乳における黄色ブドウ球菌エンテロトキシンの産生性とその検出
藤（東京農工大学

農学部

川

獣医公衆衛生学浩
〒1838509 東京都府中市幸町 358)

Production of staphylococcal enterotoxin in milk and its detection
Hiroshi Fujikawa(Veterinary public health, Faculty of Agriculture Tokyo University of Agriculture and Technology)

要旨黄色ÒÅ¡球菌jŠ‘食中毒事件n日本国内fm細菌性食中毒m発生件数jICeiI„上位j位
置X‘"本食中毒n黄色ÒÅ¡球菌K産生X‘£ïÂéÄ¨³ïK原因物質fAŒ#\m中f„ A
型毒素 SEA jŠ‘事件K最„多C"2000年j大阪f起L^ SEA jŠ‘大規模事件˜契機j#乳・乳製品jIP‘ SEA 産生g\m検出法jcCe検討V^"}Y#牛乳中fmÒÅ¡球菌増殖g SEA
産生˜数学ÞÃç˜用Ce解析V^結果#各種温度下fm本菌m増殖g SEA 産生量˜高C精度f予
測fL^"}^#生乳汚染微生物mÒÅ¡球菌増殖g SEA 産生j与G‘影響˜明‹JjV^"次
j#各種環境要因下fm増殖IŠr SEA 産生m有無˜統計学ÞÃçf解析V^結果#増殖IŠr
SEA 産生m有無˜確率論的j予測X‘RgKfL^"T‹j#乳・乳製品中fm SEA 検出m^ƒm

簡便f高C回収率m前処理方法˜確立V^"R’‹m数学的予測手法IŠr前処理方法n牛乳m
SEA j対X‘安全管理j役立cfA“E"

1.

VeC‘"Rm表j示XŠEj¦ïÐéÌª»ô・n W ƒ j´¢´áÇ/¯æK毎年 1 位gibeC‘"一方#

以前#日本国内f黄色ÒÅ¡球菌jŠ‘食中毒事

2 位J‹ 5 位}fm細菌性食中毒事件n順位n年度

件n腸炎ÏÒæ¥IŠr±çÞÉåjŠ‘食中毒g

jŠbe異i‘K#興味深CRgjXxe同W菌種

g„j非常j事件数#患者„多Jb^"最近fn大jŠbe占ƒ‹’eC‘"黄色ÒÅ¡球菌食中毒n

LN様相K変化V#細菌性食中毒fn¦ïÐéÌª最近 3 年間f„事件数f 2 4 位fAŒ#患者数f»ôjŠ‘食中毒事件K最„多N#細菌性以外fn

45 位fA‘"RmŠEj本食中毒n依然gVe食Êé¡Ÿçμ食中毒事件K非常j多C"

品衛生上重要i食中毒fA‘Rgj変•ŒniC"最近 3 年間m日本国内fm細菌性食中毒m発生

2000 年jn大阪˜中心j約 14,000 人K発症V^#

件数˜原因物質別j並x^„mK表 1 fA‘1)"R

世界f„}’j~‘規模m本食中毒事件K発生V

m表fn原因物質別j各年度m上位 5 番目}f表^"Rm事件n北海道f製造T’^脱脂粉乳K原因
fAb^gT’eC‘"hifujik＠gmail.com

Vol. 69. 2019― 12 ―

表1
年度

2016

2017

2018

最近 3 年間m国内f起L^細菌性食中毒事件
原因物質中m事件数f上位 5 菌種˜示X"
順位

事件数

患者数

‘K#\m中jn SE m特徴fA‘嘔吐活性K不確定i»ŸÓ„含}’eC‘3,4) "本食中毒事件m多Nn世界的j„R’‹ 5 cm»ŸÓm SE jŠbe

1¦ïÐéÌª»ô

339

3272

2

ÒÅ¡球菌

36

698

3

±çÞÉå

31

704

4

¡¢ç³á菌31

1411\Rf#本解説fn牛乳及r乳製品˜含ƒ^食品

5

腸管出血性大腸菌

14

252

及r\m原材料中fmÒÅ¡球菌m SEA m産生1¦ïÐéÌª»ô

320

2315

性#検出法ih˜筆者KR’}f検討VeL^Rg

2

±çÞÉå

35

1183

˜含ƒe説明V^C"

3¡¢ç³á菌

27

1220

4

ÒÅ¡球菌

22

336

5

腸管出血性大腸菌

17

168

1

¦ïÐéÌª»ô

319

1995

2

腸管出血性大腸菌

32

456

3

¡¢ç³á菌

32

2319

4

ÒÅ¡球菌

26

405

5

±çÞÉå

18

640

起RŒ#特j A 型 SEA jŠ‘事件K多C5) "上述
V^大阪fm事件„ SEA jŠbe起L^6)"2.

SEA 産生性m特徴

黄色ÒÅ¡球菌m一部m菌株K SE ˜産生V#更j\m一部K SEA ˜産生X‘"温度#栄養#水素Ÿ¥ï濃度（有機酸等jŠ‘）#水分活性（食塩ihjŠ‘）#酸素分圧ih各種m環境条件下f#Ò
Å¡球菌m SE 産生性KhmŠEi影響˜受P‘JnR’ }f 多 N m論 文 #報 告 K A‘2,7) " RRfn#液体培地（Brain heart infusion broth）中fm

2.

本菌m増殖g SEA 産生挙動˜検討V^結果˜示

ÒÅ¡球菌食中毒

X8)"iI#用C^菌株n青山等jŠbe検討T’^菌株fA‘9)"ÒÅ¡球菌食中毒n本菌m産生X‘»ïÍª質毒素fA‘ÒÅ¡球菌£ïÂéÄ¨³ï Staphylococ-

Rm株m各種温度fm SEA 最大産生量˜振gE

cal enterotoxin, SE jŠbe起R‘"\m主症状nIŠr静置培養f比較V^"iI#温度帯n 14 °C

嘔吐#嘔気fA‘"下痢ih„付随Ve起L‘場合J‹ 42 °
C gV#培養n\’]’最大産生量j到達

KA‘"本食中毒n典型的i毒素型食中毒fAŒ#X‘}f（ 2.6日間J‹22日間}f）行ib^"\

食品A‘Cn\m原材料中f SE 産生性ÒÅ¡球菌

m結果#図 1A j示XŠEj#振gE培養f SEA

K増殖X‘g本毒素K産生T’‘"\m毒素j汚染

最大産生量n 30 °C jÐôªKAb^"一方#静置T’^食品˜喫食X‘g発症X‘"毒素型食中毒細培養fn産生量n低N#Ðôªn見‹’Y# 26 °C菌jn他jØÀæÈμ菌#·è¡μ菌（嘔吐型）KJ‹ 42 °C jJPe徐々j増加K見‹’^"最大産

A‘"一方#腸管出血性大腸菌nÎÄm大腸f増殖

生時m菌濃度n図 1B j示XŠEj#両培養g„温V#\RfÕé毒素˜産生X‘"R’‹m病原細菌

度jŠ‘大Li差n見‹’iJb^"振gE培養nn生体内毒素型食中毒細菌gŠo’‘"

静置培養ŠŒ„ SEA 産生量IŠr菌濃度Kg„j

以前J‹国際的j„ŠN知‹’eC‘古典的i

高CK#細胞 1 個当Œm毒素産生量n必YV„高SE n A 型J‹ E 型}fm 5 種類A‘2)"R’‹m

NniJb^"»ŸÓn耐熱性K知‹’eC‘"\m後#F 型K発Rm菌株m SEA 産生m最適温度（ 30°
C ）fm振表T’^K#R’n嘔吐作用KiN#毒素型³ã¿gEIŠr静置培養fm増殖g毒素産生m時間経過ª症候群˜起RX TSST 1 g名称K変G‹’^"˜調x^"\m結果#図 2 mŠEj両培養jIC

T‹j#近年CNcJm新VC毒素型K報告T’#e S 字型増殖曲線˜描C^"増殖対数期m傾L

現在fn古典型以外j 20 種類以上K報告T’eC（増殖速度）j大Li差niCK#最大菌濃度n振― 13 ―

乳

業

技

術

図1

菌株11658m各種温度fm最大 SEA 産生量g増殖8)
A. 最大 SEA 産生量 B. 最大産生時m菌濃度●#振gE培養#■#静置培養

培養温度帯14°
C42°
C#Ìôn各点fm標準誤差˜示X"

図2

菌株 11658 m SEA 産生最適温度fm増殖g
SEA 産生8)●#振gE培養fm増殖#○#静置培養fm

図3

牛乳中黄色ÒÅ¡球菌 12057 m増殖g SEA
産生量（32°
C）増殖#文献10)˜改変V^"矢印n毒素産生開始時間◆#振gE培養fm SEA 産生#◇#静置培

g\m菌数˜示X"

養fm SEA 産生
各曲線n新é´μÂœ¿ªÞÃçf描C^"
Ìôn各点fm標準誤差˜示X"^10)"
市 販 牛 乳 j SEA 産 生 株 12057 ˜ 接 種 V # 定 温
gE培養m方K 1 log#Xi•`10倍zh高Jb^"（ 32°C ）f保存V^結果˜図 3 j示X"ÒÅ¡球菌

SEA m最大 産生 量 n振 gE培 養m方K約 10 倍 高m増殖n S 字型曲線˜描L#最大菌濃度n約 108

N#両培養g„毒素産生n対数増殖期後期J‹定常

CFU / ml j達V^"iI#増殖n新é´μÂœ¿

期jJPe見‹’^"ªÞÃç˜用Ce解析V^"牛乳中fn本菌g競合

3.

X‘微生物„zg™hCiCmf#上記m液体培地

牛乳中fm増殖g SEA 産生

中m増殖g同様i結果K得‹’^" SEA 産生量n

2000年j大阪f起L^ SEA jŠ‘食中毒事件n»ŸÜå«m後#時間g共j直線的i増加K~‹’

北海道内m工場f脱脂粉乳製造中j起L^停電事故^mf#Rm産生n 1 次反応g考G^"}^#毒jŠ‘g推定T’eC‘K#牛乳中fÒÅ¡球菌n

素産生直線g X 軸gm交点#Xi•`見JP上mhmŠEj増殖V#毒素˜産生X‘J˜検討V

産 生 開 始 点 n 図 m 矢 印 j 示 X Š E j 菌 濃 度 106.5

Vol. 69. 2019― 14 ―

CFU / ml j相当V^"Rm産生開始菌濃度n温度i‘g#上記m液体培地g同様j毒素産生量n一定

jŠ‹Yz{一定fAb^"T‹j保存期間K長N

値j近dC^"
各種定常温度f同様i増殖IŠr SEA 産生量˜
測定V#新é´μÂœ¿ªÞÃç˜用CeÃô»˜
解析V^"\m結果J‹#変動温度下jIP‘牛乳
中m本菌m増殖g SEA 産生量˜温度履歴J‹予測
V^"\m例˜図 4 j示X"Xi•`#図 4A mŠ
Ei温度下fm本菌m増殖g SEA 産生量m実測値
g予測値˜図 4B j示X"増殖IŠr毒素産生共j
高C精度f予測T’^"
R’‹m解析結果˜基j筆者‹n牛乳中jIP‘
ÒÅ¡球菌m増殖g SEA 産生量˜予測X‘Óé«åÜ˜作成V#（財）食品産業·ï»ôm¡¢¿Ò±ŸÄ（HACCP 支援事業）上j掲載V^11)"一般
âô²ôn図 5 j示XŠEj温度履歴˜画面右側
j入力X‘g#中央部jÒÅ¡球菌濃度g毒素産生量m予測値K時間j従be示T’‘"4.

生乳中fm増殖g SEA 産生

乳牛J‹搾乳V^生乳fmÒÅ¡球菌m増殖g
SEA 産生˜検討V^"生乳中fm SEA 産生n以前

図4

変動温度下m牛乳中fm増殖g SEA 産生量

j検討T’eC^K#R’‹m報告n免疫拡散法jm予測6)A. 温度履歴（実測値）#
B. 増 殖 g SEA 産 生 量
SEA 濃度Š‘定性的f古C方法f毒素˜測定VeIŒ#VJ●#菌濃度#■#„温度帯n10°
CJ‹37°
Cm範囲fAb^12,13)"\R
f大阪fm食中毒事件m原因解明m^ƒ#事故m起

増殖g SEA 産生曲線n温度履歴J‹m予測

L^工場fmÍŸÓ内温度（約 40 °C ）˜考慮Ve

値˜示X"

図5

牛乳中jIP‘ÒÅ¡球菌m増殖IŠr SEA 産生量予測Óé«åÜ
図中m番号 15 n操作手順˜示X"― 15 ―

乳業

技術

比較的高温fm保存˜行ib^14)"

一方#上記m 2 種類m生乳中j接種V^ÒÅ¡

一般j生乳n多種類m微生物jŠbe汚染T’e

球菌m SEA 産生量˜図 7 j示X"低微生物汚染生C‘^ƒ#上述V^牛乳gn異iŒ#微生物間m競

乳中fn 36 °C J‹ 44 °C }f明‹Ji毒素産生K見

合K予想T’‘"RRfn生乳m自然微生物叢m濃‹’# 48 °C fn全N見‹’iJb^"一方#高微度 K高 C試 料 （ 106 CFU / ml ） g 低 C試 料 （ 103.3

生物汚染生乳中fn36°
CJ‹44°C}f SEA 産生K

CFU/ml）jÒÅ¡球菌˜接種V#36°
CJ‹48°
Cm認ƒ‹’^K#\m濃度n低微生物汚染生乳中j比

温度帯f保存V^"iI#CY’m生乳jICe„

xe非常j低Jb^"}^ 48 °C fn全N産生n見ÒÅ¡球菌汚染n認ƒ‹’iJb^"‹’iJb^"一方#保存期間後半jICen 36°
Cg40°
C（}^n44°C）m間j有意i産生量m差K\m増殖結果˜図 6 j示X"低微生物汚染生乳
fn温度 36 44 °C jICe 105 CFU / ml f接種V^見‹’^"ÒÅ¡球菌j増殖K~‹’^K# 48 °C fn徐々j

一方#図 7B j示V^高微生物汚染生乳˜††低菌数m減少K~‹’^"高微生物汚染生乳fn107

C温度 28 °C # 32 °C f保存X‘g#毒素産生n全N

CFU / ml f接種V^ÒÅ¡球菌j同W温度帯f•

見‹’iJb^"以上m結果J‹#生乳中fmÒÅ

YJm増殖K~‹’^" 48 °C fn徐々j菌数m減¡球菌m SEA 産生jn温度K大LN影響VeC‘

少K~‹’^K#低汚染乳ŠŒ„速度n緩†Jf#

RgK明‹Jgib^"

60時間後„•YJi菌数K認ƒ‹’^"図6

T‹j#図 7 j示V^ŠEj#生乳中fÒÅ¡

生乳中fmÒÅ¡球菌m増殖15)
A. 低微生物汚染生乳#B. 高微生物汚染生乳●#36°
C■#40°C▲#44°C◆#48°
C$□#細菌数（A. 40°
C#B. 44°C）Ìôn標準誤差˜示X"

図7

生乳中fmÒÅ¡球菌m SEA 産生15)
A. 低微生物汚染生乳#B. 高微生物汚染生乳●#36°
C■#40°C▲#44°C◆#48°
C$□#細菌数（A. 40°
C#B. 44°C）Ìôn標準誤差˜示X"

有意差AŒ（36°
Cgm比較）"

Vol. 69. 2019― 16 ―

抑制X‘^ƒj#各種m保存料#有機酸#食塩#砂糖ih˜添加V^Œ#冷蔵}^n冷凍保存˜行ibeC‘"特j#比較的長期間品質IŠr安全性˜保持X‘^ƒ#Xi•`賞味期限˜延長X‘^ƒj
図8Ÿ¥ï交換ªéÚÄ«åÑœô画分f処理V

n#\m期間中j汚染微生物K増殖X‘J否JK重^ SEA m¡¢μ»ïÒé¿Âœï«16)
èôï 1  pH7.3 f 3 時間処理#èôï 2 

要iÙŸïÄfA‘"R’n食品中mÒÅ¡球菌j„当en}‘"T‹j#本菌j対Ven食品中f産

pH7.3 f 24 時間処理#èôï 3  pH7.3 f 72
時間処理#èôï 4  pH8.7 f 3 時間処理#

生T’‘ SEA 濃度ŠŒ„ SEA 産生m有無K重要èôï 5  pH8.7 f 24 時間処理#èôï 6 
pH8.7 f 72 時間処理#èôï 7 対照（ÄæfA“E"R’}f#多Nm研究者K各種条件下mÒÅ¡球

μ緩衝液f処理）菌増殖m有無˜検討V#\m結果˜é´μÂœ¿ª
回帰ÞÃçgCE統計学的手法f解析VeL球菌m産生V^ SEA 濃度n保存期間後半j徐々j^17,18)"最近#Ding ‹n各種条件下fm SEA 産生

低下V^"R’nRm期間中j毒素K分解T’#失jcCe同様i解析˜行ib^19)"

活V^可能性˜示VeC‘"Xi•`#生乳m自然\Rf#各種m温度g食塩濃度下f増殖/非増殖

微生物叢mA‘微生物K増殖VeA‘分解酵素˜産

IŠr SEA 産生/非産生˜統合的jé´μÂœ¿

生V#\m酵素K SEA ˜失活TZ^可能性KAª回帰ÞÃç˜使be検討V^20) "RRfn 5 株‘"\Rf#Rm生乳J‹高C»ïÍª分解酵素産

m混合菌液˜作成V#液体培地˜用Ce振gE培養

生微生物˜検索V^16) "Xi•`#上記m結果J

g静置培養m両者˜比較V^"各条件f 5 cm試‹生乳˜40°Cf培養V#分離V^細菌J‹ SEA 分

料˜用C#陽性数˜求ƒ^"\m結果˜図 9 j示

解能˜„c細菌˜分離fL^"\’˜同定V^結

X"高食塩濃度IŠr低温jŠ‘毒素産生wm抑制

果#緑膿菌 Pseudomonas aeruginosa fAb^"

K見‹’^"得‹’^Ãô»˜é´μÂœ¿ª回帰T‹j#本菌m培養液J‹Ÿ¥ï交換ªéÚÄ«分析˜行Eg図j示XŠEj#産生/非産生m境界

åÑœôjŠbe得‹’^画分jcCe SEA 分解

˜的確j表Z^"iI#Rm曲線n産生確率 0.5f

性˜調x^"\m結果#図 8 j示XŠEj処理時

描C^"

間K長Ni‘zh強C SEA 分解性mA‘画分K得ÒÅ¡球菌m増殖jcCe„同様j検討V^結果‹’^"iI#中性 pH 7.3 f処理V^場合j失活

˜図 10 j示X"増殖j関Ve„高食塩濃度IŠr

K見‹’^K#pH 8.7fn見‹’iJb^"

低温jŠ‘毒素産生wm抑制K見‹’^"}^#é3.

´μÂœ¿ª回帰分析˜行Eg図j示V^ŠEj#

各種環境下fm増殖g SEA 産生

増殖/非増殖m境界˜的確j表Z^"iI#Rm曲
線n増殖確率0.5f描C^"

食品中fmÒÅ¡球菌m増殖g SEA 産生j関V
e上述VeL^ŠEi比較的短期間fm特性˜知‘

図 9 g図 10 m回帰曲線˜同一m«åÑ上j表X

Rg„重要fA‘K#同時j比較的長期間fm増殖g#図 11 mŠEj表T’‘"Rm図J‹静置IŠ

g SEA 産生m有無j関X‘情報„重要fA‘"食 増殖„毒素産生„可能i領
r振gE培養jcCe◯

品m品質保持f言Go前者n消費期限#後者n賞味 増殖nfL‘K毒素産生mfLiC領域#◯
域#◯

期限j相当X‘"\Rf#各種環境下fmÒÅ¡球増殖„毒素産生„fLiC領域K示T’‘"

菌m増殖g SEA 産生m有無j関X‘特性˜解析V

Rmé´μÂœ¿ª回帰分析J‹新VC環境条件^"

fm毒素産生m起R‘確率˜予測V^"\m結果#

一般j市販食品jn製造後保存中m微生物増殖˜

表 2 j示XŠEj高C精度f実測値˜予測fL― 17 ―

乳

業

技

術

図9

各種m温度及r食塩濃度fm SEA 産生/非産生20)
A#振gE培養#B#静置培養＋#産生#－#非産生#x#一部産生#分数n±ïÓç中m陽性数˜示X"
点線né´μÂœ¿ª回帰曲線˜示X"

図10

各種m温度及r食塩濃度fm増殖/非増殖20)
A#振gE培養#B#静置培養＋#増殖#－#非増殖#x#一部増殖#分数n±ïÓç中m陽性数˜示X"

点線né´μÂœ¿ª回帰曲線˜示X"

表2

図11

SEA 産生g増殖m境界（p ＝0.5)20)
太線g細線n\’]’静置IŠr振gE培

新VC温度及r食塩濃度下fm SEA 産生確率m予測g実測20)

培養

食塩（)

温度（°
C)

振gE
振gE
振gE
振gE
静置
静置

13.5
14
16
14.5
17
13.5

25
25
27
20
30
20

確

率

実測値

予測値

1
0.6
0
0
0
1

＞0.99
＞0.99
＜0.01
＜0.01
＜0.01
＞0.99

^"増殖jICe„同様i高C精度m予測KfL^"

養fm SEA 産生m境界˜示X"破線g点線

同様j#食品保存料gVeŠN用C‹’‘乳酸gn\’]’静置IŠr振gE培養fm増殖m境界˜示X"

食塩KÒÅ¡球菌m増殖g SEA 産生j与G‘影響
˜検討V^結果#図 12 mŠEj増殖g毒素産生K
50m確率m境界線K示T’^21） "RRfn液体培地˜用C#\m pH n乳酸jŠbe調整V^"}

Vol. 69. 2019― 18 ―

Â¿ªμ粒子˜用C^逆受P身åÂ¿ªμ凝集反応
法„A‘"Rm方法n目視f判定fL‘mf#
ELISA fmŠEi光学的装置n不要fA‘"市販

製品gVenÃï¦生研f製造販売VeC‘"Rm¨¿Än SEA J‹ SEE }f˜識別fL‘"^_V#動物˜用C^ÌŸ¥›¿·Ÿg免疫学的i›¿·Ÿgm間jn\m結果j相違KA‘gCE
報告KA‘"Xi•`#加熱jŠbe免疫学的j失図12

食塩g乳酸jŠ‘ SEA 産生g増殖wm影響

活V^ SEA 試料K子É¯j嘔吐活性˜示V^ga. 増殖（ 30 °C ）# b. SEA 産生（ 30 °C ）# c.
増殖（10°
C）#d. SEA 産生（10°C）

Bennett n報告VeC‘22)"V^Kbe特j熱#酸ih強C変性処理j暴露T’^ SE ˜検出X‘際jnRm相違˜知beIC^方KŠC"^培養n静置f#温度n 30 °C g 10 °C gV^"図j
示XŠEj# 10 °C fn増殖g毒素産生K確率 50 

4.2.

乳及r乳製品fm前処理

m線nz{一致V^"}^#é´μÂœ¿ª回帰分

2000 年j起L^大規模i食中毒事件˜契機gV析jŠbe新VC条件fm増殖g SEA 産生˜高C

e#乳及r乳製品中m SE 検出X‘^ƒm前処理法

精度f予測fL^"（抽出・濃縮方法）K検討T’#厚生労働省J‹通

4.
4.1.

達 K 出 T ’ ^23) " R m 方 法 f n 試 料 j 塩 酸 ˜ 加

SE 検出方法

G#遠心分離後#\m上清jªéé×çÜ˜添加

検出方法

V#再r遠心分離X‘"\m上清jÄæªéç酢酸

食品及r\m原材料中m SE 検出n日常m品質I

˜加Ge#遠心分離V#沈査˜Äæμ緩衝液f溶解Šr安全管理}^n食中毒事件m原因解明等jIC

V#濃縮±ïÓçgX‘"Rm濃縮V^±ïÓç˜e行•’‘"SE n嘔吐毒fA‘^ƒ#最„信頼f

市販m毒素検出¨¿Ä（VIDAS Stap enterotxin,

L‘検出方法n子É¯#±çihm実験動物˜用CTransia Plate, RIDASCREEN SET A, B, C, D,^投与試験fA‘2)"近年nμïªμ˜使b^報告

SETRPLA「生研」）˜使be検出X‘"

例„A‘3)"VJV#RmŠEi動物˜日常的j飼

Rm前処理方法n処理工程K複雑f#時間KJJ

育管理X‘Rgn多Nm労力g費用KJJ‘"}^‘"}^ SEA 回収率„低N#特j生乳fn信頼性

感度j関Vem課題„A‘"

mA‘値n得‹’eCiC24) "低C回収率IŠr\’j替•be一般的j行•’‘方法K免疫学的

数値変動m理由gVe#試料中m SEA KÄæªé

i手法fA‘"Xi•`#例Go SEA j特異的iç酢酸ihm化学物質jŠbe分子内j¼Ýô´˜抗体˜作成V#\’˜用Ce検出X‘"以前n二重受P‘一方#複雑i工程m途中f一部m SEA K流

免疫拡散法（Ouchterlony 法）ihK行•’eC^

出VeV}E可能性K考G‹’‘"T‹j#上記m

K#近年n感度m高C ELISA K開発T’#市販

ŠEi免疫学的手法m特徴K関与VeC‘可能性„¨¿ÄK入手fL‘"\m例gVe Biomerieux 社

A‘22)"m VIDAS等KA‘"iI# VIDAS n SEA J‹\Rf#Ÿ¥ï交換ªéÚÄ«åÑœô˜用C^

SEE } f ˜ 同 時 j 検 出 X‘ ¨ ¿ Ä fA ‘ K # h

簡便i前処理法˜検討V^25) "大阪fm事件m際

m » Ÿ Ó J n 識 別 f L i C " Biopharma 社 mj„Ÿ¥ï交換ªéÚÄ«åÑœôn検討T’^"RIDASCREENSET A, B, C, D n 4 »ŸÓm識別RRfnŸ¥ï交換樹脂gVenμçÑ¤ï酸基˜

KfL‘"一方#特異抗体˜表面j固定TZ^å

持c強陽Ÿ¥ï交換体（SP SephadexTM C25, GE）― 19 ―

乳

業

技

術

表3

Ÿ¥ï交換ªéÚÄ«åÑœô前処理法jŠ‘生乳IŠr牛乳J‹m SEA 回収率25)

生乳
SEA (ng/ml)
回収率（)

0.5
97.5±5.3

0.1
74.6±3.7

0.05
97.4±5.6

牛乳
SEA (ng/ml)
回収率（)

0.1
62.6±4.6

0.05
54.4±1.50.025
61.7±4.4

数値n添加V^毒素濃度j対X‘回収率（平均g標
準誤差）˜示X"

図13

各種 pH f吸着TZ^ SEA m溶出量25)¦åÜÕ¿Å体積 4 ml "Ìôn標準誤差
˜示X"
K多Czh多量m SEA K溶出T’‘K#ÓôçV
^溶出画分全体m濃度n低Ni‘g推測T’‘"\
Rf#Ÿ¥ï交換樹脂j吸着V^一定量m SEA ˜
各種体積m溶出液f溶出V^"\m結果n図 14 j
示XŠEj#推測通Œ溶出液m体積K増Xjc’e#ÓôçV^溶出液m濃度n低NiŒ#一方f総SEA 量n増加V^"R’‹m結果J‹# 6 ml ˜最適i溶出量gV^"以上m結果#前処理jIP‘試
料m pH g溶出液m容量m最適値K得‹’^"図14

上記m条件f生乳IŠr UHT 牛乳j添加V^

各種容量m溶出液jŠbe溶出V^ SEA m
総量g濃度25)

SEA m回収率˜検討V^"試料体積n 10 ml gV▲ #溶 出 V^ SEA 総 量 #● #溶 出 液 中 m^"\m結果#表 3 j示XŠEj0.5 ng /ml 以下m

SEA 濃度
矢印n該当X‘座標軸˜示X"Ìôn標準

非常j低C添加濃度j対Ve生乳fn 75 J‹ 98

誤差˜示X"

#牛乳jICe„ 54 J‹ 63 m高C値K得‹’^"Äæªéç酢酸˜用C^濃縮法fn回収率nJiŒ低N#Soejima ‹n生乳fn信頼fL‘値n

˜用C^"SP Sephadex n SEA 精製m際j使•’

得‹’Y#UHT 牛乳f19J‹26g報告VeC‘交換樹脂fA‘"iI#前処理後m毒素n Vidas‘24)"
次j#乳製品（粉末μ¨ÜÛçª#ÍçÝ²ï

˜用Ce測定V^"
最初jŸ¥ï交換樹脂j吸着TZ‘^ƒm試料m½ô¶）jICe„添加V^ SEA m回収率˜検討

pH ˜検討V^"Xi•`#試料（SEA 産生株m培V^"\m結果#表 4 j示XŠEj 1 ng / g 以下m

養上清希釈液）˜ pH3.0 J‹ 6.0 }f調整V#\’

非常j低C添加濃度j対Veμ¨ÜÛçªf 56 ]’等VC pH m 0.05M æï酸ª£ï酸緩衝液f

J‹ 66 #ÍçÝ²ï½ô¶jICe 37 J‹ 44

平衡化V^Ÿ¥ï交換樹脂j吸着TZ^"溶出n食

m回収率K得‹’^"iI#冷却高速遠心分離˜塩加æï酸ª£ï酸緩衝液 pH8.0f行ib^"\

行ib^^ƒ#試料中m脂肪分n最上層j脂肪膜gm結果#図 13 j示XŠEj pH4.0 f調整V^試料

Ve分離fL^"T‹j#ŠŒ少量m SEA ˜検出X^ƒ#操作m

f最大量m SEA ˜溶出fL^"V^Kbe最適iμ¬ôç›¿Ó˜検討V^"RRfn#試料体積˜pH n4.0gV^"

次j溶出緩衝液m体積˜検討V^"溶出液m体積Vol. 69. 2019

60 ml jV#前述m生乳gμ¨ÜÛçªf検討V― 20 ―

表4A}ŒiCK#一方#屋外mŸÕïÄ会場ihfn

Ÿ¥ï交換ªéÚÄ«åÑœô前処理法jŠ‘乳製品J‹m SEA 回収率25)μ¨ÜÛçªSEA (ng/g)
回収率（)

156.9±1.70.5
0.25
65.9±9.3 56.3±1.6ÍçÝ²ï½ô¶
SEA (ng/g)
1
回収率（)
44.0±1.20.5
0.25
36.9±3.0 41.9±0.23

衛生管理意識„低下X‘ZCJ時々大Li事件K起
LeC‘"ÒÅ¡球菌jŠ‘事件„製造・流通過程
fm衛生管理m遵守等jŠŒ#以前ŠŒ„事件数n
減b^K#依然gVe表 1 j示V^ŠEj細菌性食中毒m中fn上位jåïªVeC‘"
本菌˜含ƒ^細菌性食中毒事件˜未然j防Ojn

数値n添加V^毒素濃度j対X‘回収率（平均g標
準誤差）˜示X"

日常m衛生管理m徹底g\m根拠gi‘科学的£ÏÃïμK重要fA‘"本解説K\m£ÏÃïμj関

表5μ¬ôç›¿ÓV^試料fm回収率25)

X‘情報gVe役立eo#筆者m意図n十分果^Z

生乳μ¨ÜÛçª
SEA
0.01a
0.1b
0.05b
0.025b
回収率
±
±
± c
± c
（) 61.6 7.0 43.0 0.38 63.8 5.0 60.5 5.3^g考G‹’‘"

参 考 文 献

数値n添加V^毒素濃度j対X‘回収率（平均g標
準誤差）˜示X"a. ng / ml, b. ng / g, c. Ñœç»ô付L遠心管jŠ‘濃縮1)

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