ごあいさつ
消費財の典型ともいえる化粧品は、消費者の潜在的ニーズにいかに応え
新たな機能・効能を実現させるかが重要であると共に、“癒し”、“心の満足”の側面が益々重要になりつつあります。これらのニーズに応えうる化粧品を社会に送り出していく為には、総合的な学術探求を欠かすことはできません。
研究報告第５号のごあいさつで人間科学の重要性に触れましたが、マス
コミ等でもこの潮流を取り上げ、コンピュータ技術の発展には電子技術と共に人間の思考、行動感覚の研究を一緒に研究する必要性があり、従来型の個別専門研究の寄せ集め方式では限界があると論評しています。つまり理工学、人文学といった分類の中から思考するのではなく両者一体となった “文理融合” の視点からの研究が必要になってくるということだと思います。勿論、遺伝子科学のようにその専門分野がより深化される流れも重要であり、この両者に分化していくだろうと思いますが、化粧品学の確立には前者がより重要ではないかと考えている次第です。
この研究報告第６号に掲載されている報告を含めますと設立当初からの累計で研究報告数が 105 題となりますが、研究分野別に見てみると、素材・物性に関する分野が 37 題、生体作用・安全性に関する分野が 56 題、精神・文化に関する分野が 12 題となっており、これからの時代を想定すると精神・文化の分野の研究が更に充実していって貰いたいと願う次第であります。
いずれに致しましても、化粧品学の確立に向けて、今後とも地道な一歩一歩を積み重ねていく努力を続けたいと考えておりますので、関係各位の皆様方の暖かいご理解とご協力をお願い申し上げます。

平成 10 年８月
財団法人 コスメトロジー研究振興財団
理事長

小林

礼次郎

目

次

ごあいさつ
■ 研究報告Ⅰ．素材、物性に関する分野
・ 材料表面─生体分子相互作用の直接解析に基づく生体適合性の発現機構の解明
九州大学大学院工学研究科
・ オリゴ糖による皮膚の耐乾燥保護の分子メカニズムに関する基礎的研究…………… 2高 原淳……………………11

東京工業大学生命理工学部

井 上

義夫

・ 新発見の糊代を持ったタンパク質の基礎と応用（タンパク質接着能を有する化粧品素材の開発） ……18
東京工業大学生命理工学部
・ 食用乳酸菌による化粧品素材としての機能性多糖の生産とその改質

茂久…………………………27

新潟大学工学部・ メラニン生合成阻害作用を示す海洋天然物の探索

広 瀬
谷 口

正之

………………………………………………35

北海道大学大学院薬学研究科

小 林

淳一

Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野
・ 表皮ケラチノサイトにおけるヒト細胞老化因子の研究…………………………………………44
愛媛大学医学部

橋 本・ 脂質皮膚モデルを利用した化粧品及び水の浸透と安全性に関する基礎的研究
東京工業大学工学部
・ 小分子化学物質によるアトピー性皮膚炎の発症と予防についての基礎研究
岐阜薬科大学・ 酸化ストレスにより生体膜に生成する酸化型リン脂質の代謝機構の解明

公二………………49

谷 岡

明彦…………………60

永 井博弌……………………67

北里大学薬学部

中 川・ アレルギー性接触皮膚炎成立の必要条件となるハプテンによる成熟分化機構の解析
東北大学医学部

相 場

靖一
………72

節也

・ 免疫不全マウス再構成皮膚における培養毛乳頭細胞による毛包形成誘導と関連因子の検討………………………79

聖マリアンナ医科大学

窪 田・ 細胞増殖因子および接着分子による皮膚硬化制御に関する分子生物学的研究
獨協医科大学泰夫………………86

山 蔭

明生

Ⅲ．精神、文化に関する分野
・ シルクロードの十字路に誕生した化粧皿とその文化の研究
─古代ガンダーラにおける化粧皿の誕生から終わりまで─
神戸芸術工科大学芸術工学部………………94

服 部

等作

目

・ 化粧品の表示に関する研究 ─ことに警告表現について─次……………………………………107

慶應義塾大学商学部

吉 川肇子■ 記念講演平成９年度記念講演 『化粧品技術の変遷』〜育毛剤・整髪料を事例に〜………………………117

コスメトロジー研究振興財団 小 林 礼次郎■ コスメトロジー研究雑感■  付…………………………………………………………………………………123録
平成９年度事業報告
役員一覧…………………………………………………………………………………135………………………………………………………………………………………………141

研究助成課題一覧……………………………………………………………………………………142

Ⅰ.
Ⅱ.
Ⅲ.

●
素材、物性に関する分野
生体作用、安全性に関する分野
精神、文化に関する分野●

Ⅰ．素材、物性に関する分野

材料表面−生体分子相互作用の直接解析に基づく生体適合性の発現機構の解明
九州大学大学院工学研究科

高

原

淳

The n-octadecyltrichlorosilane (OTS, CH3(CH2)17SiCl3), the [2-(perfluorooctyl)ethyl]trichlorosilane (FOETS,
CF3(CF2)7CH2CH2SiCl3) and their mixed monolayers were used as the model surfaces for the study of protein
adsorption mechanism. The ATR-FT IR flow cell study on protein adsorption behavior revealed that the adsorption
amount of bovine serum albumin (BSA) onto each OTS and FOETS monolayer increased remarkably in an initialstage of adsorption experiment and attained an equilibrium within a few minutes at pH=7.5. In the case of the (OTS/FOETS) mixed monolayer, the amount of protein adsorption was apparently suppressed in comparison with thecase for the OTS and the FOETS monolayers. The atomic force microscopic (AFM) observation of BSA adsorption
behavior onto monolayer surface in a BSA solution at pH=7.5 showed that BSA was preferentially adsorbed onto the
FOETS phase of the (OTS/FOETS) mixed monolayer. In contrast, the selective adsorption of BSA onto the FOETS
phase was not observed at the isoelectric point of BSA (pH=4.7). The interaction between BSA and the surface of(OTS/FOETS) mixed monolayer was evaluated on the basis of the adhesion force measurement by AFM.
When
the gold-coated tip was used as a control experiment, the adhesion force between tip and surface was less than 1 nN.
In the case of the BSA immobilized tip, the adhesion force was ca. 5 nN and showed multiple minima in retract curve
because of the multi-point contacts of BSA with the monolayer surface or the chain unfolding of BSA.

面が必要となる。

１ 緒 言

一般に、両親媒性化合物からなる単分子膜は、人工材料が体液と接触した場合、材料表面には膜調製を水面上で行うため、分子レベルでの配向

まず体液中のタンパク質が吸着し、その後、細胞制御が可能である。しかしながら、環境の変化にとの相互作用が起こる。このため、材料表面の化

伴い表面構造が不安定になるため、特に水中での学構造すなわち親水性、疎水性、荷電、結晶性及応用には耐えることが出来ない。著者らは、水面びミクロ相分離構造などがどのようにタンパク質

上で有機シラン化合物を重合し、基板上に固定化

吸着挙動に影響するかを解明することは抗血栓性するという新規な高分子化単分子膜調製法で水中材料をはじめとする生医学材料を設計するためのでも安定な疎水性表面が形成できることを見いだ

基礎的な知見となる。高分子表面への生体成分のした２−８）。有機シラン単分子膜は分子間で二次元吸着に関する研究が活発に行われているが、医用的に重合し、さらに単分子膜と基板の間に共有結材料として最も実用化が進んでいるセグメント化

合及び多重の水素結合を形成するため、環境変化

ポリウレタンなどの多相系高分子では表面構造がに対して安定で表面構造再編成を示さない単分子

環境に依存して再編成を示すため、表面構造の制膜を形成する２）。したがって、ラングミュアー法

御は極めて困難である１）。高分子材料の生体適合により調製された有機シラン単分子膜は、タンパ性の発現機構を解明するためには、表面組成が明ク質吸着挙動の研究における高分子モデル表面と確で、表面構造の経時変化のない安定なモデル表

して非常に有用である。

Elucidation of Mechanism of Biocompatibility on the basis of the Direct
Analysis of Interaction between Materials
Surface and Biological Components
Atsushi Takahara
Graduate School of Engineering,
Kyushu University,Higashi-ku,
Fukuoka 812-8581, Japan

本研究では、表面構造を制御した安定な固定化
有機トリクロロシラン単分子膜をラングミュアー
法により調製し、その表面へのタンパク質の吸着
挙動を多重全反射赤外吸収分光（ATR− FT− IR）
フローセル測定及び原子間力顕微鏡（AFM）観察に基づき評価した。さらにタンパク質修飾カンチ−2−材料表面ー生体分子相互作用の直接解析に基づく生体適合性の発現機構の解明

レバーを用いて探針と有機トリクロロシラン単分

ルで平滑な表面構造を有することが明らかであ

子膜表面間に働く力を評価した。

る。Fig. ２は（OTS/FOETS）⒜（25/75）、⒝（50/50）及び⒞（75/25）混合単分子膜の AFM 像である。

２ 実 験

基板上に単分子膜が固定化されていることをＸ線

有機シラン化合物としてアルキル基を疎水基に光電子分光測定及び多重全反射赤外分光測定によ有する n-octadecyltrichlorosilane（OTS）、及び表（OTS/FOETS）混合単分子膜は海り確認した２）。

面自由エネルギーの低いフルオロアルキル基を疎島状のドメイン構造を示した。AFM 像の高さプ

水基に有する［2−（perfluorooctyl）ethyl］trichloro-

ロファイルより評価した島状ドメインとマトリク

silane（FOETS）を用いた。Fig. １はラングミュア

スの高さの差は約 1.3nm であり、これは OTS とー法による有機シラン単分子膜の調製過程の模式

FOETS の分子長の差に対応している。また、島図である。水面上で重合した OTS、FOETS 単分状ドメインの数及び寸法は OTS の分率とともに子膜及び（OTS/FOETS）混合単分子膜を垂直引増加した。島状ドメインの占める面積比は π− A

き上げ法により水酸化処理を施したシリコンウェ

曲線からの分子極限占有面積より計算される OTS

２−８）。フローセル成分の面積比と一致した。これらの事実から円を組み込んだ赤外吸収装置を使用し、ATR− FT−

柱状ドメインは OTS 成分であり、マトリクスは

ハー上に移し取り、固定化した
９、10）

IR 法

により単分子膜の表面と牛血清アルブミ

FOETS 成分であると結論できる。また、Fig. ２ン（BSA）の相互作用を検討した。表面に単分子⒞の（OTS/FOETS）（75/25）混合単分子膜の場合、膜を固定化したシリコンプリズムをフローセルにOTS の分率が 75 モル％でも OTS 成分はマトリク−１）をスを形成せず、依然として円形のドメインを形成

流動させ、赤外吸収差スペクトルの経時変化を追した。さらに、（OTS/FOETS）（75/25）混合単分

設置し、BSA リン酸緩衝溶液（10mg・mL
４）

跡した 。また、AFM 観察によりタンパク質吸子膜の OTS 成分の結晶化が ED 像観察により確着挙動を評価した。単分子膜を固定したシリコン認された。結晶（10）面間隔は約 0.42nm であり、

−１の BSA 溶液に浸漬し、OTS 単独単分子膜のそれとよく一致した。また、

BSA 溶液浸漬後の試料を空気中で乾燥後、タッピ

アルキル基を有するシラン化合物同士の混合単分子

ングモードで AFM 観察を行った。BSA と（OTS/

膜である（OTS/n− dodecyltrichlorosilane（DDTS）

FOETS）混合単分子膜との相互作用はリン酸緩衝（非晶性））混合単分子膜においても、相分離構造

液中での BSA 固定化探針と単分子膜表面間に働が確認された４）。これらの結果より、OTS 成分のくフォースカーブ測定に基づき評価した。金蒸着

結晶化が（OTS/FOETS）混合単分子膜の相分離のした AFM のカンチレバーチップの表面に 3,3−ジ駆動力であると結論できる。

ウエハーを 20µg・mL

チオビス（プロピオン酸スクシンイミジル）（DSP）を吸着させ、さらに BSA を DSP と反応させ固定化した

３. ２ ATR− FT− IR フローセル法による単分子膜
表面への BSA 吸着挙動の評価

11）。

ラングミュアー法により調製した有機トリクロ

３ 結果と考察

ロシラン単分子膜は、分子配向が制御されており、

３. １ 混合単分子膜の表面構造

環境変化に対して安定な表面構造を有するため、

電 子 線 回 折（ED）像 観 察 に よ り、OTS 及 びタンパク質の吸着実験に適している。有機トリク

FOETS 単分子膜は室温においてそれぞれ結晶性

ロロシラン単分子膜と BSA の相互作用を ATR−

２−８）

。ま

FT− IR フローセル法に基づき検討した。OTS 及

た、AFM 観察よりこれらの単分子膜は nm レベ

び FOETS 単分子膜及び（OTS/FOETS）混合単分

及び非晶性であることが明らかとなった−3−

Fig. １ Schematic representaion of preparation process of organotrichlorosilane monolayer.

−4−

材料表面ー生体分子相互作用の直接解析に基づく生体適合性の発現機構の解明

Fig. ２ AFM images of the (OTS/FOETS) ⒜ (25/75), ⒝ (50/50), ⒞ (75/25) mixed monolayers.

Fig. ３ Variation of amount of adsorbed BSA on the surfaces of the OTS, FOETS monolayers and (OTS/FOETS)
mixed monolayer immobilized onto the Si IRE with time.

子膜をシリコン単結晶の内部反射エレメント上に
垂直引き上げ法により固定化した。Fig. ３は ATR− FT− IR フローセル法により評価した種々の有機
トリクロロシラン単分子膜表面への BSA の吸着
量の経時変化である５、６）。流動させた BSA の溶
液濃度は、10mg mL
1550cm−１である。BSA の吸着量は、−１に観測される amide Ⅱの吸収強度からFig. ４ ⒜ Tapping mode AFM image of the OTS monolayer
surface after exposure to a BSA 0.1mg mL −１ solution in
PBS (pH=7.5) at 293 K for 10 min and ⒝ the height profile
along the line shown in ⒜ .

計算した。有機トリクロロシラン単分子膜表面への BSA 吸着量は吸着初期から高い値を示し、10とが明らかとなった。これは、（OTS/FOETS）

分以内で吸着平衡に到達した。OTS 及び FOETS

混合単分子膜表面が表面自由エネルギーの異な

単分子膜表面への BSA の平衡吸着量は 0.18 〜

る相から構成される相分離構造を有しているこ（OTS/FOETS）
0.20µg cm−２であったのに対し、とと相関があると考えられる。この吸着機構に関−２混合単分子膜では 0.05µg cm程度であり、相分

離単分子膜表面への BSA の吸着は抑制されるこ

しては、AFM 観察の結果に基づき次節で詳細に
議論する。

−5−

３. ３ AFM 観察による有機トリクロロシラン単スにより除去されると考えられる。以上の結果は、

分子膜表面への BSA 吸着挙動の評価

BSA は OTS 単分子膜表面へ end− on の状態で吸OTS 及び FOETS 単分子膜及び（OTS/FOETS）

着していることを示唆している。

混合単分子膜表面への BSA の吸着状態（分布及Fig. ５⒜は、0.1mg mL −１BSA の PBS 溶液へ

び配向状態）の AFM 観察を行った。Fig. ４⒜は、室温で 10 分間浸漬した後の FOETS 単分子膜表−１

BSA の PBS 溶液へ室温で 10 分間

面のタッピングモードでの AFM 像及び ⒝白線部

浸漬した後の OTS 単分子膜表面のタッピングモ

分の高さプロファイルである。AFM 像より BSAードでの AFM 像及び ⒝ 白線部分の高さプロフ

は FOETS 単分子膜表面に均一に吸着することがァイルである。像中明るい部分は OTS 単分子膜

明らかである。吸着層の厚みを評価するため、コ表面に吸着した BSA に相当する。Fig. ４⒜より、ンタクトモードでカンチレバーに斥力をかけた状

BSA は OTS 単分子膜表面に二次元網目状に吸着態で走査を行うことにより吸着した BSA を除去することが明らかとなった。また、Fig. ４⒝より、し穴を形成させた（Fig. ５⒞）。像中暗い部分は

BSA 吸着層の厚みは約 14nm であった。X 線構造

FOETS 単分子膜表面に対応する。Fig. ５⒟ はそ

0.1mg mL2

解析に基づき BSA は 4.1×14.1nm の回転楕円体
であることが明らかにされている

12、13）。本吸着実のラインプロファイルである。BSA 吸着層の厚さは約 4nm であったことから、BSA は FOETS 単

験では BSA を有機トリクロロシラン単分子膜表

分子膜表面に side− on の状態で吸着していること

面へ吸着した後、PBS によりリンスを行っているを示唆している。

ため、弱い相互作用で吸着している BSA はリン

OTS 及び FOETS 単分子膜の単独系での吸着

Fig. ５ Tapping mode AFM image of the FOETS monolayer surface after exposure to a BSA 0.1 mg mL −１ solution in PBS(pH=7.5) at 293 K for 10 min and ⒝ the height profile along the line shown in ⒜ . The square hole at center of the image
shown in ⒞ was formed by operateing AFM in the constant mode at repulsive imaging force. ⒟ The height profile along theline shown in ⒞ .

−6−材料表面ー生体分子相互作用の直接解析に基づく生体適合性の発現機構の解明

挙動について以下議論する。FOETS 単分子膜はOTS 単分子膜より表面自由エネルギーが低いた
め、FOETS 単分子膜の水との界面自由エネルギ
ーは OTS に比べて大きい値となる。FOETS 単分子膜表面に BSA は side− on の状態で吸着するた
め、BSA 分子と FOETS 単分子膜表面との接触面積は end− on の状態で吸着する OTS 単分子膜の場合のそれと比較して大きい。また、CD スペク
トル測定より、BSA は界面自由エネルギーが大
きい FOETS 単分子膜への吸着の場合の方がより大きなコンホメーション変化が生じていることが明らかになっている６）。したがって、BSA 分子はOTS 単分子膜表面と比較して、FOETS 単分子膜
表面へより強固に吸着していると結論できる。
Fig. ６ ⒜ は、0.1mg mL− １ BSA の PBS 溶 液（pH=7.5）へ室温で 10 分間浸漬した後の (OTS/FOETS) 混合単分子膜表面のタッピングモードでの AFM 像及び ⒝ 白線部分の高さプロファイル
である。BSA は side− on の状態で FOETS 相のみに選択的に吸着した。ATR− FT− IR フローセル法から得られた結果と対応させるため、BSA の濃度を 10mg mL−１として同様な観察を行った結果、0.1mg mL−１の場合と同様、BSA の FOETS 相へ
６）

Fig. ６ ⒜ Tapping mode AFM image of the OTS monolayer
surface after exposure to a BSA 0.1 mg mL −１ solution in
PBS (pH=7.5) at 293 K for 10 min and ⒝ the height profile
along the line shown in ⒜ .

態に大きな影響を与えると考えられる。さらに、（OTS/の選択吸着が観測された 。このように、疎水性の単分子膜表面と水との間の界面自由エネ

FOETS）混合単分子膜における FOETS 相へのルギーを極小にするために、BSA が単分子膜表面

BSA の選択吸着は BSA の溶液濃度に強く依存しに吸着する際、大きなコンホメーション変化が生ない。また、in situ AFM 観察より、FOETS マト

じる必要がある。Fig. ７は（OTS/FOETS）混合単

リクス上の BSA の吸着面は時間とともに増加す

分子膜における BSA の FOETS 相への選択吸着

るが、OTS ドメイン上には BSA の吸着はほとん

過程の模式図である。
（OTS/FOETS）混合単分子

ど起こらないことが明らかとなった。これらの結膜の場合、OTS 相あるいは FOETS 相への BSA

果より、（OTS/FOETS）混合単分子膜表面におけの吸着挙動は、BSA と単分子膜表面との相互作

る BSA の吸着の抑制は BSA の FOETS マトリク用と吸着された BSA と溶液中に存在する BSA とスへの選択吸着に起因すると結論できる。

の静電的反発に依存すると予想される。吸着の初タンパク質分子と単分子膜表面間における相互期過程において、BSA が FOETS 相に吸着される作用の強さは疎水基を水界面に配向した有機トリと、OTS 相に吸着した場合と比較してより大きな

クロロシラン単分子膜の場合、疎水性相互作用に

界面自由エネルギーの低下が生じるため、FOETS

強く依存する。また、BSA の等電点は pH=4.7 付

相への優先的な吸着が生じる。吸着の進行に伴い、近であり、pH=7.5 では BSA は負に荷電している

FOETS 相に吸着した BSA はコンフォメーション

ため、BSA 分子間のイオン反発は BSA の吸着状変化することで定常状態に到達する。一方、OTS−7−

Fig. ７ Schematic representation of preferential adsorption of BSA onto the FOETS phasein the (OTS/FOETS) mixed monolayer.

相においては BSA と OTS 単分子膜表面間の弱い的反発がない状態では、BSA 分子は OTS 相及び疎水性相互作用及び FOETS 相に吸着された BSAFOETS 相に均一に吸着することが明らかとなっと溶液中にある BSA との間の静電的反発のため、た。この結果は、混合単分子膜表面の BSA 吸着

BSA は end-on で吸着し接触めｎ積と吸着相互作において、BSA 分子間の静電的反発は、選択吸着

用はより小さい。このため、OTS 相に吸着したの発現の重要な要因であることを示している。しBSA はリンスにより容易に除去され、OTS 相へ

たがって、（OTS/FOETS）混合単分子膜におけるの BSA の吸着はほとんど観測されなかったと考pH=7.5 での BSA の FOETS 相への選択吸着は、えられる。

単分子膜表面と水溶液間の界面自由エネルギーの

この選択吸着機構を確認するため、BSA の等電点である pH=4.7 の条件で（OTS/FOETS）混合単

極小化と負に荷電した BSA 分子間の静電的反発により発現していると結論できる。

分子膜表面への BSA の吸着挙動を評価した。Fig.
８⒜は、0.1mg mL −１ BSA の PBS 溶液（pH=4.7）

３. ４ タンパク質と相分離表面間に働く力

へ室温で 10 分間浸漬した後の（OTS/FOETS）混AFM はチップと表面に働く力を高精度で検出

合単分子膜表面のタッピングモードでの AFM 像

することが出来る。AFM を用いて BSA 固定化チ及び ⒝ 白線部分のラインプロファイルである。

ップと単分子膜表面間に働く力を測定した。Fig.

等電点 pH=4.7 の場合、pH=7.5 と同じ吸着時間

９はリン酸緩衝液中で AFM により測定した金蒸

では、BSA はより速い速度で単分子膜表面に吸着チップ及び BSA 固定化チップと混合単分子膜着した。また、Fig. ８より明らかなように、静電の OTS 相と FOETS 相との間働く典型的なフォ−8−材料表面ー生体分子相互作用の直接解析に基づく生体適合性の発現機構の解明

Fig. ９ Force-distance curves between AFM tip and OTS
or FOETS phase in PBS. ⒜ unmodified tip ⒝ BSA immobilized tip.

Fig. ８ ⒜ Tapping mode AFM image of the (OTS/FOETS)
mixed monolayer surface after exposure to a BSA 0.1
mg mL −１ solution in PBS (pH=4.7) at 293 K for 10 min
and ⒝ the height profile along the line shown in ⒜ .

4 結 論
ラングミュアー法により（OTS/FOETS）混合単
分子膜を調製すると相分離構造が形成されることを見いだした。この海島状相分離構造形成には構ースカーブである。チップと単分子膜との相互作

成成分の結晶化挙動が非常に重要な因子であるこ用はチップが単分子膜表面から離れていく際の凝とを明らかにした。ATR− FT− IR フローセル法及着力から評価できる。BSA を固定化していない金び AFM 観察により、混合単分子膜への BSA 吸

蒸着チップの場合、凝着力が 1 nN 以下であったが、着挙動において、単分子膜表面と水溶液間の界面

BSA 固定化チップを用いた場合は 5 nN 程度であ

自由エネルギーの極小化と負に荷電した BSA 分った。また、金蒸着チップでは凝着力が単一ピー子間の静電的反発により、選択吸着が発現される

クを示すが、BSA 固定化チップでは多数の極小値ことを明らかにした。

を示した。これは BSA 分子の単分子膜表面との多点接触あるいは BSA の分子鎖の unfolding と関

参考文献

連するものと考えられる。これらの結果は、BSA

１）A. Takahara, N. J. Jo, and T. Kajiyama, Surfaceと OTS 相あるいは FOETS 相の間に働く凝着力

Molecular Mobility and Platelet Reactivity ofの値には大きな差はなく、むしろ pH ＝ 7.5 でのSegmented Poly(etherurethaneureas) with

BSA の負の帯電による FOETS マトリクスに吸着

Hydrophilic and Hydrophobic Soft Segment

した BSA と溶液中の BSA の靜電的反発が BSA

Components, J. Biomater. Sci. Polym. Ed., 1, 19,の FOETS 相への選択吸着と関連していることを1989.

示唆している。

２）S. R. Ge, A. Takahara and T. Kajiyama,
Aggregation Structure and Surface Properties of−9−Immobilized Organosilane

Monolayers

Prepared by the Upward Drawing Method, J.

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Phase Separated Morphology of Immobilizedof Organotrichlorosilane Monolayers Prepared

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Structure and Properties of (Alkylsilane/

Surface Studies of Protein Adsorption by

Fluoroalkylsilane) Mixed Monolayers,

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５）A. Takahara, K. Kojio, S. R. Ge and T. Kajiyama,10）W. G. Pitt, S. L. Cooper, FTIR-ATR Studies

Scanning Force Microscopic Studies of Surfaceof the Effect of Shear Rate Upon Albumin

Structure and Protein Adsorption B e h a v i o r

Adsorption onto Polyurethaneurea, Biomaterials,

Organosilane Monolayers, J. Vac. Sci. Technol., A
14, 1747, 1996.

7, 340, 1986.
11）U. Dammer, M. Hegner, D. Anselmet, P.

６）S. R. Ge, K. Kojio, A. Takahara, and T.

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at an Air/Water Interface, Langmuir, 14, 971,

− 10 −

Chem., 37, 161, 1985.

オリゴ糖による皮膚の耐乾燥保護の分子メカニズムに関する基礎的研究
東京工業大学井上

生命理工学部義夫The molecular mechanisms of protective effects of oligosaccharides, such as trehalose,maltose,and
sucrose,on the cells under highly dehydrated conditions, have been studied by using model phospholipid
membrane as well as yeast cells. From the thermal and NMR analysis, and molecular dynamics
simulation,anomalously high hydration ability of trehalose was elucidated.

を解明することは、皮膚の乾燥保護・保湿剤など

１ 緒 言の化粧品素材、生体材料を長期安定保存する際の生体内で糖質は、グリコーゲン／ブドウ糖など

保存剤などとしてオリゴ糖を今後幅広く応用してとして糖質のみで存在するものから、核酸や糖蛋
白質などでの糖単位の場合のように分子の構造成分として存在するものまで様々な形態で存在し、エネルギー源、構造構築要素、分子認識相互作用
要素などとして幅広い機能を担っている。
一般に、生物が生命活動を維持するためには水は不可欠と考えられるが、一方で高度脱水の状態
で長期間経過後、加水すると生命活動を再開する
微生物が存在する。また凍結しても細胞が破壊されず生命を保持する微生物が存在する。この様な
極度乾燥あるいは凍結という物理化学的ストレスの存在する環境下で生命活動を維持するためには何らかの防御機構が必要である。パン酵母、原始的甲殻類 Artemia をはじめとする種々の微生物は、
乾燥あるいは凍結という極限環境下に置かれると２分子のぶどう糖（D−グルコース）が結合したオリゴ糖トレハロース（Gluα1− α1Glu；図１参照）
を多量に産出することが最近わかった。細胞に耐乾燥性・耐凍結性を付与するトレハロースの機能
Studies on Molecular Mechanisms ofProtective Effects of Oligosaccharides
on Skins and Cells in the Dry State
Yoshio INOUE
Faculty of Bioscience and Biotechnology
Tokyo Institute of Technology

図１ トレハロース、マルトース、スクロース（上から）− 11 −

いくため、さらにはより優れた乾燥保護機能を持

算機上で行った。トレハロースとマルトースの初つ新規オリゴ糖誘導体を開発するために極めて重期構造として結晶構造を使用した。糖水溶液とし要なことと考えられる。しかし、トレハロ−スがて１糖分子と 414 〜 419 水分子とから成る系を使細胞を保護する分子機構はまだほとんどわかって

用した。

いない。

３ 結果と考察

本研究の目的は、トレハロースおよび関連する
種々のオリゴ糖と生体膜との相互作用を調べ、オ

３. １ オリゴ糖の水和特性
トレハロースが、細胞の乾燥による破壊を防ぎ、リゴ糖、特にトレハロースが乾燥および凍結の際の細胞の破壊を防止する機構を分子レベルで解明

保護剤として働く作用機構については、モデル生

するとともに、皮膚や細胞の耐乾燥保護能力がよ

体膜を使用した実験に基づいて現在二つの仮説がり優れた新たな糖誘導体を開発するための基礎的提案されている１、２）。一つは水置換仮説であり、研究を行うことである。トレハロースの特異な耐完全脱水状態においてトレハロースが細胞膜に直乾燥細胞保護活性の機構を解明するためにはトレ接結合し、含水状態での結合水の代役を果たすとハロース、細胞および水の３者間の分子レベルでいう説である。もう一つはガラス状態仮説である。

の相互作用を検討し、さらに結果を他のオリゴ糖

これは、糖‐水混合系が脱水、濃縮、乾燥に進むについて得られる結果と比較する必要がある。そ過程でガラス化し、その結果細胞膜はマイクロカ

こで本研究では、「オリゴ糖と水の相互作用の研プセルともいうべき状況の中に閉じ込められ、そ究」と「モデル生体膜の耐乾燥安定性に対するオの時点での状態が固定・凍結されてしまうというリゴ糖の効果の研究」の二つを重要研究項目とし、説である。

おもに示差走査熱量計と超伝導核磁気共鳴法（Ｎ

乾燥状態でトレハロースが細胞膜モデルであるＭＲ）を使用した実験および分子動力学計算によ

リン脂質二分子膜の表面に直接結合することを示

る理論的方法により研究を行った。

す多くの実験事実がすでにあるが、すべての結果が水置換仮説を必ずしも支持しているわけではな

２ 実 験

い。例えば、リン脂質二分子膜のゲル−液晶転移温

市販のトレハロースとジパルミトイルホスファ

度 Tm の乾燥に伴う上昇を抑える添加糖の効果を

チジルコリン（DPPC）を水分散状態で混合後、凍糖‐膜間相互作用の強さの一つの指標として使用

結乾燥することにより種々の含水率のトレハロー

し、凍結乾燥後の DPPC リポソームの Tm を比べ

ス含有リポソームを調製した。

てみると、DPPC 単独時の 112℃は単糖グルコース、

トレハロースを菌体内に含有する、および含有

ガラクトースを添加するとそれぞれ 44.9、44.1℃

しない酵母菌体は旭化成工業㈱より提供された。

に、二糖トレハロース、マルトース、スクロース（図示差走査熱 計（DSC）測定は SEIKO ／ DSC20 高

１参照）を添加するとそれぞれ 25.4、26.0、28.7感度装置を使用し、昇温速度５℃／分、温度範囲℃になる３）。すなわち、二糖は単糖に比べると優０〜 100℃にて行った。

れた Tm 抑制効果を持つが、トレハロースが二糖

核磁気共鳴（NMR）スペクトルと磁気緩和時間は日本電子 製 JEOL ／ GSX270 装置を使用して測の中で際立った抑制効果を示しているとは言えない。
二糖の水溶液系のガラス転移温度 Tg はスクロ定した。
トレハロースとマルトースの水溶液の分子動力ース＜マルトース＜トレハロースの順に高くなり、学シミュレーションは Amder4.0 プログラムを使濃縮が進むとトレハロースの場合 Tg 値は室温付用し、分子科学研究所（岡崎）の TITAN3000V 計

近まで上昇する４）。Tg が高いことはガラス化がよ− 12 −

オリゴ糖による皮膚の耐乾燥保護の分子メカニズムに関する基礎的研究

り容易に起こることを示し、乾燥保護剤として有ースが最も大きな値を示している。すなわち、３利であることを示す。

種の二糖の中でトレハロースは水和殻の水分子の水置換仮説とガラス状態仮説のいずれが正しい

動的状態を安定化する能力が最も高い。熱分析とにせよ、糖の生体膜保護作用は糖と膜、糖と水お磁気緩和の実験から、トレハロースは静的にも動よび膜と水の間の相互作用が密接に関与する現象

的にも水を強く束縛し、構造形成させる能力の高である。生体膜の乾燥保護でのトレハロースの特い糖であると言える。

異性に注目するならば、これら３相互作用の中でトレハロースの特異的な水和特性を分子レベル

も特に糖−水間相互作用を重視することは妥当でで理解するために、マルトースとトレハロースのあろう。本研究では水和という観点からトレハロ

水溶液について分子動力学シミュレーションを行

ースを含む数種のオリゴ糖の性質を調べた。

った６）。モデル水溶液を平衡化後 40ps にわたり分

DSC により決定した１分子当たりの不凍水量は子動力学シミュレーションを行い、この間 10fs 間

トレハロース、マルトース、スクロースでそれぞ

隔でトラジェクトリィを追跡し，糖分子の構造揺れ 7.95、6.50、6.33 であり３糖のなかでトレハロ

らぎと糖極性基周辺の水の動径分布関数を調べた。

５）

ースが一番大きかった 。不凍水は、糖と相互作結果の一例として、グルコース単位の各Ｏ原子と用するためにバルク水が作る水素結合網に参加で

近接水分子の酸素原子の間の動径分布関数においきない水分子のことを示す。

て 2.8 オングストローム付近に現れる第一水和ピ

さらに、糖水溶液中の水分子の 17Ｏ核スピン−格ークの強度を表１に示した。Ｏ６の第一水和ピー

子 NMR 緩和時間を測定し、糖水和殻の水の動的クの強度はマルトースよりもトレハロースの方が５）

水和数を評価した 。動的水和数は糖分子のまわ

明らかに大きい。糖分子の全酸素原子の動径分布りで運動を制限されている水分子の数を示す。動関数の第一ピーク強度の平均を計算した結果、ト

的水和数はトレハロース、マルトース、スクロー

レハロースでは 4.22 であり、これはマルトースのスでそれぞれ 48.3、27.2、36.8 となり、トレハロ

4.17 よりも大きい。図２はシミュレーション開始

表１ グルコース単 の各酸素原子の周りの水の動径分布関数における第一水和ピークの強度− 13 −

20ps 経過後について、糖グリコシド結合酸素原子

この結果は第一水和殻に存在する水分子の運動がから５オングストローム以内の距離に存在する水

純水中に比べて束縛されていることを示す。水和

分子をスケッチしたスナップショットである。ト

水分子の束縛は存在位置に大きく依存するが、平レハロースではグリコシド結合領域にはマルトー

均するとマルトースよりもトレハロースの場合のスに比べてより多くの水分子が存在することが分方が強いことも分かった。
分子動力学シミュレーションから、マルトース

かる。
分子動力学シミュレーションから糖 OH 基酸素

よりもトレハロースの方が周囲の水構造に及ぼす原子の第一水和殻に存在する水分子の自己拡散係

摂動が少し大きく、また水和能力が高いことが分９2

かった。マルトースに比べてトレハロースでは分）の平均はトレハロースで 1.85、マルトース

子内水素結合を作る確率が低く、トレハロースので 1.90 であり、いずれも純水のＤ値よりも小さい。

水酸基は水との間の分子間水素結合を作ることに数Ｄを計算した。温度 298 ＫでのＤ値（10 ×m−１ｓ

より安定化しようとする傾向が強く、そのため周囲の水構造により大きな影響を与える。
３. ２ オリゴ糖と生体膜の相互作用
前節で示した様に、幾つかの関連オリゴ糖の中でトレハロースの水和特性は特異的である。そこ
で、この特異的水和を示すトレハロースが水和系での生体膜の構造安定性に及ぼす効果を調べた。種々の濃度のトレハロースを含む水溶液中の卵黄レシチン単一層ベシクルでの二分子膜の状態
を、31 P− NMR での燐脂質 31 P−コリンメチル 1Ｈ
間核 Overhauser 効果（NOE）を測定した７）。NOE
は観測核の運動性と核間距離に依存する。NOE のトレハロース濃度依存性から、トレハロース濃度の増加に伴いベシクル内隣接燐脂質分子間の距離が接近すること、言い換えれば脂質膜のパッキン
グ密度が大きくなることが示唆された。この結果
は、トレハロースの添加により脂質膜のゲル‐液晶転移温度が上昇するという実験結果８）と矛盾しない。ここで観測された脂質膜の構造安定性に対する効果が膜近傍に存在するトレハロースの特異的水和挙動により膜の水和が摂動を受けた結果であるとするならば、十分な量の水が存在する系でのトレハロース−生体膜間相互作用は水を介した
間接的相互作用であると考えられる。
図２ MD シミュレーション開始 20ps 経過後における、
糖グリコシド結合酸素原子から５オングストローム以内の距離に存在する水分子をスケッチしたスナップショッ
ト。ａ．トレハロース、ｂ．マルトース

トレハロースの高い水構造形成能力が実際の細胞の中で発現されているかどうかを検証するために、トレハロース高産生性酵母について、細胞内− 14 −

オリゴ糖による皮膚の耐乾燥保護の分子メカニズムに関する基礎的研究の水の 1Ｈ− NMR スピン−スピン緩和時間Ｔ2 を測
９）た水の存在状態がトレハロースのみの効果であ定した 。緩和時間の長さから、細胞内の水を運るとは断言できない。そこで、DPPC モデル生体

動性の極めて高い自由水（成分Ｃ）、運動が高度に膜についても同様の NMR 緩和実験を行った結果、抑制された結合水（成分Ａ）、およびこれらの中間

結合水の割合はトレハロース無しでは僅か 20％での状態にある水（中間水：成分Ｂ）の３種類に分あったがトレハロースの添加により 80％まで増加

けることが可能であった。培養条件を調整するこすることがわかった。

とによりトレハロースを全く含まぬ菌体と、乾燥

４ 総 括

菌体重量の 8.1％のトレハロースを含む菌体が得られる。これらを凍結乾燥後、調湿し、乾燥菌体

本研究ではオリゴ糖、特にトレハロースについ

重量の 1.91％〜 3.53％の水を含む細胞試料として水和特性および生体膜との相互作用を調べた。

た。NMR 緩和時間の解析から、成分Ａ、Ｂ、Ｃ

トレハロースは、関連するオリゴ糖に比べて、静の存在割合（population）を決定した。トレハロー

的ばかりでなく動的にも水と強く結合する能力のス欠乏および含有酵母細胞について得られた結果高い糖質であり、このトレハロースの特性は、水をそれぞれ表２と３に示した。また、成分Ｂの存

溶液中のみならず生体膜あるいは生体細胞系にお在割合の含水率依存性を調べた結果を図３に示し

いても発現されていることが分かった。

た。検討した範囲の含水量では、自由水（成分Ｃ）

蛋白質や生体膜などに強く結合した結合水は生は全く存在しないこと、結合水（成分Ａ）の割合

体系の高次構造／複合構造を保つために必須な水はトレハロースを含まぬ菌体では約 50％であるがである。トレハロースはこの必須の水分子を生トレハロースを含む菌体では約 80％にもなること

体から逃さないということにより乾燥保護剤、あがわかった。

るいは保湿剤としての働きを示すのかもしれない。

菌体は種々の物質を含むので、ここで観測されトレハロースを含有する生体中の結合水の存在部

表２ トレハロース欠乏酵母細胞のプロトン NMR 横緩和時間Ｔ２と細胞水構造の含水
率依存性− 15 −

表３ トレハロース含有酵母細胞のプロトン NMR 横緩和時間Ｔ２と細胞水構造の含水
率依存性

図３ 酵母細胞中の中間水（表２、３の成分Ｂ）の組成の含水率依存性− 16 −

オリゴ糖による皮膚の耐乾燥保護の分子メカニズムに関する基礎的研究

位、あるいはこの結合水が乾燥あるいは凍結条件

６）Sakurai M., Murata M., Inoue Y., Hino A., and下の生体の生理に及ぼす効果などの解明は今後のKobayashi S.: Molecular Dynamics Study of

研究課題である。

Aqueous Solution of Trehalose and Maltose.
Implication for the Biological Function of

引用文献

Trehalose: Bull. Chem. Soc. Jpn.,. 70 , 847 -

１）櫻井実、井上義夫：細胞のストレス耐性と糖の役割、表面、34(4),213-219(1996)

858(1997)
７）Nishiwaki T., Sakurai M., Inoue Y.,and Chujo

２）櫻井実、井上義夫：糖の水和とトレハロース

R.:Increasing Packing Density ofHydratedの生理機能、生物物理、37(1), 326-330(1997)

Dipalmitoylphosphatidylcholine Unilamellar３）Tanaka K.,Takeda T.,Fujii K.,Miyajima K.:

Vesicles Induced by Trehalose: Chem. Lett.,

Cryoprotective Mechanism of Saccharides
on Freeze-drying of Liposome:Chem. Pharm.

1841-1844(1990)８）Crowe L. M. and Crowe J. H.: Solution Effects

Bull.,40, 1-5(1992）

on the Thermotropic Phase Transition of４）Green J. L. and Angell C. A.: Phase Relations

Unilamellar Liposomes: Biochim. Biophys. Acta,

and Vitification in Saccharides-Water Solutions
and the Trehalose Anomaly: J. Phys. Chem., 93,1064,267-274(1991)
９）Sakurai M., Kawai H., Inoue Y., Hino A.,and2880-2882(1989)

Kobayashi S.: Effects of Trehalose on the Water

５）Kawai H., Sakurai M., Inoue, Y., Chujo R.,and

Structure in Yeast Cells as Studied by in vivo

Kobayashi S.: Hydration of Oligosaccharides.

1

Anomalous Hydration Ability of Trehalose:

3621-3627(1995)

Cryobiology, 29, 599-606(1992)− 17 −H NMR Spectroscopy: Bull. Chem. Soc. Jpn., 68,

新発見の糊代を持ったタンパク質の基礎と応用（タンパク質接着能を有する化粧品素材の開発）
東京工業大学広瀬

生命理工学部茂久Trappins are a family of unique proteins that have recently been identified and shown to have an anchoring
sequence at their N-termini through which they become covalently trapped at the site of action. A typicalexample of the trappin family members is the elastase inhibitor elafin which is composed of two domains: theN-terminal transglutaminase substrate domain or "cementoin" domain that serves as an anchoring sequence andthe C-terminal inhibitor domain having a compact structure stabilized by four disulfide bonds and therefore called"four disulfide core" or "WAP motif". In this study, as summarized below, we characterized the cementoin moiety
which has an important potential application in developing intelligent cosmetic materials and further carried out aseries of basic research on trappins such as molecular evolution of trappins.
Two types of derivatives of the cementoin-like anchoring sequence of trappin-1 were produced andcharacterized. The cementoin-like sequence (cem) was first elongated by tandemly linking its cDNA andexpressing it in E. coli. Using the genetically engineered cem-cem, the anchoring sequence rich in Gln, Lys,and Pro was shown to have a random coil structure and to serve as a good substrate for transglutaminase, acharacteristic very useful for developing the biotechnology of protein cross-linking or protein gluing. As a second
construct, we prepared a fusion protein of cem and green fluorescent protein (GFP). The useful properties of thecomponent proteins are maintained in the fusion protein, namely we succeeded to prepare a fluorescent cementoin
moiety that will be of special interest and importance in protein engineering.
Previous studies showed that trappin genes, especially of the pig, have undergone rapid evolution, producing
trappins with a broad spectrum of action. To understand the evolution of such a rapidly evolving multigene family,
we characterized the trappin genes and found that the intron sequences are homogenized by gene conversion.
Similar mechanisms may also operate in the other genes whose intron sequences are conserved much highly thanthe exon sequences.
In summary, 1) using the newly discovered adhesive protein "cementoin" and its family members, we developed
a powerful method for protein cross-linking. 2) The secondary structure of cementoin was determined using
recombinant cementoin. 3) Fluorescent cementoin was prepared by fusing it with green fluorescent protein. 4)
Evolution of cementoin family genes was clarified.

とが分かった（図１）。すなわちＮ末端側に Lys と

１ 緒 言

Gln に富む繰り返し配列があり，この部分を介し

私たちは最近働き場所に共有結合でとどまるとてトランスグルタミナーゼによって他のタンパクいう風変わりなタンパク質を見つけトラッピン

質に架橋されることが明らかになった。糊代に相１−９）。働き場所にトラップ

当する部分に私たちはその働きにちなんで，セメされるという意味と次に述べるようにトランスグ

ントインと命名した４）。セメントインないしはそ

ルタミナーゼ（Transglutaminase）の基質になるとの誘導体を利用すると，タンパク質の接着技術がいう意味からそう名付けた。cDNA 及び遺伝子を開発できるのみならず，皮膚の保護剤や枝毛防止

クローニングして構造を決定したところ，このタ剤として化粧品の分野でも有用な素材になると考ンパク質のＮ末端に糊代に相当する部分があるこ

えられるので，本研究ではセメントインを遺伝子（Trappin）と命名した

Properties, evolution, andcosmetological aspects of trappinsthat have recently been discovered
as a new protein family and shownto have anchoring sequences
Shigehisa Hirose
Department of Biological Sciences,
Tokyo Institute of Technology

工学的に生産し，その性質を明らかにするとともに，応用の可能性を探った。また基礎の観点から特に興味が持たれるセメントイン部分の由来を明らかにするべく，遺伝子レベルで，詳細な分子進
化学的な解析を行った。

− 18 −

新発見の糊代を持ったタンパク質の基礎と応用（タンパク質接着能を有する化粧品素材の開発）

図１ Structural features of trappins. A) Covalent cross-linking of trappins to otherproteins through the transglutaminase substrate domain. B) Domain structure of thetrappin precursor. C) Mechanism of action of transglutaminase that catalyzes theformation of the isopeptide bond. Glutamine residue (Q) acts as an acyl donor andlysine (K) residue serves as an acceptor. The catalytic sulfhydryl group involved in
the formation of an acylenzyme intermediate is also shown (for review, see Refs.
1 and 2). D) Three dimensional structure of the WAP motif of human trappin 2(SKALP/elafin) determined by x-ray crystallography and NMR spectroscopy. Four
disulfide bonds are indicated by broken lines.

を担体とするアフィニティーカラムにかけ精製し２ 実 験た。約 20mg の目的産物がマルトース結合タンパ
ク質との融合タンパク質の形で得られた。この精２. １ 遺伝子工学的生産法と精製法
実験手順の概要を図２に示す。まず，Trappin
ないしは Trappin のセメントイン部分をコードす
る cDNA を発現ベクター pMAL− p（New England
Biolabs 社）に組み込み，大腸菌に導入し，マルト
ース結合タンパク質との融合タンパク質の形でペリプラズムに分泌されるようにした。このようにして作製した形質転換大腸菌を４L の規模で４〜５時間 振とう培養したのちに，IPTG で誘導をかけて，目的タンパク質を多量に作らせた。集菌後，Cold osmotic shock をかけて，ペリプラズム中のタンパク質を回収し，これをアミロース・レジン

製標品にファクター Xa（プロテアーゼ）を作用させて，不要なマルトース結合タンパク質部分を切断除去し，ヒドロキシアパタイト・カラムに通すことにより簡便かつ効率よく目的物を得る方法を開発した。最終的な収量は約５mg であった。
２. ２ 接着能の評価
上記のようにして得た Trappin ないしはセメン
トインに触媒量のトランスグルタミナーゼを作用させ，それらが架橋接着されて重合体になる様子を光散乱法及び SDS ポリアクリルアミドゲル電− 19 −

気泳動法によりモニター
した。架橋接着反応の進行は，散乱光の増加ない
しは電気泳動ゲル上の単体に相当するバンドが消失し多量体に相当する高分子量のところに新しくバンドが現れることにより検出できる。
２. ３ その他
遺伝子工学的手法（プラスミドの調製，PCR，

図２ 糊代の役割を たすセメントインの遺伝子工学的生産と精製法の概要。

塩基配列の決定），抗体の作製，免疫化学的組織染色，インサイチュハイ
ブリダイゼーション等は通常の方法に従った。

３ 結果と考察３. １ セメントイン及びその同族分子の生産と性質
タンパク質の接着技術を確立する上で要となる
セメントインを遺伝子工学的に大腸菌に作らせる系を構築し，セメントインの性質を明らかにした。
同様に，本研究を通して新たに発見した同族分子についても，大腸菌を利用した発現系とアフィニ
ティークロマトグラフィーによる精製系を確立した。このようにして得た産物は，予想通り触媒量のトランスグルタミナーゼによって非常に効率よく架橋され，優れたタンパク質接着能力を有する
ことが確かめられた（図３）。
３. ２ セメントインの２次構造
糊代として働くセメントイン領域は，一次構造上は，Lys と Gln に富む繰り返し構造をとっていることが明らかになっているが，より高次の構造については不明である。そこで，大腸菌で生産したセメントインを用いて二次構造の決定をおこなった。立体構造に関する情報は，セメントインの接着能を理解し，応用に役立てるためには極めて重要である。

図３ 蛍光性セメントイン（His6-GFP-Cem）の調製と評価。大
腸菌用の発現ベクターにクラゲの蛍光タンパク質（GFP）とセ
メントイン（Cem）の cDNA を組み込み，産物をインクルー
ジョン・ボディとして回収し，尿素で可溶化後，Ni キレート
カラムにかけて精製した。精製標品を大 の中性緩衝液で希釈
後４℃に５日間放置し，蛍光性とした。低温で徐々に酸化させることにより蛍光を発するクロモフォアが形成されたものと推定される。トランスグルタミナーゼ（TGase）の添加により His6-GFP-Cem は速やかに架橋接着され，SDS- ポリアク
リルアミドゲル電気泳動によって はっきりと識 できるほど高分子化した（レーン２と４）。GFP は，一旦蛍光性になるとクロモフォアは極めて安定で SDS のような界 活性剤の存在下でも蛍光を失わないという利点を有する。

− 20 −

新発見の糊代を持ったタンパク質の基礎と応用（タンパク質接着能を有する化粧品素材の開発）

セメントインを大腸菌でマルトース結合タンパる。

ク質との融合タンパク質として発現させ，セメン
トイン部分のみを切り離し精製した後に，円偏光

３. ４ 蛍光性セメントイン分子の作製

二色性（CD スペクトル）を測定することによって，

セメントインは期待どおり非常に優れたタンパ二次構造である α ヘリックス，β 構造の含量を

ク質の接着剤になることがわかったが，さらにセ求めたところ，予想外に，特徴的な二次構造は持メントイン分子を標識することが出来れば利用価

たず，ランダムコイル構造をとっていることが判

値は格段に上がる。そこで，最近よく利用されて明した。最初は α ヘリックス構造が主ではないいるクラゲ由来の蛍光性タンパク質 GFP（Greenかと予想していたが，よく考えてみると，ランダ

Fluorescent Protein）との融合タンパク質として発ムコイルの方がより効率よくタンパク質を架橋す

現させることを試みた。GFP の N 末端と C 末端るのに適した構造といえそうである。

にセメントインを結合させた融合タンパク質をデザインし，それぞれの N 末端に精製のためのヒス

３. ３ 局在部位の同定

チジン・タグを付けて大腸菌で発現させた。いず

精製標品に対する抗体も作製し，ウエスタン分

れも不溶性のインクルージョンボディとして回収

析や免疫組織化学やラジオイムノアッセイの開発されたが，N 末端にセメントインを結合させたもに応用した。その結果，セメントイン及びセメンのでは，Renaturation 後も GFP の蛍光は戻らなか

トイン様接着分子は生体中では細胞外マトリック

ったので，C 末端にくつけた His6− GFP- セメント

スタンパク質に架橋されて存在すること，気管やインについて詳細に検討することにした。
His6− GFP- セメントインをインクルージョンボ

腸の上皮細胞に多く発現しており，血中にも存在
４，６）。組織分布に関しディとして回収し，6M 尿素で可溶化後，金属キては，RNase プロテクションアッセイによってもレートカラムで精製した。精製標品を希釈法によ

気管や腸に多いことを確かめた。さらにヒトのあって Renaturation し，低温に放置することによりる種の病態（Psoriasis，乾癬）では，セメントイン

蛍光を発するようにした。希釈時に，0.1％のポリが異常に発現し，皮膚等の結合組織の病気になる

エチレングリコール（MW6000）を共存させるとすることが明らかになった５）ことが判明した 。以上の結果は，本研究対象でRenaturation の効率が良くなることも見い出した。

ある接着因子が基礎及び応用の両面において，極蛍光性とすることに成功した His6− GFP- セメ

めて重要な因子であることをよく物語っている。

ントインにトランスグルタミナーゼを作用させる

私たちが最初に見つけた Trappin（Trappin−１）と，His6− GFP- セメントインは容易に重合し高分は，上述のように血中にも多量に存在するが，そ子化した。すなわち His6− GFP- セメントインは，

れがどこから来るのか不明であった。そこで，こ当初のもくろみどおり，蛍光性のタンパク質接着の問題を解く手がかりを得るために，インサイチ剤として機能することが確かめられた（図３）。最ュ ハイブリダイゼーションにより Trappin−１の近では改良型 GFP として色調の異なるものも開局在部位を決定した。ブタの小腸切片を用いて，発されており，私たちのセメントインと組み合わTrappin−１ mRNA の局在を調べたところ，陰窩

せれば魅力的な化粧品素材の一つになるものと期

底部の内分泌細胞（enteroendocrine cells）がきれ

待されよう。

７）

いに染色された 。エンテロエンドクリン細胞は，種々の腸管ペプチドを合成・分泌しており，ここ３. ５ セメントイン遺伝子ファミリーの出来方

で Trappin−１が合成されている事実は，腸の陰窩と進化が血中の Trappin−１源であることを強く示唆すセメントイン領域すなわち糊代を持った興味深− 21 −

い一群のタンパク質が存在することを見つけ，そREST 遺伝子と Trappin の活性部位をコードしてれらの性質と応用の可能性について検討してきいる WAP モチーフの先祖遺伝子がエクソン・シ

た。これらのタンパク質は皮膚等の上皮組織を守ャッフリングすることによって出来たものと推定るという極めて重要な役割を担っていることからされる。

皮膚科学との関連においてもより詳細な生化学

トラッピン・ファミリーの進化系統樹を図５に的・分子生物学的な研究を進めなければならない示す。トラッピン・ファミリーのメンバーの数がが，もう一つ明らかにしなければならない根本的動物種によって大きく異なるのも特徴であるが，問題がある。すなわち進化の過程でどのようにしブタにおいてその傾向が特に強いので，ブタの近てこのように風変わりな構造を持つタンパク質が縁種（イボイノシシ，ペッカリー，カバ）で詳細な登場したかという根源的問題にも答えなければな

解析を試みつつある（図６）11）。この過程で，イボらない。この問題解決の糸口を見つけるために，イノシシのトラッピン遺伝子を解析した際に，以DNA データベースの検索をおこない，遺伝子構下に述べるように，予想外の大発見をした。

造の類似性等を比較検討したところ，セメントイ

Trappin 遺伝子は３個のエクソンと２個のインン領域は REST 遺伝子の一部から派生し（図４），トロンから成る（図６A）。エクソン１は５' 非翻

その後繰り返し単位の複雑な重複や除去等を経訳領域と分泌シグナル（pre-sequence）をコードて，今日の姿になったことが明らかになった（図し，エクソン２はセメントイン領域とそれに続

４）11）。上述の Trappin 分子の遺伝子は，従って，

く WAP モチーフをコードし，エクソン３は５' 非

図４ トラッピン（Trappin）遺伝子の由来。トラッピン遺伝子は，REST 遺伝子と SLPI 遺伝子を起源とすることが明らかになった。REST は Rapidly Evolving Seminal vesicle Transcribed の略で，精嚢で多 に作られている一群のタンパク質の総称であるが，セメントインのようにトランスグルタミナーゼの良い基質となり，架橋接着される。REST 遺伝子産物は，Seminal Vesicle secretory Protein ないしは Seminal Vesicle clotting Protein（SVP）あるいは Semenogelin（SEMG）と呼ばれる。SLPI は，Secretory Leukocyte Proteinase Inhibitor の略で，Antileukoproteinase（ALP）とも呼ばれる。SLPI に特徴的なことは，プロテアーゼインヒビター・ドメイン（WAP
モチーフ）を２個持つことである。第２の WAP モチーフをコードするエクソン（exon ３）が REST 遺伝子の後半と一緒になって，トラッピン遺伝子が出来たと考えられる。

− 22 −

新発見の糊代を持ったタンパク質の基礎と応用（タンパク質接着能を有する化粧品素材の開発）

翻訳領域をコードする。すべてのトラッピン遺伝

子の場合イントロンの保存率が 98％と異常に高子において，エクソン２の変異率が周りのイントい（エクソンは 70％程度）のはなぜかがここ数年ロンに比べて極めて高く，これまでの分子生物学

大問題となっていたわけである９）。私たちはイボの常識では説明できない事実として注目を浴びてイノシシのトラッピン遺伝子を解析中に，この問いる。一般的には機能的制約のないイントロンのいに対する解答を得た。すなわち，ジーン・コン

方が変異しやすいと考えられ，実際にほとんどのバージョンによってイントロンの配列が一定にな遺伝子ではそうなっているので，トラッピン遺伝

るように置換されていることをジーン・コンバー

図５ トラッピン・ファミリーとその関連遺伝子の分子進化系統樹。

− 23 −

図６ 偶蹄目におけるトラッピン遺伝子の種類と構造。これまでの解析で，ブタで５種類，イボイ
ノシシで２種類，ペッカリー，カバ，ヒトでそれぞれ１種類，合計 10 種類のトラッピン分子の構造が明らかになった。接着部分のバラエティーの豊富さは応用の観点から注目される。A, トラッ
ピンの代表ブタ・エラフィン（Trappin- ２）とその遺伝子構造。B, その他のトラッピン遺伝子ファ
ミリーの構造ジョンの中間体を捕まえることにより明らかにし４ 総 括た（図７）12）。このジーン・コンバージョンの生物学的意義は現在のところ不明であるが，イントロ

糊代に相当するセメントイン領域を有する一ンが保存されるメカニズムが明らかになったこと

群の内在性のタンパク質を発見し，トラッピン

で，今後この分野の大きな進展が期待できよう。

（Trappin）と総称することを提唱した。働き場所

基礎的には画期的な成果である。

にトラップされて機能を発揮しているからであ− 24 −

新発見の糊代を持ったタンパク質の基礎と応用（タンパク質接着能を有する化粧品素材の開発）

図７ トラッピン遺伝子のイントロンの保存機構。左の系統樹は，偶蹄目においてトラッピン遺伝子がどのように分子進化をし，出来てきたかを示す ; トラッピン遺伝子の数，塩基配列の類似性，及び PRE- １の有無に基づいて推定したものである。PRE- １は Pig Repetitive Element の略で，散在性反復配列（Short Interspersed Repetitive Element, SINE）の一種である。
SINE の有無は分子進化の時標として重宝されている。カバのトラッピン遺伝子には PRE- １（SINE）は無く，PRE- １の挿入はカバとイノシシ上科の分岐後に起こったと推定される。A と B には，見かけ上エクソン２の配列のみが変化し，イントロンの配列が保存されるメカニズムが２つ示されている。A は何らかの機構でエクソン２に変異が集中的に起こるとするもので，
現在信じられている進化の中立説では説明しにくい。B は，
変異はイントロンにもエクソンにもまんべんなく起こるが，途中で相同組換えによるジーン・コンバージョン（Gene Conversion）によってイントロンの配列が置換されるために見かけ上イントロンが変化しないように見える。B の可能性を強く示唆する結 がイボイノシシの解析から得られた。

る。さらにプロテアーゼ等をトラップして不活性謝 辞化するという意味も込められている。この興味深

本研究は以下の方々の献身的な努力に負うとこいタンパク質トラッピンは皮膚を守ることにも大ろ大である : Magdy A. Ghoneim（NEDO 研究員 ;いに貢献しており，化粧品学の観点からも興味深

現 , カイロ大学助教授），古川 真（博士課程大学

い研究対象である。本研究では，基礎及び応用の院生 ; 現 , 有人宇宙システム株式会社），古谷 裕

両面から解析を進め，以下の成果を得た。

（修士課程大学院生 ; 現 , 総合研究大学院生），加藤１）内在性の架橋接着因子であるセメントイン

明（博士課程大学院生 ; 現 , 理化学研究所特 研とその同族分子を利用して効率の良いタンパ究員），鈴木陽子（東京工業大学生命理工学部教務

ク質の接着法を開発した。

職員）。

２）セメントインを遺伝子工学的に量産し，そ
文 献の２次構造を推定した。
３）蛍光性のセメントインを調製し，セメント

１）広瀬茂久 , Ghoneim MA: 糊代をもったタンパ

インの付加価値を高めた。

ク質：タンパク質の局在化機構に新たな視点；

４）セメントイン遺伝子の出来方と進化を分子タンパク質の接着技術への応用にも期待。化学レベルで明らかにした。私たちが世に送り出と生物 34, 632-633, 1996.

したトラッピンが皮膚科学・化粧品学の分野

２）Schalkwijk J, Wiedow O, Hirose S: The trappinで有名になり，愛用されることを願ってやまgene family: proteins defined by an N-terminal

ない。

transglutaminase substrate domain and a
C-terminal four-disulfide core motif. J Invest− 25 −

Dermatol, in press (1998).

immunohistochemistry. J Biol Chem, 271, 29517-

３）Saheki T, Ito F, Hagiwara H, Saito Y, et al.:29520, 1996.

Primary structure of the human elafin precursor８）Hirose S, Furukawa M, Tamechika I, et al.:preproelafin deduced from the nucleotide

Discovery of a new type of proteinase inhibitor

sequence of its gene and the presence of uniquefamily whose members have an anchoring

repetitive sequences in the prosegment. Biochem

sequence. In: Bond J, Suzuki K (eds): Intracellular

Biophys Res Commun 185, 240-245, 1992.

Protein Catabolism. Plenum, New York, 1996, 43-４）Nara K, Ito S, Ito T, et al.: Elastase inhibitor

49.

elafin is a new type of proteinase inhibitor which

９）Tamechika I, Itakura M, Saruta Y, et al.:has a transglutaminase-mediated anchoring

Accelerated evolution in the inhibitor domains ofsequence termed "cementoin". J Biochem, 115,

porcine elafin family members. J Biol Chem, 271,563-567, 1994.

7012-7018, 1996.

５）Nonomura K, Yamanishi K, Yasuno H, et al.:10）Ghoneim MA, Hirose S: Fluorescent protein

Up-regulation of elafin/SKALP gene expression

glues: preparation, properties, and applicationin psoriatic epidermis. J Invest Dermatol, 103, 88-

for protein cross-linking of cementoin moieties of91, 1994.

trappins fused to green fluorescent protein. (in６）Kuroki J, Hosoya T, Itakura M, et al.: Cloning,

preparation)

characterization, and tissue distribution of11）Furutani Y, Kato A, Yasue H, Hirose S:

porcine SPAI, a protein with a transglutaminase

Evolution in Suidae of the trappin multigene

substrate domain and the WAP motif. J Biolfamily with unusually conserved intron

Chem, 270, 22428-22433, 1995.

sequences. (in preparation)７）Furukawa M, Suzuki Y, Ghoneim MA, et al.:12）Kato A, Furutani Y, Yasue H, Hirose S:

Cryptic origin of SPAI, a plasma protein with

Mechanisms of evolution of the trappin genea transglutaminase substrate domain and thefamily and unusual conservation of their intron

WAP motif, revealed by in situ hybridization andsequences. (in preparation)− 26 −

食用乳酸菌による化粧品素材としての機能性多糖の生産とその改質

谷

新潟大学

工学部

口

正

之

Effect of co-existence of yeast cells on production of extracellular polysaccharide, (Kefiran) by Lactobacillus
kefiranofaciens was investigated on the basis of the assumption of interaction between the yeast cells andthe lactic acid bacterium in kefir grains. In the single culture of L. kefiranofaciens, not only the addition ofyeast extract to the medium but also controlling the pH of the culture at 5.5 resulted in significant increase inamount of Kefiran produced. Since the yeast cells are considered to produce carbon dioxide and ethanol in kefir
grains, the influences of aeration of gas containing carbon dioxide and addition of ethanol to the medium on
Kefiran production by L. kefiranofaciens alone were also studied. The optimal gas composition for producing
Kefiran was found to be N２ : CO ２ = 9:1. By supplying ethanol at a concentration of 10 g/L, the amount of
Kefiran produced was enhanced. Partially purified Kefiran was prepared from culture supernatant by ethanol
precipitation, followed by anion-exchange chromatography. Gel filtration analysis indicated that the averagemolecular weight of partially purified Kefiran was several millions Da.

１ 緒 言
ケフィール粒は、図１に示すような、ケフィラン生産菌であるホモ型乳酸長桿菌 Lactobacillus
kefiranofaciens と ヘ テ ロ 型 乳 酸 短 桿 菌
Lactobacillus kefir などの乳酸菌と、乳糖発酵
性および乳糖非発酵性の酵母などの複数の微生物から形成されている １）。その中で多糖ケ

図１

フィランを主に生産しているのは、乳酸桿菌 L.

ケフィール粒における微生物間の相互作用

kefiranofaciens であることが既に報告されている２）。

〜４単位連結した部分にケフィロヘプタオース

これらの乳酸菌と酵母の間には、栄養源のやり取が１単位組込まれた基本構造の繰り返しからでりや生育環境に関して相互作用や共生関係が存きており、その分子量は約 100 万台であることが在すると推定されている。すなわち、乳酸菌は乳報告されている３）。ケフィールから得られるケフ糖を分解し、ガラクトースを乳糖非発酵性酵母に

ィール粒あるいは多糖ケフィランは抗腫瘍活性、提供し、酵母は乳糖発酵性酵母も含めてエタノー

抗血栓作用などの生理活性を示すことから、医療

ルや二酸化炭素を生成して、乳酸菌の生育に適し分野において利用すること、またケフィランの水た環境に整えていると考えられている。

溶液が強い粘性を有することから、食品用の増粘多糖ケフィランは、ケフィロヘキサオースを３
Production of Functional Polysaccharide
as a Cosmetic Material by a
Lactic Acid Bacterium for Food
Processing and Modification of the
Polysaccharide.

剤、安定化剤などとして利用することが考えられている。
筆者らは、これまでにセラミックフィルタ−や合成高分子膜を濾材として用いて代謝産物の除去と新鮮培地の供給が連続的にできる濾過培

Masayuki Taniguti

養システムを完成し、この膜濾過培養方式が種々

Niigata Universityの乳酸菌の高濃度培養および有用代謝産物の効− 27 −

率的生産に適用できる実用的な生産法であるこ
４−８）

ケフィラン溶液に再び等量のエタノールを添加。すなわち、Ａ）発酵乳製

して、再沈殿させ、再び遠心分離によって回収し品のスタ−タ−としてのホモ乳酸菌およびビフた。この操作を合計３回繰り返して、粗ケフィラ

ィズス菌の生産、Ｂ）耐塩性乳酸菌の高濃度かつンを部分精製しながら回収した。

とを報告してきた

高速生産、Ｃ）Lactococcus lactis によるペプチド

粗ケフィラン溶液中の全糖をフィノール・硫酸性抗生物質ナイシンの連続生産、Ｄ）Lactococcus

法によって測定し、培養液中の粗ケフィラン濃度

lactis による抗菌性を有する発酵フレ−バ−の生を算出した。

産、Ｅ）ビフィズス菌を用いた安全な食品保存用
抗菌剤の生産などについて報告してきた。
そこで、

２. ４ ケフィランの精製

本研究では、多くの分野において利用可能な機能回収した多糖溶液を精製するために陰イオン性多糖であるケフィランを、化粧品用の保水剤、交換クロマトグラフィーを行った。陰イオン交潤滑剤などとして利用することを目的として、食換クロマトグラフィーには、DEAE − Toyopearl

用乳酸菌による機能性多糖ケフィランの生産を

650 M（東ソー㈱）を担体として用いた。その担中心に検討した。

体は、0 . 02 M Tris − HCl 緩衝液（pH 8 . 8）で平衡化した後に使用した。溶出液をフラクションコレ

２ 実 験

クターにより 10 . 0 mL ずつ採取し、タンパク量を２. １ ケフィラン生産菌とその培養培地

280 nm における吸光度によって、全糖量をフェ

本研究では、予備的な検討の結果、Lactobacills

ノール・硫酸法によってそれぞれ測定した。

kefiranofaciens JCM 6985 をケフィラン生産菌として用いた。本菌はラクトースを炭素源とした

２. ５ ケフィランの分子量測定

MRS 培地を用いて、培養温度を 30℃として培養した。

エタノール沈殿によって回収した多糖溶液および陰イオン交換クロマトグラフィーより得られた成分について分子量を測定した。分子量は、２. ２ 培養方法

カラム（Asahipak GS − 710）を用いた高速液体ク

本研究では、乳酸桿菌 L. kefiranofaciens によ

ロマトグラフィーによって測定した。検出器は示

るケフィラン生産に対する酵母の存在の影響を

差屈折計を使用した。分子量マーカーとしてプル

３つの因子に分けて検討した。すなわち、１）酵

ラン標準品を用いた。

母エキスの添加の効果、２）酵母の生育によって発生する二酸化炭素の通気の効果、および３）酵２. ６ 培地成分の分析
培養液中のラクトース濃度は、示差屈折計を検母によって生成するエタノールの添加の効果に出器とした高速液体クロマトグラフィーを用いついて検討した。

て測定した。また、培養液中の乳酸濃度は、電気
２. ３ ケフィランの回収

伝導度検出器を備えた有機酸分析システムを用

培養液を回収した後、遠心分離によって菌体をいて測定した。

除去した。得られた上澄液中の粗ケフィランは、３ 結果と考察

上澄液と等量のエタノールを添加することによって沈殿させた。沈殿した粗ケフィランは遠心分

３. １ 酵母エキスの影響

離によって回収した。回収した粗ケフィランは、

図２は、L. kefiranofaciens によるケフィラン

培養液の 1 / 10 容量の蒸留水に溶解した。この粗生産に対する酵母エキスの添加濃度の影響を示− 28 −

食用乳酸菌による化粧品素材としての機能性多糖の生産とその改質

図２

図３

酵母エキスの影響

気ガス組成の影響す。これらの培養おいて、初期ラクトース濃度はエキスを５g/L 添加した場合に、2 . 5 g/L とした

50 g/L、通気するガスの組成はＮ２対 CO ２を９対場合に比べて増加した。したがって、５g/L 程度

１とし、その混合ガスを 0 . 3 vvm になるようにの酵母エキスは L. kefiranofaciens の増殖とケフ気した。また pH は予備的に検討した結果をもとィラン生産にとって必要であることが判明した。

に、ケフィラン生産にとって最適な 5 . 5 に設定し以下の実験では、酵母エキスを５g/L となるようた。

に添加してケフィランを生産した。

酵母エキスを添加しない場合には、菌体の増殖が非常に悪く、ケフィランもほとんど生産しなか

３. ２

気ガス組成と pH 制御の影響ったが、酵母エキスの添加濃度を増加するにつれ

図３は、L. kefiranofaciens によるケフィランて、濁度の値が高くなり、また、ケフィランの生生産に対する 気ガス組成の影響を示す。これら

産量も増加した。特に、ケフィラン生産量は酵母の培養において、pH は制御せず、初期ラクトー− 29 −

ス濃度は 50 g/L とした。結果は左から通気をし２の割合を９対１とした場合には約 1 . 4 倍多くなない場合、Ｎ２と CO ２の割合を９対１、および５

り、ケフィラン生産にとって pH 制御が有効であ対５になるように調節した結果を示す。この図のることがわかった。しかし、ケフィランの生産量一番上に示す pH の変化からわかるように、いずはラクトースの消費量に応じて増加せず、消費しれの培養においても pH は培養３日目以降４以下

たラクトース量当たりのケフィラン収率は増加となり、濁度からわかるように、生育はほとんどしなかった。

停止した。
通気ガス中の CO ２の割合を増加することによ３. ３ ラクトース濃度の影響って、ラクトースの分解物であるガラクトースがケフィラン生産に対する炭素源の初期濃度の蓄積し、消費されなかった。一方、最終的なケフ影響を検討した。図５は通気ガスの組成を９対ィランの生産量は、通気ガス中のＮ２対 CO ２の割

１、pH を 5 . 5 に制御して、ラクトース濃度を合を変えてもほとんど影響を受けなかった。これ

50、75、および 100 g/L として培養した結果を示は、CO ２ はラクトースの代謝に何らかの影響をす。いずれの培養においても、乳酸濃度が 30 g/

与えるものの、pH が低下するために生育が停止

L 以上になると生育はほとんど停止したが、ラクし、ケフィランの生産量には差がでなかったため

トースは消費され続けた。初期のラクトース濃度と考えられる。

が高くなるにつれて、ラクトースをすべて消費す

そこで、次に全く同じ培養条件で pH を 5 . 5 にるまでに必要な時間は徐々に長くなり、分解産物制御して、ケフィラン生産に対する通気ガス組成であるガラクトースとグルコースが培養液中にの影響を検討した。図４は、pH 制御をした培養残存するようになった。一方、ケフィランの生産の結果を示す。いずれの培養においても、pH を

量は、初期のラクトース濃度が高くなるにつれて制御することによって 50 g/L のラクトースは４増加した。ただし、ラクトースの消費量に応じて日間で全て消費され、いったん生成したガラクト

ケフィランの生産量は増加せず、消費したラクトースもすべて消費された。また、菌体の生育量もース量当たりのケフィラン収率は低下した。

増加し、乳酸の生産量も、pH を制御しない場合

たとえば、初期ラクトース濃度を 100 g/L としに比べて約２倍に増加した。一方、ケフィラン生

た培養において、ラクトースは６日目にすべて消産量は、pH を制御しない培養に比べて、Ｎ２と CO費されたが、ガラクトースとグルコースはそれぞ

図４

pH 制御培養における 気ガス組成の影響− 30 −

食用乳酸菌による化粧品素材としての機能性多糖の生産とその改質

図５

ラクトース濃度の影響

図６

エタノール添加の影響

れ約 40 と約 11 g/L 残存しており、乳酸の蓄積がエタノールを添加して培養した場合と添加し糖代謝、およびその結果としてケフィラン生産にない場合を比較して、ラクトース消費速度、乳酸

影響を及ぼしたと考えられた。

生成量、生育量に大きな変化はなかったが、ケフ
ィランの生産量は増加した。しかし、添加するエ

３. ４ エタノール添加の影響

タノール濃度を 20 g/L に増加しても、ケフィラ

酵母の存在に関係する第三の因子であるエタ
ノールのケフィラン生産に対する効果について

ン生産 は、エタノール濃度を 10 g/L にした場合に比べて、増加しなかった。

検討した。図６は、Ｎ２と CO ２の割合を９対１、pH を 5 . 5 に制御した培養における、エタノール

３. ５ ケフィラン生産量の比較

添加の影響を示す。初期ラクトース濃度を 50 g/

図７は、これまで述べてきた各培養における粗L とし、エタノールを 10g/L と 20g/L となるようケフィラン生産量を比較した結果を示す。すなわに添加した。また、初期ラクトース濃度を 75g/L

ち、ケフィラン生産に対する通気ガス組成、pHとし、エタノールを 10g/L となるように添加した。

制御、初期ラクトース濃度およびエタノール添加− 31 −

量の影響についてまとめた結果を示す。
pH を制御しない培養において、Ｎ２と CO ２の割合を変えても粗ケフィランの生産量に影響しなかったが、同一の通気ガス条件では、pH を 5 . 5 に制御した場合に粗ケフィラン生産量は増加した。しかし、二酸化炭素の割合を増加した場合には、pH を制御しても粗ケフィ
ラン生産量はわずかしか増加

図７

しなかった。なお、窒素のみをケフィラン生産 の比較

通気した場合、L.kefiranofaciens
は増殖できなかった。これらの結果より、Ｎ ２ と CO ２ の割合を９対１として通気し、pHを制御することによって、L.
kefiranofaciens の増殖速度および粗ケフィランの生産量を増加できることがわかった。また、初期ラクトース濃度を 50、75、100 g/L と順次増加するにつれて、ケフィランの生産量

図８

陰イオン交換クロマトグラフィーによるケフィランの精製は、徐々に増加した。また、エタノールを添加すると、初期ラクトース濃度をル沈殿によって回収し、フェノール・硫酸法によ50 g/L と 75 g/L にした培養において、ケフィラって求めた全糖量として、ケフィラン生産量を表

ンの生産量はともに増加した。

してきた。しかし、エタノール沈殿によって回収以上の結果より、初期ラクトース濃度を増加すした粗ケフィランには、不純物を含んでいる可能

ることによって、およびエタノールを 10 g/L 程性がある。そこで、つぎにエタノール沈殿によっ度添加することによって、ケフィランの生産 をて回収したケフィランの水溶液を陰イオン交換増大できることがわかった。

クロマトグラフィーを用いて、さらに部分精製し最終的に、pH を 5 . 5 に制御し、Ｎ２と CO ２のた。図８は、培養して得られた粗ケフィランを割合を９対１とした混合ガスを通気し、10 g/L の

DEAE- Toyopearl を用いて、精製した結果を示

エタノールを添加することによって、最も多くのす。おおよそ８割の全糖は未吸着画分に溶出されケフィランを生産できることがわかった。

たが、低い濃度の NaCl を含むフラクションにもわずかに検出された。また、大部分のタンパク質

３. ６ ケフィランの部分精製

は NaCl の濃度が 0 . 4 M 付近のフラクションに溶

これまでは、ケフィランを培養液からエタノー出された。ケフィランはグルコースとガラクトー− 32 −

食用乳酸菌による化粧品素材としての機能性多糖の生産とその改質

図９

ゲル濾過クロマトグラフィーによる分子 の測定スからなる中性糖であることから、未吸着画分を

３. ８ 精製ケフィラン生産量の比較

エタノール沈殿によって再回収し、部分精製ケフ

図 10 は、陰イオン交換クロマトグラフィーにィランとした。また、培養条件を変えても得られ

よって部分精製したケフィランの濃度を比較しる粗ケフィランの成分はほとんど同じであり、こた結果を示す。部分精製ケフィランは代表的な培のクロマトグラフィーの結果と同じようなプロ養において得られた粗ケフィランから調製した。

ファイルを示した。

各培養条件とも、陰イオン交換クロマトグラフィ
ー後、エタノールで再沈殿して得られた部分精製

３. ７ ケフィランの分子量

ケフィランの回収率は、55％程度であった。

ゲル濾過クロマトグラフィーによってケフィ

部分精製ケフィランの量も、粗ケフィランの場

ランの分子量分布を検討した。図９は、エタノー

合と同じように、pH を 5.5 に制御し、Ｎ２と COル沈殿によって得られたケフィラン水溶液、およ２び陰イオン交換クロマトグラフィーによって精のエタノールを添加することによって、気も pH

製し、再回収されたケフィラン水溶液の分子量分制御もしない培養に比べて約 1 . 8 倍増加できるこ布を示す。

とがわかった。

の割合を９対１とした混合ガスを 気し、10 g/L

保持時間が約８分の高分子量ピークと 17 分、

４ 総 括

18 分の低分子量ピークは未精製ケフィランにおいて検出されたが、それらのピークは精製ケフィ

本研究では、ケフィール中の乳酸菌と酵母のランでは消失しており、先ほど示したイオン交換

相互関係を推定して、乳酸桿菌 L. kefiranofaciens

クロマトグラフィーによってケフィランがさらによるケフィラン生産に対する酵母の存在の影に精製されたことを確認できた。また、３つのピ響を検討した。また、得られたケフィランを部分ークが存在するが、精製ケフィランの分子量はお

精製し、その分子量を推定した。本研究の結果は、およそ数百万であることがわかった。

以下のようにまとめられる。
１．酵母エキスを添加した培地を用いて、混合ガ− 33 −

図 10

精製ケフィラン生産 の比較

ス（Ｎ２：CO ２＝９：１）を通気し、pH を 5 . 5４）小林 猛、谷口正之：膜型バイオリアクターに制御することによって、L. kefiranofaciens にによる醗酵生産 , 化学工学会編 ,：バイオリア

よる粗ケフィランの生産量を増加できた。

クター , アイピーシー，東京，1988 , 139 - 161 頁．

２．初期ラクトース濃度を増加することによって、

５）Taniguchi M., Nakagawa I., Hoshino K., etおよび 10g/L のエタノールを添加することにal.:Production of Superoxide Dismutase from

よって、粗ケフィランの生産量を増大できた。

Streptococcus lactis by Using a Bioreactor with

３．陰イオン交換クロマトグラフィーによってケa Microfiltration Module. Agric. Biol. Chem.,

フィランを精製した結果、その分子量は数百万53 , 2447 - 2453 , 1989 .

であった。また、精製ケフィランは、粗ケフィ

６）Hoshino K.,Taniguchi M., Marumoto H., et

ランと同じように培養条件を工夫することにal.:Continuous Lactic Acid Production from

よって増加できた。

Raw Starch in a Fermentation System Using a
Reversibly Soluble-Autoprecipitating Amylase

謝 辞

and Immobilized cells of Lactobacillus casei.

本研究をご支援いただきましたコスメトロジー
研究振興財団に対しまして、厚くお礼申し上げます。

Agric. Biol. Chem., 55 , 479 - 485 , 1991 .
７）Taniguchi M., Hoshino K., Ito T., et al.:Production of Superoxide Dismutase in

引用文献

Streptococcus lactis by a Combination of Use１）戸羽隆宏：中温性乳酸菌を使った発酵乳、

of Hyperbaric Oxygen and Fermentation withJapanese Journal of Dairy and Food Science, 36 ,Cross-Flow Filtration. Biotechnol. Bioeng., 39，

235 - 244 , 1987 .

886 - 890 , 1992 .

２）戸羽隆宏、足立 達：ケフィール粒の微生物

８）Taniguchi M., Hoshino K., Urasaki H., et

学、バイオサイエンスとバイオインダストリ

al.:Continuous Production of an Antibiotic

ー、47 , 383 - 388 , 1989 .

Polypeptide (Nisin) Using a Bioreactor Coupled

３）足立 達、伊藤敞敏、戸羽隆宏、ほか２名：乳酸菌の生態、微生物、６，15 - 26 , 1990 .

to a Microfiltration Module. J. Ferment. Bioeng.,
77，704 - 708 , 1994 .

− 34 −

メラニン生合成阻害作用を示す海洋天然物の探索
北海道大学大学院薬学研究科

小

林

淳

一

Tyrosinase inhibitors may control over production of the dermal melanin pigment since tyrosinase, which isa bifunctional copper protein widely distributed in animals and plants, plays an important role in the process
of melanin biosynthesis. In our going investigation of bioactive substances from marine organisms, we haveisolated novel cyclic peptides, showing tyrosinase inhibitory activity, from a marine sponge Hymeniacidon sp.
and novel alkaloids possessing inhibitory activity of melanin synthesis from a marine sponge Amphimedon sp.

る。また合成ヒドロキノン類（ヒドロキノン、ヒ

１ 緒 言

ドロキシモノベンジルエーテル）にもチロシナー

近年、紫外線の増加といった原因からシミ・ソゼ阻害作用が認められるが、皮膚の脱色による白

バカスや日焼けといった肌の色素沈着に関する関斑を生じるなどの副作用が報告されている。天然

心が、確実に増加している。こういった皮膚の物由来のチロシナーゼ阻害作用としては、コケモ

色素沈着の主な要因は、紫外線による日焼け、ホモから得られたヒドロキノン化合物アルブチンがルモン分泌異常によるメラニンの生産と排泄のバあり、現在化粧品添加物として広く用いられてランスが崩れることによると考えられており、スいる。これらのことからチロシナーゼ阻害作用

キンケアにおける重要な問題となっている。皮膚は、チロシン類似の構造を持つ化合物に特異的で色素のメラニンは非溶解性の巨大分子で、チロシあると考えられてきたが、最近、構造的に類似性

ンを出発物質として生合成される。その初期段階のない環状ペプチド化合物にチロシナーゼ阻害作を触媒する酵素チロシナーゼが皮膚色素の形成に用あるいはメラニン合成阻害作用が見い出されて重要な役割を担っていることが明らかになっておいる。乳酸菌から単離された環状テトラペプチド

り、チロシナーゼによるメラニンの過剰生産を効や、ナデシコ科植物から得られた環状オクタペプ

率的に抑制することができれば、こういった色素

チド・シュードステラリン類は、アルブチンと同沈着異常の予防や治療が可能になるものと期待さ等、あるいはそれ以上に強い阻害活性を示すことれる。

が知られている。しかしながら、海洋生物由来の

これまでにメラニンの合成阻害物質としては、
こうじ酸やメルカプトプロピオニルグリシンが知メラニン合成阻害物質は、これまでに報告されてこなかった。

られている。これらの化合物は、チロシナーゼか

本研究では、これまでこの分野において未開拓ら銅イオンを除去することにより作用発現するこの状況にある海洋生物を素材として、チロシナーとから、重篤な副作用を持つ点で注意が必要となゼ阻害活性を主な指標としたメラニン合成阻害物

Search for new marine natural
products inhibiting melaninbiosynthesis

質を探索することを目的とする。

２ 実験・結果

Jun'ichi Kobayashi
Graduate School of Pharmaceutical
Sciences, Hokkaido University

沖縄で採取した海綿動物、原索動物、腔腸動物などをメタノールを用いて抽出し、有機溶媒で分配した。得られた抽出物に対してチロシナーゼ阻− 35 −

害作用を指標としたスクリーニングを行い、顕著状ペプチドの構造を解析した。Hymenamide A 〜

な活性を示す抽出物を選別した。

E は蛋白性アミノ酸から構成される環状ヘプタペ

沖縄産海綿 Hymeniacidon sp. の抽出について、

プチドであり、Hymenamide G、H、J および K

上記の活性を指標にしてシリカゲルカラム、ゲルは環状オクタペプチドである。これらの環状ペプ

ろ過、ならびに逆相 HPLC などの種々のクロマ

チドは、いずれも芳香族アミノ酸を含む点、なら

トグラフィーにより精製し、新規環状ペプチド

びに Hymenamide J、K を除いて複数のプロリン

H y m e n a m i d e A〜E、G〜HおよびJ〜Kを、既残基を有している点が特徴である。

１〜３）

。

一方、別種の沖縄産海綿 Theonella sp. からは、これらの環状ペプチドの１次構造は、各種２新規環状ペプチド Keramamide B および F を単次元 NMR データの解析、部分加水分解反応で生離した（Fig. ２）４、５）。Keramamide B は、酸加水成したペプチドのエドマン分解、あるいは FAB

分解物のアミノ酸分析により、Pro、Orn、Ile、nMS/MS のデータに基づいて帰属した。たとえば、− Val、α− aminobutyric acid（Aba）が各１残基ず

Hymenamide B の構造解析については、本化合物つ存在することが明らかとなった。２次元 NMR

知環状ペプチドとともに単離した（Fig.１、２）

1の H NMR データならびに酸加水分解物のアミを詳細に解析することにより、異常アミノ酸としノ酸分析により、２モルの Pro および Phe、１モて 2− bromo− 5− hydroxytryptophan（BhTrp）のルの Glu、Val、および Asn の存在が示唆された。

存在が判明し、他に α−ケト− β−アミノ酸、オ各アミノ酸残基のつながりについては、HMBC な

キサゾール環に共役したアクリル酸の存在も示唆

らびに FAB MS/MS（Fig. ３）に基づいて帰属しされた。各アミノ酸残基のつながりについてはた。各アミノ酸残基の絶対立体配置は、Marfey 法

HMBC および NOESY 等の２次元 NMR ならびにによりいずれも L 体であることがわかった。さらFAB MS/MS により帰属した。各アミノ酸残基に NOE データおよび分子力場計算に基づいて、の絶対立体配置は、分解生成物のキラル GC 分析

Hymenamide B の溶液中でのコンホーメーションにより決定した。Keramamide F も Keramamideを推定した（Fig. ４）。同様の手法により、他の環

B とほぼ同様の手法で構造解析を行った。酸加Fig.1− 36 −

メラニン生合成阻害作用を示す海洋天然物の探索

Fig.2− 37 −

水分解物のアミノ酸分析により、Ala、Ile、Ise、− dehydrotryptophan（Δ− Trp）の存在が判明し、diaminopropionic acid（Dpr）が各１残基ずつ存在

他に α−ケト− β−アミノ酸、チアゾール環に共役することが明らかとなった。２次元 NMR を詳細したアクリル酸の存在も示唆された。各アミノ酸に解析することにより、異常アミノ酸として α,β残基のつながりについては２次元 NMR ならびにFig.3 FAB MS/MS Fragmentations of Hymenamide B

Fig.4 Three-Dimensional Structure of the Lowest-Energy Conformer of Hymenamide B Evaluated by Molecular Mechanics Calculation− 38 −

メラニン生合成阻害作用を示す海洋天然物の探索

FAB MS/MS により帰属し、各アミノ酸残基の絶ことから、Keramaphidin B はエナンチオ混合物

対立体配置は、分解生成物のキラル GC 分析によであることが推定された。キラルカラムを用いり決定した。

た HPLC 分析の結果、（＋）−体および（−）−体の

上記の環状ペプチドについてチロシナーゼ阻害

比率は約 20：１であることがわかった。Ircinol

活性を調べたところ、Hymenamide E および K な

A は、高分解能 EIMS より、既知の Ircinal A よ

らびに Keramamide F に活性が認められた（表１）。

りも水素原子が２個多いことが明らかとなり、これらの結果から、活性発現には、環状部分の大Ircinal A のアルデヒド部分がアルコールに還元さ

きさにはあまり関係なく、芳香族アミノ酸部分がれた化合物と推定された。このことは Ircinal A

活性に影響を及ぼしているのではないかと考えらの DIBAL による還元生成物のスペクトルデータれる。

が、Ircinol A のそれらと一致したことからも確認

沖縄産海綿 Amphimedon sp. より新規アルカロイドされた。Keramamine C の NMR データは既知のIricinol A、Keramaphidin B、および Keramamine

Manzamine C と類似しており、高分解能 EIMS より、

C を、既知インドールアルカロイド Manzamine

Manzamine C よりも４ Dalton 大きいことがわかっ

６〜８）。Keramaphidin B は、た。NMR データの比較により、Keramamine C は高分解能 EIMS より得られた分子式から５環性

Manzamine C の β− carboline 環が tetrahydro− β化合物と推定された。HMQC− HOHAHA なら− carboline 環に置き換わった構造であると帰属しびに HMBC 等の２次元 NMR データに基づいてた（Fig. ５）。

A とともに単離した

Keramaphidin B の構造を帰属した。相対立体配

上記のマンザミン関連アルカロイドの他に、置については、NOESY スペクトルと X 線結晶解

海綿 Theonella sp. より単離したマクロライド

析により明らかにした。Keramaphidin B は全体

Theonezolide A 9）、Spongidae 科の海綿より分離しとして光学活性体であるにもかかわらず、X 線

たセスキテルペノイドキノン Nakijiquinone A 10）、結晶解析に用いられた結晶はラセミ体であった

ならびにホヤ Aplidium multiplicatum より単離

表１

海綿由来の環状ペプチドのチロシナーゼ阻害活性− 39 −

Fig.5− 40 −

メラニン生合成阻害作用を示す海洋天然物の探索

表２

海洋天然物質のメラニン合成阻害活性したヌクレオシド関連化合物 Shimofuridin A 11）

たばかりであり、今後、さらにスクリーニングを（Fig. ５）について、Ｂ 16 メラノーマ細胞のメ進めることにより、これまでにない新しいタイプ

ラニン合成阻害作用を調べた（表２）。その結 、のメラニン合成阻害剤の発見が大いに期待されManzamine A および Iricinol A に顕著な活性が認る。

められた。これらの化合物は共通の５環性構造を有しており、これらの部分構造が活性発現に重要引用文献であると推測される。

１）Kobayashi J., Tsuda M., Nakamura T. et al., :Hymenamides A and B, new proline-rich cyclic

３ 考 察

heptapeptides from the Okinawan marine sponge

海洋生物から単離した環状ペプチドについて、

Hymeniacidon sp., Tetrahedron, 49, 2391-2402,

チロシナーゼ阻害活性を調べた結果、３種のペプ

1993.

チドに活性が認められた。これらのペプチドに含２）Tsuda M., Shigemori H., Mikami Y., et al., :まれる芳香族アミノ酸が活性発現に寄与している

Hymenamides C - E, new cyclic heptapeptides

ものと推測される。一方、B− 16 メラノーマ細胞

with two proline residues from the Okinawanのメラニン合成阻害活性については、５環性構造

marine sponge Hymeniacidon sp., Tetrahedron,を有するアルカロイドに顕著な活性が認められた

49, 6785-6796, 1993.

ことから、これらの環構造が活性発現に重要では

３）Tsuda M., Sasaki T., and Kobayashi J. :ないかと考えられる。以上の結果をもとに、構造

Hymenamides G, H, J, and K, four cyclic

活性相関を検討することにより、より優れたチロ

octapeptides from the Okinawan marine sponge

シナーゼ阻害物質ならびにメラニン合成阻害物質

Hymeniacidon sp.,の開発を検討する予定である。一方、海洋生物を1994.

素材としたメラニン合成阻害剤の研究は緒についTetrahedron, 50, 4667-4680,

４）Kobayashi J., Itagaki F., Shigemori H., et al.,− 41 −

: Keramamides B-D, novel peptides from thebiogenetic precursors of manzamine C from an

Okinawan marine sponge Theonella sp., J. Am.

Okinawan marine sponge, Tetrahedron Lett., 35,

Chem. Soc., 113, 7812-7813, 1991.

4387-4388, 1994.

５）Itagaki F., Shigemori H., Ishibashi M. et al., :９）Kobayashi J., Kondo K., Ishibashi M. et al.,Keramamide F, a new thiazole-containing peptide: Theonezolide A, a novel polyketide naturalfrom the Okinawan marine sponge Theonella sp.,product from the Okinawan marine sponge

J. Org. Chem., 57, 5540-5542, 1992.

Theonella sp., J. Am. Chem. Soc., 115, 6661-6665,

６）Tsuda M., Kawasaki N., and Kobayashi J. :1993.

Ircinols A and B, first antipodes of manzamine-10）Shigemori H., Madono T., Sasaki T. et al.,related alkaloids from an Okinawan marine: Nakijiquinones A and B, new antifungal

sponge., Tetrahedron, 50, 7957-7960, 1994.

sesquiterpenoid quinones with an amino acid

７）Kobayashi J., Tsuda M., Kawasaki N. et al. :residue from an Okinawan marine sponge,

Keramaphidin B, a novel pentacyclic alkaloid

Tetrahedron, 50, 8347-8354, 1994.

from a marine sponge Amphimedon sp.: a11）Kobayashi J., Doi Y., and Ishibashi M. :plausible biogenetic precursor of manzamine

Shimofuridin A, a nucleoside derivative isolated

alkaloids, Tetrahedron Lett., 35, 4383-4386, 1994.

from the Okinawan marine tunicate Aplidium８）Tsuda M., Kawasaki N., and Kobayashi J. :multiplicatum, J. Org. Chem., 59, 255-257, 1994.

Keramaphidin C and keramamine C, plausible− 42 −

Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野

表皮ケラチノサイトにおけるヒト細胞老化因子の研究
愛媛大学

橋

本

医学部皮膚科公二Senescent cells are blocked in the G1 phase of the cell cycle. The proteins p21 and p16 are inhibitors of cyclindependent kinase and affect cell cycle progression and senescence. We have studied whether p21, p53 andp16 was associated with cultured keratinocytes senescence. Keratinocytes were isolated from normal humanskin obtained from individuals aged from 1 to 70 years, and cultured under serum free condition. The cultures
have been continued until the cell growth arrest. The expression of p21, p16 and p53 in the growing cells andthe senescent cells was analyzed by Western blot. The keratinocytes obtained from the individuals aged 1
and over 40 years tend to survive longer periods than the cells from the other ages. The p21 expression has
not been changed compared to the early passage while the cells were growing, but increased just before thegrowth arrest. The p16 expression on the 8th passage has been increased compared to the third passage in bothgrowing cells and senescent cells. These data suggest that increased p21 followed by p53 play an important rolein the growth arrest of senescent keratinocytes. Increased p16 is a co-factor for the growth arrest.

期で停止する４）。

１ 緒 言

細胞周期を制御し、老化細胞の細胞増殖を抑え

表皮ケラチノサイトは皮膚における重要な構成

ると考えられている p 21 が、1993 年に、いくつか細胞であり、その老化機構の解明はコスメトロジの独立した研究グループから報告された５−８）。sdi

ーにおける生物学的基礎研究の根幹をなすと言っ

１（senescent cell derived inhibitor １）は Noda ら５）ても過言でない。1961 年に、ヒト胎児繊維芽細胞

が老化細胞由来の分裂抑制因子として、遺伝子をを in vitro で継代培養すると常に決まった分裂回単離した。そのタンパク質の分子量は 21kd で 164

数の後に、増殖を停止してしまうことが見い出さ

個のアミノ酸からなる。線維芽細胞を用いた実験

れた 。このことより in vitro における培養細胞により、継代数の増加に伴い、sdi1mRNA が増加の有限増殖能は、細胞レベルでの老化であると考すること、あるいは、sdi １を細胞に過剰に発現えられるようになった２）。正常ヒトケラチノサイ

させると細胞増殖の抑制がおこることが報告され

トでも同様に、20 − 50 代で増殖が停止し３）、まている。一方、Harper ら８）はサイクリン依存性キた他の多くのヒトの細胞でも、同様に老化するこナーゼ（cdk ２）の阻害物として働く制御物質を見とが知られている。細胞の老化は、細胞死の一種

いだし cip １（cdk-interacting protein）と名付け、であるアポトーシスへと向かう過程とは全く異な

その塩基配列を決定したところ、sdi １と同一でっており、細胞は老化するにつれて細胞周期をまあった。また、El-Deiry ら７）は、野生型 p 53 で発

わる時間が長くなり、完全に老化した細胞は G １

現が誘導され、変異型 p 53 では発現が誘導されな

１）

Senescence of cultured keratinocytes
and the expression of p21, p53 andp16
Koji Hashimoto, M.D.
Department of Dermatology
Ehime University School of Medicineい遺伝子を単離し waf １（wild type p53-activatedfragment）と名付け、その塩基配列を決定したと
ころ、sdi １と同一であった。彼らはさらに waf
１上流に p 53 結合部位を見つけた。
細胞が G1 期から S 期へ移行する際に癌抑制遺伝子産物である RB タンパク質のリン酸化が必要− 44 −

表皮ケラチノサイトにおけるヒト細胞老化因子の研究であるが、p 21 はリン酸化を行う種々の cdk と収・分散を行った。播種密度は 100mm シャーレ

cyclin の複合体に結合することによりその活性をにつき 0.5 〜 1.0×10 ６細胞 /10mL medium。な

阻害し、さらに癌抑制遺伝子産物 p 53 により誘導

お、アミノ酸添加 MCDB153 培地にはインスリンされる。また、p16 は cdk と免疫沈殿で共沈する

5.0µg/mL、モノエタノールアミン 0.1mM、ホスタンパク質として、見い出された 。cdk と結合

ホリルエタノールアミン 0.1mM ハイドロコーチ

することにより cyclin との複合体形成を競合的にゾン 0.5µM、牛脳視床下部抽出液 50 〜 150µg 蛋

阻害し、その活性を抑え、細胞周期制御・細胞老白 /mL を加えた。CaCl ２の最終濃度は 0.1mM に化に関与していると考えられている。

調整。

９）

そこでこの研究では、正常ヒトケラチノサイト
を無血清培地で可能なかぎり継代し、細胞の老化

２. ２ Western blot 法
抽出したタンパク質 70µg を 15％ SDS− PAGEと p 21、p 53、p 16 が関連しているかどうか調べた。

にて分離後、nitrocellulose 膜に転 した。以下

２ 実 験の、膜の洗浄・抗体の希釈には 20mM tris− HCl

２. １ 表皮ケラチノサイト培養

pH 7.4、150mM NaCl、0.05％ Tween − 20 を用

形成外科手術で、15 人の１才〜 70 才の人よりいた。膜を５％ BSA にて１時間ブロックした後、得られた正常皮膚由来ケラチノサイトを下記のご洗浄し、10µg/mL のモノクロナル抗 p 21（6B6;

とく無血清培地で培養し、増殖が停止するまで培Pharmingen Co., San Diego, CA）、p53（Pab1801;

養を続けた。細胞継代時には、細胞抽出物を− 80

Oncogene Science Co., Cambridge, MA）、p16℃で保存した。

（G175-405; Pharmingen Co.）中で２時間インキ

正常皮膚片を 250PU/mL Dispase−ダルベッコ

ュベートした。洗浄後、１：600 fluorescein 標

変法イーグル培養液に浸し、４℃で一晩静置。翌

識抗マウス IgG（Amersham, Buckinghamshire,

日、表皮を真皮から剥離した。表皮片を、0.25％

England）中にて、１時間インキュベートした。洗トリプシン液液中にひたし、37℃、５分間静置し浄後、さらに１：2500 AP 標識抗 fluorescein 抗体

た。表皮片を、プラスチックシャーレに移し、ほ（Amersham）中で１時間インキュベートした。洗ぐした。ほぐし終えたら表皮・溶液ともに遠心管

浄後、AttoPhos（Amersham）と約 20 分間反応さに移し入れ細胞浮遊液をつくり、細胞数を数えた。

せ、蛍光は FluoroImager（Molecular Dynamics,

遠心した後、細胞を無血清培地である MCDB153

Sunnyvale, CA）にて検出し、それぞれのバンドのに以下のアミノ酸を添加した培地（最終濃度：

強度を測定し、定 化を試みた。３代目の細胞でのisoleucine 7.5×10

M、histidine 2.4×10−４methionine 9.0×10

M、−４発現を１としたときの８代目の値を示した。

M、phenylalanine 9.0×10

−５

３ 結 果

M、tryptophan 4.5 ×10 −５M、tyrosine 7.5×−５

10 −５M）で懸濁し、100mm プラスチックシャー

３. １ 細胞増殖

レ（コラーゲンコートのシャーレ）当たり２〜３

図１は７種類のケラチノサイトの 100 日目まで

×10 細胞 /10 mL medium の割合で播種した。

の細胞増殖を示した。50 日目頃、継代数で 10 代

翌日培地交換を行い、以後、培地交換は２〜３日前後で増殖を停止するものが多かった。

６に一度おこなった。細胞密度が 70 〜 80％程度あ

さらに、増殖を続けるものがあったので、培養

るいは１週間毎に継代培養を行った。継代するとを続けた。15 種のケラチノサイトのうち、２種はきは、0.25％トリプシン、0.05％ EDTA 混合用液

約半年間増殖を続け、継代数で 27 代まで、培養を用い、37℃、５分間処理を行い血清で、トリプすることができた（図２）。それぞれ、１才、45 才

シン・EDTA のはたらきを中和した後、細胞の回− 45 −

の人より得た、ケラチノサイトであった。

得られたケラチノサイトの方が、それ以外の年齢

図３に、増殖停止時の計算上の総細胞数と年齢のヒトより得た細胞より長期間増殖を続けることの関係を示した。１才および中年以降のヒトからができる傾向があった。

図１ 100 日目までの細胞増殖。15 種のケラチノサイトのうち ７種を示す。縦軸には計算上での総細胞数を示す。

図２ 200 日目までの細胞増殖。15 種のケラチノサイトを増殖停止時まで示す。縦軸には計算上での総細胞数を示す。

図３ 増殖停止時の総細胞数と年齢との関係。

− 46 −

表皮ケラチノサイトにおけるヒト細胞老化因子の研究

３. ２ p21、p53、p16 の発現
p 21 の発現を western blot 法にて調べた。３代目と８代目のケラチノサイトを調べた（図４）。
#16、#34、#39 は８代以降も増殖を続けている
細胞、#18、# １、# ７は８代目直後に増殖停止した。増殖を続けている細胞では p 21 の変化はみられないが、増殖停止直前の細胞では、それぞれ、
3.5、2.0、1.9 と増加していた。
次に p 21 を誘導するとされている p53 の発現をWestern blot 法にて調べた。増殖停止した細胞を
図５に示す。８代目の細胞では p 53 は増加しており、p 21 の発現増加と平行していた。増殖中の細胞では p 53 の発現は一定しなかった（結果は示さ

図４ Western blot 法による３代目と８代目の細胞での p21の発現。上段（#16、#34、#39）が ８代目以降も増殖を続けている細胞、下段（#18、# １、#7）が ８代目直後に増殖停止した細胞を示す。蛍光は FluoroImager にて検出し、それぞれのバンドの強度を測定し、定 化した。３代目の細胞での発現を 1 としたときの８代目の値を下端に示した。

ない）。
次に、p21 と同様に cdk inhibitor である p16 の発現を調べた（図 6）。増殖停止した細胞では８代目で p16 は増加していたが、増殖を続けている細胞でも、８代目では同様に p16 は増加した。

４ 考 察
p21、p53、p16 の変化のまとめを表１に示す。
p 21 は増殖中の細胞では変化はなく、老化した細胞で増加していた。このことより、ケラチノサイ
トの老化に伴う細胞増殖停止には p 21 が関与して

図５ Western blot 法による増殖停止細胞
（#18、
# １、
# ７）
での p53 の発現。それぞれのバンドの強度は図４と同様に定 化した。

いると考えられる。p 53 は老化した細胞で増加しており、p 21 の増加と平行していた。p21 は p53により誘導されるとされており、老化ケラチノサ
イトでも増加した p53 により p 21 が誘導されたものと考えられる。p 21 は cyclin dependent kinaseに結合してキナーゼ活性を阻害し細胞周期を G1
期に停止させるものと考えられており、ケラチノ
サイトの老化による細胞増殖の停止は、増加した
p 21 による細胞周期の G1 期への停止が原因と考えられる。
p16 は、増殖中あるいは老化した細胞、いづれでも継代を経るにしたがって増加しており、老化に伴う細胞増殖停止には直接は関与していないものと考えられる。

図６ Western blot 法による３代目と８代目の細胞での p16の発現。上段（#16、#34、#39）が ８代目以降も増殖を続けている細胞、下段（#18、# １、#7）が 8 代目直後に増殖停止した細胞を示す。それぞれのバンドの強度は図４と同様に定 化した。

− 47 −

strains of human epidermal keratinocytes: the表１ p21、p53、p16 の発現のまとめ		

formation of keratinizing colonies from single

増殖中

増殖停止

p21

→

↑

p53

不定

↑

４）Yanishevsky R, Mendelsohn ML, Mayall BH:

p16

↑

↑

Proliferative capacity and DNA content of aging

cells, Cell, 6, 331-344, 1975.

human diploid cells in culture: a cytophotometric

図 4、5、6 の結 をまとめた。８代目の細胞での発現を３代目の細胞と比較した。

and autoradiographic analysis, J Cell Physiol, 84,

１才、および中年以降の個体より得た、ケラチ

165-170, 1974.

ノサイトは、より長期間細胞増殖を続けることが

５）Noda A, Ning Y, Venable SF, Pereira-Smith

できる傾向があった。若い個体より得たケラチノ

OM, Smith JR: Cloning of senescent cell-derived

サイトの方が長期間培養が可能であるという報告

inhibitors of DNA synthesis using an expressionはあるが、今回の実験のように中年以降の個体

screen, Exp Cell Res, 211, 90-98, 1994.

３）から得た細胞で再び長期間培養が可能になるとい

６）Xiong Y, Hannon GJ, Zhang H, Casso D,

う報告はない。その原因はよくわからないが、サ

Kobayashi R, Beach D: p21 is a universal

ンプル数を増やす必要がある。

inhibitor of cyclin kinases, Nature, 366, 701-704,
1993.

５ 結 論

７）El-Deiry WS, Tokino T, Velculescu VE, Levy

in vitro における、老化ケラチノサイトでは p 53

DB, Parsons R, Trent JM, Lin D, Mercer WE,により誘導された p 21 が細胞周期を G1 期に停止

Kinzler KW, Vogelstein B: WAF1, a potential

させて細胞増殖を停止させているものと考えられmediator of p53 tumor suppression, Cell, 75, 817-

る。p16 は増殖中の細胞でも増加しており、細胞825, 1993

増殖停止の co− factor としては働く可能性がある

８）Harper JW, Adami GR, Wei N, Keyomarsi K,

が、直接は関与していないと考えられる。

Elledge SJ: The p21 Cdk-interacting protein
Cip1 is a potent inhibitor of G1 cyclin-dependent

文 献kinases, Cell, 75, 805-816, 1993

１）Hayflick L, Moorhead PS: The serial cultivation

９）Serrano M, Hannon GJ, Beach D: A newof human diploid cell strains, Exp Cell Res, 25,

regulatory motif in cell-cycle control causing

585-621, 1961.

specific inhibition of cyclin D/CDK4, Nature, 366,

２）Hayflick L: The limited in vitro lifetime ofhuman diploid cell strains, Exp Cell Res, 37, 614636, 1965.
３）Rheinwald JG, Green H: Serial cultivation of− 48 −

704-707, 1993.

脂質皮膚モデルを利用した化粧品
及び水の浸透と安全性に関する基礎的研究
東京工業大学谷

工学部有機材料工学科

岡

明

彦

The transport phenomena of weak electrolytes through a charged membrane as a model of skin has been studied
in order to understand the basical behavior of cosmetics in the skin. The membrane potential across positively
charged and negatively charged membranes was measured for acetic acid and glycine methyl ester hydrochloride
aqueous solutions as model materials of cosmetics. The anion-to-cation mobility ratios in the membrane were
determined. In the case of acetic acid solutions in a positively charged membrane, the ratios were about 0.00010.001 times larger than those in water. On the other hand, they were about 10000 times larger than in water if anegatively charged membrane was employed. It is suggested that the transport phenomena of weak electrolyte ionsin a charged membrane can be explained by the above-described transport theory.
The dissociation constant of acetic acid as a weak electrolyte in an ion-exchange membrane was estimated using
the Donnan equilibrium theory. The total concentration, C0 , which represents the sum of the dissociated proton
concentration and carboxyl concentration of undissociated electrolyte in the membrane, was determined by neutral
titration in order to use it for the calculation. The apparent dissociation constants of acetic acid,K, in the negatively
charged membrane were on the order of 10-4 and were larger than that in water (=1.73x10-5). K( increased withan increase in the concentration in external solution and decreased with the fixed charge density increase. The
larger dissociation constant in the membrane compared with that in water suggests the existence of an interaction
between the solute and the membrane other than that with the electric field.
The glycine and leucine permeability coefficients, P, through a negatively membrane were measured as afunction of HCl concetration, CHCl, from 0 to 10-1mol/l for three different interfacial conditions. Amino acid transportphenomena remarkably depended on the interfacial condition between the membrane and the external solution. The
lowest P was obtained at CHCl=0 for both sides of the membrane, and generally P increases with an increase in CHCl.
In case of the glycine, the lowest P had been obtained if CHCl on the glycine source side was 10-1mol/l and that on the
opposite side was 0. The highest P was obtained if CHCl on the amino acid source side was 0 and that on the opposite
side was 10-1mol/l. The P values of glycine had been explained by the transport mechanism based on the interfacialchemical reaction (protonation, deprotonation or ion-exchange) and the ionic tranport across a charged membrane.
They, however, are remakably affected by the physicochemical properties of the membrane such as hydrophobicity,
molecular size, etc..

するにあたり、皮膚のすべての構造と化学組成を

１ 緒 言

明らかにし化粧品の各成分の運動を逐次追うこと

皮膚は脂質、コラーゲン、その他タンパク質をは不可能である。そこでこのように複雑な系を解主体とし、多量の水分を含有する複雑な構造を有析するには、皮膚をブラックボックスとして取りした皮膜状の物質である。化粧品はこの中を障害扱う方法と皮膚をモデル化して取り扱う方法が考物を回避し、特定の官能基を有する物質と相互作えられる。本研究では後者の方法を用いて化粧品

用くり返しながら内部に浸透していく。その浸透の安全性を解析する上で重要と考えられる基礎的能は皮膚を構成する化合物の化学構造や高次構造知見を得ることを目的とする。

に著しく依存する。化粧品の浸透性能を明らかに
Fundamental study on penetrationof cosmetics and water throughlipid-skin model for safty
Akihiko Tanioka
Department of Organic and Polymeric
Materials, Faculty of Engineering,Tokyo Institute of Technology

化粧品の多くは弱電解質であることが知られており、また皮膚を構成する脂質やタンパク質は正や負の荷電基を有していることが知られている。
このことは水溶液中の弱電解質が正または負の固定荷電基が分布する水のチャネル内を移動すると考えることができる。しかしながらこのような系
ではチャネル内における弱電解質の性質を決定す− 49 −

ることは非常に困難であるから、皮膚外で生じる測定セルの中央に膜をセットし、右側セル濃度を現象を観察することによって内部の状態を推定す

0 . 01 mol/L に固定し、左側セル濃度を 0 . 001 −ることになる。本研究では電荷を有した膜を皮膚

2 . 0 mol/L の濃度範囲で変化させ 23℃にてイオンモデルの基本単位と考え、このような膜におけるメータを使用して測定した。電極には銀／塩化銀

弱電解質やアミノ酸の挙動を理論的及び実験的に電極を使用し、飽和 KCl 水溶液中に浸し、セル

（１−５）

解析した

。

と塩橋により連絡した。
まず膜の有効荷電密度 QC X を求めるために

２ 実 験

KCl 水溶液中で膜電位を測定した。次に QC X の

２. １ 試 料

pH 依存性を調べるために HCl 水溶液及び KOH

負に荷電した試料としてスチレンジビニルベン
ゼン共重合体にスルホン酸基を付与したもの（負荷電膜：K101, TK11,12,13 & 15）及び正に荷電し水溶液中において膜電位を測定した。さらに HCl
Table 1 Physicochemical properties of charged membrane

た試料としてスチレンーブタジエン共重合体にアルキルアミンを付与したもの（正荷電膜：A201,
TA13）を使用した。これらの有効荷電密度 QC X、
荷電密度 CX、含水 、膜厚を Table １に示す。
弱電解質として酢酸を、アミノ酸としてグリシン
及びロイシンを使用した。また膜電位の測定にはKCl、HCl、KOH、グリシンメチルエステルを使用した（６）。
２. ２ 測 定
２. ２. １ 膜電位
Fig. １に示す装置を用いて膜電位を測定する。

Fig. 1 Apparatus for membrane potential measurements.

− 50 −

脂質皮膚モデルを利用した化粧品及び水の浸透と安全性に関する基礎的研究＋ KCl 及び KOH ＋ KCl 水溶液中においても同様

実験⒜：セルの両側の pH を変化させる（両側の測定を行った。弱電解質による膜電位の測定にに加える HCl 濃度は同一）。

は酢酸水溶液を使用した。酢酸の解離状態を変え実験⒝：セルの左側はアミノ酸水溶液のみとるために HCl または KOH を膜の両側に加えたこ

し、右側の pH を変化させる。

の時の濃度は 0.001mol/L であった。弱電解質の実験⒞：セルの右側はイオン交換水のみとし、結果とを比較するために、有機酸塩であるグリシ

左側（アミノ酸側）の pH を変化させンメチルエステル塩酸塩水溶液についても膜電 をる。

（６，７− 16）

測定した。

使用した pH は 1 . 0、
2 . 0、
4 . 0、
5.（
9 イオン交換水）
であった。

２. ２. ２ 透過係数

アミノ酸透過量の測定は液体クロマトグラフ

Fig. ２ に 測 定 装 置 を 示 す。 右 側 の セ ル に
0 . 87 mol/L の酢酸水溶液、左側のセルにイオン交（Inertsil Ph 5 . 0）を使用し、ラベル化せずアミノ酸溶液を直接測定した（17，18）。

換水を注入し、10 分おきに２時間、左側セルの比伝導度を測定した。この比伝導度を別に作製し２. ２. ３ 中和滴定

た校正曲線から左側セル濃度に換算した。さら⑴ ３成分イオン系に、左セル濃度の変化量から、膜におけるイオ

３成分イオン系では、膜を 1 mol/L の KCl にンの流束が求められ、この値から透過係数を計

24 時間以上浸せきし、対イオンを負荷電膜は K ＋、算した（６）。

正荷電膜は Cl −に置き換えた。次にイオン交換水

アミノ酸の透過実験にはグリシン、Ｌ−ロイシ

中で撹拌し、伝導度が十分小さくなるまでイオンンを使用した。左右同体積のガラス製の２室セル

交換水を取り換えて洗浄した。このような膜を濃を用い各室の水溶液にそれぞれ電極を浸せきし

度 C 0 の酢酸水溶液 400 mL に 24 時間以上浸せきて pH をモニタ−した。左側セルに 0 . 05 M アミ

し平衡になるまで十分な時間放置した。有効荷電ノ混合水溶液を右側セルにはイオン交換水を入密度は膜電 から決定されるために、C 0 は膜電 とれ、両側のセルから一定時間毎に一定量を採取し同じ濃度範囲ではなくてはならない。そこで膜電これを測定試料とした。また pH の調整には HClの測定と同じ 0 . 001 mol/L 〜 2 . 0 mol/L の濃度範を用い次の３種類の境界条件を設定した。

囲の 10 種類の C 0 で測定を行った。
上記の平衡状態にある膜を取り出して表面の酢酸を拭い、4 枚全てを 2 mol/L の KCl 溶液
100 mL に浸し、膜ごとの溶液を KOH 溶液で中和滴定した。この測定により、膜中の濃度 C 0 が求められる。KOH 溶液は酢酸の濃度に応じて、
0 . 01 mol/L 〜 0 . 2 mol/L の濃度のものを使用した。
この時、濃度の小さいものは、2 mol/L の KCl 溶
液 100 mL に対するブランク滴定を行い、滴定値を補正した（19）。
⑵ ２成分イオン系
２成分イオン系では、負荷電膜は 1N の HCl、

Fig. 2 Apparatus for permeability coefficient measurements

アニオン交換膜は 1mol/L の CH 3 COOK に 24 時
間以上浸せきし、対イオンを H＋、または CH3 COO −− 51 −

に置き換えた。次に、膜をイオン交換水中に浸せ過係数は次式で表すことができる。

きして撹拌を行い、pH が中性付近になるまでイ

ω+ω-RTCX
P＝ d（ω++ω-）（Ci -Ci ' ）オン交換水を取り換えながら洗浄した。このよう｛な膜を、３成分イオン系と同様に濃度 C0 mol/L の酢酸水溶液と平衡状態におき、0.1 または 0.2mol/
L の KOH で中和滴定し、C 0 を決定した。

2

2
1+ 2C
Wln
QCX

X

2

X

｝

⑶

ここで d は膜の厚みである。また W 及び Q は

更に荷電密度と膜中の解離定数を比較検討する

次式となる。
/（1 ＋ ω −/ω ＋）W ＝（1-ω− /ω ＋）

ため、荷電密度（イオン交換容量）の異なる膜に（/ k ＋ k −）Q ＝√（γ＋ γ−）（19）。

ついても同様の実験を行った√1+ 2C ）+Ｗ√（ ） √（ ） （ 1+（ QC
2C +Ｗ ）
√（ QC
）
2
1+ 2C
QCX

⑷
⑸

ここで ω −、ω ＋はそれぞれアニオンとカチオ⑶ 膜中の解離定数の決定
中和滴定により決定した C 0、Q、CX を用いて解ンの移動度、γ −、γ ＋はそれぞれアニオンとカチ

離定数の計算を行った。３成分イオン系では次式

オンの活 係数、k −、k ＋はそれぞれアニオンとカを用いて C 1 を計算した。

チオンの分配係数である。

この値から、膜中のイオン濃度を求め次式からFig. ３に KCl 水溶液を使用して求めた正荷電膜

膜中の解離定数を定めた。ここで求めた解離定数及び負荷電膜における膜電 を示す。実線及び点線は活量係数を１として取り扱っているため、真のは得られた実験データに（２）式を適用した結 で解離定数とは異なり、見かけの解離定数となってあり、非常に良い一致を示している。これらからいる。

膜中のアニオンとカチオンの移動度の比（ω − /ω ＋）

5
1

2

2

2

2

4
1

2

2

2

C （Vm −Ve Q ）＋C {VeQ VmCX ＋2K（Vm − Ve Q ）}
3
1

2

2

2

2

2
1

を計算したところいずれの膜においても水溶液中（K − 2C0）（Vm − Ve Q ）＋ C K{Q VmC（V
＋C K
X
mCX

の値と変わらなかった。さらに有効荷電密度 QC X

2を求めたところ正荷電膜に対しては 0.570mol/L、

2

2

2

− KVe）− 2KC（V} ＋ C1 K{C0 Q VmC（2V
0 m − Ve Q ）
X
eK
2
0

2

2

2

2

2

2
0

− VmCX）＋ KC （Vm − Ve Q ）} − VeQ VmCXK C ＝ 0

負荷電膜に対しては 0.684mol/L となった。これ⑴

らの値は HCl や KOH、さらには KCl-HCl や KClKOH 系においても大きな変化は見られなかった。

３ 結果と考察

これらのことから膜の物理化学的性質は pH によ３. １ 膜電る変化を受けないと考えられる。

膜に発生する電位 Δφ はドナン電位 ΔφDon と拡散電位 Δφdiff の和として次式で表すことができ
る。

C3（
" −（
√2Z3 ）＋（CQ3' ）2Z3 ）ln
Δφ＝ΔφDon＋Δφdiff＝− ZRT
3F
' −（
C3（
√2ZZXC3 X）＋2（CQ3 ）2 2ZZXC3 X ）2'i（ Ci -Ci ）ΣZ i2ωi Ci
RTΣZiω
ln Σ
2
2FΣZi ωi（ Ci -Ci' ）Z i ωi C i '⑵
ZXCX 22 ZXCX

ここで Z i は外部溶液中のイオンの価数、C X は膜固定荷電密度、ZX は固定荷電基の価数、C' 及び
C" はそれぞれ左水槽及び右水槽のイオン濃度、C'及び C" は膜のそれぞれ膜の左側及び右側界面のイオン濃度、ω i はイオン移動度、F はファラデー
定数、R は気体定数、T は絶対温度である。膜透Fig. 3 Membrane potential Δφas a function of logarithmic
KCl concentration C'. □ for positively charged membrane, and ■ for negatively charged membrane.

− 52 −

脂質皮膚モデルを利用した化粧品及び水の浸透と安全性に関する基礎的研究

Figs. ４と５に正荷電膜及び負荷電膜における、方の濃度は 10 −３mol/L から 2mol/L まで変えられ酢酸、酢酸／塩酸、酢酸／苛性カリ系における膜

た。また酸及びアルカリの濃度は膜の両側で一定

電 と酢酸濃度との関係を示す。これらの系では膜10 −３mol/L に保たれた。図中における実線、点線、の片側の酢酸濃度は 10-3 mol/L に保たれ、もう一一点鎖線は式（１）に基づく理論曲線である。この時カチオン及びアニオンの濃度は解離平衡を考慮して求めた。理論値と実験曲線は非常に良い一致を示しており、これらからそれぞれの膜におけるカチオン（H＋）とアニオン（CH ３COO −）の移動度の比を求めることができ Table ２に示す。水中での比は ω CH3COO-/ω H = 0.12 であり、正荷電膜、負＋荷電膜共に著しく異なった値を示す。正に荷電した膜内ではアニオンの移動度が著しく減少し（1000〜 10000 分の１）
、負に荷電した膜内ではカチオンの移動度が著しく減少すること（1000 〜 10000 分の１）を示唆している。膜中の固定荷電基に対すFig. 4 Membrane potential Δφas a function of logarithmic
acetic acid concentration C' in the system of positively
charged membrane. □ shows acetic acid, and ■ shows
acetic acid mixed with HCl. HCl concentration in bothsides of the membrane 10 -3 mol/L. ○ shows acetic acidmixed with KOH. KOH concentration in both sides of themembrane is 10 -3 mol/L. Acetic acid concentration C' isvaried from 10 -3 to 2 mol/L, and C" is kept constant at
10 -2 mol/L. Lines are calculated results.

る対イオン ω counter 及び副イオン ω co の移動度は次式で近似される。
C ＋ φCxωcounter ＝ ωcounter co⑹ωco ＝ ωco⑺

Cco ＋ Cx

ここで ωcounter は対イオンの、ωco は副イオンの水中における移動度、C co は副イオンの膜中における濃度である。この式によると膜中のイオンはそれと逆符号の固定荷電基の影響を著しく受けるものと考えられる。
Figs. ６と７に正荷電膜及び負荷電膜における、
グリシンメチルエステル塩酸塩、グリシンメチル
エステル塩酸塩／塩酸、グリシンメチルエステル
塩酸塩／苛性カリ系における膜電 とグリシンメチ

Fig. 5 Membrane potential Δφas a function of logarithmic
acetic acid concentration C' in the system of negatively
charged membrane. □ for acetic acid, ■ acetic acidmixed with HCl. HCl concentration in both sides of themembrane is 10 -3 mol/L. ○ shows acetic acid mixed with
KOH. KOH concentration in both sides of the membrane
is 10 -3 mol/L. Acetic acid concentration C' is varied from10 -3 to 2 mol/L, and C" is kept constant at 10 -2 mol/L.
Lines are calculated results.

− 53 −

Table 2 Mobility Ratio of H+ to CH3COO-（

ωCH3COOωH+）

Fig. 6 Membrane potential Δφ as a function of logarithmic
glycine methyl ester hydrochloride concentration C' in thesystem of positively charged membrane. □ for glycine
methyl ester hydrochloride, and ○ for glycine methyl esterhydrochloride mixed with HCl. HCl concentration in bothsides of the membrane is 10 -3 mol/L. ■ for glycine methyl ester hydrochloride mixed with KOH. KOH concentration in both sides of the membrane is 10-3 mol/L. Glycine
methyl ester hydrochloride concentration C' is varied from10 -3 to 2 mol/L, and C" is kept constant. Lines are calculated results.

Fig. 7 Membrane potential Δφas a function of logarithmic
glycine methyl ester hydrochloride concentration C' in
the system of negatively charged membrane. □ shows
glycine methyl ester hydrochloride, and ○ shows glycine
methyl ester hydrochloride mixed with HCl. HCl concentration in both sides of the membrane are 10-3 mol/L.
■ shows glycine methyl ester hydrochloride mixed with
KOH. KOH concentration in both sides of the membrane
is 10 -3 mol/L. Glycine methyl ester hydrochloride concentration C' is varied from 10 -3 to 2 mol/L, and C" iskept constant. Lines are calculated results.

ルエステル塩酸塩濃度との関係を示す。酢酸をグ

Table 3 Mobility Ratio of H3 NCH2COOH3 to Cl-+（ωリシンメチルエステル塩酸塩に置き換えた以外

ω Cl

−

H3+ NCH2COOH3）

実験条件は同じである。図中における実線、点線、一点鎖線は式（１）に基づく理論曲線である。理論値と実験曲線は非常に良い一致を示しており、これらからそれぞれの膜におけるカチオン（H３＋
NCH ２COOCH ３）とアニオン（Cl −）の移動度の比を求めることができ Table ３に示す。水中におけるこれらのデータがないことから比較のためにトリメチルアンモニウムクロライド及び塩化アンモニウムにおける水中での値 ωC l /ωN（CH ３）４ =1 . 7−＋

及び ωCl /ωNH４ = 1 . 0 を同時に示す。これらの結−＋Table 4 Permeability Coefficients of Acetic Acid
(PCH COOH) at 0.87mol/L
3、移動度の比に大きな違いは見られなかった。このことはグリシンメチルエステル塩酸塩が強電
解質としてふるまっていることを示している。
Table ４に正荷電膜及び負荷電膜における酢れらの結 によるといずれの膜においても膜の固定

酸の透過係数を示す。この値を式（５）に適用し、荷電基に対する対イオンの移動度よりもプロトン

ω ＋ ω − /（ω ＋＋ ω −）を求め、Table ２におけの移動度が著しい影響を受けることが明らかとなる移動度の比 ω − /ω ＋とからカチオンとアニオった。荷電膜における弱電解質の輸送に関しては

ンの移動度 ω ＋、ω −を求め Table ５に示す。こ飽和現象モデルや界 動力学モデル等が考えられて− 54 −

脂質皮膚モデルを利用した化粧品及び水の浸透と安全性に関する基礎的研究いるが、プロトンの輸送現象も含めてさらに考察の濃度を、Fig. ９〜 Fig.12 に示す。荷電密度を考しなければならない。また浸透圧による水の輸送

慮するといずれの系においても、電気的中性条件

がプロトンに与える影響も考慮しなければならなの成立していることが確認できた。また外部溶液（６，20 − 24）

い。

濃度が 1.0mol/L まで大きくなっても、副イオン
濃度は極めて小さい濃度となり、副イオンに対す

３. ２ 荷電膜中のイオン濃度と弱電解質の見かる Donnan 排除が強電解質系よりも顕著に現れた。

けの解離定数
外部溶液濃度に対して、中和滴定により決定
した膜中の水素イオン濃度と未解離の酢酸のカ
ルボキシル基の濃度の和 C 0 をプロットしたもの
を Fig. ８に示す。□、■がそれぞれ３成分系の負荷電膜と正荷電膜における結 、○、× がそれ
ぞれ２成分系の負荷電膜と正荷電膜における結果である。これらの濃度から計算した膜内の各成分

Table 5 Ion Mobility ω+ and ω- (mol cm2 J-1 S-1) Determined by Permeability Equation due to the Permeability Coefficient Measurements

Fig.9 Concentrations of H+, CH 3 COO-, K+ and CH 3 COOH
in negatively charged membrane are plotted as a functionof the total concentration in the external solution (C 0 ) for
K101-ternary ionic system, where □ corresponds to H+, ■ CH 3 COO- , ○ CH 3 COOH and X K+.

Fig.8 The total concentrations of dissociated and undissociated acetic acid (C 0 = C 1 +Cs) in the charged exchange
membrane determined by titration are plotted as a function of the total concentration in the external solution (C 0 ),where □ corresponds to K101 in ternary ionic system,■ A201 in ternary ionic system, ○ K101 in binary ionicsystem and X A201 in binary ionic system.

Fig. 10 Concentrations of H + , CH 3 COO - , Cl - andCH 3 COOH in positively charged membrane are plotted
as a function of the total concentration in the external solution (C 0 ) for A201-ternary ionic system, where □ corresponds to H+ , ■ CH 3 COO- , ○ CH 3 COOH and◇ Cl-.

− 55 −

これは、外部溶液中の解離したイオン濃度が小さ

離定数を求め Fig. 13 に示す。いずれの系においいためである。３成分系では、膜内の対イオンても、図中に実線で示した水中 25 . 5℃における＋−が外部溶液の H または CH ３COO と置き換わ酢酸の解離定数（1 . 73 × 10 −５）より大きい。このる を見積もることができる。強電解質溶液ではような解離定数の上昇の原因としては、膜の、物

1 . 0 mol/L の時、ほとんど全ての対イオンが置き理的構造、化学的構造、固定荷電基の影響等が考換わるが、弱電解質の場合、1 . 0 mol/L でも、約えられる（19）。

半分の対イオンが置き換わるにとどまっている。
このことも、弱電解質の解離したイオンが少ない

３. ３ 荷電膜中の弱電解質の真の解離定数
膜中の真の解離定数 Kth は膜中の活 を ai とおくことに起因している。Fig. ９、Fig. 10 をもとに解と次式で与えられる。
+ - Ca+a- γ+ Cγ
Kth＝ as ＝ γs Cs⑻

ここで γi 及び Ci はそれぞれ膜中の活 係数及び濃度である。また外部水溶液中の解離定数 K th との間に次の関係が成立する。

Kth＝k+ k-a+a- k+ k- Kthk +k - Cγ+ +C k sγｓＣｓ ＝ ks as ＝ ks⑼

ここで γi 及び Ci はそれぞれ外部溶液中の活 係数及び濃度、k i は分配係数である。このことから、膜中の解離定数はカチオン、アニオン、未解離のFig.11 Concentrations of H+, CH3COO- and CH3COOH
in negatively charged membrane are plotted as a functionof the total concentration in the external solution (C 0 )for K101-binary ionic system. □ corresponds to H+ , ■CH 3 COO- and ○ CH3COOH.

Fig.12 Concentrations of H+, CH 3 COO- and CH 3 COOH
in positively charged membrane are plotted as a functionof the total concentration in the external solution (C 0 )for A201-binary ionic system. □ corresponds to H+ , ■CH 3 COO- and ○ CH 3 COOH.

中性分子の分配係数に対応して変化する。分配係数は膜相が固定電荷を持たない時に、各イオン
または中性分子が水相、膜相に分配される割合を示し、溶液の濃度や電位には依存しない量である。

Fig.13 Apparent dissociation constants in charged membrane are plotted as a function of the total concentrationin the external solution (C 0 ) , where □ corresponds toK101 in the ternary ionic system, ■ A201 in ternaryionic system, ○ K101 in binary ionic system and X
A201 in binary ionic system.

− 56 −

脂質皮膚モデルを利用した化粧品及び水の浸透と安全性に関する基礎的研究

従って膜中の解離定数は外部溶液の溶質濃度に依ると膜中の対イオンの量は、固定荷電基の量に応存せず、一定となることが確認された。

じて増加しており、副イオンの量はほとんど変化
しない。また中性分子の量は 0.03mol/L（TK11）

３. ４ 荷電基の異なる膜における解離定数から 0.43mol/L（TK15）までかなり大きく変化し負荷電膜における２成分系で、荷電密度の異た。しかし Fig.13 において、負荷電膜の場合、中なる膜を使用し、外部溶液濃度を 0.1mol/L とし性分子の活 係数が解離定数に大きく影響した濃度て、見かけの解離定数をもとに見かけの解離定数は 0.47mol/L（C 0 =0.1mol/L）以上である。故にを計算した。この時の膜内のイオン及び、未解離

ここで取り扱う系では中性分子の活量係数もほぼの中性分子の濃度は Fig.14 に、見かけの解離定数一定であると考えられる。Fig.15、Table ５をみる

は Fig.15 に示す。また見かけの解離定数は、正荷と、全ての荷電膜において、解離定数は水中に比電膜の結 も合わせて Table ６に示す。Fig.14 によべて大きくなっており、荷電膜中で解離定数は増加することが荷電密度の異なる膜についても確認された。また荷電基の量に注目すと、Fig.15 の結は荷電密度の増加に伴い、解離定数が減少している。従って、固定荷電基は解離を押さえる効果があると考えられる（19）。
３. ５ アミノ酸の透過Fig.16、Fig.17 に負荷電膜におけるグリシン及びロイシンの透過係数を pH の関数として示す。
pH の変化と共に透過係数は変化するが、膜の両Fig.14 Concentrations of H+, CH 3 COO- and CH 3 COOH in
negatively charged membrane equilibrated with 0.1mol/Lacetic acid solution are plotted as a function of the fixedcharge density (CX), where □ corresponds to H+ , ■CH 3 COO- and ○ CH 3 COOH.

界面における pH の境界条件に著しく依存する。
グリシン及びロイシン共に実験 ⒜ で pH=5.9 の時透過係数が最も小さく pH が減少すると透過係数が増加する。最大の透過係数は実験 ⒝で pH=1 の時得られた。またグリシンの場合実験 ⒞ で pH=1
場合透過係数が著しく減少し実験⒜ で pH=5.9 の時と同様の値になった。pH が減少すると実験⒜ 、⒝、⒞ 間で透過係数の違いが著しくなる。pH=
Table 6 Apparent dissociation constant K in negatively charged membrane equilibrated with 0.1mol/L
CH3COOH

Fig.15 The dissociation constants in charged membrane
equilibrated with 0.1mol/L acetic acid solution are plotted as a function of the fixed charge density(CX).

− 57 −

１の時、透過係数は実験⒝＞実験⒜＞実験⒞の順される。従って NaCl 存在下ではアミノ酸はほと番であった。

んど透過せず実験⒜の HCl 濃度０の時とほぼ同一

アミノ酸は等電点付近の水溶液中で R-C（NH＋３）になった（17、18）。

HCOO −、酸性溶液中で R-C（NH ３＋）HCOOH と４ 結 論なる。HCl 水溶液中ではプロトン、アミノ酸カチ
オン、塩素イオン、中性アミノ酸が存在しこれら以上の結果から皮膚のように電荷を持った媒体がお互いに影響しあいながら荷電膜の中を移動す

中を化粧品のような弱電解質が移動する時は、強る。これらの輸送はドナン平衡、ネルンスト—プ

電解質の移動とは著しく異なることが明らかとな

ランクのイオン輸送の式、膜界 でのプロトン化及った。特に媒体内のプロトンが他の分子の移動にび脱プロトン化を支配する反応速度論により説明

大きく影響を与えている。このことに対して本研
究では媒体中の固定荷電基とプロトンとの電気的な相互作用が原因であると考えた。一方媒体と外部相界 におけるプロトンと弱電解質との反応が支配しているとの考え方もある。また式（１）には考慮しなかったが浸透圧による水の移動も無視することができない。これらのメカニズムを明らかにすることは皮膚における化粧品の安全性を考慮する上で非常に重要であると考える。

Fig.16 Permeability coefficients of glycine obtained for cA = 5×10 -2 mol/
L in the experiments (a) , (b) and (c) as a function of pH. Experiment (a)indicated by square ( □ ), experiment (b) circle ( ○ ) and experiment (c)rhombus ( ◇ ).

５ 本研究に関係する投稿論文
１）M.Kawaguchi, T.Murata and A.Tanioka,"Membrane potentials in charged
membranes separating solutions of
weak electrolytes", J.Chem.Soc.,Faraday
Trans., 93, 1351-1356, 1997
２）A.Tanioka, M.Kawaguchi, M.Hamada
and K. Yoshie, "Dissociation constantof weak electrolyte in charged mem
brane", J. Phys. Chem., 102 , 1730 1735, 1998
３）M. Minagawa and A. Tanioka, "Leucine transport through cation exchange membranes: effect of HCl con

Fig.17 Permeability coefficients of leucine obtained for cA = 5×10 -2 mol/l in the experiments (a) , (b) and (c) as a function of pH. Experiment (a)indicated by square ( □ ), experiment (b) circle ( ○ ) and experiment (c)rhombus ( ◇ ).

− 58 −

centration on interfacial transport", J.
Colloid & Interface Sci., 1998, in press

脂質皮膚モデルを利用した化粧品及び水の浸透と安全性に関する基礎的研究

参考文献（14）M.Planck, Ann. Physik. Chem., 39, 161, 1890

（１）F.Helfferich, Ion Exchange, McGraw-Hill, New（15）M.Planck, Ann. Physik. Chem., 40, 561, 1890

York, 1962（16）N.Lakshminarayanaiah, Equations of（２）N.Lakshminaranaiah, Transport Phenomena in

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− 59 −

小分子化学物質によるアトピー性皮膚炎の発症と予防についての基礎研究
岐阜薬科大学

永

井

薬理学

博

弌

The purpose of the present study is to investigate whether or not simple chemicals are able to introduce
atopic dermatitis like symptoms in mice. An another purpose of the present study is to investigate thepharmacological and immunological prevention of such symptoms. For the first purpose, we tried to make a goodmodel for atopic dermatitis in mice by using dinitrophenylbenzene (DNFB) on the ear skin. Consequently, we haveestablished two different kinds of models for atopic dermatitis in mice.
In the first model, mice were passively sensitized by an intravenous injection of monoclonal anti-dinitrophenol(DNP) IgE, and their ears challenged epicutaneously with dinitrofluorobenzene (DNFB) 24 h later. The cutaneous
reaction estimated by ear thickness reached a peak 1 and 24 h after the antigen challenge. Histopathologicalstudies indicate that eczemous skin lesion (24 h) in mice is similar to that in human atopic dermatitis. Prednisolone
at doses of 3 to 10 mg/kg clearly inhibited the IgE-mediated cutaneous reaction.
In the second model, DNFB was painted on the mice ear five times. The thickness due to dermatitis reacheda maximum 24 hr after the second, third and fourth paintings. The strong expressions of INF-γ and IL-2 but not
IL-4 and IL-5 mRNAs in reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) in the skin lesions indicated theparticipation of Th1 cells in the ear delayed type hypersensitivity reaction. Simultaneously, hapten specific IgE (sIgE)
was detected in serum from the immunized mice. These results indicate that five topical applications of DNFB
to the mouse ear produces eczematous dermatitis in the ear and hapten sIgE in the serum. This model shows
typical atopic dermatitis symptoms in the skin and IgE production. Regarding second project, the effect of anti-IL-4
monoclonal antibody on this hapten-induced contact dermatitis and IgE antibody production are studying now.
The results will be reported in near feature.

とそれらの予防法について検討を行なってきた。

1 目 的

アトピー性皮膚炎はその中でも最も重要な課題の

近年の化学工業の発展に伴いアレルギー疾患の一つである。これまで、アレルゲンとしてはダニ患者が増加している。この主な原因は生活環境の抗原に代表される室内アレルゲン、食物および化変化と同時に精神衛生面の環境変化が挙げられて粧品に含まれる小分子化合物などが知られているいる。アレルギー疾患発症の大きな要因は遺伝的が、近年、我々は小分子化合物によるアトピー性

要素と環境因子であることは多くの研究者によっ皮膚炎様症状を発症するマウスモデルの作成に成て指摘されている。本研究の目的は化粧品などに功したのでそれらを用い、小分子化合物による皮含まれる小分子化学物質によるアトピー様皮膚炎

膚炎の発症機序の解明を行ない、さらに予防法にの発症機序と予防法について動物モデルを用いてついての検討を行った。

検討することである。近年、アトピー性皮膚炎の２ 実 験

患者数は増加の一途を辿っている。特に、成人の患者数が増加し、社会問題にもなっている。これ

２. １ 実験材料
実験動物は体重 16 〜 21g の９〜 10 週令雌性まで、教室では種々のアレルギー疾患の発症機序
Basic studies on the onset andprevention of atopic dermatitis
with simple chemicals
Hiroichi Nagai
Department of Pharmacology, Gifu
Pharmaceutical University

BALB/c 系マウスを、日本 SLC より購入して使用した。マウスは温度 22±1℃、湿度 60±5％の恒温恒湿飼育室にて、自由給水下に固形飼料（ラボ MR ストック、日本農産）を用いて飼育した。抗原として 2,4− dinitrofluorobenzene（DNFB,
Nacalai Tesque）を用いた。DNFB は、acetone− 60 −

小分子化学物質によるアトピー性皮膚炎の発症と予防についての基礎研究（Nacalai Tesque）：olive oil（東海製薬）= ３：１の症状を示したのち、やがて血清 IgE 値の上昇を（v/v）溶液に 0.15％となるように溶解した。抗体伴う皮膚炎が発症し、その組織像、サイトカイン

は Monoclonal mouse anti− DNP IgE 抗体（MMCE）

発現パターンおよび治療薬の薬効から両モデルとを用いた。MMCE は、DNP 化ブタ回虫抽出物

もアトピー性皮膚炎の類似モデルであると考えらで免疫した Balb/c 系マウス脾細胞から樹立したれた。

マウス IgE 抗体産生細胞株（EC1）を培養して作これらのモデルを用いて発症に関与する炎症細製し上清を回収して MMCE とした。MMCE は胞および組織細胞の役割をサイトカイン、リピッ− 80℃で凍結保存し、実験には培養上清をそのドメディエーターを中心に検討し、それぞれの発まま使用した。MMCE 中の力価は、ラット 48hr症における役割を明らかにした。

heterologous passive cutaneous anaphylaxis を用

１） DNFB による二相性皮膚反応

い 1：512−1024 であった。また、enzyme linked

図１に各系統のマウスにおける二相性皮膚反immunosorbent assay によって測定した IgE の濃応の成績を示す。ddY、ICR および Balb/c 系マ

度は、2914.52ng/mL であった。

ウスでは反応後１及び 24 時間にピークを示す二相性の反応がみられる。肥満細胞欠損マウスであ２. ２ 実験方法

る WBB6F1-W/Wv マウスでは即時相の反応はみ１）

IgE 依存性二相性皮膚反応は Sakurai ら の方られないが、遅発相の反応がみられた。また、T法に従い惹起した。すなわち、雌性 Balb/c 系マcell 欠損マウスの Balb/c− nu/nu マウスでは Balb/

ウスに MMCE １mL を静脈内注射して受動的に

c+/+ 正常マウスと変わらない二相性皮膚反応が感作し、24 時間後に 25mL の DNFB をマウス両みられた。更に、本二相性皮膚反応は IL−１およ耳殻の表裏に塗布して反応を惹起した。反応惹

び TNF に対するモノクローナル抗体により抑制

起後、種々の時間にダイヤルシックネスゲ−ジされるが、IL−５に対する抗体によっては影響さ（Peacock；尾崎製作所、東京）を用いて両耳殻のれなかった（図２）。しかし、抗炎症薬のプレドニ厚さを測定した。成績は、反応惹起直前と反応惹

ゾロンは用量依存的に本反応を抑制した（図３）。

起後の耳殻の厚さの差で示した。

図４にその際の組織写真を示す（図４）。すなわち、

抗原反復塗布の実験はマウスの両耳介の表裏に抗原である DNFB の塗布により正常部位 A に比

0.15％ DNFB を 25mL 宛、１週間に１回の割合でべ、好中球を中心とする多くの炎症性細胞の浸潤

５回塗布して反応を惹起した。

がみられ、表皮の肥厚が観察される B。さらに、血管の著明な拡張がみられた。これに対し、プレ２. ３ 統計学的解析

ドニゾロン投与群では炎症性細胞の浸潤や表皮の成績は平均値 ± 標準誤差で示した。有意差検定

肥厚は少なく、組織学的にも明らかに炎症反応はは、Dunnet multiple range test あるいは Student's

抑制された。これらのことから、本モデルは低分

t-test および Aspin-Welch によって行った。

子化合物とそれに対応する抗体により生じるアレ
ルギー性皮膚炎であり、低分子化合物による皮膚３ 成績および考察

炎症の発症と予防の研究に有用であるものと思わ

これまでにマウスを用いた二種類の in vivo モ
デルの作成にほぼ成功した。in vivo モデルではれた。
２） DNFB 反復塗布によるアレルギー性皮膚炎

dinitrofluorobenzene（DNFB）を抗原としてそれに

DNFB を一週に一回、マウスの耳殻に塗布する対応するモノクロナール IgE 抗体を用いて生じると接触性皮膚炎による炎症反応が観察される（図遅発型皮膚炎、および前述の DNFB を抗原として

５）。またこの時血清中には DNP に対する特異的

皮膚に反復塗布すると当初、遅延型接触性皮膚炎− 61 −

Fig.1 IgE-mediated cutaneous reaction in ddY, ICR,BALB/c, BALB/c-nu/nu and WBB6F1-W/WVmice. Micereceived an intrevenous injection of 1.0mL of antiDNP IgE antibody 24hr before skin testing with 0.15％
DNFB. Each value represents the mean ±SEM of
5-26mice. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.

− 62 −

小分子化学物質によるアトピー性皮膚炎の発症と予防についての基礎研究

Fig.2 Effects of anti-IL-1β, anti-TNF-α and anti-IL-5 on IgE-mediated cutaneous reaction in BALB/c mice. AntiIL-1β and anti-IL-5 were given intradermally and anti-TNF-α was intrevenously 10min before antigen challenge.Each value represents the mean ± SEM of 5-8 mice. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001

F i g .3 E f f e c t o f p r e d n i s o l o n e o n I g E mediated cutaneous reaction in BALB/cmice. prednisolone was administered intraperitoncally 2hr before antigen challenge.
Each value represents the mean ±SEM of
8mice.

− 63 −

Fig.4 Effect of prednisolone on the IgE antibody mediated allergic cutaneous in mice.［A］Normal,［B］
control,［C］prednisolone

Fig.5 Ear swelling caused repeatedpainting of DNFB in mice. Ears ofmice received atopical application of
0.15% DNFB in acetone and olive oilor vehicle once a week for 5 times.
Each point indicateds the mean ±SEM of 8mice. hr: Time after eachpainting(houes)

IgE 抗体が証明された（Table １）。このことはこの時の耳介局所およびリンパ節でのサイトカイン

れまで、単純なハプテンでは接触によっては接触の mRNA 発現を RT− PCR 法で測定すると耳介局性皮膚炎のみの発症であると考えられたことが、所では IFN− γ および IL− 2 の mRNA の発現がみ明らかに、免疫グロブリンの産生を伴う反応が発られ、Th １細胞の関与が示唆された（図６）。こ症できることを示しており、ヒトのアトピー性皮の時、Th ２サイトカインである IL−４および IL−

膚炎を考える上で重要な発見であった。また、こ５は耳介では証明されず、頚部リンパ節において− 64 −

小分子化学物質によるアトピー性皮膚炎の発症と予防についての基礎研究

Table 3

Effect of repeated of DNFB on the serum immunogloblin levels

Fig.6 Expression of cytokine mRNA in the ears and cervical lymph nodes of mice treated with DNFB. Ears of micereceived a topical application of 0.15% DNFB in acetone and olive oil or vehicle once a week for 5 times. The expression of IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5 and β-actin mRNAs were examined using RT-PCR.

その発現あるいは発現増強がみられた。更にこの礎検討から本反応の発症は図７に示すような機序ことはリンパ節での IgE 産生を示唆する germlineが想定された。

Cε および productive Cε の mRNA が証明された

すなわち、小分子化合物によるアレルギー性皮ことからも確かめられた。以上のような多くの基膚炎の報告は大半が接触性皮膚炎についてであ− 65 −

った小分子化合物によるアトピ
ー性皮膚炎様症状の発症についての研究に有用なモデル系を確立でき、今後、系統的にその発症機序と予防についての免疫
薬理学的な検討を行う予定である。
参考文献
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monoclonal antibody on aller
gic cutaneous late phase reaction in mice. Life Science, 54,
PL291-295, 1994
Fig.7

DNFB 塗布によるアレルギー性皮膚炎モデルの発症機序２ ）N a g a i H , S a k u r a i
T, Inagaki N et al. ; Anる。抗原を経皮的に塗布することによる感作では、

immunopharmacological study of biphasic allergic

これまでほとんど皮膚での単核球の浸潤を主体に

skin reaction in mice, Biol Pharm Bull 18, 239-

した組織学的判定により検討してきた。また、最245, 1995

近免疫学の進歩により、T 細胞のうち helper Ｔ細３）Nagai H, Sakurai T, Abe T et al. ; TNF-a胞は、その機能の違いから Th １細胞と Th ２細participates in an IgE-mediated cutaneous胞に分類されることが明らかになった。接触性皮

reaction in mast cell deficient , WBB6F1-W/Wv

膚炎の発症は Th １細胞が反応性細胞であること

mice. Inflamm Res 45, 136-140, 1996

も次第に明らかにされてきた。さらに、Th ２細４）Inagaki N, Tsunematu M, Sakurai T et al. ;胞は液性抗体産生に必要な細胞としてとらえられ

Effect of prednisolone on IgE dependent biphasicている。しかし、小分子化合物による免疫反応に

cutaneous reaction in Balb/c mice. Gen. Pharmac.

ついての解析はほとんど行なわれていない。今回

28, 93-97, 1997の我々のモデルは小分子化合物を皮膚に反復塗布

５）Nagai H, Matsuo A, Hiyama H et al. ;すると皮膚では接触性皮膚炎に類似の症状を呈し

Immunogloblin E production in mice by means

ながら Th １細胞活性化が起き、次第に全身のリof contact sensitization with a simple chemical

ンパ系組織で Th ２細胞が活性化されて免疫グロ

hapten, J. Allergy Clin. Immunol., in press, 1997

ブリン、特に IgE 抗体の産生が始まることを明ら

６）Nagai H, Hiyama H, Matsuo A et al. ; FK-506

かにしたものである。従って、多くの点でヒトのand cyclosporin A potentiate the IgE antibody

アトピー性皮膚炎と類似しており、小分子化合物

production by contact sensitization with haptenによるアトピー性皮膚炎モデルとして有用である

in mice J. Pharmacol. Exper. Ther. 283, 321-327

ものと思われる。

(1997)

以上、本研究ではこれまであまり解析されなか− 66 −

酸化ストレスにより生体膜に生成する酸化型リン脂質の代謝機構の解明
中

北里大学

薬学部

川

靖

一

Phosholipids hydroperoxide glutathione peroxidase（PHGPx）is the unique antioxidant which is able toreduce the phospholipid hydroperoxides produced in biomembrane. PHGPx is preferentially localized in
mitochondria as compared with another type of glutathione peroxidase such as classical GPx（cGPx）. The
cDNA for PHGPx included two site for initiation of translation. One deduced product was 20 kDa PHGPx（non-mitochondrial type）and another was 23 kDa PHGPx（mitochondria type）which possessed a signal
peptide for the targetting to mitochondria. Cells that overexpressed the 23 kDa PHGPx were more resistancethan control cells to the oxidative damage of mitochondria caused by the treatment with KCN, while theprotective effect for the mitochondria damage were not observed in the 20 kDa PHGPx-overexpressed cells.
The 23 kDa PHGPx could prevent cell death due to the damage of mitochondria with oxidative stress andwould be a key antioxidant enzyme to protect a damage of the skin which is exposed to oxidative damage.

リン脂質ヒドロペルオキシドグルタチオンペ

１ 緒 言

ルオキシダーゼ（PHGPx）はリン脂質やコレステ

皮膚は生体の最外層にあり、さまざまな物質にロールヒドロペルオキシドなど生体膜中に生ずよる化学的、物理的な障害の最前線にある。特にる脂質ヒドロペルオキシドを消去できる細胞内

紫外線などによる最大の標的となるのは高度不の唯一の抗酸化酵素であり、広く組織、細胞に存

飽和脂肪酸をもつリン脂質であり、過酸化反応の在している２、３）。我々は生体膜に生ずる酸化型

結果生ずる過酸化脂質は皮膚の炎症、老化を引きリン脂質であるリン脂質ヒドロペルオキシドの起こす原因物質として注目を集めている。過酸化

代謝機構を考える上で、PHGPx はカギとなる酵

脂質研究の歴史は古いが、生体膜中に生ずる脂質素であると考え、本研究では細胞の老化と深く係の過酸化物の消去に係わる防御機構を検討した

わるミトコンドリアにおける本酵素の生理的な報告は少ない。リン脂質が過酸化されることより役割について検討を行った。

生ずる一次生成物はリン脂質ヒドロペルオキシ２ 実 験ドであり、この生成を抑制することは生体膜の酸化的な障害の防御につながる。特に、細胞内の活２. １ PHGPx の細胞内分布の測定

性酸素の主要な産生の場であるミトコンドリア

ヒト血管内皮系ガン細胞株 ECV 304 細胞、ラでの過酸化脂質の蓄積は細胞の老化、さらには細ット好塩基球系細胞 RBL 2 H 3 細胞の PHGPx を胞の死に至ることから、ミトコンドリア内の防御

放射性セレンで標識した後、オルガネラに分画し因子の役割を明らかにすることは重要と考えられた。遠心分離により、核、ミトコンドリア、ミク１）

ロソーム、細胞質に分画した。可溶化したミクロている 。
The emzymatic regulationof production of oxidative
phospholipids in biomembrane
suffered with oxidative stressYasuhito Nakagawa
Faculty of pharmaceutical
Sciences Kitasato University

ソーム、ミトコンドリア画分および細胞質画分を抗 PHGPx モノクローナル抗体で免疫沈降を行い、得られた試料について SDS − PAGE を行った。ゲルを乾燥後、イメージングアナライザーにより放射活性のあるスポットを検出した。

− 67 −

２. ２ in vitro 翻 訳 系 に よ る リ コ ン ビ ナ ン ト
PHGPx の作成

開始コドンを含む細胞質型 PHGPx をコードしている pRPHGPx 2 を哺乳動物の発現ベクターをベPHGPxcDNA を用いて、T 7 RNA polymerase35

クターに組み込み、エレクトロポレーション法ににより調製した mRNA に［ S］メチオニン、ウより RBL − 2 H 3 細胞へ遺伝子導入した。またコ

サギ網状赤血球ライゼ−トを加え、リコンビナンントロール細胞として、PHGPx インサートを含ト蛋白質の作成を行った。

まない発現ベクター SR − α と pSV 2 -neo を導入した細胞も同時に作成した。遺伝子導入した細胞２. ３ PHGPx のミトコンドリアへの輸送をゲネチシンにより耐性株を選択し、高発現細胞

２. ３. １ in vitro でのミトコンドリアへの輸送のスクリーニングを行った。

ラット肝臓ミトコンドリアにリコンビナント

３ 結 果

PHGPx を添加し、反応を開始させた。一定時間に２, ４−ジニトロフェノールを添加して反応を停

３. １ PHGPx の細胞内分布

止させた後、遠心し、ミトコンドリアと上清に分ヒト血管内皮細胞株である ECV 304 細胞に離した。ミトコンドリアは Proteinase K により

つ い て 細 胞 を 放 射 性 セ レ ン で ４ 日 間 標 識 し、

ミトコンドリア表面に結合したリコンビナント

PHGPx の放射活性の細胞内分布について調べた。

PHGPx を消化した。遠心により得られたミトコ

対象として、GPx として一般的によく知られてンドリアを可溶化して SDS − PAGE を行った。泳いる cytosolic GPx（cGPx）についても、同様に調動後、イメージアナライザーにより放射活性を測べ、比較検討した。Fig. １に示すように ECV 304

定し、定量した。
２. ３. ２ Green Fluorescent Protein（GFP）
融合タンパク質の細胞内分布の測定
PHGPx の第１開始コドンから第２開始コドンを含むアミノ酸配列の１番から 32 番までをコードする遺伝子、および第２開始コドンからのアミノ酸 28 番から 70 番までをコードする遺伝
子を GFP 遺伝子にライゲイションしたキメラ
cDNA（L − GFP、S − GFP）を構築した。第１開始コドンを含まない S − GFP、第１開始コドンを含む L-GFP をエレクトロポレーションを用いて、RBL − 2 H 3 細胞に遺伝子導入した。遺伝子導入した細胞をカバーガラスに細胞を付着させ、ホルム
アルデヒドに 20 分間浸し、細胞を固定した。カバーガラスを洗浄後、GFP の蛍光を蛍光顕微鏡で観察した。
２. ４ ミトコンドリア型、細胞質型 PHGPx 高発現細胞株の樹立
第１開始コドンを含むミトコンドリア型
PHGPx をコードしている pRPHGPx 4 と、第２Fig. １ Subcellular localizations of PHGPx andcGPx in the ECV304 cells.
ECV304 cells were metabolically labeled with 75Se
(0.14 mCi/mL) for 4 days. The 75Se-labeled cells werefractionated by differential centrifugation into nuclear
fraction, mitochondrial fraction, microsomal fraction andcytosolic fraction. Distribution of PHGPx and cGPx
was determined by immunoprecipitation analysis with
anti-PHGPx and anti-cGPx. Relative radioactivities
of PHGPx and cGPx were calculated from scanningdensitometry by a Bio-Imaging Analyzer.

− 68 −

酸化ストレスにより生体膜に生成する酸化型リン脂質の代謝機構の解明

細胞では、cGPx の総発現量の 86 % が細胞質画ンを有する cDNA からは 197 アミノ酸からなる分に存在していた。PHGPx は核画分に 13％、ミ分子量約 23 kDa の PHGPx（L − form）が、第２トコンドリア画分に 34％、ミクロソーム画分に開始コドンからは 170 アミノ酸からなる分子量18％、細胞質画分に 33％の割合で存在しており、。
約 20 kDa の PHGPx（S − form）が翻訳された４）いずれのオルガネラにおいても発現が見られた

第１開始コドンと第２開始コドンの間のリーダが、ミトコンドリア画分と細胞質画分に多く分ー配列がオルガネラへの輸送シグナルとなって布していた。ラット好塩基球系細胞である RBL −いる蛋白質が存在することから、PHGPx のこの2 H 3 細胞においても ECV 304 細胞と同様に cGPx

リーダー配列がミトコンドリアへの輸送シグナ

は主に細胞質に存在しており、PHGPx はミトコルであるか否かについて検討した。

ンドリア画分に多く存在していた。
ミトコンドリア画分および細胞質画分におけ３. ３ PHGPx のミトコンドリアへの輸送機構

る PHGPx と cGPx の存在量比について見ると、

放射性メチオニンで標識されたリコンビナン

細胞質画分では cGPx 量は PHGPx の約 3 . 5 倍でト PHGPx をミトコンドリアとともに反応させ、あるのに対して、ミトコンドリア画分では cGPx

ミトコンドリア内へ輸送された PHGPx 量を SDS-

は PHGPx の約 1 / 3 であり、ミトコンドリアにおPAGE で調べた（Fig. ３）。反応 30 分後においていて PHGPx の存在比が高いことが明らかになっも、リーダー配列を持たない 20 kDa の S-form のた。このことは細胞質に存在する主なＧＰｘのアPHGPx は輸送されず、ミトコンドリア内に放射

イソザイムは cGPx であり、ミトコンドリアでは性 PHGPx は検出されなかった。一方、リーダー

PHGPx であることを示している。

配列を持つ 23 kDa の L − form と反応したミトコ
ンドリア内では輸送された PHGPx が検出された。

３. ２ 分子量の異なる２種の PHGPx の発現

ミトコンドリア内に輸送された L − form の分子ラット脳 cDNA ライブラリーより PHGPx の

量は 20 kDa に変化していることが明かとなった。

cDNA をクローニングを行った結果、PHGPx にミトコンドリア内に輸送された 20 kDa PHGPx は

３）は翻訳開始点が２つ存在していた（Fig. ２） 。

リーダー配列を認識するポリクローナル抗体（抗それぞれの開始コドンを有する cDNA を鋳型とP −１抗体）で沈降されないことから、ミトコンド

して in vitro の蛋白質合成系を用いて、リコンビ

リア内に輸送された 23 kDa L − form のリーダー

ナント PHGPx の合成を行った。第１開始コド

配列はプロセシングにより切断され、20 kDa のFig. ２ The structure of cDNA for rat PHGPx.

− 69 −

Fig. ３ Import of mitochondria type PHGPx into mitochondria
The cytosol type and the mitochondria type of [35S] PHGPx, synthesized in thein vitro translation system (A), was incubated with rat liver mitochondria at 25℃
for 30 min (B). After import, the mitochondria were treated with proteinase K for
30 min at 0 ℃ (C). After the incubation, the mitochondria were further incubatedwith proteinase K, reisolated and analyzed by 12.5% SDS-PAGE, with subsequent autoradiography and quantitative analysis with the Bio-imaging analyzer.

PHGPx に変化したものと考えられた。これらのミトコンドリアへ選択的に輸送されることを示

結果より、リーダー配列を有する 23 kDa L − form

している。以上のことから、第１開始コドンからの PHGPx がミトコンドリア内へ輸送されること翻訳される 23 kDa PHGPx がミトコンドリアに輸が明かとなった。

送されるミトコンドリア型 PHGPx であり、第２L − form のリーダー配列が細胞内でミトコンド

開始コドンから翻訳されている 20 kDaPHGPx がリアへの標的化シグナル（ターゲティングシグナ

ミトコンドリア以外に存在する細胞質型 PHGPxル）として機能するのかについて細胞レベルで明であることが明かになった。

かにするため、シグナルペプチド− GFP の融合タ
ンパク質を細胞内に発現させることにより検討

３. ４ ミトコンドリアの選択的な酸化的障害にした。リーダー配列を含む 32 アミノ酸をコード

対する PHGPx の役割する配列をクラゲ蛍光蛋白質である GFP の N 末PHGPx のミトコンドリアにおける役割を明か側に融合させた L − GFP、第２開始コドン以降のにするために、ミトコンドリア型 PHGPx を高42 アミノ酸をコードする配列を同様に融合させ発現した M 15 細胞、細胞質型 PHGPx を高発現た S-GFP の２種類の発現ベクターを RBL − 2 H 3

した L ９細胞を作成し、ミトコンドリアの酸化細胞に導入し、発現した GFP 融合タンパク質の的障害に対する応答を調べた（Fig. ４）。電子伝

細胞内分布を蛍光顕微鏡で調べた。その結果、S達系複合体 IV の阻害剤であるシアン化カリウム− GFP を発現させた細胞は細胞全体に蛍光が見ら（KCN）で各細胞を処理し、生存率を調べた。コ

れ、S − GFP は主に細胞質に分布していることがントロール細胞株の S １、細胞質型 PHGPx 高発示された。L − GFP は S − GFP の細胞内分布とは現細胞株の L ９細胞では KCN 処理後、２時間後

明かに異なり、蛍光の分布はミトコンドリア特異に強い細胞障害が見られ、処理後４時間での生存的蛍光色素であるローダミン 123（Rh 123）の蛍

率は 35％であった。しかし、ミトコンドリア型

光パターンと良く一致した。このことはリーダー

PHGPx を高発現した細胞株である M 15 細胞で配列を融合させた GFP タンパク質（L − GFP）はは同時間の処理においても 69％の生存率を示し、− 70 −

酸化ストレスにより生体膜に生成する酸化型リン脂質の代謝機構の解明たしていると考えられている。絶えず酸化的ス
トレスの環境下にある表皮細胞のミトコンドリ
ア機能を維持するために、PHGPx は主要な役割を果たしているものと推測される。ミトコンド
リア抗酸化酵素であるスーパーオキシドジスム
ターゼ（SOD）の発現はストレスに応じて変動することから、SOD に連動して活性酸素を消去す
る PHGPx の発現も変動するものと考えられるが、PHGPx の発現制御に関しては細胞質型、ミトコ
ンドリア型の転写調節を含めほとんど明らかにされていない。生体膜の酸化型リン脂質の産生調
節機構を明らかにするためには PHGPx の発現調
節機構の解明はこれからの検討されるべき課題である。
こうした問題を明らかにすることにより、Fig. ４ Effects of KCN on the cell viability of the
PHGPx overexpressed cells.
Mitochondrial type PHGPx overexpressed
cells (closed squares, M15), cytosolic type
PHGPx overexpressed cells (closed triangles,
L9) and control cells transfected with the empty
vector (closed circles, S1) were plated in 0.5x105
cells/well in 5%FCS/DMEM. After 24h, theseclones were exposed for the indicated time with
25mM KCN. After the treatment of KCN, cell
viabiliy was examined with the release of lactate
dehydrogenase (LDH). Viability is expressed asa percentage, relative to the total LDH in thecells that were lysed with 0.2%Tween20. Data
are expressed as the means of triplicate results.

ミトコンドリアの酸化的障害が介在するさまざ
まな疾病の発症、老化、アポトーシスなどの細胞死の機構の解明につながるものと期待される。
引用文献
１）Quillet MA, Jaffrezou JP, Mansat V, et al. :Implication of mitochondrial hydrogen peroxide
generation in ceramide-induced apoptosis, J.
Biol. Chem., 272 , 21388 - 21395 , 1997 .
２）Roveri A, Maiorino M, Ursini F, : Enzymaticand immunological measurements ofsoluble and membrane-bound phospholipidhydroperoxide glutathione peroxidase, Method

処理後 6 時間においても 56％の生存率を保っておin Enzymology, 233 , 202 - 212 , 1994 .

り、S １、L ９細胞と比較して約２倍の耐性を獲得

３）Imai H, Sumi D, Hanamoto A, et al. :していた。これらの結果より、ミトコンドリアのMolecular cloning and functional expression

酸化的な障害に対し、細胞質型 PHGPx は関与する

of a cDNA for rat phospholipid hydroperoxide

ことはないが、ミトコンドリア型 PHGPx は防御因

glutathione peroxidase : 3 '-untranslated

子として機能していることが明かとなった。

region of the gene is necessary for functional
expression, J. Biochem., 118 , 1061 - 1067 , 1995 .

４ 考 察４）Arai M, Imai H, Sumi D, et al. : Import into

活性酸素の主要な産生の場であるミトコンド

mitochondria of phospholipid hydroperoxide

リアに存在する抗酸化酵素はミトコンドリアの

glutathione peroxidase requires a leader

酸化的な障害に起因する老化、アポトーシスなど

sequence, Biochem. Biophys. Res. Commun.,の細胞死を抑制する上で極めて重要な役割を果

227 , 433 - 439 , 1996 .

− 71 −

アレルギー性接触皮膚炎成立の必要条件となる
ハプテンによる成熟分化機構の解析
東北大学

相医学部皮膚科場

節也

After application of haptens to the skin, Langerhans cells (LCs), i.e., immature dendritic cells (DCs) in the skin,move to secondary lymphoid organs to sensitize naive T cells. During this process, LCs become mature DCs withaugmented expression of various co-stimulatory molecules and class II MHC antigens. In this scenario, however,critical questions remain as to what kind of chemicals can induce this maturation process through what kind of
mechanisms. To clarify these questions, we used monocyte-derived CD1a+ DCs instead of LCs since LC maturated
in in vitro culture, spontaneously. After we confirmed that monocyte-derived DCs showed at least phenotypiccharacteristics and a response to TNFa similar to LCs, we added various chemicals, i.e., dinitrochlorobenzen (DNCB),
trinitrochlorobenzen (TNCB), NiCl2, ZnCl2, sodium lauryl sulfate (SLS), or benzalkonium chloride (BC), to a cultureof purified monocyte-derived CD1a+ DCs. Among them, only NiCl2 and DNCB significantly increased the surface
expression of CD54, CD86, HLA-DR antigen, and IL-1b production, while SLS, BC, or ZnCl2 could not augment
them, except for weak augmentation of CD86 expression by SLS. Among these three molecules, the increase in
the expression of CD86 induced by NiCl2 or DNCB was most remarkable, being observed in DCs from almost all
the subjects we examined. TNCB could also induce responses similar to those with DNCB, but the number of thesubjects whose DCs responded to it was far less than that of the subjects whose DCs responded to NiCl2 or DNCB.
In spite of the augmented CD86 expression on DCs treated with DNCB or NiCl2, they induced different responsesof DCs in their expression of CD54 and HLA-DR and the production of IL-6 and TNFa. In addition, the up-regulationof CD86 expression on DCs treated with DNCB was significantly suppressed by either anti-IL-1b or anti-TNFa
antibody, while that by NiCl2 was relatively insensitive to these antibody treatments. Finally, the protein kinase C
inhibitor, H7, but not staurosporin, could suppress the augmentation of CD86 expression on DCs induced either by
NiCl2 or by DNCB. These data suggest that DCs respond to some haptens by changing their expression of several
co-stimulatory molecules and their production of cytokines with a resultant change in potency of antigen presenting
function. They also suggest that these chemicals stimulate DCs by different mechanisms. By these responses, DCs
may modulate the final immune response to chemicals.

ス細胞が表皮から所属リンパ節に遊走する事を１ 緒 言報告した。これらの報告により、生体内の非リン

骨髄の幹細胞に由来する樹状細胞は、分化成熟

パ組織のいたるところに分布している樹状細胞に伴い、種々の co-stimulatory molecules, class IIが、そこに侵入してくる抗原を取り込み、その後

MHC 抗原の発現を増強させることが知られてい所属リンパ節に遊走しＴ細胞を感作するという

１−６）。この樹状細胞の分化成熟にともなう変化は、る

シェーマが完成した。

７−８）

はじめ、試験管内での培養後に観察され、その後、しかし、このシェーマの中には、非リンパ組織

同様の現象が、皮膚にハプテンというある種の化に分布するランゲルハンス細胞がどのような刺学物質が塗布された際にも起こることが我々の激を、どの様な機序で認識し、また、どの様な機９）研究により明らかにされた 。一方、Macatoni
ら10）や、Kripke ら

11）

は、その際、ランゲルハン

Dendritic cells differently respondto haptens and irritants by theirproduction of cytokines and expressionof co-stimulatory molecules.
Setsuya Aiba
Department of Dermatology, Tohoku
University School of Medicine

序で分化成熟するのかという未解決の問題が存在する。当然、この問題を明らかにするためには、樹状細胞を試験管内で培養する必要があるが、上述したように、ランゲルハンス細胞は試験管内で培養したのみでは、未刺激で分化成熟してしまう
ため、我々の明らかにしたい問題の解決には利用できない。しかし、最近、Sallustro ら 12）、および、Romani ら 13）により、末梢血 CD 14 陽性細− 72 −

アレルギー性接触皮膚炎成立の必要条件となるハプテンによる成熟分化機構の解析

胞を、IL − 4、GM − CSF の存在化に培養すると未２. ４ 産生された IL− 1a、IL− 1b、TNFa、IL− 10、熟な樹状細胞が誘導できることが報告され、我々

IL− 12 などのサイトカインの市販の Enzyme-

は、この培養系を利用してハプテンの樹状細胞へ

linked immunosorbent assay（ELISA）キットの影響を試験管内で検討した。

による定量
樹状細胞培養上清を回収し、市販の ELISA キ

２ 実験方法ットにて IL − 1 a、IL − 1 b、TNFa、IL − 10、IL −２. １ 樹状細胞、ランゲルハンス細胞の培養

12 の産生量を定量した。

樹状細胞の純粋培養は、末梢血バフィーコー
トから比重遠心にて分離した白血球分画を、抗２. ５ reverse transcriptase polymerase chain

CD 14 標 識 ビ ー ズ と magnetic activated cell

reaction（RT − PCR）

sorter（MACS）にて処理し CD 14 陽性細胞を単以上の細胞表面マーカー、サイトカインの産離した後に、IL − 4 と GM − CSF の存在下に培養

生が mRNA の発現増加を伴っているか reverse

することにより得た。また、ランゲルハンス細胞

transcriptase polymerase chain reaction（RT −は、手術などに際し余った皮膚を dispase、トリ

PCR）により半定量した。

プシンなどで処理した後比重遠心を行い、ランゲルハンス細胞の含有率の高い表皮細胞浮遊液を

２. ６ 抗原提示
樹状細胞の機能的変化に関しては、アロＴ細胞

作成し、それを用いた。

刺激能力を指標にして検討した。
２. ２ 化学物質の添加と樹状細胞に対する生物

３ 結果と考察

学的効果の検討
可能な限り多くの化学物質の影響を検討したい

３. １ ランゲルハンス細胞と単球由来樹状細胞と考えたが、主に、本研究では、ニッケル、コバの比較（図１）

ルト、dinitrochlorobenzen、trinitrochlorobenzen

ランゲルハンス細胞と CD 14 陽性単球由来のなどのハプテンと分類される化学物質、sodium

樹状細胞を、いかなるサイトカインも加えていな

lauryl sulfate、benzalkonium chloride、phenol など

い状態、あるいは、TNFa を添加した状態で培養

皮膚一次性刺激物質、ハプテンとはなりにくい亜

し、その細胞表面マーカーの変化を比較検討し鉛、銅などを中心に検討した。これらの物質を種々た。ランゲルハンス細胞は、TNFa を加えない培の濃度で培養系に加えて以下のアッセイ方法にて養でも活性化し、CD 86 分子の発現を増強してしその影響を調べた。

まい、樹状細胞を分化成熟させることが明らかな
TNFa 12、14）を添加してもその影響が観察られなか

２. ３ flow cytometry を用いた class II MHC 抗った。

原、CD54、CD80、CD86 などの co-stimulatory

一方、単球由来の樹状細胞では、TNFa 無添加

molecules の発現量の定量

では、分化が抑制され CD 86 の発現が弱く抑え

培養樹状細胞に、種々の濃度の化学物質を添られており、それに、TNFa 添加することにより加後、経時的に樹状細胞を回収し、抗 class II

CD 86 の発現が著明に増強され、その影響が明ら

MHC 抗原、CD 54、CD 80、CD 86 抗体にて免かに観察された。

疫染色を施行後、flow cyotometry（FACScan）
にて解析した。

− 73 −

３．２

化学物質による樹状細胞表面の class II

まず，培養系にそれぞれを種々の濃度で添MHC 抗原、CD54、CD80、CD86 などの co-加したところ、採取した白血球により個体差

stimulatory molecules の発現増強（図２、３、４）がみられたが。今回の検討した試薬のなかでは

そ こ で、 こ の 細 胞 を 用 い、 ７ 種 類 の 化 学

DNCB、TNCB、NiCl 2 が明らかに樹状細胞の活物 質（DNCB、TNCB、NiCl 2、ZnCL 2、SLS、性化を促した。また、この３種の化学物質の間Benzalkonium、DMSO）が樹状細胞の分化成熟にでも相違が認められ、NiCl 2 は CD 86 のみなら与える影響を検討した。

ず HLA − DR 抗原と CD 54 の発現を、DNCB は
CD 86 のみの明らかな発現を増強させた。TNCB
は DNCB に 類 似 し た 影 響 を 及 ぼ し たが、実験に用いた白血球による個体差が非常に大きかった。また、RT − PCR を用いた、mRNA の解析によっても、NiCl 2、
DNCB 処理樹状細胞では、CD 86 mRNAの発現が増強していた。
３. ３ 樹状細胞によるサイトカインの産生（図５）
次に、NiCl 2、DNCB、TNCB、SLS で刺激された樹状細胞がいかなるサイトカ
インを産生するかを ELISA にて検討したところ。NiCl2 で刺激された樹状細胞は、
IL−1b、TNFa、IL−6 の産生を、DNCB に関しては、IL−1b の産生のみを未処理のコ
ントロールに比べて有意に増加させた。
３. ４ ハプテン刺激により誘導される樹状細胞の成熟過程におよぼす抗 IL − 1 b、
TNFa 抗体の影響
NiCl 2、DNCB 刺激により樹状細胞のサイトカイン産生が増強する事が明らかとなったので、次に、樹状細胞の成熟がこれらの産生されるサイトカインにより二次的に誘導されているのか否かを、
NiCl 2、DNCB で刺激された樹状細胞の図１ ランゲルハンス細胞と単球由来樹状細胞の細胞表 マーカーの比較
点線：negative control 抗体、shaded curve : サイトカイン無添加の培養、実線：TNFa 添加培養。ランゲルハンス細胞の培養系では、
TNFa の影響がほとんど認められないが、樹状細胞の培養系では、
CD86 の発現増強が明瞭に認められる。
（文献 17 より）− 74 −

培養系に抗 IL- 1 b、TNFa 抗体を添加することにより検討した。
その結果、NiCl 2 により誘導される樹状細胞の CD 86 分子の発現増強には、それらの抗体はほとんど影響を及ぼさなかアレルギー性接触皮膚炎成立の必要条件となるハプテンによる成熟分化機構の解析

図２ 種々の化学物質添加による樹状細胞表 抗原（flow cytometry profile）
種々の化学物質添加による樹状細胞表 抗原の変化を flow cytometry にて解析した。その代表的なプロフィール。shaded
curve：化学物質を添加しないコントロール、実線；化学物質添加 48 時間後の発現パターン。
（文献 17 より）

図３ 種々の化学物質添加による樹状細胞表 抗原（前解析例のまとめ）
種々の化学物質添加による樹状細胞表 抗原の relative fluorescence intensity を棒グラフに表した。
（文献 17 より）− 75 −

ったが、DNCB の作用は、抗 TNFa 抗体により

３. ５ 化学物質の刺激を受けた樹状細胞の抗原著明に抑制されることが明らかとなった。以上か提示（図６）

ら、樹状細胞が、ハプテンの種類により、異なっ

NiCl 2、DNCB で刺激された樹状細胞は、アロた機構により表面マーカーの発現、サイトカイン

Ｔ細胞刺激する抗原提示活性を増強した。また、の産生を変化させることが明らかとなった。すな

その活性は抗 CD 54、
CD 86 抗体により抑制された。

わち、例えぱ DNCB の場合は IL − 1 b、TNFa を

総 括

産生し、その autocrine 機構により樹状細胞を活性化させ、NiCl 2 の場合はサイトカインの分泌をアレルギー性接触皮膚炎は、一見、T 細胞が介さず、むしろ、直接、CD 86 の発現を増強させる。

成立過程のすぺてを支配しているようにうけとられがちである。しかし、今回の我々の研究により、実際は、ランゲルハンス細胞あるいは樹状細胞が抗原の侵入を察知し、それを引き金として成熟、分化し、自らの形質を変化させるという過程がきわめて重要なカギを握っていることがあきらかとなった。
化粧品の開発において、添加する化学物質が接触皮膚炎を惹起する物質であるか否かの判定はきわめて重要な過程である。これまでは、その試験を Kligaman、Magnusson ら 15、16）により開

図４ 化学物質処理樹状細胞の CD80、CD86mRNA の発
現化学物質処理樹状細胞から mRNA を取り出し、RTPCR にて CD80、CD86mRNA の発現を比較した。

発された実験動物を用いた maximization test により行ってきた。しかし、この方法には、化粧品というヒトの生命とは関わりのない物の開発に、実験動物の貴重な命を犠牲にしてよいのかと

図５ 化学物質処理樹状細胞のサイトカイン産生
樹状細胞を NiCl2、DNCB、SLS にて処理し 48 時間後の培養上清中に含まれるサイトカインを ELISA に定 した。
（文献
17 より）− 76 −

アレルギー性接触皮膚炎成立の必要条件となるハプテンによる成熟分化機構の解析

図６ 化学物質処理樹状細胞のアロＴ細胞刺激
化学物質処理した樹状細胞の抗原提示能を、アロＴ細胞刺激活性を指標に比較した。また、その系に抗体を添加し、その抗原提示活性にどの co-stimulatory molecules が重要な役割を たしているか検討した。

いう倫理的問題と、また、実験動物のデーターがGiannetti, A., J Invest Dermatol 1994 . 103 : 54 .

果たしてヒトに当てはまるのかという未解決の５ Ozawa, H., Nakagawa, S., Tagami, H. and問題が存在する。今回我々が詳細に検討した樹Aiba, S., J Invest Dermatol 1996 . 106 : 441 .

状細胞培養系は、化学物質に接触皮膚炎を惹起

６

Yokozeki, H., Katayama, I., Ohki, O.,する必要条件が存在するか否かを明らかにでき、

Matsunaga, T., Watanabe, K., Satoh, T., Azuma,

maximization test の代替法としての可能性が示

M., Okumura, K. and Nishioka, K., J Invest

唆される。

Dermatol 1996 . 106 : 147 .

なお、以上の結果は、Eur J Immunol vol 27 ,７ Schuler, G. and Steinman, R. M., J Exp Med

2031 − 2038 に報告した。

1985 . 161 : 526 .
８Inaba, K., Schuler, G., Witmer, M. D.,

文 献Valinsky, J., Atassi, B. and Steinman, R. M., J

１ Steinman, R. M., Annu Rev Immunol 1991 . 9

Exp Med 1986 . 164 : 605 .

: 271 .

９ Aiba, S. and Katz, S. I., J Immunol 1990 . 145

２ Romani, N., Lenz, A., Glassel, H., Stossel, H.,
Stanzl, U., Majdie, O., Fritsch, P. and Schuler,: 2791 .
10 Macatonia, S. E., Knight, S. C., Edwards, A. J.,

G., J Invest Dermatol 1989 . 93 : 600 .

Griffiths, S. and Fryer, P., J Exp Med 1987 . 166

３ Symington, F. W., Brady, W. and Linsley, P.
S., J Immunol 1993 . 150 : 1286 .

: 1654 .
11 Kripke, M. L., Munn, C. G., Jeevan, A., Tang,

４ Girolomoni, G., Zambruno, G., Manfredini,R., Zacchi, V., Ferrari, S., Cossarizza, A. and− 77 −J. M. and Bucana, C., J Immunol 1990 . 145 :2833 .

12 Sallustro, F. and Lanzavechia, A., JEM 1994 .
179 : 1109 .

Immunol 1995 . 25 : 1943 .
15 Kligman, A. M., J Invest Dermatol 1965 . 47 :13 Romani, N., Bruner, S., Brang, D., Kampgen,
E., Lenz, A., Trockenbacher, B., Konwalinka, G.,

393 .
16

Fritsch, P. O., Steinman, R. M. and Schuler, G., J

Magnusson, B. and Kligman, A. M.,

Idenrification of contact allergens., Springfield,

Exp Med 1994 . 180 : 83 .

Illinois 1970 .

14 Ludewig, B., Graf, D., .Golderblom, H. R.,

17 Aiba, S., Terunuma, A., Manome, H., andBecker, Y., Kroczek, R. A. and Pauli, G., Eur J

Tagami, H., Eur J Immunol 1997 . 27 : 3031 .

− 78 −

免疫不全マウス再構成皮膚における培養毛乳頭細胞による毛包形成誘導と関連因子の検討
聖マリアンナ医科大学

窪

田

泰

夫

Living human skin equivalents, in which human keratinocytes are cultured on collagen matrix containing humandermal fibroblasts, have been successfully transplanted and maintained for a long time on deep connective tissue of
immunodeficient mice. Here, we cultured human dermal papilla cells in the type I collagen gels and overlayed byprimary culture of human epidermal cells concomitant with a few melanocytes as a composite graft.
We exaimined effects of human dermal papilla cells derived from human hair follicle on the induction of hair follicle
after xenotransplantation of the composite grafts into immunodeficient mice. At three weeks after transplantation,
the epidermal cells generated human epidermis-like tissue. Histological examinations revealed that no epidermal
elongation or newly formed follicular-like structure were observed. Interestingly, a significant number of DOPA
positive melanocytes, which were initially concomitant in a primary epidermal cell culture, was found not onlyin the epidermal basal layer but also in the entire mid-dermis, while the transplantation of a composite grafts inimmunodeficient mice by using human fibroblasts instead of dermal papilla cells showed the presence of a small
number of melanocytes in the basal layer only.
These results indicates that human dermal papilla cells fascillitate the maintenance or migration of the melanocytes
in the xenotransplantation of composite grafts, a living human skin equivalents.
The present system by using the xenotransplantation of composite grafts in imunodeficient mice also seems to be
the good models for studying the cell-cell ( epithelial-mesenchymal) interaction.

今回われわれはヒト皮膚の in vivo 実験系とし

１ 緒 言て利用できる免疫不全マウスを用いた再構成皮膚免疫不全マウスに培養細胞を移植して作製するの線維芽細胞に代って培養ヒト毛乳頭細胞を用いヒト皮膚再構成システムは表皮細胞と真皮線維芽て同様の再構成皮膚を作製して毛包形成の誘導を細胞との相互作用の検討に有用である。さらに表検討した。また表皮細胞と線維芽細胞による再構

皮細胞と線維芽細胞以外にもさまざまな細胞種を

成皮膚の中に直接的に毛乳頭組織を注入して、三組み合わせて移植することで任意の細胞の in vivo者の共存のもとでの毛包形成の誘導についても検に近い状況下での機能や各種細胞間の相互作用を討した。

解析することが可能な実験系と考えられている。

２ 実 験（材料と方法）

毛乳頭細胞は毛母の構成細胞の一つで毛幹形成の上で重要な役割を果たしていることが指摘され

２. １ SCID マウスの改良と供給

１）ている 。近年、細胞培養技術の進歩や細胞成長

本 研 究 で 使 用 し た SCID マ ウ ス の 多 く は因子の発見により毛乳頭細胞はヒト毛包からもBALB/cA を遺伝的背景にもつ系統である。この

単離可能となり、長期の純培養も行なわれてい

BALB/cA− SCID マウスは高い繁殖性を有し、ビ

２）

る 。

ニールアイソレーターを用いて生産と供給を行な
The effects of human dermal papilla cellson the induction of hair follicle after
xenotransplantation of the composite
graft into immunodeficient mice.
Yasuo Kubota
St. Marianna University, School of
Medicine.Department of Dermatology

った。また定期的に微生物的汚染事故の発生を検討した。
２. ２ 細胞培養− 79 −a）ヒト表皮細胞
皮膚科手術材料よりフリーハンドルデルマトー

ムにて皮膚を薄く採取し、トリプシンないしデイ
スパーゼ処理により分散させた表皮細胞を低カル
シウム無血清培地（KGM;Clonetic 社、カルシウム
濃度 0.15 ｍＭ）にて培養を行なった。
b）ヒト線維芽細胞
皮膚科手術材料より得られた健常皮膚を型の如
く explant culture を行ない、皮膚切片から遊走す
る紡錘状細胞を 10％ FCS 添加 EagleMEM 培地（MEM;IBL, 免疫生物研究所）にて継代して使用した。
c）ヒト血管内皮細胞
臍帯静脈から 0.1％コラゲナーゼによる酵素潅
流法により単離した。培養液はＭ -199 培地に 20％ FCS、血管内皮増殖因子、ヘパリンを添加し、ファイブロネクチンをコートした培養皿で培養を行なった。形態学的にいわゆる敷石状を呈し、免疫染色により第８因子関連抗原陽性を確認した。
図１ ヒト毛包の構造（HE 染色）d）ヒト毛包毛乳頭細胞
毛根の下方は膨大し、毛球を形成し、その中にコーテイングした 35mm 培養皿に数個移して組は毛乳頭をいれている（図１）。この毛乳頭の毛器織培養した。基本培養液としては 20％ FCS 添加

官における生物学的意義は少なくない。すなわちの Medium199 を使用した。通常、48 時間程度の毛乳頭は毛包の発育や増殖を誘導し、毛組織の形

あいだに単離した毛乳頭から辺縁に向かって紡錘成や維持において重要な役割が指摘されており，状の毛乳頭細胞が増殖、伸展していく所見が観察

男性ホルモン作用にも深い関係があることが判明された（図２）。培養液は三日に一度新しいものに３）している 。この毛乳頭を構成するヒト毛乳頭細替えた。この際に培養皿に付着の完全でない毛乳胞は未分化の間葉系細胞で互いに密着して塊状を頭を誤って除去しないようにする。数日後毛乳頭なして存在する。

細胞が confluent な状態になると型のごとく 0.25４）ヒト毛包毛乳頭の単離と培養は Messenger ら％トリプシン− EDTA 溶液にて継代培養し、通常の方法に準じて行なった。まず正常人被髪頭部皮

７〜８継代の培養が可能となっている。培養が７膚より毛包を採取し、実体顕微鏡下に 23G の注〜８代を越えると毛乳頭細胞の形態は大型化し、射針を用いて採取した毛包をその周囲を被う結合細胞は２極の紡錘状から多極化を呈してきた。毛組織性被膜から切開、反転し、毛乳頭を露出させ、乳頭細胞の生存期間はやや短く、線維芽細胞の継その基部から切断して毛乳頭を単離した。この過代培養可能数の１／２〜１／３程度に短い。

程で毛乳頭に決して暴力的に物理的刺激を加えてなお上述のいずれのヒト細胞も 0.25％トリプシ

破損せしめないことが重要である。単離した毛乳

ン− EDTA 溶液により継代した。なおヒト表皮細頭は予め１mg/mL のヒトファイブロネクチンで胞は初代培養を用い、その他の細胞種では３〜７− 80 −

免疫不全マウス再構成皮膚における培養毛乳頭細胞による毛包形成誘導と関連因子の検討

継代を実験に供与した。

graft のコラーゲンゲル中に注入した。その後に
BALB/cA− nu, SCID マウスの皮下に移植して、３

２. ３ Composite graft 法によるヒト再構成皮膚の作製週間ののち再構成皮膚の形成を観察して組織学的観察を行なった。

６

培養線維芽細胞１×10 個を I 型コラーゲン液（新田ゼラチン社）の中に懸濁させて 12 皿培養シ

２. ６ 組織学的検討

ャーレでゲル化させる。続いてそのコラーゲンゲ

コラーゲンゲルの移植３週間後の開窓時に移植

ルの上に別途培養調整しておいたヒト表皮細胞

片の状態を確認して、肉眼的ならびに組織学的所

６（初代）１×10 個を重層させ Composite graft を見を検討した。組織学的検討のために通常のホル作製した。数日後ゲルは収縮して培養皿辺縁からマリン固定・HE 染色のほか、フォンタナ・マッ

剥がれてくるので、BALB/cA− nu, SCID マウスの皮下に移植し、生体接着剤を用
いてマウス皮膚により保護した。３週間後にマウス皮膚を除去して開窓し、再構成皮膚の状態を観察した（図３）。
２. ４ ヒト血管内皮細胞およびヒト毛乳頭細胞を用いた SCID マウスでのヒト再構成皮膚の作製
血管内皮細胞および毛乳頭細胞をそれぞれ線維芽細胞の図２ 培養ヒト毛乳頭細胞（ 相差像）

代りにコラーゲンゲル中に懸濁させ、同様にその上に表皮細胞を重層して Composite
graft を作製し、BALB/cA−
nu, SCID マウスの皮下に移植した。
２. ５ SCID マウスでのヒト再構成皮膚へのヒト毛乳頭組織の注入実験
線維芽細胞と表皮細胞による Composite graft を作製したのち、実体顕微鏡下にヒト毛包から単離した毛乳頭組織を直接的に Composite

図３ 線維芽細胞により作製した composite graft の nu/SCID マウスへの移植後に形成された再構成皮膚。マウス背部皮膚の開窓時の所見。

− 81 −

ソン染色および凍結切片標本を作製して DOPA

SCID マウスに改良を加えて nu 遺伝子を導入して反応を行なった。

BALB/cA− nu, SCID マウスを育成した。このマ
ウスにはこれらの欠点はみられずレシピエント動２. ７ 単離ヒト毛包の凍結保存と男性ステロイ

物として高い評価が得られるものと考えられた。

ドの作用

しかしながらこの BALB/cA− nu、SCID マウス

これまではヒト毛包の移植は頭皮皮膚の入手時

は生産効率が他種と比較してやや低く、生産規模に限られてしまう欠点があったので、その実用拡大の点で若干の問題を残している。

性を高めるため単離したヒト毛包を凍結保存して BALB/cA− nu, SCID マウスの皮下に移植した。

３. ２ SCID マウスでのヒト再構成皮膚の作製

すなはち，同一ドナーから採取した単離毛包を線維芽細胞と表皮細胞からなる Composite graft

そのまま直ちに SCID マウスに移植する群と凍結は移植後３週目に開窓した時点では、組織上、数保存してから移植する群の２群に分けた。凍結保層の表皮細胞の層とコラーゲンゲル中に紡錘状の存方法は単離した毛包を DMSO 添加細胞凍結用

線維芽細胞が散在する真皮が形成されており、い保護培地（cell stock media, 免疫生物研究所）に浸わゆるヒト皮膚の構造を呈していた。また使用し漬して凍結用チューブにいれてドライアイスにてた表皮細胞は初代培養であるため混入したメラノ

凍結させて、液体窒素中に１週間以上おいて移植

サイトが表皮基底層に分布しており、肉眼的にも実験を行なった。実験に際しては移植の直前に 37再構成された皮膚面にはわずかに黒褐色色素沈着℃の温湯にて急速に融解し麻酔下の BALB/cA −の所見が確認された。

nu, SCID マウスの背部皮膚に移植した。生体用接着剤および皮膚被覆剤にて固定保護して、経時的

３. ３ ヒト血管内皮細胞およびヒト毛乳頭細胞に毛幹の伸長を観察した。そして、毛包採取後直を用いた SCID マウスでのヒト再構成皮膚の作

ちに移植する群と凍結保存してから移植する群と製の間で毛包生着率を比較した。

血管内皮細胞を用いた移植片は移植後３週目にこの系によりヒト毛包を生体環境下に長期間維

は開窓時に皮膚様の構造が形成されていなかっ持可能となるためヒトでは行ないにくかった実験

た。すなはち少量の細胞残骸物とコラーゲン基質に利用できると考えられた。例えばヒトへの男性のみがマウス皮下に残存しているにすぎなかっステロイドの投与は危険性があり容易ではない。

た。これは血管内皮細胞はコラーゲンゲル中におそこでこの移植毛包において男性ステロイドの作

いて拘縮せず、ゲル組織を十分に支持することが用を検討した。すなはち毛包が生着して毛幹の伸できなかったものと思われた（data not shown）。

長が確認された例に関してエナント酸テストステ

一方、毛乳頭細胞により作製した Composite

ロン（Enarmon depot）５mg を週一回皮下注射に

graft のマウス移植片では、開窓時に肉眼的にはて投与した。対照としては胡麻油を投与し、経時

線維芽細胞による場合とほぼ同様の再構成皮膚の的に移植毛包の変化を観察した。

形成が確認された。しかし組織学的には毛乳頭細胞を使用した場合と線維芽細胞の場合ではメラノ

３ 結 果

サイトの分布やメラニン顆粒の沈着の点で大きな

３. １ SCID マウスの改良差異が認められた。すなはちフォンタナ・マッソ

BALB/cA− SCID マウスは加齢に伴い、Leaky

ン染色や DOPA 反応を施行したところ、コラー現象が出現することと、胸腺腫が発生するこ

ゲン中に線維芽細胞を混じた場合ではメラニン顆

とが欠点とされていた。しかしわれわれはこの粒や DOPA 陽性メラノサイトは表皮細胞層の最− 82 −

免疫不全マウス再構成皮膚における培養毛乳頭細胞による毛包形成誘導と関連因子の検討

下端のみに少数存在するのに対して、毛乳頭細胞

著明に認められた（図４a、b、c、d）。

による再構成皮膚では表皮層のみならず真皮（コ３. ４ SCID マウスでのヒト再構成皮膚へのヒト
毛乳頭組織の注入実験

ラーゲン層）へもメラニン顆粒やメラノサイトが

a

c

b

d

図４ F= 線維芽細胞により作製した再構成皮膚組織 .D= 毛乳頭細胞により作製した再構成皮膚組織 . a；HE
染色 ( 弱拡、×10）、b；HE 染色（強拡、×50）、c；フォンタナ・マッソン染色、d；DOPA 反応。毛乳頭細胞による再構成皮膚では真皮層にもメラノサイトやメラニン顆粒を多数認めた。また表皮層肥厚の程度も両者の間に差が見られた。

− 83 −

実体顕微鏡下にヒト毛包から単離した毛乳頭組織を直接的に線維芽細胞と表皮細胞を用いて作製

表１：ヒト単離毛包の nu/SCID マウスへの移植における凍結保存の影響。

ヒト単離毛包の移植成績した Composite graft のコラーゲンゲル中に注入

実験
番号
♯1
♯2
♯3
♯4
♯5
計
		

した。開窓後に組織学的に検討した結果、コラー
ゲンゲルの中に毛乳頭組織は残存していたが、その被覆表皮や周辺の線維芽細胞にはとくに変化を認めることはなかった（data not shown）。
３. ５ 単離ヒト毛包の凍結保存法の確立と男性ステロイドの移植凍結ヒト毛包への影響

凍 結
正着本数／移植本数
0 ／ 203／6
11 ／ 19
10 ／ 24
1 ／ 2325 ／ 92（27.2％）

未 凍 結
正着本数／移植本数
4 ／ 13
1／6
3 ／ 133 ／ 135 ／ 1316 ／ 58（27.6％）

５例の健常頭皮から得られた毛包についてそも認められた点は毛包採取部位の差（頭頂部、側の BALB/cA-nu, SCID マウス皮膚への生着率は頭部）あるいは検体間の差を反映している可能性

凍結保存の有無によりなんらの影響も受けなかっ

もある。

た（表１）
。さらにその生着した毛包の組織学的変４ 考 察

化も未凍結のものと比較して差異はなかった（図５）。このことは毛包のマウスへの移植実験が頭ある特定の異常を有する実験動物の作製はこれ

部皮膚入手時にのみ制限されることがなく実用性までの研究材料や方法ではアプローチが困難であの向上が図られた。

った諸問題の解明に重要な糸口を与えてくれるこ

毛包が生着して毛幹の伸長が確認された例に関とがある。近年、Ｔ細胞およびＢ細胞を欠如した

してエナント酸テストステロン（Enarmon depot）

SCID マウスを用いて正常のヒト皮膚由来細胞の５mg を週に一回の割合で合計６回投与した。対増殖や分化過程の解析が進んできている５、６、７）。

照群と比較して投与群５本の内２本において毛幹in vitro で培養された各種のヒト皮膚由来の細が脱落して移植した毛包にも退行変性を生じた胞を動物に移植することにより in vivo で増殖分

（data not shown）。変化の認められなかった毛包化させることができれば、個々のヒト皮膚由来の細胞レベルでの研究が in vivoに一層近い状態で行なうことができる。SCID マウスへの培養細胞移植によるヒト皮膚再構成システムは各種の細胞の in vivo での働きを解析するのに有用な手段と考えら
れ、皮膚の悪性腫瘍や感染症などのヒト疾患の病態解明、あるいは上皮系と間葉系との相互作用の解明など多くの研究分野に利用できるものと考えられる。

図５ 凍結単離毛包の組織像。移植 3 カ月目（HE 染色）。未凍結毛包のそれとほぼ同様であった。

− 84 −

残念ながら、当初に目指していたヒト再構成皮膚内免疫不全マウス再構成皮膚における培養毛乳頭細胞による毛包形成誘導と関連因子の検討

での培養毛乳頭細胞による毛包形成の誘導は成功

謝 辞

し得なかった。今後、このヒト皮膚再構成システ

本研究を行なうにあたりご援助をいただいた財

ムに毛乳頭細胞のほかに毛母の上皮細胞（外毛根団法人コスメトロジー研究振興財団に深謝いたし鞘細胞）の混合培養を行なったり、線維芽細胞増ます。

殖因子（FGF）や肝細胞増殖因子（HGF）などのなお、本研究の一部は平成 9 年 10 月松本市で毛髪成長に働くと考えられている各種成長因子の開催された日本皮膚科学会東部支部総会学術大添加などを試みる予定である。しかし毛乳頭細胞

会、ワークショップにおいて発表した。

による再構成皮膚では表皮基底層ならびに真皮にまで及ぶメラノサイトの浸潤が認められた。生体

引用文献においては毛乳頭細胞はメラノサイトの豊富な毛

１）Jahoda CAB, Reynolds AJ: Dermal-epidermal

母の基部に存在している。前述の所見は毛母におinteractions-Follicle-derived cell populations in

ける両細胞の相互作用、とりわけ毛母における毛the study of hair-growth mechanisms. J Invest

乳頭細胞の毛母上皮内のメラノサイトの遊走や生Dermatol, 101:33S-38S,1993.

存、維持に対する重要な関与を示唆する興味深い

２）久志本常人、窪田泰夫、河陽子、ほか３名：ものと考えられた。さらにこの毛乳頭細胞からの酵素処理、細胞外マトリックスおよび細胞成長

メラノサイトに対する因子（サイトカイン？、細因子が培養毛乳頭細胞に与える影響、日皮会誌、

胞成長因子？）の同定を進める必要がある。最106 : 249-259、1996.

８）

近、Randall ら のグループは培養毛乳頭細胞か

３）板見 智：ヒト毛乳頭細胞と外毛根鞘細胞のら SCF（stem cell factor、
幹細胞増殖因子）の産生・相互作用。組織培養工学、23：52-56、1997.

分泌を報告している。今回の実験においても毛乳４）Messenger AG. The culture of dermal papilla

頭細胞を用いた再構成皮膚に認められたメラノサ

cells from human hair follicles. Br J Dermatol,

イトの動態に関与する因子の一つとしてこの SCF

114:425-430,1986.

が考えられる。

５）McCune JM, Namikawa R, Kaneshima

BALB/cA− nu, SCID マウス皮膚への凍結ヒト

H., et al. The SCID-hu mouse; murine

毛包の移植生着は凍結保存によりなんらの影響もmodel for the analysis of human

受けなかった。さらに生着した毛包の組織学的変

hematolymphoid differentiation and function.

化も未凍結のものと比較して差異はなかった。こScience241:1632-1639,1988.

のことは毛包のマウスへの移植実験が頭部皮膚入

６）野村大成：がん研究における SCID マウスの手時にのみ制限されることがなく遠隔地への輸重要性。Oncologia,26:321-328,1993.

送も確実に行なえるなど、実験システムとして

７）Christofidou-Solomidou M, Longley BJ,の実用性を高めたものと思われる。さらに今回、Whitaker-Menezes D, et al.Human skin/SCID

SCID マウスに移植された毛包が生着して毛幹のmouse chimeras as an in vivo model for human

伸長が確認されたヒト凍結毛包に対して男性ホル

cutaneous mast cell hyperplasia. J Investモンの投与実験を行なったが，本実験系はヒトへ

Dermatol, 109:102-107,1997.

の実験的投与が必ずしも容易ではないその他の薬

８）Hibberts NA, Messenger AG, Randall VA., Dermal剤のヒト毛包に対する直接的な効果をみることがpapilla cells derived from beard hair follicles secrete

可能なシステムでありその有用性が期待される。

more stem cell factor (SCF) in culture than scalp cells
or dermal fibroblasts. Biochem. Biophysis. Res.
Commun. 212:988-994, 1995.

− 85 −

細胞増殖因子および接着分子による皮膚硬化制御に関する分子生物学的研究
獨協医科大学

山

蔭

皮膚科

明

生

Purposes: We investigated how to control skin sclerosis and softness. Systemic scleroderma is a model for sclerotic
or aging skin. We indicated that TGF-β, PDGF-AA and PDGF α receptor interaction might play an importantrole in skin sclerosis. Recently, it has been clear that many of the proteoglycans behave as modulators of growth
factors binding in scleroderma and normal fibroblasts. We examine the role of proteoglycans for binding to growth
factors on scleroderma fibroblasts in this paper. The hyaluronate receptor（CD44）molecule is a multifunctional
cell surface protein involved in T cell activation, monocyte cytokine release, fibroblast locomotion, and lymphocyte
binding to high endothelial venules. There is protein kinase C -like kinase domain in intracellular portion of CD44,
and intra-molecular serine/threonine residue may be phospholylated to mediate signal transduction. Materials andmethods: Effects of heparitinase digestion on TGF-β and bFGF binding to their receptors were studied in vitro
using ligand binding assay, 3H-thymidine uptake and affinity lavel in scleroderma and control fibroblasts. To study
the roles of CD44 molecules play in systemic sclerosis（SSc）, we measured expression and phospholylation of CD44
in lymphocytes and fibroblasts from SSc patients and healthy controls, using immunoprecipitation method with 32P
and anti-CD44 antibody. Results: TGF-β binds to 200-300kD betaglycan（type III receptor of TGF-β, type I andII receptor in scleroderma fibroblasts more than in control fibroblasts. After heparitinase digestion betaglycan isdegraded to 110kD core protein of betaglycan and TGF-β does not bind to type I nor II receptor. bFGF binds to
130kD receptor in scleroderma fibroblasts more than in control fibroblasts. After digestion bFGF bind to no receptor.
CD44 was expressed and phospholylated on many lymphocytes and fibroblasts. Furthermore, lymphocytes fromSSc patients contained more CD44 or more phospholylated than cells from healthy control. Immunohistochemically,
CD44 was expressed on the cells. Conclusions: Obtained data suggest that heparan sulfate proteoglycans are growth
factor receptors and affect storage, release and protection against degradation of growth factors. It was suggested
that multifunctionality of TGF-β express through heparan sulfate proteoglycans. In the pathogenesis of SSc, CD44
may play an important role in control of cell locomotion, cell adhesion, cell proliferation, and synthesis of extracellularmatrix component.

発現さらにはシグナル伝達機構などの働きを解明

１ 緒 言

し、線維化を様々な段階で抑制することを目指し

皮膚の柔らかさ・硬さは主に真皮結合組織、す（TGFた。すなわち transforming growth factor−β

なわち膠原線維・弾力繊維・ムコ多糖等の量的お− β）や basic fibroblast growth factor（bFGF）の

１）
、２）

。

レセプターであるヘパラン硫酸プロテオグリカン

臨床的に皮膚硬化を来す強皮症や軟化を示すエーの役割や CD44 の作用を検討して、in vitro で皮

ラース＝ダンロス症候群などの疾患で皮膚結合織

膚線維芽細胞の作用をコントロールすることによ

代謝異常が認められ、これらの病態は種々の増り、皮膚の柔軟性保持ひいては皮膚老化抑制の方

殖因子や接着分子の作用によって制御されてい法を探った。

よび質的状態を反映していると考えられる

る

３）−８）

。そこで我々は、汎発性強皮症患者と健２ 実 験

常人の皮膚を比較対照して検討することで、増殖因子や接着分子の産生およびそれらのレセプター
Molecular biological study on thecontrol of skin sclerosis by growth
factors and adhesion molecule
Akio Yamakage
Department of Dermatology,
Dokkyo University School of Medicine

２. １ 材 料
汎発性鞏皮症患者前腕伸側硬化部皮膚および健常人対照の同部非硬化皮膚より生検により採取し培養した真皮線維芽細胞、患者および健常人から分離したリンパ球浮遊液及び培養線維芽細胞培養
上清を用いて以下の実験を行なった。

− 86 −

細胞増殖因子および接着分子による皮膚硬化制御に関する分子生物学的研究

２. ２

３

H− TdR uptakeを認めた。一方、PSS では TGF− β 添加群と無１ng/mL TGF− β および１ng/mL basic FGFを加え、heparitinase 添加群と無添加群で培養線

添加群とで増殖活性は不変で、heparitinase 消化により上昇する傾向を認めた（図１）。

３維芽細胞の増殖活性を H− TdR の uptake を測定４）、９）することにより、検討した。

健常人由来線維芽細胞では basic FGF 添加群では無添加群に比して増殖活性は２倍以上上昇する傾向があり、heparitinase 消化では不変。一方、

２. ３ receptor binding assay

PSS では basic FGF 添加群では無添加群に比してリガンドとレセプターの結合を receptor binding
assay により測定し、レセプター数と親和性を算定した

増殖活性は２倍に上昇する傾向があり、heparitinase
消化により低下する傾向を認めた（図２）
。

10）

。
３. ２ heparitinase 消化による receptor binding

２. ４ immunoprecipitation 法

heparitinase 消化前後の TGF− β receptor 数は

すでにコラーゲン・ムコ多糖産生を促進することが知られている TGF− β、basic FGF のレセプ

健常人でも PSS でもやや減少し、親和性はやや増加した（図３）。

ター発現と、リガンドとレセプターの結合様式に与えるヘパラン硫酸プロテオグリカンの影響を
ヘパリチナーゼによりレセプターとしてのヘパラ
ン硫酸プロテオグリカンを切断することで検討した。
さらに、TGF− β、FGF などの成長因子が細胞表面上のプロテオグリカンを含むレセプターにどれだけ結合するかを receptor binding assay およびアフィニティラベルにより測定した。
細胞膜表面に存在する接着分子 CD44 はヒア
ルロン酸・コラーゲン・ヘパラン硫酸・ヘパリン
をリガンドとして、リン酸化シグナルを発信しリンパ球の増殖、活性化を促進するので、汎発性鞏

図１ 健常人由来および PSS 由来培養線維芽細胞における heparitinase 消化（＋）および未消化（−）条
件下での TGF− β 添加による増殖活性皮症患者より分離したリンパ球浮遊液中にヒアルロン酸を加え、32 P ラベル後抗 CD44 モノクロー
ナル抗体を用いた Immunoprecipitation 法によりCD44 を分離し、SDS− PAGE 後 autoradiographyを施行し、tyrosine kinase のリン酸化を指標としてリン酸化シグナルを測定した 11）。

３ 結 果
３. １ 培養線維芽細胞の増殖活性
健常人由来線維芽細胞では TGF − β 添加群では無添加群に比して増殖活性は低下する傾向があり、heparitinase 消化によりさらに低下する傾向

図２ heparitinase 消化（＋）および未消化（−）条件
下での bFGF 添加による増殖活性− 87 −

heparitinase 消化前後の basic FGF receptor 数

65Kd）および type Ⅱ（MW 同 95Kd）の TGF− βは健常人でも PSS でもやや増加し、親和性もや

receptor に結合していた 125 I− TGF− β は、そのや増加した（図４）。

まま残った（図５）。
heparitinase 消 化 に よ り、heparan sulfate

３. ３ heparitinase 消化による TGF − β およびproteoglycan の proteoglycan 部分に結合していた

bFGF binding site の変動

125

heparitinase 消 化 に よ り、heparan sulfate

し得なくなった（図６）。

− basic FGF は、結合部位を失ったため、結合

proteoglycan（betaglycan、TGF− β receptor type
Ⅲ、MW 300Kd 前後）に結合していた 125 I− TGF−

３. ４ ヒアルロン酸添加培養によるＣＤ 44 のリ

β は、GAG 鎖が消化されて残った、TGF− β 結

ン酸化合部位を有する core protein（MW 100 〜 130Kd）

汎発性鞏皮症より分離した末梢血リンパ球でに結合して存在するようになった。また type I

は、健常人に比してヒアルロン酸添加培養群で

（MW

125

I− TGF− β monomer との結合体として

図３ heparitinase 消化前後の TGF− βreceptor 数

CD44 のリン酸化をより強く認めた（図７）。

図５ heparitinase 消化による TGF− βbindingsite の変動

図６ heparitinase 消化による bFGF bindingsite の変動

図７ 汎発性鞏皮症より分離した末梢血リンパ球では、健常人に比してヒアルロン酸添加培養群で CD44 のリン酸化をより強く認めた

図４ heparitinase 消化前後の basic FGF receptor 数− 88 −

細胞増殖因子および接着分子による皮膚硬化制御に関する分子生物学的研究

ックスを構築し、デコリンはⅠ型コラーゲンや

４ 考 察

TGF− β に結合する。

近年、種々のコア蛋白とグリコサミノグリカ

ベータグリカンはヘパラン硫酸およびコンドロン（GAG）側鎖からなるプロテオグリカンの構造

イチン硫酸に富む GAG 鎖をもち、分子量 300Kdと機能が明かになりつつある。例えば、コア蛋白（非還元下〜 600Kd）前後のプロテオグリカンで、と GAG 鎖の種類によって軟骨のアグリカン、線

TGF− β タイプⅢレセプターとも呼ばれ、100 〜

維芽細胞のバーシカン、結合組織のデコリン、基130Kd のコア蛋白部分に TGF− β 結合部位を有底膜のパールカンなどが知られている。アグリカする（図８）。ベータグリカンそのものにはシグナ

ンやバーシカンはヒアルロン酸と結合してマトリル伝達機能は認められていないが、TGF− β を貯

図８ ベータグリカンの仮想的機能（山口佑：実験医学 10：1859, 1992 より）①ベータグリカンは TGF-β をシグナリングレゼプター（タイプⅠあるいはタイプⅡ
レセプター）に提示する。ベータグリカンの存在により、シグナリングレセプターへのTGF-β の結合が促進される。②ベータグリカンの一部は遊離型となり、TGF-β を細胞
外マトリックッスに貯蔵する。③遊離のベータグリカンがレセプターに TGF-β を提示する可能性。

− 89 −

蔵ないし保存する働きやタイプⅠおよびタイプⅡ

では bFGF と結合し得、ヘパリチナーゼ消化によ

レセプターへの TGF − β の提示ないし結合促進

り結合できなくなる点で、線維芽細胞の性状に相作用などが知られている12）− 16）。

違はなかった。

今回の実験で、PSS 患者前腕伸側硬化部皮膚由

リンパ球及び線維芽細胞表面 CD44 は、ヒアル

来および健常人対照の同部非硬化皮膚由来真皮培

ロン酸と結合し、protein kinase C 類似の kinase

養線維芽細胞に対する TGF − β の作用およびプのリン酸化および CD44 分子内 serine/threonine

ロテオグリカンの役割がより明かになった。

残基のリン酸化を来たすことによりシグナルを発

basic FGF は細胞表面のヘパラン硫酸プロテオ

信し、細胞の接着機能・増殖能・結合織成分合成

グリカンあるいはフリーの可溶性ヘパリンないし能などを制御している可能性がある（図 10）27）− 29）。

ヘパリン様分子に結合し、ある種の構造変化を遂

特に汎発性鞏皮症では CD44 を介してリンパ球及げた状態でのみ高親和性レセプターに結合し得る

び線維芽細胞の誘導、増殖、ムコ多糖・コラーゲ17）− 26）（図９）。PSS 線維芽細胞においても健常人

対照線維芽細胞においてもヘパリチナーゼ無添加

ン合成の亢進などが行なわれていることが示唆された。

図９ An Induced-Fit Model for Heparin-Dependent High Affinity Receptor Binding of bFGF
（Yayon A et all:Cell 64:841,1991 より）
bFGF can bind to its hight affinity receptor only when bound to either cell surface HSPGs
or to free, soluble heparin or heparin-like mokecules. Both free and cell surface immobilized
heparin-like molecles can interchangeably confer a stable, receptor-compatible conformational change upon bFGF. Hep, heparin; R, recepter.

− 90 −

細胞増殖因子および接着分子による皮膚硬化制御に関する分子生物学的研究

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図 10 CD44 分子の構造（反町典子ら：実験医学
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N 末端側に軟骨プロテオグリカンのコアプテイン
あるいはリンクプロテインに相同性のあるドメインが存在し、この部分でヒアルロン酸に結合すると考えられている。細胞膜直上部にコンドロイチン硫酸が付加する部分がある。

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distinct high-affinity receptors cross-linking
with acidic and basic fibroblast growth factors.

kinase. Science 259: 1918-1921, 1993
27）Pasquale EB, Singer SJ: Identification of a

EMBO J 9: 2685-2692, 1990

developmentally regulated proteintyrosine19）Rafkin DB, Moscatelli D: Recent developments

kinase by using anti-phosphotyrosine antibodies

in the cell biology of basic fibroblast growthto screen a cDNA expression library. Proc Natlfactor. J Cell Biol 109: 1-6, 1989

Acad Sci USA 86: 5449-5453, 1989

20）Moscatelli D: High and low affinity binding

28）反町典子、宮坂昌之：リガンド結合によるsites for basic fibroblast growth factor on

CD44 分子の機能的調節とその生理的意義 . 実

cultured cells:absence of a role for low affinity

験医学 12: 2190,1994

binding in the stimulation of plasminogen29）Hynes BF, Talen MJ, Hale LP & Denning

activator production by bovine capillary

SM: CD44--a molecule involved in leukocyte

endothelial cells. J Cell Physiol 131: 123-130,

adherence and T-cell activation. Immunology

1987

Today 10:423-428, 1989

− 92 −

Ⅲ．精神、文化に関する分野

シルクロードの十字路に誕生した化粧皿とその文化の研究
─古代ガンダーラにおける化粧皿の誕生から終わりまで─
神戸芸術工科大学

服

部

芸術工学部

等

作

Large numbers of the Cosmetic Trays were found in Sirkap,Taxila, in the Greek/ Shaka/ Parthian/Kushan city of the Crossroad of ancient Gandhara, now the boaderland of north-west borderlands
between Pakistan and Afganistan, famous as crossroad of the Silk Road. They were excavated fromvarious levels ranging from the second century B.C. to the first century A.D. The compositions of the
figure scene on trays generally depict Hellenistic myths, drinking scenes, amorous couples, sea monsters
or animals, and they may be used in home use, ritual practices or ceremonies.
The micaceous schist at Gandhara have no doubt products for import outside. This study refer tothe trays under the influences from the hellenising and the nomad's similar products .

化粧皿の底面は、ロクロで円弧状に成形した後、

１ 緒 言

大部分が無文であるが、時に花文や幾何学文を線

化粧皿と呼ぶ石製の小さな皿がパキスタン西北

刻する例がある。

部のアフガニスタン国境地帯にかかる紀元前後代

皿の表面には初期において西方のギリシャ神話に栄えた古代ガンダーラ地方の遺跡から出土する。

テーマを浮彫りに採用しているにもかかわらず、皿の用途は、顔料に香油を加え皿上ですりつぶしてガンダーラ以西のヘレニズムから西アジアの文化

１）圏にかけて化粧皿と直結するものがないため化粧室内の卓上に置き使用するとされてきた 。
一般的な化粧皿の直径は 10 数 cm 程、底面か皿の誕生から終わりまでには不明な点が多い。
本稿では、古代ガンダーラ地方に花開いた化粧ら上縁表面まで高さ数 cm 前後の浅い碗状の皿で
注１）

削り易い現地産片岩や凍石で製作されるが、２）。
少数の板状やテラコッタ製 化粧皿もある（図１）

皿について類似形態と技法を有する資料と共に化粧皿の誕生と終焉及びその文化を考察する。

化粧皿の様式は、表面上縁から内側には複数の

２ 化粧皿の特徴

区画をもうけ、その区画中心、または重要な区画に主題となるテ一マ、神話上の人物や怪獣などを

２. １ 化粧皿研究のはじまり

浮彫で表現し、その残り 1 ／ 4 程の凹面に幾何学

化粧皿の発掘調査は、ガンダーラの中核であっ文（貝文）や花文で装飾して香料置きや顔料とバたギリシャ人都市タキシラ ･ シルカップ遺跡でルサム油を混ぜる区画を持つ。

Marshall が行なった体系的な調査１）での概説以外

その区画された凹面を表面観察すると、刃物には少なく、化粧皿の多くが来歴不明のものに加え

よる線状痕がある反面、摩耗した状態まで様々で盗掘品が横行し化粧皿の解明を一層困難にしてい注２）あり色々な応用があったと考えられる

る。

。

Studies of Cosmetic Trays and Their
Culture in the Crossroad of Silk
Road −There Origins of Helenism
influence into the Gandhara−
Tousaku Hattori
Depertment of Arts and Design,
Kobe Design University

シルカップ遣跡調査は、主にタキシラ平地部の中心地区の第Ⅱ−Ⅲ層について行なわれた。この層位に関する限り大規模かつ組織的に発掘され、各層から出土した中の化粧皿約 40 点（34 点はタキシラ出土）の年代と図像を特定し、ギリシア人
時代からクシャン時代にわたる文化変遷の様相：− 94 −

シルクロードの十字路に誕生した化粧皿とその文化の研究—古代ガンダーラにおける化粧皿の誕生から終わりまで—

カラチ博蔵 NMK8502、片岩製 , 径 11.2cm
アポロ一ンとダフネー 1 Ｂ）- 表 1･35
A. ギリシャ人時代期

タキシラ博蔵 TM9500、凍石製 , 径 9.2cm
B. サカ前期・有翼海馬１Ｃ）- 表 1･33

タキシラ博蔵 TM8480、片岩製 , 径 11. ９cm
C1. パルティア朝・魚尾の海馬にのる男１Ｄ）- 表 1･13

カラチ博蔵 NMK8473、片岩製 , 径 11.5cm
C2. パルティア風・葡萄杯をもつ男女像１Ｄ）- 表 1･6

図１ 化粧皿の図像と形態

少なくともパルティアの支配下で化粧皿がその最（漢
現アフガニスタン北部の古代バクトリア注４）

盛期を迎え、またヘレニズムの美術がタキシラで書で言う大夏）の遊牧民サカ族と西アジアからパ

１A）

普及していた事を明かにした。

ルティア（安息国）の侵入によりギリシャ人王朝

すなわち紀元前 337 年、マケドニアのアレクサは滅亡し、インド・サカ（紀元前 80 〜紀元 25 年）、

ンドロス大王がインドへ進出し、王の死後に部下

インド・パルティア王朝（紀元 25 〜 60 年頃）の達がガンダーラ地方で興したギリシャ人時代（紀もとで化粧皿が最盛期を迎えた。

元前２世紀〜 20 年頃）のタキシラⅥ−Ⅴ層出土の１Ｂ）

化粧皿２点は、へレニズム風の表現をもつ（図

タキシラⅣ層サカ時代初期からⅢ層の後期の化
粧皿８点は、遊牧民の動物 ･ 怪獣の特徴的図像が（図１− B）。
用られる１Ｃ）。
１− A）
一方でギリシャ人が接触した遊牧民族：南ロシ

次のインド・パルティア朝のⅡ層に化粧皿が最アのスキタイ注３）に加え、ユーラシア全体ではカも多く出土する。西方へレニズムの文物を愛好し

ザフ草原のサルマタイ、天山・アラタウ山脈の烏た王朝がその美術を化粧皿などの石製彫刻にとり孫などが活躍していた。

入れヘレニズムのテーマを復活している。

− 95 −

そのうち 18 点はアフロディーテーとディオニ
注５）

ューソス

等のヘレニズムの主題が復活し、内らに化粧皿が現地産出の石材製によることから輸１Ｄ）

入品でない事を指摘した。

５点が饗宴図１E）、３点が騎獣図

１F）

･ 怪獣図

つガンダーラ美術の先駆的な役割を果した事、さ、７点が動物

１G）、３点が素文また Francfort ５）は、化粧皿の材質を片岩、凍石、とサカ時代の純粋な動物図像を漸次圧倒する。タキシラ出土の化粧皿

その他に分類し、さらに様式をヘレニズム、パル。
以外の美術にも本点は共通する（図１− C）

ティア、中間型に体系化し、存続期間を紀元前

一方で中央アジアにいた遊牧民月氏族が蒙古の150 〜紀元 50 年頃までとした。

匈奴族の圧迫をうけて移住し小国に分裂（五翕以上の各研究では、古代ガンダーラの化粧皿を侯）、その一部族がインド亜大陸中央部から西北

歴史・図像検討の面で前進したが、浮彫りのテー部にまたがるクシャン朝（貴霜国）を興した。

マとなった肝心のヘレニズム世界とガンダーラを

この王朝初期に該当するタキシラ第Ⅰ層は、最１Ｈ）結びつける化粧皿の類似品の充分な比較がされず、が出

化粧皿が交易品や所持品として西方からの流入品

土しただけで１、２世紀以降に確定できる化粧皿

か、あるいはギリシャ風のテーマを装いガンダーがない。この事からパルティア朝滅亡後に少なく

ラから西方に輸出されたものかは、依然未解明でともタキシラで化粧皿が衰退した事がわかる。

ある。

も広範囲に発掘されたが、化粧皿は５点以上の点から少なくともタキシラ出土の化粧皿

さらにヘレニズム起源に固執するあまり、ギリは、前２世紀ギリシア人時代に始まりサカ・パル

シャ人に接触し東方ギリシャ様式を獲得した遊牧ティア朝時代を経てクシャン朝時代前半の１世紀

民の影響についてほとんど考慮されていない。

まで約 300 年間程続いたと言えるが、ガンダーラ

このため、ギリシャ周辺地域の様式も含めた化全体として、スワート地方のウデグラムやチャー

粧皿の技法：形態面、及び技術面について新資料

ルサダ出土の化粧皿が浮彫りのテーマを変えつつを加えて検討する必要が残されている。

３A）

４世紀まで存続していた。

３ 化粧皿の比較

現在知られている化粧皿 162 例とそのテーマ内
容を表にした（表１）。そのうち化粧皿 98 例は、

３. １ 形態面からの類似性

ほぼ正確に出土地を特定でき、また都市遺跡（タ比較的加工が容易な陶器、石製品について化粧キシラ・シルカップ ､ ビール丘、スワート・ウデ

皿の形態面から類似のものを求め検討を進める。

グラム ､ バリコト等）は、85 例である。テーマでまずギリシャ古典期からヘレニズム期に皿・碗はディオニソスの祭祀の場面が 60 例で最も多状の内側を区画し、その主要部分に神話のテーマ

注 5）

く

、神話動物の 39 例が次ぐ。タキシラの 33 例や装飾文様の描画、浮彫り表現は一般的である。

では、怪獣図が 20 例と圧倒的に多い（表２）。

ギリシャでは、テラコッタ、陶器、石膏、石、青銅、ならびに貴金属などの多様な材料と広い応

２. ２ 化粧皿の研究と問題点用分野がみられ、アレクサンダ大王の遠征後ギリ
４）は、33 点にシャの植民地となったガンダーラのタキシラ、サ

図像比較を加えを詳しく考証し次の点を明らかに

カ朝からクシャン朝にかけてのバクトリアのベグした。まずギリシア人時代のⅥ−Ⅴ層に出土する

ラム６）遺跡にも同様の分布例がある。

Marshall の化粧皿の概説に Dar

化粧皿がタキシラで前２世紀中頃から初めて現わ

しかし、形態面からガンダーラの化粧皿に直結れ、クシャン朝初期の１世紀頃のⅠ層に終焉をむする物は、ギリシア本土から小アジアで例がなく、かえるまで化粧皿の浮彫りがヘレニズム様にはじ周辺地であるエジプト・ローマ統治時代のディス

まり、土着の仏教にギリシャ・ローマの様式をもク７）、およびイラクのパルティア帝国ハトラの神− 96 −

シルクロードの十字路に誕生した化粧皿とその文化の研究—古代ガンダーラにおける化粧皿の誕生から終わりまで—

表１ 化粧皿の一覧表１、４、５）より適用− 97 −

表２ 化粧皿のテーマ１、４、５）より適用
Ａ . ディオニューソスの祭祀
Ｂ . アフロディーナー
Ｃ . 神話動物
Ｄ . 動物界Ｅ . 太陽信仰
Ｆ . 幾何学・花文Ｇ . そのほか
Ｈ . 不明
重複計あり

60 例
31 例
39 例
23 例
10 例
26 例
58 例
21 例

計

22.0％
12.0％
15.0％
8.5％
4.0％
9.7％
21.6％
7.8％

268 例 100.0％８）

殿円板浮き彫り 以外に見あたらない。
まず古王朝代の古くから儀式用化粧板（パレッ

大英博物館蔵 EA-38517、暗緑砂岩、径 7.7cm
A. 集合場 ･ 婦人達とｷｭｰﾋﾟｯﾄﾞ５）ト）の伝統をもつエジプトにディスクと呼ぶ化粧皿７）があり、出土したアレクサンドリアは、アレ
キサンダー大王の首都となって以来、プトレマイ
オス朝では、インドまで知られる貿易経済の中心となり、紀元前 30 年以降のローマ統治下でも相互間の経済交流が増した交易の中心地である。
当時の経済関係のなかエジプトのディスクとガ
ンダーラの化粧皿が同じ起源、あるいはガンダー
ラの皿をアレクサンドリア将来とする関係が取りざたされてきた９）。共通点を求めればディスクの材質が黒色片岩や凍石を使い、寸法形状もガンダ

大英博物館蔵 EA-38516、暗灰色砂岩、径 9.6cm
B. 鵞鳥に乗るハポクラテス５）

ーラより小型か同程度、テーマも人物肖像で共通性が見られ、二つ共に最盛期の後に消滅し、再び

図２ エジプトの化粧皿風ディスク

現れない点である。
一方で不一致点は、エジプトのには注ぎ口と浅せである。いずれにしても西方からガンダーラへ碗キュリックスの影響によるのか二つ小さな把手の通過地で化粧皿への図像的影響は、イラン風のを持つがガンダーラの化粧皿には共にない。また、グリフィンがごく少数化粧皿に現れる程度であっエジプトのディスクの仕上げは研摩に緻密さをもたことからエジプトのディスクをガンダーラの源

つが、ガンダーラのは初期のヘレニズム風以降の流とするには矛盾がある。

化粧皿は、仕上りが荒々しい（図２）。

エジプトのディスクの年代と用途を、Petrie が６）

１〜２世紀の鏡台の装飾具、Evans が４世紀頃の、ヘラクレース

神酒の容器とし、共にロ一マ統治時代とする７）こ−セラビス像６Ｂ）、エジプト製のガラス６Ｃ）、タキとから、ガンダーラで化粧皿がサカ・パルティア

シラには、エジプト固有の神像ハポクラテース像

時代以降の衰退期に、エジプトのディスクが誕生やロータス文をローマのものと共に受容したにもする点で同じく矛盾がある。

またタキシラやベグラム遺跡の宝物庫 から出６Ａ）

土した青銅ハポクラテース像

かかわらず、エジプトではガンダーラのテーマは次にガンダーラ以西で化粧皿に酷似するのはパない。むしろエジプトのディスクのテーマは、エルティア朝（前１世紀〜 240 年頃）ハトラ・パン

ジプト風で鵞鳥に乗るハポクラテス、野犬に座す

テオン神殿出土の装飾浮彫り円板（イラク国立博

豊穰神とエロスなどエジプトのテーマの組み合わ

物館蔵 IM− 59033）がある８）。

− 98 −

シルクロードの十字路に誕生した化粧皿とその文化の研究—古代ガンダーラにおける化粧皿の誕生から終わりまで—「神々のつどい」をテーマに、上に向かって左端からヘラクレス立像、脇にヘラ女神を配したゼウ
ス王座座像、向かって右端には右手を上にあげた
裸体男子の集合場面を浮き彫りする。
皿内側に水平線で区画をもうけテーマを表現する点はガンダーラの化粧皿の寸法・形態・浮彫りが酷似する。登場人物像の筋肉や着衣の表現がヘレニズムの影響が濃厚で、象牙を精密に製作し調和のとれた構図と仕上がりは、ガンダーラやハトラよりも西方の製作、および祖先崇拝、宗教儀式との関係が想定でき献上目的か輸入品と考えられる（図３）。
同様例にガンダーラの北辺にあたるバクトリア

高さ 11.5cm、幅 12cm
ハトラの出土・イラク国立博物館蔵 IM-59033 ８）で紀元前２世紀のギリシャ人都市アイハヌームから化粧皿風の形態を有し凹面内側を区画した片岩

図３ 象牙型装飾浮彫り円板「神々のつどい」

製の碗と皿 10）がある。しかしテーマとなる浮彫りがなく、直径は化粧皿のおおよそ倍にあたる
20cm 近くから化粧皿の半分以下の５cm まで、厚さもおおよそ数倍のものが多く一定せず、かぶせ蓋になるように上縁外側に段差を設けるなどの相違点から化粧皿以外の容器を想定させる。
以上前述したガンダーラの化粧皿との類似例以
外の物は、ロードス式皿、および把手つき浅碗状のキユリックスの二形式、皿内側に水平線で区画し神話等の主題のテーマを描画表現する点が化粧皿と共通するのがヘレニズム圏に見当る程度である（図４）。
ロードス式皿は、大きい方の区画に絵を描き、ロードス式皿：大英博物館蔵 GR1860.4-4.1、下部は素文か花文や数本の川状線の装飾が化粧皿

図４と共通する。相違点は、ロードス式皿の主テーマ

化粧皿との類似性 11）がホメロスの英雄場面や動物の絵画表現である。

（円盤）３Ｂ、３Ｃ、13A）と、化粧皿と同一表現を持ち、この伝統は前７世紀の方形構成に始まり円形メダ

西方の表現方法、テーマが共にバクトリアに伝播

イヨン（飾り板）にも同一テーマを用いた後、円した実例である。

形に部分装飾し前５〜６世紀頃まで継承される。

上記のロードス式皿と浅碗状のキユリックスのまたキュリックスと共通するエトルスクの皿絵

内側の描画表現は、紀元前３〜１世紀中に次第に

12）（ローマ ･ ビラジュリア美術館蔵 inv.23949） に浮彫りを採用し、ギリシャのメガロス式碗、およは、円形の枠内を水平に区画し上の区画側に戦象

びエトルリアのカレニア式浅い銀製円形フィアの上に騎乗する兵士達、をテーマに描く例がある。

レ 14、15A）の浮彫りに多様化し発展する。

その手法は後述するバクトリアの古式のフィアレ− 99 −

カレニア式皿は、型製円板（前４〜前２世紀頃）

とテラコッタ製の灯油ランプ（前４〜前２世紀頃）を受けたテーマ内容もあるが、化粧皿がもつ携帯にも影響を与えた。カレニア式皿は、ロードス式

可能な寸法と異り独立分離できない構築物の外部皿と同じく扱うテーマがパーン、エロース、アフ

装飾品であり、その比較は無理がある。

ロディーテー等ほぼ同じく登場する。
ランプは、神話の登場人物が多様で、両型式共

３. ２ 技術面からの類似性
化粧皿のように皿内側を水平線で区画し、鋳物に３世紀のローマ時代までつづき、東のベグラム
６Ｄ）の浅浮彫り、あるいは鍛金で打出しによりテーマ

側に主要な浮彫し、前４〜３世紀頃まで続く。

を表現する技術も化粧皿と類似性がある。

に至る。さらにテラコッタ製円板は、円板内浮彫装飾の後期には、１世紀後半〜２世紀初期

鋳物では、紀元前４世紀頃のギリシャやエトル

頃に大理石円板（オスシラ）がギリシャにある。

スクの銀貨がある。貨幣周縁には細かい列点文を大理石円板の中心に化粧皿と同じ浮彫の方法で彫めぐらし、またテーマは、化粧皿の盛期のサカ朝像した後の残部が凹状となる様に両面を浮彫、一に最も多い有翼怪獣と同じ獣頭蛇尾 18 Ａ）や有翼海端を穿孔しディオニューソス祭には神殿門戸にか

馬 18 Ｂ）を用いる。金属の貨幣は型で製作される点け利用したとされる。

で違うが、その型材料は、化粧皿と同じく石材でタキシラで同時期の化粧皿は、ガンダーラ美術。
その仕上げ技術は共通する（図５− A、Ｂ）

における最も古い時期の彫刻に属するディオニュ

次に鋳物製銅柄鏡の蓋も化粧皿の装飾様式とのーソスのテーマが多く、その銅像と共に美しいス

類似性と化粧道具としての組み合わせからも関連

トッコのサテュロス頭部１Ｌ）が、シルカップの寺性がある。

院跡で出土し、ベグラムでもディオニューソス頭
６E）

前５世紀からギリシャにおいて製作された鏡は、が出土している。後にガンダーラ美術の盛

ヘレニズム世界を通じギリシャの東方の植民地で時にあってもディオニューソスは仏教の諸テーマあったベグラム、タキシラ１Ｍ）まで広く分布する。

と並び多数現れ、その信仰が根強く継続していた。

鏡の図は、化粧皿と同様にディオニューソス、エ部

この大理石円板を石膏製の複製品にしたヘレニ

ロスやアフロディーテーが登場する。

６F）

で多数出土するが、ガン

紀元前３世紀前半に製作されたエトルリアの鏡

ダーラ化粧皿と反対に大きく、また化粧皿には採蓋（ローマ ･ ビラジュリア美術館蔵 inv. 51391）19、用されない単独像の表現でオスシラの代用と考え

15A）

られる。

とする化粧皿の製作法と似るが、化粧皿との相違

ズム風のがベグラム

この他に２世紀前半頃の白大理石製の浅碗（パテラ・大英博物館蔵 GR1805．7− 3.435）がローマ

は、上面に像を表現し、裏面は同心円の刻文

は材質が金属と開閉の蝶番が付く点である（図５−Ｃ）。

近郊ハドリアヌス帝別荘から出ている。蔦の葉と次に、鍛金で裏側から打出した後に表面から毛

胸飾りの円形枠の中で踊る女性を表現し、化粧皿彫りした後鍍金により表現する打出し加工技術は、風である。この表現は、後述する銀製のキュリッ

陶製キュリックスの描画表現を源流にするメガロ

クスの浮彫り表現にも通じる。

ス式椀、およびエトルリアのカレニア式銀製フィ

最後に化粧皿が発展したインド土着の伝統を見。
アレ 15 Ｂ）にもつながる（図６− A）
その典型例は、碗の内側にギリシャ神話にあるると、クシャン朝以前の釈迦の象徴表現として
16）

・紀元前 185 〜 72 年頃、サオンフォロス（臍）を中心に打ち出し、その周囲ーンチー 17）・前 72 〜 25 年頃など）の塔門、欄楯に草葉文を浮彫りし幾重もの同心円状の輪の中にの円枠内側メダイヨンにテーマが表現される。表線彫 15 Ｃ）、または打出しでテーマを表現する 15 Ｄ）。

現には、アケメネス朝ペルシャやギリシャの影響一方で紀元前７世紀頃のエトルスクのフェニキ

仏塔（バールフト− 100 −

シルクロードの十字路に誕生した化粧皿とその文化の研究—古代ガンダーラにおける化粧皿の誕生から終わりまで—

A. 獣頭蛇尾銀貨 18 Ａ）

B. 有翼海馬銀貨 18 Ｂ）

ローマ ･ ビラジュリア美術館蔵
inv.51391
C. 鏡の蓋 19）

図５ 化粧皿との類似性—エトルスクの金属工芸から—

アン式銀鍍金碗や４世紀頃のカレニア式フィアレ
はオンフォロスが無い場合 15B）は特に化粧皿に近似し、碗の内側に幾重にも円形の枠を設け、その中心に化粧皿と同じ区画をもちテーマを浅く打出し、周囲に様々な図像を表現する 15 Ｅ）。
前３世紀頃以降はオスシラのように単独肖像を
高浮彫り表現する皿 15F）も現れる。後には円形の枠内に区画を設け、主要なテーマの表現 15 Ｇ）をするが、特にヘレニズム期の銀製フィアレには、ア
ケメネス朝ペルシャの影響を持つ様式も現れ 15 Ｈ）、

A. カレニア式フィアレ 15 Ａ）
ローマ ･ ビラジュリア美術館蔵

儀式用で１世紀前半頃とされるヘラクレスの毛皮の上に寝るオンファレーを表現するフィアレは、後述するサルマタイ王墓のものと同類で、これら銀碗のギリシア神話テーマは化粧皿同様にほぼ全体に及ぶ。
メガロス式碗のテーマはガンダ−ラの化粧皿と同じディオニューソスやアフロデティーが登場し、カレニア式フィアレは器の中心にギリシア神話のほぼ全体に及ぶ１ないし複数人物、または神獣を、全体には複数の円形枠の中に配置する。
１世紀頃のサルマート王墓（ロストフ博物館蔵
KP2544 ／ 13 − 17）出土の銀製フィアレ 20）は、
遊牧民の墓にも関らずヘレニズムの東方様式を完備した埋葬品で化粧皿と同じ寸法、形態、特徴を持ち中心部に主題となるモチーフを打ち出し、周B. サルマタイ王墓出土フィアレ・エロスとプシュケ 20 Ａ）。
縁の装飾を毛彫する（図６− B）

図６ 化粧皿との類似性—古式フィアレから—− 101 −

出土した８枚の内６枚の銀製大杯は、縁取りに。
ズム世界からの明らかな影響がある（図７−Ａ）

ガンダーラの化粧皿、ギリシャの銀製フィアレに

また突き棒を持つインド人象使いの表現は、西頻繁に用いられる草葉文様をもち、中央部に打出方（古典）的と東方的な要素が共存するいわゆるされたギリシャ神話テーマはエロスとプシュ

グレコ・バクトリア風美術に属し、前述した騎象

ケ

20A）

、海馬やトリトンにのるネレイデス

らびに葡萄収穫

20B）

、な

20C）

の神話テーマで円形メダイヨ

兵士を描くエトルリアの壷絵と材質以外の表現で共通する。

ンに精巧に表現し、追悼供養容器とされる 20 Ｄ）。

同じ騎象のテーマで二つある大英博物館蔵 OA同時に出土した金製ファレラ（円形の飾り板、

1937.3− 19.5. のは化粧皿の特徴、皿内側を区画し胸飾、馬の額飾）と銀鍍金の沐浴用容器（ルテリ

テーマを表現、周縁には蓮華文様を配する。これオン）は、すべてヘレニズム様式に属し、紀元１

はインド仏塔欄楯の様式を小型で金属仕様にした

世紀の末頃と考えられるこの古墳の埋葬時期から、もので、前述ファレラ 20E）を典型的なインド風にこれらの銀製大杯が埋葬時より様式上は古く、化表現しタキシラの化粧皿１N）と共通する（図７−粧皿と同時代のものである事、及び前述した銀製

BC）
。

ファレラ

20、15A Ｂ）との類似性がわかる。

他に龍文のファレラ（エルミタージュ美術館蔵

古代バクトリアのアムダリア流域でオクサスのS550）13 Ｂ）は、周囲を列点文と渦文帯で縁どりし、遺宝と呼ぶ金属盤も化粧皿との関連を考慮する必中央には、猛禽の嘴、尖った耳、猛獣の脚をもつ要がある。盤内側の大きい方の区画に以下に述べ

有翼龍が、輸形に表わされている。裏面には、皮る多様なテーマを表現、他の区画は素文、その外紐を通す鉦や鋲留め痕がある。このファレラは、

周は草葉文で装飾し化粧皿と共通する。

技術、寸法、裏面に付けた鐙の位置、ならびに文まずガンダーラの化粧皿にはない騎象をテーマ

様からも、前述の戦象文のファレラ、さらにはエに表現した一連の古式ファレラ、エルミタ−ジュ

トルスクのカレニア式フィアレ 15 Ｂ）の外周に縁ど美術館蔵 S56513A）、大英博物館蔵３Ｂ、３Ｃ）がある。

られた蛇文への関連性がある。

紀元前３〜２世紀頃の古式ファレラからエルミ以上あげたバクトリアと化粧皿との類似例は、

タ−ジュのは、兵士の兜がセレウコス朝風、鞍のアレキサンダ大王の死後、ギリシャ人の子孫が興

鞍覆はタキシラを始めガンダーラ化粧皿に度々見したセレウコス朝代に西方のシリアやギリシャ人る蛇尾の海獣と同類でエトルスクの貨幣やヘレニと接触した遊牧のスキタイを含めたヘレニズム世

エルミタージュ美術館蔵 S565
A . 騎象図 ･113 Ａ）

大英博物館蔵 OA 1937.3-19.5
B. 騎象図 ･2 ３Ｂ）
図７ 化粧皿との類似性—ファレラから—− 102 −

エルミタージュ美術館蔵 S550
C. 龍文図 ･313 Ｂ）

シルクロードの十字路に誕生した化粧皿とその文化の研究—古代ガンダーラにおける化粧皿の誕生から終わりまで—界からの流入品、または現地製としても、前３世

ギリシャ人時代が衰える一方、遊牧民族のイン

紀頃バクトリアからガンダーラにかけてに住んで

ド ･ サカ朝、インド ･ パルティア朝のもと遊牧民いたギリシャ人の子孫が精密に加工表現できる金が持つ伝統にもかかわらず領地における古くから属を基盤にガンダーラの化粧皿の製作するためのの習慣を容認し、化粧皿が最盛期を迎えた。
注６）

移行期間があったことを示している。

その証拠は、遊牧民の神器

４ 化粧皿とその文化の一つである杯においてもギリシャ神話の図像と共にヘレニズム
風のフィアレ 13）を用い、またガンダーラの化粧４. １ 化粧皿の終焉

皿では、海洋の象徴の有翼海馬や蛇尾怪獣の図像、

ここで化粧皿のまとめと終りについて述べる。

さらにディオニューソス、饗宴図などを加え、そ製作にたずさわったギリシャ人を含めた西方からのなかで遊牧民族の化粧皿の仕上げは、荒々しいの職人達は、地理的にギリシャの東の果てバクト

動物 ･ 怪獣文のテーマと共に荒けずりな彫刻法にリアのアムダリア河畔アイハヌームやガンダーラ

変化する。

のタキシラといったギリシャ人都市に生活し、グローマに対抗し覇権を競った西アジアのパルテ

レコ ･ バクトリア美術を担う伝統の製作法、テーィアの美術では、ヘレニズム文物への傾倒から化

マの表現様式などの知識を持って製作活動をした。

粧皿のテーマは怪獣とともにディオニューソスがそこでは化粧皿と同じ様式として皿の内側を区多く、この時代がもつバッカス的な風潮とも一致

画し主テーマを表現する様式と浮彫り技法の伝統

し、少なくともギリシャの東の領界にあるタキシが存在していた。内側を装飾する手本は、ロードラの化粧皿は、数量的にも最盛期をむかえた。

ス式皿の描画があった。円枠内に区画を設け、そ化粧皿の西方の領界が不明であるが、化粧皿ののテーマを浮彫し周縁を装飾する技法は、フィア

仕上がりの点から、エジプトのディスク及びハト

レ、キュリックスから応用ができた。

ラの化粧皿風の緻密な仕上がりから、明らかにガしかし化粧皿の盛期であったインド ･ サカ、インド ･ パルティア朝のもと、少なくともタキシラ

ンダーラの質と異りそれらは輸入によるものではなく、現地製である事は明確である。

の初期のギリシャ人時代においても、結果的には最後に少なくとも都市部のタキシラでは、化粧ロードス式皿、フィアレを流用する化粧皿も作ら

皿が急に衰退した。イラン系遊牧民族によるクシず、精密で高級な表現が可能な貴金属、金属によャン朝の支配で、インド土着の節度ある仏教が当る打ち出しや象牙材料にも手をださなかった。

時の文化・意識を高揚し国際化しはじめた時期で何より扱いやすく加工が比較的簡単なうえ量産やある。新たな勢力である仏教徒達は、仏伝図、あ急造に応じることが出来る現地の片岩を積極的に

るいは単独の仏像表現に関心をむけガンダーラの用い、簡単に携帯、運搬可能な重量寸法を、さら仏教美術が本格化する。この新たな宗教美術活動に浮彫りのテーマにも支配王朝毎の文化をためらの盛り上がりに対抗するため、伝統的な化粧皿をわずに採用したのである。

担ってきた主人公とテーマの関心が変化していた

即ち初期のヘレニズムの面影が強く残る化粧皿のである。

は、少なくとも緻密な加工 ･ 仕上がりを求め黄色がかった凍石などを使い緻密に製作した。当時の

４. ２ 化粧皿の文化について

石彫技術に化粧皿と同じく石を使った貨幣の型製

最後に化粧皿を利用した背景の文化を見たい。

作、例えばインド・グリーク朝最後のヘルマエオ

ベグラム遺跡から出土したインド様家具の象牙

ス王貨幣、の仕上がりにおいてすら、初期の化粧製装飾板に、ギリシャの鏡や化粧皿や道具をもち皿の緻密な仕上がりに共通性がある。

裸体で化粧する女性

６Ｇ）− 103 −像がある（図８−Ａ）。

図から古代インドでは、裸体の装いとして全身美容と衛生のため沐浴と共に化粧が意義をもち、額飾や眉間飾により邪悪を除く化粧観が示されていることからもわかる注７）。
タキシラでは少なくとも化粧皿が多く出土した女性が化粧皿、鏡、香料などを使って化粧していのは寺院の密集地区であり、寺院から非仏教的なた事がわかる。
さらに化粧は宗教儀礼の一部に土着のシバ神信者らの想像を超す空隙嫌忌観から神聖で清浄と考巨人を浮彫りした化粧皿が出ているためガンダー
ラの化粧皿が信仰との関連を無視できない。
この点に関してガンダーラのスワート・ブトカ

える白檀の泥灰を塗付し邪眼を塗りつぶす魔除けの化粧が取り込まれていた21）。

ラ寺院（紀元前１〜後３世紀頃）跡出土の化粧皿

それは、インド・グリーク朝でギリシャ系のメを使う女性のレリーフ 23）は、インド式アーチのナンドロス王（紀元前 155 〜 130 年頃）と、仏教

下でターバンをつけた貴族風男性に寄りそうイラの高僧ナーガセーナとの問答が経典

22）

のなかで

ン風衣装の女性が化粧皿を使う光景が見いだせる。
また化粧皿に酷似する装飾板がハトラの神殿跡から発見されたことも、世俗から離れた装いと信仰。
との関係をによわせている（図８−Ａ）
あとがき
本研究では、関係各位から資料調査の協力と支援をいただいた。まず、財団法人コスメトロジー
研究振興財団の研究助成のもとで大英博物館 ･ 貨
幣メダル部、エジプト部、東洋部、ヴィクトリア

ベグラム遺跡出土象牙製装飾板６Ｇ）
A. 化粧する女性像＆アルバート美術館東南アジア・インド部門、オクスフォード大学 ･ アシュモレアン博物館、ならびに㈱欧亜美術から調査で御協力をいただいた。
以上本稿を借り厚く御礼申し上げます。
引用文献
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no. 73, 80 - 1, 86, 88 - 9, G) Pl. 145, no. 92 - 94, H)
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図８ 化粧する女性像

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F)Pl. 36A, 36B G) Pl. 30A, H)Pl. 43A, 1966

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Dello Stato, 1990

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1939--1940, Meoires de la D. A. F. A., Tome XI,

Scavie Studi Recenti, エトルリア文明展、最新

A) Fig. 322, 324, B) Fig. 323, 325, C) Fig. 257 -の発掘と研究による全体像、Pl.131、朝日新聞社、

265, D) Fig. 419 - 430, E) Fig. 329, F) Fig. 274 320, G) Fig. 233, 660-68, Rencontre de Trois

1990-199120）A u s d e n S c h a t z l a m m e r n E u r a s i e n s

Civilisations Inde-Gréce-Chine, Paris, 1954

Meisterwerke Antiker Kunst, held at Kunst

７）K.Parlasca.: Greichish-romische Steinchalschenhause Museum Zurich,A) Pl.91, B) Pl.93, C)

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Pl.95, D)Pl.52, 1993,

８）深井普二：ペルシャ古美術研究 2､pl.153､ 吉

21）松山俊太郎：古代インド人の装い ､ A)pp.34

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９）Mervat Seif-el-Din: Interactions in Art-India

22）中 村 元、 早 島 鏡 正 訳： ミ リ ン ダ 王 の 問 い

and Egypt-Influence and Interactions, Marg
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23）Faccenna, D,Taddei.M.,:Sculptures from the

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10）Bernard,P.,: Fouilles d'Ai Khanoum IV.Le,Reports and memoirs

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注 釈

Tome XXIVI,pp.9- 20, Paris, 1984.
11）日本放送出版協会：大英博物館 - ３,Pl.39, 日

注１

本放送出版協会 , 1990

材 質 は 片 岩 ･Schist が 代 表 的 で、 凍 石･Steatite、Soapstone がつぐ。

12）Beazley, J.D.,:Etruscan Vase-Painting, pp.211-

注２215, Oxford, 1947

仏 語 は、Palette、 英 語 は Toilet Tray、

Cosmetic Tray とも呼ぶ。

13）Wilfried S.,:Weihrauch und Seide, Alte

注３ 現在のアフガニスタンが古代バクトリアにKulturen an der Seidenstrase, A)Pl.126, B)相当する。その南部をインド・グリーク朝、北Pl.127, 1996

部はグレコ・バクトリア朝が支配し「漢書」の14）Salvatore S.,: The land of the Etruscans, from− 105 −

大夏を示す。

注４ ギリシャのヘロドトス（紀元前 484 〜 425の新しい気風を反映し、ディオニソースの年頃）が「歴史」に記したスキタイは、ペルシ場

ャ人がサカ（塞）と称した。

98,100,150,153）。このディオニソース信仰がガ

注５ ディオニソース（英語読み・バッカス）は、
葡萄と酒の神、女性からは野生的な狂乱の神とを 表 す の が 多 い（ 表 １ の 66,89,

ンダーラでほぼ確実に存在した。
注６ ヘロドトス著の「歴史」のなかでスキタイして熱狂的な崇拝を受けた。ディオニソース、の起源神話に出てくる、黄金製の鋤・軛、戦斧、

アプロディーテーが持つ性格は、ヘレニズム美盃の三つの神器がある。

術が持つ武勇・暴力・強奪に代わり、清純で牧注７ サンスクリット語 Tilaka 、ヒンディー語

歌的な愛と情熱をかき立てる内容がある。

tika、および lalatika と呼ぶ。

ガンダ一ラの化粧皿は、このヘレニズム時代− 106 −

化粧品の表示に関する研究─ことに警告表現について─

慶應義塾大学

吉

川

商学部

肇

子

The purpose of the present study was to examine the effect of directions of cosmetics on people's
understanding of risk. In communicating risks to people, even if they are provided with accurate probabilistic
information, there may be great difficulties dealing with the uncertainty associated with evaluating probabilities.
The first experiment was conducted to examine the effect of graphical representation on understanding
probabilities. As the result the experiment, though, the graphical representation of probabilistic information did
not improve subjects' understanding of risk. Then the survey was conducted to examine the attitudes towards
cosmetics and warnings of cosmetics among women. The result revealed that instructions and warnings ofcosmetics did not attract attention among the subjects. No relationship was found between the subjects' attitudes
towards technology or cosmetics and attention towards warnings. The implications of the results were discussed.

況の中で、リスクをどのように伝えるのかとい１ 緒 言う、いわゆるリスク・コミュニケーション（risk

本研究では、化粧品のパッケージや取扱説明書、広告などにおける表示が、消費者にどのように受communication）の研究が盛んに行われるようになってきた。

け取られているのか、また、表示の内容がどの程リスク・コミュニケーションとは、「個人、機度理解されているのかについて、実験的に検討す

関、集団間での情報や意見のやりとりの相互作用ることを目的とする。ことに、本研究では、化粧的過程」（National Research Council、1989 １））と品の表示のなかでも警告表現に焦点を当て、その定義されている。こうした定義の背景には、リス表現に含まれているリスクがどの程度認知されてクにさらされる（ないしはさらされる可能性のあいるのか、またそうしたリスク認知が、消費者のる）人々に対しては、十分に情報を提供し、その化粧品の購買や使用などの行動面にいかなる影響問題に対する理解を深めてもらうことが重要であを及ぼすことになるのかについて、主として検討る、という考え方がある。
さて、このようなリスク・コミュニケーションを進める。
近年の科学技術の発展は、新たにさまざまなリ研究の基本的立場は、対象が化粧品であっても同スクを生み出している。以前から知られているリ様に尊重されるべきであると考える。化粧品の使スクも含め、ある程度のリスクを受け入れること用にリスクがあるならば、それがたとえ小さなもは、もはやさけることのできない状況といえる。

のであるにしても、正しく伝えられなければなら

また、人々には知る権利があるということがないということである。

社会的な合意となり、その権利の確立が目指さ

警告や注意書き、また、広くは取扱説明書も、れているという社会的変化もある。こうした状

リスク・コミュニケーションの一つの形態として

An empirical study on directionsof cosmetics

とらえることができる。こうしたリスク・コミュ
ニケーションは、人々にリスクがあることを伝え

Toshiko Kikkawaて、それを理解してもらうことと、安全でない行

Faculty of Business andCommerce
Keiou University

動をしないようにさせるという、行動を変容させることとの二つの目的を持つ。

− 107 −

しかしながら、現実には、これらの警告や注意書きによって、化粧品にリスクがあることは、必して使い分けられている。

ずしも正しく消費者に伝えられているとはいえな②被害がなにであるかについての記述。

い。リスクを正しく伝えていないことが、化粧品③警告にしたがわないときに起こる結果について

に対する過剰な不信を招くこともある。また、表示のあり方によっては、たとえ正しくリスクが伝の記述。
④被害を避けるために、するべきこと。または、

えられていても、消費者がそのリスクを十分に理してはいけないこと。

解し得ないということもあり得る。

これらの四つの要素は、一般的にはすべて必要

1995 年７月に施行されたＰＬ法により、化粧品

だが、必ずしもすべてなくてもよいと、彼は指摘に限らずさまざまな製造物の表示にわかりやすさ、している。たとえば、
場合によっては、「止まれ」（先

理解しやすさが求められることになった。しかしの Wogalter（1994）の④の要素にあたる）というながら、どのような表示が適切であるのか、社会文字だけでもよいということである。つまり、警心理学的な見地から十分に検討されているとはい

告に必要な要素は、その製品がどのような性質のえない。警告表示に限っても、従来の JIS 規格とものであるか、どの程度警告メッセージを載せるの不斉合や、業種間での不斉合がみられるばかり

スペースがあるか、などさまざまな要因によってでなく、はたしてそれらの表示が消費者に意図し影響されると考えられる。

たとおりに受け取られているかどうかの保証がない。

化粧品については、わが国では、渡邊（1995）
が、望ましい注意・警告事項について、①警告・こうした制度的な変化にともなって、アメリカ
２）

禁止事項の明示、②禁止を破ったときの結果の明合衆国における ANSI（1991） のように、わが国示、③その結果に対する（応急）措置、の三つをでもまた、警告や表示の標準化が、さまざまな分あげている。

３）

４）

野で試みられている（林田、1995 、渡邊、1995 、など）。

しかし、先にも述べたように、これらの表示や警告が正確に記載されているとしても、消費者がしかし、本稿で取り上げるのは、制度や基準でそれらを正しく理解するとは限らない。たとえば、はなく、そのようにして作られた表示や警告など

７）
杉森ら（1996） は、女子学生を対象とした調査が、人々にどのように受け取られているのか、そによって、化学品の表示については、「警告」と「危の効果の問題である。したがって、心理学的研究

険」という語句が危険度を逆転して理解しているによって、現在使われている警告よりも、より効者が少なくないこと（「警告」の方が「危険」より的な警告のあり方が指摘されることもある（これもリスクが高い）、シンボルマーク（絵表示）が必

５）

らの問題の詳細については、吉川（1997） を参ずしも正確に理解されていないこと、を明らかに

照）
。

している。

こ の よ う な 研 究 の 代 表 的 な も の と し て、

Wogalter et al.（1991）８）は、警告が消費者に届

Wogalter（1994）６）は、有効な警告のあり方を検かない理由を、①消費者が警告を見ない、②消討している。そして、警告の要素として、次の四費者が警告を理解できない、③消費者が警告を無つをあげている。

視する、という三つの理由に大別し、そのうちの、①警告があることがわかるような単語。しかもそなぜ警告を見ないのかについて検討を行っている。

の被害（hazard）の程度の違いがわかるもので彼らは、大学生を対象とした三つの研究によって、あること。英語でいえば、Danger と Caution

警告を読もうという気持ちは、被害（hazard）のであり、前者の方が、被害の程度が大きい。日知覚によって決定されるということを明らかにし本語では、この用語の差は「警告」と「注意」とた。すなわち、その製品が安全であると感じられ− 108 −

化粧品の表示に関する研究─ことに警告表現について─

れば警告は読まれないのであり、逆に危険である

化粧品においてリスクを正しく伝えることを阻むと感じられれば警告を読もうという気持ちになる

技術的問題を、社会心理学的立場から解明していということである。また、その製品にどれくらいくことをねらった。

慣れ親しんでいるか（familiarity）も、警告を読もまず、きわめて小さい確率のリスクを、人々がうという気持ちに関連があり、よく使ってなれてどのように認知しているのかについての実験的研いる製品ほど、警告が読まれないということであ究（第１実験）については、すでに中間報告で報る。しかし、こうした製品への慣れは、被害の知告した。この結果を要約すると、きわめて小さい

覚と比較すると、あまり重要ではないという。さ確率のリスクはたとえ図による説明がついたとしらに、被害が起こる確率よりも、その被害の重大ても、理解されにくいことが明らかになった。まさが、被害の知覚に影響することを明らかにしてた、客観的には冗漫な（意味のない）説明であっいる。つまり、被害が重大であると確信されればても、文章による説明がつくことが、被験者のわされるほど、その起こりやすさがどうであれ、警かりやすさの評価を高めることが明らかになった。

告はより読まれるようになるということである。

さて、本報告では、化粧品およびその警告に対警告の内容については、Laughery & Stanush

する女性の態度についての調査結果（第１調査）

９）（1989） が、内容の明確さ（explicitness）が、人々の結果を報告する。

の理解にどのような影響を及ぼすかについて検討

２ 第１調査している。その結果、明確な警告によって、被験者のリスク認知が高まることと、被害の程度の理

１. 目 的
本研究の目的は、以下の２点にまとめられる。

解が深まることが明らかになった。
10）

また、Lovvoll et al.（1994） も、大学生と一般①化粧品の説明と警告（注意書き）が、実際に人を対象とした調査によって、シートベルトの着どの程度読まれているのかを明らかにする。

用について、さまざまな警告文の効果を検討して②上記の行動が、被験者の化粧品や科学技術にいる。その結果、現在の（アメリカ合衆国で使わ対する態度によって影響されているかどうかれている）警告よりも、被害の内容をより明確にについて、検討する。

伝える方が有効であることを明らかにしている。
ただ、商品を売る側から見れば、「はっきりと

２. 方 法警告することで、消費者は購買を控えるのではな

被験者：成人女子 41 名（18 歳〜 41 歳）。

いか？」という懸念が生じるであろう。この問題

質問紙の構成：主たる質問項目は以下の通りであについて、Laughery & Stanush（1989）は、明確った。

な警告は、その商品の製造者の消費者に対する関

１）化粧品を買ったときに説明を読むかどうか、心の高さの反映とみなされることを明らかにして注意書き（警告）を読むかどうか、読まない場いる。この結果から Laughery らは、研究で対象

合はその理由についてあらかじめ用意した選択とした９つの製品のうち、一つの製品（排水管ク肢の中から選択させた。

リーナー）を除いて、明確な警告が買い控えにつ

２）科学技術に対する態度、化粧品の安全性に対する信念、化粧品会社に対する信頼、などの態

ながるとはいえないと結論づけている。

度をリッカートタイプの 7 点尺度上に回答させ同様に、購買意図と警告との関係を検討した
Silver et al.（1991）11）も、警告を読むことと、商た。

品の購買意図とは関連がないことを指摘している。

３）被験者自身の化粧に対しての日常的な行動や以上のような先行研究をもとに、本研究では、

信念をリッカートタイプの 7 点尺度上に回答さ− 109 −

せた。

科学技術や化粧品に対する信念を測定する質問

４）被験者自身の化粧品の保有数、化粧に使う時
間、金額（月額）。

項目についての回答を因子分析し、固有値１以上の４因子をバリマックス回転したところ、回転後の因子負荷行列として表３のような結果を得

３. 結 果た。第 1 因子は、「ほとんどの企業は、裏では不化粧品を買ったときに使い方の説明を読むかど

正な取引を行っている」、「化粧品の安全性につい

うかについて尋ねたところ、「新製品を買ったとて、化粧品会社は本当のことを公表していない」、

きだけ必ず読む」、「時々読む」、「ほとんどよまな「化粧品会社は消費者のことをあまり考えていない」という回答が多かった（表１）。
「新製品も使い」、「化粧品会社は不当に大きな利益を得ている」

い慣れている製品も買うたびに必ず読む」という回答や、「全然読まない」という回答は少なかった。

表１ 使い方の説明を読むかどうかについての回答「ほとんど読まない」または「全然読まない」と回答した被験者に、その理由を尋ねたところ、「読むのが面倒くさいから」という理由がもっとも多く、ついで「読んでも意味がわからないから」という理由が挙げられた。
化粧品を買ったときに、注意書き ( 警告）を読むかどうかについて尋ねたところ、「時々読む」という回答がもっとも多く、ついで「新製品を買っ

表２ 注意書き（警告）を読むかどうかについての回答

たときだけ必ず読む」という回答が多かった。
「新製品も使い慣れている製品も買うたびに必ず読む」という回答は少なかった（表２）。
「ほとんど読まない」または「全然読まない」と回答した被験者に、その理由を尋ねたところ、「読むのが面倒くさいから」、「読んでも意味がわからないから」、「よく知っている製品だから」という順に回答が多かった。
表３

バリマックス回転後の因子負荷量− 110 −

化粧品の表示に関する研究─ことに警告表現について─

という項目に負荷が高く、「化粧品会社に対する験者は、他の被験者に比べて、ほとんどの企業は信頼のなさ」の因子と命名した。第２因子は、「科

消費者のことをあまり考えていないと考えている

学技術の発達はわれわれの生活を豊かなものにしことになる。

てくれる」に負の負荷量が高く、「空き缶や牛乳パ

被験者自身の化粧に対しての日常的な行動や信ックのリサイクルを進めるべきだ」という項目に念についての回答を、因子分析し、固有値１以上

正の負荷量が高いので、「科学技術に対する否定の２因子をバリマックス回転したところ、表６の的な態度」の因子と命名した。第３因子は、「食料ような結果を得た。第１因子に正の負荷が高い項品はできるだけ添加物（合成着色料、保存料など）

目は、「化粧品は私の生活になくてはならないもの少ないものがよい」と「野菜はできるだけ農薬のである」と「化粧品の新製品がでたら試してみを使わない方がいい」という２項目に因子負荷量たい方である」であり、負の負荷が高い項目は「化が高いので、「化学品に対する否定的態度」の因子

粧品はできることならば使いたくない」であった。

と命名した。第４因子は、「ほとんどの企業は消これらの項目の意味内容から、第１因子を「化粧費者のことをあまり考えていない」という項目に品に対する好意的態度」の因子と命名した。ついのみ、因子負荷が高かった。

で、第２因子に負荷が高い項目をみると、「私はこれらの因子得点と、化粧品の説明書や注意書

できるだけ自然に近い成分の化粧品を使うようきを読むかどうかという行動との関係をみたとこにしている」、「使う化粧品のメーカーを決めていろ、説明書を読むかどうかによって、科学技術にる」、「肌は弱い方である」の３項目であり、いず対する否定的な態度の因子の得点に有意な差がみれも正の負荷であった。そこで、第２因子は、「化られた（F=3.13、df=3/37、p<.05、表 4）。LSD粧品に対する慎重な態度」の因子と命名した。

法によって、グループ間の差を多重比較したとこれらの因子得点と説明書や注意書きを読むか

ころ、「新製品も使い慣れている製品も買うたびどうかという行動との関連をみたところ、有意なに使い方の説明を必ず読む」と回答した被験者が、関連は見いだせなかった。

他の被験者に比べて、この因子の得点が有意に低かった。すなわち、このように回答した被験者は、

４. 考 察他の被験者に比べて、科学技術に対する態度がよ

化粧品の使い方の説明については、新製品も使り肯定的であるといえる。
また、第４因子に負荷している

表４

科学技術に対する否定的な態度の因子得点

項目は１項目だけであったが、注意書きを読むかどうかという行
動 に よ っ て、 こ の 因 子 の 得 点 に
有 意 な 差 が み ら れ た（F=3.37、
df=1/37、p<.05、表５）。LSD 法によって、グループ間の差を多重比較したところ、「新製品を買った

1）度数が少なかったため、グループを併合して分析した。
表５「ほとんどの企業は消費者のことを考えていない」（第 4 因子）の因子得点ときだけ注意書きを必ず読む」と回答した被験者が、他の被験者に比べて、この因子の得点が有意に高かった。すなわち、新製品を買ったときだけ注意書きを必ず読む被

1）度数が少なかったため、グループを併合して分析した。

− 111 −

表６

バリマックス回転後の因子負荷量

い慣れている製品も買うたびに必ず読むという被はみられなかったといえる。

験者は少なく、ほとんど読まない被験者も少なく

さらに、
本調査では被験者の日常の化粧行動（化なかった。注意書き（警告）については、使い方

粧品の保有数、化粧時間）と警告への関心についの説明よりも、読まれる割合が相対的に高かったて十分な分析が行えなかったが、これは、被験者が、それでも、十分に多くの被験者が注意書きを間で化粧行動に非常に大きなばらつきがあり、信読んでいるとはいえない。また、新製品を買っ頼できるほど十分なデータが得られなかったためたときでさえ、特に警告を読む人の割合が増えである。先に、リスク認知と警告を読むことにつるとはいえない。これらの結果は、Wogalter et

いての関連を述べたが、化粧行動とリスク認知とal.（1991）の製品に対する慣れよりも、むしろ被の関連も含め、今後さらにデータを蓄積して、こ害の知覚が警告を読もうとする気持ちに影響するの点について明らかにする必要があるといえる。

という指摘に合致すると考えられる。すなわち、本研究の被験者については、直接に化粧品につい引用文献てのリスク認知を調査していないが、それほど化

１）National Research Council Improving risk

粧品に対するリスク認知が高いとはいえず、そのcommunication. National Academy Press, 1989

ことが説明書や警告に対する認識の低さに影響し

２）ANSI American national standard for productsafety signs and labels: Z535. American Nationalていると推察される。

Standards Institute. 1991

また、科学技術に対する態度や化粧品会社に対する信頼などの態度は、説明書や警告を読むかど

３）林田学 PL 対応表示のノウハウ 中央経済社
1995

うかという行動にそれほど意味のある関係を持たなかった。化粧品を使うか使わないか、また使う

４）渡邊健二 香粧品の警告・表示等における PL
対策 Fragrance Journal, 23, 32-35. 1995

としてどのような化粧品を使うかというような行
動選択は、リスク・コミュニケーションでいうと５）吉川肇子 消費生活製品のリスク・コミュニ

ころの個人的選択の事態（personal choice settings,

ケーションー特に警告表示の効 についてー

National Research Council, 1989）である。科学技

日本リスク研究学会誌、第 9 巻 1 号、75 − 80.

術に対する態度や企業への信頼が、原子力発電所

1997

や化学プラント、環境問題などのような社会的選

６）Wogalter, M.S. Factors influencing the

択の事態（public debate settings）のリスク・コミ

effectiveness of warnings. Proceedings of Public
Graphics, 5.1-5.21. 1994

ュニケーションでは、影響が大きいことが多くの
12）

）
、本

７）杉森伸吉・安部明美・鬼武一夫・島井 哲志・

調査の結果からは、こうした化粧品の使用という

武井玲子・関沢純 化学品リスクの認知と行動

個人的選択事態においては、態度の行動への影響についての アンケート調査の解析 日本リス研究から知られているが（吉川、印刷中− 112 −

化粧品の表示に関する研究─ことに警告表現について─

ク研究学会第 10 回大会発表論文集、137-142.

& Terry, S. A. Risk Perception issues in the1996

use of motorized shoulder belt/manual lap belt

８）Wogalter, M.S., Brelsford, J.M., Desaulniers,systems. Proceedings of the Human Factors andD.R., & Laughery, K.R. Consumer product

Ergonomics Society 38th Annual Meeting, 456-

warnings: The role of hazard perception. Journal

460. 1994

of Safety Research, 22, 71-82. 199111）Silver, N. C., Leonard, D.C., Ponsi, K.A.,

９）Laughery, K.R. & Stanush, J.A. Effects of& Wogalter, M.S. Warnings and purchasewarning explicitness on product perceptions.

intentions for pest-control products. Forensic

Proceedings of the Human Factors andReports, 4, 17-33. 1991

Ergonomics Society 33rd Annual Meeting, 431-

12）吉川肇子 リスク・コミュニケーションにおけ435. 1989

る信頼 産業・組織心理学研究 印刷中10）Lovvoll, D.R., Laughery, K.R., Wogalter, M.S.,− 113 −

●
平成 9 年度記念講演 小 林
●

礼 次 郎

コスメトロジー研究振興財団
第８回表彰・贈呈式記念講演『化粧品技術の変遷』〜育毛剤・整髪料を事例に〜
コスメトロジー研究振興財団

理事長

場所
日時

はじめに

日本薬学会長井記念ホール
平成９年11 月13 日 ㈭女性）やギネスブックにインドのスワミ・バンダ

頭髪製品（育毛剤・整髪料）が日本でどのくら

ラサナジという人は 7m93cm であった等の記録

い売れているかといえば、昨年の出荷金額実績でがあるが、上記自然脱毛数と頭髪の本数から計算

ヘアトニックが 415 億円、整髪料が 1,090 億円ですると約３〜４年ですべての頭髪が生え変わるこある。フランスでは香水、オーデコロンが化粧品とになる。月当たり 1cm の成長速度とすれば 66

中の約３割の売り上げを占めるが、日本では国産

年生え変わらずに伸びたという信じられない数字の香水の売り上げは１％にも満たず、輸入品を考である。また、文学の世界での毛の長さの記述を慮したとしても大変少ない売り上げ比率である。

見てみると、源氏物語絵巻などでは宮廷の女性の逆に育毛剤（ヘアトニック）の売り上げが意外に

髪は背中より長く描かれており、大鏡の中の記述

大きいという印象がある。このような頭髪製品のに『御車に奉り給ひければ、わが御身は乗り給ひ

私なりの見方について述べてみたい。

けれど御ぐしのすそは、母屋の柱のもとにぞおわ
しける』との表現がある。つまりある高貴な女性

育毛剤が牛車に乗ったが、その髪の先はまだ門のところ

まず髪の毛の一般的特性について触れてみるとにあったとの描写である。更に『一筋をみちのく

次のような特性がある。人間の体全体には約 130紙におきたるに、いかにもすきま見え給はずとぞ

万本の毛が生えているが、その中で頭髪は約 10

申しつたへためる』との記述があるが、これは今2万本である。また、その密度は 150 本 /cm 、成でいえば半紙に前述の長い髪の毛を１本巻きなが長速度は１ヶ月に１cm、毛髪１本を抜く力は 60

ら重ならないように置いたら隙間なく黒くなって〜 80g、切るのに要する力は約 120g である。そしまったとのことであり、相当髪が長かったことして１日に約100本の毛が自然に抜けるといわれ、を窺わせるものである。

その太さは日本人で 0.7 〜 0.9mm、欧米人で 0.5

さて豊かな髪とは逆に、禿げの要因の諸説につ〜 0.7mm と日本人の方がやや太く、禿げの多い

いて見てみると、１）皮脂過多説、２）ホルモン説、

人種は白人、黒人、黄色人の順といわれている。

３）帽子説、４）遺伝説、５）頭皮緊張説などがあ髪の長さについては 2m15cm（1981 年、35 歳のげられるが、これらの要因説は 40 年前からいわ

Changing Cosmetic Technology-Hair Growth and Grooming Products-

れているものであり、新しい切り口への展開があまり進んでいないとの印象が強く、脱毛のメカニ

Reijirou Kobayashi

ズムの新たな研究進展に期待したいところである

The Cosmetology Research Foundation

が、これはさておき、上記要因説について私見も交えていま少し触れてみたい。
１）皮脂過多説は 1945 年に Agnes Savill が The− 117 −

Hair and the Scalp で唱えた説である。皮脂が過の中で根幹のものではないかと考えている訳であ多になると毛穴が詰まって脱毛に結びつくというる。しかし、一歩踏み込んで頭皮の緊張とは何かものであるが、眉の部分のように皮脂が多い部分と問われると、皮膚の組織が固くなったり、毛細でも脱毛しない事例への説明力が弱い。

血管の機能が鈍ったりする老化現象が、頭皮の緊

２）ホルモン説は 1940 年に Macanthy が Diag-

張につながっているのではと考えているだけであnosis and Disease of the Hair で唱えた説であり、り、医学的な説明はできないものの、経験的な見女性は禿げないが、男性は禿げる。また、女性で方として頭部の骨格と頭髪の形状の関係を映像的も月経閉止後は髭が生えるなどの男性的特徴が進に提示してみたい。立派な骨格で外人のような骨行する場合があること、逆に思春期以前に去勢し格の人は禿げやすく、肉付きがよく額をつまめそた男性は成人しても禿げにならず、皮脂分泌・ふうな人は禿げにくいと感じている。私はこれを骨けも少ないなどホルモンの影響を示唆したもので顔、肉顔と名づけて分類しているが、政治家で思ある。

い浮かべるのは、前者では西洋人的な骨格の桜内

３）帽子説は軍人に禿げが多いことがきっかけ

氏や中曽根氏であり、東洋的な骨格では宮沢氏でで唱えられた説であり、固くてキチッとした帽子ある。後者の事例としては安倍氏や河野洋平氏がをかぶっていたこととの因果関係に着目したものあげられるのではないだろうか。

であるが、軍人に関しては男性的な性格の人が多

さて、少し話題の角度を変えてみると、外国でく、前述のホルモン説も関連しているのではと感は禿げをあまり気にしないが、日本では大変気にじている。しかし、戦前は学生帽、中折れ帽、鳥するだけではなく、恐怖心すら感ずる人が多過ぎ打帽など男性のほとんどが帽子を着用しており、るのではないだろうか。この原因は外国人は 50

禿げも多かったと記憶している。この説はこの後歳を過ぎるとほとんどの人が禿げてくるのでマイ述べる頭皮緊張説と連動していると考えている。

ノリティの悲哀を感じなくてすむ。これに対して

４）遺伝説は禿げやすい形質が遺伝するという日本人が気にするのは 50 歳を過ぎても髪の毛のことで当事者にとっては悲劇的なものであるが、豊かな人が多いことと、カツラメーカーが髪の毛

これも頭皮緊張説と関連があるように思われる。

が薄いことのマイナス面を毎日宣伝することが影

つまり頭の形が親子でよく似ている人を見かける

響しているのではないかと思っている。しかし、が、骨格形状が近ければ、頭皮緊張度も近いこと最新号の『アエラ』には「禿げはセクシー」との記となる。

事が出ており、おやじの代名詞であり、女性にも

５）頭皮緊張説は今でも一番適合している説でてないと思われてきた禿げに対する認識が変わっあると考えているが、皮膚や結合組織が圧迫を受てきている。竹中直人などの影響で年齢を重ねてけて、血液やリンパ液の循環が悪くなり、栄養がも恋愛を楽しみたいという女性が増えてきた。イ

行き渡らなくなるという説である。男子の頭の形

タリアでは禿げの男性が好きだという女性が、嫌状は鉢が張っていて側頭部はよいが頭頂部に対しいという人の２倍もいるという内容である。日本

緊張して栄養が行きにくいため、この部分から禿もやっと禿げを気にしなくなる時代、禿げに関す

げてきやすいということで妥当性が高いと思われるグローバルスタンダードの時代になりつつあるる。

のかとも思われる。

以上の諸説をまとめてみると、遺伝説、帽子説、

さて、話題がそれてしまったが、本題に戻ってまたホルモン説も、ホルモンの関係で皮膚の弾力

育毛剤の話を続けてみたい。育毛剤に含まれる性に影響が出ると考えればすべて頭皮緊張説と結成分としては血管拡張剤、頭皮刺激剤、ホルモン

びついてくる。したがって頭皮緊張説が上記諸説

剤、抗炎症剤、殺菌剤、角質溶解剤、栄養補給と− 118 −

記念講演 「『化粧品技術の変遷』〜育毛剤・整髪料を事例に〜」

してのビタミン類、アミノ酸類、保湿剤などが各は髪を結うことであり、これに併せて整髪力の調種配合されている。昔は血行促進を意図したトウ

整が油の中で工夫された。これが明治になって西ガラシチンキなどを配合していたものだが最近の洋の文化の導入とともにポマードの出現を見た。

話題としては毛細胞へのエネルギー活性をねらっ

そして第二次大戦後の男性整髪料の流れはポマ

たペンタデカン酸グリセリドや毛髪の育毛、成長ード、ヘアリキッド、ヘアソリッド、泡状整髪料をねらったミノキシジルなどがあげられ、数多く（ムース）、ウォータージェルに代表される変遷をの製品が市場に送り出されている。日本が海外にしてくるが、この流れは自然志向と高分子化学の比べて育毛剤の売り上げが大きい要因を歴史的に発展に伴う機能性追求の流れといえるだろう。

見ると、戦後ヨウモトニック、加美乃素という会

若干、整髪料の各論を述べるならば、戦後坊主社がマーケット展開をうまく行って市場を作り出頭から髪を一斉に伸ばしヘアスタイルを整えたのし、その後各社が種々の切り口で追随展開してきがポマードである。今日では売り上げも大変少なたことが今日の市場形成に結びついていると思わくなっているが、柳屋ポマードは今でも売られてれる。このような種々の育毛剤は、細胞を使ったいる。このポマードは鉱物性と植物性があり、日in vitro 評価法、動物による評価法、ヒト実用試

本では整髪力の強い後者が売れ筋の主体であっ験（臨床評価法）を経て市場に出されている。ヒた。これはひまし油とモクロウを溶融混合し、冷トの評価法としては毛髪数を直接カウントする方

やして固めればできあがる簡単な成分組成である

法、洗髪時の抜け毛を測定する方法、実際の毛髪が、今から見ればとても快適な整髪料とはいえなを抜き取り、成長毛と休止期毛の比率を調べる方

いものであった。まず匂いが悪く、これをカバー法や、頭皮の血流量や毛髪の太さなどの外観観察するのに５％程度の香料を配合する必要があっをする方法などを組み合わせて効果測定がされてた。また、べとつくため枕を汚し、洗い落としもいる。今後の育毛剤の方向としては毛乳頭、毛包

困難なものであった。外国人が日本の国電に乗っ

上皮細胞機構の解明であり。これにまつわる細胞て感じる匂いがこのポマードの匂いであり、日本

成長因子、神経伝達物質、ホルモンの影響、遺伝

人が外国で日本を思い出す匂いもポマードの匂い子の解明が進むものと考えている。

であった、などの話が残るほど当時の主流整髪料

当財団の助成研究にも第２回の広島大学・吉里であった。そして油が 100％で水が入らない製剤

勝利先生や今回の大阪大学・板見 智先生の研究であり、儲けが薄いとの悩みも聞かれた整髪料でがありますが、今後ともこの関連の研究がより進ある。

展することを期待している次第です。

このポマードの次の製剤として登場したのがヘアリキッドであるが、これはポリオキシプロピレ

整髪料

ングリコールブチルエーテル系の高分子素材の発整髪料にはポマード、チック、ヘアリキッド、展による製剤化の典型事例であり、高分子素材をヘアムース、ウォータージェル等々の製剤がある

アルコール水溶液に溶かした液状整髪料である。

が、戦前の整髪料にはサネカヅラ、椿油、丁子油、㈱ライオンがブリストルマイヤーズ社から技術導

伽羅油などの歴史があり、一言でいえば油を髪に入して発売した「バイタリス」がこの系の先導商

塗った歴史である。日本では緑の黒髪という表現

品として有名であり、この整髪料はポマード、チがあるが、これは瑞々しさを表したもので艶を大ックの欠点を解消し、サッパリした仕上がりで洗事にしたことを示している。そしてこの艶を演出

髪も容易であることで整髪料の流れを固形から液するために油が使用されたといえる。また、相撲状に変えた画期的な製剤であった。

取りの丁髷に見られるように日本のヘアスタイル− 119 −

これと前後した時期にもう一つヘアソリッドという製剤がある。これは界面活性剤で油を可溶化

現在市場には整髪料として戦後開発されたほとしてゲル剤型としたもので、使用感はよかったが、んどの製剤があり、ヘアスタイル・好みに合わ

これに使用されたポリオキシエチレンオレイルア

せて整髪力・感触のバリエーションも多いが、戦ルコールリン酸エステル系の素材が当時の眼鏡の後の整髪料の売り上げの変遷を見てみるとポマー

つるや櫛を変形させたり、溶かすといったクレード・チックの時代から香油・ヘアクリームの時代

ムが発生したと記憶している。

を経て、液状整髪料の時代へと着実に変化してき

この次に話題を提供した整髪料がムースである

たことがわかる。この変化の背景には川上〜川下が、これは各種樹脂をアルコール水溶液に溶解

産業の見方、
つまり素材産業（鉄鋼、石油産業など）し、少量の噴射剤と混ぜてボンベから泡状の形態

からファインケミカルズ（香料、界面活性剤、染で出して使用する整髪料であり、ロレアル社が先料・顔料工業）そして化粧品、医薬品、食品のよ鞭をつけ樹脂組成の特許を押さえたため、各社は

うな消費財産業と消費者に近い産業への流れとしこれを避けながら製品化する工夫を行った製剤でて見ると、川下の産業は川上の産業の技術発展にある。この商品は髪をまとめる機能とこれを固定影響を受けて新しい製品が開発される側面があるする機能を併せ持ち、形状の目新しさもあって、が、整髪料はこの典型的事例ではないかと考えて1985 年に登場しヒット商品となった。

いる。

そして、これから主流になっていくのではない

育毛剤と整髪料の概略的で現象的な視点での話かと考えている製剤がウォータージェル系の整髪になりましたが、効能効果とメカニズムの解明・料で、樹脂をアルコール水溶液に溶かし、高分子

新たな新規素材の開発基盤の基礎研究が化粧品技ゲル化剤でジェル状にした製剤である。仕上がり術の発展に有意義であり、皆様方の研究のますまのドライ感に特徴があるが、保湿成分を加えて水すの発展を期待して止まない次第です。

に濡れたツヤ感を出すバリエーションも可能である。

− 120 −

コスメトロジー研究雑感（平成７年度）● コスメトロジーと生体材料 ●高原淳

化粧という言葉を電子百科事典（マイペディアとシフトしていった理由としては、生体は免疫反98・株式会社日立デジタル・平凡社）で引くと次応の起こらないような系では生体との親和性は極のような記述があった。

めて良く、一方では生体と人工材料の相互作用に

化粧とは顔や身体を整え飾るために人為的に行関する基礎的な研究が十分に確立されていなかっうものであるが、本来の動機は複雑であった。化たためだと筆者は考えた。今回、助成をいただい粧によって心霊が乗り移り、災難を避けるというた研究テーマは、もう一度基礎的現象を精密に解考えは古くから世界各地にあり、宗教、儀礼、呪析して、人工材料のバイオマテリアルとしての可術などと関連している。広義には入墨、抜歯、身能性を追求するためである。幸運にも、1990 年代

体切断、纏足（てんそく）などの文化人類学などに入って、新しい研究手法が大きく発展し、それでいう身体変工も含む。現在の化粧の概念は、身を利用する機会に恵まれた。実空間でのタンパク

体全体を美しく調和させるという美容の考え方に分子の形態が観察可能な分解能を有する走査プロ

なりつつある。

ーブ顕微鏡、分子間に働くナノニュートンオーダ

これらのような意味を考えるとバイオマテリア

ーの力を測定する表面力測定装置、単分子層レベ

ルの学問はまさにコスメトロジーの一分野と言う

ルでの吸着のその場評価が高い時間分解能で測定ことになる。バイオマテリアルの分野では 1970

可能な表面プラズモン共鳴（SPR）などがその例

年代後半から合成高分子をはじめとする人工材料である。筆者らもこれらの手法を相補的に用いての生体への応用に即した研究が世界的にブームと単分子膜表面と生体成分の相互作用に関わる基礎なったが、現在では組織工学に代表される生体組的な知見を得ることが出来た。今後はこれらの情織を材料としてどのように活用していくかという報を集積して、人工材料を活用した人工臓器が開研究にシフトしている。合成材料から生体組織へ発されることを夢見ている。

（九州大学）（平成７年度）● 水とコスメトロジー ●井上義夫

水が生命活動の維持に不可欠であることは誰で数が割かれている。電解質の性質は溶媒である水もよく知っている。しかし、生化学関係の教科書との相互作用を抜きにしては理解できない。しかには水の性質に関する記述は皆無に等しい。生体

し、1000 ページを越える分厚い物理化学の教科書

高分子系の高次構造や分子間相互作用における水でも、水の性質の説明は少ない。これは、水が身

素結合、疎水性相互作用の役割に関連して数行程

近なところに普遍的に存在し、良く知られた物質

度の水の性質の記述があれば良いほうである。物であり、あらためて取り上げるまでもないからで理化学の教科書では電解質の項にかなりのページ

あるという理由によるのではなく、水の理解が未− 123 −

だに不十分であるためであると思われる。

これらの生物は保護剤として多くの類似オリゴ糖

分子集合体としての水はそれを構成する分子がのなかからトレハロースを選択したか、なぜトレ小さいにもかかわらず融点、沸点、蒸発熱、比誘ハロースが生体系のストレス耐性獲得に寄与する電率などは大きく、固体である氷は液体である水かなどは未だに明確に説明できないが、水との関よりも軽い。あらためて見直すと水の示す性質はわりが重要であるように思われる。水分子の化学異常に感じられる。水の本質はもとより水が直接構造は星の数ほどある地球上の分子の中では最も的・間接的に関係する多くの自然現象の理解は今単純な部類に属する。また生体系の分子のなかで後の大きな研究課題として残されている。

はトレハロースの化学構造は単純明解である。こ水は生体内のあらゆる場所に存在し、生命活動の維持に必要な様々な特異的、あるいは選択的かのような単純な分子が未解明な多くの現象を示す
ことは不思議であり、魅力的でもある。

つ効率的な反応に媒体として、さらには反応物質

皮膚は多数の分子から構築される精緻な複合系として関与している。生体系でのほとんどの相互であり、この様な生体系と化粧料成分との相互作作用や反応は水の存在を考慮せずには説明できな用を調べることはコスメトロジー研究の困難ではいことが分かってきており、生体系での水の関わあるが重要な学際的課題であろう。最近、トレハりを積極的に取り上げた研究報告が年々増加してロースを保湿成分として含む化粧品が販売され、いる。私どもの研究室では生体反応・相互作用のテレビによりトレハロースという物質名がお茶の場としての水が反応・相互作用に及ぼす効果を実間でも耳に入るようになった。生体系におけるト

験と理論の双方から調べており、トレハロースを

レハロースの機能を調べている私どもには、トレ含むオリゴ糖の水和と機能の関係の究明は現在一

ハロースは保湿剤としての役割以上の効果を皮膚つの重要な研究課題となっている。

に与えているように思われてならない。この魅惑トレハロースを保護剤として極度の乾燥あるい的ともいえる水とトレハロースに関する研究は今は凍結状態に耐える生物が存在する。最近の研究

後のコスメトロジー発展に寄与できるものと確信によれば、トレハロースは乾燥、凍結以外のスト

して研究を進めている。

（東京工業大学）

レスに対しても生物を保護する機能を持つ。なぜ（平成８年度）● コスメトロジー雑感 ●広瀬茂久

私は富山県の黒部川下流の農村で育った。昭和って辺り一面が急に緑になっていく様は感動的で22 年（1947）の生まれゆえ，生活にゆとりのなかあった。あの時に感じた地球の息吹は今も忘れらった頃である。冬になると寒風が吹き荒れ，雪のれない。日陰に残っていた雪がなくなりかける頃

舞う日が多かった。手はあかぎれで水仕事をするになると，待っていたように草木が芽吹き，２〜としみたし，放課後にバレーボールをするとボー

３日のうちに野原を緑に染め上げるのである。そルをトスするごとにあかぎれから血がにじんだ。

して農作業が始まると鍬を持つ手にタコができ皆がそうであったから，これが当たり前で苦になた。れんげ草を絨毯代わりに寝そべったのも懐からなかった。冬が厳しければ厳しいほど，春にな

しい思い出である。燃えるような恋もした。夏休− 124 −

コスメトロジー研究雑感

みの午後は近所の友達を誘って毎日のように炎天と見つめて、来し方行く末に思いをはせている。

下の川原で過ごしたから肌は黒光りするほど真っ偶然出会った研究テーマを追っかけているうち黒になった。秋の稲刈りの時には，汗が噴き出すに，トラッピンという新型分子にたどり着き，コ

ように流れ，それが乾くと皮膚が塩を噴いたようスメトロジーの領域にも足を踏み入れることになになった。自慢できる話ではないが，昔の私の肌ったが，考えてみればコスメトロジーは健康な皮には自然と同じように四季（あかぎれ・タコ・黒膚の上になり立つゆえ，手を見て育った私にとっ光り・塩噴き）があったことになる。そのせいかては、故郷に帰ったようで，ぴったりなテーマな

今でもよく手を見て過ごす。今もワープロに向かのかもしれない。

（東京工業大学）

いながら、四季が消え華奢になった我が手をじっ（平成８年度）● コスメトロジーと食品成分 ●谷口正之

私は、これまでに各種ホモ乳酸菌、ビフィズスもりであるが、食品成分・素材として利用できる菌、プロピオン酸菌などの食品関連の微生物の培ものは、当然化粧品の原料になると考えられる。

養について研究を継続してきた。特に、ホローフ

このような考えから研究助成に応募した。乳酸菌ァイバーモジュールを組み込んだ膜濾過型バイオがつくるヒアルロン酸が化粧品素材として利用可

リアクターを構築し、ホモ乳酸菌およびビフィズ

能であることは知っていたが、多糖も利用できる

ス菌の高濃度培養について検討し、ヨーグルトやことは、これに関する発表を学会で聞いて知ったチーズをはじめとする多くの発酵乳製品用の乳酸次第である。残念ながら安い化粧品は比較的売れ

菌スターターを効率的に生産できることを報告しないそうであるから、同じ物質でも食品成分・素た。また、各種乳酸菌は食中毒原因菌や腐敗細菌材としてよりも化粧品素材として利用した方が、に対する抗菌物質（ジアセチル、有機酸、バクテ

付加価値が高いと考えられる。既にビタミンや抗リオシンなど）を生産することが知られているこ

酸化剤など多くの物質が化粧品の成分として利用とから、膜濾過型バイオリアクターを用いて高菌されていると思われるが、食品成分を化粧品の素

体濃度を維持しながらこれらの抗菌物質を効率的材として今後もっと積極的に利用できるのではなに生産できることを報告してきている。これらのいだろうか。化粧は外観を美しくするためだけで研究は、食品微生物を用いた有用生化学物質の製はなく、細胞を活き活きさせるために補給する栄

造技術および方法に関する内容であり、新規に化養と考えると、食品成分はおもに腸管を経由して合物を発見したり、合成するような０から１の研細胞に与えられる栄養であるが、化粧品成分は細究ではない。すなわち、既に有用であることがわ

胞に対する外からの栄養と考えられる。私は、毎かっている物質の効率的な大量生産に関する研究

日、お肌の活性化のために化粧品を愛用している。

であり、いわゆる１から 10 の研究に属する。

（新潟大学）

今後も、食品微生物に関する研究を継続するつ− 125 −

（平成８年度）● コスメトロジーと海洋生物 ●小林

ここ数年来、地球温暖化やオゾン層破壊などの淳一

剤の開発が望まれる。

問題が世界中で論議されている。オゾン層の破壊

興味深いことに一般に海洋生物は、その生体内は紫外線の増加に直接結びつき、われわれの生活に紫外線吸収物質を保持していることが知られてに影響を及ぼしつつある。これまで、美容の点かいる。おそらく、海洋生物は紫外線に対してかな

らシミ・ソバカスや日焼けといった肌の色素沈着

り鋭敏ではないかと考えられる。われわれ人間にに対する関心がもたれていたが、最近では、むしはそのような物質を産生する能力はなく、衣服でろ皮膚癌などの皮膚疾患の予防という点に目が向保護するか化粧品に頼るしか術はない。実際に海けられている。夏になると UV ケアと称する商品

洋生物から単離された化合物で、スキンケアクリが数多く目につくようになるが、単なる美容のたームに加えられているものがある。今回の研究は、めだけはなく、皮膚疾患に対する予防薬としても海洋生物からのメラニン合成阻害物質の探索であ考える必要がある。そういった点で、コスメトロ

るが、海には未知の部分が多く、それだけに新た

ジーは、化粧品だけではなく医薬とも密接にかかな化合物が得られることが大いに期待される。今わっている。したがって、より有効な紫外線吸収後も生物から有用な物質の探索を行う予定であ

物質や、チロシナーゼ阻害剤、メラニン合成阻害る。

（北海道大学）（平成６年度）● コスメトロジー雑感 ●橋本

公二

私が化粧のことを真剣に考えるようになったきとを考えると結婚式が近づくのが憂うつであった

っかけは、あるうら若い女性の患者である。彼女が、今はあざのことが気にならなくなり、結婚式

は結婚式を一ヶ月後に控え、首筋にある小さな赤が待ち遠しくて仕方がないとのことであった。皮

あざをとりたいと来院されたのである。レーザー

膚疾患の治療でこれほど短期間で変わった患者は治療が普及する以前の時代でもあり、日数を考え経験したことがなかったので、唖然としてしまって、結婚式には化粧で隠すことを勧めたのである。

た。

患者は半信半疑の 持ちで小生の紹介状を持ち診

それ以来化粧を如何に考えるか迷っていた

察室を出ていったのだが、何となく、重い足取りが、この疑問に明快な答えを与えてくれたのは、であった。ところが、数日後彼女が現れたときに

Kligman 博士である。Kligman 博士は高名な皮膚は 人かと見間違うほど明るく美しくなっていた科医であると同時に化粧に関する研究においてものである。事情を聞くと、化粧品会社の指導員か

世界最高の権威の一人であり、化粧品に関する分ら懇切丁寧に指導を受け、化粧をするとあざが野で彼の名を知ら 人はいないであろう。私は 10

完全に隠すことができるようになった。あざのこ

数年前にペンシルバニア大学に留学した時に初め− 126 −

コスメトロジー研究雑感て接する機会を得たが、既に 70 歳を超えていた世の女性にお願いしたい。化粧は崇高な作業でにもかかわらず、衰えを知ら 彼のパワーに圧倒さある。決して、軽々しい気持ちで化粧をしないでれたものである。その Kligman 博士が「Cosmetics

いただきたい。心を込めて化粧をし、自信を持ち、とは Hope selling である。
」と、ある講演会で述べ輝くばかりに美しくなっていただきたい。

たのである。この言葉を聞いたとき、永年抱いて（愛媛大学）

いた化粧に対する疑問が氷解する思いがした。

（平成７年度）● 本研究成 のコスメトロジーに及ぼす影響 ●谷岡明彦

いったい皮膚はどのような化合物から出来ておことに対してほとんど体系的な研究がなされていり、どのような構造をしているのだろうか。そのない。この問題を明らかにしない限りコスメトロ

中を多数の化合物を含んだ化粧品がどのように浸ジーの進展は見られないと考えた。しかしこの問透していくのであろうか。化粧品と皮膚との関係

題は以外にやっかいであることが研究を進めて行をモデル実験と計算機シュミレーションで行うこ

くうちに明らかになってきた。まず一番最初に悩とができたら、化粧品の安全性を正確に把握する

まされるのは空気中の炭酸ガスである。これは過上でも、新しい化粧品を開発する上でも非常に意去から言われ続けて来たことであるが、実際に弱味のあることに違いない。このようなことに対し電解質の問題を取り扱うと大きく立ちはだかる。

て二つのアプローチの仕方がある。一つは皮膚を単に pH を変えるだけなら問題がないが、電荷を全くのブラックボックスとして扱い、あらゆる種有した媒体中を移動するとき他の電解質の移動に類の化合物について実験を手あたり次第に行いそも影響を与える。このために出来るだけ炭酸ガスの中から一つの傾向を見いだし今後の予測に役立の影響を取り除いて実験を行うが、実際上は完全てる方法である。もう一つは皮膚を構成する要素に取り除くことが出来ない。

を把握し、化粧品の各成分がそれぞれの要素とど

本研究の最大の成果はアミノ酸の透過の所で明のような関係にあるかを見いだす方法である。前

らかにしたように、弱電解質の輸送において膜界者は物事を総合的に捉えることが出来、一方後者面でプロトン化と脱プロトン化が関与しており、は個々の機能を明らかにすることが出来る。どち

それ以外は従来のドナン平衡とネルンストープラ

らのアプローチも欠かすことは出来ないが、本研ンクの式を用いて説明することができる点であろ

究では後者の立場をとった。

う。これらを要約すると、化粧品や皮膚の複雑な構成要素を極めて単純化（1）皮膚の中へ化粧品が入る時は化粧品と皮膚としその中から自分の研究と密接に関係する要素をの親和性、両方が持つ電荷の程度、媒体中のプロ取り出すと、皮膚は電荷を有した化合物から出来トンの濃度により影響される。

ており化粧品には弱電解質が含まれているという（2）皮膚中の化粧品成分が移動する方向や程度はことである。ところが電荷を有した媒体中を強電

皮膚の電荷の程度、皮膚中や化粧品中の電解質濃解質が移動する問題は理論的にも実験的にも過去度や移動する方向によって影響を受ける。

に多数の研究がみられるが、弱電解質が移動するとなる。以上の結果は他の研究分野にも大きな影− 127 −

響を与えるものと考えられ、コスメトロジーが更連をつけるのが難しいが、欧米の非常にレベルのに発展する基盤をなすものと期待される。

高い論文誌が評価をしてくれたことを記しておき

このような研究は大変地味で実際の問題との関たい。

（東京工業大学）（平成７年度）● コスメトロジーと免疫薬理 ●永井博弌

私の専門分野は免疫薬理学という免疫学と薬理

レルギー遺伝子の研究が世界各国で行われていま

学のハイブリッドの学問です。特に私はアレルギす。まだ完全に同定されたわけではありませんが、

ーや自己免疫疾患等の免疫機構が行き過ぎて、生少しずつ解ってきています。いずれにしても、アじる生体にとって不利な反応の発症機序とその予レルギーは免疫という生体防御の機構が行き過ぎ

防および治療薬について研究しています。今回はて起きる反応であり、まさに「過ぎたるは猶およ

化粧品にもちいられるような小分子の物質によるばざるがごとし」と言った格言が当てはまる現象

アレルギー性皮膚炎について、その予防法と発症です。先日のコスメトロジーの会でこれによく似機序についての研究に研究補助金をいただきましたお話をお聞きしました。化粧の程度は段階によた。皮膚は生体の中で最も面積の広い免疫臓器でってノーメイク、ナチュラルメイク、ヘビーメイあると考えられます。皮膚に異物が接触しますと、

クの 3 段階に分けられ、これが行き過ぎると、お皮膚はただちに異物排除の機構を働かせ、非特異面になるとお聞きしました。アレルギーも自分を的機構と同時に特異的な免疫機構を活性化させま守らなければいけないという自己意識が強すぎるす。この、免疫機構が行き過ぎるとアレルギー反とかえって、逆の効果になってしまいます。化粧応として現れます。すなわちアレルギー反応によも自己を主張するためにどんどんエスカレートしってその部分が赤く腫れたり、痒くなって掻いたていき、ついには自分のもの以外に理想を求めるりします。このような赤く腫れたり、痒くなってという異常な事態になるようです。若干違うのは、その部分を掻くことはいずれも、生体防御反応で化粧の場合はうまく行けば、自己主張が効果的にあります。赤く腫れることによって、その部分に発揮されるといった点です。アレルギーの場合も血漿浸出液を出し、ある一定以上外部からの異物

何に気をつければ免疫反応を効果的に発揮させ、の侵入を防ぐ役目を致します。また、痒みは皮膚アレルギーにならないで済むかと言ったことが解を掻くことによって、その部分をかきとり、新し

れば、予防につながるのでは無いかと考えていまい組織に置き換えようとする反応であると考えらす。いずれにしても心の持ち方のコントロールはれます。では、なぜ同じ条件で外部から異物が入難しいけれど、コスメトロジーでも免疫薬理でもってもアレルギーが起きるヒトと起きないヒトが重要な課題であると思っています。

いるのでしょう。この点は大変興味のある所です。
この点についても、現在、色々な研究が進み、ア− 128 −

（岐阜薬科大学）

コスメトロジー研究雑感（平成８年度）● 酸化的ストレスとコスメトロジー ●中川

靖一

皮膚は絶えず酸素に接し、紫外線に曝露されて酸化物質の開発に役立つなど、極端な言い方をすいるところから、活性酸素による脂質過酸化物のれば、酸化的ストレスの研究はコスメトロジーの生成など光酸化反応が惹起されやすい組織といえ研究でもあることになる。

る。特に、日焼けなどの中波長紫外線による光線本研究は抗酸化酵素の性状解析について検討を

皮膚障害を防ぐことはコスメトロジーにおいて重行ったが、抗酸化酵素としてスーパーオキシドデ

要な課題である。また、皮膚の衰えは脂質過酸化ィスムターゼ（SOD）が医薬品として使用されて物の蓄積とともに促進されることから、活性酸素

おり、一定の評価を得ている。グルタチオンペル

による組織障害から皮膚を守ることは、皮膚を健

オキシダーゼは SOD の活性酸素消去には不可欠

康に美しく保つことであり、コスメトロジーの大の細胞内抗酸化酵素であることから、SOD とグ

きな使命となると考えられる。

ルタチオンペルオキシダーゼが共存した医薬品がコスメトロジーを生化学、分子生物学的にアプ開発されれば、より高い効果が望める。グルタチ

ローチする場合、過酸化脂質、抗酸化物質、抗酸

オンペルオキシダーゼと同様な活性を持つ化学合化酵素など酸化的ストレスに係わる項目はいずれ成品であるエブセレンも開発された。現在まで、も重要な研究課題である。すなわち、過酸化脂質

活性酸素調節剤の開発では天然よりの活性酸素のの生成機構や抗酸化酵素の発現調節機構を明らか

スカベンジャーの探索、また抗酸化化合物の化学にすることは活性酸素産生調節作用を有する薬剤合成が主流であるが、近い将来、抗酸化酵素を医の開発に有用であり、また、皮膚組織においての薬品として適用される時代が来ると思われる。

抗酸化物質の役割を知ることは皮膚に適合した抗（北里大学）（平成８年度）● スメトロジーと皮膚科学 ●相場

節也

この度は、コスメトロジー財団奨学金を授与いい理解無くしては発展の期待できない分野である

ただき有難うございました。これを機会にコスメ

点は相違ありません。実際、皮膚科学会では、基トロジーと私が専攻する皮膚科学との関係を考え

礎的研究面での化粧品会社の研究員の方たちの目てみました。両者は、丁度、コインの表と裏の関

覚ましい活躍が目立ちます。また、私たちの研究係にあるように思われます。コスメトロジーは皮室も同様ですが、皮膚科の研究室と化粧品会社の

膚をいかに美しく見せるかを様々な角度、手法を研究室との共同研究も盛んです。最近は、社会的用いて研究する分野であり、一方、皮膚科学は異にも産学一体の研究体制の必要性が唱えられてお常をきたした皮膚をどのようにしてもとの正常なり、今後ますます、こう言った傾向には拍車がか状態にもどすかを研究する分野です。しかし、いかると思われます。さて、私の現在の研究テーマ

ずれにしても、皮膚の形態、機能についての正しは、化学物質が樹状細胞を含む皮膚構成細胞に対− 129 −

しどの様な影響をおよぼすのかと言う問題です。

物質に対し特異的に反応すること、いわば、セン

皮膚は、言うまでもなく生体と外界との境界をサーとしての機能を有することを明らかにしまし

形成する臓器で、常に種々の化学物質に曝されてた。今後も、化学物質の生体組織、細胞への影響います。また、人は、化粧品として、必ずしも生は、コスメトロジー、皮膚科学を問わず発展させ命活動に必要の無い多くの化学物質を皮膚に塗布ていかなければいけない分野と考えています。

します。今回、私は、樹状細胞が、ある種の化学（東北大学）（平成８年度）● 本研究成 のコスメトロジーに及ぼす影響
ないしコスメトロジーの観点から見た本研究の展開 ●窪田泰夫

皮膚科臨床に携わる者の一人として感ずることが多い。また皮膚科臨床上も成人皮膚における色は近年、皮膚科において毛髪関連および色素関連

素再生は毛包を中心にみられる。よってこの毛乳の領域での研究が注目される割合が増してきたこ

頭細胞由来の因子を同定し、制御することでヒトとである。本研究の当初の計画ではヒト毛包由来

皮膚の色素沈着や脱失を主体とする各種疾患の病の培養毛乳頭細胞を用いて免疫不全マウスに作製

態解明や移植皮膚における色調の調整などの治療した再構成皮膚に新たな毛包を誘導し、その関連

面にも役立つものと思われる。本研究内容は毛髪因子を解析する予定であった。その結果、残念な研究から色素研究へ少しスライドされた形とはながら現在のわれわれの実験系では毛包の誘導はでってしまったものの、両研究領域はもっと密な関きなかった。しかし興味深いことにヒト毛包由来連をもってよいのではないかと考えられた。脱毛の培養毛乳頭細胞を用いて免疫不全マウスに作製と色素沈着（すなわち「育毛、養毛」と「美白」）はした再構成皮膚には色素細胞の著明な浸潤像が認

皮膚科領域あるいはコスメトロジーの分野でまだめられた。これは生体での毛包における毛乳頭細まだ解決すべき大きなテーマと言えよう。

胞と色素細胞の相互作用を示唆する所見であり、また in vivo と in vitro の実験の橋渡し的な役目

両細胞間のネットワークを司る諸因子（サイトカ

のみならず全く新しい実験モデルの可能性を有す

イン、細胞成長因子？）の解明につながるものとるこの免疫不全マウスのシステムはコスメトロジ思われた。成人皮膚では毛包上皮内に色素細胞がー研究の場においても今後もっと幅広く応用され密に局在しているが、その機能や動態は不明な点

るものと期待される。 （聖マリアンナ医科大学）− 130 −

コスメトロジー研究雑感（平成８年度）● コスメトロジー雑感 ●山蔭明生

東京の下町で育った私は、幼い頃、近所の銭湯いよう勧めてきた。しかし、先日皮脂に関する講へ行くのが楽しみだった。母や姉は大きな洗面器演を聞いていて、皮脂の分泌は男性では 30 〜 50に石鹸、シャンプー、リンス、タオル、バスタオ

歳にピークがあるのに対し、女性では 10 〜 20 歳

ル、着替えなどを入れ、それを風呂敷に包んでもであるというデータを示され、女性は 20 歳以降って行くのが常であったが、父と私は石鹸箱を手

皮脂含量が下り坂となり、水分保持機能も低下すに、タオルを肩にブラブラ歩いて行った。その後るのだから、しっかり化粧する必要があるのだと成人して内風呂のあるアパート暮らしをするよう了解した。

になってからも、三つ子の魂百までとか、固形石話は変わって、10 年ほど前のことになるが、割鹸で全身を洗っている。たまにもらい物のボディ

烹料理屋で私も大ファンの女優とたまたま同席す

ソープと称する液状の石鹸を風呂場で使うと、ヌる機会があった。40 歳前後であった彼女の大きルヌルして気持ちが悪い。“ツバキ油に５本櫛” なな瞳・鼻筋の通った高い鼻・すっきりした頬からどとバンカラを気取るわけではないが、シャンプ

顎の線・均整のとれた肢体……どれをとっても大ーやリンス、整髪料の類も床屋以外ではほとんど女優の名に恥じない美しさであったが、どういう使わない（床屋では気持ちよく眠っているうちに訳か “すっぴん” で、長い間ドーランを塗って映画アレコレ付けてくれる）。男性化粧品を買う若者

やテレビの強い照明に照らされ続けた跡をさらしの気が知れない。大学の職員や病院の看護婦さんて、夏季合宿明けのテニス部の学生のように顔の達についても、若いのに厚化粧している人はどう

肌は黒光りしていた。銀幕やブラウン管での彼女も苦手だ。

はどれほど化粧をしているのだろう。

若い女性の患者さんにもこれまで、UV カット（獨協医科大学）の目的のものを除いて、できるだけお化粧をしな（平成７年度）● コスメトロジー雑感 ●吉川肇子

私は近年、リスクをどのように伝えるかという的選択の問題とに分けられています。化粧品を使

いわゆるリスク・コミュニケーションの分野を研うかどうか、使うとしてどのような化粧品を選ぶ究しております。リスク・コミュニケーションにかというのは、後者の場合の問題に含められます

は、原子力発電所や化学プラントの設置のようにが、その場合に、どのような形でリスクがあるこ

社会的論争のあるような問題と、喫煙やシートベとを伝えるのかという技術的な問題については、ルトの着用のように、リスク回避行動をとるかど心理学が取り組むべき重要な問題と考え、研究助

うかは個人の判断にゆだねられているような個人成をいただいたのをきっかけに実験と調査を実施− 131 −

しました。

な問題を発見することもでき、この研究を端緒と実際に研究を進めてみますと、技術的にクリア

して、今後一層この分野の研究を進めることがでしなければならない問題が予想以上に多く、デー

きるように思います。助成をいただいただけの十タとして明確な結果を得ることができませんでし

分な成果をあげられたか心許なく思っております

た。また、時間内に分析しきれないデータが残っが、むしろこれから、よりよい研究成果をあげるておりますので、これをさらに分析していきたい

べく努力を続けていく契機としたいと考えます。

と考えております。

助成に深く感謝いたします。

この助成をいただいたことで、新たにさまざま− 132 −

（慶應義塾大学）

●
事業報告書（平成 9 年度）
役 員
研究助成課題一覧●

事 業 報 告 書（自平成９年４月１日

Ⅰ.

至平成 10 年３月 31 日）

平成９年度（第８回）事業

昨年に引き続き以下のような事業を計画し、実行しました。
自然科学や社会科学の各分野にわたり、ひろくかかわりをもつ化粧品を総合的に体系化することを目的として①化粧品学の調査・研究に関して顕著な成績をあげた研究者や機関に対して功労金をもってこれを表彰する。
（１件あたり 100 万円）②皮膚の生理機能や老化機構の解明、美容に役立つ素材の研究等化粧品学に関連した生命科学、その他の分野の調査・研究に対する助成を行う。
（１件あたり 200 万円、100 万円、又は 50 万円）③化粧品学の調査・研究にたずさわる研究者の海外派遣や招聘に対して資金援助を行う。（１件あたり 50 万円まで）

Ⅱ.

募集及び選考の経過

本年度の各事業につきましては平成９年５月６日より募集を開始し同９年７月 10日をもって締切りました。
研究助成事業は本年度も一般公募を原則とし全国 206 ヶ所の大学・病院・研究機関
等にダイレクトメールで推薦書を送付するほか、関係学術雑誌８誌にも広告し、その結果多数の応募をいただきました。応募者の研究分野が多岐にわたった為、選考委員会の中に３分科会を設け、それぞれにおいて予備選考を行い平成９年９月 24 日 ˆπ

ルビーホールにおいて本選考委員会を開催して受賞候補者を決定し、11 月 13 日の理事会及び評議員会の議決を経て、受賞者を最終決定しました。

Ⅲ.

第８回功労賞・研究助成等の結果

以下のとおり合計 22 件が決定され研究助成金 2,600 万円、国際交流援助金 150 万円が交付されました。
功労表彰（小林 孝三郎賞）

０件

研究助成

19 件

国際交流援助※ ３件※国際交流援助については 11 月以降２件の追加がなされて合計３件になった。
− 135 −

Ⅳ.

会議等

理事会
第１回通常理事会

開催日時
開催場所

平成９年６月 18 日 ˆπ

午後５時

東京都千代田区大手町１−５−１ 大手町ファーストスクエア 23 階 宴「銀河」

理事総数

13 名

本人出席

９名

監事

２名

出席

２名

委任状出席

４名（賛成）

審議事項
第一号議案

事業報告ならびに収支決算報告について配付された資料に基づき、平成８年度の事業内容が事務局より詳細に説明され、続いて収支計算、財産内容などが詳しく報告された。次いで小田倉監事より、上記内容が適正適法である旨の監査報告がなされた。
慎重審議の結果、本議案は書面表決者を含め全員一致で可決承認された。
報告事項
平成９年度の研究助成課題の公募について
研究助成事業の方式について、昨年との相違点を主とした詳細な説明がなされ、理事会全員でその趣旨を認めた。
その他
本年８月中にコスメトロジー研究報告第５号（収載論文 13 編）が発刊される予定であること、また助成金贈呈式を平成９年 11 月 13 日に開催予定であること及び記念講演の演者候補の報告がされ、いずれも了承された。
評議員会
第１回通常評議員会

開催日時・場所は理事会に同じ。
評議員総数

14 名

本人出席

８名

委任状出席

上記理事会の決議を全員一致で確認した。

− 136 −

６名（賛成）

第２回通常理事会

開催日時
開催場所

平成９年 11 月 13 日 ˆ∫

午後２時 30 分

東京都渋谷区渋谷２− 12 − 15

日本薬学会長井記念館会議室

理事総数

13 名

本人出席

11 名

監事

２名

出席

２名

委任状出席

２名（賛成）

審議事項
第一号議案

平成９年度（第８回）研究助成者等を承認する件配付された資料に基づき、事務局より平成９年度の研究助成者及び海外交流援助の候補者の提案及び選定の経緯に関する説明がなされた。
慎重審議の結果、本議案は書面表決者を含め全員一致で可決承認された。
第二号議案

平成 10 年度事業計画及び予算案を承認する件配付された資料に基づき、平成 10 年度の事業計画及び予算案について
事務局より詳細な説明がなされた。
慎重審議の結果、本議案は書面表決者を含め全員一致で原案通り可決承
認された。
第三号議案

選考委員を選任する件

事務局より前任者中村選考委員の後任として、植村展生氏を選考委員に推薦する提案がされた。
本議案は書面表決者を含め全員一致で承認された。
報告事項
平成８年度助成研究の中止申請の件
平成８年度の助成研究テーマ「光老化におけるフリーラジカルの関与」−長期紫外線反復照射による皮膚抗酸化能の変化−に関して主研究者である金沢大学医学部の安井裕子氏より研究中止及び助成金返却の申請がなされ、理事長承認の上でこれを受理した旨、申請事由の説明と併せて報告がされた。
本報告は全員一致で了解された。
第２回通常評議員会

開催日時・場所は理事会に同じ。
評議員総数 14 名

本人出席 ７名

委任状出席 ６名（賛成） 欠席 １名

上記理事会の決議を全員一致で確認した。
− 137 −

選考委員会
分科会Ⅰ

開催日時

平成９年９月３日（水） 午後６時 30 分

開催場所

東京都千代田区大手町１−５−１

審議事項

素材、物性に関する分野の選考

トップオブザスクエア会議室

分科会Ⅱ

開催日時

平成９年９月４日（木） 午後６時

開催場所

東京都千代田区大手町１−５−１

審議事項

生体作用、安全性に関する分野の選考

トップオブザスクエア会議室

分科会Ⅲ

開催日時

平成９年９月 19 日（金） 午後７時 30 分

開催場所

東京都千代田区大手町１−５−１

審議事項

精神、文化に関する分野の選考

トップオブザスクエア会議室

本選考委員会

開催日時

平成９年９月 24 日（水） 午後５時 30 分

開催場所

東京都千代田区丸の内１−９−１

審議事項

各分科会の結果を総合的に判断して助成候補者が決定された。

ルビーホール会議室

表彰贈呈式

開催日時

平成９年 11 月 13 日（木） 午後４時

開催場所

東京都渋谷区渋谷２− 12 − 15

日本薬学会長井記念ホール
以− 138 −

上

第８回 研究助成等を受けられたかたがた（JA，JB：一般研究助成− 139 −

H：国際交流援助）

（敬称略− 140 −受付順）

平成 10 年３月 31 日現在

役

員

理事長

小林礼次郎

㈱コーセー

代表取締役会長

専務理事

宮澤

香

理

事

有本

亨

理

事

磯邊

律男

理

事

宇佐美昭次

早稲田大学理工学部

理

事

内山

充

㈶日本薬剤師研修センター

理

事

小林

保清

㈱コーセー

理

事

菅原

正文

高砂香料工業㈱代表取締役会長

理

事

髙橋

久

帝京大学医学部

教授

理

事

高山冨士雄

安田信託銀行㈱

前相談役

理

事

西川

武二

慶應義塾大学医学部

理

事

花輪

隆昭

社会福祉法人 福利厚生センター

理

事

廣部

雅昭

東京大学

監

事

小田倉正典

公認会計士

監

事

黒田

節哉

弁護士

評議員

秋吉

信夫

㈱コーセー

評議員

上野

芳夫

東京理科大学薬学部

評議員

緒方

宏泰

明治薬科大学

教授

評議員

北原

文雄

東京理科大学

名誉教授

評議員

近藤

保

東京理科大学

名誉教授

評議員

長野

哲雄

東京大学薬学部

評議員

西岡

清

東京医科歯科大学医学部

評議員

野呂

影勇

早稲田大学人間科学部

評議員

福内

靖男

慶應義塾大学医学部

評議員

溝口

昌子

聖マリアンナ医科大学

評議員

宮崎

榮三

東京工業大学

評議員

山崎

幹夫

千葉大学名誉教授

評議員

渡辺

徹

日本化粧品工業連合会
㈱博報堂

専務理事

代表取締役会長
教授
理事長

代表取締役社長

教授

名誉教授

常務取締役

日本薬剤師会

教授

教授
教授
教授
教授
教授

名誉教授
専務理事

− 141 −

理事長

研究助成課題一覧

１

素材、物性に関する分野− 142 −

− 143 −− 144 −− 145 −研究助成課題一覧

２

生体作用、安全性に関する分野− 146 −

− 147 −− 148 −− 149 −− 150 −− 151 −− 152 −研究助成課題一覧

３

精神、文化に関する分野− 153 −

− 154 −コスメトロジー研究報告

Vol. 6 / ’ 98

非売品1998 年 9 月 1 日発行

編集責任者
発
行

宮澤 香
財団法人

コスメトロジー研究振興財団〒104 − 0061
電 話

製

作

東京都中央区銀座三丁目 5 番 12 号

東京 03（3564）6731

エイエム企画〒170 − 0013 東京都豊島区東池袋一丁目 33 番７号
電 話 東京 03（3590）5375

印
©1998

刷

宮崎印刷
不許複製

禁無断転載