

軽症

頭痛

中等度

重度

軽症

リンパ節腫脹

中等度

なし

なし

深さ（直径 mm）

表層～深部(4-6)

深部(4-6)表層(2-4)分布

遠心性（主に）

遠心性

求心性

症状

病変

17

皮疹の外観同一経過段階にある同一経過段階にある

様々な経過段階にあため個々の皮疹のため個々の皮疹のる皮疹が混在する

外観は均一

外観は均一

14-21

14-21

6-14

よくある

よくある

まれ

落屑までの時間（日）手掌や足底病変参考文献

１． Adler H et al, 2022 / CC BY-NC-ND 4.0 /https://www.thelancet.com/journals/laninf/article/PIIS1473-3099(22)00228-6
２． Nigeria Center for Disease Control.
https://ncdc.gov.ng/themes/common/docs/protocols/96_1577798337.pdf
３． Nalca A et al, Clin Infect Dis. 2005 Dec 15;41(12):1765-71. doi: 10.1086/498155. Epub
2005 Nov 11. PMID: 16288402.

18病原体検出マニュアル

サル痘ウイルス

第1版
令和 4 年 6 ⽉

1 / 18

⽬次
１．

概説

２．

検体の採取と保存

３．

検体の処理等3-1.検体処理時の防護3-2.検体の処理

４．

病原学的検査4-1.リアルタイム PCR
4-2.ウイルス分離
4-3.電⼦顕微鏡法によるオルソポックスウイルス感染症の検査（参考検査）

５．

ポックスウイルス感染症の診断基準

６．

連絡先

2 / 18

１． 概説サル痘はポックスウイルス科オルソポックスウイルス属に分類されるサル痘ウイルスによる感染症である。オルソポックスウイルス属には痘そうウイルス、⽜痘ウイルス、ワクシニアウイ
ルス、伝染性軟属腫ウイルス（⽔いぼの原因ウイルス） も分類されている。いずれも DNA をゲノムとしてもつ。サル痘ウイルスは遺伝⼦系統でコンゴ盆地型と⻄アフリカ型に分けられ、前者の⽅が重症化しやすい。
サル痘ウイルスは 1958 年にワクチン製造⽤のサルのコロニーで痘そう様症状を⽰す疾患が発⽣した際に初めて認識されこの名前が付けられたが、⾃然宿主はサルではなくアフリカのリス等の齧⻭類ではないかと考えられている。ヒトのサル痘は 1970 年に初めて（現）コンゴ⺠主共和国で認識され、これまで主にアフリカ中央部および⻄部の諸国で発⽣している。2003 年以降、欧⽶等で散発的に発⽣が認められるがアフリカの発⽣地域からの輸⼊事例（動物を介する場
合もある）である。サル痘は感染動物や感染者との接触、あるいはそれらに由来する⾶沫物や⾎液、体液に汚染されたもの（寝具等）との接触等で伝播する。輸⼊事例からの⼆次感染も⽣じう
るが、これまではヒトからヒトへの感染は稀であり感染の連鎖はすぐに途絶えると考えられていた。しかし 2022 年 5 ⽉以降、欧⽶を中⼼に輸⼊事例や輸⼊事例からの⼆次感染ではないと考えられる症例が短期間に数百⼈以上報告され、ヒトからヒトへの感染は想定されていた以上に⽣じやすい可能性が指摘されている。遺伝⼦系統では⻄アフリカ型に分けられる。
サル痘の潜伏期間は 5-21 ⽇（多くは 7-14 ⽇）である。発熱、頭痛、筋⾁痛、背痛、リンパ節腫脹等で発症し、その後発疹する。発疹は通常全⾝性で、顔⾯から始まり全⾝に広がる。発疹は⽔疱、膿疱、痂⽪とほぼ同調して変化し脱落する（痂⽪にも感染性ウイルスが含まれる）。2 週
から 4 週で病気が進⾏する。致命率は約 10%以下とされ、⼦供、妊婦、免疫不全の状態にある者では致命率は⾼まる。痘そうと類似点は多いが、重症度や致命率はサル痘では低く、またリンパ節腫脹は通常痘そうでは⾒られない。2022 年 5 ⽉以降の欧⽶を中⼼とした発⽣では死亡事例は報告されておらず、また発疹が⽣殖器等に限られるケースが多く認められている。
サル痘の発疹のような所⾒はオルソポックスウイルス属の他の複数のウイルスやバリセロウ
イルス属の⽔痘帯状疱疹ウイルス（ゲノムは DNA）の感染などでも認められ、迅速な鑑別のため病原学的検査（遺伝⼦検査）ではこれら複数を標的としたものを並⾏して調べることが勧められる。場合によっては国⽴感染症研究所へ相談あるいは精密検査の依頼をすべきである。⽔痘帯状疱疹ウイルスによる発疹の所⾒はポックスウイルスによるものと明らかに異なる部分があり、むしろ⽔痘が強く疑われる場合には⽔痘の病原体検出マニュアルを参照されたい。
なお、オルソポックスウイルス属のウイルスの抗原性は似通っているため、サル痘の実験室診
断を⾎清学的に⾏なうことは現時点では困難である。また、発痘部位の検索に関して、以前は免疫組織化学法あるいは電⼦顕微鏡法も検査法として挙げられていたが、網羅的スクリーニングが可能である⼀⽅で特異性には⽋き、技術と経験を要するため、これらの⽅法は参考検査の位置付けである。免疫組織化学法や電⼦顕微鏡法による検査で陽性の場合はオルソポックスウイル
ス感染症との診断にとどめる。

3 / 18

２． 検体の採取と保存
サル痘の実験室診断（病原学的検査）には⽔疱、膿疱、痂⽪等の⽪膚病変（発痘部位）が最も適する。⽪膚病変は病期（潜伏期及び前駆期 → 丘疹期及び紅斑期 → ⽔疱期 → 膿疱期 → 痂
⽪期 → 回復期）により性状が変化していき、⽔・膿疱の⽪（上蓋）、⽔・膿疱内容物、⽔・膿疱内部のスワブ、痂⽪が検査に適している。咽頭スワブも⽤いられることがあるが、検出感度は⽪膚病変に劣ると考えられており、検査陰性の結果の解釈には注意が必要である。また、⾎液からもウイルスが検出される可能性があるがウイルス⾎症は初期に⼀時的に現れるのみであり、⼀般的に診断⽬的の検査には不向きと考えられている。また、ウイルス検査以外の診療⽬的で⽪膚病変の⽣検が実施された場合、ホルマリン固定パラフィン包埋検体を⽤いた検査も可能である。その場合の検査については、国⽴感染症研究所 感染病理部に問い合わせること。実験室診
断のための具体的な採材の材料や⽅法、その保存⽅法については表 1 と図 1 を参照のこと。
表１. 検査に使⽤する検体
優先

分類

順位

検体種

採取⽅法

保管⽅法

⽣理⾷塩⽔（もしくは PBS）を
0.1〜0.2ml ⼊れた注射針(26Ｇ)付きの１ml の注射器を疱膜から挿⼊して、2〜3 回ポンピングして内容液を採取。

滅菌スクリューキャップチ
ューブ（2ml 以下）等に内容液を⼊れて密栓。冷蔵保管。

病変内部のウイルスをスワブに吸着させるために病変内部を強く擦り、内容液・浸出液をスワブに吸着させる。

スワブをウイルス輸送⽤培地(Viral Transport
Medium, VTM)に浸して密封。冷蔵保管。
スワブを溶液に浸さず密封しドライスワブのまま冷蔵保管でも良い。

痂⽪

ピンセットを⽤いて痂⽪を採取

滅菌プラスチックチューブに⼊れ密栓。冷蔵保管。

⽔疱蓋・膿疱上蓋

ピンセットと先の丸い鋏を⽤いて⽔疱・膿疱の上蓋を剥がして採取

滅菌プラスチックチューブに⼊れ密栓。冷蔵保管。

ウイルス検査以外の診断⽬的で⽪膚病変の病理組織検査が実施された場合は、当該検体を病原体検査に使⽤することが可能

常法に則り、ホルマリン固定パラフィン包埋し、常温保管。

常法に則り採取

スワブを VTM に浸して密封。冷蔵保管。
スワブを溶液に浸さず密封しドライスワブのまま冷蔵保管でも良い。

⽔疱液・膿疱液

⽪膚病変・ ２箇所以上の⽪膚病
変から採取。
・ 同じ種類の検体は 1
つのチューブに混合しても構わないが、病変部スワブ（⽔疱・膿疱内部）異なる種類の検体を１

混合しない。

・ 適切な検体採取が実施されたかどうかの判断のため、検体採取前の病変部の⾁眼
写真と検体採取時の⼿技の詳細について
検体送付時に添付す（可能であれば採取）ることが望ましい。

⽪膚⽣検検体⾮⽪膚病変
・ ⽪膚病変に加えて採２取を検討しても良い

咽頭スワブ＊

が、本検体のみでの検査は原則実施しない。

4 / 18

＊ 咽頭スワブ検体でもサル痘ウイルスが検出されればサル痘と診断可能であるが、⽪膚病変に⽐べて検出感度が低く、検査陰性でも感染を否定できないことに注意する。

【検体採取時の注意事項】
全ての検体について、採取時には、標準予防策に加えて、⾶沫やエアロゾル感染の予防をする。
具体的には、⻑袖ガウン、⼿袋、眼の防護具および N95 マスクを含む個⼈防護具を適切に着⽤し実施すること。状況に応じて、靴カバーやキャップの着⽤も考慮する。検体採取には原則
ディスポーザブルの器具を⽤いる。使⽤後の器具は汚染を広げないように適切に廃棄⼜は処理する。また、検体採取を⾏った診察室等は、リネン類の交換を含め、接触⾯の清拭などの清掃を⾏う。清掃担当する者も適切な個⼈防護具の着⽤は必須である。
採取後の検体輸送については、「感染性物質の輸送規制に関するガイダンス

2013-2014 版

国⽴感染症研究所」を参照のこと。
https://www.niid.go.jp/niid/images/biosafe/who/WHOguidance_transport13-14.pdf

図 1 検査検体を採取する⽪膚病変検査に使⽤する⽪膚病変● ⽔疱・膿疱

蓋
感染細胞
底

● 痂⽪

感染細胞が中に閉じ込められている治癒過程でここから剥げ落ちる

5 / 18図 ２ ⽪膚検体の採取⽅法

局所の⽪膚病変別の検体の採取⽅法❶ ⽔疱が保たれている場合

⽔疱内容液を注射器で吸引して採取する➋ ⽔疱が⾃壊している場合❸ 痂⽪となっている場合

⽔疱内容液及び⾃壊組織をスワブで拭い、スワブごとｽｸﾘｭｰｷｬｯﾌﾟﾁｭｰﾌﾞに⼊れる

痂⽪を採取するスクリューキャップの
2ml チューブに⼊れる
この⽅法が最もウイルスを検出しやすいことが予想される

⽔疱を切開した場合もこの⽅法を⽤いることができる

6 / 18スクリューキャップのプラスチックチューブに痂⽪を⼊れる

３． 検体の処理等
3-1. 検体処理時の防護
検体処理は BSL2 にて⾏ない、更に個⼈防護具を強化して⾏なうことが望まれる（特に痘そうワク
チンを受けていない者が作業を⾏なう場合には強く推奨される）。検体は安全キャビネット内で取扱
い、操作中は標準的な個⼈防護具に加えタイベックスーツまたは⻑袖ガウン（⽔を通さない/通しに
くい背⾯開き型）、⼿袋（2 重）、マスク（サージカルマスクで良い）、キャップ、そして⽬の防護具を着⽤すること等が望まれる。

3-2.検体の処理
3-2-1.⽔疱（膿疱）内容物の場合
3-2-1-1.内容物全量をスクリューキャップ付きの 1.5mL チューブ、⼜はそれと同等のチューブに移動させる。ここに適量の PBS（⽣理⾷塩⽔でも可、量は 500µL 等）を添加しピペットなどを⽤いて混合する。その後 2000 x g で三分間遠⼼した後上清を各種検査（PCR 検査、ウイルス分離、電顕等）に供する。ペレットおよび上清の残余はディープフリーザーで保存する。
3-2-3.⽔疱（膿疱）内容物スワブの場合
3-2-3-1.適量の PBS（⽣理⾷塩⽔でも可、量は 500µL 等）が⼊った 1.5mL チューブにスワブを⼊れ、付着物を浮遊させる。その後 2000 x g で三分間遠⼼した後上清を各種検査（PCR 検査、ウイルス分
離、電顕等）に供する。ペレットおよび上清の残余はディープフリーザーで保存する。
3-2-4.⽔疱、膿疱、痂⽪の場合
3-2-4-1.⽔疱、膿疱、痂⽪を適量の PBS（⽣理⾷塩⽔でも可、量は 500µL 等）で適度にほぐす。例
えばバイオマッシャーII（写真参照）を⽤いる場合、添付の撹拌棒を⽤い 10 回程度⼿動で擦るようにしてほぐす。組織⽚が完全には崩れないことが多いが構わない。ホモジナイザー等の機器を⽤いるとエアロゾルを発⽣する可能性があるので⽤いないこと。

7 / 18

バイオマッシャーII

3-2-4-3. 2000 x g で三分間遠⼼した後上清を各種検査（PCR 検査、ウイルス分離、電顕等）に供する。ペレット（組織⽚）および上清の残余はディープフリーザーで保存する。
3-2-4-4. 検体処理に使⽤した機材の消毒
サル痘ウイルスはエンベロープを有し、⼀般的な消毒法であるアルコール（消毒⽤アルコール）、
0.5％次亜塩素酸ナトリウム、ホルマリン、紫外線、オートクレーブによって、容易に不活化される。
検体処理時に使⽤した機材の消毒を適切に⾏い、処理後の検体から⽣じた廃棄物、使い捨てのもの
はオートクレーブバッグに回収後オートクレーブ処理をする。

8 / 18

4． 病原学的検査
4-1.リアルタイム PCR
本病原学的検査は⼆種類のリアルタイム PCR で⾏う。1 つはオルソポックスウイルス属ウイルス全般（サル痘ウイルス、⽜痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ラクダ痘ウイルス、ヤギ痘ウイ

ルス、痘そうウイルス）の A3L 遺伝⼦または H2R 遺伝⼦をターゲット領域とする SYBR Green法を⽤いた系（4-1-3 参照）、もう⼀つは 2 ⾊の蛍光プローブを⽤いたサル痘ウイルスの F3L 遺伝⼦（FAM による検出）と⽔痘帯状疱疹ウイルスの ORF38 遺伝⼦（VIC による検出）をターゲット領
域とするマルチプレックス系（4-1-4 参照）である。⼆種類のリアルタイム PCR 両⽅の検査結果を元に判定を⾏うが、これらは反応条件が異なるため 2 台の機器で並⾏して、あるいは個別に⾏なう必要がある。
4-1-1.必要な試薬や機器（同等品で代替可）
核酸抽出キット（Roche High Pure Viral Nucleic Acid Kit 、Qiagen QIAamp DNA Mini Kit 等）、
分⼦⽣物学⽤エタノール、分⼦⽣物学⽤ DW、PCR ⽤チューブ、PCR キット（QuantiTect Probe
PCR Kit 等）、TE（10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH8.0）、リアルタイム PCR 装置、プライマー（下記参照）、マイクロピペット
4-1-2. 検体からの核酸抽出
検体の処理については 3-2 を参照。必要液量を核酸抽出に供する。核酸抽出キットのマニュアルに従い、検体中の核酸を抽出する。特に⽪膚病変が検体の場合は吸光度計などで濃度測定を⾏い、抽
出液中に核酸が存在することを確認する。精製した核酸を直ちにリアルタイム PCR に供しない場合
は-80℃で保管する。
4-1-3.オルソポックスウイルス属ウイルス全般の A3L 遺伝⼦または H2R 遺伝⼦をターゲット領域とするリアルタイム PCR（SYBR Green 法）
4-1-3-1. プライマーミックスの作製
後述の PCR 反応液を作製する際に使⽤する 10x プライマーミックスを作製する。ここでは 100
reaction 分の調製を⽰す。
適宜調製量を増減しても良い。
直ちに使⽤しない場合は-80℃で保管する。
年単位での保管が可能である。
A3L
プライマー原液 (全て 50µM)

液量（µL）PCR 反応液中の終濃度（µM）

A3L f212.5

0.25

A3L r3

12.5

0.25

H2O

225

合計

250
9 / 180.25 eachH2R
プライマー原液 (全て 50µM)

液量（µL）PCR 反応液中の終濃度（µM）

H2R f312.5

0.25

H2R r1

12.5

0.25

H2O

225

合計

250

0.25 each

4-1-3-2. Standard DNA 希釈列の準備
4-1-3-2-1. Standard DNA 希 釈 列 ( 陽 性 コ ン ト ロ ー ル DNA 希 釈 列 ) 、 Non-Template Control（Nuclease-free water）を氷上に⽤意する。
4-1-3-2-2. 配布する Standard DNA（共通スタンダード。サル痘、⽔痘帯状疱疹ウイルス⽤スタンダ
ードと同じものである）は痘そうウイルス A3L 遺伝⼦と H2R 遺伝⼦の配列からなる Standard DNA
を 3µL 中に 105 コピー含む。従って Standard DNA 原液 10µL を 90µL の TE で希釈すると溶液 3µL
中に 104 コピーDNA が存在することになる。同様に Standard DNA 10µL を 90µL の TE で希釈する
操作を繰り返す。これにより、Standard DNA 希釈列を作製する（3µL 中に 101 コピー含む溶液まで作製する。104 から 101 まで）。リアルタイム PCR では、この 104 から 101 コピーまでを鋳型として使⽤する。
作製した 104 から 101 コピーの希釈列については冷蔵保存(-80℃保存が望ましい)であれば 1 週間使⽤が可能である。
4-1-3-3. リアルタイム PCR 反応液の準備
リアルタイム PCR 反応液を調製する。QuantiTect SYBR Green PCR Kit を⽤いる場合を⽰す（1 サンプルあたり、必要な本数分＋α で⽤意）。
A3L 遺伝⼦と H2R 遺伝⼦は、反応液の液量や PCR サイクルは同じだが別々の反応系で検出するた
め、実際にはそれぞれ別のチューブに⽤意することになる。
2x QuantiTect SYBR PCR Mix

12.5µL10x プライマーミックス

2.5µL

H2O

7µL

Total

22µL

0.2 ml PCR ⽤チューブに 22µL ずつ反応液を⼊れる。
4-1-3-4. Standard DNA、Non Template Control、検体の添加
4-1-3-2 で作製した Standard DNA、Non Template Control（ Nuclease-free water）、または検体 3µLをリアルタイム PCR 反応液に加える（計 25µL）。
4-1-3-5. PCR チューブにフタをする。
10 / 18

4-1-3-6 ウェルの壁についている反応液をスピンダウンし、サーマルサイクラーにセットする。
4-1-3-7. リアルタイム PCR 装置の設定
下記の条件設定後ランを開始する。
任意で 45 サイクルの PCR 反応後に Tm 値を求めるためのプログラムを挿⼊しても良い。
サンプル、
スタンダードの Tm 値を求めることはプライマーダイマーなどの⾮特異的な PCR 産物を識別する⼀助となる。
Temp

Time

Step

95℃

15 min PCR initial activation

95℃

15 sec53℃

30 sec72℃

30 secstep cycling total 45 cycles
40℃

30 secCooling

4-1-3-8. 結果の解釈について
40 サイクル以内に Standard DNA の 102 コピーのシグナルの⽴ち上がりが確認されれば本検出系は成⽴しているとみなす。A3L 遺伝⼦と H2R 遺伝⼦のどちらもシグナルの⽴ち上がりが認められた場
合に陽性と判断する。 ⽚⽅のみシグナルが確認された場合は国⽴感染症研究所ウイルス第⼀部へ連絡する。
参考 プライマー配列、Standard DNA の配列
リアルタイム PCR のターゲット領域とプライマーの配列
Target gene
A3L
H2R

プライマー/プローブ
名Sequence (5'-3')A3L f2TTGTAACGATGATGATGCGG

A3L r3CGAATGCCATAGAATAAATATCCTTGG

H2R f3

CGGTTAACGATTGGAAATCATTAACGG

H2R r1

CCTCGCCTAATAGCTTGCG

11 / 18

Standard DNA 溶液中には以下の⼆種類の配列を持つ DNA 断⽚が含まれている。プライマー領域を下線で⽰す。
Standard DNA

Sequence (5'-3')TTGTAACGATGATGATGCGGTAGATCCCCATCTAATGAAGATTATTCATACTGGATGCTCTCAAGTTATGACAGATGAGGAACAGATATTGGCT

A3L (278 bp)

TCTATTTTGTCTATAGTTGGATTTAGACCTACGTTGGTTTCTGTGGCTAGACCTATAAACGGCATCAGTTACGATATGAAACTTCAGGCGGCACCATACATAGTTGTTAATCCTATGAAGATGATCACAACATCCGACAGTCCGATTTCTATCAATTCCAAGGATATTTATTCTATGGCATTCGCGGTTAACGATTGGAAATCATTAACGGATAGCAAAACAAAATTAGAA

H2R (178 bp)

AGTGATAGAGGTAAACTTCTAGCCGCTGGTAAGGATGATATATTCGACTTCAAATGTGTGGATTTCGGCGCCTATTTTATAGCTATGCGATTGGATAAGAAAACATATCTGCCGCAAGCTATTAGGCGAGG

4-1-4. サル痘ウイルスの F3L 遺伝⼦（FAM による検出）と⽔痘帯状疱疹ウイルスの ORF38 遺伝⼦（VIC による検出）をターゲット領域とするリアルタイム PCR（マルチプレックス系）
4-1-4-1．プライマー・プローブミックスの作製
後述の PCR 反応液を作製する際に使⽤する 25x プライマー・プローブミックスを作製する。ここでは 100 reaction 分の調製を⽰す。適宜調製量を増減しても良い。直ちに使⽤しない場合は-80℃で保管する。年単位での保管が可能である。
プライマー/プローブ原液

液量（µL）PCR 反応液中の終濃度（µM）

MPXV F3L upper

10

0.2

MPXV F3L lower

10

0.2

VZV ORF38 upper

10

0.2

VZV ORF38 lower

10

0.2

MPXV F3L probe (FAM)

10

0.2

VZV ORF38 probe (VIC)

10

0.2

H2O

40

合計

100

(全て 50µM)

0.2 each

4-1-4-2. Standard DNA 希釈列の準備
4-1-4-2-1. Standard DNA 希 釈 列 ( 陽 性 コ ン ト ロ ー ル DNA 希 釈 列 ) 、 Non-Template Control（Nuclease-free water）を氷上に⽤意する。

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4-1-4-2-2. 配布する Standard DNA （共通スタンダード。オルソポックスウイルス属ウイルス全般
⽤スタンダードと同じものである）はサル痘ウイルス、⽔痘帯状疱疹ウイルスの Standard を 3µL 中に 105 コピー含む。従って Standard DNA 原液 10µL を 90µL の TE で希釈すると溶液 3µL 中に 104
コピー存在することになる。
同様に Standard DNA 10µL を 90µL の TE で希釈する操作を繰り返す。
これにより、Standard DNA 希釈列を作製する（3µL 中に 101 コピー含む溶液まで作製する。104 から 101 まで）
。リアルタイム PCR では、この 104 から 101 コピーまでを鋳型として使⽤する。
作製した 104 から 101 コピーの希釈列については冷蔵保存(-80℃保存が望ましい)であれば 1 週間使⽤が可能である。
4-1-4-3. リアルタイム PCR 反応液の準備
リアルタイム PCR 反応液を調製する。QuantiTect Probe PCR Kit を⽤いる場合を⽰す（1 サンプル
あたり、必要な本数分＋α で⽤意）。
2x QuantiTect probe PCR Mix

12.5µL

25x プライマー・プローブミックス

1.0µL

H2O

8.5µL

Total

22µL

0.2 ml PCR ⽤チューブに 22µL ずつ反応液を⼊れる。
4-1-4-4. Standard DNA、Non Template Control、検体の添加
5-4-2.で作製した Standard DNA、Non Template Control（H2O）、または検体 3µL をリアルタイム
PCR 反応液に加える（計 25µL）。
4-1-4-5.PCR チューブにフタをする。
4-1-4-6.ウェルの壁についている反応液をスピンダウンし、サーマルサイクラーにセットする。
4-1-4-7. リアルタイム PCR 装置の設定
下記の条件設定後ランを開始する
Temp

Time

Step

95℃

10 min PCR initial activation

95℃

15 sec63℃

60 secstep cycling total 45 cycles
40℃

30 secCooling

4-1-4-8.結果の解釈について
40 サイクル以内に Standard DNA の 102 コピーのシグナルの⽴ち上がりが確認されれば本検出系は成⽴しているとみなす。その時、検体については 40 サイクル以降にシグナルが⽴ち上がっても陽性
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と判断する。サル痘ウイルス DNA は FAM による蛍光、⽔痘帯状疱疹ウイルス DNA は VIC による蛍光が検出される。 FAM のシグナル増幅が認められた場合にはサル痘ウイルス陽性と判断する。
VIC のシグナル増幅が認められた場合には⽔痘帯状疱疹ウイルス陽性の可能性が⾼いため、国⽴感染症研究所ウイルス第⼀部第四室（ヘルペス担当）へ連絡し陽性と⾒做すかの判断を確認する（本法は⽔痘の病原体検出マニュアルと⽅法が異なっており確認を要するため）。
なお、オルソポックスウイルス属 PCR（4-1-3）が陽性、サル痘・⽔痘帯状疱疹 PCR（4-1-4）が陰性の場合には、サル痘以外のオルソポックスウイルスの可能性があるため、国⽴感染症研究所ウイルス第⼀部第⼀室へ連絡する。
参考 プライマー・プローブ配列 Standard DNA の配列
サル痘 F3L と⽔痘 ORF38 を検出するリアルタイム PCR のターゲット領域とプライマー/プローブの配列
Target geneサル痘 F3L

⽔痘 ORF38

プライマー/プローブ

Sequence (5'-3')名
MPXV F3L upper

CATCTATTATAGCATCAGCATCAGAMPXV F3L lower

GATACTCCTCCTCGTTGGTCTACMPXV F3L probe

FAM-TGTAGGCCGTGTATCAGCATCCATT-MGB

VZV ORF38 upper

AAACCGCACATGATAACGCVZV ORF38 lower

GATTAGGACCATCCCCCGVZV ORF38 probe

VIC-ACAATGAGTAGTGGCTTTATGGCGAG-MGB

Standard DNA 溶液中には以下の⼆種類の配列を持つ DNA 断⽚が含まれている。プライマー領域は下線、プローブ領域は⼩⽂字で⽰す。
Standard DNA

Sequence (5'-3')サル痘ウイルス GATCCATCTATTATAGCATCAGCATCAGAATCtgtaggccgtgtatcagcatccatt
F3L (79 bp)
⽔痘ウイルス
ORF38 (89 bp)

GTCGTAGACCAACGAGGAGGAGTATCTCGAGATCTAAATATAACCTCGTCCGCAAAAAAAACCGCACATGATAACGC
GCGGATACaatgagtagtggctttatGGCGAGGATCCCAAATGTCCATTACCCGGGGGATGGTCCTAATCTTCGA

4-2.ウイルス分離
4-2-1. T25 フラスコにサル痘ウイルス感受性細胞（Vero 細胞、VeroE6 細胞、LLC-MK2 細胞、BSC40 細胞等）を subconfluent にしたものを⽤意する。
4-2-2.培養上清を DMEM に FCS を 2%加えた培地（DMEM-2FCS）5mL と置換する。培地としては抗⽣物質（ペニシリン、ストレプトマイシン）や抗真菌剤（アムホテリシン B）等が添加されたも14 / 18のを推奨する。
4-2-3. 3-2（検体の処理）で得られたウイルス分離⽤の材料（100µL など）を 4-2-2 の培養細胞に添加し、1-3 時間程度培養する。バクテリア等のコンタミネーションを低減させるため、ウイルス分離
⽤の材料をあらかじめ遠⼼（10000g, 10 分等）し、その上清を細胞に添加しても良い。
4-2-4.上清を除き、５ｍL の DMEM-2FCS あるいは PBS で 2 回程度細胞を洗浄する。
4-2-5. ５ｍL の DMEM-2FCS 存在下で細胞を最⼤ 7 ⽇間培養する。
4-2-6.細胞変性効果が認められた場合あるいは 7 ⽇間培養した後、培養上清の⼀部より 4-1（リアル
タイム PCR）で⽰した⽅法でサル痘ウイルスの遺伝⼦の存在の有無を調べる。
4-3.電⼦顕微鏡法によるオルソポックスウイルス感染症の検査（参考検査）
4-3-1.必要な試薬・器具等
マイクロチューブ、ペレットミキサー、マイクロピペット、ピペットチップ、チップ捨て、蒸留⽔、
phosphate buffer (pH7.2, 0.01M)、固定液（2.5%GA 1%PFA in 0.1MPB）、濾紙（⼩⽚）、プラステ
ィックディッシュ、ピンセット、適当な⼤きさに切ったパラフィルム
安全キャビネット、遠⼼機、透過型電⼦顕微鏡）
4-3-2.グリッドの準備
200-400 メッシュのグリッド：コロジオン+カーボン膜処理済み、使⽤時にイオンスパッタ装置による親⽔化処理を⾏う
4-3-3.染⾊液の準備
2% sodium phosphotungstate(pH7.0)：DW20ml にリンタングステン酸 1g を溶かし、0.1N KOH30ml
をゆっくり加え濾過して使⽤。あるいは酢酸ウランを使⽤してもよい。
4-3-4.検体の準備
ウイルス分離材料⽤に作製した乳剤上清の⼀部（0.05 mL 程度）を使⽤する（例：マイクロチューブ
中で検査材料と phosphate buffer の乳剤を作製する。径 5mm のポックに対して 0.3-0.5ml）。不活化を⽬的として固定液（例：2.5%GA 2%PFA in 0.1MPB）を等量混合する。室温放置 15 分以上。い
ずれも安全キャビネット内で実施する。
4-3-5.染⾊⼿順（いずれも安全キャビネット内で実施する）
4-3-5-1. 固定済みのサンプルを 5,000 rpm, 1 分以上遠⼼し、材料の上清を採取する（サンプルによっては上清を２−８倍希釈し、標本を作製した⽅がよい。サンプルによって適宜⼯夫する）。
4-3-5-2. パラフィルムに材料上清、蒸留⽔、染⾊液（PTH あるいは酢酸ウラン）、蒸留⽔の順番で各 10-30 µL の⽔滴を準備する。
4-3-5-3. 材料上清の⽔滴に親⽔化処理済みグリッドを裏返しに置き、20-30 秒以上放置する。
4-3-5-4. ピンセットでグリッドを⽀持し、濾紙で余分な液を吸⽔する。
4-3-5-5. 次に蒸留⽔の⽔滴にグリッドを裏返しに乗せ、すぐに余分な⽔を吸い取る。
（この過程でエンベロープウイルスはエンベロープが壊れ、染⾊液が内部にはいり内部構造が明確になる。
）
4-3-5-6. 続いて染⾊液の⽔滴に 10-20 秒インキュベートする。過染に注意すること。
4-3-5-7. ピンセットでグリッドを⽀持し濾紙で余分な液を吸⽔する。
4-3-5-8. 10 分間 UV 照射(254nm)し殺菌処理を施す。表・裏いずれも 10 分間照射する。
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4-3-5-9. グリッドが乾燥したら透過電⼦顕微鏡で観察を⾏う。
4-3-6.評価⽅法
ウイルス粒⼦はリンタングステン酸によりネガティブに染⾊され、250-300nm の⼤型の粒⼦として観察される。オルソポックスウイルスは増殖ステージによって形態が異なり（M 型、C 型）、エンベ
ロープで覆われている場合と壊れている場合がある。特異性には⽋けるため、オルソポックスウイ
ルス粒⼦が検出された場合はオルソポックスウイルス感染症との診断にとどめる。パラポックスウ
イルスやヘルペスウイルスなどと鑑別が可能である。
参考⽂献 https://www.cdc.gov/smallpox/pdfs/negative-stain.pdf

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5． サル痘の診断基準
次のいずれかが満たされた場合、サル痘と診断する。
・PCR 法によるサル痘ウイルスの遺伝⼦の検出・分離・同定によるサル痘ウイルスの検出
いずれの場合もより精密な検査を⾏なうため国⽴感染症研究所ウイルス第⼀部第⼀室へ連絡する。
なお、電⼦顕微鏡法による検査ではオルソポックスウイルス感染症との診断にとどめる。

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6． 連絡先国⽴感染症研究所ウイルス第⼀部第⼀室
TEL: 042-848-0771（代表）
国⽴感染症研究所感染病理部
TEL: 03-5285-1111（代表）
国⽴感染症研究所ウイルス第⼀部第四室
TEL: 03-5285-1111（代表）

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