紫外線誘発DNA損傷の定量とメラニン色索のサンスクリ ー ン効果
奈良県立医科大学

小

林

信

彦

Melanin is believed to protect cells against ultraviolet (UV)-induced damage formation. It,
however, has not been experimentally proved, because published results have been inconclusive.
The present study was carried out to determine whether intracellular melanin protected cells
against UV-induced photoproduct type DNA damage formation and killing. Three humanmelanoma cell lines containing different amounts of melanin were used. Absorption spectrum,
subcellular localization of melanin, and melanin concentration were examined in the three celllines. Two types of DNA damage, cyclobutane pyrimidine dimers and (6-4)photoproducts, weredetected by an enzyme-linked immunos0rbent assay (ELISA) with monoclonal antibodies specificfor these photolesions. We found that melanin reduced the induction rates of both types of DNA
damage in pigmented cells irradiated with UVC in a melanin concentration-dependent manner.
Almost no differences in repair capacity for the two types of photolesions were observed among
the three cell lines. We also found that the more highly melanotic cell lines were more resistant
to UVC than the less melanotic cell lines. These results suggest that intracellular melanin plays
an important role in preventing UV-induced cell killing by reducing the formation of two types
of DNA damage. The three cell lines, however, might have different induction rates of
UV-damage and different UV sensitivities, under identical conditions with equal amounts ofmelanin, since they stemmed from melanomas of three different patients. Besides, we have notascertained whether melanin protects cells against sunlight, since we used UVC only. Thus, we
treated highly melanotic HM3KO cells with docosahexaenoic acid (DHA) to reduce the amountof melanin to about half, and prepared two types of cells with the same genetic background, withdifferent melanin levels. We carried out similar experiments using UVC and UVB, and ascetainedthat melanin protected melanoma cells from the two types of DNA damage formation and killingboth after UVC and aft'.!r UVB irradiation. Data obtained from the two studies in series suggestthat the protective effect of intracellular melanin increases in a melanin concentration-dependent
manner and reaches a plateau.
1

緒け、近年、皮府癌の患者数が増加傾向にある。 オ

言

ゾン層の破壊に伴って地表に到達する紫外線量が小麦色に日焼けした肌は健康的かつ魅力的であ増加し、患者数は今後さらに増加すると警告される。 また、太陽の下で遊んだり休息することは実ている。 生活習慣の変化や屋外でのしジャ ー の多に気持ちのいいものである。 しかしなから、太陽様化も皮屑癌の増加の重要な原因のひとつである

光中の紫外線によって、日焼け（紅斑•水疱•色と推測されている。それゆえ、—紫外線をよく知り、

素沈着）、光老化（しわ• しみ• そばかす）、皮岡

太陽光と上手に付き合うことが必要となる。 紫外悪性腫瘍、免疫能の低下、白内障などのさ線により表皮細胞の核にDNA損像が生じ 1) 、発癌

まざまな障害が生ずることも事実である。 とりわの引き金となる 2) 。 また、DNA損傷が紫外線によ良性・る紅斑• sunburn ce11生成• 免疫抑制などのさま
ざまな障害の直接の原因となるという報告もある
Determination of UV-induced DNA damage
and photoprotection by melanin

3- 5)。 紫外線による主なDNA損傷として、 シクロ

ブタン型ダイマ ー ・ (6-4)型ダイマ ー および後者の Dewar型異性体が知られ て いる。 これらの損

Nobuhiko Kobayashi

儀の生成量を定量することは、紫外線による障害
Nara Medical Universityとその防御を考える上で重要である。 しかし、従来これらの損傷を直接定量する方法がなかった。

-54-

紫外線誘発 DNA損偽の定乱とメラニン色素のサンスクリーン効果

共同研究者の森らは、これら3種類のDNA損傷に対ける吸光度から細胞内のメラニン色素量を定量しするモノクロ

た。 また、顕微鏡写真から各細胞の直径を測定し、ーナル抗体を世界に先駆けて樹立す

ることに成功した - 1 1) 。 そこで、本研究では、

細胞内のメラニン色素の濃度を算出した。 その結これらのモノクロ ーナル抗体を用いたELISA法お果、細胞内のメラニン色素量は、ペレットの色調

よび免疫組織化学的染色法によって DNA損傷の定•から予想されるように、HM3KO• G-361. Mewoの順量を試みた。

に多かった(Table 1)。

6

さて、紫外線から身体を守る方法として、 日傘•
帽子・サングラス•長袖のシャツ•長ズボンなど

Table 1 Melanin concentration in threemelanin cell linesの着用やサンスクリ ー ン剤の外用などが考えられ

Cells

HM3KO

G-361

Mewo

Melanin content(pg/cell)
Cell diameter (µm)
Melanin concentration(µg/mm3)

26.0士I.I

5.5士0.5

0.8士0.2

21.2土3.4
5.2土0.2

20.0士3.8
1.3土0.1

13.9土2.7
0.6士0.2·---·---------------------------··--·-----------------·---·-----る。 現在、サンスクリ ー ン剤などの紫外線防御効果の判定には、紅斑抑制効果を指標とした Sun
Protection Factor(SPF) が用いられている。 この評価に、DNA 損像生成に対する抑制効果を用いEach value shows the mean 土 SD

れば、紅斑のみならず、皮岡癌などさまざまな紫
外線障害に対する防御効果を反映することができ

次に、これらのメラノ ー マ細胞をホモジナイズ

ると考えられる。 さらに、我々はメラニン色素を‘ ー
し、遠心分離によってメラノ ノ
ムを含む分画を用いて紫外線防御することを提唱している。 しか抽出し、紫外線領域における吸光曲線を比較した。

し、メラニン色素のDNA 損俄生成抑制効果は実験‘ ー
3種類のメラノ ー マ細胞株に含まれるメラノ ノ

2

的には未た証明されておらず 1 - 1 8) 、さらに逆に

ム分画の吸光曲線は同じパタ ー ンを示し、波長がメラニン色素が光増感作用を持つという報告もあ

短くなるほど吸光度が増加し、200nm付近に吸lり 9) 、メラニン色素の光防御への応用の可否に収極大 を持つというメラニン色素に典型的なもの

ついても決着がついていないのが現状である。 紫であった(Fig. 1 ; デ ー タは真の吸収に加え、散外線とメラニン色素の関係については、総説を参乱による効果も含む）。

照されたい 2 0)

また、これらのメラノ ー マ細胞をプラスチック・。 本研究では、実験材料と実験方法を厳選することによって、メラニン色素の生物

プレ ー ト上で培養し、 その垂直切片をFontana­

学的な差異を際立たせる工夫を行い、メラニン色

Masson染色してメラニン色素の細胞内局在を調べ

素が紫外線誘発DNA損儀の生成を抑制することをた。 すべての細胞株でメラニン色素の局在には差証明した。

がなく、メラノソ ー ムは細胞質全体に分布していた。 以上の結果より、これら3種類のメラノ ー マ

2

験

2.0
マ細胞を用いた

HM3KO

実験材料として、細胞内のメラニン色素と核との位置関係が明確である培養細胞が優れていると考えられた。 そこで、 ベレ ットの 色調 の黒いHM3KO(神戸大•市橋教授より供与された）、茶色い

6
3
G

a
uUl'Q.JO SQV

3種類の培養ヒトメラノ
)
実験 '1

ー

ー
゜ ゜
ー

2. 1

実

200

G-361および白いMewo (ともに JCRB細胞パンクより供与された） の3種類の細胞株を選んだ。 メ

220

240 260 280 300
Wavelength (nm)

320

340

Fig. 1 Absorption spectra of melanosomal
fractions from human melanoma cells.

ラノ ー マ細胞をlN NaO Hにて可溶化し、400nmにお-55-

細胞株を用いて、 細胞内のメラニン色素量 と紫外巌を測定した。 2%牛胎児血清にて抗体の非特異

線 に よって誘発されるDNA損傷量とを比較する

的な吸着を阻害した上で、 シクロブタン型あるいことによって、 メラニン色素の紫外線防御効果をは(6-4)型ダイマ ー に対するモノクロ ー ナル抗体

定量できることが推測された。 さて、 従来の報告を反応させた。 つづいて、 ビオチン標識抗マウス

では、 メラニン色素の紫外線誘発DNA損傷生成

lgG抗体、 さらに、 ペルオキシダーゼ標識ストに対する防御効果はシクロブタン型ダイマ についてのみ論じられて きた l 2- l 9) 。 しかし、 最近でレプトアビジンを反応させた。 oー フェニレンジア

は (6-4)型ダイマ ー も紫外線によって誘発され、る吸光度として測定し、 両ダイマ ー の生成量としシクロプタン型ダイマ ー と同様に細胞死や突然変た。 シクロブタン型ダイマ ー および(6-4)型ダ異の原因となっている ことが知られ ており、

イマ ー ともに、 その生成量は紫外線照射線量に依(6-4) 型ダイマ ー 生成量の定量も必須となってい存して増加していた。 また、 メラニン色素量の多る。 そこで本研究では両DNA損傷の生成量を定量

い細胞株ほど両タイマ ー の生成最が少なかった。

するために、 シクロブタン型ダイマ

あるいは

この結果より、 細胞内のメラニン色素は、 その量ナル抗に依存して紫外線によるDNA損像の生成を抑制ー( 6 - 4)型タイマ ーーに特異的 なモノクロー

ミンを基質として、 その発色度を492nmにおけ体を用いたELISA法を採用した O) 。 この定量法は、していることがわかった(Fig. 2 a, b)。 さらに、

現在のところ最も感度の高い方法のひとつであり、各々の細胞株の両ダイマ ー 修復能を比較したとこ

さらに、 両ダイマ ー 量を同時に定星できる唯一のろ、 ほとんど差が見られなかった(Fig. 3 a, b)。

lー方法である。 本実験では5-20J/が(254nm)という低線量の紫外線照射によっ，て生成する両ダイマ ーg unpoJO

S o�o 6u1u1ewaJ � uau」ad

物学的に充分に低い線量であったため、 メラノー
マ細胞株の紫外線感受性の比較にも用いることができた。 メラノー マ細胞に紫外線を照射した後、細胞からDNAを抽出し、1%硫酸プロタミンで前処理した96穴プレ ー トを用いてDNA上の両ダイマ ー

b. c 6-4)photooroducts
1.2

1.0

1.0

eu~ 6�H

0.8• uu•QJ0SQV

EU~ 6マ 1 eg ueqJ0SQV

1.2

0.6
0.4

5

10

15

UV dose (Jim)

20

0.6
0.4

5

10

15

UV dose I J/m2 I

20

Fig.2 Induction of cyclobutane pyrimidine
dimers(a) and (6-4)photoproducts(b)in DNA from UV-irradiated humanmelanoma eel Is. DNA damage wasmeasured by the ELISA with monoclonal
antibodies against photolesions.

閥•

゜゜

\'

四KO

."]

100

G-361呂QHe匹〖 80？、ミヽ0�

● �3KO
0 G-361
0 Hewo

苔"'

＼＼
;
��し
60

'f

()

6

12

18

.,

:: 20

8!.

24

Repair tlme (h)Fig.3 Repair capacity for cyclobutane
pyrimidine dimers(a) and (6-4)photo­products(b) in melanoma eel Is. HM3KO,
G-361, and Mewo eel Is were UV
irradiated at 20, 15, and 10J/m',
respectively,to induce similar numbersof photo Iesions. The percentage of theinitial number of photolesions wasdetermined at various times after UV
irradiation.

0.8

0.2

0.2

00 80 .
60 40 20

量を定量することができた。 また、 この線量は生

a. Cyclobutane d1mers•。

b. (6-4)Photoprooucts

a. Cyclobutane d1mers

また、 3種類のメラノーマ細胞株の紫外線感受性をコロニ ー 形成法によって比較したところ、 メ
ラニン色素量の多い細胞株ほど紫外線に抵抗性であった。 この結果より、 細胞内のメラニン色素は、-56-

紫外線誘発DNA損傷の定試とメラニン色素のサンスクリーン効果

いることがわかった (Fig. 4)。

果より、細胞内のメラニン色素が紫外線によるDNA損楊の生成 および 細胞死を抑制することが証明された。
2. 2,

ー゜

前実験では、3人の異なる患者さんから樹立さ5

5

ドコサヘキサエン酸(DHA)によってメラニン
色素量を減少させた細胞を用いた実験'?)

,0ー 。

'
O

ー

p>pt ns ,uau」•d

K ● 0如叩L \ \
●e o

]＼＼

l- \

50

99

•K
O

100

゜

死をも抑制していると考えられた。以上の実験結<

その量に依存して紫外線による細胞死を抑制してれたメラノ ーマ細胞株を用いた。このため、細胞内のメラニン色素量が同じであっても細胞株ごと

10 15 20
UV dose (Jim2 lにDNA損傷生成量や紫外線感受性に差があった
可能性を否定できない。また、紫外線として uvc

Fig.4 UV-survival curves of cultured humanmelanoma cel Is. Survival after UV
irradiation was determined by thecolony-formation method.

を照射したが、 uvcは大気中で ほぼ吸収され るため、メラニン色素が実際に地表に到達する太陽光に対しても防御作用を持つかどうかを確かめる

次に、メラニン色素による両ダイマ ー 生成抑制
効果と細胞死抑制効果の関連を検討するために、
UV-protection factor (UPF; 紫外線防御能 を比で表したもの）を算出した (Table 2) 。

必要がある。これらの疑問点を解決するために、遺伝的背景が等しく、メラニン色素量のみ異なる
ようなメラノ ーマ細胞株を作り、メラニン色素自体の uvcおよびUVBに対する防御効果の証明を行った。
我々は、多価不飽和脂肪酸であるドコサヘキサ

Table 2 UV-protection factors(UPF s ) in threemelanoma cell lines

エン酸 ( DH A)にメラニン色素合成阻害作用の あ-------------------------------------------------------------------------------Cells

HM3KO

G-361

Mewo

ることを発見している 2 3) 。そこで、メラニン色

UPFs for cyclobucane dimers*for (6-4)phmoproduccs*
for cell killing!
Relative melanin concentration1

2.4士0.6
2.3土0.5
2.2士0.3
8.7士0.4

1.6士0.5
1.7土0.1
1.7士0.3
2.2土0.2

1.0
1.0
1.0
1.0

素を多量に含むヒトメラノ ーマ細胞株HM3KOにDHA--------------------------------------------------------------------------------

を処理して、細胞内のメラニン色素量をコントロー---------------------------------------------------------------------------------

ルする こ とにした。まず、DHAの細胞毒性をコロニ ー 形成法で調べた。DHA50µM 6日間処理で• Calculated from UV doses showing 0.5 of absorbance at 492 nm in Figs. 2a,b {the mean士 SD). The value of Mewo was expressed as 1.0.
§Calculated from UV doses showing 50 of pcn:cnt survival in Fig. 4 {themean士 SD). The value of Mewo was expressed as 1.0.
f Calculated from melanin concentration in Table I {!he mean士 SD). The
value of Mewo was expressed as 1.0は細胞毒性はほとんど認められなかった(Fig. 5)。

ー•—•ヽ+

100
Le>l>」ns :iuau」ad

各細胞株においてシクロプタン型ダイマ ー および(6-4)型ダイマ ー の生成抑制に対するUPF値がほぼ等しかったことより、メラニン色素は紫外線を遮蔽することにより両ダイマ ーの生成を 同様に抑制していると考えられた。さらに、これら両ダイマ

5010一生成抑制に対するUPF値と細胞死抑制に対す
るUPF値も ほぼ等 しいことがわかった。各々の

゜

25

50

75

DHA (µM)

細胞株の間で両ダイマ ー 修復能に差が見られなかったことも勘案すると、細胞内のメラニン色素は、両ダイマ ー の生成を抑制し、その結果として細胞-57-

Fig.5 Cytotoxicity of DHA. Cytotoxicity wasdetermined by the colony-formation
method.

また、 この 処理条件では、 細胞内のメラニン色
素量は、 溶媒のDMSOのみで 処理したコントロール

線防御効果を判定できると考えられた。 次に、 メ
ラノ ー マ細胞に紫外線(UVCおよびUVB)を照射し、生成するDNA損傷量をELISA法にて測定した。 その細胞株の約半分に減少した(Fig. 6)。

イマ ー の生成量は、 uvc 照射後およびUVB 照射後と

.¢

ー●

g \

- \

もに、 メラニン色素量の多い コントロ ー ル細胞株の方が、­

Cyclo切tone dlmers

DHA

g

ー〇 ●

100

200

JOO

400

UVB dose (J/m2 )I 6-4 ll>hotooroducts
0.5

匹

4
0

／

↓g

10

15
2

260

280

300

320

INC dose (J/m l

340

。

。

●1

1
0

5

Wavelength (nm}

2
0

2
•
0

0.5
DHA

3
0

_o ● _g』~6
マ " .uu•QJOSQV

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_
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_
／

4
•
0

1.0

6
•
0

g ~ 6',..,u,q,osqv

au UQQ.JO SQV

DMSD

8
•
0

2.0

240

／
人
｀

INC oose (JJ.,2 J

1.0

220

2
．
0

゜゜

15

Fig.8 Induction of cyclobutane pyrimidine
dimers in DHA- and DMSO-treated cells
irradiated with UVC (left) andUVB (right). Cyclobutane dimers were
measured by the ELISA method.

持っていた(Fig. 7)。

200

4
．
0

る以外には紫外線防御に関してほぼ等しい性質を゜

60

g ~6> lO auUOQJOSQ>I20

細胞内局在がほぼ等しく、 メラニン色素量が異な

10

0●

8
0

4
0

細胞株は、 細胞形態・メラニン色素の吸光曲線・

5

／ も●

0●

1.0

¢●

0 - 6
;5
0

ルのメラニン色素最の多い細胞株を用いて前回と同様の実験を行なった。 2種類の

1. 5

OHAg

ーCT ●

0
1

WU 26'• • auug 」OSQV

゜。

DHAを処 理したメラニン色素量 の少ない細胞
株と

／
／

1
1

6
Days

F i g. 6 Inhi bitory effect of DHA on
melanogenesis. Melanin content ,nDHA- and DMSO-treated eelIs wasdetermined.

コントロ ー

／

1.4

3

；

OHA

゜゜

DHA処理したメラニン色素量の少ない細胞株よりも若干少なかった(Fig. 8, 9)。

^
Y

¢

..
I ..
.
..

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『
-—. . .

▽\

60I 1ua1uou u=u•t•H
/

(LLOu

25 20 15 10

！
●
’
.+

結果、 シクロブタン型ダイマ ー および(6-4)型ダ

100

200

300

400

UVB dose (JimりFig.9 Induction of (6-4)photoproducts 1n
DHA- and DMSO-treated cells irradiatedwith UVC (left) and UVB (right).
(6-4)photoproducts were measured by
the ELISA method.

Fig. 7 Absorption spectra of melanosomal
fractions from DHA- and DMSO treatedce11 s.

また、 uvc およびUVBに対する感受性も、 メラニ
この結果より、 この2種類のメラノ ー マ細胞株

ン色素量の多いコントロ ー ル細胞株の方が若干抵を用いることによって、 メラニン色素自体の紫外抗性であった(Fig. 10)。
-58-

紫外線誘発DNA損傷の定鼠とメラニン色索のサンスクリーン効果

ニン色素量と紫外線防御効果(UPF値） との関係を

゜
ー

,
•
•
•
•
^
a
」
u
a
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n
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•
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l

11) 。

杉雑寸した (Fig,

v
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D
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a
u
」
a
d

Melan1n concentrat1on (JJg/111113 l

人
・

3.0

゜6．
0

100 200 300 400
UVB dose { Jim2 >゜

50

胞死抑制に対するUPF値がほぼ等しい値をとった。

uvcおよびUVBの両この結果より、 メラニン色素は方に対して防御効果を持つこと、 メラニン色素はー

口cyclobutane dimers
O (6-4)photopr叩ucts△ cell killing

DHA treated
HM3KO

HM3KO

↓

1

B
7
6
5
4
3
2
Relative melanin concentration

910

Fig.11 Photoprotective effect of melaninin melanoma cells with different
pigment levels. The relationshipbetween relative melaninconcentration (or melanin concent­ration) and UV-protection factor
among four types of melanoma cel Is
was shown using the present andprevious results. Only results of
UVC were plotted. Each point shows
the mean (土SD).

ー
メラニン色素による両ダイマ 生成抑制および細紫外線を遮蔽することによって両ダイマ

0
1

uvcおよびUVB照射後ともに、

』�{

o

O

UV-protection factor(UPF; 紫外線防御能の比）を算出したところ、

A

5
．
1

Fig.10 UV-survival curves of DHA- and DMSO­
treated cells. Survival after
UVC"(left) and UVB (right)
irradiation was determined by thecolony-formation method.

0
．
2

10
15
uvc dose I Jim2 l

2.5

/\fl
'
d
J
lQ
a
nu
」uo
e
u
ら3

゜

o
5

Y

g
\

＼

.
＾

ー
O
5
0.6

実験から得られたデ ー タも加えて、 細胞内のメラの生成を同様に抑制すること、 そして、 その結果として紫外線による細胞死をも抑制することが示唆され

tこ(Table 3)。
そして以下のことが明らかとなった。
1)

Table 3 UV-protection factors between DNA­and DMSO-treated cel Is

UVC-induced cyclobutane dimers0(6-4)photoproductsb
cell killingc
UVB-induced cyclobutane dimersd(6-4)photoproducts'
cell. killingc.
ReJat1ve meI anm concentration

DMSO---------

1.18土0.11
1.14士0.10
1.19土0.08
1.12士0.07
1.24士0.15
1.21土0.02
2.33土0.37

D------------------------------

クロブタン型ダイマ ー 生成抑制・(6-4)型ダイマ

oooooouAH:lll lllll

HM3KO cells treated by

細胞内のメラニン色素量が増加するほど、 シ一生成抑制および細胞死抑制に対する UPF値が増加すること。
2)

3 種類のUPFについて、 各細胞株のUPF値を結ぶと、 ほぼスム ー ズな3本の曲線が描けること。

3)abde Calculaied from UV doses showing 0.7°,0.4丸o.sd, or 0.2< ofabsorbance al 492 nm (the mean士SD). The values of DHA-trealed cells wereexpressed as 1.0.
c Calculated from UV doses showing 10 of percent survival (the mean士SD).
The values of DHA-1rea1ed cells were expressed as 1.0.

3種類のUPFの曲線がほぼ重なること。
これらの結果より、 メラニン色素が紫外線を遮蔽することによって両DNA損像の生成を抑制し、その結果として紫外線による細胞死をも抑制することが推測された。 さらに、 メラニン色素の紫外

しかし、 2つの細胞株間の相対的なメラニン色

線防御作用が強力であるため、 メラニン色素量が素量の差が2.33倍あったにも関わらず、 その紫外

比較的少ない状態でもある程度の防御効果が認め

線防御効果(UPF値）は非常に小さな値(1.12-1. 24)

られるが、 その効果はメラニン色素最が中等度にととまった。 この理由を検討するために、先の(2µg/mmりの状態で飽和してしまう事が推測され-59-た。 2つの実験で細胞内のメラニン色素量の比盛んである。 一方、太陽光中の紫外線によって、とUPF値が並行していなかったこと、および2番

しわ• しみ• そばかす・皮府癌なとさまざまな障目の実験でメラニン色素の紫外線防御効果が非常害が生ずることも事実である。 しかし、紫外線にに小さかったことは、このメラニン色素の紫外線よる障害を最小限に予防しながら、太陽光と上手

防御効果の飽和のためであったと考えられた。 こに付き合ってゆくことは可能であろう。
一般に、一生に被ばくする総紫外線巌のうち、の結果より、培養細胞を用いてメラニン色素の紫外線防御効果を証明する場合には、細胞内のメラ半分以上を青年期までに被ばくすると言われていニン色素量の差と同時に、メラニン色素の絶対的る。 このことから、紫外線対策をなるべく早い年

な最も非常に重要であることがわかった。

齢（幼少時）から、特に戸外での運動の際に行うことが大切である。 紫外線から皮rf1を守る方法とし

2. 3

免疫組織化学的染色法を用いた紫外線誘発て、帽子• 長袖のシャツ• 長ズボンなどの着用やDNA損傷の定量

サンスクリ ー ン剤の外用などが考えられる。 日本

現在、培養細胞レベルで認められたメラニン色

人の皮府には、メラニン色素が比較的多量に含ま素の紫外線防御作用が、皮問でも実際に見られるれている。 そこで、我々はメラニン色素も利用しことの証明を試みている。 多層構造をとる表皮でて紫外線防御することを提唱している。 具体的には、メラニン色素と核との位置関係が培養細胞には、 1)急に強い紫外線にあたらないこと。 あた

比べてより複雑である。 そこで、シクロプタン型

る場合にはサンスクリ ー ン剤などを使用して強力および(6-4)型ダイマ ー に対するモノクロ ー ナルにブロックすること。

抗体を用いた蛍光抗体間接法を用いて、紫外線照る場合、日光にあたった後に皮府が色素沈着しや射した表皮細胞内の両ダイマ

ー

生成量を定最する

2)慢性的に紫外線にあた

すい人は、紫外線量の少ない季節あるいは時間か系を作製している。 この方法を用いると、メラニ

ら少しずつ日光にあたる時間を延ばしていったり、ン色素の分布などの組織学的な検討とDNA損傷

あるいはサンスクリ ー ン剤 を併用して徐々に日焼の定量を同時に行うことが可能となる。 また、表け（色素沈着）し、内因性サンスクリ ー ン剤である

皮各層ごと、あるいは細胞1個ごとについての両

メラニン色素の量を徐々に増加させて紫外線防御

ダイマ

ー

を行なう。

生成量を定量することができるようにな

3) 日光にあたってもほとんど色素沈る。 皮府癌の発生には、幹細胞の性質を持つ基底

着しない人は、常にサンスクリ ー ン剤などを用い細胞におけるDNA損傷が引き金となると考えらて紫外線防御を行う。 この方法ならば、サンスクれている。 この方法を用いれば、基底細胞に生じ

リ ー ン剤の副作用・経済的負担• わずらわしさな

た両ダイマ

ー

の生成量も定量できる。 そ れゆえ、

メラニン色素やサンスクリー

どの問題を最小限にとどめ、子供にも応用できるン剤などの皮府癌予と思われる。 さらに、我々はサンスクリ ー ン剤な

防効果についての予測も可能となる。 現在のとことの紫外線防御効果の判定を、表皮細胞に生ずるろ、蛍光抗体間接法の基礎実験はほぼ終了し、まDNA損俄に対する防御効果(SPF)で表すことを提唱もなく本学に導入されるレ ー ザ ー 顕微鏡を用いてしている。 現在は、紅斑反応の抑制効果を指標と定最化する予定である。

して評価されているが、紅斑反応は生物学的な反応であるため、被検者間の個人差が大きく、最適

3

総

括

とは言えない。 一方、DNA損傷は光化学的反応の結果として、紫外線照射線量に依存して生成するため、検査のばらつきが少ない。 また、紅斑の太陽光にあたることは、人類にとっての基本的ー・

みならず、皮阿癌やその他さまざまな紫外線障害

ゴルフ ・ テニス ・ 釣りなどの屋外でのレジャ ー もに対する防御効果を反映することができる。 我々

な欲求のひとつである。 また、海水浴• スキ-60-

紫外線誘発 DNA担出の定屈とメラニン色索のサンスクリーン効果のモノクロ ー ナル抗体を用いた免疫組織化学的染色法が確立されれば、紅斑をおこさない程度の低線温の紫外線によって誘発されるDNA損俄の定量が、組織レベルで可能となるであろう。 さらに、
人工的に再構成した皮屑を用いて統一した規格を作製すれば、被検者も不要になる。 このことから、被検者によるばらつきも無くなり、 さらに精度・再現性に優れた方法となることが期待される。 本研究は、 現実的な紫外線予防方法の確立およびその効果の評価に大きく貢献するものと確信している。

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