はじめに
この資料はRefseqや「NM_」といった遺伝子解析において必要とされる情報やリファレンス配列の変換によるバリアント表記の確認などについて説明しています。
検査依頼時や結果の解釈でお困りの際は下記をご参照ください。

• Refseq・codingDNAについて・・・2〜5ページ
Refseqの説明、Accession番号、codingDNAの番号、NMの重要性について案内しています。

• バリアントの位置検索・確認方法・・・・6〜13ページ
TransVarを用いたバリアント位置の検索、Accession番号の確認、バリアント情報のリファレンス配列変換とMutalyzerでの確認方法についてをご案内します。

RefSeqとは• Refseq（Reference Sequence）とは、NCBIが提供しているゲノムやタンパク質、転写産物などをコードしている基準となる塩基配列やアミノ酸配列などの参照配列が集約されたデータベースです。https://www.ncbi.nlm.nih.gov/refseq/• Refseqに登録された配列にはAccession番号といわれるIDが割り振られます。
Accession番号には「NM_」や「XM_」などの種類があり、下記のように配列の種類によって接頭語が異なります。https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21091/
接頭語

対象分子、種類NC_

完全なゲノム領域、染色体NG_

不完全なゲノム領域

NM_

タンパクをコードする転写産物、mRNA

NR_

タンパクをコードしない転写物、RNANP_

NM_に関連付けられたタンパク

Accession番号「NM_」について⚫ 1つの遺伝子につき、 Accession番号が1つとは限らず、下記のATP7B のように基準となるcDNAの参照配列が複数登録されています。(Mutation @ a glanceより引用)⚫ 弊所では複数のAccession IDのうち、HGMD(The Human Gene Mutation Database)で採用されたものを使用して解析をしております。

Accession ID
NM_000053.3
NM_001330578.1
NM_001330579.1
NM_001243182.1
NM_001005918.2
矢印で示すような青四角がコーディングシーケンス（CDS）を表しています。

「NM_」の情報がなぜ必要なのか⚫ 例として、ATP7B のchr13:g.51946441A>G のバリアントを調べてみます。

同じ位置でもcDNAやProteinが異なります。

NM_000053.3
NM_001243182.1
NM_001005918.2

gDNA（hg38）
g.51946441A>G

Accession ID

cDNA

Protein

Exon位置

NM_000053.3

c.2903T>C

p.I968T

Exon 13

NM_001243182.1

c.2570T>C

p.I857T

Exon 14

NM_001005918.2

c.2282T>C

p.I761T

Exon 9

Accession IDが異なれば同じゲノムポジションでもcDNAやタンパクが異なり、「NM_」の情報がないと正しいバリアントの位置や情報を認識することができません。

リファレンス（hg19、hg38）とは⚫ ゲノム解析の際に解析データと比較するための基準となる塩基配列のことです。
2009年にリリースされた古いものをhg19、2013年の新しいものをhg38といい、配列情報がhg19とhg38間で異なります。
⚫ 前の例として、NM_000053.3：c.2903T>Cをhg19とhg38で比較すると、リファレンスが異なるとゲノム位置も異なります。
同じバリアントでもゲノムポジションが異なります。
リファレンス

Accession ID

gDNA

cDNA

Protein

Exon位置

hg38

NM_000053.3

g.51946441T>C

c.2903T>C

p.I968T

Exon 13

hg19

NM_000053.3

g.52520577A>G

c.2903T>C

p.I968T

Exon 13

バリアントの位置やリファレンスの変換方法⚫ RefseqのAccession IDや「hg38」などのリファレンス（参照配列）が異なることで正しくバリアントを認識できないため、それらを調べる方法をご紹介します。

1. TransVar・バリアント情報からAccession ID、ゲノムポジションの確認
・リファレンス配列「hg38」および「hg19」の変換
2. Mutalyzer
・TransVarで得られたゲノムポジションの確認

バリアントの位置を検索⚫ ゲノム位置検索の機能の一例としてMD Anderson Cancer Centerが提供するTransVarを使って説明致します。
https://bioinformatics.mdanderson.org/transvar/⚫ ATP7B、NM_000053.3、c.2903T>C、p.I968Tのバリアントの情報を例としてTransVarでの検索例をご紹介します。

バリアントの位置を検索⚫ ATP7B、NM_000053.3、c.2903T>C、p.I968Tのバリアントを例にAccession IDの確認の手順をご紹介します。

お持ちのバリアント情報を選択します。
HGVS.cのバリアントから検索します。

検索及び変換したい参照配列を選択します。

検索したいバリアントの情報を入力します。
例・・・遺伝子名：c.100A>T
バリアントの情報をどのデータベースの結果として得るかを選択します。
Accession IDを入手するため、Refseqを選択します。

バリアントの位置を検索⚫ 「hg38」をリファレンスとしたATP7B のc.2903T>CのAccession番号やゲノムポジションなどのバリアント情報が表示されます。
c.2903T>Cのバリアント情報にヒットしたAccession IDが表示されます。

cordinatesにgDNA、cDNA、proteinが表記されます。
お持ちの情報と比較・ご確認ください。

Accession ID：NM_000053の情報を用いて、hg19での位置に変換してみます。
リファレンス配列のみ「hg19」に変換して同様に検索してください。

バリアントの位置を検索⚫ 「hg38」でのATP7B のc.2903T>Cのバリアントに対して「hg19」へ変換するとゲノムポジションが表のようになります。

Accession ID

gDNA（hg38）

gDNA（hg19）

Exon位置Protein

NM_000053.3

g.51946441A>G

g.52520577A>G

Exon 13p.I968T

表のように「hg38」と「hg19」などの参照配列が異なると、ゲノムポジションは異なり、正しいバリアントの位置を認識できません。

Mutalyzerでの確認⚫ Mutalyzerを用いて、TransVarで得られた結果の確認方法をご紹介します。
https://mutalyzer.nl/

Mutalyzerでの確認⚫ Build（緑枠）の中から、解析したいリファレンス配列を選択します。
Variant description（赤枠）に、Accession IDとバリアントの情報を入力します。
＊NM_00001.〇 の〇部分の数字がVersionを表しており、稀に対応してないことがありますので、その場合はページ下部に「We found these versions:NM_~」と表示されますので、versionを変えてお試しください。

Mutalyzerでの確認⚫ リファレンス配列にそれぞれ「hg38」と「hg19」を選択し、AccessionIDはNM_000053.3を選択し、 c.2903T>Cについて検索した結果、TransVarで得られた結果と同じであることを確認できます。

Accession ID

gDNA（hg38）

gDNA（hg19）

Exon位置Protein

NM_000053.3

g.51946441A>G

g.52520577A>G

Exon 13

p.I968T