福岡県保健環境研究所年報第29号，128−130，2002

資料
市販殻付き貝類中の腸炎ビブリオ汚染実態調査
長野英俊，村上光一，世良暢之，堀川和美，高田智
市場に流通している殻付きのアサリ,サザエ，はまぐり，シジミ等の計20検体について，腸炎ビブリオ血清型 O3:K6及び TDH（耐熱性溶血毒）産生腸炎ビブリオの汚染実態を調査した．その結果，20検体中18検体から腸炎ビブリオを分離したがすべて TDH を産生しない非病原性株であった．MPN3管法での菌数測定の結果，シジミから1.1×105CFU ／10ｇの菌量を検出した．さらにサザエ，アサリ，トコブシの3検体から PCR で TDH 遺伝子が検出されたが，これらの検体から血清型 O3:K6及びその他のTDH 産生腸炎ビブリオを分離することができなかった．
［キーワード :１

腸炎ビブリオ，耐熱性溶血毒，殻付き貝類

はじめに

２

腸炎ビブリオは海水中に広く存在し，海水温が20℃］

方法

２・１

検体

を超えると検出される環境細菌であり，この菌の一部が平成13年10月16日から30日にかけて，県生活衛生課を産生する TDH（耐熱性溶血毒）がヒトへの病原性を示

通じ県内3保健所（筑紫，久留米，田川）に設置されてし食中毒を引き起こすと考えられている．この菌の生息いる食品衛生広域専門監視班に検体の買い上げを依頼

環境から明らかなように夏期に海域で採取された魚介類

し，県内で市販されている殻付きの貝類を20検体購入しはほとんどこの菌の汚染を受けていると考えられていた．検体の種類及び産地海域を表1に示す．

る．このことから腸炎ビブリオ食中毒は夏期に多く発生

なお検体は，殻付きの物はむき身として供試した．

し，魚介類の生食習慣のある本邦において重要な食中毒

表1細菌であり汚染の実態解明が急務である．1994年までは

検体名

産地海域

食中毒事例から分離される血清型は O4:K8が主流であっサザエ

豊前海，響灘，玄海灘，県外産

たが ，1996年頃から分離される血清型に変化がみられ，アサリ

豊前海，有明海，県外産

それまでの主流であった O4 :K8から O3 :K6へと変化しマテ貝

豊前海た．この分離血清型の変化により1998年には食中毒発生

いも貝

豊前海事例がサルモネラを抜き第1位となった．

生カキ

県外産

現在，腸炎ビブリオ食中毒から分離される主要な原

はまぐり

県外産

因血清型であるこの O3:K6は遺伝的に近縁の菌が何らか

トコブシ

県外産の要因により急速に広がったと考えられているが，そのシジミ

有明海，県外産原因は判明していない ．さらに従来からこの O3 :K6は

タイラギ

有明海

１）

2）

検体名及び産地海域

患者からは高頻度に分離することができるが，食品や環２・２境からの分離は極めて低いことが実情である．

検査方法

今回，腸炎ビブリオ O3 :K6及び食中毒の原因となる検査法は研究班で示された検査法で実施した.（図1）

TDH 産生腸炎ビブリオの魚介類中の汚染実態を把握す

腸炎ビブリオO3:K6及びTDH産生腸炎ビブリオを分離するたるため，平成13年厚生科学研究「食品中の微生物汚染実

め免疫磁気ビーズ及び酵素発色基質を利用したクロモアガ態・挙動の解析」において高感度な検出法を用いて国立ー・ビブリオを用いた定性法，菌数測定としてMPNを、TDH感染症研究所と共同で調査を行った．なお本資料は福岡

産生腸炎ビブリオの菌数測定のためTDH遺伝子をＰＣＲで県で実施した検査結果について報告する．

確認する方法を用いた．

福岡県保健環境研究所（〒818‑0135 太宰府市大字向佐野39）- 128 -

２・２・１ 定性法

３

結果

検体25ｇにアルカリペプトン水225ｍｌを加え軽く手調査した20検体の MPN 法 での腸炎ビブリオ菌数，揉みし（定性原液 ），35〜37℃で18時間培養した ．（1次TDH 産生腸炎ビブリオの菌数（TDH-MPN）を表2に，TDH増菌 ），1次増菌液1 ml を10 ml の食塩ポリミキシンブイ

遺伝子の確認された3検体の生産海域及び結果を表3に示ヨンに加え培養した（2次増菌）．更に，1ml を食塩ポリす．

ミキシンブイヨンで6時間培養後（3次増菌 ），その1 ml

表2 腸炎ビブリオ検出結果

を腸炎ビブリオ K6に対する免疫磁気ビーズ（デンカ生検体数

腸炎ビブリオ菌数 （ /10g）

TDH-MPN（ /10ｇ）

研）を用いて最終的に0.1ml に濃縮しクロモアガー・ビ

サザエ

63未満~750

ND 〜15ブリオ（関東化学）に塗抹した．培養後，腸炎ビブリオとアサリ

43.6~1100

ND 〜15思われるコロニーを，ブドウ糖及び乳糖，白糖の分解性，

マテ貝

143ND

さらに食塩要求性，耐性を確認後同定した．さらに腸炎

いも貝

1240

ND

ビブリオと同定された株について TDH 遺伝子の保有を生カキ

23未満~460NDPCR で確認した．

はまぐり

27.3~23

ND

２・２・２

トコブシ

17500

3未満

調整した定性原液を，10 ml のアルカリペプトン水にシジミ

23.6~1.1×10５

ND

各10ml，1ml，0.1ml，0.01ml，0.001ml 加えた後（MPNタイラギ

124000ND

MPN法

3管法，5段階），定性法と同様に3次増菌まで行い，各試ND 不検出

表3 TDH 遺伝子検出検体

験管をクロモアガー・ビブリオに塗抹培養後，定性法と同様に腸炎ビブリオの同定を行い，10g 当たりの菌数を

海域

菌数

TDH-MPN（ /10ｇ）求めた．

アサリ

県外産

930/10g

15/10g２・２・３ TDH産生腸炎ビブリオの検出

サザエ

玄海灘

750/10g

15/10gトコブシ

県外産

7500/10g

3/10g 未満定性法の1次増菌液と2次増菌液について各検体2回
PCR で TDH 遺伝子の検出を行った．TDH 遺伝子が検出された検体について MPN 法の3次増菌液で TDH 遺伝子

今回の調査でサザエ6検体中5検体から腸炎ビブリオがの検出を行い検出された本数から10g 当たりの菌数を算検出され，アサリは4検体すべてから検出された．さら出し，TDH 産生腸炎ビブリオの菌数とした．に生カキ1検体，はまぐり2検体，シジミ2検体その他の貝類4検体からも検出され20検体中18検体から腸炎ビブリオが検出された．菌数はシジミから1.1×105/10g が検MPN定性法
25ｇ＋ APW225ｍｌ出された．

APW3管法5段階

TDH 産生腸炎ビブリオはアサリ，サザエ，トコブシの各1検体から TDH 遺伝子が検出され，菌数は3~15/10
1次増菌

SPB

SPB

2次増菌

SPB

SPBｇであった（表3）．それぞれの検体から腸炎ビブリオ O
3 :K6及び TDH 産生腸炎ビブリオを分離するため各200株釣菌し確認を行ったが TDH 産生腸炎ビブリオは検出できなかった．

SPB

3次増菌

SPB
４

考察
高感度な検出法として用いた免疫磁気ビーズは腸管出塗抹

免疫磁気塗抹ビーズ（ MPN）

血性大腸菌 O157等の病原細菌や原虫類の濃縮に用いらTDH-MPNれ分離率の向上が確認されている．今回の調査で腸炎ビAPW

アルカリペプトン水

ブリオの K6抗原に対する抗体を感作させたビーズを用SPB

食塩ポリミキシンブイヨン

いて濃縮を行い，さらに分離培地には酵素発色基質を利用したクロモアガー・ビブリオを用いたが O3 :K6及び

図1

検査方法

TDH 産生腸炎ビブリオを分離できなかった．
工藤ら３）によると今回の調査と同様に免疫磁気ビーズ- 129 -

法及び酵素発色基質を用いた培地を使用しアサリ貝につ参考文献いて調査を行った結果，分離培地では従来から使用され

1）国立感染症研究所

厚生省保健医療局エイズ結核感ている TCBS 培 地よりも腸炎ビブリオの分離率が向上

染症課：1996，（特集）腸炎ビブリオ1994~1995，病原微生し，腸炎ビブリオ O3:K6の分離率も向上したと報告して物検出情報，

いるが，分離した全腸炎ビブリオからの O3:K6の割合は

2）国立感染症研究所

わずか0.14％であり，さらなる検出法の検討の必要性が1999，（特集）腸炎ビブリオ1996~1998，病原微生物検出報告されている．

情報，Vol 20，1-9

Vol 17，1-2
厚生省保健医療局結核感染症課：

今回の調査においては，PCR で TDH 遺伝子が検出さ

3） 工藤由起子ら：免疫磁気ビーズ法及び酵素発色基質

れたが TDH 産生腸炎ビブリオは分離できなかった．こ培地を用いた TDH 産生性腸炎ビブリオ O3:K6の自然汚染のことは O3 :K6以外の TDH 産生腸炎ビブリオの存在の貝からの検出．感染症誌，2001；75：955-960．

可能性とすべての TDH 産生腸炎ビブリオの分離法の検討の必要性が示唆される．
腸炎ビブリオ食中毒の発生は6月から9月にかけて多発し，調査を行った10月においても貝類中には食中毒原因となる TDH 産生腸炎ビブリオが低菌量であるが存在することが確認された．腸炎ビブリオの特徴として温度が20℃を超えると非常に早く増殖することが知られており，平成13年6月には腸炎ビブリオ食中毒の予防対策のため食品衛生法施行規則，食品，添加物等の規格基準が改正され水産食品に腸炎ビブリオの基準が設定されたことからも食中毒対策の重要性が認識された結果であり，海域で採取された魚介類の流通から家庭までの低温での保存などに十分な注意を払うことが重要で，飲食店などの食品取扱い施設においては2次汚染と考えられる他食品での食中毒の発生報告もあることから食品の取扱い，保存温度等に十分な注意が必要である．さらに家庭内においても食中毒予防のための同様な注意が必要で腸炎ビブリオ食中毒予防のための啓発を行う必要があると考えられる．

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