ホームページ:

www.agilent.com/chem/jp
カストマコンタクトセンタ：

フリーダイヤル 0120-477-111
本資料記載の情報は予告なしに変更されることがあります。
アジレント・テクノロジー株式会社© Agilent Technologies, Inc. 2013
Printed in Japan August 31, 2013
5991-2944JAJP

LC、LC/MS カラムセレクションガイド

詳細情報

LC、LC/MS カラムセレクションガイド
LC、LC/MS カラムの総合リファレンスガイド

LC および LC/MS カラム
さまざまな相と粒子サイズの Fast LC カラムの品揃えにより、分析の柔軟性と拡張性が向上します。
従来のクロマトグラフィーや超高速クロマトグラフィー、生体分子の分離、複雑な塩基性化合物の分析など、さまざまな分析において、アジレントは、高速で再現性の高い結果を実現する業界最高性能のカラムを提供します。これらはすべて、アジレントの比類のない品質と信頼性を備えています。

アジレントの消耗品情報をお届けします。
『カラム分析機器部品カタログ』が製品別に分冊化され、必要な情報を見つけやすくなりました。
各カタログには消耗品の情報だけでなく、役立つヒントやアプリケーションなども掲載されています。

• 製品の写真と詳細情報• セレクションガイドとアプリケーション• 適合性チャート• トラブルシューティングのヒント• メンテナンススケジュール

アジレントの消耗品に関する情報をセットにしてお届けします。

• Poroshell 120 カラム - 2 µm 未満のカラムよりも 30～50 % 低い圧力で高効率と高分離能を提供します。

• ZORBAX ラピッドレゾリューション High Definition (RRHD) カラム – Agilent 1290 Infinity LC やその他の UHPLC 機器と組み合わせて使用でき、120 MPa までの安定性を実現する、高度な充填プロセスを特徴とした 1.8 µm カラムです。14 種類を超える相と HILIC が用意されています。

クロマトグラフ用汎用部品 – バイアル、シリンジ、ガス精製システム、フィッティング、ツールな
どの幅広い品揃えにより、汚染を最小限に抑え、正確で再現性の高い結果を提供します。

• ZORBAX Eclipse Plus カラム – C18 および C8 カラムは、優れたピーク形状を提供しつつ、フェニ

ルヘキシル結合相と PAH 分離用の C18 結合相でより多くのアプリケーションに対応します。
Eclipse Plus のすべての相は、Fast LC/UHPLC RRHD および RRHT カラム、1.8 µm が用意されています。拡張性の面では、Eclipse Plus C18 相は Poroshell 120 EC - C18 相に非常に類似しています。

サンプル前処理 – Bond Elut SPE カートリッジ、パッケージ済み QuEChERS キット、フィルタ、乾燥マ
トリックススポットカード (DMS) など、複雑なマトリックスからサンプルを確実に抽出・濃縮できる製品が揃っています。

• Poroshell 120 および RRHD カラムに加えて、ZORBAX ラピッドレゾリューションハイスループッ

ト (RRHT) カラムは 140 を超える 1.8 µm カラムの選択肢を持つ第 3 の高速 LC オプションです。
RRHT カラムには内径 2.1、3.0、4.6 mm が用意されており、すべて 60 MPa まで使用可能です。

GC、GC/MS – GC 用のウルトライナートソリューション、注入口消耗品、Agilent J&W GC カラムおよAgilent ZORBAX LC カラムを選択するということは、信頼性の高い製品はもちろん、それ以上のものが得られるということを意味します。つまり、世界最大のクロマトグラフィー製品のサプライヤであるアジレントのサポートや、40 年を超える専門知識、テクニカルサポートも同時に得られることになるのです。インターネット、電話、担当者を通じ、アジレントはお客様の直面する課題解決をサポートいたします。

LC、LC/MS、CE、CE/MS – 低分子、生体分子、GPC/SEC 用の LC キャピラリー、ランプ、ZORBAX LC

び標準溶液など、高品質な分析を支える消耗品を取り揃えています。分析が困難なサンプルについても、再現性の高い優れた性能を実現します。

カラムの充実した品揃えにより、システムの性能を最大まで引き上げ、常に高品質の結果を生成します。

ICP-MS、分光分析 – 原子吸光分析、ICP-OES、ICP-MS、MP-AES、分子分光分析用の消耗品により、大量サンプルの迅速スクリーニングのニーズに対応します。
追加のカタログのご請求については、カストマコンタクトセンタ(0120-477-111) までお知らせください。

キャンペーン・イベント等の最新情報
消耗品のキャンペーンや、お仕事に役立つセミナー、イベントなど、最新情報をホームページで紹介しています。ぜひホームページをご覧ください。

www.agilent.com/chem/jp

目次

目次
低分子化合物の分離用 LC カラム

生体分子の分離用カラム

HPLC カラムの選択 ................................................................. 2

バイオカラム選択ガイドライン ............................................ 139

逆相 HPLC/UHPLC 用高速カラム .......................................... 23

生体高分子の分離 .................................................................... 141

Poroshell 120 .............................................................................. 24

UHPLC/HPLC 技術 .................................................................. 152

ZORBAX ラピッドレゾリューション
High Definition 1.8 µm .............................................................. 29

逆相 HPLC.................................................................................... 153

ZORBAX ラピッドレゾリューション
ハイスループット 1.8 µm............................................................... 35

ZORBAX 300Å Extend-C18 ....................................................... 164

ZORBAX 300Å StableBond....................................................... 155

Poroshell 300 .............................................................................. 168

Agilent UHPLC ガード ............................................................... 42

Poroshell 120 .............................................................................. 173

逆相分析 HPLC 用カラム ........................................................ 43

PLRP-S ......................................................................................... 175

ZORBAX Eclipse Plus ................................................................ 44

アミノ酸分析 (AAA) カラムおよび消耗品 ............................. 182

ZORBAX Eclipse PAH ................................................................ 50

イオン交換クロマトグラフィー............................................... 185

ZORBAX Eclipse XDB................................................................ 52

Agilent Bio MAb HPLC カラム ................................................ 187

ZORBAX 80Å StableBond......................................................... 60

Agilent Bio IEX HPLC カラム ................................................... 190

ZORBAX Rx ................................................................................. 68

PL-SAX 強陰イオン交換カラム ................................................ 194

ZORBAX 80Å Extend-C18 ......................................................... 70

PL-SCX 強陽イオン交換 HPLC カラム .................................... 198

ZORBAX Bonus-RP.................................................................... 74

Agilent バイオモノリスイオン交換 HPLC カラム ................ 200

ZORBAX オリジナル逆相カラム .............................................. 79
分析 HPLC 用キット .................................................................. 80

Pursuit.......................................................................................... 83
Polaris .......................................................................................... 94
TC-C18 (2) および HC-C18 (2) .................................................. 100
PLRP-S ......................................................................................... 102
分取 HPLC カラム .................................................................... 107

Agilent Prep LC カラム ............................................................. 107

サイズ排除クロマトグラフィー............................................... 204

Agilent Bio SEC-3....................................................................... 206
Agilent Bio SEC-5....................................................................... 212
ProSEC 300S ............................................................................... 216
ZORBAX GF-250 および GF-450 ゲルろ過カラム ................. 219
アフィニティクロマトグラフィー........................................... 222

Agilent バイオモノリスプロテイン A HPLC カラム ............ 222
メソッド開発 ............................................................................ 224

ZORBAX カラムメソッド .......................................................... 224

ZORBAX PrepHT ........................................................................ 110

逆相 LC/MS メソッド ............................................................... 226

Pursuit および Pursuit XRs 分取 ............................................. 115

バイオイオン交換カラムメソッド........................................... 227

Polaris 分取カラム ..................................................................... 117

SEC カラムメソッド .................................................................. 229

ロード & ロック.......................................................................... 118

高感度キャピラリーカラムメソッド....................................... 231

その他の HPLC 分離用のカラム .............................................. 119

キャピラリーカラムとナノカラム ........................................ 232

ZORBAX HILIC Plus ................................................................... 120

マイクロボア (内径 1.0 mm) カラム ..................................... 241

順相カラム ................................................................................. 122

精製 – 分取 HPLC..................................................................... 244

ZORBAX イオン交換カラム – SAX および SCX..................... 129

ZORBAX PrepHT ........................................................................ 246

糖分析用の Hi-Plex カラム ....................................................... 131

分取・プロセス用 PLRP-S ........................................................ 247
分取・プロセス用 PL-SAX および PL-SCX ............................ 252
合成ペプチド用 VariTide RPC カラム ..................................... 255

VariPure IPE ................................................................................ 256
付録 .......................................................................................... 257

HPLC カラムの USP 表記 .......................................................... 257

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

1低分子化合物の分離用カラム

HPLC カラムの選択
サンプルと移動相に従って、下のカラム選択ガイドを左から右に進んでください。右端に示されているページでカラムの詳細をご覧いただけます。

ヘキサンに可溶

有機溶媒に可溶

MeOH および
MeOH : H2O またはACN およびACN : H2O に可溶

順相モード - 未修飾シリカ

122 ページ

順相モード - 化学結合タイプ

122 ページ

逆相モード - 化学結合タイプ

44 ページ

ゲル浸透 (低分子)

THF に可溶

分子量 < 3000

逆相モード - 化学結合タイプ

44 ページ

逆相モード - イオン化コントロール

43 ページ

逆相モード - イオンペア試薬を使用した
化学結合タイプ

43 ページ

逆相モード - 未修飾シリカ (HILIC)

120 ページ

イオン交換モード

129 ページ

非イオン性

水に可溶

イオン性

サンプル

生体分子
有機溶媒に可溶

分子量 > 3000

ゲル浸透クロマトグラフィー

ゲルろ過クロマトグラフィー

219 ページ

イオン交換モード - ワイドポア充填剤

185 ページ

逆相モード - ワイドポア充填剤

168 ページ

水に可溶

分子量が 3000 を超えるバイオカラムについては、 Agilent バイオ
HPLC カラムの項 (139 ページ) をご覧ください。

サイズ排除クロマトグラフィー"Practical HPLC Methodology and Applications," Brian A. Bidlingmeyer, John Wiley & Sons, Inc., New York, p. 109 より許可を得て転載

2低分子化合物の分離用カラム

Agilent 逆相結合相のクイックガイド
ZORBAX RP - HPLC カラム

推奨用途およびアプリケーション

ページ

Poroshell 120

ü 低圧で高効率を実現するための表面多孔質粒子

24

ü 2.7 µm 粒子で 2 µm 未満の粒子と同様の効率
ü 選択性を最適化するため、エンドキャップ処理/未処理の C18 および C8 相やその他の各種相から選択可能
ü 40 MPa および 60 MPa の LC に適合

Eclipse Plus
RRHD (120 MPa) および RRHT (60 MPa) を用意、
1.8 µmü メソッド開発における第 1 の選択肢

44

ü pH 2 ～ 9 で、塩基性、酸性、中性化合物に対して信頼性の高い分離が可能で、なおかつ長寿命
ü 塩基性化合物に対して優れたピーク形状
ü 1.8、3.5、5 µm カラムでの高い分離および効率
ü 長期再現性を実現するための厳しい QA/QC テストを実施

Eclipse XDBRRHD (120 MPa) および RRHT (60 MPa) を用意、
1.8 µmü 柔軟性の高いメソッド開発のための 4 種類の選択肢

52

ü pH 2 ～ 9 の広い pH 範囲で高性能を発揮
ü 酸性、塩基性、中性に対する優れたピーク形状
ü 高密度結合とダブルエンドキャッピングで長寿命を実現
ü 1.8 および 3.5 µm カラムを使用して高速、超高速、高分離能を実現
ü キャピラリーから分取用まで対応

StableBond (SB)RRHD (120 MPa) および RRHT (60 MPa) を用意、
1.8 µmü 塩基性、酸性、中性化合物のいずれにも対応

60

ü 低 pH (1～2) での優れた安定性
ü 高温 (C18 は最高 90 °C、C8、C3、Phenyl、CN、Aq は最高 80 °C) および低 pH で非常に安定ü さまざまな選択性を示す幅広い結合相 (C18、C8、C3、CN、Phenyl、Aq) から選択可能ü 移動相としてギ酸、酢酸、または TFA を使用できるため、LC/MS に使用可能
ü ペプチドおよびタンパク質の分離用に TFA を含む移動相を使用可能
ü 高速分離に対応する 1.8 および 3.5 µm カラム(続く)

バイオカラムについては、139 ページをご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp3低分子化合物の分離用カラム

Agilent 逆相結合相のクイックガイド
ZORBAX RP - HPLC カラム

推奨用途およびアプリケーション

ページ

ZORBAX Rx

ü SB カラムとは異なる選択性で、低 pH での塩基性、酸性、中性化合物を分離

68

ü Rx-C8 は SB-C8 と同じ製品

Bonus-RPü 水比率の高い移動相での塩基性化合物の分離

高速 LC/UHPLC RRHD (120 MPa) および RRHT
(60 MPa) を用意、1.8 µm

ü 中性 pH から低 pH での塩基性、中性、酸性化合物の分離 (低 pH で特に安定)74

ü 異なる選択性でのペプチドの分離
ü 高速分離に対応する、1.8 および 3.5 µm カラム

Extend-C18
高速 LC/UHPLC RRHD (120 MPa) および RRHT
(60 MPa) を用意、1.8 µm

ü 遊離塩基構造の pKa より高い塩基性化合物の分離、pH 11.5 までの高 pH での塩基性、酸性、中性化合物の分離70ü 低分子またはペプチドの LC/MS 分析で水酸化アンモニウムを移動相添加剤として使用
ü 高 pH、中 pH、低 pH の分離で,異なる選択性を提供
ü 高速分離に対応する、1.8 および 3.5 µm カラム

オリジナル ZORBAX カラム

推奨用途およびアプリケーション

ページ

ZORBAXü SB カラムとは異なる選択性により、低 pH で塩基性、酸性、中性化合物を分離。活性シラノー
ル基は SB カラムよりも多い

79

ü より中性に近い pH 値での「混合モード」分離
ü ODS、C8、CN、ODS「Classic」(エンドキャップなし) を用意

ヒントとテクニック「The LC Handbook : Guide to LC Columns and Method Development」 (資料番号 5990-7595EN)
このガイドでは、適切な LC カラムの選択方法や、ラボの業務を改善し、生産性を向上させるための多くのヒントや秘訣を紹介しています。
詳しくはお問い合わせください。

4

低分子化合物の分離用カラム

その他のアジレント逆相カラムのクイックガイド
Pursuit ファミリ RP - HPLC カラム Pursuit
ファミリ

Pursuit HPLC

推奨用途およびアプリケーションページ

ü C18 や C8 を含む幅広い相83ü Diphenyl は強双極子 - 双極子水素結合や π - π メカニズムを使用して、芳香族化合物に別の選択性を提供
ü PFP は、標準の逆相条件下で極性 (ハロゲン化) 対象化合物や位置異性体に優れた分離能を提供

Pursuit XRs および Pursuit XRs Ultraü Pursuit ファミリを補完する大きい表面積と小さいポアサイズを提供

91

ü Ultra は特殊なハードウェアとロード量により 60 MPa までの安定性を提供

Polaris ファミリ

推奨用途およびアプリケーション

ページ

C18-A および C8-A
3.0、5.0、および 10 µm (C18-A のみ) を用意

ü C18-A および C8-A は一般的な極性のアプリケーションに異なる選択性を提供

94

Amide-C18
3.0 および 5.0 µm を用意

ü 立体的保護がないため、選択性がわずかに異なる

C18-Ether および C8-Ether
3.0 および 5.0 µm を用意ü エーテル基のエンドキャップで実現する高極性の表面による多様な選択性

アジレントのその他のカラム

推奨用途およびアプリケーション

ページ

TC-C18 (2)5 µm を用意

ü 強塩基性化合物などの極性および無極性化合物の混合物に適切

100

HC-C18 (2)5 µm を用意

ü 高い価値を持つ、保持力の強いオプション100

ü 水素結合に対応するエンドキャップを使用した設計

94

ü ZORBAX Bonus-RP のように導入されたアミド基を使用

94

ü カーボン量 17 %
ü 塩基性化合物でも優れたピーク形状

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp5低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 逆相 HPLC カラム選択フローチャート
低分子、高分子分析のために多くの分析者にとって、逆相 HPLC は主要な分析方法の 1 つです。逆相 HPLC では、イオン性および非イオン性の分析対象成分を分析できます。
そのため、この ZORBAX カラム選択フローチャートでは、逆相カラムに焦点を合わせてご説明します。このページの概要に従って、低分子および高分子用のメソッド開発に使用する逆相カラムを簡単に選択することができます。
このフローチャートでは、低分子サンプルやタンパク質およびペプチドサンプル用のメソッド開発の際に最初に使用するカラムの選択情報を提供するとともに、結合相とカラムコンフィグレーションを決定するための必要事項についても解説します。

低分子

高分子

MW < 3000

MW > 3000

充填剤のポアサイズ

80 ～ 120 Å

300 Å

充填剤のポアサイズは、分析する分子のサイズを基にして選びます。一般に低分子は、ポアサイズが 80 ～ 120 Å 前後で容易に拡散しますが、それよりも大きいペプチドやタンパク質の場合は容易に拡散しません。このため、ペプチドやタンパク質のアイソクラティックまたはグラジエント分離には、ポアサイズ 300 Å の充填剤 (300SB) を推奨します。

Eclipse Plus C18 または Poroshell 120 EC-C18

最初のカラム結合相

StableBond 300SB-C18

C18 は、中程度の極性から無極性の化合物を良好に保持するため、大部分のサンプルで最初に選択するカラム結合相としてお勧めします。C18 相で分離能を最適化できない場合、大きいタンパク質や、従来の逆相溶媒を使用した C18 では溶離が困難な疎水性化合物を分析している場合には、短鎖相を考慮する必要があります。超高速 LC 性能を活かすには Poroshell 120 EC-C18 または Eclipse Plus RRHT/RRHD から始めます。

低分子

高分子

MW < 3000

MW > 3000

標準分析

高速分析

標準分析

高速分析

Eclipse Plus C18

Poroshell 120 EC-C18

ZORBAX 300SB-C18

ZORBAX 300SB-C18

4.6 x 150 mm、3.5 µm
959963-902

4.6 x 100 mm、2.7 µm
695975-902

4.6 x 150 mm、5 µm
883995-902

4.6 x 50 mm、3.5 µm
865973-902

Poroshell 120 EC-C18

ZORBAX RRHD* Eclipse Plus C18

Poroshell 300SB-C18

4.6 x 75 mm、2.7 µm
697975-902

2.1 x 50 mm、1.8 µm
959757-902

2.1 x 75 mm、5 µm
660750-902* 圧力上限 120 MPa。1290 Infinity LC または UHPLC 装置に最適

バイオカラムについては、139 ページをご覧ください。

6

低分子化合物の分離用カラム

カラムと移動相選択のためのガイド : 逆相
HPLC カラムは 2 つの部分、カラムの化学的性質とハードウェアから構成されています。適切なカラムの化学的性質については、各タイプの結合相のカタログセクションを参照してください。カラム
ハードウェアと粒子径を選択するには、「Agilent ZORBAX ラピッドレゾリューション HT」の他、「ソ
ルベントセーバおよびキャピラリカラムと PrepHT カラム」も含め、「カラムサイズと高速分離の選
択」のセクションをご覧ください。

ポアサイズの選択
溶質の分子量が約 3000 未満の場合は、ポアサイズの小さい (60 ～ 120 Å) カラム充填剤を選択します。それ以外の場合は、ポアサイズ 300 Å のカラム充填剤を使用します。
ZORBAX ラピッドレゾリューション
ハイスループット (RRHT) カラム

粒子径の選択HPLC カラム用の標準粒子径は 5 µm で、メソッド開発には 3.5 µm 以下が主流となりました。高速分
析または高分離能の分析が必要な場合には、粒子径 1.8 µm や 2 ～ 3 µm の充填剤を使用します。粒子
径 1.8 µm で短いカラム長のカラムを使用すると、高速で高分離能の分析を行うことができ、最高の効率が得られ、2.7 µm の表面多孔質でも近い結果が得られます。1.8、2.7、3.5、5 µm と、さまざまな粒子径がありますが、HPLC や UHPLC (圧力は 40 MPa、60 MPa、または 120 MPa) では、まず小さい粒子からはじめると、最良の結果が得られます。

カラムコンフィグレーション
ここ数年で、メソッド開発における最適なカラムサイズ選択の方法は大きく変化しました。溶媒使
用量を減らし MS 検出器との互換性を得るため、内径 4.6 mm のカラムに代わって 3.0 mm や 2.1 mmなど小さい内径を持つカラムが使われるようになっています。また、50、75、100 mm など短めのカラムがまず選ばれることが増え、長いカラムは、高い分離能が必要な場合や、使用する粒子径が 3.5
または 5 µm の場合のみに使用されるようになりました。

ヒントとテクニック
メソッドに適した LC カラムの選択については、LC カラムとサンプル前処理用のセレクションツール、Navigator (英語) をご利用ください。オンラインで、またはモバイルデバイスで http://navigator.chem.agilent.com をご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp7低分子化合物の分離用カラム

シリカ、ポリマー、結合相
基剤
LC カラムの基剤は多くの場合、ZORBAX、Pursuit、Polaris など、Agilent カラムに用いられているような全多孔質粒子を含む高純度シリカです。ただし、その他の基剤を持つカラムもあり、PLRP-S カラ
ムに用いられる高い pH 安定性を持つポリマーや、Poroshell 120 カラムに用いられる表面多孔性のシリカ粒子などがあります。 ZORBAX Eclipse Plus に用いられている ZORBAX Rx-Sil や表面多孔質のPoroshell 120 といった純度の高いタイプ B シリカは、ほとんどのメソッドで威力を発揮する最もお勧めの製品です。オリジナル ZORBAX カラムに用いられている ZORBAX SIL など、タイプ A のシリカの製造も続けられており、多くのメソッドで使用されています。

結合相最初に選択する結合相としては、C18 または C8 を推奨します。また、最初に選択するカラムとしてお勧めなのが Eclipse Plus C18 または Poroshell 120 EC-C18 です。これらは素晴らしいピーク形状をもたらし、pH 2～9 の範囲で使用でき、ほとんどの一般的な LC および LC/MS 移動相に対応しています。
対象のサンプルがこれらの直鎖アルキル相のカラムで十分に分離されない場合は、異なる選択性を示す CN や Phenyl カラム (Phenyl、Phenyl-Hexyl、Diphenyl を含む) を試してください。
一般に、タンパク質などの大きな分子量を持つ物質は、短鎖逆相カラム (C3、CN、C8) で最もよく分離され、ペプチドや小分子は長鎖カラム (C18) で分離されます。ただし、このような一般則が成り立たない場合も多くあります。たとえば、短鎖カラムを使用してもペプチドが効率的に分離されることがあり、疎水性ペプチドが長鎖相でより優れた回収率を示すこともあります。そのため、最初は疎水性系列の中程度の相 (C8 など) を選択し、結果とサンプルの溶解度特性に応じて、より疎水性の高い相または親水性の高い相に変更するのが最善です。

ポリマー
非常に低いおよび非常に高い pH の移動相を使う場合は、ポリマー系充填剤をシリカ系充填剤の代わりに使用できます。ポリマー粒子は化学的に安定性が高く、可溶性化学種や微粒子が浸出しない
ため、LC/MS にも適しています。たとえば、Agilent PLRP-S カラムなどで使用される逆相球形ポリマー
充填剤は、本質的に疎水性の表面を持つスチレン/ジビニルベンゼン共重合体に基づいています。ポリマー粒子を使用した逆相クロマトグラフィーには結合相は不要です。これらの堅牢なマクロポー
ラス粒子は、弱および強陽イオンおよび陰イオン交換カラムなど、さまざまな機能を持つように
コーティングし、誘導体化することができます。

8

低分子化合物の分離用カラム

pH および移動相
逆相システム用の移動相を選択するには、まず有機溶媒を選択します。アセトニトリルは広く利用されている有機溶媒です。アセトニトリル、メタノール、テトラヒドロフラン (THF) のいずれを用いるかによって、選択性とサンプル保持時間は大きく変わります。サンプルの溶解度も溶媒によって異なる可能性が高いため、使用できる溶媒やその組み合わせに影響することもあります。溶媒によっては、特定波長での UV 検出が不可能になることがあります (200 nm でのメタノールなど)。
わずかな条件変動によって結果が大幅に変動する不安定なメソッドを作成しないようにするには、移動相の水溶液部分の pH とイオン強度の両方が重要です。イオン化合物の場合、代表的な化学種の保持時間は pH 値によつて大きな変化を示します。このような逆相システムでは、pH を制御して、保持時間と分解能を安定させることが非常に重要です。一般的に pH 範囲が 2 ～ 4 の場合、pH の変動に対しての保持時間の変動は軽微であるため、塩基性化合物や一般的な弱酸を含む大部分のサンプ
ル用メソッド開発を開始するには、この pH 範囲を推奨します。

HPLC カラム

固定相

表面の種類

ポアサイズ

カラムサイズ

粒子径

長さ

化学的性質

物理的性質

化学的寿命/選択性
リテンションファクタ

効率
感度
速度

内径

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp9低分子化合物の分離用カラム

LC/MS の使用
LC/MS 向けの HPLC カラムを選択する場合は、分離能、流量、固定相の選択など、メソッドや分離について考慮する必要があります。多くの場合、比較的シンプルな対象化合物では、短い高分離能カラムが選択肢として最適です。これらのカラムでは、高い分離効率を維持しながら高いスループッ
トを得ることができます。分離用のナローボアラピッドレゾリューション High Definition (RRHD) (>60 MPa) および Poroshell 120 カラム (< 60 MPa) は、カラムが短い場合でも高い分離能を提供します。
分析が困難なサンプルでは、長いカラムを使用します。
多くの LC/MS 分析は低い流量で実行されるため (通常は µL/min レベルから最大 1 mL/min まで)、内径の小さいカラムに変更することが最適です。多くの場合、アジレントのソルベントセーバ (内径3.0 mm) およびナローボア (内径 2.1 mm) ではメソッドの溶媒使用量が減少し、内径の大きいカラム
よりも分離能と感度を向上させる優れた選択肢です。
一般的に、最適な結合相はエンドキャップされた C18 相です。Eclipse Plus C18 は、高性能のエンドキャップされた C18 相で、2 µm 未満の RRHD および RRHT カラム形式が用意されています。LC/MSを使用した高速・高スループットの分離では、 Poroshell 120 EC-C18 が優れた選択肢となります。
Poroshell は孔径の大きいフリットを使用しているため、カラムを詰まらせることが多い薬物動態試料などの LC/MS サンプルに適しています。

Eclipse Plus C18 と Poroshell 120 EC-C18 のいずれの相も幅広い pH 範囲で安定しており、酢酸やギ酸などの揮発性緩衝液に使用できます。

ヒントとテクニック
LC 流量計算アプリケーション
このスマートフォン向け無償アプリケーションを使用すると、メソッドの流量以外の項目の変化に合わせて流量をすばやく調整できます。

www.agilent.com/chem/lcapp からダウンロードできます。

10

低分子化合物の分離用カラム

高効率カラムへのメソッドの変換
UHPLC/Fast LC 用の高効率カラムは、分析速度と分離能の向上に役立ちます。使用している機器構成に応じて、これらのカラムを最大限に活用するために、調整が必要な場合があります。

効率が高いため、高効率カラムからは非常に狭いピークがすばやく溶出します。最近の HPLC 機器や
データシステムはこれらの粒子のメリットを活用することができますが、最高の結果を得るためには機器の構成に注意することが重要です。
メソッドの変換手順 :機器の仕様を確認する – 機器が既に高効率カラム用に構成されていることがあります。そのように構成されていない場合は操作を続けます。

LC および LC/MS 用にデータ収集レートを最適化する (UV 用の高速の応答時間を持つ 40 Hz 以上の検出器) – 検出器を最速に設定します。分離能が異なる場合は、その次に高速の設定にし、確認します。
セミミクロまたはミクロフローセルを使用する – 最高の性能を得るには、セミミクロ (6 mm/5 µL) ま
たはミクロ (3 mm/2 µL) などの小容量のフローセルをお勧めします。
新しいカートリッジフローセル(超低拡散 Max-Light ウルトラフローセル、P/N G4212-60007) は、UHPLC 機器の性能を最適化するために設計されたセルです。

ヒントとテクニック
Agilent 1290 Infinity LC で、きわめて低いデッドボリュームが必要な状況では、超低拡散フローセルと内径 0.08 mm のキャピラリーが含まれる超低拡散キットを使用してください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp11低分子化合物の分離用カラム

機器のチューブ容積を最小限に抑える – サンプルが移動する容積がわずか 1/2 になるため、
緑 (内径0.17 mm) ではなく、赤 (内径 0.12 mm) のチューブを使用します。この結果、カラムのバンドの余分な広がりが抑えられます。接続ができる限り短いことを確認します。確認する必要がある主な位置は次のとおりです。

• オートサンプラニードルシート• オートサンプラからサーモスタットカラムコンパートメント (TCC)• TCC からカラム• カラムからフローセル (一体型フローセルインレットキャピラリーの内径を含む)
これらのすべての特殊キャピラリーは、お客様の機器に合わせた必要な長さで個別にご注文いただけます。
グラジエントプロファイルと注入量をスケーリングする – グラジエント溶離を使用している場合
は、グラジエントプロファイルと注入量を新しい小さいカラムに合わせて正しく調整し、メソッド
をすばやく変換して、オーバーロードを回避します。アイソクラティックおよびグラジエント溶離
では、カラム全体の容量に合わせて注入量を拡張したことを確認してください。
カラムでの注入サンプルの拡散を最小限に抑える – 特に、アイソクラティックメソッドを使用する
場合は、溶媒強度が移動相と同じかそれ以下の注入溶媒を使用する必要があります。これは、一般にすべてのカラムで適切な処置ですが、高効率カラムではさらに重要です。

ヒントとテクニック
これらの手順については、www.agilent.com/chem/poroshell120video のビデオをご覧ください。
また、www.agilent.com/chem/lcmethodtranslator の LC メソッドトラン
スレータツールもご覧ください。

12

低分子化合物の分離用カラム

注意して適切に接続する – LC システム全体に最高の密封性能を提供するフロントおよびバック
フェラル付き Swagelok フィッティングをお勧めします (これをバルブやヒーターなどの機器接続で使用する)。60 MPa までにはポリケトンフィッティングを推奨します。このフィッティング (P/N5042-8957) は、Poroshell 120 とのカラム接続に使用します。RRHD カラムでは、アジレントの交換型
120 MPa フィッティング (P/N 5067-4733) を使用します。
流量を最適化する – Poroshell 120 で内径 2.1 mm を使用している場合は 0.42 mL/min の開始流量を、
内径 3.0 mm の Poroshell 120 カラムでは 0.85 mL/min を、内径 4.6 mm では 1.5 ～ 2 mL/min をお勧めします。

120 MPa フィテッィング交換型 (SV)、5067-4733

1. 不純物 E
2. セフェピム
3. 不純物 F
4. 不純物 A
5. 不純物 B

セフェピムおよび関連不純物の高速分析

0

5.190

5

6

3

4

5

6

1

2

3

4

8

9

min

7

8

9

min

9

min

2.0
mL/min30 MPa

4.428

2

7

1.5
mL/min22.5 MPa

3.439

1.421

1

4

5.825

3

8.741

1.819

2.152

0.988

0.696
0.816

0

2

2.687

mAU
20
15
10
5
0

1

1.202

0
mAU
20
15
10
5
0

1
mL/min15.5 MPa

4

3

1.148

DAD、254 nm

1

0.473
0.544
0.659

検出器 :

Agilent 1200 Infinity シリー
ズラピッドレゾリューション
LC システム

5

2
mAU
20
15
10
5
0

0.954

装置 :

Poroshell 120 EC-C18
697975-902
4.6 x 75 mm、2.7 µm

0.419
0.510

カラム :

5

6

7

8

VHP フィッティング
アジレントの 120 MPa 交換型フィッティング (外径 1/16 インチキャピラリー用) は、ステンレス製スクリュー、内部ステンレス製フェラル、および PEEK 製フロントフェラルから構成されます。フィッティングは流路全体で使用できますが、気密性を低下させることなく再利用できるため、熱交換器とカラム間の接続に特に適しています。取り外し不能な標準のステンレス製 Swagelok フィッティングの代わりに、新しい改良型フィッティングを使用できます。超高耐圧 (VHP) フィッティングは、ショート (P/N 5067-4733)、ロング (P/N 5067-4738)、エキストラロング(P/N 5067-4739) の 3 つのサイズから選択できます。ショートフィッティングは最も一般的に使用され、約 90 % を占めます。より長いナット付きのカラムを使用する場合は、より長いフィッティングが必要な場合があります。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp13低分子化合物の分離用カラム

Agilent LC カラムの概要 : 低分子
HPLC で高速 LC の性能を得るには Poroshell 120 から開始 – ZORBAX ファミリと同じ相。

2 µm 未満のカラムよりも最大で 50 % 低い圧力、ラボの総合的な生産性を向上
1.7 µm ソリッドコア、 0.5 µm 多孔質外殻の 2.7 µm 粒子、内径 : 4.6 mm、3.0 mm、2.1 mm、長さ : 30 ～ 150 mm。
新しい相は近日発表予定。www.agilent.com/chem/jp をご覧ください。

Poroshell 120

HPLC および UHPLC 機器との互換性を持つ。酸性、塩基性、中性の分析に対応。ペプチドマッピングにも最適。
Poroshell 120 は、低いカラム圧で分析速度と分離能の向上を求めているラボに最適です。
Poroshell 120 SB-C18 (USP L1)、SB-C8
カーボン量 : SB-C18 - 7.5 %、SB-C8 - 4.5 %Poroshell 120 EC-C18** (USP L1)、
EC-C8** (USP L1)、Phenyl-Hexyl (USP L11)
カーボン量 : Phenyl-Hexyl - 8 %Poroshell 120 EC-CN (USP L10)ZORBAX StableBond

ZORBAX Eclipse XDB**メソッド開発に最適な相

ZORBAX Eclipse Plus**
ZORBAX ファミリ

RRHD : 1.8 µm、120 MPa まで安定、
RRHD : 1.8 µm、120 MPa まで安定、
RRHT : 1.8 µm、60 MPa
RRHT : 1.8 µm、60 MPa
長さ : 30 ～ 250 mm
長さ : 20 ～ 250 mm
ID : 4.6 mm、3.0 mm、2.1 mm、1.0 mm、分取 ID : 4.6 mm、3.0 mm、2.1 mm、1.0 mm、分取、CH
キャピラリー (C18)
R
O
Si
3

C18 (USP L1)、
C8 (USP L7)、
Phenyl-Hexyl (USP L11)、
PAH (USP L1)

CH3
CH3
O

Si

CH3

CH3
CH3
O

Si
CH3
CH3

O

Si

CH3

CH3
CH3
O

SB-C18 (USP L1)、
SB-C8 (USP L7)、
SB-C3 (USP L56)、
SB-Phenyl (USP L11)、
SB-CN (USP L10)、
SB-Aq

O

Si

R1

R
OH
R
O

Si

R1

RRHD : 1.8 µm、120 MPa まで安定、
RRHT : 1.8 µm、60 MPa
長さ : 15 ～ 250 mm
ID : 4.6 mm、3.0 mm、2.1 mm、1.0 mm、
キャピラリーおよび分取C18 (USP L1)、
C8 (USP L7)、
Phenyl (USP L11)、
CN (USP L10)

CH3
O

Si
CH3
CH3

O

O

O
R

O

Si

CH3

Si
CH3
CH3

R
OH

Si

CH3

CH3

Si
CH3

Si
CH3
CH3

CH3

R1

O

Si
CH3

R

幅広い pH 範囲 (pH 2 ～ 9) で塩基性、酸性、および中性化合物に優れたピーク形状を提供します。eXtra Dense Bonding お
よびダブルエンドキャップがこのカラムの寿命の向上に役立ちます。

酸性、塩基性、中性に対する高い性能と優れたピーク形状。

低 pH で優れた寿命を持ち、酸性、塩基性、中性で高い性能を発揮。

サンプルアプリケーション

サンプルアプリケーション

サンプルアプリケーション

環境 : EPA メソッド 1694、

化学/工業 : Triton

環境 : 水中の除草剤/農薬、ステロイド

廃水中の違法処方薬

環境 : 水中の農薬

食品安全性 : 食品着色料、香料、マイコト

食品安全性 : キノロン抗生物質

食品安全性 : アントシアニン、パラベン、

キシン、エポキシフェノール系の缶用塗料

医薬品 : クロラムフェニコール、

メラニン、有機酸

医薬品 : ゴールデンシールおよび関連アルシンバスタチン、クリソファノール

医薬品 : 鎮痛剤、麻酔薬、漢方薬

カノイド、抗うつ剤、トリアムシノロン(TCM)、アンフェタミン、ラニチジン
ダブルエンドキャップ(エンドキャップのな
い PAH を除く)
上限温度 : 60 °C
ポアサイズ : 95 Å
表面積 : 160 m2/g
粒子径 : 1.8、3.5、5 µm

pH : C18、C8 では
2.0 ～ 9.0、PAH、Phenyl-Hexyl では
2.0 ～ 8.0

カーボン量 : C18 : 9%、
表面積 : 180 m2/g
C8 : 7 %、粒子径 : 1.8、3.5、5、7 µm
Phenyl-Hexyl : 9 %、pH : 1.0 ～ 8.0 (SB-C18 ダブルエンドキャップ
では 0.8 ～ 8.0)
上限温度 : 60 °C
カーボン量 : C18 :ポアサイズ : 80 Å
10 %、C8 : 5.5 %、表面積 : 180 m2/g
C3 : 4 %、
粒子径 : 1.8、3.5、5、7 µm
Phenyl : 5.5 %、CN : 4 %、PAH : 14%

Aq : 独自

エンドキャップなし
上限温度 : 80 °C(SB-C18 では 90 °C)
ポアサイズ : 80 Å

すべてに最適 –低 pH の移動相に最適 –

卓越したピーク形状、効率、分離能、寿命

メソッド開発に適切

C18 (USP L1)、C8 (USP L7)、
Diphenyl (USP L11)、PFP (USP L43)、
PAH (USP L1)、Si (USP L3)

Pursuit XRs は高いロード量を提供し、Pursuit
XRs Ultra ではロードにより圧力安定性が向上。

エンドキャップ済み(Pursuit XRs Si を除く)
ポアサイズ :
200 Å (Pursuit)、
100 Å (Pursuit XRs)
表面積 : 200 m2/g
(Pursuit)、

440 m2/g (Pursuit XRs)
粒子径 : 3、5、10 µm

信頼性の高いさまざまな選択性

14

カーボン量 : C18 :10 %、C8 : 7.6 %、Phenyl : 7.2 %、CN : 4.3%

広い pH 範囲で高性能を発揮

長さ : 30 ～ 250 mm
ID : 2.0 mm、3.0 mm、4.6 mm、分取

Pursuit/Pursuit XRs

pH : 2.0 ～ 9.0 (CN で2.0 ～ 8.0)

pH : 2.0 - 9.0
カーボン量 : Pursuit
C18 : 12.9 %、Pursuit
C8 : 7.4 %、Pursuit
Diphenyl : 7.3 %、PFP : 6.3 %、XRs C18 :22%、XRs Ultra C18 :23.3 %、XRs Ultra C8 :15 %、XRs Ultra

Diphenyl : 14.6%

低分子化合物の分離用カラム

エンドキャップ : EC-C18、EC-C8、Phenyl-Hexyl、Bonus-RP (トリプル)、EC-CNO

エンドキャップなし : SB-C18、SB-C8、SB-Aq

HO

O

N

HO

N

OH

O
O

O

N

上限温度 : 60 °C (EC-C18、EC-C8、Phenyl-Hexyl、Bonus-RP)、80 °C (SB-C8、SB-Aq)、90 °C (SB-C18)
ポアサイズ : 120 Å、表面積 : 130 m2/g、pH : 2.0 ～ 8.0 (EC-C18、EC-C8、Phenyl-Hexyl)、1.0 ～
8.0 (SB-C18、SB-C8、SB-Aq)、2.0 ～ 9.0 (Bonus-RP)、カーボン量 : 8 % (EC-C18)、7 % (EC-C8)

Poroshell 120 Bonus-RP (USP L60)
カーボン量 : 7.5 %Poroshell 120 SB-AQ
カーボン量 : 独自

極性化合物

ZORBAX Extend-C18

ZORBAX Bonus-RP

SB-AQ

Polaris

RRHD : 1.8 µm、120 MPa まで安定、
RRHT : 1.8 µm、60 MPa
長さ : 20 ～ 250 mm
ID : 4.6 mm、3.0 mm、2.1 mm、1.0 mm

RRHD : 1.8 µm、120 MPa まで安定、
RRHT : 1.8 µm、60 MPa
長さ : 30 ～ 250 mm
ID : 4.6 mm、3.0 mm、2.1 mm、1.0 mm、分取

RRHD : 1.8 µm、120 MPa まで安定、
RRHT : 1.8 µm、60 MPa
長さ : 20 ～ 250 mm
ID : 4.6 mm、3.0 mm、2.1 mm、分取

長さ : 30 ～ 250 mm(3 µm および 5 µm 粒子を用意)
ID : 2.0 mm、3.0 mm、4.6 mm、分取

ZORBAX SB-Aq

C18-A (USP L1)、C8-A (USP L7)、
C18-Ether (USP L1)、C8-Ether (USP L7)、
Amide-C18 (USP L60)、NH2 (USP L8)、
Si-A (USP L3)

R1
O
C18

O

C18 (USP L1)

Si

Bonus-RP (USP-L60)

Si

PG

R

R1
CH3
Si

CH3

CH3
O

Si

R1

C18

O

Si

PG

R

PG

R

Silica Support

R1
CH3
Si

CH3

CH3
R1

pH 11.5 までの高 pH で高効率および長寿命

O

Siを実現。塩基性化合物の保持、分離能、ピーク形状が向上。ペプチドの高感度
LC/MS 分離に最適。独自の二座型結合相とダブルエンドキャッピングにより高 pH で高い安定性を提供。

低～中 pH の塩基性化合物で極性によりピーク形状を向上。

極性化合物および水比率の高い条件に最適なアジレント独自の相。

サンプルアプリケーション

サンプルアプリケーション

サンプルアプリケーション

環境 : EPA 8330 (爆発性)

環境 : トリアジン系農薬

環境 : 飲料水中の農薬

環境 : トリアジン系農薬

食品安全性 : アフラトキシン、

食品安全性 : ヒドロキシメチルフルフラール

食品安全性 : 食品中の農薬

食品安全性 : ヒドロキシメチルフルフラール

マイコトキシ

医薬品 : 抗菌剤、食欲抑制薬、潰瘍治療薬

医薬品 : 水溶性ビタミン医薬品 : 抗菌剤、食欲抑制薬、潰瘍治療薬

R1

水素結合に対応し、エーテル基のエンド
キャップにより別の選択性が得られる。

サンプルアプリケーション

医薬品 : 抗ヒスタミン剤、キサンチン

ダブルエンドキャップ

pH : 2.0 - 11.5

トリプルエンドキャップ

pH : 2.0 - 9.0

上限温度 : 60 °C

カーボン量 : 12.5%

上限温度 : 60 °C

カーボン量 : 9.5%仕様と構造については、ZORBAX
StableBond をご覧ください。

エンドキャップ
ポアサイズ : 180 Å

ポアサイズ : 80 Å

ポアサイズ : 80 Å

表面積 : 200 m2/g

表面積 : 180 m2/g

表面積 : 180 m2/g

粒子径 : 3、5、10 µm

粒子径 : 1.8、3.5、5 µm

粒子径 : 1.8、3.5、5 µm

pH : 2.0 - 9.0

C18-A : 13.8 %、Polaris C8-A : 7.4 %、Polaris C18-Ether :12.1 %、Polaris C8Ether : 7.1%

カーボン量 : Polaris

高 pH での分離用の優れた選択肢

アルキル、フェニル、シアノ相に別の低 pH での卓越した寿命 –選択性を提供エンドキャップなし

極性化合物用のオプション

HILIC カラムをお探しですか?

HILIC Plus は、優れたピーク形状を得るための Eclipse Plus シリカ系 HILIC カラムです。

バイオカラムについては、
139 ページをご覧ください。

Poroshell 120 HILIC : 2.7 µm、60 MPa まで安定
非結合シリカポアサイズ : 95 Å (120 Å、Poroshell 120)
表面積 : 160 m2/g (130 m2/g、Poroshell 120 用)
粒子径 : 1.8、2.7、3.5 µm

RRHD : 1.8 µm、120 MPa まで安定、
長さ : 50、100、150 mm
ID : 4.6 mm (3.5 µm のみ)、3.0 mm、2.1 mm

pH : 0 - 8.0
LC/MS アプリケーションで高い感度を実現、EPA 1694 に推奨。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp15低分子化合物の分離用カラム

pH 1 ～12 でのメソッド開発
低 pH (pH 2 ～ 3) でメソッド開発をスタート
選択可能なカラムが多くある中で、メソッド開発のスタートに適したカラムをどのように選択すればよいのでしょうか。メソッド開発のスター
トには、緩衝作用を持たせた低 pH 移動相 (約 pH 2 ～3) の使用を推奨します。低 pH の移動相を使用すると、シリカベースカラムを用いた塩基性化合物の分析で最良のピーク形状が得られます。低 pH では、シリカ表面のシラノールは完全にプロトン化され、正電荷を帯びた塩基性化合物は強い反応を起こしません。その結果、良好なピーク形状が得られます。酸性化合物の多くは電気的に中性であるため、低 pH での保持時間は最大化されます。これらは低 pH でメソッド開発を行う主な利点です。
標準的な分析作業では、LC/MS 以外のアプリケーションに対しては、移動相有機溶媒としてアセトニトリルを、水性成分として 20 ～ 50 mM のリン酸緩衝液 (pH 2 ～ 3) を使用してメソッド開発を開始します。この条件により、イオン化合物の分析で最大の再現性を得るために必要な良好な pH 制御が可能になります。LC/MS アプリケーションでは、ギ酸が低 pH 用の移動相としてよく使用されます。

低 pH で溶媒と結合相を最適化
メソッド開発の最初のステップにより、満足な分離が非常に速く得られることがあります。しかし、さらに最適化が必要な場合は、アセトニト
リルをメタノールまたはテトラヒドロフランに変更し、分離をさらに最適化できます。このステップにより満足のいく結果を得ることができま
すが、さらなる選択性の最適化が必要な場合は、カラム結合相を変更します。
低 pH では、最適化にあたって多くの結合相から最適なものを選択します。結合相の種類には、Eclipse Plus の他、C18、C8、Phenyl、CN などの Eclipse
XDB ファミリも含まれます。別の選択肢としては、SB-C18、SB-C8、SB-Phenyl、SB-CN、SB-C3 の 5 種類の StableBond 結合相があります。極性分析には、C18-A、C8-A、C18-Ether、Amide-C18 相などの Bonus-RP、SB-Aq または Polaris ファミリをお試しください。
低 pH 領域では、酸性化合物の保持時間を調整する必要が生じることもあります。その場合は、pH を pH 1 ～ 2 まで下げ、StableBond カラムを使用します。StableBond カラムは、非常に低い pH で最高の安定性を示し、選択性を調整して最高の分離を得ることができます。

ヒントとテクニック
LC メソッドトランスレータ
このオンラインツールを使用すると、カラムの長さ、直径、流量などの変化をす
ばやく考慮し、メソッドに対する調整を計算できできます。これは、グラジエン
トメソッドに特に有効です。

www.agilent.com/chem/lcmethodtranslator からダウンロードできます。

16

低分子化合物の分離用カラム

中性 pH (pH 4 ～ 9) でのメソッド開発
低 pH では分離できない、または中性 pH の方が可溶性や安定性が高まるサンプルもあります。Eclipse Plus C18 および Poroshell 120 EC-C18 カラム
は、メソッド開発のために中程度の pH 範囲で使用することができます。Eclipse Plus カラムは pH 9 まで安定しているため、中性 pH でも低 pH と同等に高い信頼性を提供します。ダブルエンドキャップカラムには 2 つの大きな利点があります。1 つは低 pH と中性 pH で良好なピーク形状を示すこと、もう 1 つは、十分な結合密度を持ち、pH 6 ～ 9 でのカラムのシリカ劣化を防ぐことです。
中性 pH では、塩基性化合物 (アミンなど) は正電荷を帯び、シリカ表面のシラノールは負電荷を帯びています。そのため、中性 pH では、シラノー
ル基をできるだけ表面に出さないようにすると最良のピーク形状が得られます。これにより、Eclipse Plus C18 は、中性 pH で最初に選択するカラムとして最適です。リン酸緩衝液は、緩衝範囲が pH 6.1 ～ 8.1 であるため、通常は pH 7 での移動相溶媒の第 1 の選択肢です。中性 pH に対する
2 番目の選択肢は、酢酸緩衝液です。これは pH 3.8 ～ 5.8 で緩衝し、揮発性でもあることから、LC/MS に適しています。

高 pH (9 ～ 12) でのメソッド開発
低 pH または中性 pH では十分な保持や選択性が得られない塩基性化合物があります。これらのサンプルでは、高 pH 分離が適切な場合があります。最近まで、高 pH では基材であるシリカゲルの溶解によりカラム寿命が短くなることから、シリカ系カラムでの高 pH 分離は敬遠されてきましたが、シリカの溶解を防ぐことができる ZORBAX Extend-C18 などの特殊な結合相により、満足のいくカラム寿命が実現し、高 pH での選択性の違いを利用できるようになりました。

Extend-C18 カラムによる高 pH での移動相緩衝液には、トリエチルアミンや水酸化アンモニウムなどの有機緩衝液が最適です。高 pH でカラム寿
命を延ばすには、これらの緩衝液の有機溶媒としてメタノールを使用することをお勧めします。これは、高い pH や、ポリマー系充填剤を使用した PLRP-S カラム を使用するときのオプションとして適切です。

容易で信頼性の高い pH テスト
アジレントは幅広い pH 計と電極を提供しています。クロマトグラフィー科学者のために設計されたこれらの pH 計は、シンプルな操作性と卓越した堅牢性をラボに提供します。日本での販売についてはお問い合わせください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp17低分子化合物の分離用カラム

低 pH から高 pH までのメソッド開発ガイドライン
スタート
サンプル
化合物の保持が不十分
低 pH 3.0

初期分離

ステップ 1

ü ZORBAX Eclipse Plus C18、C8、またはPoroshell 120 EC-C18

ピーク分離不十分ステップ 2ZORBAX Eclipse Plus – pH 2 ～ 9 向けカラム

有機溶媒量 (%) を 5 % (v/v) 増加または減少

pH 4.0ステップ 1aü ZORBAX SB-C18 または SB-C8
ü pH 1 ～ 3、20 ～ 50 mM バッファ
ü T = 30 °C (周囲温度 90 °C まで)
ü % ACN を 0.5 < k < 20 で調整

ピーク分離不十分ステップ 1bステップ 3ステップ 1c
有機溶媒量 (%) を 5 %(v/v) 増加または減少

ピーク
分離
不十分

ステップ 1dステップ 4
ü 結合相を Eclipse Plus Phenyl-Hexyl、Bonus-RP、Eclipse XDB-CN、SB-CN、
SB-Aq に変更
ü ステップ 1 から再スタート
ピーク分離不十分

有機溶媒量 (%) を 5 % (v/v) 増加または減少

ステップ 1e
ü 有機溶媒を変更 (ACN または THF)
ü 0.5 < k < 20 の範囲に調整

ステップ 5

ü ZORBAX Eclipse Plus C18、C8、またはOR

Poroshell 120 EC-C18

中性 (pH 7.0)

ü pH 7 (6 ～ 9) 20 ～ 50 mM 緩衝液
ü T = 30 °C (周囲温度 40 °C まで)
ü % MeOH を 0.5 < k < 20 で調整

化合物の保持が不十分

ピーク分離不十分ステップ 5aステップ 6

酸性化合物 (イオンペア形成)
ü MeOH 有機溶媒使用、10 mM リン酸
テトラブチルアンモニウム、25 ～ 50mM 緩衝液 (pH 7) を使用
ü % MeOH を 0.5 < k < 20 で調整

有機溶媒量 (%) を 5 % (v/v) 増加または減少

ピーク分離不十分ステップ 7pH 8.0塩基性化合物 (イオンペア形成)
ü MeOH 有機溶媒使用、10 mM ヘキサ
ンスルホン酸、25 ～ 50 mM 緩衝液(pH 3) を使用
ü % MeOH を 0.5 < k < 20 で調整

ピーク分離不十分

ピーク分離不十分pH 6.0OR

酸

ピーク分離不十分ü 有機溶媒を変更 (MeOH または THF)
ü % 有機溶媒を 0.5 < k < 20 で調整
ü カラム温度を変更 : Eclipse = 最高 60 °C
まで、Stablebond = 80 ～ 90 °C までü ステップ 2 から再スタート

塩基

化合物の保持が不十分

ü pH 2.5 (2 ～ 3) 20 ～ 50 mM 緩衝液
ü T = 30 °C (周囲温度 60 °C まで)
ü % ACN を 0.5 < k < 20 で調整

ü 有機溶媒を変更 (ACN または THF)
ü 0.5 < k < 20 の範囲に調整
ü ステップ 6 から再スタート

ピーク分離不十分ステップ 8ü 結合相を ZORBAX Eclipse Plus PhenylHexyl または Bonus-RP に変更
ü ステップ 5 から再スタート

ピーク分離不十分

ピーク分離不十分ステップ 5c
有機溶媒量 (%) を 5 %(v/v) 増加または減少

ピーク
分離ステップ 5b結合相の推奨温度範囲内で温度を変更

不十分
ピーク分離不十分ステップ 5dü 有機溶媒を変更 (ACN または THF)
ü 0.5 < k < 20 の範囲に調整

ステップ 9高 pH 9.0

ü ZORBAX Extend-C18
ü pH 10.5 (9 ～ 11.5)、5 ～ 20 mM アンモ
ニアまたは TEA、または 10 ～ 50 mM
有機緩衝液、またはホウ酸塩緩衝液
ü T = 25 °C (周囲温度 40 °C まで)
ü % MeOH を 0.5 < k < 20 で調整

ピーク分離不十分pH 10.0

ステップ 10
ü 有機修飾剤を変更 (ACN または THF)
ü 0.5 < k < 20 で調整
ü 結合相の推奨温度範囲内で温度を変更

pH 11.0

ピーク分離不十分

異なる HPLC モードを試す
アジレントにお問い合わせください

pH 12.018

contact_us@agilent.com

ピーク分離不十分

低分子化合物の分離用カラム

ガードカラムガードカラムの重要性
ガードカラムは分析カラムの寿命を延ばします。ガードカラムを使用すると分析カラムの交換頻度が減少するため、運用コストの削減に役立ちます。
ガードカラムは、微粒子や強く吸着する物質によって生じる損傷を防ぎます。サンプルに含まれる
不純物に対応する十分な容量を維持するために、カラムの内径に近い内径を持つガードカラムを選択してください。ガードカラムの充填剤は、分析カラムと同じであることが理想的です。
ガードカラムは分離に優れた効果をもたらすため、メソッド開発はガードカラムを含めて検討してください。
アジレント UHPLC ガードカラムは、性能を低下させずに、高効率 Poroshell 120、ZORBAX RRHD、RRHT
カラムを保護します。すべてのガードカラムの部品番号は、製品ファミリの表に示されています。
ガードカラムの交換時期を判断するのは困難です。一般に、段数、圧力、または分離能が 10 % 以上
変化した場合は、ガードカラムの交換が必要と考えられます。アプリケーションのタイプに応じてガードカラムの交換頻度を判断する必要があります。ガードカラムは、早めに交換することをお勧めします。

UHPLC ガード、120 MPa、821725-903

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp19低分子化合物の分離用カラム

カートリッジ選択ガイド
アイコン*

カートリッジの種類

特徴

効果

Agilent HPLC カートリッジ

エンドフィッティングに逆コレットを接続して、ガードカートリッジを追加できます安価
カラムの寿命延長
迅速なカラム交換が可能

2、3、4、4.6 mm カートリッジを使用可能

ZORBAX ガードカートリッジ :スタンドアロンシステム

カートリッジは両端にフィルタとシーブが付いています

詰まり防止に有効

高効率、スタンドアロン、低デッドボリューム
カートリッジ最高 5000 psi (340 bar) または 3000 psi まで密閉、PEEK フィッティング付き

金属面に対して漏れをなくした樹脂カートリッジ

ガスケットは必要なし

PEEK より溶媒耐性が高い
再使用可能なフィッティング

ZORBAX ラピッドレゾリューションおよびラピッドレゾリューション HT カートリッジカ
ラム :3.5 µm および 1.8 µm 充填剤、スタンドアロ

1/16 インチ LC フィッティングへの接続に適合

ハイスループット LC/MS、LC/MS/MS 用

Eclipse XDB を充填 (pH 2 ～ 9 用)
StableBond を充填 (低 pH 領域用)

全種類の分析対象化合物用
低ブリード

ンシステム

1 本または 3 本入りで提供

ZORBAX セミ分取ガード HPLC ハードウェア
キット :簡単な低デッドボリュームアセンブリ

最高 2,000 psi (135 bar, 13.5MPa) まで密閉

金属面に対して漏れをなくしたチューブ (ポリフェニレンスルホン)ガスケット不要

再使用可能なフィッティング

1/16 インチ LC フィッティングへの接続に適合

スタンドアロンシステム

ZORBAX および Agilent 分取カートリッジカラ 簡単な低デッドボリュームアセンブリ
ムおよびガード HPLC システム :スタンドアロンおよび一体型ハードウェア
オプション
ポリマ系分析カラムおよびガードカート
リッジ

ChromSep カラムハードウェア :カラムの寿命を伸ばす

再使用可能なフィッティング

迅速なカラム交換が可能

一体型または外部ガード用のハードウェアオプ
ション

内径 21.1 mm および 30 mm のカラムに使用可能

高い効率

経済的

低デッドボリューム

迅速なカートリッジ交換

再使用可能なホルダ

長いカラム寿命

簡単なデッドボリュームなしのアセンブリ

経済的なフォーマット

コンプリートシステムと交換用カートリッジ

特別なツールは不要
モジュール式による柔軟性

MetaGuard カラムハードウェア :簡単なデッドボリュームなしのアセンブリ

完全なシステムと交換用カートリッジ

経済的なフォーマット
特別なツールは不要
モジュール式による柔軟性

UHPLC 用 Agilent Fast Guard

特別なハードウェアは不要 – 分析カラムに直接接続性能を保ち、カラム寿命を延長

Poroshell 120、RRHD および RRHT カラムに適合する相を用意*各種ガードカートリッジハードウェアシステムに対応するガードカートリッジについては、アイコンを確認して選択してください。

20

低分子化合物の分離用カラム

カートリッジ/ガードカートリッジシステム互換性ガイド*
アイコン

カラムの種類

ガードカートリッジホルダ

内径 (mm)相カートリッジカラムカートリッジホルダ

ガードカートリッジ (内部システム) カートリッジ
ホルダ

2.0
3.0
4.0
4.6

LiChrospher
Nucleosil
PurospherSuperspher
ZORBAXZORBAX

820999-901

2.1
3.0
4.6

ガードカートリッジホルダなし

4.6

ZORBAX

セミ分取ガードカートリッジ (スタンドアロン)
カートリッジホルダ

9.4

ZORBAX

5021-1845

5021-1845

標準フィッティング

カラムガードカートリッジ (スタンドアロン)
カートリッジホルダ

ラピッドレゾリューションカートリッジホルダ

820555-901

セミ分取カラム

840140-901(続く)

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

21低分子化合物の分離用カラム

カートリッジ/ガードカートリッジシステム互換性ガイド*
アイコン

カラムの種類

ガードカートリッジホルダ

内径 (mm)相PrepHT

ガードカートリッジ

21.2

ZORBAX
Agilent Prep

820444-901

新製品

分析用

ガードカートリッジホルダ (PL1310-0016) および
PLRP-S ガードカートリッジ、2 個 (PL1612-1801)

3.0

PLRP-SUHPLC 用 Fast Guard : 1 つの交換用ガードカラム

ガードカートリッジホルダなし

1.0
2.0
4.6

PursuitPursuit XRs
Polaris の相UHPLC 用 Fast Guard : 1 つの交換用ガードカラム

ガードカートリッジホルダなし

2.1
3.0
4.6

Poroshell 120 :EC-C18EC-C8SB-C18
Phenyl-Hexyl
2 µm 未満 :Eclipse Plus C18
Eclipse XDB-C18
SB-C18SB-C8*スタンドアロンのガードカートリッジは、アジレントが販売するすべてのカートリッジおよびフィッティングカラムに適合します。アイコンのないカラムはすべてスタンド
アロンのフィッティングカラムです。

22

低分子化合物の分離用カラム

逆相 HPLC/UHPLC 用高速カラム
高い分離能を提供する小さい粒子サイズの開発や、低い背圧で分離能を向上させる表面多孔質のような粒子設計技術の進歩など、ここ 10 年間でクロマトグラフィーの効率と速度は徐々に向上してきました。
高生産性分析 (高速 LC) 用に特別に設計された Agilent ZORBAX および Poroshell カラムは、次のような特徴があります。すべての分析の最初の選択肢として最適です。

• 厳しい競合環境で優位に立つためには生産性向上が欠かせません。2 µm 未満の粒子や表面多孔質 Poroshell 120 カラムなどの技術の進歩により、速度と分離能が向上します。

• 低分子および生体分子分析に対応する柔軟性とメソッドのスケーラビリティ• 比類のないクロマトグラフィー性能：ZORBAX シリカ – すべての ZORBAX および Poroshell 120

カラムに使用されている塩基性シリカはきわめて純度が高く、非常に強固で均一性が高いため、最高の信頼性を提供します。

• 多様なアプリケーションのニーズに対応する、さまざまな相とカラムの構成
高速 LC に推奨するカラム
ラボの状況

アジレントの推奨カラム

説明

UHPLC (100+ MPa) と HPLC の両方の機器を使用している (Agilent 1290 Infinity LC および
1260 Infinity LC – 60 MPa)

1. Poroshell 120

Poroshell 120 は、両方の機器タイプで使用できるカラムです。ZORBAXRRHD は、UHPLC 用に 1290 Infinity LC の機能を最適化するために役立ち

40 ～ 60 MPa の HPLC のみ – Agilent 1200、Agilent 1100 (40 MPa) に加えて 1220 Infinity LC
または 1260 Infinity LC (60 MPa)
UHPLC 機器 (Agilent 1290 Infinity LC、その他の100 MPa 以上の機器) と HPLC 機器 (1200 LC など) の組み合わせ

2. ZORBAX RRHD 1.8 µm
1. Poroshell 120
2. ZORBAX Eclipse Plus 3.5 µm および 5 µm

ます。

Poroshell 120 を使用すると、40 MPa 機器の性能を拡張するとともに、60
MPa の UHPLC 機器の性能をさらに向上させることができます。変換できない確立されたメソッドでは、ZORBAX Eclipse Plus カラムが卓越したピー

ク形状と性能を提供します。

1. ZORBAX RRHD 1.8 µm
2. Poroshell 120

ZORBAX RRHD は、これらのすべての機器で最適な性能を提供します。
Poroshell 120 は 60 MPa の機器で使用し、その性能を最適化することができます。

ヒントとテクニック
Agilent CrossLab では、PEEK 製キャピラリーとチューブを幅広く取り揃えています。適切なフィッティングと組み合わせて使用することにより、高感度の生体分子の高速 LC に対応する不活性な流路を構築できます。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp23低分子化合物の分離用カラム

Poroshell 120• 2 µm 未満の粒子径に対して最大 90% の効率• 3.5 µm の粒子径に対して効率は 2 倍• 2 µm 未満のカラムよりも最大で 50 % 低い圧力
• HPLC や UHPLC で最大 60 MPa (600 bar) の圧力で使用可能• 選択性とピーク形状に優れた様々な結合相
硬質シリカコア、

Agilent Poroshell 120 カラムは、1.7 µm のソリッドコアと 0.5 µm の多孔質外殻を持つ 2.7 µm 粒子です。この小さな粒子径によって、2 µm 未満のカラムと同様の高い効率が得られますが、圧力は 40 ～50 % 低くなります。これらの高効率高分離カラムは、どのタイプの LC でも使用できます。多孔質外直径 1.7 µm

殻とソリッドコアによって拡散距離が制限され、分離スピードが向上する一方で、粒子径が小さいため効率と分解能が向上します。カラムは高圧に対応し、複数のカラムを使用すると、可能な限り最高の分解能と効率を実現できます。生体分子の高速、高分解能の分離に理想的な Poroshell 300 カラ

多孔質外殻、厚さ 0.5 µm

ムでも同じ原理が使用されています。

カラム仕様
結合相

EC-C18

ポアサイズ

120Å

上限温度

pH 範囲

エンドキャップ

カーボンロード

表面積

60 °C

2.0 - 9.0

ダブル

8%130 m2/g

EC-C8

120Å

60 °C

2.0 - 8.0

ダブル

5%130 m2/g

Phenyl-Hexyl

120Å

60 °C

2.0 - 8.0

ダブル

9%130 m2/g

SB-C18

120Å

90 °C

1.0 - 8.0

なし

7.5%

130 m2/g

SB-C8

120Å

80 °C

1.0 - 8.0

なし

5.5%

130 m2/g

SB-Aq

120Å

80 °C

1.0 - 8.0なし

非公開

130 m2/g

Bonus-RP

120Å

60 °C

2.0 - 9.0

トリプル

9.5%

130 m2/g

ダブル

3.5%

130 m2/g

なし

N/A

130 m2/g

EC-CN

120Å

60 °C

2.0 - 8.0

HILIC

120Å

60 °C

0.0 - 8.0

仕様は代表的な値のみを表しています。

ヒントとテクニック
既存のメソッドを Poroshell 120 に変換する方法については、
www.agilent.com/chem/poroshell120video で Poroshell 120 メソッド変換ビデオをご覧ください。

24

低分子化合物の分離用カラム

Poroshell 120(最大圧力 : 60 MPa)
ハード
ウェア 品名

寸法

粒子径

(mm)

(µm)

EC-C18USP L12.7

693975-902 693975-906 693975-912

アナリティカル 4.6 x 100

2.7695975-902 695975-906 695975-912

685975-902 685975-906 685975-914 695968-901 695975-905 695975-901

アナリティカル 4.6 x 75

2.7697975-902 697975-906

687975-902

アナリティカル 4.6 x 50

2.7699975-902 699975-906 699975-912

689975-902 689975-906 689975-914 699968-901 699975-905 699975-901

アナリティカル 4.6 x 30

2.7691975-902 691975-906

681975-902

UHPLC ガード、 4.6 x 560 MPa、3 個

2.7820750-911 820750-913 820750-914

820750-912

ソルベントセーバ 3.0 x 150

2.7693975-302 693975-306 693975-312

683975-302 683975-306 683975-314 693968-301 693975-305 693975-301

ソルベントセーバ 3.0 x 100

2.7695975-302 695975-306 695975-312

685975-302 685975-306 685975-314 695968-301 695975-305 695975-301

ソルベントセーバ 3.0 x 75

2.7697975-302 697975-306

687975-302

ソルベントセーバ 3.0 x 50

2.7699975-302 699975-306 699975-312

689975-302 689975-306 689975-314 699968-301 699975-305 699975-301

アナリティカル 4.6 x 150

EC-C8
USP L7

Phenyl-Hexyl
USP L11

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7

SB-Aq

Bonus-RP
USP L60

EC-CN

HILIC

683975-902 683975-906 683975-914 693968-901 693975-905 693975-901

ソルベントセーバ 3.0 x 30

2.7691975-302 691975-306

681975-302

UHPLC ガード、 3.0 x 560 MPa、3 個

2.7823750-911 823750-913 823750-914

823750-912

ナローボア

2.1 x 150

2.7693775-902 693775-906 693775-912

683775-902 683775-906 683775-914 693768-901 693775-905 693775-901

ナローボア

2.1 x 100

2.7695775-902 695775-906 695775-912

685775-902 685775-906 685775-914 695768-901 695775-905 695775-901

ナローボア

2.1 x 75

2.7697775-902 697775-906

687775-902

ナローボア

2.1 x 502.7699775-902 699775-906 699775-912

689775-902 689775-906 689775-914 699768-901 699775-905 699775-901

ナローボア

2.1 x 30

2.7691775-902 691775-906

681775-902

UHPLC ガード、 2.1 x 560 MPa、3 個

2.7821725-911 821725-913 821725-914

821725-912

Poroshell 120 カラム

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp25低分子化合物の分離用カラム

Poroshell 120 カラムでの環境フェノールの分析
カラム A :

Poroshell 120 EC-C18
695975-902
4.6 x 100 mm、2.7 µm

カラム B :

Eclipse Plus C18
959964-902
4.6 x 100 mm、1.8 µm

1. ヒドロキノン
2. レソルシノール
3. カテコール
4. 4-ニトロフェノール
5. p-クレゾール

A1グラジエント : A : 水 + 0.1 % ギ酸
B : アセトニトリル + 0.1 % ギ酸

2 mL/min初期 : 8% B
10 分 : 30 % B

2

検出器 : 275 nm、2 mm
フローセル
注入 :

6. o-クレゾール
7. 2-ニトロフェノール
8. 2,3 ジメチルフェノール
9. 2.5 ジメチルフェノール
10. 1-ナフトール

3

P = 332 bar

9

4
5

10 µL

Agilent 1200 SL 40 °C
パルスダンパなし
ミキサなし 3 µL ヒータ

7

6

0

2

4

10

8

6

8

10

Time (min)

B

1
2
3

P = 510 bar

9

4
5

7
6

Poroshell 120 は 2 µm 未満のカラムと同様の効率を低圧で達成します。

10

8

0

2

4

6

8

10

Time (min)EP_Poro120

2.5

9.753

10

5

13.041

N = 27295、圧力 = 38.6 MPa
8.218

RRLC チェックアウトサンプル (P/N 5188-6529)、
水/アセトニトリル (65 : 35) に 2 mg/mL
チオ尿素 50 L をスパイク

6.273

サンプル :

7.5

5.281

DAD Sig = 254,4 nm
Ref = 360,100 nm

4.132

検出器 :

B

3.494

4 µL

2.223

注入量 :

2.816

26 °C

5

2.705

カラム温度 :

2.5

1.756

0.58 mL/min

N = 25053、圧力 = 18.2 MPa

2.418

流量 :

1.148

60 % アセトニトリル : 40 % 水

0.646

移動相 :

A

1.518
2.016

Eclipse Plus C18
959964-302
3.0 x 100 mm、1.8 µm

0.865

カラム B :

1.275

Poroshell 120 EC-C18
695975-302
3.0 x 100 mm、2.7 µm

0.649

カラム A :

0.826

HPLC の圧力で UHPLC の効率

7.5

10

12.5

min

中性アルキルフェノンのサンプルに対して、Poroshell 120 カラムは 1.8 µm カラム性能の 90% を越える効率を実現しました。さらに注目すべきは、Poroshell 120 カラ
ムの背圧が 1.8 m カラムの約 50 % にとどまっている点です。

26

低分子化合物の分離用カラム

Agilent Poroshell 120 EC-C18 カラムを用いた、
圧力 40 MPa 未満での HPLC 分離。12 種類のフェノールをわずか 5 分で分離
カラム :Poroshell 120 EC-C18
699975-902
4.6 x 50 mm、2.7 µm

移動相 :溶媒 A : 0.1 % ギ酸を含む水
溶媒 B : アセトニトリル

2.5 mL/min、27.4 MPa

グラジエント : 0.8 分で 5 % B
6.8 分で 60 % B
1200 SL、25 °C で制御、2 mm フローセル
検出器 :1. ヒドロキノン
2. レソルシノール
3. カテコール
4. フェノール
5. 4-ニトロフェノール
6. p-クレゾール
7. o-クレゾール
8. 2-ニトロフェノール
9. 3,4 ジメチルフェノール
10. 2,3 ジメチルフェノール
11. 2,5 ジメチルフェノール
12. 1-ナフトール

DAD、270 nm

注目すべきは、流量が 2.5 mL/min に保たれていることです。これにより、分析 1 回あたりの移動相消費量が約 15 mL にまで減少しています。

5

0

min

Agilent Poroshell 120 は、低いカラム圧力で高効率、高分離能の分離を迅速に提供します。

長い (4.6 x 100 mm) Agilent Poroshell 120 ECC18 カラムを使用して 12 種類のフェノールを
分析
カラム :

Poroshell 120 EC-C18
695975-902
4.6 x 100 mm、2.7 µm

移動相 :溶媒 A : 0.1 % ギ酸を含む水
溶媒 B : アセトニトリル

グラジエント : 2 分で 5 % B
17 分で 60 % B
1200 RRLC SL、25 °C で制御、2 mm フローセル
mAU
検出器 :

DAD、270 nm

1. ヒドロキノン
2. レソルシノール
3. カテコール
4. フェノール
5. 4-ニトロフェノール
6. p-クレゾール
7. o-クレゾール
8. 2-ニトロフェノール
9. 3,4 ジメチルフェノール
10. 2,3 ジメチルフェノール
11. 2,5 ジメチルフェノール
12. 1-ナフトール

2.0 mL/min、39.4 MPa

100

80

流量を 2.0 mL/min に下げることで圧力を 40 MPa
未満に保ちながら溶出が遅いピーク (ハイライト
表示) の分離が向上しました。分析時間の増加はわずかです。この分離は HPLC で実行できます
が、より高い流量が必要な場合には UHPLC も利用
できます。

60

40

20

0

2

4

6

8

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

10

12

min

27

低分子化合物の分離用カラム

Poroshell 120 EC-C18、高速 UHPLC 分離用
カラム :Poroshell 120 EC-C18
695975-302
3.0 x 100 mm、2.7 µm

移動相 :65 % A : 0.2 % ギ酸
35 % B : メタノール

1. サッカリン
2. カフェイン
3. P-ヒドロキシ安息香酸
4. アスパルテーム
5. デヒドロ酢酸
6. 安息香酸

アイソクラティック

流量 :

可変

カラム温度 :

26 °C

検出器 :

Sig = 220、4 nm、Ref = オフ

流量 : 0.5 mL/min、P : 30. 0 MPa

mAU
300
200
100

この例では、高圧になる移動相条件での高速分離を示します。上段のクロマトグラムでは、3.0 mm ID カラムを使用して、典型的な LC 分離を行っています。流
量は 0.5 mL/min、圧力は 40 MPa 未満です。

0

2

4

mAU
300

6

流量 : 0.75 mL/min、P : 43.3 MPa

200
100

上の分離も高速ですが (わずか 6 分未満)、中央と下の0

クロマトグラムは、流量を上げることで分析時間を 3mAU

な高速分析では圧力が 40 ～ 56 MPa となります。
UHPLC 機能を活用するには、Agilent 1200 Infinity シ

200

リーズのフレキシブルなアップグレードオプションを100

ご検討ください。

HPLC または UHPLC の圧力でメタノールなどの粘度の高い溶媒を使用することができます。

28

2分未満まで短縮できることを示しています。このよう

4

流量 : 1.0 mL/min、P : 55.9 MPa

0

2

4 min

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX ラピッドレゾリューション
High Definition (RRHD) 1.8 µm• 1290 Infinity LC またはその他の UHPLC 機器で最適な結果を達成できる高圧 (120 MPa = 1200 bar)
カラム

• 1.8 µm の粒子径により最高の分離能を実現• 優れたピーク形状を提供する Eclipse Plus C18、低い pH での安定性を提供する ZORBAX

StableBond C18、また Bonus-RP、Eclipse PAH、Eclipse Plus Phenyl-Hexyl、Extend-C18 など、12 種類の結合相を用意• HILIC Plus も提供• すべての LC に対応するために、同一の結合相を使用した 3.5 および 5 µm ZORBAX カラムと同じ選択性を実現ZORBAX ラピッドレゾリューション High Definition (RRHD) カラムは、ZORBAX 1.8 µm 粒子カラムのラ
インナップを拡張したものです。この新しい RRHD カラムは、改良された充填処理を使用して、Agilent 1290 Infinity LC または他の UHPLC 機器で使用した場合に最大 120 MPa (1200 bar) の安定性を実現します。RRHD 1.8 µm カラムは、非常に複雑なサンプルの高速、高分解能 (真の High Definition) での分離を可能にするために、50、100、150 mm の長さを提供しています。

ZORBAX ラピッドレゾリューション
High Definition (RRHD) 1.8 µm カラム

ZORBAX RRHD カラムの仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

pH 範囲

エンドキャップ

上限温度

95 Å

160 m2/g

2.0 - 9.0

ダブル

60 °C

ZORBAX Eclipse Plus C8

95 Å

160 m2/g

2.0 - 9.0

ダブル

60 °C

ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl

95 Å

160 m2/g

2.0 - 9.0

ダブル

60 °C

ZORBAX Eclipse XDB-C18

80 Å

180 m2/g

2.0 - 9.0

ダブル

60 °C

ZORBAX Extend-C18

80 Å

180 m2/g

2.0 - 11.5**

ダブル

60 °C

ZORBAX Bonus RP

80 Å

180 m2/g

2.0 - 9.0

トリプル

60 °C

ZORBAX StableBond SB-C18

80 Å

180 m2/g

1.0 - 8.0*

なし

80 °C

ZORBAX StableBond SB-C880 Å

180 m2/g

1.0 - 8.0*

なし

80 °C

ZORBAX StableBond SB-Phenyl

80 Å

180 m2/g

1.0 - 8.0*

なし

80 °C

ZORBAX StableBond SB-CN

80 Å

180 m2/g

1.0 - 8.0*

なし

80 °C

ZORBAX StableBond SB-Aq

80 Å

180 m2/g

1.0 - 8.0*

なし

80 °C

ZORBAX Eclipse PAH

95 Å

160 m2/g

2.0 - 8.0

なし

60 °C

ZORBAX HILIC Plus

95 Å

160 m2/g

0.0 - 8.0

なし

60 °C

ZORBAX StableBond 300SB-C8300 Å

45 m2/g

1.0 - 8.0*

なし

80 °C

ZORBAX StableBond 300SB-C18

300 Å

45 m2/g

1.0 - 8.0*

なし

80 °C

ZORBAX StableBond 300SB-C3

300 Å

45 m2/g

1.0 - 8.0*

なし

80 °C

ZORBAX 300-Diphenyl

300 Å

45 m2/g

1.0 - 8.0*

あり

80 °C

ZORBAX Eclipse Plus C18* StableBond カラムは低 pH で最高の性能を発揮するように設計されています。シリカを基材とするカラムを pH 6 を超える範囲で最高の安定性を確保しながら使用するには、40 °C 以下の使用温度、0.01 ～ 0.02 M の範囲の低濃度緩衝液または有機緩衝液を使用します。300SB-C18 は 90 °C まで使用できます。pH 6 ～ 8 では、Eclipse Plus C18
カラムを選択します。

** 温度上限 : pH 8 までは 60 °C、pH 8 ～ 11.5 は 40 °C。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp29低分子化合物の分離用カラム

RRHD カラムでのカンゾウの分離
カラム A :ZORBAX RRHD SB-C18
857700-902
2.1 x 50 mm、1.8 µm

カラム B :

858700-902
2.1 x 100 mm、1.8 µm

カラム C :

859700-902
2.1 x 150 mm、1.8 µm

移動相 :10 ～ 100 % B/30 分
A : 0.1 % ギ酸 (fa)
B : アセトニトリル、0.1 % ギ酸

流量 :F = 0.4 mL/min

グラジエント :各カラムとも 30 分のグラジエント

カラム温度 :

室温

検出器 :280 nm UV

装置 :1290 Infinity LC

50 mm

A

7 ピーク
Rs: 0

mAU
200
150
100
50
0

2

0

2

4

6

8

10

12

4

14

16

18

min

100 mmB

8 ピーク
Rs: 1.37

mAU
200
150
100
50
0

2

0

2

4

6

8

10

12

4

14

16

18

min

150 mmC

9 ピーク
Rs: 2.40

mAU
200
150
100
50
0

2

0

30

2

4

6

8

10

12

4

14

6

16

18

min

低分子化合物の分離用カラム

RRHD カラムでの 1 分未満の分離
カラム :ZORBAX RRHD SB-C18
857700-902
2.1 x 50 mm、1.8 µm

グラジエント : H2O (0.05 % トリフルオロ酢酸)/
10 ～ 40 % ACN/1 分

注入量 :0.5 µL x 100 ppm each

検出器 :UV、275 nm

カラム温度 :

データレート : 160 Hz

60 °C
3

mAU
500

6 種類の化合物が含まれる殺虫剤混合物の分析 (0.5 分)

400

F = 2.0 mL/min
P = 975 bar

300

1. 2-メチル-4-イソチアゾール-3-オン
2. 5-クロロ-2-メチル-4-イソチアゾール-3-オン
3. カルベンダジム
4. ベンゾイソチアゾール-3(2H)-オン
5. 2-フェノキシエタノール
6. メチルパラベン

1
2

200

0.5 min

6

100

5
4

0
0

.05

.1

.15

.2

.25

.3

.35

.4

.45

min
RRHDSub1m

新しいレベルの感度および分離能
カラム A :ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18
959758-302
3.0 x 100 mm、1.8 µm

カラム B :×107
2

1

イオン源 : 360 °C、12 L/min、50 psi、

カラム温度 : 室温、温度制御なし (約 24 °C)

3500 VZORBAX RRHD Eclipse Plus C18
959757-302
3.0 x 50 mm、1.8 µm

移動相 :A : 0.2 % ギ酸水溶液
B : ACN検出器 :Agilent 1290 Infinity LC と6410 MS/MS

サンプル :

20 µL (50 mm カラムでは 10 µL)の 1 µg/mL 標準

A

1.5

Average PW1/2 = 0.025
nc = 43

1
0.5
0

0.1
× 107

1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1

1.1

1.2

1.3

1.4

1.5

1.6

1.7

1.8

1.873
1.9

2

B

1

Average PW1/2 = 0.0092
nc = 39

0.8
0.6
0.4
0.2

1.006

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1

Agilent RRHD カラムにメソッドを変換すると、困難な分析の分離能を向上できるため、短いカラムを使用して、性能を低下させずに時間を短縮することができます。

RRHD カラムは性能を損なわずに分析時間を短縮します。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

化合物 (溶出の順序で) と識別質量 :1. アセトアミノフェン、m/z 109
2. カフェイン、m/z 194
3. 2-アセトアミドフェノール、m/z 109
4. アセトアニリド、m/z 135
5. アセチルサリチル酸、m/z 120
6. フェナセチン、m/z 179
7. サリチル酸、m/z 120
8. スリンダク、m/z 356
9. ピロキシカム、m/z 332
10. トルメチン、m/z 257
11. ケトプロフェン、m/z 254
12. ジフルニサル、m/z 332
13. ジクロフェナク、m/z 235
14. セレコキシブ、m/z 351
15. イブプロフェン、m/z 16031低分子化合物の分離用カラム

選択性の比較 : C18 カラム
カラム A :ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18
959758-902
2.1 x 100 mm、1.8 µm

カラム B :ZORBAX RRHD Eclipse XDB-C18
981758-902
2.1 x 100 mm、1.8 µm

カラム C :

カラム D :

移動相 :ZORBAX RRHD Extend-C18
758700-902
2.1 x 100 mm、1.8 µm
ZORBAX RRHD SB-C18
858700-902
2.1 x 100 mm、1.8 µm
A : 0.1 % HCOOH 水溶液 (30 %)B : 0.1 % HCOOH アセトニトリル溶液(70 %)

1. アナンダミド (AEA)、m/z 348
2. パルミトイルエタノールアミド (PEA)、m/z PEA
3. 2-アラキドノイルグリセロール (2-AG)、m/z 379*
4. オレオイルエタノールアミド (OEA)、m/z 326
×10 2
1

OEA

0.9
0.8
0.7
0.6

PEA

0.5

A

0.4
AEA

0.3
0.2

2-AG

0.1

*

0
0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

2

2.2

2.4

カウント (%) 対取り込み時間 (分)

×10 2
1

2.6

2.8

3

3.2

3.4

2.6

2.8

3

3.2

3.4

2.6

2.8

3

3.2

3.4

2.8

3

3.2

3.4

OEA

0.9
0.8
PEA

0.7
0.6

流量 :

1 mL/min、アイソクラティック

0.5

カラム温度 :

30 °C

0.3

サンプル :

1 µL

B

AEA

0.4
0.2
0.1

MS2 スキャン : 290-390、ESI ポジティブモード、ス
キャン時間 : 500、フラグメンタ :×10 2
135 V、乾燥ガス : 12 L/min、325 °C、 1
0.9
ネブライザ圧力 : 35 psig、
0.8
キャピラリー電圧 : 3000
0.7

2-AG

*

2.2

2.4

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

カウント (%) 対取り込み時間 (分)0.6

選択性の違いは、結合の種類、エンドキャップ、シリカ上

0.3
0.2

の組成、温度、pH などがあります(これらの要素が次の例
では同一であることに注意)。

C

AEA

0.4

ます。選択性に影響を与えるその他の要素として、移動相

0.1

Agilent ZORBAX RRHD C18 カラムの選択性を比較しました。

2-AG

*

1.8

2

0
0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

2.2

2.4

カウント (%) 対取り込み時間 (分)

×10 2
1

内在性カンナビノイド分析メソッドを使用して、4 つの

OEA

PEA

0.5

のシラノールの量や種類など、わずかな差違によって生じ

2

OEA

0.9
0.8
0.7
0.6
0.5

PEA

D

0.4

AEA

0.3
0.2
0.1

2-AG

*

2

2.2

0
0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

カウント (%) 対取り込み時間 (分)ヒントとテクニック
詳細については、www.agilent.com/chem/library のアジレント資料 5990-7166EN をご覧ください。

32

2.4

2.6

低分子化合物の分離用カラム

選択性の比較 : Phenyl およびその他のカラム
カラム A :ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18
959758-902
2.1 x 100 mm、1.8 µm

カラム B :ZORBAX RRHD Eclipse Plus
Phenyl-Hexyl
959758-912
2.1 x 100 mm、1.8 µm

カラム C :ZORBAX RRHD SB-Aq
858700-914
2.1 x 100 mm、1.8 µm

カラム D :ZORBAX RRHD SB-Phenyl
858700-912
2.1 x 100 mm、1.8 µm

移動相 :
流量 :

Cyanidin, m/z 286
Peonidin, m/z 300
×10 2
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0

A : 5 % HCOOH 水溶液
B : CH3CN

×10 2
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0

0.65 mL/min

30 °C

MS2 スキャン : ESI +、200 ～ 1000

ブルーベリーアントシアニンの LC/MS スキャンデータから抽出したイオンクロマトグラム。

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

C

1

×10 2
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0

2

B

1

×10 2
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0

Petunidin, m/z 316
Malvidin, m/z 330

1

グラジエント : 10 ～ 50 % B、15 分
カラム温度 :

Delphinidin, m/z 302

A

D

1

カウント (%) 対取り込み時間 (分)ヒントとテクニック
詳細については、www.agilent.com/chem/library のアジレント資料 5990-8470EN をご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp33低分子化合物の分離用カラム

高圧用ラピッドレゾリューション High Definition (RRHD) カラム (最大圧力 : 120 MPa)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipsePlus C18
USP L1

EclipsePlus C8USP L7

Eclipse Plus
Phenyl-Hexyl
USP L11

EclipsePAH
USP L1

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 150

1.8959759-302

959759-306

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 1001.8959758-302

959758-306

959758-312

959758-318

959757-306

959757-312

959757-318

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 501.8959757-302

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

3.0 x 51.8823750-901

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 150

1.8959759-902

959759-906

959759-912

959763-918

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 1001.8959758-902

959758-906

959758-912

959764-918

959757-906

959757-912

959741-918

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 501.8959757-902

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

2.1 x 51.8821725-901

高圧用ラピッドレゾリューション High Definition (RRHD) カラム (最大圧力 : 120 MPa)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7SB-CN
USP L10

SB-Phenyl
USP L11

SB-Aq

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa 3.0 x 150

1.8859700-302

859700-306

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa 3.0 x 100

1.8858700-302

858700-306

858700-305

858700-905

858700-314

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa 3.0 x 50

1.8857700-302

857700-306

857700-305

857700-312

857700-314

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

3.0 x 51.8823750-902

823750-904

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 150

1.8859700-902

859700-906

859700-905

859700-912

859700-914

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 1001.8858700-902

858700-906

858700-905

858700-912

858700-914

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 501.8857700-902

857700-906

857700-905

857700-912

857700-914

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

2.1 x 51.8821725-902

821725-904

EclipseXDB-C18
USP L1

Bonus-RP
USP L60

HILIC Plus

高圧用ラピッドレゾリューション High Definition (RRHD) カラム (最大圧力 : 120 MPa)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Extend-C18
USP L1

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 150

1.8759700-302

981759-302

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 100

1.8758700-302

981758-302

959758-301

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 501.8757700-302

981757-302

959757-301

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

3.0 x 5

1.8

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 150

1.8759700-902

981759-902

859768-901

959759-901

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 100

1.8758700-902

981758-902

858768-901

959758-901

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 501.8757700-902

981757-902

857768-901

959757-901

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

2.1 x 5

1.8

ZORBAX RRHD カラムは生体分子向けの 300 Ǻ 構成も用意しています。155 ページをご覧ください。
ZORBAX RRHD 300-HILIC、UHPLC ガードは、2013 年に発売予定です。

34823750-903

821725-903低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX ラピッドレゾリューション
ハイスループット (RRHT) 1.8 µm• 全多孔質、粒子径 1.8 µm の充填剤を用いた高耐圧 (60 MPa) のラピッドレゾリューション HT カラムは、超高速、高分離能分析を可能にします。

• 精密に設計された粒子によって、他の 2 µm 未満のカラムより低い圧力で、最高の分離能が得られます。

• 分析時間が最大 95 % 短縮されます。
• HPLC メソッドを、より速やかに開発できます。
• 140 を超える RRHT カラムから選択できるため、従来のメソッドを問題なく移行できます。
• 短いカラムで複雑なサンプルの分析をより高速に最大のピークキャパシティで行うことができます。

• 3.5、5、7 µm の粒子径に適合し、完全なメソッド拡張性を得ることができます。
• 短い (50 mm 以下) カラムを従来の LC で使用できます。
Agilent ZORBAX ラピッドレゾリューション HT (1.8 µm) カラムは、全多孔質の 1.8 µm 粒子を使用して、超高速分析と最大の分離能を実現します。長さ 250 mm のカラムと比較すると、最大で 95 % まで分析時間を短縮できます。高性能 ZORBAX Eclipse Plus とその他の ZORBAX カラム (Eclipse XDB、
StableBond、Extend、Bonus-RP) を含む 140 以上の RRHT カラムから選択でき、迅速なメソッド開発に

ZORBAX ラピッドレゾリューション
ハイスループット (RRHT) 1.8 µm カラム

より、分離能を低減することなく小さい粒子径への移行を可能にします。粒子径が小さいため、同じ長さの 3.5 µm カラムの 2 倍の効率を得ることができ、その長さで最高の効率と分離能が達成されます。これにより、最高の分離能とピークキャパシティを維持した状態で、より短いカラムで複雑なサンプルを分析できるようになります。1.8 µm ラピッドレゾリューション HT カラムは、高速、高分離能 HPLC を新たなレベルに導きます。
この 60 MPa カラムは、耐圧の上限まで、Agilent 1260 Infinity LC システムで使用できます。また、短いカラムは Agilent 1200 LC システムなどの他の多くの LC でも使用できます。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

35低分子化合物の分離用カラム

ラピッドレゾリューション HT (RRHT) は RR カラムの2 倍の効率を提供
カラム A :

カラム B :ZORBAX ラピッドレゾリューション SB-C18
835975-902
4.6 x 50 mm、3.5 µm

段数 (N)

段数 (N)

1.

3476

1.

6560

ZORBAX RRHT SB-C18
827975-902
4.6 x 50 mm、1.8 µm

2.

4585

2.

8958

3.

5673

3.

11508

移動相 :

25 % 水、75 % MeOH

4.

6180

4.

12266

流量 :

1.5 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :

A

B

2

2
3

UV、254 nm

43

1. ウラシル
2. フェノール
3. 4- クロロニトロベンゼン
4. トルエン1

この図は、ラピッドレゾリューション HT カラムが同じカラム長の 3.5 µm のカラムの 2 倍の効率に達することを示しています。

41

この高効率は、高分離、ハイスループット分析に使用できます。
0

0.0

1

0.5
Time (min)Time (min)1.0
LCRR002

RRHT カラムによるピークキャパシティの向上
カラム A :

Eclipse RRHT XDB-C8
928700-906
2.1 x 100 mm、1.8 µm

カラム B :

Eclipse XDB-C18
961753-902
2.1 x 100 mm、3.5 µm

移動相 :A : H2O
B : ACN

ピークキャパ A : 461
B : 343
シティ :
流量 :

A
mAU
120
100
80
60
40
20
0

1. ウラシル
2. C3-アルキルフェノン
3. C4-アルキルフェノン
4. C5-アルキルフェノン
5. C6-アルキルフェノン
6. C7-アルキルフェノン
7. C8-アルキルフェノン
8. C9-アルキルフェノン
9. C10-アルキルフェノン
10. C12-アルキルフェノン
11. C14-アルキルフェノン

1

11

0

2

4

6

8

10
12
Time (min)

14

16

18

0.5 mL/min

グラジエント : 0.0 分 - 50% B
20.0 分 - 100% B

B
mAU
100

カラム温度 :

40 °C

検出器 :

UV、254 nm

60

サンプル :

アルキルフェノン

40

1

80

11

20
0
0

2

4

6

8

10
12
Time (min)

14

16

18
LCRR00436低分子化合物の分離用カラム

分析時間を大幅に短縮する RRHT カラム
カラム A :

Eclipse XDB-C18
990967-902
4.6 x 250 mm、5 µm

カラム B :

Eclipse XDB-C18
963967-902
4.6 x 150 mm、3.5 µm

カラム C :

Eclipse XDB-C18
966967-902
4.6 x 75 mm、3.5 µm

カラム D :ZORBAX Eclipse XDB-C18
935967-902
4.6 x 50 mm、3.5 µm

カラム E :

Eclipse RRHT XDB-C18
925975-902
4.6 x 50 mm、1.8 µm

移動相 :

A

1
2

B

1

5

2

1

5

2

D

3

1
2 3 4

1

E

5

5
2

6

4

3 4

6

5

7

6

7

6

4

3

C

4

3

1. ウラシル2. ナプロキセン
3. メファナム酸
4. ブチルパラベン
5. プロプラノロール
6. ナフタレン
7. フタル酸ジプロピル

7

7

6 7

73% MeOH : 27% 20 mM

リン酸緩衝液、pH 7.0

流量 :1 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、254 nm

0

2

4

6

8

Time (min)10

12
LCRR003

この図は、ラピッドレゾリューション HT カラムを使うことによって分析時間を劇的に短縮できることを示すものです。クロマトグラム A では、長さ 25 cm、内径 5µm のカラムで分離が 11.5 分かかったことを示しています。クロマトグラム B、C で示されているラピッドレゾリューションカラム (3.5 µm) では、分離をほとんど変えることなく、分析時間は大幅に短縮されていることを示しています。ラピッドレゾリューション HT カラムでは分析時間が 2.2 分にまで短縮されており、この時間は分析時間の80% にあたります。 しかも、ベースライン分離は保たれたままです。

高温でも長寿命の RRHT カラム

移動相 :ZORBAX RRHT SB-C18
827700-902
2.1 x 50 mm、1.8 µm

Plates12000

A : 60 % H2O
B : 40% ACN

10000

流量 :

1 mL/min8000

カラム温度 :

80 °C

検出器 :

UV、254 nm

サンプル :

QC テストミックス

6000

4000

2000

0

1
499
718
853
988
1153
1305
1506
1641
1776
1911
2046
2181
2319
2508
2643
2778
2913
3085
3220
3468
3603
3738
3887
4054
4189
4324
4537
4756
4892
5033
5201

カラム :

Injection Number

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

LCRR00537低分子化合物の分離用カラム

効率の比較 – ラピッドレゾリューション High Definition (RRHD)/RRHT (1.8 µm)
およびラピッドレゾリューション (3.5 µm) カラム
分離能力

分離能力

Poroshell 120

N (3.5 µm)*

N (1.8 µm)

150

32,00021,00032,500100

21,00014,00024,00075

16,00010,50017,000**カラム長さ (mm)

高分離

超高速

50

11,000

7,000

12,000

30

5,500

4,200

6,000

20

—

—

3,500

15

—

2,100

2,500

分離能 α N1/2

*同じ長さの 5 µm HPLC カラムは、段数 (N 値) が 40 % 少なくなります。
**カスタムカラム
データは、内径 4.6 mm のカラムに基づくものです

ヒントとテクニック
LC ラックによってキャピラリー長を短縮し、カラム外容積を最小化することが可能機器を保護するだけではなく、必要に応じてモジュールを切り替えることもできます。

Agilent LC システム用ラック、5001-3726

38低分子化合物の分離用カラム

高圧用ラピッドレゾリューション HT カラム (最大圧力 : 60 MPa、9000 psi)(µm)

EclipsePlus C18
USP L11.8959994-902

1.8959964-902

1.8959951-902

1.8959941-902

959941-906

959941-912

959941-918

927975-902

927975-906

727975-902

1.8959931-902

959931-906

959931-912

959931-918

924975-902

924975-906

724975-902

926975-902

926975-906

726975-902

粒子径
ハードウェア 品名

寸法(mm)

4.6 x 150
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、EclipsePlus C8USP L7

Eclipse Plus
Phenyl-Hexyl
USP L11

EclipsePAH
USP L1

EclipseXDB-C18
USP L1959964-906

959964-912

959964-918

928975-902

EclipseXDB-C8USP L7

Extend-C18
USP L160 MPa4.6 x 100
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、

728975-902

60 MPa4.6 x 75
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、
60 MPa4.6 x 50
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、
60 MPa4.6 x 30
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、
60 MPa4.6 x 20
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、

1.8

60 MPaUHPLC ガード、
60 MPa、3 個

4.6 x 51.8820750-901

ソルベントセーバ 3.0 x 100
HT、60 MPa

1.8959964-302

959964-306

959964-312

928975-302

ソルベントセーバ 3.0 x 50
HT、60 MPa

1.8959941-302

959941-306

959941-312

927975-302

927975-306

727975-302

ソルベントセーバ 3.0 x 30
HT、60 MPa

1.8924975-302

924975-306

724975-302

ソルベントセーバ 3.0 x 20
HT、60 MPa

1.8926975-302

926975-306

726975-302

UHPLC ガード、
120 MPa、3 個

1.8823750-901

1.8959794-902

1.8959764-902

959764-906

959764-912

959764-918

928700-902

928700-906

728700-902

1.8959741-902

959741-906

959741-912

959741-918

927700-902

927700-906

727700-902

1.8959731-902

959731-906

959731-912

924700-902

924700-906

724700-902

926700-902

926700-906

726700-902

3.0 x 5

ナローボア RRHT、 2.1 x 150

820750-903
728975-302

823750-903

60 MPaナローボア RRHT、 2.1 x 100

60 MPaナローボア RRHT、 2.1 x 50

60 MPaナローボア RRHT、 2.1 x 30

60 MPaナローボア RRHT、 2.1 x 20

1.8

60 MPaUHPLC ガード、
120 MPa、3 個

2.1 x 51.8821725-901

821725-903

UHPLC ガードは、2013 年に発売予定です。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp39低分子化合物の分離用カラム

高圧用ラピッドレゾリューション HT カラム (最大圧力 : 60 MPa、9000 psi)
ハード
ウェア

粒子径
品名

寸法 (mm)4.6 x 150
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、(µm)

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7

SB-Phenyl
USP L11SB-CN
USP L10

SB-Aq

1.8

829975-902

829975-906

829975-912

829975-905

829975-914

1.8828975-902

828975-906

828975-912

828975-905

828975-914

Rx-SIL**
USP L3

Bonus-RP
USP L60828975-901

828668-901

60 MPa4.6 x 100
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、
60 MPa4.6 x 75
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、

1.8

830975-906

830668-901

60 MPa4.6 x 50
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、

1.8

827975-902

827975-906

827975-912

827975-905

827975-914

827975-901

827668-901

1.8824975-902

824975-906

824975-912

824975-905

824975-914

1.8826975-902

826975-906

1.8820750-902

820750-904

ソルベントセーバ 3.0 x 150
HT、60 MPa

1.8829975-302

829975-306

829975-312

829975-305

ソルベントセーバ 3.0 x 100
HT、60 MPa

1.8828975-302

828975-306

828975-312

828975-305

828975-314

828975-301

828668-301

ソルベントセーバ 3.0 x 50
HT、60 MPa

1.8827975-302

827975-306

827975-312

827975-305

827975-314

827975-301

827668-301

ソルベントセーバ 3.0 x 30
HT、60 MPa

1.8824975-302

824975-306

ソルベントセーバ 3.0 x 20
HT、60 MPa

1.8826975-302

826975-306

UHPLC ガード、
120 MPa、3 個

1.8823750-902

823750-904

1.8820700-902

820700-906

820700-912

820700-905

1.8828700-902

828700-906

828700-912

828700-905

828700-914

828700-901

828768-901

1.8827700-902

827700-906

827700-912

827700-905

827700-914

827700-901

827768-901

1.8824700-902

824700-906

824700-912

824700-905

824700-914

1.8826700-902

826700-906

1.8821725-902

821725-904

60 MPa4.6 x 30
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、
60 MPa4.6 x 20
ラピッドレゾ
リュ―ション HT、
60 MPaUHPLC ガード、
60 MPa、3 個

4.6 x 5

3.0 x 5

ナローボア RRHT、 2.1 x 150

824975-305

60 MPaナローボア RRHT、 2.1 x 100

60 MPaナローボア RRHT、 2.1 x 50

60 MPaナローボア RRHT、 2.1 x 30

60 MPaナローボア RRHT、 2.1 x 20

60 MPaUHPLC ガード、
120 MPa、3 個

40

2.1 x 5

低分子化合物の分離用カラム

ラピッドレゾリューション HT カラムおよびカートリッジ (最大圧力 : 40 MPa、6000 psi)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipseXDB-C18
USP L1

EclipseXDB-C8USP L7922975-906

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7

Extend-C18
USP L1

822975-902

822975-906

722975-902

ラピッドレゾリュ―ション HT、40 MPa

4.6 x 501.8922975-902

ラピッドレゾリューション HT、3 個、4.6 x 501.8922975-932

822975-932

ナローボア RRHT、40 MPa

2.1 x 501.8922700-902

822700-902

ナローボア RRHT、3 個、40 MPa

2.1 x 501.8922700-932

822700-932

40 MPaラピッドレゾリューション HT カートリッジ (ハードウェアキット 820555-901 が必要)
ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

4.6 x 501.8925975-902

825975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、 4.6 x 50
3個

1.8925975-932

825975-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

2.1 x 501.8925700-902

825700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、 2.1 x 50
3個

1.8925700-932

825700-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

4.6 x 30

1.8923975-902

823975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、 4.6 x 303個

1.8923975-932

823975-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

2.1 x 301.8923700-902

823700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、 2.1 x 30
3個

1.8923700-932

823700-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

4.6 x 151.8921975-902

821975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、 4.6 x 153個

1.8921975-932

821975-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

2.1 x 151.8921700-902

821700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、 2.1 x 153個

1.8921700-932

821700-932

820555-901

820555-901

RR および RRHT カートリッジ用ハードウェアキット

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

41低分子化合物の分離用カラム

UHPLC 用 Agilent Fast Guard
UHPLC ガードカラム• 高速 LC カラム用の高性能ガードカラム• 2 つの形式 – Poroshell 120 カラム (60 MPa まで安定)、RRHD カラム、1.8 µm (120 MPa まで安定)、RRHT カラム、1.8 µm (60 MPa まで安定) 用

アジレント UHPLC ガードカラムは、アジレントの高速 LC カラムファミリ向けに設計された高性能ガードカラムです。UHPLC ガードカラムでは、カラムの端に直接フィットする、取り付けが容易な
ハードウェアを使用しています。追加のハードウェアは不要です。1 パッケージに 3 個入りです。
アジレント UHPLC ガードカラムは、性能を低下させずに分析カラムの寿命を延ばします。

UHPLC 用 Fast Guard
ZORBAX RRHD カラム、1.8 µm (120 MPa)、ZORBAX RRHT カラム、1.8 µm (60 MPa)

ハードウェア 品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipsePlus C18
USP L1

Eclipse XDB-C18
USP L1

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

2.1 x 51.8821725-901

821725-903

821725-902

821725-904

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

3.0 x 51.8823750-901

823750-903

823750-902

823750-904

UHPLC ガード、60 MPa、3 個

4.6 x 51.8820750-901

820750-903

820750-902

820750-904

EC-C18USP L1

EC-C8
USP L7

SB-C18USP L1

Phenyl-Hexyl
USP L11

Poroshell 120 カラム、2.7 µm (60 MPa)
ハードウェア 品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

UHPLC ガード、60 MPa、3 個

2.1 x 52.7821725-911

821725-913

821725-912

821725-914

UHPLC ガード、60 MPa、3 個

3.0 x 52.7823750-911

823750-913

823750-912

823750-914

UHPLC ガード、60 MPa、3 個

4.6 x 52.7820750-911

820750-913

820750-912

820750-914

ヒントとテクニック
UHPLC 用 Fast Guard の詳細 – 性能を低下させずに分析用高速 LC カラムの寿命を延ばす
簡単な方法 (英語版) (www.agilent.com/chem/fastguardsvideo)42低分子化合物の分離用カラム

その他の逆相分析 HPLC 用カラム
目的に合った逆相カラムを用いることで、優れたピーク形状と分離能を得ることができます。
高速 LC を使用している場合でも、従来の HPLC アプリケーションを使用している場合でも、アジレ
ントの LC ファミリは、分離の最適化に役立つ幅広い相と選択性を提供します。

ZORBAX ファミリの相は、ラピッドレゾリューションハイスループット (RRHT)、ラピッドレゾリュー
ション High Definition (RRHD) ファミリの高速 LC カラム、または、Poroshell 120 カラムに容易に拡張できます (前の項の 23 ページを参照)。
この項では、アジレントのその他の分析カラムの概要を説明します。

ZORBAX ラピッドレゾリューション、3.5 µm － 最初のメソッド開発に適しており、5 µm カラムと比較してすべてのアプリケーションでサンプルスループットが向上します。
ZORBAX ソルベントセーバ、内径 3.0 mm カラム － 内径 4.6 mm のカラムと比較して移動相の使用を 60 % 削減します。
ZORBAX Eclipse Plus HPLC カラム － 塩基性化合物で優れたピーク形状を実現するように設計されており、すべての ZORBAX カラム構成で使用できます。
信頼性の高い拡張とメソッド変換 － StableBond、Eclipse PAH、Eclipse XDB、ZORBAX Rx、Extend-C18、Bonus-Rx、オリジナルの ZORBAX カラムなど、合計で 13 を超える相が用意されています。

ZORBAX メソッド開発キット － 2 本の価格で 3 本のカラムが含まれます。それぞれが最適な選択性を得るための異なる結合相を持っています。
ZORBAX メソッドバリデーションキット － 必要な数のカラムをお選びください。メソッドバリデー
ションを簡単に、低コストで行えます。
Pursuit、Pursuit XRs および Pursuit XRs Ultra カラム － 異なる選択性を提供します。
Polaris カラム － ルーチン極性アプリケーション向けに極性を変更した相を提供します。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp43低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse Plus
• メソッド開発に理想的なカラム – 幅広い化合物で優れた結果を提供• 酸性、塩基性、中性化合物について、ピーク形状、効率、分離能、寿命など、すべてにおいて高いレベルの性能を発揮• 厳しい QA/QC テストにより、優れた再現性を実現• 工程すべてを管理することにより、製造プロセスがさらに改善 (特許取得済)• 粒径 1.8、3.5、5 µm の各タイプを揃え、一般分析、高分離能分析、高速 LC 分析に対応
Agilent ZORBAX Eclipse Plus カラムは、シリカベースのカラムとして卓越した性能を提供します。効率と分解能が向上し、塩基性化合物でも対称形のピーク形状を示します。アジレントは、充填剤製造
プロセスのすべてを自社でコントロールすることにより、高性能のカラムを提供しています。

ZORBAX Eclipse Plus カラム

その高い性能により、Eclipse Plus カラムは多岐にわたるサンプルのメソッド作成にとって理想的な選択肢です。高速メソッド開発と優れた生産性を実現する必要がある場合、高分解能な粒子径 1.8µm カラムをお使いください。標準メソッドに対しては、粒子径 5 µm のカラムまたはラピッドレゾ
リューション 3.5 µm カラムをお使いください。すべての粒径で、メソッドトランスファを簡単に行えます。
厳格な QA/QC 試験により、ロット間の再現性が保たれ、長期間にわたり信頼性の高い結果が得られ
ます。

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

上限温度

pH 範囲*

エンドキャップ

カーボンロード

ZORBAX Eclipse Plus C18

95 Å

160 m2/g

60 °C

2.0-9.0

ダブル

9%

ZORBAX Eclipse Plus C8

95 Å

160 m2/g

60 °C

2.0-9.0

ダブル

7%

ZORBAX Eclipse PAH

95 Å

160 m /g

60 °C

2.0-8.0なし

14 %ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl

95 Å

160 m2/g

60 °C

2.0-8.0

ダブル

9%

2

仕様は代表的な値のみを表しています。

*pH 7 以上、温度 40 °C 以上では、カラム寿命は大幅に短くなります。シリカを基材とするカラムを pH 6 ～ 9 の範囲で最高の安定性を確保しながら使用するには、40 °C 以
下の使用温度、0.01 ～ 0.02 M の範囲の低濃度緩衝液、特にリン酸緩衝液と炭酸塩緩衝液を使用します。

ヒントとテクニック
Poroshell 120 の EC-C18、EC-C8、および Phenyl-Hexyl 相は、Eclipse Plus C18、Eclipse Plus C8、および Eclipse Plus Phenyl-Hexyl 相とほぼ同等な選択性です。
24 ページをご覧ください。

44

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse Plus:テーリングのない良好なピーク形状
カラム :Eclipse Plus C18
959996-902
4.6 x 100 mm、5 µm

1. Pyridine
2. Phenol

1

移動相 :

A : 60 % 水
B : 40 % アセトニトリル

Eclipse Plus C18

流量 :1.0 mL/min

SunFire C18

カラム温度 :

室温

XBridge C18

検出器 :UV、254 nm

サンプル :

ピリジン、フェノール

2

Ace 5 C18

Discovery HS C18
Luna C18 (2)Gemini C18
XTerra MS C18
0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

Time (min)
LCEC001

ZORBAX Eclipse Plus の優れたピーク形状と効率
カラム A :

XBridge C18、4.6 x 150 mm、5 µm

カラム B :

Eclipse Plus C18
959993-902
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :A : 0.1 % ギ酸
B : 0.1 % ギ酸 ACN 溶液

流量 :1.0 mL/min

1. スルファニルアミド
2. スルファジアジン
3. スルファチアゾール
4. スルファメラジン
5. スルファメタジン
6. スルファメトキサゾール
A1

N = 14000
Tf = 1.25

N = 41000
Tf = 1.13
3

2

5

4

6

グラジエント : 0.0 分 10 % B
15 分 30 % B
カラム温度 :

40 ºC

検出器 :

UV、254 nm

サンプル :

スルホンアミド

0

2

B

4

1

6
Time (min)2

10

N = 23000
Tf = 1.01

2

0

8

4

12

N = 60000
Tf = 1.00
3

4

5

6
Time (min)8

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

6

10

12
LCEC00345低分子化合物の分離用カラム

Eclipse Plus カラムによるテーリングの抑制と分離の最適化
カラム A :

Eclipse Plus C18、4.6 x 50 mm

カラム B :

競合他社 C18、4.6 x 50 mm

移動相 :65 % ACN : 35 % 25 mM リン酸緩衝液 (pH 7.4)

A

Eclipse Plus C18、4.6 x 50 mm

1

Tf= 1.20

Eclipse Plus を用いた優れたピーク形状と選択性は、より高い分解能、容易な定量、優れた分離結果を意味します。

1. ノルトリプチリン
2. フタル酸ジプロピル

B

競合他社 C18、4.6 x 50 mm

1

Tf= 4.86
2
2
0

0.5

1

1.5

Eclipse Plus C18 と C8 の比較
Eclipse Plus C18
カラム A :
4.6 x 50 mm
カラム B :

Eclipse Plus C8
4.6 x 50 mm
水 : アセトニトリル (30 : 70)

流量 :2.0 mL/min

カラム温度 :

30 °C

0

検出器 :

UV、230 nm

B

サンプル :

リップクリーム抽出物 ACN 溶液(100 °C で溶かし、冷却後 0.45 µm でろ過)保持力が弱いため、分析時間が大幅に短縮されます。ここでは C8 が最適です。

1. オキシベンゾン
2. 内部標準
3. メトキシ桂皮酸オクチル

A

移動相 :

min

2

N: 8800
Pw : 0.014 min.
TF: 1.20

N: 11600
Pw : 0.047 min.
TF: 1.06

1
N: 5000
Pw : 0.019 min.
TF: 1.09

02

N: 6600
Pw : 0.037 min.
TF: 0.99

1

N: 11800
Pw : 0.093 min.
TF: 1.02

3

N: 6300
Pw : 0.061 min.
TF: 0.98

2

4

min

4

min

2.2 min.
3

鎮痛剤錠剤の高速分析、pH 2.7 と pH 7 での選択性の違い
カラム :Eclipse Plus C8959946-906
4.6 x 50 mm、5 µm

グラジエント : 10 ～ 60 % B/3 分
pH 2.7 : A : 0.1 % ギ酸、B : 0.1 % ギ酸 ACN 溶液
pH 7.0 : A : 20 mM リン酸ナトリウム B : ACN
サンプル :

ジェネリック エキセドリン錠剤

1. アセトアミノフェン
2. カフェイン
3. アセチルサリチル酸
4. 未知化合物1pH 2.7

3

2
0

0.5

1

1.5

4
2

2.5

3

3.5

min

pH 7.0

1
3

きます。

46

2 min.

2

Eclipse Plus C18 と C8 は、どちらも広範囲の pH で、選択性と分析時間を最適化で

4
0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

min

低分子化合物の分離用カラム

Eclipse Plus C8 は Eclipse Plus C18 よりも保持力が弱い
Eclipse Plus C8959996-906
4.6 x 100 mm、5 µm

カラム A :

カラム B :

A

Eclipse Plus C18
959996-902
4.6 x 100 mm、5 µm

3.789

移動相 :

80 % メタノール 8 mM (合計) K2HPO4 pH 7

0

流量 :

1.0 mL/min

B

検出器 :

UV、215 nm

サンプル :

アミトリプチリン 0.05 µg/µL (0.5 µL 注入)

1

2

3

Tf=1.04

4

5

6

7

8

9

min

7

8

9

min

5.777
Tf=1.00

0

1

2

3

4

5

6

C8 カラムは C18 カラムよりも保持時間が短く、分析時間が短縮されるため、通常は C8 カラムが選択されます。
Eclipse Plus C8 カラムは、分離が困難な塩基性化合物でも優れたピーク形状で同様の分離を達成します。

塩基性化合物の高速、超高速分析
カラム A :

Eclipse Plus C18
959941-902
4.6 x 50 mm、1.8 µm

カラム B :

Eclipse Plus C18
959993-902
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :A : 50 % 8 mM K2HPO4、pH 7
B : 50 % ACN

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、254 nm

サンプル :

ベルベリン、0.4 mg/mL、2 µL

A
O
N+

O

Cl-

1. ベルベリン

OCH3

Tf = 1.00

OCH3

0

0.5

1

1.5

2

2.5

min

B

Tf = 1.06

0

0.5

1

1.5

2

2.5

min
EP103

ZORBAX Eclipse Plus カラム

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

47低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse Plus

ハードウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipsePlus C18
USP L1

EclipsePlus C8USP L7

Eclipse Plus
Phenyl-Hexyl
USP L11

EclipsePAH
USP L1

アナリティカル

4.6 x 250

5959990-902

959990-906

959990-912

959990-918

アナリティカル

4.6 x 150

5959993-902

959993-906

959993-912

959993-918

アナリティカル

4.6 x 100

5959996-902

959996-906

959996-912

959996-918

アナリティカル

4.6 x 50

5959946-902

959946-906

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5959963-902

959963-906

959963-912

959963-918

ラピッドレゾリューション

4.6 x 1003.5959961-902

959961-906

959961-912

959961-918

ラピッドレゾリューション

4.6 x 75

3.5959933-902

959933-906

959933-912

ラピッドレゾリューション

4.6 x 503.5959943-902

959943-906

959943-912

959943-918

ラピッドレゾリューション

4.6 x 303.5959936-902

959936-906

959936-912

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 1001.8959964-902

959964-906

959964-912

959964-918

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 75

1.8959951-902

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 501.8959941-902

959941-906

959941-912

959941-918

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 301.8959931-902

959931-906

959931-912

959931-918

UHPLC ガード、60 MPa、3 個

4.6 x 51.8820750-901

ソルベントセーバ

3.0 x 250

5ソルベントセーバ

3.0 x 150

5959993-302

959993-306

ソルベントセーバプラス

3.0 x 150

3.5959963-302

959963-306

959963-312

ソルベントセーバプラス

3.0 x 1003.5959961-302

959961-306

959961-312

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 150

1.8959759-302

959759-306

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 1001.8959758-302

959758-306

959990-318

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 501.8959757-302

959757-306

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 1001.8959964-302

959964-306

959964-312

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 501.8959941-302

959941-306

959941-312(続く)

Agilent HILIC Plus には Eclipse Plus ファミリと同一の製造プロセスを使用しています。
ZORBAX HILIC Plus については、120 ページをご覧ください。

48

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse Plus

ハードウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipsePlus C18
USP L1

EclipsePlus C8USP L7

Eclipse Plus
Phenyl-Hexyl
USP L11959701-912

EclipsePAH
USP L1UHPLC ガード、120 MPa、3 個

3.0 x 51.8823750-901

ナローボア

2.1 x 250

5

ナローボア

2.1 x 150

5959701-902

959701-906

ナローボア

2.1 x 505959746-902

959746-906

ナローボア RR

2.1 x 150

3.5959763-902

959763-906

959763-912

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5959793-902

959793-906

959793-912

ナローボア RR

2.1 x 50

3.5959743-902

959743-906

959743-912

ナローボア RR

2.1 x 30

3.5959733-902

959733-906

959733-912

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 150

1.8959759-902

959759-906

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 1001.8959758-902

959758-906

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 501.8959757-902

959757-906

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 1001.8959764-902

959764-906

959764-912

959764-918

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 501.8959741-902

959741-906

959741-912

959741-918

959731-906

959731-912

959790-918
959701-918

959793-918

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 30

1.8959731-902

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

2.1 x 51.8821725-901

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-936

820950-937

820950-938

820950-939

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-936

821125-937

821125-938

821125-939

820999-901

820999-901

820999-901

820999-901

ガードハードウェアキット

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp49低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse PAH• EPA メソッド 610 に記載されている 16 種類の PAH を高分解で分離• 広範囲の粒子径 (1.8、3.5、5 µm) と、高速高分解能分離用のサイズ• 予想される使用条件下での再現性を最大にするために、物質の各バッチは PAH でテスト済み• Eclipse Plus カラムの高品質の改良されたシリカを使用して優れたパフォーマンスを実現• 「平面認識能」を必要とするアプリケーションまたは幾何異性体の分離に最適

ZORBAX Eclipse PAH カラム

Agilent ZORBAX Eclipse PAH カラムは、多環芳香族炭化水素の分離にお勧めします。PAH は、優先汚染
物質とみなされ、水中、土壌、および食品に存在する可能性のあるこのような発癌性化合物の分析は非常に重要です。Eclipse PAH カラムは、EPA メソッド 610 で 16 種類の PAH すべてを高分解能で分
離します。

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

上限温度

pH 範囲

エンドキャップ

カーボンロード

ZORBAX Eclipse PAH

95 Å

160 m2/g

60 °C

2.0-8.0なし

14 %仕様は代表的な値のみを表しています。

RRHT Eclipse PAH カラムによる高速高分離分析
Eclipse PAH
959941-918
4.6 x 50 mm、1.8 µm

カラム :

移動相 :

A : 水、B : アセトニトリル

グラジエント : 時間 (分)

0.00
3.5
5.2
5.5
6.5

%B
40
100
100
40
40

流量 :

2.0 mL/min

カラム温度 :

25 °C

検出器 :

DAD 220、4 nm No Ref. DAD ストップ
タイム = 6.0 分
ストップタイム = 7.0

mAU
2000
1750
1500
1250

Rs = 2.2 と 2.0
4.6 x 50 mm、3.5 µmRs = 2.2

1000
750
500
250
0
1

2

3
Time (min)45
LCEPlusPAH

50低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse PAH

ハードウェア 品名

EclipsePAH
USP L1

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

アナリティカル

4.6 x 250

5959990-918

アナリティカル

4.6 x 150

5959993-918

アナリティカル

4.6 x 100

5959996-918

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5959963-918

ラピッドレゾリューション

4.6 x 1003.5959961-918

ラピッドレゾリューション

4.6 x 503.5959943-918

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 1001.8959964-918

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 501.8959941-918

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 301.8959931-918

ソルベントセーバ

3.0 x 250

5959990-318

ナローボア

2.1 x 250

5959790-918

ナローボア

2.1 x 150

5959701-918

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5959793-918

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 1001.8959764-918

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 501.8959741-918

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-939

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-939

ガードハードウェアキット

820999-901

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp51低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse XDB

CH3
O

Si
CH3
CH3

O

Si

CH3

CH3
CH3
O

Si
CH3
CH3

O

Si

CH3

CH3
CH3
O

Si
CH3

高密度結合相とダブルエンドキャッピングを導入した Eclipse XDB 結合相• メソッド開発に合わせ 4 種類から選択可能• 塩基性、酸性、中性の化合物で良好なピーク形状• pH 2 ～ 9 の広い pH 範囲で高性能を発揮• 1.8 µm ～ 7 µm の粒径• 高密度結合とダブルエンドキャッピングで長寿命を実現
Agilent ZORBAX Eclipse XDB カラムでは、メソッド開発を最適化できるよう、4 つの結合相 (C18、C8、
Phenyl、CN) を提供しています。このため、pH 2-9 の幅広い領域で良好なピーク形状を実現し、メソッド開発における柔軟性を 1 シリーズのカラムで得ることができます。Eclipse XDB カラムは低 pH(23)でのメソッド開発に適したカラムで、あらゆるタイプの化合物で高い分解能と良好なピーク形状が得られます。また、中性 pH (6-8)での使用も可能です。中性 pH 領域では、残存シラノール基が活性が高くなり、テーリングが起こりやすくなります。こうしたテーリングを抑えるために、Eclipse
XDB カラムでは独自のプロセスにより超高密度結合とダブルエンドキャッピングを導入し、シラ
ノール基の活性をできるかぎり抑えてい ます。その結果、pH 2 ～ 9 の範囲で塩基性化合物のピーク形状が向上しています。Eclipse XDB カラムには 1.8 µm、3.5 µm、5 µm、および 7 µm の粒子径が用意されており、高速、高分解能の分析および分取スケールの分離を実現します。

カラム仕様
結合相

ZORBAX Eclipse XDB-C18

ポアサイズ

表面積

上限温度

pH 範囲*

エンドキャップ

カーボンロード80 Å

180 m2/g

60 °C

2.0-9.0

ダブル

8%

ZORBAX Eclipse XDB-C880 Å

180 m /g

60 °C

2.0-9.0

ダブル

7.6 %

ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl

80 Å

180 m2/g

60 °C

2.0-9.0

ダブル

7.2 %

60 °C

2.0-8.0

ダブル

4.3 %

ZORBAX Eclipse XDB-CN

80 Å

2

2

180 m /g

仕様は代表的な値のみを表しています。

*Eclipse XDB カラムは、幅広い pH 範囲で使用できるように設計されています。シリカを基材とするカラムを pH 6 ～9 の範囲で安定に使用するには、40 °C 以下の使用温度、0.01 ～ 0.02 M の範囲の低濃度緩衝液を使用します。

ヒントとテクニック
Poroshell 120 EC-CN は ZORBAX XDB-CN に非常によく似ています。24 ページをご覧ください。

52

低分子化合物の分離用カラム

広範囲の pH にわたり最高のピーク形状が得られる
ZORBAX Eclipse XDB カラム
カラム :

移動相 :

Eclipse XDB-C8
993967-906
4.6 x 150 mm、5 µm

サンプル: A:A : pH 3.0 75 % 25 mM リン酸緩衝液 25 % ACN
B : pH 7.0 90 % 20 mM リン酸緩衝液 10 % ACN

A

B

2

1. マレイン酸エステル
2. ドキシラミン
3. クロロフェニルアミン
4. トリプロリジン
5. ジフェンヒドラミン
B:
1. プロカインアミド
2. N- アセチルプロカイン

2

3
1

流量 :

1.5 mL/min

カラム温度 :

40 °C

3

4
5
1

アミド

3. N- プロピオニルプロカ

幅広い pH 範囲で優れたピーク形状が得られるため、ZORBAX Eclipse

インアミド

XDB カラムは pH 2 ～ 9 の範囲のメソッド開発で選択するのにふさわ
しいカラムです。
0

2.5

5.0
Time (min)

7.5

0

2.5

5.0
Time (min)7.5
LCEC004

pH 3、60 °C におけるカラム安定性のテスト
ZORBAX SB-C8883975-906
4.6 x 150 mm、5 µm

カラム :

移動相 :

Eclipse XDB-C8
993967-906
4.6 x 150 mm、5 µm
パージ条件 :

70 % 50 mM NaAc-HCl、pH 3.0
30 % ACN
保持力試験条件 :65 % メタノール
35 % 水流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

60 °C

サンプル :

三環系抗うつ剤

6.5
K of Amitriptyline

カラム :

7.0

6.0

ZORBAX SB-C8
5.5

ZORBAX Eclipse XDB-C8
他社 C8

5.0
0

2

4
6
8
Column Volumes of Mobile Phase (X1000)

10

12
LCEC005

Eclipse XDB カラムは、幅広い pH 範囲で安定しています。低 pH では、エンドキャップされた Eclipse カラムは安定性が極めて高く、pH 3 ではエンドキャップされていない
カラム、SB-C8 と同程度の安定性を示します。各カラムは 60 °C、pH 3 の移動相でパージしました。その後、強塩基性化合物を用いたテストにより、エンドキャッピング
または結合相がシリカ表面から加水分解されているかどうかを調べました。カラムボリューム 12,000 までのテスト範囲でアミトリプチリンのリテンションの値にばらつきが少ないことから、Eclipse XDB カラムは極めて安定性が高いことが分かります。他のエンドキャップされたカラムは同様の条件下で安定性が低くなっています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp53低分子化合物の分離用カラム

pH 7.0 におけるカラム安定性のテスト
カラム A :

競合他社 C8
SIL-タイプ
1826 カラムボリューム後

カラム B :

Eclipse XDB-C8
993967-906
4.6 x 150 mm、5 µm
SOL-タイプ
1843 カラムボリューム後移動相 :60 % ACN
40 % 250 mM リン酸緩衝液、pH7.0

流量 :1.5 mL/min

カラム温度 :

60 °C

サンプル :

三環系抗うつ剤AB

15

1. ウラシル
2. ノルトリプチリン
3. ドキセピン
4. アミトリプチリン
5. トリミプラミン

5

1

2, 3

4
2

3
4

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12Time (min)

0

1

2

3

4
5
Time (min)6

7

8
LCEC006

ダブルエンドキャッピングと高密度結合を導入した耐久性の高い Rx-Sil 粒子 (sol-タイプ) は、ここで使用されているシングルエンドキャッピングの sil-ゲルカラムと比べて、pH 7 におけるカラム寿命が長くなっています。このテストのような高温 (60 °C)、高塩分濃度 (250 mM) という条件下では、シリカの溶解が加速するため、sil-ゲルタ
イプのカラムの寿命が短くなります。

Eclipse XDB および StableBond の使用による塩
基性化合物の選択性の変化
カラム A :

カラム B :

Eclipse XDB-C8
966967-906
4.6 x 75 mm、3.5 µm

AZORBAX Rx/SB-C8866953-906
4.6 x 75 mm、3.5 µm

移動相 :70 % 25 mM NaH2PO4、pH 3.0
30 % メタノール

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

35 °C

B

2

2

1. バルビタール
2. スルファメトキサゾール
3. カフェイン

3

3

1

1

0

0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
Time (min)00.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
Time (min)
LCEC008

Eclipse XDB と StableBond カラムは同じシリカをベースとしていますが、結合相とエンドキャッピングが異なります。そのため、この例で示されているように、同じサンプル、同じ条件において大きく異なる選択性が得られます。

54

低分子化合物の分離用カラム

Eclipse XDB の選択性の違いを利用した分離の最適化
Eclipse XDB-Phenyl
カラム A :
963967-912
4.6 x 150 mm、3.5 µm
カラム B :

カラム C :

移動相 :

A

2
3

Eclipse XDB-C8
963967-906
4.6 x 150 mm、3.5 µm

0
B

2

4

6

1.0 mL/min
35 °C

サンプル :

日焼け止め剤

10

12

14

16

10

12

14

16

2
3

15 % H2O : 85 % MeOH

カラム温度 :

8

1

Eclipse XDB-C18
963967-902
4.6 x 150 mm、3.5 µm

流量 :1. オキシベンゾン
2. パディメート-O
3. サリチル酸エチルヘキシル

1

0
C

2

4

6

8

1

2
3

0

2

4

6

8
10
Time (min)

12

14

16
LCEC007

Eclipse XDB の全 3 種類の結合相 (C18、C8、Phenyl) を使用した日焼け止め剤の分離では、様々な結合相を分離の最適化に使用できることがわかります。3 種類の結合相全てで十分な分離能が得られていますが、Eclipse XDB-Phenyl ではピークの溶出順序が異なるとともに、全体の分析時間も短くなっています。また、3 種類の結合相全てで、移動相に添加剤を加えなくても良好なピーク形状が得られています。

尿素系農薬の選択性
Eclipse XDB-C18
カラム A :

A

993967-902
4.6 x 150 mm、5 µm

3

カラム B :

カラム C :

Eclipse XDB-C18993967-9024.6 x 150 mm、
5 µm
A. 60:40 MeOH : 水
B. 60:40 MeOH : 水
C. 77:23 MeOH : 水

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

25 °C

サンプル :

4

1

Eclipse XDB-CN
993967-905
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :

2

5
6

0

10

B

1

0

2

C

2

1

2

5
6

4
6
Time (min)
34

0

30
Time (min)

40

50

2
34

尿素農薬

20

8

10

8

10

1. フェヌロン
2. モニュロン
3. モノリニュロン
4. ジウロン
5. リニュロン
6. ペンシクロン

5646Time (min)

LCEC010

尿素系農薬の分離では、Eclipse XDB-CN カラムを使用するとリテンションタイムが短縮され、 Eclipse XDB-C18 カラムと比べて良好な選択性が得られます。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp55低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse XDB
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipseXDB-C18
USP L1

セミ分取

9.4 x 250

5990967-202

990967-206

アナリティカル

4.6 x 250

5990967-902

990967-906

990967-912

990967-905

アナリティカル

4.6 x 150

5993967-902

993967-906

993967-912

993967-905

アナリティカル

4.6 x 505946975-902

946975-906

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5963967-902

963967-906

963967-912

963967-905

ラピッドレゾリューション

4.6 x 1003.5961967-902

961967-906

ラピッドレゾリューション

4.6 x 75

3.5966967-902

966967-906

966967-912

ラピッドレゾリューション

4.6 x 50

3.5935967-902

935967-906

935967-912

ラピッドレゾリューション

4.6 x 30

3.5934967-902

934967-906

ラピッドレゾリューション

4.6 x 203.5932967-902

932967-906

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

4.6 x 51.8820750-903

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 100

1.8928975-902

928975-906

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 501.8927975-902

927975-906

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 30

1.8924975-902

924975-906

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 201.8926975-902

926975-906

ソルベントセーバ

3.0 x 250

5990967-302

990967-306

990967-312

990967-305

ソルベントセーバ

3.0 x 150

5993967-302

993967-306

993967-312

993967-305

ソルベントセーバプラス

3.0 x 150

3.5

963954-302

963954-306

963954-312

963954-305

ソルベントセーバプラス

3.0 x 1003.5961967-302

961967-306

961967-312

ソルベントセーバプラス

3.0 x 75

3.5966954-302

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 150

1.8981759-302

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 100

1.8981758-302

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 50

1.8981757-302

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 100

1.8928975-302

928975-306

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 501.8927975-302

927975-306

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 30

1.8924975-302

924975-306
926975-306

品名

EclipseXDB-C8USP L7

EclipseXDB-Phenyl
USP L11

EclipseXDB-CNUSP L10標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)

961967-905
966967-905

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 201.8926975-302

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

3.0 x 51.8823750-903

ナローボア

2.1 x 150

5993700-902

993700-906

993700-912

993700-905

ナローボア

2.1 x 505960967-902

960967-906

960967-912

960967-905

ナローボア RR

2.1 x 150

3.5930990-902

930990-906*これらのカラムには Eclipse XDB-C18、5 µm が充填されています。
(続く)

56

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse XDB
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipseXDB-C18
USP L1

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5961753-902

ナローボア RR

2.1 x 75

3.5966735-902

ナローボア RR

2.1 x 503.5971700-902

971700-906

ナローボア RR

2.1 x 30

3.5974700-902

974700-906

ナローボア RR

2.1 x 203.5972700-902

972700-906

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 150

1.8981759-902

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 100

1.8981758-902

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 50

1.8981757-902

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 1001.8928700-902

928700-906

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 501.8927700-902

927700-906

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 301.8924700-902

924700-906

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 201.8926700-902

926700-906

品名

EclipseXDB-C8USP L7961753-906

EclipseXDB-Phenyl
USP L11

EclipseXDB-CNUSP L10標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)

961753-905

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

2.1 x 51.8821725-903

マイクロボア RR

1.0 x 150

3.5963600-902

963600-906

マイクロボア RR

1.0 x 503.5965600-902

965600-906

マイクロボア RR

1.0 x 30

3.5961600-902

961600-906

マイクロボアガード、3 個

1.0 x 1755185-5921

5185-5921

ガードカートリッジ

9.4 x 155820675-112*820675-112*820675-112*820675-112*

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-925

820950-926

820950-927

820950-935

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-926

821125-926

821125-926

821125-935

ガードハードウェアキット

840140-901

840140-901

840140-901

840140-901

ガードハードウェアキット

820999-901

820999-901

820999-901

820999-901

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7977250-102

977250-106

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7977150-102

977150-106

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5970150-902

970150-906

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5970100-902

970100-906

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5970050-902

970050-906

PrepHT ガードカートリッジ

17.0 x 7.55820212-925

820212-926

ガードカートリッジハードウェアキット

820444-901

820444-901

PrepHT エンドフィッティング、2 個

820400-901

820400-901*これらのカラムには Eclipse XDB-C18、5 µm が充填されています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp57低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse XDB
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipseXDB-C18
USP L1

アナリティカル

4.6 x 250

57995118-585

アナリティカル

4.6 x 150

57995118-595

7995108-595

ラピッドレゾリューション

4.6 x 75

3.57995118-344

7995108-344

ソルベントセーバプラス

3.0 x 75

3.57995230-344

ガードカートリッジ、10 個

4.0 x 457995118-504

7995118-504

5021-1845

5021-1845

922975-906

品名EclipseXDB-C8USP L77995108-585

Agilent カートリッジカラム (ハードウェアキット 5021-1845 が必要)

カートリッジホルダー

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)
ラピッドレゾリュ―ション HT、40 MPa

4.6 x 501.8922975-902

ラピッドレゾリューション HT、3 個、40 MPa

4.6 x 501.8922975-932

ナローボア RRHT、40 MPa

2.1 x 501.8922700-902

ナローボア RRHT、3 個、40 MPa

2.1 x 501.8922700-932

ラピッドレゾリューションカートリッジ

4.6 x 30

3.5933975-902

933975-906

ラピッドレゾリューションカートリッジ、3 個

4.6 x 30

3.5933975-932

933975-936

ラピッドレゾリューションカートリッジ

4.6 x 153.5931975-902

931975-906

ラピッドレゾリューションカートリッジ、3 個

4.6 x 153.5931975-932

931975-936

ラピッドレゾリューションカートリッジ

2.1 x 30

3.5973700-902

973700-906

ラピッドレゾリューションカートリッジ、3 個

2.1 x 30

3.5973700-932

973700-936

ラピッドレゾリューションカートリッジ

2.1 x 153.5975700-902

975700-906

ラピッドレゾリューションカートリッジ、3 個

2.1 x 153.5975700-932

975700-936

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ (ハードウェアキット 820555-901 が必要)

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、40 MPa

4.6 x 501.8925975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個、40 MPa

4.6 x 501.8925975-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、40 MPa

4.6 x 30

1.8923975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個、40 MPa

4.6 x 30

1.8923975-932
(続く)

58

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Eclipse XDB
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipseXDB-C18
USP L1

EclipseXDB-C8USP L7

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ (ハードウェアキット 820555-901 が必要)
ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、40 MPa

4.6 x 151.8921975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個、40 MPa

4.6 x 151.8921975-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、40 MPa

2.1 x 501.8925700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個、40 MPa

2.1 x 501.8925700-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、40 MPa

2.1 x 301.8923700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個、40 MPa

2.1 x 301.8923700-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、40 MPa

2.1 x 151.8921700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個、40 MPa

2.1 x 151.8921700-932

RR および RRHT カートリッジ用ハードウェアキット

820555-901

キャピラリーフローカラム (ガラス内面ステンレス)
キャピラリー

0.5 x 250

55064-8286

キャピラリー

0.5 x 150

55064-8287

キャピラリー RR

0.5 x 150

3.5

5064-8288

キャピラリー RR

0.5 x 35

3.5

5064-8298

キャピラリー

0.3 x 250

55064-8269

キャピラリー

0.3 x 150

55064-8291

キャピラリー RR

0.3 x 150

3.5

5064-8271

キャピラリー

0.5 x 35

55064-8296

キャピラリー

0.3 x 35

55064-8297

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp59低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 80Å StableBond

R
O

Si

R1

R
OH

• pH 1 までの低 pH 移動相による分離において、カラム寿命と再現性が非常に良好• 特許取得済みの Stable Column Chemistry により、高温下および低 pH 下での結合相の脱落を抑制• 6 つの異なる化学結合相により広範囲な分析に対応 (SB-C18、SB-C8、SB-CN、SB-Phenyl、SBC3、SB-Aq)

R• 優れたピーク形状を得るために高純度 (B タイプ) シリカを採用
Si

O

R1

R
OH
R
O

Si

R1

R

ZORBAX StableBond カラムは、低 pH での耐久性の鍵となるシロキサン結合の加水分解を抑制するために、ジイソブチル基 (SB-C18) ややジイソプロピル (SB-C8、SB-C3、SB-Phenyl、SB-CN、SB-Aq) を側鎖に持つユニークな単官能基シラン (特許取得済) を使用しています。StableBond 充填剤は、酸性移動相で優れた安定性や長いカラム寿命と最良の再現性を維持するために、エンドキャッピングを行っていません。高純度で酸性度の低いシリカの使用により、 酸性化合物、塩基性化合物および中性化
合物で素晴らしいピーク形状を示します。そのため、StableBond カラムは多くのメソッド開発で最良の選択肢となります。ZORBAX StableBond カラムは、水溶液比率の高い移動相も含めて一般的な移動相全般を使用できます。

立体的に保護された StableBond 結合相

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

上限温度*

pH 範囲*

エンドキャップ

カーボンロード

ZORBAX SB-C18

80 Å

180 m /g

90 °C

0.8-8.0

なし

8%

ZORBAX SB-C880 Å

180 m2/g

80 °C

1.0-8.0なし

5.5 %ZORBAX SB-C3

80 Å

180 m2/g

80 °C

1.0-8.0

なし

4%

ZORBAX SB-Phenyl

80 Å

180 m2/g

80 °C

1.0-8.0なし

5.5 %ZORBAX SB-CN

80 Å

180 m2/g

80 °C

1.0-8.0

なし

4%

80 °C

1.0-8.0

なし

非公開

ZORBAX SB-Aq

80 Å

2

2

180 m /g

仕様は代表的な値のみを表しています。

*StableBond カラムは低 pH で最高の性能を発揮するように設計されています。シリカを基材とするカラムを pH 6 ～ 8 の範囲で最高の安定性を確保しながら使用するには、
40 °C 以下の使用温度、0.01 ～ 0.02 M の範囲の低濃度緩衝液を使用します。中性 pH では、Eclipse Plus、Eclipse XDB、および Bonus-RP の使用をお勧めします。

ヒントとテクニック
Poroshell 120 では ZORBAX StableBond SB-C18、SB-C8、および SB-Aq 相も使用できます。
24 ページをご覧ください。

60

低分子化合物の分離用カラム

低 pH と高温で優れた安定性を示す StableBond SB-C18(pH 0.8、90 °C)
カラム :ZORBAX SB-C18
883975-902
4.6 x 150 mm、5 µm

カラム :ZORBAX Rx-C18
883967-902
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :50 % メタノール/50 % 水
1.0 % TFA 溶液
テスト溶質:トルエン

カラム温度 :

90 °C

StableBond SB-C18(Diisobutyl-C18)

pH (0.8) と高温 (90 °C) 下で 3 か月の使用にも耐えます。ZORBAX Rx-C18 は、StableBond SB-18 とは選択性が異なるカラムとして使用できます。

Relative Retention

測定しました。StableBond SB-C18 は、非常に低い

他社 A-C18

0.8

カラムの劣化を調べるため、移動相でカラムをパージした後、トルエンのリテンションタイムをZORBAX Rx-C18(Dimethyl-C18)

1.0

他社 B-C18
0.6

他社 C-C18
0.4

他社 D-C18
他社 E-C18

0.2

0.0
0

5,000

10,00015,00020,00025,00030,000Column Volumes of Mobile Phase Purge
LCSB001

短鎖 ZORBAX SB-CN は低 pH (pH 2.0、50 °C) 下でも安定です

ZORBAX SB-CN
883975-905
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :0.1 % TFA、pH 2 : ACN

流量 :1 mL/min

SB-CN
100

80

グラジエント : 0 ～ 100 % ACN
カラム温度 :

50 °C

サンプル :

1-フェニルヘプタン、50 % AC/50 % 水の
0.1 % TFA 溶液% k Remaining

カラム :

60

40
Si-(Me)2PrCN
20

ZORBAX StableBond SB- CN や他の短鎖結合相の StableBond は低 pH でも非常に安定しています。従来のジメチル CN などの短鎖結合相の常識を覆す安定性です。

0
0

1,000

2,000

3,000

4,000

5,000

6,000

Column Volumes
LCSB002www.agilent.com/chem/lccolumn:jp61低分子化合物の分離用カラム

SB-CN による保持と分離能の最適化
ZORBAX SB-C18
866953-902
4.6 x 75 mm、3.5 µm

カラム A :

カラム B :

移動相 :

A

B
2

ZORBAX SB-CN
866953-905
4.6 x 75 mm、3.5 µm

5

1
4

2

3

30 % ACN
70 % 25mM NaH2PO4、pH 2.5

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

35 °C

4

5

1

0

5

10
15
Time (min)

20

25

0

ベストロール

3

2

1. エストリオール
2. ダイゼイン
3. ケルセチン
4. ゲニステイン
5. ジエチルスチル

4

6
8 10
Time (min)12
LCSB003

この例では SB-CN カラムの使用によって分析時間が 50 % 短縮されました。大部分の疎水性サンプルの保持時間は半分になっています。同時に、より極性の高い、早く溶出するピークの保持時間はやや増加しています。

5 種類の異なる結合相により、選択性の幅が広がります
ZORBAX SB-C18
カラム A :
883975-902
4.6 x 150 mm、5 µm
カラム B :ZORBAX SB-C8883975-906
4.6 x 150 mm、5 µm

カラム C :ZORBAX SB-C3
883975-909
4.6 x 150 mm、5 µm

3

サンプル:

1
5
4
2

3

B
1

5
4

カラム D :ZORBAX SB-Phenyl
883975-912
4.6 x 150 mm、5 µm

カラム E :ZORBAX SB-CN
883975-905
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :

A

2

3

C

1
5
4

18.8 分で 0 ～ 100 % B
A : 50 mM NaH2PO4、pH 2.5、95 % H2O / 5 % ACN
B : 50 mM NaH2PO4、pH 2.5、47 % H2O / 53 % ACN

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

26 °C

検出器 :

254 nm

2

3

D
1

5

SB-C3 は、StableBond が提供する 5 種類の選択性の 1 つです。この例では、SB-C3 を使42E用したときに最適分解能が得られました。すべて同じ高純度 Rx-SIL をベースとしていま

13
5
4

2

す。そのため、異なる結合相を持つことによって大きな選択性の変化が得られ、信頼性の高いメソッド開発が可能になります。
0

5

10

15

Time (min)LCSB00462

1. プロカイン
2. リドカイン
3. d-シンコニン
4. ブタカイン
5. テトラカイン

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 80Å StableBond
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7SB-CN
USP L10

SB-C3
USP L56

SB-Phenyl
USP L11880967-201

880975-205

880975-209

880975-212

SB-Aq

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)
セミ分取

9.4 x 250

5880975-202

セミ分取

9.4 x 150

5883975-202

セミ分取

9.4 x 1005884975-202

セミ分取

9.4 x 505846975-202

アナリティカル

4.6 x 250

5880975-902

880975-906

880975-905

880975-909

880975-912

アナリティカル

4.6 x 150

5883975-902

883975-906

883975-905

883975-909

883975-912

アナリティカル

4.6 x 505846975-902

846975-906

ラピッドレゾリューション

4.6 x 250

3.5884950-567

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5863953-902

863953-906

863953-905

863953-912

863953-914

ラピッドレゾリューション

4.6 x 100

3.5861953-902

861953-906

861953-905

861953-912

861953-914

ラピッドレゾリューション

4.6 x 75

3.5866953-902

866953-906

866953-905

866953-912

866953-914

ラピッドレゾリューション

4.6 x 50

3.5835975-902

835975-906

835975-905

835975-912

835975-914

ラピッドレゾリューション

4.6 x 30

3.5834975-902

834975-906

ラピッドレゾリューション

4.6 x 20

3.5832975-902

832975-906

4.6 x 150

1.8829975-902

829975-906

829975-905

829975-912

829975-914

4.6 x 100

1.8828975-902

828975-906

828975-905

828975-912

828975-914

4.6 x 75

1.8

4.6 x 501.8827975-902

827975-906

827975-905

827975-912

827975-914

4.6 x 30

1.8824975-902

824975-906

824975-905

824975-912

824975-914

4.6 x 201.8826975-902

826975-906

UHPLC ガード、60 MPa、3 個

4.6 x 51.8820750-902

820750-904

ソルベントセーバ

3.0 x 250

5880975-302

880975-306

880975-312

880975-314

ソルベントセーバ

3.0 x 150

5883975-302

ソルベントセーバプラス

3.0 x 150

3.5863954-302

ソルベントセーバプラス

3.0 x 100

3.5861954-302

861954-306

861954-305

ソルベントセーバプラス

3.0 x 75

3.5866953-302

ラピッドレゾリュ―ション HT、

60 MPaラピッドレゾリュ―ション HT、

60 MPaラピッドレゾリュ―ション HT、

60 MPaラピッドレゾリュ―ション HT、

60 MPaラピッドレゾリュ―ション HT、

60 MPaラピッドレゾリュ―ション HT、

60 MPa880975-914
883975-914
846975-914

830975-906

880975-305

880975-309

883975-306

883975-305

883975-309

863954-306

863954-305
861954-309

883975-312

883975-314

863954-312

863954-314

861954-312

861954-314(続く)

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp63低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 80Å StableBond
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7SB-CN
USP L10

SB-C3
USP L56

SB-Phenyl
USP L11

SB-Aq

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)
ソルベントセーバ RRHD、

3.0 x 150

1.8859700-302

859700-306

3.0 x 1001.8858700-302

858700-306

858700-305

858700-312

3.0 x 501.8857700-302

857700-306

857700-305

857700-312

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 150

1.8829975-302

829975-306

829975-305

829975-312

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 100

1.8828975-302

828975-306

828975-305

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 501.8827975-302

827975-306

827975-305

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 30

1.8824975-302

824975-306

824975-305

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 201.8826975-302

826975-306

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

3.0 x 51.8823750-902

823750-904

ナローボア

2.1 x 150

5883700-922

883700-906

883700-905

883700-909

883700-912

860975-905

860975-909

860975-912

120 MPa
ソルベントセーバ RRHD、

120 MPa
ソルベントセーバ RRHD、

120 MPa

828975-309

828975-312

828975-314

827975-312

827975-314

ナローボア

2.1 x 505860975-902

860975-906

ナローボア RR

2.1 x 150

3.5830990-902

830990-906

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5861753-902

861753-906

ナローボア RR

2.1 x 75

3.5866735-902

ナローボア RR

2.1 x 50

3.5871700-902

871700-906

ナローボア RR

2.1 x 30

3.5874700-902

874700-906

ナローボア RR

2.1 x 203.5872700-902

872700-906

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 150

1.8859700-902

859700-906

859700-905

859700-912

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 1001.8858700-902

858700-906

858700-905

858700-912

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 501.8857700-902

857700-906

857700-905

857700-912

860975-914
830990-914

861753-905

861753-912

861753-914

871700-914

(続く)

64

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 80Å StableBond
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7SB-CN
USP L10

SB-C3
USP L56

SB-Phenyl
USP L11

SB-Aq

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)
ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 150

1.8820700-902

820700-906

820700-905

820700-912

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 100

1.8828700-902

828700-906

828700-905

828700-912

828700-914

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 501.8827700-902

827700-906

827700-905

827700-912

827700-914

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 30

1.8824700-902

824700-906

824700-905

824700-912

824700-914

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 201.8826700-902

826700-906

UHPLC ガード、120 MPa、3 個

2.1 x 51.8821725-902

821725-904

マイクロボア RR

1.0 x 150

3.5863600-902

863600-906

マイクロボア RR

1.0 x 503.5865600-902

865600-906

マイクロボア RR

1.0 x 30

3.5861600-902

861600-906

マイクロボアガード、3 個

1.0 x 1755185-5920

5185-5920

ガードカートリッジ、2 個

9.4 x 157820675-115

820675-115

820675-124

820675-124

820675-115

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-920

820950-915

820950-916

820950-922

820950-917

820950-933

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-915

821125-915

821125-924

821125-924

821125-915

821125-933

ガードハードウェアキット

9.4 x 150840140-901

840140-901

840140-901

840140-901

840140-901

820999-901

820999-901

820999-901

820999-901

820999-901

877250-105

ガードハードウェアキット

863600-905

820999-901

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7877250-102

877250-106

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7877150-102

877150-106

877150-114

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5870150-902

870150-906

870150-914

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5870100-902

870100-906

870100-914

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5870050-902

870050-906

870050-914

PrepHT ガードカートリッジ、2個

17.0 x 7.55820212-920

820212-915

820212-915

ガードカートリッジハード
ウェアキット820444-901

820444-901

820444-901

PrepHT エンドフィッティング、2個

820400-901

820400-901

820400-901

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp877250-112

877250-114

820212-915

820212-933

820444-901

820444-901

820444-901

820400-901

820400-901

820400-90165低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 80Å StableBond
ハード
ウェア

品名

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L757995218-585

7995208-585

57995218-595

7995208-595

4.6 x 75

3.57995218-344

7995208-344

4.0 x 457995118-504

7995118-504

5021-1845

5021-1845

822975-902

822975-906

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

アナリティカル

4.6 x 250

アナリティカル

4.6 x 150

ラピッドレゾリューション
ガードカートリッジ、10 個

SB-Phenyl
USP L11

Agilent カートリッジカラム (ハードウェアキット 5021-1845 が必要)

カートリッジホルダー

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)
ラピッドレゾリュ―ション HT (RRHT)

4.6 x 50

1.8

ラピッドレゾリュ―ション HT (RRHT), 3 個

4.6 x 50

1.8822975-932

ナローボア RRHT

2.1 x 50

1.8822700-902

ナローボア RRHT, 3 個

2.1 x 50

1.8822700-932

ラピッドレゾリューションカートリッジ (ハードウェアキット 820555-901 が必要)
ラピッドレゾリューションカートリッジ

4.6 x 30

3.5833975-902

833975-906

ラピッドレゾリューションカートリッジ、3 個

4.6 x 30

3.5833975-932

833975-936

ラピッドレゾリューションカートリッジ

4.6 x 153.5831975-902

831975-906

ラピッドレゾリューションカートリッジ、3 個

4.6 x 153.5831975-932

831975-936

ラピッドレゾリューションカートリッジ

2.1 x 30

3.5873700-902

873700-906

ラピッドレゾリューションカートリッジ、3 個

2.1 x 30

3.5873700-932

873700-936

ラピッドレゾリューションカートリッジ

2.1 x 153.5875700-902

875700-906

ラピッドレゾリューションカートリッジ、3 個

2.1 x 153.5875700-932

875700-936

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ (ハードウェアキット 820555-901 が必要)
ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

4.6 x 50

1.8825975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個

4.6 x 50

1.8825975-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

4.6 x 30

1.8823975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個

4.6 x 30

1.8823975-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

4.6 x 151.8821975-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個

4.6 x 151.8821975-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

2.1 x 501.8825700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個

2.1 x 501.8825700-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

2.1 x 30

1.8823700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個

2.1 x 30

1.8823700-932

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ

2.1 x 151.8821700-902

ラピッドレゾリューション HT カートリッジ、3 個

2.1 x 151.8821700-932

RR および RRHT カートリッジ用ハードウェアキット

66

820555-901

833975-912低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 80Å StableBond
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

SB-C18USP L1

キャピラリー

0.5 x 250

55064-8258

キャピラリー

0.5 x 150

55064-8256

キャピラリー

0.5 x 35

55064-8254

キャピラリー RR

0.5 x 150

3.5

5064-8262

キャピラリー RR

0.5 x 35

3.5

5064-8260

キャピラリー

0.3 x 250

55064-8257

キャピラリー

0.3 x 150

55064-8255

キャピラリー

0.3 x 35

55064-8253

キャピラリー RR

0.3 x 150

3.5

5064-8261

品名

キャピラリーフローカラム (ガラス内面ステンレス)

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp67低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Rx• 低 pH 用カラムとして、Eclipse Plus C18、Eclipse XDB-C18、StableBond SB-C18 と同様にお奨めできるカラムです。高温での分析には StableBond の方が適しています。

• SB-C18 カラムより高いカーボン量を備えています (Rx=12 %、SB=10 %)。
• 低 pH でのアプリケーションで優れた安定性と良好なピーク形状を示します。
• ジメチルオクタデシルシランを使用しており、エンドキャッピングされていません。
• ZORBAX Rx-C8 は SB-C8 と同じ製品です。
カラム仕様
結合相

ZORBAX Rx-C18
ZORBAX Rx-C8

ポアサイズ

表面積

上限温度

pH 範囲*

エンドキャップ

カーボンロード80 Å

180 m2/g

60 °C

2.0-8.0

なし

12 %

80 °C

1.0-8.0

なし

5.5 %

80 Å

2

180 m /g

仕様は代表的な値のみを表しています。

*シリカを基材とするカラムを pH 6 ～9 の範囲で安定に使用するには、40 °C 以下の使用温度、0.01 ～ 0.02 M の範囲の低濃度緩衝液を使用します。

Rx-C18 によるジアゼパムの分離
ZORBAX Rx-C18
カラム :880967-302
3.0 x 250 mm、5 µm
移動相 :35 % H2O : 65 % MeOH

流量 :0.5 mL/min

12

1. エチルパラベン
2. ジアゼパム

Rx-C18 カラムを使用した、ジアゼパムと内部標準エチルパラベンの USP 分析例です。
内径 3.0 mm のソルベントセーバ Rx-C18 カラムを使用すると、4.6 x 250 mm カラムで分析した場合に比べ、溶媒使用量を 60 % 削減できます。
0.0

2.5
Time (min)

5.0

7.5
LCRX00168

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Rx
ハードウェア

Rx-C18USP L1

Rx-C8
USP L7*5880967-202

880967-201

4.6 x 250

5880967-902

880967-901

4.6 x 150

5883967-902

883967-901

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5863967-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 100

3.5861967-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 75

3.5866967-902

ソルベントセーバ

3.0 x 250

5880967-302

ソルベントセーバ

3.0 x 150

5883967-302

ソルベントセーバプラス

3.0 x 150

3.5863967-302

ソルベントセーバプラス

3.0 x 100

3.5861967-302

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

セミ分取

9.4 x 250

アナリティカル
アナリティカル

ナローボア

2.1 x 150

5883700-902

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5861767-902

ガードカートリッジ、2 個

9.4 x 157820675-115

820675-115

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-914

820950-913

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-915

821125-915

ガードハードウェアキット

9.4 x 15

ガードハードウェアキット

840140-901

840140-901

820999-901

820999-901

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7877150-106

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5870150-906

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5870100-906

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5PrepHT ガードカートリッジ、2 個

5877967-102

877250-106

870050-906
820212-914

820212-915

ガードカートリッジハードウェアキット

820444-901

820444-901

PrepHT エンドフィッティング、2 個

820400-901

820400-901*Rx-C8 は SB-C8 と同じ製品です。その他のサイズと構成については、ZORBAX StableBond の項 (60 ページ) をご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp69低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 80Å Extend-C18• pH 11.5 までの高 pH で高効率で長寿命• ユニークな二座型結合相とダブルエンドキャッピングにより高 pH での安定を示す• ポリマーベースのカラムよりカラム効率がよく、ピーク形状も良好• 塩基性化合物の保持・分離能・ピーク形状が向上• ペプチドの高感度 LC/MS 分離に最適

C18

O
Si

O

Si

Agilent ZORBAX Extend-C18 カラムには、最新の二座型結合技術が活用されています。これにより、シリカベースのカラムを用いた高 pH 移動相での高分解能分離が可能になりました。高 pH
では、非電荷塩基性化合物は基材であるシリカと相互作用しません。その結果、高い分離効率と良好なピーク形状が得られるとともに、分離能も向上します。また、高 pH での分離は、高 pH溶液で安定性と溶解性が増す化合物の分析に最適です。高 pH 移動相用の緩衝液としては、トリエチルアミン、ピロリジン、グリシン、ホウ酸塩、水酸化アンモニウムなどが挙げられます。
水酸化アンモニウム系移動相 (pH 10.5) は、ペプチドや低分子化合物の LC/MS 分析に適した移動 相成分で、TFA を使用した低 pH 移動相よりも優れた感度が得られます。Extend-C18 カラム
は pH 2 - 11.5 の範囲で安定性を発揮し、あらゆるタイプの化合物を良好なピーク形状で分離します。また、低 pH 領域でも優れた選択性を発揮します。

C18

Silica Support

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

ZORBAX Extend-C18

80 Å

表面積
2

180 m /g

上限温度*

pH 範囲**

エンドキャップ

カーボンロード

60 °C

2.0-11.5

ダブル

12.5 %

仕様は代表的な値のみを表しています。

*温度上限: pH 8 までは 60 °C、pH 8 ～ 11.5 は 40 °C。
**pH 6 を超える場合は、使用温度を 40 °C 以下に下げ、低い緩衝液濃度 (0.01 ～ 0.02 M) または有機緩衝液を使用することで、シリカ系カラムを、より安定に使用できます。

ヒントとテクニック
最高の LC 性能を実現するためには、アジレント認定ランプをご使用ください。
アジレントの検出器ランプは、非常に厳しい仕様と品質標準を満たすように設計・製造されています。光強度を高く、ノイズが低くなるように設計されているため、分析結果が向上します。アジレントでは、ランプ間の変動を最小限に抑えるようにランプの厳しいテストを実施しています。堅牢性、長寿命、経済性に優れた、アジレントのランプをご使用ください。
詳細については、www.agilent.com/chem/jp をご覧ください。

70

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Extend-C18 による高 pH 移動相での塩基性抗ヒスタミン剤の分析
カラム :

移動相 :

pH 7

ZORBAX Extend-C18
773450-902
4.6 x 150 mm、5 µm

2, 3
1

pH 7:
30 % 20 mM Na2HPO4 70 % MeOH
pH 11:
30 % 20 mM TEA 70 % MeOH

流量 :

1.0 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :254 nmサンプル :

抗ヒスタミン剤

1. マレイン酸エステル
2. スコポラミン
3. プソイドエフェドリン
4. ドキシラミン
5. クロロフェニラミン
6. トリプロリジン
7. ジフェンヒドラミン

7
4

5
6

0

5
Time (min)

pH 11

7
4
3
5
1

プソイドエフェドリンとスコポラミンは、低 pH～中性では保持するのが難しい成分です。

2

プソイドエフェドリンの分析には、イオン交換法がよく用いられます。Extend- C18 カラム

6は、高 pH でこれら化合物を電荷のない状態で保持し、分離能を向上させます。
0

5

10Time (min)LC80001

高 pH でも長寿命の Extend-C18

ZORBAX Extend-C18
773450-902
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :20 % メタノール
80 % 0.1 M 炭酸塩緩衝液、pH 10

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

室温

30

ZORBAX Extend-C18
他社カラム W

高い pH ではシリカの溶解が起こるためにカラムが機能しなくなります。他
社カラム W と比較すると、この例から、高 pH においては ZORBAX ExtendC18 のほうが長寿命であることが分かります。カラム寿命は溶解したシリカ

Amount of Dissolved Silica (mg)

カラム :

20

10

量から測定しています。

0
0

3

5

9

12

15

Volume Eluent (L)LC80002www.agilent.com/chem/lccolumn:jp71低分子化合物の分離用カラム

Extend-C18 は低 pH で優れたピーク形状を提供
ZORBAX Extend-C18
カラム :773450-902
4.6 x 150 mm、5 µm
移動相 :80 % 25 mM NaH2PO4、pH 3.0
20 % メタノール

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

35 °C

検出器 :

UV、254 nm

サンプル :

塩基性化合物1

1. テオブロミン
2. ジメチルキサンチン
3. テオフィリン
4. カフェイン

3

4

2

Extend-C18 を使用すれば、これらの塩基性化合物を低 pH 領域で良好なピーク形状で分離します。Extend-C18 は高 pH、低 pH 領域でも使用できます。
0

1

2

3

4

5

6

Time (min)7
LC80003

ZORBAX 80Å Extend-C18
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Extend-C18
USP L1

アナリティカル

4.6 x 250

5770450-902

アナリティカル

4.6 x 150

5773450-902

アナリティカル

4.6 x 505746450-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5763953-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 100

3.5764953-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 753.5766953-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 50

3.5735953-902

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 100

1.8728975-902

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 501.8727975-902

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 30

1.8724975-902

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 201.8726975-902

ソルベントセーバ

3.0 x 250

5770450-302

ソルベントセーバ

3.0 x 150

5773450-302

ソルベントセーバプラス

3.0 x 150

3.5763954-302

ソルベントセーバプラス

3.0 x 100

3.5764953-302

ソルベントセーバプラス

3.0 x 50

3.5735954-302

品名

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)

(続く)

72

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 80Å Extend-C18
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Extend-C18
USP L1

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 100

1.8758700-302

ソルベントセーバ RRHD、120 MPa

3.0 x 501.8757700-302

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 100

1.8728975-302

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 501.8727975-302

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 30

1.8724975-302

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 201.8726975-302

ナローボア

2.1 x 150

5773700-902

ナローボア

2.1 x 505760450-902

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5761753-902

品名

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)

ナローボア RR

2.1 x 503.5735700-902

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 150

1.8759700-902

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 100

1.8758700-902

ナローボア RRHD、120 MPa

2.1 x 501.8757700-902

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 1001.8728700-902

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 501.8727700-902

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 30

1.8724700-902

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 201.8726700-902

マイクロボア RR

1.0 x 150

3.5763600-902

マイクロボア RR

1.0 x 503.5765600-902

マイクロボア RR

1.0 x 30

3.5761600-902

マイクロボアガード、3 個

1.0 x 1755185-5923

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-930

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-930

ガードハードウェアキット

820999-901

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5770150-902

PrepHT

21.2 x 100

5770100-902

PrepHT

21.2 x 50

5770050-902

17.0 x 7.55820212-930

PrepHT エンドフィッティング、2 個
PrepHT ガードカートリッジ、2 個
ガードカートリッジハードウェアキット

820400-901

820444-901

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp73低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Bonus-RP

R1
O

Si

PG

R

PG

R

PG

R

• 低 pH～中性領域で非常にシャープなピーク形状で塩基性化合物を分離可能• ユニークな選択性• 導入された極性基と立体的保護基のある斬新な技術を使用• 100%水溶液の移動相が使用可能

R1
CH3
Si

CH3

CH3
R1
O

Si

アジレントの ZORBAX Bonus-RP カラムはアルキル鎖中にアミド基(高極性)が導入されています。この斬新な結合相は塩基性化合物とシリカ担体との間の相互作用を減少させ、非常に扱い難い塩基性
化合物のピーク形状を向上させます。ピーク形状とカラム寿命は、三重エンドキャッピングによって一層、改善されています。さらに、ジイソプロピル基を側鎖に導入し、低 pH における酸加水分解
から結合相を保護しています。Bonus-RP カラムは、C18 および C8 アルキル結合相とは異なるユニー
クな選択性を示します。

R1
CH3
Si

CH3

CH3
R1
O

Si
R1

ユニークな極性アルキルグループを持つ

Bonus-RP 結合相

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

上限温度*

pH 範囲

エンドキャップ

カーボンロード80 Å

180 m2/g

60 °C

2.0-9.0

トリプル

9.5 %

ZORBAX Bonus-RP
仕様は代表的な値のみを表しています。

*温度上限: pH 8 までは 60 °C、pH 8 ～ 9 は 40 °C。

ヒントとテクニック
ZORBAX Bonus-RP は Poroshell 120 でも使用できます。
24 ページをご覧ください。

74

低分子化合物の分離用カラム

Bonus-RP の使用により塩基性化合物のピーク形状が向上
Alkyl-C8
カラム :4.6 x 150 mm、5 µm
移動相 :

1

75 % 25 mM NH4OAc、pH 5.5
25 % ACN

流量 :1.5 mL/min

カラム温度 :

40 °C

検出器 :

254 nm2

TF
1. 1.82. 1.73. 2.10

カラム :ZORBAX Bonus-RP
883668-901
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :80 % 25 mM NH4OAc、pH 5.5
20 % ACN

流量 :1.5 mL/min

カラム温度 :

40 °C

検出器 :

254 nm

1. ドキシラミン
2. クロロフェニラミン
3. トリプロリジン

3

1

2

3

4 5 6
Time (min)

7

8

9

10

LCBR001

3

TF
1. 1.1
2. 1.1
3. 1.10

1

1. ドキシラミン
2. クロロフェニラミン
3. トリプロリジン

2

1

2

3
4
Time (min)5

6
LCBR002

Bonus-RP は代表的な C8 結合相と比較して塩基性化合物のテーリングが小さくなっています。中性領域では解離したシラノール基と塩基性化合物との相互作用が大きくなるので、テーリングが起こりやすくなります。Bonus-RP 結合相の極性基はシラノール基と塩基性化合物との相互作用を減少させることで、ピーク形状を改善します。

移動相 :60 % 25 mM

リン酸緩衝液、pH 7.0 : 40 % ACN
流量 :1.5 mL/min

カラム温度 :

23 °C

他社アルキル/アミドカラム

Bonus-RP

0.00160.00140.0012

Bonus-RP は 3 重エンドキャッピングを採用しているため、pH 7 での安定性が向上しています。カラムボリュームは 10,000 で、ほぼ 1 ヶ月分の稼働に相当します。

0.0018
Toluene Plate Height, cm

ZORBAX Bonus-RP は低 pH から中性領域で安定
ZORBAX Bonus-RP
カラム :883668-901
4.6 x 150 mm、5 µm

0.00100

5,000

10,00015,00020,00025,00030,00035,000Column Volume of Purge
LCBR003

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp75低分子化合物の分離用カラム

Dimethyl-C18/amide、Bonus-RP
ZORBAX Bonus-RP
カラム :883668-901
4.6 x 150 mm、5 µm

0.0055

エージング:

50 % MeOH
50 % 0.1 % TFA
試験:
80 % MeOH
20 % H2O

Bonus-RP

0.00450.00400.0035流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

エージング :

0.002560 °C

0.0020テスト :Dimethyl-C18/amide

0.0050Toluene Plate Height, cm

移動相 :0.00300

20,00010,00023 °C

30,00040,000Column Volume of Purge
LCBR004側鎖による立体的保護により、類似の極性アルキル結合相よりも低 pH 領域での安定性が向上し、カラム寿命が長くなっています。

ZORBAX Bonus-RP は独自の選択性を示す
ZORBAX Bonus-RP
カラム A :
883668-901
4.6 x 150 mm、5 µm
カラム B :

移動相 :Eclipse XDB-C8
993967-906
4.6 x 150 mm、5m

1

mAu
15
10

3

75 % 25 mM クエン酸ナトリウム、pH 6
25 % MeOH

5

2

4

0

流量 :

1.0 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :254 nm

B

3 µL

mAu

サンプル :

1. セファレキシン
2. セファクロール
3. セフロキシム
4. セフォキシチン

A

0

2

4

6

8

10

Time (min)1

セファロスポリン

15

3

10
4

Bonus-RP を使用するとピーク溶出順序は大きく変わります。この例では、最初の 3 ピークの溶出順序が変化します。

5

2

0
0

2

4

6
Time (min)

76

8

10
LCBR005低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Bonus-RP
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Bonus-RP
USP L60

アナリティカル

4.6 x 250

5880668-901

アナリティカル

4.6 x 150

5883668-901

ラピッドレゾリューション

4.6 x 250

3.5884950-577

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5

863668-901

ラピッドレゾリューション

4.6 x 1003.5

864668-901

ラピッドレゾリューション

4.6 x 75

3.5

866668-901

ラピッドレゾリューション

4.6 x 50

3.5

835668-901

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 100

1.8828668-901

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 75

1.8

830668-901

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 50

1.8

827668-901

ソルベントセーバ

3.0 x 250

5880668-301

ソルベントセーバ

3.0 x 150

5883668-301

ソルベントセーバプラス

3.0 x 150

3.5

863668-301

ソルベントセーバプラス

3.0 x 1003.5

864668-301

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 100

1.8828668-301

ソルベントセーバ HT、60 MPa

3.0 x 50

1.8

827668-301

ラピッドレゾリュ―ション HD、120 MPa

2.1 x 150

1.8859768-901

ラピッドレゾリュ―ション HD、120 MPa

2.1 x 1001.8858768-901

ラピッドレゾリュ―ション HD、120 MPa

2.1 x 501.8857768-901

ナローボア

2.1 x 150

5883725-901

ナローボア

2.1 x 505861971-901

品名

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)(続く)ZORBAX Bonus-RP 結合相は Poroshell 120 でも使用可能です。
24 ページをご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp77低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Bonus-RP
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Bonus-RP
USP L60

ナローボア RR

2.1 x 150

3.5863700-901

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5861768-901

ナローボア RR

2.1 x 503.5861700-901

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 100

1.8828768-901

ナローボア RRHT、60 MPa

2.1 x 501.8827768-901

マイクロボア RR

1.0 x 150

3.5863608-901

マイクロボア RR

1.0 x 503.5865608-901

マイクロボア RR

1.0 x 30

3.5861608-901

マイクロボアガード、3 個

1.0 x 1755185-5922

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-928

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-928

品名

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)

ガードハードウェアキット

820999-901

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7878250-101

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7878150-101

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5868150-901

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5868100-901

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5PrepHT エンドフィッティング、2 個
PrepHT ガードカートリッジ、2 個
ガードカートリッジハードウェアキット

ヒントとテクニック
アジレントの技術者が紹介する LC のトラブルシューティングに関するビデオを
www.agilent.com/chem/lctroubleshooting でご覧いただけます。

78868050-901
820400-901

17.0 x 7.55820212-928
820444-901

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX オリジナルの逆相カラム
アジレントオリジナルの ZORBAX カラムはタイプ A シリカで作られており、多くの酸性や中性化合物の分析に使用することができます。このカラムは高い活性レベルを持ち、そのため異性体(シス-トランス異性体、幾何異性体)や、その他シラノール活性が選択性を高める化合物の分離に有効 です。オリジナル ZORBAX カラムは多くの確立されたメソッドで使用することができます。

カラム仕様
ポアサイズ

表面積

上限温度

pH 範囲

エンドキャップ

カーボン量

70 Å

300 m2/g

60 °C

2.0 - 8.0

あり/なし

20 %

ZORBAX C870 Å

300 m2/g

60 °C

2.0 - 8.0

あり

12 %

ZORBAX-Phenyl

70 Å

300 m2/g

60 °C

2.0 - 8.0

あり

12 %

ZORBAX CN

70 Å

300 m2/g

60 °C

2.0 - 8.0

N/A

7%

ZORBAX-TMS

70 Å

300 m2/g

60 °C

2.0 - 7.0

N/A

4%

結合相

ZORBAX C18ZORBAX オリジナルの逆相カラム
ハード
ウェア

ODS (C18)
品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm) USP L1

C8USP L7

フェニル

USP L11CN
USP L10TMS
USP L13

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)
セミ分取

9.4 x 250

5880952-202

880952-206

アナリティカル (エンドキャップあり)

4.6 x 250

5880952-702

880952-706

880952-712

884950-507

880952-710

883952-706

883952-712

884950-526

883952-710

アナリティカル (エンドキャップなし)

4.6 x 250

5884950-543

アナリティカル

4.6 x 150

5883952-702

ソルベントセーバ

3.0 x 250

5880952-302

ソルベントセーバ

3.0 x 150

5883952-302

ガードカートリッジ、2 個

9.4 x 157820675-115

820675-115

820675-115

820675-124

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-902

820950-906

820950-912

820950-905

820950-924

ガードハードウェアキット

840140-901

840140-901

840140-901

840140-901

840140-901

ガードハードウェアキット

820999-901

820999-901

820999-901

820999-901

820999-901

877952-102

877952-106

877952-105

820400-901

820400-901

820400-901

ガードカラム (ハードウェアが必要)

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ
PrepHT エンドフィッティング、2 個

21.2 x 250

7

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp79低分子化合物の分離用カラム

分析 HPLC 用キット

ZORBAX メソッド開発キット

ZORBAX メソッド開発キット

アジレントは、迅速なメソッド開発を可能にするキットをお求めやすい価格で提供しています。各
キットには 3 本のカラムが含まれています。6 つの新しいキットが追加されました。Agilent 自動メ
ソッド開発 LC 用に推奨します。キットには、さまざまな結合相のラピッドレゾリューション HT (1.8µm) カラムを含むものと、さまざまな結合相のラピッドレゾリューション (3.5 µm) カラムを含むものがあり、いずれもメソッド最適化を簡単に行うことができます。これらのキットには、広範囲の化合物に対して優れたピーク形状と最適な性能が得られる Eclipse Plus ファミリカラムが含まれています。

ZORBAX メソッド開発キット
3 本のカラムをキット化
品名

部品番号

ラピッドレゾリューション HT (RRHT) 選択性メソッド開発キット、内径 2.1 mm

5190-1431

2.1 x 50 mm、1.8 µm、60 MPa カラム:Eclipse Plus C18、Eclipse Plus Phenyl-Hexyl、Bonus-RP 各 1 本を含む
ラピッドレゾリューション HT (RRHT) pH メソッド開発キット、内径 2.1 mm

5190-1432

2.1 x 50 mm、1.8 µm、60 MPa カラムを含む:Eclipse Plus C18、SB-C18、Extend-C18 各 1 本を含む
ラピッドレゾリューション HT (RRHT) 選択性メソッド開発キット、内径 4.6 mm

5190-1433

4.6 x 50 mm、1.8 µm、60 MPa カラム:Eclipse Plus C18、Eclipse Plus Phenyl-Hexyl、Bonus-RP 各 1 本を含む
ラピッドレゾリューション HT (RRHT) pH メソッド開発キット、内径 4.6 mm

5190-1434

4.6 x 50 mm、1.8 µm、60 MPa カラム:Eclipse Plus C18、SB-C18、Extend-C18 各 1 本を含む
ラピッドレゾリューション選択性メソッド開発キット、内径 4.6 mm
4.6 x 100 mm、3.5 µm カラム:Eclipse Plus C18、Eclipse Plus Phenyl-Hexyl、Bonus-RP 各 1 本を含む

5190-1435

ラピッドレゾリューション pH メソッド開発キット、内径 4.6 mm

5190-1436

4.6 x 100 mm、3.5 µm カラム:Eclipse Plus C18、SB-C18、Extend-C18 各 1 本を含む

80

低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX メソッド開発キット
品名

部品番号

StableBond メソッド開発キット
4.6 x 150 mm、5 µm カラム、SB-C18、SB-CN、SB-Phenyl の各相

5183-4624

高速 StableBond メソッド開発キット

5183-4625

4.6 x 75 mm、3.5 µm カラム、SB-C18、SB-CN、SB-Phenyl の各相
Eclipse XDB メソッド開発キット
4.6 x 150 mm、5 µm カラム、XDB-C18、XDB-C8、XDB-Phenyl の各相

5183-4626

高速 Eclipse XDB メソッド開発キット

5183-4627

4.6 x 75 mm、3.5 µm カラム、XDB-C18、XDB-C8、XDB-Phenyl の各相
pH メソッド開発キット
4.6 x 150 mm、5µm カラム、SB-C18、XDB-C18、Extend-C18

5185-5807

高速 pH メソッド開発キット

5185-5808

4.6 x 75mm、3.5µm カラム、SB-C18、XDB-C18、Extend-C18
Aqueous メソッド開発キット
4.6 x 150mm、5µm カラム、SB-Aq、Bonus RP、SB-C18

5185-5809

高速 Aqueous メソッド開発キット

5185-5810

4.6 x 75 mm、3.5 µm カラム、SB-Aq、Bonus RP、SB-C18

ZORBAX カートリッジカラムスタータキット
品名

部品番号

ZORBAX C18 キット
Eclipse XDB-C18 カラム (4.6 x 150 mm、5 µm) x 1、 StableBond C18 カラム (4.6 x 150 mm、5 µm) x 1、カートリッジホルダ、
取付けツール、交換フィルタ (2 個)、オープンエンドレンチ

5183-2021

ZORBAX C8 キット
Eclipse XDB-C8 カラム (4.6 x 150 mm、5 µm) x 1、 StableBond C8 カラム (4.6 x 150 mm、5 µm) x 1、カートリッジホルダ、
取付けツール、交換フィルタ (2 個)、オープンエンドレンチ

5183-2022

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp81低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX メソッドバリデーションキットZORBAX メソッドバリデーションキットは、同じ種類 HPLC カラム (結合相、粒径、コンフィグレーション) を別製造ロットから入手する必要があるお客様に提供されています。別のロットのカラムを依頼するには、以下の手順でアジレントまたは担当販売店にお問い合わせください。

• バリデーションキット (別ロットのカラム) をご請求ください (部品番号 899999-888 をお使いください)。

• 使用中のカラムの部品番号をご指定ください。
• 使用中のカラムのロット番号をご指定ください。
• 別ロットから入手したいカラムの本数をご指定ください (例: 現在、1 本のカラムを所有し、別ロットから 2 本追加したい)• 納期については担当営業にお問い合わせください。担当者から回答させていただきます。
メソッドバリデーションキットの納期は、ロットの状況によって変わります。

HPLC カスタムカラムの発注方法
カタログに載っていないカスタムカラムも次の手順で簡単に発注いただけます。

• カスタムカラム見積書 (SPQ) を請求してください (部品番号 899999-999 をお使いください)。
• カラム径 (例: 4.6 x 50 mm)、結合相の種類 (例: StableBond C3)、粒子径 (例: 5 µm)、ポアサイズ(例: 80Å) をご指定ください。

• 納期については担当営業にお問い合わせください。担当者から回答させていただきます。
カスタムカラムの納期は、ロットの状況によって変わります。

カスタムカラムは標準のカラムに対して、最小限の追加料金で価格設定されています。

82

低分子化合物の分離用カラム

Pursuit HPLC カラム
薬物探索や薬物代謝研究を始める際、目的の化合物や生体試料を分析するには、
Pursuit カラムは理想的な製品です。
最新の化学結合技術と純度の高いシリカゲルを組み合わせることで、
Pursuit シリーズのカラムは高い性能を誇ります。また、高速分析においても分離能は高く、高極性化合物においても対称性の良いピーク形状を示します。さらに、TFA などのイオンペア剤の使用も軽減され、LC/MSの性能を最大限に発揮します。
品質管理における分析に対しても、
Pursuit シリーズのカラムはトラブルフリーの分析を行います。カ
ラムの製造工程において常に厳格な品質検査を行うことで、カラム間の再現性を高く保っています。Pursuit は優れた分析を実現します。

Pursuit PFP (高極性化合物用) や Pursuit PAH (PAH 分析用) などの特殊カラムは独自の選択性を持ち、さらに高いレベルの LC 分析に挑戦できるカラムです。

Pursuit HPLC カラム

Pursuit
LC/MS および高スループットアプリケーション向けの Pursuit カラムには、ポアサイズの大きい200 Å のシリカを使用しています。高いリガンド密度により、分離能を低下させることなく分析時間を最大で 40 % 短縮します。これは、ポアサイズを大きくして質量移動を促進することで実現しています。

Pursuit XRs
Pursuit XRs カラムは、開発や品質管理、分取用に適したカラムです。100 Å のポアサイズと高い官能基密度で分離能を高めています。

Pursuit XRs Ultra
すべての機器で最高の速度と優れた分離能を提供するように設計された Pursuit XRs Ultra は、最適化された粒子径 2.8 µm と高度な充填手順を使用しています。分析時間を 10 ～ 15 % 短縮します。高流
速においても背圧は低いままです。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp83低分子化合物の分離用カラム

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

pH 範囲

ポア体積

官能基密度

Pursuit C18

200 Å

200 m2/g

1.5-10あり

12.9 %

11 mL/g

3.5 µmol/m2

Pursuit C8

200 Å

200 m2/g

1.5-10あり

7.4 %11 mL/g

3.8 µmol/m2

Pursuit Diphenyl

200 Å

200 m2/g

1.5-8.0あり

7.3 %11 mL/g

2.8 µmol/m2

Pursuit PFP

200 Å

200 m2/g

1.5-10あり

6.3 %11 mL/g

3.4 µmol/m2

Pursuit PAH

200 Å

200 m2/g

1.5-10あり

非公開

11 mL/g

非公開

Pursuit XRs C18

100 Å

440 m2/g

1.5-10あり

22 %11 mL/g

2.9 µmol/m2

Pursuit XRs C8

100 Å

440 m2/g

1.5-10あり

15 %11 mL/g

3.7 µmol/m2

Pursuit XRs Diphenyl

100 Å

440 m2/g

1.5-8.0

あり

14.6 %

11 mL/g

2.6 µmol/m2

Pursuit XRs Si

100 Å

440 m2/g

1.5-10あり

0%11 mL/g－

Pursuit XRs Ultra C18

100 Å

440 m2/g

1.5-10あり

23.2 %

11 mL/g

3.2 µmol/m2

Pursuit XRs Ultra C8

100 Å

440 m2/g

1.5-10あり

15 %11 mL/g

3.7 µmol/m2

100 Å

440 m2/g

1.5-8.0

あり

14.6 %

11 mL/g

2.6 µmol/m2

Pursuit XRs Ultra Diphenyl

仕様は代表的な値のみを表しています。

ヒントとテクニックカスタム LC カラムのご注文は、担当営業/販売店までご連絡ください。

84

エンドキャップ カーボンロード

低分子化合物の分離用カラム

三環系抗うつ剤およびベンゾジアゼピン
Pursuit XRs C18
カラム :1. 7-アミノクロナゼパム
2. 7-アミノフルニトラゼパム
3. ノルドキセピン
4. ドキセピン
5. デシプラミン
6. イミプラミン
7. ノルトリプチリン
8. アミトリプチリン
9. トリミプラミン
10. クロミプラミン
11. ノルジアゼパム
12. クロナゼパム
13. フルニトラゼパム
14. ジアゼパム

A6000150X046
4.6 x 150 mm、5 µm
移動相 :A : 水 + 0.1% ギ酸
B : MeCN + 0.1% ギ酸

グラジエント : 15 分で 30 ～ 40 % B、40 % B で 15 分間保持

1.0 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、254 nm

24
2
1
3
mAU

流量 :

5
4

67

8
9

10
11

13

12

14

0

0

24

min

VLC0001

Pursuit XR の長期安定性
Pursuit XRs C18
A6000050X020
2.0 x 50 mm、5 µm

カラム :1. 4-メトキシベンゼンスルホンアミド
2. メチル 3-アミノチオフェン-2-カルボン酸
3. トリミプラミン

DMSO に溶解

移動相 :A : メタノール : 水、10 : 90 + 0.1 % ギ酸
B : MeOH : 水、90 : 10 + 0.1 % ギ酸

注入 1 回目

1

2

3

400

グラジエント : 3 分で 0 ～ 100 % B、0.5 分で 0 % B に戻し 、
0 % B で 3.5 分間保持mAU

サンプル :

流量 :0.4 mL/min

0

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、254 nm

0

6

min

注入 5000 回目

1

2
3

mAU

400

0

0

min

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

6VLC000285低分子化合物の分離用カラム

移動相 :Pursuit XRs Ultra Diphenyl
A7521050X020
2.0 x 50 mm、2.8 µm
2

水 + 0.1 % ギ酸 : アセトニトリル + 0.1 % ギ酸、80 : 20 240,000

流量 :0.4 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、254 nm

1

1. 4-アミノ安息香酸
2. ソルビン酸
3. 安息香酸
4. サリチル酸

4

µV

抗真菌剤
カラム :

3

0

0

6

min

VLC0003

Pursuit C8 の品質試験用混合物 (LPTM)
Pursuit C8
カラム :A3031050X020
2.0 x 50 mm、3 µm
移動相 :A : 0.05 % ギ酸水溶液
B : 0.05 % ギ酸 アセトニトリル 溶液

流量 :0.6 mL/min

検出器 :UV、220 nm

42

1. アスパルテーム
2. コルチゾン
3. レセルピン
4. フタル酸ジオクチル

3

1

2

5

min

VLC0004

Pursuit PFP および C18 による副腎皮質ステロイド
アセトニトリル : 水、22.5 : 77.5流量 :1.5 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、240 nm

Pursuit PFP
300

1 2

3
4

mAU

移動相 :

5

7

6

9

8

10

0

0

min

Pursuit C18
300
mAU

1

3
2
4

10
5

6 7

0

0

min

8

9

1. トリアムシノロン
2. プレドニゾロン
3. コルチゾン
25 4. メチルプレドニゾロン
5. コルチコステロン
6. ベクロメタゾン
7. 酢酸プレドニゾロン
8. トリアムシノロンアセトニド
9. 酢酸コルチゾン
10. フルオシノロンアセトニド

25
VLC000586低分子化合物の分離用カラム

Pursuit HPLC カラム
セミ分取スケール

Pursuit C18
USP L1

Pursuit C8
USP L7

10

A3002250X100

A3032250X100

5A3000150X100

5A3000250X100

A3030250X100

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

10.0 x 250
10.0 x 150
10.0 x 250

Pursuit Diphenyl
USP L11

Pursuit PFP
USP L43

Pursuit PAH
USP L1

A3050150X100
A3050250X100

Pursuit HPLC カラム
分析スケール
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Pursuit C18
USP L1

Pursuit C8
USP L7

Pursuit Diphenyl
USP L11

Pursuit PFP
USP L43

Pursuit PAH
USP L1

4.6 x 250

10

A3002250X046

A3032250X046

4.6 x 150

10

A3002150X046

A3032150X046

4.6 x 100

10

A3002100X046

A3032100X046

4.6 x 250

5A3000250X046

A3030250X046

4.6 x 150

5

A3040250X046

A3050250X046

A7000250X046

A3000150X046

A3030150X046

A3040150X046

A3050150X046

A7000150X046

4.6 x 100
4.6 x 50

5

A3000100X046

A3030100X046

A3040100X046

A3050100X046

5A3000050X046

A3030150X046

A3040050X046

A3050050X046

4.6 x 250

3

A3001250X046

A3031250X046

A3041250X046

A3051250X046

4.6 x 150

3

A3001150X046

A3031150X046

A3041150X046

A3051150X046

4.6 x 100

3

A3001100X046

A3031100X046

A3041100X046

A3051100X046

4.6 x 50

3

A3001050X046

A3041050X046

A3051050X046

4.6 x 30

3

A3001030X046

4.0 x 250

5A3000250X040

4.0 x 125

5

A3000125X040

3.9 x 300

10A3002300X039

3.9 x 300

5A3000300X039

3.9 x 150

5A3000150X039

3.0 x 250

5A3000250X030

A3040250X030
A3040150X030

3.0 x 150

5A3000150X030

3.0 x 100

5

A3000100X030

3.0 x 250

3

A3001250X030

A7001100X046

A3050150X030
A3050100X030

3.0 x 150

3

A3001150X030

A3041150X030

A3051150X030

3.0 x 100

3

A3001100X030

A3041100X030

A3051100X030

A7001100X030(続く)

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp87低分子化合物の分離用カラム

Pursuit HPLC カラム
分析スケール
粒子径 (µm)

Pursuit C18
USP L1

3.0 x 50

3

A3001050X030

2.0 x 250

5A3000250X020

2.0 x 150

5A3000150X020

A3030150X020

A3040150X020

2.0 x 100

5

A3000100X020

A3030100X020

A3040100X020

A3050100X020

2.0 x 50

5

A3000050X020

A3030050X020

A3040050X020

A3050050X020

2.0 x 30

5

A3000030X020

A3040030X020

A3050030X020

2.0 x 20

5

A3000020X020

2.0 x 250

3

A3001250X020

2.0 x 2003

2.0 x 150

3

A3001150X020

A3031150X020

A3041150X020

A3051150X020

2.0 x 100

3

A3001100X020

A3031100X020

A3041100X020

A3051100X020

2.0 x 50

3

A3001050X020

A3031050X020

A3041050X020

A3051050X020

2.0 x 30

3

A3001030X020

A3031030X020

A3041030X020

A3051030X020

2.0 x 20

3

A3001020X020

A3041020X020

A3051020X020

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Pursuit C18
USP L1

Pursuit C8
USP L7

Pursuit Diphenyl
USP L11

Pursuit PFP
USP L43

50.0 x 250

10A3002250X500

A3032250X500

21.2 x 250

10A3002250X212

A3032250X212

21.2 x 150

10A3002150X212

21.2 x 250

5A3000250X212

A3050250X212

21.2 x 150

5A3000150X212

A3050150X212

21.2 x 100

5

寸法 (mm)Pursuit C8
USP L7

Pursuit Diphenyl
USP L11

Pursuit PFP
USP L43

A3041050X030

A3051050X030

Pursuit PAH
USP L1

A3050020X020
A3041250X020
A3041200X020

A7001100X020

Pursuit HPLC カラム
分取スケール

88

A3040100X212

Pursuit PAH
USP L1低分子化合物の分離用カラム

Pursuit ChromSep カートリッジカラム、コンプリートシステム
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Pursuit C18
USP L1

Pursuit C8
USP L7

Pursuit PAH
USP L1

4.6 x 250

5A3000250C046

A3030250C046

A7000250C046

4.6 x 2503

4.6 x 150

5A3000150C046

A3030150C046

4.6 x 100

5

A3000100C046

A3030100C046

4.6 x 150

3

A3001150C046

A3031150C046

A7001150C046

A3031100C046

A7001100C046

A3031250C046

4.6 x 100

3

A3001100C046

4.6 x 50

3

A3001050C046

3.0 x 250

5A3000250C030

3.0 x 150

5A3000150C030

3.0 x 100

5

A3000100C030

3.0 x 150

3

A3001150C030

3.0 x 100

3

A3001100C030

2.0 x 250

5A3000250C020

2.0 x 150

5A3000150C020

2.0 x 100

5

A3000100C020

2.0 x 150

3

A3001150C020

2.0 x 100

3

A3001100C020

2.0 x 50

3

A3001050C020

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

A7000150C046

A7000100C030

A3030150C020

89低分子化合物の分離用カラム

Pursuit ChromSep 交換用カートリッジ
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

4.6 x 250

54.6 x 150

5

入数

Pursuit C18
USP L1

Pursuit C8
USP L7

A7000250R046
3個
3個

4.6 x 150

A7000250T046
A3000150R046

A3030150R046

A7000150R046

A3000150T046

A3030150T046

A7000150T046

A3031150R046

A7001150R046

A3031150T046

A7001150T046

3
3個

4.6 x 100

3

A7001100R046
3個

4.6 x 5035

3.0 x 10053.0 x 150

3

3.0 x 1003

2.0 x 503A7001100T046
A3001050R046

3個
3.0 x 150

Pursuit PAH
USP L1

A3001050T046
A3000150R030

3個
3個

A3000150T030
A3000100R030

A7000100R030

A3000100T030

A7000100T030

A3001150R030
3個

A3001150T030
A3001100R030

3個

A7001100R030

A3001100T030

A7001100T030
A3031050R020

3個

A3031050T020

MetaGuard カラム、3 個
ハードウェア90

内径 (mm)

粒子径 (µm)

Pursuit C18

4.6

10

A3002MG

2.0

10

A3002MG2

4.6

5

2.0

Pursuit C8

Pursuit DP

Pursuit PFP

A3000MG

A3030MG

A3040MG

A3050MG

5

A3000MG2

A3030MG2

A3040MG2

A3050MG2

1.0

5

A3000MG1

4.6

3

A3001MG

A3031MG

2.0

3

A3001MG2

A3031MG2

1.0

3

A3040MG1
A3041MG

A3051MG

A3041MG2

A3051MG2

A3041MG1低分子化合物の分離用カラム

Pursuit XRs HPLC カラム
セミ分取スケール

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Pursuit
XRs C8USP L7

Pursuit
XRs C18
USP L110.0 x 250

10A6002250X100

10.0 x 250

5A6000250X100

10.0 x 150

5A6000150X100

10.0 x 50

5A6000050X100

10.0 x 150

3

PursuitXRs Diphenyl
USP L11

PursuitXRs Si*
USP L3A6004250X100
A6020250X100

A6021150X100*Pursuit XRs Si は順相カラムです。

Pursuit XRs HPLC カラム
分析スケールPursuit
XRs C18
USP L1

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

4.6 x 25010

4.6 x 5010A6002050X046S

4.6 x 250

5A6000250X046

Pursuit
XRs C8USP L7

PursuitXRs Diphenyl
USP L11

A6002250X046

PursuitXRs Si*
USP L3A6004250X046

A6010250X046

A6020250X046

4.6 x 150

5

A6000150X046

A6010150X046

A6020150X046

4.6 x 100

5

A6000100X046

A6010100X046

A6020100X046

A6006100X046

4.6 x 50

5

A6000050X046

A6020050X046

A6006050X046

4.6 x 250

3

A6001250X046

4.6 x 150

3

A6001150X046

A6021250X046
A6010150X046

A6021150X046

4.6 x 100

3

A6001100X046

A6011100X046

A6021100X046

A6005100X046

4.6 x 503

A6001050X046

A6011050X046

A6021050X046

A6005050X046

4.6 x 30

3

A6001030X046

4.0 x 250

5A6000250X040

A6021030X046
A6010250X040

4.0 x 150

5

A6000150X040

A6010150X040

3.0 x 250

5A6000250X030

A6010250X030

A6020250X030

3.0 x 150

5

A6000150X030

A6010150X030

A6020150X030

3.0 x 100

5

A6000100X030

A6010100X030

A6020100X030

3.0 x 150

3

A6001150X030

A6011150X030

A6021150X030

3.0 x 100

3

A6001100X030

A6011100X030

A6021100X030

3.0 x 503

A6001050X030

A6011050X030

A6021050X030

3.0 x 30

3

A6001030X030*Pursuit XRs Si は順相カラムです。
(続く)

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp91低分子化合物の分離用カラム

Pursuit XRs HPLC カラム
分析スケールPursuit
XRs C18
USP L1

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

2.1 x 10052.0 x 250

5A6000250X020

2.0 x 150

5

A6000150X020

Pursuit
XRs C8USP L7

PursuitXRs Diphenyl
USP L11

PursuitXRs Si*
USP L3A6006100X021
A6020250X020
A6010150X020

2.0 x 100

5

A6000100X020

A6010100X020

2.0 x 50

5

A6000050X020

A6010050X020

2.0 x 30

5

A6000030X020

2.0 x 250

3

A6001250X020

A6020150X020

A6020050X020

A6021250X020

2.0 x 150

3

A6001150X020

A6011150X020

A6021150X020

2.0 x 100

3

A6001100X020

A6011100X020

A6021100X020

2.0 x 503

A6001050X020

A6011050X020

A6021050X020

2.0 x 303

2.0 x 20

3A6001020X020

1.0 x 150

3

A6001150X010

1.0 x 100

3

A6001100X010

A6005050X020

A6021030X020

A6021100X010*Pursuit XRs Si は順相カラムです。

Pursuit XRs HPLC カラム
分取スケール

寸法 (mm)

粒子径 (µm)50.0 x 250

10A6002250X500

30.0 x 250

5A6000250X300

30.0 x 150

5A6000150X300

30.0 x 100

5A6000100X300

30.0 x 50

5A6000050X300

21.2 x 250

10A6002250X212

21.2 x 250

5A6000250X212

21.2 x 150

5A6000150X212

21.2 x 100

5A6000100X212

21.2 x 50

5A6000050X212

21.2 x 30

5A6000030X212*Pursuit XRs Si は順相カラムです。

92

Pursuit
XRs C18
USP L1

Pursuit
XRs C8USP L7

PursuitXRs Diphenyl
USP L11

PursuitXRs Si*
USP L3A6002250X500

A6004250X500
A6004250X300

A6020150X300

A6012250X212

A6004250X212
A6020250X212

A6020100X212

低分子化合物の分離用カラム

MetaGuard カラム、3 個
ハードウェア

内径 (mm)

粒子径 (µm)

4.6

Pursuit XRs C8

Pursuit XRs
Diphenyl

A6010MG

A6020MG

Pursuit XRs C18

Pursuit XRs Si

10

A6002MG

A6004MG

4.6

5

A6000MG

3.0

5

2.0

5

A6000MG2

A6010MG2

A6020MG2

4.6

3

A6001MG

A6011MG

A6021MG

3.0

3

2.0

3

A6001MG2

A6011MG2

A6021MG2

Pursuit PAH

A7000MG3

A7001MG3
A6001MG2

Pursuit XRs Ultra HPLC カラム
Pursuit XRs
Ultra Diphenyl

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Pursuit XRs
Ultra C18

Pursuit XRs
Ultra C8

3.0 x 150

2.8

A7501150X030

A7511150X030

3.0 x 100

2.8

A7501100X030

2.0 x 150

2.8

A7501150X020

2.0 x 100

2.8

A7501100X020

A7511100X020

A7521100X020

2.0 x 50

2.8

A7501050X020

A7511050X020

A7521050X020

2.0 x 30

2.8

A7501030X020

A7511030X020

A7521030X020

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp93低分子化合物の分離用カラム

Polaris HPLC カラム
Polaris シリーズは、独特な選択性を持った HPLC カラムです。高極性化合物を分析する際、通常の逆相系 HPLC カラムでは保持が難しい場合があります。また、有機溶媒を使用しない移動相が必要となったとしても、それが適用できない場合があります。

Polaris は、高極性化合物の分析を目的として開発された HPLC カラムであり、濡れ特性が高く、水100 % の移動相も適用できます。また、純度の高いシリカと最新の化学結合技術を用いて製造しているため、ピークの対称性も良好です。

Polaris シリーズは、さまざまな極性修飾を行ったカラムです。

Polaris C18-A
極性基で修飾されたカラムをお望みであれば、Polaris C18-A は有効な選択肢です。Polaris C18-A カラ
ムは、低有機溶媒移動相条件でのピーク形状の改善、保持時間の増大に寄与します。
Polaris HPLC カラム

Polaris C8-A
Polaris C8-A は通常の C8 カラムとは異なる選択性を持ち、疎水性が Polaris C18-A よりも低いことから、高極性化合物の分離に最適であるとともに、全体の分析時間を短くすることができます。

Polaris C18-Ether
Polaris C18-Ether は、エーテル基をアルキル鎖に埋め込んだカラムです。主要な保持機構は一般的な逆相系で使用される C18 カラムと同じですが、埋め込まれたエーテル基も二次的な相互作用として働きます。

Polaris C8-Ether
Polaris C8-Ether は、Polaris C8-A とは異なる選択性を持ち、水素結合化合物に特に有効です。

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

カーボンロード

エンドキャップ

ポア体積

官能基密度

Polaris C18-A

180 Å

200 m2/g

13.8 %

あり

1.1 cm3/g

3.9 µmol/m2

Polaris C8-A

180 Å

200 m2/g

7.4 %

あり

1.1 cm3/g

4.8 µmol/m2

Polaris C18-Ether180 Å

200 m2/g

12.1 %

あり

1.1 cm3/g

3.3 µmol/m2

Polaris C8-Ether180 Å

200 m2/g

7.1 %

あり

1.1 cm3/g

4.5 µmol/m2

180 Å

200 m2/g

15 %あり

1.1 cm3/g

4.4 µmol/m2

Polaris NH2

180 Å

200 m2/g

5.5 %

アミド

1.1 cm3/g

3.8 µmol/m2

Polaris Si-A

180 Å

200 m2/g

N/A

N/A

1.1 cm3/g

N/A

Polaris Amide C18

仕様は代表的な値のみを表しています。

94

低分子化合物の分離用カラム

Polaris カラムの選択性テストミックス
アセトニトリル : 水、70:30

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、254 nm

Polaris C8-A
5+8
6

400
mAU

移動相 :

12 3

4

1. ウラシル
2. カフェイン
3. フェノール
4. トルエン
5. ブチルベンゼン
6. o-テルフェニル
7. アミルベンゼン
8. トリフェニレン

7

0

0

14

min

Polaris C18-A
8

400

5

mAU

1

6

4

2 3

7

0

0

Polaris C8-A の LC/MS 性能試験混合物
Polaris C8-A
カラム :A2011030X030
3.0 x 30 mm、3 µm

グラジエント : 3 分で 5 ～ 90 % B、4 分保持
流量 :0.6 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、220 nm

VLC0007

3
4

A : 水 + 0.05 % ギ酸
B : アセトニトリル + 0.05 % ギ酸

1. アスパルテーム
2. コルチゾン
3. レセルピン
4. フタル酸ジオクチル

2

400
1

mAU

移動相 :

14

min

0

0

min

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

8VLC000895低分子化合物の分離用カラム

Polaris HPLC カラム
PolarisC18-A

寸法 (mm)

粒子径 (µm)50.0 x 250

10A2002250X500
A2000100X300

30.0 x 100

530.0 x 3.0

321.2 x 250

10A2002250X212

21.2 x 250

5A2000250X212

21.2 x 150

5A2000150X212
A2000100X212

21.2 x 100

521.2 x 50

5Polaris
C8-A

PolarisC18-Ether

PolarisC8-Ether

Polaris Amide C18

PolarisNH2*

Polaris
Si-A*

A2004250X500

A2007030X030
A2008250X212
A2010250X212

A2020250X212

A2030250X212

A2006250X212

A2004250X212
A2013250X212

A2003250X212
A2003150X046

A2003050X212

10.0 x 250

1010.0 x 250

5A2008250X100

10.0 x 50

34.6 x 250

10

A2002250X046

4.6 x 250

5

A2000250X046

A2000250X100

A2020250X100

A2030250X100

A2006250X100

A2013250X100

A2021050X100
A2003250X046
A2010250X046

A2020250X046

A2030250X046

A2006250X046

A2013250X046

A2020150X046

A2030150X046

A2006150X046

A2013150X046

A2003150X046

A2006100X046

A2013100X046

A2003100X046

A2006050X046

A2013050X046

A2003050X046

4.6 x 200

5

A2000200X046

4.6 x 150

5

A2000150X046

A2010150X046

4.6 x 100

5

A2000100X046

A2010100X046

4.6 x 50

5

A2000050X046

A2020050X046

4.6 x 30

5

A2000030X046

4.6 x 250

3

A2001250X046

A2007250X046

A2014250X046

A2005250X046

4.6 x 150

3

A2001150X046

A2011150X046

A2007150X046

A2014150X046

A2005150X046

4.6 x 100

3

A2001100X046

A2011100X046

A2007100X046

A2014100X046

A2005100X046

4.6 x 75

3

A2001075X046

A2011075X046

A2021250X046

A2031250X046*順相カラム(続く)

96

低分子化合物の分離用カラム

Polaris HPLC カラム
寸法 (mm)4.6 x 50

粒子径 (µm)

3

Polaris
C18-A

Polaris
C8-A

A2001050X046

PolarisC18-Ether

PolarisC8-Ether

Polaris Amide C18

PolarisNH2*

PolarisSi-A*

A2021050X046

A2031050X046

A2007050X046

A2014050X046

A2005050X046

4.6 x 30

3

A2001030X046

4.0 x 250

5

A2000250X040

A2010250X040

A2020250X040

A2030250X040

A2013250X040

A2003250X040

4.0 x 150

5

A2000150X040

A2010150X040

A2020150X040

A2030150X040

A2013150X040

A2003150X040

4.0 x 125

5

A2000125X040

A2010125X040

A2020125X040

A2030125X040

A2013125X040

A2003125X040

3.0 x 250

5

A2000250X030

A2010250X030

A2020250X030

A2030250X030

A2006250X030

A2013250X030

A2005250X046

3.0 x 150

5

A2000150X030

A2010150X030

A2020150X030

A2030150X030

A2006150X030

A2013150X030

A2003150X030

3.0 x 100

5

A2000100X030

A2010100X030

A2020100X030

A2030100X030

A2006100X030

A2013100X030

A2003100X030

3.0 x 50

5

A2000050X030

3.0 x 250

3

A2001250X030

A2007250X030

A2014250X030

A2003250X030

3.0 x 200

3

A2001200X030

3.0 x 150

3

A2001150X030

A2007150X030

A2014150X030

A2005150X030

3.0 x 100

3

A2001100X030

A2007100X030

A2014100X030

A2005100X030

3.0 x 50

3

A2001050X030

3.0 x 30

3

A2001030X030

2.0 x 250

5

A2000250X020

2.0 x 150

5

A2000150X020

2.0 x 100

5

A2000100X020

2.0 x 50

5

A2000050X020

2.0 x 30

5

A2000030X020

2.0 x 20

5

A2000020X020

2.0 x 250

3

A2001250X020

A2011250X020

A2021250X020

A2031250X020

A2007250X020

2.0 x 150

3

A2001150X020

A2011150X020

A2021150X020

A2031150X020

2.0 x 100

3

A2001100X020

A2021100X020

A2031100X020

2.0 x 7532.0 x 50

3

A2001050X020

2.0 x 30

3

A2001030X020

2.0 x 20

3

A2001020X020

A2003050X030

A2021150X030

A2021050X030

A2031050X030

A2007050X030

A2014050X030

A2005050X030

A2011030X030
A2020250X020

A2030250X020

A2006250X020

A2013250X020

A2003250X020

A2010150X020

A2020150X020

A2030150X020

A2006150X020

A2013150X020

A2003150X020

A2006100X020

A2013100X020

A2003100X020

A2010050X020

A2020050X020

A2030050X020

A2006050X020

A2013050X020

A2003050X020

A2006030X020

A2013030X020

A2003030X020

A2013020X020

A2003020X020

A2014250X020

A2005250X020

A2007150X020

A2014150X020

A2005150X020

A2007100X020

A2014100X020

A2005100X020

A2021075X020
A2011050X020

A2021050X020
A2021050X020

A2031050X020

A2007050X020

A2014050X020

A2005050X020

A2007030X020

A2014030X020

A2005030X020

A2014020X020

A2005020X020*順相カラムwww.agilent.com/chem/lccolumn:jp97低分子化合物の分離用カラム

Polaris ChromSep カートリッジカラム、コンプリートシステム
ハードウェアPolarisC18-A

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

4.6 x 250

5

A2000250C046

4.6 x 150

5

A2000150C046

4.6 x 100

5

A2000100C046

4.6 x 250

3

A2001250C046

4.6 x 150

3

A2001150C046

3.0 x 250

5

A2000250C030

3.0 x 100

5

A2000100C030

2.0 x 100

5

A2000100C020

2.0 x 150

3

A2001150C020

2.0 x 100

3

A2001100C020

2.0 x 50

3

A2001050C020

Polaris ChromSep 交換用カートリッジ
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

4.6 x 250

5

入数

Polaris
C18-A

A2000250R046
3個

A2000250T046

3個

A2000150T046

3個

A2000100T046

3個

A2001150T046

3個

A2001100T046

A2000150R046
4.6 x 150

5

A2000100R046
4.6 x 100

5

A2001150R046
4.6 x 150

3

A2001100R046
4.6 x 100

3

A2000150R030
3.0 x 150

5

3個

A2000150T030
A2000100R030

3.0 x 100

5

3個

A2000100T030
A2001100R030

3.0 x 100

3

3個

A2001100T030
A2001150R020

2.0 x 150

3

3個

A2001150T020

3個

A2001050T020

A2001050R020
2.0 x 50983

低分子化合物の分離用カラム

MetaGuard カラム
粒子径ハードウェアPolaris C18Ether

寸法 (mm)(µm)

Polaris C18-A Polaris C8-A

4.6

10

A2002MG

2.0

10

4.6

5

A2000MG

A2010MG

A2020MG

2.0

5

A2000MG2

A2010MG2

A2020MG2

4.6

3

A2001MG

A2011MG

A2021MG

2.0

3

A2011MG2

A2011MG2

A2021MG2

1.0

3

A2001MG1

Polaris C8Ether

PolarisAmide C18

Polaris NH2*

Polaris Si-A*

A2004MG
A2008MG2
A2030MG

A2031MG2

A2004MG2

A2006MG

A2013MG

A2003MG

A2006MG2

A2013MG2

A2003MG2

A2007MG

A2014MG

A2005MG

A2007MG2

A2014MG2

A2005MG2*順相カラムwww.agilent.com/chem/lccolumn:jp99低分子化合物の分離用カラム

Agilent TC-C18(2) および HC-C18(2)従来の LC カラムが必要で、カラム一本ごとの製品検査ではなく充填剤バッチの検査で十分な場合、より低価格な Agilent TC(2)/HC(2) カラムが適しています。

TC-C18 (2)Agilent TC-C18(2) は、複雑な天然物抽出サンプル、漢方薬、環境サンプル、強塩基化合物を含む極性と非極性化合物の混合物を分析する必要のあるすべてのサンプルに最適です。

• 炭素含有量 - 12 %• 極性化合物とグラジエント分離 (低い有機物濃度で始まるか、広範囲の有機物を対象とした分離) に最適• 水に溶解するサンプル、ほとんどの水系サンプルに最適• 有機修飾剤としてアセトニトリルやメタノールを含む、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸 (TFA)、
リン酸緩衝液などの一般的な移動相に使用• pH 2 ～ 8 で優れた性能

HC-C18 (2)Agilent HC-C18(2) は、炭素含有量が高く、より保持力の高い C18 カラムです。高炭素含有カラムの中でも優れたピーク形状を持ち、塩基性化合物に対しても優れたピーク形状を示します。

• 17 % の高いカーボン量が、中程度の極性から無極性の化合物を良好に保持• 無極性の化合物や中程度の有機化合物 % (有機化合物の比率が最低 10 % 超) の分離に最適• 工業用サンプルまたは有機溶媒/有機溶媒に溶解したサンプルに最適• 広範囲の pH (2-9) で安定性を確保できる高い柔軟性

100低分子化合物の分離用カラム

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

上限温度

pH 範囲*

エンドキャップ

カーボンロード

TC-C18 (2)170 Å

290 m2/g

60 °C

2.0-8.0

あり

12 %HC-C18 (2)170 Å

290 m2/g

60 °C

2.0-9.0あり

17 %仕様は代表的な値のみを表しています。

Agilent HC-C18(2)/TC-C18(2)品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

Agilent HC-C18(2)4.6 x 250

5588905-902

Agilent HC-C18(2)4.6 x 150

5588915-902

Agilent TC-C18(2)4.6 x 250

5588925-902

Agilent TC-C18(2)4.6 x 150

5588935-902

Agilent HC-C18(2) ガードカートリッジ, 2 個

4.6 x 12.55520518-904

Agilent TC-C18(2) ガードカートリッジ, 2 個

4.6 x 12.55520518-905

ガードハードウェアキット

820999-901

ヒントとテクニック
アジレントはお得なキャンペーンを行っています。
詳しくは、www.agilent.com/chem/jp をご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

101低分子化合物の分離用カラム

PLRP-S HPLC カラム• 高再現性と長寿命を達成する最も頑丈なポリマー系粒子• 高い熱安定性と化学的安定性• USP L21 に準拠• 分野を問わずあらゆる分析で使用可能
PLRP-S シリーズには、さまざまな粒子径とポアサイズを有する充填剤が使用され、分析の用途に応じて使い分けることが可能です。粒子には疎水性があるため、逆相系での分離には結合相、アルキル結合基は必要ありません。そのため、残存シラノールや残留重金属は存在しません。幅広いカラム製品は、プロテオミクス、分析分離、分取精製などのマイクロ分離に適しています。さらに、プロセスカラムには充填剤バルクを充填することもできます。

カラム仕様
使用可能 pH 範囲

1-14

緩衝液種類

制限なし

使用可能有機溶媒濃度

1 - 100 %使用可能最高温度

200 ºC

使用可能最大圧力

5 ～ 8 µm: 3000 psi (21 MPa)
3 µm: 4000 psi (30 MPa)

PLRP-S アプリケーション

102

ポアサイズ

アプリケーション100 Å

低分子/ペプチド/オリゴヌクレオチド

300 Å

遺伝子組み換えペプチド／タンパク1000 Å

分子量の大きなタンパク質4000 Å

DNA/プラスミド

低分子化合物の分離用カラム

25 bp DNA ラダーの HPLC
カラム :PLRP-S、2.1 x 150 mm

移動相 :A : 0.1 M TEAA
B : 50 % 0.1 M TEAA 水溶液 : 50 % ACN

流量 :200 µL/min

HPLC

PLRP-S 100ÅResponse, UV, 260 nm

グラジエント : 12.5 - 50 % B、150 分

PLRP-S 300Å

PLRP-S 1000Å

PLRP-S 4000Å

Time
VLCPLRPSResp

ポリエチレングリコール
PLRP-S 100Åカラム :PL1111-3500
4.6 x 150 mm、5 µm
移動相 :

A:水
B : アセトニトリル

PEG 400

グラジエント : 12 分で 10 ～ 30 % B、30 % B で 3 分間保持流量 :1.0 mL/min

注入量 :

10 µL

min

0

15

サンプル濃度 : 1 mg/mL
検出器 :ELS (neb = 50 °C、evap = 70 °C、gas = 1.6 SLM)

PEG 1080

0

min

15
VLC0048www.agilent.com/chem/lccolumn:jp103低分子化合物の分離用カラム

化学的安定性 - NH4OH 濃度
カラム :

移動相 :

2

PLRP-S 100Å
PL1512-5500
4.6 x 250 mm、5 µm

3

1

1 mM

A : アンモニア水(濃度はクロマトグラムを参照)
B : can アンモニア含有アセトニトリル(濃度はクロマトグラムを参照)

1. アンギオテンシン II
2. アンギオテンシン I
3. アンギオテンシン III

10 mM

グラジエント : 15 分で 10 ～100 % B (リニア)流量 :1.0 mL/min

検出器 :ELS (neb = 80 °C、evap = 85 °C、gas = 1.0 SLM)

100 mMmin

0

10
VLC0049

Alberta Peptide Institute 試験混合物
PLRP-S 100Åカラム :PL1512-5500
4.6 x 250 mm、5 µm
移動相 :

5

A : 99 % TFA 水溶液 (0.1 %) : 1 % ACN
B : 70 % TFA 水溶液 (0.1 %) : 30 % ACN

43

グラジエント : 30 分で 0 ～ 100 % B
流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、220 nm

1

0

2

min

1. Ala3-Gly4 (遊離アミノ酸)
2. Gly3-Gly4 (Nα-アセチル化)
3. Ala3-Gly4 (Nα-アセチル化)
4. Val3-Gly4 (Nα-アセチル化)
5. Val3-Val4 (Nα-アセチル化)

30
VLC0050104低分子化合物の分離用カラム

分子量の大きい繊維状タンパク質
カラム :PLRP-S 300Å
PL1512-3801
4.6 x 150 mm、8 µm

カラム :PLRP-S 1000Å
PL1512-3802
4.6 x 150 mm, 8 µm

2

1

移動相 :

A : 0.25 % TFA 水溶液
B : 5 % TFA 水溶液 (0.25 %) : 95 % ACN

流量 :1.0 mL/min

1

グラジエント : 15 分で 20 ～ 60 % B
検出器 :1. コラーゲン (120,000 MW)
2. フィブリノーゲン (340,000 MW)

2

PLRP-S 300Å

PLRP-S 1000Å

UV、220 nm

0

min

12

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

0

min

18

VLC0051105低分子化合物の分離用カラム

PLRP-S HPLC カラム
ハードウェア

PLRP-S
300 Å
USP L21

PLRP-S
1000 Å
USP L21

PLRP-S
4000 Å
USP L21

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

4.6 x 250

8

PL1512-5800

PL1512-5801

PL1512-5802

4.6 x 150

8

PL1512-3800

PL1512-3801

PL1512-3802

PL1512-3803

4.6 x 50

8

PL1512-1801

PL1512-1802

PL1512-1803

4.6 x 250

5

PL1512-1502

PL1512-1503

PL1512-5500

PL1512-5501

4.6 x 150

5

PL1111-3500

PL1512-3501

4.6 x 505

PL1512-1500

PL1512-1501

4.6 x 150

3

PL1512-3300

PL1512-3301

4.6 x 50

3

PL1512-1300

PL1512-1301

2.1 x 250

8PL1912-5801

2.1 x 150

8

PL1912-3801

PL1912-3802

PL1912-3803

2.1 x 508PL1912-1801

PL1912-1802

PL1912-1803

PL1912-1502

PL1912-1503

2.1 x 250

5

PL1912-5500

PL1912-5501

2.1 x 150

5

PL1912-3500

PL1912-3501

2.1 x 505

PL1912-1500

PL1912-1501

2.1 x 150

3

PL1912-3300

PL1912-3301

2.1 x 503

PL1912-1300

PL1912-1301

PLRP-S ガードカートリッジ、5 x 3 mm 用, 2 個

PL1612-1801

PL1612-1801

PL1612-1801

PL1612-1801

3.0 x 5.0 mm カートリッジ用ガードカートリッジホルダ

PL1310-0016

PL1310-0016

PL1310-0016

PL1310-0016*分取カラムは PLRP-S ファミリにも使用できます。149 ページをご覧ください。

106

PLRP-S100 Å
USP L21

低分子化合物の分離用カラム

分取 HPLC カラム
スケールアップおよび分取のための柔軟で
コストパフォーマンスの高いオプション
ルーチン分析メソッドのスケールアップや、製造段階での高精度分離の検討など、アジレントはお客様のさまざまな問題解決をお手伝いします。

• Agilent Prep LC カラムは、ミリグラムからグラム単位の製品の精製を行うため、高いロード量に耐えることができるように設計されたコストパフォーマンスの高い分取ソリューションです。

• ZORBAX PrepHT カラムは、ZORBAX ファミリの相からスケールアップできるように設計されています。

• Pursuit および Polaris カラムの拡張可能な分取カラムも用意されています。
• 充填剤バルクも用意されています (詳しくはお問い合わせください)。

Agilent Prep LC カラム• 大容量のサンプル精製に適した高いロード量• カラム内径 4.6 mm から 50 mm まで簡単にスケールアップが可能。迅速なメソッド開発を実現• 高速精製に最適なハイスループット内径 21.2 mm カートリッジ• pH 10 において際立ったカラム安定性、ロード量を誇る

分取 LC カラム

Agilent Prep LC カラムはミリグラムからグラム単位の製品の精製を行うため、高いロード量に耐えることができるように設計されています。分取カラムサイズは内径 21.2 mm、30 mm、50 mm、全長 50～ 250 mm の範囲からお選びいただけます。カラムは 5 µ または 10 µm の粒子サイズで入手することができ、どの次元でも高い効率性を発揮します。幅広い品揃えにより、ほとんどの分取サンプルを分析することができます。

Agilent Prep 内径 21.2 mm カラムは Agilent 分取カートリッジハードウェアと共にお求めいただけます。このカートリッジハードウェアにより、異なる長さのカラムを使用して簡単、確実にサンプルロード量を高めることができます。ガードカラムもこれらのカラムに簡単に組み込むことができ、分析カラムを確実に保護します。メソッド作成とより大きいカラムへのスケールアップに先立って最適化を行うため、内径 4.6 mm の分析スケールカラムも用意しています。バルク充填剤もお求めいただけます。
分取カラムは、極性、非極性にかかわらず幅広い種類の化合物の精製に適した C18 結合相を充填剤として使用することができます。また、未結合のシリカカラムもお求めいただけます。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp107低分子化合物の分離用カラム

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

上限温度

pH 範囲

エンドキャップ

カーボンロード

C18

100 Å

400 m2/g

60 °C*

2.0-10.0

シングル

24 %

シリカ

100 Å

400 m2/g**

1.0-8.0

N/A

N/A

仕様は代表的な値のみを表しています。

*温度上限 : pH 8 までは 60 °C、pH 8 ～ 10 は 40 °C。
**修飾しないシリカの温度上限は移動相の pH に依存します。

塩基性化合物での Agilent Prep C18 の優れた
ロード量
カラム :

mAU

Agilent Prep C18443905-902
4.6 x 150 mm、5 µm

mAU

4000

40
35
30
25
20
15
10
5
0

α = 1.6

3500
3000

移動相 :

50 % 0.1 % TFA : 50 % ACN

2500

流量 :

1 mL/min

1500

10 µL

1000

サンプル :

他社 W-C18

Agilent Prep C18

2000

ドキセピン/アミトリプチリン
0.5 ～ 50 mg/mL

500
0
0

1

2

3

4 5 6
Time (min)

7

8

9

α = 1.57

0

1

2

3

4 5 6
Time (min)7

8

9
LCPLC01

Agilent Prep カラムの分離能と負荷量は競合他社のカラムよりも優れています。

ステロイド : Agilent Prep カラムを使用した簡単なスケールアップ
カラム A :

カラム B :

カラム C :

カラム D :

Agilent Prep C18443905-902
4.6 x 150 mm、5 µm
Agilent Prep C18443905-102
21.2 x 150 mm、5 µm
Agilent Prep C18
413910-302
30.0 x 150 mm、10 µm
Agilent Prep C18
413910-502
50.0 x 150 mm、10 µm

移動相 :55 % 水 : 45 % ACN

流量 :0.7 mL/min
14.87 mL/min
29.77 mL/min
85.37 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :240 nmサンプル :

2 µL
42.4 µL
170 µL488 µL

1. ヒドロコルチゾン
2. テストステロン (1mg/mL 中のメタノール溶液)
A

0

1

2

B

4

2

6

8

10

12

1
2

0

2

C

4

6

8

10

12

1
2

Agilent Prep C18 は優れたスケーラビリティを示します。したがって、

0

メソッド変換がシンプルになります。

D

2

4

6

8

10

12

1
2

0

108

2

4

6
Time (min)

8

10

12
LCPLC02低分子化合物の分離用カラム

Agilent Prep LC カラム
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

C18

シリカ

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)
分取検討用

4.6 x 250

10440910-902

440910-901

分取検討用

4.6 x 150

10443910-902

443910-901

分取検討用

4.6 x 100

10449910-902

分取検討用

4.6 x 250

5440905-902

440905-901

分取検討用

4.6 x 150

5443905-902

443905-901

分取検討用

4.6 x 100

5449905-902

449905-901

分取検討用

4.6 x 505446905-902

446905-901

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)*
PrepHT

21.2 x 250

10410910-102

410910-101

PrepHT

21.2 x 150

10413910-102

413910-101

PrepHT

21.2 x 50

10446910-102

PrepHT

21.2 x 150

5443905-102

443905-101

PrepHT

21.2 x 100

5449905-102

449905-101

PrepHT

21.2 x 50

5446905-102

446905-101

820400-901

820400-901

PrepHT エンドフィッティング、2 個
標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)

Prep 3030.0 x 250

10410910-302

410910-301

Prep 3030.0 x 150

10413910-302

413910-301

Prep 3030.0 x 100

10419910-302

419910-301

Prep 3030.0 x 100

5449905-302

449905-301

Prep 3030.0 x 50

5446905-302

446905-301

Prep 5050.0 x 250

10410910-502

410910-501

Prep 5050.0 x 150

10413910-502

413910-501

Prep 5050.0 x 100

10419910-502

419910-501

Prep 5050.0 x 100

5449905-502

449905-501

10420212-902

420212-901

820444-901

820444-901

420420-901

420420-901

420910-902

420910-901

ガードカラム (ハードウェアが必要)

PrepHT ガード

21.2 x 10

カートリッジ、2 個

ガードカートリッジハードウェアキット

PrepHT 外付け用ガードハードウェアキット
バルク充填剤 (1 kg)

10*すべての PrepHT カートリッジカラムにはハードウェアキット (P/N 820400-901) が必要です。内径 21.2 mm のカラムにもガードカラムが必要な場合、PrepHT ガードハードウェアキット (P/N 820444-901) も必要です。ガードカラムを内径30 mm のカラムで使用する場合、外部カラムハードウェアキット (P/N 420420-901) が必要です。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

109低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX PrepHT• ZORBAX の結合相を使えば分析スケールから分取スケールに簡単にスケールアップが可能• 2000 mg までの高速分取分離• 高効率性、高収率をもたらす 5 µm、7 µm の粒子径
• 取り付けやすいフィンガタイトコネクションシールにより、5000 psi/35 MPa までの圧力に対応• 分取分離の分析相の選択性を維持
Agilent ZORBAX PrepHT カラムを使えば高純度、高回収率、ハイスループットも簡単に実現できます。
PrepHT カラムは、どのような状況下でも最適な分離能と試料負荷量を実現するため、Eclipse XDB、
StableBond、Bonus-RP、Extend-C18 といった豊富な種類の中から結合相をお選びいただけます。
ZORBAX PrepHT カラム

ZORBAX PrepHT カラムには 5 µm、7 µm の粒子径で充填剤が詰められており、非常に高い分離能をもたらします。この高い分離能は高い試料負荷量をもたらし、高い収率、純度で化合物を分取することを可能にします。直径が大きく強度の高い ZORBAX 粒子は 100 mL/min までの流量を可能にし、ス
ループットを高めます。
ZORBAX PrepHT カラムは、分離能を低下させることなく分析スケールから分取スケールにすばやく
スケールアップできるように設計されています。複雑な分離目的に使用するサイズの大きいカラム(内径 21.2 mm 以上、長さ 150 mm を超える) には、高い効率性と高い試料負荷量のバランスを慎重に図った結果、7 µm の粒子径を選びました。

110低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX PrepHT カラムによる高い純度と回収率

DMSO

1

ZORBAX SB-C18 カラムを使ったマスベースのフラクションコレクショ
ンは、各化合物で高い純度、回収率を実現しています (資料番号 59887113EN のアプリケーションノート)。3 種類の抗狭心剤の分離は一回の分析で成功し、高い回収率、>90 % の純度を得ることができました。分離の程度によっては、2000 mg までの分離も可能です。

2

3

DAD

1. ニフェジピン
2. ニフモジピン
3. ニフソルジピン

抗狭心症薬
吸光度 (mAU)

サンプル :

0

1

2

3

4
Time (min)

5

6

7
MSD

Vial 2 – 343
Vial 1 – 347

Vial 3 – 389

8000000
6000000
4000000
2000000
0

1

2

ニフェジピン

ニフモジピン

ニフソルジピン

[mg]

[mg]

[mg]

3

4
Time (min)5

6

7
LCPHT01

フラクション 1

18.90

0.11

0.16

ニフェジピン純度

98.6 %

フラクション 2

0.29

17.66

0.77

ニフモジピン純度

94.4 %

ニフソルジピン純度89.5 %

フラクション 3

0.49

1.66

18.36

回収率 [mg]

19.68

19.43

19.29

回収率 [%]

101.3

102.0

101.9

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp111低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX PrepHT カラムは、分離能を低下させることなく分析スケールから分取スケールにすばやく
スケールアップできるように設計されています。大きなカラム (内径 21.2 mm 以上、長さ 150 mm 以上) による複雑な分離に対して、効率と高いロード量のバランスを保つために、アジレントは 7 µmの粒子径を選択しました。

同じポンプを使用した、分析から分取 ZORBAX SB-C18 カラムへのスケールアップ
流量
カラム

寸法

カラム 1
カラム 2

検出器セル

部品番号

(mL/min)

注入 (µL)50 x 150 mm

100

2200

0.3 mm 石英製

カスタムカラム21.2 x 150 mm

18

400

0.3 mm 石英製

877150-102

カラム 3

9.4 x 150 mm

3.5

80

0.3 mm 石英製

883975-202

カラム 4

4.6 x 150 mm

0.85

2.0

3 mm、ステンレス

883975-902

同じ 1100 ポンプを使用すると、分離能を低下させずに内径 4.6 mm から 50 mm へのスケールアップが可能です。メソッドを開発し直して調整する所要時間が短縮されるため、スループットが向上します。

PrepHT へのスケールアップ
2

3500

3

3000

吸光度 (mAU)

2500
2000

Column 1

1500

1

1. テオブロミン
2. テオフィリン
3. カフェインColumn 2

1000
Column 3
500
Column 4

0
0

2.5

5.0

7.5

10.0
12.5
Time (min)

15.0

17.5

20.0
LCPHT_ScaleUp

112低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX PrepHT 80StableBond (ハードウェア 820400-901 が必要)
ハード
ウェア

SB-C18USP L1

SB-C8
USP L7

SB-Aq

SB-CN
USP L10

SB-Phenyl
USP L117877250-102

877250-106

877250-114

877250-105

877250-112

21.2 x 150

7877150-102

877150-106

877150-114

21.2 x 150

5870150-902

870150-906

870150-914

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5870100-902

870100-906

870100-914

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5870050-902

870050-906

870050-914

PrepHT ガードカートリッジ、
17.0 x 7.52個

5820212-920

820212-915

820212-933

820212-933

820212-915

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

PrepHT カートリッジ
PrepHT カートリッジ

ZORBAX PrepHT 300StableBond (ハードウェア 820400-901 が必要)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

300SB-C18
USP L1300SB-C8
USP L7300SB-C3
USP L56300SB-CN
USP L10PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7897250-102

897250-106

897250-109

897250-105

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7897150-102

897150-106

897150-109

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5895150-902

895150-906

895150-909

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5895100-902

895100-906

895100-909

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5895050-902

895050-906

895050-909

PrepHT ガードカートリッジ、2 個

17.0 x 7.55820212-921

820212-918

820212-924

820212-924

820444-901

820444-901

820444-901

820444-901

820400-901

820400-901

820400-901

820400-901

NH2
USP L8SIL
USP L3

ガードカートリッジハードウェアキット
ガードカラムエンドフィッティング、ポリマーシール、およびシール挿入ツール (シールホル
ダーとシールプッシャ) を含む

PrepHT エンドフィッティング、2 個

ZORBAX PrepHT Original (ハードウェア 820400-901 が必要)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

ODS (C18)
USP L1C8USP L7CN
USP L10PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7877952-102

877952-106

877952-105

877952-108

877952-101

820400-901

820400-901

820400-901

820400-901

820400-901

PrepHT エンドフィッティング、2 個

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp113低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX PrepHT Eclipse XDB (ハードウェア 820400-901 が必要)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

EclipseXDB-C18
USP L1

PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7977250-102

977250-106

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7977150-102

977150-106

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5970150-902

970150-906

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5970100-902

970100-906

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5970050-902

970050-906

PrepHT ガードカートリッジ, 2 個

17.0 x 7.55820212-925

820212-926

820444-901

820444-901

820400-901

820400-901

Extend-C18
USP L1

ガードカートリッジハードウェアキット

EclipseXDB-C8USP L7

ガードカラムエンドフィッティング、ポリマーシール、およびシール挿入ツール (シールホルダーとシールプッシャ) を含む

PrepHT エンドフィッティング、2 個

ZORBAX PrepHT Bonus-RP and Extend-C18 (ハードウェア 820400-901 が必要)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Bonus-RP
USP L60

PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7878250-101

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7878150-101

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5868150-901

770150-902

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5868100-901

770100-902

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5868050-901

770050-902

PrepHT ガードカートリッジ、2 個

17.0 x 7.55820212-928

820212-930

820444-901

820444-901

820400-901

820400-901

Rx-C18USP L1

ガードカートリッジハードウェアキット
ガードカラムエンドフィッティング、ポリマーシール、およびシール挿入ツール (シールホルダーとシールプッシャ) を含む

PrepHT エンドフィッティング、2 個

ZORBAX PrepHT Rx-SIL (ハードウェア 820400-901 が必要)
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Rx-SIL**
USP L3

PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7877250-101

PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7PrepHT ガードカートリッジ、2 個

17.0 x 7.55

ガードカートリッジハードウェアキット

877967-102
820212-919

820212-914

820444-901

820444-901

820400-901

820400-901

ガードカラムエンドフィッティング、ポリマーシール、およびシール挿入ツール (シールホルダーとシールプッシャ) を含む

PrepHT エンドフィッティング、2 個

ZORBAX PrepHT アクセサリ
ハード
ウェア

114

品名

部品番号

ガードカートリッジハードウェアキット

820444-901

PrepHT エンドフィッティング、2 個

820400-901

交換用シール

820385-901

低分子化合物の分離用カラム

Pursuit および Pursuit XRs 分取• Pursuit および Pursuit XRs カラム用の拡張可能な分取カラム• 10 µm までの粒子サイズ、50 mm までのカラム直径• 高い表面積を持つシリカ
Pursuit および Pursuit XRs 分取カラムは、高ロード量と大きい表面積を持つように設計されています。

天然物 – Pursuit XRs C18 によるカプサイシンおよびジヒドロカプサイシンの分析
カラム A :

カラム B :

Pursuit XRs C18
A6001150X046
4.6 x 150 mm、3 µm

230
220
210
200
190
180
170
160
150
140
130
120
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

Pursuit XRs C18
A6000150X046
4.6 x 150 mm、5 µm

カラム C :

Pursuit XRs C18
A3002150X046
4.6 x 150 mm、10 µm

移動相 :CH3CH : H20 - 70 : 30

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

室温

検出器 :220 nmサンプル :

1. カプサイシン
2. ジヒドロカプサイシン

1

mAU

2

3 µm

RT [min]

0
200
190
180
170
160
150
140
130
120
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
-10

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

5

5.5

6

6.5

7

7.5

8

8.5

9

9.5

6

6.5

7

7.5

8

8.5

9

9.5

6

6.5

7

7.5

8

8.5

9

9.5

10

mAU

5 µm

RT [min]

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

5

5.5

10

mAU

240
220
200

Pursuit XRs C18、3 µm および 5 µm 分析カラムから 10 µm 分取カラ180

ムに天然物の分析を容易にスケールアップできることを示してい

140

ます。

100

160

10 µm

120

80
60
40
20
0

RT [min]

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

4.5

5

5.5

10

115

低分子化合物の分離用カラム

Agilent Pursuit 分取カラム
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Pursuit C18
USP L1

Pursuit C8
USP L7

Pursuit Diphenyl
USP L11

Pursuit PFP
USP L43

10.0 x 250

5A3000250X100

A3030250X100

A3040250X100

A3050250X100

10.0 x 250

10A6002250X100

A3032250X100

21.2 x 250

10A6002250X212

21.2 x 250

10A6002250X212

A3032250X212

Pursuit
XRs C18
USP L1

Pursuit
XRs C8USP L7

PursuitXRs Diphenyl
USP L11

PursuitXRs Si*
USP L3

Agilent Pursuit XRs 分取カラム116

寸法(mm)

粒子径 (µm)21.2 x 250

10A6002250X212

21.2 x 250

5A6000250X212

21.2 x 150

5A6000150X212

A6010150X212

21.2 x 100

5A6000100X212

A6010100X212

21.2 x 50

5A6000050X212

30.0 x 250

10A6002250X300

30.0 x 150

10A6002150X300

30.0 x 250

5A6000250X300

30.0 x 150

5A6000150X300

30.0 x 100

5A6000100X300

50.0 x 250

10A6002250X500

A6004250X212
A6020250X212

A6020100X212

A6004250X300

A6010250X300

A6022250X500

A6004250X500

低分子化合物の分離用カラム

Polaris 分取カラム• Polaris 相用の拡張可能な分取カラム• 10 µm までの粒子サイズで内径 10.0 および 21.2 mm を用意

分析から分取までのスケールアップ
カラム A :

Polaris C18-A
A2001050X046
4.6 x 50 mm、3 µm

カラム B :

Polaris C18-A
A2000050X046
4.6 x 50 mm、5 µm

カラム C :

1
2
3

A : 3 µm

カスタムカラム

Polaris C18-A
4.6 x 50.0 mm、10 µm

1

移動相 :

A : H20 + 0.1 % NH40H、pH 10.0 (25 mM)
B : CH3CN
A : B 65:35

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

40 °C

検出器 :

215 nmサンプル :

1. ピンドロール
2. メトプロロール
3. プロプラノロール

2

3

B : 5 µm

1
2

C : 10 µm

3Polaris 分取カラム
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Polaris
C18-A

PolarisC18-Ether

PolarisAmide C18

A2006250X100

10.0 x 250

5A2000250X100

A2020250X100

21.2 x 250

5A2000250X212

A2030250X212

21.2 x 250

10A2002250X212

Polaris
Si-A

Polaris
C8-A

PolarisC8-EtherA2010250X100

A2030250X100

A2003250X212

A2010250X212

PolarisNH2

A2013250X100
A2013250X212

A2004250X212

分取用の充填剤バルク
アジレントは、充填剤バルクも用意しています。カスタムカラムおよびバルクオーダープロセスを通じてご注文いただけます。数キロ単位での製造が可能です。お見積りについては担当営業までお問い合わせください。コールセンターでも承ります。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp117低分子化合物の分離用カラム

Load & Lock 分取 HPLC カラム充填システム
アジレントは、ラボスケールおよびプロセススケールの分取用 LC である、さまざまな大きさのLoad & Lock カラムを提供しています。容易かつ迅速に充填でき、高効率の分取用カラムをすばやく作成できるように設計されています。医薬品化合物、ペプチド、および天然物の開発 (数グラム) から製造 (数キログラム) までのアプリケーションに最適なソリューションです。このカラムには生産性を最大限に高めるため、独特な移動相分散システムが備わっています。このシステムは、動的軸
圧縮 (DAC) と静的「ロック」軸圧縮 (SAC) を備えており、容易な操作が可能になるように設計されています。

ラボスケール Load & Lock カラム
ロードロックカラム• 1 つのパッキングステーションで 3 サイズのカラムをサポート• 電源は必要なし (敷設するエアーコンプレッサーには必要)• 迅速かつ簡便に充填剤を充填
アジレントのラボスケール Load & Lock カラムには、カラム内に移動相を均一に通液させ、高度な精製を達成させるシステムを搭載しています。カラムの大きさは、内径 1 インチ (25 mm)、2 インチ (50mm)、3 インチ (75 mm) の 3 種類があります。別途ご用意いただくエアーコンプレッサー以外、電源は必要ありません。簡単に脱着できるシングルボルトクランプによって、充填作業を短時間で行うことができます。

Load & Lock 分取 HPLC カラム充填システム
品名

ウォータジャ
ケット

寸法 (mm)

部品番号

Load & Lock 4001 カラム

No

25.0 x 500

PCG93LL500X25

Yes

25.0 x 500

PCG93LL500X25WJ

スペアパーツキット

Load & Lock 4002 カラム

PCG931AAKIT

No

50.0 x 500

Yes

50.0 x 500

スペアパーツキット

Load & Lock 4003 カラム

可動型パッキングステーション

118

PCG93LL500X50WJ
PCG932AAKIT

No

75.0 x 500

Yes

75.0 x 500

スペアパーツキット

PCG93LL500X50

PCG93LL500X75
PCG93LL500X75WJ
PCG933AAKIT
PCG93LLSTAND123低分子化合物の分離用カラム

その他の HPLC 分離用のカラム再現性の高い結果を提供
アジレントの HPLC カラムは高い技術力に基づいて設計・製造されているため、優れた品質で分析をサポートします。

• ZORBAX HILIC Plus – LC/MS 向けに小さい極性対象化合物を良好に保持し、高感度を実現 – UHPLC
で使用可能な 1.8 µm 粒子径カラム• ZORBAX 順相カラム – 結合および非結合シリカ充填剤• ZORBAX イオン交換カラム – 堅牢な ZORBAX シリカを使用、pH 2 ～ 7 で安定• 糖分析用 Hi-Plex カラム – リガンド交換カラム• Ultron ES Chiral カラム – 2 つの補完的なタンパク質に基づくキラル固定相を持ち、光学異性体分離用に最適。医薬品分析アプリケーションに最適

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

119低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX HILIC Plus、Poroshell 120 HILIC• 低分子の極性分析対象成分に対して優れた保持• Eclipse Plus シリカをベースにし、優れたピーク形状を実現• LC/MS アプリケーションで高い感度を実現• EPA メソッド 1694 に推奨
Agilent ZORBAX HILIC Plus カラムは、通常は極性の小さい化合物の保持と分解に用いられる親水性相
互作用クロマトグラフィー (HILIC) アプリケーションで使用するためのカラムです。HILIC Plus カラム
は、ZORBAX Eclipse Plus カラムで使用される高性能シリカに基づく非結合シリカカラムです。このシ
リカは、優れたピーク形状を実現し、多くの極性塩基性分析対象成分に不可欠です。これらのカラ
ムは、一般に HILIC 分離に必要な広範囲の平衡化を削減するために、HILIC モード (アセトニトリル :水を含む) 溶媒で出荷されています。HILIC Plus カラムは、高分離用の 3.5 µm 粒子径カラムと、UHPLC
で使用可能な 1.8 µm 粒子径カラム、一般的な HPLC で高速高分離が可能な Poroshell 120 カラムが用意されてます。

カラム仕様 (ZORBAX HILIC Plus)
相
非結合シリカ

ポアサイズ

表面積

pH 範囲

95 Å

160 m2/g

0 - 8.0*

ポアサイズ

表面積

pH 範囲

仕様は代表的な値のみを表しています。

カラム仕様 (Poroshell 120 HILIC)
相
非結合シリカ* 中性以降の pH では耐久性が低下します。

ヒントとテクニック
Poroshell 120 HILIC は ZORBAX HILIC Plusに非常に類似したカラムです。

24 ページを参照してください。

120

120 Å

2

130 m /g

0 - 8.0*低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX HILIC Plus カラムでの EPA 1694 のグループ 4 分析対象成分の分離
ZORBAX HILIC Plus
カラム :959793-901
2.1 x 100 mm、3.5 µm
移動相 :90 % アセトニトリル : 10 % 水

流量 :0.25 mL/min

1.00
0.95
0.90
0.85
0.80
0.75
0.70
0.65
0.60
0.55
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0

グラジエント : 7 分で 55 % アセトニトリルの直線グラジエント
55 % に保持
カラム温度 :

メトホルミン

シメチジン
x102

アルブテロール
ラニチジン

x102
1.00
0.95
0.90
0.85
0.80
0.75
0.70
0.65
0.60
0.55
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0

25 ºC

カラム USCJP0004 を用いて 2 回分析。分析間の平衡化時間は 10 分。

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

7.5

8.0

8.5

9.0

9.5

10.0 10.5 11.0 11.5 12.0 12.5 13.0 13.5 14.0 14.5 15.0 15.5 16.0 16.5 17.0 17.5 18.0 18.5 19.0 19.5 20.0 20.5 21.0 21.5 22.0 22.5 23.0 23.5 24.0 24.5

EPA1694

ZORBAX HILIC Plus
品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

分析用

4.6 x 1003.5959961-901

分析用

4.6 x 503.5959943-901

ナローボア

2.1 x 100

3.5959793-901

ナローボア

2.1 x 50

3.5959743-901

ZORBAX HILIC Plus RRHD、120 MPa まで使用可能
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

3.0 x 1001.8959758-301

3.0 x 501.8959757-301

2.1 x 150

1.8959759-901

2.1 x 1001.8959758-901

2.1 x 501.8959757-901

Poroshell 120 HILIC Plus
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

2.1 x 502.7699775-901

2.1 x 100

2.7695775-901

2.1 x 150

2.7693775-901

3.0 x 502.7699975-301

3.0 x 150

2.7693975-301

4.6 x 502.7699975-901

4.6 x 100

2.7695975-901

4.6 x 150

2.7693975-901

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

121低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX 順相カラム
順相クロマトグラフィー用として、Agilent ZORBAX 製品ラインには結合および非結合シリカ充填剤が揃っています。

ZORBAX Rx-SIL• 高純度 (> 99.995 %) の多孔質シリカ微細球製 (ポアサイズは固体シリカ微粒子の間の距離)• 1.8 と 5 µm の粒子径を用意• 他の種類のシリカよりも強力• ZORBAX SIL よりも弱い酸性で、金属含有量が少ない• 低い酸性度と低い金属含量という特徴により、ZORBAX Rx-SIL は、酸性の強いシリカでピーク対称性が悪い極性化合物の順相分離に最適• 強い親水性を持つ化合物を有機溶媒を多くした移動相で HILIC モードで分離する用途に有用

ZORBAX Eclipse XDB-CN• 高純度 Rx-SIL から製造
• 塩基性化合物の順相分析に最適• ZORBAX Rx-SIL よりも速く平衡化し、同じ順相分析の多くに使用

122低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX CN• ZORBAX SIL に結合されたシアノプロピルジメチルシラン単分子層• ZORBAX SIL よりも速く平衡化し、同じ順相分析の多くに使用• 詰まりにくく、シリカよりも親水性ではない

Pursuit XRs Si• 大きい表面積と優れたロード量の 100 Å シリカ• 14.6 % のカーボン量• 3 µm、5 µm、10 µm を用意

Polaris NH2• 表面積とロード量が大きい 180 Å シリカ• 5.5 % のカーボン量• 3 µm、5 µm、10 µm サイズを用意• シラノール基のシールドにより極性を変更• 水比率の高い条件に適した設計

Polaris Si-A
• 表面積とロード量が最も大きい 180 Å シリカ• 3 µm、5 µm、10 µm を用意

ZORBAX CN によるオクチルフェノキシエタノール表面活性剤 (n = 10) の高分離
ZORBAX CN
カラム :880952-705
4.6 x 250 mm、5 µm
移動相 :第 1 :ヘプタン
第 2 : 2- メトキシエタノール/イソプロパノール (50/50)

流量 :2 mL/minグラジエント : 10 分で 2 ～ 20 % 第 2 移動相、20 % で保持
カラム温度 :

50 °C

検出器 :

278 nmサンプル :

オクチルフェノキシ (ポリエチレンオキシ)
エタノール界面活性剤 (n = 10)

0

5

10

15
Time (min)20
LCNP001

Polaris の詳細情報は 94 ページでご覧いただけます。
Pursuit の詳細情報は 83 ページでご覧いただけます。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp123低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX NH2• ZORBAX SIL に結合されたアミノプロピルシラン相• 順相分離と弱アニオン交換、および極性化合物の逆相 HPLC に使用• ビタミン A と D は順相モードで分離
カラム仕様
ポアサイズ

表面積

pH 範囲

エンドキャップ

ZORBAX Rx-SIL

80 Å

180 m2/g

0 - 8.0

なし

N/A

ZORBAX Eclipse XDB-CN

80 Å

180 m2/g

2.0 - 8.0

あり

4.3 %

ZORBAX SIL

70 Å

300 m2/g

0 - 8.0

なし

N/A

ZORBAX CN

70 Å

300 m2/g

2.0 - 7.0あり

7%ZORBAX NH2

70 Å

300 m2/g

2.0 - 7.0

あり

4%

相

ヒントとテクニック
順相分離のもう一つの選択肢
が Pursuit XRs Silica です。詳細
については、91 ページを参照
してください。

124

カーボンロード低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Rx-SIL を基材とする順相カラム
ハードウェア

EclipseXDB-CNUSP L10

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Rx-SIL**
USP L3セミ分取

9.4 x 250

5880975-201

アナリティカル

4.6 x 250

5880975-901

990967-905*

アナリティカル

4.6 x 150

5883975-901

993967-905*

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 100

1.8828975-901

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

4.6 x 501.8827975-902

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

3.0 x 100

1.8828975-301

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

3.0 x 501.8827975-301

ナローボア

2.1 x 150

5883700-901

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

2.1 x 100

1.8828700-901

ラピッドレゾリュ―ション HT、60 MPa

2.1 x 501.8827700-901

ガードカートリッジ、2 個

9.4 x 155820675-119

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-919

820950-935

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-919

821125-935

ガードハードウェアキット

9.4 x 15

品名

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)

993700-905*

ガードカラム (ハードウェアが必要)

840140-901

ガードハードウェアキット

820999-901

820999-901

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7PrepHT エンドフィッティング、2 個
PrepHT ガードカートリッジ、2 個

877250-101
820400-901

17.0 x 7.55

ガードカートリッジハードウェアキット

820212-919
820444-901*これらのカラムは逆相溶媒を充填した状態で出荷されます。イソプロパノールで洗浄してから順相溶媒を使うようにしてください。
**これらのカラムは HILIC モードでも使用できます。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp125低分子化合物の分離用カラム

ZORBAX Original SIL を基材とする順相カラム
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

SIL
USP L3CN
USP L10NH2USP L8

糖分分析*

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)
セミ分取

9.4 x 250

5880952-201

880952-205

880952-208

アナリティカル

4.6 x 250

5880952-701

880952-705

880952-708

840300-908

アナリティカル

4.6 x 150

5883952-701

883952-705

883952-708

843300-908

ナローボア

2.1 x 50

5

ガードカートリッジ、2 個

9.4 x 155820675-119

820675-111

820675-111

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-901

820950-905

820950-908

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5

ガードハードウェアキット

9.4 x 15840140-901

840140-901

840140-901

820999-901

820999-901

820999-901

877952-101

877952-105

877952-108

PrepHT エンドフィッティング、2 個

820400-901

820400-901

820400-901

ガードカートリッジハードウェアキット

820444-901

860700-708

ガードカラム (ハードウェアが必要)

ガードハードウェアキット

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7*カラムはアセトニトリル : と水の混合溶液で封入され、充填剤ロット毎に糖混合物でテストされています。

126820950-908

820999-901

低分子化合物の分離用カラム

Pursuit XRs Si、USP L3
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

セミ分取スケール

10.0 x 250

10A6004250X100

10A6004250X046

分析スケール

4.6 x 250
4.6 x 100

5A6006100X046

4.6 x 505A6006050X046

4.6 x 100

3

A6005100X046

4.6 x 503

A6005050X046

2.1 x 100

5A6006100X021

2.0 x 503

A6005050X020

50.0 x 250

10A6004250X500

30.0 x 250

10A6004250X300

21.2 x 250

10A6004250X212

PolarisNH2

PolarisSi-A

分取スケールPolaris HPLC カラム
寸法 (mm)

粒子径 (µm)50.0 x 250

1021.2 x 250

1021.2 x 250

521.2 x 150

521.2 x 50

510.0 x 250

5A2004250X500
A2004250X212
A2013250X212

A2003250X212
A2003150X046
A2003050X212

A2013250X100(続く)

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp127低分子化合物の分離用カラム

Polaris HPLC カラム
PolarisNH2

PolarisSi-A

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

4.6 x 25010

4.6 x 250

5

A2013250X046

4.6 x 150

5

A2013150X046

A2003150X046

4.6 x 100

5

A2013100X046

A2003100X046

4.6 x 50

5

A2013050X046

A2003050X046

4.6 x 250

3

A2014250X046

A2005250X046

4.6 x 150

3

A2014150X046

A2005150X046

4.6 x 100

3

A2014100X046

A2005100X046

4.6 x 50

3

A2014050X046

A2005050X046

4.0 x 250

5

A2013250X040

A2003250X040

4.0 x 150

5

A2013150X040

A2003150X040

4.0 x 125

5

A2013125X040

A2003125X040

3.0 x 250

5

A2013250X030

A2005250X046

3.0 x 150

5

A2013150X030

A2003150X030

3.0 x 100

5

A2013100X030

A2003100X030

3.0 x 5053.0 x 250

3

A2014250X030

A2003250X030

3.0 x 150

3

A2014150X030

A2005150X030

3.0 x 100

3

A2014100X030

A2005100X030

3.0 x 50

3

A2014050X030

A2005050X030

2.0 x 250

5

A2013250X020

A2003250X020

2.0 x 150

5

A2013150X020

A2003150X020

2.0 x 100

5

A2013100X020

A2003100X020

2.0 x 50

5

A2013050X020

A2003050X020

2.0 x 30

5

A2013030X020

A2003030X020

2.0 x 20

5

A2013020X020

A2003020X020

2.0 x 250

3

A2014250X020

A2005250X020

2.0 x 150

3

A2014150X020

A2005150X020

2.0 x 100

3

A2014100X020

A2005100X020

2.0 x 50

3

A2014050X020

A2005050X020

2.0 x 30

3

A2014030X020

A2005030X020

2.0 x 20

3

A2014020X020

A2005020X020

A2003250X046

A2003050X030

MetaGuard カラム
ハードウェア128

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

4.6

10A2004MG

2.0

10

A2004MG2

4.6

5

A2013MG

A2003MG

2.0

5

A2013MG2

A2003MG2

4.6

3

A2014MG

A2005MG

2.0

3A2014MG2

A2005MG2

Polaris NH2Polaris Si-A

低分子化合物の分離用カラム

イオン交換カラム

ZORBAX イオン交換カラム – SAX および SCX• 堅牢な ZORBAX シリカをベースとした ZORBAX SAX と 300SCX カラム• pH 2 ～ 7 の範囲で安定• 高い効率、高速分離を提供• 有機移動相溶媒に対応
Agilent ZORBAX 強イオン交換カラムは、強陰イオン交換 (SAX) と強陽イオン交換 (300SCX) カラムの両方を用意しています。最も効率性が高くなるようにそれぞれのカラムには結合済み 5µm 球状シリカ粒子が充填されています。
ZORBAX SAX 充填剤には第 4 級アミンが結合されています。この充填剤の製造には三官能基有機シラン試薬が使用されており、水系移動相に対する安定性が最大化されています。本カラムは、芳香族/脂肪族カルボン酸やスルホン酸など、水溶性化合物の分離に理想的です。

ZORBAX SCX 充填剤には芳香族スルホン酸基に結合されたポアサイズ 300 Å のシリカ粒子が使用されています。このカラムは塩基性の水溶性化合物や生体分子の分離に使用します。

カラム仕様
結合相

ZORBAX SAXZORBAX 300SCX

ポアサイズ

表面積

pH 範囲

機能

最大圧力

70 Å

300 m2/g

2.0 - 7.0

第 4 級アミン

35 MPa2.0 - 7.0

スルホン酸

35 MPa300 Å

2

50 m /g

仕様は代表的な値のみを表しています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp129低分子化合物の分離用カラム

咳止め薬 - ZORBAX 300SCX
カラム :

移動相 :

1

ZORBAX 300SCX
880952-704
4.6 x 250 mm、5 µm

1. ピリラミン
2. テオフィリン
3. グリセリルグアイアコラート
4. カフェイン
5. フェニレフリン

100 mM NaH2PO4 (pH 6.5)

流量 :3 mL/min

カラム温度 :

20 °C

検出器 :

210 nmサンプル :

風邪薬

2
3

0

4

5

2
4
Time (min)

LCIE001

ZORBAX イオン交換カラム – SAX および SCX
品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

SAX

300SCX

セミ分取

9.4 x 250

5880952-203

880952-204

アナリティカル

4.6 x 250

5880952-703

分析

4.6 x 250

5アナリティカル

4.6 x 150

5分析

4.6 x 150

5883952-714*

アナリティカル

4.6 x 505846952-704

ソルベントセーバ

3.0 x 505860700-304

ナローボア

2.1 x 150

5883700-704

ナローボア

2.1 x 150

5883700-714*

ナローボア

2.1 x 505860700-704

ガードハードウェアキット

*これらのカラムは、保持力を弱める必要があるアプリケーション向けです。

130

880952-704
880952-714*

883952-703

820999-901

883952-704

820999-901

低分子化合物の分離用カラム

糖分析用 Hi-Plex カラム• 信頼性の高い定量および定性分析のために最先端の機能を提供する、一般的な糖の高精度、低圧分析用の推奨カラム• カラムの動作圧力を下げることで、繰り返し性能と長いカラム寿命を実現• 幅広い配位子対イオンおよびカラム構成により分析が困難な有機酸アプリケーションの要件に対応• アイソクラティック分離機能による簡略化された HPLC システム要件に対応。優れたバッチ間再現性により、きわめて信頼性の高い結果を提供• 水または希釈酸を溶離液として使用可能• 幅広い USP 充填剤タイプ (L17、L19、L34、L58) に対応する 8 µm および 10 µm の粒子サイズを用意

糖、糖アルコール、有機酸を検出するための最もシンプルな LC メソッドには、単純な移動相を使用するリガンド交換カラムが必要です。ただし、従来の樹脂は粒子サイズの分布が広いため、高い背圧と生産性の低下が見られることがあります。

Hi-Plex カラムは単分散スルホン化粒子を使用して製造されているため、糖、アルコール、有機酸の分析用の厳しい USP メソッドに特に適しています。アセトニトリル : 水の移動相を使用する糖分析用の ZORBAX NH2 カラムとは異なり、Hi-Plex リガンド交換カラムは単糖類および二糖類に高い分離能を提供します。これは、ヒドロキシル基と、スルホン酸基の陽イオン交換基に関連する金属イオ
ンとの相互作用によるものです。

カラム仕様
製品名

温度範囲

流速 (mL/min)

Hi-Plex Ca

80 ～ 90 °C

0.6

移動相
水

Hi-Plex Ca USP L19

80 ～ 90 °C

0.3

水Hi-Plex Pb

70 ～ 90 °C

0.6

水Hi-Plex H (糖分析)60 ～ 70 °C

0.6

水Hi-Plex H (有機酸分析)

40 ～ 60 °C

0.6

希釈した酸性水溶液

Hi-Plex Ca (Duo)80 ～ 90 °C

0.6

水Hi-Plex K

80 ～ 90 °C

0.6

水Hi-Plex Na (Octo)

80 ～ 90 °C

0.6

水、水酸化ナトリウム水溶液

Hi-Plex Na

80 ～ 90 °C

0.3

水

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp131低分子化合物の分離用カラム

Hi-Plex カラムの選び方
米国薬局方 (USP) では、分析において使用する HPLC の充填剤とカラムサイズを指定しています。アジレントの Hi-Plex カラムは、USP の定義に準拠しています。

L17 - Hi-Plex
水素イオンを対イオンとした硫酸基を結合させた粒子径 8 µm のスチレンジビニルベンゼン共重合体。

L19 - Hi-Plex Ca、Hi-Plex Ca (Duo)カルシウムイオンを対イオンとした硫酸基を結合させた粒子径 8 µm のスチレンジビニルベンゼン
共重合体。

L34 - Hi-Plex Pb
鉛イオンを対イオンとした硫酸基を結合させた粒子径 8 µm のスチレンジビニルベンゼン共重合体。

L58 - Hi-Plex Na、Hi-Plex Na (Octo)
ナトリウムイオンを対イオンとした硫酸基を結合させた粒子径 8 ～ 10 µm のスチレンジビニルベ
ンゼン共重合体。
標準のカラムサイズに加えて、USP メソッドで指定されている特別なカラムサイズに対しても同じ充填剤が充填されています。
一部のアプリケーションでは複数のカラムを選択することができますが、試料の性質と分離する化合物によって、最適な Hi-Plex カラムは異なります。

132

低分子化合物の分離用カラム

Hi-Plex カラムの選び方
分析対象

Hi-Plex カラム

L17 充填剤で指定された USP メソッド

Hi-Plex H

L19 充填剤で指定された USP メソッド

Hi-Plex Ca、Hi-Plex Ca (Duo)L34 充填剤で指定された USP メソッド

Hi-Plex Pb

L58 充填剤で指定された USP メソッド

Hi-Plex Na、Hi-Plex Na (Octo)

単糖類、二糖類

Hi-Plex Ca
Hi-Plex Pb
Hi-Plex H
Hi-Plex Na (Octo)

アノマー分離Hi-Plex Ca

有機酸

Hi-Plex H

アルコール

Hi-Plex Ca
Hi-Plex K
Hi-Plex H
Hi-Plex Pb

食品および飲料の粗悪品

Hi-Plex Ca、Hi-Plex Pb

食品添加物

Hi-Plex Ca、Hi-Plex Pb

乳製品

Hi-Plex Ca、Hi-Plex H

加糖乳製品

Hi-Plex Pb

砂糖菓子

Hi-Plex Ca、Hi-Plex Pb

フルーツジュース

Hi-Plex Ca

ワイン

Hi-Plex H

パルプ加水分解物 (セルロース/ヘミセルロース)

Hi-Plex Pb

発酵

Hi-Plex H

オリゴ糖

Hi-Plex Na

高塩分食品 (糖液など)

Hi-Plex Na (Octo)

五糖以下のオリゴ糖および単糖

Hi-Plex Ca (Duo)

コーンシロップ

Hi-Plex Na

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp133低分子化合物の分離用カラム

果汁の分析
カラム :

1

Hi-Plex Ca
PL1170-6810
7.7 x 300 mm、8 µm

移動相 :

水

流量 :

0.6 mL/min

カラム温度 :

85 °C

検出器 :

RI

オレンジジュース

2

0

3

20

min

2

トマトジュース

1. スクロース
2. グルコース
3. フルクトース
4. ソルビトール

3

1

0

20

min
3

リンゴジュース

1

2

4

0

25

min

VLC0009

有機酸分析
カラム :

Hi-Plex H
PL1170-6830
7.7 x 300 mm、8 µm

移動相 :

酸性水

流量 :

0.6 mL/min

カラム温度 :

60 °C

検出器 :

ELS (neb = 80 °C、evap = 90 °C、
gas = 0.7 SLM)、RI

0.1 % TFA、ELS を使用

05 mM H2SO4、RI を使用 10

1. シュウ酸
2. クエン酸
3. 酒石酸4. コハク酸
5. 酪酸

2 3
1

4

5

15

min

2 3
4

min

5

15
VLC0010134低分子化合物の分離用カラム

糖アルコールの USP メソッド
カラム :Hi-Plex Ca USP L19
PL1570-5810
4.0 x 250 mm、8 µm

移動相 :

水

流量 :

0.3 mL/min

カラム温度 :

60 °C

検出器 :

RI

1. イソエリスリトール
2. アドニトール
3. アラビトール
4. マンニトール
5. キシリトール
6. ガラクチトール
7. ソルビトール

1
2
3

4
5

6
7

0

25

min

VLC0011

コーンシロップ、Hi-Plex
カラム :Hi-Plex Na
PL1171-6140
7.7 x 300 mm、10 µm

移動相 :

水

圧力 :

1.1 MPa流量 :0.3 mL/min

カラム温度 :

80 °C

検出器 :

RI

1. Dp1
2. Dp2
3. Dp3
4. Dp4
5. Dp5
6. Dp6
7. Dp7
8. Dp8
9. Dp9
10. Dp10
11. Dp11
12. Dp12
13. Dp13
14. Dp14

14-10

1
2

3
4
9-5

0

min

30
VLC0012www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

135低分子化合物の分離用カラム

Hi-Plex Ca カラムを用いた甘味料の分析
Hi-Plex Ca
カラム :PL1170-6810
7.7 x 300 mm、8 µm
移動相 :

水

流量 :

0.6 mL/min

カラム温度 :

85 °C

検出器 :

ELSD

Hi-Plex Ca カラムは、グルコースやフルクトース (単糖類)、スクロース(二糖類)、マンニトールおよびソルビトール (糖アルコール) などの甘1. スタキオース
2. ラフィノース
3. スクロース
4. グルコース
5. ガラクトース
6. フルクトース
7. マンニトール
8. ソルビトール

3

12

0

7

5

4

8

6

23

min

味料分析に適しています。

Hi-Plex H カラムを用いた糖の分析
Hi-Plex H
カラム :PL1170-6830
7.7 x 300 mm、8 µm
移動相 :

水

流量 :

0.6 mL/min

カラム温度 :

70 °C

検出器 :

RI

1. マルトトリオース
2. 乳糖
3. グルコース
4. フルクトース

1234

高濃度の有機酸が含まれるサンプルの糖分析では、Hi-Plex H カラムがシャープで再現性の高いピークを提供します。ただし、一部の糖 (ラフィノースなど) は、水を溶離液として使用した場合にも酸加水分解が生じることがあります。

136

0

min

15

低分子化合物の分離用カラム

ナトリウム濃度が高いマトリックスに含まれる糖の分析
カラム :

1

Hi-Plex Na (Octo)
PL1170-6840
7.7 x 300 mm、8 µm

移動相 :0.015 M NaOH

流量 :0.6 mL/min

カラム温度 :

85 °C

検出器 :

RI

1. スクロース
2. グルコース
3. アラビノース

32

高濃度のナトリウムイオンが含まれる食品の中の糖分析には、Hi-Plex

Na (Octo) カラムが最適です。水酸化ナトリウムを PAD の溶離液として使用すると、水酸化ナトリウムをポストカラム添加する必要がないた

0

23

min

め、時間の短縮になります。

ソルビトールの USP メソッド
カラム :

移動相 :

Hi-Plex Pb USP L34
PL1170-2820
7.7 x 100 mm、8 µm

11. マンニトール
2. ソルビトール

水

流量 :0.7 mL/min

カラム温度 :

50 °C

検出器 :

RI

2

マンニトールを内部標準として使用した、ソルビトール (糖アルコールおよび代替甘味料) の USP メ
ソッド。Hi-Plex Pb カラムは、グリセロールも含まれるアルコール飲料の他、加糖乳製品の分析にも

0

min

23

お勧めします。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp137低分子化合物の分離用カラム

糖分析用 Hi-Plex カラム
品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

架橋化率 (%)

対イオン

部品番号

Hi-Plex Ca USP L19

4.0 x 250

8

8

Ca2+

PL1570-5810
PL1F70-6850

Hi-Plex Ca (Duo)

6.5 x 300

8

8

Ca2+

Hi-Plex Ca

7.7 x 300

8

8

Ca2+

PL1170-6810
PL1170-2820

Hi-Plex Pb USP L34

7.7 x 100

8

8

Pb2+

Hi-Plex Pb

7.7 x 300

8

8

Pb2+

PL1170-6820
PL1170-6860

Hi-Plex K

7.7 x 300

8

8

K+

Hi-Plex H

6.5 x 300

8

8

H+

PL1F70-6830
PL1170-6830

Hi-Plex H

7.7 x 300

8

8

H+

Hi-Plex H USP L17

7.7 x 100

8

8

H+

PL1170-2823

Hi-Plex Na

7.7 x 300

10

4

Na+

PL1171-6140
PL1170-6840

Hi-Plex Na (Octo)

7.7 x 300

8

8

Na+

Hi-Plex ガードカラム
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

架橋化率 (%)

対イオン

部品番号

Hi-Plex Ca

7.7 x 50

8

8

Ca2+

PL1170-1810

Hi-Plex Ca (Duo)7.7 x 50

8

8

Ca2+

PL1170-1850
PL1170-1820

品名

Hi-Plex Pb

7.7 x 50

8

8

Pb2+

Hi-Plex K

7.7 x 50

8

8K+

PL1170-1860
PL1170-1830

Hi-Plex H

7.7 x 5088H+

Hi-Plex Na

7.7 x 50

10

4

Na+

PL1171-1140

Hi-Plex Na (Octo)

7.5 x 50

8

8

Na+

PL1170-1840

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

架橋化率 (%)

対イオン

部品番号

Hi-Plex Ca

3.0 x 5.0

8

8

Ca2+

PL1670-0810
PL1670-0850

Hi-Plex ガードカートリッジ、2 個

Hi-Plex Ca (Duo)

3.0 x 5.0

8

8

Ca2+

Hi-Plex Pb

3.0 x 5.0

8

8

Pb2+

PL1670-0820
PL1670-0860

Hi-Plex K

3.0 x 5.0

8

8

K+

Hi-Plex H

3.0 x 5.0

8

8

H+

PL1670-0830

Hi-Plex Na

3.0 x 5.0

10

4

Na+

PL1671-0140

8

Na+

PL1670-0840

Hi-Plex Na (Octo)

3.0 x 5.0

3.0 x 5.0 mm カートリッジ用ガードカートリッジホルダ

138

8

PL1310-0016

生体分子の分離用カラム

生体分子の分離用カラム
サンプルの精製から分析まで、再現性と品質の高いソリューションを実現するために、アジレント
ではさまざまなバイオ分子カラムと消耗品を提供しています。
カタログのこの項では、カラムの選択やメソッドの開発に役立つ、溶媒の選択、移動相の変更、最適化、および分離例に関するアドバイスやヒントも紹介します。
アジレントは、お客様のニーズを満たす完全なソリューションを用意しています。金属を使用しないサンプル経路を持つ Agilent 1260 Infinity バイオイナート LC システム、UHPLC アプリケーション向
けに最高の速度、分解能、および超高感度を提供するように設計された Agilent 1290 Infinity LC、ワイドポア 300Å ZORBAX StableBond カラムなど、さまざまな製品、消耗品をアジレントは提供しています。複雑な生体分子の分析も、アジレントの HPLC カラム、システム、消耗品を使用することで容易に行うことができます。

生体分子とは
生体分子は生物によって作られる化合物です。その範囲は、アミノ酸や低分子量の脂質から、DNA や

RNA などの高分子量のポリヌクレオチドまでに及びます。
この項では次の分離について説明します。
タンパク質 – サイズ排除クロマトグラフィーを使用したサイズに基づく分離、イオン交換クロマト
グラフィーを使用した電荷に基づく分離、逆相クロマトグラフィーを使用した疎水性に基づく分離。
ペプチド – 疎水性、親水性、塩基性、および酸性ペプチドなど、すべてのサイズのすべてのペプチドの分析および精製用バイオカラム。また、HPLC および UHPLC によるペプチドマッピング用カラム。

DNA/RNA オリゴヌクレオチド – DNA および RNA オリゴの逆相およびイオン交換オプション。低分
子量の合成オリゴから高分子量のプラスミドまで、あらゆるサイズのオリゴヌクレオチドに対応する粒子ポアサイズを備えています。
アミノ酸 – ZORBAX Eclipse アミノ酸分析 HPLC カラムは、24 種類のアミノ酸の高速分析を行う際に高い効率を発揮します。一般的な分析時間は、75 mm カラムで 14 分、150 mm カラムで 24 分です。
広分散ポリマー – 分子量の分布と組成を確認するためにポリマー系カラムと標準を使用した脂質、多糖、薬物送達化合物の分析。狭い MW 分布や定義済みの分子量を持つほかの生体分子とは異なり、これらの化合物は幅広い MW 分布を示す傾向があります。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

139

生体分子の分離用カラム

バイオカラムとは
バイオクロマトグラフィーカラム、つまりバイオカラムは、ペプチドおよびタンパク質、オリゴヌ
クレオチドおよびポリヌクレオチド、またその他の生体分子や複合体の分離に使用する液体クロマ
トグラフィーカラムです。バイオカラムは、大きい分子サイズに対応する大きいポアサイズを持つ、生体分子の分析専用に設計されたカラムです。充填剤は、対象化合物の非特異的な結合を最小限に抑えて回収率を向上させるように設計されています。分離メカニズムは、生体機能を維持して分析
中に生体活性が失われないようにするために、または一次構造の特性解析で意図的に変性させるために選択されます。
一般に、HPLC は生体分子の分離に使用されてきました。現在は、生体分子の特性解析で複数の分離メカニズムが必要となるため、UHPLC などの高度な技術が一般に選択されるようになりました。アジレントは、サイズ排除、逆相、イオン交換、アフィニティ機能を使用した生体分子の分離に対応
するよう開発された、専用の高度なケミストリを提供しています。

140

生体分子の分離用カラム

タンパク質の分離タンパク質は、完全に特性解析するために複数の技術を必要とする複雑な分子です。三次元構造として存在し、この構造によって生体活性が決まります。
アミノ酸鎖の配列がタンパク質の一次構造を定義します。次に、一次構造のアミノ酸間の水素結合によって、通常はアルファへリックスとプリー
ツシートの形式の二次構造が決まります。さらに、二次構造の領域間で生じる一連の相互作用、水素結合、イオン、疎水性およびジスルフィド
架橋によって、タンパク質の三次構造、つまり三次元構造が決まります。タンパク質がいくつかのアミノ酸鎖で構成される場合、これらの鎖間の相互作用によって四次構造が決まります。
タンパク質の特性解析のメソッドを探している場合は、図 1 から明確にわかるように、三次および四次構造を破壊せずにタンパク質をネイ
ティブの状態で特性解析する技術が必要になります。また、三次構造を破壊した完全な変性状態で一次アミノ酸配列を評価するための技術も必要です。

タンパク質の一次構造
アミノ酸配列
アミノ酸

プリーツ

アルファ

シート

へリックス

水素結合

プリーツシート

水素結合
イオン相互作用
疎水性相互作用ジスルフィド架橋

タンパク質の二次構造
アミノ酸配列が水素結合により結合されている場合に発生

タンパク質の三次構造
アルファへリックスとプリーツシートの間に特定の引力が存在するときに発生

アルファ
へリックス
タンパク質の四次構造
複数のアミノ酸鎖で構成されるタンパク質

図 1. タンパク質のさまざまなレベルの構造を示す図

タンパク質の環境は、タンパク質の構造に影響を与え、安定化させたり、破壊したります。考慮が必要な要素として、pH、温度、塩濃度、水系
または有機溶媒の成分、また一部のタンパク質では、安定化低分子または金属イオンの存在などがあります。タンパク質の構造は、-S-S- 結合を切断するスルフヒドリル還元試薬、または尿素や塩酸グアニジンなどのカオトロピック試薬の使用によって破壊されることもあります。タンパ
ク質は複雑で、三次元構造を決定する分子相互作用があるため、タンパク質分子と、その他の分子または接触する表面との間に分子間相互作用が発生することもあります。この結果、HPLC カラムやシステムの表面など、表面でタンパク質複合体、凝集 (沈殿することもある)、分解が発生することがあります。したがって、タンパク質の処理方法や保存環境を考慮する必要があります。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp141

生体分子の分離用カラム

タンパク質カラム選択ガイド
アプリケーション 技術

アジレントのカラム

注記

一次構造の分析UHPLC/HPLC 逆相に

ZORBAX 300SB
Poroshell 300SB
PLRP-S

逆相を使用した分離には、アミノ酸配列やアミノ酸修飾 (翻訳後修飾を含む) の詳細な情報を得るためにタンパク質の変性が必要です (または分離により変性させる必要がある)。

凝集の分析

サイズ排除による
分離

Bio SEC-3
Bio SEC-5
ProSEC 300S
ZORBAX GF

タンパク質バイオ医薬品の凝集は、免疫原性反応を誘発したり、最終製剤の組成に影響を与えたりすることがあるため、大きな問題です。

電荷変異体の分析

イオン交換による
分離

Agilent Bio IEXAgilent Bio MAb
PL-SAX
PL-SCX

個々のアミノ酸の比率によってタンパク質分子の有効電荷が決まります。有効電荷がゼロになる pH は等電点 (pI) と呼ばれます。溶液の pH が pI よりも低い場合は、そのタンパク質
は正に帯電し (酸性)、溶液の pH が pI よりも高い場合は、負に帯電します (塩基性)。イオン交換分析では、溶離液の pH をその pI から 1 pH 単位以上離すことを推奨します。イオン交
換カラムを使用したタンパク質分析には、緩衝液を使用した移動相と、溶出のための塩グ
ラジエントまたは pH グラジエントが必要です。

よる分離

酸化物の高分解能分析

A : 0.1 % TFA
B : 0.01 % TFA + 80 % ACN

流量 :1.0 mL/min

グラジエント :33 ～ 50 % B、0 ～ 4 分

検出器 :ダイオードアレイ検出器を備えた

1290 Infinity LC (280 nm)
サンプル :

インスリン、インスリン鎖 A および
鎖 B、酸化型 (bovinesigma、

1 mg/mL)17.5
15

酸化型インスリン鎖 B

12.5

インスリン

10
7.5
5

酸化型インスリン鎖 A

1.648

移動相 :

mAU
1.384

ZORBAX RRHD 300SB-C18
857750-902
2.1 x 50 mm、1.8 µm

0.148

カラム :

酸化型インスリン鎖 B の副成分

2.5
0
min

ZORBAX RRHD 300SB-C18 2.1 x 50 mm、1.8 µm column により、酸化型インスリン鎖は 2 分以下で分離できました。

142

生体分子の分離用カラム

MAb 単量体と二量体の分離
カラム :

移動相 :

Bio SEC-3、300 Å
5190-2511
7.8 x 300 mm、3 µm

mAU
300

単量体

150 mM リン酸緩衝液、pH 7.0

アイソクラティック : 0 - 100 % Buffer A、0 - 30 分
流量 :1.0 mL/min

サンプル :

CHO-ヒト化 MAb、5 mg/mL - インタクト

注入 :

5 µL

検出器 :

UV、220 nm

カラム温度 :

室温

250
二量体

200

150

100

50

0
4

6

8

10

12

14 minVLC_MD_Mab

pH グラジエントによるヒト IgG1 の電荷変異体の分離
Agilent Bio MAb
カラム :5190-2411
2.1 x 250 mm、5 µm
移動相 :A : 10 mM Na2HPO4、pH 6.0
B : A + 0.5 M NaCl または 0.5 M Na2HPO4、pH 6.0 のみ

流量 :2 mL/minグラジエント :移動相 A で 0.5 分間保持、次に 15 分間で 45 %B までのリニアグラジエント (経過時間 15.5
分)。次に 15.6 分で 60 % B。20 分まで継続。
100 % B でカラムを 15 分間フラッシュした後、次の分析のために再平衡化。pH グラジエント :A : 5 mM Na2HPO4、緩衝液 (pH 5.5) および B :40 mM NA2HPO4 (緩衝液なし、pH 8.9)。15 分間で 1 mL/min で 2 % B/min、次に 90 % B で
5 分間カラム洗浄。

カルボキシペプチダーゼ B による消化後

mAU
50

検出器 :

UV、220 nm

サンプル :

移動相 A にそれぞれ 1 mg/mL
モノクローナル抗体 (MAb) - CHO 細胞由来のヒト IgG1 (5 mg/mL の原液)

装置 :カルボキシペプチダーゼ B による消化前ダイオードアレイ検出器を備えた Agilent 1200

40

30

20

10

0
10

10.5

11

11.5

12

12.5

13

13.5

14

14.5 minSL HPLC システム

MAb の C 末端の切断 : 25 mM Na2HPO4 緩衝液 (pH 7.5) に溶解したヒト IgG1 MAb (1 mg/mL) を約 25 ユニットのカルボキシペプチダーゼ
B と 18 時間インキュベートし、10 µL のサンプルを注入しました。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp143生体分子の分離用カラム

ペプチドの分離
ペプチドマッピング
ペプチドマッピングはタンパク質の特性解析に必要です。タンパク質の同定や、翻訳後修飾の同定と定量に使用されます。
精製済みのタンパク質は、最初にトリプシンなどの酵素を使用して消化し、幅広いペプチド断片を生成します。酵素による切断の特異性によって、そのタンパク質に特徴的なペプチドのフィンガー
プリントが得られます。ペプチド断片の同定によってタンパク質を確認し、ペプチド消化物のプロ
ファイルの変更を使用することで、製造または精製プロセスで生じた可能性がある、そのタンパク質に対する翻訳後修飾を識別することができます。
逆相 UHPLC/HPLC は、
MS または UV 検出によるペプチド消化物の分析用に好まれる技術です。LC/MS
が、ペプチド断片の同定と配列の範囲の確認に使用されるのに対し、LC/UV は、一般にモニタリング/QC 分野でのペプチドマップの比較に使用されます。定量および同定のための十分な分解能を得る
ためには、長いカラム長または高い効率の粒子 (2 µm 未満の ZORBAX RRHD など) や表面多孔性のPoroshell を推奨します。
ペプチド消化物は複雑な混合物であり、個々のペプチドを分離するには、高効率/高分解能の分離カラムが必要です。ペプチド断片はサイズや疎水性が幅広いため、アジレントはペプチドマッピングのために複数のカラムを提供しています。UHPLC による分離には、ポアサイズ、粒子径、表面多孔質および全多孔質の 3 つのオプションがあります。

ヒントとテクニック
キャピラリー電気泳動は、複雑なペプチド混合物の分離に適した、液体クロマトグラフィーに代わる技術です。詳細については、次のケー
ススタディをご覧ください。

An orthogonal view of peptide mapping – analysis of bovine serum albumin digest using capillary electrophoresis and quadrupole time-of-flight mass
spectrometry (資料番号 5990-7631EN)
www.agilent.com/chem/library144

生体分子の分離用カラム

ペプチドマッピングカラムの選択
推奨するカラムの選択は、システム/カラム圧の最大値とペプチドのサイズ/疎水性によって決まります。

アプリケーションシステム

アジレントのカラム

アジレントのシステム

高分子ペプチド断片/疎水性
ペプチドコア40 MPa HPLC

Poroshell 300 SB-C18
ZORBAX 300SB-C18、3.5 µm

Agilent 1200 Infinity LC

60 MPa UHPLCPoroshell 300 SB-C18

Agilent 1260 Infinity LC および 1260 Infinity バイオイナートクォータナリ LC

120 MPa UHPLCZORBAX RRHD 300SB-C18、1.8 µm
Poroshell 300 SB-C18

Agilent 1290 Infinity LC

40 MPa HPLC

Poroshell 120 EC-C18
Poroshell 120 SB-C18

Agilent 1200 Infinity LC

60 MPa UHPLCPoroshell 120 EC-C18
Poroshell 120 SB-C18

Agilent 1260 Infinity LC および 1260 Infinity バイオイナートクォータナリ LC

120 MPa UHPLCPoroshell 120 EC-C18
Poroshell 120 SB-C18

Agilent 1290 Infinity LC

低分子量の疎水性ペプチド

Agilent 1290 Infinity LC をお使いの場合は、最初に ZORBAX RRHD 300SB-C18 カラムを使用して、ペプチドマップをスクリーニングすることを推奨します。

ペプチドマッピングの分解能の向上
カラム :ZORBAX 300SB-C18
858750-902
2.1 x 100 mm、1.8 µm

Norm
350

300

移動相 :

A : 0.1 % TFA
B : 0.01 % TFA + 80 % ACN

流量 :0.5 mL/min

グラジエント :2 % B で 1 分間、8.8 分間で 2 ～ 45 %、100
0.2 分間で 45 ～ 95 % B、95 % B で 2 分間、
50
0.2 分間で 95 ～ 2 %カラム温度 :

50 °C

検出器 :

ダイオードアレイ検出器を備えた

250

200

150

0

-50

1290 Infinity LC (280 nm)
1

サンプル :

2

3

4

5

6

7

8

9

min

酵素によるタンパク質消化物 (MAb)

長い 100 mm の Agilent ZORBAX RRHD 300SB-C18 カラムがタンパク質分解物に最大の分解能を提供します。このサンプルでは、洗浄と平衡化を含む分析時間の合計は 15 分未満です。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

145

生体分子の分離用カラム

天然および合成ペプチドの分離
天然および合成ペプチドの単離や分析には精製カラムと充填剤が必要です。単離または精製されたペプチドの純度または回収率を測定するには、高効率カラムを使用する必要があります。単離および精製に使用する主な技術は逆相 HPLC です。
精製または単離ワークフローで得られた分画やペプチドの最終生成物は、高効率カラムを使用して純度分析を行います。ペプチドはサイズ、電荷、疎水性などがさまざまに異なるため、ペプチドマッ
ピングアプリケーションと同様に、アジレントではすべてのペプチドの最適な分離を提供できる幅
広いカラムを提供しています。一般に 10 個未満のアミノ酸残基を持つ低分子量のペプチドでは、ポアサイズの小さい UHPLC 充填剤を使用しますが、ペプチドが大きく、含まれるアミノ酸残基が多い
か、または二量体や多量体の形で存在する場合は、質量移動が大きいため、ポアサイズの大きい300 Å のカラムが優れた分離を実現します。

天然および合成ペプチドのカラムの選択
推奨するカラムの選択は、天然および合成ペプチドの分析に使用するシステム/カラム圧の最大値によって決まります。

アプリケーションシステム

アジレントのカラム

アジレントのシステム

10 を超えるアミノ酸

40 MPa HPLC

Poroshell 300 SB-C18
ZORBAX 300SB-C18、3.5 µm
PLRP-S

Agilent 1200 Infinity LC

60 MPaPoroshell 300 SB-C18

Agilent 1260 Infinity LC および 1260 Infinity バイオイナートクォータナリ LC

120 MPaZORBAX RRHD 300SB-C18、1.8 µm

Agilent 1290 Infinity LC

40 MPaPoroshell 120 EC-C18
Poroshell 120 SB-C18
PLRP-S

Agilent 1200 Infinity LC

60 MPaPoroshell 120 EC-C18
Poroshell 120 SB-C18

Agilent 1260 Infinity LC および 1260 Infinity バイオイナートクォータナリ LC

残基を持つ大きいペプチド

一般に 10 個未満のアミノ酸残基を持つ
ペプチド

逆相カラムはペプチド精製の第一の選択肢です。精製量により、選択するカラムも変わります。表 1にそれぞれの精製量に応じたアジレントのカラムを示します。

146

生体分子の分離用カラム

表 1. 精製量に応じたアジレントのカラム
必要なペプチドの量
アジレントのカラム

mg

g

kg

ZORBAX Prep HT 300StableBond
VariTide RPC
PLRP-S

ポリスチレン樹脂を使用した固相合成 (SPS) の後、ペプチドは担体から切断され、ここで生じた混合物を分離して対象ペプチドを取得します。候補のペプチドを構造が非常に類似したペプチドから分離する必要があるため、精製には高効率カラムが必要です。詳細については、
www.agilent.com/chem/jp をご覧ください。

ロイプロリドの分取スケールの精製
カラム :PLRP-S 100 Å、10 µm
PL1412-4100

充填剤バルク :Load & Lock 4001 カラム
PCG93LL500X25

移動相 :0.1 % TFA、28 % ACN : 72 %水溶液を使用したアイソクラ
ティック分離流量 :線速度 360 cm/hr

0

時間 (分)

40

オンカラムロード 30 mg のときの未精製ロイプロリドの分離% 純度 (前の純度 1)% 純度 (ロイプロリド)% 純度 (後の純度)

分画分析 – 濃度過負荷条件での精製

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

147

生体分子の分離用カラム

DNA および RNA オリゴヌクレオチドの分離
多くのアプリケーションで使用されるため、オリゴヌクレオチド (オリゴ) が再び注目を集めています。合成ワークフローは確立された合成ペプチド生成物に使用するものと類似しています。つまり、活性化された固相合成樹脂を、特定のヌクレオチドの段階的な添加とあわせて使用し、希望の配列を作成します。
ヌクレオチドの構成ブロックは 5’ヒドロキシル末端でジメトキシトリチル (DMT) 基によって保護されており、切断された対象オリゴにはこの保護基が結合しています。DMT は疎水性を持ち、最初の段階で使用することができます。特に酵素分解に対するオリゴヌクレオチドの安定性を向上させる場合には、酸素を硫黄に置換してホスホロチオエートを生成するなど、化学的に修飾することができます。
化学合成を使用して生体分子を生成する場合は、追加する各サイクルの結合効率は決して 100 % になりません。固相合成の担体から切断された後、サンプルにはデリーション配列、1 つまたは複数の残基が欠けたオリゴ、および二重カップリングまたはブランチングによって生じた一定量の高分子
オリゴが含まれます。サンプル混合物は複雑で、分析には高効率の技術が必要です。
オリゴヌクレオチドの分離には、次の 3 つの UHPLC/HPLC 技術が通常使用されています。
トリチルオン : この手順は実行が比較的容易で、対象オリゴを、DMT 基が結合したままの完全な長さで脱保護不完全配列から分離します。得られる分析情報には制限があるため、これは一般に精製メソッドと見なされます。
トリチルオフ、脱保護オリゴのイオン交換分離 : このメソッドでは、オリゴバックボーンの負の電荷を使用して分離を促進します。短いオリゴでは良好な分解能が得られますが、鎖が長くなるほど分解能は低下します。水系溶離剤を使用しますが、オリゴは高い電荷を持っており、カラムから溶離するためには高濃度の塩が必要です。
トリチルオフ、脱保護オリゴのイオン対逆相分離 : この技術は有機溶媒と揮発性イオン対試薬を使用するもので、LC/MS に適しています。この技術は高効率粒子で最適に実行できます。オリゴを完全に変性させ、相補的配列との結合を防止する条件が必要です。したがって、分離は高温で最適に実行できます。

148

生体分子の分離用カラム

DNA および RNA オリゴヌクレオチドのカラムの選択
アプリケーション

技術

アジレントのカラム

注記

トリチルオン/
トリチルオフオリゴヌ
クレオチド

トリチルオン

PLRP-S 50 µm 充填剤

疎水性の違いにより分離します。トリチルオフオリゴからトリチルオンオリゴの分離に理想的で、脱保護オリゴのイオン対逆相分離に使用されています。

脱保護オリゴヌクレオ
チド

トリチルオフ、脱保護オリ
ゴのイオン対逆相分離

PLRP-S 3 ～ 50 µm

脱保護オリゴヌクレオ
チド

トリチルオフ、脱保護オリ
ゴのイオン交換分離

PL-SAX 1000Å

変性を発生させる高 pH 条件下で脱保護オリゴを分離します。ポリマー粒子上の第 4級アミンの機能によって高 pH でのイオン交換分離が可能になり、自己相補的配列のクロマトグラフィーが向上します。

ヒントとテクニック
詳細については、次の資料をご覧ください。
Agilent PLRP-S 100Å HPLC Columns and Media (資料番号 # 5990-8187EN)
Agilent PL-SAX 1000Å HPLC Columns and Media (資料番号 5990-8200EN)

www.agilent.com/chem/library

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp149

生体分子の分離用カラム

アミノ酸の分析
アジレントでは、更新されたプロトコルを使用し、アミノ酸を使用して特別にテストされた Agilent
ZORBAX Eclipse AAA カラムなど、アミノ酸の分離に適したカラムを提供しています。ZORBAX Eclipse
AAA 高効率カラムは、更新および改良されたプロトコルに従ってアミノ酸を迅速に分離します。注
入から次の注入までの全分析時間は、7.5 cm のショートカラムでわずか 14 分 (分析時間は 9 分)、15
cm のカラムで 24 分 (分析時間は 18 分) です。Agilent 1200 Infinity LC を使用した 1 回の自動分析で、OPA と FMOC の誘導体化特性の両方を用いて、非常に優れた感度 (ダイオードアレイまたは蛍光検出器 で 5 ～ 50 pmol) と信頼性を達成します。新しい ZORBAX Eclipse Plus C18 カラムは、アミノ酸分離に適切な選択肢です。

ZORBAX Eclipse AAA カラム
アプリケーション

直径 × 長さ (mm)

粒子径 (µm)

日常分析

4.6 x 150

5.0

日常分析、高分解能、FLD を使用

4.6 x 150

3.5

ルーチン分析、高スループット

4.6 x 75

3.5

ソルベントセーバ、高感度、高分解能3.0 x 150

3.5

ZORBAX Eclipse Plus C18 カラムの詳細については、44 ページをご覧ください。

H
155.16137.14C6 H 9 N 3 O 2

D133.10115.09C 4 H 7 NO 4

His

Asp

アミノ酸のチャート

HistidineR
174.20156.19C 6 H 14 N 4 O 2

Arg

Aspartic Acid
F
165.19147.18C 9 H 11 NO 2

Arginine
K
146.19128.17C 6 H 14 N 2 O 2

Lys

PhenylalanineL
131.17113.16C 6 H 13 NO 2

LysineI
131.18113.16C 6 H 13 NO 2

Ile

Phe

A
89.09
71.08
C 3 H 7 NO2

Leu

AlanineM
149.21131.20C 5 H 11 NO 2 S

LeucineW
204.23186.21
C 11 H 12 N 2 O 2

Trp

Ala

C
121.16103.14C 3 H 7 NO 2 S

Met

Pro

Gly

CysteineN
132.12114.10C4H 8 N 2O3

MethionineP
115.1397.12
C 5 H 9 NO 2

Cys

G
75.07
57.05
C 2 H 5 NO 2

Asn

GlycineS
105.0987.08
C 3 H 7 NO 3

Ser

Asparagine
V
117.1599.13
C 5 H 11 NO 2

Val

Q
146.15128.13C 5 H 10 N 2 O 3

GlutamineY
181.19163.17C 9 H 11 NO 3

Serine塩基性
非極性 (疎水性)
極性、電荷なし

Isoleucine

Tryptophan

ProlineValine

酸性Gln

E
147.13129.11C 5 H 9 NO 4

Tyr

Glu

Glutamic Acid
T
119.12101.10C 4 H 9 NO 3

Tyrosine

Thr

Threonine

1 文字のアミノ酸コード
分子量S
105.0987.08
C 3 H 7 NO 3

Ser

MW-H2O

化学的構造

分子式
Serine150

3 文字のアミノ酸コード

化学名

生体分子の分離用カラム

さまざまな生体分子
糖、脂質、PEG
ポリマー系充填剤が充填されたカラムを使用した水系サイズ排除クロマトグラフィーは、生体分子や、幅広い分子量分布を持つその誘導体の確認にきわめて有効です。バイオ医薬品アプリケーショ
ンで使用される PEG 化されたタンパク質や複雑な多糖はその一例です。シリカ系充填剤に比べてポアサイズ分布の広いポリマー系 SEC カラムは、大きい多分散性を持つサンプルに適しています。

生体分子カラムの種類
低分子量ポリマーおよびオリゴマー、オリゴ糖、PEG、リグニンスルホン酸

2 または 3 PL aquagel-OH カラム
ü PL aquagel-OH 8 µm
ü PL aquagel-OH 20 5 µm
ü PL aquagel-OH MIXED-M 8 µm

多分散バイオポリマー、
多糖、セルロース誘導体

PL aquagel-OH 分析シリーズは、
2 ～ 10 の pH 範囲、有機溶媒との互換性 (最大 50 % のメタノール)、
最大 14 MPa (140 bar、2030 psi) の機械的安定性を持ち、カラム動作
圧は低めです。

2 または 3 PL aquagel-OH カラム
ü PL aquagel-OH MIXED-H 8 µm
ü PL aquagel-OH 60/50/40 8 µm

超高分子量ポリマー、
ヒアルロン酸、デンプン、ゴム

PL aquagel-OH 60/50/40 15 µm シリーズ

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp151

生体分子の分離用カラム

UHPLC/HPLC 技術
高速液体クロマトグラフィー (HPLC) は、化合物の混合物を分離できるクロマトグラフィー技術で、混合物の個々の成分を同定し、定量し、精製するために生物化学および分析化学で使用されています。これが超高速液体クロマトグラフィー (UHPLC) として進化し、小さいものから中程度の大きさを持つ分子まで高効率分離に広く採用されるようになり、分析時間の短縮と分解能の向上に使用されてきました。60 ～ 120 MPa の圧力に耐えるワイドポアクロマトグラフィー充填剤をカラムに使用することにより、UHPLC の使用は分子量の大きい生体分子にも拡張されました。
以降のページで、タンパク質やその他の生体分子の HPLC および UHPLC による分離用にアジレントが提供している幅広いカラムについて説明します。

生体分子分析向けの UHPLC/HPLC 技術
技術

利点

欠点

逆相

ü 高分解能ü 変性条件

ü 高容量

ü シリカ系カラムの場合、精製・クリーニング時にアルカリが使えないü 比較的容易ü オンカラムでのサンプル濃縮ü UHPLC による分離のための小さい粒子、1.8 µm
ü ポリマー系充填剤による卓越した化学的および熱的安定性
イオン交換ü 生体活性の良好な復元

ü 塩の存在により MS との互換性が制限される

ü 高容量
ü オンカラムでのサンプル濃縮
サイズ排除
アフィニティ

ü 生体活性の良好な復元

ü サンプルの濃縮はされない

ü サンプル回収率が良好な非対話形式の技術

ü 容量の制限ü 高い選択性ü サンプル濃縮はされない

ü 生体活性の良好な復元

ü 容量の制限ü オンカラムでのサンプル濃縮
ü 多くの場合はシングルステップでの単離152

生体分子の分離用カラム

逆相 HPLC
高分解能の分離を高い信頼性で実行
逆相 UHPLC/HPLC は疎水性の違いに基づいて溶質を分離し、最も疎水性の低いピークを最初に溶出します。この高分解能技術では、1 つのアミノ酸またはヌクレオチド残基だけが異なるペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチドを分離することができます。

HPLC は、アセトニトリル、メタノール、エタノール、プロパノールなどの有機溶媒を使用するため、生体分子の三次元構造を破壊する変性技術の 1 つでもあります。この結果、分子の一次構造と配列に関する情報に加えて、配列の変位を特定することもできます。
アジレントは、世界中の技術サポート専門家やアプリケーション化学者により支持される、業界で最も幅広いワイドポア逆相カラムを提供しています。この項では、カラムにおける次の技術革新について説明します。

• ZORBAX 300Å ポアシリカカラムは、タンパク質および生体分子の逆相による分離を業界で初めて実現したカラムで、6 つの相と幅広いサイズが用意されています。高速 UHPLC 分離用に、最大 120 MPa の圧力に耐え、Agilent 1290 Infinity LC などの高圧機器に使用できる粒子サイズ 1.8 µmのオプションを提供しています。

• Agilent Poroshell カラムは、業界初の硬質コア/多孔質シェル粒子を備えています。アジレントのワイドポア Poroshell 300 カラムは高速クロマトグラフィーに理想的で、さまざまな相が用意されています。

• Agilent PLRP-S カラムにはポリマー粒子が含まれ、さまざまなサイズのペプチドやタンパク質、および DNA/高分子複合体の分離に使用することができます。このカラムは基材にシリカを含まず、耐熱温度は最大 200 °C で、pH 1 ～ 14 の条件で使用することができます。幅広いカラムサ
イズ、粒子径 (分析分離で 3 ～ 8 µm)、ポアサイズ (100 ～ 4000 Å) から選択します。分取カラム(10 ～ 50 µm) も、充填済みカラムまたは充填剤バルクとして提供しています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp153

生体分子の分離用カラム

逆相カラムの選択
アプリケーション

Agilent カラム

説明

タンパク質およびポリペプチド

ZORBAX 300Å、1.8 µm

充填プロセスの向上により、Agilent 1290 Infinity LC での使用時に最大で 1200 bar の安定性を達成します。RRHD 1.8 µm カラムは、非常に複雑なサンプルの高速、高分解能での分離を可能にするために、50、100 mm の長さが用意されています。

ü RRHD 300SB-C18
ü RRHD 300SB-C8
ü RRHD 300SB-C3
ü RRHD 300-Diphenyl
ü RRHD 300-HILICZORBAX 300A StableBondü 300SB-C18
ü 300SB-C8
ü 300SB-C3タンパク質とペプチドなどの巨大分子を効率的に分離するには検体が結合相表面に近接する必要があるため、ワイドポア (300 Å) カラムが非常に有効です。C18 および C8 は、
複雑なタンパク質およびタンパク質消化物の分離に理想的です。StableBond は、低 pH で優れた安定性を提供します。

ü 300SB-CN

最大 1,000 kDA のペプチドおよびタンパク質、モノクローナル抗体およびインタクト
タンパク質

ZORBAX 300Å Extend-C18

独自の二座型シランが、最大で pH 11.5 での耐久性を実現しています。

Poroshell 300

Poroshell カラムでは、多孔質シリカ層と硬質シリカコアを組み合わせた独自の粒子構造を使用しています。このためタンパク質の拡散距離が短縮され、ペプチドとタンパク質の高速 HPLC 分離が可能になっています。

ü 300SB-C18
ü 300SB-C8
ü 300SB-C3
ü 300Extend-C18

タンパク質消化物に含まれる低分子ペプチド Poroshell 120

120 Å のポアサイズは、タンパク質消化物中の低分子量親水性ペプチドとペプチド断片

ペプチドから DNA

ポリスチレン・ジビニルベンゼン共重合体の粒子で、粒子そのものに疎水性があります。

PLRP-Sü 100 Å
ü 300 Åü 1000 Å
ü 4000 Å

154

低分子/ペプチド/オリゴヌクレオチド

PLRP-S 100Å

遺伝子組み換えペプチド/タンパク

PLRP-S 300Å

高分子量タンパク質

PLRP-S 1000Å

DNA/高速分離

PLRP-S 4000Å

の高速高分離分析に理想的です。

生体分子の分離用カラム

ZORBAX 300Å StableBond
Agilent ZORBAX 300 Å StableBond カラムは、タンパク質とペプチドを再現性よく分離するための理想的な選択肢です。その主な理由は次の 2 つです。第一に、タンパク質とペプチドなどの巨大分子を効率的に分離するには検体が結合相表面に近接する必要があるため、ワイドポア (300 Å) カラムが非常に有効です。第二に、タンパク質やペプチド分離に使用される低 pH 領域での TFA 含有移動相の使用に対して 300StableBond カラムは卓越した耐久性を示します。低 pH 領域での LC/MS 分離では、300StableBond カラムにギ酸や酢酸の移動相溶媒を使用することも可能です。300StableBond カラムには異なる 4 種類の結合相 (C18、C8、C3、CN) が提供されており、タンパク質やペプチドの選択性と回収率を最適化することができます。300StableBond カラムを高温条件 (最高 80 °C) で使用すれ
ば、分離の困難なタンパク質の回収率と効率をさらに向上させることができます。300SB-C18 および300SB-C8 カラムは複雑なタンパク質やタンパク消化物の分離に理想的なカラムです。キャピラリ(0.3、内径 0.5 mm) およびナノ (0.075、内径 0.1 mm) サイズのカラムは、タンパク質消化物の逆相
LC/MS 分離に最適です。キャピラリおよびナノカラムは、1D または 2D プロテオミクス分離に使用できます。

立体的に保護された 300StableBond 結合相

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

上限温度*

pH 範囲*

エンドキャップ

カーボンロード

ZORBAX 300SB-C18

300 Å

45 m2/g

90 °C

1.0-8.0なし

2.8 %ZORBAX 300SB-C8300 Å

45 m2/g

80 °C

1.0-8.0なし

1.5 %ZORBAX 300SB-C3

300 Å

45 m /g

80 °C

1.0-8.0なし

1.1 %ZORBAX 300SB-CN

300 Å

45 m2/g

80 °C

1.0-8.0

なし

1.2 %

2

仕様は代表的な値のみを表しています。

*300StableBond カラムは低 pH で最高の性能を発揮するように設計されています。シリカを基材とするカラムを pH 6 ～ 8 の範囲で最高の安定性を確保しながら使用するには、40 °C 以下の使用温度、0.01 ～ 0.02 M の範囲の低濃度緩衝液を使用します。中性または高 pH では、300Extend-C18 の使用をお勧めします。

ヒントとテクニック
詳細については、次の資料を参照してください。

HPLC と LC/MS を用いた抗体分離の選択性最適化のための ZORBAX StableBond 300 Å LC カラムの比較 (資料番号 5989-6840JAJP)
www.agilent.com/chem/jp

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp155

生体分子の分離用カラム

インタクトモノクローナル抗体の高い分解能

移動相 :グラジエント A

0.5 mL/min
最適化された分離

mAU
250
200

A : H20 : IPA (98 : 2) + 0.1 % TFA (v/v)
B : IPA : ACN : H20 (70 : 20 : 10) + 0.1 %TFA (v/v)

流量 :0.5 mL/min と 1.0 mL/min の間

グラジエント :複数のセグメント、直線的な溶出

150
ショルダ

100

分離されている5000

カラム温度 :

80 °C

mAU

検出器 :

オートインジェクタ (ALS)、バイナリポン
プ、サーモスタットオーブン、ダイオード
アレイ検出器 (DAD) を備えた Agilent 1290
Infinity LC、UV、225 nm

350

2

4

6

8

10

min

グラジエント B

mAU
100

1.0 mL/min

80

高速の分析時間

250

60

感度の向上

150

40
20
0

50
0
0

2

4

1.2

1.4

1.6

1.8

2.0

2.2

6

8

1.384

カラム :

ZORBAX RRHD 300SB-C8857750-906
2.1 x 50 mm、1.8 µm

インスリン

2.4

2.6

10

2.8 minmin

ZORBAX RRHD 300SB-C18
857750-902
2.1 x 50 mm、1.8 µm

mAU

移動相 :

A : 0.1 % TFA
B : 0.01 % TFA + 80 % ACN

15

流量 :

1.0 mL/min

グラジエント :33 ～ 50 % B、0 ～ 4 分

検出器 :ダイオードアレイ検出器を備えた 1290

Infinity LC (280 nm)
サンプル :

インスリン、インスリン鎖 A および鎖 B、
酸化型 (bovinesigma、1 mg/mL)

17.5

酸化型インスリン鎖 B

12.5
10
7.5
5

酸化型インスリン鎖 A

1.648

カラム :

0.148

酸化物の高分解能分析

酸化型インスリン鎖 B の副成分

2.5
0
min

ZORBAX RRHD 300SB-C18 2.1 x 50 mm、1.8 µm column により、酸化型インスリン鎖は 2 分以下で分離できました。

ヒントとテクニックタンパク質やペプチド分離用の移動相としては、非常に低い pH の TFA (または他の酸) を可溶性タンパク質に組み合わせます。StableBond カ
ラムはこれらの条件下でも極めて長い寿命を誇ります。最高 100 ～ 500 kDa のタンパク質に対応する 300 Å のポアサイズを用意しています。

156

生体分子の分離用カラム

モノクローナル抗体の再現性の向上

mA

カラム :

400

ZORBAX RRHD 300SB-C8857750-906
2.1 x 50 mm、1.8 µm

移動相 :A : H20 : IPA (98.2)、0.1 % TFA
B : IPA : ACN : H20 (70 : 20 : 10)、0.1 % TFA

300

流量 :

1.0 mL/min

200

カラム温度 :

80 °C

検出器 :

ダイオードアレイ検出器を備えた 1290 Infinity LC

1 回目の注入150 回目の注入

100(225 nm)サンプル :

0MAb

グラジエントのタイムスケール
時間 (分)% 溶媒 B

0.00

25

3.00

35

4.00

90

5.00

25

0.5

1

mA

150 回の注入前後

700のカラムのブラン

1.5

2

2.5

3 min
bar
750

ク分析の重ね表示

500

500

圧力

300

グラジエント洗浄および250

再平衡化領域

Agilent ZORBAX 300SB-C8 による優れた再現性と100

タンパク質の回収率

5

0

min

ペプチドマッピングの分解能の向上
カラム :

移動相 :
流量 :
グラジエント :カラム温度 :
検出器 :ZORBAX 300SB-C18
858750-902
2.1 x 100 mm、1.8 µm

Norm
350

300

A : 0.1 % TFA
B : 0.01 % TFA + 80 % ACN

250

200

0.5 mL/min
2 % B で 1 分間、8.8 分間で 2 ～ 45 %、0.2 分間で 45 ～ 95 % B、95 % B で 2 分間、
0.2 分間で 95 ～ 2 %

100

50

0

50 °C
ダイオードアレイ検出器を備えた 1290 Infinity

LC (280 nm)
サンプル :

150

-50

1

2

3

4

5

6

7

8

9

min

酵素によるタンパク質消化物 (MAb)

長い 100 mm の Agilent ZORBAX RRHD 300SB-C18 カラムがタンパク質分解物に最大の分解能を提供します。このサンプルでは、洗浄と平衡化を含む分析時間の合計は 15 分未満です。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

157

生体分子の分離用カラム

ペプチド : TFA 濃度の影響
カラム :ZORBAX 300SB-C8883995-906
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :A : Water、TFA
B : TFA、ACN

流量 :1.0 mL/min

グラジエント :0 min 0 % B
30 min 30 % B

カラム温度 :

40 °C

検出器 :

UV、254 nm

サンプル :

ペプチド標準 S1-S5、6 µL

ペプチドシーケンス

0.05% TFA

S1 S2

6

8

10

12

14

16

0.25% TFA

18

8

10

12

14

16

1.0% TFA

20

18

8

10

12

14
16
Retention Time (min)

20

移動相 :

ZORBAX 300SB-C3
883995-909
4.6 x 150 mm、5 µm
A : 5 : 95 アセトニトリル : 水、0.10 % TFA (v/v %)B : 95 : 5 アセトニトリル : 水、0.085 % TFA (v/v %)流量 :1.0 mL/min

グラジエント :20 分で 15 ～ 53 %、ポストタイム 12 分

カラム温度 :

室温 – 60 °C

検出器 :UV、215 nm

サンプル :

ポリペプチド

4, 5

室温
1

2

5
3

6
7

8

60 °C

35 °C

5

5

2

24

4

4

0

22

1. ロイシンエンケファリン
2. アンギオテンシン II
3. RNase A
4. インスリン (BOV)
5. シトクローム c
6. リゾチーム
7. ミオグロビン
8. 炭酸脱水酵素

45 °C

4

24
S5

LCBP021ペプチド/タンパク質 : 温度上昇と分離の関係
カラム :

22

S4

18

24
S5

20

S3
S2 S1

6

22

S4

S1 S2 S3

6

S5

S4

S3

4

6

8 10 12 14 16 18 20
Time (min)

0

2

4

6

8 10 12 14 16 18 20
Time (min)LCBP026

ヒントとテクニック
Agilent 1290 Infinity LC は、品質の高い結果を迅速に提供します。多くの情報が得られるため、短時間での意思決定が可能になります。生産性を高めることで、ラボの競争力がアップし、投資に対して高いリターンを得ることができます。1290 Infinity の導入によるコスト削減を計算できます。オンラインメソッドトランスレータとコスト削減カリキュレータを使用することにより、HPLC メソッドを変換し、コスト削減額を計算することができます。ホームページをご覧ください。www.agilent.com/chem/hplc2uhplc

158

生体分子の分離用カラム

低 pH、高温での安定性が高い短鎖 ZORBAX 300SB-C3

移動相 :

100

ZORBAX 300SB-C3
883995-909
4.6 x 150 mm、5 µm

90

80 分で 0 ～ 100 % B のグラジエント
A : 0.5 % TFA 水溶液
B : 0.5 % TFA アセトニトリル溶液
アイソクラティック保持力試験条件 :1- フェニルヘプタン 50 % A、50 % B

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :60 °C

% k Phenyltheptane Remaining

カラム :

80

ZORBAX 300 SB-C3
70

他社 C4

60

50
40
0

1,000

2,000

3,000

4,000

5,000

6,000

7,000

8,000

Volume of Mobile Phase (mL)
LCSB005

4 つの異なる 300SB 結合相による高分子ポリペプチドの分離の最適化カラム A :

カラム B :

カラム C :

2, 3

A

6
9
10

B

ZORBAX 300SB-C8883995-906
4.6 x 150 mm、5 µm

C

4

7

5

8
6

リニアグラジエント、40 分で 25 ～ 70 % B
A : 0.1 % TFA 水溶液
B : 0.09 % TFA 80 % アセトニトリル/20 %水溶液

各タンパク質 3 µg

9

2

1

3

移動相 :

サンプル :

8
10

ZORBAX 300SB-CN
883995-905
4.6 x 150 mm、5 µm

60 °C

5

3

カラム D :

カラム温度 :

6, 7

2

1

4

ZORBAX 300SB-C3
883995-909
4.6 x 150 mm、5 µm

1.0 mL/min

8

7

5

4

ZORBAX RRHD 300SB-C18
883995-902
4.6 x 150 mm、5 µm

流量 :1. RNase
2. インスリン
3. シトクローム c
4. リゾチーム
5. パルアルブミン
6. CDR
7. ミオグロビン
8. 炭酸脱水酵素
9. S-100β
10. S-100α

1

9
10

D

2

1

3

4

5

7

8
6

9
10

0

5

10

15

20
Time (min)

25

30

35

40
LCSB006

300SB- C18、C8、C3 および CN 結合相はペプチド混合物に対してそれぞれ異なる分離を与えます。このことはタンパク質分離をすばやく最適化する上での重要なパラメータになります。300SB-CN カラムはより親水性の高いポリペプチドに対して独自の選択性を示します。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

159

生体分子の分離用カラム

ZORBAX 300Å StableBond
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

300SB-C18
USP L1300SB-C8
USP L7300SB-CN
USP L10300SB-C3
USP L56

セミ分取

9.4 x 250

5880995-202

880995-206

880995-205

880995-209

アナリティカル

4.6 x 250

5880995-902

880995-906

880995-905

880995-909

アナリティカル

4.6 x 150

5883995-902

883995-906

883995-905

883995-909

品名

標準カラム (特別なハードウェアは必要としません)

アナリティカル

4.6 x 505860950-902

860950-906

860950-905

860950-909

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5863973-902

863973-906

863973-905

863973-909

ラピッドレゾリューション

4.6 x 100

3.5861973-902

861973-906

ラピッドレゾリューション

4.6 x 503.5865973-902

865973-906

865973-905

865973-909

ソルベントセーバプラス

3.0 x 150

3.5863974-302

863974-306

ソルベントセーバプラス

3.0 x 100

3.5

ナローボア

2.1 x 250

5881750-902
883750-902

863974-309

861973-306

ナローボア

2.1 x 150

5

ナローボア RR

2.1 x 150

3.5

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5861775-902

861775-906

ナローボア RR

2.1 x 50

3.5865750-902

865750-906

ナローボア RRHD

2.1 x 100

1.8858750-902

858750-906

858750-909

ナローボア RRHD

2.1 x 501.8857750-902

857750-906

857750-909

マイクロボア

1.0 x 2505861630-902

マイクロボア RR

1.0 x 150

3.5863630-902

863630-906

マイクロボア RR

1.0 x 503.5865630-902

865630-906

マイクロボアガード、3 個

1.0 x 1755185-5920

5185-5920

ガードカートリッジ、2 個

9.4 x 157820675-124

820675-124

820675-124

820675-124

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-921

820950-918

820950-923

820950-924

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-918

821125-918

821125-924

821125-924

ガードハードウェアキット

840140-901

840140-901

840140-901

840140-901

ガードハードウェアキット

820999-901

820999-901

820999-901

820999-901

883750-906

883750-905

883750-909

863750-906

(続く)

160

生体分子の分離用カラム

ZORBAX 300Å StableBond
ハードウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

300SB-C18
USP L1300SB-C8
USP L7300SB-CN
USP L10300SB-C3
USP L56897250-105

897250-109

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7897250-102

897250-106

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7897150-102

897150-106

897150-109

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5895150-902

895150-906

895150-909

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5895100-902

895100-906

895100-909

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5895050-902

895050-906

895050-909

820400-901

820400-901

820400-901

820400-901

820212-921

820212-918

820212-924

820212-924

820444-901

820444-901

820444-901

820444-901

PrepHT エンドフィッティング、2 個
PrepHT ガードカートリッジ、2 個

17.0 x 7.55

ガードカートリッジハードウェアキット

キャピラリーフローカラム (ガラス内面ステンレス)
キャピラリー

0.5 x 250

55064-8266

キャピラリー

0.5 x 150

55064-8264

キャピラリー

0.5 x 35

55064-8294

キャピラリー RR

0.5 x 150

3.5

5064-8268

キャピラリー RR

0.5 x 35

3.5

5065-4459

キャピラリー

0.3 x 250

55064-8265

キャピラリー

0.3 x 150

55064-8263

キャピラリー

0.3 x 35

55064-8295

キャピラリ RR

0.3 x 150

3.5

5064-8267

5065-4460

キャピラリ RR

0.3 x 1003.5

5064-8259

5065-4461

キャピラリ RR

0.3 x 35

3.5

5064-8270

5065-4462

キャピラリ RR

0.3 x 503.5

5064-8300

5065-4463

ナノ RR

0.1 x 150

3.5

5065-9910

ナノ RR

0.075 x 150

3.55065-9911

ナノ RR

0.075 x 50

3.55065-9924

0.3 x 55ナノフローカラム (PEEK フューズドシリカ)

トラップ/ガード 5 個
トラップ/ガードハードウェアキット :5065-9923

5065-9913

5065-9914

5065-9915

5065-9915

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

161

生体分子の分離用カラム

ZORBAX RRHD 300-Diphenyl
Pursuit 3.5 µm および 5 µm Diphenyl カラムと同じ独自のケミストリを使用したアジレント独自のワ
イドポア 300Å Diphenyl 相では、一次配列の芳香族アミノ酸との π-π 結合により選択性が向上します。Agilent ZORBAX 1.8 µm 300Å ラピッドレゾリューション High Definition (RRHD) カラムを使えば、インタクトタンパク質やタンパク質分解物を高分解能で分析できます。

Diphenyl カラムの用途 :• タンパク質の構造解析を含む、インタクトおよび変性タンパク質およびポリペプチドの分析• 翻訳後修飾の検出• 不純物分析• タンパク質の完全性の確認
ZORBAX RRHD 300-Diphenyl には次の特長があります。

• 低 pH における安定性 – トリフルオロ酢酸 (TFA) およびギ酸溶離液を使用し、pH 1 までの低 pH
でタンパク質およびペプチドの分離を高い信頼性で実行できます。

• 温度安定性 – 最大 80 °C で分離を実行できるため、溶離液の粘度を抑え、カラムの寿命を犠牲にすることなく効率を向上させることができます。

• UHPLC への適合性 – 短い析時間で高次の特性解析ができます。
カラム仕様
結合相

ZORBAX RRHD 300-Diphenyl
仕様は代表的な値のみを表しています。

162

ポアサイズ

300 Å

表面積
2

45 m /g

上限温度

pH 範囲

エンドキャップ

カーボンロード

80 °C

1.0-8.0あり

1.9 %生体分子の分離用カラム

移動相 :A : 0.1 % TFA 水溶液
B : 80 % n-プロピルアルコール、10 %ACN、9.9 % 水および 0.1 % TFA

サンプル :

還元モノクローナル抗体 (IgG1)

120
100

流量 :
グラジエント :0 分 - 1 % B、2 分 - 20 % B、
5 分 - 50 % B

0.766

0.454

20

0.501

40

0.5 mL/min

0
5

重鎖 1

軽鎖

重鎖 2
4.119

80

40

0

0.953

60

20

品名

4

0.594

UV、280

3

120

0.479
0.499

検出器 :

2

4.299

1

100

74 °C

重鎖 2

60

サンプルの注入 : 2 µL

カラム温度 :

重鎖 1

軽鎖

80

(1.0 mg/mL)

3.897

Agilent ZORBAX RRHD 300-Diphenyl
858750-944
2.1 x 100 mm、1.8 µm

0.569

カラム :

4.010

還元モノクローナル抗体の高速分離

1

2

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

ZORBAX RRHD 300-Diphenyl

2.1 x 501.8857750-944

ZORBAX RRHD 300-Diphenyl

2.1 x 100

1.8858750-944

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

3

4

5

163

生体分子の分離用カラム

ZORBAX 300Å Extend-C18• 堅牢性が高く、高 pH から低 pH (pH 2-11.5) の広い 範囲でポリペプチドとペプチドを分離します。
• 高 pH と低 pH では異なる選択性を示します。
• 高 pH 領域で疎水性ペプチドに対して優れた効率と回収率を示します。
• 水酸化アンモニウムの移動相を使用する LC/MS 分析に最適です。

Extend-C18 結合相には、新開発の二座構造
C18-C18 結合が使用されています

Agilent ZORBAX 300Å Extend-C18 は、pH 2 ～ 11.5 でペプチドの高効率分離を行うワイドポア HPLC カラムです。独自の二座結合相が高低両方の pH 領域で優れた寿命と再現性を提供します。高 pH 領域
でのペプチドやポリペプチドに対する保持特性と選択性は、これらの分子が荷電することによって著しく変化します。疎水性ポリペプチドの優れた回収率を得るには、室温、高 pH での分離が有効です。ペプチドとポリペプチドの LC/MS 分析感度を向上させる場合も、単純な水酸化アンモニウム含有移動相を用いて高い pH で分析するのが有効です。

カラム仕様
結合相

ZORBAX 300Å Extend-C18

ポアサイズ

300 Å

仕様は代表的な値のみを表しています。

*温度上限 : pH 8 までは 60 °C、pH 8 ～ 11.5 は 40 °C。

ヒントとテクニック
カラムの選択以外にも分析には欠かせない消耗品があります。アジ
レントでは、LC ランプなどの消耗品を幅広く取り揃えています。

164

表面積
2

45 m /g

上限温度*

pH 範囲

エンドキャップ

カーボンロード

60 °C

2.0-11.5

ダブル

4%生体分子の分離用カラム

Extend-C18 を使用したアンギオテンシンの LC/MS 分析
ZORBAX Extend-C18
カラム :773700-902
2.1 x 150 mm、5 µm

0
12.5

0

100

4.0E7

80
AIII

1.0E7

20

0

0
0

2.5

5.0 7.5 10Time (min)12.5

1468.8

433.0

40

+3
659.8

AI

8.477

AII

2.0E7

+2

60

9.621

3.0E7

m/z

1000

500

0

500

1296.6

5.0 7.5 10Time (min)

649.0

2.5

5.499

高 pH

433.0

20

1277.91326.31373.31.0E6

401179.1

AI1025.2

2.0E6

5.0E7
TIC (200-1500 m/z)

最大 : 367225

60
659.7
720.3
767.3

AII + AIII

3.0E6

+2

+3

80
227.1

4.0E6

0

アンギオテンシン I

2.5 µL サンプル (各 50 pmol)
アンギオテンシン I、II、III

100

0

B

サンプル :

649.5

35 °C

250.9

低 pH

カラム温度 :

12.050

最大 : 10889

ポジティブイオン ESI - Vf 70 V、
Vcap 4.5 kV、
N2- 35 psi、12 L/min、325 °C

グラジエント : 15 分で 15 ～ 50 % B

5.0E6
TIC (200-1500 m/z)

アンギオテンシン I

MS 条件 :

340.3
398.0
458.0

A

0.2 mL/min

844.8

流量 :

酸性条件 :
A : 0.1 % TFA 水溶液
B : 0.085 % TFA 80 % アセトニトリル(ACN) 溶液
塩基性条件 :
A : 10 mM NH4OH 水溶液
B : 10 mM NH4OH 80 % ACN 溶液

13.261

移動相 :

1000

+1
m/z
LC30003

低分子ペプチドと高分子ペプチドのいずれについても、高 pH と低 pH で選択性が変化しています。高 pH では、荷電状態が変化するため、3 種類のアンギオテンシンす
べてを分離できます。さらに、水酸化アンモニウム移動相を使用して高 pH で分析することにより、アンギオテンシン I のスペクトルが著しく明瞭になります。Extend-

C18 カラムは、低分子ペプチドを高 pH で分析する際にも効果を発揮します。
参考 : B.E. Boyes. Separation and Analysis of Peptides at High pH Using RP-HPLC/ESI-MS, 4th WCBP, San Francisco, CA, Jan. 2000.

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

165

生体分子の分離用カラム

高 pH でも長寿命な 300Extend-C18

ZORBAX Extend-C18
773450-902
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :20 % 20 mM NH4OH、pH 10.5
80 % メタノール

流量 :1.5 mL/min

カラム温度 :

エージング 24 °C
試験 40 °C

4-クロロ-1-ニトロベンゼン
トリミプラミン6k Values

カラム :

8

4

2

10,000 カラム容積は、およそ 1 ヶ月の稼働時間に相当します。

0
0

20,00010,00030,00040,00050,000Column Volumes of Mobile Phase
LC30001

高 pH で異なる選択性が得られる ZORBAX Extend-C18
カラム :

移動相 :

ZORBAX Extend-C18
773700-902
2.1 x 150 mm、5 µm
A : 0.1 % TFA 水溶液
B : 0.085 % TFA 添加 80 % ACN 溶液

A

3E7
2.5E7
2E7
1.5E7

A : 20 mM NH4OH 水溶液
B : 20 mM NH4OH 80 % ACN 溶液
流量 :0.25 mL/min

グラジエント :5-60 % B in 20 min

カラム温度 :25 °C

MS 条件 :

ポジティブイオン ESI - Vf 70V、Vcap 4.5 kV
N2 – 35 psi、12 L/min、300 °C
4 µL (各ペプチド 50 ng)

LLL-NH2

1E7
LHG

.5E7

LLL
LLVF

LHL

0
0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

B
LLL-NH2

3E7
LLL
2.5E7
LHG

2E7

LLVF

1.5E7
LHL

Extend カラムはペプチドの高 pH 分離に使用できます。高 pH と
低 pH では選択性が大きく異なることがあります。pH を変化させるたけで補完的なメソッドを開発できるため、すべてのピー
クを分離可能かどうかを確認できます。Extend カラムは高 pH と
低 pH で使用できるため、1 本のカラムで分離を補完的に調べることができます。このサンプルでは、高 pH で高い MS 感度も得
られます。

166

1E7
.5E7
0
0

2

4

6

8

10
Time (min)

12

14

16

18

20
LCBP017生体分子の分離用カラム

ZORBAX 300Å Extend-C18
ハードウェア 品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

アナリティカル

4.6 x 250

5770995-902

アナリティカル

4.6 x 150

5773995-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 150

3.5763973-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 100

3.5761973-902

ラピッドレゾリューション

4.6 x 503.5765973-902

ナローボア RR

2.1 x 150

3.5763750-902

ナローボア RR

2.1 x 100

3.5761775-902

ナローボア RR

2.1 x 503.5765750-902

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-932

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.5

5821125-932

ガードハードウェアキット

820999-901

キャピラリーフローカラム (ガラス内面ステンレス)
キャピラリー RR

0.3 x 150

3.5

5065-4464

キャピラリー RR

0.3 x 1003.5

5065-4465

キャピラリー RR

0.3 x 75

3.5

5065-4466

キャピラリー RR

0.3 x 503.5

5065-4467

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

167

生体分子の分離用カラム

硬質シリカコア、直径 4.5 µm

Poroshell 300• 表面多孔質粒子構造により生体分子を高速分離• 300 Å のポアサイズがタンパク質 (最大 1,000 kDa) とモノクローナル抗体の分離で高い効率と回収率を実現• Poroshell 300SB (低 pH)、300Extend-C18 (高 pH) でカラム寿命が向上• 4 種類の結合相 (300SB-C18、300SB-C8、300SB-C3、300Extend-C18) で回収率と選択性を最適化
Agilent Poroshell 300 カラムはタンパク質やペプチドの高速分離に理想的なカラムです。表面多孔質粒子により、流量を大きくしてもシャープで効率の良いピーク形状が損なわれることはありません。一般にペプチドやタンパク質分析では、拡散の遅い目的成分のピークの広がりを抑えるために、分離はゆっくりと行われます。しかし、Poroshell カラムでは、多孔質シリカ表面薄層と硬質シリカコ
アを組み合わせた、厚さ 0.25 µm の独自の粒子構造が導入されています。そのため、タンパク質の拡散距離が短縮され、Agilent 1260 Infinity バイオイナートなどの 400/600 bar HPLC システムを使用して、500 ～ 1,000 kDA までのペプチドとタンパク質の高速 HPLC 分離が可能になります。StableBond
結合相と結合した Poroshell カラムは、TFA およびギ酸移動相で優れた安定性と感度を発揮します。
Poroshell 300Extend-C18 カラムを使用すれば、 pH 2 ～ 11 の範囲で無類の分離性能が得られます。
ZORBAX Poroshell カラムは分析用タンパク質分離および LC/MS 分離に有用です。

多孔質外殻、
厚さ 0.25 µm

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

上限温度*

pH 範囲

エンドキャップ

Poroshell 300SB-C18、C8、C3

300 Å

90 °C

1.0-8.0

なし

Poroshell 300Extend-C18

300 Å

pH 8 超で 40 °C
pH 8 未満で 60 °C

2.0-11.0

あり

仕様は代表的な値のみを表しています。

Poroshell 300 カラム

168*300StableBond カラムは低 pH で最高の性能を発揮するように設計されています。シリカを基材とするカラムを pH 6 ～
8 の範囲で最高の安定性を確保しながら使用するには、40 °C 以下の使用温度、0.01 ～ 0.02 M の範囲の低濃度緩衝液を使用します。中性または高 pH では、300Extend-C18 の使用をお勧めします。

生体分子の分離用カラム

タンパク質やペプチドを数秒間で分離する
Poroshell 300 カラム
カラム :

5
4
3

Poroshell 300SB-C18
660750-902
2.1 x 75 mm、5 µm

移動相 :A : 0.1 % TFA in H20
B : 0.07 % TFA in ACN

流量 :3.0 mL/min

グラジエント :5 - 100 % B in 1.0 min

カラム温度 :

70 °C、圧力 260 bar

検出器 :215 nmサンプル :

タンパク質とペプチド

1
2

7
6
8

0
この例における 8 種類のポリペプチドとタンパク質の分0.5Time (min)1. アンギオテンシン II
2. ニューロテンシン
3. RNase
4. インスリン
5. リゾチーム
6. ミオグロビン
7. 炭酸脱水酵素
8. オブアルブミン

1.0
LCPO001

離は 60 秒未満で完了しています。それぞれのピーク形状
はシャープで高い効率を持ちます。

ヒントとテクニック
詳細については、次の資料をご覧ください。

Poroshell 300SB-C18 (資料番号 5988-2100ENUS)
Rapid HPLC Analysis of Monoclonal Antibody IgG1 Heavy Chains Using ZORBAX Poroshell 300SB-C8 (資料番号 5989-0070EN)
ZORBAX Poroshell 300SB-C8 HPLC カラムを用いたタンパク質の超高速 HPLC 分離における温度による分離能の向上(資料番号 5989-0589JAJP)ZORBAX Poroshell 300Extend-C18 の高 pH 領域での安定性を利用した、LC/MS におけるシグナル/ノイズ比の向上(資料番号 5989-0683JAJP)
www.agilent.com/chem/jp

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

169

生体分子の分離用カラム

Poroshell 300SB によるペプチドマップ分析時間の90 % の短縮
Poroshell 300SB-C18
カラム A :
660750-902
2.1 x 75 mm、5 µm
カラム B :ZORBAX 300SB-C18
883750-902
2.1 x 150 mm、5 µm

移動相 :A : 95 % H2O、5 % ACN、0.1 % TFA
B : 5 % H2O、95 % ACN、0.07 % TFA

流量 :1 mL/min0.208 mL/min

グラジエント :0 - 100 % B = 12 分
0 - 100 % B = 120 分

カラム温度 :

70 °C

サンプル :

20 µL (0.22 µg/1 µL)
BSA トリプシン消化物(15 時間、70 pmol)

A

1

2

3

4
Time (min)

5

6

7

10

20

30

40
Time (min)

50

60

70

8

B

80
LCPO002

タンパク質トリプシン消化物の分析では、1 回のクロマトグラフ分析に 1 時間以上もかかることがあります。Poroshell カラムを使用すれば、同様の複雑な分離を 1/10の時間で分析することができます。

LC/MS で最高の感度を実現する MicroBore
Poroshell 300 カラム
Poroshell 300SB-C18
カラム :661750-902
1.0 x 75 mm、5 µm
移動相 :A : 水 + 0.1 % ギ酸
B : ACN + 0.1 % ギ酸

流量 :600 µL/min

グラジエント :5.5 分で 20 ～ 100 % B

カラム温度 :

80 °C

MS 条件 :

LC/MS : ポジティブイオン ESI Vcap 6000 V
乾燥ガス流量 : 12 L/min
乾燥ガス温度 : 350 °C
ネブライザ : 45 psi
フラグメンタ電圧 : 140 V
スキャン : 600-2500
刻み幅 : 0.15 amu
ピーク幅 : 0.06 min

サンプル :

1EB

80000000
0.5
0.75
1.0
2.5
5.0

60000000

40000000

20000000
0

0.5

1.0

1.5

2.0
2.5
Time (min)

3.0

3.5

4.0
LCPO003

1 µL

内径の小さい (2.1 mm、1.0 mm、0.5 mm) Poroshell カラムは、LC/MS に理想的なカラムです。サンプル量が限られている場合、高感度 LC/MS 分析には内径 1.0 mm ま
たは 0.5 mm の Poroshell カラムが最適です。Poroshell カラムでは、0.5 ～ 5 pmole の微量タンパク質での高感度 MS 分析が可能です。また Poroshell カラムは、安定剤や組織培地の存在下でも MS によるタンパク質の高速検出に使用できます。

170

生体分子の分離用カラム

モノクローナル IgG1 鎖 : Poroshell 300SB-C8 での
分離
mAU
カラム :

移動相 :

Poroshell 300SB-C8660750-906
2.1 x 75 mm、5 µm

重鎖

120

軽鎖

80

A : 90 % 水 : 10 % ACN + 3 mL/Lの MW 300 PEG
B : 10 % 水 : 90 % ACN + 3 mL/Lの MW 300 PEG

mAU

流量 :

1.0 mL/min

120

グラジエント :0 分 25 % B
10 分 40 % B
10.1 分 25 % B
12 分 25 % B

IgG の処理 :
DTT

40
0
0

2

4

6

8

10

min

非グリコシル化？

グリコシル化？

IgG の処理 :DTTペプチド-N-グリコシダーゼ F

80
40
0

カラム温度 :

70 °C

mAU

サンプル :

モノクローナル IgG1

120

0

2

4

6

8

40

Novartis AG, Basel.
Dr. Kurt Forrer
Patrik Roethlisberger

0min

IgG の処理 :DTTペプチド-N-グリコシダーゼ F
カルボキシペプチダーゼ-B

80

データ提供 :

10

0

2

4

6

8

10

min
IgG_Poroshell

ヒントとテクニック
アジレントは、ポリプロピレン、不活性処理済み、シリコン処理済みガラ
ス製など、多様なサンプルに適したバイアルを提供しています。
詳細については、資料番号 5990-9022JAJP をご覧ください。

www.agilent.com/chem/jp

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

171

生体分子の分離用カラム

ZORBAX Poroshell 300SB-C8 でのタンパク質のカラム温度 : 40 °C

5
6

500

Poroshell 300SB-C8660750-906
2.1 x 75 mm、5 µm

453

1. 糖タンパク X、MW ～ 22 kDa
2. タンパク質 I、MW ～ 4 kDa
3. グルカゴン、MW ～ 3.5 kDa
4. 生合成ヒトインスリン、MW ～ 6 kDa
5. タンパク質 J、MW ～ 3 kDa
6. タンパク質 K、MW ～ 6 kDa
7. 糖タンパク Y、MW ～ 45 kDa
8. 糖タンパク Z、MW ～ 30 kDa

7

23 4

406

移動相 :

A : 0.1 % TFA 水溶液
B : 0.1 % TFA アセトニトリル溶液

流量 :1.0 mL/min

グラジエント :B : 20 ～ 70 % (3 分)

検出器 :UV (214 nm)

レスポンス (mV)

溶出パターン
カラム :

359

8

312
265
218
171

1

124
77
30
0

21

42

63

84

105
126
Time (s)カラム温度 : 60 °C
490

168

189

210

147

168

189

210

147

168

189
210
Prot_Elution

5

444
2 3

398

レスポンス (mV)

147

6

4

7

352

8

306
260
214
168
1

122
76
30
0

21

42

63

84

105
Time(s)

カラム温度 : 75 °C
480

5

435

4

レスポンス (mV)

6
7

3 2

390

126

345

8

300
255
210
165
1

120
75
30
0

21

42

63

84

105
126
Time (s)Poroshell 300
ハードウェア

粒子径 (µm)

Poroshell
300SB-C18

Poroshell
300SB-C8

Poroshell
300SB-C3

Poroshell
300Extend-C18

2.1 x 755660750-902

660750-906

660750-909

670750-902

1.0 x 755661750-902

661750-906

661750-909

671750-902

キャピラリー

0.5 x 75

5

ガードカートリッジ、4 個

2.1 x 12.55

品名

寸法 (mm)

ナローボア
マイクロボアガードハードウェアキット
マイクロボアガード、3 個

172

1.0 x 1755065-4468
821075-920

821075-918

821075-924

820999-901

820999-901

820999-901

5185-5968

5185-5968

5185-5968

5185-5968

生体分子の分離用カラム

Poroshell 120• 短鎖ペプチドマッピング向けの 120 Å のポアサイズ• 60 MPa (600 bar) のシステムで UHPLC の性能• 2 µm 未満の粒子径に対して最大 90 % の効率• 3.5 µm の粒子径に対して効率は 2 倍• 2 µm 未満のカラムよりも最大で 50 % 低い圧力
Agilent Poroshell 120 カラムは、1.7 µm のソリッドコアと 0.5 µm の多孔質外殻を持つ 2.7 µm 粒子です。この小さな粒子径によって、2 µm 未満のカラムと同様の高い効率が得られますが、圧力は 40 ～50 % 低くなります。これらの高効率、高分離カラムは、どのタイプの LC でも使用できます。多孔質
外殻とソリッドコアによって拡散距離が制限され、分離スピードが向上する一方で、粒子径が小さいため効率と分解能が向上します。カラムは高圧に対応し、複数のカラムを使用すると、可能な限り最高の分解能と効率を実現できます。120 Å のポアサイズは、タンパク質消化物の低分子量ペプチ
ドの高速高分離分析に理想的です。

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

上限温度

pH 範囲

エンドキャップ

カーボンロード

EC-C18

120 Å

60 °C

2.0-8.0

ダブル

8%

SB-C18

120 Å

90 °C

1.0-8.0なし

7.5 %仕様は代表的な値のみを表しています。

Poroshell 120 カラムファミリについては、24 ページをご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp173

生体分子の分離用カラム

Poroshell 120
EC-C18USP L1

SB-C18USP L12.7

693975-902

683975-902

4.6 x 100

2.7695975-902

685975-902

3.0 x 150

2.7693975-302

683975-302

ソルベントセーバ

3.0 x 100

2.7695975-302

685975-302

ナローボア

2.1 x 150

2.7693775-902

683775-902

ナローボア

2.1 x 100

2.7695775-902

685775-902

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

分析用

4.6 x 150

分析用
ソルベントセーバ

他の相については、24 ページをご覧ください。

174

生体分子の分離用カラム

PLRP-S• 高再現性と長寿命を達成する最も頑丈なポリマー系粒子• 高い熱安定性と化学的安定性• USP L21 に準拠• 分野を問わずあらゆる分析で使用可能
PLRP-S シリーズには、さまざまな粒子径とポアサイズを有する充填剤が使用され、分析の用途に応じて使い分けることが可能です。粒子には疎水性があるため、逆相系での分離には結合相、アルキル結合基は必要ありません。そのため、残存シラノールや残留重金属は存在しません。幅広いカラム製品は、プロテオミクス、分析分離、分取精製などのマイクロ分離に適しています。さらに、プロセスカラムには充填剤バルクを充填することもできます。

10 µm

A

10 µm

10 µm

B

C

PLRP-S 10 µm 粒子の走査型電子顕微鏡(SEM) 写真。
ポアサイズの違いが明確にわかります。

A : 小さいポアサイズ 100 Å
B : 大きいポアサイズ 300ÅC : ギガポア 4000 Å

カラム仕様
使用可能 pH 範囲

1-14

緩衝液種類

制限なし

使用可能有機溶媒濃度

1-100 %

使用可能最高温度

200 ºC

使用可能最大圧力

5 ～ 8 µm : 3000 psi (21 MPa)
3 µm : 4000 psi (30 MPa)

PLRP-S アプリケーション
ポアサイズ

アプリケーション100 Å

低分子/ペプチド/オリゴヌクレオチド

300 Å

遺伝子組み換えペプチド／タンパク1000 Å

分子量の大きなタンパク質4000 Å

DNA/プラスミド

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

175

生体分子の分離用カラム

25 bp DNA ラダーの HPLC
PLRP-S、2.1 x 150 mm

移動相 :A : 0.1 M TEAA
B : 50 % 0.1 M TEAA 水溶液 : 50 % ACN

流量 :200 µL/min

グラジエント :12.5 - 50 % B、150 分

PLRP-S 100ÅResponse, UV, 260 nm

カラム :

HPLC

PLRP-S 300Å

PLRP-S 1000Å

PLRP-S 4000Å

Time
VLCPLRPSResp

ポリエチレングリコール
カラム :PLRP-S 100 Å
PL1111-3500
4.6 x 150 mm、5 µm

移動相 :

A:水
B : アセトニトリル

グラジエント :12 分で 10 ～ 30 % B、30 % B で 3 分間保持流量 :1.0 mL/min

注入量 :

10 µL

サンプル濃度 :1 mg/mL

検出器 :ELS (neb = 50 °C、evap = 70 °C、
gas = 1.6 SLM)

PEG 400

min

0

15

PEG 1080

0

min

15
VLC0048176

生体分子の分離用カラム

TFA 濃度による分析結果の違い
PLRP-S 100 Å
カラム :PL1512-5500
4.6 x 250 mm、5 µm

1. アンギオテンシン III
2. アンギオテンシン II
3. アンギオテンシン I
2

1

移動相 :

A : TFA (各種 %) 水溶液
B : TFA (各種 %) ACN 溶液

グラジエント :15 分で 12 ～ 40 % B (リニア)流量 :1.0 mL/min

検出器 :ELS (neb = 75 °C、evap = 85 °C、
gas = 1.0 SLM)

30.0025%
0.02%
0.1%
0

min

15
VLC0068

ペプチド RP-LC での選択性
カラム :PLRP-S 100 Å
PL1512-5500
4.6 x 250 mm、5 µm

移動相 :A : 0.1 % TFA/1 % 2-プロパノール/水B : 0.1 % TFA/1 % 2-プロパノール/ACN

流量 :1.0 mL/min

グラジエント :95 % A (0 ～ 3 分) ～ 50 % A (13 分)

検出器 :UV、220 nm

1. YG
2. GYG
3. PY
4. YV
5. YY
6. GLY
7. YF
8. GFL
9. YGGFM
10. シュウ酸 (マーカ)
11. 安息香酸 (マーカ)(J.Chromatography 512 (1990) 315-23 を参照)
Agilent PLRP-S を使用したペプチド標準の良好な分離

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

177

生体分子の分離用カラム

化学的安定性 - NH4OH 濃度
カラム :PLRP-S 100 Å
PL1512-5500
4.6 x 250 mm、5 µm

2
3

1

移動相 :

A : アンモニア水 (濃度はクロマトグラ
ムを参照)
B : can アンモニア含有アセトニトリ
ル (濃度はクロマトグラムを参照)

グラジエント :15 分で 10 ～100 % B (リニア)流量 :1.0 mL/min

検出器 :ELS (neb = 80 °C、evap = 85 °C、
gas = 1.0 SLM)

1. アンギオテンシン II
2. アンギオテンシン I
3. アンギオテンシン III

1 mM

10 mM

100 mMmin

0

10
VLC0049

Alberta Peptide Institute 試験混合物
PLRP-S 100 Å
PL1512-5500
4.6 x 250 mm、5 µm

5

カラム :

移動相 :

A : 99 % TFA 水溶液 (0.1 %) : 1 % ACN
B : 70 % TFA 水溶液 (0.1 %) : 30 % ACN

グラジエント :30 分で 0 ～ 100 % B

流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、220 nm

1. Ala3-Gly4 (遊離アミノ酸)
2. Gly3-Gly4 (Nα-アセチル化)
3. Ala3-Gly4 (Nα-アセチル化)
4. Val3-Gly4 (Nα-アセチル化)
5. Val3-Val4 (Nα-アセチル化)

4
3

1

0

2

min

30
VLC0050178

生体分子の分離用カラム

乳製品サンプル中の乳清タンパク - 牛乳
カラム :PLRP-S 300 Å
PL1512-3801
4.6 x 150 mm、8 µm

2

移動相 :

A : 0.1 % TFA、99 % 水 : 1 % ACN 溶液
B : 0.1 % TFA、1 % 水 : 99 % ACN 溶液

グラジエント :24 分で 36 - 48 % B、 24 - 30 分で 48 - 100 % B、
100 % B で 5 分間保持、35 - 40 分で 100 - 36 % B

流量 :1.0 mL/min

注入量 :

10 µL

検出器 :

UV、220 nm

1301. α-ラクトアルブミン
2. β-ラクトグロブリン (B 鎖)
3. β-ラクトグロブリン (A 鎖)

24

min

VLC0074

イオンペア剤を用いた逆相系 HPLC における温度の違いによるオリゴヌクレオチドの分離結果の比較

PLRP-S 100 Å
PL1512-1300
4.6 x 50 mm、3 µm

1

25

2

移動相 :

A : 100 mM TEAA
B : 25 % ACN 溶液中の 100 mM TEAA

グラジエント :緩衝液 B を 5 分で 5 % 変化

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

35 °C、60 °C、または 80 °C

検出器 :UV、254 nm

mV

カラム :

35ºC

1. 29-mer
2. 30-mer

0
0

12.5

min

25
mV

1 2

60ºC

0
0
25

12.5

min
1

mV

2

80ºC

0
0

min

12.5

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

VLC0072179

生体分子の分離用カラム

分子量の大きい繊維状タンパク質
カラム :PLRP-S 300 Å
PL1512-3801
4.6 x 150 mm、8 µm

2

カラム :

PLRP-S 1000 Å
PL1512-3802
4.6 x 150 mm、8 µm

移動相 :A : 0.25 % TFA 水溶液
B : 5 % TFA 水溶液 (0.25 %) : 95 % ACN

流量 :1.0 mL/min

グラジエント :15 分で 20 ～ 60 % B

検出器 :UV、220 nm

1. コラーゲン (120,000 MW)
2. フィブリノーゲン (340,000 MW)

1
2

1

PLRP-S 300Å

0

180

min

12

PLRP-S 1000Å

0

min

18

VLC0051

生体分子の分離用カラム

PLRP-S HPLC カラム
ハードウェア

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

PLRP-S100 Å
USP L21

PLRP-S
300 Å
USP L21

PLRP-S
1000 Å
USP L21

PLRP-S
4000 Å
USP L214.6 x 250

8

PL1512-5800

PL1512-5801

PL1512-5802

4.6 x 150

8

PL1512-3800

PL1512-3801

PL1512-3802

PL1512-3803

PL1512-1801

PL1512-1802

PL1512-1803

PL1512-1502

PL1512-1503

4.6 x 508

4.6 x 250

5

PL1512-5500

PL1512-5501

4.6 x 150

5

PL1111-3500

PL1512-3501

4.6 x 505

PL1512-1500

PL1512-1501

4.6 x 150

3

PL1512-3300

PL1512-3301

4.6 x 50

3

PL1512-1300

PL1512-1301

2.1 x 250

8PL1912-5801

2.1 x 150

8

PL1912-3801

PL1912-3802

PL1912-3803

2.1 x 508PL1912-1801

PL1912-1802

PL1912-1803

2.1 x 250

5

PL1912-5500

PL1912-5501

2.1 x 150

5

PL1912-3500

PL1912-3501
PL1912-1502

PL1912-1503

2.1 x 505

PL1912-1500

PL1912-1501

2.1 x 150

3

PL1912-3300

PL1912-3301

2.1 x 503

PL1912-1300

PL1912-1301

1.0 x 508

1.0 x 50

5

PL1312-1802
PL1312-1500

1.0 x 105

1.0 x 150

3

PL1312-3300

1.0 x 503

PL1312-1300

PL1312-1502
PL1C12-2502

PLRP-S ガードカートリッジ、5 x 3 mm 用、2 個

PL1612-1801

PL1612-1801

PL1612-1801

PL1612-1801

3.0 x 5.0 mm カートリッジ用ガードカートリッジ

PL1310-0016

PL1310-0016

PL1310-0016

PL1310-0016

ホルダ

ヒントとテクニック
分取カラムと充填剤の注文情報は、
250 ページをご覧ください。
マイクロボアカラムの注文情報は、
241 ページをご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

181

生体分子の分離用カラム

アミノ酸分析 (AAA) カラムおよび消耗品

ZORBAX Eclipse アミノ酸分析 (AAA) カラム• 24 種類のアミノ酸の高分解能、高速分析• アミノ酸分析析用としてテスト済み• よく知られた OPA および FMOC プレカラム誘導体化法を使用• Agilent 1100/1200 オートサンプラでオンラインによる誘導体化プロトコルを使用して簡単に自動化

Agilent ZORBAX Eclipse AAA 高効率カラムは、更新および改良されたプロトコルに従ってアミノ酸を迅速に分離します。注入から次の注入までの全分析時間は、50 mm、1.8 µm のカラムでわずか 8 分 (分析時間は 7 分)、それよりも短い長さ 75 mm のカラムで 14 分 (分析時間は 9 分)、長さ 150 mm のカラムで 24 分 (分析時間は 18 分) です。Agilent 1100/1200 HPLC を使用した 1 回の自動分析で、OPA とFMOC の誘導体化特性の両方を用いて、非常に優れた感度 (DAD、FLD で 5 ～ 50 pmol) と信頼性を達成します。

ZORBAX Eclipse Plus C18 カラムは、アミノ酸分析用の優れた選択肢です。
ZORBAX Eclipse Plus カラムの詳細については、44 ページをご覧ください。

ZORBAX Eclipse アミノ酸分析 (AAA) カラム
ハードウェア

ヒントとテクニック
詳細については、次の資料をご覧ください。

High-Speed Amino Acid Analysis (AAA)on 1.8 µm Reversed-Phase (RP) Columns(資料番号 5989-6297EN)
www.agilent.com/chem/library

182

説明

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

日常の分析

4.6 x 150

5993400-902

FLD を使用した日常分析、高分
解能

4.6 x 1503.5963400-902

日常の分析、ハイスループット

4.6 x 753.5966400-902

ソルベントセーバ、高感度、高分解能

3.0 x 150

3.5961400-302

ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

5820950-931

ガードハードウェアキット

820999-901

生体分子の分離用カラム

アミノ酸標準試料
それぞれのアミノ酸標準試料には次のアミノ酸が含まれます。

• グリシン• L-シスチン• L-ヒスチジン• L-チロシン• L-ロイシン• L-メチオニン• L-セリン
• L-アラニン• L-フェニルアラニン• L-グルタミン酸• L-プロリン• L-イソロイシン• L-アルギニン• L-トレオニン• L-バリン
• L-リジン• L-アスパラギン酸

アミノ酸標準試料、10 x 1 mL アンプル*
品名

部品番号

1 nmol/µL

5061-3330

250 pmol/µL

5061-3331

100 pmol/µL

5061-3332

25 pmol/µL

5061-3333

10 pmol/µL

5061-3334

アミノ酸補助キット

5062-2478

ノルバリン、サルコシン、アスパラギン、グルタミン、トリプトファン、4-ヒドロキシプロリン
各1g*寿命を考慮して必要量を購入してください。5062-2478 は 1 g バイアルとして出荷されます

アミノ酸分離試薬
品名

部品番号

OPA 試薬、0.4 M ホウ酸緩衝液 o-フタルアルデヒド (OPA)、3-メルカプトプロピオン酸、各 10 mg/mL、6 x 1 mL アンプル

5061-3335

FMOC 試薬、アセトニトリルに 2.5 mg/mL、9-フルオレニルメチルクロロギ酸、1 mL、10 アンプル

5061-3337

ホウ酸緩衝液、100 mL

5061-3339

DTDPA (ジチオジプロピオン酸) 試薬、シスチン分析用、5 g

5062-2479

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

183

生体分子の分離用カラム

ZORBAX Eclipse-AAA プロトコルを使用した
24 種類のアミノ酸の高分離
ZORBAX Eclipse AAA
カラム :963400-902
4.6 x 150 mm、3.5 µm
移動相 :A : 40 mM Na2HPO4、pH 7.8
B : ACN : MeOH : 水、
45 : 45 : 10 v/v

流量 :2 mL/min

カラム温度 :

40 °C

検出器 :

蛍光検出器

サンプル :

24 種類のアミノ酸

3

8

2

7

4

1

22

16 17
18
19
15

9

10

14
11

1. Asp
2. Glu3. Asn4. Ser
5. Gln6. His
7. Gly8. Thr
9. Cit
10. Arg
11. Ala12. Tyr

23

20

13. Cys
14. Val15. Met16. Nva
17. Trp18. Phe19. Ile20. Leu
21. Lys
22. Hyp
23. Sar
24. Pro

12
24

6
21
5

0

5

10

15

20

25

Time (min)LCPAH0124 種類のアミノ酸の高分離分析は 18 分で完了しました。ラピッドレゾリューション 4.6 x 75 mm Eclipse AAA カラムを選択すれば、これらのアミノ酸を 9 分で分離でき
ます。

184

生体分子の分離用カラム

イオン交換クロマトグラフィー
タンパク質やその他の荷電分子の精製
イオン交換クロマトグラフィー (IEX) は、イオンや極性分子をその電荷に基づいて分離できる高感度の技術です。SEC と同様に、IEX もタンパク質をネイティブの状態で分離するために使用できます。

電荷変異体分析への IEX の適用生成および精製時に、アミノ酸置換、グリコシル化、リン酸化、その他の翻訳後修飾や化学修飾の結果、抗体の電荷均一性に変化が生じることがあります。このような変化は安定性と活性に影響を与えることがあるため、または免疫上マイナスの反応を引き起こすことがあるため、モノクローナ
ル抗体 (MAb) の生成における電荷均一性の分析はバイオ医薬品にとって非常に重要です。
タンパク質の分析では、特定の pH における電荷の変動は、分子の一次構造が変化し、問題となるタンパク質に別の形態が生じたことを示しています。これらはアイソフォーム (または電荷変異体) と呼ばれ、IEX クロマトグラフィーによって分離することができます。IEX は前処理技術としても有効です。
以降のページで、アジレントの弱および強イオン交換カラム (アニオンおよびカチオン) について説明します。

• アジレントの非多孔質 Bio IEX カラムは、高分解能、高効率、および高回収率の分離用に設計されています。

• Agilent Bio MAb カラムは、モノクローナル抗体の電荷アイソフォームの分離用に最適化されています。

• アジレントの多孔質 IEX カラム (PL-SAX および PL-SCX) は化学的な安定性があり、2 つのポアサイズが用意されているため、ペプチド、オリゴヌクレオチド、超高分子量タンパク質を分離することができます。

• バイオモノリス IEX カラムは、抗体、ウィルス、および DNA の迅速分離に特に適しています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

185

生体分子の分離用カラム

イオン交換カラムの選択
アプリケーション

Agilent カラム

説明モノクローナル抗体

Agilent Bio MAb

モノクローナル抗体の特性解析には、酸性および塩基性アイソフォームの同定とモニタリングが含まれます。Agilent Bio MAb HPLC カラムには、モノクローナル抗体の電荷に基づく高分解能の分離用に設計された独自の樹脂が使用されています。

ペプチドおよびタンパク質

Agilent Bio IEXAgilent バイオイオン交換カラムには、ポリマー系の非多孔質イオン交換粒子が充填されています。Bio IEX カラムは、高分解能、高回収率、および高効率の分離用に設計されています。

タンパク質、ペプチド、および脱保護合成オリゴヌクレオチド

PL-SAX

化学的に安定した全多孔質ポリマーに強アニオン交換基が共有結合しているため、広い動作
pH 範囲を提供します。さらに、アニオン交換容量は pH の影響を受けません。合成オリゴヌク
レオチドを変性条件下で分離する際には、変性させるための要素として温度、有機溶媒、高pH など、あらゆる手法を採用できます。また、5 µm の充填剤は高分解能用、30 µm は中圧 LC用に使用します。

ü 1000 Å
ü 4000 Å

球状タンパク質およびペプチド

PL-SAX 1000Å

生体超高分子/高速

PL-SAX 4000Å

低分子ペプチドから高分子タンパク質まで

PL-SCX
ü 1000 Å
ü 4000 Å

球状タンパク質

PL-SCX 1000Å

生体超高分子/高速

PL-SCX 4000Å

抗体 (IgG、IgM)、プラスミド DNA、ウィルス、ファージ、その他の生体高分子

バイオモノリスü バイオモノリス QA
ü バイオモノリス DEAE
ü バイオモノリス SO3

ü バイオモノリスプロテインA
ウィルス、DNA、高分子量タンパク質186

バイオモノリス QA

プラスミド DNS、バクテリオファージ

バイオモノリス DEAE

タンパク質、抗体

バイオモノリス SO3

PL-SCX は、マクロポーラス型のスチレンジビニルベンゼンポリマーに親水性コーティングと陽イオン交換基を化学結合させた、ポリマー系の陽イオン交換 HPLC カラムです。さまざまなサイズの生体分子を効率よく分離精製するために、強カチオン交換部位の密度が最適になるよ
うに制御されています。また、5 µm の充填剤は高分解能用、30 µm は中圧 LC 用に使用します。

強カチオン交換、強/弱アニオン交換、プロテイン A の各相。

生体分子の分離用カラム

Agilent Bio MAb HPLC カラム• 硬質球状高架橋ポリスチレンジビニルベンゼン (PS/DVB) 非多孔質ビーズから構成される充填
担体• 非多孔質ビーズは親水性ポリマー層で覆われ、抗体タンパク質の非特異的結合を排除して、効率と回収率を高める粒子• 粒子に対する弱カチオン交換相の層形成に異なるプロセスを使用することで、Agilent Bio WCX
カラム粒子よりも高い密度を実現• モノクローナル抗体のアイソフォームの特性解析用に設計
モノクローナル抗体の特性解析には、酸性および塩基性アイソフォームの同定とモニタリングが含まれます。Agilent Bio MAb HPLC カラムには、モノクローナル抗体の高分解能電荷ベース分離用に設計された、独自の樹脂が使用されています。水系緩衝液、アセトニトリル/アセトン/メタノールおよび水の混合溶液を使用できます。一般に使用される緩衝液は、リン酸塩、Tris、MES、および酢酸です。

Bio MAb カラムは、1.7 µm、3 µm、5 µm、および 10 µm サイズの粒子を取り揃えています。小さい粒子ほど分離能が高くなります。

カラム仕様
結合相
弱カチオン交換 (カルボン酸)

ID

粒子径

pH 安定性

使用温度上限流量

2.1 および4.6 mm

1.7、3、5、および 10 µm

2-12

80 °C

0.1 ～
1.0 mL/min

ヒントとテクニック
キャピラリー電気泳動は、電荷アイソフォームの分離に適した、液体クロマ
トグラフィーに代わる技術です。詳細
については、次のテクニカルノートをご覧ください。

Capillary electrophoreseis focusing on the
Agilent Capillary Electrophoresis system(資料番号 5989-9852EN)
www.agilent.com/chem/library

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

187

生体分子の分離用カラム

イオン交換 MAb の分離
カラム :Bio MAb、PEEK
5190-2411
2.1 x 250 mm、5 µm

mAU

移動相 :

A : 20 mM リン酸ナトリウム緩衝液
B : 緩衝液 A + 400 mM NaCl

グラジエント :0 ～ 30 分で 15 ～ 35 % 緩衝液 B

流量 :0.65 mL/min

サンプル :

CHO-ヒト MAb、1 mg/mL

注入 :2.5 µL

検出器 :UV、220 nm

カラム温度 :

室温

120
100
80
60
40
20
0

1 回目の分析

2

4

6

8

10

12

14

16

18

min

mAU
140
120
100
80
60
40
20
0

金属フリーの流路を確保するには、Bio MAb PEEK カラ
ムをお選びください。

10 回目の分析

4

2

6

8

10

12

14

16

18

min
VLC_IE_Mab

保持時間の変動を排除
カラム :Bio MAb、ステンレス
5190-2413
4.6 x 250 mm、10 µm

移動相 :A : 10 mM リン酸、pH 6.0
B : A + 1.0M 塩化ナトリウム流量 :1.0 mL/min

グラジエント :0-100 % B、42 分

カラム温度 :

25 °C

検出器 :

UV 214 nm

2

1

3

1. シトクローム c
2. リゾチーム
3. リボヌクレアーゼ A

Lot A

Lot B

Lot C

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

min

樹脂製造、カラム表面の化学的特性、カラム充填剤のすべてを適切に管理することで、カラム間やロット間でのリテンションタイムの変動を排除します。

188

生体分子の分離用カラム

モノクローナル抗体の電荷アイソフォームの分析
カラム :Bio MAb、PEEK
5190-2407
4.6 x 250 mm、5 µm

吸光度 (AU)

0.60

移動相 :

A : 10 mM リン酸ナトリウム、pH 7.50
B : A + 100 mM NaCl、pH 7.50

0.50

流量 :

0.8 mL/min

0.40

グラジエント : 15 ～ 95 % B、60 分
サンプル :

酸性のアイソフォーム

塩基性のアイソフォーム

0.30

5 µL、5 mg/mL、MAb
0.20
0.10
0.00
0

2

4

6

8

10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34

Agilent Bio MAb NP5 カラムを使用した酸性および塩基性電荷変異体の高分解能の分離

Agilent Bio MAb HPLC カラム
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Bio MAbPEEK

Bio MAb
圧力限界

ステンレス

圧力限界

5190-2413

275 bar, 4000 psi

5190-2405

400 bar, 5800 psi

5190-2403

551 bar, 8000 psi

4.6 x 250

105190-2415

275 bar, 4000 psi

4.6 x 50, ガード

105190-2416

275 bar, 4000 psi

4.6 x 250

55190-2407

400 bar, 5800 psi

4.6 x 50, ガード

55190-2408

400 bar, 5800 psi

4.6 x 503

4.6 x 501.75190-2401

600 bar, 8700 psi

4.0 x 10, ガード

105190-2414

275 bar, 4000 psi

4.0 x 10, ガード

55190-2406

413 bar, 6000 psi

4.0 x 10, ガード

35190-2404

551 bar, 8000 psi

4.0 x 10, ガード

1.7

5190-2402

600 bar, 8700 psi

2.1 x 250

105190-2419

275 bar, 4000 psi

2.1 x 50, ガード

105190-2420

275 bar, 4000 psi

2.1 x 250

55190-2411

400 bar, 5800 psi

2.1 x 50, ガード

55190-2412

400 bar, 5800 psi

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

189

生体分子の分離用カラム

Agilent バイオ HPLC イオン交換カラム• 高架橋の硬質の非多孔質ポリスチレンジビニルベンゼン (PS/DVB) 粒子は親水性ポリマー層で覆われ、非特異的結合を排除• 均一で細密に充填されたイオン交換官能基(結合点に複数のイオン交換基)が親水性層に化学結合され、高いキャパシティ

• 粒子、被膜、および交換基は高圧に対する耐性があり、より高い分解能で高速な分離が可能• キャパシティを増やすために、１つの結合点に複数のイオン交換基を結合
Agilent バイオ HPLC イオン交換カラムには、非多孔質イオン交換ポリマー粒子が充填されており、ペプチド、オリゴヌクレオチド、およびタンパク質の高分解能、高回収率、高効率分離を実現するように設計されています。
バイオ HPLC イオン交換カラムでは、強カチオン交換 (SCX)、弱カチオン交換 (WCX)、強アニオン交換 (SAX)、弱アニオン交換 (WAX) の 4 種類のイオン交換基を用意しています。1.7 µm、3 mm、5 µm、および 10 µm の非多孔質粒子経を提供しています。

カラム仕様
結合相

SCX (強カチオン交換) – SO3H

ID

粒子径

pH 安定性

使用温度上限流量

2.1 および 4.6 mm

1.7、3、5、および 10 µm

2-12

80 °C

0.1 ～ 1.0 mL/min

WCX (弱カチオン交換) – COOH
SAX (強アニオン交換) – N(CH3)3
WAX (弱カチオン交換) – N(C2H5)2

ヒントとテクニック
ホームページで各種資料をご覧いただけます。入門書、アプリケーションノート、メンテナンスガイドなど、さまざまな資料を用意しています。
詳細については、www.agilent.com/chem/jp をご覧ください。

190

生体分子の分離用カラム

卓越した分離能カラム :mAU

Agilent Bio SCX、ステンレス
5190-2423
4.6 x 50 mm、3 µm

2

1

5
4

40

移動相 :

10 mM リン酸、pH 6.0

流量 :0.5 mL/min

グラジエント :0-1.0 M 塩化ナトリウム、15 分

検出器 :280 nm

1. オブアルブミン、4.6 pl
2. リボヌクレアーゼ A、8.7 pl
3. シトクローム c、9.6 pl
4. アプロチニン、10.0 pl
5. リゾチーム、11.0 pl3

リゾチームで N > 100,000/50 mm

3020

親水性ポリマー層および密に充填されたイオン交換官能基により、広範な等電点 (pI) でタンパク質混合物質の極めてシャープなピーク形状と高分10解能が実現します。

0

2

4

6

8

10

12 minカチオン交換クロマトグラフィーによる Agilent 3 µm
イオン交換カラムを使用したタンパク質標準の分離
カラム A :

Agilent Bio SCX、NP 3、4.6 x 50 mm、SS

カラム B :

Agilent Bio WCX、NP 3、4.6 x 50 mm、SS

カラム C :

Agilent Bio MAb、NP 3、4.6 x 50 mm、SS

移動相 :A : 10 mM NaH2PO4.2H2O、pH 5.70
B : A + 1 M NaCl

流量 :0.5 mL/min

グラジエント :0 分 - 100 % A : 0 % B
25 分 - 0 % A : 100 % B

3

1
3

2
3

SCX

カラム温度 :

室温

検出器 :ダイオードアレイ検出器を備えた Agilent
1260 Infinity バイオイナートクォータナリ LC

1

2

WCX

サンプル :

2

1(220 nm)
シトクローム c、リボヌクレアーゼ A、リゾ
チーム、およびタンパク質混合物

MAb

Bio WCX、SCX、および MAb カラムのタンパク質の分離性能
Agilent カラム

ピーク番号

ピーク名

Bio WCX NP、3 µm

1
2

Bio SCX NP、3 µm

Bio MAb NP、3 µm

RT (分)

高さ (mAU)面積 (mAU*s)

段数

幅 (分)

分解能

シトクローム c

7.86

124

RNase A

9.03

241

1833

7844

0.2089

-

3358

10800

0.2044

3.32

3

リゾチーム

13.13

636

7274

44488

0.1466

13.73

1

RNase A

7.06

396

2616

39847

0.0832-

2

シトクローム c

7.66

297

2778

28920

0.1060

1.08

3

リゾチーム

10.49

763

7186

44828

0.11671.37

1

シトクローム c

10.04

203

2369

21814

0.1600-2

RNase A

11.37

256

2690

33314

0.1467

3.11

3

リゾチーム

12.59

652

6616

56734

0.12445.28

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

191

生体分子の分離用カラム

ブランド B WCX-10
4.0 x 250 mm、10 µm

移動相 :A : 20 mM リン酸ナトリウム (pH = 6.0)
B : 1.0 M 塩化ナトリウムを含む 20 mM
リン酸ナトリウム (pH = 6.0)流量 :0.5 mL/min

グラジエント :10 % B 0 分、35 % B 35 分、
10 % B 36 分、10 % B 45 分
検出器 :サンプル :

UV、220 nm/4 nm、リファレンス : オフ
(データは 220、230、240、および
280 nm でも取得)
P128

23

24

25

B
mAU
350
300
250
200
150
100
50
0
22

23

24

25

mAU
140

26

27

28

29

30

31

min

26.867

カラム C :

A
mAU
400
350
300
250
200
150
100
50
0
22

26.35926.618Bio MAb、PEEK
5190-2415
4.6 x 250 mm、10 µm

25.860

カラム B :

24.786

Bio MAb、PEEK
5190-2407
4.6 x 250 mm、5 µm

26

27

28

29

30

31

min

26

27

28

29

30

31

min

25.210

カラム A :

27.564

さまざまなカチオン交換カラムを使用した Agilent 1260 バイオイナートクォータナリ LC システムでの P128 治療用タンパク質サンプルの弱カチオン交換クロマトグラフィー分析

C120
23.97610080

限外濾過によりサンプルを脱塩し、20 mM リン酸ナトリウムに抽60出しました。

40
20
22

192

23

24

25

生体分子の分離用カラム

Agilent バイオ HPLC イオン交換カラム、PEEK
Bio-SCX

Bio WCX

Bio SAX

Bio WAX

部品番号

部品番号

部品番号

部品番号

275 bar, 4000 psi

5190-2435

5190-2455

5190-2475

5190-2495

10

275 bar, 4000 psi

5190-2436

5190-2456

5190-2476

5190-2496

5400 bar, 5800 psi

5190-2427

5190-2447

5190-2467

5190-2487

5400 bar, 5800 psi

5190-2428

5190-2448

5190-2468

5190-2488

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

4.6 x 25010

4.6 x 50、ガード
4.6 x 250
4.6 x 50、ガード

圧力限界

2.1 x 250

10275 bar, 4000 psi

5190-2439

5190-2459

5190-2479

5190-2499

2.1 x 50、ガード

10

275 bar, 4000 psi

5190-2440

5190-2460

5190-2480

5190-2500

2.1 x 250

5400 bar, 5800 psi

5190-2431

5190-2451

5190-2471

5190-2491

2.1 x 50、ガード

5

400 bar, 5800 psi

5190-2432

5190-2452

5190-2472

5190-2492

Bio-SCX

Bio WCX

Bio SAX

Bio WAX

部品番号

部品番号

部品番号

部品番号

Agilent バイオ HPLC イオン交換カラム、ステンレス
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

圧力限界

4.6 x 250

10275 bar, 4000 psi

5190-2433

5190-2453

5190-2473

5190-2493

4.6 x 250

5413 bar, 6000 psi

5190-2425

5190-2445

5190-2465

5190-2485

4.6 x 503551 bar, 8000 psi

5190-2423

5190-2443

5190-2463

5190-2483

4.6 x 50

1.7

600 bar, 8700 psi

5190-2421

5190-2441

5190-2461

5190-2481

4.0 x 10、ガード

10

275 bar, 4000 psi

5190-2434

5190-2454

5190-2474

5190-2494

4.0 x 10、ガード

5

413 bar, 6000 psi

5190-2426

5190-2446

5190-2466

5190-2486

4.0 x 10、ガード

3

551 bar, 8000 psi

5190-2424

5190-2444

5190-2464

5190-2484

4.0 x 10、ガード

1.7

275 bar, 4000 psi

5190-2422

5190-2442

5190-2462

5190-2482

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp193

生体分子の分離用カラム

PL-SAX 強陰イオン交換 HPLC カラム• 小さな粒子径で分離性能を向上• 幅広い粒子径と 2 つのポアサイズにより分析から分取に容易にスケールアップ• 高い安定性と長寿命
PL-SAX -N(CH3)3+ は、タンパク質やペプチド、変性条件下での脱保護合成オリゴヌクレオチドのアニオン交換 HPLC 分離に理想的なカラムです。化学的に安定した全多孔質ポリマーに強アニオン交換
基が共有結合しているため、あらゆる pH において効果を発揮し、その保持容量は pH の影響を受けません。合成オリゴヌクレオチドを変性条件下で分離する際には、変性させるための要素として温度、有機溶媒、高 pH など、あらゆる手法を採用できます。また PL-SAX は、凝集体やヘアピン構造
を引き起こす自己相補的配列や G リッチ配列を持つオリゴの分離も改善します。粒子径 5µm のカラ
ムは、n と n-1 のオリゴを分離できるほど高い性能を有しています。幅広い粒子径とカラムサイズを取り揃えており、分析から分取へのスケールアップも可能です。PL-SAX は、化学的安定性および熱安定性に優れ、水酸化ナトリウムでカラムを洗浄することによりカラム寿命を長く保つことができます。

カラムの仕様結合相
強アニオン交換194

内径 (mm)

粒子径 (µm)

ポアサイズ

pH 安定性

使用温度上限2.1、4.6、7.5、25、50、100

5、8、10、301000 Å および
4000 Å

1-14

80 °C

生体分子の分離用カラム

1. ミオグロビン
2. ウシ炭酸脱水酵素
3. オブアルブミン
4. 大豆トリプシンインヒビター

標準タンパク質の分離
カラム :PL-SAX 1000 Å
PL1551-1502
4.6 x 50 mm、5 µm

移動相 :A : 10 mM Tris HCl pH 8
B : A + 0.35 M NaCl pH 8

グラジエント :0 - 100 % B in 20 min

流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、220 nm

3
1

0

4

2

25

min

VLC0070

PL-SAX 4000Å を使用した
コリンキナーゼの分析
カラム :PL-SAX
PL1551-1803
4.6 x 50 mm、8 µm

移動相 :A : 20 mM トリス 5 %エチレングリコール、

%B
100

酵素活性

pH 7.5(以下は酵素活性を維持するために必要)
1.0 mM エチレングリ

コール四酢酸2.0 mM ß-メルカプトエ
タノール
0.2 mM フッ化フェニル
メチルスルホニル

B : A + 1 M KCI
流量 :3.0 mL/min

検出器 :UV、280 nm

0
0

min

40

分離データ提供 : T Porter, Purdue University, USA

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

195

生体分子の分離用カラム

代表的な乳清タンパク質の分析
カラム :

1

PL-SAX 1000 Å
PL1551-1802
4.6 x 50 mm、8 µm

移動相 :A : 0.02 M トリス塩酸、pH 7
B : A + 0.5 M CH3COONa、pH 7

流量 :1.0 mL/min

グラジエント :10 ～50 % B (10 分)

検出器 :UV、280 nm

2
1. 炭酸脱水酵素
2. α-ラクトアルブミン
3. β-ラクトグロブリン B
4. β-ラクトグロブリン A

4
3

0

min

18

ポリ-T-オリゴヌクレオチドの高度な分離(10 mer、15 mer、30 mer、50 mer は標準をスパイク)
カラム :

移動相 :

PL-SAX 1000 Å
PL1551-1802
4.6 x 50 mm、8 µm

2000
10

15

A : 7 : 93 v/v アセトニトリル : 0.1 M
TEAA、pH 8.5
B : 7 : 93 v/v アセトニトリル : 0.1M
TEAA、1 M 塩化アンモニウム、pH 8.5

グラジエント :10 分で 0 ～ 40 % B、次に 14 分で40 ～ 70 % B、25 分で 70 ～ 100 % B

流量 :1.5 mL/min

カラム温度 :

60 °C

検出器 :

UV、220 nm

30

50

0

0

min

50
VLC0045196

生体分子の分離用カラム

PL-SAX 強陰イオン交換 HPLC カラム
寸法 (mm)1.0 x 50

粒子径 (µm)5

圧力限界

PL-SAX
1000 Å

PL-SAX
4000 Å

207 bar, 3000 psi

PL1351-1502

PL1351-1503

2.1 x 505207 bar, 3000 psi

PL1951-1502

PL1951-1503

4.6 x 505207 bar, 3000 psi

PL1551-1502

PL1551-1503

2.1 x 508207 bar, 3000 psi

PL1951-1802

PL1951-1803

2.1 x 1508207 bar, 3000 psi

PL1951-3802

PL1951-3803

4.6 x 508207 bar, 3000 psi

PL1551-1802

PL1551-1803

4.6 x 1508207 bar, 3000 psi

PL1551-3802

PL1551-3803

4.6 x 250

10207 bar, 3000 psi

PL1551-5102

PL1551-5103

4.6 x 15010207 bar, 3000 psi

PL1551-3102

PL1551-3103

25 x 5010207 bar, 3000 psi

PL1251-1102

PL1251-1103

25 x 15010207 bar, 3000 psi

PL1251-3102

PL1251-3103

50 x 15010207 bar, 3000 psi

PL1751-3102

PL1751-3103

100 x 300

10207 bar, 3000 psi

PL1851-2102

PL1851-2103

4.6 x 25030

207 bar, 3000 psi

PL1551-5702

PL1551-5703

4.6 x 15030

207 bar, 3000 psi

PL1551-3702

PL1551-3703

25 x 15030

207 bar, 3000 psi

PL1251-3702

PL1251-3703

50 x 15030

207 bar, 3000 psi

PL1751-3702

PL1751-3703

100 x 30030

207 bar, 3000 psi

PL1851-3102

PL1851-3103

粒子径 (µm)

PL-SAX
1000 Å

PL-SAX
4000 Å

PL-SAX 強陰イオン交換充填剤バルク
サイズ

100 g

10

PL1451-4102

PL1451-4103

1 kg

10

PL1451-6102

PL1451-6103

100 g

30

PL1451-4702

PL1451-4703

1 kg

30

PL1451-6702

PL1451-6703

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

197

生体分子の分離用カラム

PL-SCX 強陽イオン交換カラム• 生体高分子の分離に最適なカラム• 目的の化合物に応じてポアサイズを選択可能• 高い安定性と長寿命
PL-SCX -SO3- は、マクロポーラス型のスチレンジビニルベンゼンポリマーに親水性コーティングと陽イオン交換基を化学結合させた、ポリマー系の陽イオン交換 HPLC カラムです。小さなペプチドから大きなタンパク質までを効率よく分離精製するために、イオン交換基の官能基密度を適切にコントロールしています。目的の化合物に応じて、1000 Å と 4000 Å の 2 つのポアサイズを選択できます。また、粒子径 5 µm は高分離用、粒子径 30 µm は中圧 LC 用として使用します。

カラム仕様
結合相

内径 (mm)強カチオン交換

粒子径 (µm)

ポアサイズ

pH 安定性

使用温度上限2.1、4.6、7.5、 5、8、10、30
25、50、100

1000 Å および
4000 Å

1-14

80 °C

標準タンパク質の分離
カラム :PL-SCX 1000Å
PL1545-1502
4.6 x 50 mm、5 µm

移動相 :A : 20 mM リン酸二水素一カリウム水溶液、pH 6.0
B : A + 1M 塩化ナトリウム

グラジエント :20 分で 0 ～ 100 % B

流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、280 nm

2

1

3

1. ミオグロビン
2. キモトリプシノーゲン A
3. シトクローム c
4. リゾチーム

Lot A

Lot B

Lot C

0

198

2

4

6

8

10

12

14

16

18

min

生体分子の分離用カラム

PL-SCX 強陽イオン交換カラム
寸法 (mm)1.0 x 50

粒子径 (µm)5

圧力限界

PL-SCX
1000Å

PL-SCX
4000Å

207 bar, 3000 psi

PL1345-1502

PL1345-1503

2.1 x 505207 bar, 3000 psi

PL1945-1502

PL1945-1503

4.6 x 505207 bar, 3000 psi

PL1545-1502

PL1545-1503

2.1 x 508207 bar, 3000 psi

PL1945-1802

PL1945-1803

2.1 x 1508207 bar, 3000 psi

PL1945-3802

PL1945-3803

4.6 x 508207 bar, 3000 psi

PL1545-1802

PL1545-1803

4.6 x 1508207 bar, 3000 psi

PL1545-3802

PL1545-3803

4.6 x 15010207 bar, 3000 psi

PL1545-3102

PL1545-3103

4.6 x 250

10207 bar, 3000 psi

PL1545-5102

PL1545-5103

25 x 5010207 bar, 3000 psi

PL1245-1102

PL1245-1103

25 x 15010207 bar, 3000 psi

PL1245-3102

PL1245-3103

50 x 15010207 bar, 3000 psi

PL1745-3102

PL1745-3103

100 x 300

10207 bar, 3000 psi

PL1845-2102

PL1845-2103

4.6 x 15030

207 bar, 3000 psi

PL1545-3702

PL1545-3703

4.6 x 25030

207 bar, 3000 psi

PL1545-5703

PL1545-5703

25 x 15030

207 bar, 3000 psi

PL1245-3702

PL1245-3703

50 x 15030

207 bar, 3000 psi

PL1745-3703

PL1745-3703

100 x 30030

207 bar, 3000 psi

PL1845-3102

PL1845-3103

PL-SCX
1000Å

PL-SCX
4000Å

PL-SCX 強陽イオン交換充填剤バルク
サイズ

粒子径 (µm)

100 g

10

PL1445-4102

PL1445-4102

1 kg

10

PL1445-6102

PL1445-6103

100 g

30

PL1445-4702

PL1445-4703

1 kg

30

PL1445-6702

PL1445-6703

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

199

生体分子の分離用カラム

Agilent バイオモノリスイオン交換 HPLC カラム• 大型生体分子分離用に設計されたポリマーベースのモノリス HPLC カラム• 流速に依存しない分離を実現。拡散、ポア、およびボイドボリュームがないため、移動相と固定相の間の高速移動が可能• モノリスディスクは 5.2 mm x 4.95 mm (カラム容量 100 µL) で、拡散による物質移動を排除• 超高速分離によってメソッド開発時間とコストを削減し、メソッドパラメータを固定すること
で分析時間と緩衝液を大幅に削減可能

バイオモノリスイオン交換 HPLC カラム

Agilent バイオモノリスイオン交換 HPLC カラムは、抗体 (IgG、IgM)、プラスミド DNA、ウィルス、
ファージ、その他のマクロ生体分子の高速高分解能の分離を実現します。強カチオン交換、強アニ
オン交換、弱アニオン交換、プロテイン A の各相が用意されています。バイオモノリス HPLC カラム
は、Agilent 1100 および 1200 HPLC システムを含む HPLC システムに適合します。

Agilent バイオモノリス HPLC カラム選択ガイド
カラム

説明

主要アプリケーション

部品番号

バイオモノリス QA

第 4 級アミン結合相 (強アニオン交換) は使用 pH 範囲 2 ～
13 で完全に荷電し、負電荷により生体分子と結合します。

ü アデノウイルスのプロセスモニタリングと品質管理

5069-3635

ü IgM 精製のモニタリングと品質管理
ü DNA 不純物除去のモニタリング
ü エンドトキシン除去のモニタリング
ü HSA 純度分析

バイオモノリス

DEAE
バイオモノリス SO3

ジエチルアミノエチル結合相 (弱アニオン交換) は、使用
pH 範囲 3 ～ 9 で負電荷を帯びるため、生体分子の選択性を拡大します。
スルホニル結合相 (強カチオン交換) は使用 pH 範囲 2 ～ 13で完全に荷電し、正電荷により生体分子と結合します。

ü バクテリオファージ精製のプロセスモニタリングと品質管理
ü プラスミド DNA 精製のプロセスモニタリングと品質管理ü タンパク質や抗体などの大型生体分子の高速高分離
ü ヘモグロビン A1c の高速分析

ヒントとテクニック
アフィニティクロマトグラフィー用のプロテイン A バイオモノリスカラムも提供しています。詳細については、
222 ページをご覧ください。

200

5069-3636

5069-3637

生体分子の分離用カラム

カラム仕様
寸法

5.2 mm x 4.95 mm

カラム容量

100 µL

最大圧力

15 MPa (150 bar、2200 psi)

最低/最高使用温度

使用範囲 : 4 ～ 40 °C
保管 : 4 ～ 30 °C

推奨 pH

使用範囲 : 2 - 13
洗浄 : 1 - 14

使用材質

ハードウェア : ステンレス製
パッキング材 : ポリ (グリシジル メタクリレート-co-エチレン ジメタクリレート) 多孔モノリス

カラー識別リング

バイオモノリス QA : 青
バイオモノリス DEAE : 緑
バイオモノリス SO3 : 赤

保管期限/使用期限

SO3、QA、DEAE : 24 ～ 36 ヶ月

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp201

生体分子の分離用カラム

移動相 :A : 10 mM Na2HPO4、pH 6.0
B : A + 0.5 M NaCl または 0.5 M Na2HPO4、pH 6.0 のみ

10

サンプル :

移動相 A にそれぞれ 1 mg/mL。
1. ウシ膵臓由来の RNAse (pI 9.6)
2. ウシ心臓由来のシトクローム c(pI 10.37 ～ 10.8)
3. 鶏卵由来のリゾチーム (pI 11.35) (0.5 mg)

8ダイオードアレイ検出器を備えた Agilent

3
A (NaCl グラジエントを使用)

6.834

12.170

6.357

12

14

16

18

min

18

min

16.901

10
10.335

8
9.271

6
5.653

4

6.482
7.059
7.604
8.162

UV、220 nm

1200 SL

202

2

4.483
4.968

移動相 A で 0.5 分間保持、次に 15 分間で
10
45 % B までのリニアグラジエント
8(経過時間 15.5 分)。次に 15.6 分で 60 % B。
6
20 分まで継続。
4
100 % B でカラムを 15 分間フラッシュした
後、次の分析のために再平衡化。pH グラジ
エント : A : 5 mM Na2HPO4、緩衝液 (pH 5.5)mAU
および B : 40 mM NA2HPO4 (緩衝液なし、pH 8.9)。15 分間で 1 mL/min で 2 % B/min、 1412
次に 90 % B で 5 分間カラム洗浄。

検出器 :

装置 :

1

12

4.945

グラジエント :2 mL/min

4.284
4.520
4.688

流量 :

mAU
14

16.410

Agilent バイオモノリス CM15、
5.5 x 15 mm

9.072

カラム :

7.832

タンパク質標準の分離例のベースライン拡大図

B (Na2HPO4 グラジエントを使用)

6
4
4

6

8

10

12

B の方がタンパク質の夾雑物質を良好に分離します。

14

16

生体分子の分離用カラム

50

カラム :

45

DEAE
5069-3636
5.2 x 4.95 mm

120

時間 : 36 分
時間 : 158 分

40

流量 :

1 mL/minグラジエント :100 % バッファ A (2.5 分)
0 ～ 100 % バッファ B (10 分)
100 % バッファ A (2 分)

相対吸光度 (mAU)

A : 125 mM リン酸緩衝液、pH 7.0
B : 125 mM リン酸緩衝液 + 1 M NaCl、
pH 7.08030

ファージなどの化合物

25

60

20
40

15

3

1

10

20

検出器 :

UV、280 nm

5

装置 :高圧グラジエント HPLC システム、

0

Agilent 1200 Infinity LC

100% バッファ B

35

移動相 :

2

時間 : 191 分% グラジエント

バイオモノリス DEAE カラムを使用したファージ精製のモニタリング

0
0

2

4

6

8

10

12

min

ファージ増殖が進むにつれて、宿主細胞が溶解されているためにゲノム DNA (gDNA) 濃度は高くなります。発酵の最終段階で、gDNA
は断片に分解し始めます。精製培地ではこれらの gDNA 断片を簡単に除去できないため、ゲノム DNA の分解前に発酵サイクルを停止させることが重要です。 上記は、36 分、158 分、191 分にバイオリアクターから採取した 3 種類のサンプルのクロマトグラムです。
ピーク 1 はファージ、培地、宿主細胞、ピーク 2 はインタクト gDNA、ピークは断片化された gDNA を表します。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp203

生体分子の分離用カラム

サイズ排除クロマトグラフィー (SEC)
生体分子の凝集、断片化、
化学的ライゲーション/修飾を正確に確認
サイズ排除クロマトグラフィー (SEC) は、水系溶離液を使用し、サイズによってタンパク質、オリゴ
ヌクレオチド、その他の複雑なバイオポリマーを分離するための技術です。

凝集分析への SEC の適用
タンパク質バイオ医薬品での凝集のサイズ、種類、内容は、効能と処方の両方に影響を与えたり、さらには免疫反応を誘発したりすることもあります。凝集は、ジスルフィド結合の形成や非共有結合など、さまざまなメカニズムによって発生します。
二量体など、タンパク質の凝集のサイズはタンパク質単量体とは大きく異なるため、SEC を使用してさまざまな形態を分離することができます。実際に、UV または光分散を使用した SEC は、タンパク質の凝集を定量するための標準的な技術です。

定量および分子量測定に対する SEC の適用
中程度の分子量を持つタンパク質やその他の分子では、SEC を使用して単量体、二量体、凝集、断片などを検出し、定量することができます。SEC はオリゴヌクレオチド混合物も分離できます。
デンプンやその他の多糖のようにさまざまなサイズを持つバイオポリマーでは、SEC は分子量分布とブランチング (適切な検出器を使用) に関するデータを提供します。

204

生体分子の分離用カラム

SEC カラムおよび機器のトップメーカーとして 30 年を超える実績を持つアジレントは、より高い分解能と高速の分離を提供する新しい SEC 製品を絶え間なく開発してきました。この項では、タンパ
ク質バイオポリマー分析のためのアジレントの SEC カラムファミリについて説明します。

• バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-3 カラムおよびバイオ HPLC ゲルろ過 SEC-5 カラムにはさまざまなポ

アサイズがあり、特に治療用生体製剤での二量体や凝集体の存在の確認など、タンパク質分析に最適です。バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-3 カラムが、業界標準の 5 µm Bio SEC-5 カラムよりも高い分解能を提供する点に注意してください。

• ProSec 300S カラムは、高塩濃度条件下での球状タンパク質の分析に適しています。
• ZORBAX GF-250 および GF-450 カラムは、カラムサイズが大きく、流量が大きいため、タンパク質の分取 SEC に最適です。

• PL aquagel-OH カラムは、PEG、オリゴ糖、多糖、デンプン、ゴムなど、幅広い分子量のバイオポリマーの分析に使用することができます。

サイズ排除クロマトグラフィー (SEC)
アプリケーション

Agilent カラム

ノート

ペプチド、タンパク質

Agilent Bio SEC-3

100 Å、150 Å、300 Å のポアサイズによる 3 µm 粒子からの高速高分離分析。

いくつかの分子量を持つ成分が含まれる生体高分子およびサンプル

Agilent Bio SEC-5

幅広い分析に対応する多くのポアサイズオプション (100 Å、150 Å、300 Å、
500 Å、1000 Å、2000 Å)。

球状タンパク質、抗体

ProSEC 300S

高塩濃度条件下でのタンパク質分析のためのシングルカラムオプション。

タンパク質、球状タンパク質

ZORBAX GF-250/450

SEC セミ分取および分取に対応する大きい流量機能と大きいカラムサイズ

低分子量ポリマーおよびオリゴマー、 2 または 3 PL aquagel-OH
オリゴ糖、PEG、リグニンスルホン酸
ü PL aquagel-OH 8 µm
ü PL aquagel-OH 20 5 µm

PL aquagel-OH 分析シリーズは、2 ～ 10 の pH 範囲、有機溶媒との互換性 (最大50 % のメタノール)、最大 14 MPa (2030 psi) の機械的安定性を持ち、カラム動

作圧は低めです。

ü PL aquagel-OH MIXED-M 8 µm
多分散バイオポリマー、多糖、セルロース誘導体

2 または 3 PL aquagel-OHü PL aquagel-OH MIXED-H 8 µm
ü PL aquagel-OH 60/50/40 8 µm

超高分子量ポリマー、ヒアルロン酸、 PL aquagel-OH 60/50/40 15 µm シリーズ
デンプン、ゴムwww.agilent.com/chem/lccolumn:jp

205

生体分子の分離用カラム

Agilent バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-3 カラム• 分子量ベースの生体分子分離に対する卓越した保持容量、安定性、再現性• よりシャープなピーク、高い分解能、および優れたタンパク質回収率• 粒子の大きい SEC カラムよりも高速な分離• ほとんどの水系緩衝液を使用可能• 高濃度および低濃度緩衝液での優れた安定性
Agilent バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-3 カラムは、ユニークなテクノロジーで製造されたサイズ排除ク
ロマトグラフィー (SEC) カラムです。このカラムには、独自の親水性層で被膜された球状の狭分散性
3 µm シリカ粒子が充填されています。この薄いポリマー層は、厳しく管理された条件下で、高純度で機械的に安定したシリカ粒子に化学的に結合されており、効率の高いサイズ排除充填剤となっています。

Agilent バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-3 カラムは、ほとんどのペプチドとタンパク質サイズ排除分離に対応するために、100 Å、150 Å、300 Å のポアサイズを提供しています。

カラム仕様
ポアサイズ

粒子径

MW 範囲

pH 範囲

最大圧力

100 Å

3 µm

100 - 100,000

2 - 8.5

24 MPa、3500 psi

流量0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)
0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)

150 Å

3 µm

500 - 150,000

2 - 8.5

24 MPa、3500 psi

0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)
0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)

300 Å

3 µm

5,000 - 1,250,000

2 - 8.5

24 MPa、3500 psi

0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)
0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)

ヒントとテクニック
不活性処理/シラン処理済みバイアルは、金属、生物学的製剤、タンパク質との相互作用がなく、サンプルの pH をシフトさせません。生体化合物や光に敏感な化合物には標準のポリプロピレンバイアルを使用しないでください。

206

生体分子の分離用カラム

検量線 - Bio SEC-3
カラム :Bio SEC-3
7.8 x 300 mm、3 µm

移動相 :150 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0

流量 :1.0 mL/min

1,000,000,000

検出器 :

UV

100,000,000
10,000,000

MWt

300 Å

150 Å

100 Å

サイログロブリン

670000

6.34

5.50

5.63

ガンマグロブリン

158000

8.03

6.24

5.74

BSA

67000

8.90

7.00

6.03

オブアルブミン

45000

9.57

7.70

6.41

ミオグロビン

17000

10.12

8.50

7.10

リボヌクレアーゼ A

12700

10.40

8.80

7.46

ビタミン B-12

1350

11.90

11.40

10.20

1,000,000

分子量

タンパク質

100,000

300 Å

10,000

150 Å

1,000

100 Å

100
5

4

6

7

8

9

10

11

12

13
MWvsRet保持ボリューム (mL)

MAb 単量体と二量体の分離
カラム :

移動相 :

Bio SEC-3、300 Å
5190-2511
7.8 x 300 mm、3 µm

mAU
300
単量体

150 mM リン酸緩衝液、pH 7.0

250

アイソクラティック : 0 - 100 % Buffer A、0-30 分
流量 :1.0 mL/min

二量体

200

サンプル :

CHO-ヒト化 MAb、5 mg/mL - インタクト

注入 :

5 µL

検出器 :

UV、220 nm

カラム温度 :

室温

150

100

50

0
4

6

8

10

12

14 minVLC_MD_Mab

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

207

生体分子の分離用カラム

モノクローナル抗体の分析におけるAgilent Bio SEC-3 と他社カラムとの比較
カラム :Bio SEC-3、300 Å
5190-2511
7.8 x 300 mm、3 µm

mAU
40

30

カラム :

他社製カラム 7.8 x 300 mm

移動相 :150 mM リン酸ナトリウム + 100 mM
硫酸ナトリウム (塩添加あり)
150 mM リン酸ナトリウム (塩添加なし)

流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、220 nm

サンプル :

mAU
40

単量体

単量体

30

塩添加あり

20

二量体
塩添加あり

二量体

20

10

10

塩添加なし

塩添加なし
0

8 minutes

8 minutes

0

他社カラム

Agilent Bio SEC-3

MAb (2 mg/mL)
0

2

4

6

8

10 min

0

2

4

6

8

10 minMono_Dimer1

Agilent Bio SEC-3 カラムと他社カラムを使用したモノクローナル抗体の単量体および二量体の分析

溶離液

カラム

分離比 (単量体 : 二量体)

単量体の効率

二量体の割合

アジレント

2.04

7,518

0.59

塩添加あり

他社製品

1.88

3,967

0.59

塩添加なし

アジレント

2.08

7,942

0.60

塩添加なし

他社製品

1.92

4,164

0.57

塩添加あり

208

生体分子の分離用カラム

ポアサイズの選択
充填剤のポアサイズの選択は SEC の分解能に影響を与えます。溶液での分子サイズの違いに基づいて分離が行われるため、サンプルは粒子の多孔質構造に浸透できなければなりません。ポアサイズが小さすぎる場合は、サンプルはポアから除去され、カラムのボイドボ
リュームで溶出します。ポアサイズが大きすぎる場合は、粒子に完全に浸透し、ほとんど分離されません。

ポアサイズの選択 : タンパク質
カラム A : Bio SEC-3、100 Å

5190-2503
4.6 x 300 mm、3 µm
カラム B : Bio SEC-3、150 Å

5190-2508
4.6 x 300 mm、3 µm
カラム C : Bio SEC-3、300 Å

mAU
2500

5
4

2
300Å

2000

6

1. サイログロブリンの凝集体
2. サイログロブリン
3. IgA
4. γ-グロブリン
5. オブアルブミン
6. ミオグロビン
7. ビタミン B12

7

3

1

5190-2513
4.6 x 300 mm、3 µm
移動相 :50 mM Na2HPO4、50 mM
NaH2PO4 + 0.15 M NaCl、pH 6.8

1500

流量 :

0.35 mL/min

1000

検出器 :

UV、220 nm

サンプル :

BioRad ゲルろ過標準混合物

150Å

500
100Å
0
0

2.5

5.0

7.5

10.0

12.5

15.0

17.5

20.0
PoreSz_Proteins

ポアサイズの選択 : マウス IgG
カラム A : Bio SEC-3、100 Å

5190-2503
4.6 x 300 mm、3 µm
カラム B : Bio SEC-3、150 Å

5190-2508
4.6 x 300 mm、3 µm
カラム C : Bio SEC-3、300 Å

5190-2513
4.6 x 300 mm、3 µmmAU
1. 二量体2. 単量体3. 単量体断片
4. アジド

1400
1200
1000

2
4

800
1

移動相 :

50 mM Na2HPO4、50 mM
NaH2PO4 + 0.15 M NaCl、pH 6.8

600

流量 :

0.35 mL/min

400

検出器 :

UV、220 nm

サンプル :

マウス IgG

300Å

3

150Å

200
100Å
0
0

2.5

5.0

7.5

10.0

12.5

15.0

17.5

20.0
PoreSz_Mouse

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

209

生体分子の分離用カラム

カラム長
分離時間が重要なパラメータである場合は、高効率の 3 µm 充填剤を充填した短いカラムを使用します。短いカラムで大きい流量を使用すると分析時間が短縮されますが、この場合でもデータ品質が低下することはありません (モノクローナル抗体の単量体と二量体の定量)。

Agilent Bio SEC-3 カラムの長さの比較、150 mm

Agilent Bio SEC-3 カラムの長さの比較、300 mm

カラム :Bio SEC-3、300 Å
5190-2512
7.8 x 150 mm、3 µm

カラム :Bio SEC-3、300 Å
5190-2511
7.8 x 300 mm、3 µm

移動相 :150 mM リン酸ナトリウム +100 mM 硫酸ナトリウム (塩添加あり)
150 mM リン酸ナトリウム (塩添加なし)

流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、220 nm

移動相 :150 mM リン酸ナトリウム流量 :1.0 mL/min (56 bar)、1.5 mL/min (75 bar)

検出器 :UV、220 nm

サンプル :

MAb (2 mg/mL)

サンプル : MAb (2 mg/mL)

150 mm

1.5 mL/min

1.0 mL/min

300 mm

単量体
単量体

二量体
塩添加あり

二量体

単量体
二量体
塩添加なし

4 min
8 min

210

生体分子の分離用カラム

Agilent バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-3 カラム

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Bio SEC-3
100 Å
USP L33

Bio SEC-3
150 Å
USP L33

Bio SEC-3300 Å
USP L33

7.8 x 300

35190-2501

5190-2506

5190-2511

7.8 x 150

35190-2502

5190-2507

5190-2512

4.6 x 300

35190-2503

5190-2508

5190-2513

4.6 x 150

35190-2504

5190-2509

5190-2514

7.8 x 50, ガード

35190-2505

5190-2510

5190-2515

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp211

生体分子の分離用カラム

Agilent バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-5 カラム• 広範囲の分子量ベース生体分子分離に対する最大の回収率• 卓越した再現性とカラム寿命• 高塩および低塩条件やその他の過酷な緩衝液条件下でも優れた安定性• ほとんどの水系緩衝液を使用可能
Agilent バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-5 カラムには、効率と安定性を高めるために、独自の中性親水性層で被膜された 5 µm シリカ粒子が充填されています。特別に設計された充填剤は、ポア容積を高め、ピークキャパシティと分解能の両方を向上させます。
100 Å、150 Å、300 Å、500 Å、1000 Å および 2000 Å ポアサイズ、幅広い排除上限から選択可能

カラム仕様
ポアサイズ

粒子径

MW 範囲

pH 範囲

最大圧力

100 Å

5 µm

100-100,000

2-8.5

24 MPa、3500 psi

0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)

流量

150 Å

5 µm

500-150,000

2-8.5

24 MPa、3500 psi

0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)

0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)
0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)
300 Å

5 µm

5,000-1,250,000

2-8.5

24 MPa、3500 psi

0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)
0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)

500 Å

5 µm

15,000-5,000,000

2-8.5

24 MPa、3500 psi

0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)
0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)

1000 Å

5 µm

50,000-7,500,000

2-8.5

2000 Å

5 µm>10,000,000

2-8.5

24 MPa、3500 psi

0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)
0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)

24 MPa、3500 psi

0.1 ～ 1.25 mL/min (内径 7.8 mm)
0.1 ～ 0.4 mL/min (内径 4.6 mm)

212生体分子の分離用カラム

検量線 - Bio SEC-5
カラム :Bio SEC-5
7.8 x 300 mm、5 µm

移動相 :150 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0

流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、214 nm

1,000,000,000
100,000,000

分子量10,000,000
1,000,000

1000 Å

100,000

500 Å

10,000

300 Å
150 Å

1,000

100 Å
100
4

5

6

7

保持ボリューム
タンパク質

MW

9

10

保持ボリューム (mL)

1000 Å

500 Å

300 Å

150 Å

100 Å

サイログロブリン 670000

10.07

8.23

7.03

5.82

5.77

ガンマグロブリン 158000

10.88

9.80

8.57

6.55

5.79

BSA

67000

11.13

10.44

9.44

7.29

6.00

オブアルブミン

45000

11.28

10.83

9.89

7.90

6.40

ミオグロビン

17000

11.44

11.28

10.42

8.66

7.05

リボヌクレアーゼ A 12700

11.52

11.41

10.58

8.93

7.32

ビタミン B-12

12.00

12.59

11.78

11.49

10.30

1350

8

11

12

13

CalCurves_SEC5

比較
Agilent Bio SEC-5、150 Å

他社カラム

カラム :

Bio SEC-5
5190-2521
7.8 x 300 mm、5 µm

移動相 :150 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0

流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、214 nm

1. チログロブリン、 5.43 分
2. BSA、6.19 分
3. BSA 単量体、6.93 分
4. リボヌクレアーゼ A、8.74 分
5. ポリ-DL-アラニン (1 ～ 5 kDa)、9.90 分
6. ウラシル、12.13 分

1. チログロブリン、 5.64 分
2. BSA 二量体、6.23 分
3. BSA 単量体、7.02 分
4. リボヌクレアーゼ A、9.22 分
5. ポリ-DL-アラニン (1 ～ 5 kDa)、10.02 分
6. ウラシル、11.81 分

Agilent Bio SEC-5 HPLC カラムと他社カラムでのタンパク質混合物 質 の 分 離 。 Agilent Bio SEC-5 HPLC カ ラ ム の ピ ー ク の 方 がシャープで分離能が優れていることに注目してください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp213

生体分子の分離用カラム

卓越した寿命とロット間再現性
カラム :

移動相 :

寿命

Bio SEC-5、150 Å
5190-2521
7.8 x 300 mm、5 µm

AU.80

150 mM リン酸緩衝液、pH 7.0

.70

再現性

1

1

1. チログロブリン
2. BSA.60

3. リボヌクレアーゼ A.50

4. ウラシル

4

3
2

.40

Lot 1

.30

3

2

Lot 2
.20

4

.10

4 種類のタンパク質の混合物質
は、300 回を超える注入と異なる
3 ロットのカラムにおいて、優れ

Lot 3

.00

た保持時間の再現性を示してい
ます。

0

2

4

6

8

10

12 14 min

0

2

4

6

8

12

14 min

18

min

10

3 回目の分析
300 回の注入後バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-3 カラムとバイオ HPLC ゲルろ過 SEC-5 カラムの比較

モノクローナル抗体の分析
カラム :

カラム :

Bio SEC-3、300 Å
5190-2511
7.8 x 300 mm、3 µm

mAU

Bio SEC-5、300 Å
5190-2526
7.8 x 300 mm、5 µm

100

移動相 :

150 mM リン酸ナトリウム、pH 7

流量 :1 mL/min

検出器 :UV、220 nm

サンプル :

ヒトモノクローナル抗体

1. 二量体2. 単量体3. 単量体断片

120

3

3 µm
80
1

2

60
40

5 µm

20
1

3 µm カラムの方が優れた分離能を示します。

0

3

2
0

2

4

6

8

10

12

14

16

Mono_Antibody

214

生体分子の分離用カラム

Agilent バイオ HPLC ゲルろ過 SEC-5 カラム

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Bio SEC-5100 Å
USP L33

Bio SEC-5150 Å
USP L33

Bio SEC-5300 Å
USP L33

Bio SEC-5500 Å
USP L33

Bio SEC-51000 Å
USP L33

Bio SEC-5
2000 Å
USP L33

7.8 x 300

55190-2516

5190-2521

5190-2526

5190-2531

5190-2536

5190-2541

7.8 x 150

55190-2517

5190-2522

5190-2527

5190-2532

5190-2537

5190-2542

4.6 x 300

55190-2518

5190-2523

5190-2528

5190-2533

5190-2538

5190-2543

4.6 x 150

55190-2519

5190-2524

5190-2529

5190-2534

5190-2539

5190-2544

7.8 x 50, ガード

55190-2520

5190-2525

5190-2530

5190-2535

5190-2540

5190-2545

ヒントとテクニック
アジレントのラックを用いると 1290 Infinity LC を超低拡散用に最適化できます。これにより、高効率カラムの性能を高めることができます。詳細については、www.agilent.com/chem/library にある
アプリケーションノート 5990-9502EN をご覧ください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp215

生体分子の分離用カラム

ProSEC 300S
• 使用時のブリードがない堅牢なシリカ粒子• 直線性範囲が広がったシングルカラム• マルチ検出器システムに使用できるカラムサイズ
Agilent ProSEC 300S カラムは、球状タンパク質分析用に特別に設計されたカラムです。ポアサイズの選択と最適化によって直線性の分離範囲が広がったため、幅広い球状タンパク質の分析に使用することができます。
粒子はきわめて堅牢で、使用中に断片化して溶出することはありません。この結果、非常に安定したベースラインが得られるため、このカラムは光散乱検出器での使用に理想的です。
マルチ検出器によるサイズ排除クロマトグラフィー用に、内径 7.5 mm と 4.6 mm の 2 つのカラムサ
イズが用意されています。少量分析向けにお選びいただけます。

ProSEC 300S カラムの仕様
結合相

ProSEC 300S

ポアサイズ

粒子径

タンパク質の MW 範囲

pH 範囲

流量

300 Å

5 µm

1,500 - 800,000

2-7.5

最大圧力

< 1.5 mL/min (内径 7.5 mm)

25 MPa、3700 psi< 0.5 mL/min (内径 4.6 mm)

ProSEC 300S
寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

4.6 x 250

5

PL1547-5501

7.5 x 300

5

PL1147-6501

4.6 x 505

PL1547-1501

7.5 x 50

5

PL1147-1501

ガードカラム216

生体分子の分離用カラム

球状タンパク質を使用した ProSEC 300S カラムのキャリブレーション
移動相 :0.3 M の NaCl が含まれる 50 mM
KH2PO4 - K2HPO4 (pH 6.8)

流量 :1.0 mL/min

検出器 :UV、280 nm

サンプル :

タンパク質サンプル

6
5.5

Log M

5
タンパク質の分子量Mw/ダルトンタンパク質

670,000
155,000
66,43044,28729,00016,70012,384
1,423

サイログロブリン

4.5
4γ-グロブリン
ウシ血清アルブミン

3.5

オブアルブミン
炭酸脱水酵素ミオグロブリン

3

シトクローム c

57

9Retention time (min)バシトラシン

10

13
PSEC300Sglob

ProSEC 300S カラムを使用した光散乱によるウシ血清アルブミンの分析
カラム :ProSEC 300S
PL1147-6501
7.5 x 300 mm、5 µm

移動相 :水 + 120 mM NaCl、2.7 mM KCI、

単量体

10 mM NaH2PO4
1.0 mL/min

検出器 :示差屈折率 + PL-GPC 50 二重角光散乱
検出器

サンプル :

ウシ血清アルブミン

レスポンス

流量 :

RI

三量体

四量体

二量体

分子量
単量体

66,900 ダルトン、88.5 %

二量体

134,900 ダルトン
(2.02 x 単量体の分子量)、9.8 %197,000 ダルトン
(2.94 x 単量体の分子量)、1.2 %279,300 ダルトン
(5.17 x 単量体の分子量)、0.5 %

三量体
四量体

凝集

15 Deg90 Deg0

リテンションタイム (分)14BovineSerAlb

示差屈折率と二重角光散乱サンプルの重ね表示。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp217

生体分子の分離用カラム

カラム :ProSEC 300S
PL1147-6501
7.5 x 300 mm、5 µm

移動相 :0.3 M NaCl を含む 0.1 M KH2PO4、pH 8.0

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

5 °C

検出器 :

310 nm における UV + PL-GPC 50 二重角

サンプル :

レスポンス (mV)

単量体、二量体、および三量体のピークを示す
γ-グロブリンサンプルの UV および光散乱の重ね表示

光散乱検出器タンパク質

リテンションタイム (分)UV_Overlay

カラム :ProSEC 300S
PL1147-6501
7.5 x 300 mm、5 µm

移動相 :0.3 M NaCl を含む 0.1 M KH2PO4、pH 8.0

流量 :1.0 mL/min

カラム温度 :

5 °C

検出器 :

310 nm における UV +PL-GPC 50 二重角光散乱検出器

サンプル :

タンパク質

レスポンス (mV)

単量体、二量体、三量体、および凝集体のピークを示す
BSA サンプルの UV および光散乱の重ね表示

リテンションタイム (分)UV_Overlay_BSA

218

生体分子の分離用カラム

ZORBAX GF-250、GF-450 ゲルろ過カラム• 短い分析時間で高い効率性、再現性• セミ分取および分取に対応するカラムサイズ• 有機修飾剤、変成剤に対応• 広い pH 範囲 (pH 3 ～ 8) に使用可能

GF-250 ゲルろ過カラム

Agilent ZORBAX GF-250、GF-450 ゲルろ過カラムは、タンパク質やその他の生体分子のサイズ分離に最適です。GF-250 と GF-450 カラムをつなげて使用すれば、球状タンパク質の場合、分離範囲は 4,000～ 900,000 となります。GF-250/GF-450 ゲルろ過カラムは親水性ジオール結合相を使用することによって高いタンパク質回収率 (通常 > 90 %) を示し、独自のジルコニア修飾を施したシリカによってpH 3 ～ 8 と広い pH 範囲に対応しています。GF-250、GF-450 カラムには正確に大きさを揃えた多孔質シリカ微細球が充填されており、ポアサイズと粒子径のばらつきが小さくなっています。その結果、流量 3 mL/min までのタンパク質分析分離と分取分離のいずれにも対応する、効率が高く、堅牢で再現性の高いゲルろ過カラムとなっています。これらのカラムは移動相内の有機修飾剤 (< 25 %)と変成剤に対応しているため、タンパク質の凝集を軽減することができます。一般的な分析用途としては、単量体、二量体、凝集体の分離、脱塩、タンパク質分子量の推定と修飾タンパク質の分離があります。

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

粒子径

MW 範囲

表面積

pH 範囲

流量

最大圧力

ZORBAX GF-250

150 Å

4 µm

4,000 - 400,000

140 m /g

3.0 - 8.0

3.0 mL/min 未満

35 MPaZORBAX GF-450

300 Å

6 µm

10,000 - 900,000

50 m2/g

3.0 - 8.0

3.0 mL/min 未満

35 MPa2

仕様は代表的な値のみを表しています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp219生体分子の分離用カラム

Agilent ZORBAX GF-250 カラムで分離された
Bio-Rad 標準の保持ボリューム対 log (MW)ZORBAX GF-250
カラム :884973-901
9.4 x 250 mm、4 µm
200 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0

カラム温度 :

室温

検出器 :UV、254 nm

ガンマグロブリン (158 kDa)
オブアルブミン (44 kDa)
Log (MW)

移動相 :サイログロブリン (670 kDa)

ミオグロブリン (17 kDa)

Vitamin B12 (1.35 kDa)

Retention volume (mL)

分取カラムを使用したタンパク質の分離
カラム :

カラム :

移動相 :

ZORBAX GF-250
884973-901
9.4 x 250 mm、4 µm

5ZORBAX GF-450
884973-902
9.4 x 250 mm、6 µm

35.0 mL/min

検出器 :UV、280 nm

サンプル :

200 µL42

0.2 M Na2HPO4、pH 7.0

流量 :1. サイログロブリン
2. カタラーゼ
3. BSA4. ß-ラクトグロブリン B
5. ミオグロビン
6. Tyr-Gly-Gly

6

ZORBAX GF-250

1

0

5

10

15

5

ZORBAX GF-450

3 4

6

2
1

0

5

10
リテンションタイム (分)

220

15

生体分子の分離用カラム

ZORBAX GF-250 (USP L33) および GF-450 (USP L35) ゲルろ過カラム
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

部品番号

GF-250、150 Å

9.4 x 250

4884973-901

GF-250、150 Å

4.6 x 250

4884973-701

GF-450、300 Å

9.4 x 250

6884973-902

GF-250 Diol、ガードカートリッジ、2 個

9.4 x 156820675-111

GF-250 Diol、ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

6820950-911

GF-450 Diol、ガードカートリッジ、2 個

9.4 x 156820675-111

GF-250 Diol、ガードカートリッジ、4 個

4.6 x 12.5

6820950-911

ガードカラム (ハードウェアが必要)

分取ガードハードウェアキット

840140-901

ガードハードウェアキット

820999-901

PrepHT カラム
PrepHT GF-250、150 Å

21.2 x 250

6877974-901

PrepHT GF-450、300 Å

21.2 x 250

6877974-910

PrepHT エンドフィッティング、2 個

820400-901

PrepHT GF-250、ガードカートリッジ、2 個 17.0 x 7.55820212-911

PrepHT GF-450、ガードカートリッジ、2 個 17.0 x 7.55820212-911

ガードカートリッジハードウェアキット

820444-901

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp221生体分子の分離用カラム

アフィニティクロマトグラフィー
アフィニティクロマトグラフィーは、高い特異性を持つ分子間 (多くの場合は抗原/抗体間などの特定のタンパク質間) の相互作用を利用したパワフルな技術です。アジレントは、IgG の単離および定量用のモノリシックプロテイン A カラムや、生体サンプル中の存在量の多いタンパク質除去用のマ
ルチプルアフィニティ除去システムなど、専用の製品を取り揃えています。

Agilent バイオモノリスプロテイン A HPLC カラム• IgG クラス 3 を除くすべての IgG (ヒトおよびマウス) の分析分離用に設計• 流速に依存しない分離を実現。拡散、ポア、およびボイドボリュームがないため、移動相と固定相の間の高速移動が可能

バイオモノリスプロテイン A カラム、5069-3639• 超高速分離によって、メソッド開発時間とコストを削減• メソッドパラメータのロックにより分析時間と緩衝液を大幅に削減可能
Agilent バイオモノリスプロテイン A HPLC カラムは、Agilent バイオモノリスカラムファミリの製品の 1 つです。プロテイン A バイオモノリスカラムは、Agilent 1100 および 1200 HPLC システムを含む
HPLC システムに適合します。

カラム仕様
寸法

5.2 mm x 4.95 mm

カラム容量

100 µL

最大圧力

15 MPa (150 bar、2200 psi)

最低/最高使用温度

使用範囲 : 4 ～ 40 °C
保管 : 4 ～ 30 °C

推奨 pH

使用範囲 : 2 - 13
洗浄 : 1 - 14

使用材質

ハードウェア : ステンレス製
パッキング材 : ポリ (グリシジル メタクリレート-co-エチレン
ジメタクリレート) 多孔モノリス

カラー識別リング白保管期限/使用期限

12 ヶ月

バイオモノリス プロテイン A

ヒントとテクニック
イオン交換バイオモノリスカラムについて 200 ページをご覧ください。

222

カラム

説明

主要アプリケーション

部品番号

バイオモノリス
プロテイン A

プロテイン A アフィニティカラムは、IgG
クラス 3 を除くすべての IgG (ヒトとマウス) の分析分離用に設計されています。

ü IgG の定量 (発酵滴定濃度計算)

5069-3639

生体分子の分離用カラム

Agilent バイオモノリスプロテイン A HPLC カラムを使用した
ヒトポリクローナル IgG の迅速な定量
カラム :プロテイン A5069-3639
5.2 x 4.95 mm

移動相 :PBS 緩衝液、pH 7.4
0.5 M 酢酸、pH 2.6

グラジエント : ステップグラジエント : 100 % 緩衝液
A - 100 % 緩衝液、B - 100 % 緩衝液 A (各ステップ 0.5 分)

流量 :1 mL/min

検出器 :高圧グラジエント HPLC システム、

Agilent 1200 Infinity LC - UV (280 nm)
結合緩衝液で希釈したヒト血漿 (PBS 緩衝液、pH 7.4)

1200

120

1000

100

800

80

600

60

400

40

200

20

0

% グラジエント

相対吸光度 (mAU)

サンプル :

0

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

時間 (分)
ヒト血漿由来の IgG に関するバイオモノリスプロテイン A カラムの選択性。IgG はタンパク質 A に結合し、100 % 緩衝液 B のステップグラジエントを適用すると、IgG は 1.5 分に溶出します。

説明 :レーン 1 : 分離前の全血清
レーン 2 : IgG 標準
レーン 3 : ピーク 1 (フロースルー分画)
レーン 4 : ピーク 2 (タンパク質 A 結合分画、IgG1 および IgG2 など)

分離で得られた分画の SDS PAGE 分析。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

223

生体分子の分離用カラム

メソッド開発ZORBAX カラムメソッド
このタンパク質およびペプチド用の ZORBAX カラムの選択方法では、タンパク質またはポリペプチド向けのメソッド開発に役立つ重要な詳細情報が得られます。

ペプチド、ポリペプチド、タンパク質について最初に選択するカラムと分析条件

ペプチド、ポリペプチド、タンパク質

ペプチド、ポリペプチド、タンパク質

MW < 50 kDa

MW > 50 kDa

最初に選択する結合相

StableBond 300SB-C8

Poroshell 300SB-C18

300 SB カラムは、TFA を含む移動相で比類のない長寿命を持つ

Poroshell 300SB カラムは、革新的な粒子技術を使用してタンパク質を迅速に分離します。Poroshell カラムを使用すると、短い分析

ワイドポアカラムです。この特性により、ペプチドおよびタンパ
ク質の分離に最初に選択するカラムとして理想的です。

時間で効率のよいピークを簡単に得ることができます。

• C8 は中程度の疎水性を特徴とするため、最初に選択する結• C18 は保持時間を最大にするため、ほとんどのペプチド、ポ合相として適しています。

リペプチド、タンパク質向けに Poroshell で最初に選択する結合相として適しています。

• C18 と C8 は、一般にペプチドおよびタンパク質消化物用に選択しますが、タンパク質にも使用できます。

• C8 は、一般に中程度の大きさのタンパク質用として選択されますが、ポリペプチドや非常に分子量の大きいタンパク質にも使用できます。

• C3、C4、CN は、一般に高分子量の疎水性ポリペプチドおよびタンパク質用に選択される結合相ですが、ペプチドにも使用できます。

• C3 は、一般に抗体や高分子量のタンパク質の分析用に選択されますが、ペプチドやポリペプチドにも使用できます。

• 化学的/温度安定性が必要な場合は PLRP-S を選択できます。

初期分離条件224

カラム :StableBond 300SB-C8、
4.6 x 150 mm、3.5 または 5 µm
883995-906
863973-906

カラム :Poroshell 300SB-C18、
2.1 x 75 mm、5 µm
660750-902

移動相 :A : 95 % H2O : 5 % ACN 溶液中に 0.1 % の TFA
B : 5 % H2O : 95 % ACN 溶液中に 0.085 % の TFA

移動相 :A : 95 % H2O : 5 % ACN 溶液中に 0.1 % の TFA
B : 5 % H2O : 95 % ACN 溶液中に 0.085 % の TFA

グラジエント : 60 分間で 0 ～ 60 % B

グラジエント : 60 分間で 0 ～ 60 % B

温度 :35 ～ 40 °C

温度 :35 ～ 40 °C

流量 :1 mL/min

流量 :2 mL/min生体分子の分離用カラム

低 pH で単純な水系/有機溶媒グラジエントからスタート
通常は、水/アセトニトリルに 0.1 % TFA を添加したグラジエント溶出で、すべての対象成分が溶出します。ポアサイズ 300 Å のカラムを使用した高分解能グラジエント溶出には、通常 30 ～ 50 分必要です。Poroshell カラムを使用すれば、流量を上げて分析時間を短縮することができ、しかも優れた分解能を維持します。さらに分解能を改善するには、グラジエント時間を延長する、カラム長を短くする、または流量を上げるという方法があります。

サンプル溶解度の最適化
どの pH を使用する場合も、最良のピーク形状と回収率を達成するためには、サンプルを完全に溶解することが重要です。 ZORBAX

300StableBond および Poroshell 300SB では、強酸性または中性の溶媒を使用することができ、ZORBAX 300Extend-C18 では中性溶媒および希釈した塩基性溶媒を使用できます。
タンパク質とペプチドを溶解させる溶媒の選択
水/リン酸バッファ

最も弱い

希釈した酸 (TFA、酢酸、HCl)
中性 pH 、6 ～ 8 M 塩酸グアニジンまたはイソチオシアネート

5 % 酢酸/6 M 尿素
希釈した酸 + 水/有機溶媒 (ACE、MeOH、THF)
希釈した塩基 (水酸化アンモニウム)

DMSO、または 0.1 ～ 1 % DMSO 溶液
ホルムアミド最も強い

温度の上昇
タンパク質およびペプチドの分離は温度の影響を受けます。カラム温度を上げることにより、タンパク質や凝集した疎水性ペプチドの分
解と回収率が劇的に改善されることがあります。

StableBond 300SB – 最高 80 ºC

Poroshell 300SB – 最高 80 °C

移動相 pH の最適化
低 pH で希望の結果が得られなければ、中～高 pH を試す
最適化した低 pH メソッドで理想的な分離が得られない場合は、中または高 pH の移動相を使用できます。酸性のアミノ酸は pH を上げる
ことにより負に荷電し、一部の塩基性アミノ酸は電荷を失うことがあるため、pH の上昇によって選択性が大幅に変化する可能性があります。ZORBAX 300Extend-C18 は、中～高 pH での分離向けの優れた選択肢です。
カラム :

移動相 :

ZORBAX 300Extend-C18、4.6 x 150 mm、5 µm
773995-902

グラジエント :30 分間で 5 ～ 60 % B

温度 :25 ～ 30 °C (< 60 °C)

A : 20 mM NH4OH 水溶液
B : 20 mM NH4OH 80 % ACN 溶液

流量 :1 mL/minwww.agilent.com/chem/lccolumn:jp

225

生体分子の分離用カラム

ペプチド、ポリペプチド、タンパク質の分析分離用に最初に選択するカラム

中 ～ 高 pH低 pH

MW < 50 kDa

MW > 50 kDa

MW < 25 kDa

ZORBAX 300SB-C8、
4.6 x 150 mm、3.5 µm
863973-906

Poroshell 300SB-C18、
2.1 x 75 mm、5 µm
660750-902

ZORBAX 300Extend-C18、
2.1 x 150 mm、3.5 µm
763750-902

逆相 LC/MS メソッド
タンパク質およびペプチドの LC/MS 分析は、タンパク質の特性解析や翻訳後修飾されたタンパク質の正確な同定、さらには合成および天然ペプ
チドの分子量決定のために重要な情報を提供します。プロテオミクスアプリケーションにおける 2D 分離でも、タンパク質の同定を行うために
LC/MS が使用されます。そのため、タンパク質およびペプチドの LC/MS 分析は重要な分離分野であり、目的に適合したカラムや移動相を正しく選択する必要があります。一般に、LC/MS には小さいサイズのカラムが使用され、移動相に TFA を添加すると MS の感度が低下するため、この添加剤の使用を避けるのが普通です。

タンパク質およびポリペプチドの LC/MS 分離で最初に選択するカラム
分析 LC/MS アプリケーション - サンプル量が限られていない場合は、内径 2.1 mm カラムで優れた感度が得られます。
Poroshell カラムの場合は、それよりも小さい内径 1 mm のカラムが使用されます。

低 pH

中 ～ 高 pHMW < 50 kDa

MW < 1000 kDa

MW < 25 kDa

ZORBAX 300SB-C8、
2.1 x 150 mm、3.5 µm
863750-906

Poroshell 300SB-C18、
1.0 x 75 mm、5 µm
661750-902

ZORBAX 300Extend-C18、
2.1 x 150 mm、3.5 µm
763750-902

高感度/プロテオミクスアプリケーション
タンパク質およびペプチドの高感度アプリケーションにはキャピラリーカラムを使用します。タンパク質とタンパク質消化物の分離には内径 0.5 mm のカラムが使用され、タンパク質消化物には内径 0.3 mm のカラムが最も一般的に使用されます。これらは水酸化ア
ンモニウム移動相を使用して高 pH で分析できます。ナノカラム (内径 0.1 および 0.075 mm) はプロテオミクス用の 2D LC/MS システ
ムで頻繁に使用され、最初の選択肢としては C18 結合相が使用されます。

226

生体分子の分離用カラム

イオン交換カラムメソッド

Bio MAb モノクローナル抗体

カチオン交換 (SCX、WCX)
モノクローナル抗体、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質

アニオン交換 (SAX、WAX)
オリゴヌクレオチド、タンパク質

推奨する最初の分離条件
移動相 :A : 20 mM リン酸ナト
リウム、pH 5.5
B : 緩衝液 A +400 mM NaCl

グラジエント :50 分間で 10 ～ 35 % B

サンプルサイズ : 2 mg/mL、5 µL を注入
温度 :

室温

検出 :

UV 220 nm

移動相 :A : 20 mM リン酸ナト
リウム、WCX では
pH 5.0 または SCX
では pH 6.0
B :緩衝液 A +500 mM NaCl

移動相 :A : 10 mM トリス緩衝
液、WAX ではpH 8、SAX では
pH 9.0B : 緩衝液 A +400 mM NaCl

グラジエント :50 mm カラムでは 30
分で、250 mm カラム
では 60 分で 1 ～
100 % B

グラジエント :50 mm カラムでは 30
分で、250 mm カラム
では 60 分で 1 ～
100 % B

サンプルサイズ : 2 mg/mL、5 µL を注入

サンプルサイズ : 2 mg/mL、5 µL を注入

温度 :

室温

温度 :

室温

検出 :

UV 220/280 nm

検出 :UV 220/280 nm

カラム径と粒子径に基づく流量の選択
内径 2.1 mm のカラム

内径 4.6 mm のカラム

粒子径、µm

流量、mL/min

粒子径、µm

流量、mL/min

5

0.1 - 0.5

1.7

0.1 - 0.3

1.7

0.1 - 0.8

3

0.1 - 0.55

0.1v0.8

10

0.1 - 1.0

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp227

生体分子の分離用カラム

条件の最適化
一部の分離には、特定の緩衝液、イオン強度、pH、温度が必要になることがあります。

イオン強度 :
カラムの機能を維持するためには、特定のイオン強度が必要です。通常は、最小濃度 10 ～ 20 mM の塩が必要です。ただし、カラムへの
生体分子の吸着を防ぐために、20 mM を超える強度が必要になることがあります。一般に使用される塩は、塩化/酢酸ナトリウムおよびカリウムです。溶出での一般的な塩濃度は 400 ～ 500 mM です。
注 : 背圧が大きく増加するため、水のみでのカラム洗浄は避けてください。

緩衝液と pH の選択 :緩衝液と pH の選択 :分離の最適化では緩衝液が重要な役割を果たします。抗体や多くの生体分子にはリン酸緩衝液が一般に使用されます。MES、トリス、ACES 緩衝液も推奨します。pH 5.0～ 6.5 の緩衝液を使用します。pH は、通常は +/- 0.2 単位で調整できます。特定のタンパク質では、高い pH (>pH 6.5) が必要になることがあります。pH の調整には、リン酸、酢酸、HCl、NaOH を使用できます。

アニオン交換では、pH 8.0 ～ 9.0 の酢酸およびリン酸緩衝液を推奨します。pH は、通常は+/- 0.2 単位で調整できます。特定のタンパク質では、高いまたは低い pH が必要になることがあります。pH の調整には、リン酸、酢酸、
HCl、NaOH を使用できます。

pH グラジエントは溶出にも使用できます。

pH グラジエントは溶出にも使用できます。

添加剤

添加剤

有機溶媒 :

有機溶媒 :

アセトニトリル、エタノール、メタノール、その他の類似した溶媒を最大で 50 % 使用できます。

アセトニトリル、エタノール、メタノール、その他の類似した溶媒を最大で 50 % 使用できます。

界面活性剤 :

界面活性剤 :

非イオン、アニオン、双性イオン性の界面活性剤を使用できます。カチオン系界面活性剤
は推奨しません。

非イオン、カチオン、双性イオン性の界面活性剤を使用できます。アニオン系界面活性剤は推奨しません。

温度 :Agilent Bio MAb および IEX カラムは 80 ºC まで使用可能ですが、高温ではカラムの寿命が短くなります。また、多くのタンパク質やバイ
オ分子は熱の影響を大きく受けます。高温で分離する前に、サンプルの温度安定性を必ず確認してください。

228

生体分子の分離用カラム

SEC カラムメソッド

生体分子、凝集分析 (ペプチド、ポリペプチド、タンパク質) のサイズに基づく分離のための初期条件の選択

ペプチド、ポリペプチド、タンパク質

ペプチド、ポリペプチド、タンパク質
MW > 0.1 ～ 10,000 kDa

MW > 0.1 ～ 1,250 kDa

分子量範囲とポアサイズに基づくカラムの選択

Agilent Bio SEC-3 (3 µm)

Agilent Bio SEC-5 (5 µm)

ポアサイズ

MW 範囲、kDa

ポアサイズ

MW 範囲、kDa

100 Å

0.1 - 100100 Å

0.1 - 100150 Å

0.5 - 150150 Å

0.5 - 150

300 Å

5 - 1,250

300 Å

5 - 1,250

500 Å

15 - 5,0001000 Å

50 - 7,500

2000 Å

> 10,000

推奨する初期分離条件
カラム :Agilent Bio SEC (3 µm および 5 µm)

温度 :推奨 : 10 ～ 30 ºC、最高温度 : 80 °C

移動相 :150 mM リン酸緩衝液、pH 7.0*

流量 :グラジエント :30 ～ 60 分の範囲のアイソクラティック

0.1 ～ 0.4 mL/min(内径 4.6 mm カラムの場合)
0.1 ～ 1.25 mL/min(内径 7.8 mm カラムの場合)

サンプルサイズ :総カラムボリュームの 5 % 未満

* 高および低塩濃度のさまざまな水溶性緩衝液を使用可能

詳細については、次のアプリケーションノートをご覧ください。Defining the Optimum Parameters for Efficient Size Separations of Proteins(資料番号 5990-8895EN)

www.agilent.com/chem/library

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp229

生体分子の分離用カラム

最初の分離後、分離のさらなる向上、タンパク質溶解度の維持、サンプルとクロマトグラフィー充填剤との相互作用の軽減のために、さらに変更が必要になることがあります。最適な分離を実現するために、移動相のイオン強度を調整します。 pH も、通常は+ 0.2 単位で調整できます。さらに最適化が必要な場合は、範囲を拡張する必要があります。温度の変更や、有機溶媒を追加することも検討します。

その他の塩が必要なプロトコルでは、次の緩衝液が一般的です。

50 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0 中に 100 ～ 150 mM の塩化ナトリウム50 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0 中に 100 ～ 150 mM の硫酸ナトリウム50 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0 中に 50 ～ 100 mM の尿素
その他の類似した塩 (KCl など) や塩酸グアニジンも使用できます。

pH 範囲 :

2.0 - 8.5
添加可能な有機溶媒:

50 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0 中に 50 ～ 10 % のエタノール (またはその他の類似した溶媒)
50 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0 中に 5 % の DMSO
温度 :通常は、SEC の分離は 20 ～ 30 ºC で行います。タンパク質や疎水性ペプチドの分解能と回収率の両方を向上するために、タンパク質とペプチドの分離に高い温度が必要になることがあります。

Bio SEC カラムの推奨使用温度 10 ～ 30 ºC です。

230

生体分子の分離用カラム

高感度キャピラリーカラムメソッド
移動相についての検討事項

低 pH

中 ～ 高 pH

タンパク質およびペプチドの LC/MS 分離には、一般に TFA は使用されません。通常は、最初のステップとして TFA を 0.1 ～ 1.0 % ギ酸に置き換えます。濃度 1 % までの酢酸を代わりの移動相添加剤として使用することもできます。低 pH では、移動相に TFA を添加した場合に最良の分離が得られることがあります。場合によっては、カラムからの流出後にプロピオン酸などの別種の酸で TFA を置き換えることができます。

LC/MS は、10 ～ 20 mM NH4OH を移動相添加剤として使用し、高pH で実行することもできます。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp231

生体分子の分離用カラム

キャピラリーカラムとナノカラム

ナノカラム• 試料量がごく限られている場合に非常に高い感度を発揮• あらゆる LC/MS インタフェースに対応• 内径 0.5 mm、0.3 mm、0.1 mm、0.075 mm を用意• 充填剤/結合相は小さい分子量から大きい分子量までに対応可能 (それぞれポアサイズ 80 Å と
300 Å)• 一次元 (1-D)、二次元 (2-D、プロテオミクス) アプリケーションに最適なカラム
Agilent ZORBAX キャピラリーカラム (内径 0.5 mm、0.3 mm) およびナノカラム (内径 0.1 mm、0.075mm) は、幅広い種類の結合相、ポアサイズ、寸法から選択可能です。これらのカラムは、カラム内
でのサンプル希釈を減らして感度を高めるため、サンプル量が非常に限られている分析に理想的なカラムです。Agilent カラム、低分散 HPLC 装置を使えば、高感度に加えて比類ない再現性を得ることができます。複雑なプロテオミクスサンプルの二次元 LC/MS 分析で、キャピラリー、ナノカラムの使用が急速に進んでいます。アジレントは、二次元分離に必要とされているすべてのカラム、一次
元用の SCX カラム、逆相トラップカラム、二次元用の逆相カラムを提供しています。

ヒントとテクニック
クロマトグラフィーの技術向上に役立つ各種の e セミナーとオンサイトト
レーニングを用意しています。
詳細については、

www.agilent.com/chem/jp をご覧ください。

232

生体分子の分離用カラム

ZORBAX ナノカラム、LC/MS による
高感度タンパク質消化物分析
カラム :ZORBAX 300SB-C18
5065-9911
0.075 x 150 mm、3.5 µm

移動相 :A : 水 + 0.1 % ギ酸、
B : ACN + 0.1 % ギ酸

Intens.

1.5

1.0

流量 :

600 nL/min

グラジエント :25 分で 2 % B から 52 % B に

検出器 :

ポジティブイオンナノエレクトロ
スプレー MS

サンプル :

8 種類のタンパク質の 100 fm (1 µL)
消化物

0.5

2.5

5.0

7.5

10.0

12.5
15.0
Time (min)

17.5

20.0

22.5
LCSB008

ZORBAX ナノ HPLC カラム (内径 0.075 mm) は、LC/MS によるタンパク質消化物の高感度分析を実現します。

キャピラリーカラムによる高感度分析
カラム :

カラム :

カラム :

カラム :

サンプル :mAU

ZORBAX SB-C18
5064-8255
0.3 x 150 mm、5 µm

1400

ZORBAX SB-C18
5064-8256
0.5 x 150 mm、5 µm

1000

ZORBAX SB-C18
863600-902
1.0 x 150 mm、3.5 µm
ZORBAX SB-C18
883975-902
4.6 x 150 mm、5 µm

0.3 mm

1200

800
600

0.5 mm

400
300
1.0 mm200

4.6 mm0

200 ng ビフェニル
0

2.5

5.0

7.5

10.0
Time (min)

12.5

15.0

17.5
LCCN002

試料量の限られた分析では、カラム内希釈を最小限にとどめ、感度を高めるためにキャピラリーサイズのカラムが必要とされます。この例では、0.3 mm キャピラリー
カラムは標準的な 4.6 mm カラムに比べて 100 倍の感度があることが示されています。微量サンプルアプリケーションでは、アジレントのナノボアカラム (内径 0.1 ～0.075 mm) を使用して最高で 2000 倍もの感度向上を得ることができます。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp233

生体分子の分離用カラム

ヒト血清 : LC/MS による低存在量タンパク質の
分離と同定
カラム :

5065-9913
分析 : 0.3 x 150 mm、5 µm、5064-8263
移動相 :A : 水 + 0.1 % ギ酸
B : アセトニトリル + 0.1 % ギ酸

流量 :6 µL/minグラジエント :0 min 3 % B
5 min 3 % B (loading)
50 min 45 % B
52 min 80 % B
57 min 80 % B
60 min 3 % B

サンプル :

同定されたタンパク質

ZORBAX 300SB-C18

トラップ : 0.3 x 5 mm、5 µm、ヒト血清、1-D gel digest

1. α-1-アンチキモトリプシン
2. アンチトロンビン-III 前駆体
3. 補体因子 B 前駆体

ベースピーククロマトグラム
Intens.
x107
3
2
1
0
20

25

30

35
40
Time (min)

45

50

55
LCBP014

サンプル前処理 :マルチプルアフィニテイ除去カラム (4.6 x 100 mm, P/N 5185-5985) で主要
タンパク質を除去した後、1-D gel digest を実施

キャピラリー LC カラムを使用した LC および
LC/MS によるペプチドリン酸化部位の検出

5-55 % B in 50 min, to
85 % B from 55-57 min

検出器 :UV、206 nm

MS 条件

LC/MS : ポジティブイオン ESI、
LC/MSD トラップ付き
Vcap : 4,000 V
乾燥ガス流量 : 7 L/min
乾燥ガス温度 : 250 °C
ネブライザ : 15 psi
キャピラリ出口電圧 : 最大 50 V
積算時間 : 300 ms
総平均 : 3
分離幅 : 3 m/z
フラグ振幅 : 1.0 V

サンプル :

ベータカゼイン消化物、

100 nL (4 pmol)

234

x107
0.8
0.6

phosphopeptide

0.4
0.2
0.0

% Relative Abundance

グラジエント :5.5 µL/min

Full Scan MS
x105
2.5

688.4

2.0
1.5

1032.0

1.0
0.5
0.0

10 15 20 25 30 35 40 45 50
Time (min)343.0 559.5

400

1275.4 1582.0

800

1600

m/z

1600

MS/MS of [M+2H] 2+ at m/z 1032

UV

x104
2.5

100

% Relative Abundance

流量 :A : 水 + 0.1 % ギ酸
B : アセトニトリル + 0.1 % ギ酸

MS

% Relative Abundance

移動相 :ZORBAX 300SB-C18
5064-8268
0.5 x 150 mm、3.5 µm

UV at 206 nm

カラム :

80
60
40
20
0
10 15 20 25 30 35 40 45 50
Time (min)2.0

982.5 1022.9[MH2-H2PO4]2+[MH2-H20]2+

1.5
1.0
747.3

1106.71490.81690.0

800

1600

1600

0.5
0.0
400

m/z
LCBP037

生体分子の分離用カラム

UV と MS 検出を用いたキャピラリーカラムによるHPLC 分析
ZORBAX 300SB-C18
カラム :5064-8263
0.3 x 150 mm、5 µm

5.5 µL/min

検出器 :UV、206 nm

MS 条件 :

LC/MS : ポジティブイオン ESILC/MSD トラップ - Vcap 4000 V
乾燥ガス流量 : 7 L/min
乾燥ガス温度 : 250 °C
ネブライザ : 15 psi
キャピラリー出口電圧 : 50 V
最大積算時間 : 300 ms
総平均 : 3
分離幅 : 3 m/z
フラグメンタ振幅 : 1.0 V

サンプル :

60
40
20
0
10

x10

流量 :

UV

80
UV at 206 nm

50 分で 5 ～ 55 % B、55 ～ 57 分で 85 % B に
A : 水 + 0.1 % ギ酸
B : アセトニトリル + 0.1 % ギ酸

100 nL

ベータカゼイン消化物 (4 pmol)

ZORBAX 300SB-C18 キャピラリーカラム (内径 0.3 mm) を使用してタンパク質消化物を分離し、UV およびエレクトロスプレー
MS で検出。MS 検出によりペプチド断片を検出できます。

% Relative Abundance

移動相 :

100

15

20

25

30
35
Time (min)

40

45

50

15

20

25

30
35
Time (min)

40

45

50

MS

0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
10

LCSB007www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

235

生体分子の分離用カラム

キャピラリーカラムとナノカラムによる
2D LC/MS 分析
2D HPLC 用の一般的なカラム構成
1100/1200 シリーズ
クォータナリポンプ
逆相濃縮カラム

1100/1200 シリーズ

廃液

ミクロウェルプレー
トオートサンプラ

ナノポンプ
検出 (1100/1200
シリーズ LC/MSD
トラップ)

SCX 強カチオン交換カラム

逆相カラム 1100/1200 シリーズカラム
コンパートメント

1100/1200 シリーズ
1100/1200 シリーズ

クォータナリポンプ
廃液

ミクロウェルプレー

逆相濃縮カラム

トオートサンプラ
ナノポンプ
検出 (1100/1200
シリーズ LC/MSD
トラップ)

SCX 強カチオン交換カラム

逆相カラム 1100/1200 シリーズカラム
コンパートメント

アジレントのカスタマイズされたナノフロープロテオミクスソリューションのフローパス。

1. サンプルローディング、SCX からの溶出、濃縮カラムへのトラップ
2. カラムコンパートメントのバルブスイッチ、濃縮カラムからの溶離、RP での分離、MS 分析

236

生体分子の分離用カラム

ナノ HPLC カラムを使った二次元 HPLC のペプチド分析
カラム :ZORBAX 300SB-C18
5065-9913
0.3 x 5 mm、5 µm

カラム :ZORBAX 300SB-C18
5065-9911
0.075 x 150 mm、3.5 µm

移動相 :クォータナリポンプ : 3 % アセトニトリル/

MS 条件 : イオン源 : Nano ESI、乾燥ガス流量 : 5 L/min、
乾燥ガス温度 : 225 ºC
イオントラップ : スキム : 1 : 35 V、キャピラリー出口オフ
セット : 115 V、オクタポール 1 : 12 V、オクタポール 2 :3.5 V、トラップドライブ : 80 V、ICC : オン、平均 : 4、最高積算時間 : 150 ms、ターゲット 60.000、イオンモード
ポジティブ、MS/MS モード

0.1 % ギ酸

ナノポンプ : A = 水、0.1 % ギ酸、B = ACN、

0.1 % ギ酸
流量 :

クォータナリポンプ : 30 µL/min
ナノポンプ : 300 nL/min

グラジエント :クォータナリポンプ : アイソクラティック
ナノポンプ :
6 分 = 3 % B、120 分 = 60 % B、
125 分 = 80 % B、
130 分 = 80 % B、131 分 = 3 % B、
140 分 = 3 % B

サンプル : ウシ血清アルブミンのトリプシン消化物
容量 : 1 から 8 µL
塩段階溶出 : 8 mL の 10 mM-100 mM KCI を (10 mM の増分)、125 mM、150 mM、200 mM、300 mM、500 mM、

1M

Intens.
x106
1.0

30 mM KCI

0.5
x105
6
4
2

60 mM KCI

x105
675 mM KCI

4
2
ウシ血清アルブミン (BSA) のトリプシン消化物。ベースピーククロマトグラムでは、
二次元 HPLC 分離によるフラクションの一部が現れています。シングルクロマトグラム
は、所定の塩濃度で溶出した後、濃縮、逆

x106
1.0

120 mM KCI

0.5

相クロマトグラフィーで分離した BSA のペ
プチドを示しています。

5

10

15

20
25
Time (min)

30

35

40
LCCN004

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp237生体分子の分離用カラム

ZORBAX Bio-SCX シリーズ II
LC/MS を使ったペプチドとタンパク質の二次元分離の最適化を目的に設計された Bio-SCX シリーズ
II カラムを提供しています。この充填剤は超高純度の ZORBAX シリカ粒子 (3.5 µm) を基材として、ス
ナノカラム

ルホン酸基を導入して機能性を持たせた生体高分子になじみの良いポリマーを化学的に結合してあります。このカラムを使えばペプチド、タンパク質の二次元分析のイオン交換段階で強い保持と優れたピーク形状を得ることができます。

カラム仕様
結合相

ポアサイズ

表面積

pH 範囲

交換基

最大圧力

300 Å

90 m2/g

2.5-8.5

スルホン酸

35 MPaZORBAX Bio-SCX シリーズ II

ZORBAX Bio-SCX シリーズ II

238

粒子径 (µm)

Bio-SCX
Series II

0.3 x 35

3.5

5065-9912

0.8 x 503.5

5065-9942

品名

寸法 (mm)

キャピラリー
キャピラリー

生体分子の分離用カラム

ZORBAX Bio-SCX シリーズ II の低分子量ペプチドに対する強い保持力
カラム :ZORBAX Bio SCX シリーズ II

5065-9912
0.3 x 35 mm、3.5 µm

2

移動相 :

95 % 40 mM NaCl : 5 % ACN、
0.3 % ギ酸流量 :5 µL/min

検出器 :230 nmサンプル :

1. Trp - Tyr
2. Mct - Trp

1

mAU
40
20
0
0

2

4

6

8

10

6

8

10

Time (min)

合成ジペブチド
2

mAU
40
20
0

1

0

2

4
Time (min)

LCIE002

ZORBAX Bio-SCX シリーズ II カラムには、小型のペプチドに対して他の SCX カラムよりも強い保持力が備わっています。その結果、親水性の高いペプチドフラグメントに対して高い分離能を示し、二次元 HPLC 分析でより正確な同定を行うことができるようになっています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp239

生体分子の分離用カラム

ZORBAX HPLC キャピラリーカラム (ガラスライニングステンレス)
Poroshell
300SB-C8

Bio-SCX

品名

寸法 (mm)

キャピラリー

0.8 x 50

3.5

キャピラリー

0.5 x 250

5

キャピラリー

0.5 x 150

55064-8264

キャピラリー RR

0.5 x 150

3.5

5064-8268

キャピラリー

0.5 x 75

5キャピラリー

0.5 x 35

55064-8294

キャピラリー RR

0.5 x 35

3.5

5065-4459

キャピラリー

0.3 x 250

55064-8265

キャピラリー

0.3 x 150

55064-8263

キャピラリー

0.3 x 35

55064-8295

キャピラリー

0.3 x 35

3.5

キャピラリー RR

0.3 x 150

3.5

5064-8267

5065-4460

5065-4464

キャピラリー RR

0.3 x 1003.5

5064-8259

5065-4461

5065-4465

キャピラリー RR

0.3 x 75

3.5

5064-8270

5065-4462

5065-4466

キャピラリー RR

0.3 x 503.5

5064-8300

5065-4463

5065-4467

5065-4427

5065-4427

粒子径 (µm)

300SB-C18

300SB-C8

300Extend-C18

シリーズ II5065-9942
5064-8266

5065-4468

5065-9912

交換用スクリーン、10 個

5065-4427

5065-4427

ZORBAX ナノ HPLC カラム (PEEK)ZORBAX 300SB-C18 トラップ/ガード、5065-9913

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

300SB-C18
USP L1ナノ RR

0.1 x 150

3.5

5065-9910

ナノ RR

0.075 x 150

3.55065-9911

ナノ RR

0.075 x 50

3.55065-9924

5065-9923

トラップ/ガード 5 個

0.3 x 555065-9913

5065-9914

5065-9915

5065-9915

トラップ/ガードハードウェアキット :240

300SB-C8
USP L7

生体分子の分離用カラム

マイクロボア (内径 1.0 mm) カラム• 少ないサンプル量でも高感度• LC/MS インタフェースに対応• 豊富な種類の結合相• シリカ系およびポリマー系粒子
サンプル量が限られている場合、Agilent ZORBAX マイクロボア (内径 1.0 mm) カラムが最適です。同
じサンプル量の場合、内径 2.1 mm のカラムより検出限界を 5 倍向上できます。この感度向上が、特に決定的に重要な条件になります。マイクロボアカラムは低流量 (一般的に最高で 50 µL/min) を使用します。そのため、これらのカラムは、LC/MS などの 低流量が必要な検出器や、キャピラリー LC シ
ステムで使用するのに理想的です。
マイクロボアカラムは、マイクロボア用に設計あるいは変更された HPLC システムで最適に機能します。StableBond SB-C18 と SB-C8、300SB-C18、Eclipse XDB-C18 と XDB-C8、Bonus RP、Extend C-18、Poroshell カラムを含む種類豊富な結合相が耐圧 40 MPa で使用可能です。ガードカラムも、アップタ
イト (直結式) のものが用意されており、デッドボリュームなく接続できます。
立体的に保護された 300StableBond 結合相

ZORBAX MicroBore 300SB-C18 を使用した
トリプシン消化物の分離
カラム :ZORBAX 300SB-C18
863630-902
1.0 x 150 mm、3.5 µm

移動相 :グラジエント : 60 分間で 2 ～ 60 % B
A : 0.1 % TFA
B : 0.075 % TFA/80 % ACN

流量 :50 µL/min

カラム温度 :

50 ºC

検出器 :

UV、215 nm

サンプル :

2 µL
recombinant- ヒト成長ホルモンのトリプシン消化物

マイクロボアカラムを使用して分離したトリプシン
分解物の例では、内径 1.0 mm のカラムを使用して

0

5

10

15

20

25

30
Time (min)

高感度と高分離が得られることが示されています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

35

40

45

50

55
LCMB001241

生体分子の分離用カラム

高感度ペプチド分析用のマイクロボア HPLC
カラム :PLRP-S 100Å 5 µm、150 mm x 各種の内径移動相 :A : 0.01 M トリス塩酸、pH 8
B : A + 0.35 M NaCl、pH 8

流量 :1 mL/minグラジエント :リニア 20 % ACN、0.1 % TFA ～ 50 % ACN、
0.1 % TFA で 15 分間

注入量 :0.5 µL

サンプル濃度 :0.25 mg/mL

検出器 :UV、220 nm

ピーク特定A. 内径 1.0 mm (流量 47 µL/min)
B. 内径 2.1 mm (流量 200 µL/min)
C. 内径 4.6 mm (流量 1 mL/min)

2

1. オキシトシン
2. アンギオテンシン II
3. アンギオテンシン I
4. インスリン

4

1
3

A
B
C

Agilent PLRP-S 100Å 5 µm カラムを使用したペプチドの分離

0

min

8

ピーク特定

1.0 mm
2.1 mm
4.6 mmインスリン

90

オキシトシン120

アンギオテンシン II

160

80

アンギオテンシン I

90
80

140
100

70
80

60

60

40

60

80
60

40

30

ピーク面積

50

ピーク面積

100
ピーク面積

ピーク面積

70

120

40
30

40

20

50

20

20
20

10
0

0

0
0

50

100

濃度 (ng)

150

0

50

100

濃度 (ng)Agilent PLRP-S カラムでの標準曲線のデータポイントのグラフ

242

10

150

0
0

50

100

濃度 (ng)

150

0

50

100

濃度 (ng)150

生体分子の分離用カラム

マイクロボア (内径 1.0 mm)
品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

300SB-C18
USP L1300SB-C8
USP L7マイクロボア

1.0 x 2505861630-902

マイクロボア RR

1.0 x 150

3.5863630-902

863630-906

マイクロボア RR

1.0 x 503.5865630-902

865630-906

マイクロボアガード、3 個

1.0 x 1755185-5920

5185-5920

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

Poroshell
300SB-C18

Poroshell
300SB-C8

Poroshell
300SB-C3

Poroshell
300Extend-C18

マイクロボア

1.0 x 755661750-902

661750-906

661750-909

671750-902

マイクロボアガード、3 個

1.0 x 1755185-5968

5185-5968

5185-5968

PLRP-S100 Å
USP L21

PLRP-S
300 Å
USP L21

PLRP-S
1000 Å
USP L21

PLRP-S
4000 Å
USP L21

PL1312-1502

PL1312-1503

PL1312-1802

PL1312-1803

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

マイクロボア

1.0 x 150

3

PL1312-3300

マイクロボア

1.0 x 503

PL1312-1300

PL1312-1301

マイクロボア

1.0 x 50

5

PL1312-1500

PL1312-1501

マイクロボア

1.0 x 508

品名

寸法 (mm)マイクロボア

1.0 x 50

粒子径 (µm)

5PL-SAX
1000Å

PL-SAX
4000Å

PL-SCX
1000Å

PL-SCX
4000Å

PL1351-1502

PL1351-1503

PL1345-1502

PL1345-1503

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp243

生体分子の分離用カラム

精製 – 分取 HPLC
アジレントは、生体分子の精製用に、さまざまなシリカ系カラムとポリマー系カラム、および充填剤を提供しています。µg および mg レベルのバイオ医薬品候補物質の精製用に最適化された高効率の粒子径の小さい分取カラムのほか、開発およびプロセスカラムに充填し、100 g、kg、数 kg の APIを精製するための全多孔質充填剤バルクも取り揃えています。
効率の高い精製専用に設計されているカラムや、粒子径の小さい分析カラムからフルスケールのAPI の製造まで容易に拡張できるカラムがあります。表 1 に、分取カラム/充填剤オプションと精製可能な生成物の量を示します。

ポリマー系分取 HPLC カラム

検出

バイオ医薬品のライフサイクル

µg

mg
高い効率

逆相

mRP-C18

ZORBAX Prep HT300Å StableBond

VariTide RPC

PLRP-S 100Å、300Å、1000Å、4000Å

PL-SAX

イオン交換

PL-SCX

サイズ排除

ZORBAX GF-250/450

表 1 : アジレントの生体分子精製用カラムおよび充填剤と適合用途

244

製造

開発

g

kg

数 kg

ハイスループット

生体分子の分離用カラム

精製カラムの選択
アプリケーション

モード

ノート

Agilent カラム

プロテオミクス

逆相プロテオミクスアプリケーション用のスペシャリスト向け高回収率カラム。µg スケールの精製を最大の回収率で行うための設計。

mRP-C18

すべての生体分子逆相

高効率 300 Å シリカ系粒子

ZORBAX PrepHT 300SB

合成ペプチド逆相

合成ペプチドの精製用に設計されたポリマー系充填剤。幅広い合成ペプチド (酸性および塩基性、疎水性および親水性) の高効率シングルカラムソリューションで、溶液および固相合成により生成されるペプチドのサイズ範囲に対応。

VariTide RPC

すべての生体分子逆相

ラボスケールにおける粒子径の小さい分取カラムを使用した高効率の精製から、プロセスス
ケールにおける大きい粒子径を使用した高い回収率の生成物精製への拡張まで、幅広いポアサ
イズと粒子径を持つ最高のポリマー系逆相製品ファミリ。API を製造するために精製を拡張する場合は PLRP-S を使用。規制対応の書類が必要。

PLRP-Sü 高効率用の 3 µm および 5 µm
ü 大規模な低圧精製用の 8 µm、10 µm、10 ～ 15 µm、15 ～ 20 µm、30 µm、50 µm 粒子
すべての生体分子

イオン交換

全多孔質強アニオン交換カラム

PL-SAXü 高効率分離用の 5 µm の粒子径
ü 大規模な中～低圧精製用の 8 µm、10 µm、および 30 µm 粒子
全多孔質強カチオン交換カラム

PL-SCXü 高効率分離用の 5 µm の粒子径
ü 大規模な中～低圧精製用の 8 µm、10 µm、および 30 µm 粒子

ヒントとテクニック
詳細については、次の資料をご覧ください。

Biomolecule Purification (資 料 番 号
5990-8335EN)
www.agilent.com/chem/library

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp245生体分子の分離用カラム

ZORBAX PrepHT
Agilent ZORBAX PrepHT カラムを使えば高純度、高回収率、ハイスループットも簡単に実現できます。
StableBond 300Å、C18、C8、C3、CN など、どのような条件下でも最適な分解能とロード量を提供するさまざまな結合相を用意しています。

ZORBAX PrepHT カラムには 5 µm、7 µm の粒子径で充填剤が詰められており、非常に高い分解能をもたらします。この高い分解能は高い試料負荷量をもたらし、高い収率、純度で化合物を分取することを可能にします。直径が大きく強度の高い ZORBAX 粒子は 100 mL/min までの流量を可能にし、ス
ループットを高めます。

ZORBAX 300 Å StableBond 分取 HT
カートリッジカラム

ZORBAX PrepHT カラムは、分解能を低下させることなく分析スケールから分取スケールにすばやく
スケールアップできるように設計されています。複雑な分離目的に使用するサイズの大きいカラム(内径 21.2 mm 以上、長さ 150 mm 以上) には、高い効率性と高い試料負荷量のバランスを慎重に図った結果、7 µm の粒子径を選びました。

ZORBAX 300A StableBond
ハード
ウェア

品名

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

300SB-C18
USP L1300SB-C8
USP L7300SB-CN
USP L10300SB-C3
USP L56897250-105

897250-109

PrepHT カートリッジカラム (エンドフィッティングキット 820400-901 が必要)
PrepHT カートリッジ

21.2 x 250

7897250-102

897250-106

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

7897150-102

897150-106

897150-109

PrepHT カートリッジ

21.2 x 150

5895150-902

895150-906

895150-909

PrepHT カートリッジ

21.2 x 100

5895100-902

895100-906

895100-909

PrepHT カートリッジ

21.2 x 50

5895050-902

895050-906

895050-909

820400-901

820400-901

820400-901

820400-901

820212-921

820212-918

820212-924

820212-924

820444-901

820444-901

820444-901

820444-901

PrepHT エンドフィッティング、2個
PrepHT ガードカートリッジ、2個

17.0 x 7.5

ガードカートリッジハードウェアキット

246

5

生体分子の分離用カラム

分取・プロセス用 PLRP-S• µg スケールから kg 製造スケールまで対応• 分離、最適化、クリーニング、再生時の化学的安定性により選択性とカラム寿命が延長• 複数のカラムを 1 つのバッチで充填することでシステムのダウンタイムを短縮し、バリデー
ションコストを削減

頑丈なポリスチレンジビニルベンゼンからなる PLRP-S は、低分子から高分子まで、また生体高分子に至るまで幅広い化合物の分離を行えるよう、様々なポアサイズの充填剤を用意しています。温度
および化学的安定性に優れているため、サンプル前処理、化合物の溶出、およびカラムの再生に極端な条件が必要な精製に理想的です。
保持容量と分解能は、化合物精製の効率を左右する重要なポイントです。さまざまな分析条件を適用できる PLRP-S は、化合物精製の可能性をさらに広げます。3 µm から 50 µm の粒子径により、µg ス
ケールから数 kg の cGMP 製造スケールまで対応しています。優れた化学的安定性 (最大 1 M NaOH)
により、カラム寿命を延ばすためのクリーニングと再生が可能になります。PLRP-S の最大 600 L のバッチサイズにより、複数のカラムを 1 回のバッチで充填できます。
高品質な製品を継続的にかつ確実に提供するために、アジレントでは文書で規定された方法に従い、すべての製造工程を厳格に管理しています。なお、この製品に関しては Type II Drug Master File お
よび関連規制法に基づいて製造され、製造工場においても定期的な監査を受けています。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp247生体分子の分離用カラム

分取・プロセス用 PLRP-S アプリケーションガイド
PLRP-S のポアサイズ
目的・対象

100 Å

300 Å

合成生体高分子、ペプチド、オリゴヌクレオチド✓✓

遺伝子組み換え生体高分子、ペプチド、タンパク質✓✓

巨大生体高分子、抗体、DNA 断片
低分子化合物、金属感受性の高い不安定化合物

カラム仕様
使用可能 pH 範囲

1 - 14

緩衝液種類

制限なし

使用可能有機溶媒濃度

1 - 100 %使用可能最高温度

200 ºC

使用可能最大圧力

5 ～ 8 µm : 3000 psi (21 MPa)
3 µm : 4000 psi (30 MPa)

248✓

1000 Å

4000 Å

✓✓生体分子の分離用カラム

25mer のトリチルオフオリゴヌクレオチドの精製と、
PLRP-S 100Å、4.6 x 50 mm を使用した分画の純度 (CE) : 90.54 %

200

定量分析

回収率 : 83.20 %PLRP-S 100 Å
PL1512-1300
4.6 x 50 mm、3 µm

移動相 :A : 100 mM トリエチルアンモニウムアセタート (TEAA)
B : 25 : 75 アセトニトリル : 水、100 mM TEAA

流量 :1 mL/minグラジエント :25 % B 0 分、35 % B 2 分、45 % B 22.5 分、45 % B 23 分、
25 % B 23.05 分、25 % B 26 分

カラム温度 :

80 ºC

mV

カラム :

0

0

min

0

min

25

mV

80

0

12.5
VLC0053

未精製ブラジキニンの分取分析
カラム :サンプル :

PLRP-S 100 Å
PL1512-5100
4.6 x 250 mm、10 µm
30 µL に未精製ペプチドを 1.5 mg

含む

移動相 :

21 % ACN 中 0.1 % TFA : 79 % 水

流量 :1 mL/min (360 cm/hr)

0

min

30
VLCbradykinin

分画分析 – 濃度過負荷条件での精製ピーク全体で収集されたフラクションの HPLC 分析

HPLC 純度 %100

は、フラクション 1 ～ 4 が対象ペプチドだけを含み、分画の数が増えるに従って重要な不純物のレベルが上がることを示しています。高効率の PLRP-

取得できました。詳細については、アプリケー
ションノート 5990-7736EN をご覧ください。

% 純度 (ブラジキニン)% 純度 (不純物)

HPLC 純度 %S カラムを使用することで、未精製の純度 91.7 %のものから、回収率 97 % で純度 100 % の化合物を

分画番号

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp249

生体分子の分離用カラム

分取・プロセス用 PLRP-S
PLRP-S100 Å

PLRP-S300 Å

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

100 x 30030

100 x 300

15-20

PL1812-6200

PL1812-6201

100 x 300

10-15

PL1812-6400

PL1812-6401

100 x 300

10

PL1812-6100

PL1812-6101

100 x 300

8PL1812-6800

PL1812-6801

50 x 300

8

PL1712-6800

PL1712-6801

PL1712-3200

PL1712-3201

50 x 15030

50 x 150

15-20

50 x 150

10-15

PL1712-3400

PL1712-3401

50 x 150

10

PL1712-3100

PL1712-3101

50 x 150

8PL1712-3800

PL1712-3801

25 x 300

15-20

PL1212-6200

PL1212-6201

25 x 300

10-15

PL1212-6400

PL1212-6401

25 x 300

10

PL1212-6100

PL1212-6101

25 x 300

8

PL1212-6800

PL1212-6801

25 x 15030

25 x 150

10

PL1212-3100

PL1212-3101

25 x 150

8

PL1212-3800

PL1212-3801

25 x 50

10

PLRP-S
1000 Å

PLRP-S
4000 Å

PL1812-3102

PL1812-3103

PL1712-3702

PL1712-3703

PL1712-3102

PL1712-3103

PL1212-3702

PL1212-3703

PL1712-3102

PL1712-3103

PL1212-1102

PL1212-1103

PL1512-5702

PL1512-5703

PL1512-5102

PL1512-5103

PL1512-3702

PL1512-3703

PL1512-3102

PL1512-3103

PLRP-S メソッド開発カラム

250

4.6 x 25030

4.6 x 250

15-20

PL1512-5200

PL1512-5201

4.6 x 250

10-15

PL1512-5400

PL1512-5401

4.6 x 250

10

PL1512-5100

PL1512-5101

4.6 x 250

8

PL1512-5800

PL1512-5801

PL1512-3200

PL1512-3201

4.6 x 15030

4.6 x 150

15-20

4.6 x 150

10-15

4.6 x 150

10

PL1512-3100

PL1512-3101

PL1512-3401

4.6 x 150

8

PL1512-3800

PL1512-3801

生体分子の分離用カラム

PLRP-S 充填剤バルク
粒子径 (µm)

入数

PLRP-S100 Å

PLRP-S300 Å

PLRP-S
1000 Å

50

1 kg

PL1412-6K00

PL1412-6K01

PL1412-6K02

100 g

PL1412-4K00

PL1412-4K01

30

1 kg

PL1412-6702

PL1412-6703

100 g

PL1412-4702

PL1412-4703

15-20

10-15

10

8

1 kg

PL1412-6200

PL1412-6201

100 g

PL1412-4200

PL1412-4201

1 kg

PL1412-6400

PL1412-6401

100 g

PL1412-4400

PL1412-4401

PLRP-S
4000 Å

PL1412-4K02

1 kg

PL1412-6100

PL1412-6101

PL1412-6102

PL1412-6103

100 g

PL1412-4100

PL1412-4101

PL1412-4102

PL1412-4103

1 kg

PL1412-6800

PL1412-6801

大量のご注文については、担当営業にお問い合わせください。

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp251

生体分子の分離用カラム

分取・プロセス用 PL-SAX および PL-SCX• あらゆる pH で性能を発揮するポリマー系強イオン交換カラム• 高流速と迅速な平衡化により精製サイクルを短縮• 大きなポアサイズで生体高分子を効率よく精製
アジレントは、生体高分子の分取精製用の PL-SAX 強陰イオン交換ポリマー系 HPLC カラムと、
PL-SCX
強陽イオン交換ポリマー系 HPLC カラムを製造・販売しています。これらのカラムは分析カラムから分取カラムまで、さまざまなカラムサイズを取り揃えています。

1000Å、4000Å のポアサイズとも高い安定性を誇ります。高流量と迅速な平衡化により、精製サイクルを短縮できます1000 Å のポアサイズは大容量の精製に使用し、高い質量移動性能を備えた 4000 Å ギガポア粒子は、
分子量の大きい生体分子や高速、高分離能の精製に使用します。

252

生体分子の分離用カラム

充填剤仕様
PL-SAX

PL-SCX

基材材質

ポリマー系

ポリマー系

ポアサイズ

1000 Å、4000 Å

1000 Å、4000 Å

粒子径

10 µm、30 µm

10 µm、30 µm

充填剤の形状

球状

球状

結合官能基

4 級アミンスルホン酸

使用可能最大圧力

3000 psi

3000 psi

使用可能最高温度

80 ºC

80 ºC

使用可能 pH 範囲

1 - 141 - 14

緩衝液種類

すべての陰イオン交換緩衝液

すべての陽イオン交換緩衝液

充填剤密度0.39 g/mL

0.39 g/mL

分子量の大きいオリゴヌクレオチドの精製

80

カラム :

PL-SAX 1000 Å、8 µm

移動相 :A : 93 % 0.1 M TEAA、pH 7 : 7 % ACN
B : 93 % 0.1 M TEAA、3.24 M 酢酸アンモニウム、pH 7 : 7 % ACN

グラジエント :20 分で 0 ～ 100 % B

流量 :1.5 mL/min

カラム温度 :

60 ºC

検出器 :

UV、290 nm%B

91 mer

0

0

min

35
VLC0054

Agilent PL-SAX 4000Å を使用したアミログルコシダーゼが含まれる培養濾液の分取分画
カラム :PL-SAX
PL1551-1803
4.6 x 50 mm、8 µm

移動相 :A : 0.01 M トリス塩酸、pH 8
B : A + 0.5 M NaCl、pH 8

流量 :4.0 mL/min

グラジエント :0 ～ 100 % B (2 分)

検出器 :UV、280 nm

分取分画

0www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

min

30

253

生体分子の分離用カラム

分取・プロセス用 PL-SAX および PL-SCX
PL-SAX
1000 Å

PL-SAX
4000 Å

PL-SCX
1000 Å

PL-SCX
4000 Å

30

PL1851-3102

PL1851-3103

PL1845-3102

PL1845-3103

100 x 300

10

PL1851-2102

PL1851-2103

PL1845-2102

PL1845-2103

50 x 150

30

PL1751-3702

PL1751-3703

PL1745-3702

PL1745-3703

50 x 150

10

PL1751-3102

PL1751-3103

PL1745-3102

PL1745-3103

25 x 150

30

PL1251-3702

PL1251-3703

PL1245-3702

PL1245-3703

25 x 150

10

PL1251-3102

PL1251-3103

PL1245-3102

PL1245-3103

25 x 50

10PL1251-1102

PL1251-1103

PL1245-1102

PL1245-1103

7.5 x 150

8

PL1151-3802

PL1151-3803

7.5 x 50

8

PL1151-1802

PL1151-1803

PL1145-1802

PL1145-1803

寸法 (mm)

粒子径 (µm)

100 x 300

PL-SAX および PL-SCX メソッド開発カラム
分取・プロセス用 PL-SAX および PL-SCX カラム
および充填剤バルク

4.6 x 250

30

PL1551-5702

PL1551-5703

PL1545-5702

PL1545-5703

4.6 x 250

10

PL1551-5102

PL1551-5103

PL1545-5102

PL1545-5103

4.6 x 150

30

PL1551-3702

PL1551-3703

PL1545-3702

PL1545-3703

4.6 x 150

10

PL1551-3102

PL1551-3103

PL1545-3102

PL1545-3103

PL-SAX および PL-SCX 充填剤バルク
粒子径 (µm)

入数

PL-SAX
1000 Å

PL-SAX
4000 Å

PL-SCX
1000 Å

PL-SCX
4000 Å

30

1 kg

PL1451-6702

PL1451-6703

PL1445-6702

PL1445-6703

100 g

PL1451-4702

PL1451-4703

PL1445-4702

PL1445-4703

1 kg

PL1451-6102

PL1451-6103

PL1445-6102

PL1445-6103

100 g

PL1451-4102

PL1451-4103

PL1445-4102

PL1445-4103

10

大量のご注文については、担当営業にお問い合わせください。

254

生体分子の分離用カラム

ペプチド精製VariTide は、合成ペプチドの生成にコストパフォーマンスの高いソリューションを提供します。この
カラムは、µg から g のスケールで、大量の合成ペプチド精製のコストと効率を管理することができます。VariTide は、少量多品目のペプチドを短時間で生産しなければならない場合に最適です。

VariTide RPC カラム

合成ペプチド用 VariTide RPC カラム• 1 つのカラムでほとんどの合成ペプチドに対応• 1 および 2 インチの分取カラムを使用した場合でも小さい粒子サイズで最大の効率• 1 および 2 インチ分取カラムに充填する充填剤バルクにより mg から g レベルの精製が可能
アジレントは生産性を高め、合成ペプチドの分析・分取を経済的に行うポリマー系 HPLC カラム、
VariTide を開発しました。ポリマー系カラムであることから、様々な範囲の pH で使用可能で、酸性/塩基性/親水性/疎水性ペプチドのいずれも、この VariTide で分析・分取を行うことができます。

合成ペプチド用 VariTide RPC カラム
寸法 (mm)

部品番号

21.2 x 250

PL1E12-5A05

10.0 x 250

PL1012-5A05

4.6 x 250

PL1512-5A05

VariTide RPC 充填剤バルク
品名

部品番号

100 g

PL1412-4A05

1 kg

PL1412-6A05

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

255

生体分子の分離用カラム

粗精製ペプチドのスクリーニング
カラム :VariTide RPC
PL1512-5A05
4.6 x 250 mm

移動相 :

酸性

A : 95 % TFA 水溶液 (0.1 %) :5 % アセトニトリル
B : 50 % TFA 水溶液 (0.1 %) :50 % アセトニトリル

酸性

塩基性

A : 5 % アセトニトリル、95 % 20 mm
炭酸アンモニウム pH 9.5
B : 50 % アセトニトリル、50 % 20 mm
炭酸アンモニウム pH 9.5

流量 :酸性条件では分離されない
不純物

塩基性

1.0 mL/min (360 cm/h)

グラジエント : 30 分で 0 ～ 100 % B
検出器 :UV、220 nm
min

0

30
VLC0052

VariPure IPE• 球状ポリマーを使用し粒度分布を狭く設定• 少量でも再現性の高いフローを提供• 高純度なサンプルを低コスト・高回収率で獲得
VariPure IPE は、対イオンとして炭酸イオンを結合した第 4 級アミンを官能基として持つポリマー系の固相抽出カラムで、TFA やギ酸、酢酸などの酸性イオンペア剤の除去用として開発されました。通常の固相抽出カラムに比べて、使用法も簡単で、さらに効率よく酸性イオンペア剤を除去します。適切に調整した粒子径と充填剤量によって、自然落下でも充分なイオンペア剤除去能力を発揮します。特に酸性条件下で不安定なペプチドでは、イオンペア剤を除去することによってペプチドの損失を防ぎ、純度と回収率が向上します。

VariPure IPE
充填剤量

イオンペア剤
除去能力

入数

部品番号

100 mg/3 mL

0.1 % の TFA で 5 mL まで

50 個

PL3540-D603VP

500 mg/6 mL

0.1 % の TFA で 25 mL まで

50 個

PL3540-C603VP

1 g/20 mL

0.1 % の TFA で 50 mL まで

25 個

PL3540-P603VP

25 g

256

PL3549-3603VP

付録

HPLC カラムの USP 表記
米国薬局方 (USP) には、多数の医薬品の分析方法について標準的な情報があります。USP は、メー
カーではなく、充填剤によってカラムを指定します。USP は L1 の定義を更新しました。次のリスト
では、最新の定義とその定義が適用されるカラムの一覧を示しています。ラピッドレゾリューショ
ンハイスループット (RRHT) カラムは現在、L1、L7、および L11 カテゴリで選択できます。

USP 表記カラム

USP メソッド USP 充填剤

L1

粒子径 (µm)

ポアサイズ (Å)

Poroshell 300 Extend-C18
ZORBAX Eclipse Plus C18
ZORBAX Eclipse XDB-C18
ZORBAX StableBond SB-C18
ZORBAX Rx-C18
ZORBAX Extend-C18
ZORBAX ODSZORBAX ODS classic
Pursuit XRs C18
Pursuit C18
Pursuit C18-A
Polaris C18-Ether
SepTech ST60 C18
SepTech ST150 C18
Agilent Prep C18

2.7
2.7
5
5
1.8, 3.5, 5
1.8, 3.5, 5, 7
1.8, 3.5, 5, 7
3.5, 5
1.8, 3.5, 5, 7
3, 5, 7
5
3, 5, 103, 5, 103, 5, 10
3, 5
10
10
5, 10

120
120
300
300
95
80
80, 300
80
80, 300
70
70
100
200
180
200
60
150
100

ZORBAX HILIC PlusZORBAX SILZORBAX Rx-SIL
Pursuit XRs Si
Polaris Si-A
Agilent Prep

1.8, 3.55
3.5, 5, 7
3, 5, 10
5, 10
5, 10

95
70
80, 300
100
180
100

2.7
2.7
5
1.8, 3.5, 5
1.8, 3.5, 5, 7
1.8, 3.5, 5, 7
1.8, 3.5, 5, 7
5
3, 5, 103, 5, 10
3, 5
3, 5

120
120
300
95
80
80, 300
80
70
100
200
180
200

Poroshell 120 EC-C18
多孔質シリカまたはセラミック微粒子 (直径 1.5 ～ 10µm) に化学結合したオクタデシルシラン、またはモノリ Poroshell 120 SB-C18
ス様ロッド
Poroshell 300SB-C18

L3

多孔質シリカ粒子 (直径 1.5 ～ 10 µm)、またはモノリス
様シリカロッド

L7

全多孔質シリカ粒子 (直径 1.5 ～ 10 µm) にオクチルシラン Poroshell 120 EC-C8を化学結合した充填剤、またはモノリス様シリカロッド Poroshell 120 SB-C8

Poroshell 300SB-C8
ZORBAX Eclipse Plus C8
ZORBAX Eclipse XDB-C8
ZORBAX SB-C8
ZORBAX Rx-C8
ZORBAX C8
Pursuit XRs C8
Pursuit C8
Polaris C8-A
Polaris C8-Ether(続く)

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

257

付録

USP 表記カラム

粒子径 (µm)

ポアサイズ (Å)

L8

USP メソッド USP 充填剤
全多孔質シリカゲル担体 (直径 3 ～ 10 µm) に単分子層のアミノ
プロピルシランを化学結合した充填剤

ZORBAX NH2Polaris NH2

5
5

70
180

L9

強酸性カチオン交換被膜を化学結合した不規則または球形全多孔質シリカゲル (直径 3 ～ 10 µm)

ZORBAX SCX

5、球形

300

L10

多孔質シリカ粒子 (直径 3 ～ 10 µm) にニトリル基を化学結合した充填剤

ZORBAX CN
ZORBAX SB-CN
ZORBAX Eclipse XDB-CN

5
3.5, 5
3.5, 570
80, 30080

L11

多孔質シリカ粒子 (直径 1.5 ～ 10 µm) にフェニル基を化学結合し ZORBAX Eclipse XDB Phenyl
た充填剤
ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl

ZORBAX Phenyl
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl
Pursuit XRs Diphenyl
Pursuit DiPhenyl

5
1.8, 3.5, 5
3.5
2.7
3, 5, 103, 5, 10

70
95
80
120
100
200

L13

多孔質シリカ粒子 (直径 3 ～ 10 µm) に化学結合したトリメチル
シラン

ZORBAX TMS

5

70

L14

強塩基性第 4 級アンモニウムアニオン交換基を化学結合したシリカゲル (直径 5 ～ 10µm)

ZORBAX SAX
IonoSpher A

5
5

70
120

L17

水素型のスルホン化架橋スチレン - ジビニルベンゼン共重合体(直径 7 ～ 11 µm) から構成される強カチオン交換樹脂

Hi-Plex H

8

N/A

L19

カルシウム型のスルホン化架橋スチレン - ジビニルベンゼン共重合体 (直径 9 µm) から構成される強カチオン交換樹脂

Hi-Plex Ca
Hi-Plex Ca (Duo)

8
8

N/A
N/A

L20

多孔質シリカ粒子 (直径 3 ～ 10 µm) にジヒドロキシプロパン基
を化学結合した充填剤

LiChrospher Diol

5

N/A

L21

硬質球状スチレン - ジビニルベンゼン共重合体 (直径 5 ～ 10 µm) PLRP-S

3, 5, 8, 10, 10-15, 1520, 50

100

PLRP-S3, 5, 8, 10, 10-15, 1520, 50

300

PLRP-S5, 8, 10, 30, 50

1000

PLRP-S5, 8, 10, 30, 50

4000

PLgel

3, 5, 10, 20

50, 100, 500, 103、
105、105、106、混合

Hi-Plex H

8

N/A

L22

スルホン酸基を持つ多孔質ポリスチレンゲル (約 10 µm のサイズ) からなるカチオン交換樹脂

L25

中性、アニオン、およびカチオン水溶性ポリマーに適用される、 PL aquagel-OH
分子量範囲 1,000 ～ 5,000 Da の化合物を分離できる充填剤 (ポリエチレンオキサイドにより決定)ポリヒドロキシル化エーテル(表面に残留カルボキシル官能基が多少含まれる) により架橋されたポリメタクリル酸樹脂ベースが適切であることを確認済み

5, 8

30

L33

分子量範囲 4,000 ～ 500,000 Da でデキストリンを分離できる充 ZORBAX GF-250
填剤。シリカを基本とする球状で、pH 安定性を持たせるように
Bio SEC-3
処理されています。

4

150

3

100, 150, 300

Bio SEC-55100, 150, 300, 500,
1000, 2000

ProSEC

5

300
(続く)

258

付録

USP 表記カラム

粒子径 (µm)

ポアサイズ (Å)

L34

リード型のスルホン化架橋スチレン - ジビニルベンゼン共重合
体 (直径約 9 µm) から構成される強カチオン交換樹脂

Hi-Plex Pb

8

N/A

L35

親水性 (ジオールタイプ) 単分子層結合相を持つ、ポアサイズ
150 Å のジルコニウムで安定化した球状シリカ充填剤

ZORBAX GF-250
ZORBAX GF-450

46150, 300

L43

プロピルスペーサによりシリカ粒子 (直径 5 ～ 10 µm) にペンタ
フルオロフェニル基を化学結合した充填剤

Pursuit PFP

3, 5

200

L45

多孔質シリカ粒子 (直径 5 ～ 10 µm) に結合したベータシクロデ
キストリン

ChiraDex Chiral

5

100

L50

逆相保持および強陰イオン交換機能のある多機能樹脂。この樹 ZORBAX 300SCX
脂は、ジビニルベンゼン共重合体で 55 % 架橋したエチルビニル
ベンゼン (直径 3 ～ 15 µm) で構成され、表面領域は 350 m2/g 以上。基質は第 4 級アンモニウムで機能性を持たせたラテックス
粒子でコーティングされており、ラテックス粒子はジビニルベ
ンゼンと架橋したスチレンで構成

5

300

L52

スルホプロピル基を持つ多孔質シリカ (直径 5 ～ 10 µm) による
弱カチオン交換樹脂

5

120

L53

ジビニルベンゼン共重合体で 55 % 架橋したエチルビニルベンゼ Bio SAX
ン (直径 3 ～ 15 µm ) から構成される弱カチオン交換樹脂。基質
表面は、カルボン酸やリン酸で機能性を持たせたモノマーを移植。キャパシティは 400 µeq/カラム以上。

3, 5, 10300

L56

全多孔質シリカ粒子 (直径 3 ～ 10 µm) にプロピルシランを化学結合した充填剤

3, 5

80

L57

不斉認識タンパク質のオボムコイドをシリカ粒子 (直径約 5 µm、 Ultron ES-OVM
ポアサイズ 120 Å) に化学結合した充填剤

5

120

L58

ナトリウム型のスルホン化架橋スチレン - ジビニルベンゼン共重合体 (直径約 6 ～ 30 µm) から構成される強カチオン交換樹脂

Hi-Plex Na
Hi-Plex Na (Octo)

10
8

N/A
N/A

L60

球形、多孔質シリカゲル、直径 10 µm、アルキルアミド基で共有結合修飾およびエンドキャップ処理された表面

ZORBAX Bonus-RP
Poroshell 120 Bonus-RP
Polaris Amide-C18

1.8, 3.5, 5
2.7
3, 5

80
120
180

USP メソッド USP 充填剤

IonoSpher C

ZORBAX SB-C3

www.agilent.com/chem/lccolumn:jp

259

付録

260

LC および LC/MS カラム
さまざまな相と粒子サイズの Fast LC カラムの品揃えにより、分析の柔軟性と拡張性が向上します。
従来のクロマトグラフィーや超高速クロマトグラフィー、生体分子の分離、複雑な塩基性化合物の分析など、さまざまな分析において、アジレントは、高速で再現性の高い結果を実現する業界最高性能のカラムを提供します。これらはすべて、アジレントの比類のない品質と信頼性を備えています。

アジレントの消耗品情報をお届けします。
『カラム分析機器部品カタログ』が製品別に分冊化され、必要な情報を見つけやすくなりました。
各カタログには消耗品の情報だけでなく、役立つヒントやアプリケーションなども掲載されています。

• 製品の写真と詳細情報• セレクションガイドとアプリケーション• 適合性チャート• トラブルシューティングのヒント• メンテナンススケジュール

アジレントの消耗品に関する情報をセットにしてお届けします。

• Poroshell 120 カラム - 2 µm 未満のカラムよりも 30～50 % 低い圧力で高効率と高分離能を提供します。

• ZORBAX ラピッドレゾリューション High Definition (RRHD) カラム – Agilent 1290 Infinity LC やその他の UHPLC 機器と組み合わせて使用でき、120 MPa までの安定性を実現する、高度な充填プロセスを特徴とした 1.8 µm カラムです。14 種類を超える相と HILIC が用意されています。

クロマトグラフ用汎用部品 – バイアル、シリンジ、ガス精製システム、フィッティング、ツールな
どの幅広い品揃えにより、汚染を最小限に抑え、正確で再現性の高い結果を提供します。

• ZORBAX Eclipse Plus カラム – C18 および C8 カラムは、優れたピーク形状を提供しつつ、フェニ

ルヘキシル結合相と PAH 分離用の C18 結合相でより多くのアプリケーションに対応します。
Eclipse Plus のすべての相は、Fast LC/UHPLC RRHD および RRHT カラム、1.8 µm が用意されています。拡張性の面では、Eclipse Plus C18 相は Poroshell 120 EC - C18 相に非常に類似しています。

サンプル前処理 – Bond Elut SPE カートリッジ、パッケージ済み QuEChERS キット、フィルタ、乾燥マ
トリックススポットカード (DMS) など、複雑なマトリックスからサンプルを確実に抽出・濃縮できる製品が揃っています。

• Poroshell 120 および RRHD カラムに加えて、ZORBAX ラピッドレゾリューションハイスループッ

ト (RRHT) カラムは 140 を超える 1.8 µm カラムの選択肢を持つ第 3 の高速 LC オプションです。
RRHT カラムには内径 2.1、3.0、4.6 mm が用意されており、すべて 60 MPa まで使用可能です。

GC、GC/MS – GC 用のウルトライナートソリューション、注入口消耗品、Agilent J&W GC カラムおよAgilent ZORBAX LC カラムを選択するということは、信頼性の高い製品はもちろん、それ以上のものが得られるということを意味します。つまり、世界最大のクロマトグラフィー製品のサプライヤであるアジレントのサポートや、40 年を超える専門知識、テクニカルサポートも同時に得られることになるのです。インターネット、電話、担当者を通じ、アジレントはお客様の直面する課題解決をサポートいたします。

LC、LC/MS、CE、CE/MS – 低分子、生体分子、GPC/SEC 用の LC キャピラリー、ランプ、ZORBAX LC

び標準溶液など、高品質な分析を支える消耗品を取り揃えています。分析が困難なサンプルについても、再現性の高い優れた性能を実現します。

カラムの充実した品揃えにより、システムの性能を最大まで引き上げ、常に高品質の結果を生成します。

ICP-MS、分光分析 – 原子吸光分析、ICP-OES、ICP-MS、MP-AES、分子分光分析用の消耗品により、大量サンプルの迅速スクリーニングのニーズに対応します。
追加のカタログのご請求については、カストマコンタクトセンタ(0120-477-111) までお知らせください。

キャンペーン・イベント等の最新情報
消耗品のキャンペーンや、お仕事に役立つセミナー、イベントなど、最新情報をホームページで紹介しています。ぜひホームページをご覧ください。

www.agilent.com/chem/jp

ホームページ:

www.agilent.com/chem/jp
カストマコンタクトセンタ：

フリーダイヤル 0120-477-111
本資料記載の情報は予告なしに変更されることがあります。
アジレント・テクノロジー株式会社© Agilent Technologies, Inc. 2013
Printed in Japan August 31, 2013
5991-2944JAJP

LC、LC/MS カラムセレクションガイド

詳細情報

LC、LC/MS カラムセレクションガイド
LC、LC/MS カラムの総合リファレンスガイド