ごあいさつ
財団法人コスメトロジ ー 研究振興財団は， 平成2年7月に設立されて以来， 一貫してコスメトロジ ー （化粧品学）分野の発展のための活動を続けてまいりました。
当財団の事業活動は， 幸いにも多くの方々から厚いご理解ご賛同をいただくことができ， この種の分野では初めての研究振興活動であるにもかかわらず大変順調に成果をあげつつあります。 過去三年間において助成を決定した研究課題は50件を越えています。 しかも， 幅広い学問分野から参集した優れた研究者が推進する課題であり， 関係各界から注目を集めるとともに， 高い期待が寄せられております。
当財団は研究助成のほかにも， コスメトロジ ー にかかわる国際交流の推進や援助， 長年にわたり多大な功績を挙げられた方々に対する功労表
彰などを行っております。 また， 表彰式等の折りには， 興味あるテ ー マ
をとりあげ， 高名な先生方に講演をお願いしてまいりました。
そして， ここに研究助成とその成果， 今までの事業活動内容を「研究報告」創刊号にまとめて皆様に御報告できる運びになりました。
この ような活動ができますのも， 日ごろからコスメト・ロジ ー に心を寄せていただいております皆様の暖かいご支援ご協力の賜と深く感謝申しあげる次第でございます。
今後とも， 時代に即応した， 質の高い活 動を続けていきたいと考えておりますので， 今まで以上に当財団の活動を暖かく見守ってくださいますようお願い申し上げます。
平成5年9月
財団法人コスメトロジ ー 研究振興財団
理事長

小林

孝三郎

．

ー一目

次

ごあいさつ
●研究報告
I. 平成2年度助成研究課題• 染毛剤成 分の代謝に関する研究 ......................................•.............•..•......................
法の開発 ー（財）食品薬品安全センタ ー 秦野研究所

2

中尾美津男

ヒト細胞， 毘虫細胞を用いた・ドレイズ試験代替
感度迅速高試験法の開発研究 ............•....•...... ·····•..•.•.........•........................ 12
理化学研究所 大野 忠夫• リン脂質ベシクルの表面修飾と分子集合体としての機能発現に関する研究 ...........•.....................................•....•••...............•...•. 18
筑波大学化学系 古澤 邦夫• 化 粧が意識性に及ぽす効果の研究 .................................•..•...............•.........•.•........•. 27
・胆汁酸生合成のメカニズムに関する研究

豊
早稲田大学人間科学部 春木··································································40
東京工業大学理学部 藤本

善徳

・ヒアルロン酸で表面を修飾したリポソ ー ムからの内容物の温度による放出制御

・皮膚用DDSとして の高分子脂質...........................•......•...........•..................••..46
東京理科大学薬学部牧野 公子
・・・・・・・・・・.. …... …........................ 51

リポ‘ノ ー ムの基礎研究

・皮膚の老化に伴うエラスチン遺伝子発現の動態

早稲田大学理工学部 西出 宏之他·························································59

慶應義塾大学医学部 多島 新吾の·Werner症候群患者皮膚由来培養線維芽細胞
サイトカイン• 細胞成長因子に対する応答性 ················································62
横浜市立大学医学部 佐々木哲雄
ーる· 光化学反応によ フリ ラジカルの産生と表皮培養細胞に対する影響 ………………………67
東京大学医科学研究所 金ケ崎士朗

・皮膚の糖i 旨質·········································································································72

山口労災病院皮周科 浜中すみ子他
8・皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評価解析理論の確立 ………………•…………….. 0
・皮膚への作用性 を有する各種糖脂質の合成

仁他
京都大学薬学部 瀬崎·······························································90
千葉大学薬学部 中川昌子

II. 平成3年度助成研究課題• 生体適合性逆型ベシクルの生成• 安定化と応用に関する研究 ••• …………………………….. 98
・活性酸素， フリーラ

横浜国立大学工学部 国枝 博信
防止に関する研究 ………………………….. 106
ジカルによる生体膜傷害の東京大学先端科学技術研究センタ ー

ニオく

鋭況雄：

• 化粧品原料として竹節人参の組織培養による物質生産ならびに大量増殖に関する研究 ..................................................... 110

広島大学医学部 神田 博史• 超微粒子分散系の構造と物性及び自己制御コロイド系の開発 ……………………………….. 121
京都大学工学部 松本 孝芳
的• 香料に関する定量 解析ー香りの強さ， 香りの質， 構造活性相関，”..................................................... 131“なれ ．香料センサ ー に関する研究北海道大学薬学部 栗原 堅三
ニ.........................................................................................
137• メラ ン生合 成の調 節
東北大学医学部

柴原茂樹• アルツハイマ 型老年痴呆症， ぽけ症状を呈する人々へのィヒ粧による情動活性イ t の研究 ................•.•...•.•.•.•................•.............••....... 146
ー同志社大学文学部

浜治世

・ビタミンCと上皮成長因子によるヒト皮粛線維芽細胞の増殖とコラ ー ゲン代謝調節機構の分子細胞生物学的研究 ………………………………….. 153
東京医科歯科大学 畑
■記念講演

隆 一郎

I. 平成2年度記念講演

遅延型過敏症とサイトカイン ・・・・・・・•• …······ …......….................... 157

Il. 平成3年度記念講演

東京大学薬学部 大沢 利昭
コスメトロジ一考 •......•........•........•..•...•.........•.•...........•.••..... 164

m. 平成4年度記念講演

博
一橋大学 名誉教授 南.. 172ー……………………
……………
チ
化粧科学への人間工学的アプロ
工業技術院 生命工学工業技術研究所 吉田 倫幸■コスメトロジ ー 研究雑感
I. 平成2年度助成研究課題研究者
Il. 平成3年度助成研究課題研究者■付：：：：：：：：：：：：：：:::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: :::::::::::::::::

184

録

事業報告書
I . 平成2年度事業報告
Il. 平成3年度事業報告

設］趣 ::

4��：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：： 191
196

王:門阿...::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: 喜；:：寸金行等：付五五···:::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::

役

177

員

!��

・・・・・・・・・・・・・・・..................................................................................................... 221

． ．

研究報告

I

平成2年度助成研究課題II平成 3 年度助成研究課題

I • 平成2年度助成研究課題

染毛剤成分の代謝に関する研究帥食品薬品安全センター

秦野研究所

中 尾 美津男

Regioselectivity in N-acetylation of nitro-p-phenylenediamne(NPDA, 2-nitro-1,4-diammobenzene), a widely used hair dye component, by rat liver cytosolic N-acetyl­transferases was studied in relation to its substituent effects on enzymatic N-acetylationof mono-substituted anilines. NPDA was acetylated specifically at the N'-position toafford the N'-monoacetate, a maior urinary metabolite in the rat, when incubated with
rat liver cytosol fortified with acetyl-coenzyme A. N'-Acetylation of NPDA did nottake place even when the N'-monoacetate was used as a substrate, suggesting a strong
steric hindrance effect of the ortho nitro group on the enzymatic N'-acetylation. The
steric hindrance effect of the nitro group on the cytosolic N-acetylation of the orthoamino group was revealed by a comparative study carried out by using aniline, three re­spective regioisomers of nitroanilines and phenylenediamine(PD)s as model substrates.
The comparative study also indicated the enzymatic N-acetylation of the mono-substi­
tuted anilines to be strongly influenced by the electronic effect of the substituents.
Regioselective N-acetylation in the hepatic cytosol was also investigated with N'­
and N'-monoacetates of 1,2,4-triaminobenzene(TAB). The monoacetates yielded theN', N'-diacetate, another major urinary metabolite of the hair dye component, in therat, without concomitant formation of the N', N'-diacetate or the N', N', N'-triac­
etate. The triacetate was formed only from the N', N'-diacetate in the enzymatic reac­
tions. A comparative study, carried out by using N-mono-acetates of three regioiso­
metric PDs, indicat.ed that the N-acetyl group had a potent steric hindrance effect on the
primary amino group at the ortho position.
Thus, the present in uitro study strongly suggested that the two major urinary
metabolites, NPDA N'-acetate and TAB N',N'-diacetate, of the hair dye component
could be formed, at least in the rat liver, by the enzymatic N-acetylation of the corre­
sponding amines.

1. 緒 言しかし， 染毛剤構成成分の生体内動態， 特に代謝に関する報告はあまり多くな い 6

染毛剤は古くから広く使用されて き たに もかかわらずその安全性に関してはあまり検討されてI)- 1 0)

研究は染毛剤の安全性に関する研究のセミパーマネントヘアカラー。 そこで本一環としての主要な構成成分でによって市あり， 変 異原性 I, 11, l 2l , 染色体異 常誘発性 13),

販の酸化型染毛剤の中に微生物に対して変異原性か認められるも のがあり， その 変異原性の本体は姉妹染色分体交換誘発性 14) , 不定期 DNA 合成
誘発性 I 5 >等が認 められ， 発癌性 16, l 7) も報告さ

染毛剤構成成分の芳香族アミン類である ことが報れている nitro-p-phenylenediamine(NPDA,告された。 以来染毛剤およびその構成成分の安全性評価のための試験が数多く実施されてきた2 - 5 >。

2-nitro-1,4-diaminobenzene) の代謝について

いな かった。 1975年B. N. Ames ら検討した。 我々は既に NPDA を投与したラット

Metabolism of the Hair Dye Component
Mitsuo Nakao-2-染毛剤成分の代謝に関する研究の 尿中から ， 2種類の代謝物を検出した。 一つは4

NPDA N -acetateであり もう

2. 2

一

肝可溶性画分の調製

つは1, 2, 4-

動物には6週齢 ， 体重200-210gの Sprague­triaminobenzene CTAB) N 1 , N 4 -diacetateでDawley系雄性ラット（日本チャ ー ルス ・ リバ ーあった1 8)。 NPDA N', N 4 -diacetateはその前

闊 Crj:CD(SD))を使用した。

4

駆体と考えられる NPDA N -acetateあるいは4

動物を断頭放血死させ ， 直ちに肝臓を摘出しTAB N -acetateを投与した尿中からも検出さた。 3倍量の 1.15%塩化カリウム溶液を加え， 氷冷れた。 しかし ， TAB N 1 , N 4 -diacetateを投与

下 テフロンペスル付ホモジェナイザ ーでホモジェした尿中からはTAB N1 , N2 , N4 -triacetateはナイズした。 ホモジェネ ートを105,000X g, 60

検出されなかったI 9) 。 したがって ， NPDAの代

分間冷却遠心分離した上清を酵素反応に使用した。

謝経路はNPDA→ NPDA N4 -acetate → TAB

Lowryらの方法 2 6 lによってタンパク質の定量を

N4 -acetate→ TAB N1 , N4 -diacetateであると行った。

考 え ら れ る 。 こ の経 路 の中 で NPDAおよびTAB N4 -acetateのアミノ基のNー アセチル化にインキュベ ー ションおよび高速液体クロ2. 3

位置選択性 が認められた。 そこで， このアミノ基マトグラフィ ー (HPLC)試料の調製の選択的N アセチル化 がラット肝を用いてもinLowerらの方法 27 l を改良してインキュベ ー

vivoと同様の結果を与えることを確認すると共ションを行った。 反応液の組成は0.05叫のプロピに nitroaniline, phenylenediamine CPD )等 のレングリコ ー ルに溶解した基質（芳香族アミン） 1.0

モデル化合物を基質として 用いてin vitroにおけµmol ,

ーる選択的N アセチル化についても検討した。

セチル

ー

1.0µmol アセチルコエンザイム A(アーCoA), 100µMトリ ス塩酸緩衝液(pH7 .5)および肝可溶性画分(4.3mg タンパク質相2

実験材料および方法

当）であり ， 全量を1.0叫とした。 反応液に 基質を加えることによって 反応を開始し， 37℃, 30分間

2. 1

試

インキュベ ートした。 反応終了後， 氷冷下lN水薬

NPDA N 1 -acetateをAtkinsonらの方法 20 l ,421

酸化ナトリウムを0.1叫を加えた。 次いで ， 反応

NPDA N -acetateをBulowらの方法 )にした液に HPLC 用の内部標準物質を加えた後 ， 3倍量がって合成した。 TAB N1 -acetate, TAB N2-の 酢酸エチルIn-ブタノー ル(1:1, v/v; 使用 前にacetate, TAB N4 -acetateをKehrmannらの方

水で飽和した）で 2回抽出した。 Anilineおよび法22にしたがって合成した。 合成したTAB N­

nitroaniline類の代謝物の抽出には酢酸エチルをmonoacetateには無水プロビオン酸を加え， N,使用した。有機層を50℃以下で減圧下濃縮乾固し ，N ' -dipropionate 誘 導 体 と し た 。 TAB N­

50%メタノー ル溶液に溶解し ， HPLC試料とした。

lmonoacetateのN, N' -dipropionate誘導体のそれぞれの融点は，

TAB N 1 -acetate 204℃,

なお， 芳香族アミン類のアセチル化合物の反応液からの回収率は85%以上であった。

TAB N 2 -acetate 200℃および TAB N4 -ac­etateは200℃で あった。 また，

2.4

a-PD N ac­

HPLC, 紫外吸収スペクトルおよび質量
スペクトル

2

etateをM acallumの方法 3>, a-PD N, N' ­diacetateをRugheimerの方法 24> , m-PD N,

代謝物の分離を高速液体クロマトグラフ（（松島N' -diacetateをPhillipsの方法 lにしたがっ津製作所，て それぞれ合成した。 その他の試薬については東

カラムにはShim-pack CLC-ODS((樹島津製作

京化成工業（樹等から購入して使用した。

所 ）を用い， 流速 0.6叫/min , 検出には紫外分光

25

-3-

LC-6Aシステム ）によって 行った。

Table1.

Chromatographic and Spectral Data of Nitro-p-phenylenediamine, Its N-Acetates, and1,2,4-

Tri aminobenzeneN-Acetates
IIPLC'
Retention ti●cs (oin)Co ●pouod

65744666--● ,Hass spectra1 data•'乙(relatl,o intensity, $)n● （ヽ）

mmoasoo>
09100>
253 (2刀00)
253 (23500)

153 (H', JOO), 107 (73), 80 (47), 53 (39)105 (H', 20), 153 (JOO). 107 (78), 80 (27), 53 (ZO)
195 (H', 47), 153 (JOO), 107 (88), 80 (33), 53 (42)237 (H', 24), 195 (邸), 153 (100), 107 (43), 53 (15)

o.sa
0.51
0.52
0.52

232 (21600), 261 (18100)
23 2. S (20900), 260 (17300)
231 (25400), 262 (21800)
232 (21600), 261 (18100)

291 CH', 49), 235 (34), 176 (66), 122 (66), 57 (100)277 (H', 67), 221 (36), 179 (56), 165 (44), 122 (100)277 (H', 58), 221 (40), 179 (38), 165 (57), 122 (100)277 (H", 69), 221 (51), 179 (19), 165 (100),122 (96)

11.0

〇.23
0.33

14.0
39.6
16.0

o. 27
0.37

223 (18800), 255 (10900),
300 (2300)
225,5 (29600), 255 (12000),
302 (5100)
213 (15900). 260 (12000)
230 (19300), 260 (16000)

107 (H', 39), 147 (51), 123 (46), 111 (100), 95 (45)

11.1

18.2
16.2
25.8
29. 2
32.8

1, 2,4·Tr iaainobcnzcne ・N'·acetalc ・N'·acctate ・N'-acetate ・e·Pheny1 enedia●ine
N,N'·diacetate'

UV :l!!:"

0．
0．
0．
0．

Nitro·e·phenylenediaoinef·acctateN'・acetate
N',N'・diacctatc
一ーAcetanilide 0

TLC'
Rr valuo

9.8
15.2
16.4
19.6
22.8

1,2, 4·Tr iaainobenzcne
N',N'·diacctate- N',N'- diacetate-N',N'·diacctate
N',N',N'·triacctate- - ・り'·Acetylsulfani la● ide'107 (H', 66), 147 (57), 123 (81), 111 (100), 95 (51)107 (H', 72), 147 (76), 123 (88), 121 (100), 95 (52)249 (H', 61), 165 (62), 147 (63), 123 (64), 112 (]OD)• 1: Nobile phase, acetonitrile·vater (15:85, v/v); colu口n Shia·pack CLC·ODS; flov rate, 0.6 al/ain. 2: Nobile phase, chlorofora·ethanol (95:5, v/v);
column Shi,·pack CLC·SIL; flov rate, 2.0 ,l/ain. 3: Hobile phase, aethanol·vater (10:90, v/v); colu●n Shia·pack CLC·OOS; flov rate, 0.6 ml/min.
• Hobile phase, chlorofor● ● ●ethanol·25%a●oonia water (60:JO:l, "v/v).
0 Internal standard for IIPLC. Plates: Slica ,cl 60 P,, (E. Herek).
. �. り'·Dipropionatc drivative.
●

Table 2.

Chromatographic and Spectral Data of Nitroani Ii nes, Ani Iine and Their N-Acetates

Compou n d

HPLC8Retention
times (min)
2

゜

15.8

o-Nitroaniline N-acetate

11.2

竺-Nitroaniline

1 1 .6

旦ーNitroanillne !!_—acetate

14. 2

J!:-Nitroaniline

9.6_Jl. Nitroaniline N-acetate

15.2

2, 4-Dinitroaniline b

UVEthanol
nm(E)入max

地ss spectral data
旦位(relative intens! ty, %)23J (17000)

1so (W, 15), 138 oooJ, 92 (40), 65 (41), 63 (20), 52 (21)241 (22900)

180 (炉 ， 22), 138 (100), 92 (52), 65 (37}, 64 (14), 63 (16)315 (14400),

180 (W, 25), 138 (JOO), 108 (56), 92 (29), 65 (42), 63 (24)224 (10860)
19.8

Aniline12.0

Acetanilide

14.6

m-Nitroaniline N-ocetateb

241 (16000)

135 (ず, 25), 93 (100), 66 (23), 65 (20)22.0

8 1: Hobile phase, methano l-water (1:1, v/v), 2: mobile phase, methanol-water (4:6, v/v), and other con dition s as described in
the text.
b Internal standard for high pressure liquid chromatography.

光度計検出器（（樹島津製作所 ， SPD-6A)を使用

島津製作所 ， QP-1000)を用いて， イオン化電圧

し， 検出波長254nmで行った。 紫外吸収スペク

70eV, イオン源温度290℃で直接導入法によって

ル溶液を自記分測定した。 標準品の HPLC によって測定した保光光度計（（樹島津製作所 ， UV-201A)を用いて測ー
持時間紫外吸収および質量スペクトルデ タを定した。 また ， 質量スペクトルを質量分析計（（悧Table

トルについては各試料のエタノー-4-

1, 2および3に示した。

染毛剤成分の代紺に関する研究

Table 3.

Chromatographic and Spectral Data of Phenylenediamines and Their N-Acetates
IIPU:8Retention times(min)Compound1

E_-Pheny1 enediamine

5.6

N-monoaceta te

I1.6

N,N'-dlacetate
22.8
jl_ -Phenylenediamine !!,!!'-diacetate b 31.6_!!!-Phen ylenediam1ne_!!-monoacetate

8.0
12.4

_tl_,_tl_'-diacetate.1<-Phenylenediamine !!,!!'-diacetateb

26.4
20.4

且ーPhenylenediamine

6, 4N-monoacetate.t!,.t!'-diacetate
旦 -Phenylenediamine .t!,せ'-diacetateb

8.8
20.4
26.4

UV
Ethanolnm(£)
入max

Hass spectral dato.'!'.I三(relative intensity, %)292 (2870)
208 (24100)
214 (20700)

150 (寸 ， 46), 133 (26), 108 (JOO), 107 (39), 80 (56), 53 (25)296 (2580)
223 (26900)
234 (29300)

ISO (寸 ， 54), 108 (100), 81 (22), 80 (29), 53 (14)192 (寸 ， 22), 150 (34), 108 (100), 81 (12), 80 (21)260 (15000)
265 (23000)

150 (W-, 47), 108 (100), 107 (38), 80 (33), 53 (23)192 (炉, 32). 150 (22), 108 (100) 、 107 (31), 80 (23), 53 (16)192 (寸, 20), 133 (35), 132 (36), 108 (100), 107 (31), 80 (32)

8 l: Hobile phase, methanol-water-acetic acid (15 :85: 0. I, v/v), 2: mobile phase, methanol-IQ m卜I phosphate buffer, pl! 7.5 (2:8,v/v), and other conditions as described in the text.
Internal standard for high pressure liquid chromatography.

3. 結 果3. 2

TABN-mono ー およびN,N' ­di acetate のN

3. 1

NPDA およびその N 4-acetate のN ー アI

2

中で NPDA をインキュベートし ，

条件でインキュベ ー トした場合にも起こった。 つまり，

HPLC 用内部標準物質を添加した後， 酢酸エチルIn-プタ
ルで抽出し，TAB のN-acetate およびN -acetate を NPDA と同様のアセチル ー CoA 存在下， ラット肝可溶性画分

ノ

アセチル化反応

4位のアミノ基のNー アセチル化は，セチル化反応ーー

HPLC によって代謝物を検索

TAB N'-acetate および TAB N -ac­2etate を基質とした反応液に内部標準物質を添加した後， 酢酸エチルIn-プタノ ー ル 抽出液には，した。 クロマトグラム上には基質の他に 保持時間

クロマトグラム上にそれぞれ唯一の代謝物である

25.8分にピ(100 ℃, 5 分間）した可溶性画分およびアセチル21.2分）および TABN , N -diacetate( 保持時間 14.0 分）

ークが検出された。 このビ ー クは加熱

CoA 不存在下には検出されなかった。

ーTABN , N -diacetate (保持時間
4

1

4

2

この代謝

のビ ークが認められた (Table 1) 。 各々の代謝物

物を高速液体クロマトグラムの保持時間， 紫外吸を HPLC の再クロマトグラフィ ー， 紫外吸収お収スペクトルおよびマススペクトルを標準品と比よ び マ ス ス ペ ク ト ル の検討に より確認し た較した結果 ，

(Table 1および4) 。

NPDAN -acetate であることが4

明らかになった。 しかし，

しかし ， それぞれの抽出液

NPDAN -acetateには TABN , N , N4 -triacetate に相当するクおよびNPDAN , 炉-diacetate は検出されな

ロマ ト グ ラ ム 上 のピ ー クは認められなかった

かった(Table 4) 。

(Table 4) 。

1

1

1

NPDAN -acetate を基質とした場合も NP­
4

DA N

1

, N 4 -diaceate は 検 出 さ れ な か っ た

2

1 位のアミノ基のNー アセチル化は ，

4

TABN

-acetate を前述の条件でインキュベ ー トした場

(Table 4) 。

合に起こった。

-5-

TABN -acetate を基質とした
4

Table 4.

N-Acetylation of N itro-p-phenylenediamine, 1,2,4-Triaminobenzene N-Mono-and N, N'-D 1 ーacetates by Rat Liver CytosoI
SubstrateaPossible metabolite

Metabolite formed(nmol/mg protein/30 min)
7
0 8 0
2

Nitroコ�-phenylenediamine JiI -monoacetate

Nitro-�-phcnylenediam1ne

N -monoacetate,2,4-Triaminobenzene N 1 -monoacetate.
.
l , 2 , 4 - Tnaminobenzene N 1 ,N 2 -diacetate

1

N l ,N 4 -diacetate
N 1 , N 2 , N 4 -tnacetate

1,2,4-Triaroinobcnzene N 1 ,N 2 -diacetate
N 2 ,N 4 -diacetate

N I N 2,N 4 -triacetate

1,2,4-Triarninobcnzene N I ,N 4 -diacetate

3
.o o
7

N 4 -monoacetate

0

0 .o

N 2 -monoacetate

ヽ.

Nitro-1とーphenylenediamine !il ,!i4 -diacetate

0

Nitro-且:-Phenylenediam1ne .!!_4 -monoacetate

ーー
゜q
， ー

N I ,N 4 -diacetate

N 2 ＇ N 4 - d·1acetate1

N 1 ,N 4 -diacetate,2,4-Triomlnobenzcne N 1 ,N 2 ,N 4 -triacetate

7
2

1 2
l, 2, 4-Tr iomi11obcnzcne l!_心—diucetate

N 1 , N 2 , N4 -triacetate

N 2 ,N 4 -diacetate

，.o o

．

N l N 2 N 4 -tnacetate

N I N 2 N 4 -triacetate

a Each substrate (1 mM) was incubated at 37 ° C for 30 min with rat liver cytosol (4.J mg protein/ml) in the pre咋nee,of acetyl-CoA (l mM) in 0.1吋I Tris-l!Cl buffer, pll 7.5, containing propylene glycol (5%, v/v). Propylene glycol
which had no effect on the enzymatic reactions was used for dissolution of the substrates.

反応液中から唯一の代謝物である TABN1 ,Nし合のアミノ基のNー アセチル化に及ぽす影響を検diacetateをHPLCにより分離し ，

紫外吸収およ討するためにアセチル ― C oA存在下， ラット肝びマススペクトルによって確認した(Table 1お

可溶性画分を用いて， o ― , m-, およびp-ni­

2

TAB N , N -diac­

よび4)。 しかしな がら，
1

4

2

4

etateおよびTABN , N , N -triacetateは検出されなかった(Table 4)。

troanilineを基質としてNPDAと同様の条件でインキュベートした。 反応液中のN—アセチル化
代謝物 nitroaniline N-acetateを， 内部標準物

TABN□ N2 , N4 -triacetateが代謝物として質を添加した後， 酢酸エチルで抽出 ，HPLCに反応液中から検出され たのは， TAB N1 , N2 -より溶出し， 再クロマトグラフィ ーを行い， そのdiacetate を 基 質 と し た 場 合 のみで あっ た 。

保持時間および紫外吸収， マススペクトルを標準

TAB N1 , N4 -diacetateおよび炉 ， N4 -diac­

品と比較 検討し確認した(Table 2)。

etateを基質とした場合にはTABN1 , N2 , N4 -Anilineのベンゼン環にニトロ基を導入するこ

triacetateは検出されなかった(Table 4)。

とによってその酵素的Nー アセチル化率はani­

3. 3

Nitroaniline類のN ー アセチル化反応

3種の nitroanilineの中でm-nitroanilineの酵

Anilineのベンゼン環にニトロ基を導入した場

素的Nー アセチル化率が最も高かったが ， その被lineのそれに比較して著しく減少した(Table 5)。

-6-

染毛剤成分の代謝に関する研究

Table 5.

N-Acetylation of Aniline and Nitroanilines by Rat Liver Cytosol

Substrate 3

包—Acetate formed(nmol/mg protein/
30 min)Relative acetylat1.on

Aniline38.6

o-Nitroaniline
m-Nitroaniline
且-Nitroaniline

0.0

0.00

19.5

0.51

4.8

0. 12

1.00

a Incubations were carried out under the same conditions as describedin Table 4.

PD類およびそのN-monoacetate類のN ー アセチル化反応
Anilineのベンゼン環にアミノ基あるいはアセ
チルアミノ基を導入した場合のアミノ基のNーア体であるmー およびp-PD のそれらよりも高かった。 しかし， PD N, N' -diacetateの生成については， m-およびp-PDが総酵素的N­
アセチル化率の約 15%であるのに対してo-PDの場合にはN,N' -diacetateは全く生成しなかった。
Anilineのベンゼン環にアセチルアミノ基を導入した場合 o-PD N-monoacetateの酵素的Nー アセチル化率は anilineに比較して著しく減少した。 一方 m-PDN monoacetateのN­

セチル化に及ぼす影響について検討した。
o-, m-, およびp-PDならびにそれぞれのアセチル化率もanilineに比較して僅かに減少したが， p-PDN-monoacetateのNーアセチル化

N-monoacetateを用い ， アセチル ー CoA存在下 ，
肝可溶性画分を加え， 前述と同様の条件でインキュベー トした。 PD類のNーアセチル化代謝物である PDN monoacetate類および PDN, N'-diacetate類の確認 ， PD N-monoacetate類の代謝物 PD N, N ' -diacetate類の確認を前
述 の nitroaniline N-acetateと同様の方法で行った(Table 3)。 Anilineのベンゼン環へのア率は増加した。

Nーアセチル化率は anilineの1/2であった。 p­nitroanilineに対する酵素的N— アセチル化率はm-nitroaniline のそれ の 1/4で あ り ， o-ni­
troanilineのアミノ基は全くN— アセチル化を受けなかった。
3. 4

ミノ基の 導入は ， 酵素的Nーアセチル化率をani­lineの1.7-1.9倍増加させた(Table 6)。 a-PDの酵素的N— モノアセチル化率は ， 他の位置異性

NPDAのN ー アセチル化反応におけるパラオクソンの影響
NPDA N1 ー acetateを基質としてアセチル ー

3.5

CoA存在下 ， ラット肝可溶性画分中でインキュ
ベ ー トした場合反応液中から基質の他にNP­DA , NPDA N4 -acetateおよびNPDAN 1 ,
N 4 - diacetateが検出された。 しかし， 上述の反応液中にO.lMパラオクソン（脱アセチル化酵素の阻害剤）を添加した場合NPDAおよびそのN4-7-

Table 6.

N-Acetylation of Ani Iine, P henylened iam i nes and Their N-Monoacetates by Rat Liver Cytosol
N-Acetates formed(nmol/mg protein/30 min)Total acetylation b

Substratea.!:!.,.!:!.'-Diaceta te

N-Monoacetate

39.4 (1.00)

Aniline39.4.2_-Phenylenediamine

74.1

0.0

74.1 (1.88)

�-Phenylenediamine

64.1

10.4

74.5 (1.89)_£-Phenylenediamine

56.9

10.9

67.8 (1.72).2_-Phenylenediamine _!i-monoacetate

2.3

2.3 (0.06)

町Phenylenediamine位—monoacetate

32.1

32.1 (0.81)

且-Phenylenedia mine _!i-monoacetate

44.0

44.0 (1.12)

aIncuba tions were ca rried out under the same conditions as described in Table 4.
b Numera ls in pa rentheses represent relative acetylation based on the summed values of社一mono- andN,N'-di-acetates.

Effect of P araoxon on N-Acetylation of N itro-p-phenylenediam ine and I ts N'-Acetate by Rat
Liver Cytosol'

Table 7.

Hetabo] itcs for cd (n ol/ t protein/JO•in)●

Substrate

Nitro·e ・phcnylcncdia 口incNitro·e·phcnylcncdia口ine
R'·acclate

50. 7
4.3

1\.6
3.0

Ni tro-e-phenyl cncdiamine�'·acetate
Co pJcte+ Paraoxon (0. I叫）●

Nitro·�-phonyI enediami ne
Co plete+ Parao,on (0.1 mK)●●

Nitro·e·phcnylcncdiaoinc
N'·acetate

Nitro·e ・phcny I cncdia口 1ne
N 1 ,N'·diacclatc

6.0
11.8

28. 7
26.5

●

• Incubations were carried 04t in the absence and in the presence of parao,on under the same.conditions as described in Table 4.

-acetateの生成は著しく減少した(Table 7)。 ­アセチル化への影響は認められなかった。 NP­

方，

DAN -acetateおよびo-nitroanilineを基質と

パ

4

NPDAを甚質とした場合， 上述の条件下 ，

ラオクソンの存在の有無にかかわらずNPDA
4N'-acetateおよびNPDA N', N -diacetateは全く生成せず ，成した。 また ，

4

NPDA N -acetateのみが生し，それぞれのアミノ基は全< N-アセチル化を受けなかった。

その被N アセチル化率にもほと
パ

ラオクソンを添加した場合もNPDAの1位のアミノ基と同様に，

ーんど変化が認められなく(Table 7),

パ

ラオクソ

ンの添加によるNPDAの4位のアミノ基のN--8-

染毛剤成分の代謝に関する研究

クソンによって著しく 阻害を 受けた。即ち ，NPDAN 1 -acetateの脱アセチル化酵素はO.lM

4. 考察

パラオクソンの添加により，約92%の阻害を受けた(Table 7)。そこで脱アセチル化酵素をほぼNPDAのNーアセチル化が4位のアミノ基に選択的に起こることがin vivo同様，アセチルー

完全に阻害する条件であるO.lM パラオクソン存在下，甚質としてNPDA, NPDA N4-acetate
およびo-nitroanilineを用いてアセチル ー CoA

CoA存在下，雄性ラット肝可溶性画分を用いた実験においても明らかになった(Table 4およびFig. 1)。

と共にインキュベートしたが，3種の基質共反
応液中 にN1 -acetateまたはN-acetateは検出されなかった。したがってニトロ基はoー 位のNPDAのモデル化合物 nitroanilineの3種の異t生体を基質として，そのNーアセチル化について検討した結果o-nitroanilineのアミノ基は
全 くNーアセチル化を受けず， m-および p-ni­
troanilineのアミノ基はNーアセチル化を受けたー(m >p)が， anilineの酵素的N アセチル化率に比較して著しく減少した(Table 5)。したがって ，
NPDAの1位のアミノ基がNーアセチル化を受けアミノ基のNーアセチル化を完全に阻害することが明らかになった。
TABN. N'-diacetateのNーアセチル化によるTABN 1 , N2 , N 4 -triacetateの生成は ，肝可溶性画分中TABN 1 , N2 -diacetateを基質とした場合のみ生成した。その他の異性体である
TABN 1 , N4 -diacetateおよびN2, N4 -diac­
etateを基質とした場合にはアミノ基はNーアセ
チル化を受けずTABN 1 , N2 , N4 -triacetate
は生成しなかった(Table 4)。同様の選択的N­
アセチル化はTABN, N'-diacetateを投与した場合のin uivoにおいても認められた。また，
PD類およびそのN-monoacetate類 ， TABN
-monoacetate類およびそのTAB N, N'-

ない原因は，隣接するニトロ基の主に立体障害によるものと考えられる。
Brayら 28 >はラット肝の水抽出物を用いて，数種の芳香族アミンのNーアセチル化合物の酵素
的脱アセチル化について検討し， nitroanilineN-acetateの3種の異性体の酵素的脱アセチル化は，o>>m>pの順であることを報告している。本研
究におけるラット肝脱アセチル化酵素は， パラオ

砥[〉屈

゜一

z 2

NPDA

＋

N N

H C O CH
a
O
,
q

N

H2
NPDA N'-acetate

Fig .1.

N

20
皿[
N C o Hc 3
H

NPDA N•-acetate

＋

ゥN
N

HCO CH,NO,

HCOCH,
NPDA N',N'-<liacetate

N H

l

屈[
N C o
H

c

2
H

TABN'-acelale

＋

N

N N
H

,

3

一

HCOCH,Q'
HCOCH,TABN 2,N項acetate

N
H
: e

．

H
Hc 3

oz 0
c

2

H

3

TABN 1 ,N頃acetate
N C
H

＋

N
『
N

HCOCH,COCH,
�

HCOCH 3TAB N 1 ,N2,N'-lriacelale

亨

NHCOCH 3
HCOCH,NH 2
TABN',N 2-diacctate

RegioselectiveN-Acetylations of NP DA and TAB N'-acetate by Rat Liver Cytosol Fortified with
Acetyl-CoA-9-diacetate類を基質とした場合にも隣接するアセ(1975)

チルアミノ基によってアミノ基のNーアセチル化2 ) T. Wernick, B. M. Lanman and J. L. Fraux,の立体障害によってoー3 ) C. Burnett, M. M. Jacobs, A. Seppala and P.

が起こらないことから ， アセチルアミノ基は ， そ

Toxicol. Appl. Pharmacol., 32, 450(1975)

位のアミノ基のN アセーShubik, J. Toxicol. Environ. Health, 6, 247

チル化を阻害すると考えられる。
4(1980)TABN - acetateはin vivoと同様にアセチル-CoA存在下 ， ラット肝可溶性画分を用いても ，1位のアミノ基のみ選択的にN— アセチル化を受
14) A. L. Giles, C. W. Chung and C. Kommmem,
J. Toxicol. Environ.Health, 1, 433(1976)

け ， TABN , 炉-diacetateを生成した。 しか5) G. Iyer, K. Kannan and R.R. Khan, J. Sci 一

TABN 2 , N 4 -diacetateおよびTABN 1 , N 2 ,6) P.H. Grantham, L. Mohan, T. Benjamin, P.

し，2位のアミノ基がNーアセチル化を受けた

N 4 -triacetateは生成しなかった(Table 4およびent. Ind.Res., 44, 392(1985)

P.Roller, J.R. Miller and E. K. Weisburger,

4

J. Environ. Pathol. Toxicol., 3, 1490980)

Fig. 1)。 このTABN -acetateの1位のアミノ

7) H. Hofer and E. Hruby, Fd. Chem. Toxicol.,基の選択的N アセチル化は ， 酵素基質相互作用ー

21, 331Cl983)

における立体的な影響によるものと考えられる。

酵素的N アセチル化の立体障害と考えられる

8) Y. M. loannou andH.B.Mattews, J. Toxicol.

性画分を用いて 2, 4-diaminotolueneのN— アセ

9) R. L.Bronaugh and E.R. Congdon, J. Invest.

aminotolueneの特異的 生成 を認めているか ， 210 ) L. J. Wolfram and H. I. Maibach, Archlaminotoluene を 検 出 し て い な い 。 ま た ，

11) Y. Takeda andR. Yoshimura, Eisei Kagaku,

トに投与した尿中から 2, 4-diaminoanisoleの12 ) M. M. Shahin, C. Chopy and N. Lequesne,

検出しているが ， N2 -acetateを検出していない。

13) W. F.Benedict, Nature, 260, 368(1976)

ー

報告として ， Glinsukonら

29

チ ル 化 につい て 検討し ，

4-acetylamino-2-

Environ.Health, 16, 2990985)>は ， ラット肝可溶

Dermatol., 83, 124(1984)

Dermatol.Res., 277, 235(1985)-acetyl-4-aminotolueneおよび 2, 4-diacety­

Granthamら 30) も 2, 4-diaminoanisole をラッ
424, 3220978)

N -monoacetateおよびN , N 4 -diacetateを
2

NPDAは ， 微生物に 対 する変異原性を有すIる . 1 1 - 12 )が その代謝物である NPDAN43

Environ.Mutagen., 7, 535(1985)

14) P. E. Perry and C. E. Searle, Mutat.Res., 56,
2070977)

acetateの変異原性はNPDAに比較して低い 1)'

15) C. N. Martin, A. C. McDermid and R. C.

ーアセチル化酵素によるアミノ基のN アセチル

16) G.Reznik and J.M. Ward, Fd. Cosmet. Toxi­

最後に ， 本研究に対してご援助頂きました（財）コ17) R. R. Maronpot, M. B. Skimkin, H. P.

したがって ， NPDAの不活性化酵素として ， Nーcol., 17, 4930979)

化反応は重要であると考えられる。

Witschi, L.H. Smith and J.M. Cline, J. Natl

スメトロジ ー 研究振典財団に厚くお礼申し上げまCancer Inst., 76, 1101(1986)

す。

引用文献

18) M. Nakao and Y. Takeda, J. Toxicol. Env1 一

1) B. N. Ames, H. 0. Kammen and E. Yamasa­
ki, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 72, 2423

Garner, CancerRes., 38, 2621(1978)

ron.Health, 11, 93(1983)19) M. Nakao, Y. Goto, Y.Matsuki, A.Hiratsuka-10-and T. Watabe, Chem. Pharm. Bull., 35, 785

染毛剤成分の代謝に関する研究(1987)
20) C. M. Atkinson, C. W. Brown, J. McIntyre(1951)
27) G. M. Lower, Jr. and G. T. Bryan, Biochem.

and J. C. E. Simpon(decreased), J. Chem.
Soc., 1954, 2023

Pharmacol., 22,15810973)
28) H. G. Bray, S. P. James, W. V. Thorpe and21) C. Bulow and E. Mann, Ber. Dtsch. Chem.
Ges., 30, 977(1897)

M. R. Wasdell, Biochem. J., 47, 4830950)
29) T. Glinsukon, T. Benjamin, P.H. Grantham,22) F. Kehrmann and C. Mermod, Helv. Chim.

E. K. Weisburger and P. P. Roller, Xenobiot­

Acta, 10, 62(1927)!Ca, 5, 475(1975)

23) A. D. Macallum, J. Soc. Chem. Ind., 42, 46830) P.H. Grantham, T. Benjamin, L. C. Tahan,
P. P. Roller, J. R. Miller and E. K. Weis­(1923)

burger, Xenobiotica, 9, 333(1979)24) A. D. Rugheimer, Ber. Dtsch. Chem. Ges.,

31) K. G. Dossou, M. Robinet, F. Callais, B. Fes­

39, 1653(1906)25) M.A. Phillips, J. Chem. Soc., 1928,172

ty and P. H. N'guyen, Ann. Falsif. Expert.

26) 0. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr

Chim. Toxicol., 80, 361(1987)

and R. J. Randall, J. Biol. Chem., 193,265-11-

ドレイズ試験代替法の開発 ー
ヒト細胞、 昆虫細胞を用いた高感度迅速試験法の開発研究
大理化学研究所野忠

夫

As a partial alternative to the Draize eye irritation test for detergents which are usedm shampoos or rinses and general chemicals which have been known toxic to human, wedeveloped a sensitive assay protocol for measuring release of lactate dehydrogenase(LDH) activity into the medium from cultured human cells. Results suggest that somecommonly used detergents have relatively high cytotoxicity at low concentrations thanthe cytotoxicity assumed from their ED 印. This method was applied to commercial eye
drops. We found that 8 of 9 eye drops tested were apparently cytotoxic to human cells
because of undescribed component. One of these eye drops stimulated LDH release intotears 10 second after application to human eyes
Insect cell lines, instead of human cells, were tested their sensitivity to anti-tumor
drugs. Although some of the cells showed high sensitivity to the drugs, patterns of thesensitivities to the drugs were different from those of human cell lines.

言

緒

．

.
＇
—

サギ眼に対するドレイズ試験法は残虐性が高いため， 動物愛護の立場からは国際的にも最大の攻撃

現在， 化粧品， シャンプー，リンス等， 体表に目標になっている。

適用する化成品の毒性•安全性試験は， ウサギ眼

ドレイズ試験法の本質をなすものは細胞に対す・皮膚に当該品を直接投与し， 生じた炎症反応をる試験物質の障害性である。 本研究は ， in vitro

指標にして経時的に観察評価点を与えていくと細胞培養法を応用し， ドレイズ試験法の欠点であいうドレイズ試験法によって行われている。 このる客観性， 迅速性， 経済性， 残虐性を大幅に改善

方法は，した試験法を開発することを目的とし， 2 年間の

ヒト眼・皮膚の代替としてウサギを使用するものであるが， 刺激性の評価には客観性に難計画で実施したものである。

があり高度の熟練を要する。 しかも， 障害の多くは非可逆性のため， ウサギの繰り返し使用はできl,ない 2)。 このため， 多種多様な化成品を対象に行わなければならない毒性• 安全性試験法として

2. ヒト細胞からの遊離酵素を指標にしたシャンプー， リンスに利用される界面活性剤の安全性試験法の開発

は， 迅速性， 経済性にも問題がある。
衆知のように， 欧米における熾烈な動物実験反

2. 1

はじめに

対運動はわが国にも波及してきており動物実験の安全性試験法のなかで， 培養細胞を利用する場

廃止を求める会などの団体が結成されている。 ウ合 その指標のとりかたにもいろいろあるが特An Alternative Method to the Draize Eye Irritation Test - Development of Highly Sensitive Test Methods
with Human and Insect Cell Lines
Tadao Ohno

-12-

ドレイズ試験代替法の開発

定の代謝反応をねらわず， できるだけ広く一般的な毒性を知ろうとする場合現在では， 細胞の生

昆虫細胞の場合は昆虫細胞用培地を使用したが，他の条件はヒト細胞とほとんど同じである。
LDH活性測定には臨床検査用LDH測定キッ

死増殖性を指標にするのが最も単純で， 大量かつ迅速な検体処理に適する。 さらに， 細胞からトを使用した。

遊離されてくる酵素活性を指標とする方法により，極めて低濃度の界面活性剤のヒト細胞膜破壊の程

2.3

結

果

度が実測できる。 これを多種類の界面活性剤に適表1にあげた界面活性剤についてヒト細胞を使用

ニング方法としての実用性， 限界，

した結果はToxicology in Vitro誌に発表した4) 0

ドレイズ試験法との平行性などを綿密に測定する

簡略に述べると ， 表1に示した界面活性剤C, D,こととした。

Iにつ いて， 低用 量 領 域 で詳細に 検討したと用し， スクリーAnuforo訊は， tetracyclin 処理で遊離されころ， 界面活性剤CのEDs。は0.023%, Dではてくる細胞内酵素活性は対照に対する相対量で0.032%, Iでは0.020%で ， 相対的に言えば Dは

A SAL (arginosuccinate lyase) > LDH Oac­C, Iょりも安全性が高く ， CとIはほとんど同tate

じと推定された。

dehydrogenase) > GPT(glutamate

pyruvate transaminase) > GOT (glutamate

しかし. CとIの用量反応曲線は途中でクロス

oxaloacetate transaminase) > AP (alkaline

してい たため わ ず か1%の 細胞死を引き起こ すphosphatase)の順であったと報告している。
我々は細胞質にあって， 測定しやすく相対的に安用量ED1を比較すると， C では0.0091%, I では

0.015%となり， EDsoで見られていたCとIの関定なLDHを指標とした。 臨床検査用に市販され係とは異なり， 低用量領域では I に比較して C のている血清LDH活性測定用キットを利用すれば毒性がより強く残存していること が判明した。

EDsoでははっきり差があるDとIのED1は 同

LDH活性測定は極め て単純である。 LDHは ，一

AS AL やGPT に比べて， どの細胞でも 般に活ーであった。

性が高く測定しやすい酵素である。 細胞の前培養

Watanabeらによる ドレイズ試験法の結果計さえできていれば， 検体処理， 培養上清分離，算されたドレイズスコア20を与える用量(w/v%)

LDH測定の自動化も容易である。

で表示したDS20 値 5) と， 計算されたEDs oの相関関係をみたところ， 被験物質がわずか10検体で

2.2

実

験

表1

我々は主にヒト肺癌細胞SQ-5 を使用した。 またヒト正常2倍体線維芽細胞NBlRGB を含め他のヒト細胞についても検討した。 培養用培地はMEMに10%ウシ胎児血清(FBS)を添加したものである。 96穴培養プレ ー トにlOOOcells/well播種
し， 0.1叫の培地で3日間培養後， PBSで洗浄し試験に供した。 試験の対象とした界面活性剤は表1に示した。 添加後， 20分間室温でインキュベ ー
トし培養上清に漏出したLDH活性を測定した。
その後0.3%の界面活性剤CC表1)を加えて細胞も含めて溶解し測定した全LDH活性を100 %とし，試験対象界面活性剤

ChemicalAbbreviation

Nonionic detergents
Polyoxyethylene (10) nonyl phenyl ether
Polyoxyethylene (9) lauryl ether
Polyoxyethylene (IO) launc acid

B
F
I

Anionic detergents
Cl-olefinic sodium sulfonate
Polyoxyethylene (2) laurylether sodium sulfonate

A
J

Cationic detergents
Alkyl benzyl dimethyl ammonium chloride
Pentaetoxy stearyl ammonium chloride
Stearyl trimethyl ammonium chloride

G
H
K

Amphoteric detergents
Laury! dimethyl methyl amino betame acetate
Alkyl imidazolin

CD

細胞毒性を％で表示した。

-13-

あるにもかかわらず ， 高い相関関係が観察された

本研究により， 一部の界面活性剤は， 弱い細（図1)。

胞毒性を示す用量領域CE且領域）で ， それらのED5o値の順から期待されるよりも ， 相対的に見2.4

考て強い細胞毒性が残存していることが判明した。

察

現在では多くの酵素活性の測定が高感度で可能

しかし， 酵素測定法も，なため， 細胞内酵素を測定する方法は ， 比較的少

1)確実に死んだ細胞を測定できる反面 ， 細胞膜

数の細胞があれば試験可能であり， 試験系全体を破壊が起こらなければ酵素は遊離してこない

高感度化しやすい利点をもっている。 酵素の高いため， 膜破壊以前の状態で死んでいる細胞は基質特異性を利用すれば ， 特定の代謝反応をねら測定できない，2)酵素の種類によっては細胞内でも不安定なもい打ちにした毒性試験系の設計も可能であるが，大量迅速処理を旨とする動物実験代替法の立場かのがあり， 細胞のわずかな生理状態の変動にらはそのような場合はむしろ精製酵素による生大きく影響されやすい，
3)酵素自体に直接作用する化合物は， 細胞毒性

化学的検査法か有利となり， 一般毒性試験の目的試験が容易ではなく， 複雑な補正計算を必要から離れてくる。
細胞の生死をマー

カーとする， 等の問題点をもっている。

とする毒性試験の観点から見ると ， 特に遊離酵素測定法は， 死細胞を直接本法ではLDHを選択したため， 上記2)の点は測定できるというMTT法 6) やneutral red Z去 ”

避けられるものの ， 汎用されている界面活性剤でにない特徴を持ち， 試験対象物質の低濃度領域にあるsodium dodecyl sulfateはLDH活性を 直接阻害するため， 本法を適用するためには直接阻害が起きない低用量領域をあらかじめ選択して生存細胞数の測定も同時に可能となる。

おく必要がある。
I 9

Dー＞．

J9

Ai

ー

Fi

k9
G\

・l

H↓
、
ー
c\
B

おける直接的な細胞傷害活性が正確に測定可能である。 細胞内残存酵素量を同時に測定できれば，

3. 昆虫細胞株を指標にした制癌剤の迅速細胞毒性試験法の開発

か， 特に制癌剤を対象にして検討した。 また ， 細3(OSQ 3 )8012

前項で開発した安全性試験法を， 界面活性剤のみならず ， 一般的な化学合成品に適用できるか否胞としてはヒト細胞に比べ ， 培養がはるかに容易
で， 炭酸ガスインキュベータ ー を必要とせず， 室

゜
2

.4

温で増殖する昆虫細胞株を対象とし， 制癌剤に対
1
Log(DS20)

0
ロ

SQ-5

N B IR B
ごごご：•& KATO-IIIG

ニニ：芯悶11y = - 2.741 + 0.666x
y = - 2.698 + 0.556x
y = • 2.771 + 0.569x
y = • 3.162 + 0.727x
y = • 2.970 + 0.582x

しヒト細胞と同等な反応を示すものを探索した。
表2にその結果をまとめたものを示す。
この結果は ， ヒト子宮頚部癌 細 胞 株 で あ る

R=0.663
R=0.666
R=0.690R=0.628
R:0.534

HeLa細胞に比べ ， 各種昆虫細胞株の制癌剤に反応するパタ ー ンは異なり， これらの細胞株をうまく組み合わせればヒト細胞株と同様の結果が得ら

図1

In vivoドレイズ試験法によるデータとin vitro
安全性試験法(LOH法）との相関関係れるが， 組み合わせの分だけ試験回数が増え， ヒ
卜細胞を用いる場合に比べ ， 必ずしも有利な試験-14-

ドレイズ試験代替法の開発

表2 各種制癌剤の昆虫細胞に及ぼす影響。
表の最上段は細胞名， 左側カラムは薬剤名である。 NIH-SaPe-4からBM-Nまでは各種昆虫細胞株名，
HelaS3, Y79, HL60はヒト癌細胞株， FM3Aはマウス癌細胞株。 数値は3日間培養時の各薬剤の最小増殖阻
害濃度(µg/m2)を表す。
HIH-SaPe —り

NIAS-PX-58

BH-N

HeLa SJY79(RCB280)(RCB556)(RCSり12)(RCBり30)(RCB457)(RCB271)(RCBり27)l 0000

10000

10000

5000

5000

25

25

25

12.5

12.5

0.78

6.3

0. 78

3.1

500

250

250

250

250

10

qo

1. 25

り0

methotrexate

>5000

>5000

>5000

>5000

>5000

>5000

>5000

>5000

diethylstilbestrol>25000

391

25000

98

く12

78

78

20

39

1600

100

200

り00

100

98

200

24

1600

5000

5000

cyclophosphamide
carboquone
TESPA

・

5-fluorouracil

NIAS-PX-64 SES-BoHo-15A

5000

10000

HL60

FHJA
(RCB086)

2500

5000

>5000

tegafur

2500

625

5000

1250

625

5000

l0000

ancitabin

10000>10000>10000

10000

10000

5000

5000

<4.9

9.8

bleomycin

125

125

250

250

62.5

125

500

2.0

62.5

mitomycin C

12.5

100

200

200

100

3.1

3.1

0.20

6.J

neocarzinostacin

0. 78

25

>200

12.5

6.3

0.63

10

0.31

20

daunomycin

0.39

6. 3

25

100

6.3

0.31

0.63

く0,02

2. 5

adriamycin

0. 78

l.6

12.5

200

6.3

a. 125

8.0

0.016

>8.0

actinomycin D

く0.0020.0039

0.063

0.063

0.031

く0.0020.0039<0.002

1.0

chramamycin A3

く0.002

く0.0020. 0039

0.031

0.063

<0.002o.0039o.00392.0:;;: = ;; =:;;:;: =::;;::: = :;:; :;= =:; = ===== == = =:; = =::; == = =;; ==:::; = =;; =::; ===== ==::;:;:;;::;:;;: = =;::;;;::;=:;:;:;:;;:;;;;:; = = ==:::;:;;:;:; ====:;;;;;::;=:; ==== == ==;;;:; = = = = = = = == = = ==;=-

・ trietbylenetbiophosphoramide

特異的毒性はないはずの低濃度にしてある）

法とならないことを示している。

はずで，

4. 市販目薬の安全性試験

4) LDH活性は涙中でも測定 できるため ， もし，
何らかの細胞毒性が発見されたら， in vivo

4. 1に目薬を適用してその毒性を検証できる可能

はじめに本研究で開発した遊離LDH活性測定法（以下 ，性がある，

LDH法と略称する）は前述したようにneutralからである。

red法やMTT法に比較して高感度であり， わず
4.2

かの量の細胞破壊が被験物質によって起こっても実

験

方法は前述の2.の場合と同様である。 目薬とし検出可能である。
この高感度という特性によって． 実際に人間にては， 市販品9品目をランダムに選び， ス ー パ ー

適用されており実用化していて， しかもすべての

マ ー ケット内の薬店で購入した。 これをそのまま人が安全であると信じている（はずの）製品が本当PBSで希釈し ， 検体とした。

に細胞破壊を引き起こさないか． 我々は市販の目薬を対象にLDH法を適用してみた ” 。

4.3

結

果

市販目薬を対象とした理由は．

市販目薬の能書に記載されていた有効成分は表3

1)目薬に含まれている成分はすべてドレイズ試のとおりである。
3種のヒト癌細胞株を標的細胞にしてLDH法

験を適用された物質のはずであり，
2)ヒトの眼に直接適用するため ， 最終製品としてもドレイズ試験を通過しているはずであり．
3)安全性は保証されていなければならない（少を適用した結果を表4にまとめた。 試験した9種の目薬のうち ， 7種までが明かな細胞毒性を示し ， 1
種(TG)はHL60細胞にのみ細胞毒性を示した。

なくとも期待される成分の薬用効果に比べ非-15-

そこで ， 目薬の成分のうち毒性を示すものを検表3
Eye Drops (abbreviation)
Lot No.

市販目薬の能書に記載されていた有効成分
PV

RN

RP

RS

SN

TA

TE

TG

TM

16727

0040

021

11771

NU391

12052

03181

OIIBI

AOS3

A

B

B

C

D

E

F

F

G

3.5

IO

s

Maker Code
Reported content (mg/ml)
Panthenol
L-Asparatic acid potassium salt
Glycyrrhizic acid potassium salt
Naphazoline hydrochloride
Neostigmine methyl sul『ateChlorpheniramine maleate
Aminoethanesulfonic acid
Sodium chondroitin sulfate
Allantoin
Zinc sulfate
Tetrahydrozoline hydrochloride

゜゜゜
゜゜
゜゜
゜゜゜
゜゜
゜゜

0.5

Lysozyme
Flavine-adenine dinucleotide
Pyridoxine
Cyanocobalamin

゜
゜
゜
゜゜
゜゜
゜
゜

I
10

゜゜
゜
゜゜
゜
゜゜゜
゜
゜

10

1
0.03

O.oJ

0.05

0.05

゜゜
゜゜
゜゜
゜
゜

0.1

I

I

0.02

10

I

゜
゜

0.03

゜
゜

0.5

゜゜
゜゜
゜゜
゜゜
゜

0.5

0.02

O.oJ

0.02

0.1

0.3

0.2

02

5

5

゜゜
゜゜
゜゜

I

I

0.5

0.5

゜
゜

I

I

0.1

゜゜
゜゜
゜
゜゜
゜
5

I

゜゜
゜゜
゜

I

I

0.5

゜

I

゜゜
゜
゜
゜
゜゜
゜゜
゜

0.02

03

I

出するため， 能書にしたがって各成分をPBSに感度であり， それ故にin vitroでは毒性が検出で溶解した再構成目薬を作成し， LDH 法にかけたきるが， その細胞毒性の程度はin vivo(つまりヒところ， すべての再構成目薬は全く細胞毒性を示

卜裸眼）では問題にならない少なさなのかもしれさなかった。 したがって． 細胞毒性を示す成分はなしヽ。

能書に記載されていないものであることが判明し筆者らの試験では ， 調査した市販目薬のなかには， 細胞に添加してわずか1 分で明らかに LDHた。

を遊離させるものがあり， それは実際にヒト裸眼
4.4

考に適用すると涙中の LDH 活性を上昇させた（未察

市販目薬は我国では百種以上が販売されている

表4といわれており， それぞれの最終製品の毒性試験
結果は公表されていない。 目薬に添加できる各成分についての毒性はドレイズ試験法で調べられているはずで（現時点で筆者らにこのデ

ー

タは入手

ASSAY
CELL
EYE UROl'S
l'V

TG

SQ-5
EU50(%)
24.2(2.1 0 -25 4)•55.2( 514 - 593)
65.5
(r.2R - 6R 4)
42.3(JR I• 465)
52.2
( 452-572)
62.8( 55.6 - 722)
38 8
(34 5 - 4J 0)
Undet. ••TM

Undct.

できていない）， それに十分な安全率を掛けた濃RN度で添加されているはずだからである。 すなわち ，RP

目薬は全く安全である（に違いない）という信念にRS

基づいて広く市販されていると筆者らも考えてい

SN
TA

た。

TE

しかしながら ， これらのうちわずか9種を調べたにもかかわらず その8種までが細胞毒性があり． 明らかに毒性がないのはわずか1種にすぎな
いといいう結果は驚きであった（表4)。
確かに， 培養細胞を用いた我々の LDH 法は高3種のヒト癌細胞株に対する9種の市販目薬の細胞毒性
LIJ!I
IIL60
ED50(%)
6.4(56-7))
17.2(IJ6-209)24 5(20 I�2? 6)
11.8(7R-16J)
31.2( O
J 4�.ヽ20)
11.1(8.3-140)
RR{75 - IO2)
14.5
(81•20I)
Undct.

Sjo-Gll
EDSO(%)
8.1(7� �8 4)
27.0(24.8-JO 5)
30.2(2?2-JO'J)
19.1(156-2.1 1)
36.5(Jfi Iー37 0)
27.7
125 I -JO SI
18.1
jl62 .. 202)
Undct.
Undct.

ED50 values were determined「rom the dose-response curves shown in Fig. 2,
Fig. Ja and b, and Fig. 4•Figures in parenthese nre confidence limits o「the values shown nn the line ahove…Undetectable-16-

ドレイズ試験代替法の開発発表）。 この結果からは ，

ヒト眼の外界に接する

一

部は目薬の滴下によってもちろん， 製品の種類によっては ， 毒性があっ破壊されると想定せざるを得ない。 しかもそれをてもなおかつ有効性のメリットが大きいという有引き起こしている成分は ． 能書に公表されている

効性 一 毒性のバランスの問題があろう。 しかし ，

いわゆる有効成分ではなく． 未記載の（したがっ目薬のような直接医療現場の制御下で使用されなて従来は誰もその毒性を疑わない安全なはずの）い汎用製品においては ， 最大無毒用量でなお有効成分だとしか考えられないのである。

な効果がないものならば， 販売許可を出すべきで表層細胞の少なくともる。

はないのではなかろうか。

5. 総

括
文

前項のように わずかな種類の市販製品の細胞毒性を調べただけで一般論を述べるのは時期尚早かもしれないが我々の得た試験結果は ． 従来の毒性試験法の考え方について一種のパラダイムの献

1) Marzulli F. N. and Ruggles, D. I.: J. Ass. off.
Analt. Chem., 56: 905-914, 1973.
2) Weil C. S. and Scala, R. A.: Toxic. appl.
Pharmac., 19: 276-360, 1971
3) Anuforo, D. C., Acosta, D. and Smith, R. V.

変更を求めているように思われる。
すなわち． 少なくともドレイズ試験法を含む局
所剌激性試験については ， 従来のようにin vivo

In Vitro., 14: 981-988, 1978.
4) Sasaki, T., Kawai, K., Saijo-Kurita, K., andで調べた毒性試験結果（動物で毒性が発現するまOhno, T.: Toxicol. in Vitro, 6:451-457, 1992.

で用量を増加させていって測定する）に十分な安

5) Watanabe, M., Watanabe, K., Suzuki, K.,

全率を掛け ， それによって最終製品を作成するとNikaido, 0., Ishii, I., Konishi, H.,Tanaka,

いう手順よりも, in vitroの試験法によって検出

N., and Sugahara, T.: Toxic. in Vitro, 3: 329-

しうる最大無毒用量を求め． それをin vivo局所

334, 1989.

剌激試験に適用し安全性を確かめた上で製品化するという， 従来とは逆の方法を取るのである。 こ
うすれば不幸にしてin vivoで毒性が出た動物を除いて ほとんどの動物は再使用に耐え得るはずであり， 動物実験を大幅にセープできるはずであ-17-6) Mosmann, T.: J. Immun. Meth. 65: 55-63,
1983.

7) Borenfreund, E. and Puerner, J. A.: Toxicol.
Lett. 24: 119-124, 1985.
8) Sasaki, T. and Ohno, T.: in subm1ss10n.

リン脂質ベンクルの表面修飾と分子集合体としての機能発現に関する研究
筑波大学化学系

古

澤

邦

夫

Mixed vesicles including phosphatidylcholine(PC), phosphaいdyl serine(PS) andamphoteric crown ether compound(C,8-0CH,-18-crown-6) with different component
fractions were prepared and their ion-complexing phenomena was examined by mea­suring their electrophoretic mobilities in different salt solutions. The crown ether com­pounds retained their selectively ion-complexing ability for some special cations(K·and Ba'•) even on the vesical surfaces. The zeta-potentials of the mixed vesicles of PC+
PS+crown were determined extensively by fraction of the PS component and variation inmetal cations in aqueous solution. That is, this parameter shifted remarkably in a neg­
ative direction with increase in the PS-fraction only in salt solutions containing応 or
Ba 2·. No shifting of zeta-potentials could be detected in the case of (i) PC+PS vesicles
without crown ether or, (ii) salt solutions that did not complex with the crown ether(Li•or Ca'·)

1. 緒 言合ベシクルを調製し ， それらの物性を研究することから ， 機能性粒子としての機能発現のメカニズムを調べる対象として有用である。

生体膜は多種類の脂質分子の二分子膜が流動的に二次元に広がっているところに種々のタンパク

我々は今までホスファチジルエタノ ー ルアミン質などの機能性物質が組み込まれた構造をとって(PE) およびホスファチジルセリン (PS) ベシクル

おり八 ここを通してイオンの選択透過や情報のの表面に各種金属陽イオンの結合性をコロイド化

伝達など様々な機能がなされている。 また， リン

学 的手法で調べたところ2 >.4>,

K·<Mg 2 •<脂質ベシクル（リポ ノ ー ム）は， 生体膜のモデルとCa 2 + < La 3 + < Th 4 十の順序で強くなることを見してイオンの吸着性や透過性の研究に広く利用さ

いだし， 結合性の強さに応じてこれら各種陽イオ‘

2)が イオン透過の研究モデルとしてはンは 2 種類の異なった機構でベシクル粒子の凝集

不充分な点もある。 それは生体膜にはイオンの農を誘起することがわかった叫その第一は荷電中れている

度勾配に甚づく受動輸送以外に carrier や chan­和の機構で， ベシクル表面の電荷が中和されて粒nel と呼ばれる特異なタンパク質等によって促進輸

子間の Vander Waals 引力で凝集する機構であ送も行うという高度な機能を有するからである 3)

る 5) 。 この凝集はベシクル表面への結合力の強い

一方 ， コロイド化学的な側面から眺めるとベシ

多価陽イオン (La 3 や Th 4 •) を添加すると起こる。

十十ケルは個々のリン脂質分子の集合体から成る疎水第二の機構は二価金属陽イオン (Ca 2 やMg りコロイドであるため ， 極性基の異なるリン脂質やが起こす粒子間結合 ， すなわち ， 2個の粒子間に特異な機能をもつ両親媒性物質を混ぜ合わせた混

またがったこれらイオンの橋かけ形成が原因で起Surface Modification of Phospholipid Vesicles and Its Functionality as a Molecular Assembly
Kunio Furusawa-18-リン脂質ペシクルの表面修飾と分子集合体としての機能発現に関する研究

こる凝集である。第二の機構で凝集する場合は金PC :属陽イオンの凝集限界濃度はベシクル濃度の増加

CH (CH) -C-0-CH
0
3
2 n
I 2
I
＋
CH (CH) -C-0-CH-Cll -O-P-0-CH CH -N (CH)と共に減少する傾向が見られた叫て ， 長鎖の炭化水素鎖をもつクラウンエ ー テル化

PS :合物を機能性物質に選び ， 各種リン脂質に混ぜ合

2

II
0

0
COOH
I
I
+
-C-0-CH-CII -O-P-0-CH CH-N H3
0

CH (CH)
3

2

2•11

3

あると共に 選択的に特殊な金属イオンと錯形成

2 17

2

II
0

-OCH -18-crown-6
2

6)

戸01

パ：〗

また． その側鎖に疎水基を導入することにより非イオン界面活性剤としても機能する。従って ， べ性クラウンエ ー テルが備えているイオン選択的錯

33

L-a-Phosphatidyl-L-serine (from Bovine
Brain)CH (CH)

オキシエチレン基と同様に水素結合性の親水基でシクル構成成分としてこれを混入させると両親媒

2CH (CH) -C-0-CH
3
2 ,
[ 2

テル化合物はする能力があることは広く知られた事実である

0?i

わせた混合ベシクルを調製した。酸素原子と炭素原子が環状に配列したクラウンエ

2

2•11

3

本研究では各種リン脂質の単独ベシクルに加えー

L-a-Phosphatidylcholine (from frozen egg

yolk)

に/0�

Fig. 1

形成組織的分子会合性および界面吸着性等の基

Molecular structures of PC, PS and C,.­-QC H ,-18-crown--6

本特性をベシクル粒子の形態で付与することがで

これら化合物の構造式をそれぞれ示す。本実験できると期待される。ここでは種々な条件下で形成は4種類の金属塩化 物(BaCl2 , KCl. CaClかされたクラウンエ ー テル混入ベシクルの機能性，

LiCl)を使用したが い ず れ も市販（和光純薬

特に各種陽イオンとの相互作用について ． それら株）の特級品をそのまま使用した。これらの金属の電気泳動実験より検討した。

陽イオンとC 1 s -OCH 2 -18-crown -6との錯形
成安定度(K)は ， 水中， 25℃において lo g Kで

2. 実

+

+

3.87(Ba臼>2.03(K ) >-0.5(Ca 2+ ) >-O(Li )験の順である 6) 。また水相として使用した水はすべ
2. 1

試

料

て2回蒸留し， Barnst ead(USA )社のNANO

リン脂質の基本試料としては卵黄から抽出した
L-a

Pureシステムで精製したものを用いた。

ー ホスファチジルコリン(PC)を使用した。

PCは正および負に荷電した基を1個ずつもつ中2.2性リン脂質の典型である。このPCに牛の脳からベシクルの調製

ベシクルの調製は主にExtrusio n法（押し出し“”

凍結 一 融解 を繰り抽出したL-a ー ホスファチジルセリン(PS)およ法）で行った。この方法は

び長鎖クラウンエ ー テルをいろいろな組成で加え返してunilamellarity と trapping効率を著しくた混合ベンクルを調製した。PSはリン酸基とア増大させることができ またフィルタ ー の孔径をミノ基に加えカルボキシル基を持つ酸性リン脂質

変えることによってベシクルの粒径を任意に制御

ー

テルには炭素数18の直できる特徴をもつ。まず， 通常の超音波法と同様

鎖のアルキル基をもつ o ctadecy lo xymethy 1-18に 試 料 を懸濁さ せ て Larg e Mult ilamellar-crown-6(C, e-OCH 2 -l8 -crown-6, 混合ベ

Vesic les(LMV)を作り ， 次にこのLMVを液体

シクル系では crownと表記する）を使用した。こ窒素中に入れて凍らせ，40�60 Cの温水中に入の化合物は群馬大学工学部桑村研究室で合成され ，れて解凍する

精製されたものをそのまま使用した。 Fig.-1にした。その後Lipex Biomembra n社製のEx-である。長鎖クラウンエ

°

-19-

“

凍結 一 融解" の操作を5回繰り返

さらにフィルタ ー をO.lµm孔径のものに変えて5回繰り返しUnilamellar Vesicles(UV)を調製した。
参照のため超音波分散法によってもベシクルを調製し ， 従来と同様 2). 4 l に遠心処理とゲル濾過

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10

800型）により加速電圧200 kVで観察した。

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で染色し ， 日立製作所製透過型電子顕微鏡CH-.

顕微鏡で観察した。 各種ベシクルを酢酸ウラニル.

解析装置(LPA-3000 )を使用した。 また ， いろ
いろな組成から成る混合ベシクルの膜構造を電子i

散乱法で測定した。 測定には大塚電子（樹製の粒子.

で混合して調製した ベシクルの粒径分布を動的光．•••••••
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uon nqp �sJp azJs↑

リン脂質に長鎖クラウンエ ー テルを 種々な割合

各種リン脂質の単独ベシクルおよびクラウンエ ー..�． �........
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（さ

ベシクルの粒子径分布および膜構造の観察

電気泳動測定5680
116 167→ Diameter (nm)PC + crown Vesicles

40

法で精製後使用した。

2.4

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.
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9|
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をまず0.2µm孔径のフィルタ ー で5回繰り返し ，—-―-―—一．
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．�

の圧力でベシクルをフィルタ ー から押し出す操作

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9＇
·

ご�口 �'.ご 口 �ェ ニに試料溶液を注入した。 次に窒素ガス20-30atm

2. 3

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．
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タ ー (Nucle pore社製）を2枚重ねて敷き ， その中

三 二�
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li
PC Vesicles

trud er装置の中にポリカ ー ボネ ー ト製フィル

83

ーDiameter (run)173

Fig. 2 Distribution curves of particle sizes of PC
and PC+ crown(1: 1)vesicles.

テル混入の混合ベシクル表面への各種金属陽イオ

子 径分布曲線を示す。 これらの試料はいずれも最ンの吸着作用を調べるためにベシクル粒子の電気後に孔径O.lµmのポリカ ー ボネ ー トフィルター

泳動速度を測定した。 まずベシクル懸濁液(Cp=を用いて調製したものであるが， フィルタ ー の孔---0.005g/ dL) 2mL に各種濃度の塩溶液lOmLを径に合致した平均粒子径をもつ単分散ベシクルが密栓付き 試験管に取り ， 20℃で一晩ゆるやかに転調製されていることがわかる。 また ， いずれも粒倒かくはんした後電気泳動測定を行った。 各試料子の分散は著しく安定で， 2-3日間放置しても粒の 電 気泳動速 度 は顕微鏡電気泳動装置(Rank

子径分布の変化はほとんど認められないことが確

Brother M-2)により25℃で求め ，認された。 このような傾向は他の混合ベシクル ，Helmholtze-Smol uchowski式よりt-電位を算出した。

例えばPC+PS+crown混合ベシクルにおいても同様に認められた。

3. 結果および考察

Fig.-3は超音波分散法で調製したPC+crown(1:1)混合ベシクルの電子顕微鏡写真を示す。 混

3. 1

混合ベ シ ク ル の形状と膜構造

合ベシクルにおいても明確なラメラ構造が認めら

Fig.-2 はExtrusion法で調製したPC単独ベ

れ， 二分子膜の存在がはっきりと確 認される。 ラ

シクル お よ びPC+crown(1:1)混合ベシクルの粒メラ構造はC1s― OCH2-l8-crown-6の含有量を-20-

リン脂質ベシクルの表面修飾と分子集合体としての機能発現に関する研究

40

2

゜

PC vesicles

>s ヽ、

匹

0

2 JU O JO d,)t

Ca

0
2

100 runFig. 3

Electron micrograph of the PC+ crown(1: 1)vesicles stained by uranyl acetate.

,,.

-40

2倍に増大させたベシクルの場合でも同様に観察されることから本研究に使用したクラウンエ ー テ-5ル分子はリン脂質との相溶性がよく造膜性に優れ

log

た特質をもつことがわかる。
3.2

-4
-3
[metal chlorides();Ca2 +, 〇； Ba2 +, A;Li 十 ，PC単独ベシクルヘの各種金属イオンのFig. 4吸着性-2/mol·dm-3]

△； K

+

こ ー Potential of PC vesicles in various salt
solutions.

クラウンエ ー テルで修飾されたリン脂質ベシク系で観察される濃度10-3mol·dm-3近辺からのルヘの金属イオンの吸着作用を調べる前に ， まず〖ー電位の正側への大きなシフトはCa 2十 イオン

PC単独ベシクルヘの金属イオンの吸着性を各種のリン脂質ベシクルヘの高い吸着性に基づくもの

金属塩水溶液中で処理したベシクル粒子のと思われる 7) 。

r-電位を測定して調べた。 Fig.-4はそれらの結果を
3. 3 PC+crown混合ベシクルと金属イオンのまとめたものである。 PC分子は電気的には中性な物質であるが本実験では金属を添加しない場

相互作用— 40--50mVの負電位を示し

Fig.-5 はPC に C ,a-OCH z-18-crown-6をた。 この原因については今のところ明確な説明を

重量比で1:0.5の割合で混合して得たベシクルを与えることはできないが ， ここでは塩添加によっ試料に用いた際の結果で， 各種金属イオンの濃度てベシクルのぐー電位がどれだけ正側ヘシフトしとたかで各種カチオンとの相互作用の強さを調べる

クラウンエことにした。 Fig.-4より金属イオン濃度が10-4

イオンやCa 2 • イオンを添加した場合はPC単独

合PCベシクルは

一r-電位の関係がプロットされている。 まずー，

テルとの錯形成安定度が小さいLi

+

価と二価に

ベシクルの場合(Fig.-4)とほぽ同じ曲線が得ら

よる電位の差が生じる。 もちろん負に帯電した膜

れ ， クラウンエ ー テルを混入した効果は認められ表面へのScreening効果は 一 価イオンと二価イない。 一 方， 錯形成安定度の大きいK イオンやオンでは異なるが圧 とくにCa 2十 イオン添加のBa 2• イオンの添加系では金属イオンの濃度の増mol·dm打こなると金属イオンの

十

-21-

40

40

゜ ゜
Ba

゜ ゜

PC-crown
l:0.5

庄

2

20

ヽ Im ご 5 od, ) ↑Ae＞uヽ I e-luam dー」一↑

-20

-20

-40

-40

-3

-5

-4

→ log

[metal chlorides/mol·dm 3]-5-2();Ca'+, O;Ba'+, A.; Lド， △； K+
Fig. 5t; -Potential of PC+crown(1 :0.5)vesicles
in various salt solutions.

加と共に
既に10

mol·dm―3

でベシクルは正のr- 電位-3./mol・dm-3]-2O;PC+ crown = 1 :1, △； PC+ crown = 1 :0.5,&.;PC+ crown = 1 :0
Fig. 6r- 電位は正側へ大きくシフトしている。

特にBa 2• イオン添加の場合その傾向は顕著で，―5-4log [KCl

こ ー Potential of PC+crown vesicles withdifferent component fractions in KCI
aqueous solutions.

が増大して，( — 電位は正側へ大きく変化することがわかる。

を示すことがわかる。 これはBa 2• イオンのクラ

Fig.-7は添加塩としてBa 2十 を用いた場合の結ウンエ ー テルヘの錯形成安定度が高いことに加え果である。 Ba い は二価陽イオンであると同時にて二価陽イオンによる高い静電効果に基づくもの

クラウンエ ー テルと最も錯形成安定度が高いためと思われる。

に10-0mol·dm- 3 の低濃度で既に正のI;-電位

このようにクラウンエ ー テルは溶存状態で示すを示し， 濃度の増加と共に大きく正側ヘシフトし選択的金属イオン錯形成能をベシクル表面でもそている。 ここで興味深いことはいずれのクラウンのまま保持し ， ベシクル粒子にイオンを選択的に

エ ー テル混入ベシクルにおいても塩濃度の増加で吸着する新しい機能を付与することがわかる。

対イオンによるScreening効果が全く現れず単次に PC 量を 定にしてベシクル中のクラウン
一エ

ー

テル含有量を変化させた際の t — 電位の変化を調べた。 Fig.-6は各種混合ベシクルをK十 イオ
ンで吸着処理した際の結果を示す。 クラウンエ
十ー

テル含有量が多くなるほどK イオンの錯形成量

調にI;-電位の増加のみが認められることである。
同様な傾向は0/W型エマルションを試料に用いた場合は認められない 8) ことから，

バ ックグラウンドとしての PC の極性基がこの現象に関与していることは確かであるが明確な説明を記述するこ-22-

リン脂質ベシクルの表面修飾と分子集合体としての機能発現に関する研究

危

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[BaCl

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-4
→ log

(LiCl

-2

-3
/rnol·dm -3]△;PC+ crown= l:1, 0:PC + crown= l:0.5,();PC+ crown= l:0□;PC+ crown= 1 :2, △；PC+ crown= 1:1,
O;PC+ crown= l:0.5, ();PC+ crown= 1:0
Fig. 7

PC-crown

Fig. 8r; -Potential of PC+crown vesicles withdifferent component fractions in BaCl2
aqueous solutions.

t; 一Potential of PC+crown vesicles withdifferent component fractions in LiCI
aqueous solutions.

Fig.-9に各種PC+PS混合ベシクル系およびとは今のところできない。
十Fig.-8はLi イオンを添加した場合の結果をPC+PS+crown混合ベシクル系を様々な濃度の示す。 クラウンエ ー テルとの錯形成安定度か小さ

KCl水溶液で吸着処理した際のi; -電位の変化を

く ， 混合ベシクル表面との相互作用が少ないため測定した結果を示す。 PC+PS混合ベシクル系でにクラウンエ ー テル含量の違いによる(-電位のはPCとPSの組成を変化させてもKCl濃度によ変化はほとんど認められない。

るi; -電位の変化の様子はあまり変わらず常に負の〖 ー 電位を示すことがわかる。 これはPCとPS

3 . 4 PC+PS+crown混合ベシクルと金属イオのKClに対する相互作用はあまり変わらないことを示す。 一方PC+PS+crownの3種混合ベシンの相互作用次にリン脂質を2種類混ぜ合わせた混合ベシク

クル系ではPCとPSの混合の割合でi; -電位のル系をクラウンエ ー テルで修飾した際の金属イオ

KCl濃度依存性は大きく変化する。 すなわち．

ンの錯形成効果を調ぺた。 リン脂質混合ベシクル

KCl濃度が増大すると ， PS含有量に応じてi; -

一

定として両

電位は負側へ大きくシフトする。 この際PS含量

脂質の割合を変化させ ， ここに 一 定量のクラウンの影響が極めて顕著であり ， 例えば10 3 mol·エ ー テルを混入させてベンクルを調製した。

dm 3KC1濃度の溶液中で， リン脂質に1割のPS

はPCとPSを合わせた総量は常に

―

―

-23-

40

40

PC-PS-crown

1:0:l

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PC-PS

l

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PC-PS-crown゜

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1-eI ua10,

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[KCl

仝→

△

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/mol・dm 3]

-2

-4

-3

-2

/mol・dm-3]();PC+ PS+ crown=1:0:1, D P; C+ PS+ crown=
0.9:0.1:1, [l;PC+ PS+ crown=0.5:0.5:1, O;PC+
PS=1 :0, A;PC+ PS= 0.5:0.5, △；PC+ PS=0.9:0.1();PC+ PS+ crown=1:0:1, □；PC+ PS+ crown=
0.9:0.1:1, [);PC+ PS+ crown= 0.5:0.5:1, O;PC+
PS=1:0, A;PC+ PS=0.5:0.5, △；PC+ PS=0.9:0.1

Fig. 91;-Potential ofPC+PS+ crown andPC+
PS vesicles with different component frac­
tions in KC! aqueous solutions.

Fig.10 { -Potential ofPC+PS+ crown andPC+
PS vesicles with different component frac­
tions in LiCI aqueous solutions.

r- 電位はPS含量が零の系に比た場合に限りPSを混合した効果が現れるという，を含有させると

べて20-30mV低下することがわかる。 つまり，

クラウンエ ー テル基の錯形成が関与したベシクル

ベシクルの構成成分にPSを加えると表面での特異な界面動電現象について次のように

r- 電位が引き下がるという効果が現れるのはクラウンエ ー

考察した。
まず. PSがベシクルのt; -電位を負側へ引きテルを混合した場合に限られることがわかる。
Fig.-10にLiClを添加した場合の3種混合ベシ
クルに対するr- 電位の測定結果を示す。 クラウ

ンエ ー テルとの錯形成能の低いLi+イオン 添加の十下げる効果を示すのはPSはPCと違って分子構
造中にカルボキシル基を持っており， これが溶液中で解離して負電荷をもつカルボン酸イオ ンにな場合はK イオンの場合とは対照的にPC+PS 混

るためであることは容易に理解できる。 また，合系およびPC+PS+crown混合ベシクル系共にPSがPS含量の影響は現れないことがわかる。

の種類や猥度によって異なるのはクラウンエ ー テ

このようなPC+PS系ではPSの影響が現れず，

ルとのこれらイオンの錯形成がカルボキシル基のPC+PS+crown混合ベシクル系で， かつクラウ

解離に影響を与えるためであろう。 すなわち．

ンエー テルと錯形成能の高い金属イオンを添加しr ー 電位を低下させる度合いが金属イオン

Fig.-11の模式図で示すようにベシクル表面に存

-24-

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リン脂質ベシクルの表面修飾と分子集合体としての機能発現に関する研究''

Fig.11

·.:＝
.,

20

。

O J - ) •—Schematic picture showing the surface
structure ofPC+ PS+ crownvesicle.

PC-PS-crown

在するクラウンエ ー テル基が金属イオンとの錯形-20

成によって正に帯電すると ， その静電効果によって同様にベシクル表面に存在するPSの負のカルボキシル基の解離を促進するものと思われる。 さ-40

らに電気泳動のt-電位は粒子表面からある距離
離れたところ ， すなわちSlipping planeにおける電位であるから ， カルボキシル基が幾分外水相-5側へ突き出していればPSの含まれる比率が小さ
くても 効果的にt-電位を引き下げることは可能-4→ log 1Bacl 2-3/mol・dm-3]-2であろう。 このような考えはPC+PS+crown混〇;PC+ PS+ crown= 1:0:1, [];PC+ PS+ crown=
0.5:0.5: 1, ●；PC+ PS= 1:0, �;PC+ PS=0.5:0.5

合ベシクル系に Ba 2•を添加した系にも適用でき

Fig.12

十る。 その結果をFig.-12に示す。 K イオンに比ベ Ba 2• イオンを添加した場合はより低濃度領域

でPSの混合による 効果が認められる。 Ba い ィ

r: -Potential ofPC+PS+ crown andPC+
PS vesicles with different component frac­
tions in BaCI, aqueous solutions.

て粒子表面の電位効果を変化させるとクラウンオン濃度を高めるとPSの混合効果が小さくなる

エ ー テル基の錯形成挙動がどのように影響を受けのは ， カルボン酸イオンの負の電位 効果よりもるかを調べるために 種々な溶液条件下でベシク

Ba 2•とクラウンエ ー テル基の錯形成定数が大きルのt; -電位を測定し， 次のような結論を得た。

く ， かつ二価イオンであるために正の電位効果がより強いためと考えられる。

1) PCやPSにいろいろな割合でC1a-OCH2―
18-crown-6を混合した場合でもラメラ構造を有する単分散性の高いベシクルが調製され

4. 結

論

た。 また ， クラウンエ ー テル基が溶液中で有する選択的金属イオン錯形成能はベシクル表

長い炭化水素鎖をもつクラウンエ ーテル(C,a ―面でもそのまま保持され ， ベシクル粒子に金OCH2-l8-crown-6)と極性基の異なるリン脂属イオンを選択的に吸着する新しい機能を付

質PCおよびPSをいろいろな割合で混合したベ

与することができる。

シクルを作製し， クラウンエー

テル基の持つ金属

2) PC+crownの混合ベシクルは錯形成安定度

イオン選択性錯形成挙動がベシクル粒子の表面での高い K や Ba 2 の水溶液中において ， それいかに現れるか またPCとPSの混合比を変え

-25-

十

十

らのイオン浬度を増大させてゆくと大きな正のt; -電 位 を示すが ，対イオ ンによる

2) K. Furusawa, H. Kakoki, M. Matsumura,

Screening効果は現れず10-2mol·dm-3近辺まで単調に〖 ー電位を増加させる。

Bull. Chem. Soc. Jpn.,57, 3414(1984)
3)妹尾学 ，

3) PC+PS+crownの混合ベシクルは錯形成安十2

定度の高いK やBa 'を含む水溶液中でのみ，＂膜の化学"' 大日本図書卸 ， (1987)p.

114
4)古澤邦夫 ， 鹿子木宏之 ， 武居俊明 ， 日化 ， 1984,992

PS含量のわずかな増加でt; -電位を負側へ
大きくシフトさせる。 このような現象はクラ

5) E. J. W. Verway,J. Th. G. Overbeek, "Theo­

ウンエ ー テルと錯形成能の低い金属イオンを

ry of the Stability of Lyophobic Colloid" El­

添加した場合やPC+PS混合ベシクル系では

sevier,Amsterdam(1948)

認められないことから， クラウンエーテルヘ6) R. M. Izatt,D. P. Nelson,J. H. Rytting B. L.

の金属イオンの錯形成とPSの極性基が関与

Haymore,J. Am. Chem. Soc.,93, 16190971)
7) J. Marra,Biophys. J.,50,8150986)

した特異な複合現象と言える。

8)古澤邦夫 ， 小幡千春 ， 松村英夫 ， 桑村常彦 ， 日本
文

献

膜学会第11年会講演要旨集 ， 55(1989)l) S. J. Singer, G. L. Nicolson,Science,175,720(1972)-26-

化粧か意識性に及ぽす効果の研究
早稲田大学人間科学部

春

豊

木

This study consisits of two parts, namely Study I and II . In Study I . we studied
how making up and removing it influence the mood of the person concerned. We alsostudied whether or not any difference is observed in the influence on mood by personali­
ty. The subjects were women's college students. We had those who had seldom made up
done so and measured the change of mood by SD method. On the contrary, we had those
who had usually made up removed the makeups and measured the influence on mood by
the same method. The personal山es were examined by MP! (EPQ). The result was thatmuch change of the mood occurred in both cases. The influence on mood by removing
makeup was, however, more. Though the difference by personality was also observed, it
was not so distinct.
In Study II, we studied the feeling of the adults surrounding the subjects for make­up by research. As the interest in makeup starts to increase in girls'high school stu­
dents, we studied the feeling of the adults for the making up behaviour of the girls'highschool students. In order to clarify the pecuriarity of feeling for makeup, we compared itwith the feelings for hairstyle and dressing. And in order to see the pecuriarity of
makeup, we studied the feeling of the persons surrounding the subjects for the makeup
of college students and compared 1t with that for the makeup of the girls'high school
students. The result was that the feeling of the adults for the makeup of girls' highschool students was considerably peculiar in comparison with that for the makeup of col­lege students and negative to it. The feeling for the makeup of college students becomes
positively affirmative, therefore it can be said that this dramatic change is a trait of
makeup. However we were unable to investigate the cause of this fact.

1. 緒

言

研究IIでは ， 化粧をすることに対して周囲の人達の意識を調べることにした。

化粧は美容のために行うといえるが， 美しくみ2. 研究Iせるということは， そうすることによって何らかの効果や影響を持つということであろう。

本研究では ， 化粧をしたりとったりしたときのその心に与える効果は ， 化粧をしている本人の心に対するものを考えることができる。 また一

方

意識性の変化を調べることにした。 まず実験1でで本人の周囲の人達に対するものも考えること

は 日常化粧をしない人に化粧をしてもらい， そができるであろう。

の気分の変化を調ぺ ， 実験2では逆に日常よく化

そこで本研究ではこれを二つに分け ， 研究Iでは化粧をしたり化粧をとったりしたときの本人の粧をしている人にその化粧をとってもらってその気分の変化を調べることにした。

意識状態がどのように変化するかを調べた。 次にEffects of makeup to one's awarenessYutaka Haruk1

-27-

2. 1

してもらった。 そして， 化粧をしたまま一 時間

実験I

且

ほど校舎内を自由に行動してもらい， 化粧室に化粧の経験のない女性に化粧をほどこし， 主観戻ってもらった。 戻ったならば再びその時の的感情の変化を測定する。 そしてこの変化が単

主観的感清評価を SD尺度で評定してもらった。

に化粧をしたことのみによるのか ， 化粧をし， 他

MPI尺度のチェックをもしてもらい ， 最後に者からみられる（他者の反応を知る）ことによって化粧をとっで帰ってもらった。

生ずるのかを調べることにした。 またそのことが本人の性格とどのように関わるかも調べた。

諸
化粧直前(Tl)と化粧直後の気分(T2)および一方

時間後(T3)の気分（意識性）の変化についてみて・被験者

みると ， 形容詞対全体については ， 図1のように化粧の経験がないかほとんど日常化粧をしななった。 各形容詞について. Tl, T2, T3の間でい18歳�23歳までの女子大学生33名（主として変化したかどうかをみるため検定をしたところ．
有意差のあったのは次の通りであった。

早稲田大学人間科学部学生）
化粧用具および化粧の実施•化粧用具は次の

(1)

あったもの

ものであった。 乳液 ， 収れん性化粧水 ， ファン
デ ー ション(2色），

頬紅(3色） ， 口紅(6色） ， ア

イシャドウ (12色） ，コットン， クレンジング

しみじみとした→うきうきした
暗い→明るい重々しい→軽やかな

ロ ーション， 洗顔料。 以上の用具を用いで実験者が本人の雰囲気および服装に合うようにナ
チュラルメイクをほどこした。 なおメイクは乳液収れん化粧水 ， ファンデ ーション ， 頬紅．
アイシャドウ ， 口紅の順で行った。
・調査用紙
主観的感情（気分）を測定することは大変難し
いが岩下(1979)を参考にして化粧と関係があると思われる形容詞対を33対選び. 7段階評定によりチェックしてもらうことにした (SD 尺度）。
またパ ー ソナリティ検査としてMPIを用いた。
• 手続き
化粧は個室でほどこした。 被験者にはまず化
粧をする前に現在の感清状態を SD尺度で評定をしてもらった。 次に実験者は被験者に上記の要領で化粧をした。 この間はなるべく化粧についての会話はしないようにした。 化粧が終了したならば被験者に鏡を見てもらい， その後再びその時の主観的感情の評価を SD 尺度で評定を化粧直前(Tl)と化粧直後(T2)の間で変化のH しみじみとした
1-2 憂いをおびた
1-3 元気でないH 蹄い
1-5 苦しい1-6 カなしい
J7- iii々しい
1-8 深苅な
1-9 a和しい
HOやる気がない
1-11抑圧された
1-12かたい2-1 のんびりした
1-1 ゆったりした
2-3 Illやかな
M 和やかな
2-5 のびのびした
2-6 あたたかい
2-7 さっばりした
2-11 冦ちついた
2-9 単純な浮き浮きした晴れ睛れした
元気な
明るい
去しい
うれしい
軽な
おどけた
力弓虹ヽ
やる気がある
関放された
やわらかい
せわしい
はりつめた
滋しい
とげとげしい血な
つめたい
ねっとりした買した

2-10索区
洗されたJ-1 清況な
不沿な
J-2 好ましい
いやらしい
J-3 虹全な
H 若々しい
ふけた
H 心配な
安心な
H 恥ずかしい
恥ずかしくない
H 自ほがない
目ほがある
H 消氏的な
租面的な
5--1 男性的な
女性的な5--2 がさつな
四な&-1 うすっぺらな匹ある
図1 Tl, T2, T3月I」の測定値平均の変化
0-0Tl, △ ー △ T2, X - X T3-28-

化粧が意織性に及ぼす効果の研究

深刻な→おどけたがさつな→優雅な(2) 化粧直後から 一時間後への変化

のんびりした→せわしい
落ちついた→興奮した

有意差のある変化はみられなかった。
(3) 化粧直前から 一時間後への変化

素朴な→洗練された

悲しい→うれしい

清潔な→不潔な(2)

男性的な→女性的な

男性的な→女性的ながさつな→優雅ながさつな→優雅な化粧直後(T2)から 一 時間後(T3)の間で変化のあったものの通りであった。

ねっとりした→さっばりした(3)

同様にして， 内向性の人についてみてみると次(1)

化粧直前から化粧直後への変化

心配な→安心な

暗い→明るい恥ずかしい→恥ずかしくない

やる気がない→やる気がある

化粧直前(Tl)と一

穏やかな→激しい

時間後(T3)の間で変化の落ちついた→興奮したあったもの
しみじみとした→うきうきした

清潔な→不潔な重々しい→軽やかな深みのある→うすっぺらな

素朴な→洗練された(2) 化粧直後から 一時間後への変化
恥ずかしい→恥ずかしくない

自信がない→自信がある
男性的な→女性的な(3) 化粧直前から 一時間後への変化

がさつな→優雅な素朴な→洗練された
自信がない→自信がある

次にMPI尺度により外向ー内向のパーソナ
リティを調べたが， まず外向性のパーソナリティと内向性のパーソナリティで化粧による気分変容に差があるかどうかをみるために， 化粧直後と若一

ほとんど化粧をしたことのない女子学生に化粧

時間後の結果を比較した。 なお， 化粧直前についをさせることによって， ある種の気分に変化が起ては， 外向ー内向で差がなかった。 化粧直後にこることが明らかとなった。 一般的に明る＜ ， 興

ついては， 外向性のパーソナリティの人 (12名）の奮した傾向になり ， 女性的な気分になるといえる。

方が， 内向性のパーソナリティの人 (12名）よりもこのような変化は， 化粧直後と他人と接触した後「おどけた」と「深みのある」という気分になっ（ 一時間後）とでは大きな差異がないことから ， 化ている。 一時間後の結果については， 外向性の人

粧そのものによって引き起こされるといえる。 他の方が内向性の人よりも「うきうきした」 ，人との接触によって新たに引き起こされた気分の

るい」，

「明

「おどけた」という気分が高かった。

変化は， 恥ずかしさや心配， 自信に関する気分でまた ， 外 向 性 の 人 の み について ， 化 粧直前

あって， これは化粧することによって生じた不安(El), 化粧直後(E2), 一時間後(E3)について気が他人と接触することによって解消されたと考え分の変化をみてみると ， 有意な変化のあったのはられる。

次の通りであった。

パーソナリティによって， 化粧の効果が異なる(1) 化粧直前から化粧直後への変化

こともわかった。 まず外向的なパーソナリティの深刻な→おどけた人に比べて内向的なパーソナリティの人の方が ，男性的な→女性的な多様な変化をうけやすいということである。 化粧-29-

直後の変化は内向性のほうが多くの気分で変化し鏡で見てもらい ， 同様にSD尺度にチェック(Tている。 外向的な人は女性的になったといった程2)をした。 そして， その後そのままの顔で自由度の変化であるが， 内向性の人の方が繊細な変化に校舎内で移動してもらい（約30分間）， 再び個を示しており， 明る<. 興奮させるという活動的室にもどってもらって鏡を見ながら今の気分にな効果を持っている。 また． 内向性の人は， 他人

ついて再びSD尺度にチェック してもらったとの接触によっても固有な変化を示しており． 恥(T3)。

ずかしいとか自信がないの気分がプラスの方向に拮変化している。 いずれにせよ外向性の人も内向性実験Iと同様に.

の人も自分にない性格傾向を引き起こす効果を化

3個のSD尺度の間で有意に変化のあったものの形容詞対のリストを上げる

粧はもっているといえる。

と以下の通りであった。
2.2

実験II

(1)

化粧をとる直前(Tl)と化粧をとった直後(T2)の間で変化のあったもの

且直

明るい→暗い

実験Iでは， 化粧の経験のない者に化粧をする
ことによる気分の変化をみたが実験IIでは逆に積極的な→i肖極的な化粧をしている人にそれをとってもらったときに元気な→元気でない

どのような変化が見られるかを調べた。 このこと自信がある→自信がない

によって， 逆の面から化粧の効果を知ることがでうれしい→かなしい

きることが期待された。

安心な→心配な
恥ずかしくない→恥ずかしい左

力強い→弱々しい· 被験者

やる気がある→やる気がない
優雅な→がさつな

日常化粧をしている女子大学生(20-24歳）25
名。

楽しい→苦しい• 化粧用具うきうきした→しみじみした
洗練された→素朴な化粧用具は化粧をとるためと実験後の化粧のためのものである。

クレンジングロ ーション，

女性的な→男性的な
ねっとりした→さっばりした

コットン， 化粧水， 乳液。

せわしい→のんびりした・検査用紙

激しい→穏やかな

化粧による気分の変化の測定は実験Iと同じものであった。

パー ソナリティ検査はアイゼン(2)

ク の EPQ (Eysenck Personality Question­aire) を用いた。

化粧をとった直後(T2)から30分後(T3)の間
で変化のあったもの
いずれの形容詞についても差がなかった。

(3)

• 手続き
化粧を取る手続きは個室で行った。 化粧を取化粧をとる直前(Tl)と30分後(T3)の間で変化のあったものる前に化粧をしている顔を鏡で見た上で その積極的な→消極的な時の主観的感情をSD尺度でチェック(Tl)をし元気な→元気でないた。 その後自分でクレンジングロ

ー

ションと

コットンで化粧を落としてもらった。 その顔を-30-

自信がある→自信がない
うれしい→かなしい化粧が意識性に及ばす効果の研究

恥ずかしくない→恥ずかしい

あったもの

やる気がある→やる気がない

やる気がある→やる気がない

優雅な→がさつな

洗練された→素朴な

うきうきした→しみじみした

女性的な→男性的な洗練された→素朴な

積極的な→消極的な

女性的な→男性的な

恥ずかしくない→恥ずかしい

せわしい→のんびりした

優雅な→かさつな

明るい→暗いせわしい→のんびりした

安心な→心配な

深みのある→うすっぺらな

楽しい→苦しい

内向性パーソナリティの人達の化粧除去の効果

ねっとりした→さっばりしたは以下の通りであった。

次にEPQ尺度により外向性のパーソナリティ(1)(14名）と内向性のパーソナリティ(ll名）に分け，

化粧除去直前と直後に有意な変化のあったものパーソナリティによって化粧除去の効果に差がみ

積極的な→消極的なられるかどうか調べた。

うきうきした→しみじみした

外向性パーソナリティの人達については以下の洗練された→素朴な通りであった。

明るい→暗い(1)

元気な→元気でない化粧除去直前と直後に有意な変化のあったもの自信がある→自信がない
明るい→暗いうれしい→かなしい

積極的な→消極的な

恥ずかしくない→恥ずかしい

元気な→元気でない

力強い→弱々しい

安心な→心配な

やる気がある→やる気がない

恥ずかしくない→恥ずかしい

優雅な→がさつな

やる気がある→やる気がない

楽しい→苦しい

優雅な→がさつな(2)

うきうきした→しみじみしたあったもの

洗練された→素朴ないずれの形容詞についても差がなかった。

女性的な→男性的な(3)

ねっとりした→さっぱりした

積極的な→消極的な

うれしい→かなしい

うきうきした→しみじみした

力強い→弱々しい

洗練された→素朴なせわしい→のんびりした

明るい→暗い深みのある→うすっぺらな自信がある→自信がない

化粧除去直後から30分後の間で有意な変化の
あったもの

(3)

化粧除去直前と30分後の間で有意な変化のあったもの

自信がある→自信がない(2)

化粧除去直後から30分後の間で有意な変化の

うれしい→かなしい
恥ずかしくない→恥ずかしい

いずれの形容詞についても差がなかった。

やる気がある→やる気がない

化粧除去直前と30分後の間で有意な変化の楽しい→苦しい-31-

EPQでは情緒安定ー不安定の次元がある。

ては以下の通りであった。

このパーソナリティの次元について化粧除去の気(1) 化粧除去直前と直後に有意な変化のあったもの分に及ぼす影響を分析した。 有意な変化のあったものは以下の通りである。

元気な→元気でない

情緒不安定な人達(13名）については以下の通り

自信がある→自信がないであった。

恥ずかしくない→恥ずかしい(1)

力強い→弱々しい

化粧除去直前と直後に有意な変化のあったもの洗練された→素朴な明るい→暗い積極的な→消極的な

積極的な→消極的な

安心な→心配な

やる気かある→やる気がない

やる気がある→やる気がない

優雅な→がさつな

うきうきした→しみじみした

うきうきした→しみじみした(2)

化粧除去直後から30分後の間で有意な変化のあったもの

洗練された→素朴ないずれの形容詞についても差がなかった。

女性的な→男性的な
ねっとりした→さっばりした(3)

元気な→元気でない化粧除去直前と30分後の間で有意な変化のあったもの

自信がある→自信がない

恥ずかしくない→恥ずかしい

うれしい→かなしい

洗練された→素朴な恥ずかしくない→恥ずかしい

積極的な→消極的な

楽しい→苦しい

やる気がある→やる気がない

せわしい→のんびりした考

単純な→複雑な(2)

化粧除去直後から30分後の間で有意な変化の
あったもの

(3)

化粧除去直前と直後の間に多くの形容詞対（全体の約半分）についての気分の変化がみられた。

いずれの形容詞についても差がなかった。

このことから化粧に慣れていると素顔に対してや

化粧除去直前と30分後の間で有意な変化のや否定的な感情を持つといえる。 また， 30分他人あったものと接触してきた後の評価も直後の場合とほぼ変わ

積極的な→消極的なりはなく同ー である。 このことは ， 除去した場合

やる気かある→やる気がないは他人の評価はプラスの方向に働かないといえる。

優雅な→がさつな

ただし， 30分間に被験者が他人と接触した状況は楽しい→苦しい

様々なので ， 決定的なことはいえない。

うきうきした→しみじみした

次にパーソナリティとの関係であるが， 外向洗練された→素朴なー内向の次元についてみると， 外向性の人は化

女性的な→男性的な粧除去直前と直後の間に多くの感情の変化がみら

うれしい→かなしいれる。 これは全体の変化と同じであり， 全体の変

恥ずかしくない→恥ずかしい化はほぼ外向性の人の結果が影響しているといえせわしい→のんびりしたる。 30分間の他人との接触によって， 自信のなさ

情緒安定のパーソナリティの人達(12名）についや， 元気の喪失や， 心配は除去されているが， あ-32-化粧が意識性に及ぼす効果の研究

まり直後と変化はない。

全体の結果と同様， 外向性についても内向性につ

内向性の人は， 外向性の人に比較して化粧除去

いても除去のほうがつけるよりも気分に与える影

による気分の変化はやや少ないが、 やはり多様な

響は大であるといえる。 つけるほうは内向性と外感情の変化を示している。 内容も差異はない。 ま

向性で， 例えば前者のほうは興奮など気分の高揚

た ， 同様に30分間の他人との接触についても， やについて外向性と違う効果がみられたが， 除去にや元気のなさが回復した程度であまり変化は見らついては ， 両者の間には顕著な差は認められない。

れない。 これも基本的には外向性の人と変わらな

やや外向性のほうが影響が大きく出る傾向はみら

いが ， 陰鬱な気分が後まで残る傾向がみられる。

れる。

情緒安定ー不安定の次元については， 外向ー

つけるのと除去とで共に変化のみられたのは次内向の次元とさほど違った傾向はみられない。

の通りであった。 変化の方向は両者で逆である。

情緒不安定の人はやはりかなりの化粧除去による

これらは化粧の本質を示すものということができ

感情の変動が見られ， 30分間の対人接触によってよう。

もさほと変化は起こらなかったといえるが， 自信

明るい 一 暗いや元気さについて解消されている部分はある。 情

優雅な ー がさつな

緒安定の人達は不安定の人達よりは， 化粧除去にうきうきした 一 しみじみとしたよる感情の変化は少ないが， 不安定な人達よりは，洗練された 一 素朴な気分の陰鬱さの変化はないといえる。 また ， 30分

女性的な 一 男性的な間の対人接触後には， 心配や自信の喪失は解消させわしい 一 のんびりした
化粧は女性的で優雅で洗練された気分をおこし，れ， 不安定な人達よりは気分の変化は回復される

うきうきした明るい気分を生む。 そしてせわしさ傾向があるようにみえる。

の気分がある。 これらをよくみてみると， 最初の三つは化粧について抱かれている， むしろ観念と総合的考察
研究Iにおいては化粧をつけるのととるのとのいうことができそうである。 次の二つは ， つけた

両方向から化粧が気分に及ぼす影響を調べたのでり除去したりすることによって生ずる直接的な気あるがつけるのと除去することの間には差があ分であろう。 せわしさは日常生活で外出時に化るようである。 すなわち ， つけるよりは除去する

粧をし， 家にいるときにはつけないといった生活

ほうが気分に与える影響が大きい。 つけるほうは，

習慣からくるものであるように思われる。

主として明るさの気分に関係しているが除去の

3. 研究II

ほうはその他に， やる気がない ， 元気がない， 消極的といった動機づけに影響し， 心配自信がな
い ， 恥ずかしいといった不安傾向を起こしている。

目

的また， つけるほうは， 対人接触によって興奮傾

今までは化粧をする本人の気分に与える影響に向がおさまるなど多少とも影響を受けているがついて調べてきたが次に他者から見た化粧につ除去のほうは全くといっていいほど変化はなく，いて調べる。 化粧はする人によってかなり異なっ

化粧そのものの影響が気分に反映するといえる。

た印象を与え， 知的な ， 華やかな， 洗練されたな

パーソナリティが及ぼす効果についてみると ，どのポジティヴな印象を与えることもあれば派尺度が異なるので厳密にいうと比較はできないが，

手な ， けばけばしい， いやらしいなどのネガティ

MPI, EPQともアイゼンクの作成したものであヴな印象を与えることもある。 ここでは「高校生

り内容的にも基本的な違いはない。 その結果は ，の化粧」について， 女性がもつ印象を調べた。 化-33-名）の三群に分類された。

粧と対比させるために服装や髪型素顔についても調査した。 また， 高校生と比較するために大学

1. 高校生のファッションについて生の化粧についても調査を行った。

女子高校生が休日に外出するときにふさわしい左ファッションについて， 髪型化粧， 服装の三つ· 回答者にわけて分析した。
(a)髪 型

20代から50代前半の社会人の女性および女子

髪型全項目の許容度を図2.1に示す。脱色，

大学生91名を対象に調査を行った。

染髪に強い抵抗感があり，・調査用紙

パー マヘアには多少抵抗感があることがわかる。

調査用紙は三部構成になっており， 一部は回答者本人の化粧経験と化粧の好みについて聞いまた， ロングストレ ー トヘア， セミロングスており ， 20項目ある。 二部は高校生のファ ッ

トレ ー トヘア ， 脱色染髪に関しては世代間でションについてで休日に女子高校生が外出する

許容度に差がみられた。
社会人Aの方が社会人Bよりも許容度が低のにふさわしいと思う髪型・化粧• 服装についての項目である。髪型については髪型や髪の結い項目を以下に示す。

び方など12項目についての許容度 ， 化粧についロングストレ ー トヘアては化粧の許容度化粧の種類別の許容度， 化

セミロングストレ ー トヘア粧機会などについての35項目 ， 服装については

社会人Aの方が学生よりも許容度が低い項
目を以下に示す。

スカ ー ト丈 ， 靴の種類 ， アクセサリ ー について

ロングストレ ー トヘア

18項目の許容度である。三部は， 形容詞群で ，「素顔」，「女子大学生の化粧」，

セミロングストレ ー トヘア「女子高校生の化粧」に関して聞いており， 形容詞群それぞ脱色

れ28項目である。

染髪(b)化 粧

・手続き
調査場面は ， 社会人は早稲田大学工クステン

女性が化粧を始めるのに適すると判断された

ションセンタ ー の講義にて行った。講義終了後 ，

年齢は， 18.3歳であった。この結果では世代に受講生に調査用紙を配付し， その場で記入してもらい回収した。その他の社会人は 調査用紙を渡して記入を求め， 郵送にて回収した。
学生は学内にて四年生の女子学生に配付し，その場で記入してもらい回収した。 また， 他の女子大学生にも調査用紙を渡して記入を求め，郵送にて回収した。

ロング (P)
セミロング (P)ショ ー ト(P)脱色染娑("7マニキュ7)
三つ編み

..;:
おだんし
ポニ ー テ ー ル
一つに結ぶ
ロング (S)
七ミロング (S)桔
結果を分析するにあたり， 社会人を年齢によって社会人A(35歳�56歳）， 社会人B(21歳�34歳）というように分類した。最終的に全回答者は社会
人A群(28名） ， 社会人B群(28名） ， 学 生群(35-34-

ショ ー ト(S)

-2.00

-1.00

0.00

1.00

図2.1 髪型全項目の許容度
注：＋は非許容 ， ーは許容である

2.00

化粧が意識性に及ぼす効果の研究を図 2.7に示す。 スカ ート丈がくるぶしまでとよる差はみられなかった。 また， その理由としいう項目とかかとの高い靴の項目とアクセサては高校を卒業し， 社会へ出てもおかしくない
年齢であることが 番多くあげられていた。 そリ ー のアンクレットの項目に抵抗感があるがの他には， 制服には化粧が似合わないこと， 素

全体的には許容されている項目が多い。

一

社会人 A の方が社会人 B よりも靴のロ ー

顔でも十分に綺麗であることなどが多くあげら

ファ ー， ネックレス， イヤリングについて許容れていた。

度が有意に低く， 社会人 A の方が学生よりも化粧の許容：女子高校生が化粧をしても良い

ネックレスについて許容度が低かった。 ハ イ

かという質問に対しての回答の平均値は， 7段
階評定で3.53であった。 世代間での有意な差は

ヒ ー ルに関する二項目についてはかなりの抵抗

みられず， 全体的に「やや悪い」という結果と感がみられた。

なった。
化粧の種類による許容：次に， 化粧の項目ごとに許容の程度を調べた。 その結果， リップク
リ ー ム（無色）， リップクリ ー ム（色つき）， コロ

2. 化粧に関する形容詞について「素顔」， 「女子大学生の化粧」 ， 「女子高校生の化粧」の三要因についての印象をそれぞれ28項

ンの三項目だけが「良い」方向の回答で， その目 からなる形容詞群に5段階のSD法で答えても他の項目は全て「悪い」方向の項目であった。

らい， 結果を分析した。 その平均値を図2.8-図

結果を図 2.2-2.6に示す。 図 2.2-2.6 は各化粧2.10に示す。

社会人 A の方が社会人 B よりも有意に高かっ項目の好みの平均値と合わせて表示しており，

この結果から， 許容の程度は回答者自身の好みた項目は「女子高校生の化粧」に対する印象のけに影響を受けていないように思われる。

ばけばしいであった。
社会人 A の方が学生よりも有意に高かった項

また， 各化粧品について色ごとに分析を行ったところ口紅 マスカラ， マニキュアについて

目は「素顔」に対する印象の， 色っぽい， 女っぼ

は色によって有意差が見られた。 どの化粧におい， 「女子大学生の化粧」に対する印象の， けばいてもピンク系のものが他の色よりもやや抵抗

けばしい， 「女子高校生」に対する印象の， けば感が少なかった。 口紅とマニキュアに関しては

けばしい， 不気味な， であった。

ピンク系が赤系， ロ

ーズ系， プラウン系それぞ

学生の方が社会人Bよりも有意に高かった項目

れより有意に抵抗感が少なかった。 またマスカは「女子高校生の化粧」に対する印象の， 華やか，ラに関しては透明が茶色， 青色紫色よりも有であった。 さらに， 全要因と各要因それぞれにつ

意に抵抗感が少なかった。

いて因子分析を行った。 その結果，化粧機会についての許容：高校生が化粧する機会に関しては， 「毎日する」ではかなり「悪い」とする回答が得られ， 一方「特別なときの

因子 1

健康的で明るい若々しさ

因子2 いやらしく見苦しく不健康
因子3 大人の女性の華やかさ色っぽさみする」では「良い」方向の回答が得られた。
また，

全要因については，「毎日する」では社会人Aの方が学生よりも有意に抵抗感が強く， 「特別なときのみする」では社会人Aの方が社会人Bよりも有女子高校生の化粧については，
因子 1

不快でだらしなく不自然

因子2 健康で清潔な明るさ

因子3 知的できれいな女っぽさ

意に抵抗感が弱かった。

女子大学生の化粧については，(c)服 装女子高校生の服装の各項目についての許容度-35-

因子1 不快でけばけばしいいやらしさリップ無色
リップ色つきC ー ズ系マニキニア

赤系口紅

プラウン系マニキニア

一

,9

マ

ニ
キ
ニ

ア

マ

ニ
・
一
4
ニ

系
ク
ン

ピ

ロ ー ズ系口紅

ア

ー・
ー 2・
・

系
ジ
ン

ォ

レ

プラウン系口紅'l00

ピンク系口紅

1.00

-1.00

2.00

オレンジ系口紅

-2.00

-1.00

0.00

1.00

2.00

図2.5 化粧品の好みと許容度
注：＋は非許容 ， ーは許容である

図2.2 化粧品の好みと許容度
注：＋は非許容 ， ーは許容である

1 9

99 9 ,‘

戸ロ ニ ［ 三
-1.00

0.00

1.00

J g

-2.00

9

ヤ

ド

ゥ

4、

ド

シ
系
ー
ル
プ

ゥ

シ
系
ン
ウ
ラ
プ

― ―

,
99 .

ド
ャ
シ
系
ク
ン
ッー

ゥ

ファ／デー コノ：口戸

_

ド

ゥ

ヤ

ド

ゥ

シ
系
ン
ー
リ
グ

図2.6 化粧品の好みと許容度
注：＋は非許容 ， ーは許容である

00
_
1 I.

2
・

゜
。

ヤ

シ
系
シ
ン
レ
オ

2.00

一

ミニ丈：
膝上丈，
膝下丈！

図2.3 化粧品の好みと許容度
注：＋は非許容， ー は許容であるとー�ル(0-2cm) I

スニ ー カ ー ！
ロ ー ファ ーネックレスI
ー
ノャリンク
ピアス！
指輪I
プレスレットl�-t
ふくらはぎJ.-.ーよ.'
くるぶし丈Iーヒ ル (3-Scm) Iと ー ル (5cm-)
バンプスー
ハイ：：： ー ルi
ァンクレッ

行マスたラ

�J

紫マスカラ

-2.00

1.00

I
-2.00

2.00

'I r ''
-1.00

0.00

1.00

図2.7 服装全項目の許容度
注：＋は非許容 ， ーは許容である

図2.4 化粧品の好みと許容度
注：＋は非許容 ， ーは許容である

-36-

2.00

化粧が意描性に及ぼす効果の研究

女っぼい
大人っ,�い

きつい

華やか

不快な

色っぼい

くだらない

-2.00

2.00

見苦しい
不自然な

図2.10 形容詞の対象別グラフ
注：＋はあてはまる， ーはあてはまらない

汚ない

因子2 知的で上品で健康的

いやらしい
ばかな

因子3 明る＜華やかで若々しい女っぽさ·�、

素顔については，

コぃ

だらしがない

□」図2.8 形容詞の対象別グラフ
注：＋はあてはまる ， ーはあてはまらない因子l

不快でけばけばしいいやらしさ

因子2

上品で明る＜魅力的な女っぼさ

因子3

だらしなさと大人っぼさとなった（表1-4)

竺
女性が化粧を始めるのに適した年齢を18歳前後と答えている人が圧倒的に多い。 また． 化粧を始める年齢は20年前と現在とでは差がなく． 他の項目に比べて化粧の項目は世代の差があまりみられ

淀鼓的なかった。 このことは ， 女性は世代に関係なく，清潔な

高校生の化粧に対して同じ認識を持っていること

上品なが考えられる。
また． 他のファッション， つまり髪型• 服装のさわやかI

許容範囲と比較すると． 髪型・服装よりも化粧は

活動的I
涼 しい

許容範囲が狭く． 不自由であることが示された。

I

i _
＿
＇
Iい
い
な
的
し
る
明
々
力
魅
若

高校生にふさわしい化粧として認められている-2.00

ものはリップクリ ー ム（無色） ． リップクリ ー ム（色つき）． コロンのみであった。 特にアイシャド
ウ． 透明以外のマスカラは色に関わりなく抵抗感
-1.00

2.00

図2.9 形容詞の対象別グラフ
注：＋はあてはまる ， ーはあてはまらないが強く． 口紅 マニキュアに関しては赤系 ロ ーズ系， プラウン系といった落ちついた感じの色に抵抗感が強く見られた。 このことから顔に色をつけることに． より抵抗感があるように見受けられ

-37-

表1

全要因における形容詞全体の因子負荷量
因子I

因子2

因子3

共通性

腱康的
消潔な
上品な
不自然な
明るい
さわやか
知的な
活動的
!f(;I'.!ナ(;I'.しい
涼しし、
きれい
若々しい
魅力的な
だらしがない
見苦しい
老けた
不気味な
きつい
汚い
いやらしい
ばかな
不快な
くだらなし＼
恐い
大人っぽい
華やか
色っぽい
女っぼい

. 8725.8581. 6494-.5300.6589. 8547.5598. 7554-.5414.7659. 5994. 7899. 6856-. 1340-. 2576-. 3549-. 2926- 2821-. 1424-. 切06-.3815-. 4273-. 3916-. 1832-. 1885-. 0152. 2367. 1958-.2688-.3150-.2274. 4313-.2081-. 3356＿ ． 勿51-. 2315. 4460- 1616-.'l796-.2862-. 2476. 5816.7371. 5897. 8231. 6894. 7354.8130. 7874. 7720. 7358. 7561. 0834. 0761-. 0237-. 0121-. 0751-.0116
3661
.0158
.3273
. 0577.4856.0639. 3586-. 0573.4047. 0605. 3679-.1869-.1032. 1291-. 0535.1804-. 1076. 1289. 0103.0488-. 0611-.0071. 7137. 8439.7382. 72098391.8356. 6075. 4672. 5845. 8165. 6248. 6283. 6206.6583
6013. 70966667. 3911. 6204. 4904. 7660. 5875. 5726.7508
7656. 78[0
.6985
.6053
.5518
.7182
. 6016. 5882

寄与率 m

27. 4861

25. 3915

11. 9406

累積寄与率m 21. 48Bt

52. 8776

64.8183

表2

表3

因子 l

因子2

因子3

共通性

1ナ(;!'.Iナに［しい
見苦しい
老けた
不気味な
きつい
汚し、
いやらしい
ばかな
不快な
< tごらなし、
恐い
健康的
清潔な
上品な
さわやか
知的な
活動的
涼しい
不自然な
明るい
大人っぼい
だらしがない
華やか
色っぼい
きれい
女っぼい
若々しい
魅力的な

.5282
. 6946.6226.8823. 7681.7373. 8280. 8556.8301. 7387. 7102-.1136-.1960- 1019- 3037-. 2285-. 1344- 2735.2648
0071-. 0944. 4591. 2382.0871- 1962.0372-.2611-.1155-. 1405. 1307-. 2572-. 0853- 0120-.1838- 1974- 2637- 0752-.2032-.0346. 7929. 7732.7835. 5847. 6225. 6903.5129. 0214. 4305. 2189
.1264
3381
3058
3830
.2728
. 4539. 4015-.0213-.3357- 1401-.0543. 0548-. 0522. 1273. 0882-.1819-. 2016-. 0436. 1348. 2674. 2817
4862
5027
2208
.1534
-. 4073. 4899.5452-. 5118.6087. 7287. 6687. 7716
.4700
.6684

2992
.6122
4734
.7887
5932
5801
.7407
8094
.7277
.6276
. 5075. 6597. 7078. 7037
.6706
6924
5433
3614
2365
4254
.3541
4887
. 5415. 6322
.6324
.6712
.4951
.6213

寄与率（％）

24. 9729

16.6289

16.2438

累梢寄与率(%) 24. 9729

41.6018

57. 8456

女子高校生の化粧要因における形容詞全体の
因子負荷呈
因子 l

因子2

因子3

共通性

不自然な
｀
だ らしがなし＼9ナに('ナに［しい
見苦しい
老けた
不気味な
きつい
汚い
いやらしい
ばかな
不快な
くだらなし＼
恐い
健康的
清潔な
上品な
明るい
さわやか
活動的
涼しい
若々しい
魅力的な
大人っぼい
知的な
華やか
色っぼい
きれい
女っぽい

. 4782. 6654. 4802. 8063. 5651. 8312. 6535. 7408. 8520. 7962. 7649. 7582.7770- 2011- 2487- 1624-. 1610-. 2431- 0407- 1237-.0993-. 1906. 0700-.2956- 0374-. 1554-.2187-. 0282-.1441. 020[-. 2451-. 1990- 2559- 1642- 1347- 0616- 1131-. 2121-. 2422-.1723- 1890. 8572.8216. 6765. 6869. 7802. 6922. 7394.8135. 5537
.1467
.4415
3180
2603
. 4411. 1811.0506
0955-. 08ll. 1758-.2564-. 1502-. 0695. 0561-. 0057
.0826
1729
1378
-. 0288- 1111-.0809- 3236-.3268-. 2905-. 1845-. 1596- 1240-.5163-.6300-. 4971-. 7072-.7851-.5430-. 7979. 2520
4522
2972
7206
4506
.7405
. 4500. 5557. 7387
6859
.6735
6235
.6403
7875
.7435
.5888
.6042
7323
5148
5874
. 6871. 6095. 4233
5294
.6027
.7083
.5373
6703

寄与率（％）

25 3737

21.3289

累積寄与率(%) 25 3737

46.7026

女子大学生の化粧要因における形容詞全体の
因子負荷量

表4

素顔要因における形容詞全体の因子負荷母
因子 l

因子2

因子3

共通性

けばIナIi.しい
老けた
不気味な
きつい
汚い
いやらしい
ばかな
不快な
くだらなし＼
恐い
値康的
清潔な
上品な
明るい
さわやか
知的な
活動的
涼しい
きれい
女っぼい
若々しい
魅力的な
不自然な
大人っぼい
tこらしがない
華やか
色っぼい
見苦しい

. 3628. 5118. 6601. 6343. 6357. 8270. 7661. 8034. 6346. 7260-. 1043- 2114- 1538-.1452- 2218-. 0782- 3163-. 1380-.10241263-.3310-. 1829. 1900-. 1556.3971. 0350.1667. 4255- 1748- 2618- 2358-.0224-.2240- 03[8- 2037-.2189- 1547- 0139. 5238. 6732. 5002. 6284.7215. 5862. 5945.4819. 6335. 3492. 5259. 6140- 28652675- 28203006
2125-. 2262- 0885- 3483- 0082.0091- 0777. 0541-. 0523-. 1844-.1001-. 0737- 0176-. 0932-. 0787.0729. 0546- 1519. 04320022
1523- 1245- 0117-. 0846-.4499-.5401-. 5126-.4283-. 6106-.5048. 1700. 4517. 4914.4029.4603. 6879. 6311
7274
4367
.5327
. 28555066. 2814
4213
.5727
.3728
4553
2513
4350
1534
. 3863
4176
3206
3874
4999
2750
4316
. 4871

12.6797

寄与率（％）

19. 0761

16.9247

6. 6172

59.3823

累積寄与率(%) 19.0761

36.000842.6180-38-

化粧が意俄性に及ぼす効果の研究た。 特に目の周辺の化粧は， 完璧な化粧をしていいという因子， 清潔で活動的でさわやかであるとるように感じられるためか特に抵抗感が強かった。

いう因子． 大人っぽくてしかも若々しく華やかな女子高校生の化粧に非許容の回答をした理由の一という因子が抽出された。

つに ， 若いうちは素顔がきれいだから余計なこと

高校生と大学生の化粧に関してほぼ逆の印象がはしなくてもよい ， というものがあった。 それゆ与えられた。 しかし， 高校生と大学生の化粧に共えに化粧をすることによって素顔のイメ ー ジから通しているのは大人っぼさであった。 このことか離れてしまうことがより抵抗感を強くしているの

ら化粧によって人は大人っぽくなるとみられていであろう。

ることがわかる。 しかし， 「大人っぽい」という非許容の位置にありながらもピンク系 オレン

同じ因子について高校生では否定的な結果が現れ

ジ系の口紅， マニキュアは他の項目に比べると明ており． 高校生では化粧が良い意味では受け取ららかに抵抗感か弱い。 これらの色は暖色系に属し，れていないことがわかる。 これは， 化粧は「大オレンジは温かさ ， 家庭的 陽気な， 元気等のイ人」のものという印象が強く ， 高校生ではその 年

ピンクは女性らしさ ， 化粧， 幸せ，

齢に達していないからだと考えられる。 化粧の許

やわらかさ等の， どちらかといえば女子高校生に

容年齢についての質問に ， 高校を卒業して社会的ふさわしいと考えられるイメ ー ジがある。 また，に「大人」として認められる年齢がふさわしいと同じ暖色系でも赤系は代表的なセクシ

答えた人が多いことからも化粧は「大人」のもの

メー ジがあり ，

ー

カラ ー

で

あるので女子高校生の化粧に関しては抵抗感が強という印象が強いことがうかがわれる。
一くなっているのであろう。 ビンク系に関してはさらに女性の肌の色により近いということで， 化粧ー

方大学生の化粧については， 18歳以上である

ためかやや肯定的に捉えられている。 大学生は化ジからあまり離れないので粧をすることによって， 知的さ， 上品さ． 活動的はないだろうか。 この理由により， ピンク系は他であり華やかになる， といった肯定的な要素と社の色に比べるとやや抵抗感が弱いと考えられた。

会的に認められるための必要条件があてはまるこをしても素顔のイメ

また ， 「女子高校生の化粧」 ，ー「女子大学生のとが示されている。

ジを比較すると ， 「女子高就職して会社に入っても全く化粧をしないこと

校生の化粧」は形容詞による評価の因子分析の結はある意味で礼儀に欠け． 社交的ではないとみな果から ， 不自然で不快でくだらなく， しかし汚さされる。 しかし化粧の仕方によっては水商売の女やいやらしさはないという因子， 不健康で魅力的性のような印象を人に与えることになる。 このよ

ではなく若々しさがないという因子， 大人ぶってうに化粧は社会的なイメ ー ジと性的なイメ ー ジといて知的ではなく背伸びしているという因子が抽を持ち合わせている。 今回の調査結果からは社会出された。 それに対し「女子大学生の化粧」から的なイメ ー ジが強く出ているように思われる。

化粧」に対するイメは多少けばけばしいがいやらしさや不快さはな-39-

胆汁酸生合成のメカニズムに関する研究
東京工業大学理学部

藤

本

善

徳

Cholic acid biosynthesis from cholesterol involves C-24/C-25 bond cleavage. A pre­cursor of the bond cleavage reaction is 3 a , 7 a , 12 a -trihydroxycoprostan-26-oic acid
(THCA) and this acid is converted into cholic acid by a mechanism similar to that of the/3 -oxidation of fatty acids. This research has focused on the stereochemical aspects ofthis C-C bond cleavage reaction and led to the following findings.
Evidence of the enzymatic formation of 24-oxo-THCA from△ 24 -THCA has beenobtained for the first time by the use of "C as a tracer. All of the four stereoisomers of
3a, 7a, 12a, 24-tetrahydroxycoprostan-26-oic acid (TeHCA) were formed when
THCA was incubated with rat liver mitochondrial fraction. In contrast, (24R, 25R)­
THCA was formed when 700g supernatant fraction was used for incubation. The (25R)­
stereochemistry is noteworthy, since (3S)-hydroxy intermediate is known for /3-oxida­
tion of fatty acids. 27-Nor analogs of THCA and△ 24-THCA were also incubated withthe mitochondrial fraction to give a mixture of (24R)-and (24S)-24-nor-TeHCA.

1. 緒

言

的立場からその詳細について解明を試みることにした。
我々は先に ， この反応の中間体と考えられる

コ ー ル酸(1)に代表される胆汁酸類は肝朦においてコレステロロールから生合成される。 コレステ

3 a,

3a ,

7a.

7 a,

12 a, 24-tetrahydroxycoprostan-

26-oic acid (TeHCA) (3)の24位， 25 位に関する4

ー ルがまず骨格における水酸化等の変化をうけ，

12 a -trihydroxycoprostane となり，さらに側鎖末端の酸化をうけて3a, 7 a, 12 a trihydroxycoprostan -26-oic acid (THCA) (2)となり， これが'/3 ー 酸化タイプの反応で側鎖の ��,�喜 ご。、青ご

C-24と C-25 の間で切断をうけ，

コ ー ル酸が生ゞ合成されるとされている I) 。

TeHCA(3)

ーゞ勾

COCH

’’ ’

24-oxo-THCA (5)

H

H

，
゜

3)

COCH

’’

゜
゜c

炉-THCA (4)植物ステロ ー ルのコレステロ ー ルヘの変換機構圧

0心

-

ミH

我々はステロイド代謝における炭素 炭素結合切断のメカニズムの研究（例えば， 毘虫における微生物による植物ステロ ー ルの側鎖切断の機構

ooH

y

一

を解明してきた）の 一 環として， 本炭素ー炭素結

cllolicacid (1)合切断を取り上げ， どのような立体化学的制御のFig. 1

もとに反応が進行しているのかを含めて有機化学

Studies on the biosynthesis of bile acid
Yoshinori Fujimoto-40-

B iosynthetic pathway of chol ic acid
The COO H residue can be regarded as
COSCoA in the biological system.

胆it酸生合成のメカニズムに関する研究

2 I 3. 実験および結果
2/3. 1 . 13C標識TH CA(6)および△ 24_
TH CA(7)の合成

従来の研究では胆it酸の生合成研究は放射性同

H
02
c

た。

Fig.2 Synthesis of'3C-labelled△ 2'-THCA and
THCA
Reagents:i, [P 届 PCH(''CHJ)CO2 Me] +Br ―(9), n-Buli; ii , H2 /10%Pd-C; iii, KOH­
MeOH

2/3.2. ラット肝無細胞酵素系における△ 24 _THCAの27-nor - 3a, 7a, 12a­l4

位元素( C)を用いて行われてきた。今回新し い

tr i -h yd rox ycop rostan -24-oneへ

13
アイデアとして初めて我々は安定同位元素( C)

の変換

24

-THCA を 合成し ，上で合成した13Cー 標識体（各1.0mg)をラット肝これ らを インキュベートすることにより ， 予想さ

無細胞酵素系(10,000g上清 ， Tris緩衝液pH8.5.

れるTeHCAおよび24 オキソTHCAを含めて

Mg 2 +,

で標識したTHCAおよび△
ー

3

2

゜cH

H

択性の欠如は注目に値しよう。
この様な背景のもとに以下に示す実験を実施し

ごHご 向

"f
.

酸に変換されることを報告した 5) 。 この立体選

H

M8

Ho i-

H⑧

ドリアとインキュベートすると ， いずれ もコー ルA

次いで この4種の異性体をラット肝ミトコン面―

4

学は訂正を要することが明らかとなった） ) 。

b

確定した（この結果以前に報告されていた立体化

ご

三種の立体異性体の合成法を開発しその立体配置を

AT P.

CoA, NAD を添加蛋白量10

代謝物を1 C-NMRで分析するこ とに した。 ( cmg/叫）と37.5℃, 1時間インキュベートした。 エの導入部位は合成の簡便さを考慮して27位とする

タノ ー ルおよび10%NaOHを加え5時間還流した。

ことにした。[27 - 13CJ-THCA(6)および[27- 1 3CJ

酢酸エチルで抽出し， 濃縮残i査をLH- 20(メタ3ヽー△ 2 1 -THCA(7)を目的化合物とし， Fig.2に示す方法で合成することができた。す なわち， アルデヒド(8)を原料とし 13 c標識イリド(9)と反応させ，不飽和エステルUO)を得た。これ を加水分解し(7)を得た。また， UO)を接触還元後 ， 加水分解し (6)を得た。
(7)の 13 C-NMRスペクトルはo 12.37および21.02に強いビ ー ク を示し ， △ ” に関してトランス体が95%シス体が5% の混合物であった。 (6)は o 17.55の混合物であった。 さらに ，ODSカラムによるHPLCのTHCAの25位立体異性体の溶出順序は

30

杓g.3

報告されているので， 本サンプルを同様な条件で分離し NMRにて27位が o 17.55に観察される異性体が25S体 ， 17.75のものが25R体とアサイン
できた。

-41-

25

20

15

10

1'C-NMR spectra(in part) of incubation
product
U pper:derived from [ 1'CJ一△"-THCA(7).
Lower:background from incubation
medium. Asterisked signals at 8 21.02,
12.37 and 8.16 are due to (Z) -and(E) - C27 carbons of (7), and a new carbon, re­spectively.

5

および17.75に強いシグナルを示し 25位の R/S体ノ ー ルで溶出 ）を通した後， 1 3C-NMRを測定ししていた。

た。未反応の原料シグナルの他に ． 新たなシグナ

さらに ，

ルが

13

c標識△

24-THCAのインキュベー ション

が（酵素的に酸化されて）エチルケトン体を与える

6)のかを ， 標識されていな いTeHCAを同様な条件

c標識の化学的環境から ，でインキュベーションして調べたところ，いずれ

サンプルに観察された 。
この化学シフトと

13

TeHCAの4種の立体異性体の いずれ

このシグナルは 27-nor-3 a. 7 a. 12 a -trihy­の異性体からもエチルケトン体⑪を与えることがdroxy-coprostan-24-one仰の 26位の炭素に帰わかった。
THCAを基質としたインキュベ ー ションでは属されると考えた。事実合成した標品のC-26

エチルケトン体のC- 26のシグナルは観察されなは全く同じ化学シフトを示した。

かった。

さらに ， 先の濃縮残濱を p-TLCにて標品ケトンに相当する部分を分離しトリメチルシ

リルエ ー

"
'
"
�喜

ご ご向

テル誘導体としGC-MSにより分析したところ ，

2 / 3. 3. 24-0xo-3ct., 7ct., 12a-trihydroxy

保持時間が標品ケトンと同じ位置にピ ー クを示し，-copro stan-26-oic acidの化学的安そのマススペクトルは標品より1マス高くシフト

定性

g!

2

), M

゜cH

Et

召"'"

〗H

柘唸：

/

CDl,lllen

夏

上の実験結果は，△ 24-THCAが酵素反応(hy­dratase,oxidase)にて24-oxo-3 a, 7 a, 12

a -trihydroxycoprostan-26 -oic acid(またはそのCoAエステル ）に変換された後に化学的に脱炭酸したと考えられるので，標記化合物の合成を試みた。
コ ール酸トリホルミルエステルU2)をイミダゾラ
イドとして活性化しマロン酸の半エチルエステルのマグネシウム塩と反応させケトエステルU3)を得

Fig.4 Attempted synthesis of 24-oxo-THCA(5)た。これをKOH/MeOH で加水分解した。このトを示す。しかしながら ， この混合物を抽出に先00〇® ◎ 0

,
x
'
x’
'
,
＇x
x,
'
x’
↓'
'

12 3 4 5 6---反応溶液は逆相TLCでケトカルボン酸のスポッ
立ち中和するために， 2N-HC1または飽和NH4Clを加えてTLCを追いかけると，徐々に上記のスポットは消えて新たにエチルケトン体⑪に相当
するスポットが現れてくることがわかった 6 > a@2/�.4. TeHCAの生成過程における立体化学

1 : After comletion of hydrolysis
2: After addition of 1 eq. of sat. aq. NH4 CI
3: After addition of excess sat. aq. N出Cl
4: authentic ethyl ketone {11)5: THCA (2)
6: cholic acid (1)Fig.5 Chemical stability of 24-oxo-THCA(5)TLC was performed by Merck RP18-F254
plate with MeOH-H,0(9:1) as a developing
solvent.

について
2/3.4.1. THCAのインキュベ ー ション
既に， THCAがラット肝の無細胞 系で cholic
acidに変換されることは実験的に確かめられている。また，この無細胞酵素系で NAD非存在下
では ，

TeHCAが微量生成することも報告がある。

今回 ， 4種の TeHCAの立体異性体のうちいずれ-42-

胆汁酸生合成のメカニズムに関する研究: (A) From (25S)·THCA

るという結果は他のグル ー プによっても報告されている a> a
THCAの25位の立体異性体のうちいずれが代謝されるのかに関しては， われわれの上記の結果
は両異性体とも変換されることを示している。 最
近 ． 同様な趣旨の報告がなされた。
'I(D) From (25R)-THCA

i
.

=

. :;=

[27- 13C]-THCAのインキュベーションでは25S体(o 17 .55)の方が25R体(017.75)より多く回収される。
2/3.4.2. (E)およ び(Z)―△ 24-THCAの'"'，インキュベ ー ション△ 24-THCAには(E)体および(Z)体がある。
このうちいずれがコー ル酸に変換されるかをラッ
卜肝の無細胞酵素系で調べた。
NADを添加して(E)体をインキュベ ー トするとTeHCAの生成は認められず ， コー ル酸の生成が 確 認 さ れ た 。 しかしながら，CZ)体からはー

TeHCA. コ ル酸の生成はともに認められな
心
(min)

48

かった。 現在， 得られたTeHCAの立体化学につ
32

心
(min)

48

いてTHCAを基質とした場合と同様な結果か否Fig.6 HPLC analysis of TeHCA(3) formed upon
incubation of (25S)-and(25R)-TH CA(2)(A) and(B):W1th mitochondrial fr.;(C)and(D) with 700g sup. Analysis was performedin the form of p-bromophenacyl ester,using an ODS column with MeOHー出0 sys­
tern as an eluting solvent.

か確認しているところである ” 。
2/ 3. 5. ハイブリッド基質， 27- nor-THCA
および△ 24-27-nor-T HCAの代謝物
脂肪酸のB酸化では ， 3Sの立体配置を有する
B ー ヒドロキシカルボン酸か中間体であることが知られている。今回 の24R. 25R体とはB 位の立が生成するのかを調べた。
まず， ラット肝のミトコンドリア分画を用いて体化学が Rであり脂肪酸の場合と逆である。 そNAD非存在下で(25R)ー および(25S)-THCA

こで， THCAの炭素を 一 つ取った， 27-nor­

をインキュベ ー トし生ずると考えられるTeHCA

THCAおよび△ 24 -27-nor-THCA(14およびー プロモフェナシルエステル誘導体として15)を 合成し ， これから生じる27-nor-TeHCAHPLCにてしらべたところ ， 4種のTeHCA異性U6)の立体化学を調べてみるのは脂肪酸のB酸化のをp体がいずれも確認された(Fi g.6)。 また ， このイ

酵素系と胆it酸生合成系の酵素系の比較の点からンキュベーションで△ 24-THCAも生じている

大変興味深い。

ことが認められた 7 l。
次に，

まず ， これらがラット肝の無細胞酵素系（ミト

700g上清を用いてNAD非存在下で同コンドリア画分， NAD添加）で基質となり得 る様な実験を行った。 Fig.6に示すとおり ， (24R.

か を 調 べ ， (14)は 7.7 %05)は17 .5%の収率でcholic25R)-TeHCAが主に生成することがわかった。

acidに変換されることを示した。 この 変換率はCrudeな無細胞酵素系で(24R, 25R)体が得られむしろ対応するTHCA等よりもよい値であった。

-43-

直�

二�"-�°'c�
Ho' 'oH
H

From 27-nor-THCA

\

(16)

(15)

(14)

H

H CA
(

文邸

/

戸 OOH

Fromぷ'-27-nor-THC A

’’’ ’

文6ooH
． ．． ．
-THCA＇＇△△'"·THCA (4)匹

Not metabolised

700g

supernatant 1,:

戸忙H

�OOH�OOH
�

’

28

Fig.7

’

40 (min)

戸

'

28

I

グ

H
� CA(

�

OOH=⇒

三

24-oxo-T C (5)H A'

40(mn)

�OOH

↓

己
' .

Charcterized

as this ketone (11)HPLC analysis of 27-nor-TeHCA(16)formed upon incubation of 27-nor-THCA(14) and△ "-27-nor-THCA(15) withmitochondrai I fr. Analysis was perfomedin the form of p-bromophenacyl ester, us­ing an ODS column with MeOH ー 出0 sys­
tern as an eluting solvent. Authentic(24S)-and(24R)-27-nor-TeHCA were eluted
at 29.0 and 36.4 min, respectively.

Fig.8 Summary of the Present Work*When mitochondrial fr. was employed,
four stereo isomers of TeHCA were formed.

27-nor THCAを， ラット肝無細胞酵素 系のミトコンドリア分画を用い NAD 非存在下にイン
キュベ ー トしたところ ， Fig.7に示すように24位の2つの異性体27-nor-TeHCAU6lが共に生成す
ることがわかった。こ れはTHCAを基質とした気にすることなく実験を行うことができる以外に ，代謝物を分離することなく. 13C-NMR により生成物の構造を調べることができる。この利点を生かして， 今まで未報告の24-oxo-THCAが△ 四-THCAから生成することを間接的に示すこと場合 に見られる結果と同様である 9) 。
70 0g上清によるインキュベ ー ションは現在検ができた。
なお， 27-nor-3 a, 7 a, 12 a -trihydroxy-coprostan -24-oneについて， ウシガエルの胆討中である。

4. 考 察胆汁酸の生合成におけるB酸化類似の c-c 結合切断反応 に関して有機化学的立場から種々検討を加えた。
今 ま で に 行わ れていた放射性同位元素 14 c によるトレ ー サー実験でなく， 安定同位元素 l3 c によるトレ ー サ ー 実験を初めて胆汁酸の生合成の研究に導入した。通常の実験室で放射能による汚染を

H

8H

亜から単離の報告があるが 10 ', 24-oxo-THCAから2/3.3. に示したように化学的分解により生じたものと考えられる。
最近 ， このf3酸化様反応の酵素学的研究が進歩しつつあり ， 脂肪酸 分解系の酵素との比較の議論が可能になりつつある 1 b >。例えば ， bile acidCoA ligase(ミトコンドリアに存在）やbile acidoxidase(ペルオキシゾ ー ムに存在）はpalmitoyl-CoA ligaseや fatty acid oxidaseとは異なるものであるとか ， bifunctionalなbile acid hy --44-

胆汁酸生合成のメカニズムに関する研究

dratase/dehydrogenase (ペルオキシゾ ー ムにRes., 33, 455,0992); b) D. W. Russell and K.

存 在 ）はfattyacid peroxisomal /3 -oxidation
酵素と似通ったものであるとか，

D.R. Setchell, Biochemistry, 31, 4737(1992).

thiolase (ペル2) M. Morisaki, Y. Fujimoto and N. Ikekawa,

オキシゾ ー ムに存在）は脂肪酸thiolase と同一の'Metabolic Aspects of Lipid Nutrition in In­ものであるとか言われている。

sects,'eds, T. E. Mittler and R. H. Dadd,

我々は，

基質 および代謝中間体の化学的構造にWestview Press, Colorado, 1983. p.17; N.

基づいて酵素の性質を比較を試みようとするもの

Ikekawa, M. Morisaki and Y. Fujimoto, Acc.

である。 ここに示した結果で， 注目すべきは知見

Chem.Res., in press.
3) Y. Fujimoto, C. -S. Chen, A. S. Gopalan andは：C. J. Sih, J. Am. Chem. Soc., 104, 4720(1982);

1)ミトコンドリア分画および700g上清を用いたときの生成するTeHCAの立体化学が明らか

idem, J. Am. Chem. Soc., 104, 4721(1982).
4) T. Kinoshita, M. Miyata, S. M. Ismail, Y. Fu­に異なることである。
2) 700g上清を用い たときに生成するTeHCA

jimoto, K. Kakinuma, N. lkekawa and M.

ヒMorisaki, Chem. Pharm. Bull., 36, 1340988).

ドロキシ酸 (3S)と水酸 基の立体化学が反対で

5) Y. Fujimoto, T. Kinoshita, I. Oya, K. Kak­は24R,25R体であり ，

脂肪酸におけるf3ー

あることであるcinuma, N. Ikekawa and M. Morisaki, Chem.

この事実はhydratase 酵 素の反応における 立

Pharm. Bull., 36, 142 (1988).

体的要因に， 胆it酸と脂肪酸 では差異があること

6) M. Yuri, M. Tokumoto, N. Hara, Y. Fujimo­
to, N. Kobayashi and M. morisaki, Chem.

を示すものである。
さらに知見を得るために， 胆Pharm. Bull., in press ; 由利正利 ， 徳元真理絵，

汁酸 と 脂 肪 酸 のハイプリッド基 質 27-nor­

原典行 ， 藤本善徳 ， 小林典子 ， 森崎益雄 ， 日本薬

この点について，

THCAについて調べた結果，

学会第113年会（大阪）発表。

やはりミトコンド

リア分画では(24R)―および(24S)の2つの24ー7)小林典子 ， 宇都宮禎子 ， 平賀伴子 ， 森崎益雄 ， 大ヒ

ドロキシ酸が生じることがわかった。
以上，

谷いずみ ， 藤本善徳 ， 日本薬学会第13年会（大阪）

ラット肝無細胞系において立体化学を考発表。
8) M. Une, I. Morigami, K. Kihira

慮し つつ基質と生成物の関係(Fig.8)を明らかに

and T.

Hoshita, J. Biochem., 96, 1103(1984)

してきたが， 今後は上に記した輿味ある発見の原因をより精製した酵素系を用いた実験系で解きあ

9) Y. Fujimoto, unpublished work.

かしていく必要がある。

10) Y. Noma, M. Une, K. Kihira, M. yasuda, T.
Kuramoto and H. Hoshita, J. Lipid. res., 21,

引用文献

339 (1980).

1)最近のReview: a), I. Bjorkhem, J. Lipid-45-

ヒアルロン酸で表面を修飾したリポゾ ー ムからの内容物の温度による放出制御
東京理科大学薬学部

牧

野

公

子

We prepared liposomes containing 5,6-CF, the surface of which was coated withcarboxymethyl cellulose or hyaluronic acid. Above the phase transition temperature of
the lipids composing the liposomes, almost 100% of 5,6-CF was released from the lipo­
somes within 30mins, although little release of 5,6-CF was observed at and below thephase transiいon temperature. Surface charge density of the liposomes was changed by
the adsorption of hyaluronic acid or carboxymethyl cellulose on liposome surface. Also,
we measured the zeta potential values of DMPC, DPPC or DSPC liposomes at various
temperatures. Neutral liposomes were found to exhibit non-zero zeta potentials in an
external electric field even when dispersed in solution at pH7.4. A model for the orienta­tion of lipid head groups was proposed to explain the observed non-zero zeta potentials.
The dependence of the zeta potential on temperature and ionic strength was analyzed via
this model to obtain the information on the direction of the lipid head groups in the lipo­
some surface region. The direction of the lipid head group was found to be sensitive tothe temperature and the ionic strength of the medium. At low ionic strengths, the phos­
phaいdyl groups locate at the outer portion of the head group region. With increasingionic strength, the choline groups move outward to the outer region of the bilayer sur­face. At constant temperature, as the ionic strength decreases, the choline group ap­
proaches the surface while the phosphatidyl group hides behind the surface. At the phasetransition temperature of the lipid, the phosphatidyl group lies in the outer-most regionof the surface and the choline group is in the inner-most region.

要旨

量を比較すると ， ヒアルロン酸の表面への吸着によってリポソ ー ムからの5,6-CF放出が抑制されカルボキシメチルセルロ

スまたはヒアルロンること が明らかになった。 次に， リポソ ー ムの酸を表面に吸着させたリポソ ー ムに5,6-CFを内

ゼ ー タ電位を測定した結果 カルボキシメチルセ

包して種々の温度において5,6-CFの放出挙動をルロ ー スまたはヒアルロン酸が表面に吸着するこ検討した。 このリポソーー

ムはそれを構成するリンとによって表面電荷密度が変化するという結果を脂質の相転移温度付近以下の温度ではほとんど5,得た。 さらに我々はこのリポ ノ ー ムからの温度に6-CFを放出しないが相転移温度以上では30分依存した内容物の放出挙動を知るために， リン脂以内に放出量がその最終値のほぼ100%に達した。

質の動きの温度依存性に注目して種々の温度にお

‘

‘

‘

この時表面に多糖類を持たないリポ ノ ー ムと表けるゼ ー タ電位の値からリポ ノ ー ムのリン脂質の面にカルボキシメチルセルロ ー スまたはヒアルロ

頭部の運動性を見積った。 その結果， リン脂質のン酸を吸着させたリポソ ー ムからの5,6-CF放出

相転移温度付近でリン脂質の頭部は最も広がった

Temperature-controlled release from hyaluronic acid-coated hposomes.
Kimiko Makino-46-

リポソ ー ムからの内容物の温度による放出制御

2. 実形を取りうると考察された。

1. 緒

言

験

リポソ ー ムの調製

2. 1

水または5,6-CF水溶液を内包し， ジミリスト
リポソ ー ムからの内容物の放出制御は薬物放出

イルフォスファチジルコリン(DMPC)または ，あるいは化粧品へのリポソ ー ムの配合に関連して

ジパルミトイルフォスファチジルコリン(DP­

多くの研究者によって検討されてきた。 その1つ

PC)または ， ジステアロイルフォスファチジルコ

はリポソ

ー

ムの安定性の制御の問題であり， 我々‘の研究室において多糖類でリポ ノ ー ム表面を被覆することによってリポソー‘リンCDSPC)を構成成分とするリポ ノ ー ムを調製した。
DMPC, DPPC,DSPCをクロロホルムに溶解

ムの安定性を増すという結果を得た。 即ち，リン脂質リポソ

ー

ムを界面

し， この溶液に各リン脂質の相転移温度の10度下活性剤を含む溶液中に再分散すると ， 界面活性剤の温度において蒸留水または5,6-CF水溶液を乳によってリポソ ー ムからの内容物放出は促進され化分散してW/0エマルションを調製した後 ， リるが表面をカルボキシメチルキチン ， カルボキン酸緩衝液中(pH7.4,イオン強度0.154 )にこのエ

シメチルセルロ ー ス， ヒアルロン酸（ヒアルロン

マルションを加え ， 10分間攪拌し， さらにリン酸酸は剌激性が低く ， 保湿性が高いことから医薬品，

緩衝液を加えて3時間攪拌してクロロホルムを蒸香粧品の原料として注目されている。）で被覆す散させた。 調製されたリポ ‘ノ ー ムを遠心機上で3るとリポソ ー ムからの内容物放出は抑制される。

回リン酸緩衝液で洗浄してサンプルとした。

ムからの内容物の調製中にカルボキシメチルセルロ ー ス(CMC)‘

放出制御の点に関して， 1980年代にリポ ノ ー ムの溶液またはヒアルロン酸(HA)溶液を加えること

内容物（例えば5,6-CFのような蛍光物質）の放出によって表面にこれらの多糖類を吸着した DM­

一方 ， 温度に依存したリポソ

速度がリポソーー

ムの相転移温度付近で急に大きく‘

PC,DPPC,DSPCリポ ノ ー ムを調製した。

なるかあるいは最大値を示すことが報告されている。 我々はこの結果はリポ ‘ノ ー ムの構造が温度に

2. 2

5,6-CFを含むヒアルロン酸またはカルボキシ

依存して変化することを示唆すると考え，このリポソームの構造を制御することによってリポソー

5、6-CFの放出速度の測定

メチルセルロ ー スで表面を被覆したリポ ‘ノ ー ムを‘ムの内容物の放出制御が可能になると推察した。

pH7.4のリン酸緩衝液中に分散後， リポ ノ ー ムを

本研究は ， リポ ‘ノ ー ムリン脂質の頭部および炭構成しているリン脂質の相転移温度の前後5,10素鎖の運動性が温度によって受ける影響を知り ，‘度と相転移温度において振盪し， 経時的にサンプ

ム表面に吸着しているカルボ

リングしてlOOOOrpmで遠心して上澄の蛍光強度

キシメチルセルロ ー スとヒアルロン酸の吸着量とを測定 した。 対照としてlOmM SLSを含有する

これらの多糖類の構造とリポソ ー ム全体の構造のリン酸緩衡液中に分散して相転移温度において3

温度依存性を検討して ， これらの多糖類がリポ時間振盪したリポ ‘ノ ー ムの上澄の5,6-CF濃度をソ ー ムを補強する機構と内容物の放出機構を解明

100%とした。

さらにこのリポ ノーすることを目的としている。
2. 3

DMPCリポソ ー ム ，‘

CMC-DMPCリポソ ー ム ，DSPCリポ ノ ー ム ，‘

CMC-DPPCリ ポ ノ ー ム ，
ソ

-47-

ー

ム，

DPPCリポ ‘ノ ー ム ，

HA-DMPCリポソ

CMC-DSPC リ ポーム，

HA-DPPC

100

HA-DSPCリポソ ー ムを調製し，存性を評価した。
2.4

60 40 20定した。 測定には PEN KEM System 3000を用いた。 ゼ ー タ電位の値から表面電荷密度の温度依

IJ
U
Ja
s
u
a
（
ぶ O
ー
38

を再分散し， 種々の温度においてゼ ー タ電位を測゜゜

リ ポ ソ ー ム表面に吸着したCMCとHAの量の測定
DPPC リ ポ ‘ノ ー ム，

180

150

180
(cl

0
4

゜
2

H。：時間0におけるサンプルの蛍光強度
H,0096: SLSで処理したサンプルの蛍光強度

120

0
6

且：時間tにおけるサンプルの蛍光強度

l
C
」3
S
t
（
3
Pa
ぶ o

*100

90

Time (min)8

H 10096-H。

60

゜

経時的な5,6-CFの放出率を次式によって求め放出率（％）＝

llO

(b)

30

1. 経時的な5、6-CFの放出

H,-H。

120

一

結 果

た。

90

Time (min)60 40 20

ラフィ ーを用いて評価した。

nc
」as
c
a38
（
ぶ o

に分散し， 種々の温度における吸着量を分散液中に残った CMC磯度と HA濃度を液体クロマトグ

60

8DSPCリポ ‘ノ ー ムを CMC水溶液と HA水溶液中JO

゜

DMPC リ ポ ソ ー ム ，(a)8

種々のイオン強度のリン酸緩衝液中にリポソ ー ム゜

リボ ‘ノ ー ム ，

図1に示すように DSPCリポソ ー ムからの5,6CFの放出率は45度と50度では低いが ， 55度以上
では30分以内にほぼ100%に達している。 ヒアル
ロン酸で表面を被覆することによって5,6-CFの

30

Fig.

放出率は45度と50度において低下した。 カルボキ
シメチルセルロ ー スによる被覆は5,6-CFの放出率に影響を与えない。 このような5,6-CFの放出率の温度依存性はDSPCリポ ‘ノ ー ムの相転移温
度 が 55度付近にあることと対応している。 他のたDPPC. DMPCリポソ ー ムからの5,6-CFの放出に関しても同様の傾向が見られ た。

90

Time (min)

120

150

180

1 5,6-CF leakage from DSPC l1posomes(a), from DSPC liposomes coated withcarboxymethyl cellulose(b), and fromDSPC liposomes coated with hyaluronicacid(c) at vari ous t e叩面at ures: (0)45℃,（●） 50℃、（口） 55℃, （◇）60℃, （●）65℃

2. リポソ ー ム脂質の頭部構造の温度， イオン強度依存性

DPPC. DMPCリポソ ー ムおよび， カルボキシ
メチルセルロ ー ス，ヒアルロン酸で表面を被覆し60

DMPC , DPPC .
ソ

DSPCで 調 製 し たリ ポ

ー ムはこれらのリン脂質が電気的に中性であるにもかかわらず ， pH7.4 のリン酸緩衝液中で0でないゼ ー タ電位を示した。 また， このゼ ー タ電位の値はイオン強度と温度を変えると変化した。 こ

-48-

‘

リポ ノ ー ムからの内容物の温度による放出制御のように中性リン脂質リポソ ー ムの表面の電荷分
布は温度とイオン強度に依存する。 リポソ ー ム表
面の脂質頭部の向きが温度とイオン強度に依存して変化すると考え ． この現象を説明するモデルを提出した。
図2に示すように DSPC リポ ‘ノ ー ムのゼ ー タ電

- dFig. 3

少して ， あるイオン強度で0を通り ， それ以上高いイオン強度の溶液中では電位が反転して正の値を示した。 また， 温度に関しては50度で最も低い値を示した。 DMPC, DPPC のゼーx

ン強度が低いときにはより大きな負の値を示すがイオン強度の増加に伴いゼ ー タ電位の絶対値は減

゜位はイオン強度と温度に依存して変化した。 イオ

Schematic representation of the headgroup region.

方向へのこの双極子の写影をd, リボソ ー ムの表タ電位に関面における脂質1個当たりの表面積をSとする（図しても同様のイオン強度および温度依存の傾向が

4)リポソ ー ム表面に対する頭部の傾きはdで表さ示された。

れる。 ここで ー R<d<+Pであり ， 頭部がフォ

この実験に用いた脂質が電気的に中性であるにスファチジル基の負電荷が最も表面にありコリン

タ電位を示し ， かつー
↑ ld — ↓もかかわらず ， 0でないゼ

ー

その値がイオン強度の増加に伴って反転したことを説明するために ， 我々は， 図3に示すような2枚の電荷層を持つモデルを作った。 このモデルでは
ゼ ー タ電位のイオン強度および温度依存性をリポ
ソ ー ム表面のリン脂質頭部の構造変化として説明した。 フォスファチジル基の負電荷からコリン基の正電荷に向かう電気双極子がイオン強度に依存して変化すると考察した。 個々のリン脂質分子については． 双極子の長さを¢とし． 膜面に垂直な

f
!

10

DCO

出

CH"

CH 2

I

。

[
AS]
国 go
d5

-10

0.0

Fig. 20.1

Ionic strength

0.2

Ionic strength dependence of the zeta po­
tential of DSPC liposomes at several tern­
peratures:(0)45℃, （●） 50℃,（口）55℃-49-

Fig. 4

Lipid head group region.

基の正電荷が最も内側にあるときd=- R,. フォ
スファチジル基の負電荷が最も内側に入りコリン基の正電荷が最も表面にあるときにd=+ R,となる（図5)。 こ こで次式で与えられるパラメー
ター a;rs を導入した。
ゼータ電位の値から a1rs を見積り， 図6 を得た。
図6より． イオン強度が低いとき． フォスファチ

ン酸で表面を被覆することによって， どの温度においてもリポソームのゼー タ電位の絶対値は減少した。
3. リポ ‘ノ ー ム表面へのカルボキシメチルセル
ロースおよびヒアルロン酸の吸着量は現在検討中である。
以上の結果は以下の学会で報告し， かつ学術誌に発表した。
"Temperature- and ionic strength-in­
duced conformational changes in the lipid
head group region of liposomes. "K. Maki­

d=-fl

d<O

Fig. 5d>O

d=Ono, H. Ohshima and T. Kondo, 7th Interna­
tional Conference on Surface and Colloid
Science, July 7-13 , '91 Compiegne, France.

d=+g,Model for the conformation of lipid headgroups.

“リポ‘ノーム脂質の頭部構造 一 温度 イオン強ジル基が頭部の外側に位置し， イオン強度が高くなるとコリン基がリポソーム外側に位置する傾向が見られた。 一定の温度において， イオン強度が増加すると， コリン基が表面に位置し， フォス
ファチジル基が内側を向くと推定した。 リン脂質の相転移温度付近の他の温度における状態に比べて， フォスファチジル基が外側にコリン基が内側にあると考えられる。
また ， カルボキシメチルセルロース， ヒアルロ
0.2

度依存性" 牧野公子， 山田 武， 木村真理子， 岡隆史 大島広行， 近藤 保， 第44回コロイドおよび界面化学討論会 9月27日ー 29日埼玉大学"Temperature- and ionic strength-in­
duced conformational changes in the lipid
head group region of liposomes as suggested
by zeta potential data." K. Makino, T. Ya­
mada, M. Kimura, T. Oka, H. Ohshima andT.Kondo, Biophys. Chem., 41(1991)175-183.

0.0

2

。

廻
/ 'P

-0.4

-0.6

0.0

0.1

Ionic strength

0.2

Fig. 6 Ionic strength dependence of d/S of DSPC
liposomes at several temperatures:(0)45℃,（●） 50 ℃,（口） 55℃-50-

皮膚用 DDS としての高分子脂質リポ'} ー ムの基礎研究
早稲田大学理工学部

西出宏之 • 土田英俊
Liposomes composed of polymerized phospholipids possess enormous stabilities
against mechanical stress, detergents, long term storage, and phospholipases, and are
one of the potential candidates for usage as a skin-drug delivery system (DDS). Forma­tion profile of the polymerized phospholipids derived from l,2-bis(2,4-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine was first described, and their molecular weight was es­
timated. Stability of the liposome structure was demonstrated by the add北ion test of de­tergent such as Triton X-100. Viscosity of the liposome solution coexisted with water­soluble polymers provided its rheological characteristics. Encapsulation efficiency by
the liposome was studied in the view point of concentration of encapsulated material andlamellarity of the liposome by using hemoglobin as an example. The encapsulation pro­file was also influenced by pH and ionic strength of the solution. The liposomes could befreeze-dried with a small amount of sugar, suggesting that the liposome would be uti­
lized as dry powder for skin-DDS.

1. 緒

言

ソ ー ム作製の常法に従って内包物質をカプセル化
後照射重合して安定構造に誘導できる。 ⑤小胞

ここ10年来我々は， 人工赤血球としてヘモグロ
ビン を安定に含有しうるリポソー

体として物理的に強靭である。⑥相分離や小胞体

ム（脂質小胞間の融合なしに， 高濃度の分散液が保持できる。

体：粒径0.05-0.5µm微小マイクロカプセル）に

本研究ではこれら特性を有する新しい高分子脂用いるリン脂質誘導体の合成化学的な研究を展開

質リポ ‘ノ ー ムを皮膚用DDS(薬物運搬体）とししてきたが その物質群の一 つに高分子脂質リポてはじめて新しく展開するための基礎知見を得て，ソーム が あ る 1 - 5) 。1,2-Bis (2,4-octadeca­

乳化化粧品とは全く異なる新しい 運搬システムのd ienoyl) -sn-glycero-3-phosphocholine を可能性を明らかにしようとするものである。 すな

紫外光または7線照射重合して得られる高分子脂

わち特徴①～⑥に対応して次の効果が期待される。

‘

質リポ ノ

ー

(a)界面活性剤に対する強い抵抗性①に基づき，ムであり， その特徴は次のように列挙‘できる。 ①リポ ノ ー ム2分子膜がリン脂質分子間安定な皮哨用DDSとして適用しうる。(b)生化の共有結合（重合反応による架橋）により安定化さ学的安定性②により， 急速な代謝や皮膚細胞とのれており ， 例えば界面活性剤によっても小胞体構

直接相互作用を抑制しながら， 角層～表皮～真皮造は破壊されない。 ②生化学的にも安定で， 例えへの浸透が可能。Cc)③により毒性低減が計れる。

ばホスホリパーゼAおよびD によっても直ちに(d)④・⑤に基づき内包物質の種類（油～水溶性）

は加水分解されない。 ③しかも重合後脂質部にはに制約がなく， また広い濃度範囲での内包が可能

不飽和結合が残るので緩慢に代謝される。 ④リポとなる。Ce)⑥ に起因して， 溶液 物性（レオロStudy on Polymerized Phospholipid Liposomes as a Drug Delivery System for Skin
Hiroyuki Nishide·Eishun Tsuchida-51-

ジ ー ）を調節可能で， クリ ー ム状の触感も検討対重 合率は DODPCジエノイル基の入max(255

象となりうる。 これらの特 性は乳化系はもちろんnm)の減少から測定したところ約70%であった。

のこと ， 既知のリ ン脂質リポソー

ム ， ニオソーム

では実現不可能であり ， まさに次世代の皮膚用

2.2 高分子脂質の分子量測定
重合後， 分散液にlN-NaOH溶液を添加し．

DDS系の開発に繋がる波及効果を期待できる。
具体的には本研究において ， まず高分子脂質リ

一日60℃で加熱した。 HCl水溶液で中和後 ， ク

ムの生成過程と分子量 ， 水溶性高分子とのロロホルム可溶成分を回収 メタノ ールで再沈殿相互作用を概説した後， 特に界面活性剤に対するさせる ことにより， グリセロホスホコリン部が除

ポソ

ー

リポソ

ー

ム構造の安全性を実証した。次いでヘモ去された高分子脂肪酸を得た。乾燥後． シュウ酸

グロビンを例に， いかに少ない脂質量で多量の機

クロライドを反応させて脂肪酸を酸塩化物とし ，能物質を内包するか ， その要件をはじめて定量的

これにメタノ ー ルを反応させた。 クロロホルム抽に検討するとともに ， 皮膚用 DDSの一形態と考出し ． 高分子脂肪酸のメチルエス テル体を得た。

えられる粉末試料として， 高分子脂質リポソ

ー

ム

―

IRにおいて 1712cm 1 のカルボン酸(v C=O)由―来のピ ー クが消失. 1740cm 1 にカルボン酸エスを供する可能性についても踏み込んだ。

テル （心=O)由来の吸収が認められた。 IH­

2. 実

験

NMR(CDCl3)では， メチルエステルのビ ー ク(3.6ppm)が認められ， 末端メチルとの積分比は2. 1

高分子脂質リポソー

ほぼ1であり， エステル化反応の完了を確認しムの生成

重合性リン脂質1,2-bis(2,4-octadecadienoy1)

た 6. 7) 0-sn-glycero-3-phosphocholine ( DODPC; 式

分子量測定はG PC(Water Associates社）に1)は日本油脂昧から購入した。 DODPCの純度て， カラムは104 . 10 3 . 500, およびlOOA µ­

はシリカゲルTLC にてモノスポット(Rf=0.3.

Styragelを用い. RIで検出した（溶媒THF)。

CHCla/C凡OH/H20=65/25/4 v/v/v)であることを確認してから使用した。

2.3

脂質濃度O.lwt%の高分子脂質分散液に ， 界面

CH3 (CH 2 届CH=CH-CH=CH-COOCH2
I
CH,(CH2 ) 1 2-CH=CH-CH=CH-COOCH o�出II
CH2 OPOCH2 CH2 N•-CH3

"

。

DODPC

界面活性剤に対する安定性評価

活性剤としてTriton X -100(キシダ化学）水溶液°

畑を添加した(25℃) 8)。散乱強度(90 )は光散乱計-----(1)

He-Arレ ー ザ ー (632.8nm)を用いた。

（ユニオン技研 LS- 601)にて測定した。 光源は

DODPC(200mg)のクロロホルム溶液をナス型フラスコにて減圧乾固内壁に薄膜を形成させ2.4た。 これに純水 20叫を添加し, 20℃ ， 窒素雰囲気

水溶性高分子との相互作用

ベンゼン溶液から凍結乾燥して得た脂質粉末

精工

CDODPC/ コレステ ロ ー ル /2,4-octadeca­

UR -200P. 60W)して． 平均粒径14nmの1枚膜

dienoic acid (日本油脂製） (7/7/2モル比）に ， 生

にて20分間超音波照射（プロ
リポソ

ー

ー

プ型

トミ

ー

ムを得た。 これを石英管に移し窒素置換

これをエクストル ー ダ ー にて孔径0.2µmのメン

後 ， 20℃で紫外線照射（リコ ー UVL-32W)し．
DODPCを重合した

6)。

7線重合はリポソー

ム分散液を

理食塩水を加え撹拌後 ， 多重層リポ ‘ノ ー ムを得た。
プランフィルタ ー まで通過させて， 粒径200nm

co 雰囲気下．

¢のリボソ ー ムを調整した。 Arガスで置換後密4℃ . 0.75MradのT線Cso Co)照射して行った。

閉 氷冷下で7線照射（脂質濃度2gldP., 総線量-52-皮膚用DDSとしての高分子脂質リポ ‘ノ ー ムの基礎研究

これを遠心濃縮(8wt%), pH 調整後(pH7.4)測 定に用いた9)。

占有面積(S )=0.36nm2 とした。

デキストラン(Mw 19,8 00), ヒトアルプミンはSigma社製をそのまま 使用した。ポリ エチレン
オキシド( PEO, Mw20,000, 和光純薬）は透析

Vi. Cc面）＝4冗s

粘度(3 7 ℃)はE型回転粘度 計（東機産業）を使用

2. 5

i-1

2
{r-i(d+dw) +dw } ] -----(3)‘単位脂質重量当りのリポ ノ ー ム体積 Vc., c Cc吋／g)は(4)式にて表せられる。ここでM は平均分子量 NAはアボガドロ数である。

ヘモグロビン溶液の調製

期限切れヒト赤血球を生理食塩水で二倍に希釈
し，一酸化炭素雰囲気下振盪して赤血球中のヘモグロビン(Hb) を一酸化炭素化(HbCO)した。 遠

Vcatc Cc吋/g)=

心洗浄後の濃厚赤血 球([Hb]=25g/dP)にジクロ
ロメタンを添加して溶血させ ， ストロ ー マ成分を遠心分離した。残留ジクロロメタンを減圧留去後，加熱処理(60℃) ， 変性した共存蛋白質を遠心分離した。透析後pH, イオン強度を調節して ， 限外憑
過農縮により高純度の濃厚Hb溶液を得た 10 l 。
2.6

高分子脂質リポソ

ー

ムヘの内包

‘

他方，添加脂質重量をm(g), リポソ ー ム総体
積を V(cnf)とすると．単位脂質重量当りのリポ
ソ ー ム体積の実測値である Vmeas は， 以下で求められる。リボソ ー ム分散液にグルコ ー ス m'(g)を添加し， V'(g) に 定容すると見かけのグルコ ー

ム外水相の未内包Hbを除去， 遠心分離

リポソ ー ムの遠心分離後にこの濃度を定量する。
C a PP との差はリポソ ー ムの総体積分になるので ，(5)式によりV m●● 、が算出される。

Vm••• Cc面/g)=

により濃縮した。
リポソ ー ムを構成するDODPCの高分子化は，

co 雰囲気下，4℃, 0.75Mradのパ泉( 6° Co)照射して行った。重7
合率 は約7 0%であった , 11 >。
リポソ ー ムの被覆層数 ， 内水相濃度の測定法
1個のリポ ‘ノ ー ムの 内水相体積V ,n と 構成脂質分子数Nは，各々式(2). (3)により層数 nの関数として表すことができる 12) 。ここでリポソ ー＝ムとした。ゲル慮過(Sephar ose CL-4B)により

2. 7-----(4)

N
MX NA

v_
m

理して，粒径200nm¢ のHbを内包したリポソ ー

得られたHbリポ ‘ノ ー ム分散液を

3

スはリポソ ー ムの外水相にのみ存在しているので混合脂質薄膜にHbCO溶液を添加して，多重リポソ

4 ドX - 21ー冗10

ス濃度C a ooは m'/V'(g/c面）となるが ， グルコ ー

層リポ ノ ー ムを得た。これをエクストル ー ダ ー 処ー{r-n(d+dw ) +d., } 3x10- 2 1-----(2)

N= ― I [ {r-Ci-1) (d+dw )}豆

精製して用いた。
して， ズリ速度(D)が7 .5 s -1での値を取った。

n

冗

5 nm , 二分子膜間水層Cdw )= 1.3nm, 平均分子430.73Mrad)し，高分子脂質リポソ ー ムを得た。

v·c1-c. 1c)
PPm-----(5)被覆層数 (n) は ， V m ● ●、 = V calc からNを計算

して (6) 式から算出される。リポ ‘ノ ー ムのHb 内

包効率は，単位脂質重量当りのHb重量比([Hb]/[Lipid]比 ）として表される。Hbリポソ ー ム分
散液中のリン脂質濃度とHb濃度は各々Allen Z去，
シアノメト法にて 定蘇した。
リポ ‘ノ ー ム 内のHb溶液の濃度([Hb],n)は，(6)式から算出される。
[HbJ.n (g/ df) =ム半径(r )=lOOnm. 無水状態の二分子膜厚(d)=

-53-

剣

旦M X
[Lipid]V, n

X 100-----(6)2.4

リポ ‘ノ ー ム粉末の調製

Hbリポソ

ー

ることにより有機溶媒に可溶な高分子へ誘導し6（式7). GP Cにて分子量を測定した . 7 l。 紫外ム分散液（脂質濃度lg/ dP)にショ糖(50-150mM)添加し ， 冷媒（メタノ ー ル ー ドラ

光照射により重合した高分子脂質の分子量は，

イアイス）により速やかに凍結し ， 減圧乾燥してM n = 5.4Xl0 3 , M w= 6.9Xl0 3 , r線照射重合でリポソ ー ムの粉末を得た。 これに粉末に純水を添はM n= l.5X10 4 . M w= 4.1Xlがであった。

加し， 元の 成分濃度に調整した後 ， フィルタ ー( 0.8µm¢)を通過させ， 粒径と内包Hbの漏出量をゲル遵過で分離定量し， 漏出率を測定した

7)。

3. 結果と考察
3. 1 高分子脂質リポソ ー ムの生成
DODPC(式1)はアシル鎖の各々に重合活性の高いジエン基をもつ脂質である。 水に分散後， 超

1) (COCI),

音波照射すると容易に2分子膜小胞体リポソ ー ム2) MeOH, Pyを生成する。 これに紫外光を照射すると脂質分子一内のジエン基の 部が励起されるが， 脂質分子は2分子膜内で配向しているので近接するジエン基間で共有結合を生じ易く， 連鎖的に重合が進む(Fig.I)。 7線照射では， 水の分解により生じた

紫外光の継続照射（半日）や大気下で長期保存

OHラジカルが親疎水界面に存在するジエン基(1週間）した試料では， 分子量の低下が認められを攻撃して重合が開始される。 どちらの方法でも，た。 高分子脂質は重合（高分子化）後もアシル鎖部

重合に際し小胞体の形状はそのまま保たれるので，に不飽和結合を有するので， この部位が引き金と高分子脂質リポ ‘ノ ー ムに変換される。

なって高分子脂質の分解が生起していると示唆さ生成した高分子脂質は， 式1のように分子内に2つの ジエン基を有することから

一種の架橋体であれる。 生化学的な代謝や毒性を考慮した場合 ， 高分子脂質の一 つの可能性を示している。

り， 正確な分子量測定は困難とされていた。 そのため後述のような特性がありながら ， 高分子脂質

3.2の分子量（重合度）は知られていなかった。 特に医オリゴエチレンオキシドモノオクチルフェニル

薬用に高分子脂質を利用するためには， 分子量のエ ー テル(Triton X-100)など界面活性剤は脂質把握は不可欠である。 そこで高分子脂質のグリセ

リポソ ー ムを容易に破壊する。 通常の卵黄レシチ

ロホスホコリン部を除去し， メチルエステル化すンより作成したリポソ ー ムの水溶液にTritonX-

霞紅＼薗罰眉質グ上 瓢闘輩冒爛

界面活性剤に対する安定性

100を加えていくと， 光散乱強度はいったん増大
そして減少した(Fig.2)。 これは界面活性剤によるリポソ ー ムの破壊と脂質の可溶化に対応している。 DODPC についても， 重合前は卵黄レシチンと同じく， 界面活性剤により小胞体は破壊された。 それに 対し， 高 分 子リポ ‘ノ ー ムではTri­

Fig.1 Polymerization of DOD PC in a l1posome.

tonX-100の添加によっても水溶液の光散乱度は-54-

皮膚用DDSとしての高分子脂質リポソ ー ムの基礎研究

ー

c:,
c:,
2

c:,

。

8

10

[TRITON x-1oo]x 10 3゜゜ ゜

(S·8d E )U

0
c:,

2
1
＞卜I
SNW卜NI.l
H811
0 Wee
wトト
v::,
s

6

12
(M)

Fig.2 Scattered-light intensity change at 90° forliposomes induced by the addition of Tri­
tonX-100 with different concentration.
（口） DODPC polymerized by r -irradiation,（●） DODPC before polymerization, and(O)egg yolk lecithin liposomes (as reference).
変化せず， リポ ‘ノ ー ム構造を保っていることがわ

2.5

5.0

7.5

[polymer] (wt%)
Fig.3 Changes in the solution viscosity of poly­merized phospholipid liposomes by the ad­dition of water-soluble polymers. PEO(口），
dextran(O), albumin(△）．
者では水溶性高分子との相互作用による微粒子の凝集が考えられる。 これに対し， 球状タンパク質
は凝集を引起し難いことがわかった。

かった。

今後， リポソ ー ムの粒径および脂質構成成分に高分子脂質リポソ ー ム水溶液は3ヶ月放置後も．

よる表面電荷を調整することにより， 相互作用さ

相分離や沈澱を全く生じなかった。 さらに後述のらにはレオロジ ー 物性を増減する知見が不可欠でHbを内包した高分子脂質リポソある。

ーム では. Hbの漏出は認められなかった。 これらの事実は， 高分子脂質リポソ ー ムが保存時または界面活性剤共

3.4

存下でも充分に内包物を保持して存在しうること

機能物質内包における濃度と調整温度の影響

高分子脂質リポソ ー ム内に機能物質を効率高くを示している。

内包する要件を， 機能物質としてHbを例に実験した。

3.3 水溶性高分子との相互作用‘

高分子脂質リポ ノ ー ムに種々の水溶性高分子を原料Hb溶液を濃厚にするとリポソ ー ム内Hb

加え， 溶液系の粘度を回転粘度計で測定した。 こ

量も増大すると考えられる。 Hb農度を43g/dP, まの実験は皮膚組織での相互作用を推定するため．

で増加させても， リポ ‘ノ ー ムの被覆脂質層数n値

また分散液としての溶液物性（レオロジ 一 触感）をはほぼ 一 定(1.4枚）であ ったが， リポ ‘ノ ー ムに内調節するための 一知見と考えた。

包されたHbの農度[Hbいは調製時のHb溶液

高分子脂質リポソ ム8%水溶液に ， PEO. 多糖類デキストラン， ヒトアルプミンを添加し， 溶

Hb濃度が高くなると[Hb]- [Hb] ,n は大きく

液粘度の上昇をプロットした(Fig.3)。 前2者のな っ てきた 。 高濃度 に なるとHb分 子同士で添加では， ある濃度から粘性は急激に増加したの

flocculate (ゆるい会合体）が形成され, Hb溶液に対し． 後者での粘度上昇はわずかであった。 前

粘度は急激に増大し， 内包効率が頭打ちになったーの農度とともに増大した(Fig. 4)。 しかし ， 原料

-55-

1.5
40

40
ー

1 .1

10

゜

20

10

30

2．
1

2

10

゜

3．
1

(d :J
)AjJ
SO:J
SJ
>

゜
一
/9

0
2

fp/6) "![QH ]

宮 d!l]/[
qH]

0
3

30

1 .4

0

10

20

30

Temperature (°C)

4050

F ig.6 Influence of the preparation temperature on
the [Hb]/[Lipid]ratio.([Hb]=40g/dl,[NaCl]=0.57g/dl, pH=6.9)

40[Hb] (g/dl)
Fig.4 Encapsulation profiles of Hb into liposomeswith increasing fed Hb concentration(0)and the ーsolution viscosity(●） at shear rate=
11.5 sec 1 _るほどむしろ減少した。粒径調整に際して， フィ‘

ルタ ー 細孔内でリポ ノ ー ムはズリ応力を受けて小さな粒径へと変化するが， 膜構成分子の運動性がと考えられる。しかし高濃度溶液を用いることに高くなると， より多重層単位での変形が容易となより[Hb]/[Lipid]比は確実に向上する。

るため ， 層数の大きなリポソ ー ムが形成されたと考えられる。

次に熱安定性を有するHbCOを用い， 高い温度で溶液粘度を下げてカプセル化し． 内包物質濃

従って， 内包機能物質の変性防止も考えあわせ，度[Hbいの向上を試みた(Fig.5)。Hb濃度一定

リポソ ー ムの調製は低温で実施すべきと結論づけ(31g/ dP)のもと4℃から10℃になると， 溶液粘度られた。

の低下に対応して[Hb]inは急激に増大した。 し3. 5

かし層数(n)も 温度とともに増加した。実際 内
包後[Hb]/[Lipid]比(Fig.6)は． 温度が高くな

機能物質内包におけるpH, イオン強度の影響

膜構成成分として脂肪酸を導入して， リポソ ー
28

ムの脂質分子膜表面を負に帯電させると， 層間で1.6の静電反発によりリポソ ー ムの層数低下が期待で
1.5

6
2

( ＇

4

）

U

5
2

qH ]
[
!
p/6) Uf(ー

27

荷を帯びた分子であり， 脂質膜表面との相互作用
ひいては内包効率はpHによって変化するものと考えられる。
各pHのHb溶液でリポソ ー ムを調製したとこ

1.3

24
23

きる。Hb分子も等電点を7 .0 (25℃)に有する電ろ， pH上昇とともに脂質層数(n)の減少が認め
O

10

20

゜

Temperature ( C)

30られた(Fig. 7)。高pHでは脂肪酸の解離度は高1.2くなり(pKa=7.4) 13>, 脂質分子膜間の静電反発

F ig.5 Influence of the preparation temperature onn and[Hb]'"'([Hb]=31g/dl, [NaCl]=0.69/
di, pH=7.0)

により層数の少ないリポソ ー ムが形成される。一方， Hbの等電点よりも低いpHではHbは正に帯電し， 負に帯電した脂質分子膜との親和性が増-56-

皮膚用DDSとしての高分子脂質リポ ‘ノ ー ムの基礎研究

,-

7 1.0

�， 1.30
"'
"O

五
1]
[
[P
q]
I
Hl

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�

，工．
.0

1.20

40

1.8

34

1.4

6.8

7.0

pH(·)

7.2

7.4

1.8

24

1.6

呈、.
.・..

＼

△

20

32
30

6

.E 22

U

王

）

石

"活"

(＇

1.6

"Cl
"'

3
0

26

38

豆 36

0

18

1.2

L

゜

0.4

0.8

1.2

[NaCl] (g/dl)

1.6

J·

..
曹，→

C:

1.2

2.0

Fig.7 Influence of pH of Hb solutions on the [Hb]/[ L ipid]ratio(●） ， n( △） , and[Hb],,(0).
([Hb]=40g/dl, [NaCIJ=0.6g/dl, 4 ℃)

Fig.8 Influence of NaCl concentration in Hb solu­
tions on the[Hb]/[Lipid]ratio( ● ）、 n( △） ，and[Hb];,(0). ([Hb]=27g/dl, pH=?, 1, 4 ℃)

すため[Hb] ,. は急激に増加する。 この ように高分子化脂質リポソ ー ムの分散液をそのまま凍結

pHが低くなると ， [Hb] ,. は上昇 n が増加し．

乾燥粉末としたあと， 純水に再分散させると， 粒

高くなると[Hbいが低下nが減少するといった，径は増大するが， 内包物質Hbの漏出は認められ相殺する挙動となった。 内包物質の等電点付近のなかった(Fig.9)。 従って粒径の増大はリポソ ー

pHでリポソ ー ム調製することに より最も高い

ム構造が破壊されたのではなく， 単に粉末化した［内包物質］／［脂質］比が得られた。

リポソ ー ムが凝集し， 分散し難くなっているため溶液イオン強度が上昇すると電荷遮蔽効果によJ'"�

8)。[Hb] ,. も塩濃度増大とともに減少したので，［内包物質］／［脂質］比は塩濃度の低い条件でのみ高く保てることがわかった。
3.6

高分子脂質リポソ ー ムの粉末化

200

高分子化リン脂質リポソ ー ムが凍結融解を繰り返しても粒径分布や内包物質の漏出が認められないことから 11> , リン脂質二分子膜が非常に強靭であることが明ら かとされてきた。 そこでさらに乾燥体としての形態保持能について検討した ” 。

20

600

り脂肪酸間の反発が低下， 層数が増大した(Fig.

-"

゜.,

ヽ

T

□□

1�

゜

""'.

50

10

�

『
-3

L

[Sucrose] (mM)

Fig.9 Changes in diameter and leakage of Hbfrom the polymerized phospholipid lipo­
somes after freeze-drying and rehydration.

-57-

と考えられる。 高分子化していないリポソ ー ムでは粒径が増大し ，

3) S. Takeoka, H. Ohno, N. Hayashi, and E.
Tsuchida,J. Control. Rel .,,,9,177 (1989).

Hbの漏出も80%に達することから， 高分子脂質による安定性の向上は明らかで

4) Y. Matsushita, K. Eshima, T. Shindo, Y.
Yamamoto,E. Hasegawa,H. Nishide,and E.

ある。

Tsuchida, Biochim. Biophys. Acta, 901, 166

分散性を向上させるために， 一例としてショ糖(1987)

を50mM添加して凍結乾燥を行い ， 純水に再分散させたところ ， 平均粒径約200nmのリポソー5) E. Tsuchida, H. Nishide, M. Yuasa, T. Babe,and M. Fukuzumi, Macromolecules, 22, 66

ム分散液にきわめて容易に復元することができた。

(1989).
このように機能物質の内包に際しては， 内包物

6) S. Takeoka, N. Kimura, H. Ohno, and E.
Tsuchida,Polym. J.,22,867 (1990).

質の溶液特性や， 脂質分子 ， 脂質膜との相互作用を考慮した条件設定が重要となる。 また ， 高分子

7) H. Sakai, S. Takeoka, H. Yokohama, H.

脂質を用いることにより ， 乾燥粉末としてもリポ

Nishide, and E. Tsuchida, Polym. Adu.

ソーTech.,3,389 (1993).

ムは十分に安定性を保持していることが明ら‘かとされた。 リポ ノー

ム表面は生体膜を構成する

8) H. Ohno, Y. Ogata, and E. Tsuchida, J.
Polym. Sci. Part A,24, 2959 (1986).

脂質成分と同じであり ， 生体適合性や安全性に優れ， 反面高分子脂質であるために内包物質の漏9)牧野千里 ， 木村登 ， 長谷川悦雄 ， 土田英俊 ， 日化
i志， 1991. 1102

出や急速な代謝さらには皮膚細胞との直接相互作用を抑制し ， 角層～表皮～真皮へ緩慢に浸透する

10)酒井宏水 ， 横浜裕明 ， 武岡真司 ， 西出宏之 ， 土田
英俊 ， 輸血誌38, 322 (1992).

といった ， 皮膚用DDSに備えるべき機能が期待される。

11) E. Tsuchida, Biomat. Art. Cells Immob

引用文献

12) S. Takeoka, K. Terase, H. Yokohama, H.

Biotech.,20,337 (1992).
I) E. Tsuchida and H. Nishide, "Liposomes as

Sakai, H. Nishide, and E. Tsuchida, J.

Drug Carriers" ,Ed. by G. Gregoriades,
p569,John Wiley,New York (1988).

Macromol. Sci., 0993) in press.
13) J. F. Tocanne, and J. Teissie,Biochim. Bw ーphys. Acta,1031,111 (1990).

2) H. Ohno,Y. Ogata,and E. Tsuchida,
Macromolecules,20,929, (1987)-58-

皮膚の老化に伴うエラスチン遺伝子発現の動態
慶應義塾大学医学部

多

島 新 吾

Tropoelastin (65kd) was found to be converted to a lower molecular weight fragment(45kd) in the cultured medium in chick smooth muscle cell culture. The conversion was
found to be time-dependent by pulse-chase experiment using cell culture system. This
was also confirmed by chase experiment in test tube. These results indicate that theprocessing of tropoelastin was mediated by a protease present in the cultured medium.
In fact the conversion was specifically inbibited by lmM EDTA and not by NEM and
PMSF. The processing of tropoelastin is of vital importance for understanding tropo­
elastin metabolism.

1. 緒 言を行った。

2. 実 験

老化に伴う皮膚の変化のうちsenile elastosis（老人性弾力線維症）は老人の日光曝露部の皮膚真皮表層にエラスチン線維が蓄積する状態で， 長期

受精後20日目の鶏胚動脈より酵素消化法（コラの紫外線照射によりエラスチン線維に何らかの異ゲナ ー ゼ． エラスター ゼ）を用いて平滑筋細胞を常が生じるために発生すると考えられている。 現

単離した。 以下の実験には初代培養細胞のみを用在まで，

senile elastosis中 の エ ラ ス チ ン 架 橋

いた。 細胞が confluentの状態になるまで10%牛（デスモシン ， イソデスモシン）量が増加している

胎 児 血清 添 加 Dulbecco's modified Eagle

こと ， エラスチン発現量に変化がないことがすで

mediumCDMEM)にて培養した。 0.5%牛胎児血に知られている。 この事実は局所のエラスチン合

清添加DMEMにて48時間培養し， その最終6時

成活性には異常は認められず ， 合成後のエラスチ

間を バ リン不含DMEM中に〔 3 H 〕 バ リン(60Ci/

ンタンパクの修飾 ， あるいは分解に異常が存在しmmol)でタンパクを標識した。 pulse-chaseのていることを示唆する。 エラスチンの分解過程は実験では バ リンで標識後 cold バ リンClOOµM)をいまだ不明 の点が多く主に白血球由来のエラス

し加え chaseした。

バリン以外では門S〕メチオ
3ゼが知られているのみである。 また分解をう

ニン (lOOOCi/mmol). 〔 H 〕グルコサミン(50Ci

けたエラスチンペプチドがさらにどのような代謝/mmol). 〔 H 〕マンノ ース(30Ci/mmol)で標識をうけるのか ， 不明である。 我々はエラスチンのした。 培地中のタンパクはプロテア ー ゼインヒビ

分解物が組織中に比較的安定に存在し， かつそのター CimM EDTA, NEM, PMSF)中で30%硫安

後架橋形成にも関与し ， より不安定なエラスチンで沈澱させ， 4-15% gradient SDS polyacryl­線維を形成するという仮定に基づき ， まずエラス

amide gel electrophosesis(SDS-PAGE)を行

チン分解物の同定， 分解メカニズムについて検討

い，

タ

ー

3

Elastin gene expression in the aged skrn
Shingo Tai皿a-59-

オ ー トラジオグラフィ ー を行った。 必要の場

合デンシトメ ー タ ー で各タンパクの相対量を比較生じる可能性が考えられた。タンパクをプロットした。

しエラスチン抗体で染色した結果65kd, 45kdい
ずれのタンパクも特異的に検出された。以上の結

3. 結

果

果より45kdタンパクは65kdタンパクに由来する可能性が示唆された。一方エラスチンmRNAは
multiple alternate splicingを認めることが す

すでに我々は培養平滑筋細胞がフィプロネクチ
ン，

コラ ー

ゲンの他に分子量65kdのトロポエラ

でに報告されている。アミノ酸配列では2ヵ所のスチン分子を活発に合成していることを報告した。

配列がsplice outされる(Fig.lB太文字）ことが今回の実験でトロポエラスチンより低分子のタン

報告されているがいずれの配列の鎖長もたかだ

パク(45kd)を認め ， このタンパクがトロポエラ

か62残基であり（約6 .2kd)65kdから45kdへの変スチン由来のペプチドであることを各種標識RI

換はalternatesplicingの産物による可能性は低およびエラスチン抗体を用いて検討した。トロポ

いと思われた。したがって45kdペプチドは65kd

エラスチンはすでに糖鎖を有さないこと， メチオ

トロポエラスチンが合成されてから分解をうけてニン残基を有さないこと， シスチン残基をC末端生じた産物であると考えられた。

(Fig.lB, 矢印）に2残基有 することがわかってい45kdタンパクが65kdトロポエラスチンの分解る。65kd, 45kd.いずれのタンパクも ， グルコサ産物であることを検討 するためにpulse-chaseミン， マンノ ー ス． メチオニンのとりこみが認めB)

A)られず(Fig.lA;lane1, 2, 3)またシスチンのとり

1.0

A)

-65kDa←·45kDaB)

01e

1 GGYPGAll'GGOYPGGGP!PGAOYGGLGAGLGAGLGAGG!PL!PGVSGLGG

50

51 LGPLGLQPGAOYGGLGAGLGAPPGAAFl'CAASAAAL!AA!!AGAGLGGVG 100

IOI OIGGLGOYGGVGYl'GGLGYPGVYQl'CYGAAG!PP"PGAOll'GAFN:GGV 150

151 l.l'GAOIRPPGYGVLPGVPTGTGl!A!Gl'CAGAFAOll'GLGGPGCQOPGYP 200

20! LGTPIWIJ.l'llGYRLmHGLGl'GGIGAGVI.AG!AGYPTGTGYO!Q!AA ,:,o'51 A!A!A!YGAGYLPGAGOll'GYGGYYPGVGVYPGAGYGGPAA!AAAAKAAA JOO
3'I !AGAYGAGYLI℃AGGYl'GYll'GYGYll'GLYl'GYGOll'GVAGYGTl'AGAAA 3旧

351 AAA!AA!YGAGYl'GVGYl'GYGIGGYPGYI℃ Yl'GYIOYPGYl'GYPGYltYP 4UO<01 GYl'GYPGYl'GYVPGYGYGGPAAAAAA!AAA!AAAFGAGRYl'GYGVN:AYr <:,O'""'"'"'Cf"<SI GYGVl'GICY匹』""l'GVGY印'"凡:VGVPG●m:,oo

50! GVGY印YGYP<礼9郎'"'""''"'"'""""""'""'"·,,,,os:,r APGVGGI.YI℃ YGGLYPGYGGL!l'CYGOI、APGYGAYl'GYGGPAAAAIAAAK GOO

゜

Oh 12h 24h 48hpulse-chase実験。 培養平滑筋細胞を『HJ
バリンで6時間標識しO(lane 1), 12(1ane2), 24(1ane 3)、48(1ane4)時間chaseした。
BはAの結果をデンシトメ ー ターで定量した。

I 1 3 4

Fig. 25N末端から約20kdのフラグメントが切断されて。

45kdペプチドはC末端が切断されたものでなく

eo点 g;em �t

こみが認められた(Fig.1A;lane4)。このことは60! AA!VGAGYOGYPGAVl'GAYPGVl'GYl'GYT郎YGGYl'Sl,Yl'OVGVIC.Vl:VI. r.:,u651吋AGIPQYGYQPGAKPr!FGYPOAGVIOYGGI IOOl,GYCGI.GVGOl,GAr.r.'IUII

701 L<:AGYGYl'GFGYSl'IFPGGYGGQl,G1G1:!rl'!TYGGAl,GAl.l:FR「""""''

,，,.，

I

2

3

4

Fig.1A

1B

Qf,"j"''"'

tの実験を行った(Fig.2)。この結果chaseの時間経過とともに45kdの65kdタンパクに対する割合

5

各種RIにて標識した培地中のタンパクのSDSPAGE後オ ー トラジオグラフィ ー 。
['HJグルコサミン(lane 1 ), いHJマン
ノー ス(lane2), ["SJメチオニン(lane3),[ 35 s]シスチン(lane4)により標識した。
非標識培地をトロポエラスチンモノク ロー
ナル抗体にて染色(lane5)。
cDNAより推定されるニロトリエラスチ
ンの全アミノ酸配 列（太線はalternate
splicingをうける配列。 矢印はC末端に存在するシスチン残基）が増加していくことが示され45kdが65kdの分解により生じる可能性が考えられた。以上の結果をさらに証明 するために65kdタンパクをDEAEセ
ルロ ー スカラムを用いてpartiallyに精製し， 同様の実験を行った。その結果chaseの時間とともに45kdの65kdに対する割合が増加していくことが判明した(Fig.3)。45kdが分解過程で生じるのに培地中に存在するプロテア ー ゼが関与している-60-

皮膚の老化に伴うエラスチン遺伝子発現の動態

ア ー ゼによると考えられた。

B)

A)

0. 10

。
。

今回の実験結果よりエラスチン分子は65kdか

5

aD
a
D
k
k
5
5
6
4
← ←
径劇〗
磁
疇
鴫

i, 0-1e」
mg
e
;
eo点g
(

4. 考 察ら45kdへと低分子化をおこし， この分解は①比
較的すみやかに 培地中で生じる。 ②分解はat
randomに生じるのではなく， おそらく N末端から約20kdのフラグメントが切断される。 ③45

I

2

3

Fig. 3kdの分解物は比較的安定に存在している。④こ

4partially purified tropoelastin を平滑筋細胞培地に加え ， O(lane 1), 6(1ane 2), 12(lane 3), 24(lane 4)時間chase した。 BはA の結果をデンシトメ ータで定量した。

の分解は おそらく培地中に存在する金属プロテ
ア ー ゼにより生じることが示唆された。 現在エラ
スチンを分解する酵素としてエラスター ゼがよく知られている。 この酵素は数種類のプロテア ー ゼ

可能性を検討するために培地を試験管内で各種プの集合体であり ， 膵臓由来 ， 多形核(PMN)白血

存在下で incubateして球由来， マクロファ ー ジ由来のものが知られていロテア ー ゼインヒビタ ーる。 代表的なPMNエラスター ゼはセリンプロテ

65kdと45kdの割合を検討した(Fig.4)。
その結果 NEM, APMSFでは分解は抑制され

ア ー ゼに属しエラスチン以外に皿型コラ ー ゲンをEDTA ImM存在下においてのみ抑制され分解するなどの点 より本実験で示唆されたプロテた。 このことは分解に関与する酵素は金属プロテ

ア ー ゼとは性状が異なると考えられる。 マクロず，A)ファ ー ジエラスター ゼは分泌型の金属プロテア ーB)ゼであるが八本実験にマクロファ ー ジが混入している可能性は低い。 したがって本実験の金属プ

-

＇

3

4

5

6

7

6

v
co,t,ol

Fig.4A

ロテア ー ゼは平滑筋細胞により分泌されるものと考えられた。

)
9/•a��j,

l

k
k
5
6 5
4

2

Do

I

5
。
;
e
1
1
0
o点
e
(
.,

1.0

本実験で最も興味深い点は45kdタンパクが安定であり，

intact なエラスチンが形成されるにあたり45kd同士あるいは65kdと45kdタンパク
O

0.5 I

NEM

0.1 I

APMSF

0.1 I

(mM\

EOTA

['HJ バリンで標識した培地を各種プロテ

ア ー ゼ存在下で試験管内で反応させた結果のオ ー トラジオグラフィ ― , lane 1; 培地
中のタンパク。 lane 2 ; 無添加で反応。
lane 3、4; NEM 各々 0.5, 1mM 存在下で反応。 lane 5,6; APMSF 各々 0.1、lmM 存在下。 lane 7,8; EDTA 各々 0.1, lmM 存
在下。
B は A の結果をデンシトメ ー タで定丑した。

同士が架橋を形成する可能性がある点である。 今
後不溶性エラスチンが沈着する細胞画分について
45kdタンパクの代謝という点から検討する予定
である。
文

-61-

献

1) Banda, M. J. and Werb, Z.: Biochem. J. 193,
589-605(1981).

Werner 症候群患者皮膚由来培養線維芽細胞のサイトカイン ・ 細胞成長因子に対する応答性
横浜市立大学医学部

佐々木

哲

雄

Since Werner's syndrome(WS) and progressive systemic sclerosis(PSS) have somesimilar phenotypic expressions, we performed a comparative study on the responsive­
ness of those cultured cells to basic fibroblast growth factor(bFGF). Skin fibroblasts
were obtained by outgrowth culture of the biopsies from a WS and two PSS patients andused after only one passage in these experiments. The medium used was supplemented
with fetal bovine serum in 10% all the time through these cultures. Cell proliferation was
stimulated in the presence of bFGF to a similar extent in these three cell cultures(up to
2.5 times of the culture without it). Collagenase production per cell in the presence ofbFGF was also increased; the responsiveness of WS cells was lower than that of PSS
cells. The significance of this difference in the responsiveness to bFGF remains to beclarified.

として， bFGF に対する反応性を検討した。 そ1. 緒の対照細胞として， 全身性強皮症 (PSS)皮膚由来

言

培養線維芽細胞を用いた。 PSS は皮因のみなら
Werner 症候群 (WS)は常染色体劣性遺伝性疾ず肺 ， 食道をはじめ諸腺器の線維化を主徴とし，患でいわゆる早老性症候群の代表的なものであ

膠原病あるいは自己免疫疾患に分類されている 4)

る I> 。 WS はまれな疾患ではあるが， 老化のモデが， 皮膚症状の 一部にル疾患としてのみならず ， その独特の表現型強ことから． 両疾患患者皮膚由来細胞の比較を試み

皮症様皮膚所見創傷治癒の遷延など極めて特徴た。

的な所見を有する疾患として注目されている。

ws と類似性がみられる

5)

2. 実 験

WS の培養線維芽細胞を用いた研究は少なくないが増殖因子に対する応答性を検討したものは少使用した bFGF はリコンビナントヒト bFGF

なし、 2) 0

で ， 科研製薬から供与を受けた。

basic fibroblast growth factorCbFGF)はヘ対象とした患者は WS1 例（以下同細胞をパリンに強い親和性を示す因子 heparin-bind­ws とing (fibroblast) growth factor (HBGF)ファミ記す）， PSS2 例（同細胞を PSS1. PSS2 と記す）

一 つで線維芽細胞や血管内皮細胞など多で， 皮膚生検もほぼ同時に行い， 以後可能な限り

ーリ のくの細胞に対して増殖促進活性を示す
今回は

3)

。

ws 細胞の細胞成長因子に対する応答性

同条件で培養した（表1) 。 すなわち ， 生検皮膚の一部から型の如く outgrowth culture 6> を行い ，Responsiveness of Werner's syndrome cultured skin fibroblasts to growth factors
Tetsuo Sasaki-62-

\Verner 症候群患者皮膚由来培養線維芽細胞のサイトカイン•細胞成長因子に対する応答性

表1

対象患者と培養細胞

息者 性 生検時年齢 診断m

柿細胞 組ft4
6
1
5

Werner 前腕伸側 1991.2.5 IIS

1回

PSS

前椀伸側 1991.2.4 PSS1

1回

PSS

腹部

1991.2.4 PSS2

1回

ws とPSS1は3月19日に PSS2は4月24日にそれ

細胞蛋白量に対するbFGFの効果
bfGf(ng/ol)
JO

0.1

＊

JO'

10'

10'

WS

.
14.8(1) .

18.5(1.3) 21.3(1.8) 31.3(2.1)

21.2(1.4) 38.6(2.6)

rss1

41.8(1)

10.10.1.) Ol.8(7..2) 102.R(Z.6)

78.J(l.OJ

10.lCl.8)

rssz

61.l(J)

38.5(0. 8) II. 8(0.9) 89. Z(l. 7) 113.O(Z.2)

00. 0(1. 8)

D n
u
"
＂
＂ H

2
5

男

IS

女

ME

女

SK

生検部位 生検日

表2

94. 8(1. 0)•

bFGFを0-IO'ng/ml�trするm賃隕でo n nn < 3 11 tlに1回1tl賃隕文険） m賛復、紐屈成タ）の償�, 量を測定した(1,g/,olI).
.. ( )内にはそれぞれの綿開系にわけるbFGF無斥加の間に対9 ・ るJtlf<を示した ．
... 原I了tt·f.

，

ぞれ 24 well dishに継代した。 継代は12-16日
4.0(WSは13日 ， PSS1は12日， PSS2は16日）後の培
2

地交換時にbFGFを最終濃度0ふl, 10, 10 .

bFGF

10 3 , 10 4 (一部の実験） ng/叫となるように各well
換とと もにday 0と同様にbFGFを添加した。 そ
測定”を行なった。 なお， 培地はDulbecco's

Modified Eagle's Mediumを用い ， 胎牛血清(FBS)は常に10%で 実験を行なった。 Day 0, 3,
6に採取した 各培養液はー 20℃に保存した。 培養
液中に 分 泌 されたコラゲナ ー ゼの酵素活性はFITCで標識したI型コラ ー ゲンを基質として既

10
102

1.0

報 8) のごとく測定した。

10-1

。

士
系口

3.

103 ng/ml

0
2
Aヒ ＞―
卜
Q<w S'vz
w9<JJoQの3日後(day 6)に培地を除去し， 細胞蛋白量の

0
3

(E/
sl
1
un)

に加えた(day O)。 さらに3日後(day 3)に培地交

果
16

3. 1

細胞増殖に対するbFGFの効果

Day 6における細胞蛋白量の測定結果を表2にDAYS IN CULTURE

最高でも bFGF無添加の場合の2.5倍前後(WSはws 線維芽細胞コラゲナ ー ゼ産生に対するbFGFの効果
Dav O , 3 , 6における培養液中に分泌されたコラゲナ ー ゼ活性を培養液1 m2当たりのunitとして示した（図2 , 3も同様）。 1 Ong/ m2まで
濃度依存性に産生が剌激された。

2.6倍 ， PSS1は2.5倍， PSS2は2.2倍）であった

分泌されたコラゲナ ー ゼ活性を細胞蛋白量当たり（表2)。

で 表わしても その値は ， PSS1 > PSS2> > WS示した。 いずれの細胞系においてもbFGF添加

図1により ． その農度に依存して細胞増殖が促進される傾向がみられた。 今回の細胞系では． いずれもであった（表3)。 しかしながら ， 各細胞系においコラゲナ ー ゼ産生に対するbFGFの効果て， 細胞蛋白量当たりの分泌されたコラゲナ ー ゼ

bFGFは 培養皮膚線維芽細胞のコラゲナ ー ゼ

活性をbFGF無添加の培地の同活性に対する比産生を濃度 依存的に増強させた。 bFGF添加にで示すとPSS1 > > PSS2 > WSとなり ， PSS2と3. 2

より 培地1叫当たりに分泌されたコラゲナ ー ゼ活
性はPSS1> PSS2> > > WSであった（図1-3)。

ws の差が減少し PSS1とPSS2の差が拡大した
，

（表3)。

-63-

140

bFGF

bFGF

102 ng/ml
103

125

10 2
ng/ml

75

(
E/s1
1
un) Aヒ ＞F 3<w S'v'
Nu9<440Q

100

5
7
0
5

0::>
Tl
N39'v'＞戸Qくw S'v'
In) A.L
u
,
,i
E[,
(

10

1Q3

10

3

6

3

DAYS IN CULTURE

DAYS IN CULTURE
図2

PSS 1線維芽細胞コラゲナ ー ゼ産生に対するbFGFの効果
1がng/叫まで濃度依存性に産生が刺激された。

図3

PSS 2線維芽細胞コラゲナ ー ゼ産生に対するbFGFの効果
1がng/mRまで濃度依存性に産生が剌激された。

細胞！

WS

0.1
17.8(1) .. 36.6(2.1)

PSS!

33. 0(1)

.
HD..

PSS2

87.((1)101. 7(1.2)●

bFGF(呵／●1)

1

察

細胞当たりのコラゲナ ー ゼ産生に対するbFGF
の効果＊

考

4.
表3

6

。

゜

25

ws 線維芽細 胞は血小板由来増 殖因子

10

1 02

10'
81.2(4.7)

35.8(2.1)

73.0(4.3)

94.2(6.6)

241.0(7.3)

450. 5(13.7)

1698(51. 6) 1691(51. 2)

187.6(2.2)

289.9(3.3)

663.0(7.6)

617.0(7.1)

bFGFを0-lO'ns/•l含有する培養液で6日間(3日後に1回培賛液交換）培賛
後 、 培賛液中に分泌されたコラゲナーゼの活性を綿屈蛋白量当リで示した(units/mg protein).
.. ( )内にはそれぞれの細屈系におけるbFGF無翫加の値に対する比亭を示した ．
●●● 施行せず ．

(PDGF) や FGFの増殖刺激に対する応答性は低く（血清を涸渇させた場合）， FBS(20%) の増殖剌激に対しては対照と変わらず充分に応答するとい2)う実験結果がすでに報告されている。 今回我々

は常に10%FBS 存在下で培養を行なった。 それがbFGF の細胞増殖刺激活性に対してws と PSS

でほぽ同程度の応答性を示した事実の理由と思わ
れる。

-64-

1988年平井ら 9) はその低応答性の理由としWerner症候群患者皮膚由来培養線維芽細胞のサイトカイン•細胞成長因子に対する応答性てWS細胞内における蛋白のリン酸化の低下が考Iえられるとした。 1991年河野ら O)は

ws 細胞の増殖低下はPDGFレセプタ ー の合成低下による

ws 線維芽細胞可能性を示した。 しかしながら ，におけるFGFのシグナル伝達に関する詳細な検討の報告はみられて いない。
1992年Millisら II) は ，

ws 線維芽細胞およびin vitroで継代を重ねたヒト皮膚線維芽細胞に

お いては

metalloproteinase(コラ ゲ ナ ー

ゼとstromelysin)の遺伝子発現は冗進し ， TIMP の発現は低下しているという成績を発表している。

ws 線維芽細胞においてはPDGFのコラゲナと比 較 す る と ， PSS1 , PSS2 , WS の順に

bFGFに対する応答性が強かった。 この bFGFに対する応答性の差の意義は今後なお検討を要す

るものと思われる。
文

Molsky, A. G. :Werner's syndrome. Medicine,45, 177-201, 1966.

2) Bauer, E. A., Silverman, N., Busick, D. F.,

Kronberger, A., Deuel, T. F. :Diminished re­ーsponse of Werner's syndrome fibroblasts togrowth factors PDGF and FGF. Science, 234,

ゼ産生刺激に対して応答性が低下していることがす でに示されている 2) が ， bFGFのコラゲナ ー献l) Epstein, C. J., Martin, G. M., Schultz, A. L.,

1240-1243, 1986.

ゼ産生に対する効果は我々の知る限りこれまで報3) Burgess, W. H., Maciag, T. :The heparin­

激効果に対する応答性も WSではPSSに比べてproteins. Annu. Rev. Biochem., 58, 575-606,

告されていない。 bFGFのコラゲナ ー

ゼ産生刺低下していることが今回の実験で示された。 しかbinding (fibroblast) growth factor family of
1989.

しながら ， 対照としたPSS1とPSS2でもそ の応

4)佐々木哲雄：病気の生化学(170)全身性強皮症。

なお検討を要するも のと思われる。

5)剣持つる代， 佐々木哲雄， 中嶋弘： Werner症候

答性に相当な差がみられたので， その意義は今後

代謝， 27, 65-76, 1990

群と全身性強皮症との比較研究。 横浜医学， 43,

5. 総 括ws

115-119, 1992.

とPSSは皮膚症状など 一 部の表現型に類

6) Sasaki, T., Arai, K., Ono, M., Yamaguchi,T., Furuta, S., Nagai, Y. :Ehlers-Danlos

syndrome:a variant characterized by the defi­

似性がみられるため ， 今回は両疾患患者皮膚由来

培養線維芽細胞のbFGFに対する応答性を細胞増殖とコラゲナ ー ゼ産生で比較した。 対象はws(52歳女性）とPSS(64歳女性， 57歳男性）で ， 同時に生検され ， 同様に1回継代された培養細胞に

ciency of pro a 2 chain of type I procollagen.

Arch Dermatol., 123, 76-79, 1987

7) Bradford, M. M. :A rapid and sensitive

method for the quantitation of microgram4

リコンビナントヒトbFGFを 10 ng/叫まで各種

quantities of protein utilizing the principle ofprotein-dye binding. Anal. Biochem., 72, 248

濃度に添加し ， 3日後， 6日後に培養液中に分泌されたコラゲナー

ゼの活性を ， 6日後の細胞蛋白量-254, 1976.

をそれぞれ測定した。 培養液中の胎牛血清は常に

8) Nagai, Y., Hori, H., Hattori, S., Sasaki, T. :度依存的に増強 された。 6日後の細胞蛋白量はln:Mixed Connective Tissue Disease and Anh

10%とした。 コラゲナ ー ゼ産生はbFGFにより濃bFGF添加により3種の細胞系でほぼ同程度に増加した（無添加の 2.5倍前後）。6日後の細胞蛋白当たりのコラゲナ ー ゼ産生をbFGF無添加の場合-65-

PMN-derived fibroblast-stimulating factor-nuclear Antibodies, 229-234. Ed. R. Ka­

sukawa and G. C. Sharp, Elsevier, Amster­dam, 1987.

9) Hirai,

M.,

Amagai,M.,

Tajima,下機構 ー 血小板由来成長因子受容体との関連につS.,

いて ー 。 日老医誌 ， 28, 233-234, 1991.

Nishikawa, T., Shimizu, N. :Mitogen-medi­
ated protein phosphorylation in Werner's11) Millis, A. J. T., Hoyle, M., McCue, H. M.,

syndrome fibroblasts. Cell Struc Fune., 13,

Martini, H. :Differential expression of metal­

471-480, 1988.

loproteinase and tissue inhibitor of metallo­

10)河野幹彦 ． 森聖二郎 ， 神崎哲人 ． 森崎信尋 ． 斎藤

proteinase genes in aged human fibroblasts.
Exp Cell Res., 201, 372-379, 1992.

康 ， 吉田尚： Werner症候群における細胞増殖低-66-

光化学反応によるフリ ー ラジカルの産生と表皮培養細胞に対する影響
Dithranolを例として東京大学医科学研究所

金ケ鏑

士

朗

Radical species probably formed during autooxidation of dithranol, 1,8-dihydroxy-9-anthrone, are considered to be responsible for antipsoriatic effect of this drug. By
using spin-trapping ESR spectroscopy, we investigated whether or not radical species,
such as oxygen radical and organic radical, were generated in the presence of dithranol
in organic solvent, in aqueous solution or after incorporation of the drug into ker­
atinocytes. In DMSO, o,-was found to be formed from molecular oxygen with the aid ofdithranol. The reaction was greatly enhanced by near-UV irradiation. In DMSO-PBS
mixture, o,-was also formed but it rapidly converted to·OH. After incubation of the
drug with keratinocytes, organic radical was formed from dithranol. Microsome andmitochondria were found to be responsible for the formation. Although dithranol exhib­
ited cytotoxicity, no indicative of lipid peroxidation was found. Since oxygen radical
scavengers prevent cytotoxic effect of dithranol, at least a part of the cytotoxic effect isdue to oxygen radical species.

1. 緒 言一

方 ， ある種の anthraquinone 系化合物には発癌性•発癌 promotor 性のあることが知られてDithranol (1,8 dihydroxy-9-anthrone)はおり 4) ' それらの生理活性にフリ ー ラジカルの関

ヒフの増殖性病変である乾癬の治療薬として古く与を示唆するデ ー タが蓄積されつつある 5 > 6 >。

から用いられている I) 。 この化合物は強い還元作

anthraquinone の 一 種である Dithranol には抗用を持ち ， 光や酸素によって容易に酸化されて乾癬作用だけでなく ， 発癌 promotor 作用 ” や突

10-anthranyl radical に変化し ，一

同時に 重項然変異原性のあることも報告されている 8) 。

酸素あるいはス ー パ ー オキシドアニオンのようなそ こ で本研究で は、 ESR 法に よ っ て ，

活性酸素を生ずる。 そしてこれらのラジカルや活

Dithranol の酸化過程で生成されるフリ ー ラジカ

性酸素が Dithranol の抗乾癬作用の要因である

ル種を同定し ， それらのラジカル種の生成に対すと報告されている

2)3l。 しかしながら， これまで

る光照射の影響を調べると共に， 培養ケラチノサの報告においては， Dithranol の酸化に際し生

イト細胞 を用い ，成される活性酸素種の正確な同定はなされていな

リ ー ラジカルの相関性を検討した。

Dithranol の細胞障害性とフい。 また， 産生されるフリ ー ラジカル種と細胞に対する生理活性との相関性も充分には解明されてしヽなしヽ。
OXYGEN RADICAL FORMATION DURING OXIDATION OF DITHRANOL AND ITS EFFECT ON
KERATINOCYTESShiro Kanegasaki

-67-

2. 実

験

に取込ませた 51 Crの放出を指標とした。 96穴のプラスチックプレ ートにケラチノサイト(10り穴）

Dithranol (Sigma製）は 使 用 直前に 暗所 でを移植し， 3日間培養した。 この細胞に 61 Cr­

dimethylsulfoxide CDMSO)に溶解した後 適

sodium chromateを加え37℃ 90分間incubate

当な溶媒で稀釈した。

した。 細胞外の 51 Crを 培養液で洗浄除去した後，Dithranol由来の有機フリ ー ラジカルの生成は直接ESRスペクトルを測定した。

Dithranolを含む培養液で 一 定時間incubateした後 培養液中の放射能と細胞中の放射能を別々活性酸素ラジカル種はDMP0(5,5'-dimethylに測定した。
Dithranolの細胞障害に フリ ー ラジカルが関-pyroline-1-oxide)を用いたスビントラップ
9)

ESR法 により検出した。

与するか否かを調べる実験では ， 上記のごとく

細胞内過酸化脂質ラジカルの生成を測定するた

5

1 Crを取込ませた細胞を各種のフリーラジカル

めには あらかじめ細胞に取り込ませたDHA

スカベンジャ ーないしはスビントラッパ ー 存在下(docosahexaenoic acid)由来の過酸化脂質からでDithranol処理し ， 5 1 cr放出量を比較した。

生じるアルキルラジカルをPOB N(2-(4-pyridyl

3. 結果および考察-l-oxide) -1-N-tertbuthylnitrone)でトラッ
プし ， そのESRスペクトルを測定する方法

IO)

を
Dithranolの自動酸化によるス ー パーオキ

1 .

用いた。

シドラジカルの生成とそれに由来する活性酸

フリ ーラジカル生成に対する光照射の実験には ，
キセノンラン プ (Cermax社（米）製 ，LX150-

素種の生成

300,150W, lOA, 波長範囲300nm-900nm)を使1. 1用した他昼光色蛍光灯も使用した。 対照実験はDithranolをDMSOに溶解した直後に測定し完全に遮光した状態で行った。

DMSO中での反応

たESRスペクトルをFig. laに示す。 スペクト細胞系としては ， マウス皮膚上皮細胞由来のケ

ル に は 02 ーのス ビンアダク ト であ るDMPO­

ラチノサイト (B ALB/MK -2)を用いた。 FBSOOHのシグナルのみが観察された。 スピンアダ

培養液中で4日問培養した細胞をトリプシン処理

クトの生成は， 嫌気的条件下では観察されず光照

し， 遠心沈殿したペレットをPBS(-)で洗浄後同射の有無にかかわらず認められた。 反応液を長時溶液に懸濁した。 この細胞懸濁液にDithranol

間暗所に放置した場合にはDMPO-OOHのシグを加え ， 添加直後 および一定時間incubateした

後直接並びにスビントラップ剤を加えESRス
ペクトルを測定した。
Dithranolラジカル生 成に関与する細胞分画の検討に当たっては， 上記の方法で集めたケラチ

二↑へ｀ぃノサイトを等張溶液中で超音波処理した後， 遠心CJ分離法によって mitochondria., microsomeおよ合と同様の方法でESRスペクトルの測定を行った。
Dithranolの細胞障害性は ， ケラチノサイト

V，

!OG

び cytosolの各分画を採取した。 これらの分画にDithranolを加えて incubateした後， 細胞の場

い

-_,_;

F 19. 1 D ithranolのDMSO溶液 にDMPO を 添 加
した時に観察されるESRスペクトル
5mM Dithranol溶液に180mM DMPOを添加して測定。 a) DMPO添加直後 ， b)暗所に6時間放置後 ， C)蛍光燈下に6時間放置後。 但し感度を1/20にして測定-68-光化学反応によるフリーラジカルの産生と表皮培養細胞に対する影響

ナルの他に·OHの生産を示唆するDMPO-CH3た(Fig.2d)。反応液に鉄のキレ ー タ ー を加えたの小さなシグナルが見られた(Fig. lb) 。光照射

場合にはDMPO-CHaシグナル強度がやや低下条件下に放置した場合にはDMPO-OOHのシグした。これらの結果から ， Dithranolは水溶液

ナル強度は約10倍近くまで増加し(Fig. le). 光

中でも自動酸化されて0 2ーを生成する。しかし， 水

照射が0 2 -産生を著しく増強させることを示した。

溶液中ではDMSO 中と異なり， 生成された0 2 -また， 上記DMSO 溶液中では， 以下のDMSO­

は， これから生じたH20 2 とのHa rb er-Weiss

PBS (l:l)混合反応溶液中とは異なり． 長時間光反応あるいは， 反応液中に微量に含まれる鉄を触照射して 放置して もg=2.0の有機ラジカルは観察媒とするFenton 反応によって すみやかに·OH

されなかった。この結果は0 2 ーが直接には有機ラに変換されることが示された。

ジカルの生成に関与しないことを示して いる。

反応溶液を長時間暗所に放置した場合にはDMPO-OOHとDMPO-CHaのシグナルが観察

1. 2

DMS0-PBS(pH7.4)(1:1)混合液中でのされたのに対して昼色光下で放置した場合には，

反応

これらのシグナルに加えて g=2.0に有機ラジカル

Dithranol 溶液を調整した直後のスペクトルが観察された(Fig. 3a)。反応液中にSODを添加をFig. 2a に 示 す 。 こ の 場合主なシグナルはしておくとこのシグナルの強度は増大し(Fig. 3·OH由来と思われるDMPO-CHaのシグナルで，b) ,この他に02―存在を示すDMPO-OOHの小さなDMS0100%の反応液中では反応液を長時間光照

シグナルが観察された(Fig. 2a)。反応液中に射することによって 0 2 ー産生量が増加して も有機

SODを加えておいた場合にはDMPO-OOHのラジカルは観察されなかったこと(Fig. le)およ

シグナルは観察されず(Fig2. b),catalase存在

び上記DMSO-PBS 混合反応液中に catalaseを下ではDMPO-C比のシグナル強度は1/4に低加えておくと有機ラジカルの強度が半減したこと下 した(Fig. 2c)。 さ らに 反応液中にSOD とを合わせて考えると， g=2.0 の有機ラジカルの

catalase が あ る と減少し た ( Fig. 3c)。

catalaseを加えた場合には， DMPO-OOHのシグナルもDMPO-CHaのシグナルも現れなかっニニ一乍�l\r-----------

旱

dJ

Fig.2

lOG

DithranolのDMSO-PBS(1:1) 溶液にOM­
POを添加した時に親察されるESRスペクト
ルと活性酸素スカベンジャ ー の影響

5mM Dithranol溶液に180mM
DMPOを添加して 測定。 a) 対照；b) 1000U/mi
SOD添加 ， c) 5000U/mU catalase添加d) SODとcatalase添加-69-

Fig. 3Dithrano有l 機ラジカル生成に対する光照射の影響60mM Dithranol 溶液(DMSO-PBS(1:1))にa)無添加 ， b) 1000U/mi SOD, c)
5000U/ 1111 catalase, d) SODと catalaseをそれぞれ加え ， 蛍光燈下に6時間放置後180mM DMPOを加えて測定。

そこで， このラジカル生成に細胞成分が関与し生成には光が必要であるが 02-は直接関与せず ，て い るか否かを調べる た め に ，H2 切が関与していると考えられた。

mogenateした後遠心分画し ，

昼色光下で見られた反応が近紫外部光線によることを確かめるために ， キセノンランプ(300nm

細 胞 を ho­mitochondria,

microsome, cytosolおよびcell debrisの分画に以上）を用いて同様の実験を行った。結果はFig.

ついてDithranolを加え， 上記と同様の実験を2の 結 果 と同様で ， 反応液調製直 後 に はま ず行った。結果は， mitochondria, microsomeおDMPO-OOHとDMPO-CHaのシグナルが観察

よびcell debrisの存在下で有機ラジカルが観 察された(Fig. 4a)。この液を暗所に20分放置した

され ，

場合のESRスペクトルは， 調製直後のものとほルは観察されなかった。

Cytosolを加えた系ではラジカルのシグナ

とんど変わらない(Fig. 4b)が ， 光照射下20分放置した場合にはDMPO-C止のシグナル強度は

2. 2 ケラチノサイト中で脂質の過酸化反応が1/2に低下し ， 代って g=2.0に有機ラジカルのシ生じるか否かを調べた。Dithranolは水溶液中グナルが観察された。したがって昼色光下で観察で 02 ―, ·OH, H心 2 を生成することが明らかにされたフリ ー ラジカルの生成が近紫外部光線下でなったので， これらの活性酸素種存在下でケラチ生じることが確かめられた(Fig. 4c)。

ノサイト細胞膜において過酸化脂質が産生されるか否かを調べた。このため， あらかじ めDHAを

ケラチノサイト存在下でのフリ ー

2.

ラジカルの

生成とDithranolの細胞障害作用

取り込ませたケラチノサイトにDithranolを作用させ ， DHAから過酸化脂質が生成される 時にまず産生されると考えられているアルキルラジカ

2. 1

培養ケラチノサイト細胞にDithranolを

ルをPOBNでトラップする方法で検討した。 そ加えた反応液を室温で incubateした後DMPOの結果， 対照として二価鉄を加えた反応系ではを加えてESRスペクトルを測定したところ，

POBN の ス ピ ン ア ダク ト が 観 察 さ れ た が ，DMPO-OOHのシグナルもDMPO-C止のシグ

Dithranol添加反応系ではPOBNのスピンアダ

g=2.0の有機ラジカルのシグ

クトは観察されず ， この条件下では細胞の脂質のナルも観察されず ，過酸化反応が起こっているという証拠は得られなナルのみが観察された。

二'.,�+�臼賛←い―v-t�凸—--

二)_�炉

かった。
2. 3

Dithranolの細胞障害性を s1crの放出を指標として調べた。あらかじ め s1crを取り込ませたケラチノサイトにDithranolを加えて incu­
bateし ， そ の間に放出される s1cr量を対照の細胞の値と比較した。 0.5mM Dithranolで4時間"後から有意に s1cr放出の増加が見られ(Fig. 5),

C)

,, .
ーヽ

この濃度でDithranolに細胞障害性のあること

LOG

Fig. 4が確かめられた。

Dithranol 溶液にキセノンランプを照射した
時に親察されるESR スペクトル。
5mM Dithranol 溶液(DMS0-PBS(1:1)) にa) 調製直後 ， b) 20 分間暗所に放置後 ， お
よびC) 20 分 間キセ ノンランプ照射後 180
mM DMPO を添加して測定。

2. 4

Dithranol細胞障害性に対するフリ ー ラ

ジカルスカベンジャ ー の影響を調べた。2.3と同様の系に 0.5mM Dithranol添 加 直前にSOD,-10-光化学反応によるフリ ー ラジカルの産生と表皮培養細胞に対する影響〇寸

oc*5.0 mM• Q.5 mM
• Q mM3) 水溶液中で Dithranol 自動酸化により生成された 02 ーは H 2 切をへて ・ OH に変換される。

4) H2 切存在下で光を照射すると Dithranol か
0 2 ―, ·OH は検出されず有機ラジカルの生成が観察された。

oz

6) ケラチノサイトにおける有機ラジカルの生成には細胞の mitochondria, microsome 中の酵素の関与が推定された。

oL①s
ee 一① 工 Nら有機ラジカルが生成される。

5) ケラチノサイト存在下では，

7) Dithranol は 0.5mM, 4 時間処理でケラチ
ノサイトの s1 cr 放出を促進した。

8) Dithranol による s1 cr 放出の促進が SOD に

Fig. 5

hr

4

6

2

よって低下したことから Dithranol による細胞障害性に 0 2 ーが関与すると考えられる。

（研究実施者 上野郁子， 干徳山）

培養ケラチノサイト細胞からの 51 Cr releaseに対する Dithranol の影響。

引用文献I) Ashton, R. E., Andre, P., Lowe, N. J. andWhitefield, M. J. Am. Acad. Dermatol. �173
-192(1983).

catalase, POBN, DMPO 等を加え， Dithranol

による ,1 Cr 放出の促進がこれらのフリーラジカ

2) Bruce, J.M., Kerr, C. W. and Dodd, N. J. F.
J. Chem. soc. Faraday Trans, 1, 埜85-89(1978)

ルスカベンジャ ー の処理によって抑制されるか否かを調べた。 この結果， SOD 処理の場合にのみ
約 30% の低下が見られ，

3) Fuchs, J. and Packer, L. J. Invest, Dermatol.
競677-682(1989).

0 2 ―産生が Dithranol の細胞障害性の一部に関与していることが明らかに

4) Uraguchi, K., Saito, M., Noguchi, Y., Taka­hasi, K., Enomoto,M. and Tatsuno, T., Food
Cosmet. Toxicol. 拉，193-207(1972).

なった。
以上の結果から ， Dithranol は水溶液中で自動酸化して 0 2 ーを産生し， 近紫外波長の光線はこ

5) Akuzawa, S., Yamaguchi, H., Masuda, T.
and Ueno, Y., Mut. Res. 芦63-69(1992).

速やかに産生されることが明らかになった。 さら6) Ueno, I., Hoshino, M., Maitani, T., Kane­
gasaki, S. and Ueno, Y., Free Radical Res.
Com. in pressの 0 2 ―産生を促進すること，

0 2 ーからは ·OH がに ol cr 放出を用いた実験でケラチノサイトは ，低濃度の Dithranol によって傷害され ， その原

7) Boch, F. G. and Burns, R., J. Natl. Cancer
Inst. 迎 ， 393-397(1963).

が関与していることが示された。

8) Gillberg, B. 0., Zetterberg, G. and Swanbeck,G., Nature璽415(1967).

因の一部には Dithranol 存在下で生成される 0 2 -総9) Ueno, I., Kohno, M., Mitsuta, K., Mizuta, Y.
and Kanegasaki, S. J. Biochem. 謳905-910(1989).

括

1) Dithranol は酸素存在下で自動酸化によって 02 ーを生成する。

10) North, J. A., Spector, A. A. and Buettner, G.
R. J. Biol. Chem. 匈 ， 5743-5746(1992)

2) 近紫外部から可視部に至る光線の照射は 0 2 -産生を増大させる。

-71-

皮膚の糖脂質東京都臨床医学総合研究所

山口労災病院

浜

中

すみ子

•

鈴

木

賞

Human epidemis gave two glycolipid bands that migrated faster than glucosyl­
ceramides and two bands that migrated like glucosylceramide and galactosylceramide,
respectively, on TLC. The two faster migrating glycolipids (GL- I and GL- II), which
exhibited alikali-lability, were purified by conventional DEAE and silica gel column
chromatographies, and further by HPLC on a silica gel column. Structure determina­tion of the two components, n 血ed GL- I 3 and GL- II 3, which were finally purified
from GL- I and GL- II, respectively, by HPLC on a reversed column, was performedby means of 'H-NMR spectroscopy, fast atom bombardment mass spectrometry, andcomponent analysis involving GLC-mass spectrometry. GL- I 3 was determined to bea mixture of glucosyl/3 1-N- ( w -0-linoleoyl ) triacontanoyl and -dotriaconta­
monoenoyl-eicosasphingenine, and one of the two components of GL- II 3 was deter­
mined to be glucosyl /31-N- (w -0-linoleoyl) triacontanoy1-trihydroxyeicosasphinge­nine. GL- I 3 and GL- II 3 were the major components of GL- I and GL- II, respective­
ly, and both the latter contained additional four components, which were heterogeneous
as to the ceramide portion. This paper reports the structures of acylglucosylceramides
isolated from human epidermis together whth 'H-NMR spectra and mass spectra
demonstrating their molecular weights. The structure of molecular species containing
trihydroxysphingosine having a double bond is novel.

はじめに

臨床症状はリノ ー ル酸を50%含む大豆油を原料とした乳化脂肪の投与で改善された。 必須脂肪酸

1929年

Burr と Burr によって初めて必須脂欠乏時には多くの症状が報告されている 3) が*I'

肪酸の概念が提唱された ！） 。 ラットを無脂肪食で臨床的にとくに注目されるのは皮膚症状， 易感染

飼育すると ， 皮膚の落屑体重減少， 不妊， 水分性 2' 血小板数減少およびその機能低下， 体重増

消費の増加， 尿量減少を生じ， 易感染性となり死加不良などがあげられる 4) 。 これらの症状のうちに至る。 これらの症状は w-6 不飽和脂肪酸（リ

体重減少，尿量減少， 水分消費の増加は皮膚から●ノ ー ル酸， ァ ー リノレン酸，ジホモ ー 7 ー リノレンの水分漏出の結果生じる二次的変化であり， 水分酸， アラキドン酸）の投与で著しく改善されるこ

漏出はリノ ー ル酸を外用するだけでも阻止できるとから， 生存に必須の脂肪酸の存在することが認ことが明らかとなると ， 皮膚に水分漏出を防ぐ保識された。 その後，臨床的に必須脂肪酸欠乏症が護バリア ー が存在するのではないかと想定される

注目されるようになったのは 1970 年代に高カロようになった5) 0

リ ー の非経口的栄養補液（経静脈投与）が盛んに行なわれるようになってからである 2) 0

Glycolipids of Mammalian Epidermis
Sumiko Harnanaka· Minoru Suzuki-72-

皮膚の糖脂質表11. 皮膚脂質の研究

脂人体の約7096を占める水分を保持し， 紫外線や異物・微生物などから人体を保護することは皮膚の重要な機能である。皮膚が基底細胞 ， 有棘細胞，
顆粒細胞と分化し， 最終的に角質細胞となっ て角層を形成する目的の1つは， 角層で水分保護バ リ
ア ー (transepidermal

water per�eability

barrier) をつくることである（図1) 6)。角層には細 胞 間 に 脂 質 の 層 状 構 造 (intercellular lipid

lamellae) が観察され， この脂質構造がバリア ー

ル，

ステロ ー ル／ワックスエステル ，

質

底層／
基有棘
層

顆粒層 角

層

44. 5
極性脂質
コレステロ ー ル硫酸塩
2.6
51.0
中性脂肪
11. 2
遊離ステロ ー ル
7.0
遊離脂肪酸
12. 4
トリグリセリド
ステロ ー ル／ワックスエステル 5.3
スクアレソ
4.9
3.9
n-アルカソスフィソゴ脂質
7.3
グルコシルセラミド
3. 5
七ラミド
3. 8

25.3
5. 5
56. 5
11. 5
9. 2
24. 7
4. 7
4.6
3. 8
II.7
5. 3
8. 8

4. 9
1. 5
77.7
14. 0
19.3
25. 2
5. 4
4.8
6. 1
18. I

99.1

101.1

99.3

計

の本体であろうと考えられている ” 。角層を構成する脂質はトリグリセリド， セラミド， ステロ ー

ヒト表皮細胞の脂質組成

trace

18. I

ロキシ脂肪酸で， そのQ末端にリノ ー ル酸がエス

テル結合をしている 9) 。

アルカン，

スクワレンであり， リン脂質や糖脂質はほとんど

このアシルセラミドは脂質を層状に構築するの含まれていない（表1) 8) 。角層の脂質はセラミドに必要であろうと考えられている。バ リア ー を形を豊富に含み， しかもセラミドの分子種は7種と成する脂質がどこから由来するのか明らかにする多様である。もっとも特徴的なセラミドはアシル

ために緻密な電顕的観察が続けられた結果 ， 顆粒

セラミドであり， 酸アミド結合脂肪酸がQー

ヒド細胞に存在する小器官である層板顆粒 Oamellar

body, keratinosome, cementosome, Odland
body, membrane coating granule などの名称でよばれる）で生成されることが明らかとなった 10 l 。層板顆粒は100-300nmの球形ないし卵表皮形の顆粒で， 生体膜に包まれ， 内部に disc と表現される層状構造をもつ（図2) II l 。内容物はクロロホルム ー メタノール処理により消失すること 12 l
水分の保持能力が衰え た皮膚では層板顆粒は空虚となること 13 l から内容物は脂質であり， 水分保

真皮護に重要な役割を担うことが推定された。電顕的に． 層板顆粒がゴルジ体から細胞膜へと移動し．

図1

*1
*2

皮膚の構造
茎底層 ， 有棘層 ， 顆粒層 ， 角層は ， それぞれ基底細胞 ， 有棘細胞， 顆粒細胞， 角質細胞よりなる。 〔標準皮膚科学（医学書院）を 一 部改訂〕

膜と融合したのち内容物を細胞外の角層直下に放出 するのが観察された。放出された層板構造物は角層細胞間に伸展し． 層状脂質となる（図3) 14) 0①肉眼的所見：成長停止 ， 体重減少 ， 皮贋乾燥， 落屑 ， 肥厚 ， 脱毛 ， 生殖異常 ， 血尿 ， 創傷治癒遅延 ， 易感染性など。 ②顕微鏡的所見：皮膚の角質異常 ， 肝の脂肪浸潤 ， 腎壊死など。 ③生理• 生化学的所見：水分消費塁
や基礎代謝の増加 ， 血小板減少症， 血清および各臓器脂肪酸構成の変化 ， 細胞膜透過性の変化 ， ミトコンドリ
ア細網内皮系などの機能変化など。
必須脂肪酸欠乏時には肺炎に罹患しやすい。

-;]3-

らかとなった。 このことから， 表皮では糖脂質は細胞分化に従って著明に変化し， また， 水分保護
バリア ー である層状脂質に形成するために， まず
拿が切断されアシルセラミドとなることにより， 重
要な脂質 成分の1つが供給されて い ると考えられ

令

皇
” tゎ
.
．
9‘
鳶 ヽ

屑仮馴粒

る。 そこで， 表皮糖脂質の解析， とりわけアシル

x
こ`

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胄

令 9 ，絡グルコシルセラミドの解析が注目された。

9

、 な

、

2. 表皮糖脂質の構造研究

}

會

図2

アシルグルコシルセラミドが合 成され ， ついで糖

ケラトヒア
リン馴粒

顆粒細胞の電顕像
層板顆粒を示す。

〔Dermatology, Sandoz 著(Medical Publications) より抜粋〕

表皮脂質の分析が進むにつれ， 顆粒層で糖脂質

Grayはプタとヒト表皮から糖脂質を単離• 構
造解析を行ない． 各種グルコシルセラミドの構造解析に関して報告した I 5 l。 これらグルコシルセが増加すること（表1 )'さらに層板顆粒にはめず

ラミドはシリカゲルTLC上で4成分に分離され，らし い糖脂質アシルグルコシルセラミドが豊富に

このなかでも っとも非極性な成分はグルコ ー スの存在し， 角層に至ると糖脂質が消失することが明3位に脂肪酸を有するアシルグルコシルセラミド
であることを示した。 そしてこの脂肪酸はリノ ール酸が主で ， プタで77.4%,
ることを報告した
グル

ー

16)

ヒトで56.2% を占め。 1983年，

Downingらの

プはプタ表皮を用いて追試を行ない． その結果 セラミドを構成する酸アミド結合脂肪酸はGrayの報告とは異なりQ ー ヒ ド ロキシ脂肪酸であることを報告した

17)

0

2年後の1985年， 同グル ー プは， このアシルグ
ルコシルセラミドの構造解析を再度行なって． リ
ノ ール酸は糖ではなくo ー ヒドロキシ脂肪酸とエス
テル結合をしていることを初めて明らかにした 18) 0
時をほぼ同じくしてBowserらのグル ー プがプタ
表皮から 1 9), 内田らがモルモット表皮から 2 0 l ,ほぼ同様の構造のアシルグルコシルセラミドを検出し報告した。 他にラット 2 1 > , ウマ 22) のアシル

令

グルコシルセラミドも解析された。

三
彦多
図3

これらの研究結果から． 哺乳類の表皮糖脂質に水分保護バリア ー としての脂質構造が形成される過程の電顕的模式図 I 4)
Granular cell : 顆 粒 細胞， I ntercel I u I ar
space : 細胞間隙 ， Horny cell : 角質細胞 ，gr : ゴルジ体、gem: 顆粒細胞膜 ， icl: 細胞
間層状脂質， hce : 角質細胞膜， kl : ケラチン
フィラメント ， lb : 層板顆粒。

は以下の特徴が認められた（図4)。
①動物種属間に差は認められない。②糖脂質は薄層クロマト上で4成分検出され， これらはすべて糖としてグルコ ー スをもつ。③主 成分はアシル
グルコシルセラミドであり ， その構造はグルコ ー-74-

皮膚の糖脂質゜(a)

図4 表皮アシルグルコシルセラミドの構造研究（哺乳類）(a) 1-(3'-0-acy1)- P -glucosyl-N-dihydroxypentatriacontadienoyl-sphingosine。［ヒト ， ブタ](Gray,
G. M., White, R. J., Majer, J. R., 1978)(b) (JJ ヒドロキシ脂肪酸の同定。［ブタ](Wertz, P. W., Downing, D. T., 1983),[ラット] (Wertz, P. W.,
Cho 、 E. S., Downing, D. T., 1983)(C) リノ ー ル酸は (JJ- ヒドロキシ脂肪酸の (JJ 末端にエステル結合 〇 [ブタ](Bowser, P. A り N四ぉ心几D. H.,
White, R. J., Houtsmuller 、 U. M. T., Pretty, C., 1985; Abraham, W., Wertz 、 P.W., Downing, D. T.,
1985), [モルモット](Uchida, Y., lwamori, M., Nagai, Y., 1988)ー

3. ヒト表皮の糖脂質エピデルモシドの構造解析 2 4)ス lmol. スフィンゴシンにきわめて長鎖のw­
ヒドロキシ脂肪酸が酸アミド結合を形成したセラ
ミド lmol,

さらにそのQ ー ヒドロキシ脂肪酸 のo 末端に脂肪酸 lmol がエステル結合を形成してヒト表皮糖脂質をシリカゲル TLC で分析するいる糖脂質である。④エステル結合脂肪酸としてとセレプロシドに相当する位置に4成分の糖脂質

は， リノ ー ル酸の含有率が高い。

が認められた（図 5) 。 シリカゲルを用いた HPLC

②項に関して ， 筆者らはプタ表皮に少量のガラ
クトシルセラミドが存在することを認めている。

令. ,.,
唸,..,,_

筆者らは基底層を含む表皮を真皮から分離することに成功し． そこから抽出した脂質を解析に使用

疇心とした。 基底層にはメラノサイトが存在しており ，
ガラクトシルセラミドはメラノサイトから由来し

図5

-75-

起廿

封栖

で． プタで成功した表皮調製法を用いてヒト表皮を調製し ， 糖脂質を分析することにした。

-19
Iと表皮についての解析が Gray 以来報告がないの

A,19
I

ひ

T9
A,

。 次に筆者らは，

I
F I9

l

AI-1�

23

nI
,19

たと考えることができる

表皮糖脂質の薄層クロマトグラム
Glc-Cer: グ ル コシルセラミ ド ， GL-1-VI:
ヒト表皮糖脂質 ， 中性：ヒト表皮穂脂質の中性画分。

で分離すると6成分に分けられた。 アルカリ処理

m/z1370 および 1396 (図 7C) にそれぞれ観察されを行なって TLC で分析してみると， 非極性の2成ている。 このことから GL-I3および GL-Il3は分(Rf 値の大きい成分を GL- I. 小さい成分をそれぞれ， 分子量1201および1227と， 1217および

GL-II とする） は Rf 値のより小さい 糖脂質と1243 のi昆合物であることがわかった。

なった（図 6) 。 その際 GL-Iと GL-Il はそれ

次に， アルカリ処理後の FAB マススペクトル

ぞれ脂肪酸を遊離していた。 遊離脂肪酸はリノ ー

では ([M-H] )および([M+NBA] うに起因するル酸であり． 他の脂肪酸は 検出されなかった。

ピ ー クが 262amu シフトした形 [m/z938 および

GL-Iと GL-IIの構成糖はおのおのグルコー ス

964と m/z1092および 1118(図 7B). m/z954およ―1糖であった。 すなわちヒト表皮糖脂質には2成分

び 980と m/zll08および1134(図 7D)] で出現してのアシルグルコシルセラミドが存在し． エステルいる。 アルカリ処理後のこの262amu の質量差は，結合脂肪酸はリノ ー ル酸であると結論された。

リノ ー ル酸脱離の質量差に完全に一致している。
これら GL-I3および GL-Il3の 1 H-NMR ス

GL- I , GL- II を ODS カ ラ ム を用い た
HPLC で精製したところ ， それぞれ大きく 5成分

ペクトルでは， ともに共通して出現しているシグに分離された。 HPLC クロマトグラムから各成ナル， すなわちシグナルe (2.30ppm : エステル

GL- Iの主成分である

結合カルボニル基のa ー メチレンプロトン）， f

分の構成比を算出し，GL-I3 と GL-IIの主成分である GL-II3 につ(2.77ppm : 二重結合間のメチレンプロトン）， g

いて構造解析を行なった。 GL-I3および GL­(4.06ppm : エステル結合に隣接したメチレンプ

II3の負イオン FAB( 高速原子衝撃）マススペクトロトン）が観察されている（図8)。 常法に従ってア

ルでは ， 擬似分子イオン ([M-Hr) が rn/zl200

ルカリ処理を施し，

および 1226(図7A). rn/z1216および1242(図7C)のそれぞれの H-NMR スペクトルでは， シグナ

ODS カラムで精製したあと1にそれぞれ明瞭に検出されている。 さらにマトリックスである3 ー ニ ト ロベンジルアルコ ー ル(NBA)が分子に付加したことに起因するイオン([M+MBA] うも rn/z1354 および 1380(図 7A).

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図6

アルカリ処理をほどこした GL- IとGL-11 の薄層クロマトグラム
GL- I A: アルカリ処理後の GL- I, GL-11
A: アルカリ処理後の GL-11。 CMH 画分：
ヒト表皮糖脂質のセレブロシド画分。

図7

-76-

400

800

BOO

1000

1200

1●00

(mlz I

負イオン FAB マススペクトル(A)GL- I 3 (8) アルカリ処理後の GL- I 3,
(C)GL-113, (D) アルカリ処理後の GL-113。

皮膚の糖脂質

(A)

ぃ□

(al

(g)

(cl

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L
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i

図8 'H-NMRスペクトル(A) G L- I 3, (B) G L- II 3。

(ppm I

ルeとfは消失し， かつgは3.63ppmに高磁場シランスニ重結合由来であろうと考えられた。

ドがアルカリ処理により脂肪酸すなわちリノ ール析を行なった。 アシルグルコシルセラミドのセラしていることを示している。 またアルカリ処理に

FABマススペクトルから得られた分子量を考慮フトする。 このことは各アシルグルコシルセラミ
酸を遊離した結果Qーヒドロキシ基が新たに生成よりシグナルaでは2個のメチル基(6H)が1個分

次に， GLC/MSを用いてセラミド側の構造解ミドを構成するQ ー ヒドロキシ脂肪酸は， 前述のすると ， きわめて長鎖なものであろうと考えられ(3H)減少していることも上述の結果を支持してた。 そこでTMS誘導体に比べ安定で ， かつ低温

度はそれぞれ約25%減少したことから， シスニ重を行なった。 加えて， このメチル誘導体のマススいる。 さらにアルカリ処理によりシグナルiの強結合由来のプロトンの75% がリノ

残り25%が 酸アミド結合のQ ーール酸由来で，

で分析可能なメチル誘導体としてGLC/MS分析

ペクトルは， 特徴的なフラグメントイオンを生成

ヒドロキシ脂肪酸することが知られており， 解析が容易になると予jは， スフィンゴシンのトランスニ重結合由来で-Il3のGLC/MS分析の結果 GL-I3のスフィのと異なり． フィトスフィンゴシンに存在するトキシ脂肪酸はC30:0およびC32:1と同定された。

由来であろうと考えられた。 GL-I3のシグナルあるものの． 一方GL-Il3におけるjは上述のも測された。 アルカリ処理後のGL-I3およびGL

ンゴシン塩基はd20:1. 酸アミド結合Q ー ヒドロ-77-CII,Oll

GL-13:『;『•『『C -(CIT, 畑CH,
11- H

oc
uo� O=C-CH -C 7H,.-CII
Oll

1
or
(-C,,!-156-)·0
CII,-(CI I2),-CII=CIICII2Cl I= CH-(CH,),-C =0222

して生体に要求される脂肪酸であったと結論される。 エピデルモシドは明らかに機能を有する糖脂質であり ， その特有な構造が， 層板顆粒内の脂質をディスク状に保つように役だっていることが想像されるが， 詳しい局在， 他の成分とどのように相互作用して脂質の層板構造をつくるのか ， 長鎖Cll,01!

GL-ll3:"�のQ ー ヒドロキシ脂肪酸とリノ ー ル酸のエステル,〗 \「『 冒�Ol!

occu C,.11,.-CH,t

O=C-CH,-(CH 2 ),,-Cl! 2

持の分子機作は何なのかなど， 今後の研究に期待したい。
また ， 必須脂肪酸欠乏時あるいは高カロリ ー

Cl1,-(Cl l,),-Cl l = ClIC! 1 2ClI= CII-(Cl 1 2 ) 7 -C= 0

図9結合でなければならないのはなぜなのか ， 水分保ヒト表皮アシルグルコシルセラミド（エピデルモシド）の構造

このことは， GL-I3のセラミド部分はd20:1-

補液時に投与される乳化脂肪の役割が， ともすれ
ばエネルギ ー 論に偏りがちな今日の医療において，
リノ ー ル酸はそれ自身人体に必須要素であることを強調しておきたい。

C30:0-C18:2およびd20:1-C32: 1-C18: 2の2種類

本研究は山口大学医学部皮膚科の麻上千鳥教授，の存在を示しており ， この結果は前述のFAB/

東京都臨床医学総合研究所の鈴木明身博士（生体MSの結果ときわめてよく 一致している。 一方 ，膜） ， 稲垣冬彦博士（生理活性物質）各氏との共同

GL-Il3では， スフィンゴシンは二重結合の位置研究であり ， ここに深謝します。 また， つねに暖はまだ決定されていないものの ， t20:l,w—

ヒかいご支援をいただいた恩師山川民夫先生に深謝

ドロキシ脂肪酸としては C30:0が同定された。

いたします。

GL- I 3はこれまでプタ， モルモットで確認され，

文

ウマ ， ラ ットにも共通する物質である。 しかし
GL-Il3はこれまで報告されていない糖脂質であり，

献1) Burr, G. 0., Burr, M. M.: J. Biol. Chem., 82,
345-367(1929)

ヒト表皮に特有のアシルグルコシルセラミドである可能性がある（図9)。 このような表皮特有

2) Collins, F. D., Sinclair, A. J., Royle, J. P.,のアシルグルコシルセラミドに対し ， エビデルモ

Coats, D. A., Maynard, A. T., Leonard, R.

シドと命名した。

F.: Nutr. Metabol. , 13. 150-167(1971)3)田代亜彦・真島吉也• 山森秀夫· 林田和也• 堀部

おわりに和夫• 奥井勝二：小児外科 ， 19,1013-1021(1987)
4)村上龍助•藤田位• 木村彰宏・中村肇：日新生
児会誌 ， 17, 404-4110981)

必須脂肪酸欠乏時では， エビデルモシドのアシ
ル基はオレイン酸に置き換わっているのが観察さ2れたこと 5) , アラキドン酸を投与しても ， エビ

5) Hansen, H. S. : TIES, 11, 263-265(1986)
6) Elias, P. M.: Arch. Dermatol. Res., 270, 951170981)

デルモシドのアシル基はリノ ー ル酸であったこと（アラキドン酸がリノ

ー ル酸にretroconversion

されている） 26) から， 表皮はリノー7) Lavker, R. M. : J. Ultrastr. Res., 55, 79-86(1976)

ル酸を必須としていることは明らかである。 リノ ー ル酸はエビ

8) Lampe, M.A., Williams, M. I., Elias, P. M.:

デルモシドという表皮特有の糖脂質の必須成分と-78-

J. LiTJidRes., 24, 131-140(1983)

皮膚の糖脂質9) Wertz, P. W., Swartzendruber, D. C., Abra­ham, W., Madison, K., Downing, D. T. :Arch. Dermatol., 123, 1381-1384(1987)

19) Bowser, P.A., Nugteren, D. H., White, R. J.,
Houtsmuller, U. M. T., Prottey, C.: Biochim.
Biophys. Acta, 834, 419-428(1985)

10) Van Golde, L. M. G., Van den Bergh, S. : m20) Uchida, Y., Iwamori, M., Nagai, Y.: Jpn. JF.), Vol.1, pp.1-33, Plenum, New York

21) Wertz, P. W., Cho, E. S., Downing, D. T. :Mead, J. F.: Lipids, 16, 790(1981)22) Wertz, P. W., Colton, S. W. -Vi, Downing, D.

Lipid Metabolism in Mammals(ed. Snyder,(1977):Gan-Elepano, M., Aeberhard, E.,11) Odland, G. F. : J. Invest. Dermatol., 34, 456(1966)

12)鈴木啓之• 石川勝利：日皮会誌 ， 83, 616(1973)

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Biochim. Biophys. Acta, 753, 350-355(1983)

T : Comp. Biochem. Physiol.[B],75, 217-220(1983)

23) Hamanaka, S., Yamaguchi, Y., Yamamoto,13) Tezuka, T.: Dermatologica, 166, 57-61(1983)

14) Wertz, P. W., Downing, D. T. : Science, 217,
1261-1262(1982)

15) Feay, G. M., White, R. J. : J. Invest. Derma­tol., 70, 336-341(1978)16 ) Gray, G. M., White, R. J., Major, J. R. :T.,Asagami, C.: Biochim. Biopys. Acta, 961,

374-377(1988)

24) Hamanaka, S.,Asagami, C.,Suzuki, M., Ina­gaki, F., Suzuki, A. : J. Biochem., 105, 684690(1989)25) Melton, J. L., Wertz, P. W., Swartzendruber,
D. C., Downing, D. T. : Biochim. Biophys.

Biochim. Biophys. Acta, 528, 127-137(1978)17) Wertz, P. W., Downing, D. T., : J. Lipid Res.,24, 753-757(1983)

18) Abraham, W., Wertz, P. W., Downing, D. T.:

Acta, 921, 191-197(1987)

26 ) Hansen, H., Jensen, B., von Wettstem­

J. LipidRes., 26, 761-766(1985)-79-

Knowles, P. : Biochim. Biophys. Acta, 878,
284-287(1986)

皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評価解析理論の確立
瀬崎

京都大学薬学部

仁• 山下

富義•橋田

充

For the rational design of formulation of substances which affect physiological func­tion of skin, it is important to establish analytical methods for their percutanous absorp­
tion. A physiological skin diffusion model considering the first stratum corneum layer
with polar and nonpolar routes and the second viable epidermis plus dermis layer com­bined with blood vessel compartment was constructed, and the corresponding Laplacetransformed equations for percutaneous penetration in the finite dose system were de­
rived from the Fick's diffusion law. By employing the numerical inversion of these im­age equations to the real time course by the fast inverse Laplace transform(FILT)algo­rithm, percutaneous penetration of drugs was theoretically discussed in connection with
their lipophilicities. In addition, the mechanisms of action of penetration enhancer,
which has been the most promising in the methodology for the enhancement of percuta­
neous absorption of impermeable drugs, were analyzed. Based on these analytical re­suits, the fundamental directions for the use of an enhancer in formulations of various
drugs was systematized.

言

緒

．
.
•
•
••

実である。
本研究では以上のような現状認識の上に立っ

近年皮周生理機能の賦活を目的とした各種薬て， 薬物や化粧品素材の皮眉透過現象を物質拡散物（化粧品素材）の開発が活発に進められているが ，を基本として統一的に解析することを目的とし，これらを科学的合理性に基づいて実用化するため

高速ラプラス逆変換アルゴリズムを利用することには， その皮膚透過性を客観的に評価し制御するによって ， 皮隣の解剖学的特性に基づいた複合的ための方法論の確立が重要である。 しかしながら ，な拡散モデルと実験結果として得られる透過デ ー

現在一般に用いられている薬物皮閤透過の評価解タとの統合を行った。 具体的には， 先ず in vitro

析法は，および in vivo 系に対応する皮膚透過モデルの考Fick の第二式に基づく時間次元の解析解の誘導に大きな制限があるために薬物適用を懸案およびラプラス次元での解析解の誘導を行い，濁条件下 (infinite dosing) に固定し， かつ皮膚その後実験で得られた透過デ ー タの解析から皮膚を均 ー な 一枚膜とみなしたモデルで解析するか，の特性デ ー タを抽出し， 透過促進法の機構解明と皮閲を二枚膜とみなした場合はグラフ法で解析す

それに基づく合理設計を試みた。

るしか方法がなく ， 実際の in vivo における皮膚透過現象の評価， 解析 ， 予測とは大きな隔たりを残している。 これらの結果として， 吸収促進の機

2. モデルの構築と薬物皮虜透過のシミュ
レ ー ション

構解明も進んでおらず， 吸収改善法の開発も試行
錯誤的アプロ ー チの段階にとどまっているのが現

薬物の経皮吸収パタ ー ンを精度良く予測できる

Establishment of the Analytical Method for Percutaneous Absorption of Substances Which AffectPhysiological Function of Skin
Hitoshi Sezaki, Fumiyoshi Yamashita and Mitsuru Rashida-80-

皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評価解析理論の確立

手段を開発するためには，皮膚の生理学的および解剖学的な構造を踏まえた上で， 薬物の経皮吸収機構をin vitroからin vivo までを包括的に説明できる経皮吸収モデルを構築しなければならない。
そこで， 先ず薬物経皮吸収に関するこれまでの知見をもとに生理学的皮膚拡散モデルを構築し， モ

デルに基づいた解析解の誘導を行った。
2. 1

生理学的皮虜拡散モデルの構築および理論式の誘導

薬物の皮膚透過経路としては，大きく角質層を透過する経路と毛穴等を透過する経付属器官経路の二つに分けられている。Scheu plain らは一 連のalkanolを用いてin vitro 皮膚透過実験を行い，親水性の高いalkanolでは透過係数が炭素数の増加によらず一定であるのに対し，ある程度の炭素数を有するalkanolでは炭素数の増加に伴い透過係数が増大することを報告している

！）

。角質層を

透過した薬物は， さらに生きた表皮および真皮上部を透過後脈管系に入り全身系へ運ばれるが，非常に親油性の高い薬物では， 角質層に対する親和

そこで我々は， これらの研究結果を説明可能なモデルとして， 皮屑に投与された薬物が角質層の極性および非極性経路を拡散し， さらに連続する過程として生きた表皮および真皮の拡散 ， 血管

壁透過血流による運び去りを受けると仮定した
皮膚拡散モデルを構築した(Fig.1)。

薬物はfinite系で投与され．基剤中および血管

コンパートメント中でwell-stirred状態にあると仮定した場合各層において以下に示すFickの式初期条件および境界条件は次のように表すことができる。
Fick の式：7',) ac衿， =o,,(a'ci』 万， = o.(討1/a.,)a�麻， =o,(討

初期条件：

境界条件：

C, =C。 c. = c,. = c. = c. = o
x=-1,

性が高く相対的にこれらの層が律速過程となるこ

y�dC沿＝（巧砂,-(緊ぷbC•・F-D�a�炒士（咳わ (C� ふとが知られている 2) 0x=Oa
Dが �炒,)+ oが叫ac.;£,) = 0�ac1�.)

c, =(�凡位（汲ふX = idまた， 吸収速度dQ/dt, 基剤中残存量Xv, 各

ヽ�

d

L
dA
>
―
=
·

』L

．．．．

＇

s
L
v
oAf
―
―

Jv ,;

Vehicle Ls St「ocumCorneum

゜ Viable Ltt Blood Vessel
Tissue

D: Dlffuslon Coefficient
K: Partltlon Coefflclent
C: Concentration
V: Volume
L: DI ffusion Lengthy�d�加） =Dがac始） +D,,,A(叫ac'.沿）c, = K,c. c,, = K,,c.

層での薬物量CM。M, •. Mo. Mb)は次のように表され，

A: Effective Area
f: A「ea Fraction
CL: Clearance
F: Blood Flowd %, = FC•
X, = Cふ
00
炉J,,c虹� x心J,,c,,,A(1 輝 Mo = J''c凸x. = c.v.

゜

Fig.1 Physiological Skin Diffusion Model

-81-

100

これらの式をラプラス変換し， ラプラス次元での累積吸収量(Q)'基剤中残存量(Xv), 皮膚中薬

006りN) lUnCJW\I
5nJQ

れる。
応wz,邸z.,s呻a, +Z,,sinhaダ/(Vi,r +F)/s/k(s)応Vぷら皿ha,coshaャ+Z,µ,sha,血haダ(W血ha,+z,cosha,)+z,血ha;inha.,(Z,sinha,+Wcosha,)}/s/k(s)゜20M=M戸心+M,
叫卒rf..(Z,,sinha,血ha., + z.,(oosha,I)(oosha _,+I))(\Vs呻a,+z,cosha,)-2+Z 、, sinha.,(cosha i l)(Z,sinha,+Woosha,))is/k(s)心 =Z必r}.(Z_,s呻a,,油a +Z,(oosha,+I)(匹ha -l)}(Wsinha、 +z,四ha,)_,_,+ z,sinha,(oosha -1)(2,sinha,+Woosha,)]/s/k(s)
_,

、

Fig.2

、

+ z,sinha,(cosha.,-l)(Z sinha,+Wcosha,)Jぶ応

efficient between n-Octanol and Waterの分子体積に依存するのに対して， 後者は薬物の親油性によって決定されると考えることができる。

王亭

Z ,.,,= K n,vn,la 叩

The Amounts of Drug Appearing in Re­

ceptor, Remaining in Vehichle, and Ac­
cumulating in Skin at 24 hr after the Start、+Z,(cosha,+l)(cosha,,-1))(Wsinha,+ z,cosha,),.,,a ,.,,= I

3of Diffusion as a Function of Partition Co­+Z,sinha,,(cosha,-l)(Z sinha,+1Vcosha,)]

ぷ応

2

―

+ z,sinha,sinha,,(Z,sinha,+Wcosha,)}Z, = K,Y, は，lConstonts, 00• l .2,10·'心2thrl 、 D00 ·l,2,10·6 ccm2/hrl 、 Dd•J.2x!O •ccm2thrl,+Z,,([Z,,s呻a,sinha,, + z,, (cosha,-l)(cosha,.,,+l)} (Ws呻a,+z,cosha,)

a, =L

0

A• J.I叩め 、 L5 •0.0025Ccml, L•
0.08Ccml、 f•0.001, V•
1.0Cml l,Vd•••••••• 2J. りICcol/叩1 1121●
ヽno•9,5CCcol/叩11121,
Dd
V
W'oct• IO.JCCcol/an31112 1

k(s) = Y .[(Z,,,sinha,cosha�, + z,cosha,s111ha,.,)(1Vsinha,+ z,cosha,)+Z,,,[[Z,,,sinha,s111ha-1

Partition coefficient between n-octonol and water

M, = z,双Z_,sinha, +z,,su加x.)(Z足ha,+W(cosha I))/s/k(s)又• = wz;
やX紅.,sinha, +Z,,sinha.,)/(Yi,r +F)/s/k(s)SkinVehicle80

物量CM), 末梢血管内薬物量(Xb)の式が誘導さ薬物の皮膚への分配係数は， 薬物， 基剤， およびZ,= K必fa,

皮膚の溶解度パラメ ー タを用いて次のように表す
一方，

in vitro系では血流による全身系への移行 過程はな く ， 実験は 基 本 的 にレシ ー バ側でsink conditionが成立した形で 行われる。 したことができる 5) 。
2

logK;= ((o,-o/-(o,-6;))v,几303RT (i = p, np, d)
K: Partition Coefficient Ii: Solubility Parameter v: Molar Volume

がって， 上の式で血管壁透過クリアランス CL お

R: Gas Constant

より ，／水間分配係数と皮膚基剤間分配係数を関連づけ

よび血流Fが無限に大きいことを仮定することにin vitro

実験系に対応した解析式を誘導す

T: AbsoluにTemperature i: Skin x: Drug v: Vehicle

この理論を用いることによって薬物の octanol

ることができる。

ることも可能である。 そ こで， 式に基づいて in

2. 2

高速ラプラス逆変換(FILT)アルゴリズ

数と水を基剤としたときの24hr 後の皮膚透過量

ムを利用した薬物皮膚透過および経皮吸

基剤中薬物量， 皮膚中薬物量の関係をシミュレ ー

収促進のシミュレ ー ション

ションした (Fig.2) 。 薬物の皮膚透過はある分配vitro

系を仮定し ， 薬物の octanol/水間分配係

先に示したようなラプラス次元の式を解析的に係数をもつ薬物での最大となったのに対し， 皮閤逆変換することは困難であるがこれらの式を数

中薬物量は分配係数の増加にしたがって増加し ，値的に逆変換する方法として高速ラプラス逆変換(FILT)が細野によって考案された 3 , 4 l。 そこで

基剤中薬物量は一様に減少することが示された。

このアルゴリズムを利用し薬物の経皮吸収動態お分配が増加するため皮膚透過が増大するがある

よび経皮吸収促進のシミュレ

ションを行った。

点を越えると角質層以下の層の透過が律速となり ．

薬物の経皮吸収は物理化学的な視点より拡散過さらに基剤中濃度の過度の減少に示されるように

程と分配過程からなるが， 基本的には前者が薬物

薬物の皮膚中での活動度勾配が小さくなる結果，

ー

これは， 薬物の親油性の増大に伴い皮膚に対する-82-

皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評価解析理論の確立

皮膚透過が減少することを意味している。

親油性と促進効果との関係をシミュレ ー ションに以上のシミュレ ー ション

で示されるように ， こより検討した(Fig.3)。

の生理学的皮膚拡散モデルでは異なる親油性を有吸収促進効果は ， 吸収促進剤の作用部位が薬物

一する薬物の皮洞透過を統 的に説明できるため ，透過の律速過程と一致したときに最大の効果が得

経皮吸収促進の機構解明においても有用であるとられると考えられる。 したがって ， Fig.3に示さ考えられる。

一

般に ， 吸収促進効果は対象とする

れるように吸収促進剤が角質層非極性経路に作用

薬物の物理化学的性質に応じて異なることが知らする場合にはベル型の関係が得られ ， 極性経路に6れているが . 7 l , これは吸収促進剤の作用部位と作用する場合には親水性の高い薬物ほど促進され薬物の皮膚透過経路の関連によると考えることがることになる。 一 方， 吸収促進剤の作用機構にできる。 また ， 吸収促進機構としては ， 薬物の皮よって促進効果が異なり ， 特に皮膚中薬物量に関膚中での移動度を促進する拡散性の増大， およびしては ， 拡散を増加させた場合はほとんど変化が皮膚中での薬物の濃度勾配を大きくすることにみられないのに対し， 分配を増加させた場合は顕

よって皮膚透過を促進する皮膚への分配性の増大

著に増大する結果となる。 我々はこれまでに ，の二つの機構が考えられる。 そこで先のシミュ

A zone, 1-gerany lazacycloheptan -2-one

ションをもとに角質層の各透過経路での拡散(GACH) ,1-farnesy lazacycloheptan-2-one

性および分配性を増大させた場合について， 薬物(FACH)において5種類の薬物を対象に皮膚透過レー」u hN 10 on Dlf uon o1芯 U.:ld

Ca> Partitioning Into Nonpolar Route
15

12

10

0

(cl Diffusivity In Polar Route10
Dp x lD(bl DIffusl vitY In Nonoolar Route
16

-]

-2

-1

-2

0 3

0

-1

」
l1�l l
D U一エS Ul lUnDU/\1

00
ー

100

100

80

80

80

60

60

60

り0

'no ·ll.5'no·10,5'no ·9,5

20
0

-J

-2

�o

-2

-3

-2

-1

�o

D00 x 100
如 X 10l\io X 1

20-3

Dp X 10

20

0

-1

D X5

-3

X1
p °"
-1
-2

.. 、

Lagar! thn of Part! t!on Coefficient between Octanol and Water
Constants: DD •3. 2 xl0-り(cm2/h「） ； D0D ·3, 2 x10-6c 叩2 /hrl; Dd · , xl0叫叩 /hrl; A• ,lりCar五L5 •0,00 5Canl; Ld •0.08Canl
3 1/2)
f·0.001; Vv•l.O(mll; 6D -6d•6v·6w• 3,り< <collar叩12 i, 6np•9.S«col/ 叩 i l12 i, 6oct• 10,3«col/cm l
3

2

Fig.3

2

2

3

3

2

Effect of Each Parameter on Penetration Ratio(A) and Drug Amount in Skin(B) at 24 hr against
Logarithm of Partition Coefficient between n-Octanol and water-83-

実験を行った結果分配係数l付近の薬物で促進

3. 1

in vitro皮膚透過実験の方法

効果が最も大きく ， またこれら促進剤が各薬物の吸収促進剤の薬物皮膚透過に及ぼす影響として

皮隣中薬物量を顕著に増大させることを報告しては， 基剤中での薬物との相互作用および皮膚に対いるか 8) ' 今回のモデルに基づき ， これら吸収促する直接作用が考えられる。 本研究では， 吸収促

進剤が薬物の非極性経路への分配を増加させると進剤の皮膚に対する影響のみを解析する目的で ，仮定することで各薬物に対する皮膚透過促進が吸収促進剤の前処理条件下in vitro皮膚透過実験

説明できることが明らかとなった。

を行った。 また ， モデル解析をより単純化するた
め ， flow-through型拡散セル (Fig. 4)を使用し ，3.

経皮吸収促進剤の作用機構解析

レシ ー バ側で sink conditionが成立した形で透過実験を行った。 透過実験は以下に示す方法で各種吸収促進法を利用した経皮投与製剤の開発にお いては， 薬物の本体の皮膚透過性と薬物治療行った。 モルモット背部より摘出した皮膚をセルに装着し ， ドナ ー 側を種々の農度の促進剤のエタに要求される薬物送達速度を考慮した上でその適ノ ー ル溶液0.2叫で 24hr前処理したのち ， 残存す

用条件を設定することが必要である。 しかしながるエタノ ー ルをドライヤ ー で留去し ， 1ある いは2

ら ， これらの製剤設計は試行錯誤的に行われていmMの薬物の水溶液1 叫を投与した。 また ，るのが 現状であり ， 基本的な設計指針となる吸収

strippingを1 5回行うことにより角質層を除去し促進に関する定量的な解釈が要求されている。 そた皮膚を用 いて， 24hr生理食塩水で前処理後薬

こで ， 経皮吸収促進法として現在最も注目されて物の生理食塩水溶液l叫を投与して同様の実験をいる経皮吸収促進剤を例としてin vitro皮膚透過行った。 レシ ー バ側は常に生理食塩水を灌流し ，実験を行 い ， 種 々の物 理化学的性質を有する薬物

薬液投与後灌流液中に出 現する薬物量を経時的にの経皮吸収に及ばす吸収促進剤の用量依存的効果測定した。 また ， 実験終了時には， ドナ ー 中およについて理論的な考察を行った。

び皮膚中に残存する薬物量も併せて測定した。 薬

tape

物の定量は， 液体シンチレ ー ションカウンタ ー をflow of receptor fluid
drug solution

用いて行った。
3.2

対象薬物と吸収促進効果の関係

吸収促進剤には， これまでの研究で 9 l優れた促進効果を有し皮膚剌激性の低いことを報告しているl-geranylazacycloheptan-2-one(GACH)
を選び ， 対象薬物には異なった親油性を有する
mannitol(MT) , cytosine /3 ー D-arabinofura­noside(ARA心） ， acyclovir(AC), 5-fluoro­
uracil (5-FU) , 6-mercaptopurine(6-MP),hydrocortisone (HC), butylparaben (BP)を用
screen suppo「tstirring bar
Fig.4 Flow-through Type Diffusion Cell

いてin vitro皮膚透過実験を行った。 これらの薬物のオクタノ ー ル／水間分配係数を 測定した結果
それぞれ0.00155, 0.00939 , 0.030 4, 0.1 44, 0. 654,
7. 42,371であった。
Fig.5は， 各薬物についてGACHの各種適用-84-

皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評価解析理論の確立

2り(Gl BP

18

6

2り

12

Tl心<hrl

24

18△: Control▽: GACH 3. 2 umo I〇: GACH 6.4 umol〇: GACH 12, 7 umol〇: GACH 25, 5 umo I□: GACH 51. O umol△: Stripping。

12

Time cnr1.... ..

。

18<D) 5-FU

6

12
Tl匹lhrlJS

2りPercutaneous Penetration of MT(A)、ARA-C(B), AC(C), 5-FU(D), 6-MP(E), HC(F), and BP(G) through Intact Guinea Pig Skin Preloaded with Ethanolic Solution of Different Doses of GACH
or through Tape-Stripped Skin

Table 1

Amounts of Drugs Recovered at the End of 24 hr Diffusion Experiment with Different Doses of
GACH
Recovery (\)

D喰 Preloadi.ng doseof GACH (皿al)

)IT

12

lime <hr>

0
5
0
I
O
g
u
X
^
n
u
d1
U>
J>O
Ol
aI)P
o
p=
u

叩
20
2=
o
as pa
ごこ
；
どa
d3U
2§
6
Fig.5

ti
""'
"
"'

HC

6

0080 8叩 20 0ーd355ミ""'S"'
=

I 5

(Fl

2り

JB

(Cl AC。

S(El 6-MP

12

Time lh,l

”g

6

lo
20 10 0
(
"'
"
"
''
ti
"'
"
」
3
a
ud)"
"
^
x
U
:

[

60 "
10 0
(
ll
=
-§ zPa
u
o
』
3
さa
d]i

／
／

IL

60 g
20 0
Sa
=-ooz)
pa
o
J
)
o
c
'
''"'
"
"
"

CB) ARA-C

゜

3.2
6.4
12.7
25.6
61.0
stripp江g
ara-C
0
3.2
6.4
12.7
26.6
51.0
stripping
船
3.2
6.4
12. 7
25.5
61.0
stripping
6-FU
3. 2
6.4
12.7
25 5
61.0
stripp江g

゜

゜

Donor

Skill

95.7210.26
1.06!0.16
1.73t0.11
93.3011.67
93.14!0.77
I.99!0.64
93.2410.86
1.83!0.37
2.3910.16
92.7814.67
71.06112.67 6.3811.91
27. 62±13.86 4.60!2.46
2.6911.02
92.6710.69
2.81!0.60
90.11!3.44
3.81!0.68
91.1312.77
6.47!2.14
90.62±2.2286.8113.07
4.93±0.64
71.3511.44 10.5011.77
33.84110.38 7.3513.82
96.1710.83
3.2710.14
92.2210. 73
4.3412.39
6.0l!0.49
96.1814.62
6.2810.48
92.3716.14
8.1711.92
85.1011.79
66 、 23110.64 16.88±3.83
41.01112.17 10.9110.97
3.09!1 、 01
97.6612.71
77.9511.04
6.8413.72
74.86t2. 65
7.53t0.52
57.3!t6.53 10.0311.81
9.65t1.86
45.7214.94
4.7510.78
24.98!4.04
4.7713.16
2.1410.79

Receptor

Total

0.5310.04
0.6010.12
1.4410.16
0.9810.04
I.8611.35
6.16!1.76
62.36110.H
0.91!0.13
1.6510. 80
1.96!0.66
2.8710.74
4.6010.66
14.66!1.98
60.35!1!.26
1.1910.31
1.2210. 31
1.61!0.40
l.!9!D.36
8.2412.76
16.89!6.!6
39.73士13.74
2.09!1.60
6.9912.80
13.6512.60
28.0716.80
44.9816.77
60.9017. 13
89.38!3.82

97.3010.13
96.6l!l.54
96.6610.62
96.0610.93
97.0313.39
83.60!13.IO
84.4718.70
96.3711.!9
94.6012.25
96.91!2.93
98.8610.76
96.3412.71
96. 51!2.19
91.56±1.37
100.6210.66
97.79!1 、 97
102. 7914.88
100.1314.86
101.6012.00
99.01!2.21
91.6611.37
102.8!!1.68
91.7910.97
96.04!1.35
96.41!0 、 86
!00.2Hl.24
90.6314.41
95.7610. 54

Recovery ('Yo)

Drug Preloading doseof GACH (皿lO!)
6-MP

1£

BP

The recoveries●t 24.br are expressed as me皿tS.D.

-85-

゜

3.2
6,j
12.7
26 ,6
51.0
stripping

゜

3,2
6.4
12.7
25 ,5
61.0
stripping

゜

3.2
6.4
12.7
25 ,5
61.0
stripping

Donor

Skin

Receptor

Total

91.24±3.86
84.2U3.99
77.6U6.72
63.79!6,08
34.82i3.92
37.0lH.69
23.88i8.38
66.27i7.44
60.62±4.38
45. 18i6.97
49.98±4.09
41.9215.44
32.78i7.18
23,5414.18
8.!0il.33
9.62il.02
8.69±0.84
8.4li0.63
12.23il.72
10.33±2.33
6.39il.92

6.6912.07
11.43!3.14
16.3616.21
I 7.32!7.23
23.6719.04
16.3511.60
8.2714 78
24.25!5.07
30.4613.74
34.10!5.91
32. 23!5.16
47.2512.88
67.16111.69
IS.22tl.24
29.9013.56
65.8413.28
66.2916.38
68.4814.14
76.39!12.17
79.66!3.18
33.7219.16

2.96!1.63
6.03!1.27
8.6412.36
17.06!3.46
47.2716.31
42.63!6.54
56.56!11.73
U!t2.85
11.6411.03
16.4912.50
12. 4310.75
11.9414.06
10.2411.60
48.8210.95
7.99!1.72
4、2311.64
2.66!0.79
l.21t0.62
l.2!t0.06
012.7613.81

100.88!3.66
100.6611.90
101.4912.46
98.16H.68
106.7512.22
95.9210.92
88.71!2.95
94.83!3.37
92.7213.01
94.7712.40
94.6312.96
101.1011.49
100.18!5.90
85.57H.06
46.99!1.12
69.6912.28
76.43!6.H
78.0913.66
88.83113.78
89.99!0.78
61.8716.!8

増大することが示された。 これらの結果から， 先

条件下in vitro皮膚透過実験により得られた累積のシミュレ ー ションとの対応により GACH が用

一

透過量 時間曲線を示している。 いずれの薬物においてもtape-strippingにより角質層を除去し量依存的に薬物の皮膚への分配性を増加させるこた皮膚での透過が最も大きく， コントロー ルに比とによって皮膚透過を促進することが示唆された。

ベラグタイムも顕著に短いことから． 薬物の皮膚3.3

透過において角質層が強力なバリア ー として機能していることが明らかとなった。 一 方, GACH

生理学的皮膚拡散モデルに基づく促進機構の解析

GACH の皮膚透過促進機構をより厳密に解明は基本的に用量依存的な薬物透過促進を示したが，幾分親油性の高い HC に対しては6.4µ, mol で最し， in vitroでの経皮吸収動態を精密に予測する大の効果を示し， 非常に親油性の高いBPに対しことを目的として， 先に述べた生理学的皮膚拡散ては適用量の増加に伴い皮膚透過を減少させるこ

モデルに基づいた解析を行い ， GACH 適用時のーとが明らかとなった。 このように透過パタ ンに

経皮吸収動態を拡散と分配のパラメ ー タに還元し対する GACH の影響が薬物間で異なったのに対た。 ここで， 各経路における皮膚透過パラメ ー タの薬物に対し用量依存的に実験終了時の皮膚中薬

高投与量の GACH でtape-strippingを行った

し, Table 1 に示されるように GACH はすべてを評価するために次のような2つの仮定をおいた。

物 量 を 増 大 さ せる こ と が明らかとなった。

皮膚を前処理した場合においても各薬物において透過促進が見られなかったので， GACH は角質

GACH 前処理による皮膚透過促進効果を， 薬物層以下の層には影響を与えず， 各薬物の角質層以た結果促進効果についてはベル型の関係が得ら下の層での皮困透過パラメ ー タはtape-strip­

れた(Fig.6)。 一方 ， 皮膚中薬物呈は薬物の親油

pingを行った皮膚で の透過曲線を一 枚膜皮膚モ

性が高いほど大きく， GACH 適用により顕著に

デルの解析により得られたパラメ ー タに近似でき

5
1

0
2

5

△; Control

多そ S'

令

名

〇; GACH 12. 7 umol

6'

�1a

名｀

I�

冗を苫入 名
Fig.6

0
4

0
1

on olJ :iuawauuo4u3

I

3

0
2

＼

(B)

0
6

unOW\I BnJQS Ul :i(P<ll jd d \/%) UP I

(Al

0
8

25

Logarithm of Partition Coefficient between Octanol and Water
-1
0
3
l
2
-3
-2
-1
0
l

2

-2

-3

／

のオクタノ ール／水間分配係数に対しプロットを行っ

令□; GACH 25.5 umol

Relationship between Drug Lipophilicities and Enhancement Ratios(A) and Drug Amounts in Skin(8) at 24 hr at the Pretreatment of GACH

-86-

皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評価解析理論の確立

Table 2
Drug

Diffusion and Partition Parameters in Each Domain at the Pretreatment with Different Doses of
GACH

Prelo●d頃do●●of GACH (µmo!)゜

Hr/J.A-{;

32
6.4
12 7
26 6
610
,tripping

゜

32
6j
12 7
26 、 6
61 0●tripping

゜

AC

32
6j
127
26 6
61 0
atrippi叩

゜

6-f\J

32
8I
12 7
26 6
!I O
●tripp逗�·Polar route
Dp 'Noopolar route
Dnp '

1
6 3
(hr1) (110 ,m ) (hr・ )
39.9
49 6
42.1
H8
49.6
48 6
．．
39 9
49 6
421
i18
496
48 、 6
．．
39 9
49 6
!21
41.8
49 6
48 6
39 9
06
421
41 8
49 6
48 6

---

畠
(ふ

．．

7 27
8 99
19 8
130
223
90(
．．

---

7.27
6 99
19.6
13.0
22 3
904

362
3.63
2,94
j 87
6 66
19 3

0.000102
0000206
0 000166
0 000280
0.0003 76
0.003 93

7 27
6 99
19 6
130
223
904

519
134
I 08
2. 3 816623900000910
0 000296
00000766
0 00016!
0003450 00160

1 21
6,99
19 6
130
22 3
90 l

l 43
! 30
6,60
6 26
6 88
6 78

0,000183
0 000896
0 0013 6
0 0036200077!
O 0176

Viabl, tiBSue

刈

D/
1
(h, )

(cふ

00812
00811
00812
00812
0.08120.0812
00812
00606
00606
00606
00606
00606
00606
00606
0 0666
0066!
00666
oom
00665
00666
0,066600860
0.08600 08600 086000860
0.0860
00860

0.193
0693
0.893
06 93
0693
0693
0693
0 163
0.763
0. 763
0763
0763
0763
0763
0 666
0 666
D 665
0 666
0665
0 666
0 565
1.80
I 80
180
1 BO
I 80
I 80
I 80

Drug

S-MP

Prelo●di閲do●●of臥 (pmol)

゜

3.2
6j
12. 7
26.6
61 0
●tripp匹

゜

IC

3Z
6l
12 7
26.6
61.0
atrippi閲

゜

BP

3.2

6j
12.7
26 6
alrippi叩

Polar route

Nonpohr route

\'

＇

Dp '

Dnp '

49.6
l2. l
H8
!9 8
!8.6
．．
39 9
19 6
!21
j} 8
49 6
48 6
39 9
49 5
421
!18
!9 6

od·

(cm )

(hr-1 )

7 27
6.99
19.8
130
223
90l

8 72
4.14
3 69
228
160
316

0,0001!6
0000601
0,00123
0 0060100169
0.0270

7 27
8 99
19.6
13 .0
22 3
904

3.16
326
368
1.27
0 !08
om

000167000600
6 76
9 02
10 6
129

7 27
6 99
19 6
130
223

0191
00680
00498
0 0276
0 0502

0238
2 86
6.68
130
19.8

0,0696
0.0596
0 0696
00696
00696
00196
0,069600176
0,0175
00276
00276
00276
0.0276
00276
00666
00666
0 OS66
0 066600666
0.0666Ch,1) c1108 ,.3 ) Ch,1)
39 9

怜

Viable tu,u●

刈

3

(cふ
I.Ol
l 04
1 04
104
I04
1.04
104
3.19
319
3 .19
319
319
319
319
0279
0279
0 279
0 279
0279
0279

基剤中残存量および皮膚中薬物量のいずれにおる。 また， 水を基剤とした場合親水性の高い薬物
では親油性の程度に依らず 定の皮膚透過を示す

いても計算値は実測値と良く一致した。 この結果ことを考慮して ， 非常に親水性の高いmannitol

より， 本モデルに基づく解析は種々の薬物の皮膚は角質層極性経路のみを透過すると仮定し， 他の透過を正確に表すことができるため極めて有用な

一

薬物における極性経路での皮困透過パラメ
mannitolのパラメ

ー

ー

タは

方法と考えられる。

GACH の角質層極性経路への影響は小さく，タを代用できると仮定した。

以上の仮定のもとで実験の結果得られた累積分配パラメ ー タを最大約10倍増加させたが， 拡散

透過量 一 時間曲線をラプラス次元の解析式に高速

パラメ ー タはほとんど変化させなかった。 一方，ラプラス逆変換アルゴリズムを利用した非線形最GACH はその前処理量に依存して非極性経路 に

小二乗法プログラム MULTI (FILT) を用いて当てはめ， 各層での拡散および分配パラメ ー タを算出した(Table 2)。 また， 解析の結果得られたバ

対する分配パラメ ー タを顕著に増加させた。 このように GACH は薬物の角質層非極性経路への分配を増加させることが解析的にも明らかとなり ，タを用いて実験終了時における基剤中残存シミュレ ー ションにより予測された結果と一致し量および皮膚中薬物量をシミュレ ー ションし， 実

た。 しかしながら， GACH による非極性経路へ

ラメ

ー

測値との比較を行った。
基剤中残存量：(Estimated) =1.022* (Observed)(r=0.983, n = 49)
皮腐中薬物量：(Estimated) =1.072* (Observed)(r=0.901, n = 49)の分配パラメ ー タの増加の程度は薬物間で異なったため ， さらにこれらの関係についてより詳細な検討を行った。
本実験では促進剤は前処理により投与したので基剤中での薬物と促進剤との相互作用は無視でき， 薬物の皮膚への分配の変化は促進剤 による

-87-

(
d5ヽ一ou ) g

0,03

合それぞれ 8.1. 8.8, 10.8, 11.4, 13.2. 13.7

0,02(cal/c吋） l/2 と GACH の適用量に応じて顕著に増゜加し ， GACH の非極性経路への浸透によりその経路がより極性の高いほうへ移動していることが明らかと なった。 また ，一I
O A 」 0 OW I

0,01

GACH の溶解度パラ

1
0
．
0
―

メ ー タは9.25(cal/c面） l/2であり ， GACH の高投

―
OU
� fiO

2
0
0

与量を適用したときに非極性経路の溶解度パラ

3
0
0―

一

メ ー タがこの値より大きくなることは単純な混合溶媒の理論では説明不可能である。 GACH と構造の類似している Azone が脂質膜の水和を増加

Fig.7

Relationship between solubility Parame­ters of Drugs and Logarithms of Partition
Coefficients between Nonpolar Route andVehicle Devided by their Molar Volume

させることが報告されており 11> , GACH もまた同様なメカニズムにより非極性経路の水和を促進

し極性を増加させていると推測される。
このように GACH は用量依存的に角質層非極皮固の溶媒的性質の変化として考えられる。 そこ

性経路の溶解度パラメ ー タを増加させることに

で正則溶液理論に基づいて以下に示す式を誘導

よって ， 薬物の皮膚への分配を増加させ皮膚透過

し ， 皮膚および基剤の溶解度パラメ ー タを算出した。 以上の解析により ， 薬物の分子構造と皮膚透た。
22(log K心凡= [ (8, ―凡） ー (8, - 8 品 )/2.303RT
理論式に基づいで X軸に薬物の溶解度パラ
タを，過あるいは吸収促進剤による効果までを統一的に議論し ， シミュレ ー ションすることが可能となった。

Y軸に解析により求められた角質層
4 ． 魚吉非極性経路に対する分配係数を薬物のモル体積で

論

メ

ー

を促進することがモデル解析により明らかとなっ除した値をプロットした(Fig.7)。 ここで薬物の溶解度パラメ ー タおよびモル体積はFedorsの以上 ， FILTアルゴリズムの利用により複雑な方法に従って計算し l , また角質層非極性経路モデルに対しても皮膚透過現象を時間推移として

IOの体積は0.015c吋と仮定した。 各 GACH 処理群に取り扱うことが可能であり ， 皮膚の解剖学的およ

おいて良好な直線関係を示し ， 本解析の妥当性が

び生理学的な構造を経皮吸収モデルに組み込むこ証明された。 GACH の適用量の増加に伴い ， 回とによって ， 種々の薬物に対して薬物の分子構造

帰直線の傾きは小さくなり X切片は大きくなをもとに皮膚透過現象および吸収促進までを理論る傾向がみられた。 この傾きおよびX切片から的 に 説 明 す る こ と が 可 能 と な っ た 。 今回 ，基剤および角質層非極性経路の溶解度パラメ ー タ

GACH を 一 例として皮膚透過モデルに基づいたを計算した。 基剤の溶解度パラメ ー タは GACH
1/2の適用量に依らず17.3土0.3(cal/c吋） と 一 定 で吸収促進の機構解析を行った結果， この促進剤はあり ， GACH は前処理下では甚剤の性質を変化ることによって皮膚透過を促進することが明らか

薬物の角質層非極性経路への薬物分配を増加させさせないこと および基剤中での薬物と GACHとなったが ， 正則溶液理論を適用しさらに詳細な

一経路の溶解度パラメ ー タを増大させ， 薬物の分配の相互作用が無視できることが明らかとなった。
方非極性経路の溶解度パラメ

ー

タは GACH

を 0, 3.2, 6.4, 12.7, 25.5, 51.0µmol適用した場

物理化学的検討を加えた結果 GACH は非極性を増大していることが示された。 このように ， 吸-88-

皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評価解析理論の確立

収促進剤適用時における皮膚固有のパラメ ー タの

6) R. B. Stoughton, ArchDermatol., 118:474-477

みを抽出することで ， 種々の薬物に対してその皮(1982)

膚透過を再構築することが可能になった。

7) B. W. Barry et al, J. Pharm. Pharmacol., 39:

references

8) H. Okamoto et al, J. Pharm. Sci., 80:39-45

535-546(1987)
1) R. J. Scheuplein et al, Physiol., Rev., 51:702-(1991)

747(1971)

9) H. Okamoto et al, J. Pharm. Sci., 77:418-424

2) R.H. Guy et al, Pharm. Res., 5:737-758(1988)
3) T.Hosono, Radio Sci., 16:1015-1019(1981)(1988)
10) R . F. Fedors, Polymer Eng. Sci., 14:147-154

4) Y. Yano et al, Chem Pharm. Bull., 37:1035-(1974)
11) A. J. I. Ward et al, Drug Dev. Ind. Pharm.,

1038(1989)
5) K. B. Sloan et al, J. Invest. Dermatol., 87:244-252(1986)-89-

14:1155-1166 0988)

皮膚への作用性を有する各種糖脂質の合成
中

千葉大学薬学部

川昌

子

Synthesis of four diastereomeric cerebroside B ta (la) and恥(lb) has been achieved.
The crucial step in the synthesis of cerebroside B 1 b consists in a regio-and stereoselec­
tive formation of the erythro-sphingosine moiety by the reaction of dienal 4 with 2-ni­
troethanol followed by resolution with optically active a -hydroxypalmitic acids. Using
the aglycone thus obtained, the first total synthesis of optically active cerebroside B 1aand B lb was accomplished. The absolute configuration of lb was determined to be(2S,
3R, 4E, 8Z, 2'R)-1-0-(/3 ーd-glucopyranosyl)-N-(2'-hydroxyhexadecanoyl)-4,8sphingadienine.
Our developed methods for preparation of erythro-sphingosine has been applied to
the first total synthesis of symbioramide(2), a novel ceramide obtained from the cul­
tured dinoflagellate Symbiodinium sp., which is the first example of SR Ca 2+ -ATPase
activator of marine origin and also exhibits antileukemic ativity and simultaneously es­
tablished the complete stereostructure of 2 to be (2S, 3R, 2'R, 3'E)-N-(2'-hydroxy-3'-octadecenoyll-dihydro-sphingosine.
A new sphingosine derivative(3lisolated and characterized as an N-lauroyl denva­
tive from Anemonia sulcata collected near Sousse, was also synthesized and the L-ery­thro configuration of 3 was firmly established.

はじめに

さらにこれらのスフィンゴ糖脂質やセラミドには皮膚への保湿剤としての効果も期待される。

糖脂質は生体膜の主要な構成成分であり生体に本研究においては以下に示す種々の糖脂質，おける生物認識に重要な役割を果たしていること

および関連化合物の合成とともに対応する非天然が近年の細胞表層の分子生物学の発展に伴い明ら型セレプロシド ， セラミドの合成も行い， これら

かになってきた。 糖脂質のなかにスフィンゴシン

の生物活性について検討する 10)

塩基を含むスフィンゴ糖脂質がある。

l. セレプロシドBぃ(g)およびB 1b (Tu)の合

最近蕃香や大豆などから単離されたセレプロシ

成とその絶対構造の決定
スフィンゴシン， セラミド ， セレプロシド類

ドBiaおよびB 1b はスフィンゴ糖脂質であり， 抗潰瘍性があることが見出された。

の簡易合成法の開発

一方 ， 近年海洋天然物からも種々の生物活性を2.

+

Ca 2 -ATPase 活性作用を有する（＋）シン

示す新規なセラミドが単離されている。 これらのビオラミド(2)の合成

ものは微量のため絶対構造が決定されておらず，

このセラミドは沖縄産二枚貝に共生する渦べん

また充分な生物活性を検討するに到ってないもの

毛藻 Symbiodinium sp. より単離された。 Ca 2+が多々知られている。

-ATPase を活性化する初めての海産由来の物質

Synthesis of Sphingolipids Which Affect Physiological Function of Skm
Masako Nakagawa-90-

皮膚への作用性を有する各種糖脂質の合成である。 こ の脂肪酸 部分であるa ー ヒドロキシーのアルド ー ル反応で選択的にerythroー 付加体

/1, r

ー

不飽和脂肪酸 の不斉合成も合わせて行う。

(Q)を得る条件を見出し sphingosineの簡易合成

3.

(+)Erythro-N-lauroyldocosasphinga-法を開発し止の全合成 を行い ， 立体構造を明ら

4,8-dienineCa)の合成とその絶対構造の決定かにした 2) 0

aはチュニジア近海で採取したイソギンチャク

そこで今回こ の方法を適用してtrans-dienal

Anemonia sulcata の繊毛より単離されたセラ

4からgを経由して§に導き， これにCR)または (S)ミドである。不斉合成 と光学分割の両経路によるの光学活性a ー ヒドロキシ脂肪酸1を反応させて光学活性スフィンガジエニンCa)の簡易合成 を行

光学活性セラミドCa)を合成する。§は2つのジアう。

ステレオマ ー の混合物である が， これらを分離 し ，それぞれにグリコシル化を行い ， セレブロシド

1 . Cerebroside Bパ担）とB1b(1b_)の全合成とその絶対構造の決定

B1a直）と その異性体盆を合成することを計画した。
さらに市販のD-(+)ーエリスロ ー スフィンゴ

1. 1

序

シンを9に誘導し§から得られる9と同定するこ論

セレブロシドB1a(且）およびB1 b (lb_)は1983
年蕃香（ツルナ）より単離された抗潰瘍性を示す糖とによって ， 且の絶対構造を決定することにした。

脂質であるが ， 8位の二重結合に対して のtrans
CB 1a)とcisCB I b) の異性体がある 1) 。 両者 の分

1. 2

Hexadec-2(E), 6(E)-dienalの合成

セレプロシドB1aの1,4-trans diene部を構築

離 は極めて困難であり， 天然からは極微量しか得するために必要なtrans-enal設を得るために，り決定されたが ，2'位の立体構造

ビニ ー ルアルコ ー ル且から path Aで示されるアについては明らかでなく ， 天然のスフィンゴシン

リルエ ー テル設のクライゼン転位による ル ー トがD-erythro系であることから ， また天然のaと， オルト酢酸トリエチルエステルの転位ル ー トー ヒドロキシ脂肪酸がR配合であることから1のpathBを検討した。 その結果Sch eme2に示され構造が推定されていた。

るような反応 条件で比較的容易にtrans-enal拉

2位，

3位，

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117-119'Ci12mmHg

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が得られることが明らかになった。

筆者は既に共役アルデヒドとニトロエタ

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一
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―
―

られない。1の平面構造はスペクト ルデ ー タによ！

CH,(CH,1,�ヘOH
CH,(CH,J,�co,Et THFo•c - "
84¾(1,om 11)

0-(+)-•,yth心sph;ngosme

Scheme 2

Scheme 1-91 -R Ph炉CHCHO—ー OHC'V°VvR
OHCへ
loluooo62%

13

R. (CH2)1CH,

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2SA,• R2-H呼，土どへこ～L(S)-17

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23 A,. Ac, R2. Bz
26A ,• Az•H

してそれぞれセレプロシド Bia の異性体． 姫，器 HO辛も゜合い怨の合成に成功した。

''· "'● b,o,ldo B,.
mp 183" lalo +4.6•

1 .4

Scheme 3

セレブロシド B1b 辺の絶対配置の決定

セレプロシド B 1a の全合成に成功したので， 次

Cerebroside B ,. 担の合成

ニトロアルド ー ル反応に必要なdienal.4は先にに2位と3位の絶対配置を決定するために ， 天然のD-(+)ーエリスロ ー スフィンゴシン紅から⑳に得られたenal設をWi tting試薬PhsP=CHCHO

導 き加溶媒分解し31に した。 一 方セレプロシドとトルエン中加熱還流することにより得た。 次に

B ゅ合成中間体笙を還元後， 脱トリチル化して得4とニトロエタノられた姐は天然品より誘導された辺とスペクトル

1 .3

ー

ルの反応を種々に検討した結°果 ， EtsN溶媒中 ， 0℃で4日間放置すると位置選

デ ー タ， 融点(mp121.5-124℃), [a]迂9.6

択的に1, 2付加体且がsyn, anti体の混合物とし完全に 一 致することから， セレプロシド B1b およて72%の収率で得られることが判った。 この時点

び B1. の2位と3位は天然のスフィンゴシンと同じにおける且のsyn, antiジアステレオ選択性は良D-erythro型の絶対配置を有していることが証好ではないが ， この混合物を分離することなく明された。 2位については既にD(R)-17を用い

acetonideに導いた後， EいNと加熱すると ，ていることからセレプロシドB 1, と B lb の絶対構
造はllLが(2S , 3 R, 4E, 8Z, 2'R)-1-0-(/3-dンと同じ相対関係をもつ erythro体拉に， 容易に

7
2

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-92-

6
Pl

をまた（土）—騒とLCS)-17からは盆と盆を経由

DCC

CO
X

融点が一 致した。 一方lfill_からは紅を経由して糾

32R1 • H

NHR
f・れ， 蕃香から得られた標品と， スペクトルデ タ，

31 R1 . Ac

，

ー

OH
k吟IM.OH[

D

H

次で保護基をはずすとセレプロシドB1●註ーが得ら

9 H
、
‘
‘
,
＋

•

ノ

逗をイミデ ー ト法により設でグリコシル化し，1のジアステレオマ ーを分離し， その一 方の異性体

HHC
99 出
TM C

なるセラミド体拉を得た。 坦をトリチル化後2つOHHられた。 次に拉をD(R)ーアセトキシカルボン酸
DCR)-17と縮合させ2つのジアステレオマ ー から

へ

./v

喜。
゜

トロ基のみを還元するとaminoacetonide拉が得

fヽヘ./'/ヽヘ

人
HN
J OAc

T.O, ,A.3
2．

れたacetonide臣をLiAlH 4またはAl(Hg)で二．

異性化させることができる。 このようにして得ら

[！）
o0
ooo

syn体より安定 なanti体， 即ち， スフィンゴシ

が29 A,• H

A •��JO ,

Scheme4�へヘ皮膚への作用性を有する各種糖脂質の合成- gluco pyranosy1) -N -(2'-hydroxyhex­

対 構 造 に つ い て は未決 定 の ままで あった 5)

adecanoyl)-4,8-sphingadienine, kは 4E, SE(Scheme 5) 。

―

異性体であると決定した。

筆者は以上のことを考慮のうえ symbioramideJ

Ca 2+ -ATPase 活性作用を有する

2.

(+)シンビオラミド(2)の合成の全合成に着手した。 光学活性なa -hydroxy­/3, r -unsaturated ester牡の合成については ，まずPath Aに示されるよう に ， 絶対構造を明確にする目的で出発原料として， D-マンニト ー ル

2. 1

序

論

誘導体⑱ またはL ― アスコルビン酸誘導体⑲を

セラミド類を始めとするスフィンゴシン誘導体用いた。 これらを それぞれ対応する光学活性なアは ， 古く から細胞膜の構成成分として知られていルキン紅とし ， さらにアルケンジオ ール西を経て ，るが近年ではそれ自身生理活性を有することがCS)—糾および (R)—辿 へ導くこととした。 また3)見出され ， 注目を集めている 。 また動・植物よ別ル ートPath Bとして ， D-グリセルアルデヒ

り多様な構造と生物活性を有するスフィンゴシン

ド 誘導体牡とアラナ ー ト位との反応により光学活類が数多く見出され ， 構造決定されているか， 特

性なアリルアル コ ール拉を合成し ， これを 34へ導に近年では海産動物および海産微小生物の 生物活くこととした。 またアミノジオ ール， 即ちスフィ性物質の探索か進展し， 海洋産のスフィンゴシン

ンゴシン骨格の合成については ，誘導体も数多く見出されている

4)

H.-E.RadunzらのL

�

Symbioramide iは1988年小林らにより ， 沖
縄産二枚貝ヒシガイの 一種Fragum sp. のえら細ーセ

S.Nimkarら ，リン誘導体丑 6) を用いて ， これをテトラヒドロ体位とした後器へ導くことにした (Scheme 6)。

胞内に共生する渦べん毛藻Symbiodinium sp.
より単離構造決定された新規セラミドである。 生
物活性については ，

2.2 光学活性a ー ヒドロキシ不飽和脂肪酸エ

SR Ca2 •-ATPase活性化

ステル堕の合成作用を有することが知られており ， 海産物由来で光学活性な脂肪酸エステル辿の合成は出発原

は最初の例である。 またその構造については ， メ

料としてDー マンニト ー ル誘導体⑱およびL ー ア

タノリシスによりD-erythro-dihydrosphin­

スコルビン酸誘導体堕を用いた。 これらを アルデ

gosine祖と methyl 2-hydroxyoctadec-3(E)­

ヒド(R)—11, CS)—位とし ， さらにアルキンCS)

enoate紐が得られることから決定されている。 2
位 ， 3位の絶対配置については ， 路をトリアセチ
ル体西に導きD-erythro型すなわち (2S, 3R)配置と決定されたが ， 2· 位の絶対配置すなわち
a -hydroxy- /3 , r -unsaturated ester辿の絶
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3. U.H

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2. C出lH

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OH(S)-36 28% (3●I●p,)(R)-36 33% (3 S10ps).

\. Ph,CCI

2. MEMCI
似ぼ)MCI)
3. TsOH

H(
H
MoO� C 如C ,�OH
佃BF,·E120- EISHJ(S)-34 3匹(J,1opsJ, 1.咋hom 38 (12 ,i,p,)[ab"'S-4'(R臼4 33% (3••P•I, 1.3% (R)m 39(13'1,p,J[akr'4.7"

••

(C
CH,
HO�ゞ, l-珈OR
R:MEM (S)-45 ..,. (3 ,1叩●）
R:MOM (R)-<6 Tri. (3 steps)
39(10'1...)
;

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OH

1. T,OH

Boe

ACH

OH

CH,

X.

.. 如I四TI44 (<●lop,)43'"""'(ak,,29.5'

Scheme 9
また別ル ー トとしてアラナ ー トを用いた反応について検討した。 1 ー ヘキサデシン虹をアラナ ートとした後アルデヒドCR)—仕を反応させると．
光学活性なアリルアルコー ル般が得られ(64%).
MOM化 ， 脱保護により， ジオ ー ル怪とし(56%(2工程））． さらに酸化還元を経てアルコー ルを得た[75%(2工程） ， 虹から27%(5工程）］が． 比旋光度の符号から， 非天然型の脂肪酸CS)—佳である

Scheme 7—

Boe(S�7 22% (3"●P•I(A�37 15... (<"叩.,(A)-41(S)-41紐,10,H、
C C -;;;---立(CH如C出 声五 如

,
( H
H,
如
�

ことが判った(Scheme 8)。

—

紅(22%(3工程））， (R) 泣(15%(4工程））へと導

還元により ， アルケンジオ

ー(+)ー シンビオラミド(2)の全合成"

2.3いた。 これらをアルキル化脱保護三重結合のル(S)ーQQ(28%(3 エアミノジオ ー ル骨格についてはL — セリン誘導体丑 6) を出発原料に用い， 接触還元でテトラヒド程））， (R) — 西(33%(3工程））へ変換し， さらにトリチル化 MEM化(MOM化）， 脱トリチル化をロ体位とし(100%), さらに脱アセトニド化， 脱経て(S) — 位(54%(3工程）） ， (R)—1Q(77%(3工程），

Boe化アセトニド化によりアミノアセトニド盤

辿から3.9%(10工程））とした。 これらを酸化メとした［丑から80%(4工程）] (Scheme9) 。

チル化の後脱保護すると， 2- ヒドロキシー 3ー オ

アスコルビン酸由来のアルコ ー ル(R) 一 般を酸

クタデセン酸メチル(S) — 辿(30%(3工程））が， 堡

化盤との縮合脱アセトニド化を経て位としたから1.0%(12工程）， (R) — 辿(33%(3工程））が， 堕(38%(3工程））。次で但を脱 MOM化すると， 目から1.3%(13工程）の収率でそれぞれ得られた。比的とする (2S, 3R , 2'R)配置 をもつsymbio­

旋光度を天然物由来の凶と比較することにより，ramide.2,を 得ることができた[(R)一 般から24%(4symbioramide の構成脂肪酸2の絶対配置は， L工程） ， 盤から0.9%(14工程）］。合成した2は天然ー アスコルビン酸誘導体盤由来の辿，

即ち(R)配置であることが判った(Scheme7)。
1.DIBAL
CH,(CH加C三C H ,
2·
47
q_

•

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。占

OH

(A)·41(CH,J.,cH,
人-./",./
ヽHO.__,i
OMOM

48 56% (2 steps)

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1.MOM I

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2.NaBH

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(A)-40((5)·46 75¾(2 stops), 27¾l"'m 47 5 slops)[a]o,-61.4•

2.NH,

N(CH加C出
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X. ..

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HO

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；し霊.�,

向....
.

Scheme 10-94-(

40 30% 3,t叩•I(CH如叫

A: k 35 mp. 75-7がScheme 8

(C C

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H如 H,

1,,c柑

C

C

HNYゞ,( H如 CH,

3. T,OH[""己7丑

AO'(CH2).,CH,

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0

N)lャへ芝出H
OR

40 64¾

1. Pb OAc)

0叩M

C(CH加 H,四

BF,·Ef,Oて面「一63%皮膚への作用性を有する各種糖脂質の合成物と完全に 一 致し ， また2をトリアセチル体虹に導き， 天然物のトリアセチル体と完全に

一

致した

H

(
�
55

ことで確認した(SchemelO)。

3 .

(+) Erythro-N-lauroyldocosa­
sph i nga-4,8-dien ineC3_)の合成とその絶対構造の決定

,Boe

2)

H

N'

,・
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H
""lf'

い

56

.Boe

HO

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\. la0<oyl

H

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3. 2.2・DMP

り出� (C H

0 0
X、

゜

如 H,
C

54 20¾(3 ,,..,,)l_ C( H,)"CH,へ�(C fl,).,CH ,OHo-,,ylh心351¾(2sl,ps),4.\¾l<om56(7,i,p,)
mp. 78-80℃ [uJo.J.47'[".)mp. 四7・298'C (oloo294• I(mp.65-75 ℃I

2種の異なったキラル合成法によりD­

Scheme 12

erythro-aを合成し ， その融点について真偽し ，
また絶対構造を決定した 9)CC

57��. [a)o-38.1•( H I,)

57,(,n卯57b(,yn)-96/4

CH加C ,

HO�

触手より単離された新規セラミド(+) -erythro­N-l auroyldoco sasphinga- 4, 8-dienineJ 8 iに
ついて ，

0

OH

sa 84¾,hb心●イソギンチャクの 一種Anemonia sulcataの

C 三戸士
�へへ／
ク ヽ (CH如CH二トニド化により祖とし(84%). 脱Boe化三重結

キラルなオキサゾリジノン⑳をボロンエノレ ー合の選択的還元 アセトニド化を経て． アミノア

トとした後， ジエナ ー ル臥を反応させると立体選

セトニド訊とした後[2 0%(3工程）］． アシル化

ー

択的にf3

sy n のプロムヒドリン認が得られた脱保護すると ， D-erythro-Jを得ることが出来(90%)。認をアジド置換した後 メタ ノリシ ス にた[51%(2工程）， 茜から4.1%(7工程）］。融点はやよりメチル エステル設とした[ 69%(2工程）］。 設

はり80℃付近の値を示し， また比旋光度についてを還元 アセトニド化によりアミノアセトニド迅

も文献記載値と逆の符号を示した(Scheme12)。

とした後[31% (2 工程）］ ， ラウロイル化脱アセ

さらにこの 2種のキラル合成で得られたD-ery­

トニド化すると ， D-erythro-Jを得ることが出thro-Jは， 先に別途合成で得られた(-) -Jと各来た[89%(2工程） ， 臥から16%(7工程）］。融点は，

種デ ー タが完全に 一致した。 また融点についても，80℃前後の値を示し ， また比旋光度は文献記載値

Guyot博士より戴いた天然の標品について自らとは逆の符号を示した(Schemell) 。

測定したところ ， 合成品とほぼ同じ値を示した。
ー

また アルキン茜をリ チオ化した後， L セリ

以上のことにより， 天然物の文献記載の融点は

立体選択的に誤りであり ， 実際は80℃付近の値であることがanti付加体57aが得られた(47%)。57aを脱アセ判った。 またその絶対構造は， 天然には非常に珍ナー ル誘導体函と反応させると ，

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1) E. Okuyama

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M.Yamazaki,

Chem,2) a) S. Kodato, M. Nakagawa, K. Nakayama ,,J,,C出(CH

D ,yrh心3 ,.,ら (2'1●
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献Pharm. Bull., 姐 ， 2209(1983)

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ることが判った。今後生物活性についても検討する予定である。

90% {akJ.
心.O"( HO,}
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I. LAH�(CH,),,C H,_ �iCH如CH,
2.2.2·0MPO0OH
53 69% (2 ,,..亀）・・

しいL-erythro型すなわち(2R, 3 S)配置であB<

and T. Hino, Tetrahedron, 位(no.23), 7247('"'°''(1989) ; b) S. Kodato, M. Nakagawa, and T.
Hino, iboid, �(No.23), 7263 0989).

Scheme 11-95-

For other total synthetic works of !Q:K.Mon

D. Liotta, Tetrahedron Lett., 塁3037 (1988) ;and T. Kinsho, Liebigs Ann. Chem ., 807

H. -E. Radunz, R. M. Devant, and V. Eier­(1988);c ) N.P. Singh and R.R. Schmidt, J.

mann, Liebigs Ann. Chem., 1103 (1988).

Carb hydrate Chem., 8, 199(1989 ).

7) a) M. Nakagawa, J. Yoshida, and T. Hmo,3) K. -A. Karlsson, in'Biological Membranes,'

Chem. Lett., 1407 (1990) ; b ) J. Yoshida, M

ed. D. Chapman, Academic Press, London,

Nakagawa, H. Seki, and T. Hino, J. Chem.

1982, Vol. 4, p. 1.

Soc. Perkin Trans. 1, 343 0992).

4) a) P. G. Nielsen, J. S. Carle, and C. Christo­

8) K. Chebaane and M. Guyot, Tetrahedronphersen, Phytochemistry, 廷16430982) ; b)J. H. Cardellina and R. E. Moore, Phyto

Lett., 四 ， 1495 (1986).
9) M. Nakagawa, A. Tsuruoka, J. Yoshida, andchemistry, 旦, 55 4 0978).

T.Hino, J. Chem. Soc., Chem. Commun., 603

5) J. Kobayashi, M. Ishibashi, H. Nakamura,
Y. Hirata, T. Yamasu, T. Sasaki, and Y.

(1990).
10) T. Hino and M. Nakagawa,Ohizumi, Experientia, 丑800 0988).

27,No.11(1991).

6) S. Nimkar, D. Menaldino, A.H. Merrill, and-96-

ファルマシア ，II. 平成3年度助成研究課題

生体適合性逆型ベンクルの生成•安定化と応用に関する研究
横浜国立大学工学部

国 枝 博 信We have found that reverse vesicles can be formed し y mixing biocompatible surfac­
tants such as lecithin-lysolecithin, N"-lauroyl argmme methylester hydrochloride(LAM)-lecithin, LAM-glycerol monolaurylether, sucrose monoalkanoate (DKE)-hex­
anol, DKE-hexaethyleneglycol hexadecyl ether(R,s EOs).
We have investigated the structure of reverse vesicles with the help of phase d1a­
grams, small-angle X-ray scattering, video enhanced microscopy, freeze-fractured
transmission electron microscopy. We have confirmed that reverse vesicles form fromlamellar liquid crystal swelling a large amount of oil. We have also determined and re­ported spontaneous formation of reverse vesicles from an isotropic solution in a DKE/
恥EOs /decane system. The effect of the mixing ratio of surfactants and water content
on the stability of reverse vesicles was also investigated in the DKE system.

1. 緒の安定性に対する知識を加えることができ ， さら言に非極性溶媒中の分散系の安定性に関する研究対リン脂質などの両親媒性分子を水に分散させる象になるなど基礎研究にとって極めて重要な意味と生体膜の基本構造 ll と同様の親水基を外側に向を持つ。 それだけでなく ， 油中での有用物質の保‘けた2分子膜が閉じたベシクルあるいはリポ ノ ー

持， 放出制御 マイクロカプセル化など化粧品をムと呼ばれる小胞体を形成する。 ベシクルは 1964

初めとする広い分野で応用が考えられる。
我々は従来の発想と異なり， 逆ベシクル生成にされ， 現在も物理化学， 生物化学（物理）などの分野の主要な研究対象の一 つである S . 4 >。 それに反は親水基間の相互作用を調節することが必要であるとの認識から少量の水を添加することにより，して ， 炭化水素など非極性溶媒中に分散する親水

通常のポリオキシエチレン型非イオン界面活性剤

基が内側を向いた逆2分子膜からなる小胞体逆を用いて世界で初めて逆ベシクルを発見すること

ベシクルは知られていなかった。 一般に界面活性に成功した 5 - 7 l 。 さらに同様の考えで ， イオン性剤などの両親媒性分子を単に油と混合すると分子界面活性剤あるいは非イオン ー イオン混合界面活分散溶液， 逆ミセル溶液または溶けずに固体が分散あるいは沈澱するのみである。 このため， 通性剤系においても逆ベシクルを生成することができた 8 . 9) 。 ところが， 今まで発見された逆ベシク

常のベシクルと比較して発見が遅れたものと考え

ルは何れも極めて不安定であり すぐ沈降分離られる。

してしまう。

年の発見以来八 基礎•応用の両面から広く研究

逆ベシクルは新しい自己組織体であり， 界面活性剤の会合原理に新たな知見を与えたり， 生体膜

本研究は逆ベシクルの基礎•応用に関する継続的研究の第一段階として， 化粧品などの分野に用Studies on Formation, Stabilization and Applications of Reverse Vesicles by Biocompatible Surfactants
Hironobu Kunieda-98-生体適合性逆型ベシクルの生成•安定化と応用に関する研究いることのできる生体適合性の良い界面活性剤をした試料を割断装置(Eiko F A -2/2A )を用い2.7

使用して逆ベシクル生成の可能性を検討し， そのX 10 5 Pa の高真空下で割断した。 割断試料を白構造を確認し， さらに生成• 安定条件を明らかに

金および炭素でShadowingを行いレプリカを作して粒径を制御する手段を見いだすことにある。

製した。 レプリカを透過型電子顕微鏡（日本電子，

将来的には逆ベシクルの基礎研究のみならず応用

JEOL JEM-1200EX)で観察した。

―

研究に発展させる考えである。

2.2.3

小角X線散乱(SAXS)

本報告においては最初 ， 種々の生体適合性界面

液晶あるいは遠心分離機で沈降させた逆ベシク

活性剤系における逆ベシクル生成について述べた

ルをX線用毛細管（直径1.5mm)に詰め熔封した。

後， 安定な逆ベシクルを生成するショ糖エステル

2分子膜の面間隔を出力18kWの小角X線装置（理系における詳しい研究結果を報告する。

学， RU-300)で測定した 6) 0
2.2.4

2. 実 験

FT-PGSENMR法

スウェ ー デン ， ルント大学(Lindman教授，
およびOlsson博士）の協力により， フ ー リェ変

2. 1

試

換パルス磁場勾配スピンエコー NMR法により溶料

レシチンはL ucus Me yer社製の精製大豆レシ

液中の界面活性剤の拡散係数を測定した [3) 。

チン(Epicron 100)を用いた。 塩酸N ー ラウロイ

3. 結果と考察

ルアルギニンメチルエステルはスペイン国立化学
技術繊維研のInfante 博士により提供された試料である。 リゾレシチン，
ルヘ キサデシルエーヘ キサエチレングリコー

3. 1

テルCR1sEOs)は日光ケミカ

生体適合性界面活性剤による逆ベシクル生成（成果1)

ルズ（松製である。 ショ糖エステルは第 一工業製薬

逆ベシクルは通常のベシクル， リポソ ー ムと全昧製である。 モノ脂肪酸含量は95%以上であり，

く対称的な自己組織体であるから， その生成条件

脂肪酸の 鎖長分布はC14 10%, C1s 40%, C1a 50%も逆になる。 即ち ， 通常のベシクルにおいては疎である。

水基間の相互作用が2分子膜形態を維持し， 親水
基は水との親和性に寄与していると考えられる。
一方， 逆ベシクルの場合は， 疎水基（親油基）は溶

2.2 実験方法
2.2. 1媒との親和性に寄与するため， 通常の炭化水素鎖

光学顕微鏡観察

逆ベシクルの観察にノマルスキ ー 型微分干渉顕で充分であり， 親水基は逆2分子膜構造を維持す

微鏡（ニ コンX2F-NTF-21)に画像処理装置るため強い相互作用が必要であると考えられる。

Ar guslO(浜松ホトニクス）を用いる Video En­
hanced Microscopy (VEM)を使用した IO . 11)。

従って， 通常のベシクル生成には比較的親油性の蛍光顕微鏡はオリンパス製(BH2-RFC)を用い，ルの場合は親水性の必要がある。 ただし， 油中の高感度テレビカメラをつかい， 水溶性蛍光物質

両親媒性分子は液体状態でなければ逆ベシクルをCalce inを添加し， 逆ベシクルのベシクル膜を観形成しない。

両親媒性物質が用いられるのに対して ， 逆ベシク

以上の考え方を基に， レシチン ー リゾレシチン

察した。
2.2.2

系L AMー 系， ショ糖エステル ーヘ キサノ ー ル系，

電子顕微鏡

凍結割断法で試料を調製し， 透過型電子顕微鏡

リゾレシチン ー モノグリセリド系で逆ベシクルをで観察した 12) 。 試料ホルダーに逆ベシクル分散

生成し， VEM, 蛍光顕微鏡で逆ベシクル構造を液を載せ， 液体窒素で153Kまで冷却した。 凍結

明らかにした。 このように， 逆ベシクルの 一部の-99-

特殊な界面活性剤系で生成するのではなく， 一般的な現象であることが分かった。
3.2

逆ベシクルの微細構造（成果2)

ショ糖エステル ーヘ キサノ ー ル系において， 安
定な逆ベシクルが生成することが明らかになったのでその構造を検討した。 脂肪酸が 一つついた
ショ糖エステルは極めて親水性の強い界面活性剤であり， 特に脂肪酸が直鎖の飽和炭化水素鎖からなる場合， 油には溶解しない。 したがって，
サノ

ー

ヘキ

ルのような両親媒性物質を加えて膜を柔軟{にする必要がある。 図1に相平衡図を示す。 図のようにある混合比率でラメラ液晶相が出現し， 低濃度側では液晶と油相の2相系が得られた。 ここ

図2

図1中のA点において生成した逆ベシクルのVEM写真。

図3

図2の系に蛍光色素Calceinを添加した蛍光顕微鏡写真。

で系を撹はん ， 超音波処理すると ， 図2の写真に示すように， 逆ベシクルが生成する。 この系に，水溶性の色素 Calceinを添加して， 蛍光顕微鏡で観察すると（図3)ベシクル膜だけ輝いて見え， 確
かに内外相が油であることが確認された。 さらに，

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10
微細な逆ベシクルに関しては凍結割断法でレプリ力を調製し， 透過型電子顕微鏡で観察した。 結果

A

s,.

゜゜

を図4に示す。 図中に比較的大きい逆ベシクルが3つある。 上のベシクルはちょうど中程を割断され5

図1

22.5 ° C

25ており， 内相， 外相とも同じ模様を示し ， 両相がConcn. of Water in System I wt%
ショ糖エステル／ヘキサノール／水／デカン系の相図。 ヘキサノール瀑度は系に対して9%一定である。 I LCはラメラ液晶1 相領域を表し, IILcは液品を含む2相 領域を示す。

油であることが分かる。 一方， 下の右側にあるべ

10

15

20

シクルは下の部分で割断されており， 内相の油は取り除かれている。 ベシクルの縁にそって ， 多重膜が観察される。 この厚さを測定すると約 10nm

-100-

生体適合性逆型ペシクルの生成•安定化と応用に関する研究である。 この厚さが妥当なものか確認するため，られる。 一方， ショ糖エステルの多い領域では液ベシクルを遠心分離機で沈降させ， 小角X線散晶が出現する。 偏光顕微鏡の観察でラメラ液晶で乱測定を行ったところ ， 面間隔が10.9nmであり ，あることが分かった。 通常 ラメラ液晶は水の多一電顕の結果と良い 致を見た。 すなわち ， 図4のい領域で形成され， 水無しの系で生成するというベシクルの膜は2分子膜に相当している。 CPK

報告はショ糖エステル系を除いて殆どない 14 l 0

モデルによるとショ糖エステル（ステアリン酸エ

このラメラ液晶は親水基間がくっついており ， 炭ステル）2分子の延びきった長さは約6.5nmであ化水素鎖間が離れた構造であると考えられ， いわ

り ， 2分子膜は油を層間に膨潤し， 親水基間がば逆ラメラ液晶と言える。 液晶相の構造をより明くっついている逆2分子膜である。 このように，らかにするため小角X線散乱で面間隔を測定した。

ショ糖エステルが曲中で生成する分散系は逆 ベシ

図6は典型的なSAXS曲線を示す。 2つのビ ークが観測され， その比は 1:2であり ， ラメラ液晶クルであることが確認された。

であることが分かる 15 l。 このラメラ液晶の模式

図を図7に示す。 SAXSで求められる面間隔は図3.3 逆ベシクルの自発的生成（成果3)以上述べてきたように， ショ糖エステルなど中のdである。 もし， 逆2分子膜の長さ， 出がデ

種々の生体適合性界面活性剤系で逆ベシクルが生

カンの含有量に依存せず， また， 各分子の部分モ成することが明らかになった。 ここでは， ショ糖

ル容積が純粋の場合と同じと仮定すると， 次の式

エステル／ヘキサエチレングリコ

ー ルヘキサデシが成立する 6)d=d,/¢s

ルエ ー テルCR 1sEOs)/デカン系で ， 水を添加しここで¢ s は界面活性剤の容量分率である。 界

なくても逆ベシクルを生成することを見いだした

面活性剤の密度を1.0としたときの面間隔と容量ので報告する。
図5は30℃における上記3成分系の相平衡図であ分率の逆数との関係を図8に示す。 図のように直る。 R 1 sEOsが多い領域では等方性の1液相が得

線関係が得られ ， 逆2分子膜の厚さはほぼ4.4nm
DKE

20

逆ベシクルの凍結割断法による透過電顕写真。

図5

-101-

60

Content of decane in system I訊%

、
8

図4

40

゜

B

R1sEOs>Decaneショ糖エステル/R"EO,/デカンの相平衡図。

である。 前に述べたように延びきったショ糖ステ

一方， 等方性溶液の構造をフ ー リエ変換磁場勾

アリン酸エステル 2分子の長さは 6.5nm であり ，配スピンエコ ー NMR(FT- PGSE)法で拡散係

液晶中ではかなり短くなっていることが分かる。

数を求めることから推定した。 R1sEOsなどポリ液晶状態では炭化水素鎖は融解状態にあるため，エチレングリコ ー ル型非イオン界面活性剤油溶液

この結果は妥当であると考えられる。 また， 図か（水を含まない）では ， ほとんど逆ミセルを形成しら分かるように油の含有量増大と共に面間隔は大ていないことが知られている 16) 。 図9にR1sEOs

きく広がっており ， この液晶が逆ラメラ液晶であのエチレングリコ ー ル部分をシグナルを利用してることは明らかである。

NMRで求めたR1sEOsの拡散係数の結果を示す。

①

DS
l:
8Jl
J
5U芝UI6U//J
11

測定した組成は図5に示してある。 ショ糖エステ
3
1
2
1

—

e

!

hydrophilic portion
図7

＂

2.0

3.0

4.0

1/tb s

5.0

6.0

7.0

＂

“逆 ラメラ液晶の面間隔と界面活性剤の容積分率との関係。 測定は図5中のA線上で行って
いる。
0.5

T

0.4

00000000 f

111111111o＿

一a
E /1101x
S ;,:
＇
-

三

図8

0
払
5 4ー

典型的なSAXS曲線。 組成はショ糖エステル
48%, R16 EOB 12%, デカン40%である。

7

図6

，

20 /deg.

0
9

e1
101
u1
6upeds101f
Eu1

1.0

1
1

0.12

゜

0.3

0.2

文

0.1

0.0

amphiphile molecule

10

20

30

40

Total amphiphile concentration/wt%

lipophilic portion＂逆 ラメラ液晶の模式図。 SAXSでは図中のdが求められる。

図9

-102-

等方性溶液中のR,s EOsの自己拡敬係数。 白丸
はショ糖エステルを含まない系で図5のB線に相当する。 黒丸は図5のC線に相当する。

生体適合性逆型ベシクルの生成•安定化と応用に関する研究

ルが存在しない場合拡散係数は大きな値を示し．

示す。 相図上には逆ベシクルの安定・不安定の領

界面活性剤はほぼ単分散溶解していると考えられ域も同時に示す。 逆ベシクルの調製法は次のようる。 ショ糖エステルが加わると拡散係数は大きくに行った。 所定の組成の試料をVortex Mixerで低下し ， 逆ミセル形成が起きていると推定できる。

撹はんした後水浴型の超音波処理装置で30-60

NMRのシグナルを比較しても． ショ糖エステル

分程度超音波をあてた後， 0.6µmの穴を持つを含まない場合， 鋭いビ ー クが得られるのに対し，

ポリカー ボネイトフィルタ ー で憑過して逆ベシク

含む場合はプロ ー ドなピ ー クが得られ． 界面活性

ルを得た。

剤分子の配向性が高まっていることが分かった。

R1sEOsの割合の多い領域では少量の水が加わ逆ベシクルは図5の液晶を含む2相領域（特に界ることにより等方性の逆ミセル溶液相が広がる。

面活性剤低濃度）で生成する。 この場合， 逆ベシ

一方， ショ糖エステルの多い領域では液晶を含む

クルの生成法は2つ考えられる。1)図5の逆ラメラ2液相が広がっている。 水を多量に加えて上の境

液晶を調製し， それをデカン中に細かく分散する界に達すると液晶は消え， 等方性の2液相からな方法と， 2)最初等方性の逆ミセル溶液を調製して1)

おいで それをデカンで希釈する方法である。
1)は通常のベシクル生成法であり， 大きな塊の液晶をVortex Mixerあるいは超音波などを用いて機械的に細かくする方法である。 一方2)はショ糖エステルとR1 sEOsの油に対する溶解度の差を利用する方法である。 すなわち ， 前者の油への単分散飽和濃度は極めて小さく（例えばヘプタンに対して 0.01%以下） I 7 、 I 8) , 逆にR 1 sEO叶ま100倍程度大きいと推定できる。 したがって． 図5の等方性溶液を調製して ， それをデカンで希釈すると，最初に存在していた逆ミセルからR1sEOsか油中に拡散していき ， 逆ミセル中ではショ糖エステルの割合が増していき ， 最後にラメラ液晶（逆ベシ2)クル）として ， 分散すると考えられる。 したがって ， 2)の方法では1)と比較してより細かい逆ベシ
クルが生成すると予想される。 図10に両者の方法で生成した逆ベシクルのVEM写真を示す。 予想
どおり， 2)の方法では細かい逆ベシクルが生成していることが分かる。 2)の方法は逆ベシクルが希釈により自発的に生成すると言う意味で極めて重要なものと考える。
3.4

逆ベシクルの安定性（成果4)

ショ糖エステル ー RIS E切系の逆ベシクルの安定性は水の添加量に大きく依存する。 図11に両界面活性剤の混合比率と水の添加量を変えた相図を

図10

-103-

1)の方法により生成した逆ベシクルと2)の方法
により生成した逆ベシクルのVEM写莫。

“

D. F. Evans, Langmuir, 7, 1915(1991).
InterfaceSci., 140, 2770992).

40

loid InterfaceSci., 147, 286(1991).
9 ) 中村和吉 ， 町山美昭 ， 国枝博信 ， 油化学 ， 41,480

Extremely uns匹le dispersion(wrthin 10 mu,.)

20 ⑩(1992).
10) B. Kachar, D. F. Evans, and B. W. Ninham,

゜

~
11n
00

0.2

0.

、

Weight fraction of
図 118) H. Kunieda,S. Makino, and N. Ushio, J. Col­

Water separate region(stable emulsion)

5

。ヽ°
I
M / IU0 JU O :J J
芝 eM

70 紅

7) H. Kunieda and M. Yamagata, J. Colloid

J. Colloid InterfaceSci., 100, 287 (1984).
0.6

0.8

11) D. D. Miller, J. R. Bellare, D. F. Evans, Y.

t.0

Talmon, and B. W. Ninham, J. Phys. Chem.,

DKE
DKE+R15E05

91, 674(1987).

逆ベシクルの安定性に及ぼす水の添加効果。 界面活性剤濃度は3%一 定である。

12) W. Jahn and R. Strey, J. Phys. Chem., 92,る2相領域に入る。 すなわち ， 水が過剰に存在す

13) P. Stilbs and M. E. Mosely, Chem.Scr., 15,2294(1988).
1760980).

ると親水基間の相互作用を作用を弱め， 液晶構造を保てなくなると考えられる。 事実図中の逆ベ

14) T. M. Herrington andS.S.Sahi, J. Am. Oil
Chem.Soc., 65, 1677(1988).

シクルの極めて不安定なところでは逆ベシクルはすぐに融合し大きくなる現象が観察された。 逆ベ15) P. Ekwall, L. Mandell, K. Fontell, Mol. L1g,
Cryst., 8, 157 (1969)

シクルは水が極端に少なくても不安定になるがこの現象の原因はまだはっきりしない。 しかし． 図

16) A. Kitahara, J. Phys. Chem., 69, 2788(1965).

より ． 逆ベシクルの安定化には水の量をコント

17) H. Kunieda and M. Yamagata, Colloid

ローPolym.Sci., accepted.

ルする必要があるが安定性に関して界面活性剤の混合比率の影響は比較的少ないことが明ら

18) H. Kunieda, N. Ushio, and M. Miura, J. Col­loid InterfaceSci.,submitted.

かになった。
文献1) S. J.Singer, and J. L. Nicolson,Science, 175,

研究成果
成果 1) Reversed Vesicles from Biocompat­

720(1972).
2) A. D. Bangham and R. W. Horne, J. Mol

ible Surfactants.

Biol. 8, 6600964).

Nakamura, M. R. Infante, and C.

3) P. Machy and Leserman, "Liposomes in Cell

Solans, Advanced Materials, 4, 291-

Biology and Pharmacology", John Libbey &293(1992).

Co.,London(l987).

4} M. J. Ostro, "Liposomes", Marcel Dekker,
Inc., New York0987).

H. Kunieda, K.

成果 2) Reverse Vesicles: Counter Structureof Biological Membranes.

5) H. Kunieda, K. Nakamura, D. F. Evans, J.
Am. Chem.Soc., 113, 1051(1991).
6 ) H. Kunieda, K. Nakamura, H. T. Davis, and-104-

H. Ku­

nieda, M. Akimaru, N. Ushio, K.
Nakamura, J. Colloid Interface Sci.,m press.

生体適合性逆型ベシクルの生成•安定化と応用に関する研究成果3) Spontaneous Formation of Reverse
Vesicles. K. Nakamura, H. Kunie­da, U. Olsson, a nd B. Lindman, in
preparation.

成果4) Stability of Reverse Vesicles. H.
Kunieda, K. Nakamura, A. Uemoto,-105-

N. Azemar, and C. Solans, 研究継続中．

活性酸素 フリ ー ラジカルによる生体膜傷害の防止に関する研究
東京大学先端科学技術研究センタ ー

二

木

鋭

雄

There is now an increasing number of experimental and epidemiological evidence
which indicates that the oxidations of biological molecules and membranes induced by
active oxygens and free radicals are involved in a variety of pathological events, cancer
and even aging processes. The aerobic organisms are protected against these oxidative
stress by an array of defense systems with different functions. Among others, the radi­cal-scavenging antioxidants play an important role to inhibit a chain initiation andbreak the chain propagation. This study has been performed aiming at elucidating the
dynamics and mechanism of action of various natural and synthetic radical-scavenging
antioxidants, especially the effect of reaction medium on them. A number of aminophe­
nols, chromanols and related compounds have been studied in homogeneous solution,
micelle, liposomal membranes and in ex vivo systems. The antioxidant activities of var­ious natural and synthetic carbazoles were studied in the oxidations of methyl linoleatein homogeneous solution and soybean phosphatidylcholine liposomes in aqueous disper­
sions induced by free radicals. Carazostatin, l-heptyl-3-hydroxy-2-methyl carbazole,which was isolated from a culture of Streptomyces Chromofuscus was found to be astrong antioxidant in both oxidation systems. It was also found that the physical factors
such as location and mobility of antioxidant in the microenvironment as well as chemi­
cal reactivity toward radicals are important in determining the overall antioxidant po­tency.

1. 緒

言

ミックスについて検討した。

2. 実

活性酸素種やフリ ー ラジカルによって誘起され験

る生体分子や生体膜の酸化的俄害が， 種々の疾病，
癌老化とも関わることが明らかになりつつある。

2. 1

それに伴い ， 生体が持つこれら酸化的傷害に対す酸化反応では生体脂質のモデルとして高度不る防御システムが輿味を持たれている

ll

。生体は

試 薬

飽和脂肪酸エステルの 1 種であるリノ ー ル酸メチ

活性酸素種やフリー ラジカルの生成を抑える予防

ル (MeLH), およびリン脂質の 1 種である大豆ホ

的抗酸化物， ラジカルを捕捉安定化する抗酸化物，

スファチジルコリン (soyPC) をそれぞれ常法にさらには修復 ， 再生酵素を有している。本研究でより精製した後， 基質として用いた。抗酸化物は

はラジカル捕捉型抗酸化物について， 特に種々の市販のものをそのまま用いた。使用した化合物をフェノ ー ル， クロマノ ー ル， カルバゾ ー ルおよび

図1 に示す。連鎖開始剤としては市販の脂溶性ア類縁化合物の抗酸化活性 ， ビタミン E(aトコ

ゾ化合物2,2' ーアゾビス (2,4ー ジメチルバレロニ

フェロ ー ル）の膜における抗酸化作用 のダイナトリル） (AMVN) と． 水溶性アゾ化合物2,2' ーアーA Study on the Inhibition of Oxidative Damage of Biological Membranes Induced by Active Oxygens andFree Radicals
Etsuo Niki-106-

活性酸素 ． フリ ー ラジカルによる生体膜倦害の防止に関する研究

3. 結果と考察

ゾビス(2-アミジノプロパ ン）ジヒドロクロリド(AAPH)を用いた。
スビンラベル剤として， シグマ社製のステアリ

3.1

均一溶液系における各種抗酸化物の抗酸

ン酸のドキシル誘導体(NS)を用いた。ラベル剤

化活性はベンゼン溶液を丸底フラスコにとり， ベンゼン

アセトニトリル均一溶液系における各種抗酸化を減圧下除去してフラスコ壁に薄膜とし，そこへ物の抗酸化活性を比較したところ（図1), 天然にリポソ ー

存在する抗酸化物であるa ー トコフェロ ー ル(1)ムサスペンジョンを添加 インキュベーが最も優れた抗酸化活性を示し，構造の類似したトして取り込ませた。
2.2

クロマノ ール類も(1), (2) > (3), (4) > (5)の順に

いずれも優れた活性を示した。フェノ ール類に関

実験操作

2. 2. 1

してみると(1), (2), (3), (4) > (30), (37), (5),均一溶液系における酸化反応実験

MeLH453mM,

AMVN 0.20mMに各種抗酸一(20), (32), (7) > (10), (8) > (33), (34)の順にな

化物を5µM加えた均 溶液を37℃大気下で反応

り (35), (36), (38)は抗酸化活性を示さなかった。

し ， 酸化により生成するリノ ル酸メチルの共役

クロマノ ール類＞アミノフェノ ール類＞インド ー

ジエンヒドロペルオキシドを HPLC-UVで分析

ル類＞メトキシフェノ ー ル類＞クレゾール類となした。 分 析条件は，カラムLC18(Supelco),

ることからパラ位やオルト位により強い電子供与ーElue nt MeOH/H心95/5(v/v)で分離し ，UVa) chromanols
I

なJ..

234nmで 測定した。
2.2.2

HO

ミセル系 に おける酸化反応実験

MeLH 143mM,

AAPH 5mMを加えた SDS

ミセルに抗酸化物を5µM加え，37℃ ， 大気下で反応を行ない ，

bl indol:●

MeLH酸化過程における酸素吸

咄

を求めた。
ー

リポソ ム膜系における酸化反応実験

soy PC 5mM,

AMVN lmMのリポソ ーム膜を作製し，37℃，大気下で酸化反応を行ない ， 酸化により生成する共役ジエンヒドロペルオキシドをHPLC-UVで定量した。分析は，Supelco社

w

7
HO

H

c) tryp1oph印S
H
17
16
CH,CHCOOH
HO;

H
die血azoles
2�e)抑Hoes

25

N

H

H

w

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H

、

H

19

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、

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CH,C吋

H

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H

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2

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Fig.1 Antioxidants used in this study-107-c心",CA-<H、i
0:-0'CrµH'2

CH,COCtt

w

23

22

26

O

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31

HO

CQ

応 -o-ペい·-0-ペ>0 ぺ>
儲oeaols

、

H

E □>
•OH

―バンド，FE-lXを用いて行なった。

NH,'
CH,CH ,

クトルの 測定は，水溶液用石英偏平セルと温度可変装置付キャビティを使用し， 日本電子（株製 X

H, w
H

戸

16 HQ HHO

18CH,CHCOOH hO

'/ w

[5
“

変化を測定することにより行なった 。ESRスペ

1'

w NH, CQ'
。口品、
I

0

スビンラベル剤の 減少はそのESR吸収強度の

C

H

店

●

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ESR測定

●

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12

H

'

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゜
〗5

nmで測定した。
2. 2. 4

心芦

h▲

UV234

H。

二

製 のシリカカラムを用い ， Eluent MeOH/40
mM phosphate 90/lO(v/v)で分離し ，'HO巧エ巧):-""

収速度を切モニタ ーを用いて測定し， 酸化速度
2.2.3

ti

O c,

'

性の置換基がくるものほど ， 優れた抗酸化活性を20示すと考えられる。

I
15

放線菌より単離された天然化合物である(45) 2)

は(1)の約半分程度の優れた活性を示し，(49)も弱い抗酸化活性を示したが これらの誘導体である(46), (47), (48), (50), (51), (52)はいずれも活性を示さなかった。 アミ ノ 基 は(21) > (20),

::;S

§

I

云

マ=

(6) > (7), (28) > (30), (29) = (38)より， ヒドロ

10�/

キシル基より速くラジカルと反応できるというこ

5とも推測できる。また(25)は最もすぐれた抗酸化゜゜物のひとつである(2)と同程度の， (26)も(25)には若干劣るが(28)よりも優れた活性を示すのに対し(27)は活性を示さなかった。以上のことより，
水素が抜けた後のラジカルがより安定なものほど強い抗酸化活性を示すと思われる。トリプトファ

CH3CN

•

Hexane

1 00
200time,min300

Fig.2 Rate of the ox idation with and without(1)1nacetonitrile and hexane.
[Mel H ]=453mM;[AMVN ]=0.20mM

ン類のみミセル系で測定を行なった（アセトニト
リルに不溶であるため）ので定性的な評価しかで性を調べた。(1)も(43)もともにヘキサン中でメきないが ， (16)は活性を示したが(15)は活性を示

タノ ー ル中より約6倍優れた活性を示しエ ー テル

さなかった。アミノ基，

ヒドロキシル基を持たな

酸素の有無による影響は見られなかった（図3)。

い(9), (13), (15), (23), 活性基が メタ位にある

このことから(1)の活性がプロテイック溶媒中で(14), (22), (31), 環が電子欠乏となる(11), (12),低下するのはエ ー テル酸素の水素結合によるもの(24), (44)はいずれも抗酸化活性を示さなかった。

でなく ， フェノ ー ル性水素の水素結合によるものと考えられる。

3. 2

a

ー

トコフェロ

ー

ル(1)の抗酸化活性に及(Hex.) = 6.6
1 (MeOH) / 1
4 3 (MeOH) I 4 3 (Hex.) = 6.0

ぼす溶媒効果リノ ール酸メチルの酸化を各種均一溶媒系で行なったところ，溶媒によりリノ ール酸メチルの酸化速度は異なりa

ー

トコフェロ

ー

1.0

ル(1)の抗酸化活性も溶媒の影響をうけることが分かった（図2)。
極性溶媒中で(1)の活性がおちることについて
Pryorら 3) は クロマン環酸素がクロマノキシ
ラジカルを共鳴安定化するために， (1)が強い抗4 3 (MeOH)

｀｀｀

..c

1 (MeOH)

0.5

酸化作用を示すが， プロテイック溶媒中ではエ ーテル酸素の不対電子が水素結合することにより抗酸化活性が低下すると報告している。そこでエ ー

0.0
0.0

テル酸素をもつ(1)とこれに類似しクロマン環酸素をもたない(43)とを， 各々プロテイックなメタ
ノ ー ル中およびアプロテイックなヘキサン中で酸化を行ない，これに対する(1), (43)の抗酸化活

0.5I/ [IH], µM

Fig.3 Solvent effect on the antioxidant activities of
1 & 43 in the ox 1dation of methyl I inoleate- 108-

活性酸素， フリ ー ラジカルによる生体膜傷害の防止に関する研究

0.2

0.15

／
OH l 二U!
!:J〇工 / Lj
Ul
!::1

0.1

0.2

0.4

0.05

0.00
0.0

0.6

1 / [IH] , 1 /µM

Fig.4 The relationship between Rinh/Rp and 1/[I HJin the oxidation of methyl Iinoleate inacetonitrile. [AM VN J=0.20mM; [Mel H ]=453mM 37℃ under air
3.3

0.10

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1 .2

1 / [IH] , 1 /µM

F19.5 The relationship between Rinh/Ro and 1/[I HJ1n the oxidation of soybeen PC
liposomal membranes. [AM VN ]=1mM;[soyPCJ=5mM;37℃ under air

Ot ー トコフェロ ー ルの膜中における抗酸いく。 aートコフェロ ー ルがラジカルを捕捉する

化活性分だけ ， スビンラベル剤のi肖費は抑えられる。 大

天然化合物である(1)と(45)の抗酸化活性をリ
一

変興味深 いことに． ドキシルステアリン酸の作用

溶液系では部位であるN ー オキシドを膜の内部深くにおくほ(1)の方が優れた活性を示したのに対し， リポ

ど ， a-トコフェロ ー ルはドキシルステアリン酸

ソ ー ム膜中では(45)の方が優れた活性を示したの消費を抑制しにくくなることが分かった。 すな（図4, 5)。 また(1)と類似しているが側鎖のな い

わち ， a-トコフェロ ー ルの活性部位であるフェ化合物(2)は均一溶液系では(1)と同程度の， またノ ー ル性OH基は膜表面にあり． ラジカルが膜のポソー

ム膜中で比較したところ均

リポ ‘ノ ー ム膜中では(45)と同程度の優れた活性を内部に入るほど捕捉しにくいことが明らかとなっ示すことが分かった。 このことから(1)はその側た。

鎖の影響により膜中での動きが制限されているこ文とか示唆される。

献
二木鋭雄 ，

3. 4

スビンラベル法によるトコフェロー

PP. 177-190, 学会出版センタ ー ， 東京 ， 1990

ルの

2. Kato, S., Kawai, H., Kawasaki, T., Toda, Y.,

膜中での抗酸化活性の評価

Urata, T. and Hayaishi, Y., J. Anいbiotics,

スピンラベル剤であるドキシルステアリン酸に

42, 1879-1881(1989).

は抗酸化作用があり， それ自身ラジカルと反応して消費されていく。 リポソー

活性酸素種の化学 ， 日本化学会編 ，ー トコフェ

ム膜にa

3. Pryor, W. A., Strickland, T. and Church , D.

ロ ー ルとドキシルステアリン酸を共存させると，両者ともにラジカルを競争的に捕捉して減少して-109-

F., J. Am. Chem. Soc., llO, 2224-2229 (1988)

化粧品原料として竹節人参の組織培養による物質生産ならびに大量増殖に関する研究
広島大学医学部神田

博 史

Panax japonicus C. A. Meyer is a perennial herd of the Araliaceae family, ind1ge­
nous to Japan and China. Panacis Japonici Rhizoma(Chikusetsu-ninjin, in Japanese),the dried rhizome of this plant, has been utilized for hundreds of years in Japan as adrug for gastroenteric disorder, antiulcer, expectorants, and antipyretics. Several
oleanane saponins, chikusetsusaponin- I b, - IV, -IVa, and- V, along with dammarane
saponins, chikusetsusaponin- I a and- II[ were isolated from the rhizome of this plant.
The composition of saponins in the rhizome of Satsumaninjin, which limited distribu­
いon in South Kyushu, was remarkably different from that of other P. japonicus speci 一
mens collected from other places in Japan
Callus induced from various organs of an in vitro plantlet gave embryogenes1s on
the Murashige-Skoog's(MS) medium containing 1 ppm 2, 4-D at higher yield and in
shorter incubation time than that of intact plant. When the mature embryo were cul­
tured on the 1/2 MS medium supplemented with GA and BAP(each 1 ppm), shoot for­mation was induced. Subsequently the shoots were transferred to the 1/2 MS medium
supplemented with 1 ppm GA and 10 ppm BAP to form multiple shoot complexes. Whenthe shoots were subcultured in the medium containing 2 or 4 ppm IBA, rooting occurred
to from plantlets.
From tissue callus of P. japonicus grown in South Kyushu, two dammarane
saponins, ginsenosides Rg1 and Re, and an oleanane saponin(desglucosyl chikuse­tsusaponin-IV ) together with chikusetsusaponin- IV were isolated. From the callus ofHiroshima origin, three new oleanane saponins along with chikusetsusaponin-IV and­IVa were isolated.

第1節

トチバニンジンの不定胚分化による増殖について待されている。
今回，その中から竹節人参を選び， 大量増殖に関する検討， 並びに， 化学的品質に関する評価をこれまで育毛促進効果を有する生薬として当薬行った。
ト チ バニン ジ ン(Panax japonicus C. A.

（センプリ）何首鳥（ツルドクダミ）竹参（トチバ

日本特産の多ニンジン）番椒（トウガラシ）等が報告され， 現

MEYER'

在養毛剤として市販されている。また， 最近生

年生草本で北海道本州， 四国九州の山地の薬「甘草」の油溶性エキス（フラボノイド分画）に抗チロシナーゼ作用， 紫外線吸収作用， 過酸化

樹陰に自生する。根茎は結節があって地中を長く脂質抑制作用， 抗菌作用があることが確認され，ていた跡がある。根茎が竹の節に似ることから竹

化粧品原料としてスキンケアに広範囲な利用が期

節人参と呼ばれるが その根茎を通例湯通しした

ウコギ科Araliaceae)は，横走， やや肥厚し白色各節の上面に茎を付着しStudies on the Constituents and Mass-propagation in Cultures of Panaxjaponicus for Cosmetic Materials
Hirosi Kohda-110-竹節人参の組織培養による物質生産ならびに大量増殖に関する研究

ものを生薬「竹節人参」とする。Panax属植物

チバニンジンの各器官の組織を用いて，カルス化

で根茎が発達したものは他にも多数あり， 中国西と不定胚分化に関して検討し， 下記の結果を得た。

南部にも同名の植物かある他， 節間が細く長く延びた数珠状の根茎を持つ珠子参(P. japonicus C.

1.

A. MEYER var. majorCBuRx.)C. Y. Wu et K.

トチバニンジン花芽からのカルスおよび不定胚形成

M. FENG), 小葉が竹節人参に較べて細長い狭葉

1. 1

竹節参(P. japonicus C. A. MEYER var. angus­

基本培地は，Murashige & Skoog(MS)培地 10)

カルスの誘導tifoliusCBuRK,)CttENG et Cttu)などが知られていとし， 植物ホルモンとして，2, 4-dichlorophe­

る。一方薬用人参として有名なオタネニンジンは

noxyacetic acid (2, 4-D)をlppm添加し ， 滅菌

直根型で ， 同じ型のものにはアメリカ人参（広東した花芽を植え付けた。そして， まず光の影響を

人参. i羊参 ， P. quinqu efolium L.) , 三七人参検討するため，全日長下および暗黒下で培養した。

（田七 金不換 ， P. notoginseng (BuRK,)F. H.

15週間培養した結果 ， 全日長下における培養では ，CHENG)など約5種が知られている。

カルス化することなく， 緑色を呈した花序の個々

竹節人参は， 福井 ， 長野 ， 山形， 群馬 ， 香川，の花芽が生長し， 一部には ， 開花するものも認め

鹿児島などの各県が産地であり，ほとんど野生株

られ，増殖の目的には不適当であった。このため，の採取に頼っているが， 近年試作が行われている。

以下のカルス誘導はすべて暗黒下で行った。

10-11月頃野生の根茎を掘り， 細根を除いて水花 芽切片を2, 4-D lppm ま たはa -naph­

洗， 湯通して乾燥する。竹節人参は， 配合剤（健thaleneacetic acid (NAA) lppm添加MS培地で胃剤去痰剤など）の原料とするが， 漢方の方剤

15週間培養した結果， 2, 4-DおよびNAA添 加（処方）に人参と使い分けて用いることがある。そ区とも100%のカルス化が認められた。形成カルの含有成分については主としてサポニン類についス の 生重量を 比 較す る と ， 2, 4-D添 加 区 かて詳細な研究がなされてきた I - 4 l 。これらの研究

NAA添加区に比べ約3倍であった。

から ． 自生地によるサポニン類の質 的， 量的変異

1 .2

5

不定胚形成

産地による品質の不均一性が大

2, 4-Dによる誘導カルスは， 散形花序全体がきいことが明らかとなった。また， 近年の乱獲にカルス塊となり 最初淡黄白色の柔らかいカルス

より自生株が減少し ， 資源の枯渇も懸念されるがであったが， しだいに淡褐色の部分が認められる

本植物の栽培法はいまだ確立されていない。こ のようになり，15週間後には球状胚から心朦型胚にような現状から，本研究は ． 組織培養によるトチ

至る各ステ ー ジの不定胚が形成された。不定胚形

バニンジンの優良品種の育成とその増殖による資成率は80%と良好であった。

源確保を目的とした。

1. 3

が認められ

-9l ,

胚の生育と二次不定胚

これら不定胚を形成したカルスは同 一 条件下6

そこで，各器官の組織を用いた培養法を検討し，その増殖法を確立した。各器官としては， 花芽，

週間毎に継代することにより， 各世代ほぼ同等の

茎 ， 葉， および根茎を用いて培養した。

カルス増殖と同時に全カルス切片より不定胚形成

第1項から心朦型胚まで， 胚の生育状態が不均ーであるが認められた。しかし ， これらの不定胚は球状胚各器官からのカルスおよび不定胚形成

カルス誘導と再分化 ， あるいは不定胚分化等は ，ため ， 胚の生育促進と二次不定胚の形成を目的と培養条件のうち ， とくに添加ホルモンの種類と濃して ， 球状胚のみを選び， その切片をNAAと6度に影響され ， また， 実験に用いる器官によって-benzylaminopurine (BAP) 添加培地で ， 全日も差異があることが報告されている。このためト

長下10週間培養した。結果は Fig. 1に示す通り，-111-

花芽由来の不定胚は NAA 2ppmと BAP 5ppm

根茎切片を2, 4-Dおよびkinetinの o. 0.02.

およびlOppm添加区において， 二次不定胚の形

0.2. 2ppm添加培地で ， 暗黒下6週間培養を行っ成率が100% と良好であった。 このうち NAA 2

た結果 カルス形成が認められたのは， 2, 4-D

ら ， 二次不定胚の成熟促進が認められ， 大部分の

4-D 0.2ppm添加区の全区および2, 4-D 2ppm

胚が心朦型胚を形成した。 NAA 2ppmと BAPとkinetin 0, 0.02, 0.2ppm添加区である。 しかppm, BAP lOppm添加区はその重量増加率か

2.5, 5およびlOppm添加区では約半数の切片から0.02ppmとkinetin 0.02. 0.2ppmの添加区. 2,

し， 2, 4-D 0.2ppmとkinetin 0, 0.02, 0.2, 2

平均1-2本のshoot形成が認められた。 この傾向

ppmの組合せの添加区以外ではカルスの増殖率

は NAA lppm添加区においてもみられ ， 約30%も低下し． 枯死するに 至った。 2, 4-D 0.2ppmの切片から平均1本のshoot形成が認められた。

なお ， NAA 3ppm添加区では， 二次不定胚の添加区のうち ， kinetin 2ppmとの組合せ添加区が最も良好で， 6週間培養後のカルス生重量は0.7

形成胚の成熟促進ともに不良で ， 再びカルス化

gであった。

する切片も認められた。

2.2

不定胚形成

2, 4-D 0.2ppm. kinetin 2ppm添加区による
Eror�o-111JI tip I i cation(�JOO

Fresh ;,eight(g)2誘導カルスは6週間毎に 約1年間継代を繰り返したところ ， 40%のカルス切片からX不定胚形成が認められた。 不定胚形成状態は花芽由来カルスからの不定胚形成と同様であった。 なお . 1年半後には2, 4-D 0.2ppm添加全区において ， 継代培養
カルスより不定胚分化が認められた。
2. 3

胚の生育と二次不定胚

次に 2, 4-D 0.2ppm, kinetin 2ppm添加区に1

I

おいて得られた不定胚を ， 0, 0.2. 2.0, 20ppm

2

こコ ·¾of errbryo-ll!J!tip\ied cultureの農度の NAA および BAP 添加培地で全日長下 ，

匿： final fresh weight (g/culture)

Fig. 1

Embryo Multiplication from Flower Bud
Culture condition:in MS medium、at 25士1℃, under continuous light, in 10weeks

6週間培養したところ ， いずれの組合せにおいても二次不定胚の形成率は100%であった。 NAA

20ppm添加区を除いたほば全区で． 約10倍の増加率が認められ ， 二次不定胚の形成と成熟促進が確認された。

2. 根茎からのカルスおよび不定胚形成
2. 1

カルスの銹導なお ，

根茎切片を花芽切片と同様に， 2, 4-D lppm,

NAA lppm添加 MS 培地で ， 暗黒下15週間培養

NAA-kinetin,indole 3-acetic acid(IAA) -kinetin の 添 加実験を 行 っ た 結 果，

NAA-BAP の添加区に比べ ， 二次不定胚の形成した結果， 2, 4-D lppm添加区で 55% , NAA 1

率には差がないものの， その増加率はいずれも劣ppm添加区で64%の切片がカルス化した。 しかし ，り． さらに ， 異常組織を形成するものが多く認め

両添加区ともカルスの増殖が不良で ， 継代を重ねられた。

るに従って増殖が阻害され ， 枯死するカルスが多
く ， 不定胚分化には至らなかった。 このため ， 2,

3. 茎および葉のカルス形成
葉切片および茎切片を2, 4-D lppmおよび

4-Dとkinetinの組合わせによる添加農度を検討した。

NAA lppm添加培地で ， 暗黒下15週間培養した-112-

竹節人参の組織培養による物質生産ならびに大量増殖に関する研究

結果葉切片のカルス化率は2, 4-D, NAA 添

2. まとめベ ， 最高値を示した。一 方 ， 茎切片のカルス化率ppm添加1/2MS培地が適していることが明らかは低く， 15週間の培養期間中に， カルス化することなった。本添加区においてはshootのみ形成すとなく枯死する切片が多かった。これら葉およびるものや ， shootと発根が同時に起こるものなど

以上より， 成熟胚の発芽は GA.

加区とも100%であった。生重量は他の器官に比BAP 各l

茎由来のカルスを継代したがいずれも不定胚分が認められた。 また ， 6週間後には根茎の形成が化には至らなかった。

認められるものもあった。

4. まとめ第3項 発根について

以上， トチバニンジンの花芽茎葉および根1. 発根条件の検討

茎の各部位を用いた組織培蓑を検討した 結果す胚の発芽に際し， shoot形成と同時に発根する

べての部位がカルス化した。このうち ， 葉を用いものも 一 部認められたが， shoot形成のみにとどた 場合， カルス化率と カルスの重量増加に関してまるものが大部分であった。そこでshootの発根は最高の結果が得られたが増殖につながる 不について検討した。

IAA 添加区では 発根する個体は認められな定胚誘導には至らなかった。花芽由来のカルスは15週間の培養中に不定胚を形成した。また ， 根茎

かった。Indole-3-butyric acid (IBA)添加区での場合には約1年間の継代培養後 ， 不定胚誘導には1および2ppm添加区とも発根が認められるも成功した。次に， 花芽由来および根茎由来の不定のの， 8個体中6個体のshootはshoot基部からカ胚を用いて発芽の検討を行った。

ルス化が起こり ， 15週間後にはshoot全体がカル

第2項

ス化するに至った。 NAA lppm添加区では， す胚の発芽についてべてのshootが発根し， 平均発根数6 .8本と良好な結果が得られた。0.5ppm添加区においても10

1. 不定胚の発芽条件の検討
花芽由来の不定胚の場合， さきの二次不定胚の個体中6個体のshootから根の形成が認められた。

形成 培地において， shoot形成が認められたが，大部分の胚および根茎由来の胚は， 同 一 培地で培

2. まとめ養を続けると 発芽することなく， 再びカルス化し以上より， shoot 形 成 し た 個 体 の 発根 に はたり ， 異常組織を形成したりした。そこで不定胚

NAA lppm添加区が適していることが明らかとなった。これらの幼植物はバーミキュライトヘ移の発芽条件について検討した。
予試験的に， 花芽および根茎由来の両不定胚をg山berellin Aa (GA) および BAP 各lppmを添加したMS培地で継代培養すると ， 大部分の胚は植し栽培中である。
不定胚によるトチバニンジンの増殖法の模式図をChart1に示す。

正常に発芽することなく， 再びカルス化したり ，
第2節

異常な組織形成をすることが明らかとなったので

トチバニンジンのクロ ー ン増殖

無機塩濃度を1/2 および1/4としたMS培地にGA.

BAP を添加し ， 発芽状況を検討した。この結果
GA lppm および GA, BAP 各lppmを添加した 両l /2MS培地で それぞれ 80%および85 %の胚が発芽した。

Panax japonicusの花芽および根茎由来カ ルスから誘導した 不定胚による 増殖法については前に述べた。しかし ， 2 年間の継代中に， カルスの
不定胚形成能および不定胚の再分化能は次第に低下し ， ついには失われて， 不定胚からのshootも-113-embryo multiplicat,on

一

三

正f

lo

ロ〗

口
/J'"' �'/J」□[

ca I I us mu ltipl icat1on＇�'.:'"__
屯
"
"
'
三
,
,
三
plantlet
Chart 1shootij
embryoIn vitro Multiplication of Panax Japontcus

異常な形態を示すものが観察された。よって， 不かったが ， in vitroの葉や茎切片から誘導したカ

定胚形成能を保持したカルスおよび再分化能を保ルスは不定胚を形成することが明らかとなった。

持した不定胚を得るため， in vitroの様々な器官

さらに， 今回得られた不定胚形成の比率を， 第1を培茜し， そのカルス誘導と不定胚形成について節のものと比べてみると ， in vitroの切片の方が検討した。 また， 別にin vitroのshootを用いて不定胚形成の量が多く ， 期間も短いようである。

multiple shootの形成によるクロ

ー

ン増殖を試

これらの結果は，

ミシマサイコで得られた結果とよく 一 致していた。lppm GAとlppm BAPをみた。

加えた1/2MS培地上での成熟胚の発芽率は前の第1項

in vitro植物器官からのカルスおよび不結果と同様であった。

定胚形成
まず， 不定胚形成能の回復を目 的 と してm第2項

vitroの花芽 ， 葉， 茎， 根茎様組織細根切片を，in vitro植物器官からのmultiple shoot形成

lppm 2, 4-Dを添加したMS培地に植え付け，次に， クロ ー ン植物を得ることを目的として，

25℃ ， 暗黒下で培養した。4.5ケ月後には全種類

不定胚から再分化させた正常なshootからmul­の切片からカルス誘導できた。in vitroの花芽か

tiple shootを形成させるための検討を行った。

ら誘導したカルスからは約2ケ月後に不定胚が形

BAP-GAを含むMS培地およびBAP-GA.

成された。カルス表面に未熟な， あるいは成熟し

BAP-IAAそしてBAP-NAAを含むl/2MS培た不定胚が観察された。in vitroの葉と茎から誘地にin vitroのshootを植え付けた。その結果導したカルスも4.5ケ月培養した後に不定胚を形

multiple shoot形成に最もふさわしい条件は ，成した。第1節に述べたように親植物の葉や茎切l/2MS培地にlppmGAとlOppmBAPを添加し片から誘導したカルスからは不定胚は形成されなた培地で1株当り shoot 11本が形成された。1/2-114-

竹節人参の組織培養による物質生産ならびに大量増殖に関する研究

MS培地に5ppmGAと1あるいは5ppm BAPを部を除く日本に広く野生する竹節人参葉のサポニ添加した培地では， 1株当りshoot6本が形成されンは， 生育地に特徴的で太平洋側と日本海側は全た。 MS培地に加えた様々な量のGA-BAPのほ

く異なっていることが明らかとなった。 太平洋側

とんどが multiple shoot形成に効果的であるこでは20 (S) -protopanaxatriol系サポニンのみでとを示している。 しかし ，

shootの数は， 対応す

あるが 日本海側は20 CS) -protopanaxadiol系

るl/2MS培地で得られるものより少なかった。

サポニンのみでしかも12 -keto体であり， さら

従って ， 以後multiple shoot形成にはlppmGAに鳥取型と新為型に分かれる。 一方， 竹節人参のとlOppm BAPを含む1/2MS培地を用いること

中で九州南部に野生するいわゆる薩摩人参と呼ばとした。

れるものは日本の普通の竹節人参と比較して外部形態には差がないが神田らは薩摩人参の根茎

第3項のサポニンについて検討し両者の間に明らかな差発根条件の検討

次に ， 得られた shootを発根させるため様々なが認められたことを報告した 11) 。薩摩人参のサ

NAAを添加した MS培地

ポニン組成は， 従来報告されている竹節人参よりに移植した。 その結果， 2あるいは4ppmIBAを薬用人参に近いもの であった。これらの2つのタ加えた培地が発根に適しており， 良好な幼植物形

イプの竹節人参を材料として組織培養を行い ， 制

成がなされた。よって ， この条件を発根のステ御された環境下， つまり同 一培養条件下において，濃度のIAA, IBA,ー

カルス中に生産される成分に差が現れるか否か検ジに用いることとした。

討した。
第3節

トチバニンジンのカルスのサポニンについて第1項

広島産竹節人参と鹿児島産竹節人参の成分の違い

Panax属植物を主成分であるサポニン組成の

神田等 11 ) は竹節人参の中で南九州に野生す面からみると， トチバニンジンに代表される根茎るいわゆる薩摩人参と呼ばれるものは， 日本の普型のPanaxは ， オレアノー

ル酸サポニンを主サ

通の竹節人参と比較すると， 地上部および地下部

ポニンとして含み ， ダマラン系サポニンはそれぞの外部形態には差がなかったが根茎のサポニン

れに特徴的に含まれている。一方， オタネニンジ

分画には明らかに差が認められたことを報告してンに代表される直根型のPanaxはダマラン系サいる(Chart 2)。

ー ル酸

そこで広島産のトチバニンジン（従来報告のサポニンは微量しか含まないか， 全く含まないとあった竹節人参に相当するもの）と， 鹿児島産のいう共通性がある。

トチバニンジン（神田等の報告する薩摩人参に相ポニンを主サポニンとして含み ， オレアノ

竹節人参の成分については主 としてサポニン

当するもの）から誘導したカルスについてサポニ類について詳細な研究がなされてきた。竹節人参

ン成分の検討を行った。 それぞれのカルスについ（九州南部を除く）の根茎のサポニンについては，てメタノ ー ル抽出を行い ， その粗サポニン分画に庄司ら l - 3 lによって研究が行われ， オレアノ ー ル

ついてFig. 2に示すようにTLCで定性分析を酸サポニンとして ，

Chikusetsusaponin- IV, -V.

-h, -IV. が ， ダマラン系サポニンとして，

Chikusetsusaponin -ill, - I ,- I a が報告されている。また ， 地上部のサポニンについて行った。
その結果成分パタ ー ンの異なるトチバニンジ
ンから誘導したカルスのサポニン分画は， ある程度， 原植物の成分を反映していた。

は， 矢原ら 4 - 8)によって研究が進められ， 九州南-115-

o I cano I ic acidsapon1ns

0 "Chikuselsu-Ninjin"● "Satswna-Ninj in"0chikusetsusapQn_in !VaRl

RZ-GlcUA-Glc

O● chikusetsusapQnin IV: -GlcUA'-Ara(f)-Glc

O● chikusetsusaponin V: -GlcUが — Glc-Glc: -GlcUA•-Ara(f)
＼
"Glc

-II

(=ginsenoside Ro)

RJO

・o ch1kusetsusapon1n
Ib!1.Kohda el al.
(1985)

R2

Rldammaranesapon1ns

chikusetsusaponin JIJ: -Glc 2-Glc
＼Xyl
•

-II

0

chikusetsusaponin I a: -G!c0-Xy]

-II

-II

-II

-Glc:-Glc-II-Glc'-Ara(f)● ginsenoside Rb,: -Glc 2 -Glc

: -Glc 2 -Glc

● ginsenoside Re
J.Shoji et al.
(1968-1976)
II. Kohda et al.
(1985)RIO

虹

Chart 2std. X
IIC X

HR X
KR X
I<C X

V l\'IYa Re ID
0①

o:::rn

゜

0 0
(!

゜

● ginsenoside Re-II-O-Glc 2 -Rha-Glc

● ginsenoside囮-II-0-Glc-Glc-Glc 6 -Glc

egypenoside XVII

:

-Glc

-II

● notoginsenoside RI:-II-0-Glc 2 -Xy]

-Glc

● notoginsenoside R2:-II-0-Glc 2 -Xy]-II

● notoginsenoside R4: -Glc -Glc20を用いた。 2, 4-D 10- 6 M-kinetin 10-sM 添加
MS 培地上 ，

25土2 ℃ ，

暗黒下で誘導したカルスを同条件で 6週間毎に継代を繰り返し，2年間培養して安定したものについてメタノ ー ル抽出を行・

い ， TLC で定性分析を行ったところ ， 数種のサ‘‘

ポニンの存在を認めた。

そこでカルスのみを大量に得るため， さらに。

他の植物ホルモンとして IAA,

IBA についても検討を行った。

IAA:kinetin =Thin -layer chromatogr am of sapon1ns
from rhizomes and cal Ii of Panax japoni­cus of different origin

MS 基本培地に，
10-4M:O,

10-6,

10-s.

10-4 M,

あるいは IBA:kinetin =O,

10- 6,

―5

1炉M:

0,

0,

10

―6

'

10-s,

10

―5

,

10-s,

週間培養した結果，カルスの増殖と成分の抽出

10

1炉M を添 加し ，5kinetin = lO- 6: 10- M'

2, 4-D:

添加MS 培地で培養したカルスを植え付け ， 暗黒下 ，
第2項-II -Glc'-Glc -Xy!

産由来カルスと略す）は ， 根茎から誘導したもの

Plates: silica gel IIF,o,. Solvent: CIICl,-HeOll-11,0 (30:17:4)
Colour reagent: 11,SO,
std.: stond江d saponins
m. IV. !Va. v : cl11kusclsusapon1ns- m, IV, !Va, V
Re, Rg,: ginscnosidcs Re and恥
Sain pies: crude saponin fractions of Panax japan 』 cus
IIC: callus induced fro• the plant of Hiroshima rigin
Im: rhizome of the plant of Hiroshi四 origin
Kil: rhito匹 of しhe plant ofい�oshiro origin
KC: callus induced fro• the pl邸 t of 知goshio,a origin
Fig. 2-II

Sapon ins from Rhizomes of Panax 1apon1cus

Rg,

0 ill
0貯'.: 0 o O 0
Q QC; ())
D

R3

0

25土2℃で培養した。 6

IBA 10-4M の系でカルス増殖が旺盛であった。 そのうちカルス生長とメタ

1. カルスの増殖条件
広島県産トチバニンジンのカルス（以下 ， 広島

ノ ー ルエキス の TLC パタ ー ンか ら判断し て

IBA:kinetin=lO-4: 10-6M添加MS 培地をカルス-116-

竹節人参の組織培養による物質生産ならびに大量増殖に関する研究

増殖用最適培地とした。 上記培地に移植したカル

pound 8(8rng), 10(4mg)をまたフラクション17

スは 6週間毎に継代し ， 同時に残ったカルスを収からはCompound 9(2lmg)を単離した。

穫した。 植物ホルモンの違いによるカルスの成分
パタ ー ンの差は認められなかった。

第3項

鹿児島県産トチバニンジンのカルス（以下， 鹿
児島産由来カルスと略す）に ついては ， 2, 4-D―S

既知化合物の同定

1. 広島産由来
Compound 1. 2は，

1

H-NMR .

1 3C-NMR,

5X10 M添加MS培地上 ， 25士2℃ ， 暗黒下で誘旋光度を測定した結果 ， 標品との比較により以下導したカルスを同条件で6週間毎に継代を繰りのように同定した。
1. 2のゲニン部の 13C-NMRシグナルを ， 既

返し， 広島産と同様に収穫した。

に報告されているサポニンのデ ータと比較したところ， いずれも oleanolic acidをゲニンとするこ

2. 広島産由来カルス成分の抽出収穫した広島産由来カルスは 凍結乾燥後(Drywt. 93 g). 熱メタノールで抽出 ， メタノーとがわかった。
13

C-NMRにおいてCompound 1の糖部のシルエ

キス27gを得各種クロマトグラフを繰り返した。

グナルのうち，o 105.Sppmと o 95.2ppmの2つ

ル エ キ ス の う ち 26 g を多孔性樹脂のアノメリックカ ー ボンのシグナルが観測された

DIAION HP-20 にて分画 し ， 粗サポニン分画をことによって， 2つの単糖の存在が示唆された。

メタノー

2.47 g得た。 そのうち2.4gをシリカゲルカラム

また ， A環およびC-28位のカルボキシル基のグ

クロマトグラフィ ー に付し ， フラクション1-50

リコシレ ー ションシフトから， それらは3ー グリに分画した。 フラクション3, 4からは， メタノ ー

コサイドおよびエステルグリコサイドであること

ルからの結晶化により， 結晶（それぞれ， 8mg, 20が明らかとなった。 2つの単糖類は 13C-NMRのmg)が析出 し ， それらは標品との比較により' /3糖部のシグナルパタ ー ンから ， /3 -glucoseとB- sitosterol- /3 D-glucosideと同定した。 ま-glucuronic acidであることが明らかとなった。

ー

上記の こ と よ り ， 1 の構造は，た ， フラクション26からは 逆相のクロマトグラ/3-D-glu­

フによる分離精製を繰り返しCompound 3(9mg)

copyranosy1

を ， フラクション29からはCompound 1. 4(各7curonopyranoside か /3-D-glucuronopyra­oleanolate-(3) -/3-D-glu -mg)を得た。 フラクション34からは ， 逆相のクロnosyloleanolate-(3)-/3 - D-glucopyranoside

マトグラフにより， Compound 2(10mg)を ， フのどちらかと考えられた。前者は親植物であるトラクション40からCompound 5(17mg)をフラ

チバニンジンの成分として既に報告されている

クション41からCompound 6 (7mg)を得た。

chikusetsusaponin IVa (C-IVa) であるが ， 1の3. 鹿児島産由来カルス成分の抽出

C-NMRデ ー タをC-IV. のものと比較すると ，よい 一致を示した。 /3-glucuronic acidの 6位の13

鹿児島産由来カルスについても凍結乾燥後(dryー

炭素のケミカルシフトに若干の差が見られるが ，

wt. 105g), 熱メタノ ルで抽出， メタノ ルエ

これは塩を形成しているためと思われる。 青山

キス41gを得各種クロマトグラフを繰り返した。

ら 12) は， 竹節人参の粗サポニンはマグネシウム

メタノ ー ルエキスを DIAION HP-20にて分画し，塩を形成していることを報告している。 C-IV.

粗サポニン分画3.7gを得た。 それをシリカゲル

を塩のまま測定を行ったところlと同様な変化がカラムクロマトグラフィ

ーーに付し， フラクション

認められた。 よって， 1 はC-IV. と同定した。

1-23に分画した。 フラクション5からは ， Com­

同様に， Compound 2について検討したとこ

pound 7(10mg)を， フラクション11からはCom-ろ， 18C-NMRデ ータより3つの単糖類の存在が

-117-

13

示され ， そ れ らは$-glucose, 4-substituted

C-NMRデータの標品と の比較により ， 既$ - glucuronic acid, a -arabinofuranoseと

知サポニンのうち原植物から報告されているもの推定された。 予想されるい くつかの oleanolic

として ， Compound 7をginsenoside Rgぃ 8 を

chikusetsusaponin IV

ginsenoside R e ,CC-IV)の 13C-NMRスペクトルとよい 一 致を示(=2)と同定した。

acid glycosideのうち ，し ， 2 はC-IVと同定した。

9を chikusetsusaponin IV

さらに Compound 1 0は， 広島産由来のカルス

また ， Compound 3については竹節人参 の既から得られた 3と同一 物質である3-(4-a -L­

知化合物とは一致しなかったが同じウコギ科のarabinofuranosy1) -/3- D-glucuronosy1-

Cussonia spicataから得られている3-(4-a-L

oleanolic acidであった。なお ， 本化合物の報告-arabinofuranosyl)-$ -D-glucosyloleano­lie acid13 > (=desglucosylchikusetsusaponin

は原植物（薩摩人参）にはまだない。

IV. prosapogenin of chikusetsusaponin IV)に

第4項

ついて報告された l3C-NMRデ ー タと比較したところ， 同一 物質と思われた。 その報告には 1a c

従来報告されている 竹節人参と薩摩人参は成分的に大きな差異がある。つまり， 前者が主にオレ-NMRの糖部のデ ー

アナン系サポニンを含むのに対して， 後者ではダタしか記載されていなかっまとめたため， ゲニン部は他のオレアナン系chikuse­

マラン系サポニンが主であることである。今回 ，tsusaponinのデ ー タと合わせて比較した ところ

広島産トチバニンジン（従来の竹節人参）由来のカよく一致した。 また引用文献13) の報告 の糖部シルスからは chikusetsusaponin -IV, -Naの他

グナルの 部の帰属に明らかな間違いが認められオレアナン系サポニンのみを単離した。 一方， 鹿た (glucuronic acidの3位と4位 の炭素の帰属 を，児島産（薩摩人参）由来のカルスからは chikuse­それぞれ arabinoseの3位 ， 2位と入れ替えた）。

tsusaponin- IV の 他 ，

なお ， 広島産由来のカルスから 単離した化合物のうち，4-6は糖部構造が新しいものであり ， 1ac

protopanaxatriolをゲニ ンとする ginsenoside­一

ダマ ラ ン 系の20(S) ­-NMRデ ー タよりゲニンはいずれも oleanolic

Rg1, -Reを単離した。このよ うにカルスの生産するサポニンはそれぞれの原植物の成分を反映

acidであることが明らかとなった。 そ の構造はしたものであった。同じ培養条件下において広島

Chart 3. に 示したよ うに推定し ， それに従って産と鹿児島産のカルス成分が異なり ， それぞれ原1 3 C-NMR の糖部の assignmentについては ，植物を反映する成分パタ ー ンを示したことから，収量が低かったため詳細については検討していな

従来の竹節人参と薩摩人参のサポニン類の差異はし＼。

本質的な差異によるものであり ， 環境的なものではないことが裏付けられた。従来， それらは同一

2. 鹿児島産由来

種として扱われてきたが植物分類学的にも検討を13C­要する 。 そ の他の点では， 日本の普通の竹節人

NMR, 旋光度を測定した結果 ， 標品との比較に参 に特徴的 な20 ( S ) -protopanaxadiol 系のより以下のように同定した。

chiku setsusaponin皿の他， いずれ のカルスでCompound 7, 8 , 9は ，

1H-NMR,

13

7, 8, 9のゲニン部の C-NMRシグナルを，既に報告されているサポニンのデ ー

も diol系の化合物は確認されておらず， カルス

タと比較したにおいてこの系統のサポニンが確認されない といところ， 7, 8 のゲニンはいずれも20(S)-pro­

うことは興味深い。 また ， 原植物の主化合物であ

topanaxatriolであり ， 9のゲニン部は oleanolic

る chikusetsusaponin Vは今のところ単離されacidであることが明らかとなった。

ていない。カルスから 単離したサポニンの構造を-118-

竹節人参の組織培養による物質生産ならびに大量増殖に関する研究

0 Callus induced from "Chikusetsu-Ninjin"• Callus induced from "Satsuma-Ninjin"
oleanolic acidsaponins

R2
Rl-Gle:chikusetsusaponrnN a
0 l• -GlcUA〇● 2 , 9 :-GlcUA'-Ara(f) -Glc:chikusetsusaponinN〇● 3 , 1 0 :-GlcUA'-Ara(f) -H :desglucosylchikusetsusaponinN-H: -GlcUA 2-Gle
4:＼'Ara(f)-Glc
5::-GlcUA 2-Gle＼• Ara(f)6:-Glc:-GlcUA'-Glc

゜
゜
゜

RlO

Rl
R3
R2
• 7 : -H -O-Glc 2 -Rha -Glc :ginsenosideRg,● 8: HO Glc-GI c :ginsenos1deRe

RlO
Chart 3

Saponins from Callus Induced from Panax Japontcus

Chart 3に示した。

物の生産が認められないため， カルス成分では本

総物質による効果は期待されない。

論

一方， 不定胚増殖法は人工種子材料にもなる遺伝的に安定した増殖法であり ， 誘導に成功したこ
現在， 市場品の生薬「竹節人参」は国内産およとは今後， 均ーな種苗の大量生産の道を開くこと

び中国からの輸入品を取り扱っている。 これらのになり ， 均 ー な生薬の安定供給につながるものと材料には上記のごとく化学的に本質的な差がある思われる。

ことが明らかとなった。 化粧品材料として竹節人

今後， 薩摩産， 広島産（その他の地域の一系）ト

参を使用するにあたっても輸入品と国内産さらチバニンジン， さらには各々の培養植物， カルスには国内産でも薩摩系とその他の地域のものでは成分について生理作用を検討する予定である。

効果に差があることが予想される。 天産品である

以上， 多少のバラッキは致し方ないとしても均 一

引用文献1)近藤紀子 ， 庄司順三 ， 薬学雑誌 ， 88, 325(1968).

な生薬の安定供給使用が望まれる。
均 一 材料の大量生産を期待して ， 植物組織培養

2)近藤紀子 ， 庄司順三 ， 南雲昇 ， 小松信彦 ， 薬学雑を手段としてカルス生産種苗生産を行った。 カ誌 ， 89, 846(1969);N. Kondo, Y. Marumoto

ルス誘導に成功し， 原植物の本質的な差がそのまand J. Shoji, Chem. Pharm. Bull., 19, 1103

かしながら ， 20 (S) -protopanaxadiol系の化合

3) N. Kondo, K. Aoki, H. Ogawa, R. Kasai and(1971).

ま反映された二次代謝産物生産が認められた。 し-119-

J. Shoji, Chem. Pharm. Bull., 18, 1558(1970).

9) S. Yahara, 0. Tanaka and I. Nishioka, Chem
Pharm. Bull., 26, 3010(1978).

4) T. -D. Lin, N. Kondo and J. Shoji, Chem.

10) T. Murachige and F. Skoog, Physiol. Plant,

Pharm. Bull., 24, 253(1976).

15, 473(1962).

5) S. Yahara, 0. Tanaka and T. Komori, Chem.

11) T. Morita, 0. Tanaka and H. Kohda, Chem.

Pharm. Bull., 24, 2204(1976).

Ph.arm. Bull., 33, 3852(1985).

6) S. Yahara, K. Kaji(Nee Matsuura)and 0.

12 ) 青山新次郎 ， 薬学雑誌 ， 49, 678(1929) ;idem,

Tanaka, Chem. Pharm. Bull., 27, 88(1979).

ibid., 50, 1076, 1163(1930).

7) S. Yahara, K. Matsuura, R. Kasai and 0.
Tanaka, Chem. Pharm. Bull., 24, 3212(1976).

13) J.

8) S. Yahara, R. Kasai and 0. Tanaka, Chem.
Pharm, Bull., 25, 2941(1977).

-120 -

Gunzinger,

J.

D.

MsonthiandK.

Hostettman, Phytochemistry, 25, 2501(1986).

超微粒子分散系の構造と物性及び自己制御コロイド系の開発
京都大学工学部

松 本 孝 芳Microscopic structure and properties of ultra fine colloidal particles in aqueous sys­
terns were studied using a small angle X-ray scattering and rheological methods. The
fine particle studied are micelles of N·. N·-dimethyl-N' lauroyllysine(DMLL, ampho­
teric surfactant) and octa(oxyethylene) monododecylether(Cl2E8, nonionic surfactant) ,a small vesicle of didodecyldimethyl ammonium bromide(DMA, cationic surfactant)and a globular protein molecule of ovalbumin(OA).
―
The scattering intensity I changes according to I = K,q •+ K, in a relatively wide
angle region. Here q is the wave vector and K,, K, are constants. The surface rough­ness defined by the ratio of O,。10,, where 0, and 0,。are the specific inner surface of thecolloidal particle and a completely smooth sphere, are ca. 3.5 for the DMLL micelle, ca.
2 for the Cl2E8 micelie, ca. 1. 7 for the OA molecule and ca. 5 for the DMA vesicle.
The rheological properties of the OA colloids are very characteristic, i.e. the systems―
show yield stress a y and rigidity G at extremely low concentration of 10 'g/叫and thevalues of O y and G remain almost constant over a wide concentration range from 0.1 to30 wt%. This phenomenon suggests that the OA system has some auto-controlled mech­anism in order to suppress the increase in a Y and G.
ー

1. 緒

言

超微粒子の表面状態は， 系の化学的および物理的特性に重要な影響を与える。 それではコロイド

近年世の中の多様化および技術的高度化に伴粒子における表面構造が十分理解されているかとい， 種々の機能性を持つ材料として， 多くの超微いうと必ずしもそうではない。 固体粒子の場合は，粒子分散系が注目されている。 例えば， 合成両親ある分子を吸着させることによって， 表面に関す媒性物質のミセル ， ベシクルおよびその他の二分る情報をある程度は得ることができる。 また最近

子膜系は ， 生体類似コロイド系として種々の刺激

では光電子分光法あるいは電子回折等も表面構造

一応答系あるいは人工細胞等への利用が試みられている I - 3 >。 しかし， それらの試みの多くは実験の解析に利用されている 6 . 7) 。 しかしミセル ， 二
分子膜および細胞膜等生体膜あるいは球状タンパ

室段階あるいは可能性の示唆の段階にあり． 実用

ク質の表面に関しては， この方法はほとんど利用には至っていないのが現状であろう。 このようなされていない。 それは， これらの粒子表面では分超微粒子分散系を機能性材料として扱う場合， そ子の運動性が極めて活発であると予想されること，れらの表面（あるいは界面）の持つ意味は非常に大また， これらの粒子を系外に取り出すと粒子そのきい。 これは粒子の体積に比べて表面の占める割ものが破壊されてしまうからである。 従ってこれ合が大きいからであり． ここに超微粒子系の特徴がある4 > 5 >。

らの超微粒子が水中に分散している状態のままで ，
これらの系の表面構造に関する情報を得ることがStructure and Properties of Disperse Systems of Ultra Fine Particle and Development of Auto-Controlled
Colloids
Takayoshi Matsumoto-121-された。また ， 光散乱から求めたOAの重量平均望ましい。
このような観点から ， ここでは超微 粒子， 例え

分子量は4.37Xlがである。

ばミセル． 微小ベシクルおよび球状タンパク質等

界面活性剤は蒸留水に超音波分散させることにの 微細構造および表面構造に関する小角 X線散よって ， OAは 20mM燐酸緩衝液( pH7 .0 )に溶解

乱 (SAXS)を用いた定量的解析結果について述べさせることによって測定試料とした。

るとともに 球状タンパク質コロイド系のレオロ
ジ ー 的特異挙動について述べる。

2.2 測

定

SAXS測定は 6m点収束X線カメラ（京都大学
超強力X線装置）を用いた 8) 。 X線 の波長は2. 実験及び解析方法

1.542A(CuKa)である。 試料は両面にマイカ製
2. 1

試の窓を持つ液体用セルに入れ， 試料の厚さは1.5

料a

試料としては図1に示す両親媒 性物質 ， N ,mmで測定した。

aN -dimethyl-N'-lauroyl lysine CDMLL), n­

レオロジ 一 測定は円錐円板形ワイセンベルグレ

dodecy 1 octa ( oxyethylene glycol ) monoether

オゴニオメ ー タ ー (Sangamo Controls, Rl8) を(C12E8), didodecyl dimethyl用いた。 円錐角は1.77 ' 円錐直径は7 .0cmである。

ammonium°bromide CDMA)および鶏卵の卵白に含まれる球状タンパク質であるオヴォアルプミン(OA)の水

2. 3

SAXSによる表面解析

コロイド系を用いた。 ここで DMLL(味の素， 分表面に関する情報はSAXSの広角領域から得子量M。 = 3 5 6)は a ー アミノ酸の両 性界面活性剤られる。 Porod 9 ', Luzzati 1 0', Kratky 11 'らによC12E8(日光ケミカル ， M。 = 538)は非イオン性界

れば二相系における散乱強度Iは， 二相境界でDMA( 関東化学， M。 =462)は二本鎖

電子密度の遷移が鋭く生じる場合， 次式で表され

面活性剤型陽イオン性界面活性剤である。 OA(Sigma,

る。
I = K,q- 4 +K2

grade V)はSDS-P AAゲル電気泳動によって ，
単

一のタンパク質から構成されていることが確認( 1)

ここで K,. K 2 は定数， q= ( 4冗／入） sin 0 /2である。入は X線の波長，6 は散乱角である。 (1)c"固CONH(CHふCHCOQ­I
H沢(CH山WN氾imeth y l N'lauroyl l ysine (DMLL, Ajinomoto)度の電子密度の揺らぎに起因する散乱項である。

Mo = 356

従って ， 分散系内部における電子密度の揺らぎがCu馬(OCH,CH分,OH
dodecyl octaoxyethy lene glycol monoether (C12 E,)

合K 2= 0となる。 ( 1)式によればIq 4 とq4 の関係

Mo = 538

式の定数項 K2は ， 系内即ち， 分散相あるいは分散媒あるいはその両者内における原子の大きさ程無視できる， 即ち電子密度が比較的均質である場
は直線となり， 縦軸の切片および勾配よりK1および氏を求めることができる。

C12即

沢<

CH3

Br

Cl )式が成立する場合分散粒子の表面（分散媒―C12H25
CH3
dodecyldimethy l ammoniwn bromide (DMA)と の界面）に関する 重要な量 ， 比内 部 表面積

Mo =462とができる。

( specific inner surface ) 0, を次式から求めるこ

Fig .1 Chemical formula of the surfactant
employed. M。is the molecular weight .

O, =

-122-

冗w1 K1Qo( 2)

超微粒子分散系の構造と物性及び自己制御コロイド系の開発

ここでw, しま分散媒の体積分率， Q. は次式で与え0.6られる不変量である。

°

00_

Q戸Jo I .2 dq(3)粒子の表面積(4)粒子の体積0.5'/。
゜炉←
゜ °0 o1° 。。1u'',
。

L•
一
―.
.
..
..
.
0 2―
2
0
Q
ni
ヽer

である系では. O, は次の意味を持つ。

0

d'

3.1.1

0

L
。」。

0

゜

今。い

0

゜

DMLLミセル系

DMLL は水中でほぽ球形に近いミセルを形成
して分散している。光散乱から求まるミセル半径→は約21.7 A. 重量平均分子量 Mw は約2.40 X 10 4

0.2

O

QU

0.0 2

0.01

ム

O

/A

ー

Q

゜

J

゜

゜

Q

Q
Q

°゜ Q

0.03

゜

,,

0

-o

0°

0

。

O゜ 0

0

＿・『 ヽ

表面構造

゜゜

。

゜

I'/。
oo dク

,c,』

▼
_
＿＿
ー
22
Oni 0

3. 1

o

o

0 0

『-

3. 結果と考察

゜゜0.2

ここでI=I-K2 である。分散粒子の大きさか均質O, =OMLL 2 5 C

0.4

Q

0.05

0.0ム

q

分子1個当りのミセル表面の占有面積Sは87.6A2

Fig.2 lqヽ plotted against q'for 0.5, 1 and 3 wt%
D MLL aqueous colloids.

である

12)

。 DMLL 分子の長さは全ての

c-c 結合がtrans-trans (TT)構造をとると約25A.

リ

c-c 結合がtrans-gaushe (TGTG)構

一

シン部の

'
"
""
'
"
"
'
'
'
＿
＿＿
＿―
'
_
＿＿
＿
6
2

である。従って会合数 (N•、 = Mw/M 。)は67.4,

造をとるとき約23Aである。従ってミセル半径

図2には DMLL/水コロイド系の0.5, 1および3あることを意味する。後述するが他のミセル系～

では氏は有限値を持つ。 図3には DMLL/水コbI

ロイド系におけるIずとqの関係を示す。広角側
で のデータのばらつきはあるが図上積分により
Q q を求めることができる。
SAXS 解析から求まる DMLLミセルの表面に0.8関する特性値を表2に示す。表面に凹凸の全くな

0.

Table 1 Characteristics of a DMLL micelle

2.40

67.4

21.7

S/が
87.6

C

゜

/10

g ml

゜°゜
令ぷ と
·� 寄�..
I゜g ゜。
。 °苓�i'"'":�
な名＃ ぶ�.゜°
O'/
.
.�

..

゜゜

-1

7. 70 (216µM)

0 ...

8
ム
ni ni 02

DMLLミセル内部および分散媒が比較的均質でR/A

0. 5'/。

0.4 卜

軸に平行な（即ちKz = O)直線で表される。これは

N
a
g

25 C

0.8

％におけるIq氾ずの関係を示す。この関係は横

-5

DMLL

1.2

21.7Aはほぼ妥当な値とみなせる（表1)。

4
凡/10

ム
°

0

゜
o

I•t。
0,

。
。
= °。61,o,
·
�
吟
゜
�
,• �
,n R• o

。

0 0

;o�
必

。

〇

尻

9

、

怒i$o

象

a,

心

Oo <f'
0 o

0'lJoo
o,
oO O

↑

3'/。

゜°

咤 o゜ ° ゜ °
。発
"'。
忠も 晏
a,o

�

0.12

0

O

0.2 4

'

q / A

oSs>

0.36

-I

o

0�。念：
＇
'—••

"'0

0.4 8

Fig.3 ムlq2 plotted against q for 0.5, 1 and 3 wt%
OMLL aqueous colloids.

- 123-

0.6

Table 2 Surface characterist•cs of a DML L mice I le
Q
q

5
0

0.1J7
0.0852
0.1J9

1

C I wtヽ

3
* 0

so

kー

0.02060.01500.019i

o

-1

s

I A

0.470
0.547
0.419

0 /0

s

so

) .41
). 96

) .04

= 3/R

い完全に滑らかな球体（半径R)の比内部表面積
O, 。は表面積／体積=3/Rで， Rとしてミセル半
径21.7Aを用いれば0,。= 0.138k 1 となる。 従って表2の最後の欄に示されるように， DMLLミLLミセルは同じ大きさの完全に滑らかな球のほ

oA
n
.
I

セル系の0,/0,。は平均3.5である。 これはDM­
Fig.4

ぼ3.5倍の表面積を持つことを意味する。 ここで

A model of the DMLL micelle. Aggrega­tion number is 66 and surface area of themicelle is about 3.5 times that of a com­pletely smooth sphere.

上記のように表面粗さを評価するときの尺度について述べる。 図2の直線近似のq 4 / k 4 の範囲はほれていることである 14 l。

ぼ0.004-0.045である。 これはq/ k l の範囲にして0.25-0.46. q-1;Aではほぼ4-2.2に相当する。

図5(a,b)にはC12E8/水コロイド系の10および

即ちミセルの表面粗さを観察する尺度はこの程度20%におけるIq4 とずの関係および2.5-20%にであるとみなせる。 これはミセル半径21.7Aと比おけるI q4 とq 4 の関係を示す。 前者は有限の勾較して十分小さいと言える。

配を持つ直線で表される。 即ち(1)式が成立し，

図4には以上の実験結果から得られたDMLL

氏は有限値となる。 これはC12E8ミセル内部のミセルのモデルを示す。 表面積は球体のほぼ3.5電子密度の不均質性が無視できないことを意味す

倍になるように ， DMLL分子模型はリシン部のる 1 5) 。 C12E8分子は疎水部のアルキル鎖と親水

c-c 結合が TGTG構造として また会合数は66

部のエチレングリコー ル鎖で構成され． それぞれ，として描かれている。
3. 1 . 2

ミセルの中心部と外殻部を構成していると考えら

C12E8ミセル系

れる。 これがミセル内における電子密度の不均質

C12E8/水コロイド系の25℃および60℃におけ性に関連していると見なせる。 DMLLミセルもるミセルの特性値を表3にまとめる。 25℃ではミ

C12E8ミセ ルも共に水 中で親水部付近にあ る

セル半径は28.3A. 会合数N.、は約84である

14)

0

程 度 の 束 縛水 を保有していると考えられていこのミセルは主に疎水部アルキル鎖の充填されてるl6, 17)。 しかし， 両系に(1)式が適用されるこいるコア部（半径Re )と主にエチレングリコー ルとから， これらの束縛水はミセルと分散媒界面で鎖の充填されている外殻部（半径Rm )から構成さ電子密度の変化を緩やかにするほどには多量でなれている。 また25℃における1分子鎖当たりのミ

い， あるいはそのようには作用しないと言える。

セル表面の占有面積Sは122足と比較的大きい。

Tab le 3 Characteristics of a C 12 E, mice I le

C12E8/水コロイド系で特徴的なことは， 等方均質液体相CL 1 )において系は直行偏光子顕微鏡
下でも偏光は認められないが 13) . SAXSからは

で;"c
25

60

等方相と規則構造（面心立方構造）の共存が確認さ

-124-

.

N.,110

N

•
R/A

•
R�A

'
R,I•

•1
5/A

.42
5.85

82.2
108.7

28.)
30.4

21.4
24.6

6.9
5.8

123.
107

4

嶋

<rflO

·S

·l
ョユ

• .•, (86.8 I
J.20 (59.5""'匹超微粒子分散系の構造と物性及び自己制御コロイド系の開発

a

C 12 E 8

I

�

12

- 0

25

B

0

3

I

I

c 1 2E8「

20o .o4B8-o

0.0!690 0535

K
2

1.20

Q
q

a 0611

5 05

0 125

29.9

0 6•0

19 ,9

16.5

20.6

o sI·

A
• -1

0.211
0.206

o. 366

0 202

0 52�

0 197

O 575

E,
0 s /0*
so

l.99
l 94

l 91

0 192

1 81

0 205

2 .08

l 86

• 3/R

殻部からなり， 前者の半径は21.4A. 外殻部の厚匹�o ゜ o゜ ゜9-,.

o" o o o
o

"o" o

°

• 0s

20 ・!.

ヘ..Jl-:.$。'
er�·o゜•uo。

0. 02610゜

さはほぼ6.9Aであること ， また， ミセル表面に

゜

おける1分子の占有面積は122.4A2と比較的大きいことである。 一方 Cl2E8分子長については，

こーーニ/
゜。゜

。

『

O L詞

'b

�
-03}

l

最も伸びきった状態でアルキル鎖部が15.9A, エ
チレングリコ ー ル部が32.0Aである。 アルキル鎖l部の長さはミセル中心部の半径Re にほぼ対応しているが， エチレングリコ ー ル鎖の長さはミセル
外殻部の厚さCR-Re )よりはるかに長い。 さらにー

1分子鎖当たりのミセル表面の占有面積の大きさを考慮すると， エチレングリコ ー ル鎖はミセル表

�0門

面でかなり広がったコンフォメ ー ションにあると2.5 "/.

， ゜'゜ °゜ ' . '

叶

o―o

,,

予想される。また， エチレングリコー ル鎖は， 結晶状態では ー C-C-0ー 結合がTTG構造をとるら

3、q

しかしこのTTG構造では全ての酸素原子はらせ

3 L
A
O
2
O

2

0

せん構造が安定であることが報告されている 18)

ー

Fig.5

0. 0092•

3D(6o c)25 ° C゜ P'- -

-0.6

5

J0(30 C)l
qt. I I 0-l公＿、

K
l

0. 00425

10

そご

0�

a6

Surface Character 1st1cs ofa
C,2m1celleッ "' �� o,b

Table 42 s "cんの内側に配位することおよびエチレングリコ ーlq and iq'Plottedagainstq'forC,,Ca m1・eelle colloids.

ル部は なおミセル外殻部の厚さよりはるかに長い。 このTTG配位の一 部のGをCに変えること

町とずの関係はいずれの濃度によって， エチレングリコ ー ル部のらせんの半径でも横軸に水平な直線で表される。 これは図 5aを大きくすることができると共に， 全ての酸素原から求まるK 2 の値が妥当であることを示す。直子をらせんの外側に配位させることができる。 図

線で表されるq / A- の範囲は0.004�0.045 である。

6にはDMLLミセルと同様の手法で作成された

従って， DMLLミセルのときと同様表面構造を

Cl2E8ミセルのモデルを示す。 会合数は82として算定する尺度は十分小さいと言える。 表4には等描かれている。 Cl2E8分子のエチレングリコ ー

方均質相にあるC12E8ミセル系の表面構造に関ル部のらせん半径は6-7Aで， その占有面積はミする特性値を示す。 0,/0,。の値はいずれの条件

セル表面における一分子鎖当たりの占有面積にほでも1.9�2程度である。 即ち ， C12E8ミセルは半ぼ等しい。DMLLミセルとCl2E8ミセルモデル

径の等しい滑らかな球体のほぼ2倍の表面積を持を比較すると， 0,/0,。の値は前者では約3.5.

つと言える。 C12E8ミセルの特徴は中心部と外

後者では2である。 モデルではこの違いがミセル

図 5b によれば ，

4

4

-125-

NOA

20 C

pH 7.0

°

。]

'
(

゜

｀

o

°
,-

―

OOO

oo

ム. B'/,ム，M

PuJ..JVloog o�· o0ciC ·"gQ

ロ玉“,-o.,__ ロ�-― :.,,.,"'000 00.,,., 00

［

心:

r

ヽ-.

゜゜

o"""v

9.1'/。

ーム
[

•
一

ー

[ L
r o
/

A model of the C,2Ca micelle. Aggrega­tion number is 82 and surface area of themice Ile is about twice that of a smooth
sphere. All figures are in angstroms.

表面の粗さによく反映されている。

uuo••-

I 6.7'/.

。 .- -"-4

オヴォアルブミン系

゜

3. 1 . 3

゜

、

Fig.6

オヴォアルプミン(OA)分子は385のa ー アミノ酸で構成されている球状タンパク質である。組成
的にはリシンで構成されているDMLLミセルに

如

0.8

qム/ 10 A

1.2

1_6-3 0 -1.

類似している。しかし， 前者では構成成分は共有

Fig.7 Tq ・ plotted against q'for aqueous colloidsof native ovalbumin molecules.

分子は疎水結合で凝集しているものの， 本質的におよびIずとq2 の関係を示す。前者の関係は水平結合で結ばれているが後者では個々のDMLLは独立である。後述するようにこの差がOA分子とDMLLミセルの表面構造に敏感に反映していな直線で表され， (1) 式が成立する。表5にはOA／水コロイド系における濃度0.5-16.7%にわたる

る。OA分子の水中における形態および分散状態

OA分子の表面特性を示す。前述のように， このれによればOA分子は半径約2 5Aの球状タンパク

が，会合体において も個々の分子の形状はほぽについては筆者らの詳細な研究がある 19 - 21)。そ質であり ， 濃度0.1%以下では 分子（未会合）状態
一で，濃度0.1-40%ではほぽ二分子会合体として分散していることが判明した。また， OA分子は20濃度範囲ではOA分子は2分子程度会合している
その まま保持されているので ，Table 5℃以下ではほとんど熱変性を受けないこと および 60℃以上では熱変性によって個々の球形は保持

o. 5
07
0

しな がらも数珠状に会合することが明らかにされている（後述）。ここではOA分子の表面構造のみに着目する。図7には未変性OAコロイド系の濃度4.8, 9.1および 16.7%, 20℃におけるIずとq4

-126-

0'107
0.506
0.764
0'167
0 8111
1.11

••
I

16 7
9I

履＇

Characteristic values of the native QA
molecule in aqueous colloids at pH 7.0
I( 1 /103

c/�ti:•2

゜2, 142 14
l. "0

゜ .o 3/R, R = 215 1 ．
20,。として 3/RA

0 q /10-3•A -3
5 79
7.61
11 2
6 42
11 O
13.3

0 II /A• -1 0 :, /0 IIa0
0.205
0 207
0.209
0.213
0 208
O.ZlO

l

I

71
73

70
73
1.02
I 7'
l

I

超微粒子分散系の構造と物性及び自己制御コロイド系の開発

ー

7
b
I

2 o'c

によれば， この微小ベシクルは半径約64Aの球状体で， 厚さ約 41A の DMA 二分子膜で構成され，•
A中心部に半径約23A の中空部を持つと考えられて

9』

「

,

,

D MA

,

,

,

I

-l

°
20 C

t

」

I¼

「

,f

〇

,

,

,

�

ぞ

"-"°"宝守""'°1r'uuo

o.s •ん2q•

I I 0-2ooooo -

q

- 0.6
0

C• 0

］

o-i

J

A -,

(b)

Fig.8

状の球形粒子は， ごく希薄系で存在する微小ベシ

きさは比較的均質である 24 . 2 5 l 。 さらにSAXS

ー

0, 3

「�

低塩磯度で形成される直径数µmのリポゾ ー ム

電子顕微鏡観察によれば この微小ベシクルの大

,�ニ
�f
j
―
＿
,
0, 6

I

］

を形成することが報告されている 22 , 2 3 l 。 一 方 ，クルの集合体であることが観察されている。 また

2
0 1
2f a
_
‘
s ,
9
q

""'
"
0
'
..
·
＿1 '
•
- •
．
．
＿＿-．
_
●
'
'
・
ー・・
＿_-＿
-_
.
.
.
.
…2
L
6
8
0
1
2
1
0

i.
.
. ...
... ...
..
-

L

OMA

についてのみ述べる。
図8 (a, b) には DMA/水コロイド系に関する Iq-q4

および 1 q 4 _ q の関係を示す。 前者は勾配を4持つ直線で表され ， 後者は水平な直線で表される。
即ち (1) 式が正確に成り立つことが解る。 これはDMA 微小ベシクルと分散媒界面における電子密度の変化は比較的鋭いことおよび微小ベシクル内部の電子密度の不均質性は無視できないことを意味する。 特に後者の点はこの微小ベシクル中心部に中空部が存在することに対応していると見なせる。 表 6 に DMA 微小ベシクルの表面構造の特性値を示す。 ここで O,。として， 微小ベシクルを構成する二分子膜と中心部および外側の二つの界面/0,。の値はほぽ5 である。 これは DMA 微小ベシ
クルの表面は完全に滑らかな球体のほぼ5倍の表面積を持つことを意味する。 この値は前述の両性
ミセル， 非イオン性ミセルおよびOA球状分子の0,/0,。

値と比較してかなり大きい。 この理由として，の値は平均1. 75 である。 この値はa ー アミノ酸でDMA 分子は対イオン として Br を持つこと ，構成される DMLL ミセルの値 3.5 の1/2 である。

これはOA分子はa ー アミノ酸の共有結合で構成されているが ， DMLL ミセルの構成アミノ酸はそれぞれ本質的に独立性が高く， このため前者では後者より熱運動がかなり制限されていることも一ーー

Br は H,C および N 原子と比較して電子密度が高いことが関係していると思われる。 即ち X 線

は電子密度の差を検出しているので ， DMA ベシ
Table 6

因と考えられる。

c/wtヽ

OMAコロイド系

DMA 分子は水中で多彩なベシクル構造を形成する。 この系は塩濃度の高い場合は多重ベシクル

-127-

5 0
． ．
o l

3.1.4

4

を考慮して， O,o =3/23+3/64を用いている。 0,(a) lq'plotted against q'for 0.5 and 1 wt
% DMA aqueous colloids.
(b) lq'plotted against q'for 0.5 and 1 wt
% DMA aqueous colloids.

( =0.120)を用いることができる I 9 - 2 I) 。

いる 2 5) 。 ここではこの微小ベシクルの表面構造

Surface characteristics of a OMA small
vesiclekー

0.02490. 01 3 6

k

2

59. 4

20.0

Q
q
0. 0880

o.ono

•-

o IN.
s

0, 8840. 900

l

0 /0

s

4. 99

5. 08

so

2

3

16.7•;。
9.1
0�8
1.0
0

（岱

゜

Q

0

＇

l b

2

ao·c

I,_

n 0.05
0

0.5

0

a 0.1

0.029
0.017

• Buffer

り

)
5 o

-I ,_

60'C

b

b

O

b

-I

-2

-3

D

D

b

O
O

D
b

D

0

D

b

p

b

b

I

0

0

O

log (Y / s·1)

10

I

D

゜

a�0

b

0

b

3

゜

·�
1/

b

g

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8
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§
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2

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-2

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§ §8 8 8a ga 8�ft
a a a a aB B 8

2 o ·cNOA

6

Fig.10 Flow curves of the OA col loids in thephosphate buffer(20mM, pH7.0) over awide concentration range from Oto 16.7%.

20℃

性時間の増加とともに減少する。これは， 熱変性
初期に OA 単量体が消失するという従来の考えと-1は異なる。 一 方 ， SDS法電気泳動では熱変性試
0

200

100

料でも OA 単量体の泳動位置を示す。これは，熱300

変性による分子量の増加は OA 単量体同士の化学

Id f minFig.9

結合ではなく ， SDSによって容易に分離する会

Weight average degree of association Pw
plotted against denaturation time t. atvarious denaturation temperatures.

合に起因することを示す。
図10に種々の展度の OA ー リン酸緩衝液溶液の定常流動曲線を示す。いずれの系にも平坦部が見クルと分散媒界面において，激しくプラウン運動

られ系内に規則構造が存在していることが示唆さしているであろう Br-相が，界面として検出されれる。このデ ー タの非常に特異な点は ， 極めて希ていると考えられる。これが 0,/0, 。の値を大き薄な系(10 3-10 4 g/ 叫）でも平坦部が存在し ，くしている原因の一つであろう。

――

濃度が高くなるにつれて平坦部の降伏値の上昇が鈍化していることである 1 9, 2 0 l 。図11に降伏応力

3. 2

OA コロイド系の特異性

a, の濃度c依存性を示す。この図には ， 普通の

ここでは OA 系に関して ， 熱変性に伴う分子量

分散系 Ll, L2(ラテックス分散系） ， TF( チタ

的性質の特異性につい

ネ ー ト繊維分散系）およびCB(カ ー ボンプラックて述べる。図9に種々の変性温度における分子量分散系）の挙動も示してある。これらの系と OA

Mw と変性時間tの関係を示す。変性温度60, 70,

系を比較すると， 後者ではa, のc依存性が極め

80℃では，時間経過とともに分子量は未変性 OAて少ないことが解る。 OA 系の降伏応力の実験値に DLVO 理論を適用したところ ， 理論式中のデ分子形態およびレオロジーの値(4.37 X 10りより増大する。これは OA が加熱により変性し， 会合体を形成するというこれまバィヒュッケルパラメ ー タKは OA 濃度の1/2乗に比例し増加することになる 26 l 。電荷数 1と想定での考えを支持する。
未変性および種々の熱変性条件(70℃, 10-200

した溶液中のイオンの濃度nは， この /C の値から

min 80℃, 10, 20min)における試料のNSDS法

濃度に対して 1乗の割合で増加すると考えられる。

ゲル電気泳動によれば いずれの変性条件でもこの結果から，濃度上昇と共に降伏応力値の増加

OA 単量体が存在するが その量は変性温度，変が鈍化することは OA から出るイオンと密接な関-128-

超微粒子分散系の構造と物性及び自己制御コロイド系の開発

2

3

。
e

2

Native°70 C.40mtn

Boご9 ) Bo

A D )

゜

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dl

d

。

( g

(D

゜

., 80 C. 30minJ-1

log (C / g/g)
Fig.11 Shear stress q, at t =3s-1 in the platerau
region of the flow curve is plotted against
the OA concentration c. Open circle: data
at pH 7.0. The yield stress or the rigidity
are also plotted for various colloids ofpolystyrene beads(L1, L2), carbon black(CB) and titanate fiber(TF). The dashedline is the rigidity calculated by Eq.(5)using theDLVOtheory for ,c = 3.12 x10-•
m ー '.
係にあり. OA 内に降伏応力の増加を抑えるような何らかの自己制御機構が働いているのではないかと推測される。

図12に， 降伏応力かと OA 濃度cの関係を，変性および未変性試料に対して示す。前述の自己-3-2
log (c / g/g

゜

-1

ーム

．

l

。

- L,

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-3

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-

-2

-2

ェ
ー
‘
c↓- ヽ

-1

Fig.12 Yield stressむ plotted against the QA
concentration c for native and denatured
colloids.
3) J. H. Fendler, W. L. Hinza, ibid., 103, 5439
(1981).

4)木村啓作 ， 表面， 22,613 (1984),化学と工業 ， 38,
761 (1985)5)賀集誠一郎 ， 化学， 40,582(1985)

6)表面の評価技術 ， 特集 ， 日本結晶学会誌 ， 29
(1987).

7)岩見基弘 ， 平木昭夫 ， 表面21,277 (1983).

8) H. Hayashi, F. Hamada, S. Suehiro, N.
Masaki, T. Ogawa, H. Miyaji, J. Appl. Crys.,

21, 330 (1988).

制御機構は熱変性によるゲル化によってほぼ完全

9 ) G. Porod, Koll. Z., 124, 838 (1951), 125, 51

増加する濃度c*は卵白中の OA の濃度5.9%にほぼ

10) V. Luzzati, J. Witz, A. Nicolaieff, J. Mo!. B1-に破壊される。 また，叩および剛性率の急激に等しい。
文

ol., 3, 367 (1961).

11) 0. Kratky, Prog. Biophys., 13, 105 (1963).

献1)化学総説40, 分子集合体 ， 日化会編 ， 1983, 化学
増刊 ， 人工細胞へのアプロ ー チ ， 化学同人 ， 1983

2 ) T. Kunitake, N. Nishizuka, H. Higashi, H.
Nakashima, J. Am. Chem. Soc., 106,19780984).

(1952).

12) T. Matsumoto, J. Disp. Sci. Tech., 12, 503(1991).

13) D. J. Mitchel, G. T. J. Tiddy, L. Waring, T.
Bostoch, M. P. MacDonald, J. Chem. Soc.,

Faraday Trans. I, 79, 975 (1983).

14) T. Matsumoto, H. Zenkoh, Cool. Polym. Sci.,-129-23) T. Kunitake, J. Macromol. Sci., A 13, 587

25) T. Matsumoto, Coll. Polym. Sci., 270, 4920992).

(1979).
24) T. Matsumoto, T. Heiuchi, K. Rorie, Coll.

26) T. Matsumoto, H. Inoue, Chem. Phys., 166,
299(1992).

olym. Sci. , 267, 71 (1989) .

-130-

香料に関する定量的解析
ー香りの強さ， 香 り の質， 構造活性相関，‘‘なれ", 香料センサ ー に関する研究 一
北海道大学薬学部

栗 原 堅 三1 . We measured the turtle olfactory bulbar responses to six pairs of higly pure opticalisomers. With all odorants tested, there was no difference in odor threshold and in­tensity in the whole concentration range examined between the optical isomers. The
difference in odor quality between optical isomers greatly varied with species ofodorants.
2 . The ability of the olfactory receptors to discriminate odorants having similar struc­tures was abolished by increasing temperature up to 40℃, whereas discrimination ofodorants having quite different structures was much less affected. The results sug­gested that the structures of the receptor sites for odorants are greatly affected by afluidity change of the lipid layer of the receptor membranes. The results also sug­gested that desensit、ization (adaptation) occurs not at a cell level but at a receptor sitelevel
3. The membrane potential changes of liposome, which is a model for odor sensor, m
response to odorants were measured with a voltage-sensitive fluorescence dye. The
magnitudes of the responses to odorants greatly depended on membrane composi­tion of liposomes. It was suggested that various odorants can be identified by the re­sponse patterns of liposomes having different compositions.

1. 嗅覚器の光学異性体識別能

I)

方法をカメ嗅覚器に適用し， 光学異性体間のにおいの質の差異を定量化した。

嗅覚器が光学異性体間のにおいをどの程度識別するかに関しては昔からヒトの官能試験の結果(1)を もとに議論されてきたが 明確な結論は得られ光学異性体の中では， 1-カルボンとd ーカルボていない。 本研究においては， カメ嗅覚器を用いンが最も大きな差異があるとされてきた。 1 ー カて各種の光学異性体のにおい強度および質の間にルボンの閾値とdー カルボンの閾値が本当に異差があるかどうかを定量的に調べた。 一般に， になっているかとうかを調べるために， カメ嗅覚器

おいの強度に関しては， 電気生理的方法により定の1ー およびふカルボンの応答を測定した。 図1

量的評価がなされてきたが ， においの質を定量的

は ， 各濃度のl ーカルボンおよびdーカルボンを与に評価する方法がなかった。 本研究において，えたときのカメ嗅覚応答のパタ ー ンを示す。 1-

我々は定量的な交差順応法を開発し， においの質

カルボンを与えると， 濃度の増加に伴って応答はの差異を定量的に評価する方法を確立した。 この増大し， d-カルボンを与えたときにも1ーカルボ

光学異性体間のにおい強度の差

Quantitative analysis on perfume; Studies on intensity and quality of perfume, structure-activity relation­
ship, adaptation, and perfume sensor
Kenzo Kurihara

-131-

l「

A

..J..ロ

10-8 M

,,L 上
ロ

゜

ロ

10-6 M10·7 Mロ

10·3 M

10-4 M

10·5 Mで差がないことを示している。
(2)光学異性体間のにおいの質の差

d一 体と1一 体の間のにおいの質の差は， 以下のような方法で解析した。 1 ー リモネンを与えると応答が現れるがすぐに順応し， 応答が消失する。
この状態でdー リモネンを与えても ， 小さな応答

B

しか現われない。 このことは， d-リモネンと1リモネンは同じ受容サイトに結合して応答を引き起こすため， カメは両者のにおいを識別できない....A,,...

w.,J.,..

"

一心函10·8 M

10·6 M10·7 M

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M

10·3 M

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うな実験方法では最初に与えるにおい物質の農度が2番目の応答に大きく影響する。 したがって ，_-6

答に対する影響を調べた。

...

後の5Xl0-5Mdー リモネンに対する応答を示す。

-2＇吋(hydroxycltroo礼●ij (M)r..

図3Aは， 各種濃度の1ー リモネンで順応させた
5X10-5Md ー リモネンを単独で与えたときには，
図中の左端のパタ ー ンのような応答が生じる。 最

）＿

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おい物質の濃度を系統的に変化させ， 2番目の応

IA

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より定量的な解析を行うために， 最初に与えるに

゜F

全に識別することが推測される。 ただし ， このよ..
..
l四1,11�"'"''] {M)／ , =__-2

イトは全く独立であり， カメは2つのにおいを完

1.5a; 0.5�

けるl ー リモネンとnー アミルアセテ ー トの受容サ

阿阿

g
OM
99
9
9
I心

D

log!四nthoり(M),.,,アミルアセテ ー トを与えた場合には， n-アミ

ルアセテ ー トを単独で与えたときと同じ大きさの

パ(

5
•
1

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..

.. ..

図2

ー

応答がみられた。 このことから ， カメ嗅覚器にお

A/

,.,,

..[
1.0
"'

E

に， 1-リモネンとは全く異なるにおいを有するn各濃度のIーカルボン(A)及びdーカルボン(B)に対するカメ嗅覚応答。

図1

Cことを示唆する。 一方， 1-リモネンを与えた後

�

S函

函

. 10·5 M-6初に与える1ー リモネンの濃度を高くするにつれ，l ー リモネンに対する応答は増大し， 2番目に与え"'''"""'"

log[Umol'\ene] {Ml-4·2

各種光学異性体に対するカメ嗅覚器の濃度一応答曲線。

るdー リモネンに対する応答は減少した。最初に与えるにおい物質すなわち1 ー リモネンに対する応答強度を横軸に "R 1 " としてプロットし ， 2
番目に与えたにおい物質， すなわちd ー リモネン
に対する応答強度を縦軸に "R2" としてプロッンと同様の応答が生じた。
ー一

図2は， 各種のd 体およびl 体をカメ嗅上皮にートすると ， 図3Bのグラフが得られる。 縦軸， 横

与えたときの農度 応答曲線を示す。 横軸は刺激

軸ともに ， d-リモネンを単独に与えたときの応に用いたdー 体およびl ー 体の濃度を， 縦軸はその答強度を "1" としている。 リモネンの場合では，時の応答の相対応答強度を表す。 いずれの場合も，最初に与えるl ー リモネンの応答を増大させると，においの強度および閾値濃度は， d一 体とl 一 体間

2番目に与える5Xl0 5 Mdー リモネンに対する応

-132-

―

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0.5
1.0
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T _

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0.5
1.0
A, (1-clt,onellal)

1.5

各種光学異性体に関するR, とRの関係。

答の顕著な減少が見られた。 この結果は ， カメ嗅覚器における1 ー リモネンとd ー リモネンの受容サ
イトはほぼ同ーされるものから， リモネンのようにほとんど識別
されないものまでさまざまであった。

であることを示唆した。

リモネンの場合と同様の実験を， 他のにおい物
最初に与える1 カルボンに対する応答を増大さ

2. においの受容サイトに対する膜流動性
変化の影響せても， 2番目に与えるd ー カルボンに対する応答

一温度上昇に伴うにおい識別能の低下 一質についても行った（図4)。 カルボンの場合は，ーはあまり減少しなかった。 したがって， カメ嗅覚器におけるd ー カルボンとl ー カルボンの受容サイー

一般ににおい分子の受容·識別は ， 嗅細胞膜上トは互いに異なっており ， カメはd カルボンと1の受容蛋白質を介して行われていると考えられてーカルボンを識別していると考えられる。 他のにいる叫 一方におい分子は一般的に疎水性であり ，おい物質についても同様の実験を行った。凡がにおい受容には受容膜の脂質層とにおい分子との1のときの応答の大きさは ， カルボン＞シトロネ

相互作用も無視できない 3) 。 もしもにおい受容に

ロ ー ル＞メント ー ル＞ヒドロキシシトロネラ ー ル

脂質が重要な役割を果たしているとすると， 嗅上＞シトロネラ ー ル＞リモネンであった。 本実験の皮の温度を変えて膜流動性を変化させると， にお結果から， カメ嗅覚器はある種の光学異性体のにい受容に影響を及ぽすことが期待される。

おいの質を識別していることが示唆された。 ただ

そこで本研究では ， 5℃から40℃の温度範囲でし ， 識別の程度は ， カルボンのように明確に識別におい応答がどのように変化するか， また異なる

-133-

8,

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5

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図4

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1.5

1.5

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1.0
R, (1-clt,onellol)

0

ー

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〗

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3

合 ＝OUOJl!
O·pZ)�

各濃度のIーリモネンを与えたのちの5 X 1Q-S
Mdーリモネンの応答パターン(A)。凡(d-リ
モネンに対する応答）をR1(I ー リモネンに対する応答）に対してプロットした(B)。

L
o
1 s
0

1.5

1.0

R, (I-menthol)

p
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1.0

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2

2

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図3

0

OO

heterogeneity value : 0.26 :

0.5

゜

CH
,

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CH

H
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c
1-limoncne—---------------------�゜゜

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Rl

A]

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B

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香料に関する定量的解析

1.5

二
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5001

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50

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0.1 mM t,●•
0.1 mM ,1,.
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30
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図6

⑬

。。

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2 ⑬

osuodsa,>AI
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各温度におけるトランス ー 3 ー ヘキセノ ー ルとシス ー 3 ー ヘキセノ ー ル間の交差順応パタ ー ン。

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1 1

図O

mm

ロバ ＝
—いいロ

10,

図5

4o·c

1s·c

5℃

50

トランス ー 3 ー ヘキセノ ー ルとシス ー 3 ー ヘキ
セノ ー ルの応答の温度依存性 (A) と識別能の温度依存性 (8) 。

図 6B では， シス ー 3ー ヘキセノ ー ルを単独で与えたときの応答(Ro)に対する2番目に与えたシにおいの識別能がどのように変化するかを検討し

ス ー 3 ー ヘキセノ ー ルの応答CR)の相対値(R/Ro)

た。また， カメ嗅上皮に含まれる遊離細胞およびを温度に対しプロットしている。5℃で約8割あっカメ嗅上皮より抽出した脂質より作製したリポ

た識別能が，40℃では約2割程度にまで減少した。

ソ ー ムの膜流動性変化を測定し ， におい識別能変

lmMおよびO.lmM濃度のヘキセノ ー ルを用い化と脂質層の流動性変化を比較した。

たときに ， 同様な結果が得られた。図6Aは ， そ

実験にはクサガメを用い ， 嗅球からの誘起脳波

れぞれのにおい物質を単独で与えたときの応答のを測定した。あらかじめ各温度のリンガ ー 液を嗅

温度依存性を示している。横軸は温度 ， 縦軸は5上皮に与えたのち ， 同じ温度のにおい物質溶液を℃のときの応答を1としたときの相対値を表して与えた。膜流動性変化は，1,6-ジフェニル ー1,3,いる。応答は30℃くらいまで増大し， その後少し

5 ー ヘキサトリエン (DPH) の蛍光偏光解消法によ減少する傾向に あ っ た。O.lmM濃度のヘキセり測定した。

ノ ー ルを用いたときにも， 同様の結果が得られた。

ー

図5は，5℃，18℃, 40℃においてトランス 3ヘキセノ ー

ルとシスー ー ヘキセノ ー
3

法を適用したときの応答パタールに交差順応

図7は ， 今回用いた8組のにおいについて ， 5℃における交差順応の比に対する40℃における交差ンを示している。

順応の比を求めた結果を示している。においが似

このとき，両者を単独で与えたときの応答の高さている組み合わせでは， 40℃で識別能が低下したがほぼ同じになるような濃度のにおい物質溶液をが，においが異なっている組み合わせではあまり用いた。5℃において， まず ， トランス体(a)を与大きな低下はみられなかった。

え ， 順応後すぐにシス体(b)を与えた。(c)はシス体

温度を上げると ， 受容膜の流動性が増大するこを単独で与えたときの応答である。5℃でシス体とが考えられる。図BAはカメ嗅上皮から遊離しは本来(c)の応答を与えるが， トランス体(a)の後に与えても応答はほとんど抑制されることなく現れている。18℃でも， トランス体(d)の後にシス体(e)を与えた。(f)は18℃でのシス体単独の応答である。
トランス体(d)の後にシス体(e)を与えると，部分的

trans-3・hexenol / cis・3・hexenol
lrans-3-hexenol / cis・3・hexenol
n-amyl acelale I isoamyl acetated-carvone I I・carvone
cineole / camphor
geraniol / nerol
n-amyl acetate I sec-amyl acetate
anisole I cineole/-limonene I clneoleは シス体(i)単独では大きな応答が現れるが，卜に抑制されるだけで大きな応答を与えた。40℃で

0.4

0.6

0.8

1.0

(R/Ro知·c I (R/Ro)s•c

ランス体(g)の後にシス体(h)を与えると応答はほとんど現れなかった。

0.2

図7

-134-

5℃における交差順応の比に対する40℃における交差順応の比香料に関する定量的解析

B

A

4
0

4
0

膜蛋白質の場合は有り得ないと思われるが， 嗅覚

＼

1
0

。

Temp● ,atuce("C)

5

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゜

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30

2
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0 aa,
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3
0

uoqg UOJ
O oo,g o
Od J

鱚故

10

図8

｀

ることが考えられる。 このような可能性も通常の

10

20

30

系の蛋白質が特別な性質をもっているなら， その可能性は否定できない。
また本実験結果は， においの脱感作機構に関し

4050

Tempcrature(C)カメ嗅上皮に含まれる遊離細胞の膜流動性変化の温度依存性(A)とカメ嗅上皮から抽出した脂質により作製したリポソ ー ムの膜流動性変化の温度依存性(B)。

た細胞の膜流動性変化の温度依存性を ， そして図ても重要な情報を提供している。 脱感作に Caいが関与しているという説では， 脱感作は嗅線毛膜のイオンチャネルを介して細胞内に流入した Ca いがcAMP依存性チャネルを内側から閉じるために起こると考えられている 4 , 5 l。 この説に従うと，

Ca 2 十 は細胞内を拡散するので ， 脱感作は細胞全

8Bはカメ嗅上皮から抽出した脂質より作製し た体で起こるはずである。 したがって ， 図5に示す

ムの膜流動性変化の温度依存性を示してように ， 5℃や18℃においてトランス体を与えたいる。 どちらの場合も， 温度の上昇にともなってあとにシス体の応答が現れたことは， それぞれの膜流動性が増大している。 膜流動性が増大する領受容サイトは別々の細胞に存在することを意味し

域は， におい 識別能低下の温度領域（図6B)によている。 ただしこのような解釈では， 40℃で2番く対応している。

目に与えたシス体の応答が消失するという実験結

リポソー

以上の結果より40℃においてにおいの識別能が果は説明できない。 一方， 脱感作は細胞全体では低下した機構について， 次のような3つの可能性なく， 個々の受容サイトレベルで起こるとすると ，が考えられる。 第一の可能性は， 受容膜には脂質

本実験結果を説明できる。 すなわち， トランス体と蛋白質から構成される受容サイトが存在し， にとシス体の受容サイトは同 一の細胞にあり， 脱感

おい物質は通常このサイトに吸着する。 5℃や18作は各受容サイトレベルで起こると考える。 5℃℃では受容膜がきちっとした構造をとっているのや18℃では， トランス体の受容サイトが脱感作しで， 例えばトランス体とシス体は別々のサイトにてもシス体のサイトは不活性化されないので応答結合する。 温度を上げると ， 脂質層の流動性が増が現れる。 40℃にすると， 膜流動性が増大してトし， この結果トランス体とシス体は同 一の受容サ

ランス体およびシス体とも同 一のサイトに結合す

イトに結合するようになり ， 両者は識別されなくるようになり ， トランス体の後のシス体の応答はなるものと考えられる。 二つめの可能性としては，

現れない。

ー

温度を上げると受容蛋白質のコンホメ ションが

3. においセンサ ー としてのリポソ ー ム

変化し ， 識別能が変化することが考えられる。 ただし ， 一般の蛋白質の場合 ， リガンドに対する特異性が40℃くらいで変化する例は知られていない。

各種の組成を有するリポソ ー ムを作製し ， 膜電例えば ， L-体アミノ酸に対する結合蛋白質が40位感受性色素により ， におい物質を与えたときの℃になるとD 体も結合するようになるとは考え

膜電位変化を測定した 6) 。 図9は， フォスファチ

ーられない。 ただし ， 嗅覚系の受容蛋白質が非常に

ジルコリン(PC)にフォスファチジルセリン(PS)

特別な性質をもっているなら， この可能性は否定

およびフォスファチジン酸(PA)を添加したときできない。 最後の可能性としては， 温度を上げるの各種においに対する膜電位変化を示している。

と脂質の流動性が増大し， その結果受容蛋白質の

脂質組成の違いにより ， 各種においに対する応答

コンホメ ションが変化するため識別能が変化すパタ ー ンが大きく異なるのがわかる。

ー

-135-

図10では． リン脂質にコンカナバリン A(ConA), ロイシルロイシン(Leu-Leu), ポリリシン(Poly-Lys)を添加したリポソ ー ムの各種においに対する応答パタ ー ンを示している。 においの種
類ごとに応答パターンが異なるのがわかる。 以

上の結果は， 数種の異なる組成の膜を作製し，れに対する応答パター

こンの違いにより， においの識別が可能であることを示唆した。

献文1) Taniguchi, M., Kashiwayanagi, M. and Kuri­
hara, K., Am. J. Physiol., 262, R99-Rl04(1992)

図92) Buck, L. and Axel, R., Cell, 65, 175-187(1991)

3) Enomoto, S., Kashiwayanagi, M. and Kun­

PC

PS/PC=0.05
PS/PC=0.1
PS/PC=0.2

゜

PA/PC=0.25amyl acetate
6-ionone,;1ralnonanolmenl切lmenthoneamyl acetate,.;,nonecUral
nonanolmenthol
men!切mamylacelale•�nonecitralnonanolmentholmenlhoneamyl acetate
oiononecrtralnonanolmentholmenlhoneamyl acetate
e-iono閲
cttralnon匹lmentholmenthone10△ f (%)

15

異なる脂質組成を有するリポソ ー ムの各種におい物質に対する膜電位変化。 におい物質の濃度
は ， いずれも10-'Mである。
515, 261-268(1990)

hara, K., Biochim. Biophys. Acta., 10620), 7

6) Enomoto, S., Kawashima, S., Yoshimura, A.

-12(1991)

and Kurihara, K., Sensors and Materials, 4,4) Nakamura, T. and Gold, G. H., Nature, 325,

153-164(1992)

442-4440987)
5) Kurahashi, T. and Shibuya, T., Brain Res.,(c} m;n1y odo,●nt,(bl low●<fatty●dd●I●)●myl記●,.,.

• sAr A1
0d + :>d'Sd

30

mentholmenthone

5 :J
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-136-

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od+ :J
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1

2 Ifu03+ :>d'Sd

図10 異なる組成を有するリポソ ー ムの各種におい物質に対する応答パタ ー ン。

7 sA,-.
Atod + 3d < d

20

10

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2 V 5 3+ :J

゜d'Sd
V5 3+ :J

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amyl chlo,ide
t-emyl chlonde

60 40

50
-

→
_
●

1

,. r

(di●myl chlo,ideメラニン生合成の調節
東北大学医学部

柴 原 茂 樹Tyrosinase is a rate-limiting enzyme in melanin biosynthesis and tyrosinase-relat­
ed protein(TRP)is responsible for the formation of black melanin rather than brown.
To idenいfy the cis-acting element(s) required for pigment cell-specific gene transcrip­
tion, we analyzed the promoter function of two pigment cell-specific genes encoding hu­
man tyrosinase and TRP by transient expression analysis. The fusion genes were con­structed by inserting the 5'-flanking region of the human tyrosinase gene or TRP gene
upstream from the firefly luciferase gene and were introduced into human melanoma
cells and cervical cancer cells(HeLa cells). We thus identified the enhancer sequence of
39 base pairs(bp), located about 1.8 kb upstream from the transcription initiation site of
the human tyrosinase gene, that is responsible for its pigment cell-specific expression.
Furthermore, we found the presence of enhancer-like activity in the first intron of thehuman TRP gene that enhances the transient expression of the reporterOuciferase)gene.
However, this enhancer-like activity is detected not only in melanoma(pigment)cells but
also in HeLa cells.

言

緒
．
'
.

related protein (TRP) という 二つの色素細胞特異的蛋白に着目し， メラニン合成の調節機構の一色素細胞はメラニン合成という特異な形質を持端を明らかにする。 チロシナ ー ゼはメラニン合成

つ細胞であり， 高等動物ではメラノサイトとしての最初の二つの反応（チロシンからド ー パ， ド ー

全身の皮膚に分布する神経堤 (neural crest) 由来

パからド ー パキノン）を触媒する銅酵素であり，のものと ， 色素上皮細胞として脳由来の網膜に存

ド ー パキノン以降は非酵素的にも反応が進みメラ在するものの二種類がある。 日常経験する“

日焼ニンが生成される。 TRP はチロシナ ー ゼとアミけ" という現象からも明らかなように， メラニン

ノ酸レベルで約 40% の相同性を持ち ， 黒いメラニの主な機能は紫外線に対する防護作用である。 事ンの生成に必要とされる。

実 メラニンを欠損する先天性白皮症（アルビニ

本研究では． メラニン生合成に関与するチロシズム）患者では， 日光に曝露される部位の皮膚がナ ー ゼと TRP という二つの色素細胞特異遺伝子

んの発生頻度が高い。 すなわち ， 日焼けは一種のの転写に必須な領域を決定する。

生体防御反応でもある。 日焼け以外にも， 様々な2. 実 験

皮膚の炎症後に色素沈着の起こることが知られているが， このような色素沈着（メラニン量の増加）が起こる機構はよくわかっていない。

2. 1

無細胞転写系におけるヒトチロシナ ー ゼ遺本研究では メラニン合成の律速酵素であるチ伝子とTRP 遺伝子のプロモ ー タ ー 機能解析

ゼとその関連蛋白である tyrosinase-

マウスメラノ ー マ細胞より無細胞転写系を確立

ロシナ

ー

Regulation of Melanin Biosynthes1s
Shigeki Shibahara-137 -

し， 上記色素細胞特異遺伝子のプロモ ー タ ー 活性

ロシナ ー ゼ遺伝子のプロモ ー タ ー 機能の解析によを調べる。 5'上流領域に種々の欠損を持つ鋳型

り， 転写開始点の上流270 塩基対 (bp) 内に色素細胞特異的発現に必要なシスエレメントが存在する

DNAを用いて， 転写に必要な領域を決定する。

ことが報告されている。 しかし ， ヒトチロシナ ー
2. 2

一時的発現による色素細胞特異遺伝子のゼ遺伝子のプロモ ー タ ー 機能を一 時的発現により

プ ロモ ー タ ー 機能解析

解析すると， 転写開始点の上流600bp 内には色素として細胞特異的発現に必要なシスエレメントの存在を持ち， ホタルルシフェラ ー ゼClue)をレポ ー タ ー

確認できなかった。 すなわち， 同遺伝子のプロとして持つような融合遺伝子を構築し ， ヒトメラ
ノ ー マ細胞と HeLa 細胞に導入し luc の一 時的発

モ ー タ ー 領域の下流にレポ ー タ ー 遺伝子Clue)を現を調べることにより， 色素細胞に特異的なプロ導入し ， その一 時的発現を調べると， 両者で有意

モ ー タ ー 活性とその発現に必要な領域を調べた。

な違いは検出できなかった。 一方， このような系

この際 内部コントロ ー ルとしてSV40プロモ ー

でも． マウスチロシナ ー ゼ遺伝子の転写開始点のタ ー の下流にBーガラクトシダ ー ゼ遺伝子を持つ

上流270bp が存在すれば， レポ ー タ ー 遺伝子はメ

プラスミドを上記融合遺伝子と同時に細胞に導入

ラノ ー マ細胞（色素細胞）特異的に発現した。

当該遺伝子の5'上流領域をプロモ

ー

タ

ー

持つ融合遺伝子をメラノ ー マ細胞と HeLa 細胞に

3. 2. 2• 発現させた。

ヒト チロシナ ー ゼ遺伝子の色素細胞
特異的エンハンサ ー の同定

2.3

ヒトチロシナ ー ゼ遺伝子のさらに上流領域を同色素細胞特異遺伝子の転写因子の同定

ヒトメラノ ー マ細胞より核抽出液を調製し ， ゲ

様に解析したところ ， 転写開始点の上流約 1.8 キ

ルシフト法やフットプリント法を駆使して， 色素

ロ bp の部位に色素細胞特異的発現に必要なシス

細胞特異遺伝子の 5' 上流領域に結合する蛋白質を解析する。

エレメント（約 200bp) が存在することが判明した。
しかも， この部位をSV40遺伝子プロモ ー タ ー の上流につなげても． レポ ー タ ー 遺伝子の一 時的発

3. 結 果

現は色素細胞特異的であった。 また， そのエレメ
ントを逆向きに組み込んでも， その機能に変化は

3. 1

無細胞転写系におけるチロシナー

ゼ遺伝

子とTRP遺伝子のプ ロモ ー タ ー 活性チロシナ

ーゼ遺伝子と TRP 遺伝子はメラノなかった。 よって このシスエレメントはヒトチ
ロシナ ー ゼ遺伝子の色素細胞特異的発現に必須なー

エンハンサ ー である。

3.2.3 色素細胞特異的エンハンサ ー の決定

マ由来の無細胞転写系において転写されるが ヒト HeLa 細胞由来の無細胞転写系では転写されなかった。 よって， メラノ

ー

マ細胞にはこれら二つの遺伝子の色素細胞特異的転写に必須な因子が存

ヒトチロシナ ー ゼ遺伝子の転写開始点の上流約1.8 キロ bp の部位に存在する上記シスエレメント（約 200bp) の機能をさらに詳細に解析し， 39bp の領域があれば レポ ー タ ー 遺伝子は色素細胞特異在すると思われる。

的に発現された。
3. 2

チロシナ

ー

ゼ遺伝子の色素細胞特異的発3.3

現の分子機構3. 2. 1

マウスとヒトチロシナ

ー

ヒトTRP遺伝子のプロモ ー タ ー 機能解析

ヒト TRP 遺伝子のプロモ ー タ ー 機能を3.2 と同

ゼ遺伝子の プロモ ー タ ー 機能は同等ではない様に解析した。 ヒトチロシナ ー ゼ遺伝子と異なり，トランスジェニックマウスを利用したマウスチ

ヒト TRP 遺伝子の上流約 4 キロ bp の領域内には．

-138-

メラニン生合成の調節

色素細胞特異的エンハンサ ー の存在を示唆する結ロン内のエンハンサ ー 様活性の実体を解明すると果は得られなかった。 しかし，

共に，

の第

一

ヒト TRP 遺伝子

イントロン内に細胞非特異的なエンハン

ヒト TRP 遺伝子の色素細胞特異的発現に必須なエンハンサ ー の検索を行う。

サ ー の存在が示唆された。 すなわち ， このイントロンが存在すると，
ラノー

5. 研究発表

レポ ー タ ー 遺伝子の発現がメマ細胞と HeLa 細胞の両方で著明に増加した。

1 . Shibata, K. Takeda, K., Tomita, Y.,
Tagami, H. and Shibahara, S. :Down­

4. 考 察stream region of the human tyrosinase­related protein gene enhances its pro­ー

ヒトチロシナゼ遺伝子の色素細胞特異的発現に必須なエンハンサ
同エンハンサーーmoter activity. Biochem. Biophys. Res.

の領域 (39bp) を決定した。

は転写開始点の上流約 1.8 キロ bp

Commun. 184:568-575, 1992.
2.

Shibata, K., Muraosa, Y., Tomita., Y.,の部 位 に存 在 す る 。 こ の 39bp の中には CAT

Tagami, H. and Shibahara, S. :Identifi­

GTG モチ ー

フはcation of a cis-acting element that en­

ヘリックス ー ル ー プ ー ヘリックス構造を持つ

hances the pigment cell-specific expres­DNA 結合蛋白質の認識部位であることが知られsion of the human tyrosinase gene. J.

フが存在しており ， このモチている。 今後 ， このエンハンサーーに作用する蛋白質因子を同定し， 精製する。
一

Biol. Chem. 267, 20584-20588, 1992.
3.

Shibahara, S. :Functional analysis of

ヒト TRP 遺伝子では， 色素細胞特異的

the tyrosinase gene and brown-locus

発現に必須なエンハンサ ー を見いだせなかった。

protein gene promoters. J. Invest. Der­

方，

一

その代わり ， 第 イントロン内に細胞非特異的な
エンハンサ

ー

様活性を検出した。 今後このイント-139-

matol. 100, 146S-149S, 1993

一

別 添 資 料
成果発表論文抜粋一発 表

1-1 掲載誌

BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
Vol. 184, No. 2, 1992 Pages 568-575

1-2

表

題

1-3

要

約

1-4

図表等（次頁）DOWNSTREAM REGION OF THE HUMAN TYROSINASE-RELATED PROTEIN GENE
ENHANCES ITS PROMOTER ACTIVITY
We have cloned and sequenced the human genomic DNA segments encoding the 5'-flanking
region and the first two exons of the tyrosinase-related protein(TRP) gene, a pigment cell-spe­cific gene. Functional analysis of its promoter suggests that the downstream region of the TRP
gene, including the first intron, enhances the transient expression of the luciferase gene undercontrol of the TRP gene promoter about 16-to 20-fold. This enhancer-like activity is detected not
only in melanoma cells but also in HeLa cells whose TRP gene expression is assumed to be
repressed. We suggest a possibility that the downstream region is not sufficient to confer pig­
ment cell-specific expression, but is required for efficient transcription of the TRP gene in pig­
ment cells. ©1992Academic press, Inc.

-140-

メラニン生合成の調節

A
StrI Bglll Fnu4HI Ddel

(Ec�RI)S

BstNI Aval

3'

'
+1

Exon 1* S1 probe ( )

B

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1

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1 2 3 4

Exon 2* S1 probe
1

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(D)

D

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- 527
ー404

一 307

噸"'242/238
217

三

ー欄

160/160
囀i. 147/147
123

ー 110
- 90

一

• 76
67
Fig. 1. Structural organization of the 5'-region of the human TRP gene.
A. Schematic representation of the human TRP gene. The direclion oftranscription is from leftし() right. Shown are Lhe sites for only relevant
restricLion enzymes. The EcoRI site located at the 5'-end of the gene represents
the linker sequence. Solid lines represent flanking and intronic DNA segments.
The 5'-untranslated and the protein-coding regions are indicated by open boxes
and a closed box, respectively. The Sl probes used in C and D were also shown
and asterisks indicate the sites of end-labeling. B. Northern blot analysis. Eachlane contained 10µg of total RNA prepared from MeWo melanoma cells (lane 1) andHeLa cells (lane 2). A small horizontal bar indicates the origin of lanes. A bottom
panel shows the stained rRNA (18S and 28S) representing variability in theamounts of RNA loaded. The hybridization probe used was the Rsal/ Rsal fragment(806/1554) excised from human TRP cDNA (11). C. Identification of thetranscription initiation site. Shown is an autoradiogram of a sequencing gel. Lane1, protected products with HeLa cell RNA; lane 2, protected products with humanmelanoma RNA. Lanes 3 and 4, chemically cleaved products of the Sl probe,
representing purines and pyrimidines, respectively. Capital letters, shown along
the sequencing ladder, denote the sequence of the sense strand (see Fig.2). An
arrow indicates the putative transcription initiation site. D. Sl mapping analysis
for the presence of correctly spliced transcripts. Lan·e 1, protected products with
HeLa cell RNA; lane 2, protected fragments with human melanoma RNA; and lane 3,
protected products with yeast tRNA. The size markers shown are pBR322 plasmid
DNA digested with Mspl and given in bases.

-141-

-200

GGTAATATGTTGAATA ACAGTTGAAT A-ACAGAATAAAAA-AA
I
II
II I Ill I I II Ifill II
TCATCTTGTTTCTTCCTTTGTGGTATACAGATAAGAAAAATAA-203'

ー159 AATCTCTGCAAAGTAAAC-AAATCTCACTAGTTTATCTGACTTGTATTCCAAATTAGIGCTTCTGGCCTTTTC! TAAAAC
1111 II Ill I II I 1111111
II I Ill I
11111111 1111 1111 11111111111 II
ー1 6 O'AATCACT ACAACGAAAGCAAAATCTCITCAGCGTCTCTAATACATCTTCCA AATCAGTGTGTCTGACCT IT IC ITAAGAC

い

80 oyAGC:AAtC ACA.T.-�.c. CACCT AA AGTTCC'AC.GTGAGAGGACAAGAAACACAAG. AAA TATAAAACATT-CAATTCTA.JI 1..1..1. Ill.I. ;Lil上ILI..LIUl11
1」」」」.L.. . 」, u1.fu_1.
7 8'GCAG.AAM tC.T.Ct.TCGGGCMTTAACAG::�0.1. GC.A:'『 C. AGGGGMAAG:,CAGAC-A
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知i辿叫 札山峠叫枷j,』↓ ll 翡ぷ晶叫晶糾嵐晶晶149'hl

2 J7

AAACTCCATTAGTGTAAGGGACTTTAAATCACAGAAATTAACTTGCTGGAAATC TGTTCCCAA TTC T rec TTCAGCTCCA
Ill II
Ill IIII I II Ill
111111 Ill 11111 II 11111 I 1111 1111
2 17'TGTGACCA·AAGCTCTAGGAAC-----ATGAAGGAGATTTGCTTGCTATAAACCTGTTTCCTA TTCTCCTTTCAT TTCCA

3 17

AGGTTAAATT AAATGTAATT AATGATGGTGACCTGCTAATTCATGCTTTTGAT AACTGAT ATCTA--GTATGTATATATA
II
1111 I I I I Ill I II Ill Ill I 111111111 Ill Ill 11111 I I II I I I
29 I'TGG-----TTAACTATTACT-ATGGT AGTCACCAACTAGTGGATGCTTT TGGTAAATGACATCTATGGAAAGTCTTTTTG

J95 TATAAACAAAATGACGAGGACAGGGAA TTTAATTATTTGGGTATCACACATGCAGGTGTTATAT ATGCCAAAT TTTAAAGII III II II
Ill II I 1111
Ill I 1111111
TGAGT-TCTGTCATCTAGCTATTATGCCTGCAGATATTTAAAG
240 bp365'GATCA
47 S

GT AAATTACTACTTTTATTATTTG TGTGAAATGTCATTT TACAT·ATGGGT TCCATT TTGAAAGTGGTTTGGGAAGGGGG
II Ill I II Ill I 1111 I 1111111 Ill 1111 I I 11111111
11111 Ill IllI
6 5 2'GTGAATAATTA TTTTGACTATTGTTTAGAAATGTTGTTTCACATGAAAGATTCCATTTCCGGAGTGGGTTGAAAAGTATGS S4 CATACCATTTTAAGTACCAAGAAAAACTTGCATAATCTCATTTT·ACTTTCTCTTTT TCAG. GGAT.
CCTCl ACGTG
111 i111 111111 11111111H1 .11m1 111 1
11 1 1 11 1 1 1
7 J 2'CAAAAGAACTTTTGCAAC-----------------TCTGT TTTGCCTTTCTGT TTTTCAGCTGTATr°r'f'CATCTGAGCA

6J J......
↓磁晶叫叫叫叫恥叫叫叫叫叫届叫叫翡

CTTCAGT.C TTCTCJACACAAAGAGCTGCAAACCAGGTCTJTGTTTT.GCACTCTTA TTTCAAGCAG,

795'

Fig. 2. Nucleotide sequence of upstream and downstream regions of the human TRP
gene. The top line represenls the nucleotide sequence of the 5'-flanking region,
exon 1, intron 1 and a part of exon 2 of the human TRP gene, and the botlom line
represents that of the mouse counterpart (13,14). The nucleotide sequences ofexons are printed in shaded areas. The putative transct·iption initiation site of
the human TRP gene (nucleotide ,·esidue 1) is shown by an aslerisk. Nucleotide
residues are numbered in the 5'Lo 3'direction, and nucleotides on Lhe 5'side ofresidue 1 are indicated by negative numbers. The translational iniliation codon
located in the exon 2 is boxed. The three elemenls, found in other pigmenl
cell-specific genes, are overlined (13). Double overlines rept·esent the recognition
sites for Lhree enzymes: F1w4HI, Ddel and BstNI (see Fig.lA). Small verlical lines
between both sequences indicate 1d,;ntical nucleotid e residues and small
ho1·izonlal bars represenl gaps. Two other 5'-splicing sites ofしhe mouse intron 1
are indicated by closed Lriangles (14). The middle portion (240 l,p) of the mouse
intron 1 is nol shown, because no sequence similarilies are found.
(B0111lll)

iI
I

I
I

Fnu4111

一

UstNI亡}---Exon I lnlrnn I
I

I
I
I
I
I
I
I

1 Exon 2,0

Relative luciferase activity，1 pL1

pHTRPL4

10

日

20
o

�=:

pHTRPL3
1

I'pHTRPL9'Fig. 3. Functional analysis of the human TRP gene promoter.
MeWo humanmelanoma cells and HeLa cells were cotransfecled with /3 -galaclosidase expression
veclor, pCHllO and the fusion genes containing Lhe human TRP gene promoter
upstream ofしhe luciferase gene. Both upstream and downstream regions of the
TRP gene used for construction of fusion genes are shown alしhe left panel. The
BamH1 site located at the 5'-end of the upstream region 1·epresents the linke1·
sequence used for constrnction. Cellular extracts were prepared from trnnsfecledcell s and assayed for luciferase and /3 -galactosidase activity as an internal
control. Luciferase activity was divided by /3 -galactosidase activity and shown
as a ratio to the value obtained with pLl, a promoterless luciferase expression
vector. The data shown are averages of two independent experiments as indicatedby closed or open circles.

-142-メラニン生合成の調節

発

表

2

2-1 掲載誌
THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
Vol. 267, No. 29, 1992 pp.20584-20588
2- 2 表 睡Identification of a cis-Acting Element That Enhances the Pigment Cell-specific Expression of
the Human Tyrosinase Gene
(Received for publication, June 8, 1992)
2- 3 要 約
To identify the cis-acting element that is responsible for the pigment cell-specific expression of
the human tyrosinase gene, we analyzed the promoter activity of its 5'-flanking region by tran­sient expression assays. The fusion genes were constructed by inserting the 5'-flanking regionof the human tyrosinase gene upstream from the firefly luciferase gene and were introduced into
human melanoma cells and HeLa cells. We thus found the element, located between 2.7 and 1.8
kilobase pairs upstream from the transcription initiation site, that enhances the transient
expression of the luciferase reporter gene in melanoma cells, but not in HeLa cells, the tyrosi­nase gene expression of which is not detectable. Using the fusion genes containing putative en­hancer elements under the control of the heterologous simian virus 40 promoter, we identified
the pigment cell-specific enhancer of -200 base pairs(bp) between-2.0 and -1.8 kilobase pairs
and localized the core sequence to a 39-bp region. This 39-bp core element was then confirmed todirect the melanoma cell-specific expression of the reporter gene under the tyrosinase gene pro­
moter. We thus propose that this core element is responsible for the pigment cell-specific ex­pression of the human tyrosinase gene.
2- 4

図表等（次頁）-143-

A
U LJ 2]

Hl.-n --458

且且.し
..�,

Rel●tlve luclf●,ase activity

020406080 100，，

llouao -360
-398

i pl1
209bp�pHTL10， pHTL7906bp�
pHTLS-2.7kb:＇ pHTL14,0kb
i pHTL12i pHTL13
1 pHTL4·'·"'------i

-311
-338
ー253

、

-7. kbー278-5.0kbFIG. 2. Functional analysis of human tyrosinase gene pro­
moter. The upstream regions of the human tyrosinase gene used forconstruction of fusion genes are shown to the left. The relative
luciferase activity is shown to the right. Other conditions were thesame as described for Fig. 1

ー201
-218
ー189
ー158
ー155
-98
1111 1111 111 11111111 111 11 II I Ill 111111-98 cmGCA叫GATMMGCTTAGTGTMMCAGGCTGAGAGTAmG
"""

'

j

-41 GI GTGGTATTATATAGGTCTCAGC凶GACATGTGATMTCACTGTA
111111 111111111111 111111 1111111111 11111, II-39 GAGTGG-TTATATAGGTCTTAGCCAMACATGTGATAGTCACTCCAG
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ヽ BstNI

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A

B

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Relative lucllecas, acllvlfY
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Mouse
Tyroslnase gene

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9ぶ
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Relative luclterase activity

三�芦三

出，
g]

FIG. l. Comparison of nucleotide sequences and function ofhuman and mouse tyrosinase gene promoters. A, comparison of
the nucleotide sequences. The top line represents the nucleotide
sequence of the human tyrosinase gene promoter (8, 9), and thebottom line represents that of the mouse gene (12, 14). Closed triangles
indicate the major transcription initiation sites (residue 1) and thesecond initiation site of the mouse gene (12). The nucleotides on the
5'-side of residue I are indicated by negative numbers. Relevant
restriction sites and the CATGTG motif are also indicated. B, tran­sient expression analysis. MeWo human melanoma cells and HeLa
cells were cotransfected with /J-galactosidase expression vector
pCHllO and the fusion genes containing the tyrosinase gene pro­
moters upstream from the luciferase gene. The promoter regions used
for construction of fusion genes are schematically shown to the left.
The direction of transcription is from left to right as indicated byarrows, and the transcription m1tiat1on site 1s numbered + J. The
exons coding for the 5'-untranslated regions are indicated by closed
boxes. The number shown at the 5'-end of each upstream region
represents the position from the transcription initiation site. Lucif・
erase activity was divided by /J-galactosidase activity (an internal
control) and is shown as a ratio to the value obtained with pLl(relative luciferase activity). The data shown are the mean土S.D. of
three independent experiments

"'"'
I

＇

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95
X

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Relative luctle,as● ●ctlvlty0�コ

FIG. 3. Functional analysis of enhancer element using het­
erologous promoter. A, presence of the enhancer element. The
Xbal/Ncol fragment, identified in Fig. 2, is enlarged, and the up­
stream regions of the human tyrosinase gene used for enhancer
analysis are shown to the left. The upstream regions were inserted
upstream from the SV40 promoter. The data shown were obtained
from one experiment. B, presence of the enhancer element conferring
pigment cell-specific gene expression. pHTSVLlO carries the en­hancer element in the opposite orientation, as indicated by the arrow.

-144-

メラニン生合成の調製

A

A

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EroRI

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GMncTGTCTICGAGMCATAGMMGMTIATG
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36'MATGCCACATGTGG汀ACAAGTAATGCAGAC�裟TCCCCA-GGGACAAGMGTCT
Ill Ill 11111 I 1111111111 II I I II 111111 1111 I II Ill-1270心GGCCCCATGTAGCTACAAGTAATACATAACAA>MぶCCCCAG<沿GAAACGAGGTCC
Ysel
Ysel
95'TGTG口込TCTCmGTGGCTCTGMAGAMGAGAGAGAGAMAGATIMGCCTCC訂GT11111111111 I 1111 I I 1111 I I I Ill II 1111 II II-1210 TGTGTIMTCTACTATGGGCmMGA叫GMMACMMMGGACTAAGACT-CTGAA
H;nf I. . .. . .
Ncol
155'GGAGA TCATGTGATGACTICCTGATICCAGCCAGAGGCAGCAmeCATGG
Ill 111111111 111111而1111 1111 II II 1111111
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FIG. 4. Comparison of pigment cell-specific enhancer of hu­
man tyrosinase gene with homologous sequence found inmouse counterpart. A, nucleotide sequence of the pigment cell­
specific enhancer of the human tyrosinase gene. Shown is the nucleo­
tide sequence of the EcoRI/Ncol fragment (-2.0/-1.8 kb), containing
the enhancer element of the human tyrosinase gene (tap line). The
bottom line represents the nucleotide sequence of the putative mouse
homolog (14). Nucleotide residues are tentatively numbered in the
5'- to 3'-direction for the human element (see "Experimental Pro­
cedures"), and the nucleotide residues of the mouse homolog wererenumbered according to our assignment of the transcription initia­
tion site (12). Indicated are the recognition sites for the enzymes used
for construction of the fusion genes. Vertical lines between bothsequences indicate identical nucleotide residues, and dashes represent
gaps. The core element is from 142'to 180', and the CATGTG motif
is dotted. The auerline indicates the sequence similar to the consensus
sequence of octamer-binding proteins. B, functional analysis of themouse sequence homologous to the human enhancer element. The
Pacl/Ncol fragment (-1325/-1105) of the mouse tyrosinase gene was
located upstream from the SV40 promoter/luciferase fusion gene

FIG. 5. Identification of core element in pigment cell-spe­cific enhancer of human tyrosinase gene. A, functional analysis
using the SV40 promoter. The EcoRI/Ncol fragment, identified inFig. 3, was dissected, and its enhancer activity was analyzed. B,
functional analysis using the tyrosinase gene promoter. The Msel/
Hinfl fragment, containing the core sequence of the enhancer, wasanalyzed for enhancer activity.

-145-ァルツハイマ ー 型老年痴呆症， ぽけ症状を呈する
人々への化粧による情動活性化の研究
同志社大学文学部

浜治

世This study aims at demonstrating the effectiveness of the use of cosmetics on elderly
people with Alzheimer disease and on those with senile dementia symptoms.
Our hypothesis is that the use of cosmetics may heighten their self-image and ac­companying that the subjects'senile dementia symptoms might be improved or slowed.
The experiment consists of two parts. Fifty three elderly people-all females-were rec­ommended by the doctors of an elderly people's health care center to participate in Ex­
periment I. From these 36 were selected-17 who were staying at the center and 19 who
went to the center as out-patients. The average age of the subjects was 82. Five wererecommended for Experiment II by a psychiatrist at a public hospital from away his out-patients with Alzheimer disease. Those 5 are to participate in our experiment on a con­triburing long-term basis. Their average age is 66.
The results reveal: (1) Fundamental frequencies(F。)of the voices of almost all sub­Jects increased after they received a makeup application, and those frequencies got high­er as the sessions progressed. This suggests that the makeup applications raise the sub­jects' feeling to a positive state. (2)The time spent looking at themselves in the mirror
after the makeup application also increased session by session. (3)Besides our objective
analysis of the data, their family memberss, doctors and nurses also reported to us thatthe senile dementia conditions of the subjects had improved. In this report, only one
case of each experiment was reported in detail.

1. 緒

言

症の情動の活性化と問題行動の軽減を目的として，
痴呆症状を呈しはじめている女性の老人に化粧を近年， わが国では高齢化社会を迎え ， 現在9人

施術することを試みてきた。 その結果化粧は自に1人が65歳以上の高齢者であるが， 今後さらに分の容姿に対する関心を高め， 他の日常生活の場増え続けて21世紀には4人から5人に1人が高齢者

面でも意欲が見いだされ ， 会話や積極的な行動がになると予想されている。 高齢化に伴い， 当然増加する， 行動が落ちついてくるなど好ましい効老人性痴呆症者の増加も予想される。 痴呆症者へ

果をもたらすことが実証されてきた。 これらの化の対応が早急に求められているところであるが粧の効果は， 直接的には痴呆老人の感情面・意欲

今のところ痴呆に対する有効な薬物療法はなく，面を高めることに見いだされたが， 間接的には痴

また彼らに対する適切な対応についても確立され呆老人の介護や対処で負担を感じている家族や施ていないのが現状である。 われわれ同志社大学臨設の介護にあたる者にも心理的に効果をもつこと

床心理学グループ I)ができると考えられる。

, 2)は数年来 ， 老人性痴呆Study of Emotional Activation by Cosmetic Application on Elderly People with Alzheimer Disease and on
Those with Senile Dementia Symptoms
HaruyoHama-146-アルツハイマ ー 型老年痴呆症 ， ぼけ症状を呈する人々への化粧による情動活性化の研究

化粧(Make-up)の心理学的研究の歴史は比較
い4)く， 情動を表出できないからといって感受性が損

ゃGrahamら など欧米のなわれているときめつけることは間違っていると研究者によって始められた。 彼らの研究は ， 化粧考える。 本研究はこのような仮説に基づいて ， 痴をすることによって女性の身体的魅力が高められ呆老人の情動活性化の手段として化粧を用いる。

るばかりでなく， その人の人格特性も他者から，われわれは， 化粧施術は ぼけ 症状を改善する

より好ましく評価されるようになることを示唆しか， あるいはその進行を遅らせる可能性があると的浅いが ， Hamid

た。 また ， Farinaら

5)

“

”

は ， 精神疾患による入院考える。 また， 痴呆症者の実験への参加行為自体

患者を調査して ， 適応と身体的魅力および自己認

が気分転換の効果をあげ， 化粧への動機づけを高知との間には正の相関が見られたことを指摘してめ， それが情動の活性化に導くこととなるといえいる。 さらにGrahamら

6)

は，

一

般的に化粧行よう。 さらに ， 施術後 ， 周囲の人からきれいに動から遠ざかっていると思われる高齢者であってなったとほめられることが報酬となり ， 化粧行為

も， 化粧がもたらすポジティブな効果は大きいこが強化されるのでわれわれの化粧療法は条件づとを示唆している。 余語ら ” は化粧行動の基礎的けの原理に基づく行動療法のひとつであるといえ研究を行ってきたが ， そのよう。

一つの成果として， 素

顔よりも自分で化粧を施したときの方がさらに

2. 方 法

専門技術者によって施術されたときの方が自信と満足度がより強く得られることを見いだした。

研究は後述するように実験Iと実験IIによってこのように ， 化粧と化粧行動が女性に与える正の効果を積極的に利用し， 臨床場面で化粧行動を取構成された。 実験Iでは各被験者に週l回10セッ

り入れたものを筆者は，ションを単位として約3 か月間化粧を施行する。

情動活性化療法
Ramaら

9)

'

”

“

化粧を手がかりとしたと名 づ けている。 浜ら 8) 'ならびにHibinoら

I O)の行った ，

実験IIでは， ひとりの被験者を長期間にわたって
実験観察する。

陰性症状を示す精神分裂病患者， うつ病患者の情動活性化の手段としての化粧療法は， この文脈に

2 - 1. 被験者

おいて化粧行動の臨床場面での可能性を実験的に実験Iの被験者には京都市内にある老人保健施立証したものといえる。
一

呆と血管性痴呆によるものであるが，状”設の院長に依頼し ， 施設に入所中か ， あるいはま般に痴呆症といわれるものの90%が老年性痴
“ぼけ症

は健常高齢者の単なる物忘れや記憶違いを指“していう ぼけ”と明らかに区別されるものであた． 日中のみ預かるデイケア制度を利用している老年者（女性）の中からアルツハイマ ー 型老年性痴呆症者および血管性痴呆症者を紹介していただいた。

る。 いずれの痴呆においても失認失行， 失見当 ，参加した被験者の総数は53名であった。 しかし．

知能・日常生活能力の低下 ， 記憶障害や， これら

これらの被験者の中, 17名は種々の事情で実験の精神障害に起因する問題行動， 異常言動および（化粧）を週1回10セッション以上続けることがで身体症状がみられ， しかも本人の病識の浅いこときなかった。 われわれが， これまで精神分裂病やが特徴である。

うつ病者に行ってきた研究 8, 9, IO l の結果から．

本研究の仮説は， 痴呆は環境的要因や精神的要“化粧”の効果は少なくとも10回以上続けること因によって左右されるというものである。 すなわ

によって評価できると考えるので． 本報告では17

ち ， 痴呆老人は精神機能が低下しているとはいえ，

名のデ ー タは除外することにした。 そこで実験I

情動面での機能はかなり保持されていることが多の被験者は， 老人性痴呆症状を呈する女性の老人-147-

36名（入所中の被験者17名 ， デイケア の被験者19

左側と後方に被験者の音声を収録するためのマイ名）で年齢範囲は71歳から93歳で， 平均年齢はクロフォンを設置した。モニタ ー 室には被験者の82歳であった。 このうち ， 国立精研式痴呆スク

行動の観察用のディスプレイ・テレビの他に ， 映

リ ー ニング・テストとDSM-lII-Rの判断基準

像と音声を同時に収録するためのビデオ録画装置

により典型的痴呆とみなされる被験者は14名で ，を設置した。 実験では， 実験者の1人が被験者の他の22名は痴呆の境界線にあるものであった。 こ

化粧を施術し ， 別の実験者はディスプレイ・テレ

れらの被験者はすべて薬物の投与もしくは特別なビの映像を見ながら被験者の顔が画面からはずれ

リハビリテ

ー

ションを受けていない。

ないようにカメラを遠隔操作して観察を行った。

実験IIの被験者は， 京都府立医科大学精神科教室の教授ならびに神経内科学教室の教授に依頼し，通院中のアルツハイマー2 - 4. 手続き型老年性痴呆症者を紹介

実験Iでは ， 各被験者につき ， 週1回の頻度でしていただいた。 後述の症例の被験者Aは ， 3年10回以上を実施した。すべての実験セッションで前に精神科医によりアルツハイマ

ー型老年痴呆症と診断された。痴呆の程度は中等度である。記憶

化粧の直前・直後に被験者の音声を録音した。被験者はB5判上質紙に大きく書かれた

“

あいうえ

”

場所に関する見当識に問題がある。 主治医によっお という母音を呈示されて音読するよう求めらて 行われた知能検査の結果は，れた。 音声の録音は ， マイクロフォン(SONY:

Mini - Mental

Stateで1991年12月に13点1992年10月に4点11

ElectricCondenser Microphone)を被験者のロ月に6点であった。 家族状況は， 長女と孫の3人暮から5cmから10cmの距離で集音し， デジタル ・らしで， 介護は長女か行っている。 病院の診察は

オ ー ディオ録音機(SONY)で記録した。 視力が

週1度で薬物が投与されている。症状には， 曜日低下していたり， 他の理由で文字が読めない被験や時間の失認物忘れ， 外出して1人で帰れなく者については ， まず実験者が あいうえお と発なる， などがみられる。実験開始時の年齢は62歳。

声して ， 同様に発声するよう求めた。化粧の施術“”

段階では， まず化粧水， 乳液 ， 下地クリ ー ムなどの墓礎化粧品で肌を整え ， つぎに必要に応じてコ2 - 2. 実験者

ンシーラ ー やファウンデ ー ション ， 粉白粉， 眉墨 ，美容の訓練を受けた女性4名。

口紅， 頬紅を被験者の顔に施した。化粧の施術の2 - 3. 化粧室および装置
化粧施術室と隣室のモニタ

所要時間は， 約10分であった。実験IIでは， 化粧ー室で構成される。

は週1回の頻度で計46回行われ ， 現在も進行中で化 粧 施 術 室 に は高さ80cm, 幅lmのハ ー フミある。 各回の実験には被験者の長女が同伴し， 実

ラ ー 三面鏡と， 被験者が座る上下電動式化粧施術

験中介護者は後方のソファに座って施術の終了ま用椅子が設置された。 その他給湯付き洗面台 ，で待ってもらった。

化粧品やタオルなどを備える化粧品棚が置かれた。

3. 結果と考察

三面鏡の裏側および鏡台上にはVTRカメラが設置された。 三面鏡の裏側のカメラは化粧中の被験者の様子， 鏡台上のカメラは待機中の被験者の様
子と室内全体の様子を撮影し， いずれもモニタ ー

3 - 1. 実験Iについての結果と考察
3 - 1 -1. 音声の分析

室のディスプレイ・テレビ上に映し出された。
VTRカメラはモニタ

ー

音声分析器(KAY:Visi-Pitch 6095/6097)を室から遠隔操作で上下左用いて， DATによって録音した音声を ， 化粧施

右に方向を変えることが可能であった。 三面鏡台

術前後での平均基本周波数（図中では平均F。とす-148-

アルツハイマ ー 型老年痴呆症， ぼけ症状を呈する人々への化粧による情動活性化の研究

X-—平均F。前⑱ 806040200
120
恥 180160140（

ニ�＋ ・ ・ ヽ •••平均F

3 - 2. 実験Iの症例
3 - 2- 1. 被験者W

。後被験者W(82歳）は2年前に脳梗塞発作をおこ し，
脳血管性痴呆と診断されるが， 日常生活にとくに問題はない。 平成3年7月に老人保健施設に入所したが， その時点での知能検査（国立精研式痴呆ス
クリ ー ニング・テスト）の結果は12点であった。
家族は被験者の三女夫婦， 孫の3名で， 在宅時

開始セッション

図1

中間セッション

には三女が介護している。

汲終セッション

3-2-2. 結果と考察

化粧前後の音声の平均茎本周波数“”

この被験者は週1回 化粧療法 を行い， 現在る）と基本周波数(F。)レンジについて比較した。

も継続中である。 結果の分析は17回目までの資料

また， 実験初期の数セッション， 中間期の数セッ

を用いた。
“

ション， 後 期の数セッションのあいだで平均基本

被験者 W は この歳に なってお化粧が しても周波数を比較した。 図lは全被験者の平均基本周

らえる なんて"' "女の命は顔だから と実験への波数を示す。

参加を第1 回目から非常に喜び， 毎回積極的に参3 - 1 - 2. 行動の分析＂加している。 顔面麻痺の後遺症で右目が伏せ目がビデオに収録された被験者の言語行動および非ちであること， 顔 に しみが多くできたことを気に言語行動を実験セッションごとに分析し比較ししており， 実験が進むにつれてそれを隠してほした。 分析の対象となった指標は， ①微笑時間の割いといった化粧方法に対する要求も出てくるよう合（総セッション時間に対する百分率）， ②目を閉になった。

じている時間の割合， ③ l分間あたりの瞬目の頻

図2は鏡の直視時間（累積）を化粧施術前後で比度④待機用椅子に座っている30秒間中に鏡を見較したものである。 分析対象となったデ ー タは9ている時間であった。 それぞれの指標に関して，

セッションを合計したものである。 化粧施術前後

実験者はレクチグラフによって測定し， ペンのスについて1要因の分散分析を行った結果直視 時

ビ ー ドは1mm毎秒に設定し， 被験者が行動して間のあいだに有意な差がみられた(F=15.61. df

いる間ボタンを押し続けた。 ①， ②， ④に関して=l,8, p<.01)。 このことから， 被験者は化粧は， そのボタンを押した長さを測り， 時間に換算
(sec)
10

した。
われわれは上述の各指標について， 全被験者の

，

ー

8

デ

タに 基づいて分析したが， すべて有意な差は7

みられなかった。 これは個人差が大きすぎるため

6であると思われる。 したがって， 本研究のような5実験では， 事例毎に化粧の前と後， セッションごとの効果などを詳細に検討する方法のほうが適切3である と考え， 各事例ごとに結果を詳細に分析し，2検討を行った。 ここでは限られた紙面のために，施術前

実験Iおよび実験IIのなかからとくに興味あると思われる症例を一例ずつあげて考察することとした。

-149-

図2

施術後

化粧中に鏡を熟視していた時間

後に自己像の変化に対する興味を高めたものと考えられる。
化粧後に周囲の人からほめられるのが嬉しいよ
うで自らそれを報告する。また， 家族の話によ45ると， 実験（化粧）を受けるようになってから非常
252015105 0に明るくなり， 積極性や社会性が出てきたということである。

�3-3. 実験11の症例（被験者A)

103-3- 1. 行動の変化

図4

化粧に対する興味は ， 第1セッションより高く ，

20

15

29

25

化粧中の瞬目の頻度

化粧方法についての話が中心となる。実験開始かの経過とともに平均基本周波数は増加し， 化粧にら1か月頃から朝の洗顔が習慣となり身だしなみよって声が明るくなっていることが分かる。
“

第5セッションの段階で．

も整えられるようになったとの報告を長女より受

あいうえお

”

の語

ける。簡単な化粧をして来室することも度々見受

尾を延ばして歌うように発声するようになった。

けられ， 実験開始後5か月頃からは ， 実験直前にまた第20セッションの頃よりうように教示した直後に，美容院に通うことも習慣となる。

か

3-3-2. 音声の変化

”

“

“

あいうえお

”

と言

なんて言うんでしたと教示内容を忘れてしまうようになる。

3-3-3. 瞬目の変化

図3は化粧施術前後の平均基本周波数を示す。
録音状態不良のため第2, 7, 12, 16-21セッショ

図4は1分あたりの瞬目頻度 ， 図5は目を閉じてンの数値は欠損しているが， 徐々に増加している。

いる時間の割合を示す。第19セッション以前では

化粧施術前後で差があるか ， また実験開始時と瞬目の増加と目を閉じている時間の増加は同時にセッションを重ねた後での差を調べるために ， 最

みられることが多い。しかし ， 第19セッション以

初の5セッションと最後の5セッションについて2降目を閉じている時間は徐々に増加しているに要因の分散分析を行った。その結果， 化粧施術前もかかわらず， 瞬目は減少してきている。これは ，後では有意な差は生じなかったが実験開始時と被験者が情動面で安定してきただけでなく， 覚醒

セッションを重ねた後では有意な差がみられた

水準自体が低下しているものと考えられる。図6(F=1087.353,

は微笑時間の割合を示す。第12セッションまでは

df=l. 1.

p<.01)。つまり実験
x-·I'均F.1i•i-·· . 平均F浚

200,t-.;_ �

戸

／応

プ

(%)

40
35
30
25

150

20
15

100

10

50

5
5

図3

IO

15

20

25

5

29

図5

化粧前後の音声の平均基本周波数

-150-

10

15

20

25

29

全セッション時間に対する閉目時間

アルツハイマ ー 型老年痴呆症， ぼけ症状を呈する人々への化粧による情動活性化の研究

脱字， 文字新作が目立つようになる。
(%)

被験者に習字の経験があることが逆に実験中

30の習字への導入を難しくし， 実験者を教え子に見25

立てて習字の心得を話し始めることが多い。その:i,J〗ため， 習字への導入に失敗した場合には， 歌を歌うことを試みた。歌に対しては抵抗が少ないようで， 家でも練習していると長女より報告を受ける。

5

3-3-6. 実験室外での変化

0

第22セッション（平成4年8月23日）の翌日， 被験

10

図6

20

15

25

29

者は自宅にて原因不明の意識障害を起こし倒れた。

全セッション時間に対する微笑時間

当初抗てんかん薬を処方していたようであるが ，増加しているが第14セッションから第20セッ

現在服用はしていない。 抗てんかん薬によって覚ションまでは減少している。その後再び増加しは醒水準が下がることはないと， 主治医は述べていじめているが実験開始当初より全般的に値は低る。この直後から被験者の体重の減少は一目瞭然し＼。

で体力の低下が著しい。10月より睡眠薬を漢方薬“

3-3-4. その他の変化にかえたところ， 2週間ほどで排泄時の失敗がな

化粧中， 化粧品の香料に ついて敏感に反応しくなり， 10月18日以降失敗はみられないとのこと”

いい香り などと感想を述べることが多い。そである。

"こう， 何とも長女によれば， 化粧実験開始前は5-7歳の子供言えない", "気持ちのよい"' "すぅっと"' "こに興味を示していたが最近では1-3歳の子供にれ以外にも， “ふわぁっとして"'＂の辺がこう霞がかかったようで ， などの快感情興味を示すようになっているそうである。この年の表現がセッションを重ねるごとに増加している。

齢の低下は， 被験者の退行現象を示すものと考え

形容詞を多用した表現をすることがあり， 意味がられる。被験者も なんかこの頃は私は変や"'““わかりにくい時もある。しかし， 実験者に自分が喜んでいることを示そうとする意図がみられることは， 化粧の効果の一つであるといえる。化粧後“に手鏡で顔をみると 私がしても同じようにはならない”発言をする。しかし， 被験者の礼儀正しさは実験を通じて保たれていることや， 実験指導者に会うともう何か月も前のことをはっきり覚えていて，“と実験者による化粧を喜んでおり， “別

あなたはこの前， とてもお上手に私にお手本を＂＂書いてくれましたね などと記憶再生できたこと

人のよう になれたことを楽しんでいる。
3-3-5.

”

前と違う と痴呆について自覚しているようななどを考え合わせると， 痴呆が進行していると一歌唱 ， 習字の試み

第13セッションから， 化粧後に習字をすること

概には言えない。

を試みる。被験者は習字を教えていた経験がある

朝洗顔後に化粧水やクリ ー ムをつける習慣がため， 簡単な手本を提示したことで不機嫌になっできたことや， 自分で化粧を試みた時 クリ ー ム

た。また， たまたま被験者と同年代の別の被験者と間違えて塗り薬をつけたこと， 頬紅をぬりすぎが同席したが， そのことにより競争心， 対抗心をて顔中を真っ赤にしてしまったことを長女は報告

呼び起こしたようで， 以後 ， 実験室に同世代の人しており， このことから化粧が被験者に意欲面で間がいると書くことを拒絶するようになる。第25の積極性を支えていると考えられる。また， 化粧セッション頃から ，
”

“

“

＂

”

“夜 を 応 と書いたり，”“りんりん を りしりし と書くなど， 誤字 ，を施術した日は非常に機嫌がよくなり実験への参加自体が被験者の日常生活にめりはりを与えてい-151-

tiveness in the readjustment of discharged

る。

psychiatric patients.

以上 ， 実験Iおよび実験IIをとおして， 化粧を手掛かりとして用いた情動活性化療法は老人の様々な問題行動を改善するのに有効であり ， 平板になりがちな老人の生活パター6) Graham, J. A. & Kligman, A. M.(Eds.) 1985
The psychology of cosmetic treatments. New

ンにリズムをつけYork:Prager.

る意味でも， 痴呆進行を遅らせる好ましい剌激になると考えられる。化粧がいわゆる

“

ばけ

”

症状

7) 余語真夫• 津田兼六• 浜

ぼけ”

健康心理学研究, 3, 28-32.

の症状の予防にも役立つことができるな

らば， 本研究の成果がコスメトロジー治世• 鈴木ゆかり· 互

恵子 1990 女性の精神的健康に与える化粧の効用の改善あるいはその進行をとどめるのみならず ，“Journal of Abnormal

Psychology, 95, 139-143.

に及ぽす意

8) 浜

治世・ 日比野英子• 藤田祐子 1990 化粧による情動活性化の試み日本心理学会第 54 回大会発表

義はさらに深いものとなろう。

論文集 ， 714.

9) Hama, H., Matsuyama, Y., Fukui, K.,

引用文献
泉・余語真夫 1991 化粧による

Shimizu, H., Nakajima, T., Kon, Y., &情動活性化の試み日本健康心理学会第 4 回大会発

Nakamura, K. 1990 Using cosmetics for ther­

表論文集

apy. In B. Wilpert, H. Motoaki, & J. Misumi

1) 浜

2) 浅井

治世• 浅井治世 1992 老人性痴呆(Eds.), Proceedings of the 22nd Internationalの情動活性化の試み日本心理学会第 4 回大会発表

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-152-

the

22nd

International

Hillsdale:Lawrence Erlbaum Associates. p.
199.

Bugg Jin, C. 1986 The role of physical attracofビタミンCと上皮成長因子によるヒト皮膚線維芽細胞の増殖とコラ ー ゲン代謝調節機構の分子細胞生物学的研究
東京医科歯科大学 難治疾患研究所

畑

隆一郎

言

．

緒

・
ー

L-Ascorbic acid 2-phosphate(Asc 2-P), a long-acting vitamin C derivative, stim­
ulated transcription of genes for proa,(I) and proa,(I) collagen in normal human skinfibroblasts after 8 h of treatment in the absence or in the presence of cycloheximide, in­dicating Asc 2-P stimulates transcription of type I collagen genes in the absence of pro­tein synthesis. The transcriptional rate in these cells reached the maximum value after
40 h of treatment, and at that time it was 3 to 4 times higher than that of the control cells
叫tured in the absence of Asc 2-P. Steady state levels of mRNAs for proa, (I) and pro­a,(!) chains were also increased to be 3 to 4 times higher than the control levels bytreatment of the cells with Asc 2-P for 72 h. When the fibroblasts obtained from a pa­
tient with Ehlers-Danlos syndrome were treated with Asc 2-P, the derivative also stim­
ulated transcription of the gene for proa, (I) chain and accumulation of mRNA for proa ,(I) chain. On the other hand, Ase 2-P failed to stimulate transcription of the proa,(I)gene or an increase in mRNA for proa,(I) chain. Sodium ascorbate showed effects quite
similar to those of Asc 2-P, when fibroblasts obtained from a normal control or the pa­
tient were cultured for 16 h with it.
These results indicate the existence of cis-regulatory elements responsible for tran­
scnptional activation by Asc 2-P or ascorbic acid in proa,(I) and proa,(I) genes ofnormal fibroblasts. These data also suggest some defect(s) of these elements in the pro­a,(!) gene of the patient with Ehlers-Danlos syndrome.

分であり ， 高等動物においては， 生体蛋白質のおよそ20%を占め， 組織形成多細胞体制の維持に

細胞外マトリックスが細胞の増殖， 細胞の機能

必須の成分である。
I型コラ ー ゲンの構造の異常， あるいは合成の制御に大きな役割を果していることが明らかにさエ ーラ ー ・ ダンロス症れつつある。 我々は個体の発生， 老化 ， および生低下は骨形成不全症 ，体のホメオスタシスの維持において， 細胞外マト(EDS), 壊血病の病因となり ， 器官の形成異常，

リックスが重要な機能を持つことから ， 細胞外マ機能不全を引き起こし， 重症の場合は個体の死をトリックスを神経系 ， 内分泌系免疫系とならぶ招く。 一方 ， I型コラ ー ゲンの組織への異常な蓄第四の生体制御系として位置づけ八 その代謝調

積は， 肝硬変動脈硬化強皮症等の朦器線維症

節機構と作用機構を分子レベルで明らかにしたいを引き起こす。 それ故 ， 正常な細胞ではI型コと考えている。

ラ ー ゲンを構成するa 1 (I)鎖とa2 (I)鎖遺伝子のI型コラ ー ゲンは細胞外マトリックスの主要成発現は厳密に調節されていると考えられる。

Molecular Cell Biological Studies on the Regulation of Growth and Collagen Metabolism in Human Skin F1broblasts by VitaminC and Epidermal Growth Factor
Ryu-Ichiro Hata

-153-

我々は細胞外マトリックスの代謝調節の研究中

Aに， 上皮成長因子(EGF)とビタミンC(VitC )およ
細胞の増殖を促進するが，Control

I 型コラ ー ゲンに関しては， ビタミンC とAsc2-Pが合成を活性化するのに対して， EGFは合成の阻害をすることを見いだ
し -4), さらに ， これが I 型コラ ー ゲンの遺伝子のこ

本研究では皮膚の組織形成と代謝調節機構を明「+Asc2-P

函301 o,(I)173 o,(I)1 57 P-actri(4S) (42)

397
193

403

B

L
「-

L―

+Asc2--P

「

o,CO

o,(O
156 13-acth189

し一 (33) (2B) vector

「-

Probe
43

142 JJ-actn

15 3

vector(34) (3?)

436 a,(O48叫I)
143 139 13-a ctn(43) (42) vector
439
63

371 386
53
65+Asc2-P+ Cycloheximide

し一286 a,(I)
38叫I)

276

Control

vector42 5 o,CO
226 o,CO
162 P-actn(37) (34) vector+ Cyclohexinide 162

らかにすることを目的として ， この分子機構を解
析した。

310
162

□ 417
213
+Asel
165

2

転写レベルの調節であることを明らかにした冗

I

L

び活性持続型ビ タミンC(Asc2-P)が共 に種々の

Probe

127

123

(23) (31)

a,(I)
a,(I)
JJ-actn
vector

Fig.1 Hybridization of mRNA precursors duringin vitro transcription.
A, normal control; B, EDS.

2. 実験方法

16時間の処理ではAsc2-PとVitC によるa1正常およびa2 (I) 鎖の合成欠損を示すEDS患(I)鎖とa2 (I)鎖遺伝子の転写活性化， mRNA者 6) の皮膚線維芽細胞を10%のウシ胎児血清を含

量 ， コラ ー ゲン合成量に差はなく， 長時間処理にむダルベソコ変法イ ー グル培地で定常期ま で培養よって観察された両者の効果の差 3) は その安定

後Asc2-PあるいはVitC存在下に時間を変えて性の差によると考えられる(Table 1)。

I型コラ ー ゲンを構成するa I a)鎖とa2

さ らに， Asc2-P処理による時間変化を調べ(I)鎖遺伝子の転写活性， mRNA量およびそると， 転写活性化， およびmRNA量は ， 未処理

れぞれのボリペプチド鎖の合成量を調べた。方法の細胞の3倍となったが ポリペプチド鎖の合成

は既報の方法によった 5, 6 l 。

は最大6倍に活性化されており， Asc2-Pは1型

培養し ，

コラ ー ゲン遺伝子の転写活性化の他に ， mRNA

3. 結果及び考察の安定化あるいは， 翻訳過程の活性化作用もあると考えられる ” 。

3. 1

活性持続型ビタミンCによるヒト皮膚線
維芽細胞のI型コラー

3.2

エ ーラ ー・ ダンロス症患者皮虜線維芽細胞におけるa 2 CI) 鎖の遺伝子の転写異常

ゲン遺伝子の転写活性化のキネティックス

EDS患者細胞におけるaパI)鎖の発現異常の正常細胞をAsc2-Pで処理すると ， 8時間後にはa I (I)鎖， および ， a2 (I)鎖遺伝子の転写活性は有意に上昇し， また， シクロヘキシミドを共存させて， 蛋白質の合成を95%阻害しても， 両遺伝

Table 1 Effects of Sodium Ascorbate and Ascor­
bic Acid 2-P hosphate on the Expres­sion of Type I Collagen Genes•
DNA
Content

子の転写活性化は同様に起こる(Fig.lA)。これ
ら の結果 はAsc2-P処理によるシグナルは ， 新(%)

Conrrol

Protein
Synthes,s
(%)

COL

NCP

100土2 100土9 100土12

Type I
Relativeb
Rate of
Production(%)
Collagen
(%)
a1
a2

mRNA
Level

Primary
Transaipts

a1

a2

a1

a2

100

100

(%)

7.0土 0.6

100

100

100

100

(%)

たな蛋白質合成を介さずに直接a1CD鎖とa2 (I)+NaAsc

124土9 201±9 124土14 10. 戸0.4

223

244

171

180

180

202

鎖の遺伝子を活性化することを示している。転写+As:.2-P

117±1 218丑0147± 4 10.0土0.4

233

225

1&4

175

205

234

活性 はAsc2-P処理40時間後に最大を示し， 以
後漸減した。 mRNA量 はこれを追いかけるように 増加し， 処理3日後に最大となった ” 。

叩uman skin fibroblasts were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium
containing 10 % fetal bovme serum in t11e absence or presence of 0.2 mM sodium
ascorbate (NaAsc) or 0.2 mM ascorbic acid 2-phosphate (心c 2-P) for 16 hours
bRelanve rate of collagen production to total protem production.

-154-

ビタミンCと上皮成長因子によるヒト皮膚線維芽細胞の増殖とコラーゲン代謝調節機構の分子細胞生物学研究

原因を明らかにするために患者細胞を上記と同様

クタ ー としての役割が報告されていたが本研究の処理をすると， a 1 (I)鎖についてはAsc2-P処

は. VitCあるいはAsc2-Pのシグナルが直接I理により正常細胞と同様に転写の活性化，

mR­

型コラ ー ゲン遺伝子の転写を活性化することが明

NA量の増加 a 1·(I)鎖の合成活性化が起こったらかにした。 この機構をさらに解明することによが， a2 (I)鎖の場合は， Asc2-P未処理の時は正り． 細胞の代謝を活性化する， 新しい型の化粧品

常細胞と比較して転写は1/4, mRNA量は1/10の開発に有効であると考えられる。

以下であり， aパI)鎖の合成は全く検出されなかった(Fig.lB)。 Asc2-Pで8時間から6日間の文処理では， a2 (I)鎖遺伝子の転写活性化 ，

1) R. Hata and H. Senoo:Tiss. Cult. Res. Com­mR­

献mun. 11:337-343, 1992

NA量の上昇は起こらず， a 2 (I)鎖の合成も検出できなかった。 EDS患者細胞のaパI)鎖遺伝子

2) R. Hata, H. Sunada, K. Arai et al.:をSouthem Blot法で調べると， そのサイズおよE. J. Biochem. 173:261-267, 1988.

び遺伝子量は正常細胞と違いはなかった。 これら

3) R. Hata and H. Senoo:J. Cell. Physiol. 138:
8-16, 1989.

の結果は， このEDS患者細胞においては， a2(I)鎖遺伝子の転写機構に異常があり， Asc2-P
による活性化を受けないと考えられる”

4)畑 隆一郎 ， 妹尾 春樹：日経サイエンス
1992年2月号：88-97.

。

5) S. Kurata and R. Hata:J. Biol. Chem. 266:

4. 総 括

9997-10003, 1991.
6) R. Hata, S. Kurata and H. Shinka1:

VitC は抗壊血病因子と し て発見され た。

E. J. Biochem. 174:231-237, 1988.

ゲン

7) S. Kurata, H. Senoo and R. Hata:

VitCはコラーゲンの合成において， コラー

分子特有のヘリックス構造を形成するのに必須であるヒドロキシプロリン形成の際の酵素のコファ-155-

Exptl. Cell Res. 206:63-71,1993

記念講演

．

平成2年度記念講演大沢利昭

平成3年度記念講演

南

博

吉田

倫幸

．

平成4年度記念講演（敬称略）

コスメトロジ ー 研究振興財団
第1回表彰・贈呈式記念講演

遅延型過敏症とサイトカイン
大 沢 利 昭東京大学薬学部

生体異物•免疫化学教授

場所 野口英世記念会館
日時 平成3年3月29日（金）只今 ご紹介にあずかりました大沢でございます。

クのランドシュタイナ ー とチェ ー スが ， ツベルク
リン陽性のモルモットにPPD (purified proteinー

研究振興財団の第1回表

derivative)即ちツベルクリンを注射した後 ， そ

彰 ， 贈呈式に当たりまして， 記念講演をさせて頂の血液を採取して， 白血球と血清に分けそれぞれきますことは ， 誠に光栄に存じます。 理事長始めをツベルクリン陰性のモルモットに移す実験を行

関係者の皆様に厚く御礼申しあげます。 本日 ， 私いました。 その結果， 血清を移してもツベルクリ

本日 ， コスメトロジに与えられましたテー

マは化粧品にも関連の深い

ン陽性に変えることができないが白血球を移す「遅延型過敏症とサイトカイン」と言うことでごとツベルクリン陰性のモルモットが陽性になる，ざいます。 後から申し上げますように確かに遅延

陽転することを見つけました。 ッベルクリンに対型過敏症は様々なサイトカインによって引き起こする反応性は血清中の抗体が担っているわけではされる炎症性の局所反応でありますけれども， そなく ， リンパ系の細胞が担っていることを示したの機序ということになりますと誠に複雑でございわけです。 要するにツベルクリン反応は血清中抗まして ． 免疫関連の生体現象の中でもその分子的体をエフェクタ ー 分子とする体液性免疫ではなくな解析が最も遅れている分野であります。 そういてリンパ系細胞をエフェクタ ー とする細胞性免疫う点でこの課題は大変お話ししずらいわけでありであることを明確に示したことになります。 そのます。 そこでまず皆様方既に良くご存知かとは思後 モルモットから採取した白血球をT細胞に対いますが遅延型過敏症とはどんな生体反応であする抗体で処理をしてT細胞を取ってしまった場

るかということについて， ごく簡単な基礎的なこ合も検討されました。 T細胞を除いた白血球を移とからお話ししたいと思います。

してもツベルクリンを陽転させることはできませ1890年に結核菌の発見者であったコッホは， 結ん。 陰性のモルモットは陰性のままです。 T細胞

核に感染したモルモットの皮内に結核菌あるいはを取らない状態のままで白血球を移すと陽転しま

結核菌抽出物を注射致しますと， 一日か二日後にす。 同じ結果はねずみを用いた実験でも得られま

局所に発赤硬結が見られることを発見しました。

した。
これらの実験によって， ツベルクリンに対する

これがコッホ現象と言われるものです。 コッホは
これを結核の診断に用いました。

反応性， 即ち抗原に対する情報を担っていて， 抗

これが皆様方ご存知のツベルクリン反応の最初

原と反応する細胞はT細胞であることが解りました。 T細胞， B細胞のニグル ー プに大別されるリの発見であります。
その後50年程たちました1942年にニュ ー ヨ ー

ンパ球のうちT細胞てあると限定されたわけです。

-157 -

現在では ， この T 細胞は Delayed Hypersensi­-2週間位で消失します。これがジョ ー ンズモ ー

tivity, 遅延型過敏症の頭文字 D を付して叫細ト型反応です。この反応では， 局所には ， 顆粒球胞と呼ばれ， このT細胞はCD4抗原陽性のヘルの中でも好塩基球の浸潤が非常に大きいことがパー

解っています。そのため． 好塩基球性過敏症と称

型T細胞であると解っております。

ところで今お話し致しましたツベルクリンによされる場合があります。この点が他の遅延型過敏

る皮隣反応は蒜麻疹や湿疹といくつかの点で非常症と違います。 ジョ ー ンズモ ー ト型反応の第2のに異なっています。 第 1 に発現に要する時間の点特徴として， 毛細血管の拡張や透過性の冗進によです。蒜麻疹等では抗原と接触しますと， たかだ

る皮膚の発赤腫脹が起こるが他の型に見られか2-3分以内に皮膚反応が見られます。ッベルク

るフィプリン網の形成による硬結は生じない点が皆様方， 診断で既にご存知のよう挙げられます。さらにこの型の反応は． 人では対に皮腐の発赤とか腫脹即ちふくれが最大に達す

応病変がよく解っていません。つぎにツベルクリ

るには， 少なくとも24時間から48時間位かかりまン型反応は結核菌ばかりではなく ， 細胞内寄生性す。そこでツベルクリン反応に代表される過敏症を持つ細菌とか原虫に感作された免疫動物の皮内は遅発型あるいは遅延型過敏症と呼ばれます。まにそれらの抗原を注射した時, 48時間位で腫脹がリン反応では ，たはこれをタイプ4 のアレルギー

とも言います。

最大に達する反応であります。組織学的にはマク

一方 ， 蒜麻疹や湿疹は ， 即時型過敏症 Clmmedi­

ロファ ー ジとリンパ球の強い浸潤が見られますが ，ate Hypersensitivity) に属し ， その内のタイプ 1

特に人の場合顆粒球の浸潤は殆んど見られませのアナフィラキシ ー 型反応に分類されています。

ん。この点はジョ ー ンズモ ー ト型や先程触れた即第2にツベルクリン反応では ， 陽性動物のT細時型過敏症の場合と非常に違います。ッベルクリ

胞によって陰性動物を陽転できます。即ち， 細胞

ン型反応のエフェクタ ー 細胞と言うか， 実際に働性免疫であります。 一方奪麻疹等では ， 関与する

いている細胞は， おそらくマクロファ ー ジであるー 分子がIgEと呼と考えられるわけです。後ほどその機構の説明を

物質は抗体です。エフェクタ
ばれる抗体です。

致します。
接触過敏症では ， 重金属や漆，

第3に病理組織学的にも異なります。奪麻疹やビクリー ルクロ

湿疹の場合， 局所に好中球を主体とする顆粒球のリドあるいはジニトロクロ ー ルベンゼン等に代表浸潤が見られますが ， ツベルクリン反応の場合，される低分子物質によって感作が生じます。この早い時期からマクロファージを主体とする単核球型の遅延型過敏症がおそらく最も化粧品に関連がの浸潤が生じます。 局所に単核球の浸潤が起こる

深いと思います。元来 ， 低分子物質には抗原性は

点は後から申し上げます様に遅延型過敏症の機ありませんが， 生体内の蛋白質等の高分子物質と構を考える上で大変大切なところです。

結合して免疫原性を獲得し， T細胞に対する免疫

ところで遅延型過敏症はジョ ー ンズモー ト型反が行われます。その後， 抗原が来ますと反応が起応， ツベルクリン型反応， 接触過敏症 ， 肉芽腫形

こる手順となります。3日とか4日位で免疫が完成

成反応の4つに大別することができます。

しまして， その後， 抗原と出合いますと48時間位

例えば ， 人の血清をほんの少しモルモットの皮で最高に達する炎症を起こします。ッベルクリン

下に注射しておきましておよそ4 日位 ， まだ体

型反応は真皮で生じる反応です。ところが接触過液性の抗体が血清中に現われてこない， 抗体が検

敏症は表皮に起こる反応であります。後からも申出されない早い時期に ， 前述の人の血清を再び皮し上げますが， T細胞が免疫をされたり， あるい

内に注入してやりますと， およそ24時間位で皮膚は活性化されたりする時には， 抗原をT細胞に対の腫脹が最高に達する反応が起きます。これは 1

して提示するというか， 接触を助ける細胞が必要-158-

遅延型過敏症とサイトカインです。 これを抗原提示細胞と言いますが， 真皮でうかを調べます。 さらにこれは非常に大切なこと生じる ツベ ルクリン型反応の場合ではマクロですが必要量のリンフォカインを用意して実験

ファージがそれに当たります。 表皮で起こる接触

動物に注射した時に， その疾患自身あるいは疾患

過敏症の場合には表皮にあるランゲルハンス細胞と直接関連する二次的な現象が発現して来るかを

が抗原提示細胞として働いていると考えられていしっかりと確かめます。 しかし後から申し上げまます。 その寄与は高いと考えています。

すが遅延型過敏症とサイトカインの関連につき

肉芽腫形成反応は， 結核とか羅とかあるいは梅毒とか， 色々な真菌症等の感染症で見られます。

ましては実験的にはっきりと言えるものがはなはだ少ないと言うのが現状であります。

臨床的には遅延型過敏症の中でも症状が重いもの

遅延型過敏症の発現に関係すると考えられてきです。 こ れ ら の 細菌 あ るいは真菌は ， マクロた代表的な炎症性リンフォカインを示します。 従ファー

ジ細胞の中に入っても分解され難いからで来の方式による分類です。

あります。 真菌あるいは原虫か細胞内で増殖しま

主にマクロファ ー ジ作用性のリンフォカインがすとマクロファ ー ジは連続的な刺激を受けて活性挙げられています。 近年色々なリンフォカインな化します。 その結果 マクロファー

ジ由来と考えりサイトカインが精製されたり ， あるいは遺伝子られる非常に大きな類上皮細胞ができて ， 肉芽腫

クロ ー ニングが行われて組換え体 によりそれらがが形成されるに至ると思われます。

大量に得られる様になりました。 これらを使って ，

次 に． 遅延型過敏症の病態の生成過程について

生理活性を調べたところ， 大部分のリンフォカイ
ンがかなり多機能であることが解ってきました。

述べます。
特異的にある抗原によって免疫を受けてしまっ

従いまして， あるリンフォカインをこれは炎症にた四細胞が対応する抗原と接触しますと， 活性関係するもの， これは分化増殖に主として関係す化されて 色々なサイトカインが出てきます。 T細るもの等ときちんと分類することが難かしくなっ胞から出てくるサイトカインはリンフォカインとています。 実際に炎症に関係するリンフォカイン

称されます。 このリンフォカインによって ， 発赤．

は他にもあります。 しかしながら現時点では， こ腫脹あるいはフィプリンの沈着とかの病態が引こに挙げたものが遅延型過敏症の発現に関連するき起されるものと． 現在では考えられています。

代表的なリンフォカインであるとお考えになって実のところ， この点について研究の現状をお話し結構かと思います。
もともとリンフォカインが世の中に知られる様することが今回の講演の主たる目的であります。
しかしながら， 詳しいメカニズムがどの程度解っになったのは1960年代の後半です。 具体的には，ているかと問われますとはなはだ心許ない状態でマクロファ ー ジ遊走阻止因子 ， 即ちMigrationあります。 どうも今だにすっきりと解っていない

Inhibition Factor (MIF)の研究成果からです。

のが実状であります。

1966年にニ ュ ー ヨ ー クのプル ー ム と 当 時 まだ

元来， あるサイトカインなりリンフォカインがニュ ー ヨ ーク大学にいましたジョン ・ デ ー ビット

ある種の疾患の発現と相関しているかどうかを言が， 感作されたリンパ球をその抗原で剌激するとうためには手続 きが要ります。 まずはその疾患のマクロファ ー ジの遊走を阻止する因子が放出され局所でそのリンフォカインが確かにあるかどうか

ることをそれぞれ独立に初めて発見しました。 即

それが検出されるかどうかを確かめます。

ち， マクロファ ー ジを毛細管に詰めておきますと，

それからまた， 疾患の局所のリンパ球を取って自然に自分で遊走して管外に出ますが， 遊走阻止来まして， その疾患に関連した抗原で刺激した時因子を入れて置きますと動き回りません。 先程申にリンパ球からそのリンフォカインが出てるかど

し上げましたように遅延型過敏症， 特にツベルク-159-

リン型反応や接触皮隣炎の場合， 局所におけるマクロファ

ージの浸潤は著明です。 遊走阻止因子はーの高い化粧品の開発にもつなげたいと考えてきました。

ジの遊走を抑え ， 炎症局所に蓄積さここで現在不明なところが有り過ぎますが， とせる働きを持つ典型的な炎症性リンフォカインでもあれこれまで知られているこれらサイトカインあると言えます。

の生理活性を基に． 遅延型過敏症発現の過程を無マクロファ

確か今から10年前あるいはもう少し前かも知れ

理に推論して見たいと思います。

ませんが， 今はこの因子の大家となっているコネ

まず， 抗原によって感作された叫細胞が再びチカット大学のスタンレ ー ・ コ ー エンが色々な遅抗原に出合いますと活性化されます。 このとき先延型過敏症疾患とマクロファ ー ジ遊走阻止因子の程申し上げましたが． マクロファ ー ジやランゲル関係を調べています。 その結果例えば遅延型過ハンス細胞によって． 抗原が免疫されたT細胞に敏症関連のサルコイド ー シス等の患者の血清には提示されなければなりません。 マクロファ ー ジが確かに正常人に比べて有意に高いMIF活性があ抗原を一 度取り込んでこれを処理した後， 抗原のることを証明しています。 この例からも， 炎症性

破片を自分自身の細胞の表面に並べるわけです。

リンフォカインであるMIFと遅延型過敏症とはこれがT細胞を刺激します。 面倒臭いことを言い

直接に関連していると考えられるわけです。

ますと， この際にはマクロファ ー ジとT細胞の間

こんな具合にして， リンフォカインの歴史は確で主要組織適合性抗原の 一種 ． クラス2抗原の 一

かにMIFから始まっていますが ， その後の研究致が必要であります。 このT細胞はこれも先程申は遅々として進まずの感があります。 スライドにしましたようにCD4抗原陽性のヘルパ ー 型T細記載した炎症性リンフォカインの中でリンホトキ胞です。 ヘルパ ー 型T細胞にも種類がございます

シンについては，

ジェネンティックと私共の研究が ここで働くのはインタ ー ロイキン4を産生す

室で遺伝子クロ ー ニングを成功させ， 組換えのリる Th-2 で はなく ， インタ ー ロイキン2 やガンンホトキシンの大量調製が可能となっていますが，

マ ー インタ ー フェロンを産生し． かつ種々の炎症

その他のものについてはアッセイ系が非常に複雑性リンフォカインを産生する Th-1と呼ばれるヘであることもありまして， いまだに精製とか組換

ルパ ー 型T細胞であります。 この細胞が抗原で刺え体の大量調製があまり成功していないようであ激されると遅延型過敏症に関連した色々なサイト

ります。 他のリンフォカイン， 例えば， IL-2,

カインが出てきます。 そのうちの 一 つにMCF.

IL-4とか ， IL-5とか， それからIL-6とかの分即ちマクロファ ー ジ走化性因子 ， 別名遊走因子が化増殖因子の場合， 遺伝子クローあります。 これがマクロファ ー ジを反応局所に呼ニングが終り，

大量調製が可能になり ， 研究が進展しているのとび寄せます。 MCFについては従来から熊本大学は対照的であります。 大量調製に至っていないこの林教授が非常に詳しい研究を展開されました。

とが遅延型過敏症の発症機構とサイトカインの関

林教授の大変な業績は， このような走化性因子がつの原因ではないかと

確かに遅延型過敏症に関連があることをかなり明思っている次第です。 いずれにしましても ， 炎症確にされた点にあります。 教授はモルモットのツにかかわるサイトカインの働きがさらに解明されベルクリン反応層から， マクロファ ー ジに対してて次に発現を抑制する物質が開発されるまでにな

走化活性を持つ様々な物質を単離しておられます。

りますと ， おそらくより安全性の高い化粧品の創

そのうちの 一 つがリンフォカインとm — グロプ

製にもつながって来るのではないかと思います。

リンの複合体です。 このリンフォカインの本体に

私もずっとこの炎症性リンフォカインの研究をついては良く解っていないところがあります。

連が解明されないでいる

行っていますが その一一つの方向として， 安全性-160-

最近． 私のところで活性化された人のT細胞ハ

遅延型過敏症とサイトカイン

イプリド ー マから， マクロファ ー ジに特異的に走ないかと思っております。
遅延型過敏症の場合， 病態として発赤とか腫脹化活性を持つペプチドを単離しまして， その構造を決定しております。これについては後で簡単にが生じますので， 毛細血管の拡張とか透過性の増お話し申し上げたいと思います。いずれにしまし

大を伴います。リンフォカインの 一種である皮膚てもマクロファ ー ジの呼び込み屋がいるわけです。

反応惹起因子や血管透過性因子が関連すると考え呼び込まれたマクロファー

ジは， 今度はマクロられています。皮膚反応惹起因子については最近

ファ ー ジ遊走阻止因子MIFによって局所に留めまでその存在すら疑われておりました。もしかす置かれます。研究の歴史が長いMIFですが先るとマクロファ ー ジ走化性因子と同じものではな

程述べた事情で天然因子の精製は行われておりま

いかとも言われました。ところが最近になりましせん。最近になりまして， 私共はやはり人のT細て， 活性化された人の単核細胞の培養上清から72

胞ハイプリド ー マから2種類のMIFの精製に成功

個のアミノ酸からなる皮膚反応惹起因子が精製確致しました。今， 遺伝子クロ ニングを行ってい認されました。 そして， インタ ー ロイキン8と名ます。これが完了して組換え因子が出来ますと，付けられました。これは他の機能として好中球を遅延型過敏症の機構の解析に大きく貢献するので反応箇所に呼び寄せる働きが著明であることもはないかと期待している ところです。 な お ，

解ってきています。

ー

皮膚反応惹起因子に比べ， 血管透過性因子の働

MIF的な活性をもつサイトカインとして， ガン
マ ー インタ ー フェロンとかインタ ー ロイキン4がきについてはかなり良く解っております。例えばあります。これらは私共が精製したMIFよりも

分子量約39,000の因子が知られています。この因はるかにMIF活性が弱いと思いますが確かに子がおそらくハ ー ゲマン因子を介しまして最終的活性があります。局所に集ったマクロファ ー ジは，にキニンを生成させます。そして， そのキニンに

今度はマクロファー

ジ活性化因子(Macrophage

よる血管透過性冗進作用， あるいは血管拡張作用

Activating Factor)によって活性化されます。

が起きてくると考えられています。血管透過性が

マクロファ

ー

ジは， 機能が多様化した細胞であり増大しますと， フィプリノ ー ゲンの浸出が生じ，ますので各々の機能に対応して活性化因子も複

フィブリン網の形成が冗進され硬結現象となるわ

数有ります。例えば， ガンマ ー インタ ー フェロン

けであります。それともう一つ， リンホトキシン

とか， リンホトキシンとか， あるいはガンの治療

はある種の組織細胞に非特異的に障害作用を及ぼ

に関連して

一

時大きな注目を集めたTNF(腫瘍壊死因子）等も活性化機能があります。いずれにしー

し， 発症に 一役買っている場合もあるのではないかと考えられています。

ジの抗原

以上のように遅延型過敏症の発症機構は， 炎症貪食あるいは抗原処理能力が高まりまして局所に性リンフォカインに関する分子レベルでの同定やおける遅延型過敏症反応が増幅されることになり生理活性の詳細な解析が済んでいないことがありろこの因子の作用によってマクロファ

ます。マクロファ

ー

ー

ム酵素に富

まして， まだまだよく解っておりません。私共はんだ細胞でありまして活性化されるとリソゾ ー ム

炎症性リンフォカインについて長年検討を進めての内容物を放出したり， あるいは活性酵素02-のいますが， まだまだでございます。

ジは元来リソゾ

産生放出を行ったりして， 炎症反応に直接参加す

今日のお話しの最後の話題と致しまして， 私共ることも大いに考えられています。これに関連しの行いました仕事の中からマクロファ ー ジ走化性

まして我々は， マクロファ ー ジの活性酸素放出を因子(MCF)に関する研究について大ざっばなお増大させる活性化因子の完全精製に成功しました。

話しを申し上げたいと思います。先程申し上げま

この面からも遅延型過敏症の解析に役立つのではしたようにMCFについては熊本大学の林教授あ-161-

るいは神原教授の優れた業績がありまして ， 遅延ません。 T細胞の中にもともとMCFがあり， 何型過敏症との関連がかなり明確になっています。

らかの刺激を受けると外に出てくると考えられる

しかしこの先生方が働きを明らかにされた因子のわけです。 確かに活性化していないT細胞をホモ

多くは， 抗体関連のものです。 リンフォカイン性

ジナイズして ， その上清を調べますと走化活性をのものについては まだまだ詳しい解析には至っ示します。 この実験は， MCFがT細胞に貯えらており ま せ ん 。 私共は リ ンフ ォ カ イ ン で あ る

れていることを支持しています。

MCFを何とか解析したいと考えました。 そこで次に， T細胞ハイプリド ー マの細胞上清の持つまずリンフォカインを産生する人のT細胞と人のMCFと末梢血T細胞ホモジネ ー ト上清のものがT 細胞由来の白血球を細胞融合しまして， 増殖性

同じかどうかを調べました。 バイオゲルP2によマを作りました。 こるゲル遵過を試みたところ分子量がほぼ同じであれを細胞培養してMCFをたくさん産生させ精製り， 同じ物質と考えられます。 因みにT細胞をホしようとしたわけであります。 まず， たく さんのモジナイズした上清は， やはりマクロファ ー ジにT細胞ハイプリド ー マを樹立しまして種々の生理

非常に特異的な走化活性を示すことも確かめまし

活性を調べました。 その結果D6-18と命名したた。

のある人T細胞ハイプリドー

マ株のMCF活性が高いことが解り，

アナフィラキシ ー 反応のような即時型アレル

これを使ってMCFの精製をすることとしました。

ギ ー の場合発現に際してマストセルからヒスタ

MCF活性を測るためにはボイデンチャン バー

ミンが出てきます。 ヒスタミンの放出を抑える薬

チャンバー は二つの室に分かれてい剤としてダイソジュ ー ムクロムグライケ ートがあまして ， その間が穴のあいたメンプレンで仕切らります。 この薬剤の存在下でD6-18細胞から 一れています。 上の方にマクロファ ー ジを置きまし

体MCFが出てくるかどうかを調べました。 結果て， 下にMCF活性があると思われるものを置き的にMCFの放出が非常に良く抑えられることがま す 。 そうするとも し 活性が あ れ ば ， マクロ

解りました。 マストセルの顆球の中にヒスタミン

ハイプリド

ー

を使います。

ファー

ジは穴を通して下の部屋に出てきます。 出てきた数を数えることで， MCF活性が測れるこが貯えられていますが， この薬剤は脱顆粒を抑えることが解っています。

とになります。 D6-18細胞は培養を始めますとこのことからMCFもT細胞中の顆粒の中にあ直ちに10分位でMCFを放出します。 そして90分

るのではないかと考えてみました。 そこで今度は位でそのレベルが維持されることが解っています。

T細胞をパ ー コー ルの密度勾配遠心にかけてみま

実験では， 有名な走化性ポリペプタイド fMet

した。 もし顆粒の中にあれば顆粒は重いから ， そ-Leu-Phe をコントロ ー ルに使いました。 これの部分に活性があるはずです。 予測通り重い部分

はフォルミー ルメサイオニンとロイシン， フェニに活性がありました。 軽い部分にも若干活性があル アラニンのトリペ プタイドです が ， マクロ

りましたが， これはホモジネ ー トする際に顆粒がファ ー ジも顆粒球も両方呼び込みます。

壊れて放出したものと考えられます。 これらのこそれに比べ ， D6-18細胞の培養上清は ， マクロファ

ージに特異的で顆粒球の呼び込みを殆んどとからMCFはT細胞の顆粒の中に入っているのであろうことが解ってまいりました。
次に， D6-18細胞を大量に培養しまして ， ホ

しません。 次に我々の血液中のT細胞末梢血のT 細 胞 を マ イトー ジェニックレクチン で あ る

モジナイズし， その上清からMCFを取り出し，

PHAで活性化させてみました。 そうしますと ，

各種イオンクロマトグラフィ ー と逆相HPLCを

その培養上清は， 走化活性を示します。 活性化さ組合わせて精製致しました。 詳しいことは申し上せない T 細胞の培養上清の場合， 走化活性がありげませんが， こうして精製したもののアミノ酸配-162-

遅延型過敏症とサイトカイン

列をプロテインシ ー クエンサ ー で調べましたとこ

う青紫色の偏平な発疹の出来る病気の病変部組織

ろ ， たった9つのアミノ酸で出来ているノナペプの細胞がやはりこの抗体によって良く染まることチドであることが解りました。 この程度ですと合が確かめられました。 このことから確かにこの成が出来ます。 実験を進めまして ， 合成したペプ

MCF が関与しているらしいことが解ってまいり

チドの場合でも人の単球とかモルモットのマクロました。

ファ ー ジに対して10-8から10-9モルで非常に強い

以上のように遅延型過敏症の発現にはいくつも

MCF 活性を示すことが解りました。 これが本当のサイトカインが関与します。 そしてそれらの産に炎症といいますか， 遅延型過敏症に関係がある

生とか作用の発現に当たっては相互に影響を及かどうかを調べる場合には抗体を作ることが非常ぼし合ってネットワ ー クを形成していますから，に大切です。 合成ペプチドをキャリア ー としての

それらの機能は極めて複雑であります。 いずれにキィ ー ホ ー ルリンペ ー ドヘモシアニンに結合させしましても， これらのサイトカインを分子レベルて免疫をしまして抗体を作りました。 この抗体をで解析し， 大量調製へと進める必要があります。

スライドの上に塗沫しました T 細胞に働かせてア

そうすることで近年発展の目覚ましい分子免疫学

ビシンビオチンペルオキシタ ー ゼ法で染めます。

の中でかなり取り残された感のある遅延型過敏

そうしますと， 細胞周辺部の顆粒が抗体と結合し症の解析がもっともっと進んでいくはずです。私て良く染まっていることがわかります。 抗体を共の研究室でもその分野に向けて大きな努力を作ってみることで MCF が T 細胞の周辺にある払っているわけであります。 こうした研究の成果

顆粒に存在し， 剌激を受けるとそれが放出されるによって遅延型過敏症の抑制機構が明らかになり，ということがかなりはっきり解ってきたわけで関連サイトカインの活性抑制物質が開発されるよ
うになりますと ， それはより安全な化粧品の開発あります。
今日は ， 皆様にお見せする OHP を二枚用意しにつながっていくのではないかと思います。
最後の方をちょっと急ぎまして OHP2 枚を割愛てあるのですが ， 時間の関係もあり投影は省略して説明します。

してしまいました。 冒頭申し上げましたように，

実際に疾患の場合 この MCF があるかどうか

今日は研究途中の大変難しい課題を取りあげましを確かめるために種々の遅延型過敏症関連疾患にた。 非常に雑駁なお話しにも関わらずご静聴頂き

ついて調べております。 そうすると扁平苔癬とい感謝します。

-163-

コスメトロジ ー 研究振興財団
第2回表彰 ・贈呈式記念講演

コスメトロジ 一 考
南

一橋大学

博

名誉教授

場所
日時

薬学会館長井記念館
平成3年11月18日（月）南でございます。実はこういうところではお話のを出しましたが ， その江戸研究の大先生が ，し難いんです。 むしろ僕が講義を聞きまして勉強「南さん， 江戸についての学問を何というんです

させていただいた方が妥当と思われる専門家の方か。」というので ， 「それは江戸 学 し かないで達ばかりが聞き手ですので内心， 気遅れを感じす。 」「英 語 に訳す と ど う な り ま す か 。 」

ないわけにはいきません。

「 EDOLOGY に決ま っ て い る じ ゃ な い で す

私は風俗史とか流行の歴史とか社会心理学の方か。」（笑）などと話し合ったいきさつがあります。

を主にやっておりますが ， 他の分野に進む可能性

ところで， コスメトロジ ー というのは皆さんよもありました。 父が医者なものですから ， 私を開くご存知のように， 本来 ， 英語では2つの意味が業医にさせたかったらしいんですね。 それで東大あって ， 1つは ， 美容術ですね。 日本では明i台時の医学部にも入りましたが ちょっと反抗しまし代から美顔術とか， 美貌術といい慣らされておって別の道を選びました。 その頃薬理学の教授はたようです。 もう1つは ， 学問としての化粧学に田村先生だったと思います。 薬理学で思い出すのなります。 つまり， コスメトロジ ー という言葉には ， ベラドンナのことだけですね。 覚えているのは ， 技術面と理論面の両面があるわけです。 ついは， そういう程度なんです。 生理学は橋田先生にでに申しますと ， 英語で心理学のことをサイコロ教えていただいて ， それから後京大の心理学にジ ー と申しますが ， この単語にも両義性があり，来ないかということで心理学に移りました。

アメリカの心理学者の中でもどっちと解するべき

その後 ， アメリカで研究を続けましたが ， 日本

か， よくわからない場面も出てきます。 つまり ，に帰ってみると ， 社会心理学というのをやっていサイコロジ ー といいますと， 心理学という側面だる人は殆どいませんでした。 人間は他人のやらなけではなくて ， 心理または 「こころ」という意

い所をやった方がいいですね。 たとえ， あまり成味も入ってまいりますのでこれがしばしば混同

績が良くなくっても， 誰もやっていなければ比較されてくるわけです。 コスメトロジ ー の場合もそできないじゃないですか。 そういうことでもうれと同じことが言えますが ここでは昔の用法で亡くなりましたが， 吉井先生から阪大の生理学へはなくて ， 学問としてのコスメトロジ ー であるとというお話がございましたが， 社会心理学の方でいうことでいいと思います。 先程申し上げましずっと通しました。

た江戸時代あるいは江戸の研究には化粧学の面

今日 ， お話できるとすれば， 「社会心理学の面では充分ではないと思うんですが ， この時代の化からの化粧学」ということになりましょうか。私粧に関わる事柄がいろいろ出ております。

は 学 と名のつくことが好きなんです。 ある専

私は日本人の研究を多年やっておりますが， 日門の先生と『江戸学辞典』（弘文堂1983)という本人論というのは非常にたくさんあります。 皆さ

“

”

-164-

コスメトロジ 一 考

んの中にはお読みになった方もおられると思いま一ー

プットするもの， 即ち最初に食べさせるものが悪ス ・ ベネ

ければ， 技術的には非常に精密に処理され結果がディクトというアメリカの女性人類学者が書いた出るが， コンビュ ー タからアウトプットされるも『菊と刀』というのがございます。私は戦前からのは精密な不正確さということになるんですね。

戦後2年間続けて約8年アメリカにおりました。

それに気をつけなければいけないと思います。

すが，番早かった文献に， 戦後ル

ベネディクトは非常に優れた人類学者であります

地道に勉強している間にどこかで引っ掛かるもが ， 日本語を知らないで日本史を勉強しないでの， あるいはひらめくものがある。それを裏付け

あの本を書いたと思うのです。と言うのは このていくというのが， 学であると思います。従って，本は非常に有名になりましたが基本的には歴史化粧論と化粧学との違いの中にも， そういう「思的な配慮が足りないという部分があります。やはいつき」， 「ひらめき」の問題が出てまいります。

り ， 学問は学問の歴史を知らないと困る。この事

私はその道の専門ではありませんが， 皮膚科学とは他の分野にもあてはまります。例えば， 皆さん

か医学の面でなさっている皆さんの研究は ， 単なの中には物理学を勉強なさった方もおられると思る思いつきではなく， 当然「ひらめき」とその実いますが， 物理学者は今でもニュびます。ニュ

ーー

トンカ学を学証ということになる訳です。

トンの業績を古典として読む。古

典として読むという意味は何かについて考える必

私は化粧史に関心があります。中でも特に興味があるのは風俗としての化粧であります。

要があります。ニュ ー トンはあの時代に， 学問の

従来の歴史というものは政治の歴史であれ，発達しつつある当時のレベルの中で， 新しい考え

経済の歴史であれ， 支配者側のそれです。この流方を出してきた。今日ではもはや理論としては古れの中で心理学は昔の英雄豪傑とか， 今なら独裁い。成果としては古いんですが， 方法論として ，者ヒットラ ー の心理分析などという分野ではかな

ニュ ー トンの発想であるとか論理というものは今

り良い業績を上げています。アメリカにおりまし

日でも生きている。それが古典というものです。

た当時 ベネディクトの書いた下書きの原稿のよコスメトロジ ー は本当に新しい学問であり， 私はうなものを見せてもらいました。アメリカは初め

やっばり研究する以上は化粧論ではなく， 化粧学

から勝つ気でおりますから当然ですが ， 日本の占領政策のいわば参考資料として書いたものである

でなければならないと思います。
論と学の違いはどこにあるかと申しますと， 論というのは思いつきでもできる。思いつきでも書ことが明らかで， そこにもやはり支配者側の論理が優先されています。
特に私は社会心理学をやっておりますので， 気けるのが論なんです。「日本人論」というのは沢山ございます。皆さんご承知と思いますが， 中根が付くのですが ， 独裁者の側ではなくて支配され千枝さんの「タテ社会」とか， 土居さんの「甘える側の人たちの歴史というものがもっと大事ではの構造」とかいうものがありますが， それは非常ないかと思います。支配者， 独裁者が書いたものに思いつきはいいんですが ， 裏付けというと「うとか演説などはいろいろあります。第二次世界大～ん」ということなんです。中根さんとか土居さ戦を例にして， 話を敷術します。アメリカは表現んのような， 同業学者のことをあまり言ってはいの自由の国です。特にル ー ズベルトの時代は最大

けないんですが， 私は反省上言っているのであえの自由を保障しておりました。例えばヒットラ ーて言いますが， やっばり違うのではないか。つまの演説とか ， ナチスの宣伝大臣であったゲッベル

り， 思いつきはいいんですけれども， 前提が間ス と い う 人 の 演 説 な ど は ， 全 部 ， 次の 日 の違っている。前提が間違っていると， 全部終りま『ニュ ー ヨ ークタイムス』の第 一面を潰してつぶで間違っている。 コンビュ ー タと同じで ， インさに報道されます。また今年も， 段々近づいてま-165-いりましたが，

パー ル ハ ー バ ー の時もそうでした。

に何を考えているかというのは本当は問題でありアメリカは甚大な損害を受けた直後いわば自己反ます。ヒットラ ー が成功したのは何といってもユ省をしであの時司令官達はどこにいたか等を

ダヤ人の排斥という民衆意識があって， そうでな

深く追及し報道しました。実は ， 現場に司令官達

い人達がいれば ， ユダヤ人を憎むようにしむけてはいなかったんです。あれは確かにウィ ー

クエン

いったということにあったわけです。

ドでした。それで ， 油断したからこういうことに第二次大戦前， ナチス台頭の時代に，ドイツ国なったわけで， 司令官はすぐに辞めさせられたこ

民は何を考えていたかということの研究が殆どなとになっているんです。そのころ私はアメリカへされていなかった事実は明らかです。 ソビエト戦行ってから1年以上経っておりまして， 友達もた

争で負け始めたその頃から，くさんできていました。今はそんなことはないとヒットラ ー はどうするだろうかというようなこと思いますが， 経験によるとアメリカには意外に地が アメリカの心理学者達の研究テ ー マでありま

理音痴の人が多いんですよ。大学生とかもみんなした。これには三通りのケ ー スが考えられていた僕らが行くと「おいおい，

わけです。

ハ

ワイというのはどこ

ドイツが敗戦したらの国なんだい。 ハ ワイという国はどこにあるん

1つは ， ヒットラ ー は捕虜になるだろうというだ」と， 本気でそう聞くんです。まあ ， これはこと。もう1つは， 逃亡か亡命をするだろう。そちょっと笑い話としまして， やっばりアメリカはして3つ目は， ヒットラ ー は自殺をするだろう。

世界 一の大国であると意識してますね。中国でいこの3つの可能性があったんですね。もう今は結うような中華思想ですね。世界の中心であるとい果が出てしまったので意味がありませんが， これう考えがありますから， 地理が駄目 ， 外国語が駄はクイズとしては非常に面白い課題です（最もク

目 ， になってしまうわけです。私が見たベネディイズとするには余りにも深刻ではあります）。結

クトの原稿やその他いろいろなものの中にも，

局 ヒットラ ー は自殺するだろうという結論は見

やっばり見当違いがあったんですね。例えば， 日事に当った。しかし， その場合に， やはり， ヒッ

本軍の司令官とか軍隊などについては それはもトラ ー 個人のパー ソナリティということだけではう非常に詳しく調べていたんですが， 肝心の日本

なくて，

一

ドイツ国民がヒットラ ー を本当に支持し般の民衆が ， 戦争の時に何を考えていているのかどうかということが分析されたからこるのかについては ， 検討不足でした。上陸して日

そ， こういう結果が出たわけです。例えば ， ヒッ

本を占領した場合に， 日本人は子供まで抵抗する

トラ ー が亡命しようとしても， ヒットラ ー を秘かだろうとか ， そういう考え方がアメリカの中にかに助けようとする人があり得るかどうか あるいなりあったんです。

は捕虜になるかも知れないという時に，の国民

この考え方はやはり， アメリカ人が近代史の資

民衆がヒットラー

ドイツのを支持して抵抗運動をするかど料を集め ， 日本の当時の思想支配者についてはうかというようなことを消去法で考えていくと，良く調べたけれども， 民衆一般の人達がどういうやはりヒットラ ー は自殺するしかなかったわけで考え方かということはあまり研究していなかったす。

ことに起因しています。

私は， 日本の歴史家の先生方も沢山知っており

私が社会心理という名目で前からやっているのますが， 民衆の歴史というのをやっている人は非は何かといいますと,. 従来の歴史には残されな常に少ないですね。私自身は， 民衆は演説をしなかったものの研究です。一般の人達が書いたもの

いし書いたものも残さないが， 世の中には何か間は残らない。それから， 大勢の人の前で演説をし接的な形で民衆の思想， 考え方を反映するものがたりしない。しかし，

一般民衆がその当時 ， 実際

あるに違いないと考えました。そこで， 戦後， す-166-コスメトロジ 一 考

ぐに私が始めたのは， 大衆文化の研究です。大衆

ゆらぐ性』ネスコ刊 ， 文藝春秋発売1991)。私の文化の中に日本人の生活心理が反映されているに悪い癖ですが， 本を書いてもなかなか自分の本を違いないということで ， まず流行歌を対象としま

読まないんです。映画監督でも二通りあって， 自した。調べて見ると， 日本では他の国と非常に違分の作った作品を何回も劇場に行って見て ， 喜んい， 殆ど全部といっていい程悲しい歌が多いんでだり悲しんだりする人と， 絶対二度と見ない ， とすね。単語を拾ってみますと ，番多いのは「別一ても見ていられないという人があるわけです。私れ」と「涙」です。それから， あきらめ， 運命 ，の読まないというはの自信のなさを示すものでもさだめ。場所でいうと高原駅です。

あるんです。「よくまあ， こういうことを書いてそうすると， やっばり日本人の中には幸福であ本にした」， 「皆さんにただで配るならいいけれるということに対する恐怖心があることが解明さども， 読者にお金を出させるのは申し訳ない」とれてきます。私は仮に幸福危険度といっているん

いうこともあるんでなかなか読む気にならないですが， そういうものがある。いまこの話はいたんです。しかし， 今日 ， こうやって皆さんの前でしませんがこの様な方法論で， 民衆の心理を解お話をするということになりましたので， 私の『化粧学』との中で ， 二， 三， 気の付いたことを明できます。
考えてみますと ， 私は民衆の思想の反映である

お話することにいたします。

という観点で ， 自分の専門としての社会心理学の1つは何かといいますと， すでに研究された方立場から化粧というものを追求しているわけです。

もおられると思いますので教えていただきたいん

つまり， その国の大部分の人達が一斉にある行動ですが日本人の化粧にも， 化粧の地域差というをとろうとする。あるいはそういう行動をとろう

ものがあるかどうかということです。 『江戸学辞とする傾向がみられるということが民衆の心理典』にも書かれていますが優れた文物の生じるであります。ですから私の言っている日本人学はところはご承知のように江戸時代の中期位まではやはり民衆心理の研究から始まります。風俗ある

圧倒的に上方ですね。関西です。関西から関東にいは流行という面から考えますと， 一番目につき化粧というものは流れてきた。関西の人に言わせやすく分析しやすいlつは化粧 あとは， 日本でればそれは江戸の方に下って行ったということには服装を主体とするファッションですね。

なるわけです。

ファッションという言葉は， もともとは物を作

江戸の市民というのは ， 関西即ち大阪京都るという意味があったんですが， これについてはの人達に対して， 心理学的言葉を使えば意識ある『装苑』（『装苑アイ』No.5, 1991,

いは無意識の内に劣等感を持っていた， と考えら

pp.1922)という雑誌の中にミニスカ ー トの流行れます。上方から江戸に来たもの， これは化粧品というようなことを書きました。

に限りません。服飾なども上方から江戸という，

ごく最近も ，

化粧についても化粧学というような名前で私がつまり低い所に下って来た。下り物といってます

一応問題の提起を致しましたので ， 社会心理学のが， この下り物は絶対に良い。江戸の市民の作る立場で今後も皆さんにいろいろ教えていただいてものよりも良い。「おしろい」， これは当然下り

勉強を続けていくつもりでおりますが， それには物ですね。「べに」も下り物です。それで下り

どうしても， いわゆる比較文化ということが必要

物は良いものだ。下り物でないもの ， これは "<になります。日本人の心理と言いましても， 例え

だらないば， アメリカ人とかヨー＂ものです。くだらないという言葉の語

ロッパ人とどこか違うか

源はここにあるんですね。これはギャグではなくというようなことが問題になるわけであります。

て本当にそうなんです。中期以後になりますとそ

私は『化粧学』という本を書きました（『化粧とれが変ってきて ， 江戸にとって特に大阪はいわば-167-

ライバルになりまして大阪に対して対抗できるれが支配的であったと思われます。

江戸のものができないかということになってきま

皆さんご存知の方が多いと思いますけれども，した。それまでは， 大阪に限らずいわゆる上方か

武士道の解説， あるいは武士道の教訓用のテキス

ら江戸店（ダナ）といって江戸に支店を出したんでトに『葉隠れ』というのがあります。これに「武す。中期以後になりますと ， 江戸の独自性が現わ

士は化粧しなければならない」と読める下りがあれてきます。江戸の文学にはいろいろなものがごります。化粧とはっきり書いてあるわけではあり

ざいますが， その中に化粧に関することが語られませんが， 例えば病気あがりで顔色も悪いのに，ています。それによれば， 上方の女性は厚化粧でそのまま殿様の前に出るのは失礼である。従って，す。この厚化粧という意味は， 今の言葉でいうと頬紅をつけて良い顔色でお目通りしなければいけ

趣味が良くないに当たります。江戸の女性は薄化ないということが書いてあるんです。

粧 ， 今の言葉で言えばすっきりしているというわけですね。

また， 武士同士の間で命の取り合いをやるようなことがございます。武士は死に際が大事であっでは， 何故そうなったのか。学問の面から見れて， 死んでから ， 着ていた物顔などのいろいろ

ば ， そういう伝承とか事実があったということだな所から武士の身だしなみが評価されます。できけでは単に記述に過ぎない。問題は， 何故上方はるだけ清潔で， ちゃんとした服装で死ななければ厚化粧で江戸は薄化粧なのかという点です。これいけないわけです。
戦争中は（故意かどうか）， その意味を間違えらを考えてみますと3つの視点があります。
1つは歌舞伎の世界の影響です。これはもう上れまして， 「武士道とは ， 死ぬことと見つけた方です。今の江戸歌舞伎は上方から江戸に来たもり」ということだけが有名になってしまいました。

のです。最近 ， 襲名した雁治郎なども， 初代は上あれを書いたのは山本という人ですね。この人が方の名優です。上方の女性は歌舞伎役者の扮装と言っているのはそういうことよりも「身だしなか服装あるいは模様というものを取り入れる。

み」ということでいつ殺されても死体になってご承知の市松模様というのは， 市松という歌舞伎

みっともないのは困ることを強調しています。こ役者の袴の模様からきたものですね。女性の服装

れらの点から見て， 武張った男性の世界でむしろというものは非常に歌舞伎の女形の影響を受けて化粧の作法が非常にやかましく言われていたんでいます。歌舞伎の役者は舞台のための厚化粧をしすね。これが第2点です。

ます。女形は男性ですから， 普段 ， 白粉はつけて

第3点 これは中期以後ですが ，いない。できるだけ厚化粧した方が男らしさが消言葉が出てくるようになったことであります。私える。それを真似たということが1点です。

の京大時代の恩師である， 九鬼周造先生が『粋の江戸という都会は武士の世界です。2番目にこ「粋」という構造』という本を書いておられます。お読みになの影響が大きい。江戸は町人の世界と言われておられた方も多いと思いますが この中で先生は粋

りますが， それは中期以後幕末に近づく時代にということを「さっぱりしている」， 「淡白であついて言えることであって， それまでは江戸はやる」， 「あまり目立たない。目立たないけれどもはり今の言葉でいえば軍事的な意味を持っていた。

エレガントである」というふうに言っておられま

そして， 町民と武士の間に一応， 対立のようなもす。そういう意味で薄化粧の方が良いということのがあったわけですけれども， 基本的にはやはりであります。

武家の支配する都市であった。流行というものは

しかしこれに対しての反論もあって， やはり女上から下に流れるものと， 下から上に流れるもの

性の化粧というのは定められた法律であるというがございます。当時の江戸では武家から町民の流ような表現を使っている本もあります。女性の身-168-コスメトロジ 一 考

だしなみというものは男性に快い感じを与える必

前で顔を直すということに対して非難されなく要があるというわけです。特に身内ですね。夫でなったのは比較的近代です。
1920年頃になりますと， コンパクトを出して人あるとか ， 舅であるとか， 家族内の男性に対していつもきれいにお化粧をしていなくてはならない。

の前でお化粧を直しても非難されなくなりました。

それには厚化粧よりも薄化粧の方が清潔な感じを

それ以前は女性が行う最も失礼な行為は， 人の前与えるということです。その意味では， 服飾の歴で顔を直すということだったんです。

史をご覧になって気がつくと思いますが， 江戸期

そうしますと， 化粧を直す， 顔を直すというこ

では武士の方が奥方よりも服装に気を使っていまとを言いかえれば対人関係の中で何故お化粧をす。今でも歌舞伎をご覧になればわかると思いますることを遠慮しなければいけないかが， 考察のす。いずれにしろ薄化粧と厚化粧の問題は， 論議対象になります。これがまだ私にはわからないんが尽きているとは思いません。もっと研究されなです。イギリスで書かれたものを見ると， メイクければならないわけで， 関東と関西の違いというアップについていろいろな保守的意見が出されたことを1つ問題としてこれからもっと勉強していのは1920年代ですね。ご承知のようにメイクアッ

きたいと思います。

プという言葉が日本に入ってきたのは， 大体，

今話した三つの視点とは別に検討すべき事柄がたくさんあります。例えば， 上方でも西鶴のよう1920年代の頭でありまして， いわゆるモダニズム時代を代表する言葉の一つです。

な人になると非常に醒めたものがありますから，

これに関連して滑稽な話があります。1930年頃

西鶴の作品を見ると， 顔の白い人でもその上にま

昭和の初めですが， アメリカに「キッスアンドメ

た白くしようとして， お化粧をするのはおかしい，

イクアップ」という映画があったんです。ご覧にということを言っております。

なりましたか？

江戸の方では1つ ， 吉原という所に関連して「化粧」が語られています。吉原は江戸の幕府が日本版のタイトルが「接吻とお“化粧」というんです。実は キッスアンドメイク
アップ”というのは命令形なんです。 “メイク”作った極めて政策的なものであって， 町人の不満

アップ というのは顔のメイクアップというのでなどを発散させる場所です。これは悪い場所であはなくて， 仲直りという意味なんです。原語に即るとされ ， 従って， これは初めから悪所と呼ばれしていえば「接吻して仲直りしなさい」というタました。悪場所ですので侍が個人的にそこに行く

イトルなんです。それを両方とも名詞を取ったの一場合は， 大小を預けて 般として行ったわけです

でそういう訳になったんですね。メイクアップとが その時にそこの遊女は位が高くなればなるほいう言葉をお化粧ということで使い始めたのは ，

ど薄化粧であり， いわゆる“＂すっぴん でもかま大体， その頃なんですね。

わない。段々ランクが下がってくると厚化粧してさて， 特に日本の場合， 女性がお化粧をした時もかまわないというようなことが書かれておりまには， 笑っちゃいけないというような話があるんす。

です。ここでは皆さん平気で笑っておられますが春山先生の本などもございますので， お読みにね。私の母は明冶生まれの人間ですが， 戦後に総なっておられる方もいらっしゃいましょうが， 皆理大臣になった人の奥様と親しくしていました。

さんの中には西洋の化粧の歴史についても研究さ有名な美人ですが， その奥様が笑ったのを誰も見キャップ

たことがないというんですね。1 回笑うとそれだ

れている方もおられると思います。メー

行為の社会的容認に関する問題は ， 私自身の研究

けシワが増えるというので笑わない。ついに誰も課題なので， この点について皆様方の研究成果な

その奥様の笑顔を見たことがなかったという有名

りお考えを教えていただきたいと思います。人のな話があるんですね。

-169-

私が戦後日本に帰って来て一番目についたのとか いろいろ申しますけれども， 政治， 経済には． 日本の女性には表情が無いということです。

あっては当然ですけれども， 日本人の場合， やっ

表情が無くて， お面を． マスクをかぶっているよ

ばり表情一つで誤解や摩擦の基になるということうだと感じました。まだ， ほとんどの女性がお化もありますね。ですから， 私はコスメトロジ ー の粧をしていませんでしたね。もちろん． 戦後2年

ような学問の場合には， どうしたら西洋人にもす位ですから． まだお化粧どころではなかったといぐわかるような表情を出せるかや， そういう表情

う方も多かったのでしょう。それはそれとして．

を演出できる化粧は何かの研究を含むべきだと思

お化粧しないためになおさら顔の表情が無いといいますね。この点の解明が進めば， ずいぶんと感

うこともあるんですね。当時化粧をしなかった

情面での摩擦が減るに違いない。化粧の国際化とのは日本人は自分自身のことよりも周りの人とか ，いうことを考えていく必要があるゆえんです。

つまり世間体とか ， 世間の目ということを意識す

ソビエトにおける社会の動きと風俗としてのコ
スメティックとの関連に関心を持っています。新

るためでしょうか。
そう言えば中国の考え方に． 人間は喜怒哀楽聞でご覧になった方もあると思いますが最近にを表わしてはいけない， 感情を表現しないというなってモスクワに非常に高級な美容院ができましことがあるんですね。そういう影響もあったと思た。そこにお客として来ている女のお医者さんのいますが， 当時の日本人はなるべく顔に表情を出写真が新聞に出ました。非常に収入がある方です

さないようにしていたし ， 表情を出す場合は建前とそういうところに行ける。そうすると， その美の表情で済ませ ， 本音は出さない部分がありまし

容院の外に人垣ができます。集まった人々が「あた。アメリカとはずいぶん違います。アメリカのの人はおカネがあるからできるけれど， 私達はお政党は共和党と民主党がありますね。どちらの党

化粧どころじゃない。食べるものにも不自由なのの政治家も懸案事項に対する態度表明が非常にでお化粧どころではない。」と言っていたことがすっきりしています。アメリカがドイツと戦いは記事になっておりました。中国はソビエトほど ，じめました時の話です。開戦と同時に戦争反対のそういうところは厳しくはないですね。収入にか

政治家達は追党ということになって， 良かった，

かわらずかなり急速に美容に対する関心が若い人良かったというわけです。南部にいる学生などはの間に広がっております。北京とか， 主な都会で今は少なくなりましたけれとも． アメリカの歴史

は美容のセンタ ー が段々できてくるようになった。

の中で 一 番良かったのはリンカ ー ンが殺されたこ

国際比較をやってみますと ， 化粧と社会体制ととだと本気でそう思っているんです。そして， その関係が非常にはっきりとわかるんです。例えば，

れをおおっぴらに表現します。

中国の場合， 文化大革命があった時には， 誰もおアメリカ人の僕の友達が日本で国会中継のテレ

化粧をしていない。文化大革命直後に私は中国にビを見ていて「笑っているのはおかしい。 白熱しまいりまして， 直接その様子を見ました。その後た議論 ， 対立した意見が出ているのに。」とすぐも何度か中国に行ってますがお化粧の中で最後言いましたね。それから何かの議論で答弁できなまで採用されないのはマニキュアですね。フェイ

くなった政治家が何となく笑う点もおかしいとシャルの方は普及しています。外人相手のお店に言っていますね。あれは私の解釈では笑いの先取

行きますと ， 2年位前からやっとお化粧の売り場

りで． 人に笑われる前に自分が笑ってしまうと他にいる女性の店員の人がマニキュアをしているよ一人にとって笑いがいが無くなる 種の先制攻撃でうになった。日本に来ている中国の女性でも， ほあるということなんです。全くの無表情や， あるんの一部の人ですがマニキュアをしている。

いは本音と違う， つまり， 建前の表情は国際摩擦-170-

マニキュアは何故最後に残るのかということはコスメトロジ 一 考

1 つの課題です。 女性の場合特にそうだと思いま

は体制再構築を目論む側の仕かけでお化粧というすが， マニキュアをしている人はあまり手を使わものを何か直接セクシャルなものと結びつけて，ないですね。 つまりは労働意識． 働く意識という性的なものと結びつけでお化粧することイコ ー

もの， 勤労意欲， そういうことの関係で出て来た

ル道徳的退廃というような考えがまたよみがえっのではないかというふうに私は思います。 ペディて来る可能性があるのではないかとも思います。

キュアもそうですね。 東と西のベルリンの壁が破

私は中国の人民大学というところで， 毎年講義れましたね。 あの時にちょうど現場にいた日本のをすることになっているんですが， 今後 ， 化粧心

人が言っているんですが， 壁が壊れてド一が西側に入りますね。 男性がーっと人

理学の面でも中国の状況を研究したいと思います。

番先に駆けつける

個人の化粧と対人的な化粧の関係， 私は日本人なのは西のストリップ劇場なんだそうです。 政治がので ， やっばりそれが大きな課題関心事になっ

どうこういうよりは， とにかくストリップ劇場のているわけです。

方が大事かどうかわかりませんが， そういうこと最初の30分程は直接お化粧とは関係のないことがあったそうです。 東側の男性は， 解放のシンボを話しましたが少しはお役に立ったのではない

ルとして性を享楽するストリップを通して体制のか， ということでご勘弁願いたいと思います。
ちょうど時間になりましたので， この辺で終り

崩壊自由の到来を実感したと言えなくもありま
せん。 そうすると将来． 社会状況の変化によってます。 どうもありがとうございました。

-171-

コスメトロジ ー 研究振興財団
第3回表彰・贈呈式記念講演

化粧科学への人間工学的アプロ ー チ
吉

田

倫 幸

通産省工業技術院 製品科学研究所（新 生命工学工業技術研究所）

場所
日時

薬学会館長井記念館
平成4年11月

ただ今ご紹介に預かりました吉田です。

起伏を持っていますので， まさにこの両面で揺れ

通産省工業技術院の製品科学研究所で， 主に感動きながら感情の研究を進めています。話は一般

情の研究をしております。今日はコスメトロジ 一

的になりますが ， 「ゆらぎ」は心の活動にとって研究振興財団の第3回表彰・贈呈式に当たり， 記

本質的であり， この辺りが私の脳波のゆらぎ研究

念講演を仰せつかりまして大変名誉なことと感じの出発点であるとも言えます。

ております。関係各方面の方々に厚く御礼申し上

化粧について色々考える機会が増えました。小さげます。
「化粧科学への人間工学的アプロ ー

私は素人ではありますが最近化粧品あるいはチ」についい頃には「化粧した女性はなにかやだな」というて少しお話します。私自身は化粧に関してはずぶ

化粧拒否の感覚がありました。この年になりますの素人ですが， 化粧を通して如何して我々の心のと多少変わりまして， 近頃では， ある時はけばけ

内面を引き出すかということについて人間工学的ばしいほどの化粧が良いとか， 他の時は清楚な化に考えてみたいと思います。

粧がいいとか感じるようになり， 何れにしても化

このような壇上に立って非常に緊張しています粧に対しては肯定的になりつつあります。

ので， 本題に入ります前に， まずは日頃慣れ親しご覧のように私の眉毛は薄い方です。実はこのんでいます自分の名前についてお話します。そう

間家内のアイプロ ー を借りて試しに描き足してすることで自分自身の心をリラックスさせたいとみました。なかなか気持ちのいいものです。「目思います。

がはっきりしてきたぞ」などと感じました。 「化私は自分の研究についてお話しする時に， 自分

粧をするということが我々の内面の何かを引き出の名前に使われている字を紹介します。倫「としている。それが活力となって生活に潤いをもたも」と幸「ゆき」の字です。これ（倫幸）はなかならす。」と最近感じてきたわけであります。

かそのように（ともゆき）読んで頂けません。残念

南博先生はある雑誌でコスメトロジ ー の体系をですが ， 「みちゆき」とか「のりゆき」とかと読

美容自然科学， 美容人間科学， 美容社会科学に大まれます。

別され， さらにそれぞれを細分化して考察されてそれはおくとして， 自分の名前は倫理の「倫Jいます。私はこの体系にそって言えば感清生理と幸福の「幸」であると説明します。状況によっ工学と言うべき分野を提唱してきました。

ては不倫の「倫」， 不幸の「幸」であるかもしれ

感情は言わば心の中の隠れた内面であり なかません。考えてみますと， 我々の心は「倫理的でなか表面に現れにくいこともあります。本人が言幸福である」場合もあれば， その逆の側面を見せ

葉で「良い」といっても， 内なる感情は逆に「いる時もあるわけです。私自身とて人並みに感情のやだ」といっている場合もあります。本当の感情-172-

化粧科学への人間工学的アプロ ー チ

を知るには ， この内なる感情を少しでも客観的なあろうと考えているわけです。
このスライドは立体的な楕円になっています。

手法で取り出すことが望まれます。
先程私は感情生理工学に触れましたが感情生先程説明したスライドはこの立体の一部分に当た理工学アプロ ー チとは「感情や随伴する生理的変ります。すなわち快適性の領域は色々な覚醒水準

化からそれを引き起こす剌激あるいは空間を評価

で存在し ， その程度かこの立体で示されるわけでする手続きである」 と定義して研究を進めておりす。例えば ， 眠りに入る状態を考えてみます。眠ます。 「我々が化粧をする時どんなところに注りに入る状態では， 感情の部分 ， いわゆる「意目するのか？」， この間の事情を私なりに考えて，識」はずっと減って， いずれ無くなってしまいま

それらを旨く引き出すやり方を提案してみたいとす。全体として言えば ， このような紡錘体で， 先思います。

程の評価の領域を示すことができるというのが私

まず， 感情を説明する次元について考えみたいの感情に関するモデルです。

と思います。このスライドは1950年代にシュルス

話を変えます。先程自分の名前を引き合いに

バ ー グが提案したモデルです。軸の要素には色々出して， 意識の二重性に触れました。我々には，なモデルが考えられます。例えば， 快 ー 不快の軸

現実の認識と， こうありたいと思う意識が必ず存―やこの図のように注意 拒否の軸などです。彼は在すると心理学上考えられています。

これらの軸で作られた空間に顔写真の表情（感情）

3種の パ タ ー ンを スライドに示しました。 パを数値的にプロットすることができると言っていタ ー ン1のように， 現実に今存在する自己と理想ます。

としてこうありたいと思う自己が余りにもかけ離私は自分の研究を通して， 2つの軸 ， ひとつはれている時には現実の自己を理想の自己に近づ

快ー不快の軸と， もうひとつは覚醒度， すなわち，けるのは難しいものです。一方 ，興奮 一 鎮静の軸を用いて， 図のような形で快適性

うに 現実的な自己と理想とする自己がクロスしを包括的に表すことができるのではないかと考えている時や ， 両者間の距離が短い時理想自己にています。楕円の上の部分が， 快でポジィティプ

向かって現実的自己を近づけていこうとするモチな領域下がネガティプな領域です。快適と目さ

ベ ー ション（動機づけ）が沸いてくるわけです。パ

れる領域には ， ある程度リラックスして鎮静して

タ ー ン3では現実自己と理想自己が一 致していて，

パ タ ー ン2のよいる状態多少覚醒度が高くて気分の良い状態

改善・進歩の余地はありません。従って， 新しい

興奮領域のある部分が含まれるであろうと考えて

創造， クリエ ー ティプな意識は パ タ ー ン2の状態います。

で生まれるのではないかと思います。
化粧は ， ちょうどこの状態を作り出すのに最適

赤い部分は快適というよりはワクワク， 快感，
興奮などの状態に当たります。快ー

不快の軸で見であろうと考えられます。
人の顔の写真を用いて行った実験を紹介します。

ると， この状態が昂じると快感そのものは次第に低下しで最終的には興奮のみの状態になります。

生（現存する人）の資料で説明するとよいのですが ，この図で言えば楕円のこの部分が多少へこんだ

当人に失礼になるのでは， と思い， 急きょイラス

形になります。

トにして示すことにしました。まず ， 被験者の次に不快と称されるこの部分は， イライラとか，色々な表情を写真に撮ります。その時の髪型輪

怒りとか， 気分が悪いとかの領域ですが， 興奮が郭眉毛等の要素を微妙に変化させて本人に見せ高まればその判断も薄らいできます。また鎮静状ます。本人の判断から本人が一番好ましいと思う態の場合は不快感は急速に低下してきます。人容貌を捜す実験です。この方法で， 先程説明したは通常この点線で示す領域に落ち着いているので意識上での ， 現実自己と理想自己の関係を調べる-173-

ことができるのではないかと考えました。

の部分の色を答えるのですか？」と確認を求めま

肌の色をほんの少しずつ変えるだけで同じ表情した。 どうも下の部分の灰色が気になるようです。
何れにしても車の場合， どのボディ 一 色でも心理でも受けとられる感じが違います。
輪郭を縮めたり． 広げたりしても． このように的には許せるという結果です。

違ってきます。

次はパンの事例です。

色々な組み合わせの顔をたくさん造り， 本人にスライドを5-6枚流します。 パンは色によって見せて． 「好みに合う」とか． 「これはいやだ」

はまずくておいしそうではありません。 「食べてと繰り返し判断してもらいます。 言い換えれば，もいいな」と思う色と， 「これはちょっと」と思

普段なかなか本人の意識に上らない領域のものまう色がありました。 車の事例と比較しても色にで画面上に見せることで同時に本人の学習を促し

よって受ける印象が大変違います。 もっとも， あ

ー

ラルネット

る被験者にとってはおなかがすいている時は何でと呼ばれる方法です。 色々な要素を組み合わせたもおいしく見えるという結果でもあります。 どうていきます。 これは今流行りのニュ

表情をM個の情報量とし． 本人の好みを最終アウいう状態の時観察したのかということも重要であ

トプットとします。 この時各要素について強弱るわけです。

の段階をつけて提示して， 繰り返し学習判断させ次はバ ナナの例です。

ます。 そうしますと． この図に示す「内部表現」

黄色や熟し切っていないと見ることのできる緑なるものが浮かび上がってきます。 私はこれを当色の バナナは食べられそうですが， その他の色に

人の心の中の顔であると捉えます。 学習とは ，なりますと「えっ」という感じです。

の以上が人工物から自然物までを対象として形態

答えから， その人の心の中の顔を逆推定できるよを保持しながら色を変えた時， 我々がどのような個々の情報（容貌）を教師として， イエス ， ノ
うに ， 要素にウェーー

トをかけていく過程を言いま応答をするかを調べた心理的な実験です。

す。 この方法で理想の顔を作っていくことができます。

次にこうした色違いの剌激に対して脳はどのように反応しているのか示します。 刺激に対する脳

それとそれ以外のの応答は頭の各部位から脳波として取り出すこと顔を提示した際の心理的 ， 生理的反応を比較検討ができます。 この例では15の部位から取っていますることができます。 ここで， 顔とは離れますが，す。 後ろの方（後頭部）と前の方（前頭部）で脳波の普段目に触れるありふれた品物を検討した事例をパタ ー ンが違います。 これは電位分布を頭皮上地

紹介します。 3種類の品物の色彩を変化させた実図で表したものです。

理想とする顔が確定すれば，

これは車のボディ 一 色に対するある被験者の応験です。
まず ． まるっきり人工物である車の「ボディ ー色」の例です。 次は食パンの色についてです。 こ答です。 刺激を受けてから260m sec 経った時点

での脳表面電位分布図です。 右の後頭部， 頭頂のれは人工物ではあるがある種の自然性を持って連合野に応答が出ています。 この部分は形とか ，いるものの例です。 もうひとつはバナナを対象とイメ ー ジに関わり深いところです。 また， 色にします。 バナナは植物であり自然そのものです。

よってパタ ー ンが異なります。 この被験者では赤 ，車の事例についてスライドをさっと流します。

黒黄色に対する反応が非常に大きいですね。

今お見せした車の色はどの色をとっても私にはパンの例です。 車の場合電位の高い部位が右差程違和感がありません。 皆様もそう感じたの

後頭部の方に限局されていましたが， この場合ではないかと思います。 余談ですが ， 「何色でし左半球側にも赤い部分， すなわち電位の高い部位たか？」の質問に対して． かなりの人が「車のどが認められます。紫色の場合， 黒と同様に， 右の- 174-

化粧科学への人間工学的アプロ ー チ

前頭部の部分の電位がぐっと下がっています。

ることで初めてその対応関係をつかむことができ

これはバナナの例です。前2例に比べてこの脳ます。

波パタ ー ンは色によってかなり劇的に変わっていまず， 心理的な評価に際し， 我々は気分のよします。右頭頂から左前頭部にかけて変化がありま

あし， 意識の高低に代表される項目でスケ ー リンす。

グします。この図では目盛りが ー 100から+100に以上のことから， 同じ被験者であっても対象物なっています。

によって応答が違うこと および色によって応答
パター ンに明らかな差が認められます。私は，

顔ある人が剌激を受けた時0から+100あるいは0から ー 100の目盛りを設定した場合どのくらいを対象物としてこの手法を適用することができるの量として感じたかを主観で評価してもらいます。

と考えています。

例えば実験前の安静時と実験中の心理状態をこの

先程触れましたように，

まず「ニュ ー

ロ」で学方法でチェックします。この例ではその差を剌激

習を繰り返しながら理想的な顔を作ります。次にによる心理的な変化として捉え生理的変化と対応

その顔をベ ー スに肌の色等の要素を変化させて心づけています。

理的 ， 生理的に調査検討することができます。

次に生理計測ですが ， 我々のところでは最近 ，最初の段階で， 化粧に着目する我々はこの手法

生理的変化を実時間で観察できる装置を開発しま

で次の2点を明らかにすべきであると思います。

した。得られた生理デ ー タを用いて， 心理スケ ー

ひとつには， 社会的あるいは常識的に許容できるルで評価した気分とか意識を詳細に検定評定すぎりぎりの線での理想的な顔を捜すことです。もることもやっています。

うひとつには理想的な自己かどうかは別として，

専門的になってしまいますが． 脳波測定につい社会的な限界を取り払って， その人がどんな風にて簡単にお話します。先程触れましたように ， た

なってみたいのかということです。そしてこの二くさんの電極を頭につけます。通常は， 電極と電つの間の関係を探ることでその人が本来持ってい気的処理装置を電線で結びますので実験中被験者

る心の内の優れて感性的な部分を正確に引き出すの動作が拘束されることがあります。最近では，ことができるであろうと思います。その上でそ拘束をさけるためにテレメ ー タ ー を採用し， 反応の結果を生理的な手法で確認することもできるのを電波で飛ばすことで無線化しています。これにではないかと考えています。なお， 車， 食パン，

より被験者に負担をかけず実験がスム ー スに行え

バナナに関するデ ー タはつい最近収集したものでるようになりました。
ご存知だとは思いますが得られた脳波からa

この機会に初めて公開するものです。
多数の事例を重ねて整理した上でないと確かな

波のみをフィルタによって分離します。そしてaことは言えませんが ， 次のことが結論づけられそ波が一定電位を横切る点をパルスに置き換えます。

うです。すなわち ，「経験上， それほど変わるは

パルスの発生間隔を時間的にプロットしますとa

一

波のリズムがはっきりします。この解析法を用いずがないと判断している自然物の定限度以上の属性変化に対する応答は非常に大きい。

一方で，た我々の研究によって． 心理的に快の状態と不快

どうにでも変わり得る人工物の変化に対する応答の状態ではa波のリズムに違いが出てくることがは小さい。」ということです。

わかってきました。

我々が実験上大切にしていることがあります。
心理的反応のスケー

ルをどうするかということです。人は剌激を受けると生理的にも， 心理的にも実験では映像や匂いなどの剌激を提示して脳波を取り出すと同時に先程の心理的評価を合わせて行います。

変化します。それぞれをきちんと定量的におさえ-175-

これが生の脳波です。これがa波です。出たり消えたりしています。a波の振幅には個人によっとする説です。ここに示す脳波も 1/f ゆらぎに近て大きい ， 小さいの違いがあります。この大きさ

いスペクトルとそうでないものに分けることがでの違いは， 例えば電極のつけ方や， 被験者が太っきます。

ていたりやせていたりすることでもで変化します。
ー

そのため， フィルタ を通して安定した部分のa波の周期だけを情報として取り出します。ここの

ここは感情との関わりの深い前頭左部位です。
こちらも同じく左側の頭頂部位です。 1/f に近い

スロ ー プ（傾き）のデ ー タとそれより傾きの小さい部分の波は振幅が小さいので a 波とは認識しませデ ー タに別れます。ここに先程の30例の平均心理

んのでパ ルスを出しません。これは我々が開発し評価値を対応させました。赤い方がム ー ド（気分）たオリジナルな方法です。そうしますと刺激に対で青い方が意識の評価値です。 1/f ゆらぎに近する応答をパ ルス間隔の時系列として取り出すこいこの パ タ ー ンではム ー ドの値は高く（気分がよとができます。パ ルス周期はコンビュ ー タで自動いこと）， 意識に関する値は若干低くこの程度に的に計測します。ちょうど心臓の鼓動を測るのとなっています。一方， 傾きが低い場合気分の値

似ています。心朦のドッキンドッキンを頭のリズ

は小さく， 意識に関する値は高いという結果です。

ムに置き換えてイメー

ジして頂ければ分かりやす

このように， 我々がある剌激に応答した感覚を
a波のスペクトルで調べることができます。我々

いと思います。
これがa波のリズムを取り出して整理した図でのところではこの方法をル ー チン化していまして，す。香りを与える， ホラ ー 映画に出てくる怪奇な

色々な事象をこれで評価しています。もちろんこ場面を見せる ， あるいは自然風景を見せるなどれだけで全てが解るわけではなく， 他の生理的測

我々の五感に訴える剌激を与えた実験の結果です。

定手法を併用しながら検討しています。

図は剌激を与えた後の安静時に示すa波のリズムをスペクトルに置き換えたものです。
まず ， 370余のデー

以上簡単な事例を通しての提案であり， めりはりが利かなかったきらいはありますが ， 提案したタを取り， スペクトルの低方法で化粧行為の諸側面を感性工学的に解析する

周波数領域の傾きの大きさの順にソ ー ティングしことが可能であり， 有益であると私は考えていまます。次に高いもの30, 低いもの30をそれぞれ平す。すなわち， どのような化粧が社会的に望まれ均して図に表しています。感性を扱う世界ではしるかということや， 人がその内面で描く理想の容

ばらく前から「 1/f ゆらぎ」が色々話題になって貌を捉え ， かつ， それを生理的手法で客観的に確います。小川のせせらぎ， クラッシック音楽など

認することができるのではないかと思うわけです。

の我々が一般的に心地よく感じるであろう現象に時間になりましたので私の話をこれで終わらせ

おいて ， ゆらぎのスペクトルはf(周波数）の逆数て頂きます。ご静聴ありがとうございました。

に比例してエネルギ ー （スペクトル値）が低下する-17'6-（スライド19枚省略）

． ．

コスメトロジー研究雑感I

平成2年度助成研究課題研究者

II

平成 3 年度助成研究課題研究者

研究雑霧（平成2年度）®@®®®@®®@@®®®@®®@@®®®珍）

う分野に関わって来たが， 勿論， 染毛剤＝化粧品

®
®
®
®

ではなく ， 今後も， 化粧品の生体内動態に関する

染毛剤とコスメトロジ 一
中尾

美津男

研究を通して ， その安全性について考えて行きた
いと思っている。
本研究に対してご援助頂きましたコスメトロ
ジ ー 研究振興財団に厚くお礼申し上げます。

染毛剤は頭髪用化粧品の一つであり， 高齢化社

（食品薬品安全センタ ー ）会の進行およびヘアファッションの多様化等を背@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@

商品化されてから100年以上経つにもかかわらず

in vitro 安全性試験法の位置“

その安全性に関しては1975年 染毛剤の中に微生物に対して変異原性が認められるものがある。”

大野というエイムスらの報告以前にはあまり検討され

忠夫

＠

＠ ＠ ＠

コスメトロジ ー における景に今後その需要の増加が予想される。染毛剤がていなかった。しかし ， その報告以来今日まで数

従来 ， 化粧品の成分の毒性•安全性試験は ， ほ

多くの安全性評価に関する研究が行われて来た。

とんどが動物を使ったin vivo試験が行われてきその結果発癌性等が認められる数種の染毛剤成分た。我国でも ， 昭和62年6月に厚生省から通達がの使用が中止された。

出されている。
一

われわれも ， 染毛剤の安全性に関する研究のしかし衆知のように海外における動物実験反対

環としてその代表的な構成成分であるパラフェニ

運動は熾烈で． 動物実験を行うメ ー カ ー の製品不レンジアミンおよびニトロ パラフェニレンジアミ

買運動はもとより ， メー カ ー に対する爆弾脅迫や，ンという2種類の芳香族アミンについて“

生体内製品への毒物混入脅迫などまでが日常茶飯事化し動態 という観点から研究を行ってきた。両化合ている。英国では反対運動家からの脅迫電話一本

物とも染毛剤成分として重要な化合物であり，のために． 当該会社の株価が大幅に下落し 100億”

パ

ラフェニレンジアミンについては工業化学製品中

円単位の損害がでるという事件まで発生した。単間体としても広く使用されている化合物である。

に動物が可愛そうだからという感情論をとっくに

しかし ， 研究開始当時生体内動態に関する文献は越えた社会問題なのである。

ほとんどなかった。以来， この2種類の成分の吸このような現状を背景に, 1992年 ， EC 議会で

収生体内分布， 代謝および排泄について検討をは． 動物試験使用成分を配合した化粧品の禁止が行い全容とまではいかないまでも種々の事実が明検討された。本当に近い将来ヨ ー ロッパ各国で禁らかになった。今回， ニトロ パラフェニレンジア

止されるかは問題が残るにしても． 確固たる国際

ミンの代謝経路でアミノ基のNー アセチル化に位機関がこのような討議をすること自体， もはや動置選択性が認められることが明らかになった。以物実験に代わる安全性・毒性試験法の開発が待っ

上のように， 染毛剤を通じてコスメトロジ ー といたなしの緊急状態であることを如実に示している。

-177-

本研究は，

ヒト培養細胞を用いる利点を利用した高感度試験法を開発したもので， 動物実験代替法開発研究全体からみれば ささやかな成果の一つにすぎない。

本研究で発見された新しい複合現象はコスメトロ
ジ 一 分野においても重要な現象と考える。
さらに， 本研究では一環してベシクル粒子を実験試料に用いて各種測定を行っているが， これはしかし， 本研究成果を適用し， 目薬という化粧

今後の化粧品開発やその有用性を調べる際の実験品の隣人にあたる市販製品を検査した結果は， 研

試料としてベシクルが益々利用されて行くことを究報告書に記載したように従来の毒性試験法の暗示するものとして興味深い。 それはベシクルはパラダイムの変更をせまる程のインパクトを我々

生体膜と同じ成分のリン脂質二分子膜からなり，自身に与えた。

ベシクルとの相互作用を調べることにより， 各種

実際に ， 世にこれを問うには， 研究報告書の内機能性化学物質と生体表面との親和性， 剌激性，容は微々たるものであり ， 更なる研鑽を積んでい

有害性などの有用な知見を得ることができるから

ー研究振興財団である。 また， ベシクルは典型的な分子集合体での研究助成金は， 少なくとも本研究において真価あるため， 種々な分子を任意に混入し研究に適しを発揮したのである。 ここに記して深謝申し上げた性質の生体膜を調製することも可能である。 さる次第である。

らにベシクルは， コロイド状の膜試料であるため ，“本当に有り難うございました。”

膜との相互作用の研究にNMR, 赤外や紫外吸収

かねばならないが， コスメトロジ（理化学研究所）

熱測定， 電気泳動測定など各種の物理化学的実験®@®®®@®®®@®®®@®®®@®®®@

手段を適用することが容易であり， コスメトロ

本研究とコスメトロジ ー の
関係
古澤

邦夫

＠
＠

忽｝
®

ジ 一 領域での研究に新しい実験法の適応を可能にするものとしても注目に値する。

（筑波大学）®®®®®@®®®@®®®@®®®@®®®@

人間の皮膚などの表面を美しく修飾することがコスメトロジ ー の目的であるとすれば これは正コスメトロジ ー 観の変容を

＠

めざして

＠

春木

しく表面化学の目指すものであり， 分子や原子レ豊®
®

ベルでの表面修飾法を開発することはコスメトロ

化粧というと通常は， 美しくなりたいための行

ジ ー においても最も重要な研究課題とみなすこと為であると考える。 すなわち美容という観点からができよう。 その意味において， 細胞や血球膜なみられる。 しかし， われわれ研究室の化粧に対す

どあらゆる生体表面の基本的骨格を成すリン脂質

る輿味は， 美醜に関わらず顔面の様子， あるいは二分子膜の小胞体でなるベシクルを試料に用いて，もっと一般的に髪型や服装なども含めて， 身体のその新機能発現の原理を探索した本研究はコスメ

あり方， あるいは変容が精神にどのような影響をトロジ ー の理学的なモデル研究であり， ここで得及ぼすかの追求である。

られた新しい知見はコスメテックスの開発やそのわれわれの別の研究によると， 精神と深いつな応用においても重要な情報を提供するものと信じがりがありそうな身体の部位は上半身であることる。 特に， 脂質表面の静電的相互作用は非常に遠がわかってきている。 なかでも顔面は最も強い関達性の相互作用であり ， 表面への付着や吸着現象係がある。 そこで ， 美容とは別に顔面の変容（化に重要な影響を及ぼすであろうことを考えると，

粧）が精神状態に及ぼす影響を調べることは，身-178-

体と心との関係をさぐる絶好の課題になる。

さて． 化学的立場からステロイドを主とした基本研究Iから明らかになったように， 化粧は精礎的な研究を行っているものとしては ， 薬学や医神状態に微妙に影響を与えていることがわかった。

学分野での研究とは違って， 今行っている研究を

特に最終的なまとめとして ， 高揚感と明るさが，皮膚の生理機構や老化の問題とあからさまに結び

化粧が感情にもたらすものであると結論づけられ付けるのは難しいが， ステロイドと皮膚の生理とているが， 気分という精神の深い層に働きかけるの関係を挙げられないこともない。例えば， ビタ

力を持っているといえる。また個々には動機づけ

ミンDaの生合成には皮膚での紫外線照射が必要（例えばやる気）に対する効果も持っていることがだし ， また ， 医薬品としてのコルチゾン類の顕著明らかにされたが，これは化粧がかなり多方面にな抗炎症作用は皆の知るところである。これらは作用するということである。

いずれもコレステロ ー ル由来の代謝物である。適このような化粧の持つ力は， 本研究lIから明ら切な例ではないが， 美容師は新婦の結婚式での化

かなように， 顔面は他の身体部位の影響力とは

粧ののりから妊娠をあててしまうそうである。実違って ， かなり特異的であるように思われる。本にステロイドホルモンの変化はこんなところにま研究ではこの辺の詳しいことについては検討するで及んでいる。

までに到らなかったが動物行動学的あるいは精本研究テ ー マの胆汁酸類もやはりコレステロ ー

神分析学的意味の追究にまで深まらなければならルから生合成され ， 肝臓で代謝されるコレステないであろう。

ロ ー ルの実に80%は胆汁酸に変換されている。こ

コスメトロジ ー を単なる美容法と限定しないでの変換過程に関してより詳細な解明を試みるのが身体の変容法ととらえ， さらにそれは精神の変容

今回のテ ー マである。 CTX症をはじめとする遺法にもなるのだと認識してみるならば， 化粧は女

伝性疾患， 小児の先天性胆管異常症， 内分泌疾患性のものだけではなく， 人間一般に活用できる人

および肝胆道疾患では胆汁酸の代謝異常が認めら間のための技法であるということができる。

れる。

（早稲田大学）

皮膚の恒常性が保たれるためには， まず体全体®®@®®®®®®®@®®®@®®®@®®珍）の恒常性が維持されていることが肝要である。こステロイドと「コスメトロジ

ー

」

忽）

のようにコレステロ ー ルは代謝を受け上で述べたような種々の物質に変換されて体の恒常性を保つ®
@®

であろう。このような基礎的な研究が将来広い意

耳馴れない言葉「コスメトロジ 」に関して何

味での学問としての「コスメトロジ ー 」とどこかかひと言述べよと言われて困ってしまった。図書で結び付くことを祈っている。 （東京工業大学）

藤本

善徳
ー

のに寄与している。これらの代謝過程の異常は日常の皮膚の状態に関係していろと言えなくもない

館の奥深く潜入し百科事典や化学関係の辞典類を当たってみたが， 「コスメトロジ ー 」なる語の記されているものは皆無であった。多くの英和辞典には， 「美容術」との訳語があるが言葉の成立ちからして「術」というのはいただけない。結局のところ貴財団の案内パンフレットがコスメトロ
ジ ー 「化粧品学」の一番良い説明となっていた。

-179-@®@@@®@@@®珍喀屹う®®@@®珍略曖う＠@®®®®®®®®®®®®®®®�炎多®®®®®
本研究成果のコスメトロジ ー ＠に及ぼす影響＠®
西出 宏之®

日本女性は最近とみに美しくなったとよく聞か

本研究の目的は， 物理的かつ生化学的に極めてれます。数年前 ， 私はアメリカに1年余り滞在す

安 定 な 小 胞 体 高分子脂質リポソ ー ム を 皮 膚用る機会を得ましたが確かにそう思われることも

DDS(薬物運搬系）として展開する基礎知見を得多いようでした。その1つの 理由はほとんどのア

ることにある。

コスメトロジー雑感

珍｝

牧野 公子

@

珍）

メリカの女性は化粧をしていないこと， しかも日

リポソ ー ム（脂質小胞体：粒径0.05-0.5µ,m微本と比べ湿度が低いために皮膚のみずみずしさに

小マイクロカプセル）に用いるリン脂質誘導体の欠けるためではないかと思います。同時に， 一般

合成化学的な研究を我々は展開してきたが その女性には化粧というものの認識があまり無いので物質群の一 つに高分子脂質リポソ ー ムがある。 ビはないかと思えました。この場合皮膚の手入れス（オクタデカディエノイル）グリセロホスホコリ

を含めて化粧ですが ， 乾燥がひどいので化粧をしンを紫外光照射重合して得られる高分子脂質リポても甲斐がないのでしないのか， 化粧をしないか

ソ ー ムであり ， その特徴は次のように列挙できる。

ら皮膚が乾燥するのかは定かではありませんが，①リポソ ー ム2分子膜がリン脂質分子間の共有結

かく言う私も1年あまりのアメリカ滞在の後 ， 帰合により安定化されており， 例えば 界面活性剤に国した際には日焼けしてかさかさの肌の自分を発よっても小胞体構造は破壊されない。②生化学的ーー

見しました。アメリカのス パ マ

ー

ケットで化

にも安定で ， 例えばホスホリパ ー ゼによっても直粧水を見つけるのは大変困難でした。非常に高価

ちには加水分解されない。 ③しかも重合後脂質部

なパック剤や乳液香水はデパートで簡単に見つには不飽和結合が残るので緩慢に代謝される。 ④

かるのですが ， 田舎の大学町では日本ほど安価に

リポソ ー ム作製の常法に従って内包物質をカプセ

一ル化後 ， 光重合して安定構造に誘導できる。 ⑤小禁香胞体として物理的に強靱である。⑥相分離や小胞容易に化粧水はみつからなかったようです。 方
“

”

“

でヨ

ー

ロッパの列車に水席”がみられ， これなどは過剰な化粧の人が結

禁煙席

と並んで

体間の融合なしに， 高濃度の分散液が保持できる。

構多いことを示しているのでしょう。この意味で

すなわち特徴①～⑥に対応して次の効果が期待さは日本女性は程々に化粧をし ， 化粧先進国であるれる。

と言えるでしょう。経済摩擦がとやかく言われるCa)界面活性剤に対する強い抵抗性①に基づき，昨今一つ， 日本製の乳剤でもって， 外国との関係を滑らかなものにしてはいかがでしょうか。
さてこの度私は制コスメトロジ
からヒアルロン酸修飾リポソーー

学的安定性②により， 急速な代謝や皮膚細胞との研究振興財団ムの研究で第一安全な皮膚用DDSとして適用しうる。(b)生化回

直接相互作用を抑制しながら ， 角層～表皮～真皮への浸透が可能。Cc)③により毒性低滅が計れる。

研究助成金を頂きましたことに紙面を借りて御礼(d)④・⑤に基づき内包物質の種族（油～水溶性）

申し上げます。皮膚の保湿を目的とした化粧品のに制約がなく， また広い濃度範囲での内包が可能

一

基礎研究の 助になれば幸いに存じます。
（東京理科大学）となる。Ce)⑥に起因して， 溶液物性（レオロジ ー ）を調節可能で， クリ ー ム状の触感も検討対-180-

象となりうる。 これらの特性は乳化系はもちろんのこと， 既知のリン脂質リポソ

ー ム，ニオソ ー ム

では実現不可能であり， まさに次世代の皮膚用DDS 開発に繋がる波及効果を期待できる。
（早稲田大学）®@®®®@®®®@®®®@®®®@®®®珍）
コスメトロジ ー の観点から
＠
＠
みた本研究の展開®
佐々木 哲雄@@@®®@@®®@@®®@@®®@@®®@珍）®
コスメトロジ ー との関連
珍）
忽）
多島 新吾
＠

生物学の進歩は， いわゆる遺伝性疾患に留まらず皮膚の老化を防止することは化粧品の最大の目

各種の癌の発生にも遺伝子の異常が関与している

老化の機序の解明は医学， 生物学の最も重要な目的の一 つである。 それは人間の寿命の延長をもたらすであろうし， 老化に伴って生じる種々の疾病の病因解明にもつながるであろう。 近年の分子標と思われる。 皮膚の老化はシワの形成で代表さことを次々に明らかにしつつある。 しかしながら，れる。 現在まで皮膚のシワの発生機序， 形成機序

老化の機序は遺伝子のレベルではなお明らかにさについて不明の点が多いが， エラスチン線維の量れていない。 早期に種々の老化徴候を呈する遺伝的あるいは質的異常と関連している可能性が考え性疾患の原因を探究することは， 老化の機序を研られる。 例えばエラスチン代謝異常症（皮膚弛緩究する際の有力なアプロ ー チの一つであろう。 そ症 ， 弾力線維変性性仮性黄色腫）などではシワのの意味で Werner 症候群は恰好の研究対象である。

形成が著明に認められる。 ではシワはエラスチン

Werner 症候群の細胞レベルの異常としてそののどのような異常により形成されるか， 現在まで

増殖能の低下があげられる。 その原因としては細不明であるがおそらくエラスチンの最も重要な

胞増殖因子に対する応答性の異常，すなわち情報

弾力性に異常が生じるためと思われる。 弾力性を伝達機構の異常が推定される。 そのような仮説に生じるもとになるのは架橋構造であり， おそらく基づき本研究が計画された。 これまでの研究では架橋形成に何らかの異常があるものと思われる。

本症の原因究明には程遠いが最近本症の原因遺本研究ではエラスチン分子（トロポエラスチン）

伝子の染色体上の位置が明らかにされたので，今が培養細胞の培地中ですみやかに分解をうけ特異後はより的を絞った研究が可能となると期待され的な45kdのポリペプチドヘと低分子化されるこる。

とを報告した。 この分解物は安定であり， おそら

老化の機序の解明はこれまで生理的現象として

く組織中でもそのまま保持され架橋を形成するか，

あまり顧みられなかった皮膚の種々な老化徴候のあるいは intact なトロポエラスチンと架橋を形原因の解明とその予防にもつながるであろう。 そ成する可能性がある。 このようにして形成されるの意味で本研究は皮膚科学やコスメトロジ ー にもエラスチン線維は本来の intact なトロポエラス

大いに関係しており， さらに研究を続けてゆきた

チン同士で形成される架橋とは異なり， おそらくい。

機能上異常なエラスチン線維となると思われる。
今後この点の可能性も含めてエラスチンの分解過程を検討していきたい。

（慶應義塾大学）-181-（横浜市立大学）

@＠®®®@®®®@®®®@®®®@®®®@®®
本研究成果のコスメトロジ ー ＠に及ぼす影響＠を取り上げたが， 光照射を直接うける化粧品の開発にあたっては， 蛍光燈のような弱い光線下でのフリ ー ラジカルの生成も無視できない場合があることを示すものである。

（東京大学）た。乾癬症は ， ヒトの皮膚に発生する原因不明のヒトの成分の約60%は水分である。我々が乾燥

ヒトの皮膚は， 外来の病原性微生物や有毒化合物から生体を防御するための第 一のバリア ー である。ヒトは， 古くからこの皮膚を保護し， 清潔に想美しく保つために各種の薬物や化粧品を用いて来@®忽曖淡炎参@®@®@珍焔痰多@®@®@忽烙曖う
®
感
珍）
忽）
浜中 すみ子®

金ケ崎 士朗病気で皮膚細胞の異常な増殖がみられることからした地上で生存できるのは皮膚に水分を保護する

種々の治療方法が試みられてきた。 Dithranol

バリア ー が存在するからである。このバリア ー のは anthraquinone 系化合物で ， この病気の治療

研究は1930年頃． 始まっている。現在、 皮膚には薬として有効とされているが その作用機作には特有なセラミドがあり， このセラミドがバリア ー

不明な点が多い。

を形成するのに必須の成分であることが知られて本研究では ， この薬物の作用機作を明らかにすきた。リノ ー ル酸を結合するこのセラミドは． アることを第 一の目的としたが， この化合物の特性

シルグルコシルセラミド由来であることが推定さラジカルを産生すれ． ブタで ， その構造が決定された。しかし周知として自動酸化によってフリーーることが知られている。近年の研究からフリ ラのごとく， ヒトは他の哺乳類のように厚くて保温

ジカルは生体内の各種の生理的 ， 病理的反応に関・保湿豊かな有毛性皮膚を持たない。ヒトのこの一与することがわかって来ている。 方， 環境中の滑らかな皮膚の秘密を知ることが ， 化粧品学の目

汚染物質や日常利用しているある種の医薬品や化的のひとつである「若々しくみずみずしい肌を保粧品が光化学反応によって生体に有害なフリー ラつ」カギになるであろう。私は診療に従事する皮ジカルを生じることが知られるようになった。こ膚科医の立場からヒト皮膚の脂質解析の必要性をの場合光源としては太陽光線に含まれる紫外線感じていた。それは何よりも臨床応用を念頭に置に注意がむけられる場合が多い。 しかし， 現在ヒいたからである。今回のヒト表皮アシルグルコシ

トは近紫外部から可視部に至る波長の光線を出す

ルセラミド（ エ ビデルモシド）の構造決定は皮膚水

蛍光灯下で一日の大半を過ごすのが普通であり ，分保護バリア ー 解明のワンステップになると思う

太陽光線と共に蛍光燈の影響も無視できないと考し， また同時にヒト特有の エ ピデルモシドを発見えられる。今回の実験は室内燈下で行い， 近紫外したことから， ヒトの特殊性をも示したと思う。

部から可視部に至る波長既知のキセノンランプ光

今までの研究から ，線下での結果と比較した。その結果 この化合物

肪酸がリノ

ー

エ

ビデルモシドが結合する脂ル酸からオレイン酸に変換しただけによるOi生成は蛍光燈 照射下で著しく増加するでも水分漏出が始まり動物は死に至ることが明ら

ことが明らかにされた。このようにして生成したかになっている。しかしながら水分保護能は哺乳

02-は Dithranol の細胞障害性に関係している。

類に共通するタイプのエビデルモシドで充分なはDithranol と い う An­ずである。なぜヒトはわざわざ珍しい エ ピデルモ

thraquinone 系薬物とフリ ー ラジカルとの関係

シドを生合成するのであろうか。私はヒト型 エ ピ

今回の研究では，-182-

デルモシドが存在することが， ヒトが素肌をさらなれば， 寿命を延ばすことは叶わぬまでも， 生きして生き得る可能性を意味すると仮定してみたい。

ている間は少なくとも顔をはじめとする全身の皮この仮定のもとで， ヒト型エビデルモシドが将来

膚の外観をより若々しく保つことが出来るように化粧品あるいは外用剤として皮膚に補充されれば，なるのではないかと期待される。

皮膚からみたヒトのlife span 延長の可能性， 即

著者らの今回の研究はスフィンゴ糖脂質やセラち， 若返りの秘薬が実現することになるであろう。

ミドなど皮膚への保涅剤としての効果が期待され（山口労災病院）®@®®®@®®®@®®®@®®®@®®®忽｝®
ー
私のコスメトロジ
中川

昌子

雑感

®
®

る天然物1. 2, 3の合成である。 これら天然物はいずれも微量しか得られず ， 生物活性や皮膚への作用などを見るためには量的な確保が急務である。
そこで筆者らは短工程で安価なそして種々の誘導体の合成にも適応可能な合成ル ー トを開発した。
これら生物活性物質の合成はまだ本題の目的には
遥か遠いものではあるが， これらの合成法を利用

化粧品は古代から， いろいろな形で使用されてして将来有用な関連化合物が合成されることを期きたにも拘らず． 学問の対象として輿味がもたれ，待している。 保湿剤が化粧品に重要な位置を占め科学的な基盤に立脚した研究が始められたのは，るようになり， その保湿剤の一つとしてスフィン

極最近のことではないかと思われる。 老化現象のゴ脂質が注目をあびるようになりつつあることは，科学的な追求が多方面の研究者によってなされてこの方面の化学に携わっている者にとっては大変いるが， 皮固の老化のメカニズムがもし明らかにに心強いことである。

-183-（千葉大学）

隣寃雑揺

（平成3年度）@@®®@@®®@@®®@@®®@@®®@@

ら活性種による変性やその抑制について， 反応論

当該研究のコスメトロジ ー に ＠というアプロ ー チで取り組んでいる。すなわち ，

及ぼす影響

光や熱薬物により皮膚の表面で生成した活性酸

国枝

＠
博信

®

素種やフリ ー ラジカルが， どのように脂質 タン
パク質などを攻撃し ， それによりどのような変化

珍｝

が起こるかについでその素反応を明らかにする

逆ベシクルは油中で生成する新しく発見されたことを目指している。と同時に． それをもとにし自己組織体であり ， 新しい機能を発現する新素材て ． これらの反応を如何にして制御することがでになりうる可能性を持つ。 まず， 逆ベシクル中にきるかについても研究している。

油溶性の有用物質を閉じ込め， 徐放する素材にな

従来の医学が対症療法的な治療によるものでりうる。 また ， 水溶性物質も2分子膜中の親水部あったのに対して， 今後の医学の中心が予防医学に保持することが可能である。この点に関してはの方向に進むべきであるのと同様に， コスメトロ

逆ミセル系と同様であるが逆ミセルと異なり．

ジ ー も単に表面を繕うことから． より根本的なと逆ベシクルは油中に溶解しているのではなく分散

ころから取り組むことが重要になると考えられる。

しているため ， 生体に対する剌激が少ないと考えすなわち ， 皮膚においてどのような変化が起こっられる。さらに逆ベシクルは本質的に無限会合体ているのかをより反応化学的な目で眺めることであるラメラ液晶からなるため． 界面に対する吸の重要性が広く受け入れられていくと思われる。

着性も良いと考えられ， 皮膚などへの保護膜にもそういう意味で， 本研究のアプロ ー チは先端的で使える可能性がある。

あると考えている。

（横浜国立大学）®®®®®®®®®®®®麟®®®®®®®®
コスメトロジ ー の観点から
＠
見た本研究の展開

＠

勿論自然科学というものが単に物理学， 化学，
生物学 ， 薬学だけの枠内にとじこもり ， それだけで評価されるものではなく． 社会 ， あるいはより®
®

広く生態系との関わりも合わせて考えることが必

我々は， 生命現象を「化学素反応の集積」としく関わるものであることは忘れてはならず ， これてとらえ， そのダイナミックス， メカニズムを解らすべてを如何に融合させていくかを探ることも明することによりはじめてそれを理解し， さらに本研究の ． そしてコスメトロジ ー の共通の研究課

はある特定の反応を促進したり また逆に抑える

題であると言えよう。

二木 鋭雄

要であるのと同様に． コスメトロジ ー も単なる自然科学的観点だけではなく， 心理学， 美学とも深ことが可能になると考え， それをストラテジ ー として研究を進めている。特に， 近年は活性酸素種
やフリ ー ラジカルが生体に及ぽす影響について研究を進めているがそれに関連して， 皮膚のこれ-184-（東京大学）

@®@@®®@@@®@@@®@@@®@@®珍）ー ＠
本研究成果のコスメトロジ

片岡

＠
一

則

急速な進歩に伴い，

＠

乳酸菌の遺伝子工学＠忽｝

桐村 光太郎@近年のバイオテクノロジ ー ならびに皮膚科学 のコ スメト ロジ ー

コスメトロジ 一 領域における@ @に及ぼす影響®@@@®@@@®@@@®@@@®@@@®®

人間の小腸下部に在住する乳酸菌（ビフィズ スの分野におい菌を含む）は， 乳酸を生成することにより他種のても， 皮膚組織に好ましい作用を示す生理活性物

雑菌の繁殖を抑えている。また， 乳酸菌がビタミ質を積極的に取り入れた機能性化粧品の研究・開ンをはじめとする生体に必要な微量栄養素や免疫発が日増しに盛んとなってきている。このような賦活作用物質を生産することも明らかにされてい研究· 開発においては， 新たな生理活性を発現する。このため， 乳酸菌は， 人間の健康維持•増進

る新規物質の探索とともに， これらの生理活性物に寄与する有用な微生物としての認識が高まって質を安定に配合し， 期待通りの機能を発現させるいる。一方， 乳酸菌の培養液がやけどの回復を早ための新しい化粧品調剤技術の開発が急務となっめ， 皮岡の感染症を防ぐことも発見されている。

ている。ペプチド類をはじめとして ， 生理活性物

これらの特長から， 乳酸菌培養液は約30年前より

質には不安定なものが多く ， 化粧品成分として実化粧品素材として利用されており ， 実際の使用に用化するためには， その安定化が不可欠であるとおいても保湿作用や抗酸化作用が長所として認めともに， これらの物質の徐放化を通じての作用のられている。

時間制御も重要な課題である。

このような背景から， 化粧品素材としての利用

上記のような課題を解決する最も有力な方法は，に適した乳酸菌の育種をテ ー マとして， 筆者は研化粧品成分を安定に保持し ， また， その皮凋滞留究を進めている。具体的には， 遺伝子工学を適用

性 ， 組織浸透性を改善するための担体システムのして乳酸菌の特定の能力を強化することを試みて構築である。本研究で取り組むプロック共重合体

おり ， 現在は初歩の段階すなわち形質転換法やミセルは， サイズ的には超微粒子（約50nm)の範

宿主・ベクタ ー 系の構築を行っている。一方， 皮

囲にあり ， また ， 明確な core-shell 構造を有す

膚への剌激作用が極めて少ない界面活性剤としてるために， core 部分に安定に生理活性物質を包アルキルグリコシド類が知られている。筆者は，接することが可能である。さらに， ミセルの安定

この一種であるアルキルB ー グル コシドの酵素的性や core 部分の疎水性等を調節することによっ合成を目的として， 乳酸菌の生産する当該酵素のて， 包接した物質の放出速度を広範囲に制御するクロー ニングと遺伝子レベルでの研究を進めていこともできる。ミセル表面には， 糖鎖等の生体とる。これらの研究を実用的な系にまで高めること

特異な相互作用を期待できる分子， あるいは温度ができれば ， 化粧品素材として極めて有用なセラやpH等の外部環境変化に応じて物性を変化させ

ミ ドやヒアルロン酸の生産性に優れた乳酸菌の造る高分子鎖等を連結させることも可能であり， 高成も可能になるものと期待している。

分子ミセル本来の有する利点に加えて， これらの

今後の化粧品は， 素材の生理活性を充分に生か諸機能を賦与することによって， さまざまな生理

して， 皮膚に優しく単純なものが指向されるよう活性物質の作用制御を通じてコスメトロジ ーに多大になるであろう。一時的な流行によるものではな

な貢献をなすことが期待される。（東京理科大学）

く， いつまでも変わらず優れた品質を保った化粧-185-

品を作成するための基礎学問として， コスメトロ
ジー は必要不可欠である。

筆者の研究の成果が，われる。 またこれらの特性は粒子の表面構造（粗この領域のさらなる発展に貢献できるように ， 今
後なお一

層の努力を継続する所存である。

さ）の影響も強く受けると考えられる。 当研究では超微粒子の表面構造を液体に分散しているその（早稲田大学）@@®®@@®®@@®®@@®®@@®®@@
本研究成果のコスメトロジ ー ＠に及ぼす影響

＠

神田

®
@

博史

系の安定性， 紫外線吸収能等に影響を及ぼすと思ままの状態で， SAXSを用いて定量的に把握できることを明らかにした。 この方法を用いて，超微粒子化粧品の構造と物性の関係がより基礎的且
つ詳細に検討できよう。 また． 蛋白質コロイド系
は極めて特異なレオロジー 特性を示すことが明らかにされた。 それは極めて広い農度範囲(0.1-40wt%)で， 降伏値および剛性率が 一 般のコロイド

最近， 薬用化粧品薬用養毛剤を多く見かける系より遥かに低い一定値を保持するという点であようになった。 しかしながら， 生薬を材料としてる。 この理由は明らかでないが高濃度でありないる場合品質の不均一性が必ず問題になってく

がら系の流動性は高いというコロイド系も化粧品

る。 生薬は殆どの場合， 野生品の採集品であり，の製造に役立つと思われる。 自己制御コロイド系

ロットによって薬理効果に非常にバラッキを生じの体質については． 今後さらに研究を続ける予定

る。 天産品である以上， 多少のバラッキは致し方である。

（京都大学）

ないにしても， 放置できない問題である。 本研究®®®®®®®®®@®®®®®®®®®®®®

は， 材料の品質保持と安定供給を目的としており，

本研究成果のコスメトロジ ー ＠ー

上記問題が解決できコスメトロジ に貢献できるに及ぼす影響

ものと確信する。 事実 トチバニンジンに地域的差異が認められ． 化学成分的に同 一でないことが明らかとなった。

滝川＠雅浩（広島大学）®
®

®®@@®®@@®®@@®®@@®®@@®®

本研究の成果は， 個々の化粧品が光接触性皮 F

本研究成果のコスメトロジ ー ＠に及ぼす影響＠

炎を起こす原因となり得るか否かの安全性のスク

松本

孝芳

@
®

リ ー ニングに利用することができる。 化粧品に含まれる香料， 植物由来の成分は， 現在においても
光接触アレルギ ー 能を有するものが存在すると考えられ， さらにはサンスクリ ー ン， ボディロ ー

近年社会的価値観の多様化に伴い． 種々の物性

ションはそれ自体日光曝露を前提として使用されをもつ化粧品の開発が期待されている。 当研究でるため， 本モデルを用いた光アレルギ ー 能のスクは粒子の大きさに注目し， 超微粒子（ここでは直リ ー ニングは利用価値が高い。 またマウスを用い径あるいは代表的長さ 10nm 以下の粒子をいう）

るため， 個々の化粧品における接触光過敏症の免コロイド系の構造と物性についておよび物性を疫学的な機序解明を可能とする。

自ら制御できる概念をもつ自己制御コロイド系の本研究のサンスクリ ー ンの効果判定に関する部

開発について基礎的観点からの研究を行っている。

分についての成果は， サンスクリ ー ンの UVA 遮

化粧品の製造において， 分散粒子の大きさは種々の物性． 例えば艶， 皮膚への浸透性， 被覆力，断効果を生体系を用いて評価し得ることである。

サンスクリ ー ンによる UVA の遮断は， 臨床的に-186-

UVA を作用波長とする疾患が多いこと ， UVA

能となった。 よって， 本研究成果はメラニン合成

が色素沈着の原因波長となること， 等より注目をの未知の調節機構の解明への突破口となるばかり集めている。 この意味において，本研究は従来のでなく， 種々の物質（化粧品） がこのような蛋白物理学的計測法に加 えて ， in vivo の系でのサン質因子の発現に与える影響をスクリ ー ニングする

スクリーンの効果の評価を可能とする。

ことも可能になる。 すなわち， 種々の物質が色素（浜松医科大学）®@®®®@®®®@®®®@®®®@®®®@
本研究成果のコスメトロジ ー ＠に及ぼす影響＠@柴原 茂樹®
今後我が国における老齢人口は増加の一途をた
変化 は大きく， 単に健康で長生きできればよいと質因子の発現へ与える影響などを調べることができる。 以上のように， 本研究成果はヒトにおける色素沈着の新しい観点からの予防法や治療法の開発への第一歩となる。

（東北大学）®@®@®@®@®@®@®@®@®@@@®@
コスメトロジ ー の観点から
＠
見た本研究の意義＠®
浜

どることが予想される。 しかも， 日本人の意識の細胞特異遺伝子の転写やその転写に関与する蛋白治世いうわけではなく， その余生の質が問題とされて忽）“

本研究は， われわれが提唱した 化粧を手がかいる。 今や， 美しく老いたいという願望は必ずし”も女性だけのものではない。 実際相当数の人々りとした情動活性化療法

が皮膚の老化の指標の一 つである色素沈着（いわ老年性痴呆症者やいわゆる ばけ 症状を呈するゆるシミ）を気にしており， このシミを予防でき人々の痴呆症状を改善し， 情緒を活性化し， そのるような化粧品· 薬剤の開発を待ち望んでいる。

結果， 化粧することを長らく忘れていた人々に再そして， この皮膚の老化現象には紫外線が深く関び美粧行為や化粧品へのモチベ ー ションを喚起す与していると思われる。

る有力な手段であることを実証した。 この新しい“が， アルツハイマ ー 型“””

日焼け という現象からも明ら知見は， これまで一般的に信じられてきた化粧はかなように， メラニンの主な機能は紫外線に対す

自己表現のためであり， また第三者に好印象を与る防護作用である。 日焼け以外にも ， 様々な皮膚えるためのものであるという考え方に変革をもたの炎症後に色素沈着の起こることが知られている

らすものである。

日常経験するが ， このような色素沈着（メラニン量の増加）が起

われわれの研究に被験者として参加して下さっこる機構はよくわかっていない。 それどころか，た53名の老人の方々（主にアルツハイマ ー 型老年メラニン合成に関与する蛋白質（二種類のTRP)

性痴呆と診断されている者）は， 64歳から92歳とが新しく発見され ， メラニン合成は従来考えられ

広範囲であったが ， これらの人々のうち誰ひとりているよりはるかに複雑な過程を経ていることがとして 化粧療法 を拒否した者はいない。 それ明らかになってきた。 従って，その合成にも様々どころか，なレベルにおける複雑な調節機構が存在するもの

われわれの実験を開始するまでは， 抑うつ的で感と推定される。

“

”

“ぼけ症状

”

が初期段階の被験者は ，

情が平板化していた人々であったが， セッション

本研究により， ヒトチロシナ ー ゼ遺伝子の発現“を重ねるごとに週一 回の 化粧療法

”

を待ちわび

制御に関与するシスエレメントが決定され． 今後，るようになり（このことは記憶障害が改善された

このエレメントに作用する蛋白質因子の解析が可証拠である）， その変化には精神科医も家族もお-187-どろかれたほどである。 このような変容は， われ

を行った。

“

われが精神分裂病者やうつ病者を対象にして 化「ジミリストイルホスファチジルコリンによる”粧療法 を行った先行研究によっても確かめられ

0/W型マイクロエマルションの物性」では ， 天ている。
これからのコスメトロジ ー は， 単にビジネス産

然界面活性物質を用いた0/W型マイクロエマル
ションの生成条件およびその物性は，水溶液中の業として化粧業界に貢献することに甘んじること

無機電解質の濃度やpHにかなり存在することがなく， 人々の心の健康安寧（ウェルビ イング）

分かった。

ー

のために積極的役割を担うものとならねばならな「Molecular Interactions between Lipid

いと考える。 このことは とりもなおさず， コス

and Some Steroids in a Monolayer and a Bi­

メトロジ

layer 」では， 単分子膜および二分子膜中におけー

研究振興財団理事長小林孝三郎氏が目“標に掲げられている より豊かで美しい人間生活”“”るジパルミトイルホスファチジルコリンの疎水基

化粧 が， 老とステロイドとの相互作用は， ステロイドの側鎖年性痴呆症者の ぼけ 症状の改善あるいはそのや二重結合の減少に伴い増加することが分かった。

の実現 につながるものである。
“

”

“

”

ぼけ の症状の予「アニオン／カチオン界面活性剤／昆合系マイク

防にも役立つことが可能となれば， 本研究の成果

ロエマルションの物性」では， アニオン界面活性がコスメトロジ に及ぼす影響と意義はまことに剤（アルキル疏酸ナトリウム）／カチオン界面活性進行を遅らせるのみならず，ー

コスメトロジ 一剤（塩化アルキルトリメチルアンモニウム）／デカは， 本研究が示唆したように心身の病める人々に深いものとなろう。 なお最後に，ン／アルコ ー ル／塩水系で調製した場合 ， アルコ ー

幸福をもたらすだけではなく， それらの人々を介

ルの炭化水素鎖長が3以下の時に ， 水と油を大量護する家族や周囲の人々にも心の安らぎを与えるに可溶化したマイクロエマルションが生成した。

ものだという誇りと使命を抱いて， 高齢化の進む

さらに， その相挙動は， 温度および塩濃度にほと21世紀へ向けて飛翔することを心から祈るものでんど存在しない特異な系であることを見いだした。

ある。

「0/W型マイクロエマルションの界面電気的（同志社大学）

阿部

正彦

＠ 命）

®@@@®@@@®@@@®@@@®@@@®@
本研究成果のコスメトロジ ー ＠に及ぼす影響＠

コスメトロジ ー を論じる場合人間生活と深いかかわりを持つ化粧品の存在は不可欠であり， そ研究」では， アニオン界面活性剤のゼ ー タ電位の無機電解質濃度依存性がマイクロエマルション粒
子の表面電荷密度の変化に起因すること， 両性および非イオン界面活性剤によるマイクロエマル
ションの粒子表面には正電荷よりも負電荷が優先的に吸着すること， さらに新規導出した理論式により無機電解質イオンの結合定数やマイクロエマ
ルションの会合数を求めることに成功した。

の役割・機能は重要な意味を持つ。 衆知のごとく，これらの成果は， コスメトロジ 一 分野における化粧品の中には界面活性物質（剤）がかなり利用さ化粧品としての材料設計にかなりの寄与が期待でれており， 特に， 高付加価値系であるマイクロおきるものと確信する。

よびマクロエマルションの調製• 物性が重要な因子となっている。
本研究では ， マイクロおよびマクロエマルショ
ンの溶液物性をより解明するために， 下記の研究- 188-（東京理科大学）®®®@®®®@®®®@®®®@®®®@®®
当該研究がコスメトロジ ー 研 ＠

齋藤

美穂

＠

笏）
＠

究に及ぼす影響について

ングヘの一般の興味も増加する一方である。 また
日本では古くから「色の白いは七難隠す」といわれ， 肌の白さに対するポジティプなイメ ー ジがあるようだ。しかし色の白いことの好ましさがどのような心理的概念に基づいているのかどうかを調査した研究はないため， 今回そのテ ー マに取り組

肌色に関する研究は様々な分野で進められていむことにした。色白の心理的嗜好構造を探ること

るが， 心理学でもその研究領域を拡大させている。

が出来たならば， 流行や 一過性の事象に左右され特に最近では紫外線の有害性も報じられ， 肌に対ない方向性を， この研究の成果はコスメトロジ 一する関心が高まっているのと同時に， ホワイトニにもたらすものと考えている。

-189-（早稲田大学）

付

．

録

事業報告書
I

平成2年度事業報告II

平成 3 年度事業報告III

平成 4 年度事業報告

設立趣旨書
寄附行為

．

助成金等交付規定
役員

事業報告書（自平成 2 年 7 月 5 日

平成 3 年 3 月 31 日）

至

1 . 初年度事業（平成2年度）
当財団は，

平成2年6月29日厚生省より認可を受け， 翌7月5日に登記を完了しました。 9 月 17 日に設立総会及び第 1 回理事会・評議員会を開催して， 以下のような初年度事業を計画し， 実行しました。
自然科学や社会科学の各分野にわたり， ひろくかかわりをもつ化粧品を総合的に体系化することを目的として①化粧品学の調査・研究に関して顕著な成績をあげた研究者や機関に対して功(1件あたり100万円）

労金をもってこれを表彰する。

②皮膚の生理機能や老化機構の解明， 美容に役立つ素材の研究等， 化粧品学に関連した生命科学， その他の分野の調査・研究に対する助成を行う。

(1件あたり200万円）③化粧品学の調査・研究にたずさわる研究者の海外派遣や招聘に対して資金援助を行う。

(1件あたり 50万円）

2. 選考の経緯
当財団の初年度各事業につきましては，

平成 2 年11月 1 日より募集を開始し，

平成 3 年 1 月末をもって締切りましたが， 多数の方からのご応募をいただきました。
今回は当財団の初年度でもあり， 準備期間が短かった関係で， 応募については推薦制を主とさせていただき，

平成 3 年 2 月 22 日に選考委員会を開催し， 理事長，理事及び評議員に報告， 了承を経て受賞者を最終決定いたしました。
3. 第1回功労表彰・研究助成等の結果
以下の通り， 合計21件が決定され合計功労金 300万円， 研究助成金 3,200 万円， 国際交流援助金 100 万円が交付されました。 なお， 受賞された方々のお名前は次項の通りです。
功労表彰（小林孝三郎賞）

3件

成

16 件

国際交流援助

2 件

研

如九

助

-191-

第 3 号議案 平成 3 年度助成金等交付対象者の募集方法に関する件
平成3年度の助成金等交付対象者の募集方法については， 当財団「助成金等交付規程」第 4 条 l 項及び 2 項によるほか， 同条第 3 項の規程により， その要綱を次の如く定める。
原則として全国の主要大学， 公的研究機関， 病院の施設内公募とし， 単科大学にあっては学長， 総合大学にあっては学部長， 研究機関にあってはその代表者，病院にあっては病院長の推薦を要するものとする。 これら諸機関の選考基準は次のとおりとし概ね 100 ヶ所を目途とする。
①役員， 選考委員の所属する大学， 機関等②助成， 表彰の実績を有する研究員の所属する大学， 機関等③役員の推薦する機関等④その他化粧品関連の研究が活発な大学， 機関等
なお， 今年度の募集期間は 7月 1 日より 9月20 日までとする。
第 4 号議案

選考委員前厚生省薬務局審査課化粧品審査室長平井俊樹氏の転出に伴う退任及び新たに手塚満氏を選考委員に選任する件

4. 会議等
理事会
第 一 回理事会
日時 平成 2 年 9月 17 日（月）場所

東京都千代田区丸の内

パレスホテル

出席理事数

10 名（現在理事数

12 名）

出席監事数

l 名（現在監事数

2 名）

報告事項
理事理事長， 監事， 評議員の選出を寄付行為附則第 2 項により決定した
旨を報告， 全員の了承を得た。
決議事項
第1号議案

初年度（平成2年度）事業計画及び収支予算案承認の件

第 2 号議案

選考委員の選出承認の件

第3号議案 助成金交付規程承認の件

-192-

評議員会
第一 回評議員会
日時 理事会と同時開催につき理事会に同じ。

11 名（現在評議員数 15 名）

出席評議員数

報告事項， 決議事項共に理事会と同様である。
選考委員会
日

時 平成 3 年 2 月22 日（金）場所

東京都千代田区丸の内

出席選考委員数

パレスホテル11名（現在選考委員数

11 名）

報告事項
選考委員厚生省平井俊樹氏の転勤に伴い同氏が手塚満氏に変更された， 次回理事会で承認の予定
決議事項
第1号議案

選考委員長選出の件

第2号議案

平成2年度表彰， 助成及び援助選考の件

第一回表彰・贈呈式
日

時 平成 3 年 3 月 29 日（金）場所

東京都新宿区大京町

野口英世記念会

5. その他
平成3年5月小田倉監事及び黒田監事に平成2年度事業概要報告並びに， 収支計算書， 正味財産増減計算書， 貸借対照表及び証憑書類， 脹簿等の監査を受けいづれも適法正確である旨， 両監事より報告があった。

-193-

第1回

功労表彰・研究助成を受けられたかたがた
CK-功労表彰・J ー 研究助成·H-国際交流援助）

管理番号
K90-0l

K90-02

K90-03

J90-01

研

ヮ九
l:r

題

目

分 野

外用タ ール色素の衛生化学的検索

衛生化学

代表研 究者
東京薬科大学助教授

永 山 富 雄色材の表面界面及び改質層とその分析に関
武蔵工業大学自然科学系教授する研究
応用界面化学高 岡

界面活性物質の基礎及び応用に関する研究

応用界面化学

染毛剤成分の代謝に関する研究

薬物代謝

尽

東京理科大学理工学部教授

荻 野 圭 三食品薬品安全センタ ー 秦野研究所

中尾

美津男

J90-02

ドレイズ試験代替法の開発
ヒト細胞昆虫細胞を用いた高感度迅速試
験法の開発研究J 90-03

リン脂質膜の表面修飾と分子集合体としての筑波大学化学系助教授
機能発現に関する研究
界面物理化学

J90-04

J90-05

組織培養学

理化学研究所 副主任研究員

大 野 忠 夫

古 澤 邦 夫

化粧が意識性に及ぼす効果の研究

心理学

胆汁酸生合成のメカニズムに関する研究

生物有機化学

早稲田大学人間科学部教授

春木豊

東京工業大学理学部助教授

藤 本 善 徳J90-06

東京理科大学薬学部助手
ヒアルロン酸で表面を修飾したリポ ‘ノ ー ムからの内容物の温度による放出制御
薬品物理化学J 90-07

皮膚DDSとしての高分子脂質リポゾ ー ムの基礎研究

J 90-08

態皮膚科学

J90-09Werner症候群患者皮膚由来培養線維芽細胞のサイトカイン細胞成長因子に対する応答性

皮膚科学

牧 野 公 子皮膚の老化に伴うエラスチン遺伝子発現の動

-194-

高分子合成

早稲田大学理工学部教授

西 井 宏 之慶應義塾大学医学部講師

多

島新 吾

横浜市立大学医学部助手

佐々木

哲雄

管理番号

J90-10J90-11

研

ワ九
b

題

目

分 野

光化学反応によるフリ ー ラジカルの産生と表皮培養細胞に対する影響
色素性皮膚病変に対するレ ー ザ ー療法の研究

J90-12

表皮糖脂質の生化学的形態学的並びに臨床的研究（エピデルモシド）

J90-13生体の酸化的障害に対する防御機構の生化学的研究
ービタミンEの活性発現機構の解析 一

J90-14

皮膚生理機能賦活物質の経皮吸収に対する評
価解析理論の確立

J90-15

皮膚への作用性を有する各種糖脂質の合成

J90-16

新製剤法及び新素材を用いた化粧品の品質確
保に関する研究

H90-0l

化粧人工義手コ ンピュ ー タによる色調の合成と．
ュ ー タ制御による回転式成型

H90-02

コ ンビ

炎症性サイトカインの作用機序の解析

医科学
生化学
皮膚科学
皮膚科学
生化学
生化学

薬剤学

有機合成化学代表研 究者
東京大学医科学研究所教授

金ケ崎

士朗

帝京大学医学部助教授

渡 辺 晋

一

山口労災病院皮膚科部長

すみ子

浜中

東京大学薬学部助手

由新 井 洋
京都大学薬学部教授

瀬崎仁

千葉大学薬学部助教授

中 川

昌 子

国立衛生試験所環境衛生化学部長
衛生化学
機

械

生産工学
免疫学

武

田

明

治

シンガポ ー ル国立大学講師
Swee Hin TEO 廿（受入責任者：早稲田大学梅津光生）
東京大学薬学部研究生

樋

口

昌

宏

（敬称略 受付順）-195-

事業報告書平成 3 年 4 月 1 日

（自
1 .

至

平成 4 年 3 月 31 日）

2年度事業（平成 3 年度）
初年度に引き続き以下のような事業を計画し， 実行しました。
自然科学や社会科学の各分野にわたり， ひろくかかわりをもつ化粧品を総合的に体系化することを目的として①化粧品学の調査・研究に関して顕著な成績をあげた研究者や機関に対して功C 1件あたり 100万円）

労金をもってこれを表彰する。

②皮膚の生理機能や老化機構の解明， 美容に役立つ素材の研究等化粧品学に関連した生命科学， その他の分野の調査・研究に対する助成を行う。
(1件あたり200 万円）③化粧品学の調査・研究にたずさわる研究者の海外派遣や招聘に対して資金援助を行う。

C 1件あたり 50万円）

2. 選考の経過等
本年度の各事業につきましては平成 3 年 7 月より募集を開始し平成 3 年 9 月末をもって締切ました。 本年度は 一 般公募を原則とし全国約 120 カ所の大学・病院， 研究機関等にダイレクトメ ー ルにて送付する他 8 誌の関係学術雑誌にも広告しました結果多数の応募をいただきました。
応募者の研究分野が多岐にわたった為， 選考委員会に 4 分科会を設け 2 回にわたる予備選考を行い平成 3 年 10 月 18 日（金）パレスホテルにおいて本選考委員会を開催し受賞候補者を決定し 10 月末理事長， 理事， 評議員に報告， 諒承を得て受賞者を最終決定いたしました。

3. 第2回功労表彰・研究助成等の結果
以下のとおり合計 29件が決定され功労金 300 万円， 研究助成金 4, 400 万円，
国際交流援助金200 万円が交付されました。
功労表彰（小林孝三郎賞）

3 件

成

22 件

国 際交 流 援 助

4件

研

ワ
九

助

-196-

第2回

功労表彰・研究助成を受けられたかたがた
CK-功労表彰・J ー 研究助成·H-国際交流援助）

管理番号

K91-0l

K91-02

研

ワ九
ヒ

題

目

美容器官としての皮膚香粧品の安全性確保分野

代表 研 究者

皮膚科学

東京女子医科大学名誉教授
中村 敏郎（日本皮膚科学会推薦）

香粧品科学

日本毛髪科学協会名誉研究所長
田村健夫（日本毛髪科学協会推鷹）香粧品科学

日本大学薬学部教授

衛生化学

K91-03

エマルション及び可溶化系での添加物の酸化安定性の研究J 91-01

培養表皮細胞及び線維芽細胞におけるグリコサミノグリカン及びコラ ー ゲンの代謝

J 91-02

生体適合性逆型ベシクルの生成， 安定化と応用に関する研究J 91-03

活性酸素 フリー ラジカルによる生体膜傷害の防止に関する研究

J 91-04

パッチテスト結果のコンピュ ー タ ー 処理シス
テムの開発

J 91-05.

新しいDDS 剤型としての高分子ミセルの設計と機能開発J 91-06

化粧品素材としての利用が可能な乳酸菌の新規育種技術の開発
応用生物化学

早稲田大学理工学部専任講師

J 91-07

皮膚過敏症に対するマスト細胞の役割
ーマスト細胞欠損動物を用いた検定法の開発 一

大阪大学医学部教授

J 91-08

竹節人参並びに甘草の組織培養による物質生
産並びに大量増殖に関する研究

生薬薬用J 91-09

マウス悪性黒色種を用いたチロシナ ー ゼ抑制因子の精製と応用

皮膚科学

北里大学医学部講師

メラニン色素亀山

J 91-10

界面活性剤を含む溶液混合系の相挙動と濡れの挙動に関する研究

界面化学

九州大学理学部助教授

物理化学

荒 殿

-197-

物理化学
生化学
溶液論
界面化学
有機生化学
皮膚科学

佐

藤 孝俊
（東京化粧品工業会推蔵）

東京薬科大学教授

陽
横浜国立大学工学部助教授
国

枝

博信

東京大学先端科学
技術研究センタ ー 教授

二 木鋭 雄名古屋大学医学部附属病院分院
皮膚科長

接触皮膚炎

早 川 律 子高分子合成

東京理科大学
生命科学研究所助教授

DDS

実験病理学

生物学

片

岡

桐村

北 村

一

則

光太郎

幸彦

広島大学医学部助教授

神

田 博史

孝一郎

誠

管理番号

J91-11

J91-12

J91-13

J91-14

研

b
ワ九

題

目

代表研 究者

分野

超微粒子分散系の構造と物性及び自己制御コ
ロイド系の開発

高分子物性
コロイド物性

接触光過敏症のマウスモデルを用いた化粧品
による光アレルギ ー のスクリー ニング及びサンクリー ン効果の評価

光生物学
皮膚免疫

香料に関する定量的解析

感覚生理学

メラニン生合成の調節

分子生物学

京都大学工学部助手

松 本 孝 芳浜松医科大学教授

滝 川 雅 浩
北海道大学薬学部教授

栗 原 堅 三東北大学医学部教授

柴原 茂樹

アルツハイマ ー 型老年痴呆症， ぼけ症状を呈する人々への化粧による情動活性化の研究

感情心理学

ビタミンCと上皮成長因子によるヒト皮膚線
維芽細胞の増殖とコラ ー ゲン代謝調節機構の分子細胞生物学的研究

東京医科歯科大学助手
分子細胞
生物学
隆 一 郎
畑
医化学

J91-17

人工皮膚を用いた皮膚の形成機構及び皮膚の反応性試験に関する研究

細胞生物学

J91-18

サンスクリー ンの紫外線性表皮障害に対する防御作用の免疫生物学的研究

皮膚科学

J91-19ダイレクトスキンセンサー を用いて測定した
皮溝と加齢の関係

J91-15

J91-16

J91-20

J91-21

J91-22

H90-0l

H90-02

臨床心理学

同志社大学文学部教授

浜治世子

広島大学理学部教授

吉 里 勝 利京都大学医学部講師

古 川 福 実老年病学

慶應義塾大学医学部助手

動脈硬化

本 間聡 起東京理科大学理工学部講師
各種界面活性物質によるマクロ及びマイクロ
エマルションの調製並びに物性に関する物理 応用界面化学
阿 部正彦
化学的研究
『色白』の嗜好構造に関する一考察

心理学
色彩心理学
造形心理学

早稲田大学人間総合研究センター

フリー ラジカルとポルフィリン代謝に関連する皮膚の老化機構解明に関する研究

環境科学

国立公衆衛生院労働衛生学部室長

培養細胞を用いた化学物質の安全性研究

毒性学

毒性学

細胞生物学
化粧品と環境に関する諸問題

香粧品科学

-198-

齋 藤 美 穂市 川勇

ウプサラ大学毒性学部助教授（受入貴任

B者jorn Ekwallー小野宏帥食品薬品安全センタ ）国立衛生試験所室長

木 嶋 敬 二（敬称略 受付順）

4.

会議等
理事会
第一回通常理事会
開催日時

平成3年6 月6日（木）開催場所

東京都千代田区丸の内

12名
2名

理事総数
監

事

出席者
出席者

パレスホテル会議室

11名
2名

1. 報告事項
事務局より理事長の小林孝三郎氏が健康上の理由で欠席されているので寄付行為第18条2 項の規定により専務理事が議長の代行を行う旨報
告， 全員の諒承を得た。
2. 決議事項
初年度（平成 2 年度）事業報告について

第 一号議案（平成 2 年度）収支決算書について

第二号議案
第三号議案

平成3年度助成金等交付対象者の募集方法に関する件

第四号議案

選考委員前厚生省薬務局審査課化粧品審査室長 平井俊樹氏の転出に伴う退任及び新たに手塚満氏を選考委員に選任する件について。

評議員会
第 一 回通常評議員会
理事会と同時開催につき理事会に同じ。

開催日時・場所

15名

評議員総数

出席者
欠席数

9名

6名

（うち委任状による表決権行使6 名何れも各議案に賛成）
第二回通常理事会
開催日時

平成 4 年 3 月23日（月）開催場所

東京都千代田区丸の内

理事総数

監

事

12名

出席者
欠席数

パレスホテル会議室

7名

4名（うち委任状による表決権行使 4 名何れも各議案に賛成）
2名

出席者

l名

欠席数

l名

-199-

1. 決議事項
第一号議案 平成4年度事業計画案及び予算案について
第二号議案 平成4年度研究助成金等の交付対象者募集要綱について
第三号議案 任期満了に伴う理事長， 理事， 監事， 評議員， 選考委員の選任について

2. 報告事項

特定公益増進法人の認可について

第二回通常評議員会
理事会と同時開催につき理事会に同じ。

開催日時・場所

15 名

評議員総数

出席者

10 名

欠席数

5 名（うち委任状出席 5 名）

選考委員会
第 一回選考委員会
開催日時
開催場所

平成 3 年 7 月29日（月）東京都千代田区丸の内

選考委員総数11名

パレスホテル会議室

出席者

10 名

欠席数

l名

1. 決議事項
第一号議案「平成 3 年度研究助成」の選考方式について

第二号議案「平成 3 年度功労表彰」の選考方式について

第三号議案「平成 3 年度国際交流」の選考方式について

第二回選考委員会
開催日時

平成 3 年 10月18日（金）開催場所

東京都千代田区丸の内

選考委員総数11名

出席者

パレスホテル会議室

11名

1. 決議事項
第 一号議案 平成 3 年度研究助成の候補課題選定について

第二号議案 平成 3 年度国際交流助成の候補課題の選定について
第三号議案 平成 3 年度功労表彰候補者の選定について
第四号議案

その他選考過程で生じた諸問題の検討-200-

表彰贈呈式
開催日時

平成3年11月18日（月）開催場所

東京都渋谷区渋谷 2 -12-15 日本薬学会長井記念館

その他
平成 4 年 6 月 12日小田倉監事及び黒田監事から平成 3 年度の事業報告並びに収支計算書， 正味財産増減計算書， 貸借対照表及び証憑書類， 帳簿等の監査を受けいづれも適法正確である旨， 報告があった。

-201-

事業報告書（自1 .

平成 4 年 4 月 1 日

至

平成 5 年 3 月31 日）

3年度事業（平成 4 年度）
昨年に引き続き以下のような事業を計画し， 実行しました。
自然科学や社会科学の各分野にわたり， ひろくかかわりをもつ化粧品を総合的に体系化することを目的として①化粧品学の調査・研究に関して顕著な成績をあげた研究者や機関に対して功(1 件あたり100 万円）

労金をもってこれを表彰する。

②皮膚の生理機能や老化機構の解明， 美容に役立つ素材の研究等化粧品学に関連した生命科学， その他の分野の調査・研究に対する助成を行う。

(1 件あたり200 万円および100 万円）③化粧品学の調査・研究にたずさわる研究者の海外派遣や招聘に対して資金援助を行う。

(1 件あたり 50 万円）

2. 募集及び選考の経過
本年度の各事業につきましては平成 4 年 5 月11 日より募集を開始し同 4 年 7 月

20 日をもって締切りました。 本年度も 一 般公募を原則とし全国約 120 カ所の大学·病院・研究機関等にダイレクトメ ー ルで推薦書を送付するほか 8 誌の関係学
術雑誌にも広告し， その結果多数の応募をいただきました。
応募者の研究分野が多岐にわたった為， 選考委員会に 4 分科会を設けそれぞれにおいて予備選考を行い平成 4 年10 月 1 日（木）パレスホテルにおいて本選考委
員会を開催し受賞候補者を決定し11 月末理事長・理事・評議員の諒承を得て受賞者を最終決定しました。

3. 第3回功労賞・研究助成等の結果
以下のとおり合計20件が決定され功労金200万円， 研究助成金2,400 万円， 国際交流援助金250 万円が交付されました。

2 件

功労表彰（小林孝三郎賞）
研

ワ九
b

助

13 件

成

国 際 交 流 援 助※

5 件※国際交流援助については11 月以降 3 件の追加がなされて合計 5 件になった。

-202-

第3回

功労表彰・研究助成を受けられたかたがた(K-功労表彰・J ー 研究助成·H-国際交流援助）

管理番号K92-01

研

ワ九
b

題

目

分 野

化粧品などに多く使われる化学物質による光線接触ヒフ炎の提唱とその解明

皮膚科学

代表研 究者
信州大学医学部名誉教授

高瀬 吉 雄（日本皮膚科学会推滴）K92-02複合脂質と生体反応

帝京大学薬学部教授
生 化 学

野 島 庄 七（日本薬学会推鷹）J 92-01

ヒトリゾチー ムタンパク質を分泌する酵母突
然変異体を用いた素材生産の効率化研究

分子生物学
遺伝子

J92-02

光熱変換分光法による薬物の組織及び細胞ヘの非侵襲吸収計測法の開発

J92-03

化粧品の紫外線照射による光酸化メカニズムの研究

水素添加大豆リン脂質を用いた油性ゲル， 水
性ゲルの保湿作用に関する研究

J 92-05

アスパラギン酸プロテアー ゼ類の蛋白工学的改変によるケラチナ ー ゼの開発

物理化学

薬 学

蛋白工学
生化学

J92-06

J92-07

J 92-08

神経ペプチドによる皮膚炎症反応の成立機序とその特異的制御

内科学
アレルギ ー 学

皮膚の機能と脂質代謝に関する基礎的研究
生化学

転移因子を用いたアントシアニン色素生合成
遺伝子と発現調節因子遺伝子の解析

分子遺伝学
分子生物学

-203-

鈴 木 克 周東京大学工学部教授

分析科学

界面科学
J 92-04

広島大学理学部助手

澤

田

嗣 郎

明星大学理工学部教授

日 高 久 夫
昭和薬科大学薬学部講師

藤井まき子
東京大学理学部助手

井 上 英史千葉大学医学部助手

岩 本 逸 夫
新潟大学医学部教授

小野 輝 夫
東京理科大学基礎工学部教授

飯

田

滋

管理番号

J 92-09

J 92-10

J 92-11

研

ワ九
b

題

目

分 野

モノクロ ー ナル抗体を用いた紫外線誘発DN
A損傷の定量とメラニン色素のサンスクリ ーン効果の実験的証明

奈良県立医科大学大学院生
皮膚科学

皮膚老化における染色体構造の変化と遺伝子修復機能に関する研究

アスコルビン酸2 ー グルコシドの生物学的有用性研究—経皮吸収によるビタミンC活性発現の評価—

高齢者のおしゃれ行動とその評価に関する研格

大河原千鶴子北海道教育大学教育学部助教授

人間行動科学ワ
九マン ・ マシン ・ コミュニケ ー ションの研究

心理学

H92-01
人間工学

H92-02天疱癒抗原とデスモソ ー ム類天疱癒抗原の解
析

皮膚科学
皮膚免疫学
生化学

化粧品と環境に関する諸問題及び化粧品の安全性試験代替法に関する協議

化粧品

H92-03

行政H92-05山 本

埼玉県立衛生短期大学教授
基礎看護学

同

花 岡 文 雄岡山大学薬学部教授

免疫薬理学

病院看護における化粧に関する研究

H92-04

小林 信 彦
理化学研究所主任研究員

細胞生理学

J s-92-01

J s-92-02

代表研 究者

化粧品

上

行政

欧米諸国及び日本の化粧品規制の現状把握（第4回化粧品規制に関する国際会議参加）

藤 森 立 男
信州短期大学人文学部講師

落 合

勲

慶應義塾大学医学部講師

橋本隆

厚生省薬務局係長

井 尻

潤

厚生省薬務局化粧品基準調査官

飯

田

勝 章

化粧品

タイ国厚生省薬務局局長

行政（受入貴任者：
日本化粧品工業連合会有本享Morakot Kornkasem（敬称略 受付順）-2 04-

4. 会議等
理事会
第一回通常理事会
開催日時

平成 4 年11月 25日（水）午後 3 時

開催場所

東京都渋谷区渋谷2-12-15 日本薬学会長井記念館

12 名
2名

理事総数
監

事

出席
出席

10 名
l名

委任状出席

2名

決議事項l 第3回表彰・助成金交付者の決定について
表彰等の候補者について審議が行われ前掲の如く決定され
た。
決議事項2

平成5年度事業計画及び予算が審議， 決定された。

決議事項 3

選考委員の選任について
手塚委員の退任及び新委員 3 名の追加就任が提案され全員一致で承認された。

追加新任選考委員
西沢元仁
決議事項4

二木鋭雄

増山英太郎

寄附行為第2条の変更について
財団事務所の移転の提案がなされ全員 一致で承認。
（東京都中央区八丁堀 1-9-9 → 中央区銀座 3-5-12)

報告事項

平成 4 年 7 月 27日 東京都文京区本駒込 6-19-3
小林孝三郎氏より（梯コ ー セ ー の株式20万株の寄附を受け基本財産として1, 000万円（額面l株 50円）を計上した。
配当金を運用財産として使用する予定。

評議員会
第一回通常評議員会
開催日時・場所・議題ともに理事会に同じ。
評議員総数

14名

出席

6名

委任状出席

8名

選考委員会
第一回選考委員会
開催日時

平成4年4月 22 日 （水）開催場所

東京都千代田区丸の内 1-1-1

選考委員総数

10 名

出席

-205-

8名

パレスホテル会議室
欠席

2名

決議事項

平成 4 年度研究助成選考方式について
奨励研究の設置

分科会の設置について功労表彰の選考方式について
国際交流の選考方式について
分科会I
開催日時

平成4年9月8日（火）午後5時

開催場所

東京都港区虎の門 1-8-7 富田屋会議室

決議事項

素材・物性にかかわる分野の選考

分科会11
開催日時
開催場所
決議事項

平成 4 年 9 月18日（金）午後 5 時 30分

東京都千代田区丸の内 1-9-1 ルビ ー ホ ー ル会議室
生体及び安全性にかかわる分野の選考分科会Ill
開催日時
開催場所
決議事項

平成4年9月28日（月）午後 5 時

東京都新宿区西新宿6-6-2 東京ヒルトンホテル会議室
精神・文化にかかわる分野の選考

本選考委員会
開催日時
開催場所

平成4年10 月 1 日（木）午後5時 30分

東京都千代田区丸の内 1-1-1 パレスホテル会議室

選考委員総数
決議事項

12 名

出席

11名

欠席

l名

分科会の選考結果を持ち寄り慎重な討議を重ねた結果
受賞候補者を決定した。

選考委員会（平成 5 年第 1 回）
開催日時
開催場所

平成5年 3 月5日（金）午後5時 30分

東京都千代田区丸の内 1-9-1 ルビ ー ホ ー ル会議室

11名
出席
9名
欠席
平成 5 年度研究助成の選考方式について
平成 5 年度の事業計画及び予算について

選考委員総数
決議事項
報告事項

-206-

2名

表彰贈呈式
開催日時

平成 4 年11月 25日（水）午後 4時

開催場所

東京都渋谷区渋谷2-12-15 日本薬学会長井記念館

その他
平成5年5月18日小田倉監事及び黒田監事から平成4年度の事業報告並びに収支計算書， 正味財産増減計算書， 貸借対照表及び証憑種類， 帳簿等の監査を受け， いずれも適法正確である旨報告があった。
以

-207-

上

平成 2 年 7 月 5 日

財団設立趣意書
厚生大臣

津島雄二

殿
財団法人

コスメトロジ ー 研究振興財団

設立 者

小

林

孝三郎

我が国の化粧品に関連する科学技術の進歩はめざましく， 今日では皮膚科学や健康・衛生の分野からバイオテクノロジ ー やライフサイエンスという科学技術の最先端にまで拡がっております。
化粧品の役割や機能も， 単に皮膚を清潔に保ったり， 身だしなみとしての粧いということにとどまらず， 自己表現の手段や精神的充足感といった方向へのウエイトも高くなってまいりました。
一方，「日本の将来推計人口」によると， 60 歳以上の高齢者が年々増加し， 20年

後には現在の倍となって総人口の30%を占めるといわれています。 産業の各分野や諸研究機関において高齢化社会への対応が検討されており， 化粧品分野においても老化機構の研究， 皮膚生理機能の解明による皮膚恒常性（ホメオスタ ー シス）， 安全性等に関する調査・研究がなされています。
現在， 経済大国日本はかつてない繁栄期にありますが， 真に豊かな国民生活を実現していくためには， 心の豊かさを大切にしていくことが必要であり， また， 今後
本格的な高齢化社会の到来を迎え． 国民のひとりひとりが心身ともに健全で， 長い人生を生きがいを持って暮らしていけることが何よりも重要になってきております。
このような時代に， 人々の意識の変化や高齢化に対応したコスメト ロジ ー （化粧品学）の研究を積極的に振輿していくことは． 国民の生活を美しく豊かなものとしていくために大きな意義を持つと考えられ， コスメトロジ ー に関する調査・研究
およびその助成等を行うことを目的とした当財団が設立されました。
広く国民の保健・衛生の向上を図り， 美しく豊かな人間生活の実現にお役に立てることを念願して． 積極的な事業活動を展開してまいりたいと思います。

-208-

財団法人

コスメトロジ ー 研究振興財団寄附行為
第1章

（名

総

則

称）
本財団は， 財団法人 コスメトロジ ー 研究振興財団と称する。

第 1条
（事務所）

本財団は， 事務所を東京都中央区銀座 3 丁目 5 番 12 号に置く。

第 2条
（目 的）

本財団は， コスメトロジ ー （化粧品学）に関する調査研究及びその助成を行うことに

第 3条

より． 広く国民の保健衛生の向上を図り， 美しく豊かな人間生活の実現に寄与することを目的とする。
（事 業）
本財団は， 前条の目的を達成するために次の事業を行う。

第 4条

(1)

美しく豊かな人間生活を実現するためのコスメトロジ ー の理論的体系化に関する調査研究及びその助成(2)

皮膚の生理機能や老化機構の解明， 美容に役立つ素材の研究等コスメトロジ ー に関連した生命科学その他の分野の調査研究に対する助成(3) (1)及び(2)に掲げる調査研究に関する国際交流の助成及びシンポジウムの開催,(4)

コスメトロジ ー に関する各種資料の収集及び普及(5)

その他財団の目的を達成するために必要な事業

第2章

財産及び会計（財産の構成）
第 5条

本財団の財産は， 次に掲げるものをもって構成する。
(1)

設立当初の財産目録に記載された財産

(2)

寄附金品

(3)

財産から生じる収入(4) 事業に伴う収入(5)

その他の収入（財産の種別）本財団の財産は， 基本財産及び運用財産の 2 種とする。

第 6条
2

基本財産は， 次に掲げるものをもって構成する。
(1)

設立当初の財産目録中， 基本財産の部に記載された財産(2) 設立後に基本財産とすることを指定して寄附された財産(3)

理事会において運用財産から基本財産に繰り入れることを議決した財産

-209-

3

運用財産は． 基本財産以外の財産とする。

（財産の管理）第 7条

本財団の財産は． 理事長が管理し， その方法は． 理事会の議決を経て． 理事長が別に定める。
2

基本財産のうち現金は， 郵便官署若しくは確実な金融機関に預け入れ． 確実な信託会
社に信託し， 又は国債． 公債等の確実な有価証券にかえて保管しなければならない。

（基本財産の処分の制限）
第8 条

基本財産は， これを処分し， 又は担保に供することができない。 ただし， 本財団の事
業遂行上やむを得ない理由があるときは， 理事会及び評議員会においてそれぞれ理事
現在数及び評議員現在数の4分の3以上の議決を経 ． かつ， 厚生大臣の承認を得てその一部を処分し， 又は担保に供することができる。

（経費の支弁）第 9条

本財団の経費は， 運用財産をもって支弁する。

（事業計画及び予算）第 10条

本財団の事業計画及びこれに伴う予算に関する書類は． 理事長が作成し． 毎会計年度開始前に， 理事会及び評議員会においてそれぞれ理事現在数及び評議員現在数の 3 分の2以上の議決を経て， 厚生大臣に届け出なければならない。 これらを変更する場合も同様とする。
（暫定予算）

前 条の規定にかかわらず， やむを得ない理由により予算が成立しないときは， 理事長

第 11条

は． 理事会の議決を経て， 予算成立の日まで前年度の予算に準じ， 収入支出することができる。
2

前項の収入支出は， 新たに成立した予算の収入支出とみなす。

（事業報告及び決算）
第 12条

本財団の事業報告及び決算は， 毎会計年度終了後， 理事長が事業報告書， 収支計算書，正味財産増減計算書， 貸借対照表及び財産目録等として作成し， 監事の監査を受け，理事会及び評議員会においてそれぞれ理事現在数及び評議員現在数の3分の2以上の議決を経て． 財産総額に変更が生じた場合には， 2週間以内に登記し， 登記簿の謄本を添え ， その会計年度終了後 3 ケ月以内に厚生大臣に報告しなければならない。
（長期借入金）第 13条

本財団が資金の借入をしようとするときは その会計年度の収入をもって償還する短期借入金を除き， 理事会及び評議員会において理事現在数及び評議員現在数の3分の2以上の議決を経かつ， 厚生大臣の承認を得なければならない。

-210-

（義務の負担及び権利の放棄）
第 14 条

予算で定めるものを除き， 本財団が新たに義務を負担し， 又は権利を放棄しようとするときは， 理事会及び評議員会において理事現在数及び評議員現在数の3分の2以上の議決を経かつ， 厚生大臣の承認を受けなければならない。

（会計年度）
第 15 条本財団の会計年度は． 毎年4月 1 日に始まり， 翌年3月31日に終わる。

役

員

第3章
（種類及び定数）
第16条

本財団に， 次の役員をおく。

2

理 事

10名以上15名以内

監

2名

事

理事のうちl名を理事長とする。また理事の中から専務理事及び常務理事を各l名置くことができるものとする。

（選任等）
第17条

理事及び監事は， 評議員会で選任する。
2

理事は， 互選により理事長を選任する。また． 必要に応じて専務理事及び常務理事を互選により選任する。

3

理事監事及び評議員は， 相互にこれを兼ねることはできない。

4

理事のいずれかl名とその親族その他特別の関係にある者の合計数は， 理事総数の3分の1を超えてはならない。
5

監事は． 相互に親族その他特別の関係にある者であってはならない。

6

理事に異動があったときは. 2週間以内に登記し， 登記簿の謄本を添え， 遅滞なくその旨を厚生大臣に届け出なければならない。

7（聴

監事に異動があったときは， 遅滞なくその旨を厚生大臣に届け出なければならない。

務）

第 18条
2

理事長は， 本財団を代表し， その業務を総理する。
専務理事（専務理事が欠員の場合は常務理事とする。）は， 理事長を補佐して事務を処理し， 理事長に事故があるときは又は理事長が欠けたときは． その職務を代行する。

3

理事は， 理事会を構成し， この寄附行為に定めるところにより本財団の業務を議決し．
執行する。

4

監事は． 次に掲げる職務を行う。
-211-

(1)

財産及び会計を監査すること(2)

理事の業務執行状況を監査すること(3)

財産会計及び業務の執行について ， 不正の事実を発見したときは． これを理事
会及び評議員会並びに厚生大臣に報告すること(4) 前号の報告をするため必要があるときは． 理事会及び評議員会の招集を請求し，又は招集すること
（任 期）
第19条

役員の任期は， 2年とする。 ただし， 再任を妨げない。
2

補欠又は増員により選任された役員の任期は． 前任者又は現任者の残任期間とする。

3

役員は， 辞任又は任期満了の場合においても． 後任者が就任するまでは． その職務を行わなければならない。

（解

任）

第20 条

役員が次のいずれかに該当するときは． 理事会及び評議員会において， それぞれ理事
現在数及び評議員現在数の3分の2以上の譲決によりこれを解任することができる。
(1) 心身の故障のため職務の執行に堪えないと認められるとき(2)
2

職務上の業務違反その他役員たるにふさわしくない行為があると認められるとき

前項の場合， 理事会及び評議員会においで議決の前に， その役員に弁明の機会を与えなければならない。

（報 酬）
第21 条

役員は無給とする。 ただし， 常勤の役員は有給とすることができる。

2

役員には費用を弁償することができる。

3

前2 項の報酬及び弁償費用に関し必要な事項は， 理事会の議決を経て ， 理事長が別に
定める。

第 4 章
（構

成）
理事会は， 理事をもって構成する。

第22 条
（権

理事会

能）
理事会は． この寄附行為に別に定めるもののほか． 本財団の業務に関する重要な事項

第23条を議決し． 執行する。
（種類及び開催）
理事会は， 通常理事会と臨時理事会の2 種とする。

第24条

2

通常理事会は． 毎年 2 回開催する。

-212-

3 臨時理事会は． 次のいずれかに該当する場合に開催する。
(1) 理事長が必要と認めたとき(2) 理事現在数の3分の 1以上から会議の目的である事項を記載した書面をもって招集の請求があったとき(3) 第18条第4項第4号の規定により ． 監事から招集の請求があったとき（招 集）
第 25 条

理事会は， 理事長が招集する。

2

理事長は， 前条第 3 項第 2 号及び第 3 号に該当する場合は， その日から 14 日以内に臨3

理事会を招集するときは， 理事に対し， 会議の日時 ， 場所， 目的及び審議事項を記載

時理事会を招集しなければならない。

した文書をもって， 少なくとも 7 日前までに通知しなければならない。 ただし， 理事全員の承諾があるとき又は緊急を要するときは， この日を短縮することができる。
（議長）
理事会の議長は ， 理事長がこれに当たる。

第26条
（定足数）
第 27 条（議

理事会は ， 理事現在数の 3 分の 2 以上の出席がなければ開催し， 議決することができ

ない。

決）

第 28 条理事会の議事は， この寄附行為に定めるもののほか， 出席した理事の過半数をもって決し， 可否同数の場合は， 議長の決するところによる。

（書面表決等）第 29条

やむ得ない理由のため理事会に出席できない理事は， 予め通知された事項について書面をもって表決し， 又は他の理事を代理人として表決を委任することができる。
2 前項の場合における前 2条の規定の適用については， その理事は， 出席したものとみ
なす。

（議事録）
第 30条

理事会の議事については， 次の事項を記載した議事録を作成し， これを保存しなけれ,tt.ょらない。

(1) 理事会の日時及び場所(2) 理事の現在数(3) 出席した理事の数及び氏名（書面表決者及び表決委任者の場合にあっては， その旨を付記すること）
4( ) 審議事項及び議決事項(5) 議事の経過の概要及びその結果(6) 議事録署名人の選任に関する事項

-213-

2

議事録には， 議長のほか， 出席理事の中からその会議によって選出された議事録署名人 2 人以上が， 署名押印しなければならない。

第5章

評議員及び評議員会

（評議員）
第 31条

本財団に． 評議員10名以上20名以内を置く。

2

評議員現在数は ， 理事現在数を下回らないものとする。

3

評議員は ， 理事会で選出し， 理事長がこれを委嘱する。

4 評議員は． 役員を兼ねることができない。
5

役員いずれかl名と親族その他特殊の関係にある評議員の合計数又は評議員のいずれかl名及びその親族その他特殊の関係にある評議員の合計数は， 評議員現在数の3分の1を超えてはならない。

6

評議員には第 17条（選任等）第 4 項， 第 19条（任期）， 第 20条（解任）及び第 21条（報酬）（第 21条第 1 項ただし書を除く。）の規定を準用する。この場合において．

これらの条文中「理事」及び「役員」とあるのは「評議員」と読み替えるものとする。

（評議員会）
第 32条

評議員会は， 評議員をもって構成する。

2

評議員会は， 理事長が招集する。

3

評議員会は． 通常評議員会及び臨時評議員会とする。

4

通常評議員会は． 毎年2回これを招集する。

5

臨時評議員会は， 次のいずれかに該当する場合に開催する。
(1) 理事長が必要と認めたとき。
(2) 評議員現在数の3分の1以上から会議の目的である事項を記載した書面をもって招集の請求があったとき
3( ) 第18条第4項第4号の規定により監事から招集の請求があったとき

6

評議員会を招集するときは， 評議員に対し， 会議の日時， 場所， 目的及び審議事項を記載した文書をもって少なくとも 7 日前までに通知しなければならない。ただし， 評

議員全員の承諾があるとき又は緊急を要するときは， この日を短縮することができる。

7

評議員会の議長は． 評議員会において互選する。

8

評議員会は， この寄附行為に定めるもののほか， 理事長の諮問に応じ， 必要な事項について審議し． 助言する。

9

評議員会には第 27条から第 30条（定足数． 議決， 書面表決等， 議事録）までの規定を準用する。この場合において． これらの条文中「理事会」及び「理事」とあるのは，それぞれ「評議員会」及び「評議員」と読み替えるものとする。

-214-

10 前各項に定めるもののほか． 評議員会の運営に関し必要な事項は． 理事会で定める。

第6章

選考委員会

（助成金交付規程）

本財団は， 第 4 条に基づく助成金等を交付するため． 理事会及び評議員会において，

第33条

それぞれ理事現在数及び評議員現在数の 3 分の 2 以上の議決を経て ， 別に助成金交付規程を定める。
2 助成金交付規程の変更は， 理事会及び評議員会において． それぞれ理事現在数及び評議員現在数の 3 分の 2 以上の議決を要する。
（選考委員会）第34条

本財団には第 4 条に規定する助成の対象となる者を選考するため， 選考委員会を置

2

選考委員会は，10名以上 15名以内の委員をもって構成する。

3

委員は， 学識経験のある者のうちから理事会で選出し， 理事長が委嘱する。 ただし，本財団の役員は，4 委員の任期は，
5

2名を超えてこれに当ててはならない。
2年とする。 ただし再任を妨げない。

委員には， 第17条（選任等）第4項の規定を準用する。 この場合において． 同項中「理事」とあるのは「選考委員」と読み替えるものとする。

6

前各項に定めるもののほか， 選考委員会及び選考委員に関し必要な事項は， 理事会で
定める。

第7章
（設

事務局

置）
本財団の事務を処理するため， 事務局を置く。

第35条
2

事務局には， 事務局長及び所要の職員を置く。

3

事務局長及び職員は， 理事長が任免する。

4 事務局の組織及び運営に関し必要な事項は， 理事会の議決を経て理事長が定める。
（備付け書類及び帳簿）第36条

本財団の主たる事務所に， 民法第51 条に規定するもののほか， 次に掲げる書類及び帳簿を備えなければならない。
(1)

寄附行為

(2)

理事， 監事， 評議員及び職員の名簿並びに履歴書(3)

許可， 認可等及び登記に関する書類-215-

(4) 寄附行為に定める機関の議事に関する書類(5) 収入． 支出に関する帳簿及び証拠書類(6) 財産及び負債の状況を示す書類(7)

その他必要な書類及び帳簿

2 前項の書類は． 永年保存しなければならない。 ただし， 前項第 5 号及び第 6 号の書類及び帳簿は10年以上． 第 7 号の書類及び帳簿は 3 年以上保存するものとする。

第8章

寄附行為の変更及び解散（寄附行為の変更）
第37条

この寄附行為は， 理事会及び評議員会において， それぞれ理事現在数及び評議員現在
数の4分の3以上の議決を経厚生大臣の認可を得なければ変更することができない。

（解 散）
第38条

本財団は， 民法第68条第 1 項第 2 号． 第 3 号及び第 4 号の規定によるほか， 理事会及び評議員会において， それぞれ理事現在数及び評議員現在数の4分の3以上の議決を経， かつ ， 厚生大臣の認可があったとき解散することができる。

2 民法第71条後段により 正当な理由なくして引き続き 3 年以上事業を行わないことにより設立許可を取り消される場合の事業とは， 寄附行為第4条第1号から第4号までに掲げる事業とする。

（残余財産の処分）
第39条

本財団が解散のときに有する残余財産は， 理事会及び評議員会において． それぞれ理事現在数及び評議員現在数の 4 分の 3 以上の議決を経． かつ． 厚生大臣の許可を得て，国若しくは地方公共団体又は本財団と類似の目的を有する公益法人に寄附するものと

する。

第9章
（委

雑

則

任）

第40条

この寄附行為に定めるもののほか， 本財団の運営に関し必要な事項は， 理事会の議決を経て ， 理事長が別に定める。

附

1

則

この寄附行為は， 本財団の設立許可があった日から施行する。

2 本財団の設立当初の役員は， 第 17条第 1 項及び第 2 項の規定にかかわらず設立者の定めるところによるものとし， その任期は第 19条第 1 項の規定にかかわらず平成 4 年 3 月 31 日までと
-216-

する。
3

本財団の設立初年度及び次年度の事業計画及び収支予算は， 第10条の規定にかかわらず設立者の定めるところによる。

4

本財団の設立初年度の会計年度は， 第15条の規定にかかわらず設立許可のあった日から平成3年3月31日までとする。

-217-

助成金等交付規程
第1章
（目

総

則

的）
本規程は、財団法人

第1条

コスメトロジ ー 研究振興財団（以下「本財団」という。）寄付行

為第4条l号から第4号に掲げる事業に係る助成金及び同条第5条に掲げる事業に係る功労金（以下「助成金等」という。）に関する交付及び交付後の管理を公正かつ厳正に行うため、本財団寄付行為第33条第 l 項の規程に基づいて定めるものである。
（助成金等の交付対象）
助成金等は、 本財団寄付行為第 3 条に定める目的にかなう研究を行う研究機関又は研第2 条

究者に、 これを交付する。
（交付の対象となる経費）
第3条

助成金等の交付の対象となる経費は、 主として、 研究に直接要する物品の購入費用、その他研究推進に必要な費用又は渡航費用・滞在費•海外留学•海外視察及び外国人研究者の招聘に直接要する費用とする。

第2章

助成金等交付手続（募集手続）
第4条

助成金等の交付対象者（以下「受給者」という。）を選出するため、毎年1回公開された専門誌に広告を掲載して、申請者を募集するほか、学会、 大学等の外部機関に対し、推薦を依頼することができる。
2

募集方法、 募集人員、 募集時期、 推庫依頼に関する事項、 交付金額等、 受給者選出のために必要な事項は、理事会で定める。

（選

考）

第5条

助成金等の受給者の選考は、募集締切日後遅滞なく本財団寄付行為第34条に定める選考委員会（以下「委員会」という。）が公正かつ厳正に、 これを行うものとする。

（選出及び結果の発表）
第6条

委員会において受給者の選考手続が終了した場合、理事会及び評議員会は、 委員会の選考結果に基づき、 受給者及び交付金額を決定し、理事長は、その結果を第4条第1項の広告に用いたのと同一の専門誌に発表するとともに、 決定された受給者にその旨を通知する。 学会、 大学等外部機関に対し申請者の推薦を依頼した場合は、 当該機関に対してもその結果を通知するものとする。

-218-

第3章
（招

選考委員会の運営

集）

第7条

委員会は、理事長がこれを招集する。

2

委員会を招集するには、会日の 1 週間前までに各委員に対して会議の内容、日時、場所を明記した書面をもって、その旨を通知するものとする。

（委員長）
第8条

委員会の委員長は、委員の互選で定めるものとする。

（定足数及び議決要件）
第9条

委員会は、過半数の委員の出席により成立し、委員会の決議は、出席委員の3分の2以上の賛成によりこれをなすものとする。

（議事録）
第 10 条委員会の議事については、その経過の要領及び結果を記載した議事録を作成し、委員
長が記名捺印するものとする。

（選考結果の報告）
委員長は、理事長に対し、前条の議事録を添えて選考結果を報告するものとする。

第11条

第4章

受給者の義務

（収支の報告等）
第 12 条

第 6 条に基づき決定された受給者は、助成金等の収支に関する書類を整理保管し、本財団の会計年度末日経過後遅滞なく、収支決算報告書及び研究経過報告書等を作成し、理事長に提出しなければならない。

（研究題目の変更又は研究等の中止）
第13条

受給者が助成金等の交付の対象者となっている研究題目等に関し重要な変更をしようとするとき、又は研究等を中止しようとするときは、その旨を理事長に報告し、その承認を得なければならない。

（研究の報告）第 14 条

受給者は、研究結果等を理事会に書面をもって報告しなければならない。

2

本財団は、第 12 条の経過報告書及び前項の報告書の全部又は一部につき、刊行物その他の適宜の方法をもって発表することができる。

（研究等の発表）
第15条

受給者が研究結果等を発表する場合は、本財団から助成金等の交付を受けて為したものであることを明らかにしなければならない。

-219-

2

受給者が研究結果等を刊行物に掲載した場合は、 その写しを添付して、 理事長に報告しなければならない。

（その他の業務）第 16 条

受給者は、 その選出された意義を十分認識し、 研究結果等をあげるよう最大の努力を払わなければならない。

第5章

その他

（取消し又は返還要求）
第 17条

理事長は、 受給者が次の各号のいずれかに該当すると認めた場合は、 理事会及び評議員会の議決を経て、助成金等の交付決定の取消し、 又は返還を求めることができる。
(1) 助成金等の交付による研究等を中止したい旨申し出のあったとき(2)

本規程に違反のあったとき(3) その他受給者又は受賞者としてふさわしくない行為があったとき、 又は特別な事情があったとき（規程の変更）第 18条

本規程の変更は、寄付行為第 33条第 2 項によるものとする。
同条の規程による変更決議があった場合は、 理事長は、 その旨を厚生大臣に届け出るものとする。

附則

本規程は、 平成 2 年 7 月 5 日から施行する。

-220-

員

平成5 年 4月1 日現在

役

林

佐

磯

邊

宇佐美
大

澤

小

林

菅 原
村
西

花

川
藤
輪

宮

澤

夫

桂影 雅 榮 幹 晴

泰雄 保 之 久 子 勇 昭 三 夫 彦 徹山隆

野 隈 方 原 藤 々 橋村 呂 部 崎 崎 本 辺

中（株博報堂代表取締役社長
早稲田大学理工学部教授
東京大学名誉教授（樹コ ー セ ー 代表取締役社長
砂香料工業（樹代表取締役社長
安田信託銀行（株取締役会長
慶応義塾大学医学部教授
慶応義塾大学医学部教授
環境衛生金融公庫理事

公認会計士

弁護士
芳 孝 宏 文田

上大 緒 北 近 佐 高 中 野 廣 宮 山 山 渡

員 員 員 員 員 員 員 員 員 員 員 員 員 員
議 議 議 議 議 議 議 議 議 議 議 議 議 議
評 評 評 評 評 評 評 評 評 評 評 評 評 評

黒

典哉

小田倉

（樹コ ー セ ー 代表取締役会長

東京化粧品工業会顧問
高

正 節

事 事

監 監

高

郎 正 男 次 昭 郎 文 雄 郎 二 昭 香士次三
孝 大 律 昭 利 證 正 冨 芳 武 隆

長事 事 事 事 事 事 事 事 事 事 事事 麟

理 専 理 理 理 理 理 理 理 理 理 理小東京理科大学薬学部教授
名城大学理事長
明治薬科大学教授
東京理科大学工学部教授
東京理科大学薬学部教授
内科医師
帝京大学医学部教授
早稲田大学人間科学部教授
早稲田大学人間科学部教授
東京大学薬学部教授
東京工業大学理学部教授
千葉大学薬学部教授
神奈川大学理学部教授
務理事

日本薬剤師会-221-専

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電 話

コスメトロジ ー 研究振興財団
東京都中央区銀座三丁目 5 番 12号
東京03(3564)6731'---------------------------------------------------------·

コスメトロジ ー 研究報告 Vol.1'93
1993年9月1日発行
編者

佐藤大正， 宮川安正

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