UVA による酸化的遺伝子損傷の細胞内修復機構
広島大学大学院

井理学研究科出博

Solar ultraviolet radiation with wavelength between 320-400 nm (UVA) passes through stratospheric ozone withoutabsorption and reaches the earth's surface. When exposed to UVA, reactive oxygen species (ROS) generated byendogenous photosensitizers cause damage to DNA, mostly oxidative base lesions, in living organisms. In this study,
the damage specificity has been elucidated of two base excision repair enzymes [endonuclease III homolog 1 (NTH1)
and 8-oxoguanine glycosylase 1 (OGG1)] that are potentially involved in removal of UVA-induced oxidative DNAlesions. Duplex oligonucleotide substrates containing unique lesions were incubated with the enzymes and products
were analyzed by denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. Pyrimidine lesions such as urea, thymine glycol,5,6-dihydrothymine, and 5-hydroxyuracil were efficient substrates for NTH1, and purine lesions such as 7,8-dihydro-8oxoguanine and formamidopyrimidine were also good substrates for OGG1. Interestingly, further analysis of the damage
specificity revealed that NTH1 recognized formamidopyrimidine, a purine lesion, and OGG1 recognized the pyrimidine
lesions except thymine glycol but in a paired base-dependent manner. These results suggest that NTH1 and OGG1 may
be able to act as a mutual backup enzyme, albeit not perfectly, in cells. The repair activity for 5-formyluracil, a major
UVA-induced oxidative lesions, was also investigated using mouse tissues. Incubation with the crude cell extracts fromseveral tissues including brain, heart, lung, thymus, and liver all resulted in incision of a substrate at the 5-formyluracil
site, demonstrating the presence of repair activity for this lesion. Several lines of evidence suggested that the observed
activity for 5-formyluracil resided on a novel enzyme that had not been identified before.

１．緒

す．水素結合による相補的な Watson—Crick 型塩基対形成

言は，遺伝子の複製や発現に中心的な役割を果たすため，構

太陽光には，UVA（320 - 400 nm），UVB（290 - 320 nm），造変化に伴う塩基対形成能の異常は，生物にとって極めてUVC（190 - 290 nm）の紫外線成分が含まれる（表１）．こ

重大な脅威となる．UVC および UVB は，２つのピリミの波長域に吸収帯を持つ分子が紫外線を吸収すると，分子ジン塩基が連続した dipyrimidine site に cyclopyrimidineの構造が変化したり，活性酸素などの反応種を生じ他のdimer（CPD）と（6 - 4）photoproduct（6 - 4 PP）を生じる分子を攻撃する．DNA に含まれる 4 種の塩基（A，G，C， （図１A）１）．両損傷は DNA 複製を強く阻害するため細胞T）はいずれも 260 nm 付近に吸収極大を持ち，約 300 nm致死の原因となるほか，6 - 4 PP では，損傷を乗り越えた以下の紫外線を吸収する．したがって，UVC および UVBDNA 複製が起こると，新生鎖に相補的ではない誤ったヌは，DNA に吸収され直接的に塩基の構造変化を引き起こクレオチドが取り込まれ突然変異が誘発される．ヒトでは，

表１表皮を形成する細胞の失活や突然変異，さらに悪い場合は太陽光の紫外線と DNA 損傷

皮膚癌の発症にもつながる．幸いなことに，地球を取りまくオゾン層は紫外線を吸収するため，地上に生息する生物は，最も脅威となる UVC のすべて，および短波長領域UVB による DNA の傷害を免れている．
一方，UVA はオゾン層にまったく吸収されず地表に到達する．UVA は UVB に比べ光子エネルギーは小さいが，地表に到達する全エネルギー量は UVB の約 10 倍に達する（表１）．
DNA は UVA の波長域（320 - 400 nm）には吸収帯を持たないため，UVC や UVB とは異なり直接的には DNA 損傷を

Cellular repair mechanisms of oxidative
DNA damage induced by UVA
Hiroshi Ide
Graduate School of Science, Hiroshima
University引き起こさない．しかし，細胞内には UVA 波長域に吸収を持つ多種の色素団分子（たとえば，NAD，FAD，ポルフィリン化合物など）が存在する．これらの分子は，本来細胞内において物質・エネルギー代謝に関連した補酵素として重要な働きをしているが，UVA が細胞に照射されると励起され，エネルギー移動により活性酸素（Reactive oxygenspecies, ROS）が発生する（Type Ⅱ reaction と呼ばれる）２）．

− 121 −ROS は，周辺に存在する DNA，生体膜，タンパク質と反ノックアウトマウスが作製され phenotype の解析が行われ応しこれらの分子を酸化する．生体膜の脂質過酸化やタンたが，マウスは正常に発育し有意に高い発癌率は観察されパク質の分解はこれらを再合成することにより対処できるなかった８，９）．NTH 1 ノックアウトマウスはまだ報告されが，遺伝情報を担う DNA の損傷は，UVC および UVB のていないが，大腸菌の NTH 1 ホモログ欠損株（nth）では，場合と同様に生命活動にとって多大な脅威となる．

明確な phenotype が認められないことから 10），NTH 1 ノッ

細胞内色素団分子が関与する UVA 由来の DNA 損傷としてクアウトマウスでも同様な結果が予想される．したがって，は，
thymine glycol（TG），5 -formyluracil（FU），
7 , 8 -dihydro- 8 -NTH 1 および OGG 1 は哺乳類の主要な酸化損傷修復酵素とoxoguanine（OG），2,6-diamino-4-hydroxyformamidopyrimidine

して位置づけられているにもかかわらず，これらの酵素に．TG およよる修復欠損が直ちに phenotype として現れない可能性がび FAPY は突然変異性は低いが，いずれも DNA 複製を強高い．DNA の酸化は，UVA のような外的要因だけでなくく阻害する．一方，FU および OG は複製阻害効果は低い

好気的代謝といった内的要因でも生じるため，遍在性の高が，突然変異性を示す．したがって，DNA に生じたこれらい損傷である．このような損傷に対しては，何らかの原因の損傷は，速やかに除去される必要がある．最近，これらで一つの修復酵素が働かない場合，他の酵素がこれをバッの酸化損傷を認識する哺乳類修復酵素（ヒトおよびマウス

クアップすることにより fail-safe system を形成している可（FAPY）などが同定されている（図１B）

３−５）

NTH 1，OGG 1）が同定され遺伝子がクローニングされた

．

６，７）

能性が考えられる．

NTH1 は TG，OGG1 は OG および FAPY を認識し，これら

本研究では，以上の観点から NTH 1 および OGG 1 の基質の損傷を DNA から除去する．さらに，OGG 1 については，特異性を詳細に調べ，認識する損傷のオーバーラップによる修復バックアップの可能性をまず検討した．さらに，FUを認識する哺乳類修復酵素はこれまでに同定されていないことから，この活性の検索もあわせて行った．

２．実
２. １

験

オリゴヌクレオチド基質

TG，urea（UR），5,6-dihydrothymine（DHT），5-hydroxyuracil（HOU）は配列１の X の部位，FU は配列２の Y の部位，OGおよび FAPY は配列３の Z の部位に選択的に導入した．
配列 1

ACAGACGCCAXCAACCAGG

配列 2

CATCGATAGCATCCGYCACAGGCAG

配列 3

CATCGATAGCATCCTZCCTTCTCTC

配列１−３の相補鎖はホスホロアミダイト法により合成した．DHT，HOU，FU，OG は，それぞれ対応する損傷アミダイトモノマーを用いて合成し，導入した損傷塩基が分解しない穏和な条件下で脱保護を行った．TG は対応する位置にチミンを含むオリゴヌクレオチド（配列１，X=T）の KMnO4 処理により合成し，逆相 HPLC により分取精製した．UR を含む基質は，TG を含むオリゴヌクレオチドのアルカリ処理（pH11.4）により調製した．FAPY は，前駆体として 7—メチルグアニンを DNA ポリメラーゼ反応により導入し，これを室温下，pH11.4 で処理し FAPY に変換した．

２. ２

修復酵素アッセイ

マウス NTH 1，
ヒト OGG 1，
大腸菌 endonuclease Ⅲ（EndoⅢ），formamidopyrimidine glycosylase（Fpg）およびヒト methylpurine glycosylase（MPG）は，それぞれクロ
図1
りUVB および UVA により生成する DNA 損傷
A：UVB により生成するピリミジン二 体，B：UVA によ
生成する酸化損傷

ーニングした遺伝子の大腸菌発現系を用いて発現し，イオン交換およびアフィニティークロマトグラフィーによりSDS-PAGE で単一バンドになるまで精製した 11，12）．酵素− 122 −UVA による酸化的遺伝子損傷の細胞内修復機構

活性アッセイは以下の通り行った．損傷を含むオリゴヌクレ

環開裂生成物（UR），C 5 -C 6 飽和生成物（TG，DHT），オチドを 5'- P 標識後，相補鎖とアニールし二重鎖基質とし

C 5 水酸化物（HOU）を DNA から同程度の効率で除去すた．基質（5-10nM）を酵素（1-10ng）と 37℃でインキュベることが示された．さらに，NTH 1 の酵素触媒メカニズートした．反応生成物は 16％変性ポリアクリルアミド電気ムを明らかにするため，反応中間体の解析を行った．この32泳動（PAGE）で分離し，バンドの放射活性は BAS2000 に目的で，NTH 1 と基質を NaBH 4 存在下でインキュベートより解析した．NaBH4 トラッピングアッセイでは，標識基し，反応生成物を SDS-PAGE で分析した．その結果，遊質と NaBH4（50mM）を混合し，これに酵素を加え 37℃で離の基質のほかに NTH 1 - 基質複合体が確認された．後１時間インキュベートした．反応生成物は，10％ SDS-PAGE

者は，N—グリコシラーゼ活性により生じた糖のアルデヒで分離し，バンドの定量は活性アッセイと同様に行った．

ド基（C 1 ' 位）と NTH 1 の活性中心にある Lys の間に形成された Schiff 塩基（反応中間体）が NaBH 4 により還３．結果および考察
３. １

元され生じたものと考えられる（図３）．また，UR，TG，

NTH1 の損傷特異性

DHT，HOU でトラップされた反応中間体の量は同じであNTH 1 が認識する DNA 損傷を明らかにするために，UR，った．この結果は，活性アッセイの結果とも一致した．

TG，DHT，HOU を同一配列中に含むオリゴヌクレオチド二重鎖を基質とし基質特異性を検討した．UR，TG，DHT

３. ２

OGG 1 の損傷特異性の対合塩基には A，HOU の対合塩基には G を用いた．基OGG 1 はプリン酸化損傷 OG および FAPY を DNA から質を NTH 1 とインキュベート後，生成物を PAGE で分析除去する活性を持つことが知られている７，８）．OG についした．４種の損傷はすべて NTH 1 に認識され，損傷部位でては，ホスホロアミダイト法を用いたオリゴヌクレオチド特異的に切断された生成物バンドが認められた．また，切合成法が確立されているため，多くの研究が行われている．

断生成物のゲルの移動度から，3 '- 末端は hydroxypentenal-

しかし，FAPY を特異的に含むオリゴヌクレオチド基質の5 '-phosphate であり，NTH 1 の AP リアーゼ活性により生じた β 脱離生成物であることが示された．次に，これらの損傷に対する活性を定量的に比較するために，切断バンドの放射活性を測定し切断生成物の量を定量した．UR に対する活性は他の損傷に比べ 2 倍程度高いものの，すべての損傷は NTH 1 のよい基質となることがわかった（図２A）．
原核生物（大腸菌）には，NTH 1 のホモログ Endo Ⅲが存在する６，７，11）．両酵素の基質特異性の差異を明らかにするために，Endo Ⅲの UR，TG，DHT，HOU に対する活性を NTH 1 と同様な方法で定量した．Endo Ⅲは，UR，TG，HOU を同程度の効率で認識したが，DHT に対しては著しく低い活性しか示さなかった（図２B）．以上の NTH 1 お
よび Endo Ⅲの結果から，両酵素では DHT に対する活性が大きく異なることが示された．この理由を明らかにするために，TG および DHT に対する NTH 1 と Endo Ⅲの酵素パラメータ（K m，k cat）を決定した．NTH 1 の K m は TGと DHT で同じ値であったのに対し（3 nM），Endo Ⅲのそれは TG（K m = 19 nM）と DHT（K m = 510 nM）で 27 倍の差が認められた．この結果は，Endo Ⅲの DHT に対する親和性が極めて低いことを示している．また，NTH 1 の k cat
は TG と DHT で同程度（k cat = 0 . 02 - 0 . 03 min - 1）であったのに対し，Endo Ⅲの値は，TG（k cat= 0 . 78 min - 1）と DHT（kcat= 0 . 07 min- 1）で 11 倍の差があった．これらのパラメー
タから，DHT に対する Endo Ⅲの極めて低い活性は，基質親和性の低下および触媒速度の減少の両因子に由来していることが明らかとなった．
上記の活性アッセイの結果から，NTH 1 はピリミジン

図 2 NTH1 および Endo Ⅲのピリミジン酸化損傷に対する活性urea（UR），
thymine glycol（TG），
5,6-dihydrothymine（DHT），5-hydroxyuracil（HOU）を含む基質と酵素をインキュベートし，生じた鎖切断生成物を PAGE 分析により定 した．各基質に対する活性は UR に対する相対値として示す．A：NTH1，B：
Endo Ⅲ− 123 −

合成法はこれまでに確立されていなかったため，OGG 1 の両基質に対する活性の定量的な比較は行われていなかった．本研究では，まず FAPY導入法を検討した．7 - メチルグアニン（7 mG）は，アルカリ処理によりイミダゾール環が開環しメチルFAPY に変化する．そこで，FAPYの前駆体として，7—メチルデオキシグアノシン三リン酸を DNA ポリメラーゼ反応により目的の配列中に導入した．これを室温下，pH 11 . 4 で処理し，7 mG を FAPY に変換した．
ピペリジン処理および種々の酵素処理により 7 mG から FAPY への変換効率を調べた結果，導入した 7 mGは定量的に FAPY に変換されていることが示された．7 mG はデプリネーションを起こしやすい塩基であ

図3

NaBH 4 による NTH 1 反応中間体のトラップ反応
NTH 1 の活性部 にある Lys のデオキシリボース C 1 ' への攻撃により N—グリコシド結合が切断され（a），NTH 1 と基質の間に反応中間体（Schiff base）が形成される．これから β 脱離反応が起こり DNA 鎖が切断される（b）．NaBH 4 存在下では，Schiff baseの imine が還元され，安定な酵素 - 基質クロスリンク複合体が形成される（c）．

るが，実験に用いた条件ではデプリネーションは起こらなかった．
上記の方法により同一配列中に OG および FAPY を含むオリゴヌクレオチド基質の調製が可能になったことから，これを用いて OGG 1 の両損傷に対する活性を比較検討した．
OG および FAPY の対合塩基には C を用いた．基質とOGG 1 をインキュベートし，生成物を PAGE で分析した結果，損傷部位で特異的に切断されたバンドが認められた（図４）．両損傷とも生成物は β 脱離により生じた切断生成物であった．大腸菌の OGG 1 機能ホモログ Fpg についても同様な実験を行ったところ，生成物としては δ脱離生成物が生じた（図４）．したがって，真核生物由来
OGG 1 および原核生物由来 Fpg は，OG および FAPY を認識し N—グリコシラーゼとして作用するが，引き続くAP リアーゼの作用モードは異なると考えられる．次に，種々の基質濃度条件下で生じた生成物を定量し，OGG 1 の酵素パラメータを決定した．OG および FAPY に対するK m は，それぞれ 23 nM および 15 nM，また k cat は，それぞれ 0 . 034 min - 1 および 0 . 025 min - 1 となり，両損傷で大きな違いは認められなかった．その結果，反応効率（kcat/Km）
もほぼ等しい値となった（OG：FAPY= 0 . 9：１）
．以上の

図4

OGG 1 および Fpg のプリン酸化損傷に対する活性分析
7 , 8 -dihydro- 8 -oxoguanine（OG）および formamidopyrimidine（FAPY）を含む基質を，OGG 1 あるいは Fpg とインキュベートし，生成物を 16％変性 PAGE で分析した．図中の矢印は，β 脱離生成物と δ 脱離生成物を示す．

結果から，OGG 1 が主要プリン酸化損傷 OG および FAPY

び OGG 1（３. ２）の実験では，損傷の対合塩基を A（UR，を同じ効率で DNA から除去することが明らかとなった．

TG，DHT），G（HOU），C（OG，FAPY）としたが，本実験では４種の対合塩基（A，G，C，T）をすべて用いて活３. ３

NTH 1 と OGG 1 の認識基質オーバーラップ性を検討した．活性は，基質と酵素のインキュベーション

NTH 1 と OGG 1 の基質オーバーラップを調べるためにより生成した切断バンドから定量した．NTH 1 は，UR：に， 両 酵 素 の UR，TG，DHT，HOU，OG，FAPY に

N，TG：N，DHT：N，HOU：N（N=A，G，C，T）だけ対する活性を調べた．既に述べた NTH 1（３. １）およ

でなく，これまで OGG 1 のみに認識されると考えられてい− 124 −UVA による酸化的遺伝子損傷の細胞内修復機構

た FAPY：N（N=A，G，C，T）に対しても活性を示しなかった．一方，OGG 1 は，NTH 1 と異なり，同じ損傷た（図５）．さらに FAPY に対する活性は，NTH 1 の本でも対合塩基により活性が変化した．プリン損傷に対す来の基質の１つである TG に対する活性と同程度であった．

る活性の対合塩基依存性は，OG では OG：C >> OG：T>

しかし，NTH 1 は OG：N に対してはまったく活性を示さ

OG：G>OG：A，また FAPY では FAPY：C > FAPY：
T 〜 FAPY：G 〜 FAPY：A となった．ピリミジン損傷
では，UR：C，DHT：C，HOU：C に対し活性を示したが，他の塩基（T，G，A）と対合した場合は活性は認められなかった．したがって，OGG 1 はこれまで報告されているプリン損傷ばかりではなく，ピリミジン損傷に対しても潜在的な修復活性を持つが，この活性は特徴的な対合塩基依存性を示すことが明らかとなった．

３. ４

FU 修復活性FU を認識する哺乳類修復酵素を，精製酵素および細胞粗抽出物を用いて検討した．精製酵素を用いた検索では，酸化損傷修復酵素（NTH 1，OGG 1）のほかに，大腸菌のFU 修復酵素である AlkA の哺乳類機能ホモログ（MPG）を用いた 12，13）．しかし，NTH 1，OGG 1，MPG いずれもFU に対しては活性を示さなかった．したがって，哺乳類の FU 修復酵素はこれまでに同定されていない新規なものであると考え，細胞粗抽出液中の FU 修復活性を調べた．
マウスの脳，心臓，肺，胸腺，肝臓を摘出し，それぞれの図5

FAPY に対する NTH 1 の活性分析
4 種の塩基と対合した FAPY（FAPY：N，N = A,G,C,T）を含む基質を NTH 1 とインキュベートし，生成物を 16％変性 PAGE で分析した．図中の矢印は，β 脱離生成物を示す．

細胞粗抽出物を調製した．これを基質とインキュベート後，除タンパクし，反応生成物を PAGE で分析した．その結果，比活性に差はあるものの，用いたすべての臓器で FU 部位で切断された生成物が認められた（図６）．この生成物は，

図6

マウス臓器の FU 修復活性A：マウスから脳，心臓，肺，胸腺，肝臓を摘出し，細胞粗抽出物を調製した．これを5 -formyluracil（FU）を含む基質とインキュベートし，生成物を 16％変性 PAGE で分析した．
図中の矢印は，FU 特異的な切断生成物を示す．B：FU 特異的な切断生成物を定 し，各臓器の比活性を示した．

− 125 −

FU の代わりに未損傷のチミンを含む基質では認められなかったことから，損傷特異的な活性であることが示された．

ozone, Methods in Enzymology, 319 , Academic Press,New York, 2000 .

活性を精製する目的で，細胞粗抽出物を大量に調製し，こ３）Pouget JP, Douki T, Richard MJ, et al., : DNA

れを陽イオンクロマトグラフィーにより分離した．溶出さ

damage induced in cells by gamma and UVA radiation

れた分画の FU，TG，OG 活性を分析した結果，FU 活性

as measured by HPLC/GC-MS and HPLC-EC andは TG および OG 活性が溶出される分画とは明らかに異なcomet assay. Chem. Res. Toxicol., 13 , 541 - 549 , 2000 .

った分画に溶出された．この結果は，精製 NTH 1 および

４）Decarroz C, Wagner JR, Van Lier JE, et al., :OGG 1 が FU に対して活性を示さなかった結果とよく一致

Sensitized photo-oxidation of thymidine by 2 -methyl-する．今後，この活性を SDS-PAGE で単一バンドになる

1 , 4 -naphthoquinone. Characterization of stable

まで精製し，得られた酵素の性状を詳細に解析していく予

photoproduct, Int. J. Radiat. Biol., 50 , 491 - 505 , 1986 .

定である．

５）Saito I, Takayama M, Kawanishi S, : Photoactivatable

４

総DNA-cleaving amino acids: highly sequence-selective括

DNA photocleavage by novel L-lysine derivatives., J.

UVB および UVA は，それぞれ固有の遺伝子損傷を誘発し，前者ではピリミジン二量体（CPD，6 - 4 PP）が重要

Am. Chem. Soc., 117 , 5590 - 5591 , 1995 .
６）Memisoglu A, Samson L, : Base excision repair inであるのに対し，後者では細胞内に存在する種々の色素

yeast and mammals, Mutat. Res., 451 , 39 - 51 , 2000 .

が関与した酸化損傷が重要である．本研究では，UVA に７）Krokan HE, Nilsen, H, Skorpen F, : Base excisionより生じる酸化的塩基損傷の修復に関わる哺乳類修復酵

repair of DNA in mammalian cells, FEBS Lett., 476 , 73 -素 NTH 1 および OGG 1 の損傷特異性を検討した．NTH 177 , 2000 .

および OGG 1 は，それぞれピリミジン損傷およびプリン８）Klungland A, Rosewell I, Hollenbach S, et al., :損傷特異的修復酵素と考えられていた．実際，TG およAccumulation of premutagenic DNA lesions in mice

び OG は，それぞれ NTH 1 および OGG 1 のみに認識さ

defective in removal of oxidative base damage, Proc.

れ，両酵素の固有な基質であった．しかし，他の損傷（UR，Natl. Acad. Sci. U.S.A., 96 , 13300 - 13305 , 1999 .

DHT，HOU，FAPY）は，対合塩基に依存した形で両酵９）M i n o w a O , A r a i T , H i r a n o M , e t a l . , : M m h /素の基質となった．活性の対合塩基依存性に関する生物学

Ogg 1 gene inactivation results in accumulation of的意味づけは今後の課題であるが，この結果は，酸化的塩

8 -hydroxyguanine in mice, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,

基損傷修復における NTH 1 と OGG 1 の修復バックアップ

97 , 4156 - 4161 , 2000 .

システム形成を支持するものと考えられる．今後見つかっ

10）Cunningham RP, Weiss B, : Endonuclease III (nth)てくると予想される他の哺乳類酵素についても同様な検討

mutants of Escherichia coli, Proc. Natl. Acad. Sci.

を行い，細胞内における塩基除去修復バックアップシステ

U.S.A., 82 , 474 - 478 , 1985 .

ムの全貌を明らかにしていく必要がある．また，これま11）Sarker AH, Ikeda S, Nakano H, et al., : Cloning andでに真核生物では明らかにされていなかった FU 修復活性characterization of a mouse homologue (mNthl 1 ) ofがマウスの臓器に存在し，精製酵素を用いた検討およびEscherichia coli endonuclease III, J. Mol. Biol., 282 , 761 -クロマトグラフィーの溶出挙動から，この活性は NTH 1，774 , 1998 .

OGG 1，MPG のいずれでもないことが示された．今後，

12）M a s a o k a A , T e r a t o H , K o b a y a s h i M , e t a l . , :この新規酵素をさらに精製し，UVA ならびに種々の環境

Enzymatic repair of 5 -formyluracil. I. Excision

因子に対する遺伝子防御における役割を明らかにしていくof 5 -formyluracil site-specifically incorporated必要がある．

into oligonucleotide substrates by AlkA protein(Escherichia coli 3 -methyladenine DNA glycosylase II),

本研究を遂行するあたりご援助を賜りましたコスメトロ
ジー研究振興財団に厚く御礼申し上げます．

J. Biol. Chem., 274 , 25136 - 25143 , 1999 .
13）Terato H, Masaoka A, Kobayashi M., et al., :Enzymatic repair of 5 -formyluracil. II. Mismatch（引用文献）

formation between 5 -formyluracil and guanine during

１）Friedberg EC, Walker GC, Siede W, : DNA repair

DNA replication and its recognition by two proteinsand mutagenesis, ASM Press, New York, 1995 .

involved in base excision repair (AlkA) and mismatch２）Lester P, Helmut S, : Singlet oxygen, UVA, andrepair (MutS), J. Biol. Chem., 274 , 25144 - 25150 , 1999 .

− 126 −