農業生産現場で農業生産現場で生産者自らが生産者自らが使らが使える農薬残留判定技術
える農薬残留判定技術の農薬残留判定技術の開発―水抽出法の水抽出法の検討―
検討―†荻野知美，岩船敬，渡邉栄喜独)農林水産消費安全技術センター 農薬検査部独)農業環境技術研究所 有機化学物質研究領域†

7 種のネオニコチノイド系殺虫剤および 3 種の代謝物について，ピーマンおよびトマトを供試作物とし，水を抽出溶媒として用いた抽出法 (以下，水抽出法) による一斉分析法を検討した．水抽出法では，供試化合物の大部分がろ液 (以下，水抽出液) に分配することが確認された．水抽出法での供試化合物の回収率は，添加濃度の低下に伴う著しい低下は見られず，添加濃度 0.01–1.00 mg/kg で高い割合 (78.7–125.2 %) を示した．水抽出液と有機溶媒抽出液を外観で比較すると，水抽出液では作物色素による着色がほとんど認められなかったため，試料由来の共抽出が少ないと考えられた．親化合物だけでなく代謝物の回収率も高いことから，水抽出法は供試化合物 10 種を一斉かつ定量的に抽出できる手法であるとともに，ELISA 法 (免疫化学的測定法) などのスクリーニング分析の抽出法として有用であることが示唆された．
Keywords：水抽出，多成分一斉分析，ネオニコチノイド系殺虫剤，代謝物

ラフト設備が備わっている実験施設で分析を行わ緒言
なければならない．有機溶媒の代わりに水を抽出溶媒として用いた場合 (以下，水抽出法)，残留農薬分

農作物中の残留農薬一斉分析では，一般的に液体
ク ロ マ ト グ ラ フ 質 量 分 析 計 (LC/MS も し く は

析における有機溶媒の使用量を削減することがでLC-MS/MS) や ガ ス ク ロ マ ト グ ラ フ 質 量 分 析 計(GC/MS もしくは GC-MS/MS) などの分析機器がきる．さらに有機溶媒を要する精製工程が省略可能

用いられている (以下，機器分析)．農作物の出荷前における残留農薬検査の場合，栽培時に使用した農法は農業生産現場でも導入しやすい抽出法であるである場合，廃液処理を必要としないため，水抽出ことが想定される．
薬の散布履歴から測定対象農薬を特定することができる．そのため，出荷前の残留農薬検査に対し，日本において７種類の有効成分が登録されているネオニコチノイド系殺虫剤は，平成 21 年度にお従来の機器分析だけでなく抗原抗体反応を利用した 免 疫 化 学 的 測 定 法(Enzyme-linked

ける殺虫剤総出荷量の約 18%を占めている 1)．多種多様な農作物に散布可能であり，国内の農地で幅広

immunosorbent assay， 以下 ELISA 法) が活用される場合がある．
機器分析は，測定感度および精度が高く，多成分く使用されている 2)．使用方法として農作物の収穫直前に使用可能な製剤が多く，収穫後の農作物中のの一斉分析が可能であるが，測定前の抽出および精濃度が高くなることが想定されるため，ネオニコチ
ノイド系殺虫剤に関する出荷前の残留農薬検査は極めて重要である．厚生労働省通知一斉試験法 3) では，ネオニコチノイド系殺虫剤のジノテフランおよ製等の前処理工程に時間がかかる上に，高額機器を利用するため，初期投資および維持費の負担が大き

びニテンピラムとその代謝物 CPMA および CPMFは測定対象化合物ではないため，それらの化合物にく，農業生産現場への投入は難しい．一方，ELISA法は，機器分析と比べて高額な分析機器が不要で低対する農作物中の濃度を同時に測定することができない．ネオニコチノイド系殺虫剤の一斉分析法のコストである．また，煩雑な前処理工程が不要で分析時間が短時間であるため，スクリーニング的な残検討について，前処理工程を「有機溶媒抽出→精製」または「有機溶媒抽出→転溶→精製」とした報告 4)-8)

留農薬検査に適している．しかし，機器分析およびELISA法のいずれの分析においても前処理工程ではあるが，ニテンピラムとその代謝物も同時に分析可能で良好な回収率が得られた報告は極めて少な

有機溶媒を使用するため，廃液処理を必要とし，ド1

い 7)．また，前処理工程に水抽出法を用いた報告は鈴) は (社) 日本植物防疫協会宮崎試験場で，トマ限られている 9)．
本研究では，ELISA 法などのスクリーニング分析

ト (品種：ハウス桃太郎) は同高知試験場で施設栽培された．

を農業生産現場で利用しやすくするために，有機溶媒を用いない水抽出法の検討を行うとともに，水抽出による農作物中のネオニコチノイド系殺虫剤の一斉分析法の検討を行った．すなわち，(1) 抽出溶

3. 試料調製
供試作物の表面に付着していた土を紙製のウエス（日本製紙クレシア製，キムワイプ S-200）で媒に水を用いた方法，および (2) 厚生労働省通知一斉試験法の一部を変更した方法を検討した．

拭き取り，ヘタを除去した．作物ごとに，縦に 4 分割し，全量をフードプロセッサー (TWINBIRD 製，材料および材料および方法
および方法

KC-D627) で粉砕した．粉砕した試料は分析に用いるまで冷暗所 (− 30℃) で保存した．

1. 供試化合物
水溶解度が高く，オクタノール–水分配係数 (logPow 値) が低い 7 種のネオニコチノイド系殺虫剤

4. 分析方法
4.1. 分析方法 1 (厚生労働省通知一斉試験法の厚生労働省通知一斉試験法の一部変更したした方法
方法))を変更した方法(アセタミプリド，イミダクロプリド，クロチアニジン，ジノテフラン，チアクロプリド，チアメト

厚生労働省通知一斉試験法 3) におけるアセトニトリル/水による液々分配操作を多孔性ケイソウ土キサム，ニテンピラム)，およびチアクロプリドの代謝物であるチアクロプリドアミド体，ニテンピカラムによる転溶操作に変更して，以下の手順で分析を行った (図 1)．粉砕試料 10 g に代謝物を除ラムの代謝物である CPMA，および CPMF を供試化合物とした (表 1)．

く 7 化合物 (アセタミプリド，イミダクロプリド，クロチアニジン，ジノテフラン，チアクロプリド，チアメトキサム，ニテンピラム) の 10 mg/L 混合
標準アセトニトリル溶液を 0.01 mg/kg となるよ

表１. 供試化合物の log Pow 値と水溶解度 10)

アセタミプリド
イミダクロプリド
クロチアニジン
ジノテフランチアクロプリド
チアクロプリドアミド体
チアメトキサムニテンピラムＣＰＭＡＣＰＭＦ

log P ow 値

水溶解度 (g/l)

0.8
0.57
0.7-0.549
1.26
－*
-0.13
-0.66
－*
－*

4.25
0.51
0.327
40
0.185
－*
4.1＞590－*－** 不明

うに添加し，純水 (アセトン抽出は 5 ml，アセトニトリル抽出は 10 ml) を加えて 30 分間静置した．
次にアセトンまたはアセトニトリル 50 ml を加え，
カ ッ プ 型 ホ モ ジ ナ イ ザ ー (SMTcompany 製 ，PH91) で 5 分間攪拌した．撹拌後，ガラス繊維ろ紙 (KIRIYAMA 製，Φ60 mm) を用いて吸引ろ過し，ろ紙上の残渣をアセトンまたはアセトニトリ
ル 50 ml で洗浄した．ろ過残渣を回収した後，再びアセトンまたはアセトニトリル 50 ml を加えて5 分間撹拌した．撹拌後，ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過し，ろ紙上の残渣をアセトン 50 ml で洗浄した後，1 回目の抽出液と合わせた．抽出液をロ2. 供試作物
果菜類のピーマンとトマトを供試作物とした．選定理由は次のとおりである; (1) 両作物に対し，ネオータリーエバポレーター (BÜCHI 製，R205) で減圧濃縮し，濃縮液に塩化ナトリウム 1 g を溶解させて ， 多 孔 性 ケ イ ソ ウ 土 カ ラ ム (AgilentTechnologies 製，CE1020) に負荷した．10 分間

ニコチノイド系殺虫剤を収穫前日まで散布することが可能であるため，出荷前の残留農薬検査におい静置後，ヘキサン 100 ml で洗浄し，ジクロロメタ
ン 150 ml で溶出した．溶出液を減圧濃縮して窒素て，他の作物群より高濃度で検出される可能性が高い，(2) ELISA 法において，分析妨害成分が測定結乾固した後，アセトニトリル/トルエン (3:1，v/v)
混液 2 ml で溶解した．あらかじめ同混液 10 ml で果へ及ぼす影響がピーマンは高くトマトは低いこと，を考慮した．

洗浄したグラファイトカーボン/アミノプロピルシ
リル化シリカゲル積層ミニカラム (SUPELCO

添加回収試験には，ネオニコチノイド系殺虫剤の散布履歴がない作物を用いた．ピーマン (品種：京2

製，Envi-Carb/NH2，500 mg/500 mg) に溶解液を粉砕試料 10 g加えて溶出し，さらに同混液 25 ml で溶出した．溶出液を減圧濃縮して窒素乾固した後，水/アセトニト

アセトン（アセトニトリル）50 ml
撹拌5分間

ろ過

アセトン（アセトニトリル）50 ml で洗浄

リル (80:20，v/v) 混液で定容し，測定試料とした．
液体クロマトグラフ-タンデム型質量分析計 (以下，塩化ナトリウム1 g を溶解

LC-MS/MS) で (測定条件；表 2，3) で定量を行い，分析操作は 3 連で実施した．

減圧濃縮転溶（多孔性ケイソウ土カラム）
ヘキサン100 ml で洗浄後、ジクロロメタン150 ml で溶出
減圧濃縮、窒素乾固4.2. 分析方法 2 (抽出溶媒に抽出溶媒にギ酸含有アセトン酸含有アセトン溶液アセトン溶液を溶液を用いた方法いた方法)
方法)
次項の抽出溶媒に水を用いた方法における残渣

アセトニトリル / トルエン（3 : 1）
2 ml で溶解
アセトニトリル / トルエン（3 : 1）
10 ml でコンディショニング

画分の一斉分析法を検討するため，小林 7) の方法を参考にして以下の手順の分析方法の検討を行った精製（グラファイトカーボン/アミノプロピ
ルシリル化シリカゲル積層ミニカラム）
アセトニトリル / トルエン（3 : 1）
25 ml で溶出

(図 2)．粉砕試料 10 g に 10 mg/L CPMA 標準水溶液およびその他の 9 化合物の 10 mg/L 混合標準メ

減圧濃縮、窒素乾固移動相 2 ml で溶解LC-MS/MS測定

タノール溶液を 0.1 mg/kg となるように添加し，30分間静置した．静置後，20%ギ酸-アセトン溶液 50

図１. 厚生労働省通知一斉試験法の一部を変更した

ml を加えて 30 分間振とうし，ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過した．ろ紙上の残渣をアセトン 25 ml

方法のフロー表２.

で洗浄し，アセトンで 100 ml に定容した後，定容した 100 ml から 5 ml を正確に採取した．採取した

LC-MS/MS 測定条件 1

モニターイオン
分子量(m/z)
アセタミプリド
223
223 ＞ 126
イミダクロプリド
256
256 ＞ 175
クロチアニジン250
250 ＞ 169
ジノテフラン
202203 ＞ 129
チアクロプリド
253
253 ＞ 126
チアクロプリドアミド体 271271 ＞ 126
チアメトキサム
292292 ＞ 211
ニテンピラム271
271 ＞ 225
ＣＰＭＡ256
256 ＞ 126
ＣＰＭＦ
212
212 ＞ 126

Cone
(V)
20221312252517102020Collision(V)
32252426362526312533

希釈液をロータリーエバポレーターで減圧濃縮し，濃縮液にアセトニトリル 10 ml を加え溶解した．次にあらかじめアセトン 5 ml およびヘキサン 5 ml で洗浄したグラファイトカーボン/エチレンジアミン-N-プロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラム(SUPELCO 製， Envi-CarbⅡ/PSA，500 mg/500mg) に溶解液を加えて溶出し，さらにアセトニトリ粉砕試料 10 g
20%ギ酸-アセトン 50 ml

表３.

LC-MS/MS 測定条件 2

振とう30分間

ろ過アセトン 25 ml で洗浄

LC装置
カラム流量
カラム温度
注入量
移動相

： Waters製 Alliance 2695
： Waters製 Atlantis T3
2.1 mm×50 mm，3 µm： 0.2 ml/min： 30 ℃： 10 µl
0.1%ギ酸–5 mM酢酸アンモニウム：メ：
タノール
0- 5 分
80：20- 10 分
80：20 → 5：95
- 13 分
5：95- 13.5分
5：95 → 80：20- 25 分
80：20

希釈（アセトン）

全量 100 ml

5 ml 分取

減圧濃縮
アセトニトリル 10 ml で溶解
アセトン 5 ml、ヘキサン 5 ml でコンディショニング
精製（グラファイトカーボン/エチレンジアミン-Ｎプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラム）
アセトニトリル 5 ml で溶出

MS/MS装置： Waters製 Quattro Micro
イオン化法： エレクトロスプレーイオン化法 (ESI+)
測定法
多重反応モニタリング法 (MRM)
ソース温度： 120 ℃
脱溶媒和ガス温度 ： 350 ℃
脱溶媒和ガス流量 ： 600 l/hr
キャピラリー電圧 ： 3.9 V
コーン電圧： 10–25 V

減圧濃縮、窒素乾固移動相 1 ml で溶解
LC-MS/MS測定

図２. 抽出溶媒にギ酸含有アセトン溶液を用いた方法のフロー3

から 8 ml を正確に採取した．採取した希釈液をロ

粉砕試料 5 g
水 25 ml

ータリーエバポレーターで減圧濃縮し，濃縮液にアセトニトリル 10 ml を加え溶解した．これ以降の分

30分間

振とう

遠心分離

2500 rpm、20分間

ろ過

水 15 mlで洗浄（水抽出液画分）
水抽出液画分）析操作は既述の 4.2. に準じて行った (図 3)．分析操
作は 4 連で実施した．
4.3.1. における水抽出液中の農薬量および本項における残渣中の農薬量から，以下のように物質収（残渣画分）
残渣画分）
20%ギ酸-アセトン 25 ml
振とうろ過
全量 50 ml希釈（水）希釈(アセトン)2 ml 分取

8 ml 分取

支および抽出効率を算出した．
物質収支 = (水抽出液中の農薬量＋残渣中の農薬

アセトン 20 ml で洗浄
全量 50 ml量)/農薬添加量
抽出効率 = 水抽出液中の農薬量/(水抽出液中の減圧濃縮農薬量＋残渣中の農薬量)
アセトニトリル
10 ml で溶解
アセトン 5 ml、ヘキサン5 mlでコンディショニング

結果および結果および考察
および考察
1. 分析方法 1 (厚生労働省通知一斉試験法の厚生労働省通知一斉試験法の一部を一部を変更した変更した方法した方法)
方法)
供試作物における供試化合物の回収率および変動係数を表 4 および図 4 に示した．回収率は，ニテ精製（グラファイトカーボン/エチレンジアミン-Ｎプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラム）
アセトニトリル
5 ml で溶出減圧濃縮、窒素乾固移動相
1～20 ml で溶解
LC-MS/MS測定

ンピラム (22.6-48.5%) を除いて 65.0-88.3%，変動
図３. 抽出溶媒に超純水を用いた方法のフロール 5 ml で溶出した．溶出液を減圧濃縮して窒素乾固した後，水/メタノール (80:20，v/v) 混液で定容

表４．厚生労働省通知一斉試験法の一部を変更した方法による添加回収試験結果 （添加濃度：し，測定試料とした．LC-MS/MS (測定条件；表 2，3) で定量を行い，分析操作はトマトについては 30.01 mg/kg)
ピーマン

連，ピーマンについては 4 連で実施した．

化合物名

4.3. 分析方法 3 （抽出溶媒に抽出溶媒に水を用いた方法いた方法)
方法)
4.3.1. 水抽出液画分の抽出液画分の分析方法
分析方法
粉砕試料 5 g に 10 mg/L CPMA 標準水溶液およびその他の 9 化合物の 10 mg/L 混合標準メタノー
ル溶液およびを 0.01，0.1，1 mg/kg となるように添加し，30 分間静置した．静置後，超純水 25 ml

アセトン抽出
*回収率 (%)

アセトニトリル抽出*回収率 (%)

アセタミプリド

84.8 ± 9.9

82.7 ± 6.7

イミダクロプリド

87.0 ± 10.4

84.7 ± 5.8

クロチアニジン

84.4 ± 9.1

85.1 ± 4.1

ジノテフラン

83.4 ± 11.1

84.7 ± 4.8

チアクロプリド

80.0 ± 8.7

88.3 ± 6.7

チアメトキサムを加えて 30 分間振とうし，20 分間遠心分離した後，ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過した．ろ紙上の残73.1 ± 12.0

65.0 ± 6.0

ニテンピラム22.6 ± 20.3

34.2 ± 18.6

渣を超純水 15 ml で洗浄し，超純水で 50 ml に定容した．定容した 50 ml から 2 ml を正確に採取し，トマト*平均値±変動係数 (n =3)

化合物名

アセトニトリル 10 ml を加え溶解した．これ以降の分析操作は前項 4.2. に準じて行った (図 3)．分析操

アセトン抽出
*回収率 (%)

アセトニトリル抽出*回収率 (%)

アセタミプリド

76.7 ± 5.7

83.3 ± 2.9

作は 4 連で実施した．

イミダクロプリド

81.3 ± 6.4

87.1 ± 1.3

クロチアニジン

70.3 ± 5.9

77.9 ± 1.2

ジノテフラン

77.8 ± 5.4

80.4 ± 2.3

チアクロプリド

67.8 ± 8.1

80.7 ± 3.1

4.3.2. 残渣画分の残渣画分の分析方法
4.3.1.のろ過残渣に 20 %ギ酸アセトン 25 ml を加えて 30 分間振とうし，ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過した．ろ紙上の残渣をアセトン 20 ml で洗浄し，アセトンで 50 ml に定容した後，定容した 50 ml

チアメトキサム85.3 ± 4.3

81.6 ± 3.1

ニテンピラム48.5 ± 17.6

36.4 ± 26.7

*平均値±変動係数 (n =3)4

ピーマン（アセトニトリル抽出）
トマト（アセトニトリル抽出）した 10 化合物の回収率は，水抽出液 (水抽出液画

ピーマン（アセトン抽出）
トマト（アセトン抽出）分) で 71.2-122.3%，残渣 (残渣画分) で 0.43-12.0%であった (表 6)．物質収支は 78.7-125.2%で，水抽アセタミプリド

出液と残渣から概ね全量が回収された (表 6)．抽出効率は 88.0-99.5%で，供試化合物の大部分が抽出液イミダクロプリド
クロチアニジンに分配した (表 7)．添加濃度 0.01-1 mg/kg において高い抽出効率が得られ，添加濃度の低下に伴う抽ジノテフラン出効率の低下は認められなかった (図 7)．高い抽出効率が得られた要因として，測定対象としたネオニチアクロプリド
チアメトキサム

コチノイド系殺虫剤は水溶解度が高く log Pow 値が低いため (表 1)，抽出工程で大部分が水に分配した

ニテンピラム0204060
回収率(%)

80100

図４．厚生労働省通知一斉試験法の一部を変と考えられた．
水抽出液と有機溶媒抽出液を外観で比較したと更した方法による添加回収試験結果

ころ，水抽出液中には分析妨害成分の一つである作係数は 12.0%以下であった．
Obana ら 4) や Watanabe ら 6) はキュウリやトマトなどの農作物に対するネオニコチノイド系殺表５．抽出溶媒にギ酸含有アセトン溶液を用いた方法
による回収試験結果（添加濃度：0.10mg/kg)

虫剤の一斉分析法の検討を行い，ニテンピラムの回収率が低かったことを報告している．本研究におい

化合物名

ピーマン
回収率 a)(%)

トマト
回収率 b)(%)ても同様な結果が得られ，厚生労働省通知一斉試験
法の一部を変更した分析方法によって、７種のネオアセタミプリド

79.6 ± 7.0

81.4 ± 4.4

イミダクロプリド

104.6 ± 7.4

97.3 ± 6.4

ニコチノイド系殺虫剤の作物中濃度を一斉に把握できないことが確認された．

クロチアニジン

91.1 ± 7.6

86.2 ± 4.6

ジノテフラン

77.5 ± 7.8

73.1 ± 2.3

チアクロプリド

83.5 ± 7.0

84.9 ± 4.4

チアクロプリドアミド体

85.6 ± 7.3

85.5 ± 2.8

チアメトキサム86.2 ± 7.8

90.2 ± 4.2

ニテンピラム74.6 ± 7.4

97.7 ± 5.6

CPMA75.2 ± 7.871.6 ± 6.72. 分析方法 2 (抽出溶媒に抽出溶媒にギ酸含有アセトン酸含有アセトン溶液アセトン溶液を溶液を用いた方法
いた方法)
供試化合物の回収率および変動係数を表 5 および図 5 に示した．供試化合物の回収率は71.6-104.6%，変動係数は 8.6%以下で良好であっ

CPMF
75.9 ± 8.6
78.2 ± 2.9a) 平均値±変動係数 (n =4), b) 平均値±変動係数 (n =3)

た．
小林 7) はトマトを供試作物として代謝物を含むネオニコチノイド系殺虫剤の一斉分析法の検討を行った．抽出溶媒にギ酸含有アセトン溶液を用いたアセタミプリド

後，希釈した抽出液を Envi-CarbⅡ/PSA で精製することにより，ニテンピラム，CPMA および CPMF

イミダクロプリド
クロチアニジン
ジノテフランも定量的に抽出して分析できたことを報告している (回収率 79.3-116.7%，変動係数 10.0%以下)．本

チアクロプリド
チアクロプリドアミド体研究においても同様な方法で良好な結果が得られたことから，分析方法 2 は次項の水抽出法におけるチアメトキサム
ニテンピラム残渣画分の分析方法として有用であることが示唆された．

CPMA

トマト
ピーマン

CPMF
03. 分析方法 3 (抽出溶媒に抽出溶媒に超純水を超純水を用いた方法
いた方法)
供試化合物の回収率を表 6，物質収支を表 6 および図 6，抽出効率を表 7 および図 7 に示した．供試

20

40

60

80

100120

回収率(%)

図５．抽出溶媒にギ酸含有アセトン溶液を用いた方法による添加回収試験結果

5表６．水抽出法おける画分毎の回収率および物質収支
ピーマン
添加濃度a)b)
化合物名
物質収支
画分毎の回収率 (%)（mg/kg）
水抽出液
残渣(%)

物質収支a)(%)

トマトb)
画分毎の回収率 (%)
水抽出液残渣

0.01
0.10
1.00

91.1 ± 4.9
84.0 ± 5.2
103.8 ± 0.3

86.8
81.7
101.4

4.3
2.4
2.3

101.6 ± 1.4
83.6 ± 6.9
102.9 ± 1.5

100.6
82.6
102.2

1.0
0.8
0.7

0.01
0.10
1.00

114.2 ± 1.7
100.5 ± 6.3
106.6 ± 0.4

106.2
97.2
103.9

8.0
3.3
2.7

125.2 ± 1.9
98.4 ± 6.8
101.4 ± 1.7

122.3
96.2
100.5

2.9
2.3
0.8

0.01
0.10
1.00

118.3 ± 3.1
87.8 ± 2.9
107.5 ± 0.4

110.7
85.0
105.2

7.7
2.8
2.3

104.0 ± 4.5c)
88.9 ± 7.5
108.9 ± 2.1

104.0
87.0
108.0-d)
1.9
0.9

0.01
0.10
1.00

115.8 ± 4.7
83.4 ± 4.3
102.2 ± 0.3

112.8
81.8
100.7

2.9
1.6
1.4

99.1 ± 4.6
78.7 ± 6.4
93.6 ± 1.9

96.9
77.1
93.1

2.2
1.6
0.5

0.01
0.10
1.00

93.2 ± 4.4
84.6 ± 6.0
102.8 ± 0.8

82.7
79.0
98.0

10.5
5.6
4.8

103.1 ± 1.3
84.9 ± 5.8
102.8 ± 0.9

100.1
81.9
101.3

2.9
3.0
1.5

0.01
0.10
1.00

94.3 ± 3.8
85.1 ± 5.7
99.1 ± 1.8

87.2
81.9
96.4

7.1
3.3
2.6

107.6 ± 2.3
89.5 ± 7.1
99.6 ± 1.2

105.1
86.5
98.7

2.5
3.1
0.9

0.01
0.10
1.00

101.4 ± 5.0
87.0 ± 5.4
104.7 ± 0.2

90.0
84.0
102.8

11.5
3.0
1.9

109.3 ± 4.4
90.9 ± 6.9
100.8 ± 2.0

104.6
85.7
100.2

4.6
5.1
0.6

0.01
0.10
1.00

94.3 ± 3.1c)
85.1 ± 4.8
96.2 ± 0.6

94.3
83.5
95.0-d)1.6
1.2

121.7 ± 4.1c)
97.1 ± 4.4
105.0 ± 1.6

121.7
96.6
104.5-d)
0.5
0.5

CPMA

0.01
0.10
1.00

92.2 ± 2.5
84.8 ± 8.3
101.6 ± 0.9

88.8
82.3
100.1

3.4
2.5
1.5

94.4 ± 4.6
80.6 ± 7.0
98.2 ± 1.8

93.0
80.2
97.6

1.4
0.4
0.5

CPMF

0.01
0.10
1.00

100.3 ± 6.8
80.8 ± 4.4
116.7 ± 0.3

88.6
71.2
106.1

11.8
9.7
10.6

111.8 ± 6.4
82.7 ± 6.6
92.6 ± 3.3

99.8
75.9
85.0

12.0
6.9
7.7

アセタミプリド

イミダクロプリド

クロチアニジン

ジノテフランチアクロプリド

チアクロプリドアミド体

チアメトキサムニテンピラムa) 平均値±変動係数 (n =4), b) 平均値 (n =4), c) 水抽出液画分のみの回収率, d) 定量限界値以下のため、算出不可
アセタミプリド

アセタミプリド

イミダクロプリド

イミダクロプリド

クロチアニジン

クロチアニジン

ジノテフラン

ジノテフランチアクロプリド

チアクロプリド

チアクロプリドアミド体

チアクロプリドアミド体

チアメトキサムチアメトキサムニテンピラムニテンピラムCPMACPMA

CPMF

CPMF
020406080

0100 120 140

物質収支（%）

204060

物質収支（%）

図６．ピーマン （左) およびトマト （右) の物質収支

680 100 120 140
0.01mg/kg
0.10 mg/kg
1.00 mg/kg

アセタミプリド

アセタミプリド

イミダクロプリド

イミダクロプリド

クロチアニジン

クロチアニジン

ジノテフラン

ジノテフランチアクロプリド

チアクロプリド

チアクロプリドアミド体

チアクロプリドアミド体

チアメトキサムチアメトキサムニテンピラムニテンピラムCPMACPMA

CPMF

CPMF
020406080

1000

抽出効率 (%)

2040

抽出効率 (%)

60

80

1000.01 mg/kg
0.10 mg/kg

図７．ピーマン（左)およびトマト（右)の抽出効率
1.00 mg/kg

表７．水抽出法における抽出効率

水抽出液
化合物名

添加濃度（mg/kg）

ピーマン
トマト
抽出効率a) (%) 抽出効率a) (%)

0.01
0.10
1.00

95.4 ± 2.2
97.2 ± 0.3
97.8 ± 0.3

99.0 ± 0.1
99.1 ± 0.4
99.3 ± 0.2

0.01
0.10
1.00

93.0 ± 1.9
96.7 ± 0.6
97.4 ± 0.3

97.7 ± 0.2
97.7 ± 0.4
99.2 ± 0.2

0.01
0.10
1.00

93.6 ± 1.696.9 ± 0.5
97.9 ± 0.3>94.6b)
97.9 ± 0.2
99.2 ± 0.1

0.01
0.10
1.00

97.5 ± 0.5
98.1 ± 0.5
98.6 ± 0.2

97.8 ± 0.4
98.0 ± 0.4
99.5 ± 0.2

0.01
0.10
1.00

88.8 ± 2.5
93.4 ± 0.8
95.3 ± 0.5

97.2 ± 0.2
96.5 ± 0.3
98.6 ± 0.3

0.01
0.10
1.00

92.5 ± 2.3
96.2 ± 0.5
97.3 ± 0.4

97.7 ± 0.2
96.6 ± 0.9
99.1 ± 0.3

0.01
0.10
1.00

88.7 ± 1.6
96.6 ± 0.5
98.2 ± 0.2

95.8 ± 0.4
94.4 ± 0.4
99.4 ± 0.2

0.01
0.101.00>93.8b)
98.1 ± 0.3
98.8 ± 0.3>95.2b)
99.5 ± 0.1
99.5 ± 0.1

CPMA0.01
0.101.00

96.4 ± 1.3
97.1 ± 0.9
98.5 ± 0.1

98.5 ± 0.2
99.5 ± 0.2
99.5 ± 0.2

CPMF

0.01
0.10
1.00

88.3 ± 1.9
88.0 ± 1.5
91.0 ± 0.6

89.3 ± 0.6
91.7 ± 0.7
92.5 ± 0.3

アセタミプリド

イミダクロプリド

クロチアニジン

ジノテフランチアクロプリド

チアクロプリドアミド体

チアメトキサムニテンピラムアセトン
抽出液

図８． ピーマンの水抽出液 （左） アセトン抽
出液 (右)

水抽出液

アセトン抽出液a) 平均値±変動係数 (n =4)，b) 残渣画分が定量下限値以下のため，変動係数は算出不可

図９． トマトの水抽出液 （左） アセトン抽
出液 (右)

7

物色素がほとんど含まれなかった (図 8 および 9)．

4)

H. Obana， M. Okihashi， K. Akutsu， Y.
Kitagawa， S. Hori：J. Agric. Food Chem.，
50， 4464-4467 (2002)

水抽出法では作物色素の共抽出が少なかったことから，有機溶媒を用いた抽出法と比較して分析妨害
5)要因のマトリックス効果を低減できると考えられた．
Xiao ら 9) は牛の筋肉と肝臓に対するネオニコチ
ノイド系殺虫剤の水抽出法による一斉分析法の検H. Obana， M. Okihashi， K. Akutsu， Y.
Kitagawa， S. Hori：J. Agric. Food Chem.，
51， 2501-2505 (2003)

討をし，回収率が良好 (83.2-101.9%) であったことを報告している．本研究では農作物に対するネオニコチノイド系殺虫剤と代謝物の水抽出法を検討し，良好な結果を得ることができた．水抽出法による一

6)

E. Watanabe， K. Baba， H. Eun：J. Agric.
Food Chem.，55，3798-3804 (2007)7)

小林裕子：分析化学 vol.58，985-997 (2009)8)

S. Liu， Z. Zheng， F. Wei， Y. Ren， W. Gui，H. Wu， G. Zhu：J. Agric. Food Chem.， 58，

斉分析法では，有機溶媒中で不安定な CPMA を定量的に抽出できたこと，厚生労働省通知個別試験法

3271-3278 (2010)

で誘導体化を要する CPMA および CPMF を誘導体化せずに分析できたこと，代謝物を含む対象化

9)

合 物 10 種 を 同 時 に 分 析 で き た こ と か ら ，
LC-MS/MS を用いたネオニコチノイド系殺虫剤の10) 農薬ハンドブック 2011 年版，社団法人日本植物防疫協会

一斉分析の抽出法として有効であることが示唆された．また，抽出に有機溶媒を必要としないこと，

11) 厚生労働省医薬品食品局食品安全部長通知，食安発第 0124001 号第 3 章個別試験法 (通知試11)

Ding：J. Chromatogr. B，879，117-122 (2011)

分析妨害成分の共抽出が少ないこと，および転溶操作が不要で前処理を簡略化できることから，ELISA

験法) 「ニテンピラム試験法」，2005

法などのスクリーニング分析の抽出法として農業生産現場で利用しやすいことが示唆された．本研究で検討した水抽出法による一斉分析法をさらに検証するために，添加回収試験での分析結果の比較だ
けでなく，圃場施設で農薬を散布して栽培した作物試料を用いた場合の厚生労働省通知一斉試験法と水抽出法の分析結果の比較，並びに水抽出法によるELISA 法での定量について確認する必要があると考えられる．

謝 辞
本研究の実施にあたり，作物試料の提供を賜りました (社) 日本植物防疫協会に謝意を表します。

引 用 文 献1)

農薬要覧 2009，社団法人日本植物防疫協会

2)

農薬適用一覧表 2011 年版，社団法人日本植物防疫協会

3)

厚生労働省医薬品食品局食品安全部長通知，食安発第 0124001 号第 2 章一斉試験法 (通知試

Z. Xiao， X. Li， X. Wang， J. Shen， S.

験法)「LC/MS による農薬等の一斉試験法 (農作物)」，2005

8