東京慈恵会医科大学

東京慈恵会医科大学 教育・研究年報 2018年版

Ⅲ．薬剤耐性がん細胞に対するクルクミンによる化学療法

アイソトープ実験研究施設
教

授：尾尻教
講

授：朝倉正
師：箕輪はるか博也

ウコンの成分であるクルクミンは NF κB と結合放射線診断学している IκB のリン酸化抑制およびクルクミンが持がんの生化学
放射線化学・生物

つプロテアソーム阻害作用による IκB 分解抑制作用を介して NF κB 活性化を抑制する。さらに KRAS
NF κB の恒常的活性化が起こっている膵がんや肺がんを含むさまざまながん種に対して，NF κB 抑教育・研究概要
Ⅰ．プロテアソーム阻害剤耐性細胞の上皮間葉転換制を介した抗腫瘍作用を発揮することが報告されて（EMT）誘発機構の解明：CD44 を介したがんいる。また，KRAS 変異や p53 変異の有無によっ幹細胞化の関与て大腸がん細胞株はオキサリプラチンに対する感受新規化学療法剤として用いられるようになったプ性が変わるが，クルクミンの抗腫瘍効果はそれらにロテアソーム阻害剤に対して耐性を獲得した細胞を左右されないことを示した。一方，当研究室で樹立樹立した。子宮内膜がん細胞 Ishikawa を Epoxomiしたプロテアソーム阻害剤 epoxomicin 耐性細胞株
cine（EXM）で処理することにより得られた EXM （子宮内膜がん細胞株 Ishikawa）やアドリアマイシ耐性細胞 Ishikawa/EXM 細胞は，E cadherin 発現ン耐性株およびシスプラチン耐性株（卵巣がん細胞消失を伴い EMT を誘発し，E cadherin 発現調節株 A2780）に対して，クルクミンは感受性親株とに関与する転写抑制因子は ZEB1 であることを明ら同等に抗腫瘍活性を発揮することを示し，抗がん剤かにしてきた。この発現調節系にはがん幹細胞マー耐性がんに対する有効な治療薬になり得ることを示
カーである CD44 の発現亢進していたのでその関与した。
を検討した。
また，クルクミンは生体利用効率（バイオアベイ
Ishikawa/EXM 細胞で CD44 の発現亢進が見られ， ラビリティ）が低く，さらに経口摂取では腸管からIshikawa 細胞ではその発現は見られなかった。発の吸収時に抗腫瘍活性を有する遊離型クルクミンが代謝を受け活性が低下し，十分な抗腫瘍効果が得ら現した CD44 は variant 4 であった。CD44 の発現れない。そこで，新たに開発した水溶性プロドラッのない Ishikawa 細胞に CD44v4 を過剰発現させる
グ 型 ク ル ク ミ ン： ク ル ク ミ ン モ ノ グ ル ク ロ ニ ドと，ZEB1 の発現が誘発され，それに伴い E cad（CMG）は，従来のクルクミンと比して千倍以上のherin 発現抑制を引き起こした。一方，Ishikawa/遊離型クルクミン血中濃度を達成することに成功しEXM 細胞の CD44 を antisense cDNA により発現ており，有効な新規抗がん剤として期待される。
抑制すると，ZEB1 の発現が抑制され，それに伴いE cadherin の発現を引き起こした。また，CD44 発
Ⅳ．放射線耐性生物における耐性機構の解析
現調節細胞における EXM に対する感受性を調べた
クマムシは 0.1mm 程度の大きさの微小動物であところ，CD44 高発現で耐性を獲得し CD44 発現抑制で感受性の回復が認められた。
すでに，ERK1/2 によるシグナル伝達系を介したEMT 誘発経路を確認しているので，今後 CD44 を介した ERK1/2 によるシグナル伝達系の関与について検討していく。
Ⅱ．癌細胞膜表面高発現糖タンパク質 CD147 を標的とした高分子ミセルによる化学療法の検討
高分子ミセルに抗 CD147 抗体（aCD147ab）を標
識 し GSH DXR を 内 封 し た ミ セ ル 製 剤 は，aCD147ab の高発現しているヒト類表皮癌細胞 A431 およびヒト子宮癌細胞 Ishikawa に特異的，かつ有効な抗腫瘍効果を示したので，担がんマウスでの invivo 治療効果検討の準備を進めている。

り，乾燥や電離放射線などの極限環境に耐性を持つことが知られている。８本の足を持ち，ゆっくりと歩く様子が熊を連想させることから日本語でクマム
シ，英語では water bear という名前が付けられており，単独で緩歩動物門を成している。クマムシの電離放射線への耐性機構を明らかにするため，X 線照射による DNA 損傷を分析した。試料として西新橋校周辺の苔からオニクマムシ（）を採取し，また東京都下水道局森ヶ崎水再生センターより活性汚泥の提供を受け，ゲスイクマムシ（）を採取した。X 線照射装置 MBR 1520R 3（Hitachi Power Solutions）により 500Gy の X 線をクマムシに照射し，DNA の損傷を Comet Assay Kit ES Ⅱ（Trevigen）を用いてコメットアッセイ法により分析した。クマムシ細― 307 ―電子署名者 : 東京慈恵会医科大学
DN : cn=東京慈恵会医科大学,o, ou, email=libedit@jikei.ac.jp,
c=JP
日付 : 2020.02.01 13:10:27+09'00'

東京慈恵会医科大学 教育・研究年報 2018年版

胞中の DNA を電気泳動後染色し，細胞イメージア数年 40〜60 名程度で推移しており，RI 実験を行いナライザーArrayScan XTI（Thermo Fisher Scien-やすい環境を整えるとともに，コールド実験も推進tiﬁc）でコメット像を観察し，解析した。１試料あし共同研究施設として保有する設備・機器を広く利たり 1,400 個以上の細胞を分析した結果，ゲスイク用してもらえるよう継続して努めている。特に，動マムシでは X 線照射群は未照射群に比べ，テールDNA の比率が 25％以上増加しており，DNA が損傷を受けたと考えられる。オニクマムシでは１試料
では 26％の増加がみられたが，別の試料では未照射群と有意な差はなく，DNA の損傷が見られない場合があった。クマムシの種により放射線耐性に差があると考えられ，今後さらに詳細な調査を行う予定である。

物飼育室・実験室を整備したことで需要が高まり，延べの利用時間は倍増した。
現在，施設内で使用できる密封されていない RIとして使用許可を受けている核種は 3H，14C，32P，Ⅳ．放射性降下物の環境中における追跡および測定法の開発
2011 年３月に起きた福島第一原子力発電所事故
により環境中に放出された放射性物質の分布と挙動について調査を行った。福島県および関東地方から土壌や植物などの環境試料を採取し，放射性セシウ
ム等，放射性物質の定量とイメージングプレートを用いた画像解析を行った。また事故による汚染水の海洋漏洩を受け，海水中の放射性ストロンチウムの安全かつ簡易・迅速な分析法を検討した。陽イオン交換樹脂（Dowex 50W X8）を充填したカラムにより Ca，Mg 等と分離し，放射性ストロンチウムを炭酸塩沈殿として捕集し，新たに考案したプラスチックシンチレータボトルを用いて，LSC LB7（Hitachi）で測定した。化学分離操作の所要時間は，従来の方法では約２週間かかったが，この方法では約 10 時間（延べ２日）で可能となった。この方法
を海水試料 1L に適用し，検出下限値 0.02 Bq・L−1にて分析できた。この方法は，海水のスクリーニング調査に有効に利用できると考えられる。

「点検・評価」
１．施設
アイソトープ実験研究施設は，本学における放射性同位元素（RI）を用いた基礎医学・生化学研究の実施と支援を行っている。また，RI を使用しない生化学実験・動物実験・遺伝子組換え実験等も積極的に受け入れている。2018 年度は，12 講座・研究室の 38 名，２カリキュラムの 12 名の合計 50 名（うち女性 19 名）が実験・研究を行った。昨年度に比べ，２講座・研究室が減少し利用者数も 54 名から 50 名へと減少した。RI 受入件数は５件と減少し，使用核種は 32P，51Cr，3H，14C，125I などであり，使用量合計は 472.4MBq であった。RI の利用者数はここ

33

P ， 35S ， 45C a ， 51C r ， 54M n ， 59F e ， 60C o ， 75S e ，

85

S r ， 89S r ， 90S r ， 109C d ， 125I ， 131I ， 134C s ， 137C s ，

152

Eu である。
２．研究「薬剤耐性細胞の EMT 誘発機構の解明」について継続して展開しており，EMT 誘発に直接関わる転写抑制因子と，その因子の発現制御をしているシグナル伝達系を検索している。また，薬剤耐性の克服薬の候補分子としてウコンの成分でもあるクルクミンの効果についても研究を進めており，放射線耐性に関わる遺伝子の検索も行っている。
「 放 射 性 降 下 物 の 環 境 中 に お け る 追 跡 」 で は，
2011 年３月 11 日の東日本大震災による福島第一原
子力発電所事故での汚染水の海洋漏洩を受け，海水中の放射性ストロンチウムの安全かつ簡易・迅速な分析法をさらに改良し，海水のスクリーニング調査に利用できることを示した。
３．教育
医学科２年生，３年生の教育に携わり，多くの講義・演習・研究室配属を分担している。特に，コース研究室配属では５名が６週間の実習を行った。またコース基礎医科学Ⅰのユニット「分子から生命へ」
では講義・演習・実習を担当しており，コース基礎医科学Ⅱのユニット「血液・造血器系」，コース臨
床基礎医学のユニット「代謝障害学」，「ヒトの時間生物学」の各講義を担当している。また，大学院共通カリキュラムにおいては，RI 基礎技術の修得を目的とした５日間（予備日を含めて６日間）の実習を行い，７名が受講した。
一方，教職員が施設を有効に利用できるよう，放射線障害防止法に基づく教育訓練を年７回実施し68 名が受講した。
社会貢献活動の一環として，一般向けの放射線教育を行っている。NPO 法人放射線教育フォーラムの理事として，第１回勉強会を 2018 年６月 10 日に，第２回勉強会を 2019 年３月３日にいずれも南講堂で開催した。他にも放射線教育に関する国際シンポジウム開催，各地で開かれている市民レベルでの講演会に講師を派遣している。また，「放射性降下物― 308 ―東京慈恵会医科大学 教育・研究年報 2018年版の環境中における挙動」については，一般市民の関

8）五十嵐淳哉，張心が依然として高く，関連研究会での発表のみなら志彦，箕輪はるか，吉川英樹．福島県大熊町及び双葉ず，一般向けの講演会・測定会等も継続して行っている。

究業類．第 20 回「環境放射能」研究会．つくば，３月．

績Ⅰ．原著論文
1）Asakura T, Yokoyama M, Shiraishi K, Aoki K, Ohkawa K. Chemotherapeutic eﬀect of anti CD147 antibody labelled micelles encapsulating a conjugate ofdoxorubicin with glutathione targeting CD147 expressing carcinoma cells. Anticancer Res 2018 ;38(3) : 1311 6.

Ⅲ．学会発表1）箕輪はるか，加藤結花，緒方良至．放射性ストロンチウムの簡易迅速分析法Ⅲ

天然海水試料への適用．

第 55 回放射線・アイソトープ研究発表会．東京，７月．
２）加藤結花，箕輪はるか，緒方良至．放射性ストロンチウムの簡易迅速分析法Ⅳ厚，佐藤町にて採取した放射性セシウムを含む不溶性粒子の分

放射線ばかりでなく，実験廃棄物や医療廃棄物の問題に関しても積極的に取り組んでおり，有害・医療 廃 棄 物 研 究 会 で は 理 事 と し て， 研 究 講 演 会 を2018 年７月 27 日と 2019 年２月 26 日に南講堂で開催し，環境省と東京都環境局からの講師による特別講演も実施した。

研

子見，二宮和彦，篠原

プラスチックシンチ

レータを用いた測定法の性能評価．第 55 回放射線・アイソトープ研究発表会．東京，７月．
3）箕輪はるか，加藤結花，緒方良至．簡易迅速 Sr 分
析法の天然海水試料への適用．2018 日本放射化学会
年会・第 62 回放射化学討論会．京都，９月．
4）加藤結花，箕輪はるか，緒方良至．プラスチックシンチレータを用いた LSC でのスペクトル解析．2018
日本放射化学会年会・第 62 回放射化学討論会．京都，９月．
5）Ogata Y, Kato Y, Minowa H. Measurement methodof radiostrontium using plastic scintillator via liquid
scintillation system. 2018 IEEE Nuclear Science Symposium and Medical Imaging Conference. Sydney,Nov.
6）加藤結花，箕輪はるか，小島貞男，緒方良至．海水中放射性ストロンチウムの簡易・迅速測定法Ⅰ−プラスチックシンチレータボトルを用いた測定法−．日本
放射線安全管理学会第 17 回学術大会．名古屋，12 月．
7）緒方良至，加藤結花，箕輪はるか，小島貞男．海水中放射性ストロンチウムの簡易・迅速測定法Ⅱ−化学分離・試料作製法−．日本放射線安全管理学会第 17回学術大会．名古屋，12 月．
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