ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析

東北大学大学院薬学研究科生活習慣病治療薬学分野

平 澤

典 保

Nickel (Ni) is contained in various alloys, which are widely used in accessories and biomaterials, and causes
inflammation and allergy. However, little is known about the regulation of Ni release from alloys in vivo. In this study, weestablished a novel in vivo model in which the release of Ni from metal wire could be analyzed quantitatively. A Ni wire
(99.9 %; ø 0.8 mm × 5 mm) was implanted subcutaneously in the dorsum of mice. Ni ions in the skin tissue (diameter : 14mm) on the wire were extracted and quantified by the fluorometry using Newport Green. The content of Ni ion in the tissue
was significantly increased from 8 h. When lipopolysaccharide (LPS, 1 µg) was injected into the same site immediately after
the implantation of Ni wire, the content of Ni ions in the tissue was significantly increased. These results suggest that therelease of Ni from metal wires in vivo was enhanced by LPS-induced inflammation. The findings were confirmed by in vitro
5
model using a macrophage-like cell line RAW264. RAW 264 cells (1 ×10 cells/mL, 0.2 mL) were seeded on a Ni plate (5mm square) and incubated for 24 h in the medium containing LPS (0.1, 0.3 and 1.0 µg/mL). LPS enhanced the release of Ni
by RAW 264 cells in a concentration-dependent manner. Interestingly, the enhancement was observed only when the cells
were attached with Ni plate. The inhibitor of lysosome chloroquine (10 µM) and the V-ATPase inhibitor bafilomycin A1 (1++nM) but not the Na /H exchanger (NHE) inhibitor amiloride inhibited partially the elution of Ni by unstimulated RAW264
cells. In contrast, chloroquine, bafilomycin A1 and amiloride potently inhibited that induced by the LPS-stimulated RAW264
cells. These results suggested that LPS-stimulated RAW264 cells caused the release of Ni ions via the release of lysosome
and via the activation of V-ATPase and NHE. In conclusion, we established the novel models for the release of Ni frommetals in vivo and in vitro and demonstrated that the activation of inflammatory cells apparently enhanced the release of Ni.

１．緒ルが溶出される分子機構や炎症が生じて金属周囲組織の環

言

境が変化した場合のニッケル溶出の変化の定量的な解析は肌に直接接する装飾品に含まれるニッケルは、汗で溶出されやすくアレルギーや炎症を誘発しやすい金属である。

これまでなされていない。その最も大きな理由は優れた実験モデルがなかった点にある。

ひとたび金属アレルギーを発症すると、ニッケル以外の金申請者はニッケル線をマウス背部皮下に埋稙させる新規属にも過敏になることが知られており、種々の装飾品によモデルを開発し 、ニッケルによる炎症反応の誘発とニッ

り発赤、かゆみなどが生じて、装飾品を身につけることがケルの溶出を定量的に解析することを可能にした。本研究制限される。また金属イオンにより強い接触皮膚炎を起こ

は、本モデルを用いて、ニッケル線からのニッケル溶出が、し、色素沈着を誘発する場合もあり、コスメトロジーの観その周囲で感染を模倣した炎症を誘発したときに増大する点からも大きな問題となっている。ニッケルが金属アレル

ことを示した。また、炎症細胞を用いた細胞培養系でのニギーを最も引き起こしやすい金属であることは周知の事実

ッケルイオン溶出評価系も確立し、ニッケル溶出の分子機であり、そのアレルギー誘発機構については多くの報告が序について解析した。

なされてきた1, 2）

４）。従来、ニッケルは組織蛋白に結合しハ

２．実験方法

プテンとなると考えられてきたが、最近ニッケルは直接リ
ンパ球上の MHC 複合体に結合して、細胞を活性化するこ
３）

４）

2 - 1．ニッケル線誘発炎症モデルの作製とが明らかにされ 、組織蛋白との結合による抗原の形成

Diethyl ether 麻酔下、マウス（22−25g）の背部皮下には必ずしも必要ではないことも示唆された。一方、金属ア

移植針（13 G）を用いて、UV 照射滅菌処理したニッケル線

レルギーの初期段階はニッケルを含む装飾品や金属医用材（99 . 98％ ニッケル , ニラコ）
（φ0.8 mm× ５mm）を埋稙料からのニッケルイオンの溶出である。しかしこのニッケした。その直後に、lipopolysaccharide（LPS, ５µg/mL）
0 .2 mL をニッケル線近傍に皮下投与した。対照群として

Elution of Ni ions from materials andenhancement by inflammation

saline を 0 . 2 ml 皮下投与した。

2 - 2．組織中のニッケル量の測定

Noriyasu Hirasawa
Laboratory of Pharmacotherapy of Lifestyle Related Diseases Graduate Schoolof Pharmaceutical Sciences, Tohoku
University

一定時間後に、エーテル麻酔下マウスを脱血死させ、ニッケル線を中心に、皮打ち抜き用パンチ（内径 1.4 cm）で皮膚（表皮、真皮及び皮下組織）を打ち抜き、ニッケル− 71 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

線 を 除 い た 後、 皮 膚 を Eppendorf tube（1.5mL）に 入 れ

2 - 5．統計処理

た。 そ の 後、Milli Q 水 500µL 加 え て、 ミ ン ス し、 ４ ℃
で 24 時間ニッケルイオンを抽出した。この上清を希釈し、棄却検定は Tompson’s F-test により行った。有意差検定は Student-Newman-Keuls test により行った。

Newport Green DCF dipotassium salt を最終濃度 １µM

３.

となるように加え、分光蛍光光度計 F-2000（日立ハイテク）

結果

3 - 1．ニッケル線誘発炎症を用いて Ex 505nm/Em535nm の蛍光を測定した。

マウス背部皮下にニッケル線を埋稙し、ニッケル線によ

2 - 3．マウスマクロファージ様細胞株 RAW-264 細胞によるニッケル溶出の測定

り生じる炎症を観察した。８時間後ではニッケル線周囲の組織において、弱いながらも発赤が認められ、24 時間以

ニッケル板（99.98％ , 厚さ 0.05 mm, ニラコ；5×5 mm）

後においては出血を伴う強い炎症が認められた（Fig. 1A）。

を 96 well plate の１well につき１枚ずつ設置し、RAW264

また、浮腫のパラメータとして皮膚重量を測定した結果、

5

細 胞（1.0 － 5.0×10 cells/ml 10 ％（v/v）FBS-EMEM）を

８時間後の皮膚重量は 100 mg 前後であり有意な増加は認

200µl ずつ播種し、５％ CO2 存在下 37℃で一定時間培養

められなかったが、24 時間後においては 170 － 180 mg、72

した。ニッケル板非接着群は 96-well plate にあらかじめ

時間後においては 200－220 mg となり、有意な増加が認め

RAW264 細胞を播種し、２時間後にニッケル板を細胞とられた（Fig. 1B）。

接触しないように斜めに設置した。

3 - 2．ニッケル線表面の観察
2 - 4．薬物処理

埋稙して 72 時間後のニッケル線の表面を走査型電子顕５）細 胞 を 播 種 し た ２ 時 間 後、chloroquine （ 最 終 濃微鏡を用いて観察した。未処置のニッケル線の表面と比較

度 10µM）、amiloride （ 最 終 濃 度 100µM）、あるいはして埋稙後のニッケル線の表面は腐食が確認され、ニッケ

bafilomycin A1 （最終濃度 １nM）を加え１時間前処理しルが溶出していることが示唆された（Fig. 2）。

６）

７）た後、LPS（最終濃度１µg/mL）で一定時間刺激した。

Figure 1. Ni wire-induced inflammation(A) A Ni wire was implanted subcutaneously in the dorsum of eachmouse. The mice were sacrificed 8, 24 and 72 h after the
implantation, and the skin around the wire was photographed.
(B) The skin tissue (diameter: 14 mm) on the wire was excised andthe weight of tissue was measured. The values are the means of four
mice with S.E.M. shown by vertical bars. Statistical significance;**P<0.01 vs. the 0 h group.

− 72 −

Figure 2. Erosion of the surface of Ni wire
The surfaces of untreated and implanted Ni wire
(72 h) were analyzed by scanning electron
microscope.

ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析

3 - 3．Lipopolysaccharide によるニッケル線周囲組織
へのニッケル溶出量の増大

ウス腹腔由来マクロファージ細胞株である RAW264 細胞

ニッケル線からのニッケル溶出が周囲の炎症反応によwell plate の各 well に５mm 角のニッケル板を置き、10％り影響を受けるか明らかにするため、ニッケル線の埋稙

FBS を含む EMEM 培地を加えて 24 時間 incubate した場合と 同 時 に 起 炎 剤 lipopolysaccharide（LPS）を 用 い て 炎 症には顕著なニッケル溶出は見られなかった。しかし、ニッ

反応を誘発した場合の、ニッケル溶出量の変化を解析しケ ル 板 上 に RAW264 細 胞（1.0 及 び 3.0×10 cells/mL）をた。埋稙 24 時間後のニッケル線周囲組織の切片を作製播種した場合には細胞数依存的にニッケル溶出が促進した。

後、Hematoxylin-Eosin 染色し組織形態を観察した。ニッ

さらに RAW264 細胞を LPS で刺激したところ、ニッケル

ケル線の埋稙によりニッケル線周囲組織の皮膚の肥厚及びの溶出量が有意に増加した（Fig. 4A）。

を用い、培養細胞によるニッケル溶出を検討した。96-55

好中球やマクロファージなどの炎症細胞の浸潤が認めら

ま た 細 胞 播 種 数 を 1.0×10 cells/mL と し、RAW264 細れ、LPS を投与した場合はさらに炎症細胞の浸潤が増大し胞を各濃度の LPS で刺激したところ、LPS 濃度依存的にた（Fig. 3A）。このような条件下でニッケル溶出についてニッケルの溶出量が増加した（Fig. 4B）。以上の結果から、比較したところ、埋稙 8 時間後及び 24 時間後において LPS

RAW264 細胞によりニッケル板からのニッケル溶出は促を注射した群（LPS 群）では、vehicle（Saline）を注射した

進され、この溶出作用は LPS 刺激により細胞を活性化す

場合（Saline 群）に比べてニッケル溶出が有意に増加した

ることにより著しく促進されることが明らかになった。

（Fig. 3B）。従って LPS で炎症反応を誘発すると、ニッケル線からのニッケル溶出が促進することが明らかになった。

3 - 5．LPS 刺激 RAW264 細胞の培養上清の pH 解析
LPS 刺激後の RAW264 細胞の培養上清中の pH を解析し

3 - 4．LPS 刺激マウスマクロファージ様細胞株 RAW264
によるニッケル板からのニッケル溶出の促進た。その結果、培養上清中の pH は細胞数依存的に低下す

LPS による炎症反応によりニッケル溶出が促進する現象

ごくわずかであった（Fig. 5A）。また、LPS 刺激による培が in vitro においても認められるか明らかにするため、マ

養上清の pH 値の変化は認められず（Fig. 5B）、培養上清Figure 3. Increase in release of Ni by lipopolysaccharideinduced inflammation(A) Ni wire was implanted subcutaneously in the dorsum ofeach mouse. Lipopolysaccharide (LPS) was injected into
the same site immediately after the implantation. Twentyfour hours after the implantation, the mice were sacrificed
and the skin on the wire was dissected. Paraffin section of
the tissue was prepared and stained with hematoxylineosin.
(B) The skin tissue (diameter: 14 mm) on the wire was
excised 8, 24 and 72 h after the implantation of Ni wires
and Ni in the tissue was quantified by the fluorometry. The
values are the means of five mice with S.E.M. shown byvertical bars. Statistical significance; *P<0.05, **P<0.01
vs. the Saline group at the corresponding point.

Figure 4. Enhancement of elution of Ni ions from Ni plate bylipopolysaccharide-stimulated RAW 264 cells(A) RAW 264 cells (1 and 3×10 5 cells/mL, 0.2 mL)
seeded on a Ni plate (5 mm square) and incubated for 24
h in the presence (closed columns) or absence (opencolumns) of LPS (1 µg/mL). The values are the means offive samples with S.E.M shown by vertical bars. Statisticalsignificance; *P<0.05 vs. the corresponding unstimulatedgroup.
(B) RAW 264 cells (1 ×105 cells/mL, 0.2 mL) seeded ona Ni plate (5 mm square) and incubated for 24 h incontaining LPS (0.1, 0.3 and 1.0 µg/mL). The
concentration of Ni in the supernatant was determined after
the 24 h incubation. The values are the means of fivesamples with S.E.M. shown by vertical bars. Statisticalsignificance; *P<0.05 vs. the unstimulated group.

る傾向を示したものの、pH 値 7.2－7.5 程度とその変動は− 73 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

中の pH は LPS 刺激の有無に関わらず、一定に保たれてい胞をニッケル板上に播種しニッケル板と細胞を接着させることが明らかになった。従って、LPS によるニッケル溶

た場合、あるいはニッケル板と細胞を接着させずに培養し出の増大は、培養上清の pH が低下したためではないことた場合のニッケル板からのニッケル溶出を比較した。そが示唆された。

の結果、LPS で刺激していない条件下では RAW264 細胞とニッケル板との接着及び非接着に関わらず、RAW264

3 - 6．LPS 刺激 RAW264 細胞によるニッケル溶出促
進の経時変化細胞のニッケル溶出量に差は認められなかった。しかし、RAW264 細胞をニッケル板上に播種し、LPS で刺激した

させた場合では、RAW264 細胞を LPS で刺激すると、ニ時のニッケル溶出の経時変化を解析した。Medium のみでッケル溶出が有意に促進したのに対し（P < 0.01）、ニッケ

incubate した場合、及びニッケル板上で RAW264 細胞をル板が RAW264 細胞と接着しない条件下においては、LPS

培養した場合では、培養上清中のニッケル濃度は、24 時

で刺激を加えてもニッケル溶出の促進は認められなかった

間経過後もわずかに増加した程度であった。しかし、LPS（Fig. ７）。従って RAW 細胞における LPS 刺激によるニッで RAW264 細胞を刺激した場合には培養液のニッケル濃ケル溶出促進作用の発現には、ニッケル板と細胞との接着

度は播種４時間後から増加し始め、８時間以後では LPSが必要であることが示唆された。

RAW264 細胞をニッケル板上に播種しニッケル板に接着で刺激していない群と比較して有意に増加した（Fig. ６）。

3 - 7．RAW264 細胞によるニッケル溶出促進におけるニッケル板と細胞間の接着

3 - 8．リソソーム阻害薬及びプロトン輸送 阻害薬のRAW264 細胞によるニッケル溶出抑制作用
RAW264 細 胞 に よ る ニ ッ ケ ル 溶 出 効 果 の メ カ ニ ズ ム

RAW264 細胞を LPS で刺激すると、ニッケル溶出が促を 明 ら か に す る た め、LPS 非 存 在 下 リ ソ ソ ー ム 阻 害 薬

進するメカニズムとして細胞とニッケル板の接着部位の微chloroquine（10 µM）、Na /H exchanger（NHE） 阻 害

小環境において酸性化が生じニッケルが溶出する可能性が薬 amiloride（100 µM）、vacuolar-type（H ）-ATPase

考えられる。この点を明らかにするために、RAW264 細（v-ATPase）阻 害 薬 bafilomycin A1（１nM）の 各 薬 物

+

+

+

Figure 5. pH in the culture medium of lipopolysaccharide-stimulated
RAW 264 cells(A) RAW 264 cells (1 and 3×105 cells/mL, 0.2 mL) seeded ona Ni plate (5 mm square) and incubated for 24 h in the presence(closed columns) or absence (opened columns) of LPS (1 µg/mL).
The pH of the culture medium was determined with pH meter. The
values are the means of five samples with S.E.M shown by verticalbars.
(B) RAW 264 cells (1×105 cells/mL, 0.2 mL) seeded on a Ni
plate (5mm square) and incubated for 24 h in containing LPS (0.1,
0.3 and 1.0 µg/mL). The pH in the culture medium wasdetermined with pH meter. The values are the means of fivesamples with S.E.M. shown by vertical bars.

− 74 −

Figure 6. Requirement of cell attachment
Enhancement of elution of Ni ions from Ni plate bylipopolysaccharide-stimulated RAW 264 cells
RAW 264 cells (1×105 cells/mL, 0.2 mL) seededon a Ni plate (5 mm square) and incubated for 4, 8,
and 24 h in the presence or absence of LPS (1.0µg/mL). The concentration of Ni in the culture
medium was determined. The values are the meansof five samples with S.E.M. shown by vertical bars.
Statistical significance; *P<0.05, **P<0.01 vs. thecorresponding unstimulated group.

ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析を添加し、これらの薬物の影響を解析した。その結果、

また、RAW264 細胞を LPS で刺激した場合の８時間でchloroquine 添加により非刺激 RAW264 細胞による 24 時間のニッケル溶出促進効果に対する効果を同様に解析した。

培養でのニッケル溶出は部分的に抑制され、bafilomycin

そ の 結 果、chloroquine、amiloride 及 び bafilomycin A1 はA1 も有意差はなかったもののニッケル溶出を抑制する傾いずれも LPS による Ni 溶出促進を有意に抑制した（Fig.

向が認められた。一方、amiloride にはニッケル溶出抑制

９）。

効果が認められなかった（Fig. ８）。

Figure 7. Enhancement of elution of Ni ions from Ni plate by lipopolysaccharide-stimulated RAW 264 cells
on Ni plate(A) Experimental scheme of culture condition of RAW 264 cells.
(B) RAW 264 cells (1×105cells/mL, 0.2 mL) seeded on (attached condition) or under a Ni plate (nonattached condition) were incubated for 24 h in presence or absence of LPS (1.0 µg/mL). The
concentration of Ni in the culture medium was determined. The values are the means of five samples with
S.E.M. shown by vertical bars. Statistical significance; **P<0.01 vs. the corresponding LPS (-) group.

Figure 8. Effects of drugs on elution of Ni ions from Ni plateby unstimulated RAW 264 cells
RAW 264 cells（1×10 ⁵ cells/mL, 0.2 mL）were seededon a Ni plate（5 mm square）and incubated for 24 h in
the medium containing chloroquine（CQ ; 10 µM），amiloride（Ami ; 100 µM）and bafilomycin A1（Baf ; 1nM）． The concentration of Ni in the supernatant was thendetermined. The values are the means of five samples with
S.E.M. shown by vertical bars. Statistical significance;**P<0.01 vs. medium alone（None）group, #P<0.05 vs.
unstimulated RAW 264 cells group.

Figure 9. Inhibition of elution of Ni ions from Ni plate bylipopolysaccharide-stimulated RAW 264 cells by
chloroquine, amiloride and bafilomycin A1
RAW 264 cells（1×105 cells/mL, 0.2 mL）were seeded ona Ni plate（5 mm square）and incubated for 1 h in themedium in the presence of chloroquine（CQ ; 10 µM），amiloride（Ami ; 100 µM）and bafilomycin A1 (Baf ; 1nM). Then the cells were stimulated with LPS（1.0 µg/mL）
for 8 h. The concentration of Ni in the supernatant wasthen determined. The values are the means of five samples
with S.E.M. shown by vertical bars. Statistical significance;**P<0.01 vs. unstimulated RAW 264 cells, ##P<0.01 vs.
LPS control.

− 75 −

コスメトロジー研究報告 Vol.18, 2010

４. 考いると考えられる。一方、マクロファージが LPS 刺激に

察

+

+

より活性化すると、細胞膜にある V-ATPase や Na －H

種々の装飾品に対する金属アレルギーは皮膚の健康を考

Exchanger（NHE）などのイオン輸送系が活性化すること
8 － 9）

える上で，極めて大きな問題である。金属アレルギー誘発が明らかになっているの初期段階として当然ながら金属イオンの溶出が必須であしている NHE の阻害薬であり、bafilomycin A1 はリソソる。したがって生体内での金属からの金属イオンの溶出をーム膜上の V-ATPase と同様に細胞膜上に発現している

評価し、その溶出に伴う生体応答を明らかにすることは極V-ATPase も阻害する。今回の実験では LPS により活性化めて重要である。しかしこれまで，生体内において金属溶されたマクロファージの Ni 溶出促進効果を bafilomycin A1

出を詳細に解析できる実験系はなかった。そこで私たちは、及び amiloride が強く抑制した。以上のことから、マクロニッケル線をマウス背部皮下に埋稙する炎症モデルを確立

ファージは金属表面ではこれを異物と認識してプロトンをし、ニッケルの溶出を定量的に解析できるモデルを構築し含むリソソームのエキソサイトーシスにより、また LPS でた。

活性化するとリソソームの放出に加え細胞膜の V-ATPase

ニッケル線をマウスの背部皮下に埋稙し、LPS により炎症反応を誘発するモデルは、金属製のバイオデバイスを外+や NHE が活性化され、細胞外への H 放出をさらに増大させて著しくニッケル溶出が促進されると考えられる。

科的に体内に埋稙した際に感染が生じた状態を模倣してい５．総る。このような条件下で、金属からのニッケル溶出が増大することが明らかになったことは、医療材用の安全性評価の上で極めて重要なことである。

。Amiloride は細胞膜上に発現

括

本研究において、生体内でのニッケル溶出は炎症細胞の活性化により促進されることが明らかになった。そのため炎症細胞の活性化によりニッケル溶出が促進される現象

装飾品や医用金属材料の安全性評価には従来の試験管内では in vitro においても認められた。すなわち、マウスマクの耐汗性試験、耐唾液性試験では不十分である可能性が示

ロファージ様細胞株 RAW264 細胞がニッケルを溶出する唆された。特に LPS 刺激したマクロファージ様細胞株を作用をもつこと、さらに同細胞が起炎物質 LPS により活用いたニッケル溶出系は、金属性装飾品等の安全性評価に性化されると、ニッケル溶出効果が増大することが明らか有用であると考えられる。また、コスメトロジーの観点かになった。ニッケルに限らず、金属が腐食しイオンを溶出

らは、皮膚のバリア機能をはじめ、健康な皮膚を維持する

する原因として最も一般的なものが金属表面での酸性化でことが金属アレルギーの低減につながるものと考えられる。

ある。本研究では LPS でニッケル溶出が促進した場合でも培養液中の pH は低下しなかったことと、ニッケル板上謝

辞に播種した RAW264 細胞を LPS で刺激するとニッケル溶

本研究を遂行するにあたり，ご支援を頂きました財団法出が促進したのに対し、ニッケル板と接着しない条件下に人コスメトロジー研究振興財団に深く感謝いたします。まおいては、LPS で刺激を加えてもニッケル溶出の促進は認た、本研究にご協力くださいました東北大学大学院工学研

められなかったことから、RAW264 細胞における LPS 刺

究科大津浩教授ならびに成島尚之教授に深く御礼いたしま

激によるニッケル溶出の促進作用はニッケル板と細胞とのす。

接着面で生じ、この局所環境において LPS 刺激により酸（引用文献）性化が生じていることが示唆された。
マクロファージは体内に侵入した異物を除去する機構を１）Basketter, D.A., Briatico-Vangosa, G., Kaestner,

備えており、貪食した分解すべき異物を含むファゴソーム

W., Lally, C., Bontinck, W.J. (1993) Nickel, cobalt andの形成と、細胞由来の様々なタンパク分解酵素を含むリソ

chromium in consumer products: a role in allergic contact

ソームを融合しファゴリソソームを形成して消化分解する。

dermatitis? Contact Dermatitis, 28:15-25.

リソソーム内のタンパク分解酵素は至適 pH が酸性である

２）Sato, N., Kinbara, M., Kuroishi, T., Kimura, K.,

ため、リソソーム膜にある V-ATPase により細胞質内プロ

Iwakura, Y., Ohtsu, H., Sugawara, S., Endo, Y. (2007)

トンを積極的に取り込んでいる。Chloroquine は弱塩基性

Lipopolysaccharide promotes and augments metalの化合物で細胞内に取り込まれリソソーム内に取り込まれallergies in mice,dependent on innate immunity and中和する作用がある。無刺激のマクロファージによるニッ

histidine decarboxylase. Clin. Exp. Allergy, 37: 743-751.

ケルの溶出はリソソームを中和する chloroquine 及びリソ

３）Thierse, H.J., Moulon, C., Allespach, Y., Zimmermann,

ソームを酸性化を抑制する V-ATPase 阻害薬 bafilomycin

B., Doetze, A., Kuppig, S., Wild, D., Herberg, F., Weltzien,

A1 により抑制されたことから、未活性状態のマクロファ

H.U. (2004) Metal-protein complex-mediated transportージによるニッケル溶出はリソソームの放出が関与してand delivery of Ni to TCR/MHC contact sites in nickel-− 76 −2+

ニッケルの溶出と炎症誘発作用機構の解析

specific human T cell activation. J. Immunol. 172 : 1926-

Bafilomycins: a class of inhibitors of membrane ATPases

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− 77 −