09-11使用说明书

Code No. DTM-101
保存温度 －２０℃

Quick Taq HS DyeMix
本品为预混了 Taq DNA polymerase 的 2×Master Mix（采用热启动、添加了电泳染料）。只需加入模板和引物，即可进行PCR，反应溶液可直接用于电泳分析。此外，在 Master Mix 中预混抗 Taq 抗体，通过热启动法，大幅提高了特异性，可期待高效率的扩增。
特征・ 简单・迅速地 PCR
本品为 2×Master Mix，只需加入模板和引物，即可方便地使用。
由于预混了染料(BPB)，PCR 后可直接用于电泳上样。
・ 优秀的 PCR 表现
通过对 Buffer 组分的最优化，与 Taq DNA polymerase 相比，PCR 性能有了大幅度的提高。
・ 采用热启动 PCR
采用使用抗 Taq DNA polymerase 抗体的热启动法，显示了高灵敏度和高特异性。
・ 保存稳定性高经验证，反复冻融 30 次、4℃状态下保存 3 个月对品质没有影响。
１． 产品组成
2x Quick Taq HS DyeMix

1.25ml × 2 支※ 反应体系为 50μl 时，可使用 100 次。
※ 短期内（3 个月以内）连续使用完，可 4℃保存。长期不使用时请于-20℃保存。
２． 注意事项本产品为科研用试剂。请勿作为诊断或临床检查用试剂使用。此外，对本产品的有害性调查还不十分全面，因此，在使用过程中，请一定要严格遵守实验室作业的一般注意事项，适当使用保护用品，安全操作。
３． PCR Protocol（１） PCR 反应液的配制
配制反应液之前，请充分搅拌 Quick Taq HS DyeMix，注意不要使其起泡。如试剂发生冻结，则先使其充分解冻｡
Autoclaved, distilled water
2x Quick Taq HS DyeMix
10 pmol /μl Primer #1
10 pmol /μl Primer #2

使用量X μl25 μl
1.0 μl
1.0 μlTemplate DNA

Y μlTotal

50 μl

终浓度
1×0.2 μM
0.2 μM
Genomic DNA ～200 ng / 50 μl
Plasmid DNA ～50 ng / 50 μl
菌落（※参照实验例）＜产品内容•技术相关的咨询＞
东洋纺(上海)生物科技有限公司
TEL: 021-5879 4900 FAX 021-5879 4901
营业时间: 9:00~17:00 (双休日及国定节假日除外)E-mail: tech@bio-toyobo.cn[URL] http://www.bio-toyobo.cn

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PCR 循环条件
3步法

2步法

Predenature :Denature :Annealing :Extension :94℃, 2min.
94℃,30sec.
(Tm-5)℃, 30sec.
68℃, 1min. /kb

25～40
cyclesPredenature :Denature :Extension :94℃, 2min.
94℃, 30sec.
68℃, 1min. /kb

25～40cycles

・ 延伸时间(Extension)请按目的片段链长设定为1min./kb。
・ 引物的Tm不满73℃的情况下，请用3步法。
４． 为 PCR 顺利进行需要注意：（１） 反应用离心管请尽量用薄壁管。为提高可重复性，建议 PCR 反应体系设为 50 μl。
（２） 引物请选择 GC 含量不高的 22~35mer(Tm 值>60℃)。同时，设计引物时注意避免分子内二级结构、引物二聚体等。
（３） 模板 DNA 的长度及纯度对 PCR 的结果有很大影响。如果模板 DNA 的量较宽裕，则建议事先进行电泳以确认其品质。
５． 关于 PCR 产物的克隆（１） 由于 PCR 溶液里含有电泳染料（BPB），且比重已经过调整，ＰＣＲ后，可直接用于电泳上样。
（２） 用本产品扩增的 PCR 产物，可用 TA 克隆法进行克隆。
用本公司高效率 TA 克隆试剂盒『TArget Clone』(Code No.
TAK-101)可简便地进行 TA 克隆。（※一般情况下，PCR 产物无需纯化，如果 TA 克隆效率较低，则请进行纯化。）
６． 实验例（１） 人 p53 基因（2.9 kb）的扩增
以人基因组 DNA(50ng)为模板，以较难扩增的人 P53 基因(2.9kb)为目的片段进行扩增。结果可见，使用 Quick
Taq HS Dye Mix 可得到最高效率和最高特异性。另外，可知在不采用热启动法的情况下(3、4 泳道)，特异性及灵敏度都很低(Quick Taq HS DyeMix 采用热启动法)。
M

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模板：人基因组 DNA 50ng/50μl 反应4< 扩增条件 >鋳型
ヒトゲノムDNA 50ng / 50 μl反応
M:1kb:Ladder
94℃

2.9 kb2min. ＜増幅条件＞

1.Quicker
Taq HS DyeMix
94℃ 30sec. 94℃ 2 min.
M: 1kb Ladder1:
QuickTaq™
HSDyeMix30 sec.
2.rTaq DNA polymerase(采用热启动)60℃ 30sec. 94℃ 40cycles
2 : rTaq DNA polymerase （ホットスタート法使用） 60℃ 30 sec.
3.rTaqDNADNApolymerase
68℃ 3min. 68℃ 3 min.
3 : rTaqpolymerase
4 : 公司A社Taq
Taq
Master
4.A
MasterMix Mix
Forward Primer : AATGGATGATTTGATGCTGTCCC
ReversePrimer: AATGGATGATTTGATGCTGTCCC: ATAAGAGCTCCCAAGACTTAG
Forward Primer※終濃度0.2μMで使用
Reverse Primer : ATAAGAGCTCCCAAGACTTAG※引物终浓度 0.2μM＜产品内容•技术相关的咨询＞
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240 cycles

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（２） 用菌落直接 PCR 法进行插入确认以对质粒 pTA2（包含 500bp 的插入片段）进行转化的大肠杆菌 DH5α 的菌落为样品，使用在载体上设计的引物进行 PCR。结果可见，不同大小的目的片段均可获得明亮的条带。本试剂最适用于菌落直接 PCR 法。

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７． 常见问题
问题原因•循环数太少•引物问题无法确认到扩增产物扩增量少出现 smear、非特异性条带对策•增加 2~5 个循环数
•确认引物品质→重新合成・配制•重新设计引物•模板ＤＮＡ纯度低•确认模板ＤＮＡ的纯度→提高模板 DNA 的纯度•模板 DNA 量过少•使用适量的模板 DNA•菌体量过多•减少带入菌体（菌落）的量•循环数过多•引物浓度过高•减少 2~5 个循环数
•以 0.1～0.2μM 为范围尝试•退火温度过低

•以 55～65℃为范围尝试•引物问题

•确认引物品质→重新合成・配制•重新设计引物•模板ＤＮＡ量过多•使用适量的模板 DNA

８． 相关产品
包装

Code No.

<高效率 TA 克隆试剂盒>TArget Clone

10 次份

TAK-101<利用磁珠 DNA fragment 纯化试剂盒>
MagExtractor -PCR & Gel Clean up-

200 次份

NPK-601

品名[制造 • 销售商]东洋纺（上海）生物科技有限公司
上海市浦东新区张杨路 188 号汤臣商务中心 C 座 310 室
邮编：200122
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