トランスブロット Turbo
クイックスタートガイド
トランスブロット Turbo は、セミドライ転写装置の技術をベースにしながら、独自に開発した転写バッファーとフィルターから成る転写パックを使用することで、簡便な操作で短時間のブロッティングを可能にしたシステムです。そのうえ従来から使用されている転写バッファー、メンブレン、フィルターペーパーも使用できます。
1．準備
SDS-PAGE が終了する前に、あらかじめ次のどちらかの消耗品を準備しておきます。
(1) 転写パックを使用する場合
トランスブロット Turbo の転写パックには４種類あり（Table 1 参照）、一つのカセットに対してミニゲルなら１枚または２枚を、Criterion ゲルならば１枚をセットできます（Fig.1 参照）。
0.2 um ニトロセルロース（10 枚パック）

0.2 um PVDF
（10 枚パック）

ミニゲル 7 x 8.5 cm

1704158

1704156

Criterion ゲル 13.5 x 8.5cm

1704159

1704157

Table 1 転写パックのカタログ番号

ミニゲル 1 枚ミニゲル２枚Fig. 1 カセットへの転写パックとゲルのセット例

Criterion ゲル１枚

(2) メンブレン、フィルターペーパーを別途用意する場合・転写バッファー・メンブレン（PVDF 膜またはニトロセルロース膜）
・極厚フィルターペーパー (2.45 mm 厚)

あらかじめ冷蔵しておきます
PVDF 膜の場合はあらかじめメタノールで親水化しておきます。その後、メンブレンと極厚フィルターペーパーを転写バッファーで平衡化しておきます（約 10 分間）。

2．ブロッティングサンドイッチの組み立て
注 意・メンブレンやスタック（またはフィルターペーパー）の間に気泡が入っていると、その部分は転写されません。
カセットのフタをセットする前に、メンブレンなどがずれないように注意しながら、ローラーで気泡を除くようにしてください。
・ゲルとスタック（メンブレンならびにフィルターペーパー）の順番を間違えないようにセットしてください(Fig. 2)。
陰極板（カセットのフタ）
陰極用スタック または 極厚フィルターペーパー
ゲル
メンブレン （PVDF 膜またはニトロセルロース膜）
陽極用スタック または 極厚フィルターペーパー
陽極板（カセット）

Fig. 2 転写の方向ミニゲル(1) 転写パックを使用する場合 (Fig. 3 参照)
A.) 転写パックからホイルカバーをはがします（ホイルカバーのつまみを引き上げた後、テーブル上で水平方向に引いてはがしてください）。ミニゲル用の転写パックの場合、トレイの右側にメンブレン付き陽極用スタックが、左側に陰極用スタックが入っています。Criterion ゲル用の転写パックの場合、トレイの上側にメンブレン付き陽極用スタックが、下側に陰極用スタックが入っています。
B) メンブレン付きの陽極用スタックをカセットの陽極板の中央にセットします。スタックは陽極用、陰極用とも複数枚のフィルターからなります。陽極用スタックを取り出す際には全てのフィルターをまとめて取り出すようにしてください。ミニゲルまたは Criterion ゲル用のスタック 1 枚をカセットに置く際には、バランスを考慮して中央にセットします。2 枚のミニゲルをカセットに入れる場合は重ならないように並べてセットしてください。
C) 泳動後のゲルをメンブレンの上にセットします。泳動後のゲルは転写バッファーによる平衡化を行う必要はありません。ミニプロティアン TGX ゲルは、ミニゲル用スタックよりも少し大きいので、バンドのあるレーンがはみ出ないように、スタックの中央にセットしてください。
D) ゲルの上に陰極用スタックをセットします。
E) ずれないように注意しながら、ローラーで気泡を除きます。
F) カセットのフタ（陰極板）をのせ、下に軽く押さえながら緑色のダイヤルを時計回りに回してロックします。

A)

(右側)

B)

Criterion ゲル(左側) 陰極用スタック(Top)

メンブレン付き
陽極用スタック(Bottom)

(下側)

(上側)

C)

D)

E)

(2) メンブレン、フィルターペーパーを使用する場合一般的なセミドライ型転写装置（トランスブロット SD セルなど）と同様の手順にてブロッティングサンドイッチを組み立ててください。
a.) メンブレン、極厚フィルターペーパー、泳動後のゲルを転写バッファー中で平衡化 (約 10 分) します。
b) カセットにフィルターペーパー、メンブレン、ゲル、フィルターペーパーの順にセットし、ずれないように注意しながら、ローラーで気泡を除きます。
c) カセットのフタ（陰極板）をのせ、下に軽く押さえながら緑色のダイヤルを時計回りに回してロックします。

F)

Fig. 3 ブロッティングサンドイッチの組み立て

3．本体へのカセットの挿入
ロック後のカセットはできるだけ水平状態を保ちながら、本体の上下どちらかのスロットにセットします。二つのスロットは、カセットをセットした側だけを個別にスタートすることができますが、次の組み合わせ例のように各スロットで同一のプロトコールかつ同じ転写面積となるゲル枚数（ミニゲル 2 枚分は Criterion ゲル 1 枚分に相当）である必要があります。
同時に転写可能な組み合わせ例○ ミニゲル １枚― ミニゲル１枚○ Criterion ゲル１枚 ― Criterion ゲル１枚
○ ミニゲル ２枚― Criterion ゲル１枚同時に転写できない組み合わせ例
× ミニゲル１枚 ― ミニゲル２枚× ミニゲル１枚 ― Criterion ゲル１枚

4．転写開始
プリセットプロトコール （Fig.4 参照）(1) 本体右側の主電源をいれホーム画面が起動したら ”LIST” キーを押します。
(2) プリセットプロトコールを使用する場合は、“BIO-RAD” キーを押します。なお、”USER-DEFINED” を押すと過去に保存したプロトコールを呼び出すことができます。

(1)
HOME
TRANS-BLOT TUBO
SELECT PROTOCOL
NEW

LIST

TURBO

(2)
PROTOCOLS(3) カセットにミニゲル 1 枚をセットした場合は “1MINI GEL” を、ミニゲル
2 枚または Criterion ゲル 1 枚をセットした場合は “2 MINI OR 1 MIDI
GEL” を選択します。

BIO-RAD →USER-DEFINED →HOME(4) プレセットプロトコールのリストから使用したいプロトコールを選択します（Table 2 参照）。泳動したゲル、目的タンパク質の分子量を考慮して選択します。画面右側のボタンを押すことで、プログラムをスクロールできます。
(5) カセットを上側のスロットにセットした場合は “A: RUN” を、下側のスロットにセットした場合は “B: RUN” を押します。一方のカセットがラン中でも、他方のカセットをいつでもランすることができます。ただし、両方のカセットで同一のプロトコールでなければ転写できません。
ラン中には、各カセットの出力値、残り時間が表示されます。また、ランを途中で中断したい場合には、 “A: STOP” または “B: STOP”
キーを押してください。その後、ランを継続(CONTINUE RUN)、初めからやり直す(RESTART RUN)、終了する(CANCEL) を選択できます。
注 意・ホーム画面から “TURBO” キーを押すことで(Fig.4 - 1)、プリセットプロトコールの “Mixed MW” または “1MINI TGX” をワンボタンで起動できます。
・プリセットプログラムは一般的な転写条件の一例ですので、サンプルによっては最適な転写条件の検討が必要になることがあります。
・転写パックではなく一般的なメンブレン、フィルターペーパーを使用した場合は、”Standard SD” を選択してください。さらに、TGX ゲルを使用した場合は、転写時間 15-20 分を中心に検討してください。
・プロトコールの条件を編集したい場合には、プロトコールを選択して ”EDIT” キーを押すと(Fig.4 - 4)、電流、電圧、転写時間を編集することができます(Fig.6)。

TURBO

(3)
GELS PER CASSETTE
1 MINI GEL→2 MINI OR 1 MIDI GEL→→
HOME

(4)
BIO-RAD PROTOCOL LISTMIXED MW
HIGH MW
LOW MW
STANDARD SD
HOME

EDIT

RUN

(5)
RUN: MIXED MW
SET 1.3A 25V 7MIN

MINI

A:0.0A

0V

7MIN

B:

0.0A

0V

7MIN

MENU

A: RUN

B: RUN

Fig. 4 操作画面

プロトコール名転写パック

Mixed MW(Turbo)
High MWLow MW
1.5 mm gel
1 MINI TGX(Turbo)MW(kDa)Time(min)Any7> 150< 30Any

10510Any

3ミニゲル 2 枚Criterion ゲル 1 枚ミニゲル 1 枚

2.5 A 定電流
（最大 25V）

1.3 A 定電流
（最大 25V）

N/A

2.5 A 定電流
（最大 25V）

極厚フィルターペーパー
Standard SD
Any
30
メンブレン
Table 2 プリセットプロトコール(BIO-RAD PROTOCOLS) の設定

25V 定電圧 （最大 1.0A）

GELS PER CASSETTE

Turbo プロトコールによる転写 （Fig.5 参照）(1) ホーム画面から ”TURBO” キーを押します(Fig.4 - 1)。

1 MINI GEL→
1 MINI TGX→
2 MINI OR 1 MIDI GEL→

(2) ミニプロティアン TGX ゲル用の 3 分間プロトコールを使用する場合は“1 MINI TGX” を選択します。”1 MINI GEL” または “2 MINI OR 1
MIDI GEL” を押すと、7 分間プロトコールの “Mixed MW” が選択されます。

HOME

Fig. 5 操作画面

(3) カセットを本体にセットして、“A: RUN” または“B: RUN”を押します。
注 意・3 分間の Turbo プロトコールではミニゲル２枚または Criterion ゲル１枚の転写を行うことはできません。
・3 分間の Turbo プロトコールの設定条件は 2.5A 定電流ですが、転写中には電圧の上限である 25V に到達してしまうため、実際の電流値は 2.5A よりも小さくなります。

新規プロトコールの作成 （Fig.6 参照）(1) ホーム画面から ”NEW” キーを押します(Fig.4 - 1)。

25
LIMIT V →2.5 CONST A →10 TIME(MIN) →(2) 実施したい電流、電圧条件、転写時間を入力し、定電圧(CONST V)
か定電流(CONST A) を設定します。

MENUCONST V

RUN(3) カセットを本体にセットして、作成したプロトコールをランします。
Fig. 6 操作画面

注 意
・電流は最大 2.5A まで、電圧は最大 25.0V まで、時間は最大 90 分まで設定可能です。
・作製したプロトコールは、ファイル名をつけて保存することができます。ホーム画面から “LIST” キーを押し、”USER-DEFINED” を選択することで、保存したファイルを呼び出すことができます(Fig.4 - 2)。

5．転写後の処理
プロトコールが終了すると、”RUN COMPLETE” と表示されアラームが鳴ります。カセットを取り出し（熱いので取扱注意）、緑のダイヤルを反時計回りに回してフタを開け、スタックを捨ててメンブレンを抗体処理など次の工程に進めます。
注 意・転写後はカセットから取り出したメンブレンは速やかに次のステップで使用する溶液に浸けてください（精製水、TBS、ブロッキング剤など）。転写後のカセットは熱くなっているため、メンブレンが乾燥してしまいますのでご注意ください。もし PVDF 膜が部分的に乾燥してしまった場合には、メタノールまたはエタノールに短時間つけて親水化した後、精製水で洗浄してください。
・ランの終了後に本体やカセットが冷えるのを待つ必要はなく、すぐに次のランを実施することも可能です。

6．メンテナンス
・ 使用後のカセットは、内部に残った転写バッファーを捨て、カセットとフタを水道水でよくすすいで塩類が析出しないようにしてください。さらに脱イオン水でカセットとフタをよくすすいだ後に、しっかりと乾燥させてください。
・ 本体に転写バッファー等が付着した場合は、水を湿らせたキムワイプなどでふき取ってください。

バイオ・ラッド ラボラトリーズ 株式会社
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