信州医誌，57⑹：255〜284，2009

信州大学において審査された医学博士論文要旨
氏

名

学位授与
番
号

学位授与
年 月 日

学

位

論

文

題

目

学位審査委員
主

査

副

査

牧内明子

乙第1088号 20. 6.11 Hepatocyte Growth Factor Prevents Pulmo- 久 保 恵 嗣 岡 元 和 文池田宇一
nary Ischemia‑Reperfusion Injury in Mice
（マウス肺虚血再灌流傷害モデルにおけるHGFの肺保護効果の検討）

清水昭子

乙第1089号 20. 7.23 Non‑pathogenic bacterial flora may inhibit 小 池 健 一 岡 元 和 文
竹下敏一
colonization by methicillin‑resistant Staphylococcus aureus in extremely low birthweight infants（超低出生体重児において非病
原性細菌叢はメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）保菌を抑制する）

倉田研児

乙第1090号 20. 9.10 Stress Via p53 pathway causes apoptosis by 小 池 健 一 谷口俊一郎
塩沢丹里
mitochondrial Noxa upregulation in doxorubicin‑treated neuroblastoma cells（Doxorubicin 処理された神経芽腫細胞株では，ミトコンドリア内の Noxa を増加させることにより p53経路を介したアポトーシスが引き起こさ
れる）

陳

薇

乙第1091号 20. 9.10 A possible biochemical link between NADPH 竹 下 敏 一 山 田 充 彦
樋口京一
oxidase (Nox) 1 redox‑signaling and ERp72（NADPH オキシダーゼ（Nox）１レドクスシ
グナリングと小胞体 ERp72蛋白質の生化学的
つながり）

浦澤延幸

乙第1092号 20. 9.10 Selective Vacuolar Degeneration in Dystro- 池 田 修 一 池 田 宇 一
天野純
phin ‑Deﬁcient Canine Purkinje Fibers‑
Despite Preservation of Dystrophin Associated Proteins With Overexpression of Dp71
（ジストロフィン欠損犬プルキンエ線維における選択的空胞変性―ジストロフィン結合蛋白質の保持および Dp71の過剰発現―）

濱中一敏

乙第1093号 20. 9.24 TRPV4 initiates the acute calcium‑depen- 天 野
dent permeability increase during ventilator‑
induced lung injury in isolated mouse lungs（TRPV4は人工呼吸器関連肺障害において急性期のカルシウムに依存する血管透過性を亢進させる）

純 久保惠嗣岡元和文

矢作

乙第1094号 20. 9.24 Baroreceptors mask sympathetic responses 天 野
to high intraocular pressure in dogs（眼圧亢
進時の交感神経反応を圧受容体がマスクする）

純 池田宇一山田充彦

徹

No. 6, 2009255

審査学位論文要旨

小川輝之

乙第1095号 20. 9.24 Diﬀerential roles of peripheral and spinal 大 橋 俊 夫 大 森
栄
山
田
充
彦
enodothelin receptors in the micturition
reﬂex in rats（ラット排尿反射における末梢・脊髄のエンドセリン受容体の役割）

三木

乙第1096号 20. 9.24 Polycomb complexes regulate cellular senes- 小 池 健 一 鎌 田
中山
cense by repression of ARF in cooperation
with E2F3（ポリコーム複合体は E2F3と協同
して ARF の転写調節により細胞老化を制御す
る）

純

佐々木 茂

徹
淳

乙第1097号 20. 9.24 Relationship Between the Response to Treat- 田 中 榮 司 中 山淳
宇佐美真一
ment and the Prognosis of Patients with
Aggressive Lymphomas Treated with
Chemotherapy Followed by Involved‑ﬁeld
Radiotherapy:Radiographic Assessment（中高悪性度非ホジキンリンパ腫に対する化学療法＋追加放射線療法の治療効果と予後の関係：
画像学的検討）塩原茂樹

乙第1098号 20.11.12 Expression of cyclins, p53, and Ki‑67 in cer- 谷口俊一郎 加 藤 博 之西沢理
vical squamous cell carcinomas:overexpression of cyclin A is a poor prognostic factor instsge Ib and II disease（子宮頸部扁平上皮癌におけるサイクリン，p53および Ki‑67の発現：
サイクリンＡの過剰発現は Ib 期および II 期における予後不良因子である）

金

東浩

乙第1099号 20.12.24 STAT6 signaling is important in CD8 T‑cell 中 山
activation and defense against Toxoplasma
gondii infection in the brain（STAT6シグナ
ルはトキソプラズマ感染時の CD8 Ｔ細胞の活性化と脳内における防御に重要である）

淳 竹下敏一樋口京一

畑山織絵

乙第1100号 20.12.24 Utility of Single‑slice High‑resolution CT in 角 谷 眞 澄 田 中 榮 司
野見山哲生
Upper Lung Field Combined with Low‑dose
spiral CT for Lung‑cancer Screening in the
Detection of Emphysema（低線量肺癌 CT 検診において，上肺野１スライスの HRCT を追加撮影することによる肺気腫検出の有用性）

神吉昭子

乙第1101号 21. 1.14 Endogenous α‑calcitonin gene‑related pe- 菅 根 一 男 樋 口 京 一
大森栄
ptide mitigates liver ﬁbrosis in chronic hepatitis induced by repeated administration of
concanavalin A（内因性 αカルシトニン遺伝
子関連ペプチドはコンカナバリン A 連続投与による慢性肝炎における肝線維化を緩和する）

山﨑

256

宏

乙第1102号 21. 1.14 Extensor Tendon Rupture Associated with 角 谷 眞 澄 松 尾清森泉哲次
Osteoarthritis of the Distal Radioulnar Joint（遠位橈尺関節症を伴った伸筋腱皮下断裂）
信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨

宮嵜敦

乙第1103号 21. 1.28 Anatomical and histopathological correlates 松 尾of the dermoscopic patterns seen inmelanocytic nevi on the sole:A retrospective
study（足底色素細胞母斑におけるダーモスコ
ピー所見とその解剖学的・病理組織学的要因についての後向き研究）

清 森泉哲次中山淳

長谷川淳一

乙第1104号 21. 1.28 Downregulated melanogenic paracrine cyto- 谷口俊一郎 鎌 田徹
村田敏規
kine linkages in hypopigmented palmoplantar skin（メラニン化にかかわるサイトカ
インのパラクライン機構の抑制が掌蹠皮膚の低色素状態に関与する）

中川力丸

乙第1105号 21. 1.28 Eﬀect of high‑frequency oscillatory ventilla- 川真田樹人 久 保 惠 嗣
岡元和文
tion on oleic acid‑induced lung injuryin sheep（緬羊におけるオレイン酸による肺障害に対する高頻度換気の効果）

古澤武彦

乙第1106号 21. 2.23 The eﬀects of a neutrophil elastase inhibitor 岡 元 和 文 久 保 惠 嗣
川真田樹人
on the postoperative respiratory failure ofacute aortic dissection（急性大動脈解離の術後呼吸不全に対する好中球エラスターゼ阻害剤の効果について）髙橋

乙第1107号 21. 3.11 Correlation between glial ﬁbrillary acidic 森 泉 哲 次 福 嶋 義 光
本田孝行
protein ‑positive astrocytes and age inthe human hippocampus（ヒト海馬における
GFAP 陽性アストロサイトと年齢との相関）

徹り，肺においても虚血再灌流傷害時に内因性の HGF

Hepatocyte Growth Factor Prevents Pulmonary Ischemia‑Reperfusion Injury inMice（マウス肺虚血再灌流傷害モデルにおける HGF の肺保護効果の検討）
牧

内

明

子

が，傷害された肺の修復を促進することが示されている。これらのことから，HGF の移植領域における臨床応用が期待されている。今回我々は，マウス肺虚血再灌流傷害モデルにおいて human recombinant
HGF（hrHGF）を投与し，HGF 投与による肺虚血
再灌流傷害抑制効果について検討した。

（論文の内容の要旨）【方法】マウス肺虚血再灌流傷害モデルは以下のよう【背景】肺移植時の虚血再灌流傷害（ischemia‑reper-に作成した。全身麻酔下に左肋間開胸を行い，左肺門

fusion injury）は，移植の予後を左右する大きな障壁を一括してクロスクランプ（虚血）し，30分後にクロの一つである。周術期の虚血再灌流傷害は，早期の移スクランプを開放した（再灌流）。このモデルを，植肺機能不全の原因となるばかりでなく，移植晩期の

Ａ：再灌流直前に hrHGF500μg/kg を胸腔内投与し，死亡の主因である閉塞性細気管支炎発症の危険因子で以後６時間毎に同量を皮下投与する HGF 投与群，もあると報告されており，肺移植の成績を向上させる

Ｂ：生食を胸腔内投与し，以後６時間毎に同量を皮下ためには，周術期における肺虚血再灌流傷害の予防投与する対照群，Ｃ：開胸操作を行うだけの sham 群，が重要と考えられている。多機能因子である hepato-の３群を作成した。再灌流直前，再灌流後３，６，12，

cyte growth factor（HGF）は，全身のさまざまな臓

18，24時間後に肺を摘出し，HE 染色による肺組織像

器において組織傷害時に，抗アポトーシス作用によるの評価と免疫染色によるアポトーシスおよびアポトー

組織保護や，組織再生を促進することが報告されておシス関連因子発現の解析を行うとともに，経時的に血No. 6, 2009257

審査学位論文要旨

中の内因性 HGFを ELISA法で解析し，hrHGF投与

HGF の移植領域における臨床応用が期待されている。

による虚血再灌流後の肺傷害抑制効果の検討を行った。

本研究では，牧内は，マウス肺虚血再灌流傷害モデ【結果】⑴ 肺虚血再灌流傷害後24時間まで，肺傷害ス

ルに human recombinant HGF（hrHGF）を投与し，コア（肺胞浮腫，炎症細胞浸潤，うっ血，肺出血で評HGF 投与の肺虚血再灌流傷害抑制効果について検討

価）は経時的に増悪した。hrHGF 投与群では対照群した。

に比し，肺傷害スコアの有意な低下が認められた。⑵

マウス肺虚血再灌流傷害モデルは，全身麻酔下に左

hrHGF 投与群では対照群に比し，虚血再灌流から３

肋間開胸を行い，左肺門を30分間クロスクランプする

時間後に内因性 HGF の血中濃度の有意な上昇が認めことにより作成した。これをられた。⑶ TUNEL 染色による解析で，虚血再灌流

Ａ：再灌流直前に hrHGF500μg/kg を胸腔内投与から18時間後の対照群での肺胞上皮細胞のアポトーシ

し，以後６時間毎に同量を皮下投与する HGF 投スは，sham 群に比し有意な増加が認められたが，

与群

hrHGF 投与により虚血再灌流後のアポトーシスは，
sham 群と同レベルまでの有意な抑制が認められた。
⑷ Bcl‑xL 発現は，虚血再灌流から３時間後に対照群

Ｂ：生食を胸腔内投与し，以後６時間毎に同量を皮下投与する対照群
Ｃ：開胸操作を行うだけの sham 群で有意に増加していたが，hrHGF 投与によりさらにの３群を作成した。再灌流直前，再灌流後３，６，12，上昇が認められた。これに対し Bax 発現は，虚血再18，24時間後に肺を摘出し，HE 染色による肺組織像

灌流から３および18時間後の対照群で，sham 群に比の評価と免疫染色によるアポトーシスおよびアポトーし有意な増加が認められたが，hrHGF 投与により有シス関連因子発現の解析を行うとともに，経時的に血意な抑制が認められた。

中の内因性 HGFを ELISA法で解析し，hrHGF投与【考察】本研究により，⑴ 外因性 HGF による虚血再による虚血再灌流後の肺傷害抑制効果の検討を行った。

灌流後の肺傷害の抑制，⑵ 外因性 HGF による虚血再灌流後の肺胞上皮細胞のアポトーシス抑制，⑶ 外因性 HGF 投与による虚血再灌流後早期の Bcl‑xL 発
現の増加と Bax の発現の抑制，⑷ 外因性 HGF 投与
による虚血再灌流後の血中内因性 HGF の増加，が示された。これらの結果から，外因性 HGF がこれによ

その結果，次の結論を得た。
⑴ 外因性 HGF により，虚血再灌流後の肺傷害が抑制された。
⑵ 外因性 HGF により，虚血再灌流後の肺胞上皮細胞のアポトーシスが抑制された。
⑶ 外因性HGF投与により，虚血再灌流後早期のBcl‑

り誘導された内因性 HGF と協調して，虚血再灌流後

xL 発現が増加し，Bax の発現が抑制された。

の肺組織での Bcl‑2 familyの発現を変化させること⑷ 外因性 HGF 投与により，虚血再灌流後の血中内で，肺胞上皮細胞のアポトーシスを抑制し，肺組織を因性 HGF が増加した。

虚血再灌流傷害から保護すると考えられた。

以上のことから，外因性 HGF がこれによって誘導【まとめ】HGF の抗アポトーシス作用により，肺にされた内因性 HGF と協調して，虚血再灌流後の肺組

おける虚血再灌流傷害の抑制が得られることを示した。

織での Bcl‑2 familyの発現を変化させることで，肺虚血再灌流傷害時の外因性 HGF の肺保護効果につ胞上皮細胞のアポトーシスを抑制し，肺組織を虚血再いては本報告が初めてであり，その作用機序の解明には更なる研究を要するが，周術期の HGF 投与が肺移植の成績を向上させ得る可能性が示唆された。
（論文審査の結果の要旨）
Hepatocyte growth factor（HGF）は，さまざまな臓器の組織傷害時に，抗アポトーシス作用による組灌流傷害から保護することが示された。
本研究により，HGF は抗アポトーシス作用により肺虚血再灌流傷害を抑制することを示し，周術期のHGF 投与が肺移植の成績を向上させ得る可能性が示唆された。よって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

織保護や，組織再生を促進することが報告されており，肺においても虚血再灌流傷害時に，内因性の HGF が傷害肺の修復を促進することが示されている。肺移植
時の虚血再灌流傷害（ischemia‑reperfusion injury）
は，移植の予後を左右する大きな障壁の一つであり，
258

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨coli）を保菌しており，残りは有意な細菌の増殖を認

Non‑pathogenic bacterial ﬂora mayinhibit
colonization by methicillin‑resistant Staphylococcus aureus in extremely low birthweight infants（超低出生体重児において非病原性細菌叢はメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）保菌を抑制する）
清

水

昭

子

（論文の内容の要旨）めなかった。⑷ Group1における敗血症の発症率は，。敗血症のgroup2よりも有意に低かった（p＜0.05）
主な原因菌は M RSA であった。両グループ間の臨床的所見を比 すると，敗血症の発症のみに有意差が認
められ，それ以外の項目については有意差を認めなかった。⑸ 入院後から６週までの M RSA の保菌率を週毎に累積的に検討したところ，入院後６週までの
M RSA 保菌率は，group1は56例中18例（32.1％）であったのに対して，group2は54例中42例（77.8％）【背景と目的】メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）であった（p＜0.001）。

は院内感染を起こす代表的な細菌である。MRSA に【考察】現在の M RSA による感染対策として，患者感染した新生児は重症化しやすいため，新生児集中治と病原菌の接触の防止と保菌した菌の増殖を阻害する療室（NICU）において MRSA の保菌や感染症を減ことに主眼が置かれている。しかし，これらの方法で少させることは重要な課題である。本研究では，超低は MRSA の広がりを完全に制御することはできない。

出生体重児において，非病原性細菌叢の M RSA 保菌

本研究で，超低出生体重児における非病原性細菌叢のに対する役割について後方視的に検討した。

生後１週間以内の定着が MRSA 保菌を阻止する可能【対象と方法】対象：1997年１月から2003年12月まで性を示した。出生直後の新生児では，ほとんど菌が認に長野県立こども病院 NICU に入院した超低出生体

められず，母親などと接触することにより，菌を獲得

重児164人のうち，出生後すぐに収容され，その後42していく。特に産道は新生児期における非病原性細菌

日以上入院していた110人である。先天性大奇形，胎叢の獲得にとって重要な役割を担っている。しかし，児水腫，遺伝性代謝性疾患および生後42日未満に逆搬

超低出生体重児は，帝王切開による出生，母親との分送された児は除外した。入院時に，便培養，臍浸出液

離，出生後のチューブ栄養などにより，生後早期に培養，口腔内培養を行った。口腔内培養は，その後も週

非病原性細菌叢の獲得が困難な状況にある。Coryneに１回，生後42日まで施行した。すべての検体は，５％bacteriaやコアグラーゼ陰性ブドウ球菌（coagulase‑

羊血液寒天培地，チョコレート寒天培地，modiﬁed，Bacteroides fragilis
negative staphylococci;CNS）

Drigarsky寒天培地，OPA ブドウ球菌寒天培地に植は生後数日以内に新生児の皮膚から検出されるが，帝

えつけ，37度にて24時間培養した。細菌の同定や抗生王切開により出生した児にはこれらの細菌は認められ物質に対する感受性試験も同時に行った。Oxacillinなかった。今回の研究からも，超低出生体重児におけの MIC が４μg/ml 以上の黄色ブドウ球菌を MRSAる MRSA 保菌阻止には，いかに生後早期に，咽頭，と定義した。

鼻腔，皮膚において非病原性細菌叢を獲得させるかが【結果】⑴ ほとんどすべての児において，入院時の口重要であると考えられた。

腔内培養からは細菌の有意な増殖はみられなかった。

【結論】超低出生体重児における MRSA 感染対策と次いで，生後１週間以内に非病原性細菌叢が増殖したして，非病原性細菌叢を早期に咽頭，鼻腔，皮膚など児を group1（n＝56）として，生後１週間以内に非病に獲得させることは有用な予防法の１つとなることが原性細菌叢が増殖しなかった児を group2（n＝54）と示唆された。今後，非病原性細菌叢の効果的な獲得方

して M RSA 保菌率を比 した。⑵ 非病原性細菌叢の法や MRSA 感染制御における非病原性細菌叢のもつ増殖が始まる時期は生後７日が多く，生後14，21日と潜在的な役割を明確にしていきたい。

比べて最も有意な違いが認められた。⑶ Group1では，（論文審査の結果の要旨）

生後１週間以内に，S.epidermidis（80.3％），Coryne-

院内感染の起因菌として，メチシリン耐性黄色ブド，Lactobacillus（7.1％），α‑Streptobacterium（7.1％）

ウ球菌（MRSA）は，最も重要な細菌の１つである。

coccus（5.4％）が同定された。一方，group2におい

特に，MRSA に感染した新生児は重症化しやすいたては，39％の児がすでに M RSA を，11％が他の病

め，新生児集中治療室（NICU）において MRSA の原菌（S. aureus，Enterobacteriaceae，Escherichia

保菌や感染症を減少させることは重要な課題となってNo. 6, 2009259

審査学位論文要旨いる。本研究では，超低出生体重児において，非病原防法の１つとなることが示唆された。今後は NICU

性細菌叢の M RSA 保菌に対する役割について後方視の MRSA 感染対策につながる可能性があることは重的に検討した。

要な知見と思われ，主査・副査は一致して本論文を学

1997年１月から2003年12月までに長野県立こども病位論文として価値があるものと認めた。

院 NICU に入院した超低出生体重児164人のうち，出生後すぐに収容され，その後42日以上入院していた110人を対象とし，先天性大奇形，胎児水腫，遺伝性
代謝性疾患および生後42日未満に逆搬送された児は除外した。入院時には，便培養，臍浸出液培養，口腔内培養を行い，さらに口腔内培養のみは，その後も週１回，生後42日まで施行した。すべての検体は，５％
羊血液寒天培地，チョコレート寒天培地，modiﬁed

Stress via p53 pathway causes apoptosis by
mitochondrial Noxa upregulation in doxorubicin ‑treated neuroblastoma cells（Doxorubicin 処理された神経芽腫細胞株では，ミトコンドリア内の Noxa を増加させることにより p53経路を介したアポトーシスが引き起こされる）

Drigarsky寒天培地，OPA ブドウ球菌寒天培地に植倉

えつけ，37度にて24時間培養した。細菌の同定や抗生

田

研

児

物質に対する感受性試験も同時に行い，Oxacillin の（論文の内容の要旨）

MIC が４μg/ml 以上の黄色ブドウ球菌を MRSA と【背景と目的】神経芽細胞腫（NB）は交感神経系に定義した。

由来する小児固形腫瘍である。集学的治療にもかかわ

その結果，清水は次の結論を得た。

らず，高リスク群のNBの５年生存率はいまだに約30

1) ほとんどすべての児において，入院時の口腔内培％と予後不良である。薬剤耐性のメカニズムを明ら

養からは細菌の有意な増殖はみられず，非病原性細かにすることが生存率を改善する治療法の開発に繫が菌叢の増殖が始まる時期は生後７日が有意に多かっることから，p53依存性経路を介して誘発されるアポた。

トーシスの分子機構を，doxorubicin（以下 Doxo）

2) 生後１週間以内に非病原性細菌叢が増殖した児

感受性 NB 株と非感受性 NB 株を比することによ（group1）と生後１週間以内に非病原性細菌叢が増り解析した。

殖しなかった児（group2）とを比したところ，【方法】NB細胞株を DNA傷害ストレスである Doxogroup1では，生後１週間以内に，S.epidermidis（80.3

で処理し，経時的に解析した。細胞死の判定はトリパン％），Corynebacterium（7.1％），Lactobacillus（7.1％），

ブルー取り込みにより，アポトーシスの判定はFACS

α‑Streptococcus（5.4％）が同定され，group2でによる sub G0/G1測定と DAPI 染色により行った。

は，39％の児がすでに MRSA を，11％が他の病原タンパクの局在は免疫染色と細胞分画／ウエスタンブ菌（S. aureus，Enterobacteriaceae，Escherichia

ロットで検討した。ミトコンドリア（以下Mito）内のcoli）を保菌しており，残りは有意な細菌の増殖をNoxa（Bcl‑2ファミリータンパクの１つ）の mRNA

認めなかった。

は，千葉県がんセンター研究所に集められた NB 腫

3) Group1における敗血症の発症率は，group2より瘍検体を用いて，半定量的なRT PCRと定量的リアルも有意に低かった。敗血症の主な原因菌は MRSA

タイム PCR により評価した。Doxo 処理前に Noxa

であった。

siRNA を導入し，Noxa のノックダウンによる細胞

4) 入院後から６週までのM RSAの保菌率を週毎に累死の誘導を検討した。Mito 膜電位の変化はマイトト

積的に検討したところ，入院後６週までの MRSA

ラッカー染色によって判定した。

保菌率について，group1は group2よりも有意に低【結果】Doxo に対して感受性を示す NB 株と非感受かった。

性の NB 株を同定した。Doxo 感受性株（SK‑N‑SH，

以上より，MRSA 保菌が制御不能な NICU の現状

SH ‑SY5Y，NB‑9，NB ‑69）では，Doxo 処理によにおいて，正常満期産児と比べ，非病原性細菌叢の獲り，核内への p53の集積とセリンのリン酸化が引き起得が困難な状況にある超低出生体重児に対する新たなこされ，Mito においては Noxa のタンパク量が増加

MRSA 感染対策として，非病原性細菌叢を生後早期し，Noxa 量/Bcl‑2量比率が上昇した。シトクロムｃに咽頭，鼻腔，皮膚などに獲得させることは有用な予の放出や膜電位の変化などの Mito の機能障害をきた

260

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨

し，カスパーゼ９やカスパーゼ3/7が活性化された。

性 NB 株と非感受性 NB 株を比Doxo による Mito 依存性細胞死は Noxa siRNA に析した。

することにより解よるノックダウンによりほぼ完全に解除された。また，細胞死の判定はトリパンブルー取り込みにより，アp53依存性の DNA 傷害を誘発する etoposide（以下ポトーシスの判定は FACS による sub G0/G1測定とVP‑16）で処置すると，Mito の Noxa 増加が VP‑16

DAPI 染色により行った。タンパクの局在は免疫染色感受性株（SK‑N‑SH，NB‑9とNB‑19）のみで観察さと細胞分画／ウエスタンブロットで検討した。ミトコれた。一方，Doxo非感受性株（IMR32，NB‑1，NB‑19）

ンドリア（以下 M ito）内の Noxa（Bcl‑2ファミリー

では Doxo 処理 前 か ら Mito 内 に Noxa が 集 積 し て

タンパクの１つ）の mRNA は，千葉県がんセンター

いたが，Doxo処理による増加はみられなかった。予研究所に集められた NB 腫瘍検体を用いて，半定量

後不良な NB 検体の一部では大量の Noxa mRNA の的な RT PCRと定量的リアルタイム PCRにより評価発現が認められた。特に，高水準のNoxa mRNA発現した。Doxo 処理前に Noxa siRNA を導入し，Noxa

は，生後12カ月未満の進行した病期（INSS3とINSS4）のノックダウンによるアポトーシスの誘導を検討した。

の検体に多く認められた。M YCN 増幅は Doxo 感受性と関連していたが，Noxa の mRNA 発現とは有意

その結果，倉田は次の結論を得た。
1) Doxo 感受性株では，Doxo 処理により，核内へな相関を示さなかった。

の p53の集積とセリンのリン酸化が引き起こされ，【考察】本研究から，DoxoおよびVP‑16により誘導さ

Mito においては Noxa のタンパ ク 量 が 増 加 し，れた NB 細胞のアポトーシスにおいて Noxa の増加

Noxa 量/Bcl‑2量比率が上昇した。さらにシトクロが重要な役割を果たすことが示された。また，Noxa/

ムｃの放出や膜電位の変化などの M ito の機能障害

Bcl‑2のようなアポトーシス誘導分子量とアポトーシ

をきたし，カスパーゼ９，３，７が活性化された。

ス阻害分子量の比率の増加が，Mito機能障害と カ

2) Doxo による Mito 依存性アポトーシスは Noxa

スパーゼの活性化につながり，アポトーシスを誘導す

siRNA によるノックダウンによりほぼ完全に解除ると考えられた。一方，Doxo 非感受性 NB 株では，された。Doxoにより誘導されたNB細胞のアポトー

Noxa は Doxo 処理前から Mito に非常に多く局在し，シスにおいて Noxa の増加が重要な役割を果たす

Doxo 処理しても増加せず，アポトーシスは誘導不能ことが示された。

であったことから，M ito での Noxa 不活性化がアン

3) Doxo 非感受性株では Doxo 処理前から Mito 内

トラサイクリン系に対する薬剤抵抗性機構の一因と考に Noxa が集積していたが，Doxo 処理による増加えられた。予後不良群の NB 腫瘍検体の一部でみらはみられず，アポトーシスは誘導不能であったことれる大量の Noxa mRNA は，非感受性株におけるから，Mito における Noxa の不活性化がアントラ

Noxa の動態と類似していた。Doxo 非感受性 NB 株

サイクリン系に対する薬剤抵抗性機構の一因と考えに集積した大量の不活化 Noxa を再活性化することられた。

は化学療法に抵抗性の NB に対する新しい治療法の4) 予後不良な NB検体の一部では大量の Noxa m-

開発に結びつくかもしれない。また，予後不良の NB

RNA の発現が認められた。特に，高水準の Noxa

における最も一般的な指標である MYCN は，DoxomRNA 発現は，生後12カ月 未 満 の 進 行 し た 病 期

非感受性 NB 株で増幅していたのに対して，３種類（INSS3と INSS4）の検体に多く認められ，非感受の感受性株ではすべてシングルコピーであったことか性株における Noxa の動態と類似していた。

ら，M YCN 増幅が非感受性 NB 株における p53不活

5) MYCN 増幅は Doxo 非感受性株で増加していた化に関係することを示唆し，この分子機構の解析が重が，Noxa の mRNA 発現とは有意な相関を示さな要であると思われた。

かった。MYCN 増幅が非感受性 NB 株 に お け る（論文審査の結果の要旨）
高リスク群の神経芽細胞腫（NB）は集学的治療にもかかわらず予後不良である。薬剤耐性のメカニズムを明らかにすることが生存率を改善する治療法の開発

p53不活化に関係することを示唆し，この分子機構の解析が重要であると思われた。
以上の結果から，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

に繫がることから，doxorubicin（以下 Doxo）処理により起こるアポトーシスの分子機構を，Doxo 感受
No. 6, 2009261

審査学位論文要旨

ドックス情報伝達のメカニズムについて検討した。

A possible biochemical link between
NADPH oxidase (Nox)1 redox‑signaling
and ERp72（NADPH オキシダーゼ（Nox)
１レドクスシグナリングと小胞体 ERp72蛋
白質の生化学的つながり）陳薇

（論文の内容の要旨）

5‑IAF レ ベ ル 法 と BIAM レ ベ ル 法 を 用 い て，
Nox1から産生した活性酸素により酸化されるいくつかの蛋白を同定した。また，アフィニティークロマトグ
ラフィーにより，蛋白を精製し，質量分析を行った。
その結果，72kDa の蛋白は小胞体 ERp72蛋白であることが判明した。さらに，NEM ‑BIAM ラベル法でERp72蛋白は，Nox1からの活性酸素に酸化されることを再確認した。次に，GST pulldown アッセイと免Emerging evidence indicates that NADPH

疫共沈降を用いて，in vitro と in vivo で，Nox1とoxidase (Nox)1‑generated reactive oxygen species

ERp72蛋白が相互作用することを証明した。さらに，(ROS)play key regulatory roles in various cellular

GST‑ERp72deletion mutants の融合蛋白を構築して，

processes including inﬂammation and cell prolifera-

GST pulldown アッセイで，ERp72蛋白は N 末端にtion, yet little is known about the downstream

ある Catargets of Nox1‑generated ROS. In the present

域を介して，Nox1と結合することが判明した。これ

study, we show that one of proteins selectively

らの生化学的な実験結果は，免疫蛍光染色で，Nox1

oxidized in response to Nox1‑generated ROS wasと ERp72蛋白の細胞膜共局在を調べることによってERp72, a member of protein disulﬁde isomeraseも確認された。また，insulin reduction アッセイで，(PDI)family,which catalyzes disulﬁde bonds forma-

ERp72蛋白は，Nox1からの活性酸素によって酸化さ

tion, reduction or isomerization of newly synthes-

れると reductase activityが減少することを証明した。

ized proteins in the endoplasmic reticulumn (ER)

以上の結果から，ERp72蛋白は，細胞膜で Nox1とlumen. Oxidation of ERp72 by Nox1 resulted in an

共局在し，Nox1からの活性酸素により酸化されると，

inhibition of its reductase activity. EGF‑treatment

reductase activityが抑制されることが結論された。

of cells stimulated the Nox1 activity and the

このことは，Nox1レドックス情報伝達経路に，小activated Nox1 subsequently mediated EGF‑in-

胞体 ERp72蛋白が関与するという新しい知見を得た

duced suppression of the ERp72 reductase activity.

ものとして，高く評価される。主査，副査は，一致しCoimmunoprecipitation,GST pull‑down assays andて本論文を学位論文として，十分価値があるものと認

mutational analysis,indicated that Nox1 associates

めた。

ドメインを含んだ領
binding ドメインと a°with ERp72, which involves its NH ‑terminus encompassing a Cabinding site and the ﬁrst thior-edoxin‑like motif. Furthermore, confocal microscopy showed colocalization between Nox1 and
ERp72 at the plasma membrane.These results suggest that Nox1‑dependent redox signaling pathways biochemically link to ERp72.Our ﬁndings may
provide signiﬁcant implications in understanding of
Nox1 signaling mechanisms involved in in vivo
pathological processes including inﬂammation andtumorigenesis.
（論文審査の結果の要旨）

Selective Vacuolar Degeneration in
Dystrophin ‑Deﬁcient Canine Purkinje
Fibers Despite Preservation of Dystrophin‑
Associated Proteins With Overexpressionof Dp71（ジストロフィン欠損犬プルキンエ線維における選択的空胞変性―ジストロフィン
結合蛋白質の保持およびDp71の過剰発現―）
浦

澤

延

幸

（論文の内容の要旨）【背景と目的】Duchenne型筋ジストロフィー（DMD）

NADPH オキシダーゼ（Nox）１レドックス情報は筋形質膜下の細胞骨格蛋白質ジストロフィンが欠損

伝達は，種々の細胞活性に関わっていることが分かっ

し，進行性の筋委縮を示すＸ連鎖性劣性の遺伝性疾患てきた。陳 薇らは，本研究で Nox1により産生されである。現在は呼吸筋障害に対する治療が進歩し心不る活性酸素の標的分子 ERp72蛋白を同定し，Nox1レ

全が死因の第一位である。DM D の心障害の特徴とし

262

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨て心電図上の異常Ｑ波および左室後壁を中心とした心縁に発現の増強を認めた。ウエスタンブロット解析で筋の線維化があり，また様々な不整脈，伝導障害が指は筋ジス犬 Purkinje 線維で μ‑カルパインの基質とな摘される。我々はゴールデンレトリバー種に見出されり得るデスミン，心筋トロポニン‑T および‑I の分解たジストロフィン欠損犬の凍結精子を用いて人工授精を認めた。⑸ 幼齢からの経時変化ではDp71およびμ‑を行い，ビーグル種筋ジストロフィー犬（筋ジス犬）

カルパインの免疫染色で４カ月齢から発現が増強し，コロニーを確立した。この大型モデル動物は mdx マウエスタンブロット解析では Dp71の発現増強は再現

ウスなど従来のモデル動物に比べ，よりヒトの DMDされたが，μ‑カルパインの蛋白量には経時変化がなに近い表現型を呈する。これまでの観察で若齢筋ジス

く，免疫染色での発現増強は translocation であるこ

犬では心筋障害が出現する以前から異常Ｑ波を呈し，とが示唆された。ユートロフィンは正常犬においてもまた運動誘発性に突然死した個体を認め，刺激伝導系

成長に伴い発現が低下するが，筋ジス犬 Purkinje 線障害に着目し検討した。

維では特に顕著だった。

【方法】筋ジス犬10頭，正常犬７頭（１〜13カ月齢）【考察】⑴ 本研究によりジストロフィン欠損の病初期を対象に剖検した。洞結節を含む右心房，房室結節，

で Purkinje 線維の選択的空胞変性が見出された。⑵His 束を切り出し，Purkinje 線維を含む左心室は基筋ジス犬 Purkinje 線維における Dp71の過剰発現は底部，乳頭筋レベル，心尖部の三層に横断面で全割し，４カ月齢からの空胞変性に同期し関与が推察される。

H&E 染色で組織学的解析を行った。４カ月齢の筋ジ

Dp71はジストロフィンＣ端型アイソフォームであり

ス犬，正常犬各１頭で透過型電子顕微鏡を用いて超微DAP は保持するが，Ｎ端および rod domain を欠き構造を観察した。また左心室の一部から凍結標本を作

アクチンと細胞外基質を結ぶ細胞骨格の役をなさない。

製し，筋型ジストロフィンの種々の epitope，β‑ジス

既報では Dp71のトランスジェニック mdx マウスでトログリカン，α‑，β‑，γ‑，δ‑サルコグリカン，ユー

筋変性が増強し，機序としてユートロフィンとの競合

トロフィン，μ‑カルパインに対する抗体を用いて免が考えられているが，筋ジス犬Purkinje線維でもユー

疫組織化学染色（免疫染色）を行い，これら蛋白質のトロフィンの発現が４カ月齢で急速に低下していた。

発現状況を観察した。更にマイクロダイセクション法⑶ μ‑カルパインの形質膜下および空胞への trans-

により作業心筋と Purkinje 線維を分離収集しウエス

location が観察されたが，カルパインの活性化には形

タンブロット解析を行った。

質膜下への translocation が重要である。Purkinje 線【結果】⑴ H&E 染色による組織学的検討では，全て維と同様に T 管を欠く心房筋では興奮初期に形質膜の筋ジス犬で作業心筋に変性を認めず，刺激伝導系で下から Ca 濃度が上昇し心室筋とは生理的な差異がは洞結節から His 束まで変性はなかった。一方 Pur-

存在する他，ジストロフィン欠損に起因するCa チャ

kinje 線維では４カ月齢以上の筋ジス犬で著明な空胞

ンネルの機能障害が筋ジス犬 Purkinje 線維の形質膜変性を認めた。超微構造の観察では空胞部に筋原線維下の Ca 濃度に関与している可能性がある。⑷ 筋ジの断裂，消失を認めた。⑵ epitope の異なる抗ジスト

ス犬では心筋障害が出現する以前から異常Ｑ波を呈す

ロフィン抗体を用いた免疫染色では，筋ジス犬の作業るが，機序として Purkinje 線維の変性により興奮伝

心筋は染色されず，Purkinje 線維ではＣ端を認識す

播の最も遠い左室後壁の脱分極が遅延し，初期 QRSる抗体のみ染色された。ウエスタンブロット解析の結ベクトルが心室中隔に向かうことを仮説として提唱す

果，この分子はジストロフィンＣ端型アイソフォーム

る。また His 束下部および脚は Purkinje 細胞で構成の Dp71であることが判明し過剰発現を認めた。⑶ジされており，DMD に合併する房室ブロックなど伝導ストロフィンホモログであるユートロフィンは，筋ジ障害との関連が推察される他，末梢 Purkinje 線維のス犬 Purkinje 線維で作業心筋より強く発現していた。

伝導遅延は心室性不整脈をも惹起し得る。Purkinje

ま た 筋 ジ ス 犬 Purkinje 線 維 で は α‑サ ル コ グ リ カ

線維の変性は DMD に合併する不整脈に対し新たな視ンなどジストロフィン結合蛋白質（DAP）の発現が点をもたらすと考える。

Dp71あるいはユートロフィンの存在に呼応し保持さ【結論】ジストロフィン欠損症の病初期では Dp71のれていた。⑷ Ca 依存性プロテアーゼである μ‑カル

過剰発現とともに Purkinje 線維の選択的空胞変性がパインの免疫染色では，筋ジス犬 Purkinje 線維の空観察され，ジストロフィン欠損症の異常Ｑ波および致

胞のない細胞で形質膜下に，空胞を伴う細胞で空胞辺

死性不整脈への関与も考え得る。

No. 6, 2009263

審査学位論文要旨（論文審査の結果の要旨）

結合蛋白質の消失が，Purkinje 線維の変性機序にはDuchenne 型筋ジストロフィー（以下，DMD）は，関与していないことを示し興味深い。⑸ Dp71の過剰

近年の呼吸筋障害に対する治療の進歩によって心不全発現と同様，筋ジス犬 Purkinje 線維の変性と同期しが死因の第一位を占めるに至っており，ジストロフィて，Ca 依存性プロテアーゼである μ‑カルパインのン欠損における心筋障害の重要性が高まっている。

形質膜下および空胞への translocation が観察された。

DM D の心障害の特徴として心電図上の深く先鋭な異カルパインの活性化には形質膜下への translocation

常Ｑ波および左室後壁を中心とした心筋組織の変性，が重要であることは良く知られており，mdx マウス

線維化が挙げられる。DM D における異常Ｑ波は1952の骨格筋変性においても同様の現象が報告されている。

年に Rubinと Buchbergによって指摘され，その後の筋ジス犬 Purkinje 線維の変性機序として μ‑カルパイ

多くの研究者によって DMD 患者の65‑80％に認めらンの活性化が重要であることは間違いないと考えられれる普遍的な現象であることが確認されている。このる。μ‑カルパインの活性化には，ユートロフィンの

異常Ｑ波の正確な発現機序が明らかにされていない他，減少による形質膜の機械的抵抗の障害も現段階では否様々な不整脈，伝導障害が指摘され，死因の12‑60％定することはできないが，Dp71の過剰発現に起因すは突然死であるとの報告がありながら，ジストロフィ

る Ca チャンネルの機能障害あるいはシグナル伝達

ン欠損における刺激伝導系の病理学的な検討を行ったの異常など新たな cascade を検討する必要性が示さ

報告は非常に少ない。DM D において Purkinje 線維れた。

の空胞変性を指摘した既報が２報存在するが，これら本論文は臨床的にはジストロフィン欠損症の病初期の報告は剖検例であることから，特に病初期においてから刺激伝導系異常に対してこれまで以上に注意を払の刺激伝導系障害については全くの不明であった。

う必要があることを示唆している他，機序が未だ明ら

浦澤らは DMD に対する従来の mdx マウスモデルと比かではない異常Ｑ波あるいは筋ジストロフィーにおけし，よりヒトに近い表現型を呈する筋ジストロ

る筋変性自体の解明にも新たな視点を投じ得る内容でフィー犬（以下，筋ジス犬）10頭，正常犬７頭（１〜あり，主査，副査は一致して本論文を学位論文として13カ月齢）を用いて刺激伝導系の障害に注目し検討を価値があることを認めた。

行った。⑴ H&E 染色による組織学的検討では，全ての筋ジス犬で作業心筋に変性を認めなかった。刺激伝
導系では洞結節から His 束まで変性はなかったが，Purkinje 線維では４カ月齢以上の筋ジス犬で著明な空胞変性が認められ，病初期において Purkinje 線維の選択的変性が見出された。⑵ 免疫組織化学染色およびウエスタンブロット解析の結果，変性を生ずる４カ月齢から筋ジス犬 Purkinje 線維においてジストロ
フィンＣ端型アイソフォームである Dp71の過剰発現

TRPV4 initiates the acute calcium‑dependent permeability increase during ventilator‑induced lung injury in isolated mouse
lungs（TRPV4は人工呼吸器関連肺障害において急性期のカルシウムに依存する血管透過性を亢進させる）
濱

中

一

敏

を認めた。既報では Dp71のトランスジェニック mdx（論文の内容の要旨）

マウスでも筋変性が増強しており，筋ジス犬 Purkin-【背景と目的】 重症呼吸器疾患において人工呼吸管

je 線維の変性においても Dp71が大きな役割を果たし理は重要な治療のひとつである。これまでの臨床研究ていると考えられる。⑶ ジストロフィンホモログでにより過度の換気量の増加，気道内圧の上昇による人工あるユートロフィンは，筋ジス犬 Purkinje 線維で作呼吸が肺障害 ventilator‑induced lung injury（VILI）

業心筋より強く発現していたが，やはり変性と同期しを引き起こし，死亡率を上昇させることが示されていて急速に減少しており，Dp71の過剰発現との競合がるが，このVILIの分子生物学的メカニズムは未だ完全推察される。⑷ ジストログリカン，サルコグリカンに解明されていない。高い気道内圧や肺胞の過膨張はなどジストロフィン結合蛋白質の発現は Dp71あるい

肺毛細血管内皮細胞の血管透過性を亢進させることがはユートロフィンの存在に呼応し筋ジス犬 Purkinje

明らかとなっており，これには機械刺激に対するイオ

線維では保持されていた。これはジストロフィン欠損

ンチャネルの活性化と細胞内カルシウム濃度（［Ca ］i）の骨格筋および作業心筋で認められるジストロフィンの上昇が重要な因子であることが示唆されている。

264

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨

我々はこれまでに stretch‑activated cation channel

V4 マウス肺における温度および圧による Kf の上（SACC）を介したカルシウム流入と high peak inﬂa-

昇は TRPV4 マウス肺で著明に軽減し，TRPV4おtion pressure（PIP）ventilation に 対 す る 肺 血 管 透

よびその活性化経路を阻害することでも有意に軽減し過性亢進の関連を報告してきた。しかし，SACCの分た。Intravital microscopy法による摘出灌流肺の観子実体は未だ解明されていない。TRPV4は浸透圧や察にて肺膨張時の［Ca ］上昇を認め，TRPV4 マ

熱，機械刺激，4α‑PDD，epoxyeicosatrienoic acids

ウス肺および TRPV4阻害薬で［Ca ］の変化は消（EETs）など多くの刺激によって活性化するカルシ

失したことから，肺胞の伸展によりTRPV4を介したウム透過性チャネルであり，肺を含む多くの組織，細胞Ca 流入が生じたと考えられた。Point counting 法

で発現が認められる。本論文では TRPV4チャネルとによる組織学的な肺胞浮腫および血管周囲浮腫の定量

high PIP ventilation による急性の血管透過性亢進の化で，TRPV4 マウス肺の VILI が TRPV4 マウ

関連について検討した。

ス肺で有意に軽減したことが確認され，Kf の実験結【方法】マウス摘出灌流肺モデルを用いた。30，35，

果を裏づける結果であった。これらの結果から VILI

40℃の温度設定で９cmH O（Low PIP）または25，

における血管透過性亢進において TRPV4を介した細35cmH OPIP（High PIP）にて30分間の陽圧人工換気

胞内カルシウム流入による［Ca ］上昇が生じるこを行い，濾過係数（Kf）およびwet to drylung weightとから，TRPV4チャネルを介したカルシウム流入は

ratio（W /D ratio）を測定，血管透過性および肺障害

VILI における血管透過性亢進の主要な因子であるこを評価した。次にマウス摘出灌流肺を ﬂuo‑4，furaとが明らかとなった。

red で処理し intravital microscopy法にて［Ca ］i（論文審査の結果の要旨）の変化を観察した。また，glutaraldehyde 固定した

陽圧人工換気において過度の気道内圧の上昇，換気

マウス肺の肺胞浮腫（Vaf/Vas）および血管周囲カフ量の増加は肺障害を引き起こすことが報告されている。

形成（Vc/Vw）を point counting 法にて検討した。

この人工呼吸器関連肺障害において，種々のシグナル

またTRPV4のチロシンリン酸化についてwestern blot

伝達を担う細胞内カルシウムエントリーに寄与する伸法にて検討した。

展活性化型イオンチャネルの分子実体が TRPV4であ【結果】Wild type（TRPV4 ）マウス肺においてると仮定し，TRPV4が high pressure ventilation にhigh PIP ventilation は Kf を35℃で2.2倍，40℃でよる血管透過性亢進や肺胞の伸展によるカルシウム流は3.3倍に上昇させた。TRPV4 knock‑out マウス

入に関与するかについて検討した。

（TRPV4 ）を用いた実験では35℃，40℃の両方でその結果，濱中は次の結論を得た。

high PIP ventilation による Kf の上昇を認めなかっ

1) マウス摘出灌流肺において高い気道内圧，およびた。TRPV4チャネル阻害剤（ruthenium red）
，およ

高い温度により濾過係数（Kf）が上昇し，肺障害

び TRPV4活性化経路を阻害するアラキドン酸合成阻が増悪した。

害剤（methanandamide），チトクローム P450エポキ
シ化阻害剤（miconazole）は Kf の上昇を著明に軽減した。Ratiometric ﬂuorescence microscopyを用いた実験で，肺の膨張によりカルシウム流入が生じ，こ2) TRPV4ノックアウトマウス肺において，上記の肺障害が軽減した。
3) TRPV4およびその活性化経路の阻害薬を用いることで，同様に上記の肺障害が軽減した。

の反応が TRPV4 マウス肺や ruthenium red処理後

4) 病理組織学的に血管周囲のカフ形成および肺胞のの肺で消失した。Kf測定と同様の実験による人工呼吸

肺水腫を評価し，温度と圧による肺障害が TRPV4

器関連肺障害において，組織学的に point counting

ノックアウトマウス肺において著明に軽減した。

法による定量化で high PIP ventilationでの Vaf/Vas5) 肺胞の伸展によって細胞内カルシウム濃度の上昇

およびVc/VwはTRPV4 マウス肺においてTRPV4が起こり，TRPV4ノックアウトマウス肺ではこのマウス肺と比反応が消失した。

し各々48.6％，36.6％に減少した。

TRPV4のチロシンリン酸化は low PIP および high以上の結果より，TRPV4チャネルを介した細胞内

PIP ventilation で各々2.3倍，2.0倍と有意に上昇しカルシウム流入が高気道内圧による人工呼吸器関連肺

たが換気圧による有意差は認めなかった。

障害における重要な因子であり，人工呼吸器関連肺障【考察および結論】Kfを用いた肺障害の検討で，TRP‑

害を引き起こす伸展活性化型チャネルの分子実体であNo. 6, 2009265

審査学位論文要旨

ると考えられた。

完全に切離するために，頚部迷走神経も切断した。これ

本研究は，TRPV4チャネルを介した細胞内カルシ

らの除神経が完全であることを確認するために，フェウム濃度上昇が人工呼吸器関連肺障害の重要な因子でニレフリン（１‑３μg/Kg）やニトロプルシド（２‑あることを示し，TRPV4チャネルおよびその活性化

４μg/Kg）による血圧変動に際して，反射性交感神を阻害することが，治療の標的となりうる可能性を示

経活動が変化しないことを確認した。神経活動の計測したことより，主査，副査は一致して本論文を学位論

シグナルはオシロスコープ上でモニターするとともに，文として価値があるものと認めた。

元波形とともに整流波形ならびに積分波形を記録計に保存した。すべての実験が終了した際に，交感神経活

Baroreceptors mask sympathetic responses to high intraocular pressure indogs（眼圧亢進時の交感神経反応を圧受容
体がマスクする）
矢作

徹

動のゼロレベルを求めるために，節遮断剤である臭化
ヘキサメソニウムを投与して確認した。
【結果】眼圧を上昇させる前の対照群の平均血圧ならびに心拍数はそれぞれ117±14mmHg および178±21
回/分であり，除神経群では146±17mmHg ならびに
183±21回/分で，眼圧上昇前の平均血圧は除神経群で（論文の内容の要旨）

有意に上昇していた。眼圧を30mmHg に上昇させて【背景と目的】緑内障は失明を起こす代表的疾患であも，対照群においては，平均血圧ならびに心拍数，さり，リスク要因として加齢などが指摘されており，高らにはそれぞれの交感神経活動（心臓，肝臓，腎臓，

齢化にともない今後ますますその頻度が増加するもの脾臓）には有意な変化が認められなかった。しかしなと思われる。さらに緑内障の患者の中には，交感神経

がら，除神経群においては，眼圧上昇に際して１分後系の障害が合併することも報告されている。一方，加に平均血圧は161±14mmHg と有意に上昇したが，齢にともなう圧受容器反応の障害が，神経循環調節系

心拍数には有意差は認められなかった。交感神経活動の高血圧症の発症メカニズムの１つとして以前から知においては，この除神経群において腎臓交感神経活動られている。しかしながら，眼圧上昇による神経循環は眼圧上昇40秒後に169±14％と対照群に比べて有意

調節系の影響については動物実験においてさえこれまに増加した。また，心臓交感神経活においても眼圧上で検討されていない。そこで，本研究では眼圧上昇に昇後１分では158±12％と対照群に比べて有意な増加

際して交感神経系がいかなる反応様式を示すかについを認めた。しかしながら，肝臓交感神経活動や脾臓交て，圧受容器の関与とともに，麻酔したビーグル犬に感神経活動には除神経群においても対照群と比 しておいて検討した。

有意差は認められなかった。

【方法】ビーグル犬（体重11〜13Kg）をペントバル【考察およびまとめ】本研究では，眼圧亢進に際してビタール（25mg/Kg，i. v.）で麻酔し，ポリエチレ

全身に起こる交感神経活動が如何なる反応を示すかに

ンカテーテルを大腿動脈から挿入して体血圧を測定し，ついて，麻酔したビーグル犬の眼圧を30mmHg（２

心電図の第Ⅱ誘導のＲ波をトリガーして心拍数を計測

分間）に上昇させて検討した結果，圧受容体を温存しした。眼圧を測定するために，21G のテフロンチュー

た対照群では，それぞれの計測項目において，有意なブを後角部分近くから眼内に挿入留置して，眼圧操作変化を認めなかったが，神経循環調節に関与する圧受（30mmHg，２分間）による眼圧変化を計測した。ま

容体を完全に切断した除神経群においては，眼圧上昇

た，交感神経活動の測定のために，左後腹膜経由で腎に際して，体血圧さらに心臓交感神経活動，腎臓交感臓，脾臓や肝臓神経に到達し，測定用の炭素繊維双極神経活動が有意に上昇し，肝臓交感神経活動や脾臓交電極を装着し，心臓交感神経については，左開胸して感神経活動には有意な変化を認めなかった。このよう

星状神経節を確認して頸部交感神経鎖から分枝して心な結果から，正常では眼圧上昇時には，圧受容体によっ臓に接近する神経を剥離し電極を装着した。それぞれて心臓交感神経や腎臓交感神経活動の反射性亢進は抑の交感神経活動はバースト波形が存在することによっ制されていることが示唆され，圧受容体が機能しないて確認した。さらに，圧受容器の影響を除外するため状態では，心臓のポンプ作用の増強，腎臓などの抵抗に，両側の総頚動脈分岐部および大動脈弓の線維性組

血管の収縮によって，血圧が上昇するものと考えられ織をすべて剥離・切離して除神経し，大動脈弓神経をた。以上より，高齢者で循環調節系異常をともなう緑266

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨

内障患者においては，治療として抗アドレナリン剤のとして価値があるものと認めた。

点眼や，緑内障合併高血圧症に際して，抗アドレナリン剤などの抗高血圧薬の適応の妥当性が示唆された。
（論文審査の結果の要旨）
緑内障は失明を起こす代表的疾患であり，リスク要因として加齢などが指摘され，高齢化にともなって今Diﬀerential roles of peripheral and spinal
endothelin receptors in the micturition
reﬂex in rats（ラット排尿反射における末梢・脊髄のエンドセリン受容体の役割）

後ますますその発症頻度が高くなるものと思われる。

小さらに緑内障の患者の中には，交感神経系の障害が合併することも報告されている。しかし，これまで眼圧

川

輝

之

（論文の内容の要旨）の上昇に際して引き起こされる神経循環調節系の役割

背景と目的：脊髄損傷や膀胱出口閉塞などに伴う膀については動物実験においてさえ検討されてきていな

胱の不随意収縮や間質性膀胱炎に伴う膀胱痛は求心性い。

神経の一つであるＣ線維の亢進が一部関与しているとそこで本研究では，ビーグル犬をペントバルビター

考えられている。これらのＣ線維の亢進を抑制するこルで麻酔した後，体血圧ならびに心拍数を計測し，眼とが，難治性である膀胱の不随意収縮や膀胱痛の治療

圧を30mmHg，２分間上昇させ，腎臓交感神経，脾方法となる可能性が考えられる。内因性血管収縮物質

臓交感神経や肝臓交感神経さらに心臓交感神経活動をであるエンドセリン‑１（ET ‑1）には ET と ET 二

同時に測定し，さらに，圧受容器の影響を除外するたつの受容体がある。ウサギ膀胱平滑筋の等尺張力試験

めに，両側の総頚動脈分岐部ならびに大動脈弓周辺のにおいては ET‑1投与により持続的収縮が認められ，線維性組織をすべて剥離して切離し，大動脈の除神経

また免疫染色でエンドセリン様活性は平滑筋や上皮細を行うとともに，頚部で迷走神経も切断して，眼圧の胞，血管内皮においても確認された。さらにラットの上昇にともなう各神経活動の変化を検討した。

後根神経節や末梢神経においてもＣ線維の一部にエン

その結果，以下の結論を得た。

ドセリン受容体の発現が免疫染色で確認され，ET ‑1

１．対照群において，眼圧を30mmHg に上昇させてとＣ線維の関連が示唆されている。今回我々はラット

も，平均血圧ならびに心拍数，さらにはそれぞれのの排尿反射において ET‑1の膀胱内投与および脊髄腔

交感神経活動には有意な変化が認められなかったが，内投与に対する効果とその受容体の役割について検討

除神経群では，眼圧上昇に際して平均血圧は有意にした。

上昇したが，心拍数には有意差は認められなかった。

対象と方法：対象は正常およびカプサイシンの前投２．除神経群において，RNA は眼圧上昇で対照群に

与 に よ り Ｃ 繊 維 を 脱 感 作 し た Spraque‑Dawley雌比べて有意に増加した。また，CNA においても眼ラットとした。ウレタン麻酔下に膀胱内圧測定を施行。

圧上昇後に対照群に比べて有意な増加を認めた。一

正常群およびカプサイシン前処置を行ったラットに対方，HNA や SpNA には対照群と比し ET‑1を膀胱内注入しその効果を検討した。また正して有意な差は認められなかった。

常ラットに対しては ET‑1の脊髄腔内投与に対する効

本研究により，眼圧が上昇した場合，正常では圧受

果についても検討した。また，ET ‑1の膀胱内または

容体によって CNA や RNA の反射性亢進が抑制され，脊髄腔内投与による膀胱内圧の変化が，エンドセリン

さらに，圧受容体が機能しない状態では，心臓のポン受容体拮抗薬およびオピオイド受容体拮抗薬により抑プ作用の増強，血管抵抗系から主に構成される腎臓な制されるか検討を行った。

どの抵抗血管の収縮を介して血圧が上昇するものと推結果：ET‑1の膀胱内投与は用量依存性に排尿反射測された。一方，眼圧上昇にともなう循環系応答には，を誘発し，10μM 濃度の膀胱内投与で排尿間隔を有容量血管系（肝臓，脾臓）などの収縮による血圧上昇

意に減少させた（コントロール値の38％）。この排尿に関与することは少ないものと考えられた。

反射の誘発はカプサイシ ン 前 投 与（125mg/kg，s.

以上のことから，緑内障の治療として抗アドレナリc. ）あるいは ET 受容体拮抗薬である ABT‑627の投ン剤の点眼や，緑内障合併高血圧症に際して，抗アド与（0.1mg/kg，i. v. ）により有意に抑制された。しレナリン剤などの抗高血圧薬の適応の妥当性が示唆さかしながら ET 受容体拮抗薬である A‑192621の投与れた。よって主査，副査は一致して本論文を学位論文（１，10mg/kg，i .v. ）では ET‑1誘発の排尿反射亢

No. 6, 2009267

審査学位論文要旨

進は抑制されなかった。一方，ET ‑1の脊髄腔内投与抑制された。

は排尿反射を抑制し，50fmol の投与で有意に排尿反3) ET‑1排尿反射の誘発は ET 受容体拮抗薬である射を抑制した（コントロール値の219％）。この ET‑1

A‑192621の投与（１，10mg/kg，i. v. ）では抑制

による排尿反射の抑制は，ET 受容体拮抗薬 ABT ‑

されなかった。

627の高濃度投与（10mg/kg，i. v. ）またはナロキソ

4) ET ‑1の脊髄腔内投与は排尿反射を抑制し，50

ン10μg の脊髄腔内投与により抑えられたが，ET 受

fmol の投与で有意に排尿反射を抑制した（コント

容体拮抗薬の投与（10，30mg/kg，i. v. ）では抑え

ロール値の219％）。

られなかった。

5) ET ‑1脊髄腔内投与による排尿反射の抑制は，

考察：ラット排尿反射において，膀胱レベルでは

ET 受容体拮抗薬 ABT‑627の高濃度投与（10mg/

ET‑1投与で排尿反射が誘発された。このメカニズム

kg，i.v. ）またはナロキソン10μg の脊髄腔内投与はカプサイシン感受性Ｃ線維内にある ET 受容体をにより抑えられた。

介しているものと考えられた。また，脊髄レベルにお6) ET‑1脊髄腔内投与による排尿反射の抑制は ET

いては ET‑1投与により排尿反射は抑制された。この受容体拮抗薬の高濃度投与（10，30mg/kg，i. v. ）メカニズムは ET 受容体を介したものであり，またでは抑えられなかった。

オピオイド経路の一部を介しているものと考えられた。

以上より，ラット排尿反射において ET‑1膀胱内投

結論：エンドセリン受容体とくに ET 受容体は膀

与で排尿反射が誘発された。このメカニズムはカプサ

胱の求心性線維の亢進を調節する役割が認められた。

イシン感受性Ｃ線維内の ET 受容体を介しているも従ってエンドセリンの膀胱内注入はＣ線維の亢進によっのと考えられた。また，脊髄レベルにおいては ET‑1て引き起こされる排尿反射誘発の有効なモデルと考え投与により排尿反射は抑制された。このメカニズムはられた。また膀胱における ET 受容体の抑制は様々

ET 受容体を介した反応であり，またオピオイド受容な病態によって引き起こされる排尿筋過反射や間質性体の一部を介しているものと考えられた。

膀胱炎などの膀胱痛に対して有効である可能性が考えられた。

すなわちエンドセリンの膀胱内注入はＣ線維の亢進によって引き起こされる排尿反射誘発の有用な動物モ（論文審査の結果の要旨）

デルであり，また ET 受容体拮抗薬は排尿筋過反射

膀胱および一次ニューロンにおいてエンドセリンおや間質性膀胱炎の治療薬として臨床応用される可能性

よびエンドセリン受容体の発現が認められ，エンドセがある。以上から，主査，副査は一致して本論文が学

リン‑１（ET‑1）は等尺張力試験でも膀胱平滑筋の収位論文として相応するものと認めた。

縮を認めた。排尿反射においてエンドセリンは何らかの役割があると考えられる。そこで小川らはエンドセ
リンの膀胱・脊髄に対する役割について，ウレタン麻酔下に膀胱内圧測定を施行し検討した。⑴ 正常群およびカプサイシン前処置を行ったラットに対し ET‑1
を膀胱内注入しその効果を検討した。⑵ ET‑1の脊髄腔内投与に対する膀胱内圧の効果を検討した。⑶ ET‑
1の膀胱内または脊髄腔内投与による膀胱内圧の変化
が，エンドセリン受容体拮抗薬およびオピオイド受容体拮抗薬により抑制されるか検討を行った。
その結果以下の成績を得た。
1) ET‑1の膀胱内投与は用量依存性に排尿反射を誘Polycomb complexes regulate cellularsenescence by repression of ARF in cooperation with E2F3（ポリコーム複合体は E2F3と協同して ARF の転写調節により細胞老化を制御する）
三木純（論文の内容の要旨）【背景と目的】細胞老化は様々なストレスにさらされた正常細胞に引き起こされるプログラムである。ポ
リコーム遺伝子産物（PcG）は胎生期には器官形成に，発し，10μM 濃度の膀胱内投与で排尿間隔を有意

成体期には p19 と p16に減少させた（コントロール値の38％）。

胞の定常性維持や発癌抑制に関与している。Class Ⅱ

2) ET‑1排尿反射の誘発はカプサイシン前投与（125の発現調節を介して，細PcG（Bmi1，M 33，Rae28，Mel18）の欠損マウス由mg/kg，s. c. ）あるいは ET 受容体拮抗薬である

来の線維芽細胞（M EFs）では，p19

ABT‑627の投与（0.1mg/kg，i.v.）により有意に増加し，細胞老化を起こすが，その分子機構は不明で

268

と p16

が

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨ある。本研究では，M el18欠損 MEFs を用いてこの欠損すると，ARF の発現抑制が解除され，p53が安分子機構を解析した。

定化し，細胞老化が促進されることが示された。この【方法】Mel18欠損，Mel18/ARF 欠損，Mel18/p53欠

p16/ARF の転写抑制には，class Ⅱ PcG（Ring1b，

損 MEFs を経代培養し，経時的に細胞数を算定した。

M el18）のゲノム部位への直接的な結合が関与してい細胞老化の判定は SA‑β‑Gal 染色により行った。低た。Ring1b と E2F3が複合体を形成していることか

血清，UV照射，VP16投与により惹起されるアポトー

ら，class Ⅱ PcG タンパク質複合体と E2F3は協同しシスの判定は ﬂowcytometryによる sub G0/G1測定て ARF の転写を調節し，細胞老化を制御しているとにより解析した。ARFやp53の遺伝子導入は，MSCV考えられた。

promoter レトロウイルスベクターにサブクローニン（論文審査の結果の要旨）グしたこれらの遺伝子をウイルス蛋白発現ベクターとポリコーム遺伝子産物（PcG）は p19と p16

ともに293T 細胞内にリン酸カルシウム法を用いて導の発現調節を介して，細胞の定常性維持や発癌抑制に入した。培養上清内のレトロウイルスを回収し，ポリ関与している。Class Ⅱ PcG（Bmi1，M 33，Rae28，

ブレン存在下で M EFs に感染させた。タンパクの発

M el18）の欠損マウス由来の線維芽細胞（MEFs）で現は免疫沈降とウエスタンブロットにより検討した。

は，p19 と p16

mRNA は半定量的な RT ‑PCR により評価した。ゲ

その分子機構は不明である。本研究では，Mel18欠損

ノム部位における蛋白結合はクロマチン免疫沈降法

M EFs を用いてこの分子機構を解析した。

（ChIP assay）で解析した。

が増加し，細胞老化を起こすが，

Mel18欠 損，M el18/ARF 欠 損，M el18/p53欠 損【結果】Mel18欠損 M EFs では，野生型 MEFs と比べ

M EFs を経代 培 養 し 経 時 的 に 細 胞 数 を 算 定 し た。

経代培養により増殖速度と細胞密度が低下した。野生SAβ‑Gal 染色により細胞老化を判定した。経代培養型と比べ，明らかに SA‑β‑Gal が強く染色された。

ストレス下での細胞周期に関連したタンパク発現の変低血清，UV 照射，VP16投与などのアポトーシス誘化を免疫沈降とウエスタンブロットにより，mRNA

導刺激では，M el18欠損 M EFs と野生型の間に差異発現を半定量的な RT‑PCR により解析した。Mel18/は認められなかった。経代培養により，Mel18欠損

ARF 欠 損，Mel18/p53欠 損 M EFs に ARF や p53遺MEFs の p19 ，p16

伝子をレトロウイルスベクター用いて導入し ARF/

，p53，p21，M DM 2の蛋白量は増加した。また，p19と p16の mRNA のp53経路の重要性を解析した。ゲノム部位における蛋転写量も増加した。一方，他の Class Ⅱ PcG（Bmi1，

白結合はクロマチン免疫沈降法（ChIP assay）で解Ring1b）の蛋白量は減少していたが，転写量には差析した。

異は認められなかった。E2F3aとE2F3bの蛋白量はほとんど変化がなかった。Mel18欠損MEFsでみられた

その結果，三木は次の結論を得た。
1) Mel18欠損 MEFs では，野生型 M EFs と比し細胞老化の促進は M el18/ARF 欠損 M EFs や Mel18/

経代培養により早期に増殖速度と細胞密度が低下し，p53欠損 M EFs では阻止され，ARF と p53をレトロ

SAβ‑Gal が強く染色された こ と よ り Mel18欠 損ウイルスにより導入すると再び細胞老化は促進した。

MEFs では細胞老化が促進していることが示唆さ

約20数 kb に わ た る 野 生 型 マ ウ ス p15

れた。

p16

/p19 /

ゲノム部位にはclass Ⅱ PcG（Ring1b，Mel18）2) Mel18欠損 M EFs では野生型 MEFs と比べ培養が結合していた。ARF promoter においては Ring1b

早期より p19 ，p16

，p53，p21，MDM 2の蛋の結合が顕著であり，p16promoterにおいてはRing1b

白量が増加しており，経代によりこれらの発現量がさと Mel18が同程度に結合していた。ARF promoter

らに 増 加 し た。ま た，p19

における Ring1b の結合は経代培養と M el18欠損によの転写量も増加した。M el18欠損 M EFs におけるる相乗効果で減弱した。E2F結合部位が存在するARF

細胞老化の促進に p19 ，p16

promoterにおける E2F3b結合も経代培養と Mel18欠ことが示唆された。

と p16の mRNAが関与している損による相乗効果で減弱した。ARF promoterにおけ

3) Mel18欠損 M EFs でみられた細胞老化の促進はる E2F3a 結合はほとんど認められなかった。細胞内Mel18/ARF 欠 損 MEFs や Mel18/p53欠 損 M EFs

で Ring1b は E2F3と複合体を形成していた。

では阻止され，ARF と p53をレトロウイルスによ【考察】他のポリコーム遺伝子産物と同様に M el18がり導入すると再び細胞老化は促進した。Mel18欠損

No. 6, 2009269

審査学位論文要旨

M EFs における ARF/p53経路の重要性が示唆されが用いられ，最近はPositron‑Emission Tomography

た。

（PET）も使用されるようになってきた。治療効果判

4) 約20数 kbにわたる野生型マウス p15
/p16

/p19

定や予後予測における画像学的判定の有効性について

ゲノム部位にclass Ⅱ PcG（Ring1b，Mel18）は悪性リンパ腫全体としてはいくつか報告されているが結合していた。ARF promoterにおいてはRing1bのが，ホジキンリンパ腫，非ホジキンリンパ腫に分けた結合が顕著であり，p16promoterにおいてはRing1b検討の報告は少ない。この論文では対象を化学療法とと M el18が同程度に結合していた。ARF promoter

放射線治療を行った非ホジキンリンパ腫の中高悪性度における Ring1b の結合は経代培養と Mel18欠損にリンパ腫症例に限定して CT/MRI/Ga‑67による画像

よる相乗効果で減弱した。

学的効果判定を行い，予後との関係を検討し，また効

5) E2F 結合部位が存在する ARF promoter におけ果判定時期についても考察した。対象は2000‑2003年

る E2F3b 結合も経代培養と Mel18欠損による相乗に化学療法と追加放射線治療を行った中高悪性度非効果で減弱した。

ホジキンリンパ腫33例で，男性12例，女性21例，年齢6) 細胞内で Ring1b は E2F3と複合体を形成していは20‑81歳（中央値64）であった。病理組織分類にはたことから，class Ⅱ PcG タンパク質複合体と E2World Health Organization Classiﬁcation を用い，

F3が２元複合体を構成していることが示唆された。

Diﬀuse large B‑cell lymphoma：26例，Peripheral

以上よりMel18が欠損すると，ARFの発現抑制が解T‑cell lymphoma：２例，Angioimmunoblastic T‑

除され，p53が安定化し，細胞老化が促進されること

cell lymphoma：２ 例，Extranodal T ‑/NK ‑cellが示された。このp16/ARFの転写抑制には，class Ⅱlymphoma：３例であった。Cotswolds修正Ann Arbor

PcG（Ring1b，M el18）と E2F3が２元複合体を形成

病期分 類 は Ⅰ 期：12例，Ⅱ 期：13例，Ⅲ 期：６ 例，

してゲノム部位へ直接的に結合し細胞老化を制御し

Ⅳ期：２例，IPIはLow risk：13例，Low‑Intermediateていると考えられた。重要な癌抑制機構である p16/

risk：15例，High‑Intermediate risk：２例，HighARF の転写調節におけるポリコーム遺伝子群の詳細

risk：３例，原発部位はワルダイヤ輪：12例，リンパな機能が解明されたことは重要な知見と思われ，主査，

節：８例，鼻腔副鼻腔：６例，甲状腺：３例，骨：３副査は一致して本論文を学位論文として価値があるも

例，軟部：１例，観察期間は4‑46カ月（中央値21）でのと認めた。

あった。単純/造影 CT はスライス厚５mm で撮影，
M RI は1.5T の spin‑echo 法で T1強調像，脂肪抑制

Relationship Between the Response to
Treatment and the Prognosis of Patientswith Aggressive Lymphomas Treated with
Chemotherapy Followed by Involved‑ﬁeld
Radiotherapy: Radiographic Assessment（中高悪性度非ホジキンリンパ腫に対する化
学療法＋追加放射線療法の治療効果と予後の関係：画像学的検討）佐々木茂（論文の内容の要旨）

T2強調像，造影 T1強調像を撮影，Ga‑67はクエン酸
ガリウム185MBq を投与後48‑72時間で撮影した。化
学療法は病期や IPI，腫瘍サイズを考慮し CHOP 療法を2‑6サイクル施行した。年齢や全身状態を考慮しCHOP 療法は50‑100％量で行った。化学療法後に浸潤 領 域（involved ‑ﬁeld）へ の 放 射 線 治 療30‑50Gy（１回線量1.5‑2Gy）を行った。画像による効果判定
は治療前，化学療法終了時および放射線治療終了時にCT，M RI，Ga‑67を施行した。CT，MRIによる治療効果判定には International Workshop to Standardize Response Criteria for Non‑Hodgkinʼs Lymphoma

悪性リンパ腫の予後予測因子の一つにInternationalを用いた。Ga‑67では治療前の病変部の集積と治療後

Prognostic Index（IPI）があり治療方針の決定にもの集積を比 することにより治療効果を判定した。生参考にされるが，IPI による予後予測には限界があり，存率の計算には Kaplan‑M eier 法を用い，生存率の画像診断による治療効果の判定結果も予後予測に重要

有意差は Wilcoxon 法で検定した。総治療後の結果はである。悪性リンパ腫の画像学的治療効果判定には従来：21例（64％），CompleteComplete Response（CR），MagneticResonance
Computed Tomography（CT）：７（21％），ProgresResponse unconﬁrmed（CRu）

Imaging（M RI），Gallium Scintigraphy（Ga‑67），：５（15％），２年累積生存は72％，
sive Disease（PD）

270

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨

２年無増悪生存率は63％であった。化学療法後の効

以上により，非ホジキンリンパ腫の治療後では，CT

果判定と無増悪生 存 と の 相 関 は Ga‑67で 認 め ら れや MRI より Ga‑67の方が効果判定に有用であり，ま（ｐ＝.009），CT（ｐ＝.75）や M RI（ｐ＝.19）で はた，化学療法と放射線治療を行った場合は，化学療法見られなかった。総治療後の効果判定と無増悪生存

後の Ga‑67の効果判定の方が予後に相関しているととの相関は CT（ｐ＝.15），M RI（ｐ＝.77），Ga‑67考えられた。したがって，主査，副査は一致して本論（ｐ＝.23）のいずれも見られなかった。中高悪性度非文を学位論文として価値があるものと認めた。

ホジキンリンパ腫に対して化学療法と追加放射線治療を行った場合，化学療法後に Ga‑67で集積が残存していると予後は不良である。
（論文審査の結果の要旨）
悪性リンパ腫の予後予測因子の一つにInternational
Prognostic Index（IPI）があり治療方針の決定にも参考にされるが，IPI による予後予測には限界があり，画像診断による治療効果の判定結果も予後予測に重要である。佐々木 茂は，化学療法と放射線治療を行った非ホジキンリンパ腫の中高悪性度リンパ腫症例でExpression of cyclins, p53, and Ki‑67 in
cervical squamous cell carcinomas: overexpression of cyclin A is a poor prognostic
factor in stage Ib and Ⅱ disease（子宮頸部扁平上皮癌におけるサイクリン，p53および
Ki‑67の発現：サイクリンＡの過剰発現は Ib
期およびⅡ期における予後不良因子である）
塩

原

茂

樹

，MagneticResonance
Computed Tomography（CT）（論文の内容の要旨）

Imaging（M RI），Gallium Scintigraphy（Ga‑67）【背景と目的】細胞の増殖は細胞周期の進行によってによる画像学的効果判定を行い，予後との関係を検討達成される。細胞周期の進行はcyclin，cyclin‑depend-

し，また効果判定時期についても考察した。対象は中

ent kinase（cdk）および腫瘍抑制遺伝子産物などの細高悪性度非ホジキンリンパ腫33例で，化学療法は病期

胞周期調節因子によって精密に制御されている。Cyclin

や IPI，腫瘍サイズ，年齢，全身状態を考慮し50‑100

D1，Ｅ，Ａおよび B1は細胞周期特異的に発現され，％量の CHOP 療法を２‑６サイクル施行した。化学

特定の cdk と複合体を形成し，これらが retinoblas-

療法後に浸潤領域（involved‑ﬁeld）への放射線治療

toma gene product などの基質をリン酸化することに30‑50Gy（１回線量1.5‑2Gy）を行った。画像による

よって細胞周期が進行する。一方，p53や cdk inhibi-

効果判定は治療前，化学療法終了時および放射線治療

tor などの腫瘍抑制遺伝子産物は cyclin/cdk の機能終了時に CT，MRI，Ga‑67を施行した。CT，MRIに拮抗して細胞周期進行を抑制する。多くの悪性腫瘍による治療効果判定には International Work-shop toにおいて cyclin/cdk の過剰発現と腫瘍抑制機能の消Standardize Response Criteria for Non‑Hodgkinʼs

失が報告されおり，またこれらの異常の幾つかは予後

Lymphoma を用いた。Ga‑67では治療前の病変部のに関連することも報告されている。子宮頸癌において集積と治療後の集積を比 することにより治療効果をは，進行期，リンパ節転移および基靱帯浸潤などの臨判定した。

床病理学的因子に加え成長因子やその受容体の過剰発

その結果，以下の成績を得た。

現，human papilloma virus（HPV）のタイプなどの

1) 総治療後の結果はComplete Response：21例（64

生化学的因子が予後因子として報告されている。当教％），Complete Response unconﬁrmed：７（21％），

室では子宮頸部扁平上皮病変において，細胞周期調節

Progressive Disease：５（15％）であった。

因子の過剰発現が性ステロイド受容体の欠如と関連す

2) ２年累積生存は72％，２年無増悪生存率は63％であった。

ることを報告したが，頸癌における細胞周期調節因子の予後因子としての意義は明らかではない。本研究で

3) 化学療法後の効果判定と無増悪生存との相関はGa‑は子宮頸部扁平上皮癌における細胞周期調節因子と臨67で認められ（ｐ＝.009），CT（ｐ＝.75）や MRI

床病理学的因子との関係を明らかにするため，cyclin（ｐ＝.19）では見られなかった。

（D1，Ｅ，Ａ，B1），p53，増殖マーカーとしての Ki‑

4) 総治療後の効果判定と無増悪生存との相関は CT67の発現を免疫組織学的に検討した。さらに細胞周期（ｐ＝.15），MRI（ｐ＝.77），Ga‑67（ｐ＝.23）の調節因子の発現の予後因子としての意義を解析した。

いずれも見られなかった。

【対象と方法】患者の同意のもとに得られた103例（IbNo. 6, 2009271

審査学位論文要旨

期56例，Ⅱ 期24例，Ⅲ 期18例，Ⅳ 期 ５ 例）の 子 宮 頚

現はリンパ節転移と同様に，Ib＋Ⅱ期の症例における部扁平上皮癌組織におけるcyclin（D1，Ｅ，Ａ，B1）

独立した予後因子である可能性が示唆されたことから，および p53の発現を免疫染色にて観察し，Ki‑67と比サイクリンＡの臨床応用の可能性が示唆された。

検討した。各症例の染色性は細胞 500 個あたりの陽（論文審査の結果の要旨）

性細胞率（positivity index，PI）として記載し，各細胞増殖は細胞周期調節因子の相互作用によって調染色と臨床病理学的因子の間の相関を Spearman の節されているが，細胞周期進行を促進する中心的な分順位相関によって検討した。加えて臨床病理学的因子

子がサイクリンである。本研究では子宮頸部上皮病変（腫瘍径，脈管侵襲，間質浸潤の深さ，基靱帯浸潤，リにおけるサイクリンの発現とその臨床病理学的意義を

ンパ節転移）とcyclin（D1，Ｅ，Ａ，B1），p53，Ki‑

明らかにするために，以下の実験を施行した。

67の過剰発現の予後因子としての意義を Cox 検定を

子宮頸部扁平上皮癌103例（Ib 期56例，Ⅱ期24例，用いて検討した。

Ⅲ期18例，Ⅳ期５例）におけるサイクリン D1，Ｅ，【結果】正常子宮頸部扁平上皮においては cyclin の発

Ａ，B1および p53の発現を免疫染色にて観察し，増現は傍基底細胞に散在性に観察され，cyclin D1，Ｅ

殖マーカーである Ki‑67と比およびＡの PI 値は５以下で cyclin B1の PI 値は10以

染色性は細胞500個あたりの陽性細胞率（positivity下であった。p53の発現は観察されなかった。頸部扁

index，PI）として記載し，各染色と臨床病理学的因

平上皮癌においてはこれらの発現は正常扁平上皮に比子の間の相関を Spearman の順位相関によって検討

べ増加し，Ib＋Ⅱ期（80例）では cyclin D1，Ｅ，Ａ，した。また臨床病理学的因子（腫瘍径，脈管侵襲，間B1および p53の過剰発現症例はそれぞれ13％，18％，

質浸潤の深さ，基靱帯浸潤，リンパ節転移）と上記因15％，10％および21％で，Ⅲ＋Ⅳ期（23例）ではそ子の発現の予後因子としての意義を Cox 検定を用い

れぞれ13％，39％，57％，44％および26％であって検討した。

た。Cyclin A の全症例の平均 PI 値は16.0であり，ま検討した。各症例のその結果塩原は以下の成績を得た。

た Ib＋Ⅱ期では13.3，Ⅲ＋Ⅳ期では25.1と両者の間

1) 正常子宮頸部の扁平上皮ではサイクリン D1，Ｅ，に有意差を認めたが，cyclin D1，Ｅ，B1および p53

Ａ，B1の発現は傍基底細胞に観察され，p53は陰性の PI 値においては Ib＋Ⅱ期とⅢ＋Ⅳ期との間に有意であった。

差は認められなかった。各種因子と Ki‑67との相関で

2) 子宮頸部扁平上皮癌においてはサイクリン D1，

は，Ib＋Ⅱ期で cyclin D1，Ｅ，Ａ お よ び p53と Ki‑

Ｅ，Ａ，B1および p53の過剰発現が観察された。

67との間に，またⅢ＋Ⅳ期でも cyclin D1，Ｅ，Ａ，

3) 頸癌の進行期別にみたサイクリン過剰発現症例のB1および p53と Ki‑67との間に正の相関を認めた。

頻度および平均 PI 値は，いずれのサイクリンでもIb＋Ⅱ期の症例において各種細胞周期調節因子と臨Ⅰ＋Ⅱ期よりⅢ＋Ⅳ期症例のほうが高い傾向にあり，

床病理学的因子との相関の検討を行ったところ，脈管

その傾向は特にサイクリンＡで顕著であった。

侵襲と cyclin D1の間に正の相関を，また脈管侵襲と

4) 子宮頸癌におけるサイクリン D1，Ｅ，Ａ，B1おKi‑67，間質浸潤の深さとp53，リンパ節転移とKi‑67，

よび p53の発現は増殖マーカーである Ki‑67と正の腫瘍径と p53との間に負の相関を認めた。Ib＋Ⅱ期に相関を示した。

おいて細胞周期調節因子，Ki‑67および臨床病理学的

5) 各因子発現と臨床病理学的因子との相関を検討し因子と予後の相関の検討を行ったところ，単変量，多たところ，脈管侵襲とサイクリン D1の間には正の変量解析ともにリンパ節転移陽性と cyclin A の過剰相関が認められ，脈管侵襲と Ki‑67，間質浸潤と発現が有意な予後不良因子であった。しかしながら，

p53，リンパ節転移と Ki‑67，腫瘍径と p53の間にⅢ＋Ⅳ期症例ではサイクリン A 発現と患者生存との間に有意な相関は観察されなかった。

は負の相関が認められた。
6) Ⅰ＋Ⅱ期症例でのリンパ節転移症例とサイクリン【結論】子宮頸部扁平上皮癌では cyclin D1，Ｅ，Ａ，

Ａ過剰発現症例は多変量解析の結果ともに有意な予B1が過剰発現されており，さらにこれらが Ki‑67 の後不良因子であった。Ⅲ＋Ⅳ期症例ではいずれの因発現と相関していたことから，サイクリンの過剰発現子でも有意差は観察されなかった。

が子宮頸部扁癌の活発な増殖能の獲得に深く関与してこれらの結果より，子宮頸部扁平上皮癌では各種のいる可能性が示唆された。さらに cyclin A の過剰発

サイクリンが過剰発現されており，これが子宮頸部扁272

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨

平上皮癌の活発な増殖に関与していると考えられた。

活性化し，脳内シスト数も減少した。トキソプラズマ

またⅠ＋Ⅱ期症例におけるサイクリンＡの過剰発現は感染後の脾樹状細胞における CD86の発現や IL‑12

独立した予後因子であったことから，サイクリンＡのp40産生は STAT6 マウスに比べ WT マウスで有意

臨床応用の可能性が示唆された。

に高かった。

以上より主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

【結論】以上の結果より，STAT6シグナルは抗原提示細胞の機能調節にもとづく CD8 Ｔ細胞の活性化に重要で，このことがトキソプラズマ感染後の脳内シス

STAT6 signaling is important in CD8 T
cell activation and defense against Toxoplasma gondii infection in the brain（STAT6シグナルはトキソプラズマ感染時の CD8 T 細胞の活性化と脳内における防御に重要である）金

東ト形成の抑制に関与していると考えられる。
（論文審査の結果の要旨）
IL‑12‑STAT4シグナルや IFN ‑γなどが関与する
Th1免疫応答はトキソプラズマ感染防御に重要な役割を果たしている。一方，Th2サイトカインである IL‑
4は Th1免疫応答を抑制するがトキソプラズマ感染防御におけるその役割は明らかでない。そこで金 東浩

浩

は IL‑4受容体シグナル伝達に関与する分子である（論文の内容の要旨）

STAT6のノックアウト（STAT6 ）マウスを用い【目的】トキソプラズマ（Toxoplasma gondii）はヒてトキソプラズマ感染防御における STAT6シグナル

トや動物に感染する細胞内寄生原虫で，妊娠初期〜中の役割を⑴ トキソプラズマ感染の程度を脳内シスト数

期に初感染すると胎児に重大な障害を与えることがあを数えることにより評価，⑵ 免疫防御反応を IFN‑γ

る。また，AIDS 患者など免疫力の低下したヒトではなどサイトカインの測定，および CD8 Ｔ細胞の細胞

脳髄膜炎などを発症し死にいたる場合もある。トキソ

毒性作用の測定，⑶ T 細胞の活性化を Anti‑CD25，

プラズマの感染防御に IFN‑γが重要であることは多‑CD62L を 用 い た FACS に よ る 測 定，⑷ 抗 原 提 示

くの研究により明らかにされているが，インターロイ

細胞による T 細胞の活性化を細胞移入実験，および

キン４（IL‑4）の役割についてはいまだ不明な点がDendritic cell（DC）成熟マーカーの検出により検討多い。本研究では，IL‑4シグナル伝達に関与する転した。

写因子である STAT6のトキソプラズマ感染後の免疫応答における役割について検討を行った。

その結果以下の成績を得た。
⑴ WT マウスに比べ，STAT6 マウス脳内に形成【方法，結果】トキソプラズマ感染防御におけるSTA-

されるシスト数は有意に多かった。

T6シグナルの役割をSTAT6ノックアウト（STAT6 ）⑵ WT マウスに比べ，STAT6 マウスの脳脊髄液

マウスと野生型（WT）マウスを用いて検討した。感中の IFN‑γ濃度およびCD8 Ｔ細胞からの IFN‑γ

染後28および56日目における脳内シスト数は WT マの産生は有意に少なかった。

ウスに比べ STAT6 マウスで有意に多かった。ト⑶ WT マウスに比べ，STAT6 マウスにおいて，

キソプラズマ抗原刺激による感染 STAT6 マウス

活性化した CD8 Ｔ細胞の割合は有意に低かった。

脳脊髄液および脾臓中の CD8 Ｔ細胞からの IFN‑γ⑷ WT マウスに比べ，STAT6 マウス CD8 Ｔ細の産生は WT マウス CD8 Ｔ細胞より有意に低下していた。CD25発現や細胞傷害性について比胞の細胞傷害性作用は有意に弱かった。

する⑸ STAT6 マウス脳内のシスト数は，感染 WT マと，STAT6 マウスの CD8 Ｔ細胞は WT マウス

ウスより分離した CD8 Ｔ細胞の移入により有意にに比べ機能が低下していた。感染した WT マウスのCD8 Ｔ細胞を STAT6 マウスに移入することにより脳内のシスト数は減少した。しかし，非感染 WT

減少した。
⑹ WT マウスに比べ，STAT6 マウス DC における CD86の発現は有意に弱かった。

マウスの CD8 Ｔ細胞を STAT6 マウスに移入して⑺ WT マウスに比べ，STAT6 マウス血清および，

も CD8 Ｔ細胞の活性化も脳内シスト数の減少も認め

脾細胞培養上清中の IL‑12の濃度は低下していた。

られなかった。WT マウスより採取した脾 Adherent

以上の結果より STAT6シグナルは抗原提示細胞のcell を STAT6 マウスに移入すると CD8 Ｔ細胞が機能調節にもとづく CD8 Ｔ細胞の活性化に重要であ

No. 6, 2009273

審査学位論文要旨

り，このことがトキソプラズマ感染後の脳内シスト形

用いて解析した。

成の抑制に関与していることが明らかとなった。した【結果】対象者657名の内，肺癌検診用の条件では6.4

がって主査，副査は一致して本論文を学位論文として％にしか気腫性変化を認めなかったが，１スライスの価値があるものと認めた。

HRCT を追加することによって23.3％に肺気腫を認めた。内 Subtle PE 12.2％，Mild PE 9.9％，

Utility of Single‑slice High‑resolution CT
in Upper Lung Field Combined with Low‑dose spiral CT for Lung‑cancer Screening
in the Detection of Emphysema（低線量肺癌 CT 検診において，上肺野１スライスの
HRCT を追加撮影することによる肺気腫検
出の有用性）畑山織

M oderate to Severe PE 1.2％であった。肺気腫を認めた症例の喫煙歴は有意に高頻度であり（喫煙歴あり：38.4％，非喫煙者：3.8％），気腫性変化の重症度は，年齢，喫煙歴および Brinkman index の増加と関連を示した。簡易呼吸機能検査で閉塞性換気障害を認めた者は，気腫を認めない non‑PE 群で0.19％に認められ，肺気腫群では3.92％に認められた。全
例男性で，１例を除き喫煙歴を有していた。１秒率

絵（FEV1/FVC）および最大呼気中間流量（MM EF）（論文の内容の要旨）

は，肺気腫を認めない群に比し，肺気腫を認める群に【目的】胸部低線量らせん CT に高分解能 CT（HR-

おいて有意に低値であり，FEV1/FVC，MMEFおよびCT）１スライス追加撮影することによる気腫性病変

V25/HTは肺気腫の重症度に伴い低値を示した。すなの検出力と呼吸機能との対比を目的とする。

わち，肺気腫の程度が進行するにつれて呼吸機能上，【対象と方法】肺癌検診にて鹿教湯三才山病院を受診

早期の閉塞性障害の指標や末梢気道の閉塞性障害を示し，本研究に同意が得られた664例を対象とした。対す指標が低下を示したことになる。喫煙歴を有する群

象者の平均年齢は51.3歳で，全例に自覚症状，既往歴，のみで解析でも，同様の結果であり，より結果が明確

治療歴，喫煙歴，飲酒習慣等のアンケートに回答してとなった。

もらい，全例に簡易呼吸機能検査を施行した。シング【結論】肺癌スクリーニング用低線量 CT 検査時に，

ルらせん CT（Asteion DUAL,Toshiba）を用い，肺上肺野の１スライス HRCT を加えることによって，癌検出のための撮影条件にて全肺野を10mm スライ

大幅に被爆線量を増やすことなく，気腫病変の検出

スで撮影した（tube current 20mA, X‑ray beam

感度は高まり，早期肺気腫を含め気腫病変のスクリー

width 10mm and helical pitch 3.5（bed travel rate

ニングに有効であると考えられ，この結果を禁煙指導

35mm/sec, radiation dose; 0.6〜0.7mSv））。さ らに繫げることが可能となる。また，CT によって検出に肺気腫の有無を検討するために，深吸気位で大動脈された PEは，喫煙と密接な関係にあり，将来 COPD

弓上縁付近の HRCT を追加撮影した（tube voltageに進展する可能性を示唆しており，早期発見，禁煙指120Kvp, tube current 200mA, X‑ray beam width 2

導が COPD の発症を抑制する可能性も示唆している。

mm, window level ‑800 HU and window width 900

しかし，気腫病変を伴わない COPD も存在するため，）。画像の評価は，二HU（radiation dose;6.1mSv）

COPD のスクリーニングにはスパイロメトリーも同

人の呼吸器科医がそれぞれ別々に読影を行い，肺気腫時に行う必要がある。

の程度を視覚的に評価し，肺野の低吸収域が肺野に占める割合（％ LAA）によって０％＜％ LAA（論文審査の結果の要旨）

５％

COPD（慢性閉塞性肺疾患）は主に喫煙を原因とすを Subtle PE，５％＜％ LAA 25％を Mild PE，25

る肺の炎症反応に基づく進行性の疾患で，緩徐に労作％＜％ LAA を M oderate to Severe PE と３つの肺性呼吸困難を生じる。肺気腫は慢性気管支炎とともに気腫グループに分類した。簡易呼吸器能検査はアメリ

COPD の原因疾患のひとつで，病理学的な概念で明カ胸部疾患学会の基準で校正された機器を使用し，①

らかな線維化を伴わず肺胞壁の破壊を伴ったものある。

非喫煙，所見なし（NS‑N group）② 喫煙経験者，2020年には全世界の死亡原因の第３位と予想される急所見なし（SM ‑N group）③ Subtle PE ④ M ild PE

激に増加している疾患で，日本人の COPD 有病率は⑤ Moderate〜Severe PE の各群について喫煙指数，

8.6％，患者数は530万人と推定された。しかし2005

年齢，呼吸機能を統計用ソフト Stat Flex ver.5.0を年の COPD 患者数は約22万３千人，COPD であるの

274

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨に受診していない人は500万人以上いると推定される。
多くの人々が，COPD であることに気づいていない，
または正しく診断されていないことになる。畑山は人間ドッグにおける肺癌検診目的の胸部低線量らせん
CT に高分解能 CT（HRCT）１スライス追加撮影することによる肺気腫の検出力と呼吸機能検査結果との対比，検討を行った。
その結果，以下の成績を得た。
1) HRCT の上肺野への追加撮影による肺気腫検出率657例中153例，23.3％と低線量のみ6.4％と比し，Endogenous α‑calcitonin gene‑related peptide mitigates liver ﬁbrosis in chronic
hepatitis induced by repeated administration of concanavalin A（内因性 αカルシト
ニン遺伝子関連ペプチドはコンカナバリンＡ連続投与による慢性肝炎における肝線維化を
緩和する）
神

吉

昭

子

優位に検出率が上昇した。肺気腫を CT にて検出す（論文の内容の要旨）

るには，CT の撮影条件，表示条件の設定変更を行【背景と目的】αカルシトニン遺伝子関連ペプチドう必要がある。

（αCGRP）は，カ ル シ ト ニ ン 遺 伝 子 の alternative2) 肺気腫中93.5％は喫煙経験者（現喫煙者＋既喫

splicing によって作られる37個のアミノ酸からなるペ煙者）で，喫煙と肺気腫発症の関連が証明できた。

プチドであり，神経系や血管などに広く分布し，血管3) COPD 有病率は657例中７例，1.07％と低く，呼拡張作用やカプサイシン感受性神経の神経伝達物質と吸機能検査のみでの早期 COPD のスクリーニング

しての役割など，多彩な生理作用を有するペプチドでは困難と思われた。肺気腫が COPD に進展するのある。カプサイシン感受性神経が肝保護作用に関与すか今後検討が必要であるが，禁煙による COPD 進

ること，αCGRPが炎症性サイトカインの分泌に関わる展への動機付けに有用であろう。

ことなどが報告されているが，肝臓における αCGRP

4) 喫煙歴，肺気腫重症度に応じて呼吸機能検査ではの病態生理学的意義は明らかになっていない。我々は，一秒率，呼気最大中間流量で有意差があり，末梢気

カルシトニン‑αCGRP 遺伝子配列のうち，αCGRP

道閉塞を示唆する指標が肺気腫重症度と相関し，早特異的なエクソン５のみを欠損させることで，カルシ

期 COPD を検出可能な指標として今後有用と考えトニンは正常に発現し，αCGRP のみ特異的に欠損すられた。

るノックアウトマウスを樹立している。これまでに，

以上より，肺癌検診目的の胸部低線量 CT に１ス

αCGRP ノックアウト（αCGRP‑/‑）マウスを用い

ライス HRCT を上肺野に加えることで，今後増加すた急性肝炎モデルの実験により，内因性 αCGRP が，ると予測される早期 COPD の原因のひとつである肺抗アポトーシス作用や炎症反応の制御により肝保護作

気腫を検出することが可能となった。また，ドッグ受用を示すことを明らかにした。そこで，慢性肝障害に診者には肺気腫画像を示すことによって，視覚的における内因性 αCGRP の肝保護作用のメカニズムを

COPD のリスクを訴え，禁煙による COPD 発症予防

解明するため，コンカナバリンＡ（Con A）連続投与に寄与すると思われる。

による慢性肝障害モデルを作製し，αCGRP が肝疾患

これらの結果は臨床的に新知見であり，COPD おの新たな治療に有用な物質であるか検討した。

よび肺気腫の診療において有用と判断され，主査，副【方法】16週齢の雄 αCGRP‑/‑マウスとその野生型マ査は一致して本論文を学位論文をして価値があるもの

ウスを用いた。Con A を20μg/g‑体重で週１回（計と認めた。

８回）尾静注し，慢性肝障害モデルを作製した。Con
A 投与24時間後に採血して血清トランスアミナーゼを測定し，Con A 投与１週間後に肝臓のサンプリングを行った。肝臓の線維化はマッソントリクローム
染色，肝星細胞の活性化を α‑SMA免疫染色，アポトーシスをTUNEL染色により評価した。リアルタイ
ム PCR により，肝臓での遺伝子発現を定量した。細
胞実験は，初代培養肝星細胞を two‑step collagenase
perfusion 法により分離して用い，細胞増殖を BrdU

No. 6, 2009275

審査学位論文要旨

assayで評価した。

1) 肝障害の指標である血清トランスアミナーゼは，【結果】肝障害の指標であるトランスアミナーゼは，Con A 投与１週目で αCGRP‑/‑マウスで野生型よ野生型でCon A投与１，２週目で上昇するが，３〜８

り高値であり，４週目で野生型では見られなかった

週目では上昇が見られなかった。それに対してαCGRP

有意な上昇が見られた。

‑/‑マウスでは，１週目で野生型より高値であり，特2) αCGRP‑/‑マウスでは，肝臓への炎症細胞浸潤に４週目で野生型では見られなかった有意な上昇が見と肝星細胞の活性化が，野生型より早期に生じた。

られた。肝障害の経時変化を病理染色により観察した肝臓の線維化も，野生型より悪化していた。

ところ，αCGRP‑/‑マウスでは，肝臓への炎症細胞

3) αCGRP‑/‑マウスで，Con A 投与４週目で非実浸潤と α‑SM A 陽性の活性化肝星細胞が，２週目で質細胞のアポトーシスの有意な増加が見られた。

野生型より増加し，肝線維化は早期に生じ，悪化した。

4) Con A投与１週目で炎症性サイトカイン（IL‑6とまた，αCGRP‑/‑マウスで，４週目において非実質，４，８週目で線維化関連遺伝子（TGF‑
TNF‑α）細胞のアポトーシスの有意な増加が見られた。遺伝子

β1，collagenα1，TIMP‑1，MMP‑2）と接着分子

発現を比ICAM ‑1の発現が，αCGRP‑/‑マウスにおいて，

すると，αCGRP‑/‑マウスでは，Con A

投与１週目で炎症性サイトカイン（IL‑6，TNF‑α），

野生型より上昇していた。

４，８週目で線維化関連遺伝子（TGF‑β1，collagenα1，5) Con A 投与２週目のマウスより分離した初代培

TIM P‑1，M MP‑2）や炎症性の接着分子 ICAM ‑1の養肝星細胞は，肝星細胞の活性化を示す ICAM ‑1発現が，野生型より高かった。Con A投与２週目のマウの発現が αCGRP‑/‑マウスで上昇していた。また，スより分離した初代培養肝星細胞は，αCGRP‑/‑マ

初代培養肝星細胞で CGRP の受容体である CRLR

ウスで肝星細胞の活性化を示す ICAM ‑1の発現が上と RAMP1の発現を確認した。

昇していた。また，CGRP の受容体である CRLR と

6) ヒト活性化肝星細胞株 LI90は，外因性 αCGRPRAM P1の発現を肝星細胞において確認した。ヒト活

添加により細胞増殖が抑制された。LI90において性化肝星細胞株 LI90は，外因性 αCGRP 添加によりも，CGRP の受容体である CRLR と RAMP1の発細胞増殖が抑制された。

現を確認した。

【考察】内因性 αCGRP は，炎症反応，肝星細胞の活

これらの結果より，αCGRP は急性および慢性肝障性化と増殖，肝臓の線維化，非実質細胞のアポトーシ

害ともに，肝臓構成細胞（肝細胞，類洞内皮細胞，肝スなど多様な反応を制御し，抑制することにより，慢

星細胞）それぞれに作用し，かつ炎症反応を制御す

性肝障害における肝線維化を緩和すると考えられた。

ることで，肝障害を抑制することを明らかとした。

αCGRP は慢性肝障害の治療に有用な物質である可能

αCGRP は肝障害の治療に有望な物質である可能性が性が示唆された。

示唆された。よって，主査，副査は一致して本論文を（論文審査の結果の要旨）

学位論文として価値があるものと認めた。

αカルシトニン遺伝子関連ペプチド（αCGRP）は，多彩な生理活性を有するペプチドであり，肝臓においても CGRP 受容体の発現が認められているが，肝臓に お け る αCGRP の 病 態 生 理 学 的 意 義 は 明 ら か でない。これまでに，αCGRPノックアウト（αCGRP‑/‑）マウスを用いたコンカナバリンＡ（Con A）誘導急性肝炎モデルの実験より，内因性αCGRPが，抗ア

Extensor Tendon Rupture Associated with
Osteoarthritis of the Distal Radioulnar
Joint（遠位橈尺関節症を伴った伸筋腱皮下
断裂）
山

﨑

宏

ポトーシス作用や炎症反応の制御により肝保護作用を（論文の内容の要旨）示すことを明らかにしている。そこで，急性肝炎に加【緒言】遠位橈尺関節症では伸筋腱皮下断裂を発症す

えて慢性肝障害における内因性 αCGRP の肝保護作ることがある。本症の画像所見の報告として尺骨の遠用のメカニズムを解明するため，Con A の連続投与

位への突出，尺骨頭の背側脱臼，橈骨遠位の骨棘，関による慢性肝障害モデルを作製し，αCGRP が肝疾患

節造影での関節包断裂などがある。しかし伸筋腱皮下の新たな治療に有用な物質であるか検討した。

断裂を伴った遠位橈尺関節症の手関節のＸ線写真を定

その結果，神吉は以下の成績を得た。
276

量的に評価した論文はない。41例のＸ線写真を調査し，信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨

遠位橈尺関節症における伸筋腱皮下断裂の画像上の危険因子を明らかにした。

（論文審査の結果の要旨）
伸筋腱皮下断裂を伴った遠位橈尺関節症の手関節の【対象】患者は1987〜2005年に治療した伸筋腱皮下断

Ｘ線写真を，定量的に評価した論文はない。そこで著裂を伴った遠位橈尺関節症の37例41手であった。これ者は41例のＸ線写真を調査した。関節症の程度の評価

らの患者の手関節 X 線写真（正面像）を対象とした。

した。手関節正面像での計測を行い，画像上の特徴を【方法】（関節症の程度）Ｘ線写真での関節裂𨻶の狭定量的に評価した。反対側の手関節 X 線写真（非断小化，軟骨下骨の硬化，骨棘，小骨などを参考にnone裂群）と比 することで，腱断裂の危険因子を明らか

０，doubtful ⑴，minimal ⑵，moderate ⑶，severeにした。

⑷の５段階に分類した。

その結果以下の結果を得た。

（手関節正面像での計測）Ｘ線写真での各計測値を第1) 関節症の程度は，断裂群で有意に高かった。

３中手骨長で割って％で示した。計測は最小単位を１2) 断裂した腱の数と関節症の程度に相関はなかった。

mm とした。

3) 他の関節では，関節症の程度に有意差はなかった。

（比4) 手関節正面像での計測では，carpal‑ulnar distance，）伸筋腱断裂側のＸ線写真を断裂群，反対側のX線写真を非断裂群として，関節症の程度および計測

radio ‑ulnar separation，minimum radius width

値を比 した。

が有意に小さく，anterior to posterior margin dis-

【統計学的手法】両群間の関節症の程度についてはchi‑tance of the sigmoid notch，sigmoid notch widthがsquared test を，計測値についてはM ann‑WhitneyU

有意に大きかった。

test を用いた。

以上より，１）関節症が重度だと腱断裂の危険が増【結果】（関節症の程度）断裂群では１例以外全てにすこと，２）画像上の特徴は，広く深く背側傾斜した

moderate ⑶以上の関節症を認めた。非断裂群に比べ尺骨切痕と，尺骨の橈側偏位であること，が証明されて，有意に関節症の程度は高かった。

た。したがって主査，副査は一致して本論文を学位論（手関節正面像での計測）断裂群での画像上の特徴は文として価値があるものと認めた。

広く深く背側傾斜した尺骨切痕，尺骨の橈側偏位であった。手根骨長の減少や手根骨の尺側偏位はなかった。
尺骨頭の形状を表す値には有意差がなかった。
【考察】伸筋腱皮下断裂の危険因子は⑴ 関節症の程度の増悪，⑵ 広く深く背側傾斜した尺骨切痕，⑶ 尺骨の橈側偏位であった。このような変化は，遠位橈尺関
節を構成する，尺骨頭の関節面と尺骨切痕の関節面背側が摩耗するからであると思われる。
関節リウマチにおける伸筋腱皮下断裂の危険因子に，Anatomical and histopathological correlates of the dermoscopic patterns seen inmelanocytic nevi on the sole:A retrospective study（足底色素細胞母斑におけるダー
モスコピー所見とその解剖学的・病理組織学
的成因についての後向き研究）宮嵜敦

広く深い尺骨切痕（Scallop sign）が知られている。

（論文の内容の要旨）

本症においても Scallop sign が危険因子であった。

【背景と目的】光の乱反射を防止したうえで，皮膚病

断裂側の手関節に有意に関節症性変化が強いことから，

変を拡大して観察するダーモスコピー dermoscopy

Scallop sign は関節症性変化の程度を反映していると（以下 DM S と略記）は皮膚科領域に近年，導入され思われる。

た非侵襲的な新たな診断法であり，とくに色素性皮膚

断裂群では手根骨の配列異常はなかった。遠位橈尺

病変の診断確定における有用性が明らかにされている。

関節症は他の手根関節の変形を伴わず独立して進行す

日本人における悪性黒色腫の好発部位は掌蹠であり，ると思われる。

その中でも足底が最好発部位であって，全悪性黒色腫

この研究の限界として，側面像での尺骨頭脱臼の評の30％程度がここに生じる。しかし，掌蹠には良性価を行ってないことがある。我々の症例の約半数しか病変の色素細胞母斑も頻繁にみられ，悪性黒色腫の早正確な側面像が撮影されておらず，後ろ向き研究の限期病変との鑑別でしばしば問題を生じる。信州大学皮界であった。

膚科の研究グループは掌蹠の悪性黒色腫と色素細胞母斑が，それぞれ特徴的な DMS所見を呈し，両者のNo. 6, 2009277

審査学位論文要旨

鑑別にきわめて有用なことを見出した。掌蹠では皮に認められた。すなわち DM S パターンの如何を問わ野（皮溝，皮丘）が平行線状に走行するが，悪性黒色

ず，表皮内における母斑細胞の存在部位は皮溝下部の腫は早期病変の段階から，この皮丘部に一致する帯状

表皮突起部である点で同一であることが示された。興の色素沈着を呈することを明らかにし，この所見を味深いことに，皮野に垂直方向に切り出した組織標本

parallel ridge pattern（PRP）と名付けた。これに対において，FP を呈した全ての母斑病巣で角層が斜めし，掌蹠の母斑の基本的なDMS所見は，皮溝に一致す

方向へのズレを示す所見が見出された。この角層のズる平行線状の色素沈着であることを見出し，parallel

レは PFP や LLP を呈する母斑ではほとんど認めら

furrow pattern（PFP）と名付けた。さらに，病理組れなかった。この角層のズレは主として体重負荷によっ

織学的検索により，PRP と PFP が表皮内におけるて生じるものと考えられ，このズレによって FP の所

メラノサイト（母斑細胞）の増殖部位の違いを反映す

見が説明できることを明らかにした。以上，本研究にることも見出した。掌蹠の母斑は DM Sにて PFP以外

よって足底の色素細胞母斑の主要な DM S 所見の成因に，格子状の色素沈着を呈する lattice‑like patternは病変の存在部位の解剖学的特徴と２次的な角層のズ（LLP），あるいは皮溝・皮丘を斜めに横切る方向に微レによって説明できることが明らかにされた。

細な線状色素沈着を呈するﬁbrilllar pattern（FP）も（論文審査の結果の要旨）

かなり高率に呈するが，これらのDMSパターンの成因

ダーモスコピー（dermoscopy：以下 DMS と略）は不明であった。今回の研究目的は，これらの DM Sとは，光の乱反射を防止したうえで，皮膚病変を拡大パターンの成因を解明することである。

して観察する非侵襲的な診断法であり，色素性病変の【方法】１）1995年から2001年までに信州大学皮膚科

診断決定，鑑別に有用であり，とくに掌蹠の色素細胞を受診した上述の定型的な DMS パターンを呈した足母斑と悪性黒色腫の鑑別にはとくに有用なことが明

底 の 色 素 細 胞 母 斑298病 巣（FP131例，PFP103例，らかにされている。掌蹠の色素細胞母斑の基本的な

LLP64例）についてその発生部位をプロットし，解剖DM S 所見は，皮溝に一致する平行線状の色素沈着で学的分布を検討した。２）各 DMS パターンを呈するあり，parallel furrow pattern（PFP）と呼ばれる。

色素細胞母斑35病巣（FP18例，PFP14例，LLP3例）

この他に，格子状の色素 沈 着 を 呈 す る lattice‑likeについて切除生検を施行し，皮溝・皮丘に垂直方向に

pattern（LLP），あるいは皮溝・皮丘を斜めに横切る

切り出して作製した病理組織標本にて病理組織学的検

方向に微細な線状色素沈着である ﬁbrilllar pattern

討を加えた。

（FP）も認められる。宮嵜らは，これらのDMSパター【結果と考察】LLP を呈する母斑の大多数は土踏まずンの成因を解剖学的・病理組織学的に解明することを部に存在し，残りは足底の辺縁部に存在することが明目的に⑴ FP，PFP，LLP の３パターンを呈する色

らかにされた。これらの部位では皮野が格子状を呈す

素細胞母斑の解剖学的分布を検討するとともに，⑵ 各るので，LLP はこの皮溝部に一致する色素沈着としDM S パターンの色素細胞母斑を病理組織学的に検討て理解することができる。他方，PFP と FP を呈すした。

る母斑のほとんどは，皮野が平行線状を呈する部位にその結果以下の成績を得た。

存在していたが，両者の分布には差異がみられた。す1) 足底の母斑298病巣の解剖学的分布を検討したと

なわち，FP を呈する母斑の大多数（131病巣中94病

ころ，PFPとFPを呈する母斑のほとんどは，皮野が巣）は足底のうちで体重負荷を直に受ける部分に存在

平行線状に走行する部位に存在していた。一方，LLP

するのに対し，PFP を呈する母斑の多くは（103病巣を呈する母斑の大多数は土踏まず部に存在し，残り中63病巣）体重負荷が比 的かからない部位に位置す

は足底の辺縁部にみられた。

ることが明らかにされた。これら各 DMS パターンを

2) FPを呈する母斑の大多数（131病巣中94病巣）は呈する母斑の足底における存在部位には有意差が認め足底のうちで体重負荷を直に受ける部分に存在するられた。また，各 DM S パターンを呈する色素細胞母のに対し，PFP を呈する母斑の多くは（103病巣中斑35病巣の病理組織学的検討にて，PFP を呈する母63病巣）体重負荷のかからない部位に位置していた。

斑14病巣中14病巣，LLP を呈する母斑３病巣中２病3) 各 DM S パターンを呈する色素細胞母斑35病巣の巣，FP を呈する母斑18病巣中15病巣において，母斑

病理組織学的検討では，PFP を呈する母斑14病巣

細胞の胞巣が主として皮溝下部に位置する表皮突起部

中14病巣，LLP を呈する母斑３病巣中２病巣，FP278

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨を呈する母斑18病巣中15病巣において，母斑細胞のWestern blotting 法，免疫染色法などによって検討

胞巣が主として皮溝下部に位置する表皮突起部に存した。

在することが明らかにされた。

【方法と結果】掌蹠部と非掌蹠部の皮膚病変の手術・

4) 皮野の方向に垂直に切り出した組織標本において，生検による摘出材料周囲の正常皮膚を用いて実験を行っ

FP を呈した全ての母斑病巣で角層が斜め方向へのた。最初に表皮剥離 dopa（dihydroxyphenylalanine）

ズレを示す所見が見出された。

法と電子顕微鏡を用いて，掌蹠部と非掌蹠部のメラノ

以上より DM S パターンの如何を問わず，病理組織

サイトの数と形態について観察した。表皮剥離 dopa

学的に表皮内における母斑細胞の存在部位は皮溝下部

染色像では，メラノサイトの密度は非掌蹠部に比べての表皮突起という点で同一であることが示された。

掌蹠部表皮ではわずかに低下していた。電子顕微鏡

FP では病理組織学的に角層のズレが認められ，これによる観察では，非掌蹠部皮膚に比べて掌蹠部皮膚は PFP や LLP を呈する母斑では認められなかった。

のメラノサイトの細胞質にはメラニン化した成熟メラノ

この角層のズレは主として体重負荷によって生じるもソームはほとんど認められないが，in vitroでdopa反のと考えられ，このズレによって FP の所見が説明で応処理を加えると dopa 陽性の未成熟なメラノソーム

きることを明らかにした。LLP を呈する母斑は皮野が検出できた。このことは掌蹠のメラノサイトはチロが格子状を呈する部分に多く，その皮溝部に一致する

シナーゼ活性を有しているものの，in vivo では何ら色素沈着として理解することができる。以上，足底のかの理由でメラノソームのメラニン化が阻止されてい色素細胞母斑の主要な DM S 所見の成因は病変の存在ることを示唆する。以上のことから，掌蹠部皮膚が低部位の解剖学的特徴と２次的な角層のズレによって説色素である理由はメラノサイトの細胞密度の差異では明できることが示された。本研究は以上のような新知なく，個々のメラノサイト内でのメラニン化したメラ

見を明らかにしたものであり，主査，副査は一致してノソームの産生減少によるものと考えられた。掌蹠部

本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

表皮のメラノサイトの機能が低下しているかを調べるためにメラニン色素生成の鍵酵素である tyrosinase

Downregulated melanogenic paracrine
cytokine linkages in hypopigmented palmoplantar skin（メラニン化にかかわるサ
イトカインのパラクライン機構の抑制が掌蹠
皮膚の低色素状態に関与する）
長谷川

淳

一

（論文の内容の要旨）の免疫染色法を行ったところ，tyrosinase 陽性のメラノサイトの数は，非掌蹠部に比べて掌蹠部表皮では明らかに減少していた。さらにメラニン生成の調節に中心的な働きをしている，ケラチノサイトもしくは線維芽細胞由来のサイトカインとその受容体である ET ‑1/ETBR linkageおよびSCF/c‑KIT linkageについて，
掌蹠部と非掌蹠部皮膚における発現量を real time
RT‑PCR 法，Western blotting 法および免疫染色法【背景と目的】人間の掌蹠（手掌と足底）の皮膚が他を用いて比の部位と比べて低色素であるのは上皮間葉系相互作用

real time RT ‑PCR 法では，掌蹠部皮膚（表皮と真によるもので，真皮線維芽細胞由来の，Wnt シグナ

皮）は非掌蹠部皮膚に比べて明らかに低下していた。

ル経路を抑制する dickkopf1の作用による，という研ETBR の発現は real time RT ‑PCR 法では ET ‑1の究論文が近年，発表された。一方で最近，表皮ケラチ

結果と同様に掌蹠部で発現が低下しており，免疫染色

ノサイトなどがメラニン生成に関与するサイトカイン法における ETBR 陽性メラノサイトの数は非掌蹠部を産生し，これが皮膚色の決定に重要な役割をしていに比べて掌蹠部で有意に減少していた。掌蹠部皮膚ることが報告されている。そこで，我々は dickkopf1（表皮と真皮）でのSCFの発現は免疫染色法，realtime

による表皮メラノサイトのメラニン産生機能の抑制作

RT‑PCR 法，Western blotting 法のいずれにおいて用に加えて，ケラチノサイトもしくは線維芽細胞由来

も非掌蹠部皮膚に比べて低下していた。c‑KIT の発のメラニン生成にかかわるサイトカインとそれらの受現については免疫染色法において，掌蹠部表皮でのc‑容体の発現状態が掌蹠メラノサイトの機能低下に関KIT 陽性のメラノサイトの数は非掌蹠部表皮に比べわっている可能性を考え，これらの各種因子とその受容て減少しており，Western blotting 法においても掌体の in vivo における発現状態を real time PCR 法，

蹠部表皮が有意に低下していた。最後にメラニン活性No. 6, 2009

検討した。ET‑1の発現は免疫染色法と279

審査学位論文要旨

化転写因子である M ITF と SOX10についても同様に，と掌蹠部では非掌蹠部比べて低下していたが，その掌蹠部と非掌蹠部皮膚において発現量の比差異は後者が1.3倍という僅差であった。

検討を行った。免疫染色法では MITFと SOX10が陽性のメ2) 電子顕微鏡にてメラノサイトの形態を観察すると，

ラノサイトの数は掌蹠部表皮では非掌蹠部表皮に比べ非掌蹠部皮膚に比べて掌蹠部皮膚のメラノサイトのて明らかに減少していた。M ITFについてはreal time

細胞質にはメラニン化した成熟メラノソームはほと

RT‑PCR 法と Western blotting 法のいずれにおいてんど認められないが，in vitro で dopa 反応処理をも掌蹠部表皮は非掌蹠部に比べて発現が低下していた。

加えると dopa 陽性の未成熟なメラノソームが検出【考察】本研究により，掌蹠部皮膚が低色素である理できた。

由は，メラノサイトの細胞密度の差異ではなく，個々

3) 免疫染色法にて tyrosinase, S‑100α, c‑KIT, en-のメラノサイトのメラニン化したメラノソームの産生

dothelin B receptor (ETBR),SOX10,microphthal-

減少によるものであると明らかにされた。我々の in

mia‑associated transcription factor（M ITF）にvivoの研究ではメラニン生成サイトカインであるET‑1

ついて比 したところ，これらの染色が陽性のメラとSCF，およびそれらの受容体であるETBRとc‑KIT，ノサイトの数は，掌蹠部表皮では非掌蹠部表皮に比ならびにメラニン転写因子である SOX10と MITF がべて明らかに減少していた掌蹠部皮膚では明らかに低下していた。これらの結

4) ET‑1/ETBR linkage について検討したところ，

果から，メラニン生成サイトカインとその受容体のダ

免疫染色法では掌蹠部皮膚での ET‑1の発現は非掌ウンレギュレーションが M ITF の転写活性を抑え，

蹠部皮膚に比べて明らかに低下しており，ET ‑1とメラノソームの matrix protein である Pmel17 silver

ETBRのreal time RT‑PCR法の結果も同様であっprotein の欠乏を生じ，掌蹠部メラノサイトにおけるメラノソームのメラニン化が阻止されているものと考
えられた。

た。
5) SCF/c‑KIT linkage では，掌蹠部皮膚での SCF
発現は免疫染色法， real time RT‑PCR 法， West-以上，掌蹠部表皮のメラノサイトの機能低下のメカ

ern blotting 法のいずれにおいても非掌蹠部皮膚にニズムとしては，dickkopf1による Wnt シグナル経比べて低下していた。c‑KIT の Western blotting

路の抑制に加えて，掌蹠部皮膚の ET ‑1/ETBR lin-法でも掌蹠部皮膚で発現が低下していた。

kage および SCF/c‑KIT linkage の発現低下も深く関与していることが示唆された。

6) MITF ついて検討したところ，real time RT‑
PCR 法と Western blotting 法のいずれにおいても（論文審査の結果の要旨）

掌蹠部では非掌蹠部に比べて発現が低下していた。

周知のように，人間の掌蹠（手掌と足底）は，メラ

掌蹠部皮膚ではメラニン産生に重要な ET ‑1/ET-

ニン量が非掌蹠部皮膚と比べて極端に低下し，色素形

BR linkage と SCF/c‑KIT linkages の発現が顕著に成をほとんど欠落している。この理由として掌蹠真皮低下しており，メラノサイトのマスター遺伝子である

線維芽細胞由来の，Wnt シグナルアンタゴニストでM ITF の転写活性も低下していることが明らかにさある dickkof1が表皮メラノサイトのメラニン産生機れた。以上の結果から，掌蹠部皮膚が低色素である理能を抑制することが最近，明らかにされた。一方でケ

由は，メラノサイトの細胞密度の差異ではなく，個々

ラチノサイトなどが産生するサイトカイン類が皮膚ののメラノサイトでのメラニン化したメラノソームの減色を決定するうえで重要な役割を果たしているとの報

少によるものであり，そのことにサイトカインのパラ告もある。長谷川らはケラチノサイトもしくは線維芽クライン機構の抑制が深く関与していることが示唆さ細胞由来でメラニン生成に中心的な役割を持つとされれた。

るサイトカインとそれらの受容体，および関連した転本研究は他部位とは異なった掌蹠部皮膚の生物学的写因子の発現状態が掌蹠のメラノサイトの機能低下に

特徴を明らかにしたもので，今後の美白剤開発への応関わっている可能性を考えた。そこで，これら各種因用や，有色人種で掌蹠部にメラノーマが好発する機序

子の in vivo における発現状態の比の解明において，新たな研究展開の契機となりうるもを掌蹠部と非掌蹠部皮膚の生検組織を材料にして検討した。
その結果，長谷川は次の結果を得た。

のであり，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

1) メラノサイトの密度を表皮剥離 dopa 法で調べる
280

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨な上昇が認められたが，両群間で有意差は認められなEﬀects of high‑frequency oscillatory ventilation on oleic acid‑induced lung injury insheep（緬羊における，オレイン酸による肺障害に対する高頻度換気の効果）
中

川

力

丸

かった。しかし，肺動脈閉塞圧は HFOVに切り替え
た後HFOV群で有意に上昇した（Ｐ＜0.05）。リンパ流量はオレイン酸投与後より両群共に有意に上昇し，その後 HFOV 群で低下傾向にあったが，両群間で有意差は認められなかった。しかし，４時間目の HFOV
群の Clym は，CMV 群に比べ有意に低値で あ っ た（論文の内容の要旨）（Ｐ＜0.05）。P/F ratio は，オレイン酸投与後両群と背景；急性肺損傷や急性呼吸窮迫症候群の患者に対すも投与前に比べ有意に低下した（Ｐ＜0.01）。しかし，る治療では，呼吸管理が重要である。しかし，傷害肺

CMV 群に比べ HFOV 群では有意にその低下が小さに対する一回換気量の増加や気道内圧の上昇は，人工く（Ｐ＜0.01），酸素化能の改善が認められた。W /D

呼吸による二次的肺損傷を引き起こす。そこで，このratio および気管支肺胞洗浄中の細胞数は，CM V 群

肺損傷を抑えるための換気方法として，高頻度換気法に比べ HFOV 群で有意に低値であった（Ｐ＜0.01）。

（High frequacy osscilltion ventilation HFOV）が結語；以上より，緬羊のオレイン酸による肺損傷に対挙げられるが，その評価は定まっていない。そこで今し，HFOV を用いた呼吸管理法は CMV に比べ，肺回我々は緬羊を用い，麻酔下で，オレイン酸により惹

血管外水分の低下をきたし，酸素化能を改善するため，起された急性肺損傷に対して HFOV の効果を，肺血急性肺損傷や急性呼吸窮迫症候群に有用な換気方法で

管外水分量を反映する肺リンパ流量に注目し検討した。

あることが示唆された。

方法および実験；緬羊（体重35‑44kg）をハロタン麻（論文審査の結果の要旨）

酔下で70％酸素吸入下に人工呼吸器管理し，右開胸

急性肺損傷や急性呼吸窮迫症候群の治療では，人工下に肺リンパ瘻を作成した。右内頚動・静脈からそれ呼吸管理が不可欠である。しかし，傷害肺に対して，

ぞれカテーテルとスワン・ガンツカテーテルを挿入し人工呼吸による一回換気量の増加や気道内圧の上昇は，た。緬羊を仰臥位に固定し，conventional mechani-

二次性の肺損傷を引き起こすとされる。中川らは，急性（一回換気量10ml/kg，呼吸
cal ventilation（CMV）

肺傷害時の呼吸管理として高頻度換気法（HFOV）

回数20/min，呼気終末陽圧（PEEP）６cmH O）維は，二次性の肺損傷を予防するという仮説をもとに，持下にて安定した baseline を30分以上観察した後，麻酔下緬羊を用いて，オレイン酸によって惹起される

オレイン酸0.08ml/kg を内頚静脈より投与した。実

肺損傷，肺水腫に対し HFOV の効果について検討し験は，以下の2群を行い比た。

した。CMV 群（n＝６）

ではオレイン酸投与後同じ呼吸条件のまま４時間観

ハロタン麻酔下緬羊を70％酸素吸入下に人工呼吸察した。HFOV群（n＝７）ではオレイン酸投与後器管理し肺リンパ瘻を作製し，各種循環諸量を測定の30分同じ条件のCMV維持後，HFOV（平均気道内圧ための措置を行った。Base line を測定後オレイン酸

15cmH O，SV150ml，頻度15Hz）に切り替え3.5時を投与し，conventional mechanical ventilation（以間観察した。測定項目は，30分毎に体血圧，肺動脈圧，

下 CMV）（一回換気量10ml/kg，呼吸回数20/min，

肺動脈閉塞圧，心拍出量，動脈血酸素分圧/吸入酸素

呼気終末陽圧（PEEP）６cmH O）で維持する CMV

濃度（P/F ratio），肺リンパ流量を測定し，終了後に群（n＝６）と，HFOV（平 均 気 道 内 圧15cmH O，

右肺にて気管支肺胞洗浄を行い，さらに左下葉より肺SV150ml，頻 度15Hz）で 維 持 す る HFOV 群（n＝組織を摘出し肺湿乾重量比（wet and dry ratio ; W /７）に分け3.5時間観察を行った。30分毎に体血圧，

D ratio）を計測した。また，１時間毎に採取した血肺動脈圧，肺動脈閉塞圧，心拍出量，動脈血酸素分

漿と肺リンパ液の蛋白濃度を測定し，肺リンパ液中蛋

圧/吸入酸素濃度（P/F ratio），肺リンパ流量を測定

白濃度/血漿蛋白濃度（L/P ratio）および肺リンパ蛋

し，終了後に右肺にて気管支肺胞洗浄を行い，さらに白クリアランス（Clym ;L/P x 肺リンパ流量）を計測

左下葉より肺組織を摘出し肺湿乾重量比（wet andした。

dryratio;W /D ratio）を計測し検討した。また，１時

結果；両群ともにオレイン酸投与後，酸投与前に比べ，間毎に採取した血漿と肺リンパ液の蛋白濃度を測定し，体血圧，心拍出量の有意な低下および肺動脈圧の有意

肺リンパ液中蛋白濃度/血漿蛋白濃度（L/P ratio）おNo. 6, 2009281

審査学位論文要旨

よび肺リンパ蛋白クリアランス（Clym ; L/P x 肺リ

FiO が300mmHg 以下の20症例を本研究の対象としンパ流量）を計測した。肺動脈閉塞圧は HFOV に切た。症例を以下の２群に分けて比り替えた後HFOV群で有意に上昇した。P/F ratioの（男性５例（55.6％），女性４例（44.4％））：術後にシ低下は HFOV群で有意に少なく，PaCO は HFOV群

ベレスタットの持続的静脈内投与（0.2mg/kg/hr）で有意に低下した。リンパ流量は HFOV 群で低下傾を受けた症例。Ⅱ群（男性９例（77.8％），女性２例

向にあったが，有意差は認められなかった。４時間目（22.2％））：術後シベレスタットの投与を受けなかっの HFOV 群の Clym は，CMV 群に比べ有意に低値た症例。

検討した。Ⅰ群であった。W /D ratio および気管支肺胞洗浄中の細術後の呼吸管理と肺機能の評価：ICU入室後すぐに胞数は，CM V群に比べHFOV群で有意に低値であっ

FiO 1.0で人工呼吸器による換気が開始され，PO レ

た。

ベルが70mmHgを超えるように調整した。肺胞‑動脈以上の結果から，HFOV は麻酔下緬羊のオレイン

血酸素分圧 差（Alveolar‑arterialoxygen diﬀerence

酸により惹起された急性肺損傷，肺水腫の人工呼吸器：A‑aDO ），呼吸指数（Respiratoryindex：RI）を評価の管理に対し，酸素化能の改善，および血管透過性亢進

指標とした。統計解析にはunpaired t‑testとANOVAを抑制し，人工呼吸による二次性の肺損傷を軽減させを用い，ｐ＜0.05を有意とした。

ることが示唆された。

【結果】患者の背景因子には統計的有意差はなかった。

本論文は，HFOV はオレイン酸によって惹起され手術成績は，Ⅰ群で死亡例はなく，Ⅱ群で１例が第12た急性肺損傷，肺水腫の人工呼吸器管理に有効である

病日に近位下行大動脈の残存解離腔の破裂により死亡ことを示し，人工呼吸器関連の肺損傷に対して有利にした。人工呼吸器時間と ICU 滞在時間時間には有意働くことを示唆したものであり，学位論文として十分差は認められなかった。

価値のあることを主査・副査は一致して認めた。

ICU 入室時の血液ガス分析で，PaO /FiO ，A‑a
DO ，RI には２群間で有意差はなかった。第３病日

The eﬀects of a neutrophil elastase inhibitor on the postoperative respiratory
failure of acute aortic dissection（急性大動
脈解離の術後呼吸不全に対する好中球エラスターゼ阻害剤の効果について）
古

澤

武

彦

までの比

では PaO /FiO においてⅠ群の方がⅡ群よりも改善傾向を認めたが，有意差は認められなかった。A‑a DO の比でも有意差を認めなかった。RI

はⅠ群で減少傾向を認めたが有意差は認められなかった。しかし，RIの改善率が，Ｉ群で有意に良好であった（61.6±44.2％vs．111.9±40.9％；11.86％，ｐ＝0.02）。

（論文の内容の要旨）【考察】AADは，それ自体が重篤な疾患であることに加【目的】急性大動脈解離（acute aortic dissection :えて，手術時に長時間の人工心肺（CardiopulmonaryAAD）は，緊急手術が必要な疾患で，近年手術成績

bypass：CPB）を必要とするため，人工呼吸器によるが向上しつつあるが，術後しばしば重篤な呼吸不全をサポートやICU滞在期間が長期間となる。CPBによっ合併し手術成績に影響を及ぼすことが報告されている。

て補体や好中球の活性化を引き起こすと報告されてお本研究では，シベレスタットナトリウム水和物（シり，好中球エラスターゼは結合組織に対する加水分解

ベレスタット）が好中球エラスターゼの選択的阻害剤

能が高く，組織障害性が高いものの一つといわれていであることから，AAD 術後におけるシベレスタット

る。シベレスタットは好中球エラスターゼの選択的阻投与の呼吸不全に対する治療効果について臨床的に検害剤であり，その投与によって肺胞上皮細胞の障害が討した。

減少されることが期待される。

【方法】2000年１月から2005年４月までの期間，信州大

本研究では，シベレスタット投与によって PaO /学医学部附属病院心臓血管外科で AAD に対する手

FiO ，A‑a DO ，RI の有意な改善は認められなかっ術を受けた30症例をレトロスペクティブに検討した。

たものの，RI の改善率が有意に良好であり，好中球

17症例（58.7％）が男性で，13症例（41.3％）が女

エラスターゼを阻害することによって，AAD 患者の性であった。術後30病日の死亡率は４例（13.3％）で術後呼吸不全を減少させることが可能であることが示あった。これらの症例で術後最初に計測されたPaO /

唆された。

282

信州医誌 Vol. 57

審査学位論文要旨（論文審査の結果の要旨）
急性大動脈解離（type A）対する外科治療は，人工心肺や周術期管理の改善を含む治療手段の向上により死亡率や術後の合併症は改善しているが，術後しば
しば経験される呼吸不全は，未だ改善の余地が残されている重要な課題である。術中あるいは手術後の肺循環において活性化された好中球が血管内皮を障害し，Correlation between glial ﬁbrillary acidic
protein‑positive astrocytes and age in thehuman hippocampus（ヒト海 馬に お け る
GFAP 陽性アストロサイトと年齢との相関）
髙

橋

徹

毛細血管の透過性を亢進させ，この過程で好中球エラ（論文の内容の要旨）

スターゼが組織障害を引き起こすのに重要な役割を担っ【背景と目的】海馬は，脳の中で最も組織病理学的なていることが明らかにされている。さらに血中エラス研究が行われてきた部位の一つである。海馬の詳細な

ターゼのピークレベルが，呼吸係数の増加や肺内シャ神経病理学的検索を行うことは，法医学，精神医学にントを伴う術後呼吸不全と関係があることが報告されおいて有用な情報を得られる可能性がある。我々は海馬ている。シベレスタットナトリウム水和物（シベレス

標本を観察する中で，CA4領域とhippocampal sulcusタット）は好中球エラスターゼの選択的阻害剤であり，（HS）領域で，GFAP 陽性グリア細胞が特異的に多急性呼吸促迫症候群を実験的にも臨床的にも改善する

く染色されることに気がついた。このため海馬におけことが報告されている。

る GFAP 陽性グリア細胞の定量的な評価を行い，年そこで本研究では，急性大動脈解離の術後にシベス

齢，死後経過時間，死因との関連性について解析した。

タットを投与した群としなかった群との比 をするこ

【方法】信州大学医学部法医学教室における剖検例のとにより，術後呼吸不全に対する好中球エラスターゼ

脳を用いて，海馬の免疫染色を行った（ｎ＝54）。免の選択的阻害剤の効果を臨床的に評価することを目的

疫染色は glial ﬁbrillary acidic protein（GFAP）染とした。

色を施行した。検索方法は，光学顕微鏡により，CA4

その結果，古澤は以下の結論を得た。
1) 第３病日までの比では，P/F ratio においては領域内における歯状回顆粒細胞層の近傍と，hippocampal sulcus（HS）を200倍で写真撮影し，染色さシベレスタット投与群において改善傾向を認めたが，れたグリア細胞数をカウントした。症例は54人（男32

統計学的有意差は認められなかった。

人，女22人），年齢は２カ月‑87歳（平均39.61±27.65

2) 第３病日までの比 では，A‑a DO においてはシ

歳），死後経過時間（推定死亡時刻から解剖までの時

ベレスタット投与群において改善傾向を認めたが，間）は８‑72時間（平均26.30±16.33時間）。グリア細

統計学的有意差は認められなかった。

胞数と，年齢，死後経過時間，死因との関連を調べた。

3) 第３病日までの比 では，Respiratoryindex（RI）【結果】CA4領域の GFAP 陽性細胞数は平均74.84±

においてはシベレスタット投与群において改善傾向

39.24。HS領域の GFAP陽性細胞数は，平均28.35±を認めたが，統計学的有意差は認められなかった。

21.51。２領域とも症例ごとのばらつきはあるが，年齢4) 第３病日において，RI の改善率がシベレスタッとともに細胞数が増加する傾向を認めた。細胞数と死ト投与群において有意に良好となった。

後経過時間，死因との関連性は認めなかった。CA4領以上の結果より，AAD 術後における呼吸不全に対域の GFAP陽性細胞数と年齢との相関係数は0.439

し，シベレスタット投与の効果は好中球エラスターゼ（ｐ＜0.01）で，統計学的に有意な正の相関がみられの組織障害を抑制し，臨床的に有用であると考えられた。HS 領域の GFAP 陽性細胞数と年齢との相関係た。また，シベレスタットの投与量を増量することに数は0.479（ｐ＜0.01）で，統計学的に有意な正の相よって，より良好な効果が得られる可能性も課題とさ関がみられた。また CA4領域の細胞数と HS 領域のれた。

細胞数との相関係数は0.721（ｐ＜0.01）で，両領域

本研究は，AAD 術後におけるシベレスタットの投の細胞出現の傾向はほぼ一致していた。

与が術後呼吸不全の改善に寄与する可能性を示したこ【考察】海馬は，大脳辺縁系の一部に属し，その特徴とにより，主査，副査は一致して本論文を学位論文と的な形状，遅発性神経細胞死，長期増強現象，細胞新して価値あるものと認めた。

生といった興味深い所見が数多くみられ，活発に研究がなされてきた部位である。動物実験のみならず，ヒNo. 6, 2009283

審査学位論文要旨

ト脳においても海馬研究は盛んであり，近年では精とも明らかな関連を認めておらず，加齢による要因が神科領域の画像研究において，外傷後ストレス障害

大きく関与していると予想される。今後，他の年齢推（PTSD）と海馬萎縮との関連性が注目されている。

定法との併用や，精度をあげる工夫をしていけば，海法医学分野においても，剖検脳を用いた海馬の組織

馬における GFAP 染色を年齢推定法として活用でき

病理学的研究がなされ，脳虚血後の生存時間が短い症
例において GFAP 陽性アストロサイトの膨化所見が認められること，また生存時間が長い症例ではアストる可能性があると考えられる。
（論文審査の結果の要旨）
ヒト脳海馬の詳細な神経病理学的検索を行うことは，

ロサイトの増生が著明にみられることなどが報告され

法医学，精神医学において有用な情報を得られる可てきた。ただし，これらの論文で，長時間の生存時間能性がある。高橋は海馬の CA4領域と hippocampalとされているのは，生存時間が18日と120日といった

sulcus（HS）領域で，GFAP陽性グリア細胞が特異的症例であり，高度なアストロサイトの増生が起こるにに多く染色されることに気がつき，法医剖検脳（n＝は，虚血や低酸素状態が数日以上は続く必要があると54）を対象に，この領域の GFAP 陽性グリア細胞数考えられる。

を調べ，年齢，死後経過時間，死因との関連性につい

我々の症例は，ほとんどが短時間で死亡した症例であり，本研究で観察した GFAP 陽性グリア細胞を，て解析した。
その結果，以下の成績を得た。

生存時間の長さによって増生した反応性の異常アスト

1) CA4領域のGFAP陽性細胞数は平均74.84±39.24。

ロサイトとして理解することは難しい。一方，動物実（光学顕微鏡200倍率での一視野内の細胞数）。

験では，歯状回顆粒細胞層とその内側に，生来，グリ

2) HS領域のGFAP陽性細胞数は，平均28.35±21.51。

ア細胞が生理的に存在し，このグリア細胞が胎生期か（光学顕微鏡200倍率での一視野内の細胞数）。

ら生後初期の時期の顆粒細胞層の発達に関与している

3) ２領域とも症例ごとのばらつきはあるが，年齢とと考えられている。そしてこのグリア細胞は，成体になっても消失せずに残存しつづける。我々は歯状回内側部を CA4領域とみなして評価を行ったため，このCA4領域の GFAP 陽性グリア細胞は，この領域に生理的に存在するグリア細胞である可能性がある。
本研究において GFAP 陽性グリア細胞数は，年齢ともに細胞数が増加する傾向を認めた。
4) 細胞数と死後経過時間との相関，死因との関連性は認めなかった。
5) CA4領域の GFAP 陽性細胞数と年齢との相関係
数は0.439（ｐ＜0.01）で，統計学的に有意な正の相関がみられた。

に相関して増加する傾向を示し，また死因や死後経過

6) HS 領域の GFAP 陽性細胞数と年齢との相関係

時間との関連性を認めなかった。よってこの年齢とと数は0.479（ｐ＜0.01）で，統計学的に有意な正の相もに増加する GFAP 陽性グリア細胞は，元来，生理関がみられた。

的に存在している CA4領域のグリア細胞が，加齢に7) CA4領域の細胞数とHS領域の細胞数との相関係ともなう慢性的な海馬の組織変化により，徐々に反応

数は0.721（ｐ＜0.01）で，両領域の細胞出現の傾性の異常グリア細胞へと変化していったものではない

向はほぼ一致していた。

かと考えられた。

以上より，ヒト海馬の CA4領域と HS 領 域 の GF-

Hippocampal sulcus（HS）は，海馬の stratum

AP 陽性グリア細胞数は，年齢との相関を認め，死因

moleculare を分断する溝である。この領域に，なぜや死後経過時間とは明らかな関連を認めず，加齢によ特異的に GFAP 陽性グリア細胞が存在するのかは不る要因が大きく関与していると予想された。海馬にお明であるが，静脈の走行経路となっていることが関係

ける GFAP 染色を年齢推定法として活用できる可能

しているかもしれない。

性があるものと考えられた。

本研究の結果は，年齢推定法とするには個体差が大きく精度が低い。しかし一方で，死因や死後経過時間

284

したがって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

信州医誌 Vol. 57