カルシウム摂取量と動脈硬化
ーカルシウム摂取量と酸化低比重リポ蛋白 (LDL)との関連についてー
記雄憲彦世良哲正隆浩

要沢司本岸井教

西庄絵川森

大阪市立大学医学部第二内科 助教授

授コ=，冒

動脈硬化と骨粗怒症との関連が以前から指摘されているが、これら二つの病態を関係づけている要因については十分理解されていない。今回、カルシウム摂取量の動脈硬化への影響をみるため、カルシウム摂取量と酸化LDLおよび他の危険因子との関連を検討した。
対象 lt、虚血性心疾患や末梢動脈疾患のない検診受診者271名で、カルシウム摂取量の調査を行った。酸化LDLについては、血柴より分離した LDLの試験管内被酸化性 (LDLLagtime)、血紫酸化LDL濃度 (0刻LDL)、IgGクラスの血清抗酸化LDL自己抗体価 (oxLDLAb)を測定した。また、超音波Bモード法により、頚動脈内膜中膜肥厚度 (CA‑IMT)を計調uし、動脈硬化の指標とした。
カルシウム摂取量は LDLLagtimeやoxLDLAbとは有意な関連を示さなかったが、血疑問LDL濃度とは弱い負の相関傾向を示した。血柴田LDL濃度に影響する因子を重図帰分析すると、年齢と LDLコレステロ」ルが正の、カルシウム摂取量が負の有意な関連を示した。また、カルシウム摂取量は HDL
コレステロールと有意な正相関を示し、この関係は重回帰分析においても有意であった。 CA‑IMTに影響する因子を重回帰分析したところ、年齢、血圧、 NonHDLコレステロールが正の、 HDLコレステロー
ルが負の関連を示したが、カルシウム摂取量の独立した関与は認められなかった。
以上より、カルシウム摂取量の多いものほ E血柴田LDL濃度が低く、 HDLコレステロールが高いことが示された。今回の成績から、十分なカルシウム摂取は、単に骨粗事長症のみではなく、動脈硬化に対しでも好影響を及ぼしうるものと考えられた。

緒=1=1

動脈硬化の発症進展における血紫リポ蛋白の意義は確立され、リポ蛋白のうち、低比重リポ蛋白(LDL)の動脈硬化促進性が重要視され、酸化変性がLDLの動脈硬化促進性を更に増すことが注目されている。 LDLは動脈壁内皮下腔で酸化され、マクロファージのスカベンジャー受容体、 CD36、マクロサイアリンなどの酸化LDL受容体により取り込まれ、マクロファージの泡沫細胞化、従って動脈硬化E1u

ハwd

病変の形成を促進させる。
LDLの酸化をヒトで評価する方法として、血清過酸化脂質の測定が試みられるが、測定法によっては特異性に問題があると指摘されている。血援から LDLを分離し、試験管内酸化に対する抵抗性をみ
1Jも報告されているが、生体内の状態をどの程度反映するのか不明である。酸化変性したLDLる方法 [は新たな抗原性を獲得し、それに対する液性および細胞性免疫反応が誘導されるため、血清中の抗酸化LDL自己抗体価を測定する方法が、生体内での LDLの酸化についての情報となると期待されている。
2J、重症の頚動派硬化症 [3J、早発性末梢動脈硬化症[4Jの患者で、抗酸化LDL自己抗体
冠動脈疾患 [価の上昇が報告されている。更に最近になり、酸化LDLに存在する酸化フォスファチジルコリンを特5J、これを用いた高感度ELISA[6Jにより、血異的に認識するマウスモノクローナル抗体が作成され [か苛責出可能になっている。
禁中の酸化LDL
ところで、骨粗怒症と動脈硬化症がしばしば併存することが、以前から指摘されており、骨代謝あるいは関連因子と動脈硬化との相互関連が示唆されている。例えば、骨代裁が大きく変化する慢性腎7J、動脈壁肥厚度 [8.
9Jと密接に関連して不全患者では、カルシウム・リン代謝や骨代謝が脂質代謝 [いることが示されている。骨粗霊長症の予防として十分量のカルシウム摂取が奨励されるが、現在のところカルシウム摂取量と血清脂質、 LDLの酸化変性、動脈硬化との関係は、必ずしも明らかではない。
今回の研究では、カルシウム摂取量が骨粗慈症以外の疾患、特に動脈硬化症に対して関与しうる可や他の動脈硬化危険因子との関連を検討した。
能性を検討する呂的で、カルシウム摂取量と酸化LDL対象と方法‑対象
大阪地区の健康増進プログラムへの参加者のうち、虚血性心疾患がなく末梢動脈硬化症のない者

71名が本研究に参加した(表1)。
から希望者を募り、 2
聞栄養摂取調査
独自に作成した質問票を用いて各自の平均的な食品摂取状況を調査し、パーソナルコンピュータを用いて集計し、日本食品成分表(四訂)に基づきカルシウム摂取量を算定した。
国採血車
1空腹時に採血を行い、血清およびEDTA血築を分離し、以下の測定に供した。

E血清脂質濃度総コレステロール、トリグリセライドは市販のキットを用い酵素法で測定した。 HDLコレステ
ロールは、沈殿法により上清のコレステロールを酵素法で測定して求めた。

田LDLの試験管内酸化抵抗性の測定
LDLの試験管内酸化抵抗性は E
sterbauerらの方法 [1Jにて求めた。 EDTA
血祭から LDL分画(比重1.019‑1.063g/mLlを段階的超遠心法にて分離し、 EDTA不合PBSにて透析した。最終濃度がLDL‑60ー50μE蛋白 /mL、硫酸銅2μmoI/LになるようにPBS溶液を調整し、石英セルの中で37Cでインキユベー
0Lagtime)をトし、 234nmの吸光度を経時的にモニターした。吸光度が急激に上昇するまでの時間 (測定した。
濃度測定
圃血竣酸化 LDL5Jを用いた ELISA
血築中の酸化LDLは酸化LDLを特異的に認識するマウスモノクローナル抗体 [[6](ベッセルリサーチラボラトリー社、群馬県)により定量した。マウスモノクローナル抗体を固穴プレートに血築を添加し、酸化LDLをプレートに捕捉した。十分な洗浄の後、酵素標相化した 96
識抗ヒトアポBポリクローナル抗体を添加した。洗浄後、発色基質を添加し発色させ、 450nmの吸濃度を求めた。
光度をマイクロプレートリーダ}で計測した。標準曲線から、酸化LDL
田血清抗菌量化LDL自己抗体価測定
iomedica社(オーストリア)製の ELISAを用いて測定した。まず、銅
血清抗酸化LDL自己抗体価は Bが思相化された 96
穴プレートに、予め希釈された血清を添加し、酸化イオンにより酸化させた LDLLDLを認識する抗体をプレートに結合させた。十分に洗浄したのち、酵素標識抗ヒト IgGポリクローナル抗体を添加した。十分に洗浄したのち、発色基質を添加し発色させ、 450nmの吸光度をマイク

DL自己抗体価を求めた。
ロプレートリーダーで計測した。標準曲線から、血清の抗酸化 L
園頚動脈内膜中膜肥厚度 (CA‑IMT)計測
頚動脈内膜中膜~~厚度 (CA-IMT) は、超音波B モード断層法 [8 ， 9J により計測した。

圃統計解析SD)と範聞にて要約調査したデータはパーソナルコンビューターにて集計し、平均値土標準備差 (した。群聞の平均値の差は、分散分析により検定した。変数どうしの関連は、単回帰あるいは重回帰分析により検定した。いずれの場合も、危険率P<0.05を有意とした。

結 果

国カルシウム摂取量平均±標
カルシウム摂取量の現状について、男女比較を図 lに示す。男性で、は 670土189mg/day(73::!
:240mg/dayであり、女性でよりカルシウム摂取量が多かっ準偏差)であったのに対し、女性では 7∞た (P=O. 03)。

カルシウム摂取量の年齢による変化を図 2に示す。男女とも高齢者ほどカルシウム摂取量が増加
女、 P=0.013)。
してけた(男、 P=O.Oll;・頚動脈内膜中膜肥厚度、P=動脈硬化の指標として計測した CA‑IMTは、年齢と有意な正の相関関係を示した (r=0.222

図 3。
)0.0α)3;16

置カルシウム摂取量と酸化 LDL諸指標との関係諸指標との関カルシウム摂取カぎ動脈硬化に与える影響をみるため、カルシウム摂取量と酸化LDLimeや血清oxLDLAb
価係を回帰分析した(図 4)。カルシウム摂取量は、 LDLの試験管内酸化の Lagtとは有意な相関を示さなかった。一方、カルシウム摂取量と血紫oxLDL濃度との間に負の相関傾向(r=‑‑0.
11、P=0.07)が認められたが、統計学的にはボ}ダーラインの有意水準であった。

農度は種々の要因により影響されると考えられるため、血祭酸化LDL濃度に影響する
血竣oxLDLi濃度は、年齢およびLDLコレステロール値
因子を重回帰分析により検討した(表 2)。血紫酸化LDLと独立した正の関連性を示し、またカルシウム摂取量と負の独立した関連性を示した。
田カルシウム摂取量と動脈硬化危険因子との関係
カルシウム摂取量と動脈硬化の危険因子との関係を回帰分析した(表 3)。カルシウム摂取量は血圧やNonHDLレベルとは有意な相関を示さなかったが、喫煙指数 (p=‑0.120、P<0.05)やHDLコ
レステロール (r=‑0.164、P=0.007)と有意な正相関を示した。
カルシウム摂取量と HDLコレステロールとの関連の独立性を検討するために、重回帰分析を行っndexた(表 4)0HDLコレステロールとカルシウム摂取量との聞に、年齢、性別、喫煙、 Bodymassi比)とは独立した、有意な関連が認められた。
(BM[)、ウエスト/ヒップ比 (W/H・頚動脈内膜中膜肥厚度に影響する因子の重回帰分析
島1Tに影響を与える因子を重回帰分
カルシウム摂取が動脈硬化へ与える影響をみるために、 CA‑が独立した正の関与を示し、 HDLが独立し析した(表 5)。その結果、年齢、収縮期血圧、 NonHDL
た負の関与を示したが、カルシウム摂取量と CA‑IMTとの関係は有意ではなかった。

考 察

本研究では、カルシウム摂取が動脈硬化を抑制する可能性について、カルシウム摂取と CA‑IMTお関連の諸指標との関係を、明らかな動脈硬化症をもたない検診受診者にて検討した。カ
よひ・酸化LDL濃度が低値で、あり、また HDLコレステロールが高値でかつルシウム摂取量の多いものほど血疑問LDL喫煙指数が低いとの関係が認められた。従って、十分なカルシウム摂取は動脈硬化の負の危険因子となる可能性が示唆された。
濃度、血清oxLDLAb、血紫LDL
本研究の特徴のひとつは、酸化LDL関連の指標として、血柴田LDLの試験管内酸化抵抗性 (Lagtime)を同時に検討していることである。これらの諸指標の臨床的意義は必ずしも明らかではない。動脈壁局所の oxLDLは動脈硬化の病因として重要視されているが、血中のが直接に動脈硬化を促進しているとは考えにくい。むしろ、動脈壁のoxLDLが血中にback
微量の oxLDLschemiceventを生じている Acutecoro‑diffusionしている可能性が高い。実際、冠動脈疾患のうちでも inarysyndrome患者で特に顕著な血疑問LDL濃度の上昇が認められている [10J。また、血清oxLDLAbは、冠動脈疾患、慢性閉塞性動脈硬化症、頚動脈硬化症の患者で上昇しているとの報告があり、酸化LDLro
白つに対する免疫応答が允進していることを反映しているものと考えられている。 LDLの試験管内酸化のLagt
imeは、 LDLが動脈皇室に惨み込んだ後、局所で酸化されるときの酸化抵抗性を表していると考えimeの短縮は動脈硬化に不利であるとされている。今回の 271名の健常者における断られており、 Lagt

面的研究では、 CA‑IMTはこれら 3つの指標のいずれとも有意で独立した関連を示さなかった。動脈の形態的変化は数十年におよぶ経過の蓄積を表すため、断面調査では有意な関連が検出できなかった可能性がある。更に大規模な調査を実施するか、経年的検討を行う必要があるのかもしれない。
濃度に影響する因子として、年齢が正の関連を示し、血j青山LDLAb
価としかしながら、血柴田 LDLが動脈壁からの backdiffusion
カルシウム摂取量が負の関連を示したことが注目される。血楽の oxLDLを表している [10Jとすると、血柴田LDLi
農度と1frI.i
青山LDLAb価との逆相関から、血中のoxLDLのクリアランスにoxLDLAbが関与している可能性が考えられる。実験動物において、血中に投与されたoxLDLは速やかに肝臓に取り込まれ、その大部分は Kuppfer細胞に取り込まれる [llJ0 Kuppfer
細胞は ClassA
Scav
enger
受容体 (SR‑A)以外に、 oxLDLとoxLDLAbの免疫複合体を認識する IgGFc受容体ももってい12Jo SRAのノックアウトマウスでは血中からのoxLDLのクリアランスが低下していない [llJことる[回のクリアランスに関与していることが考えられ、今回の成績もこの仮説をから、 o<LDLAbがoxLDL支持するものである。
濃度の逆相関から、カルシウム摂取が動脈からのoxLDLback
また、カルシウム摂取量と血柴田LDL
diffusionまたは oxLDLのクリアランスのいずれかに関係していることが示唆される。現在のところ、
uppfer細胞機能との関連は不明であるが、カルシウムが動脈壁カルシウムと動脈壁プラーク安定性やKv
entに対して抑のプラーク安定性に関与しているとすると、十分なカルシウム摂取が動脈硬化による e制的に作用する可能性があり、今後の重要な検討課題となると考えられる。
本研究では、カルシウム摂取量は男性より女性で多く、女性では高齢者ほど多いとの関係が有意であり、通常の食生活から予想されるのと一見逆の結果のように思われる。しかしながら、骨粗怒症に対する関心は男性より女性が高く、若年より高齢で高まるため、高齢女性でより積極的にカルシウムが摂取されていることを反挟していると考えられる。
今回の調査では、カルシウム摂取量は喫煙指数と有意な逆相関を、 HDLコレステロールと有意な正相関を示した。これらの機序として、カルシウム摂取量が女性で多く、女性で喫煙が少ないこと、女性でHDLコレステロールが高いことがあって、見かけ上の関係をみている可能性はある。しかしながら、カルシウム摂取量と HDLコレステロールとの正相関関係は、重回帰分析にて年齢、性別、喫煙、r)、体脂肪分布 (W/H比)を考慮しでも、有意で独立したものであった。摂取されたカルシ体脂肪 (BMウム、あるいはカルシウムとともに摂取された何らかの栄養素がHDLコレステロールを上昇させてい13Jでは、血中 25(OH)D3レベルがHDLコレステロールやアポる可能性がある。ベルギーからの報告 [A‑Iと正の相関を示しており、また、我々 [7Jは、慢性腎不全透析患者の血中イオン化カルシウム濃度代謝関連の肝性トリグリセライドリバーゼ (HTGL)やレシチンアシル転位酵素 (LCAT)活性が関とHDL代謝の関連が示唆されている。
連することを示しており、カルシウムと HDL
3Fhu以上、本研究ではカルシウム摂取量と動脈硬化あるいはその危険因子との関連を検討し、カルシウ
ム摂取量と血紫oxLDL
濃度や HDLコレステロールとの独立した関連を見いだ、した。その機序は必ずしも明らかではないが、カルシウム摂取と動脈硬化の関連について、今後更なる研究が期待される。

文 献

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9
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lArteriosclerThromb1
2:671，
199213. AuwerxJ，‑64ー表 1 対象のプロフィール

平均±標準偏差(範囲)

人数(男/女)271(99/
172)

年齢(歳)

54.2+9.7(24‑77)

喫煙指数(本数・年)

167+335(0‑2000)

収縮期血圧(mmHg)

128+19(89‑182)

拡張期血圧(mmHg)

82土 44(53‑
113)

総コレステロール(mg/dU

112‑
336)
208土34(

トリグリセライド (mg/dU

112+72(31‑574)‑I
IDLコレステロール(mg/dU65+18(32‑134)

FイonHDL
コレステロール (mg/dU143+36(64‑264)

表 2 血祭酸化 LDL
濃度に影響を与える因子の重回帰分析

説明変数

標準偏回帰係数 (s)

年齢0.
147*

性別(女=1 男=2)

0.
040

喫煙指数

0.
021HDL
コレステロール

0.
093LDL
コレステロール

0.
199*

カルシウム摂取量‑0.171**

2寄与率 (R)

0.118****p.
く0.
05，**pく0.
01，***P<O.OOOl

65表 3 Ca
摂取量と動脈硬化危険函子との単相関相関係数(r)

危険率 (p)

収縮期血圧0.
0330.
592

喫煙指数0.
1200.
049

総コレステロール

0.
1150.
059

トリグリセライド‑0.
0370.
549HDL
コレステロール

0.
1640.
007NonHDLコレステロール

0.
0300.
621

表4 トl
DLコレステロールに影響を与える因子の重回帰分析

説明変数

標準偏回帰係数 (s)

年齢‑
0.
009

性別(女=1;男=2)

‑
0.
035

喫煙指数

‑0.
142*

BMI

‑
0.
161**

W/H比0.235**

カルシウム摂取量

0.
135*

2
寄与率 (R)

0.200*キ **P<0.05，**P<O.O，l ***pく0.
0001‑66ー表 5 CAIMTに影響を与える因子の重回帰分析
田

説明変数

標準偏回帰係数 (s)

年齢0.164**

性別(女=1;男 =2)0.
029

喫煙指数0.
061

収縮期血圧0.
115*

HDLコレステロール‑
0.
122#NonHDLコレステロール

0.
130*

カルシウム摂取量0.
0552)
寄与率 (R0.123***

#P=O.
06，*p
く0.
05，**pく0.
01，**ネ P<O.OOOl
図 1 男女別カルシウム摂取量の分布(mg/day)
500・
14 ‑
149913α)‑13991200‑
12991100‑1199岱1009
1000‑
99990C
ト899
80700799
600‑
699
5DO‑
599
400‑
499300‑
399
200‑
299
100‑199鴫。99

男性 (N=99)
670士189mg/day∞

女性 (N=172)

773士 2
40ロ1
9/day

司

2
520

1
5105oo分布(%)‑6751015四25図 2 年齢とカルシウム摂取量の関係(kZ℃¥OE)醐長駆4RUぶ弐宍

1200

女 性 (N=172)

男 性 (N=99)
1000
P=O.Oll

P=O.013800600400200。

・3940
‑
4950・
5960・
69 70~
壬29 30

壬29 30‑3940‑
4950・5960‑69 70
壬

齢(最)

年

図 3 頚動脈内膜中膜肥厚度 (CA‑IMT)と年齢の関係

2.
5• •EE 1.
5量•••.
・•••• •〈‑.

O• •..~

20304050

年

齢‑68ー

60(歳)

70

80カルシウム摂取量と酸化 LDL関連諸指標の関係

図4100φGJ
E
380‑
0cts
J3 戸Ec、60

鐙ム、e』‑ )

40A。
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唱(t。

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e0o 2∞ 400

600‑69ー0'"∞ 1400 1600

800 1000 12

カルシウム摂取量 (mg/day)

0:女性。

・:男性