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原 著
Multi‑color/targetfluorescencei
nsituhybridization(Mt‑FISH)法及び免疫染色 (ICC)法 を用いた腹腔細胞診の検討
奈良県立医科大学病理診断学講座

榎本泰典，笠井孝彦，武田 麻 衣 子，高 野 将 人，

森田回亜也，森川剛平，柳生貴裕，嶋佐和子，

野々村昭孝
奈良県立医科大学附属 病院病理部

西川武

THEUTILITYOFMULTI‑COLOR/TARGETFLUORESCENCE(MtFISH)insitu
HYBRIDIZATIONANDIMMUNOCYTOCHEMISTRY(ICC)METHODSINPERITONEALCYTOLOGY
司YAS
UNO
RIENO
MOTO，TAKAHIKOKASAI，
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KOTAKEDA，
MASATOTAKANO，
KOUHEIMORITA，
TAKAHIROYAGYU，
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AKOMORIKAWA
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vedJune17，2011Abst
γαct:
Introduction:Utility of Mt‑FISH analysis in peritonea
lcytolog
y has not been wellr.Intheprese
ntstudy，therefore，peritonealc
ytologyi
n63patientswithelucidatedsof
a巴nt thr
ee methods，
malignant and non‑mali
gnant diseases was stu
died in differ

Papanicolaouand Giemza cytology (Pap)，ICC，andMt‑FISH，to evaluate the utilityand
avai
labil
it
yofICCandMt‑FISHi
nperitonealcytology，Materials and methods:Peritonealcytology specimens of 63 patients were collecteda Medica
lUni
versi
tyHospital，including 54
from thefi
les ofthe Pathology Section，Narrianorendometrial，andcasesofadenocarcinoma (33ofgast
rointestinalorbiliary，18ova
3primaryperi
tonea
lcancers)and9ca
sesofbenignl
esions (6benigntumorsand3non‑tumorlesions).Resultsofth
ethr
eedifferentmethodswereevaluatedandcompared.

11/54)in Pap method，36%
Results:Incidenceofposi
tiv
emalignancyr
atewas 20% ((18/50)inICC，and 59%(20/34)inMt‑
FISH. When compared to Papmethod，sen
si
tivi
t
yn ICC. No
and accur
acy were stat
isti
call
y significantlyhigher in Mt‑FISH，but not ihesewer
efoundininadequateori
nsu
f
fi
ci
entspecim
enswerefoundi
nPapmethod，butt

(50)榎 本泰典 他 9名

6% oflavagecytologyand8% ofa
sciti
ccytologyi
nICCs
pecimensand 14% oflavageespectiv
ely.
cytologyand31% ofa
sciti
ccytologyi
nMt‑FISHspecimens，rConclusion:ICCandMt‑FISHmethodsareveryu
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denceofinadequateorinsu
fficientcytology
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fprocessingthe
specimenswashigheri
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fasciticcytology，andtasciti
cfluidforMt‑FISHmustbeimprovedandarenowunderconsideration

Key wordsulti‑color/targetfluorescence i
nsituhybr
idizaticmper
itoneal cytology，M，immunocytochemistry(ICC)(Mt‑FISH).
1は じ め に

1
1.対象と方法

体腔内の遊離癌細胞を確実に及び早期に検出すること

当院病院病理部に 200
8年 8月から 2009年 6月に提出

は， 予後の予測や早期の治療開始に繋がり 重要であるが，3例のパパニコロウ染色及びギムザされた腹腔細胞診 6

しばし活動性中皮細胞が癌細胞と紛らわしい形態を示しap染色)を用いた通常の細胞診結果を，補染色(以下， p診断に難渋することがある.そのための体腔液細胞診の助診断法として用いた 1
CC法の結果及び Mt.
F1SH法を1CC法)
補助診断法としては，従来から免疫染色法 (以下 ，用いた遺伝子異常細胞数の検索結果と比較検討した.腹ev
erseTranscriptionPo.
や微量 腫蕩細胞検出のため Rlym
巴raseC
hainR
eaction(RT.
PCR)法 等 に よ る 遺 伝 子系18例，腹膜癌 3例 )， 9例の良性腫蕩性疾患 (子宮筋解析等が行われている 1‑6)が，我々が調べた限りではこれ

腫 1例，卵巣粘液性嚢胞腺腫 3例，卵巣紫液性嚢胞腺腫

ulti.
color/targetfluorescencei
nsituhybridiza.
までに Mtion(Mt‑F1SH)法による検討の報告はない そこで今肝硬変症 l例)からなる.なお ，消化器系の癌 33例の内腔細胞診 63例は， 54例の腺癌(消化器系 33例，婦人科

1例，卵巣子宮内膜症性嚢胞 2例，結核性子宮内膜炎 1例，回我々は，免疫染色法及び Mt‑
F1SH法による遺伝子異

訳は ，胃 癌 24例，勝癌 4例，胆管癌 2例，結腸癌 2例，)において悪性常細胞の検出が，腹腔細胞診 (以下， CY

虫垂癌 1例であり，婦人科の癌 18例は，すべて腺癌症例

腫蕩細胞同定に有用であるか検討を行った.

を用いた(卵巣癌 9例，子宮体癌 9例) (Table1).

.Summaryo
fclin
i
caldi
agnosi
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itonealc
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3pati
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Table1study

Gastr
i
cc
ancer

Number

Peritoneallavage

ofcases

cytology

Asciticcytology

24222Ovar旧 ncaner/per
itonealcancer

12{9/3}93Pancreaticcancer/biliar
ytr
actcancer
Cancer01uter
inebody6{4/2}4298

1Colonc
ancer/appendicealc
ancer

3{2/1}

12

Benigntumor
sj
disease9{6/3}

72total6351

12Multi‑color/targetfluorescenceinsituhybridization(Mt‑FISH)法及び免疫染色 (ICC)法を(51)用いた腹腔細胞診の検討

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dadenocarcinomaofthestomach(por2>sig，tub2，se，ly2，v1，INFr，sci)
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ytologyofPaps
tain(a)，carci
nomacellspositiveforMOC31(b)，andr
eactivemesothel
凶 cels positive forcalretinin(c)Papanicoloaustain(a)，i
mmunohistoc
hemicalst
ain(bandc)
Fi
g.2.Cytolog
ic
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gnantcell
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roundedbyarrowsonMt‑
FISHa
na
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s，show‑
ingDAPIfluorescence(a)，andamplificationofdifferentgenep
robes;5p15(5signals)(b)，6pll
1‑qll(2signals)(c)，7p12(6signals)(e)，8q24(7S叩 lals)
，andt
hei
rcomposi
temultトcolorimage(f)

Fig.1

Fig.2

(52)

複 本 泰 典 他 9名

また開腹直後に腹水を認めその』夏水を採取した症例は111. 結 果

12例， 腹水を認めず 100ccの生食にて洗浄後採取した症
1例で ，いずれも迅速細胞診と して提出された .採例は 5腺癌症例で、は，Pap染色法の Cy陽性率が 20%(11154)

取された症例の腹水及び腹腔洗浄液はすべて 95%アルであったのに比較し ，ICC法や Mt‑FISH法による CY陽コールにてパパニコロウ染色及び乾燥固定 にてギムザ染性率はそれぞれ 36%(18/50)
及び 59%(20/34)と高くな色にて標本作製を行い ，可能な限り随時 ICC法及び Mtり(Table2)，ICC法や Mt‑FIS
H法を用いること によ り，

D2‑40，
Carletinin， CY陽性率をあげることができ， FISH法での感度およびFISH法を行った. ICC法は， MOC‑31，CD68の 4種の抗体を用い， BondMax社の自動免疫染

正確度 (accuracy)が有意に高かった (Table3).MOC‑31

色装置にて染色したによる IHC法では，卵巣子宮内膜症性嚢胞に伴う異型腺

また Mt‑FISH法には ，5p15(Green)，6p11.1‑qll(CEP

上皮細胞に弱陽性を示 した症例が l例あった.不適検体6)(Aqua)，7p12(EGFR)(Red)，8q24(c‑myc)(Gold)p染色法では認めなかったが， ICC法では洗浄細は，paの 4穫 の 染 色 体 領 域 の プ ロ ー ブ か ら な る abbot
t社

t‑FI
SH法では胞診，腹水細胞診でそ れぞ、れ 6%，8%，MLAVysionMulti‑colorProbeS
etを使用 し，蛍光顕微鏡

腹水細胞診，洗浄細胞診でそれぞれ 14%，31% であ った

Leica社 DM6000Bに て 観 察 し た 解 析 Softには ，Leica(Table2).

SlF W4000を使用した.判定の際には，細胞診では pO

IV
.考 察t
Jve，SUSplClO
USを Cy(+)，negativeを Cy(ー)と した. I
CC法では出現細胞の 5% 以上 に陽性所見を有する

IHC法およ び Mt‑FISH法の補助診断法を用 いること

ものを CY(+)(Fig.
1)，5%未満を Cy(‑)とした. Mt‑によ りCY陽性率はあがった が，卵巣子宮内膜症性嚢胞FISH法では ，それぞれのプローブにつき 3つ以上のシグの 1症例で，良性疾患にもか かわらず MOC‑31によるナルが観祭されるものを増幅と定義しIH
C法にて弱陽性を 示した .このこ とは ，婦人科疾患 (特4種のプローブ(5p15，6p11.1‑q11，7p12，8q24)のうち I種以上で出に卵巣疾患)では良性疾患にお いても，上皮の卵管経由 ，% 以上 に増幅を有する ものを CY(+) (Fig.
現細胞の 5病変の破綻， また術中操作などにより腹腔内に上皮が出2)，5%未満を Cy(ー)とした 7)‑31で陽性を 示す ことがあ り，判定には注意
現 し，MOC‑FISHではさらを要すると思われた. しかし なが ら， MtTable2.Theincidenceofposi
ti
vefi
ndingofth
epr
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itoneallav
ageandasci
ti
cc
ytologyinthreedi
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cmethods;
pap，ICC，andMt
‑
FISH

5
1casesofperitoneallavagecytology
Pap

ICC

Mt
‑
FISH

acarclno打l

7/44
(16%)

13/41(32%)

15/27(56%)

Benignstu什lOr/disease0/7(0%)

1/5(20%)

Numberof
Improperspeclmens

0/5(0%)

3/49(6%)12casesofAsciticcytologyPapICC

Mt‑FISH

carclnoma

4/10(25%)

5/9(56%)

5/7(71%)0/5(0%)

Benigntu什lOrs/diseas巴

0/2(0%)

0/2(0%)

0/2(0%)

5/37
(14%)

Numberof￨
町lproperspeclmens

0/12(0%)1/12(8%)

4/13(31%)

ulti‑
color/target
Pap，Papanicolaoucytology;ICC，Immunocytochemistry:Mt‑FISH，Mns
ituhybridization
fluorescencei

Multi‑color/targetfluorescencei
nsituhybridization(Mt‑FISH)法及び免疫染色 (ICC)法を(53)用いた腹腔細胞診の検討

Table3.
Se
nsi
ti
vi
ty，
spe
ci
fi
citya
nda
cc
ur
ac
yoft
hr
e
edi
ffer
e
ntdiag
nosti
cmet
hods
;Pap，
ICCa
ndMt‑FI
SHCY
MethodSensitivity(%)

Speci
ficity(%)

Accuracy(%)

Papa

11/34(32)

7/7(100)

18/41(44)bICC18/34(53)6/7(86)

24/41(59)Mt‑FISHC

20/34(59)7/7(100)

27/41(66)

P‑valueav
S.
b:n.
s.
av
s.c:p<0.05
bv
s.
c:n.
s.

av
S.
b:n.s.
avs.
c:p<0.
05
bv
s.
c:n.
sn.
s.

Pap，Papanicolaoucytology;ICC，Immunocytochemistry:Mt‑FISH，Mult
i
‑
co
lor/t
arget
fluorescencei
nsituhybridizationに高い 59% の陽性率であった ことは ，腹水の通常の細胞FISHの有用性を 示 して いる.

辞謝診では見落としがある事を示唆し，腹水細胞診での Mt‑症例の提供およびご協力いただきました臨床各科の先不適検体数の割合は ，pap染色法に比較して IHC法や生方に深く感謝致します.

Mt‑
FISH法において高かった .一般に腹水細胞診は最終文的な検体処理まて、の時間がかかっていることが多く，そのために不適検体数が多くなる可能性があるうえに，特に Mt.
FISH法による腹水細胞診は，変性や出血などの 2

献1) 海老原善郎 ，亀井敏昭 ・消化器領域における腹腔洗浄細胞診. 体腔液アトラス

147‑151，2005

次的な影響によ る不適検体が多く，その検体の保存や処

2) 西山みどり，山崎志寿子，高橋剛，吉田康雄，岸田理などに十分な注意が必要であるとともに今後さらに改由紀子， 薬丸一洋， 高山昇二郎 :悪性中皮腫と肺腺善 して行く 必要があると考 えられた .

癌の鑑別 について

VI.結中皮腫と鑑別が問題になった腺409‑
418，癌の比較検討ー .日本臨床細胞学会誌 35:

語1996.

腹腔細胞診において ，ICC法および Mt.
FI
SH法を 用い

3)杉島節夫，安倍秀幸，山口知彦，河原明彦， 横山俊

ることで腫蕩細胞の検出頻度をあげることができ ，補助朗，吉田友子，鹿毛政義，渡辺次郎:悪性中皮腫に診断法とし て有効であることが示された

今後の課題と対する HBME‑1抗体と EMA抗体を用いた免疫細胞して，補助診断法における不適検体数をより減らすこと

450‑
456，
化学の有用性.日本臨床細胞学会誌 40:

および偽陽性率の検討の必要性があげられる

今後， さらなる症例数を追加して検討するとともに，各臓器別の細胞診の有用性についての検討も行い報告したい .

20014)岡本聡，今野良，高野忠夫，我妻理重，永瀬智，吉田祐司，五十嵐司，佐藤信二，矢嶋聡 :腹水(腹腔洗浄)細胞診における悪性卵巣腫蕩細胞と 中皮細胞の鑑別法としての免疫組織化学. 日本臨床細胞学会誌

(54)榎 本 泰 典 他 9名

37:389‑393，200l.
5)森永謙二:悪性胸膜中皮腫の診断精度の向上及び治療法に関する研究.厚生労働省がん研究助成金によ5年度る研究報告書 平成 16)佐久間暢夫，亀井敏昭，渋田秀美，岡村宏，権藤俊
一，石原得博:胸水中に出現する悪性中皮細胞と肺腺癌細胞の鑑別

画像解析装置を用いて

日本臨

3‑98， 1996.
床細胞学会誌 35:97) B
ubendorf，L.
， M
ullerP.，Joos，L.
， G
rilli，B.，etal.
:Multitarget FISH analysisint
he diagnosi
so
flung cancer. Am. ].C
lin.Pathol. 123(4):5
16‑2
3，2005