日本家禽学会誌，55 : J 1-J 7，2018
Copyright ©2018, Japan Poultry Science Association

鶏脛骨軟骨異形成症におけるコラーゲンおよびグリコサミノグリカンの局在に関する免疫組織化学的観察
池田
1

祥1・山田宜永2・杉山稔恵2

新潟大学大学院自然科学研究科，新潟市西区五十嵐二の町 8050 番地，950-2101
2
新潟大学農学部，新潟市西区五十嵐二の町 8050 番地，950-2101

ブロイラーの幼雛期における脚弱の原因として脛骨軟骨異形成症（TD）があげられる。TD は，脛骨近位端の成長板に軟骨塊が蓄積して石灰化が阻害された結果，骨強度が低下し脚弱に至る。現在，飼料に Tetramethylthiuram disulfide（Thiram）を添加することによって人為的に TD を誘発し，TD 発症機構の解明が試みられているが，その発症機構は未だ明らかではない。そこで本研究では，TD 病変におけるコラーゲンとグリコサミノグリカンの局在について免疫組織化学的に観察し，脛骨近位端の成長板の変化を検討した。
TD を誘発するため Thiram 100 ppm を 8 日齢の雛に 2 日間給与した。その後，通常飼料で飼育し 20 日齢で脛骨近位端を採取し，パラフィン切片を作製し，組織化学的に観察した。
Ⅱ型，Ⅹ型コラーゲンの局在について免疫組織化学的に観察した結果，Thiram を無給与の対照区においては，これまで報告されているようにⅡ型コラーゲンは増殖軟骨細胞層，Ⅹ型コラーゲンは肥大軟骨細胞層で観察され，局在が明確に区別された。一方，Thiram 給与により誘発した TD 病変ではⅩ型コラーゲンは対照区と同様に肥大軟骨細胞層で観察されたが，Ⅱ型コラーゲンは増殖軟骨細胞層に加え，病変部を含む肥大軟骨細胞層でも観察された。また，ケラタン硫酸，コ
ンドロイチン-6-硫酸の免疫組織化学的観察では，対照区においてケラタン硫酸およびコンドロイチン-6-硫酸は肥大軟骨細胞層に局在が観察された。一方，TD 病変ではケラタン硫酸は病変部を含む広範囲の肥大軟骨細胞層で局在が観察され，コンドロイチン-6-硫酸は病変部では観察されず，肥大軟骨細胞層下部においてわずかに観察された。
以上のことから TD は成長板のコラーゲンならびにグリコサミノグリカンの分布の異常により，軟骨内骨化における軟骨細胞の分化と石灰化が抑制され発症するものと考えられる。
キーワード : 脛骨軟骨異形成症，脚弱，コラーゲン，グリコサミノグリカン──────────────────────────

緒肥大軟骨細胞層ならびに肥大軟骨細胞石灰化層の 3 つの層に分類

言され，各層の軟骨細胞は様々なホルモンやサイトカインの作用をニワトリの疾病のひとつとして，起立困難となる脚弱が知られ受けて増殖・分化する（Stevens and Williams, 1999）。軟骨基質のている。脚弱に至る主たる原因として，脛骨近位端の軟骨内骨化

大部分は水分からなり，その水分含量は約 75% に達する。残り不全による脛骨軟骨異形成症（Tibial Dyschondroplasia : TD）がは，主としてコラーゲンからなるタンパク質が 15%，プロテオグ

報告されている（Farquharson et al., 1992 ; Cook, 2000）。TD はリカンが約 10% を占める。コラーゲンの大半はⅡ型コラーゲン

急速な成長を示すブロイラーの幼雛期で頻発し，七面鳥やアヒル

であり，加えてⅩ型コラーゲン，Ⅰ型コラーゲン，Ⅸ型コラーゲなどにも発症する（Orth and Cook, 1994）。ブロイラーなどではンおよびⅪ型コラーゲンが少量存在する（Wardale and Duance,

急速な体重増加に見合った骨の成長がみられず，軟骨内骨化の不1996）。これらのコラーゲンは骨端軟骨の成長板において特異的均衡によって血管侵入が生じずに石灰化が阻害され，脛骨近位端な局在を示し，軟骨内骨化における軟骨細胞の分化と石灰化に深の成長板に軟骨塊が蓄積し，発症すると考えられている（Stickens

く関与しており，Ⅱ型コラーゲンは関節軟骨と増殖軟骨細胞層にet al., 2004 ; Raffetto and Khalil, 2008）。

局在し，Ⅹ型コラーゲンは肥大軟骨細胞層に局在する（Phornphtkul

成長板は，関節軟骨（静止軟骨細胞層）下の増殖軟骨細胞層，and Gruppuso, 2009）。また，プロテオグリカンはコアタンパク質とグリコサミノグリカンが結合して形成されており，骨や軟骨に2017 年 9 月 30 日受付，2017 年 12 月 6 日受理
連絡者 : 杉山稔恵
〒950-2181 新潟市西区五十嵐 8050 番地
Tel : 025-262-6666
Fax : 025-262-6666
E-mail : sugiyama@agr.niigata-u.ac.jp

おける細胞の分化や石灰化を調整している。軟骨においては，ケ
ラタン硫酸やコンドロイチン硫酸といったグリコサミノグリカン
を構成要素にもつプロテオグリカンが豊富に含まれている（Funderburgh, 2000 ; Nakamura et al., 2001 ; Lamoureux et al.,2007）。TD 病変は，成長板において軟骨塊が残存するととも

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J 1 号（2018）に，肥大軟骨細胞層において石灰化が起こらないことが特徴であ酸ならびにコンドロイチン-6-硫酸に対する一次抗体をブロッキる（Whitehead, 1995）。したがって，TD 発症には，コラーゲンやング溶液にて，それぞれ適切な濃度に希釈し，パラフィン切片にプロテオグリカンの局在に変化が生じることによって軟骨内骨化

4℃で一晩反応させた（表 1）。PBS で洗浄後，ブロッキング溶液に影響を及ぼしていることが考えられる。

にて 200 倍希釈したビオチン化ヤギ抗マウス IgG 抗体（Vector

そこで，本研究では TD 病変部におけるコラーゲンならびにグ

Laboratories, Inc, CA）またはビオチン化ヤギ抗マウス IgM 抗体

リコサミノグリカンの局在について免疫組織化学的に観察し，正（Vector Laboratories, Inc.）を二次抗体として用いて，室温で 30分間反応させた。最後に，PBS で洗浄後，パラフィン切片にアル常なものと比較した。

カリフォスファターゼ標識アビジン・ビオチン複合体（Vector

材 料 と 方 法

Laboratories, Inc.）を室温で 30 分間反応させ，PBS にて洗浄後，（1）供試動物

Fast Red TR/Naphthol AS-MX（Sigma-Aldrich）により目的とす

供試動物として，20 羽の 0 日齢のブロイラー雄を用いた。そのるコラーゲンおよびグリコサミノグリカンの局在を赤く発色させ

内，10 羽は TD 病変を観察するため，Rath らの方法（2007b）にた。水溶性封入剤で封入し，光学顕微鏡にて組織像を観察した。

従って TD を誘発した。すなわち，生後 0 日齢より 7 日齢まで通なお，免疫組織化学的観察の陰性対照として一次抗体もしくは正常飼料（肥育前期飼料）で飼育した後，8 日齢より 2 日間，Tetra-

常血清を用いた。また，各組織化学的観察における成長板の長さ

methylthiuram disulfide（Thiram ; Sigma, St. Louis）を 100 ppm

を画像解析ソフトウェア NIS-Elements（Nikon, Tokyo）にて計測（100 mg/kg）添加した飼料を給与した（Thiram 給与区）
。そのした。計測値は，平均±標準誤差で示した。

後，再び通常飼料を給与し，生後 20 日齢で脛骨近位端を採取し（4）統計処理た。また，残りの 10 羽は生後 0 日齢より 20 日齢まで通常飼料を成長板の長さは統計解析ソフト JMP9（SAS Institute Japan,

給与し，対照とした。なお，本実験は新潟大学動物実験倫理委員

Osaka）を用いて統計解析を行い，p＜0.05 値を示すものを有意な会の承認を得て実施した。

差があるものと判定した。

（2）材料採取ならびに組織切片の作製

結採取した右脛骨近位端は，デンタルカッターにて縦断し，TD果（1）臨床症状

病変の有無を Rath らの方法（2004）に従い調べた。また，縦断した脛骨近位端は，10% ホルマリン緩衝液（pH7.0）にて室温で約 4

Thiram 給与区では，15 日齢で起立および歩行が困難のものが日間浸漬固定した。その後，10%EDTA 溶液（pH7.4）を用いて約観察され，20 日齢で全てのブロイラーが跛行を呈し脚弱に陥って10 日間の脱灰を行なった。脱灰後，アルコール上昇系列にて脱水いた。一方，対照区では，試験期間を通じて起立ならびに歩行困

し，パラフィンに包埋した。パラフィン切片は，ミクロトーム

難を示すものはみられなかった。

RM2135（Leica, Wetzlar）を用いて 5 μm に作製した。

（2）Azan 染色による組織化学的観察（3）Azan 染色，コラーゲンとグリコサミノグリカンの免疫組

Azan 染色を施した結果，対照区の正常な成長板においては，

織化学的観察増殖軟骨細胞層から肥大軟骨細胞層にわたる領域で淡青色にコ

組織学的に脛骨近位端の成長板を観察するために，作製したパラーゲン線維が染まり，血管と近接した肥大軟骨細胞層石灰化部

ラフィン切片を Azan 染色によるコラーゲン線維の染色を施しは濃く青色に染まっていた。また，橙色を呈した細胞が成長板のた。また，免疫組織化学法については，パラフィン切片を 0.01M

肥大軟骨細胞層に点在していた（図 1A）。Thiram 給与区では，

リン酸緩衝液（PBS）にて洗浄し，コラーゲンの局在を観察する

軟骨塊を含む成長板において広範囲にわたってコラーゲン線維が際は，ヒアルロニダーゼを含む PBS（68 mg/ml）を用いて，37℃

淡く染まっており，肥大軟骨細胞層において橙色を呈した細胞は恒温下にて 30 分間の酵素処理を施した。その後，PBS にて洗浄

ほとんど観察されなかった。（図 1B）。また，対照区の肥大軟骨し，非特異的反応を阻止するため，1% ヤギ正常血清を含む PBS

細胞層および病変部を拡大して観察した結果，対照区では，全て（ブロッキング溶液）にて，室温で 30 分間反応させた。続いて，の軟骨小腔に軟骨細胞が存在しており，軟骨細胞が肥大し，軟骨Ⅱ型およびⅩ型コラーゲン，グリコサミノグリカンのケラタン硫

小腔が拡張していた（図 2A）。一方，病変部においても軟骨小腔

表 1． 一次抗体および希釈濃度
一次抗体

会社名

希釈濃度

Mouse monoclonal to collagen type Ⅱ

Acris antibodies
GmbH

250 倍

Mouse monoclonal to collagen type Ⅹ

Santa Cruz
Biotechnology

500 倍

Mouse monoclonal to keratan sulfate

生化学工業

200 倍

Mouse monoclonal to chondroitin-6-sulfate

生化学工業

200 倍

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池田ら : TD における軟骨基質

図 1． 脛骨近位端．Azan 染色．AC : 関節軟骨．GP : 成長板．TDL : TD 病変．TB : 海綿骨．Bar＝1 mm.
1A．対照区．
成長板のコラーゲン線維が淡青色に染色され，血管に近接している肥大軟骨細胞層石灰化部位は濃い青色に染色された（矢印）．また，橙色を呈した細胞を含む血管が成長板の深部にまで侵入していた（矢頭）．
1B．Thiram 給与区．
病変部により成長板が肥厚しており，広範囲においてコラーゲン線維が淡い青色に染色されていた．成長板への血管侵入はほとんどみられず，橙色を呈した細胞を含む血管は海綿骨周辺においてのみ染色が見られ（矢頭），濃い青色に染色される肥大軟骨細胞層石灰化部は少なかった．
図 2． 肥大軟骨細胞層．Azan 染色．Bar＝20 μm.
2A．対照区．
正常な肥大軟骨細胞層．全ての軟骨小腔に軟骨細胞が存在し，軟骨細胞が肥大し軟骨小腔が拡大していた（矢印）．
2B． Thiram 給与区．
TD 病変部おける肥大軟骨細胞層．対照区の肥大軟骨細胞層と同様に軟骨小腔の拡張がみられた．しかしながら，軟骨細胞の萎縮（矢印）や消失（矢頭）が多数みられた．
図 3． 脛骨近位端におけるⅡ型コラーゲンの局在．AC : 関節軟骨．PZ : 増殖軟骨細胞層．HZ : 肥大軟骨細胞層．TDL : TD 病変．Bar＝1 mm.
3A．対照区．
Ⅱ型コラーゲンは，増殖軟骨細胞層（PZ）および関節軟骨（AC）に局在していた．
3B．Thiram 給与区．
TD 病変部を含む成長板で広範囲に渡りⅡ型コラーゲンの局在が観察された．
図 5． 脛骨近位端におけるⅩ型コラーゲンの局在．PZ : 増殖軟骨細胞層．HZ : 肥大軟骨細胞層．TDL : TD 病変．Bar＝1 mm.
5A．対照区．
Ⅹ型コラーゲンの局在は，肥大軟骨細胞層のみで観察された．
5B．Thiram 給与区．
TD 病変部を含む肥大軟骨細胞層で広範囲に渡りⅩ型コラーゲンの局在が観察された．

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図 4． Ⅱ型コラーゲンを含む成長板の長さ．
平均±S.E. * p＜0.05 vs 対照区．

図 6． Ｘ型コラーゲンを含む成長板の長さ．
平均±S.E. * p＜0.05 vs 対照区．

の拡張がみられたが，軟骨細胞の萎縮や消失が多数みられた（図発症していた。このことは，これまでに報告（Rath et al., 2004 ;2B）。

2007a ; 2007b）されているように，Thiram はブロイラーにおい（3）コラーゲンの免疫組織化学的観察て TD を効率的に誘発することが示された。

コラーゲンの局在は，アビジン・ビオチン複合体に標識したア

Azan 染色による組織化学的観察では，肥大軟骨細胞層は淡青

ルカリフォスファターゼによって形成された赤色のアゾ色素産物

色に染色され，肥大軟骨細胞層の石灰化部ならびに成長板下の海として観察された。Ⅱ型コラーゲンは，対照区の脛骨近位端の成綿骨は濃青色に染色された。この染色性の違いは，軟骨基質の線

長板において，増殖軟骨細胞層の軟骨基質に観察された（図維構造が異なっていることを示している。すなわち，肥大軟骨細3A）。一方，Thiram 給与区では，増殖軟骨細胞層に加え，軟骨塊

胞層は細線維構造を示さずに散在したⅩ型コラーゲンからなり，を有する肥大軟骨細胞層にも観察され（図 3B），対照区（1.23±

肥大軟骨細胞層石灰化部および海綿骨は軟骨から石灰化した骨に0.07 mm）と比較してⅡ型コラーゲンの局在は有意に拡大してい置換され，密な細線維構造を呈するⅠ型コラーゲンからなっていた（9.38±0.30 mm）（図 4）。また，Ⅹ型コラーゲンは，正常な脛る。しかしながら，Thiram 給与区において淡青色に染色された骨近位端の成長板において，肥大軟骨細胞層の軟骨基質で局在を部分が広範囲にみられたことから，Ⅹ型コラーゲンを主とする肥示す赤色の免疫反応が観察された（図 5A）。Thiram 給与区の成大軟骨細胞層が拡大していることが考えられる。また，この領域

長板では，対照区の成長板と同様に肥大軟骨細胞層で免疫反応をにおいて橙色を呈した細胞はみられなかったことから，血管の侵示す赤色が観察され（図 5B），対照区（5.27±0.20 mm）と比較し入はほとんどないものと考えられる。さらに対照区の肥大軟骨細てⅩ型コラーゲンの局在は有意に拡大していた（8.68±0.33 mm）

胞層軟骨細胞の拡大と Thiram 給与区の病変部の拡大を比較した（図 6）。

ところ，ともに軟骨小腔の拡張がみられたが，Thiram 給与区の（4）グリコサミノグリカンの免疫組織化学的観察

TD 病変では軟骨細胞の萎縮と消失が多数みられ，すでに細胞死

ケラタン硫酸とコンドロイチン-6-硫酸の局在は，アビジン・ビに陥っているものと推測される。

オチン複合体に標識したアルカリフォスファターゼによって形成TD 病変におけるコラーゲンの局在について免疫組織化学的にされた赤色のアゾ色素産物として観察された。ケラタン硫酸は，観察した結果，正常な成長板ではこれまでの報告通り，Ⅱ型コ

対照区の脛骨近位端の成長板において，肥大軟骨細胞層の軟骨基

ラーゲンは増殖軟骨細胞層に局在し，Ⅹ型コラーゲンは肥大軟骨質に観察された（図 7A）。Thiram 給与区では，病変部である軟細胞層に局在していた（Kirsch and Wuthier, 1994 ; Knopov et al.,

骨塊を含む広範囲の肥大軟骨細胞層で観察され（図 7B），対照区

1997 ; Pines et al., 1998）。しかしながら，TD においては，Ⅱ型コと比較してケラタン硫酸の局在は拡大していた。また，正常な脛

ラーゲンは増殖軟骨細胞層だけに留まらず，病変部の肥大軟骨細骨近位端の成長板におけるコンドロイチン-6-硫酸の局在は，ケ胞層においても局在していた。また，Ⅹ型コラーゲンは肥大軟骨

ラタン硫酸同様に肥大軟骨細胞層の軟骨基質で局在を示す赤色の細胞層に局在していたが，TD の発症によりその局在は拡大して免疫反応が観察された（図 8A）。一方，Thiram 給与区の脛骨近

いた。このことは，TD 病変においては肥大軟骨細胞層において位端の成長板では，病変部である肥大軟骨細胞層上部において観Ⅱ型コラーゲンとⅩ型コラーゲンが同時に存在していることを示察されず，肥大軟骨細胞層下部においてわずかに局在が免疫反応しており，増殖軟骨細胞層から肥大軟骨細胞層への軟骨基質の成を示す赤色が観察され（図 8B），対照区と比較してコンドロイチ

熟が不十分であることが示唆される。同様の結果として，自然発

ン-6-硫酸の局在は広範囲で減少していた。

症した TD およびビタミン D 欠乏によるくる病のニワトリでも考

in situ hybridization 法によりⅡ型コラーゲンの mRNA の局在を察観察した結果，TD 病変部の周囲の肥大軟骨細胞層においても発本研究において，ブロイラーに Thiram 添加飼料を給与したと現がみられたという（Pines et al., 1998 ; Ben-Bassat et al., 1999）。

ころ，全ての個体に脛骨近位端に軟骨塊の残存がみられ，TD が一方で，TD について同様にⅡ型コラーゲンの mRNA の発現を

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池田ら : TD における軟骨基質

図 7． 脛骨近位端におけるケラタン硫酸の局在．AC : 関節軟骨．PZ : 増殖軟骨細胞層．HZ : 肥大軟骨細胞層．TDL : TD 病変．Bar＝1 mm.
7A．対照区．
ケラタン硫酸の局在は，肥大軟骨細胞層で観察された．
7B．Thiram 給与区．
増殖軟骨細胞層下部の TD 病変部を含む広範囲の肥大軟骨細胞層にケラタン硫酸の局在が観察された．
図 8． 脛骨近位端におけるコンドロイチン-6-硫酸の局在．PZ : 増殖軟骨細胞層．HZ : 肥大軟骨細胞層．TDL : TD 病変．Bar＝1 mm.
8A．対照区．
コンドロイチン-6-硫酸の局在は，ケラタン硫酸同様に肥大軟骨細胞層において観察された．
8B．Thiram 給与区．
TD 病変部を含む肥大軟骨細胞層上部においてその局在は観察されず，肥大軟骨細胞層下部でコンドロイチン-6-硫酸の局在（＊）がわずかに観察された．

検討したところ，正常と変わらず増殖軟骨細胞に発現していたとゲル化して体重負荷に対する耐性を付与している。加えて，無血の報告もある（Hasky-Negev et al., 2008）。

管組織である軟骨において水分は軟骨細胞への唯一の血管からのⅡ型コラーゲンは，肥大軟骨細胞層においてマトリックスメタ

栄養分や軟骨細胞分化調節因子の補給方法である（Sophia Fox et

ロプロテアーゼ（MMP）-13 の分解作用を受け消失する（Sakakura,al., 2009）。このアグリカンの機能にとって，コンドロイチン硫酸

2010）。し た が っ て，TD 病 変 で は 肥 大 軟 骨 細 胞 層 に お け るの存在はとりわけ重要であり，ヒトの軟骨ではコンドロイチン硫

MMP-13 の発現が抑制されているものと推測された。実際，ゼラ酸の減少に伴って軟骨の水分含量は減少し，変形性関節症を引き

チンザイモグラフィーを用いた MMP-13 の検出や RT-PCR を用起こすことが示唆されている（Dudhia, 2005）。また，コンドロイ

いた MMP-13 の mRNA の発現において TD 病変では MMP-13

チン硫酸は軟骨細胞のコラーゲン生成を促進し，軟骨細胞の肥大が減少していることが示唆されている（Rath et al., 1997 ; Velada

化を引き起こすことが示されており，コンドロイチン硫酸が軟骨

et al., 2011）。哺乳類でも，MMP-13 ノックアウトマウスでは肥大細胞の分化を調節する（Stocum DL et al., 1979）。本研究におい

軟骨細胞層が拡大し，TD と類似した組織像を示すことが明らかて，Thiram 給与の骨端軟骨病変部上部の肥大軟骨細胞層においにされている（Inada et al., 2004 ; Stickens et al., 2004）。Ⅱ型コて，コンドロイチン硫酸の局在が欠如していた。このことは，

ラーゲンの分解産物は，軟骨細胞の増殖を抑制して，その後の分

TD ではアグリカンが正常に機能せず，軟骨細胞が直接体重付加

化を引き起こすことが知られている（Tchetina et al., 2007）。これの影響を受けるとともに，栄養分や分化調節因子の不足により細らのことから，TD は増殖軟骨細胞から肥大軟骨細胞への移行が胞死に至っているものと推測される。これらのことからグリコサ行なわれたのにもかかわらず，Ⅱ型コラーゲンの分解が起こらミノグリカンの局在が変化することにより軟骨細胞の分化に影響ず，軟骨細胞の正常な肥大軟骨細胞への分化が阻害された結果生を及ぼし，成長板における軟骨の各細胞層の構成に変化を生じさじたものと推測される。

せたと考えられる。すなわち，TD 病変においては正常にグリコ軟骨基質の主要なグリコサミノグリカンであるケラタン硫酸おサミノグリカンの分布やその濃度が保たれないことによって，軟よびコンドロイチン硫酸は，コアタンパク質と結合しアグリカン

骨細胞が正常に分化せず，あるいは軟骨細胞の細胞死を誘導してを形成する（Kiani et al., 2002）。アグリカンは，軟骨基質の主た軟骨内骨化の異常が生じていると推測される。

るプロテオグリカンであり，軟骨の 80% を占める水分を保有し，以上の結果から，TD を発症したブロイラーの脛骨近位端でJ5

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55 巻

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は，正常なものとは異なり，肥大軟骨細胞層においてⅡ型コラー
ゲンならびにⅩ型コラーゲンが混在しており，更にプロテオグリ
カンの主要な構成要素であるコンドロイチン硫酸の局在に異常が生じることにより，軟骨細胞の分化・成熟に影響を及ぼし，正常な軟骨内骨化が阻害され TD が発症するものと推測される。

引

用

文

J 1 号（2018）

献

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J6池田ら : TD における軟骨基質

Immunohistochemical Localizations of Collagens andGlycosaminoglycans in Chicken Tibial Dyschondroplasia
Sho Ikeda1, Takahisa Yamada2 and Toshie Sugiyama2
1

Graduate School of Science and Technology, Niigata University, 2-8050 Ikarashi, Nishi-ku, Niigata 950-2181, Japan2

Department Agrobiology, Niigata University, 2-8050 Ikarashi, Nishi-ku, Niigata 950-2181, Japan.

Leg weakness in broiler chickens is a skeletal disease associated with economic loss and an animal welfare
problem. The disease is largely caused by tibial dyschondroplasia (TD), characterized by a residual uncalcified cartilage
mass in the tibial epiphyseal growth plate. TD also decreases bone strength, consequently leading to bone weakness.
The present study was conducted to clarify the localizations of collagens and glycosaminoglycans in TD, and to discuss
the pathogenesis of TD. In the study, TD was artificially induced by the protocol of Rath et al. (2007). Specifically, 8day-old broiler chicks were fed a 100 ppm tetramethylthiuram disulfide (Thiram)-containing diet only for 2 days, andthe proximal ends of their tibiae were dissected after 10 days. Thereafter, the localizations of collagens and glycosaminoglycans in the epiphyseal growth plates were investigated immunohistochemically. In control chicks (without
Thiram-feeding), type II collagen was localized in the proliferative zone of the epiphyseal growth plates, and type X
collagen was observed in the hypertrophic zone, as previously reported. In contrast to the control chicks, typical TD
lesions were observed in the growth plates of Thiram-fed chicks, and type II collagen was distributed in both theproliferative and hypertrophic zones. However, the localization of type X collagen in Thiram-fed chicks was the sameas that in control chicks. Two glycosaminoglycans, keratan sulfate and chondroitin-6-sulfate, were localized in thehypertrophic zone in control chicks. In Thiram-fed chicks, chondroitin-6-sulfate was deficient in the hypertrophic zoneof TD lesions, and a weak distribution of chondroitin-6-sulfate was only observed underneath the TD lesions. Keratan
sulfate was widely observed in TD lesions, but its distribution was limited in the hypertrophic zone. The present results
suggest that modified localizations of collagens and glycosaminoglycans can inhibit chondrocyte differentiation andmaturation as well as endochondral ossification, and that TD lesions develop as a consequence.
(Japanese Journal of Poultry Science, 55 : J1-J7, 2018)
Key words : collagens, glycosaminoglycans, leg weakness, tibial dyschondroplasia

J7