190510

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大腸菌：遺伝学のツール$#A8=7</:A-)37</:D8714,=*@E

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F+?B5@,9.30@6+"& !$#&('CDE

さまざまな大腸菌株
K-12
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DH5aSJM109ONQ^npfo_kaeRK-12)

B
1942Ph[p`T1, T7Q/0DU

EKFUXJ

ind\pb=lon, ompTZ HLBWQM@cog^.%(PYXWBL21(DE3)ON

*

8:

82* 8:qEPEC, enteropathogenicr8P@-@9,168#ZCGI828:qEIEC, enteroinvasiver8P@<-Q+$ZCGI!3 8:qETEC, enterotoxigenicr8PH-ZCGIA!3Z'&82 ;8:qEHEC, enterohemorrhagicr9,@-@;ZCGH@jn!3'&PTV";!++4qHUSr@7+ZCGIAO157ONA

大腸菌を生育させる
Carbon (C): *.4+6 !3)5!
Nitrogen (N): -50,#!

!

!50%

!14%

Sulfur (S): -50,!

!4%

Phosphorus (P): -50,#!

!4%trace elements (Fe, Cu, Zn, molybdenumcofactor &%$9M9 medium

LB mediumbacto-tryptone
Na2HPO4KH2PO4bacto-yeast extract
M9 salt
NaCl
NaCl
NH4Cl
GlucoseMgSO4(1-25(2/'$"$)CaCl2$789シングルコロニー形成; &); &/527
,+806.4/5279(*06.4/527&'%&-576"+/613*$#)06.4/527%
806.4/527%'

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;:&+9$生育曲線  オートクレーブ

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/$32*

100ºC/4#0<92 :."%,121ºC.-1!
&/+=;"%,.(1(121.7ºC+107.8 kPa: TOMY:

生命科学の基本手法：変異体の取得&$3V b`aJ%1EG>j<AHG=K2@SNPk$3N:US6fZe_X4PAk
6O;Xcg]eY;8
Ze_X4O($hf9f-i!

6fZe_X4OCPk
Ze_X4O.;*5;($O

Ze_X4O)'FS);^[\dgX,/PL?RHI"DOAk<QW =K>?0-PLWM+JI>SOAk+O

Pk+h7iP;TSK.B#JCS 変異体の単離がスタート

細菌べん毛の変異体
$">B*R
6Y[]VHM<U\W]RKFC@C
P96Y[]VH8Q

mutagenesis'(H$!^UVO -,_R8D$R.%?Q

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FliGI/)

screeningP96IHU\W]R&?Q5/)RNCJ:Q
=F:E;Q^ _ characterization
identification
$0FAI$TZX1R
?QLS I)H2?Q0:E;Qmutagenesis UV, mutagen (EMS), transposon
selection (screening)

characterization

cloningsequencing
expression

Na+駆動型べん毛モーター固定子

H+-typeS

Na+-typepomA, pomB  べん毛モーター固定子の変異体とは？
#@& ( BVIO5A32 @UV7 $!A:*0:%/98+) =>?<2.
& ,-1)63:'
- 5;,*0)1)- 5;4*0)9,,1)

VIO5863@3"A

変異体形質の相補$C#)
Y]T]T\VP$2+6;;HB-FOD8L2&?3A/

Y]T]T\VP$NR]U8L( B^ _27-+6;T\VP$2=4KM>6G<;-.L/DT\VP$:CIC2KMA1<;

B-WZSXUBR]U5M;A( N659MEAT\VP$2KM>Y]T]D&8LJ0BALC?D`^"8L-@/0_!

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pomA

pomA

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X

X'N"8LWZSXUN,8ME /

遺伝子ライブラリーの作成
VIO586<F/DFA5KMHLIF9)B46

VIO5<;=%".6(:($/D*Q+'D=0VIO5<F-,.%1E2EKMHLI;?@'DKMHLI;=%

<:(<+?>E6(DVIO5! 7
(EcoRI, HindIII:9P

ligase7KMHLI;


VIO5<  +
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OMGJMN8()P

運動能欠損変異を相補するプラスミドの単離
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X

B<F>
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'"(:&/#.$1G/ HD<@DE;
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pomA

pomA

pomA

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

X

X

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pomA

pomA

pomA

pomA

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X

X

X

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SVOUQI *7HA,?(IC:SVOUQ?KXZYIEHG-クローン化の道筋 DNA4(-)*$1%02+1&5

 VIO5
EMS mutagenesis

Eco RI!
VIO5 
DNA

pSU21."'2(-1pomA  
(VIO586) 3#/%*0,/2(-1VIO586/pYA2032
345

クローニングベクター：pSU21

pSU21にクローン化されたpomA
VIO5-0
DHind III + Eco RI)
VIO586- 0%&:?6=9Hind III : pYA101
Eco RI : pYA201
<8:0 0.(pYA203204B21A6(pomA);>@5B3B7*" /,motB ,&$C
,pYA101* !%)#&DNA,')"Sac I 04B21A6"pomB 0R S OI '
?G?Cu;=g7Xr eh4$h?CuTg7Xrh[EXatYZ¡ log phase (early, mid, late), stationary phase, lagphaseZqNkV
1) JK(7|%2) zJhQ953) ?G?ChM

Dearly log
mid loglate log zpSU21hEco RI}wgUyGVIO5.h,FuEco RId*]c `DNA*3uz{]`XV pSU21izx|B#O(cat)u| ]cXrV0kv
2KDu1)]`yGVIO586g%]` u]`VKDu!:H]`.iUehpYf+dN&^sjpXZ¡

KD[!^rgiUz{}wgVIO586d1)]cXrOhUP6[@mLls` uJK(]UN&^r"I[WrVzx|un<Xd%\s`~{|ub_b-qZXg/G]U[rohuN&^rVAz{}w(MCS)gEco RI}w[Wr>8