Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

日本家禽学会誌,39:JZ‑JIO,2002

カルシウムの給与時期が卵殼形成と血漿カルシウム濃度及び卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNA儂度に及ぼす影響
後藤尚也l).田上雅之l)｡有賀美保子2).高間智浩2）武石勝l).山村奈美子2).上吉道治2）')日本配合飼料株式会社中央研究所，栃木県芳賀郡茂木町字天子451,321‑36212)ll皮阜大学農学部生物資源生嘩学科，岐阜県岐阜11丁柳戸1‑1,501‑1193
本実験では，カルシウム(Ca)給与時期が卵殼形成におよぼす影響を￨ﾘ￨らかにしようとした。使川したニワトリは，45週齢の白色レグホーン種産卵鶏で，対照鶏には3.1%Ca含有の通常飼料を，試験鶏には午前は1.0%Ca含有の低Ca飼料，ノ'二後は4.82%Ca含有の高Ca飼料を給与したo4週間飼育し，試験期間中における生存率，産卵率，卵重飼料摂取鐘，飼料要求率及びCa摂取量を調査した。また，試験終了時の排卵周期中において，3時￨H]毎に，血漿!￨'Caイオンと無機リン濃度を測定すると共に，卵殻腺部におけるカルシウム結合蛋白質(CaBP‑D28K)mRNAを測定した。さらに，試験開始時と試験終了時に，任意に採取した50個のり￨1において，卵殻強度と卵殼Ca量を測定した。その結果，対照鶏と試験鶏の問で,Ca給与時期の相違による，生存率，産卵成績飼料摂取量，飼料要求率,Ca摂取量には差は認められなかった。血漿中Caイオン濃度は午前L￨'と午後の初期において試験鶏は対照鶏に比べて有意に低かった。血漿中無機リン濃度のピークの出現は試験鶏の方が早期に現れた。卵殼強度は対照鶏において試験開始11キに比べて終了￨1!fに低下する伽li'lを示したが，試験鶏では低ド傾向は認められずむしろ墹

加傾向を示した。卵殼Ca含量は，対照鶏では試験開始時に比べ，終了時には有意に減少したのに対し，試験鶏では有意な減少は認められず，終了時においては試験鶏の〃が有意に多かった。卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNAは卵殼形成が盛んと見なされる排卵後13〜20時間の時期に対照鶏に比べ試験鶏においてfj意に高い値を示した。これらの結果から，本実 験で用いたCa給与時期で，卵殻腺部におけるCaBP‑D28KmRNAの増加を介し，卵殻へのCa沈着量が増ﾉﾉllして，卵殼質が向上する可能性が示唆された。

キーワード：カルシウム結合蛋白質遺伝子発現，カルシウム，卵殺質，ニワトリ

一一一目

緒

産卵鶏の生体内における全カルシウム(Ca)量は20〜費されている。ニワトリにおいても，骨がCaの貯蔵庫としての役割を果たしていることは知られている(Duckworthandl‑Iill,1953)が，先に述べたようにニワ309(TaylorandStringer,1965)で，その内約98%がトリではl化lの卵を産むのに約29と体内Ca量の10%骨に存在し(Common,1938),骨の支持成分としての役

近くのCaを必要とするので，ニワトリを含めて鳥類で割を果たすと共に，産卵しているニワトリでは体内カル

は，支持組織としての骨(corticalbone:皮骨）よりもシウムの約10%に相当するCaが卵殻と卵黄などに消10〜15倍Caの代謝回転率が高い骨髄骨(medullarybone)と呼ばれる特殊な骨がエストロジェンとアンド2001年8月8日受付2001年9月17日受理

ロジェンの共￨司作川によって大腿 剛空に巌卵の￨)il始前に

連絡者：後藤尚也〒321‑3621日本配合飼料株式会社中央研究所，栃木
県芳賀郡茂木I111字天子451形成され，産卵などにおけるCa需要の増加に対応する

TelO285−63−ll21

機描が発達している(Simkiss,1975)。卵般へのCa沈着におけるCa利用は，午前!￨]にCaを給与した場合はCa

FaxO285−63−ll20の多くは骨を介して卵殼に沈着するが，ノ'二後に給Ij.した

Email:hisaya.goto@nippaLco.jp

場合はCaは骨を介さず直接卵殼に沈着することが多く

Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

J 2 1 1 木 家 禽 会 誌

39 巻J1号(2002)

なる(RolandandFarmer,1984)という。放射性Caをる。ニワトリは，日本配合飼料株式会社中央研究所の無使用した実験では，卵殼形成に利用されるCaの内，骨窓鶏舎において，午前5時点灯とする1411#間照明10時

からのCaが,liめる割合が高くなるにつれて卵殼質は劣間暗黒の明暗周期下で，単飼ケージ内で飼育した。対照る(RolandandFarmer,1984)ことが報告され，また，鶏と試験鶏はそれぞれ160羽ずつで，計320羽のニワト

産卵鶏において0.4％の低Ca飼料を給与し，午前811寺

リを使用した。飼料については，対照鶏にはCa含量

または午後411吋に39のCaを櫨制給与すると，卵殼形

3.10%の飼料（通常飼料）を自由に摂取させ，試験鶏に成時期でない午前8時にCaを強制給与した場合には卵は午後7：00（消灯直前）に低Ca(1.00%)含量飼料に，殼質が悠化すること(LennardsandRoland,1981),午III午に尚Ca(482%)含量飼料にそれぞれ切り替え，自前に低Ca飼料，午後に高Ca飼料を給与すると卵殼由摂取させた。なお，試験鶏における飼料切り替えll寺期

質が改善されること(CasonandBritton,1981;

は，予備実験の結果から，試験鶏に低Ca含量飼料をBootwallaem/..1982;Hellwig"".,1982),さらに，45％，高Ca含量飼料を55%の割合で摂取させると対照

l鶏群3万羽の養鶏農場で行った後藤ら（未発表）の試

鶏における1日のCa摂取量と同じになるという算定結験結果では，午前に1̲0%の低Caを午後に6.1%の高カ果に従って設定した。飲水については，対照鶏と試験鶏

ルシウム飼料を給与することにより，卵殼質が改善され共に自由摂取させた。尚，試験に用いた飼料の配合率と破卵率が減少することなどが見出されている。これらの成分を表lに示した。

報告から，午後にCaをより多く摂取させた方が卵殼質を向上させる'1I能性が示唆されている。

試験期間は4週間とし，この期間中における生存率，産卵率，卵嘔，飼料摂取型，飼料要求率と共に,Ca摂取

一方，ニワトリの卵殼腺部には，腸管においてCaの量を算定した。また，試験開始時と試験終了時において，吸収に関与するものと￨,1じCa結合タンパク質

午前8:00と午前9:00に個体毎に産卵を記録すること(CaBP‑D28K)が存在し(Corradino,1968),しかもこのにより午前8:00〜9:00の間に産卵したことを確認し，

CaBP‑D28K量が卵殻形成I￨'に増ﾉjllする(Barand

その翌日に産卵したニワトリから艇作為に50個の卵をHurwitz,1973;Nysaal.,1989;Barg/dj.,1990;

採取して卵殼強度，卵殻重量，卵殻厚と卵殼中のCaとStriemandBar,1991;Bal･"".,1992;Nys"".,1992;

Mg含量の測定を行った。

Iedaei".,1995)ことから,CaBP‑D28Kは卵殻形成と密4週間飼育後，排卵周期111(3時￨IM毎）の9時期に，一接に関係していることが示唆されている。また，ニワト

時期に対照鶏と試験鶏それぞれ8羽づつにおいて，翼下リの排卵周1U1中において，卵殼llポ部のCaBP‑D28K

祁脈よりヘパリン涛液で湿らせておいた注射筒を川い血mRNA濃度は，血漿中のCaイオン濃度と全く逆の様l;ll

波を採取した。試料を採取した排卵周期中の9時期は，を示すことから,lill漿'‑￨‑!のCaイオンがCaBP‑D28K

クラッチ輔l排卵以外の排卵が放卵後30〜60分以￨ﾉ1にmRNA発現に関与する可能性が示唆されている（後藤

起こる(WarrenandScotl,1935;Phillipsand

ら,1998)｡しかし,Caの給与ll寺期が排卵周川巾におけWarren,1937)ことから，午前8:00〜9:00の問に放卵る血漿カルシウムと無機リン濃度の変動および卵殼腺部が確認されたニワトリのl〜2時間後から3時間毎に23におけるCaBP‑D28,<mRNAレベルの変動におよぼす影〜24時間後までのll寺期とした。

響についての報告は未だ見当たらない。

そこで，本実験では,1日のCa摂取量が3.10%Caを採取した血液は，後藤ら(2001)の方法と同様に血漿111のCaイオンを測定した後，残りの血漿を非透過性Ca

含有する通常飼料を給与した場合と￨両l等になるように，の測定時まで‑20℃で保存した。li11液採取後，断頭屠殺

午前にCa含量1.00%の低Ca飼料，午後にCa含量し開腹後，直ちに，卵殼腺部を摘出し，それぞれの粘膜

4.82％の高Ca飼料を給与することで，種々の卵殼質と111幟を採取した。粘膜組織は採取後，液体窒素で怠迎凍

共に排卵周期中における血中Ca濃度と無機リン濃度お結した後,CaBP‑D28KmRNA測定まで‑80℃で保存しよび卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNAレベルの変動

た。

に与える影響を検討することにより,Ca給与時期が卵殼形成に及ぼす効果をIﾘlらかにしようとした。

材料及び方法

飼料摂取量,Ca摂取量および卵殼強度の測定
飼料摂取量は,10羽を1群として,1週間に1度残餌量を測定し，給与量から残餌呈を減じた値を給与ll数と羽数で除することにより11l1羽当たりとして求めた。

供試鶏と試料採取

なお，試験鶏における残餌量は高Ca含量飼料と低Ca

本実験に使用したニワトリは，クラッチ7以上の白色含量飼料とで別々に測定した。Ca摂取量は飼料摂取量

レグホーン祁嵯卵郷（54週齢のデカルブTX35)であに飼料Ca含量(%)を乗じて算定した。

Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

後藤ら:CaBP‑D28K遺伝子発現とカルシウム給与時期J3

表1.3.1%,1.0%および4.82%のカルシウムを含む飼料の原料組成（上段）と成分計算値（下段）Tablel.Composition(upperpanel)andcalculatedingredient(Iowerpanel)o[dietscontainig3.1%
calcium(Ca),1.0%Caand4.82%Ca

割合（％）
組成
Compositions

Percentage(%)

l.0%カルシウム飼料

4.82％カルシウム飼料

3.l%Cadiet

1.0%Cadiet

4.82%Cadiet

ダﾙﾃﾝﾐｰﾙGultenmeal

魚粉Fishmeal

肉骨粉Meatbornmeal

動物質性油脂Animalfat
炭酸カルシウムCalciumcarbOnate
食塩SaltDL−メチオニンDL‑methionine

パブ'ノカPaprika

７０
６
０
０︲

７０
６
０
００

塩化コリンCholinechloride

４９３５６００２００００
２５１３０５３１０００００

大豆粕Soybeanmeal

１

３２
５０
６
０５５７０４
８１００５１６００

脱脂米糠Defattedricebran

57．8

２４５４２７６

とうもろこしCorn

ふすまWheatbran

４３５５

８６３
２
４
６

７０３７５５７０１２０

７５
５１４
１４００４１１００

3.1%カルシウム飼料

ビタミンミネラル混合Vitam,nemlneralmix
ｌ

Ｔ

二回Ｏ

卜ｔａ

100

100

７１ ６２５４０００００

５８
３６
０８３
１９
０５
３０
３５
２

１
３
８
２

７４３５１０００００

３０
５７
２８１
１９
４２
８７
３６
２

メチオニンMethionine(%)

2

３
８
２

'ノジンLvsine(%)

８

リンPhosphorus(%)

代謝エネルギ‑Metabolicenergy(kcal/kg)

１カルシウムCalcium(%)

８６５２６

粗繊維Crude6ber(%)

粗灰分Crudeash(%)

１３７５１６８３２

粗脂肪Crudefat(%)

７１４２０１３００３０００

粗蛋白質Crudeprotein(%)

100

シスチンCvstine(%)

卵殼強度は加圧破壊法によって測定した。すなわち，

トワコー；和光純薬工業株式会社）を使用して比色定量

卵殼強度は，市販の卵殼強度計(富士平工業株式会社製）

法(TausskyandShorr,1953)により測定した。すなわを用い，卵の鋭端部を下に，純端部を上にして卜部からち，血漿，標準液，試薬盲検として蒸留水のそれぞれ0．2

加圧し，卵殼の亀裂が生じたときの圧力を測定すること

mjに対して，除蛋白液5.0mj加え，室温にて5分間静によって求めた。

置した。その後，遠心分離(2,500rpm,5分）し，上澄み

血漿カルシウムイオン濃度の測定を採取し，この｜澄みに発色試薬0.5mj加え，室淵で10血漿Caイオン濃度は，血漿を得た後,60分以内にCa分間靜置し，分光光度計（(株)日立製作所製U‑2000型

イオン測定器(Caイオンアナライザー,CA++150;

ダブルビーム）で波長750nmで測定した。

(株)常光）で血漿状態のままで測定した。尚，測定の際卵殼カルシウムとマグネシウム含量の測定

流動パラフィンの妨害を避けるため，パスツールピペッ

乳鉢で磨砕した卵殼19をるつぼに入れ,600℃で2

トで血漿のみを保存チューブに移し換え測定を行った。

時間炭化したものに6N塩酸を10m/加え，約10分間放血漿無機リン濃度の測定

置後，蒸冊水を"Ⅱえ，6僻に希釈した。得られた溶液は，

血漿無機リン濃度は，無機リン測定キット（ピーテス

1N塩酸で500倍に希釈し，原子吸光分光光度計で卵殼Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

J4日本家禽会誌39巻J1号(2002)

中Ca含量をi1'l定した。マグネシウムの場合も同様に，尚,SenseRNAとAntisenseRNAの作成は,Komm
炭化させた卵殼に1N塩酸を20m/加え，約1O分間放置博士が作成し，島田博士と家IH博士から提供された56Oした。得られた溶液は，蒸留/kで50倍に希釈し，原子吸bpのCaBP‑D28Kプローブを川いて行った。
光分光光度計で測定した。尚，測定値は卵の卵殼l個当統計処理

たりに換算して表した。データの統計処理は分散分析によりF航を検定した
卵殼腺部のCaBP‑D28KmRNAの測定後，ダンカンの多重範囲検定法で危険率が5%以

ﾄﾞにCaBP‑D28KmRNA量の測定は，後藤ら(2001)の方法なった場合に有意な差があるものとし,2つの平均値のに準拠して,Solutionhybridization法で行なった。差の検定は,Student'st‑testで行った。

表2．カルシウム給与時期が生存率，産卵成績及びカルシウム摂取量におよぼす影響
Table2

Influenceoftimeofcalciumintakeonviability,egglayingperformanceandcalciumintake

９７５

９９０

生存率(%)Viability(%)
産卵率(%)Eggproductinratio(%)
卵重量(9)Eggweight(g/hen/day)

飼料要求率Feedcollvertion

１

H卵量(9)Eggmass(g/hen/day)
飼料摂取量(g/羽/R)Feedintake(g/hen/day)

必斗

６３
３３
４５
６０
３０
５
１
６劫却却封却却９８０１４０７
７
５５
７１
９２３
８６
１

３
１４
３７
９９
４７
０４
０
６コ却却型却却９８９２１０５
６
８２３
８５
６７
５１

対照鶏Controlhen試験鶏Treatmenthen

カルシウム摂取量(g/羽/I=I)Calciumintake(g/hen/day)
対照鶏には3.1%カルシウム含付飼料を日由に摂取させ，試験鶏には午liii5時から午後0時までは1.0%カルシウ
ム含有飼料を，午後0時から午後7時までは482％カルシウム飼料を給与した．
Controlhenswerefed3.1%calciumdietqd"b〃"柳,whiletreatmenthenswerefed1.0%calciumdietfrom
5amtoOpmand4.82%calciumdietfromOpmto7amdaily.

:：平均値士標準誤差#:Mean±SE．

表3．カルシウム給与時期が卵殼質におよぼす影響
rable3.Innuenceoftimeofcalciumintakeoneggqualit)

処理前

処理後

Beforetreatment

へftertreatment

ｎ
ｅ

ｌ

鶏趾

Ｏ

昭へ︑

Ｃ

試験鶏
Treatmenthen

対ｍ

対照鶏Controlhen

試験鶏Treatmenthen

卵殼強度(kg/cm2)
Eggshellintensity(kg/cm2)

2．95±0.076#a##3.00=t0.08a2.84±0.072a3.06士0．10()&！

卵殼重量(9)5．60±0.065a')

5．73士0.069bc

5．42±0.065a5.57=t0.082:'')0．35±0.003ab

0．36±0.004bc

0.35=t0.003a0.36士0.005a')

Eggshellweight(9)卵殼厚(mm)Eggshellthickness(mm)対照鶏には3.1%カルシウム含有飼料を自由に摂取させ，試験鶏には午前5時から午後0時までは1.0%カルシウ
ム含有飼料を，午後0時から午後7時までは482％カルシウム飼料を給与●した．
Controlhenswerefed3.1%calciumdiet(zd〃仇加加,whiletreatmenthenswerefedl.0%calciumdietirom

5amtoOpmand4.82%calciumdietfromOpmto7amdaily.

鴬：平均他±標準誤差．
z:Mean±SE．

##：同じライン上の異符号間で5％水準の危険率で有意差あり．

":Meanswithsuperscriptsinthesamelinearesignificantlydifferent(P<0.05).

Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

後藤ら:CaBP‑D28K遺伝子発現とカルシウム給与時期J5
表4．カルシウム給与時期が卵殼におけるカルシウム含量とマグネシウム含量におよぼす影響｢able4.Influenceoftimeofcalciumintakeoncontentsofcalciumandmagnesiumineggshell

カルシウム含量(mg)

処理前

処理後

Beforetreatment

へItertreatmenl

対照鶏

試験鶏

対照鶏

試験鶏

Controlhen[、reatmenthen

Controlhen

I､reatmenthen

2,169=t29.20gc"2,119±29．67')c

2,004=t22.20a2,085±30.691

Calciumcontent(mg)カルシウム割合（％）

38．7±0.28I)

37.0=t0.38;｣37.0±0.25:!37.5±0.2461

PercentofcalCium

マグネシウム含量(mg)17．8±0.32;｣18.7±0.386[21.0±0.43b23.1±0．47c

Magnesiumcontent(mg)マグネシウム割合（％）

0.317±0.004a0.327±0.005nO.388±0.006I)0．416=t0.007(

Percentofmagnesium

対照鶏には3.1%カルシウム含有飼料を自由に摂取させ，試験鶏には午前511寺から午後0時までは1.0%カルシウ
ム含有飼料を，午後0時から午後7時までは4.82％カルシウム飼料を給与した．
Controlhenswerefed3.1%calciumdietaa〃bだ"柳,whiletreatmenthenswerefed1.0%calciumdietfrom

5amtoOpmand4.82%calciumdietfromOpmto7amdaily.

恩：平均値士標準誤差
Mean=tSE.

菖菖：同じライン上の異符号間で5％水準の危険率で有意差あり．
Meanswithsuperscl‑iptsinthesamelillearesignincantlydiffererll(P<0.05).

土 士 E 日jll
口不

儂度を1111定したところ，図lに示されるように,Caイオン儂度は，対照鶏において，排卵l〜2時間後から排卵7生存率，産卵率，卵重飼料摂取量，飼料要求率およ

811寺間後までは,1.20〜l.26mMと排卵周期中では比UKCa摂取量は，いずれについても対照鶏と試験鶏との較的高い濃度で維持され，その後排卵7〜8時間後から間で有意な差は認められなかった(P>0.05)(表2)｡

排卵10〜1l時間後にかけて0.98mMまで約20%有意試験開始時と試験終了時において，無作為に採取したに減少した(P<0.05)後，排卵13〜14時間後にかけてそれぞれ50個の卵について種々の卵殼質を肌l1定したと

l.09mMまで有意に増加し(P<0.05),約1.0mMで次ころ，卵殼重量と卵殼厚は，対照鶏と試験鶏との間に有の排卵l1寺まで維持された。これに対し，試験鶏において意な差違は認められなかった(p>0.05)｡しかし，卵殼は,Caイオン濃度の排卵周期中の変動の様相は対照鶏強度においては，対照鶏では試験終了時には試験開始時の場合と同様な様相であったが，高Ca含有飼料に切りに比べて低下する傾向がみられたが，試験鶏では低Fす

替わって1時間後と4時間後である排卵4〜5時間後とる傾向はみられず，試験終了時では対照鶏より試験鶏の排卵7〜8時間後において，対照鶏のそれらの時期と比方が高い傾向を示した（表3)。さらに，卵l価￨､!1たりのべて，有意に低かった(P<005)。

卵殼中におけるCa含量は，対照鶏では試験開始時に比血漿[￨!雌機リン濃度の変動の様相は対照鶏と試験鶏とべ試験終了時に有意な減少が認められたが(P<005),の間で大きな違いは見出されなかったが，対照鶏では排試験鶏では有意な減少は認められず，結果として試験終

卵16〜17時間後にピークが見出されたのに対して，試了時においては対照鶏に比べて試験鶏の方が有意に高い

験鶏では排卵13〜14時間後に認められた。

値であった(P<0.05)(表4)。また，卵1個当たりのマ

卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNA濃度は，排卵周グネシウム含量は，対照鶏と試験鶏のいずれの場合にお期巾における変動の様相は対照鶏と試験鶏の間で大きないても，試験開始時に比べ試験終了時に有意に増加し，相違は見出されなかったが，卵殼形成期と見なされる排しかも試験終了llfでは試験鶏の方が対照鶏に比べ有意に91113〜20時間において対照鶏に比べて試験鶏の方が有多かった(P<005)(表4)。

意に高い値を示した(P<005)。

試験開始4週間後に，対照鶏と試験鶏において3時間間隔で，排卵周期'￨‑!における血漿巾Caイオン濃度と無機リン濃度および卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNA考 察
破卵による経済損失を防ぐため，卵殼質の向上を目指Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

日本家禽会誌39巻J1号(2002)

J6

8:00amnoon

7:00am

１０
３１

％％

ＣＴ

︵冨日︶

︵冒旦

目昌一呵曇目のロロ○○の碧呵ニロ四○二回︹員切望四︵冨日︶囲辿八一一謹肇無自

５２
０１
５１
００
５
３１
２１
１１
００
９ ２
１

ロＣ垣阿鼻︹５口目○○目日日三ｓ君Ｑ呵日の星図︵冨日︶囲辿入棯︑罰やぶミ侭無目

C:3.1%i
T:4.82%iⅡ

5：O0am

C:3.1%
T:1.0%

IC:3.1%!T:1.0%I

rolhent menthen

芦

CD

a

Ⅱ

1
1

Cd*

︵呈乞塵﹃国ＳｍコョヨＣ戸色

０
００
３０
２１

︵くｚ函巽普冒壱層︶

白昌穂畠首８目ｇ歪ｚ西日ェ闇口山四面○で自画乱﹁司二⑳囲墾ごｚ西日苗ざ山国飼○歸些語呂C
l〜27〜813〜1419〜2023〜24
4〜510〜1116〜1722〜23

排卵後時間
Hourafterovulation

図1

Fig.1

カルシウム給与時期が産卵周期中におけるⅢl漿力ルシウムイオンと無機リン濃度および卵殼腺部におけるCaBP‑D28kmRNA濃度におよぼす影響
Iinuenceoftimeofcalciumintakeonplasmaconcentrationsofcalciumandphosphate,andshellglandconcentrationofCaBP‑D28kmRNAduringtheovulatorycycle

対照鶏には3.1%カルシウム含有飼料を自由に摂取させ，試験鶏には午前5時から午後0時までは

1.0%カルシウム含有飼料を，午後0時から午後7時までは4.82%カルシウム飼料を給与した．
Controlhenswerefed3.1%calciumdiet(zd"b〃"叩,whiletreatmenhenswerefed1.0%

calciumdietfrom5amtoOpmand4.82%calciumdietfromOpmto7amdaily.
＃：平均値士標準誤差＃：Mean±SE．

＃＃：同じライン上の異符号間で5％水準の危険率で有意差あり．
##:Meanswithsuperscriptsinthesamelinearesignificantlydifferent(P<0.05).

★：対照鶏に対して5％水準で有意差あり(t‑検定).P<0.05versuscontrolhen.
★★：対照鶏に対して1%水雄で有意差あり(t‑検定).P<0.01versuscontrolhen.

Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

後藤ら:CaBP‑D28K遺伝二j 発 現 と カ ル シ ウ ム 給 与 I I J F I M J 7
して様々な試みが検討されているが，卵殻形成がまだ行

Waddell"".,1991),卵殼形成に伴い,Caと同様に卵われていない午前には低Ca含量飼料を，卵殼形成が行

殼への沈着が増加することが知られている(Brooks

われている午後には高Ca含量飼料を給与することで，

andHale,1955;Itohandl‑Iatano,1964;Waddel"".,

卵殼質が向上することが報告（後藤ら，未発表）されて1989)。従って，本試験結果において，試験鶏で認められいる。そこで，本実験では,Ca給与H寺期が卵殼強度，血た卵殻中のMg含量の増力Ⅱは，卵殼!IICa含量の増加に

中Ca濃度，血巾無機リン濃度，卵殼におけるCa含量及連動したものであろう。

び卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNAレベルに与える

そこで，卵殼形成が行われている卵殻腺部の影響を検討することで,Ca給与llｷ期が卵殼形成におよ

CaBP‑D28KmRNAレベルにも,Ca給与時期が何らかのぼす効果を明らかにしようとした。

影響を与えているのではないかと推察し,CaBP‑D28K

本実験では，低Ca飼料を午前5:00〜IE午の￨IxIf期に，

mRNA儂度をSolutionhybl･idization法を川いて川l定高Ca飼料を正午〜午後7:00に給与することにし，対した結果，対照鶏に比べて，試験鶏では，排卵後13〜20

照鴎にはCa含量3.10%の通常飼料を目I=￨‑1に給与し，そ時間で有意に高い価を示した。この時川は，排卵された

れぞれ水と共に自由摂取させ，4週間飼育した。

卵は卵殼腺部に到達しており，卵殼にCaが沈着し，卵その結果，血漿Caイオン濃度は，低Ca飼料が与えれ殼形成を行っているⅢf期でもある。つまり，午前にCaている午前と高Ca飼料に切り替えた初期の時期におい含量1.00%の低Ca飼料，午後にCa含量4.82%の高Caて，試験鶏の方が対照鶏に比較して約10%低いCaイオ

飼料を給与することで．卵殼形成時期においてン濃度を示した。これらのことから，低Ca飼料の給与

CaBP‑D28KmRNAレベルが有意に高い値を示すことがは，血中のCaイオン濃度を減少させることが樅察され認められた。Iedaら(1999)は，低Ca飼料(0.5%カルる。また，血漿無機リン濃度については，対照鶏と試験

シウム含有飼料）を給与することにより血巾の総Ca濃鶏の間で変動の様相に有意な相違は認められなかった

度が減少し，卵殼質が低下するが卵般腺部のCaBP‑D28K

が，対照鶏に比べて試験鶏ではピーク濃度の出現I1寺期がmRNAは有意な変動がなかったことから，低Ca飼料の早期に現れた。ニワトリにおいては，血漿中の無機リン

給与は，卵殻￨￨泉部のCaBP‑D28KmRNAには影響を技ぼ

濃度が卵殼形成ll!fに増〃llすることが報告されておりさないことを報告している。本試験結果においても，低(MonginandSauveul･,1979;Frostaa/.,1991;

Ca含有飼料を給与した午前においては,CaBP‑D28K

RuschkowskiandHart,1992;RLIschkowski"".,mRNA濃度の差はなく,Iedaら(1999)の報告を裏付け

1993),その理由として，卵殼形成により消費されたCa

る結果であった。これに対して，高Ca飼料を給与したを補うため，骨中のCaが￨Ⅲ中に移行するため，リンもノF後では，対照鶇に比べて試験鶏の方が有意に卵殼￨￨泉部

同時に移行するものと考えられている(MonginandのCaBP‑D28KmRNAが増加したことから，高Ca飼料

Sauveur,1979)。これらのことから，試験鶇において，は，卵殼腺部のCaBP‑D28KmRNAを増加させることが午前に低Ca飼料を給与することで血漿中Caイオン濃示唆された。

度が低 ドしたため，骨からのCa淵｣̲￨つまり骨吸収が早以上のように，午liilにCa含有 l.00%の低Ca飼料を，期に行われたが，｜Ⅲ漿無機リン機度の変動は対照鶏とほ午後にCa含有4.82%の高Ca飼料を給与することで，

ぼMじ様｜Ⅱであったことから，骨からのCa溶出の番ll合

生存率，産卵率，卵IⅢ，飼料摂取量，飼料要求率に影響は対照鶏と大きな差異はないと推察される。また，卵殼を与えず，卵殼強度の増加側向，卵殼中のCa含量の有形成が盛んに行われている時期には高Ca飼料がjjえら

意な墹加，さらに卵般形成lIf期における卵殼腺部のれているにも関わらず,lⅢ漿Caイオン濃度が対照鶏に

CaBP‑D28KmRNAレベルの有意な剛"Ⅱがみられること比べて高い値を示さなかったことは，試験鴉において高から，午後に高Ca飼料を給与することにより卵殼腺部

Ca飼料として給与したCaが卵殼形成に有効に利用さにおけるCaBP‑D28KmRNAの増加を介して，卵殼へのれていることを示唆している。

Ca沈着量が増加し，卵殼質が￨｢']上する口J能性が示唆さ

一方，卵殻中のCaとMg含量は，対照鴎では試験開始時に比べて，試験終了時には有意に減少しているのに対し，試験鴫ではｲ]意な減少は認められず，試験終｣/時

れた、

謝 辞

においては試験鶏の方が有意に多かった。従って，卵殼

実験遂行にあたり懇意なる御指導を賜り,CaBP‑D28K

形I戊時における高Ca飼料の給与は，卵殻巾のCa含量

cDNAをご提供頂いた名古lそ』大学農学部教授島田ﾊ!i司を増加させることを示している。また,Mgは,Caと同博士および家田照子仲̲'二に深く感謝の意を表します。ま様に卵殼腺部を介して卵殼に移行し(SolOmon,1971;

た，終始実験に協ﾉﾉ蚊いたH水配合i,1料株式会社中央研Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

日本家禽会誌39巻J1号(2002)

J8

究所・飼料畜産開発センター所員一同に感謝いたしま

presenceofaneggandcalciumdeposilioninthe

す。

shellglandonlevelsmessengerribonucleicacidof
CaBP‑D28KandofvitaminD3receptorintheshell

引 用 文 献glandofthelayinghen.GeneralandComparative

BarAandHurwitzS・Uterinecalcium‑bindingpro‑

IedaT,SaitoNandShimadaK.Effectoflowcalcium

teininlayingfowl.ComparativeBiochemistryand

dietonmessengerribonucleicacidlevelsof

Physiology,A45:576‑586.1973.

calbindin‑D28KoIintestineandshellglandinlaying

Endocrinology99:145‑151.1995.

BarA,StriemS,Mayel‑AfsharSandLawsollDEM.
Differentialrcgulationofcalbindin‑D28KmRNAin

hensinrelationtoeggshellquality.JapanesePoul.
tryScience,36:295‑303.1999.

theintestineandeggshellglandofthelayinghen.

ItohHandHatanoT・Variationofmangnesiumand

JoumalofMolecularEndocrinoIogy,4:93‑99.

phosphorusdepositionratesduringeggshellfor‑

1990.

mation.PoutryScience,43:77‑80.1964.

BarA,StriemS,VaxE,TalpazHandHurwitzS.

LennnardsRMandRolandSr.Theinfluenceoftime

RegulationofcalbindinmRNAandcalbindinturn‑o[dietarycalciumintakeonshellquality・Poultry

overinintestineandshellglandofthechicken.

AmericanJournalofPhysiology,262:R800‑R805.
1
9
9
2
．

BootwallaSM,HarmsRHandWilsonHR.E[fectof

feedingtimeandsupplementatiOnwithcalcium/
phosphoruspelletsontheperformanceofbroiler
breeders.PoultryScience,61:1421.1982.

BrooksJandHaleHP.Strengthoftheshellofthe
hen'segg.Nature(London),175:848‑849.1955.

Science,60:2106‑2113.1981.

MonginPandSauveurB.Plasmainorganicphospho‑rusconcentrationduringegg‑shellformation.Brit‑
ishPoLlltryScience,20:401‑412.1979.

NysY,Mayel‑AIshar,BouillonR,VanBaelenHand
LawsonDEM.IncreasesincalbindinD‑28KmRNAintheuterusofthedomesticfowlinducedbysexual
maturitvandshellforlnatioll.GeneralandCom‑parativeEndocrinology,76:322‑329.1989.

CasonJAandBrittonWM.Eggshellqualityfollow‑

NysY,Bake1･K,BoLlillonR,VanBaelenH,and

ingshort‑termfeeddeprivation.PoultryScience,LawsonDEM.RegulationofcalbindinD28Kandits

60:1636.1981.

CommollRH.Observationsonthemetabolismof

poulletslll.JournalofAgriculturalScience,28:347‑347.1938．

CorradinoRA,WasseramanRH,PublosMHand
ChangSI.VitaminD3inductionoIcalciumbinding

proteinintheuterusofthelayinghen.Archivesof
BiochemistryandBiophysics,125:375‑380.1968.

mRNAintheintestineofthedomestichen.Gener‑

alandComparativcEndocrinology,86:460‑468.
1
9
9
2
．

PhillipsREandWarrenDC.Observationsconcerning
themechanicsofovulationinthefowl.JoLIrnalof

ExperimentalZoology,76:117‑136.1937.
RolandDAandFarmerMEggshellQuality.World's
PoLlltryScienccJoumal,40:255‑260.1984.

DuckworthJandHillR.Storageofelementsinthe

RuschkowskiSRandHartLE.Ionicandendcrine

skelton.NutritionAbstractReverse,23:1‑1.1953.

characteristicsofreproductivefailureincalcium‑
dencientandvitaminD‑dencientlayinghens.

FrostTJ,RolandDASandMarplel)N.Thee｢｢ectsof
variousdietaryphosphoruslevelsonthecircadianpatternsofplasmal,25‑dihydroxycholecaliferol,

RuschkowskiSR,RobinsonFE,ChengKMandHart

totalcalcium,ionizedcalcium,andphosphorusIn

LE.Comparisonoftwomultiplebloodsampling

PoutryScience,71:1772‑1732.1992.

layinghens.PoLlltryScience,70:1564‑1570.1991.

regimensLIsinganinwellingvascularaccess後藤尚也・高橋大三・田上雅之・亀岡絵都子・l11村奈美

deviceforinvestigationsofthehen'sovulatory

子．武ｲi勝・上吉道治．‐'一二指腸と卵管子脚部におけるカルシウム結合蛋白質(CaBP‑D28K)mRNA発現

cycleandcalciummetabolism.PolltryScience,72:

およびIⅢ中カルシウム濃度のニワトリ排卵周期中の変Simkiss,K.Calciumandavianreproduction.

動．東海畜産学会報,9.1‑5.1998.
後藤尚山．￨n上雅之・伊那佐江子・荒川仲代･lll村奈美
子・武石勝・上吉道治．ニワトリの卵殼腺祁におけるCaBP‑D28Kの迩伝子発現に及ぼす性ステロイドホ
ルモンの影響.ll本家禽学会誌,2001.(印lll1l'l1)
HellwigHM,SlagterPJ,JohnsonZB.Potentialvalue
of@'mornig"and$､afternoon''feedsforlayinghens.
PoLlltryScience,61:1381.1982.
IedaT，SaitoN.OnoTandShimadaKEffectsof

72−184．1993，

SymposiaofZoologicalSocietyofLondon,No.35:
305‑337.1975．

SoiomonSE.F1uctuationsintotalcalciumandmag‑

nesiumintheplasmaanduterinenuidofthedo‑
mesticfowl.BritishPoutryScience,12:165‑167.
1971．

StriemSandBarA.ModulationofqLIailintestinal

andeggshellglandcalbindin(Mr28000)geneex‑pressionbyvitaminD:,,1,25‑dihydroxyvitaminD｣

Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

後藤ら:CaBP‑D28K遺伝子発現とカルシウム給与時期
andegglaying.MolularandCellularEndocrinolo‑
gy,73:169‑177.1991.

J9

WaddellAL,BoardRG,ScottVDandTulletSG.Role

ofmagnesiumineggshellformationinthedomes‑

TaylorTGandStringerDA.Eggshellformationand

tichen.BritishPoultryScience,32:853‑864.1991．

skeletalmethabolism.In"AvianPhysiOlOgy''.

WaddellAL,BoardRG,ScottVDandTu]letSG.

(SturkiePDed).2ndedition,pp.485‑514.1965.

Influenceofdietarymagnesiumcontentonlaying

CornellUniversityPress,NewYol‑k.

performanceandeggshellmagnesiumcontentin

TausskyHHandShorl‑E・Amicrocolorimetrlc
methodforthedeterminationoflnorganicphos‑

phorus.JoumalofBiologicalChemistry202:675‑
685．1953．

thedomestichen・BritishPoultryScience,30:865‑
876.1989.
WarrenDCandScottHM.Ovulationinthedomestic

fowl・PoutryScience,14:195‑207.1935.

Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

R本家禽会誌39巻J1号(2002)

JIO

InfluenceofTimeofCalciumlntakeonPlasmaConcentrationsofCalciumandShellGlandConcentration

OfCaBP‑D28KmRNA
HisayaGoto'),MasayukiTagami'),MihokoAruga2),

TomohiroTakama2),MasaruTakeishi'),NamikoYamamura2)andMichiharuKamiyoshi2)')Laboratoryo｢NipponFormulaFeedMfg.Co.,Ltd.Tochigi321‑3621
2)TheUnitedGraduatcSchoolofAgriculturalScience,GifuUniversity,Gifu501‑1193
Thepurposeofthestudywastoclarifyeffectsofthetimeofcalcium(Ca)supplementationoneggshellformation.ChickensusedintheexperimentwereWhite
Leghornsegg‑layinghensaged45weeks・Controlhensweregivenanormal‑Cafeed
containing3.1%Ca,whiletesthensweregivenalow‑Cafeedcontaining1.0%Cainthe

morningandahigh‑Cafeedcontaining4.82%Caintheafternoon.Thehenswerehousedfor4weeks.Thesurvivalrate,thelayingrate,theeggweight,thefeed

consumption,thefeedconversionandtheCacoDsumptionweremeasuredduringthe
studyperiod.TheplasmaCaionandinorganicphosphorusconcentrations,andthe
CaBP‑D28KmRNAconcentrationsintheshellglandwereanalyzedevery3hoursduring

theovulatorycycleatthestudycompletion.HardnessandCacontentoftheshellwere
measuredin50eggsoptionallycollectedatthestudyinitiationandcompletion.The
timedifferenceofCasupplementationdidnotaffectthesurvivalrate,thelayingrate,
theeggweight,thefeedconsumption,thefeedconversionandtheCaconsumption.
TheplasmaCaionconcentrationsinthemorningandearlyafternoonwere
signincantlylowerinthetesthenscomparedwiththecontrolhens･Apeakofthe

plasmainorganicphosphorusconcentrationsappearedearlierinthetesthensthanthe
control・Thehardnessoftheshellinthecontrolhenstendedtodecreasebetweenthe

studyinitiationandcompletion,butthatinthetesthensdidnot.TheCacontentoftheshellinthecontrolhenssigni6cantlydecreasedbetweenthestudyinitiationand
completion,butthatinthetesthensdidnot・TheCacontentoftheeggshellatthe
studycompletionwassignincantlymoreinthetesthensthanthecontro1.The
CaBP‑D28KmRNAconcentrationsintheshellglandl3to20hoursaftel‑ovulationwere

significantlyhigherinthetesthensthanthecontrol.Theseresultsthatdemonstrated
theCasupplementationregimenincreasedCadepositioninshellduetoraising

CaBP‑D28KmRNAlevelsintheshellgland,andwouldsubsequentlyimproveeggshell
quality.
&ﾉﾋZ""gsGPOzJ"rySCje"",39:tﾉZ‑JIO,200"
Keyword:calcuim‑bindingprotein,geneexpl‑esslon,calclum,eggshellquality,chicken