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鯵

日本家禽学会誌,47:J"‑J77:2010

IPSn

Jap8nPoullⅣScienceAssocIa伽、ニワトリの排卵周期中における卵胞重量の増加と穎粒膜プラスミノーゲン
アクチベーター活性との関係
武石勝!、安住水穗2．西田沙世2．山村奈美子2．後藤尚也!、土井守3．上吉道治2！日本配合飼料株式会社中央研究所飼料畜産開発センター，栃木県芳賀郡茂木町321‑3621
2岐阜大学農学部，岐阜県岐阜市柳戸501‑1193
311皮阜大学応用生物科学部，岐阜県11皮阜市柳戸501‑1193
ニワトリにおいて，穎粒膜のプラスミノーケン・アクチベーター(PA)は，卵胞の急速成長相における穎粒層細胞の増殖と細胞外マトリクスの再構築に関与することが知られているが，約1日の排卵周期中における卵胞重量の増加への関与については未だ十分には明らかにされていない。そこで本実験では，排卵周期中において3時間毎に卵胞重量と頚粒膜におけるPA活性を測定することにより，排卵周期中の卵胞重量増加への穎粒膜PA活性の関与の可能性を検討した。
使用したニワトリは,50週齢の白色レグホーン種産卵鶏で,14時間照明の下で，水と餌を自由に摂取させた。これらのニワトリから，排卵周期の3時間毎に，最大卵胞(F1)と2番目に大きい卵胞(F2)を採取した。卵胞は重量を測定した
後，頼粒膜を単離した。単離した頼粒膜のPA活性は色素性合成基質を用いる方法で,DNAはジフェニルアミン法の変法で測定した。
卵胞重量は,F1とF2共に,F1の排卵22‑23時間前から排卵10‑11時間前に相当する時期にかけて￨￨頂次増加し，その後はほぼ同じ値で推移した。頼粒膜のDNA含量は，周期中の時期間における差異のみならず,F1とF2における間にも差異は見出されなかった。排卵周期中においてDNA当たりに換算した穎粒膜PA活性は,F1とF2共に,F1の排卵22‑23

時間前から16‑17時間前に相当する時期にかけて有意に増加し，排卵13‑14時間前まで高い値を維持した後，排卵4‑5時
間前に相当する時期にかけて徐々に低下した。前後の時期における平均卵1句菫呈の差から求めた卵胞重呈増加量は，排卵周期中においてF1とF2と共に，頼粒膜PA活性における傾向とほぼ同じ傾向を示した。
これらのことは，頼粒膜PA活性と排卵周期中における卵胞重量の増加の間に相関関係があることを示している。

キーワード：フ･ラスミノーゲン・アクチベーター，頼粒膜排卵周期，卵胞重量，ニワトリ

1997),tPAの方が量的に少ないことからuPAがPAの主体であ

二一一巨

緒

ると考えられている(Lafranceaal.,1993;Johnson"".,1997)。卵胞におけるPAの作用は，哺乳類と鳥類で違いがあるこ

プラスミノーゲン・アクチベーター(PA)は，活性の無い酵素前駆体であるプラスミノーゲンをセリンプロテアーゼの一種であとが知られている。哺乳類は主に穎粒層細胞で生産されたPAにるプラスミンに変換して線溶系を促進する蛋白質であるよりプラスミノーゲンがプラスミンに変換されて，う°ラスミンは(Robbin""/.,1967)。う°ラスミンの代表的な生理作用は，血液中卵胞壁の開裂に作用して排卵に関与すると考えられているにおいて不溶性のフィブリンを可溶性物質に分解することであ(Beers"".,1975;Tooaaj.,1984;MartinatandCombar‑

り，血流を正常に維持することに重要な役割を果たしている

nous,1983)。さらにPA−プラスミン系が未熟卵胞の頼粒膜の再(Warren,1964;BuonassisiandVenter,1976;Loskutoffand構築に関与することにより卵胞腔の形成に関与するのではないか

Edgington,1977)。ニワトリの卵胞におけるPAは,Urokinase‑と示唆されている(Knecht,1986,1987)｡

Type(uPA)とTissue‑Type(tPA)の2種類が存在するが一方，鳥類では,PAは卵胞において哺乳類と同様に穎粒層細(TillyandJohnson,1987;Poilitsaaﾉ.,1990;Johnsonaaj.,胞で合成されるが，排卵直前の卵胞よりも発育途上の卵胞の方がPA活性は高く(Politis"".,1990;Tilly"".,1992;Lafrance

2009年9月4日受付,2010年3月9日受理"""1993;Li"".,1997),さらに排卵前の最大卵胞(F1)の連絡者：武石勝

PA活性は排卵予定時間が近づくに従って低下すること(Tillyet〒321‑3621栃木県芳賀郡茂木町大字天子45l
日本配合飼料株式会社中央研究所飼料畜産開発センター",1992),培養した順粒層細胞において排卵誘起ホルモンとして

Tel:0285−63−ll21

知られる黄体形成ホルモン(LH)がPA活性を阻害することから

Fax：O285‑63‑1120(TillyandJohnson,1987;Tischkau"".,1996),哺乳類のよE‑mail:masarutakeishi@nippaico.jp

うな排卵に関する作用は少ないと考えられているcこれまでに報J71

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日本家禽学会誌47巻J2号(2010)
告されているニワトリの卵胞におけるPAの役割は，穎粒層細胞て実施した。

の増殖(Politisc"/.,1990;JohnsonemJ.,1997),細胞外マトリ

試料の採取

クラッチ第2卵の排卵推定時刻直前のいろいろな時間にニワト

クスの再ﾙ築(Tilly"".,1992;Tischkau"".,1996;Li"""

リを屠殺して排卵の有無を確認した予備実験の結果から，本実験

1997)などがある。

飼育条件下でクラッチ第2卵の排卵は午前8時前後に30分以内

我々は最近の研究において，卵胞の頼粒膜のPAが小卵胞の急速成長相への転移に関与することを報告した（武石ら,2009)｡この範囲で起こることが確認された。そこで，午前8時を排卵0時の研究では，排卵18時間前に9番目に大きい卵胞(F9)から最大間とし，クラッチ第2卵排卵におけるl周期中において3時間毎

卵胞(Fl)までの各卵胞を採取し，顎粒膜におけるPA活性と卵にl時期に10羽ずつ供試し，卵胞を採取した。卵胞は，断頭屠殺

胞膜におけるエストラジオール176(E2)儂度を測定すると共に，後直ちに開腹してF1とF2を採取した。重量測定後，速やかに卵胞重曼と卵胞に取り込まれる物質の移動率を算出した。この結Gilbert"".(1977)の方法に従って頼粒膜を採取して，直ちに液果，小卵胞の急速成長相への転移はF6で起こり，頼粒膜におけ体窒素で凍結させ,PA活性測定時まで‑80｡Cで保存した。
う．ラスミノーゲンの精製に使用した血清は雄鶏から採取し，精るPA活性と卵胞膜におけるE2濃度は，共に急速成長相への転移に先立ち,F8からF7にかけて有意に増加し，しかも急速成長

製当日に常法に従って血清を得た。

相の転移直前のF7において最も高い値を示した。これらのこと

穎粒膜におけるPA活性の測定

は,E2が小卵胞の急速成長相への転移に重要な役割を担ってい穎粒膜のPA活性はTillyandJohnson(1987)の色素性合成るとの報告(Imaiαα/.,1998)を裏付けるとともに，頼粒層細胞

基質を用いる方法を一部変更して測定した。この測定におけるプ

におけるPA活性が急速成長相への転移に関与することが示唆さラスミノーゲンの精製法と測定操作は前報（武石ら2009)に記した方法と同様である。すなわち，凍結保存しておいた順粒膜をれている。

0.2%Triton×100‑0.1Mトリス塩酸緩衝液lml中でガラスホモ

卵胞の急速成長相では，卵胞への物質の取り込みが促進される
ことで卵''何重量が短期間で急激に増加する。卵胞に取り込まれる

ジェナイザーを用いてホモジェナイズした。得られたホモンジェ

主な物質には，卵黄前駆物質であるビテロゲニン(VTG)や超低

ネー卜は遠心分離し，その上澄みの一部をPA活性の測定に，沈密度リポタンパク(VLDL)があり，小卵胞の急速成長相への転殿をDNAの測定に供した。ただ,PA活性値の表現は前報とは移においてもこれらの卵黄前駆物質の取り込みが急激に増加す

異なり，測定したパラニトロアニリン(pNA)量を穎粒層細胞のる。これら卵黄前駆物質の卵胞への取り込みは，約1日の排卵周DNA100"g当たりの値として示した。

期中にも変化が認められており,VTGの卵胞への取り込みの様

顎粒膜中のDNAの測定相を観察した報告では（武石ら,2008),排卵周期の特定の時間に

穎粒膜中のDNAは，ジフェニルァミン法の変法(Leyvaand

VTGの卵胞への取り込みが盛んに起こり，この取り込みの調節

Kelley,1974)に従って測定した。

にPAが関与する可能性が推察されているが十分な証拠は無い。

測定は同一検体について2本ずつ行い，その平均値を検体の測

このように，穎粒層細胞におけるPAの役割には，順粒層細胞定値とし，子牛胸腺DNA(Sigma)を0.01MTris‑HCl緩衝液にの増殖と，増殖に伴う細胞外マトリクスの再構築に加えて，小卵

溶解した標準液を用いて同様に測定した標準曲線からDNA量を

l1包の急速成長相への転移に関与することが示唆されているもの算出した。

の，排卵周期中における卵'何重畠の増加への関与については未だ

統計処理十分に検討されていない。

データの統計処理は，一元配置の分散分析後，平均値間の有意そこで本実験では，穎粒層細胞の増殖や，細胞外マトリクスの差の検定はDuncansnewmultiplerangetestで危険率が5%以

再構築が行われていないF1とF2を対象として，排卵周期中に下になった場合に有意な差があるものとした。

おける卵1句壺号と頼粒膜のPA活性を測定し，排卵周期中におけ

土士
叩口る卵胞重量の増加にPA活性が関与する可能性について検討し杲

約1日の周期であるニワトリの排卵周期中において3時間毎にた｡

測定した卵胞重量の測定結果を表lに示した。卵胞軍呈は,F1と材料と方法

F2共に,F1の排卵22‑23時間前から排卵10‑11時間前に相当す

供試鶏る時期にかけて順次増加し，その後はほぼ同じレベルで推移し

本実験で使用したニワトリは，白色レグホーン種の雌鶏(50週た。

齢）と雄鶏（96週齢）である。産卵鶏は岐阜大学付属農場無窓鶏

F1とF2の排卵周期中における頚粒膜のDNA含量を表2に示舎内で点灯開始を午前5時とする14時間照明:10時間暗黒の明した。周期中の各時期の間のみならず,F1とF2の間において暗周期条件下で，飼料と水は自由に摂取させた。産卵鶏は最低3も，測定した全てのデータの間に差は認められなかった(P>週間以̲上産卵記録を取り,lクラッチの長さが4から6で，比較

0
0
5
)
。

的規則正しくクラッチを繰り返し，クラッチ間の休産日が1日でF1とF2のそれぞれの卵胞重量において，前後の時間帯の平均あるニワトリのみを使用した。また，雄鶏は岐阜大学付属農場開

卵胞重量の差から求めたその期間の卵胞重量増加量を図lの上段

放鶏舎にて飼育し，飼料と水は自由に摂取させた。本実験は，実に示した。卵胞重量増加量は,FlとF2共に,Flの排卵22‑23〜

験動物の管理と使用に関する指針(ILARandNRC,1996)に従っ

19‑20時間前に相当する期間から￨￨￨目次増加し，排卵16‑17〜13‑14
Tヮの

ノイ色

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武石ら：排卵周期中のPA活性と卵胞発育
表2．排卵周期中の最大卵胞(Fl)と2番目に大きな卵胞(F2)の頼粒膜におけるDNA含量

表l.排卵周期中における最大卵胞(F1)と2番目に大きな卵胞(F2)の重量

卵IF庫号(9)

排卵前時間

排卵前時間

DNA含量("g/granulosa)
F2

ｂ

ｄｄ

ａ４
ａ９
ａａ
９
４代
０ａ
６ａ
４ａ
２
１２１１３１１１
十一十一十一十一士士十一十一
８０４５０４４９
１６
２６
２６
１６
３６
７６
２６
３
６

Fl

ａ２
ａａ
４
２ａ
０ａ
６ａ
８ａ
３ａ
７
１１１２１１２３＋｜士十一十一十一士十一十一
８６０３２３６９
０
６６
６４
６１
６３
６６
６３
６５
６

ａ９
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８
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９
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２
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３８６７４４５７
２
１２
１３
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１５
１５
１５
１５
１

ａ０
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４
１
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２５
２２
２３
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２
００００００００
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７１７７２３５６
６
１７
１７
１８
１９
１９
１９
１９
１

３０７４１８５
２
２
１
１
１
０
０２
０
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６１
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１
２

３０７４１８０
５０
２
２
２
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１
１
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９１
６１
３１
００
７０
４０
１
２

F2

F1

各時期のDNA測定値は10羽の平均値±標準偏差で示してある。
図中のアルファベットは異なる文字間で5％水準の危険率で有意差があることを示している。

各時期の卵胞重量は10羽の平均値±標準偏差で示してある。
図中のアルファベットは異なる文字間で5％水準の危険率で有意差があることを示している。

︵望畑佃罠聾里言

００
８０
６０
４
１

1.2

回

0.2

ﾛ ﾛ

−２

５
０
０一
１
４一０

−５

０

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０
０
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７
０
０

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０
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０
１

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２６
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１

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︵くｚ口幽ユつつ﹇室ＣＥＥくｚｅ

０
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３０
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図1

Aab
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A皇A
■■■■

0

22‑2319‑2016‑1713‑1410‑1107‑0804‑0501‑02

排卵前の時間排卵周期中における最大卵胞(F1)と2番目に大きな卵胞(F2)の平均重量から算出した各時期間における卵胞増加重量（上段）と，穎粒膜
におけるPA活性（下段）
各時期のPA活性測定値は10羽の平均値±標準偏差で示してある。
図中のアルファベットは異なる文字間で5％水準の危険率で有意差があることを示している。

時間前に相当する期間において最も高い値を示した。その後，卵I寺間前に相当す る時期から16‑17時間前に相当する時期にかけて

l1句重量増加量は減少し,F1の排卵7時間前に相当する時期から有意に増加した後，排卵13‑14時間前まで高い値を維持した。そは低い値で推移した。

の後は，排卵4−5時間前にかけて徐々に低下した。

順粒膜のPA活性は,DNA当たりに換算した{￨間で示した結果

考 察を図lの下段に示した。排卵周期中における頼粒膜のPA活性は,F1,F2共に図lの上段に示した卵ll句重量増加量とほぼ同じ

本実験では，排卵周期中におけるF1とF2の卵胞穎粒膜にお様相で推移した。すなわち頼粒膜のPA涌性は,Flの排卵22‑23

けるPA活性の変動の様相が明らかとなった。そのPA活性はF

T7q
LノIRノ

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日本家禽学会誌47巻J2号(2010)lのみならずF2においても,F1の排卵22‑23時間前に相当する

たが，我々は穎粒層細胞の増殖がほとんど行われていないF2と時期から排卵16‑17時間前に相当する時期にかけて増加し,13‑

F1を対象として，約1日の排卵周期中における卵胞重量増加量，14時間前に相当する時期にピークを示した後，減少して，排卵07−

頼粒膜中のDNA含量とPA活性の変化を時系列で観察した。そ

08時間前に相当する時期以降は低いレベルで推移することが見の結果，排卵周期中の色々な時期で測定した頼粒膜のDNA含量出された。

は,F1とF2とにおいてのみならず，測定した期間においても有

また，前後の時間帯の平均卵胞重量の差から求めたそれぞれの意な差は認められなかった。このことは，大きさが5番目以上の時間帯における卵胞重量増加量は,F1とF2共にF1の排卵22‑

発育卵胞では大きさの違いにより頼粒膜におけるDNA含量に相23〜19‑20時間前に相当する時期から順次増加し，排卵16‑17

違が認められていない報告（武石ら，2009）とも符合し，しかも13‑14時間前に相当する時期において最も高い値を示した。その頼粒膜には穎粒層細胞しか認められないことから，少なくとも大後の卵胞重量増加量は減少し，排卵07‑08時間前に相当する時期

きさが5番目以上に発育した卵胞では穎粒層細胞の増殖は起こら以降の増加はほとんと認められなかった。このことは，排卵周期ないことを示している。このことは，少なくとも大きさが5番目

中における卵胞重量の増加は，一定の持続した状態で行われるの以上に成長した卵胞における穎粒層細胞におけるPAは，穎粒層

ではなく，周期の前半に起こり，後半の時期にはほとんど起こら細胞の増殖や，細胞増殖に伴う細胞外マトリックスの再構築にはないことを示していると共に，卵胞重量増加が頼粒膜における関与していないことを示唆している。

PA活性の変動とほぼ同じような様相を示したことは，排卵周期肝臓で合成された卵黄前駆物質は，血流を介して卵胞に到達中における卵胞重量の増加に，頼粒層細胞のPAが関与している

し，卵胞膜内層において基底膜に接して分布する毛細管の小孔かことを示唆している。

ら卵胞組織内に拡散し，基底膜の結合組織間,細胞膜の細胞間隙，

本実験で測定した，卵胞重量において,F2からF1へと階層が卵黄膜内居を通過して(PerryandGilbert,1979),卵細胞膜表面

変わる際に大きな重量斧が認められた。連産中のニワトリの卵重のリポ蛋白質レセプター遺伝子ファミリーに属する多機能なしセは，連産が進むに従って軽くなり，ある程度軽くなると休産してプターを介したエンドサイトーシス(Barberaaj.,1991;Bujo"

次の連産に移っていくことは経験的に知られている。Zakariag/

fzI.,1997)により，他の体細胞では前例がないほど効率的に卵細（1984）は卵胞の急速成長のパターンを詳細に調査し，クラッl1包に取り込まれ，蓄積されることにより，結果として卵胞重量がチの長さ，クラッチ内の卵の位置と卵胞成長日数の関係について増加して成長する。主な卵黄前駆物質としてVTGとVLDLが知報告している。この報告によると，クラッチの長いニワトリほどられているが，排卵周期において卵細胞に接する卵黄膜内居にお卵ll包の急速成長期間は短く，更にクラッチ内の卵の位置がクラッ

けるVTGを測定することで，排卵周期中における卵胞への卵黄

チ第1卵，第2卵…第5卵と進むに従って，急速成長日数は短く

前駆物質の取り込みの様相を検討した報告（武石ら，2008）があなる傾向が認められている。特にクラッチ第1卵は他の位置の卵る。この報告において，血液中におけるVTGレベルには排卵周よりも卵胞の急速成長期間は長く，卵黄体積が大きい傾向が認め

期中に有意な変動は認められず，検討したF1,F3とF5の何れられている(Zakariaaaﾉ.,1984)。しかし，これらの現象が何故においても卵胞重量は,F1の排卵19‑20時間前に相当する時期起こるかに関しての報告は見当たらない。

から10‑11時間前に相当する時期にかけて順次増加し，その後は

これまでに報告されているニワトリの卵胞におけるPAの役割

ほぼ一定の値で推移したのに対して，卵黄膜内層中のVTGレベ

は，頼粒層細胞の増殖(Politisaal.,1990;Johnson"".,ルは，卵1句重量の増加に先立って増加し，卵胞重量の増加が認め1997),細胞外マトリクスの再構築(Tillyaaj.,1992;Tischkau

られなくなった後は急激に減少して，その後は低いレベルで推移

aaj,,1996;Li"".,1997),小卵胞の急速成長相への転移（武石したことが見出されている。本実験で見出された頴粒膜中のPA

ら,2009)等である。これらのうち,1990年代に行われた一連の活性値は，卵黄膜内層中のVTGレベルが増加する時期には増加

研究では，哺乳類の卵巣におけるPAの作用との違いの観点からし，減少する時期には減少して，さらに低いレベルで推移した時研究が進められた。特に本研究で得られた結果と類似している期には同じようにPA活性も低いレベルで推移していることか

Tilly"".(1992)の報告では，排卵前17,5,0.5時間でF1の穎

ら，穎粒層細胞のPAが,VTGすなわち卵黄前駆物質が卵胞に取粒層細胞のPAを測定して，排卵時期に近づくに従いPA活性値

り込まれてから卵黄膜内居までの移動に関与して，卵胞重量の増が減少していること見出し，さらに，卵胞サイズ別のPA活性と加に寄与している可能性が推察される。

3H̲thymidineを使ったDNA合成能とF1の頼粒膜の杯盤部分

卵黄膜内層で毛細管血管網を形成する毛細血管の小孔から拡散とその他の部分でのPA活性とDNA合成能の検討結果から，して卵胞内に取り込まれたVTGなどの卵黄前駆物質は，卵黄膜

DNA合成が盛んで細胞増殖が盛んな時期・部位でPA活性が高内層に到達するまでに，基底膜の結合組織間と頼粒膜の頼粒層細いことが見出された。これら結果から，彼らは，烏類の頼粒膜に胞間隙を通過する(Gilbert,1971)。これらの組織に中で頼粒膜のおけるPAは，卵胞の発育における頼粒層細胞の増殖に関与し，みに細胞が存在するが，頼粒膜は構造的変化が著しく，哺乳類と排卵への関与は少ないと結論している。

は逆に，鳥類では未成熟な卵胞では細胞が多層構造を示し，成熟

これに対して，本研究で我々は,Tillyeml.(1992)とは異なるするに従って単層化し，細胞間隙が広くなる(Perryet(zI.,1978;

着眼点で，卵胞発育の直接的な効果である卵胞重量の増加とPA

武石ら,2009)｡しかし，卵胞内における卵胞単位表面積当たりのの関係を検討した。すなわち,Tilly""(1992)は頚粒層細ll包の卵黄前駆物質の移動率は卵胞が成熟するに従って低くなる

増殖に伴う細胞外マトリクスの再構築にPAが関与すると考察し(Smith,1959;WarrenandConrad,1939;武石ら,2009)。これJ74

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武石ら：排卵周期中のPA活性と卵胞発育らのことは，順粒膜の細胞間隙における卵黄前駆物質の移動が細は，卵胞刺激ホルモンとして知られるFSHにより制御されてい胞層の構築状態のみに依存していないこと示していると共に，細る可能性が示唆されるが，このことをより明確にするには，さら胞間隙における卵茜前!躯物質の移動に関与する機械が存在する可なる研究が必要とされる。

能性を示唆している。プラスミンは組織￨ﾉ1のコラゲナーゼを活性謝 辞化し，基質蛋白を分解することにより細胞外基質を粗にする

実験遂行にあたり終始協ﾉ頂いた日本配合飼料株式会社1‑￨｣央研(Birkedal‑Hansena .,1976;EeckhoLltandVase,1977;

究所の所員一同に感謝致します。

Paranjpeem/.,1980;Reicheml.,1985)ことが知られているが，このプラスミンは活性のない酵素前駆体であるプラスミノーゲン

引 用 文 献からPAの作用によって活性化したものとして生成される

BarberD,SandersE,AebersoldRandSchneiderW.The(Robbinse/(zJ.,1967)｡従って，前述したように本実験において，receptol‑foryolklipoproteindepositioninthechicken

UIJ11句重量の増加と卵黄膜内層VTGレベルとほぼ同じ様相で順粒

oocyte.JournalofBiologicalChemistry,266:18761‑18770.

居細胞におけるPA活性が変動することが見出されたことは，少

1
9
9
1
．

なくとも卵胞発育の1機序として，頼粒細胞におけるPAによりBeersWH,StricklandSandReichE.Ovarianplasminogen

活性化されたプラスミンが，頼粒膜の細ll世間隙を粗にすることにactivator:relationshiptoovulationandhormonalregula‑tion.Ce11,6:387‑394.1975.

より，卵黄前駆物質の移動が促され，結果として卵細胞におけるBirkedal‑IIansenH,CobbCM,Taylol‑RE,TaylorREand

卵黄前駆物質の蓄積が増加して，その反映として卵ll包重量が増加

Fullmel、HMActivatiolloffibroblastp1‑ocollagenaseby

し，言い換えれば卵胞発育が促されると推察される。

mastcellprotenases.BiochimicaetBiophysicaActa,438:

卵胞発育を促進する要因として，卵胞刺激ホルモン(FSH)の273‑286.1976．

効果が古くから報告されており，粗製ニワトリFSH斉llJPFSH様

BujoH,HermannM,LindstedtKA,NimpfJandSchneider
WJ.Lowdensitylipoproteinreceptorgenefamilymembers
mediateyolkdeposition.JoumalofNutrition,127:801S‑作用を示すことが知られている妊馬血清性腺刺激ホルモン(PMSG)を投与すると，卵細胞への卵胞前駆物質の取り込みが増

804S･ 997．

加することが知られている(Imai,1973;Mitchell,1970)。しかBuonassisiVandVenterJC.Hormoneandneurotransmitter

し，これらの報告では，排卵周期中の卵胞にFSHがどのように

receptorsinanestabliShedvascullarendthelialcellline.

関与しているのかは十分にW1らかではない。本実験で順粒層細￨￨包ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesofthe
UnitedStatesofAmerica,73:1612‑1616.1976.

のPA活性が高いと認められた時期と，我々の報告で卵黄膜lﾉ1層

EeckhoutYandVaseG.Furtherstudiesontheactivationof

VTGレベルの増加が認められた時期（武石ら,2008)は,FSHのprocollagcnase,thelatentprecursorofthebonecolagenase.

血中レベルと卵胞のFSH結合能が高い時期(I̲ll村ら,2001;
Scanes"".,1977)と一致し,PA活性が低くしかも卵黄膜内層

BiochemicalJournal,166:21‑31.1977.

GilbertAB.Theovary.II1:Physiologyandbiochemistryof

VTGレベルが低く維持された時期は，噸粒層細ll世におけるFSH

thedomesticfowl.(BellDJandFrecmanBMeds,),Vol.3.pp.

受容体mRNAレベルが減少する時期(Yamamura"".,2001)

1163‑1208.AcademicPress.London.1971.

GilbertAB,EvansAJ,PerryMMandDavidsonMH.Aと相応している。

methodforseparatingthegranulosacells,thebasallamina

ニワトリの順粒層細胞を刺激する因子として，トランスフォー

andthethecaofthepreovulatoryovarianfollicleofthe

ミング増殖因子アルファ(TGF‑cM),上皮成長因子(EGF),う．ロ

domesticfowl(Gallusdomesticus).JournalofReproduction

スタグランジンE2(PGE2)等が報告されているが(Tillyand

Johnson,1990a,1990b;Lier(z/・,1994,1997),これらは何れも頼andFertility,50:179‑181.1977.
InstituteofLaboratoryAnimalResearch,CommissiononLife
Sciences,NationalResearchCouncil(ILARandNRC).

粒層細胞の増殖に関連する因子として考えられており，我々が考Guidelineforthecareanduseoflaboratoryanimals(7th

える卵黄前駆物質の取り込みへのPAの関与における刺激作用に

editioll)̲NationalAcademyPress,WashingtonDC.1996.

ついては不明である。一方，ほ乳類においては,FSHが頼粒層細ImaiK.Effectsofavianandmammalianpituitaryprepara‑胞におけるPAの合成と分泌を刺激することが報告されている

tionsoninductionofovulationinthcdomesticfowl,Gallus(Liuaaj.,1981;WangandLeung,1983;MartinatandCom‑

domesticus.JoLImalofReproductionandFel‑tility,33:91‑
98．1973．

barnous,1983)。しかしながら，鳥類のPA活性は,LHによって抑制されることは知られているが(TillyandJohnson,1987),

ImaiK,SonodaYandKaiO・Folliculartransformationm

hen'sovaryaftertheadministrationofaminoglutethimide.

純粋なFSHが得られていないことから,FSHが刺激するか否か

JapanesePoultryScience,35:329‑336.1998.

は明らかにされていない。本実験においては，先に述べたように，

JohnsonAL,BridghamJTandAbthonyRV.Expressionol

排卵周期中で頼粒膜のPA活'樅が高いことを確認した時1ﾘ}は，

avianurokinaseandtissLle‑typeplasminogenactivator

FSHの血中レベルと卵胞のFSH結合能が高い時期（山村ら，messengerribonucleicacidduringfolliledevelopmentand

2001;Scanesaal,1977)と一致し,PA活性が低い時期は，順

atresia.BiologyofReproduction,56:581‑588.1997.

粒層細胞におけるFSH受容体mRNAレベルが減少する時期

KnechtM.Productionofacell‑associatedandsecretedplas‑

mmogenactivatorbyculuredratgranulosacells.Endocri‑(Yamamuragr".,2001)とも相応している。

nolo只v,118:348‑353.1986.

これらのことは，ニワトリ卵胞の顯粒層細胞におけるPA活性
T 弓 F

J/0

Copyright ©2010, Japan Poultry Science Association
H本家禽学会誌47巻J2号(2010)
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武石ら：排卵周期中のPA活性と卵胞発育

RelationshipbetweenOvarianFollicleDevelopmentandPlasminogen

ActivatorActivityinGranulosaLayerduringHenOvulatoryCycle
MasaruTakeishi'、MizuhoAzumi2,SavoNishida2、NamikoYamamura2、ダ‐

HisayaGoto',OsamuDoi3andMichiharuKamiyoshi2
ILaboratoryofNipponFormulaFeedMfg・Co.,Ltd.Tochigi321‑3621

2FacultyofAgricuiture,GifuUniversity,Gifu501‑1193
3FacultyofAppliedBiologicalScience,GifuUniversity,Gifu501‑1193

Indomesticfowl,theplasminogenactivator(PA)ingranulosaisrelatedtoovarianfbllicledevelopment.

However,theparticipationinfblliculargrowthduringthehenovulatorycycleoftheactivityofPAingranulosa
isnotsu価cientlyclear.

Whiteleghornhens,50weeksofage,hadfreeaccesstofeedandwater,andwereexposedtoaphotoperiod
ofl4hoflightandlOhofdarkness.Inthisstudy,fbllicleswerecollectedfromlayinghensat3‑hintervalsfor
24h.Thegranulosalayerwasisolatedfromthelargest(F1)andsecondlargest(F2)preovulatoryfOlliclesafter
measurementoffbllicularweight.Inthefollicles,theactivityofPAingranulosawasmeasuredusingplasminogenextractedfromrooster'splasmaandchromogenicsubstrate.TheDNAcontentofgranulosawasdeterminedby
thediphenylaminemethod.

Follicularweightincreasedgraduallyfrom22‑23tol3‑14hbefOreF1ovulation,andthenremainedconstant.
ThePAactivityofgranulosaincreasedsignincantlyfrom22‑23htol6‑17hbefbreFlovulationinbothfbllicles,

showedapeakinl3−14handdecreasedaccordingtothegrowthoffollicles.Follicularweightgain,whichis
calculatedfromthediferenceinaveragefbllicularweight,showedasimilarchangetothatofPAactivity.The

DNAcontentofgranulosadidnotshowsignilicantchangesduringtheovulatorycycle.
TheseresultssuggestthattheactivityofPAingranulosamayparticipateintheincreaseoffollicularweights
duringthehenovulatorycycle.

(Jqpa"eseJo""'fz/Q/比"/"Scie"",47:J7I‑J7Z2010)
Keywords:chicken,follicularweightgain,glanulosalayer,ovulatorycycle,plasminogenactivatoractivity

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