皮膚の炎症反応・炎症後組織修復における血小板の役割の解明と血小板機能制御による治療法の開発
京都府立医科大学大学院医学研究科皮膚科学

加 藤則 人、峠 岡理 沙

Accumulated evidences have suggested that platelets play versatile roles in variety of inflammatory reactions, butinvolvement of platelets in the homeostasis of dendritic cell re-distribution in cutaneous tissue after inflammation. Bonemarrow-derived dendritic cells were conjugated with fluorescent and injected intravenously after 6 hours from elicitation ofcontact dermatitis in mice, with or without platelet depletion. The number of dendritic cells re-distributed in the cutaneoustissue was significantly reduced in pltelet-depleted mice, which was recovered by intravenous restoration of platelet.
However, intravenous restoration of platelet from P-selectin-deficient mice did not show this effect. These results suggestthat platelets play important roles in re-distribution of dendritic cells after cutaneous inflammation and homeostasis.

１緒

膚組織に補うため末梢血から皮膚組織へ樹状細胞が供給さ言れることが知られている。この現象にも末梢血中での樹状

古くから血小板は止血に必須の細胞であることが知細胞と血小板との複合体の形成が重要な役割を果たしていら れ て い た が、 最 近 に な っ て 血 小 板 は CD40 リ ガ ン ド、る可能性が推測されるが、この樹状細胞の皮膚組織への供P-selectin などの接着分子、ケモカイン受容体、Toll 様受給におよぼす血小板の役割はまだ検討されていない。そこ

容体を細胞の表面に発現するほか、成長因子、サイトカイで、蛍光で標識したマウス骨髄由来の樹状細胞を末梢血のン、ケモカイン、セロトニンやマイクロパーティクルな血小板を著しく減少させたマウスに静脈注射して皮膚へのど様々な活性物質を遊離することによって、炎症反応に関樹状細胞の遊走動態を解析することにより、皮膚炎組織へわっていることが次第に知られるようになってきた 。しの樹状細胞の供給におよぼす血小板の役割を検討するととかし、皮膚を反応の場とするアレルギー炎症における血小もに、血小板 P- セレクチンの関与についても検討した。

１）

板の役割については、これまでほとんど検討されておらず、

２アレルギー性皮膚疾患の病態と血小板の関わりは不明であった。私たちは、これまでに活性化血小板が遊離するセロトニンがアトピー性皮膚炎患者で増加していること

2. 1２）や、実験

血小板減少マウスの作成

BALB/c マウスに抗血小板抗体を２日ごとに腹腔内投与

セロトニンが単球を活性化させて抗原提示能を増強させるすることで、末梢血中の血小板を 1000 個 /ml 程度に減少さとともにアポトーシスを抑制することで慢性炎症に関与しせた。

２）ていること 、あるいはセロトニンによって免疫制御作用
３）を有する樹状細胞への分化が誘導できること 、さらには

2. 2

接触過敏反応

血小板減少マウスを用いた実験により、ハプテン繰り返し

BALB/c マウスの耳介に１％ trinitrochlorobenzene（TNCB）塗布によるアトピー性皮膚炎モデルマウスの炎症の成立にを塗布して感作させ、７日後にマウスの耳介に１％ TNCB血小板が重要な役割を果たしていることを塗布することにより接触過敏反応を惹起させた。

４, ５）など、皮膚の炎症反応と制御における血小板の役割に関する研究結果を
６）

2. 3

報告してきた 。

マウス骨髄由来樹状細胞の調製と注射

皮膚のホメオスターシスの維持には、皮膚の抗原提示細BALB/c マウスの骨髄を採取し、骨髄細胞を GM-CSF存胞である真皮樹状細胞やランゲルハンス細胞が重要な働き在下で培養し、樹状細胞を分化誘導させた 。そして、培養しをしていることが知られている。皮膚炎に伴って皮膚の樹て得られた樹状細胞（5×10 ）を 5-chloromethylfluorescein状細胞はリンパ管に遊走し、その後減少した樹状細胞を皮diacetate（CMFDA）で標識し、TNCB 塗布 24 時間後のマ3）

6ウスに静脈注射した。

Role of platelets in cutaneous inflammationand tissue remodeling: therapeutic
approach for allergic skin diseases via
blocking platelet activity

2. 4

Norito Katoh, Risa Mineoka10 ）を投与し、P- セレクチンを欠損した血小板の静脈注

血小板補充

樹状細胞の静脈注射 20 分前にマウス血小板（7.5-8.0×8Department of Dermatology, Kyoto
Prefectural University of Medicine
Graduate School of Medical Science

射は抗 P- セレクチン抗体で処理した血小板または P- セレ
クチンノックアウトマウス由来の血小板を用いた。

− 54 −

皮膚の炎症反応・炎症後組織修復における血小板の役割の解明と血小板機能制御による治療法の開発

2. 5

皮膚組織採取はみられなかった（図３）ことから、血小板上に発現した
P-selectin が即時型過敏反応の遅発相において重要な役割樹状細胞を静脈注射して、その６時間後に耳介皮膚を4）を果たしていることが示唆された。

採取し 、4％パラホルムアルデヒドで固定した。そして、OCT コンパウンドで包埋した後、凍結切片を作成し、蛍４光顕微鏡（Biozero, Keyence）を用いて観察した。

３

結考

察

血中の樹状細胞は、血管内皮細胞の P- セレクチンを介果して循環血中から皮膚組織へ遊走することがこれまでに報3. 1 樹状細胞の皮膚への分布におよぼす血小板減少の影響

告されていたが、今回の我々の研究結果より、血中での血CMFDA で標識した樹状細胞を静脈注射して、その６時成が、血中から皮膚組織への樹状細胞の遊走動態において小板上の P- セレクチンを介した樹状細胞との複合体の形重要な役割を果たしていることが示唆された。

間後に耳介皮膚を採取し、蛍光顕微鏡を用いて皮膚組織で

７）

我々は、ヒトのアトピー性皮膚炎の CMFDA 陽性細胞を観察した。血小板減少マウスでは、

４, ５）やマウスを用いた抗血小板数が正常なマウスに比べて、皮膚組織での CMFDA原刺激による皮膚炎陽性細胞数は有意に低下していた（図１）。

性化していることを既に明らかにしており、アレルギー性において、末梢血中の血小板が活皮膚疾患において血中の活性化血小板が樹状細胞の遊走能

3. 2 樹状細胞の皮膚への分布におよぼす血小板補充の影響に大きく影響している可能性が考えられる。
今後、樹状細胞の機能における血小板の役割を明らかにしていくことにより、血小板の活性制御が、接触皮膚炎やCMFDA で標識した樹状細胞を静脈注射する 20 分前に、血小板または溶媒である生食のみを血小板減少マウスに静アトピー性皮膚炎などのアレルギー性皮膚疾患の有用な治脈注射すると、血小板を補充したマウスでは皮膚組織へ分療法になることが期待できる。

布する樹状細胞数の増加を認めた（図２）。
（引用文献）

3. 3 樹状細胞の皮膚への分布におよぼす血小板 P- セ
レクチンの影響１）von Hundelshausen P, Weber C.: Platelets as immune
cells: bridging inflammation and cardiovascular disease.
Circ. Res., 100, 27-40, 2007.

P-selectin ノックアウトマウスから得た血小板を投与した場合や、正常マウスから得た血小板を抗 P-selectin 抗２）Soga F, Katoh N, Inoue T, et al.: Serotonin activates

体で処理してから投与した場合には、遅発相反応の回復

human monocytes and prevents apoptosis. J. Invest.

図１

図２

図３− 55 −コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

play important roles in the late phase of the immediate

Dermatol., 127, 1947-55, 2007.

hypersensitivity reaction. J. Allergy Clin. Immunol.,３）Katoh N, Soga F, Nara T, et al.: Effect of serotonin on

123:581-7,2009.

the differentiation of human monocytes into dendritic

６）Katoh N.: Platelets as versatile regulators of cutaneous

cells. Clin. Exp. Immunol., 146, 354-361, 2006.

inflammation. J. Dermatol. Sci., 53: 89-95, 2009 .

４）Tamagawa-Mineoka R, Katoh N, Ueda E, et al.: The
role of platelets in leukocyte recruitment in chronic７）Tamagawa-Mineoka R, Katoh N, Ueda E, et al.: Platelet-contact hypersensitivity induced by repeated elicitation.

derived microparticles and soluble P-selectin as platelet

Am. J. Pathol., 170, 2019-29, 2007.

activation markers in patients with atopic dermatitis.

５）Tamagawa-Mineoka R, Katoh N, Kishimoto S.: Platelets− 56 −

Clin. Immunol., 131: 495-500, 2009.