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日本家禽学会誌,42.･J87 J93,2005

ニワトリ腹腔内脂肪組織を構成するタンパク質の同定
品川真吾l).仁木隆博l).河邊弘太郎2)・山下秀次l).荒木朋洋l).信國喜八郎l).芝田猛'）！)九州東海大学農学部，熊本県阿蘇郡南阿蘇村869‑1404
2)鹿児島大学生命科学資源開発研究センター，鹿児島県腱児島市郡元890‑0065
本実験では，鳥類の脂肪組織におけるタンパク質の存在とその種類を￨ﾘ1らかにするため，ニワトリの脂肪組織をもちいてSDS‑PAGEによりタンパク質を分離し，クマシーブリリアントブルー(CBB)R
250で検出した後，アミノ酸配列を決定しタンパク質の同定を試みた。供試鶏としてブロイラー(Ross308系統）を用い,43日齢に放血と殺後,ll豆腔内脂肪を摘出した。腹腔￨ﾉ1脂肪は界面活性剤と尿素を含む溶媒でホモジナイズして遠心分離し，得られた上清についてSDS‑PAGEによりタンパク質を分離した。その結果，腹腔内脂肪組織から約40種類のバンドが検出された。このうちCBBR250による染色の度合いから量的に多いと推定された12種類のタンパク質バンドについて，リシルエンドペプチダーゼ

によりゲル内消化後，逆相HPLCによりペプチドを分離した。このうち8種類のタンパク質バンドについてペプチドマップが得られた。これらのタンパク質について,1つのタンパク質当たり2〜3のペプチ
ドについてアミノ酸配列を決定した。得られたアミノ酸配llから,BLASTにより相同性のあるタンパ

ク質を推定した。相同性検索の結果と推定分子量から，血漿アルブミン，2種類のビメンチン，アネキシンⅡおよび脂肪組織由来脂肪酸結合タンパク質(AFABP)が同定された。これらのタンパク質は，二次元電気泳動法によりそのスポット位置が推定された。ペプチドのアミノ酸配'｣が決定されたタンパク質のうち3種類のタンパク質バンドは,BLASTによる州同性検索で一致するものが雌く，このうち幾つかのタンパク質バンドは，新規のタンパク質である可能性が示唆された。このことから，更に解析を進めることでニワトリのI旨肪組織に新規なタンパク質を検出できる可能 性が示唆された。
キーワード：腹腔内脂肪組織タンパク質,SDS‑PAGE,BLAST,ニワトリ

一一一目

緒

つことなどが報告されている。これらのことから脂肪細llaのI￨iIII!的意義が注￨￨されている。

脂肪組織の役割が余乗llなエネルギーの貯蔵であること

旧￨"組織について畜産学の分野では肉用牛の脂肪交雑は，従来から知られている。しかし，最近の研究では，との関辿で￨￨旨ll/jill111包分化の 災￨大￨となるC/EBPファミ

この組織はエネルギーの貯職のみならず，生即的活性物

リーやPPARγについての遺伝子解析(Sundvold"".,質の合成・分泌に関与することが示されている。すなわ1997),またゲノム解析データを利用したQTL解析（山ち，肥満遺伝子の産物であるレフ°チンがI旨肪lll胞からlill

lllら,2003)が鴨んに試みられている。ニワトリでは，

液'‑I｣に分泌されていること(Freedmanejfz/.1998),IIH

肉川鷆のllu台に｛､￨4うl1貝腔内への多量の脂肪沈着が認めら

肪細胞内にアディポネクチンと称される新規タンパク質れることから，これに関連する迫伝子についてのQTLが存在し(Maeda"".,1998),このタンパク質は仇動解析が進められている(Burt,2001)。しかし，ニワトリ

脈硬化作用(Yokota"""2000,OLIchi""l.,2001)｣Pがヒトと￨,i1棟な，または特異的なタンパク質やペプチド

インシュリン感受'￨生兀進作llj(IIotta"""2001)を排を脂llﾉ脚￨￨￨胞で合l戊，分泌しているか否かについての報告
はみあたらない。

2004年11月8日受付,2004年12ﾉ16日受皿連絡者：芝田猛〒869‑1404熊本県阿蘇郡南阿蘇村河￨場

一方，ゲノム解析の結果がデータベース化され利用できるようになってきている。しかしながら，辿伝子の機

Tel：0967‑67‑3931

能については，実￨際に細ll包￨ﾉ1で翻訳後修飾を受け，機能

Fax：0967‑67‑3960

洲節を受けて様々な働きをしているタンパク質について

e‑mail:tshibata@ktmail.ktokai‑u.ac.]pDNA解析からのみでは全てを明らかにすることは困難Copyright ©2005, Japan Poultry Science Association
J 8 8 H 木 家 禽 学 会 誌

42巻J2号(2005)である。近年，ゲノム情報を*I川)しながら遺伝子の産物

イン溶液（アマシャムファルマシアバイオテク）をであるタンパク質について,￨IL(接その機能を解明する必Hirano"".(2000)の報告に従い洲合し,8M1水系およ要のあることが認識されるようになった。この種の研究

び2％2−メルカプトエタノールを含む38％のポリアク

は，プロテオームまたはプロテオミクス解析と呼ばれ，リルアミドゲルを作製した。このIPGディスクケルでタ細胞で発現しているタンパク質を網羅的に研究しようとンパク質を分離し，これをSDS‑PAGEにより二次元展するものである(Kahn,1995;PandeyandMann,

開し,SDS‑PAGEの場合と￨1il様にCBBR250染色後，

2
0
0
0
)
。

脱色した。

本研究は，ニワトリの脂肪組織について，電気泳動法

解析に先立ち，調整した脂肪組織試料とlill漿試料を同によりタンパク質を分、し，それぞれのタンパク質につ一ゲル上で電気泳動を行い，血液タンパク質が脂肪組織

いて部分アミノ酸配l1を￨ﾘIらかにし，ゲノムデータベー

試料の電気泳動像に影響を与えていないことを￨唯認しスを利用して未だ解Iﾘ'されていないニワトリの脂肪組織た。また，供試鶏侮に腹腔内脂肪タンパク質を分離したを幟成する主要なタンパク質をIﾘlらかにすること，およが，タンパク質バンドに個体変異が確認されなかった。

び新規なタンパク質を検￨￨'し，プロテオーム解析を行う

そこで各タンパク質バンドについての1111川および解析ための埜礎とすることを￨￨￨'19として行った。

は，2〜3羽の試料をプールして川いた。

材料および方法

次に，タンパク質のアミノ酸配l1解析は，ペブチド

マップを作製し任意の単一ピークを示したペプチドにつ供試鶏としてブロイラー(Ross308系統）の雄8>Mをいてアミノ酸配列を決定することで〃った。SDS−PAGE用いた。これらのニワトリは，ドノjﾉ￨{から20FI齢までは常により分離した目的とするタンパク質祁分のゲルをLﾉjり

法に従って育雛器（全唆i判製作}ﾘ↑）で飼育した。その後，出して粉砕し,100%アセトニトリルで脱色および脱/k

43日齢までは温度2()〜24℃，照lﾘ111W114時￨川（午前5を行った。これに19のグアニシジン堀駿端,600ﾒ〃の時〜午後7時）に洲幣された部屋に移し，中雛用ケージ

トリス塩酸緩衝液(pH85)をﾉ川え，さらに,5〃/の4−にて飼育した。飼料は,201̲1齢までは育雛用，以後は中ビニルピリジンおよび10"/のトリ−，−ブチルフォス

雛用（いずれも伊藤忠飼料）を川い，水とともに自由摂

フィンを加え，室温で暗所にて還元ビリジルエチル化を取させた｡43FI齢で放血屠殺しll團腔￨ﾉ1脂肪組織を摘出し行った。その後，反応液を除去し,0.2MNH1OHで5回た。脂肪組織は分析に供試するまで‑20℃で凍結保存しゲルを洗浄し，吸引して乾燥させた。切り出したバンド

た。

に含まれるタンパク質の酵素消化は，ゲルに含まれたま

Lowry法により脂肪糺l微のタンパク質量を測定した

まの状態で行った。タンパク質のゲル内でのii'i化は，ケ

ところ，組織19あたり約l.5mgと他の組織に比較する

ル片にトリスー塩酸緩衝液(pH9.0)を266"j"IIZ,これと10〜15%程度とかなり低いものであった。このため，にプロテアーゼI(0.5"gのリシルエンドペプチダーゼ）

電気泳動に供する試料は,19の脂肪組織に3mjの試料を添加し，37℃で12時間の反応後,IIjl量のプロテアー

溶解液(8M尿素2%ノニデットP40,5%2−メルカフ．

ゼIを加え12時間行った。消化物は,15,0001‑pm,20分

トエタノール）でホモジナイズし,20,000×gで20分間

間遠心分離し，得られた上清に0.114%トリフルオロ酢

遠心分離を21'!￨行い，｜情を‑20℃で凍結保存したもの

酸(TFA)を加え，酵素消化液とした。

を用いた。

タンパク質の分離はSI)S‑PAGEによって行い，回収したペプチドをシリカ系逆ll1高速波体クロマトグ
ラフィーカラム(ChromolithPerformanceRP‑18e,4．6

Laemmli(1970)の〃法を一部変班して行った。分離川

X100mm,MerckKgaADarmstadtGcrmany)によりゲル(180×140×1mm)は10‑20%の漉度勾配を作成し分離した。ペプチドの溶''1には,0.1%TFA(群液A)とたものをl:￨1いた。各￨￨,'rl体の111ill腋をIレーン当たりタン

溶液Aに濃度60%でアセトニ￨、リルを群解したもの

パク質品30"gにi淵終し添ﾉjlIした。電気泳動後のゲルは（群液B)を用い，アセトニトリルの()〜60%のl111線膿度

0.25%クマシーブリリアントブルー(CBB)R250により勾配によりペプチドを溶出した。ペプチドの検''1は，イ染色後，脱色液（5％メタノール，7％鮓雌）で脱色し，ンテリジェントインテク､レーダ807‑IT(II水分光）によ

真空パックで保存した。

り220nmで行った。溶出された任意の単一ピークをエSDS‑PAGEにより検IIIされたバンドが単一のタンパ

ドマン法による自動アミノ酸シークエンサ(Model492

ク質か否かを検討するために，二次元電気泳動を行っprocisccLC,PEバイオシステムおよびPPSQ‑21,島津

た。まず，一次元￨̲￨の電気泳動は，固定化pH勾配ゲル製作所）によりN末端部分アミノ酸配ﾘを決定した。得(IPG)を用いて行った。IPGディスクゲルは，イモビラられたアミノ酸配列をBLAST(http://www.ncbi.

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品川ら：鶏脂肪組織タンパク質の同定J89
nlm.nih.gov/BLAST/;Kal･linandAltschul,1990)に(AP‑6),15‑kDa(AP‑7)および14‑kDa(AP‑8)と惟疋より相同性を検索しタンパク質の同定を行った。された。
二次元電気泳動により脂肪組織のタンパク質を腱附し

玄 士 E 日小口

不た像を図lbに示した。ニワトリ腹腔内の脂ll〃組織タン

1.SDS‑PAGEおよび二次元電気泳動像パク質は，その多くのものが等電点5〜7にあり，量的にlXllaに示すように腹腔￨ﾉ1脂肪糸ll織において,SDS‑多いタンパク質のほとんどがこの位置に検出された。しPAGEにより分離されCBBR250染色で肉眼的に検出かし，等電点8前後にもタンパク質が検出された。
されるタンパク質バンドは，およそ40種類であった。しまた，二次元電気泳動（図lb)からSDS‑PAGEで検かし，そのほとんどはCBBR250染色の度合いから微量出されるバンドに複数のタンパク質が含まれるか否かがであると考えられた。本実験では,IXllaに示すとおり確認された。すなわちAP‑l〜3,5およびAP‑8のバンド

CBBR250で濃く染色され．分析に｜分なタンパク質量はほぼ単一なタンパク質で幟l戊されていると猪.えられがあると考えられる12ル鯛Iのバンドについてアミノ酸た。しかしながら,AP‑4のバンドは等泄点5.5付近に濃配列解析を試みた。その結果,811m畑のタンパク質バンいスポットと7に近い1,1近に抑いスポットが恩められドのペプチドについて部分アミノ雌￨￨肥l1を得ることがでた｡AP‑6のバンドは，等電点55{､￨近に含ｲ1 IItの多いタ
きた。アミノ酸配列が〃られたタンパク質について解析ンバク質スポットが検出されるが，同様に弊',u,'､'､(71,1近I'
Iを進めるうえで，これらのタンパク'ﾊバンドに分子量のにも幾つかの薄いスポットが検''1された。AP‑7はllil一

大きい方から番号(AP‑l〜8)をつけた。これらのタンパの分子量の位置に等電点が類似した染色腱合いが鵬いもク質バンドは，タンパクII'Iマーカーの分子壁と移動度かのと薄いものの2つのスポッl､が検￨￨￨された。AP‑7にら分子量がおよそ66‑kDa(AP‑l),55‑kDa(AP‑2),50‑ついてはこの2つのスポットが共存する状態でアミノ雌kDa(AP‑3),44‑kDa(AP‑4),40‑kDa(AP‑5),29‑kDa配列解析を行った。

(b)
8

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働王鐸一ごﾆﾆｰｰ曾一…蕗.吾ｴ興率悪‑…‑‑一鐸擁鐸塞*鄙韓‑‐竪弾

21．5

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(a)

図1.SDS‑PAGEおよび二次元ポリアクリルアミドゲル'電気泳動法(2‑DPAGE)により分離されたニワトリ
I夏腔￨ﾉ1脂llﾉjil1細のタンパク質像。

(a)SDS‑PAGEによるタンパク質像。ゲルの最も左のレーンは，分子量マーカーを示す。少￨1｣のついた
タンパクI蘭は，′炎験に供せられたタンパク質を示す。AP‑l〜8は，木研究において￨,il定のためのペプチ
ド断片が好られたタンパク質を示している。(b)2‑DPAGEによるタンパク質像。矢￨吾￨｣で示されたタン
パクI間スポットは,SDS‑PAGEにより分離され,￨司定に用いられたタンパク質(AP‑1〜8)の2−D
PAGEゲル上での帷疋伽ﾊ;を示している。
Fig.1.SDS‑PAGEandtwo‑dimensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis(2‑DPAGE)separationoI
proteinsillchickenabdominaladiposetissue.

(a):showsseparationbymeanolSDS‑PAGE.TheleftlaneisproteinmolGcularmarker.

"marksshowproteillsthatwereusedfol‑thisexperiment.AP‑l〜8showproleinsthatwere
obtainedpeptidesegmentsIol‑idenlificatiolloIprotein.(b):showsseparationbymeanof2‑D
PAGE.Proteinspotswitharl‑owsshowGstimatedpositionsforAP‑I〜8on2‑DPAGEgel.

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J90日本家禽学会誌42巻J2号(2005)
表Lニワトリ腹腔内脂肪糸ll幟において￨[il定が試みられたタンパク質の部分アミノ峻配llと推定されたニワト
リのタンパク質
Table1.Partialaminoacidsequenceandestimatedproteinidentifiedinchickenabdominaladipose
l−1QQ11P
し L L 』 口 L ざ ＆ ｰタンパク質の記号推定
Symbolfor分子量ペプチドのアミノ崎Wll

Estimatedchickenprotein

ofapepti(ieGVII)LAQK･･･

SerumAlbumin(precursGr)

LQEAEE･･･

Vimentln

LQEAEE･･･

Vimentin

YPXER…

unkl−lown

69918P19121

４５
４
５
６
６
９
９
０
０
ＰＰ

GKPQMTEEQI･]編,聯講＝
ｌｌ
ｌ
１
０
０
３
３
５
５

２３４
ＰＰＰ
ＡＡＡ

66

５５
０４
４
５

AP−l

推定されたニワ￨､リのタンパク質

AminoacidsequencG

proteinbandMW(kDa)

CDVDLRK･･･
AP‑5

40

VFERYK…

ヘnnexinll

385()9Pl7785

DIISDTSGDF･･･
AP‑6

29

GELMSAK･･･

unknown

GNIEMFL…
AP‑7

AP‑8

15

14

RVYERA…

AdipocyteFattyacidbindingproteinl4894Q90X55

LGEEFDETTA(AFABP)VLSAADLGGG

unknown

DLDLEAHK…
GIFTK…

*ExPASyProteomicsServerにおけるアクセス番号。
AccessionnumberintheExPASvProteomicsServel

2．タンパク質のペプチドマッフに211,1il所のアミノ雌置換が認められた。AP‑2および3

SDS‑PAGEゲルから切り出した各タンパク質バンドの部分アミノ雌配列は，ニワトリの筋肉に発現するビメについて,HPLCにより僻素消化したペプチドを検出しンチン(AccessionNo.PO9654)のcDNA配￨I(ZChnCr

た。解析したタンパク質のペプチドは，溶￨｣120分後から

andPaterson,1983)から推定されるアミノ雌配列と部ピークが認められ80分間でほとんと､のペプチドが溶出

分アミノ樅ll肥llについて全ての配l1が一致し，その分子された。各ペプチドを然出111日にマイクロチューブにl':'￨収量も約53‑kDaとほぼ一致した。AP‑5における2つのペした。この'‑￨'から，ゲルブランクを参考にペプチドと､卜ll

プチドのアミノ酸配llは，ともにニワトリIｲ繊維芽細胞

定された立ち上がりの鋭い単一と考えられる2〜3のから得られたcDNAの塩基配列より推定されたアネキ

ピークを選びアミノ酸配列解析を行った。

3．アミノ酸配列解析とタンパク質の同定

シンⅡ(AccessionNo.Pl7785)のアミノ酸配l1(Gerke

andKoch,1990)と一致し，その分子量も約38.5‑kDaで各タンパク質のペプチドについて,N‑末端部分アミあることからほぼ一致していた。AP‑7における2つのノ酸配列を解析した結果を表Iに示した。ペプチドピー

ペプチドのアミノ雌乢llは，いずれもニワ￨、'ﾉの￨￨旨肪組

クの巾には複数のペプチドを含むものがあり解析のでき織についてi'､｝られたmRNAの塩基lIullから推定されたないものもあったが,AP‑1,4,5,6および7では,2つ

旧ljj糺l"lll米脂肪雌結合タンパク質(AFABP)(Acccs‑の部分アミノ酸配列が得られた。￨,:il様にAP‑2と3ではsionNo.Q90X55)のアミノ雌l'Wllと一致し，その分子1つの,AP‑8では3つのアミノ酸￨咄llが得られた。

l,tも約l4‑kDaであることから良く一致していた。

これらのアミノ酸配列についてBLASTによりアミ一〃,AP‑4については解析した2つのペプチドのう

ノ酸類似配列検索を行った。その結果,AP‑lにおける2

ち，一〃のペプチド(I肥ll;CDVDLRK)とニワトリのつのペプチドのアミノ雌配列は，ともに肝臓で認められ

βアクチンが一致したが，もう一方のペプチドについてたニワトリ1111情アルブミン前駆体(AccessionNo.Pは一致するものが見あたらなかった。AP‑6およびAP−8

19121)と相同性が認められた。また，解析されたllll,iil

については,BLASTに登録された高等動物のタンパクのアミノ酸配列中に1個所および8111lilのアミノ酸I肥ll'￨1

質と'1Ⅱ『1性を示すタンパク質は認められなかった。

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品lllら：鶏脂肪組織タンパク質の同定J91

考 塞

された。FABPは脂ll力酸結合タンパク質ファミリーとして各組織に存在する。ニワトリでは今までに肝臓(Ac‑

ニワトリの腹腔内脂llﾉj組織についてSDS‑PAGEおよcessionNo.P80226),心臓(AccGssionNo.Q6DRR5),

び二次元電気泳動法によりタンパク質の分離を試みた。

胚の網膜(AccessionNo.Q05423)などのFABPについ

しかし，脂肪組織はその大部分が脂肪滴で占められるたての報告がある。脂肪組織については,Wang"".

めタンパク質含量は，他の組織や臓器に比較すると10%(2004)がニワトリの脂肪組織について得られたmRNA程度と低く，電気泳動的にCBBR250染色により検￨Iさより塩基配列を決定し，脂肪組織に分布するAFABPのれたタンパク質バンドも約40橦類と少なかった。染色

アミノ雌配列を推定している｡FABPは主に脂肪酸の結度合いから見てタンパク質量が十分あると考えられる

合，細胞内への疎水性物質の輸送の仲介に関与してい12種類のバンドについてアミノ酸配￨｣を解析したが，そる。このタンパク質をノックアウトしたマウスでは，食れらのうちで配llを明らかにすることができたものは8

事性肥満からのインシュリン抵抗性や糖尿病が生じない種類であった。ペプチドのアミノ酸配列が明かとなったことが報告されている(Shaughnessy"""2000)｡し

8種類のバンドでBLASTにより同定されたものは5種

かがって,FABPは佃i断の過程で生ずる幾つかの病態の類のバンドについてであり，そのうち2種類は同一のタ発症と関連があるものと考えられる。本実験においてもンパク質であった。

タンパク質レベルでAFABPを同定することができた。

細胞は基本的に細胞I算，細￨￨包小器官および細胞質からしかし，二次元電気泳動において,￨!jl‑分子量の位置に描成される。そこで本実験で同定されたタンパク質を見

やや等垣点の異なる2つのスポットとして検出されていてみると細胞膜に存在すると考えられるものとしてアネることから,AFABPがそのいずれか，もしくはリン酸

キシンⅡが検出された。アネキシンはレクチン活性を示化などを受けて等電点が変化しているものかを検討する

すカルシウムおよびリン￨￨旨質に結合するタンパク質ファ必要がある。

ミリーで菌類を除くすべての真核細胞から20種類以上

また，血清アルブミンが検出されたが，同様にマウスのものが検出されている。これらは種類の違いにより

脂肪細Ill包の二次元電気泳動のデータベースにも血清アル

様々な物質との接昔機能あるいは接曹阻I上機能が異なる

ブミンが検出されている(http://Kr.expasyorg/cgi‑

ことから注目されているタンパク質の1つである。特にbin/ch2d‑compute‑map?WAT‑MOUSE,PO7724)。血アネキシンⅡは細胞外マトリクス糖蛋白質であるテイネ

清アルブミンはl分子に7〜8分子の遊離脂肪酸を結合

シンや組織プラスミノーケンアクティベーターと結合すし，これを旧￨"組織に運搬する働きがある。したがって，ることが明らかにされている(Mollenhauel･1997)。ニ遊離脂肪酸輸送のため脂肪ﾎlll胞膜に結合していたアルブ

ワトリではGerkeandKoch(1990)が胚繊維芽細胞にミンが検出されたものと考えられた。

ついてcDNAクローニングによりアネキシンⅡを同定

一方，その他4種頬のタンパク質は，決定された部分している。本実験において，脂肪組織でもアネキシンⅡ

アミノ酸配ﾘからBLASTによりタンパク質を同定すが合成されていることが明かとなった。

ることができなかった。これらのタンパク質では，例えさらに細胞小器官を椛成するタンパク質として，ビメ(j:､AP‑4においては．2つのペプチドのアミノ酸配列がンチンが同定された。ビメンチンは糸III胞骨烙タンパク質解読されたが，その一方はアクチンと相同性を示し，一であり，核や細胞小器官の位置決定などに関与している方は全く一致するタンパク質が無いというものであっタンパク質であると考えられている。しかし，一方ではた。アクチンはビメンチンとともに脂肪細胞分化に関与

ll旨肪細胞の分化に関係しているという報告もある

しているとのfIM告(Takenouchi"".,2004)もある。し(Takenollchiaα/.,2004)。また，ガン細胞のみを攻撃たがって,AP‑4のバンドは二次元電気泳動の結果からするヒトモノクローナル抗体では，ビメンチンを抗￨咄〔と複数のタンパク質を含んでいる可能性があるため，そのして攻撃するとの報告もある(Hagiwara"(Z/.,2001)。

一部がアクチンである可能性は否定できない。また，

ZehnerandPaterson(1983)は，ニワトリ胚の筋肉のビ

AP‑6およびAP‑8については高等動物のタンパク質とメンチンについてその性質などを明らかにしているが，一致するものは認められず，新規のタンパク質である可その分子量は約53‑kDaとされており，木実lI験において能性が,I'fjいと考えられた。

もほぼ'百l様の分子量を持つ2種類のビメンチンが脂肪組織に検￨￨￨された。

本実験では，ニワトリ腹腔内脂肪組織について4種類のタンパク質を￨司定するとともに，新規のタンパク質が細胞質に存在すると考えられるタンパク質としては，存在する可能性を示唆した。さらに今回の実験では，存IH肪組織lll来脂肪酸結合タンパク質(AFABP)が￨,il定在が認められるにもかかわらず微型:であるために￨L1定が

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J 9 2 日 本 家 禽 学 会 誌
できていないタンパク質があり，これらのタンパク質の中にも新規のタンパク質が存在する可能性が砿されている。

12巻J2号(2005)
searchCommuniCations,221:286‑289.1998．

Mollenhauel‑J，Annexlns：whataretheygoodfor？
CellularandMolecularLifeScience,53,506‑507.
1997.

謝 辞

OuchiN,KimuraS,AritaY!OkamotoY,MaedaK,KuriyamaH,HottaK,NishidaM,TakahashiM,

アミノ酸配列解析の一部を担当していただいた東海大

MuraguchiM,OhmotoY,Nakamul‑aT,Yamashita

学伊勢原研究推進部教育・研究支援センター分子科学部

S,FullahashiTandMatsLIzawaY.Adiponectin,an

門の塚本秀雄氏に感謝の意を表します。また本研究の一

adipocyte‑derivedplasmaprotein,inhibitsen‑

部は，伊藤記念財￨､jlによる平成13年度食肉に￨腱￨する助成研究調査事業および2002年度九州東海大学特色ある
教育{iⅡ究プロジェクト研究の助成を受けて行われた。

引 用 文 献dothclialNF‑kappaBsignalingthroLIghtacAMP‑dependentpathway.Circultion,102:1296‑1301.
2000．

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inganddifferentialexpl‑essionofthetwoisoIol‑ms.

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HiranoH,KawasakiHandSassaH・Two‑dimensional

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J93

IdentificationofProteinsinAbdominalAdiposeTYssuein
Chicken

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TomohiroAraki'),KihachiroNobukuni')andTakeshiShibata')！ノSchoolofAgriculture,KyushuTokaiUniversity,Aso‑gun869‑1404,Japan

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Inordertoclarifytheexistenceandthekindofproteinsinadiposetissueofchickens,weattemptedtoidentifyproteinsbymeansofSDS‑PAGEseparationwithcoomassiebrilliantblue(CBB)R250staining,andaminoacidsequencinginadiposetissueofbroilerchicken(Ross308
strain).Abdominaladiposetissueswereobtainedfromeightbirdsat43daysofage.These

tissueswerehomogenizedwithlysisbuHercontainingdetergentandurea,andcentrifuged.
ProteinsinsupernatantswereseparatedbySDS‑PAGE.Consequently,aboutfortyproteinbands
wererecognizedinthelysateofabdominalfatpad.Twelvekindsofmainproteinbandsweredigestedwithlysylendpeptidaseingel,andseparatedonareversed‑phaseHPLC.Peptide
segmentswereobtainedfromeightproteinsinthose.Twoorthreepeptidesegmentsforone

proteinwereselectedandusedfbrthedeterminationofaminoacidsequence.Fourkindsof
proteins;serumalbumin,twokindsofvimentine,annexinellandadipocytefattyacidbanding
protein(AFABP);wereidentifiedbythehomologysearchwithBLASTandthemolecularmass.

Furthermore,otherthreeproteinswereremainedaSunknownwhichhadnotbeenidentinedin
thisresearchwork.Therefore,itissuggestedfromthel‑esultsthatsomenovelproteinsmight
existinchickenadiposetissue.
(WzeJ(Jpα"eseJo""zQ/Q/比""ryScie"",イ2.･J87‑J93,2003)
Keywords:chicken、abdominaladiposetissue,protein,SDS‑PAGE,BLAST，chicken