No.51 2005 October
巻頭言

発がん物質の閾値：新しい概念の導入
大阪市立大学大学院研究科長兼医学部長

医学研究科
福島昭治

今回、巻頭言を書いてみないかとの誘いを受けた。そこ

伝子に傷をつけないが、遺伝子のはたらきのバランスをくで、この機会を利用して、私がライフワークの 1 つとしてずし、異常な細胞増殖などをもたらす非遺伝毒性発がん物取り組んでいる発がんの閾値論について述べてみたい。

質といわれるものである。

まず、発がんリスク評価について述べよう。この場合の現在までのところ、発がん物質に対するリスク評価、特リスクは危険という意味ではなく、「ある因子によってがに遺伝毒性発がん物質の閾値については実験的に非常に多んが発生する可能性の確率」と理解すべきである。したくのネズミを使っても証明されておらず、閾値がないとしがって、発がんリスク評価の前段階として、有害事象の確て評価されてきた。すなわち、発がん物質はどんなにわず認がある。すなわち、環境中に存在する化学物質の場合、

かでも、存在する限り安全ではないという考え方で、ゼロそれによってがんができるかどうかを疫学的あるいは実験

リスク論と呼ばれている。

的に明らかにする必要がある。これは極めて重要な作業でしかし、最近になって、化学物質によるがん発生のしくあるが、ある化学物質によってがんが発生するという事実みが一部、明らかになってきており、また、生体は種々ののみを証明しているということを理解していただきたい。

傷害に対して修復する機能を持っていることもわかってき

発がんリスク評価は、それがどのくらいの確率でがんをた。実際に私たちは、発がん性ヘテロサイクリックアミン発生させるかを検討する作業である。すなわち、発がんのである MeIQx や N-ニトロソ化合物のひとつジエチルニト

可能性を曝露される化学物質の量と関係づけることによ

ロサミンのラット肝臓がんは非常に低い用量では発生しなり、がんにかかることによって発生する健康上の損失をよいことを証明した。世界的にも同様なデータが最近、報告

り科学的に理解することができる。発がん物質に曝露されされている。このことは発がん物質には閾値があるというた場合、どれだけの量なら安全であるかを知る目安をつく

新しい考え方をもたらしたといえよう。

る作業といえよう。一般に化学物質は特定の反応を起こさ環境にはどうしても排除できない発がん物質が数知れずせるときに、その用量に依存して反応の程度、すなわち、存在している。そこで「閾値あり論」を導入することによ強さが違う。したがって、反応しない用量域があり、このり、排除できない発がん物質からの曝露を防ぐための基準

場合に閾値があると表現する。すなわち、閾値を求めるこ

値を科学的につくることが可能となり、リスク評価の大きとはリスク評価にとって重要な作業である。

な進歩となるに違いない。化学物質を使用することによっ

ところで、発がん物質の場合はどうであろうか。発がんて十分な恩恵が得られるのか、その場合の発がんリスクを物質はその発がん機序の面から、大きく 2 種類に分類されどのようにするのか、閾値あり論は今後のがん予防対策にる。1 つは DNA に損傷を起こし、遺伝子に傷をつけるタ

新しい展開をもたらすことが期待される。

イプのもので、遺伝毒性発がん物質という。もう 1 つは遺CONTENTS

・光細胞毒性試験及び光遺伝毒性試験について
・吸入暴露による中期ラット肝発がん性試験法（伊東法）の開発
・小動物専用採血具の有効性について●巻頭言「発がん物質の閾値：新しい概念の導入 」
大阪市立大学大学院 医学研究科●本機構の活動から・ 2005分析展●特集Ⅰ（化学物質安全部門Ⅱ
・遺伝子発現解析

日田事業所）

福島昭治●特集Ⅱ（安全性評価技術研究所）
・EUの新化学品規制 REACH案
・海外出張報告●アスベスト（石綿）の分析●編集後記
1

CERI NEWS

本機構の活動から2005 分析展
毎年恒例の社団法人日本分析機器工業会主催の分析展

また、分析展と同時に開催された新技術説明会において、が、8 月 31 日から 9 月 2 日までの 3 日間幕張メッセで経済

クロマト技術部が「失敗例から学ぶ HPLC のノウハウ・テ

産業省などの後援により開催されました。

クニック」という演題でセミナーを行いました。

本機構では、過去に化学標準部が研究機関コーナーに、多くの方に展示コーナー、新技術説明会に来ていただき

クロマト技術部が一般ブースに出展経験がありました。今まして、本機構を知っていただく良い機会となりました。

回は、テーマ展示コーナー「ソリューションコーナー」に、（企画・本橋）次の表に示すような全体の業務紹介、各部門の業務の紹介をそれぞれパネルにして展示しました。

特 集 Ⅰ （化学物質安全部門Ⅱ

日田事業所）

遺伝子発現解析1．はじめにDNA マイクロアレイ（以下マイクロアレイと略す）を用いた遺伝子発現解析は、一度に多数の遺伝子発現量（数千〜数万遺伝子）を解析可能であり、一般化学物質のみならず医薬品や機能性食品などの毒性発現や作用メカニズムの解析、バイオマーカーの探索などに非常に有効なツールです。
本機構では化学物質の毒性評価の一環として独立行政法
図 1 DNA マイクロアレイ測定概念図

人新エネルギー・産業技術総合開発機構（NEDO）委託事
業「高精度・簡易有害性（ハザード）評価システム開発」などの支持体に張り付けたもので組織などに発現する遺伝プロジェクトに参画し、ラットを用いたトキシコゲノミク

子を網羅的（数千〜数万遺伝子）に解析することができまス研究（遺伝子情報に基づく化学物質の発がん性予測法開す。

発）に取り組んできました。ここで得られた豊富なアレイ

遺伝子発現量を比較したい 2 つの異なるサンプル（例：

実験、データ解析の経験と知識を生かし、マイクロアレイ

化学物質投与と非投与の動物組織）から精製した RNA をを用いた遺伝子発現解析の受託を開始しています。本稿で異なる 2 色の蛍光色素（Cy3 ：緑、Cy5 ：赤）でそれぞれ

は、マイクロアレイの測定原理と実際の遺伝子発現受託解

標識し、それらの等量混合物をマイクロアレイ上に添加し析の流れについて紹介します。

ます。各サンプルの蛍光標識体は、存在比に応じてそれぞれマイクロアレイ上の相補的な配列を持った遺伝子断片に

2．マイクロアレイの測定原理

2

特異的に結合するので、各遺伝子スポット上の緑と赤の蛍

マイクロアレイの測定原理を図 1 に示します。

光強度を読み取ることで、比較したいサンプル間の各遺伝

マイクロアレイは生体中の各遺伝子に特異的に結合する子発現の変動倍率を測定することができます。蛍光は、画相補的な塩基配列の遺伝子断片を高密度にスライドガラス

像データとして取得され、遺伝子発現量が等量であれば黄CERI NEWS

図 4 アジレント社製バイオアナライザー③ RNA 品質検定
RNA の品質は、最終結果に影響を与えますので、アジ
図 2 アジレント社製オリゴ DNA マイクロアレイ（全体像）

レント社製バイオアナライザー（図 4）などを用いて RNAの濃度、純度、分解度を確認します。

色、Cy3 標識側の発現量が多ければより緑に、Cy5 標識側の発現量が多ければより赤に近い色のスポットとして観察することができます（図 2）。

④標識 cRNA 合成
RNA 鋳型として逆転写酵素により cDNA を合成し、これを鋳型として T7 RNA ポリメラーゼにより cRNA を合3．遺伝子発現受託解析の流れ

成すると同時に 2 色の蛍光色素で標識されたシトシン

本機構では、動物や培養細胞実験を含む遺伝子発現量測（Cy3-CTP、Cy5-CTP）をそれぞれ取り込ませます。

定から得られたデータの詳細解析までの総合的な遺伝子発cRNA は直線的に増幅されますので、出発 RNA 量が少量

現解析を受託しています（図 3）。ここではその中の基本でも、充分量の標識 cRNA を得ることができます。

パッケージとなるマイクロアレイ実験の流れについて説明します。

⑤標識 cRNA チェック
標識 cRNA の品質も、最終結果に影響を与えますので、濃度、蛍光色素の取り込み効率を確認しています。
⑥フラグメンテーション
標識 cRNA をハイブリダイゼーションに適した分子サイズに断片化します。
⑦ハイブリダイゼーション、洗浄
マイクロアレイに標識 cRNA を添加し、ハイブリダイ
ゼーションを一晩行い、翌日、洗浄して非特異的に吸着した cRNA を取り除きます。
⑧スキャニング
アジレント純正の高解像度スキャナ（図 5）でマイクロ

図 3 遺伝子発現解析の総合的な受託試験項目の提供

アレイ上の各色素の蛍光強度を読み取り、画像ファイルを①使用するマイクロアレイ
主に高密度、高品質なアジレント社製マイクロアレイ（ラット、マウス、ヒトなど）を用います。
②送付サンプル2 つのサンプルを 1 枚のアレイで比較する 2 色法を採用していますので、比較したい 2 つの RNA を凍結送付していただきます。組織、細胞からの RNA 精製もオプション
項目として実施しています。
図 5 アジレント社製マイクロアレイスキャナー

3

CERI NEWS

作成します。

望できるスキャタードプロットと合わせて納品しています（図 6）。更に詳細解析を希望される場合は、オプション項⑨数値化、色素バイアス補正

目としてクラスタリングなどの各種解析を実施していま取得した画像ファイルから専用ソフトを用いて各色素のす。

蛍光強度を数値データに変換します。また、数値化データの色素バイアス（色素の取り込み効率、1 分子あたりの量
子蛍光などに起因）を LOWESS ノーマライゼーション法

4．まとめ
マイクロアレイは多くの遺伝子の動きを網羅的に解析する強力な手段となりますので、ぜひ一度お試しください。

で補正しています。

日田事業所ではマイクロアレイ技術を始め、様々な先進技⑩簡易解析（変動遺伝子リストの作成）術を駆使した新しい毒性試験の開発に挑戦しています。
（日田・宮浦）

取得した補正データを用いて、比較サンプル間で変動した遺伝子の変動倍率順に並んだリストを作成し、全体を一図 6 変動遺伝子リストとスキャッタードプロット

光細胞毒性試験及び光遺伝毒性試験について
1. はじめに一方、光遺伝毒性試験は、米国では FDA の Center for

化学物質の暴露を受けた後、日光に曝されることにより、Drug Evaluation and Research （CDER）から 2000 年に、ヒトに毒性を示す化学物質の存在が懸念されています。こ光安全性のドラフトガイダンスとして公表されています。

のような化学物質の毒性影響を評価するには、用いる試験

このガイダンスでは、ヒトで 5 年以上にわたり使用される系の中で光の影響を考慮する必要があります。

可能性のある医薬品で、全身性暴露あるいは直射光に暴露

光照射による化学物質の毒性影響を評価する方法としてされる皮膚に塗布する場合には、当該医薬品が紫外線によ従来 in vivo 系の光感作性試験などがありますが、より簡り発がん性を増大させるかどうかを評価する必要があると便に光毒性を評価する方法として、in vitro 系の光細胞毒しており、その評価項目の一つとして光遺伝毒性試験が挙性試験が代替試験法として検討されてきました。さらに、げられています。また、EU では The European Agency

光照射による化学物質の遺伝毒性を評価する方法として、

for the Evaluation of Medicinal Products （EMEA）の遺伝毒性試験の中で最も一般的かつ簡易に実施されている

Committee for Proprietary Medicinal Products （CPMP）「細菌を用いる復帰突然変異試験」を利用した光遺伝毒性

が、2000 年に光安全性試験のガイダンスを公表しており、試験の開発が行われてきました。

光安全性を光感受性 （光刺激性及び光アレルギー） 及び

光照射による毒性影響を考慮する可能性を持つ化学物質

光遺伝毒性/光がん原性と解釈しています。2001 年には、化粧品、医薬品から一般工業化学物質まで広範囲にわ

CPMP が公表した Note for Guidance （NfG） のドラフトたるため、今後これらの安全性評価の必要性が増加するとには、光安全性試験は、光毒性 （光刺激性）、光アレル

考えられます。

ギー、光遺伝毒性、光がん原性の 4 指標を考慮すべきであることが示され、さらに、光安全性試験が考慮される医薬

2. ガイドライン等の現状

安全性評価に対する規制当局の考え方が示されています。

vitro 3T3 NRU phototoxicity test」として 2004 年に標準以上のように、海外ではいくつかのドラフトガイダンス

化されています。
4

品の特性、光安全性試験の方法、試験戦略、当該医薬品の光細胞毒性試験は、OECD テストガイドライン「432, Inが提出されており、具体的な試験手法については 1999 年、

CERI NEWSワシントンで開催された International Workshop on
Genotoxicity Test Procedure （IWGTP） で試験法の標5. 試験方法の概略

準化について国際的調和が図られています。

5.1

しかしながら、国内では試験法ガイドライン等の制定は未だなく、1980 年頃よりキノリン系殺菌剤を主として光Balb/3T3 細胞を用いる細胞毒性試験1） 使用細胞Balb/c 3T3 細胞

遺伝毒性のデータがとられてきましたが、規制目的ではな
く海外動向への対応、研究レベルのデータ収集が主体でした。

3. 試験項目
光細胞毒性試験は、すでに OECD テストガイドラインに採用されている試験方法である「Balb/3T3 細胞を用いる細胞毒性試験」を、光遺伝毒性試験は、「細菌を用いる
光復帰突然変異試験」の基礎データの収集を行ってきており、本機構の遺伝毒性試験項目として追加しました。また、
今後、in vitro 光小核試験についても基礎データ収集に向試験に使用する Balb/3T3 細胞

け検討していく方針です。
2） 試験方法

4.

試験に用いる光照射装置及び光スペクトル、照度測

2 枚の 96 ウェルプレートに細胞を播種し、被験物質液を定装置加えます。1 枚は 5 J/cm2 の光を照射し、もう 1 枚は暗所に

4.1 光照射装置保管します。

自然太陽光に近いスペクトルを照射できる SOL 500（Dr. Honle）ランプを使用します。

2 枚の 96 ウェルプレート

左は照射装置、右はランプ

原理的には、光照射によって細胞毒性を示す化学物質の場合、光を照射しない場合と比較して、照射することによって、より低濃度の被験物質で細胞が死亡するため、細4.2 光スペクトル、照度測定装置

胞内へのニュートラルレッドの取り込みが無くなることを指標にしています。
3） 結果及び評価
光細胞毒性の評価は、光照射しない場合では細胞毒性を示さない化学物質の用量群で、光照射した場合に細胞毒性を示すようになるかどうか光照射する場合としない場合のIC50 値の差によって評価を行います。光照射した被験物質の IC50 値が、光照射しない被験物質の IC50 値より低くなっ

左は UVA 照射量の測定装置、右はスペクトルラジオメータ

た場合、光照射により被験物質に細胞毒性が発現したと評
価します。

5

CERI NEWS5.2 細菌を用いる光復帰突然変異試験所では、これらの試験も含め、今後も遺伝毒性に関する

1） 使用菌株:ネズミチフス菌 S.tyhimurium TA100, TA98,

様々なご要望に迅速に応えていきたいと考えています。
（日田・小椋）TA1022） 陽性対照物質:Chlorpromazine Hydrochloride（CPZ）、
8-Methoxypsoralen（8-MOP）、Methylene blue（MB）
3） 試験方法①プレート法試験物質液、試験菌液、リン酸緩衝液及び Top agar を加え、最少グルコース寒天平板培地に重層した後、光照射
する方法。
②菌懸濁法
試験物質液、試験菌液を加え光照射した後、リン酸緩衝
液及び Top agar を加えて最少グルコース寒天平板に重層する方法。

溶媒対照群及び光遺伝毒性物質による誘発した復帰変異コロニー

4） 検討結果①照射強度は、光照射による生菌数及び復帰変異コロニー数への影響から、プレート法及び菌懸濁法とも、
1.3J/cm2 以下が適切でした。
②Chlorpromazine Hydrochloride は TA100 及び TA98 で、8-Methoxypsoralen は TA102 で、Methylene blue はTA100、TA102 及び TA98 での陽性対照物質として使用可能でした。

6. まとめ光細胞毒性試験及び光変異原性試験は、光照射による化
学物質の毒性影響を評価する有効な試験法です。日田事業

光照射時間と典型的な光遺伝毒性物質により誘発した復帰変異コロニー数

吸入暴露による中期ラット肝発がん性試験法（伊東法）の開発
1. はじめに本法には以下の特徴があります。

環境中での化学物質暴露の経路は、食物、飲料水による経口暴露に加え、発がんリスクアセスメントを行う上で大・長期発がん実験の結果を短期間に予測できる。

気による経気道的な経路は無視できません。

・用量反応関係が明確であり、肝発がん性あるいは促進作

現在の発がん性試験は、多大なコスト、期間を要し、特用強度の推定が容易である。

に吸入試験では特別な設備、施設も必要となり、更にコス・非遺伝毒性発がん物質の肝発がん性も検出できる。

トが増します。また、生産される化学物質数は、試験でき

・被験物質が少量で済む。

る化学物質数を大きく上回り、十分な評価ができていない

・開発経費（時間、動物等）を削減できる。

のが現状です。以上のことから吸入暴露における中期発が・マウスにのみ肝発がん性を示す物質も検出可能であるたん性試験は重要な代替試験法の一つといえます。今回、吸め、げっ歯類を代表できる肝発がん性検出法である｡

入暴露による中期ラット肝発がん性試験法（伊東法）の開・化学予防物質の検索にも応用できる。

発についてご紹介します。
つまり、本法は発がんリスクを検討する上で必要な多く

2. 中期ラット肝発がん性試験法（伊東法）の特徴の有用なデータを提供することができます。

発がん二段階説に基づき、イニシエーターとして
diethylnitrosamine を用い、2/3 肝部分切除を施行する 8

3. 四塩化炭素吸入暴露による中期ラット肝発がん性試

週間のモデルです。判定の指標として肝におけるグルタチ

験（伊東法）

オンＳ-トランスフェラーゼ（GST-P）陽性細胞巣の数及び面積を画像定量解析します。
6

中期肝発がん性試験（伊東法）は現在までに、313 化合物で試験が行われています 。その結果、肝発がん物質で

CERI NEWSである GST-P 陽性細胞巣の数及び面積を画像定量解析しました。
その結果、GST-P 陽性細胞巣の定量的解析では、その数と面積とも 25 及び125 ppm 群で有意な増加がみられました。また、2 年間吸入試験による発がん性データでは 125 ppm 群で肝細胞癌が有意に増加している結果が得られています。GST-P 陽性細胞巣が前癌病変であることを考慮すると、本結果が 2 年間吸入試験と相関があることが確認されました（図 3）。
図 1 試験デザイン

4.まとめ
今回、吸入暴露による中期肝発がん性試験が確立できたことで、8 週間という短期間でヒトへの主な暴露経路を考慮した発がん性試験が可能になりました。化学物質の毒性のうち究極の毒性である発がん性に関するリスク評価の観点から、非常に重要な結果が得られたと考えます。
（日田・辻村）図 2 鼻部暴露概略図

は 60/65 例（92%）が陽性で高い予測率を示しています。
それら化合物の主な投与経路は、経口投与（混餌投与、飲水投与、強制経口投与）又は皮下投与です。ヒトの場合、化学物質の経口経路による摂取は、制限することが容易ですが、吸入経路での化学物質の摂取を意図的に制限することは困難です。それを考慮すると、吸入暴露による評価は非常に重要な情報を与えます。そこで、日田事業所では、発がんリスクによる揮発性発がん化学物質の四塩化炭素をモデルとし、吸入暴露長期発がん性試験代替法としての吸入暴露による中期肝発がん性試験法の有用性を検討しました。
試験方法として、動物種、週齢（6 週齢 F344 雄ラット）、
処置（3 週時における部分肝切除術）については中期肝発
がん性試験法（伊東法）に準じて行いました。暴露方法として鼻部暴露を選択し、暴露用量は 2 年間の吸入暴露試験を参考に、空気対照群、1、5、25、125 ppm（各群 15 匹）

図 3 GST-P 陽性細胞巣計測結果としました。また、暴露時間及び頻度を 6 時間/日、6 日/（上：免疫染色結果、下：計測結果）

週暴露とした。試験デザイン及び鼻部暴露概略図を図 1 及び 2 に示します。主検索項目として肝臓の前癌病変の指標
7

CERI NEWS

小動物専用採血具の有効性について
1. はじめに

液生化学的検査値による評価を行っていますが、血液中へ

現在、小動物（ラット、マウスなど）の採血には、後大の混入が非常に少ないことが確認されています。

静（動）脈採血法、心臓採血法、眼窩静脈叢採血法、尾静脈採血法など様々な手技が確立されています。しかし、そ3.2 ストレスの軽減効果のほとんどはヒト用に開発された採血器材を使用するた

ストレス影響については、前号で KK-Ay マウスを用いめ、動物に過度の苦痛･ストレスを与える可能性がありまた検討結果を掲載しました。しかし、本動物は糖尿病の研す。日田事業所では小動物専用の採血器材の開発･作製に究に使用される特殊なモデル動物であり、前臨床試験で使取り組んできましたが、今回、「CERI NEWS 第 35 号」に用されるケースはほとんどありません。そのため、本稿で掲載した採血具が特許として登録されました（特許第は毒性試験などで一般に用いられる SD ラットを用いた検3683208 号）。そこで、本稿では当事業所で開発した採血

討結果をご紹介します。本検討では、採血具及び従来法具を改めてご紹介するとともに、その有効性及び前臨床試（剃刀による切開法）それぞれ 2 種類の方法を用いて SD

験への応用例について説明します。

ラットの尾静脈から経時的に採血を行い、血漿中のコルチ
コステロン濃度を比較しました。その結果、従来法では採2. 採血具の概要

血 2 回目よりコルチコステロンの顕著な増加がみられまし

本採血具は、主に小動物の尾静脈より血液を採取する目たが、採血具においては初回採血から最終採血時まで低い的で開発したもので、25G の針を装着した円錐型のプラス値で推移しました（図 1）。コルチコステロンは副腎皮質チック管（針部）と採血管部から構成されます（写真 1）。

から分泌されるステロイドホルモンで、ストレス侵襲時にプラスチック管内部には輪状の凸部が設けられており、毛血漿中濃度が数十倍に増加することから、別名ストレスホ

細管やテフロンチューブなどを採血管として接続します。

ルモンとも呼ばれています。このことから、採血具のスト採血を行う場合には、プラスチック管を保持して針を静脈レス軽減効果が非常に高いことが確認されました。

に刺入すると、毛細管現象により血液が自然に吸引されます。そのため、穿刺以外の操作は一切不用となり、片手で全ての操作が行えます。また、採血部の損傷も少なく、針と採血管の連結部も試料の損失を最小限に抑えられる設計になっています。

図 1 頻回採血時におけるコルチコスロン濃度の比較

3.3 前臨床試験への応用
本採血具は、動物が小さいほどその効力を発揮します。
そのため、主にマウスを用いた臨床検査に使用してきまし写真 1 採血具

たが、現在はトキシコキネティクス（TK）試験への応用について検討を進めています。TK 試験の場合、同じ動物

3. 採血具の有効性
当事業所で実施した検討結果及び前臨床試験への応用例
を以下にご紹介します。

から経時的に採血する方法が望まれますが、従来の採血法
では動物へ過度のストレスを負荷するため、採血ポイント
ごとに新しい動物を使用しているのが現状です。しかし、
本採血具を使用した場合には、頻回採血による動物へのス

3.1 採血量及び組織液の混入防止

8

トレスを軽減できるため、同一動物を用いた TK 試験が可

採血管として毛細管を使用した場合には、一度に約 70能となり、動物数削減に寄与することができます。以下に、μL の血液採取が可能です。また、テフロンチューブを使

ラットに鼻部吸入暴露した際の TK 試験結果を示します。

用した場合には、チューブの内容積に合わせて更に多くの本試験では被験物質を 125 ppm 暴露した後、同じ動物か血液が採取可能となります。組織液の混入については、血ら経時的に血液を採取していますが、血中濃度はほぼ理想

CERI NEWS

4. まとめ当事業所で開発した採血具は、小動物専用の採血具として汎用性が非常に高いことが確認されています。また、動物に対するストレス軽減効果も実証されており、動物愛護の観点からも推奨すべき実験器具と思われます。そのため、今後は学会･学術会を通じて本採血具の普及に努めるとともに、前臨床試験における更なる技術開発に貢献したいと考えています。
（日田・東原）図 2 鼻部吸入暴露時の血中濃度の推移

的な推移を示しており、採血後の動物にも異常は認められませんでした（図 2）。また、特筆すべき点として、鼻部吸入暴露の場合、動物をホルダーに保定するために採血部
位が尾部に限定されることから、本採血具以外では TK 試
験の実施が困難であることを確認しています（写真 2）。
写真 2 鼻部吸入暴露時の採血風景

特 集 Ⅱ （安全性評価技術研究所）
EU の新化学品規制 REACH 案
REACH とは質は、上市（販売の意）の前に届出が必要ですが、REACH（Regulation on Registration, Evaluation,

REACH では既存物質も対象となります。（EU 域内での）Authorization, and Restriction of Chemicals）は、EU が製造量・（EU の）輸入量が年間 1 トン以上の化学物質は、導入を目指している化学物質の登録、制限、認可及び評価

原則として EU 域内での上市に際し有害性、用途等の情報に関する新しい規制案です。2003 年 10 月 29 日に欧州委員の登録が必要となります。

会案が公表され、現在も欧州議会で審議中です。そのため、

ポイント②：登録は事業者ごとに実施

内容変更の可能性はありますが、現時点での REACH 案について紹介します。

事業者ごとにその製造・輸入量に応じて要求される情報を登録することが基本であり、同じ物質を複数の事業者が登録することになります。ただし、コンソーシアムを組み、共同で提出することも可能です。なお、登録の義務があるのは、EU 域内の製造業者と輸入業者です。日本から輸出する場合は、代理人を立てて、輸入業者の代行をするなどの対応が必要です。また、製造・輸入業者が登録していな
い用途での使用には、使用者（川下ユーザー）自らが登録します。
ポイント③：年 10 トン以上は有害性評価の実施が必要
製造・輸入量が年 10 トン以上になると、収集した情報

図 1 REACH 全体の流れを基に有害性評価（当該物質の有害性はどの程度か）が必要となります。その結果、一定以上の有害性があると分類

ポイント①：既存物質・新規物質の区別はない

されると、更に暴露評価（人や環境中の生物がどのくらい

現時点では、「危険な物質の分類、包装及び表示に関すの量の当該物質に曝されるか）及びリスク評価（有害性とる理事会指令（67/548/EEC）」に基づき、EINECS（欧州

暴露評価から人の健康や生物に影響を与えるかどうか）を

既存商業化学物質インベントリー）や NLP（ポリマーと行い、許容できるリスクとするための適切な方法の提示がみなされない物質）リストに記載されていない新規化学物

求められます。
9CERI NEWS

ポイント④：認可、制限の対象となる場合がある

10 トン、10 〜 100 トン、100 〜 1,000 トン及び 1,000 トン以登録された情報は、EU 加盟各国当局などが評価を行い上の 4 段階に分かれています。製造・輸入量の区分が上がます。大部分の物質はこの時点で製造・輸入が可能となる

ると、要求される項目が増えます。なお、100 トン以上でと言われていますが、有害性に関して人や生物に非常に高要求される情報については、情報があれば提出しますが、い懸念がある物質と判断された場合、用途ごとに認可（条ない場合は適切な試験方法とタイムスケジュールを提案

件付で使用可）、あるいは制限の対象となります。発がん

し、試験実施の必要性の判断を待つことになります。

性物質などが候補に挙がっています。

（3）Chemical Safety Report （化学物質安全評価書）

ポイント⑤：製品中の化学物質の一部も対象

有害性評価（必要に応じて暴露評価、リスク評価を追加）

1）一定以上の有害性ありと分類された物質が、2）製品中に合計 1 トン以上用いられている、3）使用中に外部へ放出される、という条件を満たすと登録又は届出対象となります。ただし、具体的な対象製品は明確になっていません。

REACH への準備
事業者が当面準備すべきこととして、次の(1)〜(3)があります。
（1）EU へ輸出している商品の確認

REACH の施行時期（2）名称などの整理

表 1 「段階的導入物質」の登録猶予期間（施行後）

化学物質名称の整理、既存物質かどうか、輸出量、用途の確認（3）情報の収集、評価
物理化学的情報、有害性情報の有無
EU の危険性分類基準による分類
このうち（3）については、収集した情報が REACH の要求する水準を満たしているかの評価を行い、もし情報が足りない場合は、追加試験を行うなどの対応が必要です。
本機構では、REACH 登録の支援として、文献を検索・査読する情報収集・評価の業務と、登録に必要な文献データがない場合は、推奨される試験の提示・実施の業務を行う所存です。

2007 年頃の施行と予想されますが、（評価研・窪田）

現在も欧州議会で審議中であり、遅れ
表 2 製造・輸入量に応じて要求される有害情報などる可能性もあります。施行された場合、既存化学物質であり、施行前 15 年間に製造・輸入された実績がある物質は、「段階的導入物質」とされ、一定期間登録が猶予されます。ただし、事前登録（登録予定の化学物質名称、事業者!

名など）をしないと猶予は適用されま!

せん。

REACH 登録に必要な情報
下記の（1）、（2）は必須、製造・輸入量が 10 トン/年以上の場合は（3）も
必要です。

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（1）Technical Dossier （技術一式文書）
一般登録情報、物質の製造と用途に

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関する情報、分類と表示、安全使用ガ!

イダンス （MSDS 相当） など（2）製造・輸入量に応じた物理化学的
性状、有害性及び生態毒性情報（表 2参照）
なお、製造・輸入量の区分は、1 〜
10!

CERI NEWS

海外出張報告2005 年 8 月 30 日から 4 日間、ハワイ・カウアイ島の最初に、発がん物質を遺伝子発現変動のパターンが類似

RADISSON KAUAI BEACH RESORT にて ICEM2005のグループに分け、各グループの発がん物質に対して発がsatellite meeting:Toxicogenomics が行われ、様々なトキ

ん性予測式を作成しました。遺伝子発現変動パターン分類

シコゲノミクス関連の研究について発表があり、活発な討は、教師無し分類手法＊の一つである階層的クラスタリン論が行われました。筆者は、初日のポスターセッションにグという統計的手法を用いて行い、その結果、3 つのグ

おいて、「PREDICTION OF HEPATOCARCINOGENI-

ループがあることがわかりました。次に、各グループの発CITY OF CHEMICALS USING THE GENE EXPRESSION

がん性物質の投与で特徴的な発現変動を示す遺伝子を統計

IN THE 28-DAY REPEAT-DOSE TOXICITY STUDY」

的手法により選定し、サポートベクターマシンという手法（28 日間反復投与試験における遺伝子発現データを用いたにより各グループの発がん物質を高確率で予測できる予測

発がん性予測）というタイトルで発表を行いました。その式を作成しました。作成した複数の予測式を組み合わせ、

内容としては、発がん性が既知の化合物を用いて 28 日間

未知の物質の発がん性予測が行えるようなシステムを構築の反復投与試験を行い、得られる肝臓のサンプルにおけるしました。内部データを用いて発がん性予測を行ったとこ

遺伝子発現変動をマイクロアレイで測定したデータをもと

ろ、予測率は 83.1%、毒性予測法を実用化するときに重要に簡易で高精度な発がん性予測法を開発した、というものとなる偽陰性率（非発がん物質と予測した確率）は 5.1%

です。

でした。

近年、生体中の遺伝子の発現量の網羅的な測定を可能に

2 時間ほどの発表の間に 10 数名討論を行ったところ、予するマイクロアレイが実用的な手段となり、化学物質暴露

測率が高く、かつ偽陰性率が非常に低いのが良いというコを受けた生物に毒性が発現される最初の生体内現象である

メントが多く、また、予測に使った遺伝子の中に、発がん遺伝子の発現量変動から毒性を評価するトキシコゲノミクとの関連が示唆される遺伝子も含まれているという結果にスの開発が進められています。この方法は、作用機序に基ついても非常に興味深いとのコメントをいただきました。

づく毒性評価が可能であり、ヒトへの外挿が容易となるな

現在、今回発表した方法を改良するとともに別の手法を用どが期待されています。NEDO では、平成 13 年度から 5いた予測法を開発中です。

年間でトキシコゲノミクス手法を用いて発がん性の高精度（評価研：松本）で簡易な予測法を開発することを目指した「高精度・簡易
有害性（ハザード）評価システム開発」を実施しており、＊分類に関連があると考えられるデータ（教師データ）、例

本機構もこのプロジェクトに参加しています。今回の発表

えば、発がん性に関連する情報など、を必要とせず、相ではこのプロジェクトで得られた成果の一部を発表しまし関係数などを基準に類似する物同士をグループ化する分た。発表の内容は次のとおりです。

類手法。

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CERI NEWS

アスベスト（石綿）の分析

編
集
後
記

第 51 号秋季号をお届けいたします。
日一日ごとに秋の深まりが感じられる季節になりましたが、いかがお過ごしでしょうか。
巻頭言は、大阪市立大学大学院 医学研究科研究科
長兼医学部長 福島昭治先生から「発がん物質の閾
値：新しい概念の導入」という表題で頂戴いたしました。誠にありがとうございました。今回の特集は、化化学物質評価研究機構
ホームページ

学物質安全部門Ⅱとして日田事業所及び安全性評価技術研究所について掲載させていただきました。
今回も内容についてのアンケートをさせていただきましたが、皆様のご意見を参考にしてよりよい CERI
NEWS にしていきたいと考えております。今後とも一層のご指導とご支援を賜りますようお願い申しあげます。
（企画・本橋）h t t p : / / w w w. c e r i j . o r. j p

CERI NEWS 第 51 号 秋季号
発行日 平成 17 年 10 月
編集発行 財団法人 化学物質評価研究機構 企画部〒 112-0004 東京都文京区後楽 1-4-25 日教販ビル 7F
Tel:03-5804-6132 Fax:03-5804-6139 mail to:cerinews@ceri.jp

古紙配合率 100 ％再生紙を使用しています12