広島工業大学紀要研究編
第 ₅₃ 巻（₂₀₁₉）61 – 66

論文

薄層クロマトグラフィーと画像解析を用いたトウガラシ属植物におけるポリアミン蓄積量の調査
今中雄大*・田中

諒*・田中英法*・今井章裕*（平成₃₀年 ₈ 月₂₁日受付）

Polyamine analyses in capsicum plants by a combined method ofthin-layer chromatography and image analysis
Yudai IMANAKA, Makoto TANAKA, Hidenori TANAKA and Akihiro IMAI
(Received Aug. 21, 2018)

Abstract
Polyamines are widely distributed in living organisms and essential for their cell proliferation andcell differentiation. Although it has shown in recent decdes that polyamines have specific funtions inplants, such as environmental stress response and organ development, the molecular basis still remains
unclear. A previous study has reported that polyamines are highly abundant in green peppers. In thisstudy, to examine whether polyamines are abundant in the every cultivars of capsicum plants, we analyzed the amount of polyamines, which are putrescine, spermidine, and spermine, by a combined
method of thin-layer chromatography and image analysis. Taking an organ-specific of polyamine accumulation into consideration, our results may suggest that high accumulation of putrescine in greenpeppers is caused by a competitive inhibition due to ethylene biosynthesis.
Key Words: polyamine, green peppers, capsicum plants, thin layer chromatography, image analysis（図 ₁ ）。スペルミジンは，プトレスシンと補因子である脱₁ ．はじめに炭酸型 S-アデノシルメチオニン（dcSAM）を基質に，スペポリアミンは，あらゆる生物の細胞内にみられ，細胞増

ルミンは，スペルミジンと dcSAM を基質に，それぞれス殖，細胞分化，および環境適応など，多岐にわたる生命現ペルミジン合成酵素とスペルミン合成酵素の触媒活性によ象に関与する生理活性物質である ［₁］。定義として“ポリアるアミノプロピル基の転移で合成される。ポリアミンは細ミン”は，アミノ基を ₂ つ以上含む低分子脂肪族化合物を胞中では，核酸や ATP，その他の酸性分子と結合して局在指す総称である。代表的なポリアミンとしては， ₂ 個のアすることで，上述のような細胞プロセスに寄与すると考えミノ基を有するプトレスシン， ₃ 個のアミノ基を有するスられている ［₃］。生物におけるポリアミン生合成の必要性にペルミジン， ₄ 個のアミノ基を有するスペルミンの三種がついては，逆遺伝学的な手法によって調べられており，出挙げられる。ヒトを含むほとんど全ての真核生物では，プ芽酵母のスペルミジン合成酵素遺伝子 SPE₃ の欠損変異体

トレスシンはオルニチンから合成されるが，例外としてアはスペルミジンまたはスペルミン要求性の増殖を示し ［₄］，ブラナ科植物の多くの種ではプトレスシンはアルギニンかシロイヌナズナのスペルミジン合成酵素遺伝子 AtSPDS₁ おらアグマチンを経由して合成されるなど，その生合成経路

よび AtSPDS₂ の二重欠損変異は胚性致死を引き起こす ［₅］。には生物種間で多様性がみられることが分かっている ［₂］加えて，ポリアミン生合成酵素の阻害剤を用いることで悪* 広島工業大学生命学部食品生命科学科
─ 61 ─

今中雄大・田中諒・田中英法・今井章裕とは興味深く，ポリアミンの植物細胞に特異的な未知の生理機能を示唆しているのかもしれない。本研究では，ピーマンを実験材料とし，植物体の異なる器官でも同様にポリアミンが多く蓄積しているのかについて調査した。また，生物学的に同種であるシシトウガラシ（以下シシトウと表記）やトウガラシの果実において，ピーマンと同様にポリアミンを多く含む食品であるかについて明らかにすることを目的とした。一般に，ポリアミンを定量分析する実験手法としては，高速液体クロマトグラフィー（HPLC）が用いられるが，定量性が高い反面，装置やカラムが高価であり，研究の初発段階の試験的な実験を行う際には不適当である。本研究では，比較的安価な機器で簡便に測定できる薄層クロマトグラフィーを採用し，画像解析と融合させた方法で定量化を試みた。加えて，植物種間におけるポリアミンの生合成機構の違いや，新たな機能を類推する手がかりを得ることを目的とした。

図 ₁ ．ポリアミンの生合成経路と化学構造式。
プトレスシン，スペルミジン，およびスペルミンはアミノプロピル基の転移によって合成される。SAM, S-アデノシルメチオニン；
dcSAM，脱炭酸型 S-アデノシルメチオニン；ACC，アミノシクロプロパンカルボン酸。

₂ ．実験方法
₂.₁．ポリアミンの抽出
植物試料からのポリアミンの抽出とダンシル化は，Flores［₁₁］& Galston（₁₉₈₂）の方法を一部改変し，次の通りに行っ性黒色腫（メラノーマ）の細胞増殖が停止することなども［₆］た。₀.₁-₁.₀ g の植物試料に対し，₁₀倍量の ₅ ％（v/v）過，複数の生物種においてポリアミン塩素酸を加え，乳鉢と乳棒を用いて破砕した。抽出液をの生合成が細胞の生存に必須であることを示唆する結果がチューブに回収し，₁₃,₅₀₀ rpm で₁₀分間遠心分離した。₁₀₀蓄積している。

µL の上清に ₂₀₀ µL のダンシルクロライド（₅ mg/mL アセ明らかになっておりポリアミンは消化管でそのまま吸収されることから，食トン）と ₁₀₀ µL の飽和炭酸ナトリウムを加え，暗所で ₂ 時品として摂取することで体内への供給が可能である。高ポ間静置した。その後，₅₀ µL の L（-）-プロリン（₁₀₀ mg/リアミンの飼料を与えたマウスでは，毛並みが良く，中年mL）を加え，₃₀分間静置した。さらに，₂₅₀ µL のベンゼ期の生存率が上昇する［₇］。また，ショウジョウバエでは，ンを加え，ボルテックスにより攪拌した後， ₂ 層に分離しポリアミンを多量に含む食品を摂取することで，加齢ととたベンゼン層 ₅₀ µL を薄層クロマトグラフィーのサンプルもに起きる記憶力の低下が緩和される［₈］。他にも，ポリアとした。

ミンは動脈硬化の誘発因子である LFA-₁の発現を抑制することから，動脈硬化などの生活習慣病を予防できる可能性

₂.₂．薄層クロマトグラフィー［₉］。こうした様々な疾病への関与

薄層クロマトグラフィーによる展開方法は，高橋らを示す結果から，ポリアミンは，いわゆる“アンチエイジ（₂₀₁₇）［₁₂］ の方法に従った。薄層プレートは TLC ガラスプ

ング効果”をもつ食品成分であるとして近年注目されていレートシリカゲル₆₀（メルクミリポア）を使用し，展開槽る。

は円筒型 TLC 展開槽（矢沢科学）を使用した。展開液にについて唱えられているポリアミンが，納豆，ぬか漬け，チーズといった発酵食は，クロロホルム：トリエチルアミン＝ ₂：₁ で混合した溶品に高濃度で含まれることはよく知られる。しかし，ピー媒を用い，展開前に溶媒蒸気を展開槽内に十分に飽和させマン（Capsicum annuum ＇grossum＇）の果実にもポリアミンた。展開液がプレートの上から約 ₅ cm に到るまで展開をが多く含まれることは，あまり知られていない ［₁₀］。ポリ行った。

アミンは細胞分裂期の細胞において特に豊富に蓄積する。
そのため，発酵食品に多く含まれるポリアミンは，活発に₂.₃．画像解析

細胞増殖する微生物によって多量に産生されたものである

展開後の薄層プレートは，ChemiDocTM XRS システムと考えられる。しかし，ピーマンにおいて種子や果皮など（BIO-RAD）を用いて ₃₀₂ nm の励起波長を照射し，露光時の複合器官である果実にポリアミンが多く蓄積しているこ間₅₀₀ミリ秒で蛍光画像を撮影した。取得した画像は，

─ 62 ─

薄層クロマトグラフィーと画像解析を用いたトウガラシ属植物におけるポリアミン蓄積量の調査

ImageJ ソフトウェア ver ₁.₅₁s（NIH）を用いて解析され，橋らの論文 ［₁₂］ を参照した。それぞれのポリアミンの物質該当するスポットのシグナル強度は Gel Analyzer モードで量とスペクトラムの積分した値（面積）をプロットしたグ計算された。

ラフを図₂C に示す。本研究で分析したプトレスシン，スペ₃ ．結ルミジン，スペルミンに関してはいずれも，₆₀-₂₀₀₀ pmol

果の範囲内において，ポリアミン物質量と面積の間に高い直₃.₁．薄層クロマトグラフィーと画像解析によるポリアミン線性が見られた（プトレスシン；y ＝₂.₅₅₉x ＋₃₇₉₈，R₂＝₀.₉₈₄₈，スペルミジン；y ＝₄.₁₅₃x ＋₂₉₅，R₂＝₀.₉₉₂₇，ス

量の測定方法の定量性の検討
本研究では代表的なポリアミンであるプトレスシン，スペルミン；y ＝₄.₅₉₈₃x ＋₃₈₀，R₂＝₀.₉₈₈₆）。プトレスシン

ペルミジン，スペルミンのみについて注目し，分析を行うに関しては，スペルミジンまたはスペルミンに比べ，基礎ことにした。まず，この三種類のポリアミン塩酸塩の混合値が著しく高かったことから，同一スポットに未同定のダ水溶液を調製し，段階的に希釈した。その希釈液をダンシンシル化化合物が含まれていることが示唆された。₂₀ pmol

ル化し，薄層クロマトグラフィーによって展開した後，高以下の物質量では直線性が低くなることから，本研究では感度 CCD カメラを用いて，紫外線照射下で薄層プレート₆₀ pmol 相当以下のシグナルに関しては不検出（n.d.）としの蛍光像を TIFF 画像として取得した（図₂A）。画像解析ソた。

フト ImageJ の Gel Analyzer モードにより，取得した画像の各レーンのシグナルの水平方向の輝度値の和を，垂直軸

₃.₂．トウガラシ属の同種栽培品種間におけるポリアミン蓄積量の比較に対してのスペクトルとして表示し（図₂B），各ピークについて積分した値を算出した。薄層クロマトグラフィーにピーマンの栽培品種であるパプリカ，シシトウ，トウガ

よる展開像におけるポリアミン三種のスポットの判別は高ラシ（図₃A-D）の果皮の湿重量あたりのポリアミン含量に

図 ₂ ．薄層クロマトグラフィーと画像解析によるポリアミン定量法の検討。
A，ポリアミン塩酸塩の混合溶液の薄層クロマトグラフィー展開像。蛍光シグナルの輝度は擬似カラーで表示した。サンプル
₁-₄はそれぞれ，各種ポリアミンを各 ₂,₀₀₀ pmol，₆₀₀ pmol，₂₀₀ pmol，₆₀ pmol で混合したものである。B，画像解析ソフ
ト ImageJ を用いて，図₂.A 中の黄色点線枠の輝度値の和をスペクトラムで表示した図。C，展開したポリアミン物質量と画像解析により算出したスペクトラムのピークの囲まれた面積のグラフ。Spm，スペルミン；Spd，スペルミジン；Put，プトレ
スシン。
─ 63 ─

今中雄大・田中諒・田中英法・今井章裕

ついて，薄層クロマトグラフィーと画像解析を融合した方のレーンにおいて，スペルミンのスポットに隣接したシグ法を用いて比較解析を行った。本実験では，パプリカは黄ナルが検出された。この蛍光画像をもとに，プトレスシン，色の果実から（図₃B），トウガラシは赤色の乾燥させていスペルミジン，スペルミンの湿重量あたりの物質量を定量ない果実（図₃D）から，それぞれ果皮を採取した。

したグラフを図 ₅ ．に示した。ピーマンとシシトウにおい上述の方法（₃.₁. に記述）と同様に薄層クロマトグラては，分析した三種類のポリアミンのなかでプトレスシンフィー展開を行った蛍光画像を図 ₄ ．に示した。シシトウが最も多く，パプリカとトウガラシではスペルミジンが最も多いことが分かった。湿重量あたりのポリアミン含量が最も多かったシシトウでは，プトレスシンが ₁.₆₂₆±₀.₂₀₅µmol/g F.W.，スペルミジンが ₀.₅₄₂±₀.₀₆₇ µmol/g F.W.，
ス ペ ル ミ ン が ₀.₀₈₅ ± ₀.₀₂₄ µmol/g F.W. 含 ま れ て い た（F.W. は湿重量 Fresh Weight の意）。一方，トウガラシは，プトレスシンが ₀.₀₅₁±₀.₀₉₆ µmol/g F.W.，スペルミジンが ₀.₂₃₉±₀.₀₀₃ µmol/g F.W.，スペルミンに関しては検出限界以下（₀.₀₃ µmol/g.F.W. 以下）であり，パプリカは，唯一スペルミジンだけが検出されたが，₀.₂₅₁±₀.₀₁₃ µmol/g
F.W. と，シシトウやピーマンに比べると低い値であった。
₃.₃．ピーマンにおける器官特異的ポリアミン蓄積量の測定
過去の研究において，ポリアミンが多く蓄積していることが明らかになっていたピーマンに関して，ポリアミンが植物体のどの器官に特に多く蓄積しているか₃.₂. の実験と図 ₃ ．本実験で使用したトウガラシ属植物の果実。

同様の方法で解析した。ポリアミンを抽出する器官として，A，ピーマン；B，パプリカ（黄色）；C，シシトウ；D，トウガラ
シ（赤色）。図中のバーは全て ₅ cm を示す。

果皮，胎座，種子，葉，茎，根を対象とした。果皮，胎座，種子，茎に関しては，ポリアミンのなかでプトレスシンが最も多量に蓄積しているのに対し，葉および根においてはスペルミジンが最も多かった（図 ₆ ）。プトレスシンに注目して比較すると，葉および根では検出限界以下であり，検出されたのは果皮，胎座，種子，および茎だけであった。
プトレスシンが検出された ₄ 器官のうち，果皮は最も多く全体の₅₃.₃％を，次いで，茎，胎座，種子がそれぞれ，₂₃.₁％，₁₅.₀％，₈.₇％を占めることが分かった。

₄ ．考

察

本研究では，従来の HPLC 法に比べ，安価かつ簡便な方法として，薄層クロマトグラフィーと画像解析を融合させた定量方法を用いて植物試料のポリアミン含量を測定した。
薄層プレート上のスポットの蛍光輝度値に関しては，少な
くとも ₆₀-₂,₀₀₀ pmol の範囲においては，高い直線性が確認された（図₂C）。Nishimura et al.（₂₀₀₆）の報告 ［₁₀］ において HPLC 法で定量されたピーマンのポリアミン含量と比べて，今回の定量法において算出した値がほぼ一致するこ
図 ₄ ．トウガラシ属各種植物の果皮から抽出したポリアミンの薄層クロマトグラフィー展開蛍光画像。
蛍光シグナルの輝度は擬似カラーで表示した。サンプル ₁ ，各₂,₀₀₀ pmol で混合した各種ポリアミン； ₂ ，ピーマン； ₃ ，パプ
リカ； ₄ ，シシトウ； ₅ ，トウガラシ。Spm，スペルミン；Spd，スペルミジン；Put，プトレスシン。とから，本手法による定量方法が概ね妥当であると考えられる。しかし，プトレスシンにおいては，物質量に対する輝度値の変化の直線性は高いと判断されるものの（R₂ ＝₀.₉₈₄₈），バックグラウンドとなる基礎値がスペルミジンやスペルミンに比べ著しく高かった。これは，過剰のダンシ─ 64 ─

薄層クロマトグラフィーと画像解析を用いたトウガラシ属植物におけるポリアミン蓄積量の調査

図 ₅ ．トウガラシ属の同種栽培品種の果皮におけるポリアミン含量。
本実験は，独立に ₃ 回反復され，エラーバーはその標準偏差を示す。不検出であったポリアミンは，n.d. として表示した。
Put，プトレスシン；Spd，スペルミジン；
Spm，スペルミン。

図 ₆ ．ピーマンの植物体における器官特異的ポリアミン蓄積量。
不検出であったポリアミンは，n.d. として表示した。縦軸は湿重量あたりのポリアミン物質量を算出し，果皮のプトレスシンの値を₁,₀₀₀とした時の相対値で表示した。
Put，プトレスシン；Spd，スペルミジン；
Spm，スペルミン。

ルクロライドを除くために添加したプロリンがダンシル化

ルモスペルミンと考えられる。テルモスペルミンの生合成され基礎値を増加させていると考えられ，このことから本

酵素遺伝子 ACL₅はシロイヌナズナにおいて初めて同定さ方法ではプトレスシンの定量性が低くなっている可能性がれており，その後植物界において幅広くみられる遺伝子で否めない。一方，スペルミジンおよびスペルミンに関してあることが知られている ［₁₃］［₁₄］。テルモスペルミンは茎伸は，バックグラウンドとなる基礎値は低かったため，これ長に必要なポリアミンであるが ［₁₅］，その作用機構についらの分子に関しては，本方法で定量した値には高い信頼性ては不明な点が多い。本研究で調査した植物はいずれも同があると言えそうである。

種でありながら，シシトウのみでテルモスペルミンが検出

果皮におけるポリアミン含量を比較したところ，シシトされたことは興味深く，栽培品種が系統的に派生する短期

ウはピーマンよりも湿重量あたりのポリアミン含量が高い間において遺伝子進化が起きた可能性が強く考えられる。

ことが明らかになった。一方，トウガラシはパプリカとほピーマンの器官別ポリアミンの相対蓄積量を調べた結果，ぼ同程度で，ピーマンやシシトウに比べると ₃ 種類のポリ果実に含まれる器官（果皮，胎座，種子）において多くポアミンの全てにおいて含量が低かった。この差の要因としリアミンが蓄積していることが明らかになった他，茎におては，果皮を構成する細胞内の水分が大きく影響しているいても多量に蓄積することが明らかになった。茎には，形のかもしれない。各果実の体積を比べると，今回使用した成層と呼ばれる維管束の木部と篩部をつくり出し肥大生長

トウガラシやパプリカは，ピーマンやシシトウと比べて体を行う分裂組織があり，そこでは細胞分裂が活発である。

積がかなり大きいことが推察できる（図 ₃ ）。仮に細胞数がポリアミンが細胞増殖期に多く蓄積していることを踏まえ大きく変わらないとすれば，細胞内を占める水分が湿重量ると ［₁］，茎に蓄積するポリアミンは形成層に比較的多く局を大きく占め，本実験のように湿重量あたりでポリアミン在しているのかもしれない。あるいは，ポリアミンは細胞含量を算出すると値は低くなるはずである。今後の研究と壁と結合し，それらの機能性や安定性を高める作用がある

して，乾重量あたりのポリアミン定量実験，または，果実と考えられている ［₁₆］ ことから，ピーマンの茎の細胞中にあたりの細胞数をそれぞれ計測することで，果実あたりのは元来遊離のポリアミンが多く局在しているのかもしれなポリアミン含量を定量することができるはずである。それい。また，この器官特異的なポリアミン類の局在に関して，により，栽培品種ごとの詳細な比較と特性の考察が可能にトウガラシ属の栽培品種間で違いがあるかについては今後なるだろう。

明らかにしていくべき課題である。

本研究で行なった薄層クロマトグラフィーで，シシトウ

複数の生物において，スペルミジンやスペルミンの生合において，スペルミンのスポットに隣接したシグナルが認

成は，基質のひとつである脱炭酸型 S- アデノシルメチオニめられた（図 ₄ ）。これはスペルミンの構造異性体であるテン（dcSAM）の生合成が律速段階となることが多くの生物

─ 65 ─

今中雄大・田中諒・田中英法・今井章裕

で報告されている ［₁］（図 ₁ ）。その反応の基質である S- アTabata S, Komeda Y, Takahashi T, Spermidine

デノシルメチオニン（SAM）は，果実の成熟を促進する植

synthase genes are essential for sur vival of物ホルモンであるエチレンの生合成に至る反応の基質でもArabidopsis, Plant Physiol, ₁₃₅: ₁₅₆₅-₇₃（₂₀₀₄）

あり，植物においてポリアミンとエチレンの生合成は拮抗［ ₆ ］Kramer DL, Chang BD, Chen Y, Diegelman P, Alm K,関係にある。今回の研究において，ピーマンは，植物体のBlack AR, Roninson IB, Porter CW, Polyamine depletion

どの器官においてもポリアミンを多く蓄積するのではなく，

in human melanoma cells leads to G₁ arrest associated

とりわけ果実に多くポリアミンを蓄積することが明らかにwith induction of p ₂₁WAF₁/CIP₁/SDI₁, changes in theなった。この結果から筆者らは，果実においてポリアミン

expression of p ₂₁-regulated genes, and a senescence-が特徴的な生理機能をもち，その初発となるプトレスシン

like phenotype, Cancer Res, ₆₁: ₇₇₅₄-₆₂（₂₀₀₁）

を積極的に多く合成していることを前提としたうえで，ス［ ₇ ］Soda K, Dobashi Y, Kano Y, Tsujinaka S, Konishi F,ペルミジンやスペルミンの蓄積量には，果実において成熟

Polyamine-rich food decreases age-associatedを促すエチレンの合成量に大きく依存しているのではない

pathology and mortality in aged mice, Exp Gerontol,

かと考える。すなわち，ピーマンやシシトウのように緑色

₄₄: ₇₂₇-₃₂,（₂₀₀₉）の未熟な果実では，果実の成熟を促すエチレンの生合成が［ ₈ ］Gupta VK, Scheunemann L, Eisenberg T, Mertel S,活発であると考えられる。それによって拮抗関係にあるス

Bhukel A, Koemans TS, Kramer JM, Liu KSY,ペルミジンやスペルミンの生合成は進みにくくなり，プト

Schroeder S, Stunnenberg HG, Sinner F, Magnes C,

レスシンが多く蓄積しているのかもしれない。この仮説は，Pieber TR, Dipt S, Fiala A, Schenck A, Schwaerzel M,

今回実験に使用した黄色のパプリカや赤色のトウガラシにMadeo F, Sigrist SJ, Restoring polyamines protects

おいて，スペルミジンの蓄積がプトレスシンよりも多かっfrom age-induced memor y impairment in an

た結果と矛盾しない。プトレスシンの生合成遺伝子やautophagy-dependent manner, Nat Neurosci, ₁₆:

dcSAM の合成を触媒する酵素の該当遺伝子の発生段階別の₁₄₅₃-₆₀（₂₀₁₃）

発現変動を調べることに加え，それらの遺伝子の変異体の［ ₉ ］Soda K, Kano Y, Nakamura T, Kasono K, Kawakami M,

表現型解析によって，果実におけるポリアミンの新たな機

Konishi F, Spermine, a natural polyamine, suppresses

能が発見されると期待される。

謝LFA-₁ expression on human lymphocyte, J Immunol,
₁₇₅: ₂₃₇-₄₅（₂₀₀₅）

辞［₁₀］Nishimura K, Shiina R, Kashiwagi K, Igarashi K,

本研究の一部は，広島県水産海洋技術センターの設備機器 ChemiDoc

TM

Decrease in polyamines with aging and their ingestion
from food and drink, J Biochem, ₁₃₉: ₈₁-₉₀（₂₀₀₆）

XRS システム（BIO-RAD）を利用して行われました。実験遂行に当たりご支援頂いた西井祥則様に感［₁₁］Flores HE, Galston AW, Analysis of polyamines in

謝致します。

higher plants by high per formance liquid文

chromatography, Plant Physiol, ₆₉: ₇₀₁-₇₀₆（₁₉₈₂）

献［₁₂］高橋卓，懸樋潤一，今井章裕，TLC を用いた簡便なポリアミン検出，ポリアミン，₁: ₁₄-₁₆（₂₀₁₇）［ ₁ ］五十嵐一衛，神秘の生命物質 - ポリアミン，₆-₃₃，共［₁₃］Hanzawa Y, Takahashi T, Michael AJ, Burtin D, Long

立出版（₁₉₉₃）［ ₂ ］Fuell C, Elliott KA, Hanfrey CC, Franceschetti M,D, Pineiro M, Coupland G, Komeda Y, ACAULIS₅ , an

Michael AJ, Polyamine biosynthetic diversity in plants

Arabidosis gene required for stem elongation, encodes

and algage, Plant Physiol Biochem, ₄₈: ₅₁₃-₂₀（₂₀₁₀）a spermine synthase, EMBO J, ₁₉: ₄₂₄₈-₅₆（₂₀₀₀）［ ₃ ］Igarashi K, Kashiwagi K, Polyamines: mysterious［₁₄］Takano A, Kakehi J, Takahashi T, Thermospermine ismodulators of cellular functions, Biochem Biophys Res

not a minor polyamine in the plant kingdom, Plant Cell
Physiol, ₅₃: ₆₀₆-₁₆（₂₀₁₂）

Commun, ₂₇₁: ₅₅₉-₆₄（₂₀₀₀）［ ₄ ］Hamasaki-Katagiri N, Tabor CW, Tabor H, Spermidine［₁₅］Kakehi J, Kuwashiro Y, Niitsu M, Takahashi T,

biosynthesis in Saccharomyces cerevisae: polyamine

Thermospermine is required for stem elongation inrequirement of a null mutant of the SPE₃ gene

Arabidopsis thaliana, Plant Cell Physiol, ₄₉: ₁₃₄₂-₉（spermidine synthase）, Gene, ₁₈₇: ₃₅-₄₃（₁₉₉₇）（₂₀₀₈）［ ₅ ］Imai A, Matsuyama T, Hanzawa Y, Akiyama T, Tamaoki［₁₆］多 田 雄 一，植 物 細 胞 遺 伝 子 工 学，₆₅-₈₀，三 恵 社

M, Saji H, Shirano Y, Kato T, Hayashi H, Shibata D,
─ 66 ─

（₂₀₁₄）