Ｘ線照射とマイトマイシンの併用によって起こる皮膚障害に対するイチョウ葉エキスの効果
星薬科大学

太田節子

One treatment for cancer is the combination of radiotherapy and chemotherapy. Either radiotherapy orchemotherapy has side effects, such as skin injury. In particular, skin injury in combination therapy is more
serious compared with it in either radiotherapy or chemotherapy. We already established the method to estimate
protective effects for skin injury by X-ray irradiation, and we found protective effects in many crude drugs.
Previous report showed that extracts of Ginkgo Biloba L. have various pharmacological effects. However, othereffects of extracts of Ginkgo Biloba L. have not been known. In this study, we examined protective effects ofextracts of Ginkgo Biloba L. for skin injury induced by X-ray irradiation combined with mitomycin in mice.

予防薬の開発を目的とする研究を行った。

１ 緒 言

著者らは 30kVp の軟Ｘ線を用いることにより、癌治療において手術、放射線照射、制癌剤投与

一般のＸ線（200kVp）の場合と類似した皮膚障害は３本の柱で、癌の種類、病巣の位置、進行度でモデルを作製し、この独自の方法によれば透過力各々が使い分けられ、また併用されている。放射の弱いＸ線が皮膚の表面に集中するため、消化管線照射と制癌剤投与の共通の副作用として、白血障害や造血機能障害を併発せず皮膚障害を観察で球減少と皮膚障害がある。白血球数の急減は免疫きる利点があることを認めた。また障害の程度を力の低下の危険性から、治療計画の中断にもかかスコア表を用いることにより計量化し、予防薬剤わる重要課題とされ、G− CSF などの治療薬が用開発のための放射線皮膚障害防護効力試験法を確いられている。一方体外から照射された放射線は立した１）。その結果、含イオウ化合物２）、フェル

必ず皮膚を通過して体内に入るため、照射部位のラ酸関連化合物３）生薬エキス４）核酸構成物質５）漢皮膚は湿性のただれや潰瘍を発生し、患者は日常方方剤６）川キュウ分画物７）キダチアロエ８）など多生活の中で常に痛みにさらされている。また、制数の薬物に有効性を認めた。この中に最近健康食

癌剤や被爆による全身の脱毛は大部分の患者に生品として人気のあるイチョウ葉エキスの分画物がじるにもかかわらず、生命の危険がなく、将来的ある。には再生することから殆ど留意されていない。しイチョウ（Ginkgo Biloba L.）は地質を問わずよかし再生までの長期間、療養中の患者は四六時中、く繁茂するために、街路樹あるいは神社、寺の癌の恐怖を意識づけられていることになり、多大境内などで植栽されている馴染みの深い植物であなストレスは回復効果にも影響する。そこでこれる。種子のギンナンは嗜好性の食品として、またらの制癌剤や放射線被曝による皮膚障害に対する鎮咳、去痰作用のある生薬として広く愛用されてProtective Effects of Extract from
Leaves of Ginkgo Biloba L. on Skin
Injury Induced by X-ray Irradiation
Combined with Mitomycin in Mice
Setsuko Ohta
Faculty of Pharmaceutical Sciences,
Hoshi Universityいる。葉は防虫、しもやけなど民間薬として用いられていたが、1965 年にドイツで緑葉エキスに動脈の血液循環を促進し、毛細血管の血流もスムーズにする働きが強力であることが認められてからは、血行障害や老人性痴呆症の治療薬として広く使われている。しかし、薬効本体の解明が充分で− 44 −

Ｘ線照射とマイトマイシンの併用によって起こる皮膚障害に対するイチョウ葉エキスの効ない状況から、日本では健康食品として扱われて幹回り 1.4 ｍ）の葉を８月初旬に採取し、加熱乾いる。

燥した後、メタノールで抽出してメタノールエキ

イチョウの緑葉抽出物に含まれるケルセチン、スを作製し、図１に示すように分画した。

ケンフェロール等のフラボノイドやビロバリド、分画物は注射用蒸留水を加えた後超音波処理

ギンゴリド等のテルペノイドは黄葉になる直前のし、溶解または懸濁させ、必要に応じて 0.4N −８月頃に最も含有量が高いことも知られており、NaOH を用いて pH7−８に調整した。この処理法

原料の緑葉はこの時期に収穫されている。

で不溶物が多い画分は遠心分離した後上清のみをまた、イチョウ緑葉エキスの末梢血行改善効果に着目して C3H 系マウスを用いた育毛効果の報用いた。これらの試料は投与液量がマウスの体重30g 当り 0.3mL になるように調整した。
８種類の制ガン剤は臨床で用いられている市販告もあるが、我々は ICR 系マウスを用いた放射線誘発皮膚障害防護効果を検討してきた。そこでイ品を入手し、注射用蒸留水に溶解させた。

チョウ緑葉より抽出した分画物の効力試験を行った結果、放射線によって生じる脱毛、潰瘍などの８種類の制ガン剤障害を 90％以上抑制する画分を得た。これらの有塩酸ニムスチン

効画分について制ガン剤投与によって発症する脱シクロフホスファミド毛に対する、抑制効果の有無を測定し、制ガン剤

ドキソルビシン

副作用抑制への応用の可否を検討した。

ビンクリスチンブレオマイシン２ 実 験

フルオロウラシル

実験材料および試料の調整法：イチョウ緑葉はマイトマイシン（MMC）

星薬科大学構内のイチョウ樹（雌株、樹高 10 ｍ、

図１ イチョウ葉の分布図− 45 −

皮膚障害効力試験法

エトポシド

照射後 20 日頃より、マウスの頭部および背部に実験動物見られる皮膚障害を照射後 40 日間、週２回、定時

日本生物材料センターより購入した生後５週令に観察した。これを症状と障害面積を考慮して定の ICR 系雄マウスを１週間予備飼育した後、実験量的に評価したスコア表（表１）に基づき、頭部に使用した。マウスは１群８匹とし、４匹ずつ１と背部に発生した皮膚障害のスコアを計測した。

ケージに入れ、繁殖用固型飼料を与え、飲料水は皮膚障害防護効力は頭部、背部又は頭部と背部併自動給水装置により自由に摂取させた。

せたスコアを１群毎に合計し、対照群と薬物投与群について同一観察日あるいは観察期間中に最悪Ｘ線照射法の症状を示した時のスコアを次式に代入して求め

ソフテックス製 CMBW 特型軟Ｘ線発生装置をた。

用い、30kVp、10mA、フィルターは使用せず、皮膚障害防護効力（％）＝照射距離 40cm、線量率 200R/min（線量計：ビクトリン 500 型

血清中の硝酸イオンの測定

プローブ：30− 330 型で測定）の条件で除毛を全くしていないマウスの背部より1200R を全身照射した。

対照群のスコア − 薬物投与群のスコア
×100
対照群のスコア

マウスをエーテル麻酔下で開腹し、腹部下行大静脈から 0.8 〜 1.0mL 採血し、血清を得た。次に0.3N の NaOH と５％の硫酸亜鉛で除蛋白し、上試料の投与方法

清を硝酸イオン測定検体とした。この検体を用い

MMC は腹腔内注射又は皮下注射し、イチョウて Griess 法にて硝酸イオン濃度を算出した。

分画物は腹腔内注射、皮下注射又は経口投与を行った。
表１ 放射線皮膚障害スコア表− 46 −

Ｘ線照射とマイトマイシンの併用によって起こる皮膚障害に対するイチョウ葉エキスの効

射で誘発された皮膚障害に対する防護効果を表

３ 結果および考察

２、３に示した。ヘキサン可溶部分画物はヘキサ３. １ イチョウ葉抽出物の放射線皮膚障害に対ンエキスをシリカゲルによるクロマトグラフィーする防護効果を行い、ヘキサンと THF の混液で溶出させて、図１に示す分画法によって得られたヘキサンエ５つの画分（S １〜 S ５）に分画したものを用いた。

キスとヘキサンエキスの分画物について放射線照軟Ｘ線を全身に照射されたマウスの頭部および背表２ イチョウ葉ヘキサンエキスの放射線皮膚障害防護効力

表３ ヘキサン可溶部の分画物（ｓ−１〜５）− 47 −

部には照射後 20 日目頃より脱毛、湿性剥離、潰毛が認められた。これに対し、MMC の腹腔内投瘍などの皮膚障害が認められ、経時的に悪化して与は、約 80 〜 100％のマウスに脱毛および湿性剥いくが、40 日目頃には細く短い毛の再生が認め離などの皮膚障害が認められた。また MMC の皮られ、回復が始まった。これに対し、ヘキサンエ下投与は背部全体に脱毛が認められない例もあっ

キス 1000mg/kg を腹腔内投与した群のマウスのたが、投与部位の重度の脱毛および潰瘍は、すべ大部分は観察期間中を通して障害が全く認められてのマウスで認められた。この様に投与部位に限ず、平均皮膚障害防護効力は約 90％であった。

られた場合は、表１に示したスコア表以外に新たまた、ヘキサンの分画物では画分 S−２に特に強い防護効力が認められ、ヘキサンエキス中の有なスコア表の設定が必要となるため、以後の実験は腹腔内投与で行った。

効成分の大部分は S−２に移行していることを認めた。

以上の結果より、MMC ６mg/kg を１回腹腔内投与した２日後に軟Ｘ線 1200R を照射し、照射後40 日間、皮膚障害を観察した。また、この条件

３. ２ 制ガン剤と放射線の併用によって誘発さでは MMC 単独又は放射線照射単独では殆ど皮膚れる皮膚障害モデルの作製障害が発現せず、両者を併用すると照射後 35 日臨床上、副作用として脱毛が問題になっている目まで障害が悪化していく傾向が認められた（図制ガン剤８種について、マウスを用いて、LD50２）。

を考慮した投与量、投与方法、投与回数などと皮汎用されている８種類の制癌剤のうち、ドキソ

膚障害の関係を検討した。制ガン剤としてニムス

ルビシンとブレオマイシンとエトポシドは臨床でチン、シクロフホスファミド、ドキソルビシン、重篤な副作用として脱毛が挙げられ、シクロホス

ビンクリスチン、ブレオマイシン、フルオロウラファミド、ビンクリスチン、フルオロウラシルもシル、マイトマイシン（MMC）、エトポシドの８「現れることがある」。MMC、ニムスチンは「と種を選び、腹腔内投与、皮下投与又は経口投与にきにみられる」と確率が下がるが明記されている。

より１回又は５回連続投与を行った。しかし制ガ

しかしマウスでは MMC に最も広汎な脱毛が認めン剤の単独投与では５日連続投与においても脱毛が認められなかった。そこで、制ガン剤投与２日後に軟Ｘ線を照射した。照射線量はあらかじめ 400R から1600R までの６種の線量を比較した結果、1200R 以下では照射による皮膚障害が全く生じないことから、1200R を照射して、制ガン剤と軟Ｘ線の併用による皮膚障害を観察した。その結果、シクロフホスファミド、ビンク
リスチン、ブレオマイシンは約50％のマウスに脱毛が認められ、ニムスチンとドキソルビシンは約 20 〜 40％のマウスに脱図２ 制ガン剤と X 線照射の併用による皮膚障害− 48 −

Ｘ線照射とマイトマイシンの併用によって起こる皮膚障害に対するイチョウ葉エキスの効られ、エトポシドは毒性傾向が認められても脱毛に相当することを薄層クロマトグラフィーで認めは軽度であった。この結果よりヒトの頭部の脱毛た（図５）。
特に原点が薄くなっていることから HMM がとマウスの背部の脱毛の再生サイクルの違いが示

Gb エキスに最も近いと考えられていた HH は Gb

唆された。

エキスと全く異なることも認めた。これら HH、
３. ３ MMC と放射線の併用による皮膚障害に対HM、HMM について 250、500、1000mg/kg の投するイチョウ葉分画物の効力

与量で腹腔内投与、経口投与の条件で MMC とＸ

図１に示したように分画して得られた画分をマ線照射の併用実験による脱毛に対する予防効 をウスに投与した後、MMC を投与し、２日後にＸ線 1200R を照射した。40 日間観察し、MMC投与後照射した対照群と MMC投与前に分画物を投与し、MMC投与２日後Ｘ線照射した群を比較するとヘキサンエキスは皮下投与で有効であった（図３）。
ヘキサンエキスは腹腔内投与でも有効であったので（図はない）、図１に示したヘキサンエキ
スの分画物（Ⅱ〜Ⅵ）を腹腔内投与した結果、ⅣとⅥに弱い効力が認められ（図４）、ⅡⅢⅤは無効であった。このⅣは放射線照射単独で起こる皮膚障害に有効であった表３の S−２画分に相当すると考えられるが、この実験

図３ 制ガン剤と X 線照射の併用によって起こる皮膚障害に対するヘキサンエキ
スと Gbext. の効条件では S−２のような強い効力は認められなかった。今後、投与方法を検討することにより、より高い効力を期待できる。
また、図３に示した Gb ext. はイチョウ葉エキスとして市販されている製品の原料エキスである。これはフラボン配糖体が全体の 1/4 を占める程多いと言われていることから図１のヘキサン不溶部の熱湯可溶部を分画して得られると考えられ、図１に示した。HM−１又は HMM−１

図４ 制ガン剤と X 線照射の併用によって起こる皮膚障害に対するヘキサンエキ
ス分画物の効− 49 −

検討した結果、バラツキが大きく、有意な効 が認められなかった。
３. ４ イチョウ葉分画物の作用機序
放射線照射と MMC のような制癌剤のガン細胞に対する効果は共にガン細胞内の DNA の二重鎖切断とその不完全な損傷修復によって、ガン細胞にアポトーシスを起こすため、と考えられている。同時に副作用として発生する脱毛も毛母細胞が正常な機能を果たせない結果生じるとされている。そこで in vitro の実験でアガロースゲル電気泳動を用いて DNA ラダーを比較してみると、MMC により発生するラダーは Gb エキス添加により見られなくなりアポトーシスを抑制しているが、HH、HM、HMM はラダーが認められ、アポトーシスを抑制しなかった。しかし、フローサイトメトリーを用いる方法では MMC によってアポトーシスを起こし、細分化した細胞のピークと HH だけが一致した傾向を示したが Gb エキスと HM は正常群と類似したピークを示し、MMC を添加しない正常群よりわずかに左にずれた小さい細胞のピークを示した。
このことは Gb エキスと HM がアポトーシスをほぼ抑制しているが、MMC より数は少ないがアポトーシスを起こしている細胞もあることを示している。HMM は Gb エキス、HM よりも完全にアポトーシスを抑制し、正常群と一致したピークを
図５ ヘキサン不溶・熱湯可溶部分画物の薄層クロマトグラフィー− 50 −示した。また、ヘキサン不溶、水可溶部の粗エキスも全く同じ傾向を示したことから、この粗エキス

Ｘ線照射とマイトマイシンの併用によって起こる皮膚障害に対するイチョウ葉エキスの効中には Gb エキス以上に MMC によるアポトーシ４ 総 括スを完全に抑制する成分が含まれており、精製法

本研究では、ガン治療時に併発される脱毛を予を変えることにより、有効性の高い画分が得られ防する薬物を検索し、将来において最近やっと重ることが示唆された。
また、DNA 鎖切断は照射により発生した遊離要視されはじめた患者のクオリティー オブ ライ基によることから、活性酸素が関与していると言フ（QOL）の一助になることを目的とした。しかし、われている。そこで照射したマウスの血清中の一放射線皮膚障害防護効力試験法を用いイチョウ葉酸化窒素ラジカル（・NO）の変動を測定し、障害画分中に著しく強い有効画分を認めていることかの原因となる・NO 合成酵素（NOS）を阻害する

ら、制癌剤による脱毛に対する効果の検討を期待

効果を HH、HMM 照射前投与で比較した（表４、したが、８種のうち特に臨床的に脱毛が激しい制図６）。その結果、照射によって増加する血清中の・癌剤にも投与部位のわずか周辺５mm 直径くらいNO 量を HH、HMM 投与群は低下させる効果はの重度の脱毛が認められただけであった。MMCなく、HH、HMM 単独投与の場合も有意な差はは最も脱毛が広汎囲に生じたが、バラツキもあるなかったが図６より HMM 分画の精製の改良によことから、本法では脱毛の発生しない低線量のＸっては NOS 抑制効果も期待できる。

線と脱毛の発生しない量の MMC を腹腔内投与し、その併用による相乗作用により生じた脱毛についてイチョウ葉エキスの効果を検討した。その結果、

表４ イチョウ抽出分画投与マウス血清硝酸イオン有効成分を確認するまでには至らなかった。しかし、アポトーシス抑制効果も認められたことから、分画精製をさらに繰り返すことにより不純物によるマイナスの影響を除けばより高い予防効果も期待できることを認めた。
謝 辞
本研究を行うにあたりご援助をいただいた財団
法人コスメトロジー研究振興財団に深謝いたします。
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