ごあいさつ
この度コスメトロジー研究振興財団として、第 18 冊目の研究報告書を刊行いたしました。当財団は平成 22 年度にて活動 20 年の節目を迎えることとなりました。化粧品科学に貢献する研究に対し助成活動を滞りなく行ってこれましたのも、多くの関係者の皆様のご理解ご協力によるものと、改めて感謝申し上げる次第でございます。
この 20 年間の変遷を顧みますと、時代とともに研究テーマは多岐にわたってきており、分野の枠を超えた基礎研究や、貢献性の明確な応用研究が顕著にみられるようになりました。それだけ、化粧品に関連するコスメトロジーの研究が、多くの分野の専門家から注目されてきていると考えております。また当財団の活動がその一助になっていることを幸いに思っております。
今回の報告書では平成 19 〜 20 年度に助成を受けられた方の中から 23 名の方の研究成果を掲載いたしました。ご一読いただければわかりますように、素材、物性に関する分野と生体作用、安全性に関する分野では基礎研究の充実を感じるとともに、両分野の融合した多くの研究もみられています。例えば素材の高機能化、炎症反応の解析、角層研究、製剤研究など多くの観点から重要な示唆が得られたと考えております。精神、文化に関する分野では感覚や感性に着目したテーマが多く、化粧の本質を捉えている側面が感じられます。
全ての研究テーマに共通している点は化粧品学への高い貢献度ということでありますが、当財団は分野の枠や研究機関の属性にとらわれることなく、化粧品学のさらなる発展のために、優れた研究に対して今後も積極的に助成を行っていきたいと考えております。
今後とも、皆様のますますのご協力とご支援をお願い申し上げます。

平成 22 年 7 月
財団法人 コスメトロジー研究振興財団
理事長

小林

礼次郎

目

次

■ごあいさつ
■研究報告
Ⅰ．素材、物性に関する分野
・ビタミン E の高機能化とさらなる有効利用を目的とした新規化粧品素材の酵素・化学複合的分子創製 … 2
大分大学医学部化学講座

下

田

恵

・ミルクタンパク質からなる無機有機ハイブリッドナノスフェアの創製…………………………………… 6

慶應義塾大学大学院理工学研究科

藤 本

基礎理工学専攻生物化学専修

啓 二

・化粧品の防腐剤低含有率化を目指した除菌材料の開発 ……………………………………………………… 10
九州共立大学工学部

桒 原

順 子

・化粧品素材としての生体安定性を有する発色ナノ粒子含有液の開発 …………………………………… 14
東京電機大学工学部電気電子工学科

平 栗

健 二

・オリーブ二次代謝産物の微生物変換によって得られる新規抗酸化物質の性状解析 ……………………… 17
岡山大学大学院自然科学研究科（農学系） 神崎

浩・両親媒性物質との分子複合体及びイオン交換体形成を利用する新規機能性ケミカルピーリング剤の開発 … 23
新潟薬科大学薬学部薬剤学研究室
・皮膚の老化予防を目的としたコラーゲンの AGE 化阻害物質の探索

菜穂子……………………………………… 27

熊本大学医学薬学研究部
・抗酸化性乳化剤の機能性化粧料としての利用に関する基礎的研究

飯村
藤 原

章 雄

……………………………………… 33

近畿大学工学部生物化学工学科

渡 邉

義 之

Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野
・均一径リポソームと細胞の融合のためのマイクロ流路デバイスの作成………………………………… 40

東京大学生産技術研究所

竹 内

昌 治

・角層コルネオデスモゾーム分解過程の免疫電顕的解析 ……………………………………………………… 45
旭川医科大学医学部皮膚科

山 本

明 美

・皮膚表皮形成に関わるタンパク質架橋接着反応の分子基盤（高反応性基質配列ペプチドを用いた皮膚型トランスグルタミナーゼの高感度で特異的な活性検出法の確立） …………………………… 49
名古屋大学大学院生命農学研究科応用分子生命科学専攻

人 見

清 隆

・皮膚の炎症反応・炎症後組織修復における血小板の役割の解明と血小板機能制御による治療法の開発 ……………………………………………………………………… 54
京都府立医科大学大学院医学研究科皮膚科学
・樹状細胞分子 SHPS -1 による皮膚免疫制御とその皮膚アレルギーへの治療的応用
群馬大学生体調節研究所バイオシグナル分野

加 藤

則 人

…………………… 57

的

崎

尚

・手のひら・足のうらで発現が高い Wnt 阻害剤・Dickkopf 1 がアンチエイジング（抗しわ、美白、色素再生、毛髪再生、除毛、皮膚再生）に及ぼす影響 ……… 62
名古屋市立大学大学院医学研究科

加齢・環境皮膚科学

山 口

裕 史

目
・角層の若返りが皮膚の若返りに果たす役割………………………………………………………………… 68
久留米大学皮膚科

・ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析

次

大 日

輝 記

………………………………………………………………… 71

東北大学大学院薬学研究科生活習慣病治療薬学分野

平 澤

典 保

・皮膚ケラチノサイトの水・グリセリンチャネル AQP3（アクアポリン３）の脂溶性ビタミンによる発現調節 … 78
明治薬科大学病態生理学教室
・表皮ケラチノサイトの角化プロセスにおける PLD/mTOR シグナリングの関与

石 橋

賢 一

……………………… 81

財団法人岐阜県研究開発財団岐阜県国際バイオ研究所

大 口

健 司

Ⅲ．精神、文化に関する分野
・アジア人の化粧に見られる身体観・身体表象とその変容についての研究─身体装飾のアジア的伝統と〈化粧のグローバル化〉の狭間で─………………………………… 86

東北大学大学院国際文化研究科
・香りが記憶や情動と結びつく際の脳内神経機構に関する研究

博 司…………………………………………… 90

産業技術総合研究所バイオメディカル研究部門
・触動作の特徴抽出による化粧品の使用感評価

山 下
梶 原

利 一

……………………………………………………………… 95

大阪大学大学院工学研究科

環境・エネルギー工学専攻

・化粧時間による耳鼻咽喉科心身症患者の抑うつ不安のレベルの評価

秋 山

庸 子

…………………………………… 99

慶應義塾大学医学部耳鼻咽喉科 五 島史 行

・香料によるメタボリックシンドローム改善効果 ……………………………………………………………… 104
福島大学保健管理センター

渡 辺

英 綱

■記念講演
平成 21 年度記念講演 『コスメの国のオタク』 ……………………………………………………………… 111
甲南女子大学人間科学部■コスメトロジー研究雑感
■付

米

澤

泉

……………………………………………………………………………………………… 121

録
平成 21 年度事業報告
役員一覧…………………………………………………………………………………………… 137…………………………………………………………………………………………………………… 140

Ⅰ.
Ⅱ.
Ⅲ.

●
素材、物性に関する分野
生体作用、安全性に関する分野
精神、文化に関する分野●

ビタミンＥの高機能化とさらなる有効利用を目的とした
新規化粧品素材の酵素・化学複合的分子創製
大分大学医学部化学講座

下 田恵

Vitamin E functions as a chain-breaking antioxidant that prevents the propagation of free radical reactions. Recently,
vitamin E has attracted much attention clinically because of its potential to be a very useful drug, and has been widely studied
for its anticancer, anti-atherosclerosis, and anticarcinogenesis effects. On the other hand, vitamin E is unstable against lightand heat. Chemical modifications such as esterification of unstable organic compounds are characteristic reactions, which
improve their stability, bioavailability, and pharmacological properties, e.g., the esters of aromatic compounds have beenused in folk medicines. To overcome the shortcomings of vitamin E, several efforts have been made to synthesize vitamin
E derivatives by chemical methods. However, little attention has been paid to the biocatalytic modification of vitamin E
by cultured plant cells. We attempted the functionalization of vitamin E by its modification through both biocatalytic andchemical procedures.

１．緒

待がかけられている。今日までに利用された主な生体触媒

言は、微生物、菌体、酵母、動物細胞、植物細胞、およびそ

近年、資源の大量消費による有用機能性物質の枯渇にもれらの酵素系である。

伴い、天然由来の生薬化合物や生理活性化合物の価値が見本研究では、ビタミン E の化粧品としてのさらなる有効直されてきた。これらの機能性化合物の中で、ビタミン関

活用を目的として、リパーゼおよび植物培養細胞を生体触

連化合物は、抗菌作用、抗酸化作用やラジカル消去能など媒とする酵素的合成法と化学的合成法を活用した、ビタミを有し、さらには免疫力の向上効果、抗ウイルス作用や制ン E の「アシル化」を中心とした化学修飾を行った。即ち、癌作用などの様々な有用生理機能を示すことから、最近で本研究において、ビタミン E を高機能化するため、酵素的は、化粧品および医薬品などとしても注目されている。ビ

合成法と化学的合成法を利用し、新規かつ安定な化粧品素

タミン関連化合物でも特に、ビタミン E は、血管系疾患の材の複合的分子創製法を開発した。

予防効果、制癌効果、血行促進作用などの生理機能を示し、

２．実

医薬品はもとより、化粧品として利用されている 1– ３）。
一方、天然植物生薬成分は、ある種の植物細胞中におい

2. 1.

験

酵素的手法によるビタミンE のプロピオニル化て、その構造の一部が様々なアルキルもしくは脂肪酸によリパーゼは本来エステル加水分解反応を触媒する酵素でりエステル化された「アシル化合物」として、光や熱に対あるが、有機溶媒中で反応させると、逆加水分解反応すな

して安定に存在し、抗酸化性を始めとした有用な生理機能

わちエステル化を触媒する。このことを利用して、有機溶を発揮していると考えられている４, ５）。

媒中におけるビタミン E の酵素触媒を活用した化学修飾をまた近年、生体触媒が行う反応を合成プロセスの一過程目的として、リパーゼによるエステル化を行った。酵素反に組み込んだ有用物質生産の試みが盛んに行われ、その成応には、有機溶媒として 1, 2- ジクロロプロパンとヘキサン

果は医薬品や香料、嗜好品、などのファインケミカルズのの混合溶液を使用した。基質ビタミン E を 50 ml の有機溶生産へ利用されるに及んでいる６）。有機合成に生体触媒を媒が入った酵素反応用フラスコへ入れ、全体が均一の溶液利用するメリットのひとつとして、その選択性の高さがあとなるまで加温した。溶液を室温まで冷却後、プロピオン

げられる。生体触媒による反応では、必要とする位置に酸とリパーゼをフラスコへ加え、40℃、120 回転 / 分の条

必要な立体を持ち、化学的に合成した場合には煩雑な行程件で振盪インキュベーションを行った。

を要する化合物についても、一段階の酵素的反応で得られ24 時間反応させた後、有機溶媒を減圧下において留去る。このことから、生体触媒の有機合成化学への利用に期し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製を行い、反応生成物を得た。

Functionalization of vitamin E togenerate new cosmetics by biocatalytic
and chemical methodology
Kei Shimoda
Department of Chemistry, Faculity of
Medicine, Oita University

2. 2. 酵素的手法によるビタミンE のゲンチオビオシル
化、ルチノシル化
タバコおよびユーカリ植物培養細胞を用いる酵素的手法
により、ビタミン E のゲンチオビオシル化、ルチノシル化を行った。植物培養細胞は主に筆者らの研究室において誘−2−ビタミンＥの高機能化とさらなる有効利用を目的とした新規化粧品素材の酵素・化学複合的分子創製

導し、継代培養したものを変換実験に用いた。植物培養細テル交換反応について、有機溶媒として 1, 2- ジクロロプロ

胞は培養用フラスコ内の新鮮な寒天培地に植え継いで、３パンとヘキサンを使用して、ビタミン E（図１、化合物１）

週間ごとに継代培養を行った。変換実験に用いるため、培とプロピオン酸、リパーゼを振盪インキュベーションする養細胞の一部を、寒天を含まない液体培地に移植し、振ことにより、ビタミン E のプロピオニルエステル体（図１、

盪培養器内において 25℃、120 回転 / 分の条件で培養する

化合物２）を得た。

と、２週間ほどで均一なサスペンション状態の培養細胞が以上、「化粧品素材」としてのビタミン E の安定化と高得られた。この培養細胞（約 50 グラム）を新鮮な液体培地

機能化を目的に、リパーゼのエステル交換反応を応用して、（100 ml）に移植して、同じ培養条件で１週間前培養を行っビタミン E の有機アルキル酸による酵素的エステル（アシた。培養細胞への基質の投与はクリーンベンチ内においてル）化を可能にした。

無菌状態で行った。基質を前培養した細胞に投与し、一定ル浸漬し、メタノール抽出物を有機溶媒と水で分配し、培3. 2. 酵素的手法によるビタミンE のゲンチオビオシル
化、ルチノシル化

地部分は有機溶媒で抽出した。変換生成物をシリカゲルカ

生体触媒としてタバコ植物培養細胞を使用して、ビタミ

ラム、イオン交換カラム、TLC、HPLC を用いる各種クロン E と振盪インキュベーションすることにより、ビタミンマトグラフィーにより単離・精製した後に、スペクトル測E の変換生成物を得た。HPLC 分析の結果、変換生成物は、定により構造解析を行った。変換反応の経時的追跡は、上細胞部分のメタノール浸漬画分に含まれることが明らかと記と同様にインキュベートさせた複数のフラスコについて、なった。メタノール抽出物をシリカゲルカラム、イオン交

一定時間ごとにフラスコ一本から反応物を抽出することに

換カラム、TLC、HPLC を用いる各種クロマトグラフィーより行った。生成物の相対量は、抽出物の高速液体クロマ

による精製を行った。反応生成物を単離し、スペクトル測

トグラフィー（HPLC）分析により求めた。

定により構造解析を行ったところ、ビタミン E のゲンチオ

期間、同じ振盪条件で反応を行った。細胞部分はメタノービオシド体（図１、化合物３）が得られた。

2. 3.

化学的手法によるビタミンE のステアリン化

また、ユーカリ植物培養細胞を生体触媒として用いる酵ビタミン E のエステル化による高機能化を目的として、素的手法により、ビタミン E の変換を行った。上記と同様揮発性の機能性成分を創製するため、ビタミン E のステアに、タバコ植物培養細胞による変換の場合にも、細胞のメリン化を行った。ビタミン E をピリジンに溶解した後、70

タノール浸漬画分に反応生成物が含まれることが明らかと℃に加温した。これに、ピリジンに溶解したステアリン無なった。メタノール抽出物をシリカゲルカラム、イオン交水物を加え、３時間加温した。さらに、３時間の還流を行

換カラム、TLC、HPLC を用いる各種クロマトグラフィー

った。TLC によるチェック後、蒸留水による希釈を行った。

を利用した精製を行い、反応生成物を単離し、スペクトル30 分の静置の後、ヘキサン抽出を行った。ヘキサン抽出測定により構造解析を行ったところ、ビタミン E はユーカ

物を減圧下で濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィ

リ植物培養細胞により、ルチノシド体（図１、化合物４）

ーによる精製を行い、反応生成物を得た。

に変換されることが明らかとなった。
次に、タバコ培養細胞およびユーカリ培養細胞の各種

2. 4.

化学的手法によるビタミンE のメリビオシル化

植物培養細胞のビタミン E に対する変換様式を調べるため、

ビタミン E のメリビオシル化による、ビタミン E の化学

ビタミン E 変換の経時変化を調べた。その結果、図２に示修飾を行った。ビタミン E をアセトニトリルに溶解した後、したように、タバコ植物培養細胞は、ビタミン E と振盪イ

2, 2’ , 3, 3’ , 4, 4’ , 6 - ヘプタアセチルアルファメリビオシル

ンキュベーションを開始した後、ビタミン E のゲンチオビ

フルオライド、1, 1, 3, 3 - テトラメチルグアニジン、およ

オシド体に変換する能力があることが分かった。これに対び３フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体の混合物へ加えた。

して、ユーカリ植物培養細胞とビタミン E を振盪インキュ

２時間、室温において攪拌後、有機物を酢酸エチルによりベーションした場合には、図３に示したように、ビタミン抽出を行った。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにE のゲンチオビオシド体に加えて、ビタミン E のルチノシ

よる精製後、ビタミン E 2, 2’ , 3, 3’ , 4, 4’ , 6 -ヘプタアセチド体に変換されることが分かった。
以上の結果から，タバコ培養細胞とユーカリ培養細胞は、

ルメリビオシドを得た。これらを加水分解することにより、外来基質として加えられたビタミン E を、それぞれ対応すビタミン E メリビオシドを反応生成物として得た。

３．結
3. 1.

るゲンチオビオシド体、ルチノシド体にまで変換する能力

果があることが明らかとなった。また，ビタミン E をルチノ

酵素的手法によるビタミンE のプロピオニル化シド体へ変換する機能は，ユーカリ培養細胞にみられる特プロピオン酸を有機酸として用いたリパーゼによるエス

徴的な変換であることが明らかとなった。

−3−

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

R1
O

R2

R5

R3 O
R4
1：R1, R2, R4=CH3, R3=H, R5=
［
（CH2）
3CH
（CH3）
］
3CH3
2：R1, R2, R4=CH3, R3=CH3CH2CO, R5=
［
（CH2）
3CH
（CH3）
］
3CH3
3：R1, R2, R4=CH3, R3=β-Glc（1-6）-β-Glc, R5=
［
（CH2）
3CH
（CH3）
］
3CH3
4：R1, R2, R4=CH3, R3=α-Rham（1-6）-β-Glc, R5=
［
（CH2）
3CH
（CH3）
］
3CH3
5：R1, R2, R4=CH3, R3=CH（CH3
2）
16CO, R5=
［
（CH2）
3CH
（CH3）
］
3CH3
6：R1, R2, R4=CH3, R3=α-Gal（1-6）-β-Glc, R5=
［
（CH2）
3CH
（CH3）
］
3CH3

Conc. of products（μg/g fr. wt of cells）

図１

化学的および酵素的手法により合成されたビタミン E 誘導体

80

40

24

Conc. of products（μg/g fr. wt of cells）

図２

Time (h)48

タバコ植物培養細胞によるビタミン E ゲンチオビオシドの合成▲：ビタミン E グルコシド、■：ビタミン E ゲンチオビオシド

80

40

24
図３

Time (h)48

ユーカリ植物培養細胞によるビタミン E ルチノシドの合成▲：ビタミン E グルコシド、■：ビタミン E ゲンチオビオシド、X：ビタミン E ルチノシド−4−ビタミンＥの高機能化とさらなる有効利用を目的とした新規化粧品素材の酵素・化学複合的分子創製

3. 3.

化学的手法によるビタミンE のステアリン化

５．総ビタミン E を、ステアリン無水物をエステルドナーとし括て使用してピリジン中で還流することにより、ビタミン E

以上、ビタミン E を高機能化するための植物培養細胞なのステアリン化に成功し、ヘキサン抽出、シリカゲルカラ

どの生体触媒を利用した合成法と化学的合成法による、ビムクロマトグラフィーにより、ステアリルビタミン E（図タミン E の「アシル化」を中心とした化学修飾を行い、新１、化合物５）を反応生成物として得た。

規かつ安定な化粧品素材の複合的分子創製法を構築した。

以上、ビタミン E のエステル化による高機能化を目的として、化学的合成手法により、ビタミン E のステアリン化

謝を可能にした。

辞本研究にご助成頂きました財団法人コスメトロジー研究振興財団に深謝申し上げます。

3. 4.

化学的手法によるビタミンE のメリビオシル化

化 学 的 合 成 手 法 に よ り、1, 1, 3, 3 - テ ト ラ メ チ ル グ ア（引用文献）

ニ ジ ン 存 在 下、 ア セ ト ニ ト リ ル 中 で、 ビ タ ミ ン E の１）Rimm ER, Stampfer MJ, Ascherio A, et al., :Vitamin2, 2’, 3, 3’, 4, 4’ , 6 - ヘプタアセチルメリビオシル化すること

E consumption and the risk of coronary heart diseaseに成功した。ビタミン E 2, 2’ , 3, 3’ , 4, 4’ , 6 - ヘプタアセチル

in men, N. Engl. J. Med., 328, 1450-1456, 1993.

メリビオシドの加水分解は定量的に進行し、対応するビタ

２）Stampfer M, Hennekens C, Manson J, et al., :Vitamin
E consumption and the risk of coronary disease in

ミン E メリビオシド（図１、化合物６）を得た。

women, N. Engl. J. Med., 328, 1444-1449, 1993.

以上、ビタミン E の化学的合成手法によるメリビオシル

３）Brigelius-Flohe R, Traber MG, :Vitamin E: function

化を可能にした。

４．考and metabolism, FASEB J., 13, 1145-1155, 1999.

察４）Subbaiah PV, Horvath P, Achar SB, :Regulation

ビタミン E を高機能化することを目的として、新規な化

of the activity and fatty acid specificity of lecithin-

粧品素材としてビタミン E 誘導体の合成を行った。各種のcholesterol acyltransferase by sphingomyelin and

化学的修飾は、それぞれの反応に適した合成手法により行

its metabolites, ceramide and ceramide phosphate,った。すなわち、リパーゼによる酵素的手法によるビタミ

Biochemistry, 45, 5029-38, 2006.

ン E のプロピオニルエステル化（アシル化）、植物培養細５）T o s i M R , T u g n o l i V , : C h o l e s t e r y l e s t e r s i nmalignancy, Clin. Chim. Acta, 359, 27-45, 2005.

胞を生体触媒として用いる酵素的手法によるビタミン E の
ゲンチオビオシル化、ルチノシル化、化学的合成法を活用

６）Ishihara K, Hamada H, :Biotransformation using

したビタミン E のステアリン化（アシル化）、およびメリplant cultured cells, J. Mol. Catal. B: Enz., 23, 145-170,

ビオシル化に成功した。

2003.

−5−

ミルクタンパク質からなる無機有機ハイブリッドナノスフェアの創製

慶應義塾大学大学院理工学研究科

藤 本

基礎理工学専攻生物化学専修

啓 二

Nanoparticles composed of biopolymers have received much attention as a useful material applicable to a variety
of industrial fields. We focused on casein proteins, which are associated and assembled into an organic and inorganic
supra-structure. We could prepare nanoparticles of beta-casein coupled with polyethylene glycol (PEG) by changing pH,
2+temperature, and Ca concentration. Since the obtained nanoparticles were soluble at body temperature, we tried to produce
calcium phosphate as a cross-linker in a nanoparticle. The obtained particles had a diameter of approximately 100 nm at pH
7.4 and kept stable over a wide range of temperature. Phosphorous could be detected inside the nanoparticle with XPS and
EDX measurements. It was also found that nanoparticles were disrupted by lowering pH from pH 7.4 to 4.0.

１．緒

オンを添加して、カゼイン内に含まれるカルシウムイオン

言と反応させることで粒子内にリン酸カルシウムを析出させ

バイオポリマーは生体適合性に優れたものが多く、そのた。得られたナノ粒子はリン酸カルシウムが架橋点としていくつかは温度、pH など生体内環境によって構造を変化

働き、PEG 鎖が分散安定性を付与することになる（ナノス

させることができる。牛乳中にはバイオポリマーであるタフェア）。最後に、作製した粒子に DDS キャリアに向けた

ンパク質が約 3 . 2％含まれており、近年これらを食品以外

モデル薬物の封入と放出の最適化を行った。

の分野における素材として利用することが注目されている。

２．実

多種類の牛乳タンパク質の中で主要なものにカゼインがあ験

る。牛乳タンパクであるカゼインは牛乳中で 100nm スケ

まず、修飾を施していない bカゼインの基礎的性質であールのミセルを形成しており、このミセルには主に a カゼ

る会合挙動を詳しく研究した。すなわち、b カゼイン水溶液

イン、b カゼインが含まれている。本研究では、ミセルをの透過率および散乱強度測定により、pH、温度応答性お形成するカゼインのうち、b カゼインに着目した。b カゼ

よび Ca 濃度による b カゼインの会合力の変化を観察した。

インは生体適合性、生分解性に加え、アミノ基を数多く持

これらを踏まえて、分散安定性の付与とナノ粒子化の制

つため、化学修飾が容易に行えるという利点がある。さら御を目的として、urea により鎖状にした bカゼインの NH2に b カゼインは pH や温度、Ca 濃度によって特徴的な会

基に polyethylene glycol（PEG）を化学修飾させることに合挙動を示すバイオポリマーである。化学修飾により会合

よって試みた。PEG 修飾後に urea を取り除き、温度と pH挙動を制御することで、生体適合性に優れた DDS キャリを変化させることにより PEG - b カゼイン粒子を作製した。

アとなるナノ粒子を作製することができる。本研究では、続いて、生体内の pH 条件においても粒子形状を維持さ抗がん剤のターゲティングを目指し、正常血管では漏出しせるため、Ca を添加することで PEG-Ca b カゼイン粒子

にくい化合物が腫瘍血管では漏出しやすく腫瘍部位に滞留を作製した。

2+2+2+

しやすいといった EPR 効果の利用を狙い、100nm スケー
ルの粒子の作製を目指した。

2+

さらに Na2HPO4 および KH2PO4 を加えることでリン酸カルシウムとbカゼインの複合化を試み、有機無機ハイブリッ

図１にデザインコンセプトを示す。はじめに bカゼイン

ドナノ粒子（Calcium phosphate-PEG-bcasein nanoparticle, ナ

を尿素を用いてランダムコイル状態に変化させて、アミノスフェア）を作製した。複合化の際にキレート剤を用いる

ノ基を介して PEG 鎖を化学修飾する。次に、カルシウム

ことにより、PEG-Ca bカゼイン水溶液に存在するCa を除

イオン存在下で urea を透析によって除去することにより、去し、Na2HPO4 およびKH2PO4 との沈殿物を生じさせないよ

100nm スケールの粒子を形成させた。その後、リン酸イ

うにした。

2+

2+

また、作製したナノスフェアに対し、組成分析、形態観
察、二次構造の分析、表面電荷測定、および内部環境評価
Preparation of inorganic-organic hybrid
nanoparticles by chemical modificationof milk protein, casein
Keiji Fujimoto
Graduate School of Science and technology,
Keio University

によるキャラクタリゼーションを行った。なお、この際リン酸カルシウムと複合化させない粒子（PEC 粒子）を作製し、ナノスフェアの挙動を比較した。その後、リン酸カル
シウムの低 pH にて溶解するといった性質を考慮し pH 応
答性を検討した。

−6−

ミルクタンパク質からなる無機有機ハイブリッドナノスフェアの創製

図１

カゼインから作る無機有機ハオブリッドナノスフェア

図２

カルシウムイオンによるβカゼインの会合挙動の変化

生体内環境を考慮した外部環境の変化に対するナノス

よって二次構造が崩れ、変性したまま疎水性結合して、よフェアの変化を観察として、この場合には pH の変化により巨大な凝集体を形成すると考えられる。これより、b カるナノスフェアの崩壊性について粒子サイズの変化を測

ゼインをナノ粒子として使用するためには、まず水中での定することにより検討を行った。さらに、モデル薬物と安定性を上げるような改質を施す必要がある。
2+

して正電荷を帯びた 6-methoxy-N-ethylquindinium iodide

b カゼインは、4℃では 400mM の Ca が存在しても沈（MEQ）を用いて、透析法によりナノスフェアへの取り込

殿しないが、37℃では 8 〜 15mM の Ca で沈殿する。こみ挙動を MEQ の蛍光強度変化から検討した。次に、MEQのように Ca を加えると凝集しやすくなることが知られの放出実験を行うために、凍結乾燥させたナノスフェアている。よって本研究では、加えた Ca の量と温度によに対し、MEQ 溶液を 4℃にて 3 日間浸透させた。未封入のる b カゼインの会合挙動の関係を求めた。pH7.4 の条件下

MEQ を限外ろ過にて除去した後に、CAPAC 粒子から放で 1000 ppm の b カゼイン溶液に Ca を添加して検討を行出された MEQ 濃度の経時変化を蛍光光度計で測定した。

った。図２に示すように b カゼインのみの溶液では温度

2+

2+

2+

2+

2+

による透過率の変化は見られないが、Ca の存在下では

３．結果および考察

温度を上げるにつれ透過率が下降した。2.0 mM では 40℃、
2+

b カゼインは pH を等電点（pI=4.6）へ近づけることで凝6.0 mM では 30℃、10.0 mM では 20℃と、Ca 濃度を上げ集体となって沈殿した。また、温度を上昇させることによていくと、より低い温度で透過率の急激な下降が見られる

り、b カゼインの散乱強度が上がり、b カゼインの会合がようになった。この結果より Ca 濃度を上げていくこと進んでいくことが示唆された。b カゼインは温度の上昇にで、b カゼインを低温で会合させることができると考えら

2+

−7−

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

図３

粒子サイズ制御のためのカゼインの PEG 修飾れる。しかし得られた b カゼインの形態は凝集した不定形

100 nm ほどのナノスフェアが分散して存在していることであり、サイズと形状を制御することはできなかった。

がわかった（図４）。図５に EDX により領域の構成元素をタンパク質はジスルフィド結合の還元切断と尿素の添加定性分析した結果を示す。粒子が存在しない部位では検出による水素結合の阻害によりアンフォールディングされ、されなかったリンとカルシウムのピークが CAPEC 粒子に

三次元の立体から二次元の鎖状になる。そして一旦アンフは検出された。これにより、ナノスフェア内にはリン酸カォールディングしても還元剤と尿素を取り除くと自発的にルシウムの結晶が含まれていることが示唆された。

天然構造が回復する。b カゼインにはシステイン残基が含以上のように、ナノスフェアの温度変化や乾燥した状態

まれていないため、ジスルフィド結合は存在しない。そのにおける安定性が示された。しかし、この粒子を DDS キ

ため、尿素のみによって、フォールディングの制御が可能

ャリアとして応用するためにはキャリアが形状を維持したであると考えられる。5000 ppm の b カゼインに尿素を加まま薬剤を目的部位まで運ぶことに加え、目的部位で保持え、b カゼインの水素結合を切断した。尿素を加えることしていた薬剤を放出することが求められる。ナノスフェア

で沈殿が生じていた b カゼインが徐々に透明になっていき、の室温における pH 応答性を調べたところ、この粒子は生尿素濃度 2.0M では透過率がほぼ 100 % となった。尿素を体内 pH では粒子の形状を維持しているが、低 pH にする

添加して粒径が顕著に減少した b カゼインから尿素を抜くと即座に粒子が崩壊することがわかった。この現象を利用と、再び b カゼインの粒径である 25nm 付近の大きさに戻することによって、pH 変化による粒子の溶解によって薬った。

剤を放出させることができると考えられる。バイオポリマ

そこで、b カゼインに安定性を付与するため両親媒性でーのような大きな物質は、エンドサイトーシス経路によりある PEG 修飾（図３）を行ったところ、環境応答性が PEG

細胞内に取り込まれることが予想される。エンドソーム内の導入率によって変化することを見出した。PEG 導入率

は低 pH に保たれていることから、低 pH で崩壊するといの高い b カゼインは pH および温度応答性を失い、会合がうナノスフェアの性質は、DDS キャリアに内包された薬起こらなくなった。一方、低い PEG 導入率では応答性は剤を細胞内で放出できるという点から有利である。

維持されており、会合が起こりやすい高温、低 pH 条件にそこで、モデル薬物として蛍光物質を用いて透析法において直径 100 nm スケールの粒子が生成することを見出よりナノスフェア内に封入することを試みたところ、正した。b カゼインのみから作製した粒子はすぐに凝集して電荷を持つ MEQ という蛍光分子の場合に封入が観察さしまったが、この PEG - b カゼイン粒子は分散状態を維持れた。おそらく、負電荷に帯電したナノスフェアとの静していた。しかし、pH を生体内条件にすると、この粒子

電相互作用により吸着および吸収されたものと考えられは溶解してしまった。

る。次に MEQ の pH 7.4 および pH 4.0 での放出実験を行っ

2+

そこで、この条件（pH7.4）において Ca を添加したとた。外部溶液に放出された MEQ 濃度の経時変化を図６に

ころ、粒子の形成が観察された。PEG - b カゼインは高 pH示す。pH7.4 では、徐々に MEQ が放出されているのに対し、では負電荷を帯びているため溶解状態であるが、Ca を添

pH4.0 では放出が一気に進んでいることがわかった。これ加することによって会合が促進されて粒子が形成されたとは、pH を 4.0 まで低下させることによりナノスフェアが崩考えられる。この PEG-Ca b カゼイン粒子はシャープな壊し、内部に MEQ を保持することができなくなったため

温度応答性を示し、高温においては会合するが、室温に戻だと考えられる。実際に pH 4.0 において粒子が完全に崩壊すことにより即座に粒子の形状を維持できなくなった。

するには約 2 日間かかったことから、50 hr ほどで放出が平2+2+次に、室温でも粒子形状を維持する粒子の作製を目指し、衡に達したのは妥当な結果であると考えられる。

リン酸カルシウムと b カゼインの複合化を行った。TEM

以上の結果から、無機有機ハイブリッドナノスフェアをによる乾燥状態の観察を行った結果、pH 7.4 において直径用いて pH の低下による薬物放出のスイッチングを行うこ−8−

ミルクタンパク質からなる無機有機ハイブリッドナノスフェアの創製

図４

ハイブリッドナノフェアの透過型電子顕微鏡

図６

図５

EDXによるナノスフェアの元素分析

pH によるナノスフェアからの薬物放出の変化とができた。今後、粒子外部への薬物の吸着を抑制し、内ができた。このナノスフェアは pH 変化によって崩壊する部への封入効率を向上させる工夫が必要だと考えている。

性質を持ち、pH 応答性 DDS キャリアとして有望な素材で４．総あることがわかった。

括バイオポリマーである b カゼインを化学的に改質した

謝

本研究は修士学生堀真帆君の貢献によるものが大であっ後、無機物と複合化することによって、生体適合性に優れ、100 nm スケールの無機有機ナノスフェアを作製すること辞た。ここに謝意を示す。

−9−

化粧品の防腐剤低含有率化を目指した除菌材料の開発
1

九州共立大学工学部 、福岡工業大学工学部

桒原

順 子 、甲斐原
1, 2

2

梢

1

Parabens are alkyl ester derivatives of parahydroxybenzoic acid and are widely used as preservatives in cosmetics, foods,
toiletries products. These parabens are essential for keeping quality high in the perishable products. However, parabens are
known to present a very weak contact allergy to user’s skin. We attempted to construct a series of sterilization agents forlowering preservative in cosmetics. These agents have dendritic lysine peptides structure as a spacer on a polystyrene bead.
Peptide immobilized beads are also effective in reducing the pollution of wastewater. The surface ionic property of thebeads is polycationic due to numerous a- or e-ammonium groups. These polycationic beads were interacted with anionicliposomes, the liposome leakage activities were increased with surface charge density and generation number of oligo
lysine dendron groups. We tested antimicrobial activity of novel surfactants containing dendritic oligo lysine groups forconfirmation effectiveness of numerous ammonium groups. It was revealed that a series of surfactants were active against
Gram-positive bacterium (e. g., Staphylococcus aureus) than Gram-negative bacterium (e.g., Escherichia coli). These results
suggest that the peptidoglycan layer of Gram-positive bacterium cells is interacts specifically with ammonium groups.

1）

１．緒

アンモニウム基との静電相互作用による抗菌効果であり 、

言第一級や第四級のアンモニウム塩でも同様の効果が期待さ

我が国における抗菌・防黴技術は 20 世紀半ば頃より急れる。

激な発展を遂げ、現在では天然物系、人工系のものを含め

本研究の目的は、防腐剤の代替物質として、安全性に優ると抗菌剤の種類は百数十種類以上にのぼる。また、食品

れ、かつ環境へ配慮した除菌材料を創製することである。

や化粧品、生活用品等の抗菌・防黴技術は私たちの衣食住

生体親和性の高いアミノ酸、特に側鎖にアンモニウム基をを中心とした生活衛生環境の向上に大きく貢献している。

有するリシンからなる除菌材料を開発した。図１で示すよ化粧品を含む一般工業製品の除菌法としては、洗浄法、

うに分子構造の異なる３種類①球状デンドリマー型、②半濾過法、吸着法など多様な手法が知られ、数種の除菌法を

球デンドリマーを親水部にもつ界面活性剤型、③半球デン

組み合わせた製品が多い。また、消費者が手にする化粧品

ドリマー固定型ビーズのそれぞれ異なるタイプの抗菌剤をのほとんどにパラベン類の防腐剤が添加されているのが現

合成し、その抗菌作用効果についてパラベンとの比較検討状である。現在、国内では、防腐剤としてパラオキシ安息を行ったので報告する。

香酸エチルなど数種が認可されている。パラベンは、食品

２．実の防腐剤としても添加が認可されているが、人体への影響が懸念されるため使用制限値が設定されている。一方、医

2. 1

験

球状型リシンデンドリマーの合成tt

療用として用いられる第四級アンモニウム系の化合物は、

保護D-アミノ酸 Boc-Lys（ Boc）
-OHおよび1, 6-diaminohexane

特にグラム陽性菌に対して優れた除菌効果を示すことが知を使用し、HOBt/HBTU による活性エステル法でカップられている。しかし、除菌能力は高いが、塩化ベンザルコ

リングを行った。得られた粗生成物についてはシリカゲル

ニウムなどのように界面活性剤系除菌剤は水で洗い流すこ

カラムクロマトグラフィーによる精製を行い、保護体を得とが前提で、化粧品のように長時間、直接肌に触れるようた。さらに HCl による Boc 基の除去を行い、第一世代をな場合は皮膚への刺激性が認められる場合もある。抗菌活得た。また、第一世代に Boc-Lys（ Boc）
-OH を４等量加え性を示す界面活性剤としてアンモニウム塩が有名であるが、てカップリングを行い、精製、脱保護を行い第二世代のデ

これらは特に負の電荷を帯びたタイコ酸を有するグラム陽ンドリマーを得た。

ttt性菌に対して効果が高い。このことは、細菌の最表層と*Study on sterilization agents forlowering preservative in cosmetics
Junko Kuwahara*, Kozue Kaibara
Faculty of Engineering, Kyushu
Kyoritsu University, Fukuoka Instituteof Technology

2. 2 半球デンドリマーを親水部にもつ界面活性剤の合成
デンドリティック D-リシン導入型界面活性剤について
は、親水部位が第一世代型を 1G DK-C12、第二世代型を
t

t

2G DK-C12 と略記する。原料は Boc-Lys（ Boc）-OH および n-ドデシルアミンを使用し、球状デンドリマー同様に合成と精製を繰り返し、第一世代型、第二世代型、第三世代型を得た。

− 10 −

化粧品の防腐剤低含有率化を目指した除菌材料の開発

Ａ

B

C

図１ 分子構造の異なる 3 種の除菌材料（Ａ）第二世代リシンデンドリマーの分子構造（Ｂ）親水部に第三世代型半球デンドリマーをもつ界面活性剤 3G DK-C12 の例（Ｃ）半球リシンデンドリマーを固定化したポリスチレン樹脂の模式図

2. 3

半球デンドリマー固定型ビーズの合成

2. 5

抗菌活性試験

粒径 75 〜 150 µm のポリスチレン樹脂表面に第四級アン抗菌活性試験は液体培地希釈法で行い、試験菌株としてモニウム基を導入するため、樹枝状ペプチド「デンドリテ

グラム陰性菌である大腸菌（E. coli，NBRC14237）、グラィックオリゴ D -リシン」を結合した。リシンデンドリマ

ム陽性菌である黄色ブドウ球菌（S. aureus, NBRC12732）

ー部位の世代数は１〜３までとし、N- 末端を第一級アンを用いた。また、半球デンドリマー固定型ビーズの抗菌活

モニウム型（nG-A, n=1, 2, 3）、あるいは第四級アンモニウ

性試験は濁度変化により評価した。

ム型（n G-TMA, n=1, 2, 3）とした。第四級アンモニウム型

3．結

は、リシンデンドリマーの末端部位に（3-Carboxypropyl）

3. 1-trimethylammonium chloride を導入した。

果

半球デンドリマー固定型ビーズのリポソーム崩壊能

図２は、ポリカチオンビーズ重量当たりの官能基モル数

2. 4

人工リポソーム崩壊能評価

に対するリポソーム崩壊能をそれぞれ示したものである。

半球デンドリマー固定型ビーズについては、抗菌活性試

第一級および第四級アンモニウム型はそれぞれ（A）およ験の予備実験として酸性リポソーム崩壊能評価を行った。

び（B）である。第一級型（nG-A）は、ビーズ重量当たり実験に用いた人工リポソームには蛍光色素 5（6）-カルボキのアンモニウム基増加、即ちビーズ表面の表面電荷密度増

シフルオレセイン（CF）水溶液を内包させる薄膜法

大に伴い CF-leakage 活性が指数関数的に増加した。また、

2, 3）

で

調製した。リポソーム崩壊能測定は、恒温セルホルダ付き

その効果はスペーサー部位であるデンドリティックオリゴ

蛍光分光光度計（㈱日立製作所 , F-2500）を使用した。

リシン鎖の世代数に大きく影響を受けた。一方、第四級型− 11 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

図２ ビーズ重量当たりの官能基モル数に対するリポソーム崩壊能評価
リポソーム内水相の漏出率（CF-leakage（%））が高いほど崩壊能が優れていることを表す。末端トリメチルアンモニウム型（Ｂ）は 0.4 mmol/g resin 付近で光学セル表面への吸着が起こった。

（nG-TMA）は、重量当たりの官能基モル数が 0.2 mmol/g

球菌に対しては 1G DK-C12 は 0.25 mg/mL、2G DK-C12 はresin 付近までは官能基モル数に対して増加傾向を示した

0.125 mg/mL 以 上、3G DK-C12 は 0.063 mg/mL 以 上 と なが、0.4 mmol/g resin 付近になるとビーズが石英ガラス表

り世代数の増加とともに抗菌作用も高くなることが明らか

面へ吸着し、測定不能となった。

となった。球状型デンドリマー分子と同様にグラム陽性菌である黄色ブドウ球菌に対して高い抗菌活性を示した。従3. 2

抗菌活性試験結果

3. 2. 1って球状型と半球型のような構造上の違いによるものでは球状型リシンデンドリマーの抗菌活性なく、１分子内に含まれるアンモニウム基の総数が抗菌活

デンドリマーは対称性のある球状高分子であり、デンド

性の強さに関係していると考えられる。

リマー末端に種々の官能基を導入することによって多用な機能性をもたせることが可能である。しかしながら、世代

3. 2. 3

数の増加とともに水への溶解度は減少するため、抗菌活性第三世代型の末端アンモニウム型樹脂の大腸菌および黄試験で使用するためにはイオン性アミノ酸からなるデンド

色ブドウ球菌に対する抗菌活性試験の結果を図３に示す。

リマーである必要がある。水に対する溶解度を考慮して第大腸菌の実験系ではほとんど顕著な差が見られなかったが、二世代型のリシンデンドリマーの抗菌活性試験を行った。

液体培地に樹脂を 50 mg/mL 投与した系では黄色ブドウ球

第二世代リシンデンドリマー HCl 塩の場合、大腸菌に半球デンドリマー固定型樹脂の抗菌活性菌の増殖を 15％以下に抑えることに成功した。

は２mg/mL 以上、黄色ブドウ球菌には 0.025 mg/mL 以上

４．考

で抗菌活性を示し、特にグラム陽性菌である黄色ブドウ察

球菌に強い効果が観測された。さらに、対照物質である p-

本研究では、化粧品の防腐剤として使用されているパラヒドロキシ安息香酸プロピル（パラベン）より抗菌効果がベンの代替物質あるいは低減化を目指した除菌材料の開発高いことが明らかとなった。

を試みた。抗菌活性試験の予備実験として行ったリポソー
ム崩壊能測定では、ポリスチレンビーズに結合するリシン

3. 2. 2半球デンドリマーを親水部にもつ界面活性剤の抗菌活性

側鎖のアンモニウム基密度が高まると酸性リポソームと強く相互作用し、崩壊能が増強されることが明らかとなった。

親水部の世代数と抗菌効果の関係を明らかにするため

また、同じ電荷密度でも世代数が高い方が有意であった。

に半球デンドリマー部位を第一世代（1G DK-C12）、第二

このことは、リシン側鎖のアンモニウム基が高密度で、か世代（2G DK-C12）、第三世代（3G DK-C12）それぞれにつつアンモニウム基が樹脂中心から遠い、つまりアンモニウ

いて調べた。まず、大腸菌に対する抗菌試験の結果、1Gム基がある程度自由に動ける空間が必要であることを示唆

DK-C12 は 2 mg/mL、2G DK-C12 および 3G DK-C12 は 0.25

している。また、半球デンドリマーを親水部にもつ界面活mg/mL 以上で抗菌作用効果があった。また、黄色ブドウ性剤は黄色ブドウ球菌に対する抗菌活性はパラベンより優− 12 −

化粧品の防腐剤低含有率化を目指した除菌材料の開発

図３

液体培地中での抗菌活性樹脂各濃度における大腸菌（Ａ）および黄色ブドウ球菌（Ｂ）の増殖曲線

れていることが明らかとなった。パラベンでは黄色ブドウ謝

辞

球菌に対する最小生育阻止濃度は１mg/mL であったのに本研究を行うにあたり、ご支援いただきました財団法人

対して 3G DK-C12 では 0.063 mg/mL であった。一方、大コスメトロジー研究振興財団に深く御礼申し上げます。ま

腸菌に対する抗菌効果は認められなかった。半球デンドリ

た、本研究にご協力いただきました九州共立大学大学院秋マー固定型樹脂でも同様に黄色ブドウ球菌に対して高活性

貞英雄教授、九州工業大学大学院西野憲和教授、同大学院が認められた。このことは、細胞膜構造の違いに由来する

前田憲成助教に深謝申し上げます。

と考えられている。グラム陽性菌である黄色ブドウ球菌はグラム陰性菌である大腸菌と比べて細胞膜を構成するペプ（引用文献）

チドグリカン層がより厚く、頑丈である。また、多糖も多１）Adair FW, Geftic SG, Gelzer J: Resistance of

く含まれている。今回の結果は、ペプチドグリカン層、あPseudomonas to quaternary ammonium compounds:

るいはアンモニウム基同士の特異的な相互作用によるもの

II. cross-resistance characteristics of a mutant ofと予想される。これまでに報告者らは、糖結合型界面活性Pseudomonas aeruginosa, Appl. Microbiol., 21: 1058-

剤 MEGA-10 に対して一級アンモニウム塩が強く相互作用

1063, 1971.

4）

しているという研究結果について既に報告しており 、今２）Kuwahara J, Akisada H, Kato T, et al.: Effects of

回の実験からもアンモニウム基はグラム陽性菌に対してよhydrophobic and electrostatic interactions on change

り抗菌作用効果の高い官能基であることが確認された。

in decapeptide conformation in micelle and liposome

５．総

solution, J. Oleo Sci., 53, 619-626, 2004.

括３）Kuwahara J, Akisada H, Wakayama N, et al.:

本研究で合成した除菌材料 ①球状デンドリマー型、②Amyloid fibril formation of a simple decapeptide in a

半球デンドリマーを親水部にもつ界面活性剤型について抗

micellar environment, J. Oleo Sci., 54, 225-231, 2005.

菌活性試験の結果、どちらも大腸菌より黄色ブドウ球菌に４）Akisada H, Kuwahara J, Kunisaki M, et al.:A circular

対して高い抗菌活性を示し、高世代型のものほどパラベン

dichroism study of the interaction between n-decanoyl-

より強い活性を示すことが明らかとなった。また、③半球

N-methylglucamide and surface active agents in mixed

デンドリマー固定型ビーズを 50 mg/mL 投与した系では黄micelles, Colloid Polymer Sci.，283, 169-173, 2004.

色ブドウ球菌の増殖を 15％以下に抑えることに成功した。
今後は、カビ・酵母などに範囲を広げて抗菌活性を示す除菌材料の検討を行っていきたいと考えている。

− 13 −

化粧品素材としての生体安定性を有する発色ナノ粒子含有液の開発

東京電機大学工学部電気電子工学科

平 栗

健 二

We have developed photoluminescent stable silicon nanocrystals (nc-Si) which have attracted great interest as quantum dots
due to their nontoxic, abundant, and low-cost materials. The nc-Si particles show visible luminescent properties caused by aradiative recombination of electrons and holes in the Si-nc. The emitted colours can be tuned by changing the size of the nc-Si. In
order to know the limit concentration for cytotoxicity, we investigated the response of HeLa cells. We detected a toxicity of nc-Si at
1,120 μg/mL. We suggested one of the mechanisms that nc-Si can generate oxygen radicals and the radicals were associated withmembrane damages.

１．緒

可視領域の光学マーカーとして期待されている。発光色と言

ナノシリコンの粒子径の関係は、直径約 3 [nm] で赤色、約発光性ナノシリコン（nc-Si）は、可視領域において発光

2.3 [nm] で緑色、約 2 [nm] で青色となり、目的の色を自由1, 2）する物質であり、最近の研究により、粒子状態で固体状まに制御する応用に適している

たは溶液内へ分散することが可能になっている。そこで、状発光性ナノシリコンは、多方面に添加できるので電子工

生体内への取り込み、毛細血管内での流動性、さらには学、光工学、機械工学だけでなく医学、薬学、化学など広

生体への安全性に優れた新規の半導体ナノ粒子材料として、範囲への応用が期待されている。また、この発光性ナノシ

シリコンナノ粒子が有望視されている。この材料は、今日

リコンは、励起源として、発光波長よりエネルギーの高いの半導体産業を支えてきたバルクシリコン結晶のサイズ

短波長の光によって発光するので、赤色には青色の励起光（直径）を 4.3 [nm]（この値は電子と正孔が静電引力で弱く源、青色には紫外線の励起光源など、発色の選択に光源を結合した粒子的状態、
すなわち励起子のボーア半径に相当）選ぶことも出来る 。

2

3）

4

さらに、この材料は、最近の生体への安全やリサイクル

以下に縮小したもので、粒子を構成する原子数も 10 〜 10
23

。特に、溶液中での分散

4, 5）[ 個 ]（通常のシリコン結晶の原子数は 10 [ 個 ] である）と等の環境や省エネを考慮した材料である極小にしたものである。

①ナノシリコンは、原料が Si であるので地球上に豊富に。その理由は、

また、材料自体もシリコン元素のみで構成されているた

存在する元素として安定に確保できる。②この Si は、ガめ、資源面、環境面以外に、特に人体に優しい無害性・無ラスの主成分として広く利用されており、生体適合性も十

毒性の物質であり、しかも材料費や製造費が安価な物質と分有する材料である。③加えて、Si の形成には半導体工業

して最大のメリットを有している。さらに、このナノシリとして培われた幅広い先端技術があり、化粧品への応用に

コン粒子の物性や機能性に関しても、大変ユニークな材料応える十分な要素を持っている。

である。その主な物性は、電子や励起子が 3.0 [nm] 以下の本研究では、この発光性ナノシリコンを含有する溶液をナノ空間に閉じ込められることによって起こる量子閉じ込

化粧用材料として利用する可能性について調査するために、め効果である。この量子閉じ込め効果により、バルクシリ

生体に対する安定性について評価する。特に、現在、利用コン結晶では見られない可視領域での発光現象が現れる。

が期待されているが生体への影響が大きいと懸念されてい可視発光は、その材料のもつバンドギャップエネルギーがる Cd および Se により構成されている量子ドット（QD）と可視領域まで広がることで得られる。さらに、粒子径によ比較する。比較の試料としては、濃度の異なる溶液を作製って発光波長が制御できるため、赤色から青色までの広いし、細胞毒性を検討した。

２．実
Luminescent nanocrystalline siliconparticles with biocompatibility forcosmetic application
Kenji Hirakuri
Department of Electrical and Electronic
Engineering, School of Engineering,Tokyo Denki University験

図１に作製方法の概要図を示す。スパッタ条件並びにエ5）

ッチング条件は、通常のパラメータで行った 。発光性ナ
ノシリコン分散溶液の作製には、真空中でのスパッタ法と液相エッチング法を併用した。高周波スパッタリング法を用いて、ターゲット材料である比抵抗２-９[Ωcm] の p 形
シリコンチップ（面方位（100））を純度 99.99 [%] の石英デ

− 14 −

化粧品素材としての生体安定性を有する発色ナノ粒子含有液の開発

ィスクを同時にスパッタリングすることにより比抵抗 0.01

この試料を生理食塩水に分散させた。細胞毒性試験には、[Ωcm] の p 形シリコン基板（面方位（100））上シリコン原

ヒト子宮頸癌細胞株 HeLa 細胞を用いた。この細胞は、マ子が混在したアモルファス SiOx 膜を形成した。

ルチウェルプレート内に 5×10 [ cells/well] を播種し、104スパッタリング後の試料は、アルゴンガス雰囲気中に[ ％ ] の仔牛血清と抗生物質を添加した Minimum essentialて 1100 [ ℃ ] で１[ 時間 ] の熱処理を行った。この熱処理にmedium（MEM）を培養液として、37 [ ℃ ]、5 [%] の CO2

おいて、過剰に含まれたシリコン原子とボロン原子が自在

湿潤環境条件下において 48 [ 時間 ] 培養した。その後、培に移動し、Si 原子がボロン原子を取り込みながら凝集する。

養液を取り除き、ウェルに毒性試験評価用材料として 2.5

この過程を経て、SiO2 層内にボロンドープされたシリコン[nm] のサイズをしたシリコンナノ粒子を 2.8 [mg/mL] からナノ粒子を形成した。このとき形成されたボロンドープシ

280 [mg/mL] までの濃度で培養液とともに添加し、37 [℃ ]、リコンナノ粒子のサイズは、約 3.0 [ nm] であった。熱処理

5 [%] の CO2 湿潤環境条件下において、さらに 48 [ 時間 ] 培

後の試料は、HF 水溶液の蒸気に暴露し余分な SiOx 膜を除養した。48 [ 時間 ] の培養期間において、ナノシリコン粒

去した。粒子状になった nc-Si を生理食塩水内に拡散して、子は HeLa 細胞内に容易に貪食されていることを光学顕微

nc-Si 分散溶液を作製した。本方法にて作製した nc-Si 分散

鏡観察像より確認している。現在までに、細胞内に貪食さ溶液の発光写真を図２に示す。

れる粒子濃度は、1120 [mg/mL] まで確認されている。また、発光性ナノシリコンの細胞毒性を評価するために分散
溶液中のナノシリコン濃度を変化させて培養試験を行っ

毒性試験用材料を添加しないで培養した細胞は、コントロールとして使用した。

た。ナノシリコンの含有量は、11.2 〜 1120 [mg/mL] とした。

ナノシリコン粒子濃度 56 [mg/mL] の溶液を HeLa 細胞内評価に使用した細胞は、子宮癌細胞（HeLa 細胞）を使用し、に取り込み、48 [ 時間 ] 培養し、その後、細胞の安定性を培養条件は通常の条件とした。細胞毒性評価試験の条件を顕微鏡により評価した。ナノシリコン粒子含有 HeLa 細胞

表１に示す。

および添加していない HeLa 細胞の様子を顕微鏡像ならび

３．結に紫外照射時の蛍光像を取得した（図３）。48 [ 時間 ] 後の果細胞は、安定して増殖していることが分かる。さらに、蛍得られたナノシリコン粒子を電子顕微鏡により観察した。

光像からはナノシリコン粒子からの発光が観察され、このその結果、平均粒径 6.5 [ nm±1.5nm] の粒子が観察された。

時点での細胞毒性および発光特性が良好であることが示唆

図１

スパッタ装置図ならびにターゲット条件
表１

細胞培養条件細胞
子宮癌細胞（HeLa 細胞）
培養液
Minimal essential medical alpha（MEM-α）
培養条件 暗室（37℃，CO2：5%）
細胞数12,500 [cells/well]
培養時間 48 [h]評価試料 CdSe (QD), nc-Si
溶液添加量 11.2, 112, 1120 [μg/mL]
青色溶液

緑色溶液
図２

赤色溶液

各色に発光した nc-Si 分散溶液

− 15 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

透過後

蛍光像

nc-Si
含有

nc-Si
無

図３

nc-Si 粒子の透過および蛍光像

図４

細胞毒性評価試験結果の細胞安定性を検討する必要がある。

された。
ナノシリコン粒子の比較対象としてナノシリコン粒子と同条件で細胞と共培養したセレン化カドミウム（CdSe）

謝辞

粒子を 用 い、 比 較・ 評 価を行った。比較的低濃度 で は、本研究を遂行するにあたり、経費を援助いただきました

nc-Si および CdSe 試料ともに、ほぼ 100 [ ％] の安定性を示

財団法人コスメトロジー研究振興財団に深謝いたします。

したが、1000 [mg/mL] を超える濃度では顕著な違いが現

細胞毒性試験評価に対する知見をいただきました国立国際れた。nc-Si 粒子では、活性率が 60 [%] 程度あるのに対し医療センター研究所山本先生に感謝いたします。

て、CdSe では極端な低値を示した（図４）。この結果より、
nc-Si 粒子は毒性が低く、細胞に対する安定性を持つこと（参考文献）が示唆された。

１）Sato, K., Hirakuri, K.: Influence of paramagnetic

次に、毒性試験用材料を含んだ状態で培養された細胞

defects on multicolored luminescence from

は、MTT アッセイ試薬と培養液を 1:1 の比率で混合した溶

nanocrystalline silicon, J. Appl. Phys. 100, p.114303

液を各ウェルに 20 [mL] ずつ添加し、37 [ ℃ ]、5 [%] の CO2（2006）．

恒温装置で発色させた。各ウェルにおいて、プレートリー

２）Sato, K., Hirakuri, K., Iwase, M., Izumi, T.: Fabrication

ダーで 450 [nm] の吸光度値から算出した細胞生存率を毒of highly efficient full-color electroluminescent device

性評価の指標とした。細胞生存率は、すべての粒子濃度にcomposed of nanocrystalline silicon, J. Nanosci.

対してコントロールと同様であり、比較的安定した傾向をNanotechnol. 5, pp.271-276（2005）．

示している。また、ナノ粒子が貪食された細胞に、UV 光３）Barreto, J., Perálvarez, M., Rodríguez, J. A., Morales,を照射することで、サイズ（この実験で使用した粒子サイ

A., Riera, M., López, M., Garrido, B., Lechuga, L.,ズは 2.3 [nm] である。
）に依存した緑色の発光を確認するこ

Dominguez, C.: Pulsed electroluminescence in siliconとができている。この発光輝度は貪食濃度に依存しており、

nanocrystals-based devices fabricated by PECVD,

5.6 [mg/mL] 以上の濃度において室内照明下でも肉眼で鮮Physica E 38, pp.193-196（2007）．
４）Sato, K., Kishimoto, N., Hirakuri, K.: Enhancement

明に確認できている。

４．考of electroluminescent properties in ethanol察dispersible nanocrystalline silicon particles, J. Nanosci.
Nanotechnol. 8 pp.374-378（2008）．

ここまでの研究結果からは、発光性ナノシリコンの細胞毒性は極めて低いことが判明した。これは、nc-Si が Si 元

５）Sato, K., Hirakuri, K.: Influence of oxidized layer on

素より構成されており、素材の安定性や不活性な表面で覆operating voltage and luminance of nanocrystalline

われていることが要因と考えられる。CdSe 系の発光性ナ

silicon electroluminescent device, J. Nanosci.

ノ粒子材料では、光励起によって粒子が活性化し、細胞にNanotechnol. 6 pp.200-204（2006）．

影響を与えることが報告されている。このため、励起粒子− 16 −

オリーブ二次代謝産物の微生物変換によって得られる
新規抗酸化物質の性状解析
岡山大学大学院自然科学研究科（農学系）

神 崎

浩

Development of novel drugs has been achieved sometimes by microbial conversion of secondary metabolites. For
example, hydroxylations of compactin and vitamin D3 by microbial cytochrome P450s generated well-known commercial
medicines, pravastatin and calcitriol, respectively. Thus, novel materials with useful functions for cosmetics or food additives
will be possibly developed by bioconversion of secondary metabolites. We found that bakers’ yeasts catalyzed the reductionof an aldehyde form of oleuropein agylcon (the substrate) in olive leaf extract. We isolated the substrate and its enzymaticallyconverted product and determined their structures by instrumental analyses. Both of the substrate and the product, a novel
alcohol, exhibited a pronounced antioxidative activity in a DPPH test. It was found that contents of oleuropein and its
aglycon in olive leaf extract vary with variety. One pot conversion of oleuropein to compound B catalyzed by a combinationof b-gucosidase and yeast cells was achieved.

1．緒

薬企業による臨床開発研究が行われている。

言

その結果を踏まえ，植物成分に含まれる二次代謝産物に二次代謝産物の利用法として，微生物による構造変換

ついても微生物の処理により，高機能化合物に変換が可能

で化合物を高機能化し，医薬品に応用する例が知られてであると考え，研究を行った。植物として，岡山大学の周いる。図１に，医薬品として開発あるいは利用が期待さ

辺地域，すなわち香川県小豆島，岡山県牛窓地区で日本でれている微生物変換の例を示した。三共が開発したプラの生産のほとんどが行われているオリーブを選んで研究をバスタチン（Pravastatin）は，スタチン系の高脂血症治実施した。その結果，オリーブ葉抽出物をパン酵母で処理

療薬として 1987 年から世界中で販売されている薬剤であすることにより，新規の抗酸化化合物が生成することを明るが，青カビ Penicillium citrinum が生産するコンパクチ

らかにした。この新規化合物はオリーブ葉に大量に含まれン（Compactin）を Streptomyces carbophilus の 酵 素 を 用る配糖体オレウロペイン（Oleuropein）のアグリコン（脱いる微生物変換によってより有効な化合物に変換させる

グルコース体）のアルデヒド基がヒドロキシメチル基に還ことで製品化に至った

1, 2）。カルシトリオール（Calcitriol）

元変換された化合物であり，オリーブの代謝産物としてはは骨粗鬆症などの低カルシウム症状の患者に投与されて知られていない新規化合物である（図２）。また本化合物

いる化合物であるが，ビタミン D3 からの化学合成にはは抗酸化活性を有しており，そのユニークな構造から，化

複数のステップが必要であったのに対し，大正製薬 - メ

粧品素材等としての有効性を有している可能性が高い。

ルシャンが１ステップでの微生物変換法を確立したこと
3, 4）

従って，本研究においては，この新規化合物の化粧品素。我々のグループでも，抗ガン剤材としての開発の可能性を探るべく，抗酸化活性の詳細をとしての開発が期待される細胞分裂阻害活性物質の探索検討するとともに，有効な調製方法の検討を加えることをの過程で，カビが生産する新規化合物フェニラヒスチン目的として実施した。

で注目されている（Phenylahistin）を放線菌 Streptomyces albulus 由来の新２．実

規酸化酵素で処理することにより，デヒドロフェニラヒス
チン（Dehydrophenylahistin）へと変換できること，さらにその変換により細胞分裂阻害活性が飛躍的に上昇し，既存の抗ガン剤レベルに達することを明らかにした

5, 6）

。現

在，本化合物の類縁体について，アメリカのベンチャー製

験（1）抗酸化活性測定
抗酸化活性は 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl（DPPH）法および BioVision 社の Total Antioxidant Capacity（TAC）
Assay kit により行った。
（1）- １

DPPH 法

水溶性抗酸化物質の代表例であるアスコルビン酸ナト
Characterization of novel antioxidative
compound produced by microbialconversion of olive secondary metabolite
Hiroshi Kanzaki
Graduate School of Natural Science andTechnology, Okayama University

リウム（Sodium ascorbate, ビタミン C）と脂溶性抗酸化物
質の代表例であるa-トコフェロール（a-tocopherol, ビタミ
ンE）を比較物質として用いた。1200 mM DPPH 25 mL（final
100 mM），50％ MeOH 225 mL，超純水 25 mL，試料 in 50 %MeOH（添加時の濃度：10, 20, 30, 40, 50, 60 mg/mL）を 96 穴

− 17 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

図１

図２

天然有機化合物の生物変換による有用物質生産例

パン酵母により触媒されるオリーブ葉成分の生物変換反応

少の割合から抗酸化力を評価した。

（2）品種の異なるオリーブ葉のオレウロペイン関連化合物含有量の比較（1）- ２

ペインおよびその関連化合物の量を測定した。当初の実験

アッセイプレートに添加して吸光度を測定し，吸光度の減

日本で栽培されているオリーブ品種に含まれるオレウロ
TAC 法
2+

+

本方法では，抗酸化物質により Cu が Cu に還元され，+で用いていたルッカー種に加え，マンザニロ種，ミッショ

その Cu をキレートした試薬が示す吸光度を測定すること

ン種の葉を材料として用いた。採取した生葉を細断し，エにより活性を評価する。評価は a -トコフェロール様化合タノールに浸漬して抽出物を調製した。得られた抽出物物である Trolox 相当量（nmol）を求めることで行った。尚，中に含まれるオレウロペインおよびそのアグリコン（化1 nmol の Trolox は２nmol の Cu を還元する活性を有する。

合物 A）含有量を ODS-HPLC で測定した。HPLC 分析条件

2+

− 18 −

オリーブ二次代謝産物の微生物変換によって得られる新規抗酸化物質の性状解析は次に示す通りである。カラム：Inertsil ODS-3（５mm），19 mM オレウロペイン 72.5 mL（final 11 mM）に 30 mg

φ4.6×250（nm），カラム温度：35ºC, ポンプ：HITACHI/mL b - グルコシダーゼ 13.75 mL（final 3.3 mg/mL）と蒸Pump L-710， 検 出 器：HITACHI Diode Array Detector

留水 38.75 mL を加えて脱グルコシル化を行った。パン酵母

L-7455（200 〜 400 nm），溶離液：60% MeOH ＋ 0.1% TFA， （日清フーズ社製）は 1.875 mg（final 15 mg/mL）添加した。
それぞれの反応区を 37℃，160 strokes/min で 24 h or 48 h

流速：1.0 mL/min

インキュベートし，遠心分離によってパン酵母と上清を分（3）オレウロペインからの化合物Ｂのワンポット合成法の検討

離させた後，上清を HPLC 分析に供した。

３．結① β- グルコシダーゼ活性測定
b - グルコシダーゼ活 性 はp-nitrophenyl-b -D-glucopyranoside（pNPG）を基質とする pNPG 分解活性で判定した。酵素活

果（1）抗酸化活性（1）- １

DPPH 法で評価した抗酸化活性性１unit の定義を pH 5.5 の酢酸緩衝液，37℃の条件下で５

図３に示すように，化合物 B，化合物 A，オレウロペイ

mM pNPG を基質として 30 分間反応させた時，1 分間に１

ンは a-トコフェロール以上の抗酸化活性を示した。さらに，

mmol の pNP を生成する酵素量とした。

オレウロペインと化合物 A はアスコルビン酸ナトリウム②オレウロペインから化合物 A への脱グルコシル化反応と同程度，化合物 B はアスコルビン酸ナトリウム以上の抗基質にオレウロペイン，酵素にアーモンド由来b -グルコシ

酸化活性を示した。DPPH ラジカルを 20% 消去する濃度

ダーゼを用いた。19 mMオレウロペイン（EXTRASYNTHESE（nM）はアスコルビン酸ナトリウムが 8.88，oleuropein が社製）14. 5 mL（final 11 mM）と30 mg/mLアーモンド由来b -グ

7.66，化合物 A が 9.02，化合物 B が 5.11 であった。

ルコシダーゼ（TOYOBO社製）2.75 mL（final 3.3 mg/mL）に蒸留水を添加して全体で25 mLとし，37℃，160 strokes/minで 24（1）- ２h 反応させ，ODS-HPLC 分析（条件は表１に示した）によTAC 法により求めた活性を Trolox 相当量（nmol）で示って化合物 A 生成の定量を行った。pH の効果を検討する

すとアスコルビン酸ナトリウムは 2.55，オレウロペインは際には，50 mM MES buffer（final 10mM）５mL を使用した。

2.30，化合物 B は 7.10 であった。

③オレウロペインから化合物 A を経た化合物 B へのワンポ

TAC 法で評価した抗酸化活性

DPPH 法，TAC 法 の 両 者 で の 評 価 値 は 類 似 し て お り，ット酵素合成アスコルビン酸ナトリウムとオレウロペインはほぼ同程度

下記の３つの反応区での変換を試みた。

の活性を，化合物Ｂはそれより高い活性を示すことが判明

Ⅰ．初めから b - グルコシダーゼとパン酵母で 24 h 反応さ

した。

せた反応区
Ⅱ．b - グルコシダーゼで 24 h 反応させた後，パン酵母を添加してさらに 24 h 反応させた反応区
Ⅲ．パン酵母のみで 24 h 反応させた反応区（2）品種の異なるオリーブ葉のオレウロペイン関連化合物含有量の比較
オリーブには 500 以上の品種があるとされており，日本

図３ DPPH 法で評価した抗酸化活性
ラジカル消去率は試料無添加区と試料添加区の吸光度の差の試料無添加区の吸光度に対する比を百分率に換算した値として求めた。

− 19 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

でも数種類が栽培されている。論文などの報告ではオリー

なるが，それをワンポットで実施可能か市販のオレウロペ

ブにはオレウロペインが著量含まれているとされており，インを基質として検討した。

今回の抽出物に含まれていた化合物 A がオレウロペイン

この手法を用いることにより，のアグリコンであったことから，この基質の品種間の差を・工程を簡略化することができる

調べることにした。品種としては，前回使用していたルッ・中間体の単離・精製をすることがないので収率の低下をカー種に加え，岡山で栽培されている，マンザニロ種，ミ防ぐことができるッション種を加えた３種を用いた。

という利点が挙げられる。

表１から判るように，全ての品種由来の抽出物中にオレ①パン酵母の β- グルコシダーゼ活性pNPG 分解活性測定試験より，現在使用しているパン酵

ウロペインと化合物 A が含まれていた。３種のオリーブ-4を比較すると，オレウロペインと化合物 A の両者ともに母の b - グルコシダーゼ活性は 5.08×10

マンザニロ種由来の抽出物に最も多く含まれていることが求められた。アーモンド由来 b - グルコシダーゼ（TOYOBO

判った。データを示していないが，抽出の際の条件を変更

社製）の pNPG 分解活性は，6.99×10

することにより，オレウロペインと化合物 A の比率が変次の実験で示すが，オレウロペインの脱グルコシル化には化することが判っており，化合物 B の効率的調製を行うた

5.77×10

めには抽出条件も重要であることが判明した。

すると反応液 25 mL に対してパン酵母を 1.14 mg 添加しな

-4

-3units/ 酵母 mg とunits/mg であった。

units 必要であり，これをパン酵母で賄おうとければならないので現実的ではない。そこで，オレウロペ（3）オレウロペインからの化合物 B のワンポット合成法の検討
様々な論文の報告および（2）で示した結果から，オリー

インから化合物 A への変換にはパン酵母ではなく，市販
精製 b - グルコシダーゼを用いることにした。
②オレウロペインから化合物 A への脱グルコシル化反応

ブ葉には配糖体オレウロペインが著量含まれており，化合

アーモンド由来 b - グルコシダーゼ（TOYOBO 社製）で物 B を効率よく生成するためには，オレウロペインからのオレウロペインを処理したところ，オレウロペインの減少，変換系を確立することが望ましい。この反応は配糖体加水化合物 A の生成が確認でき，オレウロペインの脱グルコ

分解，化合物 A の化合物 B への還元という 2 ステップからシル化の進行が判明した。
そこで，その反応について b - グルコシダーゼの反応に適した pH とされる 5.5 と中性付近の pH 7.0 で反応の経時

表１ オリーブ葉抽出物中に含まれるオレウロペインおよびそのアグリコンの量231nmで検出した各化合物のPeak area を生葉新鮮重 1グラム当たりに換算した。
オリーブ品種オレウロペイン化合物 A
99peak area（×10 ） peak area（×10 ）

酸性領域において化合物 A が多く生成された。これは使用した b -グルコシダーゼの最適反応 pH が 5.5 であったためだと考えられる。また，化合物 A の生成量は，pH 7.0 では反応開始から９h をピークに急激に減少しているのに対

1.13

し，pH 5.5 では反応開始から 72 h をピークに緩やかに減少

8.85

3.01

している。このことより，化合物 A は酸性条件で安定で

12.6

5.25

ある可能性が示唆された。

ミッション

6.00

ルッカー
マンザニロ

図４

変化実験を行った。

β-グルコシダーゼにより触媒されるオレウロペインからアグリコンへの変換反応− 20 −

オリーブ二次代謝産物の微生物変換によって得られる新規抗酸化物質の性状解析③オレウロペインから化合物 Aを経た化合物 B へのワンポッ

ダーゼ活性が低く，化合物 B の生成は認められなかった。

ト酵素合成

４．考

オレウロペインから化合物 B への変換をワンポットで行察うにあたり，オレウロペインから化合物 A への変換を触オレウロペインアグリコン（化合物 A）からパン酵母処

媒する b - グルコシダーゼと化合物 A から化合物 B への変

理により新たに生成した化合物 B はアスコルビン酸ナトリ

換を触媒するパン酵母の２種の触媒を，同時に添加する方

ウムや a -トコフェロールといった抗酸化物質より強い活法（反応区Ⅰ），触媒を継時的に連続添加する方法（反応区性を保有していることから，その作用をさらに詳細に検討

Ⅱ），パン酵母のみの触媒能で反応する方法（反応区Ⅲ）のすることにより，化粧品素材等としての開発が期待される。

３種で検討を行った。各反応区における化合物 B の生成量

化合物 B の生成が，オレウロペインからのワンポット合を図５に示した。このことより，Ⅱのステップワイズ方式

成により達成できることが判明したので，この手法によるで酵素反応を行った方が化合物 B の生成に適していること

変換率の向上が達成できれば，化合物 B を含むエキスの経が示唆された。また，反応区Ⅱにおけるクロマトグラムを済的な調製が可能となり，素材開発への道が開けることが

図６に示した。このクロマトグラムから，オレウロペイン

期待される。

から化合物 A，化合物 B が生成されたことが明らかとなっさらに，オリーブ葉の抽出物中には著量のオレウロペイ

た。なお，当初の予想通り，パン酵母のみでは b グルコシ

ンとそのアグリコンが含まれており，日本の栽培品種では

図５ ワンポット変換による化合物 B の生成量
Ⅰ : β- グルコシダーゼとパン酵母を同時添加し，24 h 反応させた反応区
Ⅱ : β- グルコシダーゼで 24 h 反応させた後，パン酵母を添加してさらに 24 h 反応させた反応区
Ⅲ : パン酵母のみで 24 h 反応させた反応区

図6

ワンポット変換（反応区Ⅱ）で得られる反応溶液の HPLC 分析クロマトグラム
検出波長 : 231nm− 21 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

チンの開発研究，藥學雜誌 , 111, 469-487, 1991

マンザニロ種由来抽出物に最も含量が多いことが判明した。
以上のことから，オリーブ葉抽出物を直接生物変換処理す３）Sasaki J, Miyazaki A, Saito M, et al.: Transformation

る手法を上記のワンポット合成も含めて検討することによof vitamin D 3 to 1a, 25-dihydroxyvitamin D 3 via

り，より有効な化合物 B 含有エキス調製法の確立が期待さ

25-hydroxyvitamin D 3 using Amycolata sp. strains,
Appl. Microbiol. Biotechnol., 38, 152-157, 1992

れる。

４）Takeda K, Asou T, Matsuda A, et al.: Application of（引用文献）

cyclodextrin to microbial transformation of vitamin D3

１）Matsuoka T, Miyakoshi S, Tanzawa K, et al.:to 25-hydroxyvitamin D3 and 1a, 25-dihydroxyvitamin
D3, J. Ferment. Bioeng., 78, 380-382, 1994

Purification and characterization of cytochrome
P-450sca from Streptomyces carbophilus. ML-236B

５）Kanzaki H, Yanagisawa S, Kanoh K, et al.: A novel(compactin) induces a cytochrome P-450sca inpotent cell cycle inhibitor dehydrophenylahistin--

Streptomyces carbophilus that hydroxylates ML-

enzymatic synthesis and inhibitory activity toward sea

236B to pravastatin sodium (CS-514), a tissue-selective

urchin embryo, J. Antibiot., 55, 1042-1047, 2002

inhibitor of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme-A６）Kanzaki H, Kanoh K, Yanagisawa S, et al.: Cell

reductase, Eur. J. Biochem., 184, 707-713, 1989

division inhibitors and process for producing the same,２）岸田有吉，内藤敦，岩藤誠吾，ほか２名：プラバスタ− 22 −PCT Int. Appl., 2001, WO 2001053290

両親媒性物質との分子複合体及びイオン交換体形成を利用する
新規機能性ケミカルピーリング剤の開発
新潟薬科大学薬学部薬剤学研究室

飯 村

菜 穂 子

Recently, chemical peeling has become very popular for treatment of skin disorders in Japan. Some drugs, such as
phenol, salicylic acid, and resorcinol are well known as drugs for treatment of acne vulgaris. However, the chemical structureof peeling agents changes by oxygen or heat. In addition, their drugs are worried about skin stimulus and safety. We tried tostabilize some drugs, such as phenol, salicylic acid, and resorcinol by making complexes with various amphiphilic agents.
We confirmed that complexes of the drugs for chemical peeling were stable against heat, and decided their crystal structuresby x-ray analysis. Moreover, we tried the ion exchange reaction counter ions of amphiphilic agents and the drug for peelingto obtain new drugs for chemical peeling. It was suggested that drugs of chemical peeling, such as salicylic acid were able
to have surface activity and skin permeability by this method. Our finding of the complex between amphiphilic agents anddrugs of chemical peeling and ion exchanged drugs of peeling will be expected as a new drug for acne vulgaris patients.

１．諸

物質との複合体を形成させること、またイオン交換体形成

言を試みることにより、浸透性が高まり、副作用の軽減され

近年、人々の美容への関心が非常に高まっている。美容た新規ピール剤の開発を試み、これまでに全く存在し得な形成、皮膚科等においてしわ、シミ、ニキビを治療したい

かった新しいケミカルピーリング剤を作製することを主なと願い、また市場に出回る化粧品開発もそのようなニーズ

目的に本研究を行った。

に応えるよう進められている。これらの治療方法の一つに

２．実

１）

ケミカルピーリングがある 。これまで皮膚色素性病変にレーザー治療、外用剤適用、ビタミン剤内服と種々治療法

験分子複合体生成が考えられてきたが、しわ、シミ、ニキビ、いずれの疾患

現在ピール剤として使用されている salicylic acid（SA）にも有効、効果的なケミカルピーリングが大変注目される（和光）、resorcinol（Res）（和光）等を選択し両親媒性物

ようになった。皮膚科、美容形成外科等の専門医の間

質との分子複合体形成を試みた。複合体形成に使用した両でも急激に関心がもたれ治療効果を報告する文献も増え且

親媒性物質は４級アンモニウム塩類及び２本鎖を有する

つ、現在では市販品として薬店等でも容易に入手ができる

dioctadecyldimethylammonium bromide（DSDAB）（東京

ようになった。しかし、ケミカルピーリングは、処方開発

化成）、dihexadecyldimethyl ammonium bromide（DCDAB）

初期の頃に提案された phenol、salicylic acid、resorcinol（東京化成）、ditetradecyl dimethylammoniumbromide（DMDAB）

2, 3, 4）

5）

、didodecyl dimethylammonium bromide（DLDAB）
等が現在でも主流の薬剤 であり、これらの皮膚刺激性、 （東京化成）
酸素、光による薬剤不安定性、低い皮膚浸透性は未だ改善（東京化成）、またアルキルピリジニウム塩である hexadecyl

されていない。そのため極端な高濃度での使用もしばしば

pyridinium Bromide（CPB）（東京化成）、hexadecylpyridinium

見られ、患者へのストレスを無視する治療が行われており、

chloride（CPC）（東京化成）、殺菌剤としてよく知られる

今まさに安心して使用できる新規ピール剤開発が待たれて

benzyl hexadecyl dimethylammonium chloride（BCDAC）

いる。

（ 東 京 化 成 ）、 さ ら に hexadecyldimethylethylammonium

そこで筆者は、これまで行ってきた「両親媒性物質との複合体形成がもたらす新規機能性の付加」の研究

6, 7）

bromide（CDEAB）（東京化成）を使用した。

を基盤としてこの技術を導入し、これまで用いられてきたピー
ル剤を薬物透過促進剤としても良く知られている両親媒性
Development of the drug for chemical
peeling using the technique of complex
formation with surfactant and the ion
exchange method
Nahoko Iimura
Faculty of Pharmaceutical Sciences,
Niigata University of Pharmacy andApplied Life Sciences

イオン交換体生成
ピール剤に界面活性機能を付加することによって皮膚浸
透性の高いピール剤を得ることが可能と思われることから、−−

両親媒性物質の対イオン（例えば Cl 、Br ）を salicylic
acid に交換し alkyltrimethylammoniumu salicylate にする
ことを試みた。

分子複合体の生成確認及びイオン交換体の生成確認
今回選択した salicylic acid、resorcinol の分子複合体の− 23 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

結晶構造が明らかになればその存在をさらに明確にするこ３．結とができる。良質な結晶を得て X 線を用いて構造解析を行いたいと考えていた。しかし万が一これらで良質結晶が得

果

両親媒性物質／ピール剤分子複合体

られない場合にその類似化合物でも複合体形成を試み分子安定に単離する事が出来た結晶性分子複合体の例を

配列を明らかにしたいと考え、phenol 類であり、比較的ピ

Table 1 に示した。これらの分子複合体の生成モル比の多ール剤と類似する化合物、p-phenylphenol、hydroquinone

くは、両親媒性物質：薬物＝ 1：1、2：1、3：2 等の整数

等でも上記両親媒性物質との分子複合体形成を試み、X 線

比で形成されていることが確認できた。

構造解析に適当な結晶獲得に努めた。

イオン交換体生成
X 線結晶構造解析

CTAC で 見 ら れ る 硝 酸 銀 反 応 が 陰 性 で あ り、 ま た

分子構造決定に適当な良質結晶が得られたならば、吹CTAC では確認できなかった UV 吸収が見られたことか

きつけ低温装置（Rigaku）により 223K の条件下、イメー

ら、hexadecyltrimethylammonium chloride（CTAC） か

ジングプレート単結晶自動Ｘ線構造解析装置（Rapid-L、ら hexadecyltrimethyl ammoniumu salicylate にイオン交

Rigaku）により、Cuk a 線を用いて回折強度測定を行った。

換されたと思われる。

直接法プログラムは Shelxs-97、SIR2002 を用いて解き、最小二乗法プログラムの Shelxl-97 によりフルマトリックス

両親媒性物質／ピール剤分子複合体の安定性試験

2を用いて Σw（Fo-Fc）を最小とすることにより精密化を行った。

昇温に伴う薬物の揮発は、両親媒性物質と複合体形成させることにより良く抑えられており、その抑制は両親媒性物質のアルキル鎖長に依存し、長いアルキル鎖を有する両両親媒性物質／ピール剤分子複合体の安定性試験

親媒性物質との分子複合体で安定性がより高まることがわ

示 差 熱 重 量 分 析 装 置（DTA- 60、Shimadzu）を 用 い て、かった。結果を Fig. 1 に示す。

温 度 範 囲 25 ～ 300 ℃、 窒 素 気 流 下 に お け る 昇 温 に 伴 う
salicylic acid、resorcinol 等の単体揮発減量、及び分子複両親媒性物質／ phenol 類化合物の X 線結晶構造解析

合体からの salicylic acid、resorcinol 等それぞれの減量測

BCDAC/hydroquinone、DLDAB/p-phenylphenolで良質結定を行い、熱に対する安定性を単体と分子複合体とで比較晶を得ることができた。Ｘ線構造解析は分子複合体形成の証検討した。

明手段として最適な方法であり、salicylic acid、resorcinolと両親媒性物質間に生成される複合体の分子配列を知るた

分子複合体の皮膚への影響

めに類似化合物の分子配列解明は有効と思われ、その X 線分子複合体が皮膚に対してどのように影響するかを知る

結晶構造解析を積極的に行った。DLDAB/p-phenylphenol

ことは、新規ピール剤の効能効果を知る上で重要なことの結晶構造について Fig. 2、3 に示す。構造解析結果から、と思われる。X 線結晶構造解析が成功している BCDAC/

両親媒性物質の交互に逆向きに並んだアルキル鎖間が少hydroquinone を選択し、test skin（東洋紡）、フランツセ

し開き、親水部に隣接するところに隙間ができ、そこにルを用いて単位皮膚あたりの hydroquinone の蓄積性につ

p-phenylphenol が取り込まれることが明らかとなった。取いて hydroquinone 単体との比較を行った。

り込まれる力は、p-phenylphenol の -OH 基と両親媒性物質

Table 1. Crystalline molecular complexes with drugs of chemical peelingComplexes

molar ratio（amphiphilic agent：drug）

CDEAB/Rez

2：1

CPC/Rez

2：1

CPB/Rez

2：1

BCDAC/Rez

1：1

D SDAB/Rez

1：1

D CDAB/Rez

1：1

DSDAB/SA

1：1

DCDAB/SA

3：2− 24 −

両親媒性物質との分子複合体及びイオン交換体形成を利用する新規機能性ケミカルピーリング剤の開発

DSDAB/SADSDAB/Rez

DCDAB/SADCDAB/Rez

SA aloneRez alone

0

0
0

200

- 20

- 10
weight (%)

weight (%)

- 10

- 30
- 40

300

- 40

- 60

- 60
- 70

(A)

200

- 30

- 50

temp(℃)

100

- 20

- 50

- 70

0

temp(℃)(B)

Fig.1 Thermogravimetry detected various drugs of chemical peeling (A: resorcinol(Res)
series, B: salicylic acid (SA) series) stability in the complex crystals.

Fig. 2Crystal structure of DLDAC/p-phenylphenol viewed along the a axis.

Fig.3

Crystal structure of DLDAC/p-phenylphenol viewed along the b axis.

Fig.4

Accumulation profile of hydroquinone in the test skin− 25 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

親水部との水素結合、p-phenylphenol のベンゼン環と疎水ちであるが、X 線構造解析を用いてその類似化合物の分子部との C-H…π 相互作用であることがわかった。一般的に配列を明らかにしたことにより、分子複合体の存在は明らは C-H…π 相互作用は弱いとされているが、この構造ではかになり、またその複合体が経皮吸収促進を示したことか

これらの相互作用が重要な役割を果たし構造安定化に貢献

らこれまで用いられているピール剤とは異なる性質をもつしている。この構造から salicylic acid、resorcinol とで形新規化合物であることも明確にできたと思われる。
両親媒性物質との複合体化やイオン交換技術を導入して成された分子複合体についても、類似の分子配列をとる可

新規の機能を付加させた本化合物が、高い有用性と皮膚ス能性が高いと考えられる。

トレスを軽減したケミカルピーリングの薬剤として臨床現

分子複合体の皮膚への影響

場において貢献できるよう今後の研究を更に展開していき

結果を Fig. 4 に示す。皮膚１ｇあたりの薬物の蓄積は複たいと考えている。

合体を形成する方が大きいことが分かった。薬物吸収促進剤として利用される両親媒性物質との分子複合体化は皮膚（参考文献）

親和性の乏しい薬物の経皮吸収に大きく貢献することが分

１）F u r u k a w a F a n d Y a m a m o t o Y , J o u r n a l o f
Dermatology, 33, 655-661（2006）

かった。

４．考

２）Yamashita R, MB Derma, 48, 25-38（2001）

察３）Funasaka Y, MB Derma, 67, 35-42（2002）

皮膚科、美容形成外科等々では定評のあるピール剤、

４）Miyazaki T, MB Derma, 67, 71-76（2002）

salicylic acid、resorcinol 等の薬剤不安定性は、両親媒性

５）林和弘、内沼栄樹、形成外科、48, 73-78（2005）

物質との分子複合体形成によって改善されることが今回の６）Sawada K, Kitamura T, Ohashi Y, Iimura N, Hirata
H, Bull. Chem. Soc. Jpn., 71, 2109-2118（1998）

研究成果から明らかになった。複合体形成に使用する両親媒性物質の種類を選択することにより多種多様なピール剤

７）Iimura N, Ohashi Y, and Hirata H, Bull. Chem. Soc.

の獲得も可能と思われる。両親媒性物質とピール剤間に生成する分子複合体は、両者の単なる mixture と誤解されが− 26 −

Jpn., 73, 1097-1103（2000）

皮膚の老化予防を目的としたコラーゲンのAGE化阻害物質の探索

熊本大学医学薬学研究部

藤 原

章 雄

e

N - (carboxymethyl) lysine (CML) is a advanced glycation end-products (AGEs) that was known as one of major AGEs
in hydrolysate of glycated collagen. Subsequently, CML was also detected in human serum, and its level in patients withdiabetes was found to be higher than in normal subjects. Furthermore, it is known that AGE-collagen induces apoptosis
in fibroblasts through activation of reactive oxygen species and MAP kinases. Therefore, treatment with AGEs inhibitors
may be a potential strategy for the prevention of clinical diabetic complications and skin aging. In the present study, weinvestigated the inhibitory effect of natural compounds on CML formation to discover the candidate agents for the new
AGE inhibitors. In this screening, rutin, astragalin, quercetin and gallic acid showed significant inhibitory effect on CML
formation during incubation of collagen with ribose, thus those compounds may be candidates for the new AGE inhibitors.

3）

１．緒

の現象は骨粗鬆症の原因の一つであると考えられている 。

言

また、コラーゲンの CML 化は、表皮に存在するケラチノ

我々は、当研究室が保有する天然化合物ライブラリーをサイト（角化細胞）の遊走やコラーゲンへの接着能を低下用いて、健康維持や疾病予防に有効な「機能性天然薬物」

させることから、糖尿病患者における創傷治癒の遅延には、の探索研究を行っており、これまでに、抗動脈硬化作用をコラーゲンの CML 化が関与していることが示唆されてい有するトマト新規配糖体や、メタボリックシンドロームをる 。

改善するリンゴ由来トリテルペン、高血圧を予防する杜仲1）

4）

コラーゲンは、皮膚の真皮において線維芽細胞から産生され、真皮の 70％以上を構成するタンパク質であり、こ葉由来イリドイド配糖体などを発見してきた 。
さらに近年、この研究の一環として、糖尿病合併症や動のコラーゲンが線維芽細胞に引っ張られることで肌の張り

脈硬化症、皮膚老化などの老化性疾患の発症や進展に関与が保たれている。しかし、CML がコラーゲンに蓄積すると、する Advanced glycation end products（AGEs）の生成を

CML 化コラーゲンが RAGE（receptor for AGE）を介し阻害する天然化合物の探索を行っている。AGEs とは、還て Caspase 経路や MAP kinase 経路を活性化し、線維芽細

元糖とタンパク質の非酵素的な反応であるメイラード反応

胞をアポトーシスさせることが報告されているによって生じる最終生成物の総称であり、このメイラード

わち、AGEs は線維芽細胞のアポトーシスを誘導すること

反応は、グルコースなどの還元糖とタンパク質のアミノによって肌の張りの低下といった皮膚老化を促進すると考基が反応してアマドリ転位物を形成する前期反応と、ア

えられる。

3, 5）

。すな

マドリ転位物が酸化、脱水、縮合、転位などの反応を経そこで、本研究では、皮膚老化予防に対する新たなターて、AGEs 構造体へと変化する後期反応からなる。現在、ゲット分子として CML に注目し、当研究室が保有する天AGEs 構造体としては、約 20 種が知られており、その中然化合物ライブラリーを用いて、CML 生成阻害化合物のeでも主要な AGEs 構造体である N（carboxymethyl）
lysine探索を行った。

（CML）は、糖尿病合併症の病変部位や動脈硬化巣のみな

２．実験方法らず、肺線維症の肺胞マクロファージなどでも蓄積する
2）

ことが報告されている 。さらに、コラーゲンに生成する

２-１．試験化合物

CML と病態との関連についても、様々な報告がなされて本研究で用いた天然物化合物は、当研究室が保有するラおり、例えば、CML 化コラーゲンは骨を形成する骨芽細イブラリー化合物に含まれる代表的な植物由来二次代謝産

胞のアポトーシスを誘導することで骨形成を阻害し、こ物（アルカロイド、テルペノイド、フラボノイドなど）であり、計 96 種を選出して用いた。

Search for natural compounds inhibiting
AGE formation for preventing skinaging

２- ２．CML 生成阻害試験

Yukio Fujiwara

型コラーゲン（1.5 mg/ml）の混合溶液を 37℃で７日間イン

Department of Cell Pathology, Graduate
School of Medical and Pharmaceutical
Sciences, Kumamoto University

リボース（30mM）とゼラチン（２mg/mL）もしくは、Ⅰ
キュベートすることで CML が生成する条件下に、DMSOに溶解した天然化合物（100 mM）を添加し、CML 生成に− 27 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

対する阻害作用を、抗 CML 抗体を用いた ELISA 法にて評

３．結

価した。

果

３-１．CMA 生成阻害作用を有する天然化合物のスク
リーニング

２- ３．ELISAELISA に よ る CML 含 量 の 評 価 は、Nagai ら の 方 法 に

1 次スクリーニングとして、リボースとゼラチン（可溶準じて行った 。リボース - ゼラチン（10 mg/ml）を 96 穴

性コラーゲン）を用いた CML 生成阻害試験系にて、96 種

プレートにコーティングし、0.05%Tween 20 を含む PBSの天然化合物の CML 生成阻害作用を評価した。方法とし（washing buffer）で３回洗浄後、0.5% ゼラチンにてブロては、リボース（30 mM）とゼラチン（２mg/mL）の混合

ッキングを行った。各 well を washing buffer で洗浄し、抗溶液を 37℃で７日間インキュベートすることで CML が生

CML 抗体（6D12）を添加後、１時間インキュベートした。

成する条件下に、天然化合物（100 mM）を添加し、CML 生

各 well を洗浄後、HRP 標識抗マウス IgG 抗体と１時間イ成に対する阻害作用を、抗 CML 抗体を用いた ELISA 法に

ンキュベートし、最後に OPD にて発色反応後、1M の硫酸て評価した。その結果、rutin, astragalin, chlorogenic acid

にて反応を停止した。各 well の 492nm における吸光度をを含む 10 種の化合物が有意な CML 生成阻害試験作用を示

micro-ELISA plate reader により測定した。

した（Fig. 1A）。次に、2 次スクリーニングとして、リボ

6）ースとⅠ型コラーゲンを用いた CML 生成阻害試験系にて、

２- ４．繊維芽細胞の 3 次元培養

１次スクリーニングで阻害作用の認められた 10 種の化合ヒト真皮線維芽細胞は、JCRB 細胞バンクより購入した。
5

物の効果を同様に評価した。その結果、rutin, astragalin,

ヒト真皮線維芽細胞（4.0×10 cells/well）を培地で懸濁さquercetin, gallic acid の４種類の化合物に顕著な CML 生成

せた溶液に、Ⅰ型コラーゲン溶液を加え、培養チャンバー

阻害作用が認められた（Fig. 1B and C）。

内で培養することで、Ⅰ型コラーゲンマトリックスに線維芽細胞を包埋した。２日後、凝固したマトリックスを培養
チャンバーより剥離し、８日間培養後することで、正常に３- ２．線維芽細胞の三次元培養を用いた皮膚老化予防作用の検討収縮するマトリックスを形成させた。

肌の張りは、真皮中に存在する線維芽細胞がコラーゲンを引っ張ることで保たれている。通常、正常なコラーゲン

２- ５．ウエスタンブロット法

マトリックス中で線維芽細胞を培養すると、線維芽細胞

ウエスタンブロットによる MAP キナーゼの活性化の評

がⅠ型コラーゲンを引っ張り引き締めることで弾力のあ5）価は、これまでの報告に準じて行った 。37℃で７日間イる真皮類似構造を形成し、マトリックスの収縮が観察されンキュベートした各種コラーゲン溶液（Ⅰ型コラーゲン溶

るが、CML 化コラーゲンマトリックス中では、その収縮液、リボース -Ⅰ型コラーゲン溶液、天然化合物を添加し率が低下する。そこで、上記のスクリーニングで得られたたリボース - Ⅰ型コラーゲン溶液）にて、３時間刺激した４種（rutin, astragalin, quercetin, gallic acid）の CML 生成

ヒト真皮線維芽細胞を回収し、lysis buffer を用いて細胞阻害化合物を添加したコラーゲンを用いて、マトリックス

を溶解させた。電気泳動には、10％ポリアクリルアミドゲの収縮に対する効果を検討した。方法としては、ヒト真ルを用いた。また、一次抗体は、Rabbit monoclonal anti-

皮線維芽細胞（4.0×10 cells/well）を培地で懸濁させた溶

5

Phospho-p38 antibody, Rabbit polyclonal anti phospho-

液に、Native-collagen 溶液、CML-collagen 溶液（ribose と（JNK1 + JNK2）antibody, Mouse monoclonal anti-b-actin

native-collagen の混合溶液を７日間インキュベートしたも

antibody を用いて行った。

の）もしくは、CML 生成阻害化合物で処理した collagen 溶液（CML-collagen を調製する条件下に CML 生成阻害化合２- ６．免疫組織化学染色物を添加したもの）を加え、培養チャンバー内で培養する

37℃で７日間インキュベートした各種コラーゲン溶液

ことで、コラーゲンマトリックスに線維芽細胞を包埋した。

（Ⅰ型コラーゲン溶液、リボース - Ⅰ型コラーゲン溶液、天２日後、凝固したマトリックスを培養チャンバーより剥離

然化合物を添加したリボース - Ⅰ型コラーゲン溶液）にてし、８日間培養後に収縮したマトリックスの直径を測定す刺激したヒト真皮線維芽細胞を４％パラホルムアルデヒドることで評価した。その結果、CML-collagen を用いたマにて固定後、パラフィンにて包埋した。続いて、パラフィ

トリックスでは native-collagen を用いた場合に比べて、そン切片を作製後、定法により抗 CML 抗体（6D12）およびの収縮率が低下し、その収縮率の低下は、CML 生成阻害

Rabbit polyclonal anti-cleaved caspase-3 antibody を用い化合物により改善された（Fig. 2）。
前述したように、rutin, astragalin, quercetin, gallic acid

た免疫染色を行った。

は、コラーゲンの CML 化により低下したマトリックスの− 28 −

皮膚の老化予防を目的としたコラーゲンの AGE 化阻害物質の探索

Fig. 1 Effect of Natural compounds on CML formation.（A）Gelatin（2 mg/mL）and ribose（30 mM）
were incubated with natural compounds（100μM）in 100 mM sodium phosphate buffer at 37℃ for 7
days.（B）TypeⅠ collagen（1.5 mg/mL）and ribose（30 mM）were incubated with natural compounds（30μM）in 100 mM sodium phosphate buffer at 37 ℃ for 7 days. The CMA content was determined bynoncompetitive ELISA.（C）Structures of natural compounds inhibiting CML formation. Data arepresented as the mean±SD. *, P < 0.01, **, P < 0.001 vs. control.

Fig. 2 Effect of Natural Compounds on Contraction of Collagen Matrix. Fibroblasts（4.0×104 cells/well）were cultured in type Ⅰ collagen matrix for 12 days. Data are presented as the mean±SD. #, P
< 0.005 vs. Native-collagen, *, P < 0.005 vs. CML-collagen.

収縮率を改善したため、その改善作用が CML 生成阻害作したところ、CML 化コラーゲン中では、線維芽細胞の形用によるものであるかを確認するために、マトリックス中態が丸くなり、Native collagen と比較して、明らかに細胞の CML 含量を、抗 CML 抗体を用いた免疫染色により評死が誘導されていた（Fig. 4）。一方、CML 生成阻害化合

価した。その結果、マトリックスの収縮率が低下したコン物（rutin, astragalin, quercetin, gallic acid）を添加したマトロールでは CML の蓄積が確認され、その蓄積は、rutin,

トリックス中の線維芽細胞は、Native collagen と比較してastragalin, quercetin, gallic acid の添加により抑制されて変化の無い正常な形態であった（Fig. 4）。さらに、カスパ

いた（Fig. 3）。ゆえに、rutin, astragalin, quercetin, gallic

ーゼ３の活性化を免疫染色により評価したところ、CML-

acid によるマトリックス収縮改善作用は、これら化合物のcollagen では、カスパーゼ３は活性化しており、その活性

CML 生成阻害作用によることが示唆された。また、マト化は CML 生成阻害化合物により抑制された（Fig. 5）ゆえリックス中の線維芽細胞の形態を、HE 染色によって確認に、CML 生成阻害化合物によるマトリックスの収縮率の− 29 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

Fig. 3Fig. 4

CMA Accumulation in Collagen Matrix.

HE Staining of Fibroblasts in Collagen Matrix.

Fig. 5

Caspase-3 Activation in Collagen Matrix.

− 30 −

皮膚の老化予防を目的としたコラーゲンの AGE 化阻害物質の探索

改善は、それら化合物がコラーゲンの CML 化を阻害した線維芽細胞の三次元培養において、コラーゲンの CML 化

ことで線維芽細胞のアポトーシスが抑制されたためであるに伴うコラーゲンマトリックスの収縮率の低下を改善しことが示唆された。

た。その理由として、CML コラーゲンのマトリックスでは、
線維芽細胞のアポトーシスが起こるためマトリックスの収

３- ３．CML 生成阻害化合物による線維芽細胞のアポ
トーシス抑制メカニズム

縮率の低下が引きおこされたが、CML 生成阻害化合物で次に、CML 生成阻害化合物が線維芽細胞のアポトー抑制されたため、マトリックスの収縮率の改善が認められシスを抑制するメカニズムを解明することにした。CML

た。また、そのアポトーシス抑制メカニズムは、CML コ

化タンパクは、RAGE を介して JNK や p38 などの MAP

ラーゲンにより活性化される MAP kinase（JNK, p38）経

kinase を活性化することで、細胞をアポトーシスに導くこ路の抑制によるものであった。つまり、CML 生成阻害化とが報告されている。そこで、本研究では、CML 化コ

合物は、コラーゲンの CML 化を抑制することで、CML-

ラーゲンによる p38 および JNK の活性化に対する CML 生

collagen により誘導される JNK および p38 の活性化を抑成阻害化合物の効果を検討した。方法としては、ヒト真制し、結果的に線維芽細胞のアポトーシスを抑制したた

皮線維芽細胞に CML-collagen または CML 生成阻害化合物

め、三次元培養におけるマトリックスの収縮率の低下を改で処理したコラーゲンを３時間添加後の phosphorylated-

善したものと考えられた。本研究において、４種の天然由

JNK および phosphorylated-p38 の発現量をウェスタンブ

来化合物（rutin, astragalin, quercetin, gallic acid）が有すロット法にて評価した。その結果、CML 生成阻害化合物は、る皮膚老化改善作用および、その作用メカニズムを解明しコラーゲンの CML 化による p38 および JNK の活性化を顕たことで、CML が皮膚老化改善作用における新たなター著に抑制した（Fig. 6）。ゆえに、CML 生成阻害化合物は、ゲット分子として重要であることが示された。さらに、本

コラーゲンの CML 化を抑制することで、CML-collagen に研究では CML-collagen が引き起こすと考えられる病態やより誘導される JNK, p38 の活性化を抑制し、結果的に線老化症状のうち、特に皮膚老化に注目して研究を行ったが、維芽細胞のアポトーシスを抑制することで、三次元培養に

CML-collagen は皮膚老化のみならず骨粗鬆症や糖尿病合おけるマトリックスの収縮率の低下を改善したものと考え

併症の原因物質であるとも考えられているため、今後さらられた。

に CML の生体に及ぼす影響が明らかになることで、CML

3, 5）

4．考

処理したマトリックスでは、線維芽細胞のアポトーシスが阻害剤の重要性が高まり、本研究で得られた知見や CML

察

阻害化合物の社会的利用価値が高まることが期待される。

一次スクリーニングにより得られた 10 種の CML 生成阻
害化合物について、Ⅰ型コラーゲンを用いた二次スクリー

謝辞

ニングを行ったところ、rutin, astragalin, quercetin, gallic

当該研究テーマおよび関連テーマの実施に際して、グラacid の４種の化合物が、顕著な CML 生成阻害作用を示し

ントサポートを賜りました財団法人コスメトロジー研究振た（Fig. 1）。また、これら４種の CML 生成阻害化合物は、

興財団に深謝致します。

Fig. 6 Effect of Natural Compounds on MAP kinase（p38, JNK）Activation. Human dermal fibroblasts
were incubated for 3 hours with 400μg/mL CML-collagen, unmodified collagen or natural compounds（30μM）-treated collagen. The phospholyration of p38 and JNK were analyzed by westernblotting
analysis.

− 31 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

（参考文献）

Chem. 2005 ; 280 : 12087-12095.

１）Fujiwara Y, Kiyota N, Hori M et al, Esculeogenin A,

４）Morita K, Urabe K, Moroi Y et al, Migration of keratinocytes

a new tomato sapogenol, ameliorates hyperlipidemia

is impaired on glycated collagen I. Wound Repair Regen.

and atherosclerosis in ApoE-deficient mice by inhibiting

2005;13:93-101.

ACAT. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2007 ; 27 : 2400-

５）Alikhani M, Maclellan CM, Raptis M et al, Advanced

2406.

glycation end products induce apoptosis in fibroblasts２）Matsuse T, Ohga E, Teramoto S et al, Immunohistochemical

through activation of ROS, MAP kinases, and the FOXO1

localisation of advanced glycation end products intranscription factor. Am J Physiol Cell Physiol. 2007; 292 :C850-856.

pulmonary fibrosis. J Clin Pathol. 1998 ; 51 : 515-519.
３）Alikhani Z, Alikhani M, Boyd CM et al, Advanced６）Nagai R, Ikeda K, Higashi T et al, Hydroxyl radical

glycation end products enhance expression of pro-mediates N epsilon- (carboxymethyl) lysine formation

apoptotic genes and stimulate fibroblast apoptosis

from Amadori product. Biochem Biophys Res Commun.

through cytoplasmic and mitochondrial pathways. J Biol

1997; 234 : 167-172.

− 32 −

抗酸化性乳化剤の機能性化粧料としての利用に関する基礎的研究

近畿大学工学部生物化学工学科

渡 邉

義 之

Octanoyl, lauroyl and palmitoyl ascorbates as antioxidative emulsifier were synthesized by the condensation of ascorbic
and the corresponding fatty acids in acetone using an immobilized lipase from Candida antarctica. The oxidation process of
methyl linoleate as an oil droplet in the O/W emulsion with ascorbic acid or acyl ascorbate was measured at 40℃ , and theirantioxidative properties against the oxidation were examined. Hydrophilic proxidant, AAPH, or lipophilic proxidant, AMVN,
was added to the water or oil phase to investigate the properties, and the kinetic parameters for the oxidation expressed by
the Weibull equation were evaluated.
It was suggested that most of the ascorbic acid molecules in the emulsion would be present in the water phase due to its
high hydrophilicity and suppress the AAPH-induced oxidation on the interface between the water and oil phases. Lauroyl
and palmitoyl ascorbates would be dissolved in the oil phase and contribute to the suppression of the oxidation in the oilphase rather than on the interface. Octanoyl ascorbate, whose hydrophilic-lipophilic balance number is 11.8, would be in
both phases. Regardless of the presence and type of the ascorbate, the rate constant, k, of the Weibull equation decreased as
the pH of the water phase increased.

１．緒

考えられる．生体にも環境にも優しい機能性化粧料として

言の利用が期待される．

脂質は人の食生活に必要不可欠なばかりでなく，化粧品・本研究は，抗酸化性乳化剤を化粧品での一般的な形態で医薬品・化成品の原料として日常生活に欠くことのできなあるエマルション系にて利用した場合のその抗酸化作用おい物質である．しかし，脂質の主要な構成成分である不よび乳化特性を測定し，系内の脂質に対する作用挙動を明飽和脂肪酸は酸化安定性が低く，酸化脂質は生体に対してらかにすることを目的とする．このことにより，化粧品に悪影響を及ぼし様々な疾病を引き起こすため，脂質の酸化代表とされる各種化学製品の化学的および物理的安定性を現象は品質管理の上で大きな問題になっている．特に，近抗酸化性乳化剤を用いることによって改善・向上させるた

年優れた生理活性が注目されているエイコサペンタエン酸めの一助になるものと考える．アシル鎖長の異なるアシル（EPA）やドコサヘキサエン酸（DHA）を構成脂肪酸とす

アスコルビン酸を合成し，それらの O/W 型エマルション

る高度不飽和脂質類に対し，効果的な酸化防止策をいかに

系での脂質酸化及ぼす影響について二種類の酸化促進剤を講ずることができるかは大きな課題である．そこで，我々用いて検討した．また，アシルアスコルビン酸を使用した

は酵素を用いて多価不飽和脂肪酸等の各種脂肪酸にビタミ際のエマルション中の pH の影響についても併せて検討しン C（L - アスコルビン酸）等の水溶性抗酸化剤を縮合させた．さらに，アシルアスコルビン酸を用いて調製した O/

ることによりアシルアスコルビン酸を合成した ．得られW 型エマルション系の外水相に含まれる水溶性物質の安た生成物は，親油性基と親水性基を併せ持つ可食性界面活定性についても速度論的解析を行った．

1）性剤となり得る．また，アスコルビン酸の抗酸化性の発現

２．実に寄与する分子内のエンジオール－ラクトン共鳴構造が特異的に保持されるため，機能性の高い脂質を豊富に含む

2. 1

材

験

料

化粧品に対し酸化防止剤として利用することが可能となる．

水溶性酸化促進剤として 2, 2’- アゾビス（2 - メチルプロ

さらに，酵素合成したアシルアスコルビン酸は，食してもピオンアミジン）二塩酸塩（AAPH）を，油溶性酸素促進

腸管において体内のリパーゼにより基質であるアスコルビ剤として 2, 2’- アゾビス（2, 4 - ジメチルバレロニトリル）

ン酸と脂肪酸に分解して吸収されるため，可食性であると（AMVN）を使用した．O/W 型エマルション系の内油相にはリノール酸メチルを使用し，これを酸化指標物質とした．また，外水相に含まれる水溶性物質の安定性評価

Studies on application of antioxidative
emulsifier as functional cosmeticsには，(+) - カテキンを用いた．アシルアスコルビン酸は，

Yoshiyuki Watanabe

L-2 C2 の位置特異的触媒作用を利用して L- アスコルビン

Department of Biotechnology andChemistry, School of Engineering, Kinki
University

Candida antarctica 由 来 の 固 定 化 リ パ ー ゼ Chirazyme®
酸とオクタン酸，ラウリン酸またはパルミチン酸との縮合− 33 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

反応により合成された．これらの精製は，既報のものに一

３．結果および考察

2）

部修正を加えて実施した ．

2. 2

3. 1 油滴の酸化安定性に及ぼすアシルアスコルビン酸の濃度およびアシル鎖長の影響

O/W 型エマルションの調製

1.0％（w/v）のデカグリセリンモノラウリン酸エステル

親 水 性 酸 化 促 進 剤 AAPH ま た は 親 油 性 酸 化 促 進 剤

ML-750 水溶液５ml にリノール酸メチル５ml を加え，氷冷

AMVN を水相または油相に添加した O/W 型エマルション

しながら，ロータ / ステータ式ホモジナイザを用いて予備中でのリノール酸メチルの酸化過程に及ぼす１mmol/l の乳化した（10,000rpm，５分間）．この粗エマルションを孔

アシルアスコルビン酸およびアスコルビン酸の影響を図１

径 0.8 mm の親水性セルロースアセテート膜に供して膜乳に示す．同様に 10 および 100 mmol/l の各種抗酸化剤を添化を実施し，O/W 型エマルションを得た．なお，AAPH

加した場合の酸化過程も得た．保存期間中の油滴粒子径のを使用する場合は ML-750 水溶液に，AMVN を利用する

測定結果から，平均粒子径は約 4.5 mm でほぼ一定であっ際にはリノール酸メチルに，それぞれ 1.0％（w/v）となる

た．エマルション中のリノール酸メチルの酸化過程に式 1

ように添加した．抗酸化剤を添加する場合，1，10 またはに示す Weibull モデル を適用して速度論的解析を試みた．

3）

100 mmol/l のアスコルビン酸，オクタノイル，ラウロイnY=exp [−
（kt）]

ルまたはパルミトイルアスコルビン酸を添加した．また，

式1

pH の影響について検討する場合には，塩酸－酢酸ナトリ

ここで Y はリノール酸メチルの未酸化率，k は酸化速度

ウム緩衝液を用いて pH ３，４または５に調整した水相を定数，t は時間および n は形状定数である．図１中の実線は，使用した．得られた O/W 型エマルションは，暗所中 40℃算出した Weibull パラメータを用いて描いた計算線である．

にて 200 rpm で攪拌しながら保存した．

図２に酸化速度定数と各種抗酸化剤濃度の関係を示す．図

経時的に採取した O/W 型エマルションを蒸留水にて

２中の点線は，抗酸化剤を含まない場合の酸化速度定数を100 から 500 倍に希釈後，遠心沈降式粒度分布測定装置に示している．抗酸化剤を添加した場合の k 値は，いずれもて油滴粒子径の測定を行った．

抗酸化剤を含まない場合よりも低かった．これは，AAPH
および AMVN 添加に関係なく抗酸化剤がリノール酸メチ

2. 3

油滴の酸化安定性

ルの酸化抑制に寄与したことを示している．AAPH 添加

O/W 型エマルション液 100 ml を採取し，これにクロロ

系では，アスコルビン酸濃度が増えるに従い k 値は大きく

ホルム／メタノール溶液（2/1（v/v））を 300 ml 加え，よく低下した．オクタノイルアスコルビン酸も同様な傾向が認

混ぜた．15,000 rpm で５分間遠心分離した後，油相を 50ml

められたが，その程度はアスコルビン酸よりも小さかった．

取り出し，溶媒を蒸散させた．その後，ヘキサン／ミリス

ラウロイルおよびパルミトイルアスコルビン酸を添加した

チン酸メチル混合液（100/2（v/v））を 300 ml 添加してガス場合，k 値はそれらの濃度に依存せず，抗酸化剤を含まなクロマトグラフィ分析用試料とした．ガスクロマトグラフ

いコントロールに近い値を示した．我々は，アスコルビン

ィ分析には，水素炎イオン化検出器およびキャピラリーカ

酸と各種飽和アシルアスコルビン酸のラジカル消去活性がラム（0.32 φmm×15 ｍ，0.2 mm ポリエチレングリコール）ほぼ同等である知見を得ている ．したがって，親水性のを用いた．キャリアガスには窒素を用い，流量 1.8 ml/min

高い抗酸化剤が水溶性酸化促進剤による油相の酸化を抑制

にて測定した．カラム温度は 180℃とし，インジェクタおし，一方親水性が低い場合には酸化抑制に寄与できなかっよびディテクタ温度はいずれも 200 ℃であった．なお，ミたものと考えられる．他方，AMVN を含んだエマルショ

リスチン酸メチルは内部標準物質として利用した．

ンでは，アスコルビン酸濃度の増加により若干 k 値が低下

4）

したが，10 および 100 mmol/l の添加では変化がなかった．

2. 4

外水相カテキンの安定性

アシルアスコルビン酸を添加した場合，AAPH 添加系とO/W 型エマルション調製時に所定量のカテキン（１異なり，それらの濃度が増えると k 値が増大する傾向が求mmol/l）およびオクタノイルアスコルビン酸またはアスめられた．AMVN 添加系では，いずれの抗酸化剤濃度にコルビン酸（１mmol/l ～ 3.76 mmol/l）を添加して，暗所中

おいても k 値は，アスコルビン酸＞オクタノイル＞ラウロ

40℃にて保存した．経時的にサンプリング後，遠心分離に

イル＞パルミトイルアスコルビン酸の順に高かった．すなて水相を取り出し，高速液体クロマトグラフィにてカテキ

わち，アシル鎖長が長いほど，親油性酸化促進剤により促

ン残量を測定した．ODS カラム（4.6 φmm×250mm）を用される油相の酸化に対する抑制効果が大きかった．しかし

いて 280 nm にて検出した．溶離液にはメタノール / 水 / リながら，抗酸化剤濃度の増大に伴い k 値が高くなった．以ン酸＝ 20/80/0.5（v/v/v）を用い，流量は 1.0 ml/min とした．

上の結果から，親水性の高いアスコルビン酸分子の多くは− 34 −

抗酸化性乳化剤の機能性化粧料としての利用に関する基礎的研究

図１ （a）AAPH および（b）AMVN 添加系にて 1μmol/l の（○）
アスコルビン酸，（□）オクタノイル，（◇）ラウロイルまたは（△）パルミトイルアスコルビン酸を含んだ O/W 型エマ
ルション中のリノール酸メチルの 40℃での酸化過程（●は抗酸化剤を含まないコントロール）．
実線は Weibull パラメータを用いて算出された計算線を示す．

図２（a）AAPH および（b）AMVN を添加した O/W 型エマル
ション中のリノール酸メチルの酸化速度定数，k，に及ぼす抗酸化剤濃度の影響（シンボルは図 1 に同じ）．
点線は，抗酸化剤を含まない場合の k 値を示す．

図３ （a）pH 3，（b）pH 4 および（c）pH 5 にて 100μmol/l の（○）アスコ
ルビン酸または（△）パルミトイルアスコルビン酸 を含んだ O/W 型エマルショ
ン中のリノール酸メチルの酸化安定性（●は抗酸化剤を含まないコントロール）．
実線は Weibull パラメータを用いて算出された計算線を示す．

エマルション中の水相に存在しており，AAPH に起因しされる．

た油水界面からのリノール酸メチルの酸化を効果的に抑止

形状定数については，酸化促進剤の種類，抗酸化剤濃度

し，一方で AMVN による油相内部での酸化には強い抑制

およびアシル鎖長との顕著な関係性が認められなかったが，効果を示さなかったものと考察される．対照的にラウロイ

いずれもの場合も 1 より小さい値を得た．いずれの系におルおよびパルミトイルアスコルビン酸分子は油相内に溶解いても誘導期間を経ずに酸化が進行したことが示唆された．

し，油水界面よりも油相内部で生じる酸化に対し抑制効果
進作用を示すことが知られている ．油相に溶解した多く

3. 2 種々の pH におけるアシルアスコルビン酸とアスコ
ルビン酸の酸化抑制作用の比較のアシルアスコルビン酸分子が部分的に油相内部での酸化pH ３，４および５の AAPH 添加エマルション系でのリを促し，その結果その酸化抑制効果が低下したものと推察

ノール酸メチルの酸化過程に及ぼすパルミトイルアスコを示したものと考えられる．高濃度の抗酸化剤は，酸化促
5）− 35 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

図４ O/W 型エマルション中のリノール酸メチルの酸化に対する（a）酸化速度定数，k，および（b）形状定数，n，のpH 依存性（シンボルは図 3 に同じ）．

図５ （○）pH 3，（□）pH 4 および（△）pH 5 における O/
W 型エマルションの乳化安定性．
r 値は油滴粒子径，r0 はその初期値を示す．

ルビン酸およびアスコルビン酸の影響を図３に示す．ま

果が強いため，pH による直接的な影響が弱かったことにた，得られた結果に Weibull 式を適用して算出した k およよるものだろう．

び n 値の pH 依存性を図４に示す．いずれの場合も，pH がアスコルビン酸を添加した場合に最も低い k 値が観察され，3. 3 外水相成分の安定性に及ぼすアシルアスコルビン
酸の影響

コントロールで最も高かった．水相中の AAPH により誘O/W 型エマルション中でのカテキンの安定性に及ぼす

発された酸化はアスコルビン酸により強く抑制され，パル

アスコルビン酸およびオクタノイルアスコルビン酸の影

ミトイルアスコルビン酸の抑制効果は小さかった．この結響について検討した．カテキンの分解過程に式 1 を適用し果は，前述したアシルアスコルビン酸およびアスコルビンてその分解速度定数 k を安定性の指標とした．いずれも酸の作用挙動についての考察を支持するものと考えられる．

10 mmol/l 以下の添加でコントロールの k 値よりも低い結

図５に pH ３，４および５の抗酸化剤を含まないエマルシ

果が得られ，カテキンの分解が抑制されたことが示された．

ョンの乳化安定性を示す．pH ４および５の場合，エマル

一方，１mmol/l 以上の添加では k 値がコントロールよりションは安定であったが，pH ３では時間とともに油滴粒も高かった．アスコルビン酸とオクタノイルアスコルビン

子径が増大した．したがって，pH ３でのリノール酸メチ酸の添加による顕著な差異は認められなかった．水溶液中

ルの低い酸化安定性は，油滴粒子の合一や凝集にともなうのカテキンの分解は，溶存酸素によるカテキン分子内の B

乳化安定性の低下に起因したものと考えられる ．同様の環の一電子酸化から始まり，その結果セミキノンラジカル

傾向は抗酸化剤を添加した場合にも観察された．しかしなが生成することが知られている ．Davies 式から算出されがら，アスコルビン酸を添加した場合の k 値の pH 依存性

るオクタノイルアスコルビン酸の親水性親油性バランスははパルミトイルアスコルビン酸のそれよりも強かった．こ

11 . 8 である ．これらの現象についての理由は不明である

れは，pH の増大により水相中のアスコルビン酸分子内のが，今後，より親油性の高いアシルアスコルビン酸を用いエンジオール基の解離を通して，その電子供与能が高まって実験を進めることにより，O/W 型エマルション系でのたことに由来したものと考えられる ．一方，油相中のパ水溶性物質に対する抗酸化性乳化剤の作用挙動が解明されルミトイルアスコルビン酸にはこのような現象が生起しなるものと考えられる．

高くなるにつれ k 値は低下した．いずれの pH においても

6）

7）

8）

9）

かったと推察される．

４．総

パルミトイルアスコルビン酸を添加した場合とコントロ括ールでの n 値は pH に強く依存した．対照的にアスコルビ

O/W 型エマルション中での油滴酸化に対する抗酸化性

ン酸添加系での n 値はほぼ一定であった．これはアスコル

乳化剤の作用は，その親水性親油性バランスのような特性

ビン酸のエマルション中での局在化に起因する酸化抑制効

により大きな差異を示すことが明らかとなった．また，エ− 36 −

抗酸化性乳化剤の機能性化粧料としての利用に関する基礎的研究

マルションの pH も乳化および酸化安定性に寄与するだけ

distribution function, J. Food Eng., 37, 175-191, 1998.

ではなく，抗酸化性乳化剤の酸化抑制効果にも影響を及ぼ

４）Watanabe Y, Kuwabara K, Adachi S, et al.: Production

すことが示唆された．さらに，O/W 型エマルション中のof saturated acyl L-ascorbate by immobilized lipase using

水溶性成分の安定性も抗酸化性乳化剤の濃度に依存するこa continuous stirred tank reactor, J. Agric. Food Chem.,とが示された．これらのことから，抗酸化性乳化剤の利用には目的に応じた効果的な特性を有する材料とその使用量

51, 4628-4632, 2003.
５）Matsui T, Yoshida M, Ifuku T, et al.: Preparation of
microcapsules containing a-tocopherol as an antioxidantの選定が肝要であるといえよう．

and the application for cosmetics (in Japanese), The謝

辞research reports of the Faculty of Engineering,

本研究を実施するにあたりご支援頂いた財団法人コスメ

Kagoshima University, 47, 71-77, 2005.

トロジー研究振興財団に深く感謝致します．

６）Sims R: Oxidation of fats in food products, Inform, 5,（参考文献）

７）Muzolf M, Szymusiak H, Gliszczyńska-Świgło A, et al.:

1020, 1022-1028, 1994.
１）Watanabe Y, Adachi S, Nakanishi K, et al.: Condensationof L-ascorbic acid and medium-chain fatty acids byimmobilized lipase in acetonitrile with low water content,

pH-Dependent radical scavenging capacity of green tea
catechins, J. Agric. Food Chem., 56, 816-823, 2008.
８）Mochizuki, M, Yamazaki, S, Kano, K, et al.: Kinetic
analysis and mechanistic aspects of autoxidation ofFood Sci. Technol. Res., 5, 188-192, 1999.
２）Yan Y, Bornscheuer UT, Schmid RD: Lipase-catalyzed
synthesis of vitamin C fatty acid esters, Biotechnol. Lett.,

catechins, Biochim. Biophys. Acta., 1569, 35-44, 2002.
９）Davies JT: A quantitative kinetic theory of emulsion
type, I. Physical chemistry of the emulsifying agent, In:

21, 1051-1054, 1999.
３）Cunha LM, Oliveira FAR, Oliveira JC: Optimal

Proceedings of the Second International Congress ofexperimental design for estimating the kinetic

Surface Activity, Butterworths Scientific Publications,parameters of processes described by Weibull probability

London, 1957, 426-438.

− 37 −

均一径リポソームと細胞の融合のためのマイクロ流路デバイスの作成

東京大学生産技術研究所

竹 内

昌 治

This report describes a method for preparation of monodisperse giant liposomes from patterned lipid films using
electroformation. The lipid films were patterned successfully on an indium tin oxide (ITO) electrode by a Parylene lift-off
process. We found that the coefficient of variation (CV) of diameters of liposomes improved from 34 % to 7.6 % by using
the patterned lipid films for liposome formation.
Giant liposomes (10 - 100 μm in diameter) are cell-sized spherical lipid membranes and can enclose bio-functional
materials (e.g DNA, proteins); they can be used as an artificial cell or biological reactor. In our previous work, we havesucceeded in enclosing different types of nano/micro materials in giant liposomes efficiently using microfluidic channels
with electroformation method. In order to control the volume of materials enclosed in the liposomes, it is important to
prepare uniform-sized liposomes. The size is also an important factor determining the success for cell-liposome fusions.
Micro-contact printing of lipids using PDMS stamp to achieve size control of liposomes was reported. However, in general,
PDMS tends to swell when in contact with organic solvents. Here, we have used a Parylene sheet instead of PDMS for
preparing lipid patterns in order to avoid such a swelling problem. Also, the Parylene sheet has advantages that it can be
patterned by standard photolithography and peeled off from the substrate easily.
Two indium tin oxide (ITO) glasses were used as electrodes and separated by a silicone spacer chamber filled withdegassed water. The lipid films were patterned on the bottom ITO glass using a Parylene sheet. When AC signal (10 Hz, 0.5- 2.5 Vpp) was applied to the top and bottom ITO electrodes, the giant liposomes were formed from the patterned lipid films.
Fluorescent images of the lipids with squares of 20 μm showed clear edges of the patterned lipids on the ITO glass. Patterned
lipids of 50 x 50 μm2 square swelled and became round after applying electric field.
The size of the liposomes became lager as the size of patterned lipid films increased. When the liposomes were produced
without the patterned lipid films, the size of the liposomes were widely distributed (CV = 34 %). In contrast, our preliminary
experiment shows that the CV became narrow to 7.6 % when the patterned lipid films were used. These results imply
that this method — electroformation of giant liposomes from lipid patterns — is useful to produce uniform-sized giant
liposomes.
Finally we fabricate a device that combines microfluidic and electrical manipulation of cells or artificial vesicles in orderto perform well controlled electrofusion. The actual device allows immobilizing cells or vesicles by suction onto an array of
microholes and aligning different vesicles over the holes by dielectrophoresis.

１．緒ムを作成することが要求されている．本研究の目的は，直言径の揃ったリポソームを効率的に作成し，リポソームと細近年，消費者のニーズは，高度化・複雑化し，多機能性を持った化粧品を求められるようになっている．近い将来

胞と融合させることができる集約化されたマイクロ流路デバイスを実現することである．

には，細胞に直接作用する多機能性化粧品に対する要求が本研究では，均一径リポソームを作成するために，筆者

今後ますます拡大すると思われる．細胞内に，物質を高効らの得意とするマイクロ流体デバイスを利用することに注

率・低侵襲な方法で導入するために，物質を含んだリポソ

目した．マイクロ流体デバイスを利用することによって，ームを細胞に融合させる方法がある．リポソームとは，リ

少量の試料で，実験に必要なさまざまな条件を変化させる

ン脂質を主体に形成される二重膜の水溶液を包含した球形

ことができる．さらに，顕微鏡下で観察・操作を可能とすの小胞である．細胞膜と同様の構造を持っているため，細るデバイスと集積化できる．具体的には以下のような機能胞との適合性があるマイクロカプセルとして使うことがでをもつマイクロ流体デバイスを実現する．

きる．物質を均一な量を大量に細胞内に導入するためには，

１）均一直径リポソームの作成機能：マイクロ流路内でマ体積の揃った（直径の揃った）マイクロサイズのリポソー

イクロエレクトロフォーメイション法を利用することによって，均一径のリポソームを効率よく生産する．
２）リポソームの操作機能（位置制御，融合）：流路内に，

Fabrication of microfluidic devices
for the production of monodisperse
liposomes and the fusion of cells
Shoji Takeuchi
Institute of Industrial Science, The
University of Tokyo− 40 −

マイクロ電極アレイを置くことで，リポソームの位置を制御する．また細胞とリポソームに電圧をかけることにより，融合させることができるような機能を付加する．
リポソームの中でも近年，直径 10 から 100 ミクロンと大均一径リポソームと細胞の融合のためのマイクロ流路デバイスの作成

きい“ジャイアント”リポソームの応用が注目されている ．

1）の微細穴あきシートを用いて，リン脂質膜のパターンニン

その大きさから，直接顕微鏡下で観察できることが一番のグする方法を試みた．一般的に PDMS は，有機溶媒中で利点であり ，細胞と同様の大きさであることから人工細膨潤してしまうという問題があるが，パリレンでは，起こ胞のモデルとして用いることができる ．さらに，リポソ

らない．また，パリレン樹脂は，ガラス基板に蒸着し，一ーム内には，薬剤や DNA を包み込むことができ，マイク

般的なフォトリソグラフィーの方法を用いて，簡単にマイロサイズの容器として用いることもできる ．

クロサイズのパターニング作製することができる．さらに，

2）

3）

4）

ジャイアントリポソームの生成法に，リン脂質膜で覆われた基板に電圧を印加することによって，膜を剥離させ，蒸着したパリレンは，容易に基板から剥がすことができる
7）という利点がある ．

単層の脂質二重膜で構成させるエレクトロフォーメーショ

以降，パリレンパターンシートを用いてリン脂質膜をパン法がある ．他の方法に比べて，単一膜構造を得られや

ターンニングし、エレクトロフォーメーション法を用いる

すい特徴があるが，水和法 など他の方法と同様に，作製ことにより，均一径のジャイアントリポソームを基板上にされたジャイアントリポソームの径には，ばらつきがあ

アレイ状に作製する方法について検討した結果を報告する．

1）

5）

る．リポソーム内に薬品や DNA を閉じ込め , 人工細胞やマ

２．実

イクロカプセルとして用いるためには，リポソームの粒径

験

は，知っておかなければならない重要なパラメーターであ

図１（a）に実験に使用したデバイスの実験系と，
図１（b）

り，均一な大きさのリポソームを作製することで，リポソに断面からみたプロセス図を示す．厚さ 0.5 mm のシリコーム内に決まった用量の試薬を注入することが可能になる．

ーンスペーサーの上下に電極（ITO ガラス，大きさ：30×

ここでは，本プロジェクトでは，まず，均一な直径のリポ

40 mm, 厚さ 0.55 mm, 10Ω/sq, 新得硝子）を配置し，内部ソームの作製に必要な検討を開始した．続いて，リポソーにリン脂質の薄膜のパターンを作製する．

ムや細胞の位置や固定操作が可能なデバイスを実現する．
これまでに，均一なリポソームを作製する方法として，

パリレン樹脂を用いた脂質膜のパターニング方法とは，
図１（b）に示すように，（i）パリレン樹脂をガラスプレー

Taylor ら は，PDMS（polydimethylsiloxane）で で き た ス

トに蒸着し，O2 プラズマによりパターン化された穴あきタンプを利用し，リン脂質フィルムをパターニングする技

シートを作る．その上から（ii）リン脂質と有機溶媒を混術とエレクトロフォーメーション法を利用する方法を試み

ぜた溶液を流し込み，１時間ほど乾燥させる．すると ITOている ．ここでは，PDMS のスタンプを使用する代わりガラスプレートが露出している穴の部分にリン脂質膜がに，マイクロ加工技術を利用して作製されたパリレン樹脂

でき，（iii）パリレンを剥がすとリン脂質膜のパターンが6）

図１（a）均一径リポソームを作製するためのマイクロデバイスの概略図．（b）パリレン
シートによるリン脂質のパターンニング法のプロセス図．（c）その基板を利用したマイクロチャネル内でのエレクトロフォーメーション法．

− 41 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

できる．有機溶媒を完全に蒸発させるため，真空中で２時

３．結果と考察

間以上乾燥させる．その後，図１（c）のように，リポソー
ム形成のため，シリコーンチャンバー内に水溶液（Milli-Q

穴あきパリレンシート上に , リン脂質溶液を流し込み乾system; Millipore，pH=6.0）を導入し，電圧を印加するこ燥させる際に，シートが ITO ガラス基板から剥がれてしとで，チャンバー内で，均一径のジャイアントリポソーム

まうことはなく，シートは，ピンセットを使い基板の端かの作製を試みた．

ら持ち上げると簡単に剥がすことができた．図２（a）に，リン脂質は，ホスファチジルコリン（EPC）とホスファ

パリレンシートを剥がす前と後の蛍光写真をそれぞれ示す．

チジン酸（EPA）（Sigma-Ladrich）をクロロホルムとメタシートを剥がす前には，基板の全体が蛍光でひかり，リン

ノール，または，ホスファチジルコリン（EPC）をメタ

脂質が全体に付着しているのがわかる．図２（b）に示す

ノールのみで溶かしたものを使用した．また，蛍光観察

ように，シートを剥がすと，リン脂質膜パターンが ITOを行うことができるように，リン脂質を，蛍光色素 DiI

基板上に作製されていることがわかる．正方形のパターン（1,1’-dihexadecyl - 3, 3, 3’, 3’- tetramethylindocarbocyanie

サイズは，20 μm×20 μmで，パターン間隔は 30 μm である．

perchlorate, ex/em: 549/564 nm）で染色した．

図２（c）にそれぞれのパターンの蛍光強度を示す．これよパターンされたリン脂質膜やリポソームの観察は，倒り，パターンのエッジの境界がはっきり確認できる．以上

立顕微鏡（IX-70, Olympus）を用いて，蛍光観察または微の結果より，マイクロ加工を用いて作製された微細穴のパ

分干渉観察し，CCD カメラ（ExwaveHAD, Sony，またはリレンシートを用いて，リン脂質を ITO ガラスの基板上

C2741-79, Hamamatsu）を用いて撮影，ビデオで録画した．

にパターンすることできた．

特に静止画像は，イメージプロセスソフト AquaCosmos作製されたリン脂質膜からエレクトロフォーメーション（Hamamatsu）を用いて撮影した．ジャイアントリポソー

法によりジャイアントリポソームを作製することを試みた．

ムの直径は，Image-Box software（Library Co.）を使用し周波数 10 Hz，電圧 0.5 V の交流電場（正弦波）を印加するて計測した．

とリン脂質膜が振動している様子を確認することができた．
その後，電圧を 1.5 V まで次第に上げていく．それに伴い脂質膜の振動も増幅した．電場を印加してから，５min 以
内にリポソームが形成されており，図３に示すように電場による振動によりリポソーム同士が融合したり，小さなリ
ポソームがジャイアントリポソームへと成長する様子を確認することができた．
図４に，大きさ 10 μm×10 μm の正方形のリン脂質膜に

図３ リン脂質膜に電圧 AC field（1.5V, 10Hz）印加した後のリポソー
ムの（a）融合前，（b）融合中，（c）融合後の微分干渉像．

図２ （a）パリレンパターンを剥がす前の蛍光写真，（b）リン脂質膜（正方形 20μm×20μm）をパターンした蛍光写真．（c）断面 A-B の蛍光強度．

図４ 脂質パターン 10μm×10μm を用いて，エレクトロフォーメーション法により作製されたリポソームアレイの微分干渉像．

− 42 −

均一径リポソームと細胞の融合のためのマイクロ流路デバイスの作成

電圧を印加してから 20min 後の結果を示す．作製されたジ泳動などの現象を利用して、リポソームを動かした。このャイアントリポソームは，その径が一番大きくなる位置でとき、多チャンネル信号発生装置によって、マイクロ電極

観察し，本微分干渉像は，基板の底辺から７μm 高さで撮間に正確に選択的な電圧を印加することにより、位置決め

影されたものである．それぞれのリン脂質膜パターン上に，を効率的に実行した。図６は、パターンした電極のある流

１つのジャイアントリポソームが形成されたが，２つ以上路にリポソームを導入し、写真の A-A’ に電圧を印加するのジャイアントリポソームが脂質パターン上に形成されてことにより、リポソームの位置を移動させた実験の写真でいたものもあった．ジャイアントリポソームは，アレイ状ある。

に作製され，基板上に固定されていた．ジャイアントリポ

また，移動制御させたリポソームを基板上へ整然と配置

ソームが基板上にアレイ状に固定されていることで，例えする方法として、図７のようなデバイスを開発した。このば，ジャイアントリポソームに一種類の膜タンパク質を再デバイスはマイクロ小孔が基板上に形成されており，その構築する場合には，膜タンパク質の機構解析を効率的に行

上下に流路が設置してある．上側流路にリポソームを導入

うことができるスクリーニングデバイスに応用することがし、下側流路を吸引すると、陰圧がかかり、上のリポソーできると考える．固定されているリポソームを基板から浮ムが、マイクロ小孔を塞ぐようにして固定化される。この遊させ，回収するには，例えば，高電圧を印加し外的な力ようにして、小孔の位置の設計どおりに、リポソームをアを加えるなど，検討が必要である．

レイ化させることが可能である。写真Ｅは、本研究で製作

図４のジャイアントリポソームの直径を測り，直径分布

したリポソーム固定用の基盤である。これを用いて、多くを図 5 に示す．比較として，リン脂質パターンを使用しなのリポソームや細胞を２列に配置することに成功した。

かった場合の結果も図５に示す．パターンを用いた場合のリポソーム径の変動係数（CV：Coefficient of Variation）
値は，脂質パターンを用いなかった場合に作製されたリポ
ソームの CV 値 34 ％から 7.6 ％に減少した．これより，均
一径ジャイアントリポソームを作製するためには，リン脂質のパターンを使用することが有用であることが確認できた．
最後に，実際にマイクロ流体デバイス内で作成されたリポソームを操作可能な機能を実現した。具体的には、リポ
ソームの位置制御、２種のリポソームの融合が可能なマイクロ電極アレイを組み込んだ。位置制御に関しては、誘電

図５ エレクトロフォーメーション法により作製されたリポ
ソームの数 vs. 直径．パターンしたリン脂質を使用しない場
合 と 使 用 し た 場 合． パ タ ー ン サ イ ズ：10μm×10μm． 変
動係数 CV：標準偏差値を平均値で割り％表示した値．

図６：電極アレイによるリポソームの位置制御

図７ リポソームや細胞の固定用基板．リポソームを固定し細胞を導入することで，リポソームと細胞の融合を試みる。か
の写真は細胞を固定している顕微鏡映像．

− 43 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

４．総

２）M. I. Angelova and D. S. Dimitrov:「Liposome

括Electroformation.」, Faraday Discuss. Chem. Soc., 81, pp.
303-311 and 345 (1986).

本研究では，マイクロ加工技術を用いて作製されたパリ
レンシートにより，リン脂質膜をパターニングすることが３）Y. Yoshikawa, T. Kanbe, and K. Yoshikawa:

できた．また，パターンされたリン脂質と，エレクトロフ「Daunomycin Triggers Membrane Blebbling andォーメーション法により，より直径分散の小さいジャイア

Breakage of Giant DNA Encapsulated in a Cell-Sized

ントリポソームを基板上にアレイ状に作製することができ

Liposome.」, Chemical Physics Letters, 366, pp. 305-310

た．さらに，マイクロ加工技術を利用してリポソームや細(2002)胞の移動や固定が可能なデバイスを実現した．これらの研

４）G. Tresset and S. Takeuchi:「Utilization of Cell-Sized

究を通じて，均一直径のリポソームを得て，細胞等と融合

Lipid Containers for Nanostructure and Macromolecule

させるためには，微細加工技術やマイクロ流体技術が有効

Handling in Microfabriation Devices.」, Analytical
Chemistry, 77, pp. 2795-2801, (2005).

であることが示された．

５）J. P. Reeves and R. M. Dowben:「Formation and謝辞Properties of Thin-Walled Phospholipid Vesicles.」, J Cell
Physiol, 73, pp. 49-60 (1969)

本研究を遂行するに当たり，ご支援いただきました㈶コ
スメトロジー研究振興財団および共同研究者に深く感謝い６）P. Taylor, C. Xu, P. D. Fletcher and V. N. Paunov:「ANovel Technique for Preparation of Monodisperse Giant

たします．

Liposomes.」, Chem Commun, 14, pp. 1732-3 (2003)（文献）７）K. Atsuta, H. Noji, and S. Takeuchi:「Micro Patterning

１）P. L. Luisi and P. Walde:「Why Giant Vesicles? Giantof Active Proteins with Perforated PDMS Sheets (PDMS
Sieve) . 」, Lab on a Chip, 4, pp. 333-336, (2004)

Vesicles.」, John Wiley & Sons, LTD. pp. 3-9 (2000)− 44 −

角層コルネオデスモゾーム分解過程の免疫電顕的解析

旭川医科大学医学部皮膚科

山 本

明 美

The epidermal stratum corneum provides a critical permeability barrier between the body and the environment. Our
skin establishes a basket-weave like appearance in the cornified layers. The cells there are attached only at the cell peripheryby corneodesmosomes which are modified desmosomes. These corneodesmosomes spare wide spaces at the central (nonperipheral) area for the lipid layers to form a continuous permeability barrier. To establish this structure while maintaining
steady state thickness of the stratum corneum, degradation process of corneodesmosomes must be under strict control.
Uncontrolled activation of proteases involved in this process could lead to severe skin phenotypes such as those seen in
Netherton syndrome, a severe autosomal recessive disease caused by gene mutations in SPINK5 which encodes a proteaseinhibitor LEKTI. Our understanding of the mechanisms which control the degradation of corneodesmosomes is limited.
For example, it is unknown why corneodesmosomes persist only at the cell periphery in fully developed corneocytes. To
explore this, we analyzed the precise distribution of two major components of the extracellular part of corneodesmosomes,
corneodesmosin (CDSN), and desmoglein 1 (DSG1) in normal adult human epidermis. Distributions of corneodesmosomal
components were analyzed using montage pictures of post-embedding immunoelectron microscopy performed on the backskin samples. The upper and lower cell surface of corneocytes from the first to the fifth layers were divided into the central
half and the peripheral half, and colloidal gold particles associated with corneodesmosomes were counted and distribution
densities per membrane length were calculated. Marked decrease in label densities was noted on the central areas of theupper cell surface from the second deepest layer for CDSN and DSG1. Central labeling was virtually lost by the fifth layer,
whereas peripheral labeling densities were relatively high up to the fifth layer. The present study clearly demonstrated
that the degradation of two major corneodesmosomal components, CDNS, and DSG1 is initiated from the central areasof corneocytes soon after the cells move into the cornified layer. This suggests that the molecular basis for the selective
degradation resides in the deepest layer of the stratum corneum.

１．緒

特徴がある。また、微細構造的には細胞内部分ではケラチ

言ン線維が付着するアタッチメントプラークが消失し、細胞

皮膚の最表層である表皮角層は生体と環境の間の物理的全周に形成される辺縁帯と一体化している。さらに細胞外１）なバリアを形成する 。角層の構造を従来は Elias が提唱

部分は dense midline 構造が失われ、全体的に電子密度のしたレンガとモルタルのモデルによって説明されてきた 。

高い板状の形態を示す。分布様式では、角層下層では細ここでは角層細胞はレンガに、モルタルは細胞間脂質に相胞全周に分布しているが、上層のよく分化した正常の角層当する。つまりかつては、このモルタルにたとえられた細細胞では辺縁部分にしか認められない。このことが顕著に

胞間脂質が細胞間の接着をつかさどっているとされていた現れているのが、ホルマリン固定パラフィン包埋標本で観のである。しかし最近では細胞同士の接着は主にコルネ

察される角層の網状構造である。すなわちアルコール脱水、

２）

オデスモゾームによっていることが分かってきており

３，４）

、

キシレン透徹処理中に細胞間に充填されていた脂質は抜け

細胞間接着における脂質が占める作用はあったとしてもわてしまうが、辺縁の接着構造であるコルネオデスモゾーム

ずかなものであろうとされている。

は残るため、角層の全体構造が網の目状を呈するのである。

このコルネオデスモゾームとは角化細胞が顆粒細胞から逆に言うと、この辺縁の接着部位に囲まれた中央部分を水角層細胞になるときにデスモゾームが構造変化したもので分バリアをつかさどる層状の細胞間脂質が埋めていることある。その構成成分は顆粒細胞のデスモゾーム構成要素に

になる

５，
６）

。

加えて、細胞内の層板顆粒から提供されるコルネオデスモ

さて、角層の厚さを一定に保ちながらこの構造をとるた

シン（CDSN）が新たに細胞外部分に加わっているというめには、コルネオデスモゾームの分解過程が精密に制御されている必要がある。その制御機構の重要性は、この分解過程が遅延すると老化した皮膚や冬期の乾燥肌にみられる

Immunoelectron microscopic analysisof stratum corneum corneodesmosomal
degradation process
Akemi Ishida-Yamamoto
Department of Dermatology, Asahikawa
Medical College７）ような角層の肥厚をきたし 、逆に異常に亢進すると重篤な魚鱗癬を生じる Netherton 症候群（常染色体劣性遺伝性疾患で、カリクレインなどの角層剥離に働く酵素を阻害す
る LEKTI をコードする遺伝子 SPINK5 の変異によって生８）じる）をきたすことからも明らかである 。しかしこの制− 45 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

御機構の詳細はまだ不明な点が多い。例えばなぜ分化したールとしては 1 次抗体を除いて反応させたものを用いた。

角層細胞では辺縁にのみコルネオデスモゾームが残っているのかその理由は全く知られていない。本研究ではコルネ

2 - 3．画像処理、計測

オデスモゾーム分解過程を明らかにするために、その主た

９－13）

免疫電顕写真は倍率 20,000 倍で撮影し、取り込んだ画像

る細胞外成分である CDSN とデスモグレイン１（DSG1）を Adobe Photoshop ver. 6.0（Adobe Systems, San Jose,の局在について、免疫電顕法を用いて角層の最深部５層にCA）を用いてモンタージュ写真を合成した。角層細胞のついて検討した。

最深部の１層目から５層目までの細胞のうち、切片上の細２．実胞の幅を Image-Pro Plus ver. 4.0 imaging software（Media験

Cybernetics, Silver Spring, MD）によって計測し、10 mm

2 - 1．材料

以上の細胞を解析対象とした。それぞれの細胞の表面を上

正 常 ヒ ト 背 部 の 皮 膚 を ２ ％ paraformaldehyde/PBS

下にわけ、それぞれの外周の長さを同ソフトを用いて測定

pH 7.4 にて４℃で１時間固定したのち、凍結固定、凍結し、これを中央２分の１と辺縁２分の１にわけて、各領域

置 換 し、Lowicryl HM20 樹 脂（Chemische Werke Lowi,

におけるコルネオデスモゾーム上の免疫標識の密度を計測

Waldkraiburg, Germany）に包埋したものを皮膚の垂直方した（図１、２）。各層あたり、６ないし７個の細胞を解析

向に薄切し、包埋後法の免疫電顕用の標本としたした。

14, 15）。すなわち手術材料から得られた皮膚を細切し、氷温の 15％

3．

glycerol/PBS に 1 時間漬けた後、Reichert KF80 凍結固定

結

果装置（Leica, Wien, Austria）を用いて―190℃の液体プロパ

角層内のコルネオデスモゾーム上には CDSN、DSG1 とンで固定した。その後、Reichert AFS automatic freeze-

もにその標識が認められた（図１）。陰性コントロールでsubstitution system（Leica）を用いて― 60℃のメタノール

は標識は認められなかった。角層の深部第 1 層目から 5 層

により凍結置換した。Lowicryl 樹脂への置換と紫外線に目までを対象とし、細胞表面を上面、下面に分け、それぞ

よる重合は製品説明書に従って行った。樹脂に埋め込まれれを中央と辺縁に２分割し、コルネオデスモゾーム上のた皮膚からウルトラミクロトームによって皮膚面に対して

CDSN、DSG1 の標識の細胞表面の長さあたりの密度を計

垂直方向になるように超薄切片を作成し、Formbar（LADD

測した。その結果、両者とも２層目の上面中央部分から顕Research Industries, Williston, VT）の支持膜を張ったニ著に減少しはじめ、5 層目までには殆ど消失することが分ッケルグリッドメッシュにマウントした。

かった（図２、３）。辺縁では両者とも密度の減少はゆるやかであった。

2 - 2．免疫染色4．考

上記の超薄切片を１％ bovine serum albumin（BSA），

察

５％ normal goat serum（NGS），0.1％ fish gelatin/PBS

コルネオデスモソームの分解過程は辺縁部分と中央部分で室温にて 15 分間、前反応させた。その後１％ BSA, １

で明らかに異なることが分かり、その複雑な制御機構が示％ NGS, 0.1％ fish gelatin/PBS 中で希釈した次の 1 次抗体

唆された。今回解析した二つのコルネオデスモゾーム成分と４℃で一晩反応させた。免疫電顕に用いた 1 次抗体はの分布密度は、ともに角層 2 層目の上面中央から急速に減CDSN の中央部分に対するウサギポリクローナル抗体

少していき、辺縁では密度の減少はゆるやかであった。

12）（250 倍希釈）および、DSG1 の細胞外ドメインに対するマ

角層細胞間の脂質層による水分バリア機能が適切に発ウスモノクローナル抗体（Dsg-1-P23, Progen Biotechnik

揮されるためには、脂質層が広がるべき部分においてコGmbH, Heidelberg, Germany）（製品原液を薄めず使用）

ルネオデスモゾームがタイミングよく消失している必要である。反応後、同希釈液で室温にて５分２回洗浄、１がある。同時に角層の構造も保たれていなくてはならな％ BSA, １ ％ NGS, 0.1 ％ fish gelatin/Tris-HCl buffered

い。コルネオデスモゾームの成分を分解する酵素としては

saline（pH 8 . 2）にて室温にて５分２回洗浄した。その後、カリクレインファミリーに属する KLK5（stratum corneum

後者にて希釈した次の２次抗体と 37℃、１時間反応させtryptic enzyme）や KLK7（stratum corneum chymotryptic

た。２次抗体は 5-nm gold-conjugated goat anti-rabbit IgG

enzyme）などが知られている 。この働きを調節する因（Amersham Bioscience, Buckinghamshire, UK），および子としては、これら剥離酵素の LEKTI をはじめとするイ

5-nm gold-conjugated goat anti-mouse IgG（Amersham

ンヒビター、相対湿度、硫酸コレステロール、遊離脂肪酸、Bioscience）を 10 倍希釈で使用した。その後、希釈液で５pH、Ca 濃度、酸化などがある

分２回洗浄、脱イオン水で５分３回洗浄した。酢酸ウラン

主要なコルネオデスモゾーム成分である CDNS と DSG1 がにて電子染色を施して電子顕微鏡観察した。陰性コントロ角層の２層目という非常に早い段階で細胞表面の中央部分

13）

2+

− 46 −

9, 16–22）。本研究では二つの角層コルネオデスモゾーム分解過程の免疫電顕的解析

図１ CDSN 免疫電顕写真のモンタージュ画像。左上の四角で囲った部位を右下に拡大して示す。コルネオデスモゾームに一致した標識が見られる。

図２ CDSN 分布密度。角層の 1 から 5 層目（C1 から C5）の細胞表面をそれぞれ上の図で示す 4 部分にわけ、CDSNの標識密度を測定した。CDSN の標識は２層目の細胞上面中央部分から減少している。（平均値 ±SEM）

図３ DSG1 分布密度。角層の 1 から 5 層目（C1 から C5）の細胞表面をそれぞれ上の図で示す 4 部分にわけ、DSG1 の標識密度を測定した。DSG1 の標識は２層目の上面中央部分から減少しはじめる。
（平均値 ±SEM）

から急速に消失していくことが明らかとなった。このこと

胞外成分である CDSN と DSG1 の局在を解析した。CDSN、は角層の深部に、異なるコルネオデスモゾーム構成成分に

DSG1 の標識はともに２層目の上面中央部分から減少しは共通する、局在部位に依存性の分解規定因子が内在するこじめた。辺縁では両者とも密度の減少はゆるやかであった。

とをうかがわせるものである。

コルネオデスモソーム成分の分解過程が辺縁部分と中央部

今回の解析では電顕標本上の断面が幅 10 mm 以上の細胞を対象としたが、免疫電顕標本の角層細胞の最大径は 30分で異なることが分かり、部位特異的な分解制御機構が角層深部に内在することが示唆された。

mm 程度であったので、今後はさらに対象を切片の断面幅
20 mm 以上の細胞にしぼって、より細胞の中央断面の状態（参考文献）

を明らかにしていく予定である。

１）Elias PM, : Stratum corneum defensive functions: an

5．総

integrated view. J. Invest. Dermatol. 125, 183-200, 2005.

括２）Elias PM,: Epidermal lipids, barrier function, and

角層の細胞間同志の接着構造はコルネオデスモゾーム

desquamation, J. Invest. Dermatol., 80 suppl, 44s-49s, 1983.

であり、この分解により角層は剥離する。コルネオデス３）Raknerud N, : The ultrastructure of the interfollicular

モゾーム分解過程を明らかにするために、その主たる細epidermis of the hairless (hr/hr) mouse. III. Desmosomal− 47 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010transformation during keratinization. J. Ultrastr. Res. 52,

13） Borgono CA, Michael IP, Komatsu N, et al., : A
Potential Role for Multiple Tissue Kallikrein Serine

32-51, 1975.

Proteases in Epidermal Desquamation. J. Biol. Chem. 282,

４）Chapman SJ, Walsh A, : Desmosomes, corneosomes

3640-3652, 2007.

and desquamation. An ultrastructural study of adult pig14） Ishida-Yamamoto A, Simon M, Kishibe M, et al., :epidermis. Arch. Dermatol. Res. 282, 304-310, 1990.
５）Elias PM, Goerke J, Friend DS, : Mammalian epidermal

Epidermal lamellar granules transport different cargoes

barrier layer lipids: composition and influence on

as distinct aggregates. J. Invest. Dermatol. 122, 1137-1144,

structure. J. Invest. Dermatol. 69, 535-546, 1977.

2004.

６）Landmann L, : Epidermal permeability barrier:15） Ishida-Yamamoto A, : Immunoelectron microscopictransformation of lamellar granule-disks into intercellular

analysis of cornified cell envelopes and antigen retrieval.

sheets by a membrane-fusion process, a freeze-fracture

Methods Mol. Biol. 289, 223-226, 2005.
16） Lee SH, Elias PM, Proksch E, et al, : Calcium

study. J. Invest. Dermatol. 87, 202-209, 1986.
７）Simon M, Bernard D, Minondo A-M, et al,: Persistence

and potassium are important regulators of barrierof both peripheral and non-peripheral corneodesmosomes

homeostasis in murine epidermis. J. Clin. Invest. 89, 530-

in the upper stratum corneum of winter xerosis

538, 1992.

skin versus only peripheral in normal skin, J. Invest,

17） Sato J, Denda M, Nakanishi J, et al, : Cholesterol sulfate
inhibits proteases that are involved in desquamation of

Dermatol., 116, 23-30, 2001.
８）Chavanas S, Bodemer C, Rochat A, et al, : Mutations

stratum corneum. J. Invest. Dermatol. 111, 189-193, 1998.

in SPINK5, encoding a serine protease inhibitor, cause18） Thiele JJ, Hsieh SN, Briviba K, et al, : Protein oxidationin human stratum corneum: susceptibility of keratins

Netherton syndrome. Nat. Genet. 25, 141-142, 2000.

to oxidation in vitro and presence of a keratin oxidation

９）Suzuki Y, Koyama J, Moro O, et al, : The role of two
endogeneous proteases of the stratum corneum in

gradient in vivo. J. Invest. Dermatol. 113, 335-339, 1999.

degradation of desmoglein-1 and their reduced activity in19） Watkinson A, Harding C, Moore A, et al, : Water

the skin of ichthyotic patients. Br. J. Dermatol. 134, 460-

modulation of stratum corneum chymotryptic enzyme

464, 1996.

activity and desquamation. Arch. Dermatol. Res. 293, 470476, 2001.

10） S i m o n M , M o n t é z i n M , G u e r r i n M , e t a l , :Characterization and purification of human20） Hachem JP, Crumrine D, Fluhr J, et al: pH directly

corneodesmosin, an epidermal basic glycoprotein

regulates epidermal permeability barrier homeostasis,

associated with corneocyte-specific modified desmosomes.

and stratum corneum integrity/cohesion. J. Invest.
Dermatol. 121, 345-353, 2003.

J. Biol. Chem. 272, 31770-31776, 1997.
11） Caubet C, Jonca N, Brattsand M, et al, : Degradation

21） Elias PM, Crumrine D, Rassner U, et al, : Basis forof Corneodesmosome Proteins by Two Serine Proteases

abnormal desquamation and permeability barrierof the Kallikrein Family, SCTE/KLK5/hK5 and SCCE/

dysfunction in RXLI. J. Invest. Dermatol. 122, 314-319,

KLK7/hK7. J. Invest. Dermatol. 122, 1235-1244, 2004.

2004.

12） D e s c a r g u e s P , D e r a i s o n C , P r o s t C , e t a l , :22） Deraison C, Bonnart C, Lopez F, et al, : LEKTICorneodesmosomal cadherins are preferential targets

fragments specifically inhibit KLK5, KLK7, and KLK14

of stratum corneum trypsin- and chymotrypsin-likeand control desquamation through a pH-dependent

hyperactivity in Netherton syndrome. J. Invest. Dermatol.

interaction. Mol. Biol. Cell 18, 3607-3619, 2007.

126, 1622-1632, 2006.

− 48 −

皮膚表皮形成に関わるタンパク質架橋接着反応の分子基盤（高反応性基質配列ペプチドを用いた皮膚型トランスグルタミナーゼの高感度で特異的な活性検出法の確立）
名古屋大学大学院生命農学研究科応用分子生命科学専攻

人 見

清 隆

Transglutaminase 1 (TGase 1) is an essential enzyme for cornified envelope formation in stratified squamous
epithelia. This enzyme catalyzes the cross-linking of glutamine- and lysine residues in structural proteins in differentiating
keratinocytes. We had used a phage-displayed random peptide library for screening of primary amino acid sequences thatare preferentially selected by human TGase 1. We had identified the most reactive sequence (K5) by evaluation of reactivity
as GST-fused recombinant protein. In this study, we have confirmed that K5 appeared to have high and specific reactivity as
substrate, even in the peptide form. Furthermore, in situ analysis of mouse skin sections using the fluorescence-conjugated
K5 peptide resulted in the detection of TGase 1 activity with high sensitivity. Additionally, we have established a specificassay system using this peptide. In conclusion, we have established in situ and in vitro detection system using substrate
peptide as sensitive and specific detection of endogenous TGase 1 activity in the skin.

１．緒が、トランスグルタミナーゼによる共有結合的な架橋を受言ける。これらの構造物が細胞膜直下に裏打ち構造（cornified

タンパク質架橋化酵素トランスグルタミナーゼは、タン

envelop）として形成される結果、表皮細胞は硬度化が生じ、パク質中のグルタミン残基と異種または同種タンパク質の外部に対し物理的にも化学的にも強力なバリアとして機能

リジン残基に、イソペプチド結合形成を触媒する架橋化酵することになる（図１B）。
我 々 は こ れ ま で、 皮 膚 表 皮 に 存 在 す る TGase の う ち、素である。同時にまた、グルタミン残基に一級アミンを取り込ませたり、脱アミド化することでグルタミン酸へと変TGase 1 と TGase 3 の組換えタンパク質を作製して、そ換させたりする場合もある（図１A）。この酵素反応は高の生化学的解析に従事してきた等動物の多くの組織で観察され、植物や下等真核生物、微性な前駆体として合成された後、TGase 1 が in vitro にお生物にも類似の反応様式が見られる事が知られている。高いてカルパインで、TGase 3 がカテプシンによって限定分

等動物においては、これらの酵素の活性発現にはカルシウ

解されて活性化されることを明らかにしてきた。

１, ２）。これらの酵素は不活

ムイオンが必要であり、カルシウムシグナルに応答して多また一方で、近年我々は、トランスグルタミナーゼが架

彩な生理現象に関わっている。トランスグルタミナーゼの橋する基質としては、どのような一次構造（アミノ酸配列）

生理的意義は、血液凝固、細胞死、形態形成、細胞外マトがあれば認識されやすいのか、という課題に取り組んできリクスの強化と幅広く、今なお未知の役割が発見される可た（どのグルタミンやリジンでも区別なく架橋重合するの能性もある。トランスグルタミナーゼはヒトにおいてはこ

ではない）。これまで、ファージ提示型ランダムペプチド

れまで８種のアイソザイムの存在が報告されているが、表ライブラリを用いて、各トランスグルタミナーゼのアイソ

皮組織には主に３つのアイソザイム（TGase 1, TGase 3、

ザイム（TGase 2 および Factor XIII）が好んで認識する

TGase 5）が存在する。

基質配列（ペプチド）の同定に成功している

皮膚表皮の形成は、表皮深層の未分化な前駆細胞が分化成熟して、角化した表皮細胞として表層に押し出されるこ

3, 4）

。さらにこ

のシステムを用いて、同様に表皮の TGase 1 に 対する高反応性ペプチド配列を得ることをめざしていた。

とによって達成される。またこの分化過程は、細胞内外の今回のコスメトロジー研究振興財団における研究課題とカルシウム濃度の変化によって支配されている。表皮細して、トランスグルタミナーゼが関わる表皮形成の分子基胞の分化に伴い、細胞内のロリクリン、インボルクリン、盤を確立するという課題で採択を頂いた。この課題の遂行

small proline rich protein（SPR）などの構造タンパク質群を２年間に分けて行い、特に皮膚型トランスグルタミナー

Molecular basis of transglutaminase
reactions in the skin epidermis formation:
development of efficient detection
system of transglutaminase 1 activity
using preferred substrate peptide
Kiyotaka Hitomi
Graduate School of Bioagricultural
Sciences, Nagoya University

ゼに対する高反応性基質配列ペプチドの解析と、これを用いた表皮組織での活性検出システムの構築を目的とした。
昨年度（平成 20 年度）まででペプチドの諸性質の解析と蛍５）光標識ペプチドを用いた検出システムの構築に成功した 。
昨年以降はさらにこれに加えて、化学標識ペプチドを用いた、in vitro での特異的な皮膚表皮架橋酵素のアッセイシ
ステムの開発にも成功したので、ここに報告としてまとめ− 49 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

図１

トランスグルタミナーゼの作用様式と表皮における役割たい。今後、表皮（培養）細胞中の活性検出方法の確立や切片を作製した。スライドグラスに貼付した切片を乾燥さ関連病態との関わりを検討していきたいと考えている。

せ、BSA により非特異的な吸着を防止するためのブロッ
キングを行った後、蛍光標識したペプチドを含むバッファ

２．実験方法ーを添加した。37 度で１時間反応させて、生理食塩水にこれまで我々は、TGase 1 に対する高い反応性を有するより洗浄してから封入・検鏡した。

基質配列を、M13 ファージディスプレイランダムペプチ

このとき、対照実験として、K5 ペプチドのグルタミン

ドライブラリからスクリーニングしている。そのうちおよ残基をアスパラギン残基に置換した変異ペプチドで同様の

そ 15 種類の配列を融合蛋白質として発現精製し、ダンシ実験を並行させた。また、TGase 1 遺伝子欠損マウスの皮

ル修飾カダベリン（蛍光標識アミン）の存在下で、TGase膚表皮切片についても行った。

1 に対する反応性の高いものを４つ選んでおり、それぞれイム（TGase 2, TGase 3, Factor XIII）に対する反応性を

２. ３ ビオチン標識ペプチドを用いての新規アッセイ系の開発

調べて、特異性の高い配列の１つ、K5（YEQHKLPSSWPF）

我々はこれまでに、フランス CovalAb 社との共同研究について、ペプチドレベルでの反応性、特異性、有用性をで、組織型酵素（TGase 2）について、ELISA 法（タンパ

検討した。

ク吸着プレートを用いた酵素発色による免疫反応検出系）

について解析を進めた。さらに、TGase 1 以外のアイソザを模した、トランスグルタミナーゼの測定系を TGase 2

２. １

６）

ペプチドレベルの反応性評価について開発していた 。これはプレートに、ポリアミン

96 穴マイクロタイタープレートを用いる発色方法で行（スペルミン）を共有結合させ、一級アミンを固定したもった。この場合、カゼインをグルタミン残基受容基質としのと、ビオチン標識した高反応性基質配列を用いた検出系て、プレートに固相化した。ここに、ビオチン標識したペで、簡便に高感度で活性検出が可能である。そこで、これプチドを含む溶液に酵素（TGase １）を添加して反応を進を応用して、TGase 1 の高反応性基質ペプチド（K5 ペプ行させた。尚、このとき、TGase 2 に対する高反応性ペプチド）を用いた特異的なアッセイ系構築を実施した 。同チド（T26：HQSYVDPWMLDH）や、
変異ペプチド（K5QN：様にポリアミンコートしたプレートに、TGase 1 およびグルタミン残基をアスパラギンに置換したもの）について

K5 ペプチドを混合して反応させ、アビジンパーオキシダも並行させた。反応停止し洗浄後、アビジンパーオキシダーゼを反応させ、発色基質を添加した。

７）ーゼを含むバッファーを反応させた。洗浄後、パーオキシ

３．結

ダーゼに対する発色基質溶液を添加して発色量を測定した。

果

蛍光標識ペプチドを用いた活性の視覚化

３. 1 選別した高反応性基質配列に相当するペプチドの反応性の評価

野生型および TGase 1 遺伝子欠損マウスから皮膚切片

ビオチン標識ペプチド（K5）を、カゼインをグルタミンを取得し、OCT コンパウンドに包埋して、３－４mm 厚で受容基質として、反応を行った。TGase 1 に対する反応を

２. ２− 50 −

皮膚表皮形成に関わるタンパク質架橋接着反応の分子基盤（高反応性基質配列ペプチドを用いた皮膚型トランスグルタミナーゼの高感度で特異的な活性検出法の確立）（K5QN）や T26 は、まったく反応を示さなかった（図２）。

３. ２ 蛍光標識高反応性ペプチドを用いた皮膚表皮における反応の視覚化

なお、図では省略したが、TGase 2, TGase 3, Factor XIII

蛍光（FITC）標識した K5 ペプチドを、皮膚表皮凍結切に対しては、反応性が低いことを確認している。ただし、片に添加して、内在性の TGase 1 活性の検出を試みた（図TGase 2 については、比較的高いペプチド濃度や酵素濃３、図４）。その結果、カルシウム存在下では、K5 ペプチ

度のときには、cross-reactivity が生じることが観察されドについて特異的なシグナルが観察された。キレート存在た。これらの結果により、K5 が TGase 1 に対して、ペプの場合、グルタミン残基を変異させた場合には観察されなチドとしてのレベルでも高く、かつ特異的に基質となるこかった。さらに、図では省略したが TGase 1 遺伝子欠損とが示された。

マウスの皮膚切片の場合では、全くシグナルは観察されな調べた結果、K5 のみが高い反応性を示し、変異ペプチド

図２

選別した高い反応性配列のペプチドレベルでの評価

図３

蛍光標識ペプチドを用いた皮膚表皮内の活性の視覚化（方法）

図４

蛍光標識ペプチドを用いた皮膚表皮内の活性の視覚化（結果）− 51 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

５）

TGase 1 の基質となることが示された。K5 の配列中にはかった 。
ヘマトキシリン＆エオシン染色での結果から、角化層にリジン残基が（グルタミン受容）あり、基質としてどのは活性は検出されず、顆粒層からやや下あたりまでの細胞

TGase アイソザイムでも反応する可能性もあったが、特層に見られた。また、TGase 1 は細胞膜直下に局在するが、異的に TGase 1 の良い基質であることが、変異体（QN 変

表皮細胞の細胞膜周辺にシグナルが見られ、これまでの知異）の解析で明らかになった。
このペプチドを用いた応用的な解析として、蛍光標識し見とも合致する結果となっている。

たペプチドを作製し、これを用いて皮膚表皮での活性を可

３. ３ ビオチン標識ペプチドを用いた、迅速で高感度な活性検出系の確立

視化できた（結果３. ２）。これは、特異的にアイソザイム

図５A に示すように、一級アミン固定化プレートに、トてきた方法よりもさらに正確に酵素の働きを知ることのでランスグルタミナーゼおよび、ビオチン標識した高反応性

きる画期的な手法と言える。抗体の場合は、「存在」のみ基質配列ペプチドを混合することによって、反応を進行さであるが、TGase 1 や TGase 3 は限定的分解を受けるとせた。図５B に示すように、TGase 1 に特異的なペプチド

活性上昇が起こるので、抗体反応のみでは活性を判断できである K5 を用いた場合、TGase 1 の酵素の存在下で時間ない場合に有効である。基礎的知見に加え、この手法では、依存的にビオチン標識 K5 の取り込みが観察された。同じ

TGase 1 の活性低下による疾病研究にも貢献できる。デようにグルタミン残基を含む、T26 や F11（Factor XIII 高

ータは省略するが、この成果より発展したヒト皮膚に関す反応性ペプチド）では反応されなかった。図では省略する

る共同研究を、北海道大学医学部・清水宏教授および秋山が、酵素量およびペプチド濃度依存的にも取り込み量が増真志准教授と行った。その中で、ヒト皮膚表皮、とりわけ大した。

魚鱗鮮患者の皮膚組織での、TGase 1 の発現解析に関しの反応物を検出する方法としては、これまで抗体で行われ

8）

４．考

ても、有用な検出系として役立つことが判明した 。

察

また結果３. ３に示すように、ペプチドをビオチン標識

緒言でも記したように、皮膚形成、特に角化層の表皮細すれば、アッセイが可能なことを示した。予備的な実験結胞でバリア機能を果たす cornified envelop が形成される果として、マウスの皮膚抽出物から、従来のアッセイ系よためには、複数のトランスグルタミナーゼの活性が必須でりもより感度良く、短時間で活性を検出することができた。

ある。なかでも、本課題で対象とした TGase 1 は、
（１）

今後、蛍光ペプチドを用いた可視化の検出系と並行して、

ノックアウトマウスで異常な皮膚形成が明らかなこと（２）

皮膚表皮トランスグルタミナーゼの異常なレベル低下の高遺伝子変異によって、重篤な皮膚疾患が生じること、から感度検出に用いられる可能性もある。

最も重要なアイソザイムであると言える。

５．総

我々が近年同定してきた、トランスグルタミナーゼのア括

イソザイムに特異的な高反応性基質配列が、ペプチドとし

このようにタンパク質架橋酵素反応を、組織および細胞ても良い基質であれば、様々な用途への展開が可能であるレベルで高感度に検出するシステムを開発することに成功との認識に基づいて、今回の研究課題に臨んだ結果、いくしたので、皮膚表皮における本酵素の分子基盤を確立する

つかの有用な成果をあげられた。

ことができたといえる。今後は、皮膚表皮培養系での活性結果の３. 1 に示したように、ペプチドとしても、他の検出と、TGase 1 以外のアイソザイムとの役割分担、おアイソザイムと交差することなく、特異性を有した形でよび架橋重合される基質群の架橋化パターンの解明を行う

図５

ビオチン標識ペプチドを用いた新規な酵素活性測定方法− 52 −

皮膚表皮形成に関わるタンパク質架橋接着反応の分子基盤（高反応性基質配列ペプチドを用いた皮膚型トランスグルタミナーゼの高感度で特異的な活性検出法の確立）ことにより、「どのように皮膚のバリア機能と固さが形成

J. Dermatol. Sci., 32, 95-103, 2003.
３）Sugimura Y. et al. Screening for the preferred

されるのか」を明らかにしていきたい。

substrate sequence of transglutaminase using a phage謝辞displayed peptide library. J. Biol. Chem. 281, 17699-17706,

本研究を遂行するにあたり、ご支援を頂いたコスメトロ

2006.

ジー研究振興財団に厚く御礼申し上げます。本研究は名古４）Hitomi K. et al.: Preferred substrate sequences for屋大学大学院生命農学研究科分子細胞制御学研究室で行わtransglutaminase 2: screening using a phage-displayed

れたもので、大学院生として実験に従事されました杉村禎

peptide library. Amino Acids. 36, 619-624, 2009.

昭博士、細野真代氏、北村三矢子氏の多大な努力による成５）Sugimura Y. et al. Identification of preferred substratesequences for transglutaminase 1: development of a novel

果であります。
また、マウスの皮膚切片標本を供与頂いた、兵庫医科大学の山西清文教授に感謝申し上げます。紹介したヒト皮膚peptide that can efficiently detect cross-linking enzyme
activity in the skin. FEBS J. 275, 5667-5677, 2008.

に関する実験は北海道大学医学研究科皮膚科学教室、清水６）Alea, M. P. et al.: Development of an isozyme-specific

宏教授、秋山真志准教授の成果です。また、活性測定系のcolorimetric assay for tissue transglutaminase 2 cross-

開発においては、フランス CovalAb 社との共同研究によlinking assay. Anal. Biochem. 389, 150-156, 2009.
７）Hitomi, K. et al. A specific colorimetric assay forるものです。

measuring of transglutaminase 1 and factor XIII
（参考文献）

activities. Anal. Biochem. 394, 281-283, 2009.

１）Hitomi K.: Transglutaminase in skin epidermis. Eur. J.

８）Akiyama et al.: Transglutaminase1 preferred substrate
peptide K5 is an efficient tool in diagnosis of lamellar

Dermatol. 15, 313-319, 2005
２）Hitomi K. et al. Analysis of epidermal-typetransglutaminase (TGase 3) in human stratified epithelia
and cultured keratinocytes using monoclonal antibodies.

ichthyosis. Am. J. Pathol. 176, 1592-1599, 2010.
９）人見清隆 タンパク質架橋化酵素の高反応性基質配列の探索と活用 生化学 81, 708-711, 2009.

− 53 −

皮膚の炎症反応・炎症後組織修復における血小板の役割の解明と血小板機能制御による治療法の開発
京都府立医科大学大学院医学研究科皮膚科学

加 藤

則 人、峠 岡理 沙

Accumulated evidences have suggested that platelets play versatile roles in variety of inflammatory reactions, butinvolvement of platelets in the homeostasis of dendritic cell re-distribution in cutaneous tissue after inflammation. Bonemarrow-derived dendritic cells were conjugated with fluorescent and injected intravenously after 6 hours from elicitation ofcontact dermatitis in mice, with or without platelet depletion. The number of dendritic cells re-distributed in the cutaneous
tissue was significantly reduced in pltelet-depleted mice, which was recovered by intravenous restoration of platelet.
However, intravenous restoration of platelet from P-selectin-deficient mice did not show this effect. These results suggestthat platelets play important roles in re-distribution of dendritic cells after cutaneous inflammation and homeostasis.

１

緒膚組織に補うため末梢血から皮膚組織へ樹状細胞が供給さ言れることが知られている。この現象にも末梢血中での樹状

古くから血小板は止血に必須の細胞であることが知細胞と血小板との複合体の形成が重要な役割を果たしていら れ て い た が、 最 近 に な っ て 血 小 板 は CD40 リ ガ ン ド、る可能性が推測されるが、この樹状細胞の皮膚組織への供

P-selectin などの接着分子、ケモカイン受容体、Toll 様受

給におよぼす血小板の役割はまだ検討されていない。そこ

容体を細胞の表面に発現するほか、成長因子、サイトカイ

で、蛍光で標識したマウス骨髄由来の樹状細胞を末梢血のン、ケモカイン、セロトニンやマイクロパーティクルな血小板を著しく減少させたマウスに静脈注射して皮膚へのど様々な活性物質を遊離することによって、炎症反応に関

樹状細胞の遊走動態を解析することにより、皮膚炎組織へわっていることが次第に知られるようになってきた 。しの樹状細胞の供給におよぼす血小板の役割を検討するととかし、皮膚を反応の場とするアレルギー炎症における血小もに、血小板 P- セレクチンの関与についても検討した。

１）

板の役割については、これまでほとんど検討されておらず、

２アレルギー性皮膚疾患の病態と血小板の関わりは不明であった。私たちは、これまでに活性化血小板が遊離するセロトニンがアトピー性皮膚炎患者で増加していること

2. 1

２）

や、

実

験

血小板減少マウスの作成

BALB/c マウスに抗血小板抗体を２日ごとに腹腔内投与

セロトニンが単球を活性化させて抗原提示能を増強させるすることで、末梢血中の血小板を 1000 個 /ml 程度に減少さとともにアポトーシスを抑制することで慢性炎症に関与し

せた。

２）

ていること 、あるいはセロトニンによって免疫制御作用
３）を有する樹状細胞への分化が誘導できること 、さらには

2. 2

接触過敏反応

血小板減少マウスを用いた実験により、ハプテン繰り返し

BALB/c マウスの耳介に１％ trinitrochlorobenzene（TNCB）

塗布によるアトピー性皮膚炎モデルマウスの炎症の成立にを塗布して感作させ、７日後にマウスの耳介に１％ TNCB

血小板が重要な役割を果たしていることを塗布することにより接触過敏反応を惹起させた。

４, ５）など、皮膚の炎症反応と制御における血小板の役割に関する研究結果を
６）

2. 3

報告してきた 。

マウス骨髄由来樹状細胞の調製と注射

皮膚のホメオスターシスの維持には、皮膚の抗原提示細BALB/c マウスの骨髄を採取し、骨髄細胞を GM-CSF存胞である真皮樹状細胞やランゲルハンス細胞が重要な働き

在下で培養し、樹状細胞を分化誘導させた 。そして、培養しをしていることが知られている。皮膚炎に伴って皮膚の樹て得られた樹状細胞（5×10 ）を 5-chloromethylfluorescein状細胞はリンパ管に遊走し、その後減少した樹状細胞を皮diacetate（CMFDA）で標識し、TNCB 塗布 24 時間後のマ

3）6ウスに静脈注射した。

Role of platelets in cutaneous inflammationand tissue remodeling: therapeutic
approach for allergic skin diseases via
blocking platelet activity

2. 4

Norito Katoh, Risa Mineoka

10 ）を投与し、P- セレクチンを欠損した血小板の静脈注

血小板補充

樹状細胞の静脈注射 20 分前にマウス血小板（7.5-8.0×

8Department of Dermatology, Kyoto
Prefectural University of Medicine
Graduate School of Medical Science

射は抗 P- セレクチン抗体で処理した血小板または P- セレ
クチンノックアウトマウス由来の血小板を用いた。

− 54 −

皮膚の炎症反応・炎症後組織修復における血小板の役割の解明と血小板機能制御による治療法の開発

2. 5

皮膚組織採取はみられなかった（図３）ことから、血小板上に発現した
P-selectin が即時型過敏反応の遅発相において重要な役割

樹状細胞を静脈注射して、その６時間後に耳介皮膚を4）を果たしていることが示唆された。

採取し 、4％パラホルムアルデヒドで固定した。そして、
OCT コンパウンドで包埋した後、凍結切片を作成し、蛍４光顕微鏡（Biozero, Keyence）を用いて観察した。

３

結

考

察

血中の樹状細胞は、血管内皮細胞の P- セレクチンを介果して循環血中から皮膚組織へ遊走することがこれまでに報3. 1 樹状細胞の皮膚への分布におよぼす血小板減少の影響

告されていたが、今回の我々の研究結果より、血中での血CMFDA で標識した樹状細胞を静脈注射して、その６時成が、血中から皮膚組織への樹状細胞の遊走動態において小板上の P- セレクチンを介した樹状細胞との複合体の形
重要な役割を果たしていることが示唆された。

間後に耳介皮膚を採取し、蛍光顕微鏡を用いて皮膚組織で

７）

我々は、ヒトのアトピー性皮膚炎の CMFDA 陽性細胞を観察した。血小板減少マウスでは、

４, ５）やマウスを用いた抗血小板数が正常なマウスに比べて、皮膚組織での CMFDA

原刺激による皮膚炎

陽性細胞数は有意に低下していた（図１）。

性化していることを既に明らかにしており、アレルギー性において、末梢血中の血小板が活

皮膚疾患において血中の活性化血小板が樹状細胞の遊走能

3. 2 樹状細胞の皮膚への分布におよぼす血小板補充の影響に大きく影響している可能性が考えられる。
今後、樹状細胞の機能における血小板の役割を明らかにしていくことにより、血小板の活性制御が、接触皮膚炎やCMFDA で標識した樹状細胞を静脈注射する 20 分前に、血小板または溶媒である生食のみを血小板減少マウスに静アトピー性皮膚炎などのアレルギー性皮膚疾患の有用な治脈注射すると、血小板を補充したマウスでは皮膚組織へ分療法になることが期待できる。

布する樹状細胞数の増加を認めた（図２）。
（引用文献）

3. 3 樹状細胞の皮膚への分布におよぼす血小板 P- セ
レクチンの影響１）von Hundelshausen P, Weber C.: Platelets as immune
cells: bridging inflammation and cardiovascular disease.
Circ. Res., 100, 27-40, 2007.

P-selectin ノックアウトマウスから得た血小板を投与した場合や、正常マウスから得た血小板を抗 P-selectin 抗２）Soga F, Katoh N, Inoue T, et al.: Serotonin activates

体で処理してから投与した場合には、遅発相反応の回復

human monocytes and prevents apoptosis. J. Invest.

図１

図２

図３

− 55 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

play important roles in the late phase of the immediate

Dermatol., 127, 1947-55, 2007.

hypersensitivity reaction. J. Allergy Clin. Immunol.,３）Katoh N, Soga F, Nara T, et al.: Effect of serotonin on

123:581-7,2009.

the differentiation of human monocytes into dendritic

６）Katoh N.: Platelets as versatile regulators of cutaneous

cells. Clin. Exp. Immunol., 146, 354-361, 2006.

inflammation. J. Dermatol. Sci., 53: 89-95, 2009 .

４）Tamagawa-Mineoka R, Katoh N, Ueda E, et al.: The
role of platelets in leukocyte recruitment in chronic７）Tamagawa-Mineoka R, Katoh N, Ueda E, et al.: Platelet-contact hypersensitivity induced by repeated elicitation.

derived microparticles and soluble P-selectin as platelet

Am. J. Pathol., 170, 2019-29, 2007.

activation markers in patients with atopic dermatitis.

５）Tamagawa-Mineoka R, Katoh N, Kishimoto S.: Platelets− 56 −

Clin. Immunol., 131: 495-500, 2009.

樹状細胞分子 SHPS-1 による皮膚免疫制御とその皮膚アレルギーへの治療的応用

樹状細胞分子 SHPS-1による皮膚免疫制御とその皮膚アレルギーへの治療的応用
群馬大学生体調節研究所バイオシグナル分野

的 崎尚SHPS-1 is a transmembrane protein that binds the protein tyrosine phosphatases SHP-1 and SHP-2 and is abundant+on the surface of CD11c dendritic cells (DCs). We recently showed that SHPS-1 is essential for priming by DCs of+
CD4 T cells and for development of Th17 cell-mediated experimental autoimmunity. We have now further evaluated theimportance of SHPS-1 and that of its ligand CD47 in contact hypersensitivity (CHS) to 2,4-dinitro-1-fluorobenzene (DNFB).
Whereas the DNFB-induced CHS response was impaired in mice that express a mutant form of SHPS-1 lacking most of thecytoplasmic region, it was unaffected in CD47-deficient mice. Moreover, treatment of wild-type mice with mAbs to SHPS1 that either block or do not block the binding of SHPS-1 to CD47 inhibited the CHS response, whereas that with a mAb
to CD47 had no such effect. The 2,4-dinitro-benzenesulfonic acid-induced proliferation of, and production of IFN-γ or IL17 by, T cells from DNFB-sensitized wild-type mice were inhibited by either mAb to SHPS-1 but not by that to CD47. In
contrast, the blocking mAbs to SHPS-1, but not that to CD47, inhibited an allogenic mixed leukocyte reaction. These results
suggest that SHPS-1 is essential for development of CHS, likely as a result of its positive regulation of the priming by DCs+of CD4 T cells. However, such regulation by SHPS-1 does not appear to require its interaction with CD47.

5）

１．諸

明らかとなっている 。私共はこれまでに、この SHPS-1

言が樹状細胞による T 細胞活性化に関与することを明らか
5）

化粧品などにより誘導される皮膚アレルギーの要因とにしている 。特に、SHPS-1 KO マウスでは、DNFB 誘なる化学物質には様々なものが知られているが、皮膚ア

導性皮膚炎や MOG 誘導性脳脊髄炎（Th17 誘導性）の発レルギーの実験的マウスモデルとしては、DNFB あるい症が顕著に抑制されることを見出しているは TNCB 誘導性皮膚炎などがよく知られている。従来こ

DNFB で感作したマウスリンパ球における IL-17 産生が、れらの化学物質誘導性の皮膚炎は、Th1 誘導性であると考SHPS-1 KO マウスでは減弱することを見出している。以

えられてきたが、最近になり Th1 細胞とは全く異なる Th

上の実験結果は、Th17 細胞の誘導には、樹状細胞に発現

細胞亜群と考えられ IL-17 を特異的に産生する Th17 細胞する SHPS-1 が T 細胞上の CD47 と相互作用して機能するの重要性が示唆されている。実際、IL-17 の遺伝子欠損ことが重要であることを強く示唆している。また興味深い（KO）マウスでは、DNFB や TNCB 誘導性の皮膚炎やこれことに、DNFB 誘導性皮膚炎の発症抑制が抗 SHPS-1 モノ

らの化学物質誘導性の皮膚炎の発症が著しく抑制されるこ

クローナル抗体投与により認められ 、抗 SHPS-1 抗体がとが報告されている 。Th17 細胞の誘導には、ナイーブ

化学物質誘導性皮膚炎の治療に有効性を持つ可能性が示唆

CD4 T 細胞が樹状細胞から抗原提示を受けた後、TGFb、されている。

1-3）

4）

+

が重要であるとされている。しかし、この Th17 細胞誘

。さらに、

6）

そこで本研究では、接触性皮膚炎発症に SHPS-1、まIL-6、IL-23 などのサイトカインが協調的に作用すること
1-3）

6, 7）

た CD47-SHPS-1 系 が ど の よ う に 関 与 す る か に つ い て 検

導の分子機構は未だ十分に明らかにされておらず、また、討を行なうとともに、化学物質誘導性皮膚炎の治療に抗Th17 系が様々な化学物資誘導性の皮膚炎発症に関与してSHPS-1 抗体を応用するための基礎的研究を行なった 。

8）

いるか否かも明らかとはなっていない。

２．実

SHPS-1 は樹状細胞に強く発現する細胞膜型分子であり、T 細胞などに発現する細胞膜型分子である CD47 と相互作用することで細胞 - 細胞間でのシグナル伝達を担うことがRegulation by dendritic cell SHPS-1 of skinimmunity and its therapeutic application
for skin allergy

2. 1

験

マウス

SHPS-1 KO マウスは SHPS-1 の細胞内領域をほぼすべて欠失した SHPS-1 を持つマウスであり、野生型 C57BL/6 と 5または６世代戻し交配を行ったマウスを SHPS-1 KO マウス
として用いた。CD47 KO マウスは、10 世代以上 CD57BL/6

Takashi Matozakiと戻し交配を行ったマウスであり、Oldenborg 博士（UmeåLaboratory of Biosignal Sciences,
Institute for Molecular and Cellular
Regulation, Gunma University

大学、スウェーデン）より供与していただいた。野生型
C57BL/6 マウスおよび BALB/c マウスは日本 SLC より購入した。

− 57 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

2. 2

3

接触性皮膚炎モデルマウスの作製

細胞に取り込まれた［ H］チミジンの量を測定することで、

８〜 12 週の雌マウスの背部に 0.5% DNFB を塗布し、5T 細胞の増殖の程度を定量化した。

日後に 0.2% DNFB を耳介に塗布した。0.2% DNFB 塗布 24

３．結

時間後に耳介部の腫脹を計測した。また、DNFB による
耳介部の腫脹に対する抗体投与の効果は、0.5% DNFB 塗

3. 1

果

接触性皮膚炎発症への SHPS-1 と CD47 の関与

布の直前に、100 mg の抗 SHPS-1 抗体（mAb 97、p84）、抗接触性皮膚炎の発症における SHPS-1 と CD47 の重要性

CD47 抗体、または正常ラット IgG 抗体をマウスの腹腔内を検討する目的で、SHPS-1 KO および CD47 KO マウスに投与することで検討した。

における DNFB 誘導性皮膚炎の誘導を試みた。その結果、以前の報告と同様に SHPS-1 KO マウスでは、DNFB 塗布

2. 3

リンパ球のサイトカイン産生と増殖による耳介の腫脹が野生型マウスに比べ有意に低下した

８〜 12 週の雌マウスの背部に 0.5% DNFB を塗布 5 日後

（図 1A）。一方、CD47 KO マウスでは、野生型マウスと同に、所属リンパ節よりリンパ球を回収した。回収したリン程度の耳介の腫脹が認められた（図 1B）。これらの結果か

パ球を 10 mg/ml の抗 SHPS-1 抗体、抗 CD47 抗体、またはら、接触性皮膚炎の発症には CD47 ではなく、SHPS-1 が正常ラット IgG 存在下で、DNBS（30 mg/ml）、または IL-2重要であることが示唆された。

（50U/ml）により 72 時間刺激した時点での培地中に含まれる IFN- γ および IL-17 の産生量を ELISA 法にて測定した。

3. 2

抗 SHPS-1 抗体による接触性皮膚炎の抑制

また、リンパ球の増殖の程度は、DNBS または IL-2 刺激 60

SHPS-1 と CD47 はそれぞれ細胞外領域を介して細胞間時間後に培地に［ H］チミジンを添加して、さらに 12 時間で結合し、細胞間シグナル CD47-SHPS-1 系を形成してい培養した時点でのリンパ球に取り込まれた［ H］チミジン

る。CD47 と SHPS-1 との結合が、接触性皮膚炎の発症にの量を測定することで定量化した。

関与するかを検討する目的で、CD47 と SHPS-1 の結合を33阻害する抗 SHPS-1 抗体である mAb97、両者の結合を阻

2. 4

リンパ球混合試験

害しない抗体である p84、および CD47 と SHPS-1 との結+野 生 型 C57BL/6 マ ウ ス の 脾 臓 よ り CD11c 樹 状 細 胞合を阻害する抗 CD47 抗体である miap301 をそれぞれマウを、野生型 BALB/c マウスより CD4 T 細胞を単離し、抗ス腹腔内に投与し、これら抗体の DNFB 誘導性皮膚炎のSHPS-1 抗体、抗 CD47 抗体、または正常ラット IgG をそ発症に与える影響について検討した。抗 SHPS-1 抗体であれぞれ 10 mg/ml を含む培地で、両細胞の混合培養を行なる p84 および mAb97 を腹腔投与したマウスでは、DNFBった。培養 72 時間後に T 細胞から分泌された IFN-γ の産生塗布による耳介の腫脹の程度が有意に低下した（図 2A, B）。

量を ELISA 法にて測定した。また、培養 60 時間後に培地

一方、抗 CD47 抗体 miap301 を投与したマウスでは、そのに［ H］チミジンを添加し、さらに 12 時間培養した後、T腫脹の程度に影響は認められなかった（図 2C）
。これらの

+

3

図１ SHPS-1 KO マウスおよび CD47 KO マウスにおける接触性皮膚炎の発症
SHPS-1 KO（A）または CD47 KO（B）の雌マウスの背部に DNFB を塗布 5 日後に、耳介に DNFB を塗布した。耳介の腫脹の程度は、耳介への DNFB の塗布前と塗布
24 時間後の耳介の厚みの差を測定することにより求めた。＊＊, P<0.01（野生型
マウスとの比較）、NS, 有意差なし− 58 −

樹状細胞分子 SHPS-1 による皮膚免疫制御とその皮膚アレルギーへの治療的応用

図２ 接触性皮膚炎発症への抗 SHPS-1 抗体および抗 CD47 抗体の効果
野生型マウスの腹腔内に抗 SHPS-1 抗体［p84（A）または mAb97（B）］、抗 CD47 抗体［miap301（C）］、
またはコントロールとして正常ラット IgG を投与後、マウスの背部に DNFB を塗布した。その 5 日後に、さらに耳介に DNFB を塗布し 24 時間後の耳介の腫脹の程度を測定した。耳介の腫脹の程度は、耳介へのDNFB の塗布前と塗布 24 時間後での耳介の厚みの差を測定することにより求めた。＊＊, P<0.01（正常ラット抗体との比較）、NS, 有意差なし

図３ DNBS 刺激によるリンパ球の増殖および IFN-γ、IL-17 産生に対する抗 SHPS-1 抗体および抗 CD47
抗体の効果
DNFB をマウス背部に塗布し、5 日後に所属リンパ節よりリンパ球を調製した。リンパ球を含む培地中に抗 SHPS-1 抗体（p84 または mAb97）、抗 CD47 抗体（miap301）、コントロールとして正常ラット IgG を添加後、DNBS（DNFB と同様の抗原性を持つ可溶性物質）または IL-2 にて 72 時間リンパ球を刺激した。
刺激終了 12 時間前に培地中に［3H］チミジンを加えることでリンパ球の増殖の程度（A）を、また培地中に分泌された IFN-γ（B）および IL-17（C）の産生量を ELISA 法により測定した。＊, P<0.05, ＊＊, P<0.01（正常ラット抗体との比較）− 59 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

結果から、抗 SHPS-1 抗体である p84 および mAb97 は接触

４．考性皮膚炎の発症抑制効果をもち、その抑制効果はこれら抗体が持つ CD47 と SHPS-1 の結合阻害活性に依存しないことが示唆された。

察DNFB 誘導性皮膚炎の発症における CD47-SHPS-1 系の役割について SHPS-1 KO マウス、CD47 KO マウスを用い解析を行なったところ、SHPS-1 KO マウスでは DNFB 誘

3. 3 DNFB により感作されたリンパ球の増殖、サイト
カイン産生に対する抗 SHPS-1 抗体の効果

導性皮膚炎の発症が抑えられたが、CD47KO マウスでは

DNFB 誘 導 性 皮 膚 炎 の 発 症 に は、 所 属 リ ン パ 節 で の疾患の発症には SHPS-1 と CD47 の相互作用が関与すると

DNFB 特異的に反応するリンパ球の増殖やそれによるサ考えられたが 、これらの実験結果から、SHPS-1 は接触

イトカイン産生が重要である。抗 SHPS-1 抗体処理により性皮膚炎の発症に重要であるが、CD47 はその発症に必須認められた DNFB 誘導性皮膚炎の発症抑制は、抗 SHPS-1

ではないと考えられた。また、CD47 と SHPS-1 の結合を抗体が所属リンパ節でのこれらリンパ球の反応を抑制し阻害する抗 SHPS-1 抗体である mAb97、および両者の結合たためである可能性が高い。そこで、DNFB 感作後のマを阻害しない抗体である p84 をマウスに投与し、接触性皮ウス所属リンパ節より調整したリンパ球を抗 SHPS-1 抗体

膚炎の発症に対する影響を検討したところ、どちらの抗体存在下で DNBS（DNFB と同様の抗原性を持つ水溶性物

によってもその発症が抑制された。一方、CD47 と SHPS-1質）刺激し、リンパ球の増殖およびそのサイトカイン産生との結合を阻害する抗 CD47 抗体である miap301 の投与でについて検討した。その結果、抗 SHPS-1 抗体（p84 またはは抑制されなかった。これらの結果は、SHPS-1 と CD47

mAb97）存在下では、DNBS 刺激を行ったリンパ球の増との相互作用が接触性皮膚炎の発症に重要ではないことを殖が抑制された（図 3A）。さらに mAb97 処理では、リン

支持するものである。

その発症の抑制が認められなかった。これまで、自己免疫
7）

パ球からの IFN-γ の産生量が低下した（図 3B）。接触性皮抗 SHPS-1 抗体投与により接触性皮膚炎の発症が抑制さ膚炎の発症には IL-17 細胞による IL-17 の産生が重要であれが、これは細胞表面上に発現する SHPS-1 が抗体によるが、mAb97 処理では DNBS 刺激によるリンパ球からのり架橋され、SHPS-1 の機能が阻害されたことによる可能IL-17 産生量の低下も認められた（図 3C）。一方、IL-2 によ性が考えられる。実際、SHPS-1 を発現する培養細胞を抗る抗原刺激に依存しないリンパ球の増殖、IFN-γ、およびSHPS-1 抗体で処理した際、細胞表面上に発現する SHPS-1

IL-17 の産生には、抗 SHPS-1 抗体処理の影響は認められなはエンドサイトーシスされることを認めている。したがかった（図３）。また、抗 CD47 抗体 miap301 処理は、リンって、抗 SHPS-1 抗体処理はランゲルハンス細胞およびパ球の増殖、および両サイトカインの産生に影響を与えな

樹状細胞上の SHPS-1 のエンドサイトーシスを誘導する

かった（図３）。

ことにより、SHPS-1 の機能を抑制した可能性が考えられる。一方で、抗 SHPS-1 抗体の処置により SHPS-1 はその3. 4 抗 SHPS-1 抗体によるアロ抗原依存的な混合リンパ球培養反応の抑制

細胞内領域にチロシンリン酸化を受けることを確認していSHPS-1 がランゲルハンス細胞などの樹状細胞に高く発の生理機能を負に制御するチロシンホスファターゼ SHP-1

現することから、抗 SHPS-1 抗体処理で認められたリンと結合し、SHP-1 を活性化することが知られている 。しパ球の増殖抑制およびサイトカインの産生抑制は、所属

たがって、抗 SHPS-1 抗体処理により SHPS-1 は SHP-1 のリンパ節での樹状細胞による T 細胞の活性化の過程に抗活性化を介して、樹状細胞の生理機能を負に制御すること

SHPS-1 抗体が抑制的に機能している可能性を示すとも考で接触性皮膚炎の発症を抑制している可能性も考えられる。

えられる。そこで、樹状細胞によるアロ反応性 CD4 T 細

しかし、樹状細胞に対する抗 SHPS-1 抗体の作用機構の詳胞の増殖とこれら T 細胞からの IFN-γ の産生に対する抗細については、今後の検討課題である。

+

る。SHPS-1 はチロシンリン酸化依存的に血球系細胞の種々
5）SHPS-1 抗体の効果について検討した。C57BL/6 マウス脾

DNFB で感作された SHPS-1 KO マウスより単離したラン臓より調製した CD11c 樹状細胞と BALB/c マウスより調ゲルハンス細胞は、運動能と TNF-a の産生の障害を示す 。

製した CD4 T 細胞の混合培養を抗 SHPS-1 抗体存在下でまた、SHPS-1 KO マウスおよび抗 SHPS-1 抗体処理を行っ行ったところ、mAb97 では CD4 T 細胞の増殖を抑制する

た野生型マウスでは、DNFB 刺激によるランゲルハンス細傾向が認められたが、p84 抗体では認められなかった（図

胞の成熟が障害を受けることも報告されている 。これら4A）。また、T 細胞による IFN-γ の産生については mAb97、に加えて、抗 SHPS-1 抗体である mAb97、p84 が、DNFB でp84 のどちらにおいてもその産生量に影響は認められなか感作を受けた野生型マウスより調製したリンパ球の DNBSった（図 4B）。一方、抗 CD47 抗体処理による T 細胞の増殖、刺激による細胞増殖を抑制し、さらに mAb97 はリンパ球

IFN-γ の産生量の変化は、全く認められなかった（図４）。

からの IFN-γ と IL-17 の産生を抑制した。また、リンパ球混

+

+

+

9）

6）

− 60 −

樹状細胞分子 SHPS-1 による皮膚免疫制御とその皮膚アレルギーへの治療的応用

図４ 樹状細胞依存的な CD4+T 細胞の増殖、IFN-γ 産生に対する抗 SHPS-1 抗体および抗 CD47 抗体の効果
抗 SHPS-1 抗体（p84 または mAb97）、抗 CD47 抗体（miap301）またはコントロールとして正常ラット
IgG を培地中に添加し、図中で示した細胞数のマウス脾臓由来の CD11c+ 樹状細胞とマウス脾臓由来
CD4+T 細胞の混合培養を行い、［3H］チミジンの取り込み量により CD4+T 細胞の増殖の程度（A）を測定し、また IFN-γ の産生量（B）を ELISA 法にて測定した。樹状細胞は C57BL6 マウスより調製し、CD4+T 細胞
は BALB/c マウスより調製した。＊, P<0.05, ＊＊, P<0.01（正常ラット抗体との比較）+合試験からは、樹状細胞による CD4 T 細胞の増殖の誘導が、specific T cell sensitization is impaired in IL-17-deficient

mAb97 処理により抑制されることが明らかとなった。すな

mice, causing suppression of allergic cellular and humoral

わち、抗 SHPS-1 抗体による T 細胞の増殖と T 細胞からのサ

responses. Immunity 17, 375-387, 2002.

イトカイン産生の抑制が、抗 SHPS-1 抗体の持つ誘導性皮膚５）Matozaki T, Murata Y, Okazawa H, et al, :Functions
and molecular mechanisms of the CD47-SIRPa signalling炎発症抑制につながる可能性が示唆された。
本研究により、SHPS-1 は接触性皮膚炎の発症に重要で

pathway. Trends Cell Biol. 19, 72-80, 2009.

あり、樹状細胞の運動、成熟、T 細胞の活性化などに関与

６）Fukunaga A, Nagai H, Yu X, et al, :Src homology 2

することが示唆された。その一方で、SHPS-1 と CD47 のdomain-containing protein tyrosine phosphatase substrate

相互作用は、その発症には関与しないと考えられた。また、

1 regulates the induction of Langerhans cell maturation.

接触性皮膚炎の発症抑制に抗 SHPS-1 抗体が有効であるこEur. J. Immunol. 36, 3216-3226, 2006.

とが明らかとなった。今後、SHPS-1 の樹状細胞における７）Tomizawa T, Kaneko Y, Saito Y, et al, :Resistance

生理機能を明らかにすると共に、接触性皮膚炎の発症をよto experimental autoimmune encephalomyelitis

り効率よく抑制する抗 SHPS-1 抗体の作製が求められる。

and impaired T cell priming by dendritic cells in
Src homology 2 domain-containing protein tyrosine（文献）phosphatase substrate-1 mutant mice. J. Immunol. 179,１）Weaver CT, Harrington LE, Mangan PR, et al, :Th17:
an effector CD4 T cell lineage with regulatory T cell ties.

869-877, 2007.
８）Motegi S, Okazawa H, Murata Y, et al, :Essential rolesof SHPS-1 in induction of contact hypersensitivity of skin.

Immunity 24, 677-688, 2006.
２）Kikly K, Liu L, Na S, et al, :The IL-23/Th17 axis:
therapeutic targets for autoimmune inflammation. Curr.

Immunol. Lett. 121, 52-60. 2008.
９）Fukunaga A, Nagai H, Noguchi T, et al, :Src homology
2 domain-containing protein tyrosine phosphatase

Opin. Immunol. 18, 670-675, 2006.
３）Iwakura Y, Ishigame H, :The IL-23/IL-17 axis in

substrate 1 regulates the migration of Langerhans cells
from the epidermis to draining lymph nodes. J. Immunol.

inflammation. J. Clin. Invest. 116, 1218-22, 2006.
４）Nakae S, Komiyama Y, Nambu A, et al, :Antigen-172, 4091-4099, 2004.

− 61 −

手のひら･足のうらで発現が高いWnt 阻害剤・Dickkopf １がアンチ（抗しわ、美白、色素再生、毛髪再生、除毛、皮膚再生）に及ぼす影響エイジング
名古屋市立大学大学院医学研究科

山 口

加齢・環境皮膚科学

裕 史

Palmoplantar skin, which stands for palms of the hands and soles of the feet, is generally hypo-pigmented comparedwith non-palmoplantar skin on the rest of the body. We have been hypothesizing that palmoplantar skin phenotype derives
from the dermal fibroblasts, which influence overlying epithelium. We have proved that cultured fibroblasts derived frompalmoplantar skin express higher levels of dickkopf1 (DKK1), which is an inhibitor of Wnt signalling, than those derived
from non-palmoplantar skin at the RNA level measured by RT-PCR and at the protein level by Western blotting andimmunocytochemistry. We also proved that DKK1 suppresses melanocyte growth and differentiation through the Wnt/
b-catenin/MITF pathway. DKK1 also suppresses melanin uptake by epidermal keratinocytes via PAR2, which explains
why DKK1 causes hypo-pigmentation in three dimensional skin equivalents. Additionally, DKK1 increases the growth of
keratinocytes via the induction of aKLEIP and keratin 9. Male type baldness is associated with higher DKK1 expression
levels. In this study, we evaluated the expression patterns of DKK1 between palmoplantar skin and non-palmoplantar skinin vivo. Western blotting and immunohistochemistry indicate that the expression of DKK1 is upregulated in palmoplantar
skin compared with non-palmoplantar skin in vivo. We conclude that the expression of DKK1 is upregulated in vivo, thus
maintaining the homeostasis of palmoplantar skin, which is non-hair bearing, thick and hypopigmented skin. Further studies
will focus on the effect of DKK1 on anti-aging.

１．緒い、毛の密度が違う。分厚い皮膚を移植すれば、その元の言場所の皮膚の性質をそのまま移すことになる。周辺の組織

皮膚科専門医にとって、掌蹠（手掌・足底）にできた皮との違和感を患者さん本人やそのご家族が非常に気にして

膚欠損の治療には難渋し、問題となることがある。掌蹠いる現状を目の当たりにした。しかも前述のように、掌蹠

皮膚は全体の約 5％しかない特殊な皮膚であるからである。

にやけどなどで皮膚欠損が生じ、掌蹠以外の皮膚で植皮さ掌蹠はなぜ分厚いか・色が白いか・毛がないかを疑問に思れた場合、活発なお子さんであれば特に、皮膚潰瘍やそれったことはないだろうか？掌蹠の皮膚は分厚い、つまり外に伴う痛みの原因となることがある。一人の医者として何的刺激に強いという特徴があり、他の部位の皮膚を用いてとか良い治療法を開発したいと考え悩んだ。

再建すると多くの点で不都合が生じる。他部位の皮膚を用そこで立てた仮説は、「皮膚が場所により違う（頭部にいて再建された場合、新たな皮膚欠損が痛みを伴い出現すは毛があり、掌蹠にはない）のは、真皮線維芽細胞というることも多い。高齢化社会で静脈性・動脈性の変化による間葉系由来細胞が、最外層に存在する上皮系成分（表皮細皮膚欠損がおきることが近年脚光を浴びている。特に糖尿胞やメラノサイト）に影響を及ぼすから」というものであ病が原因の皮膚の障害は足先や指先から始まることが多い。

った。この仮説自体は胎生期にはある程度認められている

なぜ掌蹠は特殊な皮膚を構築しているかを我々が行ってきものの、胎生期以後では一般的な概念ではなかった。
先ずはこの仮説を証明するために、同一個体から掌蹠真た研究を中心に述べ、本研究助成を得た成果を報告する。

皮線維芽細胞と大腿部などの掌蹠以外の線維芽細胞とを培

１. 1

なぜ掌蹠は分厚いのか？

養した。別個体の掌蹠以外の表皮細胞（およびコントロー

皮膚を移植する植皮は以前より、分厚ければ分厚いほどルとして掌蹠由来表皮細胞）を用意した。掌蹠表皮細胞に機能的にも見た目にも良いとされていた。私は形成外科医

はケラチン 9 という特殊なケラチンが産生されることが分を目指していた頃、大いに疑問を感じていた。皮膚には表かっていたので、掌蹠線維芽細胞と共培養した掌蹠以外の皮といわれる最外層の上皮成分と真皮といわれるその下層

表皮細胞にケラチン 9 が誘導されるか調べた。ｍ RNA レの間葉成分とからなる。皮膚は場所ごとに、分厚さ、色合ベルでも SCID マウスを用いた蛋白レベルでもケラチン 91）の誘導が確認された 。

The effects of dickkopf 1（which is an
inhibitor of Wnt signaling pathway and ishighly expressed in palmoplantar areas）
on anti-aging （including the regulationof pigmentation, hair follicles and skinregeneration）

を臨床応用した。つまり、掌蹠皮膚欠損創に掌蹠以外からYuji Yamaguchi
Department of Geriatric and Environmental
Dermatology, Nagoya City University
Graduate School of Medical Sciences

植皮は分厚い皮膚へと変化せず、移植された部位の性質

以上の基礎データを基に、実際に患者さんに本治療概念の表皮成分のみを採取し移植し、分厚い皮膚が形成されるかを確認した（図１）。予想通り、従来の掌蹠以外由来のを得ることなく、移植される前の状態の皮膚のままであっ− 62 −

手のひら ･ 足のうらで発現が高い Wnt 阻害剤・Dickkopf １がアンチエイジング（抗しわ、美白、色素再生、毛髪再生、除毛、皮膚再生）に及ぼす影響

図1

掌蹠皮膚欠損創への植皮の比較．
（文献 2 より改変）8）た。ところが、厚さ 0.2 ミリにも満たない掌蹠以外の表皮ることも明らかとなった 。このように掌蹠の色が白いののみを移植された場合、周辺の掌蹠の組織を反映するようは真皮成分の DKK1 がその上に存在するメラノサイトにに、掌蹠の皮膚へと変化していた 。糖尿病性足潰瘍 や影響を与えて機能面で抑制しているだけでなく、表皮細胞

リウマチ性潰瘍 やその他の疾患が原因の掌蹠や指端・足にも影響を与えてメラニン取り込み能をも抑制していると指の皮膚潰瘍 においてもこの治療法が非常に有効である

いうことが証明された。更に前項の話に戻るが、掌蹠が分ことが証明された。

厚い理由として、DKK1 がケラチン 9 を誘導することも証

2）

3）

4）

5）

つまり、掌蹠がなぜ分厚いかの一つの理由として、掌蹠真皮成分がその上の上皮成分に作用しているからと考えら明された。これらの一連の研究成果は総説などで詳細に解説しているので参照されたい

9, 10）。

れる。この掌蹠真皮による掌蹠皮膚の誘導は 70 歳代の成人でも起こる現象であることが分かっている。

１. ３

なぜ掌蹠は毛がないのか？

１. ２

蹠真皮線維芽細胞によるケラチン 9 の誘導に着目して、ご同じ頃 Stanford 大学の Howard Y. Chang らが我々の掌

なぜ掌蹠は色が白いのか？

上記現象の科学的な根拠を解明するために、掌蹠真皮

献体より 50 か所の様々な部位より皮膚（口腔粘膜や肺組織

線維芽細胞と掌蹠以外の真皮線維芽細胞とを培養し cDNAも含めて）を採取し、真皮線維芽細胞から RNA を抽出しマイクロアレイを施行した。多くの遺伝子で発現レベルた。そして大規模なマイクロアレイを施行し、線維芽細胞の差があった 。中でも Wnt シグナルの阻害因子であるの部位特異性を HOX 遺伝子（胎生期の対軸形成に関与す

Dickkopf1（DKK1; 独語で「頭でっかち」という俗語）にる転写因子）の発現パターンの違いで部位特異性を説明し注目し機能解析した。DKK1 はメラノサイト（掌蹠以外由た。この網羅的遺伝子解析でも多くの遺伝子群に差があり、来のもの）に作用し、増殖を抑制し、メラノサイト関連蛋

Wnt シグナルは大きな注目を浴びた。Pennsylvania 大学

白の発現をも抑制した（図２）。メラノサイトに DKK1 をの Sarah E. Miller らは、遺伝子改変マウス（DKK1 を表皮作用させることで動く遺伝子群に関しても、マイクロアレ細胞に強制発現させたマウス）を用いた系にて、DKK1 をイにより網羅的解析を施行し多くの候補遺伝子を導くこと

皮膚に作用させると、毛がなくなることを証明した。このができた 。また掌蹠真皮で多く発現している DKK1 は表ように掌蹠で毛がないことも DKK1 で説明される可能性

皮細胞にも影響し（図３）、メラニンの取り込みを抑制す

が高い。

6）

7）

− 63 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

図2

図3

DKK1 によるメラノサイトの増殖・分化の抑制．
（文献 6・7 より改変）

DKK1 による表皮細胞の増殖促進・メラニン取り込み能の抑制．
（文献 8 より改変）− 64 −

手のひら ･ 足のうらで発現が高い Wnt 阻害剤・Dickkopf １がアンチエイジング（抗しわ、美白、色素再生、毛髪再生、除毛、皮膚再生）に及ぼす影響

11）

２．実

れたい 。DKK1 の発現を調べた。既存の抗体がうまく機験能しないため、さまざまなエピトープを標識する家兎由来

緒言にて説明したように、DKK1 には様々な作用がある

ポリクローナル抗体を独自で作成した。

ことが分かってきた。DKK1 は表皮細胞に作用し、ケラチ

３．結ン 9 を誘導し表皮細胞の重層化を促進している可能性があること。また表皮細胞のメラニン取り込みのための受容体

３. 1

果

Western blotting（図 4）として知られている PAR2 の発現を抑制することで、メラ成人ヒト生体においても、掌蹠由来真皮では、掌蹠以外

ニン取り込みを抑制していること。メラノサイトに作用し、由来真皮と比較し、DKK1 の発現量が亢進していた。また

増殖能を抑制しメラノソーム関連蛋白として知られている

コントロールとして掌蹠由来表皮では、掌蹠以外由来表皮

さまざまな特殊蛋白の発現を抑制していること。などであと比較し、ケラチン 9 の発現量が亢進していた。また b カる。更に DKK1 は掌蹠真皮に発現が高いことが我々の一連

テニンの発現量の違いはうまく証明することができなかっの研究から知られているが、証明されたのは全て培養系（in

た。が、掌蹠由来表皮では、掌蹠以外由来表皮と比較し、vitro）であった。そこで今回、成人ヒト生体（in vivo）で

b カテニンの発現量が若干低下しているように思われた。

も同様のことが証明されるかどうかを調べた。

３. ２
２. １

Western blotting

免疫組織染色（図 5）

上記同様に同一個体の掌蹠から掌蹠外へと移行する部位

同一個体由来の成人ヒト皮膚を用いた。名古屋市立大学を中心に DKK1 の発現を解析した。対応する明視野との比

倫理審査委員会により承認された範囲内での研究を施行し較で、色素が薄い掌蹠側皮膚の表皮直下では多くの DKK1た。同一個体より掌蹠皮膚および周辺の掌蹠以外の皮膚をの発現を認めたのに対して、色素が濃い掌蹠以外の皮膚の採取した。これら皮膚は皮膚外科手術による余剰皮膚を用いた。Dispase（Sigma）を用いて表皮成分と真皮成分とに分けた。超音波破砕装置を用いて組織を裁断した。それ ぞ れ に 対 し て Proteinase Inhibitor を 添 加 し た Protein
Extraction Buffer に 溶 解 し た。8 ％ ゲ ル を 用 い て DKK1、ケラチン 9、b カテニンの発現量を調べた。

２. ２

免疫組織染色

上記同様に同一個体由来の成人ヒト皮膚を用いた。また
名古屋市立大学倫理審査委員会により承認された範囲内での研究を施行した。ヘルシンキ宣言も遵守した。同一個体
より掌蹠皮膚から周辺の掌蹠以外の皮膚へ移行する部位を採取した。免疫組織染色の手技の詳細は別編などを参照さ

図5

図 4 成人ヒト生体での各種因子の発現量の掌蹠・掌蹠以外間比較

成人ヒト生体での掌蹠・移行部・掌蹠外での DKK1 発現比較

− 65 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

表皮直下にはあまり DKK1 の発現を認めなかった。移行部

部位がアンチエイジング、美白、脱毛に大きな効果を有す

では色素が薄い個所に DKK1 の発現が強い傾向を認めた。

るかなどの検討も将来的に可能と思われる。

４．考

察

謝

辞

上述のように培養系だけでなく生体系でも、成人ヒトで本研究を遂行するにあたり、一部の研究費を援助して下は真皮成分の部位特異性があることが証明された。つまりさいました財団法人コスメトロジー研究振興財団に深く感掌蹠真皮では DKK1 の発現量がその他の部位由来真皮と謝申し上げます。また本研究は「部位特異的な上皮間葉系

比較して多いことが示された。今後 DKK1 のアンチエイジ

相互作用を通じた皮膚疾患病態解明及び再生医療に関するング（抗しわ、美白、色素再生、毛髪再生、除毛、皮膚再生）研究」（課題番号 18689028）（H18-H21）及び「部位特異的治療薬剤としての可能性を探求していきたい。

な皮膚再生医療に関する研究」（課題番号 21591440）（H22-）

老化に伴う顔の「しわ」を気にする方は比較的多い。老の二つの課題に対する文部科学省の科学研究費補助金によ化に伴い表皮が薄くなることは知られている。DKK1 を作る援助を受けています。本研究を指導して下さいました名用させて表皮を厚くすることができれば、しわ取り効果の

古屋市立大学加齢・環境皮膚科学主任教授森田明理先生にあるクリーム開発につながると思われる。

感謝します。

老化に伴う顔の「しみ」（正確には肝斑・老人性色素斑）を気にする方も多い。DKK1 を作用させて皮膚色調を薄く（引用文献）

することができれば、全く今までと作用機序の違う美白剤

１）Yamaguchi Y, Itami S, Tarutani M, 他 .

Regulationof keratin 9 in nonpalmoplantar keratinocytesの開発につながると思われる。
老化に伴う「皮膚潰瘍」は近年糖尿病などの生活習慣病

by palmoplantar fibroblasts through epithelial-の増加に伴い増えている。DKK1 を作用させて手のひら・

mesenchymal interactions. J Invest Dermatol 1999

足のうら型の強い皮膚を再生することができれば、新たな

Apr;112(4):483-488.
２）Yamaguchi Y, Kubo T, Tarutani M,

治療法開発に直結すると思われる。

他 Epithelial-mesenchymal interactions in wounds: treatment of

老化に伴う「はげ」（男性型脱毛）を気にする方も多い。
DKK1 を拮抗的に作用させて新しい毛生え薬の開発につな

palmoplantar wounds by non-palmoplantar pureがると思われる。現実的にもマウスの研究などから DKK1

epidermal sheet grafts.

Arch Dermatol

May;137(5):621-628.

中和抗体の研究が各種他クループ（米国や韓国）でなされ

３）Yamaguchi Y, Yoshida S, Sumikawa Y,

ている。

５．総

2001

他 Rapidhealing of intractable diabetic foot ulcers with exposed括bones following a novel therapy of exposing bonemarrow cells and then grafting epidermal sheets. Br J

再生医療が注目される昨今、研究の主流は iPS 細胞に向Dermatol 2004 Nov;151(5):1019-1028.

かっている。が、臨床応用を考慮すると、多くの解決すべき問題点があることが窺い知れる。コスメトロジーと皮膚

４）Yamaguchi Y, Sumikawa Y, Yoshida S,

他

再生医学は密接に関連しており、最新の技術を駆使して得Prevention of amputation caused by rheumatic

られた知見は、化粧品学の進歩に直結していると思われる。

diseases following a novel therapy of exposing bone

手のひら・足のうらの皮膚に張りがあり、色素が薄く、

marrow, occlusive dressing and subsequent epidermal
grafting. Br J Dermatol 2005 Apr;152(4):664-672.

毛が存在しないことの原因解明は、アンチエイジング、美白、脱毛（あるいは毛髪再生）といった美容分野開発へと

５）Hanafusa T, Yamaguchi Y, Katayama I.

Intractable

つながる可能性がある。実際、手のひら・足のうらの真皮

wounds caused by arteriosclerosis obliterans with end-

線維芽細胞とその上皮系細胞との相互作用を解剖学的に別stage renal disease treated by aggressive debridementの個所の相互作用と比較したところ、DKK1 という物質がand epidermal grafting. J Am Acad Dermatol 2007
Aug;57(2):322-326.

手のひら・足のうらの真皮でより多く存在することが培養系で証明された。更に今回の研究成果として、生体におい

６）Yamaguchi Y, Itami S, Watabe H, 他 Mesenchymal-ても DKK1 を手のひら・足のうらは他部位と比較し多く分

epithelial interactions in the skin: high expression

泌していることが証明された。

of dickkopf1 by palmoplantar fibroblasts results indecreased melanocyte function.

我々の研究グループだけでなく、他の研究者からの報告

2004

Apr;165(2):275-285.

も総合すると、今後薬剤としての DKK1 の開発に期待がもたれる。様々な抗原を認識する抗体を作成したので、どの

J Cell Biol

７）Yamaguchi Y, Passeron T, Watabe H,− 66 −

他

The手のひら ･ 足のうらで発現が高い Wnt 阻害剤・Dickkopf １がアンチエイジング（抗しわ、美白、色素再生、毛髪再生、除毛、皮膚再生）に及ぼす影響

effects of dickkopf 1 (DKK1) on gene expression and

Sep;282(38):27557-27561.

Wnt signaling by melanocytes: mechanisms underlying10）Yamaguchi Y, Hearing VJ. Physiological factors

its suppression of melanocyte function and proliferation.

that regulate skin pigmentation. Biofactors 2009 Mar-J Invest Dermatol

Apr;35(2):193-199.

2007 May;127(5):1217-1225.
Dickkopf

11）Yamaguchi Y, Takahashi K, Zmudzka BZ, 他 . Human

1 (DKK1) regulates skin pigmentation and thickness byskin responses to UV radiation: pigment in the upper

affecting Wnt/beta-catenin signaling in keratinocytes.

epidermis protects against DNA damage in the lower

８）Yamaguchi Y, Passeron T, Hoashi T, 他 .

epidermis and facilitates apoptosis. FASEB J 2006

FASEB J 2008 Apr;22(4):1009-1020.
９）Yamaguchi Y, Brenner M, Hearing VJ.
regulation of skin pigmentation.

J Biol Chem

The

Jul;20(9):1486-1488.

2007− 67 −

角層の若返りが皮膚の若返りに果たす役割

久留米大学皮膚科大 日輝 記

Chemical peeling is used clinically to improve the cosmetic appearance of the skin that has been damaged by exposure
to the sun, which is typically accompanied by pigmentation, dullness and wrinkles. A new peeling agent, 30% salicylic
acid in polyethylene glycol (SA-PEG), specifically affects the cornified layer and improves the skin texture without any
adverse reaction. SA-PEG treatment did not inhibit the epidermal prostaglandin E2 production in mice. In mouse epidermal
keratinocytes, the level of phosphorylated ERK, which was decreased by chronological aging, was rescued by SA-PEG
treatment. These results suggest that the rejuvenation by chemical peeling of the cornified layer is not by inhibition of
cyclooxygenase, but is due to unique mechanism that modulates mechanical stress in the epidermis.

１．緒

否定する目的で以下の実験を行った。

言①ヘアレスマウス（Skh/HR1）で、表皮プロスタグランデ

老化すると肌の張りが失われ、シワが増える。表皮にかかる張力の減少は、角化細胞の増殖、分化、ひいては老化そのものに影響を与えている可能性がある。

ィン E2 の粗精製および ELISA による表皮プロスタグラ
ンディン E2 の定量系を確立した。
②マウスに UVB を照射後にサリチル酸マクロゴールピー

ケミカルピーリングは、老化した肌を若返らせ、美容的リングを施行し、表皮で誘導されるプロスタグランディに改善する臨床的手技である。角層ピーリングであるサリン E2 産生を経時的に定量した。サリチル酸マクロゴー

チル酸マクロゴールピーリングは、老化した皮膚の角層をルピーリングが、角化細胞でのプロスタグランディン E2

形づくる、未熟で脆弱な cornified envelope（CE）を、成合成を阻害しないか検討した。

熟した硬い CE に更新する。また、角層のみのピーリングであるにもかかわらず、真皮乳頭層のコラーゲン配列まで

２）インテグリンおよびそのシグナル伝達物質の発現評価改善する。

角化細胞における機械的ストレス受容体としてのインテ

我々は、光老化、光発癌の動物モデルである紫外線照射

グリンのシグナル伝達物質の活性化を、加齢マウス、紫外ヘアレスマウスを用いて、サリチル酸マクロゴールピーリ

線照射マウスおよびヒトの前癌状態（日光角化症）、有棘

ングが光発癌を抑制、減少させることを示した 。さらに細胞癌で評価した。

我々は、サリチル酸マクロゴールピーリングが、ヒトおよ①若年マウスと加齢マウスに対してサリチル酸マクロゴー

びマウスで表皮をリモデリングすること、マウスで異常なルピーリングを施行し、インテグリンレセプターの下流

p53 の発現を正常化させることを示した 。

および交叉シグナル伝達物質である ERK（extracellular

１）

２）

今回、ピーリングによる表皮のリモデリングが、角化細胞

signal-regulated kinase），FAK（focal adhesion kinase）の機械的ストレス環境を修飾することで皮膚の若返りをおの発現および活性化を、免疫組織化学で評価した。またこすと考え、表皮に恒常的にかかる力学的ストレスと老化

紫外線（UVB）を 20 週間照射したヘアレスマウスの表皮の関係について、ケミカルピーリングの系を用いて検討した。

で、ERK, FAK のリン酸化を評価した。さらに、サリチ

２．実

ル酸マクロゴールピーリングを施行した場合の影響を評

験

価した。

１）シクロオキシゲナーゼ阻害作用の否定②ヒトの日光角化症および有棘細胞癌の検体で、インテグ

サリチル酸自体によるシクロオキシゲナーゼ阻害作用をリンレセプターの下流および交叉シグナル伝達物質である ERK, FAK の発現および活性化を、免疫組織化学で評価した。

Skin rejuvenation by remodeling of thecornified layer
Teruki Dainichi
Department of Dermatology, Kurume
University School of Medicine

３）ケミカルピーリングと表皮の機械的ストレスの変化
ラット足底皮膚に対してケミカルピーリングを週１回、計４回施行し、表皮梁の深さおよび間隔を組織学的に評価した。

− 68 −

角層の若返りが皮膚の若返りに果たす役割

３．結

ル伝達物質、転写因子の活性化を免疫組織化学で評価した。

果

その結果、加齢マウスでは施術６時間後に紫外線照射マウ

１）シクロオキシゲナーゼ阻害作用の否定

スではピーリングにより ERK のリン酸化が若年マウスとマウスで、表皮プロスタグランディン E2 の定量系を確同等まで増加した（図 2A）。一方、紫外線照射マウスでは立した。次に、紫外線照射により表皮にプロスタグランデ

施術の３日後に一時低下した後、４週間後に回復することィン E2 を誘導したマウスで、サリチル酸マクロゴールピが示された（図 2B）。

ーリングは角化細胞のプロスタグランディン E2 合成を阻

紫外線によって生じた前癌病変である日光角化症 10 例および有棘細胞癌 12 例の病変部における FAK のリン酸化

害しないことを証明した（図１）。

を免疫組織化学的に評価したが、一定の傾向はなかった。

２）インテグリンおよびそのシグナル伝達物質の発現評価
角化細胞における機械的ストレス受容体としてのインテ
グリンのシグナル伝達が、ケミカルピーリングによる表皮のリモデリングで変化するかどうかを、紫外線照射マウス

３）ケミカルピーリングと表皮の機械的ストレスの変化
表皮梁の深さおよび間隔を定量的に測定したが、有意な変化はなかった。

で評価した。インテグリンレセプターの下流の各種シグナ

図１ 表皮プロスタグランディン E2 の定量。SA-PEG：サリ
チル酸マクロゴールピーリング、CP：プロピオン酸クロベ
タゾール。

図２ サリチル酸マクロゴールピーリング施術によるマウス表皮活性化 ERK の発現に対する影響。
A. 経時的加齢に伴うリン酸化 ERK の発現の変化と、ピーリングによる回復。
B. 紫外線連続照射による光老化モデルにおけるリン酸化 ERK 発現に対するケミカルピーリングの効果。

− 69 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010４．考

（参考文献）

察１）Dainichi T, Ueda S, Isoda M, et al Chemical peeling

今回の実験で、サリチル酸マクロゴールピーリングによwith salicylic acid in polyethylene glycol vehicle

る作用が、サリチル酸のシクロオキシゲナーゼ阻害による

suppresses skin tumor development in hairless mice. Br
J Dermatol., 148, 906-12, 2003

直接作用であることを否定した。また、機械的ストレスシ
グナル伝達物質のひとつである活性化 ERK の発現が施術

２）Dainichi T, Amano S, Matsunaga Y, Iriyama S, Hirao
T, Hariya T, Hibino T, Katagiri C, Takahashi M, Ueda

により変化することを示した。
角化細胞の分化が、細胞が強いられた形によって誘導さ

S, Furue M. Chemical peeling by SA-PEG remodels

３）

れることは、試験管内では古くから示されている 。一方、

photo-damaged skin: suppressing p53 expression

ヒトの乳癌細胞で、細胞外基質の硬さ（牽引応力）が、イ

and normalizing keratinocyte differentiation. J Invest

ンテグリンレセプターを介して悪性度（増殖、形態等）をDermatol., 126, 416-21, 2006

４）３）Cell shape controls terminal differentiation of human

高めることが示された 。

epidermal keratinocytes. Watt FM, Jordan PW, O'Neill

我々は、角化細胞の力学的ストレスと老化の関係につい５）

CH. Proc Natl Acad Sci U S A., 85: 5576-80, 1988て、次のように考えた 。
「角層は、表皮の力学的環境を支配することで、正常な増殖、分化ならびに構造維持に機

４）Tensional homeostasis and the malignant phenotype.

能している。老化によって角層の機能が損なわれ、力学的Paszek MJ, Zahir N, Johnson KR, Lakins JN, Rozenberg

バランスが破たんすると、力学的ストレスの受容体を介GI, Gefen A, Reinhart-King CA, Margulies SS, Dembo M,

したシグナル伝達を経て、シワの形成や発癌に結びつく。」

Boettiger D, Hammer DA, Weaver VM. Cancer Cell 2005;
8: 241-54.

ケミカルピーリングは、角層を更新し、表皮の力学的環境を回復させることで、角化細胞のみならず、間接的に真皮５）Dainichi T, Ueda S, Furue M, Hashimoto T. By theにまで影響を及ぼし、抗加齢にはたらく可能性がある。

grace of peeling: the brace function of the stratum
corneum in the protection from photo-induced
keratinocyte carcinogenesis. Arch Dermatol Res., 300,
s31-8, 2008

− 70 −

ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析

東北大学大学院薬学研究科生活習慣病治療薬学分野

平 澤

典 保

Nickel (Ni) is contained in various alloys, which are widely used in accessories and biomaterials, and causes
inflammation and allergy. However, little is known about the regulation of Ni release from alloys in vivo. In this study, weestablished a novel in vivo model in which the release of Ni from metal wire could be analyzed quantitatively. A Ni wire
(99.9 %; ø 0.8 mm × 5 mm) was implanted subcutaneously in the dorsum of mice. Ni ions in the skin tissue (diameter : 14mm) on the wire were extracted and quantified by the fluorometry using Newport Green. The content of Ni ion in the tissue
was significantly increased from 8 h. When lipopolysaccharide (LPS, 1 µg) was injected into the same site immediately after
the implantation of Ni wire, the content of Ni ions in the tissue was significantly increased. These results suggest that therelease of Ni from metal wires in vivo was enhanced by LPS-induced inflammation. The findings were confirmed by in vitro
5
model using a macrophage-like cell line RAW264. RAW 264 cells (1 ×10 cells/mL, 0.2 mL) were seeded on a Ni plate (5mm square) and incubated for 24 h in the medium containing LPS (0.1, 0.3 and 1.0 µg/mL). LPS enhanced the release of Ni
by RAW 264 cells in a concentration-dependent manner. Interestingly, the enhancement was observed only when the cells
were attached with Ni plate. The inhibitor of lysosome chloroquine (10 µM) and the V-ATPase inhibitor bafilomycin A1 (1++nM) but not the Na /H exchanger (NHE) inhibitor amiloride inhibited partially the elution of Ni by unstimulated RAW264
cells. In contrast, chloroquine, bafilomycin A1 and amiloride potently inhibited that induced by the LPS-stimulated RAW264
cells. These results suggested that LPS-stimulated RAW264 cells caused the release of Ni ions via the release of lysosome
and via the activation of V-ATPase and NHE. In conclusion, we established the novel models for the release of Ni frommetals in vivo and in vitro and demonstrated that the activation of inflammatory cells apparently enhanced the release of Ni.

１．緒ルが溶出される分子機構や炎症が生じて金属周囲組織の環

言

境が変化した場合のニッケル溶出の変化の定量的な解析は肌に直接接する装飾品に含まれるニッケルは、汗で溶出されやすくアレルギーや炎症を誘発しやすい金属である。

これまでなされていない。その最も大きな理由は優れた実験モデルがなかった点にある。

ひとたび金属アレルギーを発症すると、ニッケル以外の金申請者はニッケル線をマウス背部皮下に埋稙させる新規属にも過敏になることが知られており、種々の装飾品によモデルを開発し 、ニッケルによる炎症反応の誘発とニッ

り発赤、かゆみなどが生じて、装飾品を身につけることがケルの溶出を定量的に解析することを可能にした。本研究制限される。また金属イオンにより強い接触皮膚炎を起こ

は、本モデルを用いて、ニッケル線からのニッケル溶出が、し、色素沈着を誘発する場合もあり、コスメトロジーの観その周囲で感染を模倣した炎症を誘発したときに増大する点からも大きな問題となっている。ニッケルが金属アレル

ことを示した。また、炎症細胞を用いた細胞培養系でのニギーを最も引き起こしやすい金属であることは周知の事実

ッケルイオン溶出評価系も確立し、ニッケル溶出の分子機であり、そのアレルギー誘発機構については多くの報告が序について解析した。

なされてきた1, 2）

４）。従来、ニッケルは組織蛋白に結合しハ

２．実験方法

プテンとなると考えられてきたが、最近ニッケルは直接リ
ンパ球上の MHC 複合体に結合して、細胞を活性化するこ
３）

４）

2 - 1．ニッケル線誘発炎症モデルの作製とが明らかにされ 、組織蛋白との結合による抗原の形成

Diethyl ether 麻酔下、マウス（22−25g）の背部皮下には必ずしも必要ではないことも示唆された。一方、金属ア

移植針（13 G）を用いて、UV 照射滅菌処理したニッケル線

レルギーの初期段階はニッケルを含む装飾品や金属医用材（99 . 98％ ニッケル , ニラコ）
（φ0.8 mm× ５mm）を埋稙料からのニッケルイオンの溶出である。しかしこのニッケした。その直後に、lipopolysaccharide（LPS, ５µg/mL）
0 .2 mL をニッケル線近傍に皮下投与した。対照群として

Elution of Ni ions from materials andenhancement by inflammation

saline を 0 . 2 ml 皮下投与した。

2 - 2．組織中のニッケル量の測定

Noriyasu Hirasawa
Laboratory of Pharmacotherapy of Lifestyle Related Diseases Graduate Schoolof Pharmaceutical Sciences, Tohoku
University

一定時間後に、エーテル麻酔下マウスを脱血死させ、ニッケル線を中心に、皮打ち抜き用パンチ（内径 1.4 cm）で皮膚（表皮、真皮及び皮下組織）を打ち抜き、ニッケル− 71 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

線 を 除 い た 後、 皮 膚 を Eppendorf tube（1.5mL）に 入 れ

2 - 5．統計処理

た。 そ の 後、Milli Q 水 500µL 加 え て、 ミ ン ス し、 ４ ℃
で 24 時間ニッケルイオンを抽出した。この上清を希釈し、棄却検定は Tompson’s F-test により行った。有意差検定は Student-Newman-Keuls test により行った。

Newport Green DCF dipotassium salt を最終濃度 １µM

３.

となるように加え、分光蛍光光度計 F-2000（日立ハイテク）

結果

3 - 1．ニッケル線誘発炎症を用いて Ex 505nm/Em535nm の蛍光を測定した。

マウス背部皮下にニッケル線を埋稙し、ニッケル線によ

2 - 3．マウスマクロファージ様細胞株 RAW-264 細胞によるニッケル溶出の測定

り生じる炎症を観察した。８時間後ではニッケル線周囲の組織において、弱いながらも発赤が認められ、24 時間以

ニッケル板（99.98％ , 厚さ 0.05 mm, ニラコ；5×5 mm）

後においては出血を伴う強い炎症が認められた（Fig. 1A）。

を 96 well plate の１well につき１枚ずつ設置し、RAW264

また、浮腫のパラメータとして皮膚重量を測定した結果、

5

細 胞（1.0 － 5.0×10 cells/ml 10 ％（v/v）FBS-EMEM）を

８時間後の皮膚重量は 100 mg 前後であり有意な増加は認

200µl ずつ播種し、５％ CO2 存在下 37℃で一定時間培養

められなかったが、24 時間後においては 170 － 180 mg、72

した。ニッケル板非接着群は 96-well plate にあらかじめ

時間後においては 200－220 mg となり、有意な増加が認め

RAW264 細胞を播種し、２時間後にニッケル板を細胞とられた（Fig. 1B）。

接触しないように斜めに設置した。

3 - 2．ニッケル線表面の観察
2 - 4．薬物処理

埋稙して 72 時間後のニッケル線の表面を走査型電子顕５）細 胞 を 播 種 し た ２ 時 間 後、chloroquine （ 最 終 濃微鏡を用いて観察した。未処置のニッケル線の表面と比較

度 10µM）、amiloride （ 最 終 濃 度 100µM）、あるいはして埋稙後のニッケル線の表面は腐食が確認され、ニッケ

bafilomycin A1 （最終濃度 １nM）を加え１時間前処理しルが溶出していることが示唆された（Fig. 2）。

６）

７）た後、LPS（最終濃度１µg/mL）で一定時間刺激した。

Figure 1. Ni wire-induced inflammation(A) A Ni wire was implanted subcutaneously in the dorsum of eachmouse. The mice were sacrificed 8, 24 and 72 h after the
implantation, and the skin around the wire was photographed.
(B) The skin tissue (diameter: 14 mm) on the wire was excised andthe weight of tissue was measured. The values are the means of four
mice with S.E.M. shown by vertical bars. Statistical significance;**P<0.01 vs. the 0 h group.

− 72 −

Figure 2. Erosion of the surface of Ni wire
The surfaces of untreated and implanted Ni wire
(72 h) were analyzed by scanning electron
microscope.

ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析

3 - 3．Lipopolysaccharide によるニッケル線周囲組織
へのニッケル溶出量の増大

ウス腹腔由来マクロファージ細胞株である RAW264 細胞

ニッケル線からのニッケル溶出が周囲の炎症反応によwell plate の各 well に５mm 角のニッケル板を置き、10％り影響を受けるか明らかにするため、ニッケル線の埋稙

FBS を含む EMEM 培地を加えて 24 時間 incubate した場合と 同 時 に 起 炎 剤 lipopolysaccharide（LPS）を 用 い て 炎 症には顕著なニッケル溶出は見られなかった。しかし、ニッ

反応を誘発した場合の、ニッケル溶出量の変化を解析しケ ル 板 上 に RAW264 細 胞（1.0 及 び 3.0×10 cells/mL）をた。埋稙 24 時間後のニッケル線周囲組織の切片を作製播種した場合には細胞数依存的にニッケル溶出が促進した。

後、Hematoxylin-Eosin 染色し組織形態を観察した。ニッ

さらに RAW264 細胞を LPS で刺激したところ、ニッケル

ケル線の埋稙によりニッケル線周囲組織の皮膚の肥厚及びの溶出量が有意に増加した（Fig. 4A）。

を用い、培養細胞によるニッケル溶出を検討した。96-55

好中球やマクロファージなどの炎症細胞の浸潤が認めら

ま た 細 胞 播 種 数 を 1.0×10 cells/mL と し、RAW264 細れ、LPS を投与した場合はさらに炎症細胞の浸潤が増大し胞を各濃度の LPS で刺激したところ、LPS 濃度依存的にた（Fig. 3A）。このような条件下でニッケル溶出についてニッケルの溶出量が増加した（Fig. 4B）。以上の結果から、比較したところ、埋稙 8 時間後及び 24 時間後において LPS

RAW264 細胞によりニッケル板からのニッケル溶出は促を注射した群（LPS 群）では、vehicle（Saline）を注射した

進され、この溶出作用は LPS 刺激により細胞を活性化す

場合（Saline 群）に比べてニッケル溶出が有意に増加した

ることにより著しく促進されることが明らかになった。

（Fig. 3B）。従って LPS で炎症反応を誘発すると、ニッケル線からのニッケル溶出が促進することが明らかになった。

3 - 5．LPS 刺激 RAW264 細胞の培養上清の pH 解析
LPS 刺激後の RAW264 細胞の培養上清中の pH を解析し

3 - 4．LPS 刺激マウスマクロファージ様細胞株 RAW264
によるニッケル板からのニッケル溶出の促進た。その結果、培養上清中の pH は細胞数依存的に低下す

LPS による炎症反応によりニッケル溶出が促進する現象

ごくわずかであった（Fig. 5A）。また、LPS 刺激による培が in vitro においても認められるか明らかにするため、マ

養上清の pH 値の変化は認められず（Fig. 5B）、培養上清Figure 3. Increase in release of Ni by lipopolysaccharideinduced inflammation(A) Ni wire was implanted subcutaneously in the dorsum ofeach mouse. Lipopolysaccharide (LPS) was injected into
the same site immediately after the implantation. Twentyfour hours after the implantation, the mice were sacrificed
and the skin on the wire was dissected. Paraffin section of
the tissue was prepared and stained with hematoxylineosin.
(B) The skin tissue (diameter: 14 mm) on the wire was
excised 8, 24 and 72 h after the implantation of Ni wires
and Ni in the tissue was quantified by the fluorometry. The
values are the means of five mice with S.E.M. shown byvertical bars. Statistical significance; *P<0.05, **P<0.01
vs. the Saline group at the corresponding point.

Figure 4. Enhancement of elution of Ni ions from Ni plate bylipopolysaccharide-stimulated RAW 264 cells(A) RAW 264 cells (1 and 3×10 5 cells/mL, 0.2 mL)
seeded on a Ni plate (5 mm square) and incubated for 24
h in the presence (closed columns) or absence (opencolumns) of LPS (1 µg/mL). The values are the means offive samples with S.E.M shown by vertical bars. Statisticalsignificance; *P<0.05 vs. the corresponding unstimulatedgroup.
(B) RAW 264 cells (1 ×105 cells/mL, 0.2 mL) seeded ona Ni plate (5 mm square) and incubated for 24 h incontaining LPS (0.1, 0.3 and 1.0 µg/mL). The
concentration of Ni in the supernatant was determined after
the 24 h incubation. The values are the means of fivesamples with S.E.M. shown by vertical bars. Statisticalsignificance; *P<0.05 vs. the unstimulated group.

る傾向を示したものの、pH 値 7.2－7.5 程度とその変動は− 73 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

中の pH は LPS 刺激の有無に関わらず、一定に保たれてい胞をニッケル板上に播種しニッケル板と細胞を接着させることが明らかになった。従って、LPS によるニッケル溶

た場合、あるいはニッケル板と細胞を接着させずに培養し出の増大は、培養上清の pH が低下したためではないことた場合のニッケル板からのニッケル溶出を比較した。そが示唆された。

の結果、LPS で刺激していない条件下では RAW264 細胞とニッケル板との接着及び非接着に関わらず、RAW264

3 - 6．LPS 刺激 RAW264 細胞によるニッケル溶出促
進の経時変化細胞のニッケル溶出量に差は認められなかった。しかし、RAW264 細胞をニッケル板上に播種し、LPS で刺激した

させた場合では、RAW264 細胞を LPS で刺激すると、ニ時のニッケル溶出の経時変化を解析した。Medium のみでッケル溶出が有意に促進したのに対し（P < 0.01）、ニッケ

incubate した場合、及びニッケル板上で RAW264 細胞をル板が RAW264 細胞と接着しない条件下においては、LPS

培養した場合では、培養上清中のニッケル濃度は、24 時

で刺激を加えてもニッケル溶出の促進は認められなかった

間経過後もわずかに増加した程度であった。しかし、LPS（Fig. ７）。従って RAW 細胞における LPS 刺激によるニッで RAW264 細胞を刺激した場合には培養液のニッケル濃ケル溶出促進作用の発現には、ニッケル板と細胞との接着

度は播種４時間後から増加し始め、８時間以後では LPSが必要であることが示唆された。

RAW264 細胞をニッケル板上に播種しニッケル板に接着で刺激していない群と比較して有意に増加した（Fig. ６）。

3 - 7．RAW264 細胞によるニッケル溶出促進におけるニッケル板と細胞間の接着

3 - 8．リソソーム阻害薬及びプロトン輸送 阻害薬のRAW264 細胞によるニッケル溶出抑制作用
RAW264 細 胞 に よ る ニ ッ ケ ル 溶 出 効 果 の メ カ ニ ズ ム

RAW264 細胞を LPS で刺激すると、ニッケル溶出が促を 明 ら か に す る た め、LPS 非 存 在 下 リ ソ ソ ー ム 阻 害 薬

進するメカニズムとして細胞とニッケル板の接着部位の微chloroquine（10 µM）、Na /H exchanger（NHE） 阻 害

小環境において酸性化が生じニッケルが溶出する可能性が薬 amiloride（100 µM）、vacuolar-type（H ）-ATPase

考えられる。この点を明らかにするために、RAW264 細（v-ATPase）阻 害 薬 bafilomycin A1（１nM）の 各 薬 物

+

+

+

Figure 5. pH in the culture medium of lipopolysaccharide-stimulated
RAW 264 cells(A) RAW 264 cells (1 and 3×105 cells/mL, 0.2 mL) seeded ona Ni plate (5 mm square) and incubated for 24 h in the presence(closed columns) or absence (opened columns) of LPS (1 µg/mL).
The pH of the culture medium was determined with pH meter. The
values are the means of five samples with S.E.M shown by verticalbars.
(B) RAW 264 cells (1×105 cells/mL, 0.2 mL) seeded on a Ni
plate (5mm square) and incubated for 24 h in containing LPS (0.1,
0.3 and 1.0 µg/mL). The pH in the culture medium wasdetermined with pH meter. The values are the means of fivesamples with S.E.M. shown by vertical bars.

− 74 −

Figure 6. Requirement of cell attachment
Enhancement of elution of Ni ions from Ni plate bylipopolysaccharide-stimulated RAW 264 cells
RAW 264 cells (1×105 cells/mL, 0.2 mL) seededon a Ni plate (5 mm square) and incubated for 4, 8,
and 24 h in the presence or absence of LPS (1.0µg/mL). The concentration of Ni in the culture
medium was determined. The values are the meansof five samples with S.E.M. shown by vertical bars.
Statistical significance; *P<0.05, **P<0.01 vs. thecorresponding unstimulated group.

ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析を添加し、これらの薬物の影響を解析した。その結果、

また、RAW264 細胞を LPS で刺激した場合の８時間でchloroquine 添加により非刺激 RAW264 細胞による 24 時間のニッケル溶出促進効果に対する効果を同様に解析した。

培養でのニッケル溶出は部分的に抑制され、bafilomycin

そ の 結 果、chloroquine、amiloride 及 び bafilomycin A1 はA1 も有意差はなかったもののニッケル溶出を抑制する傾いずれも LPS による Ni 溶出促進を有意に抑制した（Fig.

向が認められた。一方、amiloride にはニッケル溶出抑制

９）。

効果が認められなかった（Fig. ８）。

Figure 7. Enhancement of elution of Ni ions from Ni plate by lipopolysaccharide-stimulated RAW 264 cells
on Ni plate(A) Experimental scheme of culture condition of RAW 264 cells.
(B) RAW 264 cells (1×105cells/mL, 0.2 mL) seeded on (attached condition) or under a Ni plate (nonattached condition) were incubated for 24 h in presence or absence of LPS (1.0 µg/mL). The
concentration of Ni in the culture medium was determined. The values are the means of five samples with
S.E.M. shown by vertical bars. Statistical significance; **P<0.01 vs. the corresponding LPS (-) group.

Figure 8. Effects of drugs on elution of Ni ions from Ni plateby unstimulated RAW 264 cells
RAW 264 cells（1×10 ⁵ cells/mL, 0.2 mL）were seededon a Ni plate（5 mm square）and incubated for 24 h in
the medium containing chloroquine（CQ ; 10 µM），amiloride（Ami ; 100 µM）and bafilomycin A1（Baf ; 1nM）． The concentration of Ni in the supernatant was thendetermined. The values are the means of five samples with
S.E.M. shown by vertical bars. Statistical significance;**P<0.01 vs. medium alone（None）group, #P<0.05 vs.
unstimulated RAW 264 cells group.

Figure 9. Inhibition of elution of Ni ions from Ni plate bylipopolysaccharide-stimulated RAW 264 cells by
chloroquine, amiloride and bafilomycin A1
RAW 264 cells（1×105 cells/mL, 0.2 mL）were seeded ona Ni plate（5 mm square）and incubated for 1 h in themedium in the presence of chloroquine（CQ ; 10 µM），amiloride（Ami ; 100 µM）and bafilomycin A1 (Baf ; 1nM). Then the cells were stimulated with LPS（1.0 µg/mL）
for 8 h. The concentration of Ni in the supernatant wasthen determined. The values are the means of five samples
with S.E.M. shown by vertical bars. Statistical significance;**P<0.01 vs. unstimulated RAW 264 cells, ##P<0.01 vs.
LPS control.

− 75 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

４. 考いると考えられる。一方、マクロファージが LPS 刺激に

察

+

+

より活性化すると、細胞膜にある V-ATPase や Na －H

種々の装飾品に対する金属アレルギーは皮膚の健康を考

Exchanger（NHE）などのイオン輸送系が活性化すること
8 － 9）

える上で，極めて大きな問題である。金属アレルギー誘発が明らかになっているの初期段階として当然ながら金属イオンの溶出が必須であしている NHE の阻害薬であり、bafilomycin A1 はリソソる。したがって生体内での金属からの金属イオンの溶出をーム膜上の V-ATPase と同様に細胞膜上に発現している

評価し、その溶出に伴う生体応答を明らかにすることは極V-ATPase も阻害する。今回の実験では LPS により活性化めて重要である。しかしこれまで，生体内において金属溶されたマクロファージの Ni 溶出促進効果を bafilomycin A1

出を詳細に解析できる実験系はなかった。そこで私たちは、及び amiloride が強く抑制した。以上のことから、マクロニッケル線をマウス背部皮下に埋稙する炎症モデルを確立

ファージは金属表面ではこれを異物と認識してプロトンをし、ニッケルの溶出を定量的に解析できるモデルを構築し含むリソソームのエキソサイトーシスにより、また LPS でた。

活性化するとリソソームの放出に加え細胞膜の V-ATPase

ニッケル線をマウスの背部皮下に埋稙し、LPS により炎症反応を誘発するモデルは、金属製のバイオデバイスを外+や NHE が活性化され、細胞外への H 放出をさらに増大させて著しくニッケル溶出が促進されると考えられる。

科的に体内に埋稙した際に感染が生じた状態を模倣してい５．総る。このような条件下で、金属からのニッケル溶出が増大することが明らかになったことは、医療材用の安全性評価の上で極めて重要なことである。

。Amiloride は細胞膜上に発現

括

本研究において、生体内でのニッケル溶出は炎症細胞の活性化により促進されることが明らかになった。そのため炎症細胞の活性化によりニッケル溶出が促進される現象

装飾品や医用金属材料の安全性評価には従来の試験管内では in vitro においても認められた。すなわち、マウスマクの耐汗性試験、耐唾液性試験では不十分である可能性が示

ロファージ様細胞株 RAW264 細胞がニッケルを溶出する唆された。特に LPS 刺激したマクロファージ様細胞株を作用をもつこと、さらに同細胞が起炎物質 LPS により活用いたニッケル溶出系は、金属性装飾品等の安全性評価に性化されると、ニッケル溶出効果が増大することが明らか有用であると考えられる。また、コスメトロジーの観点かになった。ニッケルに限らず、金属が腐食しイオンを溶出

らは、皮膚のバリア機能をはじめ、健康な皮膚を維持する

する原因として最も一般的なものが金属表面での酸性化でことが金属アレルギーの低減につながるものと考えられる。

ある。本研究では LPS でニッケル溶出が促進した場合でも培養液中の pH は低下しなかったことと、ニッケル板上謝

辞に播種した RAW264 細胞を LPS で刺激するとニッケル溶

本研究を遂行するにあたり，ご支援を頂きました財団法出が促進したのに対し、ニッケル板と接着しない条件下に人コスメトロジー研究振興財団に深く感謝いたします。まおいては、LPS で刺激を加えてもニッケル溶出の促進は認た、本研究にご協力くださいました東北大学大学院工学研

められなかったことから、RAW264 細胞における LPS 刺

究科大津浩教授ならびに成島尚之教授に深く御礼いたしま

激によるニッケル溶出の促進作用はニッケル板と細胞とのす。

接着面で生じ、この局所環境において LPS 刺激により酸（引用文献）性化が生じていることが示唆された。
マクロファージは体内に侵入した異物を除去する機構を１）Basketter, D.A., Briatico-Vangosa, G., Kaestner,

備えており、貪食した分解すべき異物を含むファゴソーム

W., Lally, C., Bontinck, W.J. (1993) Nickel, cobalt andの形成と、細胞由来の様々なタンパク分解酵素を含むリソ

chromium in consumer products: a role in allergic contact

ソームを融合しファゴリソソームを形成して消化分解する。

dermatitis? Contact Dermatitis, 28:15-25.

リソソーム内のタンパク分解酵素は至適 pH が酸性である

２）Sato, N., Kinbara, M., Kuroishi, T., Kimura, K.,

ため、リソソーム膜にある V-ATPase により細胞質内プロ

Iwakura, Y., Ohtsu, H., Sugawara, S., Endo, Y. (2007)

トンを積極的に取り込んでいる。Chloroquine は弱塩基性

Lipopolysaccharide promotes and augments metalの化合物で細胞内に取り込まれリソソーム内に取り込まれallergies in mice,dependent on innate immunity and中和する作用がある。無刺激のマクロファージによるニッ

histidine decarboxylase. Clin. Exp. Allergy, 37: 743-751.

ケルの溶出はリソソームを中和する chloroquine 及びリソ

３）Thierse, H.J., Moulon, C., Allespach, Y., Zimmermann,

ソームを酸性化を抑制する V-ATPase 阻害薬 bafilomycin

B., Doetze, A., Kuppig, S., Wild, D., Herberg, F., Weltzien,

A1 により抑制されたことから、未活性状態のマクロファ

H.U. (2004) Metal-protein complex-mediated transportージによるニッケル溶出はリソソームの放出が関与してand delivery of Ni to TCR/MHC contact sites in nickel-− 76 −2+

ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析

specific human T cell activation. J. Immunol. 172 : 1926-

Bafilomycins: a class of inhibitors of membrane ATPases

1934.

from microorganisms, animal cells, and plant cells. Proc.

４）Hirasawa, N., Goi, Y., Tanaka, R., Ishihara, K., Ohtsu,

Natl. Acad. Sci. USA 85 : 7972–7976.

H., Ohuchi, K. (2010) Involvement of prostaglandins and８）Brisseau, G.F., Grinstein, S., Hackam, D.J., Nordström,

histamine in Nickel wire-induced acute inflammation inT., Manolson, M.F., Khine, A.A., Rotstein, O.D. (1996)

mice. J. Biomedical Mtaerials Res. Part A, in press.

Interleukin-1 increases vacuolar-type H -ATPase activity５）Schneider, P., Korolenko, T.A., Busch, U. (1997) A
review of drug-induced lysosomal disorders of the liver in
man and laboratory animals. Micros. Res. Tech., 36 : 25375.

+

in murine peritoneal macrophages. J. Biol. Chem. 271:
2005-2011.
９）Vairo, G., Royston, A.K., Hamilton, J.A. (1992)
Biochemical events accompanying macrophage activation

６）Kleyman, T.R., Cragoe, E.J. Jr. (1988) Amiloride and its

and the inhibition of colony-stimulating factor-1-induced

analogs as tools in the study of ion transport. J. Membr.

macrophage proliferation by tumor necrosis factor-a,Biol., 105 : 1–21.

interferon-g, and lipopolysaccharide. J. Cell. Physiol.,

７）Bowman, E.J., Siebers, A. and Altendorf, K. (1988)

151:630–641.

− 77 −

皮膚ケラチノサイトの水・グリセリンチャネル AQP3（アクアポリン３）の
脂溶性ビタミンによる発現調節明治薬科大学病態生理学教室

石 橋

賢 一

The skin is constantly exposed to external physical and chemical toxins to protect the interior and eventually to keep thehomeostasis. This barrier mechanism will be enhanced by moisturizing the skin, which is partially conducted by glycerol,an ancient ingredient of cosmetics. The uptake of glycerol into the keratinocyte is mainly conducted by AQP3, a member ofaquaglyceroporins also including AQP7, 9, and 10. Recent analyses of AQP3-null mice showed that the absence of AQP3 not
only decreases the water content of the skin but also inhibits the development of skin cancer through the glycerol transport.
Therefore, glycerol will be beneficial to moisten the skin and promote its regeneration while it will be harmful to stimulate
the growth of skin cancers. Since the glycerol transport is regulated by the amount of AQP3 expression in the keratinocyte,
the regulation of AQP3 expression should be examined to predict the clinical outcome of the application of cosmetics. Since
we examined the effects of glycerol and vitamin A on AQP3 expression in keratinocarcinoma previously, here we tested
the effects of vitamin E and D on the expression of AQP3 in a human normal epidermal keratinocyte cell line (PHK16-0b).
Both lipophilic vitamins and lower concentration of glycerol significantly stimulated AQP3 expression examined by RT-PCR
technique while higher concentration of glycerol inhibited its expression. It will be more efficient to develop a screening
system to examine the effect of cosmetic ingredients on AQP3 expression in the keratinocyte in culture to predict theirpotential benefits and harms to the skin.

１．緒になるので、AQP-11 が細胞分化、増殖にかかわっており、

言

4）

他のアクアポリンでも同様の役割がある可能性がある 。

われわれの体には 13 種類の水チャネルが発現してい興味深いことに、最近 Verkman のグループは、AQP3

る。水チャネルは水を選択的に通す古典的なアクアポリン

ノックアウトマウスに皮膚癌が増殖しにくいことを発見し、（AQP0. 1. 2. 4. 5. 6. 8）と、水以外にもグリセロールや尿グリセリンの補充で増殖するようになることを報告してい素も通す aquaglyceroporin（AQP3, 7, 9, 10）と、さらにはる 。これは AQP3 の発現をへらすことが皮膚癌の治療に水を通す細胞内オルガネラに存在する AQP11, 12 の３つのなると同時に、AQP3 の増加は癌の増殖を促進するというサブグループにわけられている 。

諸刃の剣になる可能性を示している。さらに、グリセリン

1）

皮膚の角質層には水・グリセリンチャネルであるアクア
ポリン 3（AQP3）が多く発現している。AQP3 は角質層の3）の輸送が関与していることから、グリセリンが皮膚癌の増殖を促進する危険性も示唆している。

グリセリンと水の量を調整しており、皮膚の保湿にとってグリセリンは古来ひろく皮膚に直接投与する基剤としても重要な役割をはたしていることが AQP3 ノックアウト

使われているので、その安全性について検証することは重マウスの解析からあきらかになった 。

要である。とくに化粧品は連日長期に使用されるので問題2）

さらに 2005 年に Alan Verkman らによって、血管内皮となる。だだ、これまでグリセリンによる有害事象は長期において AQP1 がないと細胞運動が遅くなって血管新生が的には報告されておらず、今回のノックアウトマウスの知

遅延することが示されて、アクアポリンの新たな役割が注

見が、ヒトにも適用できるかどうかはにわかには判定しが目されるようになった。皮膚や角膜にある AQP3 も、組織

たい。

3）

再生に重要な役割をしていることが示されている 。現在

われわれはこれまで AQP3 をはじめヒト、マウスのアのところ細胞運動にアクアポリンが促進的にかかわっていクアポリンを７つあらたにクローニングしてきた（AQP3,

ると考えられているが、組織の修復が促進されることから

7-12） 。さらに、皮膚の AQP3 についてもビタミン A に

細胞増殖にもかかわっている可能性もある。アクアポリン

よって増加することをあきらかにしてきた 。またケラ-11（AQP-11）のノックアウトマウスでは多発性のう胞腎

チノサイトの腫瘍細胞（keratinocarcinoma）での内因性

1）

5）

AQP3 が、ソルビトールによっても増加することもあきら
The regulation of aquaglyceroporin
AQP3 by lipophilic vitamins in skinkeratinocytes
Kenichi Ishibashi, M.D.
Meiji Pharmaceutical University,
School of Pharmacy, Department of
Pathophysiogy

5）

かにしてきた 。
一方、皮膚の細かい傷のすみやかな修復は、きめの細かい美的肌を保つために必須である。AQP3 によってそれが促進されている可能性があり、AQP3 の発現を調節する物
質を発見することは、将来的に化粧品の開発のシードを提供する。これは、老化による皮膚のダメージからの修復に− 78 −

皮膚ケラチノサイトの水・グリセリンチャネル AQP3（アクアポリン３）の脂溶性ビタミンによる発現調節も関与している可能性もある。さらに、医療の現場においに増加した（1.5 〜 1.8 倍）。0.001%（0.14 mM）グリセローても、圧迫潰瘍（床ずれ、褥瘡）など難治性の傷の治療にルの添加では、コントロールと変わらない発現量であった。

もつながりうる重要な知見を提供すると考えられる。

一方、0.1%（14 mM）グリセロールの添加では、コント

ビタミン A が紫外線から皮膚を保護する機構の一部に、ロールの 0.8 倍に減少し、１%（137 mM）グリセロールのAQP3 の増加による皮膚再生の活性化もありうる。また

添加では、コントロールの 1/10 にさらに減少した。10%

皮膚圧迫潰瘍の治療において、ユーパスタのような高尿（1.37 M）グリセロールの添加では、細胞がはがれてしま

素軟膏が使われて効果をあげているが、この機構の一部っため検討できなかった。以上より、高濃度のグリセローにも AQP3 の誘導がありうる。このような研究によって、

ルは、ケラチノサイトには毒性がある可能性が示唆された。

AQP3 をバイオマーカーとして新薬を開発できる可能性が

ただ、少量のグリセロールで AQP3 の発現が刺激されるが、ある。もっとも、AQP3 を高度に誘導すると皮膚癌が発生

中等量では抑制されるという結果は、中等度濃度のグリセしやすい環境では、皮膚癌の増殖を促進してしまう可能性

ロールには毒性よりもネガティブフィードバックによる制があるので注意が必要である。

御作用がある可能性がある。

そこで、癌細胞ではなく培養正常ヒト皮膚ケラチノサイ

以前、われわれは別の細胞で 50, 100, 200 mM のグリセトを用いて、軟膏薬としてよく用いられ、AQP3 の発現をロールでは、24 時間後の AQP3 蛋白の発現に影響しなか調節する可能性のある、脂溶性ビタミンである、ビタミンったという結果を得ている 。これは浸透圧によると考え

ＥとＤについて検討したので報告する。

られるソルビトール 200 mM で、AQP3 の発現が２倍に増

２．実

5）

加するという結果とは違っており、グリセロールに浸透圧

験とは異なる特異的な細胞作用が存在することを示唆してい文献５に順じて、培養細胞を用いて実験をおこなった。
簡単に述べると、正常ヒト皮膚ケラチノサイト（NHEK）
６）

る。今後、時間経過やタンパク量の発現も含めて検討する必要がある。

（PHK16-0b 細胞） を 12 ウェルプレートに 40000 細胞播き、一方、カルシトリオール（活性型ビタミン D）の添加に

翌日約 60％コンフルエントに増殖したことを確認後、ビ

よる AQP3 の RNA 発現量の変化をみてみると、添加濃度

タミン類あるいはグリセロールをそれぞれ添加して培養に依存して増加し、1×10 M の濃度で 1.5 倍に増加した。

した。PHK16-0b 細胞の培養は、KGM-2 Bullet Kit を用い、さらに、酢酸トコフェロール（ビタミンE）添加（2×10 M）に培地交換は１日おきに行った。細胞の継代および使用時

よっても、AQP3 の発現量の同程度の増加が見られた。このプレートへの播き替えは、HEPES 緩衝液（HEPES 濃度

れに対して、トコフェロールのみでは、添加濃度を変えて30 mmol/L 添加した生理食塩水）で洗浄したのち、トリプ

も AQP3 の RNA 発現量および形態の変化は全く生じなか

シン /EDTA 液（HEPES 緩衝液にトリプシン濃度 0.025%、った。さらに、トコフェロール添加後の培養が 12 時間後、

EDTA 濃度 0.01% 添加）を加え、細胞がフラスコ面から丸

24 時間後でも、共に AQP3 の発現量に変化は認められなみをおびるのを確認後、フラスコ面を軽くたたいてフラ

かった。これは、トコフェロール単体ではバイオアベイラ

スコから剥離させ、トリプシン中和液（HEPES 緩衝液にビリティーに問題がある可能性があるので、今後検討され

FBS10% 添加）を加えて細胞を回収した。

なければならない。

ビタミン類はカルシトリオール（ビタミンD；1×10

-8

-10

-10

〜1×
-4

-8

-10

以上より、正常ヒト皮膚ケラチノサイト PHK16-0b 細胞〜1×10 M）、

において、少量グリセロール、カルシトリオール、酢酸ト〜2×10 M）、

コフェロールの添加により、AQP3mRNA の発現量が増加

グリセロールは 0.001 〜 10％を最終濃度になるよう用いた。

することがあきらかになった。以前我々はケラチノカルチ

各ビタミンあるいはグリセロール添加 12 時間あるいは 24

ノーマ細胞において、ビタミン A 添加による AQP3 の発現時間後、細胞を回収して、トータル RNA を精製（RNeasy

変化を認められなかったが 、今回正常ヒト表皮ケラチノ

Mini Kit, QIAGEN）し、RT-PCR を行い、各ビタミンあるサイト（NHEK）を用いることで、より正常に近い反応を

いはグリセロール添加によるヒト AQP3 の発現変化を検討検討できたのではないかと考えられる。

10 M）、 トコフェロール
（ ビタミンE；1×10
酢酸トコフェロール
（ビタミンE 酢酸塩；2×10

-10

-6

5）

した。コントロールは上記添加ビタミン類なし、あるいは今回もちいた脂溶性ビタミンは皮膚疾患によく用いられ最終濃度 0. 1% エタノールを添加したケラチノサイトを用るものなので、AQP3 発現調節にどのように関与するかにいた。

興味がもたれる。以前のわれわれの検討でも 、脂溶性物

5）

質の溶解に用いる DMSO だけで、AQP3 の発現が増加す

３．結果と考察ることを認めており、vehicle の影響には細心の注意を払

0.01%（1.4 mM）グリセロールの添加による 12 時間と 24

う必要がある。今回は、エタノールを vehicle にもちいて時間後の AQP3 の発現量は、コントロールに比較し明らかおり、エタノールそのものだけでは、AQP3 の発現に影響− 79 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010をしないのを確認しているが、実際の化粧品などでは混合（参考文献）

物が多いので、それらの影響も考慮する必要がある。

１）Ishibashi K, Hara S, and Kondo S.: Aquaporin water
channels in mammals.

今後、これらの培養細胞での知見が、皮膚組織においClin Exp Nephrol.13, 107-117,

2009.

ても認められるかを検証していく必要がある。さらには、
AQP3 の発現を定量化するより簡便な方法を開発すること

２）Hara-Chikuma M, and Verkman AS. : Aquaporin-3

で、もっと多くの化学物質を効率よくスクリーニングする

functions as a glycerol transporter in mammalian skin.

ことが可能になる。自動化も含めたスクリーニング系の開Biol Cell. 97, 479–486, 2005.

発は、より効果的で安全な化粧品の開発にもつなげられる可能性があるので重要である。

３）Hara-Chikuma M, and Verkman AS. : Prevention ofskin tumorigenesis and impairment of epidermal cell

3）

proliferation by targeted aquaporin-3 gene disruption.

一方、マウスでみられたような 、皮膚癌をグリセリン

Mol Cell Biol. 28, 326–332, 2008.

が促進する可能性があるので、ケラトカルチノーマ細胞における AQP3 の発現制御が、正常皮膚ケラチノサイトと同

４）Morishita Y, Matsuzaki T, Hara-Chikuma M, et al, :様であるのかどうかも検討していく必要がある。ケラトカ

Disruption of aquaporin-11 produces polycystic kidneys

ルチノーマ細胞の AQP3 を減少させるが、正常皮膚ケラチ

following vacuolization of the proximal tubule. Mol Cell

ノサイトの AQP3 の発現を増加させる物質を同定することBiol. 25, 7770–7779, 2005.

が、より安全な化粧品の開発には望まれると考えられるか

５）Nakakoshi M, Morishita Y, Usui K, et al,: Identificationof a keratinocarcinoma cell line expressing AQP3. Biology

らである。

of the Cell. 98, 95-100, 2006.
謝辞６）Ishibashi Y, Sugita T, Nishikawa A.: Cytokine secretion

本研究に対して、重ねてご支援いただいたコスメトロジ

profile of human keratinocytes exposed to Malassezia
yeasts. FEMS Immunol Med Microbiol. 48, 400-409, 2006.

ー財団に感謝いたします。

− 80 −

表皮ケラチノサイトの角化プロセスにおけるPLD/mTORシグナリングの関与

財団法人岐阜県研究開発財団岐阜県国際バイオ研究所

大口 健司
Calcium has been known to be a major factor for triggering the differentiation of keratinocytes. In the current study,
the involvement of mammalian target of rapamycin (mTOR) in the regulation of calcium-induced diffrentiation was
examined using normal human epidermal keratinocytes (NHEK). Treatment of NHEK with calcium was found to cause
marked decreases in p70 ribosomal S6 kinasae (p70S6K) phosphorylation level. The activity of mTOR is essential forphosphorylation of p70S6K and the treatment of NHEK with rapamycin, a potent inhibitor of mTOR effectively potentiatedcalcium-induced differentiation. Moreover, treatment of NHEK with rapamycin caused marked decreases in protein level ofcyclin D1, a cell cycle regulator. These results indicate that mTOR would be involved in the calcium-induced differentiation
by modulating the expression of cyclin D1 in NHEK.

１．緒

グナリングの機能が注目されている。

言

これまでに我々は、種々の細胞機能制御における PLD/細胞は外来刺激を受けると固有の情報変換酵素が活性

mTOR シグナリングの関与について検証してきた。メラ化され、様々なシグナル伝達系を介して細胞機能が発揮

ニン細胞がもつメラニン生合成機能（メラノジェネシス）される。情報変換の引き金として、ホスホリパーゼに代における PLD の関わりについて、マウス B16 メラノーマ

表される脂質変換酵素の役割が重要であり、膜脂質の大細胞系を用いて解析した結果、PLD アイソザイムのひと部分を占めるホスファチジルコリンは、ホスホリパーゼ Dつである PLD1 の発現量および酵素活性がメラニン生成量（PLD）により分解されホスファチジン酸（PA）に変換さと逆相関の関係にあることを突き止め、PLD1 はメラノジれる。PA 自身、あるいはその変換体であるリゾ PA やジ

ェネシスのネガティブレギュレーターとして作働すること

アシルグリセロールは、種々のシグナル伝達分子の活性制を見出した 。さらに、PLD1 の作用メカニズムについて御に関わる重要なセカンドメッセンジャーとして機能する。

解析を行った結果、PLD1 は mTOR を介してチロシナーゼ

最近、mTOR（mammalian target of rapamycin）と呼ば（メラニン生合成過程の律速酵素）の発現を mRNA レベル

れるタンパク質が、PLD の産生する PA によって直接的にから抑制することを明らかにした 。

１）

３）

４）

活性化されることが報告された 。mTOR は、マクロラ

メラノジェネシスのみならず、PLD1 が真皮線維芽細胞

イド系有機化合物ラパマイシン（rapamycin）の細胞内標のもつコラーゲン産生機能の制御分子としても作用するこ的分子として同定されたセリン・スレオニンキナーゼであとを見出している 。ヒト真皮線維芽細胞の PLD1 遺伝子り、ターゲット分子の p70S6K（p70 S6 kinase）ならびにをノックダウンすると、mTOR 活性の低下に伴い細胞外4E-BP1（eIF4E-binding protein

へのコラーゲン分泌が抑制されることが明らかとなった。

1）を介して種々の細胞機

５）

能制御、特に細胞の分裂や成長（サイズ）における調節因PLD1 ノックダウンによるコラーゲン産生の減弱は、細胞２）子として重要な役割を果たしている 。mTOR は、ある内のプロコラーゲン発現量の低下と相関しており、PLD1

種のアミノ酸や PI3K/Akt 経路によって活性が調節されるが mTOR を介してコラーゲン合成を促進的に制御するとことが知られていたが、PA が mTOR の FRB ドメインにいう新知見を得ている 。このように、PLD/mTOR シグ

結合することによっても活性化されることが明らかにされナリングは、各々の皮膚細胞がもつ重要機能の制御に関与ている 。この作用は PA 以外のリン脂質ではみられないすることが明らかになってきた。

１）５）

ことから、mTOR の活性化はリン脂質の中でも PA 特有の一方、皮膚の主要細胞であるケラチノサイト ( 表皮角化作用であり、新しいシグナル経路としての PLD/mTOR シ

細胞 ) は、活発に増殖と分化を繰り返すユニークな特色をもつ。細胞分裂は基底層でのみ行われ、分裂によって生じた新しい細胞は上層へ移動しながら幾つかのステージを経

Involvement of PLD/mTOR signaling
in differentiation of human epidermal
keratinocytesて分化し、最終的に apoptotic な角質細胞となる。すなわ
ちケラチノサイトの分化は、増殖→分化→終末分化（角化）という一連のプロセスをみることができる。ケラチノサイ

Kenji Ohguchi

トの分化を制御するシグナル伝達系に PLD が関与する可Gifu International Institute of Biotechnology

能性は、Bollag らにより報告されているが− 81 −

6, 7）

、その意義

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

や分子機構は十分に明らかにされていない。また、ケラチの発現増加がみられた（Fig. １）。

ノサイト分化シグナリングにおける mTOR の関与につい

次に、カルシウムによる分化誘導後の mTOR 活性のては知られていないのが現状である。そこで、ケラチノサ

変動について、mTOR の代表的なターゲット分子である

イトの分化制御における PLD/mTOR の関わりについて解p70S6K のリン酸化レベルを指標に調べた。リン酸化タン

析することを目的とし、本研究ではカルシウムによる角化

パク質に特異的な抗体（２種類）を用いたウエスタンブロ

誘導における mTOR の関与について検証した。

ット法により、分化誘導後のリン酸化 p70S6K の経時変化２．実を解析した。Fig. ２に示すように、２種類の抗体により検験

出した p70S6K のリン酸化レベルは、分化誘導直後から低細胞は、正常ヒト表皮ケラチノサイト（NHEK、
クラボウ）

下が見られた。両者の変化には若干のタイムラグがあり、を用いた。ケラチノサイト分化の制御機構に mTOR が関Thr389 の 脱 リ ン 酸 化 は 分 化 誘 導 ５ 分 後 か ら、Thr421/

わっているか否かについては、mTOR の直下に位置する

Ser424 の脱リン酸化は分化誘導 10 分後から起こることがターゲット分子である p70S6K のリン酸化状態を指標に、分かった。また、両者の脱リン酸化状態は一過性であるが、カルシウムスイッチ（1.5mM カルシウム添加）による分

Thr389 においては 60 分後には定常レベルに戻るのに対し、化誘導系にて検証した。P70S6K のリン酸化は、Phospho-

Thr421/Ser424 はリン酸化レベルの低い状態が 24 時間後

p70S6K（Thr389）Antibody おまで続いた。

よび Phospho-p70S6K

Extracellular signal-regulated kinase（ERK）もカルシ（Thr421/Ser424）Antibody（Cell signaling）を 用 い た ウウムによる分化誘導に伴いリン酸化レベルが低下すること

エスタンブロット法により検出した。

が報告されている。Fig. ３に示すように、p70S6K（Thr389）

３．結果および考察とほぼ同様の挙動を示したが、脱リン酸化の回復時間や程3. 1. カルシウムによるケラチノサイト分 化 誘 導と
p70S6K のリン酸化レベルの変化

度に相違がみられたことから、mTOR 経路との連係（相互のクロストーク作動機構）解析が今後の課題である。

細胞外カルシウムは、ケラチノサイトの分化調節に重要に向かって高くなるカルシウムの濃度勾配が存在し、角化

3. 2. カルシウムによるケラチノサイト分化誘導に対する
mTOR 阻害の影響

調節因子の重要因子と考えられている。NHEK の細胞外

ケラチノサイト分化の制御機構における mTOR の関与

カルシウム濃度を上昇させると、角化が誘導され分化マーとその意義を明確にするために、カルシウムによる分化誘カーとして知られている involcurin（エンベロープ蛋白質）

導に対するラパマイシン（mTOR の選択的阻害剤）の影響な役割を演じている。実際に、表皮では基底細胞から上層

Fig.1 Induction of differentiation marker
by calcium in normal human epidermal
keratinocytes.

Fig.2 Changes in phosphorylation levels of p70S6K during calciuminduced differentiation in normal human epidermal keratinocytes.

Fig.3 Changes in phosphorylation levels of ERK1/2 during calciuminduced differentiation in normal human epidermal keratinocytes.

− 82 −

表皮ケラチノサイトの角化プロセスにおける PLD/mTOR シグナリングの関与を検証した。ラパマイシンの添加により involcurin の発現（抗アポトーシス）や細胞成長（サイズ）の制御などに関与に変化はみられなかったが、ラパマイシン存在下にて高カすることが報告されているが、細胞分化への関わりはあま

ルシウム処理した細胞では、involcurin 発現が増強しており知られていない。本研究では、mTOR 経路を中心としり、mTOR を阻害することで分化誘導がより促進されるたシグナリングの視点からケラチノサイト特有の分化プことが示された（Fig. ４）。すなわち、mTOR はカルシウ

ロセスである角化の制御機構について解析した。その結ムによる分化誘導シグナリングにおいてネガティブレギュ

果、分化誘導後の cyclin D1 のダウンレギュレーションにレーターとして作動している可能性が示唆された。

mTOR が関わっている可能性が示唆された。分化誘導初期にみられる p70S6K の脱リン酸化機構については不明で

3. 3. カルシウムによるケラチノサイト分化誘導に伴う
cyclin D1 発現レベルの変化あるが、mTOR 活性の阻害（上流シグナルの遮断）あるい

Cyclin D1 は、細胞周期の G1 期から S 期への進行因子でターゼ）の活性化が考えられることから、mTOR に対するあることから、その発現量を減少させることで、増殖からsiRNA を用いた検証などから明らかにしていきたい。ケ

分化へのスイッチ切り替えに寄与する重要な因子として知ラチノサイトの分化異常は、種々の角化異常症のみならずられている。NHEK におけるカルシウム分化誘導に伴う皮膚の自然老化現象としても頻繁に観察される。これらのcyclin D1 発現の変化を調べたところ、p70S6K の脱リン酸発症に、これらのシグナリング異常が関与する可能性もあ化がみられた直後から、顕著なダウンレギュレーションがり、今後の検討課題としたい。

は p70S6K をターゲットとする脱リン酸化酵素（ホスファ

みられた（Fig. ５）。
謝

3. 4. Cyclin D1 の ダウンレギュレーションに おける
mTOR の関与

辞本研究にご助成頂きました財団法人コスメトロジー研究振興財団に心よりお礼申し上げます。

ケラチノサイト分化誘導に伴う cyclin D1 のダウンレギュレーション機構における mTOR の関与を調べるために、 （引用文献）
cyclin D1 のタンパク質発現に対するラパマイシンの影響

１）Fang Y, Vilella-Bach M, Bachmann R. et al.

を検証した。その結果、ラパマイシンの添加により cyclin

Phosphatidic acid-mediated mitogenic activation of

D1 の発現が減少した（Fig. ６）。すなわち、カルシウムに

mTOR signaling. Science, 294, 1942-1945 (2001)

よる分化誘導シグナリングにおける mTOR のネガティブ

２）Fingar DC, Blenis J. Target of rapamycin (TOR): an

レギュレーターとしての機能は、cyclin D1 発現の調節に

integrator of nutrient and growth factor signals and

起因する可能性が示唆された。

coordinator of cell growth and cell cycle progression.

４．総

Oncogene, 23, 3151-3171 (2004)

括３）Ohguchi K, Banno Y, Akao Y. et al. Involvement

PLD/mTOR シグナリングは、新しい細胞内シグナル伝達経路として注目されている。これまでに、サバイバルof phospholipase D1 in melanogenesis of mouse B16
melanoma cells. J Biol Chem, 279, 3408-3412 (2004)

Fig. 4 Effects of rapamycin on calcium-induced differentiation in normal
human epidermal keratinocytes.

Fig. 5 Changes in expression of cyclin D1 during calciuminduced differentiation in normal human epidermal
keratinocytes.

− 83 −

Fig. 6 Effects of rapamycin on cyclin
D1 expression in normal humanepidermal keratinocytes.

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

４）Ohguchi K, Banno Y, Nakagawa Y. et al. The

and -2 phosphorylation (activation) are required fornegative regulation of melanogenesis by phospholipasemaximal phorbol ester-induced transglutaminase

D1 through mTOR/p70 S6 kinase 1 signaling in mouse

activity, a marker of keratinocyte differentiation. J

B16 melanoma cells. J Cell Physiol, 205, 444-451 (2005)

Pharmacol Exp Ther, 312, 1223-1231 (2005)５）Ohguchi K, Banno Y, Akao Y. et al. Involvement７）Bollag WB, Xie D, Zheng X. et al. A potential roleof phospholipase D1 in collagen type I production

for the phospholipase D2-aquaporin-3 signaling moduleof human dermal fibroblasts. Biochem Biophys Res

in early keratinocyte differentiation: production of a

Commun, 348, 398-402 (2006)

phosphatidylglycerol signaling lipid. J Invest Dermatol,

６）Bollag WB, Zhong X, Dodd ME. et al. Phospholipase
D signaling and extracellular signal-regulated kinase-1− 84 −

127, 2823-2831 (2007)

アジア人の化粧に見られる身体観・身体表象とその変容についての研究─身体装飾のアジア的伝統と〈化粧のグローバル化〉の狭間で─
東北大学大学院国際文化研究科

山 下

博 司

Asia, or more specifically so-called "Monsoon-Asia" in celebrated Tetsuro Watsuji's terminology, is undergoing rapid
globalization in various aspects of human life including fashion and cosmetics. However, Asia still retains the cosmetologicaltradition deep-rooted in its history and culture with the span of thousands of years. In this study, we take up the indigenous
way of cosmetology and its cultural significance as well as the dynamics of transformation in the present era of extensive
globalization.
In the present paper, the focus will be placed on the role of eyes and their accentuation employing native cosmetological
techniques. We will point out the magical significance of those traditions widely observed in Asia, from the viewpoint ofritualism and native religious institutions.
Finally, we will sum up the discussion and properly locate it in the broad context of anticipated cosmetological research
project with encompassing perspectives.

１．緒とは、脱宗教化した現代の化粧のあり方やトレンドに対し言て多くの刺激や示唆を与えることになるであろう。

本研究課題は化粧の文化論、あるいは身体装飾の思想研

２．考究を指向するもので、文明史や文化史の研究においてきわ
めて斬新な研究分野を構成する。日本を包含するアジア地察

2. 1 「アジア」の概念と領域

域を中心的な考察の対象とするが、アジアの諸文明におけ

本稿は、如上の立脚点に立ち、アジア地域における伝統

る化粧の文化史的・精神史的意義の究明を基礎にして、そ的身体装飾、とくに「化粧」という人間生活の日常的な行の方法論と成果をアフリカやヨーロッパといった旧大陸の為について、その特徴と意味とを比較文化論的および文化

文明、さらにはアメリカやオーストラリアなど新大陸の文史学的視座から示唆しようとするものである。この場合の明にも及ぼし、体系的な「化粧の文化学」を構築すること「アジア」とは、日本を含む東アジア、東南アジア、およを企図している。

び南アジアを第一義的に指すものとする。

「コスメトロジー」が、即物的な意味内容としての狭義

これらの地域を一括りに論じるのは、まず気候風土的にの「美容術」ではなく、化粧に関する総合的・体系的な学近似する条件下にあるという事実に基づく。この地域を和問をさす用語と捉えた場合、理系・文系といった既成の学

辻哲郎の『風土』の所論に倣い「モンスーン・アジア」と問領域の枠組を超えた広がりと奥行きをもって然るべきでも規定し得る所以である。さらに、仏教やヒンドゥー教、ある。素材や物性についての研究、生体作用や安全性につ儒教や道教など、この地域内に起源を有する共通の宗教的いての研究と並んで、化粧を施す主体の側の文化的・社会影響が浸潤していることも、同地域を一括して論じる根拠的な研究も相俟って、体系的でホーリスティック（全体論となる。言語的にはきわめて多様かつ多元的な様相を呈す的）なコスメトロジーが成立するものと考えられる。

るものの、自然的・文化的・歴史的に緩やかな紐帯で結ば本研究は、アジア地域の「化粧における歴史的交流」のれてきた地域と認め得るのである。
（さりとて、このこと足跡をたどり、その背後にある思想や精神をていねいに読を以て地域内の多様性をことさら無視しようとするものでみとる作業を通じて、きわめて日常的な「化粧」という行はない。大局的な議論をまず踏まえたのちに、細部にも及為に潜む文化的・社会的意味を追究するコスメトロジー研

ぼすという順序をとりたい。）

究の一環として位置づけられる。

現代社会においては、情報の越境や広範なグローバリゼ

アジアの化粧の背景に潜む思想や文化伝統を理解するこーションによって、世界的規模で美意識や美的観念に均質化・平準化の現象が進行していることは否定できない。無論アジアとてこの大きな流れの中で例外たり得ない。アジThe Cosmetological Traditoin in Asiaand its Transformation under the Ageof Globalization

ア地域においても、化粧法を含む固有の伝統的身体装飾の方法が今もって盤石であるとは言い難い現状にある。本稿では、グローバル化に起因する支配的トレンドを現実としHiroshi Yamashitaて踏まえつつも、なおも生きるアジア特有の傾向に光をあTohoku University

てることで、アジア人に特徴的な身体観や宇宙観に迫りた− 86 −

アジア人の化粧に見られる身体観・身体表象とその変容についての研究 −身体装飾のアジア的伝統と〈化粧のグローバル化〉の狭間で−女神に関わる呪術性・宗教性も影を落としている。

いと考える。

いわば女神に自らを似せることによって自身が女神と一2. 2 「目の強調」が示唆するもの如となり、合体した女神のもつパワーを己のものとして神アジアの化粧法の特色をなすものの代表例として、頬の加護を得るのである。化粧によって変身し、成り代わっ紅を塗ったり、いわゆるアイライナーに相当するものをた他者（ここでは超自然的存在）の呪力を得るという発想使った「目の強調」を指摘することができる。
（ちなみに、である。身体装飾によって「神的なるもの」と同一化を果

アイライナー（eyeliner）は純然たる英語の単語であるが、たすというプロセスにおいて、化粧は仮面とも軌を一にしアイライン（eyeline）のほうは和製英語である。）しかも、ている。さらには、超自然的存在や神秘的な印を彫った入

これは西アジアも含めた広義のアジア地域に共通する要素

れ墨（タトゥー）とも、その発想を同じくしている。卑近でもある。現代のアジア女性の間では、チーク、ファンデな例を挙げれば、プロレスラーがマスクをつけてリングにーション、ブルーのアイシャドウなどが一般化しているが、上がるのも、そのマスクにデザインされた存在（猛獣や悪これらは西洋の化粧法の影響で近年になって定着したもの魔など）の威力を得んがためである。これらの現象の背後と考えるのが妥当である。本来は地域自生の植物成分や鉱にあるのは、アニミズム、シャーマニズム、トーテミズム

物からの天然染料を効果的に用いて、目、唇、爪などを赤などの原初的かつ通文化的な宗教観念である。
この文脈で、化粧と神聖舞踊との結びつきも指摘され得その他に染色・着色していたのである。
「目の強調」は、アジア人の化粧にとって半ば本質的なる。世界各国の舞踊に詳しい芸能人類学者の宮尾慈良によ意味をもっている。かなりの程度画一化された「目の強調」

れば、南アジア・東南アジアでは、バラタナーティヤムにの技法（化粧術）によって、結果的に類似する印象を備えせよバリの踊りにせよ、踊り子は化粧を施す前に神に祈りた顔貌を得ることになるが、そのことは化粧の目的や効果を捧げるという。このことは、神聖舞踊が神への奉納といを減じたり損なったりするものではない。アジアの化粧はう意味をもつことを表しているが、同時に、化粧のプロセ

西洋のそれのような「個性」を標榜しない。化粧の「仕様」

スを経ながら踊り手が踊られる神へと変身していく、一体が同じか統一されており、化粧の結果として個性的な美し化を遂げていくことも示唆している。
「神の器」となったさが引き立つというより、むしろ類似した顔つきになるの踊り子は、あたかも神が憑依してでもいるかのように、あである。一方現代の日本に目を転じれば、わざとらしさをるいは神そのもののように踊るのである。日本の巫女がや排除してその人の美しさを際だたせるようなメイクが理想

はり踊りを踊ることも想起される。アジアにおいて化粧がとされている。技術力があってのものだが、個人の肌の色

単なる世俗的な行為ではないことの証である。

や顔かたちによってその人の個性が美しく際だつような化

化粧により変身するがゆえにナチュラルメークは必要と粧が求められるのである。西洋の場合もほぼ同様と言ってしない。その場合の化粧に要求されるのは、むしろ個性のよい。というより、日本をはじめとする現代社会の化粧に滅却であり、規範性の優越である。
「個性」はアジアの化関わる観念が西洋の影響を濃厚に被っているのである。

粧にとって本質的な意味をもたない。一切を統べる、「個」

ところがアジア古来の伝統に発する化粧には、「個性のを超越した存在になる以上、個性は問題にならないからで発現」は必ずしも期待されない。様式化・規範化が顕著なある。化粧は人間が神あるいは神秘的存在になるための操のである。あたかも、理想とする、あるいは規範となる固作であり、その意味でまさしく「化ける」のである。そこ

定的な顔貌の心象があって、それに似せるために敢えて化にあるのは「没個性化」であって、ナチュラルメーク云々

粧を施しているようにすら見える。理想とする相好の概念の余地は存在しない。

が共有されている、と言い換えてもよい。

「没個性」を指向する化粧の伝統は、神が憑依したり、
聖なるものと一体になったり、最高実在と一つになるとい2. 3

化粧の宗教性う、西洋や西アジアにおける神と人との関係からは導き得

それでは「固定的な顔貌の心象」とは一体いかなるもの
なのか、具体例を掲げて論じよう。アジア、とりわけヒン

ないアジアに独特な宗教観念の為せる技ということができる。

ドゥー化した南アジアや東南アジアで、女性の化粧の祖型としてあるのは超自然的存在、より具体的には「女神」の

2. 4

化粧の呪術性イメージである。すなわち、化粧を施すことで女神と見ま

化粧には如上のような宗教性に加え、呪術性も指摘されがう姿、あるいは少なくとも女神に似た姿になるのである。

なければならない。キリスト教徒やイスラーム教徒などはインド女性は、女神のイメージに似せた化粧によって、個別として、インド女性の化粧は眉間にクンクマという赤い性がない同じ顔になる。そこには女神が女性の美しさの理

斑点を施すことで完成する。吉祥なる印とされるが、男性

想あるいは典型になっているという事情が伏在する一方、もこの斑点を付けることが見られる。特に朝の沐浴のあと、− 87 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

身支度を調えてから、神に祈ってクンクマを付けるのであ

このように目には不可思議な力が宿っているとされ、未る。クンクマの起源について定説はないが、犠牲獣の血にだに人々の信じるところとなっている。南インドでは赤ん由来するとする見かたが有力である。犠牲になった獣の呪坊の両眼にマイと呼ばれる黒い縁取りを施し、目を際立た力、あるいは犠牲を伴う宗教儀礼を経て更新された神のパせるが、そこにも呪術的な観念が働いていることは想像にワーを我がものとするのである。ここにあるのも化粧の宗難くない。

教性・呪術性である。このクンクマに似た習俗は、ヒンド

目に関わる諸問題は、アジア人の化粧が宗教性と顕著なゥー化したアジア（インドやバリなど）のほか、
古代の日本、結びつきを示す一例として提示したに過ぎない。このよう（現代を含む）韓国やタイなどにも観察される。おそらくな例は枚挙にいとまがない。

インドからの影響が及んだものと考えられ、本来はそのよ

３．総うな宗教的観念を伴って採り入れられたものであろう。
「目の強調」という点からすれば、
クンクマは「第三の目」

3. 1

でもある。シヴァ神が第三の目から発するパワーによって

括

結びと展望

アジア人の「化粧」は単なる化粧ではない。そこには、邪悪な存在を焼き尽くすように、人間に与えられた第三の美的観念だけでなく、人々の日常の営為の背後にある伝統目としてのクンクマは、邪気を祓い、吉祥をもたらすので的な神観念、身体観、世界観が色濃く反映されている。

ある。

アジアの化粧の伝統について、本報告では諸々の理由にこのような発想は、化粧とはある意味で矛盾する行為−より一つのものとして扱ったが、均質性が貫徹しているわ

身体を敢えて汚すこと−をも説明する。インドでは赤子のけではなく、細部に目を凝らせば歴史文化的に大きく二頬に煤を使って大きな斑点をつける。見目麗しい赤ん坊はつの系統に分かれると言ってよい。一つは南アジア（イン悪魔の関心を引き、命を奪われる。悪魔の気を引かないよド文化圏）であり、一つは東アジア（中国文化圏）である。

う、敢えて頬に煤を塗って醜くするのである。古代日本に

今後は、東南アジアへの伝播など、民族の違いを超えて広おいても、子供に敢えて汚いイメージをもつ名前をつけ、範な影響を与えた南アジア系の化粧の伝統を手始めに、そ鬼を遠ざけたというが、やはり魔除けの発想に基づく。こ

こに垣間見られるアジア的精神世界を、さまざまな方面（哲のような、「化粧」とは真っ向から対立するように見える

学思想、生命観、身体観、芸術理論など）からあぶり出し、＜顔を汚す＞という行為が、「呪術性」という意味で化粧その意義を多面的に究明していきたいと考えている。

と軌を一にしているのである。

考察の具体的対象としては、南アジアの伝統的芸術理論

以上のことからも、アジアにおける化粧ないし身体装飾（ラサ論、美学理論、ナーティヤ・シャーストラなど）、芸の顕示的性格は明らかである。変身しなくてはいけない以能パフォーマンス（カタカリ、バラタナーティヤム、オリ

上、あるいはわかってもらわなくてはいけない以上、化粧ッスィー、カタックなど）、伝統医療と栄養学（アーユル

した事実が目立たなくてはらないのである。化粧を施したヴェーダ、スィッダマルットヴァムなど）、インド古典哲

事実が隠匿される「ナチュラルメイク」ではなく、作為性学理論（シャッダルシャナや仏教・ジャイナ教など）、東や虚構性（虚偽性と言い換え得るかもしれない）が明らか

南アジア（インドシナ、マレー半島、インドネシア）へのであって構わないし、むしろ明らかである必要があるので伝播の様相などが考えられよう。

ある。アジア人にとって化粧による虚構性が露わになるこ

これらの個別的考察から、南アジアの生活文化を特徴づと、顕示的であることに抵抗を覚えない背景には、以上のける基本色調（白・黒・黄・赤・青）の由来を探り、南アようなアジアの化粧の根本にある観念が作用していると考ジアの化粧とその色調の背後にある世界観や身体観を明らえることができる。

かにしたい。

2. 5 「目」のもつ神秘力

移民等を通じて世界各地に拡散している。個々のディアス「目の強調」の話題に戻ろう。上述の文脈から考えた場

ポラにとどまらず、イギリスなどホスト社会の服飾文化に合、目のもつ呪術性の問題に突き当たる。目は感官であるも影響を与えつつある。

南アジアの化粧の伝統は、伝統的ファッションとともににとどまらず、神秘的なパワーに裏打ちされた器官でもある。しかも両義的な性格（ambivalence）を具えている。

3. 2

その視線は、人を加護する力を有する一方で、人に不幸を「化粧」についての通文化的な研究は、これまでほとん

招来することもできる。後者の場合が邪視（evil eye）であ

ど為されてこなかった。個々の国民ないし民族集団についる。多くの視線にさらされた時には、邪視を祓う儀礼が施ての個別的な研究成果は散見されるものの、通文化的な視される。筆者も、南インドの部族社会で祭りに参加した際、点を採り入れつつそれらを総合し、精神文化との関わりを入念にこの邪視の祓いを受けた記憶がある。

も考慮しながら体系的に整えられた研究は事実上皆無に− 88 −

おわりにアジア人の化粧に見られる身体観・身体表象とその変容についての研究 −身体装飾のアジア的伝統と〈化粧のグローバル化〉の狭間で−等しい。その重要性と研究の潜在的可能性にもかかわらず、 （参考文献）
１）宮尾慈良『比較芸能論』彩流社、東京、2006．

文化研究の中で等閑視され続けてきたのが現状である。
かたや、本報告で特に取り上げなかったが、当該課題の２）宮尾慈良『舞踊の民族誌』彩流社、東京、2007．

中心的なテーマとも関連する「色彩」ないし「彩色」につ

３）山下博司「南アジア世界における＜衣＞の意味とそのいても、事情は概ね同様である。イェール大学出版部など

変容−経済開放下の変化をふまえて−」『第 9 期ファッ欧米の著名な大学出版局からアジア文化における「色」をション研究助成事業成果報告書』、日本ファッション協

扱った写真集が刊行されてはいるが、大学からの出版物で会、東京、2003．

あるにもかかわらず、適切な学問的解説や客観的分析を欠いており、折角の美しいカラー写真を盛った出版物も存在

４）山下博司・橋本泰元・宮本久義『ヒンドゥー教の事典』
東京堂出版、東京、2005．
５）山下博司『ヒンドゥー教−インドという＜謎＞−』講

意義が半減している。
こうした現象の背景にあるのは、物質文化や大衆文化に談社、東京、2004．

対する学問的関心および学問的理解の相対的稀薄さである。

６）山下博司『ヨーガの思想』講談社、東京、2009．

たとえ意識はしていないにせよ、人間の「おもて」に顕れ

７）山下博司「ニールギリの邑から−バダガ族の火渡りと出た様相は、その人間の内面をも表出していて然るべきで輪舞の祭」『コッラニ』第 13 号、コッラニ編集部、東京、あり、またそうであるに相違ない。哲学や思想を哲学書や1988．

思想書に拠って考察するのは至極当然のこととしても、化８）Yamashita, Hiroshi,“The Forms and Functions of

粧や服飾などの表現様式の中に内面世界の伝統を見出そう

the Aiyanar Temple Complex: A Preliminary Study onとするのも、劣らず正当な精神文化研究たり得るはずであ

the Cult of the Male Godlings in Rural Tamil Nadu”,

る。

Y.Ikari & Y.Nagano (eds.), From Vedic Altar to Village

本研究は、このような既成の学問的営為の限界を踏まえ、

Shrine: Towards an Interface between Indology andかつ虚心な反省にも立ちながら、化粧や服飾等の物質文化

Anthropology (Senri Ethnological Studies 36), Nationalの形態の中にその地域・文化圏の精神の営みの反映を探る

Museum of Ethnology, Osaka, 1993.

糸口を見出す試みであり、今後構築されるべき体系的研究の枢要な一部を構成するものである。

− 89 −

香りが記憶や情動と結びつく際の脳内神経機構に関する研究

産業技術総合研究所バイオメディカル研究部門

梶 原

利 一

Olfactory information from the piriform cortex (PC) is relayed to the amygdala and the hippocampus via two parallel
pathways. One of which is via the amygdaloid cortex (AC) and the other is via the entorhinal cortex (EC). Since theseolfactory cortices are located in ventral part of the brain, it is difficult to analyze the neural propagation pattern under invivo conditions. For studying these olfactory cortices, the use of the isolated whole brain in vitro preparation is one of theideal methods. By imaging voltage-sensitive dye signals in the isolated whole brain, we can monitor the spread of neuralactivity. In fact, physiological connections among the olfactory cortices (PC, EC, and AC) were successfully investigated in
our laboratory. In the more recent study, we suggested that the AC and EC represent functionally coupled structures in theolfactory stream of information (Kajiwara et al. Eur J Neurosci 2007). However, stimulus frequency dependency, plasticity,and other neural network properties of the olfactory system are still not well understood. In the present study, we stimulated
olfactory nerves repetitively at theta frequency (10Hz), and investigated the change of the spatio-temporal pattern of evokedneural activities in the olfactory cortices. And it was found that the neural activities propagated from the EC to the AC wereenhanced under the influence of the repetitive stimulation to the olfactory nerves.

１．緒

行う事が可能になる

言

1- 3）

．これまでに我々は，この実験系

で嗅索を電気刺激した際の神経活動伝播パターンを解析し，ある香りを入力として受けた時，我々は無意識のうちに情動系（扁桃体）システムの入り口にあたる扁桃体皮質が，過去の記憶と参照し，入力された香りを認識する．多くの記憶系（海馬）システムの一部である嗅内皮質に先行して場合，快・不快のような気持ちさえも抱く．これはどのよ

活性化される事を示すと同時に，並列関係にあると思われうな神経機構によるものなのであろうか？これまでに得らたこれら扁桃体皮質と嗅内皮質の間には，実は機能リンク

れている嗅覚情報処理に関する知見を総合すると，嗅球かを可能にする神経経路が存在し，この経路が記憶と情動のらの出力信号は，梨状皮質－嗅内皮質を介して海馬へ入情報統合機能に関わっている可能性を示唆している ．本

力する経路（海馬システム）では「認識」に関する情報が，研究では，これまで行ってきた実験を発展させ，嗅索への３）梨状皮質－扁桃体周囲皮質を介して扁桃核に入力する経路

刺激パターンを変化させた時の神経応答パターンを検討す（扁桃体システム）では「情動」に関する情報が，それぞると同時に，イメージングでは捉えられない脳深部の現象

れ階層的な段階を経て並列に処理されていると考えられる．

を解析する為の多点神経応答計測装置の開発を試みた．

本研究では，これら神経経路の動作機構を詳細に調べる事

２．実を目的とした．
視覚や聴覚などにみられる感覚皮質と異なり，嗅覚系皮

2. 1.

験

単離脳標本

質は脳の腹側部に位置している為，in vivo での神経活動

実験には Hartley 系モルモット（150 － 250g）を使用し計測が容易ではない．そこで本研究ではモルモット単離脳標本を作製した．まずペントバルビタール（60 mg/kg）の標本の利用により，この問題を克服した．単離脳標本で腹腔投与後，心臓より氷冷した実験液を灌流した．そしは，摘出した全脳は血管系を介して実験液が常に灌流されて頭部が十分に冷却された後，丁寧に脳を取り出し，実ている為，３次元的な神経回路構造とその生理活性が維持

体顕微鏡下にセットした測定用チェンバーに移した．こされている．更に，嗅覚系皮質が頭蓋骨無しで露出されての時点でのチェンバー内の灌流液の温度は 15℃に維持しいる為，電極アクセスが容易になるだけでなく，膜電位感た．次に，椎骨動脈よりカニューレを刺入し，対側の椎骨受性色素で標本を染色すれば，神経活動のイメージングも動脈，内頚動脈，下垂体動脈をシルク糸で縛った後，椎骨動脈から毎分６ml の速度で実験液の灌流を開始した．そして 90 分以上かけてゆっくりと灌流液の温度を 30℃まで

How does the olfactory information input
to the hippocampal and amygdaloid
network?

上昇させた後，測定を開始した．液温調節は，チェンバー
下にセットしたペルチェ素子の制御により行った．尚，実験液として以下の組成の，低分子デキストラン入り人工脳

Riichi Kajiwara

脊髄液を使用した．（in mM）NaCl, 126；KCl, 3；KH2PO4,

Biomed. Res. Inst., AIST

1 . 2；MgSO4, 1.3；CaCl2, 2.4；NaHCO3, 26；glucose, 15；− 90 −

香りが記憶や情動と結びつく際の脳内神経機構に関する研究

HEPES, 2.1；and ３％ dextran（M.W. 70 000）
，saturated

微鏡を使用したが，この顕微鏡では，第一及び第二対物レ

with 95％ O / ５％ CO ．

ンズの組み合わせを変える事によって，倍率を 0.5 倍，１2

2倍，及び２倍に切り替えられる．また，安定化電源を用い

2. 2.

神経活動の電気的及び光学的計測

たハロゲン光源からの光は光ファイバーを介して顕微鏡へ

単離脳標本において，嗅球の出力繊維（LOT）への電気送りこまれるが，535 nm（±20 nm）の帯域通過フィルタ

刺激により惹起される嗅覚ネットワークの神経応答を，電ーを通して後，ダイクロイックミラー（580 nm で 50％透過）

気生理学的手法と神経活動イメージング手法の二つの手法

で反射，標本に照射される．また，標本からの蛍光はダイにより計測した．刺激電極には，双極性タングステン電極

クロイックミラーを透過して後，長波長域通過フィルター（直径 25mm，先端間隔 100mm）を使用した．0.9％ NaCl 液（600 nm で 50％透過）を通して CCD で受光される．

を充填したガラス電極（電極抵抗は ５–10MΩ）を，細胞

３．結外誘導記録用電極として使用した．神経活動のイメージン

果

Molecular Probes）により標本を染色した．膜電位感受性

3. 1. 嗅索刺激により誘発される神経応答の刺激強度依存性

色素の調整法は，冨永らの報告に従った ．Di-4-ANEPPS

モルモット単離脳標本において外側嗅索（LOT）を刺激

５mg を１ml エタノール及び 0.5 ml クレモフォア EL10% 水

すると，神経興奮はまず前梨状皮質（APC）から後梨状皮溶液により溶解し，ストック液とした．ストック液 40 ml

質（PPC）へ伝播する．その後，神経興奮は内側径路を介を 0.5 ml 仔ウシ血清と 0.5 ml の実験液に溶かしたもの（最して扁桃体皮質（AC）へ，外側経路を介して嗅内皮質（EC）

終濃度 0.2 mM）を直接脳表に滴下して標本を染色した．尚，へと伝播する．これまでこれら二つの経路の関係は，完全標本を膜電位感受性色素で 25 分間染色した後，30 分以上に並列であると思われていたが，最近の我々の研究

灌流液を流す事により，細胞膜に取り込まれず残った不要よって，嗅内皮質に惹起された神経興奮は，吻側方向へ戻な色素を洗い流した．光計測は，KODAK 製 CCD イメー

るように伝播し，扁桃体皮質を再び活性化させることがジセンサ（KAI - 1003）を基に我々が開発した装置によりわかった（図 1A 赤矢印）．つまり，嗅内皮質と扁桃体皮質行った．光計測を行うための光学系は自作のタンデム型顕は，機能的に結び付いているのである．我々は，この嗅内グを行う際は，膜電位感受性色素Di-4-ANEPPS（Invitrogen /４）

図１ 外側嗅索（LOT）刺激により誘発される神経応答の刺激強度依存性
A. モルモット単離脳を腹側より見た模式図．嗅索刺激により惹起された神経興奮は，二つの経路（直接的な内側
経路と嗅内皮質を介する外側経路）を経由して扁桃体皮質へ送られ統合される．OB: 嗅球，LOT: 外側嗅索，
APC: 前梨状皮質，PPC: 後梨状皮質，AC: 扁桃体皮質，EC: 嗅内皮質，破線で囲まれた領域は観測領野．
B. 20µA ( 上 ) および 35µA( 下 ) で刺激した際の嗅覚皮質における神経興奮伝播パターン．
C. 扁桃体皮質の任意のピクセルにおける光シグナル（上）と集合電位（下）．

− 91 −

３）にコスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

５）

皮質と扁桃体皮質を結ぶ神経経路が，刺激強度に依存してグ周波数は約 4 – 12 Hz といわれている ．もし外側嗅索

どのように活性化されるのかを検証した．図 1B は，LOT（LOT）が繰り返し電気的な刺激を受けると神経応答は，

刺激時の神経興奮伝播パターンを表す．上段の結果におどのように脳内へ伝えられるのであろうか？我々はこのいて，刺激後 20ms にイメージ中央の AC の領域が，45 ms問題を検討する為に 10Hz で外側嗅索（LOT）を繰り返しに EC が活性化され，65ms には再び，AC が活性化された．

電気刺激し，これにより惹起される神経応答の活動パター

下段の結果では，刺激後 15 ms に AC，35 ms に EC，50 ms

ンを解析した．図 2A のように，モルモット単離脳標本のには AC が再度活性化された．つまり，LOT への刺激強度

LOT に刺激電極を配置し電気刺激を施した．図 2B は，刺が多少変化しても，扁桃体皮質へ入力する二つの経路（内激により誘導された細胞外記録電位波形である．10Hz で

側径路：PPC → AC，外側経路：PPC → LEC → AC）が活

LOT を６回刺激すると，後部梨状皮質（PPC）および嗅内性化されるという現象に大きな変化は認められなかった．

皮質（EC）では，100 ms 間隔で振幅の大きい下向き集合電

図 1C の波形は，二種類の刺激条件下で得られた扁桃体皮位が６回記録された．扁桃体皮質（AC）では，１回目の刺質の神経応答の時間経過を表している．上が任意の二箇所

激に対する応答が極めて小さいものの，２回目以降においから導き出した光シグナル（膜電位変化に比例した蛍光変て，顕著な下向き集合電位が観測された．つまり，繰り返化），下が細胞外記録電極により同時測定した集合電位でし入力が与えられる事によって，AC の反応性が高まった

ある．光シグナルトレースは二峰性を示し（図 1C 上），こ

事が読み取れる．

のピーク間隔とほぼ同一の間隔を持つ二つの集合スパイク

ではこのとき，AC の神経応答は，どのような神経経路

電位が，電気生理学的な計測によっても確かめられた（図の活性化により増大したのであろうか？我々は，図２の破

1C 下）
．

線で囲まれた領域において，神経活動イメージングを行った．その結果が図 2C である．繰り返し刺激の一回目，二3. 2. 嗅索への繰り返し刺激により惹起される神経応
答パターン

回目，三回目の刺激に対する応答を上段，中段，下段に齧歯類がニオイの識別や探索を行う際のスニッフィン

られ，85 ms に神経興奮が EC まで伝播している様子がわ示した．上段では，刺激後 25 ms に PPC で神経興奮が認め

図２ 外側嗅索（LOT）を繰り返し刺激した際の嗅覚ネットワークの神経応答
A. モルモット単離脳標本の模式図．
B. 後部梨状皮質（PPC），扁桃体皮質（AC），嗅内皮質（EC）における細胞外記録．
C. 図 A の破線で囲まれた領域で観測した神経活動伝播パターン．

− 92 −

香りが記憶や情動と結びつく際の脳内神経機構に関する研究

かる．更に，２回目（中段），３回目（下段）と，繰り返し

吻側方向へ戻るように伝播し，扁桃体皮質を再び活性化さ

LOT に刺激が入力されると，嗅覚系皮質の全体にわたっせた．今回の研究によって，刺激強度を変化させても，こて神経応答の顕著な増大が認められた．著しい変化が生じの伝播様式が大きく変化しない事がわかった．しかし，刺たのは，EC と AC の領域であった．下段 245 ms のイメー

激強度が強いほど，AC の興奮性は劇的に増大した．特にジの白破線内において，EC の応答の顕著な増大に引きず

EC を介した外側経路の影響が大きいようであった．また，られて AC の領域が大きく活性化されることが判明した．

刺激強度が，極めて小さく，EC → AC の伝達経路が，ほとんど活性化されない場合でも，繰り返し入力が与えられ

3. 3.

脳深部神経活動計測の為の機器開発

るとこの経路は活性化される事がわかった．

我々の所有する光計測システムで検出する光シグナル

本実験では，標本の特性上，匂い物質を実際に与えて脳は，脳表面からおよそ 300 ミクロンまでの深さにある組織の活動を見ることが出来ないため，電気刺激を擬似的に与全体から発せられる蛍光シグナルを加算したものと考えらえた．刺激強度の強弱は，与えられた匂い物質の濃度の高１）れる ．本研究では，これよりも深部の脳皮質領域や，更低を表す可能性もあるが，匂いの種類の差を表している可に深部に位置している海馬や扁桃体外側核の神経活動を記

能性もある．刺激強度の増大によって，弱い刺激強度では録する為に，多点電極記録システムの構築を試みた．市販

活性化されていなかった LOT の神経線維（つまりその元の 16 チャンネルシリコンプローブの使用を想定し，ヘッにある嗅細胞）が新たに刺激されたと考える事ができるた

ドアンプに電極が直接挿入できるような仕様とした．初段めである．つまり，ある匂い物質については，EC － ACのヘッドアンプ部で 10 倍，後段の信号処理回路部で 10 倍，間の経路を活性化させるには不十分でも，他の匂い物質に

合計 100 倍のゲインを有するシステムとした．初段と後段

ついては，この経路を大きく活性化させる可能性を有しての間にはカットオフ 0.1 Hz のハイパスフィルターを配置し，いる事が示唆される．また，繰り返し刺激の実験結果から，後段のアナログ信号処理回路部では，カットオフ２kHz を

かすかな匂いでも間隔を置いて，繰り返し与えられる事が，有する４次ローパスベッセルフィルターを構成した．

EC － AC の経路の活性化には，効果的である事も示唆さ

16 チャンネルから記録される集合電位は，市販の AD コ

れた．

ンバータを介してコンピュータに取り込み，取り込んだデEC は海馬と結び付いて記憶系の情報処理に関わる事がータは Matlab によって，CSD 解析を行えるような仕様と知られるが，AC は，脳深部の扁桃体亜核と結び付いて，した．

情動の情報処理に関与する．本研究で得られた結果は，入４．考力する匂い物質の違いによって，記憶と情動の結び付きに察関与する神経経路が活性化されやすかったり，されにくか

モルモット単離脳標本に膜電位イメージングを適用して，
嗅覚神経経路の機能構造解析を行った．外側嗅索（LOT）

ったりする事を意味しているのかもしれない．
今回の研究のようにモルモット単離脳標本を用いれば，を電気刺激すると，神経興奮はまず前梨状皮質（APC）か

スライス標本の使用では不可能な，複雑な神経ネットワー

ら後梨状皮質（PPC）へ伝播し，その後，神経興奮は内側クの解析が行えるが，脳深部で生じた現象までは，解析す径路を介して扁桃体皮質（AC）へ，外側経路を介して嗅内ることが出来ない．そこで本研究では，脳深部の多点電気皮質（EC）へと伝播した後，EC に惹起された神経興奮は，生理計測を可能にする計測システムを新たに構築した．今図３

開発した多チャンネルアンプ（左）と波形解析ソフトウェア（右）− 93 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

Eur J Neurosci 18, 95-101.

後は，この装置を既存の単離脳標本実験システムと組み合わせて使用し，脳深部の複数箇所からの神経応答解析を進３）Kajiwara R., Tominaga T., & Takashima I. (2007)

める事によって，嗅覚系における海馬や扁桃体ネットワー

Olfactory information converges in the amygdaloid

クの動作様式をより詳しく明らかにしてゆきたいと考えて

cortex via the piriform and entorhinal cortices:いる．

observations in the guinea pig isolated whole-brain
preparation. Eur J Neurosci 25, 3648-3658.

（参考文献）

４）Tominaga T., Tominaga, Y., Yamada, H., Matsumoto,１）de Curtis M., Takashima I., & Iijima T. (1999) Optical

G. & Ichikawa, M. (2000) Quantification of optical

recording of cortical activity after in vitro perfusion of

signals with electrophysiological signals in neural

cerebral arteries with a voltage-sensitive dye. Brain

activities of Di-4-ANEPPS stained rat hippocampal

Res 837, 314-319.

slices. J. Neurosci. Meth 102, 11–23.

２）Biella G.R., Gnatkovsky V., Takashima I., Kajiwara５）Kepecs A., Uchida N., & Mainen Z.F. (2007) Rapid

R., Iijima T., & de Curtis M. (2003) Olfactory input toand Precise Control of Sniffing During Olfactory

the parahippocampal region of the isolated guinea pig

Discrimination in Rats. J Neurophysiol 98, 205-213．

brain reveals weak entorhinal-to-perirhinal interactions.

− 94 −

触動作の特徴抽出による化粧品の使用感評価

大阪大学大学院工学研究科 環境・エネルギー工学専攻

秋 山

庸 子

The correlation between tactile sensation and tactile movement during application of cosmetics is important because
tactile sensation is induced only by active handling. The aim of this study is to evaluate application feeling of skin careproducts objectively using motion analysis of human finger during application. The effect of the application velocity on
the sensory evaluation score was investigated. It was shown that the participants tends to apply the skin care products atthe velocity which they feel the most comfortable. Based on this result, change in the application velocity by changing
rheological property of the skin care product was studied. From these results, it was shown that motion analysis ofapplication is useful to evaluate tactile feelings of the skin care products. In the similar method, to establish the evaluation
method of tactile sensation of human hair, coincidence measurement of motion analysis and load measurements during
hair brushing and finger combing were performed. Change in load profile from root to tip of hair by application of haircare products was examined. Change in the maximum load by hair damage and treatment and its correlation with sensory
evaluation were also discussed. It was shown that the load during hair brushing which is considered to reflect the frictional
property of human skin surface is useful to evaluate tactile feelings of human hair. The rheological properties of hair careproducts mainly effects on the brushing load, whereas that of skin care products mainly effects on the velocity of application
movement.

１．緒

作の速度や特徴を抽出することにより，官能評価よりも客言観的であり，しかも化粧品の粘弾性などの物性測定と異な本研究は，スキンケア化粧品の塗布時の指の触動作，おり，生体と化粧品との相互作用を反映した化粧品の評価手

よびヘアケア化粧品適用前後のブラッシング・手ぐし動作法として利用可能であると考える．本研究では，スキンケを対象に３次元動作解析を行い，動作速度や変位から特徴

ア化粧品塗布時の塗布動作解析，およびヘアケア化粧品適

となるパラメータを抽出することによって，化粧品の使用

用前後のブラッシングの動作解析を行い，官能評価との相関感の新たな評価手法を構築することを目的とする．

を調べることにより，触動作解析を用いた化粧品の使用感

スキンケア・ヘアケア化粧品は，皮膚や頭髪の保湿や乾の新たな定量的評価手法について検討した結果を報告する．

燥からの保護などの効果のみならず，人間の触感を刺激し，

２．実

それによって心地良さや爽快感を与える効果が期待される．
したがって，スキンケア製品塗布時の触感や，ヘアケア製

2. 1

験
１）

スキンケア製品の塗布動作の解析

品適用後のくし通り・指通りの感覚は，QOL（生活の質）

20 代の被験者６名（男性２名，女性４名）を対象として向上をもたらす化粧品開発に欠かすことのできない因子でスキンケア製品塗布時の動作解析および官能評価を行った．

ある．しかし，これらの使用感は，専門パネルあるいは一

被験者は志願者であり，事前に十分なインフォームドコン

般パネルによる官能検査による評価が一般的であり，化粧セントを行った．実験は全て気温 25±1.0℃，湿度 60±10

品の触感制御のためには，より客観的な評価手法の確立が％に保たれた部屋で行った．市販のスキンケア製品２種（ク必要である．

リーム状のものと乳液状のもの，いずれも O/W エマルシ

触感は「さわる」という能動的動作により惹起されるこョン）0.15 mL を，左手の前腕内側，肘線から約５cm の約とを考慮すると，その次の段階の研究として，触動作，官７-10 cm の範囲に塗布するという条件で行った．塗布は能特性，材料物性の相互の関連付けが必要である．特に化

右手人差し指の第一関節部を用いて行った．実験開始前に

粧品のように，その変形挙動が時間依存性を持つ粘弾性材

赤外線マーカーを人差し指の第２関節と第３関節の間に配料の触感設計において，触動作は重要な情報となる．触動

置し，マーカーの動きを３次元運動解析システム（Movetr/3D，㈱ライブラリ）によって塗布時の人差し指の動作をEffects of Tactile Movement Speed on
Tactile Feeling

追跡した．また触圧測定は，ELF システム（ニッタ株式会社）を用いて，人差し指の指先にセンサーを配置し測定しYoko Akiyama

た．測定の概要を図１に示す．

Graduate School of Engineering,
Division of Sustainable Energy andEnvironmental Engineering, Osaka
University

2. 2

２）

毛髪ブラッシング速度・反力測定

全ての実験は全て気温 25±1.0℃，湿度 60±10％に保た− 95 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

れた部屋で行った．ブラッシング動作解析と毛髪にかかる

リング速度は 50 msec であった．測定の概要を図２に示す．

反力評価を同時に行うため，毛髪サンプル（長さ 30cm, 10

３．結ｇの中国人毛）を小型万能試験機（EZ-test，島津製作所）の引張試験ユニットに固定した．小型万能試験機のロード

3. 1

果

スキンケア製品の塗布速度の測定

セルは 50N のものを使用した．ロードセルの変位速度を 0

スキンケア製品の触感の違いが塗布速度に与える影響にに設定した状態でブラッシングを行い，そのときの反力をついて検討するため，粘性率の異なる市販のクリーム状乳測定した（測定分解能約 0.0025 N）．毛髪サンプルは未処

液状の，いずれも O/W エマルションである２種のスキン

理毛，ブリーチ処理毛（2.5％アンモニア，６％過酸化水素

ケア製品について，塗布動作の解析を行った．２種のスキを含む２剤式ブリーチ剤にて未処理毛を 25℃・30 分の処

ンケア製品の往路・復路の塗布動作速度の代表的な結果を理を３回行ったもの），未処理毛に市販のヘアケア剤２種

図３に示す．往路・復路それぞれの最大塗布速度の５回分をそれぞれ使用したもの（ヘアワックス0. 5ｇを塗布，ヘアスの平均値を求め，往路・復路それぞれについて調べた．被プレーを約３秒間全体に吹付したもの）を用いた．毛髪サ

験者によって塗布速度に大きな違いがあったため，各被験ンプルのブラッシングを複数の被験者に行ってもらい，３

者について２種のスキンケア製品の塗布速度の比較を行っ次元動作解析システム（Move-tr/3D，㈱ライブラリ）を用た．その結果，被験者６名のうち５名において，粘性率のいたブラッシング速度の測定と合わせ，その時の反力を同比較的低い乳液において往路塗布速度の有意な増加が見ら時測定した．動作解析については，くしおよびブラシの背れたが，往路の塗布速度で有意差が見られたいずれの被験面に赤外線マーカーを配置してその動きを追跡した．動作者も，復路には有意差が見られなかった．このことは，化解析のサンプリング速度は 1/30s，最大誤差は 0.57 mm で粧品の物性の違い，特に粘性率の減少が主に往路の塗布速あった．動作解析のサンプリング速度は 1/30 s，最大誤差度の増加として反映されていることを示している．これは，は 0.57 mm であった．また手ぐし時の反力測定も同条件で皮膚表面における塗布時の化粧品の流動特性の違いに起因行い，ブラッシング時と比較を行った．反力測定のサンプすると考えられる．

図１

触動作と触圧の同時測定− 96 −

図２

毛髪のブラッシング反力・動作の同時測定

図３

スキンケア製品の塗布速度（**p<0.01）

触動作の特徴抽出による化粧品の使用感評価

このようにして測定した塗布速度がどのような官能評価

試験機の引張試験ユニットに固定した毛髪サンプルのブラ

項目に対応しているかを調べるため，塗布速度と官能評価

ッシングを複数の被験者に行ってもらい，ブラシの背面に結果との相関を調べた．官能評価は各試料について，評価

赤外線マーカーを配置し，３次元動作解析システムを用い項目ごとに SD 法により１−５の５段階で評価した．官能てブラッシング速度を測定した．このような測定系で動作

評価スコアと上記の方法で求めた往路・復路の塗布速度おと反力の同時測定を行った．

よび塗布長さとの相関をまとめたものを表１に示す．伸び

毛髪の処理によりブラッシング速度が変化することをのよさ，なめらかさ，しっとり感，ぴちぴち，の各評価ス予想したが，いずれのサンプルでもブラッシング速度はコアが塗布速度と正の相関を持ち，その多くがせん断力を

50 cm/s 前後であり，サンプル間でほとんど有意な差は見加えたときの抵抗が小さいことに関連する官能値であるとられなかった．それに対して反力には明らかな違いが見らいえる．一方，膜厚感，べたべた，ぱさぱさ，の各評価れた．横軸に反力，縦軸にブラシの Z 軸方向の変位をとり，スコアが塗布速度と負の相関を示した．これらはいずれも，未処理の毛髪とヘアスプレー処理後の結果をプロットした

せん断力を加えたときの抵抗が大きいことに関連する官能ものを図４に示す．この図において，Z 軸座標が 45 cm 付

値であるといえる．また，往路の速度のほうが復路の速度

近の位置が毛髪サンプルの根元であり，10 cm 付近が毛先に比較して高い相関を示した．このことは，往路では指先に対応している．未処理の毛髪では根元付近と毛先付近での動きによってスキンケア製品を塗り伸ばしているが , 復

２つのピークが見られるが，ヘアスプレーで処理した場合，

路は塗布動作というよりはむしろ，指が初期位置に戻るた

根元から中間部にかけて増加し，その後毛先にかけて減少

めの戻り動作としての役割が大きいことを示唆している．

する傾向が見られた．特に毛先でのピークが未処理のものと比較して消失していることが分かり，これはヘアケア製

3. 2

毛髪ブラッシング速度と反力の同時測定品による毛先の絡まりの解消を反映していると考えられる．

未処理，ブリーチ毛，市販のヘアスプレーやヘアワック

スキンケア製品の場合と同様に，官能評価と動作・反力

スで処理した毛髪について，ブラッシング時に毛髪に加わパラメータの相関を調べた結果を表２に示す．ここで反力る反力とブラッシング動作の同時測定を行った．小型万能の積分値とは，１回のブラッシングごとに反力を距離につ

表１

スキンケア製品の塗布速度と官能評価の相関（*p<0.05）

伸びのよさ
なめらかさ
油っぽさ
みずみずしさ
膜厚感
べとつき
しっとり感
すべすべ
ぎとぎと
ぴちぴち
べたべた
さらさら
ぱさぱさ
総合評価
嗜好

往路最大速度 復路最大速度
0.32
0.42
0.21
0.31
0.03
ｰ 0.050.26
0.28
ｰ 0.30ｰ 0.33ｰ 0.04ｰ 0.120.65 ＊
0.64 ＊
0.14
0.19
0.05
ｰ 0.030.42
0.45
ｰ 0.26
ｰ 0.33ｰ 0.03ｰ 0.01
ｰ 0.34ｰ 0.350.14
0.18
ｰ 0.21
ｰ 0.15

表２

塗布長さ
0.17
0.14
0.07
ｰ 0.15
0.22
0.23
0.00
0.05
ｰ 0.26
ｰ 0.390.23
ｰ 0.09ｰ 0.060.32
0.23

図４ 未処理毛髪とヘアスプレー処理毛髪におけるブラシの変位とブラッシング反力の関係

毛髪のブラッシング反力・速度と官能評価の相関

反力最大値（５回の平均値）
反力最大値の標準偏差
反力積分値（５回の平均値）
反力積分値の標準偏差
速度最大値（５回の平均値）
速度最大値の標準偏差

くし通り しなやかさ さらさら感
ｰ 0.01
ｰ 0.03ｰ 0.340.21
ｰ 0.22ｰ 0.47ｰ 0.060.17
ｰ 0.290.02
ｰ 0.11
ｰ 0.33ｰ 0.020.33
ｰ 0.14ｰ 0.070.00
ｰ 0.29− 97 −きしみ
ｰ 0.100.11
ｰ 0.25ｰ 0.10ｰ 0.20ｰ 0.42

ぬるつき
0.46
ｰ 0.12
0.49
0.05
0.29
ｰ 0.04ぱさつき
ｰ 0.300.09
ｰ 0.05ｰ 0.23ｰ 0.04ｰ 0.04

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

いて積分したものであり，ブラッシングに必要な運動エネ

一方，毛髪ブラッシング実験においては，被験者は毛髪サ

ルギーに相当する．傾向としてくし通りは最大反力およびンプルの状態に関わらず速度が一定になるようにブラッシ

その標準偏差と負の相関，きしみは最大速度の標準偏差とングしているため，摩擦力の寄与が大きいと考えられる反正の相関，ぬるつきは最大反力と正の相関を示し，これら力にヘアケア製品による明確な影響が見られたと考えられの傾向はおよそ妥当な結果といえる．したがって，毛髪のる．

触感の客観化のために速度・反力の測定が有用である可能

以上のように，指先やブラシによって物体を触る動作に性が示された．また，相関係数は全体的に反力のパラメー

おいて，毛髪ブラッシングと皮膚への塗布の場合で触動作

タのほうが大きい傾向にあった．以上のことから，毛髪のの特徴が異なる，すなわちそれぞれが，触対象の状態に関ブラッシング時の反力により，毛髪のくし通りを定量的にわらず速度がほぼ同じである動作と，反力がほぼ同じであ評価できる可能性が示された．

る動作である可能性が示された．

４．考

察

５．総

括

以上の結果について，大まかな傾向をまとめると，毛髪本研究では，皮膚へのスキンケア製品の塗布，および毛ブラッシングの場合は触感が主に反力に反映される傾向が髪へのヘアケア製品の噴霧あるいは塗布が触感に及ぼす影得られ，スキンケア製品塗布の場合は触感が主に塗布速度

響について，人が皮膚あるいは毛髪をさわる際の動作解析に反映される傾向が得られた．このようにそれぞれの動作と反力測定を用いて，触動作の特徴抽出を行い，官能評価に特徴的な傾向が表れたことについて考察する．

との相関を調べることによって，触感を客観的に示すため

３）

神川ら は流体潤滑剤を塗布した表面の摩擦特性が固体の新たな指標の構築を試みた．
皮膚へのスキンケア製品塗布の場合 , 塗布速度が官能値

潤滑状態と流体潤滑状態が混在した状態であると考え，摩に影響していることがわかった．このことはスキンケア製

擦力が式（1）のように表されると述べている．
式（1）品のレオロジー特性，特に動的粘弾性に深く関わっている

ここで，F は摩擦力，μ は境界潤滑部における動摩擦係と考えられ，今後も検討を続けていく予定である．一方毛数，W は法線力，U は物体表面間の相対速度 ,η は流体の髪の場合，反力によって触感が評価できる可能性が示され

粘性率，a, b は境界潤滑・流体潤滑のそれぞれの寄与に依たが，皮膚と異なる点として，毛髪と化粧品の相互作用の存する係数である．

みならず，毛髪どうしの相互作用，さらには指やくしと毛F =μaW +ηbU

本研究の場合は皮膚および毛髪のほとんどの部分が化粧

髪の相互作用も検討する必要があることが挙げられる．こ品に覆われているとすると，流体潤滑の寄与が大きいと考のことに関してはトライボロジーの観点からの検討がなさえられるため，式（1）の第２項の寄与が大きいと考えられれ始めているが，系をどのように単純化して物理モデルをる．この式から，図５に示すように，摩擦力 F は相対速度構築するか，さらには微視的特性とどのように関係付ける

U に比例し , その傾きは粘性率 η に依存して変化する．本かが今後の課題になると考えられる．今回の結果から，ス

実験結果から，スキンケア製品を塗布する場合，被験者はキンケア製品，ヘアケア製品の触感の評価において，触動

サンプルの種類に関わらず往路の指先の摩擦力が同じにな作の特徴抽出が有用であることが示されたため，今後触感るようにスキンケア製品を塗布しているため，サンプルにの客観化とともに，その物理的背景の検討を行っていく予

よって塗布速度に大きな違いが現れた可能性が考えられる．

定である．
（参考文献）
１）秋山庸子，泉佳伸，西嶋茂宏，触動作の特徴抽出による化粧品の使用感評価〜スキンケア製品の塗布動作〜

日本化粧品技術者会誌 43（2）95 -100（2009）．
２）秋山庸子，松江由香子，土井佑介，泉佳伸，西嶋茂宏，触動作の特徴抽出による化粧品の使用感評価 - 毛髪
ブラッシング動作の解析 -，日本レオロジー学会誌 37（3）129-134（2009）．
３）神川康久 , 野々村美宗 , 前野隆司 , 皮膚上塗布物のトラ
イボロジー特性と触感の関係 , 日本機械学會論文集 . C
編 Vol.73, No.730, pp.1827-1833,（2007）．

図５ 皮膚へのスキンケア製品塗布と毛髪のブラッシングにおける摩擦特性− 98 −

化粧時間による耳鼻咽喉科心身症患者の抑うつ不安のレベルの評価

慶應義塾大学医学部耳鼻咽喉科

五 島

史 行

The makeup is basically unique behavior only for the female. The consuming time for makeup can be closely related
to the personality. Recently we are keen to treat the psychosomatic patients in otolaryngology with clinical psychologist.
The objective evaluation of the patients with these disorders are usually difficult. We realized that the makeup time is notstable in any patients but it was altered depending on the state of mental health in patients. The subjects were 25 control and3 patients. BSRI (Bem Sex-Role Inventory) and original inquires asking their makeup time were used. The Bem Sex Role
Inventory is designed to provide an assessment of degrees of masculinity, femininity, and androgyny according to Sandra
Bem’s gender schema theory (Bem, 1981). BSRI The results indicated that the score of BSRI in control were M=76.4±16.7,
F=92.0±13.3, S=85.6±8.8, makeup time=15.8±7.2 minutes, and M=74±26.9, F=104±15.6, S=94.3±6.8, makeup
time=13.3±5.8 minutes respectively. From these results the weak collation were postulated that the degrees of masculinity,
femininity, and androgyny can affect their makeup time. Further studies are required to confirm the makeup time can be
subjective parameters for the evaluation of mental health in psychosomatic patients.

た。性役割尺度は長い間男性性、女性性と一次元の両極的はじめに概念としてきた11, 12）。ところが Bem は一人の人間の中に化粧は男性が行わず女性が積極的におこなうものの一つ

男性性、女性性、が存在するという仮説を立て男性性と女である。化粧時間の長さは女性の持つ外面に気を遣うとい性性を二次元の概念と考えた。そして新しい性役割尺度とうメンタリティとの関係がある可能性がある。近年女性がして Bem Sex Inventory（以下 BSRI ）（表１）を考案した。

男性化していると言われている。これまで我々は耳鼻咽喉

この性役割尺度と化粧所要時間を臨床に応用することを考科において耳鼻咽喉科心身症患者に対して図 1 に示すよう

えた。

13）

な体制をとり、臨床心理士と共に心身医学治療を行ってき
た

目

1-10）

。一般的に行われる心身症患者への心理治療は、カ

的ウンセリングや認知行動療法、自律訓練法である。最近抑病院における医療行為は主に薬物、外科的治療が中心でうつ症状を含めた臨床症状が数ヶ月で改善した症例を経験あり心理治療はあまり行われていない。また治療効果の判した。それは、突発性難聴の後の難聴に対し、抑うつ症状

定には一般的に患者の主訴や血液検査などの医学的検査のに対しての行動療法としてエステサロンに月に一度行くこ

結果が指標として用いられる。現在の医療の問題点は、人と、月に一度お手伝いさんを雇用して夕飯の手伝いをし間にある“心”の部分を正確に評価していないこと、そしてもらうことを徹底させたというものである。この期間中、て“心”を意識した診断的、治療的アプローチを行ってい患者の化粧行動は大きく変容し、化粧品の購入金額、化粧ないことにある。病院を受診する心身症患者の割合は決しにかける時間が増大した。他にも外来診療中に患者の心身て低くなく、我々の耳鼻咽喉科のデータでもおよそ７- ９の健康度が正常化するにつれて患者の化粧の様子が変化することをしばしば経験する。このことから患者の化粧関連行動が患者の抑うつ不安などの心理的健康度によって影響を受ける可能性がある。このことを契機に本研究を発案した。しかしながら患者の化粧時間を詳細に問診することは容易ではなく研究方法をかえ今回は男性的か女性的かという性的特徴と化粧時間との関係を調べることを目的とし
The evaluation of the level of anxiety
a n d d e p r e s s i o n i n p a t i e nt s w i t h
psychosomatic disorders who visitedot ola r y ngolog y by mea ns of t hei r
required makeup time
Fumiyuki Goto M.D.
Keio University School of medicine,
Department of otolaryngology− 99 −

図１

耳鼻咽喉科医と臨床心理士の協同コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010％である。これらの心身症患者に対しては、従来、その他に用いるものとしては、最も簡便な化粧にかける時間としの患者と同様な診断、治療が行われてきた。その結果、患た。しかしながら患者の化粧時間を詳細に問診することは者の予後は良好でなく、通院を中断したり、他の病院に移容易ではなく研究方法をかえ今回は男性的か女性的かといったり、通院期間が長期化する原因となっていた。このよう性的特徴と化粧時間との関係を調べることを目的とした。

うな望ましくない現状をふまえ、心身症患者に対してより対象および方法

適切に診断、治療する方法を開発することを目的とした。
一般的に行われる心身症患者への心理治療は、カウンセリ
ングや認知行動療法、自律訓練法である。化粧行動は、女

健常被検者 25 人（全員女性 45.5±17.2 才）および耳鼻咽喉科心身症患者３人を対象とした。

性にとって心理的余裕が無いと取ることのできない行動で

男性性、女性性を調べるために質問紙として BSRI を施ある。化粧行動は化粧品の購入、外出の頻度・時間、化粧行した。合わせて各自の化粧時間について質問紙を用いにかける時間、そしてエステサロンなどの自分で行う以外て調査した。男性性、女性性と化粧時間の関係を調べた。

の快適さを追求する広い意味での化粧行為のことを指す。

BSRI は 1974 年に S. Bem

化粧行動は個人差が大きく、相対評価が必要である。評価

女性的か男性的かを診断するためのものである。実際に使

表１

表２

13）

BSRI

日本人の平均値

M

F

S

日本平均女性82

91

88

日本平均男性91

93

88− 100 −

が開発した尺度であり被検者が化粧時間による耳鼻咽喉科心身症患者の抑うつ不安のレベルの評価

用した質問紙を表１に示す。健常者、耳鼻咽喉科心身症患±7.2 分 で あ り 患 者 群 で は M ＝ 74±26.9、F ＝ 104±15.6、S者の男性性（M）、女性性（F）、中性性（S）についてこれ＝ 94.3±6.8、化粧時間＝ 13.3±5.8 分であった。また日本人まで得られている日本人の平均値（表２）との比較を行った。

平均値との比較を行った（図４）。さらに男性性、女性性、結

中性性と化粧時間との相関関係について検討した（図５）。

果

また耳鼻咽喉科心身症症例ごとの男性性、女性性、中性性

健常被検者 25 人の結果を図２に示す。また耳鼻咽喉科
心身症患者の結果を図３に示す。コントロールでは M ＝と日本人平均14）との比較を行った（図６）。

コントロールと患者で化粧時間を比較した（図７）。

76.4±16.7、F ＝ 92.0±13.3、S ＝ 85.6±8.8、 化 粧 時 間 ＝ 15.8

図２

男性性女性性のスコア分布（コントロール N=25）

今回の結果（N=25（コントロール））
日本人の平均値

図３

男性性女性性のスコア分布（患者 N=3）

図４

日本人平均値との比較

化粧時間
（分）

男性性スコア（点）図５

女性性スコア（点）MFS（男性性、女性性、中性性と化粧時間との相関関係）− 101 −

中性性スコア（点）コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

図６

症例ごとの男性性、女性性、中性性と日本人平均との比較）

考

図７

化粧時間の比較察まとめ

先行研究では、BSRI 日本語版を用いて被験者を女性型、当初予定していた研究課題の成果がえられればコスメト

男性型、両性具有型、未分化型の性役割タイプに分類し生ロジーが患者の診断、治療の手段として十分活用できるこ

物的な性差（性別）との関係を検討していた。BSRI 日本語とが示され、コスメトロジーに対する医療者、患者の認識

版による男性性得点と女性性得点の中央値分割にて性役割が深まることが予想された。また患者の化粧行動に着目すタイプに分類を行うと、性役割タイプの出現率では性差はることによってこれまで無かった視点から患者を評価、診認められなかった。つまり、男性および女性の中性化が断することが可能になり新しいアプローチが可能となる。

進んでいると推測する

臨床心理学はコスメトロジーと一部重複するところがある。

14）。Bem の先行研究では女性では女性型 39.4％、男性型 12.4％、両性具有型 30.4%、未分化

そのため行動療法、認知療法といった心理学的手法を積極型 17.9% であり女性では女性型が最も多く性別と性役割タ的に取り入れることにより臨床心理士の間に対する啓蒙活イプが一致するタイプの出現率が高く、性別との対応関係

動となりコスメトロジーがさらに発展する。今回の研究のが高いテストであった。近年の調査では女性では女性型が問題点をふまえ今後さらに耳鼻咽喉科心身症患者を増やし

少なく、未分化型、両性具有型、男性型が多いと報告され、検討を加えていきたいと考えている。

性役割タイプと性別に関係が認められなかった。
化粧時間と性役割の関係については必ずしも女性性が高謝

辞い被検者が長い化粧時間をかけているという傾向は得られ

本研究は平成 20 年度コスメトロジー研究費“耳鼻咽喉なかった。化粧時間は心身の健康状態以外にもその日にと科を受診する心身症患者に対する心理治療の化粧関連行動

る行動の予定など様々な因子によって影響を受ける。実際

による評価の試み”の補助を受けた。

のデータは示していないが、病院を受診した後女性の知人と約束がある場合には化粧時間が長くなる傾向が観察され（文た。したがって化粧時間を心身の健康の尺度として活用す

１）五島史行 , 中井貴美子：唾液アミラーゼ測定を用いたることを考えた場合には実際の時間以外にも被検者がその自律訓練法、カウンセリングによる急性ストレス変化

日に撮る行動予定なども加味した評価を行う必要がある。

の客観的評価の試み . 日本心療内科学会誌 2009 ; 13 : 79-

今回の研究では健常者（女性）は男性性よりも女性性を

献）

83.

高く持つものが多く日本人平均値と近い値を示し、性別と２）中井貴美子 , 五島史行 , 内山喜久雄：難治化したメニ

性役割りタイプは一致していた。症例数は少ないものの耳

エール病症例への認知行動療法の適用 . カウンセリング

鼻咽喉科心身症患者においては日本人平均値からはなれて

研究 2008;41:340-345.

いるものが多くこれらの要素が対人関係に葛藤を生じる原

３）五島史行 , 中井貴美子 , 村上正人 , 小川郁 : 耳鼻咽喉科

因となり心身症の発症や進展に影響を及ぼしている可能性

領域における線維筋痛症、筋痛症の診断治療 . 日本心療がある。

内科学会誌 2009 ; 13 : 16-20.
４）五島史行 , 中井貴美子 , 小川郁：耳鼻咽喉科における− 102 −

化粧時間による耳鼻咽喉科心身症患者の抑うつ不安のレベルの評価

明らかな器質的異常を認めない発熱患者に対する治療 .

９）五島史行 , 中井貴美子：カウンセリングが有効であった咽喉頭異常感症の検討 . 口腔・咽頭科 2006 ; 18 : 363-

日本心療内科学会誌 2009 ; 13 : 5-9.
５）中井貴美子 , 五島史行：定年退職後に発症した閉所恐怖症に有効であった認知行動療法 . 未病と抗老化 2008;368.
10）五島史行 , 浅間洋二 , 中井貴美子：めまいを主訴とした線維筋痛症の治療経験 . 日本耳鼻咽喉科学会会報 2005

17 : 159-162.
６）中井貴美子 , 齊藤秀行 , 神崎晶 , 五島史行 , 田副真美 ,et al.：自律訓練法により耳鳴が改善した一側聾症例 . 自; 108 : 1171-1174.
11）柏木恵子：青年期における性役割の認知 . 教育心理学
研究 1972 ; 20 : 48-58.

律訓練研究 2008 ; 28 : 56-61.
７）五島史行 , 矢部はる奈 , 中井貴美子 , 國弘幸伸 , 小川

12）柏木恵子 . 現代青年の性役割の取得 . In: 現代青年心理

郁：本邦における Phobic postural vertigo（恐怖性姿勢

学講座 4めまい）症例について . Equilibrium Research 2007 ; 66 :48-58.

現代青年の性意識 . 東京 : 金子書房 ; 1972. p.

13）Bem SL: The measurement of psychological123-129.
８）五島史行 , 矢部はる奈 , 中井貴美子 , 藤野紀子 , 小川

androgyny. J Consult Clin Psychol 1974 ; 42 : 155-62.

郁：心因性発声障害の治療経験 . 日本心療内科学会誌

14）加藤知可子：BSRI 日本語版による性役割タイプの分2008 ; 12 : 5-9.

類 . 広島県立保健福祉短期大学紀要 1999 ; 4 : 7-11.

− 103 −

香料によるメタボリックシンドローム改善効果

福島大学保健管理センター

渡 辺

英 綱

There is no doubt that we live in an ever-increasingly stressful world. Stress can have a wide range of effects on mind
and body, including by causing obesity. In this study, we were able to induce weight loss by controlling mental stress throughexposure to fragrances.
27 subjects with metabolic syndrome or its preliminary group were divided into 3 groups in this study, 12 subjects did
not want the support of public assistance and fragrances. 9 subjects wanted to help the general dietary and exercise therapy,
six subjects wanted to help weight loss support by the aroma. For about three months, we compared the changes in weightloss and stress between 3 groups. Before and after the experiment, we measured body weight and preperitoneal fat thickness
using abdominal ultrasonographic scanning method, and analyzed the values obtained. We assessed the subjects’ mental stateusing questionnaires (ex. GHQ30 for evaluating neurosis, Zung’s Self-Rating Depression Scale (SDS)). We also evaluatedthe degree of stress by measuring the concentration of cortisol in saliva.
Cypress oil reported that weight loss. I reported that the same weight loss effect in both general therapy and Cypress
oil. Compared to a typical diet and exercise therapy group, in the use of cypress oil group, mental health scales (GHQ30,
SDS) were improved, salivary cortisol levels are decreased. Cypress oil may improve mental health scale and abnormal HPA(hypothalamic-pituitary-adrenal axis activity) by reducing the level of cortisol in saliva. Cypress might be causing a decreasein visceral fat and west circumference, could lead to weight loss.

１．緒

接証明する報告は少ない。これまではマウスの実験報告の言みであるが、NPY 受容体の拮抗剤投与により腹部脂肪沈

近年、香料の心理作用は多く報告され、ラベンダーは、着が減少し、このことから現在問題とされるメタボリック

中枢神経を鎮静する作用があり、ジャスミンは中枢神経をシンドロームの改善にストレスコントロールが有用である

覚醒する。最近は心理学的、生理学的効果の評価技術が発可能性が示唆された。
今回、メタボリックシンドロームの中心である内臓脂肪

達し、香りによる効用が報告されている。
2005 年、日本の内科学会等が中心となり日本版メタボ

蓄積に対する香料の作用を検討し、メタボリックシンドロ

リックシンドロームの診断基準が発表された。マルチプルーム改善に対する香料によるストレスコントロールの有効リスクファクター症候群と同様に生活習慣との強い関連性性を検討した。

が指摘されている。実際臨床の場で、一般的に軽度の脂質

２．実

代謝障害、高血圧、糖尿病をあわせ持つ症例が観察され、験

これらの危険因子集積がそうでないものと比べ冠動脈疾患

平成 20 年度健康診断受診者の中でメタボリックシンドの危険因子を増加させる事が報告されている。大規模なコ

ロームおよび予備群と診断された受診者を対象とした。メ

ホート前向き研究でも生活習慣病の有病率、死亡率、およタボリックシンドロームは 2005 年４月に関連８学会で協びその危険因子との因果関係が実証されつつある。メタボ

議し診断基準が提示された。図１に示すとおり、腹囲基準

リックシンドロームの中心は腹囲で代表される内臓脂肪でが超えた上で、血糖、血圧、血中脂質のうち２項目以上があると報告されている。

異常を呈した場合に、メタボリックシンドロームと診断し、近年、ストレスは体脂肪細胞に作用し肥満を刺激する可

１項目のみ満たす群を予備群とした。対象者に対し、現在能性が、神経ペプチド Y（NPY）を介して解明されつつあまでの病歴、食習慣、運動習慣等の生活習慣に関し問診しる。10 年以上前から、慢性的なストレスと肥満には関係た。検査結果より、糖尿病、整形外科的疾患、心疾患、腎があることがわかっていたが、肥満とストレスの関係を直The Effect to Improve Metabolic
Syndrome by Essential Oils
Hidetsuna Watanabe
Fukushima University Health Care
Center１；腹囲男性 85cm、女性 90cm 以上が必須。
かつ①血圧 130/85mmHg 以上。
②中性脂肪 150mg/dL 以上または HDLc40mg/dL 未満。
③血糖 110mg/dL 以上。
２；上記①ー③の 3 項目中 2 項目以上。

− 104 −

図１

メタボリックシンドローム基準

香料によるメタボリックシンドローム改善効果

疾患等が存在するか疑える対象者は研究への参加を中止し、精査加療目的に近医に紹介した。次に、身長、体重、ウエ２. 3.

ZUNG 自己評価式抑うつ尺度（SDS）

Zung によればアメリカ人の SDS 平均値は健常者 26 点、ストを測定し、標準体重を算出し、運動習慣に応じて食事

神経症患者 46.2 点、うつ病患者で 59 点を示し、うつ病な指導を行う。さらに整形外科的な異常が運動によって悪化

いしうつ状態で高得点を示すことが明らかにされている。

しないことを医師による診察で確認したのち、年齢にあっ本邦では福田らの判定で 40 点未満は「抑うつ状態はほた運動指導を行った。対象者に対して、従来の運動食事指

とんどなし」、40 点台で「軽度の抑うつ性あり」、50 点以導以外に、香料を用いた減量支援が有る旨を説明し、香料

上で「中等度の抑うつ性あり」と判定されている。

による減量支援を希望する群に対し、本人の同意を得た上１）で、抗肥満効果が報告されているサイプレスを賦香した

一般臨床において SDS 50 点以上になるとうつ傾向があると判断する。

アロマオイルを使用させた。アロマオイルを使用前に、精神状態の評価を GHQ30（WHO にて認定されている精神状

2. 4.

唾液中コルチゾール測定

態の判定質問紙）、鬱尺度の測定は ZUNG 自己評価式抑う唾液中コルチゾールの測定はHPA（hypothalamic-pituitary-つ尺度（SDS）により自己記入式で行なった。SDS は抑う

adrenal axis activity）異常の判定に用いられ、唾液中コル

つ症状の重症度を評価するための代表的な質問紙による心チゾールは血中コルチゾールと強い相関関係がある 。

4）

理検査である。体重、体脂肪、腹部超音波による内臓脂肪厚測定を測定した。約３ヶ月の香料使用後にもう一度

2. 5.

統計解析

GHQ 質問紙と SDS に自己記入式で回答していただき、体体重、腹囲、血圧、血糖、脂質、唾液中コルチゾール変重、体脂肪、腹部超音波による内臓脂肪厚測定を行ない、化の測定値の比較および有意差検定は one-way ANOVA

香料による減量効果の有無とその背景を検討した。

で行い、多重比較は Fisher’s PLSD を用いた。SDS うつ尺
度、GHQ 得点改善度の比較および有意差検定は Krushal-

２. 1.

腹部超音波による内臓脂肪厚測定法

Wallis test で行い、多重比較は Mann-Whitney U test を用

被験者をベット上に寝かせ、次に、心窩部においてプロいた。

ーブを正中線と平行に保持して皮膚に垂直に当てて、剣上

３．結突起の下から臍までの縦走査を行う。この際深く息を吸い

果込ませることで肝が下がり、肝表面が皮膚面と平行になる

健康診断受診者中、メタボリック症候群に該当する対象

ので、そこで呼吸を止めさせて画像を固定する。画像上で者は 14 名、予備群に該当する対象者は 13 名で、95 名はメ

腹壁前脂肪の最大の厚さ（P）と腹壁皮下脂肪の最小の厚

タボリック症候群に該当しなかった（図２）。健診受診者さ（S）を計測する。この比 P/S を計算して腹壁脂肪指数のメタボリック症候群該当者は非該当者と比較して、有意（abdominal wall fat index; AFI）とする。Ｘ線 CT 法の内に BMI、血圧、血糖、インスリン抵抗性指数が高く、脂蔵型の脂肪蓄積に対応して、男性では AFI > 1.0、女性で質異常を呈した（表１）。

2）

は AFI > 0.7 を内蔵型の脂肪蓄積とするとの報告もある 。

メタボリック症候群に該当または予備群と判断された

上記の方法を用いて、内臓脂肪型肥満の指標である P

27 名中、12 名は一般支援および香料による支援を希望し値がインスリン抵抗性や中性脂肪値と正の相関を示し、なかった。一般的な食事指導や運動療法の支援を希望した

TNF（tumor necrosis factor）a とも正相関する事を明ら９名と、香料による減量支援を希望した６名に分け、約３かにした。腹部超音波法による簡易なＰの測定は、動脈硬ヶ月間の減量効果、精神尺度の変化を比較した。３群間に化を引き起こす危険因子の 1 つである内臓脂肪型肥満の測3）定法になりうる事を報告した 。

基準該当14, 11％2. 2. GHQ 質問紙（The General Health Questionnaire）
WHO 世界保健機構版に準拠して作られている日本版
GHQ30 を今回使用している。質問紙法による検査法で、主として神経症者の症状の把握、評価および発見にきわめ

予備群
13, 11％て有効なスクリーニングテストであり、一般的疾患傾向、

非該当
95, 78％

身体的症状、睡眠障害、社会的活動障害、不安と気分変調、
希死念虜とうつ傾向が分かる。
図２− 105 −

健康診断受診者のメタボリック症候群を呈する割合

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

おいて減量支援開始前の年齢、BMI、腹囲、血圧に有意な意に低く、腹囲も減少した。香料支援群において、介入前差は見られなかったが、血糖値、脂質異常は香料支援群がに他の群に比して有意に高値であった空腹時血糖値や脂質有意に高値を呈した（表２）。

異常は介入により改善し他の群と有意な差を認めなかった

減量支援後には支援希望しなかった群と比較し、香料（表３）。介入後に香料支援群では、一般支援群よりも有意支援および一般支援群ともに有意な減量効果を認めた（図に腹囲は減少した（図４）。また、腹部超音波で測定した

３）。支援後の BMI は支援希望しなかった群と比較して有腹壁前最大脂肪厚 P 値は介入により有意に減少し、ほぼ同

表１

健診受診者とメタボリック症候群の背景

表２

減量支援前のメタボリック症候群と予備群の背景

表３

減量支援後メタボリック症候群と予備群の背景− 106 −

香料によるメタボリックシンドローム改善効果

等の減量効果が得られた一般支援群よりも有意な改善を認

香料支援群で有意に介入後に改善し、ほぼ同等の減量効果

めた（図５）。

が得られた一般支援群よりも有意な改善を認めた（図７）。

精神尺度として用いた GHQ30 得点は香料支援群で有意ストレスの指標の１つとされる唾液中コルチゾール値は香に介入後に改善し、ほぼ同等の減量効果が得られた一般料支援群において有意に改善し、ほぼ同等の減量効果が得

支援群よりも有意な改善を認めた（図６）。鬱尺度の測定られた一般支援群よりも優れた改善効果を認めた（図８）。

は ZUNG 自己評価式抑うつ尺度（SDS）においても同様に、

図３

図４

支援と香料による減量効果

図５

支援と香料による腹壁前脂肪厚減少効果

図７

支援と香料による SDS 得点改善効果

図６

図８− 107 −

支援と香料による腹囲減少効果

支援と香料による GHQ30 改善効果

支援と香料による唾液中コルチゾール減少効果

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

４．考に効果があり、内臓脂肪量の目安となる腹壁前脂肪厚 P 値

察が減少していることから、香料による減量支援はメタボリ

医療制度改革に伴い、糖尿病等の生活習慣病予備群の25％削減目標が設定され、健診・保健指導にメタボリックック症候群の前提条件である腹囲にも改善効果があることを示した。

シンドロームの概念を導入し、医療保険者に健診・保健指５．総導を義務化させた。しかし、25％もの生活習慣病予備群の削減には、標準的な評価システムと健診・保健指導プログ

括抗肥満効果が報告されているサイプレスの使用により、ラムの作成が必要となった。リスクの重積がある者に対し一般減量支援と同等の減量効果を認めた。同程度の減量て発病前から早期介入して行動変容につなげる支援を行え群と比較して香料支援群では精神健康尺度（GHQ30, SDS）

るようにした。一方で、早期に介入するために発病前の状がより改善し、唾液中コルチゾール値も改善効果が高かっ態をリスクの階層化により分類したことで、保健指導の対たことから、サイプレスはストレスおよびうつ状態を改善

象者が増加し、保健指導の有効性を高めるため、行動変容

し、HPA 異常の改善により唾液中コルチゾール値を減少理論の実践と６ヶ月間の経過観察と指導の継続を推奨した

させ、腹囲の減少、つまりは内臓脂肪の減少を引き起こし、事で、多くの集団に対して有効な行動変容理論を活用した減量効果をもたらす可能性がある。

生活習慣介入法が必要になった。しかし、集団に対して生活習慣支援の有効な継続可能性を示した方法はいまだ報告（参考文献）

されていない。

１）元永千穂、河野斉治、原田健、他 3 名 : 精油の抗肥満効

これまで、生活習慣病のリスクとして脂肪肝の存在および内臓脂肪蓄積の存在を報告し、大学生活が今後の生活習慣の基礎となる可能性を示した

5, 6）。運動習慣や食事習慣と肥満、睡眠時間、就寝時間およびパソコン使用時間とは果―肥満と心の関係に着目したアプローチ― AROMARESEARCH No. 30（Vol.8/No.2 p164 -167 2007）２）村野俊一、田所直子、森崎信尋 ; 超音波による内臓型
脂肪蓄積の診断法、日本臨床53 巻 ,

203-208, 1995

正の相関関係を認め、特に職員に関しては運動習慣、食事

３）Watanabe Hidetsuna, Baba T, Shigetomi S. 他 1 名 . ;習慣において、ライフスタイル上の問題を抽出し、実行可TNFa, its Receptores and insulin resistance in obese

能な目標を設定し、目標が達成できるよう継続した支援を

subjects. The comparison between the preperitoneal

行うと、脂質および動脈硬化危険因子の改善が見られるとand subcutaneous fat deposition. The International

報告した 。

Diabetes Federation Abstract Volume of the 18

7）

今回、一般的な運動および食事療法による減量効果と香thCongress. A192. 2003

料による減量支援と同等の減量効果が得られた。同等の減

４）S. Francis, R. Walker, D. Riad-Fahmy, 他 3 名 . ;量効果でも、香料支援群では、GHQ30 および SDS 尺度のAssessment of adrenocortical activity in term newborn

両者で、一般支援減量群より有意にストレス尺度は改善し、

infants using salivary cortisol determinations. J. of

かつ唾液中コルチゾール値も改善した。これまで香料によ

Pediatrics, 111,129-133,1987

る減量効果の検討では、減量によりストレス尺度が改善し５）渡辺英綱、渡辺厚、酒井コウ、他 1 名、肥満学生の内

たのか、香料使用によりストレス尺度が改善したのか不明

臓脂肪型肥満と脂肪肝の関係、CAMPUS HEALTH，43であった。そのためストレス改善作用が果たして減量効果（1），p205, 2006.1を生んでいるのか解明されていなかった。香料を減量支援

６）渡 辺 英 綱、 渡 辺 厚、 酒 井 コ ウ、 他 1 名、 大 学 生 のに使用し、減量効果が同じでも一般支援群以上にストレス

朝 食 欠 食 と 生 活 習 慣 の 関 連 性 に つ い て、CAMPUS

改善効果が見られたことより、香料使用は減量効果以上にストレス改善効果があり、ストレス改善効果により減量効

HEALTH, 40（1），p302-303, 2002.3
７）渡辺英綱、渡辺厚、酒井コウ、他 1 名、肥満学生に対果を生んでいる可能性が高まった。また、一般支援と同程する２年間の減量支援効果

度の減量効果であっても、腹囲の減少は香料支援群で有意研究会東北地方研究集会報告書、p32、2003− 108 −

第 41 回全国大学保健管理●
平成21年度記念講演●

米澤 泉

㈶コスメトロジー研究振興財団
第 20 回表彰・贈呈式記念講演概要

コスメの国のオタク
甲南女子大学人間科学部

米澤泉
場所：㈱コーセー

王子研修センター

日時：平成 21 年 11 月 13 日 ㈮私は現在、甲南女子大学の文化社会学科というところに

日本では大衆に化粧が広まっていて、それぐらい日本人と所属しておりまして、学生さんには文化社会学というもの

いうものは伝統的に化粧好きなわけなんですけれども、そを教えることになっています。私が担当しております講義

れだけではなくて、90 年代の後半ぐらいから、日本人女

題目はファッションビューティー論と申しまして、その名性が特にお化粧に熱心になってきました。いろいろな化粧のとおり、ファッションとビューティーを学生さんたちにの雑誌とか、化粧や美容の本がたくさん書店に並んだり、教えております。ファッションビューティー論という名前

そういうことが結構目につくようになってきたわけなんでの講義をやっている大学は多分うちの甲南女子大学だけじすね。

ゃないかと思いますが、まず私自身がファッションやビュ

例えば「顔黒（ガングロ）」という言葉や、「茶髪（チャーティーに並々ならぬ関心がございまして、趣味が高じてパツ）」とか、あと「目力（メヂカラ）」とか、そういったと申しますか、好きこそ物の上手なれと申しますか、気が化粧関係の流行語というものが 90 年代になってきますとつきますと、いつの間にか大学でファッションビューティ

非常に世間を賑わすようになってきました。80 年代まで

ーを教える立場になっていました。本日も、そういう化粧は茶髪という言葉すらなかったと思うんですが、90 年代

好き、ファッション好きの視点から見た現代女性の生き方、になってみんなが髪を茶色に染めるようになると茶髪とい日本文化、そういうものを皆様にお話しできればと思ってう言葉が生まれました。同じように、女性たちが非常に熱おります。

心に目のお化粧をするようになると、今度は目力という言３年ほど前になりますけれども、『電車の中で化粧する

葉が生まれました。そんなふうに、化粧が流行を動かすと女たち』という本を書きました。電車の中で化粧する女た

いうか、社会現象になるようなことが 90 年代に起こってちの実態を書いた本です。90 年代の初めぐらいから、電まいりました。

車の中で化粧する女性たちをだんだん見かけるようになっ以前よりもみんなが熱心に化粧するようになりましたし、てきて、それまではあまり電車の中で化粧する女性というテレビをつければ、美のカリスマとか言われるような人たものは見かけませんでしたけれども、それが 90 年代の半ちが登場したり、あるいはメイクアップのアーチストたち

ばごろから非常に目につくようになってきて、なぜだろう

がスターのような感じでテレビに出てきて化粧を教えたり、ということで私自身も非常に気になりまして、そちらのほ

以前にはあり得なかったことが起こるようになってまいりうの研究をしようかなというふうに思ったのがこの研究にました。そのような中で、化粧品は２兆円産業などと呼ば入るきっかけでした。なぜ日本人女性だけが電車の中で化れるようになって、消費量も非常に増えてきました。化粧粧するんだろうかというのは気になるところですが、もとというものがそのころから少しずつ、従来の化粧から脱却

もと日本人女性、というか日本人は、非常に化粧に熱心なしてきたというか、変わってきた、その時代が 90 年代と人々であるというように認識されていると思います。例えいうふうに考えられます。そのような状況の中で、先ほば、化粧が一番早く大衆に普及したのもやはり日本ですし、

どから申しております電車内化粧というものもだんだん人

江戸時代の後期ぐらいには、もう一般大衆が普通にお化粧目につくようになってきて、それこそ車内マナーのワースするということが日常化しておりました。
『都風俗化粧伝』

ト３ぐらいにいつも挙げられ、電車の中での化粧というのなんていう、化粧の指南の本がベストセラーになるぐらいがやり玉に上げられるようになってきたのも、同じように

け わい

90 年代の半ばぐらいからではないかと思います。
どうして女性たちが電車の中で化粧するようになったのかということですけれども、一般的には、やっぱりお行儀が悪くなって、例えば地べたに座ったりするような若者がFaculty of Human Sciences

増えておりますけれども、そういう若者とか、電車の中で、

Izumi Yonezawa

例えば物を食べたり、お弁当を食べたりするのと同じよう

Konan Women’s Universityに、要するに、プライベートな空間とパブリックな、公の− 111 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

空間との区別ができていない若者たちが 90 年代から増えを待たずに、欲望のままに生きるという、そういうのがコてきたので、化粧も、同じように、本来は家でやることをギャル的であると思うんですね。待つことを知らないとい外でやってしまうという、そういうふうな流れで大体解釈うか。例えば、コギャルは、ブランドバッグなどをすぐされることが多かったと思われます。確かにそれはもちろに欲しがって、子供というか、まだ女子高生の分際でもそん一理ありますが、やっぱりそれだけではないというのがういった高級ブランドバッグを欲しがります。同じよう私の主張です。やっている本人はお化粧を電車の中でするに、コギャルは、化粧に関しても、化粧したかったら今すことに対して罪悪感をそれほど持っていないのではないか、

ぐするんですね。その結果こういうことになったわけなの

そんなに悪いと思っていないのではないかというのが私ので、それまでは、女子高生というと、基本的にやっぱりお考えです。

化粧はしないというのが社会通念だったと思います。例えというのは、先ほどから申しておりますように、90 年

ば、化粧品メーカーさんのメーク講習会というものが結構

代以降、化粧そのものが以前の化粧とは大分変わってきて開催されていたと思うんですが、そういうものも、やっぱいると考えられます。それまでは、お化粧というと、成人り高校を卒業する 18 歳の少女に向けて、社会人になった

女性、大人の女性の身だしなみという、やはりその範疇にらお化粧しなさいという感じで行われていたと思うんです

おさまっていたと思いますが、90 年代以降は、どんどんが、もうコギャルが登場してからは、女子高生は既にお化

大人の女性の身だしなみという範囲を超えてというか、む

粧をしているのが当たり前で、それをいかに薄くさせるか

しろそこが崩壊してきて、小学生も最近ではお化粧したりというか、そっちの方向にエネルギーを注がないといけな

しますし、中学生、高校生はもちろんですし、男性もお化くなったんじゃないかなというふうに思います。

粧するような時代にだんだんなってきています。そういっというように、80 年代は、女子高生というものはお化た中で、いつまでもお化粧というものを身だしなみ的にと粧をしていないという、そういう常識が大人側にも子供らえていると、身だしなみだから家でやりなさいというふ

側にもあったと思いますが、それが 90 年代になりますと、

うになりますが、化粧を逆に自己表現とか教養、あるいはコギャルが登場したことで、制服にこのような顔黒メーク、趣味と考えると、別に電車の中で本を読むのをとがめる人

顔を真っ黒にして、マスカラでまつ毛を過剰なまでに強調がいないように、電車の中でメールをするのと同じように、して、時々ペンで描いていたような子もいますけれども、電車の中で別にお化粧してもいいんじゃないでしょうかと

そういうふうな過剰な化粧が、女子高生イコール化粧といいう、そういう感じで本人たちはやっているのかなといううように、大人側の常識をくつがえしてしまいました。そふうに私は思います。だから、ケータイでメールするみたこから大人の女性の身だしなみ、イコール化粧というふう

いに、コンパクトを出してお化粧をしているので、それほな考え方はもう過去のものになったのではないかと思って

ど目くじらを立てなくてもよいのではないかというのが私います。
それで、なぜ待てなくなったのか、コギャルは待たないの言いたいところなんですが、どうでしょうか。
では、なぜ 90 年代に化粧が身だしなみから自己表現とのかということですけれども、それには 90 年代に普及しか、教養とか、趣味とか、そちらの方向に移ったのかといた携帯電話などのメディアが非常に関係していると思いまうことですけれども、その理由の一つとしては、コギャル

す。私たちもそうなんですが、携帯電話が普及してからのが登場してきたことが挙げられると思います。コギャルと

世の中というものは、みんな待つことを知らなくなってし言えば、顔黒（ガングロ）とか、あまりよくないイメージ

まったという気がします。例えば、以前ですと、待ち合わで語られることが多い人たちですけれども、90 年代半ば

せというものでは、何時にどこどこでというのをきっちりあたりから社会現象として捉えられるようになりました。

確認して、それからその時間に行って、相手がおくれたらコギャルとは何かということを一言で言うのはちょっと

30 分待つとか、そういう時間の約束事の中に私たちは生難しいですが、社会学者の上野千鶴子先生がコギャルを定きていたと思うんですが、携帯電話が普及してからは、は義しておられますので、それをお借りして言いますと、「消っきり会う時間も決めずに、大体３時ごろにどこどこでね

費社会的なギャルたちの行動様式が低年齢化した現象を指という感じで約束をして、そのあたりに行ったら、「ちょす」というようにおっしゃっています。上野先生の場合は、

っと 10 分おくれます、ごめんなさい」とか言って連絡して、行動様式の中でも特に性行動を含むということで、それがもう待たないわけです。すぐに「今どこにいるの？」とい低年齢化した現象をコギャルというようにおっしゃってい

う連絡ができるものですから、私たちは以前のように待つますけれども、要するに、低年齢化ということは、何もか時間というものを失っていったのではないかなと思います。

も大人になるまで我慢しないということです。

それが、やはり我慢するとか、じっくり考えるとか、そう欲しいものがあれば今すぐ欲しいという、それがコギャルなのではないかと思います。我慢せずに、大人になるのいうことの低下にもおそらくつながっていったのではない
かなというふうにも考えています。

− 112 −

コスメの国のオタク

90 年代の半ばに待つことがなくなり、それにはメディュースする感覚を生み出し、目力のある私になるためにいアが関係しているというお話を今いたしましたけれども、ろいろ努力をしないといけないということで、その最たる

90 年代というのは、非常にメディア環境が発達した時代

ツールとして化粧というものに対して世の女性の関心が高です。それが化粧の変化にも非常に深くかかわっているとまっていったのではないかなと考えられます。

考えられるわけです。ここでは３つのメディア、プリクラ

それまでは、お化粧というと、どちらかというとマイナと携帯とインターネットが挙げられますが、このプリクラスイメージ、負のイメージも背負っていたと思うんですね。

というのがまず 95 年に登場しています。それから、女子

日本語の言葉で「化粧何とか」とつくのはあまりいい言葉

高生の間で特にブームになりまして、今はもうすっかり定もございませんし、そもそも「あの人はお化粧が上手です

着しているという感じでしょうか。

ね」というふうに言われると、それは、今までの日本ではそれから、携帯電話自体は 90 年代から普及していて、褒められていることにはならなかったはずです。お化粧

カメラ付き携帯という、今はどの機種にもついていると思が上手ですね、ということは、「じゃ、素顔はイマイチな

いますが、カメラ機能のついた携帯電話が 2000 年ごろかの？」ということになりますので、あまり言われてもうれ

ら一般に普及しています。もう一つ、インターネットです

しくない褒め言葉だったんですが、90 年代の半ばぐらい

が、90 年代の半ばにウィンドウズ 95 が発売され、その後から、お化粧がイコール自己プロデュース能力というふう

インターネットが、女性も含めて、多くの人たちが気軽にに、お化粧が上手であるということが評価されるようにな使うメディアになって普及していきました。2000 年以降ってくるとまた話は違ってくるわけなんですね。化粧に対は、さらにさまざまな機能が追加されて、ブログとか、自するマイナスイメージというものもかなり払拭されるよう分自身を語ったり表現するための装置というものが、以前になりましたし、今までは、「私はすごく化粧好きなんです」には考えられないぐらい広まってきているという、そういということを人に公言するのはちょっとはばかられたんでうメディア環境の変化がありました。

すが、そういうことを堂々と口にできるような時代がやっ

そういう状況下で、私たちの顔や体というものはいつでてまいりました。それはもちろん一般人もそうですし、芸もどこでも被写体となる可能性が高くなってきました。以能人というかタレントのような人たちも次々と「私はすご

前は、写真を撮るというと、やはりカメラを持っていって

く化粧品に詳しいんです」とか「化粧好きなんです」とか、写真を撮るという感じだったんですが、今はだれでも携帯

そういうことをマスコミ、テレビや雑誌などで口にするよを持っていますので、いつでも、どこでも撮ろうかという

うになりました。

ことになって、すぐに撮ることが当たり前になっています。

その中で、美容セレブとか、そういうふうに呼ばれるよ

また、撮った私をブログなどに載せるという、そういううな有名人たちが、叶姉妹とか、君島十和子さんとか、最機会もあるわけなので、私というものが非常に見せる──

近ではもういろんな人たちが出てきて、美についてや、自ここでは「魅せる」という漢字が使ってありますけれども、分の美容法を堂々とテレビで語ったりするようになってき

魅力的な私で、人に見せてもいい私でいないといけないと

たわけなんですね。一般人も結構、私は化粧が好きですという、そういう時代に突入してまいりました。せっかくプいうことを口にする人が増えてまいりまして、そういう人

リクラのシールになったり、友達と一緒に写真を撮ったり、たちのことをコスメフリークというようにマスコミが呼びあるいはブログに載ったときに、やっぱりかわいい、友達始めました。だんだんコスメフリークの人口が目立ってきよりも際立った存在の私でいたいというのはだれでも、女ましたので、そのような人たちに向けた雑誌なども次々と

子高生、若い女性、もうちょっと年のいった女性も含めて、創刊されるようになりました。

男の方もそうかもしれませんが、だれでもよく写りたいとコスメフリークとは何かということなんですが、まあ、思うわけです。そこで、自分のイメージ、自己イメージのコスメフリークという人たちは、とにかく化粧品が好きで、編集が始まってくるわけです。女性の場合は、それがもう化粧が好きで、24 時間化粧のことばかり考えているよう

化粧に直結するんだというふうに思います。

な人たち、というふうに言えるかと思うんですが、そんな

例えば、プリクラは特に、目が大きく写ると非常に美人人たちがほんとうにいるのかと、特に男性の方なんかは思というか、かわいく写るわけですね。そうなるためには、われるかもしれないんですが、結構いるんですね。私が考やっぱり目力が必須ということで、目を大きく見せるためえたコスメフリークの化粧行為というのがありまして、そのマスカラの使用量というんでしょうか、売り上げが 90

れは、化粧を読む、書く、語る、その 3 つが三位一体にな

年代から非常に伸びてきたと思われます。とにかく写真っているんですけれども、一つずつご説明いたしますが、に写ったときに目を大きく見せたいという、そういう願望、

普通の化粧というと、スキンケアとか、メークとか、そう

フォトジェニックな私、写真写りのよい私になりたいといいうものを含めて、一般の人だと一日の間で 20 〜 30 分ぐう、そういう思いがやはり自己を編集する、自己をプロデらいで終わると思うんですけれども、このコスメフリーク− 113 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

ウィンドウズ 95 が普及したあたりから、操作も簡単になの人たちは一日中化粧のことを考えているんですね。
まず、化粧を「読む」ですけれども、美容関係の雑誌をりまして、女性のパソコンユーザーも増えてまいりました

熱心に読んで、新しい化粧品の情報を仕入れないといけな

し、女性向けのホームページとか、そういうコンテンツのいわけです。今はインターネットもありますが、そういう部分でも女性を意識したものが増えてきました。インター

さまざまなメディアから化粧品の情報を手に入れて、例え

ネット社会が到来して、自分自身を表現するメディアとしばこの秋の新しいファンデーションだったら、数々の新製てインターネットは最適なメディアですけれども、そのよ品がさまざまなメーカーのさまざまなブランドから発売さうな中で、コスメを語り合うようなコスメフリークというれますから、その中で自分の肌に合ったファンデーション

ものが登場してきたのはやはりネットの普及と非常に関連を一つ見つけるのでも、結構真剣にやればすごく難しい作があるというふうに思います。どちらも 90 年代の半ばぐ業です。顔は一つですし、一つずつ試していくのも非常にらいから、ネット社会の到来とともにコスメフリークとい難しいので、いろいろな口コミなどを頼りに、私の肌にはう存在が顕在化してきたのではないかと考えられるわけでどれがいいのかということを研究しないといけないわけなすね。

んです。それだけでも結構かかりますし、実際買いにいっ

もう一つ、90 年代の半ばぐらいからは、オタク社会とて、そしてやっと化粧を「書く」。
「書く」というのは顔にいうふうに言われています。オタク文化というものは、そ描くことですが、今度は、その買ってきた化粧品を自分のれまではごく一部の愛好家の人たちの間だけで閉じられ肌に乗せていく、化粧をする段階になります。普通の人だていて、一般の人たちのところにまでそういったオタク文とそれで終わりなんですけれども、コスメフリークの場合化が広まっていなかったんですが、90 年代の半ばぐらい

は、非常に研究熱心ですので、化粧をした結果、そのファから、さまざまなオタク文化が一般的になってきました。

ンデーションが自分の肌にとってよかったのか、イマイチ

言葉で言いますと、例えば、「萌える」とか「萌え」とか、だったのか、どうだったのか、ほかの人にも勧めたいのか、

あと「アキバ系」とか、そういった流行語も生まれてまい

そのようなことを自分のブログとか、インターネット上にりましたし、流行現象としてメイドカフェ、メイドさんの書き込んだりしてそれを公開するんです。それがコスメを格好をしたウェイトレスがいるカフェとか、「電車男」な「語る」です。コスメフリーク同士で、お互い、どこどこんていうものも数年前にヒットしたりしましたけれども、のあのファンデーションはよかったねとか、アイシャドー

今までは一般的でなかったオタク文化とオタク、そういうの新しいのは思ったほどよくなかったとか、あっちのほうものが脚光を浴びた時代でもありました。それで、オタクがかわいかったとか、化粧談義とでも申しましょうか、そと呼ばれるような存在の人たちと、先ほどからお話ししてういうふうに化粧品をネタに延々と語るという作業が待っおります化粧が大好きなコスメフリークとは、まあ、どちています。

らかといえば家にこもっているようなタイプのオタクの人

そういうことをやっていると、ほんとうに 24 時間ぐらとは一見相入れない、対極の存在であるというふうに思わいすぐにたって、化粧のことばかり考えて一日が終わってれるんですが、実はそうではないというのが私の持論なんしまうんですけれども、それぐらい化粧品好きな女性といですね。

うものが実際に今非常に増えてきているということなんでコスメフリークとオタクとは、実は非常に似ているといす。人気のブログのジャンルでも、そういったコスメ系のうのがここからのお話ですが、まず一つ目は、どちらも虚ブログというのは常に結構上位のほうにランキングされて構の世界に生きているということです。オタクの人たちといると思いますし、今は、ほんとうに化粧が趣味なんです

いうのは、一般的にインターネットの世界ですとか、好きという感じで、立派な趣味の一つとして化粧を楽しんでいなアニメとか、好きな漫画とか、そういうふうな虚構の世る女性たちというのが増えてきていると思います。コスメ

界、バーチャルな世界に生きている、そういうところに価フリークについて今お話ししたんですけれども、次は、そ値を見出して、そこに自分自身のアイデンティティというのコスメフリークの生まれてきた時代背景と申しますか、

ものを見出しています。現実の出来事よりも、アニメの中

世の中の動きと関連づけて少しコスメフリークを見ていきの世界の出来事のほうが大事という、それがオタクの価値たいというふうに思います。

観というわけです。

コスメフリークが登場したころというのは、先ほども少よく、アニメのポスターとか、漫画とか、そういった自し申しましたけれども、インターネット社会が到来した時分の好きな世界のものを袋に入れて大量に持ち歩いている

代なんですね。IT 化などが叫ばれたり、ウィンドウズ 95

オタクの人というのがいますけれども、そういう人たちとが登場したりというふうに、非常にインターネットといういうのは、その漫画の本とかアニメの物語の虚構の世界がメディアが一般の人たちに普及して、特にそれまで女性は、自分の心のよりどころになっていて、一種の精神安定剤的

ネット上でも男性に比べてユーザーが少なかったんですが、な要素があるので、それを常に持ち歩かないと非常に気分− 114 −

コスメの国のオタクが不安になってしまう。だからオタクの人というのはそうの、自分が萌えられるようなキャラクターというものを頭いうものを持ち歩いているそうですが、それと同じように、の中でつくり上げているのではないかというふうに考えら

コスメフリークの人たちも、化粧をした顔の世界に生きてれるわけですね。だから、コスメフリークにとっての化粧いるというふうに考えられるわけです。化粧をした虚構のというのは、自分というフィギュアづくりであると考えら

顔と申しますか、バーチャルな顔のほうを素顔というふうれるのではないかと思います。

に感じているのがコスメフリークで、化粧をした顔に私のというように、一見正反対に見えるオタクとコスメフリ

アイデンティティを見出しているのがコスメフリークなんークには実は共通点があったということで、どちらも 90ですね。メークを落とした素顔はもうほんとうの私の顔で年代以降の時代の産物ですけれども、オタクのほうは、自はないぐらいに思っている人たちが結構多くて、だから、分の頭の中で、脳内でフィギュアの美少女と恋愛して、そコンビニに行くのにでもつけまつげをつけるような人もいれで結構自己満足というか、自己完結してしまいます。逆たりします。

に、コスメフリークのほうは、頭の中で、自分自身が少女というように、コスメフリークの頭の中では、アニメの漫画のヒロインの顔になったような気分で、もうそれで満ヒロインのような顔を、私はこれというふうに思っている

足してしまいます。このように、お互いに脳内恋愛であっ人が多いんですね。先ほどオタクの人たちが漫画やアニメたり、脳内美人であったり、自分の頭の中でだけ満足してのポスターを大量に持ち歩いて、そこに精神的なよりどこ

完結してしまうので、お互いに自分しか愛せないというか、ろを見出していると申しましたけれども、コスメフリーク

頭の中は自分しか存在しないというような、自己愛だけとも、同じように、大量の化粧品を常にポーチに入れて持ちいう点でも非常に似ているのではないかなとも思います。

歩いて、そこに心のよりどころを見出している。まあ、ポ

そうなってきますと、なかなかお互いが出会う機会も少な

ーチを忘れたりすると非常に不安になるというところが、いので、オタクやコスメフリークが増えてきた世代においオタクとコスメフリーク、どちらも虚構の世界に生きていては未婚率が高かったり、それが少子化の原因になっているという点で非常に似通っているのではないかと思います。

るというところまでも話が広がってしまうわけなんですね。

二番目の類似点としては、アニメのキャラクターやキャでは、最後に、なぜそんなにコスメフリークたちが化粧ラクターの一部の要素というものをオタクの人というのはに夢中になるのか、化粧というフィギュアづくりに夢中に非常に好んで、それを溺愛するんですが、その溺愛するこなるかということをお話ししたいと思います。先ほどお話とを一般に「萌える」というふうな言い方で表現している

しましたオタク文化などは、今非常に高い評価を得て、日わけなんですが、コスメフリークもそうなんです。例えば、本の独自の文化として、最近ではさまざまなアート関係のオタクの人たちというのは、あるアニメに出てくるキャラ

ビエンナーレなどにもオタク文化として美少女フィギュア

クターの女の子を非常に溺愛して、その女の子の眼鏡がいが出品されたりとか、そういうことがあって、海外に向け

いとか、着ているメイドさんの服がいいとか、ついているて日本の文化、オタク文化というものが発信されています。

猫の耳がいいとか、しっぽがいいとか、いろいろなこだわ

私自身は、それと同じように、日本のコスメ文化、化粧文

りポイントがあって、専門じゃない人にはなかなか理解し化も、「J カルチャー」としてこれが日本の文化ですといがたいところがあると思うんですが、それらの萌えるポイ

うことで発信していけばいいのにと思っています。それぐ

ントに非常に萌える、溺愛するという、それがオタクなん

らい日本のコスメというものは非常にレベルが高いと思いですけれども、コスメフリークの人も結構似ていまして、ます。

オタクがキャラクターのフィギュアに萌えるように、自分、どうしてかと言いますと、日本のコスメというのはゲー「私」というフィギュアに結構萌えているんじゃないかな

ムとして完成されているというふうに考えられるわけです。

ということなんですね。萌えるポイントは、コスメフリー

まず、本体、自分の体がゲーム機器、何でも構わないです

クの場合もオタクと同じようにありまして、例えば、ある

けれども、DS でもいいですし、プレイステーションでも人にとってはそれが目であったり、白い陶器のような肌で何でもいいですが、自分の体がゲーム機器みたいなものであったり、ぽってりした唇であったり、どうしても譲れなす。そこに新作の化粧品、ソフトを投入します。そしていい巻き髪であったりというふうに、それぞれのこだわりポ

ろいろ、年齢を重ねていくと出てくる敵がいるわけです。

イントがあって、そこに萌えているというか、自分自身のシワとかシミとかタルミとか、そういうものを次々と自分部分部分を溺愛しているというような傾向があるんじゃな

自身で退治して、クリアして、そして自分の中で自分が望いかなと思っています。

むフィギュアというものを完成させていく。完成すること

オタクの人たちがフィギュアを例えば自分自身でつくっができたらクリアという、そういうゲームをコスメフリーて喜んでいるように、コスメフリークの人たちは、化粧にクという人たちは頭の中でというか、自分の体を使ってやよって自分というフィギュア、人形をつくって、自分好みっているのではないかというふうに思います。また、それ− 115 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010ができるテクニックと能力を持った人たちなんですね。ど璧にできているからこそいつまでも高い支持を得ているん

んどん年齢を重ねますと、シワ、シミ、タルミ、そういうじゃないかなと思います。

ものも次々と出てまいりますし、高度にもなっていきます

一方、『MAQUIA』など多くの雑誌に登場しています平が、そうなるとまた次の新しい化粧品が開発されて、それ

子理沙さんというタレントでモデルさんなんですが、彼女がどんどんレベルアップしてということで、まさに尽きるも、ぱっと見た感じですといくつかわからないんですが、ことがないコスメというゲームなんですが、そのおもしろ今 38 歳なんだそうです。38 歳なんですが、25 歳にも見えさにはまっているコスメフリークたちが非常に多いんじゃ

るし、20 歳にも見えるしという、そういうふうな感じでないかなと思います。

すね。お人形さんのようなイメージで、雑誌の一番大きなフィギュアを目指して、フィギュアを完成させたら終わ見出しも、「一生姫で生きていく」と書いてあるんですね。

りというふうに申しましたけれども、では、女性たちといまさにこれが今 20 代、30 代の女の子たちが目指している

うのは、具体的にどんなフィギュアになりたがっているの

ところなんだと思います。もう 30 代に突入したけれども、か、どんな姿になりたがっているのかということをお話し

まだまだこのお姫様のようなルックスはキープできている

たいと思います。まずはバービー人形ですね。結局どの年ので、このまま頑張って 40 代、50 代といってみようという、代の女性に聞いても、行き着くところはここなんですね。

そういう心意気がこの雑誌からも伺えるんじゃないかなと

私は今、20 代の学生さんを毎日相手にしておりますけれ思います。だから浜崎あゆみさんとか安室奈美恵さんといども、20 歳ぐらいの女の子も、やっぱりバービーみたいった女性たちは 30 代に突入したばかりですけれども、もな感じになりたいと。バービーみたいな、今、例えば 30

う平子理沙さんのように、30 代後半でも少女風というよ

歳そこそこの、安室奈美恵さんとか、浜崎あゆみさんとうな女性たちが増加してきているわけなんですね。

か、ああいう人たちのような女性にどうしてもあこがれる

今、「大人可愛い」という言葉が大流行していて、ファというふうに 20 歳の女の子は言います。もちろん、30 代の、ッション雑誌、化粧の雑誌、そういうところではもうキー

浜崎あゆみとか安室奈美恵の同世代の女の子たちは、当然ワードとして絶対外せないのが「大人可愛い」という言葉

彼女たちのようになりたいんだと思います。それからもっなんですけれども、今までは、大人というのは、イコールと上の世代、40 代とか 50 代の女性たち、その女性たちも成熟なので、「可愛い」ということとはやっぱりどこかで意外とバービー人形になりたいというふうに思っているん

決別するというか、卒業するのが当たり前だったんですが、ですね。まあ、私の実感で言いますと、大体世の中の女性

今は「大人可愛い」まま、30 代はごく当たり前のようにの 9 割ぐらいはバービー人形になりたいんじゃないかな─

いきますし、40 代でも「大人可愛い」でオッケーという、

─本音のところでは、ですが──と思っているんじゃない

そういう感じの時代になってきています。

かなというふうに思います。
今は時代的にも、「これが私よ」

一生姫で生きていくというのはどういうことかというと、とか、「私らしさよ」というのを強調して、個性を追求す姫というのは、いつも主役なんですね。お姫様というのはる私探しの時代というよりも、バービー人形のようになっ

基本的に脇役にならないということで、一生姫で生きていて、毎日違うイメージで変身したい、自分を変えたい、メ

く宣言の裏の意味は、一生私が主役で生きていきたいとい

ークも服もファッションも、自分も変わりたいという、そう、そういうことじゃないかなと思います。今までは、30

ういうふうな女性のほうが多いような気がいたします。そ代になると、女性というのは、例えば結婚とか出産をして、の中でバービー人形になりたいという願望が非常に明確に妻となって、母となって、いやおうなしに人生において子なってくるのもやっぱり当たり前のことなんじゃないかな

供が主役になったり夫が主役で、自分は脇役というふうなと思います。

生き方が一般的だったんですが、今は、30 代になろうが、では、次に、その現状を少しお話したいと思います。
『sweet』というファッション雑誌がありますが、今アラ私は姫で、私は主役ということを女性たちが暗に言っているのではないかなというふうに思います。

サーと呼ばれるような、20 代後半から 30 代前半ぐらいの

今度はもうちょっと上の年代、40 代、そして 50 代のと女の子たちの間で絶大な支持を得ている雑誌です。でも、ころまでいってみようと思うんですが、50 代女性も、実二十歳ぐらいの大学生も結構読んでいます。その表紙になは同じように「大人可愛い」とバービーを目指しておりまっているのが浜崎あゆみさんですね。彼女は 30 歳ぐらいして、30 代とほとんど変わらないんです。新しい 50 代とですが、お人形さんのようなイメージをもう 10 年以上保いうキャッチフレーズが最近目につくようになりました。

ち続けていると思いますし、それがやっぱり人気の秘密と萬田久子さんという女優さんも『HERS』など多くの女性

いうか、このルックスなしにはやっぱり浜崎あゆみのカリ誌に登場しますが、彼女は 20 代のときにミスユニバース

スマ的な人気というものはなかったと思いますし、ファッの日本代表に選ばれたという見事なプロポーションの持ちションもメークも含めて自己プロデュースというものが完主です。そのイメージを、今は彼女は 50 代ですが、20 代、− 116 −

コスメの国のオタク

30 代、40 代、50 代と、同じようなイメージをキープした

えておりますので、そういう女性たちは、急に次の 60 代

まま 50 代になっています。そういう 50 代のことを多分新になったからといって脇役に回るとはとても思えません。

しい 50 代というふうに呼んでいるんだと思います。

新しい 60 代とかいってまた同じようなイメージで頑張っ

今までは、やっぱり 30 代、40 代となってきますと、体ていくんじゃないかなと思いますけれども、結局、主役を型も崩れてきたり、ルックス的にどうしても老化というこおりない、いつまでたっても一生主役でいたい、一生現役ともありますし、大人になったということで、若いころとでいたい、一生姫でいたいという、そういう女性たちが増同じようなスタイルというものはしなかったと思うんです

えてきているわけなんですね。

が、今は、40 代であろうが、50 代であろうが、20 代と同

松田聖子さんがウェディングドレスを着ていることでちじように好きな格好をするというように、それが基本になょっと話題になった CM がありました。やっぱりこれも、ってきています。そのためにはやはりアンチエイジングのいくつになってもウェディングドレスの似合う私でいたい

化粧品というものが必須になってくるんだと思います。新という、もう女性の願望のすべてがここに凝縮されている

しい 50 代のイメージとしては、コーセーさんの新キャラのではないかなというふうに思います。どうしてウェディ

クターに選ばれた黒田知永子さんがいらっしゃいますが、ングドレスなのかというと、やはり主役ですね。ウェディ

彼女もやはり美しくエイジレスに年をとっていくタイプのングドレスを着た花嫁さんというのは主役の象徴みたいな女性の代表というふうに考えられます。このように、年齢ものだと思います。ウェディングドレスを着ている限り、を超越するような女性たちがどんどん登場してきています。

女性は脇役にはならない、私が主役と彼女は言っているとそのためにもアンチエイジングの化粧品というか、高額化思います。

粧品ですね。他には美容医療とかがありますけれども、こそんなふうに、女性たちが一生現役主義で、主役をおりれらも含めて、やはり 50 代、60 代、同じイメージをキーない女性たちが増えて、女性たちのバービー人形になりた

プして若々しくいるためにはますます化粧品の力というもい願望というものが続く限り、このコスメの国のオタクでのが非常に重要になってくると思います。

あるコスメフリークたちは、どんどん増加するんじゃない

それで、なぜいつまでも彼女たちはバービー人形を目指かなというふうに思います。60 代のバービー人形とか 70しているのかというのが最後にお話ししたいことですけれ

代のバービー人形がそろそろあらわれる時代がこれからやども、やっぱりいくつになっても私自身が主役でいたいとってくるのではないか、生まれるのももう時間の問題ではいう想い、「私」で遊びたいというか、着せ替え人形になないでしょうか。私自身も、非常に化粧品好きでして、コって、バービー人形のように、いくつになってもお洋服がスメフリークなんですけれども、自戒を込めて、今後のコ似合う、最新のメークや髪形が似合う、ファッショナブル

スメフリークたちの行方を自分自身も実践しながら追ってな私でいたいという想いが今の 50 代の女性にはもう芽生

いきたいと思っております。

− 117 −

コスメトロジー研究雑感

平成 19 年度

研究助成

コスメトロジーへの植物変換の応用について下田恵

私は大学院時代から植物培養細胞を生体触媒とする物質す。このたびは、植物培養細胞を利用して、有機化合物を変換機能について研究を行ってきました。植物は様々な二さらに有用な物質へ変換する手法を、化粧品の成分に応用

次代謝産物を生産しますから、その培養細胞は種々の優れする研究を計画いたしました。幸運にも、貴財団の研究助

た物質変換機能を示します。即ち、ある種の植物は生薬な成に採択され、研究計画を遂行する機会を賜りました。今どの有用な生理活性物質を生産する能力があり、生産物で回開発に成功した新規な化粧品素材については今後も、そある生薬のみならず、その培養細胞にも生体触媒としてのの生理機能を評価し、化粧品としての可能性を検討してま魅力があります。しかし、植物培養細胞を生体触媒とする

いりたいと考えております。最後に、本研究にご助成を賜

物質変換に関する研究はまだあまり行われておらず、そのりました財団法人コスメトロジー研究振興財団に深く感謝

研究手法を発展・展開することをライフワークとしていま申し上げます。

（大分大学）

平成 19 年度

研究助成

秘すれば花
藤本

郷里の姫路には城がある。とても美しい姿と物語を持っている。広大な縄張りに螺旋状の堀をこしらえ、天守に至啓二考えるのではなく、化粧することによって現れる姿を美しいと思いたい。

るまではいくつも門がある。その先に豪華な破風を持つ四われわれはさまざまなことを経験してここにいる。教育

つの天守が聳え立っている。これらは数多くの石垣と柱にとはひとが成長するために重要なものである。そして、そよってかたちを与えられている。そうして全体に均整の取れによって得た知識やスキルをすべて消し去った跡に残るれた美しさが現れている。この姫路城の西の丸には化粧櫓

ものが教育の結実したものであると聞いたことがある。そと呼ばれる櫓がある。大天守に登るまでの城内に漂う、冷れはそのひとから立ち上る匂いと言ってもいいかもしれ

たく優しい空気をよく思い出す。これは年を経たものだけない。それでは齢を重ねて醸し出される匂いを加齢臭と呼が持つ深みである。

ぶのはふさわしいのであろうか。名をつけられたとき、そ話は変わるが、わたしは加齢臭という言葉がどうも嫌いのものは生命力を失う。少なくともその存在の一部を失う。

である。最近になってこのような臭いが気になってきた。

すべてが加齢の臭いになり、ひとはその臭いの原因を探し

おそらくみなさんもそうではないだろうか。帰りの車内は出すことに意味を見出そうとする。しかし、そこには本来仕事を終えて疲れきった人たちで一杯である。ここでは臭の加齢の香りはない。ひとは櫓をつくり、そこに住まう美いという言葉が独り歩きし、臭いという存在を消そうとししいひとにちなんで化粧櫓と呼ぶようになった。そこにはている。臭い、シミ、しわなどを隠すための行為も化粧でひとびとの気持ちがある。物数を極めて工夫を尽くして後、ある。これは、ただ化かすための、そして化けるための謀

花の失せぬところを知るべし。齢を重ねることが楽しいこであろうか。化粧は美しいひとを目指す行為です、とひととであるように、言葉に惑わされるのではなく、秘するこは言う。自己を他と分かつための方法で、個性を表現するとによって花の失せぬよう努めることがコスメトロジーで方法のひとつです、とも言う。私は化粧することに意味をあると思いたい。

− 121 −

（慶應義塾大学理工学部応用化学科）

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

平成 19 年度

研究助成

未来へ繋げていきたいコスメトロジー
桒原

順子

今回の研究テーマは、ある女性が敏感肌のため日頃から実は、敏感肌のある女性とは私の母。彼女のような多く

低刺激性の化粧品を愛用していたことから着想に至った経の敏感肌の方々のためにもコスメトロジー研究を続けてい緯があります。市販の化粧品なら何でも肌にあうわけでなければと思っています。ところで、私ごとではありますが、

く、少々割高ではあるが刺激の少ない化粧品を使いたい。

研究助成をいただいておりました２年もの間に幸いにも二できれば、使わせてあげたい。本研究申請当時は、私は産人目の子どもに恵まれました。第二子の長男は第一子の長休・育休明けで「研究」と「はじめての子育て」の両立に女と違ってとても肌が弱く、朝夕のスキンケアが欠かせま悩まされながらも徐々に自分のペースをつかみつつある時せん。成長するにつれて肌も強くなる、とは言われている期でした。それでも子供が急に発熱した時には実験予定をものの心配です。子どもたちのそのまた子どもたち、これ変更して保育園までお迎えに行かなくてはなりません。生から先の時代も敏感肌で悩まれる方々は少なからずいらっ

活圏から私の実家は程遠く、実家の母の協力は全く得られしゃると思います。敏感肌を少しでも緩和できるより良いないため苦悩の日々が続きました。そんな中、コスメトロ

素材を未来へ。一研究者、そしてひとりの母としてもコスジー研究助成に採択され、今は細々ながらでも一人の研究

メトロジーを未来へ繋げていきたいと思っています。
（九州共立大学工学部）者としてこれからも研究を続けていかねば、という強い意
志と財団からの励ましを頂いたと感謝しております。

平成 19 年度

研究助成

材料から見たコスメトロジー
平栗健二

私が学生の頃は、シリコン（珪素：Si）が電子デバイス

今回、コスメトロジー財団より、研究助成を受けコスメトの原料として半導体材料の主力に成長する時代と重なり、ロジーに関しての研究を実施する機会に恵まれた。この研素材の精錬技術や大型化技術が急速に発展した。さらに、究に際し、医学、薬学、化学などの異分野における研究者

1980 年代にはオイルショック後の化石燃料に代わる未来と接する機会が得られ、視点の置き方、実験の手法、評価のエネルギー源としての太陽電池や高速通信を担うスイッの検討など課題解決への道程が意外なところに潜んでいる

チングデバイスに利用されるようになって行った。その当ように実感している。コスメトロジー分野においても、地時、受講した電子デバイスや半導体物性の授業では、“Si

球環境に配慮した材料や人類を含む生物の安全性を考慮しからの発光は難しい”と学習した記憶があるが、現在のナた素材の開発が不可欠であり、その実現のためには多方面

ノテクノロジーの凄まじい進歩によって、“発光デバイスの研究者の協力が必要である。

としての開発が難しいはずの Si ”を数ナノメートルに微自分自身の専門は、半導体工学であるが、境界領域や融細化することで発光が可能となり、しかも医療、服飾、化合分野の研究者との協調と遂行が重要であることが実感で

粧品分野への展開を見せていることに深い感慨を持つ。

きたことに大変感謝する。今後さらに研究の進展に尽力し、化粧品の分野で利用されている多くの材料は、金属酸化物や硫化物など意外と工業界で利用されている素材が多い。

この Si ナノ粒子（nc-Si）の製品化が実現できることを期待している。

− 122 −

（東京電機大学）

コスメトロジー研究雑感

平成 19 年度

研究助成

コスメトロジーと農学部学生
神崎浩

私が現在教育を行っている岡山大学農学部では、学生定いる学生が多く、それらを解決するための研究をぜひ行い員のほぼ半数を女子学生が占めている。それら学生の中にたいと思っていることが判る。もともとそのような学生諸は漠然と食品を取り扱う研究を行いたいという希望を抱い

君は、皮膚に優しい化粧品や炎症の原因究明に興味を持っている者が多いようである。我々の学部は４コース制を取ており、コスメトロジーに対して人一倍嗅覚が鋭かったこっているが、その中に農芸化学コースがあり、そのコースとになるが、農学部でもそのような研究を行う可能性があの教育を受けることにより彼女達は、食品素材ばかりでなることを知ることによって、コスメトロジー業界を就職先

く化粧品素材や医薬品の開発に関係する研究が農芸化学との選択肢とするきっかけとなるようである。実際に私の研いう学問分野と大いに関係があることを知る。

究室を卒業した学生が、日本酒メーカーで化粧品素材開発

私は応用微生物学、天然物有機化学を研究フィールドとに携わったり、化粧品素材企業で毎日素材と格闘しながらしているため、講義で有機化学という科目を担当している

活躍してくれている。さらに後輩達の中にも彼女達を手本が、その中で化粧品の素材についても紹介している。そのにしてコスメトロジー分野での就職を目指す学生が増えて中で，化粧品の素材開発に農芸化学研究者も関わっており、いる。最近は男子学生も男性化粧品の生産量の増加に伴っもともと化粧品を取り扱っていなかったような企業が化粧てコスメトロジーに興味をもちつつある。

品の研究開発を行っているという情報を伝えると、彼女た以上の状況を考えて、我々教員としては農学部学生にコちは非常に興味をもち、質問をしてくることが多い。逆にスメトロジーのおもしろさを教えるとともに、継続的にコこちらから彼女たちに尋ねてみると、アトピー性皮膚炎や、スメトロジー研究に従事する学生を育てたいと思っている。
（岡山大学大学院自然科学研究科）

乾燥肌、化粧に弱い体質など、皮膚を中心に悩みを持って

平成 19 年度

研究助成

本研究成果のコスメトロジーに及ぼす影響
飯村

ケミカルピーリングは、皮膚科、形成外科といった専門医が皮膚疾患治療で行ってきたが、最近では癒し空間とし

菜穂子

が社会ニーズに応えるためにも重要と思われる。
これまで筆者が行ってきた研究成果として、salicylic acid、ても好評で美を追求する現代人の人気を集めるエステティ

resorcinol 等の薬剤不安定性が、両親媒性物質との分子複ックサロンでも取り入れられるようになった。またドラッ

合体形成、イオン交換体形成によって改善されることが明グストア、コスメショップでもピーリング剤配合と謳う市らかになった。また経皮吸収促進も見られたことからこれ

販化粧品のコーナーも設けられるほど今やケミカルピーリ

まで用いられているピール剤とは異なる性質をもつことがングの一般普及、需要は目を見張るものがある。

うかがわれる。従って本研究で得られた複合体等は、新規ピール剤の代表的なものに phenol、salicylic acid、resorcinolの化合物であると考えるのが適当であると思われる。

等があり、これらは現在も主流の薬剤と思われる。しかし両親媒性物質との複合体化やイオン交換技術を導入した

これらの皮膚刺激性や酸素、光による薬剤不安定性、低い

ピール剤開発は、新規の機能を持つ化合物の獲得へと繋が

皮膚浸透性は未だ完全には改善されているわけでない。まり、臨床現場において高い有用性と皮膚ストレスを軽減した極端な高濃度での使用もしばしば見られ、患者へのストたケミカルピーリングの薬剤として貢献できると思われる。

レス軽減に課題が残る。従って、ケミカルピーリングにお本研究が新規皮膚疾患治療薬の提案へと発展できるよう更いて使用される薬剤には、①患者へのストレスを軽減し、に大きく展開していきたいと考えている。

②安心して使用できる、③安定性高い新規ピール剤の開発− 123 −

（新潟薬科大学薬学部薬剤学研究室）

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

平成 20 年度

研究助成

本研究のコスメトロジーに及ぼす影響生
藤原章雄

近年、コラーゲンの AGE 化が皮膚老化の促進に関与し湿やビタミン補給といった予防改善法ではなく、より高いていることが明らかになってきた。特に、CML はコラー技術や確かな科学的根拠に基づいた有用性の高い成分を配ゲンに生成する主な AGEs 構造体であることから、CML

合した機能性化粧品や機能性食品の開発が求められてい生成阻害剤は皮膚老化改善作用が期待できると考えられる。

る。このような背景から近年では、各化粧品・医薬品会社

このように、我々が皮膚老化を引き起こす原因物質としてが、機能性成分を配合した商品の開発に取り組んでいるもCML に注目する中、近年、皮膚老化の予防法に対する社のの、それら機能性成分の作用は、紫外線など外来刺激物

会的関心は、オゾン層の破壊による紫外線量の増大や平均質からの防御作用や、活性酸素など生体に対して無差別的

寿命の伸長などといった理由から非常に高まっており、外に有害作用を及ぼす化学種の除去作用にとどまっており、科的手術やレーザー療法、化粧品、健康食品、ケミカルピ

より高い有効性を発揮する商品を開発するためには、特定ーリング、コラーゲンの注入法など、様々な手法で皮膚老の新規ターゲット分子に対する有効成分の開発が必要とさ化を予防する試みがなされている。しかしながら、レーザれる。前述したように、コラーゲンに生成した CML は皮ー療法やケミカルピーリング、コラーゲン注入法では、瘢

膚老化を引き起こす原因物質であることが示唆されており、痕形成や色素沈着、皮膚の壊死などの副作用が現れる可能

CML は皮膚老化予防に対する新たなターゲット分子とし性もあり、特にケミカルピーリングにおいては施術後に徹て注目されるものと考えられる。ゆえに、今後、本研究で底した遮光を行う必要があるなど、これらの治療法では要得られた CML 生成阻害化合物及び、さらなる阻害化合物する手間や時間・費用がかかりリスクも高いことから、よの探索を行い、それらの in vivo での効果を検討すること

り安全性が高く、安価で手軽に行える化粧品や健康食品がで、将来 CML 生成阻害剤が皮膚老化の予防・改善に応用

最も一般的に普及している。一方で、近年の皮膚化学研究

できるよう努力していきたい。（熊本大学医学薬学研究部）の発展に伴い、これまでの化粧品や健康食品でみられた保

平成 20 年度

研究助成

新しいものを発信すること
渡邉義之

男性用のシェーバーは数千円から数万円の物まで様々なは、専ら身だしなみと整えるというレベルで満足でき、し価格の商品が店頭に並んでおり、それらの価格差は十倍以

たがって中位の機種を選択する人が多いのではないだろう

上にもなる。簡単に調べたところ、最上位の高級シェーバ

か。そのようなことを考えているうちに、ふと次のようなーではスペックの数値が高いだけでなく、目玉となる独自問いが思い浮かんだ。最先端の技術や製品を選択する人のの先端技術が活用されていることが多いとのこと。個人的割合とは幾らくらいだろうか？ 化粧品の場合はどうだろには、最新技術を駆使した製品を是非試してみたいといううか？ 勿論、シェーバーのような電気機械と化粧品のよ

願望を常に抱くが、いざ購入となると結局財布との交渉がうな化学製品とでは、大きな違いがあるだろうが、絶えず優先されてしまう。安価で長持ちするシェーバーに出会う

進歩を求められていることに違いはない。昨今、社会的・こともあれば、中クラスの価格のシェーバーでも度々故障

経済的閉塞感が報じられているが、やはり新しいものを発してしまい焦る朝を迎えた経験もあったため、これらの信することは肝要であり、コスメトロジーが担うべき役割

経緯も商品の選定に少なからず影響しているのだろう。一も重要であることが再認識される。

般的にも男性の場合、美しさを追求するという意識より− 124 −

（近畿大学工学部生物化学工学科）

コスメトロジー研究雑感

平成 19 年度

研究助成

私的コスメトロジー観山本明美

人類の歴史の中で化粧は相当昔からあったらしく、文化

化粧をするとどんな良いことがあるのだろうか。欠点がのひとつとも言えるから、現代人の生活もこれを抜きにはカバーされる（決してなくなっているのではない）、若々すまされない。特に女性は化粧をするのと落とすのに毎日しく見える（決して若くなっているのではない）、気分が相当の時間とお金をかけている。私は皮膚科の診療をして引き締まる、皆と同じ化粧をすることで安心できる、あるいるので、明らかに化粧をするために生じた、あるいは悪いは他人より目立つ化粧で自己主張をできるといったこと化した顔面の病気の患者さんをみると、化粧をやめることだろうか。鏡に向かって化粧するときは他人の目線を意識を一応勧めてみる。しかしほとんどのかたは無理です、とし、どのように映りたいかをイメージしながら表情をつく答える。職場が許さない、接客業なので、あるいはいまさりあげていくだろうから、他者を意識した社会生活の基本

らとても素顔でなんて、とおっしゃる。ほとんど化粧をし姿勢の形成につながるとも言える。リハビリメイクというていない私（女性皮膚科医）は化粧なんかしなくても平気分野もあるくらいだから、顔面の皮膚病を気にせず明るくですよ、むしろ楽だし、化粧品代もかからないし、いいこ

生活できるようになる方もいるだろう。化粧品を買うこととばっかり、せめてポイントメークだけにしたらそのニキで消費を促しているという見方すれば内需を拡大する手だ

ビ（あるいは湿疹）は良くなりやすいですよ、とさらにしてになっているのかもしれない。コスメトロジーとは化粧

つこく勧める。一応納得してくれる方もいるが、たいていを通じて世の中を明るくする学問ということだろうか。
（旭川医科大学医学部皮膚科）

は次の受診日にもバッチリ化粧をしてくる。

平成 19 年度

研究助成

酵素学研究からその先の向こうにあるものを期待して
人見

農学部という基礎と応用の両方を追い求める研究分野で、

清隆

ものを、あえて書かせてもらえれば、この酵素と皮膚の硬これまで皮膚形成に必要な酵素反応（トランスグルタミナ

さ、老化によりこの酵素反応物の蓄積は関係しそうである。

ーゼというタンパク質の架橋化反応）について研究をしてしかし、だからこの酵素の調節をすれば皮膚が柔らかくなきた。酵素科学の専門であり、皮膚の専門家です、とはとります、とは正直言えない。表皮の性状を決める要因がそても言えない立場であるが、今回のご支援によって、多少んな単純なものではない。とは言え、これら酵素反応のなりとも皮膚科学における知見を増やせたと考えている。

調節機構が皮膚の硬さや状態に関連するのでは、と期待も基礎研究としての研究報告書を書き終え、さてしかし、している。なかなか実際の検証に進めずにいるのだが、今課題の「化粧品について普段思うこと」、「自分の研究と化回こうした財団のご援助を頂く中でその先のアイデアを考粧品学との関わり」はすらすらと筆が進まない。自身が身えるようになった。基礎的な研究の積み重ねが突如として、だしなみを含めて化粧品のことを普段あまり考えることのいろんな利用価値を生みだすのは、どの産業分野でも明らない典型でもあり、またすぐに化粧品製品に繋がるようなかである。基礎と応用の垣根が低くなっている事はどの分研究課題ではないのである。所属する農学部の化学系は女野でもそうであろうと思う。皮膚の基礎的知見を深めるこ

子学生も多い。学生や妻にヒントになるインタビューを試とが、化粧品学を進め、思いもかけぬ新方向を見出すかもみたが、話は他の方向へ盛り上がってしまい、研究していしれない。今回のご支援に感謝すると同時に、そうした基る酵素とすぐにつながるような答えは得られない。

礎知見に期待を持ち続けて頂けることをお願いする次第で私の対象としている酵素についてその先の向こうにあるある。

− 125 −

（名古屋大学大学院生命農学研究科）

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

平成 19 年度

研究助成

コスメトロジーの重要性
加藤則人

３歳になった娘が、妻の化粧に強い関心を示すのをみる

今回、コスメトロジー財団から研究助成により、血小板

たびに、美しくありたいと願うのは、人類が生まれながらが皮膚の炎症において果たす役割を検討する機会を頂いた。

に持つ欲求だと思わずにはいられない。そういえば、私も血小板は、組織修復に必要な物質を豊富に含んでいる細胞

小学生の頃、母親の化粧をまねてこっそりメイクをした覚であり、アンチエージングにも重要な役割を有しているとえがある。人間が元来有する欲求を安全にかなえるべく、考えられる。今後は血小板を利用した安全な化粧品の開発

コスメトロジーという学問は今後ますます発展していくこにもぜひ携わってみたいと思っている。
（京都府立医科大学大学院医学研究科皮膚科学）とが期待される。

平成 19 年度

研究助成

美の追究のジレンマ
的崎尚“まつ毛エクステ”なるものが最近女性の間で人気らし

私共の研究では、化学物質誘導性の接触性皮膚炎の新たい。自まつ毛に人工まつ毛を付け足し、目をぱっちりとさな治療法の開発を試みております。皮膚での炎症反応にはせるもので、“付けまつ毛”よりも自然に仕上がるという体に存在する多種多様な免疫細胞が主に関わっています。

ことで流行しているようだ。１ヵ月程度は維持できるのでそこで、特に免疫細胞の活性化を調節する司令塔的な役割

化粧時の手間が省けるのも人気のポイントのようである。

を果たす樹状細胞に注目し、その細胞の機能を上手く操作

ところが最近になって消費者庁からまつ毛エクステンショ

することで、炎症反応をコントロールする新たな方法を確

ンの安全性の確保について注意を促す通知が出されている。

立しようと試みております。現在私共の研究成果から得ら

まつ毛エクステに使用する接着剤によるアレルギーへの対れつつあるものが、新たな接触性皮膚炎の治療薬になり得応の問題を含め、充分な技術をもたない業者などによる事

るには、まだ多くの研究が必要となりますが、今後、接触故例が増加しているとのことである。女性は常に美を追究

性皮膚炎の治療法の確立に貢献できるものであると信じてするが、一部で求めるものと逆の結果を導いてしまうのはおります。さらには、私共の研究が、接触性皮膚炎で化粧

なんともジレンマである。同様のことが化粧品にも言える。

品が使用できず悩んでいる女性や男性？（最近では、化粧本来使用することで美しくなるべき化粧品、一方、その中品を使用する男性が多くなりつつありますが）の希望となに含まれる化学物質との接触のため皮膚に炎症がおきるとればうれしい限りです。

（群馬大学生体調節研究所）

いった接触性皮膚炎がそのケースにあてはまる。

平成 20 年度

研究助成

私のコスメトロジー観山口

小学生の頃から（言葉を理解せずとも）「コスメトロジー」

裕史

えてくれた。

に漠然とした興味があった。女性の美容に対する熱意は何

医師として将来の診療科を選択する際に ｢ コスメトロジ

歳になっても「すごい」ことを母や祖母らやその知人が教ー ｣ に関連した分野（美容外科）もある形成外科を志すこ− 126 −

コスメトロジー研究雑感

40 歳も半ばを迎えた現在、私の研究成果は「自己満足」とにした。
駆け出しの医師の頃は私の理想とする医師像と現実とので終わることなく、社会に還元されるべきであると強く意ギャップに苦しみ、研究を重視するタイプの皮膚科医とし識するようになった。ここでの「社会」とは、あらゆる病て再出発したが、この科にも「コスメトロジー」は関与し気に苦しむ患者さんだけでなく、外見を気にするばかりにていた。某先輩の「皮膚科は研究が臨床に直結しているや社会と疎遠になり「社会的な命」を落としそうになってい

りがいのある科だ」との言葉を鮮明に覚えている。

る方も含めた大きな意味である。命を救うばかりが医者で２度の留学で「コラーゲン」
・｢ メラノサイト ｣・「再生医学」

なく、自分の生活・家族も大事にできる人間でありたい。

を研究したので、「コスメトロジー」は身近なものであり、自己満足の研究ばかりを追求するのではなく、産業として昨年は某化粧品メーカーのコンサルタントを務めた。妻も還元できる研究を楽しくできればいいなと感じるように母も祖母もサンプルを喜んだ。仕事中心人間ができる罪滅なった。
（日本は欧米の３分の１しか医療従事者がいない。

ぼしのような気がした。

患者の側からも医師の側からもこれは大問題である。医師

ただ長年興味があるものの「コスメトロジー」に関する研究には後ろめたさがあった。医師たるもの「命」に関わの多様性が日本も必要なので、医療従事者の質を保ちつつ人員が増えることを切に願っている。）

る研究を算術に囚われず志すべきであると思っていたから

あとどれ程私自身が研究をできるかは分からない。でもだ。
それが私の理想の医師像であり、皮膚がん・皮膚潰瘍（自楽しく、何かに囚われることなく、社会に産業として還元

然に治癒することなく敗血症に陥り命の危険性があるもの

できる研究をするのが理想である。それを叶えてくれるのを指す）の領域で成果を上げると同時に私自身の能力の限が私にとってのコスメトロジーである。
（名古屋市立大学大学院医学研究科）

界に直面した。

平成 20 年度

研究助成

コスメトロジー展望
大日輝記

医学は本来「人類が病気と戦うための学問」であり、美り、これをいかに取り扱うか結論を得ていないからである。

容という手法とは相容れなかった。しかし、社会の成熟に

美とはオカルト（目にみえないもの）であり、そこにつけ伴い、医学は美容という領域にまで立ち入るようになった。

込む欺瞞を許してはならない。これを断じる手段を持たな

美容医学という領域がある。定義づけるとすれば「個人のい以上、学問領域としての成熟は未だ望めない。

あくなき美的欲求に対して、医学を中心とした集学的知見

現時点で確実なことは、以下の３つである。

に基づき、医療行為で応える科学的手法」である。

第一に、提供者の喜びである。身体に関して享受者が抱

一方、美容の手段の中心である化粧は、「外的素材を付えていた不幸やストレスを取り除くことで本人や周囲の人加することで美を得る行為」である。化粧材料には、美意が幸福と感じ、そこに喜びを見いだす点では変わることが識にもとる部分を快適に覆い隠し、補う機能が求められてない。

きたし、従来の化粧の最大の使命は「若返ったように見せ

第二に、携わる者の責任として、「今、美容はここまでる」ことであった。しかし、市場の拡大と科学の進歩は、できる」という可能性と限界、そしてリスクを示せるかど

化粧の定義を覆そうとしている。
「機能性化粧品」といううかが重要である。宇宙旅行ができる、という選択肢は、言葉が示すように、皮膚の生理機能を理解し、科学的根拠

実際には行けなくても私たちに夢と希望とをもたらす。

に基づき、皮膚本来が持つ美しさを引き出す。さらには本そして最後に、コスメトロジーがもつ集学的知見とケースの蓄積は、他の学問領域にとっても可能性の宝庫である。

当の若返りをも目指している。
この境界領域に関わる者にとって、この急速な進歩と繁現象に真摯に接することで、医学、生物学の進歩に還元、栄は華やいで見える反面、戸惑いを禁じ得ない。なぜなら、貢献しうる発見が、今後、コスメトロジーの最前線から生

美容は今もって、享受者本人の満足という主観が第一であまれると信じている。

− 127 −

（久留米大学皮膚科）

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

平成 20 年度

研究助成

金属アレルギーを予防するコスメトロジーへ
平澤典保

今回、金属アレルギー抑制の観点からコスメトロジーへ

わち、制汗剤などにより体表面で金属の溶出を抑制したり、のアプローチを試みました。金属を含む装飾品等からニッ体表面で薄膜を形成して皮膚バリアを補強することによっケルなどの金属が溶出することが、金属アレルギーの発症て金属イオンの皮膚組織への浸透を抑制することは金属アに大きく関与し、それによってかゆみ・発赤が生じ、ひどレルギーの予防につながると考えられます。このような機い場合には色素沈着にいたる場合もあります。汗により装能を強めた化粧品を開発することができれば、機能性化粧飾品から金属イオンが溶出し、溶け出したニッケルイオン

品として今後大きく発展するのではないでしょうか。そのは組織に浸透していき、細胞膜蛋白あるいは組織間液のタためには、動物モデルや組織モデルで金属の浸透を解析でンパク質と結合して抗原となり、アレルギーを誘発します。

きる新たな実験系の確立が不可欠です。今回私たちは、動アレルギーの治療は、様々な薬が開発されていますが、物体内での金属溶出評価系、ならびに細胞系での評価系を

あくまで対症療法であり、特に金属アレルギーのような確立しましたが、さらに、体表面での金属溶出、そして組

IV 型アレルギーを主体とするアレルギー性炎症は治療が織への浸透を評価できる系の確立も目指しています。

困難です。このように金属アレルギーは薬ではコントロー

作用点が体表面であれば、基本的に人体に対する害は少ルしにくい疾患で、その症状を治療するよりも、むしろ金

なくなります。体表面での金属アレルギーの予防の方法論

属の溶出とそれに続くイオンの組織浸透を体表面において開発の研究を、コスメトロジーの新しい一領域として発展さ抑制する方法がより有効性を示す可能性があります。すな

せていきたいと考えています。（東北大学大学院薬学研究科）

平成 20 年度

研究助成

化粧品の安全性？
石橋

皮膚は外界に曝されており、紫外線などの物理的刺激や、賢一

りこませる AQP3 のないマウスの皮膚では皮膚癌の発育

細菌・汗・化粧品などの化学的刺激もうけている。従ってが抑制されるのは事実なので、グリセリンを化粧品として皮膚の大きな役割はバリヤーとしての機能である。一方、積極的にぬることが適切かどうか、改めて問う必要がある

ヒトにおいては皮膚の色は表情とともに重要なコミュニケのではないかということであろう。

ーション・ツールとなっている。そこで化粧品の使用は文

発癌ではなく癌の増殖促進なので、これは皮膚の再生に明とも関連して非常に重要な位置をしめ、バリヤーの機能とってみればむしろ好ましいことともいえる。女性には癌にどうかかわるかが問題である。さらに、近年皮膚が光やができにくいので、化粧品による皮膚癌促進がめだたな

酸素濃度を感知するセンサーとしても重要であることがわ

い側面もあるかもしれない。この可能性をおそれて、化かってきたので、化粧品の無毒性についてもあらたな検証

粧品の使用をひかえると美的に不利益をこうむり、ひいてが望まれている。

は QOL にも影響するかもしれない。もちろん、化粧品産

今回とりくませていただいたテーマは、皮膚癌という狭業にとっても大問題であろう。さらに、病気や寿命との関い範囲に限った化粧品、とくに含有成分として古くより使連でいえば、日本人にはめずらしい皮膚癌よりも、同じくわれてきたグリセリンの皮膚癌への影響についての検討で

AQP3 が発現している大腸癌の増殖に、グリセリンのとりあったが、不十分な結果に終わったのは残念である。ただこみが関連しているとすれば、医学的にも重要な問題であこのテーマは紫外線による発癌との関連でも考えていく必る。

要があり、またわれわれの周辺には多くの発癌物質がある

一方、同じくグリセリンをとりこむ AQP7 が欠損したので、究極的な安全性に関しては、疫学的手法による検討

マウスの心臓では、心負荷でエネルギー代謝が不十分で、が必要になると思われる。ただ、グリセリンを細胞内にと心肥大・心不全になるようなので、正常細胞ではむしろグ− 128 −

コスメトロジー研究雑感

リセリンは必要ともいえる。このほかに、グリセリンチャい。これまで、グリセリンと脂肪代謝・肥満に注目されすネルとしてはヒトに AQP9 と AQP10 があるが、これらのぎたきらいがあるからである。

役割についても気になるところである。すでに、これらのこの生物の複雑さをうまく利用、あるいは回避するには、

ノックアウトマウスは作られて、一見異常がなさそうなの

まだまだ解明しなければならないことは多いとつくづく考

ではあるが、病気での役割など、解明されるべきことは多えさせられる。

（明治薬科大学病態生理学）

平成 20 年度

研究助成

平成 18 年度

研究助成

機能性化粧品のターゲット探し
大口

mTOR（mammalian target of rapamycin）は、細胞の分裂や成長（サイズ）を調節する因子として知られている

健司

れ、mTOR の機能性化粧品素材の新しいターゲット分子としての可能性が広がった。

セリン・スレオニンキナーゼである。これまでに我々は、

近年、化粧品の効能・効果に対する関心が強くなってお

mTOR の新たな作用としてメラノジェネシスなど皮膚細り、機能性の高さが消費者にとって化粧品を選ぶ際の“も胞がもつ重要機能の制御に関与することを見い出しておのさし”となってきた。化粧品の機能性や有用性は、科学

り、化粧品原料メーカーと共同で mTOR をターゲットとの進歩とともに拡大してきているが、法制度において「機した機能性化粧品（ホワイトニング）の素材開発を進めて能性化粧品」を直接定義したものはない。その辺りにジレいる。今回コスメトロジー研究振興財団から助成金をいたンマを感じる事もあるが、化粧品の果たす大切な役割に貢だき、表皮ケラチノサイトの分化過程における mTOR の献できるよう、新しいターゲット探しに日々励みたいと思関わりについて検証した。角化の新たな制御シグナル機構

う。

の解明に貢献するとともに、応用的観点からも角化をコン（財団法人岐阜県研究開発財団岐阜県国際バイオ研究所）

トロールする機能性物質の探索研究に寄与する知見が得ら

平成 19 年度

研究助成

コスメトロジーの意義、コスメトロジー財団の意義
山下博司

化粧は人間が一定の環境下・条件下で行う日常的所作「人間学」とは「つながりの学問」である。人間が一人である。それは太古の昔から延々と続いてきた行為であで生きられないように、化粧もまた、人間生活のもろもろ

り、おそらく人類の歴史と同じくらい古い。財団の名称との営為と切り離しがたく結びついている。人が、どのようもなっている「コスメトロジー」という語は、即物的な意

な生活の局面で、どのような化粧をするのか。特定の化粧味内容として「美容術」を表すが、より抽象的な語義とし行為と結びつく行事や服飾は何か。何を以て化粧と見なし、て、化粧に関する総合的・体系的な学問を指す用語でもあ

何を以て化粧と見なさないのか。化粧はどのような文化的・る。個別的・具体的な美容術を超えたものである以上、理

社会的意義に裏打ちされているのかなどなど、複眼的・多系・文系といった既成の学問領域の枠組を超えた広がりと角的に読み解いてこそはじめて、化粧のもつ深みや奥行き

奥行きをもって然るべきである。素材や物性についての研が見えてくるはずである。

究、生体作用や安全性についての研究と並んで、化粧を施

コスメトロジー研究振興財団が、自然科学的研究プロジ

す主体の側の文化的・社会的な研究も相俟って、体系的でェクト以外に、いわゆる文系分野にも門戸を開放してくだ

ホーリスティック（全体論的）なコスメトロジーが成立すさったのは、化粧という文化現象を人類の文明史の中に位るものと考えられる。人文科学や社会科学といった「人間置づける上で、とても意義のあることだと思う。
（東北大学大学院国際文化研究科）

学」にもじゅうぶんに出番はあるはずである。

− 129 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010平成 19
18 年度 研究助成

嗅覚系の研究とコスメトロジー
梶原利一

平成 18 年度

研究助成

先日、ドラッグストアへ行った時の事である。何回か年を及ぼす魔法のような力がある。記憶・情動の中枢であるを越して使っていたリップスティックがついに無くなって海馬や扁桃体の神経回路に、匂いが直接働きかけることをしまったことを思い出し、足を運んだ私は愕然とした。そ可能にするような脳内の配線が、この魔法の力を引き出す

れらしき商品の棚に、リップスティックが溢れんばかり一因になっているといわれている。ところが、この配線のにぶらさがっていたのである。その数およそ 20 種類以上。

動作の仕掛けを、神経科学的な手法で明らかにしようとし目当ての“濃い緑色をして白いキャップがちょこんと乗った研究はあまり無い。私が今回行った研究は、この点に着た”製品を探しだせないくらい種類が豊富にあった。良く目した研究であり、匂いの情報処理の仕組みの解明を目指

見ると、ほとんどの製品が同じデザインだけれども色が微すものである。実験手法の多くの制約から、現時点では、

妙に違う。どうも、それぞれには、異なる香り成分が添加

匂いの種別に応じた、脳の動作様式を解析するまでには至されているようであった。すんなり受け入れられるものにっていない。しかし、もしこれが可能になり、レモンよりはレモンやライムがあったが、イチゴ、ピーチ、さらにはも、マンゴーの香りの方が、心地よいばかりか物事の記憶

マンゴーまであった。

にもよい、といった類のことが神経科学的に説明できるよ

このように、「匂い」は、香水だけでなく様々な化粧品に、うになったとしたら、その実験系はコスメトロジーの分野

意図的に混合されている（私の見た大量のリップスティッ

で、香り成分のアッセイシステムとして利用されることにクは厳密にいうと化粧品ではないのかもしれないが、、、）。

なっているかもしれない。このような事を思い描きながら、では、どのような意図で、様々な匂いが化粧品に混合され今回ご支援頂いて遂行した研究を更に大きく発展させてゆているのであろうか。最近は、高校生を中心にした世代にきたいと思っている。

売れるから、などという経営戦略的な意図だけでなく、リ

ところでリップスティックだが、結局、ピーチの香りがラックス効果のような、我々の精神活動（脳）への影響をする唇のオジサンの姿をイメージできず、購入には至らな意識した意図もあるようである。たしかに、匂いには、快・かった。（産業技術総合研究所バイオメディカル研究部門）

不快といった「情動」のみならず、「記憶」にも強い影響

平成 19 年度

研究助成

近くて遠いコスメトロジー
秋山庸子“工学研究科の環境・エネルギー工学専攻というところに恵まれました。材料というものは、一見動かない無機質に籍を置きながら、なぜ化粧品の研究をやっているんです

なものに思えますが、暫くひとつの材料の分析や合成に携か。
”としばしば尋ねられます。確かに地球規模の環境問わっていると、どのような材料も、やがて生き物のように題やエネルギー問題を扱っている専攻で、触動作による触

活き活きとした姿を見せ始めます。その中でも化粧品は感の定量化という研究テーマは一見異質な存在に思えるの

大変表情豊かな材料で、人の肌の上でさまざまに形を変え、も不思議ではありません。社会的な価値観が機能性の追求

着手、塗布、連用時のそれぞれに違った側面を見せてくれから快適性の追求に向かっている中で，そもそも人にとっます。このように肌と化粧品が相互作用する瞬間を捉えるて一番身近な環境は生活環境であり、中でもきわめて身近のがこの研究の中心的な作業となりました。

なものは直接肌に触れる材料ではないか、という考えがこ

しかし思った以上に一筋縄では捉えきれず、触感の背後にある物理的現象を捉え、さらに触感設計に辿り着くには、の研究の出発点となっています。
まだ浅い経験ながら、これまでコロイド・界面化学の分先の道程が長いというのが研究期間を終えての実感です。

野を中心にさまざまな材料を相手に研究をさせて頂く機会

触感の迷路にまよい込むにつれて，自分自身が鏡の前でメ− 130 −

コスメトロジー研究雑感

イクする余裕がなくなっていくのは気のせいでしょうか…。

ーマにした本研究をご採択いただき、研究の機会を与えてコスメトロジーは私にとって、公私共々まだ近くて遠い存

くださいましたコスメトロジー研究振興財団の皆様に心か在なのかもしれません。最後に、人と材料との関わりをテら感謝いたします。

（大阪大学大学院工学研究科）

平成 20 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
五島史行

この度、コスメトロジー研究振興財団研究助成をいただを化粧行動によって評価することを発想しました。化粧関

きましたことを心から御礼申し上げます。私は耳鼻咽喉科

連行動による耳鼻咽喉科心身症患者の健康評価の試みといにおいて、心理治療や心身医学に力を注いでいます。このうテーマで研究を行いました。しかし実際に研究を行って領域は非常に重要なものであると考えておりますが、そのみると、化粧関連行動は女性の心の健康状態以外のいくつ

思いとは裏腹にあまり日の目を見ない領域であります。体かの要素によって影響を受けることが分かりました。それの病気と心は密接に結びついているという考えは現代の医

は病院を受診した後にどのような予定を立てているかと言学教育ではあまり強調されていないのが現状です。患者さうことです。同姓の知人と約束があるケースが最も化粧にんがどのような症状で病院を受診しているかを言葉を交わ力を注ぐ傾向があるようです。これまで化粧行動を詳細にす前にどのくらい感じることが出来るかというトレーニン

分析したことがなかった男性の一人としてとして本研究をグをしばらくしてみたことがあります。その際には診察室行うことによって女性の行動について少し理解が深まりまに患者さんが入ってきたときの様子、つまり服装や行動をした。このことをさらに深め心身医学、行動医学に応用しつぶさに観察するようになります。そのような診療を心がていきたいと考えています。
（慶應義塾大学医学部耳鼻咽喉科）

ける中で気づいたのは心理的な健康状態が女性の化粧行動に関連することです。このことから患者さんの心の健康度

平成 20 年度

研究助成

平成 18 年度

研究助成

香りが及ぼす効果渡辺英綱

特定健康診断により、これまでより積極的な事後指導がいのある、むしろ一般的な支援を受け入れる対象者よりリ必要になったが、実際希望者は多いとは言えず、減量支援

スクの高い集団とも言える。無理に一般的な支援に組み込は困難であることが多い。今後の危険を説明しても、実際んでもドロップアウトしがちな集団である。正直、介入開自分に降りかかるとは実感しにくいのと、支援を受けるに

始時は、減量にてこずるだろうと覚悟したが、一般臨床医

も時間がかかり、実行可能な支援がほとんどないと訴えるの勘を覆す効果があらわれた。一般的支援と減量効果に有

受診者は多い。香りによる支援は、特に食事指導も、運動意差はないのだが、もともと減量にてこずると思われた群指導もなく（もちろん希望すれば受けてもいいのだが、ほが、同等の効果があらわれたのには驚きさえ感じた。今回

とんど希望しない）、自宅にいるときにアロマオイルを使の研究では、ストレス評価と内臓脂肪肥満に着目し腹囲の用するだけである簡易さがやってみようという気にさせる減少を指標としたが、香料の効果を理論的に解明できたかのかも知れない。それさえ面倒で受けたくない対象者がい自信がない。

ることは、今後さらに簡易な介入法が必要ということだろ今後は、運動量に有意差はあるのか３軸加速度計等を用いて評価し、基礎代謝に及ぼす影響の評価、レプチンなど

うか？
香りによる介入を望む対象者は背景として、一度食事と食欲に関するホルモンへの影響も検討したいと考えている。

運動療法を試みて挫折し、肥満等の危険要因と長い付き合

また、介入法として更に簡易な方法はないか、支援を希望− 131 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

しない対象者がいなくなるのは、研究上困るのだがエントトしていただいた財団法人コスメトロジー研究振興財団にリーしやすい介入法も考えたい。最後に、当研究をサポー感謝いたします。

（福島大学保健管理センター）

平成 21 年度

国際交流援助第４回日本分子イメージング学術集会を開催して
長野哲雄

平成 18 年度

研究助成

2009 年５月 14 日、15 日の２日間、千代田区一ツ橋の学

主催の学術集会としては今年は第４回目を迎え、学会の揺術総合センターにおいて、第４回日本分子イメージング学

籃期から大きく発展する成長期に入っている。本大会にお会学術集会が開催された。企業関係者 80 名を含め 437 名

ける先生方の活発な討議を通して、日本のイメージング研の参加者が一堂に集い、分子イメージングに関する最近の究が世界のトップになることを祈願して本学術集会が開催

成果について活発な討議が行われた。

された。本大会には、特別講演者として Samuel Achilefu

昨年（2008年）のノーベル化学賞が下村先生、Prof. Tsien,

博士をお招きして、最新の成果を報告していただいた。

Dr. Chalfi 等の「緑色蛍光タンパク質 GFP の発見とその応用」

Achilefu 博士は光分子プローブについて lifetime イメージ研究に与えられたことに代表されるように、生細胞、生体ングなど新たな視点からの講演を行った。マルチモダリテ

組織、in vivo あるいは人体の中で起こっている現象を時

ィなど、現在最も興味ある先進的な話題もあり、他研究分と場所を特定して「視る」ことができれば、真の生命現象

野の聴衆も興味深く講演に聞き入っていた。このように本を解析する上において極めて有用であることは明らかであ

公演は、新たな光イメージング技術の展開を示唆する内容

る。我が国でも大学、研究期間、企業を含めた分子イメーであったため参加者からも多くの質問があり、ポスター会

ジング研究の連携が組まれ、多くの先生方のご尽力によ

場においても Achilefu 博士との熱の入った議論が行われり 2006 年５月に日本分子イメージング学会（JSMI）が設ていた。

立された。諸外国の組織に比べても、JSMI は MRI、PET、光などのイメ−ジング手法が異なる専門家が大同団結し、終わりにあたり、本学術集会の開催にあたり、ご支援を頂きましたことを厚く御礼申し上げます。
（東京大学大学院薬学系研究科）

極めて強固に組織された。日本イメージング学会（JSMI）

平成 21 年度

国際交流援助コスメトロジーと医学国際交流稲垣豊

平成 18 年度

研究助成

皮膚は全身諸臓器の中でも、コラーゲンをはじめとする

さて、今年度より所属大学の国際交流委員を拝命し、医細胞外マトリックスの含量が最も多い組織のひとつである。

学部学生の海外交換留学に携わることとなった。グローバ

その適切な発現は、皮膚の生理機能の維持や創傷の治癒にリゼーションの功罪が論じられるようになって久しいが、重要であるが、過剰な発現は皮膚の線維化やケロイド形成

四方を海に囲まれたわが国では、表面的な短期の海外旅行

を引き起こす。この度、コスメトロジー研究振興財団からを別にすれば、海外と交流する機会は実際のところはまだ

海外交流助成を受け、フィンランド・テュルク大学皮膚科

まだ少ない。交換留学生には、医学の研鑽や英語力の向上の Veli-Matti Kähärï 教授を日本にお招きして、皮膚の線にとどまらず、多面的なものごとの考え方・多様な価値観

維化と発癌機序に関する研究の交流を行う機会を得た。同を学んで欲しいと願いつつ、欧米の提携校を訪問している。

教授の講演会には多くの結合組織領域の研究者と皮膚科をひるがえって、化粧の評価はひとえに個人の美的感覚やはじめとする臨床医師が参加し、得るところ誠に大なるも精神文化に影響される面が大きく、いわゆる「標準化」
や「グのがあった。コスメトロジー研究振興財団のご支援に、あローバリゼーション」とは縁遠いように感じられる。そのらためて厚く御礼申し上げる次第である。

ような中にあって、医学の国際交流がコスメトロジーの進− 132 −

コスメトロジー研究雑感

歩に寄与しうるとすれば、そのひとつは冒頭に述べたよう教授の来日を契機として、皮膚科学・結合組織学をはじめに皮膚の病態生理を理解して、健康な皮膚を維持するメカとする医学の進歩が、コスメトロジーの発展にも寄与しう

ニズムを解明することであろう。また、皮膚科疾患や手術ることを再認識した次第である。今後も、皮膚の創傷治癒後の跡をいかに最小化するかは、単に見かけ上の改善のみ

や線維化の研究を通じて、医学からコスメトロジーへの橋

ならず、コンプレックスの解消や自信の回復といった患者

渡しに少しでも貢献できることを願っている。

の精神面に大きな影響を及ぼすことも見逃せない。Kähärï

− 133 −

（東海大学医学部基盤診療学系・総合医学研究所）

●
事業報告書（平成21年度）
役

員●

事業報告書事 業 報 告 書

（自平成 21 年 4 月 1 日

至平成 22 年 3 月 31 日）《研究助成等の選考関連》
2009

5

7

公募開始

全国 273 ヶ所の大学・病院・研究機関等、関係学術雑誌８誌、当財団 HP
他２HP に掲載

7

2

公募締切り

応募数 83 件

9

4

選考委員会（分科会１）

素材、物性に関する分野の選考

9

8

選考委員会（分科会２）

生体作用、安全性に関する分野の選考

9

11

選考委員会（分科会３）

精神、文化に関する分野の選考

928

本選考委員会

各分科会の結果を総合的に判断して研究助成 30 課題、国際交流援助２課
題を選考

11

13

表彰贈呈式

記念講演：｢ コスメの国のオタク ｣

11

12 〜

助成課題の公表

当財団 HP 他関係学術雑誌に掲載

持ち回り企画委員会

平成 22 年度の研究助成課題選考に関して

通常理事会

平成 20 年度事業報告ならびに収支決算報告、研究助成引当資産の積立承認、甲南女子大学人間科学部
2010

2 中旬

専任講師

米澤泉 先生《理事会関連》
2009

6

12

株主としての議決権行使、報告事項
11

13

通常理事会

平成 21 年度（第 20 回）研究助成者等の承認、
平成 22 年度事業計画及び予算案の承認、公益財団法人移行認可申請方針、公益財団法人移行時の最初の評議員の選任方法、報告事項

2010

3

16

臨時理事会

事務所所在地の移転等の承認
最初の評議員の選定委員会の委員会運営細則の決定、最初の評議員の選定委員会の外部委員３名及びその他の選任、報告事項《評議員会関連》
2009

6

12

通常評議員会

平成 20 年度事業報告及び収支決算報告、報告事項

1113

通常評議員会

平成 21 年度（第 20 回）研究助成者等の承認、
平成 22 年度事業計画及び予算案の承認、公益財団法人移行認可申請方針等、公益財団法人移行時の最初の評議員の選任方法、報告事項

2010

3

16

臨時評議員会事務所所在地の移転等の承認、報告事項

財団活動の情報更新

当財団 HP へ平成 21 年度事業計画等を記載

コスメトロジー研究報告「コスメトロジー研究報告」17 号の概要を当財団 HP に掲載

《その他》
2009

3

末

6

末

12

当財団 HP へ平成 20 年度事業報告等を掲載− 137 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

第 20 回研究助成を受けられたかたがた（J：一般研究助成、H：国際交流援助）

管理番号J-09-01

J-09-02

J-09-03

J-09-04

J-09-05

J-09-06

J-09-07

J-09-08

J-09-09J-09-10J-09-11

J-09-12

J-09-13

J-09-14

J-09-15

J-09-16

研

究

課

題

分

る化粧品素材の探索
界面活性粒子を利用した多重エマルションおよびマ

界面化学
物理化学

イクロカプセルの開発

生物化学工学
酵素工学
界面コロイ
ド化学

酵素合成トレハロース脂質の生理機能を活用した付加価値の高いリポソーム化粧品の開発

生薬学
天然物化学

アロエの美白成分クロモン類の生合成研究

多様な皮膚酸化障害を制御するガロイル化フラボノ

生物資源科学
天然物有機化学

イド素材の探索

表

研

究

者

山形大学大学院理工学研究科
准教授

野々村

美

宗

東京都市大学工学部エネルギー化学科
准教授

黒

岩

崇

東京大学大学院薬学系研究科
教授

阿

部

郁

朗

徳島大学大学院ソシオ･アーツ･アンド･サイエンス研究部 教授

増

田

俊

哉

芳

海

静岡大学工学部

有機・無機ハイブリッ
助教
ド材料、天然色素物
理化学、
光化学

化粧品用色材としての天然色素／無機ホスト複合材料の開発
エレクトロスプレーを利用した高機能性粉体調製技

粉体工学
界面化学

術の開発

−紫外線防御と一重項酸素消去作用−

代

細胞生物学、分子生物 大阪大学大学院薬学研究科蛋白情報
解析学分野 助教
学、生化学、核内受容体リガンドスクリーニング
橘
敬 祐

核内受容体PPARを介して皮膚の美容効果を発揮す

アロエ含有物によるUVケアの研究

野

河

野

独立行政法人物質・材料研究機構
主幹研究員

川

上

亘

作

愛媛大学
物理化学
教授
ボディケア化粧品学長（UVケア化粧品学）

岡

伸

一

加齢に伴う皮膚脂質の変化に対するリピドーム解析

自生ハマナス（Rosa rugosa）の精油成分と抗菌活性〜コスメトロジーへの有効利用を目的とした基礎的研究〜
能動的標的化技術を搭載した新規ドラッグデリバリー
システムキャリア「バイオナノカプセル」の次世代化粧品分野での応用可否の検討
新規角質保護素材応用へ向けた抗炎症性スフィンゴ
糖脂質の精製と性質解明に関する研究
ヒトはいかにして化粧品にかぶれるのか−一次刺激性皮膚炎を伴わない接触皮膚炎モデルの作成−

小皺形成に関わる皮膚特異的プロテアーゼSASPase
活性と加齢の関係
栄養障害型表皮水疱症の原因遺伝子であるⅦ型コラー
ゲンの分泌メカニズムの解析
タイトジャンクション動的平衡を制御する低分子化
合物の探索− 138 −

生化学
分析化学
天然物化学
および
微生物学
分子細胞生物学
DDS学
糖鎖生物学
脂質生化学
免疫生化学
皮膚科学

皮膚科学
表皮分化、
生化学
細胞生物学
分泌、小胞輸送京都府立医科大学
博士研究員

守

田

麻由子

弘前大学大学院理工学研究科
准教授

長

岐

正

彦

名古屋大学大学院生命農学研究科
産業生物工学研究分野 教授

黒

田

俊

一

独立行政法人産業技術総合研究所
四国センター 研究員

奥

田

徹

哉

東北大学大学院医学系研究科
教授

相

場

節

也

東京医科歯科大学難治疾患研究所
メディカル･トップ･トラック
（MTT）
プログラム
特任講師

松

井

毅

東京大学大学院薬学系研究科
生理化学教室 助教

齋

藤

康

太

複合 領域（細胞 生 神戸大学大学院医学研究科
物学・構造生物学・ 特命教授
ケミカルバイオロジ
廣 明 秀 一ー・計算機科学）事業報告書（J：一般研究助成、H：国際交流援助）
管理番号J-09-17

J-09-18

J-09-19

研

究

課

題

分

皮膚の健康・老化状態の非侵襲的解析法：質量分析法を基盤としたケラチン上の化学修飾スクリーニン
グ法の開発
皮膚細胞を用いた化粧品中のナノマテリアルの安全性評価
細胞外マトリックス糖タンパク質による皮膚の再生・修復のグリコバイオロジー
物質の輸送・代謝リズムの分子時計機構の解明と操J-09-20

作要因の開発：テーラーメード化粧品適正使用を目指して

J-09-21

J-09-22

J-09-23

遺伝子改変動物を用いた脂肪酸受容体の皮膚における作用の検討MEMS触覚センサを用いた髪の手触り感計測に関する研究
皮膚表皮でのナノマテリアルの動態と免疫応答の可視化−ナノマテリアルに対する新たな安全性評価法の確立に向けて−

野

臨床分析化学
薬学
毒性学
皮膚科学

タンパク質断片の相互作用により検出するシステム

マトリックス生化学、分子生物学

J-09-26

J-09-27

J-09-28

J-09-29

J-09-30

毛包の色素幹細胞形質維持におけるエピジェネティ
クス機構の関与と白髪形成予防法の研究「少女」の化粧−近代および現代の美容教育からの一考察−
高齢者の終末期および死後における整容・美容ケアの標準化「化粧と現代化粧観」「身体加工と化粧」、「化粧の消費と身体規範の転換−現代カイロの化粧をめぐる世代間の衝突」「台湾と日本の化粧文化の比較研究−日常生活の実践を中心に」

化粧がもつ自尊心昂揚効果に関する発達脳科学的研究

研

究

者

東北大学大学院薬学研究科
教授

大

江

知

行

大阪大学大学院薬学研究科
教授

堤

康

央

小

川

温

子

九州大学大学院薬学研究院
時間生物学
教授
時間薬理学
時間化粧学
大 戸 茂 弘テーラーメード化粧学

薬理学
細胞生物学

MEMS触覚センサ
ナノテクノロジー
生体イメージング
免疫学
細胞生物学

の開発
J-09-25

表

糖鎖生物学、細胞外 お茶の水女子大学大学院人間文化
創成科学研究科 教授

皮膚老化・がん化を誘発するストレス性刺激を蛍光
J-09-24代

京都大学大学院薬学研究科薬理ゲノ
ミクス分野 准教授

平

澤

明

田

堅太郎

東京大学
特任助教

野

大阪大学免疫学フロンティア研究センター
特任助教

藤

井

文

彦

金沢大学医薬保健研究域薬学系
准教授

山

下

克

美

エピジェネティクス 国立成育医療センター研究所周産期病態研究部 部長
幹細胞学
色素細胞学
秦
健 一 郎
毛髪科学
化粧文化研究立命館大学大学院先端総合学術研究科
修士相当

小

出

治都子

名古屋大学医学部附属病院卒後臨床研究・

高齢者終末期ケア キャリア形成支援センター 特任助教
医学教育
高齢者のQOL平 川 仁 尚
中東研究
人類学
ジェンダー論
文化人類学
化粧文化学
認知神経科学
実験心理学
社会心理学
大脳生理学

お茶の水女子大学大学院人間文化研
究科 大学院博士後期課程学生

鳥

山

純

子

本

芳

美

都留文科大学准教授

山

長崎大学大学院医歯薬学総合研究科
助教

土

居

裕

和

Washington University School of Medicine

H-09-01

新規近赤外蛍光プローブの開発による光イメージング
技術研究

Samuel Achilefu

受入責任者
東京大学大学院 薬学系研究科 教授

長

野

哲

雄

University of Turku Department of Dermatology

H-09-02

皮膚の創傷治癒と線維化進展機序に関する研究

Veli-Matti Kähäri

受入責任者
東海大学医学部基盤診療学系教授

稲− 139 −

垣豊

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

役

員
平成 22 年３月 31 日現在

理事長

小林礼次郎

専務理事（常勤） 有本
理

監

事

事

評議員

磯邊

㈱コーセー取締役相談役

亨
律男㈱博報堂相談役

宇佐美昭次

早稲田大学名誉教授

内山充

一般社団法人薬剤師認定制度認証機構理事長

小林保清㈱コーセー代表取締役会長

新村嘉也

高砂香料工業㈱取締役相談役

髙橋

久

西川

武二

慶應義塾大学名誉教授

花輪

隆昭

昭和館館長

廣部

雅昭

静岡県学術教育政策顧問

内田康策

日本化粧品工業連合会専務理事

帝京大学名誉教授

小田倉正典

公認会計士

黒田

節哉

弁護士

石倉

伸治

㈱コーセー常務取締役

上野芳夫

元東京理科大学薬学部教授

緒方宏泰

明治薬科大学教授

北原文雄

東京理科大学名誉教授

近藤保

東京理科大学名誉教授

齊藤

勲㈶日本食品化学研究振興財団専務理事

多島新吾

防衛医科大学校教授

長野

哲雄

東京大学大学院薬学系研究科教授

西岡清

横浜赤十字病院院長

野呂影勇

早稲田大学名誉教授

溝口昌子

聖マリアンナ医科大学名誉教授

宮㟢榮三

東京工業大学名誉教授

山崎幹夫

新潟薬科大学学長（専務理事以外は全員非常勤）− 140 −

＊本財団についてのお問い合わせは下記にお願いいたします。

財団法人 コスメトロジー研究振興財団〒104−0032

東京都中央区八丁堀三丁目11番８号
ニチト八丁堀ビル五階
電話 03（3206）7721

コスメトロジー研究報告

Vol.18／2 010

非売品

2010年９月１日発行

編集責任者
発
行

制

作

印

刷

有本 亨
財団法人

エイエム企画〒170− 0013 東京都豊島区東池袋三丁目15番２号
電話 03（3590）5375

太陽印刷工業

表紙デザイン監修：コーセー
2010

コスメトロジー研究振興財団〒104− 0032 東京都中央区八丁堀三丁目11番８号
電話 03（3206）7721

商品デザイン部デザイン室不許複製

禁無断転載