信州医誌，59⑸：331〜379，2011

信州大学において審査された医学博士論文要旨
学位審査委員

名

学位授与
番
号

学位授与
年 月 日

坂本道雄

甲第839号

22. 3.31 Re‑evaluation of spontaneous regeneration 本 郷 一 博 加 藤 博 之
天野直二
of the lateral olfactorytract（外側嗅索の自然再生の再評価）中村勝哉

甲第840号

23. 3.31 Spinocerebellar ataxia type 6 (SCA6):Clini- 天 野 直 二 能 勢博福嶋義光
cal pilot trial with gabapentin（ガバペンチンを用いた脊髄小脳失調症６型（SCA6）に対す
るパイロット試験）矢野志春

甲第841号

23. 3.31 Selective α1A ‑adrenoceptor stimulation 森 泉 哲 次 池 田 修 一
村田敏規
induces Muellerʼs smooth muscle contraction
in an isolated canine upper eyelid preparation（選択的 α1A‑アドレナリン受容体の刺激は，単離イヌ上眼瞼標本のミュラー筋を収縮させる）

森

甲第842号

22. 9.30 Application of ﬂuorodeoxyglucose positron 岡 元 和 文 宮 川 眞 一
角谷眞澄
emission tomography in the detection of

氏

周介

学

位

論

文

題

目

主

査

副

査

proximal lesions in obstructive colorectal
cancer（FDG‑PET 検査の閉塞大腸癌に対する近位側病変評価への応用）
松下一彦

甲第843号

22. 3.31 A splice variant of ASC regulates IL‑1β 竹 下 敏 一 小 池 健 一
瀧伸介
release and aggregates diﬀerently from
intact ASC（カスペース‑１活性化シグナル経路のアダプター分子の ASC スプライシング変異体（vASC）は IL‑1βの放出と凝集において
全長 ASC とは異なっている）

銭

金澤

甲第844号

22. 9.30 M ouse Senile Amyloid Fibrils Deposited in 池 田 修 一 谷口俊一郎
能勢博
Skeletal Muscle Exhibit Amyloidosis‑Enhancing Activity（骨格筋に沈着したマウス老化ア
ミロイド線維はアミロイドーシス発症促進効果
を持つ）

長屋匡信

甲第845号

22. 9.30 Down‑regulation of SREBP‑1c is associated 谷口俊一郎 宮 川 眞 一
本田孝行
with the development of burned‑out NASH
（非アルコール性脂肪肝炎の進行に伴う肝脂肪沈着の減少は，1c 型ステロール調節領域結合蛋白の発現低下に関連する）

堀込実岐

甲第846号

22. 9.30 Assessment of Left Ventricular Dyssy- 天 野
nchrony in Patients with Coronary Artery
Disease During Adenosine Stress Using
ECG‑gated Myocardial Perfusion Single
Photon Emission Computed Tomography（冠動脈疾患患者における心電図同期 SPECTを用いたアデノシン負荷中の左室非同期性の評価）

No. 5, 2011

純 角谷眞澄山田充彦

331

審査学位論文要旨

小林宣隆

甲第847号

23. 3.31 Hyaluronan deﬁciency in tumor stroma 中 山
impairs macrophage traﬃcking and tumor
neovascularization（腫瘍間質のヒアルロン酸
欠損はマクロファージ動員と腫瘍血管新生を阻
害する）

田朋子

甲第848号

23. 3.31 Accurate and simple method for quanti- 本 田 孝 行 青 山 俊 文
ﬁcation of hepatic fat content using magnetic
駒津光久
resonance imaging : a prospective study inbiopsy‑proven nonalcoholic fatty liverdisease（M RI を用いた肝脂肪含有量の非侵襲的定量法：非アルコール性脂肪性肝疾患におけ
る検討）

藤原祝子

甲第849号

22. 3.31 A C‑terminal amino acid substitution in theγ‑ 本 田 孝 行 樋 口 京 一
chain caused by a novel heterozygous frame谷口俊一郎
shift mutation (Fibrinogen Matsumoto Ⅶ)
results in hypoﬁbrinogenaemia（新規フレーム
シフト変異のヘテロ接合体であるフィブリノゲ
ン Matsumoto Ⅶに起因する γ鎖Ｃ末端アミノ酸置換は低フィブリノゲン血症の原因である）

星野

瞳

甲第850号

23. 3.31 M embrane‑associated Activation of Choles- 竹 下 敏 一 本 田 孝 行
terol α‑Glucosyltransferase, an Enzyme
佐々木克典
Responsible for Biosynthesis of Cholesteryl‑
α‑D‑glucopyranoside in Helicobacter pylori
Critical for its Survival（ピロリ菌の生存に必須なコレステロール‑α‑D‑グルコピラノシド
生合成に関わるコレステロール‑α‑D‑グルコー
ス転移酵素の膜結合型活性）小岩井慶一郎

甲第851号

23. 3.31 Risk Factors for Severe Dysphagia after 田 中 榮 司 宇佐美真一
Concurrent Chemoradiotherapyfor Head and松尾清Neck Cancers（頭頸部癌に対する同時化学放射線療法後に生じる摂食障害のリスク因子）

林晶子

甲第852号

22. 3.31 Type‑speciﬁc roles of histone deacetylase 谷口俊一郎 中 山
淳(HDAC) overexpression in ovarian car本田孝行
cinoma : HDAC1 enhances cell proliferationand HDAC3 stimulates cell migration withdownregulation of E‑cadherin（卵巣癌における histone decetylase 発現は，サブタイプにより役割が異なる。HDAC1は細胞増殖を促進し，
HDAC3は E カドヘリン発現抑制を介して細胞の移動を促進する）

日髙奈緒

甲第853号

23. 3.31 Endoscopic identiﬁcation of Helicobacter 小 池 健 一 田 中 榮 司
pylori Gastritis in children（小児における宮川眞一
Helicobacter pylori 胃炎の内視鏡的識別）赤澤陽平

甲第854号

23. 3.31 Intratracheal catheter suction removes the 小 池 健 一 久 保 惠 嗣
same volume of meconium with less impact
塩沢丹里
on desaturation compared with meconium
aspirator in meconium aspiration syndrome（胎便吸引症候群において気管内吸引カテーテ
ルを用いた気管内吸引法はメコニウムアスピレー
ターを用いた気管内吸引法と比 して，同等の吸引効果があり，血中酸素飽和度の低下は小さ
い）

332

淳 鎌田
徹
池田宇一

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

鈴木彰

甲第855号

23. 3.31 Induction of high endothelial venule‑like ves- 中 山
sels expressing GlcNAc6ST‑1‑mediated L‑
selectin ligand carbohydrate and mucosal
addressin cell adhesion molecule 1 (M AdCAM ‑1) in a mouse model of “Candidatus‑induced gastritis
Helicobacter heilmannii”
and gastric mucosa‑associated lymphoid tissue (M ALT)lymphoma（ヘリコバクターハイ
ルマニ感染マウス胃炎・ MALT リンパ腫モデ
ルにおけるＬ‑セレクチンリガンド糖鎖と粘膜
アドレシン細胞接着分子‑1（M AdCAM ‑1）を発現した高内皮細静脈様血管の誘導）宮川

健

甲第856号

22. 3.31 Reduced hyperthermia‑induced cutaneous 岡 元 和 文 久 保 惠 嗣
川眞田樹人
vasodilation and enhanced exercise‑induced
plasma water loss at simulated high altitude(3200 m) in humans（3200m 高地環境下における運動時の皮膚血管拡張抑制は運動による血漿量低下亢進に起因する）

増田雄一

甲第857号

23. 3.31 Clinicopathological features of hepatitis C 田 中 榮 司 中 山淳
竹下敏一
virus disease after living donor liver transplantation :relationship with in situ hybridisation data（生体肝移植後のＣ型肝炎の臨床病
理学的特徴：in situ hybridisation 法の結果と
の関係）

菊池

忠

甲第858号

22. 3.31 Protocol‑based noninvasive positive pressure 川眞田樹人 久 保 惠 嗣
本田孝行
ventilation for acute respiratory failure（急性呼吸不全に対するプロトコルに基づいた非侵襲的陽圧換気療法）

池上章太

甲第859号

23. 3.31 Bone mineral density measurement at both 野見山哲生 角 谷 眞 澄
佐々木克典
spine and hip for diagnosing osteoporosis in（日本人の骨粗鬆症診断におJapanese patients
ける脊椎・大腿骨両部位骨密度測定の重要性）

筒井

将

甲第860号

23. 3.31 Serum Fragmented Cytokeratin 18 Levels 谷口俊一郎 本 田 孝 行
宮川眞一
Reﬂect the Histologic Activity Score of
Nonalcoholic Fatty Liver Disease More
AccuratelyThan Serum Alanine Aminotransferase Levels（サイトケラチン18フラグメン
トの血清レベルは，非アルコール性脂肪肝疾患の組織学的活動性スコアを血清アラニンアミノ
トランスフェラーゼレベルよりもより正確に反
映する）

堀内美和

甲第861号

22. 3.31 Decrease in the density of t‑tubular L‑type 池 田 宇 一 青 山 俊 文
川眞田樹人
Ca channel currents in failing ventricular
myocytes（不全心室筋細胞のＴ管のＬ型 Ca
チャネル電流密度の低下）

小平

甲第862号

22. 3.31 Electrophysiological features of familial 能 勢
amyloid polyneuropathy in endemic area（集積地家族性アミロイドポリニューロパチーの電気生理学的特徴）

農No. 5, 2011

淳 田中榮司
本田孝行

博 多田
剛
山田充彦

333

審査学位論文要旨

米田

傑

甲第863号

23. 3.31 Association of Serum Cytokine Levels with 竹 下 敏 一 宮 川 眞 一
本田孝行
Treatment Response to Pegylated Interferon
and Ribavirin Therapyin Genotype 1 Chronic
Hepatitis C Patients（ジェノタイプ１型のＣ型慢性肝炎患者における，ペグインターフェロ
ンとリバビリン併用療法の治療効果と血清サイ
トカインの関連性）

重村倫成

甲第864号

22. 3.31 Eﬀect of the mutant microphthalmia‑as- 奥 山 隆 平 瀧伸介
村田敏規
sociated transcription factor found in Tietz
syndrome on the in vitro development ofmast cells（Tietz 症候群で認められる変異型
microphthalmia‑associated transcription factor の in vitro における肥満細胞の増殖・分化に対する影響）百瀬正信

甲第865号

22. 3.31 Reevaluation of melanin‑bleaching using 本 田 孝 行 青 山 俊 文
中山淳warm dilute hydrogen peroxide for histopathological analysis（病理組織学的解析のための加温希釈過酸化水素を用いたメラニン漂白の再
評価）

酒井宏司

甲第866号

23. 3.31 Isolation and characterization of portal 谷口俊一郎 田 中 榮 司
瀧伸介
branch ligation‑stimulated Hmga2‑positive
bipotent hepatic progenitor cells（門脈結紮により誘導された Hmga2陽性肝前駆細胞の分離と機能解析）

宮﨑大吾

甲第867号

23. 3.31 M atrix metalloproteinase ‑2 ablation in 池 田 宇 一 佐々木克典
中山淳
dystrophin‑deﬁcient mdx muscle reduces angiogenesis resulting in impaired growth ofregenerated muscle ﬁbers（ジストロフィン欠
損 mdx マウス骨格筋における MM P‑2の欠損は血管新生を阻害し，再生筋線維の成長障害を引き起こす）

加納義也

甲第868号

23. 3.31 In vitro transdiﬀerentiation of HepG2 cells to 大 森
pancreatic‑like cells by CCl , D‑galactosamine, and ZnCl （CCl ，D‑galactosamine，ZnCl による HepG2細胞から膵臓様細胞へのin vitro における分化転換）李甲第869号

23. 3.31 M echanism of alkalosis‑induced constriction 池 田 修 一 大 橋 俊 夫
川眞田樹人
of rat cerebral penetrating arterioles（アルカローシスにより喚起されるラット脳細動脈の収縮反応の解析）甲第870号

22. 9.30 Early Intervention with Rosuvastatin 天 野Decreases the Lipid Components of thePlaque in Acute Coronary Syndrome:Analysis Using Integrated Backscatter IVUS
(ELAN Study)（ロスバスタチンによる急性期
脂質低下療法は急性冠症候群における冠動脈プ
ラークの脂質成分を減少させる：Integrated
Backscatter IVUS を用いた検討から）

玉輝

小田切久

334

栄 森泉哲次駒津光久

純 岡元和文駒津光久

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨を調べた。嗅覚機能検査後のラットは，逆行性またRe‑evaluation of spontaneous regenerationof the lateral olfactory tract（外側嗅索の
自然再生の再評価）
坂

本

道

雄

は順行性の神経トレーサーを注入し，同様に神経再生の有無を検索した。
【結果】
１．LOT 完全切断例は，正常成熟ラットで見られる白い髄鞘帯が完全に欠損し，さらに嗅球投射ニュー（論文の内容の要旨）

ロン（僧帽細胞）が神経トレーサー FB で標識され【目的】外側嗅索（LOT）は，嗅球からの嗅覚情報をないことにより，客観的に評価できた。完全切断例

嗅皮質へ伝える嗅覚系の主要な伝導路である。新生児は69.2％で，不完全切断例は30.8％であった。

ラットの LOT を切断すると，長期間経過後に，嗅覚

２．LOT 完全切断４〜８週後に，切断部後方の嗅皮

伝導路の自然再生がおこるという興味深い研究論文が質に注入された神経トレーサー FG は逆行性に軸索1997年に発表された。しかし，論文を詳細に検討する輸送され，切断部を越えて多数の嗅球投射ニューロと，LOT 切断の客観的評価（完全切断・不完全切断），

ンが標識された。

LOT 再生の形態的評価（切断部を越えて伸長する再３．LOT 完全切断４〜８週後に，嗅球に注入された

生神経線維の証明），LOT 再生の機能的評価（嗅覚機

神経トレーサー BDA は順行性に軸索輸送され，切能），再生までの期間など，脳内伝導路再生に関する断部を越えて後方の嗅皮質にまで多数の標識が観察重要な点が不明瞭であり，これらの課題を解明するこされた。正常側と比べると，BDA（＋）領域は嗅とを目的として本研究を行った。

皮質内で厚さが薄く，視交叉より後方の遠位嗅皮質【方法】にまでは及んでいなかった。また，MBP（＋）の

１．手術：生後１日または２日の新生児ラット（ n ＝軸索線維が欠損し，電子顕微鏡では多くの BDA

78）の左 LOT を切断し，完全切断を客観的に評価（＋）の軸索終末が見られたが，ミエリン鞘を欠いする目的で，左嗅皮質に逆行性の神経トレーサーていた。

Fast Blue（FB）を注入した。

４．シクロへキシミド溶液を用いた嗅覚識別検査の正２．逆行性神経トレーサーによる再生の証明：左LOT

解率は，LOT 完全切断群（新生児左 LOT 完全切

切断・ FB 注入後，一定期間（４〜８週間）生存さ

断・４〜６週右嗅球除去）91.3±1.2％で，右嗅球せた後に，左嗅皮質に別の逆行性の神経トレーサー除去のみの対照群の92.8±1.0％と同様であった。

Fluoro‑Gold（FG）を注入した。FG 注入２日後に両側嗅球除去群や LOT 完全切断と反対側嗅球除去

還流固定を行い，嗅球・脳の凍結切片（30μm）をを同時に行った群のそれぞれの正解率は，49.6±

作成し，蛍光顕微鏡で観察した。

1.7％と54.3±2.5％で あ り，有 意 差（P ＜0.01）

３．順行性神経トレーサーによる再生の証明：左LOTを認めた。

切断・ FB 注入後，４〜８週間生存させた後に，両【結論】側の嗅球に順行性の神経トレーサー Biotinylated

１．新生児ラット LOT の完全切断後，４週以内に切

dextran amine（BDA‑10000）を注入した。BDA

断部を越えて神経線維が伸長し，嗅覚伝導路の自然注入７日後に還流固定を行い，嗅球・脳の凍結切片再生がおこることが，順行性並びに逆行性の神経ト（50μm）を作成し，蛍光顕微鏡で観察した。隣接

レーサーを用いて証明された。

切片は，DAB 反応を行い，BDA を可視化し，光

２．再生された LOT は，正常と異なり髄鞘形成がな

学顕微鏡や電子顕微鏡で観察した。また，髄鞘形成

いが，嗅球投射ニューロン由来の軸索終末は嗅皮質を見る目的で，抗 Myelin basic protein（MBP）に多数存在し，シナプスを形成し，機能的にも嗅覚抗体を用いて，免疫組織化学反応を行った。

識別能が正常に維持されていることが明らかにされ４．嗅覚機能検査：左 LOT 切断・ FB 注入後，４〜６週間生存させた後に，切断側の嗅覚神経系の機能た。
以上の結果より，形態的・機能的両面から，脳内伝を知る目的で，非切断側の右嗅球を吸引除去した。

導路の自然再生がおこると結論された。

その後２日間絶水させ，0.01％シクロへキシミド（論文審査の結果の要旨）

溶液を用いて嗅覚機能（olfactoryaversionbehavior）
No. 5, 2011

本研究で坂本は，主要な嗅覚伝導路である外側嗅索335

審査学位論文要旨（LOT）の自然再生に対して，LOT 切断の客観的評

再生が明らかにされた。これまでの研究で行われなかっ

価，切断部を越える再生神経線維の直接的証明，嗅覚た外側嗅索切断の客観的評価，順行性神経トレーサー

検査による LOT 再生の機能的評価，再生期間の決定を用いた再生神経線維の直接的な証明，再生神経線維などの未解明なこれらの課題を明らかにすることを目による機能獲得といった機能的評価がなされており，的として，新生児ラットについて LOT 切断実験を

生物学的にも臨床医学的にも意義があるものと考えら行った。

れ，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価

その結果，坂本は次の結果を得た。

値があるものと認めた。

１．LOT の完全切断は，正常成熟ラットで見られる白い髄鞘帯が完全に欠損していること，そして，
LOT 切断直後，切断部後方の嗅皮質に注入された
神経トレーサー FB によって嗅球投射ニューロン（僧帽細胞）が逆行性に標識されないことにより，Spinocerebellar ataxia type 6 (SCA6):
Clinical pilot trial with gabapentin（ガバペンチンを用いた脊髄小脳失調症６型（SCA6）に対するパイロット試験）

客観的に評価できた。

中

２．LOT 完全切断４〜８週後に，切断部後方の嗅皮

村

勝

哉

質に注入された神経トレーサー FG は逆行性に軸索（論文の内容の要旨）輸送され，切断部を越えて多数の嗅球投射ニューロ【背景】脊髄小脳失調症６型（SCA6）は常染色体優ンが標識された。また，LOT 完全切断４〜８週後

性遺伝性の脊髄小脳失調症の一病型であり，本邦ではに，嗅球に注入された神経トレーサー BDA は順行

比 的頻度が高い疾患である。主に中高年に発症し，性に軸索輸送され，切断部を越えて後方の嗅皮質に小脳症状が主体で他の神経症状が乏しい純粋小脳型をまで多数の標識が観察された。よって，新生児ラッ呈する。SCA6の病因は電位依存性カルシウムチャネ

ト LOT の完全切断後，４週以内に切断部を越えてル（voltage‑dependent calcium channel，VDCC）

神経線維が伸長し，嗅覚伝導路の自然再生がおこるの α1サ ブ ユ ニ ッ ト を コ ー ド す る 遺 伝 子 内 に あ る

ことが，順行性並びに逆行性の神経トレーサーを用

CAG リピートの過剰伸長であり，結果的に α1サブいて証明された。

ユニットの蛋白構造が変化し，カルシウムチャネルの３．さらに詳細に LOT 再生神経線維の形態的評価を

機能異常をきたすと考えられている。ガバペンチン

行うと，正常側と比べると，BDA（＋）領域は嗅（商品名ガバペン）は GABA 系神経伝達の賦活化だ

皮質内で厚さが薄く，視交叉より後方の遠位嗅皮質

けでなく，VDCC の α2δサブユニットに結合してカにまでは及んでいなかった。また，MBP（＋）のルシウムチャネルの機能調節作用も併せ持つ。このた軸索線維が欠損し，電子顕微鏡では多くの BDA

め SCA6の運動失調への効果が期待されるが，SCA6（＋）の軸索終末が見られたが，ミエリン鞘を欠いに対しガバペンチンを用いた臨床研究は今までに報告ていた。よって，再生された LOT は，正常と異なされていない。そこで，今回我々は，Internal Co‑

り髄鞘形成がないが，嗅球投射ニューロン由来の軸

operative Ataxia Rating Scale（ICARS）と重心動

索終末は嗅皮質に多数存在し，シナプスを形成して揺検査を評価項目に用い，ガバペンチンの臨床効果をいることが明らかにされた。

検討した。

４．シクロへキシミド溶液を用いて嗅覚識別検査を【方法】対象は遺伝子検査にて確定診断された SCA6行った。正解率は，LOT完全切断群（新生児左LOT

患者11名（平均年齢55.4歳（range 39‑65歳），平均発

完全切断・４〜６週右嗅球除去）91.3±1.2％で，症年齢38.6歳（range 29‑54歳），平均罹病期間12.9年

右嗅球除去のみの対照群の92.8±1.0％と同様で（range 2‑26年））。ガバペンチンは投与開始日のみ400あった。両側嗅球除去群や LOT 完全切断と反対側

mg/日を単回投与，２日目以降は1200mg/日を３回

嗅球除去を同時に行った群のそれぞれの正解率は，

分割で４週間投与した。内服前後で，Internal Co‑

49.6±1.7％と54.3±2.5％で あ り，有 意 差（P ＜operative Ataxia Rating Scale（ICARS）による失0.01）を認めた。機能的にも嗅覚識別能が正常に維

調症状の評価・重心動揺検査・脳血流シンチを行った。

持されていることが明らかにされた。

重心動揺検査は，動揺面積（SA，cm ）および単位以上により，新生児ラットの外側嗅索切断後の自然軌 跡 長（SPL，cm/s）を そ れ ぞ れ 評 価 し た。髄 液336

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

GABA 濃度は内服前および４週間後に，ガバペンチ（論文審査の結果の要旨）

ンの血中濃度は２週間後に測定した。本研究はパイロッ

脊髄小脳失調症６型（SCA6）は常染色体優性遺伝

ト試験であるため，統計学的検定は SIGM ASTAT性の脊髄小脳失調症の一病型であり，その病因は電位（version 2.0）にて paired t‑test を用いた。

依存性カルシウムチャネル（voltage‑dependent cal-【結果】ICARS 総 合 点 は，内 服 前 29.9± 12.6点

cium channel，VDCC）の α1サブユニット遺伝子（mean±SD）と比 し，３時間後27.4±10.7点（p＝（CACNA1A 遺伝子）内の CAG リピートの過剰伸長

0.07），２週間後26.3±11.1点（p＜0.05），４週間後である。SCA6は，本邦の優性遺伝性脊髄小脳変性症

26.8±11.9点（p＝0.09）と改善し，内服終了後４週の約25％を占めるが，根治的な治療法は存在しない。

間後は28.3±13.4点と再び上昇する傾向が見られた。

ガバペンチン（商品名ガバペン

ICARS の変化は主に姿勢・歩行障害（静的点数）と伝達の賦活化だけでなく，VDCC の α2δサブユニッ

四肢協調運動（動的点数）の改善によるものであり，

トに結合してカルシウムチャネルの機能調節作用も併

構音障害・眼球運動障害分野の点数に変化はみられなせ持つ。本論文は，ガバペンチンの SCA6に対する臨かった。重心動揺検査は，外周面積は内服前14.5±

床効果を検討した結果を述べたものである。

）は GABA 系神経9.6cm と比 し，３時間後11.6±5.5cm （p＝0.18），

対象は遺伝学的検査にて確定診断された SCA6患

４週間後10.6±5.2cm （p＝0.25），内服終了４週間者11名。ガバペンチンは投与開始日のみ400mg/日を後19.9±13.0cm であった（p＜0.05，vs.week 4）。

単回，２日目以降は1200mg /日 を ３ 回 分 割 で ４ 週

単位軌跡長は，内服前5.7±2.7cm/sec と比間投与し，内服前後で，International Co‑operative

し，３

時 間 後4.0±1.4cm/sec（p＜0.05），４ 週 間 後4.3±

Ataxia Rating Scale（ICARS），重心動揺を評価した。

1.9cm/sec（p＝0.06），内 服 終 了 ４ 週 間 後6.8±4.9

ICARS 総 合 点 は，内 服 前29.9±12.6点（ mean±

cm/sec（p＜0.06，vs. week 4）と，ICARS と同様SD）と比の傾向が見られた。脳血流シンチでは，明らかな血流

２ 週 間 後26.3±11.1点（p＜0.05），４ 週 間 後26.8±

改善効果を認めなかった。髄液中 GABA 濃度は９11.9点（p＝0.09）と改善し，内服終了後４週間後は

名 で 測 定 し，内 服 前 183.9± 110.2pmol/ml，内 服

28.3±13.4点と再び上昇する傾向が見られた。重心動

後110.2±35.6pmol/ml（p＜0.05）と 有 意 に 低 下 し揺検査は，外周面積は内服前14.5±9.6cm ，３時間た。ガバペンチン血中濃度は10名で測定し，6.2±1.7

後11.6±5.5cm （ p＝0.18），４ 週 間 後10.6±5.2μg/ml。ガ バ ペ ン チ ン 血 中 濃 度 は，腎 機 能 正 常 群，内 服 終 了 ４ 週 間 後19.9±13.0cm
cm （p＝0.25）（eGFR＞90ml/min/1.73m ，n＝４）で4.7±0.9□（p＜0.05，vs. week 4）。単 位 軌 跡 長 は，内 服 前

g/ml に 対 し，軽 度 低 下 群（eGFR 60‑90ml/min/

5.7±2.7cm/sec，３ 時 間 後4.0±1.4cm/sec（p＜1.73m ，n＝６）7.1±1.3□ g/ml と明らかに高値で

0.05），４ 週 間 後4.3±1.9cm/sec（p＝0.06），内 服

あった（p＜0.05）。投与期間中，７人が軽度の眠気

終了４週間後6.8±4.9cm/sec（p＜0.06，vs. weekを訴えた以外は有害事象は認めず，全11例が予定観察

4）と，ICARS と 同 様 の 傾 向 が 見 ら れ た。髄 液 中期間を終了した。

GABA 濃 度 は ９ 名 で 測 定 し，内 服 前183.9±110.2【考 察】今 回 の 研 究 で は，ガ バ ペ ン チ ン 内 服 中 の

pmol/ml，内 服 後110.2±35.6pmol/ml（p＜0.05）

SCA6患者の臨床症状に一定の改善傾向が見られたもと有意に低下した。ガバペンチン血中濃度は10名で測のの有意な改善ではなかった。一つの要因としては，

定し，腎機能（推算糸球体濾過量）との負の相関がみ

ガバペンチン血中濃度が不充分であった可能性がある。

られた。

し，３時間後27.4±10.7点（p＝0.07），

ガバペンチン血中濃度は，腎機能に逆相関するため，今回の研究では，ガバペンチン内服中の SCA6患者

最大臨床効果を期待するには留意する必要がある。まの臨床症状に一定の改善傾向が見られたものの，統計

た，患者背景として罹病期間が10年を超える例が多学的に有意な改善ではなかった。要因としては，少数かったことも影響した可能性がある。本研究の問題点

例での検討であった点，ガバペンチン投与量が適正でとしては，稀少疾患である SCA6に対する初めての試あったかという点，全例に実薬を open label で投与みであったこともあり，全例に実薬を open label でした前後比 研究であった点，などがあげられる。こ投与した前後比れらの結果は SCA6の新規治療薬開発に寄与する新し研究に過ぎず，プラセボ効果や評価者の主観などの混入があり得た点が挙げられる。
No. 5, 2011

い知見であり，学位論文として十分価値があるものと337

審査学位論文要旨

主査，副査は一致して認めた。

ニレフリンでミュラー筋組織を収縮さ せ た 後 に，BM Y7378（α ア ド レ ナ リ ン 受 容 体 拮 抗 薬）（100Selective α ‑adrenoceptor stimulationinduces M uellerʼs smooth muscle contraction in an isolated canine upper eyelid
preparation（選択的 α ‑アドレナリン受容体の刺激は，単離イヌ上眼瞼標本のミュラー筋を収縮させる。）
矢

野

志

春

nM ）を Krebs‑Henseleit 液に溶解して灌流し，その後 WB4101（100nM ）を続けて灌流して弛緩する変化量を調べた。最後に，ABT‑866（α アドレナリン
受容体アゴニスト）をフェニレフリンの代わりに累積的にボーラス投与し，収縮力を測定した。ミュラー筋の存在部位を確認するために，採取した上眼瞼を矢状断にスライスし，抗平滑筋アクチン抗体を用いて免疫染色した。

（論文の内容の要旨）【結果】フェニレフリン（0.001‑30μmol）を注入す【背景と目的】上眼瞼の平滑筋であるミュラー筋は開ると，イヌ上眼瞼ミュラー筋は用量依存的に収縮し瞼を補助しており，眼瞼の挙上に重要な組織である。

た。Hillの式による解析では，フェニレフリンの最大

また，眼輪筋などの痙攣とミュラー筋の働きに関連が張力は0.70g，K （最大反応の50％を引き起こすある可能性も報告されており，ミュラー筋には，瞼をフェニレフリンの用量）は0.11μmol，Hill係数は1.50

開けるための補助的な役割以外の機能が存在するのでであった。フェニレフリンによる収縮は，平均92±はないかと考えられている。上眼瞼挙筋の腱膜と瞼板

6.4分持続した。WB4101（100nM ）が存在下での，との接着が弱まり，瞼が開けづらくなっている腱膜性

フェニレフリンによる最大張力は0.64g，K は2.9

眼瞼下垂症患者では，αアドレナリン受容体アゴニ

μmol，Hill 係 数 は0.86で あ っ た。 WB4101（100ストであるフェニレフリンを点眼することによって上nM ）は，フェニレフリンの用量反応曲線を右方へシ

眼瞼のミュラー筋が収縮し，瞼が開くことが示されてフトし，同じ収縮力を得るための用量を増加させたが，いる。ヒトのミュラー筋に関しては，切除検体を用い最大反応を有意に抑制しなかった。したがって，フェた収縮反応実験から，αアドレナリン受容体の α ，ニレフリンの反応は WB4101によって競合的に阻害

α ，α のサブタイプのうち，α アドレナリン受容され た と 考 え ら れ た。BM Y7378（100nM ）ま た は体が優位であるという報告もあるが，受容体のサブタ

WB4101（100nM ）は，フェニレフリンにより誘発イプの検索が眼瞼下垂症の病態生理や，ミュラー筋のされる持続的収縮をいずれも時間依存性に抑制したが，機能の解明を進めていくために重要であるため，イヌ

WB4101（100nM ）は BMY7378（100nM ）より有意の上眼瞼を用いた新しい実験系を確立し，薬理学的手に強い抑制を示した。したがって，α アドレナリ法にて，ミュラー筋の収縮を誘発する αアドレナリン受容体阻害よりも，α アドレナリン受容体阻害がン受容体サブタイプを分析した。

強く収縮を抑制した。ABT ‑866（0.001‑3μmol）を【材料および方法】22頭のビーグル犬（体重10‑15kg）

注入するとイヌ上眼瞼ミュラー筋は用量依存的に収から上眼瞼を周囲の軟部組織とともに採取した。眼瞼

縮 し た。Hillの 式 に よ る 解 析 で は，ABT ‑866の 最組織内に分布する眼角静脈にカニューレを挿入し，こ大張力は0.67g，K （最大反応の50％を引き起こす

こから逆行性に36±１℃の Krebs‑Henseleit 液を灌

ABT ‑866の 用 量）は0.19μmol，Hill 係 数 は0.72で流し，同液を満たした専用チャンバーに設置した。上あった。眼瞼組織の免疫染色では収縮力測定に用いた

眼瞼の瞼縁側に絹糸を４箇所取り付け，収縮力測定のすべての標本で，眼瞼結膜下にミュラー筋に相当する

ためのトランスデューサと接続し，等尺性収縮力を測

平滑筋が密集して存在していることを認めた。

定した。αアドレナ リ ン 受 容 体 ア ゴ ニ ス ト で あ る【結論】ミュラー筋の収縮と収縮の維持には，α アド

フェニレフリンをカニューレから累積的にボーラス

レナリン受容体の刺激が関わっている。ABT ‑866の投与し，張力反応を測定した。収縮張力の用量反応

ような α アドレナリン受容体アゴニストはミュラー

曲 線 は Hillの 式 で 解 析 し た。ま た，WB 4101（α筋の持続的収縮を惹起し，眼瞼下垂症の改善に役立つ

お よ び α ア ド レ ナ リ ン 受 容 体 拮 抗 薬）
（ 100nM ）可能性がある。

を含む Krebs‑Henseleit 液を灌流させて，フェニレ
フリンを注入したときの収縮を測定した。次に，フェ338（論文審査の結果の要旨）
上眼瞼の平滑筋であるミュラー筋は開瞼を補助して
信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

おり，眼瞼の挙上に重要な組織である。また，眼輪筋

Hill 係 数 は0.86で あ っ た。WB4101（100nM ）は，などの痙攣とミュラー筋の働きに関連がある可能性もフェニレフリンの用量反応曲線を右方へシフトし，同報告されている。上眼瞼挙筋の腱膜と瞼板との接着がじ収縮力を得るための用量を増加させたが，最大反応弱まり，瞼が開けづらくなっている腱膜性眼瞼下垂症を有意に抑制しなかった。したがって，フェニレフリ

患者では，αアドレナリン受容体アゴニストである

ン の 反 応 は WB 4101に よ っ て 競 合 的 に 阻 害 さ れ た

フェニレフリンを点眼することによって上眼瞼のミュと考えられた。BMY7378（100nM ）または WB4101

ラー筋が収縮し，瞼が開くことが示されている。受容（100nM ）は，フェニレフリンにより誘発される持体のサブタイプの検索が眼瞼下垂症の病態生理や，ミュ続的収縮をいずれも時間依存性に抑制したが，WB4101

ラー筋の機能の解明を進めていくために重要であるた（100nM ）は BMY 7378（100nM ）よ り 有 意 に 強 いめ，本論文は，イヌの上眼瞼を用いた新しい実験系を抑制を示した。したがって，α アドレナリン受容体

確立し，薬理学的手法にて，ミュラー筋の収縮を誘発阻害よりも，α アドレナリン受容体阻害が強く収縮する αアドレナリン受容体サブタイプを分析したもを抑制した。ABT ‑866（0.001‑3μmol）を注入するのである。

とイヌ上眼瞼ミュラー筋は用量依存的に収縮した。

22頭のビーグル犬（体重10‑15kg）から上眼瞼を周Hillの式による解析では，ABT‑866の最大張力は0.67g，

囲の軟部組織とともに採取した。眼瞼組織内に分布す

K （最 大 反 応 の50％ を 引 き 起 こ す ABT ‑866の 用る眼角静脈にカニューレを挿入し，ここから逆行性に量）は0.19μmol，Hill 係数は0.72であった。眼瞼組

36±１℃の Krebs‑Henseleit 液を灌流し，同液を満織の免疫染色では収縮力測定に用いたすべての標本で，たした専用チャンバーに設置した。上眼瞼の瞼縁側に

眼瞼結膜下にミュラー筋に相当する平滑筋が密集して絹糸を取り付け，収縮力測定のためのトランスデュー

存在していることを認めた。

サと接続し，等尺性収縮力を測定した。αアドレナリ

これらの結果より，ミュラー筋の収縮と収縮の維持

ン受容体アゴニストであるフェニレフリンをカニューには，α アドレナリン受容体の刺激が関わっている。

レから累積的に投与し，張力反応を測定した。収縮張ABT ‑866のような α アドレナリン受容体アゴニス

力の用 量 反 応 曲 線 は Hill の 式 で 解 析 し た。ま た，トはミュラー筋の持続的収縮を惹起し，眼瞼下垂症のWB4101（α および α アドレナリン受容体拮抗薬）

改善に役立つ可能性があることが明らかにされた。よ（100nM ）を含む Krebs‑Henseleit 液を灌流させて，って主査，副査は一致して本論文を学位論文として価フェニレフリンを注入したときの収縮を測定した。次値があるものと認めた。

に，フェニレフリンでミュラー筋組織を収縮させた後に，BM Y7378（α ア ド レ ナ リ ン 受 容 体 拮 抗 薬）
（100nM ）を Krebs‑Henseleit 液に溶解して灌流し，その後 WB4101（100nM ）を続けて灌流して弛緩する変化量を調べた。最後に，ABT‑866（α アドレナ
リン受容体アゴニスト）をフェニレフリンの代わりにApplication of ﬂuorodeoxyglucose positron emission tomography in the detectionof proximal lesions in obstructive colorectal cancer（FDG‑PET 検査の閉塞大腸癌に対する近位側病変評価への応用）

累積的に投与し，収縮力を測定した。ミュラー筋の存

森

在部位を確認するために，採取した上眼瞼を矢状断にスライスし，抗平滑筋アクチン抗体を用いて免疫染色
した。

周

介

（論文の内容の要旨）【背景と目的】大腸癌は先進国において増加傾向にあフェニレフリン（0.001‑30μmol）を注入すると，り，多発大腸癌は全大腸癌症例の4.6〜11％にみられ

イヌ上眼瞼ミュラー筋は用量依存的に収縮した。Hill

る。進行大腸癌による強い狭窄があって内視鏡が通過の式による解析では，フェニレフリンの最大張力はできない場合これより口側腸管の評価は困難となる。

0.70g，K （最大反応の50％を引き起こすフェニレ

内視鏡通過不可能な閉塞大腸癌に対する口側腸管のフリンの用量）は0.11μmol，Hill 係数は1.50であっ術前評価法として F‑ﬂuorodeoxyglucose positron

た。フェニレフリンによる収縮は，平均92±6.4分持emission tomography（FDG‑PET）が有用であるか続した。WB4101（100nM ）が存在下での，フェ ニ検討を行った。

レフリンによる最大張力は0.64g，K は2.9μmol，【対象と方法】過去78カ月間に内視鏡通過不可能であ

No. 5, 2011339

審査学位論文要旨

る閉塞大腸癌に対し術前に FDG‑PET を施行した症

は４ ‑80mm（中 央 値15）
，PET 陰 性 群 は ２ ‑10mm

例を後向きに調査し，病理組織検査もしくは術後12カ（中央値５）であり２群間に有 意 差 を 認 め た（P ＝月以内に消化管内視鏡検査が施行され口側腸管の評価

0.00014）。５）この２群を分ける腫瘍径をカットオフが行われたものを対象とし，FDG‑PET 施行時に血値に設定し受信者操作特性曲線分析法を用いて至適感

糖値が200mg/dL を超えるものを除外した。結果本度と特異度を求めたところ，８ mm 以上の腫瘍の検研究の対象は52例となった。FDG‑PET 検査は４時出に対する PET の感度は94.1％，特異度93.3％で間以上の絶食の後５ MBq/kg の FDG を静注し60分あった。

後に全身撮像を行い，腹部に局所的な集積を認めた場【結論】FDG‑PET 検査は質的診断能には劣るが，口合は120分後にその部位の遅延像撮像を追加した。肝側腸管に異常集積を示した場合にはその SUV臓の集積よりも強い結節状集積であり遅延像で集積がり腫瘍の大きさの推定が可能であり，８ mm 以上の同等から増強するものを異常集積と判断し，腸管に沿っ病変の検出に関し高い感度，特異度を持つことが示さたびまん性の集積もしくは結節状集積であっても遅れた。内視鏡通過不可能な閉塞大腸癌の術前検査とし延像で消失あるいは形状が変化するものは生理的集て FDG‑PET 検査は口側腸管病変の検索に有用であ積と判断した。Standardized uptake value（SUV）

ることが示唆された。

は FDG の集積度を半定量化したもので，病的集積を認めた場合にその最高値（SUVによ（論文審査の結果の要旨））を測定した。こ

大腸癌による強い狭窄があって内視鏡が通過できな

こでは口側腸管に FDG の異常集積を認めるものをい場合これより口側腸管の評価は困難となる。内視鏡

PET 陽性，認めないものを PET 陰性と定義した。

通過不可能な閉塞大腸癌に対する口側腸管の術前評価

統計解析は中央値およびノンパラメトリック検定を用法として18F‑ﬂuorodeoxyglucose positron emission

い， P値0.05未満を統計学的有意とした。

tomography（FDG‑PET）検査が有用であるか検討【結果】対象の特徴として，内視鏡通過不可能な主病を行った。

変の部位は上行結腸11例，横行結腸12例，下行結腸４

閉塞大腸癌に対し術前に FDG‑PET 検査を施行し例，Ｓ状結腸14例，直腸11例で，年齢は51‑86歳（中た症例を後向きに調査した。病理組織検査もしくは術央値70），男女比は33対19，FDG 投与20分前の血糖値

後12カ月以内に消化管内視鏡検査が施行され口側腸管は67‑153mg/dL（中央値86.5），主病変の SUV

はの評価が行われたものを対象とし，FDG‑PET 検査

5.3‑25.0（中央値13.8）であった。PET 陽性群は52

施行時に血糖値が200mg/dL を超えるものを除外し例中12例が該当し，計17の口側病変への異常集積を認た結果，本研究の対象は52例となった。FDG ‑PET

め，その内訳は腺腫10，早期癌５，進行癌２であった。

検査は４時間以上の絶食の後５ MBq/kg の FDG を

17病変のうち術前に CT で病変が指摘可能であったも静注し60分後に全身撮像を行い，局所的な集積を認めのは２病変でありいずれも進行癌であった。PET 陰

た場合は120分後に遅延像を追加した。肝臓の集積よ性群は40例が該当し，うち25例は術後内視鏡検査により強い結節状集積であり遅延像で同等から増強するもる口側腸管の評価が行われた。残りの15例は結腸右半のを異常集積と判断し，腸管に沿ったびまん性の集積切除術が施行され病理組織診断で全例に口側病変を認

もしくは結節状集積であっても遅延像で消失あるいはめなかった。術後初回内視鏡検査までの期間は１‑12形状が変化するものを生理的集積と判断した。Stan-

カ月（中央値10）であり，12例に15病変が認められそ

dardized uptake value（SUV）は FDG の集積度をの内訳は腺腫13，早期癌２であった。統計解析で以下半定量化したもので，異常集積を認めた場合に関心領の結論を得た。１）腫瘍径と SUV

域の最高値（SUVに正の相関を認）を測定した。統計解析は中央めた（P ＝0.00016）。２）口側腫瘍の存 在 に 対 す る

値およびノンパラメトリック検定を用い， P値0.05未PET 検査の感 度 は50％ で 特 異 度 は100％ で あ っ た

満を有意とした。

（P ＝0.002）。３）PET 陽性群の口側病変の組織学的診断は腺癌７，腺腫10，PET 陰性群は腺癌２，腺腫13であり，群間比

で有意差を認めず集積の有無で癌と腺腫の鑑別に至るという結果は得られなかった（P ＝ 0.12）。４）PET 陽 性 群 の 口 側 病 変 の 腫 瘍 径340

その結果，森は次の結論を得た。
１．腫 瘍 径 と SUVに 正 の 相 関 を 認 め た（P ＝0.00016）。
２．腫瘍の存在に対する PET 検査の感度は50％，特異度は100％であった（P ＝0.002）。
信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

３．異常集積の有無より癌と腺腫を鑑別するには至らなかった。

りも小さい変異体（vASC）が存在することをウエス
タンブロット解析法および質量分析法により確認した。

４．異常集積を認めた場合の口側病変の腫瘍径は４‑

本研究では fASC と vASC の性質の違いを調べるこ

80mm（中央値15），異常集積を認めない場合の腫とによって，エクソン２に対応する蛋白質部位の役割

瘍径は２‑10mm（中央値５）であり２群間に有意と ASC の活性機構を調べることを目的とした。

差を認めた（P ＝0.00014）。

【方法と結果】fASC および vASC を細胞内で強制発

５．８ mm 以上の腫瘍の検出に対する PET 検査の感現させて分布を調べたところ，２つとも自己結合によっ度は94.1％，特異度は93.3％であった。

て繊維状の凝集体をつくったが，２つの点で違いがこれらの結果より FDG‑PET 検査は質的診断能にあった。fASC は一部の細胞でのみ凝集体が形成されは劣るが，SUVにより腫瘍の大きさの推定が可能

たが，vASC は発現した全ての細胞で凝集体が形成さであり，８ mm 以上の病変の検出に関し高い感度，れた。また，凝集体の形態を見ると，fASC は 円形

特異度を持つことが示され，閉塞大腸癌の術前検査との繊維状凝集体をつくるが，vASC は分枝形の繊維状しての有用性が示唆された。よって主査，副査は一致

凝集体を形成した。

して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

fASC と vASC の活性作用の違いがあるのか調べる
ため細胞内にカスペース‑1前駆体，IL‑1β前駆体，A splice variant of ASC regulates IL‑1βrelease and aggregates diﬀerently from
intact ASC（カスペース‑１活性化シグナル
経路のアダプター分子の ASC スプライシン
グ変異体（vASC）は IL‑1βの放出と凝集において全長 ASC とは異なっている）
松

下

一

彦

（論文の内容の要旨）

fASCまたはvASCを共強制発現させて，カスペース‑1の活性化をウエスタンブロット解析法により測定した。fASC と vASC はほぼ同程度にカスペース‑1前駆体を活性型にし，IL‑1β前駆体も活性型にプロセッシングされることを確認することができた。プロセッ
シングされた IL‑1βは速やかに細胞外に放出されるので，培地中に放出された IL‑1βの量を ELISA で測定したところ，fASC，vASC の活性化により培地中に IL‑1βが検出され，vASC を強制発現させた時の【背 景 と 目 的】ASC（apoptosis‑associated speck

方がより IL‑1βの放出量が多い傾向にあった。

like protein containing a caspase recruit domain）【考察】以上の結果から，エクソン２はカスペース‑1

は， CARD（ caspase recruit domain）と PYD

活性化には必須ではないが，inﬂammasome 形成上重（pyrin domain）から成るアダプター分子であり，分要な役割を果たしていることが示唆された。また，こ子腫瘍学分野で22KDa のアポトーシス促進蛋白質との部分がヒンジ部分に相当すると推定され，凝集体形して同定された。ASC は PYD と CARD という二つ成頻度が vASC において高いことから fASC の不活の結合モチーフを持ち，ASC と結合する主要な蛋白性状態ではヒンジ部分で折りたたまれて閉じた状態に質は CARD を有するカスペース‑1と，ロイシンリッ

維持されており，ヒンジ部分のない vASC では常にチ領域を持つ細胞質の病原体受容体として最近注目さ活性化された状態になっているのではないかと考えられている PYRIN ファミリー蛋白質 NLRPs が知られれた。

ており，ASC はカスペース‑1活性化分子であることが確立されている。

（論文審査の結果の要旨）
細胞質病原受容体（cytosolic pathogen receptor）

ASC の mRNA は３つのエクソンによって構成さとその下流分子は炎症と自然免疫の分野で近年注目されており，エクソン１およびエクソン３には結合モれている。ASC は細胞質型の自然免疫シグナル調節

チーフである PYD と CARD がそれぞれ対応しエク蛋白質として機能しており，NLRPs やカスペース‑1

ソン２には19残基のアミノ酸がコードされているが，前駆体などとともに inﬂammasome を形成し，カス

３個のグリシン残基と４個のプロリン残基が含まれる。

ペース‑1を活性化することがわかっている。ASC は遺伝子データバンクで ASC mRNA にはエクソン１

ASC 遺伝子のエクソン１（1‑90aa）エクソン２（91‑とエクソン３のみからなるものが知られてきたが，

110aa）エクソン３（111‑195aa）から構成され，エク

我々は蛋白質レベルでも普通の全長 ASC（fASC）よ

ソン１に対応する PYD（pyrin domain），エクソン

No. 5, 2011341

審査学位論文要旨

３に対応する CARD（caspase recruit domain）からなるアダプター分子であり，当初，HL‑60細胞におけるアポトーシス促進蛋白質として見出された。HL‑
60細胞を SDS‑PAGE で泳動し，抗 ASC 抗体でウェスタンブロット解析を行うと，ASC の他に低発現の低分子量蛋白質も見出されており，松下はこの低分子

Mouse Senile Amyloid Fibrils Deposited in
Skeletal Muscle Exhibit Amyloidosis‑Enhancing Activity（骨格筋に沈着したマウス
老化アミロイド線維はアミロイドーシス発症促進効果を持つ）

量蛋白質Ｘに注目して検討し，以下の結果を得た。

銭

１．この蛋白質Ｘを質量分析しデータベースで解析す金澤

ると，ASC からグリシンとプロリンに富むエクソ（論文の内容の要旨）

ン２に対応するオリゴペプチドが欠失した splicing【背景と目的】アミロイドーシスとはアミロイドタン

variant であることが分かった。

パク質がアミロイド線維を形成し，臓器/組織に沈着

２．この variant ASC（vASC）と full length ASC

する「タンパク質のフォールディング異常」が原因の（fASC）の機能カスペース‑1活性化能の相違を調疾患群である。マウス老化ア ミ ロ イ ド ー シ ス で はべた。そのために，Cos7細胞に，カスペース‑1前

apolipoprotein A‑II（apoA‑II）がアミロイド線維

駆体，IL‑1β前駆体，fASC もしくは vASC の発現（AApoAII）を形成して全身臓器に沈着するが，アミベクターを導入し強制発現させた。その結果，細胞ロイドーシスが発症したマウスから排出された糞，ミ内のカスペース‑1，IL‑1βの産生に有意な差はみルクや唾液を介した，個体から個体への伝播の可能性

ら れ な か っ た が，細 胞 外 に 放 出 さ れ た IL‑1βはが示されてきた。すなわちマウス AApoAII アミロイ

vASC 強制発現細胞において fASC 強制発現細胞よドーシスは「伝播性疾患」であることが明らかになっりも多いことが認められた。

た。最近 Creutzfeldt‑Jacob 病などの各種プリオン病

３．fASC あるいは vASC の強制発現細胞内においてでは骨格筋中に異常プリオンタンパク質（PrP ）vASC の方が fASC よりも高頻度で凝集体を形成し，が検出され，筋肉を食することによる疾患の伝播のfASC は環状凝集体を作ったのに対し，vASC は枝

可 能 性 が 危 惧 さ れ て い る。そ こ で，本 研 究 で は，状の凝集体を作った。

AApoAII アミロイドーシスの伝播機構をより詳細に

４．以 上 の 結 果 よ り，グ リ シ ン と プ ロ リ ン に 富 む解明するために，骨格筋組織への AApoAII 線維の沈ASC エクソン２対応部分は ASC によるカスペー

着と沈着した AApoAII 線維の伝播性を解析した。

ス‑1活性化に必須ではないが，ASC 構造に影響し，【材料及び 方 法】マ ウ ス：R1.P1‑Apoa2 （SAMR1

結果として inﬂammasome 形成・ IL‑1放出制御にC）マウスはアミロイドーシスを好発する apoA‑II の関わると考えられた。

対立遺伝子（Apoa2 ）を持つコンジェニックマウス

本研究は，カスペース‑1活性化因子 ASC の PYD

系統，Apoa2 Tg は全身臓器で Apoa2 タンパク質がと CARD 間 の エ ク ソ ン ２ 対 応 部 分 が 細 胞 内 で の過剰発現し，老化アミロイドーシスを好発するトラン

inﬂammasome 形成と IL‑1産生放出の制御に関わっ

スジェニックマウス系統である。アミロイドーシスのていることを示唆し，ASC の splicing variant の同誘発：重度にアミロイド線維が沈着した SAMR1C マ

定は臨床における炎症の解析に対して有用な情報を提ウス肝臓よりアミロイドーシス誘発用の AApoAII ア

供するものと考えられ，主査，副査は一致して本論文

ミロイド線維を分取した。２カ月齢の SAMR1C とを学位論文として価値あるものと認めた。

Apoa2 Tg マウスの尾静脈に AApoAII アミロイド線維を投与後，２カ月と４カ月で屠殺した。筋肉へのア
ミロイド沈着をコンゴ赤染色，免疫組織染色，Western blot 解析と電子顕微鏡で検討した。筋肉から抽出した AApoAII 線維による２次伝播性：AApoAII が沈着した骨格筋からアミロイド線維分画を抽出し，SAM R1C マウスの尾静脈に投与し，２カ月後に屠殺して，各臓器へのアミロイド沈着を Amyloid Indexで評価した。

342

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨【結 果】 AApoAII 線 維 を 投 与 し た SAM R1C や筋肉へのアミロイド沈着をコンゴ−赤染色，免疫組織

Apoa2 Tg マウスでは，投与後２カ月で，全身臓器に染色，Western blot 解析と電子顕微鏡で検討した。

AApoAII アミロイド線維が沈着するとともに，複数

さらに，AApoAII が沈着した骨格筋からアミロイドの部位（前肢，後肢，胸部，背部）の骨格筋組織中に線維分画を抽出し，SAMR1C マウスの尾静脈に投与

AApoAII アミロイド線維が沈着し，大胸筋への沈着

し，２カ月後に屠殺して，全身へのアミロイド沈着のの程度は一番強いことが明らかになった。４カ月後に程度を調べた。

は骨格筋への沈着程度は増大したが，Apoa2 Tg マウ

その結果，銭金澤は次の結論を得た。

スが SAMR1C マウスよりも有意に強かった。沈着部

１．Real‑Time PCR 法により，肝臓と比 すると少位は主に筋肉の血管及び間質組織（筋内膜）であるこ

量であるが，骨格筋でも apoA‑II mRNA が発現がとが明らかなった。骨格筋から分取されたアミロイド

明らかになった。骨格筋での apoA‑II 発現のアミ線維の Western blot 解析の結果，AApoAII アミロ

ロイド沈着への関与は不明である。

イド線維の沈着が確認された。また，電子顕微鏡によ２．全身臓器に AApoAII アミロイド線維が沈着する

る観察では血管壁及び筋内膜へのアミロイド線維の沈とともに，複数の部位（前肢，後肢，胸部，背部）着を確認した。骨格筋から抽出したアミロイド線維は，の骨格筋組織中に AApoAII アミロイド線維の沈着

肝臓から分取されたアミロイド線維に比 すると細く，が認められたがが，大胸筋への沈着の程度が一番強短い線維であった。骨格筋から分取した AApoAII ア

かった。

ミロイド線維分画を SAMR1C マウスへ投与すると，アミロイドーシスを誘発したが，6M グアニジン塩酸
処理でアミロイド線維構造を破壊すると，誘発はおこらなかった。この結果から骨格筋肉中に存在するアミロイド線維構造による伝播が示唆された。

３．筋肉へのアミロイド沈着は，アミロイド誘発後の時間経過に伴い沈着程度が増加した。
４．沈着部位は主に筋肉の血管及び間質組織（筋内膜）であった。
５．骨格筋から分取した AApoAII 線維の投与（静脈【結論】本研究では，マウスの骨格筋への AApoAII内）はアミロイド線維構造に依存して，アミロイドー

アミロイド線維の沈着を確認し，沈着したアミロイド

シスを誘発した。

線維のマウスへの投与実験では２次伝播性を示した。

以上の結果は，AApoAII アミロイドーシスでも，

すなわち，AApoAII のような全身性アミロイドーシ

Prion 病と同様に，筋肉を介した伝播の可能性が示唆

スでも，プリオンと同様に筋肉を介して伝播する可能さ れ，全 身 性 ア ミ ロ イ ド ー シ ス（AApoAII や AA性が示唆され，アミロイドーシスの発症機構の解明と等）の発症機構の解明や予防法の開発に新たな視点を予防法の開発に新たな視点を与える。

与えるものである。このような銭金澤の研究成果は非（論文審査の結果の要旨）
AApoAII アミロイドーシスでは，発症したマウスから排出された糞，ミルクや唾液を介した伝播の可能常に重要でありかつ意義あることと考えられた。
よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

性が示されてきた。今回，AApoAII アミロイドーシスの伝播機構をより詳細に解明するために，骨格筋組
織への AApoAII 線維の沈着と沈着した AApoAII 線
維の伝播性を解析した。
アミロイドーシスを好発する apoA‑II の対立遺伝子（Apoa2 ）を持つコンジェニックマウス R1.P1‑
Apoa2 （SAMR1C） 及び全身臓器で Apoa2 タンパ
ク質が過剰発現するトランスジェニックマウス

Down‑regulation of SREBP‑1c is associated with the development of burned‑out
NASH（非アルコール性脂肪肝炎の進行に伴う肝脂肪沈着の減少は，1c 型ステロール
調節領域結合蛋白の発現低下に関連する）
長

屋

匡

信

Apoa2 Tg 系統を用いた。重度にアミロイド線維（論文の内容の要旨）が沈着した SAM R1C マウス肝臓よりアミロイドーシ【目的】非アルコール性脂肪肝炎（以下 NASH）ではス 誘 発 用 の AApoAII ア ミ ロ イ ド 線 維 を 分 取 し，

線維化進行に伴い肝臓内の脂肪沈着量の減少を認める，

SAM R1C と Apoa2 Tg マウスの尾静脈に投与した。

いわゆる burned‑out NASH の状態になることが知アミロイドーシスを誘発２カ月と４カ月後に屠殺し，られているが，その形成機構は不明である。本研究でNo. 5, 2011343

審査学位論文要旨

は，NASH の線維化進行に伴う脂肪酸・中性脂肪代された50例［単純性脂肪肝10例，線維化の比 的軽度

謝の変化を遺伝子レベルで解析することで burned‑

な NASH（Mild NASH）20例，高度の線維化を伴

out NASH の形成機構を解明することを目的とした。

うNASH（Advanced NASH）20例］，正常肝６例を【方法】2006年４月〜2008年３月までに当院及び関連対象とし，各群間における患者背景，生化学，組織学

病院で肝生検を施行し，NAFLD と診断された50例

的解析に加え，肝生検により得られた肝臓中の脂質代［単純性脂肪肝10例，線維化の比的軽度な NASH

謝関連遺伝の mRNA 発現量を定量 PCR 法で，また，（M ild NASH）20例，高度の線維化を伴う NASH

蛋白質発現量は免疫染色及びイムノブロット法を用い（Advanced NASH）20例］，正常肝６例を対象として測定した。

た。各群間における患者背景，生化学，組織学的解析

その結果，長屋は以下の結論を得た。

に加え，肝生検により得られた肝臓中の脂質代謝関連

１．脂肪酸取り込み・輸送系，脂肪酸酸化関連遺伝

遺伝の mRNA 発現量を定量 PCR 法で解析した。ま子及び very‑low‑density lipoprotein（VLDL）合た，蛋白発現量は免疫染色及びイムノブロット法を用

成・分泌系に関連する遺伝子においては各群間でのいて測定した。

差は認められなかった。

【結果】脂肪酸取り込み・輸送系，脂肪酸酸化関連遺２．脂肪酸合成関連遺伝子である fatty acid synthase

伝子及び very‑low‑density lipoprotein（VLDL）合（FAS），Acetyl‑CoA carboxylase1（ACC1），ま成・分泌系に関連する遺伝子においては各群間での差

た，中性脂肪合成に関与する diacylglycerol‑acyl-は認められなかった。脂肪酸合成関連遺伝子である

transferase1（DGAT1）では単純性脂肪肝と比

fatty acid synthase（FAS），Acetyl‑CoA carbox

して，NASH 群で有意に mRNA の発現量低下を，また，中性脂肪合成に関与するdiacylylase1（ACC1）
glycerol‑acyltransferase1（DGAT1）では単純性脂
肪肝と比

認めた。
３．核内転写因子である1c 型ステロール調節領域結

し て，NASH 群 で 有 意 に mRNA の 発合蛋白質 sterol regulatory element‑binding pro-

現量低下を認めた。それらの遺伝子を調節している

tein（SREBP）‑1c も同様に NASH の進行により核内転写因子である1c 型ステロール調節領域結合低下していた。

蛋 白 sterol regulatory element ‑ binding protein（SREBP）‑1c も同様に NASH の進行により低下し４．FAS，ACC1，DGAT 1，SREBP‑1cは線維化
stage と有意に逆相関していた。

ていた。FAS，ACC1，DGAT1，SREBP‑1c は線維５．SREBP‑1免疫染色に加え，蛋白質電気泳 動 に化 stage と優位に逆相関していた。また，SREBP‑1

おいても同 様 に，NASH の 線 維 化 進 行 に 伴 い，

免疫染色に加え，蛋白電気泳動においても同様に，

SREBP‑1の発現低下を認めた。

NASH の線維化進行に伴い，SREBP‑1の発現低下を

６．liver X receptor（LXR）α，retinoid X rece-認めた。さらに，NASH の進行に伴い，炎症性サイ

ptor（RXR）α，peroxisome proliferator ‑acti-

トカインである tumor necrosis factor（TNF）‑αvated receptor（PPAR）α，PPARδ，PPARγ，の増加を認め，SREBP‑1c の発現低下との関連が示PPARγ coactivator（PGC）1β，carbohydrate

唆された。

regulatory element‑binding protein（ChREBP）【結論】SREBP‑1c 及び，SREBP‑1c に 調 節 さ れ てなどの転写因子の発現には各群間での差は認められいる脂肪・中性脂肪合成遺伝子の発現低下が burned‑

なかった。

out NASH の形成に関連することが示された。本研

７．NASH の進行に伴い，炎症性サイトカインであ究は NASH の進行に伴う遺伝子発現変化を考える上る tumor necrosis factor（TNF）‑αの増加を認で有用な情報を提示するものと考えられた。

め，SREBP‑1c の発現低下との関連が示唆された。

（論文審査の結果の要旨）

今回の研究は日本人 NAFLD 患者において各病期

非アルコール性脂肪肝炎（以下 NASH）では線維での脂質代謝遺伝子の発現解析を行った最初の研究で化進行に伴い肝臓内の脂肪沈着量の減少を認める，いある。NASH の進行による肝臓における脂肪沈着低

わゆる burned‑out NASH の状態になることが知ら下の原因として転写因子である SREBP1c が関与しれているが，その形成機構は不明である。本研究では，ていることが解明できた。このことにより NASH の

非アルコール性脂肪肝疾患（以下 NAFLD）と診断

病態の解明，将来的には各病期での治療法の選択にも344

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

つながると考えられる。

【結果】冠動脈疾患患者ではアデノシン負荷中の MD‑

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

TES と MD‑TPF1は安静時に比し有意に延長したが，コントロール群では有意な変化は認めなかった。さらに，冠動脈疾患患者では虚血の重 症 度 を 示 す SDS

Assessment of Left Ventricular Dyssynchrony in Patients with Coronary
Artery Disease During Adenosine Stress
Using ECG‑gated Myocardial Perfusion
Single Photon Emission Computed Tomography（冠動脈疾患患者における心電図同期 SPECT を用いたアデノシン負荷中の左室
非同期性の評価）
堀

込

実

岐

（summed diﬀerence score）と the extent of change
of MD‑TES（post‑stress M D‑TES minus rest MD‑
TES）間に正の相関を認め，the extent of changes
in M D‑TPF1（post‑stress MD‑TPF1 minus rest
M D TPF1）との間にも正の相関を認めた。
【考察】本研究では，正常心機能の冠動脈疾患患者において，アデノシン負荷により左室の非同期性が生じることが初めて示された。これまで，冠動脈疾患患者
では運動または薬物負荷により心筋の stunning が生
じ，LV dysfunction が生じうることは報告されてい（論文の内容の要旨）る。しかし，運動または薬物負荷による左心室の非同【背景と目的】左心室の非同期性は左室収縮能が低下

期性についてはこれまでに報告されていない。負荷をし，心電図上 QRS 幅が拡大した心不全患者に生じる

行わない安静時の検討としては，豚の心臓において心と考えられてきた。しかし，最近の報告では QRS 幅筋に局所的な stunning が生じると非同期性が起こるが正常であっても非同期性がみられると報告されていことが報告されている。また，人の心臓については心る。さらに冠動脈疾患を有する患者でも，心電図上

電図同期ポーラーマップという手法を用いて，左心室

QRS 幅が正常であっても左室に非同期性が生じるこの非同期性をみる指標として SDP（standard devia-とが報告されている。これまで，冠動脈疾患を有する

tion of the peak contraction phase）を評価した研究

患者については安静時の左室非同期性の評価が報告さが報告されているが，これによると収縮時相の SDPれているが，運動または薬物負荷時の評価を行った報と左室駆出率（EF），最大駆出速度（PER）などの告はなく，当研究では左室収縮能が保たれている冠動収縮指標は逆相関し，拡張時相の SDP と最大充満

脈疾患患者に対してアデノシン負荷を行った際の左室速度（PFR），拡 張 早 期1/3で の 平 均 充 満 速 度（1/3

非同期性について，心電図同期 SPECT による左室FR）などの拡張指標は逆相関することが示されて

局所壁運動解析法を用いて検討した。

いる。このことから，運動または薬物負荷により虚【方法】冠動脈疾患患者18名，コントロール18名を対血心筋の stunning が生じ，EF や PER の低下または象とした。冠動脈造影検査にて冠動脈に75％以上のPFR や1/3FR の低下がみられ LV dysfunction が生

有意狭窄があり，心筋梗塞の既往がなく，EF＞50％，

じている場合には，それぞれ収縮時相，拡張時相での心電図上 QRS 幅が正常の患者を冠動脈疾患患者とし非同期性の増大が生じうると考えられる。本研究では，た。SPECT 画像は安静時とアデノシン負荷時の２回薬物負荷により心筋の局所的な stunning が生じ，結撮影した。QGS を用いて左室局所の壁運動を17分画果として左室の非同期性が生じたと考える。さらに，にわけて解析し，それぞれ０から収縮末期までの時間

左室の非同期性と虚血の重症度 を 示 す SDS（sum-（time to end systole；TES），０から収縮極期までの

med diﬀerence score）との間には正の相関関係があ

時間（time to peak ejection；TPE），０から拡張極ることが示されており，左室の非同期性を負荷時に評期までの時間（time from 0to peak ﬁlling during the

価することにより，虚血の存在や重症度の評価に貢献，収縮末期から拡張
whole diastolic period；TPF1）できる可能性があると考える。

極期までの時間（time from end systole to peak

（論文審査の結果の要旨）

ﬁlling during the whole diastolic period；TPF2）を

左心室の非同期性は左室収縮能が低下し，心電図上

測 定 し た。各 項 目 毎 の maximal diﬀerence（MD）

QRS 幅が拡大した心不全患者に生じると考えられて（17領域中最長と最短の差）を測定し，これを心室非きた。しかし，最近の報告では QRS 幅が正常であっ

同期性の指標とした。

ても非同期性がみられると報告されている。さらに冠No. 5, 2011345

審査学位論文要旨

動脈疾患を有する患者でも，心電図上 QRS 幅が正常であっても左室に非同期性が生じることが報告されている。これまで，冠動脈疾患を有する患者については
安静時の左室非同期性の評価が報告されているが，負荷時の評価を行った報告はなく，当研究では左室収縮能が保たれている冠動脈疾患患者に対してアデノシン

Hyaluronan deﬁciency in tumor stroma
impairs macrophage traﬃcking and tumor
neovascularization（腫瘍間質のヒアルロン
酸欠損はマクロファージ動員と腫瘍血管新生を阻害する）

負荷を行った際の左室機能および左室非同期性につい

小て，心電図同期 SPECT による左室局所壁運動解析法を用いて検討した。

林

宣

隆

（論文の内容の要旨）

冠動脈疾患患者18名，コントロール18名を対象とし【背景と目的】癌の進展過程は，単に癌細胞自身の自た。SPECT 画像は安静時とアデノシン負荷時の２回律的増殖のみならず，腫瘍微小環境との相互作用に撮影した。左室局所壁運動解析ソフト（QGS）を用

よって制御される。ヒアルロン酸（HA）は細胞外マト

いて左室局所の壁運動を17分画にわけて解析し，それリックス（ECM ）を構成する主要な分子であり，腫ぞれ０から収縮末期までの時間，０から収縮極期まで

瘍間質の HA の蓄積は予後不良因子であることが報の時間，０から拡張極期までの時間，収縮末期から拡告 さ れ て い る。我 々 は Has ‑2を 過 剰 発 現 す る 乳 癌

張極期までの時間を測定した。各項目毎の maximal

モデルマウスを作成し解析を行ってきた。Has‑2過

diﬀerence（17領域中最長と最短の差）を測定し，こ剰 発 現（Has2

れを心室非同期性の指標とした。

（Has2

その結果，堀込は次の結論を得た。

）群 に 発 生 し た 乳 癌 で は，対 照）群に比べ，HA に富んだ腫瘍間質が形成され血管およびリンパ管の新生が認められた。この結１．冠動脈疾患患者では，アデノシン負荷後，左室の果から，腫瘍間質の HA が腫瘍の悪性度を規定する収縮指標（左室駆出率，最大駆出速度）と拡張指標可能性が示唆された。近年，腫瘍間質に腫瘍関連マク（最大充満速度）の低下を認めた。

ロファージが集蔟して，腫瘍進展に寄与することが報

２．コントロール群では，アデノシン負荷による左室告され注目を集めている。そこで本研究では，腫瘍間収縮能，拡張能の変化は認めなかった。
３．冠動脈疾患患者では，アデノシン負荷後，収縮時質の HA が TAM の動員に果たす意義を検討した。
【方法】Has2

群および Has2

相の左室非同期性と拡張時相の左室非同期性が認め

（Has2

られた。

を樹立した。これらの細胞株を単独あるいは共に，

４．コントロール群では，アデノシン負荷による左室同期性の有意な変化は認めなかった。
５．冠動脈疾患患者では，負荷による左室同期性の変T，Has2群から腫瘍細胞株

T）と線維芽細胞株（TAF）

ヌードマウスに移植して腫瘍を作製した。フローサイト
メトリー法で腫瘍内の F4/80 CD206 マクロファージ数を評価した。同時に免疫組織染色を行って，マクロ化度と虚血の重症度との間に正の相関関係を認めた。

ファージ，血管およびリンパ管数を評価した。ここで，これらの結 果 よ り，心 筋 梗 塞 の 既 往 が な く 正 常マクロファージの機能を検討するため，clodronate

QRS 幅で正常心機能の冠動脈疾患患者においても，

liposome 法でマクロファージを枯渇させた腫瘍を作

アデノシン負荷により左室の非同期性が生じることが製して，上記と同様に免疫組織染色を行った。さらに，示された。さらに，左室の非同期性との間には正の相線維芽細胞が産生する HA の機能を評価するため，

関関係があることも示され，左室の非同期性を負荷時

Has‑1と Has‑2を欠損した線維芽細胞株と Has2に評価することにより，虚血の存在や重症度の評価にT をヌードマウスに共移植して腫瘍を作製し，上記貢献できる可能性があると考えられる。

と同様の評価を行った。④ 線維芽細胞に発現す る

以上より，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

versican の機能を検討するため，高分子 HA と versican を添加して Has2

T 移植腫瘍を作成し，上記と同様の評価を行った。
【結 果】① F4/80 CD206 マ ク ロ フ ァ ー ジ 数 は，
Has2

T 移植腫瘍に比べ，Has2多かった。一方で Has2346

T 移植腫瘍に

T 移植腫瘍では，TAF を
信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

共移植するとマクロファージ動員数が増加した。②の HA を欠損させると TAM の動員数，血管およびマクロファージを枯渇させると腫瘍の発育，腫瘍血管

リンパ管新生が抑制された。Has2

およびリンパ管新生が抑制された。③ 腫瘍間質 のversican を添加した場合に，TAM の動員数が増加し

HA を欠損させると，F4/80 CD206 マクロファージ

た。

の動員数，腫瘍血管およびリンパ管新生が抑制された。
④ Has2

T 移植腫瘍に versican を添加した場合に，

F4/80 CD206 マクロファージの動員が誘導された。

T 移植腫瘍に以上のことから，腫瘍間質の HA は TAM の動員を促進し，腫瘍血管およびリンパ管新生を誘導して腫瘍進展に寄与することが示された。

以上のことから，腫瘍間質の HA は腫瘍関連マクロHA が制御する細胞間相互作用のメカニズムのさらファージの動員を促進し，腫瘍血管およびリンパ管新なる解明は，腫瘍微小環境を標的にした，腫瘍血管新生を誘導して腫瘍進展に寄与することが示された。

生の阻害薬の新規開発に寄与することが期待できる。

【考察】HA が制御する細胞間相互作用のメカニズム

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値の解明によって，腫瘍血管新生阻害薬の新規開発に寄があるものと認めた。

与する可能性が示唆された。
（論文審査の結果の要旨）
我々はこれまでヒアルロン酸（HA）を過剰産生する乳癌モデルマウスを作成し解析を行ってきた。HA
合成酵素（Has）‑2過剰発現（Has2
た乳癌では，対照（Has2）群に発生し）群に比べ，HAに富んだ腫瘍間質が形成され，血管およびリンパ管の新生が認められた。近年，腫瘍間質に腫瘍関連マクロファージ（TAM ）が集蔟して腫瘍進展に寄与することが報告されている。そこで本研究では，腫瘍間質のHAがTAM の動員に果たす意義を検討した。
Has2
（Has2

群 お よ び Has2
T，Has2群から腫瘍細胞株

T）と線維芽細胞株（TAF）

Accurate and simple method for quantiﬁcation ofhepaticfat content using magnetic
resonance imaging : a prospective study
in biopsy‑proven nonalcoholic fatty liverdisease（MRI を用いた肝脂肪含有量の非侵襲的定量法：非アルコール性脂肪性肝疾患における検討）
田朋子（論文の内容の要旨）【背景】近年，非 ア ル コ ー ル 性 脂 肪 性 肝 疾 患（nonalcoholic fatty liver disease：NAFLD）は日本を含を樹立して，ヌードマウスに移植して腫瘍を作製した。

め世界的な罹患率増加が確認されている。罹患症例のフローサイトメトリー法で TAM 数を評価した。同検出および経過観察において，簡便かつ非侵襲的で正時に免疫組織染色を行って，血管およびリンパ管数を確な肝脂肪含有量の定量法が望まれている。M RI は評価した。ここで，clodronate liposome 法で TAM

その候補の一つであるが，肝脂肪定量の正確性に対すを枯渇させた腫瘍を作製して同様な解析を行った。さる検討は未だ十分とは言えない。

らに，線維芽細胞が産生する HA の意義を評価する【目的】我々はファントムを用いた MRI による基礎

ため，Has1null ﬁbroblast あるいは Has1/Has2dou-

実験を行い，その結果に基づく簡便な肝脂肪含有量のble KO ﬁbroblast を Has2

T と共移植した腫瘍を定量法を考案した。本研究の目的は，この MRI によ作製して同様な解析を行った。最後に，腫瘍間質のる肝脂肪定量法を臨床応用し，病理組織学的な脂肪量

HA の特性を評価するため，高分子 HA と versican

評価の結果と比 することにより本法の脂肪量測定のを添加した Has2

正確性を検証することである。

T 移植腫瘍に作製して同様な解析を行った。

【方法】M RI 撮像機器は市販されている1.5Ｔの機種

以下の結果を得た。
TAM 数 は， Has2
Has2を使用し，撮像法は脂肪検出に最も鋭敏であるとされ
T 移 植 腫 瘍 に 比 べ て，

T 移植腫瘍に顕著に観察された。Has2

る化学シフト法（double‑echo fast low‑angle shot
sequence）を用いた。対象は臨床的に NAFLD ある

T 移植腫瘍に TAF を共存させると TAM 動員数が増

いは非アルコール性脂肪性肝炎（nonalcoholic hepa-

加したことから，TAF の産生する HA の重要性が示

titis：NASH）を疑われ，肝生検により罹患が証明唆された。TAM を枯渇させると，腫瘍の発育，血管された連続した26症例（平均年齢44.7±16.4歳，男性

およびリンパ管新生が抑制された。さらに，腫瘍間質12名，女性14名）。ファントム実験の結果に基づいた

No. 5, 2011347

審査学位論文要旨

脂肪含有量算出法を用いて M RI 画像から各症例の肝未だ十分とはいえないため，MRI によるファントム

脂肪含有量を算出し，生検検体を用いて病理組織学的実験（基礎実験）の結果に基づいた簡便な肝脂肪含有に測定した肝脂肪含有量との相関を検証した。

量の定量法（以下，本法とする）を考案し，本法を臨【結果】対象26症例の内，肥満（BMI＞25kg/m ）を床応用した肝脂肪含有量測定の結果と病理組織学的な有する症例は21例（81％），NASH と診断された症

脂肪含有量測定の結果とを比 して，本法の脂肪定量

例は15例（58％）であった。病理組織学的に測定しにおける正確性を検証した。

た肝脂肪含有量は21.5±8.6％（平均±標準誤差），

その結果， 田は次の結論を得た。

MRI 画像から算出した肝脂肪含有量は22.9±9.5％

１．ファントムを使用した基礎実験の結果，肝脂肪含であった。両者は良好な相関を示し（相関係数0.91，

有量と，in‑phase と opposed‑phase との信号強度，CT や US では評価が難しいとされる軽P＜0.001）比の関係は３次多項式にほぼ近似できた。

度脂肪肝（脂肪含有量５‑33％）の症例群でも高い相２．１．で得られた３次多項式に基づいて得られた，関を認めた（相関係数0.91，P＜0.001）。両者の誤差NAFLD 症例群全体における M RI による肝脂肪含

は軽度脂肪肝の症例群で3.2±2.5％，中等度以上脂有量の測定結果と，病理組織学的な肝脂肪含有量の肪肝（脂肪含有量33％以上）の症例群で3.9±1.0％

測定結果とは，強い相関を示した。

であった。また，stage2以上の線維化を有する症例群，３．CT や US では評価が難しいとされる軽度脂肪肝および score2あるいは3の lobular inﬂammation を有（33％以下の脂肪沈着）の症例でも，MRI での脂する症例群でも，MRI により算出した脂肪含有量と

肪含有量測定の結果と病理組織学的な脂肪含有量測

病理組織学的に評価した脂肪含有量の相関は高かった定の結果とは良好な相関を示した。

（相関係数0.93および0.94，それぞれ P＜0.001）。

４．線維化および肝小葉の炎症の重症度は，M RI に【考察】MRI は被曝することなく客観的な全肝脂肪含

よる脂肪含有量測定の結果と病理組織学的な脂肪含有量の評価が可能であり，その正確性は過去の研究結

有量測定の結果との相関に明らかな影響を及ぼさな果から示唆されている。しかしこれらの研究の撮像法

かった。

や病理組織学的な脂肪量評価法には統一性がなく，ファ以上の結果より，本法を用いた肝脂肪含有量の定量

ントムを用いた基礎実験も施行されていない場合が多は，肝生検による病理組織学的な肝脂肪含有量評価といため，半定量的な検討であった。本法はファントム

ほぼ同等の正確性を有すると考えられた。よって主査，を使用した基礎実験とそのデータに裏付けられた臨床

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるも応用を行い，病理組織学的な脂肪含有量評価に関してのと認めた。

も従来採用されているグレーディングシステムでなく脂肪滴の面積測定という客観的方法を使用しており，他の研究と比 してより厳密に定量の正確性を検証した。加えて本法は1.5Ｔの MRI 機器を有する施設であればどこでも施行可能であり，定量過程において特殊なハードウエアおよびソフトウエアを一切必要としないという簡便さを特長としている。
【結論】NAFLD における本法を用いた肝脂肪含有量の定量は，肝生検による病理組織学的な肝脂肪含有量
評価とほぼ同等の正確性を有すると考えられる。
（論文審査の結果の要旨）

A C‑terminal amino acid substitution in
the γ‑chain caused by a novel heterozygous frameshift mutation (FibrinogenMatsumoto VII) results in hypoﬁbrinogenaemia（新規フレームシフト変異のヘテロ接合体であるフィブリノゲン Matsumoto
VII に起因する γ鎖Ｃ末端アミノ酸置換は低フィブリノゲン血症の原因である）
藤

原

祝

子

近年，非アルコール性脂肪性肝疾患（nonalcoholic（論文の内容の要旨）

fatty liver disease：NAFLD）は日本を含め世界的【目的と背景】フィブリノゲン（Fbg）は生体内におな罹患率増加が確認されている。罹患症例の検出およ

いて血液凝固カスケードの最終段階で働く分子量340

び経過観察において，簡便かつ非侵襲的で正確な肝脂kDa の糖タンパクであり，肝臓において合成される

肪含有量の定量法が望まれている。M RI はその候補，Bβ鎖（461個），γ鎖（411Aα鎖（アミノ酸610個）の一つであるが，肝脂肪定量の正確性に対する検討は個）の３種のポリペプチドの複合体（AαBβγ）がＮ

348

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

末端で S‑S 結合し，２量体（AαBβγ）として血流中Fbg を ELISA 法により定量した結果，患者 γ鎖，γʼに存在している。また， γ鎖には健常者でも alterna-

鎖 と 同 様 の 変 異 を 持 つ γΔ7651A，γʼΔ7651A と，

鎖：427個）tive splicing により生じたバリアント（γʼγΔ7651A の変異にさらに糖鎖結合を妨げた γΔ7651

が８‑15％程度存在することが知られている。本研究A/399T において培養液，細胞破砕液ともに有意な低では， γ鎖7651番アデニル酸が欠失し，フレームシフ

下が認められ，そのほかの変異では Fbg 量の有意なトにより387番アミノ酸 Ile およびそれ以降の24アミ低下は認められなかった。γΔ7651A および γʼΔ7651

ノ酸の置換と終止コドンのシフトにより15アミノ酸のA を WB 解析した結果，γ ，γʼは患者血漿中で確認

延長を認めた新たな変異 Fbg M atsumoto VII（Fbg

したものと同様であり，N ‑Glycosidase F 反応によM ‑VII）を同定し，その変異の特徴と低 Fbg 血症をり新たな糖鎖の付加が証明された。Pulse‑chase 解析

引き起こす原因を解析・検討した。

の結果，異常な Fbg は細胞中で３‑６時間後に少量認【症例】45歳女性。子宮筋腫の術前検査においてフィめ，培養液中には24時間後にかろうじて僅かに認めた。

ブリノゲン量が低値であったことから発見され，出血【結論】Fbgγ鎖7651番アデニル酸が欠失したことにおよび血栓の既往はなかった。PT，APTT は正常で，より387番アミノ酸 Ile およびそれ以降の24アミノ酸

Fbg は活性量0.77g/L，抗原量0.89g/L で共に低下の置換と15アミノ酸の延長を認め，低 Fbg 血症を引していた。

き起こす新たな変異Fbg M ‑VIIを同定した。Fbg M ‑【材料および方法】患者末梢血より DNA を抽出し，VII に関連したアミノ酸変異を有する Fbg を発現さ

PCR 産物のダイレクトシークエンスを行って Fbg 遺せた実験より，387Ile よりＣ末端側である391〜398の伝子変異を同定した。患者血漿のウエスタンブロット

８個のアミノ酸変異が Fbg M ‑VII において Fbg の著（WB）解析を行って Fbg の異常ポリペプチド鎖を検減に大きく関与しており，15個アミノ酸伸長されるこ出し，さらに N ‑Glycosidase F を反応させてからとや新たに糖鎖が結合することが原因ではないことがWB を行うことで新たな糖鎖の付加を証明した。ま示唆された。γΔ7651A では細胞内，培養液中ともにた，患者血漿とトロンビン，XIIIa 因子を反応させてFbg 量が著しく低下していたものの（培養液中 Fbg

から WB を行い，患者 Fbg の架橋結合部位の機能に

量/細胞内 Fbg 量）比は正常と変わらないことから分ついて解析した。正常 γ鎖および γʼ
鎖 cDNA 発現ベ泌異常はないことが明らかとなった。Pulse‑chase 解

クターを鋳型として11組の変異プライマーを用いた

析の結果より γ鎖産生低下かもしくは Fbg の組み立

site‑directed mutagenesis 法により患者および患者て低下によって細胞内で少量の Fbg が時間をかけて関連変異プラスミドを作成し，Aα鎖 Bβ鎖をすでに産生され，細胞外へ分泌されることが示唆された。

発現している CHO 細胞にトランスフェクションした。

（論文審査の結果の要旨）

培養液および細胞破砕液の Fbg は ELISA 法によりフィブリノゲン（Fbg）の分子異常は，全世界で約定量し，WB 解析を行った。さらに Pulse‑chase 解300家系以上が報告されている。本研究では低 Fbg 血析を行い異常な Fbg の動態を経時的に追った。

症を呈した新たな変異 Fbg Matsumoto VII（M ‑【結果】患者ゲノム DNA のダイレクトシークエンス

VII）を見出し，その特徴と低フィブリノゲン血症をおよびサブクローニングにより γ鎖7651番アデニル酸

引き起こす原因を検討した。

が一方の allele で欠失している事を確認した。また，

遺伝子解析により Fbg 遺伝子の変異を同定し，患Fbg 遺伝子全ての領域を検索したが他に変異は認め

者血漿のウエスタンブロット（WB）解析を行い，られなかった。患者血漿の WB では正常 γ鎖（γ），

Fbg を構成している異常ポリペプチド鎖を検出した。

鎖（γʼ）の 他 に Bβ鎖 と ほ ぼ 同 様 の 分 子 サ イ ズ
γʼ

患者と同様または患者と一部同様のアミノ酸配列をに 異 常 γ鎖（γ ），Aα鎖 と Bβ鎖 の 間 に 異 常 γʼ鎖有すリコンビナント Fbg を発現させ ELISA および（γʼ）を認め，検出バンドをデンシトメトリーで解析

WB 解析を行った。さらに Pulse‑chase 解析を行い，し た 結 果 γ，γ ，γʼ，γʼは そ れ ぞ れ60％，27％，

細胞内外での異常な Fbg の動態を経時的に検討した。

11％，２％であった。患者血漿にトロンビン，XIIIa

その結果，藤原祝子は次の結論を得た。

因子を反応させた WB の結果，正常な γ‑γは認めら

１．遺 伝 子 解 析 の 結 果，一 方 の allele で Fbg γ鎖れるものの γ あるいは γʼのダイマーは検出されな7651番アデニル酸欠失が明らかとなり，そこからかった。CHO 細胞における発現実験により得られた387番アミノ酸 Ile およびそれ以降の24アミノ酸置No. 5, 2011349

審査学位論文要旨

換と15アミノ酸延長が推測された。

種々の胃関連疾患の原因菌とされている。胃粘液は表

２．患者血漿のWBでは，正常 γ鎖（γ），γʼ鎖（γʼ）

層粘液と腺粘液から構成されているが，腺粘液の特徴の 他 に Bβ鎖 と ほ ぼ 同 じ 分 子 サ イ ズ と Aα鎖 とである α1,4結合した N ‑アセチルグルコサミン残基

Bβ鎖の間に異常なバンド，γ と γʼをそれぞれ認をもつ O ‑グリカン（αGlcNAc）は，ピロリ菌の主めた。

要な細胞壁構成成分であるコレステロール‑α‑D‑グ

３．患者血漿にトロンビン，XIIIa 因子を反応させた

ルコピラノシド（CGL）生合成に関わるコレステロー

WB の結果，異常 γ鎖は架橋形成が行えないこと

ル α‑D‑グルコース転移酵素（CHLαGcT）の活性をが示唆された。

阻害することで，ピロリ菌の増殖と運動能を抑制する

４．リコンビナント Fbg を定量した結果，患者 γ鎖，ことが知られている。しかしながら，ピロリ菌におけ鎖と同様の変異を持つクローンおよびその変異にγʼ

る CHLαGcT の局在は明らかにされていない。そこ

加えて糖鎖結合を妨げたクローンにおいて，培養液，で本研究では，CHLαGcT に対するポリクローナル

細胞破砕液ともに有意な低下が認められた。その他

抗体を作製し，post‑embedding 法を用いた免疫電顕の変異では，有意な低下は認められなかった。

により，ピロリ菌における CHLαGcT の局在を定量

５．リコンビナント Fbg の WB 解析により患者血漿的に解析した。また，ピロリ菌より抽出したタンパクで認められた γ と γʼは，異常 γ鎖と γʼ
鎖である質の分画を行い，各分画における CHLαGcT の存在ことが証明され N‑Glycosidase F 反応により新た

および酵素活性の有無を Western blotting 法ならびな糖鎖の付加が明らかとなった。

に酵素活性測定法により解析した。

６．Pulse‑chase 解析の結果，異常な Fbg は正常よ【方法】３種類の合成ペプチドをウサギに免疫し，そり少量の Fbg が組み立てられ分泌されていることの血清をアフィニティーカラムに通すことにより３種が明らかとなった。

類の抗 CHLαGcT 抗体を得た。作製した抗体の特異以前，奥村らは γ鎖388よりＣ末端側24アミノ酸の性を CHLαGcT 遺伝子で形質転換した大腸菌，ベク

存在は Fbg の組み立て・分泌に必須でないことを報ターのみで形質転換した大腸菌，ピロリ菌より抽出し告している。本研究の結果では，たとえＣ末端側アミたタンパク質を用いた Western blotting 法にて確認

ノ酸が存在していても391〜398位のアミノ酸に変異がした。次いで，ピロリ菌26695株（ATCC 700392）をあると Fbg 分泌が低下することが明らかになった。

急速凍結置換法により電子顕微鏡用試料とし，post‑

さらに，Fbg の低下は γ鎖産生低下かもしくは Fbg

embedding 法を用いて染色を行ったのち細胞質，内組み立ての低下によって引き起こされていることが明膜，ペリプラズム，外膜，菌体外に存在する金コロイ

らかとなった。よって，主査，副査は一致して本論文

ド数を定量化した。さらに活性型 CHLαGcT の局在を学位論文として価値があるものと認めた。

を調べるため，ピロリ菌のタンパク質を浸透圧ショック法ならびに超遠心分離によりペリプラズム分画，細Membrane‑associated Activation of Cholesterol α‑Glucosyltransferase,an Enzyme
Responsible for Biosynthesis ofCholesteryl‑
α‑D‑glucopyranoside in Helicobacter pylori
Critical for its Survival（ピロリ菌の生存に必須なコレステロール‑α‑D‑グルコピラノシド生合成に関わるコレステロール α‑D ‑グルコース転移酵素の膜結合型活性）星

野

瞳

胞質分画，膜分画に分画し，これらを酵素供給源とした in vitro 解析を行い，CHLαGcT の合成産物である CGL の局在を薄層クロマトグラフィー（TLC）により検出した。
【結果】CHLαGcT の66.3％が内膜直下の細胞質に存在していた一方，24.7％は内膜上に認められた。
加えて，2.6％，5.0％，1.4％の CHLαGcT が，ペリプラズム，外膜，菌体外のそれぞれに認められた。
分画したピロリ菌のタンパク質を Western blotting法で解析した結果，全分画より CHLαGcT の存在を（論文の内容の要旨）確認した。一方，これらの分画タンパク質を酵素源と【背景と目的】ピロリ菌は世界人口の約半数に感染しして用いた in vitro の CGL 合成アッセイにおける反ているグラム陰性のらせん状桿菌であり，慢性胃炎や応産物を TLC にて解析したところ，膜分画の反応産

胃潰瘍，胃悪性腫瘍，胃 M ALT リンパ腫といった物のみに CGL を認めた。

350

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨【結論】本研究では，抗 CHLαGcT 抗体を用いた免ならびに in vitroの酵素解析という２つの異なった

疫 電 顕 微 鏡 な ら び に in vitroの 酵 素 解 析 の ２ つ の方法を用いることにより，活性型 CHLαGcT が膜分方法を用いることにより，活性型 CHLαGcT が膜分画に存在することを明らかとした。以上の結果より

画に存在することを明らかとした。以上の結果より

CHLαGcT が非活性型として細胞質で合成され，細CHLαGcT が非活性型として細胞質で合成され，細胞膜と結合することにより活性型に転換することが示

胞膜と結合することによって活性型に転換することが唆された。現在，薬剤耐性ピロリ菌の出現が問題と示唆された。

なっているが，本研究の成果を基に，ピロリ菌に対す（論文審査の結果の要旨）
腺粘液の特徴である α1,4結合した N ‑アセチルグ
ルコサミン残基をもつ O‑グリカン（αGlcNAc）は，る新たな除菌法の開発が期待できる。よって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

ピロリ菌の主要な細胞壁構成成分であるコレステロー
ル‑α‑D ‑グルコピラノシ ド（CGL）生 合 成 に 関 わ
る コ レ ス テ ロ ー ル ‑α‑D ‑グ ル コ ー ス 転 移 酵 素（CHLαGcT）の活性を阻害することで，ピロリ菌の増殖と運動能を抑制することが知られている。しかしながら，ピロリ菌における CHLαGcT の局在は明ら

Risk Factors for Severe Dysphagia after
Concurrent Chemoradiotherapy for Headand Neck Cancers（頭頸部癌に対する同時
化学放射線療法後に生じる摂食障害のリスク因子）

かにされていない。そこで本研究では，CHLαGcT

小岩井

に対するポリクローナル抗体を作製し，post‑embed-

慶一郎

ding 法を用いた免疫電顕により，ピロリ菌における（論文の内容の要旨）

CHLαGcT の局在を定量的に解析した。またピロリ【背景および目的】進行期頭頸部癌に対する放射線治菌より抽出したタンパク質の分画を行い，各分画に療では化学療法の同時併用が行われる。放射線治療単おける CHLαGcT の存在および酵素活性の有無を独に比べ治療成績は向上するが，同時に有害事象も増Western blotting 法ならびに酵素活性測定法により強することが知られている。本治療法が行われた患者

解析した。

の50‑80％で生じるとされる重症摂食障害は，患者のピロリ菌26695株（ATCC 700392）のアミノ酸配列

生活の質を著しく損なうことから問題点の一つとなっを基に３種類のポリクローナル抗体を作製し，West-ている。頭頸部癌に対する化学療法併用放射線治療に

ern blotting 法にて抗体の特異性を確認した。次に，伴う摂食障害のリスク因子を解析する。

急速凍結置換法により電子顕微鏡用試料としたピ【対象と方法】1998年12月から2006年３月に頭頸部癌

ロリ菌に対して post‑embedding 法を用いて染色を行に対し根治的化学療法併用放射線治療を行った47例をい，CHLαGcT の局在を定量化した。さらに活性型対象とし，遡及的に解析した。年齢は16‑81歳（中央CHLαGcT の局在を調べるため，ピロリ菌タンパク値63），原発部位は喉頭が18例，中咽頭が11例，上咽質を分画し，これらを酵素供給源とした in vitro にお頭が７例，下咽頭が７例，その他が４例であった。臨ける解析を行い，CHLαGcT の合成産物である CGL

床病期はの局在を薄層クロマトグラフィー（TLC）により検してプラチナ製剤を用いた化学療法が行われた。シス出した。

プラチンの累積投与量は80‑300mg/m （中央値100）

その結果，次の結論を得た。

期が20例，‑ 期が27例であった。主とであった。放射線治療における投与線量は50‑70Gy

１．CHLαGcT の66.3％が内膜直下の細胞質に存在（中央値70）であった。有害事象は Common Termi-

していた一方，24.7％は内膜上に認められた。加nology Criteria for Adverse Events ver.3.0で評価しえて，2.6％，5.0％，1.4％がそれぞれペリプラた。照射野サイズの指標として用いた等価正方形照射

ズム，外膜，菌体外のそれぞれに認められた。

野の一辺の長さは，5.5‑16.5cm（中央値11.3）であっ

２．細胞質分画，膜分画，ペリプラズム分画の全てにた。統計学的解析では，フィッシャーの正確確率検定

CHLαGcT のタンパク質は検出されたが，酵素活で単変量解析を，多重ロジスティック回帰分析で多変性は膜分画のみにしか認められなかった。

量解析をそれぞれ行い，有意水準はいずれも0.05未満

本研究では，抗 CHLαGcT 抗体を用いた免疫電顕とした。

No. 5, 2011351

審査学位論文要旨【結果】47例中22例（47％）に急性期有害事象として

２．重篤な摂食障害と年齢，全身状態，治療前体重減重篤な摂食障害（grade 3‑4）が認められた。そのう

少，喫煙歴，原発巣，臨床病期，照射野サイズ，累ち１例は12カ月後の経過観察時にも経管栄養が必要で

積シスプラチン投与量，累積５‑FU 投与量およびあった。単変量解析において，臨床病期（

線量分割法の計11項目との関連を検討した単変量解‑ 期）（P ＝0.017），原発巣（中‑下咽頭）（P ＝0.041）およ析では，臨床病期（

び照射野サイズ（等価正方形の一辺の長さ＞11cm）（中‑下咽頭）（P ＝0.041）および照射野サイズ（等（P ＜0.001）の３因子が重篤な摂食障害の発生と有意

価正方形の一辺の長さ＞11cm）（P ＜0.001）の３に関連していた。多変量解析においては照射野サイズ

因子と重篤な摂食障害の発生とに有意差が示された。

のみが有意な関連性を示した（P ＝0.048）。

‑ 期）（P ＝0.017），原発巣

３．原発巣，臨床病期，照射野サイズ，累積シスプラ【考察および結論】過去に報告されている重症摂食障

チン投与量の４因子を対象とした多変量解析におい害のリスク因子は，臨床病期，原発巣，全身状態，喫ては，照射野サイズのみに有意な関連性が示された

煙歴，年齢などである。臨床病期や原発巣は照射野の（P ＝0.048）。

広さや照射部位に関連する因子であり，放射線治療がこれらの結果から，頭頸部癌に対する化学療法併用

摂食障害形成に深く関与していることが示唆される。

放射線治療において，照射野サイズは摂食障害のリス

今回の検討から，照射野サイズは頭頸部癌に対する化

ク因子となり得ると結論した。以上から，主査，副査

学療法併用放射線治療に伴う摂食障害のリスク因子とは一致して本論文を学位論文として価値があるものとなり得ると結論した。本治療法で広範な照射野を必要認めた。

とする場合，重症摂食障害の出現を想定した対応をすべきである。
（論文審査の結果の要旨）
進行期頭頸部癌に対する化学療法同時併用放射線治療では50‑80％の症例に重症摂食障害が生じると報告されており，本治療法の大きな問題点の一つとなっている。今回小岩井慶一郎らは頭頸部癌に対する化学療法同時併用放射線治療に伴う摂食障害のリスク因子を解析した。
1998年12月から2006年３月にかけて根治的化学療法
併用放射線治療を施行した頭頸部癌47例を対象とした。
年齢は16‑81歳（中央値63），原発部位は喉頭が18例，
中咽頭が11例，上咽頭が７例，下咽頭が７例，その他が４例であった。臨床病期は期が20例，

Type‑speciﬁc roles of histone deacetylase(HDAC) overexpression in ovarian carcinoma : HDAC1 enhances cell proliferation and HDAC3 stimulates cell migration
with downregulation of E‑cadherin（卵巣癌における histone decetylase 発現は，サブタイプにより役割が異なる。HDAC1は細胞増殖を促進し，HDAC3はＥカドヘリン発現抑制を介して細胞の移動を促進する）
林

晶

子（論文の内容の要旨）‑ 期が【背景と目的】ヒストンのアセチル化と脱アセチル

27例であった。化学療法にはプラチナ製剤が主として化は，epigeneticな変化の一つであり，核クロマチ用いられた。放射線治療における投与線量は50‑70

ン活性，それに引き続いて起こる遺伝子発現を制御

Gy（中央値70）であった。有害事象は Common Ter-

し て い る。こ の 制 御 機 構 に は Histone deacetylase

minology Criteria for Adverse Events ver. 3.0で評（HDAC）が重要な役割を果たしており，悪性腫瘍

価した。照射野サイズの指標として用いた等価正方形

では HDAC は p21等の癌抑制遺伝子の不活化をもた照射野の一辺の長さは，5.5‑16.5cm（中央値11.3）

らすとされている。HDAC には18のサブタイプがあであった。統計学的解析では，フィッシャーの正確確

り，４つのクラスに分類される。その中でも Class1率検定で単変量解析を，多重ロジスティック回帰分析

HDAC である HDAC1，HDAC2および HDAC3は癌で多変量解析をそれぞれ行い，有意水準はいずれもにおいて発現増強が報告されており，最もよく研究さ0.05未満とした。

れている。特に，悪性リンパ腫などの血液癌において，

その結果，小岩井慶一郎らは次の成績を得た。

HDAC 阻害剤は新たな分子標的薬剤として注目され

１．47例中22例（47％）に急性期有害事象として重臨床応用が開始されている。しかし，卵巣癌における篤な摂食障害（grade 3‑4）が認められた。
352

HDAC の発現および機能は解明されていない。そこ
信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

で，上皮性卵巣腫瘍における Class1 HDAC である

期間が有意に短縮していたことから，HDAC1が卵巣

HDAC1，HDAC2，HDAC3の発現を検討し，卵巣癌癌の予後因子となりうると考えられた。また，ヒト培細胞における HDAC 抑制の効果を検討した。

養卵巣癌細胞株において，HDAC1は増殖との関連が【方法】患者の同意を得て採取した上皮性卵巣腫瘍115

示され，HDAC3は細胞遊走能との関連が示され，

例（良性23例，境界悪性17例，悪性75例）に対して抗HDAC のサブタイプによって機能が異なる可能性がHDAC1，HDAC2および HDAC3抗体を用いて免疫示唆された。今後，HDAC を標的とした治療法を検組織染色を行い，100細胞中の陽性細胞をカウントし討する際には，サブタイプによる機能の違いを考慮す

Positivity Index（PI）として算出した。HDAC1，

る必要があると考えられた。

HDAC2および HDAC3の PI と増殖マーカーである（論文審査の結果の要旨）

Ki67，接着因子である E‑cadherin発 現 と の 関 連，

遺伝子発現制御に関連する核クロマチン活性は，および患者生存期間との関連を検討した。また，手ヒストンのアセチル化と脱アセチル化により調節さ

術摘出組織から蛋白質を抽出し，それぞれの発現を

れ，Histone deacetylase（HDAC）が重要な役割を果

Western blot にて検討した。さらに，ヒト培養卵巣たしている。悪性腫瘍では HDAC1，HDAC2および癌細胞株に対し HDAC inhibitor（TSA，apicidin，

HDAC3の発現増強が報告されており，p21等の癌抑SAHA）を添加し，細胞増殖能および apoptosis に対制遺伝子の不活化をもたらすとされている。今回，上する効果を検討した。また，卵巣癌細胞株に HDAC1，

皮性卵巣腫瘍における Class1 HDAC である HDAC1，

HDAC2お よ び HDAC3特 異 的 siRNA を 導 入 し，

HDAC2，HDAC3の発現を検討し，卵巣癌細胞におHDAC 発現抑制による増殖能，細胞接着能および遊ける HDAC 抑制の効果を検討した。

走能の変化を WST ‑1 assay，ﬂow cytometory，

患 者 の 同 意 を 得 て 採 取 し た 上 皮 性 卵 巣 腫 瘍115

anchorage‑independent assay，migration assayに例（良 性 23例，境 界 悪 性 17例，悪 性 75例）に 対 して検討した。

て HDAC1，HDAC2お よ び HDAC3抗 体 を 用 い て【成績】上皮性卵巣腫瘍において，HDAC1，HDAC2

免 疫 組 織 染 色 を 行 い，100細 胞 中 の 陽 性 細 胞 数 をおよび HDAC3の発現は，良性，境界悪性，癌の順にPositivity Index（PI）として算出した。それぞれの発現が増強していた。Western blotting 解析でも同PI と増殖マーカーである Ki67，接着因子である E‑様の結果であった。HDAC1および HDAC2発現は，cadherin 発現との関連，および患者生存期間との関Ki67発 現 と 正 の 相 関 を 示 し（HDAC1：ρ＝0.443，

連を検討した。また，手術摘出組織から蛋白質を抽出

p＜0.0001， HDAC2： ρ＝0.535 p＜0.0001），

し，それぞれの発現を Western blot にて検討した。

HDAC3発現は E‑cadherin と逆相関を示した（ρ＝さらに，ヒト培養卵巣癌細胞株（A2780，OVCAR3，‑0.404，p＝0.001）。これらの発現と患者生存期間を

SKOV3）に 対 し HDAC inhibitor（TSA，apicidin，比SAHA）を添加し，細胞増殖能および apoptosis に対したところ，HDAC1陽性症例は陰性症例に比べて生存期間が短縮していた（p＝0.043）。卵巣癌細胞する効果を検討した。また，卵巣癌細胞株に HDAC1，

株（ A2780， OVCAR3， SKOV3）に HDACin-

HDAC2およ び HDAC3特 異 的 siRNA を 導 入 し，増hibitor（TSA，apicidin，SAHA）を 添 加 し た と こ

殖 能，細 胞 接 着 能 お よ び 遊 走 能 の 変 化 を WST ‑1

ろ，細胞増殖が有意に抑制され，同時に apoptosis がassay，ﬂow cytometory，anchorage‑independent

誘導された。さらに，細胞周期との関連を検討したと

assay，migration assayにて検討した。

ころ，HDAC inhibitor によって G1 arrest が誘導さその結果「林晶子」は次のような結論を得た。

れ，細胞周期促進因子である cyclin A 発現の減少が１．上皮性卵巣腫瘍において，HDAC1，HDAC2お確認された。HDAC 特異的 siRNA を用いて個々のよび HDAC3の発現は，良性，境界悪性，癌の順にHDAC の機能の違いを検討したところ，HDAC1の発現が増強し，Western blotting 解析でも同様の抑制により細胞増殖能および造腫瘍能ともに抑制され結果であった。

（p＝0.001），HDAC3の抑制により遊走細胞数が減少

２．HDAC1および HDAC2発現は，Ki67発現と正のし，E‑cadherin の発現が誘導された。

相関を示し，HDAC3発現は E‑cadherin と逆相関【考察】上皮性卵巣腫瘍において，HDAC 発現は悪性を示した。

度が増すにつれて増強し，HDAC1陽性例で患者生存
No. 5, 2011

３．患者生存期間の検討では，HDAC1陽性症例は陰353

審査学位論文要旨

性症例に比べて生存期間が短縮していた。

【方法】2001年１月から2006年５月に，消化器症状や４．卵巣癌細胞株に HDAC inhibitor を添加したとこ

貧血の精査目的に上部消化管内視鏡検査を施行した小ろ，細胞増殖が有意に抑制され，同時に apoptosis

児87名（男児38名，女児49名，平均年齢13歳）を対象が誘導された。さらに，細胞周期との関連では，とした。内視鏡検査はキシロカインスプレーによる咽G1 arrestが誘導され，細胞周期促進因子である頭麻酔とミダゾラムの経静脈鎮静下で細経スコープ

cyclin A 発現が減少した。

（GIF‑XP240または XP260）を用いて同一の小児科

５．HDAC 特異的 siRNA による検討では，HDAC1

医が行った。通常の内視鏡検査に引き続き，胃体下部の抑制により細胞増殖能および造腫瘍能が抑制され，小弯と胃体上部大弯の胃粘膜を内視鏡先端からおよそ

HDAC3の抑制により遊走細胞数が減少し，E‑cad-

５ mm の近距離で観察し，微細な発赤点が整然と配

herin の発現が誘導された。

列している像を RAC 陽性，発赤点が不明または不規

これらの結果より，上皮性卵巣腫瘍においてHDAC則に配列している像を RAC 陰性とした。RAC の判

発現は悪性度と関連し，HDAC1が卵巣癌の予後因子

定は，患者の臨床経過や H. pylori 感染状況を知らさとなりうると考えられた。また，ヒト培養卵巣癌細胞

れていない消化器内視鏡医が行った。拡大内視鏡観察

株 に お い て，HDAC1は 増 殖 と 関 連 し，HDAC3はは GIF‑Q240Z を使用し，８名の患者に対して行った。

細胞遊走能と関連していたことから，HDAC のサブ

H. pylori 感染の診断は13Ｃ尿素呼気試験，血清 H.

タイプによって機能が異なる可能性が示唆された。今

pylori抗体および病理組織により行った。前庭部大後，HDAC を標的とした治療法を検討する際には，弯，胃体下部小弯，胃体上部大弯から組織を採取し，サブタイプによる機能の違いを考慮する必要があると胃炎の程度は HE 染色標本により，H. pylori 感染は考えられた。

Giemsa 染色標本により，評価した。

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

【結果】87名の小児の中で，H. pylori 感染者は25名（29％）であった。年齢，性別に有意差を認めなかった。H. pylori 陽性者の７名に十二指腸潰瘍があり，

Endoscopic identiﬁcation of Helicobacter
pylori Gastritis in children（小児におけるHelicobacter pylori 胃炎の内視鏡的識別）
日

高

奈

緒

前庭部の結節性変化は H. pylori 陽 性 者 の21名（84％）に認めたが，H. pylori陰性者には観察されなかった。H. pylori 感染を診断する上で，前庭部結節性変化は，感度，特異度，陽性適中率，陰性適中率がそれぞれ84％，100％，100％，94％であった。一方，RAC（論文の内容の要旨）

陽性者は全 例 H. pylori 陰 性 で，全 て の H. pylori 感【背景と目的】Helicobacter pylori（H. pylori）感染

染者と５名の H. pylori 陰性者は RAC 陰性と評価さは成人，小児ともに慢性胃炎を引き起こす原因である。

れた。H. pylori 感染を診断する上で，胃体部の RAC

上部消化管内視鏡検査は H. pylori 感染の診断に有用

陰性所見は，感度，特異度，陽性適中率，陰性適中率

で，小児・成人とも，H. pylori 非感染の正常胃体部がそれぞれ100％，92％，83％，100％であった。８

胃粘膜には，regular arrangement of collecting

名の拡大内視鏡による観察では，RAC 陽性例では集venules（RAC，微細な発赤点の整然とした配列）が合細静脈が観察され，RAC 陰性例では集合細静脈が観察され，成人では集合細静脈と一致することが確認

消失していた。

されている。小児の H. pylori 陽性慢性胃炎の内視鏡【考察】RAC 陰性の H. pylori 陽性慢性胃炎に対する所見としては，以前から前庭部の結節性変化が広く知感度は胃体部の部位に依らず100％で前庭部結節性変られているが，日本成人の H. pylori 陽性慢性胃炎に化の感度より高く，他の H. pylori 陽性慢性胃炎の所

特徴的な粘膜委縮や腸上皮化生は，小児で観察される

見 に 乏 し い 小 児 に お い て は，RAC 陰 性 所 見 は H.

ことはまれであり，小児において胃粘膜生検採取を決

pylori 陽性慢性胃炎の診断に有用であると考えられた。

定する内視 鏡 所 見 は 未 だ 確 立 し て い な い。今 回，

また，小児の H. pylori 陽性慢性胃炎は前庭部優位でRAC の消失が小児における生検採取の指標となり得あるとされているが，RAC 所見は胃体部の部位に関るか否かを検討した。また，拡大内視鏡を用いて小児

わらず全例で消失しており，H. pylori 感染が汎発性の胃体部の RAC を観察した。

胃炎を引き起こすことを示唆するものであった。さら354

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨に，成人と同様に小児においても RAC は集合細静脈感染の診断情報として有用であった。RAC 陰性例でを観察しているものであることが拡大内視鏡観察で確は積極的に胃粘膜組織を採取し，病理組織学的に胃炎認された。

の評価と Hp 感染の有無を確認すべきであると考えら【結論】小児において，胃体部における RAC 所見のれた。

存在は H. pylori 陰性の診断情報として有用であった。

情報の少ない小児の Hp 感染慢性胃炎の内視鏡所見

RAC 陰性例では積極的に胃粘膜組織を採取し，病理に関する重要な知見であり，主査，副査は一致して本

組織学的に胃炎の評価と H. pylori 感染の有無を確認

論文を学位論文として価値があるものと認めた。

すべきであると考えられた。
（論文審査の結果の要旨）
日本成人の Helicobacter pylori（Hp）陽性慢性胃炎に特徴的な粘膜委縮や腸上皮化生は小児で観察されることはまれである。小児の Hp 陽性慢性胃炎で以前から報告されている前庭部結節性変化は，特異度は高いものの感度が低く，小児において胃粘膜組織採取を決定する内視鏡所見は未だ確立していない。小児・成人とも，Hp 非感染の正常胃体部胃粘膜には，regular arrangement of collecting venules（RAC，発赤点の整然とした配列）が観察され，成人では拡大観察
により集合細静脈と一致することが確認されている。

Intratracheal catheter suction removes thesame volume of meconium with less
impact on desaturation compared withmeconium aspirator in meconium aspiration syndrome（胎便吸引症候群において気管内吸引カテーテルを用いた気管内吸引法はメコニウムアスピレーターを用いた気管内吸引法と比 して，同等の吸引効果があり，血中酸素飽和度の低下は小さい）
赤

澤

陽

平

今回，RAC の消失が小児における組織採取の指標と（論文の内容の要旨）なり得るか否かを検討した。また，拡大内視鏡を用い【はじめに】胎便吸引症候群（Meconium aspirationて小児の胃体部の RAC を観察した。

syndrome，以下 MAS）は子宮内もしくは出生後に消化器症状や貧血の精査目的に上部消化管内視鏡検

胎便が気管内に吸引されることにより発症する呼吸障査を行った小児87名を対象に，細経スコープ（GIF‑

害である。発症した場合有効な治療法はなく，重症

X240又は XP260）を用いて，通常観察後に胃体下部

M AS では人工呼吸管理や NO 吸入療法などの集中治

小弯と胃体上部大弯の２箇所を近接観察して RAC の療を要し，予後不良の疾患である。子宮内での胎便吸有無を判定し，同部位と前庭部から生検組織を採取し引を予防する方法はないため，MAS 発症のリスクがた。拡大内視鏡観察は GIF‑Q240Z を使用し，８名に高い新生児では，出生後早期からの介入が必要となる。

対して行った。Hp 感染は13Ｃ尿素呼気試験，血清

新生児心肺蘇生法（Neonatal Resuscitation Pro-

Hp 抗体および病理組織により診断した。

gram，以下 NRP）では，MAS 発症予防のために出Hp 陽性者の21名（84％）に前庭部結節性変化を認

生後，羊水が胎便で混濁しており，児の元気がない場

め，全例で胃体下部小弯・胃体上部大弯ともに RAC合（自発呼吸が弱い，筋緊張が低下している，心拍数は陰性であった。RAC 陰性の Hp 陽性慢性胃炎に対が100回/分未満のいずれかを認める場合），蘇生者はする感度は胃体部の部位に依らず100％で，前庭部結

児に20秒以内で気管内挿管し，挿管チューブに直接

節性変化の感度より高く，他の所見に乏しい小児にお接 続 し た メ コ ニ ウ ム ア ス ピ レ ー タ ー（M econium

いては，RAC 陰性所見は Hp 陽性慢性胃炎の診断に

Aspirator，以下 MA）を用いて，気管内から胎便が有用であると考えられた。また，小児の Hp 陽性慢性

吸引されなくなるまで，吸引を反復することを推奨し胃炎は前庭部優位であるとされているが，RAC 所見ている。新生児への気管内挿管は習得までに経験を要

は胃体部の部位に関わらず全例で消失しており，Hp

し，しかも，低酸素，徐脈などの vital sign に影響し感染が汎発性胃炎を引き起こすことを示唆するものでうる侵襲的な手技である。さらに，M A による気管あった。さらに，拡大内視鏡観察により，小児におい内吸引では，M A は直接挿管チューブに接続し，挿ても成人と同様に RAC は集合細静脈を観察している

管チューブを引き抜きながら吸引するため，反復吸引ものであることが確認された。

が必要な際や，吸引後に人工呼吸管理が必要な場合は，

以上より，小児において，胃体部のRAC所見はHp
No. 5, 2011

気管内挿管を繰り返し施行しなければならない。一方，
355

審査学位論文要旨

日本では気管内吸引が必要な場合は，気管内挿管後，手技に要する時間も20秒以上要することが多いとする

挿管チューブ内に直接吸引カテーテルを挿入し，胎便報告がある。NRP が推奨する20秒以内での気管内挿を吸引する。この手技の場合，繰り返し吸引が必要な管は必ずしも容易ではないと考えられ，吸引カテーテ

場合や吸引後人工換気を行う場合も，挿管チューブは

ルによる吸引法は，気管内挿管を繰り返す必要のある

留置したままでよいため，気管内挿管を反復する必要

M A による吸引法と比がない。本研究では，MAS 動物モデルを用い，MA

りながらも，児にとって侵襲が少なく，低酸素血症のによる気管内吸引法と吸引カテーテルを用いた吸引法

リスクも低いと考えられた。

での胎便回収率，回収後の vital sign への影響につい【結論】胎便吸引症候群において MA による吸引法とて比比 し，気管内吸引カテーテルを用いた気管内吸引法検討した。

し，吸引効果は同程度であ【対象と方法】48羽の成熟日本家兎を使用した。鎮静は同等の吸引効果があり，胎便吸引後の血中酸素飽和後，気管切開を行い，気管切開孔から20％胎便（3.5度の低下は小さいことから，吸引カテーテルを用いた

ml/kg）を気管内注入し，MAS モデルを作成し，以気管内吸引法の有効性が示唆された。

下の実験１，２を行った。実験１では，MA 群および吸引カテーテル群の２群（それぞれ n＝８）に無作（論文審査の結果の要旨）
胎便吸引症候群（Meconium aspiration syndrome，

為に振り分け，胎便回収率および胎便吸引後20分，以以下 MAS）は胎便が気管内に吸引されることにより降30分毎２時間後までの合計 ５ 回 の 時 点 で 酸 素 分発症する呼吸障害である。新生児心肺蘇生法（Neo-

圧（以下PaO ），脈拍数，平均血圧値を２群間で比natal Resuscitation Program，以下 NRP）では，した。実験２では，MA 群を胎便を吸引してから再

M AS 発症予防のために出生後，羊水が胎便で混濁し挿管するまでの時間で３群に分類し（MA‑05群：再ており，児の元気がない場合，蘇生者は児に20秒以内

挿管まで５秒，M A‑10群：再挿管まで10秒，MA‑15で挿管し，メコニウムアスピレーター（M econium

群：再挿管まで15秒），吸引カテーテル群との４群間

Aspirator，以下 MA）を用いて，気管内から胎便が（それぞれ n＝８）に無作為に振り分け，胎便吸引後吸引されなくなるまで，再挿管，吸引を反復すること

急性期の酸素飽和度（以下 SpO ），心拍数，平均血を推奨している。しかし，MA を用いた場合，反復圧値の変化を連続測定し，４群間で比吸引が必要な際や，吸引後に人工呼吸管理が必要な際した。

【結果】実験１では両群間の胎便回収率に有意差はな

は，再挿管を繰り返す必要がある。一方，日本では，

か っ た（MA 群 14.8％±5.5％，吸 引 カ テ ー テ ル

挿管後に挿管チューブ内に直接吸引カテーテルを挿入

群 19.5％±5.0％）。胎便吸引後２時間の人工換気

し，胎便を吸引する。この場合，挿管チューブは留置中の PaO ，心拍数，平均血圧値はいずれの時点でもしたままでよく，再挿管の必要がない。本研究では，２群間で有意差はなかった。実験２では胎便注入後のM AS 動物モデルを用い，MA による気管内吸引法を

SpO は，M A‑15群が吸引カテーテル群に比して有施行した群と吸引カテーテルによる気管内吸引法を施意に低値であった（p＜0.05）。また，胎便吸引後，行した群での胎便回収率，回収後の vital sign への影

一旦低下した SpO が90％以上に上昇するまでの時間

響について比 検討した。

は MA‑15群がその他の群に比し有意に長かった

その結果，赤澤は次の結論を得た。

（p＜0.05）。

１．両群間で胎便回収率に有意差はなかった。

【考察】今回の研究では M AS の動物モデルにおいて，

２．胎便吸引後２時間の人工換気中の血中酸素分圧，

気管内胎便吸引法の違いによる効果と vital sign への心拍数，平均血圧値はいずれの時点でも両群間で有影響を検証した。MA による吸引法と吸引カテーテ

意差はなかった。

ルによる吸引法は吸引効果に差はなかったが，MA

３．胎便注入後10分間の動脈血酸素飽和度は，MAによる吸引法は，再挿管までの時間が長い場合，吸引により胎便を吸引し，吸引後再挿管までの時間を15

カテーテルによる吸引法に比 し，吸引後の酸素飽和秒と設定した群は吸引カテーテル群に比 して有意度の低下が大きいことが示された。新生児への気管内に低値であった。また，胎便吸引後，一旦低下した

挿管は，児に徐脈，低酸素，血圧変動などを惹起しう

SpO が90％以上に上昇するまでの時間も MA による侵襲的な手技である。新生児蘇生の現場では気管内り胎便を吸引し，再挿管までの時間を15秒と設定し挿管が１回で成功する割合は60％程度と低く，挿管た群は有意に長かった。

356

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

以上より，２つの方法間で吸引効果に差はなかった

示されるＬセレクチン結合糖鎖，mucosal addressin

が，M A による吸引法では再挿管までの時間が15秒，ヘリコバ
cell adhesion molecule 1（MAdCAM ‑1）

以上と長い場合，吸引カテーテルによる吸引法よりもクターハイルマニ，およびＢ細胞（CD45R/B220）

吸引後の酸素飽和度の低下が大きいことが示された。

の免疫染色，および３）Ｌ‑およびＥ‑セレクチン・

また，新生児への気管内挿管は侵襲的な手技であり，IgM キ メ ラ 蛋 白 を 用 い た in vitro binding assayを蘇生の現場では迅速な挿管は必ずしも容易ではない。

行った。また，ヘリコバクターハイルマニ感染後83週

この点からも気管内吸引カテーテルを用いた気管内吸目のマウスと非感染マウスから胃粘膜を採取し，それ引法の方が，吸引効果は同等でありながら児の vital

ぞれから作製した cDNA を基に PNAd に提示される

sign への影響が少ないことが明らかとなった。これ

Ｌセレクチン結合糖鎖の合成に関与する N ‑acetylg-

らの知見は新生児蘇生法にとって重要と思われ，主査，

lucosamine ‑6‑O ‑sulfotransferases（ GlcNAc6

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるもSTs）および MAdCAM ‑1 mRNA の発現をリアルタのと認めた。

イム定量 PCR 法により，また α1,3‑ﬂucosyltransferase（Fut4 と Fut7 ）mRNA の発現を PCR 法によりInduction of high endothelial venule‑likevessels expressing GlcNAc6ST‑1‑mediated L‑selectin ligand carbohydrate andmucosal addressin cell adhesion molecule 1(M AdCAM ‑1) in a mouse model of “Candidatus Helicobacter heilmannii”‑induced
gastritis and gastric mucosa‑associatedlymphoid tissue (MALT) lymphoma（ヘリコバクターハイルマニ感染マウス胃炎・
MALT リンパ腫モデルにおけるＬ‑セレク
チンリガンド糖鎖と粘膜アドレシン細胞接着分子‑1（MAdCAM ‑1）を発現した高内皮細静脈様血管の誘導）
鈴

木

彰

検討した。
【結果】肉眼的に感染マウスの胃粘膜には感染後26週で小結節が出現し，83週では多数の小結節が観察された。感染マウスにおいては慢性胃炎が発症し，感染の経過に伴い炎症の増強をみた。非感染マウスでは観察期間を通じて組織学的に変化が認められなかった。
CD45R/B220陽性の杯中心細胞様細胞の集族とリンパ上皮性病変を認める MALT リンパ腫が感染後54週および83週のマウスでそれぞれ11.1％（1/9）1，77.8％（7/9）に認められた。胃炎や M ALT リンパ腫を発症した感染マウス胃粘膜には PNAd および MAdCAM ‑1を発現した高内皮細静脈（HEV）様血管が認められた。慢性胃炎の進行に伴い，HEV 様血管の数は増加した。誘導された HEV 様血管には Ca の存
在下にＬ‑およびＥ‑セレクチン・ IgM キメラ蛋白が（論文の内容の要旨）

結合し，EDTA の存在下ではこれらの結合は認めら【背景】ヘリコバクターハイルマニは慢性胃炎を引きれなかった。GlcNAc6ST ‑1 と MAdCAM ‑1mRNA

起こし，時にＢ細胞型胃 MALT リンパ腫を惹起する。

の発現が感染後83週のマウスにおいて亢進していた。

本研究ではヘリコバクターハイルマニ感染マウスモデ

また，Ｌ‑セレクチンリガンド糖鎖の生合成に関与す

ルを用い，感染胃粘膜にみられる組織学的変化や血管る Fut4 と Fut7 は感染マウスおよび非感染マウスに内皮細胞上のリンパ球接着分子の発現を検討し，ヘリおいて発現していた。

コバクターハイルマニ感染により胃粘膜に惹起される【結語】GlcNAc6ST‑1により硫酸化を受けたＬ‑セレ

慢性炎症および M ALT リンパ腫の発症機序を解析しクチンリガンド糖鎖と粘膜細胞接着分子‑1（MAd-た。

CAM ‑1）を発現する HEV 様血管がヘリコバクター【対象と方法】ヒトから分離した SH4ヘリコバクター

ハイルマーニによる慢性胃炎と M ALT リンパ腫の発ハイルマニ株を８週齢の BALB/C マウスに感染させ症に重要な役割を担っていると考えられた。

た。感染後８，26，54，そして83週後にマウスを屠殺し，胃粘膜にみられる病理組織学的変化を以下の方法（論文審査の結果の要旨）
ヘリコバクターハイルマニは慢性胃炎を引き起こし，を用いて検討した。ホルマリン固定パラフィン包埋切時にＢ細胞型胃 M ALT リンパ腫を惹起する。本研究

片を用いて，１）HE 染色による病理組織像の評価，ではヘリコバクターハイルマニ感染マウスモデルを用

２）peripheral lymph node addressin（PNAd）に提い，感染胃粘膜にみられる組織学的変化や血管内皮細No. 5, 2011357

審査学位論文要旨

胞上のリンパ球接着分子の発現を検討し，ヘリコバク

EDTAの存在下ではこれらの結合は認められなかっターハイルマニ感染により胃粘膜に惹起される慢性炎た。

症および M ALT リンパ腫の発症機序を解析した。

６．GlcNAc6ST‑1と MAdCAM ‑1 mRNA の発現がヒトから分離した SH4ヘリコバクターハイルマニ

感染後83週のマウスにおいて亢進していた。また，

株を８週齢の BALB/C マウスに感染させた。感染後

Ｌ‑セレクチンリガンド糖鎖の生合成に関与する

８，26，54，そして83週後にマウスを屠殺し，胃粘膜Fut4と Fut7は感染マウスおよび非感染マウスにおにみられる病理組織学的変化を以下の方法を用いて検いて発現していた。

討した。ホルマリン固定パラフィン包埋切片を用いて，これらの結果より，GlcNAc6ST‑1により硫酸化を

１）HE 染色による病理組織像の評価，２）periph-

受けたＬ‑セレクチンリガンド糖鎖と粘膜細胞接着分

eral lymph node addressin（PNAd）に提示されるＬ

子‑1（MAdCAM ‑1）を発現する HEV 様血管がヘリセレクチン結合糖鎖，mucosal addressin cell adhe-

コバクターハイルマーニによる慢性胃炎と MALT リ

sion molecule 1（MAdCAM ‑1），ヘリコバクターハ

ンパ腫の発症に重要な役割を担っていると考えられた。

イルマニ，およびＢ細胞（CD45R/B220）の免疫染色，よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とし

および３）Ｌ‑およびＥ‑セレクチン・ IgM キメラ蛋て価値があるものと認めた。

白を用いた in vitro binding assayを行った。また，
ヘリコバクターハイルマニ感染後83週目のマウスと非感染マウスから胃粘膜を採取し，それぞれから作製した cDNA を基に PNAd に提示される L セレクチン
結合糖鎖の合成に関与する N ‑acetylglucosamine‑6‑
O ‑sulfotransferases（GlcNAc6STs）お よ び MAdCAM ‑1mRNA の発現をリアルタイム定量 PCR 法により，またα1,3‑ﬂucosyltransferase（Fut4 と Fut7 ）mRNA の発現を PCR 法により検討した。
その結果，次の結論を得た。
１．肉眼的に感染マウスの胃粘膜には感染後26週で小Reduced hyperthermia‑induced cutaneous
vasodilation and enhanced exercise‑induced plasma water loss at simulated highaltitude(3200 m)in humans（3200m 高地環
境下における運動時の皮膚血管拡張抑制は運動による血漿量低下亢進に起因する）
宮

川健（論文の内容の要旨）【背景・目的】本研究では，高地では低地と比して結節が出現し，83週では多数の小結節が観察された。

対流による熱放散量が減少することが知られているが，感染マウスにおいては慢性胃炎が発症し，感染の経

それは運動時の活動筋への血漿水分移動が亢進するこ過に伴い炎症の増強をみた。非感染マウスでは観察とで血漿量が減少し，それによって圧反射性に皮膚血期間を通じて組織学的に変化が認められなかった。

管拡張が抑制されるのではないか，さらに，それは低２．CD45R/B220陽性の杯中心細胞様細胞の集族とリ圧よりも低酸素によって引き起こされるのではないか，

ンパ上皮性病変を認める MALT リンパ腫が感染後という仮説を検証した。

54週および83週のマウスでそれぞれ11.1％（1/9）

【方法】７名の若年男性を被験者とし，室温30℃，相1，77.8％（7/9）に認められた。

対湿度50％に設定された人工気象室において，１）３．胃炎や M ALT リンパ腫を発症した感染マウス胃

標高610m の正常圧（710mmHg；CNT），２）標高

粘膜には PNAd および M AdCAM ‑1を発現した高3,200m 相 当 の 低 圧 低 酸 素（510mmHg；LPLO），

内皮細静脈（HEV）様血管が認められた。慢性胃

３）標高610m であるが低酸素吸入を行う正常圧低酸炎の進行に伴い，HEV 様血管の数は増加した。

素（710mmHg；NPLO）の３条件下で，CNT にお４．肉眼的に感染マウスの胃粘膜には感染後26週で小ける最大酸素摂取量の50％の強度で自転車運動を40結節が出現し，83週では多数の小結節が観察された。

分間行わせた。CNT および LPLO では気象室内の空感染マウスにおいては慢性胃炎が発症し，感染の経気を吸入させ，NPLO は LPLO の O 分圧相当である

過に伴い炎症の増強をみた。非感染マウスでは観察

14％ O と N の混合ガスを吸入させた。測定項目は，期間を通じて組織学的に変化が認められなかった。

血漿量の変化量（ΔPV），酸素摂取量（VO ），平均５．誘導されたHEV様血管にはCa2＋の存在下にＬ‑

動脈血圧（MBP），食道温（T ），平均皮膚温（T ），およびＥ‑セレクチン・ IgM キメラ蛋白が結合し，前腕皮膚血流量（FBF），発汗速度（SR）であった。

358

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨【結果】MBP，VO ，T ，SR は３条件間 で 有 意 な
差を認めなかった（P＞0.05）。また，SR の T の上を受けなかった。
４．LPLO と NPLO 間ですべての測定項目において昇に対する感受性は３条件間で有意な差を認めなかっ

差を認めなかった。

たにもかかわらず，皮膚血管コンダクタンス（FBF/

これらの結果から，3,200m 高度における運動時のMBP）の感受性は CNT に比べ LPLO，NPLO で低対流による熱放散の減少は，血漿量の低下に起因する下した（P＜0.05）。その結果，T の運動開始５分目

圧反射性皮膚血管拡張抑制が関与していること，さらから40分目までの上昇は CNT に比べ LPLO，NPLOに，これらの現象は低圧よりも低酸素によって引き起で亢進した（それぞれ，P＝0.026，P＝0.011）。さら

こされることが明らかとなった。

に，ΔPV は 運 動 開 始 後10分 目 以 降，CNT に 比 べ
LPLO，NPLO で大きく亢進した（P＜0.05）。一方

以上，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

で，LPLO と NPLO の２条件間ではこれらの測定項目において有意な差を認めなかった。
【結論】これらの結果から，3,200m 高地における運動時の対流による熱放散の減少は，血漿量の低下に起因する皮膚血管拡張の抑制が引き起すことが明らかとなった。さらに，これらの現象は低圧よりも低酸素によって引き起こされることが明らかとなった。
（論文審査の結果の要旨）
本研究では，高地では低地と比 して対流による熱Clinicopathological features of hepatitis C
virus disease after living donor liver transplantation : relationship with in situ
hybridisation data（生体肝移植後のＣ型肝炎の臨床病理学的特徴：in situ hybridisation 法の結果との関係）
増

田

雄

一

放散量が減少することが知られているが，それは運動（論文の内容の要旨）

時の活動筋への血漿水分移動が亢進することで血漿量【背景と目的】Ｃ型肝硬変は，肝移植の適応となる末が減少し，それによって圧反射性に皮膚血管拡張が抑期肝不全患者の原疾患のなかで最も多い疾患である。

制されるのではないか，さらに，それは低圧よりも低本疾患では，肝移植後にＣ型肝炎ウイルス（HCV）

酸素によって引き起こされるのではないか，という実の再感染がほぼ全例に起こり，移植後５年で30％の験仮説を検証した。

患者が肝硬変に進展するとも報告されている。Ｃ型肝７名の若年男性を被験者とし，室温30℃，相対湿炎症例に対する肝移植後の肝機能障害の治療において度50％に設定された人工気象室において，１）標高再発Ｃ型肝炎と急性拒絶反応では治療が全く異なり，610mの正常圧（710mmHg；CNT），２）標高3,200

両者の正確な鑑別診断が必要とされている。また，肝m 相当の低圧低酸素（510mmHg；LPLO），３）標移植後の再発Ｃ型肝炎に対して，インターフェロン

高610m で あ る が 低 酸 素 吸 入 を 行 う 正 常 圧 低 酸 素（IFN）とリバビリンを用いた抗ウイルス療法が一般（710mmHg；NPLO）の ３ 条 件 下 で，CNT に お け的であるが，治療に対する反応は個体差が大きく，治る最大酸素摂取量の50％の強度で自転車運動を40

療効果予測因子の検討は臨床的に有用である。肝移植

分間行わせた。CNT および LPLO では気象室内の空後の再発Ｃ型肝炎に関する研究は多いが，肝生検組織

気を吸入させ，NPLO は LPLO の O 分圧相当であるを用いた in situ hybridisation（ISH）法による研究

14％ O と N の混合ガスを吸入させた。そして運動報告は極めて少ない。今回我々は，陽性シグナルが中の血漿量の変化量（ΔPV），酸素摂取量（VO ），HCV の感染細胞を表しているとされる HCV ゲノム

食 道 温（T ），前 腕 皮 膚 血 流 量（FBF），発 汗 速 度（G）に 対 す る RNA プ ロ ー ブ と，陽 性 シ グ ナ ル が（SR）を測定した。

HCV の増殖を表しているとされる複製中間体（re-その結果，次の結果を得た。

plicate‑intermediate：RI）に対する RNA プローブ

LPLO および NPLO は CNT と比 して，を作製し，Ｃ型肝炎患者に対する生体肝移植後の肝生１．運動に伴う血漿量の減少が亢進した。

検組織を用いて ISH 法による HCV 感染状態の検討

２．そのため，食道温上昇に対する皮膚血管拡張が抑を行った。この結果を臨床病理学的に解析し，ISH制された。
３．一方で，食道温上昇に対する発汗速度はその影響
No. 5, 2011

法による検討が再発Ｃ型肝炎と急性拒絶反応の鑑別に有用であるか，また再発Ｃ型肝炎に対する治療効果予359

審査学位論文要旨

測に有用であるか否かについて検討した。

と診断された肝生検組織と同等に HCV のＧ，RI 陽【方法】当科にて2007年10月までにＣ型肝 炎（geno-

性シグナルが認められ，ISH 陽性肝細胞数の割合でtype 1b）に対して成人間生体肝移植が施行された症

再発Ｃ型肝炎との鑑別を行うことはできなかった。し例を対象とし，術後初回肝生検検体を用いて ISH 法

かし，ISH 法による肝生検組織の評価は生体肝移植による検討を行った。再発Ｃ型肝炎が組織学的に診断後の再発Ｃ型肝炎対する抗ウイルス療法の早期の効果された患者に 対 し て は，IFNαも し く は pegylated

予測に有用である可能性が示唆された。

IFNα2b にリバビリンを加えた抗ウイルス療法を施（論文審査の結果の要旨）行した。ISH 法に用いるプローブは，Qian らにより

Ｃ型肝硬変に対する肝移植後には，Ｃ型肝炎ウイル報告された方法に準じて作製した。すなわち HCV のス（HCV）の再感染がほぼ全例に起こることが報告

5ʼ
末端側非翻訳領域を逆転写し，TOPO ベクターを用されている。再発Ｃ型肝炎と急性拒絶反応では治療がいてサブクローニングした後，digoxigenin で標識し，全く異なるため，肝移植後の肝機能障害の治療にあG ・ RI それぞれに対する HCV‑RNA プローブを作

たっては両者の鑑別が大きな問題とされている。また製した。プローブの方向は direct sequence により確

肝移植後再発肝炎に対して，インターフェロンとリバビ

認した。これらのプローブを用いて ISH を行った肝リンを用いた抗ウイルス療法が一般的であるが，治療

生検組織標本を400倍顕微下で観察 し，任 意 の10視に対する反応は個体差が大きく，治療効果予測因子の野において HCV 陽性細胞を同定し，同視野内の総肝検討が行われている。今回，陽性シグナルが HCV の細胞数に対する陽性細胞数の割合を算出した。また，感染を表しているとされる HCV ゲノム（Ｇ）に対す

肝 生 検 組 織 を HE 染 色 の 所 見 に よ り，再 発 Ｃ 型 肝るプローブと，陽性シグナルが HCV の増殖を表して

炎（RHC），急性拒絶反応（ACR），その両者の混在いるとされる複製中間体（replicate‑intermediate：（M IX）の３群に分け，ISH 法により得られた陽性細RI）に対するプロ ー ブ を 作 製 し，Ｃ 型 肝 炎 患 者 に胞割合と比 し，臨床病理学的に検討を行った。さら対する生体肝移植後の肝生検組織を用いて in situに RHC 群において抗ウイルス療法が施行された症例

hybridisation（ISH）法による HCV 感染状態の検討を，治療開始後１カ月後に血清中の HCV 量が減少しを行った。この結果を臨床病理学的に解析し，ISHた症例と減少しなかった症例に分けて，ISH 法によ法による検討が再発Ｃ型肝炎と急性拒絶反応の鑑別にり得られた結果を臨床検査所見と比 し検討を行った。

有用であるか，また再発Ｃ型肝炎に対する治療効果予【結 果】男 性15名，女 性 ４ 名 で，RHC 群 は11例，測に有用であるかについて検討した。

ACR 群は５例，M IX 群は３例であった。臨床背景因【方法】

子において３群間に有意差を認めなかった。ISH に

１．肝生検組織を HE 染色の所見により，再発Ｃ型

よる G，RI 陽性シグナルを肝細胞の核周囲および，

肝炎（RHC），急性拒絶反応（ACR），その両者の細胞質に認めた。RHC 群，ACR 群，M IX 群それぞ混在（MIX）の３群に分け，ISH 法により得られれにおけるシグナル陽性細胞数割合は，Ｇにおいてた陽性細胞割合と比

14.8％，13.4％，12.0％，RI に お い て は19.4％，

行った。

し，臨床病理学的に検討を14.8％，14.0％ で あ り，３ 群 間 に 有 意 差 を 認 め な

２．RHC 群において抗ウイルス療法が施行された症かった。抗ウイルス療法が施行された症例のうち，例を，治療開始後１カ月後に血清中の HCV 量が減

HCV量が減少した症例（Ｄ群）は７例，減少しなかっ少した症例と減少しなかった症例に分けて，ISHた症例（ND 群）は３例であった。Ｇ，RI それぞれ法により得られた結果を臨床検査所見と比 し検討の陽性細胞数の割合は，Ｄ群で11.7％，13.1％であを行った。

り，これは ND 群の24.7％，31.6％と比し有意にその結果，増田は次の結論を得た。

低値であり，特にRIにおいてより差が大きかった。臨１．RHC 群，ACR 群，MIX 群それぞれにおけるシ床検査所見においては，２群間に有意差を認めなかっグ ナ ル 陽 性 細 胞 数 割 合 は，Ｇ に お い て14.8％，

た。

13.4％，12.0％，RI においては19.4％，14.8％，【結語】Ｃ型肝炎患者に対する生体肝移植後の肝生検

14.0％であり，３群間に有意差を認めなかった。

組織における，ISH 法を用いた検討では，急性拒絶２．HCV 量が減少した症例のＧ，RI それぞれの陽反応と診断された肝生検組織においても再発Ｃ型肝炎

性細胞数の割合は11.7％，13.1％であり，減少し360

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

なかった症例の24.7％，31.6％と比し有意に低【方 法】⑴ NPPV 開 始 前 の 換 気 補 助 の 必 要 性，⑵値であった。両群間の臨床検査所見には有意な差を

NPPV の適応，⑶ NPPV 開始から30〜120分後の有認めなかった。

効性の評価，⑷ NPPV 開始から12〜24時間後の有効

これらの結果より，Ｃ型肝炎患者に対する生体肝移性の評価，⑸ウィーニングの適応，⑹ NPPV 中止か植後では，組織学的に急性拒絶反応と診断された症例

ら30〜120分後の評価，の６つのチェックリストからにおいても，再発肝炎と診断された症例と有意差なくなるプロトコルを開発した。急性呼吸不全のため緊急

HCV の感染・増殖が起こっていることが示唆され，入院した救急患者213名のうち，救急外来で気管挿管

免疫抑制療法の強化を必要とする急性拒絶反応の治療を行った患者133名と NPPV の経過中に気管挿管を時に，HCV 感染・増殖がより顕著になる可能性が考望まない６名を除いた74名を対象とし，pNPPV 群えられた。また組織学的に再発肝炎と診断された症例（37例）と iNPPV 群（37例）のデータを比において ISH 法による陽性シグナルが強く認められ

本研究はプロトコル導入前の後ろ向き研究の結果と，る症例では，従来のインターフェロン治療の効果が低プロトコル導入後の前向き研究の結果を比 したもの

い可能性が示唆された。これらの成績は，Ｃ型肝炎患である。

者に対する肝移植後に出現する肝機能障害の原因検索，【結果】患者背景においては両群間で，NPPV 開始前

および再発Ｃ型肝炎の治療方針を考える上で有用な知の性，急性呼吸不全のタイプ（高二酸化炭素血症性ま見であると考えられる。よって主査，副査は一致してたは低酸素血症性），急性呼吸不全の原因，SOFA ス

本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

コア，APACHE Ⅱスコア，バイタルサイン，血液ガした。

スデータに差を認めなかった。ただし，平均年齢はProtocol‑based noninvasive positive pressure ventilation for acute respiratory failure（急性呼吸不全に対するプロトコルに基づいた非侵襲的陽圧換気療法）
菊池忠

pNPPV 群の方が iNPPV 群よりも有意に高かった（69±17vs 58±23yr，p＝0.02）。気 管 挿 管 へ の 移 行
率は２群間で有意差を認めなかった（6/37vs 10/37，。しかし，気管挿管が必要であった症例でp＝0.26）は，pNPPV 群の方が iNPPV 群より気管挿管までの時間が短縮する傾向にあった（2±1vs 4±4 days，（論文の内容の要旨）。人工呼吸期間は二群間で有意差を認めな
p＝0.11）【背景と目的】非侵襲的陽圧換気療法（noninvasive

かった（8±10vs 6±10days，p＝0.43）。入院期間はpositive pressure ventilation，NPPV）は，急性呼吸

pNPPV 群で iNPPV 群に比べ短縮する傾向にあった不全患者の呼吸管理において一般的なものとなって（35±21vs 48±46 days，p＝0.14）。28日死亡率およきている。これまで慢性閉塞性肺疾患の急性増悪，心び院内死亡率は pNPPV 群が iNPPV 群に比べ有意

原性肺水腫，免疫不全状態の患者における急性呼吸不に低くなった（2/37vs 8/37，p＝0.049）。

全に対しては NPPV の有用性が実証されている。し急性呼吸不全のタイプ別にサブグルー プ 解 析 をかし，NPPV は気管挿管下人工呼吸に比べマスク換行 っ た。高 二 酸 化 炭 素 血 症 性 急 性 呼 吸 不 全 患 者気である点でその効果については限界がある。救急患（pNPPV：iNPPV＝12：14）においては，気管挿管者に NPPV を施行したとき気管挿管の遅れにより死への移行率（1/12vs 4/14，p＝0.33），人工呼吸期間亡率が増加したという報告がある。そこで，NPPV（5.9±5.5vs 5.4±10.9 days，p＝0.89），入院期 間の使用方法を標準化し，NPPV 使用に関する方針決（39±20vs 44±44days，p＝0.69）は二群間で有意差定のためのプロトコルを作成した。このプロトコルに基を認めなかった。しかし，気管挿管が必要であった症

づ い た NPPV（protocol‑based NPPV，pNPPV）

例では，pNPPV 群の方が iNPPV 群より気管挿管まを行えば，各医師の独自の 判 断 に 基 づ い た NPPV

での時間が短縮する傾向にあった（2vs 7±4 days，（individual physician ‑directed NPPV，iNPPV）。28日死亡率および院内死亡率は pNPPV
p＝0.10）を行った場合よりも急性呼吸不全患者の予後を改善す

群が iNPPV 群に比べ有意に低くなった（0/12vs 5/

るのではないかという仮説を立てた。この研究の目的

14，p＝0.04）。一方，低酸素血症性急性呼吸不全患

は，pNPPV が iNPPV に比し急性呼吸不全患者の予者（pNPPV：iNPPV＝25：23）に お い て は，気 管後を改善するという仮説を検証することである。

挿管への移行率（5/25vs 6/23，p＝0.62），気管挿管

No. 5, 2011361

審査学位論文要旨が必要であった症例の気管挿管までの時間（2±1vs

呼吸不全患者においては，28日死亡率および院内死

3±2days，p＝0.48），人 工 呼 吸 期 間（8.5±12.0vs

亡率は pNPPV 群が iNPPV 群に比べ有意に低く

6.1±9.6days，p＝0.45），入院期間（35±22vs 50±

なった（0/12vs 5/14，p＝0.04）が，低酸素血症性48days，p＝0.16），28日 死 亡 率 お よ び 院 内 死 亡 率

急性呼吸不全患者では有意差を認めなかった。

（2/25vs 3/23，p＝0.66）ともに２群間で有意差を認

これらの結果より，プロトコルに基づいた NPPV

めなかった。

は，各医師の独自の判断による NPPV に比べ，急性【結論】pNPPV を行うと iNPPV の場合よりも有意呼吸不全を合併した救急患者の呼吸管理に有用であり，に死亡率が低下した。特に高二酸化炭素血症性急性

急性呼吸不全で救急搬送される患者の予後を改善させ呼吸不全患者で有効であった。本研究は，プロトコル

る可能性があると思われた。よって，主査，副査は一に基づいた NPPV は，各医師の独自の判断による致して本論文を学位論文として価値があるものと認め

NPPV に比べ，急性呼吸不全を合併した救急患者のた。

呼吸管理に有用であり，急性呼吸不全で救急搬送される患者の予後を改善させる可能性を示唆している。
（論文審査の結果の要旨）
非侵襲的陽圧換気療法（noninvasive positive pressure ventilation，NPPV）は，急性呼吸不全患者の呼吸管理において一般的なものとなってきている。しかし，救急患者に NPPV を施行したとき気管挿管の遅れにより，死亡率がむしろ増加したという報告がBone mineral density measurement at bothspine and hip for diagnosing osteoporosis
in Japanese patients（日本人の骨粗鬆症診断における脊椎・大腿骨両部位骨密度測定の
重要性）
池

上

章

太

ある。そこで，NPPVの使用に関する共通のプロト（論文の内容の要旨）

コルを作成し，このプロト コ ル に 基 づ い た NPPV

【背景と目的】日本における骨粗鬆症診断では骨密度（protocol‑based NPPV，pNPPV）を行えば，各医測定がゴールデンスタンダードとなっている。2006年

師の独自の判断に基づいた NPPV（individual physi-版骨粗鬆症ガイドラインでは，診断の際骨密度は腰椎

cian‑directed NPPV，iNPPV）を行った場合よりもと大腿骨近位部の両方を測定することを推奨している。

急性呼吸不全患者の予後を改善すると仮定し，これをしかし現状ではまだ腰椎骨密度測定のみを行なってい検証した。

ることが多いと思われる。我々は2003年より全症例に⑴ NPPV 開始前の換気補助の必 要 性，⑵ NPPV

腰椎正面と大腿骨近位部（片側）の DXA を施行しての 適 応，⑶ NPPV 開 始 か ら 30〜 120分 後 の 有 効 性いる。今回我々は個人の腰椎と大腿骨の骨密度間の乖の評価，⑷ NPPV開 始 か ら 12〜 24時 間 後 の 有 効 性離について調査し，骨密度測定部位が骨粗鬆症診断にの評価，⑸ウィーニングの適応，⑹ NPPV 中止から与える影響を検討した。

30〜120分後の評価，の６つのチェックリストからな【方法】2003年〜2006年の間，DXA を施行した2,026

るプロトコルを開発した。急性呼吸不全のため緊急入名（男性485名，女性1,541名）を検討対象とした。平

院した救急患者213名の内，救急外来で気管挿管を均年齢は男性63.7歳，女性65.4歳であった。測定装置

行った患者133名と気管挿管を望まない６名を除いたは Hologic QDR2000。大腿骨骨密度を測定前に予測74名 を 対 象 と し，pNPPV 群（37例）と iNPPV 群

するのに有効な因子を検討するため，同骨密度を従属（37例）のデータを比 した。

変数，年齢・体重・身長を独立変数とした重回帰分析

その結果，菊池は次の結論を得た。

を行なった。また腰椎・大腿骨骨密度間の相関係数を

１．気管挿管が必要であった症例では，pNPPV 群の求めた。腰椎正面あるいは大腿骨近位部全体いずれか方が iNPPV 群より気管挿管までの時間が短縮するの骨密度が YAM の‑2.5SD 以下（WHO 基準）であ傾向にあった（2±1vs 4±4 days，p＝0.11）。

る対象者を骨粗鬆症と診断し，骨密度評価部位による

２．28日 死 亡 率 お よ び 院 内 死 亡 率 は pNPPV 群 が

診断不一致例の割合を計算した。腰椎 DXA の大腿骨

iNPPV 群に比べ有意に低くなった（2/37vs 8/37，

低骨密度（YAM の‑2.5SD 以下）検出力を評価する

p＝0.049）。

ため陽性および陰性尤度比（LR＋，LR‑）を計算し，３．サブグループ解析では，高二酸化炭素血症性急性362

LR＋５以上を確定診断に有効，LR‑0.2以下を除外診
信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

断に有効なものとした。

腰椎・大腿骨３部位（近位部全体・頸部・転子部）【結果】年齢・身長・体重のうち男性では体重，女性の骨密度測定では，骨粗鬆症対象者は男性146名

では年齢が大腿骨骨密度の予測力が他より大きかった。

（30％），女性910名（59％）がいたが，その対象者

腰椎・大腿骨骨密度間の相関係数は年齢で調整して男のうち腰椎は低密度でないが大腿骨は低密度である性0.65，女性0.53。対象患者のうち男性23％，女性者の割合は男性36％，女性39％だった。

44％が骨粗鬆症診断基準に適合していた。骨粗鬆症

４．骨粗鬆症診断の感度は，腰椎・大腿骨１部位の骨診断基準に適合した対象者の中で，大腿骨のみ低骨密密度測定では，40〜69歳まで大腿骨測定の感度が男度であり腰椎は低骨密度ではない患者，すなわち腰椎

女とも低かった。一方，腰椎・大腿骨３部位では特DXA では見つけられない骨粗鬆症患者の割合は，男に女性において40歳以上全ての年代で大腿骨測定の性16％，女性18％であった。腰椎 DXA の大腿骨低感度が高かった。

骨密度に対する LR＋は男性5.32，女性3.66，LR‑は５．大腿骨骨粗鬆症に対する腰椎骨密度測定は，腰男性0.36，女性0.33であった。

椎・大腿骨１部位の骨密度測定で陽性尤度比が男性【まとめ】大腿骨骨密度は年齢や体重からある程度予

5.32，女性3.66，陰性尤度比が男性0.36，女性0.33

測できるが，十分ではなく，また腰椎・大腿骨骨密度だった。一方，腰椎・大腿骨３部位の測定では，陽間の相関は十分高いとはいえず，腰椎骨密度からは大性尤度比が男性5.14，女性8.87，陰性尤度比が男性

腿骨骨密度の予測は難しいと考えられた。また評価部

0.54，女性0.44だった。

位による骨粗鬆症診断の不一致が多く生じていた。骨骨粗鬆症を診断する際，腰椎骨密度測定のみでは大密度測定部位選択が及ぼす骨粗鬆症診断への影響は大腿骨が低骨密度であるものが検知できていなかった。

きく，骨粗鬆症を見逃さないためには全症例に腰椎・

しかし大腿骨骨密度測定を含めた診断を行うことによ大腿骨両方の骨密度を測定するのが望ましいと考えらり全年齢で骨粗鬆症を検知できることが明らかになっれた。

た。この結果から池上は，骨粗鬆症診断の際に骨粗鬆（論文審査の結果の要旨）

症を見逃さないためには腰椎・大腿骨両方の骨密度を日本における骨粗鬆症診断では骨密度測定がゴール測定するのが望ましいと結論付けた。この内容に対し，

デンスタンダードとなっている。骨密度は腰椎で測定

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値がすることが多いが，腰椎骨密度は変性等の要因で測定あるものと認めた。

値が高めになることがしばしばあり，他の身体部位の骨量低下，特に大腿骨の低骨密度を見落とす可能性がある。今回池上は，骨粗鬆症診断のために骨密度測定を行った男性485名，女性1,541名，計2,026名の腰椎・大腿骨骨密度間の乖離について調査し，骨密度測定部
位が骨粗鬆症診断に与える影響を検討した。
その結果以下の成績を得た。
１．腰椎骨密度に関連するのは男性では体重だったが，年齢は関連しなかった。一方女性では年齢，体重が関連した。また，大腿骨骨密度に関連するのは，男性，女性共に体重，年齢だった。
２．腰椎・大腿骨骨密度間の相関係数は年齢で調整した場合，男性0.65，女性0.53でいずれも有意であった。

Serum Fragmented Cytokeratin 18 Levels
Reﬂect the Histologic Activity Score
of Nonalcoholic Fatty Liver Disease
More Accurately Than Serum Alanine
Aminotransferase Levels（サイトケラチン
18フラグメントの血清レベルは，非アルコー
ル性脂肪肝疾患の組織学的活動性スコアを血清アラニンアミノトランスフェラーゼレベル
よりもより正確に反映する）
筒

井将（論文の内容の要旨）【背景と目的】非アルコール性脂肪肝疾患（NAFLD）

３．骨粗鬆症診断基準を満たす対象者は腰椎・大腿骨は，非飲酒にもかかわらず肝への脂肪沈着を認める

１部位（近位部全体）の骨密度測定では，男性112

疾患群であり，肥満，耐糖能異常，脂質異常症を始め名（23％），女性679名（44％）がいたが，その対としたメタボリック症候群に起因している。そして，象者のうち腰椎は低骨密度でないが大腿骨は低骨密

NAFLDの中には非アルコール性脂肪肝炎（NASH）

度である者の割合は男性16％，女性で18％だった。

と呼ばれる重症型・進行型が存在し，肝硬変，肝不全，No. 5, 2011363

審査学位論文要旨

肝細胞癌に進展すると考えられている。NAFLD のての因子について，両 CK18及び Hsp90αは正の相関

組織学的活動性の評価や NASH の診断には，肝生検を示した。NAS との相関については，CK18フラグが必須とされているのが現状である。アラニンアミノ

メントが最も強い正の相関を示し，重回帰分析では，

トランスフェラーゼ（ALT）は，肝細胞障害の信頼CK18フラグメントが NAS の最も効果的な予測因子できるバイオマーカーであるが，基準値レベルの維持となった。次に，治療前後に肝生検を実施した20名のが必ずしも NASH の非進展を保証するものではない

NAFLD 患者を対象に，血清パラメータの変化量とことが報告されており，NASH の活動性と ALT 値

NAS の変化量との関係を検討した。NAS 改善群13の乖離が問題になる場合がある。よって NAFLD の名（65％）のうち，CK18フラグメント，AST 及び組織学的活動性を反映した新規バイオマーカーが求め，12
ALT が減少した患者は，それぞれ12名（92％）

られている。今回，NASH の病理組織学的診断に有名（92％）及び11名（85％）であり，いずれも有意用な因子の一つであるマロリー小体が，疾患の重症度に減少した。一方，NAS 悪化群７名（35％）についや進展とよく関連していることに着目し，血中に出現ては，CK18フラグメントは６名（86％）の増加が認したマロリー小体を構成成分が，NAFLD の組織学められたが，AST 及び ALT の増加はいずれも２名的活動性と相関するのではないかと仮説を設定し，そ（29％）のみであった。NAS 悪化群では，いずれのれを検討した。

パラメータも有意な増加は示されなかったものの，【方法】肝生検を実施した118名の NAFLD 患者を対ALT や AST に比べて CK18フラグメントの増加が，象に，マロリー小体の構成成分（Total CK18，CK18より一致する傾向を示した。さらに，NAS の変化量

フラグメント，Hsp70，Hsp90α，ユビキチン＋１及に対しては，CK18フラグメントの変化量が最もよくび p38α）の血清レベルを測定し，組織学的所見及び相関し，AST や ALT よりも強く NAS の変化量を

NAFLD 組織学的活動性スコア（NAS）との関係を反映した。

検討した。組織学的所見は，Kleiner らによって提案【考察】この研究では，非侵襲的な血清バイオマーカー

されたステージング・グレーディングシステム［脂肪として，マロリー小体構成成分である CK18フラグメ

蓄積（0〜3），肝小葉炎症（0〜3），肝細胞風船様変性

ントが有用であり，ALT 測定の弱点を補うことがで（0〜2）の合計スコアを NAS とする］に従ってスコきることが示された。そして，CK18フラグメントは，ア化した。また，マロリー小体は，３段階［rare（0），疾患の状態をモニターし，NASH 患者の治療効果を］でスコア化した。更に，治療
few（1），many（2）評価することができる有望なツールであることが示唆

前後に肝生検を実施した20名の NASH 患者を対象に，された。

NAS の変化とマロリー小体構成成分の血中濃度の変化との関係について検討した。

（論文審査の結果の要旨）
非アルコール性脂肪肝疾患（NAFLD）は，非飲酒【結果】118名の NAFLD 患者は，組織学的所見によにもかかわらず肝への脂肪沈着を認める疾患群であり，り NASH 患者105名，非 NASH 患者13名に分類され肥満，耐糖能異常，脂質異常症を始めとしたメタボ

た。非 NASH 患者に対して NASH 患者が有意に高リック症候群に起因している。そして，NAFLDの中値であったのは，Total CK18，CK18フラグメントのには非アルコール性脂肪肝炎（NASH）と呼ばれる

両 CK18及 び Hsp90αの 他，年 齢，BM I，コ レ ス テ

重症型・進行型が存在し，肝硬変，肝不全，肝細胞癌

ロール，グルコース，インスリン，グリコヘモグロビに進展すると考えられている。NAFLD の組織学的ン，HOM A‑IR であった。組織学的所見と血清パラ

活動性の評価や NASH の診断には，肝生検が必須とメータとの相関は，脂肪蓄積の程度には，両 CK18，されているのが現状である。アラニンアミノトランス

Hsp90α，ALT 及 び 血 小 板 数 が，肝 小 葉 炎 症 の 重

フェラーゼ（ALT）は，臨床現場で使用されている症 度 に は，両 CK18，Hsp90α， AST ， ALT 及 び

代表的な肝細胞障害のバイオマーカーであるが，基準

HOMA‑IR が，肝 細 胞 風 船 様 変 性 の 程 度 に は，両値レベルの維持が必ずしも NASH への非進展を保証

CK18，Hsp90α，AST 及び HOM A‑IR が相関した。

するものではないことが報告されており，NASH のまた，マロリー小体の程度には，CK18フラグメント，

活動性とALT値の乖離が問題になる場合がある。よっAST 及び HOM A‑IR が正の相関を示し，血小板数て NAFLD の 組 織 学 的 活 動 性 を 反 映 し た 新 規 バ イ

は負の相関を示した。興味深いことに，NAS のすべ

オマーカーが求められている。今回，NASH の病理364

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

組織学的診断に有用な因子の一つであるマロリー小体
が，疾患の重症度や進展とよく関連していることに着目し，血中に出現したマロリ ー 小 体 の 構 成 成 分 が
NAFLD の組織学的活動性と相関するのではないかとの仮説を設定し，それを検討した。

Decrease in the density of t‑tubular L‑type
Ca channel currents in failing ventricular
myocytes（不 全 心 室 筋 細 胞 の Ｔ 管 の Ｌ 型
Ca チャネル電流密度の低下）

肝生検を実施した118名の NAFLD 患者を対象に，

堀

マロリー小体の構成成分である総サイトケラチン

内

美

和

18（Total CK18），CK18フラグメント（カスパーゼ（論文の内容の要旨）で 切 断 さ れ た 断 片），熱 シ ョ ッ ク 蛋 白（Hsp）70，【背景と目的】心不全は，あらゆる循環器疾患の終末

Hsp90α，ユビキチン＋１及び p38αの血清レベルを病 態 で あ る。心 不 全 で は，心 室 筋 細 胞 内 Ca 代 謝

ELISA 法で測定し，組織学的所見及び NAFLD 組織異常が生じる。心室筋細胞では，活動電位により細学的活動 性 ス コ ア（NAS）と の 関 係 を 検 討 し た。

胞膜のＬ型カルシウムチャネル（LTCC）が開口し，組織学的所見は，Kleinerらによって提案されたスCa が 細 胞 内 に 流 入 す る。表 面 細 胞 膜（SS）と Ｔ

コアリングシステム［脂肪蓄積（0〜3），肝小葉炎症管（TT）のLTCCの近傍には，筋小胞体（SR）のリ（0〜3），肝細胞風船様変性（0〜2）の合計スコアをアノジン受容体（RyR）が集合し，それぞれ periph-

NASとする］に従ってスコア化した。また，マロリー

eral junction または dyad という構造を形成している。

小体は，３段階［rare（0），few（1），many（2）］でLTCC から流入した Ca は，これらの構造内の RyR

スコア化した。更に，治療前後に肝生検を実施した20を活性化し，SR から大量の Ca 放出を生じ収縮を引

名の NASH 患者を対象に，NAS の変化とマロリー

き起こす（Ca ‑induced Ca ‑release（CICR））。

小体構成成分の血中濃度の変化との関係について検討

TT は SS より数倍多くの LTCC を発現し，興奮収した。

縮連関で重要な役割を果たす。これまでの研究では，その結果，筒井は次の結論を得た。
１．Total CK18，CK18フ ラ グ メ ン ト 及 び Hsp90α

心不全で LTCC 活性は大きく変化しないと言われてきた。しかしある種の心不全モデルでは，CICR gainの血清レベルが，NAS の構成因子である脂肪蓄積，（LTCC から流入した Ca 量に対する，SR から放出

肝小葉炎症及び肝細胞風船様変性に対して有意な正された Ca 量の比）が低下する。そしてその原因は，の相関を示した。

dyad または TT 構造の乱れであると推察されてきた。

２．CK18フラグメントは，NAS と最も強い相関を

しかしこれらの研究では，CICR gain は，興奮収縮示し，NAS の最も効果的な予測因子であった。

連関で重要な役割を果たす TT の LTCC から流入し

３．治 療 前 後 の CK18フ ラ グ メ ン ト の 変 化 率 は，た Ca 量ではなく，細胞全体の LTCC から流入した

ALT や AST の変化率に比べて，NAS の変化率とCa 量を基に計算されている。そこで申請者らは，強く相関した。

心不全での CICR gain の低下は TT の LTCC 電流密これらの結果から，血清 CK18フラグメントレベル

度の低下を反映しているのではないかと仮定し，このは，NASH の組織学的活動性を反映していることが仮説の検証を行った。

示された。このことは，CK18フラグメントが NASH

【材料及び方法】C57BL/6マウスにイソプロテレノーの病勢把握や治療効果の評価に有用なバイオマーカー

ルを21日間皮下投与し心不全マウス（ISO マウス）になりうることを示唆している。よって，主査，副査を作成した。コントロールには，生理的食塩水を投与は一致して本論文を学位論文として価値があるものとしたマウスを用いた（CONT マウス）
。心機能評価は認めた。

心臓超音波法と左室圧の計測，タンパク量測定はウェスタンブロット法，形態学的解析には組織染色と共焦点レーザー顕微鏡，膜電位電流測定はパッチクランプ法を用いた。
【結果】ISO マウスの左心室 fractional shortening と
dP/dt

は CONT マウスより有意に小さく，ISO マ

ウスは心不全を呈していた。LTCC サブユニットのNo. 5, 2011365

審査学位論文要旨

タンパク発現量は CONT マウスと ISO マウスで有意

Ｌ型カルシウムチャネル（LTCC）の機能に大きな差はなかった。単離心室筋細胞の画像解析より得た異常は生じないと言われてきた。しかし堀内は，心SS 膜面積に対する TT 膜面積の比は CONT マウス

不全で興奮収縮連関の要であるＴ管細胞膜（TT）のと ISO マウスで有意差はなく，ISO マウスの TT 構

LTCC 活性が低下しているのではないかと仮定し，造は維持されていた。本研究では，浸透圧ショックに本研究を行った。

より心室筋細胞の TT を急速に閉塞させ，SS と TT

心不全モデルマウスは，C57BL/6マウスにイソプの LTCC 電流を別々に計測した。その結果 ISO マウ

ロテレノールを21日間皮下投与し作成した（ISO マ

スでは CONT マウスと比して，TT の LTCC 電流ウス）。コントロールには，生理的食塩水を投与した密度が約半分に低下し，SS の LTCC 電流密度が有意マウスを用いた（CONT マウス）
。心機能評価は心臓に増加していた。この異常の機序を知るために，タン

超音波法と左室圧の計測，タンパク量測定はウェスタ

パク質リン酸化酵素（PK）・脱リン酸化酵素（PP）

ンブロット法，膜電流測定はパッチクランプ法を用い阻害薬の LTCC 電流密度への影響を検討した。そのた。

結果，CONTマウスのTTのLTCC電流密度は，Ａキナーゼ（PKA）阻害薬Ｈ‑89，カルモジュリン依存性

その結果，堀内は次の結論を得た。
１．ISO マ ウ ス の 左 心 室 fractional shortening とキナーゼⅡ（CaMKII）阻害薬KN‑93，PP1/2A阻害dP/dt

薬 Okadaic acid（OA），PP2B 阻 害 薬 Cyclosporin

マウスは心不全を呈していた。

（CsA）により影響を受けなかったが，非特異的 PK
阻害薬 staurosporine（SP）により有意に減少した。
一方，ISO マウスの TT の LTCC 電流密度は，SP，

は CONT マウスより有意に小さく，ISO

２．LTCC サブユニットのタンパク発現量は CONT
マウスと ISO マウスで有意差はなかった。
３．ISO マウスでは CONT マウスと比して，TT

Ｈ‑89，KN‑93，CsA により影響を受けなかったが，の LTCC活性が約半分に低下し，表面細胞膜（ SS）

OA により約２倍に増加した。次に，CONT マウスの LTCC 活性が有意に増加していた。

の SS の LTCC 電流密度は，Ｈ‑89，KN‑93，CsA によ４．薬理学的検討の結果，
ISO マウスの TT の LTCC

り影響を受けなかったが，SP で有意に減少，OA では CONT マウスの TT の LTCC よりＡキナーゼ

有意に増加した。一方 ISO マウスの SS の LTCC 電（PKA）やカルモジュリン依存性キナーゼⅡ阻害

流密度は，Ｈ‑89，KN ‑93，OA，CsA により影響を薬（CaMKⅡ）以外の蛋白質リン酸化酵素により受けなかったが，SP で有意に減少した。

弱く活性化され，蛋白質脱リン酸化酵素（PP）1/2A【結論】以上の結果より，ISOマウスのTTのLTCCはにより強く抑制されているため，活性が低いと考え

CONT マ ウ ス の TT の LTCC よ り PKA や CaMKられた。

Ⅱ以外の PK により弱く活性化され，PP1/2A により

５．ISO マウスと CONT マウスの SS の LTCC は，

強く抑制されているため，活性が低いと考えられた。

ともに PKA や CaM KII 以外のリン酸化酵素によまた ISO マウスと CONT マウスの SS の LTCC は，り活性化されているが，ISO マウスの SS の LTCC

ともに PKA や CaMKII 以外のリン酸化酵素によりの方が CONT マウスの SS の LTCC より PP1/2A活性化されているが，ISO マウスの SS の LTCC のによる脱リン酸化により弱く抑制されているので，方が CONT マウスの SS の LTCC より PP1/2A によ

活性が高いと考えられた。

る脱リン酸化により弱く抑制されているので，活性がこれらの結果により，不全心室筋細胞では，タンパ高いと考えられた。したがって，心不全ではタンパク

ク質リン酸化酵素と脱リン 酸 化 酵 素 に よ る LTCC

質リン酸化酵素とタンパク質脱リン酸化酵素によるの 調 節 が 変 化 し，TT の LTCC 活 性 が 減 少，SS の

LTCC の調節が変 化 し，TT と SS の LTCC 活 性 がLTCC 活性が上昇したと考えられた。この現象は心変化したと考えられた。この現象は心不全における心不全における心室筋細胞の興奮収縮連関の異常の新た室筋細胞の興奮収縮連関の異常の新たな原因となりうな原因となりうる可能性が示唆された。よって，主査，る可能性が示唆された。

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるも（論文審査の結果の要旨）のと認めた。

心不全は，あらゆる循環器疾患の終末病態である。
心不全では心室筋細胞内 Ca 代謝異常が生じるが，366

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

stage Ⅱが32名，stage Ⅲが０名）及び発症からの期Electrophysiological features of familial
amyloid polyneuropathy in endemic area
（集積地家族性アミロイドポリ ニューロ パ
チーの電気生理学的特徴）
小平

農間と比 検討した。
【結果】FAP 臨床病期の stage Ⅰは発症４年以内，stage Ⅱは発症４年以上の症例が大部分であった。
Stage Ⅰでは下肢と比 して上肢の神経障害は軽度であったが，stageⅡでは上下肢とも神経障害は高度となり，脛骨神経のCMAPは38％，SNAPは50％の症例（論文の内容の要旨）で消失した。一方，針電極を用いたnear nerve法を行【目 的】家 族 性 ア ミ ロ イ ド ポ リ ニ ュ ー ロ パ チ ー

うことで stage I では80％の症例で SNAP が導出可

（FAP）は，トランスサイレチン遺伝子の変異に起因能であった。発症からの期間との比 では，尺骨神経する遺伝性全身性アミロイドーシスである。下肢からの CMAP は0.75mV/年で低下，DL は0.15ms/年で始まる末梢神経障害，自律神経障害，心臓や腎臓など

延長，MCV，SCVはそれぞれ1.7m/s/年，1.1m/s/年の臓器障害を特徴とするが，最も頻度が高い遺伝子変で低下した。脛骨神経においては DL が0.32ms/年

異は30番目のバリンからメチオニンへの変異（Val30で延長し，女性（0.23m/s）より男性（0.48ms/年）

Met）である。従来 FAP は集積地に限局した疾患とで DLがより延長する傾向があった（p＝0.13）。脛

考えられてきたが，非集積地出身の弧発例が多数見い

骨神経の CMAP，SNAP は早期より多くの症例で導だされ，遺伝性末梢神経障害の主要な原因として注目

出不能となり，CMAP は発症３年，SNAP は発症１されている。大部分のトランスサイレチンは肝臓で産年後から導出不能例が出現し，CM AP は発症7.7年，生されるため20年ほど前より肝移植が施行され，肝移SNAP は発症6.5年で，半数例で導出不能となった。

植後は末梢神経障害の進行抑制が報告されている。さ【考察】25年前の検討では発症年齢の男女差はなかっ

らに，トランスサイレチンの凝集を抑制する薬物療法

たが，今回の検討では男性のみに年齢促進現象が認めの臨床試験も進行中であり，末梢神経障害の正確な発られ，一部の測定項目では男性における進行の方が早症機序や薬物療法の効果の客観的評価を行うことが重い傾向にあったことから，性別が集積地 FAP 患者の要である。しかし，未治療の本症の自然経過を客観的発症や症状の進行へ関与していると考えられた。集積定量的指標を用いて多数例で検討した研究はない。

地 FAP 患者では発病年期の小径有髄神経と無髄神経

我々は未治療の集積地 FAP 患者の末梢神経障害の自の選択的障害が強調されてきたが，神経伝導機能検査

然経過を男女差にも注目して，末梢神経伝導機能検査で評価できるものは大径有髄神経機能が主体であり，を用いて定量的に検討した。

発症直後から上下肢ともに大径有髄神経の障害が出現【対象と方法】対象は1981年から2009年までに遺伝子していることが確認された。運動神経伝導機能指標の診断にて確定診断された未治療の集積地（長野県小川

うち DL と MCV は最速，最大径の運動神経機能のみ村）出身 FAP（Val30Met）患者69名（男性34名，女しか評価できないが，CMAP の振幅は運動神経線維性35名）。初発症状は下肢感覚障害が68％，自律神経束全体の機能を反映しており，本症の末梢神経におけ障害が32％で，全例ともいずれかの末梢神経障害でる運動神経機能の評価に適していると推測された。実

発症していた。発症年齢は19〜63歳（35.8±9.3歳）

際，脛骨神経では発症２年以内に急速に CM AP の振で，男性が33.4±9.4歳，女性が38.1±8.7歳と男性が幅は低下し，長期にわたって小さな CMAP を導出でより若年発症であった（p＜0.05）。発症から0.4〜10

きたことは本症の病態の進行をよく反映していると考年（3.6±2.4年）に，尺骨神経と脛骨神経で，複合筋えられる。また，針電極を用いた near nerve 法は末活動電位（CMAP），終末潜時（DL），最大運動神経梢神経障害が最も高度である下肢遠位部の感覚神経機

伝導速度（MCV），最大感覚神経伝導速度（SCV）

能においても比 的長期にわたって評価することがでを記録した。表面電極を用いた通常の感覚神経伝導検

き，有用であると考えられた。今回の検討により集積査では早期より感覚神経活動電位（SNAP）が消失

地の FAP 患者の末梢神経障害の機能的進行過程の自するため，針電極を用いた near nerve 法で感覚神経

然経過が詳細に明らかとなった。これは今後の本症に伝導検査を施行した。これらの指標を Countinho ら

対する薬物療法の効果を客観的に評価する際に重要なの FAP 臨床病期（stage ０が２名，stage Ⅰが35名，情報となりうる。

No. 5, 2011367

審査学位論文要旨（論文審査の結果の要旨）
家族性アミロイドポリニューロパチー（FAP）は，
トランスサイレチン遺伝子の30番目のバリンからメチオニンへの変異（Val30Met）が最も頻度が高い遺伝
性全身性アミロイドーシスである。下肢から始まる末梢神経障害，自律神経障害，心臓や腎臓などの臓器障害を特徴とするが，未治療の本症の自然経過を，客観的定量的指標を用いて多数例で検討した研究はない。
本論文は未治療の集積地（長野県小川村）出身 FAP（Val30M et）患者において尺骨神経と脛骨神経で神経伝導検査を行い，男女差にも注目して本症の末梢神経障害の自然経過を神経生理学的に定量評価したものである。

Association of Serum Cytokine Levels
with Treatment Response to PegylatedInterferon and Ribavirin Therapy in
Genotype 1 Chronic Hepatitis C Patients（ジェノタイプ１型のＣ型慢性肝炎患者における，ペグインターフェロンとリバビリン併用療法の治療効果と血清サイトカインの関連
性）
米

田

傑

（論文の内容の要旨）【目的】肝細胞癌は日本人の死因の上位（男性４位，

遺伝子診断にて確定診断された未治療 の 集 積 地

女性５位）を占める疾患であり，その70‑80％はＣ型

FAP 患者69名（男性34名，女性35名）を対象に検討

肝炎ウィルス（HCV）感染による慢性肝炎が原因でし た。発 症 年 齢 は 男 性33.4±9.4歳，女 性38.1±8.7ある。このため，肝細胞癌の撲滅には，HCV を排除

歳と男性がより若年発症であった。FAP臨 床 病 期

し肝炎を治癒させることが重要とされている。しかし，stage Ⅰでは下肢と比して上肢の神経障害は軽度でジェノタイプ１型で高ウィルス量の症例では，現在最あったが，stage Ⅱでは上下肢とも神経障害が高度とも強力なペグインターフェロンとリバビリンの併用療なり，脛骨神経の複合筋活動電位（CMAP）は38％，法を用いても約50％しか著効しない。この治療効果

感覚神経活動電位（SNAP）は50％の症例で消失しを規定する因子として，ウィルス因子，治療因子，宿た。一方，感覚神経伝導検査は針電極を用いた near

主因子が挙げられるが，この中で，免疫応答を含む宿

nerve 法を行うことで，stage I では80％の症例で主因子は必ずしも十分な検討はなされていない。一方，

SNAP が導出可能であった。発症からの期間との比

HCV 感染において，各種サイトカインは病態の形成では，尺骨神経の CM AP は0.75mV/年で低下，や治療感受性において重要な役割を演じているという

遠位潜時（DL）は0.15ms/年で延長，運動神経伝導報告がなされている。本研究では，ジェノタイプ１型

速度（MCV），感覚神経伝導速度（SCV）はそれぞれのＣ型慢性肝炎患者を対象として各種サイトカインを

1.7m/s/年，1.1m/s/年で低下した。脛骨神経におい測定し，Ｃ型慢性肝炎の病態と関連するサイトカインては DL が女性（0.23m/s）より男性（0.48ms/年）でを明らかにするとともに，ペグインターフェロン・リ

延長する傾向があり，CM AP は発症7.7年，SNAP はバビリン併用療法に対する反応性との関連を検討した。

発症6.5年で，半数例で導出不能となった。

【方法】ペグインターフェロン・リバビリン併用療法

今回の研究により集積地 FAP 患者の末梢神経障害を施行した，ジェノタイプ１型Ｃ型慢性肝炎患者79人の機能的進行過程の自然経過が詳細に明らかとなった。

（著効31人，再燃23人，無効25人）を対象とした。各

また，性別が集積地 FAP 患者の発症や症状の進行へ症例について，治療開始前，治療開始後４週，治療終関与していると考えられた。CM AP の振幅が本症の了後24週の３ポイントで，血清中の８種類のサイトカ

運動神経機能の評価に適しており，針電極を用いたイン（IL‑2，IL‑4，IL‑6，IL‑10，IL‑12 p40，IL‑12

near nerve 法により比p70，IL‑18，VEGF）を Luminex

的長期にわたって感覚神経

Multiplex Cyto-

機能を評価可能であった。これらの結果は本症に対す

kine Kits を用いて測定した。また，治療効果と関連る薬物療法の効果を客観的に評価する際に重要な情報する HCV 遺伝子のコア70番変異と ISDR 変異を直接となる新しい知見であり，学位論文として十分価値がシークエンス法にて測定した。コントロール群として，あるものと主査，副査は一致して認めた。

26人のトランスアミナーゼ正常健常人の血清サイトカ
インを測定した。
【成績】IL‑2と IL‑6を除く６項目のサイトカインが定量可能であった。患者群とコントロール群の比 では，368

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

IL ‑10（P＝0.032），IL ‑12p40（P＜0.001），IL ‑12，IL ‑18（P＝0.008）の ４ 項 目 が 患
p70（P＜0.001）

として健常人26例の血清サイトカインを測定した。
その結果，米田は以下の結論を得た。

者群で高値であった。著効群と非著効（再燃＋無効）

１．測定した８項目のサイト カ イ ン の う ち ２ 項 目

群の比に お い て，IL ‑12p40（P＝0.003），IL ‑12（IL‑2，IL‑6）は測定感度以下となったため，残る

p70（P＝0.001），IL ‑18（P＝0.001），VEGF（P＜

６項目（IL‑4，IL‑10，IL‑12p40，IL‑12p70，IL‑

0.001）の４項目は著効群で高値であり，IL‑10は非

18，VEGF）について解析を行った。

著効群で高値であった（P＝0.002）。多変量解析では，

２．患 者 群 と コ ン ト ロ ー ル 群 の 比，IL‑12高値（P＝0.024），IL‑
IL‑10低値（P＝0.014）（P ＝ 0.032），IL ‑12p40（P ＜ 0.001），IL ‑12p70

18高値（P＝0.006）が，それぞれ著効と関連する独（P＜0.001），IL‑18（P＝0.008）の４項目が患者群

立因子であった。また HCV 遺伝子変異の解析では，で高値であった。

IL ‑12は ISDR（P＝0.027）と，IL ‑10は コ ア 蛋 白Glu70（P＜0.001）と，有意な相関を認めた。

で は，IL ‑10

３．IL‑10，IL‑12，IL‑18が，著効に関連する独立因子であった。

【考案】本研究では血清中の IL‑10，IL‑12，IL‑18濃４．治療無効群で高値を示した IL‑10は，Core70番

度が併用療法の治療効果と関連していた。この中で，変異と相関を認め（P＝0.045），治療奏功群で高免疫応答抑制因子とされる IL‑10の高値は HCV 遺伝値を示した IL‑12は，ISDR 変 異 と 相 関 を 認 め た子のコア70番変異（Glu70）と相関し，Th1から誘導（P＝0.027）。

さ れ る 炎 症 性 サ イ ト カ イ ン で あ る IL‑12の 高 値 が５．著効群において，IL‑10，IL‑12，IL‑18はいずれ

ISDR 変異（mutant type）と相関した。これまで，も治療経過に伴って有意に低下を認めた。一方，非これら血清サイトカインと HCV 遺伝子変異との関連

著効（再燃＋無効）群では有意な変化を認めなかっを示唆した報告は過去になく，今回の成績は HCV にた。

対する宿主の免疫応答の解明に重要であると考えられ今回の研究によって，PEG‑IFN/RBV 併用療法のた。また臨床現場においては，これらのサイトカイン

治療開始前の血清サイトカインを測定することにより，を治療前に測定することで，併用療法の治療効果を予治療効果を予測できる可能性が示唆された。また本研測できる可能性が示唆された。

究は，PEG‑IFN/RBV 併用療法における宿主側因子【結語】Ｃ型慢性肝炎患者において，IL‑10，IL‑12，（血清サイトカイン）とウィルス側因子（ウィルス遺IL‑18などの血中濃度は，インターフェロン治療感受伝子変異）とに相関があることを報告した最初の研究性を決める HCV 遺伝子変異と関連すること，およびでもある。複雑なネットワークを有するサイトカイン

ペグインターフェロン・リバビリン併用療法におけるの検討において，多項目を同時に測定し上記結果を得

治療効果の予測因子になりうる可能性が示唆された。

たことは，その病態の解明に寄与するものであり，将（論文審査の結果の要旨）

来的にはＣ型慢性肝炎の治療の選択や治療法の開発に本邦において，肝細胞癌は悪性腫瘍による死因の上もつながると考えられる。よって，主査，副査は一致

位（男性３位，女性４位）を占める疾患であり，そのして本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

80％はＣ型肝炎ウィルス（HCV）による慢性肝炎が原因とされている。このため肝細胞癌を撲滅するためには HCV を排除することが重要だが，最も有効な治療である PEG‑IFN/RBV 併用療法を用いても，著効率は50％と低く，治療効果の規定因子の検討が進められている。本研究では，1b 高ウィルス量のＣ型慢性肝炎患者79例（著効31例，再燃23例，無効25例）を対象とし，治療前，治療開始４週後，治療終了後24週の保存血清を用いて，８項目 の 血 清 サ イ ト カ イ ン（IL‑2，IL‑4，IL‑6，IL‑10，IL‑12p40，IL‑12p70，

Eﬀect of the mutant microphthalmia‑associated transcription factor found in Tietz
syndrome on the in vitro development ofmast cells（Tietz 症候群で認められる変異型 microphthalmia‑associated transcription
factor の in vitro における肥満細胞の増殖・分化に対する影響）
重

村

倫

成

IL‑18，VEGF）を測定し，治療効果およびウィルス（論文の内容の要旨）

遺伝子変異との関連を検討した。またコントロール群【背景と目的】Microphthalmia‑associated transcrip-

No. 5, 2011369

審査学位論文要旨

tion factor（M ITF）は basic‑helix ‑loop ‑helix ‑mutant MITF は wild type MITF に対してドミナン

leucine‑zipper 型の転写因子で，メラニン生成に最もトネガティブに作用することが明らか と な っ た。

重要な酵素である tyrosinase の promoter の転写活

⑵ SCF刺激に対する肥満細胞の増殖能は，MITF変性を有し，メラニン産生細胞であるメラノサイトや網異マウスと異なり，ヒトでは異常は認められなかった。

膜色素上皮の分化に必須である。M ITF に異常を持

また，CD34 細胞からの肥満細胞の分化能は保持されつマウスは肥満細胞の分化に異常をきたし，数の減少ていることが示唆された。以上から肥満細胞におけるや表現型の異常を起こすことが報告されている。ヒトM ITF の機能はヒトとマウスでは異なることが示さ

MITF は皮膚や毛髪の色素欠損，虹彩の色素異常，れた。

難聴を３主徴する Waardenburg症候群型（WS2）（論文審査の結果の要旨）の責任遺伝子として同定されているが，肥満細胞の増Microphthalmia‑associated transcription factor

殖，分化能に対する影響については不明である。代表（M ITF）はメラニン生成に最も重要な酵素である的な MITF の変異マウスである mi/mi マウスと同

tyrosinase の promoter の転写活性を有し，メラニン

じ変異を有する Tietz 症候群（WS2の重症表現型）

産生細胞であるメラノサイトや網膜色素上皮の分化に患者で，末梢血 CD34 細胞を用いて，stem cell fac-

必須である。さらに，MITF は肥満細胞の分化にもtor（SCF）の存在下で無血清培養し，産生される肥関与するといわれており，M ITF に変異を持つマウ

満細胞数や肥満細胞の代表的なプロテアーゼである

スでは肥満細胞の分化に異常をきたし，数の減少やtryptase の発現を検討した。

表現型の異常を起こすことが報告されている。ヒト【方 法】⑴ MITF の wild type と 変 異 型 ベ ク タ ー

M ITF は Waardenburg 症 候 群（mutant MITF）をそれぞれ作成し，tyrosinase pro-遺伝子として同定されているが，肥満細胞の増殖，分moter における転写刺激活性を reporter assayで比化に対する影響について は 不 明 で あ る。本 研 究 はした。⑵ MITF の tyrosinase promoter 刺 激 活 性

M ITF 変異マウスの中でも最も重篤な表現型をきたに対する mutant MITF の刺激阻害効果を検討した。

す mi/mi マウスと同一の変異を有する Tietz 症候群⑶患者と control の末梢血 CD34 細胞5X10 個を SCF（WS2の重症表現型）患者で肥満細胞への増殖能，分50ng /ml存在下で６ 週 間 無 血 清 培 養 し，細 胞 数 お化能を中心に解析した。

よ び tryptase 染 色 陽 性 細 胞 比 率 を 比型（WS2）の 責 任し た。⑷

その結果，重村は次の結論を得た。

tryptase お よ び M ITF の mRNA 発 現 を real time

１． Wild type M ITF と mutant

RT‑PCR で比した。⑸肥満細胞の起源と考えられ

M ITF と のtyrosinase promoter における転写活性を reporter

る 末 梢 血 CD34 細 胞 に お け る c‑kit お よ び c‑kit

assayで 比CD13 比率を ﬂow cytometryで比 した。

し た と こ ろ，wild type MITF は

tyrosinase promoter 転 写 活 性 を 有 し て お り，

【結果】⑴ Mutant MITF では wild type MITF に比mutant M ITF はその転写活性を用量依存的に抑制

し，tyrosinase promoter 刺激活性の著明な減弱がみすることから，mutant M ITF は wild type M ITFられた。⑵ M utant M ITF は，wild type MITF のに対してドミナントネガティブに作用することが示

tyrosinase promoter刺激活性 を 用 量 依 存 性 に 阻 害された。

した。⑶末梢血 CD 34 細胞を SCF 存在 下 ６ 週 間 培

２．患者と control由来培養肥満細胞での細 胞 数 お

養 後 の 細 胞 数 お よ び tryptase陽 性 細 胞 比 率 は，患よび tryptase 陽性細胞比率，また tryptase および者と control 間で差異は認められなかった。また，

MITF の mRNA の発現にはそれぞれ違いはなく，

tryptaseおよび M ITFの mRNAの発現にも違いはみ

肥満細胞の起源と考えられる末梢血 CD34 細胞にられなかった。⑷患者および control の末梢血 CD34

お け る c‑kit＋お よ び c‑kit＋CD13＋比 率 に も 差細胞におけるc‑kit陽性率はそれぞれ49.1％，67.4％

はないことから，mi/miマウスと同じ変異を持つで，c‑kit 陽性 CD13陽性細胞比率は33.9％，37.1％

Tietz 症候群患者では，in vitro での末梢血 CD34であった。

細胞から肥満細胞への増殖能，分化能には異常がな【結論】⑴ Wild type M ITF と mutant MITF とのいことが示された。

tyrosinase promoter に お け る 転 写 刺 激 活 性 を re-

このように，MITF はマウスと同様にメラニン産

porter assayで比 したところ，マウスの報告と同様，生細胞に対して大きく関与しているが，肥満細胞の増370

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

殖，分化に対しては影響がない可能性が示された。ヒ

伸展乾燥させた。

トでの MITF の肥満細胞に対する役割は不明であり，【方法】１．最適な過酸化水素漂白条件を決定するた

今回の研究でヒトとマウスでは異なることが示された

めに，メラニン顆粒沈着の強いメラノーマ５例の薄切ことは重要な知見と思われ，主査・副査は一致して本切片を用いて，以下の検討を行った。① 適切な希釈論文を学位論文として価値があるものと認めた。

剤評価のために0.03M Na HPO （pH9.3），0.05M
PB（pH7.4），0.05M PBS（pH7.4）に 対 し て55℃

Reevaluation of melanin‑bleaching using
warm dilute hydrogen peroxide for histopathological analysis（病理組織学的解析のための加温希釈過酸化水素を用いたメラニン漂白の再評価）
百

瀬

正

信

にて0.5時間，１時間，２時間，３時間反応させた。
② 適切な温度と反応時間の評価のために３％又は10％の H O ・ PB にて50℃，55℃，60℃で0.5時間，１時間，２時間，３時間反応させた。２．抗原賦活化と漂白の順番が組織形態の保持に及ぼす影響を調べるために，メラニン顆粒沈着の強いメラノーマ５例の切片に対して，抗原賦活化法（0.01M Tris‑HCl buﬀer（論文の内容の要旨）（１ mM EDTA‑2Na 含有）によるマイクロウェーヴ【目的】メラノサイト関連病変における過剰なメラニ処理，0.2％トリプシン処理）の前後に漂白処理（加ン顆粒の細胞内沈着は，細胞形態の把握を困難とし，

温 H O ・0.05M PB （ pH 7.4） 又 は KM nO /抗原抗体反応を直接的に阻害することで病理組織学的oxalate 法：0.025％ KMnO 処理40分後２％ oxalic

評価を困難にする場合がある。特に酵素抗体法に，

acid にて切片が無色になるまで還元）を行い評価しDAB を用いると茶褐色の DAB 発色産物とメラニンた。３．漂白処理の抗原性に対する影響をamelanotic

顆粒の区別が難しくなる。これに対処する方法には，

melanoma ５例と扁桃組織を用いてメラノサイト関① アルカリフォスファターゼ（ニューフクシン）法

連マーカー，リンパ球マーカー，及び内皮マーカーをを用いる方法と② DAB‑immunoperoxidase 法の対中心に免疫組織化学的に評価した。

比染色として azure B を用いてメラニン顆粒を緑青【結果】１．0.05M PB（pH7.4）を３％ H O の希釈

色に変化させる方法とがある。しかし何れの方法も過剤として用いると２時間以内に漂白が完了し，組織・剰のメラニン顆粒が存在していることに変わり無く物

細胞形態の保持が0.03M Na HPO 溶液及び0.05M

理的に抗原抗体反応を阻害している状態にある。そこ

PBS を希釈剤とした場合より優れていた。この結果

で，幾つかのメラニン漂白法が報告された。中でも①を基に希釈剤は PB とし0.3％，３％，10％ H O を過マンガン酸カリウム・シュウ酸（KM nO /oxalate）

用いて50℃，55℃，60℃における漂白完了時間を調法と② 希釈過酸化水素（H O ）法が良く用いられてべたところ，0.3％では何れの温度でも３時間以内にいる。前者は迅速に漂白可能であるが，抗原性の減弱

漂白は完了せず，３％では55℃，60℃で２時間以内を起こしやすい。後者は抗原性の減弱は起こりにくい

10％では55℃，60℃で１時間以内に漂白が完了した。

が，漂白に長時間を要する。そこで，短時間処理が可

この条件で組織・細胞形態は保持されていた。

能な10％過酸化水素を60℃に加温する改良メラニン

２．マイクロウェーヴ或いはトリプシンによる抗原賦漂白法が報告された。本研究では，加温による過酸化

活化を漂白処理の後に実施すると組織・細胞形態の傷

水素漂白法を抗原賦活化法と関連付けて再評価し，組害が強く，組織・細胞像の評価が困難となった。組織形態の保持と抗原性の保持を満たす最適なメラニン

織・細胞形態の保持のためには，抗原賦活化後３％

漂白条件を検討した。

H O（PB，55℃，２時間）の処理が３％ H O（PB，【材料】免疫組織化学的に HM B‑45と M ART ‑1に陽60℃，２時間），10％ H O （PB，55℃/60℃，１時

性でメラニン顆粒沈着の強いメラノーマ５例及び間）より優れていた。

amelanotic melanoma ５例，扁桃組織５例（メラノ３．３％ H O （PB，55℃，２時間）処理後の免疫サイトに含まれない種々の抗体を用いた免疫染色に使

染色における染色性は３％ H O （0.03M Na HPO ，用）を本学部附属病院臨床検査部病理検査症例より抽

室温24時間）処理とほぼ同等であった。例外として出した。組織はホルマリン固定パラフィン包埋後，３CD1aは３％ H O （PB，55℃，２時間）処理で減弱

μm に薄切し，コーティングスライドグラスに貼付し，した。CD4，CD31は室温及び加温による H O 処理

No. 5, 2011371

審査学位論文要旨

で減弱，CD21は逆に増強 し た。KMnO /oxalate 処が得られた。

理ではMART‑1，CD1a，CD4，CD10，CD21，CD31，

これらの結果より，免疫組織化学的方法に適した脱cytokeratin に対する抗原性が減弱した。

メラニン法は，組織・細胞形態の保持，抗原性の保持，【結論】本研究では，メラニン色素沈着の強い病変の迅速性の観点から，抗原賦活化後，0.05M PB（pH

免疫組織学的検索のための漂白法として，組織・細胞7.4）を用いて３％に希釈した過酸化水素にて，55℃，

形態の保持，抗原性の保持，迅速性の観点から，抗原

２時間の加温処理が最適と結論づけた。

賦活化後，0.05M PB（pH7.4）を用いて３％に希釈した過酸化水素にて，55℃，２時間の加温処理が至よって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

適条件であった。
（論文審査の結果の要旨）
メラノサイト関連病変における過剰なメラニン顆粒
の細胞内沈着は，細胞形態の把握と免疫組織化学的評
価を困難とすることで，病理組織学的評価を困難にする場合がある。酵素抗体法における DAB の使用は，
メラニン顆粒との識別が難しくなり，対処法として，発色産物の色調を変えたり，azureB を用いてメラニ

Isolation and characterization of portal
branch ligation‑stimulated Hmga2‑positive bipotent hepatic progenitor cells（門脈結紮により誘導された Hmga2陽性肝前駆細胞の分離と機能解析）
酒

井

宏

司

ン顆粒の色調を変えるなどの方法があるが，過剰なメ（論文の内容の要旨）

ラニンの存在下では，これらの方法は効果的とは言え【背景と目的】マウスやラットの成体から分離されたない。そこで，過マンガン酸カリウム・シュウ酸法や肝非実質細胞分画中には肝前駆細胞様の性質を示す細希釈過酸化水素法などの漂白法が考案され，近年では胞が存在し，発ガン物質投与などによる肝障害時に増加温による過酸化水素漂白法が報告されている。本研

殖することが知られている。しかしながら，この誘導

究では加温による過酸化水素漂白法を抗原賦活化法と方法を臨床応用することは難しい。門脈塞栓術は拡大関連付けて再検討し，組織形態と抗原性の保持を満た肝葉切除の前治療として既に臨床で広く利用されていす最適なメラニン漂白条件を検討した。

る。門脈塞栓を行うと，塞栓葉の萎縮，非塞栓葉の代

１．過 酸 化 水 素 の 希 釈 剤 と し て，0.05M PB（pH

償性肥大を生じる。塞栓葉の萎縮は肝細胞自体の萎縮7.4）を用いると２時間以内に漂白が完了し，組と apoptosis によるとされている。Oval cell をはじ

織 ・ 細 胞 形 態 の 保 持 の 点 で0.03M Na HPO ，めとした肝前駆細胞は，肝細胞が増殖できない重篤な0.05M PBS（pH7.4）を用いた場合より優れてい肝障害が起きたときに増殖するとされており，門脈結た。よって希釈剤は PB とした。更に，過酸化水素

紮により肝前駆細胞が増殖する可能性があると考えた。

濃度を0.3％，３％，10％と し，50℃，55℃，60℃

本研究ではマウス門脈結紮モデルで肝前駆細胞の増殖において，0.5時間，１時間，２時間，３時間反応が誘導されることを確認し，さらに肝前駆細胞の簡易させたところ，10％，55℃，60℃で１時間以内にな分離方法の確立，その発現遺伝子の解析，in vitro

漂白可能であった。また組織・細胞形態も保持されでの分化誘導を目的とした。

ていた。

【方法と結果】C57BL/6J マウス（８〜12週齢，雄）２．抗原賦活化処理を漂白処理の後に実施すると，組の門脈一次分枝（左枝）を結紮し，術後肝非実質分画

織・細胞形態の傷害が強く，組織・細胞像の評価がを分離した。これらをラミニンコートディッシュ上困難であった。

で 培 養 し た と こ ろ，術 後 ７ 日 後，14日 後 の 肝 非 実

組織・細胞形態保持のためには，抗原賦活化後３

質分画より上皮様細胞のコロニーが形 成 さ れ た。

％ H O （0.05M PB，55℃，２時間）の処理が最さらに限界希釈法により single cell cloning を行 っも優れていた。

た。これにより６カ月以上維持可能な上皮様細胞集団

３．抗原賦活化後３％ H O （0.05M PB，55℃，２（Portal branch‑ligation‑stimulated hepatic cells：時間）処理後の免疫染色は，従来法として最も免疫

PBLHCs）を分離し得た。RT ‑PCR による解析では染色に適しているとされている３％ H O （0.03M

PBLHCs は胆管上皮のマーカーである ck19，肝細胞

Na HPO ，室温24時間）処理と，ほぼ同等の結果のマーカーである albumin を発現していた。また，

372

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

前駆細胞のマーカーである sca‑1，CD44，Hmga2をコロニーが形成された。さらに限界希釈法により sin-

発 現 し て い た。免 疫 細 胞 染 色 で CK19，HNF4α，gle cell cloning を行った。これにより６カ月以上維HMGA2の発現を確認した。PBLHCs を oncostatin

持可能な上皮様細胞集団（Portal branch‑ligation‑

M 添加のもと，matrigel 上で培養すると RT ‑PCR

stimulated hepatic cells：PBLHCs）を分離し得た。

で glucose‑6‑phosphatase をはじめとする成熟肝細PBLHCs の発現遺伝子を RT ‑PCR により解析し，

胞マーカーの発現が増加することが確認された。また，

肝細胞マーカー，胆管上皮細胞マーカーで免疫細胞染アンモニア代謝能，尿素合成活性が培養後１週間まで色を行った。次に PBLHCs を異なる培養条件下にお徐々に増加，その後少なくとも培養２週間後まで同様

き分化誘導を試みた。最後に PBLHCs で HMGA2がの活性が持続することがわかった。PBLHCs をマト陽性であることを確認し，生体肝でのこの前駆細胞のリゲルを含むコラーゲンゲル内で３次元培養を行うと，局在を調べた。

cyst 様の構造を形成した。免疫染色により actin の
cyst 内腔側への集積が確認され，管腔構造として極

その結果，酒井宏司は次の結論をえた。
１．PBLHCsは RT ‑PCRで ck19（胆管上皮細胞マー性を持っていることがわかった。さらに培養を継続すカー），albumin（肝細胞マーカー），sca‑1，CD44，

ると枝分かれ様の形態を示し，胆管上皮細胞への分化

Hmga2（前駆細胞マーカー）の発現があることをが示唆された。成体肝での HMGA2の発現を免疫組確認した。免疫細胞染色でも CK19（胆管上皮細胞

織染色で確認したところ，正常肝では胆管上皮にそのマーカー），HNF4α（肝細胞マーカー），HMGA2発現が認められた。門脈結紮を行うと，HMGA2陽性（前駆細胞マーカー）の発現があり，これらはこれ

細胞は肝実質内に向かって進展増殖していた。門脈結まで報告されている肝前駆細胞の性質に矛盾しない。

紮により Hmga2陽性肝前駆細胞が増殖したと考えら

２．PBLHCsをoncostatin M 添加のもと，matrigel上れた。

で培養すると RT ‑PCR で glucose‑6‑phosphatase【結論】マウスの門脈一次分枝を結紮することにより，をはじめとする成熟肝細胞マーカーの発現が増加す

肝内に出現した肝細胞および胆管上皮細胞に分化しうることが確認された。また，アンモニア代謝能，尿る肝前駆細胞を簡便な方法で分離できることが示され素合成活性が培養後１週間まで徐々に増加，その後た。将来的に臨床で肝前駆細胞を得るための方法とし少なくとも培養２週間後まで同様の活性が持続するて本手法が利用できる可能性が期待される。

ことがわかった。したがって，肝細胞様の細胞に分（論文審査の結果の要旨）化することが示唆された。

マウスやラットの成体から分離された肝非実質細胞

３．PBLHCs をマトリゲルを含むコラーゲンゲル内

分画中には肝前駆細胞様の性質を示す細胞が存在し，で３次元培養を行うと，cyst 様の構造を形成した。

発ガン物質投与などによる肝障害時に増殖することが免疫染色により actin の cyst 内腔側への集積が確知られている。しかしながら，この誘導方法を臨床応認され，管腔構造として極性を持っていることがわ

用することは難しい。門脈塞栓術は拡大肝葉切除の前かった。さらに培養を継続すると枝分かれ様の形態治療として既に臨床で広く利用されている。門脈塞栓を示し，胆管上皮細胞への分化が示唆された。

を行うと，塞栓葉の萎縮，非塞栓葉の代償性肥大を生

４．成体肝での HMGA2の発現を免疫組織染色で確じる。塞栓葉の萎縮は肝細胞自体の萎縮と apoptosis

認したところ，正常肝では胆管上皮にその発現が認によるとされている。Oval cell をはじめとした肝前められた。門脈結紮を行うと，HMGA2陽性細胞は

駆細胞は，肝細胞が増殖できない重篤な肝障害が起き肝実質内に向かって進展増殖していた。門脈結紮にたときに増殖するとされており，門脈結紮により肝前より胆管内に存在する Hmga2陽性肝前駆細胞が増

駆細胞が増殖する可能性がある。今回，マウス門脈結殖したと考えられた。

紮モデルで肝前駆細胞が増殖するか，またその前駆細これらの結果より，マウスの門脈一次分枝を結紮す

胞を分離し，その性質を調べることを目的とした。

ることにより肝内に出現した肝細胞および胆管上皮細C57BL/6J マウス（８〜12週齢，雄）の門脈一次分胞に分化しうる肝前駆細胞を簡便な方法で分離できる枝（左枝）を結紮し，術後肝非実質分画を分離した。

ことが示された。将来的に臨床で肝前駆細胞を得るた

これらをラミニンコートプレート上で培養したところ，めの方法として本手法が利用できる可能性が期待され術後７日後，14日後の肝非実質分画より上皮様細胞のる。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文

No. 5, 2011373

審査学位論文要旨

として価値があるものと認めた。

よびジストロフィン結合タンパク質（nNOS，ß‑ジス
トログリカン）について定量的 RT‑PCR およびウエ

Matrix metalloproteinase‑2 ablation in
dystrophin‑deﬁcient mdx muscle reduces
angiogenesis resulting in impaired growthof regenerated muscle ﬁbers（ジストロフィ
ン欠損 mdx マウス骨格筋における MMP‑2の欠損は血管新生を阻害し，再生筋線維の成長障害を引き起こす）
宮

﨑

大

吾

スタンブロットを用いて解析した。さらに，マイクロアレイを用いて mdx と mdx/MM P‑2 マウスの前
脛骨筋における発現量の異なる遺伝子について網羅的に解析した。
【結 果】Wild‑type，MMP‑2 ，mdx お よ び mdx/
M MP‑2 の各マウスの前脛骨筋，腓腹筋，大腿四頭筋，横隔膜について病理組織学的に解析した結果，３
カ月齢の mdx マウスに比べて同月齢の mdx/MMP‑
2 マウスの再生筋線維が有意に小径であり，再生筋（論文の内容の要旨）

線維の成長に障害が起こっていることを見出した。３【背景】Duchenne 型筋ジストロフィー（DMD）は進

カ月齢の mdx/MM P‑2 マウスの骨格筋において，行性の筋萎縮と筋力低下を呈するＸ連鎖性の致死性筋

平 均 血 管 径，筋 線 維 当 た り の 血 管 数 と endothelial疾患であり，DMD 遺伝子の変異により細胞骨格タンarea が同月齢の mdx マウスに比べて有意に減少し，パク質であるジストロフィンが欠損する。ジストロ

血管新生の関連因子である血管内皮細胞増殖因子

フィンの欠損に伴いジストロフィン結合タンパク質（VEGF）と そ の 受 容 体 Flt‑1の 発 現 は ３ カ 月 齢 の（ジストログリカン，サルコグリカンや神経型 nitric

mdx マウスに比べて同月齢の mdx/MM P‑2 マウスoxide synthase（nNOS）など）の発現も低下し，筋の骨格筋で有意に低下していたことから，MMP‑2欠

形質膜が脆弱となり細胞内への Ca の流入増加が起損により mdx マウス骨格筋の血管新生が障害されるこる。この結果，筋の変性・壊死，炎症細胞浸潤，線ことが分った。さらに，３カ月齢の mdx マウスに比維化や脂肪浸潤が起こるが，詳細な機序には不明な点

べて同月齢の mdx/MM P‑2 マウスで誘導型 NOSが多い。DM D やモデル動物である mdx マウスの骨（iNOS）や血管型 NOS（eNOS）の発現に差はなかっ

格筋では，細胞外基底膜成分の分解酵素であるマト

たものの，nNOS の発現は有意に低下していた。

リックスメタロプロテアーゼ（MMP）‑2，‑9が過剰

マイクロアレイによる解析では，S100カルシウムに発現してジストログリカンの分解に関与しているこ

結 合 タ ン パ ク 質（S100）A8，A9や CC ケ モ カ イ ンとが報告されている。我々も以前に，壊死や変性筋に

CCL‑2，‑7，CC ケモカイン受容体 CCR ‑1，‑2およ

おいて MM P‑9の発現が増加し，再生筋では M MP‑2

び chitinase 3‑like 3の発現が３カ月齢の mdx と比べの発現が増加していることを報告してきた。また，て同月齢の mdx/M M P‑2 マウスの骨格筋で有意にMM P‑9を欠損させた mdx マウスの骨格筋では壊死増加していた。ジストロフィン欠損筋では MMP にや炎症が減少しており，MM P‑9がジストロフィン欠

より ß‑ジストログリカンが分解されることが知られ損筋の筋障害に関連していることが最近報告された。

ているが，同月齢の mdx/MM P‑2 と mdx とマウ

しかし，ジストロフィン欠損筋における MM P‑2の役

ス骨格筋との間に ß‑ジストログリカンの分解の程度

割は十分には明らかにされていないことから，MMP‑に差は見られず，M MP‑2は ß‑ジストログリカンの2を欠損させた mdx マウスを用いてジストロフィン

分解への関与は少ないと考えられた。

欠損筋における M MP‑2の役割を解明することを目的【考 察】我々は，ジ ス ト ロ フ ィ ン 欠 損 筋 に お け るとした。

M MP‑2の欠損により血管新生の障害と再生筋線維の【方法】M MP‑2欠損（MM P‑2 ）マウスと mdx マ

成長障害が起こることを見出したが，その分子機構のウスを交配して M MP‑2とジストロフィンの二重欠損１つとして VEGF の発現低下の関与が考えられる。

（mdx/MMP‑2 ）マウスを作製した。１カ月と３カVEGF は正常骨格筋の血管に発現しているが，骨格

月 齢 の wild ‑type，M MP ‑2 ，mdx お よ び mdx/

筋障害により活性化された筋衛星細胞や再生筋線維に

MM P‑2 の各マウスから種々の骨格筋を採取し，筋も発現することから，筋再生に対して促進的に働くと線維や筋線維内の毛細血管について病理組織学的に解考えられている。従来，M MP‑2は VEGF の下流に析した。また，様々な成長因子，筋特異的転写因子お位置する分子と考えられていたが，MMP‑2の抑制に

374

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

より integrin αVß3‑mediated phosphoinositide 3‑

Wild‑type，M MP‑2 ，mdx および mdx/MMP‑

kinase/Akt を介して VEGF の発現が低下すること

2 （二重欠損）の各マウスの骨格筋についての病理が最近報告され，３カ月齢の mdx/M MP‑2 マウス

組織学的評価からは，３カ月齢で mdx に比べて二重の骨格筋においても同様の機序が働いている可能性

欠損マウスの再生筋線維が有意に小径であった。また，が あ る。ま た，３ カ 月 齢 の mdx/MM P‑2 マ ウ ス

骨格筋内の平均血管径，筋線維当たりの血管数と en-

骨格筋では nNOS の発現が低下していた。炎症など

dothelial area は３カ月齢の mdx に比べて同月齢のの高サイトカイン状態では nNOS の発現が抑制され二重欠損マウスで有意に減少していた。さらに，血管ることが報告されているが，事実，３カ月齢の mdx/

新生に関連する血管内皮細胞増殖因子（VEGF）とそ

MM P‑2 マウス骨格筋では CCL‑2などの幾つかのの受容体 Flt‑1の発現は二重欠損マウスで特異的に低サイトカインの発現が増加していた。これらのサイト

下していたことから，MMP‑2欠損により VEGF のカインは S100A8/A9により誘導されることが知られ発現低下を介して血管新生が障害されていることが示ている。また，S100A8/A9は MM P‑2の転写を誘導唆された。また，nNOS が３カ月齢において mdx にしており，S100A8/A9の発現増加は MM P‑2の欠損比べて二重欠損マウスで有意に低下し，血管新生へのに伴い代償性に起こっている可能性が考えられること影響を及ぼした可能性が考えられた。マイクロアレイ

から，３カ月齢の mdx/MMP‑2 マウス骨格筋で見による遺伝子発現解析では，S100カルシウム結合タられた nNOS の発現低下は，代償性に発現が増加しンパク質（S100）A8，A9やCCL‑2，‑7，CCR‑1，‑2

た S100A8/A9よりサイトカインが誘導された結果とおよび chitinase 3‑like 3の発現が３カ月齢の mdx に考えられる。nNOS は骨格筋の血管新生にも関与す

比べて同月齢の二重欠損マウスで有意に増加していた。

ることが報告されていることから，３カ月齢の mdx/

これは MM P‑2欠損に対する代償性の S100A8/A9のMM P‑2 マウスの骨格筋で見られた血管新生の障害発現増加に伴う高サイトカイン状態と考えられ，nNOSには VEGF や nNOS の発現低下が関与している可能の発現低下への影響も考えられた。

性が考えられた。

以上から M MP‑2の欠損によりジストロフィン欠損

以上の研究成果から，ジストロフィン欠損筋におけ筋に血管新生の障害と再生筋線維の成長障害が起こる

る MM P‑2の役割は，血管新生を介した再生筋線維のことを見出し，これらに VEGF や nNOS の発現低下

成長の促進であることをはじめて指摘した。

が関与している可能性を示唆した。本研究成果はジス（論文審査の結果の要旨）

トロフィン欠損筋における M MP‑2の役割が，血管新Duchenne 型筋ジストロフィー（DM D）は進行性生を介した再生筋線維の成長促進であるとの可能性をの筋萎縮と筋力低下を呈するＸ連鎖性の致死性筋疾患

明らかにした新しい知見であり，主査，副査は一致しであり，DMD 遺伝子の変異によりジストロフィンがて本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

欠損する。さらに，ジストロフィン結合タンパク質（ジストログリカンや nNOS など）の発現も低下し，筋形質膜が破綻して細胞内への Ca の流 入 増 加 が起こる。この結果，筋の変性・壊死，炎症細胞浸潤，線維化や脂肪浸潤が起こるが，詳細な機序には不明な 点 が 多 い。DM D や モ デ ル 動 物 で あ る mdx マ ウスの骨格筋では，マトリックスメタロプロテアーゼ（M MP）‑2，‑9の過剰発現が知られている。本研究者たちは壊死や変性筋においては MM P‑9，再生筋でIn vitro transdiﬀerentiation of HepG2
cells to pancreatic ‑like cells by CCl ,D ‑galactosamine, and ZnCl （CCl ，D ‑galactosamine，ZnCl による HepG2細胞から膵臓様細胞への in vitro における分化転
換）
加

納

義

也

は MM P‑2の発現が増加していることを報告した。最（論文の内容の要旨）

近，M MP‑9がジストロフィン欠損筋の筋障害に関連【背景と目的】分化転換とは，一度分化した細胞が異していることが報告されたが，MMP‑2の役割は十分なる種類の細胞に変わることであり，広義においては，には明らかにされていない。本研究は，MM P‑2を欠組織における変異形成や組織幹細胞の分化も含まれる。

損させた mdx マウスを用いてジストロフィン欠損筋

本研究で対象とする膵臓と肝臓は，発生初期において，における M M P‑2の役割の解明を目的とした。

共通の領域から発生するため，お互いの分化転換は起No. 5, 2011375

審査学位論文要旨

こりやすいと考えられる。実際，肝臓から膵臓への分る。in vitro の研究においては Pdx‑1などの遺伝子を化転換は，in vivo すなわち実験動物において肝障害

細胞内で人為的に過剰発現することにより分化転換がを引き起こす薬剤を使うことにより惹起されている。

起きることが報告されている。分化転換により得た細また，人間においても特定の病的状態で出現すること

胞を臨床応用することを念頭に，遺伝子操作をよる弊が報告されている。しかし，薬剤を用いた分化転換に害を避けるためにこの研究では薬剤による分化転換法

関して in vitro では報告されていない。一方，ウイルを試みた。

スを用い Pdx ‑1を過剰に発現させ る プ ラ ス ミ ド を株化された肝癌細胞である HepG2細胞を研究材料

HepG2細胞に遺伝子導入することにより膵臓様細胞とし，分化転換の指標とするため肝臓マーカー Albu-への分化転換を引き起こす in vitro の研究は散見され

min‑GFP と膵臓マーカーの Elastase‑DsRed を遺伝る。しかし，遺伝子操作には様々な弊害を伴うため，子導入した。クローニングを行い，FAE‑HepG2細胞移植治療などを念頭に臨床応用可能な分化転換法をを作成した。

開発するためには，遺伝子操作をさけるべきだと考え，D‑galactoHepG2細胞をそれぞれCCl （100mM ）た。そこで，肝障害をもたらす試薬である CCl ，D‑，ZnCl （200uM ）を 含 む 培 地 で 培
samine（2mM ）galactosamine や膵臓の機能と発生を促進する ZnCl

養をした。其々の試薬ごとの経時的変化を蛍光顕微鏡

等の低分子の試薬を用いて分化転換を行うことにした。

で観察した。HepG2細胞が膵臓細胞に分化転換する【材料及び方法】分化転換を行う細胞として cell line

割合を FACS 解析で明らかにした。また，分化転換化されたヒト肝癌細胞 HepG2を選んだ。分化転換をした細胞の性状を明らかにするため，膵外分泌細胞の視覚的に観察出来るようにするために，HepG2細胞マーカーであるアミラーゼ，内分泌マーカーであるイに，肝臓マーカープラスミド Albumin‑GFP と膵臓

ンスリンとグルカゴンの免疫組織化学的解析を行った。

マーカープラスミド Elastase‑DsRed を遺伝子導さらに，各試薬で分化転換した細胞についてアミラー

入し，クローニング後，FAE‑HepG2細胞を作成した。

ゼとインスリンの遺伝子発現量解析を行った。

この細胞を単層培養し，それぞれ CCl （100mM ），以上の解析より加納は次の結論を得た。

D‑galactosamine（2mM ），ZnCl （200uM ）を投与

１．FAE‑HepG2細胞にCCl （100mM ），D‑galacto-

し，その後に起こる変化を蛍光観察し分化転換を追跡，ZnCl （200uM ）を そ れ ぞ れ30
samine（2mM ）した。各試薬の最適濃度は，あらかじめ生存率を検討

日間与えることによりすべての試薬において Elas-

し，細胞が死滅することのない最大量を選んだ。分化

tase‑DsRed 陽性細胞を確認することが出来た。ま

転換の状況を把握するため，アミラーゼ，グルカゴン，

た，日を追うごとに Elastase‑DsRed 陽性細胞が増インスリンの免疫組織化学解析及びインスリン，アミ

加していくことが蛍光顕微鏡解析と FACS 解析かラーゼの遺伝子発現量を解析した。

ら明らかとなった。特に ZnCl は他の二剤に比【結果】FAE‑HepG2細胞を各試薬で30日間培養する

早期に膵細胞様細胞に転換した。

し，

ことで，Elastase‑DsRed 陽性細胞を確認できた。ま

２．30日間処理された細胞コロニーに，どの試薬におた，免疫組織化学解析において，各試薬いずれにおいいても，アミラーゼ陽性細胞とグルカゴン陽性細胞ても，外分泌マーカーであるアミラーゼ，内分泌マーとインスリン陽性細胞が存在した。

カーであるインスリン及びグルカゴンの発現をみた。

３．30日間処理され分化転換した細胞は，それぞれの

また，遺伝子発現量を解析した結果，各試薬でアミラー試薬において，コントロールと比 し，インスリン

ゼ及びインスリンはともにコントロールの細胞に比べとアミラーゼの遺伝子発現量が大幅に増加した。

て上昇した。

このように，株化されたヒトの肝癌細胞 HepG2細【結 論】HepG2細 胞 に CCl （100mM ），D ‑galacto-

胞にそれぞれ CCl ，D‑galactosamine，ZnCl を加え，ZnCl（200uM ）で30日間培養する
samine（2mM ）ることにより in vitro で膵臓様細胞に分化転換するこことにより膵臓様細胞に分化転換することが明らかととが明らかとなった。また，ZnCl は他の２つの試薬なった。

に比べて安全性が高く，アルブミンを抑制して短期間（論文審査の結果の要旨）

で Elastase‑DsRed 陽性細胞に分化転換が起きること

膵臓から肝臓への分化転換は，in vivo の研究におがわかった。今後，移植治療に向けた強力なツールにいて肝障害により引き起こされることが報告されていなると考える。以上の知見から，主査，副査は一致し

376

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨て本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

（論文審査の結果の要旨）
脳血流量は，自動調節能により一定に保たれている。

Mechanism of alkalosis‑induced constriction of rat cerebral penetrating arterioles（アルカローシスにより喚起されるラット脳細動脈の収縮反応の解析）李玉

このメカニズムの一つとして脳内での pH 変化が知られている。アルカローシスによる血管収縮反応自体はよく知られているがそのメカニズムについては不明な点が多い。最近 Na /H exchanger（NHE）が脳血管の収縮，弛緩反応に重要な働きが有ることが注目輝されているため，ラット摘出脳細動脈を用いてアルカ（論文の内容の要旨）

ローシスによる脳血管収縮反応と NHE の関係を中心【背景と目的】脳血流量は，自動調節能により一定にに解析した。

保たれている。このメカニズムの一つとして脳内での実験には雄の SD ラット（n＝35，350‑450g）を用

pH 変化が知られている。アルカローシスによる血管いて行った。ペントバルビタールの腹腔内投与による収縮反応自体はよく知られているがそのメカニズムに麻酔後，脳を摘出し中大脳動脈より分枝し Virchow‑

ついては不明な点が多い。最近 Na /H

exchanger

Robin 腔を走行する穿通枝（細動脈）を摘出した（内（NHE）が脳血管の収縮，弛緩反応に重要な働きが有

径60‑80μm）。摘出した穿通枝を，微小ガラスピペッ

ることが注目されているため，ラット摘出脳細動脈をトを用いて臓器槽内でカニュレーションし血管内径を用いてアルカローシスによる脳血管収縮反応と NHE

倒立顕微鏡下に測定した。

の関係を中心に解析した。

細動脈に60mmHg の内圧を負荷し，血管外腔を持【方法】実験には雄のSDラット（n＝35，350‑450g）

続的に灌流液で循環した。臓器槽の温度を室温からを用いて行った。ペントバルビタールの腹腔内投与

38℃に維持すると自発性の収縮を認め（内径50‑60による麻酔後，脳を摘出し中 大 脳 動 脈 よ り 分 枝 しμm），この内径をコントロールとし実験を行った。

Virchow‑Robin 腔を走行する穿通枝（細動脈）を摘

pH は7.3をコントロールとし，そこから0.1刻みで出した（内径60‑80μm）。摘出した穿通枝を，微小ガ上昇させ，その血管の収縮反応を観察した。また，

ラスピペットを用いて臓器槽内でカニュレーションし種々の阻害剤の影響についても解析を行った。

血管内径を倒立顕微鏡下に測定した。
細動脈に60mmHg の内圧を負荷し，血管外腔を持その結果，次の結論を得た。
１．アルカローシスにより細動脈は有意な収縮反応を続的に灌流液で循環した。臓器槽の温度を室温から示した。

38℃に維持すると自発性の収縮を認め（内径50‑60

２．5‑N,Nμm），この内径をコントロールとし実験を行った。

hexamethylene‑amiloride（NHE in-,4ʼ‑dichlorobenzamil（Na /Ca
hibitor），3ʼ

ex-

pH は7.3をコントロールとし，そこから0.1刻みでchanger inhibitor）と ouabain（Na /K adeno-

上昇させ，その血管の収縮反応を観察した。また，

sine triphosphatase inhibitor）の存在下では，ア種々の阻害剤の影響についても解析を行った。

ルカローシスの収縮は有意に抑制された。

【結果】アルカローシスにより細動脈は有意な収縮

３．Glibenclamide と反応を示した。5‑N,N（K channel inhibitor）の存在下では有意な変化は

hexamethylene‑amiloride（NHE inhibitor），3ʼ
,4ʼ‑dichlorobenzamil（Na /Caexchanger inhibitor）と ouabain（Na /K

tetraethylammonium ions

見られなかった。
これらの結果より，アルカローシスによる脳細動脈

adenosine triphosphatase inhibitor）の存在下では，の収縮には，NHE，Na /Ca

exchanger と Na /アルカローシスの収縮は有意に抑制された。Gliben-

K adenosine triphosphatase が関係していることがclamide と tetraethylammonium ions（K channel

示唆された。主査，副査は一致して本論文を学位論文

inhibitor）の存在下では有意な変化は見られなかった。

として価値があるものと認めた。

【結語】アルカローシスによる脳細動脈の収縮には，
NHE，Na /Ca

exchanger と Na /K adenosine

triphosphatase が関係していることが示唆された。

No. 5, 2011377

審査学位論文要旨

10mm（p＜0.001）へと減少していた。さらに脂質

Early Intervention with Rosuvastatin
Decreases the Lipid Components of thePlaque in Acute Coronary Syndrome:
Analysis Using Integrated Backscatter
IVUS (ELAN Study)（ロスバスタチンによる急性期脂質低下療法は急性冠症候群における冠動脈プラークの脂質成分を減少させる：
Integrated Backscatter IVUS を用いた検討
から）
小田切

久

成分の変化率は，ACS 発症時におけるプラークの脂質成分割合と負の相関が認められた（r＝‑0.498，p＝0.024）。
【考察】ロスバスタチンを用いた ACS 症例に対する
急性期脂質低下療法により，６カ月間で冠動脈プラー
ク容積の有意な減少が観察された。さらに，この減少は主としてプラークの脂質成分が減少することによりもたらされておりプラークの安定化が示唆された。また，この効果には ACS 発症時のプラークの組織性状が関与している可能性も推察された。
（論文審査の結果の要旨）（論文の内容の要旨）

近年，後方散乱波を用いた血管内超音波検査（Inte-【背景と目的】近年，後方散乱波を用いた血管内超音

grated backscatter intravascular ultrasound：IB‑波検査（Integrated backscatter intravascular ultra-IVUS）により，冠動脈プラークの組織性状を検討す

sound：IB‑IVUS）により，冠動脈プラークの組織性ることが可能となった。急性冠症候群（Acutecoronary

状を検討することが可能となった。さらにこの IB‑

syndrome：ACS）の原因となる不安定プラークは，IVUS の検討から，急性冠症候群（Acute coronary

その容積と内包する脂質成分の割合が高いことが報告

syndrome：ACS）の原因となる不安定プラークは，されている。一方，冠動脈疾患においてスタチンを用

プラーク容積と内包する脂質成分の割合が高いことがいた脂質低下療法によるプラークの退縮効果が注目さ報告されている。一方，冠動脈疾患においてスタチンれている。今回小田切は，ロスバスタチンを用いた急による脂質低下療法によるプラークの退縮効果が注目

性期脂質低下療法が ACS 症例のプラークの組織性状されている。これらより本研究の目的は，ロスバスタに与える影響を IB‑IVUS により検討した。

チンを用いた急性期脂質低下療法が，ACS 症例のプ

ACS にて緊急経皮的冠動脈形成術（percutaneouus

ラークの組織性状に与える影響を IB‑IVUS により検coronary intervention：PCI）を施行された際に，非討することである。

責任病変の冠動脈プラークを IB‑IVUS で記録しえた【方法】ACS にて当院へ救急搬送され，緊急経皮的冠20症例を対象とした。PCI 後にロスバスタチンの内動脈形成術（percutaneouus coronaryintervention：

服を開始し，６カ月後から９カ月後の確認冠動脈造影

PCI）を施行された際に，非責任病変の冠動脈プラー

検査までの期間内服を継続した。この確認検査の際にクを IB‑IVUS で記録しえた症例を対象とした。対象同部位に IB‑IVUS を施行し，冠動脈プラークの量的は PCI 後にロスバスタチンの内服を開始し，６カ月

な変化および質的な変化に関して検討を加えた。

後から９カ月後の確認冠動脈造影検査までの期間内服

その結果，小田切は次の結論を得た。

を継続した。この確認検査の際に同部位に IB‑IVUS

１．急性期脂質低下療法により，LDL コレステローを施行し，冠動脈プラークの量的な変化および質的な

ル 値 は117±34 mg/dl か ら73±19 mg/dl（ p＜変化に関して検討を加えた。

0.001）へと低下した。

【結果】ACS 発症から上記プロトコル通りに追跡し得

２．プラーク量は98.4±42.1mm /10mmから80.2

た20例の ACS 症例を本研究の対象とした。LDL コ±35.8mm /10mm（p＜0.001）へと減少した。

レステロール値は急性期脂質低下療法により，ACS

３．プラーク中の脂質成分は44.1±29.6mm /10mm

発症時には117±34mg/dl であったが，確認冠動脈造から28.6±17.8mm /10mm（p＜0.001）へと減少

影検査時には73±19mg/dl（p＜0.001）へと低下 しした。

ていた。IB ‑IVUS による検討では，プラーク 量 は

４．脂 質 成 分 の 変 化 率 は，ACS 発 症 時 に お け る プ

98.4±42.1mm /10mm か ら80.2±35.8 mm /10

ラークの脂質成分割合と負の相関が認められた（rmm（p＜0.001）へと減少し，またプラーク中の脂質＝‑0.498，p＝0.024）。

成分は44.1±29.6mm /10mm から28.6±17.8mm /これらの結果より，ロスバスタチンを用いた ACS

378

信州医誌 Vol. 59

審査学位論文要旨

症例に対する急性期脂質低下療法は，冠動脈プラーク

与している可能性も推察された。スタチン療法により容積を減少させる効果があることが観察された。さらACS 患者の冠動脈プラークが安定化することを IB‑に，この効果は主として脂質成分の減少によりもたら

IVUS により証明した臨床的有用な研究であり，主査，

されており，プラークの安定化が示唆された。また，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるもこの効果には ACS 発症時のプラークの組織性状が関のと認めた。

No. 5, 2011379