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Q1

Ethachinmateとは何ですか。

Q13

T4 DNA Ligaseの反応に対する影響はありますか。

A1

核酸（DNA及びRNA）をエタノール沈殿またはイソプロパノール沈殿させる際に使用するアクリルアミド系の高分子キャリアー溶液です。

A13ありません。

Q14

AMV Reverse TranscriptaseのcDNA合成反応に対する影響はありますか。

A14ありません。ただし、Ethachinmateはアクリルアミド系のポリマー溶液で、アミノ基が含まれております。後の実験にアミノ基を利用した反応を行う場合には、Ethachinmateが影響することがありますのでご注意ください。

Q2

RNAの回収に使用できますか。

A2

本品はDNase, RNase freeであることを確認していますので、RNAの回収に問題なく使用できます。
【実験例１参照】

Q3

定量的に回収できるDNAまたはRNAの濃度及び長さはどのくらいですか。

Q15

Taq DNA PolymeraseによるPCRに対する影響はありますか。

A15ありません。
【実験例２参照】

A3

20 ng/ml以上のDNA(100 bp以上)およびRNA(120 base以上)が定量的に回収できます。

Q4

260 nmの吸光度測定による定量に影響はありますか。

Q16

Klenow Fragmentの反応に対する影響はありますか。

A4ありません。
【実験例３参照】

A16ありません。

Q5

プロトコールでは、DNA溶液100 μlに対してEthachinmateを1 μl加えることになっていますが、DNA溶液が100 μlより少ない場合はどうすれば良いですか。

Q17

大腸菌の形質転換に対する影響はありますか。

A17ありません。エレクトロポレーションにおいても影響しません。
【実験例４参照】

A5

Ethachinmateは1 μl加えて下さい。DNA沈殿を可視化するためには1 μl以上のEthachinmateが必要です。なお、添付の3 M
Sodium Acetateは比例換算して適量を加えて下さい。

（例 : DNA溶液50 μlの場合、3 M Sodium Acetate 1.7 μl, Ethachinmate 1 μl）

Q6DNA溶液が300 μl以上の場合、Ethachinmateはどのくらいの量を添加すれば良いですか。

A6DNA溶液が300 μl以上の場合、Ethachinmateは溶液の量に関係なく3 μl加えて下さい。Ethachinmateを過剰に加える必要はありません。なお、添付の3 M Sodium Acetateは比例換算して適量を加えて下さい。

Q18

in vitro パッケージングに対する影響はありますか。

A18

λファージのin vitro パッケージング効率は若干低下します。

Q19

Ethachinmateを加えてエタノール沈殿するとモノヌクレオチドは沈殿しますか。

A19

8 merおよび17 merのオリゴヌクレオチドを用いた実験では、Ethachinmate添加の有無に関わらず、回収率に変化はありません。

Q20

ホルムアミドを含むハイブリダイゼーション溶液中で変性しますか。

A20

変性しません。

Q21

ブロッティングに影響はありますか。

A21ありません。

Q22

シークエンス反応に影響はありますか。

A22

サイクルシークエンス法、ダイデオキシ法（サンガー法）においては影響がないことを確認しております。

Code No.

318-01793
312-01791

製品名Ethachinmate

包装単位

希望納入価格（税別）

0.2 ml

16,000円

0.02 ml

3,200円※ 本製品には３M Sodium Acetate が添付されています

DNARNA

核酸 (DNA 及び RNA) をエタノールまたはイソプロパノール沈殿させる際に共沈剤として使用するアクリルアミド系の高分子キャリアー溶液です。塩の存在下 (例えば >0.1 mol/l Sodium Acetate) で本品を加えてアルコール沈殿を行うだけで、高効率な核酸回収ができます。
また、グリコーゲンなどの生体由来物質ではないため、生体由来の微量核酸混入の心配がありません。

（例 : DNA溶液600 μlの場合、3 M Sodium Acetate 19.8 μl, Ethachinmate 3 μl）

Q7DNA溶液を2回以上エタノール沈澱したいのですが、2回目以降にもEthachinmateを加えた方が良いですか。

A7

Ethachinmateは一度添加したらその後追加する必要はありません。Ethachinmateを繰り返し加えるとDNA溶液が粘稠になり、以後の操作に支障をきたす場合もあります。

Q8

凍結させた場合、Ethachinmateの効果に影響はありますか。

A8ありません。

Q9

オートクレーブ処理した場合、Ethachinmateの効果に影響はありますか。

A9ありません。

Q10

Ethachinmateを含むDNA溶液をフェノール、クロロホルム処理した場合、Ethachinmateの効果に影響はありますか。

A10ありません。

Q11

電気泳動パターンに対する影響はありますか。

A11ありません。ただし、電気泳動条件によっては、数十kbp以上のDNAのバンドがブロードになることがあります。

Q12

制限酵素反応に対する影響はありますか。

A12ありません。

Q23

リアルタイムPCRに対する影響はありますか。

A23ありません。

Q24

Ethachinmateを添加すると沈殿がチューブからはがれやすくなってしまうことはありますか。

A24

はがれやすい傾向があります。
したがって、遠心後（12,000×g,5分間）のエタノールの除去は、デカンテーションを行わずにピペットで吸い取るようにして下さい。

エタ沈メイトのその他のQ&Aや実験例はニッポンジーンのホームページをご覧ください。
https://www.nippongene.com/siyaku/

3.3μl 3 M Sodium Acetate ＊1
1μl Ethachinmate＊2

DNA or RNA溶液（100μl）

ボルテックス

2〜2.5倍量
エタノール社 〒540-8605 大 阪 市 中 央 区 道 修 町 三 丁 目 1 番 2 号 TEL ：06-6203-3741 (代表)東京本店 〒103-0023 東京都中央区日本橋本町二丁目4番1号 TEL ：03-3270-8571 (代表)
フリーダイヤル

0120-052-099

遠心（≧12,000×g, 5分間）

沈殿

＊１：塩濃度は終濃度0.1 M以上とする。 ＊２：Ethachinmateは通常核酸溶液100 µl当たり1 µl加える。溶液量が100 µl以下の場合でも1 µl加える。ただし、溶液量が300 µl以上の場合は3 µlあれば十分である。Ethachinmateは、一度添加したらその後追加する必要はない。

〒930‐0834 富山市問屋町二丁目7番18号
TEL： 076‐451‐6548 FAX： 076‐451‐6547
URL： https://www.nippongene.com

本

ボルテックスフリーファックス

0120-052-806

１）ISOGEN を用いた微量サンプルからのTotal RNA 抽出

実験例１：低分子RNAのエタノール沈殿
21塩基の合成RNAをエタノール沈殿し、Ethachinmateを添加した場合（+）と添加しなかった場合（−）
での回収量を比較した。
サンプル： 合成RNA（ 10 ng、20 ng、40 ng、80 ng ）エタノール沈殿： 各100 μlの合成RNA溶液に、3 M Sodium Acetate 3.3 μl、Ethachinmate 1μlを加えて行った。エタノール沈殿はすべてのサンプルについてエタノールを添加及び混合後、すぐに遠心を行った。

電気泳動： 15% ポリアクリルアミドゲルを使用（全量を泳動）。

エタノール沈殿前ーーー＋＋＜ ISOGEN 製品マニュアルより：微量試料からのRNAの単離＞サンプル（１〜５mg tissue）

エタノール沈殿後ー

微量な試料からのRNA抽出には、ISOGEN（Code No.311-02501）の基本プロトコールを若干変えたほうがうまくいく場合がある。以下は、微量試料（ラット下垂体またはヒト肝針生検材料）を用いた場合の例である。

＋＋

Ethachinmate

Lane 1
Lane 2
Lane 3
Lane 4Lane 5
Lane 6
Lane 7
Lane 8Lane 9Lane 10Lane 11
Lane 12： エタノール沈殿前：〃：〃：〃： Ethachinmate未使用：〃：〃：〃： Ethachinmate使用：〃：〃：〃

合成RNA 10 ng
合成RNA 20 ng
合成RNA 40 ng
合成RNA 80 ng
合成RNA 10 ng
合成RNA 20 ng
合成RNA 40 ng
合成RNA 80 ng
合成RNA 10 ng
合成RNA 20 ng
合成RNA 40 ng
合成RNA 80 ng

0.8 ml★ ISOGEN の構成品

２）ISOHAIRを用いた毛髪からのDNA抽出
ISOHAIR（Code No.319-03401）は、ヒトの毛髪・爪からDNA を抽出するためのキットである。毛髪の主成分はケラチンという非常に分解しにくいタンパク質であるが、ISOHAIRを使用すると約30 分間で毛髪を完全に溶解することが可能で、約1 時間でDNA を得ることができる。

＜ ISOHAIR 製品マニュアルより：標準プロトコール ＞

200μl

ISOGEN ★

ホモジナイゼーション or ピペッティング

5μl

0.2 ml クロロホルム

混合

4℃で ５分間放置5μl

実験例３：吸光度測定への影響

Ethachinmate存在下で、約600 bpのDNA領域をTaq DNA Polymeraseを用いて増幅した。

Ethachinmateの260 nm及び280 nmにおける吸光度を調べた。

Lane 1
Lane 2
Lane 3
Lane 4Lane 5
Lane 6： Ethachinmate：
〃：
〃：
〃：
〃
：
〃

無添加
0.2 μl 添加
0.5 μl 添加
1.0 μl 添加
3.0 μl 添加
5.0 μl 添加

25 mM TAPS-HCl（pH9.3）
50 mM KCl
2 mM MgCl2,
1 mM 2-mercaptoethanol
0.01% gelatin
200 µM dNTPs,0.2 M Primers
1.25 units Taq DNA Polymerase

30 秒間手で激しく振る

55℃, 20分間

遠心（12 K×g, 15分間, 4℃）

混合A 260

A 280

原液

0.16

0.11

100倍希釈液*0.000.00*通常使用時の濃度に相当する。

94℃ 1 min
55℃ 2 min
72℃ 1 min3μl

Ethachinmate＊1）

遠心（11 K×g, 5分間, 室温）

水相20μl2 μl
混合遠心（12 K×g, 15分間, 4℃）

3 mol/l Sodium Acetate (pH5.2) ★

Ethachinmate ★

400 μl エタノール

遠心（11 K×g, 15分間, 室温）沈殿
1ml

70％ エタノール

ボルテックス遠心（7.5 K×g, 5分間, ４℃）

沈殿
風乾沈殿
1 ml

70% エタノール

20 μl

TE（pH8.0）★

乾燥DNA溶液＊３）

ddH2O, TE（pH8.0）,0.5％ SDS

実験例４：トランスフォーメーション
Competent E. coli JM 109（Code No. 316-01353）を用いて、Ethachinmateによるトランスフォーメーション効率への影響を調べた。

PCI（25:24:1）

転倒混和＊２）, 5分間

4℃で30分間から一晩放置＊2）

25 cycles

Enzyme Solution ★

200μl

水相

■ PCRサイクル

Lysis Solution ★

55℃, 5〜10分間

0.8 倍量 イソプロパノール
Ethachinmate

Enzyme Solution ★

8μl

遠心（12 K×g, 15分間, 4℃）■ 反応条件（25 µl反応系）

Extraction Buﬀer ★

室温で 5分間放置

水相

実験例２：Taq DNA Polymerase★ ISOHAIR の構成品

毛髪＊１）

溶解

total RNA溶液＊1) 毛根部の場合1 cm、毛幹部の場合2〜6 cm、爪の場合1 mm角2個（0.5 mg）程度必要である。
＊2) ボルテックスなどの激しい操作は避ける。
＊3) 必要があればRNase処理を行う。

Competent E. coli JM 109 (100 µl) を氷中にて融解pBR322 DNA 0.1 ng,Ethachinmate or Glycogen氷中にて20分間静置
熱処理 (水浴, 42℃, 45秒間)後、氷中にて2分間以上静置
全量を400 µlのHi-Competence Broth（Code No. 319-01343）を含む試験管に移し、37℃にて60分間振とう

LBプレート(100 µg/ml：アンピシリン)に塗布し、37℃にて一晩静置

弊社では、ラット下垂体またはヒト肝針生検材料1~5mgを用いた場合のRNAの収量は、4~8 μg／1~5 mg wet weightという結果が得られた。
ここでは3 mol/l Sodium Acetate（pH 5.2）を加える必要＊1) 溶液中に塩類が含まれているため、はない。

＊2) -20℃以下では夾雑物が多くなるので4℃が望ましい。
この状態で、通常RNAの沈殿は見えない。

エタ沈メイトの効果

エタ沈メイトを加えることにより、核酸を効率よく回収でき、さらに沈殿を目で確認することができる。