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日本家禽学会誌,39.･cﾉ25‑J40,2002

卵殼形成における血漿カルシウム濃度と卵殼腺部のカルシウム
結合蛋白質(CaBP‑D28K)mRNAの発現
後藤尚也')・田上雅之I).水野雅司2).亀岡絵都子3).武石勝'）

山村奈美子3)．土井守3)．上吉道治3）'）日本配合飼料株式会社中央研究所，栃木県芳賀郡茂木町字天子451,321‑3621
2)日清食品株式会社中央研究所，滋賀県草津市野路町2247,525‑0055
3)￨￨皮阜大学農学部生物資源生産学科．11皮阜県岐阜市"ll戸1‑1,501‑1193
ニワトリの卵管の卵殼腺部におけるカルシウム(Ca)沈着にCa結合蛋白質(CaBP‑D28K)が関与していることは良く知られている。しかし,CaBP‑D28Kの遺伝子発現とカルシウムとの関連についての報告は少ない。そこで，本実験では，卵殼形成との関連において，最初に，血漿Ca濃度を測定し，次に，血漿Caイオン濃度と十二指腸及び卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNA濃度を測定した。

産卵鶏と休産鶏において，24時間にわたり211｣澗毎にlⅢ漿Ca濃度を測定したところ，産卵鶏においては，血漿総Ca濃度と非透過性Ca濃度は，排卵14〜1611寺間後に相当する20〜22時にピークが認められた。一方，血漿Caイオン濃度は，排卵4時間後から611寺間後にﾎ￨1当する10〜12時にかけて有意に増ﾉ｣Ⅱし，排卵6時間後において最も高い値を示した後，排卵10時間後にかけて急激に減少し，その低い濃度が排卵16時間後まで維持された後，次の放卵時まで徐々に増加した。休産鶏においては，何れの血漿Ca濃度についても有意な変動は認められなかった。また，プロスタグランジンF2(Mを投与して放卵を誘起することにより,1m漿Caイオン濃度の低下は認められなくなり，さらに，アミノグルテチミドを投与
してステロイドホルモンの合成を抑制することにより，血漿総Ca濃度と非透過性Ca機度のピークは認められなくなった。血漿Caイオン機度と共にCaBP‑D28KmRNAを測定した実験において，卵殻へのCa蓄積は，排卵4〜5時間後から始まり，最初の3時間は少なかったが，その後はほぼ一定の割合で行われ，放卵前に減少した。lill漿Caイオン濃度は前述の結果と同様な変動が認められたが，この血漿Ca
イオン濃度の変動の様相とは逆に，卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNA濃度は，排卵4〜5時間後に最も低い値を示した後，排卵13〜14時間後まで徐々に増加し，その高い値が排卵19〜20時間後まで維持
され後，次の放卵にかけて有意に減少した。これに対して，十二指ll易におけるCaBP‑D28KmRNA濃度

は，排卵周期中で有意な変動は認められなかった。以上の結果から,1m中Caイオン濃度は卵殼へのCa
蓄積と関連して変動し，血巾非透過性Ca濃度はステロイドホルモンにより影響を受けることが明らかとなった。また，リ'1殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNA発現は，卵殼へのCa帯依のみならず，それと関連した血[￨｣Caイオン濃度とも関連している可能性が示唆された。
キーワード：カルシウム結合蛋白質，辿伝子発現，プロスタグランジンF2QI,アミノグルテチミド，カルシウムイオン

2001年9月27H受付2001年11月21日受理
連絡者：後藤尚也〒321‑3621日本配合飼料株式会社中央研究所，栃木
県芳賀郡茂木IIIJ字天子451

一一一目

緒

ニワトリの排卵周期は約11̲1であるが，この周期において，卵管の揃斗部に排卵された卵は，膨大部で卵白，

峡部で卵殼膜卵殼腺部（子宮部）で卵殼が形成され，TelO285−63−ll21

完成した卵として約1口後に卵殼I泉祁から膣部を介して

FaxO285−63−ll20放卵される。そして，次の卵が排卵される。WarrenとEmail:hisaya.goto@nippai̲co.jp

Scott(1935)によると，卵管￨ﾒ1の各部位に卵が滞留するCopyright ©2002, Japan Poultry Science Association

J 2 6 日 本 家 禽 会 誌

39巻J1号(2002)￨￨1洲は，漏斗部に18分，膨大部に211｣fH54分,l映部に起とアミノグルテチミド(AGT)投与によるステロイド

1時間14分，卵殼腺部に20時間40分である。卵殼腺部

合成抑制が排卵周期中における血漿カルシウム濃度に与で形成される卵殼は5〜69であるが，その主成分はえる影響を検討した。次に，卵殼へのCa蓄積との関連

CaCO3である。従って，一個の卵を脈むのに要するカルで，血漿Caイオン機度とシウム(Ca)は約2.0〜2.49である。このCaは，飼料かるCaBP‑D28KmRNA濃度を測定した。

ら摂取したCaと鳥類において発達しているCaを貯蔵

二指暘及び卵般腺部におけ材料及び方法する機能を有する骨髄'￨ ￨･から供給されている(Driggers

本実験では，大きく分けて2種類の実験を試みたが．

andComar,1949;Mueller"""1964)｡｜Ⅲ中におけるCaは，蛋白質と結合した蛋白結合Ca,イオン化したCaイオンおよび無機物と化合物を形成しそれらの実験に使用した供試鶏と試料の採取は次の通りである。

たCa化合物として存在しているが，大部分は蛋向結合

実験1卵殼形成における血漿Ca濃度

CaとCaイオンであり，これらでliⅡ中全Caの98%近供試鶏くを占めている(Copp"".,1969)。卵殼にCaが蓄柚

この実験lでは，3種類の実験を行ったが，これらのすることから，卵殼へのCa蓄積との関連で,lⅢ中にお実験に使用した供試鶏は何れも岐阜大学農学部動物環境

ける総Ca膿度(Hodges,1969;LuckandScancs,1979

飼育室で飼育した白色レグホーン種（ハイラインマリ;ParsonandCombs,1981;NysaaJ.,1986a;Kollingア）である。ニワ￨、リは点灯IM始を午前5111iとする1411*

aaI"1992),非透過性Ca濃度(PaulandSnetsinger,

間照叫10時間暗黒の明暗周期下で，単飼ケージ内で飼1969;Mueller"".,1973;NysaaJ.,1986b)及びCa

育し，成鶏用飼料(Ca含量2.75%以上,P含量0.55%以

イオン濃度(LuckandScanes,1979;Parsonsand

̲'二）と水は自山に摂取させた。産卵鶏においては，実験Combs,1981;Nysg"/"1986a;Singheia/.,1986)のに先立ち，最低2週間以上の産卵記録をとり,1クラッ

変勤の様相が報告されている。しかし，非透過kCa濃チの長さが4から6であり，クラッチ問の休産日が1日

度が卵殼形成と関連しているか否か，またCaイオン膿

で，しかも同じような連産を21'!￨以̲L繰り返したニワト

度が卵殼形成以外のステロイドホルモンにより影響をうリ（体重1.6‑2.2kg,18‑24"jl齢）を使用した。また，一けているか否かは，まだ￨ﾘ1確にされていない。

部の実験で休産鶏を使用したが，休産鶏については，予飼料からのCaは主に小ll易から吸収されるが，小腸で備実験で3日間の絶食絶水処1II1を行ったところ，処l'l!￨}MのCa吸収能は‑￨一二指腸,空腸,回ll易のlll目で低くなり，こ始から1週間は産卵せず，しかも処理1週間後におけるの￨￨￨II位と同じ様な関係でCa結合蛋白質(CaBP‑D28K)濃卵巣重量が99以 ド，卵管重量が199以 ドであったこと

度が低くなる(TaylorandWasserman,1967)ことなどから,￨,ilじような処理をｲj(j',処理1週間のニワトリから，今日では小腸におけるCa吸収はCaBP‑D28蕊を介(体重l.2‑l.8kg,18‑24カ月齢）を休産鶏として使lllしし，しかもこの蛋白質の合成に関与するmRNAの発現た。実1験lにおける血液採取は，ストレスをできる限り

は活性型ビタミンDによって調整されている少なくするため，採血開始の￨1i旧にカニューレを装着(CorradinoandFullmer,1991;Nys""/・,1992)ことし，カニューレを介して，翼下静脈よりヘパリン溶液でが剛られている。一方，卵殼形成部位である卵管の湿らせておいた注射筒を用いて行った。採取したI(l1"

卵般￨￨泉部においても，｜￨叶管と￨h]じCaBP‑D28Kが存在しは，ヘパリン溶液で湿らせ，流動パラフィン（和光純薬(Corradinoaal.,1968),しかもこの蛋白量と工業株式会社特級）を0.1m/入れておいた小型試験管にCaBP‑D28KmRNA濃度が卵殼形成との関連で変動する

できる限り空気に触れないように入れた。その後，30分(Nys"".,1989;StriemandBar,1991;Bar"""以内に遠心分離(1,400×9,10分,4℃）し，血漿をi!｝た。

1992;Iedaaaj.,1995)ことから，卵殼腺部における卵採取60分以内にCaイオンを測定し，残りの血漿は，非殼へのCa帯械においてもCaBP‑D28Kが関与していると透過性Caの測定時まで‑20℃で保存した。なお，産卵

葛･えらている。しかし，卵殼腺部におけるCaBP‑D28K

鶏における血液採取は，全てクラッチ輔2卵に対してのmRNAの発現機構は，必ずしもl･分に明らかにされて排卵前の一日内で行い，クラッチ第2IIJ(C2)の排卵予いない。

定時亥￨￨の推定とカニューレ装着法によるIⅢ液採取は山村

以上のことから，本実験では，蚊初に,IⅢ漿総Ca"

ら(2001b)の#Mi'iと同様にして行った。

庇，非透過liCa濃度及びCaイオン濃度を排卵周期'￨'

試料の採取の産卵鶏と休産鶏において一日の各ll寺期に川11定し，さらl)血漿Ca濃度にプロスタグランジンF2q(PGF2q)投与による放卵誘この実験ではクラッチ第2卵排卵間10111'の産卵fI)(8

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後藤ら:CaBP‑D28K
K遺遺伝 伝子発現と血漿カルシウム濃度J27羽）と休産鶏（7羽）について，午前10時から翌日の10から粘1期u職を鼎￨￨がし11Xり，マイクロチューブに入れ，時までの24時間にわたり．2時間毎にlⅢ液を採取し，そ液体窒素で急速凍結した後,Northenblothybridiza‑

れらの血漿中のCa濃度を測定した。

tionによるmRNA測定時まで‑80℃で保存した。

2）放卵誘起による血漿Ca濃度

2SolutionhybridizationRNaseprotection法

クラッチ第2卵排卵前22時iHl,言い換えればクラッ

この実験では，卵殼形成過程における卵殼腺部と十二チ第1卵排卵後4時間に相当する午前10時に1回目の指腸のCaBP‑D28KmRNA発現状況を定量的に知るため血液を採取し，その4時間後のﾙ￨後2時における2回￨｜に，連産を比較的IEしく繰り返し，しかも午前8時からの採血後,0.5mZの生哩的食塩水に溶解したl〃gの911寺の間に放卵したニワトリにおいて，排卵1‑2時間後

PGF2q,または0．5mjの生理的食塩水をポリエチレンから3時￨H1毎に排卵23‑24時間後までの9時期に,111li

製チューブを取り付けた注射器を用いて卵殼腺部内に投亥llに10羽ずつ断頭屠殺し，卵殼腺部と十二指腸を採取与した。PGF2aを投与した場合には，投与15分以内にして内容物を洗い落とした後，粘I貨組織を採取した。糸Ⅱ

放卵が誘起されたニワl､リについて，他方，生理的食塩

縦は速やかに液体窒素下で凍結した後,Solutionhy‑

水を投与した場合には，投与により放卵が誘起されな

bridizationRNaseprotectionによるmRNAillll定までかったニワトリについて，4時間毎に翌1lの午前10時ま‑80℃で凍結保存した。また，卵殼腺部に卵が存在し，で111液を採取し，血漿Ca濃度を測定した。

卵殻膜が完全に形成された卵において，卵殼亜量と卵殻

3）ステロイド合成阻害による血漿Ca濃度

Ca含量を測定した。さらに，ml漿Caイオン濃度の測定

クラッチ第1卵の排卵4時間後に相当する午前10111fのために,Im液を断頭屠殺前に翼下静脈より，予めヘパとその30分後に，それぞれAGTを体重kg当たり200

リンで湿らしておいた注射筒を川いて採取した。採取しmg/mjの投与量で浅'剛筋に注射した。対照鶏には体亜たlill液はヘパリンと酸化防止のため流動パラフィン(fllkg当たりlmjの溶媒を注射した。血液はこれらのニワ

光純薬業株式会社，特級）を0.1mj入れておいた小型試

トリから,AGTの投与直前とその後4時間毎に翌日の験管にできる限り空気にふれないように入れた。その

午前10時まで採取した。
実験2卵殼形成における卵殼腺部のCaBP‑D28K
mRNA

この実験では,mRNAをNol‑thernblothybridiza‑

後，30分以内に遠心分離(1,400×9,10分間,4℃）し，血漿を得た。Caイオン濃度は,lill漿を得た後,60分以内に測定した。
Ca測定法

tion法で定 肚的に，またSolutionhybridizationl)血漿CaRNaseprotection法で定量的に測定したが，それらの(1)総Ca濃度方法における供試鶏と試料の採取は下記の通りである。

凍結保存しておいた血漿を室温で解凍した後,100"

供試鶏を小型試験管に採取して原子吸光分析川希釈液で50倍Northernblothybridizationに供試したニワトリは，に希釈した後，試験管ミキサーで撹祥してから，原子吸実験lと同様であるが,SolutionhybridizationRNase

光分光光度計(PolarizedZeemanAtomicAbsorption

protection法に供試したニワトリは，採卵用コーマシャ

Spectrophotometer;LI立Z6100型）で測定した。

ルの白色レグホーン種産卵鶏（50週齢のデカルブTX‐（2）非過性Ca濃度35）であり，ニワトリは￨￨本配合飼料株式会社飼料畜産」￨透過性Ca濃度は，総Ca濃腱と透過性Ca濃度を測

開発センター内飼育室において，点灯管理を午前5時と定し，総Ca濃度から透過性Ca濃度を差し引くことにする14時間照明:10時間暗黒の照明周!Ul‑ドで，餌と水より求めた。すなわち，総Ca濃度は,1鳥述した方法と同は自由摂取させて単飼ケージで飼育した。

様にして求めた。一方,透過性Ca濃度は，血漿を限外濾

試料の採取

過川チューブ（セントリカットW‑10;分画分子量1万；

INorthernblothybridization法、この実験では，卵殼形成が行われている時期と行われ倉救紡績株式会社）に400"j入れ，遠心分離(5,000×9，1111ilW],4℃）して得られた濾液25"Iを原子吸光分析用

ていない時期において，腸管と卵管におけるCaBP‑D28K

希釈液で40倍希釈した後，原子吸光分光光度計で測定

mRNA発現状況を定性的に知るために，午前8〜9時にした。

放卵したニワトリについて，卵殼l1泉部に卵が認められな(3)Caイオン磯度

かった正午と卵殼I服部に卵が認められたﾉF前211ゲとの2

I1Ⅱ漿Caイオン鵬度は,lill漿をi!}た後,60分以内にCa

時期に，それぞれ￨折頭屠殺して，腸管と卵管の糸M織を摘

イオン測定器(Caイオンアナライザー,CA++150;

出し，内容物を食塩水で洗い流した後，それぞれの組織(株)常光）でlill漿状態のままで1111定した。なお，測定のCopyright ©2002, Japan Poultry Science Association

J 2 8 日 本 家 禽 会 誌

際流動パラフィンによる測定妨害を避けるため，パス〕9巻J1号(2002)

Comm‑(M,LHβ及びFSHBmRNAを測定したLeung

ツールピペットで血漿のみを保存チューブに移し換え測ら(1988)の方法に準拠して，山村ら(2001a)の報告と定を行った。

同様にして,Solutionhybridization‑PNaseprotection2）卵殼Ca法によって行った。なお，この法においては，標準1IIhと乳鉢で磨砕した卵殼lgをるつぼに入れ,600℃で2なるSenseRNAと32Pにより標識した32P̲antisense

時間炭化したものに6N塩酸をlOmj加え，約I0分間放RNAは,BluescriptllSK(‑)ベクターに挿入された

置後，蒸留水を加え，6倍に希釈した。得られた溶液は，

560bpのニワトリCaBP‑D28KcDNAプローブを使用し1N塩酸で500倍に希釈し,￨鼠子吸光分光光度計で卵殼て，加〃"γotranscription法によって合成した。

中Ca含量を測定した。
CaBP‑D28KmRNA

本実験においては,mRNAの定性的な測定方法とし

統計処理

データの統計処理は分散分析によりF値を検定した

後，タ．ンカンの多重範1I:l検定法で危険率が5%以下にてのNorthernblothybridization法とmRNAを定量なった場合に有意な差があるものとし，2つの平均値の的に測定可能なSolutionhybridizationPNaseprotec‑

差の検定は,Student'st‑testで行った。

tion法を使用して,mRNAの測定を行った。これらの

結 果測定に使用したCaBP‑D28KcDNAプローブは,Komm

博士（アリゾナ大学）が作成し，島田渭司博士と家田照子博士(名TII.屋大学）により提供されたものを使用した。
また，組織からのRNAの抽出はグアニジンチオシア

血漿Ca濃度の変動

産卵里 と休産鶏の一日の各時期における血漿Ca濃度の測定結果を図1に示した。

ネートーフェノール・クロロホルム法によりイ「った。llll

産卵鶏においては，総Ca儂度(375mM〜5.02mM),

出したRNAは，吸光度計で260nmの吸光度を測定す

非透過性Ca濃度(209mM〜3.31mM),及びCaイオン

ることにより濃度を算出した。なお，実験に供した濃度(1.15mM〜1.41mM)の何れにおいてもほぼ1日のRNAの260nmと280nmの吸光度の比は1．8以̲￨二で周期である排卵周期中において有意な変動が認められたあった。

(P<005)。すなわち，総Ca濃度は，午前10時から増加

1)Northenblothybiridization法

し始め，22時に最も高い値を示した後，翌日の午前10mRNAの定性的な測定は,767bpのCaBP‑D28K

時にかけて前日の午前10時とほぼ同じ濃度まで￨￨旧次減

cDNAプローブを用いて,Northenblothybridization

少した。非透過性Ca濃度は総Ca濃度の場合と同様に，法で行い，その概略は次の通りである。

午前10H寺から増加し始めたが，最も高い濃度は20時にすなわち,0.02MMOPを含む1%アガロースケルの認められ，その後は総Ca濃度の場合とほぼ同様な様相

スロットに組織から抽出したRNAをlスロット当たりで推移した。これに対して,Caイオン濃度は，排卵4時に20"g/30"になるように，またはRNA分子量マーカ￨州後から6時間後に相当する10〜12時にかけて有意にを注入して電気泳動を行った。泳勤終r後，ゲル上の垪加し(P<005),排卵6時間後に最も高い値を示した

RNAをバイオダインA‑ナイロンメンブラン（日本ポー後，排卵10時間後に相当する16時にかけて急激に減少

ル(株)）に転写した。これと561bpのCaBP‑D28KcDNA

し，その低い濃度で22時まで推移した後，放卵時にかけから作成し,32Pで標識したCaBP‑D28KDNAプローブとて徐々に増加した。‑一方，休産鶏においては，何れのCa

ハイプリさせ，その後バイオイメージアナライザー

機度に関しても測定した1日に期間において有意な変動(BAS2000,富士フィルム(株))を川いて画像を読みとは認められず(P>0.05),しかも産卵鶏に比べ低い値でり，解析を行った。測定値は特異的なバンドの放射能量あった。

から非特異的な部分の放射能量（バックグランド）を差し引いた値で表した。なお，一部の実験で，宮本蕪博
士と水谷哲也博士（福井医科大学）により提供され，PCR法により合成されT‑Easyベクターに取り込まれ放卵誘起による影響

PGF2aを子宮内に投与し放卵が誘起された処11￨1鶏と対照鶏におけるml漿Ca濃度測定結果を￨Xl2に示した。
総Ca濃度と非透過性Ca儂度は，共に10時から徐々た561bpのニワトリGAPDHcDNAう°ローブを川いに増加し22時に最も高い値を示した後，翌日の10時にて,InternalStandardとして，上述と￨司様にしてjlll定かけて減少し,{IIIれの時期においても，処理鶏と対照鶏を行った。

との間で有意な差は認められなかった(P>0.05)。これ

2)SolutionhybridizationRNaseprotection法

に対して,Caイオン濃度は，対照鶏においては,14時かmRNAの定量的な測定は，ヒツジ下垂体前葉'‑￨!のら22時にかけて急激に減少し，その後は次の放卵ll寺に

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後藤ら

CaBP‑D28K遺伝子発現と血漿カルシウム濃度

J29

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囲辿ぐゃハミ侭迩一項姻擶

ロ○君国目８口８日日当ｇ①室田己消で︲ｐｏｚ︵冒日︶

囲辿判心八ミ侭望

目Ｃ画国圏目の買目・日ロ臼司Ｑ君ぢ臼一○一産卵鶏、Layinghen−−●−−休産鶏、Non‑layinghen

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口○画呵揖目の︒口ＣＱ目白日ロロｓ百○10121416182022000204060810

一日内の時間Timeinaday
図］

産卵鶏と休産鶏の一日の各時期における血漿総カルシウム，非透過セ
産卵鶏と休産鶏の一日の各時期における血漿総カルシウム，非透過性カルシウムとカルシウムイオン濃度

口﹃ＩＬ

９

１

Ｆ

Concentrationsoftotalcalcium,non‑diffusiblecalciumandcalciumionin

theplasmaoflayingandnon‑layinghensatvarioustimesinaday
各点は7〜8羽の平均値±標準誤差．
EachpointisMean±SEof7〜8hens.

同じライン上での異符号間に5％水準の危険率で有意差あり．

Meanswithdifferentsupel･scriptsinthesamelinearesignincantly
different（P＜0.05)．

かけて￨￨旧次増加した。一方,14時の血液採取後に卵殼腺た(P<0.01)｡

部内へのPGF2α投与により放卵を誘起した処理鶏におステロイド合成阻害による影響

いては，濃度は放卵誘起後から増加し，放卵誘起後の何AGTを投与し，ステロイドホ
AGTを投与し，ステロイドホルモンの合成を阻害しれの時期においても対照鶏との間で有意に高い値を示した処理鶏と対照鶏における血漿Ca濃度の測定結果を図Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association￨｜本家禽会誌39巻J1号(2002)

J30

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︵冒日︶囲墾卦伯一︑型へ侭黎︵冒日︶囲辿鞭貝で３へ長起︑噌姻蒜

言旨︶９画国言８﹇﹇８日員ロ百百目︵冒日︶ｇ胃ｓ５目８日︒己君：室温唱弓︲ｇｚ

一○一対照鶏、Controlhen‑●一処理鶏、Treatmenthen

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ａ召員言ｇ室田勇目の○口○○自負目国昌○忌○

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一日内のll寺間Timeinadav

図2

プロスタグランジンの投与が1m漿総カルシウム，非透過性カルシウムとカ Iレシウ
ムイオン濃度に及ぼす影響

Fig.2.Innuenceofprostaglandininjectiononplasmaconcentrationsoftotal
calcium,non‑diffusibleionandcalciumion

各点は5〜6羽の平均値士標準誤差
EachpointisMean±SEof5〜6hens．
￨,ilじライン上での異符号間に5%水準の危険率で有意差あり．
Meanswithdiiferentsuperscriptsinthesamelinearesignincantly
different(P<0.05).

★★対照鶏に対して1％水準で有意差あり．
★★P<0.01versLIscontrolhen..

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後藤ら:CaBP‑D28K遺伝子発現と1m漿カルシウム機度
一○一対照鶏、Controlhen‑‑●−処理鶏、Treatmenthen

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４６５４３２６︵冒日︶浬辿パ﹃心︑３へ侭鼈︵昌冒︶遡墾ぐい︑３へ長型一項燭擶︵冒日︶口◎冒閏目８口８白自旦ｇ君ぢ日︵冨日︶口自活角言ｇｐ８日日︒君︒①一呂閂逼君︲目︒ｚ

8

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︵冒日︶幽鑿八杙や４いぶ当侭

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10141822020610

一日内の時間Timeinaday
図3

Fig.3

アミノグルテチミドの投与が血漿総カルシウム，非透過￨￨首カルシゥ
アミノグルテチミドの投与がⅡu漿総カルシウム，非透過￨￨竜カルシウムとカルシウ
ムイオン濃度に及ぼす影響

InfluencGo[aminoglulethimideinjectiononplasmaconcentrationsoftotal
calcium,non‑dilTusibleionandcalciumion

各点は5〜6羽の平均価士標準誤差．
EachpointisMean±SEof5〜6herls・

同じライン上での異符号間に5％水準の危険率で有意差あり．

Meanswithdifferentsllperscriptsinthesamelinearesignincantly
different(P<0.05).

★対照鶏に対して5％水準で有意産あり．
★:P<0．05versuscontrolhen.

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J32

A

B

腸 管 卵 管 腸 管

卵管

IntestineOviductlntestine

Oviduct

l

矛
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l

I

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ｋｋ
Ｏ０
３２

醗乳,

IX14.腸管と卵管におけるCaBP‑D28KmRNAのNorthernblot分析

Fig.4.NorthemblotanalysisofCaBP‑D28KmRNAintheinestineandoviduct
A:組織は卵が卵殼腺部に存在していた午前2時に採取した．
A:Tissueswerecollectedal2:00amwhenaneggwaspresentintheshellllglanq．

B:糺l幟は卵が卵殻腺部に存在してしていない正午に採取した．
B:Tissueswerecollectedatnoonamwhenaneggwasnotpresentinthe
shellgland.

CaBP‑D28KmRNA分子種のサイズは左側に示されている
SizesofCaBP‑D28KmRNAspeciesareshownontheleftside.

3に示した。

AGTを投与したニワトリにおいて，放卵は全て予想排卵時刻に行われた。

2時期において，腸管の十二指腸，空腸，回腸，盲￨￨易，結直腸と卵管の漏斗部，膨大部峡部，卵殼￨￨隈部l1窒部におけるmRNA発現を検討した結果を図4に示した。

総Ca濃度と非透過性Ca濃度は，対照鶏においては，似'4に示されるように，腸管においても卵管において￨1il述した排卵周期'‑￨!における変動の様ｲllと同様に,22時にピークとなるような有意な変動を示した。これに対しが認められた。それらの分子種の発現量は，腸管において,AGT処理鶏では，有意なピークは認められず,ll!ffHの経過と共に少しずつ減少する傾向が認められた。

一方,Caイオン膿度は，対照熟と処III鵯との間でいずれの時期においても有意な差は認められず，前述した排も2.0kbと3.0kbの二種類のCaBP‑D28KmRNA分子種ては‑'一･二指l1易，空ll易,II!lll易，結直腸，盲I易の111頁で，何れのll場管組織においても卵殻形成の有無による大きな差異は認められなかった。これに対して，卵管においては卵

卵周期巾における変動の様相とほぼ同様な変動であっ殼腺部においてのみ発現が認められ，しかも卵殼形成が認められない時期に比べ卵殼形成が行われているll寺期のた。

方が発現趾が多かった。

NorthenblOthybridization法によるCaBP‑D28K
mRNA発現卵殼腺部に卵が認められず卵殼形成が行われていない

jl三午と卵が認められ卵殼形成が行われている午前2111Fの上述の結果から,CaBP‑D28KmRNAが多く検出された￨￨勝管の｜･二指￨￨勝と卵管のり￨j殻腺部において，卵殼形成の有無によるCaBP‑D28KmRNA分子種の発現に差異があるか否かを検討した。その結果をIXI5に示した。

Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

後藤ら:CaBP‑D28K遺伝子発現と血漿カルシウム濃度
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Shellgland

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GAPDH《､図5．十二指腸と卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNAの大分子種に対する小分子種の割合Fig．5.RationofthemajorspeciesversLIstheminorspeciesofCaBP‑D28kmRNA
intheduodenumandshellgland

A:組織は卵が卵殼腺部に存在していた午前21畔に採取した．
A:Tissueswerecollectedat2:00amwhenaneggwaspresentintheshellgland.

B:ill幟は卵が卵殼腺部に存在してしていない｣F午に採取した．
B:Tissueswerecollectedatnoonamwhenaneggwasnotpresentinthe
shellgland.

各棒は10羽の平均値と標準誤差
EachbarisMean±SEoflOhens.

図4の結果と￨司様に，十二指腸においても卵殼腺部においても,2.0kbと3.0kbの二種類の分子極が認められ，しかも3.0kbのCaBP‑D28KmRNA分子種に比べて2.0kbのそれの方が発現量が多かった。そこで，十二指SolutionhybridizatiOnRnaseprotection法によるCaBP‑D28KmRNA発現l)SolutionhybridizationRNaseprotection法によるCaBP‑D28,<mRNA測定法の確認

腸と卵殼腺部の組織間，及び卵殼形成の有無により，2SolutionhybridizationRNaseprotection法により，種類の分子極の発現量に差異があるか否かをfⅡるために

CaBP‑D28KmRNAが定量的に測定できるか否かを確認

発現量をバンドの攪淡からBAS200を用いて数値化すするために,32Pで標識したCaBP‑D28Kのanti‐

ることによって求め比較したところ，'二指￨￨易と卵殻腺

senseRNAプローブを，標準品であるCaBP‑D28Ksense

部において何れも．2.0kbのCaBP‑D28KmRNA分子種

RNAとあるいは十二指IIM,卵殼腺部，結直腸，膨大部のの方が3.0kbのそれに比べて約2.4倍多く，しかもそれそれぞれの組織から抽出したRNAを反応させ，得られらの値は十二指腸と卵殼腺部における組織間のみならずた用量と反応との関係を図6に示した。

卵殼形成の有無においても有意な差異は認められなかった(p>0.05)oAntisenseRNAはSenseRNAと7.8〜250Pgの範￨昨￨で用量‑反応IIII線が成立した。SenseRNA測定におけCopyright ©2002, Japan Poultry Science Association

日 本 家 禽 会 誌 3 9 巻J1号(2002)

J34︵巳号︶咽如埋至ｚ唇四四ｓ︲口勇︵日ｇ︶で①国壱﹇皇残塁くｚ酉Ｑ四四甸○︲ロ国師

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●CaBPmRNA，CaBPmRNA
O十二指腸A、DoudenumA■‑'一二指腸B、DoudenumB

口卵殼腺部A、ShellglandA▲卵殼腺部B、ShellglandB

ン濃度と卵殼重量および卵殼Ca含量の肌ll定結果と共に，図7に示した。

血漿Caイオン濃度は，排卵1〜2時間後から排卵4〜△直結腸、Rectumcolon

5時間後にかけて有意に増加し(P<0.05)し，排卵4〜5◆膨大部、Magnum

時間後において最も高い値を示した後，排卵1()〜1l時
間後にかけて急激に有意に減少し(P<005),その低い
儂度が排卵19〜20時間後まで維持された後，次の放卵時にかけて有意に増加した(p<0.05)｡

排卵された卵は，排卵4〜511寺間後から卵殼腺那に認められるようになり，その卵殼腺部における卵の卵殻重量の増加と卵殻へのCa蓄積は，最初の3時間は少な
110100100010000100000

mRNA(pg/チューブ)or総RNA(ng/tubeチューブ）
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図632P‑CaBP‑D28KcRNA(antisenseRNA)とSensGRNAあるいは各種組織のRNAとによる用量‑反応曲線

Fig.6.Thedose‑responsecurvesforhybridi‑

かったが，その後はほぼ一定の禅'1合で増ﾉJIIし，放卵直前に減少した。

卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNA濃度は,0.7

10.8fmol/10"gRNAで排卵周期中において著しい変動を示した。すなわち，排卵l〜2時間後から4〜5時間後にかけて減少し，排卵4〜5時間後において07=t0.l

fmol/10"gRNAと最も低い濃度を示した後，急激に増zationof32P‑CaBP‑D28KcDNA(antisense

加して排卵13〜14時間後に10.8±07fmol/10"gRNARNA)withsenseRNAol‑RNA[romと最も高い濃度を示した。その高い濃度が排卵19〜20

varlOuStlssues

11寺間後まで維持された後，放卵ll!fにかけて有意に減少しA:組織は卵が卵殼腺部に存在していた午
liil2時に採取した．
A:Tissueswerecollectedat2:00am

whenaneggwaspresentinthe
shellgland.

B:組織は卵が卵殼腺部に存在していない
正ﾉ｢に採取した．
B:Tissueswerecollectedatnoonam

whenaneggwasnotpresentinthe
shellgland.

た(p<0.05)｡これに対して，十二指腸におけるCaBP‑D28KmRNA濃度は,5.8〜9.lfmol/10"gRNAの範囲であったが，有意な変動は認められなかった(P>
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｡

考 察

今までに，卵殻形成との関連でlill中Ca膿度の変動の様相が報告されている(Hodges,1969;PauiandSne‑
tsinger,1969;MLleller"".,1973;LLIckandScanes,
1979;ParsonandCombs,1981;Nys"".,1986ab;

CaBP‑D28KのAntisenseは十二指腸と卵殼腺部から抽Kolling"".,1992;Singh"".,1986)が，本実験において，血中Caイオン膿度は卵殻形成との関連で変動し出したRNAとは反応し，用量‑反応曲線が成立し，しかているが，蛋白質と結合した非透過性Ca儂度は必ずしるアッセイIﾉ1の変動係数は,7.13%であった。また，もこれらの用1,t‑反応曲線とSenseRNAによる川量‑反も卵殼形成とは連動せず，むしろステロイドホルモンに応曲線との間で平行性が認められた。また，これらの組

よって影響されていることが明らかとなった。すなわ

織の反応において，卵殻形成のｲI無により， 二指腸でち，イj常在形態が異なるCa全てを合計したものとして表はほとんど差は認められなかったが，卵殼腺部においてされる総Ca,分子量の大きい蛋白質と結合しているとは卵殻形成が汀われている場合の方が行われていない場考えられる非透過性Caおよびイオン化したCaイオン合に比べて反応が多かった。これらに対して，結直腸との血漿における濃度は，何れも，周期がほぼ一llである

膨大部のRNAは，本実験で側Mした13"gまでの用量

排卵III1期中において変動していることが認められた。し内では，反応は認められなかった。

かし，排卵が認められない休産鶏においては一I1の内で

2）卵殼形成過程における十二指腸と卵殼腺部のCaBP‑D28,(111RNA濃度

有意な変動は認められなかった。これらのことは，これらのlill'‑￨1Ca膿度は，少なくとも排卵との関連で変動し排卵周期中において3時間毎に十二指腸と卵殼腺部のていることを示している。しかし,PGF2aの卵殼腺部￨ﾉﾘ

CaBP‑D28KmRNA濃度を測定した結果を血漿Caイオ

への投与‑により放卵を促して卵殻形成をIIⅡ止することにCopyright ©2002, Japan Poultry Science Association

後藤ら:CaBP‑D28K遺伝子発現とlill漿カルシゥム濃度

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1〜27〜813〜1419〜2023〜24
4〜510〜1116〜1722〜23

排卵後の時間Hourafterovulation

図7．排卵周期['1の色々な時期における血漿カルシウムイオン濃度，卵殼重量，卵殼カルシウム含量と卵殻腺部CaBP‑D28KmRNA儂度

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shellandCaBP‑D28KmRNAconcentrationintheshellglandatvarioustimesduringthe
ovulatorvcvcle

各点は9〜10羽の平均値±標準誤差．
EachpointisMean±SEof9〜10hens.

同じライン上での異符号間に5％水準の危険率で有意差あり．
Meanswithdifferentsuperscriptsinthesamelinearesignincantlydifferent(P<0.05).

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J 3 6 日 本 家 禽 会 誌

39 巻J1号(2002)

より，卵殼形成時に認められた血漿Caイオン濃度の減1995)の十二指腸と卵殼腺部のCaBP‑D28KmRNA分子少は認められなくなり，むしろ増力llしたのに対して，Ⅲl種について，比較的発現量の多い2.0kbの分子種と2種

漿総Ca濃度と非透過性Ca濃度の変動には有意な影響

類の発現量が比較的少ない約3.0kbの分子種が存在すは認められなかった｡これらのことは，Ⅲ中Caイオン

ると報告されているが，発現量が少ない約3.0kbの2種

濃度は卵殼形成との関連で変動しているが，卵殼への類の分子種のサイズはほぼ同じで,StriemandBar

Ca沈着は血中総Ca濃度と非透過性Ca濃度には必ずし(1991)とBarら(1992)の報告では約3.0kbの2種類のも反映しないことを示している。

分子種はまとめて1種類の分子種として表している。本

AGTはコレステロール側鎖切断酵素活性の抑制を介実験では，十二指腸と卵殼腺部において，少なくとも20

してステロイドホルモンの合成を阻害する(Kowal,

kbと3.0kbのCaBP‑D28KmRNA分子種が存在するこ

1969)ことが知られている。本実験では,LHの放出に対とが確認されると共に，それら2分子種間における発現するステロイドホルモンの影響を検討したJohnsoll

量は2.0kbの分子極の方が3.0kbの分子種に比べて多andvanTienhoven(1984)の報告における用量と投与く，しかも何れの分子種においても腸管組織では，十二方法でAGTを投与したところ,AGTの投与によって，指腸，空腸，回腸，結直腸，盲腸のlllHで発現壁が多く，排卵周期中におけるⅢl漿Caイオン濃度の変動には影響すでに報告されている腸管におけるCa吸収能(Taylorが認められなかったが，血漿総カルシウム濃度と非透過

andWasserman,1967)と相応していた。また，卵管で性Ca濃度の変動は認められなくなった。このことは，

ステロイドホルモンが血中Caイオン濃度に影響を与えは卵殻腺部においてのみ,CaB‑D28KmRNAが検出された。これらのことは,CaBPが卵殼腺部におけるCa沈る可能性は少ないが，血中総Ca膿度と非透過性Ca濃着機能と密接に関係しているという報告を支持してい度には影響を与えていることを示している。Ⅲl漿非透過る。また，前述したように,CaBPD28KmRNA分子種は性Ca濃度は，総Ca濃度の約60%を示しているが，こ2種類として確認されたが，卵殼腺部のみならず十二指の非透過性Caは卵黄前駆物質として知られる腸においても，発現量は2.0kbの分子種の方が3．0kbのvitellogeninと呼ばれるリン蛋白質と結合した(Greenberg"".,1936)ものであり，産卵に伴って血中分子種に比べて約2.4倍多く，しかもこの発現量の割合
は卵殼形成の有無によって有意な差異は見出されなかっ濃度が増加する(Copp,1969)ことが知られている。

た。このことは,2.0kbと3.0kbの分子種の発現割合は，また，｜￨Ⅱ中非透過性Ca濃度は，エストロジェンの投少なくとも卵殼形成に伴う生理的変化には影響されてい与によって雄鶏やヒナにおいても増加する(Urist"".,ないことを示している。

1958）ことが報告されている。本実験では，総Ca濃度とニワトリの卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNAを共に，非透過性Ca濃度は一日の時刻では正午頃からSolutionhybridizationRNaseprotection法により，徐々に増加し，20時頃に最も高い濃度を示した後，徐々定量的にまた特異的に測定出来るか否かを検討したとこに減少している。実験ではクラッチ第2卵の排卵前の一ろ，十二指腸と卵殻腺部から抽出したRNAは，いずれ日内において,Ca濃度を測定しているので，クラッチ第もCaBP‑D28KのAntisenseRNAと反応し，川量と反応2卵に対してはこの実験での正午は排卵20時間前頃にが得られ，しかもそれらの用量一反応曲1線とSense

相当し，また22時は排卵10時間前頃に相当する。本実CaBP‑D28KRNAによる用量‑反応曲線との間で平行性が認められた。これに対して，結直腸と膨大部より抽出し験と同じ条件で供試している山村ら(2001b)は，本実験で血漿非透過性Ca濃度の増加が認められたと同じ時期

たRNAは，本実験で使用した用量の範囲ではAntis‑に卵胞発育が認められたと報告している。このように，

enseCaBP‑D28KRNAとの間では反応が認められなかっⅢl漿非透過性Ca濃度の増"l1の時期と卵胞の発育が認めた。また，反応は，十二指腸では卵殼形成の有無によるられるllf期とが一致していることは，排卵との関係で認差異は見出されなかったが，卵殼腺部においては卵殼形

められた1m漿非透過性カルシウム濃度の変動は，卵胞発

成時において多かった。これらのことから，ニワトリの育と関連していると推察される。この推察は,AGTを十二指腸と卵殼腺部において,CaBP‑D28KmRNAを定投与して，ステロイドホルモンの合成を阻害することに量的かつ特異的に測定出来ることが明らかとなった。

より，排卵との関連で認められた血漿非透過性Ca濃度

本実験では，排卵周期中に,CaBP‑D28KmRNA濃度はの変動が認められなくなったことによっても支持され卵殼腺部においては著しく変動することが確認されたる。

が，十二指ll易において有意な変動は見出されなかった。

すでに，ウズラ(StriemandBar,1991)とニワトリ

これらの結果は,CaBP‑D28KmRNAをNorthernblot(KingandNorman,1986;Bar"""1992;Iedaaa/.,hvbridization法で測定したIedaら(1995)と,Solu‑Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

後藤ら:CaBP‑D28K遺伝子発現とIm漿力ルシゥム濃度
tionhybridizationRNaseprotection法によって測定J37するのであろうと推察される。

したStriemandBar(1991)とBarら(1992)の結果と

謝 辞

良く一致している｡Iedaら(1995)は，プロスタグラン

ジンE2を投与して放卵を誘起すると，卵殼腺部に卵が実験遂行にあたり懇意なる御指導を賜り，ニワトリ

存在する対照鶏に比べて，卵殼腺部のCaBP‑D28K

CaBP‑D28KcDNAプローブをご提供頂いた名古屋大学農mRNAレベルが減少することから，卵殼腺部における学部教授島田渭司博士及び家田照子博士と，ニワトリ

卵の存在とCa沈着がCaBP‑D28KmRNAの合成と蓄積に対しての刺激因子かもしれないと推察している。本実GAPDHcDNAプローブをご提供頂いた福井医科大学

教授宮本薫博士及び水谷哲也博士に深く感謝の意を表験においても，卵殼形成の開始と共に，卵殼￨￨鼎部におけします。また，終始実験に協力戴いた日本配合飼料株式

るCaBP‑D28KmRNAレベルが急激に増加したことか

会社中央研究所・飼料畜産開発センター所員一同に感謝

ら，卵が卵殼腺部に到達して卵殼が形成されることが，いたします。

卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNAレベルの増加を促すことは伺い知ることは出来るが，その増加が約10時

引 用 文 献間持続しているにも関わらず，その期間に卵殼重量と共に卵殼へのCa蓄積は一定の苫l1合で増加していること，および卵殼へのCa沈着が未だ行われているにも関わらず放卵数時間前からCaBP‑D28KmRNAレベルが急激に減少したことは，卵殼腺部CaBP‑D28KmRNAの発現は卵殼へのCa沈着だけでは説明出来ないことを示している。すでに述べたように，本実験では排卵周期中において血巾Caイオン濃度が卵殼形成との関連で変動していることが示されたが，この血中Caイオン濃度における変動と卵殼腺部CaBP‑D28KmRNA濃度の変動との間
で,Caイオン濃度の増加時にはCaBP‑D28KmRNA濃度が減少し，逆にCaイオン濃度の減少時期にはBarA,StriemS,VaxE,TalpazHandHurwitzS
RegulationofcalbindinmRNAandcalbindinturn.

overinintestineandeggshellofthechicken

AmericanJournalofPhysiology,262:R800‑R805
1
9
9
2
．

BarA,VaxE,HunzikerW,HalevyOandStriemS
Theroleofgonadalhormonesingeneexpression
ofcalbindininthelayinghen，GeneralandCom‑parativeEndocrinology,103:l15‑122．1996.
CoppDH.Review:Endocrinecontrolofcalcium

homeostasis.JournalofEndocrinology,43:137‑
161.1969.

CorradinoRAandFullmerCS.Positivecotrans‑

CaBP‑D28KmRNA濃度が増加し，またCaイオン濃度がcriptionalregulationofintestinalCalbindin‑D28k

低いときはCaBP‑D28KmRNA濃度は高い傾向が認めら

geneexpressionby1,25‑dihydroxyvitaminD3andれた。このように，血中Caイオン濃度と卵殼腺部

glucocorticoids・Endocrinology,128:944‑950.1991.
CorradinoRA,WassermanRH,PubolsMHand

CaBP‑D28KmRNA濃度の変動の様相の￨川で，ほぼ逆の

ChangSI.VitaminD3inductionofacalcium‑

関係が認められたことは，あるいはカルシウム恒常性に

bindingproteinintheuterusofthelainghen.
ArchivesofBiochemistryandBiophysics,125:378

関与する副甲状腺ホルモンとカルシトニンの場合と同様に,Caイオンが卵殼腺部におけるCaBP‑D28KmRNAの発現を調整しているのかも知れない。しかしながら，これらの推察にはさらなる研究が必要とされる。

‑380.1968.

DriggersJandComarC.Thesecretionofradioactive

calcium(Ca45)inthehen'segg･PoultryScience,28:429‑424.1949．

また，本実験では，排卵19〜2011寺間後から急激に卵殼GreenbergDM,LarsonCE,PearsonPBandBru‑

腺部CaBP‑D28KmRNA濃度が急激に減少することが見mcstreBR.Thestateandpartitionofthecalcium
andinorganicphosphorusintheserumofthefowl.

出されたが，この時期は次の卵に対しては排卵4〜5時
間前に相当する。この時期には排卵誘起ホルモンである

LHの放出が認められ，このLHの刺激により血中プロ

Effectofgrowthandovulation.PoultryScience,15:483‑489.1936.

HodgesRD.Thestructurcofthefowl'sLlltimo‑

ジェステロン(P4)濃度が増加していることが知られてbranchialgland.AnnalsofBiologicalAnimalBio‑

いる(Johnson.1990)｡また，産卵鶏へのP4投与によchemistryandBIophysics,10:255‑275.1969.
IedaT,SaitoN,OnoTandShimadaK.Effectsofり，卵殼腺部CaBP‑D28KmRNA濃度が減少することが見出されている(Bar""J"1996;後藤ら，未発表)｡これらのことから,LHにより分泌が刺激されるP4の作

川により,CaBP‑D28KmRNAの発現が抑制され，その結果として卵殼へのCa沈着が減少して，卵殼形成が終了

presenceofaneggandcalciumdepositioninthe
shellglandonlevelsofmessengerribonucleicacid
CaBP‑D28kandofvitaminD:Ireceptorintheshellglandoflayinghen.GeneralandComparativeEn‑
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Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

J38

日本家禽会誌39巻J1号(2002)

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Copyright ©2002, Japan Poultry Science Association

後藤ら:CaBP‑D28K遺伝子発現と血漿カルシウム膿度

TqQ

rJuv

PlasmaCalciumConcentrationsandExpressionof
CaBP‑D28KmRNAintheShellGlandinRelation

toCalcificationintheLayingHen
HisayaGoto'),MasayukiTagami'),MasashiMizuno2),EtukoKameoka3),
MasaruTakeishi'),NamikoYamamura3),OsamuDoi3)
andMichiharuKamiyoshi3)])LaboratoryofNipponFormulaFeedMfg.Co.,Ltd.Tochigi321−36212)LaboratoryofNissinFoodProductsCo.,Ltd.Shiga525−00553)TheUnitedGraduateSchooIolAgriculturalScience,GifuUniversity,Gifu501−1193
Itisknownwellthatcalcium‑bindingprotein(CaBP‑D28K)isinvolvedincalcium(Ca)depositionintheeggshellglandoftheoviductinthelayinghen.However,there
arefewreportsregardingacorrelationbetweengeneexpressionofCaBP‑D28KandCa.
Inthisstudy,changesinplasmaCaconcentrationsinrelationtocalci6cationwere
measured,andthen,plasmaCaionandCaBP‑D28KmRNAconcentrationsmduodenum

andshellglandwerequantitativelyanalyzed.TheplasmaCaconcentrationswere

measuredevery2hoursduring24hoursinlayingandnon‑layinghens.Inlayinghens,
apeakofplasmatotalandnon‑diffusibleCaconcentrationswasobservedbetween20:00and22:00correspondingtobetweenl4andl6hoursaftertheovulation.PlasmaCaionconcentrationssignincantlyincreaseduntillO:00tol2:00correspondingto4
to6hoursaftertheovulation･Afterindicatingthemaximumvalueat6hours,plasmaCaionconcentrationsrapidlydecreasedandreachedthelowestvallleatlOhoursafter
theovulation･PlasmaCaionconcentrationsmaintainedthelowestvalueuntill6

hoursaftertheovulation,andthereafter,graduallyincreasedbynextovulation･In
contrast,nosignincantchangeintheplasmaCaconcentrationswasobservedin

non‑layinghens.PlasmaCaionconcentrationsdidnotdecreasedfOllowingadminis‑
trationofprostaglandinF2",whichinducedovLllation.Additionally,thepeaksofthe
plasmatotalandthenon‑diffusibleCaconcentrationsdisappearedIollowingadminis‑
trationofaminoglutethimide,whichinhibitedsyntheslso[steroidhormones.In

simultaneousmeasurementoftheplasmaCaionandCaBP‑D28KmRNAconcentrations,
Cadepositionintheeggshellinitiatedat4105hoursaftertheovlllation,wasmildfor
thefirst3hours,thereafter,Caconstantlyaccumulated,anddecreasedbeforethenext
oviposition.PlasmaCaionconcentrationschangedwithsamemannerasmentioned

above.CaBP‑D28KmRNAconcentrationsintheeggshellglandwerethelowestvalueat
4to5hoursaftertheovulation,graduallyincreaseduntill3tol4hours,werestableat

thehighvalueuntill9to20hours,andsignincantlydecreasedbythenextoviposition.

However,CaBP‑D28KmRNAconcentrationsintheduodenumdidnotshowsignincant
changesduringtheovulatorycycle.TheseresLlltsdemonstratedthatthebloodCaionCopyright ©2002, Japan Poultry Science Association

J40

日本家禽会誌39巻J1号(2002)

concentrationscorrelativelychangedwithCadepositionintheeggshell,andthebloodnon‑diffusibleCaconcentrationswerechangedbythesteroidhormones･Geneexpres‑sionofCaBP‑D28Kintheshellglandwassuggestedpossiblycorrelatingwiththechange
inbloodCaionconcentrationaswellasCadepositionintheeggshell.

Utz""esePo""ryScie"",39:J25‑J¥0,2002ノ

Keyword:calcium‑bindingprotein,geneexpression,prostaglandinF2(r,ami‑
noglutethimide,calciumion