はじめに
病態分子イメージングセンター

センター長

伊藤誠二

医学・医療技術の進歩により世界一長寿国となった現在、認知症などの神経系
疾患、がん、動脈硬化、糖尿病など代謝性疾患の早期診断と進行予防が喫緊の課題となっています。これらの疾患は生体の正常機能を担う遺伝子の変異、タンパ
ク質の変性やエネルギー物質の蓄積によることが明らかになってきています。また、画像診断、組織診断の進歩により病変部位が可視化され、病気の早期診断と経過観察が可能になっていますが、関与する因子は多様で、治療成績の向上には
必ずしもつながっていません。このような状況に対応するために、平成 23 年度文部科学省私立大学戦略的研究基盤形成支援事業に応募した「分子イメージングによる体系的病態の解明と診断治療法の開発」（平成 23 年～平成 27 年）が採択されたのを契機として、平成 23 年 9 月に病態分子イメージングセンターを設立し、枚方学舎北棟 5 階に臨床系綜合研究施設を設置して研究連携を推進する体制を構築しました。本研究プロジェクトは１）蛍光イメージングによる分子動態、幹細胞の同定と病態解析、２）疾患の原因候補分子の分子イメージングと探索・同定、
３）診断と治療応用のための動物疾患モデルの作製に焦点を当てた全学的プロジ
ェクトとして取り組みました。本プロジェクトの研究は順調に進捗し、トップジ
ャーナルを含め欧文雑誌に 250 編以上発表し、国内外の学会発表は 420 回を数え、外部評価委員の高い評価を受けました。
この間、附属病院にはがんセンター、附属滝井病院には PET センター等多くのセンターが開設され、基礎医学研究と臨床応用の連携の重要性は増しています。
平成 28 年 5 月に附属滝井病院は新本館を建設し、総合医療センターと改称し、3D画像で行う内視鏡専用手術室を備えるなど最先端の診断治療に分子イメージング
技術は不可欠となっています。病態分子イメージングセンターの活動を通じて形成された研究基盤と関西医科大学の将来を担う高度医療人や若手研究者の育成の取り組みをさらに発展させるために、病態分子イメージングセンターは研究施設として研究活動を継続することになりました。文部科学省私立大学戦略的研究基
盤形成支援事業の報告書から数えて、今回の研究成果報告書は第 3 号となります。
平成 29 年 7 月
1

目

次

はじめに ........................................................................................................................................... 1目

次 ............................................................................................................................................... 2

Ⅰ．病態分子イメージングセンター
１．平成 28 年度の参加講座と研究課題 ............................................................................. 3
２．平成 28 年度の研究成果の概要...................................................................................... 5
３．平成 28 年度の活動記録.................................................................................................. 8
Ⅱ．研究業績
１．雑誌論文 ......................................................................................................................... 10
２．図書 ................................................................................................................................. 16
３．学会発表 ......................................................................................................................... 17４．特許 ................................................................................................................................. 24
Ⅲ．各事業推進者の平成 28 年度研究成果報告
１．神経部門 ......................................................................................................................... 25
２．がん部門 ......................................................................................................................... 43
３．代謝部門 ......................................................................................................................... 65
Ⅳ．病態分子イメージングセンター規程 ................................................................................. 852

Ⅰ．病態分子イメージングセンター
病態分子イメージングセンターは、枚方学舎北棟 5 階に設置し、神経、がん、代謝の３研究部門で研究体制を構築しています。これまでの研究成果をさらなる病態の解明、診断治療法の開発、臨床応用に発展させるために、分子イメージン
グにとらわれずに基礎医学研究から臨床応用研究まで多岐にわたるトランスレー
ショナル研究、共同研究を推進します。病態分子イメージングセンターの規程に従って、センター長・副センター長と３部門の部門統括者により管理・運営が行われます。
１．平成 28 年度の参加講座と研究課題
参加講座
神経部門

8 講座

がん部門

11 講座

代謝部門

9 講座

部門区分

事業推進者

課題名
【

神

経

部

門

】

神経細胞および内分泌細胞のイメージング解析による解剖学第一講座

山田久夫

解剖学第二講座杉本哲夫

線条体 aspiny interneuron のイメージング研究

生理学第一講座松田博子

病因細胞および分子のイメージング

生理学第二講座中村加枝

霊長類におけるセロトニン・ドパミンによる認知機能の制御

医化学講座

伊藤

誠二

神経障害性疼痛の原因因子の同定と神経再生機構の解明

神経内科学講座

日下博文

神経機能部門

小早川

令子

生物学教室

平野

伸二

機能解明

パーキンソン病モデルラットを用いた
大脳基底核神経回路の可塑性の研究
嗅覚刺激による先天的な恐怖情動の誘発を担う受容体分子の解明
自閉症関連遺伝子プロトカドヘリンの発現と局在
【

が

ん

部

門

】

病理学第一講座

上野博夫

多色細胞系譜追跡法を用いた幹細胞の維持機構の解析

微生物学講座藤澤

順一

ATL 発症機構の解明・予防法・治療法の開発

衛生学講座

薗田

精昭

ES 細胞様組織幹細胞の同定と分化経路の解明：細胞移植・再生医療への応用

公衆衛生学講座西山利正

多能性幹細胞の分化誘導の検討と感染症の新規診断法の開発

3分子遺伝学部門

木梨達雄

リンパ節のホーミングの分子機構に関する研究

生体情報部門松田達志

がん幹細胞の機能・分化に関わるシグナル分子の解明

内科学第一講座

野村昌作

ヒト樹状細胞によるさまざまな病態関連応答の解明と新たな難病治療戦略の開発

内科学第三講座岡崎和一

分子イメージングによる炎症性および
腫瘍性消化器病変のバイオマーカー探索

外科学講座

權

雅憲

各種癌における蛍光ナノ粒子技術を用いた PD-L1 発現検索

腎泌尿器外科学講座

松田公志

分子イメージングによる組織幹細胞の解明

病態検査学講座蔦幸治

網羅的遺伝子解析技術を用いた胆道癌における再発予測遺伝子の同定
【

代

謝

部

門

】

薬理学講座

中邨

智之

細胞外マトリックス線維形成の加齢変化に関する研究

法医学講座

赤根

敦

次世代シークエンサーを用いた法遺伝学研究

モデル動物部門李成一

病態モデル遺伝子改変マウス作製および維持、保存に関わる研究

内科学第二講座

塩島一朗

心臓組織幹細胞の単離法と分化誘導法の開発

耳鼻咽喉科・
頭頸部外科学講座

友田

幸一

緑色蛍光タンパク質を発現する
マウス好酸球を用いた検討

形成外科学講座楠本健司

皮膚・軟部組織の加齢変化、組織再生における分子
イメージングによる病態解明と診断治療への応用

皮膚科学講座岡本祐之

炎症性皮膚疾患において皮膚に浸潤する
単球サブセットの解析

眼科学講座

高橋

寛二

マウス Bruch 膜弾性板の発達及び加齢性変化

物理学教室

影島

賢巳

細胞内機能と構造のイメージングに関する研究4

２．平成 28 年度の研究成果の概要

１．神経部門
20 世紀後半から神経科学への分子遺伝学・発生工学の導入により、高次脳機能に関連する様々な分子の同定と機能解析が進み、脳科学はルネッサンスを迎えている。脳の構成成分はニューロンで、それぞれのニューロンは樹状突起で他のニューロンからの情報を入力し、ニューロンから出る 1 本の軸索で他のニューロンにシグナルを送っている。細胞間はシナプス結合により伝達されるが、学習によりそのシナプス強度は大きくなり、近隣のニューロンにシグナルを送る確率が高
まり、神経回路が形成される。大脳皮質の神経回路をヒントに、最近、複雑なリンクをもつニューラルネットワークを使うディープラーニング技術を用いる人工知能が脚光を浴びている。
神経部門では、分子から動物行動まで様々な研究を行い、基礎研究から臨床応用を目指している。ニューロンが神経回路を形成するには神経伝達を高効率かつ高速で行うため軸索を絶縁するオリゴデンドロサイトや栄養を供給するアストロ
サイトなどニューロンとグリアの相互作用が重要になる。解剖学第一講座ではオ
リゴデンドロサイトのマーカーとして確立された O4 モノクロナル抗体のエピトープとしてスルファチドを同定した。生理学第一講座ではコレラ副毒素の結合タンパクとしてアノクタミン 6 を明らかにしてコレラの新たな予防・治療薬の可能性を示した。医化学講座ではプロテオミクスを駆使して痛みの制御因子として
BEGAIN を同定し、遺伝子改変マウスで痛みに関係することを確認した。神経機能部門では、先天的恐怖情動を誘発する匂い分子の受容体を明らかにした。
上に述べた人工知能の基盤であるディープラーニング・ネットワークの学習のアルゴリズムには、データに関する仮説とどのような解があるのかという仮説が必要で、「教師あり学習」が用いられている。例えば、ネズミは周囲に対する環境に知識を持ち、食物や配偶者をどのように見つけ、捕食者をどう避けるかという嗅覚行動が生まれながらにして備わっている。どのようなプログラマーも、行動を生み出している脳の司令がわからなければ、マウスの行動を生み出すプログラ
ムを書くことはできない。神経機能部門の小早川らは独自に確立した嗅覚刺激による先天的と後天的な恐怖情動の統合処理モデルを用いてそのメカニズムの解明を進めている。生理学第二講座ではサルを用いて、視覚を通じて入るストレスや嫌悪刺激による意思決定機構の変化により不適切な行動選択につながること、大脳基底核と脳幹のセロトニンニューロンが行動制御につながることを明らかにした。慢性痛はストレスや負の情動と深く関わっている。痛みの負の記憶には、脳幹の下行性疼痛抑制系、扁桃体、前頭前野、大脳辺縁系などのニューラルネット
ワークが関わり、デフォルトモードネットワークで日々情報が更新されている。
これらのネットワークの形成の理解には、大脳基底核のニューロンの性格付けや投射経路（解剖学第二講座）や細胞接着因子プロトカドヘリン（生物学教室）の機能の解明が重要である。
神経機能は嗅覚・視覚・痛覚などの感覚受容と嫌悪・恐怖・慢性痛と関連する
5

情動・感情の 2 面があり、神経機能部門の匂い分子チアゾリン類は精神疾患、慢性痛治療薬のノルアドレナリン・セロトニン再吸収阻害薬はうつ病の治療、視覚異常は認知症の診断に用いられる。神経内科学講座では、パーキンソン病モデル
マウスを用いて治療薬の作用を検討しており、これまでの成果が臨床応用だけでなく、人工知能の医療応用に結びつくことが期待される。
２．がん部門
現在、年間約 100 万人が癌を発症し、約 37 万人が癌で死亡している。癌は死亡
原因第 1 位で、年々少しずつ増加している。がん部門では、組織・がん幹細胞の同定、発癌・転移機構に焦点を当ててきたが、現在、臨床現場での癌の治療応用に展開し始めている。病理学第一講座では、多色細胞系譜追跡法を用いて組織幹細胞の同定で多大な成果をあげてきた。平成 28 年度はこれまでの成果をさらに発展させるため、新たに 2 段階細胞系譜追跡法の開発を行った。衛生学講座ではヒト、マウス骨質由来の微小（幹）細胞の同定ならびにヒト骨質と骨髄由来間葉系
幹細胞の樹立とこれらの細胞特性の解明を行った。そして、白血病幹細胞の同定と抗体療法の開発を目指している。内科学第三講座はリンカー部リン酸化 Smad2/3
タンパクを消化管粘膜上皮・膵の新規組織幹細胞マーカーとて同定し、粘膜再生と発癌機構の解析を行った。公衆衛生学講座は多能性幹細胞の下垂体細胞への分化誘導、内科学第二講座は心臓幹細胞、腎泌尿器外科学講座は生殖幹細胞の同定、局在を明らかにした。
癌の予防・治療には発癌・転移機構の解明が重要になる。細胞の増殖・分化を制御する PI3K-mTOR 経路は種々の癌組織においてその異常が知られている。生体情報部門は mTOR 経路を負に制御する Tsc1 をリンパ球の B 細胞系列特異的に欠損させたマウスで腎嚢胞が形成され、腎癌発症の引き金となることを示した。分子
遺伝学部門はリンパ節のホーミングの分子機構を詳細に解析してきた。今年度はSema3E/PlexinD1 が胸腺において皮質から髄質への移動に関与することを明らかにした。
癌治療において、免疫系の賦活化に加えて、最近免疫チェックポイント療法が着目されている。微生物学講座は HTLV-1 ウイルス感染ヒト化マウスを用いて白血病の治療薬やそのウイルス感染／発症予防ワクチンの開発、内科学第一講座は樹状細胞療法の作用機序の解明、外科学講座は免疫チェックポイント阻害薬の効果の解析を行った。外科学講座と病態検査学講座は nCounter 解析装置を用いた手術
組織標本の胆道癌の治療効果予測や再発予測因子の検索、腎泌尿器外科学講座は
膀胱癌の予後規定程因子の検索を行っている。このように、病態分子イメージン
グセンターではがんの基礎研究から臨床研究に展開され始めている。
３．代謝部門肺、動脈、皮膚などの組織の弾性は弾性線維というゴムのように伸び縮みする
細胞外マトリックスによって構築されている。加齢に伴って弾性線維が劣化・断裂することが肺気腫・動脈中膜硬化・皮膚のたるみなどの直接原因となるため、弾性線維の形成機構の解明と組織の再生は高齢社会において重要な課題になって6

いる。薬理学講座は細胞外マトリックスタンパクの LTBP-2 と LTBP-4 の遺伝子改変マウスを作製し、LTBP-4 の遺伝子欠損が肺気腫や大動脈の蛇行の表現型を示すのに対し、LTBP-2 の遺伝子欠損は水晶体脱臼を引き起こすことを明らかにしている。平成 28 年度はこれら 2 つのタンパクの欠損の表現型の違いは、タンパクの発現部位の違いに起因するものであり、弾性線維の足場形成において同じ機能を有していることを明らかにした。眼科学講座は加齢黄斑変性症の病変部位の Bruch
膜弾性板の弾性線維形成の胎生期から老年期までの発達と加齢変化を調べた。
耳鼻咽喉科・頭頸部外科学講座は副鼻腔炎から喘息にわたる上下気道炎症における好酸球の役割を解明し、アレルギーの新しい治療戦略の開発を目指している。
皮膚科講座は尋常性乾癬やサルコイドーシスの皮膚の組織病変の浸潤細胞の解析を行った。形成外科学講座は脂肪組織由来幹細胞や多血小板血漿の創傷治癒、組織再生の基礎研究から乳房再建をはじめ治療に向けた臨床応用を推進している。
病態分子イメージングセンター事業は、神経部門、がん部門、代謝部門の 3 部門に分けてスタートしたが、所期の目的の通り、共通の研究基盤が形成され、研究領域を 3 部門にわけるのが難しくなっている。さらに、基礎社会系講座の研究
トークランチの開催、臨床系講座の研究医長制度の導入により、事業推進者間での共同研究体制の構築が強力に推進された。その結果、講座間の垣根が低くなり、研究者の交流が進んでいる。そして、モデル動物部門による遺伝子改変マウスの作製や法医学講座による次世代シークエンサーの共同利用が行われるようになった。また、生物学教室や物理学教室は学外との共同研究を積極的に推進している。
さらに、臨床系綜合研究施設への nCounter 解析装置や 3D プリンターなど最新機器の整備、医療分野での人工知能の活用施策、さらに生命医学研究所にゲノム
編集部門、ゲノム解析部門の研究支援部門の新設（予定）など友田幸一学長のガバナンスのもと、病態分子イメージングセンターは、関西医科大学の研究拠点の１つとして着実に地位を固めつつある。

7

３．平成 28 年度の活動記録
2017 年 6 月 21 日
枚方学舎 4 階中会議室にて 18 時より岡山大学大学院医歯薬学総合研究科の森田 瑞樹准教授による「病院併設型バイオバンクの構築と体制」と、岡山大学病院

呼吸器・乳腺内分泌外科の宗 淳一講師による「病院併設型バイオバンクがもたらす効果」（神田 晃講師 司会）と題した臨床系研究室セミナーが開催されました。
2017 年 6 月 6 日
枚方学舎 6 階綜合研究施設

セミナー室にて 13 時より Advanced Cell Diagnostics 社

望月 明

日香博士による超高感度 mRNA 検出試薬 RNAscope の紹介と、RNAscope を使用した研究成果
として、腎泌尿器外科学講座

滝澤 奈恵助教による「Usefulness of RNAscope for detection of

low copy genes in rat adrenal」、外科学講座

良田 大典氏による「In situ hybridization of HPV informalin fixed paraffin embedded section using RNAscope」と題した RNA in situ ハイブリダイゼー
ションセミナーが開催されました。
2017 年 3 月 15 日
枚方学舎 4 階中会議室にて 17 時 30 分より名古屋市立大学大学院芸術工学研究科

産業イノベ

ーションデザイン領域

センター長

教授・名古屋市立大学病院

医療デザイン研究センター

國本 桂史先生による「臨床医療デザインとプロダクト -the way which builds the future-」（海堀昌樹准教授 司会）と題した臨床系研究室セミナーが開催されました。
2017 年 2 月 28 日
枚方学舎 4 階カンファレンスルーム D にて 16 時より新潟大学脳研究所野教授

遺伝子機能解析学分

池内 健先生による「患者由来バイオリソースを活用したアルツハイマー病の病態解析」（伊藤 誠二教授 司会）と題した大学院講座が開催されました。
2016 年 12 月 21 日
枚方学舎 2 階第 4 講義室にて 17 時 30 分より日本 IBM 研究開発

ビジネス開発部部長

西野 均先生による「コグニティブ・コンピューティングの医療分野での活用」（伊藤 誠二教授
司会）と題した臨床系研究室セミナーが大学院講座共催で行われました。
2016 年 11 月 25 日
枚方学舎 1 階第 1 講義室にて 17 時 30 分より立命館大学総合科学技術研究機構
学

名誉教授

教授・東京大三品 昌美先生による「シナプス分子から脳と心へ」（小早川 令子学長特命教授 司会）と題した大学院企画セミナーが開催されました。
2016 年 11 月 22 日
枚方学舎 2 階学生セミナー室 2C にて 18 時より理化学研究所
究開発ユニット

ユニットリーダー

バイオインフォマティクス研

二階堂 愛先生による「1 細胞ゲノム科学の最前線と再生医療への応用」（上野 博夫教授 司会）と題した大学院企画セミナーが開催されました。
82016 年 11 月 18 日
枚方学舎 1 階加多乃講堂にて 17 時 30 分より筑波大学国際統合睡眠医科学研究機構(WPI-IIIS)
機構長

柳沢 正史先生による「睡眠・覚醒の謎に挑む」（小早川 令子学長特命教授 司会）と題した大学院企画セミナーが開催されました。
2016 年 10 月 19 日
枚方学舎 2 階第 2 講義室にて 17 時 30 分より情報・システム研究機構
データベースセンター(DBCLS)

ライフサイエンス統合

特任研究員（特任准教授）坊農 秀雅先生による「公共デー

タベース活用による知のめぐりのよい医学研究」（廣田 喜一学長特命教授 司会）と題した臨床系研究室セミナーが開催されました。
2016 年 6 月 15 日
枚方学舎 4 階中会議室にて 17 時 30 分より米国アラバマ大学バーミンハム校
授・がんセンターニューロオンコロジープログラム共同リーダー

脳神経外科教中野 伊知郎先生による「米国におけるがん基礎研究、臨床への橋渡しと若手医師の教育」（岩田 亮一助教 司会）と題した臨床系研究室セミナーが開催されました。
2016 年 4 月 20 日
枚方学舎 4 階中会議室にて 18 時より腎泌尿器外科学講座

吉田 健志助教による「motion

tracker を用いた手術技能分析の取り組み」、摂南大学理工学部

学部長、機械工学科教授

川野 常夫先生による「慣性センサーを用いたモーションキャプチャー」（三島 健産学連携知的財産統括室顧問 司会）と題した臨床系研究室セミナーが開催されました。

9

Ⅱ．研究業績
１．雑誌論文
神経部門
解剖学第一講座

1.
2.
3.
4.

Hirahara, Y., Wakabayashi, T., Mori, T., Koike, T., Yao, I., Tsuda, M., Honke, K., Gotoh, H., Ono, K.
and Yamada, H. Sulfatide species with various fatty acid chains in oligodendrocytes at different
developmental stages determined by imaging mass spectrometry. J. Neurochem. 140, 435-450, 2017.
Tanaka, S., Takizawa, N., Honda, Y., Koike, T., Oe, S., Toyoda, H., Kodama, T. and Yamada, H.
Hypocretin/orexin loss changes the hypothalamic immune response. Brain Behav. Immun. 57, 58-67,
2016.
Tanaka, S., Honda, Y., Honda, M., Yamada, H., Honda, K. and Kodama, T. Anti-tribbles pseudokinase
2 (TRIB2)-immunization modulates HYPOCRETIN/OREXIN neuronal functions. Sleep 40, zsw036,
2016.
Takizawa, N., Matsuzaki, T., Yamamoto, T., Mishima, T., Miyasaka, C., Tanaka, S., Kinoshita, H.,
Uemura, Y., Yamada, H. and Matsuda, T. Novel strategy for cystitis glandularis: Oral treatment withcyclooxygenase-2 inhibitor. Int. J. Urol. 23, 706-708, 2016.

解剖学第二講座

1.

Trifonov, S., Yamashita, Y., Kase, M., Maruyama, M. and Sugimoto, T. Overview and assessment of
the histochemical methods and reagents for the detection of -galactosidase activity in transgenic
animals. Anat. Sci. Int. 91, 56-67, 2016.

生理学第一講座

1.
2.

3.
4.

Andharia, N., Joseph, A., Hayashi, M., Okada, M. and Matsuda, H. Involvement of intracellulartransport in TREK-1c current run-up in 293T cells. Channels (Austin) in press, 2017.
Aoun, J., Hayashi, M., Sheikh, I.A., Sarkar, P., Saha, T., Ghosh, P., Bhowmick, R., Ghosh, D.,
Chatterjee, T., Chakrabarti, P., Chakrabarti, MK. and Hoque, KM. Anoctamin 6 contributes to Cl−
secretion in accessory cholera enterotoxin (Ace)-stimulated diarrhea: an essential role forphosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PIP2) signaling in cholera. J. Biol. Chem. 291, 26816−26836,
2017.
Hayashi, M. and Matsuda, H. Potassium channels in pancreatic cancer. Med. Res. Arch. 4, 600, 2016.
Hayashi, M., Inagaki, A., Novak, I. and Matsuda, H. The adenosine A2B receptor is involved in anion
secretion in human pancreatic duct Capan-1 epithelial cells. Eur. J. Physiol. 468, 1171−1181, 2016.

生理学第二講座

1.
2.
3.

Wong-Lin, K., Wang, D., Moustafa, A., Cohen, J. and Nakamura, K. Toward a multiscale modelingframework for understanding serotonergic function. J. Psychopharmacol. in press, 2017.
中村加枝, 林和子, 中尾和子. 背側縫線核による報酬・嫌悪情報処理. 日本薬理学雑誌, 149,
40-43, 2017.
Yamada, H., Inokawa, H., Hori, Y., Pan, X., Matsuzaki, R., Nakamura, K., Samejima, K., Shidara, M.,
Kimura, M., Sakagami, M. and Minamimoto, T. Characteristics of fast-spiking neurons in the striatumof behaving monkeys. Neurosci. Res. 105, 2-18, 2016.

医化学講座

1.
2.
3.

Hayashi, M., Shinozuka, Y., Shigenobu, S., Sato, M., Sugimoto, M., Ito, S., Abe, K. and Kobayashi, S.
Conserved role of Ovo in germline development in mouse and Drosophila. Sci. Rep. 7, 40056, 2017.
Taniguchi, H., Katano, T., Nishida, K., Yao, I., Morimoto, Y., Matsuda, T. and Ito, S. Expression of
hOvol2 in the XY body of human spermatocytes. Andrologia 49, e12599(1-8), 2017.
Uchida, H., Matsumura, S., Okada, S., Suzuki, T., Minami, T. and Ito, S. RNA editing enzyme ADAR2
is a mediator of neuropathic pain after peripheral nerve injury. FASEB J. 31, 1847-1855, 2017.

10

4.

Nguyen H.T., Katano, T., Matsumura, S., Pham M.V., Muratani, T., Minami, T. and Ito, S. Role ofc-Jun N-terminal kinase in late nerve regeneration monitored by in vivo imaging of thy1-yellow
fluorescent protein transgenic mice. Eur. J. Neurosci. 43, 548-560, 2016.
5. Taniguchi, H., Katano, T., Nishida, K., Kinoshita, H., Matsuda, T. and Ito, S. Elucidation of themechanism of suppressed steroidogenesis during androgen deprivation therapy of prostate cancer
patients using an animal model. Andrology 4, 964-971, 2016.
6. Shimma, S., Kumada, H-O., Taniguchi, H., Konno, A., Yao, I., Furuta, K., Matsuda, T. and Ito, S.
Microscopic visualization of testosterone in mouse testis by use of imaging mass spectrometry. Anal.
Bioanal. Chem. 408, 7607-7615, 2016.
7. Kawabata, K., Nishimura, I., Fujiwara, T., Terauchi, S., Minami, T., Ito, S. and Okuda-Ashitaka, E.
Intrathecal administration of low-dose Nociceptin/Orphanin FQ induces allodynia via c-Jun N-terminal
kinase and monocyte chemoattractant protein-1. Eur. J. Neurosci. 43, 1499-1508, 2016.
8. Okamoto, K., Ohashi, M., Ohno, K., Takeuchi, A., Matsuoka, E., Fujisato, K., Minami, T., Ito, S. andOkuda-Ashitaka, E. Involvement of NIPSNAP1, a neuropeptide nocistatin-interacting protein, in
inflammatory pain. Mol. Pain 12, (1-11), 2016.
9. Inoue, A., Uchida, H., Nakazawa, T., Yamamoto, T. and Ito, S. Phosphorylation of NMDA receptor
GluN2B submit as its Tyr1472 is important for trigeminal processing of itch. Eur. J. Neurosci. 44,
2474-2482, 2016.
10. Katano, T., Fukuda, M., Furue, H., Yamazaki, M., Abe, M., Watanabe, M., Nishida, K., Yao, I., Hata,
Y., Okumura, N., Nakazawa, T., Yamamoto, T., Sakimura, K., Takao, Y. and Ito, S. Involvement ofbrain-enriched guanylate kinase-associated protein (BEGAIN) in chronic pain after peripheral nerve
injury. eNeuro 3, e0110-16(1-18), 2016.
神経内科学講座

1.
2.
3.

Oki, M., Kaneko, S., Morise, S., Takenouchi, N., Hashizume, T., Tsuge, A., Nakamura, M., Wate, R.
and Kusaka, H. Zonisamide ameliorates levodopa-induced dyskinesia and reduces expression of striatal
genes in Parkinson model rats. Neurosci. Res. in press, 2017.
Oki, M., Hori, S., Asayama, S., Wate, R., Kaneko, S. and Kusaka, H. Early-onset Parkinson’s diseaseassociated with chromosome 22q11.2 deletion syndrome. Intern. Med. 55, 303-305, 2016.
金子鋭. Disease modifying therapy の実現は可能か?（基礎編）「No」の立場から. Fronti. Parkinson
Dis. 9, 22-24, 2016.

生物学教室

1.

Schoch, H., Kreibich, A.S., Ferri, S.L., White, R.S., Bohorquez, D., Banerjee, A., Port, R.G., Dow,
H.C., Cordero, L., Pallathra, A.A., Kim, H., Li, H., Bilker, W.B., Hirano, S., Schultz, R.T.,
Borgmann-Winter, K., Hahn, C.G., Feldmeyer, D., Carlson, G.C., Abel, T. and Brodkin, E.S.
Sociability Deficits and Altered Amygdala Circuits in Mice Lacking Pcdh10, an Autism AssociatedGene. Biol. Psychiatry 81, 193-202, 2017.

がん部門
病理学第一講座

1.

2.
3.

4.

Yan, KS., Janda, CY., Chang, J., Zheng, GXY., Larkin, KA., Luca, VC., Chia, LA., Mah, AT., Han, A.,
Terry, JM., Ootani, A., Roelf, K., Lee, M., Yuan, J., Li, X., Bolen, CR., Wilhelmy, J., Davies, PS., Ueno,
H., von Furstenberg, RJ., Belgrader, P., Ziraldo, SB., Ordonez, H., Henning, SJ., Wong, MH., Snyder,MP., Weissman, IL., Hsueh, AJ., Mikkelsen, TS., Garcia, KC. and Kuo, CJ. Non-equivalence of Wnt
and R-spondin ligands during Lgr5+ intestinal stem cell self-renewal. Nature 545, 238-242, 2017.
Xu, J., Ueno, H., Xu, C., Chen, B., Weissman, I. and Xu, P-X. Identification of mouse cochlear
progenitors that develop hair and supporting cells in the organ of Corti. Nat. Commun. 8, 15046, 2017.
Yanai, H., Atsumi, N., Tanaka, T., Nakamura, N., Komai, Y., Omachi, T., Tanaka, K., Ishigaki, K.,
Saiga, K., Ohsugi, H., Tokuyama, Y., Imahashi, Y., Ohe, S., Hisha, H., Yoshida, N., Kumano, K., Kon,
M. and Ueno, H. Intestinal cancer stem cells marked by Bmi1 or Lgr5 expression contribute to tumor
propagation via clonal expansion. Sci. Rep. 7, 41838, 2017.
Tanaka, T., Atsumi, N., Nakamura, N., Yanai, H., Komai, Y., Omachi, T., Tanaka, K., Ishigaki, K.,
Saiga, K., Ohsugi, H., Tokuyama, Y., Imahashi, Y., Hisha, H., Yoshida, N., Kumano, K., Okazaki, K.
and Ueno, H. Bmi1-positive cells in the lingual epithelium could serve as cancer stem cells in tongue

11

5.
6.

cancer. Sci. Rep. 6, 39386, 2016.
Ueno, H. Identification of normal and neoplastic stem cells by the multicolor lineage tracing method.
Pathol. Int. 66, 423-430, 2016.
Hisha, H., Tanaka, T. and Ueno, H. Lingual Epithelial Stem Cells and Organoid Culture of Them. Int. J.
Mol. Sci. 17, 168, 2016.

微生物学講座1.

Miwa, M., Ida, C., Yamashita, S., Tanaka, M. and Fujisawa, J. Poly(ADP-ribose). Structure,
Physicochemical Properties and Quantification in vivo, with special reference to poly(ADP-ribose)binding protein modules. Curr. Protein Pept. Sci. 17, 683-692, 2016.

衛生学講座

1.

Nakatsuka, R., Iwaki, R., Matsuoka, Y., Sumide, K., Kawamura, H., Fujioka, T., Sasaki, Y., Uemura, Y.,
Asano, H., Kwon, A-H. and Sonoda, Y. Identification and characterization of Lin-CD45-Sca-1+ VSEL
phenotypic cells residing in adult bone tissue. Stem Cells Dev. 25, 27-42, 2016.

公衆衛生学講座1.
2.

Lamaningao, P., Kanda, S., Laimanivong, S., Shimono, T., Darcy, A.W., Phyaluanglath, A., Mishima, N.
and Nishiyama, T. Development of a PCR assay for diagnosing trematode (opisthorchis and haplorchis)
infections in human stools. Am. J. Trop. Med. Hyg. 96, 221-228, 2017.
Phommanivong, V., Kanda, S., Shimono, T., Lamaningao, P., Darcy, A.W., Mishima, N., Phaytanavanh,
B. and Nishiyama, T. Co-circulation of the dengue with chikungunya virus during the 2013 outbreak inthe southern part of Lao PDR. Trop. Med. Health, 44, 24, 2016.

分子遺伝学部門

1.
2.
3.
4.

Kondo, N., Ueda, Y., Kita, T., Ozawa, M., Tomiyama, T., Yasuda, K., Lim, D.S. and Kinashi, T.
NDR1-dependent regulation of kindlin-3 controls high-affinity LFA-1 binding and immune synapse
organization. Mol. Cell Biol. 37, e00424-16, 2017.
Ueda, Y., Kondo, N., Ozawa, M., Yasuda, K., Tomiyama, T. and Kinashi, T. Sema3e/Plexin D1
Modulates Immunological Synapse and Migration of Thymocytes by Rap1 Inhibition. J. Immunol. 196,
3019-3031, 2016.
Iida, T., Saito, K., Katagiri, K., Kinashi, T. and Ohta, Y. The RacGAP protein FilGAP is a negative
regulator of chemokine-promoted lymphocyte migration. FEBS Lett. 590, 1395-1408, 2016.
Katakai, T. and Kinashi, T. Microenvironmental control of high-speed interstitial T cell migration in thelymph node. Front Immunol. 7, 194, 2016.

生体情報部門

1.

Arima, M., Cui, D., Kimura, T., Sonoda, K.H., Ishibashi, T., Matsuda, S. and Ikeda, E. Basigin can be atherapeutic target to restore the retinal vascular barrier function in the mouse model of diabetic
retinopathy. Sci. Rep. 6, 38445, 2016.

内科学第一講座

1.

2.
3.

Azuma, Y., Nakaya, A., Hotta, M., Fujita, S., Tsubokura, Y., Yoshimura, H., Satake, A., Ishii, K., Ito, T.
and Nomura, S. Disseminated intravascular coagulation observed following treatment with
gemtuzumab ozogamicin for relapsed/refractory acute promyelocytic leukemia. Mol. Clin. Oncol. 5,
31-34, 2016.
Fujita, Y., Nakaya, A., Fujita, S., Hotta, M., Yoshimura, H., Azuma, Y., Nakanishi, T., Satake, A., Ishii,
K., Ito, T. and Nomura, S. Mogamulizumab treatment of refractory peripheral T-cell lymphoma
following autologous stem cell transplantation: A case report. Mol. Clin. Oncol. 4, 151-153, 2016.
Esaki, A., Ishii, K., Azuma, Y., Tsubokura, Y., Yoshimura, H., Hotta, M., Nakanishi, T., Fujita, S.,
Nakaya, A., Satake, A., Ito, T. and Nomura, S. Rapid improvement of hyperammonemic
encephalopathy by bortezomib treatment in IgD-type multiple myeloma. Rinsho Ketsueki, 57, 854-858,

12

4.
5.

6.

7.

8.

2016.
Nakaya, A., Fujita, S., Satake, A., Nakanishi, T., Azuma, Y., Tsubokura, Y., Hotta, M., Yoshimura, H.,
Ishii, K., Ito, T. and Nomura, S. Enhanced international prognostic index in Japanese patients withdiffuse large B-cell lymphoma. Leuk. Res. Rep. 6, 24-26, 2016.
Nakaya, A., Fujita, S., Satake, A., Nakanishi, T., Azuma, Y., Tsubokura, Y., Hotta, M., Yoshimura, H.,
Ishii, K., Ito, T. and Nomura, S. Delayed HBV reactivation in rituximab-containing chemotherapy:
How long should we continue anti-virus prophylaxis or monitoring HBV-DNA? Leuk. Res. 50, 46-49,
2016.
Tsubokura, Y., Satake, A., Hotta, M., Yoshimura, H., Fujita, S., Azuma, Y., Nakanishi, T., Nakaya, A.,
Ito, T., Ishii, K. and Nomura, S. Successful treatment with mogamulizumab followed by allogeneic
hematopoietic stem-cell transplantation in adult T-cell leukemia/lymphoma: a report of two cases. Int. J.
Hematol. 104, 744-748, 2016.
Nomura, S., Maeda, Y., Ishii, K., Katayama, Y., Yagi, H., Fujishima, N., Ota, S., Moriyama, M., Ikezoe,T., Miyazaki, Y., Hayashi, K., Fujita, S., Satake, A., Ito, T., Kyo, T. and Tanimoto, M. Relationshipbetween HMGB1 and PAI-1 after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. J. Blood Med. 7,
1-4, 2016.
Shibata, T., Ohto, U., Nomura, S., Kibata, K., Motoi, Y., Zhang, Y., Murakami, Y., Fukui, R., Ishimoto,T., Sano, S., Ito, T., Shimizu, T. and Miyake, K. Guanosine and its modified derivatives are endogenous
ligands for TLR7. Int. Immunol. 28, 211-222, 2016.

内科学第三講座

1.

Kato, K., Ikeura, T., Yanagawa, M., Tomiyama, T., Fukui, T., Uchida, K., Takaoka, M., Nishio, A.,
Uemura, Y., Satoi, S., Yamada, H. and Okazaki, K. Morphological and immunohistochemicalcomparison of intrapancreatic nerves between chronic pancreatitis and type 1 autoimmune pancreatitis.
Pancreatology 17, 403-410, 2017.
2. Uchida, K. and Okazaki, K. Roles of Regulatory T and B Cells in IgG4-Related Disease. Curr. Top.
Microbiol. Immunol. 401, 93-114, 2017.
3. Sakao, M., Sakaguchi, Y., Suzuki, R., Takahashi, Y., Kishimoto, M., Fukui, T., Uchida, K., Nishio, A.,
Matsuzaki, K. and Okazaki, K. Smad2/3 Linker Phosphorylation Is a Possible Marker of Pancreatic
Stem/Progenitor Cells in the Regenerative Phase of Acute Pancreatitis. Pancreas 46, 605-613, 2017.
4. Okazaki, K. and Umehara, H. Current Concept of IgG4-Related Disease. Curr. Top Microbiol.
Immunol. 401, 7-17, 2016.
5. Tanaka, T., Atsumi, N., Nakamura, N., Yana, H., Komai, Y., Omachi, T., Tanaka, K., Ishigaki, K.,
Saiga, K., Ohsugi, H., Tokuyama, Y., Imahashi, Y., Hisha, H., Yoshida, N., Kumano, K., Okazaki, K.
and Ueno, H. Bmi1-positive cells in the lingual epithelium could serve as cancer stem cells in tongue
cancer. Sci. Rep. 6, 39986, 2016.
6. Ando, Y., Mazzurana, L., Forkel, M., Okazaki, K., Aoi, M., Schmidt, P.T., Mjösberg, J. and Bresso, F.
Downregulation of MicroRNA-21 in Colonic CD3+ T Cells in UC Remission. Inflamm. Bowel Dis. 22,
2788-2793, 2016.
7. Ikeura, T., Miyoshi, H., Shimatani, M., Uchida, K., Takaoka, M. and Okazaki, K. Long-term outcomesof autoimmune pancreatitis. World J. Gastroenterol. 22, 7760-7766, 2016.
8. Ikeura, T., Horitani, S., Masuda, M., Kasai, T., Yanagawa, M., Miyoshi, H., Uchida, K., Takaoka, M.,
Miyasaka, C., Uemura, Y. and Okazaki, K. IgG4-related Disease Involving Multiple Organs with
Elevated Serum Interleukin-6 Levels. Intern. Med. 55, 2623-2628, 2016.
9. Suzuki, K., Yokoyama, J., Kawauchi, Y., Honda, Y., Sato, H., Aoyagi, Y., Terai, S., Okazaki, K.,
Suzuki, Y., Sameshima, Y., Fukushima, T., Sugahara, K., Atreya, R., Neurath, M.F., Watanabe, K.,
Yoneyama, H. and Asakura, H. Phase 1 Clinical Study of siRNA Targeting Carbohydrate
Sulphotransferase 15 in Crohn's Disease Patients with Active Mucosal Lesions. J. Crohns. Colitis. 11,
221-228, 201610. Suzuki, K., Arumugam, S., Yokoyama, J., Kawauchi, Y., Honda, Y., Sato, H., Aoyagi, Y., Terai, S.,
Okazaki, K., Suzuki, Y., Mizumoto, S., Sugahara, K., Atreya, R., Neurath, M.F., Watanabe, K.,
Hashiguchi, T., Yoneyama, H. and Asakura, H. Pivotal Role of Carbohydrate Sulfotransferase 15 inFibrosis and Mucosal Healing in Mouse Colitis. PLoS One 11, e0158967, 2016.
11. Uchida, K., Miyoshi, H., Ikeura, T., Shimatani, M., Takaoka, M. and Okazaki, K. Clinical andpathophysiological issues associated with type 1 autoimmune pancreatitis. Clin. J. Gastroenterol. 9,
7-12, 2016.
12. Yoshida, K., Murata, M., Yamaguchi, T., Matsuzaki, K. and Okazaki, K. Reversible Human TGF-
Signal Shifting between Tumor Suppression and Fibro-Carcinogenesis: Implications of Smad
Phospho-Isoforms for Hepatic Epithelial-Mesenchymal Transitions. J. Clin. Med. 5, 7(1-19), 2016.

13

外科学講座1.

Yamaki, S., Yanagimoto, H., Tsuta, K., Ryota, H. and Kon, M. PD-L1 expression in pancreatic ductal
adenocarcinoma is a poor prognostic factor in patients with high CD8+ tumor-infiltrating lymphocytes:
highly sensitive detection using phosphor-integrated dot staining. Int. J. Clin. Oncol. 22, 726-733,
2017.

腎泌尿器外科学講座

1.

駒井資弘, 田中敏弘, 徳山陽子, 矢内洋次, 大江秀一, 大町太一, 厚海奈穂, 吉田真子, 熊野恵城, 比舎弘子, 松田公志, 上野博夫. 長期生殖幹細胞における Bmi1 の発現. 関西医大誌, 67,
1-7, 2016.

代謝部門
薬理学講座

1.
2.

Fujikawa, Y., Yoshida, H., Inoue, T., Ohbayashi, T., Noda, K,. von Melchner, H., Iwasaka, T., Shiojima,I., Akama, TO. and Nakamura, T. Latent TGF-β binding protein 2 and 4 have essential overlapping
functions in microfibril development. Sci. Rep. 7, 43714, 2017.
Kageshima, M., Maruyama, T., Akama, T. and Nakamura, T. Novel magnetic indenter for rheologicalanalysis of thin biological sheet for regenerative medicine. Rev. Sci. Instrum. 87, 074302, 2016.

法医学講座

1.
2.

湯浅勲, 飯野守男, 山本敏充, 松末綾, 赤根敦. 日本人特異的アレルによる日本人の証明：
JapanesePlexの試み. DNA多型, 24, 172-175, 2016.
橋谷田真樹, 赤根敦, 松本智寛, 吉村澄孝, 時安太久磨, 細谷直, 舟山眞人. ストレスモデルラ
ットにおけるmicroRNA (miRNA) の発現変化. DNA多型, 24, 218-220, 2016.

モデル動物部門

1.

2.

安齋政幸, 井上達也, 西村愛美, 野田義博, 東里香, 梶本みずき, 三谷国, 細井美彦.
β-Nicotinamide mononucleotide を添加したマウス体外成熟培地が未成熟卵子内への活性酸素種(ROS)に与える影響. 日本受精着床学会雑誌, 33, 21-26, 2016.
井上達也, 東里香, 野田義博, 西村愛美, 梶本みずき, 小橋朱里, 折杉卓哉, 安齋政幸. L-カル
ニチン添加体外成熟培地がマウス卵子細胞質内活性酸素種に与える影響. 近畿大学先端技術
総合研究所紀要, 21, 49-56, 2016.

形成外科学講座

1.
2.
3.
4.
5.
6.

覚道奈津子, 森本尚樹, 尾川武史, Lai Fangyuan, 楠本健司. 脂肪幹細胞を用いた脂肪組織再生療法. 細胞, 49, 96-98, 2017.
Ogino, S., Morimoto, N., Sakamoto, M., Jinno, C., Taira, T. and Suzuki, S. Efficacy of gelatin gel
sheets sustaining epidermal growth factor for murine skin defects. J. Surg. Res. 201, 446-454, 2016.
Sakamoto, M., Morimoto, N., Ogino, S., Jinno, C., Taira, T. and Suzuki, S. Efficacy of gelatin gel
sheets in sustaining the release of basic fibroblast growth factor for murine skin defects. J. Surg. Res.
201, 378-387, 2016.
Sakamoto, M., Morimoto, N., Ogino, S., Jinno, C., Kawaguchi, A., Kawai, K. and Suzuki, S.
Preparation of Partial-Thickness Burn Wounds in Rodents Using a New Experimental Burning Device.
Ann. Plast. Surg. 76, 652-658, 2016.
Masuoka, H., Morimoto, N., Sakamoto, M., Ogino, S. and Suzuki, S. Exploration of the wound healing
effect of topical administration of nicotine in combination with collagen scaffold in a rabbit model. J.
Artif. Organs 19, 167-174, 2016.
Morimoto, N., Jinno, C., Mahara, A., Sakamoto, M., Kakudo, N., Inoie, M., Fujisato, T., Suzuki, S.,
Kusumoto, K. and Yamaoka, T. The Alteration of the Epidermal Basement Membrane Complex of

14

7.
8.
9.
10.

11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.

Human Nevus Tissue and Keratinocyte Attachment after High Hydrostatic Pressurization. Biomed Res.
Int. 2016, 1320909(1-9), 2016.
Jinno, C., Morimoto, N., Ito, R., Sakamoto, M., Ogino, S., Taira, T. and Suzuki, S. A Comparison ofConventional Collagen Sponge and Collagen-Gelatin Sponge in Wound Healing. Biomed Res. Int.
2016, 4567146(1-8), 2016.
Morimoto, N., Kakudo, N., Ogura, T., Hara, T., Matsui, M., Yamamoto, M., Tabata, Y. and Kusumoto,K. Easy-to-Use Preservation and Application of Platelet-Rich Plasma in Combination Wound TherapyWith a Gelatin Sheet and Freeze-Dried Platelet-Rich Plasma: A Case Report. Eplasty 16, e22, 2016.
Morimoto, N., Mahara, A., Jinno, C., Ogawa, M., Kakudo, N., Suzuki, S., Fujisato, T., Kusumoto, K.
and Yamaoka, T. The superiority of the autografts inactivated by high hydrostatic pressure to
decellularized allografts in a porcine model. J. Biomed. Mater. Res. B, Appl. Biomater. in press, 2016.
Morimoto, N., Jinno, C., Sakamoto, M., Kakudo, N., Yamaoka, T. and Kusumoto, K. An Exploratory
Clinical Trial of a Novel Treatment for Giant Congenital Melanocytic Nevi Combining InactivatedAutologous Nevus Tissue by High Hydrostatic Pressure and a Cultured Epidermal Autograft: Study
Protocol. JMIR res. protoc. 5, e162, 2016.
Hara, T., Kakudo, N., Morimoto, N., Ogawa, T., Lai, F. and Kusumoto, K. Platelet-rich plasma
stimulates human dermal fibroblast proliferation via a Ras-dependent extracellular signal-regulated
kinase 1/2 pathway. J. Artif. Organs 19, 372-377, 2016.
Kakudo, N., Morimoto, N., Ogawa, T., Hihara, M., Koseki, R. and Kusumoto, K. Elastofibroma dorsi:
a case report with an immunohistochemical and ultrastructural studies. Med. Mol. Morphol. 49, 42-47,
2016.
覚道奈津子, 森本尚樹, 尾川武史, Lai Fangyuan, 楠本健司. 脂肪幹細胞を用いた脂肪組織再生療法. BIO Clinica 31, 66-69, 2016.
三宅ヨシカズ, 福田智, 楠本健司. PRP の滑液嚢胞への応用. 形成外科, 59, 950-955, 2016.
三宅ヨシカズ, 福田智, 楠本健司. PRP の創傷手術時の創への使用. 形成外科 , 59, 944-949,
2016.
福田智, 三宅ヨシカズ, 楠本健司. PRP 療法の美容医療（シワ）への応用. 形成外科, 59, 956-963,
2016.
楠本健司. PRP 療法の現況と今後の展望. 形成外科, 59, 974-979, 2016.

皮膚科学講座1.

Thi Hong Nguyen, C., Kambe, N., Kishimoto, I., Ueda-Hayakawa, I. and Okamoto, H. Serum solubleinterleukin-2 receptor level is more sensitive than angiotensin-converting enzyme or lysozyme fordiagnosis of sarcoidosis and may be a marker of multiple organ involvement. J. Dermatol. 44, 789-797,
2017.

物理学教室

1.
2.
3.

Kageshima, M., Maruyama, T., Akama, T. and Nakamura, T. Novel magnetic indenter for rheologicalanalysis of thin biological sheet for regenerative medicine. Rev. Sci. Instrum. 87, 074302(1-12), 2016.
Niiyama, Y., Tuji, A., Takemoto, K. and Ichise, S. Pseudanabaena sp. nov. and P. subfoetida sp. nov.
(Cyanophyta/ Cyanobacteria) producing 2-methylisoborneol from Japan. Fottea 16, 1-11, 2016.
Takemoto, K., Yoshimura, M., Yamamoto, A., Ichise, S., Namba, H. and Kihara, H. Imaging of
musty-odor producing filamentous cyanobacteria by various microscopies, AIP Conf. Proc. 1696,
020024, 2016.

15

２．図書
神経部門
生理学第二講座

1.

Balasubraman, P., Chakravarthy, S., Wong-Lin, K., Wang, D., Cohen, J.Y., Nakamura, K. and Moustafa,
A.A. Neural circuit models of serotonergic system: From microcircuits to cognition. In A. Moustafa(Ed.) Computational models of Brain and Behavior. Wiley-Blackwell, in press, 2017.

医化学講座

1.

伊藤誠二. 痛覚のふしぎ 脳で感知する痛みのメカニズム, 全 224 頁, 講談社, 2017 年 3 月.

神経内科学講座

1.

金子鋭. 第 4 章 パーキンソン病の経過, パーキンソン病の療養の手引き（全 112 頁）, 43-47,
2016. 「厚生労働科学研究費補助金（難治性疾患政策研究事業）神経変性疾患領域における調査研究班」(http://plaza.umin.ac.jp/~neuro2/)

生物学教室

1.

2.
3.

Suzuki, S.T. and Hirano, S. Chapter 1:Introduction. "The Cadherin Superfamily - Key Regulators of
Animal Development and Physiology" (Suzuki, S.T. and Hirano, S. Eds.), 3-11, Springer, 2016.（部分執筆）
Imai-Okano, K. and Hirano, S. Chapter 11:Various atypical CAdherins: T-cadherin, RET, Calsyntenin,
and 7D-cadherin. "The Cadherin Superfamily - Key Regulators of Animal Development andPhysiology" (Suzuki, S.T. and Hirano, S. Eds.), 277-311, Springer, 2016.（部分執筆）
Hirano, S., and Imai-Okano, K. Chapter 15:Cadherin-related diseases. "The Cadherin Superfamily Key Regulators of Animal Development and Physiology" (Suzuki, S.T. and Hirano, S. Eds.), 399-421,
Springer, 2016.（部分執筆）

がん部門
内科学第三講座

1.

Okazaki, K. IgG4-related disease, Springer, 128 頁, 2017.

代謝部門
形成外科学講座

1.
2.
3.

楠本健司. 再生医療の応用 外科系医師が知っておくべき創傷治療のすべて, 鈴木茂彦, 寺師
浩人編, 263-269, 南江堂, 2017.
Mizuno, H., Tobita, M., Ogawa, R., Orbay, H., Fujimura, J., Ono, S., Kakudo, N., Kusumoto, K. andHyakusoku, H. Adipose-Derived Stem Cells in Regenerative Medicine, “Principle of Gender-Specific
Medicine 3” Marianne J. Legato Eds. 459-479, Academic Press, UK, 2017.
楠本健司, 福田智, 三宅ヨシカズ. 多血小板血漿(PRP)療法 患者満足度ベストを目指す非手術・低侵襲 美容外科形成外科学に基づいた考え方とテクニックの実際, 高柳進編, 162-169,
南江堂, 2016.

16

３．学会発表
神経部門
解剖学第一講座

1.
2.

平原幸恵, 小池太郎, 高森康晴, 山田久夫. TOF-SIMS 法を用いたマウス成獣脳におけるスルファチドバリアントの局在解析. 第 57 回日本組織細胞化学会総会・学術集会, 東京, 2016 年 9 月
小池太郎, 片岡洋祐, 前田光代, 齊藤育, 高森康晴, 山田久夫. 基板吊り下げ型補助具を用いた
超薄連続切片回収法. 第 57 回日本組織細胞化学会総会・学術集会, 東京, 2016 年 9 月

解剖学第二講座

1.
2.
3.

4.

山下雄司, トリフォノフ ステファン, 加瀬政彦, 丸山正人, 中野洋輔, 西村拓也, 杉本哲夫.
マウス脳 GPR155 の機能解明へのアプローチ. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
山下雄司, トリフォノフ ステファン, 丸山正人, 加瀬政彦, 中野洋輔, 杉本哲夫. マウス線条
体の GPR155 陽性 interneuron. 第 122 回日本解剖学会総会・全国学術集会, 長崎, 2017 年 3 月
加瀬政彦, 山下雄司, 中野洋輔, 丸山正人, 杉本哲夫. 成熟ラット脳における Bcas1 mRNA 発
現細胞の免疫組織化学的および形態的解析. 第 122 回日本解剖学会総会・全国学術集会, 長崎,
2017 年 3 月
山下雄司, トリフォノフ ステファン, 丸山正人, 加瀬政彦, 杉本哲夫. マウス線条体外側部の D1 ニューロンは GPR155 を発現している. 第 121 回日本解剖学会総会・全国学術集会, 郡山, 2016 年 3 月

生理学第一講座

1.
2.
3.

Andharia, N., Joseph, A., Hayashi, M., Okada, M. and Matsuda, H. Involvement of intracellulartransport in TREK-1c current in 293T cells. 第 94 回日本生理学会大会, 浜松, 2017 年 3 月
Hayashi, M., Inagaki, A. and Matsuda, H. Functional expression of adenosine A2B receptor inpancreatic duct cells. 第 94 回日本生理学会大会, 浜松, 2017 年 3 月
Inagaki, A., Hayashi, M., Andharia, N. and Matsuda, H. Butyrate activates XE991 sensitive potassium
secretion in rat rectal colon. 第 94 回日本生理学会大会, 浜松, 2017 年 3 月

生理学第二講座

1.
2.
3.
4.

Ueda, Y., Yasuda, M. and Nakamura, K. Different population of primate caudate neurons is involved indecision making under different emotional context. Annual meeting of Society for neuroscience, San
Diego, USA, 2016 年 11 月
上田康雅, 安田正治, 中村加枝. サルの意思決定、自律神経反応および線条体尾状核の情報処理に嫌悪刺激の存在が与える影響. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
安田正治, 中村加枝. 感情が学習に与える影響についての生理学的解析. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
中村加枝. 背側縫線核による報酬・嫌悪情報処理. 第 89 回日本薬理学会 シンポジウム, 招待
講演, 横浜, 2016 年 3 月

医化学講座

1.
2.
3.

Nguyen H.T., Katano, T., Matsumura, S., Pham, M.V. and Ito, S. Involvement of Na+/K+-ATPase inperipheral nerve regeneration via lactate signaling in sciatic nerve transection-regeneration model. The
46th annual meeting of the Society for Neuroscience, San Diego, USA, 2016 年 11 月
Okuda-Ashitaka, E., Kawabata, K., Nishimura, I., Fujiwara, T., Terauchi, S., Minami, T. and Ito, S.
Nociceptin/Orphanin FQ-induced allodynia via c-Jun N-terminal kinase and monocyte chemoattractant
protein-1 in the spinal cord. 6th World Congress on Pain, Yokohama, 2016 年 9 月
Pham, M.V., Nguyen H.T., Katano, T., Matsumura, S. and Ito, S. Study on the effect of diabetic
neuropathy on peripheral nerve regeneration in mouse model. 6th World Congress on Pain, Yokohama,2016 年 9 月

17

4.

片野泰代, 渡辺雅彦, 崎村建司, 伊藤誠二. 海馬におけるマウス BEGAIN の生化学的解析. 第89 回日本生化学会大会, ポスター発表, 仙台, 2016 年 9 月

神経内科学講座

1.

Oki, M., Kaneko, S., Morise, S., Nakamura, M., Wate, R., Takenouchi, N. and Kusaka, H. Expressionof mRNA for adenosine A2A receptor in rat model of levodopa-induced dyskinesia. 第 57 回日本神経学会学術大会, 神戸, 2016 年 5 月

神経機能部門

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

山中智子. 扁桃体中心核セロトニン 2A 受容体による先天的と後天的な恐怖の階層性制御. 第
94 回日本生理学会大会, 浜松, 2017 年 3 月
Kobayakawa, K. Htr2a-expressing cells in the central amygdala control the hierarchy between innate
and learned fear. Wiring and Functional Principles of Neural Circuit. San Diego, USA, 2016 年 11 月
小早川高. 匂いが誘発する恐怖行動と生理応答. 第 10 回メタボロームシンポジウム, 鶴岡,
2016 年 10 月
小早川高. 先天的と後天的な恐怖情報の統合と行動制御メカニズム. 生理研研究会『神経回路研究と精神疾患研究の連合による情動機構解明』, 岡崎, 2016 年 10 月
小早川高. 先天的と後天的な情動の統合処理メカニズム. 第 9 回 Symphony, 東京, 2016 年 9 月
小早川高. 嗅覚刺激が誘発する恐怖行動と自律神経応答. 耳鼻科ニューロサイエンス研究会,
大阪, 2016 年 8 月
Kobayakawa, R. Htr2a-Expressing Cells in the Central Amygdala Control the Hierarchy between
Innate and Learned Fear. 17th International Symposium Olfaction and Taste (ISOT 2016), Yokohama,2016 年 6 月
Matsuo, T. Main olfactory system-mediated social behaviors in mice. 17th International Symposium
Olfaction and Taste (ISOT 2016), Yokohama, 2016 年 6 月

生物学教室

1.
2.
3.

Vibulyaseck, S., Sarpong, G.A., Fujita, H., Hirano, S. and Sugihara, I. Early development of thelongitudinal striped compartments in the prenatal mouse cerebellum studied with three-dimensional
mapping of protocadherin 10 expression. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
Sarpong, G.A., Fujita, H., Vibulyaseck, S., Furuichi, T., Hirano, S. and Sugihara, I. Comparison of
expression patterns of different marker molecules of the cerebellar longitudinal striped compartmentsin the mouse. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
Oishi, K., Nakagawa, N., Tachikawa, K., Sasaki, S., Aramaki, M., Hirano, S., Yamamoto, N.,
Yoshimura, Y. and Nakajima, K. Identity of neocortical layer 4 neurons is specified through correct
positioning into the cerebral cortex. (poster) 21st Biennial Meeting of the International Society for
Developmental Neuroscience (ISDN2016), Antibes-Juan les Pins, France, 2016 年 5 月

がん部門
病理学第一講座

1.
2.
3.
4.

上野博夫. 多色細胞系譜追跡法による幹細胞、癌研究. 第 33 回日本毒性病理学会総会および学術集会, 大阪, 2017 年 1 月
上野博夫. 多色細胞系譜追跡法による幹細胞・発生研究. 第 75 回日本癌学会学術総会, 横浜,
2016 年 10 月
Ueno, H. Organoids of tongue and esophagus, Organoids: Modelling Organ Development and Diseasein 3D Culture, EMBO | EMBL Symposia 2016, Heidelberg, Germany, 2016 年 10 月
上野博夫. 多色系譜追跡法による成体幹細胞の同定と解析. 第 25 回日本形成外科学会, 大阪,
2016 年 9 月

18

微生物学講座

1. Joseph, A., Ueno, T., Ren, Y., Yao, J., Lee, S., Tanaka, M. and Fujisawa, J. Both HBZ Protein andmRNA are Required for Leukemic Growth of HTLV-l-infected T-cells in Humanized Mouse Model.
18th International Conference on Human Retrovirology, Tokyo, 2017 年 3 月
2. Tanaka, M. Ren, Y., Yao, J., Lee, S., Takenouchi, N. and Fujisawa, J. Effect of Adjuvant in the Tax
Vaccination of Humanized Mouse to Prevent HTLV-l Infection. 18th International Conference on
Human Retrovirology, Tokyo, 2017 年 3 月
3. Joseph, A., Ueno, T. and Fujisawa, J. Establishment of HTLV-1–infected Jurkat cell lines with mutated
Tax and HBZ genes. 第 3 回日本 HTLV-1 学会学術集会, 鹿児島, 2016 年 8 月
4. 任 翊華, 田中正和, 姚 錦春, 李 成一, 藤澤順一. ATL 発症過程における感染細胞内 Tax 遺伝子
発現の変動. 第 3 回日本 HTLV-1 学会学術集会, 鹿児島, 2016 年 8 月
5. 田中正和, 任 翊華, 竹之内徳博, 姚 錦春, 李 成一, 藤澤順一. HTLV-1 感染ヒ卜化マウスを用いた感染予防ワクチンにおけるアジュバント効果の検討. 第 3 回日本 HTLV-1 学会学術集会,
鹿児島, 2016 年 8 月
衛生学講座

1. 河村孟, 中塚隆介, 松岡由和, 角出啓輔, 藤岡龍哉, 飯田寛和, 薗田精昭. ヒト SSEA-4+CD271+
間葉系幹細胞の老化には TGF-2 が関与する. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3月
2. 松岡由和, 角出啓輔, 河村孟, 中塚隆介, 藤岡龍哉, 佐々木豊, 薗田精昭. ヒト骨髄由来間葉系
幹細胞による造血支持機構の解明. 第 26 回日本サイトメトリー学会総会, 福岡, 2016 年 7 月
3. Matsuoka, Y., Sumide, K., Kawamura, H., Nakatsuka, R., Fujioka, T., Sasaki, Y. and Sonoda, Y. Humanbone marrow-derived CD271+SSEA-4+ mesenchymal stromal cells support hematopoietic
stem/progenitor cells through the cell-cell contact. The 14th Stem Cell Research Symposium, Kobe,
2016 年 5 月
公衆衛生学講座

1.

Phommanivong, V., Kanda, S., Shimono, T., Lamaningao, P., Darcy, A.W., Mishima, N., Phaytanavanh,
B. and Nishiyama, T. Co-circulation of the dengue with chikungunya virus during the 2013 outbreak inthe southern part of Lao PDR. 10th National Health Research Forum, Savannakhet, Lao PDR, 2016 年
10 月

分子遺伝学部門

1.
2.

Ueda, Y., Kondo, N. and Kinashi, T. Rap1-deficiency caused defective lymph node homing oflymphocytes and thymocyte-selection.(3-E-W31-11-O/P) The 45th Annual Meeting of the JapaneseSociety for Immunology, Okinawa, 2016 年 12 月
Kondo, N., Ueda, Y. and Kinashi, T. High-affinity LFA-1/ICAM-1 binding triggers the reorganizationof vesicular transport regulators to facilitate the maturation of immunological synapse. (1P-0317) The
39th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan, Yokohama, 2016 年 11-12 月

生体情報部門1.

2.

3.

松田達志, 江口稚佳子, 住吉麻実, 生田優希, 小河穂波, 丹賀直美, 早川夏姫, 渡邊利雄. マス
ト細胞脱顆粒過程における PI3K 経路の役割解明. 第 39 回日本分子生物学会年会, 横浜, 2016年 12 月
逆井智貴, 田中順子, 松田達志, 水野聖哉, 濱田理人, 高橋智, 三輪佳宏. 近赤外イメージング
マウスを用いたリンパ球集積から見る炎症反応の可視化. 第 39 回日本分子生物学会年会, 横浜, 2016 年 11 月
松田達志, 澤田和孝, 合田昌史, 村田昌行, 吉澤敏男, 住吉麻実. 新規 Itk 阻害剤を用いた T 細胞機能制御. 第 26 回 Kyoto T cell Conference, 大津, 2016 年 5 月

19内科学第一講座

1.

Ito, T. Immunomodulatory Drugs (IMiDs), lenalidomide and pomalidomide, suppress Th1-inducing
capacity of dendritic cells but enhance Th2-mediated allergic response. The 58th ASH Annual Meeting2016 - The American Society of Hematology, San Diego, USA, 2016 年 12 月

内科学第三講座

1.
2.
3.
4.
5.

6.

7.

8.

Uchida, K. and Okazaki, K. The 1st JSGE Asian Session. Immunological Aspects in Type1
Autoimmune Pancreatitis. 第 103 回日本消化器病学会総会, 東京, 2017 年 4 月
Ando, Y., Mazzurana, L., Forkel, M., Okazaki, K., Schmidt, P.T., Mjösberg, J. and Bresso, F.
MicroRNA-21 is down-regulated in UC remission and is negatively correlated with PDCD4 expression
Asian Pacific Digestive Week (APDW) Kobe, 2016 年 11 月
柳川雅人, 内田一茂, 岡崎和一. 消化器領域における IgG4 関連疾患の病態 1 型自己免疫性膵炎における好塩基球の関与. 第 58 回日本消化器病学会大会, 神戸, 2016 年 11 月
Ando, Y., Mazzurana, L., Forkel, M., Okazaki, K., Schmidt, P.T., Mjösberg, J. and Bresso, F. The
PDCD4/miR-21 pathway in UC remission. Asian Organization for Crohn's and Colitis (AOCC) Kyoto,2016 年 7 月
内田一茂, 光山俊行, 柳川雅人, 池宗真美, 津久田諭, 三好秀明, 池浦司, 島谷昌明, 高岡亮,
西尾彰功, 水野伸国, Giuseppe Zamboni, Luca Frulloni, 能登原憲司, 岡崎和一. 自己免疫性膵炎（1 型・2 型）における好中球浸潤機序の違いについて. 第 53 回日本消化器免疫学会総会, 大阪, 2016 年 7 月
福井寿朗, 岸本真房, 高橋悠, 鈴木亮, 宮本早知, 谷村雄志, 松本泰司, 中島淳, 坂尾将幸, 内
田一茂, 西尾彰功, 岡崎和一. 腸炎関連大腸癌モデルマウスにおける Smad2/3 蛋白リンカー部
リン酸化の発癌との関連性についての検討. 第 7 回日本炎症性腸疾患学会, 京都, 2016 年 7 月
内田一茂, 光山俊行, 柳川雅人, 池宗真美, 津久田諭, 三好秀明, 池浦司, 島谷昌明, 高岡亮,
Giuseppe Zamboni, Luca Frulloni, 水野伸国, 能登原憲司, 里井壯平, 岡崎和一. 1 型・2 型自己免疫性膵炎における好中球浸潤の差異についての検討. 第 33 回日本胆膵病態・生理研究会, 大阪,
2016 年 6 月
福井寿朗, 岸本真房, 高橋悠, 鈴木亮, 宮本早知, 谷村雄志, 松本泰司, 中島淳, 坂尾将幸, 内
田一茂, 西尾彰功, 岡崎和一. 特定のリンカー部スレオニンがリン酸化された Smad2/3 蛋白（pSmad2/3L-Thr）の消化管上皮幹細胞マーカーとしての検討と応用. 第 53 回日本臨床分子医学会 学術集会, 東京, 2016 年 4 月

腎泌尿器外科学講座

1.

駒井資弘, 速水悠太郎, 吉田崇, 谷口久哲, 三島崇生, 吉田健志, 矢西正明, 安田鐘樹, 渡辺仁
人, 杉素彦, 木下秀文, 松田公志, 上野博夫. マウス精子形成幹細胞の挙動：精上皮 stage との関連. 第 104 回日本泌尿器科学会総会, 仙台, 2016 年 4 月

代謝部門
薬理学講座

1.
2.
3.
4.
5.
6.

中邨智之. 生体組織の伸縮性を生み出すしくみ. 第 10 回近畿ハート倶楽部, 特別講演, 大阪,
2017 年 2 月
Nakamura, T. Latent TGFβ-binding protein 2 is essential for the stable structure of ciliary zonule
microfibrils. Invited talk at ISER2016 (XXII Biennial Meeting of the International Society for Eye
Research, Keio Plaza Hotel, Tokyo, 2016 年 9 月
中邨智之. 生体の伸縮性を生み出すしくみ～弾性線維形成の分子機構とその破綻による多臓器疾患～. 第 10 回癌・免疫若手セミナー, 特別講演, 大阪, 2016 年 9 月
赤間智也, 安形清彦, 久保田智巳, 中邨智之, 福田道子. B. fragilis endo-beta-galactosidase のクローニングとその酵素活性解析. 第 89 回日本生化学会大会, 仙台, 2016 年 9 月
Nakamura, T. Molecular mechanism of elastic fiber assembly. The 17th Annual Meeting of Society for
Photoaging Research, 第 17 回光老化研究会 Educational Lecture, 神戸, 2016 年 8 月
中邨智之. ミクロフィブリルと弾性線維の形成機構. 第 48 回日本結合組織学会学術大会 シ

20

7.
8.

ンポジウム, 長崎, 2016 年 6 月
中邨智之. 弾性線維の形成と再生の分子機構〜弾性線維と皮膚疾患の関わり〜. 第 115 回日本皮膚科学会総会 シンポジウム, 京都, 2016 年 6 月
中邨智之. 毛様小帯ミクロフィブリルの形成における LTBP-2 の役割. 第 120 回日本眼科学会
総会 シンポジウム, 仙台, 2016 年 4 月

法医学講座

1.

2.
3.
4.

橋谷田真樹, 赤根敦, 松本智寛, 吉村澄孝, 大内司, 舟山眞人. HID-Ion AmpliSeqTM Ancestry
Panel による日本人 SNP データベースの構築. 日本 DNA 多型学会第 25 回学術集会, 柏, 2016
年 11-12 月
橋谷田真樹, 赤根敦, 松本智寛, 吉村澄孝, 時安太久磨. 心臓突然死例における次世代シークエンサーを用いた遺伝子解析. 第 63 回日本法医学会学術近畿地方集会, 大阪, 2016 年 11 月
橋谷田真樹, 赤根敦, 松本智寛, 吉村澄孝, 時安太久磨. メタゲノム解析の法医学的応用. 第100 次日本法医学会学術全国集会, 東京, 2016 年 6 月
Hashiyada, M., Akane, A., Matsumoto, T., Yoshimura, S. and Tokiyasu, T. Constructing the SNP
database of Japanese population using the HID-Ion AmpliSeqTM Ancestry Panel on the Ion PGMTM
System. Human Identification Solutions Conference, Barcelona, Spain, 2016 年 5 月

モデル動物部門

1.

2.

3.

4.

小橋朱里, 東里香, 折杉卓哉, 西村愛美, 中川隆生, 小笠原里奈, 小木曽力, 鷲津朱理, 細井美彦, 安齋政幸. マウス GV 期卵子の体外成熟中における外因性 L-カルニチンの影響. 第 39 回日
本分子生物学会年会, 横浜, 2016 年 12 月
折杉卓哉, 東里香, 小橋朱里, 西村愛美, 野田義博, 中川隆生, 小笠原里奈, 小木曽力, 鷲津朱理, 細井美彦, 安齋政幸. マウス体外成熟培地への β-Nicotinamide Mononucleotide の添加が初期胚発生に与える影響. 第 39 回日本分子生物学会年会, 横浜, 2016 年 12 月
安齋政幸, 西村愛美, 野田義博, 東里香, 中川隆生, 小橋朱里, 折杉卓哉, 細井美彦. 体外成熟培地への β-Nicotinamide mononucleotide(β-NMN)添加がマウス卵子内 Sirt1 発現に及ぼす影響.
第 50 回日本実験動物技術者協会総会, 川越, 2016 年 9 月
安齋政幸, 杉本瑞紀, 井上達也, 西村愛美, 野田義博, 東里香, 小橋朱里, 折杉卓哉, 中家雅隆,
中川隆生, 細井美彦. β-NMN 添加体外成熟培地による卵子の体外成熟とその後の胚発生に与える影響. 第 63 回日本実験動物学会総会, 川越, 2016 年 5 月

内科学第二講座

1. Horitani, K., Iwasaki, M., Kishimoto, H., Wada, K. and Shiojima, I. Repetitive postprandial combined
metabolic spikes activates p53 in bone marrow progenitor cells and induce premature aging of bonemarrow. 第 81 回日本循環器学会, 金沢, 2017 年 3 月
2. Horitani, K., Iwasaki, M., Kishimoto, H., Wada, K., Nakano, M. and Shiojima, I. Repetitive
postprandial combined metabolic spikes activates p53 in bone marrow protenitor cells and induce
premature aging of bone marrow. 第 33 回国際心臓研究学会日本部会, 東京, 2016 年 12 月
3. Horitani, K., Iwasaki, M., Kishimoto, H., Wada, K., Nakano, M. and Shiojima, I. Repetitive
postprandial glucose/triglyceride spikes activates p53 in bone marrow progenitor cells and induce
premature aging of bone marrow. 19th International Vascular Biology Meeting, Boston, USA, 2016 年
11 月
4. Shiojima, I. Wnt and cardiovascular ageing. European Society of Cardiology, Roma, Italy, 2016 年 8 月
5. Horitani, K., Iwasaki, M., Kishimoto, H., Nakano, M. and Shiojima, I. Repetitive postprandial
glucose/triglyceride spikes activates p53 in bone marrow progenitor cells and induce premature aging ofbone marrow. American Diabetes Association, New Orleans, USA, 2016 年 6 月
耳鼻咽喉科・頭頸部外科学講座

1.

神田晃, Dan van Bui, 河野由美子, 宇都宮啓太, 坂田喜子, 松本洋平, 小林良樹, 岩井大, 友田
幸一. 新規遺伝子改変マウスと気道過敏性評価法を用いたアレルギー性疾患に対する創薬への挑戦. 新学術説明会, 東京, 2016 年 12 月

21

形成外科学講座

1.
2.

3.

4.
5.

6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.

19.

20.
21.
22.
23.
24.
25.

森本尚樹. 真皮再生方法は未確立である. 第 16 回日本再生医療学会総会, シンポジウム, 仙台,2017 年 3 月
森本尚樹, 神野千鶴, 馬原淳, 光井俊人, 覚道奈津子, 藤里俊哉, 鈴木茂彦, 楠本健司, 山岡哲
二. 細胞残渣を含む不活化自家皮膚と脱細胞化同種皮膚の移植後経過の比較. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
来方远, 覚道奈津子, 森本尚樹, 竹谷茂, 原朋也, 尾川武史, 楠本健司. The effect of platelet richplasma in proliferation of human adipose-derived stem cells. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台,2017 年 3 月
覚道奈津子, 森本尚樹, 尾川武史, 楠本健司. TGF-β がヒト脂肪幹細胞の増殖、遊走、収縮に与える影響. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
尾川武史, 森本尚樹, 馬原淳, 光井俊人, 覚道奈津子, 楠本健司, 山岡哲二. 5 種の細胞に対する高圧処理の影響と不活化メカニズムの解明. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3月
坂本道治, 森本尚樹, 井家益和, 篠原力, 鈴木茂彦. 同種細胞を用いた皮膚組織の再生. 第 16回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
山岡哲二, 馬原淳, 森本尚樹. 高圧処理を利用した脱細胞化／殺細胞化スキャホールドの開発と in vivo 評価. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
神野千鶴, 森本尚樹, 馬原淳, 坂本道治, 荻野秀一, 藤里俊哉, 鈴木茂彦, 山岡哲二. 高圧処理による悪性黒色腫治療にむけた基礎的検討. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
森本尚樹. 皮膚の再利用治療. 第 46 回日本創傷治癒学会, シンポジウム, 東京, 2016 年 12 月
神野千鶴, 森本尚樹, 馬原淳, 坂本道治, 荻野秀一, 藤里俊哉, 鈴木茂彦, 山岡哲治. 高圧処理による悪性黒色腫治療にむけた基礎的検討. 第 46 回日本創傷治癒学会, 東京, 2016 年 12 月
坂本道治, 森本尚樹, 篠原力, 井家益和, 鈴木茂彦. 同種培養表皮の開発～細胞治療を標準治療へ～. 第 46 回日本創傷治癒学会, 東京, 2016 年 2 月
楠本健司. 多血小板血漿(PRP)と種々の臨床応用. 第 22 回千葉県形成外科研究会, 特別講演,
千葉, 2016 年 11 月
楠本健司. 多血小板血漿(PRP)と育毛、その他の臨床領域での応用について. 第 21 回日本臨床毛髪学会学術集会, 学術講習会講演, 横浜, 2016 年 11 月
笹尾卓史, 福田智, 楠本健司. 再生医療等安全性確保法施行後の市中病院における多血小板血漿 PRP を用いた治療について. 第 114 回関西形成外科学会学術集会, 高槻, 2016 年 11 月
森本尚樹. 高圧処理母斑と自家培養表皮を用いた皮膚再生治療. 第 25 回日本形成外科学会基礎学術集会, セミナー講演, 大阪, 2016 年 9 月
覚道奈津子, 森本尚樹, 田中義人, 楠本健司. 脂肪幹細胞を用いた脂肪再生の臨床研究実施に向けた課題と対策. 第 25 回日本形成外科学会基礎学術集会, シンポジウム, 大阪, 2016 年 9 月
来方远, 覚道奈津子, 森本尚樹, 原朋也, 楠本健司. ヒト脂肪幹細胞における多血小板血漿の増殖効果. 第 25 回日本形成外科学会基礎学術集会, 大阪, 2016 年 9 月
日原正勝, 覚道奈津子, 森本尚樹, 原朋也, 来方远, 楠本健司. ヒト線維芽細胞成長因子(bFGF)とゼラチンハイドロゲルシートを用いた皮弁生着延長効果の検討. 第 25 回日本形成外科学会
基礎学術集会, 大阪, 2016 年 9 月
畔熱行, 楠本健司, 森本尚樹, 覚道奈津子, 日原正勝, 光井俊人, 尾川武史, Lai Fangyuan,
Sharon Claudia Notodihardjo, 原朋也. 血管の氷点下非凍結保存後移植. 第 25 回日本形成外科学
会基礎学術集会 大阪, 2016 年 9 月
Kusumoto, K., Fukuda, S., Miyake, Y., Morimoto, N., Kakudo, N., Ogura, T., Hara, T. and Koseki, R.
Platelet-Rich Plasma and the ulcer treatment with various applications. 5th congress of WUWHS2016,
Florence, Italy, 2016 年 9 月
Morimoto, N., Kakudo, N., Koseki, R., Ogura, T., Hara, T. and Kusumoto, K. Easy-to-use preservation
and application of platelet-rich plasma; The combination wound therapy with a gelatin sheet andfreeze-dried platelet-rich plasma. 5th congress of WUWHS2016, Florence, Italy, 2016 年 9 月
Kusumoto, K. Chronic Wonds; Complications Management. Educational Lecture, 5th congress of
WUWHS2016, Florence, Italy, 2016 年 9 月
Kusumoto, K. Platelet-rich plasma and the combination usage at the adipoinjection. Invited Lecture,
The 3rd Chinese Academic Conference on Adipose Plastic Surgery & Symposium on Adipose
Transplantation, Shanghai, China, 2016 年 7 月
楠本健司. 多血小板血漿(PRP)を用いたアンチエイジング. 第 10 回見た目のアンチエイジング
研究会, 講演, 東京, 2016 年 7 月
Sakamoto, M., Morimoto, N., Ogino, S., Jinno, C., Ito, R. and Suzuki, S. Development of Gelatin Gel
22

Sheets Sustaining EGF and bFGF. The 13th Japan-Korea Congress of Plastic and Reconstructive
Surgery, Kanazawa, 2016 年 5 月
26. 森本尚樹. 皮膚の再生医療. 「報道機関向け話題提供の会」, 講演, 第 59 回日本形成外科学会
総会・学術集会, 福岡, 2016 年 4 月
27. 楠本健司. 美容医療における再生医療. 「報道機関向け話題提供の会」, 講演, 第 59 回日本形成外科学会総会・学術集会, 福岡, 2016 年 4 月
28. 森本尚樹, 神野千鶴, 覚道奈津子, 坂本道治, 光井俊人, 畔熱行, 鈴木茂彦, 楠本健司. 高圧処
理母斑皮膚と自家培養表皮を用いた色素性母斑に対する新規皮膚再生治療. 第 59 回日本形成外科学会総会・学術集会, 福岡, 2016 年 4 月
皮膚科学講座1.

Nguyen, CTH., Ueda-Hayakawa, I., Yamazaki, F., Mizuno, K., Kambe, N. and Okamoto, H. Properties
of CD14+CD16+ cells in psoriatic skin lesions. 25th Congress of the European Academy ofDermatology and Venereology, Vienna, Austria, 2016 年 9 月

眼科学講座

1.
2.
3.

盛秀嗣. Development and age-related changes of the elastic lamina of Bruch’s membrane in mice eyes.
ARVO-Asia 2017, Brisbane, Australia, 2017 年 2 月
盛秀嗣. Changes in immunostaining of five elastic fiber components in Bruch’s membrane andlaser-induced choroidal neovascularization in mice. ARVO2017, Seattle, USA, 2016 年 5 月
盛秀嗣. 正常マウスの Bruch 膜弾性板を構成する蛋白質の検討. 第 120 回日本眼科学会, 仙台,2016 年 4 月

物理学教室

1.
2.
3.
4.

Kageshima, M., Maruyama, T., Akama, T. and Nakamura, T. Rheological Study of Cell Sheet andMatrix Sheet with Home-Built Magnetic Indenter. International Conference on Rheology (ICR2016),
京都, 2016 年 8 月
Takemoto, K., Yoshimura, M., Ohigashi, T., Namba, H. and Kihara, H. Application of soft X-ray
microscopy to environmental microbiology of hydrosphere. The 13th International Conference on
X-ray microscopy (XRM2016), Oxford, UK, 2016 年 8 月
影島賢巳, 丸山敏朗, 赤間智也, 中邨智之. 細胞外マトリックスシートの力学物性計測. 第 48
回日本結合組織学会学術大会学術大会, 長崎, 2016 年 6 月
竹本邦子, 吉村真史, 難波秀利, 木原裕. 結像型軟 X 線顕微鏡による Pseudanabaena sp.の細胞内微細構造観察. 日本放射光学会, 千葉, 2016 年 1 月

23

４．特許
がん部門
病理学第一講座

1.

2.

名称：食道上皮幹細胞の単離方法
出願番号：特願 2013-118652
発明者：上野博夫
出願日：平成 25 年(2013 年) 6 月 5 日
名称：舌上皮幹細胞の単離方法
出願番号：特願 2013-118649
発明者：上野博夫
出願日：平成 25 年(2013 年) 6 月 5 日

衛生学講座

1.

2.

名称：間葉系幹細胞の分離方法
出願番号：特願 2013-170480
発明者：薗田精昭、松岡由和、中塚隆介、飯田寛和
出願日：平成 25 年(2013 年) 8 月 20 日
名称：微小幹細胞の分離方法
出願番号：特願 2012-220648
発明者：薗田精昭、中塚隆介、岩城隆二、飯田寛和
出願日：平成 24 年(2012 年) 10 月 2 日
特許：第 6061600 号

公衆衛生学講座

1.

名称：検査キット及び検査方法
出願番号：特願 2016-060798
発明者：関西医科大学、西山利正、神田靖士
出願日：平成 28 年(2016 年) 3 月 24 日

代謝部門
耳鼻咽喉科・頭頸部外科学講座

1.

名称：マウス細胞
出願番号：特願 2016-198365
発明代表者：神田晃

24

Ⅲ．各事業推進者の平成 28 年度研究成果報告

１．神経部門
解剖学第一講座
解剖学第二講座
生理学第一講座
生理学第二講座
医化学講座
神経内科学講座
神経機能部門生物学教室

25

研究成果報告書の概要
講座等名

解剖学第一講座

分担研究課題神経細胞および内分泌細胞のイメージング解析による機能解明

キーワード

髄鞘脂質、グリア細胞、脊髄後根神経節、質量顕微鏡、3 次元電顕講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

山田

久夫

6名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
山田久夫（教授）：研究の取りまとめ
田中進（准教授）：分子生物学的実験・神経内分泌学的実験平原幸恵（講師）：脂質解析と質量顕微鏡観察
大江総一（助教）：培養実験・細胞生物学的実験
小池太郎（助教）：脊髄後根神経節の細胞構築・3 次元顕微観察
滝澤奈恵（大学院生）：副腎皮質に関する実験
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
本講座では、神経系の各細胞や内分泌細胞を対象に、細胞の増殖と分化、機能獲得について、各種イメージング技術を用いて解析を進めている。
≪本年度の成果≫
1） グリア細胞がもつ髄鞘脂質の解明
スフィンゴ糖脂質であるスルファチド類は、髄鞘を形成するオ
リゴデンドロサイトの分化に関わる複合糖脂質であるが、含まれる脂肪酸の種類が様々なので、分化段階や機能状態において分子種を特定する必要がある。一方、オリゴデンドロサイト（図 1）のマーカーとして確立された O4 モノクローナル抗体のエピトー
プは、ミエリン鞘に豊富に含まれる C22 や C24 の脂肪酸を含むス
ルファチドと考えられてきたが、スルファチドの合成が生化学的手法により確認できない幼若期のオリゴデンドロサイトでも、この抗体によって免疫組織化学的陽性となることが、長らくこの分 図 1：成熟オリゴデンドロサイト
野の研究者にとって謎であった。この両者を解決するために質量分析および質量顕微鏡にて分子種を同定した結果、幼若期のオリ
ゴデンドロサイトは C16 や C18 の脂肪酸を含むスルファチドを含有することが明らかとなった（図 2）。また、O4 モノクローナル
抗体は脂肪酸と異なる分子内部位をエピトープとし、脂肪酸の炭素数に影響されることなくスルファチドを認識しているという研図 2：髄鞘脂質分子の観察
究成果副産物も得られた。以上の内容の論文が出版された。
2） 脊髄後根神経節の細胞構築
本年は、脊髄後根神経節の光顕組織化学（図 3）とリンクした電顕 3次元画像取得をおこなうための実験を始めた。とくに走査電顕反射電子画像を array-tomography という連続切片による画像 3 次元化と、それにリンクさせる光顕レベルの組織化学法の手技の改良・開発をおこなった。連続切片採取のための簡便グッズの開発に成功、一般化して使用できるように工夫して、成果公開に向け、論文投稿や学会発表登録をおこなった。

図 3：DRG ニューロンとシュワン細胞

優れた成果があがった点
上記 1）の研究では、本学に設置の高額機器を存分に使いこなした点が大きな成果である。さらに、O4 というモノクローナル抗体のエピトープ（認識物質）に関する長年の疑問を解明し、本抗体をマーカーとして利用する際の決定的な裏付けを、本領域の研究者に提供したことになる。
そのことが認められ、当該論文が掲載された学術雑誌の Editorial Highlight に選ばれた。

26

2）の実験では、組織化学法・光顕レベルの 3 次元所見に、電顕レベルの 3 次元画像をリンクさせながら細胞構築や細胞動態および細胞の性質を解明しているが、この両者をリンクさせるための重要な機器をハンドメイドするための方策を考案した。
問題点
研究経費の制約もあって、抗体等試薬を充分にそろえるのが困難である。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Hirahara, Y., Wakabayashi, T., Mori, T., Koike, T., Yao, I., Tsuda, M., Honke, K., Gotoh, H., Ono, K.
and Yamada, H. Sulfatide species with various fatty acid chains in oligodendrocytes at different
developmental stages determined by imaging mass spectrometry. J. Neurochem. 140, 435-450, 2017.
2. Tanaka, S., Takizawa, N., Honda, Y., Koike, T., Oe, S., Toyoda, H., Kodama, T. and Yamada, H.
Hypocretin/orexin loss changes the hypothalamic immune response. Brain Behav. Immun. 57, 58-67,
2016.
3. Tanaka, S., Honda, Y., Honda, M., Yamada, H., Honda, K. and Kodama, T. Anti-tribbles
pseudokinase 2 (TRIB2)-immunization modulates HYPOCRETIN/OREXIN neuronal functions.
Sleep 40, zsw036, 2016.
4. Takizawa, N., Matsuzaki, T., Yamamoto, T., Mishima, T., Miyasaka, C., Tanaka, S., Kinoshita, H.,
Uemura, Y., Yamada, H. and Matsuda, T. Novel strategy for cystitis glandularis: Oral treatment withcyclooxygenase-2 inhibitor. Int. J. Urol. 23, 706-708, 2016.
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. 平原幸恵, 小池太郎, 高森康晴, 山田久夫. TOF-SIMS 法を用いたマウス成獣脳におけるスルファチドバリアントの局在解析. 第 57 回日本組織細胞化学会総会・学術集会, 東京, 2016 年
9月
2. 小池太郎, 片岡洋祐, 前田光代, 齊藤育, 高森康晴, 山田久夫. 基板吊り下げ型補助具を用いた超薄連続切片回収法. 第 57 回日本組織細胞化学会総会・学術集会, 東京, 2016 年 9 月

27

研究成果報告書の概要
講座等名

解剖学第二講座

分担研究課題

線条体 aspiny interneuron のイメージング研究

キーワード

GAD1、GPR155、nNOS、DARPP32

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

杉本

哲夫

5名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
杉本哲夫（教授）：構想、総括
加瀬政彦（講師）：mRNA 検出
丸山正人（講師）：immunoblotting、イメージング、データ解析
中野洋輔（助教）：mRNA 検出、データ解析
山下雄司（大学院生）：immunostaining、イメージング

研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） 線条体の新たな GABA 性投射ニューロンの同定
ハンチントン病や自閉スペクトラム症に関連することが知られている膜タンパク GPR155 は、線条体に豊富に発現している（図 1）。これまでの本研究で、GPR155 がマウ
ス線条体中型有棘ニューロンに局在することを報告した。
中型有棘ニューロンはマウス線条体において細胞タイプの約 90%を占める。
今 回 、 GPR155 が マ ウ ス 線 条 体 の 無 棘 ニ ュ ー ロ ン(aspiny interneuron) にも発現しているかどうかをめぐって検討を加えた。多重免疫染色に用いるマーカー抗体として、GPR155 抗体に加えて、投射ニューロンのマーカー
図 1：線条体での GPR155 の発現
DARPP32、GABA ニューロンのマーカーGAD1、無棘ニ
ュ ー ロ ン の マ ー カ ー nNOS (Nos1) 、 Neuropeptide Y 、 Tyrosine hydroxylase 、 Parvalbumin 、 Choline
acetyltransferase に対する各抗体を用いた。Alexa 標識二次抗体を組み合わせ、多重蛍光染色を実施したうえで所見を解析した。
結果として GPR155 と DARPP32 の両者が陽性のニューロンが大多数見られた。その一方、少数のニューロンは GPR155 陽性かつ DARPP32 陰性であった。
この結果から GPR155 陽性 aspiny interneuron が存在することが示唆された。これらの interneuron はほ
とんどが GAD1 陽性、nNOS と Neuropeptide Y 陽性と判断された。
優れた成果があがった点
線条体の GPR155 陽性 aspiny interneuron が少数ながら存在することが示された。この細胞タイプの機能と病態に有する意義を今後追究することで、GPR155 の役割、特に nNOS 情報処理との関連について知見が拡大するものと期待される。
問題点
特になし
研究業績
＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Trifonov, S., Yamashita, Y., Kase, M., Maruyama, M. and Sugimoto, T. Overview and assessment of
the histochemical methods and reagents for the detection of -galactosidase activity in transgenic
animals. Anat. Sci. Int. 91, 56-67, 2016. レフェリー有＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）
・発表年月）
1. 山下雄司, トリフォノフ ステファン, 加瀬政彦, 丸山正人, 中野洋輔, 西村拓也, 杉本哲夫.
マウス脳 GPR155 の機能解明へのアプローチ. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月

28

2.

3.

4.

山下雄司, トリフォノフ ステファン, 丸山正人, 加瀬政彦, 中野洋輔, 杉本哲夫. マウス線
条体の GPR155 陽性 interneuron. 第 122 回日本解剖学会総会・全国学術集会, 長崎, 2017 年 3月
加瀬政彦, 山下雄司, 中野洋輔, 丸山正人, 杉本哲夫. 成熟ラット脳における Bcas1 mRNA 発
現細胞の免疫組織化学的および形態的解析. 第 122 回日本解剖学会総会・全国学術集会, 長崎, 2017 年 3 月
山下雄司, トリフォノフ ステファン, 丸山正人, 加瀬政彦, 杉本哲夫. マウス線条体外側部の D1 ニューロンは GPR155 を発現している. 第 121 回日本解剖学会総会・全国学術集会, 郡山, 2016 年 3 月

29

研究成果報告書の概要
講座等名

生理学第一講座

分担研究課題

病因細胞および分子のイメージング

キーワード

イオンチャネル、記憶神経回路、上皮膜輸送、シナプス可塑性講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

松田

博子

5名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
松田博子（教授）：統括
小原圭吾（講師）：記憶神経回路の光遺伝学的解析
林美樹夫（講師）：膜タンパクのイメージング
武藤恵（助教）：シナプス可塑性の電気生理学的解析
Andharia Naaz（大学院生）：病因分子のイメージング
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） コレラ菌副毒素による陰イオンチャネル Ano6 の活性化
コレラは重篤な下痢を引き起こす経口感染症であり、インドでは現在も流行している。その病原性因子にはコレラ菌が産生するコレラ毒素に加え、コレラ菌副毒素が発見されている。コレラ菌副毒素
はコレラ毒素とは異なる機序により、腸管におけるイオン分泌を刺激し、分泌性下痢を引き起こすことが示唆されているが、分子機構は不明のままである。そこで本研究は、コレラ菌副毒素が活性化す
る細胞内情報伝達系および膜タンパク質の解明を目的とした。コレラ菌副毒素は結腸上皮細胞 (Caco-2) の全細胞陰イオ
ン電流を活性化した。またコレラ菌副毒

図 1：コレラ菌副毒素(Ace)によるアノクタミン 6(Ano6)
陰イオンチャネルの活性化

素はアノクタミン 6 (Ano6) を強制発現させた HEK293 細胞の陰イオン電流を活性化した（図 1）。
コレラ菌副毒素は細胞内 Ca 濃度を上昇させなかったが、その情報伝達経路は RhoA（G タンパク質）、ROCK（Rho キナーゼ）および PIP2（ホスファチジルイノシトール 2 リン酸）であった。ア
ノクタミン 6 チャネルタンパク質の N 末端に PIP2 の結合領域を同定した。この情報伝達経路の選択的抑制薬はコレラの新たな予防・治療薬として期待できる。
2） 海馬における抑制性シナプス伝達効率の変化
シナプス可塑性は学習・記憶の基礎課程と考えられるが、抑制性シナプスの可塑性については解明が進んでいない。本研究では幼若海馬標品を用い、GABAA 受
容体作動性の自発抑制性シナプス後電流 (sIPSC) を記録・解析した（図 2）。シナプス前細胞が活性化される条件下では、シナプス後細胞の反復する短時間の脱分
極刺激および持続の長い一回脱分極刺激は sIPSC 頻度を一過性に低下させた。このことから、幼若期の抑制性シナプスの可塑性におけるシナプス前後の協調した
図 2：海馬スライスのシナプス電流の測定

活動の重要性が示唆された。

30

3） K チャネル活性における run-up 機構の解析
細胞の興奮性を維持するため、K チャネルの活性は、合成、分解、細胞内輸送などによって制御されている。タンデムポア型 K チャネル (TREK-1c) を 293T 細胞に発現させ、全細胞電流を記録すると、電流は徐々に増加する (run-up) 。膜タンパク質輸送の阻害薬 (NEM) 、エンドサイト
ーシスの阻害薬 (pitstop2) 、Mtap2 との結合を競合阻害するペプチド、および ezrin 阻害薬による
全細胞電流とチャネルタンパク質の細胞内分布の作用から、TREK-1c チャネルの細胞内輸送と細胞膜への定着がチャネル活性の run-up に寄与することがわかった。
優れた成果があがった点
インド国立コレラ・腸管感染症研究所との共同研究において、コレラ菌副毒素による分泌性下痢の分子機構を世界に先駆けて明らかにすることができた。
問題点特記するほどの問題点はない。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Andharia, N., Joseph, A., Hayashi, M., Okada, M. and Matsuda, H. Involvement of intracellulartransport in TREK-1c current run-up in 293T cells. Channels (Austin), in press, 2017. レフェリー有2. Aoun, J., Hayashi, M., Sheikh, I.A., Sarkar, P., Saha, T., Ghosh, P., Bhowmick, R., Ghosh, D.,
Chatterjee, T., Chakrabarti, P., Chakrabarti, MK. and Hoque, KM. Anoctamin 6 contributes to Cl−
secretion in accessory cholera enterotoxin (Ace)-stimulated diarrhea: an essential role forphosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PIP2) signaling in cholera. J. Biol. Chem. 291, 26816−26836,
2017. レフェリー有3. Hayashi, M. and Matsuda, H. Potassium channels in pancreatic cancer. Med. Res. Arch. 4, 600, 2016.
レフェリー有4. Hayashi, M., Inagaki, A., Novak, I. and Matsuda, H. The adenosine A2B receptor is involved in anion
secretion in human pancreatic duct Capan-1 epithelial cells. Eur. J. Physiol. 468, 1171−1181, 2016.
レフェリー有＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Andharia, N., Joseph, A., Hayashi, M., Okada, M. and Matsuda, H. Involvement of intracellulartransport in TREK-1c current in 293T cells. 第 94 回日本生理学会大会, 浜松, 2017 年 3 月
2. Hayashi, M., Inagaki, A. and Matsuda, H. Functional expression of adenosine A2B receptor inpancreatic duct cells. 第 94 回日本生理学会大会, 浜松, 2017 年 3 月
3. Inagaki, A., Hayashi, M., Andharia, N. and Matsuda, H. Butyrate activates XE991 sensitive potassium
secretion in rat rectal colon. 第 94 回日本生理学会大会, 浜松, 2017 年 3 月

31研究成果報告書の概要
講座等名

生理学第二講座

分担研究課題

霊長類におけるセロトニン・ドパミンによる認知機能の制御

キーワード

事業推進者名中村

加枝

ドパミン、セロトニン、サル、報酬、社会性、背側縫線核、視床下部、大脳基底核線条体、前頭葉講座内の本プロジェクト参加研究者数4名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
中村加枝（教授）：実験の遂行と解析
上田康雅（講師）：実験の遂行と解析
安田正治（講師）：実験の遂行と解析
則武 厚（助教）：実験の遂行と解析
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） ストレスによる行動変化の神経機構の解明
強いストレスの存在下では、ヒトも動物もしばしば不適切な行動を選択してしまうことが報告されている。しかし、背景となる情動特にストレスや負の情動による意思決定機構の変化の神経メカニズムは不明である。
我々は、嫌悪刺激と関連付けられた
視覚刺激を呈示しつつ意思決定を行う
行動課題を開発し、マカクサルに訓練した。この課題では、報酬・音・嫌悪
刺激に関連付けられた 3 つの異なる視覚刺激のうち、2 つ視覚刺激を同時にサルに提示し、どちらか一方を、眼球運動を用いて選択させる。この結果、（報酬・音）の組み合わせに比べて、（報酬・嫌悪刺激）の組み合わせでは有意に報酬を選択する割合が減少した（図 1）。このことは、嫌悪刺激と関連付けられた視覚刺激の選択肢としての存在が、サルにとってはストレスとなり、不適切な行動選択をしたと考えられる。

図 1：ストレス強度の異なる状況下での行動選択

実際に、ストレスの指標となる瞳孔径の大きさは、後者の組み合わせで大きくなる傾向が見られ、サルのストレス強度の有効なバイオマーカーとなることが確認された。さらに、意思決定に重要な役割を担う線条体尾状核のニューロンでは、嫌悪刺激の存在する組み合わせで、正しく報酬を選択する直前に強く反応していたニューロンが、不適切な嫌悪刺激の選択の直前では放電活動が弱まることがされた。このことは、ストレスが強くなるとこのニューロンの放電が弱まり、
不適切な行動の抑制がうまくいかず、不適切な行動の発現につながることが示された。
2） 情動による行動制御の神経メカニズムの解明
さらに、脳内セロトニンがストレス耐性に重要な役割を担うという仮説を検証するため、強度の異なるストレス環境の下で、セロトニンニューロンが多く分布する背側縫線核ニューロンの活32

動も記録し、ストレス強度を反映する放電活動が観察された（図 2）。以上のことから、大脳基底核およびセロトニン調節系がストレス下の行動制御に関与していることが明らかに
なった。

行動

情動

図 2：背側縫線核の情動表現に関わるニューロンの活動記録

意思決定

優れた成果があがった点
行動が背景にある情動によって変化を受ける神経メカニズムを明らかにする際、情動を客観的な指標で評価し、これと関連しつつ神経活動のダイナミックスを関連させる必要がある。ヒトにおける自律神経反応変化の研究は多いが、動物における測定は侵襲的計測と同時に行えるという利点が大きい。本研究ではヒトと体格が近い霊長類を用い、基底核線条体および背側縫線核細胞の発火パターンと、自律神経反応との関連を明らかにできた。本成果は情動による脳活動変化のメカニズムの解明、さらに客観的な情動の指標の確立に貢献できる。
問題点
本実験は神経活動と情動の「関連」は明らかにできたが、「計測された神経活動が情動や行動の変化を実際引き起こしているか」は明らかではない。
今後、該当領域の興奮や抑制という操作によりこの点を明らかにする必要がある。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Wong-Lin, K., Wang, D, Moustafa A., Cohen, J. and Nakamura, K. Toward a multiscale modelingframework for understanding serotonergic function. J. Psychopharmacol. in press, 2017.
2. 中村加枝, 林和子, 中尾和子. 背側縫線核による報酬・嫌悪情報処理. 日本薬理学雑誌, 149,
40-43, 2017.
3. Yamada, H., Inokawa, H., Hori, Y., Pan, X., Matsuzaki, R., Nakamura, K., Samejima, K., Shidara,
M., Kimura, M., Sakagami, M. and Minamimoto, T. Characteristics of fast-spiking neurons in the
striatum of behaving monkeys. Neurosci. Res. 105, 2-18, 2016.
＜図書＞（著者名・出版社・書名・発行年・総ページ数）
1. Balasubraman, P., Chakravarthy, S., Wong-Lin, K., Wang, D., Cohen, J.Y., Nakamura, K. andMoustafa, A.A. Neural circuit models of serotonergic system: From microcircuits to cognition. In A.
Moustafa (Ed.) Computational models of Brain and Behavior. Wiley-Blackwell, in press, 2017.
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Ueda, Y., Yasuda, M. and Nakamura, K. Different population of primate caudate neurons is involved
in decision making under different emotional context. Annual meeting of Society for neuroscience,
San Diego, USA, 2016 年 11 月
2. 上田康雅, 安田正治, 中村加枝. サルの意思決定、自律神経反応および線条体尾状核の情報処理に嫌悪刺激の存在が与える影響. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
3. 安田正治, 中村加枝. 感情が学習に与える影響についての生理学的解析, 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
4. 中村加枝. 背側縫線核による報酬・嫌悪情報処理. 第 89 回日本薬理学会 シンポジウム, 招待講演, 横浜, 2016 年 3 月

33

研究成果報告書の概要
講座等名

医化学講座

分担研究課題

神経障害性疼痛の原因因子の同定と神経再生機構の解明

キーワード

分子イメージング、Begain、Nax、神経再生、Ovol2

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

伊藤

誠二

8名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
伊藤誠二（教授）：統括
松村伸治（講師）：多光子励起顕微鏡を用いる脊髄後角の in vivo 分子イメージング
片野泰代（講師）：プロテオミクスを用いた神経障害性疼痛の制御因子の同定
西田和彦（助教）：脊髄後角から大脳への投射ニューロンの同定
井上明俊（助教）：痒みの作用機序舩津宣雄（助教）：Ovol2 遺伝子の機能解析
Nguyen Huu Tu（特別研究員）：末梢神経再生モデルによる再生機構の解明
Pham Minh Vuong（大学院生）：2 型糖尿病モデルに対する神経再生の治療応用
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
ヒトのヒトたるゆえんは日々学習することであり、記憶・学習の基盤は神経の可塑性にある。
認知症、パーキンソン病をはじめとする神経変性疾患の記憶障害、運動障害は可塑的変化の担い手である神経細胞の欠落に起因する。一方、慢性疼痛は本来一過性である感覚伝達経路の、いわゆる“痛覚の記憶・学習”による可塑的変化に起因する。分子、シナプス、ネットワークでの可塑的変化がヒトの高次脳機能として表出される。神経活動に伴うシナプスの形態変化が二光子励起顕微鏡で捉えることが出来るなど基礎研究が進展する一方、ヒトの高次脳機能は fMRI や PET で解析可能であり、さらにニューラルネットワークはコンピュータのシミュレーションへと発展している。最近のディープラーニングと呼ばれる画期的なアルゴリズムの登場により、人工知能の医療応用への期待が高まっている。
1） 痛みの作用機序の解明
疼痛研究は 1 週間から数ヶ月間もの長期にわたり、分子から疼痛行動まで体系的に研究できる利点があること、侵害情報の中継地である脊髄は、大脳に比べてニューラルネット
ワークの構成成分が限られることから、我々は慢性疼痛、なかでも神経障害性疼痛の脊髄における発症維持機構の解明に焦点を当ててきた。平成 28 年度は、プロテオミクスを用いて 慢 性 疼 痛 に 関 連 す る 新 し い 分 子 Brainenriched guanylate kinase associated protein(BEGAIN) を発見し、遺伝子改変マウスを作製してその行動解析や機能解析を行った（図1）。BEGAIN は記憶に関係する海馬にも豊富に発現する。脊髄は単なる中継地でなく、痛図 1：BEGAIN による脊髄での疼痛調節覚を大脳に伝達する関門の役割をしているが、脊髄から大脳に伝達するニューロン（投射ニューロン）の性質が良くわかっていないことから、投射ニューロンになる神経幹細胞の同定と発生時期の解析を行った。痛みの研究は成熟期にあり、研究成果を社会に還元するために 2017 年 3 月に一般人向けの単行本ブルーバックス『痛覚のふしぎ』を講談社から出版した。
2） 痒みの作用機序の解明
皮膚を軽く掻くと痒みが消えるが、痒みがない時に強く掻くと痛みを引き起こす。このように、
痒みと痛みは密接に関係し、その伝達経路は共通しているが、そのメカニズムはよくわかっていない。グルタミン酸受容体 GluN2B のリン酸化が慢性疼痛に関係することを遺伝子改変マウスを用いてすでに明らかにしているが、急性の痒みにおいても GluN2B のリン酸化が関与していることを遺伝子改変マウスを用いて明らかにした。
34

3） 末梢神経再生における乳酸シャトルの役割
2005 年に 150 年前から今まで治らないとされた疼痛、カウザルギ
ー等の外傷や手術の際に傷つけられた神経によって起こる激烈な痛みが再生工学で治療されたことが初めて報告された。我々は、末梢神経の再生機構を明らかにするために、神経組織に緑色蛍光タンパ
クを特異的に発現するマウスを用いて、坐骨神経切断―再生モデルを確立した。平成 28 年度は、グリアの 1 つ Schwann 細胞からでる神経栄養因子だけでなく、乳酸がエ
図 2：末梢神経再生におけるニューロン・グリアの相互作用
ネルギー源として神経再生に関与すること、乳酸産生にはエンドセリン、Na+チャネル Nax、Na+,K+-ATPase が関与していることをを明らかにした（図 2）。
4） 転写因子 Ovol2 の動物種を超えた生殖細胞形成機能の解明
Movo（ovol2）はショウジョウバエの卵形成に関係する ovo のマウスの相同遺伝子として医化学講座で単離された。マウスでは幹細胞に発現し、Movo 遺伝子欠損マウスは 10 日胚近傍で胎生致死となる。成獣では、主に精巣に発現するが、皮膚の形成にも重要な役割をすることを報告している。ovo 遺伝子は、遺伝子のオン／オフを制御する転写制御タンパク質を産生することから、平成 28 年度
は、筑波大学の小林悟教授と共同研究を行い、ショウジョウバエとマウスには、生殖細胞の形成に関わる共通の遺伝子制御機構が存在すること 図 3：ショウジョウバエとマウスにおける Ovo タンパク質の機能を明らかにした（図 3）。系統的に遠い関係にあるショウジョウバエとマウスに、共通の遺伝子制御機構が見出されたことにより、多くの動物の生殖細胞形成における共通原理が明らかになると期待され、プレスリリースを行った。
優れた成果があがった点
ovo 遺伝子は、遺伝子のオン／オフを制御する転写制御タンパク質を産生することから、今回ショウジョウバエとマウスには、生殖細胞の形成に関わる共通の遺伝子制御機構が存在することが示唆された。ショウジョウバエとマウスに、共通の遺伝子制御機構が見出されたことにより、多くの動物の生殖細胞形成における共通原理が明らかになると期待される。
神経再生には、細胞、増殖因子、場の 3 要素が重要と考えられてきた。ニューロン-グリア間の乳酸シャトルが末梢神経再生を促進するという新しいメカニズムを明らかにした。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Hayashi, M., Shinozuka, Y., Shigenobu, S., Sato, M., Sugimoto, M., Ito, S., Abe, K. and Kobayashi,
S. Conserved role of Ovo in germline development in mouse and Drosophila. Sci. Rep. 7, 40056,
2017. レフェリー有2. Taniguchi, H., Katano, T., Nishida, K., Yao, I., Morimoto, Y., Matsuda, T. and Ito, S. Expression of
hOvol2 in the XY body of human spermatocytes. Andrologia 49, e12599(1-8), 2017. レフェリー有3. Uchida, H., Matsumura, S., Okada, S., Suzuki, T., Minami, T. and Ito, S. RNA editing enzyme
ADAR2 is a mediator of neuropathic pain after peripheral nerve injury. FASEB J. 31, 1847-1855,35

2017. レフェリー有4. Nguyen H.T., Katano, T., Matsumura, S., Pham M.V., Muratani, T., Minami, T. and Ito, S. Role ofc-Jun N-terminal kinase in late nerve regeneration monitored by in vivo imaging of thy1-yellow
fluorescent protein transgenic mice. Eur. J. Neurosci. 43, 548-560, 2016. レフェリー有5. Taniguchi, H., Katano, T., Nishida, K., Kinoshita, H., Matsuda, T. and Ito, S. Elucidation of themechanism of suppressed steroidogenesis during androgen deprivation therapy of prostate cancer
patients using an animal model. Andrology 4, 964-971, 2016. レフェリー有6. Shimma, S., Kumada, H-O., Taniguchi, H., Konno, A., Yao, I., Furuta, K., Matsuda, T. and Ito, S.
Microscopic visualization of testosterone in mouse testis by use of imaging mass spectrometry. Anal.
Bioanal. Chem., 408, 7607-7615, 2016. レフェリー有7. Kawabata, K., Nishimura, I., Fujiwara, T., Terauchi, S., Minami, T., Ito, S. and Okuda-Ashitaka, E.
Intrathecal administration of low-dose Nociceptin/Orphanin FQ induces allodynia via c-Jun
N-terminal kinase and monocyte chemoattractant protein-1. Eur. J. Neurosci. 43, 1499-1508, 2016.
レフェリー有8. Okamoto, K., Ohashi, M., Ohno, K., Takeuchi, A., Matsuoka, E., Fujisato, K., Minami, T., Ito, S. andOkuda-Ashitaka, E. Involvement of NIPSNAP1, a neuropeptide nocistatin-interacting protein, in
inflammatory pain. Mol. Pain 12, (1-11), 2016. レフェリー有9. Inoue, A., Uchida, H., Nakazawa, T., Yamamoto, T. and Ito, S. Phosphorylation of NMDA receptor
GluN2B submit as its Tyr1472 is important for trigeminal processing of itch. Eur. J. Neurosci. 44,
2474-2482, 2016. レフェリー有10. Katano, T., Fukuda, M., Furue, H., Yamazaki, M., Abe, M., Watanabe, M., Nishida, K., Yao, I., Hata,
Y., Okumura, N., Nakazawa, T., Yamamoto, T., Sakimura, K., Takao, Y. and Ito, S. Involvement ofbrain-enriched guanylate kinase-associated protein (BEGAIN) in chronic pain after peripheral nerve
injury. eNeuro 3, e0110-16(1-18), 2016. レフェリー有＜図書＞（著者名・出版社・書名・発行年・総ページ数）
1. 伊藤誠二. 痛覚のふしぎ 脳で感知する痛みのメカニズム, 全 224 頁, 講談社, 2017.
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Nguyen H.T., Katano, T., Matsumura, S., Pham, M.V. and Ito, S. Involvement of Na+/K+-ATPase inperipheral nerve regeneration via lactate signaling in sciatic nerve transection-regeneration model.
The 46th annual meeting of the Society for Neuroscience, San Diego, USA, 2016 年 11 月
2. Okuda-Ashitaka, E., Kawabata, K., Nishimura, I., Fujiwara, T., Terauchi, S., Minami, T. and Ito, S.
Nociceptin/Orphanin FQ-induced allodynia via c-Jun N-terminal kinase and monocyte
chemoattractant protein-1 in the spinal cord. 6th World Congress on Pain, Yokohama, 2016 年 9 月
3. Pham, M.V., Nguyen H.T., Katano, T., Matsumura, S. and Ito, S. Study on the effect of diabetic
neuropathy on peripheral nerve regeneration in mouse model. 6th World Congress on Pain,
Yokohama, 2016 年 9 月
4. 片野泰代, 渡辺雅彦, 崎村建司, 伊藤誠二. 海馬におけるマウス BEGAIN の生化学的解析. 第89 回日本生化学会大会, ポスター発表, 仙台, 2016 年 9 月＜プレスリリース＞
1. Hayashi, M., Shinozuka, Y., Shigenobu, S., Sato, M., Sugimoto, M., Ito, S., Abe, K. and Kobayashi, S.
ショウジョウバエとマウスに共通して生殖細胞の形成に関わる遺伝子を発見 ～動物における生殖細胞形成の共通原理を明らかにする第一歩～
http://www.tsukuba.ac.jp/wp-content/uploads/170110kobayashi-1.pdf

36

研究成果報告書の概要
講座等名

神経内科学講座

分担研究課題パーキンソン病モデルラットを用いた大脳基底核神経回路の可塑性の研究

キーワード

Parkinson 病、6-OHDA model Rat、Real time RT-PCR

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名日下

博文

6名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
日下博文（教授）：研究を統括する。
金子鋭（准教授）：研究計画の立案や結果の解析、論文執筆を行う。
和手麗香（講師）：分担研究者として研究課題全般に取り組む。
中村正孝（講師）：分担研究者として研究課題全般に取り組む。
隠岐光彬（助教）：研究を遂行し、データの解析を行う。
森勢諭（大学院生）：研究を遂行し、データの解析を行う。
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） 動物モデルを用いた大脳基底核神経回路の解析
背景と目的
Parkinson disease (PD) は黒質緻密部ドパミン性神経細胞の脱落を特徴とする進行性の神経変性疾患である。病初期にはドパミン補充療法が有効であるが、進行に伴い wearing
off や dyskinesia といった運動合併症および全体的な薬効の低下が起こり治療に難渋する。これらはドパミン神経の脱落による大脳基底核での presynaptic な変化だけでは説明出来ず、postsynaptic あるいは extrasynaptic な変化も伴ってい 図 1：パーキンソン病モデルラットの脳ると考えられる。近年、大脳基底核回路に関する非ドパミン系伝達物質の関与が言われており、それらに対する PD 治療の応用が期待されている。本研究は PD モデルラット（図 1）、およびレボ ド パ 誘 発性 ジ ス キ ネジ ア (LID) モ デ ル ラ ット を 用 い てド パ ミ ン 神経 の 脱 落 後に 生 じ る
postsynaptic や extrasynaptic、さらにはネットワークレベルでの変化を解明し、PD の進行に伴って薬効が減弱していく機序や、進行期に LID が発症する病態生理を明らかにする。さらに新たな作用機序を有する抗パーキンソン病薬である zonisamide (ZNS) を投与することによる各種受容体遺伝子の発現変化を明らかにし、新たな治療戦略を見いだすことを目的とする。
材料と方法
SD rat 雌 体重 220～250g の片側 medial forebrain bundle に、6- Hydroxydopamine hydrobromide(6-OHDA) を施注し一側性の PD モデルラットを作成した。この PD モデルラットに対して、①無治療、②持続的レボドパ投与、③間欠的レボドパ投与、④間欠レボドパ＋ZNS 投与の処置を行い、二週間後のジスキネジアをスコア化して評価した。また①～④の処置を行ったラットの凍結線条
体組織において real time RT-PCR 法によりドパミン D1・D2 受容体 (drd 1・2)、adenosine A2A 受
容体、mGluR5 受容体、CB1 受容体や proenkephalin、prodynorphin などの mRNA 量を定量し術側と健側とで比較した。
結果および考察ID は②④では発症せず③では発症した。ドパミン受容体発現量は①では変化は無かったが、②では D2 受容体のみ術側で増加し、③④では D1、D2 受容体ともに増加した。A2A 受容体発現量は③のみ増加し、④では変化がみられなかった。CB1 受容体発現量は①②③で増加していたが、④では変化がなかった。
レボドパ間欠投与によって LID が誘導され、線条体での直接路の D1 受容体および間接路の A2A

37

受容体の増加が関連している。Zonisamide はレボドパ間欠投与で誘導されるジスキネジアの発症を抑制し、間接路での A2A 受容体および線条体での CB1 受容体発現の変化も抑制した。
優れた成果があがった点

1. 凍結脳組織における mRNA 発現量の局所的かつ定量的な解析方法を確立した。
2. LID 発症の背景に A2A 受容体 mRNA の増加が確認された。
3. ZNS はレボドパ間欠投与で誘導されるジスキネジア発症を抑制し、A2A および CB1 受容体の発現量の変化も抑制した。
問題点
A2A 受容体 mRNA の増加が LID 発症の原因なのか、LID 発症に対する代償的変化なのかを解明する。
このモデル系を用いて LID 発症抑制につながる治療薬を検索する。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）

1.

Oki, M., Kaneko, S., Morise, S., Takenouchi, N., Hashizume, T., Tsuge, A., Nakamura, M., Wate, R.
and Kusaka, H. Zonisamide ameliorates levodopa-induced dyskinesia and reduces expression of
striatal genes in Parkinson model rats. Neurosci. Res. in press, 2017. 査読有2.

Oki, M., Hori, S., Asayama, S., Wate, R., Kaneko, S. and Kusaka, H. Early-onset Parkinson’s diseaseassociated with chromosome 22q11.2 deletion syndrome. Intern. Med. 55, 303-305, 2016. 査読有

3.

金子鋭. Disease modifying therapyの実現は可能か?（基礎編）「No」の立場から. Fronti. Parkinson
Dis. 9, 22-24, 2016. 査読無＜図書＞（著者名・出版社・書名・発行年・総ページ数）

1.

金子鋭. 第 4 章 パーキンソン病の経過, パーキンソン病の療養の手引き（全 112 頁）, 43-47,
2016. 「厚生労働科学研究費補助金（難治性疾患政策研究事業）神経変性疾患領域における調査研究班」(http://plaza.umin.ac.jp/~neuro2/)＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1.

Oki, M., Kaneko, S., Morise, S., Nakamura, M., Wate, R., Takenouchi, N. and Kusaka, H. Expressionof mRNA for adenosine A2A receptor in rat model of levodopa-induced dyskinesia. 第 57 回日本神経学会学術大会, 神戸, 2016 年 5 月

38

研究成果報告書の概要
講座等名神経機能部門

分担研究課題嗅覚刺激による先天的な恐怖情動の誘発を担う受容体分子の解明

キーワード

恐怖、先天的、受容体遺伝子、フォワードジェネティクススクリーニング

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名小早川 令子5名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
小早川令子（学長特命教授）
小早川高（学長特命准教授）
松尾朋彦（研究員）
土井昭宏（研究員）
伊早坂（山中）智子（研究員）
が本プロジェクトに必要な分子生物学、免疫組織化学、イメージング、行動学の実験を共同で実施した。
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
脳は感覚刺激の意味を判断して適切な情動や行動を誘発する。適切な情動判断は行動の動機づけに必須であるが、異常な情動判断は生存に適さない不適切行動を選択したり、精神疾患を発症させたりする原因となりうる。
恐怖は正常な行動や精神疾患の発症や症状に多大な影響を与える強力な情動で、先天的と後天的なメカニズム
で制御される。私たちは、独
図 1：嗅覚刺激による先天的と後天的な恐怖行動の統合制御
自に確立した嗅覚刺激による先天的と後天的な恐怖情動の統合処理モデルを用いて、感覚神経や脳の中枢部において先天的と後天的な恐怖情報が統合処理される過程（図 1）を解明することを目的とした研究を実施してきた。
私たちが開発した極めて強力な先天的恐怖情動を誘発する匂い分子である「チアゾリン類恐怖
臭 (thiazoline-related fear odors: tFOs)」を感知して、恐怖行動やそれに伴う生理応答を誘発する分子は未解明であった。そこで、本研究では tFOs を感知して恐怖応答を誘発する受容体遺伝子を同定することを目指した研究を実施した。
1） 先天的と後天的な情報の統合処理メカニズムの研究
匂い分子は嗅覚受容体遺伝子により感知され行動を誘発すると考えられている。マウスのゲノ
ムには 1000 種類以上の嗅覚受容体遺伝子が存在する。一般に、一種類の匂い分子はこれらの中か
ら数十種類以上の受容体を活性化する性質がある。従って、匂い分子に対する応答を制御する単一の受容体を同定することは困難であり、これまで特定の匂い行動の制御に関与することが解明された単一の受容体遺伝子は殆ど存在しない。私たちは、恐怖行動を誘発する複数の tFOs と、tFOsと類似した化学構造を持つが恐怖行動を誘発しない複数のコントロール匂い分子を対象として、
全マウス嗅覚受容体機能発現スクリーニングを実施することで、tFOs に対する恐怖行動の制御に関与する嗅覚受容体遺伝子の探索を実施した。このスクリーニングで同定した候補嗅覚受容体遺伝子の機能をノックアウトマウスを用いて解析した。その結果、複数種類の嗅覚受容体が tFOs に対する恐怖応答の制御に関与することを発見した。
2） 先天的恐怖の誘発技術を活用した創薬や技術研究
一方で、私たちは米国テキサス大などとの共同研究で、フォワードジェネティクススクリーニ
ングによる tFOs に対する受容体遺伝子の探索も併せて実施した。tFOs は個体差なく強力な39

Freezing 行動を誘発できる活性を持つので、一匹の変異動物しか得られないフォワードジェネティクススクリーニングにも適応ができる。ENU 変異動物に対する全エキソンシークエンス、掛け合わせによるホモ変異動物の作出などの過程を経て、1 万匹以上の変異動物の tFOs に対する行動を解析した結果、tFOs が誘発する恐怖行動を強力に制御する単一の受容体遺伝子候補 (tFO-R1)を同定することに初めて成功した。さらに、ここで同定された受容体遺伝子のノックアウトマウ
スを用いて機能を検証した。続いて、tFO-R1 が脳へ情報を伝達する経路を全脳活性化マッピング法を用いて解明した。また、自由行動条件での tFO-R1 の tFOs による活性化を解析するために、
tFO-R1-Cre ノックインマウスを作成した。
tFOs は Freezing などの恐怖行動のみならず、低体温や低心拍などの生理応答を誘発するが、tFO-R1 ノックアウトマウスでは、これらの生理応答も大幅に低下することが判明した。以上の結果から、tFOs は複数の受容体を介して先天的な恐怖行動と生理応答の誘発を引き起こす情報を脳へ伝達しているが、これらの中で tFO-R1 の寄与率が最も高いことが明らかになった（論文投稿中）。
優れた成果があがった点
恐怖は正常な行動のみならず、精神疾患の発症や症状にも影響を与える強力な情動である。しかし、恐怖情動の誘発に関与する分子メカニズムの解明は殆ど進んでいない。このような背景で、先天的恐怖情動を誘発する単一の受容体遺伝子の同定に成功したことは、今後の研究を大きく進める突破口となる。
問題点
私たちは、tFOs は低体温や低代謝を伴う保護モードへと全身の細胞の状態を遷移させ、低酸素や虚血再灌流障害への抵抗性を与えることを解明している。tFO-R1 はこの細胞保護モードの発動に対して重要な役割を果たすが、tFO-R1 以外の受容体の寄与も大きいことが判明している。この
未知の受容体を同定し、tFOs が誘発する恐怖行動、生理応答、細胞状態の遷移を制御する受容体の全貌を解明する必要がある。
研究業績＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. 山中智子. 扁桃体中心核セロトニン 2A 受容体による先天的と後天的な恐怖の階層性制御. 第
94 回日本生理学会大会, 浜松, 2017 年 3 月
2. Kobayakawa, K. Htr2a-expressing cells in the central amygdala control the hierarchy between innate
and learned fear. Wiring and Functional Principles of Neural Circuit. San Diego, USA, 2016 年 11 月
3. 小早川高. 匂いが誘発する恐怖行動と生理応答. 第 10 回メタボロームシンポジウム, 鶴岡,
2016 年 10 月
4. 小早川高. 先天的と後天的な恐怖情報の統合と行動制御メカニズム. 生理研研究会『神経回路研究と精神疾患研究の連合による情動機構解明』, 岡崎, 2016 年 10 月 17-18 日
5. 小早川高. 先天的と後天的な情動の統合処理メカニズム. 第 9 回 Symphony, 東京, 2016 年 9月
6. 小早川高. 嗅覚刺激が誘発する恐怖行動と自律神経応答. 耳鼻科ニューロサイエンス研究会,
大阪, 2016 年 8 月
7. Kobayakawa, R. Htr2a-Expressing Cells in the Central Amygdala Control the Hierarchy between
Innate and Learned Fear. 17th International Symposium Olfaction and Taste (ISOT 2016), Yokohama,2016 年 6 月
8. Matsuo, T. Main olfactory system-mediated social behaviors in mice. 17th International Symposium
Olfaction and Taste (ISOT 2016), Yokohama, 2016 年 6 月

40

研究成果報告書の概要
講座等名

生物学教室

分担研究課題自閉症関連遺伝子プロトカドヘリンの発現と局在

キーワード

プロトカドヘリン、カドヘリン、自閉症講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

平野伸二

4名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
平野伸二（教授）：組織化学、行動解析
佐藤泰史（助教）：組織化学的解析
岡野圭子（講師）：解析協力
林崎俊伍（学部生：研究医養成コース）：組織化学的解析
共同研究…病理学第二講座、理化学研究所、東京医科歯科大学、米国アイオワ大学等
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） 神経系における細胞接着分子プロトカドヘリン 9（図 1）の研究
まず、内耳におけるプロトカドヘリン 9 の局在を調べたところ、平衡斑の有毛細胞と内耳神経の接着部位に局在していることがわかった。また、理化学研究所永雄総一博士と共同研究を行い動眼反射を調べてみると、視機性眼球反応に異常があることも分かった。
さらに、プロトカドヘリン 9 のノックアウトマウスの行動解析を理
化学研究所若菜成晴博士と共同研究を行い、このマウスが情動系の行動に異常があることがわかった。一方、一般組織学的な解析では異常が見られなかったことから、この分子が神経系で何らかの機能を担っていることが推測された。
2） 神経系における細胞接着分子プロトカドヘリン 1 の研究
図 1：後根神経節における
また、プロトカドヘリン 1 の発現を lacZ 遺伝子のノックインマ
プロトカドヘリン 9 の発現ウスを用いて調べた。その結果、海馬などに強い発現が見られた。
また、大脳皮質や扁桃体においても発現が見られた。また、理化学研究所若菜成晴博士と共同研究を行い、プロトカドヘリン 1 のノックアウトマウスの行動解析を行ったところ、社会性行動が上昇していることが分かった。
3） 神経系における細胞接着分子プロトカドヘリン 3 の研究
プロトカドヘリン 10 の小脳における線状の区画形成について、共同研究者の東京医科歯科大学の杉原泉博士のグループが中心となって行い、プルキンエ細胞の配置が区画形成と密接に関わっていることが明らかになった。
優れた成果があがった点
内耳の平衡斑の有毛細胞でプロトカドヘリン 9 が局在していることが明らかになった。また、プロトカドヘリン 9 ノックアウトマウスで、行動異常が観察され、この分子が情動系の行動にかかわっていることが明らかになった。
問題点
プロトカドヘリン 9 が成体では発現しなくなり、行動異常の細胞レベルでのメカニズムの解明が今後の課題である。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Schoch, H., Kreibich, A.S., Ferri, S.L., White, R.S., Bohorquez, D., Banerjee, A., Port, R.G., Dow,
H.C., Cordero, L., Pallathra, A.A., Kim, H., Li, H., Bilker, W.B., Hirano, S., Schultz, R.T.,
Borgmann-Winter, K., Hahn, C.G., Feldmeyer, D., Carlson, G.C., Abel, T. and Brodkin, E.S.
Sociability Deficits and Altered Amygdala Circuits in Mice Lacking Pcdh10, an Autism Associated41Gene. Biol. Psychiatry 81, 193-202, 2017. レフェリー有＜図書＞（著者名・出版社・書名・発行年・総ページ数）
1. Suzuki, S.T. and Hirano, S. Chapter 1:Introduction. "The Cadherin Superfamily - Key Regulators of
Animal Development and Physiology" (Suzuki, S.T. and Hirano, S. Eds.), 3-11, Springer, 2016.（部分執筆）
2. Imai-Okano, K. and Hirano, S. Chapter 11:Various atypical CAdherins: T-cadherin, RET, Calsyntenin,
and 7D-cadherin. "The Cadherin Superfamily - Key Regulators of Animal Development andPhysiology" (Suzuki, S.T. and Hirano, S. Eds.), 277-311, Springer, 2016.（部分執筆）
3. Hirano, S., and Imai-Okano, K. Chapter 15:Cadherin-related diseases. "The Cadherin Superfamily Key Regulators of Animal Development and Physiology" (Suzuki, S.T. and Hirano, S. Eds.), 399-421,
Springer, 2016.（部分執筆）＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Vibulyaseck, S., Sarpong, G.A., Fujita, H., Hirano, S. and Sugihara, I. Early development of thelongitudinal striped compartments in the prenatal mouse cerebellum studied with three-dimensional
mapping of protocadherin 10 expression. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
2. Sarpong, G.A., Fujita, H., Vibulyaseck, S., Furuichi, T., Hirano, S. and Sugihara, I. Comparison of
expression patterns of different marker molecules of the cerebellar longitudinal striped compartmentsin the mouse. 第 39 回日本神経科学大会, 横浜, 2016 年 7 月
3. Oishi, K., Nakagawa, N., Tachikawa, K., Sasaki, S., Aramaki, M., Hirano, S., Yamamoto, N.,
Yoshimura, Y. and Nakajima, K. Identity of neocortical layer 4 neurons is specified through correct
positioning into the cerebral cortex. (poster) 21st Biennial Meeting of the International Society for
Developmental Neuroscience (ISDN2016), Palais des Congrès d’Antibes Juan les Pins, Antibes-Juanles Pins, France, 2016 年 5 月

42２．がん部門
病理学第一講座
微生物学講座衛生学講座
公衆衛生学講座
分子遺伝学部門
生体情報部門
内科学第一講座
内科学第三講座
外科学講座
腎泌尿器外科学講座
病態検査学講座

43

研究成果報告書の概要
講座等名病理学第一講座

分担研究課題多色細胞系譜追跡法を用いた幹細胞の維持機構の解析

キーワード

幹細胞、発生、再生講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

上野

博夫

11 名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
上野博夫（教授）：研究の総括
熊野恵城（准教授）：幹細胞の単離と遺伝子発現解析
比舎弘子（講師）：幹細胞の培養
吉田真子（講師）：遺伝子改変マウスの作製
厚海奈穂（助教）：ターゲティングベクターの構築
田中敏弘（博士研究員）：成体幹細胞の解析
大町太一・大杉治之・中村尚広・石垣和彦（大学院生）：成体幹細胞の解析
田中聖道（大学院生）：がん幹細胞の解析
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
本プロジェクトでは主に新しい細胞系譜追跡法のコンストラクト作製を行った（図 1）。細胞系譜追跡法は単細胞レベルで生体外に単離して移植する等の研究手法が使えない成体幹細胞にとって非常に強力かつ有用な研究手法である。
しかしながら、現在一般的に行われている方法では、レポーター分
子が 1 種類であるために、研究対
象組織の幹細胞に非常に特異的なマーカーがあれば有用であるが、そうでない場合には限られた情報
しか得ることができなかった。
図 1：2 段階細胞系譜追跡法のコンストラクト
一方フローサイトメトリーを用いた成体幹細胞単離においては、複数の幹細胞マーカーを組み合わせる事で単離する幹細胞の純度を上げることが一般的になっている。今回の研究プロジェクトでは複数の幹細胞マーカーを組み合わせることで細胞を標識する細胞系譜追跡法の新手法の開発に取り組んだ。
優れた成果があがった点
既に上記 2 段階細胞系譜追跡法のコンストラクトを完成し個体化に取り組んでいる。今後作製したマウスの解析を通じて新しい手法の有用性を証明していく。
問題点
特になし。

研究業績
＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Yan, KS., Janda, CY., Chang, J. Zheng, GXY., Larkin, KA., Luca, VC., Chia, LA., Mah, AT., Han, A.
Terry, JM., Ootani, A., Roelf, K., Lee, M., Yuan, J., Li, X., Bolen, CR., Wilhelmy, J., Davies, PS.
Ueno, H., von Furstenberg, RJ., Belgrader, P., Ziraldo, SB., Ordonez, H., Henning, SJ., Wong, MH.,
Snyder, MP., Weissman, IL., Hsueh, AJ., Mikkelsen, TS., Garcia, KC. and Kuo CJ. Non-equivalence
44

2.
3.

4.

5.
6.

of Wnt and R-spondin ligands during Lgr5+ intestinal stem cell self-renewal. Nature 545, 238-242,
2017.
Xu, J., Ueno, H., Xu, C., Chen, B., Weissman, I. and Xu, P-X. Identification of mouse cochlear
progenitors that develop hair and supporting cells in the organ of Corti. Nat. Commun. 8, 15046, 2017.
Yanai, H., Atsumi, N., Tanaka, T., Nakamura, N., Komai, Y. Omachi, T., Tanaka, K., Ishigaki, K.,
Saiga, K. Ohsugi, H., Tokuyama, Y., Imahashi, Y., Ohe, S., Hisha, H., Yoshida, N., Kumano, K., Kon,
M. and Ueno, H. Intestinal cancer stem cells marked by Bmi1 or Lgr5 expression contribute to tumor
propagation via clonal expansion. Sci. Rep. 7, 41838, 2017.
Tanaka, T., Atsumi, N., Nakamura, N., Yanai, H., Komai, Y., Omachi, T., Tanaka, K., Ishigaki, K.,
Saiga, K., Ohsugi, H., Tokuyama, Y., Imahashi, Y., Hisha, H., Yoshida, N., Kumano, K., Okazaki, K.
and Ueno, H. Bmi1-positive cells in the lingual epithelium could serve as cancer stem cells in tongue
cancer. Sci. Rep. 6, 39386, 2016.
Ueno, H. Identification of normal and neoplastic stem cells by the multicolor lineage tracing method.
Pathol. Int. 66, 423-430, 2016.
Hisha, H., Tanaka, T. and Ueno H. Lingual Epithelial Stem Cells and Organoid Culture of Them. Int.
J. Mol. Sci. 17, 168, 2016.

＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. 上野博夫. 多色細胞系譜追跡法による幹細胞、癌研究. 第 33 回日本毒性病理学会総会および学術集会, 大阪, 2017 年 1 月
2. 上野博夫. 多色細胞系譜追跡法による幹細胞・発生研究. 第 75 回日本癌学会学術総会, 横浜,
2016 年 10 月
3. Ueno, H. Organoids of tongue and esophagus, Organoids: Modelling Organ Development and Diseasein 3D Culture, EMBO | EMBL Symposia 2016, Heidelberg, Germany, 2016 年 10 月
4. 上野博夫. 多色系譜追跡法による成体幹細胞の同定と解析. 第 25 回日本形成外科学会, 大阪,
2016 年 9 月＜特許申請・取得状況＞
1. 名称：食道上皮幹細胞の単離方法
出願番号：特願 2013-118652
発明者：上野博夫
出願日：平成 25 年(2013 年) 6 月 5 日
2. 名称：舌上皮幹細胞の単離方法
出願番号：特願 2013-118649
発明者：上野博夫
出願日：平成 25 年(2013 年) 6 月 5 日

45

研究成果報告書の概要
講座等名

微生物学講座分担研究課題ATL 発症機構の解明・予防法・治療法の開発

キーワード

HTLV-1、ATL、NOG-SCID、ヒト化マウス

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

藤澤

順一

7名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
藤澤順一（教授）：研究の統括
竹之内徳博（准教授）：統計解析
田中正和（助教）：抗 Tax ワクチンの解析
上野孝治（助教）：ウイルス遺伝子の機能解析
Ancy Joseph（特別研究員）：ウイルス遺伝子の in vivo 機能解析
姚 錦春（大学院生）：宿主遺伝子の発現解析
任 翊華（大学院生）：ウイルス遺伝子の発現制御
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） HTLV-1 感染ヒト化マウスによる ATL 様病態の再現
我々はこれまでに、ヒト臍帯血由来造血幹細胞のNOG-SCID マウス
への骨髄内骨髄移植で作製したヒト化マウスの腹腔内に HTLV-1 産生細胞株を移入し、マウス個体内のヒトT 細胞に HTLV-1
を感染させること
図 1：HTLV-1 感染ヒト化マウスを用いた ATL 発症過程の解析
で ATL 様病態を再現することに成功した（図 1）。
個体レベルでの HTLV-1 感染におけるウイルスの調節遺伝子やアクセサリー遺伝子の役割を明らかにする目的で、変異を導入した HTLV-1 プロウイルス DNA を 293HEK 細胞に一過的に導入し、産生されたウイルスを感染させることで、単一のウイルスクローンが感染した Jurkat ヒト T細胞株を作成する系を確立した。野生株 HTLV-1 を感染させた Jurkat 細胞株 (JEX22) は、通常の培養状態ではウイルス産生は見られなかったが、PMA/Ca2+ ionophore 刺激で感染性ウイルスの産生が観察された。同細胞をヒト化マウス腹腔内へ投与すると、感染 4 週以内に末梢血感染細胞の急激な増加を伴い白血病死する個体群と感染 4 週以上生存する個体群に分かれた。そこで、それぞれから脾臓細胞を採取し、ウイルス感染率で補正した感染細胞あたりの HTLV-1 の発がん遺伝
子 Tax の遺伝子発現を解析したところ、感染 4 週以内の感染細胞では、感染 4 週以降の細胞と比較して、高い発現が観察された。
2） ATL 発症予防薬の開発
一方、Tax ペプチドワクチンを投与したヒト化マウスに HTLV-1 を感染したところ、抗 Tax 細胞
障害性 T 細胞の発現誘導とともに感染細胞の白血病様増殖の抑制が観察されたことから、感染初期において Tax を高発現する感染細胞群は抗 Tax 細胞障害性 T 細胞を主体とする宿主免疫応答により除外され、感染後期には Tax 低発現細胞が生き残った可能性が示唆された。
次に HTLV-1 による ATL 発症への関与が示唆されるアクセサリー遺伝子 hbz に変異を持つ
HTLV-1 クローンを感染した Jurkat 細胞株(JEC-TTG)を作成したところ、培養状態では PMA/Ca2+46

ionophore 刺激で感染性ウイルスを産生するものの、ヒト化マウスへの投与では低い感染効率しか得られなかった。
以上の結果は、個体レベルでの ATL 発症制御において抗 TaxCTL が主要な役割を果たしていることを強く示唆しており、感染細胞内でのウイルスおよび宿主遺伝子の発現と宿主免疫系との相互作用の変化が ATL 発症の転機となる可能性が考えられた。
優れた成果があがった点
Tax ペプチドワクチンの投与によりヒト化マウスにおいて抗 TaxCTL が誘導され、その結果、
HTLV-1 感染および HTLV-1 感染細胞の増殖が抑制された可能性が強く示唆された。今後、感染個体への追加投与の効果等、発症予防ワクチンの開発に興味が持たれる。また、ペプチドワクチンの鼻腔投与でも皮下と同等の効果が確認されたことから、ウイルスエンベロープ蛋白等、他の感染予防ワクチン候補探索への応用が期待される。
問題点
ワクチン投与群においては感染細胞の増殖が遅延したが、感染細胞数が低レベルでの状態でのマウスの死亡が確認され、その際、血清中の IL-6 の発現が上昇していた。この事実はマクロファージ・樹状細胞等の過剰な反応を想像させることから、今後、HTLV-1 感染細胞の増殖制御およびワクチン開発において、アジュバントを中心とした自然免疫の活性化制御が課題であると考えられる。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Miwa, M., Ida, C., Yamashita, S., Tanaka, M. and Fujisawa, J. Poly(ADP-ribose). Structure,
Physicochemical Properties and Quantification in vivo, with special reference to poly(ADP-ribose)binding protein modules. Curr. Protein Pept. Sci. 17, 683-692, 2016. レフェリー有＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Joseph, A., Ueno, T., Ren, Y., Yao, J., Lee, S., Tanaka, M. and Fujisawa, J. Both HBZ Protein andmRNA are Required for Leukemic Growth of HTLV-l-infected T-cells in Humanized Mouse Model.
18th International Conference on Human Retrovirology, Tokyo, 2017 年 3 月
2. Tanaka, M. Ren, Y., Yao, J., Lee, S., Takenouchi, N. and Fujisawa, J. Effect of Adjuvant in the Tax
Vaccination of Humanized Mouse to Prevent HTLV-l Infection. 18th International Conference on
Human Retrovirology, Tokyo, 2017 年 3 月
3. Joseph, A., Ueno, T. and Fujisawa, J. Establishment of HTLV-1–infected Jurkat cell lines with mutated
Tax and HBZ genes. 第 3 回日本 HTLV-1 学会学術集会, 鹿児島, 2016 年 8 月
4. 任 翊華, 田中正和, 姚 錦春, 李 成一, 藤澤順一. ATL 発症過程における感染細胞内 Tax 遺伝
子発現の変動. 第 3 回日本 HTLV-1 学会学術集会, 鹿児島, 2016 年 8 月
5. 田中正和, 任 翊華, 竹之内徳博, 姚 錦春, 李 成一, 藤澤順一. HTLV-1 感染ヒ卜化マウスを用いた感染予防ワクチンにおけるアジュバント効果の検討. 第 3 回日本 HTLV-1 学会学術集会, 鹿児島, 2016 年 8 月

47

研究成果報告書の概要
講座等名

衛生学講座

分担研究課題ES 細胞様組織幹細胞の同定と分化経路の解明：細胞移植・再生医療への応用

キーワード

組織幹細胞（間葉系幹細胞、造血幹細胞）、VSEL、ES 細胞、再生医療講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

薗田

精昭

6名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
薗田精昭（教授）：研究全般の指導、及び統括
藤岡龍哉（准教授）、松岡由和・中塚隆介（助教）：実験計画の立案、指導、及び実施
河村孟・角出啓輔（大学院生）：実験の実施
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） マウス骨質由来微小（幹）細胞の同定とその細胞特性の解明
平成 25 年度～27 年度の研究成果報告書に記載したように、B6 マウス脛骨より、既報の very small
embryonic-like stem cell (VSEL) と同様の表面免疫特性 (Lin-CD45-Sca-1+) を示す bone-derived
VSEL (BD VSEL) を効率的に FACS で分取する方法を開発・確立した。本細胞は、小型（直径 6m程度）で核比の高い細胞であった。表面抗原解析および遺伝子発現解析の結果、BD VSEL は既知の組織幹細胞（間葉系幹細胞、造血幹細胞）や ES 細胞とは異なる細胞特性を示し、多能性幹細胞マーカー（Oct4、Nanog など）を発現していなかった。機能解析の結果、in vitro 培養系で血球系細胞（中胚葉）への分化能を示した。また、in vivo 移植実験において、肝細胞（内胚葉）への分化転換が示唆された。しかし、BD VSEL が三胚葉に分化可能な組織幹/前駆細胞である可能性についてはさらなる検討が必要と考えられた (Stem Cells Dev 25:27-42,2016)。
2） ヒト骨質由来微小（幹）細胞の同定とその細胞特性の解明
ヒト骨質を材料として、マウス BD VSEL の counterpart と考えられる微小幹細胞 (humanbone-derived VSEL, hBD VSEL) を効率的に分離する方法を開発した。
大腿骨の人工骨頭置換術の際に切除された大腿骨骨端部の骨皮質ブロック（1～2cm 角）の提供を受けた（関医倫第 1114-1 号承認）。骨皮質ブロックを collagenase-Dispase 液で分散し、骨皮質細胞浮遊液を得た。得られた細胞を、Lineage マーカー抗体、CD45 抗体、CD34 抗体、7AAD、及びAnnexinV を用いて免疫染色し、FACS を用いて直径 4～10μm で、7ADD、AnnexinV、Lineage、及び CD45 陰性であり、且つ CD34 陽性である細胞（Lin-CD45-CD34+細胞）を微小幹細胞 (hBD VSEL)として分離した。hBD VSEL は、CD49f、CD90、CD105、CD271 が陽性であったが、N-cadherin、
KDR(Flk-1) 、CD133、CXCR4、Tie2、Tra-1-60、Tra-1-81 などは陰性であった。現在、in vitro, in vivo
において、ヒト骨質由来 hBD VSEL の機能解析を行っており、興味ある結果を得ている（投稿準備中）。
3） ヒト骨髄由来間葉系幹細胞の樹立とその機能解析
平成 25 年度～27 年度の研究成果報告書に記載したように、本研究では、ヒト骨髄ニッチ細胞（間葉系幹細胞、MSC）の予期的分離と、その造血幹細胞 (HSC) 支持機構の解明（図 1、2）を行った。はじめにヒト骨髄 CD45-Lin-CD271+/-SSEA-4+/- 分画より FACS にて細胞を分取し、

図 1：ヒト造血幹細胞の分化パターン

図 2：支持因子によるヒト造血幹細胞の体外増殖48

CD271-SSEA-4+ 分画を除く 3 分画より、10 代以上継代可能な MSC を樹立した。その結果、
CD271+SSEA-4+ 分画より樹立した MSC (DP MSC) が、最も高い CD34- 造血幹細胞 (HSC) 支持能を示した。今回の検討の結果、DP MSC はヒト骨髄ニッチにおいてヒト HSC の支持に重要である
可能性が示唆された。また、ヒト骨髄 MSC による HSC 支持は複数の因子により行われていることが明らかとなった(Stem Cells 33:1554-1565, 2015)。今後、さらなる検討を行うことにより、ヒト
HSC 支持機構の解明を進める予定である。
4） ヒト骨質由来 CD271+ SSEA-4+間葉系幹細胞(MSC)の同定とその幹細胞特性の解明
3）と同様の方法で、ヒト骨質由来の CD45-Lin-CD271+SSEA-4+ 分画より CD271+ SSEA-4+ MSC(DPMSC) を樹立することに成功した。MSC の加齢に伴う細胞老化は未分化性や増殖能に影響する。我々はこれまでに、ヒト骨組織由来 DPMSC が加齢に伴って減少し、早期に細胞老化を来すことを明らかにしている。そこで、DPMSC の加齢に伴う機能的変化を評価するために、DPMSCの分化能と造血支持能を指標として解析を行った。人工股関節置換術の際に摘出された若年者（30歳前後）と高齢者（80 歳以上）の骨組織より DPMSC を予期的に分離した。各々の DPMSCs につ
いて骨、脂肪への分化誘導能と分化に関連する遺伝子発現について解析した。次に、各 DPMSCsと 18lin-CD34+CD38-CD133+細胞 (HSC) との共培養を行い、共培養後に造血細胞コロニー形成試
験と重症免疫不全マウスへの移植実験により造血支持能について解析した。高齢者 DPMSC は若年者と比較して骨分化誘導効率と骨分化に関連する Runx2 遺伝子の発現が有意に低下していた。
また、共培養後の血球細胞の増殖率とコロニー形成数は、高齢者 DPMSC 群で有意に減少していた。以上より、高齢者 DPMSC は、骨分化能や造血支持能が低下していると考えられる。興味あることに、高齢者 DPMSC では、TGF-2 が若年者に比べて高く発現していたことから、前述した加齢による DPMSC の機能的変化には、TGF-2 が関与している可能性が示唆された（第 16 回日
本再生医療学会発表、投稿準備中）。
優れた成果があがった点
マウス骨由来の BD VSEL の効率的な同定・分離法を開発し特許を取得した（特許第 6061600
号）。
また、その幹細胞特性について in vitro, in vivo で詳細に検討し、発表した点が評価できる (StemCells Dev 25:27-42, 2016)。
また、ヒト骨質からも同様の hBD VSEL を分離する方法を開発したことも、ヒトへの臨床応用を考えると極めて重要である。
加えて、ヒト骨髄から未分化な HSC 支持能を持つ MSC を樹立 (Stem Cells 33:1554-1565, 2015)（特願 2013-170480）したことは、細胞移植・再生医療への応用という観点から高く評価される。
これらの研究を発展させて、ヒト骨組織から CD271+ SSEA-4+ MSC (DPMSC) を樹立する方法を確立し、加齢による細胞老化の分子機序について解析した点も評価できる。
問題点
これまでにヒト、マウスにおいて、成体組織内に三胚葉系に分化可能な多能性組織幹細胞が存在するという報告がある。しかしながら、今回同定されたマウス及びヒト骨質由来の BD VSELの幹細胞性の検証には更なる確認実験が必要と考えられた。

研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Nakatsuka, R., Iwaki, R., Matsuoka, Y., Sumide, K., Kawamura, H., Fujioka, T., Sasaki, Y., Uemura,Y., Asano, H., Kwon, A-H. and Sonoda, Y. Identification and characterization of Lin-CD45-Sca-1+
VSEL phenotypic cells residing in adult bone tissue. Stem Cells Dev. 25, 27-42, 2016. 査読有49

＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. 河村孟, 中塚隆介, 松岡由和, 角出啓輔, 藤岡龍哉, 飯田寛和, 薗田精昭. ヒト SSEA-4+CD271+
間葉系幹細胞の老化には TGF-2 が関与する. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3月
2. 松岡由和, 角出啓輔, 河村孟, 中塚隆介, 藤岡龍哉, 佐々木豊, 薗田精昭. ヒト骨髄由来間葉系
幹細胞による造血支持機構の解明. 第 26 回日本サイトメトリー学会総会, 福岡, 2016 年 7 月
3. Matsuoka, Y., Sumide, K., Kawamura, H., Nakatsuka, R., Fujioka, T., Sasaki, Y. and Sonoda, Y.
Human bone marrow-derived CD271+SSEA-4+ mesenchymal stromal cells support hematopoietic
stem/progenitor cells through the cell-cell contact. The 14th Stem Cell Research Symposium, Kobe,
2016 年 5 月＜特許申請・取得状況＞
1. 名称：間葉系幹細胞の分離方法
出願番号：特願 2013-170480
発明者：薗田精昭、松岡由和、中塚隆介、飯田寛和
出願日：平成 25 年(2013 年) 8 月 20 日
2. 名称：微小幹細胞の分離方法
出願番号：特願 2012-220648
発明者：薗田精昭、中塚隆介、岩城隆二、飯田寛和
出願日：平成 24 年(2012 年) 10 月 2 日
特許：第 6061600 号

50研究成果報告書の概要
講座等名

公衆衛生学講座

分担研究課題多能性幹細胞の分化誘導の検討と感染症の新規診断法の開発

キーワード

iPS 細胞、下垂体細胞、タイ肝吸虫、デング熱ウイルス

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

神田

靖士

5名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
西山利正(教授):研究の統括
神田靖士(准教授):大学院生等の研究指導並びに下垂体幹細胞の特徴付けと遺伝子発現の解析
下埜敬紀(助教):下垂体幹細胞の特徴付け（細胞培養とシークエンス解析）と遺伝子導入
岡崎はるか(研究員):内耳の聴覚伝導路（特に下丘）における組織幹細胞の探索
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） マウス iPS 細胞から下垂体細胞への分化誘導の検討
薬剤でターゲット遺伝子の発現を調節可能な発現ベクタ
ーを用いて遺伝子導入したマウス iPS 細胞を用いて下垂体
前葉細胞、特に成長ホルモン(GH) 産生細胞ヘ分化誘導すること目的とし、本年度はまず、Pit1, Pitx2, Pttg1ip などを遺伝子導入した細胞株の取得を行った。取得したこれらのcell line を 用 い て EB
(Embryoid body) を作成した
後、様々な増殖因子を培地中に添加し分化誘導を行う
SFEBq 法に従い高効率に下垂
図 1：マウス iPS 細胞から下垂体前葉細胞への分化誘導
体前葉細胞へ分化誘導することを検討した。分化誘導開始から 21 日後に細胞を回収し、RT-PCR 法にて誘導された細胞の分化度を検討した結果、下垂体前葉の原器であるラトケ嚢の段階で高発現する Lim3 の発現が確認され、同時に免疫染色においても同様に Lim3 の発現および立体的なラトケ嚢様の構造が観察された（図 1）。今後はさらに遺伝
子の発現時期を薬剤を用いて調整することでそれぞれの遺伝子の分化誘導に及ぼす影響と高効率な下垂体系細胞さらには GH 産生細胞への高効率な分化誘導法を確立する予定である。
2） ヒトの便を用いた PCR 法による吸虫類の鑑別法の開発
酷似した形態を有する 2 種類の寄生虫卵の鑑別法として寄生虫のミトコンドリア DNA のうち
cytochrome c oxidase subunit I (COI) 遺伝子中の相同性の高い領域にプライマーをデザインし通常の PCR を行った後、O.v.、H.t.それぞれの特異的プライマーを用いて RealTime PCR を行い、melting
curve analysis 法にて解析を行うという新たな combined PCR 法を考案し、O.v.と H.t.との鑑別を試みた。その結果、24 人(71%)が O.v.に陽性、31 人(91%)が H.t.に対して陽性であった。さらに 21人(62%)の患者においてはこの両方に陽性であった。このことより、今回開発した combined PCR
法は感度、特異度とも高い鑑別法であることが分かった。
3） ラオス人民共和国におけるデング
熱とチクングニア熱の流行に関する研究
ラオス国に於いて病院でデングと診断（図2）された患者血漿から分子生物学的手法を用いてデングウイルスおよびチクングニアウイルスの検出を試みた。またゲノムシーケンスを決定し血清型・遺伝子型の解明と分子系統学的

図 2：ラオスでのデング熱の調査風景

51解析も行いこれらのウイルスの動向について明らかにした。その結果、患者40名のうち14名のサンプルからデングウイルスが検出され、7名がデングウイルス2型、5名がデングウイルス3型、2名がデングウイルス2型と3型の両方に感染していたことが明らかになった。
優れた成果があがった点
検体に糞便を使用した PCR 法による鑑別法には PCR 反応を阻害する要因が糞便中に含まれることが挙げられる。
我々の開発した PCR 法と qPCR SYBR Green I–based assay を連結した combined
PCR 法は顕微鏡を用いた虫卵検査では検出できなかった検体においても検出可能であり、さらに酷似した虫卵の形態を示す 2 種類の寄生虫 O.v.と H.t.が混在する地域において感度、特異度とも高い非常に有用な鑑別法であると考えられる。
問題点
現在、下垂体幹細胞に特異的に発現する遺伝子の機能解析を行うためマウス iPS 細胞に遺伝子導入し、その分化能などを検討している。Lim3 の発現によりラトケ嚢への分化誘導までは確認できたが、更に分化誘導し GH 産生細胞への効率の良い誘導法を試行錯誤して検討しているが、まだ確立されていない。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Lamaningao, P., Kanda, S., Laimanivong, S., Shimono, T., Darcy, A.W. Phyaluanglath, A., Mishima,N. and Nishiyama, T. Development of a PCR assay for diagnosing trematode (opisthorchis andhaplorchis) infections in human stools. Am. J. Trop. Med. Hyg. 96, 221–228, 2017.
2. Phommanivong, V., Kanda, S., Shimono, T., Lamaningao, P., Darcy, A.W., Mishima, N.,
Phaytanavanh, B. and Nishiyama, T. Co-circulation of the dengue with chikungunya virus during the2013 outbreak in the southern part of Lao PDR. Trop. Med. Health, 44, 24, 2016.
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Phommanivong, V., Kanda, S., Shimono, T., Lamaningao, P., Darcy, A.W., Mishima, N.,
Phaytanavanh, B. and Nishiyama, T. Co-circulation of the dengue with chikungunya virus during the2013 outbreak in the southern part of Lao PDR. 10th National Health Research Forum, Savannakhet,
Lao PDR, 2016 年 10 月
＜特許申請・取得状況＞
1. 特許申請：検査キット及び検査方法、特願 2016-060798（2016/3/24 出願中）、関西医科大学、
西山利正、神田靖士

52研究成果報告書の概要
講座等名

分子遺伝学部門

分担研究課題リンパ節のホーミングの分子機構に関する研究

キーワード

ケモカイン、抗原受容体、インテグリン、細胞移動

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名木梨達雄

5名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
木梨達雄（教授）：研究統括植田祥啓（講師）：胸腺内動態近藤直幸（助教）：免疫シナプス
上岡裕治（助教）：リンパ球動態
福原貴太郎（研究員）：リンパ球動態
研究成果の概要（平成 27 年度の研究成果について）
胸腺細胞が皮質から髄質に移動し、自己抗原を認識する過程で Rap1 エフェクター分子 Mst1 が胸腺細胞と胸腺上皮細胞との相互作用による移動と抗原認識、制御性 T 細胞分化に重要であることを明らかにしてきた。
我々はこの過程で胸腺細胞が plexinD1 を一過性に発現させることを見出し、その機能解析を進めた。plexinD1 のリガンドである Semaphorin3E (Sema3E) は皮質から髄質にかけて分布していた。
plexinD1 は細胞内領域に split GAP ドメインを持ち、Rap1 に対する GAP 活性を有することをリン
パ球細胞株を用いて明らかにした。Sema3E 刺激によってケモカインによる Rap1 活性化を抑制し、LFA-1/ICAM-1 を介する接着を阻害した（図 1）。また、抗原特異的接着構造である免疫シナプスを人工脂質二重膜に peptide/MHC と ICAM-1 を用いて再現したところ、正の選択を受けた CD69
陽性胸腺細胞は pMHC クラスター (cSMAC) を LFA-1/ICAM-1 がリング状 (pSMAC) に取り囲む構造を示した。しかし、Sema3E を添加すると免疫シナプス構造が速やかに消失することが明らかになった。in vivo での機能を調べるため、plexinD1 を T 細胞系列で欠損させた胸腺細胞を用いて胸腺組織内動態を 2 光子イメージング解析した結果、組織内移動する胸腺細胞の Rap1 の活性化が増強されていることが分かった。また CD4 陽性胸腺細胞の髄質局在が増加していることが明らかになった。したがって Sema3E/plexinD1 は Rap1 を負に制御することによって髄質への移行を遅延させる働きがあることが示唆された。
免疫シナプス形成における Rap1 シグナル経路を解析し、Rap1a/Rap1b ダブル欠損では免疫シナプスが形成できないこと、Rap1/RAPL/Mst1・Mst2 による NDR1 活性化が kindlin3 による高親和性
LFA-1 の誘導に必要なことを一分子イメージング等を用いて明らかにした。また、リンパ球ホーミングを解析した結果、ローリングは正常であるが、停止過程ができず、末梢リンパ節への移行が著しく低下することが明らかになった。

図 1：胸腺でのリンパ球の移動と接着のメカニズム53

優れた成果があがった点
1. Sema3E/PlexinD1 は Rap1 を不活化し LFA-1/ICAM-1 を介する接着を阻害する働きがあることが明らかになった。
2. 胸腺組織の 2 光子イメージングによって Rap1 活性化を可視化し、plexinD1 欠損によって増強することが確認された。
3. 免疫シナプスを人工脂質二重膜で再現し、Sema3E/plexinD1 によって免疫シナプスが消失することが明らかになった。
4. plexinD1 欠損マウスを解析することによって Sema3E/plexinD1 は胸腺細胞の髄質への移行を遅延させる働きがあることが明らかになった。
5. Rap1a/Rap1b ダブル欠損マウス解析によって Rap1 が免疫シナプス形成、リンパ球ホーミングに必須であることが明らかになった。
問題点
特になし
研究業績
＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Kondo, N., Ueda, Y., Kita, T., Ozawa, M., Tomiyama, T., Yasuda, K., Lim, D.S. and Kinashi, T.
NDR1-dependent regulation of kindlin-3 controls high-affinity LFA-1 binding and immune synapse
organization. Mol. Cell Biol. 37, e00424-16, 2017. レフェリー有2. Ueda, Y., Kondo, N., Ozawa, M., Yasuda, K., Tomiyama, T. and Kinashi, T. Sema3e/Plexin D1
Modulates Immunological Synapse and Migration of Thymocytes by Rap1 Inhibition. J. Immunol.
196, 3019-3031, 2016. レフェリー有3. Iida, T., Saito, K., Katagiri, K., Kinashi, T. and Ohta, Y. The RacGAP protein FilGAP is a negative
regulator of chemokine-promoted lymphocyte migration. FEBS Lett. 590, 1395-1408, 2016. レフェリー有
4. Katakai, T. and Kinashi, T. Microenvironmental control of high-speed interstitial T cell migration in
the lymph node. Front Immunol. 7, 194, 2016. レフェリー有＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Ueda, Y., Kondo, N. and Kinashi, T. Rap1-deficiency caused defective lymph node homing oflymphocytes and thymocyte-selection.( 3-E-W31-11-O/P) The 45th Annual Meeting of the JapaneseSociety for Immunology, Okinawa, 2016 年 12 月
2. Kondo, N., Ueda, Y. and Kinashi, T. High-affinity LFA-1/ICAM-1 binding triggers the reorganizationof vesicular transport regulators to facilitate the maturation of immunological synapse. (1P－0317)
The 39th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan, Yokohama, 2016 年 11-12 月

54

研究成果報告書の概要
講座等名

生体情報部門

分担研究課題

がん幹細胞の機能・分化に関わるシグナル分子の解明

キーワード

PI3K、mTOR、細胞増殖、細胞分化講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

松田

達志

1名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
松田達志（准教授）：研究の総括研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
PI3K-mTOR 経路は細胞の増殖・分化・生存を制御する細胞内シグナル伝達経路（図 1）であり、種々のがん組織においてその異常が報告されている。本研究では、PI3K-mTOR
経路に関わる各種分子の遺伝子改変マウスを対象に、これら
シグナル伝達経路の活性の増減が各種血球系細胞の分化・増殖過程に及ぼす影響の解析を試みた。
具体的には、mTOR 経路の中でも、特に細胞増殖と密接に関わる mTORC1 経路に着目し、mTORC1 シグナルを負に制御する Tsc1 のコンディショナルノックアウトマウスを用いて、各種組織における mTORC1 シグナルの上昇が生体の恒常性に及ぼす影響の検討を行った。CreERT2 マウスとの交配を行い、タモキシフェン誘導性に全身で Tsc1 を欠失させた
図 1：mTORC1 経路
ところ、タモキシフェン投与後 2 週間以内にマウスが全例死亡することが分かった。そこで、T 細胞系列や B 細胞系列において Tsc1 を特異的に欠損させることで、白血病用の症状が認められるか検証を行ったが、細胞の応答性に変化は確認されたものの、造血系における腫瘍形成の兆候は認められなかった。しかし、驚いたことに、B 細胞系列特異的に Tsc1 を欠失させる目的で樹立した mb1-Cre x Tsc1-fl/fl マウスにおいて、100%の頻度で腎嚢胞が形成されることが判明した。詳細な解析を行ったところ、腎尿細管上皮細胞において mTORC1 シ
グナルの亢進が確認されると共に、renal cell carcinoma 様の組織像が観察された。実際、各種の解析の結果、腎発生の初期過程で、mb1 遺伝子が一過的に発現していることが確認された。
以上の結果は、尿細管上皮細胞における mTORC1 シグナルの破綻が、嚢胞形成や腎がん発症の引き金となりうることを強く示唆する結果と言える。
優れた成果があがった点
mb1-Cre x Tsc1-fl/fl マウスが全く新しい腎嚢胞・腎癌の発症モデルになりうることを明らかにできた。また、これまで B 細胞特異的に Cre を発現すると考えられてきた mb1-Cre マウスが、実際には腎臓の発生のごく初期の過程においても Cre を発現していることを見出し、腎臓を対象とした各種解析の有用なツールとなりうることを示した。
問題点
特になし。
研究業績
＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Arima, M., Cui, D., Kimura, T., Sonoda, K.H., Ishibashi, T., Matsuda, S. and Ikeda, E. Basigin can bea therapeutic target to restore the retinal vascular barrier function in the mouse model of diabetic
retinopathy. Sci. Rep. 6, 38445, 2016.

55

＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. 松田達志, 江口稚佳子, 住吉麻実, 生田優希, 小河穂波, 丹賀直美, 早川夏姫, 渡邊利雄. マス
ト細胞脱顆粒過程における PI3K 経路の役割解明. 第 39 回日本分子生物学会年会, 横浜, 2016年 12 月
2. 逆井智貴, 田中順子, 松田達志, 水野聖哉, 濱田理人, 高橋智, 三輪佳宏. 近赤外イメージン
グマウスを用いたリンパ球集積から見る炎症反応の可視化. 第 39 回日本分子生物学会年会,
横浜, 2016 年 11 月
3. 松田達志, 澤田和孝, 合田昌史, 村田昌行, 吉澤敏男, 住吉麻実. 新規 Itk 阻害剤を用いた T 細胞機能制御. 第 26 回 Kyoto T cell Conference, 大津, 2016 年 5 月

56

研究成果報告書の概要
講座等名

内科学第一講座

分担研究課題

ヒト樹状細胞によるさまざまな病態関連応答の解明と新たな難病治療戦略の開発

キーワード

樹状細胞、IL-33、OX40 リガンド、RANK リガンド、TSLP、血小板、アレルギー講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

野村

昌作

7名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
野村昌作（教授）
伊藤量基（准教授）
札谷直子（助教）
中西孝尚・田中晶大・稲垣詔子・木畑佳代子（大学院生）
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
多発性骨髄腫 (multiple myeloma;
MM) の新規治療薬としてレナリド
ミドやポマリドミドといった免疫調
節薬 (IMiDs) が非常に優れた治療成績をもたらしている。転写因子調節
による直接の腫瘍増殖抑制作用に加え、免疫賦活化能による抗腫瘍効果を有している。プロテアソーム阻害薬ボ ルテゾミブ とならんで 、この
IMiDs が現在の MM 治療のキードラッグである。しかしながら、IMiDsの抗腫瘍免疫作用機序は未解明である。すなわち IMiDs の免疫賦活効果

図 1：司令塔としての役割を果たす樹状細胞を理解し、その機能をいかに有効に活用するか、またプロテアソーム阻害薬との組み合わせでいかに IMiDs の免疫賦活能を障害させないか、それらを理解して使用することが、今後の MM 治療の発展に重要と考えられる。これまで免疫エフェクター細胞である T 細胞や NK 細胞に対する
IMiDs の賦活化効果は報告されているが、本研究では、エフェクター細胞の上位に位置し、自然免疫と獲得免疫いずれをも制御する「樹状細胞 (Dendritic cell:DC)」に対する作用機序（図 1）の解明を目的とする。
結果1.

臨床的血中濃度のレナリドミドは CpG-刺激 pDC の持つ IFN-産生能を維持増強する（統計学的に傾向）ことを確認した。ボルテゾミブはむしろ IFN-産生能を根絶することから、この効果は IMiDs の特徴と考えられる。

2.

pDC のマイクロアレイ解析による網羅的検索により、レナリドミド刺激により、免疫エフェ
クター細胞を牽引するケモカイン (CCL2,5,19,20,CXCL1,2,3,8,9,10,11) の RNA レベルが増幅することが判明した。

3.

また IMiDs が、TSLP 刺激 mDC からの Th2 ケモカイン CCL17 産生を増強することを発見した。この CCL17 はレナリドミド投与患者の血清においても増加していること、レナリドミド
関連皮疹発症時にさらに増加することも確認している。

優れた成果があがった点
レナリドミド投与時ではウィルス感染に強い状態と考えられ、ヘルペス感染リスクの高い患者に対しては、ボルテゾミブよりレナリドミド使用が現実的な選択肢として推奨されることが理解

57

できる。
レナリドミドによって免疫エフェクター細胞がリンパ組織に引き寄せられ、pDC の産生する I
型 IFN によって活性増幅されるメカニズムが推測される。
IMiDs は投与初期に皮疹の出現が多く、治療続行に支障をきたすことがあるが、この皮疹は Th2
関連薬剤アレルギーと推察され、その免疫学的根拠となり得る基礎データと言える。
問題点
レナリドミドが CpG-刺激 pDC の持つ IFN-産生能を維持増強させるシグナル解明が今後の一つの課題である。
レナリドミドのケモカインの RNA レベルの増幅をタンパク質レベルで解析することと、NK や
T 細胞との共培養の系でその実働性を確認する必要がある。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Azuma, Y., Nakaya, A., Hotta, M., Fujita, S., Tsubokura, Y., Yoshimura, H., Satake, A., Ishii, K., Ito,T. and Nomura, S. Disseminated intravascular coagulation observed following treatment with
gemtuzumab ozogamicin for relapsed/refractory acute promyelocytic leukemia. Mol. Clin. Oncol. 5,
31-34, 2016. 査読あり
2. Fujita, Y., Nakaya, A., Fujita, S., Hotta, M., Yoshimura, H., Azuma, Y., Nakanishi, T., Satake, A., Ishii,
K., Ito, T. and Nomura, S. Mogamulizumab treatment of refractory peripheral T-cell lymphoma
following autologous stem cell transplantation: A case report. Mol. Clin. Oncol. 4, 151-153, 2016. 査
読あり
3. Esaki, A., Ishii, K., Azuma, Y., Tsubokura, Y., Yoshimura, H., Hotta, M., Nakanishi, T., Fujita, S.,
Nakaya, A., Satake, A., Ito, T. and Nomura, S. Rapid improvement of hyperammonemic
encephalopathy by bortezomib treatment in IgD-type multiple myeloma. Rinsho Ketsueki, 57,
854-858, 2016. 査読あり
4. Nakaya, A., Fujita, S., Satake, A., Nakanishi, T., Azuma, Y., Tsubokura, Y., Hotta, M., Yoshimura, H.,
Ishii, K., Ito, T. and Nomura, S. Enhanced international prognostic index in Japanese patients withdiffuse large B-cell lymphoma. Leuk. Res. Rep. 6, 24-26, 2016. 査読あり
5. Nakaya, A., Fujita, S., Satake, A., Nakanishi, T., Azuma, Y., Tsubokura, Y., Hotta, M., Yoshimura, H.,
Ishii, K., Ito, T. and Nomura, S. Delayed HBV reactivation in rituximab-containing chemotherapy:
How long should we continue anti-virus prophylaxis or monitoring HBV-DNA? Leuk. Res. 50, 46-49,
2016. 査読あり
6. Tsubokura, Y., Satake, A., Hotta, M., Yoshimura, H., Fujita, S., Azuma, Y., Nakanishi, T., Nakaya, A.,
Ito, T., Ishii, K. and Nomura, S. Successful treatment with mogamulizumab followed by allogeneic
hematopoietic stem-cell transplantation in adult T-cell leukemia/lymphoma: a report of two cases. Int.
J. Hematol. 104, 744-748, 2016. 査読あり
7. Nomura, S., Maeda, Y., Ishii, K., Katayama, Y., Yagi, H., Fujishima, N., Ota, S., Moriyama, M.,
Ikezoe, T., Miyazaki, Y., Hayashi, K., Fujita, S., Satake, A., Ito, T., Kyo, T. and Tanimoto, M.
Relationship between HMGB1 and PAI-1 after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. J.
Blood Med. 7, 1-4, 2016. 査読あり
8. Shibata, T., Ohto, U., Nomura, S., Kibata, K., Motoi, Y., Zhang, Y., Murakami, Y., Fukui, R.,
Ishimoto, T., Sano, S., Ito, T., Shimizu, T. and Miyake, K. Guanosine and its modified derivatives areendogenous ligands for TLR7. Int. Immunol. 28, 211-222, 2016. 査読あり
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Ito, T. Immunomodulatory Drugs (IMiDs), lenalidomide and pomalidomide, suppress Th1-inducing
capacity of dendritic cells but enhance Th2-mediated allergic response. The 58th. ASH Annual
Meeting 2016 - The American Society of Hematology, San Diego, USA, 2016 年 12 月

58

研究成果報告書の概要
講座等名

内科学第三講座

分担研究課題分子イメージングによる炎症性および腫瘍性消化器病変のバイオマーカー探索

キーワード

分子イメージング、幹細胞、粘膜再生、腫瘍、炎症性腸疾患、自己免疫性膵炎講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

岡崎

和一

16 名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
炎症性消化器疾患における病態解析とバイオマーカー探索西尾彰功（准教授）、内田一茂・池浦司・安藤祐吾（講師）、富山尚（助教）池宗真奈美・柳川雅人・松井芙美（大学院生）
消化管・膵・肝再生における幹細胞の探索と粘膜再生・発癌メカニズムの解析
福井寿朗（講師）、山口隆志（助教）
宮本早知・谷村雄志・津久田論・諏訪兼彦・桝田昌隆・中丸光（大学院生）
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） 炎症性消化器疾患における病態解析とバイオマーカー探索
IgG4 関連自己免疫性膵炎 (AIP) とアルコール性慢性膵炎の免疫担当細胞サブセットにおける
各 TLR の発現と IgG4 陽性細胞の病態解析を行い、AIP では TLR7 陽性 M2 マクロファージ、TLR2,4陽性好塩基球が有意に浸潤し、自然免疫系の異常が病態に関与し、バイオマーカーになる可能性が示唆された。
2） 消化管・膵・肝再生における幹細胞の探索と粘膜再生・発癌メカニズムの解析
最新の幹細胞、細胞周期研究の知見や、各消化器疾患モデルマウスの知見を応用することにより、消化管粘膜上皮・膵における有用な新規組織幹細胞マーカーとしてリンカー部スレオニンリ
ン酸化 Smad2/3 蛋白 (pSmad2/3L-Thr) を同定した。正常マウス小腸・大腸粘膜や DSS 起因性大腸炎モデル、IL-10 ノックアウトマウス大腸炎・化学自然免疫系の関与を検討するために、発癌大腸癌モデル・セルレイン膵炎といったモデルを作製し、pSmad2/3L-Thr と Ki-67 の蛍光二重免疫染色法にて同様に組織幹細胞を検出し、組織上皮幹細胞のマーカーとして利用できることを確認した。
特に DSS 起因性大腸炎モデル・セルレイン膵炎については pSmad2/3L-Thr 強陽性細胞を粘膜障害・再生の経過とともに経時的に確認し、活動性病変部では pSmad2/3L-Thr 強陽性幹細胞はほぼ消失しており、再生治癒状況が進行するにつれ消化管では粘膜基底部と膵では tubular complex における pSmad2/3L-Thr 強陽性幹細胞は著明に増加していた。
消化管粘膜には二種類 (slow- or rapidcycling) 存在するとされる組織幹細胞のうち、slow-cycling stem cell の特徴に合致すると考えられた。IL-10 ノックアウトマウス大腸炎・大腸癌モデルにおいては pSmad2/3L-Thr 強陽性細胞の分布を腸炎部、癌部にて観察したが、粘膜が過形成となる腸炎部では pSmad2/3L-Thr 強陽性細胞が著増していたが、癌部と思われた病変部では pSmad2/3L-Thr 強陽性細胞はほとんど発現していなかった。内視鏡的に摘出された組織標本（正常消化管粘膜組織や各消化管腫瘍組織）を利用して、同様に pSmad2/3L-Thr 強陽性細胞を検出する実験を予備的に施行したところ、腫瘍部、脈管浸潤部において pSmad2/3L-Thr 強陽性細胞が散在性に認められた。
優れた成果があがった点
アルコール性膵炎と IgG4 関連自己免疫性膵炎との比較で自然免疫系の関与について詳細に検討したものはなく、病態解明において非常に有意義な研究となった。
消化管粘膜上皮・膵における有用な新規組織幹細胞マーカーとしてリンカー部スレオニンリン
酸 化 Smad2/3 蛋 白 (pSmad2/3L-Thr) を 同 定 し た 。 消 化 管 粘 膜 上 皮 お よ び 癌 細 胞 の う ち 、
pSmad2/3L-Thr 陽性幹細胞は、slow-cycling stem cell の特徴を有し細胞周期 G0 の状態にあり、正常細胞だけでなく癌幹細胞のバイオマーカーにもなりうると考えられた。

59

問題点
難病を対象としており、十分なサンプル数の確保が容易でないが、日本有数のセンターとして症例は蓄積してきている。
細胞内蛋白質のリン酸化部位特異的な発現を見ているため、遺伝子を lineage tracing するような遺伝子発現の実験と結びつけることが出来ず、また生きたまま細胞を回収できないためその後の培養実験などをすることが出来ない点。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Kato, K., Ikeura, T., Yanagawa, M., Tomiyama, T., Fukui, T., Uchida, K., Takaoka, M., Nishio, A.,
Uemura, Y., Satoi, S., Yamada, H. and Okazaki, K. Morphological and immunohistochemicalcomparison of intrapancreatic nerves between chronic pancreatitis and type 1 autoimmune pancreatitis.
Pancreatology 17, 403-410, 2017.
2. Uchida, K. and Okazaki, K. Roles of Regulatory T and B Cells in IgG4-Related Disease. Curr. Top.
Microbiol. Immunol. 401, 93-114, 2017.
3. Sakao, M., Sakaguchi, Y., Suzuki, R., Takahashi, Y., Kishimoto, M., Fukui, T., Uchida, K., Nishio, A.,
Matsuzaki, K. and Okazaki, K. Smad2/3 Linker Phosphorylation Is a Possible Marker of Pancreatic
Stem/Progenitor Cells in the Regenerative Phase of Acute Pancreatitis. Pancreas 46, 605-613, 2017.
4. Okazaki, K. and Umehara, H. Current Concept of IgG4-Related Disease. Curr. Top Microbiol.
Immunol. 401, 1-17, 2016.
5. Tanaka, T., Atsumi, N., Nakamura, N., Yana, H., Komai Y., Omachi T., Tanaka, K., Ishigaki, K.,
Saiga, K., Ohsugi, H., Tokuyama, Y., Imahashi, Y., Hisha, H., Yoshida, N., Kumano, K., Okazaki, K.
and Ueno, H. Bmi1-positive cells in the lingual epithelium could serve as cancer stem cells in tongue
cancer. Sci. Rep. 6, 39986, 2016.
6. Ando, Y., Mazzurana, L., Forkel, M., Okazaki, K., Aoi, M., Schmidt, P.T., Mjösberg, J. and Bresso, F.
Downregulation of MicroRNA-21 in Colonic CD3+ T Cells in UC Remission. Inflamm. Bowel Dis. 22,
2788-2793, 2016.
7. Ikeura, T., Miyoshi, H., Shimatani, M., Uchida, K., Takaoka, M. and Okazaki, K. Long-term outcomesof autoimmune pancreatitis. World J. Gastroenterol. 22, 7760-7766, 2016.
8. Ikeura, T., Horitani, S., Masuda, M., Kasai, T., Yanagawa, M., Miyoshi, H., Uchida, K., Takaoka, M.,
Miyasaka, C., Uemura, Y. and Okazaki, K. IgG4-related Disease Involving Multiple Organs with
Elevated Serum Interleukin-6 Levels. Intern. Med. 55, 2623-2628, 2016.
9. Suzuki, K., Yokoyama, J., Kawauchi, Y., Honda, Y., Sato, H., Aoyagi, Y., Terai, S., Okazaki, K.,
Suzuki, Y., Sameshima, Y., Fukushima, T., Sugahara, K., Atreya, R., Neurath, M.F., Watanabe, K.,
Yoneyama, H. and Asakura H. Phase 1 Clinical Study of siRNA Targeting Carbohydrate
Sulphotransferase 15 in Crohn's Disease Patients with Active Mucosal Lesions. J. Crohns. Colitis. 11,
221-228, 201610. Suzuki, K., Arumugam, S., Yokoyama, J., Kawauchi, Y., Honda, Y., Sato, H., Aoyagi, Y., Terai, S.,
Okazaki, K., Suzuki, Y., Mizumoto, S., Sugahara, K., Atreya, R., Neurath, M.F., Watanabe, K.,
Hashiguchi, T., Yoneyama, H. and Asakura, H. Pivotal Role of Carbohydrate Sulfotransferase 15 inFibrosis and Mucosal Healing in Mouse Colitis. PLoS One. 11, e0158967, 2016.
11. Uchida, K., Miyoshi, H., Ikeura, T., Shimatani, M., Takaoka, M. and Okazaki, K. Clinical andpathophysiological issues associated with type 1 autoimmune pancreatitis. Clin. J. Gastroenterol. 9,
7-12, 2016.
12. Yoshida, K., Murata, M., Yamaguchi, T., Matsuzaki, K. and Okazaki, K. Reversible Human TGF-
Signal Shifting between Tumor Suppression and Fibro-Carcinogenesis: Implications of Smad
Phospho-Isoforms for Hepatic Epithelial-Mesenchymal Transitions. J. Clin. Med. 5, 7(1-19), 2016.

60

＜図書＞（著者名・出版社・書名・発行年・総ページ数）
1. Okazaki, K. IgG4-related disease, Springer, 128 頁, 2017.
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Uchida, K. and Okazaki, K. The 1st JSGE Asian Session. Immunological Aspects in Type1
Autoimmune Pancreatitis. 第 103 回日本消化器病学会総会, 東京, 2017 年 4 月
2. Ando, Y., Mazzurana, L., Forkel, M., Okazaki, K., Schmidt, P.T., Mjösberg, J. and Bresso, F.
MicroRNA-21 is down-regulated in UC remission and is negatively correlated with PDCD4
expression Asian Pacific Digestive Week (APDW) Kobe, 2016 年 11 月
3. 柳川雅人, 内田一茂, 岡崎和一. 消化器領域における IgG4 関連疾患の病態 1 型自己免疫性膵炎における好塩基球の関与. 第 58 回日本消化器病学会大会, 神戸, 2016 年 11 月
4. Ando, Y., Mazzurana, L., Forkel, M., Okazaki, K., Schmidt, P.T., Mjösberg, J. and Bresso, F. The
PDCD4/miR-21 pathway in UC remission. Asian Organization for Crohn's and Colitis (AOCC)
Kyoto, 2016 年 7 月
5. 内田一茂, 光山俊行, 柳川雅人, 池宗真美, 津久田諭, 三好秀明, 池浦司, 島谷昌明, 高岡亮,
西尾彰功, 水野伸国, Giuseppe Zamboni, Luca Frulloni, 能登原憲司, 岡崎和一. 自己免疫性膵炎（1 型・2 型）における好中球浸潤機序の違いについて. 第 53 回日本消化器免疫学会総会, 大阪, 2016 年 7 月
6. 福井寿朗, 岸本真房, 高橋悠, 鈴木亮, 宮本早知, 谷村雄志, 松本泰司, 中島淳, 坂尾将幸, 内
田一茂, 西尾彰功, 岡崎和一. 腸炎関連大腸癌モデルマウスにおける Smad2/3 蛋白リンカー
部リン酸化の発癌との関連性についての検討. 第 7 回日本炎症性腸疾患学会, 京都, 2016 年 7月
7. 内田一茂, 光山俊行, 柳川雅人, 池宗真美, 津久田諭, 三好秀明, 池浦司, 島谷昌明, 高岡亮,
Giuseppe Zamboni, Luca Frulloni, 水野伸国, 能登原憲司, 里井壯平, 岡崎和一. 1 型・2 型自己免疫性膵炎における好中球浸潤の差異についての検討. 第 33 回日本胆膵病態・生理研究会,
大阪, 2016 年 6 月
8. 福井寿朗, 岸本真房, 高橋悠, 鈴木亮, 宮本早知, 谷村雄志, 松本泰司, 中島淳, 坂尾将幸, 内
田一茂, 西尾彰功, 岡崎和一. 特定のリンカー部スレオニンがリン酸化された Smad2/3 蛋白（pSmad2/3L-Thr）の消化管上皮幹細胞マーカーとしての検討と応用. 第 53 回日本臨床分子医学会 学術集会, 東京, 2016 年 4 月

61

研究成果報告書の概要
講座等名

外科学講座

分担研究課題

各種癌における蛍光ナノ粒子技術を用いた PD-L1 発現検索キーワード

蛍光ナノ粒子、PD-L1、免疫染色講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

權

雅憲

4名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
權 雅憲（教授）
柳本泰明（講師）
良田大典（大学院生）
蔦 幸治（病態検査学講座 教授）：共同研究
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
免疫寛容状態を解除することで、抗腫瘍効果が期待できるため、各種腫瘍において臨床応用されている。悪性黒色腫における CheckMate066 試験、非小細胞肺癌における POPLAR 試験で抗PD-L1 抗体および抗 PD-1 抗体の有効性が示された一方、同試験において一般的な DAB を使用した免疫染色で PD-L1 陰性と判断された症例においても抗 PD-L1 抗体による抗腫瘍効果が認められている。そのため、DAB を使用した免疫染色では真の PD-L1 の発現を検出できていない可能性があり、より高感度な免疫染色方法の確立が必要であると考えられた。
われわれは、より高感度かつ客観的な免疫染色法として 2 次抗体に 1 対 1 で結合するコニカミ
ノルタ株式会社が開発した蛍光ナノ粒子 (phosphor integrated dot: PID) を用い、その発現量をデジタル評価する方法にて腫瘍表面の PD-L1 発現を定量的に測定した。当院で根治切除された胆道癌
127 例および膵癌 42 例を対象とし、保存されたパラフィンを薄切し PD-L1 を免疫染色で評価した。
胆道癌においては、PD-L1の発現はDAB法で11.8%、PID法で48.8%とPID法でより高感度に検出可能であった。全生存期間に関してDAB法では予後に関して有意差を認めなかったが、PID法ではPD-L1陽性群で有意に予後不良であった。また、多変量解析でPID法におけるPD-L1発現は独立した予後予測因子であった。PID法はDAB法と比較して高感度な免疫染色方法であり、胆道癌および膵癌ではPD-L1発現が予後予測因子になりうることが示唆された。今後の展望として、この技術を応用し肺がん、頭頸部がん、腎がん患者におけるPD-L1発現をPIDで評価し、免疫チェック
ポイント阻害剤投与患者の治療効果予測可能かどうかを評価していく。
優れた成果があがった点
PID 法は DAB 法と比較して高感度な免疫染色方法であり、胆道癌および膵癌では PD-L1 発現が予後予測因子になりうるという新知見が示唆された。
問題点
日常臨床に PID 法を使用するためには、さらなる追加検討および解析ソフトウェアやシステムの確立が必要と考えられる。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Yamaki, S., Yanagimoto, H., Tsuta, K., Ryota, H. and Kon, M. PD-L1 expression in pancreatic ductal
adenocarcinoma is a poor prognostic factor in patients with high CD8+ tumor-infiltrating
lymphocytes: highly sensitive detection using phosphor-integrated dot staining. Int. J. Clin. Oncol. 22,
726-733, 2017.

62

研究成果報告書の概要
講座等名腎泌尿器外科学講座

分担研究課題分子イメージングによる組織幹細胞の解明

キーワード

生殖幹細胞、精巣、Bmi1

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

松田

公志

2名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
松田公志（教授）：研究全体の統括
駒井資弘（助教）：研究全般の実施、論文作成、学会発表
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
平成 28 年度は、前年度に研究した“長期生殖幹細胞における Bmi1 の発現”に関する発表を第
104 回日本泌尿器科学会総会（仙台）で行った。次世代に遺伝情報を伝える生殖幹細胞に Bmi1 が発現し、精上皮周期に関連して Bmi1 遺伝子が増加するという内容で、学会参加者とは大いに議
論が盛り上がった。また同内容で関西医大誌（67 巻 P1-7 2016）にも寄稿した。
さらに組織マイクロアレイ法を用いた膀胱がんの予後規定因子の検索（Bmi1 を含めた種々の遺伝子について免疫染色を施行）を開始し、現在、研究中である。膀胱がんの予後規定因子が発見できれば新たな治療のターゲットとなる可能性があり、重要であると考えている。
優れた成果があがった点
生殖幹細胞に Bmi1 が発現していることを発見した。さらに、これまでは生殖幹細胞と精上皮周期は関係がないと考えられていたが、我々は初めて Bmi1 遺伝子が精上皮周期と関連して生殖幹細胞で増加していることを突き止めた。
問題点
組織マイクロアレイ法を用いた膀胱がんの予後規定因子の検索を行っているが、まだ研究中であり、平成 28 年度には成果がでなかった。
研究成果＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）

1.

駒井資弘, 田中敏弘, 徳山陽子, 矢内洋次, 大江秀一, 大町太一, 厚海奈穂, 吉田真子, 熊野恵城, 比舎弘子, 松田公志, 上野博夫. 長期生殖幹細胞における Bmi1 の発現. 関西医大誌, 67,
1-7, 2016. レフェリー有＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1.

駒井資弘, 速水悠太郎, 吉田崇, 谷口久哲, 三島崇生, 吉田健志, 矢西正明, 安田鐘樹, 渡辺仁
人, 杉素彦, 木下秀文, 松田公志, 上野博夫. マウス精子形成幹細胞の挙動：精上皮 stage との関連. 第 104 回日本泌尿器科学会総会, 仙台, 2016 年 4 月

63

研究成果報告書の概要
講座等名

病態検査学講座

分担研究課題網羅的遺伝子解析技術を用いた胆道癌における再発予測遺伝子の同定

キーワード

遺伝子網羅解析、nCounter analysis system、RNA scope、in situ hybridization

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名蔦

幸治

4名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
蔦

幸治（教授）

權雅憲（外科学講座 教授）：共同研究

柳本泰明（外科学講座 講師）：共同研究
良田大典（外科学講座 大学院生）：共同研究
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
胆道癌は予後不良な癌であり、根治手術が施行された場合でも 5 年生存率は 40%程度とされている。術後補助治療として、化学療法や放射線療法により予後が改善されるとの報告はあるものの、その適応は確立していない。特に再発をきたした患者の予後は極めて不良であり、再発リス
クの予測が術後補助療法の適応判断に有用となる可能性が高いと考えられる。われわれは過去の
パ ラ フ ィ ン 包 埋 さ れ た 手 術 検 体 か ら RNA を 抽 出 し 、 nCounter analysis system (NanoString
Technologies; Seattle, WA, USA) を利用して遺伝子発現を網羅的に定量解析し、再発予測因子となる遺伝子群の検索を行った。
2006 年 1 月から 2015 年 6 月に当院にて根治手術を行った胆道癌患者 86 名を対象とした。はじめに、全生存期間が 66〜111 ヶ月の長期生存群（pStageⅠ-Ⅱ, R0 かつ補助治療なし）5 例と全生存期間が 10〜36 ヶ月の短期生存群 (pStageⅠ-Ⅱ, R0) 6 例で 770 種の癌関連遺伝子の RNA 発現量を網羅的に解析したところ、45 の遺伝子で発現量に有意差を認めた。45 種の遺伝子に関して 86 名の胆道癌患者の検体から抽出した RNA の網羅的解析を行った。
86 例中、再発をきたした患者は 29 名であり、無再発患者に対して再発患者では 6 遺伝子において発現量に有意差を認める結果となった。この 6 遺伝子が再発リスク遺伝子群になる可能性が高いと考えられた。この内容は現在論文執筆中である。
今後の展望として、mRNA の発現の局在（腫瘍、腫瘍周辺細胞）を明らかにすることを考えている。その方法として、mRNA を in situ hybridization にて特定する RNA scope を用いて可視化することを考えている。同定された因子の中で腫瘍細胞から産生されている可能性のあるマーカー
は胆汁や血液、間質で産生されているマーカーは血液マーカーとして応用可能かの検討を行う予定である。また、コニカミノルタ社が開発しているナノ粒子を用いて定量的 RNA in situ
hybridization 法の開発も視野に入れている。
優れた成果があがった点
従来不可能であった過去のパラフィン包埋検体から RNA を抽出し、遺伝子発現を網羅解析し、再発予測遺伝子群を特定することができた。
問題点
臨床応用する際には前向きの観察研究が必要になると考えられる。
研究業績
該当なし

64

３．代謝部門
薬理学講座
法医学講座
モデル動物部門
内科学第二講座
耳鼻咽喉科・頭頸部外科学講座
形成外科学講座
皮膚科学講座
眼科学講座
物理学教室

65

研究成果報告書の概要
講座等名

薬理学講座

分担研究課題

細胞外マトリックス線維形成の加齢変化に関する研究

キーワード

弾性繊維、ミクロフィブリル、LTBP

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名中邨

智之

6名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
中邨智之（教授）：プロジェクトの統括
赤間智也（准教授）：大学院生の指導、遺伝子変異マウスの作成
藤川雄介（大学院生）：Ltbp2/Ltbp4 ダブルノックアウトマウスの解析吉田秀之（大学院生）：Ltbp2 ノックアウト/Ltbp4 ノックインマウスの解析
石戸隆裕（大学院生）：誘導型 Fibulin-5 ノックアウトマウスの作成と解析
増田実希（技師）：実験補助
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
肺や大動脈といった伸び縮みする組織の弾性は弾性線維と呼ばれる特殊な細胞外マトリック
スの線維によって構築されている（図 1）。本研究では生体内において弾性線維構築に重要な役割を担う細胞外マトリックスタンパク質 LTBP-2 お
よび LTBP-4 の機能を明らかにするべく、その遺伝子改変マウスを作成して表現型の解析を行っている。
TGF-シグナリングに関わるタンパク質ファミ
図 1：弾性線維の加齢変化と老化関連疾患
リーLTBP の中で、LTBP-2 と LTBP-4 は TGF-シ
グナリングとは別に、弾性線維形成に直接関わっていることが示唆されている（図 2）。LTBP-4 ノックアウト
マウスは肺気腫や大動脈の蛇行といった弾性線維形成
不全の表現型を呈することが知られており、一方でLTBP-2 ノックアウトマウスは野生型マウスとほとん
ど違いが見られないが、眼球と水晶体とをつなぎ止める毛様小体に形成不全が見られ、水晶体脱臼を引き起こすことが明らかとされている（図 3）。毛様小体はミクロフィブリルと呼ばれる線維により形成されており、このミクロフィブリルは弾性線維形成の足場になることから LTBP-2 はミクロフィブリル形成に重要な役割を担っていることが示唆されたが、全身で発現している LTBP-2 の変異マウスが眼球のみに表現型を示すことから他のタンパク質との機能の重複が予想され 図 2：LTBP-4 による微小線維形成機構の解析
た。LTBP ファミリータンパク質のうち、眼球毛様体上皮細胞では LTBP-4 のみが発現していないことがわかり、LTBP-2 とLTBP-4 の機能が重複していて眼球以外の組織では LTBP-2 の機
能の消失を LTBP-4 が補償しているのではないかと考えられた。
そこで LTBP-2/LTBP-4 二重変異マウスを作成してその表現型を解析したところ、二重変異マウスは重度の肺気腫を発症してその半数が生後 1 ヶ月以内に死亡することがわかった。変異マウ
スの線維芽細胞を用いて in vitro でのミクロフィブリルの線維形成を調べたところ、二重変異マウスでは線維形成が著しく阻害されていたが、培養液に組み換え体 LTBP-2 あるいは LTBP-4 を添加することで線維形成を回復させることができたことから、
ミクロフィブリル形成において LTBP-2 と LTBP-4 は同じ役割を 図 3：LTBP-2 欠損による毛様小帯の線維形成不全と水晶体脱臼担っていることが明らかとなった。また全身で LTBP-4 を発現し66

ているマウスを作成して LTBP-2 欠損マウスと掛け合わせたところ、LTBP-2 欠損/LTBP-4 発現マ
ウスでは毛様小体形成不全が回復しており、その毛様小体には LTBP-4 の局在が観察された。このことから生体内においても LTBP-2 と LTBP-4 はミクロフィブリル形成という点において同じ機能を有していることが証明された。
優れた成果があがった点
本研究により LTBP-2 および LTBP-4 がミクロフィブリルの成熟過程に必須であることが明らかとなった。また LTBP-2 欠損により生じる水晶体脱臼に対し、LTBP-4 の過剰発現による治療の可能性を示した。本研究において作成した遺伝子変異マウスは肺気腫や水晶体脱臼などの疾患におけるモデルマウスとして利用できることがわかった。
問題点
遺伝子やタンパク質の生体内での生体内における機能を解析するには遺伝子変異マウスの作成が不可欠であるが、その作成には長い期間と熟練した技術を必要とする。CRISPR/Cas9 システムを用いた迅速な遺伝子変異マウス作成のプラットフォームを構築する必要があるのではないか。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Fujikawa, Y., Yoshida, H., Inoue, T., Ohbayashi, T., Noda, K,. von Melchner, H., Iwasaka, T.,
Shiojima, I., Akama, TO. and Nakamura, T. Latent TGF-β binding protein 2 and 4 have essential
overlapping functions in microfibril development. Sci. Rep. 7, 43714, 2017. レフェリー有2. Kageshima, M., Maruyama, T., Akama, T. and Nakamura, T. Novel magnetic indenter for rheologicalanalysis of thin biological sheet for regenerative medicine. Rev. Sci. Instrum. 87, 074302, 2016. レフ
ェリー有＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. 中邨智之. 生体組織の伸縮性を生み出すしくみ. 第 10 回近畿ハート倶楽部, 特別講演, 大阪,
2017 年 2 月
2. Nakamura, T. Latent TGFβ-binding protein 2 is essential for the stable structure of ciliary zonule
microfibrils. Invited talk at ISER2016 (XXII Biennial Meeting of the International Society for Eye
Research, Tokyo, 2016 年 9 月
3. 中邨智之. 生体の伸縮性を生み出すしくみ～弾性線維形成の分子機構とその破綻による多臓器疾患～. 第 10 回癌・免疫若手セミナー, 特別講演, 大阪, 2016 年 9 月
4. 赤間智也, 安形清彦, 久保田智巳, 中邨智之, 福田道子. B. fragilis endo-beta-galactosidase のク
ローニングとその酵素活性解析. 第 89 回日本生化学会大会, 仙台, 2016 年 9 月
5. Nakamura, T. Molecular mechanism of elastic fiber assembly. The 17th Annual Meeting of Society
for Photoaging Research, 第 17 回光老化研究会 Educational Lecture, 神戸, 2016 年 8 月
6. 中邨智之. ミクロフィブリルと弾性線維の形成機構. 第 48 回日本結合組織学会学術大会 シンポジウム, 長崎, 2016 年 6 月
7. 中邨智之. 弾性線維の形成と再生の分子機構〜弾性線維と皮膚疾患の関わり〜. 第 115 回日本皮膚科学会総会 シンポジウム, 京都, 2016 年 6 月
8. 中邨智之. 毛様小帯ミクロフィブリルの形成における LTBP-2 の役割. 第 120 回日本眼科学会
総会 シンポジウム, 仙台, 2016 年 4 月

67

研究成果報告書の概要
講座等名

法医学講座

分担研究課題次世代シークエンサーを用いた法遺伝学研究

キーワード

次世代シークエンサー、メタゲノム、SNP タイピング事業推進者名赤根敦

2名

講座内の本プロジェクト参加研究者数研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
赤根敦（教授）：実験の総括
橋谷田真樹（准教授）：実験、および解析の実施
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） 次世代シークエンサーの法医学への応用
本年度の研究として次世代シークエンサー（図1）を用いて 2 つのテーマを行なった。まず一つはメタゲノムの法医学的応用であり、もう一つは 人 種 識 別 の た め の single nucleotide
polymorphism (SNP) データベースの構築である。

図 1：綜合研究施設に設置された
次世代シークエンサー

メタゲノム解析とは、環境中に存在する微生物のゲノム DNA を一度にまとめて抽出し、網羅的に解析する手法である。その法医学的応用として、遺体の腸内細菌叢を対象として解析を行い、死因および死後経過時間との関連性をみた。また、溺死肺の微生物を解析し、溺水の証明手段となり得るかを検証した。24 例の剖検例から結腸内容物約 200mg を、また、溺死例 4 例から肺 50mg を採取し、DNA を抽出した。微生物の識別は
16SrRNA 領域をターゲットとして PCR で増幅し、次世代シークエンサーIon PGM System (Thermo
Fisher Scientific) にてシークエンス解析を行なった。その結果、遺体の腸内細菌叢は解析可能であったが、死因や死後経過時間による細菌叢の違いを明確に示すことは困難であった。しかし、乳児例からはその栄養を母乳、ミルクから得ているため Bifidobacterium, Lactobacillus などの特徴ある菌が検出された。一方、溺死肺においては、PCR で 16S rRNA 領域の増幅が確認されたのに対し、他の死因の肺では増幅が確認されず、この時点で溺死か否かの識別が可能であった。

2） 次世代シークエンサーを用いた SNP データベースの構築
もう一つは SNP データベースの構築であるが、これまでの研究報告で SNP 情報が人種的な祖先及び家系情報を示す DNA マーカーでることが判明しており、それらは ancestry informative markers(AIMs)や lineage markers と呼ばれている。そのため、通常の DNA 型鑑定に用いる常染色体上 shorttandem repeat (STR) と並んで法医実務上で非常に有益なマーカー群であることが知られている。
本年度は 207 名の日本人試料を用いて、次世代シークエンサーを用いて一人当たり 165SNPs を増幅・解析した。その結果、全ての座位においてハーディ・ワインベルグ平衡を満たしてはいたが、14 座位では全員同じ型を示した。また、同じ染色体上に存在する 648 座位間中 24 座位間で相関が見られ、これらを考慮しての総合同値確率は 1.22×10−41 となった。

優れた成果があがった点
メタゲノムの法医学的応用に関しては、ある程度死後経過時間の経った遺体試料からでも解析68

が可能であることが示された。今後、例数を増やしデータを積み重ねることで実務に応用可能となるであろう。さらに、腸内細菌叢や肺だけでなく、毛髪、表皮などの試料を用いて解析してみるもの面白い。
SNP データベースの構築に関しては、今回の 165 座位は個人識別というよりは遺伝的な出身地域を推定するのに適しているとされた座位である。そのため日本でこのキットとシステムを応用したところで実務に適しているとは言い難いが、データベースを広く世界に提供し海外のデータと統合することで、海外での東アジア人種の識別が可能となり、意味のあるものとなるであろう。

問題点
遺体の腸内細菌叢解析では試料の変動パラメータ（死因、年齢、死後経過時間など）が多過ぎ、ある程度の絞り込みが必要であることが示唆された。当大学での剖検例は、他の大学と比較して多い方ではなく、試料の採取および解析データの積み重ねに時間を要するであろう。
SNP 解析においては、日本人試料のはずであるが解析の結果、東アジアの他国のものと判断された例がいくつか見られた。解析ソフトの限界なのか、または本当に日本人ではないのかの検討が必要である。

研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）

1.

湯浅勲, 飯野守男, 山本敏充, 松末綾, 赤根敦. 日本人特異的アレルによる日本人の証明：
JapanesePlexの試み. DNA多型, 24, 172-175, 2016. レフェリー有2.

橋谷田真樹, 赤根敦, 松本智寛, 吉村澄孝, 時安太久磨, 細谷直, 舟山眞人. 2016/09. ストレス
モデルラットにおけるmicroRNA (miRNA) の発現変化. DNA多型, 24, 218-220, 2016. レフェリー有＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1.

橋谷田真樹, 赤根敦, 松本智寛, 吉村澄孝, 大内司, 舟山眞人. HID-Ion AmpliSeqTM Ancestry
Panelによる日本人SNPデータベースの構築. 日本DNA多型学会第25回学術集会, 柏, 2016年
11-12月2.

橋谷田真樹, 赤根敦, 松本智寛, 吉村澄孝, 時安太久磨. 心臓突然死例における次世代シークエンサーを用いた遺伝子解析. 第63回日本法医学会学術近畿地方集会, 大阪, 2016年11月

3.

橋谷田真樹, 赤根敦, 松本智寛, 吉村澄孝, 時安太久磨. メタゲノム解析の法医学的応用. 第100次日本法医学会学術全国集会, 東京, 2016年6月

4.

Hashiyada, M., Akane, A., Matsumoto, T., Yoshimura, S. and Tokiyasu, T. Constructing the SNP
database of Japanese population using the HID-Ion AmpliSeqTM Ancestry Panel on the Ion PGMTM
System. Human Identification Solutions Conference, Barcelona, Spain. 2016年5月

69

研究成果報告書の概要
講座等名

モデル動物部門

分担研究課題病態モデル遺伝子改変マウス作製および維持、保存に関わる研究

キーワード

遺伝子改変マウス、ES 細胞、CRISPR/Cas9、体外成熟卵子講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

李成一

2名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
李成一（准教授）：遺伝子改変マウスの作製および解析
西村愛美（助教）：遺伝子改変マウスの作製および解析
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
様々な病態モデルに対応するために、多くの遺伝子改変マウスが作製され研究に使用されている。遺伝子改変マウスの使用には、内在性タンパクの動態を探るためのマーカー遺伝子を付随するものや、人工的遺伝子欠損による標的分子動態の制御機構を探るなど多岐に渡る。
現在までに、本部門では、リンパ球のインテグリン活性化の制御に関わる分子について解析を行う為の遺伝子改変マウスの作製を主に行ってきた。特に、ES 細胞を用いた遺伝子改変マウスの作成では、Rap1 の活性化因子である C3G を部位特異的にノックアウトするキメラマウスの作製
および生殖系列への寄与に成功した。さらに、部位特異的な RasGRP2 のノックアウトマウス作製の為のキメラマウス作出に成功した。
また、以前よりシグナル誘導増殖関連遺伝子である Sipa1 においては、HaloTag マーカーを付加することで、細胞内動態を探るマウスを作製していたが、今回、新技術として CRISPR/Cas9 によるゲノム編集技術を用いた KO マウスの作成にも着手し、Sipa1 の KO マウス作製を行った。
CRISPR/Cas9 を用いたゲノム編集技術は PX330 plasmid を用いた前核注入法（図 1）を採用し、前核注入後の生存成績は 49/54 (90%)、生存前核卵子と 2 細胞期まで発生した胚を移植した結果、11/40(28%)が産子として得られ、その内の 3 匹は数塩基～数百塩基の欠損を認めた。また同遺伝子の別欠損部位に関しても同様に生存成績 48/60(80%)、4/38(11%)の産子が得られ、内 1 匹に 1 塩基の挿入が認められた。これら作製した F0 マウスの殆どは遺伝子情報がモザイクになっており、使用するためには変異を固定するために WT マウスとの交配が不可欠であることが明らかになった。
また、作製した遺伝子改変マウスの生産効率を高めるための技術として、3 週齢雌マウスを使用した体外受精によって、自然交配よりも早いサイクルでの産子獲得や、麻酔処置後に生存したまま片側の精巣
上体尾部を採取する事で貴重なマウスを残したままの体外受精が可能であった。

図 1：プラスミドの前核への注入と GFP の発現

さらに、多様な疾患モデルマウスの中には、排卵障害を持つものも存在しており、卵巣からの未成熟卵子を体外で受精可能な卵子まで発生させる体外成熟技術を用いた体外受精に関しても研究を進めている。しかしながら、体外成熟培地の確立が不完全な上、体外成熟由来の胚は、胚盤
胞期胚および産子への発生成績が未だ低率であることから、体外成熟時の培地の調整による発生
成績の改善を行っており、-Nicotinamide mononucleotide または L-carnitine の添加により胚盤胞期への発生成績の向上が確認された。これらの添加が発生段階でどのように寄与しているのか検討
中である。

70

優れた成果があがった点
CRISPR/Cas9 による KO マウスの作成技術を確立した。
貴重なマウス個体を処分することなく体外受精で産子を作製する技術を本施設においても確立
できた。
問題点
特になし

研究業績
＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）

1.

安齋政幸, 井上達也, 西村愛美, 野田義博, 東里香, 梶本みずき, 三谷国, 細井美彦.
β-Nicotinamide mononucleotide を添加したマウス体外成熟培地が未成熟卵子内への活性酸素
種(ROS)に与える影響. 日本受精着床学会雑誌, 33, 21-26, 2016. レフェリー有2.

井上達也, 東里香, 野田義博, 西村愛美, 梶本みずき, 小橋朱里, 折杉卓哉, 安齋政幸. L-カル
ニチン添加体外成熟培地がマウス卵子細胞質内活性酸素種に与える影響. 近畿大学先端技術

総合研究所紀要, 21, 49-56, 2016. レフェリー有＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1.

小橋朱里, 東里香, 折杉卓哉, 西村愛美, 中川隆生, 小笠原里奈, 小木曽力, 鷲津朱理, 細井美彦, 安齋政幸. マウス GV 期卵子の体外成熟中における外因性 L-カルニチンの影響. 第 39 回
日本分子生物学会年会, 横浜, 2016 年 12 月

2.

折杉卓哉, 東里香, 小橋朱里, 西村愛美, 野田義博, 中川隆生, 小笠原里奈, 小木曽力, 鷲津朱理, 細井美彦, 安齋政幸. マウス体外成熟培地への β-Nicotinamide Mononucleotide の添加が初期胚発生に与える影響. 第 39 回日本分子生物学会年会, 横浜, 2016 年 12 月

3.

安齋政幸, 西村愛美, 野田義博, 東里香, 中川隆生, 小橋朱里, 折杉卓哉, 細井美彦. 体外成熟培地への β-Nicotinamide mononucleotide(β-NMN)添加がマウス卵子内 Sirt1 発現に及ぼす影響.
第 50 回日本実験動物技術者協会総会, 川越, 2016 年 9 月

4.

安齋政幸, 杉本瑞紀, 井上達也, 西村愛美, 野田義博, 東里香, 小橋朱里, 折杉卓哉, 中家雅隆, 中川隆生, 細井美彦. β-NMN 添加体外成熟培地による卵子の体外成熟とその後の胚発生に与える影響. 第 63 回日本実験動物学会総会, 川越, 2016 年 5 月

71

研究成果報告書の概要
講座等名

内科学第二講座

分担研究課題心臓組織幹細胞の単離法と分化誘導法の開発

キーワード

心臓幹細胞、心臓発生、心筋再生講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

塩島一朗

4名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
塩島一朗（教授）：全体の総括
岩崎真佳（診療講師）：心臓幹細胞の単離・培養、表面マーカー探索
堀谷啓太：ヒト心臓幹細胞の単離
岸本広志：マウス心臓幹細胞の単離

研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
心臓は胎児発生の初期に形成され、その後も生涯にわたりその機能が維持される。哺乳類では
心筋細胞の分裂能が出生直後に失われることから、心臓は再生しない臓器であると従来考えられてきたが、近年の解析により、成人期の心臓に心筋細胞や血管系の細胞に分化しうる組織幹細胞が存在することや、正常なヒトにおいても年間約 1%の心筋細胞が新たに作られた細胞と入れかわることなどが明らかにされた。しかしながら組織幹細胞による心臓再生の分子メカニズムの詳細については現在ほとんど知られておらず、その制御機構が明らかになれば、幹細胞分化・組織の恒常性維持・器官再構築といった点において大きなインパクトを持つものと考えられる。
我々はこれまで心筋細胞・血管内皮細胞・血管平滑筋細胞など心臓内の複数の細胞種に分化しうるヒト心臓組織幹細胞が心臓手術中に末梢血に動員されることを明らかにし、さらに以下の点について検討をおこなってきた。

1） ヒト心臓幹細胞を効率よく末梢血中に動員する方法の確立
2） ヒト心臓幹細胞のイメージングに使用可能な特異的表面抗原の同定
3） 心臓組織において心臓幹細胞が局在するニッチの同定
1）2）については、ヒトにおいてヘパリンの静脈投与が心臓組織幹細胞の末梢血への動員がおこすこと、また、表面抗原の解析から、ヒト心臓幹細胞には CD73 および KDR（ヒト VEGF 受容体）が発現していること、が平成 27 年度までに明らかになっていた。今年度は主に 3）について検討をおこない、免疫染色で CD73 陽性細胞が血管周囲に存在することが明らかになった。

優れた成果があがった点
ヒト心臓幹細胞が心臓内において血管周囲に存在することを示唆するデータが得られた点。

問題点
マウスを用いた心臓幹細胞の末梢血への動員を試みているが、これまで検討した実験条件ではヘパリンによる心臓幹細胞の末梢血への動員方法の確立には至っていない。今後
CD73-BAC-EGFP トランスジェニックマウスを用いてマウスにおける検討も進めていきたい。

72

研究業績
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1. Horitani, K., Iwasaki, M., Kishimoto, H., Wada, K. and Shiojima, I. Repetitive postprandial combined
metabolic spikes activates p53 in bone marrow progenitor cells and induce premature aging of bonemarrow. 第 81 回日本循環器学会, 金沢, 2017 年 3 月

2. Horitani, K., Iwasaki, M., Kishimoto, H., Wada, K., Nakano, M. and Shiojima, I. Repetitive
postprandial combined metabolic spikes activates p53 in bone marrow protenitor cells and induce
premature aging of bone marrow. 第 33 回国際心臓研究学会日本部会, 東京, 2016 年 12 月

3. Horitani, K., Iwasaki, M., Kishimoto, H., Wada, K., Nakano, M. and Shiojima, I. Repetitive
postprandial glucose/triglyceride spikes activates p53 in bone marrow progenitor cells and induce
premature aging of bone marrow. 19th International Vascular Biology Meeting, Boston, USA, 2016 年
11 月

4. Shiojima, I. Wnt and cardiovascular ageing. European Society of Cardiology, Roma, Italy, 2016 年 8 月
5. Horitani, K., Iwasaki, M., Kishimoto, H., Nakano, M. and Shiojima, I. Repetitive postprandial
glucose/triglyceride spikes activates p53 in bone marrow progenitor cells and induce premature aging
of bone marrow. American Diabetes Association, New Orleans, USA, 2016 年 6 月

73研究成果報告書の概要
講座等名

耳鼻咽喉科・頭頸部外科学講座 事業推進者名

分担研究課題緑色蛍光タンパク質を発現すマウス好酸球を用いた検討

キーワード

好酸球、アレルギー、顆粒タンパク（EDN; eosinophil-derived neurotoxin）

講座内の本プロジェクト参加研究者数

友田

幸一

5名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
神田晃（講師）：実験施行責任者（実験計画、立案、まとめ）小林良樹（助教）：実験施行者
尹泰貴・Bui Van Dan（大学院生）：実験施行者
岩井大（教授）：研究計画のアドバイス
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
日本人の半数ほどが何らかのアレル
ギー症状を有しており、国民病と言われている。アレルギー性鼻炎や喘息などのアレルギー性疾患では、最終的には好酸球が炎症局所に集積（図 1）し、活性化することで炎症が遷延化する。
また、好酸球が病態形成に重要な役割を果たす疾患として、喘息を高度に合併した難治性の好酸球性副鼻腔炎が知られており、社会問題化している。これら好酸球性気道炎症のメカニズムはほとんど解明されていないが、炎症局所での好酸球の役割を検討すること
で、新しい治療戦略の開発につながることが期待される。炎症局所での好酸

図 1：上・下気道炎症における好酸球の役割

球の動態を詳細に検討するためには、好酸球を追跡する事が出来るマウスが必要となるが、そのようなマウスは存在していなかった。そこで、我々は、好酸球を追跡する事が出来るマウスを樹立する考えに至った。
そのようなマウスを作製するためには、好酸球に特異的に発現する分子をターゲトにする必要がある。そこで、本研究では、好酸球に特異的に発現する顆粒タンパクの一つである EDN(eosinophil-derived neurotoxin) に注目し、EDN の exoin2 に緑色蛍光タンパク質 (GFP) と Cre の融合タンパク質をノックインしたマウスを設計した（図 2）。そして、その癒合タンパク質のノックインした後、キメラマウスの作製に成功した。

図 2：EDN のプロモータ下流領域に緑色に光る蛍光タンパク質と Cre を導入したコンストラクト

優れた成果があがった点
本研究で設計したマウスは、EDN の下流に蛍光タンパク質をノックインすることで、炎症局所の好酸球を追跡する事が可能となるだけでなく（2 光子顕微鏡を用いた生きた生体内での好酸球動態の追跡）、好酸球がどのように分化し活性化するかと言った細胞系譜解析にも応用する事が出来る。さらに、ターゲットとなる分子がアレルギー性炎症に重要な役割を果たす分子であれば、

74

その役割も検討する事が可能となる。このようなマウスは、世界に存在してなかったため、我々が開発した EDN をターゲットにした新しい遺伝子改変マウスは、好酸球性疾患研究のマイルストーンとなることが期待される。
問題点
EDN-CreEGFP マウスの開発の進捗状況は、F3 まで進んでいる。しかし、実際にワークするかどうかを確認する必要がある。そこで、本年度は、その確認作業をおこなう予定である。
研究業績＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1.

神田晃, Dan van Bui, 河野由美子, 宇都宮啓太, 坂田喜子, 松本洋平, 小林良樹, 岩井大, 友田
幸一. 新規遺伝子改変マウスと気道過敏性評価法を用いたアレルギー性疾患に対する創薬への挑戦. 新学術説明会, 東京, 2016 年 12 月

＜特許申請・取得状況＞

1.

名称：マウス細胞；特願 2016-198365；発明代表者 神田晃

75

研究成果報告書の概要
講座等名
分担研究課題キーワード

形成外科学講座

事業推進者名楠本

健司

皮膚・軟部組織の加齢変化、組織再生における分子イメージングによる病態解明と診断治療への応用
再生、再建、創傷治癒、組織、細胞、皮膚、脂肪、骨、軟骨、神経、血管
19 名

講座内の本プロジェクト参加研究者数研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
楠本健司（教授）：統括責任者・実施責任者
鈴木健司（病院准教授）、森本尚樹（准教授）、日原正勝（診療講師）、覚道奈津子（講師）、畔熱行・尾崎裕次郎（助教）、田中義人・三宅良平・田中寧子・岩宮怜子：実施責任者
藤原奈都美（助教）、西村京子・加古絢子（任期付助教）、来方远・光井俊人・Sharon Claudia（大学院生）、原朋也・尾川武史（研究員）：研究実施者
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
形成外科学講座では、生理的ならびに病的創傷治癒過程を検証し、実験的創傷や病的創傷の治
癒を種々の組織再生因子の付与により生理的創傷治癒への所見を病態分子イメージングでとらえることで、明らかな改善、治癒に関与するエビデンスを積み重ねている。この病態分子イメージ
ングにより明らかにされる創傷治癒、組織再生による基礎的現象を応用して、効果や精度の高い
臨床的治療と再建に導く大きな役割を果たすことを目指している。
平成 28 年度は、引き続き多血小板血漿 (PRP) 、脂肪組織由来幹細胞、高圧脱細胞化、骨再生、電場負荷での細胞・組織保存を研究テーマとした。
1） 脂肪組織由来幹細胞 (ASCs)（図 1）
ASCs と正常脂肪細胞とを生着のための適正混和比を明らかにしていたが、これら基礎データを基に、乳癌切除後の乳房変形に対して本学医学倫理委員会と再生医療等安全性確保法（3 種）の認可を得て臨床応用を開始した。
2） 多血小板血漿 (PRP)（図 1）
PRP による創傷治癒促進効果を検証した。また、PRP がいかにASCs の増殖に寄与するかの検討を行い、濃度条件を変えつつ適正濃度等の検討を進めている。
図 1：臨床応用に用いる PRP と脂肪組織由来幹細胞

3） 高圧脱細胞化
皮膚組織に 200MPa 負荷により、脱細胞して足場 (scaffold) としての皮膚構築を目指す基盤データを得ていた。培養表皮の上乗せを行うことにより皮膚構造を構築出来ることを明らかにした。
巨大色素性母斑の治療として本学医学倫理委員会と再生医療等安全性確保法（2 種）の認可を得て臨床応用を開始した。
4） 骨再生Hydroxyapatite (HAP) 、Hydroxyapatite+Collagen 合材、骨形成タンパク (BMP) の埋入実験による比較検討を進めている。
5） 電場負荷条件での細胞組織の保存
電場負荷での細胞、組織の保存がより長期に行えることを示したが、電場環境で保存した血管を用いた血管吻合により血流維持が可能かの動物実験を遂行中である。

76

優れた成果があがった点
ASCs の検証実験を行いながら、乳癌の再建に臨床応用に進めることが出来た。PRP による ASCsの増殖効果を検討し、再生医療の複合治療の有効性が出始めた。 母斑細胞の高圧による死滅度合
いを検討することで、詳細なデータを得て、臨床応用に進んだ。HAP、HAP＋CL 合材、BMP の骨増生を検討できた。臨床応用に繋がるデータを得ることが出来た。電場条件での 2 日間保存血管が、移植に有効で差異を認めた。臨床に繋がるデータが得られつつある。
問題点
臨床応用に繋がった ASCs や高圧処理では、臨床面での問題点を挙げつつ、この検証や改善への振り返り実験を要す。PRP、骨再生、電場応用は、臨床応用に繋がるための基盤実験を継続して行く必要がある。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. 覚道奈津子, 森本尚樹, 尾川武史, Lai Fangyuan, 楠本健司. 脂肪幹細胞を用いた脂肪組織再生療法. 細胞, 49, 96-98, 2017. レフェリー無2. Ogino, S., Morimoto, N., Sakamoto, M., Jinno, C., Taira, T. and Suzuki, S. Efficacy of gelatin gel
sheets sustaining epidermal growth factor for murine skin defects. J. Surg. Res. 201, 446-454, 2016.
レフェリー有3. Sakamoto, M., Morimoto, N., Ogino, S., Jinno, C., Taira, T. and Suzuki, S. Efficacy of gelatin gel
sheets in sustaining the release of basic fibroblast growth factor for murine skin defects. J. Surg. Res.
201, 378-387, 2016. レフェリー有4. Sakamoto, M., Morimoto, N., Ogino, S., Jinno, C., Kawaguchi, A., Kawai, K. and Suzuki, S.
Preparation of Partial-Thickness Burn Wounds in Rodents Using a New Experimental Burning
Device. Ann. Plast. Surg. 76, 652-658, 2016. レフェリー有5. Masuoka, H., Morimoto, N., Sakamoto, M., Ogino, S. and Suzuki, S. Exploration of the woundhealing effect of topical administration of nicotine in combination with collagen scaffold in a rabbit
model. J. Artif. Organs 19, 167-174, 2016. レフェリー有6. Morimoto, N., Jinno, C., Mahara, A., Sakamoto, M., Kakudo, N., Inoie, M., Fujisato, T., Suzuki, S.,
Kusumoto, K. and Yamaoka, T. The Alteration of the Epidermal Basement Membrane Complex of
Human Nevus Tissue and Keratinocyte Attachment after High Hydrostatic Pressurization. Biomed
Res. Int. 2016, 1320909(1-9), 2016. レフェリー有7. Jinno, C., Morimoto, N., Ito, R., Sakamoto, M., Ogino, S., Taira, T., Suzuki, S. A Comparison ofConventional Collagen Sponge and Collagen-Gelatin Sponge in Wound Healing. Biomed Res. Int.
2016, 4567146(1-8), 2016. レフェリー有8. Morimoto, N., Kakudo, N., Ogura, T., Hara, T., Matsui, M., Yamamoto, M., Tabata, Y. andKusumoto, K. Easy-to-Use Preservation and Application of Platelet-Rich Plasma in Combination
Wound Therapy With a Gelatin Sheet and Freeze-Dried Platelet-Rich Plasma: A Case Report. Eplasty
16, e22, 2016. レフェリー有9. Morimoto, N., Mahara, A., Jinno, C., Ogawa, M., Kakudo, N., Suzuki, S., Fujisato, T., Kusumoto, K.
and Yamaoka, T. The superiority of the autografts inactivated by high hydrostatic pressure to
decellularized allografts in a porcine model. J. Biomed. Mater. Res. B, Appl. Biomater. in press, 2016.
レフェリー有10. Morimoto, N., Jinno, C., Sakamoto, M., Kakudo, N., Yamaoka, T. and Kusumoto, K. An Exploratory
Clinical Trial of a Novel Treatment for Giant Congenital Melanocytic Nevi Combining InactivatedAutologous Nevus Tissue by High Hydrostatic Pressure and a Cultured Epidermal Autograft: Study
Protocol. JMIR res. protoc. 5, e162, 2016. レフェリー有11. Hara, T., Kakudo, N., Morimoto, N., Ogawa, T., Lai, F. and Kusumoto, K. Platelet-rich plasma
stimulates human dermal fibroblast proliferation via a Ras-dependent extracellular signal-regulated

77

12.

13.
14.
15.
16.
17.

kinase 1/2 pathway. J. Artif. Organs 19, 372-377, 2016. レフェリー有Kakudo, N., Morimoto, N., Ogawa, T., Hihara, M., Koseki, R. and Kusumoto, K. Elastofibroma dorsi:
a case report with an immunohistochemical and ultrastructural studies. Med. Mol. Morphol. 49, 42-47,
2016. レフェリー有覚道奈津子, 森本尚樹, 尾川武史, Lai Fangyuan, 楠本健司. 脂肪幹細胞を用いた脂肪組織再生療法. BIO Clinica 31, 66-69, 2016. レフェリー無三宅ヨシカズ, 福田智, 楠本健司. PRP の滑液嚢胞への応用. 形成外科, 59, 950-955, 2016. レ
フェリー無
三宅ヨシカズ, 福田智, 楠本健司. PRP の創傷手術時の創への使用. 形成外科, 59, 944-949,
2016. レフェリー無福田智, 三宅ヨシカズ, 楠本健司. PRP 療法の美容医療（シワ）への応用. 形成外科 , 59,956-963, 2016. レフェリー無楠本健司. PRP 療法の現況と今後の展望. 形成外科, 59, 974-979, 2016. レフェリー無＜図書＞（著者名・出版社・書名・発行年・総ページ数）
1. 楠本健司. 再生医療の応用 外科系医師が知っておくべき創傷治療のすべて. 鈴木茂彦, 寺師
浩人編, 263-269, 南江堂, 2017.
2. Mizuno, H., Tobita, M., Ogawa, R., Orbay, H., Fujimura, J., Ono, S., Kakudo, N., Kusumoto, K. andHyakusoku, H. Adipose-Derived Stem Cells in Regenerative Medicine, “Principle of Gender-Specific
Medicine 3” Marianne J. Legato Eds. 459-479, Academic Press, UK, 2017.
3. 楠本健司, 福田智, 三宅ヨシカズ. 多血小板血漿 (PRP) 療法 患者満足度ベストを目指す非手術・低侵襲 美容外科形成外科学に基づいた考え方とテクニックの実際. 高柳進編,
162-169, 南江堂, 2016.
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1.

森本尚樹. 真皮再生方法は未確立である. 第 16 回日本再生医療学会総会, シンポジウム, 仙台, 2017 年 3 月
2. 森本尚樹, 神野千鶴, 馬原淳, 光井俊人, 覚道奈津子, 藤里俊哉, 鈴木茂彦, 楠本健司, 山岡哲
二. 細胞残渣を含む不活化自家皮膚と脱細胞化同種皮膚の移植後経過の比較. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
3. 来方远, 覚道奈津子, 森本尚樹, 竹谷茂, 原朋也, 尾川武史, 楠本健司. The effect of platelet
rich plasma in proliferation of human adipose-derived stem cells. 第 16 回日本再生医療学会総会,
仙台, 2017 年 3 月
4. 覚道奈津子, 森本尚樹, 尾川武史, 楠本健司. TGF-β がヒト脂肪幹細胞の増殖、遊走、収縮に与える影響. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
5. 尾川武史, 森本尚樹, 馬原淳, 光井俊人, 覚道奈津子, 楠本健司, 山岡哲二. 5 種の細胞に対する高圧処理の影響と不活化メカニズムの解明. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3月
6. 坂本道治, 森本尚樹, 井家益和, 篠原力, 鈴木茂彦. 同種細胞を用いた皮膚組織の再生. 第 16回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
7. 山岡哲二, 馬原淳, 森本尚樹. 高圧処理を利用した脱細胞化／殺細胞化スキャホールドの開発と in vivo 評価. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3 月
8. 神野千鶴, 森本尚樹, 馬原淳, 坂本道治, 荻野秀一, 藤里俊哉, 鈴木茂彦, 山岡哲二. 高圧処理による悪性黒色腫治療にむけた基礎的検討. 第 16 回日本再生医療学会総会, 仙台, 2017 年 3月
9. 森本尚樹. 皮膚の再利用治療. 第 46 回日本創傷治癒学会, シンポジウム, 東京, 2016 年 12 月
10. 神野千鶴, 森本尚樹, 馬原淳, 坂本道治, 荻野秀一, 藤里俊哉, 鈴木茂彦, 山岡哲治. 高圧処理による悪性黒色腫治療にむけた基礎的検討. 第 46 回日本創傷治癒学会, 東京, 2016 年 12 月
11. 坂本道治, 森本尚樹, 篠原力, 井家益和, 鈴木茂彦. 同種培養表皮の開発～細胞治療を標準治療へ～. 第 46 回日本創傷治癒学会, 東京, 2016 年 2 月
12. 楠本健司. 多血小板血漿 (PRP) と種々の臨床応用. 第 22 回千葉県形成外科研究会, 特別講演, 千葉, 2016 年 11 月

78

13. 楠本健司. 多血小板血漿(PRP)と育毛、その他の臨床領域での応用について. 第 21 回日本臨床毛髪学会学術集会, 学術講習会講演, 横浜, 2016 年 11 月
14. 笹尾卓史, 福田智, 楠本健司. 再生医療等安全性確保法施行後の市中病院における多血小板
血漿 PRP を用いた治療について. 第 114 回関西形成外科学会学術集会, 高槻, 2016 年 11 月
15. 森本尚樹. 高圧処理母斑と自家培養表皮を用いた皮膚再生治療. 第 25 回日本形成外科学会基礎学術集会, セミナー講演, 大阪, 2016 年 9 月
16. 覚道奈津子, 森本尚樹, 田中義人, 楠本健司. 脂肪幹細胞を用いた脂肪再生の臨床研究実施に向けた課題と対策. 第 25 回日本形成外科学会基礎学術集会, シンポジウム, 大阪, 2016 年 9月
17. 来方远, 覚道奈津子, 森本尚樹, 原朋也, 楠本健司. ヒト脂肪幹細胞における多血小板血漿の増殖効果. 第 25 回日本形成外科学会基礎学術集会, 大阪, 2016 年 9 月
18. 日原正勝, 覚道奈津子, 森本尚樹, 原朋也, 来方远, 楠本健司. ヒト線維芽細胞成長因子(bFGF)とゼラチンハイドロゲルシートを用いた皮弁生着延長効果の検討. 第 25 回日本形成外科学会基礎学術集会, 大阪, 2016 年 9 月
19. 畔熱行, 楠本健司, 森本尚樹, 覚道奈津子, 日原正勝, 光井俊人, 尾川武史, Lai Fangyuan,
Sharon Claudia Notodihardjo, 原朋也. 血管の氷点下非凍結保存後移植. 第 25 回日本形成外科
学会基礎学術集会 大阪, 2016 年 9 月
20. Kusumoto, K., Fukuda, S., Miyake, Y., Morimoto, N., Kakudo, N., Ogura, T., Hara, T. and Koseki, R.
Platelet-Rich Plasma and the ulcer treatment with various applications. 5th congress of
WUWHS2016, Florence, Italy, 2016 年 9 月
21. Morimoto, N., Kakudo, N., Koseki, R., Ogura, T., Hara, T. and Kusumoto, K. Easy-to-use
preservation and application of platelet-rich plasma; The combination wound therapy with a gelatin
sheet and freeze-dried platelet-rich plasma. 5th congress of WUWHS2016, Florence, Italy, 2016 年 9月
22. Kusumoto, K. Chronic Wonds; Complications Management. Educational Lecture, 5th congress of
WUWHS2016, Florence, Italy, 2016 年 9 月
23. Kusumoto, K. Platelet-rich plasma and the combination usage at the adipoinjection. Invited Lecture,
The 3rd Chinese Academic Conference on Adipose Plastic Surgery & Symposium on Adipose
Transplantation, Shanghai, China, 2016 年 7 月
24. 楠本健司. 多血小板血漿(PRP)を用いたアンチエイジング. 第 10 回見た目のアンチエイジン
グ研究会, 講演, 東京, 2016 年 7 月
25. Sakamoto, M., Morimoto, N., Ogino, S., Jinno, C., Ito, R. and Suzuki, S. Development of Gelatin Gel
Sheets Sustaining EGF and bFGF. The 13th Japan-Korea Congress of Plastic and Reconstructive
Surgery, Kanazawa, 2016 年 5 月
26. 森本尚樹. 皮膚の再生医療「報道機関向け話題提供の会」. 講演, 第 59 回日本形成外科学会
総会・学術集会, 福岡, 2016 年 4 月
27. 楠本健司. 美容医療における再生医療「報道機関向け話題提供の会」. 講演, 第 59 回日本形成外科学会総会・学術集会, 福岡, 2016 年 4 月
28. 森本尚樹, 神野千鶴, 覚道奈津子, 坂本道治, 光井俊人, 畔熱行, 鈴木茂彦, 楠本健司. 高圧処
理母斑皮膚と自家培養表皮を用いた色素性母斑に対する新規皮膚再生治療. 第 59 回日本形成外科学会総会・学術集会, 福岡, 2016 年 4 月

79

研究成果報告書の概要
講座等名

皮膚科学講座分担研究課題

炎症性皮膚疾患において皮膚に浸潤する単球サブセットの解析

キーワード

乾癬、サルコイドーシス、単球、CD14、CD16

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

岡本祐之

5名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
岡本祐之（教授）：研究の総括
神戸直智（准教授）：研究指導
山﨑文和（講師）：臨床検体の準備
植田郁子（助教）：臨床検体の準備
Chuyen TH Nguyen（大学院生）：免疫蛍光組織染色および解析
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） 尋常性乾癬の皮膚の組織学的研究
尋常性乾癬の皮膚組織においては，健常者の皮膚組織とは異なり，CD14+CD16+陽性となる単球が浸潤していた。また乾癬の病勢を PASI スコアによって評価すると，病勢の強い乾癬患者においては真皮のみならず，CD14+CD16+陽性細胞が表皮内にも浸潤していることが確認された。また，
これら CD14+CD16+陽性細胞は，CD1a，CD11c，CD68 にも陽性を示すことから，皮膚の免疫に関わるランゲルハンス細胞，樹状細胞，マクロファージに皮膚局所において分化する細胞であることが示唆されるとともに，TNFα陽性であり乾癬の病態にも深く関与することが示唆された。この成果は，Nguyen CTH, Ueda-Hayakawa I, Yamazaki F, Mizuno K, Kambe N, Okamoto H. Properties of
CD14+CD16+ cells in psoriatic skin lesions. 25th Congress of the European Academy of Dermatology and
Venereology, ウィーン（オーストリア），2016/09 として国際学会で発表した。
2） サルコイドーシスの皮膚の組織学的研究
サルコイドーシスの患者において，血清中の可溶性 IL-2 受容体が上昇することを明らかにしたが，この解析と平行して Th2 サイトカインとして捉えられる TARC の上昇が確認された。現在，サルコイドーシス患者の皮膚組織を用いて，乾癬での先行研究に準じて，CD14+CD16+陽性となる
単球の浸潤を患者皮膚組織を用いて確認するとともに，TARC 産生細胞の同定を試みている。
優れた成果があがった点
乾癬の病変組織において CD14+CD16+陽性となる単球が浸潤することは既に他の研究者から報告されていたが，病勢の強い乾癬患者においては真皮のみならず CD14+CD16+陽性細胞が表皮内にも浸潤していることを明らかにしたのは，我々の報告が最初である。
問題点
乾癬の病変組織で確認される CD14+CD16+陽性の単球が乾癬独特の皮膚構築にどのように関わるかを明らかにする必要があり，表皮突起の延長との相関といった統計的な解析が必須と考えている。
サルコイドーシスにおいては，血清中で確認された TARC がどのような細胞から産生されているのかを，患者組織を用いて同定する必要があると考えている。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）
1. Thi Hong Nguyen, C., Kambe, N., Kishimoto, I., Ueda-Hayakawa, I. and Okamoto, H. Serum solubleinterleukin-2 receptor level is more sensitive than angiotensin-converting enzyme or lysozyme fordiagnosis of sarcoidosis and may be a marker of multiple organ involvement. J. Dermatol. 44,
789-797, 2017. 査読あり
＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）
1. Nguyen, CTH., Ueda-Hayakawa, I., Yamazaki, F., Mizuno, K., Kambe, N. and Okamoto, H.
Properties of CD14+CD16+ cells in psoriatic skin lesions. 25th Congress of the European Academy ofDermatology and Venereology, Vienna, Austria, 2016 年 9 月

80

研究成果報告書の概要
講座等名

眼科学教室

分担研究課題マウス Bruch 膜弾性板の発達及び加齢性変化

キーワード

fibrillin-1、tropoelastin、fibulin-5、LTBP-2、LTBP-4、Bruch 膜弾性板

講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

高橋

寛二

4名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
高橋寛二（教授）：研究の管理及び指導山田晴彦（准教授）：研究の管理及び指導盛秀嗣（大学院生）：研究責任者
遠山桂子（研究助手）：研究責任者の研究補助
中邨智之（薬理学講座・教授）・赤間智也（薬理学講座・准教授）：共同研究者
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
加齢黄斑変性症の主病変である脈絡膜新生血管の病態（図 1）を理解するうえで、Bruch 膜弾性板に関する理解を深めることは必要不可欠である。これまでに、マウス Bruch 膜弾性板に関する研究は多数報告されている。しかし、これらの報告は全て組織学的な研究のみの報告であった。近年、弾性線維に関する研究が深まり、組織学的研
究以外にも分子生物学的研究に関する報告が散 図 1：実験的脈絡膜新生血管のマウスモデルの蛍光見されるようになった。そこで、我々研究グルー
眼底造影写真（左）とその組織像（右）プはマウス Bruch 膜弾性板に着目し、弾性線維研究の第一人者である薬理学講座の中邨らと共同研究を行うことになった。
弾性線維構成に必須の蛋白質として、fibrillin-1, tropoelastin, fibulin-5, LTBP-2, LTBP-4 があるが、本研究においても、マウス Bruch 膜弾性板にこれら 5 種類の蛋白質が存在することを免疫染色により世界で初めて証明した。
さらに、マウス Bruch 膜弾性板の胎生期〜老齢期までの経年変化について、これら 5 種類のmolecular における quantitative Real-time PCR による定量的変化及び電子顕微鏡による組織学変化を観察することにより、マウス Bruch 膜弾性板の完成時期を生後 3 週〜6 週と断定した。
以上の研究結果をまとめ、現在論文投稿中である。
優れた成果があがった点
マウス Bruch 膜弾性板に弾性線維形成に必須の fibrillin-1, tropoelastin, fibulin-5, LTBP-2, LTBP-4が存在することを証明した。
電子顕微鏡下における Bruch 膜弾性板については、これまでの報告では線維の束として報告されるのみであった。本研究で初めてマウス Bruch 膜弾性板を電子顕微鏡下での観察において、microfibril 及び tropoelastin に分けて観察し、胎生期〜老齢期までの組織学的変化を報告した。
マウス Bruch 膜弾性板の完成時期を定量的評価 (quantitative Real-time PCR) 及び定性的評価（免疫染色、電子顕微鏡）により生後 3 週〜6 週と断定した。
問題点
本研究では眼球全体をサンプルとした。本来であれば、Bruch 膜のみ抽出すれば、より精密な定81量測定ができる。しかし、Bruch 膜はごく微量組織であり、Bruch 膜のみ分離抽出することは非常に困難である。
→今後は lasermicrodissection を使った quantitative Real-time PCR による定量測定法も try してみる必要があると思われた。
研究業績＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1.

盛秀嗣. Development and age-related changes of the elastic lamina of Bruch’s membrane in miceeyes. ARVO-Asia 2017, Brisbane, Australia, 2017 年 2 月

2.

盛秀嗣. Changes in immunostaining of five elastic fiber components in Bruch’s membrane andlaser-induced choroidal neovascularization in mice. ARVO2017, Seattle, USA, 2016 年 5 月

3.

盛秀嗣. 正常マウスの Bruch 膜弾性板を構成する蛋白質の検討. 第 120 回日本眼科学会, 仙台,2016 年 4 月

82

研究成果報告書の概要
講座等名

物理学教室

分担研究課題

細胞内機能と構造のイメージングに関する研究

キーワード

軟 X 線顕微鏡、原核細胞オルガネラ、XAFS、細胞シート、ヤング率講座内の本プロジェクト参加研究者数

事業推進者名

楠本

邦子・影島

賢巳

2名

研究組織（本プロジェクトに参加する研究者の役割や大学院生の状況等）
影島賢巳（教授）：細胞シート力学物性計測装置の開発
楠本（竹本）邦子（准教授）：軟 X 線顕微鏡による細胞内機能イメージング
研究成果の概要（平成 28 年度の研究成果について）
1） 軟 X 線顕微鏡による細胞内機能イメージング
未処理の原核細胞オルガネラや細胞外代謝物を軟 X 線顕微鏡 (XM)
で観察し、機能や状態のイメージング（図 1）を目指している。フルフィールド透過 X 線顕微鏡と走査型透過 X 線顕微鏡を用い、細胞径1m 以下の微細シアノバクテリアを、化学固定や染色や薄片化などの試料調整を行うことなく観察した。培養条件を制御することで、通常状態の細胞と分裂期の細胞を観察することができた。さらに、X 線吸収分光法とイメージングを組み合わせた観察を行った。X 線吸収微細2 µm

構造 (X-ray absorption fine structure: XAFS) スペクト解析の結果から、分裂中と考えられる細胞で、染色体様構造体の他に、細胞内で特定の元素の集積を確認した。今後、この元素と細胞分裂の関連について研

図 1：軟 X 線顕微鏡による微細ケイソウの 3 次元像

究を進めて行く予定である。
2） 細胞シート力学物性計測装置の開発
円形孔上に担持した試料に磁性球体を載せて磁気力を加える旧装置は、操作は比較的容易であるが、磁性球の自重のため無負荷状態
近辺のデータが得られず、また試料の上下方
向がふさがれるため他の観察・操作手段との併用が困難である。本研究では、装置の改良版の開発を目的として、液面直下に浮遊させたシート状試料の両端を 2 つの可動ピースで保持し、片方のピースを制御された磁気力で
図 2：細胞シート力学物性計測装置

牽引してバネでつながれた他方の変位量から張力を検出する方式を考案し、装置（図 2）を試作した。デモンストレーション用試料として厚さ 7 ミクロンの医療用ポリウレタンシートを用い、シートの 1 軸方向伸長距離と牽引力の関係を計測した。シートのひずみ量が 0.03 以下の領域ではほぼ線形に近い特性が得られ、ヤング率として 2.4 MPa という妥当な値を得た。
優れた成果があがった点
軟 X 線顕微鏡による細胞内機能イメージングでは、X 線イメージングと XAFS スペクトから、染色体様構造体と特定元素の集積を確認することができた。この方法が、オルガネラや機能と関連した特定元素を、特別な試料調整をすることなく観察できる方法として有効であることを示す
ことができた。
細胞シート力学物性計測装置の開発では、浮遊したシート状試料に加える張力を、完全無負荷

83の状態から約 2.5 mN までの範囲で連続的に調整できるようになり、旧装置の欠点が克服できる可能性が示された。
問題点
軟 X 線顕微鏡による細胞内機能イメージングでは、XAFS スペクルから元素だけではなく化学結合状態についての情報も得られるが、データ量が膨大でデータ解析に時間が掛かるので、解析方法の改良が必要である。
細胞シート力学物性計測装置の開発では試料の適切な担持方法が問題である。繊細な細胞シー
ト試料を担持するには、今回ウレタンシートに用いた機械的なクランプ方法より試料へのダメー
ジが少なく、かつ張力負荷時でも保持部分のスリップが起きないような方法を見出す必要がある。
研究業績＜雑誌論文＞（著者名・論文標題・雑誌名・レフェリー有無・巻・発行年・ページ）

1.

Kageshima, M., Maruyama, T., Akama, T. and Nakamura, T. Novel magnetic indenter for rheologicalanalysis of thin biological sheet for regenerative medicine. Rev. Sci. Instrum. 87, 074302 (1-12), 2016.
査読あり

2.

Niiyama, Y., Tuji, A., Takemoto, K. and Ichise, S. Pseudanabaena sp. nov. and P. subfoetida sp. nov.
(Cyanophyta/ Cyanobacteria) producing 2-methylisoborneol from Japan. Fottea 16, 1-11, 2016. 査読あり

3.

Takemoto, K., Yoshimura, M., Yamamoto, A., Ichise, S., Namba, H. and Kihara, H. Imaging of
musty-odor producing filamentous cyanobacteria by various microscopies, AIP Conf. Proc. 1696,
020024, 2016. 査読あり

＜学会発表＞（発表者名・発表標題・学会名・開催地（海外の場合は国名と都市名）・発表年月）

1.

Kageshima, M., Maruyama, T., Akama, T. and Nakamura, T. Rheological Study of Cell Sheet andMatrix Sheet with Home-Built Magnetic Indenter. International Conference on Rheology (ICR2016),
京都, 2016 年 8 月

2.

Takemoto, K., Yoshimura, M., Ohigashi, T., Namba, H. and Kihara, H. Application of soft X-ray
microscopy to environmental microbiology of hydrosphere. The 13th International Conference on
X-ray microscopy (XRM2016), Oxford, UK, 2016 年 8 月

3.

影島賢巳, 丸山敏朗, 赤間智也, 中邨智之. 細胞外マトリックスシートの力学物性計測. 第 48
回日本結合組織学会学術大会学術大会, 長崎, 2016 年 6 月

4.

竹本邦子, 吉村真史, 難波秀利, 木原裕. 結像型軟 X 線顕微鏡による Pseudanabaena sp.の細胞内微細構造観察. 日本放射光学会, 千葉, 2016 年 1 月

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Ⅳ．病態分子イメージングセンター規程(設置)
第 1 条 関西医科大学に病態分子イメージングセンター（以下「センター」という。
）を
置く。
(目的)
第 2 条 センターは、基礎と臨床のトランスレーショナル研究発展のため、神経、がん、代謝の 3 研究グループと支援グループの研究体制を構築する。分子イメージング
システムを駆使して、患者と動物モデルの疾患の病態を分子から個体まで体系的に解明し、課題とする疾患の診断治療法の開発に結びつけることを目的とする。
(部門)
第3条

センターに次の部門を置く。
(1)

神経部門

(2)

がん部門

(3)

代謝部門

(職員)
第4条

センターに専任教員を 1 名置き、他の教職員は本学の教職員をもつて充て、兼務とする。ただし、本学教職員以外の者を嘱託として委嘱することができる。

(センター長)
第5条

センターにセンター長を置く。

2

センター長は、センターを管理し、その運営にあたる。

3センター長は、大学院医学研究科委員会構成員から学長が任命する。

4

センター長の任期は 2 年とし、再任を妨げない。

5

センター長に欠員が生じたときの後任の任期は、前任の残任期間とする。

(副センター長)
第6条
2

センターに副センター長を置く。

副センター長は、センター長を補佐し、センター長不在のときは、その職務を代行する。

3

副センター長は、大学院医学研究科委員会構成員からセンター長が推薦し、学長が任命する。

4

副センター長の任期は 2 年とし、再任を妨げない。

5

副センター長に欠員が生じたときの後任の任期は、前任の残任期間とする。

(部門統括者)
第 7 条 第 3 条の部門に部門統括者(基礎系・臨床系)をおく。
2

部門統括者は、センター長と副センター長とが協議して大学院医学研究科委員会構成員の中から推薦し、学長が任命する。

(運営委員会)
第8条
2

センターに運営委員会を置く。

運営委員会は、次の者をもつて構成する。
(1)

センター長
85

(2)

副センター長(3)

部門統括者 6 名

3

前項第 1 号及び第 2 号に掲げる委員の任期は、在任期間とする。

4

第 2 項第 3 号に掲げる委員の任期は 2 年とする。ただし、再任を妨げない。

5

運営委員会は、センターの円滑な運営をはかるために、次の事項を審議する。
(1)

センターの予算の審議(2)センター長が必要とする事項(3)

センターにおける研究の充実並びに促進に関する事項(4)

研究の成果の活用に関する事項(5)

その他センター運営に関する事項

6

センターの施設利用に関することは、綜合研究施設に付託する。

7

運営委員会は、必要に応じてセンター長がこれを招集し、議長となる。

8

運営委員会の庶務は、大学事務部研究課において行う。

(規則の改廃)第9条

この規則の改廃は、センター運営委員会及び大学院医学研究科委員会の議を経て学長が決定する。

附則

この規程は、平成 29 年 2 月 15 日から施行する。
附則

この規程は、平成 29 年 4 月 1 日から施行する。

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87

病態分子イメージングセンター

分子イメージングによる体系的病態の解明と診断治療法の開発
平成 28 年度研究成果報告書
第3号
関西医科大学
平成 29 年 7 月

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