遺伝工学基盤技術室
Bioresource Engineering Division室長小倉淳郎（農博）

Atsuo OGURA, D.V.M., Ph.D.

当研究室では、理研バイオリソースセンターが各リ開発を行っている。また、これらの開発した技術が広く

ソース、特に実験動物および幹細胞をより高度なクオリ

研究コミュニティに活用されるべく、研修事業も行ってティにて維持供給するために必要な以下の遺伝関連技術

いる。

事業内容
1. 体細胞核移植クローン技術の開発

4. 新規幹細胞の開発

2. 顕微授精技術の開発

5. 技術研修

3. 効率的な胚 ･ 配偶子の凍結保存法の開発

職員とメンバー構成
室長

小倉

淳郎

専任研究員

井上

貴美子

専任技師

持田

慶司

越後貫

協力研究員

本多

新

脇阪

特別研究員

的場

章悟

テクニカルスタッフⅡ

廣瀬

美智子

アシスタント中村可奈子

基礎科学特別研究員

三木洋美（～平成 20 年 8 月）

客員研究員

斉藤

美佳子

訪問研究員

Kim Jin Moon（金

研究生

後藤

康文

研修生

森

真菜実

パートタイマー成美
紀子（～平成 21 年 3 月）鎭文）Herena Fulkova（～ 20 年 12 月）
相澤

辻本賀子（～平成 21 年 5 月）

冨島俊子

本多、後藤、的場、金、廣瀬、中村
持田、森、小倉室長、越後貫、冨島、井上― 115 ―

健太郎（～ 20 年 4 月）

RIKEN BRC Annual Report 2008

遺伝工学基盤技術室
Bioresource Engineering Division

年次計画と成果
ことが明らかとなった。一方、SCNT 胚では個々のサン

1. 体細胞核移植クローン技術の開発

プルにおける発現パターンが大きく異なっており、不完

マウスにおいて再現性が極めて低い体細胞クローン技

全な胚性遺伝子活性化を明確に示す結果となった。現在

術の効率の改善および安定化をめざすとともに、再プロ

このゲノム再プログラム化不全を改善させる可能性のあ

グラム化機構の解明をめざす。

る遺伝子として、IVF 胚 -SCNT 胚間で 117 個の差次的（1）二細胞期体細胞核移植クローン胚における遺伝子

遺伝子を抽出し、さらなる解析を行っている。

発現パターンの解析（図 1）（2）胚盤胞期体細胞核移植クローン胚を用いた胎盤形

体細胞核移植クローン（SCNT）における低産生効率

成異常に関する解析

は、核移植後に卵細胞質内で起こる体細胞ゲノムの再プ

胚盤胞期胚は胚発生プロセスにおいて胚組織と胚体

ログラム化が不完全であることに由来していると考えら外組織が明確に区別される最も初期のステージである。

れる。当研究室では、初期胚におけるゲノム再プログラ

SCNT 由来の動物では多くの動物種を通じ、胎盤の形態

ム化の指標としてこれまでに定量 RT-PCR を用いてマウ異常が最も高頻度で観察されるため、この原因を明らか

ス SCNT 胚の遺伝子発現の解析を行ってきたが、このにすることを目的としてマウス胚盤胞期胚を用いてマイ現象をより網羅的に明らかにするために、マウス未受精

クロアレイ解析を行った。解析は 1 個の胚盤胞期胚由来

卵子、二細胞期体外受精（IVF）胚・SCNT 胚を用いての RNA を in vitro transcription により 2 回増幅し、Mouse

マイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。解析Whole Genome Oligo DNA Microarray にハイブリダイズには 10 個の卵子・胚由来の RNA を in vitro transcription

させることで行った。2 種類の交雑系に由来する体細胞により二回増幅することで得られた増幅 RNA を 41,534を用いて作製された胚盤胞期 SCNT 胚と正常なコント

個 の プ ロ ー ブ を 含 む Mouse Whole Genome Oligo DNA

ロールとして用いた IVF 胚盤胞期胚の遺伝子発現パター

Microarray（Agilent）にハイブリダイズさせることで行っ

ンは、PCA 解析により明確に分離され、この実験系がた。Principal Component Analysis（PCA） 解 析 で は、 未再現性を持って機能していることが示された。2 種類の受精卵子、二細胞期 IVF 胚、SCNT 胚がそれぞれグルー

交雑系グループ内で共通している体外受精胚と SCNT

プごとに分離されており、この実験系が再現性を持って胚との差次的遺伝子として 164 個の遺伝子が抽出され、機能していることが示された。受精後 24 時間の二細胞

内 131 個は IVF 胚に比べて発現亢進、33 個は抑制され期 IVF 胚における遺伝子発現パターンは未受精卵子とていた。抑制遺伝子の多くは X 染色体上に位置してお大きく異なっており、母親由来遺伝子発現の抑制と胚性り（20/33 遺伝子），X 染色体と遺伝子発現抑制との明白

遺伝子の活性化による Maternal-Zygotic transition が起こな関連性が示された。今後はこれらの遺伝子と胎盤異常ることで、遺伝子発現パターンが大規模に変化しているの関連を検討していく予定である。

図１

未受精卵子、IVF 胚、SCNT（体細胞核移植）胚の遺伝子発現パターン。一本のラインは一個の遺伝子を表す。IVF 胚と SCNT 胚ではその発現パターンが大きく異なっている。

未受精卵子

IVF胚

SCNT胚

― 116 ―

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遺伝工学基盤技術室
Bioresource Engineering Division
インマウス（B6x129）も 3 世代 106 日でコンジェニッ

2. 顕微授精技術の開発 ･ 応用

ク化が完了した (86 マーカー )。ENU mutagenesis マウス

正常精子だけでなく、通常は受精能のない不動精子、（DBA/2xB6）については 190 日で 5 世代目（172/176 マー

形態異常精子、未成熟精子などでも受精卵および産仔をカー；マイクロサテライトマーカーと SNPs の併用）に作出する顕微授精技術の開発をめざす。また、その技術至り、現在は自然交配によりコンジェニック化を進めての生殖工学実験系への幅広い応用を実施する。

いる。戻し交配で維持したノックアウトマウス（ES 細（1）顕微授精技術を利用した超迅速コンジェニック化

胞：129、レシピエント卵子：B6）については 5 世代目
より本法によるコンジェニック化を行ったところ、6 世

技術の確立
新たなコンジェニックマウス系統の樹立には、性成熟

代 343 日でコンジェニック化が完了した（86 マーカー）。

マウスを用いた戻し交配を行うために１世代約 2.5-3 ヶ未成熟雄マウスの円形精子細胞を用いた顕微授精技術と月かかり、系統樹立までに 2 年以上という長い月日を要

多型マーカーによる選抜を組み合わせることにより、従する。このため本来の研究開始まで長期間待たなければ

来の約半分以下の期間でコンジェニック化できることがならないのが最大の欠点である。自然交配の代替として明らかになった。

未成熟マウスの生殖細胞を用いた顕微授精技術と多型マ（2）人為的卵子活性化処理なしでの凍結円形精子細胞

イクロサテライトマーカーによる選抜システムを併用の顕微注入によるマウス産仔の作出（図 2）した超スピードコンジェニック法の確立を試みた。生マウス雄性生殖細胞では伸張精子細胞から精子に発生

後 22-24 日齢以降の円形精子細胞を用いて顕微注入を行する過程において卵子活性化能を獲得することが知られい、その後胚移植をすることで産仔を得た。次の顕微授ている。よってまだ卵子活性化能を獲得していない円形精を行うまでに雄産仔の目的遺伝子存在の確認およびマ

精子細胞を受精に用いる場合には、卵子への人為的活性

イクロサテライトがより多く受容系統の遺伝子型に置換化処理が必須である。しかしながら凍結保存した円形している個体の選抜を行う。これを繰り返すことによっ精子細胞を用いた顕微授精において、卵子への人為的活てコンジェニック化を進行させていく。現在までにト性化処理なしで産仔が得られることが明らかになった。

ランスジェニックマウス（バックグラウンド：BDF1）2

円形精子細胞は精巣丸ごとあるいは 7.5% グリセロール

系統についてはそれぞれ 5 世代 188 日および 230 日でコ+7.5% FCS 添加 GL-PBS への精細胞懸濁液として凍結

ンジェニック化が完了した (74 マーカー )。またノック保存を行った。融解後、細胞を GL-PBS あるいは NIM

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図２

凍結円形精子細胞注入卵で観察される卵細胞質 Ca2+ 動態のパターン。
新鮮円形精子細胞の注入では Ca2+ の上昇は観察されない。

― 117 ―

RIKEN BRC Annual Report 2008

遺伝工学基盤技術室
Bioresource Engineering Division(K+-rich, Ca2+-free) に回収した。精巣凍結 +NIM 回収群を

（1）マウス精子の冷蔵温度での保存および輸送につい除き、いずれの実験群も高い卵子活性化率と産仔が得てられた（ICR: 2-cell 率 75%、産仔率 28% [23/81]； B6: 同

精巣上体尾部を 3℃ (3-5℃ ) および 6℃ (6-8℃ ) で 2

46%、11% [6/53]）。凍結円形精子細胞による卵子の活性

日間の冷蔵保存後に体外受精へ用いたところ、BDF1 系化の機序については現在調査中であるが、凍結融解操作

統では受精率がそれぞれ 73％および 78％、C57BL/6Cr

2+による傷害によって外液中の Ca が円形精子細胞に取系統では 59％および 71％、C57BL/6J 系統では 3％おり込まれている可能性が考えられた。また幼若齢マウス

よび 15％であり、亜系統間でも大きな差が認められの凍結円形精子細胞でも同様に卵子活性化能が認められた。C57BL/6J 系統では精子前培養液に PVA-HTF(0.4mM産仔が得られている。本法は出生後早期に死亡してしま

MBCD 添加 ) を用いたところ、受精率がそれぞれ 13％

うマウス系統の保存および継代技術として有益であるとおよび 48％に改善された。更に熊本大学から 6-8℃の条考えられる。

件で C57BL/6J の精巣上体尾部を輸送したところ、雄 8（3）マウス顕微授精効率への系統、精子成熟度、およ匹分の尾部組織から、受精率の平均は 57％（S.E.±5.0）

び精子（細胞）凍結の影響に関する統計学的解析と安定していた。それぞれの雄由来の胚を 3 腹ずつ合計

マウスの顕微授精技術は、受精 ･ 配偶子形成関連遺伝

24 腹に移植したところ、72％（207/288）が産仔へと正子の機能解明、老齢 ･ 幼若個体からの子孫作出、不動あ

常に発生した。以上から、マウス精巣上体尾部の安定しるいは未成熟精子（精細胞）の利用などに極めて有用でた冷蔵輸送条件が確立された。

ある。マウス顕微授精の効率は、用いる系統や精子の成（2）マウス精子のドライアイス温度での保存および輸熟度など多くの因子に影響されることが経験的に知られ

送について

ているが、
科学的な統計分析はほとんど行われていない。

凍結および低温保存に弱いとされている C57BL/6J 精

そこで各マウス系統、精子成熟度（精巣上体精子、伸長子を、一般的な精子凍結液（18％ラフィノース－ 3％ス

精子細胞、円形精子細胞）、およびこれらの凍結の有無

キムミルク水溶液）を用いてストロー内に封入して凍結の 3 因子が顕微授精に与える影響についてマウス 5 系統

保存後、発泡スチロールの箱にドライアイスと共に詰め（ICR、DBA/2、C57BL/6、C3H/He、129+ter/Sv） を 用 いて、熊本大学から理研まで輸送した。48 時間のドライて統計学的に解析を行った。その結果、卵子生存率は系

アイス温度保存後、液体窒素温度へ保管し、後日体外受統と細胞の種類に影響され、C3H/He 卵子および円形精精に用いた。4 匹の雄由来の精子において、通常の HTF

子細胞が最も生存率が高かった。分割率は細胞の種類に液では受精率の平均が 31％（S.E.±3.3％）であったが、影響され、精子が最も成績が良かった。胚移植後の着床前培養液に PVA-HTF(0.4mM MBCD 添加 ) を用いること

率と産仔率も細胞の種類に影響され、伸長精子細胞が最で受精率が 46％ (S.E.±4.1％ ) に改善された。以上から、も成績が良かった。実験を通した効率（産仔数／注入卵

体外受精の条件を考慮することで安定した受精率を得る

子数）は、系統により精子あるいは伸張精子細胞が高く、ことができ、ドライアイス温度での輸送は可能であるこ

一方すべての系統で円形精子細胞が低くなっていた。マとが確認された。

ウス顕微授精の効率は、注入から産仔作出までの各段階（3）マウス胚の冷蔵温度での保存および輸送について

において、3 つの因子のいずれかが複雑に関与している

体外受精にて作出した C57BL/6J 系統の 2 細胞期胚を、ことが明らかになった。近年、様々な遺伝的背景を持つ

1.5ml チューブに満たした M2 培養液中に静置したまま、新たな実験用マウス系統が作り出されており、本実験の最初に、熊本大学から理研まで冷蔵温度で輸送を試みた。

顕微授精の結果は、これらの系統の効率的な計画立案、輸送した胚（40 個ずつ 3 本）を冷蔵 48 時間後に回収し実験遂行に役立つことが期待される。

たところ、回収率 100％、形態正常率 100％であり、胚培養した 82％ (46/56) が胚盤胞へ発生した。回収した胚

3．効率的な胚・配偶子の凍結保存法の開発の一部を 2 細胞期のうちに移植したところ、40％ (16/40)

胚および配偶子の凍結保存技術は、実験動物バイオリ

が産仔へと発生した。次に理研において体外受精で作成

ソース保存の核となる技術である。さまざまな条件設定

した胚（24 個ずつ 4 本）を同様に放射線医学総合研究（凍害防止剤の調製、温度設定など）により、効率的な所まで冷蔵輸送したところ、回収率 99％ (95/96)、形態

凍結保存技術とその周辺技術の開発をめざす。

正常率 99％ (94/95)、培養による胚盤胞率 97％（33/34）、
胚移植による産仔率 50％ (30/60) であった。以上から、― 118 ―

RIKEN BRC Annual Report 2008

遺伝工学基盤技術室
Bioresource Engineering Division

マウス 2 細胞期胚の冷蔵保存および輸送は、少なくとも48 時間以内において、安定して行えることが確認され

4. 各種幹細胞株の樹立、解析、および利用技術の開発た。

近年、induced pluripotent stem cell (iPS 細胞 ) の創出に

（4）マウス胚のドライアイス温度での保存および輸送より、幹細胞を用いた再生医療研究に多大な注目が集まについて（図 3）
ガラス化保存胚はガラス転移温度 (-110 ～ -130℃ ) 以

り、それに付随して胚性幹細胞だけでなく組織幹細胞に上で不安定となり、細胞内の氷晶形成などから生存でき対する関心も高まっている。我々はヒト再生医療のモデないと考えられることから、我々が通常用いているガラ

ルに資するために、複数の新規幹細胞の開発・応用技術

ス化液（EFS40）よりも浸透圧の高い溶液を調整し、ドを確立してきた。これまでに、マウスやウサギからの胚

ライアイス温度（-79℃）でも保存できる条件を検討し性幹細胞（Embryonic Stem (ES) cell）や体細胞核移植由た。エチレングリコール濃度が 42.5％および 45％、ス

来（nt）ES 細胞の効率的な樹立技術を開発した。ウサ

クロースをそれぞれ 1.01Mol および 0.825Mol 含むガラ

ギは小型実験動物として唯一ヒト型の ES 細胞を生じる

ス化液（EFS42.5c-d、EFS45c）において、2 日および 7動物であり、医療分野へのトランスレーショナルリサー

日間のドライアイス温度保存でも 95％以上の高い生存チとしての応用が期待されている。また、我々はマウス率が得られた。実際に EFS45c で保存した胚を、理研か

新生仔卵巣由来の発育期卵子の体外発育・成熟や莢膜幹ら放射線医学総合研究所までドライアイスに詰めて輸細胞の分離・分化誘導技術も開発した。これらは雌性生送したところ、回収率は 99％ (124/125)、形態正常率は殖細胞の新しい研究ツールとしての発展が期待されてい99％ (123/124) であり、胚移植により妊娠雌あたり 93％

る。

(103/111) が着床し、67％（74/111）が正常な産仔として（1）マウス ES 細胞株樹立とその利用得られた。以上から、マウス胚は少なくとも 7 日間のドマウス ES 細胞は最も多く利用されている ES 細胞でライアイス温度保存が可能であり、ドライシッパーがなあり、その研究分野は多岐にわたっている。iPS 細胞がくても安定して輸送できることが確認された。

樹立された現在、これまでの ES 細胞の知見との比較を�������������輸送��

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図３

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ドライアイスを用いた凍結胚の梱包と輸送方法。ドライアイス温度でのマウス胚ガラ
ス化保存を可能にした事により、高価で返却が必要なドライシッパーは使わずに、安価で返却の不要な発泡スチロール箱で輸送できるのが大きな特長である。

― 119 ―

RIKEN BRC Annual Report 2008

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Bioresource Engineering Division

行うことは iPS 細胞の性質を知る上で重要であり、ま化能の乏しさから一般的ではなかった。そこで、4 ライ

すます ES 細胞研究の必要性が高まっている。一般的な

ンの C57BL/6 由来の ES 細胞を樹立し、キメラマウス (4ES 細胞は 129 系統のマウスから樹立するものであり、

ライン ) と生殖系列への寄与 (2 ライン ) を確認した。こ他の系統から樹立するのは困難とされてきた。しかし、れらは BRC の細胞材料開発室（細胞バンク）に寄託し当研究室では、遺伝的背景の均一化を簡略化できる B6て一般に公開している。

マウスや ES 細胞のゲノム修飾状態を容易に解析できる（2）ウサギ ES 細胞株樹立とその利用（図 4，5）

野生マウスとラボマウスの F1( 亜種間雑種 ) を含む 7 種

マウス以外の実験動物で ES 細胞が一般的に利用され類（47 ライン）の ES 細胞株を樹立している。また、核ているのはサルのみであり、他の動物種からの ES 細胞移植技術や顕微授精技術と組み合わせることにより様々

樹立は、自己複製能や未分化性維持能の乏しさから非常な状態の細胞や胚（終末分化細胞・雄性核胚など）からに困難とされている。このような背景の中でウサギは古も ES 細胞を樹立することができ、体細胞核移植クロー

くから実験動物として利用されてきた歴史を有しているン胚からは 8 種類（45 ライン）の ntES 細胞株樹立に成だけでなく、ヒト疾患モデル動物としても注目されてお功しており、様々な特徴を兼ね備えた “ 特殊な ” ES 細り、もしもウサギで ES 細胞が樹立されれば、その利用胞の提供も可能にする。また、均一な遺伝的背景が必価値は高い。我々はこれまでにウサギ ES 細胞の効率的要な研究には C57BL/6 由来の ES 細胞が強く求められてな樹立方法と維持方法を開発した。樹立したウサギ ES

いるが、特に樹立が困難であることや、生殖系列への分細胞は長期にわたる培養にも安定であり、各種未分化

図4

ウサギ ES 細胞とヒト ES 細胞の共通点。ウサギ ES 細胞はその形態だけでなく、未分化性維持機構もヒト ES 細胞に酷似していることが明らかになった。

図5

ウサギ ES 細胞の神経分化誘導。体外で神経に分化誘導したウサギ ES 細胞。

― 120 ―

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遺伝工学基盤技術室
Bioresource Engineering Division

マーカー陽性なだけでなく多分化能（体外・体内）も確

我々はマウス新生仔莢膜幹細胞の培養下において Stem

認されている。また、様々な点（その形態や成長因子にcell factor (SCF) を添加することにより、非常に効率よく対する反応性等）においてウサギ ES 細胞はヒト ES 細裸の卵子を調製・発育させることに成功した。その数は胞に酷似していることから、ウサギは非常に扱いやすい

一匹の雌の産仔から約 800 個も調製可能であり、一回のヒト型 ES 細胞を生じる小型実験動物であることが明ら実験で 10 個の卵子を調製することも容易である。本研かになった。これらの利点を最大限に生かすために、今究によって調製可能な卵子は、培地にも工夫を施すこと後は未分化性向上の試み、in vitro 分化法の確立とトラにより、30 日以上の長期にわたり卵子細胞死を抑えなンスレーショナルリサーチへの応用、およびウサギでがら、発育させることにも成功した。このように発育さのジーンターゲティングやノックダウン、およびウサギ

せた卵子には透明帯もあり、精子との膜融合能や、薬剤

iPS 細胞株作製と利用も視野に入れて研究を展開する予による減数分裂の再開能、さらに、その発育に依存した定である。

卵子特異的なインプリント遺伝子メチル化も再現できる（3）未成熟卵子の効率的な発生・発育法開発

ことが明らかになった。今後はより卵子に適した培養環

4

これまで哺乳動物の生殖研究において、卵子の持つ神境の検討を施しながら、多量に調製できる卵子を用いた秘的な能力にメスをいれるにはあまりにも量が少なく、卵子発生のメカニズム解析や、卵子に備わっているリプ

大規模な解析が非常に困難であった。一方、精細胞や精ログラム能を利用した研究展開を予定している。

子は大量調製が可能であることから、精子形成や受精等の分子メカニズムなどに関してもプロテオーム解析や

5. 技術研修DNA マイクロアレイ解析などが容易で、様々な知見が平成 20 年度および 21 年度「マウス精子・胚の凍結保蓄積されてきた。
卵子を大量に調製することができれば、存方法に関する技術研修」において、所外からの研修生

精子と同様の研究展開を期待できるだけでなく、卵子にを対象にマウスの体外受精、胚培養、胚凍結、精子凍結、備わっているリプログラミング能などの優れた能力を利および胚移植の研修を行った。

用する道も開ける。このような背景の中で、これまでに研究発表（誌上発表）【原著論文】（査読制度あり）1. Kazuki Y, Hoshiya H, Kai Y, Abe S, Takiguchi M, Osaki

4. Honda A, Hirose M, Inoue K, Ogonuki N, Miki H,

M, Kawazoe S, Katoh M, Kanatsu-Shinohara M, Inoue K,

Shimozawa N, Hatori M, Shimizu N, Murata T, Hirose

Kajitani N, Yoshino T, Shirayoshi Y, Ogura A, Shinohara

M, Katayama T, Wakisaka N, Miyoshi H, Yokoyama K,

T, Barret J, Oshimura M, "Correction of a genetic

Sankai T, Ogura A, "Stable embryonic stem cell lines

defect in multipotent germline stem cells using a humanin rabbits: potential small animal models for humanartificial chromosome." Gene Therapy Vol.15 pp617-624

research." Reproductive BioMedicine Online Vol.17(2008)

pp706-715 (2008)

2. Wakisaka N, Inoue K, Ogonuki N, Miki H, Sekita Y,

5. Nakamura T, Inoue K, Ogawa S, Umehara H, Ogonuki N,

Hanaki K, Akatsuka A, Kaneko-Ishino T, Ishino F, Ogura

Miki H, Kimura T, Ogura A, Nakano T, "Effects of Akt

A, "Ultrastructure of placental hyperplasia in mice:signaling on nuclear reprogramming." Genes to Cells

Comparison of placental phenotypes with three different

Vol.13 pp1269-1277 (2008)

etiologies." Placenta Vol.29 pp253-259 (2008)
6. Yamashita M, Honda A, Ogura A, Kashiwabara
3. Nakanishi T, Ishibashi N, Kubota H, Inoue K, Ogonuki

S, Fukami K, Baba T, "Reduced fertility of mouse

N, Ogura A, Kashiwabara S, Baba T, "Birth of normal

epididymal sperm lacking Prss21/Tesp5 is rescued byoffspring from mouse eggs activated by a phospholipase

sperm exposure to uterine microenvironment." Genes to

C zeta protein lacking three EF-hand domains." Journal

Cells Vol.13 pp1001-1013 (2008)of Reproduction and Development Vol.54 pp244-249(2008)― 121 ―

RIKEN BRC Annual Report 2008

遺伝工学基盤技術室
Bioresource Engineering Division

7. Kim E, Yamashita M, Kimura M, Honda A, Kashiwabara

C57BL/6J sperm suspension." Experimental Animals

S, Baba T, "Sperm penetration through cumulus massVol.58 pp395-401 (2009)and zona pellucida." The International Journal of
Developmental Biology Vol.52 pp677-682 (2008)

15. Miki H, Wakisaka N, Inoue K, Ogonuki N, Mori M,
Kim J, Ohta A, Ogura A, "Embryonic Rather than

8. Shimozawa N, Sankai T, Ogura A, "Reproductive

Extraembryonic Tissues Have More Impact on theTechnologies and related studies in the cynomolgus

Development of Placental Hyperplasia in Cloned Mice."monkey." Journal of Mammalian Ova Research Vol.25

Placenta Vol.30 pp543-546 (2009)

pp133-142 (2008)
16. MIki H, Hirose M, Ogonuki N, Inoue K, Kezuka F,
9. Kanatsu-Shinohara M, Lee J, Inoue K, Ogonuki N,

Honda A, Mekada K, Hanaki K, Iwafune H, Yoshiki A.

Miki H, Toyokuni S, Ikawa M, Nakamura T, Ogura A,

Ishino F, Ogura A, "Efficient production of androgenetic

Shinohara T, "Pluripotency of a single spermatogonialembryos by round spermatid injection." Genesis Vol.47

stem cell in mice." Biology of Reproduction Vol.78

pp155-160 (2009)

pp681-687 (2008)
17. Kim J, Ogura A, "Changes in allele-specific association
10. Sekita Y, Wagatsuma H, Nakamura K, Ono R, Kagami

of histone modifications at the imprinting control regions

M, Wakisaka N, Hino T, Suzuki-Migishima R, Kohda T,

during mouse preimplantation development." Genesis

Ogura A, Ogata T, Yokoyama M, Kaneko-Ishino T, Ishino

Vol.47 pp611-616 (2009)

F, "Role of retrotransposon-derived imprinted gene, Rtl1,
in the feto-maternal interface of mouse placenta." Nature

18. Honda A, Hirose M, Inoue K, Hiura H, MIki H, Ogonuki

Genetics Vol.40 pp243-248 (2008)

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1. 金田 秀貴 , 桝屋 啓志 , 中潟 直己 , 持田 慶司 , 小倉

木 洋美 , 下澤 律浩 , 羽鳥 真功 , 清水 なつみ , 村田淳郎 , 山村 研一 , 城石 俊彦 , 小幡 裕一 , 若菜 茂晴 ,武英 , 廣瀬 めぐみ , 形山 和史 , 脇阪 紀子 , 三好 浩之 ," マウス生殖工学実験のためのプロトコールデータ

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Bioresource Engineering Division
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茂晴 , 栗原 裕基 , 阿部 訓也 , 小倉 淳郎 , " 顕微授精技術を利用した超迅速コンジェニック化技術の確

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11. 越後貫 成美 , 三木 洋美 , 井上 貴美子 , 廣瀬 美智子 ,持田 慶司 , 三浦 郁生 , 佐藤 崇裕 , 三瀬 名丹 , 若菜
茂晴 , 栗原 裕基 , 阿部 訓也 , 小倉 淳郎 , " 顕微授精19. 田熊 究一 , 持田 慶司 , 伊集院 麻衣子 , 植木 彩 , 高橋

技術を利用した超迅速コンジェニック化技術の確

仁美 , 吉木 淳 , 小倉 淳郎 , " マウス精巣上体尾部組

立 " 第 101 回日本繁殖生物学会大会 福岡 9 月 (2008)

織の冷蔵保存条件の検討 " 第 56 回日本実験動物学会総会 さいたま 5 月 (2009)12. 金 鎭文 , 小倉 淳郎 , " マウス着床前胚におけるアレ
ル特異的ヒストン修飾の解析 " 第 22 回モロシヌス

20. 目加田 和之 , 滝澤 明子 , 神谷 松雄 , 高橋 稔 , 持田
慶司 , 小倉 淳郎 , 中潟 直己 , 芹川 忠夫 , 吉木 淳 ,研究会 東京 9 月 (2008)" 実験動物マウス及びラットリソースの輸送システ
ムの開発その 2" 第 56 回日本実験動物学会総会 さ

13. 脇阪 紀子 , 井上 貴美子 , 越後貫 成美 , 三木 洋美 , 小

いたま 5 月 (2009)

倉 淳郎 , 関田 洋一 , 花木 賢一 , 赤塚 明 , 金児－石野知子 , 石野 史敏 , "3 種の過形成胎盤モデルマウスにおける胎盤の電顕組織学的形態観察 " 第 101 回日本

21. 井上 麻紀 , 茂木 浩未 , 櫻庭 喜行 , 土岐 秀明 , 松井純子 , 平山 妙子 , 金田 秀貴 , 権藤 洋一 , 美野輪 治 ,繁殖生物学会大会 福岡 9 月 (2008)

小倉 淳郎 , 若菜 茂晴 , 野田 哲生 , "ENU 誘発大規模
14. 小倉 淳郎 , " 雄性生殖細胞の胚形成能について顕微

ミュータジェネシスにより開発された糖尿病モデル

授精と核移植クローン技術の応用 " 第 24 回環境医マウスの解析 " 第 52 回日本糖尿病学会年次学術集

学研究所・第 15 回研究推進委員会合同セミナー 浦会 大阪 5 月 (2009)

安 10 月 (2008)
22. 越後貫 成美 , 井上 貴美子 , 廣瀬 美智子 , 三浦 郁生 ,15. 小倉 淳郎 , " 遺伝子発現パターンから見た体細胞核

持田 慶司 , 佐藤 崇裕 , 三瀬 名丹 , 目加田 和之 , 吉

移植クローン胚の特性について " 文部科学省科学研

木 淳 , 阿部 訓也 , 栗原 裕基 , 若菜 茂晴 , 小倉 淳郎 ,究費補助金・特定領域研究第 5 回「性分化機構の解" 顕微授精技術を利用したマウス超迅速コンジェ

明」、「生殖系列の世代サイクルとエピゲノムネット

ニック化技術の確立 " 第 56 回日本実験動物学会総ワーク」第 1 回合同領域会議 熊本 11 月 (2008)

会 さいたま 5 月 (2009)

16. 三瀬 名丹 , 近藤 昌代 , 廣瀬 美智子 , 中野 かおる ,23. 越後貫 成美 , " 実験動物を用いた顕微授精技術の応

野瀬 俊明 , 小倉 淳郎 , 阿部 訓也 , " 生殖細胞特異用 " 第 56 回日本実験動物学会総会 さいたま 5 月

的に Venus を発現する新規 Tg マウスと ES 細胞を(2009)

用いた生殖細胞発生過程の研究 " 第 31 回日本分子生物学会年会・第 81 回日本生化学会大会合同大会

24. 廣瀬 美智子 , 本多 新 , 小倉 淳郎 , " ウサギ ES 細胞の樹立と未分化性維持機構の解析 " 第 56 回日本実(BMB2008) 神戸 12 月 (2008)

験動物学会総会 さいたま 5 月 (2009)17. 三浦 郁生 , 越後貫 成美 , 金田 秀貴 , 尾崎 藍 , 鈴木
智草 , 中村 千佳 , 蜂巣 明子 , 篠木 晶子 , 森田 千春 ,25. 小倉 淳郎 , " 顕微鏡下で胚を作る － 顕微授精と核鈴木 智広 , 小林 喜美男 , 古瀬 民生 , 目加田 和之 , 吉

移植クローン － " 岩手医科大学 実験動物学講演会

木 淳 , 小倉 淳郎 , 若菜 茂晴 ," 理研 BRC 日本マウス

盛岡 6 月 (2009)

クリニック IV：安定的・効率的な検査個体の供給― 124 ―