ごあいさつ
コスメトロジー研究振興財団として、このほど 16 冊目の研究報告書をお届けできることになりました。当財団は創設以来、18 年間にわたって活動を続けてきておりますが、優れた研究に対する助成活動や、研究報告書の発行を滞りなく行ってこられましたのも、多くの関係者の皆様のご理解ご協力によるものと、改めて感謝申し上げる次第でございます。
今回の報告書では平成 17 〜 18 年度に助成を受けられた方の中から 20 名の方の研究成果を掲載いたしました。
ご一読いただければわかりますように、研究テーマは非常に幅広い分野にまたがっております。それだけ、化粧品に関連するコスメトロジーの研究が注目を集めるようになってきたということができると思いますが、当財団の活動もその一助となっているものと考えております。
化粧品等への応用が期待される素材分野では、老化防止や健康増進をキーワードとする研究が多く、バイオミメティック素材や乳化制御など注目に値する基盤
研究をご報告することができました。
皮膚研究や安全性研究に関しては、生体組織や細胞、遺伝子など多様な観点からの独創的な研究が多く、再生医療や動物代替、老化メカニズム等の基礎研究レベルで国際間の協調が盛んになりつつあるだけに、本報告書の果たす役割も大きいのではないかと考えております。
また、神経生理や免疫機能等、生体活動と心理、行動を追求した「こころ」と「からだ」の関係からアプローチした研究もあるなど多岐にわたっておりますが、当財団は分野の枠や研究機関の属性などにとらわれることなく、化粧品学のさらなる発展のために、優れた研究に対して積極的に助成を行っていきたいと考えております。
今後とも、皆さまのますますのご協力とご支援をお願い申し上げます。

平成 20 年 7 月
財団法人

コスメトロジー研究振興財団
理事長

小林

礼次郎

目

次

■ごあいさつ
■研究報告
Ⅰ．素材、物性に関する分野
・メラニン生合成阻害作用を有する環状ジアリルヘプタノイド類の美白効果に関する研究 ……………… 2
星薬科大学薬学部

森 田

博 史・ヒト由来の生体材料を用いたテーラーメイド型化粧品基材の創出−ヒト毛髪タンパク質とキトサンから成る複合フィルムの作製と性質−………………………………… 6

信州大学繊維学部
・安定分散かつ耐熱性を併せ持つ酵素担保ナノ粒子の設計

藤 井

敏 弘

…………………………………………………… 10

筑波大学大学院数理物質科学研究科
・好熱菌由来カロテノイド化合物の生体膜安定化効果の研究

長 崎

幸 夫

………………………………………………… 18

大阪府立大学大学院理学系研究科生物科学専攻
・圧電材料基板上のマイクロ流路を用いた単分散多相エマルション生成法の開発

原

正

之

………………………… 25

東京工業大学精密工学研究所

西 迫

貴 志

Ⅱ．生体作用、安全性に関する分野
・プロスタグランジン D2 受容体を標的とした皮膚アレルギー炎症治療法開発…………………………… 32

東京医科歯科大学大学院皮膚科学分野

佐 藤

貴 浩

・ヒト汗に存在する核酸分解酵素を含有させた化粧品や医薬品軟膏が有する生理作用や薬理作用の推定 … 38
島根大学医学部法医学
・脂質を中心とした非蛋白抗原に対する皮膚免疫応答機構の解明とその制御法の確立
京都大学ウイルス研究所
・Apollon による細胞老化の制御機構

竹 下

治 男

………………… 41

杉 田

昌 彦

…………………………………………………………………………… 45
東京大学分子細胞生物学研究所

・骨髄由来表皮細胞の分化ならびに遊走機序の解明

幹 彦…………………………………………………………… 49

北海道大学大学院医学研究科皮膚科・白皮症の病因遺伝子の解明とその遺伝子産物のメラニン色素生成における機能解析
山形大学医学部皮膚科学分野
・真皮幹細胞を利用した皮膚の若返り治療

内 藤
阿部

理一郎

…………………… 54

鈴 木

民 夫

……………………………………………………………………… 59
京都大学大学院医学研究科形成外科

・紫外線誘発メラニン合成へのスフィンゴシン 1- ホスフェートの抑制効果の検討

内 藤

素 子

……………………… 62

神戸大学大学院医学系研究科応用分子医学講座皮膚科学 錦織

千佳子

・黄色ブドウ球菌における病原性遺伝子の多様化メカニズム：
同一種内多数ゲノム比較によるゲノム進化解析 ………………………………………………………………… 65
東京大学新領域創成科学研究科および東京大学医科学研究所

小 林

一 三

目

次

・メラノサイト由来リポカリン型プロスタグランジン D 合成酵素が関与する皮膚組織の恒常性維持機構
東北大学大学院医学系研究科細胞生物学講座分子生物学分野

柴 原

… 71

茂 樹

Ⅲ．精神、文化に関する分野
・化粧やネイルケアが高齢者のライフスタイルや QOL と免疫能の向上に及ぼす影響
早稲田大学大学院人間科学研究科健康福祉科学研究領域
・化粧・美容意識についての日仏文化比較研究…………………… 76

町 田—日仏大学生へのアンケート調査の結果から—

大阪大学言語学博士、ナント大学言語科学科博士課程・「聞香」による香りの言語化プロセスと脳内情報構造化機能の解明

石丸……… 87

久美子………………………………………… 95

理化学研究所脳科学総合研究センター象徴概念発達研究チーム

椎名・中高年者の化粧行動の変動様態と前頭葉認知機能との関連に関する神経心理学的研究
関西福祉科学大学健康福祉学部
・人前化粧における意識

和 彦

さやか

……………… 100

八 田

武 志

………………………………………………………………………………………… 105
岡山大学大学院社会文化科学研究科

塩田

真友子

■記念講演
平成 19 年度記念講演 『顔の美の基準と科学的理論』 ……………………………………………………… 113
クリニック宇津木流■コスメトロジー研究雑感
■付

宇津木

龍一

……………………………………………………………………………………………… 121

録
平成 19 年度事業報告
役員一覧…………………………………………………………………………………………… 135…………………………………………………………………………………………………………… 138

メラニン生合成阻害作用を有する環状ジアリルヘプタノイド類の美白効果に関する研究
星薬科大学薬学部

森 田

博 史

Cyclic diarylheptanoids with a biphenyl ether linkage such as a series of acerogenins have been isolated fromthe bark of Acer nikoense (Aceraceae), a Japanese folk medicine for hepatic disorders and eye diseases. A seriesof acerogenins exhibited a range of biological activities such as anti-inflammatory, antihepatoxic, antibacterial, andinhibitory activity on nitric oxide production. There are well-known natural biphenyl ethers such as glycopeptide
vancomycin, cyclic peptides from Rubia cordifolia, and macrocyclic bisether marchantin A from the liver wort
Marchantia species. These structurally interesting cyclic diarylheptanoids continue to be of interest from biologicalpoints of view as well as providing challenging targets for total synthesis.
Our interest has been focused on inhibition of tyrosinase enzyme by a series of cyclic diar ylheptanoids,
acerogenins and the other biological activities. Fractions and acerogenins prepared from Acer nikoense showed
inhibition of tyrosinase enzyme and melanin biosynthesis, and also showed vasorelaxant activity on rat aorta.

１．緒

コウジ酸、アルブチンあるいはビタミンＣなどのチロシナ

言ーゼ活性阻害剤がよく知られている。しかし、これらのチ

我々は植物をはじめとする生物資源の調査と同時に、化

ロシナーゼ活性阻害剤においては、それぞれ安定性、安全粧品素材の原点となる有用物質を未利用植物資源に求めて性、効果等において一長一短が指摘されており、依然改良きた。植物成分のなかでもアルブチン、コウジ酸のようなの余地が残されている。

フェノール性化合物のなかにはメラニン生合成阻害活性を今回、薬用植物および未利用植物などの天然資源から得示す化合物群が知られている。一方、既存のタイプにとらられた抽出エキスに対して、チロシナーゼ阻害活性のスク

われることなく、新たな骨格をもつ天然有機化合物は、しリーニングを行った結果、カエデ科メグスリノキ由来の抽ばしば重要な医薬品発見の糸口となるばかりでなく、新た出エキスに本酵素の阻害活性を見出したので、チロシナー

な化粧品素材としての可能性も期待される。このような観ゼ阻害活性を指標として分離精製を各種カラムクロマトグ

点から、メラニンの過剰生成による色素沈着（シミなど）

ラフィーを用いて行い活性物質の単離および分画フラクシの予防および抑制効果を有する化粧品の開発を目的とし、ョンの諸性質に関する検討を試みた。
一方、我々は、美白効果、抗酸化効果、発がん予防効果、さまざまな薬用植物および未利用植物などの天然資源からメラニン生成抑制物質のスクリーニングを行ってきた。そ

血管平滑筋弛緩作用等の複数の機能を同時に合わせ持つ新の結果、これまでに和漢薬などに含まれる環状ペプチド類

しい化粧品素材の開発をも狙っており、今回、メグスリノ

が、B16 マウスメラノーマ細胞培養系でメラニン生成を抑

キの抽出エキスより分画した各種フラクションおよび ア

制することを報告してきた。

セロゲニンを用いて血管平滑筋に対する作用も検討した。

チロシナーゼは色素細胞に特異的に発現している酵素で２．実

メラニン産生において最初の反応を触媒する働きを持っている。一方、過剰な紫外線刺激による人皮膚の黒色化やシ２．１

験

カエデ科メグスリノキ（Acer nikoense）

ミ・ソバカスなどの生成は、一般に人皮膚細胞中の色素細メグスリノキは、一名チョウジャノキともいうが、宮城胞（メラノサイト）内のメラノソームで、酵素チロシナー

県以南の本州、四国、九州の山地に自生する落葉高木であゼが、アミノ酸の一種であるチロシンあるいはドーパを酸り、三出複数をもち、若枝、葉柄、葉の下面に密に灰白色化して生成した黒色のメラニンによることが知られている。

の開出粗毛が存在することを特徴とする。民間では、そのさらに人皮膚の美白用皮膚外用剤としてハイドロキノン、樹皮を煎じて洗眼に用いたことから、目薬の木という名がついたと言われている。メグスリノキの成分としては、現Inhibition of Melanin Biosynthesis of
Cyclic Diarylheptanoids from Acer
nikoense
Hiroshi Morita
Faculty of Pharmaceutical Sciences,
Hoshi University

在までに環状ジアリルヘプタノイドの他、トリテルペノイ
ド、フラボノイド、クマリンなどが単離されている１）。今
回、群馬県で採集し風乾した樹皮を研究材料として用いた。

２．２ メグスリノキ（Acer nikoense）の抽出および分画

永井らの方法に従い１）、メグスリノキの樹皮を粉砕後、−2−

メラニン生合成阻害作用を有する環状ジアリルヘプタノイド類の美白効果に関する研究

メタノールで抽出し、濃縮して得たエキスをチャートに示

３．結すようにエーテル、酢酸エチルで順次、分配して、それぞれの可溶性画分を調製した。次に、チロシナーゼ阻害活性のみられたエーテル抽出画分をシリカゲルカラムクマトク

果

３．１ メグスリノキの粗抽出物の有機溶媒可溶性画分のチロシナーゼ阻害活性およびシリカゲルカラム

ラフィーおよび ODS カラムクマトクラフィーに付し、数

クロマトグラフィーによる分画

種の活性フラクションを得た。

メグスリノキのメタノール抽出物およびエーテル可溶性
画分にチロシナーゼ阻害活性が認められた（Fig.１）。また、エーテル可溶性画分のシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーによる分画（CHCl3 〜 MeOH）によって得られた
Fraction 9 の画分には、より強いチロシナーゼ阻害活性が認められた。

３．２ 活性画分の ODS カラムクロマトグラフィー
による分画
シリカゲルカラムで分離した後に強い活性が認められた画分を ODS カラムクロマトグラフィー（H2O 〜 MeOH）
でさらに分画し、得られた各画分の活性を測定したところ、
チロシナーゼ阻害活性を有するフラクション（Fr.9-3）を得られ、アセロゲニン類が含有されることが分かった。これらの画分の活性には、コウジ酸、アルブチンと同様に、

２．
３

チロシナーゼ阻害活性の測定法

用量依存性が確認された（Fig. ２）。

文献記載の方法に従い、mushroom tyrosinase を用いた
ドーパクロム法で測定した。試料は、全てエタノールに溶

３．３ メラニン生成抑制活性と細胞毒性

解（2000 ㎍ / ㎖）し、不溶物はメンブランフィルターでろ過して除去した。

アセロゲニンの B16 マウスメラノーマ細胞培養系での細胞毒性とメラニン生成抑制活性を検討した結果、アセロ
ゲニンは 0.5mM 以下で増殖を阻害せず、１mM でわずか

２．
４

メラニン生成抑制活性に増殖を阻害し、0.5mM で有意にメラニン生成を抑制しB16 マウスメラノーマ細胞を、10％ FCS、ペニシリン、た。このとき、アルブチンは、0.1mM 以下で増殖を阻害

ストレプトマイシン、アンホテリシン B、炭酸水素ナトリ

ぜず、0.5mM 以上で増殖を阻害し、0.1mM で有意にメラウムを添加した D-MEM で 37℃、５％ CO2 条件下で培養

ニン生成を抑制した。

した。24 時間後にサンプルの DMSO 溶液を含む培地に交換し、３日間培養した。メラニン生成抑制活性は、細胞中３．４ 活性画分の血管平滑筋弛緩作用のメラニン量と培地中のメラニン量（吸光度より算出）か

各抽出画分をラットより摘出したリング標本を用いて、ら求めた。また、細胞に対する毒性は、細胞溶解液のタン

ノルエピネフリン収縮に対する弛緩作用をその張力変化でパク量から評価した。

測定した。その結果、各画分に血管平滑筋弛緩作用が観察

２．
５された（Fig. ３）。

３）血管平滑筋に対する作用

Wistar 系雄性ラットより胸部大動脈を摘出しリング標

３．５ アセロゲニンの血管平滑筋弛緩作用本を作成し、その張力変化を等尺性に記録した。この張活性画分より単離したアセロゲニンをラットより摘出したリ

力変化はオルガンバス中に懸垂した血管標本を張力トラン

ング標本を用いて、ノルエピネフリン収縮に対する弛緩作用

ジューサーに接続して測定した。分画フラクションの作用

をその張力変化で測定した。その結果、アセロゲニンは、ラは、標本のノルエピネフリン収縮に対する弛緩作用を指標

ット胸部大動脈由来の血管平滑筋のノルエピネフリンのにスクリーニングを行った。ついで血管内皮の有無の影響、収縮に対して内皮非依存性の弛緩作用を示した（Fig. ４）。

KCl、endothelin 等の収縮薬や各種リガンド存在下の血管

また、アセロゲニンは、高濃度カリウムによる脱分極の収収縮を観測し、作用機序の推定を行った。

縮を阻害した（Fig. ５）。このことから、アセロゲニンの弛緩作用は、主に電位依存性カルシウムチャネルによる細胞外カルシウムの流入の阻害によるものと考えられた。

−3−

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

Figure 1

Inhibition of Tyrosinase by MeOH and Ether Extracts

Figure 2

Inhibition of Tyrosinase by Acerogenins

Figure 3 Typical Effects of Each Extract on the Aortic Rings Precontracted with 3×10 − 7 M
Norepinephrine (NE).

Figure 4 Relaxation responses induced by acerogenin A ( 3×10 − 7 M) on aortic rings withendothelium (+E) and without endothelium (-E) precontracted with 3×10 − 7 M norepinephrine
(NE).

−4−

メラニン生合成阻害作用を有する環状ジアリルヘプタノイド類の美白効果に関する研究

Figure 5 Concentration-Response Relationship for Contractile Responses of the
Aoric Rings to Ca2+ in a Ca2+ -Tree Medium Preincubated with High Potassiumu（60mM）; Symbols : - ○ - control, - ■ - : acerogenin A（10-5M）, - ▲ - :acerogenin A（ ３×10-5M）, Values are the mean ±S.E.（n ＝ 4）．*P<0.05,**P<0.01

４．考り摘出したリング標本を用いて測定した。その結果、アセ察

ロゲニンは、ラット胸部大動脈由来の血管平滑筋のノルエ

メグスリノキは、カエデ科の Acer nikoense の樹皮を乾燥したもので、日本で民間薬として強壮あるいは目に有効

ピネフリンの収縮に対して内皮非依存性の弛緩作用を示した。

な薬として服用されている。永井らにより、メグスリノキ

今後、高い活性が認められた画分よりアセロゲニンをはの樹皮より、特異な環状ジアリルヘプタノイド類をはじじめとする関連化合物の単離、同定を行い、得られた活性めとする様々な成分が明らかにされている 。また、近年、物質の構造を解明していく予定である。また、得られた活これらに環状ジアリルヘプタノイド類に、抗炎症、発ガン性物質の物性および各種誘導体を作成し、構造とチロシナ

プロモータ抑制活性、NO 産生抑制活性などのさまざまなーゼ阻害活性、血管平滑筋弛緩作用との関係についても検１）

討していきたい。一方、メグスリノキの粗抽出エキスの細２）

生物活性が報告されている 。
今回、メグスリノキ由来のメタノール抽出物のエーテル

胞培養系での効果、安全性、安定性などを調べ、化粧品の可溶性画分およびこの画分のシリカゲルおよび ODS カラ

素材としての可能性と応用性についても検討していく予定

ムクロマトグラフィーによる分画で得られた数種の画分にである。

チロシナーゼ阻害活性が認められた。今回測定した画分のなかで最も活性が高かった画分は、アルブチンと同程度の（引用文献）

活性を有することが分かった。これらの画分の TLC には、

１）Nagai, M.; Kubo, M.; Fujita, M.; Inoue, T.; Matsuo, M.

複数のスポットが検出され、アセロゲニン類が含有される

J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1976, 338-339; Inoue, T.;

ことが分かった。

Ishidate, Y.; Fujita, M.; Kubo, M.; Fukushima, M.; Nagai,
M. Yakugaku Zasshi 1978, 98, 41-46; Kubo, M.; Inoue, T.;

単離したアセロゲニンは、チロシナーゼ阻害活性を示し、アルブチンと同様に用量依存性が確認された。アセロゲニ

Nagai, M. Chem. Pharm. Bull. 1980, 28, 1300-1303.

ンの B16 マウスメラノーマ細胞培養系での細胞毒性とメ

２）Morikawa, T.; Tao, J.; Toguchida, I.; Matsuda, H.;
Yoshikawa, M. J. Nat. Prod. 2003, 66, 86-91.

ラニン生成抑制活性を検討した結果、アセロゲニンはアルブチンより弱いながらメラニン生成を抑制した。また、こ３）Nagai, M.; Noguchi, M.; Iizuka, T.; Otani, K.; Kamata,
K. Biol. Pharm. Bull. 1996, 19, 228-232.

のとき細胞毒性は示さなかった。
さらに、アセロゲニンの血管平滑筋弛緩作用をラットよ−5−ヒト由来の生体材料を用いたテーラーメイド型化粧品基材の創出−ヒト毛髪タンパク質とキトサンから成る複合フィルムの作製と性質−
信州大学繊維学部

藤 井

敏 弘

The technology of film production is important in the cosmetics and biomedical fields. We have developed
convenient procedures for preparing human hair protein films and particles mainly consisting of hard keratins.
Chitosan, a polysaccharide composed of D-glucosamine and N-acetyl-D-glucosamine, can form a film and iscommercially used in various fields. Thus, we prepared the composite films consisting of human hair proteins andchitosan. The composite films were translucent and formed a micro phase separation structure, which has eachcrystal of two components. The films consisting of 70-95% hair proteins exhibited higher UV/VIS-absorption around260-400 nm wavelength over the values that were obtained by summation of each component. The values of watercontent and contact angle decreased with increasing the content of hair proteins. The heat stability of hair protein
was improved by the addition of chitosan. These results suggest that a simple mixing with chitosan can control theproperties of the hair protein film including UV-absorption, water content, and contact angle. The composite film
can be customized for individuals and will be a promising material with biocompatibility.

１．緒られる。キチンが多くの溶媒に対して不溶性なのに対し、

言

キトサンは多種類の薄い有機酸に可溶で、加工しやすい利

私たちは、“セルフリサイクル”という理念を提唱して点をもつ。また、生体とのなじみが良く、生分解性、免疫いる。これは、動物や他人由来ではなく自己由来で廃棄さ効果、抗菌作用があるため化粧品や医用材料として使用されているが再生可能な組織を原材料として有用加工品を作れている 。

８）

製する技術を確立して、本人のために使用していこうとい本研究では、ヒト毛髪タンパク質粒子とキトサンが混合う考え方である。この理由としては、自己由来の原料からしたフィルムを作り、両者の特性を有する複合フィルムのできたモノを本人が使用するため、安全・安心な製品とな作製を試みた。

ることが期待できる。

2．実

セルフリサイクル製品の原料として，毛髪を第一に考え験

切られ不要物質として廃棄されている生体材料である。こ2．1 毛髪タンパク質粒子とキトサン溶液の調製と複合フィルムの作製のため、血液などと比べ採取の負担が少なく、ある程度ま複数のボランティアから採取した毛髪を用い、エタノー

とまった量を集めることが可能である。毛髪の 70 − 80％

ル洗浄を行った後に使用した。ヒト毛髪を信大法溶液（５は、ケラチンを主成分とするタンパク質で構成された硬組

M 尿素 , 2.6 M チオ尿素 , ５％ 2 -メルカプトエタノール，織である。ここからタンパク質を簡便に抽出する方法を見

25 mM Tris-HCl, pH8.5）に浸し、50℃下で３日間抽出を出して、信大法と名付けた行った。ろ過と遠心操作により毛髪残渣を取り除き、毛髪ている。髪の毛は一生涯にわたり合成され、余分な毛髪は１−３）。次に，毛髪タンパク質フ

ィルムを形成する方法を開発した

４, ５）。しかし，このタン

３）タンパク質溶液（60−70 ㎎/㎖）を得た 。フィルム形成は、

パク質フィルムの力学的な強度が低いため適用範囲が狭い。

100 mM 酢酸緩衝液（pH4.0）を満たしたシャーレにタンパ

フィルムは機械的な刺激を受けることにより、容易に粒子

ク質溶液を静かにキャスティングして行った。十分に洗浄状態とすることができた。この作製と性質は本研究財団研後、回収したフィルムは超音波操作により粒子とした。キ

究業績の中間報告集などで報告している

トサンは、その粉末を 150 mM 酢酸水溶液に溶解した後蒸

６，
７）

。

キチンはエビやカニの甲殻から分離、精製される複合多糖の１種で、これを脱アセチル化することでキトサンは得Creation of tailor-made type cosmetic
materials using human bio-materials−Preparation and properties of composite
film consisting of human hair proteinsand chitosan−
Toshihiro Fujii

留水に対して透析を行い、約 15 ㎎ / ㎖のキトサン溶液を得た。
毛髪タンパク質粒子の懸濁液とキトサン溶液の混合溶
液をテフロン板またはシャーレ上にフィルム重量１−３㎎/㎠となるようにキャスティングし、室温で一晩自然乾燥させることにより、厚さ 15−50 ㎛の複合フィルムを作製した。

Faculty of Textile Science andTechnology, Shinshu University−6−ヒト由来の生体材料を用いたテーラーメイド型化粧品基材の創出

2．2

吸収スペクトル測定−ヒト毛髪タンパク質とキトサンから成る複合フィルムの作製と性質−

2．6

接触角測定

石英板上に約１㎎ /㎠となるようにキャスティングして接 触 角 は FACE Measurement and Analysis System

フィルムを作製した。吸収スペクトル（260−400nm）はFAMAS を使用して測定した。フィルムは約２時間蒸留

分光光度計にて測定した。測定に使用したフィルムは、毛水で膨潤させた後、測定は 10 カ所で行い、その平均値を髪タンパク質粒子とキトサン溶液の混合溶液を、室温にて算出した。

3−5 時間自然乾燥させたものを使用した。フィルムの厚3．結果と考察さは 15−20 ㎛であった。

3．1
2．3

フィルムの形態

フーリエ変換赤外吸収スペクトル測定（FT-IR）

ヒト毛髪タンパク質とキトサンを合計した質量を一定と赤外吸収スペクトル測定は FTIR-8400（Shimadzu 製）

して、その質量比を変えた複合フィルムを作製した（Fig.

を使用し行った。凍結粉砕したフィルムを臭化カリウムと1）。毛髪タンパク質フィルムは薄茶色を帯び半透明である。

混合し、タブレットに成型したものを使用した。測定範囲

一方、キトサンフィルムは透明なフィルムであった。複合は 400 − 4600 ㎝−1 で積算回数は 50 回とした。

フィルムにおいては、キトサン含量が 5 〜 20％の複合フ
ィルムは白味を帯びているが、20 − 80％のものではほぼ

2．4

熱重量損失測定（TG）

透明であった。SEM 観察において特別な構造は見られな熱に対する挙動を調べるため、Thermo plus TG-8120

かった。

を使用し熱重量損失測定を行った。フィルムを細かく砕いたものを使用し、昇温速度は 10℃ /min で 100℃から 500℃

3．2まで温度を上昇させ、窒素中でフィルム重量を測定した。

吸収スペクトル測定

フィルムの 260 − 400nm における吸光度を Fig. 2 に示した。複合フィルムはキトサンフィルムおよび毛髪タンパ

2．5

膨潤率測定

ク質フィルムに比べて吸光度が増大し、毛髪タンパク質含

膨潤率は厚さ 40−50 ㎛のフィルム片５−10 ㎎を使用し、量 80 − 90％の複合フィルムで特に高くなった。これは毛37℃で２時間蒸留水に浸すことで増加するフィルムの重量

髪タンパク質含量 80 − 90％の複合フィルムが光を通しに（膨潤重量）を測定した。測定は５回行い、その平均値をくいフィルムであることを示しており、肉視によるフィル算出した。

ム観察の結果と一致していた。また 280nm 付近の波長に膨潤率（％）=（膨潤重量（g）−乾燥重量（g））／乾燥重量（g）
×100

Fig. 1

おいて、キトサンフィルムにはピークが見られなかったが、Photographs of the composite films consisting of hair proteins (HP) and chitosan−7−

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

毛髪タンパク質が加えられた複合フィルムでは吸収が見ら

3．4

熱重量損失測定（TG）れた。これは主成分のケラチンを構成しているに芳香族のフィルムの熱重量損失測定（TG）の結果を Fig. 4 に示

アミノ酸などに依っているものと思われる。特に、UV-B

した。フィルムは 250 ℃付近から分解が始まり、徐々に重（290 − 320nm） と UV-C（200 − 290nm） の 紫 外 線 を 吸量を損失していった。500 ℃においては、毛髪タンパク質収するため、UV 吸収および反射型のフィルムとなること

フィルムが重量の約 80％を損失しているのに対し、キトが期待される。

サンフィルムでは約 60％に留まっていた。複合フィルム
においては毛髪タンパク質含量が少ないフィルムほど重量3．3

赤外吸収スペクトル測定 (FT-IR)の損失は少なかった。したがって、キトサンを含むことに各フィルムの 400 − 4600 ㎝ における赤外吸収スペク−1

トルを Fig. 3 に示した。複合フィルムの波形は、毛髪タン

より、複合フィルムは毛髪タンパク質フィルムよりも熱に対する安定性が増大することが示された。

パク質フィルムとキトサンフィルムの波形を加算した波形を示した。仮に毛髪タンパク質とキトサン分子が互いに結

3．5

膨潤率

合しポリイオンコンプレックスなどを形成すれば、新たなフィルムを２時間蒸留水に浸したときの膨潤率を Fig. 5分子状態を示すピークが複合フィルムには生まれると考えに示した。最も重量が増加したキトサンフィルムにおいてられるが、今回作製したフィルムにおいては新たな分子状は、乾燥時の約 2.5 倍の水分重量を含んだ。毛髪タンパク態の変化を示唆するピークは確認できなかった。このこと

質含量が増加するにしたがって膨潤率は減少し、毛髪タン

から、タンパク質分子とキトサン分子がフィルム内で独立

パク質フィルムでは乾燥時の重量とほぼ同量の水分を含ん的に存在しているミクロ相分離の構造である可能性が高いものと思われた。

Fig. 2 Spectrometry of the composite films

Fig. 4

Thermogravimetric curves of the composite films−8−Fig. 3

FT-IR spectra of the composite films

Fig. 5

Water content of the composite films

ヒト由来の生体材料を用いたテーラーメイド型化粧品基材の創出でいた。キトサンは親水性ゲルを形成するといわれている−ヒト毛髪タンパク質とキトサンから成る複合フィルムの作製と性質−

謝辞

ため、両者の比率によりフィルムの膨潤率は調節が可能となる。

本研究にご助成頂きました財団法人コスメトロジー研究振興財団に深謝申し上げます。また、本研究の遂行にあたフィルムを 24 時間蒸留水に浸しその溶出率を調べたとり、共同研究者の野田裕人君に厚く御礼申し上げます。

ころ、いずれのフィルムにおいても 10％以下であった。
また 70％エタノール処理をしたフィルムにおいても同様（参考文献）

な結果が得られた（data not shown）。

１）藤井敏弘：セルフメディケーションに向けたヒト毛髪
蛋白質フィルムの創製と販売，バイオインダストリー ,３．
６ 接触角測定19(12), 22-27, 2002.

蒸留水中でのフィルムの接触角を Fig. 6 に示した。接触

２）藤井敏弘 , 小林俊一：セルフ - リサイクルに向けたヒ

角はキトサンフィルムが約 40°で最も高く、毛髪タンパク

ト毛髪タンパク質からの個人対応材料の開発，日本香粧品学会誌 , 30(1), 5-9, 2006.

質含量が増加するにしたがって減少する傾向を示した。毛髪タンパク質フィルムにおいて約 35°であった。接触角は

３）Nakamura, A., Arimoto, M., Takeuchi, K., and Fujii, T.:

濡れ特性を評価するための指標のひとつで、一般的に高い

A rapid extraction procedure of human hair proteins

ほど撥水性が高いと考えられている。毛髪タンパク質フィ

and identification of phosphorylated species, Biol.
Pharm. Bull., 25, 569-572, 2002.

ルムはキトサンとの混合化によりその接触角を微妙に調節

４）Fujii, T., Ogiwara, D., and Arimoto, M.: Conventient

することが可能であることが明らかとなった。

４．結

procedures for human hair protein films and properties

語of alkaline phosphatase incorporated in the film. Biol.
Pharm, Bull., 27, 89-93, 2004.

中間報告などでヒト毛髪タンパク質フィルムから機械的な刺激により微粒子への変換とその形態と性質について報
告した

６, ７）

５）Fujii, T. and Ide Y.: Preparation of translucent andflexible human hair protein films and their properties,。今回は、毛髪タンパク質微粒子を利用してキBiol. Pharm. Bull., 27, 1433-1436, 2004.

トサンと混合したフィルムを作製し、その形態と物理化学的な性質に重点をおいて調べた。この結果、両者は相分離６）Kobayashi, S., Morikawa, H., Ishii, S., and Fujii, T.:

しているフィルムであるが、キトサンが毛髪タンパク質フDevelopment of blood analog fluids using human hair

ィルムに混合されることにより機械的な強度の改善が見ら

protein particles. JSME Int. J. Ser. C, 48, 494-498, 2005.

れた。また、キトサンが 5 〜 20％添加されることにより

７）藤井敏弘：Preparation and properties of protein particles

白濁化が生じることと、キトサンの添加量に依存した複合

from human hair, コスメトロジ研究振興財団 研究業績

フィルムの膨潤率の増大と接触角の微増が認められた。

中間報告集 , 16, 25-31, 2007.

キトサンが衛生関連の商品に利用されている一因として、

８）戸倉清一：物性・機能と用途，矢吹稔編，：最後のバ

抗菌作用を示すことに依っている。今後、フィルムの抗菌

イオマスキチン、キトサン，技報堂出版，1995，51-86

性についての評価を行い、コスメトロジー分野における個頁.

人対応型新規素材としての可能性を検討する。

Fig. 6

Contact angles of the composite films−9−安定分散かつ耐熱性を併せ持つ酵素担保ナノ粒子の設計

筑波大学大学院数理物質科学研究科

原

暁 非、長 崎幸 夫

Glucose dehydrogenase (PQQ-GDH) and α-methoxy-poly(ethyleneglycol)-b-poly[2-(N, N-dimethylamino) ethyl
methacrylate] (PEG-PAMA) were dropped into gold sol (pH=9.0) to formulate enzyme/polymer/gold hybridizes
called nanozymes. Size growth and red-shift in the surface plasmon resonance (SPR) of the gold nanoparticles(GNPs), observed in dynamic light scattering (DLS) and ultra-visible (UV) spectroscopy analysis, respectively,
suggested the adsorption of the PQQ-GDH and PEG-PAMA on the surface of the GNPs. Transmission electron
microscopy analysis (TEM) showed that the nanozyme mainly composed of single GNP, on the surface of which
the PQQ-GDH and/or the PEG-PAMA were loaded. ζ-Potential of the nanozymes evidenced the presence of
the PEG-PAMA layer around the GNP. The nanozyme thus obtained was highly dispersible even though underphysiological saline condition for one week by the protection of the peripheral hydrophilic PEG shell. It also kept
its architecture in fact spanning broad pH regions from 9.0 to 2.5, providing a desirable, convenient approach togenerate nanozymes at various pH regions, retaining high dispersion stability of the GNPs. It is interesting to notethat apparent enzymatic activity decreased ca. 40% when the PQQ-GDH adsorbed on bare GNP surface, while coimmobilization with the PEG-PAMA gave 1.4 times higher activity than that of free enzyme, associated with notable
improvement of the poor thermostability of the PQQ-GDH at pH=9.0, 25℃ . These results significantly indicated the
responsibility of the PEG-PAMA not only for the structure stability of the nanozyme, but also its enzymatic activity.

1．緒

えば、蛋白質工学の方法により、酵素活性にあまり影響し言ない程度に、静電相互作用や疎水性相互作用、化学結合な酵素の利用は、酵素という概念が現れるかなり前からもど様々な力で酵素分子の構造を固定する。この方法は良い

行われており、ほぼ人類の歴史と共に始まったと言われて結果が得られるものの、複雑、専門知識が要るという欠点いる。これは、酵素が卓越した触媒機能（高効性・特異性）がある。従って、簡単かつ有効な方法が必要である。
固定化酵素、特にナノ粒子に固定された酵素の研究は、を有することに強く起因している。近年、生化学の発達による酵素の作用機構の解明や、新しい酵素源（細菌、微生近年非常に注目を集めている。固定化酵素の作成は、物理物など）の開発、特に多様な設備及び技術（分離、精製、あるいは化学吸着方法により酵素を簡単にナノ粒子へ固定

分析）の顕著な進歩などは、酵素の研究を著しく促進し、することである。このように作った固定化酵素は、例えば、酵素の応用は各領域まで広く浸透している。現在、醸造・工業用の反応触媒として、反応系からの分離・回収・再利発酵工業をはじめとして、繊維工業、皮革工業、食品工業、用が元のフリー酵素より簡単・便利になり、経済面の有利

医薬品工業など広い分野にわたっている。我々の日常生活さは明らかである。また、固定化により酵素安定性の改善には欠けないものになってきている。

は、注目されるもう一つの重要な原因である。
我々は、この固定化酵素の方法を利用し、モデル酵素と一方、よく知られているように、酵素は、生体触媒で、もっとも代表的な機能性タンパク質である。ネイティブなして油脂分解酵素リパーゼを金ナノ粒子やシリカ粒子の表立体構造を形成してはじめて触媒機能を発揮する。逆にい面へ吸着させ、リパーゼの固定化酵素（ここは、酵素複合

うと、変性した酵素には触媒機能はない。よって、酵素は体と呼ぶ）を作成した。この作り方は、酵素と粒子を混合

タンパク質と同様に、周囲環境（温度、酸、アルカリ、有させるだけで非常に簡単である。また、ナノ粒子は低毒性、機溶媒など）に対し、非常に敏感である。この変性しやす

不活性、良い生体適合性、低コスト（シリカ粒子）、特別

い特徴は、酵素の応用を大幅に制限している。この問題をの光学活性（金粒子）など多様な利点を有するため、この解決するために、今まで様々な方法が報告されてきた。例

ような酵素 / ナノ粒子複合体の応用範囲は広いと考えられる。予想通りに、酵素複合体の耐熱安定性が著しく向上す

Design of enzyme-loading nanoparticles
with both high thermostability and highdispersability

共固定することにより、極めて高い分散安定性を示すこと

Yukio Nagasakiを見つけている。これは、粒子への固定化が酵素構造の変Graduate School of Pure and Applied
Sciences, University of Tsukuba, Tsukuba
Research Center for Interdisciplinary
Materials Science (TIMS)化を抑制し、更に PEG 密生層が粒子の凝集を抑えるとと1）ることを見出した 。特に、酵素と共に親水性の PEG をもに酵素リフォルディング能を示した結果と考えられる。

− 10 −

以上の概念を基にして、本研究では、より実用性が高安定分散かつ耐熱性を併せ持つ酵素担保ナノ粒子の設計

い酵素の複合体の研究を行うことを目的とした。グルコ

１週間行った。

ー ス 酸 化 酵 素 glucose oxidase（GOD）は、 昔 か ら よ く

E/Au/PEG 酵素複合体に各濃度の塩酸溶液を加え、複研究され、現在血糖値の測定やグルコースセンサーに広合体溶液の pH 値を酸性に調整した。上の実験と同様に、く応用されている。しかしながら、グルコースの酸化に酵素複合体の粒径変化（30 分間から１週間以内）及び金は、酵素が不可欠であり、サンプル中の酵素濃度により粒子の SPR 吸収波長の変化（30 分後）を評価した。

測定値は大きく変わるため、これは致命的な欠点であった。一方、pyrroloquinoline quinine（PQQ）
を含む Glucose

2．4

酵素複合体の活性

dehydrogenase（PQQ-GHD）は、GOD と比べて、反応性

Tris-HCl 緩衝溶液（20mM、pH＝９）0.75 ㎖に、0.1 ㎖が高いことと酵素から影響を受けないことが魅力的な利グルコースの Tris-HCl 溶液（１mM）と 0.05 ㎖ 2,6-dichlo

点である。また、グルコース以外の糖類とも反応し、人工

lophinolindophenol（DCIP）水溶液（0.08 mM）を入れた。

電子受容体も沢山あるため、GOD より簡単にグルコース

そして、0.1 ㎖の酵素複合体溶液を添加し、良く混ぜた後、センサーを作ることが可能である。しかしながら、PQQ-

600nm において DCIP の UV 吸収減少速度を酵素反応速

GDH は熱に対して不安定であり、これが実用化を妨げて度として測定した。

いる

２−４）

。従って、本研究で提案する酵素 / 金粒子の酵素

複 合 体 に よ り PQQ-GDH の 耐 熱 安 定 性 が 改 善 で き れ ば、

酵素複合体を 25℃で５時間静置し、１時間ごと酵素複合体の活性を前と同様に測定し、活性の安定性を評価した。

グルコースセンサーの研究・応用に大きく貢献することが３．結果と考察期待できる。

２．実
2．1

3．1

験

酵素複合体の構造分析

図 1a に示すように、GNP 溶液に PQQ-GDH を添加する

酵素複合体の作成と、その量の増加に伴い、GNPs の表面プラズモン（SPR）

グルコース酸化酵素 PGG-GDH（pH=9、0.1 ㎖）と pH=

吸収は徐々に長波長側に移動し、吸収強度も強くなった。

9 に 調 整 さ れ た 市 販 品 金 ナ ノ 粒 子（GNPs、 粒 径 10 nm、DLS の測定結果により、この SPR 変化と共に、複合体の0.9 ㎖）のトリス緩衝溶液（Tris-HCl、20 mM、pH=9）を

サイズも増大した（図１b）。酵素と金ナノ粒子の個数比（E/

混ぜることにより、PQQ-GDH を GNPs の表面へ固定させAu）が４以上になると、複合体のサイズが異常に大きくた。25℃で 10 分間静置した後、更に、正電性のセグメンなると共に、サイズの再現性も悪くなった。４℃で一週間

トを有する親水性ポリマー PEG/ ポリアミン α-methoxy-

保存した後、低い E/Au 比の複合体よりこのサイズが顕poly（ethylene glycol）-b-poly [2-（N, N-dimethylamino）

著に増大した。大量の酵素の金粒子表面への吸着により弱ethyl methacrilate]（PEG-PAMA） の Tris-HCl 緩 衝 液くなった GNPs 間の静電斥力が、複合体の凝集を促進した

0.05 ㎖を添加し、PQQ-GDH/ 金粒子 /PEG（E/Au/PEG）ためと考えられる。一方、E/Au 比一定（E/Au=2）の複酵素複合体を調整した。

合体へ、更に PEG-PAMA を加えると、同様の変化傾向を示した（図２）。PEG-PAMA と金ナノ粒子の個数比（PPg2．2

酵素複合体の構造分析＝ PEG-PAMA/Au） が 240 倍 以 上 で は、E/Au/PEG 複

Zetasizer Nano ZS（Malvern、UK） を 利 用 し て、 動

合体の粒径と SPR 吸収波長がほぼ安定になった。物質が的光散乱（DLS）と表面電位の測定により酵素と PEG-

GNPs 表面に吸着すると GNPs の表面屈折率が変わるた

PAMA の吸着によって起こる金ナノ粒子のサイズおよびめ、SPR 吸収が変化する 。従って、PQQ-GDH と PEG-

表面電位の変化を確認した。紫外・可視分光分析（UV、PAMA が金表面へ固定されたことが SPR と DLS の実験

PL-2500、島津）により、酵素と PEG-PAMA の吸着によ結果により証明された。

5）って起こる金ナノ粒子の表面プラズマ（SPR）吸収波長の以上の結果により、E/Au=2 と PEG-PAMA/Au=480 の変化を確認した。透過型電子顕微鏡（JEM-100CX、JEOL）

酵素複合体（それぞれ NZ-2-0 と NZ-2-480 で表示）を酵素を使用し、TEM 測定により形成された E/Au/PEG 酵素

複合体のモデルとして用い、各特性の検討を行った。

複合体の金ナノ粒子の構成を確認した。

GNPs（10 nm）、フリー酵素（DLS 測定結果：8 -10 nm）、
及び酵素複合体（NZ-2-0 と NZ-2-480）のサイズ（DLS 測

2．3

素複合体の分散安定性

定結果）と PEG セグメントの水中鎖長（5 nm）を比較し塩濃度 150mM になるように E/Au/PEG 酵素複合体にたところ、NZ-2-0 と NZ-2-480 がそれぞれ主に一つの金ナ

NaCl を加えた。酵素複合体の粒径変化（30 分間以内）及ノ粒子から構成されたと考えられる。これは、TEM 写真

び金粒子の SPR 吸収波長の変化（30 分後）を 25℃で測定（図 3a と 3b）により確認された。また、DLS 測定結果にした。その後、酵素複合体を４℃で保存して、粒径変化をより、酵素複合体のサイズ分布は多少多分散であり（図− 11 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

1b と 2b）、数個 GNPs の凝集体が少量存在することが確

3．3

素複合体の活性認された。これも TEM 写真と一致する。更に、図 3c と図８に示すように、PQQ-GDH は金ナノ粒子へ固定され3e を比べて、酵素複合体の場合は、金ナノ粒子の表面にた後、活性がフリー酵素より６割程度に減少した。その酵素のような球状なものが吸着していることは明らかにな上に PEG-PAMA で修飾すると、フリー酵素に比べて活性った。従って、本研究で作成した酵素複合体は、主に一つが若干大きくなった。Km 及び最大反応速度を評価した結の金ナノ粒子へ酵素と PEG ポリマーの共固定により構成

果は、NZ-2-0 複合体とフリー酵素は、最大反応速度とされた。酵素複合体の形成過程は、図４のようにイメージ

Km. glucose 値（酵素とグルコース反応する Km 値）がほぼ一できる。

致し、金表面への固定により酵素の失活がないことを確認した。しかし、フリー酵素より NZ-2-0 複合体の3．2

素複合体の分散安定性

Km･DCIP 値（酵素と DCIP 反応する Km 値）は倍ぐらい増

NaCl 濃 度 150 mM に な っ た 後 30 分 以 内 で、NZ-2-0 の大した。NZ-2-480 複合体とフリー酵素は、この三つの値

サイズが 20 倍ぐらい上昇したことに対して、NZ-2-480が実験誤差範囲内では一致であった。
（表 1）よって、酵は、４℃で一週間静置したことに係わらず、サイズの変素は金ナノ粒子に固定された後、周囲環境が疎水性に変化

化が全く観察されなかった。
（図５）PEG-PAMA の代わしたため、酵素と DCIP 基質の接触が悪くなったと考えらりに等量（PEG-PAMA/Au=480）および二倍量の PEG-れる。親水性の PEG-PAMA と共固定の場合、酵素の親水

OH をそれぞれ NZ-2-0 の中に加えて調製した酵素複合体

性の周囲環境は推持されたため、Km 及び最大反応速度は（control-480 と control-960） は、control-960 で は、 こ のフリー酵素と比べて変化してなかった。

サイズ変化は多少抑制されたが、control-480 にはまった

25℃で５時間静置すると、フリー酵素の活性は速やかにく抑制効果がなかった。従って、生理塩濃度に対する分低下した。これに対して、酵素複合体の活性変化は遅くな

散安定性は、NZ-2-480 自身の特性で、フリー PEG-PAMAった。特に NZ-2-480 複合体の場合、５時間後の酵素活性（使用した酵素複合体は精製してないため）の分散剤効果

がフリー酵素の初期活性と一致した。酵素複合体は、フリ（PEG-OH と類似する）に由来したものとは考えられない。

ー酵素より活性安定性が顕著に改善された。

NZ-2-0 の表面電位は約− 35mV（図６）であるため、粒子4．総間の静電斥力により分散しているが、塩の添加によりこ括の静電斥力が弱くなって、粒子が凝集した。NZ-2-480 の固定化酵素は注目されている現在でも、固定化酵素自身

表面電位は零に近いので（図６）、親水性の PEG によりの構造に関する詳しい情報はほぼ報告されていなかった。

分散している。この PEG 層が粒子の凝集を阻害するため、本研究では提案する PEG/ 酵素共固定系はこれまでの“単NZ-2-480 の分散安定性に対して大きく寄与していると考なる”固定化酵素と比べて、飛躍的な特性の向上が期待でえられる。

きるだけでなく、その構造と性質の関連を解明することは、

酵素複合体溶液の pH を９から酸性まで調整した後 30

このようなナノ粒子上の PEG/ 酵素二元系の特徴を抽出し、分間以内のサイズ変化は図７に示している。溶液の酸性は一般化することで実用化につなげる極めて重要なプロセス

強くなればなるほど、NZ-2-0 サイズの増大は速くなった。

である。従って、本研究では、酵素複合体の構造を明らか

同時に、SPR 吸収波長は長波長側に移動した。酸性環境にさせるため、構造と各性質（分散安定性や酵素活性）のにおいて、NZ-2-0 は不安定で、凝集した。これに対して、関連、更に固定化酵素の性質コントロール・設計にとってNZ-2-480 のサイズ及び SPR 吸収波長はほぼ変化せず、非も、非常に興味深い研究であると考えられる。タンパク質

常に安定であった。酸性環境下では、酵素が正電性になっ工学の方法を利用し、PQQ-GDH の安定性を向上させようて（PQQ-GDH の等電点は 9.5 である）
、負電性の金ナノ粒とする試みは多く、その一部は有用であるものの、すべて子と静電相互作用により NZ-2-0 粒子の凝集を促進したとの酵素化学に適用するためには難がある。本研究のように考えられる。しかしながら、NZ-2-480 は、PEG ポリマー

簡単、便利、短時間で調製できる、かつ有効な方法は、他の共固定により金ナノ粒子の表面電荷がほぼゼロ（表面電にはない。

位の結果）になったと共に、親水性 PEG 層がこのような凝集（もしあれば）を障害するため、粒子の凝集は発生しなかった。よって、酸性環境においても、NZ-2-480 酵素
複合体の PEG 層の外れはなく、酵素複合体は安定に分散できることが見出された。

− 12 −

安定分散かつ耐熱性を併せ持つ酵素担保ナノ粒子の設計

Figure 1 (a) E/Au-dependent peak top wavelengths of the SPR bands of NZ-m-0; (b) variations in the diameterand polydispersity index of NZ-m-0 as the E/Au ratio increases from 0 to 7. (m denotes the molar ratio of
enzyme to GNP(E/Au) and 0 denotes the ratio of PEG-PAMA to GNP (PEG-PAMM/Au)).

Figure 2 (a) PPg-dependent peak top wavelengths of the SPR bands of NZ-2-PPg ; (b) variations in the diameterand polydispersity index of NZ-2-PPg as the PPg value rises from 0 to 960. (PPg denotes the ratio of PEGPAMA to GNP (PEG-PAMA/Au)).

− 13 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

Figure 3 (a) and (b) are TEM pictures of NZ-2-0 and NZ-2-480，respectively; (c) and (e) are TEM
pictures of NZ-2-480 and GNPs, both dyed using silicotungstic acid aqueous solution. (d) is anamplified TEM picture of a part of (c) for better viewing.

Figure 4酵素複合体の作成イメージ図− 14 −

安定分散かつ耐熱性を併せ持つ酵素担保ナノ粒子の設計

Figure 5 (a) Physiological saline-induced variations in the size of NZ-2-0 (closed circle),
NZ-2-480(closed diamond), control-1 (PEG-OH/Au=480; open triangle), and control-2
particles(PEG-OH/Au=960; closed triangle), during the first 30 minutes after salt
addition. (b) Pictures of NZ-2-0, control-1 and NZ-2-480 particles in 150 mM NaCl after
being kept at 4℃ for one week. (C) Time − dependent variations in the size of NZ-2-480
particles in 150 mM NaCl 4℃ .

− 15 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

Figure 6 Variations in the -potential of freshly prepared nanozymes
particles as a function of the PEG-PAMA/Au ratio (solid line) and the
PEG-OH/Au ratio (dashed line).

Figure 7 pH-induced variations in the SPR spectra (a, b; during the first 30 minutes after the addition of
HCl of various concentrations) and size (c, d; during the first 30 minutes after the addition of HCl ofvarious concentrations) of NZ-2-0 (a, c) and NZ-2-180 (b, d).

− 16 −

安定分散かつ耐熱性を併せ持つ酵素担保ナノ粒子の設計

Figure 8 (a) Influence of the PPg value on the normalized apparent enzymatic activity of the NZ-2-PPg
nanozymes; (b) time-dependent normalized apparent enzymatic activity of NZ-2-PPg and free enzyme at
25℃ . (From left to right: 0, 1, 2, 3 and 4 hours, for each group.)

Table 1

Kinetic parameters of PQQ-GDH in free enzyme, NZ-2-0, and NZ-2-480-3-4

K m. glucose (10 M)

Km. DCIP (10 M)

Vmax (µmol/min)

0.36
0.31
0.38

2.31
5.01
2.28

1.52
1.49
1.57

Free E
NZ-2-0NZ-2-480（参考文献）

thermal stability of the water-soluble pyrroloquinoline

１）Nagasaki Y, Yoshinaga K, Kurokawa K, et al. :quinine glucose dehydrogenase by single amino acid

Thermal and Dispersion Stable Lipase-installed Goldreplacement, Enz. Microbiol. Technol. 26, 491-496, 2000.

Colloid, - PEGylation of Enzyme-installed Gold Colloid-,４）Igafashi S, Okuda J, Ikebukuro K, et al. : Molecular

Colloid Polym. Sci. 285, 563-567, 2007.

engineering of PQQGDH and its applications, Arch.

２）G e i g e r O , G o r i s c h H , : R e v e r s i b l e t h e r m a lBiochem. Biophy. 428, 52-63, 2004.

inactivation of the quinoprotein glucose dehydrogenase５）Aoki S, Zhou H. S, Honma I, et al. : Observation of

from Acinetobacter calcoaceticus, Biochem. J. 261, 415-

Cytochrome b-562 Adsorption on Gold-Particle Surface

42l, 1989.

by Optical Absorption Measurement, Surface Rev. and

３）Sode K, Ootera T, Shirahane M, et al. : Increasing theLet., 3, l137-1141, 1996.

− 17 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

好熱菌由来カロテノイド化合物の生体膜安定化効果の研究

大阪府立大学大学院理学系研究科生物科学専攻

原正 之

Polar carotenoids are known to stabilize lipid bilayer membranes. We investigated the membrane-stabilizing
effect of three synthesized polar carotenoids, thermozeaxanthin (TZ), zeaxanthin-glucoside (ZG) and zeaxanthin(Z), using the fluorescent calcein-leakage measurement from the calcein-entrapped liposomes composed ofdipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC). The addition of TZ stabilized the liposomal membranes composed of DPPCat pH values ranging from 4.0 to 10.0. The addition of three carotenoids, TZ, ZG and Z, stabilized the membraneat acidic and neutral pH values ranging from 4.0 to 7.5. The values of leakage were lower at 30 ℃ and highest
at 40 ℃ and subsequently, gradually decreased at the higher temperature. The addition of TZ and Z stabilized
the membranes, whereas, ZG destabilized the membranes at a temperature higher than 50 ℃ . In addition, themembrane-stabilizing effect of the carotenoids with the calcein-entrapped liposomes composed of lipids extracted
from Thermus thermophilus were investigated. The addition of TZ resulted in stabilization of the membrane at all
ranges of pH values. However, the addition of Z and ZG destabilized the membrane.

１．緒
１・１

に対して、Thermus thermophilus の脂質組成の特徴として

言は分岐脂肪酸を含む糖脂質等を含むことや

好熱菌 Thermus thermophilus

１, ２, ３）

、膜中に黄色から橙色のカロテノイド類を含有していることが知ら温泉等の高温水域に生育する好熱性の細菌類が、常温

れている

４, ５）

。また、これらの糖脂質やカロテノイド類の性のそれらに較べて、なぜ高い耐熱能を持つのかについ

含有量が菌の培養温度に依存して変わることなども報告さては、これまでに多くの研究者が興味を持ち、核酸、蛋

れていることなどから、これらの脂質組成と菌の生体膜の白質、脂質などの生体分子の熱安定化機構が研究されて耐熱性との関与が考えられてきた。

きた。Thermus thermophilus は 50℃から 82℃（至適温度

一般に長く伸びた共役二重結合を有するカロテノイド類

は 70℃から 75℃）で生育する代表的な好熱性細菌であり、は抗酸化剤として知られており、ラジカル補足剤（radical

グラム陰性・好気性の細菌である。この菌は古細菌または

scavenger）としての働きを持つ場合が多いので、高温域始原菌（archaea）と呼ばれるグループではなく真性細菌

で早く増殖する好熱菌において呼吸などの代謝活動に伴っ（eubacteria）に属している。生育温度だけを較べるならて生じる活性酸素を消去するのに、カロテノイド類が役立ば、さらに高温で生育可能な菌も他に多く存在するが、T.

っているのではないかという可能性も考えられる。しかし、thermophilus の利点としては、その発見以来、我が国や米1995 年に Yokoyama 等により本菌から図１に示すような、国を中心として多くの研究者が微生物自体やその生産する糖と脂肪酸を結合した特徴的な構造を持つ極性カロテノイ

蛋白質の耐熱性機構を研究するためのモデルとして用いてドである thermozeaxanthin（TZ）が発見されたことによきたため、すでに多くの学問的知見が蓄積していることがり、膜貫通型脂質として生体膜の熱安定化に寄与している

上げられる。遺伝子操作を行うためのベクター系もすでにのではないかというモデルが提唱され、注目を集めるよう開発されているので、物質生産に適した組み替え体を作るになったなど、代謝工学的な研究にも極めて適した細菌であると言の極性カロテノイドが、膜貫通型脂質としてリベットの様える。

にリン脂質膜に挿入され、細胞膜を安定する効果があると

６, ７）。また、これに先立ち、TZ 以外にも幾つか

８）いう説が Nakatani 等により提唱されていた 。

１・２

好熱菌とカロテノイド

常温で生育する多くの真性細菌がリン脂質を多く含むの

１・３

カロテノイドの膜安定化効果

我 々 は こ れ ま で に、 様 々 な リ ン 脂 質 ２ 分 子 膜 小 胞
Studies about the effect of carotenoids
f rom t her moph ilic bacter ia on t hestability of biological membranes
Masayuki Hara
Depa r t ment of Biolog ica l S cience ,Graduate School of Science, Osaka
Prefecture University（liposome）を作製してその性質を明らかにし、さらにこれらをそのまま、またはハイドロゲルなどを組み合わせて薬剤の徐放に生体材料（biomaterial）として利用するための技術についての基礎的な研究を行ってきた。以前に、水溶性の蛍光色素 calcein を封入した liposome からの色素の漏出により脂質膜の安定性を評価する実験系を用いて、T.

− 18 −

好熱菌由来カロテノイド化合物の生体膜安定化効果の研究

thermophilus の菌体より抽出した TZ が脂質膜を安定化す
９）liposome の調製方法は、以前に報告したものとほぼ同9）ることを、実験的に証明した 。TZ の研究を始めた当初

じ で あ る 。 脂 質 と し て は dipalmitoylphosphatidylcholine

は、Hoshino 等が遺伝子工学的に作製した T. thermophilus（DPPC）を用い、100 mM calcein（pH7.5）を含む liposomeのカロテノイド大量生産株を 70℃程度の温度で振とう培の調製を行った。まず水和法と凍結融解操作にて多重膜養し、生産するカロテノイドを高速液体クロマトグラフィ

liposome（MLV）を作製した後、孔径 100 nm の膜を用いー（HPLC）等で精製、分取して実験に用いていた。しかし、

た限外濾過により一枚膜 liposome とし、Sephacryl S-300

この場合には脂肪酸の鎖長の揃った標品を大量に得ること

column ゲル濾過により外液の calcein を除去して 50mMが難しく、有る程度鎖長のばらついた混合物になりがちでTris HCl（pH7.5）に懸濁された一枚膜（LUV）の calcein

あった。今回の実験では脂肪酸の鎖長の揃った TZ

封入 liposome 溶液を得た。

いて研究を行った11）を用

この方法で得られた一枚膜 liposome の粒径を動的光散

。

２．実
２・１

10）

乱測定法（DLS-6000 AS, Othuka Electoronics, Japan）で

験

測 定 し た。 そ れ ぞ れ control/liposome : 90.0±33.8 nm、

liposome の調製方法

Z/liposome: 1012.4±38.2 nm、ZG/liposome: 127.8±29.8

Yamano 等が有機化学的に合成した thermozeaxanthin

nm、TZ/liposome : 93.9 + 31.1 となっており、実験試料（TZ） お よ び そ の 合 成 中 間 体 で あ る zeaxanthin（Z）、により多少のばらつきがあるものの、概ね 100 nm 前後のzeaxanthin-β-gludoside（ZG）を提供頂いて以後の実験

粒径を持っている事が確認された。

に用いた

10）

。

図１

実験に用いた３種のカロテノイドと TZ のリン脂質２分子膜への挿入モデル

図２ Calcein 封入 DPPC-liposome の調製方法
TZ:DPPC = 1:100 に混合した脂質をナス型フラスコにて減圧乾燥し、100 mM calcein (pH 7.5) 水溶液に懸濁して 10 mg lipid/ml とした。この懸濁液の凍結融解を５回行い、フィルター（孔径 100 nm）で限外濾過して粒径を揃えた後 Sephacryl S300 カラムでゲル濾過を行ってリポソーム外液のカルセインを除き、50 mM Tris-HCl (pH 7.5) 緩衝液に懸濁された Calcein 封入 DPPC-liposome を得た。

− 19 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

２・２

蛍光色素を用いた膜安定性評価

された測定原理によると、漏出した calcein による蛍光強Calcein は本来強力な蛍光（Ex 488nm, Em 517nm）を度の経時的な増加のみで、現象は起きないはずであるが、発する蛍光色素であるが、高濃度では自己消光して蛍光を実 際 に は 図 ４ の（B），
（D），（E） 等 に 見 ら れ る よ う に、発しない。Calcein が liposome の外部に漏出して希釈されバックグラウンドレベルの漸次的な減少が起きる場合があた場合にのみ蛍光を発するので、Calcein 封入 liposome 懸る。この原因として、漏出した calcein が希釈された状態

濁液の蛍光を測定することで liposome 膜を横切る Calcein

では経時的に退色するのではないかと考え、その程度を確の漏出量を測定することが可能で、これが膜安定性の指標認するために calcein 水溶液の蛍光強度の時間経過を測定となる。懸濁液の蛍光強度の初期値を F0、ある条件でのした（図４（F））。

蛍光強度値を F’、0.03％（w/v）Triton X-100 を溶液に添

一般に DPPC-liposome 膜の安定性は pH に依存してお加して全ての liposome が溶解した後の封入 calcein 全量にり、酸性および塩基性 pH では、やや縦軸の数値が大きく基づく蛍光強度値を Ft とすると、以下の関係式により漏なる傾向がみられた。これは脂質の荷電の変化などによる出量を計算できる。

違いと思われる。図４の時間経過のグラフでは、測定値の点が control より下にあれば、膜が安定化されていると解漏出量（％） ＝ （F’− F0）／（Ft − F0）

釈できることになる。

漏出量の数値が高いほど、liposome 膜が不安定化してZ，ZG，TZ の ３ 種 類 の カ ロ テ ノ イ ド の 添 加 に よ る

色素の漏出が促進されていると解釈できる。Liposome 調

DPPC-liposome 膜安定化効果の程度を、図４の時間経過

製時に TZ をあらかじめ DPPC に対してモル比で１％添のグラフより 10 分（概ね、calcein 漏出の初期速度を表す

加しておくと、TZ 添加 liposome となるので、非添加の場と考えられる）、および 200 分（概ね、calcein 漏出の到達合と比較して TZ の膜安定化効果を調べることができる。

定常値を表すと考えられる）における蛍光強度の数値について纏めた結果を表１に示す。表１では不等号または等号

２・３

好熱菌の脂質により膜安定化効果の強さの順序を表示してある。これら

DPPC で は な く T. thermophilus 由 来 の 脂 質 を 用 い たの結果より、TZ は pH4.0-10.0 の比較的広い pH 領域におCalcein 封入 liposome を作製する場合には、Hoshino 等にいて膜を安定化し、Z および ZG も少なくとも pH4.0-7.5

より作製されたカロテノイド欠損株である T. thermophilusの pH 領域では膜安定化効果を示すことが明らかとなった。

HB27Crt2 株を 70℃にて振とう培養し、菌体をリゾチーム

次に、Calcein 封入 DPPC-liposome を用いて様々な温処理した後に抽出した粗脂質を用いて、先述の方法と同様

度での膜安定化効果を調べた。各温度で 30 分間インキュに Calcein 封入 liposome を作製した。

ベーションし、calcein 漏出量を調べた結果を図５に示す。

３．結
３・１

DPPC の相転移温度を超えると急に calcein 漏出量が増え

果ること、相転移温度以上ではほぼ同程度のであることが判

DPPC-liposome

る。これは相転移により脂質の膜の流動性が大きく変化すCalcein 封入 DPPC-liposome を用いて様々な pH 条件でる為と思われる。

の calcein 漏出を測定した（図４（A）-（E））
。図３に示図３ Calcein 封入 liposome を用いた膜安定性の評価方法の原理
カルセイン封入リポソームを上記の緩衝液に希釈して各種の条件にてインキュベーションした後、カルセインの漏出を蛍光の自己消光解除により測定した（励起波長 488nm 発光波長 517nm）。各試料ごとの封入カルセイン量の違いを補正するために、界面活性剤を添加してリポソームを完全に崩壊させた場合のカルセイン放出量を 100% として放出の程度を表示した。

− 20 −

好熱菌由来カロテノイド化合物の生体膜安定化効果の研究

図４ Calcein 封入 DPPC liposome を用いた膜安定性の評価試験の時間経過 (A)-(E)、および希釈後の calcein 自体の蛍
光強度の経時変化 (F)。カロテノイドを添加しない control（●）、 DPPC に対して Z（○）、ZG（▲）、TZ（△）をそれぞれモル比で 1% 添加した liposome を、25℃で上記の各緩衝液中でインキュベーションし、calcein 漏出を測定した。control に較べて漏出量が少ないほど、膜が安定化されたと推測される。

表１

カロテノイドによる DPPC-liposome 膜安定化効果のまとめ− 21 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図５ Calcein 封入 DPPC liposome を用いた膜安定性の温度依存性。
カロテノイドを添加しない control（●）、 DPPC に対して Z（○）、ZG（▲）、TZ（△）をそれぞれモル比で 1% 添加した liposome を、各温度で３０分間インキュベーションし、calcein 漏出を測定した。control に較べて漏出量が少な
いほど、膜が安定化されたと推測される。 DPPC の相転移温度を超えると著し
く膜が不安定になる。高温でも TZ = Z > Control >ZG の順番で安定化効果あり。

図６ Calcein 封入 Thermus themophilus 脂質 liposome を用いた膜安定性の時間経過 (A)-(E) 。
カロテノイドを添加しない control（●）、 脂質に対して Z（○）、ZG（▲）、TZ（△）をそれぞれ概算モル比で 1% 添
加した liposome を、25℃で上記の各緩衝液中でインキュベーションし、calcein 漏出を測定した。control に較べて漏出量が少ないほど、膜が安定化されたと推測される。 膜安定化効果は概ね TZ > Control >Z >ZG の順で、 TZ は膜を安定化するが Z および ZG は逆に不安定化する傾向が見られた。

３・２ T. thermophilus 由来脂質 -liposome

したことにならないのではないかという批判を受ける可能

T. thermophilus は糖脂質などを含むことがすでに報告されを用いて Calcein 封入 liposome を作製し、同様の膜安定ているため、同菌の細胞（菌体）から抽出した脂質を用い性評価を行った結果を図６に示す。DPPC-liposome の場て TZ 等の膜安定化効果を検証しないと本来の役割を検証

合とは異なり、TZ の添加は全ての pH 領域で liposome 膜以上の実験は全て DPPC-liposome を用いて行ったが、性もある。このため、T. thermophilus から抽出した粗脂質− 22 −

好熱菌由来カロテノイド化合物の生体膜安定化効果の研究

安定化効果を示すが、Z や ZG はその添加により、しばし

学、生物物理学的研究分野で用いられるほか、患部に必要ば逆に膜を不安定化させる傾向が認められた。

な薬剤を効率よく投与するための選択的薬物送達系（DDS

４．考
４・１

: drug delivery system）や、薬剤の血液中の滞留時間を察延長するための徐放技術（CR: controlled release）の担体

実験結果の考察として、すでに細胞への遺伝子導入系（非ウイルスベクタ

カロテノイド主骨格の両端部に OH 基を有する zeaxanthin（Z）等の極性カロテノイドが膜貫通型脂質として、リンー）、医薬品（抗ガン剤等）、化粧品（各種の生理活性物質）、などに利用されている。

脂質膜の安定化に寄与することは、Nakatani 等により報

今回の calcein 封入 liposome のように、水溶性の薬剤を

８）

告されている 。また、カロテノイド以外の膜貫通型脂質

内部に封入して用いることもあるが、水に不溶性の疎水性のとしては、古細菌（始原菌）由来の脂質が報告された例

薬剤を懸濁させる素材として用いる場合もある。どちらにしもある。我々は以前に T. thermophilus から抽出した TZても、liposome の安定性は薬剤の患部への到達効率や放出がリン脂質膜を安定化させる効果を持つことを、calcein

速度を決めるものなので、膜の安定性を制御することは重要

封入 liposome を用いて初めて実験的に示したのであるが、な課題である。liposome の安定化技術は、これまでにも研

今回の研究はさらに膜安定化効果の分子メカニズムを詳細究されてきた。天然の脂質を用いて安定な liposome を調整に検討するため TZ だけでなく、Z および ZG の合成標品

できる脂質を選択するだけでなく、分子設計に基づく特殊なを用いて実験を行った。

脂質の合成、脂質分子間の化学架橋や、liposome の膜表12）一般にリン脂質からなる liposome 膜の安定性は DPPC

面に高分子を付加して被覆する安定化方法など、様々な技法

等のような単一組成の脂質よりも大豆、卵黄、大腸菌などが発明されてきている。これらの方法は確かに膜の安定化

天然物から抽出・精製した脂質を用いた liposome の方が技術として有効であるが、化合物の安全性については未確認

高いことが多い 。おそらく様々な鎖長の脂肪酸を含む膜のものも多い。我々が研究対象とした TZ はこれまでにも食の方が、熱的な揺らぎに対して安定なのではないかと思わ品に添加されてきた天然のカロテノイド色素と類似の構造を一れる。今回の実験では化学合成した TZ に対して脂肪酸の部持った化合物であり、今後、DDS や CR の素材として医鎖長の揃った DPPC を先ず実験に用いた。天然の PC を薬品や食品への利用が期待される化合物である。今回の実用いて calcein 封入 liposome を作成した場合には、カロテ

験 では、有機 化学的に合成された TZ を実 験に用いたが、ノイドを添加しない liposome でも、室温（25℃）で、200

Hoshino 等により遺伝子組み替え技術を用いた TZ 大量生産分程度の時間ではほとんど calcein の漏出が起こらないた

株もすでに作られているので、将来的には微生物を用いた大め、同様の膜安定化試験を行うことが困難であった。

量生産も可能と思われる

９）

４, ５）

今 回 の 研 究 で、TZ は DPPC-liposome に お い て も T.

。

５．総

thermophilus 由来脂質 liposome においても、良好な膜安括定化効果を示したが、ZG 等は膜の安定化に効果のある場

我々は、TZ がその存在菌である T. thermophilus 由来脂合と、逆に不安定化させる効果のある場合が明らかになっ

質 liposome においても、良好な膜安定化効果を示すことた。この結果はどちらかと言うと意外なものであったが、を実験的に示した。TZ が天然物由来の安全な膜安定化剤

図１に示した構造式からも判るように、ZG はそもそも疎として、各種の liposome に添加され、DDS などに利用さ

水性のカロテノイド主骨格の片側の末端にグルコースが付れることを期待している。

いた構造を持っているので、界面活性剤として作用しても謝

おかしくない構造を有している。このため、脂質膜に対しては界面活性剤として作用し不安定化する場合もあるのかも知れない。

辞本研究ならびに関連の研究を遂行するにあたり、財団法人コスメトロジー研究振興財団より研究助成を賜りました

今回の実験では DPPC に対するモル比で１％程度の極こと、ならびに山野由美子（神戸薬大）、伊藤允好（神戸めて少量の TZ を脂質に加えただけであるにも関わらず、

薬大）、苑輝卿（山東医科大）、三宅淳（産総研）、星野貴行（筑顕著な liposome 膜安定化効果を示しているので、TZ は図波大）、横山昭裕（東ソー）の各先生を含めた共同研究者

１のモデルに示されたような膜貫通型の脂質として強力なの皆様に御協力頂いたことを、感謝の意を込めて付記させ安定化効果を発揮しているものと結論できる。

て頂きます。

４・２（参考文献）TZ の産業への利用の可能性

Liposome は、生体膜を構成する脂質や膜蛋白質の機能

１）Pask-Hughes R.A., Shaw N. : Glycolipids from some

や物理化学的な性質を研究するための実験系として生物科

extreme thermophilic bacteria belonging to the genus− 23 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008８）Lazrak, T., Milon A., Wolff G., Albrecht A.M., Mieche

Thermus, J. Bacteriol., 149, 54-58. 1982.
２）Oshima M., Yamakawa T. : Chemical structure ofM., Ourisson G., Nakatani Y. : Comparison of the effects

a novel glycolipid from an extreme thermophilile,of inserted C40- and C50-terminally dihydroxylated

Flavobacterium thermophilum, Biochemistry, 13, 1140-

carotenoid on the mechanical properties of various

1146, 1974.

phospholipid vesicles, Biochim. Biophys. Acta 903 (1987)
132 - 141.

３）Ray P.H., White D.C., Brock T.D. : Effect of growthtemperature on the lipid composition of Thermus

９）Hara M., Yuan H., Yang Q., Hoshino T., Yokoyama

aquaticus, J. Bacteriol., 108, 227-235, 1971.

A., Miyake J. : Stabilization of liposomal membranes
by thermozeaxanthins: carotenoid-glucoside esters,４）Hoshino T., Yoshino Y., Guevarra E.D., Ishida S.,

Biochim Biophys Acta 1461, 147-154, 1999.

Hiura T., Fujii R., Nakahara T. : Isolation and partial
characterization of carotenoid underproducing10）Yamano Y., Sakai Y., Hara M., Ito M. : Carotenoids

and overproducing mutants from an extremely

and related polyenes. Part 9.1 Total synthesis ofthermophilic Thermus thermophilus HB27, J. Ferment.

thermozeaxanthin and thermocryptoxanthin and the

Bioeng., 77, 131-136, 1994.

stabilizing effect of thermozeaxanthin on liposomes, J.
Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2006-2013, 2002.

５）Hoshino T., Fujii R., Nakahara T. : Overproduction of
carotenoid in Thermus thermophilus, J. Ferment. Bioeng.

11）Hara M., Yamano Y., Sakai Y., Kodama E., HoshinoT., Itoh M.., Miyake J. : Stabilization of liposomal

77, 423-424, 1994.
６）Yokoyama A., Sandmann G., Hoshino T., Adachi

membranes by carotenoids: Zeaxanthin, xeaxanthinK., Sakai M., Shizuri Y. : Thermozeaxanthins, newglucoside and thermozeaxanthin, Materials Science andcarotenoid-glycoside-esters from thermophilic

Engineering C 28, 274-279, 2008.

eubacterium Thermus thermophilus, Tetrahedron Lett.

12）Elferink M.G.L., del Wit, J.G., Driessen, A.J.M.,
Konings, W.N. : Stability and proton-permeability of

36, 4901-4904, 1995.
７）Yokoyama A., Shizuri Y., Hoshino T., Sandmannliposomes composed of archaeal tetraether lipids, 1994,

G. : Thermocryptoxanthins: novel intermediates in

Biochimica et Biophysica Acta - Biomembranes 1193

the carotenoid biosynthetic pathway of Thermus(2), pp. 247-254

thermophilus, Arch. Microbiol. 165, 342-345, 1996.

− 24 −

圧電材料基板上のマイクロ流路を用いた単分散多相エマルション生成法の開発
東京工業大学精密工学研究所

西 迫

貴 志

Monodisperse double emulsions (also referred to as multiple emulsions) have numerous potential applications
in various fields, such as cosmetics, pharmaceutics, food, and colloid science. In conventional two-step mixing
technique, however, it is difficult to produce monodisperse double emulsions. Here, we propose a novel microfluidic
technique to produce monodisperse double emulsions by applying surface acoustic wave (SAW) streaming.
The microfluidic device consists of two planar substrates: a piezoelectric substrate with interdigital transducers(IDTs), and a polymethyl metacr ylate (PMMA) plate with microfabricated grooves. The IDTs were fabricatedon a planar piezoelectric (LiNbO3) substrate by conventional lithographical technique. The microgrooves on the
PMMA substrate were fabricated by mechanical machining. The microchannel geometry consists of a Y-shaped
junction to infuse aqueous and organic phases and to generate a water-in-oil (W/O) emulsion by SAW, and a sheathflow geometry to form water-in-oil-in-water (W/O/W) double emulsions by shear-rupturing mechanism. First, bygenerating SAW, we could produce polydisperse W/O emulsion droplets of 1-10 μm in diameter at the Y-junction.
Then, at the sheath-flow junction, organic droplets encapsulating fine aqueous droplets (i.e., W/O/W emulsion
droplets) could be reproducibly formed in the external aqueous stream. The breakup rate was approximately 200
drops / s-1. The produced W/O/W droplets were highly monodisperse, with a mean diameter of 150 μm and acoefficient of variation (CV) below 5 %.

１．緒

そこで本研究では，弾性表面波（Surface Acoustic Wave,

言

これまで，コスメトロジーに関する分野

1−5）SAW）の機械振動とマイクロ流路の分岐構造を組み合わに限らず，せて単分散多相エマルションを生成する手法を提案する．

医学，薬学，食品科学，コロイド科学等を含めた幅広い分

弾性表面波とは基板表面を伝播する超音波振動のひとつ

野において，多相エマルション（図１）の潜在的応用事例

であり，圧電材料基板上に配置した櫛型電極（interdigitalについて数多くの研究が成されてきた．にもかかわらず，

transducer, IDT）に高周波電圧を印加することで発生さ実際に実用化された事例は数少ないと言える．こうした現せることができる．現在，弾性表面波デバイスは通信用の状の背景としては，従来技術（二段階攪拌法，図２）では，電子回路素子として広く普及しているが，その一方で，霧液滴サイズや内包率が高精度に制御された多相エマルショ

化

ンを簡便に調製できなかったという事情が挙げられる．特等，微小液体のハンドリング方法に関する数多くの研究

８-10），微小液滴や微小物体の搬送

11-15），液相の混合16, 17）に，サイズのばらつき（多分散性）に由来する多相エマル事例が近年報告されている．図 3 に，water-in-oil-in-water

ションの不安定性は，実用化における最も大きな障害であ（W/O/W）型の多相エマルションを例として，本研究でると考えられる．

提案する技術の概要を示す．本技術における多相エマルシ

一方，筆者は近年，マイクロ流路の２段階分岐構造を用いた単分散多相エマルション生成法を開発した

６, ７）

．この

ョン生成手順は，以下の（1）〜（4）から構成される：（1）IDT を配置した圧電基板とマイクロ流路基板を図３のように貼り合せる．

手法は，外部液滴と内部液滴をともに単分散状に調製できるほか，内包液滴数を精密に制御できるという長所を有す（2）Y 字路に内水相と有機相を導入し，低レイノルズ数（Re<<1）の二相流を形成する．

る．しかし本手法には，（a）流路壁面の局所的な化学修飾が必要であるため装置作製が難しい，（b）流路の目詰ま（3）IDT へ高周波電圧を印加して SAW を放射させて二相流に作用させ，W/O エマルションを得る．

りや圧力損失の増大といった制限から，1 〜数 μm の内包（4）下流部の分岐路で外水相を合流させて分散相をせん断滴の生成が困難，といった課題があった．

し，単分散 W/O/W 液滴を連続的に得る．
Preparation of monodisperse double
emulsions in microfluidic channels on a
piezoelectric substrate
Takasi Nisisako
Precision and Intelligence Laboratory,
Tokyo Institute of Technology

本研究課題では，上記の手法により，内包滴の平均径が1−10 μm 程度であり，且つ外部液滴径の変動係数（＝標
準偏差 ÷ 平均径，CV 値）が５％以下である，単分散多相
エマルションの調製を目標とした．

− 25 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図１ 多相エマルション概念図．(a) water-in-oil-in-water (W/O/W) 型．(b) oil-in-waterin-oil (O/W/O) 型．

図２

図３

２．実
２・１

二段階攪拌による多相エマルション生成法の概念図．

弾性表面波（SAW）を用いた多相エマルション生成法の概念図．

２・２

験

マイクロ流路加工

アクリル樹脂（PMMA）基板上に，エンドミル（刃径：IDT 電極の作成

100 μm）を用いた機械加工によってマイクロ流路の分岐

圧電材料基板として 128°Y カットのニオブ酸リチウム

構造を作成した．加工溝の断面は矩形状であり，流路の幅（LiNbO3）（伝播方向：X 軸方向，厚さ 1.0 mm，山寿セラ

は最小部で 100 μm，深さは一様に 100 μm とした．加工溝ミックス）基板を用い，表面にフォトリソグラフィによりの密封は透明粘着テープによって行い，IDT 電極を作成

10 対の IDT を作成した（図４）．この IDT に交流電圧をした圧電基板と互いに貼り合せた状態で使用した．

印加することにより，基板表面に弾性表面波の一種である
レイリー波を励振，電波させることができる．電極サイズ

２・３

材料

は，電極幅 0.2 mm, 電極間距離 0.2 mm, 電極交差幅４mm

W/O/W エ マ ル シ ョ ン の 内 水 相 と し て イ オ ン 交 換 水とした．電極はスパッタリングにて Ti を 100 nm，Au を（18.0 MΩ・cm），中間相としてデカン（和光純薬工業）

100 nm を順に堆積させることで作製した．

に脂溶性界面活性剤（CR-310, 阪本薬品工業）を 1.0 wt％− 26 −

圧電材料基板上のマイクロ流路を用いた単分散多相エマルション生成法の開発

添加したもの，外水相として超純水にポリビニルアルコー

水相流中に高速で連続生成される様子が観察された（図ル（PVA）を 2.0 wt％添加したものを用いた．

5a）．高速度ビデオカメラによる映像で確認したところ，
液滴生成周期は毎秒 200 個程度であった．ただし内水相液

２・４

その他の機材

滴サイズのばらつきが大きく，且つ分岐路への供給が不規

IDT への高周波電圧の印加には，RF 発生源であるアマ
チュア無線機（IC-703，アイコム）を使用した．スペク

則に行われたため，内包液滴個数にも大きなばらつきがあった．

トラムアナライザ（U3751，アドバンテスト）を用いて印加電圧を 35Vpp とした際の W/O/W 液滴生成の様子

SAW 基板の周波数特性を測定し，その結果から駆動周波を図 5b に示す．印加電圧を上昇させることでより強力な数として主に 50MHz を選択した．

SAW を発生させ，より径の小さい 1−10 μm 程度の W/O

マイクロ流路内の観察は，光学式顕微鏡（BX-51，オリ

エマルション滴が生成される様子を確認することができた．

ンパス）に高速度ビデオカメラ（フォトロン，Fastcam-

ただし，SAW によるミキシングは連続的ではなく間欠的

1024PCI）を組み合わせて行った．流路内への各液体のに生じたため，W/O エマルションに密な部分と疎な部分

送液および流量制御にはシリンジポンプ（KDS200，KDが生じる様子が観察された．下流部の液滴生成地点では外Scientific）およびガラスシリンジ（Hamilton）を組み合

水相流中に毎秒 200 個程度の速度で W/O/W エマルショ

わせて用いた．生成液滴径の測定は，デジタルデータの画ン滴が連続生成される様子を確認することができた．ただ像処理によって行った．

し，生成される W/O/W 液滴には，内包率のばらつきが

３．結
３・１

観察された．

果

W/O/W 多相エマルションの生成

３・２生成された W/O/W エマルション滴

図５に，SAW による二液混合とマイクロ流路分岐構造

図 6a に生成された W/O/W 多相エマルションの顕微鏡での液滴生成を組み合わせた W/O/W エマルション生成

写真を示す．外部液滴サイズのほぼ均一な W/O/W 液滴の様子を示す．まず印加電圧を 25Vpp にし，内水相と中間が得られていることがわかる．外部液滴の平均径は約 149-1相の流量をともに 0.5mL h としたところ，Y 字路近傍で内．一方，内包されてμm，CV 値は 4.2％であった（図 6b）

水相と中間相が粗く混合し，直径 10−150 μm 程度でばらいる水滴のサイズは直径１μm 以下から 10 μm 程度の間でつきの大きい水滴が有機相中に生成される様子が観察さればらついており，多分散状であった．さらに，内水相と中た．この状態で２つの外水相流の流量をともに 4.0mL h と間相の比率が 1：1 になるように流量条件を設定したもの

したところ，合流箇所にて，水滴を内包した有機相滴が外の，外部液滴によっては水滴をあまり含まず明らかに内水-1図４作成した IDT 電極の顕微鏡写真．

図５ W/O/W エマルション生成の様子． (a) 印加電圧 25Vpp の場
合．(b) 印加電圧 35Vpp の場合．流量条件は，内水相と中間相がともに 0.5 mL h-1，外水相が 8.0 mL h-1 (4.0 mL h-1 × 2)．スケー
ルバーは 200μm．

− 27 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

相の体積分率が 50％を下回るものも観察され，各外部液ると言える．しかしながら一方では，マイクロ流路分岐構

滴の水滴内包率には大きなばらつきがあった．なお，生成造を用いた液滴生成法で一般的な CV 値（1 − 3％）に比したエマルションを 1 時間程度放置して後に観察したとこ

べると，やや大きな値となっている．これは，SAW によろ，合一による多分散化は確認されず，単分散性を保ってって生成されてマイクロ流路分岐に供給される W/O エマ

いた．

ルションの濃度が流れの中で一様ではなく，そのため流れ

４．考に見かけ上の粘度のむらが生じ，外部液滴の生成をやや不察安定にしたためと考えられる．

印加電圧が小さい場合，サイズおよびばらつきの大き５．総い W/O エマルションが生成されたが，印加電圧を上昇さ括せることで，これを改善することが可能であった．しかし

以上のように，弾性表面波による二液体の混合技術と，印加電圧を上昇させると IDT 電極周囲の温度上昇につな

マイクロ流路の分岐構造を用いた液滴生成法を組み合わせ，がり，これによるマイクロ流路の変形，破損や液体材料成

単分散多相エマルションの生成が可能であることを明らか

分の変性等が懸念される．この問題を解決するためには，にした．本研究の手法では，マイクロ流路の二段分岐構造

SAW 励振のための入力波を単純なサイン波ではなく，高を用いた単分散多相エマルション生成法に比べ，容易に内周波と低周波の２つを組み合わせたものにする（バースト

包液滴を著しく小さくすることができ，また流路内の表面駆動）こと，およびペルチェ素子等の冷却機構を装置に組処理も要さないという長所がある．また，本手法により生み込むことが有効であると予想される．また，印加電圧を成される多相エマルションは単分散性に優れるため，従来上昇させた場合においても W/O エマルションに疎，密な手法による多分散の生成物に比べて，経時安定性の大幅な部分が生じたが，これは SAW によるミキシングが連続的改善が見込まれる．また本手法では，外部液滴サイズ，内ではなく間欠的で不安定であったためと考えられる．これ

部液滴サイズ，および内包率を容易且つ高精度に制御できを改善するには，SAW 励振の入力波の条件検討とともに，るため，不安定薬剤の安定化，内包成分の徐放特性，経時マイクロ流路内に Passive な混合を行える構造を設けるこ

安定性やレオロジー特性等を評価するためのモデル系の調とも有効と考えられる．

製手段としても有効と考えられる．

W/O/W エマルションの外部液滴に関しては，CV 値４

今後，諸条件の検討により，SAW 発生における発熱や％程度の液滴径分布を確認することができた．この CV 値

安定性の問題を解決することで，より簡便な多相エマルシ

は，既存の多相エマルション生成法による値（数十％）に

ョン生成法として本技術が利用可能になることが期待され比べると格段に良い値であり，生成物は十分に単分散である．また，現状の装置では１流路素子での生産量は最大で図６ 生成された W/O/W 多相エマルション滴と液滴径分布．(a)W/O/W エマルション滴の顕微鏡写真．生成流量条件は
内水相と中間相がともに 0.5 mL h-1, 外水相が 8.0 mL h-1 (4.0 mL h-1 × 2)．(b) 外部液滴径分布．平均径 149μm，CV
値 4.2%．

− 28 −

圧電材料基板上のマイクロ流路を用いた単分散多相エマルション生成法の開発

１g/h 程度にすぎないため，産業界における大量生産の要

multiple-phase microfluidic system, Soft Matter, 1,

望に応えるためには生産量の大幅なスケールアップが求め

23- 27, 2005.

られる．これには，リソグラフィ技術の利用による，流路

８）Kurosawa M, Watanabe T, Futami A, Higuchi T,

および電極の集積化が有効であると考えられる．たとえば: Surface acoustic wave atomizer, Sens. Actuator

100 − 1000 本の流路の集積化により数百 g/h 〜数 kg/h

A-Phys., 50, 69 -74, 1995.

の生産量が見込まれるが，この生産量は数〜数十トン／年９）Chono K, Shimizu N, Matsui Y, et al., : Developmentの生産量に相当し，パイロットプラント用装置として十分

of novel atomization system based on SAW streaming,

なスループットであると考えられる．なお現時点で，流路

Jpn J. Appl. Phys., 43, 2987-2991, 2004.

の集積化によるエマルション生成のスケールアップに関し
18）10）Kim JW, Yamagata Y, Takasaki M, et al., : A device．今後，電極を集積化した圧電基

for fabricating protein chips by using a surface

板上への 100 − 200 流路の配置により，上記の生産量を達

acoustic wave atomizer and electrostatic deposition,ては実証済みである

Sens. Actuator B-Chem., 107, 535-545, 2005.

成することが可能と考えられる．

11）Wixforth A, Strobl CJ, Gauer C, et al., Acoustic

謝辞manipulation of small droplets, Anal. Bioanal. Chem.,

本研究を遂行するに当たり，ご支援をいただきました財
団法人コスメトロジー研究振興財団に深く感謝いたします．

379, 982-991, 2004.
12）Guttenberg Z, Müller H, Habermüller H, et al., : Planar
chip device for PCR and hybridization with surface（引用文献）

acoustic wave pump, Lab Chip, 5, 308-317, 2005.

１）Bonina F, Bader S, Montenegro L, et al., : Three

13）Yamamoto A, Nishimura M, Ooishi Y, et al., :phase emulsions for controlled delivery in the cosmetic

Atomization and stirring of droplets using surface

field, Int. J. Cosmet. Sci., 14, 65-74, 1992.

acoustic wave for integrated droplet manipulation, J.

２）Yoshida K, Sekine T, Matsuzaki F, et al., :Stability ofvitamin A in oil-in-water-in-oil-type multiple emulsions,14）Renaudin A, Tabourier P, Zhang V, et al., : SAW
nanopump for handling droplets in view of biological

J. Am. Oil Chem. Soc., 76, 195-200, 1999.
３）Sekine T, Yoshida K, Matsuzaki F, et al., : A novel
method for preparing oil-in-water-in-oil type multiple
emulsions using organophilic montmorillonite clay

applications, Sens. Actuators B-Chem., 113, 389-397,
2006.
15）Smorodin T, Beierlein U, Ebbecke J, WixforthA, : Surface-acoustic-wave-enhanced alignment ofmineral, J. Surfactants Deterg., 2, 309-315, 1999.
４）Miyazawa K, Yajima I, Kaneda I, Yanaki T, :Preparation of a new soft capsule for cosmetics, J.

thiolated carbon nanotubes on gold electrodes, Small, 1,1188-1190, 2005.
16）Sritharan K, Strobl CJ, Schneider MF, et al., :Cosmet. Sci., 51, 239-252, 2000.
５）関根知子，：第 3 章Robotics Mechatronics, 18, 146-152, 2006.

マルチプルエマルションの調製法と特徴，角田光雄監修：機能性エマルションの技術とAcoustic mixing at low Reynold’s numbers, Appl.
Phys. Lett., 88, 054102, 2006.
17）Guttenberg Z, Rathgeber A, Keller S, et al., : Flow

評価，シーエムシー出版，東京，34-45, 2002.
６）Okushima S, Nisisako T, Torii T, Higuchi T,: Controlled production of monodisperse double
emulsions by two-step droplet breakup in microfluidic

profiling of a surface-acoustic-wave nanopump, Phys.
Rev. E, 70, 056311, 2004.
18）Nisisako T, Torii T, : Microfluidic large-scale
integration on a chip for mass production ofdevices, Langmuir, 20, 9905-9908, 2004.
７）Nisisako T, Okushima S, Torii T, : Controlledformation of monodisperse double emulsions in amonodisperse droplets and particles, Lab Chip, 7,
287 - 293, 2008.

− 29 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

プロスタグランジンＤ２受容体を標的とした
皮膚アレルギー炎症治療法開発
東京医科歯科大学大学院皮膚科学分野

佐 藤

貴 浩

Biological activities of prostaglandin D2 (PGD2) are thought to be mediated by the classical DP receptor and
CRTH2 (chemoattractant receptor-homologous molecule expressed on Th2 cells). In the present study, to examine
the role of PGD2-CRTH2 interaction in development of allergic inflammation, we generated mice that containa targeted disruption of the CRTH2 gene. We used these mice to characterize chronic cutaneous inflammatory
processes, including IgE-mediated ver y-late-phase responses and chronic contact hypersensitivity induced byrepeated hapten application. The present findings indicate that IgE-mediated cutaneous responses are dependent
on PGD2. Ear swelling responses were suppressed by administration of HQL-79, which is a PGD synthase inhibitor.
CRTH2-deficient mice failed to develop IgE-induced very-late-phase cutaneous responses, which are histologicallycharacterized by a decrease in infiltrative lymphocytes, eosinophils and basophils, associated with inhibited
production of MDC and RANTES. However, local production of IL-4 and IFNγ was not affected by lack of CRTH2.
In chronic contact hypersensitivity models, CRTH2 deficiency also resulted in diminished skin responses andserum IgE production. These findings indicate that PGD2 signaling via the CRTH2 receptor plays important roles
in IgE-mediated cutaneous responses and chronic contact hypersensitivity reactions. CRTH2 may represent a novel
therapeutic target for the treatment of chronic allergic skin inflammation, such as atopic dermatitis.

1．緒

役割を解析し、これらを標的とした治療法を開発、検討す

言ることを主な目的としている。

PGD2 は主に肥満細胞から分泌され、血管拡張作用や気アレルギー性皮膚炎として知られる代表的な皮膚疾患は管支収縮作用などの生理活性をもつ物質としてしられる。

アトピー性皮膚炎である。そこで今回はマウスモデルとしまたかねてより炎症反応においても何らかの役割を果たて IgE 依存性皮膚反応とハプテン繰り返し塗布による慢す可能性のあることが示唆されてきていた。最近になり

性接触過敏反応を選び検討を加えた。

PGD 合成酵素を恒常的に発現するマウスにおいて気管支２．実

喘息反応の増強や好酸球浸潤など、いわゆる Th2 型反応
1）の亢進のみられることがわかり 、アレルギー性炎症にお2．1

ける PGD2 の役割があらためて大きな注目を集めるようになってきている。

験

CRTH2 欠損マウスの作成

CRTH2 欠損マウスは図１にしめす方法で作成した。その後 BALB/c マウスと 10 代以上交配して用いた。

PGD2 の受容体として古くから DP 受容体が知られている。そして DP 受容体の欠損マウスでは気管支喘息反

2．2

2）

IgE 依存性皮膚反応の誘導応が弱まるとされる 。一方最近になってもう一つ受容マウス耳介皮下に抗 dinitrophenyl（DNP）特異 IgE 抗体として CRTH2（chemoattractant receptor homologous

体を投与（1.25μg）。その翌日に 0.5% のジニトロフルオ

molecule expressed on Th2 cells）が知られるようになっロベンゼン（DNFB）を塗布（20μℓ/耳介）して、その後た。これは当初、Th2 細胞に特異的に発現される分子と経時的に耳介腫脹を測定した。

してクローニングされたものであるが、その後、好酸球や好塩基球などの表面にも発現していることがわかり、さら2．3

慢性接触過敏反応の誘導に PGD2 の受容体として機能し、細胞の遊走や活性化に

マウス剃毛腹部に５％トリニトロクロロベンゼン

関わることが明らかにされた 。今回の研究は、PGD2 ま（TNCB） を 塗 布 し て 感 作 し た。 そ し て ５ 日 後 に 1 ％たはそれらの受容体の慢性アレルギー性皮膚反応におけるTNCB を耳介に塗布して惹起を行った。その後惹起を２

3）

日ごとに繰り返し 25 日目までおこなった。
Therapeutic approach for allergic skindiseases via blocking prostaglandin D2
receptors
Takahiro Satoh
Depar tment of Dermatology Graduate
S c h o o l , To k y o M e d i c a l a n d D e n t a l
University

2．4

浸潤細胞数の測定

耳介皮膚の浸潤細胞は組織切片をギムザ染色し、光学顕微鏡下においてカウントした。また好塩基球の測定は皮膚組織を collagenase III で処理後、浸潤細胞を回収。FITC
標識抗 Fc εRI 抗体、R-PE 標識抗 c-kit 抗体、PE-Cy5.5 標− 32 −

プロスタグランジンＤ２受容体を標的とした皮膚アレルギー炎症治療法開発

図１

識抗 Gr-1 抗体にて染色してフローサイトメトリーにて観その一方、IL-4, IFN-γ, eotaxin は CRTH2 欠損の影響をう察。FcεRI（+），c-kit（-），Gr-1（-）細胞を好塩基球としてけなかった（図３）。

カウントした。

3．2 血球型 PGD 合成酵素（H-PGDS）抑制薬の効果
2．5

サイトカイン・ケモカインの測定

CRTH2 欠損において IgE 依存性皮膚反応が減弱してい耳介皮膚を 0.1％ Tween 20 含有 PBS を用いて粉砕しホたことから、PGD2 の合成にかかわる酵素（H-PGDS）のモゲネートを作成。15,000g で 10 分遠心後に上清を回収。

抑制薬（HQL-79）がこの反応に対して治療効果をもたそれぞれにおけるサイトカイン・ケモカインを ELISA 法らすか否かを検討した。その結果 IgE 依存性皮膚反応はにて測定した。

HQL-79 の経口投与により著明に抑制された（図４A）
。

3

結

果

3．3

CRTH2 拮抗薬の効果の検討

3．1 CRTH2 欠損マウスにおける IgE 依存性皮膚反応

PGDS 抑制薬の効果が CRTH2 受容体を介したものであ

まず、CRTH2 の in vivo における役割を IgE 依存性皮ることを確認するため、CRTH2 拮抗薬であるラマトロバ

膚反応を用いて検討した。その結果、皮膚反応の顕著な減ンの投与効果を観察した。その結果、IgE 依存性皮膚反応

弱が確認された（図２A,B）。また浸潤細胞の変化を検討

は CRTH2 欠損マウスにおいてみられたように減弱していしたところリンパ球、好中球、好酸球、肥満細胞のいずれた（図４B）。

もが CRTH2 の欠損により減少した（図２C）。さらに興味深いことに IgE 依存性の第 III 相反応の成立に必須とされる好塩基球4）の浸潤も減少していた（図２D）。

3．4

CRTH2 欠損マウスにける慢性接触過敏反応

アトピー性皮膚炎にみられる慢性皮膚反応のもう一つの次に局所におけるサイトカイン・ケモカインの産生量モデルである慢性接触過敏反応の変化を CRTH2 欠損マウを測定した。その結果、CRTH2 欠損マウスにおいては

スを用いて観察した。慢性接触過敏反応は 5％ TNCB に

MDC, RANTES, TARC の産生が少ないことがわかった。

て感作後、1％ TNCB による惹起を隔日で繰り返すことに− 33 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図２

図３

− 34 −

プロスタグランジンＤ２受容体を標的とした皮膚アレルギー炎症治療法開発

図４− 35 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図５

− 36 −

プロスタグランジンＤ２受容体を標的とした皮膚アレルギー炎症治療法開発

より誘導した。図５Ａにみるように皮膚反応は５日目でTh1 細胞にも発現されていることに起因すると考えられは 24 時間後にピークがみられるが、惹起を繰り返すごと

る 。

5）

に早まり 25 日目には２から５時間目にピークをむかえる

今回は CRTH2 受容体を中心に慢性皮膚アレルギー性反ようになる。CRTH2 欠損マウスでは反応ピークの移動は応における役割を解析してきた。今後、もう一つの受容みられるものの、その強さは惹起を繰り返すごとに wild

体 DP についても同様の解析を行い、さらに他のハプテン

type マウスに比して減弱しその差が明瞭になっていくこ

に対する反応を含めて種々の皮膚炎症反応にける CRTH2,とがわかった。さらに 27 日目での耳介皮膚全体の厚さもDP, PGD2 の重要性を検討したい。そして疾患ごとの治療

wild type マウスより薄く（図５Ｂ）、また血清 IgE の産の標的と治療の選択につき検討を進めたい。

生も少なかった（図５C）。

４

考（引用文献）

察１）Fujitani Y, Kanaoka Y, Aritake K, et al.: Pronounced

今回の研究において PGD2 受容体の一つである CRTH2

eosinophilic lung inflammation and Th2 cytokine

が IgE 依存性皮膚反応の成立において重要であることがrelease in human lipocalin-type prostaglandin D

CRTH2 欠損マウスを用いた実験によって初めて明らかと

synthase transgenic mice. J. Immunol., 168, 443-449,なった。さらに H-PGDS 抑制薬である HQL-79 や CRTH2

2002.

拮抗薬のラマトロバンが治療効果をもたらすことも見出さ

２）M a t s u o k a T , H i r a t a M , T a n a k a H , e t a l . :れた。CRTH2 の重要性は慢性接触過敏反応においても確

Prostaglandin D2 as a mediator of allergic asthma.

認された。以上のことから PGD2 または CRTH2 受容体をScience. 287, 2013-2017, 2000.

標的とした治療法はアトピー性皮膚炎を含めて一部のアレ

３）Hirai H, Tanaka K, Yoshie O, et al.: Prostaglandin D2

ルギー性皮膚疾患において有用である可能性があると思わ

selectively induces chemotaxis in T helper 2 type cells,れる。

eosinophils and basophils via seven-transmembrane

IgE 依存性皮膚反応の抑制機序についてはまだ十分にはreceptor CRTH2. J. Exp. Med., 193, 255-262, 2001.

解明できていないが、おそらく CRTH2 を介した PGD2 に４）Mukai K, Matsuoka K, Taya C, et al.: Basophils play

対する炎症細胞の遊走が抑制されたためと推測される。まa critical role in the development of IgE-mediated

た IgE 依存性第 III 相反応に必須とされる好塩基球の浸潤

chronic allergic inflammation independently of T cellsが抑制されたために、その後に生じる種々の炎症カスケー

and mast cells. Immunity, 23,191-202, 2005.
５）Abe H, Takeshita T, Nagata K. et al.: Molecularドが影響を受けたためとも考えられる。
CRTH2 はヒトのリンパ球においては Th2 細胞に発現さcloning, chromosome mapping and characterization

れているが、CRTH2 欠損マウスでの局所サイトカインプ

of the mouse CRTH2 gene, a putative member of the

ロフィールは必ずしも Th1,Th2 のいずれへの偏りもみら

leukocyte chemoattractant receptor family. Gene, 227,れなかった（図３）。これはマウスにおいては CRTH2 が71-77, 1999.

− 37 −

ヒト汗に存在する核酸分解酵素を含有させた化粧品や医薬品軟膏が有する生理作用や薬理作用の推定
島根大学医学部法医学

竹 下

治 男

Human and porcine recombinant deoxyribonucleases I (DNases I) were expressed in COS-7 cells, and purified
by a single-step procedure. Since affinities for concanavalin A (Con A) and wheatgerm agglutinin (WGA) werestrong in these recombinant DNases I, purification using Con A-WGA mixture-agarose column was performed. By
this method, the enzymes in culture medium could quickly be isolated to apparent homogeneity in approximately
ten minutes. From 1 ml of culture medium, about 20~30 μg of purified DNase I with a specific activity ranging
from 22000 to 41000 units/mg were obtained. The purified DNases I were subjected to enzymatic deglycosylationby either Peptide N-glycosidase F (PNGase F) or endoglycosidase H (Endo H). The recombinant enzyme wascleaved by PNGase F, not by Endo H, indicating that the recombinant enzymes are modified by N-linked complextype carbohydrate moieties. In the human recombinant DNase I, activity was decreased by PNGase F-treatment,
while that of the porcine DNase I remained unaffected. The thermal stability of the human enzyme was extremely
susceptible to heat following PNGase F-treatment, as was the porcine enzyme to a lesser extent. This study
suggests that N-linked complex-type carbohydrate moieties may contribute to the enzymatic activity and/or thermal
stability of recombinant DNases I. Moreover, we developed a method for the simultaneous genotyping of SNP(A2317G) and 56-bp VNTR polymorphism within DNase I gene, and using this method, we determined the allele
frequencies of both polymorphisms in Ovambo, Turk, Mongolian, Korean and Japanese populations and revealed
wide differences between these ethnic groups.

１．緒

標準定量法となっている、single radial enzyme diffusion

言（SRED）法を開発した。この方法は極めて感度の高い微我々はヒトの核酸分解酵素である、デオキシリボ核酸

量定量法であり、各種臓器及び体液中の核酸分解酵素の活分解（DNase）およびリボ核酸分解酵素（RNase）の生化性測定が可能になり、この途上において、汗中に当該酵素学、酵素学、化学、人類遺伝学、分子生物学などに関するが存在することを見出しえた。最近、発生や老化に深く研究に従事してきた。両酵素は遺伝的多型形質であり、ま関与しているアポトーシスの生化学的マーカーであるヌ

たヒト汗中には極めて活性の高い両酵素が存在することか

クレオソーム断裂化に DNase や RNase が関与するというら、我々は、微量な汗からでも実施可能な個人識別法を確

報告が目立つが、皮膚組織の損傷再生機構等にも当該酵素

立して法医鑑識の実際に応用している。しかし、汗に含まが関わっているのではないかと考えられる。さて、哺乳類

れる高活性な核酸分解酵素の生理学的および薬理学的作用

DNase I は 3 型に分類され、膵臓型は、耳下腺型及び膵は不明である。この研究では、汗に含まれる高活性な核酸

臓・耳下腺（混合）型に比して酸性下で不安定である。今分解酵素の生理学的および薬理学的な役割や意義を解明し回、耳下腺と膵臓の抽出物及び DNase I cDNA を哺乳類たい。これによって、ヒト核酸分解酵素を含有させた医薬細胞に導入・発現させた組み換え型酵素のレクチン親和性品軟膏（化粧品等を含む）が有する生理作用や薬理作用を精査を行い、これら試料より DNase I のワンステップ精推定することができる。核酸分解酵素は、単なる消化酵素製を行った。さらに、DNase I を含有させた化粧品や医薬と考えられてきたので、多くの研究者の興味の対象ではな品軟膏が有する生理作用や薬理作用の個人感受性差異の調かった。しかし、
最近になって、
１）アポトーシスへの関与、査を併せて行い、５民族の血痕由来 DNA から、等電点電２）全身性エリテマトーデスとの関連性、３）難治疾患の気泳動に基づく蛋白多型検出ではなく、新たな同時 PCR

治療薬、４）心筋梗塞の早期診断マーカー、５）遺伝的多法に基づく DNA 多型同時検出法を開発し、従来からある型の存在などが解明され脚光を浴びてきつつある。我々は、

DNase I（DNASE1）多型および最近新たに DNase I 遺伝

現在、ヒト核酸分解酵素 DNase および RNase の国際的な子内に見い出された DNase I（HumDN1）多型の頻度分布調査を行い、データベースの構築に着手した。

Fundamental study of the function on
endonuclea s e（DNa s e I）i n hu ma n
sweat
Haruo Takeshita, M.D. Ph.D
Department of Legal Medicine, Facultyof Medicine, Shimane University

２．実験

２・１ 組み換え型酵素のレクチン親和性精査およびDNase I のワンステップ精製
ラットの耳下腺・下顎腺、ウサギの耳下腺・膵臓及びブタの膵臓を用いた。さらに、ヒトおよびブタ DNase I− 38 −

ヒト汗に存在する核酸分解酵素を含有させた化粧品や医薬品軟膏が有する生理作用や薬理作用の推定

cDNA を発現ベクターに挿入し、得られた construct をリ

WGA により強固な親和性が認められ、膵臓型酵素の精製

ポフェクション法により、COS-7 細胞に導入・発現させたには、組み換え体の利用が有用であると考えられた。

培養上清を用いた。親和性精査には、レクチンカラム 4 種（Con ALCA

RCA 120

WGA）を用い、DNase I のワ

ンステップ精製には、Con A-WGA 混合カラムを用いて行
った。

３・２

ワンステップ精製

ConA-WGA 混合カラムによりラットとウサギの耳下腺、ラットの下顎腺、ブタの膵臓の精製を行ったところ、いずRecombinant peptide N-glycosidase F（PNGase F）と

れからも電気泳動上単一なバンドが得られた。また、ブタ

endoglycosidase（endo H）による脱グリコシル化について、

およびヒトの組み換え体酵素は天然酵素と同一な移動度

各試料に希釈した PNGase F あるいは endo H を等量添加を示し、単一のバンドを形成する活性酵素が得られた。こ後 37℃で酵素反応を行い、DNA-casting

れら酵素の分子量、金属イオン要求性などは、既報の精製

PAGE により分析した。さらに、脱グリコシル化後の DNase I の安定

DNase I のものと一致した。

性について精査した。

２・２

３・３ 脱グリコシル化を受けた DNase I の活性染
色による検出DNase I 多型データベースの構築

島根県の日本人 114 名、ブサンの韓国人 379 名およびウ

PNGase F はアスパラギン結合型糖鎖のうち、高マンノ

ランバートルのモンゴル人 220 名の血液、ナミビアのオース鎖、混成型糖鎖、複合型糖鎖のアスパラギン残基とバンボス人 176 名およびトルコ北部アダナ地方のトルコ

最も近い GlcNAc の間を切断し、Endo H は、アスパラギ

人 136 名の血痕から DNA を抽出した。DNASE1 多型にン結合型糖鎖の高マンノース鎖、混成型糖鎖の一部を切断

ついて、１型〜４型の検出は既法に従った。５型の検出する。すべての native 試料で PNGase F 処理により対照

は、ARMS（amplification refractory mutation system）と比べて低分子の位置に一本のバンドがみられた。一方、法に拠り、６型の判定は mismatched PCR-RFLP 法に拠

Endo H 処理では、native 酵素において二つのパターンをった。今回調査した DNASE1 多型において、最初の検索示した。すなわち、ラットとウサギの耳下腺、ラットの下からいずれのサンプルからも３型‐６型のマイナーアレル

顎腺およびブタの膵臓では二本バンドが見られ（対照の位は検出されなかったので、DNASE1 多型の主要対立遺伝

置と PNGase F のバンドより高分子の位置）、また ラット子（DNASE1*1 および DNASE1*2）と HumDN1 多型の同の下顎線、ウサギの膵臓では PNGase F 処理と同じ位置に時検出を試みた。両多型を同一のゲル上で同時検出するた

一本のバンドがみられた。組み換え体酵素では、ブタ及びめ、次のような塩基配列の DNASE1 プライマーを用いた。
forward（5’-ATCGTGGTTGCAGGGATGCTGCCTC-3’）

ヒトともに PNGase F 処理により、脱グリコシル化を受

および reverse（5’-AGTTCAACAGGTGTGGGGAG-3’）。

った。これらの結果から、DNase I には臓器特異的な糖鎖他付加の相違が認められるとともに、native 酵素と組み換え

方 HumDN1 プ

ラ

イ

マ

ー

に

は、forward（5’- GAGCGCTACCTGTTCGTGTACAG-3’） お よ びけたが、Endo H 処理では脱グリコシル化は認められなか

体酵素においても糖鎖付加の相違が示唆された。

reverse（5’- CACCGCAGACACCTGGTCAGGC-3’）を用いた。上記の PCR 産物は XhoI による制限酵素処理を行った。各サンプルを８％ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分離し、銀染色によりバンドを検出した。

活性染色像に強弱が認められたため、酵素による脱グリコシル化処理時間と DNase I 活性の関係を調べた。脱グリコシル化処理により、12 時間で、native 及び組み換

３．結果と考察
３・１

３・４ 脱グリコシル化が DNase I 活性に及ぼす影響

え体のブタの膵臓では酵素の失活がみられ、ラットの下レクチンカラム親和性

顎線では約 60％酵素活性が減少した。種 / 臓器特異的なラットとウサギの耳下腺、ラットの下顎腺では Con A、

DNase I の性状が示唆された。また、脱グリコシル化によ

WGA 両方に強い親和性がみられた。一方、膵臓では、ウってブタ膵臓に脆弱性が認められることから、脱グリコシ

サギ、ブタともに Con A に親和性が認められたが、WGAル化を受けたブタ及びヒト組み換え体酵素において、熱安親和性は非常に低かった。これらから、唾液腺酵素と膵臓定性を調べたところ、やはり、ヒトに比してブタでは極め

酵素の性状の相違はレクチンの認識する糖鎖構造に関連がて高度の熱不耐性が認められた。レクチンカラムにより、あるのではないかと考えられた。膵臓型酵素の親和性の低哺乳類 DNase I の精製が初めてワンステップで可能となさはレクチンカラムを用いた精製に支障を来たす可能性がった。本法は、生体試料および培養上清中の組み換え型酵考えられた。そこで、ブタ及びヒト組み換え体酵素におい素の両方から、迅速・簡便に多量の酵素を得られる有用なて親和性を精査したところ、native 酵素に比して、Con A、ものである。哺乳類 DNase I のレクチン親和性精査およ− 39 −

び脱グリコシル化の結果から、局在の異なる DNase I の

analysis of recombinant human and porcine

性状の差異には糖鎖付加が関係しているのではないかと考

deoxyribonuclease I expressed in COS-7 cells.

えられた。

Biotechnology Letters, 28, 215-221, 2006
２）Fujihara J, Yasuda T, Takeshita H ほか : Frequency

３・５

DNase I 多型データベースの構築

of a single nucleotide（A2317G）and 56-bp variable

今回 DNASE1 および HumDN1 多型同時検出法を新た

number of tandem repeat polymorphisms within theに 構 築 し た。DNASE1 に 関 し て、 こ れ ま で の 日 本 人 集

deoxyribonuclease I gene in five ethnic populations.

団の調査では、９つの表現型が報告されているが、今回Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, 44,1188-1191, 2006

調査された５集団においては、いずれも主要表現型の１、1 - 2 および２型のみが観察された。HumDN1 多型に関し

３）Takatsuka H, Fujihara J, Takeshita H ほか : Analysisて、反復数が２回から６回に相当するアレル２からアレof genetic polymorphism of deoxyribonuclease I in

ル６までが検出された。両多型とも、トルコ人集団では、Japanese from Shimane prefecture using genotyping

DNASE1*2、HumDN1*4 お よ び HumDN11*5 の 出 現 頻 度

method. Shimane Journal of Medical Science, 23, 1-6,は他集団に比べ有意に高かった。アフリカオバンボス人集

2006

団では、DNASE1*1 および HumDN1*3 の出現頻度が他集

４）Fujihara J, Yasuda T, Takeshita H ほ か : Variation

団に比して有意に高かった。アジア人３集団においては、

of interleukin 8 -251 A > T polymorphism in worldwide

両多型とも類似した集団データを示した。DNase I 遺伝子

populations and intra-ethnic differences in Japaneseに存在する DNASE1 多型と HumDN1 多型との間の相関に

populations. Clinica Chimica Acta, 377, 79-82, 2007

ついて解析したところ、両多型の間に連鎖不平衡が認めら

５）Fujihara J, Xue Y, Takeshita H ほか : CYP1A2

れた。いずれの集団においても、HumDN1*3 は DNASE1*1

polymorphism（C>A at position-163）in Ovambos,と、HumDN1*4 および HumDN11*5 は DNASE1*2 と 有 意

Koreans and Mongolians. Cell Biochemistry andに相関していた。

Function, 25, 491-494, 2007

今回得られた DNase I 組み換え型酵素のレクチン親和６）Fujihara J, Takatsuka H, Takeshita H ほか : Two

性精査、DNase I のワンステップ精製、DNase I 型検出法

deoxyribonuclease I gene polymorphisms andおよび DNase I 多型データベースを基に、今後さらに酵

correlation between genotype and its activity in

素活性データを包含させ、ヒト汗に存在する核酸分解酵素

Japanese population. Legal Medicine, 9, 233-236, 2007

を含有させた化粧品や医薬品軟膏が有する生理作用や薬理

７）Fujihara J, Kunito T, Takeshita H ほか : Frequencyof two human glutathione-S-transferase omega-1

作用の推定の一助にしたいと考えている。

polymorphisms（E155 deletion and E208K）in Ovanbo（参考文献）and Japanese populations using the PCR-based
genotyping method. Clinical Chemistry and Laboratory

この研究を遂行するにあたり、ご援助いただきました貴Medicine, 45, 621-624, 2007

財団に深謝致します。また、貴財団からのご援助により本研究に関連した以下の成果を達成しました。この事実を以

８）Takeshita H, Fujihara J, Soejima M ほか : Extremely

下の文献に記載して謝意を表明しました。

high prevalence of DNASE1*1 allele in African１）Fujihara J, Okui I, Takeshita H ほ か : Single-step

populations. Cell Biochemistry and Function, 26, 151-

purification by lectin affinity and deglycosylation− 40 −

153, 2008

脂質を中心とした非蛋白抗原に対する皮膚免疫応答機構の解明とその制御法の確立
京都大学ウイルス研究所

杉 田

昌 彦

Human group 1 CD1 molecules (CD1a, CD1b, CD1c) are expressed prominently in dendritic cells, and mediate
presentation of non-protein lipid antigens to T cells. Langerhans cells are epidermis-resident dendritic cells thatplay a pivotal role in skin immunity. These cells are unique in their abundant expression of the CD1a protein, but
its role in skin immunity remains to be determined. The principal investigator of this project previously isolatedLangerhans cells from the human skin, and observed their striking ability to activate microbial lipid-specific T cells.
To extend this finding further, this project has aimed to address whether CD1a-positive Langerhans cells mediate
lipid-specific immune responses in vivo. To accomplish this, we have attempted to reconstitute by a transgenic
technology CD1a-dependent immunity in mice that have deleted genes for CD1a. Generation of mice carrying thehuman CD1A genome has been completed, and we found that the human CD1a protein was expressed specificallyin epidermal Langerhans cells. In addition, microbial lipid-specific, CD1a-restricted T cell responses were readily
detected in these mice, suggesting that the positive selection for CD1a-restricted T cells indeed occurred as inhumans. Therefore, these mice provide a valuable opportunity for our evaluating CD1a function in vivo.

１．緒

これまでに研究代表者は、比重遠心法を用いてヒトラン

言ゲルハンス細胞を単離する技術を確立し、それを用いたイ

主要組織適合抗原（MHC 分子）が、蛋白断片であるペ

５）６）

ンヴィトロでの機能解析を行ってきた。その結果、ヒプチド抗原を結合し、Ｔ細胞に抗原提示する現象は、近代

ト表皮より単離したランゲルハンス細胞は、CD1a 分子を免疫学が確立した中心的パラダイムのひとつである。感染介して細菌脂質をＴ細胞に提示することにより、脂質特異

免疫や癌免疫、アレルギーや自己免疫疾患の病態がこのパ的 CD1a 拘束性Ｔ細胞を活性化する能力を有することが初

ラダイムに基づいて説明されてきた。これに対して、研究めて実証された。

代表者らの最近の解析から、脂質に対して特異的に応答す

一方、これらのインヴィトロでの解析とは別に、脂質特る免疫経路の存在が明らかとなりつつある。ヒト CD1 分子

異的な皮膚免疫応答を生体レベルで実証するにはそれに適（CD1a、CD1b、CD1c）は、脂質抗原を結合し、Ｔ細胞に抗した実験動物が必要である。研究代表者はこれまでモルモ

原提示する新しいタイプの抗原提示分子であるットがヒト脂質免疫応答の解析に適した実験動物であるこ

１）２）３）４）。

これらの CD1 分子は樹状細胞に発現して、脂質抗原特異とを示し、抗酸菌感染モルモットにおける脂質免疫応答を的なＴ細胞応答を惹起する役割を担う。

実証してきた 。しかしモルモットの免疫解析手法は限ら

７）

ヒト表皮には、ランゲルハンス細胞と呼ばれる樹状細れていることから、細胞レベル、分子レベルでの詳細な解胞が分布し、皮膚免疫応答において中心的な役割を担う細析は困難である。免疫研究に多用されるマウスやラットは、胞として知られている。この表皮ランゲルハンス細胞は、

ヒト CD1a に相当する分子を欠如している。したがって、

CD1a 分子を多量に発現した生体内でも稀な樹状細胞であマウスにヒト CD1A 遺伝子を導入することにより、CD1a

る。そのため、CD1a 分子はランゲルハンス細胞のマーカ

依存的免疫応答をマウスに再構築すれば、CD1a 分子を介ーとして長らく注目されてきたが、その機能は不明であっした皮膚免疫応答の生体レベルでの解析が可能になると考た。研究代表者は、ヒト CD1 分子の基礎解析成果を基に、えられる。

CD1a 陽性ヒトランゲルハンス細胞は皮膚における脂質特このような学術的背景と考察を基に、本研究課題におい異的免疫応答を惹起する細胞であるとの作業仮説を立て、て、ヒト CD1A 遺伝子を導入したトランスジェニックマ

その検証を試みてきた。

ウスの作製を試みた。その結果、ランゲルハンス細胞に特異的に CD1a 分子を発現したマウス系統の樹立に成功した。

Pathways for skin immunity directedagainst lipids and other non-protein
antigens
Masahiko Sugita
Institute for Virus Research, Kyoto
University

２．実
２・１

験

CD1a トランスジェニックマウスの樹立

すべてのエキソンを含むヒト CD1A ゲノム遺伝子を単離し、エキソン部分については核酸変異がないことを確認した。得られた遺伝子断片をマウス（C57BL/6）受精卵前− 41 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

核中に注入し、仮親の卵管内へ移植を行ってマウスを誕察すると、細胞表面および細胞内の小胞に CD1a 分子の発生させた。得られたマウスの尾よりゲノム DNA を抽出し、現が観察された（図３）。この発現分布のパターンは、研これを鋳型とした PCR 法により CD1A 遺伝子のマウスゲ

究代表者がこれまでに行ったヒト樹状細胞の解析結果とよ

ノムへの挿入を確認した。

く符合していた 。

２・２

マウスについて、表皮ランゲルハンス細胞における CD1a２）

さらに交配を重ねて得られた CD1a トランスジェニック

骨髄樹状細胞の単離と解析得られたトランスジェニックマウスより骨髄細胞を採取

分子の発現を検討した。表皮シートを抗 CD1a 抗体を用いし、マウスリコンビナント GM-CSF の存在下で 10 日間培て染色すると、樹状細胞様の形態を保持した細胞において、養することにより、骨髄由来樹状細胞を得た。細胞は抗ヒ特異的なシグナルが検出された（図 4A）。表皮より single

ト CD1a 抗体と蛍光色素で標識した抗マウス IgG 抗体を

cell suspension を得て、抗 CD1a 抗体と抗 MHC クラス 2

用いてラベルし、フローサイトメトリおよび蛍光顕微鏡に抗体を用いた二重染色をし、フローサイトメトリ測定を行よる解析を行った。

ったところ、MHC クラス 2 陽性細胞が CD1a 分子を発現していることがわかった（図 4B）。以上のことから、この

２・３

表皮ランゲルハンス細胞の解析

CD1a トランスジェニックマウスにおいて、表皮ランゲル

マウス耳介より皮膚を採取し、0.5 M チオシアン酸アン
モニウム処理を行ったのち、表皮と真皮を分離した。表ハンス細胞が特異的に CD1a 分子を発現していることが確認された。

皮を冷アセトン固定し、ビオチン化ヒト CD1a 抗体およびこのマウスにおいて、CD1a 拘束性 T 細胞のポジティ

horseradish peroxidase 標識ストレプトアビジンを用いてブセレクションが起こっていることを検証する目的で、蛍光染色を行った。染色組織を封入したのち、蛍光顕微鏡

MAC 感染後の脾臓における MAC 脂質特異的 T 細胞の存下での観察を行った。

在をインターフェロンガンマ ELISPOT 法を用いて調べた。

表皮細胞のフローサイトメトリによる解析には、dispase

その結果、CD1a 陽性骨髄樹状細胞の存在下で脂質抗原特処理を行った皮膚より表皮を剥離し、EDTA 処理を施し異的な応答が観察され、その応答は抗 CD1a 抗体により阻て single cell suspension を得た。細胞の染色は２・２に止された。このことは、この CD1a トランスジェニックマ

記載した方法で行った。

ウスにおいて、CD1a 拘束性の T 細胞が生成されていることを示唆している。

２・４

ELISPOT 法

４．考Mycobacterium avium complex（MAC） 感 染 CD1a ト

察

ランスジェニックマウスより脾臓細胞を回収し、MAC 菌

脂質特異的免疫応答の解析には、主としてモルモットが体より抽出した脂質抗原の存在下に骨髄樹状細胞と混合培使用されてきた。しかしその機序の詳細な解析や、蛋白特養した。活性化に伴いインターフェロンガンマ産生する細異的免疫応答との差異を明確にするためには、遺伝子操作

胞を市販の ELISPOT キットにより検出した。

が容易なマウス実験系の樹立が必須である。本研究で樹立

３．結された CD1a トランスジェニックマウスの解析をさらに進果めることにより、ランゲルハンス細胞の新しい機能が明ら産まれてきた 17 匹のマウス（オス 10 匹、メス７匹）にかにされることが期待される。接触性皮膚炎を惹起する原

ついて、PCR 法による genotyping を施行したところ、メ因分子の多くは非蛋白抗原であり、ウルシオールなど脂溶

ス２匹が陽性であった（図 1、#3 と #7）。このうち１匹性の性質を持ったものも見られる。これらの脂質に対するについて骨髄樹状細胞を採取しフローサトメトリ解析を行

応答には CD1a 分子が関与している可能性が高く、その実ったところ、ヒト CD1a 分子の発現が確認できた（図２）。

証は病態の理解だけでなく新たな制御法の開拓にも結びつ

さらにサポニン処理した骨髄樹状細胞を抗 CD1a 抗体とテくことが考えられる。

キサスレッド標識二次抗体でラベルし、蛍光顕微鏡下で観図１

CD1a トランスジェニックマウスの genotyping 結果（本文参照）− 42 −

脂質を中心とした非蛋白抗原に対する皮膚免疫応答機構の解明とその制御法の確立

図２ CD1a トランスジェニックマウスより得られた骨髄樹状細胞のフローサイトメトリ解析結果
抗 CD1a 抗体（青線）およびネガティブコントロール抗体（赤地）の染色パターンを示した。樹状細胞の細胞表面に顕著な CD1a 分子の発現が認められた。

A

図３ CD1a トランスジェニックマウスより得られた骨髄樹状細胞の蛍光顕微鏡解析結果（本文参照）

B

図４ CD1a トランスジェニックマウス表皮ランゲルハンス細胞における CD1a 分子の発現(A) 表皮シートを抗 CD1a 抗体を用いて蛍光染色した。 (B) 表皮より得た細胞を抗 CD1a 抗体と抗 MHC クラス 2 抗体を用いて二重染色し、フローサイトメトリにより解析した。

− 43 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図５ CD1a トランスジェニックマウスにおける、CD1a 拘束性 T 細胞の存在証明
MAC 感染マウス脾臓より T 細胞を単離し、CD1a 陽性あるいは CD1a 陰性樹状細胞の存在下で、MAC 由来脂質抗原による刺激を行った。一部は阻害抗体を加える条件で行った。活性化を受けインターフェロンガンマを産生した T 細胞の数を、ELISPOT 法により測定した。

（引用文献）

deficient cells. Immunity, 16, 697-706, 2002.

１）Sugita M, Jackman RM, van Donselaar E, et al.:５）Pena-Cruz V, Ito S, Oukka M, et al.: Extraction of

Cytoplasmic tail-dependent localization of CD1b

human Langerhans cells: a method for isolation of

antigen-presenting molecules to MIICs. Science, 273,

epidermis-resident dendritic cells. J. Immunol. Methods,

349-352, 1996.

255, 83-91, 2001.

２）Sugita M, Grant EP, van Donselaar E, et al.: Separate

６）Pena-Cruz V, Ito S, Dascher CC, et al.: Epidermal

pathways for antigen presentation by CD1 molecules.

Langerhans cells efficiently mediate CD1a-dependent

Immunity, 11, 743-752, 1999.

presentation of microbial lipid antigens to T cells. J.
Invest. Dermatol. 121, 517-521, 2003.

３）Sugita M, van der Wel N, Rogers RA, et al.: CD1cmolecules broadly survey the endocytic system. Proc.

７）Watanabe Y, Watari E, Matsunaga I, et al.: BCG
vaccine elicits both T-cell mediated and humoral

Natl. Acad. Sci. USA, 97: 8445-8450, 2000.
４）Sugita M, Cao X, Watts GF, et al.: Failure oftrafficking and antigen presentation by CD1 in AP-3-− 44 −

immune responses directed against mycobacterial lipid
components. Vaccine, 24, 5700-5707, 2006.

Apollon による細胞老化の制御機構

東京大学分子細胞生物学研究所

内 藤

幹 彦

Apollon is a large protein containing baculoviral-IAP-repeat and ubiquitin-conjugating enzyme domains at theamino- and carboxy termini, respectively. Apollon inhibits apoptosis by facilitating proteasomal degradation of
caspase-9 and SMAC. Homozygous disruption of apollon gene in mice results in embryonic lethality, and the mutant
embryos showed polymorphic phenotype including growth retardation and defects in vasculogenesis. Here we showthat embryonic fibroblasts from apollon-deficient mice showed earlier replicative senescence and over-duplicationof centrosome. The time required for completion of mitosis was extended in the apollon-deficient cells comparedwith wild-type cells. Thus, cell cycle regulation is affected in the apollon-deficient cells, which may be involved in theearlier replicative senescence.

１．緒

サスペンドして 10 ㎝ディッシュにまき、炭酸ガス培養器

言で培養する。

IAP（inhibitors of apoptosis）ファミリーの 1 つである

genotyping 用 に と っ た 胎 仔 の １ 部 に 60uL の Lysis

Apollon は N 末 端 側 に BIR（baculovirus IAP repeat）ドBuffer 加え、55℃、1 時間処理する。95℃で 20 分処理後、メインを、C 末端側に UBC（ubiquitin-conjugating enzyme）

15000 rpm、10 分間遠心し、上清１ul に genotyping 用プ

ドメインを有する分子量 530 Ｋの巨大なタンパク質である。

ライマー、PCR Buffer、dNTPmix、polymerase、を加え、これまでの研究で、Apollon は BIR、UBC ドメインを介

PCR にかける。反応産物を２% agarose gel（エチジウム

して Caspase ９や SMAC をユビキチン化し、プロテアソ

ブロミド入り）で泳動し、バンドを観察する。

ームによる分解を促進することによりアポトーシスを阻害1）することが明らかとなっている 。しかし、BIR、UBC ド

2・2

細胞老化の観察メイン以外の広大な領域の機能は未知であり、また、当研

2・2・1

究室で作成した Apollon 欠失マウスは胎生致死であること

MEF の初代培養を始めた日を０日とし、２日後から３から、Apollon には細胞死制御以外似も様々な機能がある

日毎に細胞数を計測し、MEF（+/+）は５×105cells/10と推測される。

㎝ dish で、MEF（-/-） は 7×10 cells/10 ㎝ dish で ま き

本研究では、主に Apollon 遺伝子を欠損したマウス胎児

累積の細胞増殖曲線

5続けた。

繊維芽細胞（MEF）を解析し、Apollon 欠損 MEF が早期に増殖を停止し老化した表現型を示すこと、Ｍ期の進行が2・2・2遅延していること、中心体が過剰複製されていることを見

MEF の初代培養を始めた日を 0 日とし、初代培養開始後、
さま

出した。

ざまな時間に細胞を固定し、senescence β-galactosidase

２．実
2・1

senescence β-galactosidase 染色

staining kit（Cell Signalling）の protocol に従い、染色を

験

行った。

MEF の初代培養と Genotyping

耐性 14.5 日のマウス胎児を摘出し、ハサミで細かく切

2・3

免疫染色

り刻んでから、一部を genotyping 用に分ける。トリプシ細胞を PBS で洗った後、４％パラホルムアルデヒドでンを加え室温で 40 分間振倒した後、DMEM を加えて遠固定する。PBS で３回洗浄した後、0.1％ TritonX-100 お心（1000rpm、５分）し、上清を除く。沈殿を DMEM によび３％ BSA 入りの PBS で浸透化とブロッキングをする。
Blocking Buffer に 1 次抗体を希釈し、室温で２時間処理

Regulation of replicative senescence byapollon

する。PBS で 10 分 × ３回洗った後、蛍光標識 2 次抗体と、

Mikihiko Naito

再び PBS で 10 分 × ３回洗浄し、Poly-Mount 液とカバー

Institute of Molecular and Cellular
Biosciences, The University of Tokyo

hoechst も同様に希釈し、遮光して室温で１時間処理する。
ガラスを用いて封入する。

− 45 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

2・4

Time-lapse microscopy

期に老化するのか検討した。正常細胞は分裂回数を重ねる

MEF は顕微鏡下、37℃、25mM HEPES-KOH（pH7.3）

３．結
3・1

ごとに CDK インヒビターの p16、p21 タンパクの発現が増加し、p21 は完全に老化すると減少することが知られて含有 DMEM で培養し、3 分毎に撮影を行った。

いる。初代培養を開始後経時的に MEF の lysate を調製し果

Western blot で解析した結果、野生型 MEF と比較して、Apollon 欠損 MEF の初代培養

Apollon 欠損 MEF では p16、p21 ともに早期に発現が増

Apollon（+/-）マウスを交配して得られた胎児の細胞を初代培養して、野生型 MEF、及び Apollon 欠損 MEF

加していることが明らかになった（Fig. 2B）。また、老化マーカーとして知られる酸性 β-galactosidase 染色を樹立した。PCR により Genotype を解析し、Apollon 欠
損 MEF は Apollon タンパク質を発現していないことを確認した（Fig. 1）。XIAP 遺伝子破壊マウスでは、cIAP-1、
2）

cIAP-2 が発現上昇していることが報告されている 。そこで、Apollon の欠失マウスで他の IAP の発現を検討したが、野生型 MEF との差は見られなかった（Fig. 1）。

3・2

MEF の老化

ヒトやマウス線維芽細胞を培養すると、細胞は一定期間
増殖後、扁平な形態となり、不可逆的に増殖を停止し長期間生存し続ける。このような状態を細胞の老化と呼び、老化した細胞は対数増殖期の細胞とは異なる特徴を示すことが知られている。野生型 MEF は約 30 日間増殖した後細胞分裂を停止したが、Apollon 欠損 MEF は約 10 日で増殖を停止した（Fig. 2A）。そこで Apollon 欠損 MEF は早

Fig.2

Fig.1

MEF の genotyping と IAP の発現

Apollon 欠損 MEF に見られる細胞老化− 46 −

3）におApollon による細胞老化の制御機構

いても、野生型 MEF と比較して、Apollon 欠損 MEF で

その結果、Apollon 欠損 MEF では野生型 MEF と比べては早期に強陽性を示す細胞が出現した。
（Fig.2C）。これら

分裂期の開始から終了までの時間が約 1.5 倍に延長していの結果から、Apollon 欠損 MEF は早期に老化することがた（Fig.3B）。１回の細胞周期に要する時間は、ほとんど明らかになった。

同じであったことから、Apollon 欠損 MEF では細胞周期の M 期の進行が特異的に遅れていることが示唆された。

3・3

Apollon 欠損 MEF に見られる細胞分裂の異常

これらの結果から、Apollon は細胞周期、特に G2/M 期の

老 化 し た MEF の 培 養 を 長 期 間 維 持 す る こ と に よ り、制御に関与することが考えられた。

自然に形質転換を起こして不死化した野生型 MEF 及び
Apollon 欠損 MEF を樹立した。これらの不死化した MEFの細胞分裂の様子をビデオに撮影して観察した（Fig.3A）。

Fig.3

3・4

Apollon 欠損 MEF に見られる中心体過剰複製

ビデオの観察から、Ｍ期が遅延していることに加えて、Apollon 欠損 MEF に見られる M 期の延長

− 47 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

Apollon 欠損 MEF では２つに分裂できない細胞や、１度して機能することが知られている。今後、Apollon によっ３つに分裂した後１つに融合してしまう細胞等、細胞分裂てユビキチン化などの制御を受ける細胞周期制御因子を明に異常を示す細胞も多数観察された（Fig.3A）。細胞分裂

らかにすることにより、Apollon による細胞老化の制御機の過程で、凝縮した染色体は分裂中期において赤道面上に構を解析していく予定である。

並び、対極に位置する２つの中心体から紡錘糸が伸びてきて染色体を均等に分配する。しかし、中心体が過剰に存在（文

すると染色体が不均一に分配され、３つ以上に分裂するこ

１）Hao, Y., Sekine, K., Kawabata, A., Nakamura, H.,

献）とがある。そこで、Apollon 欠損 MEF で中心体が過剰にIshioka, T., Ohata, H., Katayama, R., Hashimoto, C.,

存在するかどうか、γ-tubulin の免疫染色により検討した

Zhang, X., Noda, T., Tsuruo, T., and Naito, M.: Apollon（Fig.4A）。野生型 MEF の中心体はほぼすべての細胞が２ubiquitinates SMAC and caspase-9, and has an

個以下であったのに対し、Apollon 欠損 MEF では約 20%

essential cytoprotection function. Nat Cell Biol, 6 (9),の細胞で中心体が過剰複製していた（Fig.4B）。

４．考849-860, 2004.
２）Harlin, H., Reffey, S. B., Duckett, C. S., Lindsten,察

T., and Thompson, C. B.: Characterization of XIAP-Apollon 欠損 MEF の解析から、Apollon が細胞周期（特deficient mice. Mol Cell Biol, 21 (10), 3604-3608, 2001.

にＭ期）の制御や中心体複製の制御に重要な機能を持つこ

３）Dimri, G. P., Lee, X., Basile, G., Acosta, M., Scott, G.,とが示唆された。Apollon 欠損によるこれらの制御異常が、

Roskelley, C., Medrano, E. E., Linskens, M., Rubelj, I.,

初代培養 Apollon 欠損 MEF に見られた早期老化の原因とPereira-Smith, O., and et al.: A biomarker that identifies

なっている可能性が考えられる。Apollon は UBC ドメイ

senescent human cells in culture and in aging skin in

ンを持ち、Caspase ９や SMAC のユビキチンリガーゼとvivo. Proc Natl Acad Sci U S A, 92 (20), 9363-9367, 1995.

Fig.4

Apollon 欠損 MEF に見られる中心体過剰− 48 −

骨髄由来表皮細胞の分化ならびに遊走機序の解明

北海道大学大学院医学研究科皮膚科

阿 部

理一郎

Recent studies have suggested that bone marrow (BM) cells transdifferentiate to regenerate a variety of cellularlineages. Due to the relatively small population of BM-derived cells in each organ, it is still controversial whether
these BM-derived cells are really present in sufficient numbers, for effective function. Conversely, it is speculated
that chemokine/chemokine receptor interactions mediate this migration of the tissue specific precursor cells fromBM into the target tissue.
Here we show that cutaneous T-cell attracting chemokine (CTACK) /CCL27 is the major regulator involvedin the migration of keratinocyte precursor cells from BM into skin. By screening various chemokine expression
patterns, we demonstrated that CTACK is constitutively expressed in normal skin and upregulated in wounds andthat approximately 20% of CD34+ BM cells expressed CCR10 the ligand for CTACK.
These results provide direct evidence that recruitment of BM keratinocyte precursor cells to the skin isregulated by specific chemokine/chemokine receptor interactions, which makes possible the development of newregenerative therapeutic strategies.

１．緒造を形成し、かつ適切な部位に留まらなければならないこ言とである。よって、骨髄移植で、標的の臓器（皮膚）に骨

これまで再生医学領域の研究により、種々の体細胞成分
が骨髄幹細胞から分化可能であることが明らかとなった。

髄由来表皮細胞が遊走し、かつ欠損タンパクを産生し、機能的に働くかは全く不明である。

骨髄幹細胞から表皮細胞への分化の可能性も示唆されてい

また、組織幹細胞を用いた再生医療は、胚性幹細胞（ESるが、なお確定はえられていない。一方先天的酵素欠損症細胞）と比較し、倫理的にも ES 細胞が胎児由来であるの（Hunter 症候群など）は同種骨髄移植によりドナー由来細に対し、骨髄幹細胞は本人由来である。加えて採取が格段

胞から欠損酵素を供給する治療が試みられ臨床的にも有用に容易という画期的利点があり、臨床適応が切望されていであることが証明されている。しかしながら同種骨髄移植る。しかしながら、現在骨髄幹細胞を用いた再生医療へのを用いた、構造タンパク欠損症に対する治療法の研究はな

応用の実現化において、乗り越えるべき大きな課題がある。

されていない。

これまでの検討で、各臓器において骨髄幹細胞由来の分化

構造タンパク欠損症である表皮水疱症に対する根本的治した臓器細胞が存在することは確認できているが、その頻療法は、主に病因である欠損タンパクを遺伝子導入するこ度は非常に低く、生物学的機能を有しうるか疑問視されてとで産生させる、遺伝子治療が検討されている。しかしないる。一方、特異的細胞遊走はケモカイン、ケモカインレ

がら現在遺伝子治療に関しては技術的問題、安全性の問題

セプターの相互作用により起こることが知られており、他などで、一般的な臨床応用までにはなお時間がかかると予臓器細胞に分化する骨髄幹細胞においても同様の機序が予想される。先天的酵素欠損症（Hunter 症候群など）は同想される。我々は遊走能の観点から、すでに骨髄由来線維種骨髄移植によりドナー由来細胞から欠損酵素を供給する

芽細胞の創傷部位への遊走はケモカイン（SLC）ケモカイ治療が試みられ臨床的にも有用である。しかしながら同種

ンレセプター（CCR7）interaction により起こることを明

骨髄移植を用いた、構造タンパク欠損症に対する治療法のらかにしている。以上から、ケモカイン、ケモカインレセ

研究は皆無である。

プターの相互作用を用いることで、骨髄由来の表皮細胞の一方、構造タンパク欠損症と先天的酵素欠損症の相違は、頻度を増加させることができ、より生物学的機能を発揮さ産生させるタンパクが産生されるのみならず、機能的な構せうる可能性があると考えられる 。

１）

本研究課題において、創傷部皮膚において発現されるケTransdifferentiation and migration ofbone marrow-derived kerationcytes

モカインの同定、および骨髄細胞中のケモカインレセプタ
ー発現細胞の検索を行った。

Riichiro Abe
Department of Dermatology, Hokkaido
University Graduate School of Medicine

２．実
２．１

験

骨髄細胞からの表皮細胞への分化の同定

正常マウスに対し、GFP トランスジェニックマウス（全− 49 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

身の細胞が GFP 産生し緑色に蛍光を発する）から骨髄移14 もともに陽性であったため、骨髄由来表皮細胞を確認植を行う。骨髄由来細胞が置換された移植マウス（レシピ

できた（Fig. 1A）。またこの細胞は血球マーカーである

エントマウス）に皮膚創傷を作成し経時的に創傷部皮膚を

CD45 やランゲルハンス細胞のマーカーである CD11c は採取し、レシピエントマウスにおいてドナー骨髄幹細胞由陰性であった。加えてこの細胞の多くは基底層に存在し、

来表皮細胞が分化しているか確認する。

毛包のバルジ領域に存在するものほとんど認めなかった。
創傷部の全表皮細胞中における骨髄由来表皮細胞の割合

２．２ 骨髄細胞由来表皮細胞の表皮への効率的遊走機序の検討

は 0.025％ ±0.009％であり、基底細胞中の割合は 0.1% 程度であった。

効率的な骨髄幹細胞の皮膚への遊走を促すため、骨髄移植の際のドナー、レシピエントの条件の検討を行う。あわせて、皮膚発現のケモカイン中で特異的に骨髄由来表皮細３．２ 骨髄細胞由来表皮細胞の表皮への効率的遊走機序の検討

胞の表皮への遊走を促進するケモカイン、またその候補ケ再生の場である皮膚創傷における骨髄由来表皮細胞の集モカインに対するケモカインレセピターの骨髄幹細胞にお積は、再生現象が生じている時期にのみ特異的に起こるとける発現を検討する。具体的には、皮膚再生が強力に誘導予想される。よって皮膚創傷部には組織特異的なケモカイ

される創傷部において、骨髄由来表皮細胞の表皮遊走誘導ンが発現し、それに対するケモカインレセプターを持つ骨ケモカインの発現が亢進すると予想されるので、創傷部位

髄由来表皮細胞が遊走してくると思われる。

におけるケモカイン発現を検討する。次に候補となるケモ

最 初 に 創 傷 部 に お け る ケ モ カ イ ン の 発 現 を RT-PCR、カインを用い、in vitro における骨髄幹細胞遊走能の検討、Western blot、免疫染色で検討したところに示すように

in vivo における骨髄由来表皮細胞誘導能の検討を行い、SDF-1α、SLC、CTACK の発現が特異的にみられた（Fig. 1）。

骨髄由来表皮細胞特異的ケモカインを同定する。

３．結
３．
１

次にこれらのケモカインに対するケモカインレセプ
ターの発現を、骨髄幹細胞（CD34 陽性細胞）において

果

FACS を用いて検討を行った。それぞれのケモカインに対ドナー骨髄幹細胞由来表皮細胞の分化するレセプターの発現を確認できた（SDF-1α：CXCR4、

GFP トランスジェニックマウス骨髄を移植した正常マ

SLC:CCR7、CTACK:CCR10）（Fig. 2A）。

ウスを解析した。表皮のなかに GFP 陽性の骨髄由来細胞

さらにこのレセプターが機能的に発現しているか、inがあり、この細胞は表皮細胞のマーカーであるケラチン

vitro migration assay を用いて検討した。それぞれのケモ

FIGURE 1
Bone marrow (BM) derived keratinocytes (BMDK) wereidentified and CTACK was expressed in wounded skin.
(A) Engrafted BMDK in wounded skin expressed both GFP,
as a marker of bone marrow origin (green), and keratin14,
as a marker of basal keratinocyte (red), (arrows) (e:epidermis, d: dermis).
(B-D) Normal (N) or wounded (W) skin tissue samples werecollected and analyzed for chemokine expression as shownin Table 1. The expressions of SDF-1α, SLC and CTACK
were detected by RT-PCR (B) and Western blot analysis (C)in normal skin and also in skin 24 hours after wounding.
These experiments of RT-PCR and Western blot analyses
were performed in triplicate. Immunofluorescence staining
in the wound edge 3 days after wounding, particularly
CTACK expression was upregulated (green) (D). SDF-1
αand SLC were weakly expressed (data not shown). Nuclei
were counterstained with propidium iodide (red) (e:epidermis, d: dermis).

− 50 −

骨髄由来表皮細胞の分化ならびに遊走機序の解明

カインによって、ある程度の CD34 陽性の骨髄幹細胞は遊走を特異的に誘導することが明らかになった。
さらに、二つの系を用いて骨髄幹細胞を増加させたとこ

走することが示された（Fig. 2B, C）。

ろ（G-CSF 投与、または CD34 陽性細胞静注）、骨髄由来

３．３ 創傷皮膚における特異的骨髄由来表皮細胞の遊走能

表皮細胞の数は有意に増加したが、同時に CTACK を投与するとさらに増加した（Fig. 3A）。

次に創傷皮膚において特異的骨髄由来表皮細胞についてり 検 討 し た。SDF-1α、SLC、CTACK そ れ ぞ れ 投 与 し、

３．４ CTACK は骨髄由来表皮細胞を増加させることにより創傷治癒を促進させる

治癒した表皮における骨髄由来表皮細胞数をカウントした

CTACK による骨髄由来表皮細胞増加の創傷治癒に対するところ、CTACK のみが有意に増加させた（Fig. 3A）。ま

影響に関して検討を行った。創傷辺縁に CTACK を局所た中和抗体局所投与により有意に減少した（Fig. 3B）。以投与すると、有意に創傷治癒が促進された（Fig. 4A,B）。

上から CTACK が生体内において骨髄由来表皮細胞の遊また CTACK 投与により血管新生は促進されず（Fig. 4C）、

それぞれのケモカインを創傷辺縁に局所投与することによ

FIGURE 2
CCR10, a receptor for CTACK, was expressed in CD34+ BM cells and these CD34+ BM cells migrated in response to
CTACK in vitro.
(A) CXCR4, a receptor for SDF-1
α, CCR7, a receptor for SLC, and CCR10 expression on CD34+ BM cells wereanalyzed by flow cytometry. The staining with a specific antibody for each chemokine receptor (solid line) and thebackground staining with the non-specific Ig antibody (negative isotype matched control; shaded profile) by the gatedCD34-positive population. CD34+ BM cells expressed CXCR4 (97.4%), CCR7 (12.9%), and CCR10 (19.1%).
(B, C) Chemotaxis assays were undertaken in vitro. Isolated CD34+ BM cells purified by FACS were added to the upper
well of a 3-μm pore Transwell. Recombinant SLC, SDF-1α or CTACK was added to the upper and/or lower plate. CD34+
BM cell migration rates increased in response to media containing recombinant SLC, SDF-1α or CTACK (100ng/ml) (*P< 0.05, **P < 0.001) versus media alone (n=4) (B). CTACK (0-500ng/ml) induced CD34+ BM cell migration was in dosedependent manner (n=4) (*P < 0.05) (C). SDF-1
α and SLC were also induced it in dose-dependent manner (data notshown).

− 51 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

FIGURE 3
CTACK specifically accumulated BMDK in wounded skin.
(A) The number of BMDK was quantified as a percentage of the total number of keratinocytes in wounded skin from
untreated mice or those treated with G-CSF for cytokine mobilization or those that received CD34+ BM cells adoptive
transfer. SLC, SDF-1α or CTACK (1μg in 30μl) were intradermally injected into the periphery of wounded skin (5 mice ineach group). CTACK significantly accumulated large numbers of BMDK as compared with SLC, SDF-1α and PBS (**P <0.01). Furthermore, the number of BMDK increased in mice treated with G-CSF for cytokine mobilization or those thatreceived CD34+ BM cells adoptive transfer (***P < 0.005).
(B) CTACK neutralizing antibody (0-16μg in 120μl) was injected to the periphery of wounded skin. The numbers of BMDK
were decreased by CTACK neutralizing antibody in dose-dependent manner (5 mice) (*P < 0.05, ***P < 0.005).

FIGURE 4
Increased BMDK by CTACK accelerated wound closure without angiogenesis or keratinocyte proliferation.
(A, B) Wound size was measured at 10 days after wounding and subsequent CTACK treatment (total 3μg in 100μl) or PBS (100μl), as control (6 mice in each group). Full-thickness cutaneous wounds were made and subsequently monitored daily.
Intradermal injection of CTACK significantly accelerated wound closure (*P < 0.05) (A). Representative photographs of PBS, as
control (mouse 1-3), or CTACK (mouse 4-6) treated wound appearance at 10 days after wounding (B).
(C) The numbers of capillaries in the dermis treated by CTACK (1μg in 30μl) or PBS (30μl) as control vehicle at 3 days after
wounding were quantified. There was no statistical difference between CTACK and control (2 sections at each 5 mice).
(D) Keratinocytes were cultured with or without CTACK (0-100ng/ml) for 72h and viable cells were determined by proliferation
assay. There was no statistical difference in proliferation of keratinocytes between the two treatment groups (9 mice).

− 52 −

骨髄由来表皮細胞の分化ならびに遊走機序の解明

CTACK は表皮細胞の増殖を促進しないことからも（Fig.

また最近我々は間葉系幹細胞（MSC）も同様に、特異

4D）、CTACK の創傷治癒促進効果は主に骨髄由来表皮細的ケモカイン、ケモカインレセプターにより創傷皮膚に遊胞誘導により惹起された。

走することを見出した 。幹細胞を用いる再生医療におい

４．考

２）

てケモカイン、ケモカインレセプターを用いた治療の可能

察性が開かれたと期待する。

本研究課題により、骨髄由来表皮細胞の皮膚遊走機序の詳細が解明された。特定された特異的骨髄由来表皮細胞遊（引用文献）

走因子：CTACK を用いた新たな再生医療の可能性がある

１）Inokuma D, Abe R, FujitaY, et al.: CTACK/CCL27と考える。またこの本研究の手法および成果は、多の組織

accelerates skin regeneration via accumulation of

細胞においても応用可能なものであり、本研究成果がブレ

bone marrow derived-keratinocytes. Stem Cells 24.

ークスルーとなり、他臓器についても解明されると予想さ2810-2816, 2006.

れる。さらに構造タンパク欠損を同種骨髄移植で補えるこ２）Sasaki M, Abe R, Fujita Y, et al.: Mesenchymal stemとが示されれば、根本治療の全くない重症表皮水疱症へのcells are recruited into wounded skin and contribute to

画期的治療に結びつくと思われる。あわせて、他臓器の多wound repair by transdifferentiation into multiple skin

種の構造タンパク欠損症に対しても治癒の可能性を示すとcell type. J Immunol 180, 2581-2587, 2008.

考える。

− 53 −

白皮症の病因遺伝子の解明とその遺伝子産物のメラニン色素生成における機能解析
山形大学医学部皮膚科学分野

鈴 木

民 夫

Oculocutaneous albinism (OCA) is a group of autosomal recessive disorders characterized by reduced orabsent biosynthesis of melanin in melanocytes of the skin, hair, and eye. OCA is caused by mutations in the genes
associated with melanin synthesis. So far, 16 genes have been reported to be involved in OCA. We have investigatedthe mechanism of melanogenesis. Here, we describe the analysis of the OCA genes in Japanese OCA patients andthe identification of ten these patients, one OCA1, one OCA2, and eight OCA4. Ten novel mutations (c.445delTAin TYR gene for OCA1, p.792V in P gene for OCA2, and p.Y49C, p.G89R, P.C229Y, p.T437A, p.T440A, p.G473A in
SLC45A2 gene for OCA4) were detected. Furthermore, we analyzed an OCA patient who was a Moroccan origin
Belgian boy with type 4 oculocutaneous albinism (homozygous p.H38R mutation in the SLC45A2 gene). Functional
analysis by transfection of the mutant OCA4 cDNA, p.D157N, or p.G188V which had been reported as high frequent
mutations in Japanese OCA4 into uw-mutant melanocytes established from OCA4 model mice showed that thesemissense substitutions are pathologic, resulting in these variant being unable to produce melanin. The p.H38R
mutation was also investigated for the function in melanogenesis, and revealed to have no activity for melanogenesis.
This is the first report on patient with OCA4 identified among African origin ethnic groups.

１．緒てきた。これらの分子の異常は、結果としてメラニン合成

言の低下、あるいは消失をもたらし、臨床的には眼皮膚白皮

ヒトの色素として、ヘモグロビン、カロチノイド、フラ症（oculocutaneous albinism, OCA）、あるいは OCA に加ボノイド、メラニンなどが知られているが、最も重要な役

えて出血傾向や間質性肺炎を合併する Hermansky-Pudlak

割を担っているのはメラニンである。メラニンは複雑な組症候群（HPS）などの症候群付随型白皮症を引き起こす 。

１）成を持つ高分子化合物であり、生体高分子化合物の中でも我々は皮膚科医として、これまでに臨床的には白皮症を際立った特異性を有している。つまり、溶媒に不溶性で呈する患者に対してその遺伝子診断による確定診断を行い、あり、構造が不規則であり、加水分解により単量体に分解

その診断をもとに日常生活における紫外線対策などの生するのも困難である。このような特異的で複雑な構造ゆえ

活指導などを行ってきた。一方で、基礎研究を通じて白皮に、メラニンは光の吸収と発散、フリー・ラジカル補足、症の病因、病態、つまり、メラニン合成およびメラノソー

熱の保持などの多様な機能を持つことが知られている。こムの生合成およびその制御機構を明らかにしてきた。今回、のメラニンは、皮膚においては紫外線障害を防御してい臨床的アプローチとして、日本各地からの日本人白皮症症る。メラニン合成に関わる研究は、近年急速な発展を遂げ例に加え、モロッコ系ベルギー人症例の検体を解析する機ている。ここ 15 年間にメラニン合成に関わる分子が次々会を得たので、その結果を報告する。さらに基礎的アプロに明らかにされ、その数は 100 種類以上といわれている。

ーチとして、in vitro 培養メラノサイトを使用した解析にメラニンはメラノサイトのメラノソーム内で合成される。

より、１）日本人 OCA ４型白皮症患者で見つかった変異

メラノソームはメラニンを合成、保持する唯一の細胞内小OCA ４遺伝子産物の機能解析を行い、遺伝子異常による器官であり、最終的にはメラニンごと近隣のケラチノサイ

メラニン合成能の変化を検討し、さらに２）モロッコ系ベトに受け渡される。このメラノソーム内でメラニン合成に

ルギー人にて明らかになった OCA4 原因遺伝子 SLC 症例

直接関わっている分子をはじめ、メラノサイトの細胞質やの遺伝子変異について１）と同様に機能解析を行った。

エンドソームに局在し膜輸送を介してメラノソームの生合

２．実成、あるいは成熟に必須とされる分子、さらにはメラノサ
イトの発生、分化に特異的に関与する分子が明らかにされ2．1

験

臨床的アプローチ

白皮症を呈する症例の原因遺伝子変異スクリーニングは、
Investigation and functional analysis on
the responsible genes for oculocutaneousalbinism
Suzuki Tamio
Department of Dermatology, Yamagata
University School of Medicine

PCR-SSCP（polymerase chain reaction- single stranded
conformation polymorphism）法にて行なった。患者末梢血２〜 10 ㎖より genomic DNA を抽出し、それを鋳型に用いて各 OCA 原因遺伝子増幅用の PCR プライマーにて、原因遺伝子のエクソンをその近傍を含め 200 〜 300bp ごとに増幅した。次に、これらの PCR 産物を SSCP にてス− 54 −

白皮症の病因遺伝子の解明とその遺伝子産物のメラニン色素生成における機能解析

クリーニングを行い、異常バンドを検出した場合は、そのノ酸と考えられた。

バンドの塩基配列を direct sequencing 法にて変異を同定

3．2

した。

基礎的アプローチ（変異タンパク質の機能解析）

3．2．1

2．2

基礎的アプローチ

日本人症例で見られた変異

我々がこれまでに報告した 18 例の日本人白皮症 4 型患

正常ヒト OCA4cDNA をヒト培養メラノーマ細胞であ４）者でみられた SLC45A2 遺伝子変異のうち、最も高頻度

る MNT-1 cell cDNA library よりクローニングした。次に見られた p.D157N と p.G188V の 2 種類のアミノ酸置換に、 そ の 正 常 型 OCA4cDNA に p. D157N、p. G188V とを伴う変異について検討した。また同時に、OCA4 型のモ

p. D153N の変異をそれぞれ導入し、これらの cDNA を

デルマウスである underwhite マウスで既に同定され報告

CMV プ ロ モ ー タ ー 下 の ハ イ グ ロ マ イ シ ン 耐 性 ベ ク タ

されている p.D153N 変異もあわせて検討した。ヒト変異ー（pIREShyg3）に移し、OCA4 のモデルマウスである

OCA4cDNA 導入 uw-melanocyte stable tranformant のメ

underwhite マウスより樹立された培養メラノサイト（uwラニン合成能を調べる目的で、メラニン含有量を測定した。

cell）に導入した。その後、ハイグロマイシンで選択し、その結果、図６に示すように、正常型 OCA4cDNA を

stable transformant を樹立した。なお、コントロールと導入したメラノサイトは、control ベクターを導入した

して OCA4cDNA を組み込んでいない空のハイグロマイ

Mock に比べ、有意な差をもってメラニン合成能が上昇

シン耐性ベクターを導入し、同様にそれぞれ独立クローン

した（P ＜ 0.005）。このことは、ヒト正常型 OCA4cDNAの stable transformant を６個以上、樹立した。こうしては、 マ ウ ス 由 来 の uw-melanocyte に お い て メ ラ ニ ン 合得られた stable transformant のメラニン含有量とタンパ

成について代償機能があることを示すものである。そこ

ク量を測定した。

で、次に変異 cDNA を導入した stable tranformant のメ

3.

結ラニン含有量を調べたところ、変異 cDNA を導入した

果

stable tranformant ではいずれもメラニン含有量は少なく、

3．1 臨床的アプローチ
3．1．1

control ベクターを導入した Mock に比べ合成能の上昇が日本人白皮症症例

見られなかった。つまり、control ベクターを導入した

日本各地よりの白皮症（OCA）患者の集積に努め、そMock に比べ、メラニン量について有意差はなかった。この 遺 伝 子 診 断 に よ る 分 類 を 行 な っ た と こ ろ、OCA1 とのことより、変異型 OCA4cDNA はメラニン合成活性が

OCA2 を各１例ずつ 、確定診断した（図１および２）。

欠損、あるいは極めて低いことが推定された。

２）

これらの症例は、それぞれ各１種類の新規遺伝子変異を伴っていることが判明した。また、８症例の OCA4 患者を

3．2．2

同様に遺伝子診断した 。これら８症例では、合計６種類

p.H38R 変異を導入した SLC45A2 cDNA を同様にしての新規遺伝子変異が見つかった（図３および４、表 1）。

培養メラノサイトに導入してメラニン合成活性を正常型

３）

モロッコ系ベルギー人症例で見られた変異

cDNA 導入クローンと比較検討したところ、変異 cDNA
3．1．2

モロッコ系ベルギー人症例を導入したクローンは有意な差を持ってメラニン合成能がベルギー・アントワープ大学の Storm 博士より依頼の少なかった（図 7）。以上の結果より、p.H38R はメラニン

あった白皮症患者を遺伝子変異スクリーニングした。症例

色素合成能が低下した病的変異である事が確認された。

は 5 歳、男児。生下時より、全身の白色皮膚、白色頭髪、4．考

青色虹彩、眼振陽性。メラニン色素沈着低下による症状以察外の異常所見は認めなかった（図５）。血液検査、血液凝OCA は、日本人では 4 万人に 1 人の頻度で見られる比集検査では特に異常を認めない。両親はモロッコ系移民で較的稀な常染色体劣性遺伝性疾患である。今回、臨床的いとこ婚。1 歳の弟は皮膚色については健常。白皮症の原アプローチとして積極的に OCA 患者の集積に努め、遺伝

因遺伝子検索目的で当科にコンサルトされた。1 〜４型眼子診断したところ、１種類ずつの新規遺伝子変異を伴う

皮膚白皮症の全ての原因遺伝子の変異スクリーニングを行

OCA1 型 1 例、２型１例、６種類の新規遺伝子変異を伴うなった。その結果、SLC45A2 遺伝子に p.H38R 変異を認OCA4 型８例を新たに確定診断することができた。OCA4めた。データベースの検索では、調べ得たすべての哺乳類、型は、世界的にはこれまでに報告数が少ない稀なタイプと魚類、鳥類、両生類で 38 番目のアミノ酸であるヒスチジ

言われている 。しかし、日本人では主要病型の 1 つであンは保存されていた。また、27 人のモロッコ系ベルギー

り、日本人白皮症の約 25％を占めると報告されている

人健常コントロールでは p.H38R は全く認めなかったこと

実際にはさらに頻度が高く 30％程度は OCA4 型が占める

より、H38 は SLC45A2 タンパク質の機能上、重要なアミ事が予想される。

５）− 55 −

４）が、

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図１ 8 ヶ月日本人女児。OCA １型の原因遺伝子であるチロ
シ ナ ー ゼ 遺 伝 子（TRY） に 2 種 類 の 遺 伝 子 変 異（c.445_445delTA and c.929insC）が明らかになり OCA1A型と遺伝子診断した。眼振、白髪、白色皮膚、そして蒙古班の欠如など、典型的な１A 型の症状を呈した。

図２ 4 ヶ月日本人男児。双生児の一方。OCA ２型の原因遺伝 子 で あ る P 遺 伝 子（P） に 2 種 類 の 遺 伝 子 変 異（c.2373_2375delCGT and p.A481T）が明らかになり OCA
２型と遺伝子診断した。金髪、クリーム色の皮膚、褐色の虹彩を呈する比較的軽症の症状を示す。双子のもう一方も同様
な白皮症症状を呈する。
同様に白皮症を呈する。

図３ ６歳日本男児（表１、患者１）。OCA ４型の原因遺伝子である SLC45A2 遺伝子に 2 種類の遺伝子変異（p.D157Nand p.T440A）が明らかになり OCA4 型と遺伝子診断した。
褐色の頭髪、赤褐色の虹彩、眼振なし。軽症型。

図４ ８歳日本男児（表１、患者 8）。OCA ４型の原因遺伝子で あ る SLC45A2 遺 伝 子 に 2 種 類 の 遺 伝 子 変 異（p.G89R
and p.G188V）が明らかになり OCA4 型と遺伝子診断した。
白色の頭髪、青い虹彩、眼振陽性。重症型。同じ OCA4 型であっても、図３の症例に比べ明らかに色素沈着が少ない。

− 56 −

白皮症の病因遺伝子の解明とその遺伝子産物のメラニン色素生成における機能解析

表１

8 人の日本人 OCA4 症例の SLC45A2 遺伝子変異形と臨床症状

図５ ５歳、男児。生下時より、全身の白色皮膚、白色頭髪、
青色虹彩、眼振陽性。メラニン色素沈着低下による症状以外の異常所見は認めず。血液検査、血液凝集検査特に異常なし。
両親はモロッコ系移民でいとこ婚。1 歳の弟は正常。

− 57 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図６ 日本人 OCA4 症例で見られた SLC45A2 変異の機能解析結果。変異を導入した培養細胞は、正常 SLC45A2 を導入した細胞に比べ、有意な差を持ってメラニン合成能が低く、陰性コントロールとほぼ同程度である。Nor：正常ヒト SLC45A2cDNA
導 入 stable transformant, 153：p.D153N 変 異 導 入 stabletransformant, 157：p.D157N 変異導入 stable transformant，
188：p.G188V 変 異 導 入 stable transformant，Mock：control stable tranforman，＊：P <0.005

in vitro 培養メラノサイトをつかったアミノ酸置換変異

図７ モロッコ系ベルギー人 OCA4 症例で見られた SLC45A2
変異の機能解析結果。変異を導入した培養細胞は、正常
SLC45A2 を導入した細胞に比べ、有意な差（P <0.01）を持ってメラニン合成能が低く、陰性コントロールとほぼ同程度で
ある。

（文献）

によるメラニン合成能回復試験の解析で、今回解析した

１）Tomita Y, and Suzuki T: Genetics of Pigmentary

D157N と G188V 変異については、確かに正常型 cDNA を導Disorders. (review) Am J Med Genet 131C: 75-81 (2004)

入した細胞に比べメラニン合成能が低下しており、この 2 種２）Ito S, Suzuki T, Inagaki K, Suzuki N, Kono M,

類の変異が確かに病的変異であることが証明された。このよ

Iwamoto T, Mochizuki S, Tomita Y: Two novel

うな in vitro での変異遺伝子解析報告はこれまでにない新しmutations detected in Japanese patients with

い手法の確立であり、今後の新しい変異に対しても応用が可

oculocutaneous albinism. J Dermatol Sci 44: 116-118

能である。

(2006)

今回、アフリカ系人種であるモロッコ系ベルギー人白皮３）Inagaki K, Suzuki T, Ito S, Suzuki N, Adachi K,症症例の遺伝子診断する機会を得た。白皮症１〜４型原因

Okuyama T, Nakata Y, Shimizu H, Matsuura H, Oono

遺伝子全てを調べたところ、OCA4 型原因遺伝子である

T, Iwamatsu H, Kono M, Tomita Y: Oculocutaneous

SLC45A2 にアミノ酸置換変異（ミスセンス変異）を認め

albinism type 4: six novel mutations in the membrane-

た。この変異は、調べ得た限り他の種で保存されている重associated transporter protein gene (SLC45A2) and

要なアミノ酸に生じていること、また、入手可能であった

their phenotype. Pigment Cell Res 19:451-453 (2006)

同民族の健常人 27 人において同じ変異を認めなかったこ

４）Inagaki K, Suzuki T, Shimizu H, Ishii N, Umezawaとより、病的変異の可能性が高いと考えられた。そこでさY, Tada J, Kikuchi N, Takata M, Takamori K,

らに、OCA4 モデルマウスより樹立した培養メラノサイト

Kishibe M, Tanaka M, Miyamura Y, Ito S, Tomita Y:を使用した in vitro のシステムを用いてメラニン合成活性

Oculocutaneous albinism type 4 is one of the mostを調べたところ、ほとんどメラニン合成活性がないことがcommon types of albinism in Japan. Am J Hum Genet

示され、p.H38R 変異は明らかに病的変異である事が示さ

74: 466-471 (2004)

れた。これまでにアフリカ系人種でが OCA4 症例の報告

５）Newton JM, Cohen-Barak O, Hagiwara N, Gardnerがなく、本症例が OCA4 と診断された初めての症例である。

JM, Davisson MT, King RA, Brilliant MH: Mutations in

今回の研究により、明らかに眼皮膚白皮症 4 型の研究が

the human orthologue of the mouse underwhite gene

推進されたと考える。

(uw) underlie a new form of oculocutaneous albinism,
OCA4. Am J Hum Genet 69: 981-988 (2001)− 58 −

真皮幹細胞を利用した皮膚の若返り治療

京都大学大学院医学研究科形成外科

内 藤

素 子

Intrinsic aging and photodamage of the face result in dull and lax skin with clear and deep wrinkles at rest.
The “aged face” is characterized by poorly organized dermal extracellular matrix, including collagens and elastic
fibers. Many young peoples also have skin troubles, such as acne scar. Although ablative and nonablative therapies
of skin resurfacing and rejuvenation are performed against these skin damages, these methods do not achievecomplete remission. Recently, dermal multipotent cells (DMCs) were isolated from the mammalian dermis. Thesecells are able to differentiate into many cell types including osteocytes, chondrocytes, adipocytes and neuros, andare thus suggested to play important roles in wound healing process as an origin of reproduced dermal tissues.
This research project aims to determine whether DMCs have a potency to contribute to skin resurfacing andrejuvenation by differentiating into dermal fibroblastic cells that synthesize de novo matrix. As a first step of the
project, we determine the most effective method to obtain DMCs from adult aged human dermis and chek their
proliferation and abilities to produce matrix proteins. Next, we examine whether DMCs grafted with keratinocytes
can differentiate into dermal fibroblast at skin wound in nude-mice and stimulate wound healing process byreproduction of extracellular matrix. These experiments will contribute to the establishment of new complete
therapy of damaged skin.

1.

緒

膚より採取した線維芽細胞を皮膚のたるみやしわの部分、

言

にきび痕陥凹部に注入することが一部の施設で行われてい近年、皮膚の老化に伴うたるみやしわをとり、皮膚を若る。しかし、たとえ注入細胞が生着しても、時間とともに返らせる、という治療は国民の関心を集めている。また、その数は減り、またマトリックスの産生も減少してしまう

ニキビ痕などの顔面皮膚表面の凹凸に対する種々のレーザことが予想される。申請者らが形成外科診療において行う

ー照射による治療も改良が重ねられ、注目を集めている。 「真皮移植」術においてさえ、移植片は時間の経過ととも
しわ、たるみに対するコラーゲンやヒアルロン酸の注入、に吸収されてしまう。このことは、「真皮移植」という極神経毒素の注入などの局所注入療法や、ピーリング、レー

めて新鮮な状態で、自己の真皮線維芽細胞と細胞外マトリザー療法、Face-Lifting 手術などが行われている。これら

ックスを移植しても、それのみでは術直後の状態を維持すの治療を行う施設は、ここ数年急激に増加しており、女性ることが困難なことを意味する。そこで我々は、移植され誌を開けば、必ずといってよいほどこのような治療に関すた場所で、自己複製し、マトリックスを産生し続ける能力る広告が掲載されており、女性の関心をいかに集めているのある細胞を用いることが肝要であると考え、その候補とかがわかる。しかし、いずれも、効果の程度や持続期間がして真皮幹細胞は最適であると予想した。

必ずしも一定ではなく、持続的効果を期待するためには、

真皮幹細胞は、2001 年に Toma１）

らによって初めて報

定期的に処置を受けることが必要である場合が多い。ピー

告されて（Toma. et al., Nat. Cell. Biol. 3: 778-784, 2001）

リングは、しわやたるみ、瘢痕による凹凸をとる、という

以降、数報の発表

ことに関して少ない施術回数で確実な効果を期待するのは化させ、神経系の細胞を誘導して臨床治療に役立てる方向難しい。手術療法は、侵襲が大きく、術後の管理も必要とで研究がなされている。我々は、この真皮幹細胞を皮膚のなり、患者の負担も大きい。最近、自己血液より採取した

若返り、あるいは皮膚再生に用いるとことを目的に、研究

血小板分画を濃縮し、注入することにより、皮膚の若返りを開始した。

２）, ３）, ４）を図る試みがなされているが、効果の確実性や持続性など

2.

が一定しない点があり、個体差もある。あるいは、自己皮がある。マウス真皮幹細胞を分実

験

2・1 成人ヒト皮膚由来真皮幹細胞の効率的採取方法の検討：

Skin rejuvenation and resurfacing withdermal multipotent cells
Motoko Naitoh
Department of Plastic and Reconstructive
Surgery, Graduate School of Medicine,
Kyoto University

成人ヒト真皮幹細胞は数が少なく、従来の sphere 法
では効率的に採取することが困難である。Joannides ら

４）（Lancet, 364, 172-178, 2004）の報告をもとに、さらに効率
よく真皮幹細胞を採取、培養する方法について検討し、得られた細胞の性質も解析した。

− 59 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

2・2 真皮幹細胞が創傷治癒、真皮性状、瘢痕化に与える影響の調査：
真皮幹細胞を血清入り培地にて増殖させて得た細胞多いことが判明した（図２）。

3・2（SDM cell とよぶ）が、創傷治癒、瘢痕化にどのような影

ヌードマウス背部に作製した直径１㎝ の皮膚全層欠損

響を与えるかを調べた。ヌードマウス背部に直径１㎝の皮層に、各細胞を移植して６日目で移植部を含むマウス背部

膚全層欠損層を作製し、同部に SDM cell を表皮角化細胞皮膚を採取した。図 3-B に示すように線維芽細胞を移植しとともに移植して経過を観察した。比較対象として、成人た創は、上皮化していない範囲が広いのに対して、SDM

ヒト皮膚由来線維芽細胞と表皮角化細胞を移植した。創がcell を移植したほう（図 3-A）は、すでに上皮化が完了し縮むことにより治癒する影響を防ぐため、創周囲にシリコている。皮膚質感も周囲皮膚とかわらずしなやかで拘縮はンリングをおき、６- ０ナイロン糸で筋層まで糸を通して認められない。SDM cell は表皮角化細胞によるすみやか

縫合固定した。

な上皮化を促し、瘢痕化を伴わない真皮再生に影響を与え3.

る可能性が示唆された。さらに、長期経過観察を行い、7結果および考察

ヵ月後の組織所見を比較したところ、SDM cell 移植部位

3・1

はでは、真皮内には周囲マウス真皮層よりも太く密なコラ

ヒト成人皮膚を細切後、デイスパーゼ処理により表皮をーゲン線維束が観察され、十分な厚さの真皮様組織が形成除去した後、得られた真皮を２㎜角程度に細切し、コラゲされていた（図 3-C）。一方、線維芽細胞移植部（図 3-D）

ナーゼ処理、ストレナーを通して、non-coated dish に播ではコラーゲン線維も細く、成熟瘢痕様組織であり、厚み種した。培養液は、Toma らの方法に順じ、DMEM/F12（1:1）

も SDM cell 移植部と比較して半分以下であった。以上のに B27、bFGF、EGF を含有した培地を用いた。約１週ことから、ヒト真皮由来幹細胞は良好な増殖能とマトリッ

間後に、図 1-A に示すごとく真皮幹細胞＝ sphere が形成

クス産生能を持ち、皮膚再生や皮膚若返りに有用である可

されてくる。この sphere を取り出し、細胞培養用 coated

能性が示唆された。

dish に入れ、血清添加間葉系細胞用培地で培養すると、
約２〜３日で sphere は dish 底面にはり付き、そこから細（参考文献）

胞が増殖し始める（図 1-B）
。これを我々は SDM cell と呼１）Toma JG, Akhavan M, Fernades KJL, et al,: Isolation

んでいる。sphere と異なり、SDM cell は容易に継代が可of multipotent adult stem cells from the dermis of能である。Joannides ら

mammalian skin. Nat. Cell. Biol., 3, 778-784, 2001.

４）の報告では添加血清は 20％となっているが、我々の系では 10％で十分であると考える。

２）K a w a z o e Y , Y a n a g i Y , T a k a t o T , e t a l , :また、培地中に試薬 A を添加した場合は、少なくとも 14

Characterization of multipotent adult stem cells

週間までは増殖率が衰えることなく継代が可能である。次from the skin: transforming growth factor-β (TGF-β)に、この培養液から、血清をふくまない sphere 用培地へ

facilitates cell growth. Exp. Cell. Res., 295, 194-203, 2004

交換すると、dish 底面にはり付いていた細胞は浮遊し始め、

３）Fernandes KJL, McKenie IA, Mill P, et al,: A dermal

１週間程度でもとの球状の sphere に戻り（図 1-C）
、分化

niche for multipotent adult skin-derived precursor

能でも可塑性を示す。また、SDM cell のマトリックス産

cells. Nat. Cell. Biol., 6, 1082-1093, 2004.

生能をみるため、マイクロアレイにてエラスチン、フィブ

４）Joannides A, Gaughwin P, Schwiening C, et al,:

リリン１、I 型コラーゲン、の m ＲＮＡ発現量を同一人物

Efficient generation of neural precursors from adultの同部位から培養した線維芽細胞と比較したところ、それ

human skin: astrocytes promote neurogenesis fromぞれ 2.2 倍、1.35 倍、1.7 倍、SDM cell のほうが産生量がskin-derived stem cells. Lancet, 364, 172-178, 2004.

− 60 −

真皮幹細胞を利用した皮膚の若返り治療

図１ A. sphere 法を用いて 74 歳女性の皮膚より得られた真皮幹細胞。B. sphere を細胞培養用 coated dish で 10％血清入り培地を用いて培養すると、底面にはりつき増殖する。C. 培地を初代 sphere 用培地に転換すると、はりついていた細胞は浮遊し始め
sphere に戻る。Bar=100 ㎛

図２ Elastin, fibrillin-1, コラーゲン α1(1) 遺伝子の発現量の相対値。線維芽細胞における各遺伝子の発現量を１としたときの、SDM cell における発現量を数値化した。n=3

図３ A. ヌードマウス背部に作製した皮膚全層欠損層に SDM cell と表皮角化細胞を移植して６日後の状態。創は上皮化が完了し、質感も周囲皮膚と大差なく良好な状態である。B. 線芽細胞と表皮角化細胞を移植したものでは、まだ上皮化が完了していない。
Bar=5 ㎜ C. SDM cell と表皮角化細胞移植後７ヶ月後、HE 染色像。D. 線維芽細胞と表皮角化移植後７ヶ月の結果 HE 染色像。Bar=C,D, とも 100 ㎛。

− 61 −

紫外線誘発メラニン合成へのスフィンゴシン 1-ホスフェートの抑制効果の検討
神戸大学大学院医学系研究科応用分子医学講座皮膚科学

錦 織

千佳子

Melanin content in pigment cells is regulated by multiple mechanisms. We have previously shown thatmelanogenesis in mouse B16 melanoma cells is inhibited by activation of phospholipase D through ubiquitin
proteasome-mediated degradation of tyrosinase. Further, we have recently found that sphingosine 1-phosphate, alipid messenger that is implicated in the regulation of a wide variety of important cellular events acting throughintracellular as well as extracellular mechanisms, suppresses melanin content in B16 cells. In this study, theinvolvement of phospholipase D and sphingosine kinase, a key regulator of intracellular sphingosine 1-phosphatelevel, in ultraviolet B-induced skin pigmentation and sphingosine 1-phosphate-induced suppression of melanincontent in B16 cells was examined. Neither phospholipase D activity nor sphingosine kinase activity in B16
cells was affected by ultraviolet B, suggesting that these enzymes are not involved in ultraviolet B-induced
pigmentation. We next investigated the involvement of phospholipase D and sphingosine kinase in the sphingosine
1-phosphate-induced suppression of melanin content. sphingosine 1-phosphate did not activate phospholipase
D in B16 cells, indicating that phospholipase D activation is not involved in the sphingosine 1-phosphateinduced suppression of melanin content. However, treatment of B16 cells with the sphingosine kinase inhibitor
dimethylsphingosine resulted in an increase in melanin content without affecting  tyrosinase activity. Melanosomes
were highly aggregated in the cells treated with dimethylsphingosine. Furthermore, sphingosine kinase colocalized with the aggregated melanosomes. These results suggest that sphingosine 1-phosphate, that is derived
from sphingosine in the melanosome membrane through the catalytic activation of sphingosine kinase, regulatesmelanin content through melanosome distribution.

１．緒は大部分スフィンゴシンキナーゼ（SPHK）によるスフィ

言

ンゴシン代謝により制御されている。SPHK には SPHK1、哺乳動物のメラニンは、色素細胞に存在する特殊な細胞

SPHK2 の 2 つの分子種が存在する。一方、我々は細胞膜内小器官であるメラノソーム内で合成される。メラノソー

情報変換酵素であるホスホリパーゼ D（PLD）活性化がムにおいて、メラニン合成はチロシナーゼによるチロシン

同じく B16 細胞においてチロシナーゼのユビキチン−プの酸化反応を始めとする多段階のステップを経て遂行されロテアソーム系分解を促進した結果、メラニン生成抑制をる。メラニンはこのステップの中で生じた色素を有する

起こすことを見い出し報告している２）。ある種の細胞では様々な生体高分子の混合物である。メラニンで満たされた

S1P により細胞内 PLD が活性化されることが報告されてメラノソームは色素細胞の樹状突起内を突起端まで運ばれ、いる３, ４）。

色素細胞の周囲に存在する角化細胞に移送され、紫外線か本研究において我々は、皮膚の色素沈着を起こす紫外線

らの皮膚の防御、種々の毒物・化学物質の吸収、肌色の違および色素細胞内メラニン量を減少させる S1P それぞれいの原因等に重要な役割を果たしている。

の作用への SPHK、PLD 活性化の関与を検討した。

我々は色素細胞内メラニン量調節機構の研究過程で、マ２．実

ウス黒色腫由来 B16 細胞をスフィンゴシン 1- ホスフェート（S1P）処理した際、細胞内メラニン量が減少すること

験

１）細胞

を見い出した。S1P は生体膜スフィンゴ脂質由来の代謝産マウス黒色腫由来 B16 細胞を使用し、継代および実験

物で、細胞内セカンドメッセンジャーとして、あるいは細には 10%FCS を含む Eagle’s minimal essential medium を胞膜表面レセプターを介するリガンドとして働く新規の情用いた。

報伝達脂質として注目されている 。細胞内 S1P レベル

２）SPHK アッセイ

１）

SPHK アッセイは、細胞溶解液とスフィンゴシンを 32 P
Role of sphingosine 1-phosphate inultraviolet-induced melanogenesis

で標識された ATP 存在下で反応させ、生成した S1P を

Chikako Nishigori

る 32P をバイオイメージング分析器（BAS2000, Fuji Photo

Kobe University Graduate Schoolof Medicine, Department of ClinicalMolecular Medicine, Division of
Dermatology

薄層クロマトグラフィーにより分離し、S1P 中に含まれFilm）により測定することにより行った。
３）PLD アッセイ

− 62 −

PLD 活性は、14C で標識されたリゾホスファチジルコリ

紫外線誘発メラニン合成へのスフィンゴシン 1-ホスフェートの抑制効果の検討

ンで標識した細胞をエタノール存在下で S1P で 30 分刺激

されている５）が、S1P による B16 細胞内メラニン量減少は、したあと、ホスファチジル基転移反応によって生成された細胞膜 S1P レセプターを刺激するのに用いられる S1P 濃

ホスファチジルエタノール中の 14C 放射能が脂質中に取り度に比べて高い濃度を要するため、S1P は細胞内に直接入込まれた全放射能に占める割合で表した。

って効果を現わしている可能性を考え、細胞内の S1P レ

４）メラニン定量およびチロシナーゼアッセイ

ベルを制御する SPHK の関与について検討することにしこれまでに我々が用いた方法２）で行った。

た。B16 細胞を SPHK 阻害剤である dimethylsphingosine

５）免疫染色及び観察（DMS）（３µM）で処理したところ、72 時間後にはコン細胞の固定は３％パラホルムアルデヒド／ PBS で 20

トロールに比べて細胞内メラニン量は増加していた（図分行った。0.2％ Triton X-100 処理および BSA によるブ

2A）。しかし、チロシナーゼ活性は DMS 処理細胞とコロッキング後、抗メラノソーム抗体（HMB45）および抗ントロール細胞で差がなかった（図 2B）。DMS 処理した

SPHK1 抗体にて反応させ、２次抗体にて発色後、共焦点

B16 細胞内における SPHK1 の局在をメラノソームの局在顕微鏡にて観察した。

と比較したところ、DMS 処理によりメラノソームは凝集

３．結
３. １

し（図 3）、このときメラノソームと SPHK1 の局在はよく果一致していた（図 4）。

紫外線が SPHK、PLD 活性に及ぼす影響

４．考B16 細胞に紫外線 B を 5、10、30mJ/ ㎠照射したとき

察の PLD、SPHK 活性を測定したが、どの照射量の場合も紫外線 B は PLD、SPHK 活性には影響を与えなかった

SPHK、PLD 活性には影響を与えなかった（データ省略）。

ため、紫外線による皮膚色素沈着機序への PLD、SPHK
活性変化の関与は否定的と考えられた。次に我々は、S1P

３. ２ S1P が細胞内のメラニン量、PLD 活性に及ぼす影響

による B16 細胞内メラニン量減少機序への PLD、SPHK

B16 細胞を 10µM S1P で処理すると 72 時間後には細胞プターを介して PLD 活性化を起こし、その結果我々が以内のメラニン量はコントロールに比べて減少していた（図前報告した機序 、すなわちチロシナーゼのユビキチン−

1A）。しかし、10µM S1P 処理により B16 細胞内の PLD

プロテアソーム系分解促進により細胞内メラニン量が減少は活性化されなかった（図 1B）。

する可能性を考えたが、B16 細胞内のメラニン量を減少さ

活性の関与を調べた。まず、S1P が B16 細胞表面のレセ
１）

せる濃度の S1P による PLD 活性化は起こらず、この S1P
が PLD 活性化を介してメラニン量を減少させる可能性をB16 細胞には S1P レセプターが発現していることは示能性を考え、細胞内の S1P 量を制御する SPHK の 阻害剤

A

A

6
4
2

0.2

0.1

0

0
EtOH

S1P

EtOH

S1P

図 1 AS1P 処理による B16 黒色腫細胞内メラニン量の変化
B16 細胞を 10µM S1P 処理し、72 時間後のメラニン量をコントロール（0.1％エタノール：EtOH）細胞とともに測定した。BS1P 処理による B16 黒色腫細胞内 PLD 活性変化：
14B16 細胞に C で標識されたリゾホスファチジルコリンを取り込ませ、エタノール存在下で 10μM S1P で 30 分刺激し、PLD 活性をコントロール（0.1％エタノール：EtOH）細胞とともに測定した。PLD 活性は、ホスファチジル基転移反応によって生成されたホスファチジルエタノール（PtdEtOH）
14
中の C 放射能が、脂質中に取り込まれた全放射能に占める割合で表した。

B
10

16
Tyrosinase activity（X 10−3ｄｐｍ/µg protein）

0.3

8

否定した。次に、S1P が細胞内に入って効果を発揮する可Melanin content（µg/mg protein）

B
PtdEtoh（％ of total）

Melanin content（µg/mg protein）

３. ３ SPHK 阻害剤が細胞内のメラニン量、メラノ
ソームの局在に及ぼす影響

14
12
10
8
6
4
2
0

8
6
4
2
0

EtOH

DMS

EtOH

DMS

図 2 A DMS 処理による B16 黒色腫細胞内メラニン量の変化
B16 細胞を 3µM DMS 処理し、72 時間後のメラニン量をコントロール（0.1％エタノール：EtOH）細胞とともに測定した。B DMS 処理による B16 黒色腫細胞内チロシナーゼ活性変化：B16 細胞を 3µM DMS 処理し、72 時間後のチロシ
ナーゼ活性をコントロール（0.1％エタノール：EtOH）細胞とともに測定した。

− 63 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

anti-melanosome

DIC

anti-melanosome

anti-SPHK1DICDMS（-）
図 4 ADMS 処理した B16 黒色腫細胞内のメラノソームとSPHK1 の局在
B16 細胞を 3µM DMS 処理し、72 時間後、抗メラノソーム抗体（anti-melanosome）および抗 SPHK1 抗体（anti-SPHK1）で免疫染色を行い共焦点顕微鏡にて観察した。

DMS（+）

図 3 DMS 処理による B16 黒色腫細胞内のメラノソーム局在の変化
B16 細胞を 3µM DMS 処理し（DMS（+））、72 時間後、
DMS 処理を行わなかった細胞（DMS（-））とともに抗メラノソーム抗体（anti-melanosome）を用いて免疫染色を行い共焦点顕微鏡にて観察した。

である DMS で細胞を処理したところ、B16 細胞のメラニ（文献）

ン量は増加した。よって SPHK 活性化によって生じる細１）Taha TA, Hannun YA, and Obeid LM, : Sphingosine

胞内 S1P はメラニン量制御因子として働く可能性が示唆

kinase: Biochemical and cellular regulation and role in

された。DMS によるメラニン量増加はチロシナーゼ活性

disease. J. Biochem. Mol. Biol. 39, 113-131, 2006.

増加を伴わないことから、S1P はメラニン生成を促進する

２）Kageyama A, Oka M, Okada T, et al, : Down-という機序以外の機構により細胞内のメラニン量を制御す

regulation of melanogenesis by phospholipase D2ると推定した。そこで DMS 処理した細胞を顕微鏡で観察

through ubiquitin proteasome-mediated degradation of

したととろ、メラノソームの著明な凝集が起っていた。こtyrosinase. J. Biol. Chem. 279, 27774-27780, 2004.

の結果より、SPHK により産生された S1P はメラノソー

３）Cummings RJ, Parinandi NL, Zaiman A, et al, :ムの凝集・拡散を制御していると考えられ、DMS による

Phospholiase D activation by sphingosine 1-phosphate

メラニン量増加はメラノソームの凝集過多の結果、拡散しregulates interleukin-8 secretion in human bronchialて細胞外に分泌されるメラノソームが減少した結果である

epithelial cells. J. Biol. Chem. 277, 30227-30235, 2002.

と推定した。さらに、メラノソームと SPHK1 は局在がよ４）Banno Y, Takuwa Y, Akao Y, et al, : Involvement of

く一致したことから、SPHK1 はメラノソーム膜のスフィ

phospholipase D in sphingosine 1-phosphate-induced

ンゴシンからの S1P 産生を制御することによりメラノソ

activation of phosphatidylinositol 3-kinase and Akt inームの凝集・拡散を調節していると推定した。細胞内で生Chinese hamster ovary cells overexpressing EDG3. J.
Biol. Chem. 276, 35622-35628, 2001.

じた S1P がどのような機序でメラノソームの凝集・拡散を制御しているかは現時点では不明であるが、その機序の５）Arikawa K, Takuwa N, Yamaguchi H, et al, : Ligand-

解明は色素細胞のメラニン量制御機構およびメラニン分泌

dependent inhibition of B16 melanoma cell migration

機構の理解に大きく役立つと期待される。

and invasion via endogenous S1P2 G protein-coupled
receptor. J. Biol. Chem. 278, 32841-32851, 2003.

謝辞

本研究は、神戸大学大学院医学系研究科分子生物学講座
生化学

中村俊一教授との共同研究である。

− 64 −

黄色ブドウ球菌における病原性遺伝子の多様化メカニズム：
同一種内多数ゲノム比較によるゲノム進化解析
東京大学新領域創成科学研究科および東京大学医科学研究所

小 林

一 三

Staphylococci are normal inhabitants on skin and mucous membrane of humans and can become pathogenic.
Especially, Staphylococcus aureus can cause severe inflammation in various tissues including skin whichsometimes results in serious disorder. In addition, this bacterium has developed resistance to practically all typesof antibiotics. Due to its clinical importance, whole genome sequences of multiple S. aureus strains have been
decoded. To date, complete genome was sequenced for more than ten strains and has become publicly available. In
their genome, several tandem clusters of paralogous genes, likely pathogenicity-related, have been found in genomic
islands. Intergenomic comparison with respect to these clusters revealed polymorphisms in them. In the case of lpl
gene cluster, encoding lipoprotein homologues, the variation was very extensive. Our multiple sequence alignment
revealed presence of a region highly conserved not only at the amino acid sequence level but also at the nucleotide
sequence level and regions to its 5’ and 3’ sides, which are more variable. The highly conser ved nucleotide
sequences are likely to have provided a site for homologous recombination generating the variation of this region.
Comparison of phylogenies of the 5’-variable region and the 3’-variable region revealed significant incongruence
within the same ORF. By contrast, pairs of 3’-variable region of an ORF and 5’-variable region of its downstream ORF
gave more congruent phyogenies with groups of conserved pairs, which suggested their linkage. An intergenic
region sandwiched by such a pair of variable regions seemed to have co-evolved with it. These lines of observations
supports our hypothesis that homologous recombination at the central conserved region have played a major rolein generating variations in this cluster. This model explains not only formation of various types of rearrangements
through multiple crossing-over events but also generation of a novel ORF with different sets of two variable regions.
The crossing-over events caused extensive shuffling of the two variable regions in one ORF, but maintained aconserved unit comprising 3’-variable region, intergenic region, and 5’-variable region spanning adjacent ORFs.
This characteristic mode of tandem paralogue diversification, maintaining 3’-part of a gene, intergenic region, and 5’part of its downstream gene as a unit of evolution, is unique among previously studied paralogue rearrangements, inwhich an ORF tended to have been considered as the unit of evolution.

１．緒の毒素遺伝子群、宿主細胞への接着や抗原抗体反応に関わ文

る因子の遺伝子群、加水分解酵素の遺伝子群など、多様なブドウ球菌属細菌 Staphylococcus はヒトの皮膚や粘膜

病原性因子が見出されてきた

１-７）。また、既に病原性に関に常在する細菌として重要である。この中で特に病原性わることが知られていた遺伝子に加えて、これらのホモロが問題となるのは黄色ブドウ球菌 Staphylococcus aureus

グである病原性関連の候補遺伝子も見つかってきている。

で、ニキビや吹き出物等の傷口から皮膚に侵入し化膿性疾

こうした病原性遺伝子の多くは、「動く遺伝子単位」であ患を引き起こす。とびひ等の深刻な皮膚疾患の原因菌でもるファージやゲノミック・アイランド上に存在し、これらにあるほか、時に血管やリンパ管を介して感染が拡大すると乗って染色体に組み込まれていることが明らかになった 。

８）

更に重篤な疾患をも引き起こす。黄色ブドウ球菌はまた、

著者らはこれまでに、黄色ブドウ球菌のゲノム解読に参MRSA、VRSA 等、抗生物質が効かない系統の病院内感染・加し、抗生物質耐性やその他の病原性因子を乗せたゲノミ

市中感染が社会的な問題ともなっている。

ック・アイランド上に、「動く遺伝子」の侵入・維持を制

１）

こうした臨床上の重要性から、黄色ブドウ球菌は本稿

御する制限酵素の遺伝子が存在することに注目してきた 。

執筆時で 10 を超える菌株の全ゲノム配列が解読され、公また、やはりゲノミック・アイランド上でよく似た病原性

開 さ れ て い る（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genomes/）。

関連遺伝子が縦につながってクラスターを形成している、

これらのゲノムには、抗生物質耐性に関わる遺伝子群、種々

タンデム・パラログ・クラスターを複数株で比較し、その９）

再編の分子機構を推定した 。
A mechanism to generate variation inpathogenicity-related tandem paraloguesof Staphylococcus aureus
Ichizo Kobayashi
Graduate School of Frontier Sciences,
University of Tokyo & Institute ofMedical Science, University of Tokyo

本研究では、黄色ブドウ球菌のゲノムが造り替えられ、
多様な病原性が獲得されていく機構を解明すべく、以下の2 つの解析を行った。
（1）ゲノミック・アイランド上の制
限酵素遺伝子の活性の有無を実験的に検討する。
（2）著者らの先行研究９）で著しい再編が示唆された、ゲノミック・アイランド ν Sa α 上の病原性関連遺伝子 lpl のタンデム・− 65 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

パラログ・クラスターについて、多数のゲノムで比較を行

identity を保っている central conserved region は相同組

い、ゲノム再編の機構を明らかにすること。
（1）について換えを引き起こしてきたと考えられた。

は、ファージアッセイによって制限酵素活性を検討した（H.
Yuzawa & I. Kobayashi, unpublished）。本稿では（2）に３・２

ついて、以下に詳細な結果を報告する。

２．解
２・１

可変領域の系統樹比較

仮 に ORF 中 央 の central conserved region を 介 し た
相同組換えが繰り返されてきたとすると、ある ORF の析

5’-variable region と 3’-variable region は 交 叉 crossing-

配列抽出

over によってその組み合わせを変えてきたと考えられる。

NCBI ゲノム配列データベース（http://www. ncbi.nlm.

一方、ある ORF の 3’-variable region とその下流の ORF

nih.gov/Genomes/）に 2007 年８月末の時点で登録されての 5’-variable region とでは、この過程において組み合わいた黄色ブドウ球菌９株のゲノム配列において、ゲノミッ

せが保存されてきたことが予想される。

ク・アイランド ν Sa α 上に存在するリポプロテイン様遺伝

そこで、二つの可変領域の塩基配列系統樹の比較を試

子 lpl のホモログを、BLASTP および TBLASTX（http://

みた（Fig. 2）。１つの ORF を構成する 5’-variable region

www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/）を用いた相同性検索によっと 3’-variable region のペアーで線を結んだ場合（Fig. 2て同定した。

（A））、系統樹間をつなぐ線は頻繁に交差し、予想通りこの組み合わせは進化の過程でシャッフルを起こしてきたこ

２・２

配列解析に使用したプログラムとが示唆された。一方で、ある ORF の 3’-variable region

マルチプルアラインメントの作成には ClustalW（http://とその下流の ORF の 5’-variable region というペアで線

www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw/）を用いた。Similarity plot

を結んだ場合（Fig. 2（B））、系統樹間をつなぐ線はほと

は PLOTCON（http://emboss.sourceforge.net/）により作成した。系統樹は近隣接合法を用いて MEGA4.0（http://www.
megasoftware.net/）により作成した。

３．結果

３・１ lpl 遺伝子の構造

９株（N315，Mu50, MW2, COL, MRSA252, MSSA476,

NCTC8325, USA300, RF122）のゲノム配列から同定した
lpl 遺伝子全ホモログに対して、塩基配列およびアミノ酸配列を用いてマルチプルアラインメントを作成した。塩基配列レベルおよびアミノ酸配列レベルの similarity をプロットした結果を Fig. 1 に示す。なお、N315 株と Mu50
株、MW2 株 と MSSA476 株 で は、 該 当 す る 遺 伝 子 お よび遺伝子間領域が完全に一致していており、本解析ではN315 株、MW2 株の配列のみを用いた。ORF の内部において、132 bp（44 a. a.）で gap を含まず、アミノ酸配列レベルでも塩基配列レベルでもよく保存された配列が見出され、この領域を central conserved region と定義した。
そして、この領域の 5’- 側および 3’- 側の可変領域をそれ
ぞ れ、5’-variable region、3’-variable region と 定 義 し た。
２つの可変領域は塩基長や配列組成に多様性が見られた。
リポプロテイン共通の，脂質修飾を受けるシステイン残基と、その N 末側のシグナルペプチドモチーフは、
5’-variable
region に含まれていた（Fig. 1）。
一般に、相同組換えは組換えを行う配列間に充分な長さと高い identity を要求する

10, 11）。この過程について詳細な解析が行われている近縁の枯草菌では、最小の長さ
は 70bp と報告されている

12）。塩基配列レベルでも高い

Fig. 1 lpl 遺伝子の、構造（上）、塩基配列に基づく similarity
plot（中）およびアミノ酸配列に基づく similarity plot（下）。
ORF 中央の保存領域を灰色で示す。（Tsuru & Kobayashi,
unpublished）− 66 −

黄色ブドウ球菌における病原性遺伝子の多様化メカニズム：同一種内多数ゲノム比較によるゲノム進化解析

Fig. 2 5’-variable region と 3’-variable region の系統樹比較。塩基配列を用いて近隣接合法により作成したそれぞれの系統樹を、一つの ORF の 5’側と 3’側という組み合わせ（A）、およびある ORF の 3’側とその下流の ORF の 5’側という組み合わせ（B）で比較したものを示す。（B）では、配列が保存されたペアー同士の分類が、それぞれ異なる破線のパターンで示されている。このペアーの分類に対応する、各系統樹での単系統群・側系統群の分類が、長方形で囲ってある。（Tsuru & Kobayashi, unpublished）

んどの場合、互いに平行な線でつながれるグループに分

３・４

ゲノム間比較とゲノム再編素過程の再構築類できることが見出された。加えて、この平行な線のグ

二つの可変領域にたいする分類を各ゲノムの Map 上にループは、それぞれの可変領域の系統樹における internal

表示したものを Fig. 3（A）に示す。ゲノム間を比較する

branch の短い単系統群ないしは側系統をつなぐように形と、遺伝子の順序は保存しておらず、またどの分類の配成されていた。これは、お互いに配列が保存されたペアの列セットを持つかがゲノムごとに異なっており、この領存在を示しており、やはり予想と一致する結果であった。

域が激しく再編成を起こしてきたことが示唆された。その中で、ORF を単位としてみると、１つの ORF の中で３・３

遺伝子間領域の比較

は 5’-variable region と 3’-variable region と の 組 み 合 わ

Fig. 2（B）において保存されていることが示された、「あせがシャッフルされており、多様なホモログが存在している ORF の 3’-variable region とその下流の ORF の 5’-variable

る。他方、「ある ORF の 3’-variable region とその下流のregion」という組み合わせのペアについて，それらの間にORF の 5’-variable region」という組み合わせの保存され挟まれた遺伝子間領域の配列を比較すると、遺伝子間領域たペアは、このような再編性を経た中でも維持されてきたでも配列が保存されていることが明らかとなった。従って，

様子が見て取れる。

このタンデム・パラログ・クラスターでは，隣り合う２つ

Pairwise のゲノム間比較において、次のような再編成のの ORF をまたいで、「3’-variable region、遺伝子間領域、素過程を見出すことが出来た。（1）挿入 / 欠失が USA300

5’-variable region」を一つの単位とする、保存された配列

株（k-D-f-C-g-H-j-A-a-B1-）と COL 株（k-B1-）の間に見らのグループが存在することが示された。

れた。（2）転位が N315/Mu50 株（-D-f-G-k-）と MSSA252− 67 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

Fig. 3 （A）各株における lpl タンデム・パラログ・クラスターの map。アルファベットで示した 5’-variable
region（ 小 文 字 ） お よ び 3’-variable region（ 大 文 字 ） に 対 す る 分 類 は、Fig. 2（B） で の 分 類 に 基 づ く。
USA300 株・COL 株間および COL 株・NCTC8325 株間の挿入 / 欠失について想定される欠失イベントについて、欠失領域を破線で、その境界領域を１から５の太線で示す。（B）USA300 株・COL 株間で想定される欠失イベントでの、境界領域のアラインメント。境界領域３は、境界領域 1 と境界領域２の間の組換えによって生じたことが示唆される。Central conserved region をアラインメントの上に表示した。（C）COL 株・
NCTC8325 株間で想定される欠失イベントでの、境界領域のアラインメント。（B）と同様。こちらでは、境界領域５が境界領域３と境界領域４の組換えによって生じたことが示唆される。
（Tsuru & Kobayashi, unpublished）

株（-G-k-D-f-）間で見られた。
（3）置換は RF122 株（-b-K-

このタンデムパラログクラスターで見られる多様性は、こd-B2-h-J-c-M-） と MW2/MSSA476 株（-b-B1-e-E-i-M-） のれらの再編素過程の繰り返しによって生成されてきたと考間で見られた。また、（4）USA300 株に存在する離れた二えられる。

つの A-a は遺伝子変換 gene conversion を示唆している。

− 68 −

USA300 株・COL 株 間 お よ び COL 株・NCTC8325 株

黄色ブドウ球菌における病原性遺伝子の多様化メカニズム：同一種内多数ゲノム比較によるゲノム進化解析

間の挿入 / 欠失について想定される、欠失イベントの境

まれるような構造が形成されたと考えられる。Central

界のアラインメントを Fig. 3（B）,（C）に示す。ここでconserved region は相同組換えの足場となり、更なる再編

は、３本の配列のうち中央の配列が上流で 1 番目の配列とを生じてきたのだろう。すなわち、交叉を通じ ORF 内で完全一致（３本目とは部分一致）していたものが、下流で２つの可変領域の組み合わせを交換し、ORF という遺伝は３番目の配列と完全一致（１本目とは部分一致）するよ

子発現の単位での多様性の創出に寄与してきた。この過程

うになる、という変遷がみられる。組換え点と推定されるで、隣接する ORF をまたいで、「上流 ORF の 3’-variable

この領域は、central conserved region によく一致していregion、遺伝子間領域、下流 ORF の 5’-variable region」

た。この結果は、これらのイベントの分子機構が centralという単位は保存されてきたと考えられる（Fig. 4（A））
。
交叉の繰り返しはまた、Fig. 4（B）で示したように、

conserved region での相同組換えであった可能性を支持している。次節のモデルで示すように、その他の再編素過程

Fig. 3（A）で観察されたような様々な再編の素過程を生も、同様に central conserved region での相同組換えといじうる。現在のゲノムのこの領域に見られる著しい多型のう分子機構によって生じてきたとして説明できる。

生成はこれらの再編素過程の積み重ねによって生じたと考えられる。

３・５ Central conserved region での相同組み換えによる再編・多様化モデル

４．考察

Fig. 4 に、今回の解析に基づくタンデムパラログ遺伝子

今回のモデルにおいては ORF 内部の配列を介した相同の再編・多様化モデルを示す。配列レベルの多様性が生組み換えによって、２つの可変領域の交換による ORF レ

じる過程において、ORF 内部の central conserved region

ベルの多様性の創出と、ゲノム間のパラログ・クラスターが特異的に保存され、この部分が二つの可変領域に挟比較で見られる遺伝子順序やホモログ・セットの多様性のFig. 4 ORF 内部の保存配列を介した相同組換えによる多様化モデル。（A）相同組換えに伴う交叉によって、一つの ORF の 5’-variable region と 3’-variable region の組み合わせが交換されるが、ある ORF の 3’-variable
region と隣接する下流の ORF の 5’-variable region の組み合わせは保存される。（B）このような交叉の繰り返しによって様々な再編が生じうる。姉妹染色体間の不等交叉 [b] により、欠失（[a] から [c]）と重複（[a]から [d]）が生じる。さらに不等交叉 [e] が繰り返されると、遺伝子変換（[a] から [f]）が生じうる。染色体内の不等交叉 [g] は、環状 DNA[h] の切り出しと欠失（[a] から [i]）を生じる。環状 DNA が再挿入される [j] と、転位（[a] から [k]）が生じる。二通りの欠失（[a] から [c]、[a] から [i]）によって、置換 ([c] と [i]) が生じうる。

− 69 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

創出の両方を説明することができた。この多様性の基とな

４）Holden MT, Feil EJ, Lindsay JA, et al., :Complete

る、（異なるグループの間で見られる）配列レベルの多様genomes of two clinical Staphylococcus aureus strains:

性は、今回のモデルとは異なる進化的次元で形成されてきevidence for the rapid evolution of virulence and drug

たと考えられる。lpl 遺伝子ホモログを載せたゲノミック・

resistance, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 101, 9786-9791,
2004.

アイランド ν Sa α は、ブドウ球菌属細菌の中で黄色ブドウ球菌に種特異的に見られる。従って多様な配列を有するホ５）Gill SR, Fouts DE, Archer GL, et al., :Insights on

モログ・セットは ν Sa α が黄色ブドウ球菌の祖先型に挿入

evolution of virulence and resistance from the complete

される前に既に存在し、その後、本モデルの機構によってgenome analysis of an early methicillin-resistant

種内での多様性を更に蓄積してきたのかもしれない。

Staphylococcus aureus strain and a biofilm-producing
methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis strain,

多くの細菌では、様々な環境に応答して DNA レベルのJ. Bacteriol., 187, 2426-2438, 2005.

再編成を引き起こし、表現型を変化させて生存を計る、相13）６）Diep BA, Gill SR, Chang RF, et al., :Complete genome

宿主の免疫系の抗原となる分子の多様性を生み出す場合

sequence of USA300, an epidemic clone of community-は特に抗原変異 antigenic variation と呼ばれる

acquired meticillin-resistant Staphylococcus aureus,

変異 phase variation と呼ばれる過程が知られている

。

13）

。時に

Lancet, 367, 731-739, 2006.

それらは細菌の病原性にも関与する。これらの過程にパ
14）。Lpl 遺伝子産７）Herron-Olson L, Fitzgerald JR, Musser JM, et

物がどのような生理学的な意義を担っているのか、相変異

al., :Molecular Correlates of Host Specialization inや抗原変異に関わる因子なのかについては不明である。しStaphylococcus aureus, PLoS ONE, 2, e1120, 2007.

ラログ群が関わる例が多く知られている

かし、もし他の細菌で見られるような抗原変異に関わるリ

８）Lindsay JA, Holden MT, :Staphylococcus aureus:

ポプロテインなのであれば、なぜこのような多様な配列をsuperbug, super genome?, Trends Microbiol., 12, 378-

持つ遺伝子がいくつも維持されているのか、なぜ central

385, 2004.

conserved region が塩基配列レベルで非常に高い identity

９）Tsuru T, Kawai M, Mizutani-Ui Y, et al., :Evolution

で保存されているのかを説明することができよう。今後のof paralogous genes: reconstruction of genome

実験的研究の進展が待たれる。

rearrangements through comparison of multiple「隣接する ORF をまたいだ配列を再編成の単位としてgenomes within Staphylococcus aureus, Mol. Biol. Evol.,23, 1269-1285, 2006.

遺伝子レベルの多様化を創出する」という本研究のモデル
は、ORF という単位に基づいていたこれまでのパラログ

10）Fujitani Y, Yamamoto K, Kobayashi I, :Dependence

研究・多重遺伝子族研究にない、新たな視点の導入である。

of frequency of homologous recombination on thehomology length, Genetics, 140, 797-809, 1995.

謝辞11）Fujitani Y, Kobayashi I, :Effect of DNA sequence

本研究に対して終始ご支援いただいたコスメトロジー財

divergence on homologous recombination as analyzed

団に感謝いたします。本報告書の中の進化解析は、東京大by a random-walk model, Genetics, 153, 1973-1988, 1999.

学大学院博士課程学生の鶴剛史君が中心になって進めまし12）Khasanov FK, Zvingila DJ, Zainullin AA, et al.,:Homologous recombination between plasmid andた。

chromosomal DNA in Bacillus subtilis requires（参考文献）

approximately 70 bp of homology, Mol. Gen. Genet.,
234, 494-497, 1992.

１）Kuroda M, Ohta T, Uchiyama I, et al., :Whole genome
sequencing of meticillin-resistant Staphylococcus13）Villemur R, Deziel E, :Phase variation and antigenic
variation, Mullany P (ed) :The Dynamic Bacteriralaureus, Lancet, 357, 1225-1240, 2001.

Genome, Cambridge University Press, New York, 2005,

２）Baba T, Takeuchi F, Kuroda M, et al., :Genome and277-322.

virulence determinants of high virulence community-14）Hughes D, Norstrom T, :Biological consequences

acquired MRSA, Lancet, 359, 1819-1827, 2002.
３）Ohta T, Hirakawa H, Morikawa K, et al., :Nucleotide

for bacteria of homologous recombination, Mullany

substitutions in Staphylococcus aureus strains, Mu50,

P (ed) :The Dynamic Bacterial Genome, Cambridge

Mu3, and N315, DNA Res., 11, 51-56, 2004.

University Press, New York, 2005, 351-384.

− 70 −

メラノサイト由来リポカリン型プロスタグランジン D 合成酵素が関与する皮膚組織の恒常性維持機構
東北大学大学院医学系研究科細胞生物学講座分子生物学分野

柴 原

茂 樹

Microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) is responsible for differentiation of melanocytes. The
Mitf gene contains many promoters that generate multiple Mitf isoforms with distinct amino-termini, such asa melanocyte-specific Mitf-M. We have been interested in a Mitf mutant mouse, black-eyed white (bw), which
is characterized by the white coat color and inner ear deafness due to the lack of melanocytes and by normallypigmented eyes. By cDNA microarray analysis between wild type and bw mouse skin, we have identified lipocalintype prostaglandin D synthase (L-PGDS) as a new melanocyte marker. L-PGDS is a unique bifunctional protein; itfunctions as an enzyme that catalyzes the conversion of prostaglandin H2 (PGH2) to prostaglandin D2 (PGD2) and as
an extra-cellular carrier protein that specifically binds small lipophilic molecules, such as retinoic acid and bilirubin.
Mitf appears to be involved in transcription of the L-PGDS gene in melanocytes. Importantly, L-PGDS is expressedin normal human epidermal melanocytes, but not in human melanoma cell lines, as judged by northern blot and RTPCR analyses. We also showed the inhibitory effect of PGD2 on the growth of human melanocytes and melanoma
cell lines, HMV-II, SK-MEL-28, 624mel, and G361. These results suggest that L-PGDS may modulate the growthpotential of melanocytes through PGD2, thereby maintaining the skin homeostasis.

5）

１．緒

ヒトメラノーマにおいて消失することを発見した 。この事実は、

言

L-PGDS がメラノサイトの増殖を負に制御すること、さらに、小眼球症関連転写因子（MITF）は塩基性ヘリックス・

癌抑制遺伝子として機能する可能性を示唆する。

ループ・ヘリックス - ロイシンジッパー（bHLH-LZ）構造

従来、皮膚組織における PGD2 の産生は、皮膚に局在を持つ転写因子であり、神経堤由来のメラノサイトと脳由する免疫系細胞（マスト細胞やランゲルハンス細胞）由来

来の網膜色素上皮細胞（RPE）の分化制御因子であるとされてきた 。事実、それらの免疫系細胞は、L-PGDS

1，2）

。

7）

小眼球症関連転写因子 MITF の変異マウス（black-eyedと異なる遺伝子産物である血球型プロスタグランジン D

white, bw）は、メラノサイトを欠損するため白毛と難聴合成酵素（H-PGDS）により PGD2 を産生し、皮膚におけを呈するが、正常な網膜を有する（白毛黒眼） 。興味深る炎症反応に関わる（図１）。したがって皮膚の炎症に関いことに、bw マウスは低酸素あるいは高炭酸ガス吸入刺

わる PGD2 研究は、主にマスト細胞やランゲルハンス細激に対して過剰な換気応答を呈するため、中枢性の化学受胞においてなされてきた。事実、マスト細胞では MITF

容機構も障害されていると考えられる 。我々は bw マウが H-PGDS 遺伝子の転写を促進することが報告された 。

３）

4）

8）

ス皮膚で欠損する分子を探索した結果、リポカリン型プロ

そこで、L-PGDS がメラノサイト、及び皮膚組織の恒常

スタグランジン D 合成酵素（L-PGDS）がメラノサイトマ

性維持に関わると考え、L-PGDS 及び PGD2 の未知の生理ーカーであることを発見した 。すなわち、L-PGDS はメ

機能とその発現調節機構の一端を明らかにした。

5）

ラノサイトで特異的に発現されている。L-PGDS によって２．実合成されるプロスタグランジン D2（PGD2）は睡眠、痛覚、
６）

そして免疫の調節に関わる 。また L-PGDS は酵素であると同時に分泌タンパクでもあり、皮膚の再生に重要なレ験

２・１ 正常ヒト表皮メラノサイトおよびメラノーマ細胞における PGD2 の生理作用の解析

チノイン酸などのレチノイド、抗酸化作用の強いビリルビンの

HMV-II、624mel、G361、SK-MEL-28 の ４ 系 統 の ヒ ト

結合タンパクとしても機能する（図１）。このように L-PGDS

メラノーマ細胞を用いた。PGD2、及びその代謝産物であは多様な機能を担う分 子であるが、メラノサイトにおけるる PGJ2 が細胞増殖に及ぼす効果を検討した（各 10 μM、

L-PGDS の役割は不明である。さらに、L-PGDS の発現が72 時間培養）。なお、PGJ2 は核内受容体 PPAR-gammaの ligand で も あ る。 さ ら に、PGD2 受 容 体 で あ る DP1

Mela no cy te - der ived l ip o ca l i n -t y pe
prostaglandin D synthase as a regulator
for skin homeostasis
Shigeki Shibahara
Department of Molecular Biology andApplied Physiology, Tohoku University
School of Medicineと DP2 のアゴ二スト、PPAR-gamma のアンタゴニスト（GW9662）の効果を調べた。

２・２ ヒトメラノーマ細胞における L-PGDS の生
理機能の解析
L-PGDS cDNA を恒常的に発現するメラノーマ細胞株を− 71 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

さらに、PGJ2 はヒトメラノサイトおよびメラノーマ細胞の増殖を有意に抑制した。その抑制効果は PPAR-gammaのアンタゴニスト添加により解除された。よって、PGJ2によるヒトメラノサイトおよびメラノーマ細胞の増殖抑制
作用は PPAR-gamma を介すると考えられた。
（以上、論文投稿準備中）３・２ 正常ヒトメラノサイトとヒトメラノーマ細胞における L-PGDS の生理機能
L-PGDS cDNA を恒常的に発現するメラノーマ細胞株を樹立した。今後、細胞増殖などに対する影響を検討する。
図１ MITF は皮膚における PGD2 産生を制御する
メラノサイトでは、MITF-M が L-PGDS 遺伝子の転写を制御する。一方、マスト細胞では、MITF-E などが H-PGDS 遺伝子の転写を調節する。細胞外へ分泌された L-PGDS は、レチノイ
ン酸、ビリルビンなどの脂溶性分子と結合する。PGD2 の一部
は非酵素的に PGJ2 に代謝される。
図は文献 7 から一部改変して使用。

３・３

L-PGDS 遺伝子の発現制御機構の解析

ヒトメラノーマ細胞を低酸素下（１% O2）で培養したが、
L-PGDS mRNA の発現レベルに有意な変化を見られなかった。一方、低酸素曝露マウスの心臓では、心筋における
L-PGDS mRNA の発現誘導を観察した。なお、心筋における Mitf の発現が報告されており、今後、心筋における
L-PGDS 遺伝子の転写調節機構を明らかにする。

樹立した。

３・４
２・３

RPE における PGD2 の役割

L-PGDS 遺伝子の発現制御機構の解析

RPE は脱落・生成を繰り返す杆体細胞外節片を絶えず

ヒトメラノーマ細胞を低酸素下（１％ O2）で培養し、貪食・処理するのみならず、ロドプシンの構成成分であL-PGDS 遺伝子の発現への影響を検討した。一方、低酸

る 11- シス - レチナールを再生し視細胞に供給する。この素（10％ O2）曝露マウスを用い、心筋における L-PGDS

ように、RPE は視細胞の機能維持に必須である。また、

mRNA の発現変化を解析した。

RPE は体内の最も過酷な環境で機能する細胞でもある。
PGD2 との培養により、濃度依存的、時間依存的にヘムオ

２・４

９）

ヒト RPE における PGD2 の役割

キシゲナーセ１の発現を誘導した 。PGD2 がヘム分解にヒト RPE 細胞を PGD2 と培養し、ヘムオキシゲナーセ

関与することが初めて明らかになった。

１の発現への影響を調べた。ヘムオキシゲナーセ１はヘム

４．考

分解系の律速酵素であり、ヘムを酸化的に開裂し、ビリべ
ルジン、鉄、一酸化炭素を生成する。ビリべルジンは直ち察

皮膚における L-PGDS 及び PGD2 に着目する本研究は、にビリルビンに還元される。ヘムオキシゲナーセ１は酸化

メラニン産生、メラノサイトの増殖、皮膚の炎症反応など

ストレスに対する防御に重要な酵素として知られる。

皮膚の恒常性維持機構の解明に貢献する。皮膚の恒常性維

３．結持の破綻を如何に防ぐかはコスメトロジーにとっても重要果な課題であり、本研究成果は色素沈着（シミ）を予防でき

３・１ 正常ヒト表皮メラノサイトおよびメラノーマ細胞における PGD2 の生理作用

るような化粧品・薬剤の開発に寄与する。事実、L-PGDS

PGD2（10μM）と 72 時間培養はヒトメラノサイトおよ質である可能性が高い。よって、今後、増加傾向にあるメびメラノーマ細胞（４系統すべて）の増殖を有意に抑制しラノーマに対する新規治療法の開発への貢献も期待される。

の産物である PGD2 はメラノサイトの増殖を制御する物た。特に、メラノサイトに対する抑制効果は DP2 受容体

一方、Mitf 変異マウスである bw マウスが低酸素あるいを介する作用であることが示唆された。一方、メラノーマ

は高炭酸ガス吸入刺激に対して過剰な換気応答を呈するこ細胞の増殖抑制作用は、各アゴ二スト処理では検出できなとは興味深い 。すなわち、メラノサイト、あるいは Mitf

かった。事実、RT-PCR 解析では、メラノーマ細胞（４系の未知の標的遺伝子が中枢性の化学受容機構に関与してい統すべて）における DP1 と DP2 受容体 mRNA の発現をる可能性が考えられる 。よって、本研究はコスメトロジ

検出できなかった。よって、PGD2 によるメラノーマ細胞

ーが支援する「精神、文化に関する分野」とも密接に関連の増殖抑制作用は未知の作用機序によることが示唆された。

する。睡眠の調節に関与する L-PGDS が、皮膚ではメラノ

4）

4）− 72 −

メラノサイト由来リポカリン型プロスタグランジン D 合成酵素が関与する皮膚組織の恒常性維持機構

サイトに限局して存在する事実は重要である。メラノサイ
ト由来 L-PGDS の未知の生理機能が示唆される。本研究は

Mitf

mi-bw

mice, lacking melanocytes. J. Biochem. (Tokyo)

141, 327-333.

美肌の維持には良好な睡眠が重要という経験則に科学的な

５）Takeda, K., Yokoyama, S., Aburatani, H., et al.

根拠を与えるものである。高齢化が進む我が国においては、(2006) Lipocalin-type prostaglandin D synthase as a

快適に眠り、美しく老いるという願望は、すべての国民のmelanocyte marker regulated by MITF. Biochem.

願いであり、
本研究成果は良好な QOL の達成にも貢献する。

Biophys. Res. Commun. 339, 1098-1106.
６）Urade, Y., Hayaishi, O. (2000) Biochemical, structural,（文献）genetic, physiological, and pathophysiological features

１）Hodgkinson, C.A., Moore, K.J., Nakayama, A., et al.
(1993) Mutations at the mouse microphthalmia locus
are associated with defects in a gene encoding a novelof lipocalin-type prostaglandin D synthase. Biochim.
Biophys. Acta, 1482, 259-271.
７）Takeda, K., Takahashi, N.-H., Shibahara, S. (2007)

basic-helix-loop-helix-zipper protein. Cell 74, 395-404.

Neuroendocrine functions of melanocytes: Beyond the２）Hughes, M.J., Lingrel, J.B., Krakowsky, J.M., et al.

skin-deep melanin maker. Tohoku J. Exp. Med. 211,(1993) A helix-loop-helix transcription factor-like gene is201-221.

located at the mi locus. J. Biol. Chem. 268, 20687-20690.

８）Morii, E., Oboki, K. (2004) MITF is necessary for

３）Yajima, I., Sato, S., Kimura, T., et al. (1999) An L1

generation of prostaglandin D2 in mouse mast cells. J.

element intronic insertion in the black-eyed whitemi-bw

Biol. Chem., 279, 48923-48929.

) gene: the loss of a single Mitf isoform

９）Kuesap J., Li, B., Satarug, S., et al. (2008) Prostaglandin

responsible for the pigmentary defect and inner ear

D2 induces heme oxygenase-1 in human retinal

deafness. Hum. Mol. Genet. 8, 1431-1441.

pigment epithelial cells. Biochem. Biophys. Res.

(Mitf

４）Takeda, K., Adachi, T., Han, F., et al. (2007)

Commun. 367, 413-419.

Augmented chemosensitivity in black-eyed white− 73 −

化粧やネイルケアが高齢者のライフスタイルや QOL と免疫能の向上に及ぼす影響早稲田大学大学院人間科学研究科健康福祉科学研究領域

堤谷めぐみ、小川奈美子、若林 紋、加瀬裕子、川名はつ子、辻内琢也、町田和彦
To study the effects of nail care on bio-defense function of elderly people in a Japanese nursing home, twentythree women were divided into the intervention group of mean age of 88.5±10.5 years and the control group of ageof 83.5±14.5 years. To the invention group, nail-care were conducted for two months.
All subjects were asked the answer to the questionnaire tests of WHO QOL, Stress and PGC moral scale pre andafter the intervention term. In addition, the capacity of circulating neutropils to ingest bacteria (phagocytosis) and to
produce superoxide (by nitroblue tetrazolium reduction method) were measured also.
The present analyses revealed that the results of all questionnaires and neutrophils function were significantly
higher in the intervention group than in the control group. These results showed that the performance of nail-caregave a big satisfaction to elderly people.

1

緒

益者としての高齢者」から「社会で積極的な役割を果たす

言高齢者」へと高齢者観も変わろうとしている。そして、こ高齢者施設は介護の場であると同時に高齢者の生活のれらの 2 つの課題に応えるには「おしゃれな生き方」が場である。現在の高齢者施設では従来の集団的処遇の高齢

キーワードになるのではないかと考え、美容という視点か者施設を見直し、小規模で家庭的雰囲気の「自宅でない在らシニアのおしゃれな生き方を提案したいと思った。人は宅」を目指して制度および居住環境が大きく変わりつつあ

誰でもおしゃれをすると積極的に外出したくなり、周りのる。そのような現状の中で、よりよい環境を提供するため人に「きれいだね！」「かっこいいね！」と言われることで、には、多くの課題があると言えよう。老人ホームでの生活何より気分が高揚し、自然に表情が明るくなる。当然、外に対して満足しているかどうかという調査においては、「満へ目を向けることにもなり、色々なものを見たり、触れた足している」が 28.7％にとどまり、「おおむね満足している」

りすることで、精神面が充足し心のリハビリテーションへが 39.3％という結果になっているとつながり、よりよい環境で過ごせるようになると思われ

35）。このように高齢者が住み慣れた地域や家を離れ、施設で生活を送ることはそる。

れ自体がストレッサーになり、結果的にそのことが彼らの「本研究では、都内某所の特別養護老人ホーム M の入居

生活の質（Quality of Life；以下 QOL とする）を低下させ者にとって「美容」をテーマにした人とのふれあいや働きている。QOL はいろいろな角度から人間の生命や生活のかけが、免疫機能、心理面、QOL にどのような影響を与質を表そうとしたものであり、それは疾病にかかった人々

えるかについて検討し、明らかにした。さらに、この結果が感じる幸福感・満足感などの主観的要素を重視して構成を踏まえ、高齢者施設入居者に対してよりよい高齢者ケア

されている。近年、この高齢社会への移行に伴い医療の現を提供できるように報告・提案することを本研究の目的と場で QOL が注目されている。特に、介護保険時代になり、した。

介護老人福祉施設及び介護老人保健施設や医療機関におけ2る高齢者ケアの質を引き上げることの大切さが問われるようになった。施設ケアの中心を QOL に置く施設も増加し、

２- １

QOL への関心はさらに高まっている。

調査対象

本調査の対象者は、都内某所の特別養護老人ホーム M

高齢者施設の持つ課題は、高齢者の（1）QOL の向上と
（2）市民としての社会参加（Citizenship）にあるだろう。「受*研究方法に入居している、著しく介護度が高くなく、本人または家族の同意が得られた 65 歳以上の高齢者の女性 23 名である。
そのうち 12 名を介入群（88.5±10.5 歳、認知度なし４名・Effects of nailcare on bio-defense functionof elderly people in a Japanese nursing home

認知度軽度 4 名・認知度中度４名）、11 名（83.5±14.5 歳、

Megumi Ttsutsumitani, Namiko Ogawa, Aya
Wakabayasi,Yuko kase, Hatsuko Kawana,
Takuya Tsujiuti, Kazuhiko Machida*

対照群とした。

Area of health Science and Social Welfare,
Graduate School of Human Sciences,
Waseda University

認知度なし３名・認知度軽度 4 名・認知度中度 4 名）を

２- ２− 76 −

介入調査内容・方法・期間

介入内容は週三回で８週間の 24 回、対象者にネイルケ

化粧やネイルケアが高齢者のライフスタイルや QOL と免疫能の向上に及ぼす影響

からつまんで、そのまま押して施術する。

ア介入を行い、対面式個別面接調査法で介入前後のアンケート調査を行った。また、2006 年 10 月と 2007 年 10 月の④１本の指を 10 秒ずつ施術する。両手の親指、人さし指、

健康診断の際に採血したものより、NBT 還元試験を行い、中指、小指をひととおり刺激するのを、１日に２から介入前後で比較した。介入期間は、2007 年８月から 2007３度行う。

年 10 月の健康診断日にかけて実施した。採血後の各種血⑤刺激するときは、指の先端で痛いくらいに押して施術

液・血清の処理および測定は早稲田大学側で行った。いずする。軽い刺激では効果がない。あまり強すぎてもいれの試料も匿名化し冷凍庫に保管した。なお本研究は早稲

けないが、少し痛いというくらいにもむのが効果的。

田大学人間科学部倫理委員会にて承認されている。
Ⅲ 使用材料

2-1-3 ネイルケア

ラベンダーオイル（１% 濃度でホホバオイルにラベ

美容を狭義に捉えた上で、先行研究が少ない「音楽」
・
「イ
ンテリア」
・
「ネイルケア」のうちアンケートで一番ニーズ

ンダー精油をブレンドしたもの）、透明マニキュア、除光液、コットンのあったネイルケアを行った。
Ⅳ ラベンダーオイル
Ⅰ 定義

ラベンダーはアロマテラピーのなかで最もよく使われ日本ネイル・マニキュア普及会によると本来なら、①
爪の形を整える②キューティクルリムーバーにより甘皮を押し上げる③オイルまたはハンドクリームを馴染ませながらマッサージ

④バッファー仕上げ⑤よくふている。古代から薬用植物として知られ、沐浴をしたり、ラベンダーの小枝を焚いて流行病を防いでいた。
精神面では神経の緊張、不安をやわらげる効果、安眠作用がある。肉体面では頭痛、特に鋭い痛みに効果があり、き取りマニキュアを塗る、という過程が一般的であるが、殺菌力が強く、鎮痛作用もあるので、風邪に効き、予防

今回、対象者が高齢者ということもあり、安全の為、内にもなる。虫刺され（蚊、蜂、ブヨなど）の毒の中和、火傷、容をオイルによるマッサージとマニキュアとした。また切り傷に精油を直接塗ると殺菌効果によって効果がある。

この際、施術者は被験者と会話を積極的に行った。

美容の面ではニキビ、吹き出物、ブツブツなどのトラブ
ル肌の場合高い殺菌力が効果的であり、細胞の成長を刺Ⅱ マッサージ

激し、肌を若返らせる効果が期待できる

アロママッサージの効果は多くで確かめられているが、

16）33）34）。

今回、オイルマッサージの中でもラベンダーオイル

マッサージの方法は様々である。今回、ネイルを中心とを使ったのはマッサージの効果の先行研究が最も多く、したケアということから班目健夫医師により提唱されて様々な結果がでているためラベンダーを選択した。

5）

いる爪もみを行った 。加齢と共に爪が硬くなる為に爪の手入れがおっくうになり易いが、爪もみでこまめに手Ⅴ マニキュア

入れをする事で指先の運動に繋がり、硬くなった爪周辺

日によって気分が変わる高齢者にあわせて、本人が希の血管をほぐす事になり指先の冷感を改善する事も出来望した日のみ施術、除去を行ったが、少なくとも１人ある。加えて、ストレスの解消やリラックス効果があるのたり週１回行った。（平均 1.2 回／週）

ではないかとも言われている。また、日々の生活で爪が歪んでしまう事があるが、爪と指自身を揉み解す事で少２- ３

アンケート内容と評価方法

しずつ修正することも出来る。この時、オイルやハンド

質問紙項目は、（1）WHO QOL-26、（2）桂らによってクリームを使う事で爪の保湿保成分をはかり、マッサー開発されたストレス度（SCL-S）に関する項目、（3）PGC

ジ効果を高める事ができ、アロマセラピーを織り交ぜた

モ ラ ー ル・ ス ケ ー ル に 関 す る 項 目、
（4） 状 態 不 安 尺 度

ものを使用するとリラックスの相乗効果をもたらす事が（STAI-1）特性不安尺度（STAI-2）に関する項目を対面できると言われている。

式個別面接調査法で行った。

〈マッサージの方法〉①マッサージの施術部位は、手の指の爪の生えぎわの両方の角。

（1）WHO QOL-26
A 身 体 的 領 域 ７ 項 目（Q3、4、8、10、15、16、17、②両手の親指、人さし指、中指、小指の 4 本の指を施18、）、B 心理的領域 6 項目（Q5、6、7、11、19、26）、C術する。この時、薬指は交感神経を刺激してしまうの社 会 的 関 係 ３ 項 目（Q20、21、22）、D 環 境 ８ 項 目（Q9、で使わない。

12、13、14、23、24、25）、E 全般的な生活の質 2 項目（Q1、③刺激するときは親指と人さし指で爪の生えぎわを両側

2）の 24 項目それぞれについて Q1 が（1）まったく悪い− 77 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

（2）悪い（3）ふつう（4）良い（5）非常に良い、Q2 が（1）

かに痛みを和らげるか、いかにコントロールするかもまったく不満（2）不満（3）ふつう（4）満足（5）非常に含まれる。痛みを逃れるのに簡単な手段ができるほど、

満足、Q3 〜 26 が（1）まったくない（2）少しだけ（3）

痛みに対する恐怖は少なく、QOL への影響も変わっ

多少は（4）かなり（5）非常に でそれぞれ答えてもらった。

てくるはずである。また、痛みの強さが変化していく

判定方法は５件法を用い、点数が高いほど QOL が高いとのは痛みそのものよりつらいのかもしれない。痛みをいうことにした。

感じなくなっているのに痛み止めを服用したり、その痛みが現れたり消えたりするものであると、痛みの恐A 身体的領域

怖に絶えずさらされているということで QOL に影響

日常生活動作：日常生活（身だしなみから資産の管理なするであろう。人は痛みに対しての反応はさまざまで

どの毎日行う行為）ができるのかを問う質問。他人にあるし、痛みへの寛容さや受容度は QOL に影響を及頼るのか頼らないのかの程度は QOL に影響を及ぼす

ぼすと思われる。これは、凝り・疼き・痒みなどの身と思われる。

体的な不快感も含まれる。人が痛みを感じると言った

医療品と医療への依存：身体・心理の両面において良好場合、それを説明できる医学的な根拠の有無に関係なく、「痛みがある」とみなす。

な状態を維持するために、どのくらい医療品や医療を使用しているかを問う質問。医薬品は副作用によって睡眠と休養：十分な睡眠・休養が取れている、あるいは生活の質を下げてしまうこともあるものの、一般的に取れないことでの人の QOL がどのように影響されるは QOL を高める効果がある。また、この質問には医か問う質問。睡眠障害は、眠りにつくのが困難であっ薬品以外にも理学療法的手段（人工肛門、ペースメーたり、夜中に目が覚めてしまい眠りに戻れなかったり、カーや義足など）も含まれる。しかし、医薬品の種類

すっきりした目覚めがない等を含む。ここでは個人的そのものの詳細を問うものではない。

または環境的要因はあるかもしれないが、どのような活力と疲労：余暇活動などの選択的な活動と同じく、日理由であっても、とにかく睡眠が妨げられたかどうか

常生活のなかで必要な元気さ、情熱、あるいは忍耐がを聞いている。睡眠によって十分に休息を取り、英気あるかどうかを問う質問。これに支障をきたすほどのを養って、睡眠を妨げられたことからくる不快感がな

疲れから、適度な元気さのレベル、あるいは生きてい

く、毎日の生活を支障なく行えるかが焦点となっているという実感のレベルまで、さまざまなことを考えるる。

ことができる。疲労は抑うつや消耗などの神経の病気

仕事の能力：仕事に対するエネルギーの使い方を問う質や問題をはじめとしてさまざまな原因からもたらされ問。この場合の仕事とは、人が従事している活動のこることがある。

とである。主な活動には、報酬が発生する仕事、無報

移動能力：ある場所から目的地に移動する、家の周囲を酬の仕事、地域のボランティア活動、家事労働、学生・散策する、仕事場や交通機関に到達するなどの能力を生徒の学業などが含まれる。どのような仕事をしてい問う質問で、周囲からの援助や手助けなしに移動でき

るかではなく、仕事を遂行する能力の有無に焦点をあるか否かが生活の質に影響を及ぼすと考えるのは当然てている。

である。これは何らかの移動手段を利用する、しないに関わらず行きたいと思うところに誰の助けも借りず

B 心理的領域に行くというときの一般的な能力を示す。どこに行く

ボディイメージ（容姿・外見）：人が持つ自分自身の身にも他人に頼らなければならないのは、QOL に悪い体についての見解を問う質問。つまり、自分の容姿・影響を及ぼすと予想される。また、人の移動能力にお外見に対してポジティブまたはネガティブに感じていける変化がいきなりあらわれて出たのか、あるいは少るかどうかである。自分の容姿・外見に満足している

しずつあらわれたのかは、QOL にかなりの影響を及かどうか、またそれが自分にどのように影響しているぼすと思われるがここではそれにはこだわらないことかが焦点となっている。これには、欠損認識や事実とにした。機能欠損があるからといって、移動能力が必して身体欠損があったにしてもそれを修正できる場合

ずしも影響されるとは限らない。例えば、車椅子や杖（化粧・洋服・義足など）が含まれている。周囲の人が、を使用して生活している人々にとって適切に改良されその人の容姿にどのように対応するかも、ボディイメ

た家屋や職場であると、十分に満足できる移動性が得ージにかなり影響する。
否定的感情：どのくらいネガティブ（落胆・悲しみ・悲られるはずである。
痛みと不快：人が経験する身体的感覚で、苦痛を伴い、

嘆・絶望・喜びの欠如・不安・罪悪感・神経過敏など）

生活の妨げになる程度の不快感を扱う質問である。いな感情を体験しているかを問う質問。ストレスやネガ− 78 −

化粧やネイルケアが高齢者のライフスタイルや QOL と免疫能の向上に及ぼす影響

ティブな感情が、機能にいかに影響するかを考慮して分かち合い、聞きに際して援助してくれるかなどに焦いる。ここでは、うつ病、気分障害、恐怖症などの心点をあてている。

理的に障害を受けている人も含むよう配慮されている。

性的活動：性に対する願望、衝動、またそれを適切なか

肯定的感覚：人生においてどれだけポジティブ（満足・たちで表現できるか否かに関する質問。ここでは性に幸福・希望・喜び・楽しみなど）な感情を体験するか

関する価値判断は含んでいない。また、性の嗜好性・を問う質問。人々が自分自身の将来をどのように展望

実践は重要ではなく、性への願望、表現、性行為の機し、どのように感じているかというのは QOL にとっ会、満足度などがこの項目の焦点である。性的活動にて非常に重要な項目であり、この項目は QOL と同義

ついて文化圏によってはタブー視する傾向にある地域

語とみなされる。

もあり、こうした質問に対して保守的なところがある

自己評価：自分自身についてどのように感じているかをという認識ももっておくべきである。男女・性別・年齢によって答えが変わるとも考えられる。

問う質問。自分自身について、否定的（ネガティブ）な感情を抱いたり、肯定的（ポジティブ）な感情を抱いたりという風に幅があると思われる。自己の能力やD 環境制御能力、満足感に対する自己評価がここでの焦点と金銭関係：経済状況が健康で快適なライフスタイルを送なる。
質問にはさまざまな側面での自分自身の感情（他るための必要性に叶っているかどうかを問う質問。自人とのつきあい、自分の教育、特殊な作業や行動を達分の収入で手に入れられるものについて、満足か不満成する能力、家族関係、威厳、自己受容性など）が含足か、金銭的状況に依存しているか自立しているか、まれる。人によって自己評価は、職場・家庭での自分

十分か不足かなどの感覚も含まれる。

の役割、他人からの自分の扱われ方の認識に大きく関自由・安全と治安：身体的な危害がある場合に人が感じる安全や治安にたいしての感覚について聞く質問。あわっていたりする。
精神性・宗教・信条：人の信念がいかに QOL に影響す

らゆる場面において安全に対する脅威は生じうるし、るか調べるものである。信念によって人は人生の困難

日常生活している場所や状況もさまざまであるので、から救われたり、経験を構造化したり、自己の問題にそれらを広くカバーできるように作られている。また、

精神的な意味合いを見いだすなど、良好な状況を手に

この項目は自然災害の被害者、ホームレス、危険が予するための感覚を与えられたりするであろう。多くの想される職業、犯罪者と関連のある人、性的虐待を受けた人などにとって特に重要である。

人にとって宗教、信条、精神性は快適、良好、安定などというプラスの方向に働くが、人によってはマイナ

健康と社会的ケア（利用しやすさとサービスの質）：周辺にある保健医療サービスについての見解を問う質問。

スな影響を与えることもある。
思考・学習・記憶・集中：意思決定をする際の思考、学習、

保健医療サービスをどのように見ているのかに焦点をあてている。

記憶、集中に関する見解を問う質問。一般的に、思考の速さ、明晰さ、創造性、意思決定能力などが含まれ居住環境：人が住み生活する場所、その生活への影響をている。認知度が高い人は自分の分析が不十分なため調べる質問。居住環境の質は、快適性を基本にして評に他の代わりの人の評価が必要となることもある。

価され、スペースの広さ、清潔さ、プライバシーの確
保、電気水道などの設備、建物の構造などもその評価

C 社会的関係に含まれる。家の周辺環境の質も QOL にとってとて

人間関係：日常生活の中で、親密な人間関係のうえに形も重要な要素である。

成される感情である友情、愛情、援助をどのようにか

新しい情報と技術の獲得の機会の有無：新しい技術を学んじているのかを問う質問。これは、愛し愛されるとんだり、知識を獲得したり、現在何が進行しているかいう他人と親密になる機会、またはその能力にも焦点を適切に知ることができる機会や願望について問う質があてられる。どういった感情であっても理解しあえ

問。これは教育プログラムや成人教室、余暇活動などるほどにお互い愛情があるということに加えて、身体

個人的なものから公的なものまで、通じてなされるだ的側面としての人間関係は性行為を含めた、接触する

ろう。地域や国のニュース、国際的なニュースを知るという親密さも含まれる。ネガティブな体験、ポジテ

ことができる状態、その他の情報が満たされる機会、

ィブな体験の両方含まれる。

知識の必要性が満たされる機会があるかどうかにも焦

社会的支え：家族や友人から得られる支援、実際あてに点があてられている。

できる援助があるかないかを問う質問。自分に関する

余暇活動の参加と機会：余暇や暇つぶしなどののんびり問題を解決するのに家族や友人がどれほど共に動き、することに参加する機会や能力、傾向を問う質問。個− 79 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

人の余暇活動や暇つぶし、また友人と会う、スポーツ

スケールを作成したのである。PGC モラール・スケールは、をする、読書をする、テレビを見る、団らんするなど、当初 22 項目から成る測定尺度で 6 つの主成分を含むとさのんびり過ごすことへの能力、その機会、楽しみ方とれていたが、その後 Lawton 自身の改訂によって 17 項目

いう 3 つの側面に焦点があてられている。

に削減され、3 つの主成分Ⅰ「心理的動揺」、Ⅱ「老いに生活圏の環境：自分の置かれている環境についての見解

対する態度」、Ⅲ「孤独感」から成るものとされた。これを問う質問。騒音、公害、天候または一般的な景観なが今回調査で用いた改訂 PGC モラール・スケールである。

どが QOL を改善するのか、悪影響を及ぼすのかが含Ⅰ「 心 理 的 動 揺 」 に 関 す る 項 目（4、7、12、13、16、
17）、Ⅱ「老いに対する態度」に関する項目（1、2、6、8、まれる。
交通手段：外出する際に交通手段が利用できて、それが10）、Ⅲ「孤独感」に関する項目（3、5、9、11、14、15）

どれだけ使いやすいかについて問う質問。利用可能なの 17 項目の質問に対して、1、6 は（1）そう思う（2）そ

交通手段（自転車、乗用車、バスなど）が使用できる

うは思わない、2、10、11、12、13、14、15、16、17 は（1）

ために、好きな活動が保証されている、また日々の必はい（2）いいえ、3 は（1）ない（2）あまりない（3）時々

要な活動ができる交通手段がどれくらいあるかに焦点感じる（4）感じる、5 は（1）満足している（2）もっとをあてている。

会いたい、7 は（1）ある（2）ない、8 は（1）良い（2）同じ（3）悪い、9 は（1）ある（2）あまりない（3）ない、E 全般的な生活の質で答えてもらった。
判定方法は質問項目のそれぞれについて、肯定的な選（2）ストレス度（SCL-S）

択肢（質問用紙の中で下線を付した選択肢）が選ばれた

SCL-S は桂らによって開発されたものである。
「ストレ場合に１点、その他の選択肢が選ばれた場合には０点を与スチェックリスト」は 20 項目、80 点満点で、判定基準は、

え、単純に加算して合計得点を出す。最高得点は 17 点でその得点が高いほど、その個人のストレス度は高く、低けある。点数が低いほどよい状態を表す。改訂 PGC モラー

ればストレス度が低いこととなっている。

ル・スケールの得点は、幸福な老いの程度あるいは ｢ 主観（SCL-S）：最近 1 ヶ月くらいの間にどのような症状が的 QOL｣ の指標であり、被検者の相対的な位置を示すもあったか、（1）はい（2）いいえ で 30 項目の質問にのであるにすぎない。“幸福な人”や“不幸な人”の弁別を答えてもらった。

行なうものではない。
（4）状態不安尺度（STAI-1）特性不安尺度（STAI-2）（3）PGC モラール・スケール
モラールの概念は、老化のプロセスの研究や福祉サービ

原著者スピルバーガー（サウスフロリダ大学）を共同研

スの効果測定のために用いられる社会老年学の主要な概念究者に迎え、英語版『STAI-Y』に改良を重ね、日本の文の 1 つである。「モラールが高い」ということの意味は、化的要因を考慮して開発した日本語最新版の「状態 - 特性

Lawton,M,P によれば次の 3 点に要約される 。

不安検査」である。日本人特有の情緒 ( 感情 ) を考慮する①自分自身について基本的な満足感をもっていること−生ことで、状態不安の密度の測定と人格構成としての特性不涯を通して何かを達成してきたという感じ、自分が有用

安における個人差の測定をより正確なものにしている。
『新な人物であるという感じをもっていること、あるいは自版 STAI（STAI-JYZ）』の項目は、英語版『STAI（Form Y）』

分が相当な（adequate）人物であると考えていられるの項目を慎重に翻訳したものと、状態不安、特性不安につこと。

いての日本の文化に見合う新しい項目を加え、精巧な統計

7）②環境の中に自分の居場所があるという感じをもっている的プロセスを用いて因子構造を検討し、さらに状態、特性

こと−彼が出会う他者や事物が彼に何らかの満足を与え、それぞれの尺度について心理測定の特性の視点から、不安

彼の欲求と環境からの所与とが一致していること。

存在および不安不在の下位尺度となりうる最も適切な項目③努力しても動かし難いような事実−たとえば自分の年齢を選択し、不安存在および不安不在の項目数を等しくした−は事実として、何らかの形で受容できていること。

点で『STAI-JYZ』は概念的にも、方法の上でも、『STAI

Lawton は、このような「モラール」を多次元のものと（Form Y）』より進んだものである。

して定義し、老年後期の人々にも適用でき、しかも信頼性

不安存在と関連したネガティブな感情と不安不在を示すを保ちながら同時に被験者を疲れさせることのない適切なポジティブな感情を測定する下位尺度を独立に作成したこ

長さ（短さ）のスケールの開発を目指した。彼は「モラーとにより、不安における重要な 2 つの構成要素を識別すル」に関連すると思われる 50 項目の質問を用意し、これることができ、このことによって、『新版 STAI』は状態

を 300 名の被験者に実施した結果によって、
PGC モラール・

不安と特性不安について慎重な測定を可能にした。加えて、− 80 −

化粧やネイルケアが高齢者のライフスタイルや QOL と免疫能の向上に及ぼす影響

それぞれの尺度における不安の存在と不在を示す感情を測前後で介入群において、身体的領域、心理的領域、社会的定する下位尺度を備えているものである。

領域、全般的な生活の質は有意に増加が見られた。環境領

STAI-1：たった今どう感じているかを（1）全くない（2）域においては、有意差は見られなかった。対照群においていくらかある（3）かなりある（4）はっきりある で

心理的領域では有意に減少が見られ、身体的領域、社会的答えてもらった。

領域、全般的な生活の質、環境領域では有意差は見られな

STAI-2：ふだんどう感じているかを（1）ほとんどない（2）かった（図 2）
。介入前の介入群と対照群での有意差、介時々ある（3）しばしばある（4）いつもある で答え

入後の介入群と対照群での有意差はともになかった。またてもらった。

それぞれの領域においての介入前の介入群と対照群での有判定方法は STAI-1 の（1）全くない（2）いくらかある（3）かなりある（4）はっきりある、STAI-2 の（1）ほとんど

意差、介入後の介入群と対照群での有意差も見られなかった。

ない（2）時々ある（3）しばしばある（4）いつもある をそれぞれ 1 点、2 点、3 点 4 点とし、最高得点 80 点とし、点数が高いほど不安の状態が高いといえる。

３- ３ ストレス度（SCL-S）（図 3 は巻末）
ストレス度では介入前後で介入群において得点が有意に減少する傾向が見られた。対照群では有意に増加する傾向

２- ４

NBT 還元試験が見られた（図３）。介入前の介入群と対照群での有意差

生体防御機能検査として好中球の貪食・殺菌能検査を
松田の毛細管法を改良して、マイクロチューブを用いたはなかったが、介入後の介入群と対照群間では有意に増加する傾向が見られた。

NBT 還元試験により実地した。NBT 還元試験は、食細胞が生成する活性酸素が NBT を還元することにより、細胞３- ４

PGC モラール・スケール（図 4 は巻末）

内に有色の凝固物（フォルマザン）を形成する反応を利用

PGC モラール・スケールでは介入前後で心理的動揺のしたものである。NBT 還元試験には刺激試験（スタヒロ）

項目において介入群で有意に減少が見られ、対照群では有と非刺激試験（レスト）があり、スタヒロでは、食細胞の意差は見られなかった（図 4）。その他の項目では有意差

活性酸素生成を促進させるための刺激物質を添加した。刺は見られなかった。また、介入前の介入群と対照群での有激物質として、
本実験では黄色ブドウ球菌（Staphylococcus

意差、介入後の介入群と対照群での有意差はともになかっaureus 209p）を用いた。結果は 1 検体について 2 種類のた。

試験を行い、塗末標本を作製しそれぞれ好中球 100 個を観察し、朝長の組織学的判定量化法に準じて、好中球の生成

３- ５

したフォルマザンをスコア化した。また刺激試験では同時（図 5 は巻末）に好中球の細菌貪食率についても貪食能として測定し、殺STAI-1 は一過性の不安状態を表し、STAI-2 は個人の菌・貪食の同時観察を試みた。

状態不安尺度（STAI-1）特性不安尺度（STAI-2）

特性に基づく不安状態を表すものである。STAI-1 では介
入前後で介入群において有意に減少が見られ、対照群にお

２- ５

解析方法

いて有意差は見られなかった。STAI-2 では介入前後で介解析は統計ソフト SPSS14.0 を用い相関係数を算出し、介入前の介入群と対照群での有意差、介入後の介入群と対T 検定を行った。

3
３- １

属

結

照群での有意差も STAI-1、STAI-2、ともになかった。

果

性

３- ６

表1

NBT 還元試験（図 6 は巻末）

３- ６- １

対象者の属性を表１に示す。

介入前である 2006 年の介入群との比較有意差は見られ

対象者の属性群

人数

性別

年齢 ± 標準偏差

介入群

12 人

女

88.5±10.5 歳

対照群

11 人

女

83.5±14.5 歳

３- ２

入群、対照群ともに有意差は見られなかった（図 5）
。また、

なかった。
３- ６- ２
介入後である 2007 年の介入群と対照群の比較刺激時の
NBT スコアにおいて、介入群の方で有意に増加が見られ、QOL-26（図 1、図 2 は巻末）

非刺激時の NBT 還元率において、介入群の方で有意にはQOL-26 では全体的に見ると介入前後で介入群において至らなかったが減少する傾向が見られた。

有意に増加が見られ、対照群では有意には至らなかったが減少する傾向が見られた（図 1）。領域別に見ると、介入− 81 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

３- ６- ３

QOL の向上の報告は両文献とも対象者が疾患を持つ患者

介入群において 2006 年と 2007 年での比較非刺激時ので年齢幅もあり、しかも施術部位が全身であるという違い

NBT 還元率において介入後の 2007 年での方で有意には至があった。文献 12）のラベンダーオイルを使用したアロらなかったが減少する傾向が見られた。

ママッサージによる QOL の向上の報告は対象者や対象者

３- ６- ４

年齢にも大差はないが、マッサージ療法とともにローズマ

コントロール群において 2006 年と 2007 年での比較刺激

リー・ラベンダー・カモミールの三種類同時の芳香療法を時の NBT 還元率において介入後の 2007 年での方で有意組み合わせており、ともに今回の介入と完全に照らし合わには至らなかったが減少する傾向が見られた（図 6）。

せることはできない。文献 13）14）15）の化粧療法の３

４

考つの報告のうち、今回の介入の対象者と年齢・対象者の属察

性・方法で近似しているものは１文献のみであった。これ

要介護者が利用する施設には、老人保健施設、特別養護らの文献と今回の介入を総合的に考えると、今回のネイル

老人ホームなどがあるが、老人保健施設利用者は、身体機ケアの介入による QOL の向上の結果はネイルケアに含ま能の維持回復、痛みの軽減、リハビリテーションに対するれる、ラベンダーアロマオイルを使用したマッサージの効

ニーズを強くもっており、特別養護老人ホーム利用者は、果とは断定しがたく、むしろマニキュアの効果であるとは終の住処として、生活を楽しみたいとするニーズを高く認考えられる。コントロール群において心理的領域で QOL識している傾向が示されている 。これにより、美容といが減少する結果となったことに関しては、季節の変化の影

う視点からシニアの新しいライフスタイルを築くには、特響や身近な人の死や病気が原因である可能性も否定できな

別養護老人ホーム利用者の方がより適すると考えられる。

い。

7）

次に、対照群に比べて介入群では、自覚的ストレスが減

今回、これに基づき、都内某所の特別養護老人ホームにご少し、さらに、貪食能と活性酸素産生能間での相関が強ま協力を頂き、本研究を進めた。
本研究では、対照群に比べて介入群では、QOL が向上るという結果になった。このことは、「自覚的ストレスのした。領域別に見ると、介入群では、環境領域以外の身体増加は免疫能の一つである好中球の貪食能と活性酸素種産的領域、心理的領域、社会的領域、全般的な生活の質の生能のアンバランスを引き起こし、好中球機能の低下を誘QOL が向上するという結果となった。また、コントロー

導すると考えられる」という報告9）に一致する。

ル群においては心理的領域で QOL が減少する結果となっ自覚的ストレスにおいては、アロママッサージ（ラベン

た。介入群の環境領域において、介入前後ともに同施設でダーオイルも含めた数種類のオイルの中から被験者が希望

過ごしているため影響がでないのは当然の結果であると考する香りのオイルを使用した場合）による自覚的ストレスえられる。また、介入群において、身体的領域、心理的領の減少の報告域、社会的領域、全般的な生活の質の QOL が向上したこ

レスの減少の報告とについては、今回の介入によって美容に身近に触れるこの減少の報告とで、被験者は活力が湧き、ポジティブ思考になるという、

11）16）、ラベンダーの香りによる自覚的スト

21）17）18）19）20）、化粧による自覚的ストレスがなされている。

今回の結果とこれらの文献を比較すると、文献 11）16）

いい影響を与えうることを示した。今回のネイルケア介入のアロママッサージ（ラベンダーオイルも含めた数種類のの中に含まれる爪もみのマッサージによる QOL の改善のオイルの中から被験者が希望する香りのオイルを使用した

5）

効果は報告されており 、この結果と一致するものとなっ場合）による自覚的ストレスの減少の報告は両文献ともた。また、アロママッサージ（ラベンダーオイルも含めた対象者が重い疾患を持つ患者で年齢幅もあり、しかも施術数種類のオイルの中から被験者が希望する香りのオイルを部位も全身と両前腕であるという違いがあった。文献 17）

使用した場合）による QOL の向上の報告

10）11）、ラベンダ

18）19）20）のラベンダーの香りによる自覚的ストレスのーオイルを使用したアロママッサージによる QOL の向上

減少の報告については年齢が若い女性であるため、ともの報告に今回の介入と完全に照らし合わせることはできない。文

12）がなされている。

今回のネイルケアに含まれるマニキュアの塗布は爪への献 21）の化粧療法の報告は、今回の介入の対象者と年齢・化粧行為と捉えることができるだろう。そのことを踏まえ

対象者の属性・方法で近似しているため、今回のネイルケ

ると化粧による QOL の改善の報告

アの介入による自覚的ストレスの減少は、QOL と同じく、

13）14）15）にも一致する

結果となった。今回の結果とこれらの文献を比較すると、ネイルケアに含まれるラベンダーアロマオイルを使用した文献 5）の爪もみの報告は今回の対象者よりも対象者年齢

マッサージの効果とは断定しがたく、むしろマニキュアのが若かったのが特徴である。文献 10）11）のアロママッ効果であるとは考えられる。これにより、化粧療法の免疫サージ（ラベンダーオイルも含めた数種類のオイルの中か機能への効果が認められた報告はまだあまり存在していなら被験者が希望する香りのオイルを使用した場合）によるいが、今回の介入により、その効果も十分ありうるという− 82 −

化粧やネイルケアが高齢者のライフスタイルや QOL と免疫能の向上に及ぼす影響可能性も示唆された。コントロール群において自覚的ストある。また、ラベンダーオイルを使用したアロママッサージにレスが増加する結果となったことに関しては、QOL と同

よる PGC モラールの心理的動揺項目の改善の報告

じく、季節の変化の影響や身近な人の死や病気が原因であラベンダーの香りによる PGC モラールの心理的動揺項目の改る可能性も否定できないと考えられる。

善は見られなかったという報告

28）29）31）、32）がある。これらの報告は、STAI においては、コントロール群に比べて介入群は状

今回の介入の対象者の年齢・対象者の属性・方法で近似し態不安が減少し、特性不安の変化はともに見られなかった。

ているため、今回のネイルケアの介入による心理的動揺項目

STAI-1 については、アロママッサージ（ラベンダーオイの改善はアロマオイルの皮膚からの吸収の単体の効果か、マルも含めた数種類のオイルの中から被験者が希望する香り

ッサージの単体の効果か、もしくはその両方の複合効果か断のオイルを使用した場合）、アロマオイルを含まないオイ

定はできないが、いずれにしてもマニキュアの効果があったと

ルマッサージともに同程度、状態不安が減少するという報は考えられる。

告22）、ラベンダーオイルを使用したアロママッサージによる状態不安の減少の報告

12）23）

ジによる状態不安の減少の報告
による状態不安の減少の報告の減少の報告13）15）

最後に、他に報告は見られないが、爪もみがストレス・、オイル未使用マッサー

不安・心理的動揺・免疫機能へ何らかの形で関係している、ラベンダーの香り可能性も考えられるだろう。さらに、ネイルケアの際に行、化粧による状態不安った施術者との会話も同様に心理的・免疫的に影響を与え

24）25）

26）27）がある。文献 22）のアロママッサージているということは否定できない。

（ラベンダーオイルも含めた数種類のオイルの中から被験今回行ったネイルケア介入には結果を左右させる要因が者が希望する香りのオイルを使用した場合）、アロマオイ

五つ含まれる。①ネイルケアの際に使用したアロマオイル

ルを含まないオイルマッサージともに同程度、状態不安がの皮膚吸収の影響、②ラベンダーの香りの影響、③ネイル減少するという報告と文献 24）25）のオイル未使用マッケアの際に行った施術者との会話の影響、④爪もみマッサ

サージによる状態不安の減少の報告は、今回の対象者よりージの効果、⑤マニキュアを塗ることによる化粧効果、のも年齢が若いうえに施術が全身であるというのが特徴であ五つである。今回の結果はこれらの効果が総合された結果る。文献 12）23）のラベンダーオイルを使用したアロマであるが、このネイルケアが施設入居高齢者の生体防御機

マッサージによる状態不安の減少の報告は今回の介入の対能や心理面に大きな役割を果たしていることが示唆された

象者と対象者の属性や対象者年齢にも大差はないが、文献ものと思われる。今後、これらの効果１つ１つが何から影

12）においては、マッサージ療法とともにローズマリー・

響されたかを解明していくこともこれからのよりよい環境

ラベンダー・カモミールの三種類同時の芳香療法を組みの施設作りへ向けて必要であるだろう。

合わせており、また、文献 23）においては今回の対象者に比べると年齢が若いうえ、施術が全身であるという違い

謝辞があった。文献 26）27）のラベンダーの香りによる状態

本稿を作成するにあたり、本調査にご協力頂きました都

不安の減少の報告のうち文献 26）が今回の介入の対象者

内のＭ特別養護老人ホームの皆様方に深謝いたします。まと年齢的にも近似しており、手術前の不安変化を見ている

た、本調査にご協力頂きました宮本真氏ほか早稲田大学大が重疾患の患者ではないことから、状態不安の効果を計る

学院人間科学研究科 町田研究室の皆さんにお礼を申し上ものとしては参考にすることは可能だと考えられる。文献

げます。

13）15）の化粧による状態不安の減少の報告も今回の介入の対象者と年齢・対象者の属性・方法で近似しているもの（引用文献）があり、これらの文献と今回のネイルケア介入を総合して

１）総務省「国勢調査」

考えると、今回のネイルケアの介入による状態不安の減少

２）国立社会保障・人口問題研究所「日本の将来推計人口

は、鎮静作用があると言われるラベンダーの香りの効果と、（平成 18 年 12 月推計）」の出生中位・死亡中位仮定によマニキュアの効果ではないかと考えられる。

る推計結果

今回の結果同様に、STAI-2 が有意に変化した報告はな

３）厚生労働省「完全生命表」

かった。これは、STAI-1 は一過性の不安状態を表すため、

４）平成 19 年版 高齢社会白書

効果がすぐに反映しうるが、STAI-2 は個人の特性に基づ

５）班目健夫 川嶋朗 爪もみ健康法の実験的検討 治療

く不安状態を表すため、効果が現れにくい事による違いであると考えられる。

６）手塚千史 高齢者の心身機能を高めるマッサージと次に、コントロール群に比べて介入群は PGC モラールの心
理的動揺項目が有意に改善していると示された。このことについては、化粧による PGC モラールの増加の報告

Vol.89 No.3,579-582 2007.03.01

15）21）

がしてドイツの歴史的ロマケア 月刊 GPNet Vol.54 No.2
39-44７）小沼真理子 北川慶子 鐘ヶ江寿美子 林ちづる 高齢者− 83 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

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スケールの分析−老年社会学 2 83 − 95

高志 , 安保秀勇 , 吉田寿美子 , 荒川冴子 , 中幡美絵 化粧９）町田和彦 メカニズムをさぐるⅢ 好中球 臨床スポーツ

療法の健康増進に与える影響に関する研究 月刊総合ケ

医学 19 巻 11 号

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22）H i r o k o K u r i y a m a , S a t o k o W a t a n a b e , T a k a a k i

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フル ･ ボディ ･ トリ

学会論文集 看護総合 Vol.37th Page.185-187 (2006.12.19)

ートメントによるアロマテラピーの心理的効果 - 性格

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特性を考慮した検討アロマテラピー学雑誌 Vol.3 No.1
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貴美子 老人性痴呆疾患治療病棟におけるはいかい患者へのアプローチ - 不安 ･ 焦燥感を呈する痴呆患者に対す

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SHIRAHATA Isao The Effects of Massage Therapy

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foundations created byintegration of medical care andbeauty care for severe skin colorproblems. Forager J26）小野美千子，佐々木恵美子，工藤千奈美，三上淳子，
酒井珠美，小野善昭，村田加代子

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27）米沢優子 , 芹沢直美 , 樫山ひろみ , 岡里美 , 植田百合

トロジー研究報告 Vol.15 Page.106-114（2007.09.01）

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術前不安に対するアロマテラピーを用いた術前療法

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子 アロマテラピーによる看護婦のストレスの軽減 日本

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− 84 −

化粧やネイルケアが高齢者のライフスタイルや QOL と免疫能の向上に及ぼす影響

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35）入内島一崇、峯島孝雄 施設高齢者の認知的社会関係と QOL の関係 東保学誌 1999Vol.2 No.2

with Dementia. THE JOURNAL OF ALTERNATIVE

図1

図3

図5

QOL-26 の総合得点変化

ストレス度の得点変化＊ p ＜ 0.01

図2

QOL-26 の領域別得点変化＊：p ＜ 0.01, ＊＊ p ＜ 0.05

図 4 PCG モラール・スケールの心理的動揺の項目における得点変化

STAI-1,STAI2 における得点変化− 85 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図6

NBT 還元試験におけるネイルケアし施術の効果の相関図とｔ検定の比較図＊ p ＜ 0.05（刺激時の NBT 還元率の有意差）、＊＊ p ＜ 0.05（NBT と貪食率の相関）− 86 −

化粧・美容意識についての日仏文化比較研究—日仏大学生へのアンケート調査の結果から—
大阪大学言語学博士、ナント大学言語科学科博士課程

石 丸

久美子

The aim of this study is to analyze the difference between French and Japanese university students regarding
beauty consciousness.
A survey on makeup, skincare practices, and beauty consciousness was conducted in France in January 2007,
and again in Japan from June to July 2007.
The subject group consisted of 126 French (18-22 years old, Average: 19.3 years old) and 123 Japanese (18-24
years old, Average: 19.1 years old) female university students.
Quite unexpectedly, some common denominators were found for the two countries: The most important makeup
item for them is mascara. Other kinds of eye makeup are also important for both. French and Japanese students
admire many of the same cosmetics brands, and their expenditure on cosmetics is approximately the same.
However, there were also differences between answers of two countries. 70% of French students like getting
a tan and 90% of Japanese students dislike it. The cosmetics they use the most on a daily basis are perfume forFrench students and mascara for Japanese students. Among skincare products, moisturizing products (lip balm,
cream) are important for French students, but cleansing products are more important for Japanese students. The
French students’ predominant criteria for cosmetic selection are quality and effect, and for Japanese are ease-ofuse and packaging or colour. Concerning advertising copy aimed at a certain country's women (e.g., “This productis made for Japanese women”.), most French students were unfavorable toward it (e.g., “strange”, “ridiculous”,“discriminatory”, “unpleasant”), and the majority of Japanese students were positive about it (e.g., “good”, “safe”,“happy”).

１．緒

果と、今回、実際に日本とフランスで行った実地調査の結言

果がいかに関連しているかについても考察したい。

近年、化粧文化研究が本格的な学問分野の対象となり、

２．アンケート調査

いくつもの研究が出てきているが、研究内容としては、その史的考察を行ったものが多く、化粧観や美意識についての研究はいまだに少ないと言わざるを得ない。特に、これらを実地調査した研究は、村澤、大坊、趙（2005）１） 等

2. 1

研究目的

日仏の女子大学生を対象として、アンケート調査を行い、両国の学生の化粧・美容意識の共通・相違点を見ていく。

の他には殆ど無いと言えるだろう。
筆者は、今まで、日仏の化粧品広告言説（ディスクール）

2. 2

調査方法

を考察し、その内部に構築された、理想の「女性美」や化自らの化粧習慣、意識についての調査項目と共に、日仏

粧・美容意識を分析してきた２）。フランスは、日本と同様に、両国間での相互印象に関する調査項目を作成し、選択式、

大手化粧品メーカー / ブランドを多く持つ、化粧品大国で自由記述式併用で回答をしてもらった。

ある。ゆえに、本研究では、化粧・美容についての意識がアンケートは、フランス（ナント市）では、2007 年１月に、国によってどう異なるのかということを問題提起とし、社

日本（京都市）では 2007 年６〜７月に、質問用紙を配布、会・文化が大きく異なる、日本とフランスという二国にお回収し、実施した。

ける化粧・美容意識を比較考察することを目指したい。特に、これまで、日仏の学生の化粧・美容意識を現状調査した研究は見られないことからも意義のある調査だと考える。
また同時に、筆者の化粧品広告言説に関する先行研究結

2. 3

調査対象者

フランス人女子学生

ナント大学、オデンシア経営高等専門学校（グランゼコール）、テュノン国際学校（観光・ホテル学）、ヨーロッパ商業高等専門学校（グランゼコール）

A C o mp a r at ive S t udy o n B e aut y
Consciousness of Japanese and French
University Students
Kumiko ISHIMARU
Ph.D. (Language and Culture), Osaka
University, Postgraduate, Faculty of
Language Sciences, Nantes University

126 名（年齢：18-22 歳、平均 19.3 歳）
日本人女子学生

京都外国語大学

歳、平均 19.1 歳）
2. 4

質問項目

質問事項は以下の通りである。

− 87 −

123 名（年齢：18-24

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

年齢：……………歳

学年（分野を詳しく教えてください）：……………
（フランス人学生に対して）日本滞在 /（日本人学生に対して）フランス滞在経験はありますか。□ある
滞在日数：……………
1. 美容について
1. 日焼けは好きですか。以下から選択してください。
□大変好き。 □どちらかといえば好き。 □どちらでもない。

□どちらかといえば嫌い。

2. 化粧について
1. 普段の化粧には、どの化粧品を使いますか（複数回答可）。
□ファンデーション □パウダー □アイシャドー □アイライナー□マスカラ □アイブローペンシル・パウダー □チーク □口紅 □グロス□ない

□全く好きではない。嫌い。

□マニキュア □香水 □その他（）

2. あなたにとって、最も重要な化粧品は何ですか。一つだけ選んでください。
□ファンデーション □パウダー □アイシャドー □アイライナー□マスカラ □アイブローペンシル・パウダー □チーク □口紅 □グロス □マニキュア □香水 □その他（）

3. 普段、顔のお手入れに、どの基礎化粧品を使いますか（複数回答可）。
□石鹸 □化粧落とし、洗顔料 □化粧水 □乳液 □クリーム □ゴマージュ / ピーリング（角質対策用品） □パック / マスク□保湿リップ □その他（）
4. 夜はどのように、どんな化粧品を使って洗顔しますか。
5. 朝はどうですか。
6. 好きな化粧品メーカー / ブランド名を挙げてください（複数回答可）。またその理由を述べてください。
メーカー / ブランド名：理由：
7. 憧れの化粧品メーカー / ブランド名を挙げてください（複数回答可）。またその理由を述べてください。
メーカー / ブランド名：理由：
8. 化粧品購入に、月に、また年にいくら出費しますか。
月に
円
年に

円

9.（フランス人学生に対して）日本女性の美容と化粧について、どのような印象を持っていますか。また、日本メーカー / ブランドの化粧品についてはどうですか。
日本女性について：
日本メーカー / ブランドの化粧品について：（日本人学生に対して）フランス女性の美容と化粧について、どのような印象を持っていますか。また、フランスメーカー / ブ
ランドの化粧品についてはどうですか。
フランス女性について：
フランスメーカー / ブランドの化粧品について：
10.（フランス人学生に対して）日本の化粧品広告には、製品が日本女性のために作られたという、次のような表現がよくあります。
：「この製品は、日本女性の肌に合わせたテストをしています。
」（Dior）「日本とアジアの消費者の肌ニーズに合わせて処方・、開発」（LANCÔME PARIS） もし、このような表現がフランス人女性に向けにあったら、どのように思いますか。
（日本人学生に対して）次の文は化粧品広告からの抜粋です。：「この製品は、日本女性の肌に合わせたテストをしています。
」（Dior）、「日本とアジアの消費者の肌ニーズに合わせて処方・開発」（LANCÔME PARIS）これらについてどう思いますか。

焼け止めを使いつつも日光浴をすることを勧めるのに対し、

３． 結果と考察
3. 1

日本広告では日光浴を勧める言説は皆無であった。この文

日焼けについて（Fig.1）

化的差異を証明するように、日焼けの好き嫌いについてのによると、日仏

質問では、フランス人学生が、「どちらかといえば好き。」

化粧品広告で大きな違いが見られ、フランス広告では、日49 回答、「大変好き。
」41 回答で、約 7 割が好きと答えた

日焼けについては、筆者の先行研究

３）− 88 −

化粧・美容意識についての日仏文化比較研究—日仏大学生へのアンケート調査の結果から—のに対し、日本人学生は、「まったく好きではない。嫌い。」

100

82 回答、「どちらかといえば嫌い。
」29 回答で、約 9 割が80

好きではない、嫌いと回答した。
回答数

3. 2

普段の化粧について（Fig. 2）

60
40「普段の化粧には、どの化粧品を使いますか。」という

20

質問については、フランス人学生の回答で一番多かったの0が、「香水」であったのに対し、日本人学生の回答は、「マどちらかとい どちらでもな どちらかとい 全く好きでは
大変好き。
えば好き。
い。
えば嫌い。 ない。嫌い。

フランス
日本

スカラ」であった。これは、昨今のマスカラ人気４） を証明するものといえる。香水がフランスでは重要な位置を占

41
3

49
3

18
6

12
29

4
82

Fig. 1 日焼けについて

める化粧品であるというのは、筆者の先行研究５）の調査で、フランスでは香水の広告数が第 1 位であったということに一致している。「マスカラ」と「アイライナー」は二国共

3. 3

最も重要な化粧品（Fig. 3）

で 3 位以内に入っており、日仏両国でアイメークが重要視では、日仏各国の学生にとって、最も重要な化粧品とはされていること、さらに、日本では「アイシャドー ｣ もフ何であろうか。
「あなたにとって、最も重要な化粧品は何

ランス以上に多く用いられていることが分かった。フランですか。」という質問に答えてもらった。その結果、日仏

スにおけるアイシャドーの使用が日本より少ないのは、フ両国で、「マスカラ」が第 1 位に選ばれた。次に興味深い

ランス人は一般的に日本人よりも彫りの深い顔で、必要性ことは、第 2 位に、フランスでは、前章で最も使われる化を感じないためかもしれない。日仏での違いとしては、「マ粧品という結果だった、「香水」が挙がったのに対して、ニキュア」がフランスでは第 4 位に多かったのに対し、日日本では前章で第 2 位だった「アイライナー」を抜いて、本では、第 10 位であった。また、「ファンデーション」が第 2 位「ファンデーション」、第 3 位「アイブロー」とい

日本では第 3 位だったのが、フランスでは、第 5 位、「アう結果になったことであろう。香水は日本では第 5 位であイブローペンシル・パウダー」が日本では第 5 位だったの

り、香水を付けることが、日本人とは比較にならないほど、が、フランスでは、最下位の第 12 位であった。また、チ

フランス人にとっては重要な行為であることが証明され、ークも日本でより多く用いられていた。つまり、フランス

日本では、フランス以上に、ファンデーションを塗ること

では、香水、爪の化粧、お手入れが日本より重視されておが重要と考えられていることが明らかになった。

り、日本では、ファンデーションを使うこと、アイブロー
を使い、眉を整えること、チークを入れることがフランス

3. 4

普段使う基礎化粧品（Fig. 4）より重視されていることが分かる。そして全体として日本

では、普段の顔のお手入れには、どのような基礎化粧品の学生の方が、多くの化粧品を使い、フルメークをしていが多く用いられ、重要と考えられているのだろうか。回答

ることがグラフから読み取れる。

としては、第 1 位がフランスでは「保湿リップ」で、日本

120
100
回答数

80
60
40
20
0

フランス
日本

ファン
パウ
デー
ダー
ション
51
88

42
56

アイ
アイラ マスカ アイブ
チーク 口紅
シャ
イナー ラ
ロー
ドー
49
87

82
90

97
103

7
80

23
76

21
33

Fig. 2 普段の化粧に使う化粧品− 89 −

グロス
40
67

マニ
香水 その他
キュア
57
48

100
62

9
9

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

45
40
35
回答数

30
25
20
15
10
5
0

フランス
日本

ファン
パウ
デー
ダー
ション
11
24

アイ
アイラ マスカ アイブ
シャチーク 口紅
イナー ラ
ロー
ドー

9
1

3
5

24
14

39
34

2
19

1
6

1
3

グロス
2
2

マニ
香水 その他
キュア
0
0

30
7

4
3

Fig. 3 最も重要な化粧品

150
回答数

100
50
0

フランス
日本

石鹸

化粧落と
化粧水
し、洗顔

乳液

クリーム

角質対
策

パック・ 保湿リッ
その他
マスク
プ

44

79

57

12

76

42

29

82

5

12

117

110

68

36

14

19

47

5

Fig. 4 普段使う基礎化粧品

では「化粧落とし、洗顔料」であった。また、フランスで

スでは、日本に多い保湿タイプの化粧水よりも、クレンジ

は第 3 位だった「クリーム」が日本では第 5 位であり、日ングの役割をしたり、汚れを落としたりするタイプの化粧本では第 3 位だった「乳液」がフランスでは第 8 位という水が大変人気であり、それを使っている人が多いことによ

結果からも、フランスでは日本よりも保湿ケアがより重要る。「乳液をつける」と述べたのが日本で 12 回答だったのと考えられていることが分かる。これは、やはり、フランに対して、フランスではわずか 1 回答であり、「クリームスの方が乾燥した気候であることにもよるであろう。そしを使う」と答えた人がフランスでは日本の 3 倍近くになって、日本では、「洗顔」
、
「化粧水」
、
「乳液」が基礎化粧品

た。この結果も上記で述べた通り、フランス人学生は、よセットとして使用されていることが分かる。その他としてり高い保湿力を好むことからであろう。また、フランスには、「ゴマージュ / ピーリング（角質対策用品）」がフラン

特徴的なこととして、gant と呼ばれる、（顔や体を洗うた

スでより多く用いられていた。
「化粧落とし、洗顔料」をめの）タオル地の袋状のグローブを使うという 2 回答があ使う人の割合が日本の方が多く、「石鹸」を使うのがフラった。

ンスの方が多いのは、上記で触れたように、日本人学生の方がファンデーションを使う人が多いことによるのではな

3. 6

かろうか。

朝のお手入れ朝のお手入れも傾向としては夜とほぼ同じであった。しかし、水、ぬるま湯で洗うという回答が日本の方がフラン

3. 5

夜のお手入れスの倍近くであった。逆にローション、化粧水を使う人が

夜はどのような化粧品を使って洗顔をするか質問をした

フランスで多かったが、これも前章で述べたような、汚れ所、「化粧落とし、クレンジングを使う」と答えた人は日落としをする化粧水を使う人が多いためであろう。また、仏共ほぼ同数であったが、「洗顔料を使う」と答えたのは、

フランスではグローブを使って洗うという回答がやはり 4

日本の方が多かった。
「ローション、化粧水を使って」と回答、シャワージェルでというのが 1 回答あったが、これいう回答は、フランスの方が多かったが、これは、フラン

は、朝、お風呂に入るか、シャワーを浴びる人が多いこと− 90 −

化粧・美容意識についての日仏文化比較研究—日仏大学生へのアンケート調査の結果から—によると思われる。

3. 7

フランス
品質が良い 34（回答）、価格（高すぎない、安い、手頃）

好きな化粧品「好きな化粧品メーカー / ブランド名を挙げてください。
またその理由を述べてください。
」という質問に対しての結果は、全体として、フランスでは、スーパーで買える手軽な価格のメーカー / ブランドが多く、日本では逆に百貨店で買うようなより高価なメーカー / ブランドが多く挙げられていた。
フランスでは、第 3 位までのすべてがスーパーで売っているものであった。
（日本では決して安くはないフランス

28、効果、保湿力、肌が美しくなる 22、よい製品、ブランドだから 8、安心、信頼、信用、安全 5、肌に合っているから 5、品質と価格が見合っている 5…
日本
価格（高くない、手ごろ、安い）17、使いやすい 10、色がきれい 9、肌に合う 8、パッケージ、見た目、デザイン
が好き 8、かわいい 7、発色がいい、きれい 5、ファンデがいい 5…

3. 8

憧れの化粧品大手メーカー L'Oréal もスーパーで売っている。価格も自前章で実際に使っていると思われる、好きな化粧品につ国のものであるからか、日本より随分と安価である。
）そいて述べてもらったが、次の質問としては、「憧れの化粧

して、第 4 位は、薬局で売っているブランド Avène、第品メーカー / ブランド名を挙げてください。またその理由

5 位は、フランス中に独立店舗を持ち、非常に手頃な価格を述べてください。
」として、実際には使っていなくともで自社製品を売っている、Yves Rocher であった。この憧れを持っているメーカー / ブランド名とその理由を挙げ

ように、フランスでは、上位は、割と手頃な価格のメーてもらった。結果としては、日仏共、第 1、2 位は同じ結果で、カー / ブランドであり、高価なブランドとしては、やっと

フランスのブランド、Chanel と Dior であった。日本では第 6 位で Lancôme が挙がった。これに対して、日本では、

第 3 位でようやく国産の資生堂、マキアージュが挙げられ

KATE、マジョリカ・マジョルカやメイベリン等は手頃なていた。

価格帯のブランドであるが、それ以外は高いブランドが多く挙がっていた。

理由としては、日仏共、「高価」、「高級」ということが上位に挙がっていた。しかし、フランス人が「質が良いか

フ ラ ン ス で は、 上 で 述 べ た Avène の 他、La Rocheら」を第 1 位に挙げ、重視しているのに対し、日本人は、「かPosay、Neutrogena という薬局ブランドも挙がっていた

わいい」、「見た目、パッケージ」、「色がきれい」と見た目のが特徴的である。

を重視した回答をしていたのが興味深い。この回答は前章

フランス
NIVEA* 44（回答）、L’ Oréal* 27、Gemey-Maybelline* 19、Avène+ 14、Yves Rocher 13、Lancôme 9、La Roche
Posay+ 8、Evian* 7、Dior 6、Mixa* 6、Neutrogena+
6、Sephora 6 、 特 に な し 5、Garnier* 5、Agnès b 5、Bourjois* 5、Chanel 4、Clarins 4、Guerlain 4…［以下省略］* スーパーで販売 + 薬局で販売
日本
資生堂 29、特になし 13、KATE 11、アナスイ 9、マジョリカ・
マジョルカ 8、メイベリン 8、ランコム 8、マキアージュ 7、
RMK 6、REVUE 5、Chanel 5、Dior 5、KOSE 4、PAUL& JOE 4、MAC 4…

次に、以上のようなメーカー / ブランドを選んだ理由としては、フランス人学生の回答では、第 1 に「品質が良い」、
第 2 に「価格」、
第 3 が「効果」となっていた。これに対し、日本人学生は、第 1 に「価格」、第 2 に「使いやすい」、第3 に「色がきれい」と述べていた。このように、フランス
では、品質・効果といった質的なことに価値が置かれているのに対して、日本ではむしろ、使い易さと見た目の美しさ（第 3 位「色がきれい」、第 4 位「パッケージ、見た目、デザインが好き」、第 5 位「かわいい」）といった実用・利便性や美に価値が重かれていることが明らかになった。

の調査項目の答えと共通しており、日本人とフランス人の化粧品に対する評価基準が異なることが証明されたといえよう。
フランス
Chanel 40（ 回 答 ）、Dior 35、 特 に な し 12、Lancôme 10、Yves Saint Laurent 8、Guerlain 5、L’ Oréal 5、Clarins 4、Shiseido 4…
日本
シャネル 31、ディオール 17、マキアージュ 7、特になし 9、ランコム 8、アナスイ 6、RMK 5、Yves Saint Laurent 4…
理由：
フランス
質が良い 21（回答）、豪華さ 15、高価 11、有名、評判 9、
高級ブランド、高級品 9、効果、肌に良い 5、美しい広告、広告の影響 4、美、美しい 4、良い香り 2、良い製品 2、美を象徴するから 2…
日本
高価 10、かわいい 10、高級感 5、見た目、パッケージ 5、
色がきれい 4、何となく 3、品質 3、大人な感じ、大人っ
ぽい 3、かっこいい 2、きれい 2、よさそう 2、使いやすそう、
使いやすい 2、好きだから、好み 2、広告、CM の女優さんがキレイ 2…

− 91 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

3. 9

化粧品購入費えることを好む」、「化粧（品）が好き」、「西洋人に似よう

日仏の学生は、それぞれ化粧品購入にどれほどの出費をとする」と鋭い指摘といえる回答があった。

しているのかという疑問から、これについての調査項目を
日本の化粧品については、無回答も多く、「Shiseido」設けた。
結果は、1 か月の出費は、日本人学生の方が概して多く、という答えがあったものの、大半が「知らない」という回

フランス人学生の倍近くを化粧品に使うことを示していた答であった。また、「どれが日本製か知らない。」という回が、1 年での出費額を比較すると、日仏でほぼ同じである

答があったのも興味深い。

こと、学生によって出費に大きな違いがあり、2 〜 4 倍あ

日本女性の美容と化粧について：ナチュラル、地味、シンプル、薄化粧 29（回答）、濃い化粧、
地味でない、派手 19、白い肌、パウダー 22、赤い口紅 16、アイライナー、目の上を黒くする 14、念入りにお手入れしている、お風呂場で長時間過ごす、沢山の化粧品を使う
12、美しい、お洒落 12、頬紅 7、清らか、端正、ピュア 7、肌を明るくみせようとする、「白く」見えることを好む 6、
芸者 6、伝統的な化粧、美 5、化粧品、化粧が好き 5、美しい、綺麗な、すべすべな肌 5、西洋人に似ようとする、
西洋的にしようとする 4…

るいはそれ以上の差があることが分かった。
フランス：月に5 ユーロ（約 800 円）18（回答）、10 ユーロ（約 1,600 円）
15、20 ユーロ（約 3,200 円）11、15 ユーロ（約 2,400 円）9、
30 ユーロ（約 4,800 円）7、40 ユーロ（約 6,400 円）5…
最低 0 ユーロ（0 円）3、最高 60 ユーロ（約 9,600 円）3
日本：月に
3,000 円 17、2,000 円 13、5,000 円 10、1,000 円 9、10,000 円 7、20,000 円 3…

日本の化粧品メーカー / ブランドについて：知らない 49、Shiseido 10、良い、質が良い、信頼 5、どれが日本製か知らない 2…

最低 0 円 4、最高 70,000 円 1
フランス：年に50 ユーロ（約 8,000 円）13、100 ユーロ（約 16,000 円）9、120 ユーロ（約 19,200 円）7、200 ユーロ（約 32,000 円）7、
30 ユーロ（約 4,800 円）6、150 ユーロ（約 24,000 円）5…
最低 0 ユーロ（0 円）1、最高 700 ユーロ（約 112,000 円）2

3. 10. 2

フランス女性、フランスの化粧品についての

印象
本章では、日本人学生のフランス女性、化粧品に対するイメージについて言及したい。学生らがフランス人女性に

日本：年に10,000 円 11、30,000 円 9、5,000 円 8、20,000 円 8、15,000円 5…

持っている印象は、第 1 位が「美しい、綺麗、カワイイ」で、その次に、「薄化粧」あるいは「ノーメーク」であることが分かった。

最低 3,000 円 1、最高 150,000 円 1、すごい額 1

フランスの化粧品については、好きな化粧品にフランス

注：1 ユーロ＝ 160 円で計算した。また、例えば 5,000 〜 10,000 円というように幅があった回答は、最低金額 5,000 円と最高金額 10,000
円の両方を回答として集計した。

のメーカー / ブランドのものを挙げている人が多かったに

3. 10とあり、第 4 位に「香り、匂いがきつい」とあったことは

日仏の美容と化粧に関する相互印象

ところで、日仏の学生は、互いの国の女性の化粧や美容もかかわらず、意外にも「分からない、知らない」という回答が第 1 位であった。次に、「高価、高そう」、「高級」
注目に値するであろう。

について、どのような印象を持っているのであろうか。また、化粧品メーカー / ブランドについてはどうであろうか。
3.10.1

日本女性、日本の化粧品についての印象

フランス人学生の回答は、矛盾していると同時に、伝統的なステレオタイプであった。まず、「ナチュラル、地味」
が第 1 位でありながら、第 2 に「濃い化粧」と挙げられていたのは、普通の日本人女性は化粧が薄いのに対し、芸妓や「コギャル」、「ギャル」等の濃い化粧を想像することによると思われる。
「芸者」の「伝統的な化粧」、つまり、「白い肌」に「赤い口紅」と「アイライナー」というステレオ
タイプが見事に挙げられている。同時に、現代女性のイメージとしては、「念入りにお手入れしている」
、
「
「白く」見

− 92 −

フランス人女性の美容と化粧について：
美しい、綺麗、素敵、美人、カワイイ 27（回答）、薄化粧、
ナチュラル、自然 24、ノーメーク、すっぴん、何もしな
さそう 9、特にない、分からない 8、お洒落（に敏感）6、
アイメーク 4、顔がはっきりしていそう、顔が濃い 3、化粧に興味がなさそう 3、濃い化粧 3、おしゃれに厳しそう、手を抜かない、こだわりがありそう 3、肌が白い 3、美容対策していそう、気をつかっていそう 3、自分にあった化粧の仕方をしていそう 3…
フランスメーカー / ブランドの化粧品について：分からない、知らない 16、高価、高そう 10、高級 9、香り、匂いがきつい 7、おしゃれ 5、良い匂い 3、ランコム 3、
良さそう、良い 3、美しい、きれい 3、濃い 3、Dior 3…

化粧・美容意識についての日仏文化比較研究—日仏大学生へのアンケート調査の結果から—

3. 11

日本人向け化粧品広告言説についていう答えがあった。そして、次に、フランス人学生と正反によると、日本広告には、「日本女性対の捉えられ方がなされている、「日本人、アジア人のたの肌」、「日本の素肌」
、
「日本の」
、
「日本」
、
「日本人の女性」

めに作ってくれてうれしい。ありがとう。
」という意見がといった表現が用いられ、その化粧品が日本女性のためにあったのが特徴的であった。その他には、「買って、使っ製造されたこと、その化粧品メーカーが日本女性の肌に特てみたい。」、「国籍、人種、肌の色によって違うと思うから。

化した研究を行なっていることを示す言説（ディスクール）

日本人とフランス人は肌質が違うから。
」、「外資系は肌がが多く見られた。この種の言説はフランスの広告には皆無

あれやすい / きつい / 合わなかったから。
」という意見がであった。そこで、これらの言説について、どのような意続いた。また、「何も思わない。別に。」という意見が日本

見、印象を持つのかを日仏学生に質問した。フランス人学

人学生では 7 回答あった。このような答えはフランス人学生に対しては、もしこのような言説がフランス人女性向け

生では、唯一、「分からない。」という１回答があった。日

にあったらどのように思うかという質問を設定した。集計

本でも否定的に受け取るという回答も少数だが、4 回答あにあたっては、肯定・否定、賛成（あるいは理解しうる）
・った。これらは、「「テスト」と言われると若干不安。
」、「ど反対（あるいは疑問視する）のどちらの意見かという点にれだけ肌に悪いものを使っているのか。
」という理由から

着目した。

であった。

筆者の先行研究６）

賛成か、反対かについては、反対、疑問を感じるという3. 11. 1

フランス人学生の回答のが 12 回答で、
「本当かどうか分からない。信用性が無い。
」

フランス人学生においては、否定的に受け取るという意というものが多く、次に、「それよりも日本メーカーの方

見が 49 回答で大半を占めていた。その理由として述べらが信用できる。
」という答えが続いたのも印象的であった。

れていたのは、「変、滑稽」というものが最も多かった。

そして、賛成は 7 回答で、「ヨーロッパとアジアではやは次に、「差別的表現である、差別されているように感じる」

り違うのだな。」と思ったという意見、「日本人女性が美容というものがあり、そして、「不快、不愉快、いらだたせる、に関心を持っていることを良く分かっている。
」
、
「欲しく

侮辱されたように感じる、被害を受けたように感じる」となりそう。」、「是非（日本向け処方・開発を）してほしい。
」、

いう意見が続いた。また、「驚きだ」、「偏狭な印象」、「す「もっと日本人にあったのを作って欲しい。」という、更なべての人の肌は異なり、それは出身地や文化によらない。

る期待をするような感想が見られ、これはフランスとは全

どの国の人も同じ肌！むしろ、年齢によって違いがある。」

く違う現象であった。

という意見も見られた。肯定的意見は、計 8 回答で、その４．総理由は、「品質により高い信用・信頼がおける、良い商品括を買うのだと確信できる。
」というものや、「面白い」、「良以上、日仏の女子大学生に対するアンケート調査の結果

いアイデア」、「興味を引かれるかもしれない。
」というもから、日仏における化粧・美容意識の共通・相違点を分析のがあり、また、黒人学生 2 人が、「良いと思う。民族カ

し、また、互いの国の化粧についてのイメージという異文

テゴリーに合わせているのが興味を引く。
」、「効果的」と化間考察を行った。日仏という大きく社会・文化の違う二答えていたのが興味深い。

国で調査したことにより、互いの国の特性がよりはっきり

賛成・反対意見としても、やはり、反対、疑問を感じると浮かび上がってきたと思われる。

という意見が多く、28 回答で、その大半が「フランス人

結果としては、日仏で意外にも共通点があることが明ら

女性の肌は多様だ。
」という理由からであった。これは、かになった（「マスカラ」、アイメークの重要性。憧れの化

フランス人は、多様なルーツを持った国民であり、肌の色粧品。化粧品への出費。）。また逆に、それぞれの社会・文も人により異なるということだろう。その他は、「フラン

化的差異、化粧・美容に対する意識、考え方の違いも顕著

ス人女性の肌が他の国の人の肌と違うとは思わないから。」に現れていた（日焼けの好き嫌い：仏・約 7 割は好き、日・というものがあった。そして、賛成、あるいは理解できる

約 9 割は嫌い。普段使う化粧品第 1 位：仏・香水、日・マとした回答は 11 回答あり、その殆どが、「確かに、皆、肌スカラ。基礎化粧品：仏・保湿ケア重視、日・化粧落としが違うのは事実。
」という内容のものであった。

と洗顔重視。化粧品評価基準：仏・品質、効果、日・実用性、見た目の美しさ。日本人向け広告言説について：仏・否定

3.11.2

日本人学生の回答

的、日・肯定的。）。

フランス人学生の回答と日本人学生の回答は、非常に対また、今回の調査によって、筆者の先行研究である化粧照的であり、日本では、肯定的、好意的に受け取るという品広告言説（ディスクール）の研究結果をさらに裏付ける答えが 45 回答で多数であった。その理由としては、「良いことができたと思う。

と思う」というのが一番多く、次に、「安心感がある」と今回の調査を踏まえ、今後も、異文化比較を通じた化粧文− 93 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

ロジー研究振興財団、2005。

化研究をより多角的視点から行っていければと考えている。

２）石丸久美子、『日仏化粧品広告の比較研究—ディスク

謝辞ール分析の観点から』、大阪大学大学院言語文化研究科

本研究を行うにあたって、アンケート調査実施にご協

博士学位論文、関西学院大学出版会、学位論文オンデマ

力頂きました、ナント大学、田中丈史助教授、同大学院生

ンド出版、2007a。石丸久美子、「化粧・美容意識につい/ 日本語講師三枝大修氏、中津匡哉氏、同大学院生 / スペての日仏比較研究—日仏化粧品広告ディスクール分析」、

イン語講師 Ana-María Guerrero 氏、京都外国語大学、中『研究業績中間報告集』第 16 号、財団法人コスメトロジ

山智子講師に厚く御礼を申し上げます。また、本研究に対ー研究振興財団、2007b。

して助成を頂きました財団法人コスメトロジー研究振興財

３）同上、2007b。

団に深く感謝致します。

４）SHIMIZU, Kaho, “The eyes have it but will mascaraboom continue?” , The Japan Times, Tuesday, March（参考文献）

1, 2005. http://search.japantimes.co.jp/cgi-bin/

１）村澤博人、大坊郁夫、趙鏞珍、「日本人と韓国人の化

nn20050301f1.html（2008 年 1 月現在。）

粧観の国際比較研究—男女学生のアンケート調査から」、

５）前出、2007b。

『コスメトロジー研究報告』Vol. 13、財団法人コスメト６）同上。

− 94 −

「聞香」による香りの言語化プロセスと脳内情報構造化機能の解明
理化学研究所脳科学総合研究センター象徴概念発達研究チーム

椎名（日原）さやか、藤井 直敬、入來 篤史
Real world contains enormous environmental information. We receive very diverse information though eachsensory organs or receptors and send to central nervous system, recognizing external environment. The humanbrain seems to be sorting complex information implicitly into simple but structured abstract form. Prefrontal cortex
is known to be a place where abstract information is manipulated. We recorded brain activity by NIRS in PFC from
Koh-Do experts and beginners during Koh-Boku（premium incense）discrimination task. Experts were well trained
sorting subtle and complex koh-boku fragrance into koh-boku names. We found clear difference between two
groups. Experts showed highly organized response pattern in PFC but beginners didn't. We found that PFC canorganize and implement attentive abstract discrimination process, acquired on demand by interacting with automatic
covert processes, which fits to subject’s exact dynamic thinking traces.

１．緒的な状況下で行っている意思決定の神経メカニズムの解明

言を目指すとなると、新たな実験課題の設定が要求される。

思考とは、私達が過去の記憶や経験をもとにして新たなそこで我々は推論の神経メカニズムを解明するため今回結論を作り出す過程と定義され、脳が取り扱っている高次の実験では、“香道”という芸道を導入した。香道は日本

認知機能の一つであり、プランニング、推論、概念形成、文化において嗅覚を入り口とする伝統芸能で、1000 年以判断などの要素から成り立っている。普段、私達は何気な上もの歴史を持ち皇族や貴族により伝承されてきたものでく推論を通し意思を決定しているが、この際、脳は１）過ある（3. Morita）。香道では６種の香木の香りを“聞く”

去の経験を通して得られた知識を参照する、２）多くの仮ことを楽しみ、さらにそれを分類し言語化することが求め説を検証する、３）どの結論が現実の世界を一番合理的にられ、この能力は稽古を積むことで習得していく。初心者解釈できるのか選択する、という作業を行っている。さらは香りを聞くことは出来ても、それを分類、言語化するこに、私達は外部環境から様々な刺激を常に受けているので、とは非常に困難であるが、熟練者は香りを聞く能力が高い

脳は絶えず視覚、聴覚、触覚、嗅覚、味覚などの感覚情報のは当然の事ながら、それを分類し、評価軸のせ、言語的を分析し、必要に応じてこれらの情報も仮説に反映させて表現をすることが可能になる。つまり、後天的学習によりいかなければならない。

嗅覚刺激を過去の記憶と照合しながら分析・分類し、言語思考に関する研究は、機能的核磁気共鳴画像（fMRI）、ポジトロン・エミッション・トモグラフィ（PET）、近赤表現をしてゆくのである。この過程は正に推論の過程なのである。

外線分光法（NIRS）などの非侵襲的脳機能測定法と呼ば香木の香りは、微弱かつ似通っており、聞香は非常に難れるイメージング技術の開発に伴い飛躍的に進み、健常者

しい課題である。例えて言うならば、りんごとみかんを弁が実際に思考している最中の脳活動を計測することが出来別するという簡単なものではなく、香りからりんごの品種

るようになった。そして、推論を始めとする多くの高次認を弁別するようなものである。香道がアロマテラピーや知機能に“前頭前野”が関連していることが判明してきたソムリエの行うテイスティング（4.Castriota Scanderbeg）（1. Fuster，2. Mah）
。しかしながら、従来の研究で用いと異なるのは、言語表現軸が定まっている点である。言語られた課題は、見本合わせ課題のような刺激−反応が比較

評価は、“苦、甘、塩辛い、辛、酸”の５つの五味と呼ば的単純な課題が多く、その一方で私達が日常生活で直面しれる、通常使う味覚的意味とは全く異なる単語を定量的にている問題というのは、複雑かつ重層的であり、より現実

組み合わせて行う。この言語的表現法を用いることにより*熟練者間で香木の香りを共有することができるのである。
Labeling Process dur ing odor
discrimination task, “Listening Kohboku”, in Human prefrontal cortex withnear-infrared spectroscopy

このように感覚情報をもとにした推論プロセスの神経メカ

Sayaka Shiina-Hihara*, Naotaka Fujii,
Atsushi Iriki

熟練者と初心者において、“聞香”中の香りを分類し言語

Laboratory for Symbolic Cognitive
Development, RIKEN Brain Science Instituteていると考えられている前頭前野（5. Fujii, 2003）をター

ニズムの研究に、香道は適した実験課題であると言える。
そこで本研究では、二つのグループ、すなわち、香道の化する過程の局所的脳血流量変化を、抽象的操作を制御し− 95 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

ゲットに近赤外線分光法（NIRS）（6. Watanabe E, 1996,

練 者（30-65 歳、 女 性 10 人 ）、 初 心 者 各 10 人（24-48 歳、

7. Koizumi H, 2001）を用いて計測・比較することで、従男性３人、女性７人）に実験に参加してもらった。近赤外来の研究で知りえることの出来なかった言語を含む、脳の分光法（NIRS、日立 ETG-100）を用い、被験者の頭部に嗅覚情報および高次脳内情報の処理機構の解明を目指した。

照射プローブ、検出プローブ各 10 本（図１A,B）を両側

２．方
２. １

の前頭前野皮質へ対称に装着し、計 20 チャンネルからの法

NIRS 信号（酸化ヘモグロビン量、還元ヘモグロビン量）

被験者を非侵襲的に計測した。計測中、被験者には実験課題と対

右利き健常者を被験者とし、香道歴 10-40 年からなる熟照課題を行ってもらった。

図１
A：実験の模式図……被験者は肘を肘掛に置き NIRS プローブを装着された状態で、香炉を持ち聞香する。
B：各10 本の照射プローブ、検出プローブの配置……番号は記録チャンネル（20 個）を示している。1-10 チャンネルは右前頭葉を、11-20 チャンネルは左前頭葉からの NIRS 信号を計測している。
C：香炉……香炉に灰と熾した炭団を入れ、その上に板（雲母）を乗せ、数ミリ角に切った香木を熱し香りを発散させる。
D：実験課題スケジュール……４種類の香りを聞きそれを記憶する「プライミング期」とプライミング期間中に聞いた香りと現在聞いている香りを比較する「テスト期」から構成される（上段）。被験者にはテスト期は、A-D までの刺激がランダムに渡され、プライミング期中に記憶した香りと、今聞いている香りを比較し、A-D までのどれに該当するかを聞香期（Listening Period; 20 秒）に考える。反応期（Response Period; 10 秒）にはその答えをモニタ上に提示された文字（A-D）を選択・注視することで解答する。
被験者は目前に置かれたモニタに提示される指示に従って課題を遂行していく（下段）。

− 96 −

「聞香」による香りの言語化プロセスと脳内情報構造化機能の解明

２. ２

解析

った。

課題遂行中の酸化ヘモグロビン量（oxy-HB）、還元ヘモ

なお、この実験の成果は８）Fujii et al. で発表されている。

グロビン量（deoxy-HB）を 10Hz で計測し、血流動態の３．結果と考察

指標は総ヘモグロビン量（oxy-HB と deoxy-HB の和）とした。総ヘモグロビン量は、1 試行につき（課題前後も含図２A は、初心者（上段）、熟練者（下段）における課め）、60 秒 間（600samples/ch） 計 測 し、 多 項 式 適 合 法、

題遂行中の５つのポイントにおける総ヘモグロビン量の信移動平均によるノイズ除去、標準化を行った後、16 試行

号強度を示している。両群において課題遂行時にヘモグロ

×20 チャンネル ×600sample のマトリックスの画像化・ビン量が経時的に変化していることがわかる。さらに課題解析を行った。

中のあるポイントで、同系色で構成される縦軸方向もしく

被験者ごとに各試行、各チャンネルの標準偏差（SDt；は横軸方向のバンドが観察された（図２A 縦、横矢印）。

n=16, SDc；n=20）とこれらの平均値を求め、閾値を平これはある試行中もしくは、あるチャンネルにおいて信号

均 値 -2SD と 設 定 し、 こ の 閾 値 以 下 の 値 を 示 し た 試 行、強度の差異が小さいことを意味している。つまり、縦軸方

チ ャ ン ネ ル を そ れ ぞ れ bands in trails（BT）、bands in向のバンド（bands in trails, BT）は、ある試行中に記録

channels（BC）とした。

チャンネル全体がほぼ同じレベルで活動したことを示し、また横軸方向のバンド（bands in channels, BC）は全試行

２. ３

実験課題

中において同一チャンネルが局所的にほぼ同じレベルで活嗅覚（香木）弁別課題：嗅覚刺激は３種類の香木（A-C）

動しているということを示している。

と１種類のコントロール刺激（D）を用いた。それぞれの次に、課題遂行中の上記のバンド（BT、BC）数を初心

刺激は香炉に灰と熾した炭団を入れ、その上に板（雲母）者、熟練者ごと算出し、その分布を見た（図２B ａ−熟練を乗せ、数ミリ角に切った香木を熱し香りを発散させた（図者 , c −初心者、BT；黒、BC；グレー）。その結果、熟練

１C）。課題は、この４種類の香りを聞き、それを記憶す

者では聞香期と反応期に BC が多く現れ、BT はほとんどる“プライミング期− Priming Phase”とプライミング期

現れなかった。さらに、BC の数を半球ごとにプロットす中に聞いた香りと現在聞いている香りを比較する“テスト

ると（図 2 Ｂ -e、黒：左半球、点線：右半球）、BC は聞期− Test Phase“から構成される（図１D）。被験者は目香中期から試行終了まで右前頭前野で顕著に増加してい前に置かれたモニタに提示される指示に従い課題を遂行した。一方、初心者において BT は課題中全般、BC は聞香ていく。

中に現れた。課題の正答率は熟練者（68％）、初心者（58まず、“プライミング期”（4 試行）では、A-D の 4 種類％）であり、正答率に大差はなかった。BC は BT と異なり、の香炉を順番に聞いていく。被験者は香炉を手渡され（準局所的な脳活動を示す指標である。従って、これらの結果

備期）、スタートシグナル後 20 秒間香を聞く（聞香期）。

は、初心者は課題中前頭前野全体的に使用しているのに対反応期には刺激と対応したモニタ上のアルファベット

し、熟練者においては右前頭前野を組織的様式で使ってい（A-D）を注視する。20 秒の待機期後、次の香が手渡される。

ることを示唆している。

被験者は同様の手続きで各試行を遂行し、A-D の 4 種類

なぜこのような反応差が２群の間で生じたのであろうか？初心者の嗅覚刺激物質に関する知識、経験の少なさがの香りを記憶する。
次の“テスト期“（12 試行）では、A-D までの刺激がラ影響しているのだろうか？この問いに答えるため、対照実

ンダムに選ばれ、被験者へ渡される。被験者は渡された香験として味覚（お茶）弁別課題を行った。お茶を弁別刺激りを聞き、プライミング期中に記憶した香りと、今聞いてとして利用した理由は、日本人はお茶を日常的に飲んでいいる香りを比較し、A-D までのどれに該当するかを聞香

るので、お茶に対する経験・判別能力は被験者間で差異が期に考える。反応期にはその答えをモニタ上に提示された少ないと考えたからである。刺激の特徴を抽象的に操作す文字（A-D）を選択・注視することで解答する。待機期後、るという点に関しては、味覚の弁別過程も香木の弁別過程

再び別の香炉が提示され、被験者は同様に香木の種類を答とほとんど変わらないはずである。
実 験 課 題 と 同 様 に、 対 照 課 題 遂 行 中 の バ ン ド（BT、えていく。

BC）数を算出しその分布を図２B に示す（ｂ−熟練者 ,

２. ４

対照課題

ｄ−初心者、BT；黒、BC；グレー）。両群とも BC が出

味覚（お茶）弁別課題：対照課題としてお茶の弁別課題

現するのに対し、BT はほとんど現れなかった。また、我々を（香道熟練者４人、初心者 3 人）実験課題終了後に、実の予測通り、課題の正答率は両群ともに 100％だった。こ験課題と同様の手順で行った。味覚刺激には３種類のお茶の結果は、刺激の感覚種に依存せず、過去の経験、知識をを使用し、プライミング期に 3 試行、テスト期に６試行行もとにした推論過程において前頭前野の活動は NIRs 信号− 97 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

図２
A：課題実行中の５つのポイントにおける総ヘモグロビン量のマッピング
それぞれのチャンネルの総ヘモグロ
ビン量の信号強度がピクセルの色によって示されている。上段が初心者、下段は熟練者である。横軸はトライ
アル、縦軸はチャンネルを示す。矢印は同色の色で構成されたバンドを示している。
B：BC、BT の分布
横軸は時間、縦軸は 1 秒間のバンドのカウント数である。ダークグレー、
ライトグレーの陰影はそれぞれ聞香
期、反応期を示している。（a,c）：課
題中のバンドカウント、a：熟練者、c：
初心者（b,d）対照課題中のバンドカ
ウント b: 熟練者、d: 初心者。（e）
熟練者における左右半球ごとの課題
中のバンドカウント− 98 −

「聞香」による香りの言語化プロセスと脳内情報構造化機能の解明

Res, 133（1）, 66-70, 2000.

として検出できるということを示している。

４．総

２）Mah, L., Arnold, M. C., & Grafman, J. Impairment

括of social perception associated with lesions of the

推論は最も基本的な認知的脳機能の一つであり、私達は現実世界における意思決定のほとんどを推論を通して行っ

prefrontal cortex. Am J Psychiatry, 161（7）, 1247-1255,2004.

ている。従来、推論過程の神経機構の解明は非常に難しい

３）Morita K. The Book of Incense: Enjoying theとされてきたが、今回私達は香道を利用し、適切な課題設

Traditional Art of Japanese Scents. Kodansha

定を作り出すことができた。その結果、“聞香—嗅覚弁別International, TOKYO, 1992.

課題”に前頭前野皮質が香道の初心者、熟練者ともに活動

４）Castriota-Scanderbeg et al. The appreciation of wine

しているだけでなく、初心者では課題遂行中全般に前頭前by sommeliers: a functional magnetic resonance study

野皮質全体で、熟練者では一過性かつ局所的に右前頭前野of sensory integration. Neuroimage. 25（2）:570-8, 2005.

で嗅覚情報の推論処理を行っていることが示唆された。ま５）Fujii, N., Graybiel AM. Representation of action

た、熟練者の前頭前野のみが、聞香中にダイナミックな修

sequence boundaries by macaque prefrontal cortical

飾を受けていることから、この活動様式は仮説的推論過程

neurons. Science, 301（5637）:1246-9, 2003.
６）Watanabe E, Yamashita Y, Maki A, Ito Y, Koizumiの神経活動を反映しているものと考えられる。

H（1996）Non-invasive functional mapping with multi-

謝辞channel near infra-red spectroscopic topography in

香道に関し技術的なご指導、ご協力を頂いた山田氏、亀humans. Neurosci Lett. 205: 41-44, 1996.

山氏、渡辺氏に深謝致します。また、本研究を遂行するに

７）Koizumi H, Maki A, Yamamoto T. Noninvasive

当たり、御支援頂きました㈶コスメトロジー研究振興財団

higher-order brain-function imaging by near-infrared

及び共同研究者に感謝いたします。

spectroscopy. Rinsho Shinkeigaku 41: 1201-1206, 2001.
８）Fujii et al. Prefrontal activity during koh-do incense（参考文献）

discrimination. Neuroscience Research 59: 257-264, 2007.

１）Fuster, J. M. Executive frontal functions. Exp Brain− 99 −

中高年者の化粧行動の変動様態と前頭葉認知機能との関連に関する神経心理学的研究
関西福祉科学大学健康福祉学部

八 田

武 志

The purpose of this study was to address the relationship between cosmetic behavior and higher brain functionof middle and aged female people in order to examine the validity of Hatta’s aging model (2007). Participants were181 community dwellers in rural town (their age ranged from 39 to 91 years old). They had a cognitive test battery
as a part of medical checkup. The used cognitive test was Nagoya University Cognitive Assessment Battery (NUCAB) that mainly consisted of items for the examination of prefrontal brain function. Results of habitual cosmetic
behavior with aging suggested middle and old women quitted the makeup behavior in the first stage and thenthe care cosmetic behavior such as skin care in the second stage. Results of cognitive function showed that theparticipants habitually having the care cosmetic behavior were higher than the participants habitually did not inseveral cognitive tests. These results seem to support Hatta’s aging model and suggest strong relationship between
sustaining of cosmetic behavior and decline of higher brain function in the aged people.

１．緒る中高年者に前頭葉機能が優れる印象を強く感じてきた。

言

化粧行動は発達の比較的遅い時期に獲得する行動であり、本研究の目的は、中高年者の化粧行動と前頭葉認知機能との関連を検討することである。この検討は筆者が提唱すこのことが科学的手続きで確認できると、筆者の提唱する加齢モデルに合致しモデルを強化できることになる。

る加齢と認知に関するモデルの検証として位置づけられる

女性が化粧行動を獲得する過程について、1989 年に 15もので、筆者らは 26 年目を迎える北海道 Y 町での住民検〜 64 歳の女性 4,903 名を対象に実施された調査では、女診に 7 年前から心理学班として加わり、毎年約 500 名を対性が最初に使用した化粧品として最も回答が多いのは化粧

象に前頭葉機能の評価を実施してきた。このコホート研究

水で、次いで乳液、口紅、クリーム類、リップクリームでには、内科、整形外科、泌尿器科、眼科、耳鼻科が参加すあった（霜田 , 1993）。つまり、女性の多くはまず、化粧る大規模なものであり、心理学班が参加している点に特徴

水や乳液などケアに相当する化粧行動を身に付け、そのあを有している。これまでの研究からは、生活習慣と前頭葉とで口紅やマスカラなどメーキャップに相当する化粧行動

機能との関連や前頭葉機能と筋・運動系機能評価との関係を獲得する。それゆえ、休耕田モデルに従って予測すると、が明らかとなっている。Illinois 大学の Wilson らが「高齢女性は年を取るにつれて化粧をしなくなるが、メーキャッ者の認知活動と脳機能保存モデル（Stern,2007）」を提唱

プ、ケアの順にやめていくと考えられる。

する以前から、筆者らはコホート研究での様々な分野の資以上のことから、本研究では、年齢と化粧行動の関係に料を総合評価する過程で、①「発達段階の遅い時期に獲得ついて、加齢に伴い化粧をやめていく過程において、女性した行動から機能低下が始まる」、②「遅い段階に獲得しはケアよりもメーキャップを先にやめることが推定できる。

た行動を維持すると加齢に伴う機能低下は鈍化する」とい

そこで、高齢者を対象にした本調査では習慣的にケアをう加齢モデル（休耕田モデル）を提唱してきた。言語関連

施す女性はメーキャップを施す女性よりも多いと予想する

機能では短歌や俳句、文章を書く高齢者は前頭葉機能や筋・（仮説 1）。さらに、高次脳機能の衰退は、習慣的にメーキ

運動系機能は保存される傾向が認められたからである。こャップを施す女性の方がそうでない女性よりも少なく、ケこで報告する研究は中高年者の化粧行動を対象に筆者の加アを施す女性のほうがそうでない女性よりも少ないと予想

齢モデルの妥当性を検証することを目指したものである。

する（仮説 2）
。これらの仮説を以下に記述する調査研究

これまでの中高年者（40 歳〜 89 歳）を対象に前頭葉機能によって検証した。

検査を実施した経験から、一般に、化粧行動を維持してい

２. 方

法

Neuropsychological study on the relation
between cosmetic behavior and frontal
lobe cognitive function in the middle
and upper-middle age Japanese women.

2. 1

Takeshi Hattaの参加に同意した女性 181 名であった。対象者の年齢はKansai University of Welfare Science,
Department of Health Science, School of
Health Welfare

参加者

対象者は北海道 Y 町が主催する住民検診（2006 年度）において、高次脳機能検査を受診した者のうち、本調査へ
39 〜 91 歳で、平均年齢は 63.13（SD=11.08）歳であった。
対象者は麻痺および運動機能に関する神経心理学的障害は− 100 −

中高年者の化粧行動の変動様態と前頭葉認知機能との関連に関する神経心理学的研究有しておらず、注意機能、記憶機能、見当識検査により認点の得点を割り当てた。
注意機能と実行機能を検査するための項目として知症の疑いはないと判定された人々であった。

Stroop 課題を用いた。この課題では、赤・青・黄・緑で

2. 2

手続き

塗りつぶされた直径 2.5 ㎝の円が印刷されたドット図版の本調査では、2006 年 7 月 10 日から 27 日までの期間にあと、ひらがなで「あか」「あお」「き」「みどり」の文字

住民検診の希望者に対して調査票を郵送し、参加に同意でがそれと一致しない色で印刷された Stroop 図版を用いて、きる者について、検診当日に記入した調査票を持参するよそれぞれ印刷の色をできるだけ早く、かつ正確に回答するう求めた。検診当日、調査への参加に同意した住民検診参よう求め、時間とエラー数を測定した。

加者は住民検診の一環としての高次脳機能検査を受診した。

言語機能を検査するため、言語流暢性課題を用いた。こ
の課題は文字流暢性と意味流暢性からなり、文字流暢性の

2. 3

質問項目

場合「あ」か「か」のいずれかを個人に割り当て、割り当

調査票において測定した項目は化粧行動に関する項目

てられた文字で始まる普通名詞をできるだけ多く挙げるよで、「特別な用事がないとき」「買い物へ出かけるとき」「友う求めた。意味流暢性の場合「動物」か「スポーツ」のい達に会うとき」「法事や結婚式のとき」の各状況において、ずれかを個人に割り当て、そのカテゴリーに相当する名詞

洗顔・化粧水・乳液による基礎化粧とファンデーション・をできるだけ多く挙げるように求める。いずれの課題にお白粉による下地化粧、口紅・頬紅・眉墨による仕上げ化粧

いても一度挙げた名詞は挙げないよう教示し、重複した分を「する」と「しない」の 2 件法で回答を求めた。基礎化を除く正答数を得点とした。

粧は「ケア」に相当し、下地化粧と仕上げ化粧は「メーキ注意機能と実行機能を検査するための項目として

ャップ」に相当する。ただし、本研究では習慣的な化粧行

D-CAT を用いた（八田・伊藤・吉崎 ,動の効果について検討するため、「特別な用事がないとき」の課題では、ランダムに並んだ数字の列のなかから指定さ

2001,

2006）
。こ

の化粧行動に関する項目のみを分析の対象とした。

れた数字をそれぞれ 1 分間にできるだけ早く、かつ見落としなく抹消することが求められる。課題は 3 試行からなり、

2. 4

課題

第 1 試行では 1 つの数字、第 2 試行では 2 つの数字、第 3

これまで多くの神経心理学的認知検査は注意機能、言試行では 3 つの数字が抹消の対象となる。この課題では、

語機能、記憶機能、空間能力、および実行系機能に関する各試行において検索した数字の個数を作業量として測定し検査を含むものが多い。今回の住民検診で用いた認知機能

た。さらに、検索した数字のうち、抹消できていない対象

検査バッテリ（名古屋大学認知機能スクリーニング検査：の個数を抹消対象となる数字の個数で割った者を見落とし

NU-CAB）も同様の構成で、これらの機能を検査するため率として測定した。

にさまざまな課題が含まれている（八田 , 2004）。本研究３. 結で検討した検査課題は NU-CAB の中から選択した、散文
記憶課題、Money 道路図検査、Stroop 検査、言語流暢性検査、D-CAT である。

3. 1

果

化粧行動

習慣的にケアとメーキャップを実施している人数の割合

記憶機能を検査するため、Wechsler 記憶検査の論理記について検討するため、参加者のうち各化粧行動のすべて

憶項目にある散文記憶課題を用いた。この課題では、25について回答した人を分析の対象とし、コクランの Q 検の文節からなる短文を検査者が 2 回読み上げた後、参加者定を行った。分析の結果、化粧行動の効果が有意であった。

はそれを再生する。通常、この再生は直後と遅延条件の両つぎに各化粧行動間の比較を行うため、マクニマー検定を方で実施されるが、過去に行われたこの住民検診において、行った。その結果、基礎化粧をすると回答した人数は下地直後再生と遅延再生条件の成績がかなり高い相関関係（r化粧、仕上げ化粧をすると回答した人数よりも有意に多か= 0.92）にあることから（八田・永原・岩原・伊藤 , 2005）、った（ps<.01）。下地化粧をすると回答した人数と仕上げ

直後再生のみを実施し、0 〜 25 点の得点を割り当てた。

化粧をすると回答した人数に有意差はなかった。

空間機能検査項目として、Butters, Soeldner and Fedio（1972）による Money 道路図検査を用いた。この検査課

3. 2

年齢と化粧行動

題では、練習試行と本試行からなり、それぞれ 2 ㎝幅の線

年齢と化粧行動の関係について調べるため、参加者のう分が描かれており、練習試行では 4 箇所の曲がり角、本試

ち各化粧行動の項目のいずれかひとつでも回答した人を分

行では 12 箇所の曲がり角が左右ランダムに存在する。検析対象とした。化粧行動ごとに「する」と回答した人を査者は、被検査者にこの線分を道路とみなし、左右どちら化粧する群、「しない」と回答した人を化粧しない群とし、に曲がるかを報告するよう求め、正解を 1 点とし、0 〜 12

基礎化粧要因と下地化粧要因、仕上げ化粧要因を設けた。

− 101 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

表１

3. 4

化粧行動ごとの各群のサンプル数

基礎化粧

高次脳機能差と化粧行動

する

しない

合計

高次脳機能における化粧行動の効果を検討するため、表

144

15

159

1 で示したように化粧行動ごとに「する」と回答した人を

下地化粧

78

66

144

化粧する群、「しない」と回答した人を化粧しない群とし、

仕上げ化粧

63

77

140

基礎化粧要因と下地化粧要因、仕上げ化粧要因を設けた。
各化粧要因を独立変数とし、高次機能検査におけるさまざ
まな課題得点について分散分析を行った。

表 1 は各群のサンプル数を示したものである。各化粧要因

散文記憶課題の得点を従属変数として分散分析を行っを独立変数とし、年齢を従属変数として分散分析を行った
ところ、下地化粧と仕上げ化粧要因の効果が有意で、これたところ、基礎化粧要因の効果が有意傾向であった（Fらの化粧行動をすると回答した人はそうでない人より年齢（1, 158）=2.85, p=.09）。基礎化粧をすると回答した人はそが高かった（F（1, 143）= 5.43, p<.05; F（1, 139）=8.49, p

うでない人よりも散文記憶課題の得点が高かった（図 1）。

<.01）。基礎化粧要因の効果は有意でなかった。

また、Money 道路図検査における得点を従属変数として分散分析を行ったところ、基礎化粧要因の効果が有意であ3. 3

年齢と高次脳機能った（F（1, 158）=5.56, p<.05）。

年齢と高次脳機能との関連について検討するため、本図１に示したように、基礎化粧をすると回答した人はそ

調 査 へ の 参 加 者 181 名 を 対 象 に、 年 齢 と 散 文 記 憶 課

うでない人よりも Money 道路図検査課題の得点が高かっ

題、Money 道路図検査、言語流暢性課題における得点、た。言語流暢性課題における得点を従属変数として分散分

Stroop 課題における時間とエラー数を要因として相関分析を行ったところ、文字流暢性課題において基礎化粧要因析を行ったところ、各課題の得点は年齢と負の相関関係にの効果が有意で（F（1, 158）=14.42, p<.01）、意味流暢性あり、Stroop 課題における時間とエラー数は年齢と正の課題において有意傾向であった（F（1, 158）=2.82, p= .09）。

相関関係にあることが示された（表２）。

基礎化粧をすると回答した人はそうでない人よりも文字流
暢性と意味流暢性課題の得点が高かった（図 1）。

D-CAT に各試行の作業量と見落とし率、年齢を要因として相関分析を行ったところ、年齢は作業量と負の相関関

さらに、Stroop 課題における時間とエラー数を従属変係にあり、見落とし率と正の相関関係にあることが示され数として分散分析を行ったところ、ドット図版と Stroop

た（表 3）。これらの結果は、年齢が高いほど高次脳機能

図版の時間に関して基礎化粧要因の効果が有意であった。

検査における得点が低く、作業に時間を要し、エラー数も基礎化粧をすると回答した人はそうでない人よりも課題多いことを示している。

に要する時間が短かった（図 2）。ドット図版のエラー数

表２ 年齢と散文記憶課題、Money 道路図課題、Stroop 課題、言語流暢性課題の成績との相関関係
１．年齢
２．散文記憶３．Money道路図
４．文学流暢性
５．意味流暢性
６．ドット図版・時間
７．ドット図版・エラー
８．Stroop図版・時間
９．Stroop図版・エラー

１

２

３

４

５

６

−.422**−.391**−.212**−.441**.521**.090.535**.323**.421**.278**.490**−.498**−.144−.481**−.361**.214**.355**−.373**−.136−.359**−.314**.357**−.255**−.047−.262**−.117−.543**−.173*−.481**−.239**.287**−.649**−.382**

７

８

.121
.125

.724****p<.01. *p<.05.

表３ 年齢とD-CAT課題の成績との相関関係
１．年齢
２．作業量（第１試行）
３．見落とし率（第１試行）
４．作業量（第２試行）
５．見落とし率（第２試行）
６．作業量（第３試行）
７．見落とし率（第３試行）

１

２

３

４

５

６

−.629**.356**−.609**.279**−.565**.376**−.198**.839**−.325**.747**−.423**−.235**.226**−.249**.281**−.170*.881**−.316**−.140.609**−.234****p<.01. *p<.05.

− 102 −

中高年者の化粧行動の変動様態と前頭葉認知機能との関連に関する神経心理学的研究

20

しない
する

16

300

12

200

8

150

4

100

0

散文記憶

Money 道路図

文字流暢

意味流暢

しない
する

50
40

0

作業量 1
図３

作業量 2

作業量 3

作業量における基礎化粧の効果

基礎化粧を施す女性よりも少ないことを示している（仮説1 を支持）。このことから、女性は年を取るにつれてメーキャップをしなくなるが、ケアは継続されやすいと思われ

30
20
10
0

する

50

図１ 散文記憶、マネー道路図、言語流暢性課題における基礎
化粧の効果

70
60

しない

250

る。また、本研究において、下地化粧と仕上げ化粧をすると回答した人はしないと回答した人よりも高齢であった。
このことは習慣的にメーキャップをしている人の年齢がしドット・時間図２ていない人よりも高いことを意味し、現在、高齢である女

Stroop・時間

性ほど化粧行動は習慣化していると思われる。

Stroop 課題の時間における基礎化粧の効果

第二の目的について検討する前に、まず、年齢と高次脳について下地化粧要因と仕上げ化粧要因の効果が有意であ

機能の関係について調べた。本研究の結果は、年齢が高いった（F（1, 143）=6.714, p< .01; F（1, 139）=4.80, p<.05）。

人ほど Money 道路図課題、言語流暢性課題に関する得点

下地化粧と仕上げ化粧をすると回答した人はしないと回答

が低く、Stroop 課題において時間を要し、エラー数も多く、した人よりもエラー数が多かった。

D-CAT 課題において作業量が少なく、見落とし率も高い

D-CAT における第 1 〜 3 試行のそれぞれの作業量と見落とし率についても従属変数として分散分析を行った。分ことを示しており、加齢に伴い高次脳機能は低下することを示している。

析の結果、全試行の作業量について基礎化粧要因の効果がつぎに、基礎、下地、仕上げの各化粧行動が高次脳機有意であった（F（1, 158）=6.12, p<.05; F（1, 158）=7.92,

能の低下を抑制することについて検討した。本研究の結果

p<.01; F（1, 158）= 7.79, p<.01 ）。

は、これらの化粧行動のうち、おもに基礎化粧行動の効果

図３に示したように、基礎化粧をすると回答した人はしが顕著であることを示した。具体的には、①基礎化粧をすないと回答した人よりも作業量が多かった。第 1 試行と第る女性はそれをしない女性よりも散文記憶課題、Money

3 試行の見落とし率について、基礎化粧要因の効果が有意

道路図課題、文字 ･ 意味流暢性の両言語流暢性課題におけであった（F（1, 158）=11.33, p<.01; F（1, 158）=11.15, p<

る得点が高かった。また、② Stroop 課題においても、基.01）。表 4 は化粧行動ごとの各試行における見落とし率で礎化粧をする女性はそれをしない女性よりも課題遂行に要ある。基礎化粧をすると回答した人はしないと回答した人する時間が少なかった。さらに、③基礎化粧をする女性はよりも見落とし率が低かった。さらに、第 2 試行の見落と

D-CAT 課題における作業量が多く、見落とし率も低かっ

し率について下地化粧要因と仕上げ化粧要因の効果が有意た。これらのことから、基礎化粧を習慣的に行う女性は高で（F（1, 143）=4.13, p<.05; F（1, 139）=4.69, p<.05）、第次脳機能に関する検査課題の成績が総じて良好であるとい3 試行において下地化粧の効果が有意傾向であった（F（1,える（仮説 2 を支持）。

143）=3.13, p ＝ .08）
。下地化粧や仕上げ化粧をすると回本研究では、加齢に伴い脳機能は低下することや基礎化

答した人はしないと回答した人より見落とし率が高かった。

粧をする群とそうでない群に年齢差が見られないことが示４．考されていることから、基礎化粧を行うことは高次脳機能の察低下を遅延させると思料できる。

本研究の目的は、第一に加齢に伴う化粧行動について明

八田（2008）は、加齢に伴う認知機能の変遷を説明する

らかにし、第二に、化粧行動が認知機能に及ぼす長期的な休耕田モデルにおいて、獲得が遅い認知機能や行動様式ほ影響を検討することであった。第一の目的について、本研ど早くに衰退することを指摘しており、さらに、そうした究の結果は、習慣的に下地化粧や仕上げ化粧を施す女性が衰退は前頭葉機能の活動様態によって遅延されると論じて− 103 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

いるが、本研究の結果は、基礎化粧行動について資料の分交わされた協定に基づく名古屋大学医学部倫理委員会の承析でもこのモデルを支持するものであった。化粧行動は後認を得た住民検診事業によるものであり、代表者である浜天的に獲得される行動であり、それは基礎化粧に相当する

島信之教授および検診チームの皆さんと保健福祉課職員、

ケア、下地化粧や仕上げ化粧にあたるメーキャップの順に

参加住民の皆さんの協力に深謝します。

獲得される。また、化粧行動は前頭葉による高次脳機能が大きく関与する行動であり、こうした行動が習慣化される（引用文献）

ことは、日々、前頭葉機能を活動させる機会が生まれるこ

１）阿部恒之 化粧の心理学 Fragrance Journal, 20, 55-61,とを意味する。地方農漁村に在住する高齢者女性を対象と1992.

した本研究の結果は、習慣的にメーキャップはしないが、

２）阿部恒之 スキンケアへの期待の変遷と心理学的効果

ケアをする人が多く、ケアをする人はそうでない人よりも大坊郁夫（編）化粧行動の社会心理学：化粧する人間の高次脳機能が低下していないことを示しており、加齢に伴こころと行動 シリーズ 21 世紀の社会心理学 9 北大路書

い女性はメーキャップ、ケアの順に化粧行動をやめ、習慣的に化粧行動を行う人は前頭葉機能の低下が遅延されると解釈できる。

房 Pp.148-157, 2001.
３）Butters, N., Soeldner, C., and Fedio, P.. Comparisonof parietal and frontal lobe spatial deficits in man:

ただし、化粧行動が高次脳機能の低下を遅延させるという影響は基礎化粧行動に限定されたもので、下地化粧や仕上げ化粧行動が高次脳機能に及ぼす影響はほとんど示されなかった。むしろ、下地化粧や仕上げ化粧をする人はそれをしない人よりも Stroop 課題のドット図版におけるエラー率が高く、D-CAT 課題にける見落とし率が高かった。
しかし、本研究において、下地化粧や仕上げ化粧をする群
はそれをしない群に比べて年齢が有意に低かった。それゆえ、本研究で示された下地化粧や仕上げ化粧による効果はExtrapersonal vs personal （egocentric） space.
Perceptual and Motor Skills, 34, 27-34, 1972.
４）藤井紀男題

高次脳機能障害支援モデル事業の現状と課

リハビリテーション研究 ,５）八田武志116,7-12, 2003.

脳のはたらきと行動のしくみ

医歯薬出版，

2003.
６）八田武志

住民検診を対象とした認知機能検査バッ

テ リ（NU-CAB） 作 成 の 試 み

人 間 環 境 学 研 究、2,

15-20, 2004.

年齢の効果とも推察されるので、今後の詳細な検討が必要

７）八田武志 「記憶のはたらき・注意する力・言葉を操る」である。また、基礎化粧をする群としない群におけるサン

機能を維持するために。唐沢・八田（編）幸せな高齢

プル数に偏りがあった。このことは、本研究において示された化粧行動の効果に直結する問題であり、サンプル数を増やして再度検討する必要があるだろう。また、本研究の対象者は、住民検診という公の場に自発的に参加している者としての生活、ナカニシヤ出版 （印刷中）, 2008.
８）八田武志・伊藤保弘・吉崎一人
能スクリーニング検査

D-CAT：注意機

改訂版（株）FIS, 2006.

９）八田武志・永原直子・岩原昭彦・伊藤恵美

中高年者

人々であり、こうした人々は基本的には認知的機能も高いを対象とする単語記憶・散文記憶の基準値について

カテゴリーに属すると思われる。今後の課題は、こうした間環境学研究、3,

場に現れない人々を含む一般的な高齢女性を対象に化粧行

人

7-12, 2005.

10）浜治世・浅井泉 メーキャップの臨床心理学への適用
資生堂ビューティーサイエンス研究所（編）化粧心理学

動の効果を検討することである。
本研究は、加齢に伴い、女性がメーキャップ、ケアの順

フレグランスジャーナル社 Pp.346-358, 1993.

に化粧行動をやめていく傾向にあることと、女性がケアを

11）伊波和恵・浜治世 高齢女性と化粧 ‐化粧の臨床心理

習慣的に行うことは高次脳機能の低下を遅延させることを学的適用の方法および実践‐ 繊維機械学会誌 , 53（6）,示しており、アンチ・エイジングの観点から化粧行動は認222-228, 2000.

知機能にとって有効な手段であるといえる。また、加齢と12） 永 尾 松 夫

認知機能の関係を説明するうえで、八田の休耕田モデルは133-144, 1983.

妥当であることが示唆された。

女 性 に お け る 化 粧 意 識 化 粧 文 化 , 8,13）霜田道子 化粧水の使い心地 資生堂ビューティーサイ
エンス研究所（編）化粧心理学 フレグランスジャーナ謝

辞ル社 Pp.59-65, 1993.

本研究を実施するにあたりご支援をいただいた㈶コスメ
トロジー研究振興財団に感謝いたします。本研究で用いた

14）Stern, Y. Cognitive reserve: Theory and applications.
New York: Tylor and Francis, 2007.

資料の一部は北海道Ｙ町保健福祉課と名古屋大学との間で− 104 −

人前化粧における意識

岡山大学大学院社会文化科学研究科

塩 田

真友子

To makeup in public places has become common recently in Japan. In this study, the consciousness both thedoer and the viewer of such behavior were investigated. In Study 1, the correlation between the behavior to makeup
in public places or not several psychological scales were investigated. As a result, such behavior was significantly
correlated with public self-consciousness, public other-consciousness, and the frequency of makeup in daily life.
In short, those who are highly concerned with self and other’s appearance, and those who makeup in daily life
frequently tend to makeup in public places. Interestingly, Study 1 found that to value public manner and shame
weren’t correlated to such behavior. In Study 2, the difference of the viewer’s consciousness by generation of thedoer and by degree of makeup was investigated. As a consequence, participants rated more negatively to makeup
heavily than lightly. And, participants rated more permissively to same generation than different generation.
Within different generation, they rated more permissively to lower generation than to older generation. This study
suggests that to makeup in public places isn’t correlated with moral and shame. And consideration on the factor ofyouth will be needed.

１．緒

化粧によって得られる満足感には化粧中に得られるものと言

化粧後に得られるものがあり，前者が対自的，後者が対人

化粧とは，一般に女性にとって日常的かつ重要な行為で的なものであると述べている７）。対自的効果は私的空間にある。村澤（2001）は，化粧を「ある集団＝社会がもつ美おいて，対人的効果は公的空間において得られるものであ

意識に基づいて顔やからだに意図的に手を加えて，外見的ると考えられる。化粧をする人にとっては，化粧前の顔，にも内面的にもそれまでの自分とは異なる自分になろうと

つまり素顔は私的なもの，化粧後の顔は公的なものと捉え１）するための行為」としている。ここで言及されているよ

られている。素顔から化粧後の顔へ変化することによって，

うに，化粧は対人的な作用だけではなく対自的作用をも持

変身願望の充足や気分の高揚などの対自的効果が得られる

つ行為である。このことを示す研究はいくつかみられる（e.

一方，化粧後の顔を他者に提示することによって自己顕示

g. 松井・山本・岩男，1983

２）

３）

欲求の充足や積極性の上昇などの対人的効果が得られると

５）；岩男・菅原・松井，1985

４）

；
；

考えることができる。菅原（2001）は，化粧が私的空間と宇山・鈴木・互，1990 ６））。それらによると，化粧行動は「外公的空間を明確に区別し，両空間を往来する際のスイッチ

見的評価の上昇」や「自己顕示欲求の充足」，「社会的役割

ングの役割を果たしていると述べている８）。

松井・岩男・菅原，1985；菅原・岩男・松井，1985

への適合」（松井・山本・岩男，1983），「積極性上昇」（宇山・

しかし近年，この理論にあてはまらない行動が見られる

鈴木・互，1990）といった対人的効果と，「自己愛撫の快感」

ようになった。電車やバスの中といった公的空間での化粧や「変身願望の充足」等の「化粧行為自体がもつ満足感」（松

行動である。前述のように，本来化粧過程は私的空間にお井・山本・岩男，1983）や「リラクゼーション」，「気分のいて見られるものであったが，公的空間においてそれを露高揚」（宇山・鈴木・互，1990）といった対自的効果を有呈させるという行動が盛んに行なわれるようになった。こすることが報告されている。松井・山本・岩男（1983）はの行動がマナー違反であると取り沙汰されるようになり，

それら２つに加えて，「積極的な自己表現や対人行動」，「自それに関する調査も行われるようになった。中央調査社

信や自己充足感」といった心の健康に作用する要因を示し（2001）が電車内のマナーに関する意識調査を行なったとている。

ころ，電車内での化粧について調査対象者の 66.0％が「腹このように，化粧行動は主に対人的効果，対自的効果と立たしい」，「気になる」と回答していた９）。平松（2006）は，いう２つの効用を有するとされている。岩男（1993）は，

このような公衆場面での化粧行動の許容の構造を検討した
結果，公衆場面での化粧行動の許容には，外的他者意識，

Consciousness of makeup in public
places.

公的自意識や私的自意識が影響することを見出した 10）。

Mayuko Shiota

ようなものなのであろうか。これについて，心理学的に統Okayama University Graduate School of
Humanities and Social Sciences

では，公衆場面における化粧行動の行為者の意識はどの制した調査を行った研究は少ない。そこで本研究では，大学生を対象として幾つかの心理尺度を用い，公衆場面での化粧行動を規定する要因を検討する（研究１）。具体的には，− 105 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

仮想的有能感（速水，2006）11），行動基準（菅原・永房・
12）

佐々木・藤澤・薊理，2006）

表１，恥意識（永房，2000），

公共の乗り物での化粧行動

公的自意識（菅原，1984）14），他者意識（辻，1993）15），

化粧への興味・関心
流行への関心仮想的有能感行動基準
地域的セケン
仲間的セケン
自分本位
他者配慮
公共利益
恥意識
自己内省
同調不全
社会規律違反視線感知
公的自己意識他者意識
内的他者意識外的他者意識
対人志向性
対人的関心・反応性
個人主義傾向
普段の化粧頻度

対人的志向性（斉藤・中村，1987）16） の６つの尺度を用いる。人前での行動には公共マナーを重視する規範意識
や，それに違反した際に生じる恥意識なども関連すると考えられるため，行動基準（菅原他，2006），恥意識（永房，2000）を採用した。公的自意識（菅原，1984），他者意識（辻，1993）については先行研究を鑑み，さらに他者に対する関心を測定する対人志向性（斉藤・中村，1987）のうち，対人的関心・反応性尺度と個人主義傾向尺度を採用した。そして，社会的迷惑行為を行う者は自分に直接関係のない人間を軽視している（速水，2006）という可能性が考えられるため，仮想的有能感（速水，2006）を採用した。

２．調
2・1

査

研究１

2・1・1

方法

調査協力者

19 歳〜 29 歳（M=19.65 歳，SD=1.30）の大

質問紙は以下の内容で構成された。①仮想的

.181
.152
.019
−.101
.087
.156
.075
−.012
.
−.026
.118
−.038
−.079
.234*
.080
.190*
.091
.008
.243***p < .05 **p < .01

学生 144 名（女性 130 名，男性 14 名）。
調査内容

公共の乗り物での化粧行動と他の変数との相関係数13）（表１）。その結果，公共の乗物での化粧行動と公的自己意

有能感（速水，2006）11 項目，②行動基準（菅原ほか，

識（r=.234, p<.05），外的他者意識（r=.190, p<.05），普段

2006）５因子 20 項目，③恥意識（永房，2000）４因子の化粧頻度（r=.243, p<.01）との間に弱い正の相関が見ら

17 項目，④公的自己意識（菅原，1984）11 項目，⑤他れた。この結果より，公的自意識が高い，つまり自己の外者意識（辻，1993）２因子 11 項目，⑥対人志向性（斉見や言動に向ける注意が高い人，外的他者意識が高い，つ藤・中村，1987）より対人的関心・反応性，個人主義傾まり他者の外見に対する関心が高い人，普段の化粧頻度が向の２因子８項目，⑦化粧への興味・関心を尋ねる１項

高い人ほど公衆場面において化粧行動をすることが示され

目，⑧流行への関心を尋ねる１項目，⑨公共の乗り物でた。

の化粧行動，⑩公共の乗り物での化粧を自分一人でもす

しかし，本研究で設定した仮想的有能感や行動基準，恥るのか，誰かと一緒でなければしないのか，⑪普段の化

意識と公共の乗物での化粧行動との相関は見られなかった。

粧頻度，⑫公共の乗り物での化粧行動についてどう思う

この結果より，大学生においては人前で化粧をすることと，か（自由記述）を尋ねた。①〜⑧については，「１：全

公共マナーを重視することや恥ずかしいという意識，無条

くあてはまらない」から「５：よくあてはまる」の５段

件に他者を軽視する意識とは関係がないということが示さ

階評定を求めた。⑨については，「よくする，たまにする，れた。

全くしない」，⑪については，「ほぼ毎日，たまに，めっ
たにしない」の３段階で評定を求め，それぞれ頻度の高い方から３−１点を得点化した。
調査時期
手続き

2・2

研究２

研究１では，公衆場面での化粧行動の行為者の意識につ2007 年 1 月

いて検討したが，研究２においてはそのような行為の観察

個別記入式の質問紙により，大学の講義時間中に者の意識について検討する。平松（2006）は，当該行為の配布し，その場で回答を求め回答後回収した。回収率は許容を規定する観察者の個人差要因を見出したが，本研究72％であった。

では行為者の属性に着目する。具体的には，行為者の世代，
化粧の程度を設定した。行為者の世代については，調査対

2・1・2

結果

象者である大学生より下の世代である高校生，同世代であ調査内容を考慮し，調査協力者のうち女性でかつ回答に不備のない 113 名を分析対象とした。

る大学生，上の世代である 30 代の 3 条件を，程度について
は簡単な化粧直し，フルメイクの２条件を設定した。つま公衆場面における化粧行動の関連要因を検討するため，り，６場面を想定しそれぞれについて評定を求め，行為者

公共の乗り物での化粧と他の変数間の相関係数を算出したの世代，化粧の程度による観察者の意識の差異を検討した。

− 106 −

人前化粧における意識

2・2・1

方法

は，研究 1 における「あなたは，あなた自身，あるいは18 歳〜 30 歳（M=20.7，SD=1.64）の大学生

他人が電車やバスの中などで化粧をすることについてど

146 名（女性 94 名，男性 50 名，2 名については無記述

う思いますか」という質問に対する自由記述での回答をであった）。

KJ 法により分類し，作成したものである。

調査対象者

質問紙

質問紙は世代３（下世代，同世代，上世代）× 化

最後に，自分自身は電車の中のような公衆場面で化粧

粧の程度２（化粧直し，フルメイク）の６場面を想定しをするかしないか（女性に対してのみ回答を求めた），たものである。実際の場面想定文は以下の通りである。

性別，学年，年齢，出身都道府県を尋ねた。

①「あなたが電車に乗っている時，あなたより年下であ調査時期る女子高校生が鏡を見ながら油とり紙を使ったり，リッ手続き

2007 年 6 月〜 7 月。
質問紙１枚につき，１場面とそれに対する６つのプを塗るといった簡単な化粧直しをしているのを目にし質問項目を記載した。場面の順序による効果を相殺するました。」②「あなたが電車に乗っている時，あなたよため，６場面の順序は１部ごとにランダムとした。個別

り年下である女子高校生が鏡を見ながらアイメイクをし，記入式の質問紙により，大学の講義時間中に配布し，そ頬紅，口紅を塗るといったフルメイクをしているのを目の場で回答を求め，回答後回収した。回収率は 88.6％でにしました。」③「あなたが電車に乗っている時，あなあった。

たと同世代の女子大学生が鏡を見ながら油とり紙を使ったり，リップを塗るといった簡単な化粧直しをしている

2・2・2のを目にしました。」④「あなたが電車に乗っている時，調査内容を考慮し，調査対象者のうち年齢が 25 歳以下

結果

あなたと同世代の女子大学生が鏡を見ながらアイメイク

であり，かつ回答に不備のない 139 名（女性 90 名，男性をし，頬紅，口紅を塗るといったフルメイクをしている49 名）を分析対象とした。

のを目にしました。」⑤「あなたが電車に乗っている時，行為者の世代，化粧の程度による観察者の意識の差異をあなたより年上である 30 歳前後の女性が鏡を見ながら見るため，６つの質問項目それぞれの得点について，世代

油とり紙を使ったり，リップを塗るといった簡単な化粧３（下世代，同世代，上世代）× 化粧の程度２（化粧直し，直しをしているのを目にしました。」⑥「あなたが電車

フルメイク）の２要因実験参加者内分散分析を行った（表に乗っている時，あなたより年上である 30 歳前後の女２）。その結果，「面白いと思う」を除く全ての質問項目に性が鏡を見ながらアイメイクをし，頬紅，口紅を塗るとついて世代の主効果が有意であった。また，全ての質問項

いったフルメイクをしているのを目にしました。」。これ目について化粧の程度の主効果が有意であった。このうち，

ら 6 場面それぞれに関して，「不愉快な気分になる」，「よ交互作用が得られたのは「よい感じがしない」，「あまり気い感じがしない」，「マナーが悪いと思う」，「恥ずかしいにしない」の２つの項目であった。

ことだと思う」，「面白いと思う」，「あまり気にしない」

これらの２つの質問項目について，交互作用が認めらの６つの質問項目について「１：全くあてはまらない」

れたので，単純主効果検定を行なった。まず，「よい感じから「５：よくあてはまる」の５段階評定を求め，それがしない」について，全ての化粧の程度における世代のぞれ１−５点を得点化した。なお，この６つの質問項目

単純主効果が有意であった（化粧直し：F（2, 552）=14.55,

表２

各質問に対する行為者の世代・化粧の程度別の平均得点（SD）

化粧直し

フルメイク

下世代

同世代

上世代

下世代

同世代

上世代

2.48
（1.13）
よい感じがしない 2.77
（1.20）
マナーが悪い
2.81（1.22）
恥ずかしい
2.60（1.21）
面白い
1.79（0.93）
気にしない
3.51（1.19）

2.33（1.10）
2.72（1.25）
2.71（1.17）
2.58（1.16）
1.75（0.98）
3.71（1.24）

2.75（1.14）
3.07（1.23）
3.06（1.23）
3.00（1.22）
1.92（1.14）
3.20（1.27）

3.64（1.16）
4.07（1.05）
4.17（0.92）
3.96（0.97）
2.39（1.32）
2.32（1.21）

3.4（1.20）
3.89（1.14）
4.00（1.00）
3.89（1.06）
2.22（1.22）
2.42（1.19）

3.73（1.17）
4.15（1.02）
4.22（0.95）
4.23（0.90）
2.32（1.35）
2.18（1.11）

不愉快*p < .05 **p < .01− 107 −

世代

化粧の程度

交互作用

18.87**
202.07**（2, 276） （1, 138）
14.88**
188.94**（2, 276） （1, 138）
15.62**
185.04**（2, 276） （1, 138）27.10**
214.96**（2, 276） （1, 138）
2.64
51.85**（2, 276） （1, 138）
16.48**
174.58**（2, 276） （1, 138）

1.93
（2, 276）
3.34*（2, 276）
2.42（2, 276）
1.08（2, 276）
2.16（2, 276）
3.69*（2, 276）コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

p<.01，フルメイク：F（2, 552）=7.27, p<.01）。5％水準

３．考のライアン法（Mse=.33）による多重比較の結果，化粧直察

し条件において，同世代（2.72（SD=1.25）），下世代（2.77

本研究では，電車の中という公衆場面における化粧行動（SD=1.20））＜上世代（3.07（SD=1.23））となり，フルメ

に関する大学生の意識を明らかにすることを目的とした調イク条件においては同世代（3.89（SD=1.14））＜下世代（4.07

査を行った。研究１では，公衆場面での化粧行動を規定す（SD=1.05）），上世代（4.15（SD=1.02））となった。このる要因を検討し，研究２ではそのような行動を目撃した観結果より，化粧直し条件においては行為者が同世代であ察者の意識について検討した。研究１の結果より，自己のる場合と下世代である場合に評価の違いは無く，上世代に外見や言動に向ける注意が高い人，他者の外見に対する関対しては否定的な評価をしているが，フルメイク条件にお心が高い人，普段の化粧頻度が高い人ほど公衆場面においいては行為者が自分と同世代である場合に最も寛容な評価て化粧行動をするが，公共マナーを重視することや恥ずかをしていることが示された。また，全ての世代における化

しいという意識，無条件に他者を軽視する意識は人前での粧の程度の単純主効果が有意であり（下世代：F（1, 414）

化粧行動を決定づける要因であるとは言えないということ=174.28, p<.01，同世代：F（1, 414）=142.91, p<.01，上世代：が示された。研究２では，公衆場面において他者の化粧行

F（1, 414）=122.64, p<.01），いずれの世代においても化粧動を目撃した際，その化粧の程度が軽い場合（化粧直し）直し条件よりもフルメイク条件の方が有意に得点が高かっよりも重い場合（フルメイク）の方が否定的評価が強いこた。すなわち，行為者の世代に関わらず，化粧直しよりもと，またその行為者が自分と同世代の人物である場合の方

フルメイクのほうがより否定的に評価されていることが明が異なる世代の人物である場合よりも寛容な評価を下し，らかとなった。

さらに，異なる世代である場合，自分より下の世代の人物

次に，「あまり気にしない」について，全ての化粧の程度における世代の単純主効果が有意であった（化粧直よりも上の世代の人物に対してより否定的評価を下すことが示された。

し：F（2, 552）=19.28, p<.01， フ ル メ イ ク：F（2, 552）

化粧の程度が軽い方が許容度が高いという結果に関して=4.24, p<.05）。5％水準のライアン法（Mse=.47）によるは，平松（2006）の知見と一致する。行為者の世代に関し

多重比較の結果，化粧直し条件において，上世代（3.02てであるが，菅原（2005）によると，“若者たちが恥ずか（SD=1.27））＜下世代（3.51（SD=1.19））＜同世代（3.71

しいと感じるのは，“若者らしくない姿や行動”である”（SD=1.24））となり，フルメイク条件においては上世代という。電車の中で化粧をするという行動が“若者らしい（2.18（SD=1.11））＜同世代（2.42（SD=1.19））となっ行動”と捉えられているならば，本研究の結果は妥当であた。この結果は，化粧直し条件では行為者が自分と同世代ると考えることができる。すなわち“若者らしい行動”をである場合はあまり気にならないが，異なる世代である

するべきではないと感じた上世代の行為者に否定的評価を場合は気になる，特に，下世代よりも上世代の方がより気下したと考えられる。研究１についても，行為者にとってになるということを示している。フルメイク条件においては当該の行動は“若者らしい行動”であるため恥ずかしいも，自分と同世代または下世代が行なっているよりも，上とは感じなかったと考えることができる。

世代の方が気になるということを示唆している。また，全菅原（2005），澤口・南（2004）17）は，現代人はセケン・ての世代における化粧の程度の単純主効果が有意であり仲間と認識する範囲が狭いこと，その中のメンバーからの（下世代：F（1, 414）=128.40, p<.01，同世代：F（1, 414）

評価は非常に気にするが，それ以外の人間からはどのよう=149.30, p<.01，上世代：F（1, 414）=93.96, p<.01），いずに評価されるかは気にしないことなどを主張している。故れの世代においても化粧直し条件よりもフルメイク条件のに，電車の中といった公共の場に居合わせる人々に関心が方が有意に得点が低かった。すなわち，行為者の世代に関ないため，化粧や地面に座り込むなどの行動をするのだとわらず，化粧直しよりもフルメイクを行なっているのを見述べている。本研究では，調査対象者に観察者としての評た時の方がより気になるということが明らかとなった。

定を求めたが，自分が行為者であると想定し他者からどの化粧の程度については，一貫して化粧直しよりもフルメ

ような評価を受けるかについての回答を求めるといった調

イクの方が否定的に評価されていた。世代については，自査を行なえば，そのような主張について心理学的に検証す分と異なる世代よりも同世代の行為者に対して評価が寛容ることが可能であろう。

であること，自分と異なる世代においては，下世代よりも上世代に対してより否定的評価がなされるという傾向が見
られた。

謝

辞

本研究を助成いただいたコスメトロジー研究振興財団に厚く御礼申し上げます。
また，本研究における調査にご協力いただいた就実大学− 108 −

人前化粧における意識

原奈津子先生，松山東雲大学林幹也先生，岡山大学東條光
彦先生，長谷川芳典先生，堀内孝先生に深く感謝いたします。

行動の社会心理学，北大路書房，京都，2001，102-113 頁．
９）中央調査社，：車内マナーに関する意識調査，中央調査報，522，1-3, 2001.

（引用文献）

10）平松隆円，：化粧行動許容に関わる公衆場面の構造解

１）村澤博人，：化粧の文化誌，大坊郁夫編，：化粧行動の明とそれを規定する個人差要因，繊維製品消費科学，47，
12-21，2006．

社会心理学，北大路書房，京都，2001，48-63 頁．
２）松井豊・山本真理子・岩男寿美子，：化粧の心理的効用，

11）速水敏彦，：他人を見下す若者たち，講談社，東京，
2006，133 頁．

マーケティング・リサーチ，21，30-41，1983．
３）岩男寿美子・菅原健介・松井豊，：化粧の心理的効用

12）菅原健介・永房典之・佐々木淳ほか 2 名，
：青少年の（Ⅳ）−化粧行動と化粧意識−，日本社会心理学会第 26

迷惑行為と羞恥心−公共場面における 5 つの行動基準と回大会発表論文集，102-103，1985．

の関連性−，聖心女子大学論叢，107，57-77，2006．

４）松井豊・岩男寿美子・菅原健介，：化粧の心理的効用（Ⅳ）13）永房典之，：日本の若者における恥意識の特徴−道徳−生きがい・充実感との関係から−，日本社会心理学会

性と自己意識からの検討−，東洋大学大学院紀要，37，

第 26 回大会発表論文集，104-105，1985．

17-38，2000．

５）菅原健介・岩男寿美子・松井豊，：化粧の心理的効用（Ⅳ）−自己呈示としての化粧行動−，日本社会心理学

14）菅原健介，：自意識尺度（self-consciousness）日本語
版作成の試み，心理学研究，55，184-188，1984．
15）辻平治郎，：自己意識と他者意識，北大路書房，東京，会第 26 回大会発表論文集，106-107，1985．
６）宇山侊男・鈴木ゆかり・互恵子，：メーキャップの心1993．

理的有効性，日本香粧品科学会誌，14，163-168，1990．

16）斉藤和志・中村雅彦，：対人的志向性尺度作成の試み，

７）岩男寿美子，：化粧する理由に関する一考察，資生堂

名古屋大学教育学部紀要（教育心理学科），34，91-109，

ビューティーサイエンス研究所編，：化粧心理学化粧と心のサイエンス，フレグランスジャーナル社，東京，

1987．
17）澤口俊之・南伸坊，：平然と車内で化粧する脳，扶桑社，
2004．

1993，264-267 頁．
８）菅原健介，：化粧による自己表現，大坊郁夫編，：化粧− 109 −

コスメトロジー研究振興財団
第 18 回表彰・贈呈式記念講演

顔の美の基準と科学的理論
クリニック

宇津木流

宇津木

龍 一
場所：日本薬学会 長井記念館ホール
日時：平成 19 年 11 月 20 日（火）

私は、美容形成外科医です。美容外科というのは顔の美というのはすぐに損なわれてしまいます。マイケルジャクを追究する医学ですから、はじめて美容外科を習いはじめ

ソンのように極端に細い鼻がついているだけで、全く不自たときに、ある程度科学的に顔の美の理論が解明されてい然な顔になり、とても美しいとは言えなくなってしまいま

るだろうと期待して、いろいろな先生に聞いてみました。

す。また、一般的には顔の美というとパーツ間の形、比率、

しかし、みんな異口同音に顔の美なんていうものは理屈じ

大きさなどについて語られます。また、顔の美というもの

ゃ語れないものだから、勘とセンスを磨くしかない、といを別の角度からみてみますと、例えば、エチオピアのムル

うようなことを言われました。顔の美の基準については、

シ族は、口唇にいれる皿が大きいほど美人ですが、これは歴史的にいろいろな理論が考えられていますが、形がいく

もちろん最初から、唇に大きな皿をつけた顔が美しかった

ら美の基準に近づいても、かならずしも魅力的な美しい顔

わけではなく、異常な形をしていると、昔は奴隷刈りに連になる訳ではないというのです。

れていかれず、子供を育てあげることができる安全性がだ

私は医学として美容外科をやる以上、できるだけ科学的な理論に基づいて手術をすべきだと考えました。患者さんの希望する手術は、やる方がよくなるのか、やらないほうがよいのか？

どこを治せばどのぐらいよくなるのかといんだん美しいと認識されるように変わってきたのではないかと考えられます。
つまり元来醜い、異常な顔だったはずなのに、それがその種族にとっては美に変換されており、これは教育、すりうようなことを手術前にわかるようになりたいと思ってい込み、洗脳の結果で、このようなタイプの美もあるわけです。

たところ、アメリカで研究をする機会に恵まれました。そ顔の美や魅力というのは、時代や人種、習慣とか地域なのときに、私なりにまとめた顔の美の科学的理論について

どによって異なりますけれども、それでも尚、すべてに共

一部ご紹介したいと思います。

通した美の基準というのもあるはずです。実際、これまで＊いろいろな人が様々な美の基準を考案してきました。比較＊

美容外科というのは患者さんのシンデレラ願望を満たす

的最近議論されたものが、平均的な顔は美しいという理論科です。手術をした翌日からは別人のように美しくなったで、今から 100 年ぐらい前に、Nature に発表されました。

私になることを手助けする科です。私の専門は、単に二重たくさんの人の写真を重ね焼きしてできた顔が一番美しくにするとか、胸を大きくする手術ではなく、より美しく若なるという説ですが、15 年ほど前に、やはり Nature に平返らせる再建美容外科ともいうべき分野をやっております。

均顔はかならずしも美しいとはいえないと、100 年前の説

特に、しみ、しわ、たるみといった美容的アンチエイジンを否定する論文が掲載されました。結局、科学的に考える

グ治療が専門です。もともとは、形成外科で顔面奇形と顔と顔の美しさは、やはり一言では語ることができないとい

面変形の治療をやっておりました。

うことにおちついているといえます。

＊

美容外科手術の目的は美の追究ですが、顔の美の基準は＊

魅力的な美しい顔の作り方を考えてみますと、美しい顔

千差万別で、客観的に診断、評価することはできないといがどのようなものかを説明するよりも、美しくない顔を説

われています。千差万別であるにもかかわらず、患者さん

明するほうがはるかに簡単です。例えば美しくない顔をつとのコミュニケーションをとることすら難しくて、患者さ

くりたければ、前歯が１本ない笑顔だけで、美しさや品位んの希望を医者が正確に把握することができないという危
険性もあります。そこで、私は手術前にコンピューター上で、患者さんの写真を使って、患者さんの希望する通りの手術を行えば、本当に患者さんは満足してくれるのかを調べています。例えば、患者さんが、ある女優に似た顔にな

Ryuichi Utsugi, M. D.
Clinic UTSUGIryu

るために手術を希望したとします。患者さんは、目や、口だけでも、この女優の顔のように治してくださいと言ってくるわけです。そこで、写真上で女優のパーツを患者のも− 113 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

グが専門の美容外科医ですから、私は影の治療をしていまのと入れかえて、本当に満足するか確認するわけです。
実際それをやってみますと、ほとんどの患者さんは、そす。まず色むらを治療します。色黒か色白かは問題ではあの結果に満足しません。それが美容外科の問題点なわけでりません。黒くても白くてもどっちでもいいですから、とす。たとえ患者のパーツを全部めざす女優の形に変えても、にかく均一な色の肌を目指します。

期待するイメージにはならないのです。そこに患者の錯覚

次に、しみ、くすみ、発赤がない顔。それから、しわ、があるわけです。メーキャップアーティストのもとにも、でこぼこ、たるみがないことが若くて美しい顔になるためある女優に似た化粧をしてくださいと希望する人が来るとには重要です。

思いますが、希望をかなえることは単純ではなく、大変に顔をコンピュータで二値化処理すると、光の反射のつよい領域が hilight area として表されます。hilight area は、

難しいと思います。
次に、ふたつの顔の皮膚を画像処理して白くすると、両顔の立体的構造に応じて、卵形、クローバーリーフ型、逆者同じ顔であることが明らかになります。画像処理する前

三角形に分けることができます。昔の日本人の美人は、卵の顔の違いでわかる様に、皮膚の部分が違うだけで、たと形、アフリカンなどのエスニックタイプの美人はクローバ

え眉、目・鼻・口などのパーツの形が一緒であるにもかかーリーフ型、美人女優のほとんどは逆三角形です。
この hilight area の形や辺縁の線が乱れてぎざぎざが入

わらず、顔の印象は全く違ってしまいます。
顔の印象や美醜の違いは、パーツの形ではなく、皮膚にあることはこれで明らかになりました。皮膚の美しさこそ顔の美しさ要因であることは、美容形成外科医としては大ってしまうと、たちどころに顔はきれいには見えなくなってしまいます。
つまり hilight area の形をきれいに整えるというのは、きな驚きでした。そこで、顔の美醜を決定する皮膚の要因

卵に目鼻のようにスムーズな肌の局面、凹凸がない、ざらについて検討してみました。輪郭の違いでしょうか？

ざらがないということです。肌に凹凸だとかざらざらだと輪郭をそろえてみます。それでも、やはり右と左の顔の美かができると、それが陰となり、顔はたちどころに醜くなしさというのは違います。左右の写真をさらに光の反射しるわけです。

ている部分（hilight）と影の部分（shadow）とに分けて通常、図１の左の人が例えばきれいな顔になりたいと思

みると、光の反射している部分（hilight）だけの顔のほうった時に何を考えるかというと、目の形を変えよう、鼻をが、shadow の部分だけよりも顔の美しさが判断し易いこ高くしよう、あごを削ろうか、などと形を変えることを考とがわかります。shadow だけを見てみると、どっちがきえていたわけです。

れいだか一見わからない。人は shadow の部分ではなく、

ところが、図１の右のように皮膚をきれいにすれば、形

hilight の部分を見て、きれいかどうかを判断しています。

は同じでも、劇的に美しくなれるということが、美容外科

shadow の部分だけをピックアップして表現してみます

医としてわかってきたわけです。老化というのは、このハと、顔のしみ、にきび跡、その他点状斑状の shadow を取イライトが乱れて、余計な影がたくさん増えるというのがり除くと明らかに美しく見えるようになることから、それ特徴です。若いときはきれいに整ったハイライトをしていらの shadow が顔の美を妨げていることがわかります。特に、目の下や口の周りの shadow を消すと、顔は劇的に美
しくなります。これは私にとって非常におもしろい発見でした。これによって私は皮膚をきれいにすることに大変興味を持つようになりました。
顔の美や、顔の魅力というのは、パーツの形プラス、ファンデーションの領域、つまり皮膚の美しさが合わさって初めて生まれるものです。顔にできる影は美を損ねるので、化粧で白塗りをして影を隠すことで美しくなる。顔のshadow というのは、肌表面のでこぼこ、大小の凹凸です。
また、肌の色むら、しみ、発赤、赤ら顔、皮膚の萎縮でキメが消えてつるつるした部分など、ほんのわずかな影が顔の美を損ねています。
写真の撮り方によって、別人のような写真に写ることがありますが、それはたいてい影のでき方の違いです。これまで目の形、位置、口の形、などパーツが顔の美の要素で、それについてしか語られていません。私はアンチエイジン

図１ 左右の写真は、皮膚以外の眉目鼻口、輪郭は全て同じであるにもかかわらず、顔の印象はまったく別人である。皮膚が顔の美にいかに重要であるあるかがわかる。これまでは、
顔の美は形態の問題と考えられてきたが、今後は皮膚の重要性がますます認識されると思われる。

− 114 −

顔の美の基準と科学的理論＊たのが、次第に崩れて、ハイライトの形が崩れてきて変形してしまう。このハイライトの乱れを私はきれいに整える＊

最近の美容医療についてのトピックスについても話をしてほしいということなので、触れておきます。新しいこと仕事をしているわけです。
この場合、目・鼻・口、の形はそれほど問題ではありまではないのですがコラーゲン注射やヒアルロン酸注射を受せん。hilight の形によって、アジア人になったり白人にける患者さんが世界的に急増しています。私も最近 10 年

なったりするというぐらい、私は hilight の形態は重要な

位患者さんに勧めている医療です。
老化現象というのは、素材としての皮膚そのものが老化ものだと考えています。
きれいな hilight を作る基本は健康な肌です。それにはしてくるということが１つ。形が崩れてくるという問題が日々のスキンケアや定期的な肌診断、そして適切な治療が１つ。それから、この２つが合併しています。形が変わっ必要です。

てしまったものは手術でないと治せません。しかし、顔のスキンケアと治療について考えてみます。

形は素材である皮膚にはりがあってしっかりしていれば、

例えば皮膚を切りますと、皮膚の色というのは、ごく表

なかなか崩れません。

面の 30 ミクロンから 50 ミクロンぐらいの浅い表皮層にだけあるのが普通です。真皮は真っ白です。表皮の色素をよその皮膚がなぜ崩れてくるかというと、皮膚の中にある
コラーゲンが抜けていくからです。

く見ると、くすみの部分は肌がさびたようになっています。

顔のコラーゲン量をもとに戻す方法や、減らさない２つ

メラニンの沈着や血管新生や拡張を治療するということが、の方法があります。１つはやけどをさせることです。やけ影のない均一なきれいな肌を作る基本になります。

どの治癒力を使ってコラーゲンを作らせる方法、これがレ肌の治療は病院で短時間でやることもできるでしょうし、ーザー治療法です。それともう一つは、コラーゲンを組織

化粧品を使って長時間かけて治していくという方法もあるの中に直接注射する方法です。注射したコラーゲンは半年

かもしれません。例えば、萎縮をしてしみとくすみだらけから１年でアミノ酸に分解されて消えていくわけですけれという肌は現代女性の典型です。このような肌の表面を顕ども、そのアミノ酸を線維芽細胞が取り込んで自分のコラ

微鏡で見ますと、きめの全くない状態です。つまり萎縮しーゲンをつくる良い肥やしになります。

て代謝の悪い状態だからしみができるわけです。乾燥を治

コラーゲン注射にはヒト由来、牛由来、豚由来などがあし、新陳代謝を促進してきめを作り、くすみとしみを治療ります。私は医者になり立てのころに、ウシのコラーゲンすることになります。

注射を見て気持ちが悪いと思いました。こんなものを注射

理想の女優などの写真をもって、似た顔になりたいといして、将来どうなるかわからないので絶対やりたくないとう場合、目・鼻・口を同じにしただけでは、似た顔にはな

思っていました。ところが注射を定期的に打ち続けているりません。そこで、理想の顔から自分の現在の顔へ、モル患者さんの肌が本当にみるみる明らかに若返っていくのをフィングソフトを使って段階的に少しずつ画像を融合変化

10 年間見て、しかも、コラーゲンの安全性は２５年以上させた写真を作ります。今まで 100 人以上やりましたけれ

にわたり、世界で確認されていることを考えて、私も 10ども、最初は理想の顔になりたい、今の自分の顔は絶対嫌

年ほど前から積極的に使っております。コラーゲン注射は、だと言っていた人でも、98％以上が中間の顔を選びます。

深い法令線（鼻唇溝）、目の下のクマ、口角の線などに、

つまり自分の顔の個性を残した美を人間は求めている事が即席で劇的に効果を発揮します。例えば 63 歳の方ですけ

わかります。顔の魅力というのは、個性（individuality）、れども（図２）、４〜６ヶ月毎にコラーゲン注射をして３その人らしさがものすごく重要だということです。そ

年後の状態です。肌は明らかに若返っています。次に 67

れ と 同 時 に、 目・ 鼻・ 口 な ど の パ ー ツ の 形 と、hilight、

歳の細かいしわが多くて、ファンデーションが塗れないとshadow のファンデーション部分、このふたつのハーモニいうので治療をすることになった患者さんですが、少しずーが非常に重要だということです。
このハーモニーを考えれば 100％理想の顔になることは無理でも、50％くらい似ている顔なら手術で何とかなりそうとか、30％くらい似た顔なら化粧品でどうにかなりそうだということが予測できます。
似た顔を目指すには、目指す顔と元の顔の差を計測することも重要です。また、私は患者さんに求められれば
hilight area の形をきれいに出すためのファンデーションの塗り分け法のインストラクションをコンピュータで作ってあげることもあります。

図２ コラーゲン注射をして、皮膚が若返った例
方法はケミカルピーリングおよびレーザーピーリング治療前後の皮膚表面をデジタルマイクロスコープを使って診断し、効果に対する患者自身の評価と比較検討した。

− 115 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

つ皮膚に注射して、２年後の状態です（図３）。１年間に治るということは、医師でもまだ知らない人が多いのです

３回から４回注射しました。

が、形成外科学会では、大きなトピックスとして知られて48 歳の目の下が気になる患者さんです。目の下にコラいます。あまりほかの科の先生は知らない人も多いのですーゲン注射をして２年後ですけれども、肌のはりが戻ればが、信州大学形成外科の松尾清教授が発見して以来、形成

こんなに若返り、毛穴の開きも小さくなります。額は、ま外科学会では大きなトピックスとして知られるようになりゆ毛が上下運動をしてできるしわですから、ボトックスでました。私もこの手術を、10 年前から専門的に行ってき前頭筋を弛緩させて上下運動を止めれば写真のようにしわましたが、どこにいって調べても原因がわからなかった頭は消えてしまいます。

痛や肩こりなどの治療効果はすばらしいものがあります。
＊

このまゆ毛の上下運動というのは、顔の上半分を急速に＊老化させるものだということがわかってきました。つまり

例えばこの方はこの額、つるつるになります。ボトック

まばたきは、１日１万回から３万回行われますが、45 歳

スの治療はいろいろなところに使えますし、それから汗も頃から少しずつ目をあける筋肉がゆるんで目が開きにくく少なくするので多汗症だとか、最近は頭痛にもよく効くとなりはじめ、50 歳を過ぎると誰でも開きにくくなります。

言われています。つまり眉間のところにしわを寄せている

そのためにまゆ毛を上げて、努力して目を開けるようになということは、三叉神経の第一枝がこの眉間のところからります。

これが眼瞼下垂症という症状で、目があきにく出てきます。あまり眉間にしわばかり寄せていると、そのい、まぶたが垂れてくる。まゆ毛を挙げるので額にしわが第三枝をずっと刺激していることになるので頭が痛くなっ出る。最近、額にしわが増えてきたと思っている人は、皮てくる。それを眉間にしわを寄せなくなると頭痛が治せる

膚がたるんできたわけではありません。まゆ毛を上げるよということなんです。
＊

うになってきたということです。つまり目を開ける筋肉が＊緩んで、ふだん努力をして目を開けているという証拠です。

実は、私も４年前、50 歳の時に、後輩に頼んでその手こうなると、目はもちろんのこと、全身的に非常に疲れや術を受けましたが、全く痛みもなく、目が開き易くなりますく、根気がなくなり、最後は鬱病になります。まゆ毛をした。私の場合は、眼精疲労と夕方以降の疲れ易さが劇的上げるということは、例えば皆さんが運転をしていて眠くに改善しました。私の周囲の形成外科医たちも、数多くこなると、自分を覚醒させようとして、まゆ毛を必ず上げるの手術をうけています。
＊

はずです。眉上げは無意識に交感神経を刺激して覚醒しよ＊うとしている現象でみられます。交感神経の刺激スイッチ

図４は 67 歳の女性で頭痛持ちでしたが、手術後それがを常にオンの状態にするということは、自律神経系が疲れ改善して元気になってタレントさんになったという人です。

て破綻してしまうということです。眼瞼下垂が、自律神経

今は本当に生き生きと働いています。手術前は目を努力しの破綻を引き起こし、頭痛、肩こり、不眠、眼精疲労、ドて開けていて、神経をすり減らしていたわけです。また、

ライアイそして鬱病などを引き起こすことが最近わかって

顔の上半分と老化は眼瞼下垂で促進される

きています。

67 歳前後

額にしわが深くなり、眉毛があがり、まぶたのたるみが70 歳前後気になるようになったら、目を開ける筋肉のゆるみを治す
簡単な手術をする必要があります。大体片目で 30 分ぐら
いの簡単な手術によって昔のように目が楽に開くようになり目を開ける努力が必要なくなるので、大変元気になります。眼瞼下垂手術で頭痛、肩こり、鬱病などの不定愁訴が図３ コラーゲン注射で皮膚のちりめんじわを治療した例
方法はケミカルピーリングおよびレーザーピーリング治療前後の皮膚表面をデジタルマイクロスコープを使って診断し、効果に対する患者自身の評価と比較検討した。

図 4 眼瞼下垂の術前術後患者さんの左顔面の術前鏡像と術後写真を合わせて作った写真。術前と術後の違いがよくわかる。
写真上、患者さんの左顔面が眼瞼下垂術前、右顔面が同側術
後 3 年の状態。
術後目が開けやすくなり、同時に眉毛の上下運動が減って著しく若返っている。
術後にスキンケアも行った。

− 116 −

顔の美の基準と科学的理論

まゆ毛の上下運動で皮膚には１日数百回の伸縮のストレス

しかし、眼瞼下垂を放置しておくと、まゆ毛を止めていがかかる。そのために皮膚が老化していました。手術をしる靱帯が緩み、目をぱっちり開ける手術をしてもまゆ毛がてから３年後の写真を比較すると、本当に顔が生き生きと下がり過ぎるようになります。このために早く手術をしな

して、皮膚も若々しくなっています。写真は左顔面が術前

いと、表情がかわってしまったり、怖い顔になる。まゆ毛の顔。右顔面が術後の同側の顔を鏡像にしてひとつにしたを上げていれば明るい表情ですけど、まゆ毛が下がってし写真です。

まうと不機嫌な怒ったような感じになるからです。まゆ毛手術をした後は、まゆ毛を上げて努力して目を開けていが緩んであまり下に落ちてこないうちに手術したほうが自る必要がなくなるのでまゆ毛が下がってくる、リラックス

然な表情にしあがります。まゆ毛があまり下がると邪魔でする。だから、元気になる。頭痛も治るし肩こりも少なくすから、さらにまゆ毛を上げて頑張って目を開けなくてはなる。頭痛は 80％以上、肩こりは 40％から 60％ぐらいのいけなくなるので、眉毛を挙げる手術も必要になります。
私は、50 歳以降に快適な生活を送るためには、、この手治癒率です。
眼瞼下垂の症状は、額しわ、目の上のくぼみ、二重の幅術が絶対に必要だと確信しています。

が広くなって乱れてくる、それから、目の下が膨らんでく＊る。この目の下の膨らみも、こちらの目の上の脂肪が中に＊顔の美は、形の問題ではなく、皮膚の質が重要であることがわかってきました。また、アンチエイジングの美容医引き込まれるために下が出てくるということです。
写真を見ておわかりのとおり、術後に目が開き易くなる

療は最近 20 年ほどの間に、急速に進歩しました。いまや、と、まゆ毛を挙げる必要がなくなるので、眉毛が下がり、

しみ、しわ、たるみは、外観だけの問題ではなく、健康と

額のしわもなくなるし、肌も若返る。つまり老化というの生活の質に直結した問題であることが明確になり、顔の老はまぶたからくるわけです。

化程度はある程度自分で選べる時代でもあると思います。

− 117 −

コスメトロジー研究雑感

平成 17 年度

研究助成

コスメトロジーと植物
森田

人間と薬とのつながりは長い歴史をもっており、より安
全な薬を求め続けてきた。日本でも、漢方薬の保険適用が博史

コラーゲン生成の促進、皮膚柔軟性、シミ・そばかすの防止、メラニン色素の生成を抑えるなど様々である。

認められて以来、薬用植物を中心とする天然物が見直され単一な植物成分でも、いろいろな活性を合わせ持つ場合てきた。もちろん、薬になるものは植物に限らず、動物、があるが、植物エキスを使う場合は、膨大な成分を含んで鉱物も沢山あるが、全体的にみると、70 − 80％が植物でいるために緩衝剤的な面も見られ、ファジ−的な要素の高ある。

い素材である。天然薬物の類は、過去の長い歴史もあるし、

コスメトロジーと植物との関係も深いものがある。最その間に実際の臨床経験をもって取捨選択されてきたも近、植物性の機能性物質のなかでも、ポリフェノールは、のなので、用法を間違えなければ、副作用で大事を起こす

抗菌活性、抗酸化活性、ラジカル消去活性など有し、制がことはすくない。

ん作用や抗ウィルス作用などの様々な機能を示すことか

このような経験的に使われてきた植物のなかから、コスら、化粧品素材として注目されている。化粧品素材としてメトロジー的に有用な素材が生まれることを期待していの機能といっても、皮膚の保湿・細胞賦活、血行促進、消る。

（星薬科大学生薬学教室）

炎作用、創傷治癒効果、抗酸化作用、フリーラジカル消去、

平成 17 年度

研究助成

自己素材の文化事業とコスメトロジー
藤井敏弘

助教授時代の大学院生から人の毛髪の分子診断の話がている有名人は誰？」と聞くと、多くの人は田中康夫 知あり、タンパク質の分析であることもあり、あまり考えず

事（当時）との返答であるため、コンタクトをとり協力をに研究をスタートさせた。ケラチンを主成分としており、依頼した。田中知事の髪の毛タンパク質入りのファイバー

細胞骨格をバックグランドにしている私にとっては身近の写真は、地元の信濃毎日新聞（2003 年 11 月 17 日）にに考えられた。タンパク質の分子診断のため、分解させな掲載していただいた。また、「シルクの光沢をもつ、しな

いような抽出方法を必要とした。これを検討する中で、いやかなファイバー」のキャッチフレーズもつくった。

くつかの変性剤を組み合わせた信大法を見出して確立し毛髪、爪は、容易に採取できる素材で、保管も簡便にでた。信大法を使用したタンパク質の抽出効果が高いため、きる。個人単位での利用を行えば、生体適合性に優れた材分離した大部分のタンパク質を廃棄することがしばしば料となることが想定できる。これらを「セルフ - リサイクであった。元来のケチ根性で「もったいない」という気持ル」の概念として提唱してきている。コロンブスの卵と同ちから、何かへと変換すれば、新規の基材になることを思じような当たり前の提案であるが、バイオあるいは材料関

いついた。努力といいたいが、偶然と共同研究者に恵まれ、連の新たな概念とテクノロジーとして育て上げたい。このフィルム、ファイバー、微粒子への変換技術を開発してき具現化のため、2007 年に㈱バイオメモリアル研究所を大ている。

学発のベンチャー企業として設立した。特に、コスメトロ

繊維学部の所属であることからファイバーについて紹

ジー領域はセルフ - リサイクル製品の最大のターゲットに介すると、天然高分子多糖の組み合わせに毛髪タンパク質なると考えている。また、私ごとですが、2008 年４月かを導入したファイバーの紡糸に in vitro の系で成功した。

ら学部改組により感性工学科から応用生物学系バイオエ

新しいタイプのファイバーであるため、この宣伝に有名人

ンジニアリング課程へ移籍した。

の髪の毛を考えた。2002 〜 2003 年頃、「長野県に関係し− 121 −

（信州大学繊維学部）

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

平成 17 年度

研究助成

コスメトロジーとナノバイオマテリアル
長崎幸夫

薬物キャリアを目標とし、高分子化学を基盤として材料り込んだナノ粒子は活性酸素を効率的に消去するナノ粒子

設計を進めてきた筆者が金や半導体、シリカやガラスなどとして生体内外で利用することが可能であろう。生体環境の様々なナノ粒子に適用範囲を広げ、その生体環境下での下で高度に分散安定化したシリカにキノン誘導体を封入し利用を目的として研究を進めてきた。ナノバイオマテリア

メラミン色素分解などの実験も出来るようになってきた。

ルと総称するこの様な生体環境適合性コロイドが様々な応

この様にバイオナノ粒子に要求される性能として、生体用用途があろうと思ってはいたが、実際には手が廻らずに環境下で高度に分散安定であり、生体に対して親和性が高していた。幸いなことに最近、筆者の研究室では卒業研究いことが常に要求されるバイオナノ粒子はコスメトロジー

生を含む学生の数が増え、様々な研究を展開できるように分野にそのまま適用可能であるだけでなく、さらに高次のなってきた。例えば pH に応答して薬物を放出するコアー

機能を付与することが期待できるため、この領域への展開

シェル型のナノゲルは疎水性の有機アニオンを効率的に取を強く意識した研究を進めていきたいと思います。

り込むため、高い胆汁酸吸着性を示し、これは高脂血漿薬の代替として期待できるだけでなく、ダイエット食品や飲我々の研究に対してご助成頂きました㈶コスメトロジー
研究振興財団に心から感謝申し上げます。
（筑波大学大学院数理物質科学研究科）

料としての可能性も期待できる。同様に電子スピン共鳴を利用してバイオイメージング用に用いる安定ラジカルを取平成 18 年度

研究助成

コスメトロジーとバイオマテリアル
原正之

だいぶ前の話になるが、バイオマテリアルの研究で高名なる小胞（リポソーム）、コラーゲン蛋白質などは医療用なある先生が若い人の結婚披露宴のスピーチをされた際に、具にも化粧品にも利用されている。細胞の接着や、薬剤の「インプラント（体内埋め込み型の医療用具）というのは、

徐放、保湿効果など目的とする機能を果たすことに加えて、人間の体（免疫機能を持った生物）と医療用材料（異物）

生体適合性が良いことが、絶対的に必要な条件となるからとの接する場所である。年月を重ねる途中でつなぎ目が緩である。

んだり、割れたりということでは困るので、そういうこと

日頃は化粧品についてあまり縁の無い門外漢なりに考えの無いようにするためにはいろいろな工夫が必要であり、てみると、医薬品や医療用具などが身体的（physical）な研究開発が行われている。家庭というものもまた、かくあ

効果を主目的するのに対して、化粧品はこれに加えて、明るべし。
」というような話をされたのを聞いたことがある。

らかに精神的（mental）あるいは社会的（social）な効果

私は、大学の講義で「生体材料（バイオマテリアル）」のウエイトが大きいように思われる。材料と生体との適合とは何か？という話をする時に、「医療用具などに使われ、性が必要なことは言うまでも無いが、化粧品は、衣服など

人体に接して用いられる生体適合性の材料」であると説明と同じく、それを利用するヒトの外観や印象を変化させ、し、生物の体を構成する「生体物質」（蛋白質、核酸、糖

ヒト個人の間の人間関係にも影響を与え得るからであり、質、脂質）とは違う概念であることを強調するようにしてその意味では医薬品と衣服の間に位置するものと考えるこいる。化粧品の素材もまた、その多くが生体材料に含まれとも出来るかもしれない。

るように思う。私自身が研究材料としている脂質の膜から− 122 −

（大阪府立大学大学院理学系研究科）

コスメトロジー研究雑感

平成 18 年度

研究助成

親と子のコスメトロジー
西迫貴志

子供の頃から現在に至るまで，化粧品はもちろん整髪料

かならないかと内心ハラハラしていたが，妻が知人から教

さえもほとんど使用したことがない私は，「コスメトロジ

えてもらったローションを塗り始めたところ，数日で顔やー＝化粧品」であり，関係があるのはほとんど女性に限ら手の肌が見る見るきれいになっていくのがわかった．父親

れる，と勝手に思い込んでいた．しかし今回の助成をいたとしても次第に気持ちが楽になっていき，ふと，「なるほど，

だくにあたって，コスメトロジーという概念がバイオ分野

これもコスメトロジーの恩恵だ．親子ともに心身両面でおから精神・文化に関する分野まで広範に及ぶことを知った．

世話になったわけだな」，と変に感心した次第である．

自身の不知を恥じるとともに，視野を広げるまたとない機

さて，私のここ数年の研究は，マイクロ流路構造を用い会を得られたことを感謝している．さらに贈呈式でのかづた均一サイズの各種エマルションの生成とその応用に関すⓇ

きれいこ先生の「リハビリメイク 」に関する記念講演でるものである．特に，従来手法では生成が難しかった均一

も，コスメトロジーが実に幅広く，多くの人に希望を与え

サイズの多層構造のエマルション（ダブルエマルション）

うるものであることに新鮮な驚きを感じた．

は，有効物質のカプセル化，放出制御を容易に行えるため，

そんな私にもコスメトロジーの恩恵を直接実感する出来

コスメトロジーを含めた多分野への応用を模索中である．

事があった．贈呈式から約 2 週間後，待望の第 1 子が誕生

自身の子供達，そのまた子供たちが恩恵を少しでも実感でしたのであるが，冬場の乾燥した空気のせいか，産後の数

きる，そんな研究成果を世に残すことができれば研究者冥週間ほど，顔や手の肌がひどく荒れてしまっている時期が利に尽きる，などと考える今日この頃である．
（東京工業大学精密工学研究所）

続いた．赤ん坊の泣き叫ぶ姿は見た目に痛々しく，なんと

平成 17 年度

研究助成

スキンケアとプロスタグランジン D2
佐藤貴浩

皮膚は日常的に紫外線や機械的刺激を含めた物理的刺激

を産生、放出するようです。また慢性的に炎症を繰り返しを受けています。また乾燥の危険にもたえずさらされていている皮膚はバリア機能が障害されやすく、よって種々のます。しかし表面の角層を含めた巧妙な構築と組成により刺激因子に対してダメージを受けやすくなっています。こ皮膚はこれらの危険から生体を守っています。そしてそののような状態の皮膚は機械的刺激に対して容易にプロスタ機能を補うことがスキンケアの重要な意義の一つです。プ

グランジン D2 を容易に産生し、その結果炎症がさらに増

ロスタグランジン D2 とスキンケアとは全く関係のないも悪してしまうかもしれません。もちろんプロスタグランジの同士という印象があるかもしれません。たしかにプロス

ン D2 は炎症を一方的に悪化させるだけでなく、逆の作用

タグランジン D2 といえば最近では“アレルギー”というをもっている可能性もあります。そして今後は皮膚の機能

イメージが先行しています。今回の研究でも主に慢性アレ維持とプロスタグランジン D2 との関係についても目をむ

ルギー性炎症という面からプロスタグランジンＤ２の関与

ける必要性がありそうです。

を解析しました。しかしどうやら皮膚はキズをつけるなどのダメージをうけるだけで瞬時にプロスタグランジンＤ２− 123 −

（東京医科歯科大学大学院皮膚科学分野）

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

平成 17 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
竹下治男

我々は、ヒト汗中に極めて活性の高いデオキシリボ核酸

それぞれの生物種において十分な酵素活性が発揮できるよ分解酵素（DNase I）酵素が存在し、しかも遺伝的多型形

う分子進化してきたことが判明した。特に、各種脊椎動物

質であることから、微量な汗からでも実施可能な個人識別

DNase I の比較・検討から、わずか一アミノ酸の置換や挿法を確立して法医鑑識の実際に応用している。しかし、汗入・欠失が、酸安定性、熱安定性、最適 pH 及びアクチンに含まれる高活性な核酸分解酵素の生理学的および薬理学

結合能のような生化学的性状を左右していることが解明さ的作用は不明である。ヒトの DNA 分解酵素のひとつであれ、DNase I から見た脊椎動物の多様性と分子進化に関するデオキシリボヌクレアーゼⅠ（DNase I）に遺伝的多型

る新たな知見が最近得られている。さらに臨床医学的な側の存在を発見し、有用な遺伝マーカーのひとつとして確立面からも DNase I の２型は胃癌、大腸癌、肝疾患などにした。この発見に端を発し、この酵素の cDNA 構造、遺罹患しやすく、１- ２型は消化器疾患に罹患しがたいこと伝子構造、染色体座位及び遺伝的多型性の分子論的基盤を見い出している。また、最近、胸痛発作後 3 時間以内になどの分子遺伝学的側面を解明した。次いで、DNase I は観察される血清酵素活性値の一過性上昇は、急性心筋梗塞

外来性の DNA を消化・分解する“単なる消化酵素”と考の特異的超早期診断マーカーであることを見い出した。

えられてきたが、これら酵素の新規な生物学的機能を解

このように DNase I 研究を広く深く遂行することによ明するため哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類及び魚類由来

り、コスメトロジーに関する方面でも貢献できるものと考の DNase I に関する生化学的、免疫学的および分子生物えている。

（島根大学医学部法医学）

学的解析を継続している。その結果、これら DNase I は

平成 17 年度

研究助成

表皮ランゲルハンス細胞の新機能の解明とコスメトロジーの発展
杉田昌彦

皮膚恒常性の維持機構ならびに外界刺激に対する免疫には、バーベック顆粒というランゲルハンス細胞に特徴的反応の理解は、臨床的にもまたコスメトロジーの観点からな構造物が存在する。実は CD1a 分子は、細胞表面ととももきわめて重要である。その鍵となる細胞の一つが表皮にに、このバーベック顆粒に多量に発現している。このよう存在する樹状細胞、すなわちランゲルハンス細胞である。

な事実を総合すると、CD1a 分子は、ランゲルハンス細胞

敷石状に配置されたケラチノサイトの間隙に網目状に突の機能と密接に関連した分子であることが容易に推察で起を伸ばしたランゲルハンス細胞は、さまざまなアンテナ

きる。

（受容体）を用いて皮膚環境をモニターし、制御している。

これまでランゲルハンス細胞に発現した CD1a 分子のしたがって、ランゲルハンス細胞に特有の働きを解明して働きは、まったく不明であった。しかし最近になって、いくことは、つねに外界と接したユニークな臓器である皮CD1a 分子が脂質を結合し、Ｔ細胞に抗原提示する新しい

膚の生理機能の理解に不可欠である。

タイプの抗原提示分子として働くことが明らかとなって

古くから表皮ランゲルハンス細胞のマーカータンパク

きた。実際、ヒト皮膚より単離したランゲルハンス細胞は、質として、CD1a 分子が用いられてきた。実際、未熟胸腺

細菌脂質を特異的に認識するＴ細胞を活性化することがＴ細胞を除くと、生体内で CD1a 分子を発現した細胞はラできる。また、脂質に対する皮膚遅延型アレルギー反応もンゲルハンス細胞のみであると言っても過言ではない。し実証されている。ランゲルハンス細胞が、CD1a 分子を介かもその発現量が尋常ではない。培養液中で人為的に誘導して、脂質特異的な皮膚免疫応答を制御していることは、した樹状細胞の 10 倍以上の CD1a 分子をランゲルハンス

間違いのない事実であろう。

細胞は発現している。また、ランゲルハンス細胞の細胞内

これまで皮膚におけるＴ細胞活性化の研究は、主として− 124 −

コスメトロジー研究雑感

タンパク質抗原を標的とした免疫応答に限られてきた。し拓が必須であった。そこで、ヒト CD1a 分子をコードする

かし、皮膚常在菌は特有の脂質を産生する。皮膚炎を惹

遺伝子を導入した「CD1a トランスジェニックマウス」の起するウルシオールは脂質である。化粧品かぶれを起こす樹立を試みた。ヒトと同様の CD1a 分子の機能発現をマウ物質の多くは、非タンパク質分子であるという話も聞く。

スにおいて再構築する試みにおいて、多くの困難に直面しCD1a 分子を介した脂質特異的皮膚免疫応答の解明は、こたが、最終的には表皮ランゲルハンス細胞と未熟胸腺Ｔ細れまで必ずしも明確でなかったさまざまな皮膚炎の発生機

胞に特異的に CD1a 分子を機能発現したマウスを樹立する

序の理解につながり、ひいてはその治療や予防にも役立っことができた。
このマウスを用いた研究の進展により、これまで知られていくであろう。
免疫研究に極めて有用で、さまざまな皮膚免疫病態の解ていなかった新しい皮膚免疫の基礎が確立され、コスメト

明に貢献してきたマウスは、実は CD1a 分子をコードする

ロジーの発展に大きく貢献できれば大変喜ばしいことであ遺伝子を欠如している。したがって、この新領域の研究をる。

（京都大学ウイルス研究所）

展開、発展させていくためには、新たな小動物モデルの開平成 17 年度

研究助成

メカニズム vs 効果の実感
内藤幹彦

最近体を動かした後に膝など関節が痛むことがある。コ

制御する方法を開発し、これを実生活に役立てるというのラーゲンやヒアルロン酸など軟骨の潤滑成分が不足してきは、実用的な研究開発のひとつの理想像であろう。しかしたせいだろうか。新聞などでこのような成分を謳った健康

細胞の営みは大変複雑であり、メカニズムの全体像を明ら食品の広告を見ると、試してみようかという気にもなる。

かにすることは一大事業である。また細胞レベルの現象と最近は少し治まったようだが、母が一頃山のように健康食

皮膚組織の生理現象の間にもギャップがある。研究は奥が品を買い込んで毎食後に飲んでいたのを思い出す。自分も深く難しい。
厳密なメカニズムは脇に置いておいても、皮膚を若々し

そんなことを気にする年になったということか。
コラーゲンやヒアルロン酸などの高分子を摂取しても、く保つ方法が確立されれば多くの人にとって朗報であろう。

消化管から吸収されてそのまま膝に行くとは考えにくい。

考えてみれば基礎化粧品はまさにこのようなものであり、だからビタミン剤などは別として、健康食品など食べても効果の実感があるからこそこれまで多くの女性達に支持さ

無駄ではないかと思っていた。しかしメカニズムはどうでれてきたのだろう。極論すれば、メカニズムなどわからな

あれ、実感として健康食品の効果を感じる事もあると母はくても効果があれば商品は売れるし、作用機序はわからな言う。その中にはプラセボ効果も含まれるだろうが、このくても病気を治す薬は社会に役に立つのである。詳細なメ実感が一般の消費者にとって大切な要素なのだろう。

カニズム研究も学問的にはおもしろいが、視野が狭くなっ

老化や細胞死のような生命現象を観察していると、どうて自己満足の研究に陥らないよう気をつけたい。
（東京大学分子細胞生物学研究所）

してもメカニズムを解明するという方向に関心が向いていく。例えば、皮膚の老化メカニズムを理解した上で老化を

平成 17 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
鈴木民夫

日本の古くからの言い伝えである「色の白いは七難隠す」

的要素の一つであります。
（この言葉はよく考えてみますにもありますように、古来より色白は「美」の概念の中心と、美白の価値はかなりすごいことであることがわかりま− 125 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

す。ただ皮膚の色が白いだけで、性格悪い、頭悪い、体形白信仰における「美白」願望への想いとかなりの部分をオ

悪い、さらにあと４つも付加される難点をキャンセルさせーバーラップいたします。今回、コスメトロジー財団よりてしまうというのです。何の根拠もなくここまですごい事

研究費をいただくことができて、二重の意味でうれしく思だと言っているのですから、やはり一種の信仰と言ったほいました。ひとつはもちろん経済的意味ですが、もう一つうがいいのかもしれません。
）つまり、「美白」は ､ コスメ

は、最近、皮膚科領域ではすっかりマイナー領域になってトロジーの原点 ､ 出発点であると言っています。この「美しまった色素異常症に関する研究課題に対して助成をいた白」への願望は、言い換えれば皮膚におけるメラニン合成

だいたからです。この領域にはまだまだ解明すべき課題がのコントロールへの願望であります。私は 1998 年の米国

たくさんあり、また、多くの患者様が治らないまま悩んでコロラド大学留学を境にして、色素細胞の研究に携わるよいる疾患がたくさんあり、よい治療法の開発が期待されてうになりました。他に特に専門らしき分野のない私は、そおります。微力ながら、そんな期待に沿えるような研究をれ以来、色素細胞の研究者と名乗ることにしております。

目指しております。今後とも、色素細胞の研究を通じて、そんな私にとっては、まだまだ未知の領域が多いメラニン

コスメトロジーの発展に微力ながら寄与したいと思ってお合成機構とその調節メカニズムの解明というテーマは、美ります。

（山形大学医学部皮膚科学分野）

平成 17 年度

研究助成

私とコスメトロジー
内藤素子

私は、以前救急部に３年間勤務したことから、熱傷や外ようになりました。なんらかの原因により、皮膚組織が劣傷の患者さんを多く担当して参りました。その経験から、化、あるいは障害を受けている状態を再生するということ

創傷治癒ならびに皮膚再生に興味を持ち、ケロイドや肥を目標に、これまでずっと研究を続けて参りましたが、そ厚性瘢痕の治療、研究に従事して参りました。これらの研れはすなわち、皮膚を健康でいきいきとした状態に戻す事

究を進めるうち、皮膚の中に存在する体性幹細胞にも興味にほかなりません。このように考えますと、私がこれまでを持ち、この細胞を創傷治癒・皮膚再生に応用するべく研従事してきた研究もコスメトロジーという領域に随分と究を進めてまいりました。このような私の研究生活の過程通じる点があるように思い、本助成事業に応募させていたで、正直申し上げまして、これまであまり「コスメとロジだきました。有り難いことに助成していただけることとなー」を意識したことがありませんでした。しかし、数年ほり、「コスメトロジーという」新たな観点から研究を発展ど前から、光治療等に接する機会を得て、いわゆる「皮膚させる機会に恵まれましたこと、深く感謝申し上げます。

若返り」について考えるようになりました。そういたしま

今後も、皮膚に存在する幹細胞をコスメトロジー分野にもすと、「皮膚若返り」というのは、私が以前から従事して応用することを念頭におきながら、研究を進めたいと考えまいりました「皮膚再生」に含まれるのではないかと思うております。

（京都大学大学院医学研究科形成外科）

平成 17 年度

研究助成

コスメトロジーの観点からみた本研究
錦織

千佳子

今回の研究で私が意外だったのは、スフィンゴシンキナ

すこし行き詰まったが、あるとき通常は気にしない培養ーゼ阻害剤 DMS による B16 細胞内メラニン量と細胞培地

液の色が DMS 添加群と非添加群で異なることに気づき、中のメラニン量の相関である。はじめは DMS による B16

DMS の細胞内メラニン量制御作用はメラノソームの凝集・細胞内メラニン量増加は、メラニン産生系の亢進であろう

拡散および細胞外への分泌調節によるものと推定するにと考えたが、実験の結果は否定的であった。そこで研究は至った。調べてみると培養色素細胞の培地中へのメラニン− 126 −

コスメトロジー研究雑感分泌の研究は案外少なく、さらに培地中の黒色物質の同定への分泌を調節する’ことを検証する過程で、メラニン分も行われていないことがわかった。メラニン分泌機序や培

泌現象に関する知見を集積させたいと考えている。さらに、

地中の黒色物質について国内のメラニン研究者に尋ねても本研究の延長として、色素細胞から周囲の角化細胞へのメみたが、やはりほとんど研究されていないということで、ラニンの受け渡しの調節機序にスフィンゴシンキナーゼのメラニン分泌現象において研究すべきことがまだまだ多く

関与が証明されれば、これを利用した全く新しい観点から残されていると思われた。今後、本研究で得られた仮説、の皮膚色調節に関するコスメトロジーのツール誕生も夢ですなわち‘スフィンゴシンキナーゼはメラノソーム膜のスはないと考えている。

フィンゴシンからのスフィンゴシン 1- ホスフェート産生（神戸大学大学院医学系研究科応用分子医学講座皮膚科学）を制御することによりメラノソームの凝集・拡散・細胞外平成 18 年度

研究助成

「きれい好き」の体を覆う、薬が効かない細菌たち
小林

病原性大腸菌に端を発して、狂牛病、炭疽菌、SARS、一三

ろ、同じ祖先から最近多様化した一族とわかったという。

鳥インフルエンザ、はしか等のトピックが続いたことで、薬剤耐性菌が増えた原因が薬剤の濫用である事につい

感染症の脅威が広く再認識されるようになってきた。実て、ほとんどの研究者の考えは一致している。いったんで際、細菌感染は我が国の死因の大きな部分を占めている。

きた薬剤耐性変異型遺伝子は、様々なルートで別の細菌に

高齢者の最期は、細菌感染による肺炎という場合が多い。

動いていく。その薬剤にさらされると、この変異型遺伝子

年に数万の死亡者を出す胃がんも、その原因はピロリ菌らを持った細菌だけが生き残ってくる。どんな薬剤でも、濫しい。

用すれば、その薬剤の耐性菌を増やす事になる。そのよ「細菌は抗生物質で退治できる」というかつての楽観は、うな事態を避けるには、「効く事が確かな時だけ薬を使う」

抗生物質が効かない耐性菌の世界中での蔓延で吹っ飛んようにするしかない。そこで、教室では「細菌の薬剤感受でしまった。皮膚や鼻の中を覆っているブドウ球菌も、今性を調べてから抗生物質を処方せよ」と教えられるわけだ

では多くが薬剤耐性菌である。以前は「病院で耐性菌に感が、臨床の現場ではほとんど徹底されていない。

染されてしまう」ことが問題になっていたが、今では病院病院よりもっと深刻な問題は、日常生活にあふれる抗菌グッズにあるかもしれない。石鹸、肌着、靴下から、家電、外でも頻繁に耐性菌が見つかってくる。
薬剤耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）のゲノム解析に参加

文房具に至るまで、「抗菌」が氾濫している。ある種の抗した時、「毒素のデパート」ともいうべきたくさんの病原菌剤は、異物排出ポンプを活性化する変異を持つ細菌を選因子群、そして薬剤耐性遺伝子が、「動く遺伝子の塊」に択する。細菌がこの変異型遺伝子を獲得していると、色々乗っている事が印象に残った。今では 13 株の黄色ブドウな抗生物質で攻めても、どれもたちまち排出されてしまう

球菌の全ゲノム配列が解読されていて、それらを比べる事になる。清潔好きを自認して抗菌剤漬けの環境を作り、と、病原遺伝子と薬剤耐性遺伝子がどのようにして細菌

自分の肌を薬剤耐性菌だらけにしている人は、いざ切り傷に入り込んだか、進化していったかを追跡できる。PNASなどでそれらの細菌に感染された時、どうすればいいのだ

誌最新号（2008 年１月 29 日）によると、アメリカ中からろうか？

市中感染型 MRSA の 10 株を集めてゲノムを解読したとこ（東京大学新領域創成科学研究科および東京大学医科学研究所）− 127 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

平成 17 年度

研究助成

色素細胞研究の多様性を支援するコスメトロジー
柴原茂樹

色素細胞研究は、美白、日焼け、毛包の維持（白髪、脱メトロジーが支援する「精神、文化に関する分野」とも密毛）、網膜変性疾患（先進国における最も多い成人失明の接に関連する。さらに、睡眠の調節に関与するリポカリン

原因）、老人性難聴などの身近な問題から悪性黒色腫の治

型プロスタグランジン D 合成酵素（L-PGDS）が、皮膚で療など幅広い領域を包含する。高齢化社会を迎え、色素細はメラノサイトに限局して存在する事実は重要である。メ

胞研究は今後益々重要になると考えている。

ラノサイト由来の L-PGDS に未知の生理機能が示唆されメラノサイトの分化に重要な転写因子 Mitf の変異マウる。これらの知見は美肌の維持には良好な睡眠が重要といスである bw マウスは、全身のメラノサイトを欠損するたう経験則に科学的な根拠を与えるものである。高齢化がめ、白毛、難聴、黒眼（ほぼ正常な網膜）を呈する。我々

進む我が国においては、快適に眠り、美しく老いるというは bw マウスが低酸素、及び高炭酸ガス吸入刺激に対して願望は、すべての国民の願いであり、本研究成果は良好な

過剰な換気応答を呈することを発見した。特に、睡眠時のQOL の達成にも貢献する。

呼吸の維持には血液炭酸ガス分圧が重要であり、高炭酸ガ

Mitf の換気応答への関与という予想外の成果を得るこス吸入刺激に対する bw マウスの換気異常は驚きであった。

とができた。このように、一見異分野の研究を支援していこれまで、このような換気応答異常を呈するマウスの報告

ただいたコスメトロジー研究振興財団に深く感謝するとは皆無である。すなわち、メラノサイト、あるいは Mitf

共に、貴財団のさらなる発展を祈念する。

の未知の標的遺伝子が中枢性の化学受容機構に関与してい（東北大学大学院医学系研究科細胞生物学講座分子生物学る可能性が考えられた。よって、我々の Mitf 研究はコス分野）

平成 17 年度

研究助成

コスメトロジー研究の難しさ
町田和彦

20 年前の早稲田大学赴任時より適度の運動習慣やスト題などなどがあり、思うような結果が出ませんでした。そレスによる好中球のブドウ球菌貪食能と活性酸素産生能

こで目本の特別養護老人ホームのご協力をいただき、今回や NK 細胞の変化などによる非特異免疫能の変化を当初はの結果を出すことになりました。この研究はネイルケアの動物実験で、後には高齢者の健康増進運動で明らかにして女性入居者に与える影響を見たのもですが、施術者の研究きた。しかし、介護保険制度の始まりは本来目指した在宅者らしからぬ服装や言葉遣いが施設の従業員や利用者に介護の推進とは逆に施設介護に殺到する結果となった。そ逆に良い印象を与え、その結果われわれも想像しなかった

こで、最近は介護施設入所者に対する心身の健康増進といほどの良い結果になった気がします。考えて見ますとお化う立場からの介入研究を始めております。

粧というのもかなり心理的要素も加味された影響である

ちょうど本研究助成を頂いた時でしたので、初めは中国ような気がしますので、この結果は妥当なものだと思ってでのクリームを用いたハンドマッサージを計画し、かなりおります。

苦労して実施したのですが、言葉の行き違いや測定上の問（早稲田大学大学院人間科学系研究科健康福祉科学研究領域）− 128 −

コスメトロジー研究雑感

平成 17 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
石丸

久美子

私が化粧品に関する研究を本格的に始めたのは、フラン

私は大学で日本語の非常勤講師をしていたが、授業をしスの大学院に留学していた頃である。今考えれば、その時ながら、学生の化粧、ファッションを観察するのも面白かに日仏の化粧を研究対象にしようと決めたのは、やはり、った。何故なら、日本語を学びたい学生には漫画や日本の留学中に体験し、感じた様々な文化的な違い、驚きが影響

若者文化好きの学生が多く、ゴシック風の化粧、服装をししているのだと思う。まず大学に通い始めて気付いたのは、ている学生が数名いたからだ。また、いつも痛そうだなとフランス人学生は皆とても薄化粧ということだった。そし思ったのは、眉の上や舌にピアスをしているフランス人学てアイライナーだけは濃い学生が多かった。私も日本式に生が結構いたことであった。フランスでは、刺青もファッ

ファンデーションを塗って行くと不自然な気がして、段々ションとして驚くほど流行している。でも、テレビ番組でと薄化粧になっていった。その他、大学で驚いたのは、春は、流行に乗って入れたものの、後になって後悔する人が先や秋でも急に暖かい日があると、学生達は芝生にノース増えているというルポルタージュをやっていた（入れるのリーブで寝転がって日向ぼっこ、日焼けを始める。家の近は安いが、消すのには多額の費用が必要だという。結婚し所の公園では、夏には、水着になって日焼けをしている人

たカップルの約半数が離婚する国なのに、彼女の名前を刺がいて驚かされた。フランス人の日光に対する執念はこれ

青する人がいる不思議。）。今でも時々、偶然町で見かけた、程までにすごいのだ。

肩に「猪」（フランスは今、空前の漢字ブームなのだ。
）とフランスの美容院も衝撃だった。タオルを顔に掛けるという配慮などなく、ざぶざぶと洗い、お湯（いや、冬でも水で冷たいこともあった。
）が耳に入るのも気にしない。

いう刺青を入れていた、ずいぶん太めの女性が、今頃後悔していないだろうかとふと思い出す。
今後も、このような異文化間的衝撃を感じた当初の心を日本の美容院の丁寧さが身に沁みた。ある時は、「はい、忘れずに、学術的な比較文化研究を続けていきたい。

立ち上がって。」と言われて驚いたこともあった。長髪だ（大阪大学言語文化学博士、
ナント大学言語科学科博士課程）と立ち上がった方が切りやすいというのだ。

平成 17 年度

コスメトロジー雑感
椎名

まず、私達の研究課題に対し助成頂いたことをお礼申し

研究助成〜香道への誘い〜

さやか

道について少しご紹介したいと思います。

上げたいと思います。民間研究助成金の申請は今回が初め

香道は一定の作法に基づき香木を焚き、その香りを日常てのことでしたので、採択のご連絡を頂いた時には、共同から離れた静寂の世界で楽しむもので、6 世紀に日本へ渡

研究者と共に喜びまた驚いたことを今でも鮮明に覚えてお来し、室町時代に体系化されたとされています。香木は、ります。さて、私達の研究では、“香道”という日本独自

単純に香りを持った木というわけではなく、熱帯雨林で倒に発展してきた古典的伝統芸道を実験課題に用いましたが、木にバクテリアが付着し長い時間をかけて樹脂化されたも私自身この実験を共同研究者から持ちかけられるまで、実のです。「香の十徳」と呼ばれる、“癒し”をもたらす精神

は香道というものの存在すら知りませんでした。日本には的・肉体的作用が昔から伝えられているそうで、現在では“道”という文字の付く長い年月の修練により会得する芸

初心者を対象とした一日体験教室も実施されており、（実道がいくつかあります。みなさんも柔道、茶道は学生時代験を始めるにあたり私も参加してきました）、香席の独特に体育の授業や部活動で一度は経験したことがあることとな雰囲気を簡単に体感することができます。私は組香と呼思います。しかし、香道は他の芸道と違い日本人でもなじ

ばれる香席に参加しました。組香はまず数種類の香り（試

みが薄いものだと思います。そこでこの場をお借りして香香）を聞きその香りを覚えた後、再度香木を聞き（本香）− 129 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

その香りが試香時のどの香木と同じかを答えるという少しりに集中し嗅覚を研ぎ澄ます、このような経験は日常でなゲーム感覚のあるものでした。香席はただ香木を聞くといかなかできるものではありません。みなさんも機会がござうだけではなく、詩歌が詠まれたり、硯を磨り筆で文字をいましたら是非一度体験してみて下さい。
最後になりましたが、今後益々のコスメトロジー財団の書く場面もあったりと、他の芸道も取り入れられています。
所要時間２時間弱の短い香席でしたが、ピリッとした緊張

発展をお祈りいたします。
（理化学研究所脳科学総合研究センター）

感の中にゆったりとした時を感じ、またかすかな香木の香

平成 18 年度

研究助成

雑感

八田

武志

今回の助成の対象課題である高齢者の化粧行動に関心をな状態となってしまった。当然、院生からの評判は悪かっ抱くようになったきっかけは、Ｙ町の住民検診に参加するた。次年度からは各検査者が検査バッテリの項目を一通りようになった初年度のことである。北海道でおいしいものやる方式に変更し、それ以後検査の効率は上がり、検査者が食べられるとの勧誘に乗った５名の院生を連れて参加し、である院生の評判も改善したため、その後院生の参加者は各人が記憶検査、注意検査という具合に担当を決めて対象増加したという経緯がある。初年度の方式ではすべての検者に巡回してもらう方式で実施した。ところが、Ｙ町の住診対象者に出会うが、翌年度以降のやり方では一部の受診

民検診には１日で 400 人が参加する規模という予想以上の者にしか出会わないという違いがある。

大がかりなもので、高次脳機能検査と銘打ったブースには、前置きが長くなったが、初年度にすべての受診者に出会希望者のみとしたにもかかわらず長蛇の列が生まれるといったお蔭で、高齢者の化粧行動に関心を抱くようになった

う事態になってしまった。住民の受診希望者に検査項目をのである。80 歳を超えて化粧をきちんとして香水の香り

巡回してもらう、人間ドックなどで採用されている検診方が漂う女性は化粧気のない女性よりも検査結果の成績が優式の採用には問題があったのである。一つの検査で長引くれる印象を持ち、この直観が今回の研究課題につながった。

人がいると、その次の検査に移れないために長い順番待ち

言わば効率の良くなかった検査方式が研究のアイディアが出来てしまったのである。順番待ちの列が長くなると待を生んだわけで、何事にも効率だけを追求することは考えっている住民のイライラも検査者に伝わり出すという具合ものであることを改めて思い知った次第である。
（関西福祉科学大学健康福祉学部）

で、検査者の院生は昼飯も十分にとれない、ストレスフル

平成 18 年度

研究助成

コスメトロジー雑感
塩田真友子

本研究助成において，電車の中といった人前での化粧行

これはあくまで私の個人的経験・感想に過ぎないが，電車動に関する大学生の意識について調査・検討を行なった。

の中で友達同士で騒ぎながら化粧をしている高校生のグル

このような行為は，電車の中で大きな声で話したり，通路ープを見た時，彼女達の真の目的は化粧することそのものに座り込んだりするという行為とは異なり，実害は殆ど無ではなく，それがコミュニケーションの一手段としての役い。にも関わらず，周囲にあまり良い印象を与えるもので割を果たしているように見えた。同じ行為を共有することはない。
「何となく目につく」，「何となく嫌な感じがする」

によりグループ内のコミュニケーションを円滑にしていると感じる方が多いのではないだろうか。しかし，行為者当ように見えたのである。

人はその行為をどのように捉えているのだろうか。勿論，今回は大学生のみを調査対象者としたが，高校生や年配

時間が無かったため仕方なく，という場合もあるだろう。

の世代を対象に調査を行うことができれば，より興味深い− 130 −

コスメトロジー研究雑感

結果が見出されるかもしれない。また，今回は質問紙によない。

る調査を行ったため，設定した内容についてのみの検討し最後になりましたが，本研究を採択していただき助成をか行えないという限界があった。面接法などの他の手法に賜りましたコスメトロジー研究振興財団に心より感謝申しよるアプローチを行えば，新たな見解が得られるかもしれ上げます。

（岡山大学大学院社会文化科学研究科）

平成 18 年度

国際交流援助海外交流コスメトロジーとの結び付きに関する雑感文
大野

泰雄／小島

去る平成 19 年８月 21 〜 25 日にかけて、第６回国際動th

肇のグローバリゼーション並びに科学者と動物福祉活動者とWorld Congress on Alternativeの対話」をメインテーマに、化粧品のための EU 域内での& Animal Use in the Life Science）がホテルイースト 21

動物実験が原則禁止される 2009 年に向けての「代替法のバ

東京（東京都江東区）にて開催された。34 カ国、１地域

リデーション・行政の受け入れ」に関する新たな研究開発から 1000 名を超える参加者が東京に集い、過去最大の盛等についての討論等が行われた。

物実験代替法会議（６況な会議となった。参加者は 47 に及ぶシンポジウムや市

国際協調、動物実験とコスメトロジーの３つのキーワー

民公開講座などの多彩な科学プログラムで研鑽を積む一ドを結ぶ海外交流は、もはや留めきれない潮流になりつつ方、ウエルカムパーティに先立ち企画された動物慰霊祭、ある。動物実験の禁止は EU 域内の問題であり、本来は国夏祭りを想定した親睦会などで日本や東京の夏を満喫し際問題ではない。しかし、経済や文化のグローバル化、国た。また、アジアで初めて開催された会議ということも際協調、相互交流を考慮すれば、日本だけ（医薬部外品）

あり、中国、韓国、京都でもサテライトシンポジウムが規制があるからという理由で動物実験を継続することはで開催され、総勢 300 名以上が集った。本会議では、「動物きない。今回の会議は日本の動物実験代替に対する前向き

実験代替法の促進、３Rs（replacement（代替法の利用）、な姿勢を示し、欧米の研究者や愛護団体関係者がそれぞれreduction（動物利用数の削減）、
refinement（苦痛の軽減））評価したと考えている。

− 131 −

事業報告書

事 業 報 告 書

（自平成 19 年 4 月 1 日

至平成 20 年 3 月 31 日）《研究助成等の選考関連》
2007

5

7

公募開始

全国 265 ヶ所の大学・病院・研究機関等、関係学術雑誌８誌、当財団 HP
他２HP に掲載

7

2

公募締切り

応募数 86 件

9

4

選考委員会（分科会１）

素材、物性に関する分野の選考

9

11

選考委員会（分科会２）

生体作用、安全性に関する分野の選考

9

6

選考委員会（分科会３）

精神、文化に関する分野の選考

921

本選考委員会

各分科会の結果を総合的に判断して研究助成 23 課題、国際交流援助２課
題を選考

11

20

表彰贈呈式

記念講演：｢ 顔の美の基準と科学的理論 ｣クリニック宇津木流 院長 宇津木 龍一 先生

11
2008

20 〜

2 中旬

助成課題の公表

当財団 HP 他関係学術雑誌に掲載

持ち回り企画委員会

平成 20 年度の研究助成課題選考に関して

通常理事会

平成 18 年度事業報告ならびに収支決算報告、会計処理規則の改定、株主と《理事会関連》
2007

6

18

しての議決権行使について、報告事項
11

20

通常理事会

平成 19 年度（第 18 回）研究助成者等の承認、
平成 20 年度事業計画及び予算案の承認《評議員会関連》
2007

6

18

通常評議員会

平成 18 年度事業報告及び収支決算報告、報告事項

1120

通常評議員会

平成 19 年度（第 18 回）研究助成者等の承認、
平成 20 年度事業計画及び予算案の承認

《その他》
2007

3

末

6

末

12

財団活動の情報更新

当財団 HP へ平成 19 年度事業計画を記載
当財団 HP へ平成 18 年度事業報告を掲載

コスメトロジー研究報告「コスメトロジー研究報告」15 号の概要を当財団 HP に記載− 135 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

第 18 回研究助成を受けられたかたがた（J：一般研究助成、H：国際交流援助）

管理番号J-07-01

J-07-02

J-07-03J-07-04J-07-05

J-07-06

J-07-07J-07-08

J-07-09

研

究

課

題

分

ビタミン E の高機能化とさらなる有効利用を目的とした新規化粧品素材の酵素・化学複合的分子創製
皮膚の炎症反応・炎症後組織修復における血小板の役割の解明と血小板機能制御による治療法の開発
紫外線の皮膚慢性毒性に対するサンスクリーン剤の防御効果を高速・高感度に評価する方法の開発
新しい生体親和性材料としてのペプチド性人工コラーゲンゲル
低分子量Ｇ蛋白質Rab27Aによるメラノソーム輸送
制御メカニズムの解明

触動作の特徴抽出による化粧品の使用感評価

化粧品素材としての生体安定性を有する発色ナノ粒
子含有液の開発
遺伝子改変マウスを用いたヒスタミンの接触性皮膚炎に与える影響の研究
非線形光学現象を利用した真皮コラーゲン分布 in vivo
可視化法の開発野

カーの変動と血流量／血液量／血流速度の変化とのJ-07-12J-07-13

J-07-14

J-07-15樹状細胞分子SHPS-1による皮膚免疫制御とその皮
膚アレルギーへの治療的応用
リン脂質代謝酵素ホスホリパーゼA2群の皮膚における発現・機能と脂質メタボロミクス
経済開放政策以降のインドにおける中間層の増加と化粧品の消費動向の変化に関する研究
ミルクタンパク質からなる無機有機ハイブリッドナ
ノスフェアの創製
皮膚表皮形成に関わるタンパク質架橋接着反応の分子基盤− 136 −

研究者

大分大学准教授

皮膚科学
皮膚免疫学
薬理学

京都府立医科大学大学院
医学研究科皮膚科学准教授

下

広

伸

ペプチド・蛋白質化学 早稲田大学理工学術院
教授
高分子化学
小 出 隆
細胞生物学

規

メラノソーム輸送に関する分子の同定・解析

藤

恵
人

皮膚科学
紫外線生物影響加田則

東北大学大学院
医学系研究科助教

池畑

東北大学大学院
生命科学研究科助教伊藤敬

バイオメカニクス 大阪大学大学院工学研究科
環境・エネルギー工学専攻助教
感性工学
サイコレオロジー

秋

山

材料工学
光電子工学
反応化学、分析化学

東京電気大学教授

分子生物学
薬理学
薬学

東北大学大学院
工学研究科教授

平
大

栗

庸

子

健

二

津

浩

大阪大学大学院
生体計測学
基礎工学研究科教授
レーザー応用光学
荒 木
皮膚組織学

睡眠科学

関連についてJ-07-11

表

酵素化学
合成化学
生物工学

全断眠または連続した部分断眠によるストレスマー
J-07-10代勉

大阪大学保健センター
特任研究員

菅

沼

仲

盛

免疫学
皮膚科学
生化学

群馬大学
生体調節研究所教授

基礎生物学
生化学
分子生物学

東京都医学研究機構
東京都臨床医学総合研究所副参事研究員

化粧と文化

的
村

崎

尚

上

誠

東北大学大学院文学研究科
専門研究員

岡

光

信

子

慶應義塾大学理工学部応用化学科
高分子化学
准教授
天然高分子
無機有機ハイブリッド
藤 本 啓 二ナノ粒子

タンパク質に関する 名古屋大学大学院
生命農学研究科准教授
細胞生物学
人 見 清
生化学

隆

事業報告書

管理番号J-07-16

J-07-17

J-07-18

J-07-19

J-07-20

J-07-21

J-07-22

J-07-23

研

究

課

題

分

野

代

表

研

両親媒性物質との分子複合体及びイオン交換体形成

製剤学

新潟薬科大学薬学部
薬剤学研究室講師を利用する新規機能性ケミカルピーリング剤の開発

香粧品科学

飯

正常肌およびバリア機能異常肌における角層コルネ
オデスモゾーム分解過程の研究

表皮各層の細胞接着機構の形態的生化学的解析

オリーブ二次代謝産物の微生物変換によって得られる新規抗酸化物質の物性解析
細胞内シグナルPTEN/PI3キナーゼ経路による白髪化の制御

天然物有機化学
応用酵素化学
応用微生物学

成分の探索

者

菜穂子

国立大学法人旭川医科大学准教授

山

本

明

岡山大学大学院
自然科学研究科教授

神

崎

浩

鈴

木

聡

千葉大学大学院
薬学研究院助教

天然物化学

大

槻

崇

東北大学大学院
アジア人の「化粧」にみられる身体観、身体表象と化粧と文化
国際文化研究科教授
その変容についての研究−身体装飾のアジア的伝統と〈化粧のグローバル化〉（化粧や身体装飾と山 下 博
精神文化構造の連関）のはざまで−

香りが記憶や情動と結びつく際の脳内神経機構に関する研究
化粧品の防腐剤低含有率化を目指した除菌材料の開発美秋田大学教授

分子生物学
生化学

Wntシグナルを標的とした育毛促進作用をもつ天然

村

究

司

独立行政法人産業技術総合研究所
研究員

神経生理学

梶

生体高分子化学
ペプチド科学
生物化学

原

利

一

順

子

九州共立大学講師

原

Federal Institute for Risk Assessment（ドイツ）
Director and Professor at the BfR

H-07-01

動物実験代替法の開発促進と動物福祉の向上

Horst Spielmann

受入責任者

国立医薬品食品衛生研究所副所長

大

野

泰

雄

ペラデニア大学．医学部講師

H-07-02

Senarath B. P. Athauda

C .elegansを指標とした長寿命化作用をもつ化合物の検索と作用機構の解析受入責任者

東京薬科大学大学院生命科学研究科教授

井

上

英

史

（敬称略・受付順）※第１回〜17回の研究助成課題はホームページ（http://www.cosmetology.or.jp/）でご覧ください。

− 137 −

コスメトロジー研究報告 Vol.16, 2008

役

員
平成 20 年３月 31 日現在

理事長

小林礼次郎

専務理事（常勤） 有本
理

監

事

事

評議員

磯邊

㈱コーセー取締役相談役

亨
律男㈱博報堂相談役

宇佐美昭次

早稲田大学名誉教授

内山充

有限責任中間法人薬剤師認定制度認証機構理事長

小林保清㈱コーセー代表取締役会長

新村嘉也

高砂香料工業㈱取締役相談役

髙橋

久

西川

武二

慶応義塾大学名誉教授

花輪

隆昭

昭和館館長

廣部

雅昭

静岡県学術教育政策顧問

牧野利孝

日本化粧品工業連合会専務理事

帝京大学名誉教授

小田倉正典

公認会計士

黒田

節哉

弁護士

石倉

伸治

㈱コーセー常務取締役

上野芳夫

元東京理科大学薬学部教授

緒方宏泰

明治薬科大学教授

北原文雄

東京理科大学名誉教授

近藤保

東京理科大学名誉教授

齊藤

勲㈶日本食品化学研究振興財団専務理事

多島新吾

防衛医科大学校教授

長野

哲雄

東京大学大学院薬学系研究科教授

西岡清

横浜赤十字病院院長

野呂影勇

早稲田大学名誉教授

溝口昌子

聖マリアンナ医科大学名誉教授

宮㟢榮三

東京工業大学名誉教授

山崎幹夫

新潟薬科大学学長（専務理事以外は全員非常勤）− 138 −

＊本財団についてのお問い合わせは下記にお願いいたします。

財団法人 コスメトロジー研究振興財団〒104−0032 東京都中央区八丁堀一丁目９番９号
電話 03（3206）7721

コスメトロジー研究報告

Vol.16／2008

非売品

2008年９月１日発行

編集責任者
発
行

制

作

印

刷

有本 亨
財団法人

エイエム企画〒170− 0013 東京都豊島区東池袋三丁目15番２号
電話 03（3590）5375

太陽印刷工業

表紙デザイン監修：㈱コーセー
2008

コスメトロジー研究振興財団〒104− 0032 東京都中央区八丁堀一丁目９番９号
電話 03（3206）7721

商品デザイン部デザイン室不許複製

禁無断転載