信州医誌，71⑸：291～374，2023

信州大学において審査された医学博士論文要旨
氏

名

学位授与
番
号

授与年月日

博

士

論

文

名

学位審査委員
主

査

副

査

出田宏和

甲第1297号 Ｒ 4. 3.31 Antitumor effect of sclerostin against osteo­ 中 沢 洋 三
sarcoma（骨肉腫に対するスクレロスチンの抗
腫瘍効果）

平塚佐千枝
柴
祐司
河野博隆

小山

甲第1298号 Ｒ 4. 3.31 A new remnant preservation technique reduces 栗 田
bone tunnel enlargement after anatomic doublebundle anterior cruciate ligament reconstruction（解剖学的２重束前十字靭帯再建術における新しい遺残組織温存方法は術後骨孔拡大を抑制す
る）

浩

藤永康成
福島菜奈恵

由井千枝

甲第1299号 Ｒ 4. 3.31 Effects of cardiac surgical support on long-term 瀬戸達一郎
outcomes of emergent or complex percutane­
ous coronary intervention cases : a sub-analysisof the SHINANO 5-year registry（冠動脈疾患に対する経皮的冠動脈形成術施行施設の心臓血管外科の有無に伴う長期予後の検討：SHINANO
レジストリー５年間のサブ解析）

今村
浩
柴
祐司
尾崎和幸

山本悠太

甲第1300号 Ｒ 4. 9.30 Circulating T cells and resident non-T cells 菅 野 祐 幸
restrict type 2 innate lymphoid cell expansion
in the small intestine（循環Ｔ細胞および組織
常在性非Ｔ細胞が小腸における２型自然リンパ球集団の拡大を制限する）

竹下敏一
柴
祐司
高橋将文

PANG BO

甲第1301号 Ｒ 3. 9.30 An epilepsy-associated mutation of salt- 関 島 良 樹
inducible kinase 1 increases the susceptibility
to epileptic seizures and interferes with adre­nocorticotropic hormone therapy for infantile
spasms in mice（Salt-induced kinase１遺伝子のてんかん関連変異はてんかん発作の感受性を高めるとともに，マウスの点頭てんかんに対す
る ACTH の効果を減弱させる）

新藤隆行
古庄知己

SHEN
DANDAN

甲第1302号 Ｒ 5. 3.31 Subfascial infiltration of 0.5 ％ ropivacaine, but 杠
not 0.25 ％ ropivacaine, exacerbates damage
and inflammation in surgically incised abdomi­
nal muscles of rats（0.5 ％ロピバカインによる筋膜下浸潤麻酔は，外科的切開後の筋損傷と炎症を増悪するが，0.25 ％ロピバカインはそれらを増悪しない）

髙橋
淳
川眞田樹人
川股知之

傑

No. 5, 2023

俊介

291

審査学位論文要旨

DIAO
PAN

甲第1303号 Ｒ 5. 3.31 Dietary fat composition affects hepatic angio­ 副 島 雄 二
genesis and lymphangiogenesis in HCV coregene transgenic mice（食事中脂肪組成はＣ型
肝炎ウイルスコア遺伝子トランスジェニックマ
ウスの肝血管新生およびリンパ管新生に影響を
与える）

栗田
浩
駒津光久
寺井崇二

江原毅人

甲第1304号 Ｒ 5. 3.31 LGR5 expression is associated with prognosis 伊 藤 研 一
in poorly differentiated gastric adenocarcino­ma（低分化胃腺癌において LGR5の発現は予後と関連する）

小泉知展
平塚佐千枝
市川大輔

畠中輝枝

甲第1305号 Ｒ 5. 3.31 Comparison of differences and random errors 藤 永 康 成
in pedicle diameter measurements between MRI
and CT : observational study of 315 pedicles inlenke type 1 adolescent idiopathic scoliosis pa­
tients（MRI と CT による椎弓根径測定の違いとランダムエラーの比較：Lenke１型思春期特発性側弯症患者における315椎弓根の観察的研
究）

清水公裕
古庄知己
波呂浩孝

田畑裕章

甲第1306号 Ｒ 4. 3.31 Usefulness of the controlled-rotation dilator 山 田 充 彦
sheath“ Evolution RL ”for extraction of oldleads in two Japanese centers-An experiencein use（回転制御型ダイレーターシース“Evolution
RL”の，国内２施設における長期植え込みリード抜去への有用性）

瀬戸達一郎
柴
祐司

西村

甲第1307号 Ｒ 5. 3.31 Detection of cognitive decline by spinal pos­ 野見山哲生
ture assessment in health exams of the generalolder population（一般高齢者の健康診断における脊椎姿勢評価による認知機能低下の検出）

鷲塚伸介
髙橋
淳
松山幸弘

小川典之

甲第1308号 Ｒ 4. 3.31 Autologous Bilayered Adipose-Derived Mes­ 柴enchymal Cell-Gelatin Sheets Reconstruct Ure­ters in Rabbits（脂肪由来間葉系幹細胞から作製した積層細胞シートを用いたウサギ尿管再生
の試み）

祐司

髙橋
淳
栗田
浩
三井貴彦

中村加世子

甲第1309号 Ｒ 5. 3.31 Autologous antigen-presenting cells efficiently 清 水 公 裕
expand piggyBac transposon chimeric antigen
receptor T cells with predominant memory
phenotype（自己末梢血由来遺伝子改変フィー
ダー細胞は，メモリー機能を保持したピギー
バックトランスポゾン遺伝子改変キメラ抗原受容体Ｔ細胞の増殖に寄与する）

塩沢丹里
上原
剛
今井千速

後藤憲彦

甲第1310号 Ｒ 5. 3.31 The usefulness of a combination of age, body 今 村
mass index, and blood urea nitrogen as prog­
nostic factors in predicting oxygen require­ments in patients with coronavirus diesease2019（年齢，BMI，血清 BUN 値は新型コロナ
ウイルス感染症患者の酸素投与の必要性の予測に有用である）

関島良樹
小泉知展
菊地利明

292

輝

浩

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

HAN
YIBING

甲第1311号 Ｒ 5. 3.31 Immunohistochemical investigation of biomark­ 平塚佐千枝
ers for predicting adipose tissue invasion inoral squamous cell carcinoma（口腔扁平上皮
癌の脂肪浸潤予見因子の免疫組織化学的研究）

伊藤研一
浅村英樹
各務秀明

細見謙登

甲第1312号 Ｒ 5. 3.31 NanoSPECT imaging reveals the uptake of 田 中 直 樹
123
I-labeled oxidized low-density lipoprotein in
the brown adipose tissue of mice via CD36
（NanoSPECT イメージングによるマウス褐色脂肪組織における CD36を介した 123I 標識酸化LDL 取込みの発見）

桑原宏一郎
杠
俊介
下村伊一郎

髙橋芳之

甲第1313号 Ｒ 4. 3.31 CD8＋ lymphocyte infiltration is a specific fea­ 小 泉 知 展
ture of colitis induced by immune checkpoint
inhibitors（CD8陽性リンパ球は免疫チェック
ポイント阻害薬による腸炎に特異的な所見であ
る）

菅野祐幸
梅村武司
櫻庭裕丈

髙橋佑介

甲第1314号 Ｒ 4. 3.31 Distribution and progression of cerebral amyloid 藤 永 康 成
angiopathy in early-onset V30M (p.V50M) he­reditary ATTR amyloidosis（若年発症 V30M
変異型遺伝性 ATTR アミロイドーシス患者における脳アミロイド血管症の進展および分布）

堀内哲吉
古庄知己
植田光晴

ZHANG
ZHE

甲第1315号 Ｒ 5. 3.31 Clinically Relevant Dose of Pemafibrate, a Novel 竹 下 敏 一
Selective Peroxisome Proliferator-Activated
Receptor α Modulator (SPPARMα), Lowers
Serum Triglyceride Levels by Targeting He­
patic PPARα in Mice（臨床投与相当量の新規選択的 PPARα モジュレータ―・ ペマフィブ
ラートをマウスに投与すると，肝臓の PPARαに作用して血中の中性脂肪値が低下する）

梅村武司
森
政之
本多
彰

MEHTA
ANURADHA

甲第1316号 Ｒ 5. 3.31 IQSEC2 Deficiency Results in Abnormal Social 新 藤 隆 行
Behaviors Relevant to Autism by Affecting
Functions of Neural Circuits in the Medial Pre­
frontal Cortex（IQSEC2の欠損は内側前頭前皮質の神経回路機能に影響を与え自閉症に関連した社会行動の異常をきたす）

鷲塚伸介
田渕克彦
深田正紀

柿原伸次

甲第1317号 Ｒ 5. 3.31 Role of adrenomedullin-2/intermedin in the 菅 野 祐 幸
pathogenesis of neovascular age-related mac­ular degeneration（滲出型加齢黄斑変性症の病態におけるアドレノメデュリン2/インターメ
ディンの役割）

田渕克彦
新藤隆行
今井
靖

三村哲彦

甲第1318号 Ｒ 5. 3.31 Adjacent segment pathology following posterior 堀 内 哲 吉
lumbar interbody fusion for lumbar degenera­tive spondylolisthesis : a comparison between
minimally invasive and conventional open ap­
proach（腰椎変形すべり症に対する腰椎後方
椎体間固定術後の隣接椎間障害：低侵襲アプ
ローチと従来アプローチの比較）

清水公裕
髙橋
淳
波呂浩孝

No. 5, 2023

293

審査学位論文要旨

大倉絵梨

甲第1319号 Ｒ 5. 3.31 Cancer among children, adolescents and young 塩 沢 丹 里
adults in the Hokushin region, Japan, between
2010 and 2015（2010～2015年の北信地域における小児・AYA 世代のがん罹患の実態）

古庄知己
伊原正喜
今井千速

内海雅史

甲第1320号 Ｒ 5. 3.31 Predictors of a Non-response to Prophylactic 中 沢 洋 三
Indomethacin for Patent Ductus Arteriosus inPreterm Infants（早産児における動脈管開存症に対するインドメタシン予防投与への不応予
測因子の検討）

山田充彦
伊原正喜
犬飼岳史

武田良淳

甲第1321号 Ｒ 4. 3.31 Clinical and molecular features of patients with 中 沢 洋 三
COL1-related disorders : implications for thewider spectrum and the risk of vascular com­plications（COL1関連症候群における分子遺伝
学的・臨床的検討）

髙橋
淳
駒津光久
澤井英明

一戸記人

甲第1322号 Ｒ 5. 3.31 Usefulness of breath-hold fat-suppressed T2- 梅 村 武 司
weighted images with deep learning-based re­construction of the liver : comparison to con­ventional free-breathing turbo spin echo（深層学習再構成を用いた肝の呼吸停止下 T2強調
画像の有用性：自由呼吸下高速スピンエコー法
との比較）

副島雄二
田中直樹
五島
聡

原

大地

甲第1323号 Ｒ 5. 3.31 Histopathologically defined intestinal metapla­ 竹 下 敏 一
sia in lesser curvature of corpus prior to Helicobacter pylori eradication is a risk factor for gas­
tric cancer development（ヘリコバクター・ピ
ロリ除菌療法前の胃体部小弯の組織学的腸上皮化生は除菌後胃癌のリスク因子である）

中山佳子
梅村武司
佐藤貴一

林

桃子

甲第1324号 Ｒ 5. 3.31 Development of the rabbit NASH model resem­ 瀧
bling human NASH and atherosclerosis（ヒトNASH および動脈硬化を模したウサギ NASH
モデルの作出）

伸介

森
政之
松田和之
本多
彰

鈴木大介

甲第1325号 Ｒ 5. 3.31 Correlations between the properties of saliva 田 中 直 樹
and metabolic syndrome : A prospective ob­servational study（唾液性状とメタボリックシ
ンドロームの関係性：前向き研究）

石塚
修
浅村英樹
宇田川信之

上田勝也

甲第1326号 Ｒ 5. 3.31 Biocompatibility Evaluation of Carbon Nano­ 栗 田
horns in Bone Tissues（Carbon nanohorns に対する骨組織での生体応答性評価）

浩

髙橋
淳
竹内あかり
松田佳和

原

甲第1327号 Ｒ 4. 3.31 Cold stress-induced bladder overactivity in 田 中 直 樹
type 2 diabetic mellitus rats is mitigated by
the combination of a M3-muscarinic antagonist
and a β3-adrenergic agonist（冷えストレスに起因する２型糖尿病ラット排尿筋過活動に対す
る M3ムスカリン受容体拮抗薬と β3アドレナリン受容体作動薬の併用による抑制効果）

梅村武司
栗田
浩
齊藤源顕

294

寛彰

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

荒井勇輔

甲第1328号 Ｒ 5. 3.31 Analysis of the effect of brexpiprazole on sleep 花 岡 正 幸
architecture in patients with schizophrenia : apreliminary study（統合失調症患者の睡眠構築に対するブレクスピプラゾールの効果の分
析：予備研究）

杉山暢宏
野見山哲生
渡邊衡一郎

沼田隆佑

甲第1329号 Ｒ 5. 3.31 Assessment of Left Atrial Deformation in Pa­ 古 庄 知 己
tients with Total Anomalous Pulmonary Ve­
nous Connection by Two-Dimensional SpeckleTracking Echocardiography （ 2D speckle
tracking 法を用いた総肺静脈還流異常症の左房
機能解析）

桑原宏一郎
中沢洋三
濱田洋通

鈴木一浩

甲第1330号 Ｒ 4. 3.31 Role of advanced glycation end products in 駒 津 光 久
the longitudinal association between muscularstrength and psychotic symptoms among ado­lescents（思春期の筋力と精神病症状の縦断関連における最終糖化産物の意義）

髙橋
淳
杉山暢宏

河西彩香

甲第1331号 Ｒ 5. 3.31 Early phase increase in serum TIMP-1 in pa­ 古 庄 知 己
tients with acute encephalopathy with bipha­
sic seizures and late reduced diffusion（遅発性拡散低下を伴う二相性急性脳症患者における急性期血清 TIMP-1値の上昇）

関島良樹
中沢洋三
山中
岳

小池由美

甲第1332号 Ｒ 5. 3.31 Clinical study of pollen-food allergy syndrome 古 庄 知 己
estimated by double-blind, placebo-controlled
food challenges of ten apple cultivars（リンゴ
花粉―食物アレルギー症候群患者に対する10品
種のリンゴを用いた二重盲検プラセボ対照食物負荷試験による臨床的特徴の検討）

花岡正幸
中沢洋三
吉原重美

山下裕騎

甲第1333号 Ｒ 5. 3.31 Prognostic utility of albumin-bilirubin grade in 田 中 直 樹
Japanese patients with primary biliary cholan­
gitis（日本人原発性胆汁性胆管炎におけるアル
ブミン―ビリルビングレードによる予後予測の
有用性）

副島雄二
梅村武司
寺井崇二

倉沢伸吾

甲第1334号 Ｒ 4. 3.31 Serum positivity of tTG-IgA in Japanese Chil­ 中 沢 洋 三
dren with IBD（日本人小児 IBD 患者における血清抗組織トランスグルタミナーゼ IgA 抗体の陽性率に関する検討）

田中直樹
米倉真一
今井千速

小野元紀

甲第1335号 Ｒ 4. 3.31 Anti-tumor effect of Wasabi component, 6-(meth­ 副 島 雄 二
ylsulfinyl) hexyl isothiocyanate, against endo­
metrial carcinoma cells（ワサビ成分６-(meth­ylsulfinyl) hexyl isothiocyanate の子宮内膜癌細胞に対する抗腫瘍効果）

山田充彦
中沢洋三
高野政志

No. 5, 2023295

審査学位論文要旨

丸山悠太

甲第1336号 Ｒ 4. 3.31 Factors affecting day-to-day variations in tac­ 内 藤 隆 文
rolimus concentration among children andyoung adults undergoing allogeneic hemato­
poietic stem cell transplantation（小児および若年成人における同種造血幹細胞移植時のタク
ロリムス血中濃度の変動に影響を与える因子の
検討）

山田充彦
米倉真一
今井千速

中村

甲第1337号 Ｒ 5. 3.31 RhoA G17E/Vav1 signaling induces cancer in­ 伊 藤 研 一
vasion via matrix metalloproteinase-9 in gas­
tric cancer（胃癌における RhoA G17E/Vav1
シグナルはマトリックスメタロプロテアーゼ-9を介したがん浸潤を誘導する）

小泉知展
平塚佐千枝

井上貴浩

甲第1338号 Ｒ 4. 3.31 Development of Bilayered Bone Marrow- 柴
derived Cell-Gelatin Grafts for Augmentation
Cystoplasty and Reconstruction of Bladder
Tissues in Rats（膀胱組織を再構築する積層型
骨髄由来間葉系幹細胞グラフトの開発）

祐司

塩沢丹里
栗田
浩
三井貴彦

小田切宏樹

甲第1339号 Ｒ 5. 3.31 Efficacy of cetylpridium chloride mouthwash 田 中 直 樹
compared to povidone iodine on oral flora for
perioperative patient care : A randomized con­trolled feasibility study（周術期患者の口腔内細菌叢に対するポビドンヨードと比較した塩化
セチルピリジニウムの有効性：準ランダム化比
較試験）

工
穣
栗田
浩
宇田川信之

小川

甲第1340号 Ｒ 5. 3.31 Prospective cohort study for postnatal CMV in­ 古 庄 知 己
fection in preterm infants（早産児のおける後天性 CMV 感染に関する前向きコホート研究）

塩沢丹里
中沢洋三
森岡一朗

甲第1341号 Ｒ 5. 3.31 Clinical and molecular features of 66 patients 杠with musculocontractural Ehlers-Danlos syn­drome caused by pathogenic variants in CHST14(mcEDS-CHST14)（CHST14の病的バリアントを原因とする筋拘縮型エーラスダンロス症候群（mcEDS-CHST14）66症例の臨床的および分子学的特徴）

髙橋
淳
中沢洋三
倉橋浩樹

聡

亮

湊川真理

296

俊介

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

学位審査委員

名

学位授与
番
号

大塚りさ

甲第45号

Ｒ 4. 3.31 The changes in frailty and death within six 伊 澤
months of discharge in heart failure patients
80 years and older（80歳以上の心不全患者における退院後６か月以内の虚弱の変化と死亡）

西川良太

氏

授与年月日

博

士

論

文

名

査

副

淳

上村智子
務臺
均

甲第46号

Ｒ 4. 3.31 The effects of visual cues from optical stimula­ 横 川 吉 晴
tion devices on gait disturbance in patientswith Parkinsonʼs disease（光刺激装置による視覚的キューがパーキンソン病患者の歩行障害に及ぼす影響について）

百瀬公人
木村貞治

馬場孝浩

甲第47号

Ｒ 4. 3.31 Validity of temporo-spatial characteristics of gait 横 川 吉 晴
as an index for fall risk screening in communi­
ty-dwelling older people（地域在住高齢者の転倒リスク・スクリーニングの指標としての歩行における時間的・空間的パラメータの妥当性）

西澤公美
木村貞治

小林千世

甲第48号

Ｒ 4. 3.31 Reminiscence Activates the Frontal Lobe and 下 里 誠 二
Ameliorates Negative Mood States in Cogni­
tively Intact Older Adults（回想は認知機能が低下していない高齢者の前頭葉を活性化し，ネガティブな気分を改善する）

木村貞治
池上俊彦

藤本知宏

甲第49号

Ｒ 5. 3.20 Relative and absolute reliability of gait vari­ 木 村 貞 治
ables obtained from gait analysis with trunk
acceleration in community-dwelling individu­
als with chronic stroke : a pilot study（地域在住の慢性期脳卒中患者の体幹加速度を用いた歩行分析から得られる歩行変数の相対・絶対信頼性：予備研究）

横川吉晴
百瀬公人

小林

純

甲第50号

Ｒ 5. 3.20 Immature Platelet Fraction and its Kinetics in 松 田 和 之
Neonates（新生児における未成熟血小板分画とその動態）

中山佳子
石田文宏
井上克枝

須江慶太

甲第51号

Ｒ 5. 3.20 Preexisting brain lesions in patients with post 西 澤 公 美
stroke pusher behavior and their association
with the recovery period : A one year retrospec­tive cohort study in a rehabilitation setting（脳卒中患者の既往病変が pusher 現象の回復過程に与える影響：回復期リハビリテーション
病棟における１年間の後ろ向きコホート研究）

百瀬公人
横川吉晴
網本
和

小出将太

甲第52号

Ｒ 5. 3.20 Genomic Traits Associated with Virulence and 安 尾 将 法
Antimicrobial Resistance of Invasive Group B
Streptococcus Isolates with Reduced Penicillin
Susceptibility from Elderly Adults（高齢者より分離された侵襲性ペニシリン低感受性Ｂ群レンサ球菌の病原性と抗菌薬抵抗性に関するゲノ
ム特性）

長野則之
木村文一
髙橋
孝

No. 5, 2023

主

査

297

審査学位論文要旨

Antitumor effect of sclerostin against osteosarcoma（骨肉腫に対するスクレロスチンの抗腫
瘍効果）
出

田

宏

和

（論文の内容の要旨）

ティブコントロールの平均値を差し引き，補正を行っ【研究の背景と目的】骨肉腫は骨芽細胞系細胞に由来た。Scratch assay では，143B および LM8細胞をスする悪性腫瘍であり，異常な骨や類骨の形成が骨肉腫

クレロスチンで３日間処理した。細胞単層にピペットに共通する現象である。骨肉腫の治療には外科的治療

チップで傷をつけ，スクレロスチンを培地に再度添加と多剤併用化学療法が行われているが，過去数十年間した。経時的に画像を撮影し，スクラッチ領域の面積

は新薬が開発されておらず，生存率は頭打ちの状態とを定量化した。Migration assay には，孔径８μm のポなっている。

リカーボネートメンブレンのついた Transwell cham­Wnt 経路は，恒常性の維持や幹細胞の発生・成長・

ber kit を用いた。143B および LM8細胞はスクレロス

分化など，生体の幅広い現象を制御している。β カテ

チンで３日間処理した。無血清培地で懸濁した143B

ニンを介する古典的 Wnt 経路は，Wnt が Frizzled と細胞および LM8細胞をアッパーチャンバーに播種しLRP5/6の受容体複合体に結合し，β カテニンが細胞た。 血清を含む培地をボトムチャンバーに添加し，内に蓄積され，核に移行すると標的遺伝子の発現を制143B は４時間，LM8は16時間培養した。メンブレン

御し，細胞の増殖や分化を調節する。骨代謝において上面の非遊走細胞を綿棒で除去し，メンブレン下面の

古典的 Wnt 経路は骨芽細胞の分化・増殖を制御して細胞を固定・染色した。光学顕微鏡で無作為に選んだいる。

５つの領域で遊走細胞の数を計測した。

スクレロスチンは主に骨細胞から分泌される Wnt

In vivo の実験では，それぞれ C3H/He および BALB/

経路阻害因子のひとつで，骨形成を抑制し，骨量減少

c-nu/nu マウスの背部に移植し，骨肉腫モデルマウス

や骨粗鬆症を引き起こす。一方，抗スクレロスチン抗を作製した。スクレロスチンを腫瘍移植日より７日間

体はスクレロスチンに結合して古典的 Wnt 経路を活

連日腹腔内注射し，腫瘍サイズと生存期間を検討した。

性化させ骨形成を促進させる作用があり，骨粗鬆症治【結果】マウスおよびヒト骨肉腫細胞にスクレロスチ

療薬として利用されている。骨形成促進性の骨粗鬆症

ンを投与すると，AlamarBlue assay および scratch

治療薬は，動物実験において過量投与により骨肉腫を

assay において，マウスおよびヒト骨肉腫細胞の増殖

含む骨腫瘍の発生頻度が増加したという報告がある。

が優位に抑制され，migration assay においてマウス

しかし，スクレロスチンや抗スクレロスチン抗体によおよびヒト骨肉腫細胞の遊走が有意に抑制された。骨る骨肉腫への作用は不明である。そこで我々は，スク肉腫モデルマウスにスクレロスチンを投与すると，非レロスチンが骨肉腫に対して抑制的に作用するのでは投与群と比較して腫瘍の成長が有意に抑制され，生存ないかと仮説を立てた。本研究の目的は骨肉腫に対す期間が延長した。

るスクレロスチンの抗腫瘍効果を検討することである。

【考察】スクレロスチンは主に骨細胞から分泌され，【方法】マウス骨肉腫細胞株 LM8およびヒト骨肉腫細胞

骨組織に特異的に作用すると考えられている。スクレ

株143B を用いた。In vitro の実験で骨肉腫細胞株の増ロスチンを骨肉腫治療に臨床応用する際には，いくつ殖と遊走を評価した。細胞増殖の評価には AlamarBlue

かの利点がある。骨組織への特異性が高いため，全身

assay と scratch assay を用い，細胞遊走能の評価に的な副作用は軽度で，他の臓器への影響はほとんどなは migration assay を用いた。AlamarBlue assay では，い可能性がある。また，スクレロスチンはすべての骨

143B および LM8細胞株をスクレロスチンで３日間処肉腫に共通する定義である骨形成を阻害するため，多理した。96ウェルプレートに細胞を播種し，４時間接様性の高い骨肉腫であってもより多くの患者に有効か着させた後 alamarBlue 試薬を添加した。ネガティブコもしれない。さらに，スクレロスチンは細胞毒性を有ントロールとして，細胞を含まない培地に alamarBlue

さないため，既存の抗がん剤治療との併用が可能な可試薬を添加しないウェルを準備した。マニュアルに従能性がある。骨肉腫治療の主要薬剤の一つであるドキい３時間後の蛍光強度を測定した。測定値からネガ

ソルビシンは，骨肉腫の Wnt 経路を活性化させて薬

298

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

剤耐性を生じさせることが知られているが，Wnt 阻の増殖の評価に AlamarBlue assay と scratch assay

害剤であるスクレロスチンを併用することでドキソルを行い，遊走能の評価に migration assay を行った。

ビシンの薬剤耐性を克服できる可能性がある。

In vivo の実験では，LM8と143B をそれぞれ C3H/He（論文審査の結果の要旨）

および BALB/c-nu/nu マウスの背部に移植し，骨肉骨肉腫の治療には外科的治療と多剤併用化学療法が腫モデルマウスを作製した。スクレロスチンを腫瘍移行われているが，過去数十年間は新薬が開発されてい植日より７日間連日腹腔内注射し，生存期間と腫瘍体ない。Wnt 経路は生体の幅広い現象を制御しており，積の変化を評価した。

骨代謝において古典的 Wnt 経路は骨芽細胞の分化・調査結果は以下のとおりである。

増殖を制御している。スクレロスチンは主に骨細胞か

１．マウスおよびヒト骨肉腫細胞にスクレロスチンをら分泌される Wnt 経路阻害因子のひとつで，骨形成投与すると，骨肉腫細胞の増殖および遊走が有意にを抑制する。一方，抗スクレロスチン抗体はスクレロ抑制された。

スチンに結合して古典的 Wnt 経路を活性化させ骨形

２．骨肉腫モデルマウスにスクレロスチンを投与する

成を促進させる作用があり，骨粗鬆症治療薬として利と，非投与群と比較して腫瘍の成長が有意に抑制さ用されている。骨形成促進性の骨粗鬆症治療薬は，過れ，生存期間が延長した。

量投与により骨肉腫を含む骨腫瘍の発生が懸念される。

本研究により骨肉腫に対するスクレロスチンの抗腫

しかし，スクレロスチンや抗スクレロスチン抗体によ瘍効果が示唆された。今後，スクレロスチンの骨特異る骨肉腫への作用は不明である。我々はスクレロスチ性の有無や，モデルマウスにおける転移巣への影響なンが骨肉腫に対して抑制的に作用するのではないかとどについて評価する必要があるが，スクレロスチンを仮説を立て，骨肉腫に対するスクレロスチンの抗腫瘍

骨肉腫に対する治療薬として応用した場合，副作用や効果を評価した。

薬剤耐性といった既存の抗がん剤がもつ問題を解決でマウス骨肉腫細胞株 LM8およびヒト骨肉腫細胞株
143B を用いた。In vitro の実験では，骨肉腫細胞株

きる可能性がある。主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

A new remnant preservation technique reduces bone tunnel enlargement after anatomic
double-bundle anterior cruciate ligament reconstruction（解剖学的２重束前十字靭帯再建術における新しい遺残組織温存方法は術後骨孔拡大を抑制する）
小山

傑（論文の内容の要旨）

移植腱で remnant を挟むことにより，術後の前方安【目的】前十字靭帯損傷（ACL）に対する前十字靭帯

定性を向上させるものである。しかし，この新しい方再建術（ACLR）は標準的な術式であり，良好な成績

法が骨孔拡大に与える影響に関する研究はまだ行われが報告されているが，まだ解決すべき様々な合併症ていない。本研究の目的は，新しい remnant 保存法が存在する。再建靭帯を通す骨孔拡大はそのようなが術後の大腿骨および脛骨骨孔拡大に及ぼす影響を調ACLR 時の一般的な合併症の一つである。骨孔拡大

査 し ，remnant 切 除 も し く は remnant が 存 在 し なは，術後膝安定性に関連しないと報告されているが，かった症例と比較することである。研究仮説は，術後再 ACLR 時の治療戦略に影響を与える。近年，遺残骨孔拡大は remnant 切除した場合に比べ，この新し組織（remnant）温存併用 ACLR が行われ，固有感

い remnant 温存併用 ACLR 手技によって減少すると覚器官の温存，移植腱の血行再建・靭帯化，膝安定性いうものである。

などさまざまな効果が注目されている。remnant 温【患者と方法】2012年７月―2019年12月に当院で ACL存による骨孔拡大予防に関する報告も散見されるが，再建を行った患者のうち，再手術，複合靭帯損傷，経結果は一定ではない。一般的に remnant 温存は rem­

過観察１年未満，術前後 CT 未撮影，骨孔癒合例を除nant 内に移植腱を通して再建するが，remnant の力

外した150膝を後ろ向きに調査した。ACLR 時，鏡視学的機能に着目した新しい remnant 温存方法が報告

下に正常の50 ％以上の remnant の連続性が確認できされている。この手技は remnant の連続性を保ち，た症例は，全例温存を試みた。移植腱の anteromedi­

No. 5, 2023299

審査学位論文要旨

al（AM）束，posterolateral（PL）束で remnant をは，行う価値があると考えている。

挟み込むように温存した。骨孔作成後，remnant の【結論】新たな remnant 温存方法は，大腿骨，脛骨側連続性が残存しているものを温存群（Ｐ群：49膝），ともに全ての骨孔拡大を予防できた。

連続性が残せなかったものを切除群（Ｒ群：47膝）と（論文審査の結果の要旨）した。remnant が最初から存在しなかったものは欠前十字靭帯損傷（ACL） に対する前十字靭帯再損群（Ａ群：54膝）とした。術直後，術後１年 CT に建術（ACLR）は標準的な術式であり，良好な成績がて各骨孔（大腿骨 AM，大腿骨 PL，脛骨 AM，脛骨

報告されているが，まだ解決すべき様々な合併症がPL）面積を測定し，骨孔拡大率（［術後１年骨孔面積存在する。 再建靭帯を通す骨孔拡大はそのような―術後１週骨孔面積］/ 術後１週骨孔面積×100）を

ACLR 時の一般的な合併症の一つである。骨孔拡大は，３群間で比較した。また骨孔拡大率≧30 ％の割合を

術後膝安定性に関連しないと報告されているが，再３群間で比較した。術後骨孔拡大リスク因子を評価す

ACLR 時の治療戦略に影響を与える。近年，遺残組るため，remnant 温存の有無，年齢，性別，手術待織（remnant）温存併用 ACLR が行われ，固有感覚

機期間，脛骨後方傾斜，骨孔位置を独立因子として器官の温存，移植腱の血行再建・靭帯化，膝安定性な

単・多変量ロジスティック回帰分析を行った。

どさまざまな効果が注目されている。remnant 温存【結果】骨孔拡大率は，大腿骨―AM：Ｐ群27.1 ％，による骨孔拡大予防に関する報告も散見されるが，結Ｒ群61.2 ％，Ａ群59.8 ％，PL： Ｐ群49.3 ％，Ｒ群

果は一定ではない。 一般的に remnant 温存は rem­93.4 ％，Ａ群88.5 ％，脛骨―AM：Ｐ群2.5 ％，Ｒnant 内に移植腱を通して再建するが，remnant の力

群27.0 ％，Ａ群27.2 ％，PL：Ｐ群4.2 ％，Ｒ群32.9

学的機能に着目した新しい remnant 温存方法が報告％，Ａ群32.7 ％と全ての骨孔でＰ群は他２群よりもされている。この手技は remnant の連続性を保ち，有意に小さかった（全骨孔：Ｐ＜0.01）。骨孔拡大率

移植腱で remnant を挟むことにより，術後の前方安≧30 ％の割合は，大腿骨―AM：Ｐ群36.7 ％，Ｒ群定性を向上させるものである。しかし，この新しい方

80.9 ％，Ａ群77.8 ％，PL：Ｐ群65.3 ％，Ｒ群91.5 ％，法が骨孔拡大に与える影響に関する研究はまだ行われＡ群92.6 ％，脛骨―AM：Ｐ群10.2 ％，Ｒ群46.8 ％，ていない。

Ａ群38.9 ％，PL： Ｐ群12.2 ％，Ｒ群57.4 ％，Ａ群

そのため小山らは，実際に解剖学的二重束再建術を44.4 ％とＰ群はＲ群と比較して全ての骨孔で，Ａ群に施行した150例を，骨孔作成後に remnant の連続性が比較して大腿骨 AM と大腿骨 PL で有意に小さかった。

残存しているものを温存群（Ｐ群：49膝），連続性がロジスティック回帰分析では，全ての骨孔において，残せなかったものを切除群（Ｒ群：47膝），最初から

remnant 温存は骨孔拡大抑制の有意な因子であった。

存在しなかった欠損群（Ａ群：54膝）と３群に分け，【考察】本研究の最も重要な発見は，この新しい rem­CT における術後１週～術後１年の骨孔拡大率，骨孔nant 温存方法は全ての骨孔における骨孔拡大を抑制

拡大率≧30 ％の発生率を検討した。また骨孔拡大リした点である。骨孔拡大は，様々な生物学的要因と機スク因子について調査し，以下の結果を得た。

械的要因が相互作用した結果に発生すると報告されて１．骨孔拡大率は，大腿骨 anteromedial，大腿骨 pos­

いる。従来の remnant 内を通過させる方法でも術後terolateral，脛骨 anteromedial，脛骨 posterolateral

骨孔拡大を抑制した報告はあり， その理由は rem­

全ての骨孔でＰ群は他２群よりも有意に小さかった。

nant を温存することによって骨孔開口部から骨孔内

２．骨孔拡大率≧30 ％の発生率は，Ｐ群はＲ群と比への炎症性サイトカインの流入を抑制したことにある

較して全ての骨孔で， Ａ群に比較して大腿骨 an­と考察されている。しかし，remnant で全ての骨孔

teromedial と 大 腿 骨 posterolateral で 有 意 に 小 さ

開口部を覆うことはできないため，拡大抑制効果は覆かった。

うことが可能な一部の骨孔に限定されていた。本方法

３．ロジスティック回帰分析では，全ての骨孔においでは remnant が移植腱と早期に癒着したことにより，て，remnant 温存は骨孔拡大抑制の有意な因子で移植腱の micro motion や骨孔へのストレス軽減など，あった。

機械的要因を抑制することによって拡大を抑制したと

これらの結果により，新たな remnant 温存方法は，考えられた。本研究は簡便で特殊な器具も必要としな

大腿骨，脛骨側ともに全ての骨孔拡大を予防できるこい。ゆえに remnant の連続性が保たれている症例でとが明らかとなった。

300

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

主査，副査は，一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Effects of cardiac surgical support on long-term outcomes of emergent or complex percutaneous coronary intervention cases : a sub-analysis of the SHINANO 5-year registry（冠動脈疾患に対する経皮的冠動脈形成術施行施設の心臓血管外科の有無に伴う長期予後の検討：
SHINANO レジストリー５年間のサブ解析）
由井（論文の内容の要旨）

千

枝

を行った。

【目的】冠動脈疾患（CAD）に対する経皮的冠動脈形【結果】登録した1,665名の患者のうち，外科のある施成術（PCI）において技術とデバイスの進歩により手設で治療された1,257名の患者群では透析症例，末梢技の成功率，合併症の発生率が改善し PCI は CAD に

動脈疾患の既往，冠動脈バイパス術の既往の割合が高対する効果的な治療法となっている。そのため心臓血く，外科のない施設で治療された408名の患者群では管外科のサポートのない病院での治療数も増え，また緊急での PCI 症例，STEMI 症例の割合が有意に高い

最新版の日本循環器学会によるガイドラインにおいて傾向であった。グループ間でのカプランマイヤー分析

ST 上昇型心筋梗塞（STEMI）に対する primary PCIを行ったところ，長期予後，MACCE に関しての有は早期治療が望ましい観点から心臓血管外科のない施

意差は認めなかった。また，緊急 PCI 症例群，複雑設での PCI もクラスⅡa で推奨されている。近年，大病変群での心臓血管外科の有無によるサブグループ間

規模メタ解析などで心臓血管外科の有無によって比較でも長期予後，MACCE に関してそれぞれ有意CAD 患者に対する PCI の予後に差があるかを調査し差は認められなかった。

た報告がなされているが，有意差を認める結果は得ら【考察】本研究では，冠動脈疾患に対する PCI 施行施れていない。一方で待機的に治療を行うリスクを伴う設において心臓血管外科の有無では長期予後に有意差

複雑病変に関しては欧州心臓病学会のガイドラインでを認めないこと，また緊急性を要する STEMI などに

循環器系の集中治療が可能な医療機関でさらに十分な対する緊急症例や待機的な複雑病変に関しても心臓血経験を積んだオペレーターのみ PCI を実施すること

管外科の有無では治療成績や長期予後に有意差を認めをクラスⅡa で推奨しているが，これらリスクを伴うないことを明らかにした。この結果から現代において複雑病変への PCI に関して，心臓血管外科の有無で外科的なサポートのない施設でも CAD 患者に対しての長期予後を比較検討した研究は少ない。そこで本研

安全性の高い治療を提供できることが示唆される。特究では CAD に対して PCI を施行された患者において，に地理的な背景や全身状態から搬送が困難な患者に対緊急で PCI 施行された群，待機的に PCI を施行されして，より迅速な治療を要する緊急症例において外科

た複雑病変群も含めて，施設の心臓血管外科の有無別

施設のない病院での治療成績が長期的にみても劣らなに分類し初期治療の成功率，長期予後に関して比較検いという点に関しては CAD 患者にとって非常に有益討した。

な結果と言える。過去の大規模研究では CAD 患者全【方法】SHINANO 5 year registry は，長野県におい体に対する PCI の治療成績を心臓血管外科の有無にて2012年８月から2013年７月までに，PCI を施行されよって分類している研究がほとんどであるのに対し，た連続1,665名の虚血性心筋症患者を，５年間にわた本研究ではさらに緊急症例，複雑症例に対しての長期りフォローを行った。本研究では1,665名の患者を後予後を評価し検討できたことは大きな研究結果と言えろ向きに解析し患者は治療施設の心臓血管外科の有無る。ただ，本研究は単一の地方県での検討であり緊急で２グループに分類した。主要評価項目は全死亡と，症例，複雑症例事態の患者数が少ないことから今後さ

全死亡，心筋梗塞，脳卒中，血管内再狭窄を含めた主らなる研究が必要であると考える。また，地域特性と

要脳心血管イベント（MACCE）とした。

してハートチームとしての連携が行いやすい環境であまた，238名の緊急症例，ESC のガイドラインに準り適切に，症例を振り分けられている背景も本結果に拠した72名の待機的な複雑病変症例のサブグループに関連しているものと考えられる。PCI 施行時には外科関してもそれぞれ２グループに分類し予後の比較検討

的サポートが必要であることも多く，今後も CAD 患

No. 5, 2023301

審査学位論文要旨

者のより安全な治療のために状況に応じた各施設間おとした。
その結果，以下の結論を得た。

よび施設内でのハートチーム内での連携によるよい治

１．長野県において全死亡，MACCE ともに心臓血療を行っていく必要性がある。
（論文審査の結果の要旨）

管外科の有無は PCI 後の CAD 患者の長期予後に影響しない結果であった。

経皮的冠動脈形成術（PCI）は，冠動脈疾患（CAD）
患者に対して安全で有益な治療となり，心臓血管外科

２．病変自体の PCI の難易度に有意差はないが，患のない施設での施行も増えている。過去の研究では心者背景は心臓血管外科のある施設群でハイリスク症

臓血管外科の有無で比較した大規模研究において予後例の割合が多く，外科のない施設では STEMI や緊に有意差は認めていないが，長期予後の検討を行っ

急症例の割合が多い傾向であった。

ている研究はあまりない。また昨今，日本だけでな

３．サブグルール解析については STEMI，待機的な

く欧州のガイドラインにおいて，ST 上昇型心筋梗塞

複雑症例において全死亡，MACCE ともに有意差（STEMI）や待機的な複雑症例に対しての術者や治療は認められず，心臓血管外科の有無は長期予後に影施設に関する提言がなされているがそれらについて施

響しない結果であった。

設間の違いで比較検討した研究はない。本研究は長野

以上より本研究は， 長野県において PCI 施行施県において PCI を受けた CAD 患者の追跡調査である

設の心臓血管外科の有無は PCI 後の CAD 患者の長SHINANO registry のデータを基に心臓血管外科のあ期予後には影響しないことを明らかにした。 また，る病院，ない病院それぞれで PCI 患者の長期予後を

STEMI，待機的な複雑症例においても同様の結果で比較，検討することを目的とした。本研究では外科のあることを明らかにした。地方の医療圏における今後ある施設での PCI 症例1,257名，外科のない施設でのの PCI 施設や心臓血管外科の在り方を含め，地域のPCI 症例408名に分類し，またそれぞれの群においてCAD 患者にとって安全性の高い治療を維持していく

STEMI 患者，待機的な複雑症例患者などのサブグルー

ために各々の施設が持つ責務を果たしていくことの重プ別に，５年間のフォローを行った。主要評価項目は要性を示すものであり，臨床的に有用かつ意義の高い

全死亡，Ｑ波心筋梗塞，非致死性脳卒中，標的病変のものと考える。よって，主査，副査は一致して本論文

再血行再建を含めた主要脳心血管イベント（MACCE）

を学位論文として価値があるものと認めた。

Circulating T cells and resident non-T cells restrict type 2 innate lymphoid cell expansion
in the small intestine（循環Ｔ細胞および組織常在性非Ｔ細胞が小腸における２型自然リンパ球集団の拡大を制限する）
山

本

悠

太

（論文の内容の要旨）

い。我々は以前に獲得免疫が欠損している Rag1欠損【背景】自然リンパ球（innate lymphoid cells：ILCs）

マウスにおいて，siLP の ILC2の数が野生型に比べては組織常在性リンパ球で，炎症や感染の際と同様に多いことを報告した。そのことから，獲得免疫細胞がsteady state においても粘膜組織の維持に大きく関

siLP 中の ILC2数の上限を規定していると仮説を立て，わっている。ヘルパーＴ細胞の３つのサブセットと対検討を行った。

応するように，ILCs にも３つのサブセットが存在す【方法】複数の遺伝子改変マウス（Rag1-/-，Ihgm，

μMT/μMTる。すなわち，インターフェロン γ を産生する１型自然Stat6 ，RORc(γt)

リンパ球（ILC1），IL-5と IL-13を産生する ILC2，そしら採取した単核細胞を蛍光抗体で染色し，フローサイて IL-22を産生する細胞や胎児期の lymphoid tissue

トメトリーを用いて解析し，細胞数を算定した。CD4＋

inducer（LTi） 細胞に類似する細胞を含む RORγtＴ細胞の adoptive transfer は，同細胞を野生型マウ

依 存 性 ILC3 で あ る 。 肺 や 小 腸 粘 膜 固 有 層（ small

スの腸管膜リンパ節と脾臓から autoMACS を用いて

intestine lamina propria：siLP）の ILC2細胞集団の調整し，５×106個を尾静脈から注入し，４-５週間後

恒常性の維持には細胞間のクロストークや環境要因がに解析した。並体結合（parabiosis）については，麻影響していると考えられているが，詳細は明らかでな

酔下に２匹のマウスの肘関節から膝関節まで皮膚を切

302

-/-

gfp/gfp）を用いた。小腸粘膜固有層か

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

開し，上腕骨と大腿骨を縫合した後に皮膚を縫合閉鎖

トカインで，ILC2の機能を抑制することが知られてして行った。この際，白血球細胞がどちらのマウス由いるインターフェロン γ の受容体のノックアウトマウ

来 な の か を 確 認 す る た め に CD45.1/45.2 コ ン ジ ェ

スの siLP では，ILC2は増加していなかった。一方で，ニックマウスを用い，術後４-５週間後に解析した。

Th2細胞の分化に必須な Stat6および Th17の分化にＴ細胞の除去は，抗 CD3抗体もしくは抗 CD4抗体お

必須な RORγt をそれぞれ欠損するマウスの siLP のよび抗 CD8α 抗体の混合物を４週齢から１週間ごとに

ILC2はコントロールと比較して増加していた。しか５回以上腹腔内投与して行った。また，Ki67陽性細しながら，STAT6もしくは RORγt を欠く CD4＋Ｔ細胞ならびに5-Ethynyl-2’-deoxyuridine（EdU）含有

胞が Rag1-/-マウスに adoptive transfer されると，野水を３日間飲ませた後に，EdU 取り組み細胞の比率

生型 CD4＋ Ｔ細胞と同様に ILC2数を減少させた。まを測定して細胞増殖率の測定を行った。

た RORγt や STAT6を欠くマウスでは，野生型マウ-/-【結果】先天的にＴ，Ｂ細胞を欠く Rag1 マウスでは，スと parabiosis し，siLP に十分な野生型 CD4＋Ｔ細胞

コントロールマウスと比較して siLP の ILC2および複が存在していても，ILC2は野生型マウスのものより

数の ILC3サブセットの細胞数が増加していた。一方，も多いままであった。これらのことから，CD4＋Ｔ細抗 CD3抗体でＴ細胞を後天的に除去すると，ILC2の胞の ILC2数の制限は，Th 細胞のエフェクター機能数が増加したが，ILC3のダブル・ネガティブ以外のとは無関係であり，そしてＴ細胞非依存性で STAT6

サブセットでは細胞数が増加しなかった。Ｂ細胞欠損

および RORγt 依存的な組織常在性細胞による ILC2数

Ighm

制限機構が存在することが示唆された。

マウスでは，siLP の ILC2の数は同等でμMT/μMT-/-あった。 また，Rag1 マウスでも骨髄の ILC2 pre­【結論】この研究によって，steady state の siLP に

cursor の数に変化はなかった。 これらのことから，

お い て Ｔ 細 胞 に よ る 機 構 に 加 え て RORγt お よ び

Ｔ細胞は ILC2の発生・分化ではなく恒常性に影響を

STAT6に依存的な機構を通じて ILC2数が制限されて与えていると考えられた。一方で，抗 CD4抗体と抗いることが初めて明らかになった。アレルギーや寄生CD8α 抗体によって conventional T 細胞を除去しても，虫感染の際の２型免疫応答には組織の ILC2が大きく

抗 CD3抗体を用いた場合とは対照的に ILC2数の増加

関 与 し て い る こ と か ら ，ILC2 集 団 を ホ メ オ ス タ

はみられなかった。このとき，TCRγδ または TCRαβ

ティックに制御する細胞間の相互作用を更に詳しく明－－を発現するダブル・ネガティブ（CD4 CD8 ）Ｔ細胞

らかにすることはこれら疾患の病因，病態の理解につの増加がみられたことから，conventional single posi­

ながるものと期待される。

tive T 細胞と同様に，これら非定型Ｔ細胞も ILC2数（論文審査の結果の要旨）
自然リンパ球（innate lymphoid cells：ILCs）は組の制限が可能であることが示唆された。
-/-

逆に Rag1 マウスに野生型マウスの脾臓および腸＋織常在性リンパ球で，炎症や感染の際と同様に steady

間膜リンパ節から採取精製した CD4 Ｔ細胞を trans­

state においても粘膜組織の維持に大きく関わっていfer すると，siLP の ILC2が減少した。同様に，野生型

る。ILCs には３つのサブセットが存在し，ILC2は-/-マウスとの parabiosis によって Rag1 マウスにＴ細IL-5と IL-13を産生することを特徴とする。肺や小腸胞とＢ細胞を経循環的に流入させると，siLP の ILC2

粘膜固有層（small intestine lamina propria：siLP）が減少した。Rag1-/-マウスの NKp46＋ ILC3の Ki-67の ILC2細胞集団の恒常性の維持には細胞間のクロス＋

陽性率は，CD4 Ｔ細胞の transfer や野生型マウスとトークや環境要因が影響していると考えられているが，の parabiosis によって著明に低下したが，ILC2に関詳細は明らかでない。獲得免疫が欠損している Rag1-/-

してはそのような変化は認めなかった。Rag1 マウ

欠損マウスにおいて，siLP の ILC2の数が野生型に比スでは，siLP において特に若いマウスで NKp46陽性

べて多いことから，獲得免疫細胞が siLP 中の ILC2数

ILC3の EdU 陽性率がコントロールマウスと比較しての上限を規定していると仮説を立て，検討を行った。

高かったが，ILC2に関してはほぼ同等であった。こ複数の遺伝子改変マウスを用い，小腸粘膜固有層

れらのことから，Ｔ細胞が siLP 中の細胞集団サイズ

から採取した単核細胞を蛍光抗体で染色し，フローを制御する機序は ILC2と ILC3で異なり，前者では増サイトメトリーを用いて解析し，細胞数を算定した。

殖の抑制とは異なることが分かった。

Rag1-/-に 対 す る CD4＋ Ｔ 細 胞 の adoptive transfer ，１型ヘルパーＴ細胞（Th1）が産生する主要なサイ
No. 5, 2023

Rag1-/-と野生型マウスの並体結合（parabiosis）よる
303

審査学位論文要旨

Ｔ細胞の移入を行った。また，depletion 抗体による

３．Ｔ細胞が siLP 中の細胞集団サイズを制御する機

Ｔ細胞の除去は，抗 CD3抗体もしくは抗 CD4抗体お

序は ILC2と ILC3で異なり，後者は増殖の抑制だが，よび抗 CD8α 抗体の混合物を腹腔内投与して行った。

前者では増殖の抑制とは異なるメカニズムであった。

Ki-67 の 核 内 染 色 お よ び 5-Ethynyl-2’-deoxyuridine

４．CD4＋ Ｔ細胞の ILC2数の制限は，Th 細胞のエ

（EdU）含有水を用いた EdU 取り組み実験を行い，細胞フェクター機能とは無関係であり，そしてＴ細胞非増殖率の測定を行った。さらに，ILC2の数に対する依存性で STAT6および RORγt 依存的な組織常在ヘルパーＴ細胞（Th） の effector function の影響，性細胞による ILC2数制限機構が存在することが示

および STAT6と RORγt 依存的な組織常在性細胞の唆された。

影響を検討した。

以上の結果から，steady state の siLP において，

その結果，山本は次の結論を得た。

Ｔ細胞による機構に加えて RORγt および STAT6に

１．Ｔ細胞が先天的に欠損するマウスでは，siLP の依存的な機構を通じて ILC2数が制限されていると結ILC2の数が増加していた。また，抗 CD3抗体を用論付けた。アレルギーや寄生虫感染の際の2型免疫応

いてＴ細胞を後天的に欠損させても，ILC2が増加し答には組織の ILC2が大きく関与している。ILC2集団

た。Rag1欠損マウスでは骨髄の ILC2 precursor のを恒常的に制御する細胞間の相互作用を更に詳しく明数に変化はなかった。

らかにすることは，これら疾患の病因，病態の理解に

２．adoptive transfer および並体結合（parabiosis）-/-

よって Rag1 マウスにＴ細胞の移入すると，ILC2

つながるものと期待され，主査，副査は一致して本論
文を学位論文として価値があるものと認めた。

の数が減少した。

An epilepsy-associated mutation of salt-inducible kinase 1 increases the susceptibility toepileptic seizures and interferes with adrenocorticotropic hormone therapy for infantile
spasms in mice（Salt-induced kinase１遺伝子のてんかん関連変異はてんかん発作の感受性を高めるとともに，マウスの点頭てんかんに対する ACTH の効果を減弱させる）
Pang Bo
（論文の内容の要旨）

ACTH was administrated intraperitoneally to exam­【Background and Aims】Salt-inducible kinase 1 (SIK1)

ine the rescue effect in SIK1-MT and wild-type con­is an AMP-activated protein kinase (AMPK) with in­trol mice. We also analyzed electrophysiological prop­

ducible expression in the adrenal cortex in response toerties of the cortical neurons in SS using patch clamp

the salt intake or adrenocorticotropic hormone (ACTH).

recordings.

Six mutations in the salt-inducible kinase 1 (SIK1)-【 Results 】SIK1-MT mice grow normally without

coding gene have been identified in patients withshowing early lethality. In the SIK1-MT mice, weearly infantile epilepticencephalopathy (EIEE-30) ac­

found NMDA-induced spasms are more severe. Using

companied by autistic symptoms. Two of the muta­

patch clamp electrophysiology, we found input resis­

tions are nonsense mutations that truncate the C-

tance and the number of action potentials was in­terminal region of SIK1. Although the relevance be­creased in SIK1-MT mice and an increase in thetween the SIK1 mutation and autistic behaviors has

density of c-fos positive cells in 12 out of 126 brain

been uncovered in SIK1-MT mice, the effect of theregions by immunohistochemistry against c-fos, and

SIK1 mutation on epilepsy remains unknown.

pretreatment of ACTH did not alleviate the severity【Materials & Methods】To study the effects of theseof NMDA-induced spasms in SIK1-MT mice. We

mutations on the disorder, we injected NMDA or PTZ

also found that SIK1 is involved in temporal lobe epi­

into SIK1-MT males to induce epileptic seizures inlepsy by PTZ-induced seizure, and the neural cir­mice. Activated brain regions were identified by im­cuits activated by PTZ and NMDA injection may bemunohistochemistry against c-fos, Iba1, and GFAP.

different base on the laminar distribution of c-fos

304

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

positive cells in the somatosensory cortex.

tations on epilepsy, NMDA or PTZ was injected into

【Conclusion】Altogether, epilepsy-associated SIK1

SIK1-MT males to induce epileptic seizures. I stud­mutant mice were subjected to NMDA- and PTZ-

ied these epilepsy model by focusing on the suscepti­

induced seizures, rodent models for infantile spasms,

bility to epileptic seizures and adrenocorticotropic

and temporal lobe epilepsy. As suggested in humanhormone therapy for infantile spasms and foundclinical research, our data support the hypothesis

following :that the SIK1 gene is closely associated with epilep­

１．Seizure susceptibility induced by both NMDA

tic seizures and raise the notion that SIK1 may be
involved in the molecular pathway underlying theand PTZ was enhanced in SIK1-MT mice.
２．Distinct brain regions were activated in NMDAinduced seizures.

ACTH therapy for infantile spasms.
（論文審査の結果の要旨）

３．No microglial activation was detected in NMDA-

Salt-inducible kinase 1 (SIK1) is an AMP-activatedprotein kinase (AMPK) with inducible expression in
the adrenal cortex in response to the salt intake or

induced seizures.
４．SIK1-MT canceled the effect of ACTH treatment
on NMDA-induced seizures.

adrenocorticotropic hormone (ACTH). Six mutations

５．Distinctive neurons within the cortical layer for­in the salt-inducible kinase 1 (SIK1)-coding genemation were activated in NMDA- or PTZ-induced

have been identified in patients with early infantile

seizures.

epilepticencephalopathy (EIEE-30) accompanied by

The committee chair and vice chairs evaluated that

autistic symptoms. To study the effects of these mu­

the thesis deserved a doctoral dissertation.

Subfascial infiltration of 0.5 ％ ropivacaine, but not 0.25 ％ ropivacaine, exacerbates damage
and inflammation in surgically incised abdominal muscles of rats（0.5 ％ロピバカインによる筋膜下浸潤麻酔は，外科的切開後の筋損傷と炎症を増悪するが，0.25 ％ロピバカインはそれらを増悪しない）
SHEN DANDAN（論文の内容の要旨）

my：LAP） は， 吸入麻酔下に右側最下部肋骨から【背景と目的】 局所麻酔薬の創部浸潤麻酔は神経ブ

0.5 cm 離れた腹部の皮膚を2.5 cm 斜切開し，さらにロックと比較して手技が比較的容易であり，様々な手筋肉（外腹斜筋，内腹斜筋，腹横筋）を２cm 切開し術において術後鎮痛効果があり，周術期のオピオイドて作成した。局所麻酔薬は，以下の二種類の方法で投の使用量を減少させることが知られている。特に開腹与した。⑴ 実験１（単回投与）：開腹手術モデル作成

手術でも創部浸潤麻酔が広く実施されているが，鎮痛，後，0.25 ％ロピバカイン（LAP＋0.25 ％RPV 群）効果を発揮するためには比較的大量の局所麻酔薬投与

0.5 ％ロピバカイン（LAP＋0.5 ％RPV 群）または生が必要である。これまでの研究では，正常な骨格筋に

理食塩水（LAP＋saline 群）100 μl を切開線に沿って対して筋内投与した場合の局所麻酔薬の筋毒性やアポ筋膜下に単回投与した。⑵ 実験２（繰り返し投与）：

トーシス作用が報告されているが，切開した筋組織に開腹手術モデルを作成後，先端に15個のサイドホール

対する低濃度の局所麻酔薬の影響については十分に調のついた15 cm のカテーテルを筋膜下に留置した。

査されていない。本研究では，ラットの開腹手術モデ

0.25 ％ロピバカイン（LAP＋repeated 0.25 ％RPV

ルを用いて，臨床的に頻用される局所麻酔薬の一つで群），0.5 ％ ロ ピ バ カ イ ン（ LAP＋repeated 0.5 ％あるロピバカインを0.25 ％と0.5 ％の濃度で創部筋膜

RPV 群），または生理食塩水（LAP＋repeated saline下に投与し，切開した筋組織の損傷，炎症反応，およ群）100 μl を切開直後と切開１日後，２日後，３日後，び筋再生に及ぼす影響と鎮痛効果を検討した。

４日後にカテーテルから注入した。

【材料及び方法】本研究は，６-７週齢雄性 Sprague-

２種類の実験において，自発痛の指標である Rat

Dawley ラットを用いた。開腹手術モデル（Laparoto­

Grimace Scale（RGS）と von Frey フィラメントを用

No. 5, 2023305

審査学位論文要旨

いた腹部創部近傍の逃避閾値（abdominal constriction

切開した筋肉の損傷を更に増悪させたことを示唆する。

threshold：ACT）の経時的変化を記録した。また，

0.5 ％ロピバカインは，筋再生のマーカーの発現も増

切開５～10日後に， 筋組織を取り出し，hematoxy­

加させたが，筋損傷が増悪した二次的な結果をみていlin-eosin（HE）染色を行い，筋損傷の領域を調査しる可能性がある。

た。さらに，炎症反応，および筋再生に及ぼす影響を【結論】本研究では0.25 ％ロピバカインの単回・繰り検討するために，切開２～５日後に，筋組織を取り出返し投与は，切開筋近傍の筋損傷に影響を与えないこし，マクロファージ全体の標識マーカー（CD68）やとが示された。一方，筋内投与でなくても，切開筋近筋再生マーカー（MyoD）を用いて免疫染色を行った。

傍に臨床使用濃度である0.5 ％ロピバカインを投与し【結果】実験１（単回投与）：切開２時間後に，LAP＋た場合，骨格筋の損傷をさらに悪化させる可能性が示

saline 群と比較して，LAP＋0.25 ％RPV 群と LAP＋された。今後，有益性と有害性のバランスを考慮しな

0.5 ％RPV 群で自発痛と機械性痛覚過敏は有意に軽がら，筋切開近傍の創部浸潤麻酔に使用する局所麻酔減したが，それ以降は観察期間を通して三群間に有意薬の最適な濃度と投与量についてさらに検討する必要差はなかった。また，LAP＋0.25 ％RPV 群と LAP＋がある。

0.5 ％RPV では鎮痛効果に差はなかった。HE 染色に（論文審査の結果の要旨）

おいて，切開後の筋損傷の領域は，切開５，10日後に，開腹手術では，創部浸潤麻酔が広く実施されている

LAP＋0.5 ％RPV 群は LAP＋saline 群と比較して有が，鎮痛効果を発揮するためには比較的大量の局所麻意に拡大した。筋組織の免疫染色において，LAP＋酔薬投与が必要である。これまでの研究において，正0.5 ％RPV 群は，LAP＋saline 群と比較して，切開２，

常な骨格筋に対して筋内投与した場合の局所麻酔薬の５日後に，CD68の発現が有意に増加し，切開５日後

筋毒性やアポトーシス作用が報告されているが，切開に，MyoD の発現が有意に増加した。一方，LAP＋した筋組織に対する低濃度の局所麻酔薬の影響につい0.25 ％RPV 群は，LAP＋saline 群と比較して筋損傷ては十分に調査されていない。そこで SHEN DAN­の領域，CD68と MyoD の発現に有意差はなかった。

DAN は，局所麻酔薬の切開した筋組織の損傷，炎症

実験２（繰り返し投与）：カテーテルを介した繰り

反応，および筋再生に及ぼす影響と鎮痛効果を検討し返しの局所麻酔薬投与によって，２時間後の機械性痛た。

覚過敏は有意に軽減した。HE 染色において，切開５，

本研究では，ラットの開腹手術モデルを用いて，臨10日後の LAP＋repeated 0.5 ％RPV 群の筋損傷の領床的に頻用される局所麻酔薬の一つであるロピバカイ

域は，LAP＋repeated saline 群と比較して有意に拡ン（RPV）を0.25 ％と0.5 ％の濃度で二種類の方法

大した。LAP＋repeated 0.5 ％RPV 群の切開５日後（単回投与および繰り返し投与）で筋膜下に投与し，の筋組織の CD68と MyoD の発現は，LAP＋saline 群

以下の検討を行った。

と比較して有意に増加した。一方，LAP＋repeated

１．行動評価として自発痛の観察，機械刺激に対する0.25 ％RPV 群は，LAP＋repeated saline 群と比較し逃避閾値測定て，筋損傷の領域，CD68と MyoD の発現に有意差は２．HE 染色を用いた筋損傷の領域の調査

なかった。

３．免疫染色による CD68発現の検討（炎症反応に及【考察】本研究では，臨床を模した投与量と濃度のロ
ピバカインを，筋切開近傍の筋膜下に投与した。ロピ

ぼす影響の検討）
４．免疫染色による MyoD 発現の検討（筋再生に及バカインによる一過性の鎮痛効果がみられたことは，ぼす影響の検討）

臨床における報告と矛盾しない。また，本研究においその結果，以下の結果を得た。

ては，0.25 ％と0.5 ％のロピバカインの鎮痛効果に差

１．0.25 ％RPV と0.5 ％RPV の単回投与では，切開はなかった。0.25 ％ロピバカインの筋膜下への単回

２時間後の自発痛，機械性痛覚過敏が軽減した。一または反復投与は，開腹手術後の筋損傷，炎症反応，方，0.25 ％RPV と0.5 ％RPV の繰り返し投与では，筋再生に影響を与えなかった。一方，開腹後の創部近投与２時間後の機械性痛覚過敏が軽減した。

傍に0.5 ％ロピバカインの筋膜下浸潤麻酔を行った場

２． 単回投与，繰り返し投与共に，0.25 ％RPV 群と合，HE 染色では筋損傷領域の拡大と，CD68の発現

0.5 ％RPV 群を比較して鎮痛効果に差はなかった。

増加がみられた。この結果は，0.5 ％ロピバカインが３．筋損傷の領域は，単回投与，繰り返し投与共に切

306

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

開５，10日後に，0.5 ％RPV 群は saline 群と比較の発現に有意差はなかった。

して有意に拡大した。

以上より，0.25 ％ロピバカインの単回・繰り返し

４．CD68の発現は，単回投与において，切開２，５日

投与は，切開筋近傍の筋損傷に影響を与えないことが後に，0.5 ％RPV 群は saline 群と比較して有意に示された。一方，筋内投与でなくても，切開筋近傍に増加した。一方，繰り返し投与では，切開５日後に，臨床使用濃度である0.5 ％ロピバカインを投与した場

0.5 ％RPV 群は saline 群と比較して有意に増加し合，骨格筋の損傷をさらに悪化させる可能性が示された。

た。0.25 ％ロピバカインは鎮痛効果もあり，切開筋

５．MyoD の発現は，単回投与，繰り返し投与共に，切開５日後に，0.5 ％RPV 群は saline 群と比較してに筋損傷を悪化させないことは，有益な情報であると考える。
以上の結果から，主査，副査は一致して本論文を学有意に増加した。
６．0.25 ％RPV 群は，単回投与，繰り返し投与共に位論文として価値があるものと認めた。

saline 群と比較して筋損傷の領域，CD68と MyoD

Dietary fat composition affects hepatic angiogenesis and lymphangiogenesis in HCV coregene transgenic mice（食事中脂肪組成はＣ型肝炎ウイルスコア遺伝子トランスジェニックマ
ウスの肝血管新生およびリンパ管新生に影響を与える）
DIAO PAN（論文の内容の要旨）

ysis, and immunohistochemistry.

【Introduction】Previous research has demonstrated【Results】Long-term feeding of SFA and TFA dietsthat an isocaloric diet rich in trans fatty acid (TFA),

to HCVcpTg mice increased the expressions of vas­saturated fatty acid (SFA), and cholesterol (Chol) pro­cular endothelial cell indicators, such as CD31 andmoted steatosis-derived hepatic tumorigenesis in hep­

TEK tyrosine kinase, in addition to lymphatic vessel

atitis C virus core gene transgenic（HCVcpTg）mice

endothelial hyaluronan receptor 1, indicating that an­

in different manners. Growth factor signaling andgiogenesis/lymphangiogenesis were up-regulated

ensuing angiogenesis/lymphangiogenesis are key fac­

only by these fatty acid-enriched diets. This promot­

tors in hepatic tumorigenesis that have become re­ing effect correlated with elevated VEGF-C and FGF

cent therapeutic targets for hepatocellular carcino­

receptor 2 and 3 levels in the liver. c-Jun N-terminal

ma. However, the influence of dietary fat composition

kinase (JNK) and hypoxia-inducible factor (HIF) 1α,

on these factors remains unclear. This study investi­

both key regulators of VEGF-C expression, were en­gated whether the type of dietary fat would have ahanced in the SFA- and TFA-rich diet groups as

specific impact on hepatic angiogenesis/lymphangio­

well. The Chol diet significantly increased the ex­genesis in HCVcpTg mice.

pressions of such growth factors as FGF2 and PDGF

【Methods】Male HCVcpTg mice were treated with

subunit B (PDGF-B), without any detectable impact

a control diet, an isocaloric diet containing 1.5 ％ cho­on angiogenesis/lymphangiogenesis.

lesterol (Chol diet), or a diet replacing soybean oil with

【Conclusion】This study revealed that diets rich inhydrogenated coconut oil (SFA diet) for a period of 15

SFA and TFA, but not Chol, might stimulate hepaticmonths, or with shortening (TFA diet) for 5 months.

angiogenesis/lymphangiogenesis mainly through the

The degree of angiogenesis/lymphangiogenesis and

JNK-HIF1α-VEGF-C axis. Our observations indicate

the expression of growth factors, including fibroblast

an importance of dietary fat species for preventing

growth factor (FGF), vascular endothelial growth fac­

hepatic tumorigenesis.

tor (VEGF), and platelet-derived growth factor (PDGF),（論文審査の結果の要旨）

were evaluated in non-tumorous liver tissues using

Previous research has demonstrated that an isoca­

quantitative mRNA measurement, immunoblot anal­

loric diet rich in trans fatty acid (TFA), saturated

No. 5, 2023307

審査学位論文要旨

fatty acid (SFA), and cholesterol (Chol) promoted ste­１． Long-term feeding of SFA and TFA diets to

atosis-derived hepatic tumorigenesis in hepatitis C

HCVcpTg mice increased the expressions of vas­virus core gene transgenic (HCVcpTg) mice in differ­cular endothelial cell indicators, such as CD31 andent manners. Growth factor signaling and ensuing

TEK tyrosine kinase, in addition to lymphatic ves­

angiogenesis/lymphangiogenesis are key factors insel endothelial hyaluronan receptor 1, indicating

hepatic tumorigenesis that have become recent ther­that angiogenesis/lymphangiogenesis was up-

apeutic targets for hepatocellular carcinoma. Howev­

regulated only by these fatty acid-enriched diets.

er, the influence of dietary fat composition on theseThis promoting effect correlated with elevatedfactors remains unclear. This study investigated

VEGF-C and FGF receptor 2 and 3 levels in thewhether the type of dietary fat would specificallyliver.

impact hepatic angiogenesis/lymphangiogenesis in２． c-Jun N-terminal kinase (JNK) and hypoxiainducible factor (HIF) 1α, both key regulators of

HCVcpTg mice.

VEGF-C expression, were enhanced in the SFA-

Male HCVcpTg mice were treated with a control

and TFA-rich diet groups as well.

diet, an isocaloric diet containing 1.5 ％ cholesterol(Chol diet), or a diet replacing soybean oil with hy­

３．The Chol diet significantly increased the expres­drogenated coconut oil (SFA diet) for a period of 15

sions of such growth factors as FGF2 and PDGF

months, or with shortening (TFA diet) for 5 months.

subunit B (PDGF-B), without any detectable impact

The degree of angiogenesis/lymphangiogenesis andon angiogenesis/lymphangiogenesis.

the expression of growth factors, including fibro­

This study revealed that diets rich in SFA andblast growth factor (FGF), vascular endothelial growth

TFA, but not Chol, might stimulate hepatic angio­

factor (VEGF), and platelet-derived growth factor

genesis/lymphangiogenesis mainly through the(PDGF), were evaluated in non-tumorous liver tis­

JNK-HIF1α-VEGF-C axis. Our observations indicate

sues using quantitative mRNA measurement, immu­

the importance of dietary fat species for preventing

noblot analysis, and immunohistochemistry.

hepatic tumorigenesis.
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値As a result,「DIAO PAN」obtained the followingがあるものと認めた。

conclusions.

LGR5 expression is associated with prognosis in poorly differentiated gastric adenocarcinoma（低分化胃腺癌において LGR5の発現は予後と関連する）
江

原（論文の内容の要旨）

毅人

Ⅳの10例を除外し，ステージⅡ/Ⅲの41例を解析対象【背景と目的】Leucine-rich repeat-containing G-とした。LGR5 mRNA の発現を RNA in situ hybrid­

protein-coupled receptor 5（LGR5） は Wnt/β カテ

ization（RNA ISH）を用いてグレード０から４までのニン―シグナル伝達経路の標的遺伝子の一つである。

５段階で評価し，グレード０から２を低発現群（LGR5-

腸管上皮の幹細胞マーカーとして知られているが，癌L），グレード３から４を高発現群（LGR5-H）と定義

幹細胞マーカーとしての可能性も報告されている。本

し，臨床病理学的因子と比較検討した。

研究はステージⅡ/Ⅲの低分化胃癌における LGR5の【結果】41例中38例で LGR5 mRNA の発現を認め，そ発現と臨床病理学的因子について検討し，予後不良でのうち17例は LGR5-H であった。臨床病理学的因子

ある低分化胃癌における LGR5発現の意義を明らかにとの比較検討では75歳以上（p＝0.0472）と男性（p＝することを目的とした。

0.0498）が LGR5-H と有意な関連性を示したが，EBV【方法】2008年から2018年の間に長野県内の６施設で感染，脈管侵襲，TIL（Tumor-infiltrating lympho­切除された低分化胃癌91例の内，再評価によって低分cyte）スコア，高頻度マイクロサテライト不安定性，化成分を含まない５例，ステージⅠの35例，ステージ

びまん型，TNM 病期分類は LGR5の発現とは有意な

308

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

関連は見られなかった。全生存率解析では LGR5-Lる RNA in situ hybridization（RNA ISH）を用いたの５年生存率が64.3 ％なのに対し LGR5-H は22.0 ％LGR5発現と胃癌の臨床病理学的因子を検討した研究と LGR5-H が有意に予後不良であった（p＝0.0108）。

は少ない。RNA ISH を用いた既報では胃癌において累積生存率に対する多変量解析では予後不良因子としLGR5発現は予後に影響を及ぼさなかったと報告しててステージⅢ（HR＝0.36，95 ％CI 0.13-0.89，p＝いるが，組織型やステージ別の検討がなされておらず，

0.026）と LGR5-H（HR＝3.48，95 ％CI 1.36-9.22，

さらなる検討の余地があると考えた。そこで予後不良

p＝0.01）が抽出された。

であるステージⅡ/Ⅲの低分化胃癌における LGR5の【考察】LGR5に対する免疫染色は特異性が低く，正確発現と臨床病理学的因子との関連を RNA ISH を用いな評価が困難である。近年，免疫染色より特異性の高て調べることとした。

い評価方法として RNA ISH の手法が開発された。免2008年から2018年の間に長野県内の６施設で切除さ疫染色を用いた評価ではステージⅠ/Ⅱの胃癌におけれた低分化胃癌91例の内，再評価によって低分化成分

る LGR5高発現は予後不良因子として報告されたが，を含まない５例，ステージⅠ35例，ステージⅣ10例を

近年の RNA ISH を用いた研究では，LGR5の発現が除外し，41例を解析対象とした。LGR5 mRNA の発胃癌の予後に関連しないと報告された。前者は再発リ

現を RNA ISH を用いてグレード０から４までの５段

スクの低いステージⅠ/Ⅱ，後者は全ステージを対象階で評価し，グレード０から２を低発現群（LGR5-L），とし，両研究共に組織型別には解析されていなかった。

グレード３から４を高発現群（LGR5-H）と定義し，基礎研究では LGR5は遊走能や上皮間葉転換（EMT）

臨床病理学的因子と比較検討した。

を制御する分子であることが明らかになっており，予その結果41例中38例で LGR5 mRNA の発現を認め，後不良な低分化腺癌や再発リスクの高いステージⅡ/

そのうち17例は LGR5-H であった。臨床病理学的因

Ⅲ胃癌においては，さらなる検討の余地があると考え子との比較検討では75歳以上（p＝0.0472） と男性

本研究を行った。我々の仮説通り，ステージⅡ/Ⅲの（p＝0.0498）が LGR5-H と関連したが，EBV 感染，

低分化胃癌における LGR5高発現は予後不良因子とし脈管侵襲，TIL（Tumor-infiltrating lymphocyte）スコて抽出された。本研究で予後不良であった要因として

ア，MSI-H，びまん型，TNM 病期分類は LGR5の発は，LGR5が制御する癌幹細胞や EMT の関連が予想

現とは有意な関連は見られなかった。全生存率解析でされ，LGR5が低分化胃癌のバイオマーカーや治療標

は LGR5-L の5年生存率が64.3 ％なのに対し LGR5-

的になる可能性が示唆された。

H は22.0 ％と LGR5-H が有意に予後不良であった【結語】ステージⅡ/Ⅲの低分化胃癌において LGR5高（p＝0.0108）。累積生存率に対する多変量解析では発現は予後不良と関連していた。LGR5の胃癌での役

予後不良因子としてステージⅢ（HR＝0.36（0.13-

割はまだ解明されていない部分が多く，更なる研究が0.89），p＝0.026）と LGR5-H（HR＝3.48（1.36-9.22），必要である。

p＝0.01）が検出された。
（論文審査の結果の要旨）

これらの結果よりステージⅡ/Ⅲの低分化胃癌におLGR5（Leucine-rich repeat-containing G-protein-

いて LGR5高発現が予後不良因子であることが明らか

coupled receptor 5）は胃癌の癌幹細胞としての機能になった。

が報告されている。既報では免疫染色を用いて解析している報告が多いが，感度・特異度が高いとされていよって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Comparison of differences and random errors in pedicle diameter measurements between
MRI and CT : observational study of 315 pedicles in lenke type 1 adolescent idiopathic scoliosis patients（MRI と CT による椎弓根径測定の違いとランダムエラーの比較：Lenke1型思
春期特発性側弯症患者における315椎弓根の観察的研究）
畠

中

輝

枝

（論文の内容の要旨）

は，一般的に椎弓根スクリューを用いた脊椎後方固定【背景と目的】思春期特発性側弯症（AIS）の治療に術が用いられている。放射線被曝を低減するために，

No. 5, 2023309

審査学位論文要旨

CT 以外の方法で術前に椎弓根径を決定することが望精度は近いうちに向上すると思われる。

ましいとされている。MRI と CT による椎弓根径の（論文審査の結果の要旨）

測定値の違いを調査し，関連する因子を検討すること

思春期特発性側弯症（AIS）の治療には，一般的にを目的とする。研究デザインは横断的研究を用いた。

椎弓根スクリューを用いた脊椎後方固定術が用いられ【方法】2009年４月～2019年10月に脊椎後方固定術をている。放射線被曝を低減するために，CT 以外の方施行した AIS Lenke 1型21名（女性19名，男性２名，

法で術前に椎弓根径を決定することが望ましいとされ手術時平均年齢：15.4歳）を対象とした。MRI と CTている。MRI と CT による椎弓根径の測定値の違い

でそれぞれ撮影された T1から L3までの左右の椎弓根を調査し，関連する因子を検討することを目的とした。

の内径と外径を２人の脊椎外科医が別々に測定し，統研究デザインは横断的研究を用いた。
2009年４月～2019年10月に脊椎後方固定術を施行し計的に比較した。
【結果】CT，MRI による椎弓根外径および内径の測た AIS Lenke 1型21名（女性19名，男性２名，手術時定値平均は，どの椎体においても有意差は認めなかっ

平均年齢：15.4歳）を対象とした。MRI と CT でそた。CT，MRI による測定値平均の差（CT-MRI）のれぞれ撮影された T1から L3までの左右の椎弓根の内最小値と最大値は，内径でそれぞれ－3.7 mm，4.7

径と外径を２人の脊椎外科医が別々に測定し，統計的mm，外径ではそれぞれ－4.6 mm と5.3 mm であっに比較した。
その結果，畠中らは次の結論を得た。

た。CT，MRI による椎弓根の測定値の差の関係は外径，内径ともに弱い正の相関を示した。検査者間誤差

１．検者間・検者内の測定値の差は，CT・MRI どち
らかに限って大きくなることはない。

については MRI，CT とも２mm の誤差が生じる確率は５％未満であった。また，１mm の差の確率も５％２．低体重の患者ほど，測定値の差が大きくなる傾向にある。

以下であり，３mm 以上の差の確率は，内径で2.1 ％，外径で2.9 ％であった。CT，MRI それぞれの測定値

３．太い椎弓根ほど，測定差が大きくなる傾向にある。

から推測されるスクリュー径について比較したところ，これらの結果より，MRI での測定は CT での測定

スクリュー径が一致した割合は41.7 ％であった。低と異なる特性があり，MRI による測定の精度は高く

体重の患者および太い椎弓根ほど，測定差が大きくなないと考えられた。将来 MRI 画像処理の進歩により，る傾向にあった。

MRI による椎弓根測定の精度が向上する可能性がる【結果】MRI は，現時点では AIS 患者の椎弓根径をと考えられた。
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値測定するための信頼性を持っていない。しかし，画像処理技術の進歩により，MRI による椎弓根径測定のがあるものと認めた。

Usefulness of the controlled-rotation dilator sheath“Evolution RL”for extraction of oldleads in two Japanese centers―An experience in use（回転制御型ダイレーターシース“Evolution RL”の，国内２施設における長期植え込みリード抜去への有用性）
田

畑

裕

章

（論文の内容の要旨）

第２世代の Evolution RL は2018年に本邦での使用が【目的】ペースメーカーや植え込み型除細動器などの許可された新規のデバイスであり，ステンレス製の刃

心血管植え込み型電気デバイス（CIEDs）の感染やのついた先端を，手動で２方向に回転させることによ

リードの機能不全において，経静脈的リード抜去術

り，第１世代 Evolution のリードの損傷などの問題を（TLE）は欠かせない手術となっている。過去20年の解決した。Evolution RL の有効性と安全性は海外の間にエキシマレーザーシースやポリプロピレンメカニ

臨床試験で報告されているが，本邦での使用成績は報カルシース，種々の形状のスネアなどのデバイスが導告されていない。また従来のデバイスでは困難を伴う，入され，TLE の手術成績は向上してきたが，植え込10年以上の長期間植え込まれたリードに関する Evo­

みから時間が経過した古いリードや癒着したリードの

lution RL の有効性・安全性のデータは存在しない。

抜去には依然として困難や合併症のリスクが存在する。

本研究では日本の２つの TLE 実施センターにおける，

310

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

Evolution RL の成績を報告し，10年以上植え込まれtion RL や steady シースの使用頻度が有意に高かった。

た古いリードの抜去における有効性と安全性を評価す

これは古いリードでは線維性癒着組織の量が多く，剥ることを目的とした。

離した癒着組織が雪玉状になってシースに詰まる snow

【方法】2017年９月から2019年12月までに，信州大学

prowling 現象や，癒着組織でシースの先端が動かな

医学部附属病院と東京女子医科大学附属病院で，Evo­

くなる co-lateral rotation 現象が生じ，シースの口径

lution RL を使用してリード抜去術を行った連続27症を太くしたり steady シースを使用したりする必要が例を後方視的に解析した。またリードの植え込み期間あるためと考えられる。

を10年以上と10年未満に分け，Evolution RL の長期

本研究は本邦における Evolution RL の使用成績に植え込みリードにおける有効性と安全性や，手術の詳

関する初の報告である。本邦における TLE の症例数細を評価した。リード抜去術は全例手術室またはハイは年々増加しており，全国で月間100例近くが行われブリッド手術室で全身麻酔下に行われ，まず従来のエるようになっているが，特に非感染性の適応で TLE

キシマレーザーシースやポリプロピレンメカニカルを必要とする潜在的な患者は依然多いとされる。本研

シースを使用し，成功しない場合に Evolution RL を究で示された Evolution RL の有効性と安全性は，エ使用した。術前の評価で，リードの重度の癒着や静脈キシマレーザーシースが高価なためこれまで TLE が閉塞を認める場合や，長期の植え込み期間である場合

施行できなかった施設や地域でも Evolution RL を用

は，術者の判断で最初から Evolution RL を使用した。

いて安全に抜去が行えることを示唆しており，潜在的【結果】連続27症例中，20名（74.1 ％）が男性で，年な患者に対し TLE を拡大できる可能性がある。

齢中央値は62歳（14-91）であった。リードの総数は

本研究は患者数やイベントの少なさや，非感染症例

58本，植え込み期間の中央値は136か月（８-448）での少なさなど患者背景の偏り，後方視的研究でありあった。感染による抜去が22名（81 ％）であった。

Evolution RL の使用や手術の戦略が術者の判断に任

全例で臨床的成功が得られ，24名（88.9 ％）で完全されている点などの制限があり，長期植え込みリードな抜去に成功した。３例では４cm 未満のリードの先に対する Evolution RL の真の有効性と安全性を評価

端が心臓内に残存したが，臨床的な問題は生じなかっするためには前方視的なランダム化試験が必要である。

た。重大な合併症は認めず，植え込みポケット部の血（論文審査の結果の要旨）腫が２名で発生した。58本のリードのうち，45本（78ペースメーカーや植え込み型除細動器などの心血管％）のリードで Evolution RL を使用した。植え込み

植え込み型電気デバイス（CIEDs）の感染やリードの期間が10年以上のリードは34本あり，10年未満のリー機能不全において，経静脈的リード抜去術（TLE）

ドと比較し，手術成功率には差がなく，Evolution RL

は欠かせない手術となっているが，植え込みから時間の使用率が有意に高かった（94.1 ％ vs 54.2 ％，P＝が経過した古いリードや癒着したリードの抜去には依0.001 ）
。Evolution RL の 口 径 の 大 き い 11Fr ，13Fr

然として困難や合併症のリスクが存在する。第２世代

シースの使用率も有意に高く（79.4 ％ vs 33.3 ％，p＝の Evolution RL は2018年に本邦での使用が許可され0.001，52.9 ％ vs 16.7 ％，p＝0.001），シースの先た新規のデバイスであり，その有効性と安全性は海外

端を固定する補助シースである steady sheath の使用の臨床試験で報告されているが，本邦での使用成績は率も有意に高かった（64.7 ％ vs 20.8 ％，p＝0.001）。

報告されていない。また10年以上の長期間植え込まれ【考察】本研究では，日本の２つの TLE センターにたリードに関する Evolution RL の有効性・安全性のおける，Evolution RL の，特に長期植え込みリード

データは存在しない。

に対する有効性と安全性が示された。リードの植え込

本研究では日本の２つの TLE 実施センター（信州み期間の中央値136か月（８-448）は過去の TLE に大学医学部附属病院と東京女子医科大学附属病院）に関する大規模研究と比べて長期であった。リードの植

お い て ，Evolution RL を 使 用 し て リ ー ド 抜 去 術 をえ込み期間は手術の不成功や合併症の予測因子である

行った連続27症例を後方視的に解析した。またリード

が，長期の植え込み期間のリードに対して，過去の研の植え込み期間を10年以上と10年未満に分け，Evolu­

究と同等の成功率，安全性を示した。

tion RL の長期植え込みリードにおける有効性と安全

リードの植え込み期間を10年以上と10年未満で比較すると，10年以上のリードでは口径の大きい Evolu­
No. 5, 2023

性や，手術の詳細を評価した。
その結果，以下の結論を得た。
311

審査学位論文要旨

１．連続27症例中，抜去したリードは58本であり，植Evolution RL の，特に長期植え込みリードに対するえ込み期間の中央値は136か月（８-448）であった。

有効性と安全性が示された。日本における TLE の症

45本のリードで Evolution RL を使用し，全例で臨例数は年々増加しており， 更に非感染性の適応で床的成功が得られ，24名，55本のリードで完全な抜

TLE を必要とする潜在的な患者は依然多いとされて去に成功し，主要合併症は認めなかった。

いる。本研究で示された Evolution RL の有効性と安２．植え込み期間が10年以上のリードにおいても，手全性は，従来のデバイスが高価なためこれまで TLE

術成功率には差がなく，Evolution RL の使用率や，が施行できなかった施設や地域でも Evolution RL を

口径の大きい11Fr，13Fr シースの使用率が有意に用いて安全に抜去が行えることを示唆しており，臨床高く，シースの先端を固定する補助シースである

的に有用かつ意義の高いものと考えられる。よって，

Steady sheath の使用率も有意に高かった。

主査，副査は一致して本論文として価値があるものと以上により，日本の２つの TLE センターにおける，して認めた。

Detection of cognitive decline by spinal posture assessment in health exams of the generalolder population（一般高齢者の健康診断における脊椎姿勢評価による認知機能低下の検出）
西村輝（論文の内容の要旨）価した。SVA は全脊椎立位単純Ｘ線写真側面像で第【背景と目的】高齢者の認知機能低下は同時に起こっ

７頚椎椎体中央からの重心線と仙骨椎体後上縁との水てくる身体機能低下，社会的役割の消失などと結びつ

平距離で定義される。姿勢のバランスがとれている場

いて健康を損ない要介護になりやすい高齢者特有の状合，第７頚椎椎体中央は仙骨椎体後上縁の直上付近に態「フレイル」の要素であると考えられている。軽度位置するため SVA は０cm 付近となるが，加齢とと認知障害は健康な状態と認知症の間の状態であり，高もに背中が前傾してくくると徐々に頭部が前方に移動

齢者の１-２割が発症していると推定されている。こし SVA は５cm，10 cm と大きくなっていく。方法は，の状態は健康な状態に回復することもあるため，軽度

男女別に各年齢（50代，60代，70代，80代）における認知障害であるかどうかを確認することは将来の認知

認知機能評価のスコアと矢状面脊柱バランスの分布を症予防にとって重要である。しかしながら，軽度認知分析し，矢状面脊柱バランスの不良によって認知機能障害は見過ごされがちでもある。2014年に開始された低下を検出できるかを調べた。

おぶせスタディでは住民の運動器検診を行っている。

【結果】男性では，50歳以上かつ SVA 100 mm 以上，

おぶせスタディにて我々は過去の研究で高齢者では運70歳以上かつ SVA 90 mm 以上，80歳以上かつ SVA

動機能低下が認知機能低下とともに起こってくること，

70 mm 以上の場合，認知機能低下が起こっている可

運動機能低下が姿勢の変化として表在化してくること能性が高いことが明らかとなった。また，女性では50を明らかにしてきた。そこで，今回の研究は，高齢者歳以上では年齢にかかわらず SVA 70 mm 以上の場合，特有の姿勢変化をとらえることで認知機能低下をスク

やはり認知機能低下が起こっている可能性が高いこと

リーニングできるのではという仮説を立て検証した。

が明らかとなった。

【対象・方法】おぶせスタディ協力自治体の住民基本【結論】50歳以上の住民の矢状面脊柱バランスの前方

台帳から無作為抽出された50～89歳の住民411人（男化を評価することにより，潜在的な認知機能低下を検性202人，女性209人）が本研究に登録され，認知機能出することができる。

と姿勢が評価された。認知機能は，Montreal Cogni­（論文審査の結果の要旨）

tive Assessment（MoCA）のスコアリングにて評価

軽度認知障害は健康な状態と認知症の間の状態であした。MoCA は30点満点で25点以下の場合，軽度認

り，高齢者の１-２割が発症していると推定されてい知障害を検出する性能が高いとされる。本研究ではる。この状態は健康な状態に回復することもあるため，

MoCA25点以下を認知機能低下と定義した。姿勢は全軽度認知障害であるかどうかを確認することは将来の脊椎立位単純Ｘ線写真側面像を用いて，Sagittal Ver­

認知症予防にとって重要である。しかしながら，軽度

tical Axis（SVA）を計測し矢状面脊柱バランスを評

認知障害は見過ごされがちでもある。そこで，今回の

312

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

研究は，高齢者特有の姿勢変化をとらえることで認知に減少する傾向があり，認知機能低下の有病率は，機能低下をスクリーニングできるのではという仮説を50代の男性と女性のそれぞれ28 ％と15 ％で，70代では半分以上，80代では80 ％以上に認められた。

立て検証した。
おぶせスタディ協力自治体の住民基本台帳から無

３．多変量解析の結果，男性は年齢と SVA が，女性

作為抽出された50～89歳の住民411人（男性202人，女

では年齢が認知機能低下と有意な関連を認めた。

性209人）が本研究に登録され，認知機能と姿勢が評

４．男性では，50歳以上かつ SVA 100 mm 以上，70価された。認知機能は，Montreal Cognitive Assess­

歳以上かつ SVA 90 mm 以上，80歳以上かつ SVA

ment（MoCA）のスコアリングにて評価した。姿勢70 mm 以上の場合，認知機能低下が起こっているは全脊椎立位単純Ｘ線写真側面像を用いて，Sagittal

可能性が高いことが明らかとなった。女性では50歳

Vertical Axis（SVA）を計測し矢状面脊柱バランス

以上では年齢にかかわらず SVA 70 mm 以上の場合，を評価した。方法は，男女別に各年齢（50代，60代，認知機能低下が起こっている可能性が高いことが明70代，80代）における認知機能評価のスコアと矢状面らかとなった。

脊柱バランスの分布を分析し，矢状面脊柱バランスのこれらの結果より，50歳以上の住民の矢状面脊柱バ不良によって認知機能低下を検出できるかを調べた。

ランスの前方化を評価することにより，潜在的な認知機能低下を検出することができることを明らかにした。

その結果，西村は次の結論を得た。
１．年齢と SVA の間には中等度の正の相関を認めた。

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とし

２．認知機能テストのスコアは男女ともに年齢とともて価値があるものと認めた。

Autologous Bilayered Adipose-Derived Mesenchymal Cell-Gelatin Sheets Reconstruct
Ureters in Rabbits（脂肪由来間葉系幹細胞から作製した積層細胞シートを用いたウサギ尿管再生の試み）
小川典

之（論文の内容の要旨）

同士が接着するように積層して，２日間培養を行った【背景と目的】泌尿器科領域において，尿管狭窄や尿ものを積層細胞シートとした。ゼラチン繊維基材のみ

管損傷に対する根治治療として外科的治療が行われる。

を２枚重ねたものを無細胞シートとした。ウサギの尿狭窄や損傷の部位に応じて，尿管端々吻合術，psoas

管を約１cm 部分切除した後，尿管内にポリエチレン

hitch 法，Boari-flap 法などが行われる。しかし，術チューブを挿入して，切除断端を含むように巻き付け後の吻合部狭窄， 吻合部からの尿溢流などによっる形で積層細胞シートを自家移植した（積層細胞シーて，再手術に至る症例が多いことが臨床的課題である。

ト群；n＝９）。また，無細胞シートを用いて同様な

本研究は，脂肪由来間葉系幹細胞（Adipose-derived

手術を行ったものを対照群（n＝９）とした。移植４

mesenchymal cell：AMC）から作製した積層型細胞週間後（積層細胞シート群 n＝７，対照群 n＝６）
，おシートを利用して，尿管の病変部位に依存せず，術後よび，移植４週間後にポリエチレンチューブを抜去しの吻合部狭窄や尿溢流などのリスクを回避できる尿管て，さらに４週間飼育した後（積層細胞シート群 n＝再生が可能であるかどうか検討した。

２，対照群 n＝３），移植部位を含む尿管を摘出して，【方法】10週齢雌ウサギの下腹部の脂肪組織から分離

４％PFA 固定，脱灰処理，パラフィン包埋した。HE

した細胞をコラーゲンコート培養皿上で初代培養を行染色，マッソン染色，免疫組織二重染色の組織学的解い，接着，増加した細胞を AMC とした。コンフルエ

析により，尿管再生について検討を行った。

ントに達した後，移植後の AMC を検出するために【結果】積層細胞シートでは，２層のゼラチン繊維基

PKH26で細胞標識処理をした。標識した AMC を温材の間に間葉系幹細胞マーカーである STRO-1抗体

度応答性培養皿に継代培養した。オーバーコンフルエ

陽性な AMC が存在していた。それらの細胞は，細胞ントに達した後，温度応答性培養皿の温度を低下させ接着因子である Integrin β1や N-cadherin を発現するて，単層状に浮遊した細胞をゼラチン繊維基材に付着

細胞活性を示した。移植４週間後，両群において，目させ回収した。この細胞シートを２枚作製して，細胞視下では腹腔内への尿溢流を認めない尿管組織が再構

No. 5, 2023313

審査学位論文要旨築された。対照群では，シート移植部位より腎側の尿肪由来間葉系幹細胞を得た。細胞標識処理した後，温管が著しく蛇行，および拡張していたが，積層細胞

度応答性培養皿に継代培養をし，ゼラチン繊維基材をシート群では，著しい蛇行や拡張を呈さない尿管が再利用して細胞をシート状に回収した。これを２枚作製構築されていた。再構築された尿管部位において，対し，細胞同士が接着するように積層して，積層細胞照群では，粘膜層と尿管筋層の間に線維化した層を認シートとした。ゼラチン繊維基材のみを２枚重ねたもめたが，積層細胞シート群では，AMC の抗線維化作のを無細胞シートとした。尿管を約１cm 部分切除し用などにより線維化が抑制されていた。積層細胞シーた後，尿管内にポリエチレンチューブを挿入して，こト群では，シート移植部位における尿管筋層の厚みは，れに巻き付ける形で積層細胞シートを自家移植した対照群と比較して有意に増大した。移植８週間後（ポ（積層細胞シート群；n＝９）。また，無細胞シートをリエチレンチューブ抜去４週間後），対照群のシート用いて同様な手術を行ったものを対照群（n＝９）と移植部位では，粘膜層と尿管筋層の間の線維化が進行した。移植４週間後（積層細胞シート群 n＝７，対照群

し，内腔が狭窄していたが，積層細胞シート群では，

n＝６），および，移植８週間後（ポリエチレンチュー

粘膜層下の線維化や内腔の狭窄を認めなかった。積層

ブ抜去４週間後，積層細胞シート群 n＝２，対照群 n＝細胞シート群では，PKH26で標識された AMC の生３），尿管を摘出して，組織学的解析を行った。

着を認めるとともに，その一部は，Pax7陽性筋芽細その結果，小川典之は次の結論を得た。

胞，Desmin 陽性未熟平滑筋細胞や SMA 陽性成熟平１．両群において，移植4週間後に目視下では腹腔内

滑筋細胞へと段階的に分化していた。尿管組織の再構への尿溢流を認めない尿管組織が再構築された。

築の機序として，断端部からゼラチン繊維基材に沿っ２．対照群では，著しい尿管の拡張や尿管狭窄を認めて線維芽細胞が遊走して薄い層構造を形成したところ

たが，積層細胞シート群では，著しい拡張や狭窄をに，移植した AMC が TGF シグナル経路などを経て認めなかった。

平滑筋細胞に分化する，あるいは，断端部から平滑筋細胞が遊走して，尿管筋層を形成することが考えられ

３．積層細胞シート群では，対照群より厚い尿管筋層が形成された。
４．対照群では，線維化による内腔狭窄を認めたが，た。
【結論】本研究では，尿管の一部を摘除した欠損部に積層細胞シート群では，線維化の抑制により狭窄が無細胞シート，あるいは，積層細胞シートを移植する認められなかった。

と，尿管組織が再構築されることを示した。再構築された尿管において，対照群では，著しい蛇行や拡張を

５．生着した脂肪由来間葉系幹細胞が平滑筋細胞へと段階的に分化した。

認めたが，積層細胞シート群では，蛇行や拡張を認め

６．積層細胞シート群の移植部位では，断端部からゼなかった。また，積層細胞シート群では，対照群よりラチン繊維基材に沿って線維芽細胞が遊走して，層も尿管筋層の厚みが有意に増大しており，線維化によ構造を形成した。

る内腔の狭窄が抑制されていた。尿管組織の再構築の

７．脂肪由来間葉系幹細胞から分化した平滑筋細胞と，機序として，AMC の平滑筋細胞への分化，断端部か断端部から遊走してきた平滑筋細胞によって尿管筋

らの線維芽細胞の遊走などを示した。したがって，積層が再構築された。

層型脂肪由来間葉系幹細胞シートを利用することにこれらの結果より，積層型脂肪由来間葉系幹細胞

よって，尿管の病変部位に依存せず，術後の吻合部狭シートを利用することによって，尿管の病変部位に依窄や尿溢流などのリスクを回避できる尿管再生が可能

存せず，術後の吻合部狭窄や尿溢流などのリスクを回であると結論づけた。

避できる尿管再生が可能であると結論づけた。よって，（論文審査の結果の要旨）
本研究は，脂肪由来間葉系幹細胞から作製した積層

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

型細胞シートを利用して，尿管の病変部位に依存せず，術後の吻合部狭窄や尿溢流などのリスクを回避できる
尿管再生について検討した。
10週齢雌ウサギの下腹部の脂肪組織から分離した細胞をコラーゲンコート培養皿上で初代培養を行い，脂
314

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

Autologous antigen-presenting cells efficiently expand piggyBac transposon chimeric antigen
receptor T cells with predominant memory phenotype（自己末梢血由来遺伝子改変フィー
ダー細胞は，メモリー機能を保持したピギーバックトランスポゾン遺伝子改変キメラ抗原受容体Ｔ細胞の増殖に寄与する）
中 村（論文の内容の要旨）

加世子
PB-HER2-CAR-T 細胞の細胞増殖率，特性，抗腫瘍【背景と目的】近年，悪性腫瘍に対する有望な治療法

効果の評価を行った。

として遺伝子改変キメラ抗原受容体Ｔ（CAR-T）細

【結果】CAR-T 細胞を培養開始１日目にフィーダー胞療法が注目されている。CAR-T 細胞とは，患者自細胞と共培養することで CAR 陽性率は飛躍的に改善

身のＴ細胞に腫瘍抗原を特異的に認識し，Ｔ細胞を活し，14日目の細胞増殖率は8.6±1.1倍，CAR 陽性率性化させることのできる人工キメラタンパク質を発現は60.5 ％±9.0 ％であった。この細胞は，CD8優位で，させた細胞である。体外で培養した CAR-T 細胞が患

CD45RA ，CCD7 ，CD28 ，CD95 陽 性 で 規 定 さ れ る者へ投与されると，CAR-Ｔ細胞が腫瘍抗原を特異的

Stem Cell Memory 分画が優位であり，PD-1発現率に認識し，シグナル伝達ドメインを介して自ら活性化が極めて低い特性を示した。PB-HER2-CAR-T 細胞

し，細胞質内に蓄えられたパーフォリン・グランザイ

は，骨肉腫，横紋筋肉腫，ユーイング肉腫，滑膜肉腫

ムなどの細胞傷害性タンパクを放出することで，腫瘍に対して強力な抗腫瘍効果を示した。また，連続した細胞の細胞死が誘導される。CAR-T 細胞療法では，腫瘍細胞刺激でも免疫疲弊による殺細胞効果の減弱な

メモリーＴ細胞分画が高く免疫疲弊因子の発現が低い

く持続した抗腫瘍効果を示し，共培養後の PB-HER2-

製剤で臨床効果が高いと報告されている。そのため，

CAR-T 細胞における PD-1発現率も低値であった。

細胞製剤製造中のＴ細胞分化や免疫疲弊を惹起せず，

In vivo においても，PB-HER2-CAR-T 細胞投与群でかつ種々の CAR-T 細胞に応用可能な，汎用性の高い

強い抗腫瘍効果を認めた。PB-HER2-CAR-T 細胞投培養法の開発が必須である。我々は，HER2抗原を標

与群では末梢血中に CAR-T 細胞は長期間残存し，腫的とした CAR-T 細胞製剤を開発するにあたり，ピ瘍の再移植を行っても生着せず，抗腫瘍効果が長期にギーバックトランスポゾン（PB）法を用いて，製造渡って持続した。さらに，同製造法を用いて，CD19効率，汎用性，かつ抗腫瘍効果に優れた CAR-T 細胞

を始めとする種々の CAR-T 細胞製造に成功し，抗腫製造法を開発した。

瘍効果の高い特性を持っていた。

【材料および方法】CAR 遺伝子として，HER2抗原を【結語】遺伝子改変フィーダー細胞を用いて作製した

特異的に認識する一本鎖抗体と，共刺激分子の CD28

PB-HER2-CAR-T 細胞は，良好な細胞増殖，安定しシグナルドメイン，Ｔ細胞受容体の CD3 ζ シグナルド

た CAR 発現，抗腫瘍効果と関連するメモリーＴ細胞

メインをインフレームに結合させた HER2-CAR コン優位であり，PD-1発現が低い特性を示した。また，ストラクトを作製し，ピギーバックトランスポゾンベ

担がんマウスモデルにおいて強力かつ，長期に渡る抗クターにクローニングした（PB-HER2-CAR）。フィー

腫瘍効果を示した。がん種を問わず，臨床効果に優れ

ダー遺伝子として，HER2抗原と共刺激分子の CD80，

た CAR-T 細胞療法を可能にする製造法であることが4-1BBL（CD137L）をコードする遺伝子も同様にク示唆された。

ローニングした。

（論文審査の結果の要旨）

ヒト末梢血単核球に対して，CAR 遺伝子とピギー

遺伝子改変キメラ抗原受容体Ｔ細胞（CAR-T 細

バックトランスポザーゼ遺伝子をエレクトロポレー胞）療法では，メモリーＴ細胞が多く，免疫疲弊因子

ション法で遺伝子導入し CAR-T 細胞を作製した。遺発現の低い CAR-T 細胞製剤で臨床的効果が高いこと

伝子改変フィーダー細胞は，フィーダー遺伝子のみをがわかってきた。そのため，細胞製剤製造中のＴ細胞

遺伝子導入した。培養１日目に，UV 照射で不活化さ分化や免疫疲弊を惹起せず，様々な CAR-T 細胞に応せたフィーダー細胞と CAR-T 細胞を共培養し，サイ用可能な，汎用性の高い培養法の開発が必須である。

トカイン添加下で14日間培養した。さらに，作製した今回，固形腫瘍に対する HER2-CAR-T 細胞療法を

No. 5, 2023315

審査学位論文要旨目的とし，ピギーバックトランスポゾン（PB）を用

CD45RA ，CCR7 ，CD28 ，CD95 陽 性 で 規 定 さ れ る

いた，製造効率，汎用性，かつ抗腫瘍効果に優れた製

Stem Cell Memory 分画が優位であり，PD-1発現率造法を検討した。

が極めて低い特性を示した。PB-HER2-CAR-T 細胞

PB-HER2-CAR プラスミド（HER2抗原を特異的には，骨肉腫，横紋筋肉腫，ユーイング肉腫，滑膜肉腫

認識する第２世代 CAR）と PB トランスポザーゼプ

細胞に対して強力な抗腫瘍効果を示した。また，腫瘍ラスミドをエレクトロポレーション法により自己末梢細胞からの連続した抗原刺激でも，免疫疲弊による殺血単核球（PBMC）へ導入し，PB-HER2-CAR-T 細細胞効果の減弱なく持続した抗腫瘍効果を示し，PB-胞を作製した。先行研究と同様に，PBMC や活性化

HER2-CAR-T 細胞における PD-1発現率も低値であっＴ細胞をフィーダー細胞に用いた培養方法を試みたが，た。In vivo においても PB-HER2-CAR-T 細胞投与

PB-HER2-CAR-T 細胞の増殖は認められなかった。

群で強い抗腫瘍効果を認め，腫瘍細胞の再移植を行っ

そこで生理的なＴ細胞の活性化である，MHC/TCRても生着せず，抗腫瘍効果が長期に渡って持続した。

複合体と共刺激因子による免疫シナプスの形成を人工

さらに遺伝子改変フィーダー細胞による製造法を用い的に再現することにより，PB-HER2-CAR-T 細胞のて，CD19や GD2を始めとする種々の CAR-T 細胞製

拡大培養を検討した。PB-HER2-CAR-T 細胞と同様造に成功した。

に，HER2抗原と共刺激因子プラスミドをヒト PBMC

これらの結果より，自己由来遺伝子改変フィーダーへ導入し，遺伝子改変フィーダー細胞を作製した。遺細胞を用いて作製した PB-HER2-CAR-T 細胞は，良伝子導入翌日に，UV 照射により不活化させたフィー

好な細胞増殖，安定した CAR 発現，強力かつ持続的ダー細胞を CAR-T 細胞と共培養し，サイトカイン

な抗腫瘍効果を発揮できる特性を持っていた。この遺添加下で14日間培養した。 さらに， 作製した PB-

伝子改変フィーダー細胞法は，種々の抗原に対する

HER2-CAR-T 細胞の細胞増殖率，特性，抗腫瘍効果

CAR-T 細胞の製造に応用可能な，汎用性の高い培養の評価を行った。

法であった。固形腫瘍を標的とする CAR-T 細胞の問

PB-HER2-CAR-T 細胞を遺伝子改変フィーダー細題点を克服し，臨床効果の高い CAR-T 細胞療法を可胞と共培養することで CAR 陽性率は飛躍的に改善し，能にする製造方法であった。よって，主査，副査は一

14日目の細胞増殖率は8.6±1.1倍，CAR 陽性率は致して本論文を学位論文として価値があるものと認め60.5 ％±9.0 ％であった。この細胞は，CD8優位で，た。

The usefulness of combination of age, body mass index, and blood urea nitrogen as prognostic
factors in predicting oxygen requirements in patients with coronavirus disease 2019（年齢，BMI，血清 BUN 値は新型コロナウイルス感染症患者の酸素投与の必要性の予測に有用である）
後

藤

憲

彦

（論文の内容の要旨）

究参加医療機関に入院した COVID-19入院患者84例【背景と目的】新型コロナウイルス感染症（COVID-19）のデータを収集し，後方視的に検討した。入院後に酸は重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-

素投与を必要とした患者群（酸素投与群）と酸素投与

CoV-2）によって引き起こされる感染症で，世界中でを必要としなかった患者群（酸素非投与群）に分け，拡大している。COVID-19感染症は時に重症化し，特年齢・身体情報，既往歴，初診時バイタル所見，血液に高齢者や肥満，高血圧症や糖尿病を有する患者で重検査所見，画像所見を２群間で比較した。また，先行症化する可能性が指摘されている。そのため，医療者研究で報告されているリスクスコア［Modified Warn­は重症化が予想される患者を迅速に選別し，適切な治ing Score（MEWS），quick COVID-19 Severity Index

療方法を決定する必要があり，より簡便な重症化予測（qCSI），CURB-65，A-DROP，4C mortality score］

モデルの確立が望まれる。本研究では診断時に得られを用いて酸素投与の有無に対する感度および特異度をる臨床的特徴から，酸素投与が必要になる患者をトリ計算し，ROC 曲線の Area Under the Curve（AUC）

アージするための予測モデルについて検討した。

を比較した。単変量・多変量ロジスティック回帰分析【方法】2020年２月16日から2021年３月21日の間に研を行い，酸素投与が必要となる COVID-19患者のリ

316

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

スク因子を検討し，多変量解析の結果に基づくノモグい，COVID-19患者の酸素投与の必要性を予測するリラムの作成を行った。

スク因子について後方視的に検討した。

【結果】84例中35例が酸素投与群，49例が酸素非投与

その結果，後藤は次の結論を得た。

群であった。患者背景としては酸素投与群では酸素非１．酸素投与群では酸素非投与群と比較して，高齢で，投与群と比較して高齢で，BMI および喫煙指数が高BMI および喫煙指数（Brinkman Index）が有意に値であった。また，高血圧症と糖尿病の合併が多く，高かった。

初診時の症状としては発熱，倦怠感，呼吸困難が有意に多かった。バイタルサインでは酸素投与群で経皮的２．酸素投与群では酸素非投与群と比較して，高血圧，
糖尿病を有する症例が有意に多かった。

動脈血酸素飽和度（SpO2 ）が低値であった。血液検

３．酸素投与群では酸素非投与群と比較して，発熱，査所見では，酸素投与群で血中リンパ球数とアルブミ

倦怠感，呼吸困難の症状を有する症例が有意に多ン値が低値で，LDH，BUN，クレアチニン，CRP，かった。

KL-6が高値であった。画像所見では酸素投与群にお４．酸素投与群では酸素非投与群と比較して，血液検

いて浸潤影を認める割合が高かった。初診時のバイタ

査では白血球数，リンパ球数，血中アルブミン値がルサインによるリスク評価では酸素投与群において，低値であり，AST，ALT，LDH，BUN，クレアチ

4C mortality score が酸素非投与群と比較して有意に

ニン，CRP，KL-6が有意に高値であった。

高値であった。単変量ロジスティック回帰分析では

５．酸素投与群では酸素非投与群と比較して，抗ウイ

高齢，高 BMI，リンパ球数低値，アルブミン低値，

ルス療法（レムデシビル）とステロイド治療（デキLDH 高値，BUN 高値，CRP 高値が酸素必要性のリ

サメサゾン）を受けた症例が多かった。

スク因子であった。多変量回帰分析では年齢，BMI，
BUN がリスク因子として抽出され，これら３因子を

６．酸素投与群では酸素非投与群と比較して，画像所
見では浸潤影を認める割合が高かった。

合わせた AUC は0.88と高く，これらのリスク因子を

７．酸素投与群では酸素非投与群と比較して，初診時用いて酸素投与の必要性を予測するノモグラムを作成のバイタルサインでは SpO2が有意に低値であった。

した。

８．各因子について単変量ロジスティック回帰分析を【考察】先行研究において，BMI，喫煙指数，高血圧行ったところ，年齢，BMI，喫煙指数，アルブミン，症と糖尿病の有病率は重症化群で有意に高いことが報LDH，BUN，CRP がリスク因子の候補と考えられ告されている。本検討では単変量解析で年齢，BMI，た。

LDH，BUN，CRP が酸素投与群において有意に高９．上記因子について多変量ロジスティック回帰分析値であった。D-dimer やリンパ球数などの血液検査を行ったところ，年齢，BMI，BUN が独立したリ所見もリスク因子として注目されているが，年齢はスク因子と考えられた。

COVID-19の重症化や死亡について重要なリスク因子

10．多変量解析で得られた年齢，BMI，BUN の３因である。SARS-CoV-2は腎臓での BUN の再取り込み

子を組み合わせて判別分析を行うと AUC 0.88と高を引き起こすことから，BUN は COVID-19による脱値であった。

水や腎機能障害のバイオマーカーとなる可能性がある。

11．年齢，BMI，BUN の３因子を用いて酸素投与のまた，本検討では BMI も独立したリスク因子であっ必要性を予測するノモグラムを作成した。

たが，既報でも肥満によって COVID-19が重症化す

これらの結果から，年齢，BMI，BUN が COVID-19

ることが知られている。

患者における酸素投与の必要性を予測しうると考えら【結論】年齢，BMI，血清 BUN 値は COVID-19患者れた。よって主査，副査は一致して本論文を学位論文の酸素投与の必要性を予測しうると考えられた。

として価値があるものと認めた。

（論文審査の結果の要旨）
2020年２月から2021年３月までに長野県内医療機関へ受診した COVID-19患者84例を対象として，質問票による症例データを収集した。症例を酸素投与を必要とした群（酸素投与群）と必要としなかった群（酸素非投与群）に群分けし，２群間で統計学的解析を行
No. 5, 2023317

審査学位論文要旨

Immunohistochemical investigation of biomarkers for predicting adipose tissue invasion inoral squamous cell carcinoma（口腔扁平上皮癌の脂肪浸潤予見因子の免疫組織化学的研究）
HAN YI BING
（論文の内容の要旨）

dency to be associated with buccal fat pad invasion.

【Introduction】It is difficult to completely remove tu­

The result of the comparison of IHC reactivity on themors with appropriate surgical margins due to ana­

Tumor-adipose tissue contact area with and without

tomical limitations in OSCC. Barrier approaches which

fat invasion are shown a tendency for the expression

targeting anatomical and pathological defensive struc­of α-SMA and FABP4 to be more frequent in casestures. The aim of this study was to identify a bio­of fatty infiltration. Significantly less Collagen Ⅵ wasmarker that could be used to predict adipose tissue

observed in fatty infiltration cases.

invasion in OSCC. If such a marker were found, it【Conclusion】The expression levels of α-SMA andmay be possible to use the fatty layer as a barrier

FABP4 at connective tissue at tumor invasion area

during tumor resection in appropriate cases of OSCC.

may be useful biomarkers for predicting adipose tis­

【Material and method】The immunohistochemistry

sue invasion in OSCC. It would be possible to deter­(IHC) staining of 30 primary OSCC patients whose sur­mine the optimal excision range using the fat layer

gical specimens was performed. Seven molecules as

as an anatomical barrier. Information about the ex­candidate predictive markers of fatty infiltration in­pression of these biomarkers may be not available tocluding MMP11, Collagen Ⅵ, E-cadherin, N-cadherin,

surgeons during the preoperative period (preopera­

α-SMA, FABP4 and IL6 were used for IHC. Adipose

tive biopsy). Further studies to identify more effec­

tissue invasion was assessed HE stained sections. The

tive biomarkers are required.

relationship between the tumor surface and tumor-（論文審査の結果の要旨）

adipose tissue contact area was also examined. On the

It is difficult to completely remove tumors with ap­

bases of staining results, Correlation of IHC activity

propriate surgical margins due to anatomical limita­

between tumor surface and tumor-adipose tissue con­tions in OSCC. Barrier approaches which targetingtact area was compared by correlation coefficient. Dif­

anatomical and pathological defensive structures. The

ferences in IHC activity between the tumors with andaim of this study was to identify a biomarker thatwithout adipose tissue invasion was examined bycould be used to predict adipose tissue invasion inmedian test.

OSCC.

【Results】In the tumor with fat invasion, strong ex­

The immunohistochemistry (IHC) staining of 30 pri­pression of E-cadherin was evident in tumor surface,mary OSCC patients whose surgical specimens wasstrong expression of α-SMA in the tumors of invasion

performed. Seven molecules as candidate predictive

front and surrounding connective tissues, and FABP4

markers of fatty infiltration including MMP11, Colla­

only in connective tissues. On the other hand, Colla­

gen Ⅵ, E-cadherin, N-cadherin, α-SMA, FABP4 andgen Ⅵ immunoreactivity disappeared in the OSCC

IL6 were used for IHC. Adipose tissue invasion waswith fat invasion. From the comparison of H-Score atassessed HE stained sections. The relationship be­tumor surface and tumor-fat contact area, with thetween the tumor surface and tumor-adipose tissue

exception of IL-6, H-Scores were significantly cor­

contact area was also examined.

related in the superficial and infiltrated areas. Except

As a result, Han Yi Bing obtained the following

for E-Cadherin, the H-Score was higher in the infil­

results.

trated area. The result of the comparison of IHC re­

１．In the tumor with fat invasion, strong expression

activity on the tumor surface with and without fatof E-cadherin was evident in tumor surface, strong

invasion shown N-cadherin expression showed a ten­

expression of α-SMA in the tumors of invasion front

318

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

and surrounding connective tissues, and FABP4 only

quent in cases of fatty infiltration. Significantly lessin connective tissues. On the other hand, Collagen Ⅵ

Collagen Ⅵ was observed in fatty infiltration cases.

immunoreactivity disappeared in the OSCC with fat

From these results, the expression levels of α-SMA

invasion.

and FABP4 at connective tissue at tumor invasion

２．From the comparison of H-Score at tumor surface

area may be useful biomarkers for predicting adi­

and tumor-fat contact area, with the exception ofpose tissue invasion in OSCC. It would be possible toIL-6, H-Scores were significantly correlated in thedetermine the optimal excision range using the fat

superficial and infiltrated areas. Except for E-

layer as an anatomical barrier.
In reviewing the thesis, there were some correc­

Cadherin, the H-Score was higher in the infiltrat­
ed area.

tions to the figures in the tables in the thesis, but we

３．The result of the comparison of IHC reactivity on

confirmed that they were within the acceptable range

the tumor surface with and without fat invasionin terms of content. The primary and secondary re­shown N-cadherin expression showed a tendency

viewers unanimously approved the thesis as a valu­

to be associated with buccal fat pad invasion.

able thesis.

４．The result of the comparison of IHC reactivity on（審査にあたって論文中の表の数字の訂正があったが，

the Tumor-adipose tissue contact area with and

内容的に問題ない範囲であることを確認した。主査，

without fat invasion are shown a tendency for the

副査は一致して本論文を学位論文として価値あるもの

expression of α-SMA and FABP4 to be more fre­と認めた。）

NanoSPECT imaging reveals the uptake of 123I-labeled oxidized low-density lipoprotein in thebrown adipose tissue of mice via CD36（NanoSPECT イメージングによるマウス褐色脂肪組
織における CD36を介した123I 標識酸化 LDL 取込みの発見）
細

見

謙

登

（論文の内容の要旨）

BAT の交感神経活動制御と一致して，123I 標識酸化【目的】褐色脂肪組織（BAT）等の熱産生脂肪組織の

LDL の BAT への集積は，マウスを麻酔するとほぼ

抗動脈硬化作用が知られるようになっているが，その完全に消失し，β3 アゴニストの投与により回復した。

メカニズムは不明である。また，脂肪蓄積ではなく，一方，肝臓への 123I 標識酸化 LDL の分布は，麻酔に

脂肪燃焼により熱産生を行うという，その特異な生理影響されなかった。さらに，摂氏４度の寒冷刺激にマ作用と疾病予後との関連から，BAT のイメージング

ウスを暴露すると，25度での飼育時よりも，123I 標識を的確に行うことが強く望まれている。一方，循環血酸化 LDL の BAT への集積は有意に促進された。

液中からの酸化 LDL の除去を行うのは，肝臓が主要な臓器であるとされていた。

123

I による酸化 LDL の標識は，酸化 LDL の蛋白質部分を標識しているため， 酸化 LDL の脂質部分をそこで本研究では，123I 標識酸化 LDL を用い酸化

DiI-C18により蛍光標識した酸化 LDL を用いてさらLDL の生体内での行方のイメージングを最新の手法に実験を行ったところ，やはり同様の結果を得たことにより改めて行い，同時に酸化 LDL の臓器への蓄積から，蛋白質と脂質からなる酸化 LDL の粒子全体がメカニズムについても解析した。

BAT に取り込まれることが示唆された。

123【方法と結果】無麻酔のマウスに I 標識酸化 LDL あ
123

次に，BAT で酸化 LDL を取り込む受容体を同定

るいは I 標識 LDL を静注し，10分後に固定したうするために，培養褐色脂肪細胞株 HB2および初代培えで，高分解能 nanoSPECT/CT で撮像を行い，組織養褐色脂肪細胞を用いた解析を行った。HB2の分化誘123分布を解析した。 I 標識 LDL が，これまで知られ導処置により，脂肪様細胞への分化が確認され，同時ている通り，ほとんど肝臓へ集積するのが検出されたに脂肪細胞マーカーの Fabp4，Pparg，および，褐色123のに対し， I 標識酸化 LDL は，肝臓への集積と同脂肪細胞マーカーの Ucp1，Cidea の遺伝子発現が誘程度の強さで，BAT への集積が検出された。

導された。この際，未分化の状態で全く見られなった

No. 5, 2023319

審査学位論文要旨

DiI-oxLDL 取込みが，分化 HB2で明確に確認された。

【結論】BAT に酸化 LDL が集積し，これが CD36を介

そこで，oxLDL 取り込みに関与する受容体，CD36，

していることをマウスで初めて明らかにした。BAT

SR-B1（Scarb1），SR-A1（Msr1），LOX-1（Olr1）

は循環血液中から動脈硬化惹起性の LDL を除去するの分化前後での発現変化を解析すると，CD36は他のことで向動脈硬化機能を発揮している可能性がある。

受容体よりもはるかに大きい約４万倍の発現上昇が見（論文審査の結果の要旨）られた。さらに Western blotting により蛋白質レベ

褐色脂肪組織（BAT）等の熱産生脂肪組織の抗動ルでの発現を解析すると，CD36の発現は分化ととも脈硬化作用が知られるようになっているが，そのメカに顕著に増加し，未分化時に比べ分化 day 6で，60倍ニズムは不明である。また，脂肪蓄積ではなく，脂肪以上の発現上昇が確認された。また，分化 HB2での燃焼により熱産生を行うという，その特異な生理作用

DiI-oxLDL 取り込みと，CD36の局在を共焦点レーと疾病予後との関連から，BAT のイメージングを的

ザー顕微鏡で観察すると，DiI-oxLDL と CD36の細胞確に行うことが強く望まれている。一方，循環血液中

膜上での co-localization が確認された。そこで，分化からの酸化 LDL の除去を行うのは，長年，肝臓が主HB2で，CD36の siRNA 処置を行うと，CD36発現が要な臓器であるとされていた。

抑制されるとともに，DiI 標識酸化 LDL の取り込み

これに対し，細見は，静注した酸化 LDL の臓器へも有意に抑制された。また，抗 CD36中和抗体の培地の分布メカニズムについて，マウスを用いた個体レベへの添加は濃度依存的に DiI 標識酸化 LDL の取り込

ルのイメージングを行い，さらに組織・細胞レベルのみを抑制した。このように，分化 HB2での oxLDL 取

解析を行うことにより，次の結論を得た。

込みには CD36が関わっていることが証明された。

１．無麻酔のマウスで，静注した123I 標識酸化 LDL は

そこで，マウスから調整した初代培養褐色脂肪細胞

BAT へ，肝臓への集積と同程度の強さで集積した。

を用い，CD36と oxLDL 取込みの関係を解析した。

２．無麻酔のマウスで123I 標識 LDL を静注すると，こ初代培養褐色脂肪細胞を分化誘導処置すると，脂肪滴れまで知られている通り，ほとんど肝臓へ集積した。

の形成，脂肪細胞および褐色脂肪細胞マーカー遺伝子

３．マウスを麻酔すると123I 標識酸化 LDL の BAT への発現が誘導され，DiI 標識酸化 LDL の細胞への取の集積は，ほぼ完全に消失し，β3アゴニストの投与込みが観察された。この DiI-oxLDL 取込みはやはり，

により有意に回復した。

siRNA を用いた CD36ノックダウンおよび抗 CD36中
和抗体処置により抑制された。このように褐色脂肪細胞での酸化 LDL 取込みは CD36が主に媒介している
ことが明らかとなった。

４．マウスの寒冷刺激により，123I 標識酸化 LDL のBAT への集積は有意に促進された。
５．酸化 LDL の脂質部分を DiI-C18で蛍光標識した
酸化 LDL（DiI 酸化 LDL）の静注でも，肝臓と同さらに，CD36の個体レベルでの役割を CD36ノッ

程度の BAT への DiI 酸化 LDL の集積が見られた。

123

クアウトマウス（CD36KO）を用いて解析した。 I

６．培養褐色脂肪細胞株 HB2の分化誘導により，脂標識酸化 LDL 静注後の nanoSPECT/CT イメージン

肪細胞マーカーおよび褐色脂肪細胞株マーカーの発123

グで，野生型マウスで見られた BAT への I 標識酸

現とともに，酸化 LDL 受容体の１つである CD36の

化 LDL 集積は，CD36KO では完全に消失した。一方，顕著な発現増加が起き，未分化では見られない DiI

肝臓への 123I 標識酸化 LDL の集積は，CD36KO でも

酸化 LDL の取り込みが見られるようになった。

明確に検出された。
同様に酸化 LDL の脂質部分に蛍光標識した DiI 標
識酸化 LDL の静注後の取り込みを組織切片で解析し７．培養 HB2での DiI 酸化 LDL の取り込みは，CD36に対する siRNA および中和抗体の処置により有意に抑制された。

た。BAT では野生型マウスで CD36発現とともに DiI

８．培養初代培養褐色脂肪細胞での DiI 酸化 LDL 取標 識 酸 化 LDL 集 積 が 見 ら れ た が ，CD36KO で は ，り込みも，CD36に対する siRNA および中和抗体のCD36発現の消失とともに DiI 標識酸化 LDL 集積も消処置により有意に抑制された。

失した。蛍光強度の定量でも，CD36KO では，DiI 標

９．CD36ノックアウトマウスに，無麻酔で123I 標識酸

識酸化 LDL 取込みは消失が確認された。このように

化 LDL を静注すると，野生型でみられる123I 標識酸

BAT への酸化 LDL 取り込みは，CD36によることが化 LDL の BAT への集積は消失し，肝臓への集積

個体レベルで証明された。

はむしろ増加した。

320

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

10．DiI 酸化 LDL の CD36ノックアウトマウスへの静注でも同様に，DiI 酸化 LDL の BAT への集積は消する可能性が示唆された。また，BAT のイメージン
グの新たな手法も開発された。
以上の成果により，主査，副査は一致して本論文を失し，肝臓への集積は増加した。
これらの結果から，BAT が動脈硬化惹起性 LDL

学位論文として価値があるものと認めた。

の除去機能を持つことにより，抗動脈硬化機能を発揮

CD8＋ lymphocyte infiltration is a specific feature of colitis induced by immune checkpoint
inhibitors（CD8陽性リンパ球の浸潤は免疫チェックポイント阻害薬による腸炎に特異的な所
見である）
髙

橋

（論文の内容の要旨）

芳之パ球/CD4陽性リンパ球比は1.17であった（感度：83【背景と目的】免疫チェックポイント阻害剤（ICI）は％，特異度：84 ％）。

免疫チェックポイント分子もしくはそのリガンドに結【結論】CD8陽性リンパ球浸潤数と CD8陽性リンパ球

合して免疫抑制シグナルの伝達を阻害することで，抗/CD4陽性リンパ球比は，irAE 大腸炎を他の形態の大腫瘍効果を発現する。一方で，全身臓器に出現する免腸炎と区別するための有用な指標となる可能性がある。

疫関連有害事象（irAE）は治療継続の妨げとなり臨床（論文審査の結果の要旨）

上問題となる。ICI によって誘発される irAE 大腸炎

免疫チェックポイント阻害剤（ICI）は免疫チェッの臨床的特徴および病理学的特徴は，炎症性腸疾患，

クポイント分子もしくはそのリガンドに結合して免疫

特に潰瘍性大腸炎（UC）と酷似しており，鑑別が困抑制シグナルの伝達を阻害することで，抗腫瘍効果を難である症例が多い。irAE 発症の機序は未だ不明で発現する。一方で，全身臓器に出現する免疫関連有害あるが，様々な臓器への CD8陽性リンパ球浸潤と関事象（irAE）は治療継続の妨げとなり臨床上問題で連していることが報告されている。本研究では，irAEある。ICI によって誘発される irAE 大腸炎の臨床的大腸炎における CD8陽性リンパ球の組織学的浸潤と特徴および病理学的特徴は，炎症性腸疾患，特に潰瘍臨床学的特徴を他の大腸炎と比較検討した。

性大腸炎と酷似しており，鑑別が困難である症例が多【方法】2010年７月から2020年６月に信州大学医学部

い。irAE 発症の機序は未だ不明であるが，様々な臓附属病院で大腸炎と診断された102人を対象として後器への CD8陽性リンパ球浸潤と関連していることが方視的に検討した。全例で下部消化管内視鏡検査が施報告されている。本研究では，irAE 大腸炎12人，潰行され，大腸の最も炎症の強い部位から生検が施行さ瘍性大腸炎37人，クローン病22人，虚血性大腸炎31人れている。 顕微鏡視野で CD4陽性リンパ球およびを対象とした。大腸の最も炎症の強い部位から生検さCD8陽性リンパ球の浸潤数と CD8陽性リンパ球/CD4れた組織標本を用いて CD4，CD8の免疫組織化学染陽性リンパ球比を測定して，病態ごとに比較検討した。

色を行い， 顕微鏡視野で CD4陽性リンパ球および【結果】症例の内訳は irAE 大腸炎12人，UC37人，クローCD8陽性リンパ球の浸潤数と CD8陽性リンパ球/CD4ン病（CD）22人，虚血性大腸炎（IC）31人であった。

陽性リンパ球比を計測して，病態ごとに比較検討した。

irAE 大腸炎では，CD8陽性リンパ球浸潤数は CD4陽性

その結果，髙橋は以下の結論を得た。

リンパ球浸潤数より有意に高値であった（p＜0.01）。

１．炎症性腸疾患に比べて irAE 大腸炎では大腸におCD8 陽 性 リ ン パ 球 浸 潤 数 は ，UC（ p＜0.05 ），CD

ける CD8陽性リンパ球の浸潤が高度であった。

（p＜0.05），および IC（p＜0.01）と比較して irAE 大

２．irAE 大腸炎の診断において大腸に浸潤する CD8

腸炎で有意に高値であった。CD8陽性リンパ球/CD4陽性リンパ球数102/HPF と CD8陽性リンパ球/CD4陽性リンパ球比は，irAE 大腸炎で有意に高値であっ陽性リンパ球比1.17がカットオフ値として有用であった（それぞれ，UC，CD，および IC に対して p＜0.01）。

た。

ROC 解析を行うと，irAE 大腸炎を診断するための最適な CD8陽性リンパ球浸潤数のカットオフは，102個/視野（感度：75 ％，特異度：81 ％），CD8陽性リン
No. 5, 2023

３．irAE 大腸炎の疾患重症度は大腸の CD8陽性リン
パ球浸潤数と相関を認めなかった。
４．irAE 大腸炎では大腸上皮内に CD8陽性リンパ球
321審査学位論文要旨が多く浸潤する傾向にあった。

潤数と CD8陽性リンパ球 /CD4陽性リンパ球比は，これらの結果より，irAE 大腸炎は大腸に浸潤してirAE 大腸炎を他の形態の大腸炎と区別するための有いる CD8陽性リンパ球数と CD8陽性リンパ球/CD4陽用な指標となる可能性を示した。
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値

性リンパ球比が高値となることが示された。さらに，
CD8陽性リンパ球の浸潤部位は大腸上皮内に多いことの高い研究であるものと認めた。

が特徴であった。本研究結果は，CD8陽性リンパ球浸Distribution and progression of cerebral amyloid angiopathy in early-onset V30M (p.V50M)
hereditary ATTR amyloidosis（若年発症 V30M 変異型遺伝性 ATTR アミロイドーシス患者
における脳アミロイド血管症の進展および分布）
髙

橋

佑

介

（論文の内容の要旨）

動性失語，片側脱力，感覚障害，意識障害であった。

【背景】遺伝性 ATTR（ATTRv）アミロイドーシス

アミロイドーシス発症から中枢神経症状出現までの期は，変異トランスサイレチン（TTR）を主たる構成

間は平均17.0年で，PiB の集積は罹病期間に比例して成分とするアミロイド線維が全身臓器に沈着すること増加し（相関係数＝0.67，P＜0.001），SUVR の増加により惹起される常染色体顕性遺伝の致死性の疾患で率は女性で有意に高かった（P＝0.046）。 フォローある。近年，肝移植や TTR 四量体安定化薬，核酸医

アップ撮影では初回と比較し SUVR の有意な上昇を薬などの疾患修飾薬の開発によって本症の予後が劇的認めた（P＝0.002）。3D-SSP z-score 画像では，アに改善している。しかし，これらの治療は肝臓で産生

ミロイド沈着は発症約10年後に小脳上面から始まり，され血中に分泌される TTR を標的としているため，15年後には小脳表面全体，シルビウス裂，大脳縦裂前脈絡叢で産生された変異 TTR が脳血管に沈着する脳部へと拡大した。発症25年後には大脳表面全体にアミアミロイド血管症（CAA）に対する効果は限定的でロイド沈着を認めた。

ある。よって，本症の長期生存者において CAA が最【考察】本研究で ATTRv アミロイドーシス患者におも深刻な合併症になると予想される。このような背景

ける CAA の特徴的な分布と進行様式が明らかになっから，ATTRv アミロイドーシス患者の CAA の自然た。なぜ本症において小脳上部，シルビウス裂，大脳経過を明らかにし，有用なバイオマーカーを開発する

縦裂前部からアミロイド沈着が始まるのかは不明だが，ことが求められている。

これらの狭いスペースでは脳脊髄液が停滞するためア【対象・ 方法】 対象は， 全身撮影において C-PiB-

ミロイドが沈着しやすい可能性が考えられる。また本PET 陽性の ATTRv アミロイドーシス患者34名（男

研究により，罹病期間に加え女性も CAA 発症の危険性22名， 女性12名）。 全例が TTR 遺伝子の V30M

因子である可能性が明らかになった。 さらに PiB-

（p.V50M）変異を有していた。32名が若年（50歳未PET が ATTR 型 CAA の早期診断と治療評価のため満）発症，２名が高齢（50歳以上）発症。平均発症年の有用なバイオマーカーになる可能性が示された。

齢は34.0歳，研究時平均年齢は48.9歳。22名が肝移植（論文審査の結果の要旨）

後，14名が疾患修飾薬を使用，２名は PiB-PET 撮影

遺伝性 ATTR（ATTRv）アミロイドーシスは，変時に未治療であった。全例で中枢神経症状の解析と異トランスサイレチン（TTR）を主たる成分とする

PiB-PET を 実 施 。15 名 で は PiB-PET の フ ォ ロ ー

アミロイドが全身臓器に沈着することにより惹起されアップ撮影を実施した。PiB-PET SUVR 画像は橋をる致死性の疾患である。近年，肝移植や TTR 四量体

基準として作成し，各脳領域の SUVR 定量解析およ安定化薬，核酸医薬などの疾患修飾薬により本症の予びｚスコア画像の解析を行った。

後が劇的に改善した。しかし，これらの治療は肝臓で【結果】CAA に関連した中枢神経症状は８名（男性

産生され血中に分泌される TTR を標的としており，２名，女性６名）でみられ，Transient focal neurologic

脈絡叢で産生された変異 TTR が脳血管に沈着する脳episodes（TFNEs）が７名，小脳出血と認知機能低アミロイド血管症（CAA）に対する効果は限定的で下がそれぞれ２名で認められた。TFNEs の症状は運ある。よって，本症の長期生存者では CAA が深刻な

11

322

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

合併症になると予想される。このような背景から，本例して増加し，SUVR の増加率は女性で有意に高症患者の CAA の自然経過を明らかにし，有用なバイかった。
２．フォローアップ撮影では初回と比較し SUVR のオマーカーを開発することが求められている。
対象は，PiB-PET 陽性の ATTRv アミロイドーシ
ス患者34名（男性22名，女性12名）。全例が TTR 遺有意な上昇を認めた。
３．ｚスコア画像では，アミロイド沈着は発症約10年

伝子の V30M 変異を有していた。32名が若年（50歳

後に小脳上面から始まり，15年後には小脳表面全体，未満）発症，２名が高齢（50歳以上）発症。平均発シルビウス裂，大脳縦裂前部へと拡大した。発症25

症年齢は34.0歳，研究時平均年齢は48.9歳。全例で年後には大脳表面全体にアミロイド沈着を認めた。

中枢神経症状の解析と PiB-PET を実施。15名ではこれらの結果より，ATTRv アミロイドーシス患者

PiB-PET のフォローアップ撮影を実施。各脳領域のにおける CAA の特徴的な分布と進行様式が明らかに

SUVR 定量および3D-SSP z スコア画像の解析を行った。

なった。また罹病期間に加え女性も CAA 発症の危険因子である可能性が明らかになった。PiB-PET が本

その結果，髙橋は次の結論を得た。
１．CAA に関連した中枢神経症状は８名でみられ，症患者の CAA の早期診断と治療評価のための有用なTransient focal neurologic episodes（TFNEs）が７

バイオマーカーになる可能性が示された。よって，主名，小脳出血と認知機能低下をそれぞれ２名で認め査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があた。アミロイドーシス発症から CNS 症状出現までるものと認めた。

の期間は平均17.0年で，PiB の集積は罹病期間に比Clinically Relevant Dose of Pemafibrate, a Novel Selective Peroxisome Proliferator-Activated
Receptor α Modulator (SPPARMα), Lowers Serum Triglyceride Levels by Targeting Hepatic
PPARα in Mice（臨床投与相当量の新規選択的 PPARα モジュレーター・ペマフィブラートをマウスに投与すると，肝臓の PPARα に作用して血中の中性脂肪値が低下する）
ZHANG ZHE（論文の内容の要旨）

atotoxicity in mice, likely due to hepatic PPARα stim­【Introduction】Pemafibrate (PEM) is a novel lipid-

ulation and the enhancement of fatty acid uptake andlowering drug classified as a selective peroxisome

β-oxidation in addition to a concomitant increase inproliferator-activated receptor α (PPARα) modulator

microsomal triglyceride transfer protein. Interestingly,

whose binding efficiency to PPARα is superior to

PEM activated PPARα only in the liver, but not in thethat of conventional fibrates. This agent is also usefulheart, kidney, or adipose tissue. The clinical dose offor non-alcoholic fatty liver disease and primary bili­

PEM also increased serum/hepatic levels of fibroblastary cholangitis with dyslipidemia. However, it re­

growth factor 21 (FGF21) without enhancing hepatic

mains unclear on how PEM exerts lipid-lowering ac­

lipid peroxide 4-hydroxynonenal or inflammatorytion in the clinical setting.

signaling.

【 Methods 】PEM at a clinically relevant dose (0.1【Conclusion】A clinically relevant dose of PEM could

mg/kg/day) or relatively high dose (0.3 mg/kg/day)efficiently and safely reduce serum TG and increase

was administered to male C57BL/6J mice for 14 days.

FGF21 targeting hepatic PPARα in mice. These find­In this study, histopathological analysis of several or­

ings may help explain the precise mechanism of howgans such as liver, heart, kidney and adipose tissue,

PEM attenuates circulating TG in humans.

biochemical analysis, quantitative polymerase chain（論文審査の結果の要旨）

reaction, Western blot, and enzyme-linked immuno­

Pemafibrate (PEM) is a novel lipid-lowering drug

sorbent assay were conducted.

classified as a selective peroxisome proliferator-【Results】Clinical dose PEM efficiently lowered cir­activated receptor α (PPARα) modulator whose bind­

culating triglyceride (TG) levels without apparent hep­

ing efficiency to PPARα is superior to that of conven­

No. 5, 2023323

審査学位論文要旨

tional fibrates. This agent is also useful for non-stimulation and enhanced fatty acid uptake and β-alcoholic fatty liver disease and primary biliary

oxidation in the liver.

cholangitis with dyslipidemia. However, it remains
unclear on how PEM exerts lipid-lowering action in
the clinical setting.

２．Hepatic microsomal triglyceride transfer protein
was increased by clinical dose of PEM.
３．PEM activated PPARα only in the liver, but not

PEM at a clinically relevant dose (0.1 mg/kg/day)in the heart, kidney, or adipose tissue.

or relatively high dose (0.3 mg/kg/day) was adminis­

４． Clinical dose of PEM increased serum/hepatic

tered to male C57BL/6J mice for 14 days. In thislevels of fibroblast growth factor 21 (FGF21) with­study, histopathological analysis of several organs

out enhancing hepatic lipid peroxide 4-hydroxynon­such as liver, heart, kidney and adipose tissue, bio­enal or inflammatory signaling.

chemical analysis, quantitative polymerase chain

A clinically relevant dose of PEM could efficiently

reaction, Western blot, and enzyme-linked immuno­

and safely reduce serum TG and increase FGF21 tar­sorbent assay were conducted.

geting hepatic PPARα in mice. These findings may「ZHANG ZHE」obtained the following conclusions.
１．Clinical dose of PEM efficiently lowered circulat­
ing triglyceride (TG) levels without apparent hepa­
totoxicity in mice, likely due to hepatic PPARαhelp explain the precise mechanism of how PEM at­tenuates circulating TG in humans.
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

IQSEC2 Deficiency Results in Abnormal Social Behaviors Relevant to Autism by Affecting
Functions of Neural Circuits in the Medial Prefrontal Cortex（IQSEC2の欠損は内側前頭前皮質の神経回路機能に影響を与え自閉症に関連した社会行動の異常をきたす）
Mehta Anuradha（論文の内容の要旨）

clamp recording from acute brain slices for quantify­【Background and Aims】Lately, genes located on theing the synapse physiology ; in-utero electroporation

sex chromosome have been associated immensely tofor selective knockdown of IQSEC2 in pyramidal

the etiologies of a wide variety of developmental psy­

neurons ; and stereotactic viral injection for express­

chiatric disorders. Aberrant crosstalk at the level ofing IQSEC2 isoform1 in the medial prefrontal cortex

synapse is presumably the major culprit underlying(mPFC) of mouse brain.

the pathophysiology of such neurological conditions【Results】We have shown the involvement of thismanifested collectively in learning, memory, and be­post synaptic molecule in relevance to the phenotypic

havioral abilities. One such potential candidate, themanifestation of autism, more specifically the social

gene encoding IQ Motif and Sec7 Domain 2 (IQSEC2),

behavioral aspect. Up-regulation of c-Fos expression

located on the X-chromosome, has been linked toin the mPFC by social stimulation was attenuated inneurodevelopmental disorders, like intellectual dis­

IQSEC2 KO mice, implicating the significance of thisability, epilepsy, and certain forms of autism spec­

brain region in IQSEC2 associated phenotypes. The

trum disorders (ASDs). We seek to elucidate the role

AMPAR, NMDAR, and GABAR-mediated synapticof this molecule in physiology at the level of synaptictransmissions were also found to be impaired in the

crosstalk, in relevance to ASDs.

pyramidal neurons of mPFCs in IQSEC2 KO mice,【Materials and Methods】We used a global and local

with a more robust deficit in AMPAR mediated syn­approach to justify our hypothesis by generating the

aptic transmission. The KD approach recapitulated

CRISPR/Cas9-mediated knockout (KO) mouse model

the synaptic impairments, attributing the synaptic

and shRNA mediated knockdown (KD) of IQSEC2

deficits to the postsynaptic deletion of IQSEC2. Most

respectively. Major methodologies include patch-

importantly, the social behavioral deficits and synap­

324

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

tic impairments were successfully abolished whentrafficking. Having generated a CRISPR/Cas9 sys­

we reconstituted the longest isoform of IQSEC2 totem-based knockout (KO) mouse model of IQSEC2, I

the mPFC, of the KO mice by an adeno-associatedattempted to elucidate its function in behavior andviruses (AAV)-mediated gene delivery system.

synapse physiology. I observed the following major【Conclusion】We generated IQSEC2 KO mice andfindings :studied their behavior and electrophysiological prop­

１． IQSEC2 KO mice exhibited autistic behaviors,

erties focusing on the mPFC. The IQSEC2 KO mice

including overgrooming, decreased social interac­exhibited overgrooming and social deficits reminis­

tion, social preference, and social novelty prefer­cent of the symptoms of autism. AMPAR, NMDAR,

ence.

and GABAR-mediated synaptic transmissions were

２．Up-regulation of c-Fos expression in the medial

impaired in pyramidal neurons in layer 5 of theprefrontal cortex (mPFC) by social stimulation was

mPFC in IQSEC2 KO mice. Re-expression of IQSEC2

attenuated in IQSEC2 KO mice.

in the mPFC rescued both synaptic and social behav­

３．AMPAR, NMDAR, and GABAR-mediated synap­

ioral phenotypes, suggesting that an impairment intic transmissions were decreased in the pyramidal

the neural function in the mPFC may be responsible

neurons in layer 5 of the mPFC in IQSEC2 KO mice.
４．The above synaptic phenotypes were attributable

for social deficits in IQSEC2 KO mice.
（論文審査の結果の要旨）

to the postsynaptic deletion of IQSEC2 from the

The gene encoding IQ Motif and Sec7 Domain 2

result of cell type specific IQSEC2 KD using in utero(IQSEC2), located on the X-chromosome, has been

electroporation.

linked to neurodevelopmental disorders, like intellec­

５．Re-expression of IQSEC2 isoform 1 in the mPFC

tual disability, epilepsy, and certain forms of autism

rescued the electrophysiological and behavioral phe­

spectrum disorders (ASDs). IQSEC2 is a PSD-95 bind­notypes in IQSEC2 KO mice.

ing molecule and an ADP-ribosylation factor 6 (ARF6)Guanidine Exchange Factor (Arf6-GEF) in the excit­

The committee chair and vice-chairs evaluatedthat the thesis deserved a doctoral dissertation.

atory post synapse, where it contributes to receptor

Role of adrenomedullin-2/intermedin in the pathogenesis of neovascular age-related maculardegeneration（滲出型加齢黄斑変性症の病態におけるアドレノメデュリン２/インターメディン
の役割）
柿

原

伸

次

（論文の内容の要旨）

同じく，カルシトニンスーパーファミリーの１つとし【背景と目的】本邦の中途失明原因の上位を占める糖尿て発見された生理活性ペプチドであるが，眼内病的血病網膜症や滲出型加齢黄斑変性（nAMD）において管新生における意義は不明である。

は，各々，病的網膜新生血管，脈絡膜新生血管（CNV）

本研究では，眼内血管新生における AM2の病態生が眼内に発生し，これらが浮腫，出血，線維化などを理学的意義を，AM2ノックアウト（AM2-/-）マウ

引き起こして，視機能低下を生じる。現在，これらのスを用いて検討した。

疾患群に対して，抗 VEGF 薬の硝子体注射が行われて【材料および方法】1）野生型（WT），AM2-/- マウス

いるが，反復投与による治療抵抗性や高額な薬剤費がに，酸素誘発網膜症（OIR）を誘導し，出生７，12，17

問題となっており，VEGF 以外の血管制御分子に着

日目に眼から網膜展開標本を作製し，網膜血管につい目した治療法が求められている。我々はこれまで，アて WT と AM2-/- マウスで比較した。また，PBS，AM，

ドレノメデュリン（AM）が，眼内病的血管新生の治AM2の局所投与が，OIR の病的網膜新生血管に与え療標的となる可能性を報告してきた。アドレノメデュ

る影響を検討した。

リン２/インターメディン（AM2/IMD）は，AM と2）レーザー誘導脈絡膜新生血管（LI-CNV）を，９-

No. 5, 2023

325

審査学位論文要旨

12週齢の雄マウスの眼に誘導し，７日後に脈絡膜展開性の亢進および電気抵抗の減少は，AM2の投与で抑標本を作成し，CNV や網膜下線維化の面積，マクロ制された。

ファージ浸潤を評価した。さらに，各種遺伝子発現を

5）ARPE19に対する TGF-β2＋TNF-α 刺激は，上皮qPCR 法で確認し，WT，AM2-/- マウス間で比較し系マーカーの発現低下と間葉系マーカーの発現亢進をた。

生じたが，AM2の投与によりそれらは抑制された。

3）LI-CNV 誘導直後に，浸透圧ポンプを用いて PBS，また，TGF-β2＋TNF-α 刺激により，ARPE19におい

AM，AM2のいずれかを持続投与し，2）同様に比較て有意な AM2の発現亢進を認めた。

した。

6）トランスクリプトーム解析にて，２倍以上もしく

4）フルオレセイン蛍光眼底造影によって，LI-CNV

は1/2以下の有意な発現変化が認められた遺伝子は，からの漏出に対する AM2の影響を検討した。また，コントロールと比べて，AM 投与で113遺伝子，AM2

網膜血管内皮細胞（TR-iBRB）に対して，VEGF 単投与で82遺伝子認められた。そのうち，AM と AM2独あるいは AM2との共投与を行い，血管透過性と電で同様な発現変化を認めた遺伝子は Meox2を含む15

気抵抗に与える影響を評価した。

遺伝子であった。

5）ヒト網膜色素上皮細胞（ARPE19）に対して，

7）マ ウ ス 脈 絡 膜 複 合 体 に お け る Meox2 の 遺 伝 子

TGF-β2＋TNF-α による刺激を行い，上皮間葉転換

発現は，レーザー照射後１日目に約1/2に低下し，１（EMT）を誘導し，AM2投与の有無による EMT へ

週間後にはレーザー照射前と同等のレベルまでの影響を，免疫染色および qPCR 法にて検討した。

戻った。レーザー照射後１日目の，脈絡膜複合体に

6）3）と同様のサンプルを用いて，トランスクリプ

おける Meox2の発現は，AM2の投与で有意に亢進

トーム解析を行い，LI-CNV における AM2の効果へし，AM2-/- マウスで有意に低下した。AM2-/- でのの関与が考えられる候補遺伝子について，qPCR 法に

Meox2の発現低下を免疫染色で確認した。 さらに，

よって遺伝子発現を確認した。

HUVEC において TGF-β2＋TNF-α によって惹起さ

7）脈絡膜複合体における Meox2の遺伝子発現・タン

れる EndMT は，AM2の投与で抑制されたが，siRNA

パク質の発現を，qPCR 法・免疫染色で確認した。さによる Meox2のノックダウンにより AM2の効果はキャらに， ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC） に対してンセルされた。同様に，TNF-α によって即時に惹起

Meox2 siRNA によるノックダウン実験を行い，内皮される NF-κB の活性化は，AM2の投与で抑制された間葉転換（EndMT）や NF-κB シグナルに与える影

が，Meox2のノックダウンにより AM2の効果はキャ響を検討した。

ンセルされた。

【結果】1）WT，AM2-/- 新生仔マウス間で，生理的【結論】AM2は，血管透過性抑制，酸化ストレス抑制

網膜血管新生，無血管領域，病的網膜新生血管領域にに加えて，Meox2発現亢進を介した抗線維化作用や，は有意差を認めなかった。また，AM2の局所投与は抗炎症作用などを介して，nAMD の病態を改善させ

病的網膜新生血管に明らかな変化を生じなかった。

る。

2）AM2-/- マウスでは，WT マウスに比べて，CNV（論文審査の結果の要旨）は拡大し，網膜下線維化やマクロファージ浸潤の亢進

加齢黄斑変性（nAMD）は失明原因の上位を占めを認めた。さらに，脈絡膜複合体での Vegfa，Kdr，る眼疾患であり，脈絡膜新生血管（CNV）が原因とCd68，Cyba，Ncf1，Tgfb1，Ccn2，Serpine1の遺伝なり浮腫，出血，線維化を招き，視機能低下を生じる。

子発現は AM2-/- マウスにおいて有意な亢進を認め

実臨床では，抗 VEGF 薬による治療が行われている

た。

が，問題点も多く，VEGF 以外の血管制御分子に着

3）逆に，AM2の投与は，CNV 形成，網膜下線維化

目した治療法が求められている。柿原は，多彩な生理やマクロファージ浸潤を抑制した。また，AM2投与

活性を有するペプチドであるアドレノメデュリン２により，脈絡膜複合体での Vegfa，Kdr，Cd68，Cyba，（AM2）に着目し，nAMD をはじめとする眼内血管

Ccn2の有意な発現低下を認めた。

新生疾患における AM2の病態生理学的意義を，AM2

4）CNV からのフルオレセインの漏出は，AM2-/- マ

ノックアウト（AM2-/-）マウスを用いて検討した。

ウスで増加し，AM2投与で減弱した。培養血管内皮細胞において，VEGF によって惹起された血管透過326

その結果，柿原伸次は次の結論を得た。
１．野生型マウスと AM2ノックアウトマウス（AM2信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨/-）新生仔マウス間の比較や，AM2の硝子体投与

５．トランスクリプトーム解析から AM2の CNV 改による検討では，網膜血管新生に対する明らかな影

善効果に関連することが予想されるホメオボックス
遺伝子 Meox2を同定した。

響を認めなかった。
２．レーザー誘導脈絡膜血管新生（LI-CNV）をマウ

６．脈絡膜複合体における Meox2の発現は，AM2投スに誘導すると，AM2-/- マウスでは野生型マウ

与で亢進し，AM2-/- で減弱した。ヒト臍帯静脈スに比べて，CNV 拡大・網膜下線維化拡大・マク

内皮細胞（HUVEC）において TGF-β2＋TNF-α に

ロファージ浸潤の亢進を認めた。逆に，AM2の投よって惹起される内皮間葉転換は，AM2の投与で与はこれらを抑制した。同様に，AM2-/- マウスで抑制されたが，siRNA による Meox2のノックダウ

は，脈絡膜複合体での Vegfa，Kdr，Cd68，Cyba，ンにより AM2の効果はキャンセルされた。同様に，

Ccn2の発現上昇を認め，AM2投与はこれらの発現

TNF-α によって即時に惹起される NF-κB の活性を抑制した。

化は，AM2の投与で抑制されたが，Meox2のノックダウンにより AM2の効果はキャンセルされた。

３．網膜色素上皮細胞 ARPE19に対する TGF-β2＋
TNF-α 刺激は， 上皮間葉転換を誘導し， 上皮系

以上の結果から，柿原伸次は，AM2は，血管透過マーカーの発現減少と間葉系マーカーの発現亢進を性抑制， 酸化ストレス抑制に加えて，Meox2発現もたらしたが，AM2の投与によりそれらは抑制さ亢進を介した抗線維化作用や，抗炎症作用などを介しれた。また，TGF-β2＋TNF-α 刺激は，ARPE19にて，nAMD の病態を改善させることを示し，AM2がおける AM2発現亢進を惹起した。

nAMD の有望な治療標的となる可能性を示した。
よって主査，副査は一致して本論文を学位論文とし４．AM2は，in vivo および in vitro で血管内皮からて価値があるものと認めた。

の透過性亢進を抑制した。

Adjacent segment pathology following posterior lumbar interbody fusion for lumbar degenerative spondylolisthesis : a comparison between minimally invasive and conventional open
approach（腰椎変形すべり症に対する腰椎後方椎体間固定術後の隣接椎間障害：低侵襲アプ
ローチと従来アプローチの比較）
三

村

哲

彦

（論文の内容の要旨）

alignment，骨癒合率，椎間関節の損傷に有意差は認【背景】脊椎固定術後の隣接椎間障害の発症には生体められなかった。MI-PLIF 群68例中４例（5.9 ％），力学的因子が重要な役割を果たす。そのため，傍脊柱O-PLIF 群32例中６例（18.8 ％）で手術が必要な隣接筋損傷の少ない低侵襲（MI）アプローチを用いた腰椎間障害を発症した。Kaplan-Meier 解析では，５年

椎後方椎体間固定術（PLIF）は，従来の open PLIF

後の無イベント生存率は MI-PLIF 群で98.5 ％（95 ％（O-PLIF）よりも隣接椎間障害の出現が少ない可能

confidence interval［CI］：95.5 ％-100 ％），O-PLIF性がある。本研究の目的は，MI-PLIF 後の隣接椎間群で90.6 ％（95 ％CI：81.1 ％-100 ％），10年後の無障害の発症率を検討することである。

イベント生存率は MI-PLIF 群で93.7 ％（95 ％CI：

【対象と方法】腰椎変性すべり症に対して L4/5レベル

86.8 ％ -100 ％ ），O-PLIF 群 で 71.8 ％（ 95 ％ CI ：の単椎間 PLIF を受けた患者100名を対象とした（MI-52.9 ％-97.5 ％）であり，MI-PLIF は O-PLIF よりも

PLIF 群68名，O-PLIF 群32名，平均追跡期間100.5か有意に手術が必要な隣接椎間障害の発生が少なかった月）。隣接レベルの病変による再手術を必要とした場（P＝0.04）。多変量 Cox 比例ハザードモデルにおいて，合を，手術が必要な隣接椎間障害と定義した。各群のO-PLIF が独立した隣接椎間障害の危険因子であった

生存曲線を推定し，統計的に比較した。また，Cox（ オ ッ ズ 比 3.97 ，95 ％ CI：1.02-15.48 ，P＝0.04 ）。

比例ハザードモデルを用いて，患者情報の交絡を調整

MI-PLIF 群は O-PLIF 群に比べて JOA スコアの改善した。臨床転帰として，術前および最終診察時の JOA率が有意に高かった（79.8 ％ vs. 61.1 ％，P＜0.01）。

スコアを評価した。

【結論】MI-PLIF の後，手術が必要な隣接椎間障害の【結果】両群の患者情報，術前の椎間板変性，sagittal

発症率は５年後に1.5 ％，10年後に6.3 ％と予測され

No. 5, 2023327

審査学位論文要旨

た。MI-PLIF は O-PLIF に比べて手術が必要な隣接（JOA スコア）を評価した。
その結果，三村らは次の結論を得た。

椎間障害の発症率が低く，良好な臨床転帰を示した。
PLIF における MI アプローチは，手術が必要な隣接１．手術が必要な隣接椎間障害の発生率は５年で MIPLIF 1.5 ％，O-PLIF 9.4 ％，10年でそれぞれ6.3

椎間障害発症のリスクを低下させる。
（論文審査の結果の要旨）％，28.1 ％であり，MI-PLIF は O-PLIF と比較し脊椎固定術後の隣接椎間障害の発症には生体力学的て発生率が低かった。

因子が重要な役割を果たす。そのため，傍脊柱筋損傷

２．患者の背景因子を含めた多変量解析においてもの少ない低侵襲（MI）アプローチを用いた腰椎後方椎O-PLIF は MI-PLIF に対して有意な手術が必要な

体間固定術（PLIF）は，従来の open PLIF（O-PLIF）

隣接椎間障害のリスク因子であり，その発生率はよりも隣接椎間障害の出現が少ない可能性がある。本

3.97倍であった。

研究の目的は，MI-PLIF 後の隣接椎間障害の発症率

３．画像学的な隣接椎間障害として，L3/4椎間の後を検討することである。

方開大の増加が O-PLIF の方が多く，O-PLIF は本研究では，腰椎変性すべり症に対して L4/5レベ

MI-PLIF よりも上位の隣接椎間での不安定性が増

ルの単椎間 PLIF を受けた患者を後ろ向きで検討し，している可能性を示唆していた。

MI-PLIF 群と O-PLIF 群の２群に分けて隣接椎間障

これらの結果により，MI-PLIF は O-PLIF よりも害の発生を比較した。隣接レベルの病変による再手術手術が必要な隣接椎間障害の発生が少ないことを示しを必要とした場合を，手術が必要な隣接椎間障害と定た。MI-PLIF は傍脊柱筋の損傷が O-PLIF より少な義した。各群の生存曲線を推定した。また，隣接椎間く不安定性を起こしにくく，隣接椎間障害の発生を減における画像学的な隣接椎間障害として，椎間板の高少させたと考えられる。今後はサンプルサイズの大きさの減少，椎体すべりの増加，椎間の後方開大の増加

な前向き研究が必要である。

を検討した。また，臨床転帰として，術前および最終
診察時の日本整形外科学会腰痛疾患治療成績判定基準

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Cancer among children, adolescents and young adults in the Hokushin region, Japan, between
2010 and 2015（2010～2015年の北信地域における小児・AYA 世代のがん罹患の実態）
大

倉

絵

梨

（論文の内容の要旨）

大きく変化し，がん種とライフステージにより，具体【緒言】14歳以下の小児がんは，臨床研究の推進によ的な対応のニーズが異なる可能性があるため，それらり治癒率は向上しているものの，依然として難治症例に応じた関わり方や理解の促進，環境整備などが必要も存在することから，十分な診療体制の構築とともにである。しかし，本邦における小児・AYA 世代のが診断時から晩期合併症への対応が必要である。15歳以ん罹患の疫学情報は未だ乏しく，十分な把握がされて上39歳以下の思春期・若年成人（adolescent and young

いない現状がある。2019年10月に国立がん研究セン

adult；AYA）世代のがんは，ほぼすべてが希少がん

ター・国立成育医療研究センターから発表された全国（人口10万人あたり６人未満の発症）に含まれ，小児調査の報告により，その実態や予後も少しずつ明らかがん（14歳以下）や成人がん（主要五大がん）と比較になってきているものの，地域ごとの実態や問題点・して専門医の診療を受ける機会や標準治療が乏しく５課題などの現状は把握されておらず，地域のがん医療

年生存率が低い。また，就学・就労・結婚・出産・育に十分活用できていない可能性がある。

児などの多彩なライフイベントへの影響が不可避であ本研究では，隣接する４県（北信地域：長野県，富り，新規治療法・薬物の開発が滞っている。そのため，

山県，石川県，福井県）のデータベースを活用し，同AYA 世代のがんについては，治療成績の向上のみな地域の小児・AYA 世代のがん罹患の状況を正確に把らず，精神的・社会的問題のサポートも含めた AYA

握し，全国調査の結果と比較することにより，地域の世代に適切な診療体制を早急に構築する必要がある。

小児・AYA 世代がんの実態を明らかにした。

小児期から AYA 世代にかけて，がんの種類の内訳は【対象と方法】2010年１月から2015年12月までにがん

328

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨（上皮内がんを含める）と診断され，北信地域のがん

世代がんのデータベースの中では，正確性，カバー率，診療を担当する主要病院20施設で院内がん登録され，細分類および更新スピードの点で有用ではないかと考北信がんプロ・地域がんデータベースにデータ提供さえられた。今後，４県の地域はもとより全国の小児・れた症例のうち，０～39歳の男女例のデータを使用しAYA 世代の診療体制の整備に利用されることが期待た。データ使用にあたり，各医療施設の倫理審査委員される。

会で承認を受けた。０～39歳の経年推移を年齢・性（論文審査の結果の要旨）

別・県毎に集計し，同時期の県毎の人口動態から小2010年１月から2015年12月までに北信がんプロ・地児・AYA 世代の人口10万人に対する推定罹患率を算

域がんデータベースのデータ提供された０～39歳の男

出し，過去の報告と比較，がん罹患における地域性の女例，計5,718例を集計，解析を行い，過去の全国調有無も検討した。

査の結果と比較した。がん種の割合において，０～14【結果】該当データは計5,718例で，がん発症率（人口歳は非癌腫がそのほとんどを占め，15歳以降から段階

10万人あたりの粗罹患率）は０～14歳，15～19歳，20～

的に癌腫が増えていく傾向は，本データベースにおい

29歳，30～39歳において各々13.4，14.5，44.0，101.5ても全国調査と一致した。

であった。がん種の割合において，０～14歳は非癌腫

小児の白血病・悪性リンパ腫が３割を占めるというがそのほとんどを占め，15歳以降から段階的に癌腫がデータは，全国調査と一致した。これらの疾患は専門増えていく傾向は，本データベースにおいても全国調病院での治療が集約している疾患であり，本データに査と一致した。０～19歳の男女比は1.3：１と男性のは小児がん専門病院である長野県立こども病院のデー罹患数が多かったが，20歳以降は女性の罹患数が顕著

タが含まれており，４県すべての小児がん診療施設がに増加し，年齢を追うごとに男女比の差が拡大した。

参加していたことから，小児期のがん発症率としてよ

20歳以降の男女比の逆転とその後の男女比の拡大は全り正確な現実に即したデータであることと考えられた。

国調査と同様の傾向であった。

AYA 世代のうち，20代の女性のがん発症率が全国【考察】AYA 世代の女性のがん発症率が全国調査よ調査よりも高かったことに関しては，地域性に伴う環りも高かったことに関しては，地域性に伴う環境要因

境要因や遺伝学的背景というよりは，本データベース

や遺伝学的背景というよりは，本データベースが若年が若年成人のがん診療を行うほとんどの施設を網羅し成人のがん診療を行うほとんどの施設を網羅しているていることから，抽出データを基とする全国調査よりことから，抽出データを基とする全国調査よりも正確

も正確な情報を導き出せた可能性が示唆された。本な情報を導き出せた可能性が示唆された。０～14歳のデータベースの調査結果を全国の現状を示す結果と判

がん種の割合において，神経芽腫の割合が全国調査よ断するためには，環境要因や遺伝学的背景の影響の有りも高かったことに関しては，神経芽腫は集学的治療

無も考慮したさらなるデータの集積が必要であるが，が困難な地域においては近隣県や遠方の大都市圏で医現存する小児・AYA 世代がんのデータベースの中で療が提供されることが少なくないが，本データベース

は，正確性，カバー率，細分類および更新スピードのでは４県すべての小児がん診療施設が参加していたこ

点で有用ではないかと考えられた。今後，４県の地域とから，地域全体の神経芽腫発症率がより正確に算出はもとより全国の小児・AYA 世代の診療体制の整備された可能性が考えられた。本データベースの調査結に利用されることが期待される。

果を全国の現状を示す結果と判断するためには，環境要因や遺伝学的背景の影響の有無も考慮したさらなる

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

データの集積が必要であるが，現存する小児・AYA

No. 5, 2023329

審査学位論文要旨

Predictors of a Non-response to Prophylactic Indomethacin for Patent Ductus Arteriosus inPreterm Infants（早産児における動脈管開存症に対するインドメタシン予防投与への不応予
測因子の検討）内海雅史（論文の内容の要旨）「頭蓋内出血」，「脳室周囲白質軟化症（PLV）」，「壊【背景と目的】動脈管（DA）は胎児が母胎内で正常

死性腸炎」，「敗血症」，「抗生剤投与」に加え，母体因発達するために主肺動脈から大動脈へのバイパス血管子として「母体年齢」，「出産回数」，「妊娠契機」，「胎と機能する胎児循環の重要な要素であるが，出生後は児数（単胎・多胎）」，「母体合併症（妊娠糖尿病，妊不要となり早期に閉鎖する必要がある。しかし妊娠28

娠高血圧症，母体感染症）」を検討した。

週未満で出生した早産児の50-70 ％で DA が閉鎖しな【結果と考察】選択基準を満たした早産児は76例（反い状態が持続することがある。DA が開存している場

応群42例，不応群34例）であった。反応群と不応群の合，肺血管抵抗の減少に伴い DA を介して大動脈か間で，「多胎妊娠」と「子宮内感染症」で有意差が確ら肺動脈へのシャント血流が増加し，肺血流の増加と認された。多胎例で不応群が反応群に比して有意に高全身血流の低下を招く。そのため，早産時の動脈管開かった（３例［7.1 ％］vs ９例［26.5 ％］；P＝0.029）。

存症（PDA）は心不全，肺鬱血，肺出血，壊死性腸

子宮内感染症例についても PIND 不応群が有意に高炎（NEC）を合併し新生児死亡率に強く関連する。通常，

い結果となった（２例［4.8 ％］vs ８例［23.5 ％］；母胎内では胎盤から供給されるプロスタグランジン

P＝0.038）。単変量ロジスティック回帰解析では多胎（PGE2）と DA 自身で生成する PGE2により開存を妊娠と子宮内感染症は PIND 不応と有意に相関し，維持するが，出生後，胎盤からの PGE2供給が停止し多変量ロジスティック回帰分析において有意かつ独立

DA は閉鎖する。早産児に対して出生後早期にインした不応予測因子であった（OR 5.45，95 ％CI 1.05-

ドメタシン（IND）やイブプロフェンなどの非選択的29.2，P＝0.044）。伊藤らの報告では双胎羊の早産児

シクロオキシゲナーゼ（COX）阻害剤を投与するこにおいて単胎羊と比較して DA 閉鎖に必要な内膜肥とは PGE2の作用を抑制して DA 閉鎖を促し，PDA

厚が遅いことを報告しており，今回得た結果を支持す及び PDA 関連合併症の予防に効果があることが知らる結果となっている。また早産時の全身感染症は血中れている。本邦では妊娠26週未満で出生した新生児及PGE2濃度を上昇させることが知られており，PIND

び呼吸急迫症候群（RDS）による肺サーファクタン

不応のリスクなっていると考えられる。

ト治療を受けた妊娠28週未満の早産児に PIND が行【結論】本研究の結果より，多胎妊娠は PIND 不応因

われている。一方で一部の早産児には予防的 IND 予防

子になることが示唆された。 また子宮内感染症も投与（PIND）に抵抗性があり外科的治療による DAPIND 不応因子なることが示唆され，これらのリスク

閉鎖が必要になる症例が存在する。本研究では早産児を要する早産児に対しては早期に治療介入することがにおける PIND に対する周産期不応予測因子を明らか望ましいと考えられた。

にすることを目的とした。

（論文審査の結果の要旨）【対象と方法】2009年から2019年に信州大学医学部附動脈管（DA）は胎児が母胎内で正常発達するため

属病院で PIND が実施された妊娠週数28週未満の早に主肺動脈から大動脈へのバイパス血管と機能する胎産児についてカルテ記載を基に後方視的に検討した。

児循環の重要な要素であるが，出生後は不要となり早PIND は出生後24時間以内に開始され IND（0.1 mg/

期に閉鎖する必要がある。しかし妊娠28週未満で出生

kg/ 回）を６時間かけて持続投与され DA の閉塞が得した早産児では閉鎖しない状態が持続することがあり，られるまで，24時間毎に最大３回まで行われた。対象

肺血管抵抗の減少に伴い DA を介して大動脈から肺者は PIND への反応に対して「反応群」と「不応群」に動脈へのシャント血流が増加し，心不全，肺鬱血，肺分類した。評価項目は対象新生児について「性別」，「妊出血，壊死性腸炎（NEC）を合併し新生児死亡率に娠週数」，「出生体重」，「アプガースコア」，「RDS 治療

強く関連する。本邦では妊娠26週未満で出生した新生歴」，「子宮内感染症」，「肺出血」，「慢性肺疾患（CLD）」，

児及び呼吸急迫症候群（RDS）による肺サーファクタ

330

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

その結果，内海は次の結論を得た。

ント治療を受けた妊娠28週未満の早産児に PIND が行われている。一方で一部の早産児には予防的 IND

１．
「多胎妊娠」で不応群が反応群に比して有意に高かった。

予防投与（PIND）に抵抗性があり外科的治療によるDA 閉鎖が必要になる症例が存在する。本研究では早２．「子宮内感染症」についても PIND 不応群が有意に高かった。

産児における PIND に対する周産期不応予測因子を３．
「慢性肺疾患」については反応群の方が有意に高調べた。

かく，前２項目と反対の結果であった。

2009年から2019年に信州大学医学部附属病院で PINDが実施された76症例についてカルテ記載を基に後方視４．
「多胎妊娠」と「子宮内感染症」は有意かつ独立的に検討した。PIND への反応に対して「反応群」とした不応予測因子であった。

「不応群」に分類し，「性別」，「妊娠週数」，「出生体

本研究の結果より，多胎妊娠は PIND 不応因子に重」，「アプガースコア」，「RDS 治療歴」，「子宮内感なることが示唆された。また子宮内感染症も PIND

染症」，
「肺出血」
，
「慢性肺疾患（CLD）」，「頭蓋内出

不応因子なることが示唆され，臨床においてこれらの血」，「脳室周囲白質軟化症（PLV）」，「壊死性腸炎」，

リスクを要する早産児に対しては早期に治療介入する「敗血症」，「抗生剤投与」 に加え， 母体因子としてことが必要であることが示唆された。慢性肺疾患に対「母体年齢」，「出産回数」，「妊娠契機」，「胎児数（単する厳重な全身管理の結果 PDA 閉鎖に関与したこと

胎・多胎）」，「母体合併症（妊娠糖尿病，妊娠高血圧が考えられた。よって主査，副査は一致して本論文を症，母体感染症）」を検討した。

学位論文として価値があるものと認めた。

Clinical and molecular features of patients with COL1-related disorders : Implications for thewider spectrum and the risk of vascular complications（COL1関連症候群における分子遺伝
学的・臨床的検討）
武

田

良

淳

（論文の内容の要旨）

析と PCR ダイレクトシークエンス法によりバリアン【背景】Ⅰ型コラーゲンは α1鎖２本と α2鎖１本のヘテトを検出，ACMG/AMP ガイドラインによる評価でロ三量体による triple helix 構造によって構成され，骨・pathogenic または likely pathogenic を病的バリアン

軟骨，皮膚，心筋，血管壁などの結合組織に広く分布

トと判定した。

する。α1鎖と α2鎖はそれぞれ COL1A1，COL1A2【結果】＜症例＞性別は男性８例（35 ％），女性15例

によりコードされ，転写，翻訳，翻訳後修飾の過程（65 ％），年齢分布は３歳から67歳（中央値26）で，を経て成熟コラーゲン繊維を形成する。COL1A1，

20歳未満の小児例は10例（43 ％），20歳以上の成人例

COL1A2変異により骨脆弱性を主徴とする骨形成不は13例（57 ％）であった。臨床診断は骨脆弱性を主全症（OI），皮膚脆弱性や関節過伸展を主徴とする

徴とする OI 群が18例（78 ％），関節・皮膚症状を主Ehlers-Danlos 症候群（EDS），OI と EDS の中間的徴とする EDS 群が５例（22 ％）で，EDS のサブタイ

な 疾 患 概 念 で あ る COL1-related overlap disorder

プは多発関節弛緩型（aEDS）２例，古典型（cEDS）（C1ROD）など複数の先天性結合組織異常症を発症す

１例，血管型（vEDS）１例，vEDS または OI が１る。本研究では，臨床的に OI または EDS が疑われ，例であった。遺伝子解析による確定診断は，OI type

COL1A1または COL1A2に病的バリアントを検出しⅠまたは分類不能型 OI が17例，４例が C1ROD，１

確定診断した COL1関連症候群の臨床像および遺伝学

例が COL1関連 cEDS であった。臨床像は極めて多彩的特徴を検討した。

であり，同一家系内においても多発骨折および青色強【対象と方法】臨床的に OI または EDS が疑われ，次膜から OI と臨床診断される場合や先天性股関節脱臼

世代シーケンサーを用いた COL1A1/COL1A2遺伝子

や関節過伸展から aEDS と臨床診断される場合が認解析で病的バリアントを検出した15家系23症例を対象められた。

とした。末梢血白血球よりゲノム DNA を抽出し，次＜COL1A1/COL1A2遺伝子解析＞

世代シーケンサーおよび結合組織疾患パネルによる解No. 5, 2023

15家系中11家系が COL1A1のミスセンス・ナンセ
331審査学位論文要旨

ンス／フレームシフト・スプライスバリアント，４家離の形成と進展を抑制する。同じ結合組織異常症であ系が COL1A2のミスセンス・スプライス・４塩基欠る Marfan 症候群や Loyes-Diez 症候群，vEDS の血

失バリアントであり，全て triple helical domain 内に管合併症に対して β-blocker の有効性が報告されてお位置していた。COL1A1の７家系と COL1A2の３家

り，COL1関連症候群の血管合併症に対しても有効で系は既報バリアントであり，このうち COL1A1の2家ある可能性が考えられた。

系と COL1A2の１家系は既報とは異なる臨床像を示【結語】本研究では，C1ROD を含む COL1関連症候していた。＜心臓・血管合併症＞心臓・血管合併症は群の新規症例を報告し，OI および COL1関連 EDS と23例中７例（22 ％）に合併し，１例が死亡した。脳動の臨床的・分子遺伝学的オーバーラップと同一家系内脈瘤，くも膜下出血，脳動脈解離，腹部大動脈瘤，心における表現度の多様性を示した。背景とする表現型

臓弁疾患，動静脈奇形と多彩であり，発症年齢は全例に関わらず重篤な血管合併症を発症する可能性があるが20歳以上であった。

ため，生涯にわたるサーベイランスおよび適切な治療【考察】COL1関連症候群は，骨脆弱性を主徴とする介入が必要と考えられた。

OI，関節・ 皮膚症状を主徴とする COL1関連 EDS，

（論文審査の結果の要旨）

両者の中間的な症状をもつ C1ROD と幅広い表現型を

Ⅰ型コラーゲン分子をコードする COL1A1，COL1

示した。COL1関連 EDS と C1ROD の EDS 群は OI

A2変異は，先天性結合組織異常症である骨形成不全

群と比較して皮膚症状が顕著な傾向を示したが，OI症（OI），および Ehlers-Danlos 症候群（EDS）の４群では骨折歴を除いて EDS 群と大きな差を認めな

つの病型（古典型，血管型，多発関節弛緩型，心臓弁

かった。同一家系内でも臨床像は極めて多彩であり，型）の原因である。近年，OI と EDS の中間的な疾患

骨折回数や心臓血管合併症などの年齢依存性の症状や，概念である COL1-related overlap disorder（C1ROD）

初発症状など年齢被依存性の症状の多様性を認めた。

の概念が新たに提唱された。今回，COL1A1またはC1ROD で確認された３つのバリアントはすべて

COL1A2に病的バリアントを検出し確定診断した COL1

triple helical domain 内のＮ末端アンカー領域に位置関連症候群の臨床像，遺伝学的特徴について検討した。

し， 同部位に生じる病的バリアントの結果，triple

臨床的に OI または EDS が疑われ，COL1A1/COL1

helix 構造の安定化や蛋白 folding が阻害され C1ROD

A2病的バリアントを検出した症例の臨床症状，遺伝の症状を呈すると考えられた。C1ROD における遺伝子解析結果，合併症に関するデータを収集した。

型―表現型相関は低く，epigenetic などさまざまな修
飾因子が影響する可能性が考えられた。
Ⅰ型コラーゲンは，心臓弁や動脈壁に高度に発現し，その結果，武田らは次の結論を得た。
１．対象は15家系23症例，20歳未満の小児例は10例（43 ％），20歳以上の成人例は13例（57 ％）であっ

壁の構造と引張強度の維持に極めて重要である。脳動た。臨床診断は OI 群が18例（78 ％），EDS 群が５脈瘤において壁内に分布する I 型コラーゲンのリモデ

例（22 ％）で，遺伝子解析による確定診断は，OI

リングが促進していること，OI に合併する大動脈解type Ⅰまたは分類不能型 OI が17例，４例が C1ROD，離において組織学的に囊胞性内膜変性を認めることか

１例が COL1関連古典型 EDS であった。同一バリら，血管合併症の発症に I 型コラーゲンの障害が関与

アント保有者の家系内において，臨床診断は父親がしている可能性が示唆された。今回の検討では確認さOI，長女および長男が多発関節弛緩型 EDS と異なっれなかったが，COL1関連 cEDS においても重篤な血ていた。

管合併症を発症することが報告されている。また，脳２．15家系中11家系が COL1A1のミスセンス・ナン

動脈瘤の合併頻度は31 ％（４/13例）と一般成人集団

センス／フレームシフト・スプライスバリアント，

コホートにおける未破裂動脈瘤の有病率である0.5～

４家系が COL1A2のミスセンス・スプライス・４３％と比較して有意に高値であった。これらの所見よ

塩基欠失バリアントであり，すべて triple helical

り，COL1関連症候群におけるⅠ型コラーゲンの生合

domain 内に位置していた。C1ROD のバリアント

成障害が血管合併症の発生に強く関与する可能性が考はすべて triple helical domain 内のＮ末端アンカー

えられた。
β-blocker は心拍出量の減少による降圧効果に加え，動脈壁に対する脈動性ストレスを緩和させ動脈瘤や解332領域に位置していた。
３．脳動脈瘤，くも膜下出血，脳動脈解離，脳梗塞，腹部大動脈瘤，大動脈解離，心臓弁疾患，動静脈奇
信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

形などの心臓・ 血管合併症は23例中７例（22 ％）る表現度の多様性，遺伝学的診断の重要性が示された。

にみられ，全例が20歳以上での発症であった。脳動

背景とする表現型に関わらず重篤な血管合併症を発症

脈瘤は成人13例中４例（31 ％）にみられ，一般成する可能性があり，生涯にわたるサーベイランスおよ

人 集 団 コ ホ ートにおける未破裂動脈 瘤 の 有 病 率

び適切な治療介入が必要であることが示唆された。

（0.5～３％）と比較して有意に高値であった。

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文としこれらの結果より，COL1関連症候群における臨床て価値があるものと認めた。

的・分子遺伝学的オーバーラップと同一家系内におけ

Usefulness of breath-hold fat-suppressed T2-weighted images with deep learning-based
reconstruction of the liver : comparison to conventional free-breathing turbo spin echo（深層学習再構成を用いた肝の呼吸停止下 T2強調画像の有用性：自由呼吸下高速スピンエコー法
との比較）
一

戸

記

人

（論文の内容の要旨）

症例を対象とした。また，これらの症例に認めた10【背景】肝の T2強調画像は，自由呼吸下（呼吸同期）

mm 以上の充実性病変58個も対象とした。FB-TSE，

または複数の呼吸停止下で高速スピンエコー法（turbo

BH-DL-TSE，BH-DL-HASTE に関して，撮像時間

spin echo，TSE）等の multi-shot technique によりと画質を比較した。画質評価は，２名の放射線科医の撮像されることが多い。この撮像法は撮像時間が長く，合議による５段階の定性評価，病変―肝信号比の定量

モーションアーチファクトに弱いという短所がある。

評価を行った。３つの撮像法の画質に有意差があるか，一方，超高速スピンエコー法（half Fourier acquisition

Friedman 検定及び Dunn の多重比較による統計解析

single-shot turbo spin echo，HASTE）等の single-を行った。

shot technique が用いられることもある。この撮像法【結果】：撮像時間は，FB-TSE で４分43秒±１分21秒

は，撮像時間が短く，モーションアーチファクトに強（95 ％信頼区間４分28秒―４分58秒），BH-DL-TSE

いという長所があるが，T2 blurring によりコントラで40秒，BH-DL-HASTE で20秒であった。肝の呼吸ストが低下するという短所がある。近年，アンダーサ

アーチファクトは，BH-DL-HASTE で，FB-TSE とンプリングされたｋ空間から deep learning（DL）を

BH-DL-TSE より有意に少なかった（p＜0.0001）。

用いて MR 画像を再構成する方法が開発され，肝のFB-TSE と BH-DL-TSE は，BH-DL-HASTE と比較

T2強調画像の撮像時間を短縮し，画質を向上させら

して，motion-related signal loss（MRSL）が有意にれることが報告されている。しかし，多くの報告では少なく，肝内脈管も明瞭であった（p＜0.0001）。肝

DL 再構成を用いた呼吸停止下 single-shot technique

左葉辺縁（肝と胃の境界）の描出は，BH-DL-HASTEを評価しており，以下の２点が明らかにされていない

で 最 も 良 好 で（ p＜0.0001 ），BH-DL-TSE は FB-：⑴ 従来法の自由呼吸下 multi-shot technique と比TSE より良好であった（p＝0.0290）。肝右葉辺縁の較して，DL 再構成を用いた呼吸停止下 multi-shot

描出，病変の明瞭性，病変―肝信号比では，３つの撮

technique は有用か，⑵ DL 再構成を用いた呼吸停止下

像法間で有意差を認めなかった（p＝0.1290，0.5292，

single-shot technique と DL 再構成を用いた呼吸停止下0.6026）。

multi-shot technique のいずれが有用であるか。本研究の【結語】BH-DL-TSE は，FB-TSE と比較して撮像時

目的は，従来法の自由呼吸下 TSE 法（FB-TSE），DL

間が短く，画質も同等以上であり，従来法の FB-TSE

再構成を用いた呼吸停止下 TSE 法（BH-DL-TSE），DLを代替できる可能性がある。BH-DL-TSE と BH-DL-

再構成を用いた呼吸停止下 HASTE 法（BH-DL-HASTE）

HASTE はそれぞれの長所があり，相補的に用いるべの撮像時間や画質を比較することで，BH-DL-TSE やきと考えられる。

BH-DL-HASTE の有用性を評価することである。

（論文審査の結果の要旨）【方法】2022年４月から５月に当院にて，肝疾患が疑対象は，2022年４月から５月に当院にて肝疾患が疑われて3-T の撮像機器で T2強調画像を撮像した111

われて3-T の撮像機器で T2強調画像を撮像した111

No. 5, 2023333

審査学位論文要旨

その結果，一戸は次の結論を得た。

症例である。また，これらの症例に認めた10 mm 以上の充実性病変58個も対象とした。肝の脂肪抑制 T2強

１．FB-TSE と比較して，BH-DL-TSE と BH-DL-

調画像の撮像に関して，従来法の自由呼吸下 TSE 法

HASTE の撮像時間は短かった。BH-DL-TSE は（FB-TSE），Deep Learning（DL）再構成を用いた呼BH-DL-HASTE より撮像時間が長いが，20秒の呼吸停止下 TSE 法（BH-DL-TSE）および DL 再構成を

吸停止が１回多いだけの違いであり臨床的に許容範用いた呼吸停止下 HASTE 法（BH-DL-HASTE）の囲内である。

撮像時間や画質を比較した。画質評価は，２名の放射２．肝の呼吸アーチファクトや肝左葉辺縁の描出の評

線科医の合議による５段階の定性評価，病変―肝信号価結果から，BH-DL-HASTE がモーションアーチ

比の定量評価を行った。３つの撮像法の画質に有意差ファクトに最も強く，BH-DL-TSE は FB-TSE よがあるか，Friedman 検定及び Dunn の多重比較により呼吸以外のモーションアーチファクトに強いと考る統計解析を行った。

えられた。これは撮像時間の違いのためと推測される。

撮像時間は，FB-TSE で４分43秒±１分21秒（95 ％信頼区間４分28秒―4分58秒），BH-DL-TSE で40秒，

３．BH-DL-HASTE で MRSL が多く，脈管が不明瞭

BH-DL-HASTE で20秒であった。肝の呼吸アーチファである要因としては，併用される variable flip angle

ク ト は ，BH-DL-HASTE で ，FB-TSE と BH-DL-に含まれる low flip angle が考えられた。

TSE より有意に少なかった（p＜0.0001）。FB-TSE

４．肝病変のコントラストは，今回の撮像条件においと BH-DL-TSE は ，BH-DL-HASTE と 比 較 し て ，て３つの撮像法間では，定性的にも定量的にも同等

motion-related signal loss（MRSL）が有意に少なく，であった。

肝内脈管も明瞭であった（p＜0.0001）。肝左葉辺縁

これらの結果より，BH-DL-TSE は，FB-TSE と（肝と胃の境界）の描出は，BH-DL-HASTE で最も比較して撮像時間が短く，画質も同等以上で，従来法良好で（p＜0.0001），BH-DL-TSE は FB-TSE よりの FB-TSE を代替し検査時間を短縮できる可能性が良好であった（p＝0.0290）。肝右葉辺縁の描出，病ある。 また，BH-DL-TSE と BH-DL-HASTE はそ

変の明瞭性，全病変―肝信号比，血管腫―肝信号比，れぞれの長所があり，相補的に用いることができる可非血管腫病変―肝信号比では，３つの撮像法間で有能性が示唆された。よって，主査，副査は一致して本意差を認めなかった（p＝0.1290，0.5292，0.6026，

論文を学位論文として価値があるものと認めた。

0.9260，0.5439）。

Histopathologically defined intestinal metaplasia in lesser curvature of corpus prior to Helicobacter pylori eradication is a risk factor for gastric cancer development（ ヘ リ コ バ ク
ター・ピロリ除菌療法前の胃体部小弯の組織学的腸上皮化生は除菌後胃癌のリスク因子である）
原（論文の内容の要旨）

大地にすることを目的とした。

【背景と目的】Helicobacter pylori（H. pylori）感染は【対象と方法】2004年から2018年までに信州大学医学

胃癌発症のリスク因子である。H. pylori に対する除部附属病院で，除菌療法前に updated Sydney System

菌療法を施行することでわが国における胃癌の罹患率（USS）に基づき，胃より５点生検（前庭部小弯，前と死亡率は低下傾向である。しかし，除菌成功後も一庭部大弯，胃角部小弯，体部小彎，体部大弯）もしく定の割合で胃癌が発生するため，除菌後胃癌は臨床的は培養目的の２点生検（前庭部大弯，体部大弯）を行に問題となっている。よって，発症のリスク因子を明い H. pylori 感染と診断し， その後除菌に成功したらかにすることは重要な課題である。現在，リスク因692例を対象とした。除菌時に40歳未満であった症例，

子の一つとして除菌療法前の組織学的腸上皮化生の存除菌後12か月以上の経過観察ができていない症例，胃在が報告されているが，腸上皮化生の分布や程度につ癌既往がある症例を除外した247例を解析した。除菌

いては明らかになっていない。本研究では，除菌後胃後胃癌は除菌後12か月以上経過した後に新規に診断し癌における除菌療法前の組織学的リスク因子を明らかたものと定義し，発癌の有無で除菌後胃癌群と非胃癌

334

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

群に分類し，臨床病理学的特徴を比較検討した。組

題となっている。そのため，除菌後胃癌のリスク因子

織学的評価は，USS に基づき各生検部位毎の萎縮スを明らかにすることは重要な課題である。そこで，除コアおよび化生スコアを評価し，また組織学的スコ

菌後胃癌における除菌療法前の組織学的リスク因子をアと分布でステージングを行う The operative link on検討した。信州大学医学部附属病院で，除菌療法前に

gastritis（OLGA），The operative link on gastric in­

updated Sydney System（USS）に基づき，胃より５

testinal metaplasia（OLGIM）も評価した。

点生検（前庭部小弯，前庭部大弯，胃角部小弯，体部【結果】全247例中11例（4.5 ％）に除菌後胃癌を認め

小弯，体部大弯）が施行された247例を解析した。除た。全症例の観察期間中央値は64か月（12-181か月）

菌後胃癌は除菌後12か月以上経過した後に新規に診断で，除菌後胃癌群11例（男性６例，年齢中央値67歳，したものと定義し，発癌の有無で除菌後胃癌群と非胃観察期間中央値75か月），非胃癌群236例（男性 98例，

癌群に分類し，臨床病理学的特徴を比較検討した。
その結果，原は次の結論を得た。

年齢中央値 63歳，観察期間中央値63か月）であった。
内視鏡的高度萎縮は，除菌後胃癌群で90.9 ％（10/11

１．全247例中11例（4.5 ％）に除菌後胃癌を認めた。

例）に認めており，非胃癌群45.8 ％（108/236例）と

２．内視鏡的高度萎縮は，除菌後胃癌群で90.9 ％（10/比較して有意に高率（P＜0.01）であったが，USS に11例）に認めており，非胃癌群45.8 ％（108/236例）

よる各部位の組織学的萎縮スコアおよび OLGA Ⅲ/Ⅳと比較して有意に高率（P＜0.01）であったが，の割合は両群で有意差を認めなかった。一方，組織学

USS による各部位の組織学的萎縮スコアおよび的化生スコアは除菌後胃癌群で全部位において有意にOLGA Ⅲ/Ⅳの割合は両群で有意差を認めなかった。

高値であり（いずれも P＜0.05），OLGIM Ⅲ/Ⅳの割

３．組 織 学 的 化 生 ス コ ア は 除 菌 後 胃 癌 群 で 全 部 位

合も除菌後胃癌群で有意に高率であった（P＜0.05）。

において有意に高値であり（いずれも P＜0.05），

各部位の USS 化生スコアおよび OLGIM が除菌後胃

OLGIM Ⅲ/Ⅳの割合も除菌後胃癌群で有意に高率で癌発症の予測に有効であるか ROC 解析を施行すると体あった（P＜0.05）。

部小彎の AUC が0.82と５点の中で最も高く，OLGIM

４．各部位の USS 化生スコアおよび OLGIM が除菌の AUC（0.82）と相違なかった。体部小彎における後胃癌発症の予測に有効であるか ROC 解析を施行

USS 化生スコアのカットオフ値を２とした場合，スすると体部小弯の AUC が0.82と５点の中で最も高コア２以上の症例は２未満の症例と比較して有意にく，OLGIM の AUC（0.82）と相違なかった。

除菌後胃癌発症が多く，感度81.8 ％，特異度71.6 ％，５．体部小弯における USS 化生スコアのカットオフ

オッズ比11.4であった。

値を２とした場合，スコア２以上の症例は２未満の【結論】除菌療法前の組織学的腸上皮化生は除菌後胃症例と比較して有意に除菌後胃癌発症が多く，感度癌のリスク因子であった。特に体部小彎に USS スコ

81.8 ％，特異度71.6 ％，オッズ比11.4であった。

ア２以上の化生を認める症例は除菌後胃癌のリスクが以上より，除菌療法前の組織学的腸上皮化生の存在高く，除菌療法後も慎重な経過観察を行う必要がある。

は除菌後胃癌のリスク因子であり，特に体部小弯に（論文審査の結果の要旨）

USS スコア２以上の化生を認める症例は除菌後胃癌

Helicobacter pylori（H. pylori）に対する除菌療法のリスクが高いことを示した。本研究は，体部小弯１を施行することで，わが国における胃癌の罹患率と死点の生検評価で除菌後胃癌リスクを評価できる可能性

亡率は低下傾向である。しかし，除菌成功後も一定のを示唆した。よって，主査，副査は一致して，本論文

割合で胃癌が発生するため，除菌後胃癌は臨床的に問を学位論文として価値があるものと認めた。

Development of the rabbit NASH model resembling human NASH and atherosclerosis（ヒト NASH および動脈硬化を模したウサギ NASH モデルの作出）
林

桃子（論文の内容の要旨）

薬の探索が急務である。これまで，ヒト NASH の研【背景及び目的】非アルコール性脂肪肝炎（NASH）

究にはマウスやラットなどのげっ歯類がモデル動物とに対する有効な治療法は未だ確立されておらず，治療して多用されてきた。しかし，ヒトとこれらのげっ歯No. 5, 2023335

審査学位論文要旨

類の間には様々な種差が存在しており，特に NASH

NASH モデル動物で得られた知見のヒトへの外挿の発症・進展に関与するリポタンパク質の動態および性に大きな障壁となっていると考えられる。一方，心肝臓からのコレステロール排出に寄与する胆汁酸の組

血管疾患（CVD）は NASH 患者の主な死因の一つで成，代謝についての差異は，モデル動物で得られた知あり，CVD のリスク要因である動脈硬化や高血圧は見のヒトへの外挿性に大きな障壁となっていると考え

NASH 患者で有病率が高いことや CVD イベントの有られる。一方，心血管疾患（CVD）は NASH 患者の意な増加が報告されていることから，NASH と動脈主な死因の一つであり，CVD のリスク要因である動硬化を同時に治療法できる方法が必要となる。本研究

脈硬化は NASH 患者で有病率が高いことから，NASH

では，リポタンパク質の動態ならびに胆汁酸の組成がと動脈硬化の両方に有効な治療法の開発が求められてげっ歯類に比べてヒトに近似するウサギを用いて，動いる。本研究では，リポタンパク質の動態ならびに胆脈硬化との同時評価が可能な NASH モデルの作出に

汁酸の組成がげっ歯類に比べてヒトに近似するウサギ

ついて検討した。

を用いて，動脈硬化との同時評価が可能な NASH モ

日本白色ウサギ（Kbs：JW）に特殊飼料 high-fat

デルの作出を目的とした。

high-cholesterol diet（HFHCD）を16週間給餌し，肝【方法】日本白色ウサギ（Kbs：JW）に特殊飼料 high-

臓・大動脈の組織学的解析，血清・肝臓の生化学的指

fat high-cholesterol diet（HFHCD）を16週間給餌し，標による病態評価を行った。また，経時的な病態変化

肝臓・大動脈の組織学的解析，血清・肝臓の生化学的を検討するために HFHCD を４，８，14週間給餌し指標による病態評価を行った。また，経時的な病態変た際の同評価項目および real-time PCR 法による肝化を検討するために HFHCD を４，８，14週間給餌

臓の遺伝子発現解析を行った。

した際の同評価項目および real-time PCR 法による肝臓の遺伝子発現解析を行った。

その結果，林 桃子は次の結論を得た。
１．HFHCD によって血清の AST/ALT の上昇およ【結果】HFHCD を給餌したウサギでは，血清の脂質び脂質異常を呈した。肝臓ではコレステロール，総異常および肝臓の顕著なコレステロール増加を認めた。

胆汁酸が顕著に増加した。

肝組織像では，脂肪肝から肝細胞の膨化および炎症細２．HFHCD は肝組織像において脂肪肝から肝細胞の胞の浸潤を伴う NASH，そして肝線維化に至る NASH

膨化および炎症細胞の浸潤を伴う NASH，そしての進展を示した。加えて，HFHCD 給餌８週目には大肝線維化に至る NASH の進展を示した。

動脈における動脈硬化病変の形成が見られた。遺伝子

３．HFHCD８週目には大動脈におけるプラークの形解析では肝臓のコレステロールの取り込みおよび加水成を認め，14週ではプラークの肥厚および泡沫細胞

分解，炎症並びに線維化関連遺伝子の増加を認めた。

の集積を生じた。

加えて，ER ストレス，リポアポトーシスに関連する

４．肝臓の遺伝子発現解析により，HFHCD では肝臓遺伝子発現の増加がみられたが，脂質過酸化マーカーのコレステロールの取り込みおよび分解酵素の遺伝である4-HNE の有意な増加は認められなかった。

子発現が増加した。

【結論】 本研究における HFHCD 投与ウサギ NASH

５．HFHCD では炎症・線維化関連遺伝子，ER スト

モデルは，コレステロール優位の NASH 病態ならびレスやリポアポトーシスに関連する遺伝子発現の増に動脈硬化病変を呈した。本モデルはヒトの NASH

加がみられたが，脂質過酸化マーカーである4-HNE

および動脈硬化に対する治療法の探索に有用であるとの有意な増加は認められなかった考えられた。

これらの結果より，本研究における HFHCD 投与（論文審査の結果の要旨）

ウサギ NASH モデルはコレステロール優位の NASH

非アルコール性脂肪肝炎（NASH）に対する有効な病態ならびに動脈硬化病変を呈することから，本モデ

治療法の探索のため，ヒト NASH の研究にはマウス

ルはヒトの NASH および動脈硬化に対する治療法のやラットなどのげっ歯類がモデル動物として多用され探索に有用であると考えられた。よって，主査，副査てきた。 しかしヒトとこれらのげっ歯類の間にはは一致して本論文を学位論文として価値があるものとNASH の発症・進展に関与するリポタンパク質の動認めた。

態や肝臓からのコレステロール排出に寄与する胆汁酸の代謝に関わる種差が存在することから，げっ歯類の
336

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

Correlations between the properties of saliva and metabolic syndrome : A prospective observational study（唾液性状とメタボリックシンドロームの関係性：前向き研究）
鈴木（論文の内容の要旨）

大介分泌の減少や，歯周病の増加による炎症の増加による【目的】歯周病とメタボリックシンドローム（以下ものと考えられた。糖尿病患者では，有用な指標になMetS）の間には密接な関連があると報告されている。

ると考えた。

歯周病などの口腔疾患は，唾液検査により低侵襲で容２．腎障害：血漿クレアチニンの上昇に伴い，pH の易に検査することが可能であり，MetS などの全身疾

上昇と唾液緩衝能の上昇する相関関係を認めた。慢性患との関連性が指摘されている。今回我々は，特定健腎不全の患者では唾液分泌の低下，唾液 pH，緩衝能診に加えて行う歯科検診に唾液検査を導入することにが上昇していた。口腔内細菌による窒素化合物の分解より，唾液性状の変化と MetS の構成要素の変化を横はアンモニウムイオン，ひいてはアルカリ環境の増加

断的，縦断的に検討したので，その概要を報告する。

を招いたのかもしれない。

【対象および方法】2017年と2018年に長野県塩尻市，

３．メタボリックシンドローム：唾液緩衝能とトリグ

安曇野市の特定健診と歯科検診の受診者を対象とした。

リセリドに相関関係を認めた。MetS の構成要素が増特定健診は厚生労働省により示された標準プログラム

加するにつれて，pH が低下すると報告があり，唾液

に沿って行われた。唾液検査は，Salivary Multi Testの緩衝能は，酵素や重炭酸，尿素，タンパクに影響を（ライオン株式会社，以下 SMT）を使用し，唾液緩受ける。

衝能，唾液 pH，唾液中の白血球，タンパク，潜血，

４．SMT：SMT は，短時間で唾液検査項目を効率よアンモニア，齲蝕原因菌数について検査した。特定健く検査が可能であった。特定検診を利用することで，診は，喫煙習慣や飲酒などの生活習慣の調査および高初めて大規模に，唾液検査が歯周病だけでなく，MetS

血圧，脂質異常，糖尿病治療薬の投薬の有無，身長，のスクリーニングに利用できることを示すことができ

体重，腹囲，血圧，トリグリセリド，LDL/HDL コレ

た。

ステロール，HbA1c，クレアチニンについて検査が【結論】唾液性状と MetS の構成要素との間に有意な行われた。唾液検査結果の推移と MetS の構成要素の関連を認め，特定検診に唾液検査が有効である可能性

変化を統計学的に検討した。

が示唆された。

【結果】特定健診受診者は2017年が7,848人，2018年が（論文審査の結果の要旨）

7,084人で，そのうち歯科健診受診者数は2017年が1,887

以前より，歯周病とメタボリックシンドローム（以人，平均年齢64.8歳，2018年が2,279人，平均年齢67.6

下 MetS）の間には密接な関連があると報告されてい歳であった。横断研究では，唾液緩衝能と HbA1c おる。歯周病などの口腔疾患は，唾液検査により低侵襲よびクレアチニンとの間に有意な関連を認めた。縦断で容易に検査することが可能であり，歯周病は MetS

研究では，唾液タンパクと HbA1c および高血圧とのなどの全身疾患との関連性が指摘されている。本研究間に有意な関連を認め，唾液緩衝能とトリグリセリドの目的は，特定健診に加えて行う歯科検診に唾液検査との間にも有意な関連を認めた。

を導入することにより，唾液性状と MetS の構成要素【考察】・高血圧：唾液タンパクと高血圧には，有意なの関係について評価検討することである。

関連性を認めていた。前向き研究で，唾液タンパクの本研究では，2017年と2018年に長野県塩尻市，安曇増加，歯周病と血圧の上昇は関連があるとの報告があ野市の特定健診と歯科検診の受診者を対象とした。特り，歯周病と高血圧とのメカニズムははっきりしてい定健診受診者は2017年が7,848人，2018年が7,084人で，ないが，心疾患で増加する CRP や動脈硬化に関連す

そのうち歯科健診受診者数は2017年が1,887人，平均年

る内皮マイクロパーティクルが寄与している可能性が

齢64.8歳，2018年が2,279人，平均年齢67.6歳であっある。

た。横断研究は2017年に特定健診，歯科検診を受診し１．糖尿病：縦断と横断研究で，唾液タンパクと HbA1cた方を対象とした。縦断研究は2017，2018年に特定健値には有意な関連があり，唾液タンパクの上昇は唾液

診，歯科検診を受診した方を対象とし，781人平均年齢

No. 5, 2023337

審査学位論文要旨

65歳であった。唾液検査項目（唾液緩衝能，唾液 pH，

上昇と唾液緩衝能の上昇する相関関係を認めた。

唾液中の白血球，タンパク，潜血，アンモニア，齲蝕

４．メタボリックシンドローム：唾液緩衝能とトリグリセリドに相関関係を認めた。

原因菌数）と特定健診項目および MetS の構成要素（喫煙習慣や飲酒などの生活習慣の調査および高血圧，

５．唾液検査に使用した Salivary Multi Test（ライ脂質異常，糖尿病治療薬の投薬の有無，身長，体重，オン株式会社，以下 SMT）：SMT は，５分という

腹囲，血圧，トリグリセリド，LDL/HDL コレステ

短時間で多数の唾液検査項目を効率よく網羅できた。

ロール，HbA1c，クレアチニン）の結果および変化

特定検診を利用することで，初めて大規模に，唾液

を統計学的に検討した。

検査が歯周病だけでなく，MetS のスクリーニングに利用できることを示すことができた。

その結果，鈴木大介は次の結論を得た。

これらの結果により，唾液性状と MetS の構成要素

１．高血圧：縦断研究にて，唾液タンパクと高血圧にとの間に有意な関連を認め，特定検診に唾液検査が有は，有意な関連性を認めた。
２．糖尿病：縦断と横断研究で，唾液タンパクと HbA1c

効である可能性が示唆された。
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値値には有意な関連を認めた。
３．腎障害：血漿クレアチニンの上昇に伴い，pH のがあるものと認めた。

Biocompatibility Evaluation of Carbon Nanohorns in Bone Tissues（Carbon nanohorns に対する骨組織での生体応答性評価）
上田（論文の内容の要旨）

勝也

骨孔を作製し，CNHs と CBs を注入し12週後の骨再生【背景と目的】Nanotechnology の進歩に伴い，Drugを骨組織標本で評価した。

delivery system（DDS）キャリアとしての Nanopar­【結果】in vitro 実験の細胞毒性評価では CNHs と CBs

ticles に大きな関心が寄せられている。Carbon nano­はどちらも破骨細胞，骨芽細胞の両細胞でシビアな細horns（CNHs）は毒性が低く，表面修飾の容易性や胞毒性を示さなかった。また細胞内取り込み評価では薬剤内包の特徴的機構を持っている。我々は骨疾患に両細胞内で CNHs と CBs ともに Lysosome に取り込

対する新規治療法の DDS キャリアとして CNHs を応まれていた。そして，興味深い事に細胞毒性が見られ用することを目標にしている。一方で CNHs 単独でない濃度において，CNHs 群でのみ破骨細胞の Tar­の骨組織に対する生物学的特性を評価した報告が少な

trate-resistant acid phosphatase 活性および分化マー

いため，我々は同じ様な粒子径で表面，立体形状が異カー遺伝子の発現を低下させた。一方で，骨芽細胞でなる Carbon blacks（CBs）を比較対照に，骨関連細は CNHs 群だけが Alkaline phosphatase 活性と分化胞での in vitro 実験，in vivo 実験で生体応答性を評

マーカー遺伝子の発現を上昇させた。更に骨芽細胞の価した。

石灰化条件下では，CNHs は石灰化結節を増加させ，【材料及び方法】滅菌済み CNHs と CBs を Bovine

細胞内外の石灰化小胞に取り込まれ結晶核となっていserum albumin と Hanksʼ balanced salt solution とのる状態を確認した。CBs 群では両細胞において酵素

分散剤下で10 mg/mL となるように調製し，60分間超活性や分化マーカーに影響を及ぼさなかった。また

音波処理にて高分散溶液を作製し，in vitro 実験，inin vivo 実験では CNHs 群でのみ骨再生が有意に促進

vivo 実験でベースサンプルとして使用した。in vitro

しており，CNHs が骨基質や骨小腔内に局在している

実験ではマウスマクロファージ様細胞株 Raw264細胞状態が見られた。

を破骨細胞に誘導し，マウス頭蓋冠由来骨芽細胞様細【結論】これらの結果は，エストロゲン低下やがん細胞株 MC3T3-E1（骨芽細胞）と共に，細胞毒性や細胞

胞由来の炎症性物質により破骨細胞の増殖，活性化に内取り込みを評価した。更に細胞内への取り込みによよる骨溶解を主体とした骨粗鬆症やがん骨転移などのる酵素活性や遺伝子発現への影響を評価した。加えて，骨疾患に対して，破骨細胞の抑制，骨芽細胞の成熟促

骨芽細胞では石灰化機能への影響も評価した。in vivo

進による骨再生などの副次的な効果をもつ新規治療法

実験では，ウィスター系10週齢の雄性ラットの脛骨にの DDS キャリアとして応用できる可能性がある。

338

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨（論文審査の結果の要旨）

よび分化マーカー遺伝子の発現を低下させた。一方

骨疾患に対する新規治療法の Drug delivery system

で， 骨芽細胞では CNHs 群だけが Alkaline phos­（DDS）キャリアとして Carbon nanohorns（CNHs）

phatase 活性と分化マーカーの発現を上昇させた。

を応用することを目標にしている。一方で CNHs 単独

加 え て ，CBs 群 で は 両 細 胞 で は 酵 素 活 性 や 分 化

での骨組織に対する生物学的特性を評価した報告が少マーカーに影響を及ぼさなかった。

ないため，同じ様な粒子径で表面，立体形状が異なる

４．骨芽細胞の石灰化条件下では，CNHs は石灰化結

Carbon blacks（CBs）を比較対照に，骨関連細胞で節を増加させ，細胞内外の石灰化小胞に取り込まれの in vitro 実験，in vivo 実験で生体応答性を評価し結晶核の生成が起きていた。

た。

５．in vivo 実験では CNHs 群でのみ骨再生が有意に評価項目は，in vitro 実験で細胞毒性や細胞内取り促進しており，CNHs が骨基質や骨小腔内に局在し込み，CNHs や CBs の取り込みによる酵素活性や遺た状態が見られた。

伝子発現への影響，石灰化機能を評価した。更に in

以上の結果から，CNHs は医療応用に対する重要な

vivo 実験でラット脛骨での CNHs や CBs 暴露による，細胞毒性を示さず，in vivo 実験では創傷治癒を促進

12週後の骨再生を評価した。

した。更に in vitro 実験では CNHs は破骨細胞の分化

その結果，上田は次の結論を得た。

を抑制し，骨芽細胞の分化，石灰化を促進した。これ

１．細胞毒性評価では CNHs と CBs はどちらも破骨らのことから，CNHs は骨組織への生体適合性が高く，細胞，骨芽細胞の両細胞でシビアな細胞毒性を示さ

破骨細胞による骨溶解が促進される骨疾患において，なかった。

骨再生を促進する様な付加価値を有する DDS キャリ

２．細胞内取り込み評価では CNHs と CBs は両細胞の Lysosome に蓄積していた。

アとして開発できる可能性が明らかとなった。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が３．細胞毒性が見られない濃度では，CNHs 群で破骨あるものと認めた。

細胞の Tartrate-resistant acid phosphatase 活性おCold stress-induced bladder overactivity in type 2 diabetic mellitus rats is mitigated by the
combination of a M3-muscarinic antagonist and a β3-adrenergic agonist（冷えストレスに起因する２型糖尿病ラット排尿筋過活動に対する M3ムスカリン受容体拮抗薬と β3アドレナリン
受容体作動薬の併用による抑制効果）
原寛

彰（論文の内容の要旨）とが知られている。また，薬物治療に抵抗性を呈する【背景・目的】過活動膀胱（OAB）は，尿意切迫感をため，治療に難渋する症例が多く，一過性の要因，例

主とした症状症候群であり頻尿をともなう下部尿路症

えば，寒冷季節などにおける「冷えストレス」によっ状のひとつである。OAB に対する治療は，排尿筋収ても増悪する。糖尿病患者の OAB 症状に対して，低縮を抑制するムスカリン受容体拮抗薬（以下，抗コリ

用量での抗コリン薬と β3 作動薬との併用療法は，非ン薬），あるいは，排尿筋弛緩を促進する β3アドレナ

常に有効だと考えられる。本研究では，２型糖尿病モリン受容体作動薬（以下，β3作動薬）を中心とした薬

デルラット（Goto-Kakizaki：GK ラット）を用いて，物療法が行われる。しかし，抗コリン薬は，口渇や便抗コリン薬と β3 作動薬との併用療法は，冷えストレ

秘などの副作用から，β3 作動薬は，OAB 抑制機序にスを摸倣した急激な低温への暴露によって起因する排ついて十分に解明されていないことから，それぞれ長尿筋過活動を緩和できるかを検討した。

期投与や増量が制限される場合が多い。そこで，低用【方法】10週齢雌 GK ラットを４週間高脂肪飼料で飼量での抗コリン薬と β3 作動薬との併用療法は，副作育した。飼育後，膀胱内圧測定２日前に，内圧測定用用を低減させるとともに長期間の治療が可能と考えらのカテーテルを膀胱に，薬物投与用カテーテルを腹腔れる。

内にそれぞれ留置して，対照薬投与群，0.1，または，２型糖尿病患者の約20 ％が OAB 症状を有するこ
No. 5, 2023

1.0 mg/kg 抗コリン薬（ソリフェナシン）単剤投与
339

審査学位論文要旨

群，0.1，または，1.0 mg/kg β3作動薬（ミラベグロ

リン受容体を介する排尿反射経路の関与が示唆されて

ン）単剤投与群，0.1 mg/kg ソリフェナシンとミラベいる。一方で，病態モデル動物の一つである自然高血

グロン併用投与群，あるいは，1.0 mg/kg ソリフェナ

圧発症ラットでは，GK ラットで効果が認められな

シンとミラベグロン併用投与群に分けた（各群 n＝６）。

かった低用量の抗コリン薬と β3 作動薬との併用投与

膀胱内圧測定は，内圧測定用のカテーテルを介して定により冷えストレス排尿筋過活動が抑制される。した時速度（10 ml/hr）の生理食塩水を連続的に膀胱内注

がって，冷えストレス排尿筋過活動は，末梢神経障害

入して，蓄尿時膀胱基底圧，排尿時膀胱収縮圧，排尿などによる神経原性要因，膀胱血流障害などによる筋間隔時間，一回排尿量を記録した。最初に，室温（27±

原性要因など基礎疾患に影響を受ける複数の機序が存２℃）下で膀胱内圧測定を行った後，薬物投与用カ

在すると考えられた。

テーテルから各薬剤を腹腔内投与した。投与10分後に抗コリン薬による薬物治療を受けている OAB 患者

測定を再開して薬剤投与後の膀胱機能を記録した。続の約80 ％が副作用を訴えると報告されている。抗コ

いて，ラットを低温環境（４±２℃）に速やかに移しリン薬と β3 作動薬の併用療法は，副作用を低減，回て，40分間の膀胱内圧測定を行った。ラットを再び室避しながら長期投与を可能にして，患者の QOL を向温に戻して測定を終了した。その後，膀胱を摘出して上，改善させることが期待できる。

M3 ムスカリン受容体，および，β3 アドレナリン受容【結語】GK ラットの冷えストレス排尿筋過活動は，体の組織学的解析を行った。また，４週間高脂肪飼料

1.0 mg/kg 抗コリン薬と1.0 mg/kg β3作動薬との併用で飼育した別の GK ラット（n＝12）の膀胱で M3ムス投与によって，一部抑制されることが示された。GK

カリン受容体，および，β3アドレナリン受容体の遺伝

ラットの膀胱内において，M3 ムスカリン受容体，β3子発現解析を行った。

アドレナリン受容体は，尿路上皮層，平滑筋層，求心【結果】室温下では，各薬剤投与による膀胱機能の変神経細胞での発現を認めるとともに，M3 ムスカリン化が認められなかった。対照薬群，ソリフェナシン単受容体は，β3アドレナリン受容体よりも高発現である剤投与，ミラベグロン単剤投与，あるいは，低用量併ことを示した。

用群では，室温から低温下へ移行すると排尿間隔時間（論文審査の結果の要旨）の短縮と膀胱容量の減少を呈する排尿筋過活動が認め過活動膀胱（OAB）症状に対しては，ムスカリンられた。しかし，高用量併用群では，低温下へ移行し受容体拮抗薬（以下，抗コリン薬）や β3 アドレナリ

たとき，排尿間隔時間の短縮（約－15 ％）と膀胱容

ン受容体作動薬（以下，β3作動薬）を中心とした薬物量の減少（約－７％）は，対照薬群の排尿間隔時間の治療が行われる。しかし，各薬剤の増量や長期投与に短縮（約－46 ％）と膀胱容量の減少（約－42 ％），おは，副作用などにより制限が生じる場合がある。そこ

よび，低用量併用群の排尿間隔時間の短縮（約－55で，低用量での抗コリン薬と β3作動薬の併用療法は，％）と膀胱容量の減少（約－46 ％）と比較して有意副作用を低減させるとともに長期間の治療が可能と考に抑制されており，排尿筋過活動の一部が抑制された。

える。２型糖尿病患者の約20 ％が OAB 症状を有しGK ラットの膀胱組織内において，M3ムスカリン受ているとの報告がある。また，薬物治療に抵抗性を呈

容体と β3 アドレナリン受容体の発現は，ウロプラキするため，治療に難渋する症例が多い。実臨床におい

ンⅢ陽性尿路上皮層，α 平滑筋アクチン陽性排尿筋層，て，寒冷刺激（冷えストレス）によって糖尿病患者のカルシトニン遺伝子関連ペプチド陽性求心性神経細胞

OAB 症状が増悪することをしばしば経験する。糖尿での発現が認められた。また，M3 ムスカリン受容体

病患者の OAB 症状に対して，低用量での抗コリン薬

mRNA は，β3アドレナリン受容体 mRNA よりも高いと β3 作動薬との併用療法は，非常に有効であると考発現量を示した。

えられる。 本研究では， ２型糖尿病モデルラット【考察】健常 Sprague Dawley ラットと４週間高脂肪（Goto-Kakizaki：GK ラット）を用いて，抗コリン薬

飼料飼育の健常 Wister Kyoto ラットの冷えストレスと β3 作動薬との併用療法は，冷えストレスに起因す

排尿筋過活動は，抗コリン薬によって抑制されないが，る排尿筋過活動を緩和できるかを検討した。

β3作動薬によって抑制される。つまり，健常ラットで10週齢の雌 GK ラットを高脂肪飼料で４週間飼育しの冷えストレス排尿筋過活動の機序では，M3 ムスカ

た後，膀胱内圧測定を実施した。まず，室温（27±リン受容体を介する排尿反射経路よりも β3 アドレナ２℃）下で測定を開始して投薬前の膀胱機能を記録し，

340

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

対照薬，抗コリン薬（0.1，または，1.0 mg/kg ソリフェ

時間の短縮，および，膀胱容量の減少は，対照薬投ナシン），β3作動薬（0.1，または，1.0 mg/kg ミラベ

与群と低用量併用薬投与群より抑制されており，排尿筋過活動の一部抑制を示した。

グロン），あるいは，ソリフェナシンとミラベグロンの併用薬（それぞれ0.1 mg/kg 併用と1.0 mg/kg 併

３．膀胱内の尿路上皮層，平滑筋層，求心神経細胞に用）を腹腔内投与した（各 n＝６）。投与10分後に室おいて，M3 ムスカリン受容体，β3 アドレナリン受温下で測定を再開して投薬後の膀胱機能を記録した後，容体の発現を示した。

ラットを低温（４±２℃）に速やかに移して膀胱機能

４．GK ラットの膀胱内において，M3ムスカリン受容の測定を継続した。膀胱内圧測定後に膀胱を摘出して体は，β3アドレナリン受容体よりも高い発現量を示

M3 ムスカリン受容体および β3 アドレナリン受容体のした。

発現を解析した。

これらの結果から，２型糖尿病モデルラットの冷え
ストレスに起因する排尿筋過活動は，単剤でのソリ

その結果，原は次の結論を得た。
１．低温下へ移行後，対照薬投与群，ソリフェナシン

フェナシンとミラベグロンで抑制されないが，それら単剤投与群，ミラベグロン単剤投与群，または，低を併用することによって効果的に抑制できることを明

用量ソリフェナシンとミラベグロン併用投与群では，らかにした。抗コリン薬と β3作動薬との併用療法は，排尿間隔時間の短縮，および，膀胱容量の減少を呈副作用を低減するとともに長期間の治療が可能である

する排尿筋過活動を示した。

有効な治療になると結論を得た。よって，主査，副査

２．高用量でのソリフェナシンとミラベグロンを併用投与した GK ラットは，低温下へ移行後，排尿間隔は一致して本論文を学位論文としての価値があるものと認めた。

Analysis of the effect of brexpiprazole on sleep architecture in patients with schizophrenia :a preliminary study（統合失調症患者の睡眠構築に対するブレクスピプラゾールの効果の分
析：予備研究）
荒井（論文の内容の要旨）

勇輔

服用後で比較した。

【背景】非定型抗精神病薬ブレクスピプラゾールは日【結果】 ブレクスピプラゾールの追加投与は，P＜

本では統合失調症の治療薬として広く用いられている。

0.05の名目上の有意水準において，急速眼球運動潜時

これまでの研究で，いくつかの抗精神病薬の睡眠変数を有意に延長し，N2期および N3期の睡眠時間およびに対する治療効果が検討されているが，我々の知る限割合（分，％）を増加させ，急速眼球運動期の睡眠時

り，ブレクスピプラゾールの睡眠変数に対する影響は，間および割合（分，％）を減少させた。

統合失調症患者において検討されていない。この研究【結論】多重比較の補正後では有意ではなかったが，の目的は，統合失調症患者において，睡眠ポリグラフ

今回の結果から，ブレクスピプラゾールの上乗せは統で測定した睡眠変数に対するブレクスピプラゾールの合失調症患者の睡眠構造を変化させる可能性があるこ

影響を探索的に検討することであった。

とが示された。今後，これらの結果を再現し，ブレク【方法】この研究の対象は，もともとハロペリドール

スピプラゾールが睡眠に及ぼす有益な影響についてさ単独で治療を受けていた統合失調症患者10名であった。

らに検討することが望まれる。

参加者の睡眠変数はポリソムノグラフィーを用いて測（論文審査の結果の要旨）定された。研究基準に合致しない患者を除外した後，非定型抗精神病薬ブレクスピプラゾールは日本では７名（男性５名，女性２名，平均年齢［標準偏差］：

統合失調症の治療薬として広く用いられている。これ

59.0［10.0］歳）がさらなる分析に適格であった。ポまでの研究で，いくつかの抗精神病薬の睡眠変数に対

リソムノグラフィーは，参加者がハロペリドールに加する治療効果が検討されているが，我々の知る限り，

えてブレクスピプラゾールを処方された４週間後に繰

ブレクスピプラゾールの睡眠変数に対する影響は，統り返された。ポリソムノグラフィーを用いて測定した

合失調症患者において検討されていない。本研究では参加者の睡眠変数を，ブレクスピプラゾール服用前と統合失調症患者の睡眠構築に対するブレクスピプラ

No. 5, 2023341

審査学位論文要旨

１．REM 潜時の延長

ゾールの影響を探索的に検討した。
被験者はハロペリドール単独で治療を受けていた統合失調症患者10名とした。研究の適格基準を満たした

２．Stage N2および N3の時間と割合の増加
３．Stage REM の時間と割合の減少

７例（男性５名， 女性２名， 平均年齢［SD］59.0

多重比較の補正後では有意ではなかったが，今回の［10.0］歳）に対し，ブレクスピプラゾールを４週間

結果から，ブレクスピプラゾールの上乗せは統合失調上乗せ投与した。ブレクスピプラゾール服用前と服用症患者の睡眠構築を変化させる可能性があることが示

後の終夜睡眠ポリグラフを測定し，睡眠構築を比較しされた。これは，ブレクスピプラゾールが統合失調症

た。また，全ての終夜睡眠ポリグラフは２夜連続して患者の睡眠にポジティブな影響を与える可能性を示唆行い，第２夜のデータを検定の対象とした。

しており，臨床精神医学での薬物療法に有益な示唆をその結果，ブレクスピプラゾール上乗せ後の睡眠構与えうる。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

築の変化は以下のとおりであった。

Assessment of Left Atrial Deformation in Patients with Total Anomalous Pulmonary Venous
Connection by Two-Dimensional Speckle-Tracking Echocardiography（2D speckle tracking法を用いた総肺静脈還流異常症の左房機能解析）
沼

田

隆

佑

（論文の内容の要旨）

conduit，contractile 機能が全て低下していた（TAPVC【背景と目的】総肺静脈還流異常症（以下，TAPVC）

患者群 vs コントロール群，reservoir，conduit，andは先天性心疾患の約１-３％に発生する稀な先天性心contractile 機能の中央値；術前：17.0 ％ vs. 26.0 ％，疾患である。既報では，左心系の発育異常や左室拡張

12.9 ％ vs. 15.9 ％，and 6.3 ％ vs. 10.4 ％；１-２歳

能異常を生じると報告されている。我々は，TAPVC：30.0 ％ vs. 45.7 ％，23.2 ％ vs. 29.6 ％，and 6.1

患者が，出生前から左心系への血流が減少することに％ vs. 16.3 ％； ５-７歳：31.2 ％ vs. 43.1 ％，25.0より，左房の発育のみならず左房機能にも影響を与え％ vs. 31.2 ％，and 5.2 ％ vs. 10.8 ％；p＜.05）。修ると仮定した。今回，我々は TAPVC 患者の左房機復術により左心系への血流が適正化された後も，con­

能を経胸壁心エコーの2D speckle tracking 法を用いtractile 機能は経年的に有意な改善が得られなかったて解析し，経年的な変化も踏まえ検討を行った。

（contractile 機能の中央値；6.0 ％→5.9 ％）。また，【方法】2009年１月１日から2022年１月１日の間に当

出生時に肺静脈閉塞を来していた患者は，そうでない

院で新生児期に手術を行った孤立性 TAPVC 患者を患者に比し，reservoir および conduit 機能が有意に対象に，単一施設の後ろ向きコホート研究を実施した。

低下しており，左房圧も有意に高かった。

TAPVC 患者の左房機能を手術前（n＝28），フォロー【結論】TAPVC 患者は生まれつき左房機能が低下しアップとして１-２歳（n＝24），５-７歳（n＝13）のており，修復後も持続する事が明らかなとなった。特３群それぞれで解析し，年齢をマッチさせた健常対象に，左房最大容積が正常に復したにも関わらず，左房者（2009年１月～2022年１月）の左房機能と比較検討

機能の特に contractile 機能の低下が出生時から修復した。左房機能はストレイン（＝歪み）の解析として後まで持続することが示された。このような患者群は

QLAB®を用いて reservoir，conduit，contractile 機

加齢に伴い，「収縮性が保たれた拡張機能低下による心能に分けそれぞれを評価した。また，左房圧に関して不全（＝Heart failure with preserved ejection frac­は術後の定期心臓カテーテル検査で評価した。

tion）」へ早期に進行することが懸念される。

【結果】TAPVC 患者はコントロール群に比し，術前（論文審査の結果の要旨）の左房最大容積が有意に小さかった。また，TAPVC

総肺静脈還流異常症（TAPVC）は左心系の発育異患者は術後経年的に左房最大容積が正常に復し，左房常や左室拡張能異常を生じると報告されている。肺静最小容積はコントロール群よりも有意に増大した。2D

脈が左房に接続しないことに起因する胎児期の左心系

speckle tracking 法で求めた左房機能（ストレイン）への血流減少が原因で，左房の発育のみならず左房機能はすべての時点で，コントロール群に比し reservoir，にも影響を与えると仮定した。今回，我々は TAPVC 患

342

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

者の左房機能を経胸壁心エコーの2D speckle tracking

経年的に改善傾向となるが，contractile 機能のみ有法を用いて詳細に解析した。

意な改善を認めなかった。

2009年１月１日から2022年１月１日の間に当院で新４．出生時に肺静脈閉塞を来した患者は，そうでない

生児期に手術を行った孤立性 TAPVC 患者の左房機患者に比し，reservoir，conduit 機能が有意に低下能を，手術前（n＝28），フォローアップとして１-２しており，左房圧も有意に高かった。

歳（n＝24），５-７歳（n＝13）の３群に分け，年齢

これらの結果より，TAPVC 患者は生まれつき左房をマッチさせた健常対象者の左房機能と比較検討した。

固有の機能が低下しており，修復後も持続することが明らかとなった。左房容積が正常に復したにも関わらその結果，沼田らは次の結論を得た。
１．TAPVC 患者は正常コントロール群に比し，術前ず，左房機能の特に contractile 機能の低下が修復後の左房最大容積係数および左房最小容積係数が有意まで持続することが示された。このような患者群はに小さかった。TAPVC 患者は，術後に経年的に左「収縮性が保たれた拡張能低下による心不全（＝Heart

房最大容積係数が正常にまで復した。

failure with preserved ejection fraction）」の患者特２．2D speckle tracking 法で求めた左房機能の res­性と類似しており，加齢に伴い早期に同様の病態へ進

ervoir，conduit，contractile 機能は，全て TAPVC

行することが懸念される。よって主査，副査は一致し群で正常コントロールに比し有意に低下していた。

て本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

３．TAPVC 患者は術後，reservoir，conduit 機能はRole of advanced glycation end products in the longitudinal association between muscularstrength and psychotic symptoms among adolescents（思春期の筋力と精神病症状の縦断関連における最終糖化産物の意義）
鈴

木

一

浩

（論文の内容の要旨）

ル ボ ニ ル 化 合 物（ Reactive carbonyl compounds；【背景と目的】統合失調症は思春期から青年早期に発RCOs）とタンパク質や脂質，DNA などとの非酵素症し，思考障害を生じて幻覚や妄想といった陽性症状，的なメイラード反応により生じる物質であり，一度形

意欲の減退や集中力の低下といった陰性症状を呈する

成されると不可逆的で糖尿病合併症や骨粗鬆症，認知疾患である。ひとたび発症すると再燃を繰り返しつつ症といった全身性の多様な機能障害を生じさせること

進行し，認知機能低下をきたすことから長期予後改善が知られ，統合失調症の病態においても AGEs が関のために早期介入が重要と考えられているが，発症の与する可能性があると考えられている。

好発期である思春期に発症の兆候を捉えることは容易

筋組織は肝臓とならび生体内における最大のグルではない。抗精神病薬が開発される以前から，統合失コース吸収器官であり，同時に RCOs を解毒代謝す

調症患者にはやせ型が多いことが報告されている。さることで抗糖化作用を有するビタミンＢ６の最大の貯らに，近年これを裏付けるように徴兵時から24年間追蔵器官である。これまで成人において低筋力と AGEs

跡した100万人規模のコホート研究により，10代後半

上昇が横断的に関連することは報告されているが，縦の低筋力はその後の統合失調症の発症リスクとなるこ

断的な調査はほとんど報告されていない。以上の背景と，後の人生の自殺リスクを有意に上昇させることがのもと，本論文では思春期における低筋力が AGEs

報告されている。しかしながら，これまでに低筋力との上昇を引き起こし，それが精神病発症に関与するの精神疾患の発症を繋ぐ生物学的なメカニズムについてではないかという仮説について，縦断疫学的な関連性

はっきりとしたことはわかっていない。

について検討を行った。

これまでに統合失調症患者の中で，血中の終末糖化【方法と結果】本研究は，世田谷，三鷹，調布の３都産物（Advanced glycation end products：AGEs）が市にて実施されている10歳時点からの成長発達を追う

増加する一群が存在し，これらの群では抗精神病薬へ

人口集団出生コホート研究である東京ティーンコホーの治療反応が乏しく治療抵抗性であることが示されてト調査を用いた。10歳時点で参加した3,171人のうち，いる。AGEs はグルコース代謝により生じる反応性カ

12歳・14歳時に尿検体を採取した1,542人の児童を対

No. 5, 2023343

審査学位論文要旨

象とした。まず，12歳時と14歳時の２時点において，（論文審査の結果の要旨）

全身の筋力の指標として握力を，生体内の AGEs 指

10歳時点からの成長発達を追う世田谷，三鷹，調布

標として早朝第一尿中のペントシジン値を測定した。

の３都市にて実施されている人口集団出生コホート研

握力と尿中ペントシジン値についての交差的時間差相

究の東京ティーンコホート調査を用いた。10歳時点で関分析を行い縦断的，因果的方向性を検討した結果，参加した3,171人のうち，12歳・14歳時に尿検体を採BMI の影響とは別に，12歳時の筋力が低いほど14歳取した1,542人の児童を対象とし，12歳時と14歳時の時の AGEs が上昇していた（β＝－0.20，p＜0.001）。

２時点において，全身の筋力の指標として握力を，生一方で，12歳時の AGEs と14歳時の筋力との縦断的体内の AGEs 指標として早朝第一尿中のペントシジ

関連性は認められなかった（β＝0.04，p＝0.062）。

ン値を測定した。

本結果より，低筋力が持続することにより AGEs がまず，握力と尿中ペントシジン値についての交差的上昇するという縦断的関連が示唆された。次に，12時間差相関分析を行い縦断的，因果的方向性を検討し歳・13歳・14歳の３時点においてデータを採取したサ

た結果，BMI の影響とは別に，12歳時の筋力が低い

ブサンプルの256人において，12歳時の低筋力が13歳

ほど14歳時の AGEs が上昇していた（β＝－0.20，p＜

時の AGEs 上昇を介して14歳時の精神病症状を生じ0.001）。一方で，12歳時の AGEs と14歳時の筋力とるという仮説についてパス解析を行った。精神病症状の縦断的関連性は認められなかった（β＝0.04，p＝は，親に対する質問紙である Child behavior checklist

0.062）。本結果から，12歳から14歳の時期においては，を調査し，後の精神病症状発症との関連が示されてい低筋力が AGEs を上昇させるという縦断的関連性がる下位項目である思考の問題を本研究におけるアウト

示唆された。

カムとして検討を行った。結果，12歳時の低筋力と14

次にこの結果をもとに，12歳・13歳・14歳の3時点

歳時の精神病症状の間に媒介因子として13歳時のにおいてデータを採取したサブサンプル256人においAGEs が関与する可能性があるという仮説についての十て，12歳時の低筋力が13歳時の AGEs 上昇を介して分に説明可能なモデル適合が得られた（CFI＝0.971，

14歳時の精神病症状を生じるという仮説を立ててパス

RMSEA＝0.057）。これらの結果から，これまでに繰

解析を行った。精神病症状は，親に対する質問紙であり返し報告されている低筋力と統合失調症の関連性にる Child behavior checklist を調査し，後の精神病症

は，低筋力が AGEs の上昇を生じることで後の精神状発症との関連が示されている下位項目の思考の問題

病症状と引き起こす可能性があると考えられた。

をアウトカムとした。結果，12歳時の低筋力と14歳時【結論】思春期はライフステージの中でも神経発達がの精神病症状の間に，媒介因子として13歳時の AGEs

最も活発な時期であり，この時期の神経発達の障害はが関与する可能性について，十分に説明可能なモデル

後の生涯を通じて長期的な影響を及ぼす。精神疾患は適合が得られた（CFI＝0.971，RMSEA＝0.057）。

早期介入と早期からの社会的支援が予後において最もこれらの結果から，鈴木は，これまでに繰り返し報

重要である。本研究結果より，早期発見のためには低告されている低筋力と統合失調症の関連は，低筋力が筋力の児童を注意深く見守る必要性が高いと考えられAGEs の上昇を生じさせ，それによって後の精神病症た。

状と引き起こす可能性があると結論を得た。

また，本報告は統合失調症と低筋力を結び付け，そ

本報告は統合失調症と低筋力を結び付け，その生物の生物学的メカニズムとしての AGEs の役割を検討

学的メカニズムとしての AGEs の役割について検討した初めての研究である。統合失調症患者におけるした初めての疫学研究であり，統合失調症患者におけ

AGEs 上昇は，これまで抗精神病薬の内服により糖代る AGEs 上昇が発症に先行して生じる可能性を示唆

謝異常が生じた影響と考えられていたが，発症前からするものである。病態進行予防の観点からも AGEsの変化を捉えた本研究の結果より， 発症に先行しは有効な治療標的となりうると考えられる。よって，AGEs が上昇する可能性が示された。病態進行予防の主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が観点からも AGEs は有効な治療標的となりうることあるものと認めた。

から，今後さらなる研究が必要になると考えられる。

344

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

Early phase increase in serum TIMP-1 in patients with acute encephalopathy with biphasic
seizures and late reduced diffusion（遅発性拡散低下を伴う二相性急性脳症患者における急性期血清 TIMP-1値の上昇）
河

西

彩

香

（論文の内容の要旨）

で，７種のサイトカイン（Interleukin-1β，-2，-4，-10，【背景と目的】遅発性拡散低下を伴う二相性急性脳症-17A，-21，Macrophage inflammatory protein-1α）（AESD）は日本で最も多い急性脳症症候群で，発症を Cytometric Bead Array 法で測定した。

率は100～200人 / 年と報告されている。生命予後は良【結果】血清 TIMP-1は，AESD 二相目群と比較し好であるものの，約60 ％の患者で神経学的後遺症をて一相目群が有意に高値であった。血清 MMP-9や残す重篤な病型である。AESD の初発症状は発熱当

MMP-9/TIMP-1比の上昇は見られなかった。三群全日または翌日に出現するけいれんで，多くは重積する体での検討では，血清 TIMP-1と MMP-9との間に有（一相目）。意識状態は一旦改善するものの，第３～７

意な正の相関を認めた。髄液 TIMP-1，MMP-9およ

病日に再度けいれんや意識障害を認め，頭部 MRI 検

び血清・髄液サイトカイン値は三群間で有意差は見ら査にて拡散能低下所見を認める（二相目）。AESD のれなかった。

病態の中心は，けいれん毒性に伴う遅発性神経細胞死【考察】AESD 二相目群と比較して一相目群で血清と考えられているが，詳細は不明である。

TIMP-1が高値で，かつ血清 MMP-9および MMP-9/

Matrix metalloproteinase-9（MMP-9）は細胞外マ

TIMP-1比の上昇を伴わなかった点が，本研究が初め

トリックスを分解するメタロプロテアーゼの一種で，て 明 ら か に し た 知 見 で あ る 。AESD 患 者 に お い て

好中球，マクロファージ，血管内皮細胞などから産生

MMP-9と TIMP-1について報告した研究は一編のみされる。MMP-9は血液脳関門の血管基底膜を障害す

で，AESD 患者と健常対照とを比較して血清 MMP-9

るため，血液脳関門に対する攻撃因子として知られて高値，TIMP-1低値であったことが報告されており，いる。Tissue inhibitor of metalloproteinase-1（TIMP-

我々の研究とは矛盾する結果である。しかし，この研

1）は，血管内皮細胞，神経芽細胞，滑膜細胞，CD4

究では AESD 患者の検体採取時期が一相目なのか二陽性Ｔ細胞，マクロファージなどから産生される糖タ相目なのか区別されていなかった。我々は一相目と二ンパク質である。TIMP-1は MMP-9の内因性阻害因

相目を分けることで，AESD の超急性期である一相子として知られており，MMP-9による血液脳関門の目に血清 MMP-9の上昇を伴わない血清 TIMP-1の上障害を抑制するため，血液脳関門に対する防御因子と昇が見られることを明らかにした。この血清 TIMP-1考えられている。種々の急性脳炎・脳症では，血清の単独上昇は，脳梗塞や HHV-6脳炎など複数の中枢

MMP-9/TIMP-1比の上昇，およびそれに伴う血液脳神経疾患で報告されているが AESD での報告はなく，関門の破綻が病態に関与している可能性が報告がされまた，血清 TIMP-1の主な分泌細胞や病態との具体的ているが，AESD での報告はほとんどない。

な関連は不明である。AESD 患者のサイトカインプ

AESD の病態に対する MMP-9，TIMP-1，およびロファイルに関する研究や TIMP-1分泌細胞に関する

それらに関連するサイトカインの関与を明らかとする

既報告を基に，今回７種のサイトカインを血清・髄液ことを目的とし，AESD の一相目と二相目の患者，で測定したが，いずれも有意な関連性は見いだせなおよび比較対照として良性疾患である熱性けいれん重かった。また，血清 MMP-9や MMP-9/TIMP-1比の積（PFs）患者を対象として，血清・髄液中の MMP-

上昇はなく，両者の間に有意な正の相関を認めたため，

9，TIMP-1，およびサイトカイン値を検討した。

血清 TIMP-1が血清 MMP-9の上昇と連動している可【対象・方法】2014年４月４日～2020年７月９日の期

能性も示唆された。これまでの報告とは別の TIMP-1

間に長野県立こども病院で治療を受けた AESD 患と MMP-9の関連性や，血液脳関門の破綻と AESD

者17名（一相目７名，二相目10名），および PFs 患者の病態との関連に関して今後の検討を進めるための研８名を対象とした。血清，髄液中の TIMP-1および究結果であると考えた。今後より多くの患者およびサ

MMP-9を Enzyme-Linked Immunosorbent Assay 法

イトカインで解析し，検討する必要がある。

No. 5, 2023345

審査学位論文要旨（論文審査の結果の要旨）

9，TIMP-1，およびサイトカイン値を検討した。

遅発性拡散低下を伴う二相性急性脳症（AESD）は2014年４月～2020年７月の期間に長野県立こども病

小児の急性脳症のうち最頻度に起こり，約2/3の患者

院で治療を受けた AESD 患者17名（一相目７名，二で神経学的後遺症を残す脳症である。AESD の初発

相目10名），および PFs 患者８名を対象とした。血清，症状は，発熱当日または翌日にけいれんで発症する

髄液中の TIMP-1および MMP-9を Enzyme-Linked（一相目けいれん）。意識状態は一旦改善するものの，

Immunosorbent Assay 法で， ７種のサイトカイン

第３～７病日に再度けいれんや意識障害を認め，頭部（Interleukin-1β，-2，-4，-10，-17A，-21，Macro­

MRI 検査にて拡散能低下所見を認める（二相目けい

phage inflammatory protein-1α）を Cytometric Bead

れん）
。AESD の病態の中心は，けいれん毒性に伴うArray 法で測定した。

遅発性神経細胞死と考えられているが，詳細は不明である。Matrix metalloproteinase-9（MMP-9）は細胞その結果，河西彩香は次の結論を得た。
１．血清 TIMP-1は，AESD 患者の二相目群と比較

外マトリックスを分解するメタロプロテアーゼの一種
で，血液脳関門の血管基底膜を障害するため，血液脳して一相目群が有意に高値であった。
２．血清 MMP-9や MMP-9/TIMP-1比の上昇は見ら関門に対する攻撃因子として知られている。Tissue in­hibitor of metalloproteinase-1（TIMP-1）は MMP-9

れなかった。
３．三群全体での検討では，血清 TIMP-1と MMP-9との間に有意な正の相関を認めた。

の内因性阻害因子として知られており，MMP-9による血液脳関門の障害を抑制するため，血液脳関門に対４．髄液 TIMP-1，MMP-9および血清・髄液サイトする防御因子と考えられている。種々の急性脳炎・脳カイン値は三群間で有意差は見られなかった。

症では，血清 MMP-9/TIMP-1比の上昇，およびそれ

AESD 二相目群と比較して一相目群で血清 TIMP-1に伴う血液脳関門の破綻が病態に関与している可能性が高値で，かつ血清 MMP-9および MMP-9/TIMP-1が報告がされているが，AESD での報告はほとんど比の上昇を伴わなかった点が，本研究が初めて明らかない。

にした知見である。これまでの報告とは別の TIMP-1

AESD の病態に対する MMP-9，TIMP-1，およびと MMP-9の関連性や，血液脳関門の破綻と AESD

それらに関連するサイトカインの関与を明らかとするの病態との関連に関して今後の研究につながる成果でことを目的とし，AESD の１相目と２相目の患者，あると考えられた。よって，主査，副査は一致して本および比較対照として良性疾患である熱性けいれん重論文を学位論文として価値があるものと認めた。

積（PFs）患者を対象として，血清・髄液中の MMP-

Clinical study of pollen-food allergy syndrome estimated by double-blind, placebo-controlled
food challenges of ten apple cultivars（リンゴ花粉―食物アレルギー症候群患者に対する10品
種のリンゴを用いた二重盲検プラセボ対照食物負荷試験による臨床的特徴の検討）
小

池

由

美

（論文の内容の要旨）の有用性が報告によって異なること，出現症状がリン【背景と目的】近年，日本を含め世界的に花粉症患者

ゴの品種により異なること，また出現する症状が主の増加がみられ，それに伴い花粉―食物アレルギー症

観的であるため，シングルブラインドの食物経口負候群（PFAS：Pollen-Food Allergy Syndrome）の患

荷試験では評価が難しい点があり，精度の高い診断の者が増加している。PFAS の代表的な例はシラカバ花

ためにはより多くのリンゴ品種で二重盲検負荷試験

粉症患者がバラ科の果物を摂取した際にみられる口腔（DBPCFC：Double Blind Placebo Control Test）を粘膜症状であり，特にリンゴは PFAS の中でも主要行い，患者の主観的な症状を視覚連続尺度（VAS：

な原因食物である。リンゴ PFAS 患者の症状を誘発

visual analog scale）を用いて数値化することで評価する主要な原因タンパク質の一つは Mal d 1であり，する必要がある。しかし DBPCFC の実施には労力をシラカバ花粉の Bet v 1との交差抗原性により症状を要し，症状を誘発させるリスクがあるため，より低侵誘発する。PFAS の診断における課題は，皮膚テスト

襲の補助検査が必要である。

346

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨【目的】リンゴ PFAS 患者に対してリンゴの品種別に可能性がある。複数の品種のリンゴで DBPCFC を行DBPCFC を施行し，皮膚テストおよび特異的 IgE 値

うことで，リンゴ PFAS 患者でも品種により出現症との関連性について解析することにより，補助的な検状の差異があることを明らかにすることができた。

査の有用性について検討し，同時に，品種による症状（論文審査の結果の要旨）

発現の差異を明らかにすることを目的とする。

花粉―食物アレルギー症候群（PFAS）の代表例は【対象と方法】2019年９月から2020年１月の間に長野

シラカバ花粉症患者のバラ科の果物の摂取による口腔

県立こども病院を受診した患者で，生リンゴの摂取に粘膜症状であり，リンゴは主要な原因食物である。リ

よる口腔粘膜症状を複数回きたした既往があり，文書ンゴに含まれる原因タンパク質は Mal d 1であり，シによる同意を得ているリンゴ PFAS 患者を対象としラカバ花粉の Bet v 1との交差抗原性により症状を誘た。対象に対して10品種のリンゴを用いて DBPCFC

発する。PFAS の診断の課題は，皮膚テストの有用性を施行し，症状の程度を VAS で評価した。VAS はが報告によって異なること，出現症状がリンゴの品種

患者が感じた症状の強さを０～100で評価し，＞０をにより異なること，また出現する症状が主観的であ陽性とした。対象者の Mal d 1 と Bet v 1に対する特るため，精度の高い診断にはより多くのリンゴ品種で異的 IgE 値の測定及びリンゴの品種ごとに皮膚テス

二重盲検負荷試験（DBPCFC：Double Blind Placebo

トを施行した。全症例における，VAS と皮膚テスト

Control Test）を行い，主観的な症状を視覚連続尺度の関連についての検討にはカイ二乗検定を行い，各対（VAS：visual analog scale）を用いて数値化するこ

象者で VAS 陽性となったリンゴの VAS 平均値と各とで評価する必要がある。

種特異的 IgE 値の評価にはスピアマンの順位相関係

2019年９月から2020年１月の間に長野県立こども病

数を用いて検定した。

院を受診したリンゴ PFAS 患者を対象とし10種類の【結果】対象６名（すべて女性，年齢中央値24.5歳，長野県産リンゴを用いて DBPCFC を行った。

範囲10～45歳）のうちリンゴ２品種で VAS 陽性とその結果，小池らは次の結論を得た。

なったのが３名（50 ％），３，４，５品種で陽性と１．対象は６名（すべて女性，年齢中央値24.5歳，範なったのがそれぞれ１名（17 ％）であった。VAS 陽

囲10～45歳），リンゴ２品種で VAS 陽性となった性となったリンゴの品種は，症例毎に異なっていた。

のが３名（50 ％），３，４，５品種で陽性となった

全症例における VAS と皮膚テストの関連については，のがそれぞれ１名（17 ％）であった。

VAS 陽性（18件）中の皮膚テスト陽性は12件，VAS

２．VAS 陽性となったリンゴの品種は症例毎に異な陰性（37件）中の皮膚テスト陰性は21件で，VAS と皮り，リンゴ品種の掛け合わせの元となる品種毎での膚テストとの間に有意差を認めなかった（p＝0.103）。

VAS に差はみられなかった。

各対象者の VAS 平均値と Mal d 1および Bet v 1特異３．全症例における VAS と皮膚テストの関連は，VAS

的 IgE 値とは，それぞれ正の相関を認めた（r＝0.5，

陽性（18件）中の皮膚テスト陽性は12件，VAS 陰性

r＝0.84）。

（37件）中の皮膚テスト陰性は21件で VAS と皮膚【考察】 本検討ではシングルブラインドではなくテストとに有意差を認めなかった（p＝0.103）。

DBPCFC で行うことで結果の信頼性を高めること

４．各対象者の VAS 平均値と Mal d 1および Bet v 1ができた。 また10品目という多くのリンゴ品種で特異的 IgE 値とは，それぞれ正の相関を認めた（r＝DBPCFC 行うことで，リンゴ品種間による症状出現0.5，r＝0.84）。

の差を明らかにすることができた。特異的 IgE 値とこれらの結果より，皮膚テストは基準とはなりにく

VAS との関連については，リンゴ PFAS の診断の一

く，今後の PFAS の診断基準作りでは複数種のリン助として Bet v 1特異的 IgE 値が有用である可能性が

ゴ負荷試験を施行することを盛り込む必要があることあり，今後の PFAS の診断基準作りとしては，皮膚が示唆された。本検討ではシングルブラインドではな

テストは基準とはなりにくく，多品種のリンゴ負荷試

く10品目という多くの品種を用い DBPCFC で行うこ験を施行することを盛り込む必要があることが，今回とで，結果の信頼性を高めることができ，リンゴ品種の検討より示唆された。

間による症状出現の差を明らかにすることができた。

【結語】リンゴ PFAS の診断に皮膚テストは有用ではリンゴ PFAS の診断の一助として Bet v 1特異的 IgEなかった。Bet v 1特異的 IgE 値は診断の一助となる値が有用である可能性がある。

No. 5, 2023347

審査学位論文要旨

よって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Prognostic utility of albumin-bilirubin grade in Japanese patients with primary biliary
cholangitis（日本人原発性胆汁性胆管炎におけるアルブミン―ビリルビングレードによる予後予測の有用性）山下裕

騎（論文の内容の要旨）（ハザード比：4.242，p＜0.0001）。５年時の無移植【背景と目的】原発性胆汁性胆管炎（PBC）は，病因，生存率は，全 ALBI グレード間で有意差を認めた（グ

病態に自己免疫学的機序が想定される慢性進行性のレード１：97.2 ％，グレード２：82.4 ％，グレード

胆汁うっ滞性肝疾患である。ウルソデオキシコール

３：38.8 ％，pc＜0.0001，log-rank test）。また同様

酸（UDCA）が第一選択薬であり，約70 ％の症例ではに５年時の非肝関連生存率についても，全 ALBI グ

UDCA 治療が奏功し，長期予後は良好である。しかレード間で有意差を認めた（グレード１：98.1 ％，し，無治療例，あるいは治療が行われても反応不良な

グレード２：86.0 ％，グレード３：42.0 ％，pc＜0.0001，

症例では，肝硬変から肝不全を呈し，肝移植を行わな

log-rank test）。

いと救命できない。よって，診断時に予後を正確に予【結論】本邦の全国調査を用いた検討によって，PBC

測することは臨床上重要である。アルブミン - ビリル

診断時の ALBI グレードは予後を非侵襲的に予測しう

ビン（ALBI）グレードはアルブミン値と総ビリルビることが示唆された。

ン値のみから算出可能であり，肝細胞癌の患者におけ（論文審査の結果の要旨）

る肝予備能を正確に評価する数値として開発された。

原発性胆汁性胆管炎（PBC）は病因に自己免疫学的現在までに様々な慢性肝疾患の臨床的意義が検討され機序が想定される慢性進行性の胆汁うっ滞性肝疾患でており，PBC でも予後を予測する可能性が報告されある。ウルソデオキシコール酸（UDCA）が第一選ている。本研究では厚生労働省「難治性の肝・胆道疾

択薬であり，約70 ％の症例では UDCA 治療が奏功し，患に関する調査研究」班 PBC 分科会による全国調査

長期予後は良好である。しかし，治療不応例では，病の大規模データを用いて ALBI グレードが，PBC の態が進展し，肝硬変や肝不全に至る予後不良例が存在

組織学的ステージや予後予測に有用かどうかを検討しする。よって，診断時に予後を正確に予測することがた。

できる方法は臨床上必要とされている。アルブミン -【対象と方法】1980年から2016年の間に全国469施設か

ビリルビン（ALBI）グレードはアルブミン値と総ビら登録された PBC の診断基準を満たし，かつ ALBI

リルビン値のみから算出可能であり，肝細胞癌の患者

グレードが算出可能であった8,768例を解析対象としにおける肝予備能を正確に評価する数値として開発さた。ALBI グレードと患者背景，肝病理学的所見の関れた。現在までに様々な慢性肝疾患の臨床的意義が検連について検討し，予後（全死亡，肝移植，肝関連討されており，PBC でも予後を予測する可能性が報死）を予測し得るかどうか統計学的解析を行った。

告されている。そこで，本研究では厚生労働省「難治【結果】年齢の中央値は57歳，女性は86 ％であり，組性の肝・胆道疾患に関する調査研究」班において1980

織学的ステージ（Scheuer 分類）は１期：35 ％，２期：

年から2016年に施行された全国調査の大規模データか

23 ％，３期：10 ％，４期：３％であった。ALBI グレー

ら 8,768 例 の PBC 患 者 の 診 断 時 の デ ー タ を 用 い てドはグレード１：63 ％，グレード２：33 ％，グレード

ALBI グレードを決定し，PBC の組織学的ステージや３：４％であった。観察期間中央値5.3年中，1,227例

予後予測に有用かどうかを検討した。

（肝関連死は789例）が死亡し，113例が肝移植を受けその結果，山下は次の結論を得た。

た。ALBI グレードは組織学的ステージと有意に関連していた（p＜0.0001）。ALBI グレード２または３で

１．ALBI グレードは PBC の組織学的ステージと有意に関連している。

あることは，全死亡または肝移植の予後に有意に関連

２．ALBI グレード２以上では，全死亡または肝移植していた（ハザード比：3.453，p＜0.0001）。同様に，の予後と肝関連死または肝移植の予後と有意に関連

肝関連死または肝移植の予後に有意に関連していた

している。

348

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

３．５年時の無移植生存率および非肝関連生存率は全が報告されていることから，診断時に ALBI グレード

ALBI グレード間で有意差を認める。

２以上の症例においては治療開始時から UDCA に

全国調査の検討により，PBC における診断時の2nd line の治療を併用するという治療選択を提唱でき

ALBI グレードは PBC の簡便な予後予測の指標になる可能性がある。
よって主査，副査は一致して本論文を学位論文としりうることを明らかにした報告である。現在，UDCA
治療不応例が約30 ％存在し，予後が不良であることて価値があるものと認めた。

Serum positivity of tTG-IgA in Japanese Children with IBD（日本人小児 IBD 患者における血清抗組織トランスグルタミナーゼ IgA 抗体の陽性率に関する検討）
倉

沢

伸

吾

（論文の内容の要旨）

器症状の精査として上部消化管内視鏡検査および十二【背景と目的】炎症性腸疾患（IBD）は，消化管の慢

指腸粘膜の生検組織検査を実施された18歳以下の例で，性的な炎症を起こす原因不明の疾患である。近年，日過去一年以内に採取された血清が－30 ℃で保存され本人小児 IBD の患者数は増加傾向にあり，動物性脂ていた例を対象とした。診断時年齢，性別，症状（腹肪の摂取量の増加，魚油や米の摂取量の減少を特徴と

痛 ， 吐 き 気 ， 下 痢 ， 血 便 ， 体 重 減 少 ）， 血 液 検 査する食生活の欧米化は，小児 IBD 患者数の増加傾向（WBC，Hb，Alb，CRP，IgA），診断名，治療内容と一致している。IBD の治療には，栄養療法，5-ア（5-ASA，コルチコステロイド，アザチオプリン，生

ミノサリチル酸（5-ASA），副腎皮質ホルモン，免疫物学的製剤） を診療録から抽出した。 分類不能型

調整剤，生物学的製剤が一般的に推奨されている。セ

IBD，monogenic IBD，IgA 欠損症（IgA＜７mg/dl），

リアック病（CeD）は，小麦に含まれるグルテンおよ

IBD 疑いの例を除外した。全例が，小児消化器疾患

びその代謝産物に対する免疫反応によって引き起こさ

を専門とする医師により内視鏡検査が実施され，消化れる慢性消化器疾患で，腹痛，下痢，成長障害などの器疾患に精通した病理医により病理組織学診断を受け症状を引き起こす。 海外の診療ガイドラインでは，た。残血清を用いて ELIZA キット（ORGENTEC 社，

CeD を疑った場合のスクリーニング検査として血清

Germany）で tTG-IgA を測定し，10 U/ml 以上を陽抗組織トランスグルタミナーゼ IgA 抗体（tTG-IgA）性とした。潰瘍性大腸炎（UC）およびクローン病（CD）が推奨されている。CeD の治療法は，グルテンフリーの診断基準を満たす例を IBD 群，UC および CD の診食である。日本人における CeD の有病率は低く，そ断基準を満たさない例を非 IBD 群とした。非 IBD 群のの主な要因として遺伝学的な背景と，日本人の食生活中で，Roma Ⅳ分類の診断基準を満たす例を機能性消が欧米と比較して一般的に小麦の摂取量が少ないこと

化管疾患（FGID）群と定義した。IBD 群と FGID 群が挙げられる。しかしライフスタイルの欧米化に伴い，

で，tTG-IgA の中央値について IBM SPSS Statistics

これまで日本にはほとんど存在しないと考えられてい27を用いて Mann-Whitney U の検定で比較した。

た CeD が，今後増加することが予想される。IBD と【結果と考察】IBD 群31例と非 IBD 群53例を対象としCeD では治療法が異なるため，IBD と CeD を合併した。FGID 群は22例だった。tTG-IgA の陽性率は全た場合，不適切な医療が行われる可能性があり，両疾体 で 5.7 ％（ ５ /84 例 ），IBD 群 で 3.2 ％（ 1/31例 ），患を適切に診断することが重要である。しかし，日本

非 IBD 群 で 7.1 ％ （ 4/53 例 ）， FGID 群 で 4.5 ％人小児 IBD について tTG-IgA や CeD を評価した報（1/22例）だった。本研究の IBD 群の陽性率は海外で告はない。本研究では日本人小児における tTG-IgA

複数報告されている小児 IBD 例の tTG-IgA 陽性率と抗体の陽性率，IBD と CeD の合併の有無について調ほぼ同等の結果だった。tTG-IgA の陽性率について査することを目的とした。

IBD 群と FGID 群で統計学的な有意差を認めなかっ【対象と方法】本研究は後方視的研究である。信州大た（p＝0.66）。tTG-IgA 陽性群と陰性群とで，年齢，

学医学部附属病院の倫理委員会より承認を得て実施し性別，症状と血液検査に統計学的有意差はなかった。

た（承認番号5013）。2021年の１月27日から12月31日

IBD 群の１例と非 IBD 群の１例は tTG-IgA 陽性かつまでに信州大学医学部附属病院小児科を受診し，消化小麦摂取後の腹痛または体重増加不良の症状を有して

No. 5, 2023349

審査学位論文要旨いた。全例で十二指腸球部と下行脚から１か所ずつ生IBD と CeD の合併の有無について調査することを目検が実施され，組織学的に CeD と診断された症例は的とした。

なかった。海外の報告で tTG-IgA 陽性かつ CeD の2021年１月27日から12月31日までに信州大学医学部

組織学的な特徴がない例を潜在性 CeD（PCeD）とす附属病院小児科を受診し，消化器症状のため上部消化管る概念が提唱されている。本研究の２例も PCeD で内視鏡検査および十二指腸粘膜の生検組織検査を実施ある可能性が考えられる。

された18歳以下の例で，過去一年以内の残血清が－30 ℃【結論】日本人小児 IBD の集団にも tTG-IgA 陽性ので保存されていた例を対象とした。 残血清で tTG-

症例が存在した。tTG-IgA 陽性かつ小麦摂取後の症

IgA を測定し，10 U/ml 以上を陽性とした。IBD 群と状を有する症例では PCeD の可能性を考慮したフォ

機能性消化管疾患（FGID）群とで tTG-IgA を比較

ローアップを要する。 本研究の Limitation として，した。
その結果，倉沢は次の結論を得た

単一施設の検討であること，サンプルサイズが小さい
こと，後方視的な検討であるため HLA 検査の検討が１ ．tTG-IgA の 陽 性 率 は 全 体 で 5.9 ％（ 5/84 例 ），ないことなどが挙げられる。 日本人小児の IBD と

IBD 群 で 3.2 ％ （ 1/31 例 ）， 非 IBD 群 で 7.1 ％CeD 合併について更なる症例の集積が必要である。

（4/53例），FGID 群で4.5 ％（1/22例）であった。

（論文審査の結果の要旨）

２．tTG-IgA 陽性５例中２例は小麦摂取による症状

近年日本人小児の炎症性腸疾患（IBD）の患者数はを有していたが CeD の組織学的特徴を有する例はなかった。

増加傾向で，食生活の欧米化がその傾向と一致している。IBD の治療には栄養療法，5-アミノサリチル酸，

３．IBD 群と FGID 群に tTG-IgA の有意差はなかっ

副腎皮質ホルモン，免疫調整剤，生物学的製剤などがた。

ある。セリアック病（CeD）は，グルテン摂取による

日本人小児 IBD 集団にも tTG-IgA 陽性例が存在し免疫反応に起因する慢性消化器疾患である。海外の診たが組織学的な CeD 診断例がなかった。理由として

療ガイドラインでは，CeD の初期スクリーニング検tTG-IgA の偽陽性， 十二指腸生検の個数， 潜在性査として血清抗組織トランスグルタミナーゼ IgA 抗CeD の可能性が考えられた。 本研究は日本人小児体（tTG-IgA）が推奨されており，治療法はグルテ

IBD 集団に対し tTG-IgA を測定し CeD の合併につン除去食である。日本人は遺伝学的な背景や食生活かいて検討した最初の報告である。 今後日本人小児

ら CeD の有病率は低いとされていたが，ライフスタ

IBD の tTG-IgA と CeD の有病率についてさらに大イルの欧米化に伴い CeD が今後増加することが予想

規模な検討が必要であると結論付けられた。よって主される。IBD と CeD では治療法が異なるため，両疾査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があ患の合併の有無は治療方針を決定するために重要であるものと認めた。

る。本研究では日本人小児の tTG-IgA 抗体の陽性率，

Anti-tumor effect of Wasabi component, 6-(methylsulfinyl) hexyl isothiocyanate, against
endometrial carcinoma cells（ワサビ成分６（methylsulfinyl）hexyl isothiocyanate の子宮内膜癌細胞に対する抗腫瘍効果）
小

野

元

紀

（論文の内容の要旨）も報告されており，安全性の高い新規治療薬が望まれ【背景と目的】本邦において子宮体がん（EMC：en­

る。そこで我々は長野県の特産品であり，古くから食材

dometrial carcinoma）患者は急速に増加しており，予として親しまれているワサビに注目した。ワサビは抗菌後は一般的に良好であるが，進行例や再発例では依然作用を持つことで知られていたが，近年，カラシなど

として不良である。近年，再発例に対する多標的チロに含まれる allyl isothiocyanate（AITC），ブロッコリーシンキナーゼ阻害薬 Lenvatinib や免疫チェックポに含まれる sulforaphane（4-MITC）などのイソチオイント阻害薬 Pembrolizumab の有用性が報告されてシアネート類（ITCs）の様々な作用が報告されておいるが，同時に深刻な副作用（AE：adverse effect）

り， ワサビの主要化合物である6-（ methylsulfinyl）

350

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

hexyl isothiocyanate（6-MITC）についても抗炎症作カーである CC3発現は Ishikawa，HEC108，HEC265

用など様々な機能が報告されてきた。6-MITC の抗腫で増強したが HEC1B では発現を認めなかった。次に瘍効果は乳癌や皮膚癌，膵癌，大腸癌，血液腫瘍など

Ishikawa と HEC1B の異種移植マウスを用いた検討でで報告されているが，EMC に対する報告はないこと

は，6-MITC を４μmol/kg/day 経口投与群で対照群から，本研究では，6-MITC の EMC 細胞株に対すると比較して移植５週間後に Ishikawa，HEC1B の異種抗腫瘍効果を in vitro および in vivo で検討した。

移植腫瘍体積が有意に減少した（P＝0.01，0.02）。ま【方法】EMC 細胞株（Ishikawa，HEC265，HEC108，

た，摘出した腫瘍の免疫染色では，Ki-67発現の減少

KLE，HEC1B）と，非癌正常細胞としてヒト臍帯静（P＝0.28，0.03）と CC3発現の増強（どちらも P＜

脈内皮細胞 HUVEC，不死化正常子宮内膜細胞 EM-0.01）を認めた。6-MITC は in vitro では HEC1B に

E6/E7-hTERT2における，6-MITC の細胞生存率にCC3発現増強を誘導しなかったが，in vivo では誘導

対する作用を WST-1アッセイにより測定し，その作したことから，ヌードマウスにも存在する NK 細胞

用を positive control である AITC，4-MITC と比較

が HEC1B のアポトーシス誘導に関与する可能性を考した。また EMC 細胞株の細胞生存に対する抗癌剤シえ，検討を行った。特に EMC 細胞の異種移植４週前

スプラチン（CDDP）と6-MITC の併用効果を WST-1

から6-MITC を連日投与することで，NK 細胞活性のアッセイにより評価した。6-MITC の誘導する細胞

有意な増強が観察された（P＜0.05）。一方，6-MITC

死について，Annexin V と Ethidium Homodimer Ⅲ

投与により，マウスは飲水量の低下や体重減少を認めの蛍光染色によるアポトーシス / ネクローシス / 正常ず，明らかな AE はみられなかった。

細胞検出キットおよびウエスタンブロット法を用いて【結論】本研究により，6-MITC は EMC 細胞に対し検討した。EMC 細胞を免疫不全ヌードマウスの右臀て抗腫瘍効果を有することが示された。一方，非癌正部（Ishikawa），左臀部（HEC1B）に異種移植し，6-常細胞に対しては殺細胞性を示さず，生体内でも明ら

MITC２μmol/kg/day もしくは４μmol/kg/day を強かな AE は認めないことから，安全性が高いと考えら

制経口投与し，子宮体癌細胞異種移植片の腫瘍量や体れた。6-MITC は生体内においては，直接作用だけ

重変化を経時的に計測し，実験終了時に摘出した異種でなく NK 細胞活性増強を介して EMC 細胞のアポ移植腫瘍の Ki-67と cleaved-caspase 3（CC3）の免トーシスを誘導する可能性が考えられた。以上のこと

疫染色を行い，6-MITC の細胞増殖や細胞死への関から，6-MITC は EMC の新規治療薬候補となりうる

与について検討した。さらに同時に摘出した脾臓よりことが示唆された。

ナチュラルキラー（NK）細胞を抽出し，NK 細胞活性を測定した。

（論文審査の結果の要旨）
本邦において子宮体がん（EMC：endometrial car­

【結果および考察】6-MITC は全ての EMC 細胞株のcinoma）患者は急速に増加している中で，進行例や増殖を抑制し，50 ％阻害濃度（IC50）は9.6 μM（Ishi­

再発例に対する治療は限られており，最近導入されたkawa）から17.6 μM（HEC1B）の間であった。一方，

免疫チェックポイント阻害薬やマルチキナーゼ阻害

HUVEC や EM-E6/E7-hTERT2に対する増殖抑制作薬は特有の副作用が問題となる。そのため，安全性の用は乏しく，IC50を算出できなかった。また6-MITC

高い新規治療薬が望まれる。そこで長野県の特産品でによる EMC 細胞の増殖抑制作用は AITC や4-MITCあり，古くから食材として親しまれているワサビに注より強く，特に Ishikawa で差が大きかった。CDDP

目し，その主要化合物であり，抗炎症作用など様々なとの併用では，6-MITC 単独では増殖抑制効果の乏機能が報告されている６-（methylsulfinyl）hexyl iso­

しい５μM の投与により，CDDP の殺細胞効果を増強

thiocyanate（6-MITC）の EMC 細胞株に対する抗腫し，特に HEC265および HEC1B に対しては顕著な相瘍効果を in vitro および in vivo で検討した。

乗効果を示した。蛍光染色による検討では，Ishikawa，

方法としては，EMC 細胞株（Ishikawa，HEC265，

HEC108 ，HEC265 で は 6-MITC 用 量 依 存 的 に ア ポ

HEC108，KLE，HEC1B）および正常細胞としてヒトーシスが増加したが，HEC1B では有意な増加は観ト臍帯静脈内皮細胞 HUVEC，不死化正常子宮内膜細察されなかった。ウエスタンブロットでは，全ての胞 EM-E6/E7-hTERT2を用い，6-MITC の細胞生存

EMC 細胞において6-MITC により抗アポトーシスタ率に対する作用や，抗癌剤シスプラチン（CDDP）とンパク BCL2の発現が抑制され，アポトーシスマーの併用効果，アポトーシス誘導作用を検討した。また

No. 5, 2023351

審査学位論文要旨

生体内での6-MITC の作用は，ヌードマウス皮下の用に自然免疫系であるナチュラルキラー（NK）細

EMC 細胞株異種移植腫瘍を用いて検討した。

胞の活性化が関与する。
本研究によりワサビに含まれる6-MITC は，EMC

その結果，小野らは次の結論を得た。
１．6-MITC は EMC 細胞に対して増殖抑制とアポ細胞に対して抗腫瘍作用を有することが示された。既トーシス誘導による細胞障害作用を有するが，正常存の抗がん剤との併用効果や NK 細胞活性化という細胞に対しての細胞障害性は低い。

新知見も示されており，副作用の少ない新規治療薬と２．6-MITC は EMC 細胞株の CDDP による細胞障なりうる可能性が示されたことを確認できた。したがって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とし害作用を増強する。
３．6-MITC 経口投与は，生体内においても EMC 異て価値があるものと認めた。

種移植腫瘍に対する抗腫瘍作用を示したが，その作

Factors affecting day-to-day variations in tacrolimus concentration among children andyoung adults undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation（小児および若年成人における同種造血幹細胞移植時のタクロリムス血中濃度の変動に影響を与える因子の検
討）
丸

山

悠

太

（論文の内容の要旨）

Tac の投与量を変更していない連続する２日を選択し，【背景】タクロリムス（Tacrolimus；以下 Tac）は同その間の Tac 血中濃度およびヘマトクリット値と以

種造血幹細胞移植（allo-HSCT）における移植片対宿

下の項目を収集した。評価項目：発熱の出現，発熱の主病（GVHD）の予防として広く使用される免疫抑制

持続，解熱，CYP3A4関連薬物の投与開始，免疫抑制剤である。有効血中濃度の範囲が狭く，血中濃度高値

剤 の 投 与 開 始 ， 輸 血（ RCC ， 濃 厚 血 小 板［ PC ］），

は電解質異常，高血圧，神経毒性などの副作用発生に

Tac 投与ルートの交換。Tac 血中濃度は全血を用いて関連し，低値は GVHD のリスクを増加させるため治測定した。

療薬物モニタリングに基づく用量調節が必須である。

Tac 血中濃度の変動に影響を与える要因の解析にはTac の代謝は，CYP3A4関連薬剤や免疫抑制剤の併用，独立ｔ検定による単変量解析および重回帰分析による

年齢，患者の状態などの影響を受けることが報告され多変量解析を行った。Tac 血中濃度の急激な変動を引ている。近年，赤血球濃縮製剤（RCC）の輸血も Tac

き起こす要因を特定するためにロジスティック回帰を

血中濃度の上昇に関係することが報告されている。し用いた多変量解析を行った。

かしながら，Tac 血中濃度に影響を与える因子を総合【結果】Tac 投与量を変更していない計1315のポイン的に評価した報告は無く，それぞれの因子がどの程度

トを解析対象として抽出した。Tac 血中濃度は，RCC

Tac 血中濃度に影響を与えるか十分には分かっていな

輸血（partial regression coefficient［B］：25.403，95 ％い。

confidence interval［CI］：22.75-28.06，p＜0.0001），【目的・方法】本研究は allo-HSCT 後に Tac 持続点

メトトレキサート投与（Ｂ：3.732，95 ％ CI：0.69-

滴を受けた小児および若年成人を対象に，Tac 血中濃6.77，p＝0.0162），発熱の持続（Ｂ：5.594，95 ％ CI：

度の日内変動に影響を与える要因を調査することを主

1.64-9.55，p＝0.0056），解熱（Ｂ：7.500，95 ％ CI：な目的とした。副次的な目的として，Tac 血中濃度の3.47-11.53，p＝0.0003）で有意に増加していた。一

急激な変動（20 ％以上）を引き起こす要因を特定す方，PC 輸血（Ｂ：－4.094，95 ％ CI：－5.63-－2.56，

ることとした。

p＜0.0001），発熱の出現（Ｂ：－4.674，95 ％ CI：

2009年１月から2021年12月までに信州大学医学部附－8.79-－0.56，p＝0.0261），Tac 投与ルートの交換（Ｂ：属病院小児科で allo-HSCT 後に Tac 持続静注を受け－18.845 ，95 ％ CI ： －29.81-－7.88 ，p＝0.0008 ）た25歳未満の小児・若年成人患者123名の後ろ向きコでは血中濃度が有意に低下していた。

ホート研究である。allo-HSCT 後 Tac 血中濃度が７Tac 血中濃度の急激な上昇は，低体重，RCC 輸血，

ng/mL 以上となった初日から移植後28日目において，

メトトレキサート投与，発熱の持続，解熱と関連して

352

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨いた。一方，低体重，PC 輸血，Tac 投与ルートの交換

本研究は allo-HSCT 後に Tac 持続点滴を受けた小は急激な血中濃度の低下と関連していた。また，タクロ

児および若年成人を対象に，Tac 血中濃度の日内変動

リムス血中濃度の変動とヘマトクリットの変動の間に，に影響を与える因子および Tac 血中濃度の急激な変有意な相関関係を認めた（r＝0.556，p＜0.0001）。

動（20 ％以上）を引き起こす因子の特定を目的とし【考察】RCC 輸血とそれに伴うヘマトクリット値の上た。2009年１月から2021年12月までに信州大学医学部

昇は，Tac 血中濃度の上昇に強い影響を与えることが附属病院小児科で allo-HSCT 後に Tac 持続点滴を受分かった。また，PC 輸血が Tac 血中濃度の低下に関けた25歳未満の小児・若年成人患者123名ついてカルテ係していることが本研究で初めて明らかとなった。投記載を基に後方視的に検討した。allo-HSCT 後 Tac

与された Tac の約85 ％が赤血球と結合するため，全血中濃度が７ng/mL 以上となった初日から移植後28血を用いて測定されている Tac 血中濃度はヘマトク

日目において，Tac の投与量を変更していない連続す

リット値により大きな影響を受けていると推測される。

る２日を選択し，その間の Tac 血中濃度およびヘマ

ただしヘマトクリット値の変動に伴う Tac 血中濃度

トクリット値と以下の項目を収集した。評価項目：発の変動は表面上の変動であるため，ヘマトクリット値

熱の出現，発熱の持続，解熱，CYP3A4関連薬物の投の変動を最小限にするような診療を行う必要があると与開始，免疫抑制剤の投与開始，輸血（RCC，濃厚考えられた。

血小板［PC］），Tac 投与ルートの交換。Tac 血中濃本研究では，CYP3A4関連薬剤やステロイド投与な
どは Tac 血中濃度に有意な影響を与えていなかった。
投与開始直後のため Tac 代謝への影響が少なかった

度は全血を用いて測定した。
その結果，丸山は次の結論を得た。
１．輸血（RCC と PC），発熱，メトトレキサート投と推測された。

与，Tac 投与ルートの交換は，日々の Tac 濃度の【結論】RCC および PC の輸血，発熱，メトトレキサー

変動に独立して影響を与える因子であった。

ト投与，Tac 投与ルートの交換は，Tac 血中濃度の変動に影響を及ぼす独立した要因であった。上記の因子

２．上記に加えて低体重および低年齢は Tac 濃度の急激な変動のリスク因子であった。

に加え低体重は Tac 血中濃度の急激な変動の因子で３．Tac 濃度とヘマトクリット値は相関関係にあった。

あった。これらの知見は allo-HSCT における Tac 血

本研究の結果より，特にヘマトクリット値の変動に中濃度のより適切な管理に寄与すると考えられた。

より Tac 濃度が変動することが明らかとなった。こ

（論文審査の結果の要旨）の変動は必ずしも血漿中濃度，リンパ球中濃度とは一

タクロリムス（Tacrolimus；以下 Tac）は同種造

致しない可能性があり，解釈には注意が必要である。

血幹細胞移植（allo-HSCT）における移植片対宿主病

急激な Tac 濃度の変動を減らすためにはヘマトクリッの予防として広く使用される免疫抑制剤である。Tac

ト値の変動を極力減らす必要があり，低体重者に対する血中濃度には，CYP3A 関連薬剤や免疫抑制剤の併用，

RCC 投与量を少なめに設定するなどの工夫が有用で

年齢，患者の状態，投与ルート交換，赤血球濃縮製剤ある可能性が示された。これらの知見は allo-HSCT（RCC）輸血などの因子が影響することが報告されてにおける Tac 血中濃度のより適切な管理に寄与するといる。しかしながら allo-HSCT において Tac 血中濃考えられた。

度に影響を与える因子を総合的に評価した報告は無く，それぞれの因子がどの程度 Tac 血中濃度に影響を与よって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

えるか十分には分かっていない。

No. 5, 2023353

審査学位論文要旨

RhoA G17E/Vav1 signaling induces cancer invasion via matrix metalloproteinase-9 in gastriccancer（胃癌における RhoA G17E/Vav1シグナルはマトリックスメタロプロテアーゼ -9を介したがん浸潤を誘導する）
中

村

聡（論文の内容の要旨）

浸潤を促進することが明らかになった。さらに，免疫【背景と目的】Rho ファミリーの低分子量 GTPase で沈降法により，Vav1と RhoA G17E が特異的に結合ある RAS homolog family member A（RhoA）と Rho

していることが示された。Vav1と RhoA G17E の浸ファミリーGTPase のグアニンヌクレオチド交換因子

潤能亢進への経路は，RhoA，Vav1の下流 pathway（GEF）である Vav1は，アクチンなどの細胞骨格にを検索するも，証明するには至らなかったが，matrix

関連する経路を活性化し，細胞の形状，接着，運動性

metalloproteinase -9（MMP9）が Vav1の RNA 干渉を制御することが報告されている。一部のＴ cell リン試験で関与を示し，RhaAG17E による浸潤能亢進はパ腫では，これらの分子の相互作用が悪性腫瘍のシグVav1と結合することで MMP9を介して機能することナル伝達に関与していることが報告されているが，上が明らかになった。また，ヌードマウスの腹膜異種移

皮性悪性腫瘍における機能は不明である。本研究では，

植モデルにおいて，G17E は野生型 WT と比較して腹胃がんにおける変異型 RhoA の存在によるシグナル

膜播種結節形成を促進することが示された。これらの変化を調べ，RhoA が上皮性がんにおいてどのような腹膜播種結節形成は Vav1のノックダウンによって抑役割を果たすかを明らかにした。また，RhoA G17E/

制されることも示された。

Vav1がびまん性胃癌の新規治療標的となる可能性を【結論】RhoA 変異型 G17E は Vav1と結合することが示した。

示され，それらは Matrix Metalloproteinase -9を介し【方法】RhoA 野生型 WT と RhoA 変異型 R5W，G17E，て胃癌細胞の浸潤を促進することが示唆された。したY42C を胃癌細胞株 MKN74にレトロウイルスで導入がって，びまん性胃がんにおける RhoAG17E/Vav1

し，RhoA 変異型が安定発現する細胞株を作成し，in

シグナルは，治療標的として有用である可能性が示唆

vitro で形態学，増殖，遊走 / 浸潤試験，in vivo で腹された。

膜異種移植試験を行った。

（論文審査の結果の要旨）【結果】RhoA 変異型 G17E および Y42C は，MKN74

Rho ファミリーの低分子量 GTPase である RAS ho­に形態変化を誘導した。細胞増殖能は野生型，変異型

molog family member A（RhoA）と Rho ファミリーの遺伝子導入で変化はなかったが，G17E で遊走能，

GTPase のグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）で浸潤能を促進することが分かった。それらの変化の原ある Vav1は，アクチンなどの細胞骨格に関連する経因を検索するため，RhoA シグナルの下流を検索する

路を活性化し，細胞の形状，接着，運動性を制御すると，G17E で Cofilin のリン酸化が亢進していることがことが報告されている。本研究では，胃がんにおける分かった。しかし，Cofilin のリン酸化を阻害薬にて変 異 型 RhoA の 存 在 に よ る シ グ ナ ル 変 化 を 調 べ ，抑制すると，遊走能は反対にさらに亢進し，浸潤能はRhoA が上皮性がんにおいてどのような役割を果たす

変化しない結果であった。そのため，RhoA 下流の変かを明らかにすることを目的とした。 方法として，化が G17E による浸潤能亢進の経路として関連付られ

RhoA 野生型 WT と RhoA 変異型 R5W，G17E，Y42Cなかった。ほかの経路の関与を考え，Tcell リンパ腫

を胃癌細胞株 MKN74にレトロウイルスで導入し，の 報 告 な ど か ら RhoA の 活 性 化 の 調 整 因 子 で あ る

RhoA 変異型が安定発現する細胞株を作成し，in vitro

Vav1に着目した。Vav1について既存の遺伝子導入さで形態学，増殖，遊走 / 浸潤試験，in vivo で腹膜異れた MKN74で検討すると，G17E で Vav1の mRNA

種移植試験を行った。

およびタンパク質レベルで発現が亢進していることがその結果，中村らは次の結論を得た。

分かった。ほかの胃癌細胞（MKN45）でも，G17E

１．RhoA 変異型 G17E および Y42C は，胃癌細胞株の導入で mRNA の増加を認めた。Vav1の RNA 干渉

MKN74への遺伝子導入によりって形態的変化を誘試験により，RhoA G17E は Vav1を介して癌細胞の導した。また，RhoA 変異型 G17E の遺伝子導入で

354

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

遊走能，浸潤能が亢進した。しかし，これら浸潤能

変異型 G17E 導入細胞は，野生型 WT 導入細胞と比亢 進 の 機 序 は RhoA 下 流 シ グ ナ ル で あ る RhoA

較して腹膜播種結節形成を促進した。Vav1をノッROCK pathway とは異なる経路による制御と考えクダウンすることで腹膜播種形成は抑制されることられた。

がわかった。

２．RhoA 変異型 G17E の遺伝子導入で Rho ファミ

以上の結果から，RhoA 変異型 G17E は Vav1と結リーを活性化させるグアニンヌクレオチド交換因子

合することで Vav1発現が亢進し，それにより MM9（GEF）である Vav1発現が亢進することが分かっ

を介して胃癌細胞の浸潤を促進することが示唆された。

た。Vav1は RhoA 変異型 G17E を遺伝子導入した

したがって，RhoA 変異を持つびまん性胃がんにおい胃癌細胞株における浸潤能の亢進に関与し，Vav1て，RhoAG17E/Vav1シグナルは，新規の治療標的とは RhoAG17E に特異的に結合し，Matrix metallo­

して，また新規治療標的の検索の足掛かりとして有用

proteinase-9（MMP9）を介して浸潤能を制御していである可能性が示唆された。以上から，主査，副査はた。

一致して本論文を学位論文として価値があるものと認

３．ヌードマウスの腹膜播種モデルにおいて，RhoA

めた。

Development of Bilayered Bone Marrow-derived Cell-Gelatin Grafts for Augmentation
Cystoplasty and Reconstruction of Bladder Tissues in Rats（膀胱組織を再構築する積層型骨髄由来間葉系幹細胞グラフトの開発）
井

上

貴

浩

（論文の内容の要旨）

ングラフト，細胞シートゼラチングラフト，単層型細【背景と目的】神経因性膀胱，放射線性膀胱炎，膀胱

胞グラフトを作製した。10週齢雌 SD ラットの膀胱頂

結核，間質性膀胱炎等により膀胱コンプライアンスが部を切開して積層細胞グラフト，あるいは，対照グラ低下して，膀胱容量の減少や高圧蓄尿が生じて腎機能フトを置いた（各 n＝４）
。さらに，生分解性ポリグ

低下，尿路感染の併発などから保存的治療が困難な場

ルコール酸（PGA）不織布を重ねて，３，６，９，合，腸管（主に回腸）を利用した膀胱拡大術が行われ12時方向でレシピエント膀胱と縫合した。移植４週間る。しかし，腸管利用のため侵襲が大きい手術であり，後，それぞれの群での膀胱を摘出して組織学的解析を

術後の腸管狭窄，尿路結石，電解質異常など合併症が行った。別の10週齢雌 SD ラットを用いて，膀胱に週多い。そこで，人工素材や動物由来組織を用いて膀胱

１回２グレイの放射線線量で５回照射した。最終照射

拡大術に利用するグラフトの開発研究が行われている。

から２週間通常飼育したものを放射線照射傷害膀胱モ

本研究は，骨髄由来間葉系幹細胞とゼラチン基材を用デルとした。放射線照射した膀胱に対して，上述と同いて，腸管利用を回避できるとともに，膀胱組織を効様に膀胱頂部に切開して，積層型細胞クラフト（n＝果的に再構築できる新規グラフトの開発を行った。さ５），あるいは，対照グラフトとしての無細胞ゼラチ

らに，開発したグラフトの効果について，放射線照射

ングラフト（n＝７）を移植した。移植４週間後に膀で傷害を与えた膀胱モデルを用いて検討した。

胱の組織学的解析を行った。

【材料および方法】17週齢雄 Green Fluorescence Protein【結果】正常膀胱への移植４週間後，各グラフト移植（GFP）-transfected Sprague-Dawley（SD）ラットの群において，膀胱頂部の切開部位が閉創されていた。

大腿骨から採取した細胞をコラーゲン培養皿上で初代閉創された膀胱頂部には，尿路上皮層，平滑筋層から培養を行った。接着増加した骨髄由来間葉系幹細胞を構成される組織が再構築されていた。積層型細胞グラ

温度応答性培養皿に継代培養した。オーバーコンフル

フト群の再構築された組織内での平滑筋層の厚みは，エントに達した後，培養皿の温度を低下させて細胞間各対照グラフト群と比較して有意な増大を示した。放結合を維持した単層状の骨髄由来間葉系幹細胞シート

射線照射膀胱への移植４週間後において，正常膀胱へをゼラチン基材で回収した。これを２枚作製し，細胞の移植と同様に，積層型細胞グラフト群と対照グラフ

同士が接着するように積層した（以下，積層型細胞グ

ト群とも再構築された尿路上皮層，平滑筋層から構成ラフト）。また，対照グラフトとして，無細胞ゼラチ

される組織によって膀胱頂部の切開部位が閉創されて

No. 5, 2023355

審査学位論文要旨いた。積層型細胞グラフト群の平滑筋層の厚みは，対髄由来間葉系幹細胞を回収した。これを２枚作製し，照グラフト群と比較して有意な増大を示した。さらに，細胞同士が接着するように積層した（以下，積層型細再構築された組織内で移植した GFP 陽性の骨髄由来間胞グラフト）。また，対照グラフトとして，無細胞ゼ

葉系幹細胞の生着を認めた。生着した骨髄由来間葉系

ラチングラフト，細胞シートゼラチングラフト，単層

幹細胞の一部は，SMA 陽性成熟平滑筋細胞，Desmin型細胞グラフトを作製した。10週齢雌 SD ラットの膀

陽性未熟平滑筋細胞，Pax7陽性筋芽細胞，あるいは，

胱頂部を切開して積層細胞グラフト，あるいは，対照CRPG 陽性神経細胞に分化した。

グラフト（無細胞ゼラチングラフト）を移植した（各【結論】本研究は，膀胱組織を効果的に再構築する積n＝４）。また，別の10週齢雌 SD ラット膀胱に対して，層型細胞グラフトを開発した。積層型細胞グラフトは，

週１回２グレイの放射線照射を５回行った。最終照射

放射線照射によって傷害を与えた膀胱においても膀胱から２週間通常飼育した後，同様に積層型細胞クラフ

組織を再構築した。積層型細胞グラフトを構成していト（n＝５），あるいは，対照として無細胞ゼラチン

る間葉系幹細胞の一部は，平滑筋細胞や神経細胞へのグラフト（n＝７）を移植した。正常膀胱，あるいは，分化を示した。本研究で開発した積層型細胞グラフト

放射線照射した膀胱に移植してから４週間後，膀胱をは，膀胱拡大術用のグラフトとして発展していく可能

摘出して組織学的解析を行った。

性が示された。

その結果，井上は次の結論を得た。

（論文審査の結果の要旨）

１．正常膀胱への移植において，積層型細胞グラフト

神経因性膀胱，放射線性膀胱炎，膀胱結核，間質性群，および，３種類の対照グラフト群において，膀

膀胱炎等により膀胱コンプライアンスの低下から膀胱
容量の減少，高圧蓄尿が生じて，腎機能低下，尿路感染などの併発により保存的治療が困難な場合，腸管胱頂部の切開部の閉創を示した。
２．膀胱頂部の閉創部において，尿路上皮層，平滑筋層から構成される組織の再構築を示した。

（主に回腸）を利用した膀胱拡大術が行われる。しか３．放射線照射した膀胱においても，尿路上皮層，平し，腸管を利用した侵襲の大きい手術であり，術後の滑筋層から構成される再構築された組織によって，

腸管狭窄，尿路結石，電解質異常など合併症が多い。

膀胱頂部の切開部が閉創してすることを示した。

そこで，人工素材や動物由来組織を用いて膀胱拡大術

４．正常膀胱と放射線照射膀胱において，積層型細胞に利用するグラフトの開発研究が行われている。本研

グラフト群で再構築された平滑筋層の厚みは，対照

究は，骨髄由来間葉系幹細胞とゼラチン基材を用いて，グラフト群と比較して有意に増大したことを示した。

腸管利用を回避できるとともに，膀胱組織を効果的に

５．再構築された組織内で移植した GFP 陽性骨髄由再構築する新規膀胱グラフトの開発を行った。さらに，

来間葉系幹細胞の生着，および，一部生着細胞の平開発した膀胱グラフトの効果について，放射線照射傷

滑筋細胞，あるいは，神経細胞への分化を示した。

害膀胱モデルを用いて検討した。

これらの結果から積層型細胞グラフトは膀胱組織を

17 週 齢 雄 Green Fluorescence Protein（ GFP ）効果的に再構築することが示された。本研究で開発しSprague-Dawley（SD）ラットの大腿骨から採取したた積層型細胞グラフトは，膀胱拡大術用のグラフトと細胞をコラーゲン培養皿上で初代培養を行い，接着増して発展していく可能性が示された。よって，主査，

殖した骨髄由来間葉系幹細胞を温度応答性培養皿に継副査は一致して本論文を学位論文として価値があるも代培養した。オーバーコンフルエントに達した後，培のと認めた。

養皿の温度を低下させて，ゼラチン基材で単層状の骨

356

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

Efficacy of cetylpridium chloride mouthwash compared to povidone iodine on oral flora for
perioperative patient care : A randomized controlled feasibility study（周術期患者の口腔内細菌叢に対するポビドンヨードと比較した塩化セチルピリジニウムの有効性：準ランダム化比較試験）
小田切（論文の内容の要旨）

宏 樹た。

【研究の背景】口腔内は肺炎や血液感染症の原因とな【試験の結果】 中断症例を除き83名（CPC 群42名，る病原性細菌の温床とされる。本邦では，がん治療・

PVP-I 群41名）の臨床指標と検体の解析を行なった。

臓器移植・心臓血管外科・整形外科手術などを受ける

両群とも背景因子に有意差はなかった。両群とも術後患者に周術期口腔管理が行われている。周術期口腔管１週間で OHI-S と BOP が有意に減少した。 また，理は誤嚥性肺炎の予防，創部感染の予防，入院期間の両群とも術後１週間で総菌数と OTU 数の改善が認め

短縮や医療費の軽減につながるとされている。ポピドられた。 唾液と頬粘膜は， 両群ともに手術翌日でンヨード（Povidone iodine：以下 PVP-I）製剤は口Streptococcus 属の減少を認めた。CPC 群は手術後１腔内細菌の増殖の抑制が報告されており，本邦で多く週間後までこの菌叢が維持されたが，PVP-I 群は手使用され，当院でも周術期口腔管理で PVP-I 製剤を術前と同程度に戻っていた。舌については細菌叢に大採用している。しかしながら，使用時の希釈や含漱のきな変化はなかった。両群間で特徴的な細菌属の比較際の用法が煩わしく，１回の使用量が60mL と多く，を線形判別分析にて行ったところ，CPC 群では最も希釈や唾液の添加でさらなる殺菌力の低下が確認され特徴的な細菌として Haemophilus 属が検出されたが，ている。塩化セチルピリジニウム（cetylpyridinium

PVP-I 群では，Streptococcus 属が検出された。

chloride 以下：CPC）製剤は，両親媒性の第四級化合【考察】両群とも術後１週間で OHI-S と BOP が有意

物で口腔衛生用品としての安全性と有効性が証明されに減少し，総菌数と OTU 数の減少が認められたことており，歯垢形成の抑制と歯肉炎の予防に有効とされる。

から，PVP-I 製剤，CPC 製剤を併用した周術期口腔また１回の使用量は10 mL と少なく，患者の負担を軽管理は，術後も良好な口腔内の状態を維持できること

減することができ，希釈する必要がないため PVP-Iが示唆された。また，過去の報告で Streptococcus 属のように，患者によって濃度が変化することはない。

は術後肺炎と関連し，制御は感染予防の鍵とされてい

CPC 製剤は周術期のセルフケアにおいて，PVP-I 製

るが，周術期における CPC 製剤の使用は，PVP-I 製剤に替わることができる可能性を考えたため，ランダ剤と比較して抗生剤の効果を補助し，手術後の合併症

ム化比較試験を行い有効性について検討した。

のリスクを低減させる可能性が示唆された。さらに舌【試験の方法】頭頸部を除く全身麻酔下での手術をについては細菌叢に大きな変化はなかったことから，

予定している患者100名を CPC 群（n＝51） または舌への抗生剤や含嗽の効果は限定的であり，舌ブラシ

PVP-I 群（n＝49）に無作為に割り付けた。被験者はによる清掃や抗菌ジェルやスプレー剤などの局所投与

術前口腔ケアを受けた後，ブラッシングに加え CPCなど代替アプローチが必要であることが示唆された。

製剤もしくは PVP-I 製剤のいずれかを併用しセルフ【結論】本研究は，CPC 洗口液と PVP-I うがいの口ケアを行う。手術後は可及的にセルフケアを開始する。

腔内細菌叢への影響を検討するランダム化比較試験の臨床指標（歯周ポケット深さ，歯肉出血，OHI-S，舌実現可能性を支持するものと考える。CPC 洗口液は苔の量）検査を術前口腔ケア前と手術１週間後に行い，

PVP-I うがい液よりも抗菌効果を長く維持できる可

頬粘膜と舌のスワブ検体を術前口腔ケアの前後，挿管能性がある。

時，抜管時，手術翌日，手術1週間で採取し，唾液検（論文審査の結果の要旨）

体を術前口腔ケアの前後，手術翌日，手術１週間後に周術期口腔管理は誤嚥性肺炎の予防，創部感染の予採取した。採取された検体は，リアルタイム PCR 法

防などに有効とされているが，周術期口腔管理の有効にて総菌数の測定が行われ，16S リボソーム RNA 解性を示した前向き研究はほとんどない。周術期口腔管

析，OTU 解析によって OTU 数，細菌叢の解析を行っ

理では専門的な口腔ケアに加え，セルフケアの補助とNo. 5, 2023357

審査学位論文要旨

して含嗽剤を併用することがある。周術期口腔管理で少した。

併用する含嗽剤の選択肢として，当院ではポピドン

２．細菌叢の変化は，唾液，頬粘膜において，両群とヨード（povidone iodine；PVP-I）配合製剤を採用しもに抗生剤の影響を受け手術翌日で Streptococcusているが，使用時の希釈や含漱の際の用法が煩わしく，属の減少を認めた。CPC 群においては，手術後１１回の使用量が60 mL と多い。また，希釈や唾液の添週間まで菌叢が維持されたが PVP-I 群は手術前と加で殺菌力の低下が報告されている。塩化セチルピリ

同程度となった。

ジニウム（cetylpyridinium chloride；CPC）配合製

３．舌については細菌叢に大きな変化はなく，抗生剤

剤は歯垢形成の抑制と歯肉炎の予防に有効とされ，１による影響も受けていなかった。

回の使用量は10 mL と少なく，患者の負担を軽減する

１．の結果より，PVP-I 製剤，CPC 製剤を併用しことができる。希釈が必要な PVP-I 製剤と比較して，た周術期口腔管理は，術後も良好な口腔内の状態を維患者によって濃度が変化することはないため，CPC

持できることが示唆された。 また， 過去の報告で製剤は PVP-I 製剤に代わる可能性があると考えた。

Streptococcus 属は術後肺炎と関連し，制御は感染予

周術期口腔管理を受ける100名を CPC 製剤使用群と防の鍵とされているが，２．の結果により，周術期にPVP-I 製剤使用群にランダムに振りわけを行い，両おける CPC 製剤の使用は，PVP-I 製剤と比較して抗群の唾液と頬粘膜と舌における， 総菌数，OTU 数

生剤の効果を補助し，手術後の合併症のリスクを低減（細菌の種の数），細菌叢の経時的変化（術前口腔ケア

させる可能性が示唆された。さらに３．の結果より，の前後，挿管時，抜管時，手術翌日，手術１週間後）

舌への抗生剤や含嗽の効果は限定的であり，舌ブラシと，臨床指標（歯周ポケット深さ，歯肉出血，OHI-S，による清掃や抗菌ジェルやスプレー剤などの局所投与

舌苔の量）の術前と術後の変化について比較検討した。

など代替アプローチが必要であることが示唆された。
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値

その結果，小田切宏樹は次の結論を得た。
１．術前口腔ケア前と手術１週間後を比較し，OHI-S，があるものと認めた。

BOP スコア，総菌数，OTU 数が両群とも有意に減Prospective cohort study for postnatal CMV infection in preterm infants（早産児のおける
後天性 CMV 感染に関する前向きコホート研究）
小川亮（論文の内容の要旨）

こども病院 NICU に入院した在胎32週以下の早産児【背景と目的】サイトメガロウイルス（CMV）は先天とした。本研究は，長野県立こども病院倫理委員会

性感染，後天性感染をきたし周産期に問題となるウイ（承認番号29-11）が承認した。両親の書面による同意ルスである。後天性 CMV 感染の感染経路としては母のもと実施した。当院の NICU に入院した対象者は，乳，輸血関連，産道感染が挙げられる。主な感染経路

生後３週間以内と修正35週以降の２回，尿 CMV 核酸

は母乳であり，感染予防のため凍結融解母乳の使用が検査で感染の有無を評価した。生後３週間以内の陽性推奨されているが，その感染予防効果は不十分と言わ例を先天性感染，生後３週間以内の検査が陰性で修正れている。後天性 CMV 感染症は，正期産では不顕性35週以降で陽性例を後天性感染，２回とも陰性を感染感染であるが，早産児，特に在胎32週以下では敗血症なしとした。母乳は生後１週間までは新鮮母乳，生後様症候群，肺炎，壊死性腸炎，肝腫大，肝酵素上昇，

１週から修正35週までは凍結融解母乳，修正35週以降

血小板減少症，好中球減少症などの症状を呈すること

は新鮮母乳もしくは凍結融解母乳を与えた。輸血は，がある。後天性 CMV 感染症は早産児の重要な問題だ

CMV 抗体陰性の血液製剤のみを使用した。診療録よが，その疫学は十分に明らかにされていない。在胎32

り周産期情報，退院までの臨床的症状，血液検査の週以下の後天性 CMV 感染の感染率，リスク因子，感データを収集した。

染を疑う臨床像を明らかにするため前向きコホート研【結果】在胎32週以下で出生し，２回の尿 CMV 検査を究を行った。

行ったのは139例であった。先天性感染３例（2.2 ％），【方法】対象は2017年７月から2021年３月に長野県立

後天性感染例７例（5.0 ％），感染なし129例（92.8 ％）

358

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨であった。後天性感染群では全例で凍結融解母乳が使研究を行った。

用されていた。在胎期間は後天性感染群が感染なし群

対象は2017年７月から2021年３月に長野県立こどもと比較し有意に短かった（p＝0.04）。凍結融解母乳

病院 NICU に入院した在胎32週以下の早産児とした。

が与えられた期間は後天性感染群で有意に長かった対象者は，生後３週間以内と修正35週以降の２回，尿（p＝0.03）。母体年齢は後天性感染群で有意に高齢でCMV 核酸検査で感染の有無を評価した。生後３週間あった（p＝0.001）。 輸血回数は両群で有意差はな

以内の陽性例を先天性感染，生後３週間以内の検査がかった。後天性感染例の症状は肺炎5例が最多であっ

陰性で修正35週以降で陽性例を後天性感染，２回ともた。１例で敗血症様症候群，肺炎，壊死性腸炎，肝腫

陰性を感染なしとした。母乳は生後１週間までは新鮮大を認め，死亡した。後天性感染例で認めた血液検査

母乳，生後１週から修正35週までは凍結融解母乳，修の異常所見は好中球減少（＜1500/μL）６例，CRP 上昇

正35週以降は新鮮母乳もしくは凍結融解母乳を与えた。

（＞1.0 mg/dL）５例，直接ビリルビン高値（＞1.0

輸血は，CMV 抗体陰性の血液製剤のみを使用した。

mg/dL）４例，血小板減少（＜150000/μL）２例，肝酵

その結果，小川らは次の結論を得た。

素上昇（AST＞140 U/L，ALT＞50 U/L）１例であっ１．在胎32週以下で出生し２回の尿 CMV 検査を行った。後天性感染群と感染なし群でオッズ比を検討した

た139例のうち，先天性感染３例（2.2 ％），後天性

ところ，有意差があったのは肺炎（オッズ比14.5；

感染例７例（5.0 ％），感染なし129例（92.8 ％）で95 ％CI，2.62-80.1），好中球数減少（オッズ比8.88；あった。

95 ％CI，1.04-76.0），CRP 上昇（オッズ比19.0；95

２．後天性感染群は感染なし群と比較し，在胎期間が％CI，3.38-107.0）であった。在胎期間を調整因子

有意に短く，凍結融解母乳を与えられた期間が有意とした多変量ロジスティック解析を行ったところ，有に長く，母体年齢が有意に高齢であった。

意差があったのは母体年齢，肺炎，CRP 上昇であっ３．後天性感染群では肺炎を呈したのが5/7例で，た。母体年齢を調整因子とした場合は，有意差があっいずれも気管分泌物のグラム染色で貪食像がなく，たのは肺炎，CRP 上昇であった。

CRP 軽度上昇を認め，ウイルス感染を疑う所見で【結論】在胎32週以下の早産児の後天性 CMV 感染率あった。敗血症様症候群，肺炎，壊死性腸炎，肝腫は5.0 ％であった。リスク因子は在胎期間が短いこと，大を呈した１例は死亡した。

凍結融解母乳の使用期間が長いこと，母体高齢であっ４．後天性感染群は好中球数減少（＜1500/μL）を６た。後天性感染が肺炎，好中球数減少，CRP 上昇の

例，CRP 上昇（＞1.0 mg/dL）を５例，直接ビリル

原因となっている可能性がある。早産児に対する母乳ビン上昇（1.0 mg/dL）を４例で認めた。

の凍結融解による後天性感染予防効果は十分ではな

５．後天性感染群と感染なし群でオッズ比を検討した
ところ， 有意差があったのは肺炎， 好中球減少，かった。
（論文審査の結果の要旨）

CRP 上昇であった。

サイトメガロウイルス（CMV）は先天性感染，後母乳による後天性 CMV 感染が考えられ，凍結融解

天性感染をきたし周産期に問題となるウイルスである。

母乳による感染予防効果は十分ではないと思われた。

後天性 CMV 感染の感染経路としては母乳，輸血関連，

後天性感染例で敗血症様症候群を呈して１名の方が亡

産道感染が挙げられる。輸血関連感染は CMV 抗体陰くなった。Real-time PCR 法を実施していないため，性血液製剤で概ね防ぐことができ，産道感染率は極め

後天性 CMV 感染と，臨床症状や血液検査異常所見のて低いとされ，主な感染経路は母乳と考えられている。

因果関係が定かでないが，後天性感染が肺炎，好中球

経母乳感染予防のため凍結融解母乳の使用が推奨され数減少，CRP 上昇の原因となっている可能性がある。

ているが，その感染予防効果は不十分と言われている。

早産児の後天性感染症の予防策の見直しが必要と考え

後天性 CMV 感染症は，正期産では不顕性感染であるられた。よって，主査，副査は一致して本論文を学位

が，早産児，特に在胎32週以下では敗血症様症候群，

論文として価値のあるものと認めた。

肺炎，壊死性腸炎，肝腫大，肝酵素上昇，血小板減少症，好中球減少症などの症状を呈することがある。在胎32週以下の後天性 CMV 感染の感染率，リスク因子，
感染を疑う臨床像を明らかにするため前向きコホート
No. 5, 2023359

審査学位論文要旨

Clinical and molecular features of 66 patients with musculocontractural Ehlers-Danlos syndrome caused by pathogenic variants in CHST14 (mcEDS-CHST14)（CHST14の病的バリ
アントを原因とする筋拘縮型エーラスダンロス症候群（mcEDS-CHST14）66症例の臨床的および分子学的特徴）
湊

川

真

理

（論文の内容の要旨）

皮下血腫，側弯，便秘，停留精巣，筋緊張低下，運動【背景と目的】筋拘縮型エーラス・ ダンロス症候群

発 達 遅 滞 も 多 く の 症 例 が 共 有 し て い た（＞80 ％ ）。

（ musculocontractural Ehlers-Danlos syndrome ：mcEDS-CHST14の幼少期と成人期の顔貌所見を比較

mcEDS）は，近年原因遺伝子が明らかになった新しい

した受信者動作特性曲線下面積（area under the re­

タイプの EDS である。mcEDS は CHST14（mcEDS-

ceiver operating characteristic curve；AUC）の値はCHST14）もしくは DSE（mcEDS-DSE）の両アレ

0.94であり，幼少期から成人期にかけてその特徴は変ル機能喪失型変異を原因とし，いずれも多発関節拘縮，化することが示唆された。関節脱臼と巨大皮下血腫の皮膚脆弱性，顔貌所見を主な所見とするが，その他の初発年齢の中央値はいずれも６歳で，多くが小児後期合併症は多岐に渡る。mcEDS は新規稀少疾患であり，までに初発を経験していた。全症例中９例は既死例

バリアントの分布や，個々の合併症の頻度を含めた自であり，死亡年齢の中央値は12歳で，死因はいずれも

然歴等，明らかではない。本研究は，国際共同臨床調

本疾患の関連合併症であった。mcEDS-CHST14と査により，mcEDS-CHST14既報告例に新規報告例を

mcEDS-DSE を比較した所，mcEDS-CHST14の症加えた44家系66症例のバリアントおよび臨床所見の詳例の方が関節や皮膚の特徴的所見を高頻度で認めた。

細を体系的に分析し，mcEDS-CHST14のバリアント【考察】mcEDS-CHST14に関する初の国際共同臨床の分布および自然歴を明らかにする。

調査である本研究により，mcEDS-CHST14の詳細な【方法】自験例の遺伝子解析は，末梢血リンパ球から自然歴が明らかになった。胎児期から内転拇指や内反DNA を採取し，CHST14の直接シークエンスもしく足が見られ，ほぼ全例で出生時に多発関節拘縮と筋緊は CHST14を含む結合組織関連疾患のカスタムパネ

張低下を認める。小児期には内反足や側弯の治療を要ルを用いた次世代シークエンスで行った。mcEDS-

し，特に内反足の進行による運動発達遅滞がみられる

CHST14および mcEDS-DSE の臨床情報とバリアンこともある。小児期に共通する重篤な合併症に関節脱ト情報は，以下の３つの方法を組み合わせて収集した。

臼と巨大皮下血腫があり，患者の QOL を著明に低下① 臨床経過に関する質問紙への主治医による回答，させる。この他，小児期に認める重要な合併症に，反② 既報論文，③ 信州大学医学部附属病院のカルテ。

復性尿路感染，膀胱機能障害，難聴，緑内障，網膜剥

mcEDS-CHST14と mcEDS-DSE の合併症を比較す

離，屈折異常，歯列不整，便秘症がある。思春期以降

るめ，Mann-Whitney U を算出した。mcEDS の重篤は，小児期に発症し得る合併症に加え，稀ではあるが，な合併症である巨大皮下血腫と関節脱臼の累積罹患

気胸，大腸憩室，胃潰瘍，心臓弁膜症等，重篤な合併率を算出した。幼少期と思春期以降の顔貌の変化を，症を生じ得る。

Face2Gene（FDNA，USA） の DeepGestalt テクノ

mcEDS は特徴的な骨格所見と顔貌所見から診断可

ロジーを用いたアプリケーションにで検証した。

能な疾患であるが，本研究で示唆されたように幼少期【結果】mcEDS-CHST14の新規18症例を含む，48家から成人期にかけて顔貌の特徴は変化するため，診断系66症例（男女比１：１；０-59歳）を分析した。日に際しその理解は重要である。また，mcEDS-DSE

本人が27家系で最多であった。遺伝型と表現型の明らより mcEDS-CHST14の方が重症度は高いことが示

かな関連は示唆されなかった。顔貌（大泉門開大と閉

唆され，過去の分子生物学的研究からも矛盾ないと考鎖遅延，眼瞼裂斜下，眼間開離），骨格（特徴的な指えられた。本研究対象者44家系中，日本人が27家系との変形， 進行性の足変形，反復性関節脱臼）， 皮膚最多であった。これは日本人が一定頻度で有している（過伸展，細かい手掌線，易出血性），眼の所見（屈折特有のバリアントが関連する創始者効果であると推察

異常）は共通所見として顕著だった（＞90 ％）
。巨大

される。

360

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

本研究により mcEDS-CHST14の詳細な臨床症状

その結果，湊川真理は次の結論を得た。

とバリアントの分布が明らかになった。生涯を通して

１．mcEDS-CHST14の病的バリアントの種類は様々

自然歴に応じた細やかで専門性の高い診療が不可欠でで，ミスセンス変異は sulfotransferase 2ドメインあり，疾患について医療者間で広く共有し，各専門科が連携しながら診療する必要があると考える。
（論文審査の結果の要旨）上に集中していた。
２．遺伝型と表現型の間に明らかな関連は示唆されなかった。

筋拘縮型エーラス・ダンロス症候群（musculocon­

３．顔貌，骨格，皮膚，眼，その他，症例間で共通すtractural Ehlers-Danlos syndrome：mcEDS）は，近る所見を多数認め，各所見の出現頻度が明らかに

年原因遺伝子が判明した新しいタイプの EDS である。

なった。

mcEDS は CHST14（ mcEDS-CHST14 ） も し く はDSE（mcEDS-DSE）の両アレル機能喪失型変異を原４．mcEDS-CHST14の幼少期と成人期の顔貌を比較し，算出した AUC は0.94で差異を認めた。

因とする。多発関節拘縮，皮膚脆弱性，顔貌所見を主５．関節脱臼と巨大皮下血腫の初発年齢の中央値はいな所見とし，その他の合併症は多岐に渡る。mcEDS

ずれも６歳で，多くは小児後期までには初発を経験

は新規稀少疾患であり，バリアントの分布や自然歴はしていた。

明らかではない。本研究では，これらを明らかにするため，48家系66症例の mcEDS-CHST14の遺伝学的所見および臨床所見を体系的に分析した。以下のいず

６．既死例は９例で，死因はいずれも本疾患の合併症に関連していた。
７．mcEDS-CHST14は mcEDS-DSE より重症度がれかの方法で臨床情報とバリアント情報を収集した。

高いことが示唆された。

① 臨床経過に関する質問紙への主治医による回答，

以上より，mcEDS-CHST14の詳細な臨床経過と遺② 既報論文，③ 信州大学医学部附属病院のカルテ。

伝学的事項が明らかになり，生涯を通じて自然歴に応

mcEDS-CHST14と mcEDS-DSE の合併症の頻度をじた細やかで専門性の高い診療の必要性が示唆された。

比較するため所見毎に Mann-Whitney U を算出した。

以上の結果から，主査，副査は一致して本論文を学

mcEDS の重篤な合併症である巨大皮下血腫と関節脱位論文として価値があるものと認めた。

臼それぞれの累積罹患率を算出した。幼少期と思春期以降の mcEDS の顔貌を比較し，受信者動作特性曲線
下面積（area under the receiver operating charac­
teristic curve；AUC）を算出した。

No. 5, 2023361

審査学位論文要旨

The changes in frailty and death within six months of discharge in heart failure patients 80
years and older（80歳以上の心不全患者における退院後６か月以内の虚弱の変化と死亡）
大

塚

り

さ

（論文の内容の要旨）であった。退院６か月後に，14名（14.6 ％）が死亡，【はじめに】高齢心不全患者では，加齢に伴う様々な虚弱度は改善１名（1.1 ％），維持67名（69.8 ％），悪臓器機能の低下によって，ストレス要因への対処能力化12名（12.5 ％）であり，２名（2.1 ％）が追跡不可の低下状態，すなわち虚弱が生じやすい。先行研究でであった。14名の死亡理由は，心不全，老衰，腎不全，

は，心不全で虚弱があると死亡や再入院のリスクが高感染症であり，12名の虚弱度悪化理由は，心不全増悪，まることは分っているが，虚弱度の経過は調べられてがん悪化，てんかん悪化，脳梗塞発症，認知症発症，いない。また，高齢心不全患者の虚弱に関する研究の転倒骨折であった。死亡群には，高 NYHA，心不全

多くは，認知障害や歩行障害の人を除外している。こ

複数回入院，低 hemoglobin，低 albumin，低 Barthelのため，虚弱な高齢心不全患者にどう支援すべきかのindex（BI），低 CFS の人が多く（p＜.01），高 BNP，

エビデンスが少ない。そこで本研究では，高齢心不全

低 e-GFR（p＜.05）の人も多かった。虚弱度悪化群

患者の退院支援のあり方の示唆を得るため，退院６かは，ACE-I/ARB 非処方，糖尿病でない人が多かった

月後の死亡や虚弱度変化と，予後に影響する要因を調（p＜.05）。また，ACE-I/ARB 非処方の人は，入院期べた。

間が長く（p＜.05），BMI と BI が低かった（p＜.01）。

【方法】対象は，単施設の循環器内科の80歳以上の心糖尿病なしの人は，低 BMI であった（p＜.01）。

不全入院患者とし，除外基準は，入院中の死亡や他の【考察】本研究の結果，80歳以上の心不全患者が退院

重篤疾患の発症，同意不可とした。当該施設は，循環６か月後に，14.6 ％が死亡，12.5 ％が虚弱度悪化に

器外科はないが循環器疾患の地域中核病院であった。

至ることが示された。この死亡率を先行研究と比べる

虚弱度は９段階の Clinical Frailty Scale（CFS）で評と，循環器外科のある病院より高値，循環器外科の無価した。CFS は，医療従事者が患者の機能的状態やい病院の中では低値であり，手術適応の低い高齢心不併存症を把握して評定するもので，所要時間が短く，

全入院患者の実態を反映していると思われた。本研究

虚弱の検出感度が良好なので用いた。退院時をベースで示された死亡のリスク要因は，重症心不全，貧血，ラインとし，６か月後の死亡と死亡理由，虚弱度の変

低栄養，高度虚弱，腎機能低下など，先行研究と同様

化（維持・改善・悪化）と悪化の理由を調べた。６かであった。一方で，虚弱度悪化のリスク要因は，不良

月後の CFS は，対面か電話か手紙による聴取で行っアウトカムとして先行研究で調べられている再入院とた。死亡や虚弱度悪化の理由は診療録で確認した。死同様に少数で，ACE-I/ARB 非処方と糖尿病なしで亡や虚弱度悪化のリスク要因の分析では，ベースライあった。ACE-I/ARB は心不全患者への有用性が示さ

ン時の属性を虚弱度維持・改善群のものと比較した。

れた薬剤であり，虚弱の悪化抑制に影響した可能性は

解析は単変量解析，有意水準は p＜.05とした。本研

あるが，本研究の非処方群は入院期間が長く BMI や

究は信州大学医倫理委員会の承認を得て行った。

BI が低く，状態不良による薬剤不耐性の影響も考え【結果】96名を追跡した。平均年齢は89±4.3歳，男性られた。糖尿病は，高齢者では心不全患者の予後不良が52名（54.2 ％），心不全初回入院が47名（49.0 ％）のリスク要因でないとする報告はあるが，従来の研究であった。心不全の原因は弁膜症75名（78.1 ％）やとは違う結果であり，さらなる検討を要する。このよ

高血圧62名（64.6 ％）等で，併存症は心房細動，認うに虚弱度悪化のリスク要因抽出の難しさを踏まえる

知障害，睡眠時無呼吸症候群，糖尿病などであった。

と，高齢心不全患者の虚弱度悪化予防には，本研究で退 院 時 の New York Heart Association 心 機 能 分 類

示された虚弱度悪化理由に対処するとよいと思われた。

（NYHA）は，Ⅱが12名（12.5 ％），Ⅲが75名（78.1

本研究は，小サンプル，虚弱度の変化を２時点で評価，％），Ⅳが９名（9.4 ％）であり，CFS は４（ごく軽度

CFS の再現性が未確認といった限界はあるが，高齢虚弱）～６（中等度虚弱）が76名（79.1 ％），７（重心不全患者の退院支援として，① 心不全や併存症の度虚弱）～８（非常に重度虚弱）が20名（20.9 ％）三次予防と，② 転倒骨折や認知症や脳卒中の一次・

362

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

二次予防が望ましいことを示唆した。②は推奨する論文はあるが未検証であり，今後，検証したいと考えて転倒・骨折があったことが確認された。
以上より本研究では，地域中核病院の実臨床における高齢者心不全の実態と，退院後６か月までの予後がいる。
（論文審査の結果の要旨）示された。死亡および虚弱度悪化の関連因子に関する

大塚りさによる本論文は，80歳以上の心不全入院患

解析は，対象数が少なく単変量の解析に限定された点者を対象とし，退院６か月後までの虚弱度の変化と死に研究の限界が存在したが，死亡と関連した因子は先亡について，それぞれの関連因子を探索的に研究した

行研究と一致していた。虚弱度の悪化は少数であり，論文である。超高齢社会となった我が国において，心退院時と退院６か月後の２時点の評価による解析の限不全パンデミックと呼ばれる心不全患者数の増加は，界や，交絡因子の存在が考察された。これらの限界が高齢者人口の多い地域医療では喫緊の課題となっていあるものの，本研究では，高齢心不全患者の予後改善る。特に入院による虚弱（フレイル）の進行は，介護や虚弱の進行を予防するための方策に示唆を与える結度の上昇のみならず心不全の予後にも関わることが報果が得られた。

告されていることから，地域医療における大きな課題

２．審査結果であり，本研究はその課題解決に示唆を与える成果が審査に先立ち，大塚より本研究の概要について説明

期待された。

があった。高齢心不全患者の退院支援における再発予１．論文の概要

防策の重要性を明らかとし，虚弱度の変化を解析した

本論文は臨床研究論文であり，診療科として循環器点に本研究の独自性があり，死亡と虚弱度の上昇と関内科を有するが循環器外科のない地域中核病院におい連を認めた要因について，解析結果が共有された。研て，心不全のために入院治療を要した80歳以上の高齢

究成果に基づいて，高齢心不全患者の退院支援として，患者を対象として実施された。96名について退院時の心不全や併存症の三次予防と，転倒骨折や認知症の進評価を基準として，６か月後までの死亡と死亡理由，

行および脳卒中の予防が，予後の改善や虚弱の進行予そして虚弱度の変化を９段階の Clinical Frailty Scale

防のために重要であることの説明がなされた。

（CFS）により評価し，退院時と比較した CFS の維持，改善，悪化が調査された。

最終審査では，最初に研究デザインを確認し，研究対象とした虚弱について，定義と評価方法，改善や悪対象者の平均年齢は89±4.6歳，男性が54.2 ％，心不化の判断基準について，質疑応答があった。大塚氏は，全の背景疾患は，弁膜症（78.1 ％），高血圧症（64.6 ％），虚弱を評価する１～９の９段階の CFS について，段

虚血性心疾患（18.8 ％），そして併存疾患は，心房細動

階ごとの評価基準およびフローチャートにより判別さ（72.9 ％），認知症（48.4 ％），睡眠呼吸障害（29.2 ％），れること等を詳しく説明した。近年トピックスとなっ

糖尿病（27.1 ％）などであり，高齢者心不全で知られている心不全と虚弱の関連について，因果関係は明確ている多彩な背景が示された。さらに，高齢者心不全

ではないが，双方に共通する病態として神経内分泌やで頻度の高い，左室駆出率が保たれた心不全（HFpEF）

代謝の異常，炎症等が存在し，患者の予後を規定するを60.4 ％に認めた。退院時の NYHA 心機能分類はⅢとの先行研究があることが紹介された。

（78.1 ％），CFS は４～６（79.1 ％）が主体であった。

続いて虚弱評価における下肢筋力やバランス機能の６か月後までに14名（14.6 ％）に認めた死亡と関評価，通院心臓リハビリテーション（外来心リハ）の連する因子は，重症心不全（NYHA 心機能分類およ

利用状況，虚弱例に認める転倒骨折の原因について質び BNP 値が高い，複数回の心不全入院），ヘモグロ問があった。確かに入院による身体機能の低下が転倒

ビン低値（貧血），アルブミン低値（低栄養），Barthel

骨折等の予後に影響した可能性が存在すると考えられ，index 低値（基本的日常生活動作の制限），推算糸球

実際に研究対象例の多くで下肢筋力やバランス機能の

体濾過率の低値（腎機能障害）などであった。一方，評価が実施されていたことから，今後の研究テーマと12名（12.5 ％）に認めた CFS の上昇（虚弱度悪化）

して提起された。また，外来心リハに関して，実務のと関連する因子は，レニン・アンジオテンシン系阻害

主担当は理学療法士だが，実際の退院支援において，薬を内服していない例，非糖尿病例であり，そして虚セルフマネジメントの工夫などの心不全教育，活動量

弱度悪化の理由となった病態として，心不全の増悪，の指導などに，作業療法士がチームの一員として貢献

がん・てんかんの悪化，脳梗塞および認知症の発症，していることが共有された。

No. 5, 2023363

審査学位論文要旨

また，本研究の対象となった高齢心不全患者の，退院後の死亡および虚弱の進行と関連するその他の因子関して，さらに研究を発展させる必要であることが共有された。

に関して，議論が行われた。死亡と関連する因子に関し以上から，本論文は地域中核病院における高齢者心て，大塚は，メタアナリシスやガイドラインにおいて，不全の実態に基づいて，診療チームによる退院支援や

男性，年齢，左室駆出率が低下した心不全（HFrEF），

予後改善のための新たな視点と示唆を提供するもので血圧，心拍数，心房細動，慢性閉塞性肺疾患（COPD），

あり，博士論文として本研究の内容と成果は高く評価

認知障害などが報告されている事実を説明した。ただされるものである。主査および副査は，本論文が信州し，従来の研究の多くにおいて，本研究が対象とした大学大学院医学系研究科保健学専攻の博士論文にふさ超高齢者や虚弱高齢者が除外されており，超高齢社会

わしいものであると全員一致して判断した。

となった我が国の高齢者心不全の予後に関わる要因に

The effects of visual cues from optical stimulation devices on gait disturbance in patientswith Parkinsonʼs disease（光刺激装置による視覚的キューがパーキンソン病患者の歩行障害に及ぼす影響について）
西

川

良

太

（論文の内容の要旨）

0.001）を増加させた。また，Pref 条件では N-Pref【目的】本研究は，パーキンソン病（PD）患者の歩行条件よりも歩行速度が有意に速くなった（p＝0.043）。

障害に対して，発光時間や患者個人の好みに基づいて【結論】本研究の結果より，ゴーグルタイプのウェア

発光条件を調整できるウェアラブルデバイスを用いたラブルな視覚的手がかり装置の使用により，PD 患者

視覚的手掛かり（visual cue）が，歩行機能に与えるの歩行における一歩一歩の所要時間の短縮と規則性の影響を定量的に検証することを目的とした。

向上が認められるとともに，患者が歩きやすいと感じ【参加者と方法】24名の PD 患者がコントロール条件

る視覚刺激の条件を設定することで，歩行速度が向上

としてゴーグルタイプの視覚的手がかり装置（Optical

する可能性が示唆された。今後は，患者の好みやニー

Gait Analysis System, OGAS）を刺激なしで装着してズに合わせて発光状況をカスタマイズできるウェアラ

約10 ｍを歩行した際の各被験者の歩行周期におけるブルデバイスの開発と製品化により，PD 患者の日常

stride duration を測定した。次に各被験者の歩行周生活における歩行機能の改善に貢献していきたい。

期を元に，その10 ％もしくは50 ％の発光持続時間で（論文審査の結果の要旨）

LED を点滅させるという２つの刺激条件（LR10 ％条

最初に申請者から本研究論文の概要の説明が行われ

件・LR50 ％条件）を設定し，各条件での歩行の運動

た。パーキンソン病患者に対する，発光条件を調整で学的特性（歩行パラメータ）を簡易歩行分析システム

きるゴーグルタイプのウエラブルデバイス（視覚的手（HASOMED 社製，RehaGait） を用いて測定した。

が か り 装 置：Optical Gait Analysis System ， 以 下

２つの刺激条件での歩行後，どちらの刺激条件が歩きOGAS）を開発し，その使用条件が歩行能力に及ぼすやすいかという点について口頭にて質問し，相対的に影響を検討した内容であった。市中病院にて研究協力

歩きやすいと感じた方の条件（Pref 条件），歩きにくを求め，説明を行い同意の得たパーキンソン病患者25いと感じた方の条件（N-Pref 条件），コントロール条

人が対象となった。歩行能力のうち stride duration

件における歩行パラメータの比較を行った。３条件間やその変動係数，ケイデンス，そして歩行速度を指標

における歩行パラメータの比較として，反復測定分散とした。OGAS 使用にあたっては歩行周期の10 ％と分析またはフリードマン検定を行った後に事後検定を50 ％，LED を発光させ左右に点滅を繰り返す条件を行った。有意水準は５％とした。

設定した。次に1）装着なし，2）10 ％点滅，3）50 ％【結果】視覚的手がかりを用いた条件（LR10 ％条件・点滅ごとに主観的歩行評価を行い，歩行環境肯定群とLR50 ％条件）は，コントロール条件と比較して，有意に歩行環境否定群に分けて，測定指標の比較を行った。

stride duration の平均値（p＜0.001）と変動係数（CV）

stride duration とその変動係数では，点滅なし条件（p＝0.002）を減少させ，ケイデンスの平均値（p＜との比較で10 ％点滅条件と50 ％点滅条件が有意に低

364

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨下していた。逆にケイデンスの平均値を増加させた。

された歩行周期に応じた LED 発光機能は世界で初め

歩行環境否定群に比べ，歩行環境肯定群の歩行速度はてのものであり，患者の歩行評価や装着練習によるす増加した。

くみ足現象の改善を図るといった今後の研究課題に有これらの発表内容と原著論文を照らし合わせて質疑用である可能性が示唆された。

が行われた。タイトルにある gait disturbance は論文審査において質疑に対する申請者の応答は真摯に行

中の測定指標に十分反映されていないこと，疾患の重われ，その説明も論理的であり，本研究の中心的役割

症度分類や特に歩行障害の代表であるすくみ足の情報を果たして遂行されたことが伺えた。
以上から，主査，副査は一致して本論文を学位論文が不十分であること，stride duration の低下の考察が不十分であることが指摘された。一方，OGAS で開発として価値があるものと認めた。

Validity of temporo-spatial characteristics of gait as an index for fall risk screening in community-dwelling older people（地域在住高齢者の転倒リスク・スクリーニングの指標としての歩行における時間的・空間的パラメータの妥当性）
馬

場

孝

浩

（論文の内容の要旨）

らなる研究が必要であると報告している。そこで，本【目的】65歳以上の地域在住高齢者が１年間に転倒研究の目的は，転倒経験者と転倒非経験者を含む地域

する割合は約30 ％であり，転倒により骨折を受傷する

在住高齢者の歩行機能を慣性センサーを用いて定量的割合は，６％または13 ％と報告されている。65歳以に測定し，転倒リスク・スクリーニングの指標として上の高齢者を対象として転倒時の状況を調査した研究の歩行における時間的・空間的パラメータの妥当性をでは，転倒前の活動は，立位・歩行が56.5 ％と最も感度，特異度，カットオフ値を分析することにより検多く，転倒の原因としては，バランス / 歩行の問題が証することとした。

61.9 ％を占めていたと報告している。以上の先行研【方法】対象は，介護予防事業に参加している65歳以上

究より，転倒は歩行中に頻繁に発生していることが報の地域在住高齢者50名であり，本研究の内容を説明

告されているため，本研究では地域在住高齢者の歩行し同意を得た。採用基準は，歩行補助具を使用せずに機能に注目することとした。歩行機能を測定する方法

歩行が自立している者とし， 除外基準は， 脳卒中，

としては，パフォーマンスを用いた臨床評価，３次元

パーキンソン病，股関節や膝関節の手術後，リウマチ

動作解析装置，慣性センサー，歩行路に設置する光学の診断を受けた者とした。過去１年間の転倒歴の有無

式センサーを用いた方法などが行われている。一般的は問診にて聴取した。歩行機能は，裸足の状態で簡易に，３次元動作解析装置は高価で測定場所が実験室な

歩行分析システム（キッセイコムテック製，Reha­

どに限られ測定時に複雑な操作が必要となることが挙Gait）を装着し，先行研究を参考にして16 ｍの平地

げられ，歩行路に設置する光学式センサーを用いて測を通常の速度で１分間の休憩をとりながら２回歩行測定する方法は，関節角度を測定することができないと定した。RehaGait は，３軸加速度，ジャイロスコー

いう問題を有している。一方，近年の科学的進歩によ

プ，磁力計を含む７つのセンサーで構成されており，り，慣性センサーは安価で携帯可能であり，生活する足部（外果下），下腿（足関節直上），大腿（膝関節直場面での歩行評価を客観的にできるよう改良されてき上），第４・第５腰椎間にベルトで固定した。センサーている。このような観点から本研究では，地域在住高のキャリブレーションは，安静時立位保持10秒と立位

齢者の歩行機能を分析するために慣性センサーを使用

で足を前に出す動作により実施した。歩行の時間的パすることとした。転倒と歩行の時間的・空間的パラ

ラメータ（ストライド長，速度，ケーデンス）と，空メータに関するシステマティックレビューでは，歩行間的パラメータ（足高，ヒールストライク角度，足関

速度，ストライド長，ステップ長を測定することで転節角度，膝関節角度，股関節角度）は，システム独自

倒者と非転倒者の判別ができる可能性があるが，レのソフトウェアを用いて算出した。統計解析は，転倒ビューした論文は測定方法，対象者選定，転倒の定義無し群と転倒有り群の群間比較として，各データの正が均一ではないという問題点が含まれており，今後さ

規性を Shapiro-Wilk 検定にて解析し，正規性がある

No. 5, 2023365

審査学位論文要旨

場合は対応のないｔ検定，正規性がない場合は Mann-

速度， ケーデンス） と， 空間的パラメータ（足高，Whitney のＵ検定を用いた。なお，性差についてはカイ

ヒールストライク角度，足関節角度，膝関節角度，股２乗検定を用いた。有意水準は５％とした。さらに，群関節角度）が算出された。転倒無し群と転倒有り群の間比較で有意差が認められた歩行の時間的・空間的パ群間比較，群間比較で有意差が認められた歩行の時間

ラメータは，Receiver Operating characteristic curve

的・ 空間的パラメータによる，Receiver Operating（ROC 曲線）を作成しカットオフ値，感度，特異度を決定

characteristic curve（ROC 曲線）を作成しカットオフ

した。

値，感度，特異度を求めた。

【結果】50名（女性43名，男性７名）の地域在住高齢選択基準に該当する50人を解析対象者とした。50名

者が研究に参加した。年齢，性別，身長，体重の違い（女性43名，男性７名）の分析で，歩行速度と左右を群間にて確認したが有意差は認められなかった。歩ヒールストライク角度において有意差が認められた。

行時の時間的空間的パラメータを転倒者と非転倒者で歩行速度は，AUC0.686，カットオフ値0.83 m/s，感比較した結果，歩行速度と左右ヒールストライク角度

度0.85， 特異度0.56， 左ヒールストライク角度は，において有意差が認められた。歩行速度は，AUC0.686，

AUC0.722，カットオフ値15.8度，感度0.79，特異度

カットオフ値0.83 m/s，感度0.85，特異度0.56，左0.63，右ヒールストライク角度は，AUC0.691，カット

ヒールストライク角度は，AUC0.722，カットオフ値15.8

オフ値16.5度，感度0.68，特異度0.69であった。TUG

度，感度0.79，特異度0.63，右ヒールストライク角度と比べると同等とはいえないが，ある程度予測的妥当

は，AUC0.691，カットオフ値16.5度，感度0.68，特異性を検証することができた。
これらの発表内容と原著論文を照らし合わせて質疑

度0.69であった。
【結語】慣性センサーを使用して歩行速度とヒールスが行われた。タイトルにある validity は論文中の測定

トライク角度を測定することは，地域在住高齢者の転から具体的に十分説明されていないこと，分析対象者

倒リスク・スクリーニングとして有効な方法である可の特徴の情報が不十分であること，異なる歩行条件で能性が示唆された。

測定した場合の考察が不十分であること，引用文献が（論文審査の結果の要旨）

やや古いことが指摘された。一方，RehaGait で分析

最初に申請者から本研究論文の概要の説明が行われされたヒールストライク角度が転倒と関連した結果はた。転倒経験者と転倒非経験者を含む地域在住高齢者

新規性があり，高齢者の歩行評価や練習における改善の歩行機能を慣性センサーを用いて定量的に測定し，を図るための注意点として活用できる可能性が示唆さ

転倒リスク・スクリーニングの指標としての歩行におれた。

ける時間的・空間的パラメータの妥当性を感度，特異審査において質疑に対する申請者の応答は真摯に行

度，カットオフ値を分析する内容であった。介護予防

われ，その説明も論理的であり，本研究の中心的役割

教室にて研究協力を求め，参加者100人が対象となっを果たして遂行されたことが伺えた。
以上から，主査，副査は一致して本論文を学位論文た。歩行機能は，裸足の状態で簡易歩行分析システム（キッセイコムテック製，RehaGait）を装着し２回歩として価値があるものと認めた。

行測定した。歩行の時間的パラメータ（ストライド長，Reminiscence Activates the Frontal Lobe and Ameliorates Negative Mood States in Cognitively Intact Older Adults（回想は認知機能が低下していない高齢者の前頭葉を活性化し，ネガティブな気分を改善する）
小

林

千

世

（論文の内容の要旨）る。加齢に伴う認知機能低下予防法には薬物療法や非１．Introduction：老化は身体的・認知的機能の低下

薬物療法がある。非薬物療法である回想法は高齢者のを引き起こし，加齢への適応や高齢者の自立，生活の認知状態を改善する効果が報告されているが，生理学質に影響を与える。高齢化が進む現在，高齢者の身体的メカニズムは検証されていない。本研究では皮質領的・認知的機能低下を予防・改善する支援が重要とな域の Oxy-Hb 濃度や Deoxy-Hb 濃度により脳活動を

366

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

評価可能な非侵襲的光学的手法である近赤外分光法（論文審査の結果の要旨）（NIRS）を用いて健康な高齢者の回想中の前頭葉活動

高齢者の認知機能の低下を予防することは高齢者のを評価するとともに，心拍変動，POMS 得点，主観

健康維持のために重要であるが，その方法の一つに回的健康観を測定し，回想の認知機能への影響とその基想法がある。認知機能に障害のない高齢者に対する回盤となる生理学的な変化を明らかにすることを目的と

想法介入のポジティブな効果が報告されているが，回した。

想法中および回想法後の前頭葉への効果の基盤となる

２．Materials and Methods：研究参加者は平均年齢

生理学的メカニズムは十分に理解されていない。本研

70.1±4.7歳の21名（男性６名，女性15名）。全員右利

究は回想法を施行中の近赤外分光法近赤外線分光法

きで，平均 MMSE 得点は29.2±1.0点である。回想（Near-infrared spectroscopy：NIRS）による，両側は担当者が「子供時代の楽しかったことを思い出し，前頭葉の血流，酸素代謝変化及び心拍変動による自律

その内容を話してください」と促し，子供のころの楽

神経活動の変動，また施行前後での気分と主観的健康

しかった記憶を想起する Recalling と，想起した内容

観の変化を測定し，回想法による影響を検討したものを説明する Storytelling で構成された。回想効果の評である。

価指標として，前頭葉活動は左右前頭葉の Oxy-Hb

実験手続きとして，回想法の手順は事前に対象とな

濃度・Deoxy-Hb 濃度，気分状態は Profile of Moodる参加者の年代を考慮して予備実験をもとに設計されStates（POMS）得点と主観的健康観得点，自律神経

各２分の Baseline 期，Recalling 期，Storytelling 期と活動 R-R 間隔を測定した。R-R 間隔は周波数解析をされた。評価項目として試行中の NIRS の Oxy-Hb，行った。データは Baseline と Recalling または Story­

Deoxy-Hb 濃度，Heart Rate Variability の HF 及び

telling，回想前・後で比較した。

LF/HF，試行前後に，Profile of Mood States（POMS）

３．Results：回想中に右前頭葉の Oxy-Hb 濃度は Base­２短縮版の各因子，主観的健康観が測定された。

line よりも Recalling および Storytelling の方が有意に高く21名のサンプルに対して実験が行われ，平均年齢（p＜0.01），Deoxy-Hb 濃度は Baseline よりも Story­

70.1±4.7歳で全員 Mini Mental State Examination

telling の方が有意に低かった（p＜0.01）。左前頭葉

で認知機能異常がないことが確認された。結果として，の Deoxy-Hb 濃度は Recalling および Storytelling がOxy-Hb は右側頭葉で Baseline＜Recalling，Baseline

Baseline よりも有意に低く（p＜0.001），Oxy-Hb 濃度＜Storytelling であり，Deoxy-Hb は右側頭葉で Base­は Recalling および Storytelling ともに有意な上昇は認

line＞Storytelling，左側頭葉では Baseline＞Recalling，

められなかった。Recalling および Storytelling 中はBaseline＞Storytelling に統計学的に有意な変化を認

左右ともに継続して Oxy-Hb 濃度の平均値が上昇傾めた。また，試行中 Oxy-Hb 平均値は上昇傾向を示

向を示し，Deoxy-Hb 濃度の平均値は低下傾向を示し

し，Deoxy-Hb の平均値は下降傾向を示した。POMSた。気分状態は POMS のネガティブな気分得点が回では anger-hostility，confusion-bewilderment，de­

想後に有意に低く（A-H：p＜0.001，C-B：p＜0.05，

pression-dejection ， tension-anxiety ， total mood

D-D：p＜0.001，T-A：p＜0.001，TMD：p＜0.001），

disturbance で有意に改善を認めた。主観的健康観も

主観的健康観得点は回想後に有意に高くなった（p＜試行後に有意な上昇を認めた。HRV には変化を認め

0.01）。自律神経機能を示す HF/LF/HF に有意な差なかった。

は認められなかった。

この結果から本研究は回想法に基づく介入が前頭葉

４．Discussion：認知機能が低下していない高齢者のを活性化し，認知機能に異常のない高齢者参加者のネ前頭葉は，左右前頭葉の Oxy-Hb 濃度と Deoxy-Hb

ガティブな気分を改善することを明らかにした。これ

濃度の変化から回想中に活性化されること，回想中のらの知見は，臨床実践へのエビデンスを与える新規性

前頭葉の活性化に左右差がないことや，過去の楽しいの高いものであり，高齢者の QOL の向上に寄与する

記憶を想起するだけでなく，想起した内容を言葉にす

可能性のあるものである。

ることが活性化に有効であることが示唆された。また，回想することでネガティブな気分得点の改善や主観的よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

健康観は向上することからネガティブな感情が改善すること考えられた。
No. 5, 2023367

審査学位論文要旨

Relative and absolute reliability of gait variables obtained from gait analysis with trunk acceleration in community-dwelling individuals with chronic stroke : a pilot study（地域在住の慢性期脳卒中患者の体幹加速度を用いた歩行分析から得られる歩行変数の相対・絶対信頼性：予備研究）
藤本

知宏（論文の内容の要旨）価を行った。３軸加速度計から得られた前後，側方，垂直【はじめに】脳卒中のリハビリテーションは主に歩行方向の体幹加速度から normalized Root Mean Squareの評価と治療に焦点が置かれており，歩行分析は患者（ nRMS ），Autocorrelation coefficient に よ る stepの歩行能力を理解するうえで重要となる。近年，体幹regularity と stride regularity，improved harmonic

加速度を計測する３軸加速度計を用いた歩行分析 Ac­

ratio（iHR）を算出した。歩行速度，歩幅は，10 ｍ歩

celeration-based gait analysis（AGA）が行われてい行テストから算出した。統計はＲ（ver4.02）を使用る。AGA により，歩行の安定性や対称性，円滑さのした。各変数の正規性の確認後，検者内信頼性の確変数を表すことができ，慢性期脳卒中患者の転倒リス認に級内相関係数：ICC（1,1），絶対信頼性の確認にクとの関連，立位バランスや ADL 動作との関連が示

Bland-Altman 分析を行い，standard error of meas­

されている。先行研究では AGA の検者内信頼性は高urement，MDC，MDC％を算出した。

いと報告されているが，慢性期脳卒中患者を対象とし【結果】AGA による歩行変数の ICC は，快適歩行速

たものは少なく，minimal detectable change（MDC）

度，最大歩行速度ともに0.70-0.99であった。Bland-を用いた絶対信頼性について検証した研究はない。まAltman 分析からいずれの条件の変数で系統誤差は認

たいずれの先行研究の歩行速度条件は快適歩行速度のめなかった。MDC は，nRMS が0.06-0.25ｇ，step

みであり，最大歩行速度で信頼性を検討していない。

regularity が0.09-0.20，stride regularity が0.09-0.20，

最大歩行速度での歩行評価は運動学，運動力学的に快iHR が7.90-25.20であった。多くの変数で最大歩行速

適歩行速度と異なり，運動障害や転倒恐怖感などの理度の方が快適歩行速度よりも ICC は高く，MDC は小解にもつながる。本研究の目的は，慢性期の脳卒中患さくなった。

者を対象とした AGA による歩行変数の相対信頼性，【考察】本研究は，慢性期の脳卒中患者を対象とし絶対信頼性を快適歩行速度，最大歩行速度から検討す

AGA による歩行変数の相対信頼性，絶対信頼性を快ることである。

適歩行速度と最大歩行速度で検討した。相対信頼性は，【方法】参加者は25名の発症から６か月以上経過し，ICC の結果から慢性期の脳卒中患者を対象とした先行

片側の麻痺である地域在住の慢性期脳卒中患者である研究と同様に一定の信頼性を得た。 絶対信頼性は（年齢74.0±6.6歳；身長161.2±9.4 cm；体重61.1±

AGA による測定に系統誤差はなく，信頼性があると10.7 kg）。参加者の基準は補装具の有無に関わらず介いえる。MDC は健常者よりも大きい結果であり，こ助なしで歩行可能，指示入力可能，歩行に影響を与えれは脳卒中患者が健常者と異なる運動学的，運動力学

るような整形疾患，神経疾患，高次脳機能障害がない，的な歩行パターンや歩行戦略を有していることに起因

バイタルサインが安定しているものとした。歩行評価

すると考える。また，快適歩行速度と比較して最大歩は，１週間空けた２日間実施し，同じ検者が同じ時間

行速度条件では，歩行補助具の使用に関わらず，多くに行った。歩行路は，加減速距離を６ｍ含む16 ｍとの変数で ICC が高く，MDC が小さかった。脳卒中患した。参加者は第３腰椎の高さに３軸加速度計を装着

者が最大歩行速度で歩行することで，歩行パターンやし，歩行時の前後，側方，垂直方向の加速度をサンプ

代償戦略のばらつきを減少させることが報告されておリング周波数100Hz で計測した。事前に練習後，快り，このことは AGA の ICC と MDC に関する我々の適，最大歩行速度の２つの歩行条件を１日に２回ずつ知見を支持する。本研究より慢性期脳梗塞患者におけランダムに実施し，２日間で計８回の歩行評価を行っ

る AGA による歩行変数の相対信頼性と絶対信頼性がた。この際，歩行補助具や装具の使用を許可した。ま確認され，最大歩行速度での測定がより高い信頼性をた参加者の体幹には転倒防止用のベルトを装着して評得ることができると示唆された。本研究で得られた知

368

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

見は，今後より大きなサンプルサイズを用いた研究の歩行速度よりも ICC は高く，MDC は小さくなったと基礎となり得る。

している。

（論文審査の結果の要旨）

これらの結果から，慢性期の脳卒中患者を対象とし本研究は，慢性期の脳卒中片麻痺患者の歩行時の体

た AGA による歩行変数の相対信頼性は，ICC の結果

幹加速度を３軸加速度計を用いて分析（Acceleration-から慢性期の脳卒中患者を対象とした先行研究と同様

based gait analysis（AGA）した際の歩行変数の相対に一定の信頼性を示し，絶対信頼性は AGA による測信頼性，絶対信頼性を快適歩行速度，最大歩行速度か定に系統誤差はなく，信頼性があると述べている。まら検討することを目的とした研究である。内容として，た，MDC は健常者よりも大きい結果であり，これは25名の発症から６か月以上経過し，片側の麻痺である

脳卒中患者が健常者と異なる運動学的，運動力学的な地域在住の慢性期脳卒中患者を対象として，第３腰椎歩行パターンや歩行戦略を有していることに起因するの高さに３軸加速度計を装着し，快適，最大歩行速度と考えられると考察している。さらに，快適歩行速度

における歩行時の前後，側方，垂直方向の加速度をサと比較して最大歩行速度条件では，歩行補助具の使用

ンプリング周波数100Hz で計測し，２つの歩行条件をに関わらず，多くの変数で ICC が高く，MDC が小さ

１日に２回ずつランダムに実施し，２日間で計８回のかったことなどから，脳卒中片麻痺患者が最大歩行速

歩行評価を行った。３軸加速度計から得られた前後，側度で歩行することで，歩行パターンや代償戦略のばら方，垂直方向の体幹加速度から normalized Root Mean

つきを減少させている可能性を推察した。

Square（nRMS），Autocorrelation coefficient によるこれらの研究成果は，従来観察による定性的歩行分

step regularity と stride regularity ， improved

析が中心であった脳卒中片麻痺患者の歩行分析に加え

harmonic ratio（iHR）を算出し，歩行速度，歩幅は，て，客観的で定量的な歩行分析を実施していくことの10 ｍ歩行テストから算出した。その結果，AGA によ重要性を提言する貴重な指針になったものと考えられる歩行変数の ICC は，快適歩行速度，最大歩行速度

る。 審査会では， 主査・ 副査からの質問に対して，

ともに0.70-0.99で，Bland-Altman 分析からいずれ

データや自身の考えを織り交ぜながら適確な回答を述の条件の変数で系統誤差は認めなかったとしている。

べることができた。

MDC は，nRMS が0.06-0.25ｇ，step regularity が0.09-0.20 ，stride regularity が 0.09-0.20 ，iHR が以上より，主査・副査は一致して，本論文を博士の学位論文として価値のあるものであると判断した。

7.90-25.20で，多くの変数で最大歩行速度の方が快適

Immature Platelet Fraction and its Kinetics in Neonates（新生児における未成熟血小板分画とその動態）
小林

純（論文の内容の要旨）

けるデータはほとんどない。本研究では，新生児にお【背景】巨核球から放出された直後の RNA を多く含ける IPF を臨床的に評価するために，出生時におけむ血小板は網血小板（RP）と呼ばれ，骨髄での血小る IPF の基準範囲（RI）を定義し，IPF に影響を与え

板産生能を反映するとされている。RP の測定手技はる要因を評価するとともに出生後の IPF の動態を分煩雑であり，従来は臨床現場での測定はほとんど行わ

析した。

れていなかったが，近年，Sysmex 社の多項目自動血【方法】2018年10月から2020年２月に出生し，長野県

球分析装置 XN アナライザを用いて RP を未成熟血小立こども病院または信州大学医学部附属病院にて IPF

板分画（IPF） として測定する方法が開発された。

を含む血球数算定が実施された新生児を対象に，出生

IPF は血小板減少症の鑑別を始めとした種々の病態の時，生後14日，28日のデータを収集した。IPF を含む評価に用いられている。

血球数算定には XN-1000または XN-9000を使用し，血小板減少症は新生児に一般的に見られる血液異常

核酸染色用色素である oxazine を用いた血小板測定専

である。IPF は末梢血検体で測定でき，血小板造血を用チャネル（PLT-F）において，前方散乱光と側方蛍光

比較的簡便に評価する指標となりうるが，新生児におからなる二次元プロット上で成熟血小板と未成熟血小No. 5, 2023369

審査学位論文要旨

板を区別し，全血小板に対する未成熟血小板の割合をする感受性の上昇などが関係している可能性がある。

IPF％として算出した。IPF 絶対数（A-IPF）は，血小出生後の Hb および RET は PLT，IPF とは異なる変板数（PLT）×IPF％から算出した。

動を示しており，生後１か月程度の新生児では血小板

本研究の対象は様々な臨床的背景を有する新生児例
9

造血と赤血球造血は異なる動態を示すことが示唆されであるため，出生時の PLT が RI 内（150-350×10 /L）

た。新生児期においても免疫関連血小板減少症などのの新生児について，多変量解析にて在胎週数，出生体

病態を反映して IPF％が変動することが確認されたが，重，性別に加え，在胎不当過小児，前期破水，新生児

分娩，臨床的背景，免疫状態などに関する様々な要因

仮死，子宮内感染，染色体異常，呼吸障害，先天性心が新生児の血小板造血と IPF に影響を与えている可疾患の有無が IPF％に影響するかを評価した後，本解能性が示唆された。

析にて抽出された因子を有さない症例から IPF％および本研究で得られた知見から，IPF は新生児の血小板

A-IPF の RI を算出した。さらに，出生後，生後14日，

造血や血小板減少症を評価するための有用なツールと28日の PLT と IPF の変動を解析し，ヘモグロビン濃なりうると考えられる。

度（Hb），網赤血球（RET）の変動と比較した。

（論文審査の結果の要旨）【結果】533人の新生児から得られた合計822の血液サ

巨核球から放出された直後の mRNA を多く含む血

ンプルを分析し，その内訳は出生時が423，生後14日

小板は網血小板（RP）と呼ばれ，骨髄での血小板産が203， 生後28日が196であった。 出生時の PLT は生能を反映する。近年，Sysmex 社の多項目自動血球330例が RI 内であり，46例は RI 未満，47例は RI を分析装置 XN シリーズにて，RP を未成熟血小板分画

超えていた。多変量解析の結果，IPF％に影響を与え（IPF）として測定する方法が開発された。IPF は血る独立した因子として早産，新生児仮死，子宮内感染，小板減少症の鑑別を始めとした種々の病態の評価に用

染色体異常，呼吸障害が抽出された。これらの因子をいられるが，新生児での検討は十分でない。本研究で有さない92例から算出した IPF％，A-IPF の RI はそ

は，新生児の出生時における IPF の基準範囲（RI）

れぞれ1.3～5.7 ％，3.2～14.5×10 /L であった。血を定義し，IPF に影響を与える要因を評価するととも小板減少症のない新生児では，生後14日および28日のに出生後の IPF の動態を分析することで，新生児にPLT は出生時に比べて有意に増加していた。IPF％とおける IPF の臨床的有用性を検討した。

9

A-IPF は生後14日でピークに達し，生後28日では低

本研究では２施設の533人の新生児から出生時，生下したが出生時よりも高値であった。出生時および生後14日，生後28日の合計822のデータを収集した。対後14日，28日の３ポイントのデータが揃っている26例

象は様々な臨床的背景を有する新生児例であるため，の新生児において，個人内でも同様の変動が認められ，

IPF の RI 算出にあたっては，単変量および多変量解

生後14日目には IPF％は出生時の約２倍，A-IPF は

析にて抽出された IPF％に影響を与える因子を有さな

約3.3倍まで増加した。一方，Hb は出生後連続的にい症例を対象とした。IPF％に影響を与える独立した

減少し，RET は生後14日に最低値を示し，その後増因子として，在胎週数37週未満の早産，新生児仮死，加した。出生時の PLT が100×10 /L 未満の血小板減

子宮内感染，染色体異常，呼吸障害が抽出された。こ少症例19例のうち，16例では IPF％が RI を超えておれらの因子を有さず，血小板数が150-350×109/L でり，免疫関連血小板減少症２例では IPF％が18.7 ％，あった新生児92例から算出した IPF％と IPF 実数の26.3 ％と著明に高値であった。

基準範囲はそれぞれ1.3-5.7 ％，3.2-14.5×109/L で【考察】本研究で定義した新生児の RI は，XN アナラ

あった。これは既報の成人の基準範囲と比較して臨床イザを用いた成人の IPF％の RI 上限を5.8 ％，7.3 ％的判断に影響する程の差異はないと考えられた。また，とする報告と比較して臨床的判断に影響を与える程の血小板減少症のない新生児における経時的な変動の解差はなく，出生時の IPF は成人と同等の基準で評価

析では，生後14日および28日の血小板数は出生時に比可能であることが示唆された。ただし，新生児では生べて有意に高値であった。IPF％と IPF 実数は生後14後２週間程度は一過性に増加する変動が認められる点

日でピークに達し，生後28日では低下したが出生時よに注意を要する。このような新生児期における血小板りも高値であり，個人内においても同様の変動を認め

パラメータの変動は， 出生後のトロンボポエチン

た。一方，ヘモグロビン濃度は出生後から生後28日ま（TPO）濃度の増加，巨核球系前駆細胞の TPO に対で継続的に減少し，網赤血球は生後14日に最低値を示

9

370

信州医誌

l. 71

審査学位論文要旨

しており，生後１か月における新生児の血小板造血とにおける IPF の基準範囲を設定し，出生後の動態を

赤血球造血の動態は異なることが示された。様々な背明らかにするとともに，実臨床での利用の可能性を示

景因子を有する血小板減少症例で IPF％は増加したが，した点で今後の研究への発展性も含めて評価できる。

特に免疫関連血小板減少症ではその病態メカニズムを研究は適切に行われており，学位審査においても質疑反映して IPF％は著明に高値であった。

に対し適切に答えていることから，主査，副査は一致

本学位論文では，健常データを得ることが困難な新して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

生児において，統計学的手法を用いて新生児の出生時

Preexisting brain lesions in patients with post stroke pusher behavior and their association
with the recovery period : A one year retrospective cohort study in a rehabilitation setting（脳卒中患者の既往病変が pusher 現象の回復過程に与える影響：回復期リハビリテーション
病棟における１年間の後ろ向きコホート研究）
須

江

慶

太

（論文の内容の要旨）

時 の Stroke Impairment Assessment Set（ SIAS ），【緒言】Pusher 現象（Pusher behavior：PB）は脳卒

ADL 能力として入退院時の Functional Independence

中後に生じる姿勢異常の一つで，あらゆる姿勢で麻痺

Measure（FIM）の情報を収集した。PB の有無と重側に傾斜し，自らの非麻痺側上下肢で床や座面を押し，症度は Scale for Contraversive Pushing（SCP）で評

姿勢を正中位にしようとする他者の修正に対し抵抗す

価され，入院後１週間毎に評価した情報を収集した。

る特徴を持つ。この現象は脳卒中発症後早期に消失しSCP が各下位項目＞０の場合に消失したとして扱い，ていくとされが，右半球損傷では回復遅延することが脳卒中発症から PB の回復に要した期間（日）を算出

報告されている。回復が遅延する場合，日常生活動作した。脳卒中の既往病変ならびに cSVD の有無は医（Activities of daily living：ADL）の回復が不良で入師により電子カルテの既往情報，放射線読影レポート

院期間が延長することが報告されている。そのため損ならび，Magnetic Resonance Imaging で評価した。

傷側以外の回復遅延要因を明らかにすることは，入院各既往病変の有無をもとに，既往病変スコア（０点～期間の設定などリハビリテーションゴールの設定に重５点）を算出した。統計解析は先行研究に基づき，既要となる。脳卒中の既往や，無症候性脳梗塞，大脳白往病変スコアの中央値から，患者を２群（既往病変ス

質病変，脳微小出血そして血管周囲腔拡大といった脳コア＜２群，既往病変スコア≧２群）に分類した。次小血管病（Cerebral small vessel disease：cSVD）のいでデータの正規分布に基づき基本データの群間比較存在は，新規脳卒中発症後の機能予後の不良要因とさを実施した。また両群間の PB の回復を Kaplan-Maierれる。これまで Pusher 現象の回復遅延要因について曲線を描き，Log-rank テストにて群間比較を行った。

検討した報告の多くは初発脳卒中患者を対象にしてお最後に先行研究で PB の遅延要因と報告されている損り，これらの影響について十分に検討されていない。

傷側と既往病変スコアを共変量として，PB から回復

本研究では，過去の脳卒中の既往病変や cSVD の存するまでに要した期間を Cox 比例ハザード比解析で

在が PB の回復期間に影響するか明らかにすることを検討した。統計解析は SPSS ver 25を用い行い，有意目的とした。

水準は５％未満とした。

【方法】研究デザインは後ろ向きコホート研究とし，【結果】期間内に入院した脳卒中患者435名の患者のう

対象は回復期リハビリテーション病棟へ入院した脳卒

ち，21名（4.83 ％）に PB を認めた。データ欠損が中患者のうち，適合基準である1）20歳以上，2）入院あった２名を除いた19名（平均年齢74.4±7.5）を解時に pusher 現象がある，3） 入院前の生活が自立，

析対象とした。脳卒中の既往，無症候性脳梗塞，大脳

4）発症前に精神疾患や認知症がない，5）データ欠損

白質病変，脳微小出血そして血管周囲腔拡大を有するがないもの，とした。基本情報として年齢，性別，損も の の 割 合 は そ れ ぞ れ 21.1 ％ ，47.4 ％ ，47.4 ％ ，

傷側（右 / 左），脳卒中のタイプ（出血性 / 梗塞性）

31.6 ％，0.0 ％であった。既往病変スコアの中央値をの情報を収集した。また身体機能評価として入退院

もとに分類した２群間の基本データに群間差は認めな

No. 5, 2023371

審査学位論文要旨

かった。PB からの回復期間の中央値は既往病変スコく必要がある。
（論文審査の結果の要旨）

ア＜２群で62日，既往病変スコア≧２群で94日であり，
Log-rank テストで既往病変スコア≧２群で回復が有

本研究は，リハビリテーション施設における脳卒中

意に遅延した（P＝0.029）。Cox 比例ハザード解析の後の患者を対象に，既存の脳病変とプッシャー症状か結果では，既往病変スコアはハザード比0.458（P＝らの回復時間の関連性を検討した結果，脳病変が多い

0.036）と有意に PB からの回復期間に影響を与えてい患者ほど回復時間が遅延することを明らかにした内容た。一方で損傷側のハザード比は0.669（P＝0.467）

で，社会的意義が高く，有用な研究と思われる。
審査会では論文の内容に沿って主査，副査よりそれで有意差は認めなかった。
【考察】先行研究では，既往脳卒中病変や cSVD の存

ぞれ質疑が行われた。特に，プッシャー症状を呈した

在は機能予後に影響を与えることが報告されているが，患者数の少なさについては２名の副査から質問があっ本研究ではこれらが PB の回復過程にも影響を及ぼす

たが，所属施設の特色上，急性期病院と異なり有病率ことを初めて明らかにした。脳卒中の重症度に対するが低いことなどが説明された。また，既往病変スコア

保護因子の一つに脳容量が挙げられるが，既往脳卒中が低いグループと高いグループ間で Stroke Impair­が場合は脳容量が低下することも報告されている。そment Assessment Set（ SIAS ） や Functional Inde­のため既往病変が多い PB を有する患者では，保護因

pendence Measure（FIM）に差がなかった結果つい子が乏しい結果，その回復に影響を及ぼす可能性があて，プッシャー症状の残存が影響しているのではないる。また，cSVD を有する地域在住高齢者やラクナ梗

かという指摘が挙がったことについては，スコアが高

塞患者はバランス能力が低いとの報告もなされている。

かった患者群の中に回復が遅延したケースが複数あっ

cSVD など有し，元々バランス能力が低いものが脳卒たことなどが説明された。

中発症後に PB を呈した場合には，残存機能によるバ

このように，特に複数の審査員から同様の質疑がランスの機能の代償が困難となり，PB からの回復があった点や，呈示されたデータからは分かりにくい現遅延する可能性がある。本研究では，PB の回復に脳象があったことは，審査員だけでなく多くの読者が疑損傷側の影響に有意差はなかった。これはサンプルサ

問に持つ点と思われたが，これらを含むすべての質疑

イズの小ささが影響した可能性がある。一方で，先行に対して，学生はデータに沿って明確かつ適切に回答

研究で既往脳卒中患者も含み回復過程の検討を行った

することができた。

研究では，損傷側の影響がないことが報告されている。

さらに，論文自体も結果の解釈を丁寧に考察されてそのため，既往病変を有する患者では，初発脳卒中患

おり，将来性が期待できる内容であることが確認でき者とは PB の回復過程が異なる可能性がある。今後はた。

大規模調査や多施設共同研究により，サンプルサイズを確保した上で既往病変の影響度をさらに検討してい以上より，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Genomic traits associated with virulence and antimicrobial resistance of invasive group B
Streptococcus isolates with reduced penicillin susceptibility from elderly adults（高齢患者由
来侵襲性ペニシリン低感受性Ｂ群レンサ球菌の病原性・薬剤耐性に関わるゲノム特性）
小

出

将

太

（論文の内容の要旨）

ル ー プ が ペ ニ シ リ ン 低 感 受 性 GBS（ GBS with re­【背景】Ｂ群レンサ球菌（group B Streptococcus，GBS）

duced penicillin susceptibility，PRGBS）を初めて報

は新生児侵襲性感染症の主要な原因菌である。また，

告して以降，米国をはじめ諸外国で PRGBS の報告が近年では GBS による高齢者や基礎疾患を有する成人相次いでいる。国内の GBS 臨床分離株におけるペニの侵襲性感染症事例も増加してきている。特に65歳以シリン非感受性の割合は2008年の4.8 ％から2020年の上では原発性血流感染症が優位で高い死亡率をもたら

5.8 ％と増加傾向にある。しかしながら，PRGBS のす。ペニシリン系薬剤が感染症治療及び分娩時予防投

臨床的意義については未だ不明であり，成人侵襲性感与の第一選択薬であるが，2008年に長野らの研究グ染症由来 PRGBS のゲノムレベルでの分子学的特性は

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審査学位論文要旨解明されていないことから，本研究では侵襲性 PRGBS

AlpST-1付着因子遺伝子が Ia-ST1株で確認された。

株の病原性，薬剤耐性に関する特性解析を行った。

PRGBS８株を含む全100株のゲノムの Gubbins 解析【材料と方法】同一医療機関の予後不良事例に由来すで得られた core SNPs 系統樹で，本報の血清型 Ia-

る血清型 Ia で sequence type（ST）1の４株と，他の複ST1及びⅢ-ST1の PRGBS 株は組換え変異率3.97で一数医療機関で収集した血清型Ⅲ-ST1の２株，Ib ST10

つの独立したクレードに属した。この変異率はヒト血及びⅢ-ST464の各１株の血液由来多剤耐性 PRGBS8

液由来株が優位な V-ST1 GBS が形成するクレードの株を対象に全ゲノム解析を実施した。また，NCBI 登

組換え変異率0.11より36倍高値であった。血清型 Ia

録のヒト，動物，魚類などに由来する PRGBS とペニ

やⅢは ST1 GBS 株では非常に稀である。よって，Ia-

シリン感性 GBS を含む92株のゲノム配列を加えた比ST1及びⅢ-ST1の PRGBS 株の遺伝系統は ST1の集

較解析を行った。

団の中から組み換えにより出現してきた可能性が考え【結果と考察】ゲノム配列間の OrthoANI に基づく ANIられる。

値は PRGBS８株で ≥ 98.02 ％，さらに同一医療機関の本研究知見は，侵襲性 PRGBS 株が GBS で報告さ血清型 Ia-ST1の４株の間では99.96-99.98 ％，これられている主要な病原因子遺伝子群を保有し，さらにはと他施設のⅢ-ST1の２株の間では ≥ 98.43 ％であった。

多剤耐性であることから早期診断，早期治療の重要性

PRGBS８株の pan-genome の総遺伝子数は3,531個で，を強調している。

そのうち core-genome 遺伝子数は1,694個であった。

（論文審査の結果の要旨）

Pan-genome のサイズはゲノムの添加に伴い継続的に増Ｂ群レンサ球菌（group B Streptococcus，GBS）は加していき，べき指数（power-law exponent）0.210

新生児侵襲性感染症の主要な原因菌である。また，近をもってオープンパンゲノムの特性を示したことから年では GBS による高齢者や基礎疾患を有する成人の水平伝播による遺伝子獲得事象が高頻度に存在する可

侵襲性感染症事例も増加してきており，特に65歳以上能性が示唆される。アクセサリー遺伝子には株間で多では原発性血流感染症が優位で高い死亡率をもたらす。

様性が認められたが，血清型 Ia-ST1の４株はほとんど

ペニシリン系薬剤が感染症治療及び分娩時予防投与ののアクセサリー遺伝子を共有していた。また，アクセ

第一選択薬であるが，2008年に Nagano らがペニシリ

サリー遺伝子の clusters of orthologous groups（COGs）

ン低感受性 GBS（PRGBS）を初めて報告して以降，分類では COG 機能カテゴリー［L］Replication，

米国をはじめ諸外国で PRGBS の報告が相次いでいる。

recombination，and repair と［K］Transcription に

国内の GBS 臨床分離株におけるペニシリン低感受

属する蛋白が多く分布していたが，これは GBS にお性の割合は2008年の4.8 ％から2020年の5.8 ％と増ける既報の知見と類似していた。

加傾向にある。しかしながら，PRGBS の臨床的意義

PRGBS８株はペニシリン結合蛋白（PBPs）に既報

については未だ不明である。本学位論文はこれまで報のアミノ酸置換を有し，ペニシリンの MIC は0.25-

告のない成人侵襲性感染症由来 PRGBS 株を対象に病1 μg/mL で他系統の薬剤にも耐性を示した。 また，原性，薬剤耐性に関する特性を解明したものである。

１株で PBP2A のヌクレオチド位567への１塩基挿入

PRGBS８株の pan-genome の総遺伝子数は3,531個で，によるフレームシフト変異に起因する未熟終止コドン

うち core-genome 遺伝子数は1,694個であった。Pan-が生じていたが，増殖能に影響はなかった。本研究のgenome のサイズはゲノムの添加に伴い継続的に増加

PRGBS 株は多剤耐性であったが， 薬剤耐性遺伝子

していき，べき指数（power-law exponent）0.210をtet(M)，erm(B)，mef(A)-msr(D) の保有に加え，GBS

もってオープンパンゲノムの特性を示したことから水では極めて稀なアミノグリコシド高度耐性遺伝子

平伝播による遺伝子獲得事象が高頻度に存在する可能aac(6’)-aph(2’’) が１株で確認された。また，キノロ性が示唆される。PRGBS８株はペニシリン結合蛋白

ン耐性の６株ではキノロン耐性決定領域にアミノ酸置（PBPs）に既報のアミノ酸置換を有し，ペニシリン

換を認めた。

の MIC は0.25-1 μg/mL で他系統の薬剤にも耐性を

PRGBS 株は主要な病原遺伝子群（bibA，fbsA/-示した。これらの多剤耐性 PRGBS 株は薬剤耐性遺B/-C，cspA，cfb，hylB，scpB，lmb，and the cyl

伝子 tet(M)，erm(B)，mef(A)-msr(D) の保有に加え，

operon）を保有し，侵襲性 GBS と同等の病原性をGBS では極めて稀なアミノグリコシド高度耐性遺伝子有する可能性が示唆される。さらに ST1に特異的な

aac(6’)-aph(2’’) が１株で確認された。また，キノロン

No. 5, 2023373

審査学位論文要旨

耐性の６株ではキノロン耐性決定領域にアミノ酸置換をた。血清型 Ia やⅢは ST1 GBS 株では非常に稀である。

認めた。さらに主要な病原遺伝子群（bibA，fbsA/-B/-C，

よって，Ia ST1及びⅢ ST1の PRGBS 株の遺伝系統は

cspA，cfb，hylB，scpB，lmb，and the cyl operon）

ST1の集団の中から組み換えにより出現してきたと考を保有し，侵襲性 GBS と同等の病原性を有する可能えられる。以上の研究知見は，侵襲性 PRGBS 株が性が示唆される。ST1に特異的な AlpST-1付着因子

GBS が保有する主要な病原因子遺伝子群を保有し，遺伝子が Ia-ST１株で確認された。PRGBS８株を含

さらには多剤耐性であることから早期診断，早期治療

む全100株の Gubbins 解析による core SNPs 系統樹で，の重要性を強調している。

本報の血清型 IaST1及びⅢ ST1の PRGBS 株は組換え

研究は適正に行われており，学位審査においても質変異率3.97で一つの独立したクレードに属した。この

疑に対し適切に答えていることから，主査，副査は一

変異率はヒト血液由来株が優位な V ST1 GBS が形成

致して本論文を学位論文として価値があるものと認めするクレードの組換え変異率0.11より36倍高値であっ

た。

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