^*2013年 4月改訂（第2版）
2010
年 7月作成HISTOFINE

研究用試薬

ヒストファイン
製造販売元

第一抗体

抗CDX‑2ウサギモノクローナル抗体（動物種 ：ウサギ ）包装 ：50テス ト (6ml)

株式会社ニチレ‑(J（ヤオサイエンス〒104‑8402
東 京 都 中 央 区 築 地 6‑19‑20T
E
L.03(3248)2208F双 03(3248)
2243Code:4
18011■特異性および抗原分布： ヒト CDX2(caudal・related homeodomainprotein2)タンパク質と特異的に反応する。
CDX2遺伝子 1)は、 Homeoboxge
nefamilyのひとつであり、転写因子機能を有 し、主に、腸粘膜の発達と維持に関与している。正常では、腸管上皮（十二指腸〜直腸）の核に発現がみられる。腫瘍では、大腸腺癌 3),7),15)、十二指腸腺腫、胃腺癌 2),5),11)、食道腺癌、卵巣粘液性腺癌等 8,)9,)10)
で高い頻度で発現がみられる 6)。膵腺癌、胆管癌、 胆嚢癌、カルチノイド 14),16)でも発現がみられ、頻度は低いが、肺非小細胞癌 6)でもみられる場合がある。肝細胞癌、非粘液性卵巣癌、膀脱移行上皮癌、扁平上皮癌、肺腺癌 4),13)、肺小細胞癌等ではみられない 6)0注）組織の固定状態等により、肝細胞の細胞質に染色所見（弱から中程度の強度）がみられる場合がある。

■クローン名 ：EPR2764Y■抗体のサブクラス ：ウサギ lgG■免疫原 ：ヒト CDX‑2の N 末端近くの残基に対応する合成ペプチド■製法 ：培養上清から得ている。
1.内容

第一抗体 ・・・
抗 CDX‑2ウサギモノクローナル抗体（動物種：ウサギ）。
液状。
ウシ血清アルブミン (BSA)と、 0.
1％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中にて、 即時使用可能な抗体濃度に希釈済み。
1バイアル中に 6mLを含む。
2．使用目的組織 ・細胞中のヒト CDX‑2の染色。
*3．
使用方法
パラフィン包埋切片の免疫組織化学および免疫細胞化学染色に使用できる第一抗体である。
パラフィン包埋切片の場合、前処理（抗原賦活化）としてヒストファイン抗原賦活化液 pH9 (Code:415201 または Code:415211)を用いたオー トクレーブ処理が必要である頃；面の操作手順参照）。
スライド上の組織切片が完全に覆われるように第一抗体を 2滴 (lOOμL)
滴下 し、常温(15‑25℃)で 30分〜 1時間インキュベートする 。＊
この反応時間は、ヒストファ イ ン シンプルステインM心 C・PO(R)を使用する場合の目安であり、他のキットを使用する場合は、研究者自身が至適反応時間を調べる必要がある。

■参考 ：組織の固定状況等により抗原賦活化液 pH9(Code:415201または Code:415211)の替わりに lOm Mクエン酸緩衝液(pH6.0)を用いたオー トクレープ処理をすることで良好な染色結果が得られる場合がある（裏面の ■参考参照）。
4.
貯法
2‑8℃保存。

5．
使用上又は取扱上の注意
ヒト由来の検体は、取扱者に感染をひき起こす危険性がある。従って、適切な取扱および廃棄法を用いるとともに、この免疫組織（細胞） 化学染色法を施行するに際し、関連技術および操作法に充分習熟しておかなければならない。

6．参考文献(1)F.Drummond,eta
l: Ann.Hum.G
enet.6
1: 393・400,1997(2)SenoH,etal:IntJOncol.21(4) :769・774,2002(3)MoskalukCA,etal: ModPathol16(9):913・919,2003(4)BarbareschiM,etal: A mJSurgP
athol.27(2): 141・149,2003(5)MizoshitaT,etal: JCancerResClinOncol.129(12): 727・734,2003(6)RobertW.Wer
ling,eta
l:A mJSurgP
athol.27(3): 30
3・310,2003(7)SaadRS,etal: Cancer.25;
102(3):1
68・l73,2004(8)RaspolliniM R,etal: ApplImmunohistochemMolMorphol.12(2):1
27・ 131,2004(9)KimMJ.: JKoreanMedS
ci.20(4): 643・648,2005(10)MazziottaR M,etal: ApplImmunohistochemMolMorphol.13(1):55・60,2005(11)FanZ,etal:ClinCancerRes.11(17):6162・6170,2005(12)JoseAOrtiz‑Rey,etal: ApplImmunohistochemMolMorphol.13(2): 142・146,2005(13)LevinePH,etal: DiagnC
ytopathol.34(3): 191・195,2006(14)Jaff
eeIM.,etal: 紅 chPatholLabMed1
30:1522・
1526,2006(15)TanakaS,etal: OncolRep.18(1): 87・92,2007(16) LinX,etal: ApplImmunohistochemMolMorphol.15(4):407・414: 2007

■研 究 用 と し て の み 使 用 す る こ と 。

免疫
染色におtIる操
作
手順および前処理（杭原賦活化）
＊
■

操作手順
［切 片 の 準 備］
1.50℃ で十分 に 湯伸 ばしした切 片 (3‑4μm厚） をシランなどのコーテ ィングスラ イ ド上 に貼 り付 け
、 37℃の恒温器内で16時間以上 乾燥させる 。
2.脱 パラフ ィン → 親 水化 → PBS
3.前処理 （抗原 賦 活化）：オートクレ ーブ処理
① 緩衝液（下記記載）を耐熱性バットに入れ、 切片を浸す。
②バットに蓋をする 。 蓋が取れないように輪 ゴムでとめる。
③120℃ 、20分間オー トクレープ処理する。
④ 圧 力 が十 分下がった後、バットごと切片 を取 り出す。
⑤バットの蓋をはずし、バットごと 切 片 を常温 に20分 間以上放置し 、 ゆっく り熱 を 冷 ま す。
※オー トクレープ処理後は、バットおよび緩衝液等が高温になっている。こ れらを取り扱う際は、 手袋等を使用し火係に注意する。
⑥スラ イ ドを緩衝 液から 取 り出 し、 PBS
で よ くすすぐ (3分 間ず つ 容器 を2度 か え る か 、 ま た は 洗浄 ビンを使用する ）。
［染 色 手順］ ＜ ヒ ス ト フ ァ イ ン シ ン プ ル ス テ イ ン MAX‑PO(R)使 用 の 場合 ＞
4
. 内因性ペルオキシダーゼの除去 10 15分間／ 常温 → PBS
洗浄
5.第 一抗 体 の 添加・ 反 応 30分〜1時間／ 常 温 → PBS
洗浄＊
6.シンプルステインM心 <‑PO(R)の添加・反応
30分 間／常 温 → PBS
洗浄
7. 基 質溶液の添加・ 反応
DAB
発色 → 水 洗

8.対 比染 色核染（ヘマトキシリン）→封入→乾燥→検鏡■注 意・「PBS洗 浄 」 はPBSに浸し、 5分 間ず つ 3回放置する 。
• 4．のプ ロセ ス は3．の前に行ってもよい。
・ヒス トファ イ ンSABキッ トを使 用する場合は上記 l. 4ま で 行 い SABキットの操作方法に従 って染色を行う 。
．抗原 賦 活化液 pH9の作 り方

・Cod
e:41520
1 抗原賦活化液 pH9（調 製済）は、そのまま 用いる 。
・Code:415211 抗 原 賦 活化液 pH9(10倍 濃 縮）は、精製水で 10倍希釈する 。

■参考： lOmMクエ ン酸緩衝液(pH6.0)、オー トクレープ処理を用いる場合（お もて面の■
参考参照）
• lOm
M クエン酸緩衝液 (pH6.
0)の作り方A液9mL+B液41mL＋精製水450mL （用時調製）
A液 ：
O.
l
M クエン酸水溶液 ：常温で保存可能
クエン酸ー水和物 (C6比 0;・H20)2.
lg／精製水 lOOmL
B液 ：O.
l
M クエン酸ナトリウ ム水溶液 ：常温で保存可能
クエン酸三ナトリ ウムニ水和物 (CGH5Q7Na3• 2H20) 1
4.
7g／精製水 500mL

ここから必要な時に調製する。