22-05

取扱説明書(TRT-101)

Code No. TRT-101
10,000U×1 本
Code No. TRT-101X5 (10,000U×1 本)× 5
Code No. TRT-101X10 (10,000U×1 本)×10
保存温度 －２０℃
伸長性・反応効率・高温反応性が向上した逆転写酵素

ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ®
ReverTra Ace®は M-MLV RTase の RNaseH 活性ドメインと DNA 合成ドメインに当社独自の点変異を導入し、機能改変した高効率逆転写酵素です。また、バッファーの至適化を行い、今までにない高温反応性・伸長性・反応効率を実現しています。
・ 伸長性が向上 本酵素では、M-MLV RTase の RNaseH 活性ドメインに点変異を導入し、RNaseH 活性を除去しています。
RNaseH 活性は、cDNA 合成において鋳型／プライマーである DNA-RNA ハイブリッドの RNA を分解し、反応効率等の低減の原因となることが知られています。従来の M-MLV RTase、デリーションタイプの M-MLV
RTase RNaseH-に比べて、伸長性が格段に向上しています。
・ 反応効率・高温反応性が向上 M-MLV RTase の DNA 合成ドメインに点変異を導入し、高温反応性・反応効率を向上させています。RNA の高次構造は RTase の反応の進行を妨げ、cDNA の合成を困難にしますが、反応温度を上げることにより鋳型 RNA の高次構造を緩和し、RTase による cDNA 合成反応を促進させることができます。

1. 内容物
ReverTra Ace® は容量別に次の 3 種類をご用意しております｡
TRT-101(10,000U×1)
ReverTra Ace® (100U/μL)
5×Buffer

100 μL × 1 本
1mL × 1 本

TRT-101X5

TRT-101X10(TRT-101)×5(TRT-101)×10（注１）5×Buffer 中に dNTPs は含まれておりません。
（注２）5×Buffer は、Code No.: TRT-1B として別売しています。

＜製品の内容・技術に関するお問合せ＞
東洋紡（株）バイオプロダクト営業部 テクニカルライン
TEL 06-6348-3888 FAX 06-6348-3833
開設時間 9:00~12:00, 13:00~17:00 (土日祝日、休日を除く)
E-mail: tech_osaka@toyobo.jp[URL] https://lifescience.toyobo.co.jp/
A3667K①

取扱説明書(TRT-101)
2. 安全上の注意
本製品は､研究用試薬です｡診断・臨床用試薬として使用しないでください｡また､本製品の使用にあたっては､実験室での一般の注意事項を厳守し､安全に留意してください｡
3. 性能･品質
本製品は次の性能を保有していることを各ロットで確認しています。
（１） 合成能Poly(rA)：Oligo(dT)20 を鋳型／プライマーとして、42℃、10 分間に１nmol の TTP を酸不溶性沈殿物に取り込む酵素量を 1U としています。
（２） 純度
酵素50Uと0.2μgのMS2 RNAを42℃で１時間反応させてもRNAの電気泳動パターンに変化はありません。
4. プロトコール（RT-PCR のための１本鎖 cDNA 合成）（１） 反応液の調製
・ 凍結している試薬は完全に融解してからご使用ください。
・ 反応液を調製する前に各試薬を十分混合してからご使用ください。
Components

Volume or Final Concentration

total RNAor poly(A)+RNA
Oligo(dT)12-20 or Gene Specific Primer (10 pmoles/μL)
or Random Primers (25 pmoles/μL)
5×Buffer
10mM dNTPs
ReverTra Ace® (100units/μL)
Total Volume

0.5～5μg50～500ng
0.5μL
1μL
4μL
2μL
1μL
20μL

（２）酵素反応温度条件アニーリング 30℃ ・ 10min.
注意：Random Primer を使用する時は必要です。
↓酵素反応42℃ ・ 20～60min.
↓変性
99℃ ・ 5min.
注意：必ず行ってください。DNA/RNA ハイブリッドとタンパクが結合したままですと後の PCR が阻害される可能性があります。
（３）PCR 組成
Components
1st strand reaction
10×BufferdNTPs
Amplification primer 1 (10 pmoles/μL)
Amplification primer 2 (10 pmoles/μL)
Blend Taq® (2.5 U/μL)
Total Volume

Volume or Final Concentration～20 μL10 μL
0.2 mM
1μL
1μL
0.5μL
100μL

（注１）dNTPs の添加量は RT 反応液からの持込分を加味して調整してください。

②＜製品の内容・技術に関するお問合せ＞
東洋紡（株）バイオプロダクト営業部 テクニカルライン
TEL 06-6348-3888 FAX 06-6348-3833
開設時間 9:00~12:00, 13:00~17:00 (土日祝日、休日を除く)
E-mail: tech_osaka@toyobo.jp[URL] https://lifescience.toyobo.co.jp/

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5. 使用上の注意（１） 反応温度について
本酵素は通常 42℃で行ってください。RNA の高次構造の緩和のために反応温度を上げる際には､プライマーのアニーリング効率に留意する必要があります｡（２） RNA の熱変性について
RNA の高次構造緩和のため､一旦 RNA を熱変性させてから反応を開始させると効率が上がる場合があります。
その際は､RNA, Primer, H2O のみで 65℃, 5min の熱処理を行い、直ちに氷上に移して急冷します。その後、
5×Buffer, 10mM dNTPs, ReverTra Ace® を加え反応を行います。
（３） 逆転写反応液を PCR のテンプレート DNA として用いる場合､RT 反応液中の過剰の RNA が PCR 反応を阻害することがあります｡PCR 反応液 50μL に添加する RT 反応液量は､RNA 量として 100ng 以下にすることをお勧めします。つまり､Total RNA1μg を用いて 20μL の容量で RT 反応を行った場合､PCR 反応への添加量は 2μL 以下にします｡（４） 5×Buffer を溶解させたときに浮遊物（沈殿）がでることがありますが、これは還元剤の一部が析出したものです。転倒混和後室温で静置して溶かした後お使いください。
6. 実施例【42～60℃における cDNA 合成反応】
ReverTra Ace®
反応温度(℃) 42 50 55 60
9.49kb→7.46kb→4.40kb→

42

当社従来品
5055

Poly(rA)Tail を持つ 9.49，7.46，4.40，2.37，1.35kb の長さの RNA 400ng を鋳型に、42～60℃の反応温度で Oligo(dT)30 25pmolesをプライマーとして、酵素 100U を用いて30min の cDNA 合成反応を行いました。

2.37kb→1.35kb→ReverTra Ace® では 42℃及び 50℃で 9.49kb，55℃で 4.40kb，60℃で 2.37kb の cDNA の合成が確認されました。

※弊社ウエブサイトの製品ページに本製品の実施例を掲載しております。ご確認ください。
https://lifescience.toyobo.co.jp/detail/detail.php?product_detail_id=151＜製品の内容・技術に関するお問合せ＞
東洋紡（株）バイオプロダクト営業部 テクニカルライン
TEL 06-6348-3888 FAX 06-6348-3833
開設時間 9:00~12:00, 13:00~17:00 (土日祝日、休日を除く)
E-mail: tech_osaka@toyobo.jp[URL] https://lifescience.toyobo.co.jp/③

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7. 関連商品
包装

Code No.

2,500 U × 1 本(2,500 U×1 本)×5

SIN-201
SIN-201X5

ReverTra Ace -α-®

100 回用FSK-101F

Oligo(dT)20 Primer

1nmoleFSK-201

Random Primer(9mer)

2.5 nmoles

FSK-301

dNTPs Mixture(10mM)

0.2 mLNTP-301

ReverTra Ace®用 Buffer

1 mL

TRT-1B＜高性能 Taq polymerase＞
Blend Taq®

250 U × 1 本(250 U×1 本)×5

BTQ-101
BTQ-101X5＜Hot start PCR 用高性能 Taq polymerase＞
Blend Taq® -Plus-

250 U × 1 本(250 U×1 本)×5

BTQ-201
BTQ-201X5品名RNase Inhibitor, recombinant

8. 参考文献（１）K.miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219-2226 (2003)（２）A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59-66 (2002)（３）S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241-246 (2002)（４）S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453-5460 (2001)（５）Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666-675 (2000)（６）S.Lee et al.,Gene,245:253-266 (2000)【製造･発売元】－価格･在庫に関するお問い合わせ－
東洋紡株式会社 バイオプロダクト営業部（大阪）〒530-0001 大阪府大阪市北区梅田一丁目 13 番 1 号
大阪梅田ツインタワーズ・サウス

TEL 06-6348-3786 FAX 06-6348-3833
E-mail : order_lifescience@toyobo.jp
東洋紡株式会社 バイオプロダクト営業部 (東京)〒104-8345 東京都中央区京橋一丁目 17 番 10 号 住友商事京橋ビル
TEL 03-6887-8819 FAX 03-6887-8951
E-mail : order_lifescience@toyobo.jp－製品の内容・技術に関するお問い合わせ－
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