神戸学院大学

若手研究者支援枠

神戸学院大学PCRを用いて薬物代謝酵素などの遺伝子多型を測定できるかについても探索的に検討を行う。
（図1）

等）

DBS法を用いて薬物動態試験を行った例は限られており、
１）DBS法を用いた薬物血中濃度測定法の構築

事業実施期間：開始 令和元年9月1日〜終了 令和3年3月31日

申請者役職・氏名

薬学部・講師

入江慶

研究 ・ 事業名

DBS法を用いた薬物血中濃度測定法の構築
交付申請内容研究·事業の目的及び意義
本研究の目的は、Dried blood spot（DBS）法を用いて、血液1滴から薬物血中濃度を測定できる方法を構築し、本方法

外で治験の薬物動態試験にもDBS法が利用されはじめている

DBS法を用いた薬物血中濃度測定法を臨床研究に実用化す

DBS法を用いた薬物濃度測定法は、過去に申請者が報告しるための意義のある研究である。
また、遺伝子多型の情報を同た方法をもとに、必要に応じて改良を加えて行う。対象は、分子時に得ることができれば、さらに本方法の適応範囲が拡大され標的薬剤（アベマシクリブ等）や免疫薬製剤（タクロリムス等）ると考えられる。など臨床的に重要な疾患の治療薬であり、その薬物血中濃度

本研究は、神戸学院大学と神戸市立医療センター中央市民が治療効果や副作用などと関連する可能性がある薬物とする。

病院の大学-医療連携の中で行う研究であり、大学と医療機関構築した測定法は、厚生労働省の発出する医薬品開発におけが連携を図ることによって実現できる研究である。

る生体試料中薬物濃度分析法のバリデーションに関するガイドラインやEuropean Bioanalysis Forumが発出するDBS
法のバリデーションに関するホワイトレターなどを参考にバリデーションを行う。

研究・事業により期待される効果
DBS法を用いて薬物血中濃度測定法の構築により、医薬品の開発段階や実臨床における薬物動態試験をより低侵襲かつ２）DBS 法を用いた遺伝子多型測定法の構築簡便に実施できるようになることが期待される。将来的には、が、通常の静脈血採血で得た血液検体をろ紙に滴下するといD B S に 含 まれる D N A を 抽 出し、Ta q m a n ®プ ロ ーブ

う方法で行っているなど、DBS法の利点を最大限に活用でき（Applied Biosystems）を用いたリアルタイムPCR法によっているとは言い難い。て、薬物代謝酵素の遺伝子多型の測定を行う。遺伝子多型は、これらのことにより、医薬品開発の薬物動態試験の侵襲性地域の薬局や在宅医療などで治療薬物モニタリング（TDM）にも活用できると考えられる。

を用いた薬物血中濃度測定法を臨床研究に応用できるかを医以上のように、DBS法を用いて血液1滴から薬物血中濃度対象とする薬剤の種類や日本人における変異割合などを考慮の低減や効率化、臨床現場における臨床研究によって、より安療機関と連携し、検討することである。本方法の開発によって、を測定する技術は、臨床研究における薬物動態試験を実施すし、CYP3A5やCYP3A4などを検討する。
また、薬物の種類に全で有効な個別化薬物治療の実現、将来的な薬剤師の職能臨床研究における薬物動態試験をより低侵襲かつ簡便に実施る上で様々な利点があり、有用な方法であると考えられる一方よっては、薬 物の排 泄に関わるトランスポーター（ P - g pや拡大など、様々な効果が本研究から期待できる。

できるようになることが期待される。

で、臨床研究に広く活用できるほどには、普及しておらず、発展OATPなど）の遺伝子多型も測定することを計画している。

DBS法は、微量の血液をろ紙に滴下し乾燥させ、試料を保途上な技術であるといえる。そこで、本研究では、DBS法を用管、運搬する方法である。近年、分析技術の進歩により、DBSいた薬物血中濃度測定法を構築するとともに、本方法を用い中の微量な血液から薬物血中濃度を測定することが可能になた薬物濃度測定法が臨床研究に応用できるかを医療機関とり、免疫抑制剤や抗菌薬、抗がん剤など多くの薬物のDBS法を連携し、検討することとした。

３）DBS法を用いた薬物動態試験（パイロットスタディ）
DBS法を用いて薬物血中濃度を測定する臨床研究のパイロットスタディを行う。構築した測定法を用いて、対象薬剤を服用いた測定法が報告されている。薬物動態試験では、正確なタ

また、薬物代謝酵素やトランスポーターなどの遺伝子多型が用中の患者を対象に指先などから自己採血により、DBSを採イムスケジュールでマルチポイントの採血が必要な場合が多く、薬物の体内動態に大きく影響することが知られている。DBSは、取し、血液１滴から薬物血中濃度が可能であることを実証する。

手技が簡便で、静脈採血に比べて侵襲の少ないDBS法は、薬DNAを得るための試料としても利用でき、DBSから薬物血中

この過程において、試料を採取する手技や患者の苦痛の程度、物動態試験に有用である。
また薬物によっては、乾燥させるこ濃度に加えて、遺伝子多型の情報が得られることができれば、自己採血によって医療機関以外の場所で採血が可能かどうかとによって保管中の安定性が高まり、試料を介した感染のリス薬物の体内動態を解析する上で有益である。そこで、本研究でなどについても検討し、標準化した薬物動態試験の手順を作クを低減できる利点もある。さらに通常は冷凍保管が必要なは、薬物血中濃度の測定で余ったDBSから遺伝子多型を測定成する。

血漿や血清などと比較し、DBSは多くの場合、室温で保管できできるかについても探索的に検討を行う。

るため試料を郵送することもできる。
また、血糖値測定のように【参考文献】

自己採血でDBSを採取すれば、検体の採取場所や採血に必要な医療スタッフの制限を受けず、自宅や地域の薬局などで薬物

1) Irie K, et al., J Chromatogr B. 1087‒1088,
1‒5, 2018

動態試験を行うことも可能になる。
このような背景から申請者
は、非小細胞肺がんの治療に使用される分子標的薬であるゲフィチニブのDBS法を用いた測定法を開発しており、ゲフィチ

この臨床研究は、神戸市立医療センター中央市民病院で行う。神戸学院大学と神戸市立医療センター中央市民病院は、教育・研究に関する連携協定を結んでおり、その活動の中でDBS法が実際に臨床研究に活用できるかを検討する。臨床研

研究・事業の方法及び手段究の実施については、ヒトを対象とした医学研究に関する倫理指針を遵守し、研究計画書を作成した上で、神戸市立医療センニブを服用中の患者を対象とした臨床研究を行い、DBS法をDBS法を用いた薬物血中濃度測定法の概略を下記に示す。

ター中央市民病院および神戸学院大学の倫理委員会の承認用いて血液1滴から簡便かつ低侵襲にゲフィチニブの血中濃血液1滴をろ紙に滴下し乾燥させ、DBSを得る。乾燥させたを得た上で実施し、試料の採取前にすべての患者から書面に度を測定できることを報告している 。

DBSから直径3mmの範囲をパンチアウトし、薬物を抽出し、よる同意を得る。

1)

1

研究・事業の特徴（新規性、独自性

これまで多くの薬物のDBS法を用いた薬物血中濃度の測定

液体クロマトグラフィータンデム型質量分析装置（LC-MS/法が報告されているが、実際にDBS法を用いて臨床研究をMS）を用いて薬物血中濃度の測定を行う。
また、薬物血中濃度行った例は限られている。最近では、医薬品開発において国内の測定で余ったDBSの外側からDNAを抽出し、リアルタイム

助成金成果抄録集

助成金成果抄録集2

神戸学院大学

実績報告内容（図1）

研究・事業の方法及び手段研究・事業により期待される効果/神戸医療産業都市の発展に与える効果

本研究では、図1に示す概略のようにDried blood spot

当初予定していた通り、DBS法を用いてアベマシクリブおよ（DBS）法を用いた薬物血中濃度測定法の構築を行った。血液びパルボシクリブの血中濃度および遺伝子多型測定法を構築

1滴をろ紙に滴下し、乾燥させたDBSから直径3mの範囲をパし、薬物動態試験をより低侵襲かつ簡便に実施できるになった

ンチアウトし、薬物を抽出し、液体クロマトグラフィータンデムと考えられる。DBS法を用いたアベマシクリブおよびパルボシ型質量分析装置（LC-MS/MS）
を用いて薬物血中濃度の測定

クリブの測定法は、通常の血液検体を用いた方法に比べ、少なを行った。
また、薬物血中濃度の測定で余ったDBSの外側からい侵襲で簡便に血中濃度を測定できることから、マルチポイン

DNAを抽出し、リアルタイムPCRを用いて薬物代謝酵素などのトの採血を必要とする薬物動態研究を行うために優れている。

遺伝子多型を測定できるかについても探索的に検討を行った。

アベマシクリブやパルボシクリブは、乳がんの治療に使用される分子標的薬であるが、副作用として、重篤な好中球減少や下研究・事業の内容及び目標達成状況

痢などが発現し、治療を中断、中止されることも多く、今後、本研究で構築した薬物濃度測定法や遺伝子多型の同時測定法を用いて、これら副作用と薬物濃度や遺伝子多型との関係を

１）DBS法を用いた薬物血中濃度測定法の構築
当初の計画の通り、DBS法を用いた薬物血中濃度測定法の明らかにすることができれば、個々の患者に適した投与設計の提案が可能になると期待される。

構築を行った。対象とする薬剤は、乳がんの治療に使用されるCDK4/6阻害薬であるアベマシクリブおよびパルボシクリブとし、液体クロマトグラフィータンデム型質量分析計（LC-MS/今後の展開MS）を用いて、測定条件の検討を行った。血液をろ紙に滴下し、アベマシクリブおよびパルボシクリブを含むDBSを作成し、DBS法を用いたアベマシクリブおよびパルボシクリブの測定DBS中からの抽出条件を検討した。抽出溶媒としてメタノール法は、これまでに報告されておらず、本助成事業の成果として、を用い、チューブミキサーを用いて安定した条件で抽出するこ今後、論文投稿を予定している。
また、新型コロナウイルス感染とにより、DBS中のアベマシクリブおよびパルボシクリブを短時症の拡大で開始が遅れているが、神戸市立医療センター中央間で精度よく定量できることが確認できた。

市民病院との共同研究において、乳がん患者と対象として、本２）DBS 法を用いた遺伝子多型測定法の構築方法を用いた臨床研究を実施する予定である。

アベマシクリブは、p糖蛋白質の基質であることから、p糖蛋白質の活性に重要な一塩基多型（SNP）であるrs1045642をリアルタイムPCRを用いて、DBSの外側から抽出したDNAを用いて判定できることを確認した。
３）DBS 法を用いた薬物動態試験（パイロットスタディ）
本方法を用いた臨床研究を神戸市立医療センター中央市民病院において開始するにあたり、アベマシクリブおよびパルボシ
クリブの薬物動態学的パラメータ（クリアランスや分布容積、AUCなど）を求めるために必要な採血時間を非線形混合効果
モデルソフトウェアを用いてシミュレーションして検討を行った。
少なくとも4-5ポイント以上の採血ポイントが必要であることがわかった。
しかし、本方法を用いた臨床研究を実施するには、まだ至っていない。

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