M**2013年 4月改訂（第 3版）*
2008年 4月改訂（第 2版）
2005年 6月 作 成

HISTOFINE

研究用試楽

ヒストファイン
製造販売元

第一抗体

CD
15モノクローナル抗体 (MCS‑1)（動物種：マウス）
包装： 50テスト (6ml)

株式会社ニチレ‑(J（ヤオサイエンス
〒104‑
8402
東 京 都 中 央 区 築 地 6‑19‑20TEL.03(3248)2208FAX.03(3248)22心

Code:413461■特異性および抗原分布：糖鎖抗原で ある ヒト CD15抗原（x‑ハプテン、 LewisX、lacto‑N ‑fucopentaoseill)と特異的に反応する。 CD15は血液型抗原、分化抗原に広く分布している。腫瘍では古典的ホジキンリンパ腫の 75・85%1、2、4ふ 6、7)、大腸癌、胃癌、肺癌、骨髄性白血病細胞に発現がみられる。 正常では成熟顆粒球、骨髄系前駆細胞、単球および星状膠細胞に発現がみられるが、リンパ球、好塩基球にはみられない。結節性リンパ球著明ホジキンリンパ腫 2ふ 7)には染まらないため古典的ホジキンリンパ腫との鑑別に有用である 。
国 際 抗 体 分 類 ： First,Third and FifthInternatio
nalWorkshop and Conference on Human Leucocyte
DifferentiationAntigens(1982,1986,1995)で CD15に分類されている。
クローン名： MCS‑1抗体のサブクラス： IgG3
製法： ①免疫原 ・・・ヒト 急性骨髄性白血病細胞株 ML・l

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②免疫法 ・・•免疫原で免疫した Balb/c マウスの牌細胞とマウスミエローマ細胞 NS·lとの融合細胞（ハイブリドーマ）から抗体産生 クローンを得ている。
由来： ハイブリ ドーマの培養上清より、プロテイン A アフィニティークロマ トグラフ ィーを用いて精製している。
1.内容■

第一抗体・ ・ •CD15 モ ノクローナル抗体(MCS·l) （動物種 ： マウス）。

液状。
ウシ血清アルプミン(BS心と、 0.
1％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水(PBS)にて、即時使用可能な抗体濃度に希釈済み。
1バイアル中に 6mLを含む。
2．
使用目的
組織・細胞中の CD15陽性細胞の染色。
**
3.使用方法パラフィン包埋切片の免疫組織化学染色および免疫細胞化学染色に使用できる第一抗体であ る。
パラフ ィン包埋切片の場合、前処理（抗原賦活化）として lOmMクエン酸緩衝液(pH6.
0)を用いたオートクレープ処理が必要である（裏面の操作手順参照）。
スライド上の組織切片が完全に覆われるように第一抗体を 2滴 (100μL)滴下 し、常温(15‑25℃)で 30分〜 1時間イ ンキュベートする。＊＊
この反応時間は、ヒス トファイン シンプルステイン MAX‑PO(M)を使用する場合の目安であり、他のキットを使用する場合は、研究者自身が至適反応時間を調べる必要がある。

■参考： lOmMクエン酸緩衝液(pH6.0)の替わりにヒストファイン 抗原賦活化液 pH9(Code:415201または Code:415211)を用いたオートクレーブ処理をすることで良好な染色が得られる場合がある頃団即） ■参考参照）。
4.貯 法
2‑8℃保存。

5．
使用上又は取扱上の注意
ヒト由来の検体は、取扱者に感染を引き起こす危険性がある。従って、適切な取扱および廃棄法を用いるとともに、 この免疫組織（細胞）化学染色法を施行するに際し、関連技術および操作法に充分習熟しておかなければならない。

6．主要文献(1)SteinH etal:IntJCancer29:2
83・290,1982(2)HsuSMetal:AmJClinPathol82:29・32,1984(3)FaliniBetal:Histopathology11(1・2):1229・1242,1987(4)AminiR Metal:IntJCancer71:5
10・
516,1997(5)SteinH etal:WorldHealthOrganizationClassificationofTumours;PathologyandG
eneticsof
TumoursofHaematopoieticandLymphoidTissues:244・253,2001(6) 田 丸 純 一 ： 新 WHO分類による白血病・リンパ系腫瘍の病態学： 245・257,2004(7) 田丸純一 ：血液 ・ 腫 瘍 科 第 49巻： 173・178,
2004■研究用としてのみ使用すること。

免疫
染色におt
Iる操
作
手順
＊
＊
■

操作手順
［切片 の準 備］
1. 50℃で十分に湯伸ばしした切片 (3‑4μm厚）をシランなどのコーティングスライド上に貼り付け、 37℃の恒温器内で 16時間以上乾燥させる 。
2. 脱パラフィン → 親水化 → PBS
3. 前処理（抗原賦活化） ：オートク レーブ処理①緩衝液（下記記載）を耐熱性バットに入れ、切片を浸す。
②バットに蓋をする。蓋が取れないように輪ゴムでとめる。
③120℃、 20分間オートクレーブ処理する。
④圧力が十分下がった後、バットごと切片を取り 出す。
⑤バットの蓋をはずし、バットごと切片を常温に 20分間以上放置し、ゆっくり熱を冷ます。
※オートクレーブ処理後は、バットおよび緩衝液等が高温になっている。これらを取り扱う際は、手袋等を使用し火侮に注意する。
⑥スライドを緩衝液から取り出し、 PBSでよくすすぐ(3分間ずつ容器を 2度かえるか、または洗浄ビンを使用する）。
［染色手順］ ＜ ヒ ス ト フ ァ イ ン シ ン プ ル ス テ イ ン M心 <‑PO(M)使 用 の 場 合 ＞
4. 内因性ペルオキシダーゼの除去 10 15分間／常温 → PBS洗浄
5. 第一抗体の添加 ・反応 30分〜 1時間／常温 → PBS洗浄＊＊6. シンプルステイン M心 <‑PO(M)の添加 ・反応
30分間l
常温 → PBS洗浄
7. 基質溶液の添加・反応
DAB発色 → 水洗
8 対比染色核染（ヘマトキシリン） → 封 入・注意→乾燥→検鏡「PBS洗浄」は PBSに浸し、 5分間ずつ 3回放置する 。

4．のプロセスは 3．の前に行っ てもよい。
ヒス トファイン SABキットを使用する場合は上記 l. 4
ま で 行 い SABキットの操作方法に従って染色を行う。

lOmM クエン酸緩衝液 (pH6.
0) の作り方A液 9mL+B液 41mL＋精製水 450mL （用時調製）
A液： O.lM クエン酸水溶液：常温で保存可能
クエン酸ー水和物 (C6比 07• H心） 2.
lg／精製水 lOOmL
B液： O.lMクエン酸ナトリウム水溶液：常温で保存可能
クエン酸三ナトリウム ニ水和物 (CsH501Na3・2Hゆ） 14.
7g／精製水 500mL
ここから必要な時に調製する。

■参考；ヒスト ファイン 抗原賦活化液 pH9(Code:415201または Code:415211)、オートクレーブ処理を用いる場合（おもて面の ■参考参照）．抗原賦活化液pH9の作り方• Code:415201 抗原賦活化液 pH9（調製済）は、そのまま用いる。
• Code:415211 抗原賦活化液 pH9(10倍濃縮）は、精製水で 10倍希釈する。