2015 JULY
No. 5932015 年（平成 27 年）7 月号

第 61 巻 第 4 号（通巻 593 号）

挨拶・巻頭言何処に向かう獣医臨床..........小野憲一郎（ 2 ）獣医病理学研修会
第 53 回 No.1071 イヌの心臓................. 株式会社 LSI メディエンス（ 3 )レビュー
馬のワクチネーションプログラム.........................................松 田 芳 和（ 4 ）論文紹介
サルモネラ生ワクチンと不活化ワクチンが誘導する免疫応答と防御の関係について........................................ 今 井 孝 彦（10）お知らせ

お知らせ.................................................（16）
研修者･見学者受け入れ状況....................（16）日生研たより

2（42）

何処に向かう獣医臨床小野憲一郎
獣医学ならびに関連学問領域の発展・進歩にともなって、獣医臨床も著しい進展を遂げている。動物の病気の診断・治療を通じて社会に貢献することが命題の一つである獣医臨床において、小動物診療（個体診療）では専門分野に分化・特化した専門診療が社会的な要求となってきている。一方、産業動物臨床では対象動物の飼養戸数は減少し飼育頭数は増加する
多頭飼育化がここ数十年続いている。40 数年前、恩師であり、亡くなられた臼井和哉先生
が「僕の夢は丸の内に立体駐車場のスタイルで肥育牛育成センターを作ることだ」と言われていたことを思い出す。今後ますます多頭化が進み、養鶏、養豚などのように企業化が進むものと思われる。これに対応し、産業動物診療では個体診療から群管理へと、予防獣医学や「食の安全」に関連する管理獣医学への取り組みに重点が置かれるようになってきている。
これら獣医臨床を支える獣医学教育にも大きな変革が起こっている。まず国際基準を満たす獣医学教育を行うため、卒業時までに身につけるべき必須の能力（知識・技能・態度）の到達目標と近年の獣医学の進歩や社会的ニーズを考慮した講義科目 51 科目（臨床獣医学教育分野 23 科目）、実習科目 19 科目のコアカリキュラムが策定された。このカリキュラムを実施するにあたり、教員数の増加と教育資源の有効活用を図るため、平成 24 年度から北海道大学・帯広畜産大学共同獣医学課程、山口大学・鹿児島大学共同獣医学部、東京農工大
学・岩手大学共同獣医学科が設立された（この他、平成 21 年度には鳥取大学・岐阜大学・
京都産業大学で連携教育も試行されている）。しかしながら、卒前教育が前提とはいえ、いずれの科目についてもレベルの向上に必要な研究に携わる教員確保は想定されていない。米国の獣医学部では教育スタッフと研究スタッフを抱える傾向が強く、また我が国の医学部臨床分野では診療スタッフと研究スタッフを備える大学がほとんどである。
「医学教育コアカ
リキュラムの概念と位置づけ」には「――生命科学・医学や科学技術の進歩により、医学の情報量は著しく増え（中略）限られた大学教育課程の中で（中略）すべて完全に修得することは不可能であり（中略）卒後臨床研修以降（中略）専門領域の能力向上を図り（中略）社会に貢献する――」とある。この専門診療に従事する医師の育成には、卒後臨床研修体制の整備と「――当該医療機関に勤務する医師一人に対して主たる診療科名を原則 2 つ以内とし――」とした厚生労働省通知による所が大きいと思われる。一方、獣医臨床では社会的要求の高い、専門分野に分化・特化した診療を担う獣医師の養成は、現在のところ一部学会に委ねられている。専門診療科目は社会の要求に見合ったものである必要があり、的確に選定しなければならない。医療では細分化・特化の結果、専門以外の知識・技術を欠く弊害を招くに至り、再編を余儀なくされた。
獣医臨床においても、卒後研修体制の整備、専門診療獣医師の在り方、標榜診療科の制限、獣医師会の関わり方など、様々な観点からの検討が必要な時期に来ていると思われる。
（評議員）

61（4）
、2015

3（43）

イヌの心臓
第 53 回獣医病理学研修会 No. 1071

動物：イヌ、ボクサー、雌、7 歳。
臨床事項：3 歳時に心電図によるモニタリングで心室性期外収縮、心室性頻拍が認められた。その後特筆すべき
臨床症状は無く経過したが、7 歳時に突然死したため剖
検が行われ、心臓のみが当研究室に送付された。
肉眼所見：ホルマリン固定後標本より、摘出された心臓は右室壁がやや菲薄化し、心外膜下は全周性に黄色を呈していた。
組織所見：右室壁心筋層の外層から中層にかけて心筋細胞の線維脂肪性置換が認められた（図 1、2， 図 2 エラ
スチカ・マッソントリクローム染色）。残存する心筋細胞には大小不同が認められ、しばしば空胞を有していた（図 2 矢印）。これらの空胞はオイルレッド O 陰性であった。また、シュモール法で青緑に染色される褐色色
素（リポフスチン）を有する心筋細胞も多く認められた。心筋細胞間には単核細胞浸潤が散在性に認められたが、心筋の壊死像は観察されなかった。左室壁外層には、右室壁よりも浅層に限局した心筋細胞の線維脂肪性置換が認められた。左室心筋細胞は全層性に肥大し、心筋細胞内にはリポフスチンが認められた。左室壁心筋層内層から乳頭筋部には線維化した領域が複数認められた（図 3）。同領域の心筋細胞は萎縮し空胞が多数認められ、同領域を支配する小動脈には内膜肥厚が認められた（図 4、エラスチカ・ワンギーソン染色変法）。ホル
マリン固定標本からの戻し電顕では，右室左室とも、心株式会社 LSI メディエンス

筋細胞内にはリポフスチンと考えられる高電子密度の顆
粒状物を容れる単層の膜で覆われた胞状構造が認められたが、心筋細胞内に脂肪の存在を示唆する所見は認められなかった（図 5）。
診断：心筋の線維脂肪性置換、左心室壁内層から乳頭筋部の間質線維化を伴う（ボクサー犬の不整脈原性右室心筋症（ARVC ））考察：ヒトの ARVC の特異な例として心筋の脂肪細胞分化の報告があり [ 1 ]、獣医領域においても同様の分化を示唆する記述がある [ 2 ]。しかし、本症例の心筋細胞
内空胞に脂肪は認められなかった。ボクサー犬の ARVCで左心室壁内層に動脈内膜肥厚を伴う線維化の見られた報告はなく、その機序を確定するには至らなかった。本会では心筋の変性壊死を診断名に含めるかどうかが議論になり途中で終了したが、再検討した結果、上記診断名としたい。
（山田 直明）
参考文献：
1. d'Amati, G., di, Gioia, C. R., Giordano, C. and Gallo,
P.. 2000. Myocyte transdif ferentiation: a possible
pathogenetic mechanism for ar rhythmogenic rightventricular cardiomyopathy. Arch.Pathol. Lab. Med.
124 : 287 – 290.
2. 町田登 . 2012. 日本獣医循環器学会獣医循環器認定医プログラム 講座 34 犬と猫の心筋症―総論― . Veterinary
Circulation. 1（1）: 78 – 81.

日生研たより

4（44）

レビュー

馬のワクチネーションプログラム
松 田 芳 和（日本中央競馬会

馬事部防疫課）に年 1 回の補強接種を実施することとなっている。
はじめに

日本中央競馬会（JRA）では、これら 3 種類に加え、馬に使用されている主なワクチンとしては、馬イ

馬のゲタウイルス感染症および馬鼻肺炎の予防接種

ンフルエンザ、日本脳炎、破傷風、馬のゲタウイルも実施している。馬のゲタウイルス感染症は、日本

ス感染症および馬鼻肺炎に対するものがある。特に脳炎と同様に流行期前の 5 月以降に接種する必要が競走馬や乗用馬などの軽種馬群においては、軽種馬ある。馬鼻肺炎に関しては、若齢馬における冬季の防疫協議会（農林水産省を含めた競走馬や乗用馬等

呼吸器疾患（発熱）を予防するため、2 歳馬（明けの関係団体で構成された協議会）が定めた予防接種3 歳馬）に対して接種している。これまで不活化ワ

要領（表 1）に基づき、馬インフルエンザ、日本脳クチンを使用してきたが、今シーズン（2014 年 12

炎および破傷風の 3 種類のワクチンの接種が推奨さ月以降）から新たに開発された生ワクチンに切り替れている。具体的には、馬インフルエンザは基礎免

えたところであり、更なる効果が期待される。

疫後に半年に 1 回の補強接種を実施、日本脳炎は流一方、北海道を中心とする生産地においては、各行期前の 5 月以降に 2 回接種、破傷風は基礎免疫後

種疾病の蔓延防止および本会施設内への疾病侵入阻表1

軽種馬防疫協議会の定める「馬の予防接種要領」

日本脳炎、破傷風）を推進している。2007 年の馬● 初回は使用説明書に基づいて2回接種（基礎免疫）し、以降半年に1回（春季・秋季）の補強接種を実施すること。
※ただし、予防接種間隔が1年を越えた場合は、再度基礎免疫から実施すること。

インフルエンザ流行による被害を最小限に抑えた要因の一つとして、本事業が果した役割は大きいとい日本脳炎● 使用説明書に基づいて流行期前の5月〜6月に毎年2回接種すること。
※この期間内に接種が完了していない場合でも、必ず10月末までに接種すること。

破傷風の追加や接種対象を繁殖牝馬へ拡大するなど、防疫かけての競走馬に対するワクチネーションプログラ※ただし、前年度の接種歴がない場合は、再度基礎免疫から実施すること。

表2

える。また、その流行後には、1 歳馬への補強接種体制がさらに強化されている。育成期から競走期に● 初回は使用説明書に基づいて2回接種（基礎免疫）し、翌年からは年1回の補強接種を実施すること。

ムは表 2 に示すとおりである。

競走馬の予防接種プログラム

1歳

JRA

予防接種推進事業」を通じ、本会施設への入厩前の育成馬を対象とする予防接種（馬インフルエンザ、

馬インフルエンザ

標準止を目的とし、1998 年から開始された「育成馬等

2歳

3歳

1〜3月

5月

秋

5〜6月

秋 12月 1月

馬インフルエンザ

●

●

◎

○

○

○

日本脳炎

●

●

○

●

破傷風

●

●

(○)

○

馬インフルエンザ

●

●

◎

日本脳炎

●

●

○

●

破傷風

●

●

(○)

○

○

2月

●

4歳以上

5〜6月

秋

5 〜6 月

秋

○

○

○

○

●

●

●

○

○

○

馬鼻肺炎

△

生産地や育成牧場で接種（育成馬等予防接種推進事業）

○

●

●

●

●

○
●

○

ゲタウイルス感染症△△◎ 初回補強接種

○

○

●

●

● 基礎免疫○○ 補強接種

○

3種混合

●

○
日脳・ゲタ混合61（4）
、2015

5（45）

に抗原性の差が確認された。そこで、1995 年に馬馬用ワクチン開発の経緯と接種体制の変遷
馬インフルエンザワクチン株の変更

防疫検討会「馬インフルエンザワクチンに関する

馬インフルエンザウイルスは A 型インフルエン

専門会議」が設置され、株変更の必要性が検討さザに属し、その抗原性から 1 型（H7 亜型）と 2 型

れ、当時の流行株であるアメリカ系統株の導入が（H3 亜型）の 2 種類に大別される。特に馬 2 型ウイ

決 定 さ れ た。1996 年 に A/equine/Tokyo/2/71 株

ルスは抗原性が変異しやすいため、流行を起こしや（H3N8）に代えて A/equine/La Plata/ 93 株（H3N8）

すいとされる。

を加えた新ワクチンが承認された（第 3 代ワクチン）。

我が国では、1969 年に日本生物科学研究所（日2000 年に至り、第 3 代ワクチン株では当時のヨー生研）と競走馬総合研究所（栃木支所）が共同でワ

ロッパにおける馬 2 型流行株をカバーできない可能

クチン開発に着手していたところ、1971 年に馬イ性が生じたため、再び「馬インフルエンザワクチン

ンフルエンザが流行した。翌 1972 年の春に野外試に関する専門会議」が設置され、ワクチン株の変更

験が開始され、同年の秋に初代ワクチンが製品化さの必要性が検討された。第 3 代ワクチンの馬 2 型株れた。このワクチンには馬 1 型として A/equine/（H3N8）は、いずれもアメリカ型であるため、ヨーPraque/56 株（H7N7）、馬 2 型 と し て A/equine/

ロッパ型を組み入れる必要性が指摘された。ワクチ

Miami/1/63 株（H3N8）お よ び 流 行 株 で あ る A/

ン 製 造 用 株 と し て の 適 性 を 検 討 し た 結 果、A/equine/Tokyo/2/71 株（H3N8）が用いられた。

equine/Avesta/93 株が適当であるとの結論に達し、数年が経過し、世界各国での流行を繰り返すうちA/equine/Kentucky/1/81 株に代えて A/equine/Av-に、ウイルス株の抗原性が少しずつ変異しているこ

esta/93 株を加えた新ワクチンが 2003 年に承認さとが明らかとなった。我が国でも初代ワクチン株でれた（第 4 代ワクチン）。

ある A/equine/Miami 株と流行株の間に、かなりの

近年では、アメリカ型がさらに変異し、１つの新抗原性の差が認められることが判明した。そこで、しい系統（フロリダ亜系統）を形成していることが栃木支所が中心となり、関係各機関で検討した結果、 報告されはじめ、2005 年に世界獣疫事務局（OIE）
A/equine/Newmarket/1/77 株（H7N7）、A/equine/

は、2004 年以降に世界各国で分離された株のほとTokyo/2/71 株（H3N8）および A/equine/Kentucky/

んどがフロリダ亜系統に属するウイルスであること、

1/81 株（H3N8）の 3 株をワクチン製造用株とする

新旧アメリカ系統株の抗原性状が互いに大きく異ことで合意され、1985 年に新ワクチンが承認されなっていること等を鑑み、フロリダ亜系統株をワクた（第 2 代ワクチン）。さらに、1992 年に香港で流チンに含めるよう勧告した（図 1）。これを受け、行した際に分離された株と第 2 代ワクチン株との間2007 年 5 月の馬防疫検討会「馬インフルエンザワ

0.110

0.100

0.090

0.080

0.070

A/equine/Miami/1/63

0.060

0.050

0.040

0.030

0.020

0.010

0.000

A/equine/Tokyo/3/81
A/equine/Kentucky/1/81
A/equine/Suffolk/89
A/equine/Newmarket/93 (substrain 2)
A/equine/Hong Kong/1/92
A/equine/Avesta/93
AA/
equine/A/Avesta/93
A/equine/LaPlata/1/93
AA/
equine/LaPlata/1/93
A/equine/Argentina/1/96
A/equine/Kentucky/1/94
A/equine/Newmarket/93 (substrain 1)
A/equine/Argentina/97
A/equine/Argentina/99
A/equine/Florida/1/93
A/equine/Kentucky/1/97
A/equine/Kentucky/5/02
A/equine/Bari/05
A/equine/Wales/1/05
A/equine/Essex/1/05
A/equine/New York/452/03
A/canine/Florida/242/03
A/canine/Florida/43/04
A/equine/Ohio/1/03
A/A
equine/Ohio/1/03
A/equine/SouthA
A/
equine/South Africa/4/03
A/equine/Wisconsin/1/03
A/equine/Shiga/1/07
A/equine/Kitakyushu/1/07
A/equine/Ibaraki/1/07
A/equine/Ibaraki/2/07

Europe系統

America系統

当時のワクチン株
OIE推奨株2007年分離株

図1

2007 年時点の EIV2 型の進化系統樹

Florida亜系統

日生研たより

6（46）

クチンに関する専門会議」において、フロリダ亜系（図 2）。OIE はワクチンにこれら 2 株を含めるよう

統に対応した株を加える必要性が指摘された。また、 推 奨 す る よ う に な っ た。こ の こ と を 踏 ま え、
馬 1 型（H7N7）は 1980 年の分離を最後に報告がな

2014 年の動物用インフルエンザワクチン国内製造いことから、ワクチン株に含める必要はないと判断

用株選定委員会において、ワクチンの株の変更が検された。さらに、株変更を迅速化する新しいシステ

討 さ れ、既 に 発 生 が な い ヨ ーロ ッパ 系 統 株 の A/

ムの構築が必要であるとも提言された。その直後の

equine/Avesta/93 株、および旧アメリカ系統株の

8 月にフロリダ亜系統株による馬インフルエンザがA/equine/La Plata/93 株は不要とされ、A/equine/流行した。新たなワクチンには馬 1 型の A/equine/

Ibaraki/1/07 株（クレード 1）に動物検疫所の輸入

Newmarket/1/77 株 に 代 え て、国 内 で 分 離 さ れ た

検 疫 馬 か ら 分 離 さ れ た A/equine/Yokohama/A/equine/Ibaraki/1/07 株 を 加 え る こ と と な り、

aq13/10 株（クレード 2）を加えた 2 株に変更する

2009 年に承認された（第 5 代ワクチン）。

ことが決定した（第 6 代ワクチン）。

一方、2008 年に社団法人日本動物用医薬品協会が事業主体となり、動物用インフルエンザワクチン

JRA に入厩するための
馬ンフルエンザワクチン接種条件

実践的株変更法確立事業（3 ヵ年計画）が立ち上げられた。この事業においてワクチン株を迅速に変更

JRA では 1971 年の流行を踏まえ、初代ワクチンするための制度が検討され、2011 年に動物用インが開発された以降、1973 年から入厩条件としてワフルエンザワクチン国内製造用株選定委員会が設立

クチン接種を義務付けることとした。当初は基礎免された。以降は、毎年春季に本委員会が開催され、疫完了後、年 1 回の補強接種を実施することしてい

株変更の要否、候補株選定、製造用株としての適正

たが、基礎免疫完了後の初回補強接種の重要性、入確認等が検討されることとなった。

厩前に十分な抗体価を保持する必要性等を考慮し、その後、フロリダ亜系統株による流行が世界的に現行の入厩条件は表 3 のとおり定めている。

継続し、北米大陸とユーラシア大陸でそれぞれ個別に進化してクレード 1 およびクレード 2 に分化した
A/equine/Ohio/1/200929

A/equine/Yokohama/aq19/2009

49
86

A/equine/Cheshire/2/200995

A/equine/Kentucky/1/2009
A/equine/Kentucky/7/2007

94

A/equine/Guelph/06-28865/2006
88

2003年以降

A/equine/Pennsylvania/1/2007

66

A/equine/Ibaraki/1/07

85

A/equine/Sydney/6085/2007

67

Florida sublineage

Clade 1A/equine/Kentucky/9/2004

Florida sublineage

70 58 A/equine/Ohio/1/2003

A/equine/Newmarket/5/2003
A/equine/Wildeshausen/1/2008
A/equine/Solihull/1/2007

2000年ごろA/equine/Perthshire/3/200985

A/equine/equine/Inner Mongolia/2008

63

99

99

A/equine/Liaoning/9/2008
A/equine/Richmond/1/2007

Florida sublineage

Clade 2A/equine/Katra-Jammu/6/200842

A/equine/Gansu/7/2008
A/equine/Yokohama/aq13/2010
A/equine/Kentucky/5/02

59

A/equine/Florida/1/93
A/equine/Kentucky/1/94

95 65

1980年代後半

American lineage

A/equine/Kentucky/1/91

80

A/equine/La Plata/1/93
A/equine/Kentucky/1/92
79

A/equine/Sussex/1/1989
A/equine/Suﬀolk/89
A/equine/Aboyne/1/05

95

Eurasian lineage

A/equie/Avesta/93

87
94

A/equine/Hong Kong/92
A/equine/Miami/1963

99

0.01

A/equine/Fontainbleu/1/1979

図2

2010 年時点での EIV2 型の進化系統樹

文献 2 から引用

61（4）、2015
表 3 JRA に入厩するための馬インフルエンザワクチン接種条件【 新入厩馬 （本会施設に初めて入厩する馬） 】① 基礎免疫として2週間以上2ヶ月以内の間隔で2回接種されていること。
② 基礎免疫完了後4週間以上7ヶ月以内に初回補強接種されていること。
その後のすべての補強接種は1年を越えない間隔で接種されていること。
③ 入厩前2週間から7ヶ月の期間に補強接種が実施されていること。

【 再入厩馬 （新入厩馬以外の馬） 】① 前回の入厩以降、すべての補強接種は1年を越えない間隔で接種されていること。
② 入厩前2週間から7ヶ月の期間に補強接種が実施されていること。
（注１）内国産馬の基礎免疫は1歳時の春期に、外国産馬の基礎免疫は輸入後速やかに実施するのが理想的。
（注２）軽種馬防疫協議会から半年に1回（春季と秋季）の補強接種が推奨されている。

7（47）

りに美浦トレーニング・センターにおいて、発症が確認された（最終的に 33 頭が発症）。栗東トレーニ
ング･センターでも、1 頭確認されたが、同馬は入厩直前まで美浦トレーニング・センター近隣の牧場に飼養されていたことから、入厩時すでに感染していた可能性が高いと考えられた。
本病の予防にはワクチンが非常に有効とされ、適切な接種が行われていれば発症しないと考えられていたが、2014 年の事例ではワクチン接種が行われていた馬においても発症が認められた。その原因の一つとして、発症した 2 歳馬の一部はその時点で基馬の日本脳炎礎免疫接種が完了していなかったことから、免疫が日本脳炎は、ヒトや馬に脳炎を起す人獣共通感染

十分に付与されていなかったことが考えられた。ま症であり、馬で日本脳炎ウイルスが分離されたのはた、ワクチン未接種の新入厩馬の抗体調査を行った

1942 年である。1947 年から 1948 年にかけてヒトとところ、美浦トレーニング・センターでの流行と同馬において全国規模で大流行（1947 年 1,216 頭、時期に、茨城県および千葉県内の周辺牧場において1948 年 3,678 頭の馬が発症）したのを契機に馬用ワ

ゲタウイルスが流行していたことが示唆された。しクチンが開発され、1948 年から野外での使用が開たがって、周辺牧場を含めた地域全体でウイルスが始された。さらに 1958 年からは改良ワクチンによ蔓延した結果、美浦トレーニング・センターの馬がる集団接種が全国的に行われるようになり、発生頭ウイルスに曝される機会が増加し、ワクチンによる数は暫時減少した。しかしながら、関東近郊の牧場

集団防御が破綻したと推察された。

で 1983 年に 5 頭、1984 年に 1 頭、1985 年に 3 頭が摘発されたことから、ワクチンの見直しが必要となった。そこで、栃木支所は日生研と協力し、哺乳マウス由来のワクチン株（中山株）から組織培養由来の北京株に変更した新たな不活化ワクチンを開発
し、1990 年に製品化された。同時に新しいワクチ
ンプログラムとして、毎年 5 月以降に 2 回接種する方法を樹立し、現在に至る。
2003 年にワクチン未接種の農用馬１頭に発生が認められたものの、近年、ワクチン接種馬での発症例の報告はない。

図3

発熱馬頭数と推定 ERV 感染馬頭数の推移（栗東）
文献 3, 4 から引用

図4

発熱馬頭数と推定 ERV 感染馬頭数の推移（美浦）文献 3, 4 から引用

馬のゲタウイルス感染症
美浦トレーニング・センターにおいて、開場した1978 年に、発熱、発疹、四肢の浮腫を主症状とする原因不明の疾患が流行（722 頭が発症）し、ゲタウイルスが原因であることが判明した。翌 1979 年には栗東トレーニング・センターでも小規模な流行がみられたが、迅速に開発されたワクチンの接種を開始した 1980 年以降、JRA 施設内での発生は認められなくなった。ところが、2014 年に実に 35 年ぶ

日生研たより

8（48）
表4

３歳馬の ERV ワクチン接種率

年には発熱した子馬からも EHV – 4 が分離された。

流行期

栗東

美浦

また、1967 年には米国からの輸入妊娠馬の流産に2006‑2007

41.4

46.0

2007‑2008

47.4

44.8

2008‑2009

54.3

53.1

2009‑2010

99.4

99.8

2010‑2011

99.4

98.3

2011‑2012

99.6

88.6

2012‑2013

99.5

98.4

2013‑2014

100.0

97.0

1期目から高い接種率

流行抑制

端を発し、生産地で流産が多発（日高 90 頭、千葉
6 頭）、いわゆる「流産の嵐」と称される大流行が起こった。この際に EHV – 1 が初めて分離された。

全頭接種

この流行を契機にワクチン開発が検討されることとなった。ワクチン開発には、栃木支所と日生研が共同で着手し、数年の時間を要した後、1979 年に流

文献 3, 4 から引用

産予防用として不活化ワクチンが承認された。その後、抗原力価を高めた改良ワクチンが 1992 年に承認・製品化された。

破傷風
破傷風は、土壌に生息している破傷風菌の感染によって産生される毒素により筋肉の強直や痙攣を起不活化ワクチンの接種体制の変遷と集団免疫効果

す急性感染症である。1951 年、幻の名馬と呼ばれJRA 施設においては、1973 年に若歳馬を中心にたトキノミノル号が破傷風にかかり死亡するという呼吸器型が発生した以降、毎年、若齢馬で散発的なショッキングな出来事が起こった。このトキノミノ

発 生 が 認 め ら れ た。1989 年 に は 栗 東 ト レ ーニ ンル号の死亡が契機となり、農林省は破傷風の予防液

グ・センターで呼吸器型が流行（一部で神経型）しに関する研究に積極的に取り組むこととなった。農たため、ワクチン接種が検討され、1994 年から若林省の要請に応じて、JRA も接種試験等に協力し、齢馬を対象に野外試験を開始した。

その後 2 年を経ずに破傷風トキソイドが開発された。

当初は、トレーニング・センターに入厩する若齢

JRA の所属馬にこのトキソイドが接種されるように

馬（11 月〜 12 月の 2 歳馬、翌年 1 月〜 3 月の 3 歳なり、破傷風の発症馬は認めていない。

馬）のうち、入厩検疫時の ELISA 抗体価の低い馬を対象に試験的な接種を開始した。ワクチン接種を開始し、約 10 年経過したところで効果を検証した

馬鼻肺炎
ワクチン開発の経緯

ところ、接種を開始する以前の 10 年間と比較し、

馬鼻肺炎（ERV）は、ウマヘルペスウイルス 1 型

冬季の若齢馬の発熱頭数が明らかに減少しているこ（EHV – 1）あ る い は 4 型（EHV – 4）の 感 染 に よ るとが確認された。そこで、2009 年 12 月から、接種

伝染性疾病の総称であり、発熱性呼吸器疾患、流産

対象を流行期にトレーニング・センターに在厩しておよび神経疾患が含まれる。我が国では、1957 年

いる全ての若齢馬およびこの期間中に入厩する若齢に流産胎仔から EHV – 4 が初めて分離され、1959

馬に拡大し、概ね 1 月の間隔で 3 回を上限とする接表5

ERV 感染馬に占める 4 歳以上の割合

栗東
流行期

3歳

2006‑2007 53
2007‑2008 76
2008‑2009 38
2009‑2010 52
2010‑2011 6
2011‑2012 17
2012‑2013 3
合計
245

4歳以上

合計

6
16
3
9
1
2
2
39

59
92
41
61
7
19
5
284

美浦
4歳以上
（％）
10.2
17.4
7.3
14.8
14.3
10.5
40.0
13.7

3歳
15
25
6
33
0
15
6
100

4歳以上
（％）
17
11.8
29
13.8
7
14.3
46
28.3
0
16
6.3
7
14.3
122
18.0

4歳以上 合計
2
4
1
13
0
1
1
22

文献 3, 4 から引用

61（4）、2015

種体制に変更した。

9（49）
表6

在厩馬全体の ERV ワクチン接種率

この若齢馬全頭接種体制に変更したところ、最初

流行期

栗東

美浦

のシーズン（1 期目）はそれまでと同程度の流行が2006‑2007

48.0

50.3

2007‑2008

51.3

48.6 集団免疫効果を発揮

2008‑2009

53.2

51.2

2009‑2010

77.9

79.3

2010‑2011

85.3

87.8

認められたものの、2 期目となる 2010 年 – 2011 年
シーズン以降、3 期連続で流行規模が小さくなったことが明らかとなった（図 3・図 4）。この ERV 流
行抑制が 1 期目から見られなかった理由を検証する
ため、各流行期におけるワクチン接種率を調査した。

2011‑2012

91.1

88.0

2012‑2013

95.7

95.1

2013‑2014

96.0

95.4

3 歳馬のワクチン接種率は、両トレーニング・セン

流行抑制

全頭接種

文献 3, 4 から引用

ターとも全頭接種開始前は 50％程度だったが、全頭接種開始後 1 期目から 99％前後に上昇していたで研究が進められ、2014 年 8 月に馬用ワクチンで（表 4）。これは 3 歳馬の接種率が上昇しただけではは初めてとなる生ワクチンが発売された。

ERV の流行に対する集団免疫効果が十分に得られJRA では、2014 年 – 2015 年シーズンから生ワクないことを示している。そこで 4 歳以上の馬群に着チンに切り替え、接種回数も 3 回から 2 回（概ね目し、2006 年 – 2007 年シーズンから 2012 年 – 2013

1 ヶ月間隔）に変更した。生ワクチンによる集団免

年シーズンの ERV 感染による発熱馬の年齢を調査

疫効果に関しては、数期経過した後に検証する予定したところ、4 歳以上の頭数の割合は期間中の合計である。

で、栗東では 13.7％、美浦では 18.0％であった（表5）。この結果から 4 歳以上の馬群も少なからず流行に関与していることが示唆された。そこで、4 歳以

参考文献

上を含めた在厩馬全体のワクチン接種率を検証した

1. 今川浩 . 2006 年 . 馬用ワクチンの開発・改良の経ところ、両トレーニング・センターとも全頭接種開緯 . 馬の科学 . Vol.43 No.1 : 32 – 38

始前は 50％程度だったが、2009 年 – 2010 年以降の

2. Yamanaka T, Cullinane A, Gildea S, Bannai H,

4 期で、栗東では 77.9、85.3、91.1、95.7％、美浦でNemoto M, Tsujimura K, Kondo T, Matsumura T.

は 79.3、87.8、88.0、95.1％と段階的に上昇していThe potential impact of a single amino-acid substitu-

た（表 6）。以上のことから、若歳馬全頭接種を導tion on the efficacy of equine influenza vaccines.

入したことで在厩馬全体の接種率が段階的に上昇し、

Equine Vet J. 2014 Apr 28. doi : 10.1111/evj.12290.

2 期目から集団免疫効果が発揮され、ERV の流行を[Epub ahead of print]

抑制したと考えられた。

PMID : 24773030 [PubMed - as supplied by publisher]
3. 坂内天 , 前尚美 , 大出浩隆 , 根本学 , 辻村行司 , 山

生ワクチンの開発
現在、国内で市販されている馬鼻肺炎不活化ワク

中隆史 , 近藤高志 , 松村富夫 . 2015 年 .
トレーニング・センターにおけるウマヘルペスウ

チンは、抗体の持続期間が短いため、流行期間中のイルス 1 型ワクチンの接種率向上による予防効果を継続するためにはワクチン接種を 3 回実

集団免疫効果 . 馬の科学 . Vol.52 No.1 : 2 – 12

施する必要がある。さらに、不活化ワクチンでは、

4. Bannai H, Mae N, Ode H, Nemoto M, Tsujimura K,

ヘルペスウイルスに対する防御に重要な細胞性免疫

Yamanaka T, Kondo T, Matsumura T.

（活性化したリンパ球による働き）の誘導が難しい

Successful control of winter pyrexias caused byとされている。一方、生ワクチンは、一般的に細胞

equine herpesvirus type 1 in Japanese training

性免疫の誘導能が高いことが知られ、他の動物のヘ

centers by achieving high vaccination coverage.

ルペスウイルス感染症では、既に臨床応用が行われClin Vaccine Immunol 2014. 21 : 1070 - 1076.

ている。以上の理由から、組換えウイルスを用いた

5. 軽種馬防疫協議会 . 2005 年 3 月発行 . 馬の感染症

生ワクチンの開発に向け、栃木支所と日生研と共同（第 3 版）

日生研たより10（50）

論文紹介

サルモネラ生ワクチンと不活化ワクチンが誘導する免疫応答と防御の関係について
今井 孝彦
Humoral and cellular immune response generated by different vaccine programs before and after Salmonella
Enteritidis challenge in chickens.
Rafael Antonio Casarin Penha Filho et.al., 2012 Vaccine 30, 7637 – 7643,
血清中の抗体価の上昇と比べて効率がよいことを紹
1. 要約介する。一方、グループ E（LV+KV）では、腸管内

世界中の消費者に安全なサルモネラフリー食物を腔における高い IgA の分泌が認められ、この IgA提供するため、養鶏産業においてはサルモネラワクと CD8 陽性 T 細胞がサルモネラ感染に対する高い

チンに高い需要がある。生ワクチン（LV）または防御能を示すことが期待できるかもしれない。

不活化ワクチン（KV）の使用の基準は、それぞれのワクチンによって誘導される免疫機構の違いによるが、Salmonella Enteritidis（SE）に対するワクチ

2. 背景

ンは多くの国で広く使用されている。本研究では、

Salmonella enterica subsp. enterica serovar

市販のバクテリン（不活化ワクチン；KV）と弱毒Enteritidis（SE）は世界的に流行している病原体で、Salmonella Gallinarum 変 異 株（生 ワ ク チ ン；LV）

養鶏産業を行う国々では 1990 年代から認識されてを 4 つ の 異 な る ワ ク チ ン プ ロ グ ラ ム（LV、きた。毎年、世界中で食物を介して数百万件のサル

LV+LV、 KV、 LV+KV）で投与した。SE による攻モネラ症が起こり、死者数は 155,000 人に達すると

撃 1 日前と攻撃 1、6、9 日後に、液性免疫（IgM、推定されている。鶏肉や鶏卵は、食物を介した SE

IgG と 分 泌 型 IgA）と 細 胞 性 免 疫（CD8 陽 性 T 細の主たる感染源であると考えられ、現在までに鶏に胞）応答、IL – 10、IL – 12、IFN – γの産生量を評価

ワクチンを投与することによって SE 感染を抑制でした。攻撃後、全ての鶏の組織で CD8 陽性 T 細胞

きることが示されている。

の増加が認められたが、不活化ワクチンで免疫され2 種類のサルモネラワクチン（生ワクチンと不活

た鶏は CD8 陽性 T 細胞数が少なく、免疫グロブリ

化ワクチン）は異なるメカニズムで機能する。不活ンのレベルは高かった。ワクチン投与群では、全て化ワクチンは多くの国で採卵鶏（レイヤー）のワクの群でサイトカインの発現量が上昇したが、攻撃後チネーションプログラムに使用されている。これらに低下した。一方で、対照群では攻撃後にサイトカのワクチンのほとんどは SE 抗原とアジュバントをイン発現量の上昇が認められた。IL – 10 の量は不活成分としており、液性免疫応答を高め、鶏をサルモ化ワクチン免疫群で攻撃 1 日後に最も高くなったが、 ネラ症から守る。一方で、弱毒サルモネラ株を使用
これは不活化ワクチン投与群では弱い細胞性免疫応した生ワクチンは細胞性免疫を刺激するが、必ずし答しか誘導できないことに起因するかもしれない。

も高い抗体産生を誘導しない。宿主特異性を高めヒ盲腸扁桃において、攻撃１日前の IFN – γの発現はトへの感染のリスクを低下させるため、Salmonella

ワクチン 2 回投与群（LV+LV、LV+KV）で上昇し、enterica subsp. enterica serovar Gallinarum biovar

攻撃後の CD8 陽性 T 細胞の数は LV のみで免疫しGallinarum（SG）が鶏のサルモネラ症に対する生た群（LV、LV+LV）で上昇した。本研究ではサルワクチンとして鶏に対し広く使用されている。

モネラ生ワクチンが誘導する CD8 陽性 T 細胞によサルモネラのような細胞内寄生菌に対する免疫応

る免疫応答が、不活化ワクチンによって誘導される

答には、Toll 様受容体（TLRs）のような宿主のパ61（4）、2015

11（51）

ターン認識受容体（PRRs）による病原体関連分子

り鶏を免疫し、各群について SE による攻撃試験とパターン（PAMPs）やサイトカイン産生を通じた

CD8 陽性 T 細胞数、抗体価とサイトカインの発現

シグナルなど多くの因子が関与しており、それらはを調べた。

免疫応答の働きを調節する上で重要な役割を果たしている。炎症性サイトカインは自然免疫応答の引き金となり、サイトカインの走化性活性は貪食細胞や

3. 実験方法

ナチュラルキラー細胞、マクロファージや偽好酸球

3.1

実験動物

など、SE に対する初期の免疫応答に重要な細胞をSE に感受性を持つ白色採卵鶏の雌鶏 120 羽を孵誘導する。現在までにこれらの自然免疫応答が SE

化日に導入した。これらの鶏全てを細菌学的およびの定着阻害に重要な役割を果たしていることが示さ

血清学的な試験に供し、サルモネラに感染していな

れているが、獲得免疫は SE に対してさらに早く、いことを確かめた。

また特異的な免疫応答をもたらす。
CD8 陽性 T 細胞は感染細胞を認識し傷害する。

3.2

細菌株とワクチン

ナイーブ CD8 陽性 T 細胞は抗原提示細胞を介してフ ァージ 型 PT4、PT8、PT13a 抗 原 の SE を 含 む

抗原刺激を受け、CD8 陽性 T 細胞を二種類の細胞

オイルエマルジョンバクテリン（不活化ワクチン）へと分化させる。それが細胞傷害性 T 細胞（CTL）

を 上 頸 部 皮 下 に 投 与 し た（0.3 mL/bird）。cobS ととメモリー T 細胞である。生ワクチンがこれらのcbiA 遺伝子を欠損し、シアノコバラミンを合成でCD8 陽性 T 細胞を刺激するという研究は過去に実きないが、SE に対して抗原性のある弱毒 SG 株を施されている。CTL への分化は主に IL – 12 が関与

生ワクチンとして使用した。侵襲性のある SE 株でしている。また、IL – 12 はサルモネラ感染初期におある PT4 株を攻撃株として使用した。使用した菌ける防御免疫応答に必須のサイトカインであるは Luria – Bertani（LB）培 地 を 37℃、24 時 間 振 盪Interferon – γ（IFN – γ）の産生を誘導する。IL – 10

培養（100rpm）することで調製した。生ワクチン

は炎症応答を抑制したり、マクロファージを非活性および SE 攻撃株はリン酸緩衝液（PBS）（pH7.4）化 す る 調 節 性 サ イ ト カ イ ン で あ る。IL – 10 は Tで希釈し、108 CFU/bird を経口的に素嚢内投与した。

helper 1（Th1）細胞による IFN – γ発現を負に制御
し、Th2 細胞の増殖や抗体産生を促進する。

3.3

試験系

サルモネラに対する防御の指標として抗体価の測

鶏は 20 羽ずつ 5 つの群に分け、5 日齢と 25 日齢定を用いることは、矛盾する結果が出ると報告されの両方またはいずれか一方の日に免疫した（表 1）。

ている。すなわち、血清中の IgG 濃度と腸内の SE

45 日齢で全ての鶏を攻撃した。ワクチン非投与か量が相関しないことが、過去の研究で示されている。 つ非攻撃群をサイトカインの定量試験の陰性対照と一方、別の野外試験によるとワクチン投与群でサルして使用した。

モネラ菌の保有率が低いほど、高い抗体価を有しているとの報告もある。IgA は局所免疫に重要な役割を果たす。IgA は粘膜表面で分泌され、腸管内腔へ

3.4

採材と細菌学的解析

攻撃 1 日前と攻撃 1、6、9 日後にそれぞれの群のの菌の定着を阻害する。さらに IgA は受動免疫に
よりヒナに移行し、新たに生まれたヒナを感染から

表1

ワクチンプログラム

グループ

鶏の数

1 回目（5 日齢）

2 回目（25 日齢）

上述の通りサルモネラに対する免疫機構は研究さ

A

20

—

—

れてきたが、野外で適用できるワクチンプログラム

B

20

LV

—

によって付与される獲得免疫を調べることも重要で

C

20

LV

LV

ある。本研究では、市販のバクテリン（不活化ワク

D

20

—

KV

チン）と新しいワクチン候補である弱毒 SG 株（生

E

20

LV

KV

守る。

ワクチン）を用いて 4 つのワクチンプログラムによLV： 生ワクチン、 KV： 不活化ワクチン

日生研たより12（52）

5 羽から血液を採取し、採材を行うため頸椎脱臼法

逆 転 写 に よ り cDNA を 合 成 し た。cDNA は – 20℃

により安楽殺した。解剖後、腸管内腔を 2 mL ので保存した。

phenylmethyl sulfonyl fluoride（PMSF）バッファーで洗浄し、4℃、2000rpm で 30 分間遠心し、上清を3.8

定量的リアルタイム PCR– 20℃で保存した。免疫組織化学的解析および定量

リアルタイム PCR は 50 ng の cDNA、0.5μM のPCR 解析に使用する脾臓、肝臓、盲腸扁桃は無菌

プライマー、12.5μL の Maxima SYBR Green 2X、的に採材し、液体窒素で急速に凍結した後、 – 80℃

0.2μL の Platinum Taq DNA polymerase を 用 い てで保存した。

25μL の反応系で行った。プライマーの配列とア

脾臓と盲腸は細菌学的解析にも使用した。試料 1

ニーリング温度は表 2 に示した。各々のサイトカイグラム当たりの SE の生菌数を、底を 10 とした対ンの mRNA の発現量比は 18S や対照群の鶏や非攻数値で示した。濃縮後に生菌数が検出されたサンプ

撃群の鶏を基準として、2-ΔΔCt 法により算出した。

ル（≦ 102 CFU/g）に つ い て は、計 算 上 2(log10 of
3.9

CFU/g）で表した。

統計解析

各サンプリング日における、グループ間の差は
3.5

抗体産生

Kruskall – Wallis 検定と Bonferroni 検定を用いて比血清中の IgG と IgM、腸管内腔洗浄液中の分泌型較した。p<0.05 を統計学的に有意であるとした。

IgA は SE 抗原を用いた ELISA 法にて測定した。OD
値を測定し、以下の公式を用いて E 値を算出した。
E 値＝（OD sample – OD negative control）/（OD

4. 結果
4.1

positive control – OD negative control）

SE の分離各々のワクチンプログラムの有効性を SE 攻撃株
3.6

免疫組織化学的解析の脾臓および盲腸内容物における分離菌数によってCD8 陽性 T 細胞数を調べるため、免疫組織化学調べた。

的解析を実施した。肝臓と盲腸扁桃の凍結組織切片

脾臓では感染 1 日後に対照群（グループ A）とグ

（8μm）を氷冷したアセトンで固定した。切片に抗ループ B と E で、サンプルを濃縮したときのみ菌

ニワトリ CD8α 抗体を加えて 4℃で一晩インキュが検出されたが、有意差は認められなかった。感染ベ ート 後、3, 3ʼ – diaminobenzidine（DAB）を 用 い

6 日後、全てのグループから攻撃菌が検出された。

て検出した。組織切片は光学顕微鏡でランダムに撮グループ E は対照群と比べ、攻撃菌の分離数が有影し、染色された領域の割合を算出した。

意に減少していた。攻撃 9 日後では、脾臓における+SE の量は低下し、全てのグループ間で統計的有意
3.7

RNA 分離と逆転写

差は無かった。

脾 臓 と 盲 腸 扁 桃 か ら RNA を 抽 出 し、Nanodrop

盲腸内容物においては、攻撃菌の分離量は対照群とアガロースゲル電気泳動により純度を調べた後、で非常に高かった（>105CFU/g）。攻撃 1 日後では、

表2

各グループにおける排菌数の比較
排菌数

グループ

ワクチン

脾臓

盲腸内容物

1dpi

6dpi

9dpi

1dpi

6dpi

9dpi

B

LV

→

→

→

↓

↓

↓

C

LV+LV

→

→

→

↓

↓

↓

D

KV

→

→

→

↓

→

→

LV+KV

→

↓

→

↓

↓

↓

E

→：対照群（グループ A）と同等↑：対照群から有意に上昇↓：対照群から有意に減少

dpi：攻撃後日数61（4）、2015

13（53）
表3

各グループにおける免疫応答の比較

抗体応答
グループ

ワクチン

CD8 陽性 T 細胞の数

IgG

IgM

IgA

肝臓

盲腸扁桃

1dbi

1dpi

6dpi

9dpi

1dbi

1dpi

6dpi

9dpi

B

LV

→

→

→

↑

→

↓

↓

→

↑

↓

↑

C

LV+LV

→

→

→

↑

↓

↓

↓

→

→

→

↑

D

KV

↑

↑

↑

→

↓

→

↓

→

↑

↓

→

E

LV+KV

↑

↑

↑

↑

↓

↓

↓

→

↑

↓

→

→：対照群（グループ A）と同等↑：対照群から有意に上昇↓：対照群から有意に減少

dbi：攻撃前日数
dpi：攻撃後日数

全ての免疫群で SE が検出されたが、対照群と比べ腸扁桃における IFN – γ発現量はグループ C と Eてその量は有意に低下していた。攻撃 6 日後と 9 日で攻撃 1 日前に、グループ E で攻撃 6 日後に、他後の細菌量は、グループ B、C、E で有意に低下しのグループと比べて有意に上昇した。

たものの、不活化ワクチンを 1 回投与したグループ

攻撃 1 日前の脾臓における IL – 10 発現量は、全D では、SE の量は対照群と差が認められなかった。

ての免疫群で対照群と比べ顕著に増加していた。攻
撃 1 日後では脾臓における IL – 10 発現量が、グルー

4.2

血清中の抗体量

プ D を除く全てのグループで減少した。盲腸扁桃

IgM と IgG 量は、不活化ワクチンを投与したグにおいては、IL – 10 発現量はグループ C と E で攻ループ D と E で有意に高かった。対照群、グルー

撃前と比べて上昇しており、グループ E におけるプ B、C では、IgM や IgG の量はどのサンプルで発現量のピークは攻撃 6 日後であった。

も比較的少なかった。攻撃 9 日後に IgM は対照群とグループ C で若干上昇した。対照群や生ワクチ
ンのみを投与した群であるグループ B、C の IgG 量は、攻撃 6 日後に増加した。

4.5

CD8 陽性 T 細胞数

免疫組織化学によって CD8 陽性 T 細胞の肝臓および盲腸扁桃における数を評価した。攻撃 1 日前、全てのグループの盲腸扁桃における CD8 陽性 T 細4.3

腸管内腔における分泌型 IgA の産生胞の量は少なかった。攻撃 1 日後、対照群を含む全攻撃 1 日前に全てのグループで IgA の量は同等てのグループで盲腸扁桃における CD8 陽性 T 細胞であった。攻撃 6 日後までに、グループ D と E での増加が認められた。攻撃 6 日後では、対照群とグ

IgA の産生が有意に増加した。感染 9 日後では、グループ C で CD8 陽性 T 細胞の数が他のグループよループ E は他のグループより IgA 量が有意に増加

り有意に高くなり、攻撃 9 日後ではグループ B とした。有意差はないもののグループ B と C で感染

C で 最 も 高 い 値 を 示 し た が、グ ル ープ D と E は

後 9 日後までの分泌型 IgA 量が増加した。一方で、

CD8 陽性 T 細胞の量は有意に低く、対照群と同程対照群の IgA 量は低いままであった。

度であった。
攻撃後、全てのグループで肝臓における CD8 陽

4.4

IL-12、IFN-γ、IL-10 の発現性 T 細胞数が増加し、最も増加したのは対照群で攻撃前の脾臓と盲腸扁桃における IL – 12 の発現あった。グループ D では CD8 陽性 T 細胞数は一定

量は、対照群と比べて全ての免疫群で有意に高かっであり、経過観察中に有意に増加することはなかった。攻撃後、免疫群の IL – 12 の発現量は減少し、た。攻撃 6 日後には、全ての免疫群間で CD8 陽性

盲腸扁桃においては対照群と有意差が無くなった。

T 細胞の量に差は認められなかった。しかし、攻撃

攻撃前の脾臓と盲腸扁桃における IFN – γの発現

9 日後ではグループ B と C はグループ D と E より

量は、対照群と比べて免疫群で有意に高かった。盲

肝臓における CD8 陽性 T 細胞の量が多かった。

日生研たより14（54）は低下した。この現象は対照群において攻撃後に誘5. 考察
生ワクチンと不活化ワクチンが鶏の免疫応答に及ぼす影響を調べる研究は、ワクチンの作用機序を解導された自然免疫応答と明らかに異なっており、
IFN – γが獲得免疫機構の惹起と関連性があるかもしれない。

明する上で重要である。生ワクチンは病原性復帰がパラチフス菌によるチフス性疾患は、高頻度で消よく問題になる一方で、不活化ワクチンは細胞性免化管のみで発生する。このように、細菌の進入はま疫の惹起能が弱いと言われ、サルモネラワクチンのず腸の粘膜や腸管関連リンパ組織（gut associated

使用法はいつも論争の的になっている。過去にも報

lymphoid tissue ; GALT）、特に盲腸扁桃で阻止しな

告があるように、不活化ワクチンは液性免疫を刺激くてはならない。このことを考慮して今回の結果をするが、それだけではサルモネラ感染をコントロー

見てみると、盲腸扁桃において最も高い IFN – γ産

ルするには不十分であることが本研究でも示された。 生量がグループ C と E で認められており、攻撃 6
しかし、不活化ワクチンはバイオセキュリティプロ

日後では IFN – γの発現量はグループ E で有意に上グラム下で使用した際には、サルモネラの蔓延を防昇し、このグループでは感染初期における SE の定ぐ効果があることが過去に示されている。

着と進入を阻害できると考えられる。IFN – γ産生

生ワクチンによって惹起される免疫応答は、病原と初期のサルモネラ菌のクリアランスには関連性が性のある株が鶏に感染した時と同様の過程で生じる。 あることが過去に報告されており、実際、盲腸内容野生株と同様、SG 変異株も消化管から宿主の体内物におけるサルモネラ菌数のコントロールはグルーに侵入し内臓に定着する。さらに、遺伝子組換え体

プ A と D に 比 べ、グ ル ープ C と E で 明 ら か に 早（GMO）であるワクチン株はラフ型株と比べて病原かった。しかし、攻撃 1 日後には免疫群における性復帰のリスクが少ない。攻撃後、生ワクチンは

IFN – γの量が減少し、対照群と同程度になった。

SE の排菌数を減少させた。攻撃 9 日後に、生ワク

このことは、免疫群における獲得免疫系の発達は単チンのみで免疫しているグループ B と C において、に IFN – γだけに依存していないことを示唆してい盲腸扁桃において最も高い CD8 陽性 T 細胞の誘導

る。

を示した。

IL – 12 には IFN – γの産生を刺激する重要な役割

攻撃前に、CD8 陽性 T 細胞の減少が認められたがあり、これによってナイーブ CD8 陽性 T 細胞やが、これは過去の報告通り免疫後から攻撃までの間

CTL を誘導したり、CD8 陽性メモリー T 細胞を発に CD8 陽性 T 細胞が基底レベルへと戻ったことを達させたりする。本研究では、攻撃前の免疫群で示唆している。攻撃後は、グループ B と C で CD8

IL – 12 発現量が高くなっていることを示した。実際、陽性 T 細胞の量はコンスタントに増加した。この

攻撃 1 日前に盲腸扁桃における IL – 12 の発現量はことはグループ B と C に属する鶏において、メモ

対照群と比べて全ての免疫群で高かった。対照群でリー CD8 陽性 T 細胞が増殖していることを示唆しは IL – 12 発現量が低く、それに伴って CD8 陽性 Tている。さらに、生ワクチンのみを使用した群（グ

細胞数も少なくなっているが、その結果抗原特異的

ループ B と C）では、CD8 陽性 T 細胞数が多い状CD8 陽性 T 細胞の免疫応答が弱く、鶏はサルモネ

態が長期間持続した。生ワクチンと不活化ワクチン

ラ菌感染に感受性になるのかもしれない。

を両方免疫したグループ E では、不活化ワクチン

生ワクチンは細胞性免疫の発達を刺激すると考えのみを接種した群（グループ D）と同様、CD8 陽られている。グループ B と C における CD8 陽性 T

性 T 細胞の量は少なかった。一方で対照群では、細胞数は SE の量が減少するにつれて増加した。そおそらく肝臓への細菌の侵襲性により、肝臓への早れゆえに攻撃 6 日後と 9 日後では、生ワクチンで 1い細胞傷害性 T 細胞の誘導が認められた。

回以上免疫した群（グループ B、C、E）で SE の排生ワクチンを 1 回投与した鶏（グループ B）は攻

菌数が減少した。一方で、グループ D では免疫グ

撃前に脾臓における IFN – γ産生量が最も高くなっ

ロブリンのレベルは非常に高いが、排菌数の減少はた。IFN – γはマクロファージの活性化に重要な役認められなかった。

割を果たすが、免疫群において攻撃後の IFN – γ量生ワクチンと不活化ワクチンの組み合わせは包括

61（4）、2015

15（55）

的な免疫応答を誘導する。生ワクチンのベースとなっている SG は細胞性免疫を誘導するのに効果が6. 所感

あるが、不活化ワクチンは flagellin のような免疫原

サルモネラはヒトに食中毒を引き起こすことから、性の高いタンパク質を含んでおり、高い抗体応答を国内のみならず世界中で依然として重要な感染症の誘導する。これら細胞性免疫と分泌型 IgA の高い一つである。一般的に感染した鶏は無症状のまま保力価を組み合わせたワクチンプログラムによって、菌鶏となるが、過度のストレスが加わると菌が糞便グループ E では良いワクチン効果が得られた。B

中などに排出され、総排出腔でサルモネラが付着し細胞とそれが産生する免疫グロブリンは、サルモネた卵も産出される。よって、感染初期に菌の定着を

ラ抗原を提示したり CTL による効率的な免疫応答阻止し、菌の排出・拡散を減らすことや、ワクチンを生み出したりするとの報告もあり、サルモネラ感による感染の予防が非常に重要になる。

染の効率的なコントロールに重要である。

紹介した論文では、筆者らは 2 種類のワクチンを

本研究は生ワクチンと不活化ワクチンを使用した

用いた 4 つのワクチンプログラムを使用して、サル

異なるワクチンプログラムによって誘導される液性

モネラの排菌抑制効果や抗体、細胞性免疫、サイト

免疫と細胞性免疫応答の性状を解明し、それぞれのカイン産生などの免疫応答を比較した。その結果とワクチンプログラムの効果とサルモネラ感染のコンして、筆者らは生ワクチンを使用することにより、トロールを関連付けた。不活化ワクチンのみを使用

強力な細胞性免疫を惹起でき、排菌数が減少するとして高い免疫グロブリンの量を誘導しても、高い細主張している。

菌量を制御しているようには見えない。不活化ワク

今回紹介した論文では触れられていなかったが、チンは生ワクチンと比べて CD8 陽性 T 細胞を誘導

サルモネラ生ワクチンには細胞性免疫を惹起する以する能力が低い。しかし、ワクチンプログラムに生

外にも、競合排除的な作用も報告されており、生ワ

ワクチンと不活化ワクチンを組み合わせること、あクチン株が鶏に定着することで野外サルモネラ菌がるいは生ワクチンを 2 回投与することにより、ワク

腸管などの組織に定着することを阻害する効果も期チン効果が増すことが示された。これらのワクチン待できる。しかしながら、生卵を食べる習慣のあるプログラムは共にサルモネラに対する防御免疫を付

日本では、安全性の観点から現在のところ生ワクチ

与する。総じて、本研究は養鶏産業において SE 感ンは使用されていない。一方で生卵を食べる習慣の染を効率的にコントロールするためのワクチンの重ない欧米諸国において、これほどまでにサルモネラ

要性を示し、野外において役に立つであろう新しい

生ワクチンが投与され、有効性が検証されているこワクチンプログラムの選択肢を示したものである。

とを鑑みると、今後ヒトへの安全性の評価次第では国内での使用が認められることに繋がるかもしれない。より安全で効果的なワクチンを開発し、サルモ
ネラによる食中毒が一件でも減少することを目指し、今後も研究・開発に励みたいと思う。
（研究員）＞＞＞＞＞＞＞＞＞＞＞＞＞＞ 編集室からのお知らせ ＜＜＜＜＜＜＜＜＜＜＜＜＜＜日生研たより 2015 年 5 月号 第 61 巻 第 3 号（通巻 592 号）16 ページの所感にて、事実とは異なる記載がありました。正しくは以下の通りです。読者の皆様並びに関係各位にご迷惑をお掛けしましたことをお詫びするとともに、ここに訂正させて頂きます。
（誤）気管支と肺胞上皮には多くの線毛が存在し～（正）気管支には多くの線毛が存在し～

日生研たより16（56）

お知ら

せ

当研究所の平成 27 年度定時評議員会が、去る平成 27 年 5 月 29 日に開催され、平成 26 年度の事業報告及び決算報告が承認・可決されました。尚、平成 27 年 6 月 1 日現在の理事及び監事は下記の通
りです。
理事・監事
氏

名

役

職

担

当

長井 伸也

理事長

経営

笹川 千尋

所長

研究開発及び検査

草薙 公一

常務理事

企画学術

齋藤 敏樹

常務理事

製造、品質管理及び実験動物

朱通 市次郎

常務理事

管理

真板 敬三

監事

小坂 善三

監事

研修者･見学者受け入れ状況 （平成 26 年 4 月から平成 27 年 3 月）
来所日・期間平成 26 年

平成 27 年

所属機関・人数

研修・見学内容

6 月 23 日～ 6 月 24 日

グローバルピッグファーム株式会社

2名

技術習得

8 月 4 日～ 8 月 8 日

麻布大学

1名

学外実習

8 月 4 日～ 8 月 8 日

日本獣医生命科学大学

1名

学外実習

8 月 20 日～ 9 月 5 日

日本全薬工業株式会社

1名

技術習得

10 月 20 日

株式会社ジャパンファーム

1名

技術習得

2月6日

日本大学

2名

施設見学

日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（隔月 1 回発行）

（通巻 593 号） 平成 27 年 6 月 25 日印刷
発行所〒 198–0024

生命の「共生・調和」を理念とし、生命体の豊かな明日と、研究の永続性を願う
気持ちを快いリズムに整え、視覚化したものです。カラーは生命の源、水を表す「青」としています。

編集室

表紙題字は故中村稕治博士の揮毫

印刷所

平成 27 年 7 月 1 日発行（第 61 巻第 4 号）

一般財団法人 日本生物科学研究所
東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL：0428（33）1520（企画学術部） FAX：0428（33）1036
http://nibs.lin.gr.jp/
発行人

草薙公一

委

員／今井孝彦（委員長）、大嶋 篤、手島香保

事務／企画学術部

株式会社 精案社（無断転載を禁ず）