信州医誌，64⑹：373〜386，2016

信州大学において審査された医学博士論文要旨
氏
名(所属教室)

学位授与
番
号

授与年月日

博

士

論

文

名

学位審査委員主査

副査

中 澤 英 之 乙第1184号 27. 8.26 Screening Tests Using Serum Tissue Transg- 田 中 榮 司 中 山
淳（内科学⑵）
宮川眞一
lutaminase IgA May Facilitate the Identiﬁcation of Undiagnosed Celiac Disease among
Japanese Population（血清抗組織トランスグ
ルタミナーゼ IgA 抗体をスクリーニング検査に用いた日本におけるセリアック病の潜在患者同定の可能性）張野 乙第1185号 27. 9. 9 Nox4‑generated ROS regulate TGF‑β1‑in- 竹 下 敏 一 菅 野 祐 幸
（免疫・
谷口俊一郎
duced motility of colon cancer cells through微生物学）
the low molecular weight protein tyrosine
phosphatase‑Rho signaling pathway（LMW ‑PTP‑Rho 経 路 を 介 し て，Nox4に 由 来 し た
ROS は TGF‑β1によって誘導される大腸ガン細胞の運動能を促進する）
滝澤佐季子 乙第1186号 27.11.11 A Novel Stepwise Diﬀerentiation of Func- 中 山（組織発生学）tional Pancreatic Exocrine Cells from
Embryonic Stem Cells（胚性幹細胞からの機能的な膵外分泌細胞の新たな段階的分化誘導）

淳 池田宇一駒津光久

半 田 秀 一 乙第1187号 27.12. 9 Target intensity and interval walking train- 加 藤 博 之 本 田 孝 行
（スポーツ
今村
浩
ing in water to enhance physical ﬁtness in
医科学）
middle‑aged and older women :a randomised
controlled study（中高年女性における水中イ
ンターバル速歩トレーニングの体力向上効果とその目標運動強度：無作為化比 試験）
原 田 道 彦 乙第1188号 28. 1.27 Obligate Anaerobic Lactobacillus Casei 谷口俊一郎 伊 藤 研 一（分子腫瘍学）
竹下敏一
KJ686 Selectively Targets Solid Tumors andExhibits an Antitumor Eﬀect（偏性嫌気性菌
Lactobacillus casei KJ686 は固形癌を選択的に標的とし，抗腫瘍効果を発揮する）
鬼頭
恆 乙第1189号 28. 2.23 Comparison of alterations in cerebral hemo- 池 田 修 一 本 郷 一 博（精神医学）
角谷眞澄
globin oxygenation in late life depression and‑
Alzheimerʼs disease as assessed by nearinfrared spectroscopy（近赤外線スペクトロス
コピーを用いた老年期うつ病とアルツハイマー病の大脳皮質ヘモグロビン酸素化状態の変化についての比 検討）山 田 重 徳 乙第1190号 28. 3. 9 Reduced gland mucin‑speciﬁc O‑glycan in 菅 野 祐 幸 佐々木克典（内科学⑵）
森泉哲次
gastric atrophy: A possible risk factor for
diﬀerentiated‑type adenocarcinoma of thestomach（慢性萎縮性胃炎に於ける腺粘液特異的 O‑グリカンの発現減弱：分化型胃癌発生の危険因子）
No. 6, 2016373

審査学位論文要旨

西 村 貴 文 乙第1191号 28. 3. 9 Reduction in peripheral regulatory T cell 小 池 健 一 池 田 修 一（小児医学）
本田孝行
population in childhood ocular type myasthenia gravis（小児眼筋型重症筋無力症における末梢血制御性Ｔ細胞の減少）
原田由紀子 乙第1192号 28. 3.23 PPARα‑dependent cholesterol/testosterone 石 塚（小児医学）
disruption in Leydig cells mediates 2,4‑dichlorophenoxyacetic acid‑induced testicular
toxicity in mice（ライディッヒ細胞におけるPPARα依存的なコレステロール・テストステロンの枯渇が2，4‑ジクロロフェノキシ酢酸暴露によるマウス精巣毒性を引き起こす）修 駒津光久
菅野祐幸

Screening Tests Using Serum Tissue Transglutaminase IgA May Facilitate the Identiﬁcation of
Undiagnosed CeliacDiseaseamong JapanesePopulation（血清抗組織トランスグルタミナーゼ IgA
抗体をスクリーニング検査に用いた日本におけるセリアック病の潜在患者同定の可能性）
中

澤

英

之

（論文の内容の要旨）

製造元の推奨する10.0U/ml をカットオフ値とした。

【背景】セリアック病は遺伝的素因を背景に小麦に含

tTG‑IgA≧10.0U/ml となった陽性患者については，

まれるグルテンの経口摂取を契機に発症する炎症性腸十二指腸粘膜生検を実施した。粘膜生検ができない場疾患である。小腸粘膜病変に伴って生じる慢性の下痢

合は過去の手術検体などを用いて病理学的検討を行っや吸収不良が主な消化管症状であるが，いずれもグルた。粘膜病変の評価は，セリアック病の病理診断基準

テン制限で改善する可逆的変化であることが特徴であである Marsh‑Oberhuber 分類に沿って，上皮内リンる。鉄欠乏性貧血や骨粗鬆症などの消化管外症状も知

パ球浸潤，陰窩過形成，絨毛萎縮の有無を評価し，陽られる。さらに腸症型Ｔ細胞リンパ腫（EATL）合併

性所見が認められた患者をセリアック病の疑いがありのリスクを高め，一旦リンパ腫を発症すると予後を規と判断した。結果はカイ二乗検定と M ann‑Whitney

定する因子となる。グルテン制限でこれらの症状・合U 検定を用いて評価した。

併症の発症リスクを軽減できるとする報告も多く，セ【結果】健常者に tTG‑IgA 陽性者を認めなかった。

リアック病は予防医学の観点からも重要である。近年，患者群710人中20人（2.8％）でtTG‑IgAが陽性となっ血清学的スクリーニング検査を用いた疫学調査が進み，た。20人の基礎疾患の内訳は，悪性リンパ腫（８人），

欧米では罹患率が約１％であることが明らかになった。

胃腸炎（２人），急性白血病（以下１人），多発性骨髄しかし本邦では，セリアック病の遺伝的素因として知腫，肝硬変などだった。tTG‑IgA 陽性20人のうち11られる HLA‑DQ2/DQ8の頻度が低いことから疫学調

人において小腸粘膜の病理検討が可能であり，そのう

査は実施されていない。今回我々は血清学的スクリー

ち７人において Marsh‑Oberhuber type3相当の粘膜ニング法を用いて，本邦におけるセリアック病の疫学病変が認められ，セリアック病が疑われた（0.98％）。

調査を試みた。

診療録を用いてセリアック病関連の症状の有無を確認【対象・方法】対象は1980年から2007年に信州大学病したところ，４人に下痢症状があり，２人はグルテン院血液内科，消化器内科，腎臓内科に受診歴がある患

制限食で下痢の改善を認めていた。鉄欠乏性貧血を１者710人と，新たに募集した健常者239人である。セリ人に認めた。家族歴が疑われる患者も１人存在した。

アック病の血清学的スクリーニングとして，凍結保存

また，７人中５人は悪性リンパ腫患者で，いずれも消血清中の抗組織トランスグルタミナーゼ IgA 抗 体化管にリンパ腫病変を有していた。しかし EATL は（tTG ‑IgA）の 抗 体 価 を 測 定 し た。測 定 に は tTG ‑認めなかった。悪性リンパ腫患者の割合は，tTG‑IgA

IgA ELISA キット（American Product 社）を用い，陽性群と陰性群との間で統計学的有意差を認めなかっ374

信州医誌 Vol. 64

審査学位論文要旨た（p＝0.055）。悪性リンパ腫の５人のうち１人はグ

２．tTG‑IgA 陽性20例のうち８例は基礎疾患に悪性

ルテン制限食を継続して生存，３人は悪性リンパ腫でリンパ腫を有していた。そのうち６例はＢ細胞リン

腫瘍死，１人は anasarca で死亡した。

パ腫，２例はＴ細胞リンパ腫だった。

【考察】本研究は，血清学的スクリーニングでセリアッ

３．tTG‑IgA 陽性20例中11例で小腸粘膜病理の検討

ク病の疫学調査を試みた本邦初の報告で，セリアックが可能であった。そ の う ち ７ 例（患 者 群710例 中病患者が稀ながらも存在する可能性を示した。しかし，0.98％）に絨毛萎縮と粘膜内リンパ球浸潤を認め，本研究にはHLA検索が含まれていない点や，セリアッ

セリアック病の病理診断基準である Marsh‑Ober-

ク病様の粘膜病理をきたす鑑別疾患である悪性リンパhuber grade3相当の所見を認め，セリアック病であ腫が対象患者に多く含まれる点，後ろ向き研究である

る可能性が示唆された。

ためグルテン制限の効果が十分評価できていない点な

４．この７例は年齢中央値54歳（27‑74歳）で，６例

ど，この７例をセリアック病と確定診断するためには，が男性だった。５例が背景疾患として悪性リンパ腫

さらなる検討が必要である。

を有していたが，セリアック病に多いとされる腸症（論文審査の結果の要旨）

型Ｔ細胞リンパ腫（EATL）は含まれなかった。他

セリアック病は遺伝的素因を背景にグルテンの経口摂取を契機に発症する小腸の炎症性疾患で，骨粗鬆症

の２例は Budd‑Chiari 症候群と糖尿病性慢性腎不全の患者だった。

や悪性リンパ腫などを合併することが知られている。

５．７例中２例において，グルテン制限食で改善する

遺伝的背景の違いから国内には患者が存在しないとさ下痢症状を認めていた。明らかな家族歴を有する患

れ，疫学調査も実施されていない。本研究では，血清者は認めなかった。

学的スクリーニング法を用いて本邦におけるセリアッ

今回の研究は，血清学的スクリーニング検査によっク病患者の疫学的検討を試みた。血液疾患や消化器病てセリアック病の疫学調査を試みた本邦で最初の研究で当院受診歴のある患者710例と健常者239例を対象とである。欧米においてセリアック病の診断に用いられ

し，凍結保存血清中の抗組織トランスグルタミナーゼ

る tTG‑IgA が陽性となる患者群が国内にも一定数存

IgA 抗体（tTG‑IgA）を ELISA 法によって測定した。

在することを明らかにし，さらに組織学的にもセリアッ

tTG‑IgA 陽性患者を対象として小腸粘膜の病理学的ク病が疑われる患者群の存在を発見した。今後の本邦検討を行った。血清学的かつ病理学的にセリアック病における潜在的セリアック病患者の診断とその臨床像が疑われた患者は診療録を用いてその臨床像を検討しの解明につながると考えられる。さらに対象患者群710た。

例中0.98％というデータは，セリアック病に関するその結果，中澤英之は以下の結論を得た。

国内の新たなエビデンスになり得る。よって，主査，

１．健常者群239例にはtTG‑IgA陽性者を認めなかった。患者群710例中20例（2.8％）で血清 tTG‑IgA

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

が陽性だった。

Nox4‑generated ROS regulate TGF‑β1‑induced motility of colon cancer cells through the low
molecular weight protein tyrosine phosphatase‑Rho signaling pathway（LMW‑PTP‑Rho 経路を介して，Nox4に由来した ROS は TGF‑β1によって誘導される大腸ガン細胞の運動能を促進する）
張野（論文内容の要旨）

病原菌を殺し，生体防御の役割をもつことが知られて【背景と目的】癌細胞では，活性酸素の産生が高くいる。ところが，1999年以来，その新しいファミリー

発癌の原因になっていると考えられてきたが，その分遺伝子群（Nox1〜５，Duox1，２）が，造血細胞以子機構は十分に理解されていない。一方，NADPH

外の種々の組織で発見され，自然免疫以外の生命現象

oxidaseは，NADPHを基質として，活性酸素（ROS）

における役割が示唆され，それを解明することが重要を産生する膜タンパク質で，貪食細胞に存在して，な問題となってきた。特に，Nox4は H O を産生し，No. 6, 2016375

審査学位論文要旨

細胞の小胞体，ミトコンドリアなどの細胞内器官の膜存した大腸癌細胞の遊走・浸潤能に寄与するという新に局在して，血管新生，糖代謝および発癌などの生理知見が得られた。この結果から，Nox4は大腸癌治療

的・疾患過程における重要な役割を果たすことが明らの新しい分子標的となる可能性が示唆された。

かにされてきた。しかし，大腸癌においては，Nox4（論文審査の結果の要旨）がどのように発現し，発癌過程に関与するのかまだ明

Nox4は正常な大腸組織に発現していないが，大腸らかにされていない。それゆえ，本研究では，大腸癌

癌組織に発現していることから，Nox4は大腸の癌の発癌過程における Nox4によるレドックスシグナル

化の原因の一つと考えることができる。そこで張はの機能的役割を解明しようとした。

Nox4がどのように大腸がん発生に関与するのかまたそ【方法】大腸癌組織切片において Nox1，Nox4およびの調節機構を⑴ 大腸癌組織中の Nox1，Nox4およびTGF‑β1のタンパクの発現を免疫染色にて比検討しTGF‑β1を抗Nox1，Nox4およびTGF‑β1抗体を用いた。さらに，ヒト大腸癌由来細胞株（RKO，HCT ‑て免疫染色による検出と，⑵ 大腸癌由来細胞株HCT‑116）において TGF‑β1に誘導される Nox4の発現と116，RHO において TGF‑β1による誘導される大腸ROS の産生を Western blotting と ROS の定量法等

癌運動への関与を生化学手法（Westenr blotting，

にて解析した。また，cell migration assay法を行っ

RT‑PCR，BIAM ‑labeling，RHO assayなど）を用て TGF‑β1は大腸癌細胞の移動を誘導するか調べた。

いて，両者により検討した。

さらに，大腸癌細胞において，Nox4がTGF‑β1によって誘導される細胞運動を如何に媒介するのか，その調節機構を生化学的手法（Western bolotting，Rho
activityassayおよび BIAM labeling 等）を用いて検討した。

その結果以下の結論を得た。
１．Nox1と異なり，Nox4は正常の大腸には発現していないが，大腸癌組織に発現している。
２．TGF‑β1は大腸癌細胞株における Nox4の転写発
現と ROS の産生を誘導した。

【結果と考査】Nox1と異なり，Nox4は正常の大腸組

３．TGF‑β1は大腸癌細胞株の運動を誘導した。

織には発現しないが，大腸癌組織に特異的に発現する

４．Nox4は，LMW‑PTPを酸化・不活化してRhoGAP‑

ことを見出した。しかも，Nox4の発現パターンは，Rho シグナルを制御した。

大腸癌の浸潤に関与する TGF‑β1の発現パターンと５．Nox4は，LM W ‑PTP‑Rho シグナルを介して，酷似していた。TGF‑β1は大腸癌細胞における Nox4

TGF‑β1によって誘導される大腸癌細胞株の運動をの転写発現を誘導し，細胞内の H O 産生を高めた。

媒介した。

さらに，Nox4に由来する ROS は，プロテインタイ

以 上 よ り，Nox4レ ド ッ ク ス シ グ ナ ル は LMW ‑ロシンフォスファテース（LMW ‑PTP）を酸化・不PTP‑RhoGAP 経路を介して，TGF‑β1に依存した大活化して，細胞運動に関与する RhoGAP‑Rho シグナ

腸癌細胞株の遊走・浸潤能に寄与すると考えられた。

ル経路を制御した。また，Nox4を不活 化 す る と，また，本研究により Nox4は大腸癌治療の新しい分

TGF‑β1による大腸癌細胞運動の誘導が抑制されるこ子標的となる可能性がある。したがって，主査，副査とを見出した。

は一致して本論文を学位論文として価値があるものと【結論】本研究により，Nox4レドックスシグナルは認めた。

LMW ‑PTP‑RhoGAP 経路を介して，TGF‑β1に依A Novel Stepwise Diﬀerentiation Of Functional Pancreatic Exocrine Cells From Embryonic StemCells（胚性幹細胞からの機能的な膵外分泌細胞への新たな段階的分化誘導）
滝

澤

佐季子

（論文の内容の要旨）

内分泌細胞に比べて研究が遅れている。哺乳動物由来【背景と目的】膵外分泌細胞は食物の三大栄養素すべの膵外分泌細胞は，in vitro において機能的に培養でてを消化することができる消化酵素を分泌している。

きる系が確立されておらず，また仮に単離できたとし

しかし，これまで単離して培養するなど in vitro でのても，成熟した外分泌細胞を長期的に培養することは

研究報告は少なく，発生メカニズムの解明についても困難であることから，我々は多分化能を有する多能性376

信州医誌 Vol. 64

審査学位論文要旨

幹細胞に注目した。本研究では，有用な消化酵素の産

CPA，CTRB の発現が上方制御される傾向にあり，生，さらには膵臓疾患研究に役立てる目的で，マウス

ま た amylase陽 性 細 胞 に つ い て も 誘 導 効 率 が 高 い

胚性幹（ES）細胞から膵外分泌細胞への分化誘導を傾向が確認された。一方で，内分泌細胞については，

試みた。

Insulin，Glucagon の遺伝子発現レベルに違いが確認【方法】未分化マウス ES 細胞は0.1％トリプシンをされなかったことから，FGF7は膵外分泌細胞の分化用いて培養ディッシュから剥離した。胚様体（EB）に寄与する可能性が示された。加えて，誘導した細胞を形成するため，マウスES細胞の懸濁液をディッシュの培養上清中においてアミラーゼの活性を検出したこ

蓋に50μL ずつドロップ状に置いた後反転させ，５日とから，アミラーゼ分泌機能を有する外分泌細胞であ間静置浮遊培養を行った。作成した EB は，ゼラチンることが考えられた。

コートディッシュに接着，伸展させ，培地中に誘導因（論文審査の結果の要旨）

子を加えて分化誘導を行った。分化誘導は段階的に行膵外分泌細胞は食物の三大栄養素すべてを消化する

い，形成した EB に対してまず activin A（Stage1），

ことができる消化酵素を分泌している。しかし，哺乳次いで retinoic acid（Stage2）で処理をした。その後，動物由来の膵外分泌細胞は，In vitro において機能的FGF7で３日間処理（Stage3）後，FGF7，GLP‑1，に培養できる系が確立されておらず，また仮に単離でnicotinamide で処理（Stage4）し，膵外分泌細胞へきたとしても，成熟した外分泌細胞を長期的に培養すの分化を促した。分化誘導した細胞は，各ステージにることは困難である。そこで，滝澤は有用な消化酵素

おいて RT‑PCR 法，real‑time PCR 法及び免疫組織の産生を目指し，マウス胚性幹（ES）細胞から膵外化学法などを用いて評価を行った。

分泌細胞への分化誘導を試みた。膵臓は上皮間葉相互【結果と考察】Activin Aによる誘導により有意にFoxa2作用が形態形成を調節している典型的な臓器であり，陽性細胞への誘導効率が高く，Foxa2及び Sox17ダ

そのシグナル伝達の分子として FGF7に着目をした。

ブルポジティブ陽性の細胞を多数確認したことから，

FGF7は，膵臓上皮細胞に発現している FGFR2b に胚体内胚葉へ誘導されていることが示された。次いでのみ結合し，またマウス胎児の膵臓間葉系の細胞で発Stage2では，レチノイン酸による誘導により腸管内生後期に特に高く発現していることが報告されている

胚葉マーカーである Hnf1b，Hlbx9の発現を高率にことから，マウス ES 細胞から膵外分泌細胞への誘導

検出し，さらに膵前駆細胞マーカー Pdx1についても因子として有力な候補分子として用いた。

発現が検出された。Stage3では FGF7で誘導した細その結果，滝澤は以下の成績を得た。

胞において，膵前駆細胞マーカー Pdx1，Nkx6.1，

１．Activin Aとレチノイン酸によって誘導したマウス

Hnf6の発現を高率に検出し，Pdx1陽性細胞を多数確

ES 細胞に対し，FGF7を作用させることで Pdx1

認した。これらの Pdx1陽性細胞は Foxa2陽性細胞の陽性細胞が有意に誘導されることが確認された。

集団の中に共局在しており内胚葉由来の細胞であるこ２．Pdx1陽性細胞は Foxa2陽性細胞と共局在しておとが示唆された。加えてカウント解析の結果から，り，内胚葉由来の膵前駆細胞であることが考えられ

FGF7を添加することにより有意に Pdx1陽性細胞がた。

誘導されることが確認され，FGF7による膵前駆細胞

３．FGF7で誘導した細胞に対し，最終段階としてへの誘導効果が確認された。Stage4では，control に

FGF7及び GLP‑1，Nicotinamide を組み合わせて比べ，誘導因子 FGF7，GLP‑1，nicotinamide を添加作用させることで，消化酵素をコードする遺伝子のした細胞で消化酵素をコードする遺伝子，Amylase

発現が上方制御された。

（AMY ），（ELA），（CPA），
Elastase
Carboxypeptidase A

４．誘導最終段階において，誘導因子の組み合わせで

Chymotrypsinogen（CTRB ）の発現を高率に検出し，は FGF7を作用させることで外分泌マーカーの発現

AMY に関しては長期的に上方制御された。AMYが上方制御され，Amylase 陽性細胞への誘導効率と CPA もしくは Chymotrypsin とのダブル染色の結が向上する傾向が示された。

果，これらのタンパク質は顆粒状に染色され，同じ細５．最終的に誘導された細胞は，免疫組織化学の結果

胞内に共局在していた。また，誘導因子の組み合わせ

Amylase と Carboxypeptidase A などの消化酵素のうち，FGF7の有無による評価を行ったところ，遺を有し，これらの消化酵素は顆粒状に染色された。

伝子レベルでは外分泌細胞マーカー AMY ，ELA，

６．最終的に誘導された細胞は，Amylase の分泌能

No. 6, 2016377

審査学位論文要旨を有していることが確認された。

が可能であることが示唆された。したがって主査，副以上の結果から，FGF7を用いた段階的分化誘導法

査は一致して本論文を学位論文として価値があるもの

により，マウス ES 細胞から膵外分泌細胞が分化誘導と認めた。

され，哺乳動物由来の有用な消化酵素を獲得すること

Target intensity and interval walking training in water to enhance physical ﬁtness in middle‑aged andolder women:a randomised controlled study（中高年女性における水中インターバル速歩トレー
ニングの体力向上効果とその目標運動強度：無作為化比 試験）
半

田

秀

一

（論文の内容の要旨）

ずつ，６セット/日，＞４日/週を目標に，８週間おこ【背景】高強度の運動トレーニングは中高年者の体力なわせた。なお，その際の速歩時の主観的運動強度は低下を予防する。しかし，中高年女性は大腿部の筋力

ボルグ指数で16‑18ポイント，緩歩は10‑12ポイントで低下や膝関節痛などにより，陸上で高強度運動トレー

実施するように指示した。実際の運動強度はそれぞれニングをおこなうことが難しい場合がある。一方，水の環境で校正した三軸の加速度計で測定した。トレー

中歩行時には浮力により体重を減少させてこれらの問

ニング後に前と同様に持久力と筋力測定をおこなった。

題を解決でき，さらに，心臓への静脈還流量が増加し，【結果】トレーニング前，水中において歩行による負一回心拍出量が増加し，好気的運動能が向上する可能荷漸増法で測定した VO GET は，陸上より14％高く，性がある。その結果，水中では陸上に比べて高い運動

一定の運動負荷に対する HR は，陸上より10beats･

強度で歩行でき，一定期間のトレーニング効果が亢進

min‑ 低かった（P＜0.001）。トレーニング日数およびする可能性がある。しかし，それらを検証した研究は

時間は両群間で差はなかったが（P＞0.9），トレーニない。

ング期間中の速歩時の平均運動強度は WG で1.59l･【目的】水中歩行時には，陸上歩行時に比べ，乳酸産

min‑ ，LG で1.40l･min‑ と，WG の 方 が13.6％ 高生の指標であるガス交換閾値（VO GET）が上昇し，かった（P＜0.05）。すなわち，トレーニング開始時

一定の運動強度（VO ）における心拍数（HR）が低には速歩時の運動強度が WG で LG に比べすでに高下するのではないか，さらに，水中では陸上に比べ，く，さらに４週目以降，運動強度が開始時に比べさら同程度の主観的運動強度でインターバル速歩を実施しに上昇した（P＜0.05）。一方，LG では速歩時の運動

た時の運動強度が高く，その結果，一定期間でより高強度はトレーニング期間初期レベルを維持した。そのい持久力と筋力の増強効果が得られるのではないか，

結果，トレーニング後，WGにおいて自転車で求めたという仮説を検証した。

VO【方法】中高年女性31名（年齢：59±５歳，身長：158F±４cm，体重：59±９kg平均値±SD）を水中群（WG）

れらの増加量はLGに比べ高かった（すべて P＜0.05）。

16名，陸上群（LG）15名に無作為に分けた。まず，【結論】中高年女性の水中歩行時には，VO GET の上

WG 16名を対象として，水中（水深110cm，水温31℃，

昇（乳酸産生抑制）と一定の運動強度に対する HR

25m プール）および陸上（15m×15m 体育館）におの低下がおき，陸上より高い運動強度で歩行すること

いて，歩行による三段階負荷漸増法をおこない，そのを可能にした。その結果，水中インターバル速歩は陸間の HR，VO GET，最高酸素摂取量（VO

上と比べて，８週間で，より高い持久力と筋力の増強）を測定した。LG は陸上でのみこれらの測定をおこなった。さらに，両群で陸上において自転車による負荷漸増法で歩行時と同様の測定をおこなった。さらに，別途，等尺性膝伸展（Fが11.5％，

が11.6％有意に増加し（すべて P＜0.001），そ効果を認めた。
（論文審査の結果の要旨）
水中では陸上に比べて高い運動強度で歩行でき，一）筋力を測定定期間のトレーニング効果が亢進する可能性がある。

した。その後，WGはプールで，LGは体育館で，歩行しかし，それらを検証した研究はない。水中歩行時にによる三段階負荷漸増法によって測定した VO GETは，陸上歩行時に比べ，ガス交換閾値（VO GET）

＋35％以上の強度の速歩とそれ以下の緩歩を３分間が上昇し，一定の運動強度（VO ）における心拍数378），屈曲（Fが18.0％，VO GETが14.7％，F

信州医誌 Vol. 64

審査学位論文要旨（HR）が低下するのではないか，さらに，水中ではトレーニング後に前と同様に持久力・筋力をおこなっ

陸上に比べ，インターバル速歩を実施した時の運動強た。

度が高く，その結果，一定期間でより高い持久力と筋力の増強効果が得られるのではないか，という仮説をその結果，半田は次の結果を得た。
１．水中歩行は陸上と比べて，ガス交換閾値が14％検証した。

高く，一定の運動負荷に対する心拍数が10拍低かっ

中高年女性31名を水中群（WG）16名，陸上群（LG）
15名に無作為に分けた。まず，WG 16名を対象とした。
２．トレーニング期間中の速歩時の平均運動強度は，て，水中および陸上において，歩行による三段階負荷漸増法をおこない，その間の HR，VO GET，最高
酸素摂取量（VO

WG の方が13.6％高かった。
３．トレーニング後，WG において自転車で求めた）を測定した。LG は陸上でのVO

みこれらの測定をおこなった。さらに，両群で陸上において自転車による負荷漸増法で歩行時と同様の測定が18.0％，VO GET が14.7％増加した。

さらに，膝伸展筋力が11.5％，膝屈曲筋力が11.6％増加した。

をおこなった。さらに，別途，等尺性膝伸展と屈曲筋

これらの結果より，中高年女性の水中歩行は，陸上力を測定した。その後，WG はプールで，LG は体育

より高い運動強度で歩行でき，水中インターバル速歩

館で，歩行による三段階負荷漸増法によって測定した

トレーニングは陸上と比べて，８週間で，より高い持VO GET＋35％以上の強度の速歩とそれ以下の緩歩

久力と筋力の増強効果があることが示唆された。

を３分間ずつ，６セット/日，＞４日/週を目標に，８

よって，水中インターバル速歩トレーニングは，中週間おこなわせた。なお，その際の速歩時の主観的運

高年女性の運動処方として大きな意義をもつことを示

動強度はボルグ指数で16‑18ポイント，緩歩は10‑12ポ

しており，主査，副査は一致して本論文を学位論文とイントで実施するように指示した。実際の運動強度はして価値があるものと認めた。

それぞれの環境で校正した三軸の加速度計で測定した。

Obligate Anaerobic Lactobacillus Casei KJ686 Selectively Targets Solid Tumors and Exhibits an
Antitumor Eﬀect（偏性嫌気性菌 Lactobacillus casei KJ686 は固形癌を選択的に標的とし，抗腫瘍効果を発揮する）
原

田

道

彦

（論文の内容の要旨）に MRS 液体培地にて培養し，増殖相にあるカゼイ菌【目的】今回，細胞壁の多糖類がビフィズス菌より少KJ686 ５×10 c.f.u/100μl PBS（−）を腫瘍径５mm

ないため，細胞壁が薄く，菌体内で産生されたタンパとなった LLC 担癌マウスに１日１回，２日間尾静注

ク質などがより分泌されやすいと推測されるカゼイ菌した。② カゼイ菌 KJ686 を１×10 c.f.u/ml DMEMに注目した。カゼイ菌はその細胞質分画やタンパク質，に調整した生菌と，それを95℃90分間加熱処理したペプチドグリカンが培養細胞で腫瘍の増殖を抑えると死菌を作成し，１×10 〜１×10 c.f.u/well の濃度での報告がある。しかし生体内では宿主の免疫反応を介

96well plate の培養細胞 LLC １×10 /well に加え24した間接的な抗腫瘍効果は認めるものの，直接的な抗時間培養した。③ カゼイ菌 KJ686 を DMEM 培地で腫瘍特性は指摘されていない。通性嫌気性から偏性嫌24時間嫌気培養した後，培養液上清を分離した。培養

気性へ変異したカゼイ菌が，担癌マウスの腫瘍やその上清は遠心分離フィルターにより100kDa 以上，100‑

培養細胞に対する影響を検討した。

50kDa，50‑10kDa，10kDa 以下の分画に分離した。

【方法】① C57BL/6（生後８週，オス）に Lewis lung

これらを元の培養上清と同じ濃度に希釈したのち6（LLC）１×10 /100μlハンクス細胞浮遊液
carcinoma

well plate の培養細胞 LCC 500/well に加え８日間培を皮下注射し，LLC 担癌マウスを作成した。通性嫌養細胞増殖への影響を調べた。さらに１kDa 以下の気性菌であるカゼイ菌 ATCC393 の変異菌にエリス分画を水層と有機層に分けて同様に培養細胞 LLC に

ロマイシン耐性遺伝子のみを組み込んだ偏性嫌気性菌

加えて８日間培養した。

カゼイ菌 KJ686 がある。これを37℃で嫌気性条件下【結果】① カゼイ菌 KJ686 を尾静注後５日目以降に

No. 6, 2016379

審査学位論文要旨

おいて有意な腫瘍増殖抑制抗効果を認めた。投与17日目においても腫瘍組織にカゼイ菌 KJ686 を認めたが，正常組織には認めなかった。グラム染色にてカゼイ菌

腫瘍増殖抑制抗効果を認めた。
２．投与９日目には腫瘍組織にカゼイ菌 KJ686 を認めたが，正常組織には認めなかった。

KJ686 は腫瘍組織と壊死部との境界に小集塊状に認３．グラム染色にてカゼイ菌 KJ686 を腫瘍の生組織

めたが，この境界部分でのサイトカイン（IL‑2，IL‑と壊死部との境界に小集塊として認めたが，この境4，IL‑12p，IL‑1β，IFN ‑γ）の RNA の発現は認め

界部分でのサイトカイン RNA の発現は認めなかっなかった。また血清中のサイトカインについて投与３た。また腫瘍組織での NK 細胞数の増加といった日目と９日目に評価したところ IL‑1βが投与３日目

宿主免疫反応は認めなかった。

に増加していたのみで，腫瘍組織での NK 細胞数の４．In vitro において生菌では１×10 c.f.u/well 以上増加など宿主免疫反応は認めなかった。② 生菌ではの濃度で LLC 細胞に対する増殖阻害効果を認め

１×10 〜１×10 c.f.u/well の濃度で抗腫瘍効果を認たが，死菌ではその効果は認められなかった。まめたのに対して死菌では１×10 c.f.u/well でも抗腫た乳酸菌培養時の培地 pH 低下を考慮し，乳酸で瘍効果は認めなかった。グラム染色では生菌も死菌もpH4.0とした培地で LCC 細胞を培養したが，細胞同様の染色性を示した。このことはカゼイ菌 KJ686

増殖阻害効果は認めなかった。

の生菌そのものや何らかの産生物が抗腫瘍効果をもた

５．カゼイ菌 KJ686 の培養上清の分画のうち１kDa

らすことを示唆すると思われた。また乳酸菌培養時の以下の分画のみで元の培養上清と同等の LLC 細胞培地の pH は約4.0であるため，乳酸により pH4.0と増殖阻害効果を示した。さらに１kDa 以下の分画した培地で LCC を培養したが，抗腫瘍効果は認めなの有機層では LLC 細胞増殖阻害効果は認めず，水かった。③ 培養上清の各分画のうち10kDa 以下の分層において１kDa 以下の分画と同等の細胞増殖阻

画のみで元の培養上清と同等の抗腫瘍効果を示した。

害効果を認めた。

さらに１kDa 以下の分画の有機層では抗腫瘍効果は認めなかったものの，水層において１kDa 以下の分

６．５．の水層を100℃１分加熱処理した後も同様の細胞増殖阻害効果を認めた。

画と同等の抗腫瘍効果を 認 め た。ま た こ の 分 画 は７．５．の水層を疎水カラムで疎水性により分けると100℃１分加熱処理した後も同様の抗腫瘍効果を認め全ての分画で細胞増殖阻害効果は認めなかった。

た。

以上より，LCC 担癌マウス C57BL/6におけるカゼ【結論】LCC 担癌マウス C57BL/6においてのカゼイ

イ菌 KJ686 の抗腫瘍効果は，宿主免疫反応よりもむ菌 KJ686 の抗腫瘍効果は，宿主免疫を刺激する間接

しろカゼイ菌 KJ686 が産生した１kDa 以下の水溶性的な効果よりもカゼイ菌 KJ686が産生した１kDa 以複合体物質による直接的な癌細胞増殖阻害効果による下の水溶性物質による直接的な効果によるものの寄与と考えられた。また，カゼイ菌 KJ686 に抗腫瘍物質が大きいと考えられた。

遺伝子等を導入することで相加・相乗効果による更な（論文審査の結果の要旨）
今回，原田道彦は細胞壁の多糖類がビフィズス菌より少ないため，細胞壁が薄く，菌体内で産生された物

る抗腫瘍効果を示す可能性を示唆した。したがって主査，副査は一致して学位論文として価値があるものと認めた。

質がより分泌されやすいと推測されるカゼイ菌に注目した。カゼイ菌は抽出された菌体成分が培養細胞で腫瘍の増殖を抑えるとの報告がある。しかし生体内では宿主の免疫反応を介した間接的な抗腫瘍効果は認める
ものの，直接的な抗腫瘍特性は指摘されていない。原
田道彦は通性嫌気性から偏性嫌気性へ変異したカゼイ菌の Lewis 肺癌（LLC）細胞増殖に対する影響を invivo（生体内）及び in vitro（培養レベル）で検討した。
その結果より，以下の結論を得た。
１．カゼイ菌 KJ686 を尾静注後５日目以降で有意な380

信州医誌 Vol. 64

審査学位論文要旨

Comparison of alterations in cerebral hemoglobin oxygenation in late life depression and Alzheimerʼsdisease as assessed by near‑infrared spectroscopy（近赤外線スペクトロスコピーを用いた老年期うつ病とアルツハイマー病の大脳皮質ヘモグロビン酸素化状態の変化についての比 検討）
鬼頭（論文の内容の要旨）

恆
量に有意差が認められた。

【背景】老年期うつ病と，アルツハイマー病の初期像【考察】アルツハイマー病群では，大脳皮質の賦活反は，鑑別が難しく最近のトピックとなっている。こう応が比 的保たれており，うつ病群では賦活反応が低した状況で，近赤外線スペクトロスコピー（Near‑

下している傾向がみられ，頭頂葉の領域で有意な差がInfraRed Spectroscopy：NIRS）を両者の鑑別補助認められた。頭頂葉の上頭頂小葉や楔前部は，視空間目的に利用できないかと考えた。NIRS は，近赤外線イメージ，エピソード記憶の再生，自己処理に関するを用いて，課題施行時の大脳皮質ヘモグロビン濃度変操作の機能があり，この賦活反応の差は，これらの脳化を測定することで，脳賦活状態を簡便にとらえるこ

領域でのアルツハイマー病とうつ病の脳機能の違いをとができる脳機能画像法である。

反映していると考えられた。アルツハイマー病群では【目的】NIRS を用いて，老年期うつ病とアルツハイ

認知機能の低下があり，うつ病群と同じパフォーマン

マー病の大脳皮質賦活反応性に違いがあるか検討する

スを発揮するのに，より大きな脳賦活が必要である可ことが目的である。

能性が推測された。

【方法】60歳以上の右利きの男女で，うつ病30名（平以上の結果から，NIRS が，老年期うつ病とアルツ

均年齢77歳），アルツハイマー病28名（平均年齢71歳），

ハイマー病を鑑別する有用な補助診断法となりうる可健常者33名（平均年齢70歳）を対象に NIRS を実施

能性が示唆された。

した。頭部 M RI を実施して，脳血流に影響を与える（論文審査の結果の要旨）

粗大な脳梗塞，動脈瘤のある症例は除外した。NIRS

老年期うつ病と，初期のアルツハイマー病は，鑑別測定の際の賦活課題は，語流暢課題と視空間認知課題

が難しいのが現状である。うつ病の症状である意欲低（Benton Judgment of Line Orientation）の二つを用下と認知症の症状であるアパシーは，簡単に見極め

いて，前頭葉と頭頂葉の酸素化ヘモグロビン濃度変化られないケースが存在する。老年期うつ病は，うつ病量を調べた。測定はブロックデザイン（レスト区間30による因子と加齢による因子が影響しあい認知機能

秒―タスク区間60秒―レスト区間30秒）で行い，一人障害を伴いやすく，このことも診断を難しくしていの被験者に３回繰り返した結果を加算平均し，レストる。こうした課題をかかえた高齢者の日常臨床においの平均値とタスクの平均値の差を賦活反応量とした。

て，近赤外線スペクトロスコピー（Near‑InfraRed

前頭葉に22個のチャンネル，頭頂葉に22個のチャンネ

Spectroscopy：NIRS）を両者の鑑別補助目的に利用ルができるようにプローブの配置をした。

できないかと考え，NIRS を用いて，老年期うつ病と【解析】44個のチャンネルごとに３群間で賦活反応量

アルツハイマー病の大脳皮質賦活反応性に違いがあるに有意差がみられるか調べた。

か検討を行った。60歳以上の右利きの男女で，DSM ‑【結果】視空間認知課題において，うつ病群とアルツの基準により診断された，うつ病30名，アルツハイ

ハイマー病群の賦活反応量の比 で有意な記録チャンマー病28名，健常者33名を対象に NIRS を実施した。

ネルが認められた。アルツハイマー病群の賦活反応量

NIRS 測定の際の賦活課題は，語流暢課題と視空間認は，うつ病群より大きく，頭頂葉の上頭頂小葉や楔前知課題（Benton Judgment of Line Orientation）の部にあたる５個のチャンネルで有意差が認められた。

二つを用いて，前頭葉と頭頂葉の酸素化ヘモグロビン

有意差が検出されたチャンネルの一つでは，感度71.5

濃度変化量を調べ，比 検討した。前頭葉に22個の記％，特異度70.0％でうつ病とアルツハイマー病の鑑録チャンネル，頭頂葉に22個の記録チャンネルができ別が可能であった。視空間認知課題の成績については，るようにプローブの配置をし，被験者は椅子に座り，両群に有意な差はみられなかった。また，語流暢課題

卓上のパソコン画面を見た状態で NIRS 測定した。

においては，健常群とうつ病群の比 でのみ賦活反応
No. 6, 2016

その結果，鬼頭は以下の成績を得た。
381

審査学位論文要旨

１．アルツハイマー病群では，大脳皮質の賦活反応が比

４．語流暢課題においては，健常群とうつ病群の比的保たれており，うつ病群では賦活反応が低下でのみ賦活反応量に有意差が認められた。

している傾向がみられ，頭頂葉の領域で有意な差が認められた。

以上により，NIRS は，老年期うつ病とアルツハイ
マー病を鑑別するための有用な補助診断法であると考２．頭頂葉で有意差が検出されたチャンネルの一つでえられた。NIRS は fMRI などに比べ，賦活課題をかは，感度71.5％，特異度70.0％でうつ病とアルツ

けやすく，また侵襲性がなく，操作も簡便であるため，ハイマー病の鑑別が可能であった。

ベットサイドでも実施できるメリットがある。今後の３．頭頂葉の上頭頂小葉や楔前部は，視空間イメージ，
エピソード記憶の再生，自己処理に関する操作の機研究の積み重ねにより，NIRS が臨床応用される可能性もあると考えられた。

能があり，この賦活反応の差は，これらの脳領域でのアルツハイマー病とうつ病の脳機能の違いを反映

したがって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

していると考えられた。

Reduced gland mucin‑speciﬁ
c O‑glycan in gastric atrophy: A possible risk factor for
diﬀerentiated‑type adenocarcinoma of the stomach（慢性萎縮性胃炎に於ける腺粘液特異的 O‑グ
リカンの発現減弱：分化型胃癌発生の危険因子）
山田（論文の内容の要旨）

重徳

腺管数を各群間で比した。また，αGlcNAc/MUC6【背景と目的】非還元末端に α1，４結合型 N ‑アセチの比率を算出し，各群間での有意差検討を行った。最ルグルコサミン（αGlcNAc）を有する O ‑グリカン

後に，慢性萎縮性胃炎で αGlcNAc の発現の無い症

は，幽門腺等の胃腺粘液細胞から分泌されるユニーク

例と αGlcNAc が保たれている症例を抽出し Ki‑67

な糖鎖で，α1，4‑N ‑アセチルグルコサミン転移酵素

labeling index を計算，αGlcNAc の発現が保たれて（α4GnT）によって生合成される。我々はこれまでにいる H. pylori 陰正常胃粘膜の Ki‑67 labeling index

αGlcNAc が H. pylori に対して抗菌的に作用すること比 した。統計処理は P ＜0.05を有意とした。

と（Kawakubo et al. Science. 2004；305；1003‑【結果】萎縮性胃炎と分化型胃癌近傍の幽門腺では1006）や，αGlcNAc欠損マウスで分化型胃癌が発生す

M UC6陽性腺管数に比して αGlcNAc 陽性腺管数がることを示し（Karasawa et al.J.Clin.Invest.2012；

有意に減少していた（P ＜0.001）。一方，正常胃粘膜

122；923‑934），αGlcNAc は胃癌抑制因子である可の幽門腺と未分化型胃癌の幽門腺では MUC6陽性腺能性を報告してきた。今回，我々は幽門腺における管数と αGlcNAc 陽性腺管数はほぼ同数であり，両αGlcNAc の発現低下がヒト分化型胃癌発生のリスク

者に有意差を認めなかった。αGlcNAc/MUC6比率因子となり得るか否を検討するため，正常胃幽門腺，の４群間比 では，正常胃粘膜と比 し，萎縮性胃炎

慢性萎縮性胃炎を示した幽門腺，胃癌周囲に見られたと分化型胃癌で有意に低値であった（P ＜0.001）。ま非腫瘍性幽門腺における αGlcNAc の発現パターン

た，Ki‑67陽性率は正常胃粘膜と比を免疫組織学的に比 解析した。

が消失した慢性萎縮性胃炎で有意に高かった（P ＜【方法】2001年１月から2011年12月までの間に，信州

0.05）
。

大学および関連施設にて胃粘膜定点生検を施行した【考察】胃粘膜上皮の萎縮に伴い αGlcNAc の発現がH. pylori 陰性正常胃粘膜67症例，H. pylori 陽性萎縮

減弱し，これに伴い胃粘膜上皮の増殖能が亢進，分化性胃炎70例，胃体下部に発生し内視鏡切除を施行した型腺癌発症のリスクとなっている可能性が示唆された。

粘膜内に限局する分化型胃癌68例および未分化型胃癌

今回の研究の結果は αGlcNAc 欠損マウスが胃粘膜11例を対象とした。αGlcNAc とそのコア蛋白である上皮の過形成を経て，分化型胃癌が発生した過程と合MUC6の検出はそれぞれ HIK1083抗体と CLH5抗体

致 す る。ま た，同 研 究 で は 炎 症 性 ケ モ カ イ ン で あを用い免疫染色を行った。各群の幽門腺で，αGlcNAc

るCCL2や炎症性サイトカインである IL‑1β，肝細胞および MUC6陽性腺管数を計測し，それぞれの発現

増殖因子などの上昇を認めていた。このことから，

382

し，αGlcNAc

信州医誌 Vol. 64

審査学位論文要旨

αGlcNAc の発現減弱を呈した萎縮性幽門腺粘膜では，

αGlcNAc の免疫染色を行い，染色性の違いを検討し発現を誘発する炎症が背景に存在している可能性が考た。さらに慢性萎縮性胃炎で αGlcNAc の発現の無えられた。慢性萎縮性胃炎の患者に対して胃粘膜生検

い症例と αGlcNAc が保たれている症例を抽出し Ki‑

を行い，αGlcNAcと M UC6染色を行うことは，将来

67 labeling index を計算，αGlcNAc の発 現 が 保 た的な発癌のリスクを検討するのに有用であると思われれている H. pylori陰性正常胃粘膜の Ki‑67 labelingた。

index と比 した。
（論文審査の結果の要旨）

その結果，山田は次の結論を得た。

胃癌は慢性萎縮性胃炎を背景に発生することが知１．慢性萎縮性胃炎では正常胃粘膜と比 してMUC6られているが，発癌に至る詳細なメカニズムは不明な点が多い。非還元末端に α1，４結合型 N ‑アセチル

陽性腺管数が減少していた。
２．慢性萎縮性胃炎と分化型胃癌周囲の非腫瘍性幽門グルコサミン（αGlcNAc）を有する O‑グリカンは，腺においては MUC6と比MUC6をコア蛋白とし，胃腺粘液細胞から分泌されるる発現減弱が認められた。

して αGlcNAc の更な糖鎖であり α1，4‑N ‑アセチルグルコサミン転移酵

３．αGlcNAc の消失した慢性萎 縮 性 胃 炎 の Ki‑67

素（α4GnT）により生合成される。我々はこれまでにlabeling indexは正常胃粘膜と比 して有意に高かっ

A4gnt欠損マウスで分化型胃癌が発生することを示した。

（Karasawa et al. J. Clin. Invest. 2012；122；923‑

これらの結果より，αGlcNAc はヒト分化型胃癌発934），αGlcNAc が胃癌抑制因子であることを報告し生に関与している可能性が示唆された。胃粘膜上皮のた。

萎縮に伴い αGlcNAc の発現が減弱し，これに伴い

今回我々はヒト胃粘膜において αGlcNAc の発現

胃粘膜上皮の増殖能が亢進，分化型腺癌発症のリスク低下が分化型胃癌発生のリスク因子となるかを検討しとなっている可能性が示唆された。今回の研究の結果た。

は αGlcNAc 欠損マウスが胃粘膜上皮の過形成を経

胃粘膜定点生検を施行した H. pylori 陰性正常胃粘て，分化型胃癌が発生した過程と合致する。主査，副膜67症例，H. pylori 陽性萎縮性胃炎70例，胃体下部

査は一致して本論文を学位論文として価値があるものに発生し内視鏡切除を施行した粘膜内に限局する分と認めた。

化型胃癌68例及び未分化型胃癌11例に対し MUC6とReduction in peripheral regulatory T cell population in childhood ocular type myasthenia gravis（小児眼筋型重症筋無力症における末梢血制御性Ｔ細胞の減少）
西

村

貴

文

（論文の内容の要旨）

年齢一致対照群として，18例の免疫や炎症が関与して【はじめに】重症筋無力症（M G）は自己免疫疾患のいない発達遅滞やてんかん患者（男児10名，女児８名，１つで，ステロイドやタクロリムス（Tac）等の免疫

平均8.1±5.0歳）を用いた。Treg は，末梢血から単抑制・調整薬による治療が主体となるが，免疫学的

核細胞を分離し，CD4，CD25抗体と反応させた後，病態については未だ不明な点が多い。近年の報告で，細胞固定・細胞膜透過を行い，Foxp3モノクローナル

成人 MG の免疫学的異常として制御性Ｔ細胞（以下蛍光抗体を反応させ，フローサイトメトリーで測定しTreg）の関与が示されている。しかし，小児におけた。Th17は 末 梢 血 単 核 細 胞 を 培 養 液 中 で PM A やる報告はほとんどないため，本研究で末梢血液中のionomycin で４時間刺激し，細胞固定・細胞膜透過

Treg 数と Th17数を測定し，免疫学的特徴を明らか

後に抗 CD4抗体と抗 IL‑17a 抗体と反応させ，フローにすることを目的とした。またこれらが病勢の評価にサイトメトリーで測定した。Treg は単核細胞におけ有用であるかを検証した。

る CD4＋細胞中の CD25＋Foxp3＋分画の比率により，【対象と方法】対象は2009年から2013年までの４年間

Th17については CD4＋細胞中の IL‑17A＋の比率にに当科および協力施設における小児眼筋型 MG 患者より測定した。

13例（男児４名，女児９名，平均年齢8.2±4.7歳）。

【結果】対照群における Treg/CD4（％）（Treg 値）

No. 6, 2016383

審査学位論文要旨の平均は5.0±0.6％で，年齢による差は認められなは未だ不明な点が多い。近年の報告で，成人 MG のかった。患者の病期毎（活動期，寛解期）における免疫学的異常として制御性Ｔ細胞（以下 Treg）の関Treg 値を対照群と比したところ，症状に伴って変与が示されている。しかし，小児における報告はほとん

動 し た。即 ち，活 動 時 Treg 値（3.3±1.3％）は 明

どないため，本研究で末梢血液中の Treg 数と Th17

らかに対照群と比数を測定し，免疫学的特徴を明らかにした。また，こし有意に低値であったが，
（p＝

0.04）
，寛解期は有意に増加した（4.8±1.7％）。寛解期と対照群に差は認められなかった。 症例提示>

れらが病勢の評価に有用であるかを検証した。
その結果，西村らは次の結論を得た。

１例目は眼筋型 M G の13歳男児。初診時の Treg 値

１．対照群における Treg/CD4（％）（Treg 値）の 平

は2.6％と低値であった。症状の改善とともに５％以

均は5.0±0.6％で，年齢による差は認められなかっ上に増加した。１回目の再発時の Treg 値は1.1％，

た。

寛解期には5.3％まで上昇した。２回目の再発時は２．患者の病期毎（活動期，寛解期）における Treg/

2.0％と有意に低値で，タクロリムス併用による症状

CD4（％）値は症状に伴って変動した。即ち，活動改善とともに再び増加した。２例目は２歳７か月発症

時（3.3±1.3％）は明らかに対照群（5.0±0.6％）の眼筋型 MG の女児。Prednisolone（PSL）とウブレと比チドで２年以上の寛解が保たれていた。寛解中は対照期は有意に増加した（4.8±1.7％）。寛解期と対照

群と同等の値で推移していたが，再発時（６歳時）に群に差は認められなかった。

し有意に低値であったが（p＝0.04），寛解

おける Treg 値は1.8％と著しく低値となった。PSL

３．症例提示：１例目は13歳男児で，初診時の Tregの増量と症状改善とともに6.4％に増加した。経時的値は2.6％，症状の改善とともに５％以上に増加しに測定できた６例では，再発時は寛解時に比べ Treg

た。１回目の再発時の Treg 値は1.1％，寛解期に値は著しく低かった（ p＝0.003）。一方，Th17/CD4

は5.3％まで上昇した。２回目の再発時は2.0％と（％）（Th17値）は，活動期，寛解期，対照群との間有意に低値で，タクロリムス併用による症状の改善で有意差を認めなかった。

とともに再び増加した。２例目は２歳７か月の女児【考察】CD4陽性Ｔ細胞から産生されるサイトカイン

で，prednisolone（PSL）とウブレチドで２年以上やケモカインを介してＢ細胞の抗体産生を促すことが，の寛解が保たれ，寛解中は対照群と同等の値で推移

MG の主要な免疫学的病態と考えられている。成人無していたが，再発時（６歳時）における Treg 値は治療 MG 症例では末梢血中の Treg 数が減少し，免1.8％と著しく低値であった。PSL の増量と症状

疫抑制療法で増加するという報告を受け，小児眼筋型改善とともに6.4％に増加した。

MG 症例において Foxp3発現により評価した。その結果，成人と同様の結果が得られ，末梢血中の免疫寛容の低下が示唆された。また，経時的な測定により，

４．経時的に測定できた６例では，再発時は寛解時に比べ Treg 値は著しく低かった（p＝0.003）。
５．今回の検討では，Th17/CD4（％）（Th17値）のTreg 値は症状に伴い変動することが判明した。特に，上昇を認めず本疾患への関与は明らかではなかった。

再発時の Treg 値が有意に低下することが明らかとCD4陽性Ｔ細胞から産生されるサイトカインやケモなったことは，Tregが治療経過における病勢の指標

カインを介してＢ細胞の抗体産生を促すことが，MGとなる可能性を示すものであった。今回の検討ではの主要な免疫学的病態と考えられている。成人無治療

Th17値の上昇を認めず本疾患への関与は明らかではM G 例では末梢血中の Treg 数が減少し，免疫抑制療なかった。小児 M G 患者では，数の異常はないもの

法で増加するという報告を受け，小児眼筋型 MG 症の，Th1/Th2バランスに異常をきたし，自己抗体の例において Foxp3発現により Treg 値を評価した。そ産生に影響を及ぼしていることが示唆されるため，今の結果，成人と同様の結果が得られ，末梢血中の免疫後も他の免疫パラメーターと合わせ，多数例での検討

寛容の低下が示唆された。また，経時的な測定により，が必要と思われる。

Treg 値は症状に伴い変動することが明らかになった（論文審査の結果の要旨）

ことは，小児眼筋型 M G 患者の病態および治療経過重症筋無力症（M G）は自己免疫疾患の１つで，スにおける病勢の指標に繫がる重要な知見と思われ，主テロイドやタクロリムス（Tac）等の免疫抑制・調整

査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があ

薬による治療が主体となるが，免疫学的病態についてるものと認めた。

384

信州医誌 Vol. 64

審査学位論文要旨

PPARα‑dependent cholesterol/testosterone disruption in Leydig cells mediates 2,4‑dichlorophenoxyacetic acid‑induced testicular toxicityin mice（ライディッヒ細胞における PPARα依存的なコレステロール・テストステロンの枯渇が2，4‑ジクロロフェノキシ酢酸暴露によるマウス精巣毒性を引き起こす）原田（論文の内容の要旨）

由紀子
は，2，4‑Ｄを投与した PPARαノックアウトマウス【背景と目的】2，4‑ジクロロフェノキシ酢酸（2，4‑Ｄ）

では観察されなかった。

は水田や芝の除草に広く用いられている除草剤である【結論】PPARαが2，4‑Ｄによる精巣毒性に関与してが，内分泌攪乱物質の可能性が指摘されている。過去

おり，その分子機構としてライディッヒ細胞でのコレの疫学調査では，除草剤散布者に男性不妊や精子異常

ステロール・テストステロン恒常性の破綻が考えられの頻度が高いことが報告されているが，これらの直接た。本研究は，代表的除草剤である2，
4‑Ｄによる精巣

的因果関係と分子機構に言及した研究は皆無である。

毒性や男性不妊の発生機構を解釈する上で，新たな知2，
4‑Ｄは肝細胞においてペルオキシソームを増殖させ見を提示している。

ること，それを主に仲介する α型ペルオキシソーム増（論文審査の結果の要旨）

殖剤活性化受容体（PPARα）が精巣ではライディッ

2，
4‑ジクロロフェノキシ酢酸（2，4‑Ｄ）は水田や芝ヒ細胞に多く発現することから，我々は2，
4‑Ｄによるに広く用いられている除草剤である。2，4‑Ｄ散布者に精巣毒性が PPARαを介して生じるのではないかと

精子異常症の頻度が高いことが報告されているが，この仮説を立てた。本研究は，作業仮説の検証とその分れらの因果関係と分子機構を調べた研究は皆無である。

子機構の解明を目的とした。

2，4‑Ｄは肝細胞においてペルオキシソームを増殖させ【方法】野生型・ PPARαノックアウトマウス（16‑ること，それを仲介する α型ペルオキシソーム増殖剤

20週齢，Sv/129系統）に2，4‑Ｄ（130mg/kg/day）あ活性化受容体（PPARα）が精巣ではライディッヒ細

るいはvehicleを２週間経口投与し（各群８匹），精巣

胞に多く発現することから，原田は2，
4‑Ｄによる精巣の変化を病理組織学的に解析した。また2，
4‑Ｄ投与マ

毒性が PPARαを介して生じるのではないかとの仮ウスからライディッヒ細胞を単離し，コレステロール説を立てた。そこで，野生型・PPARαノックアウトマ

含有量や定量 PCR 法によるコレステロール・テスト

ウス（16‑20週齢，Sv/129系統）に2，
4‑Ｄ（130mg/kg/

ステロン代謝関連遺伝子の発現を計測した。最後にオday）あるいは vehicle を２週間経口投与し（各群８ス野生型・PPARαノックアウトマウスに2，
4‑Ｄを投

匹）
，精巣の変化を解析した。また2，
4‑Ｄ投与マウス

与しつつメス野生型マウスと交配させ，妊娠率や総出からライディッヒ細胞を単離し，コレステロール含量

生児数を調べた。

や定量 PCR 法によるコレステロール・テストステロ【結果】２週間の2，4‑Ｄ投与により，野生型マウスだン代謝関連遺伝子の発現を計測した。最後にオス野生

けに精巣内テストステロンの著明な減少，精子細胞や型・PPARαノックアウトマウスに2，4‑Ｄを投与しつ

セルトリ細胞の変性が見られた。同時にライディッヒ

つメス野生型マウスと交配させ，妊娠率や総出生児数

細胞ではテストステロンの前駆物質であるコレステを調べた。

ロール滴の消失が認められ，これはコレステロール合

その結果，以下の成績を得た。

成酵素である HM G‑CoA synthase 1と HMG‑CoA

１．2，4‑Ｄ投与により，野生型マウスだけに精巣内テreductase の発現低下に起因していた。一方，コレス

ストステロンの著明な減少，精子細胞やセルトリ細テロールからテストステロンに変換する酵素群の発現

胞の変性が見られた。

量には顕著な変化が見られなかったため，ライディッ

２．ライディッヒ細胞ではテストステロンの前駆物質でヒ細胞における PPARα依存的なコレステロール合あるコレステロール滴の消失が認められ，これはコレ

成障害・枯渇がテストステロン減少や精細胞傷害に関ステロール合成酵素である HM G‑CoA synthase 1

連していると考えられた。妊娠率や出生児数は2，
4‑Ｄと HMG‑CoA reductase の発現低下に起因してい投与下の野生型マウスで低下した。上述の一連の変化た。

No. 6, 2016385

審査学位論文要旨

３．一方，コレステロールからテストステロンに変換

しており，その分子機構としてライディッヒ細胞でのする酵素群の発現量には顕著な変化が見られなかっコレステロール・テストステロン恒常性の破綻が考えた。

られた。本研究は，代表的除草剤である2，
4‑Ｄによる４．妊娠率や出生児数は2，4‑Ｄ投与下の野生型マウスで低下した。
５．上述の変化は，2，
4‑Ｄを投与した PPARαノッ
クアウトマウスでは観察されなかった。

精巣毒性や男性不妊の発生機構を解釈する上で，新たな知見を提示していると考えられた。したがって主査，
副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

以上より，PPARαが2，4‑Ｄによる精巣毒性に関与

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信州医誌 Vol. 64