SR21142

最終報告書

表

題：1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパンの細菌を用いる
復帰突然変異試験

試験番号：SR21142

株式会社化合物安全性研究所- 1 -SR21142

試験責任者の署名

表

題： l‑メトキシ‑
3‑(
3‑メトキシプロポキシ）プロパンの細菌を用いる復帰突然変異試験

試験番号： SR21142

株式会社化合物安全性研究所以〉，＞／年‑2 ‑1i 月 ュ 1日

SR21142

陳述書
表

題： l
‑メトキシ‑
3（ー3‑メトキシプロポキシ）プロパンの細菌を用いる復帰突然変異試験

試験番号： SR21142

本試験は，「新規化学物質等に係る試験を実施する試験施設に関する基準について」（平成 23年
3月 3
1 日薬食発 033
1第 8号・平成 23・03・29製局第 6号・環保企発第 1
1
0
3
3
1
0
1
0号 厚 生 労 働 省

医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環境政策局長連名通知）を遵守して実施した（ただし，被験物質の安定性を除く）．
本試験に用いた試験方法は，試験法ガイドライン「新規化学物質等に係る試験の方法について」（平成23年 3月 3
1 日薬食発 033
1第 7号・平成 23・03・29製局第 5号・環保企発第 110331009号厚生労働省医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環境政策局長連名通知）および「新規化学物質等に係る試験の方法について」の一部改正について（令和 2年 1
1月 5日薬生発 1
10
5第 2号・ 20201015 製局第 1 号・環保企発第 2011055 号厚生労働省医薬•生活衛生局長・経済産業省製造産業局長・環境省大臣官房環境保健部長連名通知）に準拠した．

株式会社化合物安全性研究所
試験責任者⇒C上 ／ 年 ノ ̲ j ̲ 月 ̲ J ̲7

‑3 ‑

日

SR21142

信頼性保証書表題：l‑メトキシ ‑
3（ー3
‑メトキシプロポキシ）プロパンの細菌を用いる復帰突然変異試験

試験番号：SR21142

本試験は，株 式 会 社 化 合 物 安 全 性 研 究 所 Q
AUによって，下記のとおり査察された ．
査察段階

査察日

試験責任者

運営管理者

への報告日

への報告 日

試験計画書

2
0
2
1年 9月 1日

2021年 9月 1日

202
1年 9月 1日

被験物質の管理2021年 9月 9日

202
1年 9月 9 日

202
1年 9月 9日

被験物質の調製

20
2
1年 9月 9日

2021年 9月 9日

202
1年 9月 9日

被験物質処理2021年 9月 9日

2021年 9月 9日

202
1年 9月 9日

観察および計測

2021年 9月 1
3日

2021年 9月 1
3日

2
0
2
1年 9月 13日

試験計画書変更書 (
N
o
.
I
)

2
0
2
1年 1
0月 2
8日

2021年 1
0月 28 日2021年 1
0月 28 日2021年 1
1月 1
5日

2
0
2
1年 1
1月 1
5日

2021年 1
1月 1
5日

2
0
2
1年 1
1月 1
5日

2021年 1
1月 1
5日

2
0
2
1年 1
1月 1
5日

2
0
2
1年 1
2月 27 日2021年 1
2月 27 日生データ

最終報告書（草案）：図表

最終報告書（草案）：本文
最終報告書

2
0
2
1年 1
1月 1
2日
2
0
2
1年 1
1月 1
5日
2
0
2
1年 1
1月 1
2日
2
0
2
1年 1
1月 1
5日
202
1年 1
1月 1
2日
2
0
2
1年 1
1月 1
5日
2
0
2
1年 1
2月 27 日

本試験は，「新規化学物質等に係る試験を実施する試験施設に関する基準について」（平成 23

年 3月 31日薬食発 0331第 8号・平成 23• 0
3• 29製局第 6号・環保企発第 110331010号 厚 生 労働省医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環境政策局長連名通知）に従い実施された
本試験は，試験計画書に従って実施され，また，本報告書には当該試験に使用した方法および手順が正確に記載されており，試験成績には当該試験の実施過程において得られた生データが正確に反映していることを確認した．

株式会社化合物安全性研究所
QAU責任者立 ↓‑4 ‑土 月 ̲)..1 日

SR21142

目次頁

表紙 ························································································································· 1
試験責任者の署名 ······································································································· 2
陳述書 ······················································································································ 3
信頼性保証書 ············································································································· 4
目次 ························································································································· 5
表題 ························································································································· 7
試験番号 ··················································································································· 7
試験目的 ··················································································································· 7
試験実施基準および試験法ガイドライン ········································································· 7
試験委託者 ················································································································ 7
試験施設 ··················································································································· 7
試験責任者 ················································································································ 8
試験従事者およびその業務分担 ····················································································· 8
試験日程 ··················································································································· 8
1 要約 ······················································································································ 92 緒言 ····················································································································· 10
3 材料および方法 ······································································································ 10
4 成績 ····················································································································· 19
5 考察 ····················································································································· 20
6 試験成績の信頼性に影響を及ぼしたと思われる環境要因················································ 20
7 資料の保存 ············································································································ 20
Tables1

Results of dose-finding test in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol
Dimethyl Ether ···························································································· 212

Results of main test in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl
Ether········································································································· 22

Figures1-1

Dose-response curves of revertants on Salmonella typhimurium TA100 without
metabolic activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl
Ether········································································································· 23- 5 -SR21142

1-2

Dose-response curves of revertants on Salmonella typhimurium TA100 with metabolic
activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl Ether ··········· 24

2-1

Dose-response curves of revertants on Salmonella typhimurium TA1535 without
metabolic activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl
Ether········································································································· 25

2-2

Dose-response curves of revertants on Salmonella typhimurium TA1535 withmetabolic activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl
Ether········································································································· 26

3-1

Dose-response curves of revertants on Escherichia coli WP2uvrA without metabolic
activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl Ether ··········· 27

3-2

Dose-response curves of revertants on Escherichia coli WP2uvrA with metabolic
activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl Ether ··········· 28

4-1

Dose-response curves of revertants on Salmonella typhimurium TA98 without
metabolic activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl
Ether········································································································· 29

4-2

Dose-response curves of revertants on Salmonella typhimurium TA98 with metabolic
activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl Ether ··········· 30

5-1

Dose-response curves of revertants on Salmonella typhimurium TA1537 without
metabolic activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl
Ether········································································································· 31

5-2

Dose-response curves of revertants on Salmonella typhimurium TA1537 withmetabolic activation in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl
Ether········································································································· 32

Annex
1

Historical control data for bacterial reverse mutation test ··········································· 33
最終頁 33- 6 -SR21142

表題
1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパンの細菌を用いる復帰突然変異試験

試験番号SR21142

試験目的
Salmonella typhimurium および Escherichia coli を用いて，1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパンの細菌における遺伝子突然変異誘発性の有無を検討した．

試験実施基準および試験法ガイドライン
試験実施基準 (GLP) ：｢新規化学物質等に係る試験を実施する試験施設に関する基準について｣ (平成 23 年 3 月 31 日薬食発 0331 第 8 号・平成 23･03･29 製局第 6号・環保企発第 110331010 号 厚生労働省医薬食品局長・経済産業省
製造産業局長・環境省総合環境政策局長連名通知)
試験法ガイドライン ：｢新規化学物質等に係る試験の方法について｣ (平成 23 年 3 月 31 日薬
食発 0331 第 7 号・平成 23･03･29 製局第 5 号・環保企発第 110331009
号厚生労働省医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環
境政策局長連名通知)｢新規化学物質等に係る試験の方法について｣の一部改正について (令和 2 年 11 月 5 日薬生発 1105 第 2 号・20201015 製局第 1 号・環保企
発第 2011055 号 厚生労働省医薬・生活衛生局長・経済産業省製造産業局長・環境省大臣官房環境保健部長連名通知)

試験委託者
名称

：厚生労働省医薬・生活衛生局

所在地：東京都千代田区霞が関 1-2-2 (〒100-8916)

担当者

：

試験施設
名称

：株式会社化合物安全性研究所

所在地：札幌市清田区真栄 363 番 24 (〒004-0839)

運営管理者

：

- 7 -

SR21142

試験責任者
氏名

：

所属

：株式会社化合物安全性研究所 安全性研究部

試験従事者およびその業務分担
被験物質調製

：

試験操作

：

試験日程
試験開始日

：2021 年 9 月

1 日

実験開始日

：2021 年 9 月

9 日

前培養開始

：2021 年 9 月

8 日

被験物質処理：2021 年 9 月 9 日

コロニー計数：2021 年 9 月 13 日

用量設定試験

本試験
前培養開始：2021 年 9 月 21 日

被験物質処理：2021 年 9 月 22 日

コロニー計数：2021 年 9 月 24 日

実験終了日

：2021 年 9 月 24 日

試験終了日

：2021 年 12 月 27 日

- 8 -

SR21142

1 要約
1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパンの細菌における遺伝子突然変異誘発性の有無を，Salmonella typhimurium TA100，TA1535，TA98，TA1537 および Escherichia coli WP2uvrAを用いる復帰突然変異試験により検討した．試験は，被験物質の調製媒体に蒸留水を使用し，直接法 (S9 代謝活性化系の非存在下) および代謝活性化法 (S9 代謝活性化系の存在下) で，プ
レインキュベーション法により実施した．
用量設定試験では，直接法および代謝活性化法ともに被験物質の最高用量を 5000 µg/plate とし，以下公比 3 で 6 段階の計 7 用量 (6.86 ~ 5000 µg/plate) を設定した．本試験では，用量設定試験の結果から，直接法および代謝活性化法ともに，被験物質の最高用量を 5000 µg/plate とし，以下公比 2 で 5 段階の計 6 用量 (156 ~ 5000 µg/plate) を設定した．
試験の結果，用量設定試験および本試験での各菌株の直接法および代謝活性化法のいずれの試験系列においても，被験物質群の復帰変異コロニー数の平均値は陰性対照群の平均値の 2倍未満であり，用量の増加にともなう復帰変異コロニー数の増加も認められなかった.
析出および生育阻害はいずれの菌株においても観察されなかった．用量設定試験および本試験の結果には再現性が確認された．
各菌株の陰性対照群の復帰変異コロニー数の平均値は，すべて試験施設の背景データに基づ
く管理値の範囲内であり，各菌株の陽性対照群の復帰変異コロニー数の平均値は，それぞれの陰性対照群の平均値と比較して 2 倍以上の明確な増加が認められた．
以上のことから，1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパンは，当該試験条件下において遺伝子突然変異誘発性を有しないと判断した．

- 9 -SR21142

2 緒言
Salmonella typhimurium および Escherichia coli を用いて，1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパンの細菌における遺伝子突然変異誘発性の有無を検討した．

3 材料および方法
3.1 被験物質
名称：1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパン

別名 1) 2)：ジプロピレングリコールジメチルエーテル (異性体混合物)
Dipropylene Glycol Dimethyl Ether

CAS 番号：111109-77-4

化審法官報公示番号 1) ：(7)-1321
構造式 2)：

000/¥/¥/¥
(C3
屯
） （
Cが6
)

化学式 1)2)：C8H18O3

分子量 1)：162.23

物理化学的性質 1)3) ：外観；無色，澄明の液体
密度；0.904 g/mL
沸点；171°C
融点；-75°C
引火点；65°C
含量 3)：99.5% (キャピラリーカラム GC) (異性体混合物)

ロット番号 3)：

製造者・供給者：

試験施設受領日：2021 年 7 月 30 日

保存場所および保存期間：被験物質保存室 [2021 年 7 月 30 日 (試験施設受領) ~ 2021 年 9月 22 日 (本試験 処理)]
保存条件

：冷蔵 (実測範囲 3.1 ~ 3.6°C)，気密，遮光

安定性 1) (非 GLP)

：光により変質するおそれがある．

- 10 -

SR21142

被験物質管理責任者からの移管量：5.0008 g
使用量：1.0000 g

取扱上の注意：ゴム手袋，マスク，保護メガネ着用

参考資料：1) 安全データシート：ジプロピレングリコールジメチルエーテル (異性体混合物)
2) NITE-CHRIP：1-メトキシ-3-(3-メトキシプロポキシ)プロパン
3) 検査成績書：ジプロピレングリコールジメチルエーテル (異性体混合物)

3.2 被験物質の調製
媒体：蒸留水 (日本薬局方注射用水) (3.3.1 陰性対照物質と同一のものを使
用)

調製方法

：被験物質は媒体を用いて溶解ならびに希釈し，所定の濃度に調製した．
調製方法は以下に記載する．
a

被験物質必要量をメスフラスコに精秤した．

b

メスフラスコに媒体を少量ずつ混和しながら加え，メスアップした．

c

メスフラスコに栓をし，よく混和した後，プラスチック製試験管に移し入れ，最高濃度調製液を調製した．
用量設定試験では，最高濃度調製液として 50 mg/mL 調製液を調製し，以下公比 3 でタッチミキサーで混和しながら希釈し，
16.67，
5.56，1.85，0.617，0.206，0.0686 mg/mL 調製液を調製した．
本試験では，50 mg/mL の濃度を調製し，以下公比 2 でタッチミ
キサーで混和しながら希釈し，25，12.5，6.25，3.13，1.56 mg/mL
調製液を調製した．

媒体の選択理由：試験施設において蒸留水を用いて調製確認 (SR21142 検討) を行った．
その結果，被験物質は 50 mg/mL の蒸留水には溶解することが確認され，反応性 (発熱，変色，発泡等) はみられなかった．このことから，
当該試験の媒体として蒸留水を使用した．

調製頻度

：用時調製

調製上の注意：ゴム手袋，マスク，保護メガネ着用．

残余調製液の処理：残余調製液は，産業廃棄物として回収した．

- 11 -

SR21142

3.3 対照物質
3.3.1 陰性対照物質
名称：蒸留水 (日本薬局方注射用水，Water)

製造者：株式会社大塚製薬工場

ロット番号：K0H73

保存場所：被験物質保存室

保存条件：室温，開封後の残余は廃棄した．

被験物質管理責任者からの移管量：20 mL × 6 本
原液のまま使用した．
使用量：80 mL

陰性対照物質の選択理由：被験物質の調製媒体を陰性対照物質として使用した．
3.3.2 陽性対照物質
以下に示す陽性対照物質調製液を事前に調製し，その調製液を試験に使用した．
3.3.2.1

2-(2-フリル)-3-(5-ニトロ-2-フリル)アクリルアミド (AF-2)
製造者：富士フイルム和光純薬株式会社

ロット番号：CAH4001

含量：98.8%

保存条件

：室温

調製方法

：ジメチルスルホキシド (ロット番号 KCP6773，富士フイルム和光純
薬株式会社) に 0.1 および 1 g/mL の濃度で溶解．

3.3.2.2

アジ化ナトリウム (NaN3)

製造者：富士フイルム和光純薬株式会社

ロット番号：YLN7517

純度：100.5%

保存条件

：室温

調製方法

：蒸留水 (日本薬局方注射用水，ロット番号 K0E82，株式会社大塚製薬工場) に 5 g/mL の濃度で溶解．

3.3.2.3

9-アミノアクリジン塩酸塩 (9-AA)

製造者：Fluorochem Ltd.

バッチ番号

：FCC34329

純度：99.94%- 12 -

SR21142

保存条件

：冷蔵

調製方法

：ジメチルスルホキシド (ロット番号 KCP6773，富士フイルム和光純
薬株式会社) に 800 g/mL の濃度で溶解．

3.3.2.4

2-アミノアントラセン (2-AA)

製造者：富士フイルム和光純薬株式会社

ロット番号：CAM6587

含量：96.6%

保存条件

：室温

調製方法

：ジメチルスルホキシド (ロット番号 KCP6773，富士フイルム和光純
薬株式会社) に 5，10，20 および 100 g/mL の濃度で溶解．

3.3.3 陽性対照物質調製液の取扱い
保存条件：分注後，-20ºC 以下で凍結保存．

使用期限：2021 年 11 月 3 日 (調製後 1 年)

取扱上の注意：ゴム手袋，マスクおよび保護メガネ着用．

残余調製液の処理：産業廃棄物として回収した．

3.4 試験系
菌株：以下の 5 菌株を使用した．
塩基対置換型
Salmonella typhimurium TA100
Salmonella typhimurium TA1535
Escherichia coli WP2uvrA
フレームシフト型
Salmonella typhimurium TA98
Salmonella typhimurium TA1537

菌株の入手先：菌株の入手年月日：1991 年 10 月 18 日

菌株の保存条件：培養液 8 mL に対しジメチルスルホキシドを 0.7 mL の割合で加え，分
注後，-80ºC 以下で凍結保存．

菌株の選択理由：遺伝毒性を有する化学物質の検索に適した細菌として広く受入れられていることから選択した．

菌株の特性検査：アミノ酸要求性，膜変異 rfa 特性，紫外線感受性，薬剤耐性ならびに- 13 -

SR21142

陰性対照値および陽性対照値について検査し，規定の特性が保持されていることが確認された菌株を試験に使用した．
3.5 培地3.5.1 前培養用培地
名称および製造者：ニュートリエントブロス培地 (NUTRIENT BROTH No.2，Oxoid Ltd.)

ロット番号：2202237

調製方法：蒸留水 (日本薬局方注射用水，ロット番号 0H87，株式会社大塚製薬工場) を用いて 25 g/L に調製した．Salmonella typhimurium TA98 およびTA100 の培地には，使用時にアンピシリンナトリウム (ロット番号
M7H8514，ナカライテスク株式会社) を 25 g/mL となるように添加した．

3.5.2 試験用培地 (最少グルコース寒天培地：以下プレートと称する)名称および製造者：バイタルメディア AMT 培地 (極東製薬工業株式会社)

ロット番号：DZAM7902

製造日：2021 年 7 月 9 日

有効期限：2022 年 1 月 5 日

組成：調製された組成を次表に示す．
培地 1000 mL 中の組成
硫酸マグネシウム七水和物
クエン酸一水和物
リン酸水素二カリウム
リン酸二水素アンモニウム
水酸化ナトリウム
ブドウ糖
寒天末 (SSK セールス：大洋寒天，ロット番号 BM-M5-281)

0.2 g
2.0 g
10.0 g1.92 g0.66 g20.0 g15.0 g3.5.3 重層用培地
調製方法：次表の組成の (A) ソフトアガーおよび (B) アミノ酸溶液を蒸留水(日本薬局方注射用水，ロット番号 0H87，株式会社大塚製薬工場) を用いて調製し，使用時に (A) : (B) ＝ 10 : 1 の容量比で混合した．
Salmonella typhimurium には L-ヒスチジンおよび D-ビオチンのアミノ酸溶液を，Escherichia coli には L-トリプトファンのアミノ酸溶液を使用した．これらの重層用培地は使用時まで 47ºC に保温した．

- 14 -

SR21142組

成(A) ソフトアガー
BactoTM Agar
(ロット番号 0063461，Becton, Dickinson and Company)
塩化ナトリウム(ロット番号 KCJ4743，富士フイルム和光純薬株式会社)(B) アミノ酸溶液
L-ヒスチジンおよび D-ビオチン溶液(L-ヒスチジン，ロット番号 LKE0405， 和光純薬工業株式会社)(D-ビオチン，ロット番号 LKH4528，和光純薬工業株式会社)
または
L-トリプトファン溶液(L-トリプトファン，ロット番号 WDN5663，和光純薬工業株式会社)

0.6%
0.5%

各々 0.5 mmol/L

0.5 mmol/L

3.6 S9 mix
S9 の製造者：家田貿易株式会社

ロット番号：RAA202106A

製造日：2021 年 6 月 18 日S9 の製造方法：フェノバルビタール (PB) および 5, 6-ベンゾフラボン (BF) の腹腔内投与で酵素誘導 (1 日目 PB 30 mg/kg，2 日目 PB 60 mg/kg，3 日目 PB
60 mg/kg + BF 80 mg/kg，4 日目 PB 60 mg/kg を，各々腹腔内投与) した Slc:SD 系ラット (雄，7 週齢，体重範囲 184 ~ 240 g) の 5 日目に肝ホモジネートより調製された．

S9 の保存条件：-80ºC で凍結保存

S9 の使用期限：製造後 6 ヵ月 (製造日より 4 ヵ月以内に使用)

S9 mix の調製方法：S9，S9 mix 用 Cofactor (ロット番号 999101，Cofactor-I，オリエンタル
酵母工業株式会社) および蒸留水 (日本薬局方注射用水，ロット番号
0H87，株式会社大塚製薬工場) を用いて，用時調製した．なお，S9 お
よび S9 mix 用 Cofactor の使用ロットは，それぞれベンゾ[a]ピレンを用いた復帰突然変異試験により，生物学的活性が確認されている．
調製した S9 mix 1.0 mL 中の組成は次表の通りである．

- 15 -

SR21142
S9 mix 1.0 mL 中の組成S9
塩化マグネシウム 6 水和物
塩化カリウムグルコース-6-リン酸
還元型ﾆｺﾁﾝｱﾐﾄﾞｱﾃﾞﾆﾝｼﾞﾇｸﾚｵﾁﾄﾞﾘﾝ酸 (NADPH)
還元型ﾆｺﾁﾝｱﾐﾄﾞｱﾃﾞﾆﾝｼﾞﾇｸﾚｵﾁﾄﾞ (NADH)
リン酸ナトリウム緩衝液，pH 7.4

0.1
8
33
5
4
4
100

mL
mol
mol
mol
mol
mol
mol

3.7 試験方法
3.7.1 試験群
3.7.1.1

用量設定試験

各菌株につき，直接法 (代謝活性化系の非存在下) および代謝活性化法 (代謝活性化系の存在下) で試験を実施した．
直接法および代謝活性化法ともに，被験物質の最高用量を 5000 µg/plate とし，以下公比 3で 6 段階の計 7 用量の試験群 (5000，1667，556，185，61.7，20.6 および 6.86 µg/plate，各々
プレート当たり 0.1 mL を添加) を設定した．
3.7.1.2

本試験

各菌株につき，直接法および代謝活性化法で試験を実施した．
用量設定試験の結果，各菌株の直接法および代謝活性化法ともに，復帰変異コロニー数の増加は認められず，被験物質による生育阻害および析出も観察されなかった．
以上のことから，本試験は各菌株につき，直接法および代謝活性化法ともに被験物質の最高用量を 5000 µg/plate とし，以下公比 2 で 5 段階の計 6 用量の試験群 (5000，2500，1250，
625，313 および 156 µg/plate，各々プレート当たり 0.1 mL を添加) を設定した．
3.7.1.3

陰性対照群および陽性対照群

用量設定試験および本試験のいずれにおいても，陰性対照群および次表の陽性対照群を設定した．
陽性対照物質 (用量：g/plate)
直接法
代謝活性化法
AF-2(0.01)
2-AA
(1)
NaN3
(0.5)
2-AA
(2)
AF-2
(0.01)
2-AA
(10)
AF-2
(0.1)
2-AA
(0.5)
9-AA
(80)
2-AA
(2)

試験菌株
Salmonella typhimurium TA100
Salmonella typhimurium TA1535
Escherichia coli WP2uvrA
Salmonella typhimurium TA98
Salmonella typhimurium TA1537
3.7.2 プレート数およびプレートの識別

プレート数は，陰性対照群および被験物質群ならびに陽性対照群ともに，各 3 枚とした．
- 16 -

SR21142

なお，無菌試験のプレート数は，最高濃度調製液および S9 mix ともに各 2 枚とした．プレー
トには，試験番号および試験群を特定できるようにラベルを貼付した．
3.8 操作方法
3.8.1 試験菌株の前培養
容量約 40 mL の L 字管に前培養用培地 (ニュートリエントブロス培地) 12 mL を入れ，解凍した保存菌を 12 L 接種し，37ºC，振とう速度 100 回/分に設定した振盪恒温槽 (Personal-11・EX，タイテック株式会社) で 10 時間の往復振とう培養を行った．なお，菌株の接種後，L 字
管を振とう培養開始まで，用量設定試験，本試験ともに 7 時間，各々冷却 (氷冷) を行った．
培養終了時に，得られた菌培養液の OD660nm を濁度計 (可視光度計 CO7500，フナコシ株式会社) で測定し，各菌株の生菌数－OD660nm 相関式より生菌数を算出した．生菌数が 1×109
cells/mL より多いことが確認された培養液を試験に使用した．
各培養液の生菌数 (計算値) は次表の通りであった．
生菌数 (計算値) (×109 cells/mL)

試験菌株

用量設定試験

本試験

2.87
3.21
4.66
3.04
1.87

2.87
3.18
4.66
3.04
1.87

Salmonella typhimurium TA100
Salmonella typhimurium TA1535
Escherichia coli WP2uvrA
Salmonella typhimurium TA98
Salmonella typhimurium TA1537
3.8.2 試験液および対照物質調製液の処理

試験液および対照物質調製液の処理は，プレインキュベーション法で行った．蓋付きのチューブを使用して，試験液あるいは対照物質調製液 0.1 mL に，0.1 mol/L Na-リン酸緩衝液 (pH7.4) 0.5 mL (直接法) または S9 mix 0.5 mL (代謝活性化法) を加えて混合した．さらに菌培養液
0.1 mL を加え，37ºC，振とう速度 100 回/分に設定した振盪恒温槽 (Personal-11・EX，タイテック株式会社) で 20 分間プレインキュベーションした．プレインキュベーション終了後，0.05
mmol/L L-ヒスチジンおよび 0.05 mmol/L D-ビオチン (Salmonella typhimurium) あるいは，0.05
mmol/L L-トリプトファン (Escherichia coli) を含む重層用培地 2 mL を混和し，プレートに重層した．重層用培地を固化させた後，37ºC に設定したインキュベーター (MIR-254S-PJ，パナソ
ニックヘルスケア株式会社) 内で， 49 時間の静置培養後，用量設定試験では自動切り替えで8ºC の設定でコロニーの観察および計測まで冷蔵保存した．
試験液の最高濃度および S9 mix について無菌試験を実施し，雑菌の混入の有無を確認した
結果，いずれも雑菌の混入は認められなかった．

- 17 -

SR21142

3.8.3 観察および計測
実体顕微鏡 (SZ6045TR，オリンパス光学工業株式会社) を用いて菌株の生育阻害の有無を確認した．さらに被験物質群については目視で析出の有無を確認した．次に，コロニーアナ
ライザー (CA-11D，システムサイエンス株式会社) を用い，面積補正を実施して復帰変異コ
ロニー数の計測を行った．なお，生育阻害あるいは析出がコロニーアナライザー計数に影響すると考えられるプレートはなかったことから，実体顕微鏡を用いて復帰変異コロニー数の目視計測は行わなかった．
生育阻害の有無の判定は以下の基準で行い，1 以上を生育阻害有とした．なお，生育阻害 3
および 4 の復帰変異コロニー数は 0 として取扱うこととした．
0：生育阻害が認められない．
微細なバックグラウンドローン (50 倍程度の倍率で観察可能) が培地一面に観察され，陰性対照群のバックグラウンドローンとの差が認められない場合．
1：わずかな生育阻害が認められる．
陰性対照群に比べ，バックグラウンドローンが減少して個々のコロニーの大きさが大きくなっている場合．
2：中程度の生育阻害が認められる．
隆起した大きな復帰変異コロニーと，平坦で小さなバックグラウンドコロニ
ーが並存している場合．
3：強い生育阻害が認められる．
バックグラウンドコロニーが復帰変異コロニーと同程度の大きさまで成長し，両者の判別が困難である場合．
4：生存菌が全く認められない．
3.8.4 観察結果の集計方法
各菌株の陰性対照群，被験物質群 (用量毎) および陽性対照群について，復帰変異コロニー数の平均値 ± 標準偏差を求めた．なお，いずれの値も小数点以下を四捨五入し整数で表示した．
3.8.5 観察および計測終了後のプレートの処理
産業廃棄物として回収した．
3.9 試験結果の評価
3.9.1 菌株の感度確認
各菌株の陰性対照群の復帰変異コロニー数の平均値が試験施設の背景データに基づく管理- 18 -

SR21142

値の範囲内であり，かつ，各菌株の陽性対照群の復帰変異コロニー数の平均値が陰性対照群の平均値の 2 倍以上である場合に，菌株が適切な感度を有しているものと判断した．
3.9.2 試験結果の判定基準
少なくとも 1 つの菌株において，被験物質群の復帰変異コロニー数の平均値が陰性対照群の平均値の 2 倍以上となり，かつ，被験物質の濃度の増加にともなう復帰変異コロニー数の増加が再現性を持って認められた場合に陽性と判定することとした．試験結果に再現性が認められない場合には，確認試験等を実施して再現性を確認することとした．
3.9.3 統計処理
試験結果の判定にあたって，統計学的手法は用いなかった．
3.9.4 変異原比活性の算出
当該試験において陽性結果は得られなかったことから，変異原比活性の算出は実施しなかった．

4 成績
用量設定試験の結果を Table 1 に，本試験の結果を Table 2 に，被験物質用量と復帰変異コロ
ニー数の用量-反応曲線を Figure 1-1 ~ 5-2 に示す．
4.1 用量設定試験
各菌株の直接法および代謝活性化法ともに，被験物質群の復帰変異コロニー数の平均値は陰性対照群の平均値の 2 倍未満であり，被験物質の用量の増加にともなう復帰変異コロニー数の増加も認められなかった．また，生育阻害および析出はいずれの菌株においても確認されなかった．
4.2 本試験
各菌株の直接法および代謝活性化法ともに，被験物質群の復帰変異コロニー数の平均値は陰性対照群の平均値の 2 倍未満であり，被験物質の用量の増加にともなう復帰変異コロニー数の増加も認められなかった．また，生育阻害および析出はいずれの菌株においても確認されなかった．

4.3 菌株の感度確認
用量設定試験および本試験のいずれにおいても，各菌株の陰性対照群の復帰変異コロニー数の平均値は，すべて試験施設の背景データに基づく管理値 (Annex 1) の範囲内であり，また，
陽性対照群の復帰変異コロニー数の平均値は，すべて陰性対照群の平均値の 2 倍以上であった．

- 19 -

SR21142

これらの結果から，各菌株が変異原性物質に対し適切な感度を有していたことが確認された．

5 考察
1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパンの細菌における遺伝子突然変異誘発性の有無を， Salmonella typhimurium TA100，TA1535，TA98，TA1537 および Escherichia coli
WP2uvrA を用いる復帰突然変異試験により検討した．
用量設定試験では，直接法および代謝活性化法ともに被験物質の最高用量を 5000 µg/plate とし，以下公比 3 で 6 段階の計 7 用量 (6.86 ~ 5000 µg/plate) を設定した．本試験では，用量設定試験の結果から，直接法および代謝活性化法ともに，被験物質の最高用量を 5000 µg/plate とし，以下公比 2 で 5 段階の計 6 用量 (156 ~ 5000 µg/plate) を設定した．
試験の結果，用量設定試験および本試験での各菌株の直接法および代謝活性化法のいずれの試験系列においても，被験物質群の復帰変異コロニー数の平均値は陰性対照群の平均値の 2倍未満であり，用量の増加にともなう復帰変異コロニー数の増加も認められなかった.
析出および生育阻害はいずれの菌株においても観察されなかった．用量設定試験および本試験の結果には再現性が確認された．
以上のことから，1-メトキシ-3- (3-メトキシプロポキシ) プロパンは，当該試験条件下において，試験菌株に対する遺伝子突然変異誘発性を有しないと判断した．

6 試験成績の信頼性に影響を及ぼしたと思われる環境要因
試験成績の信頼性に影響を及ぼしたと思われる環境要因はなかった．

7 資料の保存7.1 資料の種類
以下の資料を試験施設の資料保存室に保存する．
1． 試験計画書および試験計画書変更書
2． 生データその他の記録文書
3． 最終報告書
7.2 保存期間
試験終了後 5 年間保存し，その後の保存については試験委託者との協議により決定する．

- 20 -

SR21142
Table 1Results of dose-finding test in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl EtherAR

With(+) or
Test article dose
without(-)(µg/plate)S9 mix
Negative control

AR

AR

AS

TA100
115

106

107

9

118

107

106

117

134

118

S9 mix
(-)

84

105

134

6

121

114

116

14

135

142

113

21

119

124

99

11

132

122

103

10

133

123

108

10

119

124

125

3

131

125

117

12

S9 mix
(+)

133

130

114

6

136

148

118

12

116

127

108

11

116

141

123

15

132

159

152

20

Positive
control
S9 mix(-)

22

Positive
control
S9 mix(+)

Number ofrevertants/plate

10

256

1026

22

18

18

11

25

15

16

13

20

16

13

17

17

13

14

18

20

16

13

11

22

40

1133

249

23

21

32

27

39

26

28

31

32

17

33

15

28

28

20

17

46

38

26

26

35

17

AV

35

44

16

37

40

19

33

51

11

42

33

25

25

17

35

25

21

5

7

21

17

17

23

18

10

14

8

22

26

27

35

29

46

34

31

10

31

33

8

31

35

4

18

35

7

34

31

7

34

25

6

3

8

4

3

2

11

7

7

( 7 ±0)12

16

11( 13 ± 3 )
10

23

14

( 16 ± 7 )
14

15

21

( 17 ± 4 )
18

17

13

( 16 ± 3 )
12

12

17

( 14 ± 3 )
22

8

12

( 14 ± 7 )8( 34 ± 3 )327( 7 ±5)( 27 ± 9 )377( 4 ±1)( 31 ± 4 )273( 6 ±3)( 33 ± 2 )283( 8 ±2)( 37 ± 8 )358( 5 ±2)( 33 ± 3 )( 20 ± 4 )18

21( 26 ± 1 )( 35 ± 6 )
18

27

6

( 4 ±3)( 14 ± 7 )( 41 ± 9 )31

2( 14 ± 5 )( 36 ± 4 )38

15( 19 ± 4 )( 37 ± 6 )
32

22

5

( 6 ±2)( 17 ± 0 )( 37 ± 12 )33

8

( 18 ± 10 )( 40 ± 6 )49

13( 22 ± 5 )( 25 ± 5 )35

11( 19 ± 4 )( 29 ± 13 )15

17

( 13 ± 5 )
18

12

9

( 14 ± 7 )( 21 ± 4 )( 30 ± 5 )( 13 ± 5 )

NaN3

AF-2
0.01

AF-2
0.1

9-AA
80

353

355

119

245

85

115

438

( 106 ± 19 )2-AA
2

( 1103 ± 68 )23

( 24 ± 8 )( 321 ± 57 )

2-AA
1
1151

10

0.5
658

( 671 ± 23 )ChemicalDose(μg/plate)
Number ofrevertants/plate

698

7

AV

TA1537( 15 ± 6 )( 28 ± 3 )( 17 ± 5 )

AF-2
0.01
657

25

( 19 ± 1 )( 148 ± 14 )ChemicalDose(μg/plate)15( 14 ± 1 )( 127 ± 13 )
5000

14

22

( 30 ± 8 )( 15 ± 3 )( 117 ± 10 )
1667

26

( 14 ± 2 )( 134 ± 15 )556

11

( 13 ± 7 )( 126 ± 10 )
185

14

27

( 28 ± 4 )( 14 ± 2 )( 124 ± 7 )
61.7

25

( 13 ± 11 )( 123 ± 3 )
20.6

15

( 15 ± 5 )( 121 ± 13 )
6.86

12

17

( 25 ± 4 )( 9 ±2)( 119 ± 15 )Negative control

30( 13 ± 2 )( 114 ± 13 )
5000

17

( 15 ± 5 )( 130 ± 15 )
1667

14

AV

TA98

( 20 ± 6 )( 14 ± 2 )( 117 ± 4 )556

16( 12 ± 6 )( 108 ± 25 )185

10

( 12 ± 4 )( 123 ± 10 )61.7

WP2uvrA

17

AU

Frameshift typeTA1535( 110 ± 7 )
20.6

AU

Base-pair substitution type( 109 ± 5 )
6.86

AS AS
AT
AT AT
AU
Number of revertants/plate (Mean ± S.D.)

288

Negative control : Water
AF-2 : 2-(2-Furyl)-3-(5-nitro-2-furyl) acrylamide
NaN3 : Sodium azide
9-AA : 9-Aminoacridine hydrochloride
2-AA : 2-Aminoanthracene- 21 -

716

854

381

1182

( 419 ± 33 )

2-AA
10

( 261 ± 24 )

438

715

364

402

993

( 1082 ± 95 )

2-AA
0.5

( 762 ± 80 )

1071
2-AA
2

317

( 361 ± 43 )

145

162

126

( 144 ± 18 )

SR21142
Table 2

Results of main test in bacterial reverse mutation test of Dipropylene Glycol Dimethyl EtherAR

With(+) or
Test article dose
without(-)(µg/plate)S9 mix
Negative control

AR

AR

AS

TA100
116

122

132

10

120

121

95

135

129

138

625

114

122

130

22

130

132

133

7

120

119

129

11

106

Negative control

116

152

128

11

144

10

142

129

142

14

142

135

157

625

114

133

154

14

115

143

119

17

124

131

127

8

126

143

123

18

Positive
control
S9 mix(-)

19

Positive
control
S9 mix(+)

Number ofrevertants/plate

22

397

965

7

15

16

11

19

13

8

13

12

8

17

7

17

13

16

8

11

14

29

930

284

18

43

24

32

21

22

26

13

24

22

23

32

27

26

29

24

30

10

21

16

22

AV

18

25

17

32

23

25

28

32

30

20

26

24

30

18

6

12

12

12

21

17

16

11

16

27

37

33

23

45

16

15

5

31

32

3

35

23

10

36

28

31

31

3

9

7

3

7

25

15

7

5

6

7

( 6 ±2)7( 16 ± 9 )
15

15

20

( 17 ± 3 )
21

12

19

( 17 ± 5 )
18

27

14

( 20 ± 7 )
15

16

8

( 13 ± 4 )24( 32 ± 4 )287( 8 ±2)( 32 ± 8 )314( 6 ±3)( 28 ± 6 )385( 5 ±2)( 25 ± 17 )227

( 6 ±2)( 27 ± 5 )( 25 ± 5 )
17

20

6

( 8 ±4)( 30 ± 6 )( 30 ± 2 )26

12( 17 ± 7 )27( 29 ± 5 )29

22( 17 ± 1 )( 24 ± 6 )
31

20

3

( 5 ±2)( 18 ± 6 )( 23 ± 8 )29

7( 11 ± 1 )( 25 ± 5 )32

12( 22 ± 6 )( 28 ± 3 )21

18( 22 ± 2 )( 25 ± 4 )1519( 19 ± 5 )
18

16

18

( 16 ± 6 )( 24 ± 7 )( 30 ± 2 )( 17 ± 1 )

NaN3

AF-2
0.01

AF-2
0.1

9-AA
80

316

321

86

284

119

106

435

( 104 ± 17 )2-AA
2

( 975 ± 51 )AV

TA1537( 16 ± 3 )( 22 ± 8 )( 345 ± 45 )

2-AA
1
1031

29

0.5
665

( 640 ± 27 )ChemicalDose(μg/plate)
Number ofrevertants/plate

642

16

( 14 ± 6 )

AF-2
0.01
612

15

18

( 28 ± 7 )( 16 ± 3 )( 131 ± 11 )ChemicalDose(μg/plate)35( 11 ± 6 )( 127 ± 4 )
5000

18

( 12 ± 5 )( 126 ± 15 )
2500

17

25

( 24 ± 7 )( 12 ± 3 )( 134 ± 20 )
1250

19

( 13 ± 6 )( 145 ± 11 )S9 mix(+)

15( 14 ± 3 )7( 138 ± 8 )
313

8

20

( 29 ± 13 )( 11 ± 4 )( 132 ± 15 )156

27

( 14 ± 3 )( 129 ± 23 )137

13

( 15 ± 4 )( 123 ± 6 )
5000

10

AV

TA98

( 22 ± 3 )( 10 ± 4 )( 132 ± 2 )
2500

20

( 15 ± 6 )( 122 ± 8 )
1250

10

( 11 ± 2 )( 134 ± 5 )S9 mix(-)

WP2uvrA

13

AU

Frameshift typeTA1535( 112 ± 15 )313

AUBase-pair substitution type

( 123 ± 8 )
156

AS AS
AT
AT AT
AU
Number of revertants/plate (Mean ± S.D.)

226

Negative control : Water
AF-2 : 2-(2-Furyl)-3-(5-nitro-2-furyl) acrylamide
NaN3 : Sodium azide
9-AA : 9-Aminoacridine hydrochloride
2-AA : 2-Aminoanthracene- 22 -

857

905

416

843

( 426 ± 10 )

2-AA
10

( 265 ± 33 )

426

902

387

354

1135

( 894 ± 220 )

2-AA
0.5

( 888 ± 27 )

705
2-AA
2

343

( 361 ± 23 )

114

123

144

( 127 ± 15 )

SR21142〔TA100,S9(-),Dose-finding test 〕 〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔TA100,S9(-),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 1-1 Dose-response curves of revertants on
Salmonella TA100
typhimurium
TA100
without
metabolic activation
Salmonella typhimurium
without
metabolicactivation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 23 -

SR21142*〔TA100,S9(+),Dose-finding test 〕 〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔TA100,S9(+),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 1-2 Dose-response curves of revertants on
Salmonella TA100
typhimurium
TA100 withmetabolic activation
Salmonella typhimurium
with metabolic
activation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 24 -

SR21142〔TA1535,S9(-),Dose-finding test 〕 〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔TA1535,S9(-),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 2-1 Dose-response curves of revertants on
Salmonella TA1535
typhimurium
TA1535without
metabolic activation
Salmonella typhimurium
without
metabolicactivation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 25 -

SR21142*〔TA1535,S9(+),Dose-finding test 〕〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔TA1535,S9(+),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 2-2 Dose-response curves of revertants on
Salmonella TA1535
typhimurium
TA1535 withmetabolic activation
Salmonella typhimurium
with metabolic
activation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 26 -

SR21142〔WP2uvrA,S9(-),Dose-finding test 〕〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔WP2uvrA,S9(-),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 3-1 Dose-response curves of revertants on
Escherichia
WP2uvrA
without
metabolic activation
Escherichia coli
WP2uvrAcoli
without
metabolicactivation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 27 -

SR21142*〔WP2uvrA,S9(+),Dose-finding test 〕〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔WP2uvrA,S9(+),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 3-2 Dose-response curves of revertants on
Escherichia
metabolic activation
Escherichia coli
WP2uvrAcoli
withWP2uvrA
metabolicwith
activation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 28 -

SR21142〔TA98,S9(-),Dose-finding test 〕〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔TA98,S9(-),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 4-1 Dose-response curves of revertants on
Salmonella TA98
typhimurium
without
metabolic activation
Salmonella typhimurium
withoutTA98
metabolicactivation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 29 -

SR21142*〔TA98,S9(+),Dose-finding test 〕 〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔TA98,S9(+),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 4-2 Dose-response curves of revertants on
Salmonella TA98
typhimurium
TA98 withmetabolic activation
Salmonella typhimurium
with metabolic
activation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 30 -

SR21142〔TA1537,S9(-),Dose-finding test 〕 〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔TA1537,S9(-),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 5-1 Dose-response curves of revertants on
Salmonella TA1537
typhimurium
TA1537
without
metabolic activation
Salmonella typhimurium
without
metabolicactivation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 31 -

SR21142*〔TA1537,S9(+),Dose-finding test 〕〔 Dose-finding test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

6.86

20.6

61.7

185

556

1667

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)〔 Main test 〕〔TA1537,S9(+),Main test 〕

Revertants per plate (%)

200

150

100

50

0
0

156

313

625

1250

2500

5000

Concentrationof Dipropylene
GlycolDimethyl Ether (µg/plate)
Concentration of Dipropylene
GlycolDimethyl Ether(µg/plate)Figure 5-2 Dose-response curves of revertants on
Salmonella TA1537
typhimurium
TA1537 withmetabolic activation
Salmonella typhimurium
with metabolic
activation
in bacterial
reversemutationtest of Glycol
Dipropylene
GlycolDimethyl Etherin bacterial reverse
mutationtest ofDipropylene
Dimethyl
Ether- 32 -

Annex 1

SR21142(2021)

Historical control data for bacterial reverse mutation test
Reference : Control data (Date : 2016.4～2021.3)
TA100

StrainTA1535TA98

WP2uvrA

TA1537

Metabolicactivation

S9(-)

S9(+)

S9(-)

S9(+)

S9(-)

S9(+)

S9(-)

S9(+)

S9(-)

S9(+)

No. of data

342

341

336

335

335

334

338

336

335

334

Mean ± S.D.

109 ± 16120 ± 13

11 ± 311 ± 323 ± 626 ± 616 ± 431 ± 513 ± 417 ± 5

Maximum

169

157

30

21

51

58

37

48

25

34

Minimum

83

92

6

6

11

13

8

19

5

10

85 ～133

88 ～152

6 ～16

6 ～16

7 ～39

10 ～425 ～27

18 ～44

2 ～24

6 ～28

X-R-RsaReference : Positive control data (Date : 2016.4～2021.3)
TA100

StrainaTA1535TA98

WP2uvrA

TA1537

Metabolicactivation

S9(-)

S9(+)

S9(-)

S9(+)

S9(-)

S9(+)

S9(-)

S9(+)

S9(-)

S9(+)

Compound

AF-2

2-AA

NaN3

2-AA

AF-2

2-AA

AF-2

2-AA

9-AA

2-AA

Concentration(µg/plate)

0.01

1

0.5

2

0.01

10

0.1

0.5

80

2

No. of data

326

326

320

320

319

319

322

321

319

319

Mean ± S.D.

691 ± 105

1478 ± 330

333 ± 73366 ± 98

95 ± 151194 ± 109

293 ± 34355 ± 46356 ± 242

263 ± 123

Maximum

951

2344

510

630

141

1489

393

531

1145

782

Minimum

398

969

206

231

58

949

169

253

73

112

X-R-Rs a

547 ～835

1193 ～1763

259 ～407

273 ～459

227 ～360

278 ～432

98 ～614178 ～348

74 ～116 1008 ～1380

X-R-Rs = X ± 2.66Rs ； X = Mean ，Rs = Mean of (Xi -Xi-1)

Culture medium ： OXOID Nutrient Broth No.2
Subculture ： Tester strain suspension (12 µL) was inoculated into an L-shaped tube (capacity of approximately 40 mL)
containing 12 mL of the culture medium for subculture. Then, the mixture was incubated for 10 hr.
Mimimum glucose agar medium ： Vitalmedia AMT, Kyokuto Pharmaceutical Industrial Co., Ltd.

- 33 -