実験コス ト を 大幅カッ ト!

リアルタイムPCR関連製品
RNA抽出 からリアルタイムPCR までのラインナップをご紹介！

リアルタイムPCR

ニッポンジーンでは、リアルタイムPCRに必要な「RNA抽出キット」、「cDNA合成キット」、「リアルタイムPCR試薬」をラインアップしています。オリジナルプロトコールや高性能な酵素を組み合わせた製品を安価に提供します。

Step 1RNA抽出■ ISOSPIN Cell & Tissue RNA ＜動物組織・細胞用＞
50回用 … ¥30,000¥600／検体 (DNase I 添付)■ ISOSPIN Plant RNA ＜植物組織用＞
50回用 … ¥36,000

Step 2

前処理カラム不要のオリジナル
プロトコールにより高収量・高純度¥720／検体 (DNase I 添付)

cDNA合成■ GeneAce cDNA Synthesis Kit ＜cDNA合成キット＞
50回用 … ¥33,000

Step 3¥660／反応 (RNase H 添付)

・ RNase H処理によりRT-PCRの効率を向上
・ 長鎖のcDNA合成効率を向上

リアルタイムPCR■ GeneAce SYBRTM qPCR Mix II ＜SYBRTM Green I 検出系＞
500反応用 … ¥24,000¥48／反応（20 µl反応系）■ GeneAce Probe qPCR Mix II ＜蛍光標識プローブ検出系＞
200反応用 … ¥24,000 ¥120／反応（50 µl反応系）
表示価格は希望納入価格（税別）です。
（2024年4月更新）

・ 非特異増幅を抑制（SYBRTM）
・ SNPジェノタイピング実験にも最適（Probe）

20240401KM

Step 1

RNA抽出動物組織・細胞用ISOSPIN Cell & Tissue RNAISOSPIN Plant RNA

植物組織用【補助試薬】Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA 抽出困難な植物試料にスピンカラムを用いて、動物組織・細胞/植物組織からRNAを抽出・精製するためのキットです。

特 長

簡易操作フロー○ 多糖類を含む試料からも高純度なRNAを抽出可能○ フィルターによる前処理が不要○ DNase I はキットに添付（別途購入不要）○ フェノール、クロロホルムは不要○ 抽出困難な植物試料には、専用補助試薬（別売)を組み合わせることで改善

フィルター前処理不要
夾雑物を沈殿にして除去サンプルを溶解夾雑物の除去RNAの吸着洗浄

RNAの溶出

実験例：マウス各種組織からのRNA抽出 ＜ ISOSPIN Cell & Tissue RNA ＞
10 mgのマウス各種組織から本品とA社製品を用いてRNAを抽出し、吸光度測定により収量と純度を比較した。
吸光度で定量したRNA量を基に、アプライするRNA量をそろえて電気泳動を行った。
② 電気泳動による比較① RNA収量と純度の比較

結果

収量（μｇ/mg）

純度（A260/A230）

Brain

Liver

KidneyTestis

マウス
組織A社

本品

A社

本品

脳0.160.91

1.011.94

肝臓1.593.591.872.22

腎臓0.443.071.592.25

RNAアプライ量：
各0.5 μg（Brainのみ 0.25 μg）

精巣

0.41

1.47

1.80

2.25

1% Agarose S/TAE

A社 本品 A社 本品

A社 本品 A社 本品

吸光度測定より、本品はA社製品よりも収量および純度が高いRNAを抽出できていることが示唆された。
また、電気泳動でも明瞭な rRNA のバンドが確認できた。

実験例：キャベツ種子からのRNA抽出 ＜ ISOSPIN Plant RNA ＞
約4 mgのキャベツ種子から本品とB社製品を用いてRNAを抽出し、吸光スペクトルを測定した。
吸光度で定量したRNA量を基に、アプライするRNA量をそろえて電気泳動を行った。
① 吸光スペクトル測定による比較
0.2

B社製品
本品

0.15

Abs

② 電気泳動による比較
B社

本品

M6 kb
3 kb

0.10.05

0220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320

波長（nm）

キャベツ種子RNAアプライ量： 各 1 μg
M： RNA Ladder 1μg （Code No. 311-06261）

1％ Agarose S（ホルムアルデヒド変性）

結果 本品は、B社製品より低いA230 の値を示し、多糖類などの夾雑物が効率良く除去できていることが示唆された。
電気泳動でも明瞭な rRNA のバンドが確認できた。
Code No.

製品名容量

希望納入価格(税別)

314-08211

ISOSPIN Cell & Tissue RNA

動物組織や培養細胞からのRNA抽出キット

50 回用￥30,000

310-08171

ISOSPIN Plant RNA

植物組織からのRNA抽出キット

50 回用￥36,000

315-08501

Assist Buffer for ISOSPIN Plant RNA

抽出困難な植物組織用（専用オプションバッファー）

50 回用￥12,000

用途Step 2cDNA合成

GeneAce cDNA Synthesis Kit

1st strand cDNA 合成キット

RNAを鋳型に1st strand cDNAを合成するためのキットです。逆転写反応後にRNase H処理を行うことにより、PCR阻害を引き起こす要因となり得る鋳型RNAを分解することができます。

特 長

キット内容（容量 50回用*）○ cDNA合成に必要な試薬が全てセット○ 改変型の逆転写酵素を採用しているため完全長cDNAの合成効率が向上○ RNase H処理によりRT-PCRの効率が向上○ 当社リアルタイムPCR試薬との組み合わせに最適▶ GeneAce Reverse Transcriptase

50 µL×１本▶ RNase Inhibitor

50 µL×１本▶ Oligo(dT)20 primer (50 µM)

50 µL×１本▶ 5×RT Buﬀer

1 mL×１本

50 µL×１本▶ 10 mM dNTP Mixture

50 µL×１本▶ Random hexamers (50 µM)

50 µL×１本▶ RNase H

1 mL×２本▶ ddWater (RNase free)* 1反応あたり20 µL容量でcDNA合成反応を行った場合

実験例：長鎖cDNA（約10 kb）の合成効率の比較
マウスFM3A細胞 total RNA (2 μg) を鋳型に Oligo (dT) primer を使用してcDNAを合成した。
得られたcDNAを鋳型にリアルタイムPCRを行い、Utrophin遺伝子のcDNA量を比較した。
（プライマーは3'末端から約10 kb付近に設計）

cDNA (ng)

リアルタイムPCR試薬：GeneAce SYBR ® qPCR Mix α Low ROX
検出対象：Utrophin遺伝子（約10 kbp）

本品
A社
B社
図1. cDNA合成量の比較

結果 本品は、他社製品よりも長鎖cDNAの合成効率が高いことが示された。

実験例：RNase H 処理の効果検証
HeLa細胞 total RNA (2 μg) を鋳型に、本キットを用いてcDNAを合成した。
得られたcDNAを鋳型にして、RNase H処理の有無によるPCR効率の比較を行った。
M

RNase H処理あり（Lane ＋）： RNase H 処理（37℃, 15分間）した+－

RNase H処理

cDNA（DNA一本鎖）を鋳型にしたPCR産物← 2.6 kbp

RNase H処理なし（Lane －）： 得られたcDNA（DNA-RNAヘテロ二本鎖）をそのまま鋳型にしたPCR産物
マーカー（Lane M）： Gene Ladder Wide 1 (Code No. 313-06961)
検出対象： EPAS1遺伝子一部領域（約2.6 kb）

図2. PCR産物の電気泳動像

結果 RNase H処理によりPCR効率が向上した。
Code No.
319-08881

製品名
GeneAce ｃDNA Synthesis Kit

用途

容量

1st strand cDNA合成キット

50 回用

希望納入価格(税別)￥33,000

Step 3リアルタイムPCR

GeneAce SYBRTM qPCR Mix IISYBRTM Green I 検出系

GeneAce Probe qPCR Mix II

蛍光標識プローブ検出系

リアルタイムPCR用マスターミックス（2×濃度）です。 化学的な修飾を施されたホットスタートDNAポリメラーゼと最適化されたバッファーにより、非特異的増幅を抑制し、広範囲の鋳型濃度に対し精度の高い分析ができます。

特 長

SYBRTM Green I 検出系

特 長○ 圧倒的コストパフォーマンス 48円／反応（20 µl反応系）○ 高い特異性と増幅効率○ UNG（別売）の添加でキャリーオーバー防止○ 各種リアルタイムPCR装置に対応（補正用色素添加済み）

蛍光標識プローブ検出系○ 圧倒的コストパフォーマンス 120円／反応（50 µl反応系）○ SNPジェノタイピング実験に使用可能○ UNG（別売）の添加でキャリーオーバー防止○ 各種リアルタイムPCR装置に対応（補正用色素添加済み）

実験例：GeneAce SYBRTM qPCR Mix II
ISOSPIN Cell & Tissue RNA（Code No. 314-08211）およびGeneAce cDNA Synthesis Kit（Code No. 319-08881）を用いて得られたマウス肝臓に由来するcDNAの10倍段階希釈液（8 ng～0.8 pg RNAに相当）をテンプレートとし、本品を用いてβ-actin（増幅長 156 bp）の増幅を本キット推奨PCR条件で行った。
本キット推奨PCR条件：95℃ 10分 → (95℃ 5秒, 60℃ 1分) ×45サイクル → 融解曲線解析
増幅プロット

融解曲線0.8 pg

検量線

目的PCR産物（単一のピーク）

傾きSlope=-3.389, 増幅効率E=97%, R 2＝0.999

結果 本品では各濃度のテンプレートで増幅が起こり、融解曲線で単一のピークが得られました。

実験例：GeneAce Probe qPCR Mix II と 他社製品の比較
ISOSPIN Cell & Tissue RNA（Code No. 314-08211）を用いてHeLa細胞から抽出したTotal RNAから、GeneAce cDNA Synthesis Kit(Code No. 319-08881) を使用してｃDNAを合成し、従来品（GeneAce Probe qPCR MixαLow ROX）及びB社製品と増幅効率を比較した。
10Standard Curve

GeneAce Probe qPCR Mix II
従来品
B 社製品

Delta Rn

1R2 : 0.9993
Slope : -3.4412
Intercept : 22.3658

32

Ct

Th. : 0.2
Base line : 3-15

0.1

C

GeneAce Probe qPCR Mix II36

従来品
B 社製品

2824

[ 鋳 型 ] ： cDNA の段階希釈 (RNA 相当量 :10 ng, 1 ng, 100 pg, 10 pg, 1 pg）[PCR 条件 ] ： 95℃ 10 min → (95℃ 30 sec,60℃ 1 min)×45 cycles[ 標的遺伝子 ] ： β-actin 一部領域
[ 反応液量 ] ： 25 µｌ[ 装 置 ] ： ABI 7500

200.01181510152025Cycle Number

30354045-3-2.5-2-1.5-1-0.5
Log C000.51

結果 本品は従来品、B社製品と比較して最も早い立ち上がりを示し、検量線もCt値のばらつきが少なく直線性の高い結果が得られた。

Code No.

製品名

用途

容量

希望納入価格(税別)

313-09423

GeneAce SYBRTM qPCR Mix IISYBRTM Green I 検出系

500反応用（20 µl反応系）￥24,000

GeneAce Probe qPCR Mix II

蛍光標識プローブ検出系

200反応用（50 µl反応系）￥24,000

313-08823［注意］ SYBRTM は、Thermo Fisher Scientific 社の登録商標です。