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日本家禽学会誌,45:J16‑t/20,2008＜研究ノート＞

産卵鶏血漿中8−ハイドロキシデオキシグアノシン(8‑OHdG)の季節変動
菫侘蒸・青柳陽介
茨城大学農学部，茨城県阿見町300‑0393

産卵鶏の血漿中8−ハイドロキシデオキシグアノシン(8‑OHdG)儂度の季節変動(2005年12月〜2006年12月）について調査した。産卵鶏の血漿中8‑OHdG濃度は,5月および9月で最も低値であった。夏季および冬季で,8‑OHdG濃度の有意な上昇がみられた。夏季の血漿中8‑OHdG濃度と鶏舎内最高温度との間には有意な正の相関関係が，また，冬季の血漿中8‑OHdG攪度と鶏舎内最低温度との間には有意な負の相関関係が観察された。卵重は,2006年1月より2007年1月までほぼ一定の値であったが，8月および9月で最も高い値が得られた1月より有意に減少した。また，7，8および9月でのみ，軟卵が確認された。産卵率に関しては，測定を開始した2006年1月から7月までは高い値で推移したが，その後，日齢の進行に伴い，暫時減少し,12月には62.4%まで減少した。
本研究の結果より，低温および高温環境下で，産卵鶏が受ける酸化ストレスが増加する可能性が示唆された。
キーワード：産ﾘ￨1鶏8‑ハイドロキシデオキシグアノシン(8‑OHdG),卵重，産卵率".,1993;葛西,2001)。遺伝子DNAが修復される過程で8‑OHdG

緒 言は細胞外に排出され，さらに血液を経て尿中に排泄される

動物体内に生じる酸化ストレスが，動物に悪影響を及ぼすこと(Suzukiem/.,2003,;Chioue"/.｡2003;Wueml.,2004)。またが広く知られている(Amesaaj.,1993;Bongarzone"".,8‑OHdGは比較的安定な物質で，生体内で代謝や分解されること1995)。酸化ストレスは種々の要因により誘導されるが(Halli‑なく尿中に速やかに排泄され，生体損傷を鋭敏に反映するため，well,1998;NewcombandLoeb,1998),環境温度もその要因のヒトの尿中8‑OHdGが酸化ストレスマーカーとして実用化され一つである。寒冷曝露により，ラット肝臓のミトコンドリアからており，臨床検査で利用されている(Makieta/.,2007)。本研究放出される過酸化水素により，肝臓に酸化ストレスが生じること

でも，産卵鶏の酸化ストレスのマーカーとして血中8‑OHdGを用が報告されている(Vendittie"J.,2007)｡また，高温環境下でニいた。

ワトリヒナの血中および肝臓中の過酸化脂質量が増加することよ

材料と方法

り，高温曝露によりニワトリヒナ体内に酸化ストレスが生じ，それが夏季におけるニワトリの生産性低下の一因となることが示唆用いた実験動物すべての取り扱いは，茨城大学動物実験指針されている（冑柳ら,1997;Mujahidαα/.,2007)。本研究は，産(茨城大学実験動物委員会）に従った。単冠白色レグホーン種雌初卵鶏が受ける酸化ストレスの季節変動について調査することを目生ヒナ（霞ヶ浦孵卵場，土浦市）をヒーター付きケージ内で予備的とした。

飼育した。飼料は市販の幼雛用飼料を用い，水とともに自由摂取

これまでに、チオバルビツール酸反応物(TBARS,Yagi,1976),させた。23日齢時にヒナを実験鶏舎に移し，産卵が確認できるまタンパク質カルボニルの定量(StadtmanandOliver,1991)なでケージ内で2羽ずつ飼育した。産卵が{i唯認された時点で,6羽ど，酸化ス￨､レスの評IIlliのため，種々の〃法が提I￨昌されている。

を選抜し，ケージ￨ﾉ1で単飼した。実験鶏舎は，南￨[IIきの風通しのそれらには，酸化ストレスに対する特異性が低いこと，試薬が高よい開放鶏舎であり，ネット，粘着式のネズミ捕りおよび殺鼠剤{'lliであること，熟練した実験・操作技術が必要であることなどのの使用により，野鳥および野鼠との接触を防いでおり，茨城県保短所がある。そこで，信頼性が高く，操作が簡易な方法の開発が健所からも問題無しと判断された。なお，鶏舎内の照明と温度は望まれていた。近年8−ハイドロキシデオキシグアノシン（8‐特別なコントロールは行っておらず，毎日の鶏舎内の最高およびOHdG)が酸化ストレスマーカーとして注目されている。8‐最低気温を記録した。飼料は産卵鶏の各ステージに適合した市販

OHdGは，遺伝子DNA中のグアノシン塩基が活性酸素の作用に飼料を用い，飼料と水は自由摂取とした。

より酸化的損傷を受けることで生成される物質である(Loft"

実用産卵鶏の群産卵率は210H齢前後でピークに達するとされている（松島ら,1982)。また，卵重に関しては330日齢前後で成2007年10月1日受付,2007年12月4日受理
連絡先：青柳陽介〒300‑0393茨城県阿見町中央3‑21‑l

熟卵重に達するとされている（松島ら,1982)。そこで，本研究では，産卵率および卵重の測定開始を300日齢程度に設定し，そのTel/Fax:029‑888‑85791ケ月前である2005年12月(247日齢）より2006年12月(622E‑mail:arambo@jcom.homene.jp日齢）まで，毎月1回翼下静脈より，約200"の血液をヘパリン
J16Copyright ©2008, Japan Poultry Science Association菫ら：産卵鶏の酸化ストレスの季節変動処理したシリンジを用いて採取した。採血時刻は午後2時とし35た。また，2005年12月〜2006年9月まで，採血はすべて産卵後30一酷高温であった。直ちに血漿を分離し，分析まで‑80℃で保存した。約25寺低温

1年間の採血期間中の飼育条件は前述の通りである。また,2006f T20
こ年1月より2007年の1月までの産卵率を記録し，同期間中,全て圏5の卵重を測定した。飼料摂取量に関しては，使用した給餌器の形

鴫10状のため，こぼれが多く，正確に測定することができなかった。

5血漿中8‑OHdG濃度は，モノクローナル抗体を用いた

0ELLISAキット（日本老化制御研究所，袋井市）で測定した。凍−5結保存血漿サンプルを解凍後0.1"mのフィルター(Ultrafree‑f､舟ふみずべぐ､ふふ●●妙MC,MilliporeCorporation)を用いてタンパク質を除去し,8‑月′

OHdG濃度の測定に供した。血漿サンプルは可能な限り密閉保存＄§f

したが，実験初期の血漿サンプルと後期のサンプルでは，保存期

図1.鶏舎内の最高最低温度間にかなりの差があるため水分含量が変化する可能性が考えられ

法(Duncan,1966)に依った。

舎内の月平均温度は‑1.3〜30.2℃の範囲であった。
図2に2005年12月より2006年12月までの毎月の産卵鶏の血bcd

Idefcdeｊ↑且

図1に実験鶏舎内の月平均最高および最低温度を示す。実験鶏I
北工○壱画○土無巨結果および考察

２１
５ １
５Ｏ
ＱＱＯ
Ｏ

GLMおよびCORRプロシジャを用い，平均値の比較は夕．ンカン

ababcT０八堀︑昌西如巨︶

統計解析には，統計解析パッケージSAS(SASInstitute)のa０︵虹︑孝定し,8‑OHdG濃度を補正した。

３２５Ｑた。そこで，タンパク質濃度測定キット(DCproteinassay,Bio‑RadLaboratories)を用いて血漿中のタンパク質濃度を同時に測工defet綴瀞月および9月で最も低値であった。測定期間中の産卵鶏の血漿中8‑OHdG濃度と鶏舎内最高および最低温度の間には何ら有意な相関関係が得られなかった。しかし，図2から5月および9月を境図2に，夏季および冬季で産卵鶏の血漿中8‑OHdG濃度が̲￨二昇するというパターンであった。

iiilfl■■'漿中8‑OHdG濃度を示した。産卵鶏の血漿中8‑OHdG濃度は,5I

■■

def−L

●ず●ふざ､ぐ､ふふ、●J、
月

産卵鶏の血漿中8‑OHdG濃度の季節変動
縦線は標準誤差の大きさを表す(n=6).
異符号間に有意差あり(P<005).

8‑OHdGはDNAのグアニン塩基が酸化ストレスにより8位の炭素に水酸基が付加し，その後代謝され，ヌクレオシドとして血液を経由して，尿中に排泄される物質である(Inoue"".,1993;

鶏舎内平均最高温度と産卵鶏血中8‑OHdG濃度との相関を調べLoft""Z.,1993)。現在，酸化ストレスマーカーとして，ヒトの尿た。その結果,r=0.44115,P<0.05という有意な正の相関関係が中8‑OHdG濃度が臨床検査に応用されている。本研究では，産卵得られた。また，2005年12月〜2006年5月および2006年9月〜

鶏の血中8‑OHdGを酸化ストレスマーカーとし，その季節変動に2006年12月の鶏舎内平均最低温度と産卵鶏血中8‑OHdG濃度のついて調査した。その結果（図2)，採血を開始した2005年12月

相関を調べた結果,r=‑0.59051,P<0.01という有意な負の相関より2006年1月と有意に上昇し,3月まではほぼ￨司等の値であっ関係が得られた。低温(Venditti"".,2007)および高温環境た。4月には1年間で最も高い値であった1月の値よりも有意に(Flanaganemj・,1998;Hall"""1994)が体内での活性酸素の減少した。5月にはさらに減少したが，6月より気温の上昇に伴発生を増加させ，その結果，ラット体内での酸化ストレスの増加い，血中8‑OHdG儂度も上昇を始め,7月の値は5月のそれに比を促すことが報告されている。

し，有意に高い値となった。その後再び減少し,2006年9月の値

以上より，産卵鶏においても，高温および低温環境下で体内には，約1年の測定期間中最も低値であった。以後，上昇傾向に転生じる酸化ストレスが増加する可能性が示唆された。しかし，高じ，採血最終月の2006年12月の値は2005年12月の値とほぼ同温よりも低温環境の方が，より大きく影響することに関しては予程度であった。産卵鶏の至適温度は13〜24℃だとされている（松想外であった。

島ら,1982)｡2006年5月および9月の実験鶏舎内の月平均最高温度は21.9℃と26.2℃であり，月平均最低温度はそれぞれさらに日照時間と産卵鶏血中8‑OHdG濃度の関係についても解析したが，何ら有意な相関関係は観察されなかった。

13.8℃,19.4℃であった。また，産卵鶏の酸化ストレスマーカーが本研究では，産卵鶏の日齢と血中8‑OHdGとの間には何ら有意最も低値であったことから，2006年5月から2006年9月までのな相関関係はみられなかった。しかし，本研究に用いた産卵鶏は，
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日本家禽学会誌45巻J1号(2008)

様の実験を行うことで，環境温度と産卵鶏が受ける酸化ストレスとの関係について，より詳細に考察できるものと考えられた。ま剖二

た，前述のとおり，2005年12月〜2006年9ﾉ1まではすべて産卵後の個体であったが，それ以降，採血終了までは，産卵前の個体も含まれる。産卵前後での血中8‑OHdG濃度の比較も必要であると考えられるが，今後の課題であると考えられた。
図3に卵重の季節変動について示した。卵菫は2006年lHか

２７０６８６６６４６２６０５８５６５４７4月孵化の鶏のみである。今後，孵化)lの異なる産卵鶏を用い，同■、<1Lf 趣1。

abab

1abc｢Tab工l Ⅲ iL' 1 1■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ーら2007年1月までほぼ一定の値であったが,8月および9月で最も高い値が得られた2006年1月より有意に減少した。また，Ⅵ8および9月でのみ，軟卵が確認された。しかし，本研究では，使用羽数が少ないため，さらなる検討が必要と思われた。

図3

高温環境下で産卵鶏の卵重が減少することが報告されている

産卵鶏の卵重の季節変動

縦線は標準誤差の大きさを表す(n=6)
異符号間に有意差あり(P<0̲05).

(Marsden"""1987)。本実験でも卵重に関しては,2006年の8月で卵重の測定を開始した2006年1月の値に比して有意に減少

ａ主度まで回復した。また,2006年7,8,9月で合計7個の軟卵が観昇することが判明したが（区'2)，木実験で得られた夏季における

bc

1aD

I

口工,bab

卵重の減少と血中8‑OHdG濃度の夏季における上昇との間には約1ケ月の時間差が生じた。この原因に￨腱￨しては不Iﾘ1であり，今IXI4に庫卵率の季節変動を示す。本研究では2571‑￨齢ll#(2005年12H)より一ケノ1毎の産卵率を測定した。2006年1月より7月までは高い産卵率が得られたが，その後li'l'jかずつ下降し,ll)1

1I

60後の検討課題であると考えられた。

50'!'''ーー●ふ仰には81.7%,12ﾉ｣には62.4%まで減少した。採lillは2006年12月

図4に終了したが，その後1ケH間は産卵率と卵重は測定を続けた。

その結果,2007年1月の産卵率は僅かではあるが,2006年12ノl

グ０︑﹃１

夏季において血中8‑OHdG濃度即ち酸化ストレスが高温期で￨:aa

工−一がよく知られている(PardueandThaxton,1986)。前述の通り，

ａＴｌｌｌ■

１コ■ｆ■■︵ま︶計量魁察された。高温環境下で軟卵および破卵の発生率が￨昇すること

ａ−０１０００９０８０７０２１１１

した｡2006年9月の値は他のどの区よりも有意に低値であった。

その後，10月より増加を始め,lljjには2006年IHの値と￨司程■■く､ふふ●●
H

産卵鶏の産卵率の季節変動
縦線は標準誤差の大きさを表す(n=6)
異符号間に有意差あり(P<005).の値よりも回復した。これにはH齢以外の要因が考えられた。本
実験の産卵鶏の飼育条件では，鶏舎￨ﾉ1温度は年間‑4.1｡C〜35.2℃であった。また，照明および温度コントロールは行っていない。

ると，内モンゴル自治区の養鶏場の年間鶏舎内温度は0〜35℃の

従って，1ケ月の平均日照時間等の要因も考えられたが，茨城県幅を持つ。これは，本研究で使用した実験鶏舎内の年間気温変動の2006年12月の平均日照時間は9時間44分であり,2007年1とほぼ同等である。

月のそれは9時間59分と大差が無かった。従って，前述の8‐本研究では，産卵鶏の飼育環境温度のみを内モンゴル地区内でOHdG濃度の低温環境による増加,MI]ち酸化ストレスの増加もそ使用されている鶏舎内温度に模しており，湿度等の他の環境条件の一因として考えられた。

は異なる可能性が十分に考えられたが，少なくとも，環境温度が筆頭著者の出身地は，中華人民共fⅡ国，内モンゴル自治区，通産卵鶏血中8‑OHdG濃度に影響を及ぼすことが判明した。筆頭著遼市である。この地は，北緯43．，東経120.に位置し，内陸部の者は，帰国後，本研究と同様な実験を内蒙古民族大学と共同で行ために，寒暖の差が激しく，夏季では30〜35℃，冬季には‑20℃うことになっており，本研究で考慮しなかった諸条件と産卵鶏が程度となる。近年，中華人民共和国でも養鶏産業が盛んであるが，受ける酸化ストレスとの関係についてより詳細に調査することが日本に比較すると鶏肉・鶏卵は高Ⅲiである。近代的な養鶏施設も可能であると考えられた。その際,8‑OHdG法は少量の血液の採増加しているが，都市部近郊以外では，まだ日本でいうところの，取で測定可能であり，酸化ストレスマーカーとして有効であると庭先養鶏的な形態も多く存在する。しかし，一般消費者が，猫入考えられた。上海に近く，杭州市を擁する湘江省の大規模養鶏業

する鶏卵および鶏肉は，｜ﾉ1モンゴル自治区の場合，規模が数千か者(A公司）では，鶏舎の温度を年間18〜25℃にコントロール

ら数万判程度の養鶏場で生産される。これら養鶏場の鶏舎は，あし，生産性が内モンゴル自治区に比較して高い。内モンゴル自治

る程度の温度調節は行っているが，近代的な養鶏施設ほと．は充実区でも，これに習い，飼育環境（鶏舎）の改善等により，鶏卵をしていない。内蒙古民族大学より提供された資料（未発表）によより効率的に生産できることが可能であると考えられた。さらにⅢ8

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菫ら：産卵鶏の酸化ス￨､レスの季節変動本研究で明らかとなった低温および高温環境によって産卵鶏が受oxidativestressandinflammationinpatientswithhepati‑ける酸化ストレスを緩和することにより，動物福祉の面でも寄与

tisCvirus‑associatedhepatocellularcarcinoma.Annals
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できる可能性が考えられた。

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TheSeasonalChangesinthePlasma8‑Hydroxy‑2‑Deoxyguanosine(8‑OHdG)ConcentrationsinLayingHens
WeijieDongandYosukeAoyagi
LaboratoryofAnimalNutrition,collegeofAgriculturelbarakiUniversity,Ami‑machi,Ibaraki‑ken300‑0393

Inthepresentstudy,plasma8‑hydroxy‑2‑deoxyguanosine(8‑OHdG)concentrationsweremeasuredfbrl
year(December2005‑2006)inlayinghenS,inordertoevaluateanypossibleseasonalchangesinoxidativestressinthesehens.Thelowestvaluesoftheplasma8‑OHdGconcentrationsinthelayinghenswereobservedinMayandSeptember.Whileasigniiicantincreasewasobservedinsummerandwinter､Insummer,asignificantpositive
correlationwasobservedbetweentheplasma8‑OHdGconcentrationsandhightemperatures,whileinwinter,asignificantinversecorrelationwasobservedbetweentheplasma8‑OHdGconcentrationsandlowtemperatures.

EggweightsweremeasuredfromJanuary2006‑2007.thesevaluesweresignilicantlylOwerinAugustandSep‑
temberthaninJanuary.Moreover,softeggswereobservedonlyinJuly,AugustandSeptember.Eggproduction

wasmeasuredfromJanuary2006‑2007.Highvalueswel･eobtaineduntilJuly.Thereafter,eggproduction

graduallydecreased,andthemeanvalueinDecemberwas62.4%.
Basedontheresultspresented,itwassuggestedthatloworhighambienttemperaturecausesoxidativestressinlayinghens.
JoI"'"
α/of比"/")
ﾉ靴ie"",
45.･JI6‑J20,2008)(J"αα""eesseeJo"
ﾉ･"α/
Q/比"/"γ靴ie"ce,45Keywords:layinghens,8‑hydroxy‑2‑deoxyguanosine(8‑OHdG),eggweight,eggproductions

J20