19-06
使用说明书货号： HSTTX-111
保存温度: -20 ℃
高效率 RT-PCR 试剂盒

Hot Start TTx (RNA) Kit
本品是使用本公司独家的 TTx DNA Polymerase 酶而开发的的 RT-PCR 试剂，该酶在 Mn2+存在条件下具有逆转录活性，因此可使用 1 酶体系进行 RT-qPCR 反应。相比广泛使用的 Taq DNA Polymerase，具有更高的扩增效率，
可进行高速 PCR 且可扩增含有 PCR 抑制剂的粗样品。
TTx DNA Polymerase 具有 5’→3’ Exonuclease 活性，所以可用于 TaqMan®分析等使用探针法的荧光定量 PCR 中。
本试剂使用了高性能热启动抗体，所以可进行特异性高的 Hot start PCR。

特征● 可进行高效率的 1 酶体系・1-step RT-PCR
TTx DNA Polymerase 具有很高的逆转录活性，即使微量模板也可高效地进行 RT-PCR。扩增效率高，短时间的循环条件下也能够高效地扩增。也可用于 DNA 的检测。
● 粗样品扩增能力强
在扩增含有 PCR 抑制剂的粗样品（生物样品材料、土壤、食品等）时性能卓越。血液粪便等生物样品无需抽提核酸即可扩增。

1. 组分产品名称
5x Buffer for rTth/ TTx (DNA/ RNA)2mM dNTPs
50mM Mn(OAc)2Hot Start TTx DNA Polymerase (4U/ μL)

容量

保存温度

1 mL
1 mL
250 μL62.5 μL

-20°C
-20°C
-20°C-20°C* 进行荧光定量 PCR 时：本试剂中不含有 Passive Reference 荧光染料（ROX）。Applied Biosystems 或 Agilent
Technologies 公司的仪器等，为校正孔间荧光强度及分装误差，使用 Passive Reference 时，请使用另外的产品 50x ROX
reference dye(Code No. ROX-101)。

* 5x Buffer for rTth/ TTx (DNA/ RNA)是含有缓冲液、盐等的 5×浓度的反应液。请试剂中附带的 dNTP、Mn(OAc)2 溶液、
Hot Start TTx DNA Polymerase、以及模板 DNA 或 RNA、引物、灭菌水等，制备成 1×浓度的反应液进行使用。
* 2 mM dNTPs 是含有 dATP、dGTP、dCTP、dTTP 各 2 mM 的溶液。
* 50 mM Mn(OAc)2 是反应必需的 Mn2+离子。
* Hot Start TTx DNA Polymerase 是含有 TTx DNA Polymerase 与热启动抗体的酶溶液。其浓度为 4U / μL。
※ TaqMan®是 Roche Molecular Systems Inc.注册的商标。

联系电话：021-58794900

1东洋纺（上海）生物科技有限公司

2. 安全注意事项
本品为科研用试剂。请勿用于诊断及临床检测。另外，使用本品时，请严格遵守实验室的一般注意事项，务必注意安全。相关实验中，有时可能会处理含有对人体有害的试剂。请严格按照各试剂中附有的注意说明书，仪器･器具中
添加的操作说明书的指示进行操作，必要时，请佩戴合适的保护工具进行操作。

3. 反应液的制备
20 μL 反应液的制备例。冻结试剂请完全融解后再使用。反应液制备前，请先将各试剂充分混匀再使用。
组分5x Buffer for rTth/ TTx (DNA/ RNA)
2 mM dNTPs
50 mM Mn(OAc)2
PCR Forward Primer (10 μM)
PCR Reverse Primer (10 μM)
TaqMan® Probe (10 μM)
Hot Start TTx DNA Polymerase
Template RNA or DNA (Sample)
灭菌水体积

终浓度

4 μL
4 μL
1 μL
0.6 μL0.6 μL0.4 μL0.25 μL
X μL
to 20 μL

1×
0.4 mM
2.5 mM
0.3 μM
0.3 μM
0.2 μM
1U* 全部组分添加之后，请先充分混匀反应液，再放于热循环仪内进行反应｡* 引物的添加量为各引物最终浓度 0.2-0.6μM、TaqMan®探针的添加量为最终浓度 0.05-0.3μM, 请按此标准进行添加优化。
扩增效率差时，增加添加量可提高扩增性能；但是反之，如果添加量过多，则会产生非特异扩增，会降低检测灵敏度。

4. 反应条件
qPCR 循环实验例。必要时请调整反应条件。
预变性195℃,30 sec.

逆转录60°C, 5 min.

预变性295℃, 1 min.

变性:95℃, 15 sec.

退火/ 延伸:60℃, 30 sec

40～50cycles* 进行 UNG 处理时，请在 Predenature 反应前，设置 UNG 反应步骤。请根据各公司推荐条件进行 UNG 反应。
* Annealing/ Extension 温度，请在 55~65℃范围内进行优化，可提高灵敏度。

网址：http://www.bio-toyobo.cn

2

使用说明书

5. 实验例
使用 TaqMan®探针，检测了流感 RNA 病毒。向 20 μL 的反应液中添加 1 μL 稀释的提纯 RNA 进行反应。结果显示：
使用本试剂比使用 Tth DNA Polymerase 酶为基础的试剂得到了更高的灵敏度。 使用 TTx DNA Polymerase，即使微量模板也可以进行高效率地检测。

6. 相关产品
产品名称<高效率 PCR・RT-PCR 酶>

Hot Start TTx DNA Polymerase<DNA 扩增用 rTth/ TTx 反应 Buffer (含有 Mg2+) >2x Buffer for rTth / Ttx (DNA)<Passive Reference>

50x ROX reference dye<高效率 PCR・RT-PCR 酶>

Hot Start rTth DNA Polymerase<DNA・RNA 扩增用 rTth/ TTx 反应 Buffer (不含 Mg2+, Mn2+) >5x Buffer for rTth / Ttx (DNA/ RNA)*<RNA 扩增用 Mn 离子溶液>

50 mM Mn (OAc)2<DNA 扩增用 Mg 离子溶液>

25 mM MgCl2*请与 50 mM Mn (OAc)2, 或 25 mM MgCl2 组合使用。

联系电话：021-58794900

3包装

货号

10,000 U
100,000 U
1,000,000 U

HSTTX-129
HSTTX-159
HSTTX-179

100 mL
250 mL
1,000mL

QRZ-1B1
QRZ-1B2
QRZ-1B45mL

ROX-101

10,000 U

HSTTH-329

40 mL
400 mLQRT-1B1
QRT-1B2

20 mL

QRT-MN140 mL

TAP-2S1东洋纺（上海）生物科技有限公司<销售商>东洋纺（上海）生物科技有限公司
邮编：200122
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