皮膚細胞を用いた化粧品中のナノマテリアルの安全性評価〜ナノマテリアルの皮膚ランゲルハンス細胞に対する影響評価〜
大阪大学薬学研究科毒性学分野

堤康 央

Amorphous silica nanoparticles (nSPs), widely used in cosmetics, medicines, and foods, are thought to pose risks
induced by changes in the biologic reactivity and kinetics of bulk materials due to the reduction of the particle size. In aprevious study, we demonstrated that silica particles with a diameter of 70 nm penetrated the stratum corneum (SC) of mouseskin and were taken up by living cells such as keratinocytes and Langerhans cells. Here, to reveal the relationship among
particle size, distribution, and cellular response, we evaluated size-dependent intercellular localization and cytotoxicity ofsilica particles in a mouse epidermal Langerhans cell line (XS52). Treatment with silica particles of various diameters (70,300, or 1000 nm) increased both the amount of silica particles taken up into the cells and cytotoxicity in accordance withthe reduction of particle size. These findings suggest that smaller-sized silica particles induce greater cytotoxicity against
Langerhans cells in association with a greater quantity of silica particles taken up by the cells.

1．緒

内に吸収され得る可能性を見出している。しかしながら、言

ナノマテリアルの安全性研究は世界経済協力機構（OECD）

近年のナノテクノロジーの発展に伴い、化粧品や食品、の主導のもとで進められているものの、ハザード情報が散医薬品分野を中心として、ナノマテリアルを配合した数多在するばかりで具体的な安全性評価指針の策定や安全なナくの製品が既に実用化・上市されている。ナノマテリアル

ノマテリアルの設計指針に関する情報は皆無である。これは、サイズの減少に伴い、電気的・磁気的・光学的特性やは、従来までのサブミクロンサイズの素材の知見に基づき、組織浸透性などといった点において、従来までのサブミクナノマテリアルの場合でも曝露されても吸収されないだろ

ロンサイズ以上の素材とは異なる特徴的な機能を有するこうという誤った認識にも大きく影響されている。このままとが明らかとなっている。そのため種々の産業に革命を起

では、ナノマテリアルの体内吸収性 / 生体内動態に関するこす新素材として強く期待されている。化粧品産業におい検討がなされぬまま、ハザード情報のみを鵜呑みにした科ては、粒子サイズを小さくすることにより得られる使用感学的根拠に乏しい無闇な使用規制が施行されてしまい、ナの向上や紫外線遮蔽能の向上といった利点から、ナノシリノマテリアルの有用性を享受した豊かな社会の構築や産業カやナノ酸化チタンなどのナノマテリアルが多くの製品に発展が阻害されてしまいかねない。従って、ナノマテリア使用されており、その使用量は、世界で年間約 2000 トン

ルと従来までのサブミクロンサイズ以上の素材との体内 /にも達することが報告されている。

細胞内動態や生体 / 細胞への影響における相違点を科学的

このようにナノマテリアルが我々の日常生活に欠かせな根拠に基づいて立証し、ナノマテリアルの物性を反映したい素材となっている一方で、ナノマテリアルは、これら特安全性を評価し、それらの情報を基盤としてより具体的な徴的な機能を反映して、サブミクロンサイズ以上の従来素安全性評価の推進と情報発信、安全設計指針の提示が急務

材とは異なる生体内動態や生体影響を発揮する可能性が危となっている。

惧され始めている。実際に近年、遺伝子改変マウスなどを本稿では、マウスランゲルハンス細胞株（XS52 細胞）を用いた安全性試験から、カーボンナノチューブがアスベス用いて、香粧品基材としての非晶質ナノシリカの粒子サイト様の発がんリスクを有するなど、ヒトの健康を確保する

ズと細胞内局在や細胞傷害性 / 酸化ストレス誘導との連関上で軽視できない事実が続々と報告されている 1）、2）。事実、に焦点を絞って解析し、興味深い知見を得たので報告し、我々の研究グループの検討結果においても、直径が 100nm

当該成果が、安全で安心、そして魅力的な化粧品／香粧品以下の非晶質ナノシリカが、皮膚角質バリアを通過して体の創出に結びつくことを期待している。

2．実
Safety science for nanomaterials in
cosmetics using skin-related cells
Yasuo Tsutsumi
Laboratory of Toxicology and Safety
Science, Graduate School of PharmaceuticalSciences, Osaka University

2. 1

験

シリカ粒子

本研究では、赤色蛍光色素（RedF）で標識された直径70 nm（nSP70）、300 nm（nSP300）、1000 nm（mSP1000）の非晶質ナノシリカを使用した。

− 78 −

皮膚細胞を用いた化粧品中のナノマテリアルの安全性評価

2. 2細胞培養〜ナノマテリアルの皮膚ランゲルハンス細胞に対する影響評価〜

2´7´- dichlorofluorescein（DCFH - DA）を用いた。DCFH-DA

マウスランゲルハンス細胞株（XS52 細胞）はマウス GM-

は、細胞内において ROS と反応して DCFH となり、蛍光CSF（2 ng/ml）、10％マウス皮膚由来繊維芽細胞（NS47を発する。3×104 個の XS52 細胞を 96 プレートに予め播種細胞）の培養上清、10％非働化ウシ胎児血清、1％非必須し、24 時間後に種々の濃度に調製した nSP70、nSP300、

アミノ酸、1％ L -グルタミン、1mM ピルビン酸ナトリウム、mSP1000 を添加した。各シリカを添加して 3 時間後、phenol

1％ 2- メルカプトエタノール、10mM HEPES 緩衝液、1％

red free の RPMI-1640 培地（ナカライテスク）で 3 回洗浄抗生物質を含む RPMI -1640 medium（ナカライテスク）を

操 作 を 行 い、10 mM に 調 製 し た DCFH-DA を 含 有 し た用いて、37℃、5％ CO2 条件下で培養した。

phenol red free の RPMI-1640 培 地 を 添 加 し、37 ℃、5%CO2 条件下で培養した。30 分培養後、DCFH の蛍光強度を2. 3透過型電子顕微鏡観察

励起波長 485 nm、蛍光波長 530 nm で蛍光プレートリーダ

4

1×10 個の XS52 細胞を 8 穴チャンバースライドに播種ーを用いて測定した。

し、24 時間後に終濃度が 100 mg/ml になるように nSP70、3．結

nSP300、mSP1000 を添加した。ナノシリカを添加して 24果時間培養した XS52 細胞を PBS で洗浄した後に、氷冷した

これまでに我々は、香粧品基材として粒子径 70nm の非2.5％グルタールアルデヒド液で１時間固定した。続いて晶質ナノシリカをマウスの皮膚に塗布したところ、角質層0.1 M リン酸緩衝液で洗浄した後に１％四酸化オスミウムを通過し、角化細胞やランゲルハンス細胞などの細胞内にで 30 分間後固定し、さらに上昇エチルアルコールで脱水取り込まれることを明らかとしている。これらの結果は、した。常法に従ってこれらの標本をエポキシ樹脂で包埋し、直径が数百 nm 以上の従来素材では見られない現象であり、熱重合により硬化させた。この標本からダイヤモンドナイ

従来素材では予想もしなかった想定外の生体影響を誘発す

フを用いて超薄切片を作製し、無染色あるいは酢酸ウラニる可能性を示している。これらの結果を踏まえて、本論文

ウムおよびクエン酸鉛の二重電子染色を施した後に、透過ではマウスランゲルハンス細胞株（XS52 細胞）の in vitro

電子顕微鏡を用いて観察した。

培養系を用いて、ナノシリカの粒子径と細胞内動態や細胞2. 4影響との連関を解析した。初めに、非晶質ナノシリカの粒3細胞増殖試験（［ H］チミジン取り込み試験）

子径が細胞内局在に与える影響について評価する為に、

41×10 cells の XS52 細胞を 96 穴プレートに予め播種し、100 mg/ml の nSP70、nSP300、mSP1000 を 24 時 間 処 理 し

24 時 間 後 に 種 々 の 濃 度 に 調 製 し た nSP70、nSP 300、た XS52 細胞を透過型電子顕微鏡で観察した。その結果、

mSP 1000 を添加した。各ナノシリカを添加して 18 時間後

Fig. 1 に示すように、nSP300 あるいは mSP1000 を適用しに、１mCi/well となるように［3H］チミジンを添加し、さらたいずれの群において各シリカが細胞内に侵入した像が認に６時間培養した。培養終了後に細胞内に取り込まれためられた（Fig. 1 c, d）。それに対して、nSP70 は、細胞内3［ H］チミジンの放射活性（cpm）を液体シンチレーションに侵入するばかりか核膜を透過して核内に侵入していた

カ ウ ン タ ー（TopCounter、PerkinElmr、MA、USA）を（Fig. 1 a, b）。更に、粒子サイズの減少に伴い、細胞に取用いて測定した。

り込まれる粒子量の増加が認められた。これらの結果は、
直径 70 nm の非晶質ナノシリカが従来までのサブミクロン

2. 5

細胞膜傷害性試験（LDH release assay）サイズ以上のシリカとは異なる細胞内動態特性を示すことナノシリカの細胞膜傷害性は、ナノシリカを曝露したを示唆している。更に、nSP70 は、nSP300、mSP1000 とXS52 細胞の上清中に放出された Lactate dehydrogenaseは異なる細胞内局在を示すことから、細胞に対する反応性4（LDH）量を指標として評価した。1×10 cells の XS52 細胞も異なる可能性が示された。

を 96 穴プレートに予め播種し、24 時間後に種々の濃度にそこで次に、シリカの粒子サイズが XS52 細胞の増殖能調製した nSP70、nSP300、mSP1000 を添加した。各ナノに与える影響について評価した。その結果、Fig. 2 に示すシリカを添加して 24 時間後、細胞上清を回収し、上清中ように、ナノシリカ処理により、XS52 細胞の増殖は粒子の LDH 量を LDH cytotoxicity test（WAKO、Osaka、径依存的に阻害されることが示された。nSP70、nSP300、Japan）を 用 い て 定 量 し た。 尚、 細 胞 膜 傷 害 性（ ％ ofmSP1000 の IC50 値 は、 そ れ ぞ れ 4.2mg/ml、32.6mg/ml、control）は 0.％ Tween を添加群の LDH 放出量を 100％と75.0 mg/ml であり、粒子サイズの小さいシリカほど、よりして算出した。

低濃度で XS52 細胞の増殖阻害を示すことが明らかになった。以上の結果は、粒子サイズが、細胞内局在と同様に細2. 6 非晶質ナノシリカ添加時の活性酸素種（ROS）の測定胞に対する反応性に対しても大きく影響を及ぼすことを示

活性酸素種（ROS）量の評価には蛍光プローブである唆している。続いて、ナノシリカによる粒子径依存的な細− 79 −

コスメトロジー研究報告 Vol.20, 2012

胞傷害性の機構解明を目的に、膜傷害性による細胞傷害性められた。一方で、mSP1000 添加群では LDH の放出は確の指標である Lactate dehydrogenase（LDH）量の測定を認できなかった。この結果より、ナノシリカによる XS52行った。ナノシリカを XS52 細胞に添加し、24 時間後に回細胞に対する粒子サイズ依存的な細胞傷害性は細胞膜に対収した培養上清中の LDH 放出量は、Fig. 3 に示すように、する傷害性の違いに起因していることが示された。

nSP300、nSP70 添加群では濃度依存的な LDH の放出量の安全なナノシリカの創出や開発支援を念頭に、ROS 産増加が認められた。特に 30 mg/ml の nSP70 添加群におい生の観点から XS52 細胞の細胞傷害性をはじめとした細胞て非常に高い LDH 放出量（193±6.8% of the control）が認

毒性の発現メカニズムの解明を試みた（Fig. 4 ）。各粒子サ

Fig.1 Localization of each silica particles in XS52 cells(arrows).
XS52 cells were treated for 24 hr with nSP70 (a and b),
nSP300 (c) and mSP1000 (d). nSP300 and mSP1000 wereonly located cytoplasm. On the other hands, nSP70 waslocated in nucleus as well as cytoplasm (b, arrow head).
Scale bars; 2μm (a, c and d), 500 nm (b)Fig. 3 Effect of silica particles against membrane damage ofXS52 cells.
Cellular membrane damage on XS52 cells after incubation
with nSP70 (circle), nSP300 (square) and mSP1000(diamond) for 24 hr were evaluated by LDH release assay.
The percentage of cellular membrane damage rate wasrelative data as compared to the negative (medium) andpositive (0.2% Tween20) control. The data were presented
with means±SD.

Fig. 2 Effect of various sized silica particles against theproliferation of XS52 cells.
The proliferation of XS52 cells after incubation with nSP70(circle), nSP300 (square) and mSP1000 (diamond) for 24 hr
were evaluated using tritium thymidine uptake assay. Thepercentage of cell proliferation rate was relative data as
compared to the negative control. The data were presented
with means±SD.

Fig. 4 Detection of reactive oxygen species (ROS) inducedby silica particle treatment in XS52 cells.
XS52 cells were incubated with various concentrations ofnSP70 (circles), nSP300 (squares), and mSP1000(diamonds) for 3 h. Total ROS induced by silica particles
were expressed as relative fluorescence units in the DCFH
assay. Data are presented as means±SD (n=4).*P < 0.01 vssame dose of nSP300 and mSP1000.

− 80 −

皮膚細胞を用いた化粧品中のナノマテリアルの安全性評価〜ナノマテリアルの皮膚ランゲルハンス細胞に対する影響評価〜

イズのシリカを XS52 細胞に添加し、3 時間後の ROS 産生程において発生する一連の活性分子種（O2−、H2O2）である。

量を DCFH-DA を用いて測定した結果、全てのサイズの非実際に、動脈硬化などの生活習慣病や代謝疾患性疾患、ア晶質シリカにおいて、作用濃度に依存した ROS 産生が認

ルツハイマー病など様々な疾患の発症・悪化や、細胞レベめられた。特に nSP70 添加群では、nSP300、mSP1000 でルにおいてもアポトーシスや DNA 損傷などの多くの細胞は ROS 産生が認められなかった低濃度添加時においても、内ストレス応答に関与していることが知られている。我々

コントロール群と比較して約 2 倍の ROS 産生が認められはこれまでに、ヒト皮膚角化細胞を用いた検討において、ており、サブミクロンサイズのシリカよりも高い ROS 産非晶質ナノシリカによる DNA 損傷には、ROS 産生の関与生能を有することが明らかとなった。ROS は、DNA 傷害が関与していることを見出している。この事実を踏まえるや炎症反応の起点となり得る。従って、直径 100 nm 以下と、貪食能を有するランゲルハンス細胞においても同様に、の素材を対象として安全性を評価するに当たっては、ROSエンドサイトーシスによる非晶質ナノシリカの細胞内取りを起点とした遺伝毒性や免疫毒性について特に精査する必込みを介した ROS 産生により、DNA 損傷などの細胞毒性要があるものと考えられた。また、これらの事実は、ナノを誘発していることが予想され、これが細胞傷害性の発現シリカに ROS 産生を誘導しない何らかの修飾を施すことにつながる可能性を考えている。ROS 産生と細胞応答性が出来れば、安全かつ有用なナノシリカを創製できることの関係について、未だ不明な点は多くあるが、近年、ROSを示すものである。現在、ナノマテリアルに加え、サブナ産生経路の一つである NADPH oxidase が、異物が細胞内ノマテリアルの経皮安全性の解析やアトピーといった皮膚に取り込まれる際にエンドソーム膜にリクルートされ、疾患との関係など、さらなる追求を始めている。

ROS 産生を通じて異物の除去に寄与することが明らかと４．考なっている。例えば，アスベストや結晶性シリカなどの微察粒子状の異物が炎症を引き起こす際に、粒子が細胞に侵入香粧品分野において、ナノマテリアルは紫外線遮蔽能のすることにより発現する NADPH oxidase の関与が報告さ向上や使用感の向上といった利点から我々の生活に多大なれ，これらの報告では NADPH oxidase から産生されたる恩恵をもたらす新素材として大きな期待が寄せられていROS が NALP3 を活性化することが明らかとされている。

る。しかし一方で、ナノマテリアルのリスク評価に関する以上の点を踏まえ、現在我々は ROS 産生経路と細胞毒性情報開示は極めて少なく、本邦におけるナノマテリアルのの発現について ROS 産生経路の観点から解析を進めてい安全性評価研究は欧米諸国に比べると圧倒的に立ち遅れてる。また、ランゲルハンス細胞や皮膚上皮細胞の ROS 産いる。従って、これまで殆ど検討されていなかったナノマ生を介して、皮膚免疫系の攪乱が誘発されることも報告さ

テリアルの体内吸収性やハザードの明確化およびメカニズれており、この点も加味すると、非晶質ナノシリカが皮膚ムの解明を積極的に推進すると共に、ナノシリカの物性が免疫系に対する影響も精査する必要があると考えている。

体内 / 細胞内動態や生体 / 細胞に対する反応性に与える影

一方で我々は、これまでの検討において、ナノシリカの粒響について精査する必要がある。そこで我々は、非晶質ナ子表面をアミノ基やカルボキシル基で修飾することで、ナノシリカに関して物性−動態−安全性の連関解析を進めてノシリカの細胞毒性を軽減できることを見出している。今おり、これまでの検討において、粒子サイズが皮膚透過性後、Nano - Safety Science 研究の推進の観点からナノマテに与える影響について解析を行い、nSP70 のみがマウスのリアルの安全性確保と社会受容の促進を実現するためには、角質層を通過し皮膚ランゲルハンス細胞に取り込まれるこ曝露実態とハザード情報を詳細に収集し、ナノマテリアルとを明らかとしている。そこで本検討においては、マウスのリスクを把握すると共に、これらのハザードを回避するランゲルハンス細胞を用いて粒子サイズが細胞内局在と細ための方法論の確立が必須であろう。

胞に対する反応性に与える影響について評価するために、

以上、本研究では非晶質ナノシリカがランゲルハンス細nSP70、nSP300、mSP1000 それぞれの細胞内局在と細胞胞に対して細胞傷害性を発現すること、ならびにその細胞傷害性を解析した。その結果、粒子径依存的に細胞内への傷害性には ROS 産生が関与している可能性を見出した。

取り込み量・細胞傷害性が増加すること、更に、核内移行

ランゲルハンス細胞は、皮膚の抗原提示細胞として免疫応性という点において、nSP70 のみが独自の細胞内動態を示答に大きく関与している細胞である。そのため、ランゲルすことを明らかとした。そこで次に、安全なナノシリカのハンス細胞の機能不全は免疫応答の撹乱を引き起こすこと創出や開発支援を念頭に、XS52 細胞を用いて、非晶質ナが報告されている 3）〜 6）。そのため、我々の今回明らかとノシリカによる細胞傷害性の発現を ROS 産生の観点からした事実 7）〜 10）は、免疫応答が攪乱される可能性を示唆す解析した。その結果、粒子径依存的な ROS 産生の増大がるものである。また、nSP70 が細胞の核内にまで侵入して認められ、細胞傷害性の発現と同様の傾向を示すものであいることから、既にナノシリカによって引き起こされるこった。ROS は、生体内のエネルギー代謝や感染症防御過とが報告されている核内蛋白質の凝集、RNA 転写阻害 11）− 81 −

コスメトロジー研究報告 Vol.20, 2012

等、核の機能不全に繋がる可能性が示唆される。そこで今Lett., 6 (1) : 93-98, 2011.

後は、ナノシリカの細胞内局在情報を基盤とした各種ハザ

３）Nabeshi H., Yoshikawa T., Matsuyama K., Nakazato

ード評価を実施中であると共に、皮膚ケラチノサイト等のY., Tochigi S., Kondoh S., Hirai T., Akase T., Yamashita

他の細胞種を対象として同様の検討を進めると共に、アトT., Yamashita K., Yoshida T., Nagano K., Abe Y.,

ピーや皮膚炎との関係などを精査しているところである。

Yoshioka Y., Kamada H., Imazawa T., Itoh N., Tsunoda

5．総S., Tsutsumi Y. : Amorphous nanosilica induce

括endocytosis-dependent ROS generation and DNA
damage in human keratinocytes., Part. Fibre. Toxicol.,

以上、本検討において我々は、70nm の非晶質ナノシリカ

8 (1) : 1-10, 2011.

は、XS52 細胞に対して、細胞内動態・細胞に対する反応性という点においてサブミクロン以上のサイズのバルクマテリア

４）Nabeshi H., Yoshikawa T., Akase T., Yoshida T.,

ルとは異なる性質を発揮することを明らかとした 7）、8）、9）、10）。

Tochigi S., Hirai T., Uji M., Ichihashi K., Yamashita

即ち、ナノマテリアルの安全性確保と社会受容の促進を実T., Higashisaka K., Morishita Y., Nagano K., Abe Y.,

現するためには、ナノマテリアルをバルクマテリアルとはKamada H., Tsunoda S., Itoh N., Yoshioka Y., Tsutsumi

別個の新素材として捉え、細胞内動態や組織浸透性 / 蓄積

Y. : Effect of amorphous silica nanoparticles on in vitro

性といった生体内動態をより慎重に解析し、免疫応答や遺RANKL-induced osteoclast differentiation in murine

伝毒性等といった安全性情報を収集する必要があることをmacrophages., Nanoscale Res. Lett.,6 (1) : 464-468, 2011.

示している。更に、動態と細胞に対する反応性が相関しているという本検討の結果は、ナノマテリアルの動態情報を（引用文献）基盤とした安全性評価が NanoTox 研究において重要であ１）Takagi, A., Hirose, A., Nishimura, T., et al. : Induction

ることを示している。我々は現在、ナノシリカの粒子サイof mesothelioma in p53+/- mouse by intraperitoneal

ズが動態 - 安全性に影響を与える機構を解明するために、

application of multi-wall carbon nanotube. J Toxicol

細胞内への取り込み機構やストレス応答の観点から解析を

Sci., 33: 105-16, 2008.

進めている。これによって、ナノマテリアルの物性と安全

２）Takagi, A., Hirose, A., Nishimura, T., et al.: Carbon

性の因果関係を明確化することが可能になるものと考えて

nanotubes introduced into the abdominal cavity ofいる。これら物性−動態−安全性の連関解析から得られる

mice show asbestos-like pathogenicity in a pilot study.
Nat Nanotechnol., 3: 423-8, 2008.

情報が安全なナノマテリアルの設計指針の提示、さらには安全性評価法の確立に繋がり、安全なナノマテリアルの開３）Bennett, C.L., van Rijn, E., Jung, S., et al.: Inducible

発とその支援、そして安全・安心で魅力的な香粧品／化粧ablation of mouse Langerhans cells diminishes but fails

品の誕生と豊かな社会への展開に寄与することを期待して

to abrogate contact hypersensitivity. J Cell Biol., 169:
56 ｘ 9-576, 2005.

いる。

６．成果発表（コスメトロジー研究振興財団への謝辞記載）

４）Tinkle, S., Antonini, J.M., Rich, B.A., et al.: Skin
as a route of exposure and sensitization in chronic
beryllium disease. Environ Health Perspect., 111: 1202-１）Nabeshi H., Yoshikawa T., Matsuyama K., Nakazato

120814, 2003.

Y., Matsuo K., Arimori A., Isobe M., Tochigi S., Kondoh
S., Hirai T., Akase T., Yamashita T., Yamashita K.,

５）Fifis, T., Gamvrellis, A., Crimeen-Irwin, et al.: Size-Yoshida T., Nagano K., Abe Y., Yoshioka Y., Kamada

dependent immunogenicity: therapeutic and protective

H., Imazawa T., Nakagawa S., Mayumi T., Itoh N.,

properties of nano-vaccines against tumors. J Immunol.,Tsunoda S., Tsutsumi Y. : Systemic distribution,173: 3148-3154, 2004.

nuclear entry and cytotoxicity of amorphous nanosilica

６）Palucka, K., and Banchereau, J.: How dendritic cells

following topical application., Biomaterials., 32 (11) : 2713-and microbes interact to elicit or subvert protective

2724, 2011.

immune responses. Curr Opin Immunol., 14: 420-431,
2002.

２）Nabeshi H., Yoshikawa T., Arimori A., Yoshida T.,
Tochigi S., Kondoh S., Hirai T., Akase T., Nagano K.,

７）Nabeshi H., Yoshikawa T., Arimori A., Yoshida T.,

Abe Y., Kamada H., Tsunoda S., Itoh N., Yoshioka

Tochigi S., Kondoh S., Hirai T., Akase T., Nagano K.,

Y., Tsutsumi Y. : Effect of surface properties ofAbe Y., Kamada H., Tsunoda S., Itoh N., Yoshioka

silica nanoparticles on their cytotoxicity and cellularY., Tsutsumi Y. : Effect of surface properties of

distribution in murine macrophages., Nanoscale Res.

silica nanoparticles on their cytotoxicity and cellular− 82 −

皮膚細胞を用いた化粧品中のナノマテリアルの安全性評価

distribution in murine macrophages., Nanoscale Res.

〜ナノマテリアルの皮膚ランゲルハンス細胞に対する影響評価〜

10）Nabeshi H., Yoshikawa T., Matsuyama K., Nakazato

Lett., in press.

Y., Tochigi S., Kondoh S., Hirai T., Akase T., Yamashita８）Nabeshi H., Yoshikawa T., Matsuyama K., Nakazato

T., Yamashita K., Yoshida T., Nagano K., Abe Y.,

Y., Matsuo K., Arimori A., Isobe M., Tochigi., S.,Kondoh

Yoshioka Y., Kamada H., Imazawa T., Itoh N., Tsunoda

S., Hirai T., Akase T., Yamashita T., Yamashita K.,

S., Tsutsumi Y. : Amorphous nanosilica induce

Yoshida T., Nagano K., Abe Y., Yoshioka Y., Kamada

endocytosis-dependent ROS generation and DNA

H., Imazawa T., Nakagawa S., Mayumi T., Itoh N.,

damage in human keratinocytes., Part. Fibre. Toxicol.,Tsunoda S., Tsutsumi Y. : Systemic distribution,in press.

nuclear entry and cytotoxicity of amorphous nanosilica11）Chen, M., and von Mikecz, A.: Formation offollowing topical application, Biomaterials., in press.

nucleoplasmic protein aggregates impairs nuclear９）Nabeshi H., Yoshikawa T., Yoshioka Y., Tsutsumi

function in response to SiO 2 nanoparticles. Exp CellY.：Safety evaluation study of nanomaterials aimed
at the promotion of the social reception., Genes andEnvironment, in press.

− 83 −Res., 305: 51-62, 2005.