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日呼吸誌

3（1），2014●ファイザーフェローシップ報告

γ -secretase inhibitor によるヒト肺癌細胞における Notch3 活性と細胞増殖の抑制
小西純

はじめに方法私は 2005 年 4 月から 2008 年 3 月まで，テネシー州ナッ

肺 癌 細 胞 株 は Notch3 が 高 発 現 で あ る HCC2429，

シュビルにあります Vanderbilt 大学の Thao P. Dang 先H460，A549 を使用した．Notch3 の発現と各種アポトー生の教室に留学させていただきました．留学中，膜受容シス関連蛋白の発現は，ウエスタンブロットにより確認

体蛋白である Notch3 の肺癌における役割について，研した．HES1 と HEY1 の発現については real time PCR究いたしました．その結果につきましては，Konishi らを使用し確認した．γ -secretase inhibitor の細胞傷害活の文献 に記載されておりますが，内容をご報告いたし性については MTT assay を用い，アポトーシス細胞はます．

annexin V と PI を用いフローサイトメトリーにより確1）

認した．Notch3 の抑制は以下のシークエンス（5 -CAC-背景と目的CUAUAACUGCCAGUGC-3 ）を用い siRNA により施Notch pathway は，神経，造血，血管といったさま行した．xenograft model は，ヌードマウスに上記の肺ざまな組織の分化にとって重要な役割を果たしている，癌細胞株（1×107）を接種し作製した．腫瘍が触知可能シグナル伝達経路である ．哺乳動物においては 4 つのになった時点で γ -secretase inhibitor（100 mg/kg）を 1細胞膜蛋白である Notch receptor と 5 つのリガンドの週あたり 3 日間連続経口投与，4 日間休薬とし，2〜3 週存在が知られており，4 つすべての Notch receptor の異間施行した．

2）

常活性が癌化と密接に関連していることが報告されてい結る3）〜6）．Notch 活性化の機序としては，リガンドが Notch

果receptor にいったん結合するとγ -secretase と呼ばれる

γ -secretase inhibitor は， 非 小 細 胞 肺 癌 株 に お け る

プロテアーゼにより Notch receptor が分解され，活性Notch3 の発現を濃度依存的に抑制し，Notch pathway型である Notch 細胞内ドメイン（NICD）が細胞膜よりの下流のシグナルであるHES1，HEY1の発現も抑制した．

核内へ移行する．その後 NICD が転写因子である CSL

またγ -secretase inhibitor は非小細胞肺癌細胞株の増殖（CBF1，Sel，Lag-1）と結合することで，標的遺伝子（Hes，を抑制し，アポトーシス細胞数の増加を誘導した．さらHey）の転写活性が行われる ．γ -secretase inhibitor はに Bcl-2，BclxL の 発 現 の 低 下 と PARP，cytocrome C

γ -secretase の活性化を抑えることで Notch pathway をの発現が誘導され，γ -secretase inhibitor によりアポトー抑制し，さまざまな腫瘍をアポトーシスに導くことが報

シスシグナルの活性化が認められた．

2）

において告されている が，肺癌における詳細な検討は十分ではγ -secretase inhibitor 投与群ではコントロール群に比べない．我々は，Notch3 が肺癌組織の約 40％に過剰発現て腫瘍縮小効果を認め，腫瘍組織において Notch3 発現しており，さらに Notch3 を dominant negative（DN）の低下が認められた．使用した肺癌細胞株のうち 4 つのにより抑制すると，非小細胞肺癌細胞株の増殖が抑えら

Notch family の発現を調べたところ，Notch3 の発現のれ腫瘍原性が失われることを報告した ．今回我々は，γ

ほ か に HCC2429 で の み Notch1 の 発 現 を 認 め た が，-secretase inhibitor を使用し Notch3 の肺癌細胞におけA549，H460 では発現を認められず，γ -secretase inhibi-る役割について検討した．

tor の作用は比較的 Notch3 特異的であることが示唆さ

4）
7）

8）

れた．HCC2429 については，Notch3 の発現が Notch3siRNA によって抑制されるとγ -secretase inhibitor の効
連絡先：榊原 純（現姓）〒060‑8638 北海道札幌市北区北 15 条西 7 丁目
北海道大学医学部第 1 内科
（E-mail: konishj@med.hokudai.ac.jp）

果が減弱したことから，HCC2429 においてもγ -secretase inhibitor の効果は Notch3 特異的であると考えられた．

γ -secretase inhibitor によるヒト肺癌細胞における Notch3 活性と細胞増殖の抑制

結論

γ -secretase inhibitor を使った Notch pathway の抑制は，肺癌における新しい標的治療となりうることが示唆された．
謝辞：今回，このような留学の機会を与えていただき誠にありがとうございました．ファイザーフェローシップ選考委
員の先生方をはじめとして，ご指導いただきました数多くの先生方にこの場をお借りして深謝いたします．

引用文献
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