報道発表資料
2022 年 9 ⽉ 20 ⽇
東京慈恵会医科⼤学

肝がん早期診断の新規⾎液バイオマーカーとして⾎清 PKCδ を同定
既存マーカー陰性例でも陽性例があり肝がん早期発⾒や予後向上に期待

東京慈恵会医科⼤学・内科学講座・消化器・肝臓内科の及川恒⼀講師と猿⽥雅之教授の研究グループは、同⽣化学講座の⼭⽥幸司講師と吉⽥清嗣教授および同総合医科学研究センター・基盤研究施設の坪⽥昭⼈教授との共同研究により、肝細胞がん(Hepatocellular carcinoma: HCC) 患者の⾎清中に存在するタンパク質「プロテインキナーゼ C デルタ (PKCδ)」が新規の早期診断バイオマーカーとして有⽤であることを明らかにしました。早期発⾒により肝がんの予後の向上が期待できます。
本成果は、2022 年 8 ⽉ 4 ⽇（⽶国時間）に国際科学誌「Gastro Hep Advances」にオンライン掲載されました。

①ポイント


⾎清 PKCδ の肝細胞がん HCC 診断における新規バイオマーカーとしての有⽤性を確認し、既存マーカーを補完するだけでなく、新規の診断バイオマーカーとして有⽤性が⾼いことがわかりました

⾎清 PKCδの測定により、早期診断が困難であった肝がんの発⾒を早められる可能性が明らかになりました②

研究の背景と概要
肝がんは全世界でがん関連死亡の第 4 位を占め、我が国でも年間約 3 万⼈が死亡し、5
年再発率が 70-80%に達する予後不良のがんであることが知られています。しかしながら早期発⾒されれば根治治療が可能となり予後が期待できることから、肝発がんの早期スクリーニングや術後再発サーベイランスを向上させることは肝がん根治や治療成績向上に⼤きな影響を与えると考えられています。
現在、臨床で主に使⽤される肝がんの腫瘍マーカーである AFP や PIVKA-II (DCP)は、いずれもがんの病期 (ステージ) が進むにつれて上昇するものの早期には陽性になら
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ず、それらの感度は早期診断のためには満⾜のいくレベルではありません。また腫瘍マーカー陰性となる症例が約 20 %も存在します。特に近年増加傾向にある⾮アルコール性脂肪肝炎 (NASH) 肝がんではウイルス性肝がんと⽐べ既存の腫瘍マーカーの陰性率が⾼く、ウイルス性とは異なる肝がんサーベイランス法が確⽴していないことから巨⼤かつ進⾏がんで発⾒されることが少なくないのが現状です。これらの腫瘍マーカー陰性患者では、定期的サーベイランス以外での肝がん精査に必須である画像検査を施⾏する機会が失われ、結果として早期発⾒されず進⾏がんで発⾒される症例が多数存在することが問題となっていました。
本研究グループはこれまでに基礎研究において、細胞内にのみ存在するとされていたPKCδ が、(1) 肝がん細胞で特異的に細胞外分泌され、この機構に autophagy が関与すること (2) IGF-1R や EGFR を介した Erk1/2 や STAT3 等の増殖シグナル活性化により細胞増殖亢進に寄与すること (3) 抗 PKCδ 抗体投与により腫瘍増殖が抑制される
ことを発⾒し、肝がんの発がんや腫瘍形成に関わる重要な分泌タンパク質であることを世界で初めて明らかにしてきました (Cancer Res, 2021 81(2):414-425., Cancer Sci,2022 113(7):2378-2385., PNAS, 2022 119(36):e2202730119)。
そこで、本研究では実臨床での肝がんのなかでも約 90％以上を占める肝細胞がん HCC
診断において新規バイオマーカーとしての⾎清 PKCδ の有⽤性を検証しました。

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研究の成果と意義
健常⼈ 9 例、慢性肝疾患 74 例、治療前 HCC108 例の⾎清 PKCδ をサンドイッチ ELISA
法 (注 1) で測定し、HCC 診断能を解析するとともに既存マーカーである AFP/PIVKAII と⽐較検討しました。
HCC 群の⾎清 PKCδ (中央値、46.9 ng/mL) は健常⼈や慢性肝疾患患者群 (慢性肝炎や肝硬変患者) と⽐較して有意に⾼値でした [健常⼈群 (中央値、27.0 ng/mL, 慢性肝疾患群 (中央値、37.9 ng/mL)、P < 0.001]。⾎清 PKCδ の HCC 診断能 (CLD 群対照)の ROC 解析 (注 2) では cutoff 値 57.7ng/mL、AUC 0.686、感度 38.0%、特異度 97.3%であり、AFP >20 (AUC 0.641、感度 29.6%、特異度 98.6%)、PIVKA-II >40 (AUC 0.716、感度 50.0%、特異度 93.2%)と有意差はなく、HCC 診断能は既存の腫瘍マーカーと同程度であることが判明しました。また PKCδ は AFP/PIVKA-II と相関はなく、AFP(-)
PIVKA-II (-) HCC 群の PKCδ 陽性率は 42.5%であり、既存マーカーとは異なる特性を有すると考えられました。さらに、既存マーカーとの組み合わせにより HCC 診断能2が向上することが⽰されました (図 1)。

図 1 健常⼈、慢性肝疾患患者、肝細胞がん患者における⾎清 PKCδ 値分布 (左)および既存マーカー陰性肝細胞がんにおける PKCδ 陽性率 (右)肝細胞がんでは健常⼈や慢性肝疾患と⽐較して統計学的有意に PKCδ 値である。
既存マーカー陰性肝細胞がんにおける PKCδ 陽性率は 42.5%で、これらの組み合わせにより診断能が⾼くなる。

さらに特筆すべきは、単発かつ最⼤腫瘍径 20mm 以下 HCC 群 (BCLC stage 0; veryearly stage に相当 n = 20)では、PKCδ の陽性率は 45.0%と最も感度が⾼いことです。
⼀⽅で既存マーカーである AFP、PIVKA-II の陽性率はそれぞれ 15%にとどまり、AFPと PIVKA-II を組み合わせて⽤いても PKCδ の診断能を超えることはありませんでした (図 2)。さらに PKCδ は 3 つのマーカーの中で AUC 0.762 と最も⾼値を⽰しました。従って、⾎清 PKCδの測定により、これまで早期診断が困難であった症例に対して肝がん罹患の発⾒を早めることが出来る可能性があると考えます。

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図 2 病期における⾎清 PKCδ および既存マーカーの陽性率
既存マーカーである AFP/PIVKA-II 陽性率は病期が進⾏するにつれて陽性率が上昇するが、PKCδ は各病期である⼀定の陽性率を占め、特に超早期に相当する BCLC ステ
ージ 0 (注 3) での陽性率が既存マーカーと⽐較して⾼い。
⾎清 PKCδ は HCC で特異的に⾼値であることから、既存マーカーを相補的に補完するだけでなく、早期発⾒が困難な AFP/PIVKA-II 陰性 HCC や早期 HCC 患者を特定できる新規診断バイオマーカーとして有⽤性が⾼いことが⽰され、肝がんの予後の向上が期待されます。

今後の展開

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本研究で⾎清 PKCδ 測定に⽤いたサンドイッチ ELISA キットは研究⽤試薬ですが、今後実臨床での測定を実現するため、診断キットの開発を⽬指しています。また、本研
究グループが同定した肝がんの新規早期診断マーカーPKCδ と肝がん患者の臨床的特徴との関連性を解析することにより、⾎清 PKCδ 測定が将来、肝がん抑⽌や予後向上のための早期診断のみならず、予後予測や治療反応性バイオマーカーとなる可能性を多施設共同研究で検証していきます。
論⽂
タイトル
PKCδ Is a Novel Biomarker for Hepatocellular Carcinoma
著者（注；責任者）
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Tsunekazu Oikawa（注）, Kohji Yamada, Akihito Tsubota, Chisato Saeki, Naoko Tago, Chika
Nakagawa, Kaoru Ueda, Hiroshi Kamioka, Tomohiko Taniai, Koichiro Haruki, Masanori
Nakano, Yuichi Torisu, Toru Ikegami, Kiyotsugu Yoshida, and Masayuki Saruta
URL：https://www.ghadvances.org/article/S2772-5723(22)00134-0/fulltext （外部サイトにリンクします）

特記事項

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本研究は⽇本学術振興会 科学研究費補助⾦（JP18K15253、JP18K19484、JP20H03519、
JP20K07621、 JP22K08063）や、国⽴研究開発法⼈⽇本医療研究開発機構（AMED）
⾰新的がん医療実⽤化研究事業「早期肝がんに対する PKCδ を⽤いた新規⾼感度診断法の開発」（研究開発代表者：⼭⽥幸司）、AMED 橋渡し研究戦略的推進プログラム慶應拠点シーズ A「核移⾏タンパク質の細胞外分泌を標的とした新規診断法の開発」（研究開発代表者：⼭⽥幸司）などの⽀援を受けて⾏われたものであり、現在も橋渡し研究
シーズ B として、慶應拠点の⽀援を受けています。

【本研究内容についてのお問い合わせ先】
東京慈恵会医科⼤学
講師

及川恒⼀

内科学講座

消化器・肝臓内科

電話 03-3433-1111（代）

メール oitsune@jikei.ac.jp【報道機関からのお問い合わせ窓⼝】
学校法⼈慈恵⼤学 経営企画部 広報課

電話 03-5400-1280

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メール koho@jikei.ac.jp

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⽤語解説

(注 1) ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) 法
末端に酵素 (アルカリフォスファターゼ、ペルオキシダーゼなど)を結合した抗体を⽤いて抗原抗体反応を⾏い、抗体結合量と酵素反応量との相関を⽤いて酵素反応量を指標として測定する免疫学的測定法の⼀つである。
(注 2) ROC (receiver operating characteristic) 解析
ROC 曲線は、診断法がそのくらい有⽤なのかを解析する統計学的な⽅法。特定の cutoff 値を設定した際の感度・特異度をそれぞれ縦軸・横軸 (1-特異度) にプロットして折れ線で結んだ曲線のこと。曲線下⾯積 (AUC: area under the curve) によって定量化され、鑑別能がたかい診断法であれば AUC の値は 1 に近づく。
(注３) BCLC (Barcelona Clinic Liver Cancer) 病期分類
がんの進⾏の程度は病期 (ステージ) で分類され、病期と肝予備能に応じて治療法が決定される。肝がんの病期分類で国際的に影響⼒の強いバルセロナ臨床肝がん病期分類のステー
ジ 0 は超早期 (very early stage) に相当し、A, B, C と移⾏するに伴い進⾏がんとなる。

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