信州医誌，58⑹：319〜339，2010

信州大学において審査された医学博士論文要旨
学位授与
番
号

学位授与
年 月 日

学

位

論

文

題

目

学位審査委員

氏

名

林

宏一

乙第1108号 21. 5.13 High‑frequency30‑MHz sonographyin preoper- 角 谷 眞 澄 倉 科 憲 治
中山淳
ative assessment oftumor thickness ofprimarymelanoma : Usefulness in determination ofsurgical margin and indication for sentinel
lymph node biopsy（30M Hz 高周波超音波診断装置を用いた悪性黒色原発巣の厚さの術前評
価：切除範囲の決定ならびにセンチネルリンパ節生検における有用性）

沖山

洋

乙第1109号 21. 5.27 Polyenephosphatidylcholine prevents alco- 福 嶋 義 光 山 田 充 彦
中山淳
holic liver disease in PPARα‑null micethrough attenuation of increases in oxidative
stress（ポリエンフォスファチジルコリンは酸化ストレスの増大を緩和することにより α型
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体欠損マウスにおけるアルコール性肝障害を予防する）

柳沢

龍

乙第1110号 21. 5.27 Low toxicity of a conditioning with 8‑Gy 宮 川 眞 一 角 谷 眞 澄
田中榮司
total body irradiation, ﬂudarabine and cyclophosphamide as preparative regimen for allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in pediatric hematological malignancies（小児血液悪性疾患における8‑Gy全身放射線照射，フルダラビン，シクロフォスファミドを前処置とした同種造血幹細胞移植の低毒性）

山崎敏明

乙第1111号 21. 5.27 A New Device to Estimate VO during In- 谷口俊一郎 久 保 惠 嗣
川眞田樹人
cline Walking by Accelerometry and Barom（加速度計と気圧計による傾斜地歩行時のetry･
VO 計測機器の開発）

草野義和

乙第1112号 21. 6.24 Prediction of functional outcome in acute 角 谷 眞 澄 池 田 修 一
森泉哲次
cerebral hemorrhage using diﬀusion tensor（３ステ
imaging at 3T :A prospective study
ラ拡散テンソル画像を用いた急性期脳内出血患者の予後予測に関する前向き研究）河野啓一

乙第1113号 21. 9. 9 PPARα attenuates the proinﬂammatory 田 中 榮 司 西 澤
理
（ペルオ
山
田
充
彦
response in activated mesangial cells
キシソーム増殖剤活性化受容体 α型は活性化
メサンギウム細胞の炎症反応を抑制する）

No. 6, 2010

319

主

査

副

査

･

審査学位論文要旨

鹿島大靖乙第1114号 21. 9. 9 Autocrine stimulation of IGF1 in estrogen‑ 橋 爪 潔 志 谷口俊一郎
中山淳
induced growth of endometrial carcinoma
cells:involvement of the mitogen‑activatedprotein kinase pathway followed by up‑regulation of cyclin D1 and cyclin E（子宮内膜癌細胞のエストロゲン依存性増殖には IGF1のオートクリン刺激を介した，サイクリン D1とサイクリン E の発現増強を引き起こ
す MAP kinase 経路が関与する）

胡

乙第1115号 21. 9.30 IFN‑γdeﬁciency worsen Pneumocystis pneu- 瀧
monia with Th17 development in nude mice
（ヌードマウスにおける IFN‑γ欠損は Th17を誘導しニューモシスチス肺炎を悪化させる）

伸介 本田孝行
竹下敏一

小野晃市

乙第1116号 21.11.25 Increased isoprostane levels in oleic acid‑in- 川眞田樹人 久 保 惠 嗣
岡元和文
duced lung injury（オレイン酸肺障害モデルにおけるイソプロスタン値の増加）

木藤健治

乙第1117号 21.12.22 Simultaneous Suppression of MITF and 谷口俊一郎 鎌 田
徹
塩
沢
丹
里
BRAF
Enhanced Inhibition of Melanomaの同Cell Proliferation（MITF と BRAF
時抑制は悪性黒色腫細胞の増殖抑制を強化す
る）

松浦宏樹

乙第1118号 21.12.22 Elevation of Plasma Eotaxin Levels in Chil- 小 池 健 一 宇佐美真一
瀧伸介
dren with Food Allergy（食物アレルギーを持
つ小児では血中のエオタキシン値は上昇する）

中村勝

乙第1119号 22. 1.13 Cisplatin and weekly docetaxel with concur- 塩 沢 丹 里 宮 川 眞 一
田中榮司
rent thoracic radiotherapy for locallyadvanced stage Ⅲ non‑small‑cell lung cancer（局所進行第Ⅲ期非小細胞肺癌に対するシスプ
ラチン併用ドセタキセル週分割投与化学療法と同時胸部放射線療法の併用療法）

赤石江太郎

乙第1120号 22. 1.13 Antigen p57/Kip2 as a potential negative 本 郷 一 博 天 野 直 二
鎌田徹
regulator of human astrocytoma growth（p57/Kip2が持つヒト星状細胞腫に対する腫瘍増殖抑制効果の可能性）

小松万喜子

乙第1121号 22. 2.24 M ultiple roles of PPARα in brown adipose 田 中 榮 司 佐々木克典
野見山哲生
tissue under constitutive and cold conditions（褐色脂肪組織における α型ペルオキシソ−ム
増殖剤活性化受容体の新機能の解明）

320

信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨

色腫原発巣の厚さの測定は，切除範囲の決定ならびにHigh‑frequency 30‑MHz sonography inpreoperative assessment of tumor thickness of primary melanoma :Usefulness indetermination of surgical margin and indication of sentinel lymph node biopsy（30MHz 高周波超音波診断装置を用いた悪性黒色腫原発巣の厚さの術前評価：切除範囲の決定ならびにセンチネルリンパ節生検における
有用性）
林

宏

一

センチネルリンパ節生検の適応を決定するための術前診断として大変有用であることが示され，特に薄い病変における有用性が示された。
（論文審査の結果の要旨）
悪性黒色腫の原発巣の厚さの術前評価は治療方針の決定にきわめて重要である。悪性黒色腫の staging には原発巣の組織学的厚さ（Breslowʼ
s tumor thickness）が必須とされ，推奨される外科的切除範囲はこの staging により規定されている。またセンチネルリ
ンパ節生検は組織学的厚さが１mm 以上の症例に対し推奨されている。この組織学的厚さを知るためには（論文の内容の要旨）

術前に全切除生検を行う必要がある。しかしながら，【背景】悪性黒色腫の原発巣の厚さの術前評価は治療

この全切除生検は侵襲を伴い，周囲の正常組織を障害方針の決定にきわめて重要である。本研究では，30する。この侵襲によってリンパ流が変化しセンチネル

MHz 高周波超音波診断装置を用いて悪性黒色腫原発

リンパ節の同定に問題を生じうる可能性がある。した巣の厚さを測定し，組織学的な厚さとの相関についてがって，術前に全切除生検を行うことなしに無侵襲で検討を行い，高周波超音波診断装置が原発巣の切除範

原発巣の厚さを計測することが可能であれば，原発巣囲の決定ならびにセンチネルリンパ節生検の適応の決の切除範囲の決定ならびにセンチネルリンパ節生検の定に有用か否かを検討した。

適応の決定ならびにより正確なセンチネルリンパ節の【方法】1998年から2006年の信州大学における74症例同定に有用であると考えられる。そこで林らは，1998につき，15M Hz ならびに30MHz のプローブを持つ

年から2006年の信州大学における74症例につき，15

高周波超音波診断装置を用い術前に画像上で原発巣のM Hz ならびに30M Hz のプローブを持つ高周波超音

厚さを測定した。すべての切除標本において，組織学

波診断装置を用い術前に画像上で原発巣の厚さを計測的な原発巣の厚さ（Breslowʼ
s tumor thickness）をしたうえで，切除病変の組織標本にて組織学的な厚さ測定した。

（Breslowʼs tumor thickness）を測定し，高周波超音【結果】74例のうち腫瘍像が明確に捉えられなかった４波診断装置上の厚さと組織学的な厚さとの相関を検索

例および悪性黒色腫表皮内病変（melanoma in situ）のした。そして，高周波超音波診断装置が原発巣の切除

２例を除いた68例において，超音波装置で測定した厚範囲の決定ならびにセンチネルリンパ節生検の適応のさと組織学的な厚さとの間には相関係数0.887と良好決定に有用か否かを検討した。

な相関がみられた。特に足底の26例では相関係数0.95

その結果林は次の成績を得た。

と非常に良好な相関がみられた。腫瘍の厚さ１，２，

１．74例のうち腫瘍像が明確に捉えられなかった４例

４mm で分類され る UICC の Ｔ 分 類（T1〜T4）の カ

および悪性黒色腫表皮内病変（melanoma in situ）

テゴリーにそれぞれの症例を分類すると，超音波診断の２例を除いた68例において，超音波装置で測定し装置によるＴ分類と組織学的なＴ分類がよく一致してた厚さと組織学的な厚さとの間には相関係数0.887いた。特に１mm 前後の比と良好な相関がみられた。

的薄い厚さの病変で非常によく一致していた。ほぼ全症例についてこの超音波診断装置上での厚さをもとに原発巣の切除範囲を決２．日本人に多い足底の症例26例では，相関係数0.95と非常に良好な相関がみられた。

定した。センチネルリンパ節生検については原発巣の３．腫瘍の厚さ１，２，４mm で分類される UICC の組織学的な厚さが１mm 以上の場合適応とされていＴ分類（T1〜T4）のカテゴリーにそれぞれの症例る。今回超音波診断装置上の厚さが１mm を超えるを分類すると，超音波診断装置によるＴ分類と組織22症例においてセンチネルリンパ節生検あるいは根治

学的なＴ分類がよく一致していた。

的リンパ節郭清を行った。
【結論】30M Hz高周波超音波診断装置を用いた悪性黒No. 6, 2010

４．このうち特に１mm 前後の比的薄い厚さの病変で特によく一致していた。
321

審査学位論文要旨

５．ほぼ全症例について，この超音波診断装置上での厚さをもとに原発巣の切除範囲を決定した。

ンドリアの腫大，肝細胞周囲の線維化など，ヒトでのアルコール性肝炎に類似した病像が出現すること

６．センチネルリンパ節生検については原発巣の組織を報告した。本研究は，PPARα欠損マウスを用いて学的な厚さが１mm 以上の場合適応とされている

PPC の ALD に対する作用機序を検証することを目が，今回超音波診断装置上の厚さが１mmを超える的とした。

22症例においてセンチネルリンパ節生検あるいは【方法】12週齢のオス野生型，PPARα欠損マウスを根治的リンパ節郭清を行った。

それぞれ４群（各群 n＝６）に分け，コントロール

これらの結果より，30MHz 高周波超音波診断装置

Lieber‑DeCarli 食，コントロール食＋PPC（30mg/を用いた悪性黒色腫原発巣の厚さの測定は，切除範囲，４％エタノール含有 Lieber‑DeCarli 食，
kg/day）の決定ならびにセンチネルリンパ節生検の適応を決定

４％エタノール含有食＋PPC（30mg/kg/day）をそするための術前診断として大変有用であることが示さ

れぞれ６カ月間投与した。投与終了時の血液と肝臓をれ，特に薄い病変における有用性が示された。本研究採取し，生化学的・組織学的解析を行った。

は，従来臨床所見や侵襲を伴う切除生検をもとに外科【結果】エタノール含有食のみを投与した全ての PP-的な治療方針が決定されていたことに対し，高周波超ARα欠損マウスにおいて肝細胞傷害，肝炎，肝細胞の音波診断装置を用いることにより無侵襲で術前に外科

アポトーシスが観察されたが，PPC はこれらの病的的治療方針を決定できる可能性を示したものであり，変化を有意に抑制した。この PPC の保護作用はエタ

臨床的意義はきわめて大きい。よって主査，副査は一ノール投与による肝臓での酸化ストレス増加を抑制

致して本論文を学位論文として価値があるものと認めし，それに伴う炎症性サイトカイン（tumor necrosis

た。

factor‑α，intercellular adhesion molecule‑1など），
Toll‑like receptor 4・ CD14，アポトーシス促進蛋白

Polyenephosphatidylcholine prevents alcoholic liver disease in PPARα ‑null micethrough attenuation of increases inoxidative stress（ポリエンフォスファチジ
ルコリンは酸化ストレスの増大を緩和することにより α型ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体欠損マウスにおけるアルコール性肝障害を予防する）
沖山

洋（Bax，truncated Bidなど）の発現低下に起因していた。PPC の酸化ストレス軽減作用は catalase などの酸化ストレス消去酵素の発現増強ではなく，酸化ス
トレス産生酵素［cytochrome P450 2E1，acyl‑CoAoxidase，NADPH oxidase（NOX）‑2，NOX‑4など］の発現抑制に由来していた。そして PPC はエタノー
ル投与による transforming growth factor‑β1の発現増加や肝星細胞の活性化を抑制し，結果として肝線維化を抑制した。
【結論】PPC は PPARα欠損マウスにおける ALD に（論文の内容の要旨）

対し，抗炎症・抗アポトーシス・抗線維化作用を呈し【背景と目的】アルコール性肝障害（alcoholic liver

た。このような作用は，PPC がエタノール摂取に伴disease；ALD）は肝硬変の原因となりうる慢性肝疾う酸化ストレス産生酵素の過剰発現を著明に抑制する患の一つであるが，その治療戦略は未だ確立されていことに起因していた。以上の結果は，PPC の肝保護ない。ポリエンフォスファチジルコリン（polyene-

作用の新規分子機構を提示するものと考えられた。

phosphatidylcholine；PPC）は必須不飽和脂肪酸を（論文審査の結果の要旨）有するリン脂質の一種で，大豆や卵黄に豊富に含まれアルコール性肝障害（alcoholic liver disease，ている。PPC がヒヒのアルコール性肝線維症を抑制

ALD）は肝硬変の原因となりうる慢性肝疾患の一することが過去に報告されているが，その詳細な分子つであるが，その治療戦略は未だ確立されていない。

機構は不明であった。以前我々は，α型ペルオキシ

ポ リ エ ン フ ォ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン（polyenephos-

ソーム増殖剤活性化受容体（peroxisome prolifer-

phatidylcholine，PPC）は必須不飽和脂肪酸を有す

ator‑activated receptor α；PPARα）欠損マウスにるリン脂質の一種で，大豆や卵黄に豊富に含まれてい４％エタノール含有 Lieber‑DeCarli 食を６カ月間投る。PPC がヒヒのアルコール性肝線維症を抑制する

与し，肝腫大や肝炎，肝細胞のアポトーシス，ミトコ

ことが過去に報告されているが，その詳細な分子機構322

信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨は不明であった。以前我々は，α型ペルオキシソー
ム増殖剤活性化受容体（peroxisome proliferator‑
activated receptor α，PPARα）欠損マウスに４％エタノール含有 Lieber‑DeCarli 食を６カ月間投与し，肝腫大や肝炎，肝細胞のアポトーシス，ミトコンドリ
アの腫大，肝細胞周囲の線維化など，ヒトでのアル
コール性肝炎に類似した病像が出現することを報告した。本研究は，PPARα欠損マウスを用いて PPC のALD に対する作用機序を検証することを目的とした。
12週齢のオス野生型，PPARα欠損マウスをそれぞれ4群（各群 n＝６）に分け，コント ロ ー ル Lieber‑，
DeCarli 食，コントロール食＋PPC（30mg/kg/day）

Low toxicity of a conditioning with 8‑Gy
total body irradiation, ﬂudarabine andcyclophosphamide as preparative regimen
for allogeneic hematopoietic stem celltransplantation in pediatric hematologicalmalignancies（小児血液悪性疾患における8‑Gy全身放射線照射，フルダラビン，シク
ロフォスファミドを前処置とした同種造血幹細胞移植の低毒性）
柳沢龍

４％エタ ノ ー ル 含 有 Lieber‑DeCarli 食，４ ％ エ タ（論文の内容の要旨）

ノール含有食＋PPC（30mg/kg/day）をそれぞれ６【背景】造血幹細胞移植（HSCT）は化学療法抵抗性

カ月間投与した。投与終了時の血液と肝臓を採取し，の血液悪性疾患に対する有効な治療法である。特に全生化学的・組織学的解析を行った。

身放射線照射（TBI）は高い抗腫瘍効果と拒絶予防効

その結果，沖山 洋は次の結論を得た。

果から HSCT の前処置として選択されることが多い。

１．エタノール含有食のみを投与した全ての PPARα

しかし，12Gyの照射では移植関連死の増加が問題とな欠損マウスにおいて肝炎，肝細胞の壊死・アポトー

る。近年，成人領域を中心に前処置を軽減した HSCT

シスが観察されたが，PPC はこれらの病的変化をでの治療関連死（TRM ）の減少が報告されている。

有意に抑制した。

しかし，小児例ではまだ報告は少ない。我々は TBI を

２．PPC の保護作用はエタノール投与による肝臓で8Gyに減量し，フルダラビン，シクロフォスファミ

の酸化ストレス増加を抑制すること，それに伴う炎ドと併用した前処置で小児血液悪性疾患の治療を行い，症性サイトカイン（tumor necrosis factor‑α，

有効性について検討した。

intercellular adhesion molecule‑1など），Toll‑【方法】対象は2002年12月 以 降 に HSCT を 行 っ た22

like receptor 4・ CD14，アポトーシス促進蛋白

例で，年齢の中央値は6.5歳（１‑13歳），男児８例，女（Bax，truncated Bid など）の発現低下に起因し児14例であった。診断は急性リンパ性白血病（ALL）ていた。

が10例（第一寛解期２例，第二寛解期６例，非寛解

３．PPC の酸化ストレス軽減作用は catalase などの期２例），急性骨髄性白血病（AML）が11例（第一酸化ストレス消去酵素の発現増強ではなく，酸化ス

寛解期３例，第二寛解期５例，非寛解期３例），若年

トレス産生酵素［cytochrome P450 2E1，acyl‑

性骨髄単球性白血病が１例であった。移植ドナーは

CoA oxidase，NADPH

HLA 完全一致同胞３例，HLA 完全一致血縁２例，

oxidase（ NOX）‑2，

NOX‑4など］の発現抑制に起因していた。
４．PPC は エタノール投与による transforming

HLA 不一致血縁９例（３座不一致４例，２座不一致
２例，１座不一致３例），骨髄バンク６例，臍帯血バン

growth factor‑β1の発現増加や肝星細胞の活性化

ク２例であった。前処置は全例 TBI（8Gy）＋ﬂudara-を抑制し，結果として肝線維化を抑制した。

＋cyclophosphamide（120mg/kg）
bin（150mg/m ）PPC は PPARα欠損マウスにおける ALD に対し，

で行い，GVHD 予防は short term methotrexate

抗炎症・抗アポトーシス・抗線維化作用を呈した。こ（ sM TX）＋ cyclosporin A， sM TX＋ tacrolimusのような肝庇護作用は，エタノール摂取に伴う酸化ス（FK506），sMTX ＋FK506＋methylprednisolone のトレス産生酵素の過剰発現の抑制にに起因していた。

いずれかで行った。

以上の結果は，PPC の肝庇護作用の新規分子機構を【結果】全例で生着が得られた。生着日の平均値は G‑

提示するものと考えられた。

CSF 投与群においては15日，非投与群で22日であっ主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。
No. 6, 2010

た。早期再発で死亡した１例を除いて血小板の生着も平均23日で達成した。また，全例で完全ドナーキメリ
323

審査学位論文要旨

ズムが確認された。Grade Ⅱ以上の急性 GVHD の発【方法】対象は2002年12月 以 降 に HSCT を 行 っ た22症は50％，extensive type の慢性 GVHD の発症率は例で，年齢の中央値は6.5歳（１‑13歳），男児８例，女

23.8％であった。前処置を含む全ての合併症に対す児14例であった。診断は急性リンパ性白血病（ALL）

る評価を NCI‑CTC を用いて行ったところ，gradeが10例（第一寛解期２例，第二寛解期６例，非寛解

Ⅱ以上の粘膜，消化管，肝臓の毒性を9.1％，22.7％，

期２例），急性骨髄性白血病（AML）が11例（第一36.4％に認めた。これらの多くは生着症候群もしく

寛解期３例，第二寛解期５例，非寛解期３例），若は GVHD が原因であった。また，９％に grade Ⅱ以

年性骨髄単球性白血病が１例であった。移植ドナーは上の膀胱毒性を認めた。Seatle Grading System を用HLA 完全一致同胞３例，HLA 完全一致血縁２例，

いて前処置関連毒性（RRT）のみに限定して評価をHLA 不一致血縁９例（３座不一致４例，２座不一致

行ったところ，18例では毒性を認めず，残り４例に２例，１座不一致３例），骨髄バンク６例，臍帯血バン

grade Ⅰの消化管毒性を認めた。５例が死亡し，そク２例であった。前処置は全例 TBI（8Gy）＋ﬂuda-の死因は原疾患の再発が４例で，残りの１例は慢性rabin（150mg / m ）＋ cyclophosphamide（120mg

GVHD による肝不全であった。全症例における移植/kg）で行い，GVHD予防はshort term methotrexate

後２年時の粗生存率（OS），無病生存率（LFS），再（ sM TX）＋ cyclosporin A， sM TX＋ tacrolimus

発 率（RR）は そ れ ぞ れ73.8％，59.7％，37.2％ で（FK506），sM TX＋FK506＋methylprednisolone のあった。ALL10例における OS，LFS，RR はそれぞいずれかで行った。

れ57.1％，48.0％，46.0％であった。一方，骨髄性白血病ではそれぞれ91.7％，71.3％，28.7％であっその結果，柳沢は次の結論を得た。
１．生着不全は１例も認めず，全例で生着が得られた。

た。RRT による死亡は認められず，TRM は4.8％でまた，全例で完全ドナーキメリズムが確認された。

あった。以前当科で12Gy‑TBI を含む前処置後に移２．Seattle Grading System を用いて前処置関連毒植した19例の移植成績と比したところ，OS（8Gy

性（RRT）のみに限定した評価を行ったところ，：73.8％，12Gy：42.1％，p＝0.029）および TRM

４例に grade Ⅰの消化管毒性を認めたものの残り（8Gy：4.8％，12Gy：39.2％，p＝0.015）に有意差

18例では毒性を全く認めなかった。

を認めた。

３．Grade Ⅱ以上の急性 GVHD の発症は50％，ex-【考察】22症例中９例（41％）は非寛解期もしくはtensive typeの慢性 GVHD の発症率は23.8％であっ

HLA2座以上の不一致ドナーからの高リスク HSCTた。

であったにも関わらず，全例に生着が得られ，TRM

４．５例が死亡した。死因は原疾患の再発が４例では極めて低値であった。Grade Ⅰの消化管毒性以外，（ALL ３例，AM L １例），残りの１例は慢性 GVHD

大部分の症例で RRT は全く認められず，この前処置による肝不全で死亡した。全症例における移植後２の安全性が確認された。OS および LFS においても年時の粗生存率（OS），無病生存率（LFS），再発

過去の報告と比べても優れた結果であり，小児血液悪率（RR）を Kaplan‑Meier 法にて検討したところ，性疾患に対する有効性が確認された。特に骨髄性白血それぞれ73.8％，59.7％，37.2％であった。ALL病においての成績が良好であった。今後さらなる症例

10例における OS，LFS，RRはそれぞれ57.1％，を蓄積するとともに，長期的合併症についてもフォ

48.0％，46.0％であった。一方，骨髄性白血病にローを継続する予定である。

おける OS，LFS，RR はそれぞれ91.7％，71.3％，（論文審査の結果の要旨）【背景】造血幹細胞移植（HSCT）は化学療法抵抗性

28.7％であった。TRM （治療関連死）は4.8％であった。

の血液悪性疾患に対する有効な治療法である。特に全５．以前当科で12Gy‑TBI を含む前処置後に移植し身放射線照射（TBI）は高い抗腫瘍効果と拒絶予防効

た19例 の OS，LFS，RR，TRM は そ れ ぞ れ42.1

果から HSCT の前処置として選択されることが多い。

％，36.8％，37.8％，39.2％であった。8Gy‑TBI

しかし，12Gyの照射では移植関連死の増加が問題とによる成績と比なる。そこで TBI を8Gyに減量し，フルダラビン，

よび TRM （p＝0.015）に有意差を認めた。

シクロフォスファミドと併用した前処置で小児血液悪このことから，8Gy‑TBI を含む前処置は小児血液性疾患の治療を行い，有効性について検討した。
324

したところ，OS（ｐ＝0.029）お悪性疾患に対し有効性および安全性の高い治療方法で
信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨･あることが証明された。よって，主査・副査は一致し【結論】傾斜地における歩行時の VO は，気圧計を内て本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

蔵した３軸加速度計で正確に推定できる。
（論文審査の結果の要旨）･

A New Device to Estimate VO during
Incline Walking by Accelerometry andBarometry（加速度計と気圧計による傾斜･
地歩行時のVO 計測機器の開発）
山

崎

敏

･

歩行時の酸素摂取量（VO ，mL ・ kg ・ min ）は加速度計により推定できるが，従来の加速度計は平地歩行を前提としており，傾斜地における歩行時の･VO 推定に誤差を生じる。そこで山崎は，⑴ 傾斜可変トレッドミル歩行実験の結果より平地および傾斜地

明･における歩行時 VO の推定式を決定し，⑵ 加速度計

（論文の内容の要旨）にその推定式と気圧計を組み込んだ新しい機器を開発･【目的】歩行時の酸素摂取量（VO ，mL・kg ・min ）し，⑶ フィールドにおいてその機器の精度を検証しを推定する従来の加速度計は傾斜地における歩行時にた。

は誤差を生じる。そこで加速度計に気圧計を組み込ん･だ機器を開発し，これにより正確なVO を推定できる

その結果以下の成績を得た。
･

１）歩行時のVO 推定式は重回帰分析により･ことを検証する。

VO ＝0.044VM ＋1.365H ＋0.553H （r＝0.93，【方法】男女同数の計42人（63±７（SD）歳）の健常

Ｐ＜0.001）

者 に 対 し て，−15％，−10％，−５％，０％，＋５と決定した。ただし，VM は加速度累積値，H は％，＋10％，＋15％の傾斜のトレッドミル上を歩か

鉛直上方向の速度，H は鉛直下方向の速度である。

･･

せ，呼気ガス分析装置により VO を，腰に装着した

２）フィールド実験における精度検証の結果，VO の推３軸加速度計で加速度ベクトルの累積値（VM ）を計

定値（ｘ）と，呼気ガス分析装置による実測値（ｙ）

測した。被験者には各傾斜のトレッドミル上を「ゆっはほぼ一致した（ｙ＝0.97x，ｒ＝0.88，Ｐ＜0.001）。
･

くり」，「普通」，「速い」と感じる速度でそれぞれ３分

３）フィールド実験におけるVO の実測値と推定値のずつ歩かせた。ただし，０％（平地）では，これらに差は Bland‑Altman法により−0.20±3.47（mean加えて「最も速い」速度の設定も加えた。また，下り±SD， mL ・ kg ・ min ）であった。

の設定ではトレッドミルの仕様上の制限から５ km ・

以上より，気圧計を内蔵した３軸加速度計は，平地

h を最速とした。各３分のトライアルのうち，最後および傾斜地における歩行時のVO の推定に有用であ･･の１分間の VO ，およびトレッドミルの傾斜角度とると考えられた。また，本研究により開発された機器

歩行速度から求めた理論上の鉛直上下方向の速度は，フィールドにおける歩行トレーニング量のモニ･（H ，H ，m ・ min ），から VO の推定式を重回帰

ター機器として従来機器以上に正確な計測が可能であ分析により求めた。この推定式の精度を検証するためると共に，新しい環境における効果的なトレーニングに，新たに開発した気圧計内蔵型加速度計と呼気ガス方法の開発にも有効である。したがって主査，副査は分析装置を装着した11名の被験者にアップダウンのあ

一致して本論文を学位論文として価値があるものと認る屋外を約１時間歩かせた。

めた。
･【結果】トレッドミル実験の結果から導いた VO （安･静時代謝量を除く）の推定式は，VO ＝0.044VM ＋
1.365H ＋0.553H （ｒ＝0.93，Ｐ＜0.001）で あ っ･た。この推定式を組み込んだ新しい機器によるVO の推定値（ｘ）と，呼気ガス分析装置による実測値（ｙ）はほぼ一致し（ｙ＝0.97x，ｒ＝0.88，Ｐ＜0.001），
Bland‑Altman プロットによる解析では，2.0‑33.0･

mL ・ kg ・ min の範囲で，VO の実測値と推定値

Prediction of functional outcome in acutecerebral hemorrhage using diﬀusion tensor
imaging at 3T :A prospective study（３テ
スラ拡散テンソル画像を用いた急性期脳内出血患者の予後予測に関する前向き研究）
草

野

義

和

の差は，−0.20±3.47（mean±SD）であった。なお，（論文の内容の要旨）

屋外実験における鉛直上下方向の速度は気圧計の計測【背景と目的】脳出血患者において発症早期に神経運値の変化量から算出した。

動機能を予測することは，治療方針の決定あるいはリ

No. 6, 2010325

審査学位論文要旨

ハビリ計画の策定において極めて有用な情報をもたら⑶ データ処理：２次元 FA カラーマップ上の両側大す。拡散テンソル画像（DTI）を用いた研究では，慢脳脚前半部に６個の関心領域を置き FA 値および性期から亜急性期脳梗塞および亜急性期脳内出血症例

Mean Diﬀusivityをそれぞれの関心領域で測定し，について検討が行われ，錐体路における Fractional

その平均値を測定値とした。患側の FA 値を健側のAnisotropy（FA）値の低下が機能予後不良の因子とそれで除したものを FA 比とした。
（FA比＝FA値患側なることが明らかになっている。しかし，急性期脳内／FA 値健側）

出血症例で FA 値がどのように変化するか，あるいは全ての測定値は，平均値±SD で表示した。P＜0.05

FA 値と機能予後との関係についての研究は行われてを統計学的な有意差とした。

いない。そこで本研究では，脳内出血症例に対して発【結果と考察】急性期脳内出血患者18例（男性11例，症後２日以内に DTI を撮像し，運動および機能予後女性７例）に DTI を撮影した。患者の内訳は表２の通を予測する検討を行った。

りであった。年齢は，30歳から99歳（67.8±16.2歳），血【対象と方法】本研究に先立ち，大脳脚前半部での腫の局在は，被殻７例，視床６例，皮質下５例であっFA 値の左右差の有無，最適な Motion Probing Gra-た。DTI は発症から0.72±0.89日で撮像された。FA

dient（M PG）を求めるための予備実験を行った。両

値は，患側で有意に低下（0.60±0.63，0.68±0.046，

側大脳脚での FA 値は，M PG6では右側で0.79±0.09，

P ＝0.001）したが，M ean Diﬀusivityに有意差は認左側で0.08±0.02，MPG13では右側で0.81±0.03，左めなかった（P ＝0.50）。さらに，FA 比は第０病日

側で0.80±0.04であった。MPG6（P＝0.85）とMPG13

および第28病日の麻痺の程度（Paresis Grading）と（P＝0.75）では有意差はなく，左右差についても MPG6

それぞれ負の相関を示した（P ＝0.002，r＝−0.674，と MPG13で有意な差は認めなかった（右：P ＝0.79，。機能予後については，FA 比
P＜0.001，r＝−0.767）

左：P ＝0.86）。こ れ に 撮 像 時 間 も 考 慮 し て MPG6

は第28病日に計測した modiﬁed Rankin Scale と負を用いることとした。急性期脳内出血患者のうち，以の相関を示した（P＝0.002，r＝−0.676）が，Barthel

下の条件を満たす患者を対象とした。１．CT スキャ

Index との相関関係は認めなかった。第28病日の時点

ンでテント上脳内出血を認める，２．入院時に運動麻での運動機能良好群と不良群を分ける FA 比の平均値

痺を呈する，３．脳卒中の既往がなく，脳内に器質的は有意に異なり（P ＜0.001），両者を分 け る カ ッ ト

異常を認めない，４．保存的に治療された，５．拡散

オフポイントは0.85であった。我々は脳内出血の発テンソル画像が発症後２日以内に施行された。

症後２日以内に撮影された DTI が，運動障害を定量⑴ 神経症状の評価：神経症状は第０病日および第化することが可能であり，機能予後を予測し得ること

28病日に運動麻痺の評価を，第28病日に日常生活のを示した。DTI は，片麻痺を有する脳内出血患者につ機能評価をそれぞれ行った。運動麻痺は modiﬁed

いて極めて有用な情報を提供し，運動予後を予測する

National Institutes of Health Stroke Scale

ことに利用可能であると考えられた。

（NIHSS）に基づいて測定し，上下肢のスコアを加（論文審査の結果の要旨）えたものを Paresis Grading とした。日常生活の機脳内出血患者において発症早期に運動機能の予後を能評価は modiﬁed Rankin Scale および Barthel

予測することは，患者の治療方針の策定において極め

Index を用いた。全ての患者は，第28病日の Par-て有用な情報をもたらす。一方，MRI 拡散テンソル

esis Grading に基づき運動機能良好群（０から３

画像（DTI）は，パ ラ メ ー タ ー の 一 つ で あ る Frac-点）と不良群（４から８点）に分けた。

tional Anisotropy（FA）を測定することにより神経⑵ M RI 撮像条件：M RI は GE 横河メディカル社製

線維の障害度を評価することができると言われている。

M RI 装置（Signa3テスラ）を用いた。DTI は sin-

そこで草野は片麻痺を有するテント上脳内出血患者に

gle‑shot echo‑planar 法で撮影し，撮影条件は以下

対し，発症から２日以内に DTI を撮像し大脳脚前半の通りである。TR，10,000ms；TE，75ms；NEX，部で FA を測定することにより以下の検討を行った。

2；matrix size，128×128；FOV，260mm；voxel⑴ FA と入院時および28病日の麻痺の程度との関係にsize of 2.0×1.4×4.0mm；section thickness，

ついて，⑵ FA と28病日の機能予後との関係について，４mm。使用した M PG の数は６，ｂ値は1,000s/⑶ MRI 撮像時に28病日の運動機能良好群と不良群をmm に設定した。

予測するための FA のカットオフポイントを算出した。

326

信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨

なお，本研究では FA の絶対値は年齢などにより患者の機能については不明だったが，近年メサンギウム細間でばらつきが見られるため，患者間の比 には患側胞で PPARαの発現や腎炎抑制作用が報告された。

の FA を健側のそれで除した FA 比を用いた。

本研究はその機能解明のため，野生型および PPARα（FA 比＝FA 値患側／FA 値健側）。

遺伝子欠損型メサンギウム細胞を利用し，LPS 刺激

これにより以下の結果を得た。
１）脳内出血患者18例（男性11，女性７，平均年齢67.8
歳）に対し，発症から平均0.72±0.89日に DTI を撮像した。

で惹起される炎症反応の差異を解析した。
【方法】① 野生型および PPARα遺伝子欠損型マウスの腎から sieving 法により得られた単離糸球体を継代培養

２）FA 値は，健側と比して患側で有意に低下していた。

し，自然純化された３継代以降のメサンギウム細胞を使用した。10％ FBS 含有培養液にて conﬂuence３）FA 比は０病日および28病日の麻痺の程度とそれぞれ有意に負の相関を示した。
４）機能予後について，FA 比は28病日に計測した日常
生活の自立度の評価スコアの一つである modiﬁed
Rankin Scale と有意に負の相関を示した。
５）28病日での運動機能良好群と不良群を分ける FA
比の平均値は有意に異なり，両者を分けるカットオ
フポイントは0.85であった。

になるまで培養し，１％FBS含有培養液で６時間培養後，各濃度の LPS やリガンド等を加えた培養液
でさらに６時間培養し以下の項目を比 した。
② 両群の比 項目：⑴ IL‑6濃度：培養液上清を ELISA 法で測定。
⑵ DNA 合成能： H‑Thymidine を培養最後の３時間に加え細胞内取り込みを測定。
⑶ LPS レセプター，各種サイトカイン，PPARα，以上より，脳内出血の発症後２日以内に撮影された

PPARγの mRNA 発現量：刺激後の細胞から to-

DTI が，運動障害を定量化することが可能であり，tal RNA を抽出，oligo（dT）法にて逆転写を行機能予後を予測し得ることを示した。本研究により，

い mRNA を cDNA とした。得られた cDNA は

DTI は片麻痺を有する脳内出血患者について極めて

ABI PRISM 7700Sequence Detection system で有用な情報を提供し，運動予後を予測することに利用

real‑time PCR にて定量した。

可能であると考えられ，脳内出血患者の治療上有用で⑷ 刺激後の細胞を溶解し総蛋白を抽出，Immuno-

あると考えられた。したがって，主査・副査は一致しblot にて PPARαと PPARγ蛋白の半定量を行って本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

た。
⑸ p65蛋白の核内移行・ p38および SAPK/JNK

PPARα attenuates the proinﬂammatory
response in activated mesangial cells（ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体 α型は活性化メサンギウム細胞の炎症反応を抑制す
る）
河

野

啓

一

（論文の内容の要旨）

蛋白のリン酸化：刺激後回収した細胞から，総蛋
白・核分画蛋白を抽出し，Immunoblot にて各蛋白の半定量を行った。
⑹ PPARαリガンドによる炎症反応の変化と活性：培養液中に fenoﬁbric acid を加え同様の培養を行い，各種サイトカイン，PPARα，PPARαの標的遺伝子である ACOX の mRNA 発現を調べた。

【目的】メサンギウム細胞は高分化間葉系細胞であり，③ PPARαの発現のメカニズムを調べるため細胞の非活性時は糸球体構造の支持と糸球体血流調節などを

αSMA mRNA 発現を調べた。また生体内での，行っている。しかし，炎症刺激で活性化すると，細胞PPARα応答を検討するため，10週齢の野性型マウ

増殖能，サイトカイン分泌能を獲得し糸球体腎炎の進スに LPS 溶液を腹腔内投与し18時間後に腎組織を展に関連する。ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体

得，連続切片の免疫染色にて PPARαと αSM A のα型（peroxisome proliferator‑activated receptor

発現変化を検討した。

α；PPARα）は，リガンド依存性に転写調節を行う核【結果・考察】内受容体であり，炎症反応，脂質代謝など様々な生理① PPARα遺伝子欠損メサンギウム細胞は，野性型機能に関わっている。糸球体内発現は非常に少なくそ
No. 6, 2010と比し培養液上清中の IL‑6濃度，DNA 合成能，327

審査学位論文要旨

核分画内の p65蛋白および NFκB 経路の標的遺伝

おける PPAR αの抗炎症作用を明らかにするため，子である COX2，ICAM ‑1，TNFαの mRNA 発現

河野らは培養メサンギウム細胞を用いた実験を試みた。

が有意に増加していた。一方，IκBα mRNA 遺伝

野生型および PPARα遺伝子欠損型メサンギウム細子発現は有意に低かった。なお，両群間で LPS レ

胞に LPS 刺激を加え惹起される炎症反応の差異を検セプターの発現レベル，M APK 経路の活性化は有討した。

意差がなかった。PPARαは IκBαの発現を通じて NFκB 経路を抑制し，抗炎症性に機能することが示唆された。
② PPARαの mRNA および蛋白発現は，定常状態

その結果以下の成績を得た。
① PPARα遺伝子欠損メサンギウム細胞は，野性型と比し IL‑6分泌と DNA 合成能が有意に増加，LPS 刺激に対する応答反応が増強していた。

では両群とも極めて低かったが，野性型では LPS② 両群間で LPS レセプターの発現に有意差はなかっ

刺激により有意に誘導された。PPARα誘導に伴い，た。PPARα遺伝子欠損群で核分画内の NFκB 蛋

PPARαの標的遺伝子である ACOX 発現が増加し，

白や NFκB 標的遺伝子 mRNA 発現は有意に増加

さらに PPARαリガンド投与でその発現が増強さし，また NFκB 抑制因子 IκBαの mRNA 発現は有れた。また，リガンド投与により，炎症反応が低下

意に低下した。

し，IκBα発現が増加した。PPARα の発現誘導は，③ PPARαの mRNA および蛋白発現は，定常状態

IL‑1β刺激でも起き，形質転換マーカーである α−では両群とも極めて低かったが，野性型は LPS 刺SMA と同調して発現した。野性型では，LPS 刺激により有意に誘導された。

激により PPARαが高度に誘導され，誘導された④ PPARα誘導に伴い，PPARαの標的遺伝子である

PPARαは転写調節機能を保持し抗炎症作用を示す

ACOX 発現が増加，さらに PPARαリガンド投与ことが示唆された。PPARαの発現誘導は，メサンで発現が増強されることから，誘導された PPARα

ギウム細胞の形質転換と関連する可能性が示唆されは転写調節機能を保持していることが判明した。また。

た，リガンド投与により炎症反応が低下，IκBα発③ マ ウ ス 腎 組 織 で は，同 じ メ サ ン ギ ウ ム 領 域 に現が増加した。

PPARαと α−SMA 陽性細胞を認めた。形質転換⑤ PPARαの発現誘導は，他の炎症刺激物質であに関連する PPARα誘導は，in vivo でも生じるこる IL‑1β刺激でも生じ，形質転換マーカーであるとが示唆された。

α−SM A と同調した発現を示していた。

【結論】定常状態のメサンギウム細胞では，PPARαは⑥ LPS 溶液を腹腔内注射したマウス腎組織で，同じほとんど発現していないが，炎症刺激により PPARα

メサンギウム領域に PPARαと α−SMA 陽性細胞をが 誘 導 さ れ る。こ の PPARαは 転 写 活 性 を 持 ち，認め，炎症性刺激による PPARα誘導は，in vivoIκBαを増加させることで NFκB 経路を抑制，炎症でも生じた。

性サイトカインの産生やメサンギウム細胞増殖能を低以 上 よ り，定 常 状 態 の メ サ ン ギ ウ ム 細 胞 で は，下させると考えられた。PPARαの発現誘導は，メサ

PPARαはほとんど発現していないが，炎症刺激によンギウム細胞の形質転換に関連している可能性が考えり PPARαが誘導されると，PPARαは転写活性をられ，in vivo でも確認することができた。メサンギ

発揮し IκBαを増加させることで NFκB 経路を抑制

ウム細胞の PPARαは，新たな腎炎治療因子となる

し，炎症性サイトカインの産生やメサンギウム細胞増可能性が示唆された。

殖能を低下させると考えられた。PPARαの発現誘導（論文審査の結果の要旨）

は，メサンギウム細胞の形質転換に関連する可能性が考

メサンギウム細胞は，炎症刺激で活性化すると細胞えられ，in vivo でも確認出来た。これらは，PPARα

増殖能，サイトカイン分泌能を獲得し糸球体腎炎の進の活性調節を利用した新たな腎疾患治療法の開発に寄展に関連すると考えられている。ペルオキシソーム増与する結果であると考えられた。

殖剤活性化受容体 α型（Peroxisome Proliferator
Activated Receptorα：PPAR α）はリガンド依存性

よって主査，副査は一致して本論文が学位論文として価値のあるものと認めた。

に転写調節を行う核内受容体であり，炎症反応など
様々な生理機能に関わっている。メサンギウム細胞に
328

信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨

発現はE2添加約２時間後から増加し，12時間後にピー

Autocrine stimulation of IGF1 in estrogen‑induced growth of endometrial carcinoma
cells:involvement of the mitogen‑activated protein kinase pathway followed byupregulation of cyclin D1 and cyclin E（子宮内膜癌細胞のエストロゲン依存性増殖には
IGF1のオートクリン刺激を介した，サイクリン D1とサイクリン E の発現増強を引き起こす MAP kinase 経路が関与する）
鹿

島

大

靖

クを呈した。サイクリン E の蛋白質，mRNA 発現はともに添加６時間後から増加し24時間後まで増加した。
以上より，E2刺激により細胞増殖が促進されること，
サイクリン D1および E 発現が増強することが明らかとなった。Ishikawa細胞の E2刺激増殖における
M APK3/1経路の関与の有無を検討したところ，E2
刺激２時間後よりリン酸化 M APK3/1が出現し24時間まで増加した。
また，
この MAPK3/1のリン酸化はER アンタゴニストと MAP2K 阻害剤により著明に抑制されたことから，E2により MAPK3/1経路が活性化されることが明らかとなった。次に，E2により誘（論文の内容の要旨）導される増殖因子をスクリーニングし，E2刺激によ【背景と目的】正常子宮内膜や一部の子宮内膜癌はエ

り Insulin‑like growth factor 1（IGF1）mRNA 発現

ストロゲン受容体（ER）を発現し，エストロゲンにが増強するとともに，IGF1蛋白質が培養液中に分泌さより細胞増殖が促進されることが知られているが，これることを見出した。Ishikawa細胞にIGF1受容体のの増殖機序の細胞内分子学的メカニズムは未だ十分に発現を確認し，IGF1刺激24時間後の細胞増殖は濃度依解明されていない。一般に細胞増殖は増殖因子やサイ存性に促進され，IGF1刺激後15分で MAPK3/1のリ

トカインなどの細胞外刺激により促進されることがン酸化を認めた。E2による MAPK3/1のリン酸化は抗知られている。これら細胞外の刺激に対し適切な細胞

IGF1受容体抗体により抑制されることから，E2によ応答を引き起こすための主要な細胞内シグナル伝達経

るM APK3/1経路の活性化にはIGF1を介したオートク

路，M PAK 経路がある。現在までに古典的 M APK，リン機構が関与していることが示された。IGF1刺激

ERK5，JNK/SAPK，p38の４つのカスケードが明らによる細胞周期調節因子の検討ではサイクリン D1とかになっており，増殖因子，ホルモン，サイトカイン，

サイクリン E mRNA 発現がそれぞれ２時間後，４時

ストレスなどの細胞外刺激を構成分子の連続的なリン

間後から増強し，またその発現は MAP2K 阻害剤に酸化によりシグナル伝達し，増殖，分化，アポトーシス，

より著明に抑制されたことから，IGF1は M APK3/1

ストレス応答などの細胞応答を引き起こす。その中で，経路を介しサイクリン発現を制御していることが明ら

古典的 M APK 経路と呼ばれる RAS/RAF/MAP2K/

かとなった。さらに E2刺激24時間後の細胞増殖は，MAPK3/1経路は，特に細胞の増殖に関わる重要なシER アンタゴニスト，M AP2K 阻害剤および抗 IGF1

グナル伝達経路と考えられている。MAPK3/1経路

受容体中和抗体により有意に抑制されたこと，またの活性化は，細胞外刺激を受けた細胞膜上の受容体か

IGF1刺激による細胞増殖は MAP2K 阻害剤により有らのシグナルが RAS から下 流 の RAF，MAP2K，

意に抑制され，E2刺激による細胞増殖には IGF1の

MAPK3/1を連続的にリン酸化することで引き起こさオートクリン機構を介した MAPK3/1経路の活性化れる。活性化されたリン酸化 M APK3/1は核内へ移が関与することが確認された。

行し転写因子によりサイクリンなどの細胞周期調節因子を発現させることで細胞周期を進行させる。

次に免疫染色によって子宮内膜組織（正常内膜30例，
内膜癌組織48例）における MAPK3/1発現と活性化

本研究ではエストロゲン刺激による子宮内膜癌細胞について検討した。正常内膜では MAPK3/1は増殖期，の増殖における M APK3/1経路の関与および細胞周分泌期の両者に発現していたが，リン酸化 M APK3/1

期調節因子の発現について検討した。

は分泌期に比べ増殖期に有意に高頻度に観察された。

【方法と結果】ER 陽性子宮内膜癌 Ishikawa 細胞に

また子宮内膜癌組織でもリン酸化 MAPK3/1を分泌estradiol（E2）を添加し，24時間後の細胞増殖は濃期に比べ有意に高頻度に認め，増殖の活発な子宮内膜

度依存性に促進されること，またＳ期分画の増加を確

組織では MAPK3/1が活性化されており，増殖への認した。さらにサイクリン D1とサイクリンＥの発現関与が示唆された。

を検討したところ，サイクリン D1の蛋白と mRNA

【結論】以上より，子宮内膜癌細胞の E2刺激増殖には，

No. 6, 2010329

審査学位論文要旨

MAPK3/1経路が重要な役割を担っており，その活性

MAP2K 阻害剤，抗 IGF1受容体抗体により抑制さ化には IGF1のオートクリン機構が関与していること

れ，IGF1刺激による細胞増殖は M AP2K インヒビが明らかとなった。このことは子宮体癌治療においてターにより抑制された。

IGF1およびその受容体が新たな分子標的となりうる
ことを示唆している。
（論文審査の結果の要旨）
エストロゲン受容体（ER）を発現する子宮内膜癌

７．免疫染色では正常増殖期内膜は分泌期内膜に比べ
核，細胞質ともにリン酸化 MAPK3/1染色が増強して観察された。また，子宮内膜癌も増殖期内膜と同程度にリン酸化 M APK3/1染色を認めた。

はエストロゲンにより細胞増殖が促進されることが知以上より，子宮内膜癌細胞のエストロゲン刺激増殖られているが，この増殖機序の細胞内分子学的メカニに IGF1のオートクリン機構を介した M APK3/1経路

ズムは未だ十分に解明されていない。一般に細胞増殖の活性化が関与していることを示した。この結果は不は増殖因子やサイトカインなどの細胞外刺激により促明な点の多い子宮内膜癌細胞のエストロゲン刺激増殖

進されることが知られているが，細胞外刺激を核へと伝の細胞内分子学的メカニズムを明らかにしており，子える主要な細胞内シグナル伝達経路に M PAK 経路が

宮内膜癌治療における新たな分子標的として IGF1受あり，特に古典的 MAPK 経路と呼ばれる MAPK3/1

容体が候補となることを示唆している。したがって，

経路は，細胞の増殖に関わる重要なシグナル伝達経路

主査，副査は一致して本論分を学位論文として価値がと考えられている。そこで，鹿島は，子宮内膜癌細胞あるものと認めた。

のエストロゲン刺激増殖におけるMAPK3/1経路の関与を明らかにするために，⑴ estrogen receptor（ER）
陽性子宮内膜癌細胞株 Ishikawaでの estradiol（E2）刺激による細胞増殖，サイクリン発現，MAPK3/1のリン酸化を解析，⑵ 同細胞でE2刺激によるInsulin‑likegrowth factor‑1（IGF1）の発現，培養上清への分泌

IFN‑γ deﬁciency worsen Pneumocystis
pneumonia with Th17 development in nudemice（ヌードマウスにおける IFN‑γ欠損はTh17を誘導しニューモシスチス肺炎を悪化させる）を検討し，⑶ 同細胞で IGF1刺激による細胞増殖，サ胡

イクリン発現，M APK3/1のリン酸化を検討した。さらに⑷ 正常子宮内膜，子宮内膜癌組織での MAPK3/1（論文の内容の要旨）発現，そのリン酸化を免疫染色を用いて検討した。

【目的】ニューモシスチス肺炎は Pneumocystis jir-

その結果，以下の成績を得た。

ovecii により惹起され，臓器移植，AIDS など免疫低１．Ishikawa 細胞は E2刺激により濃度依存的に細胞下をきたした人に発症する重要な日和見感染症の１つ

増殖が促進され，サイクリン D1，サイクリンＥ発である。臨床的知見や動物モデルをもちいた研究結果

現が転写レベルで誘導された。

から，ニューモシスチス肺炎の症状は宿主免疫応答と２．E2刺激により M APK3/1のリン酸化を認め，そ関係していることが示唆されてきた。ところが，ニュー

れは ER アンタゴニスト，M AP2K 阻害剤で抑制さモシスチス感染時において宿主免疫系は抑制されていれた。

るため，ニューモシスチス肺炎発症の詳細な免疫学的３．E2刺激により IGF1 mRNA 発現が増強し，培養上清中にも IGF1蛋白質を認めた。
４．IGF1刺激により早期にM APK3/1のリン酸化を認
め，E2刺激による M APK3/1のリン酸化は抗 IGF1受容体抗体により抑制された。

メカニズムには不明な点が多い。そこで，ニューモシ
スチス肺炎発症における IFN‑γの役割について明らかにするため IFN‑γノックアウト（GKO）ヌードマ
ウスを作成し野生型（WT）ヌードマウスと比

検討

を行った。

５．IGF1刺激により濃度依存的に細胞増殖を促進さ【方法】GKO ヌードおよび WT ヌードマウスにマウれ，サイクリン D1，サイクリン E mRNA 発現を認ス Pneumocystis を感染させ，体重変化，肺の病理組めた。また，IGF1刺激によるサイクリン D1，サイ織を比 検討した。また，肺の洗浄液（BALF）中のクリン E の発現は M AP2K 阻害剤により抑制されIFN‑γ，IL‑17，IL‑10，TNF‑α，IL‑12，IL‑4など

た。

のサイトカインの測定を行い，両マウス間で比 した。

６．E2刺激による細胞増殖は ER アンタゴニスト，
330

さらに，IL‑17に注目し，産生細胞の検討を行った。
信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨【結果】感染後の体重減少は WT ヌードマウスにおい

CD4 T 細胞中の IL‑17産生細胞の割合が高かった。

て著明であったが，感染９週後の肺におけるシスト数

以上より，ヌードマウスにおいては IFN ‑γ欠損

は WT ヌードより GKO ヌードマウスの方が多かっにより重いニューモシスチス肺炎を発症した。これた。肺の病理組織の比により，GKO ヌードマウス

は IFN‑γ欠損により Th17細胞の増殖が誘導され，では肺の炎症が強く肉芽腫様病変が多く見られた。肺

Th17により産生される IL‑17により重篤なニューモ

胞洗浄液（BALF）中の IL‑17産生量は GKO ヌード

シスチス肺炎が引き起こされたためであると考えられマウスの方が高く，感染マウス肺より得られた細胞のた。また，Th17応答は Pneumocystis の排除に関与しIL‑17産生量も WT ヌードより GKO ヌードマウスのていないことが示唆された。したがって主査，副査は方が多かった。肺細胞内染色の結果では，主に CD4

一致して本論文を学位論文として価値があるものと認T 細胞が IL‑17の産生に関与していることが判明した。

めた。

WT ヌードマウスと比べ，GKO ヌードマウスのほうが CD4 T 細胞中の IL‑17産生細胞の割合が高かった。
【結論】ヌードマウスにおいては IFN ‑γ欠損により重いニューモシスチス肺炎を発症した。これは IFN‑

Increased isoprostane levels in oleic acid‑induced lung injury（オレイン酸肺障害モデルにおけるイソプロスタン値の増加）

γ欠損により Th17細胞の増殖が誘導され，Th17によ小り産生される IL‑17により重篤なニューモシスチス肺

野

晃

市

炎が引き起こされたためであると考えられた。また，（論文の内容の要旨）

Th17応答は Pneumocystis の排除に関与していないこ【背景】酸化ストレスは，脂質およびリン脂質の過酸とが示唆された。

化の一因であり，種々の疾患や病態との因果関係が注（論文審査の結果の要旨）目されている。8‑epi‑prostaglandin F2αは，アラキ

ニューモシスチス肺炎に対する研究は臨床的知見やドン酸の過酸化反応産物であるイソプロスタン類の一動物モデルをもちいた研究結果から，ニューモシスチ

種で，酸化ストレスによる脂質過酸化の特異的かつ高ス肺炎の症状は宿主免疫応答と関係していることが示

感度のマーカーの１つであることが明らかになってい唆されてきた。ところが，ニューモシスチス感染時にる。呼吸器疾患では，慢性閉塞性肺疾患の発症，病因

おいて宿主免疫系は抑制されているため，ニューモシに酸化ストレスは重要な役割を果たし，急性疾患では

スチス肺炎発症の詳細な免疫学的メカニズムには不明

Acute respiratory distress syndrome（ARDS）患者な点が多い。そこで，ニューモシスチス肺炎発症におの尿中イソプロスタン値が著明に上昇していることがける IFN‑γの役割について明らかにするため IFN‑

報告されている。さらに，その中でも8‑epi‑prostag-γノックアウト（GKO）ヌードマウスを作成し野生

landin F2α には生物活性が認められ，肺や腎にお型（WT）ヌードマウスと比 検討を行った。

いて血管収縮因子として働く可能性が示唆される。

その結果以下の成績を得た。
１）感染後の体重減少は WT ヌードマウスにおいて著明であった。

イン酸誘発肺障害の病態メカニズムに活性酸素の関与が示唆されているが，8‑epi‑prostaglandin F2α値を２）感染９週後の肺におけるシスト数は WT ヌード
より GKO ヌードマウスの方が多かった。
３）肺の病理組織の比ARDS/ALI の代表的な動物病態モデルである，オレ検証した報告はない。今回我々は麻酔下緬羊を用い，
急性肺塞栓症およびその後に誘発される急性肺障害のにより，GKO ヌードマウス

実験的モデルとされるオレイン酸により惹起される急では肺の炎症が強く肉芽腫様病変が多く見られた。

性肺障害における8‑epi‑prostaglandin F2α濃度に注

４）肺胞洗浄液（BALF）中の IL‑17は GKO ヌード

目し，本病態における酸化ストレスの関与について検マウスの方が高かった。
５）肺より得られた細胞の IL‑17産生量も WT ヌード
より GKO ヌードマウスの方が多かった。

討した。
【方法および実験】本実験はすでに共同研究者により報告された研究結果（Nakagawa R et al，Lung 186

６）肺細胞内染色の結果では，主に CD4 Ｔ細胞が；225‑232，2008）に追加・補充して行われた。緬羊

IL‑17の産生に関与していることが判明した。WT（体重35‑44kg）15匹を用いた。ハローセン麻酔下でヌードマウスと比べ，GKO ヌードマウスのほうが70％酸素吸入下に人工呼吸器管理し，右開胸下に慢No. 6, 2010331

審査学位論文要旨

性肺リンパ瘻を作成した。右内頸動・静脈にそれぞ度の有意な差に，この8‑epi‑prostaglandin F2α濃度

れカテーテルと Swan‑Ganz カテーテルを挿入した。

が関与する可能性がある。そこで小野は，オレイン酸

さらに気管切開を施行し，conventional mechanical

誘発肺障害モデルにおける8‑epi‑prostaglandin F2α（一 回 換 気 量10ml/kg，呼ventilation（以 下 CM V）の意義を，麻酔下緬羊を用い，急性肺塞栓症およびそ

吸回数20/min，呼気終末陽圧換気圧５cmH O）維持の後に誘発される急性肺障害の実験的モデルとされる下にて，安定した baseline を１時間以上観察した後，オレイン酸誘発肺障害モデルで，高頻度換気またはオレイン酸0.08ml/kg を内頸静脈より投与した。実CMV で人工呼吸管理し，体血圧，肺動脈圧，肺動脈

験は，以下の２群を行い比した。CM V 群（n＝８）

閉塞圧，動脈血酸素分圧，血漿中および肺リンパ中のではオレイン酸投与後同じ呼吸条件のまま４時間観察

8‑epi‑prostaglandin F2α濃度をガスクロマトグラフィ

した。また High‑frequency oscillation ventilation

にて測定し，検討した。

（HFOV 群，n＝７）ではオレイン酸投与後 HFOV（平その結果以下の成績を得た。

均気道内圧15cmH O，一回駆出量150ml，frequency

１）動脈血酸素分圧値は，オレイン酸投与後２時間で15Hz）に切り替え４時間観察した。測定項目は，２有意に低下し，４時間まで低値を持続していた。両

時間ごとに体血圧，肺動脈圧，肺動脈閉塞圧，動脈血群間で有意差は認められなかったが，高頻度換気群

酸素分圧，血漿中および肺リンパ中の8‑epi‑prosta-

で動脈血酸素分圧値は４時間目に上昇し，CM V 群

glandin F2α濃度を測定た。8‑epi‑prostaglandin F2αより高い傾向にあった。

濃度は，ガスクロマトグラフィにて測定した。

２）8‑epi‑prostaglandin F2α濃度は，オレイン酸投【結果】Baseline に比し，オレイン酸投与後，動脈血

与後２時間で有意に上昇し，４時間目では低下した。

酸素分圧の有意な減少が認められたが，両実験群間

HFO 群では，血漿および肺リンパ液ともに基準値に有意差は認められなかった。血漿中および肺リンパまで低下したが，CM V 群の肺リンパ液中の8‑epi‑

液中の8‑epi‑prostaglandin F2α 濃度 は，オ レ イ ン

prostaglandin F2α濃度は有意に基準値より高値を酸投与後，２時間で有意に上昇し，４時間で減少した

維持していた。

が，両実験群間に有意差を認められなかった。8‑epi‑

３）血漿中の8‑epi‑prostaglandin F2α濃度の上昇率

prostaglandin F2α濃度と各種のパラメータとの相関と，動脈血酸素分圧の低下率に正の相関を示しそのを検討した。肺リンパ流量などの肺水腫の重症度や肺相関係数は0.54であった。

動脈圧上昇とは相関を示さなかったが，オレイン酸投

４）肺リンパ液中の8‑epi‑prostaglandin F2α濃度の与後２時間の，血漿中および肺リンパ液中の8‑epi‑

上昇率と，動脈血酸素分圧の低下率に正の相関を示

prostaglandin F2α濃度の上昇率と，動脈血酸素分圧しその相関係数は0.71であった。

の減少率に相関を認めた。

以上より，8‑epi‑prostaglandin F2αは，オレイン【結語】緬羊のオレイン酸による肺障害において，8‑酸投与後，血漿および肺リンパ液中で有意に上昇し，

epi‑prostaglandin F2α値は血漿中および肺リンパ液

オレイン酸誘発肺障害モデルにおける低酸素血症の程中で上昇し，低酸素血症の重症度と相関した。以上よ度と相関を示した。特に肺リンパ液中で低酸素血症とり，8‑epi‑prostaglandin F2αは急性肺塞栓症の実験より強い相関を示したことから，肺組織から産生分泌モデルにおいて，特にその低酸素血症の病態に関与しされた8‑epi‑prostaglandin F2αが，低酸素血症の機ている可能性が示唆された。

序に関与していると考えられた。したがって主査，副（論文審査の結果の要旨）
8‑epi‑prostaglandin F2αは，アラキドン酸の過酸査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

化反応産物であるイソプロスタン類の一種で，酸化ス
トレスによる脂質過酸化の特異的かつ高感度のマーカーの１つとして注目されている。オレイン酸誘発肺障害モデルでは過酸化ストレスの関与を指摘する報告があるが，8‑epi‑prostaglandin F2α濃度を実測した報告はない。また，高頻度換気および Conventional
Mechanical Ventilation（以下 CM V）の肺損傷の程332

信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨の範囲においてのみ増殖を促進すると考えられた。以Simultaneous Suppression of MITF and
BRAF
Enhanced Inhibition of M elanoma Cell Proliferation（MITFとBRAFの同時抑制は悪性黒色腫細胞の増殖抑制を強
化する）
木

藤

健

上より，MITF は悪性黒色腫の治療において分子標的となりうると考えられた。MITF の発現抑制による増殖抑制制御機構に関しては，現在までに p16
p21

，p27

や

といった CDK インヒビターの発現により引き起こされるとの報告がある。しかしながら今回の結果では細胞株ごとに MITF の発現抑制による治

これらの分子の挙動は異なり，必ずしも特定の CDK（論文の内容の要旨）

インヒビターが MITF の発現抑制による増殖抑制を【背景と目的】MITF は色素細胞の分化，増殖，生存引き起こしているわけではないと考えられた。また，を制御する最も重要な遺伝子として知られ，最近では

M ITF の発現抑制により CDK2の発現も抑制される

悪性黒色腫における癌遺伝子とも考えられている。し傾向が強い株が存在し，これらの株は MITF の発現

かしながら一方で，MITF を高発現させることでも抑制による増殖抑制効果も強い株であることがわかっ

増殖抑制が引き起こされることが知られており，増殖た。これらの結果から，MITF の発現抑制による増における MITF の正確な機能に関しては明らかに殖抑制の制御機構は細胞株により異なっていると考えなっていない部分も多い。少なくとも内因性のM ITF

られ，また MITF の発現抑制による増殖抑制効果がの機能に関して多種類の黒色腫細胞で検討した報告は強い株では，MITF‑CDK2の経路が細胞増殖に重要存在しない。そこで本研究では，MITF の発現量の異である可能性が示唆された。今回の検討より M ITF

なる悪性黒色腫細胞株８株において内因性の M ITFの発現抑制による増殖抑制効果が弱い細胞も存在すの発現を RNA 干渉により抑制し，黒色腫細胞に対することがわかり，こういった細胞に対しては，他の戦る増殖抑制効果とその制御機構を検討した。また，３略が必要であると考えられた。そこでまず，以前から

株の黒色腫細胞では M ITF の強制発現による効果もの我々の研究で，すでに発現抑制により増殖抑制を引同時に観察し，これらの結果より MITF の分子標的

き起こすことを確認している変異癌遺伝子の BRAFとしての意義を検討した。更により強力な黒色腫細胞（BRAFの 増 殖 抑 制 を 得 る た め に，MITF と 変 異 癌 遺 伝 子制による遺伝子発現の変化を，マイクロアレイを用いの同時発現抑制効果も検討した。

て検討した。そのクラスター解析の結果，あるクラス

BRAF）と，今回の MITF のそれぞれの発現抑【方法】M ITF の発現量の異なる８種類の悪性黒色腫

ターを構成する細胞株では MITF と BRAF

細胞株で，内因性の M ITF を RNA 干渉により抑制

現抑制により，それぞれ異なった増殖に関する分子のし，増殖抑制効果を観察，その効果の制御機構検討の発現変化が共通であることがわかった。つまり M ITF

ため各種の細胞周期調節分子の発現変化を Westernと BRAFblot 解析で検討した。また，M ITF を強制発現させ，していると考えられ，これら２分子を同時に発現抑制

その効果も同様に検討した。さらに増殖抑制効果の増することで，どちらかのみの抑制では耐性を示す細強を得るために M ITF と BRAF胞にも効果を引き出すことが可能であると思われた。

の同時発現抑制の発では，異なった経路により増殖を制御の効果も検討した。

実際，M ITF と BRAF

【結果と考察】MITF の発現抑制により，今回検討し

M ITF と BRAF

た全ての細胞株で増殖抑制を認めた。M ITF の発現

殖抑制を認めた。これらの結果をまとめると，内因性量の低い細胞株においても増殖抑制が引き起こされるの MITF は，その適切な発現量が細胞ごとに異なっことから，内因性の M ITF は悪性黒色腫細胞株におており，その範囲においては常に増殖を促進すると考いて常に増殖を促進させていると考えられた。また，えられる。よってMITFは，悪性黒色腫治療におけるMITF の強制発現によっても同様に強い増殖抑制を分子標的としての意義を十分に持っていると考えられ認めた。これは内因性の MITF の発現量が非常に少るが，その発現抑制による効果や，増殖抑制の制御機ない株でも，大量に発現している株でも同様の結果で構に関しては細胞ごとに異なっていると思われる。こあった。これら２つの結果より，M ITF は細胞株ご

ういった様々な点で異なる細胞群に対しては，M ITFとに増殖において適切な発現量があり，その適切な量とBRAF

No. 6, 2010の発現同時抑制により，の単独抑制よりも有意に強い増という２つの分子を同時に抑制すること333審査学位論文要旨

で，異なるバックグラウンドを持つ細胞にも対応でき明らかにし，将来的に悪性黒色腫に対する極めて有用

ると考えられ，悪性黒色腫の治療において非常に有効な治療戦略を提示した。よって，主査，副査は一致しな治療戦略となると思われる。

て本論文を学位論文として価値があるものとして認め（論文審査の結果の要旨）た。

M ITF は色素細胞の分化や増殖，生存を制御する
必要不可欠な遺伝子とされているが，悪性黒色腫においては lineage survival oncogene とも考えられている。そこで木藤らは，MITF 発現量の異なる黒色腫細胞株８株を用いて内因性 MITF の発現を RNA 干

Elevation of Plasma Eotaxin Levels inChildren with Food Allergy（食 物 ア レ ル
ギーを持つ小児では血中のエオタキシン値は上昇する）

渉により抑制し，黒色腫細胞の増殖抑制効果とその制

松

御機構を検討した。また，M ITF の強制発現による影響も同時に観察した。さらに，M ITF の発現抑制

浦

宏

樹

（論文の内容の要旨）と，黒色腫の最も重要な癌遺伝子である BRAF

【背景】食物アレルギーは小児に多くみられるアレルの発現抑制の併用効果も検討した。

ギー性疾患で，発症には好酸球，CD4陽性Ｔ細胞，肥その結果，木藤らは以下の結果を得た。

満細胞等が関与する。血中好酸球数は，脂質メディエー

１）M ITF の発現抑制により，検討した細胞株８株

ター，細菌産生物やケモカイン等によっても増加する

全てにおいて有意な増殖抑制を認めた。ただし，増ため，食物アレルギーの重症度の指標としては用いに

殖抑制の程度には細胞株の間で差異があり，４株でくい。エオタキシンは好酸球の移動を促す CC ケモカ

は強い抑制が見られたが，他の４株ではその効果はインの１つで，CCR3レセプターを介して作用する。

比本研究では，小児の食物アレルギー患者における血中的弱かった。

２）増殖抑制効果は G1期停止によるものであった。

エオタキシン値を測定し，好酸球数や IgE 値との関

３）M ITFのRNA干渉による各種CDKインヒビター

連を検討した。

の発現の変化は細胞株ごとに異なっていた。

【対象および方法】グレード２以上の症状を示した35

４）M ITF の発現抑制により，CDK2の発現も抑制さ

名の食物アレルギー患者（18名はアトピー性皮膚炎あれる傾向が強い株が存在し，これらの株で増殖抑制り）と，36名のアトピー性皮膚炎患者（18名は食物ア

効果も顕著であった。

レルギーあり），および19名の健常児の血中エオタキ

５）M ITF の強制発現によっても黒色腫細胞の増殖

シン‑１，‑３値，末梢血好酸球数と血清 IgE 値を測抑制が認められた。その際の各種CDKインヒビター

定した。

の発現の変化は細胞株ごとに異なっていた。

【結果】食物アレルギー患者の血中エオタキシン‑１６）M ITF と BRAFのそれぞれの発現抑制に値は93.6±33.4pg/ml で，アトピー性皮膚炎患者群

よる遺伝子発現変化のマイクロアレイ検討により，（78.0±31.8pg/ml）とは差異を認めなかったが，健あるクラスターを構成する細 胞 株 で は MITF と常群（60.4±15.7pg/ml）よりも有意に高値であった。

の発現抑制により，それぞれ異なった増血中エオタキシン‑３は食物アレルギー群，アトピー

BRAF

殖に関する分子の発現が変化していた。
７）RNA 干渉によ る MITF と BRAF性皮膚炎群，健常群との間に有意差は認めなかった。
の同時発

食物アレルギー群をアトピー性皮膚炎の有無により評

現抑制により，それぞれの単独抑制よりも有意に強価した。エオタキシン‑１は，食物アレルギーにアトい G1期停止と増殖抑制を認めた。

ピー性皮膚炎を合併した群では90.7±29.8pg/ml，

これらの結果より M ITF は悪性黒色腫治療におけ非合併群では96.6±37.5pg/ml で，ともに健常群よる分子標的となりうると考えられた。ただし，その発りも有意に上昇していた。エオタキシン‑３はアトピー現抑制による効果や，増殖抑制の制御機構は細胞ごと性皮膚炎合併群，非合併群，健常群との間に差異を認に異なっており，黒色腫細胞の多様性が示唆された。

めなかった。アトピー性皮膚炎群を食物アレルギーのしかし，本研究の成績はこのような多様性を有する黒有無で分け，エオタキシン‑１，‑３値を比 したが，色腫細胞に対して，MITF と BRAFという２つ有意差は認めなかった。血中エオタキシン値と，好酸の分子の同時抑制がその増殖を顕著に抑制することを

球数，血清 IgE 値の間に相関があるか否か検討した。

334

信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨

食物アレルギー群，健常群ともに，エオタキシン‑１93.6±33.4pg/mlで，アトピー性皮膚炎患者群（78.0と‑３の間には相関は認めなかった。また，各エオタ±31.8pg/ml）とは差異を認めなかったが，健常

キシンと好酸球数，IgE 値にも相関は認められなかっ群（60.4±15.7pg/ml）よりも有意に高値であった。

た。

２．血中エオタキシン‑３は食物アレルギー群，アト【考察】食物アレルギー患者，気管支喘息患者の気管

ピー性皮膚炎群，健常群との間に有意差は認めな

支洗浄液や喀痰，アトピー性皮膚炎患者では，エオタ

かった。

キシン‑１は健常群よりも高値であることが報告され３．エオタキシン‑１は，食物アレルギーにアトピーている。われわれの検討では，食物アレルギー群の血性皮膚炎を合併した群では90.7±29.8pg/ml，非

中エオタキシン‑１値は健常群よりも明らかに上昇し合併群では96.6±37.5pg/ml で，ともに健常群よていた。食物アレルギー群のエオタキシン‑１値は，りも有意に上昇していた。エオタキシン‑３はアトアトピー性皮膚炎の合併例と非合併例の間で差異を認

ピー性皮膚炎合併群，非合併群，健常群との間に差めなかった。一方，アトピー性皮膚炎群のエオタキシ

異を認めなかった。

ン‑１値は，食物アレルギーの有無で差異を認めな

４．アトピー性皮膚炎群を食物アレルギーの有無で分かった。このため，血中エオタキシン‑１値はアトピー

け，エオタキシン‑１，‑３値を比 したが，有意差性皮膚炎に関係なく，食物アレルギー患者で上昇するは認めなかった。

ことが明らかとなった。血中エオタキシン値と好酸球

５．血中エオタキシン値と，好酸球数，血清 IgE 値

数の相関は認めなかった。これは，Rothenberg らのの間に相関があるか否か検討した。食物アレルギー

提唱するエオタキシンは血中好酸球数維持が主な役割

群，健常群ともに，エオタキシン‑１と‑３の間にはであるという仮説と関連しているのかもしれない。食相関は認めなかった。また，各エオタキシンと好酸物アレルギー患者に対する食物除去治療は，エオタキ

球数，IgE 値にも相関は認められなかった。

シン‑１，‑３値に影響を及ぼさなかった。これは，ア

これらにより血清エオタキシン‑１はアトピー性皮レルゲンを完全に除去することは困難なためかもしれ

膚炎の有無に関係なく食物アレルギー患者において有ない。上記の結果から，食物アレルギー群では血中エ意に上昇していることが明らかとなり，食物アレル

オタキシン‑１値は有意に上昇しており，食物アレル

ギーの診断に有用であることが示唆された。よって，ギーを評価するのに有用なパラメーターになりうると

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が思われた。

あるものと認めた。
（論文審査の結果の要旨）【背景】食物アレルギーは小児に多くみられるアレル
ギー性疾患で，発症には好酸球，CD4陽性Ｔ細胞，肥満細胞等が関与する。血中好酸球数は様々なメディエー
ターによって増加するため，食物アレルギーの重症度の指標としては用いにくい。エオタキシンは CCR3レ
セプターを介して作用する好酸球の移動を促す CC ケ
モカインの１つである。本研究では，小児の食物アレ
ルギー患者における血中エオタキシン値を測定し，好酸球数や IgE 値との関連を検討した。

Cisplatin and weekly docetaxel with concurrent thoracic radiotherapy for locallyadvanced stage Ⅲ non‑small‑cell lungcancer（局所進行第Ⅲ期非小細胞肺癌に対するシスプラチン併用ドセタキセル週分割投与化学療法と同時胸部放射線療法の併用療
法）
中

村

勝

【対象および方法】グレード２以上の症状を示した35（論文の内容の要旨）

名の食物アレルギー患者（18名はアトピー性皮膚炎あ【目的】我々は以前，シスプラチン（CDDP）とドセ

り）と，36名のアトピー性皮膚炎患者（18名は食物アタキセル（DOC）週分割投与の化学療法の第１相，レルギーあり），および19名の健常児の血中エオタキ

第２相臨床試験を行い，CDDP80mg/m と DOC25

シン‑１，‑３値，末梢血好酸球数と血清 IgE 値を測

mg/m （day１，８，15）は，血液毒性の軽減が可能

定した。

で，CDDP80mg/m とDOC60mg/m の一括投与と同その結果，松浦は次の結論を得た。
１．食物アレルギー患者の血中エオタキシン‑１値はNo. 6, 2010

等の奏効率と生存期間が得られることを報告してきた。
今回我々は局所進行性非小細胞肺癌の患者を対象
335

審査学位論文要旨に，この CDDP と DOC の週分割投与法に胸部放射

胸部放射線化学療法は抗腫瘍効果が高く長期生存に寄線同時照射法を併用した治療法の安全性とその有用性

与すると報告されているが，血液および非血液毒性，を検討した。

特に放射線肺臓炎，食道炎が増強することが知られて【対象と方法】細胞診および組織学的に診断確定されいる。今回中村らはシスプラチンとドセタキセルの週た75歳以下の臨床病期 stage Ⅲの未治療の非小細胞分割投与法に胸部放射線同時照射を加えた治療法の安肺癌患者を対象とした。全身状態は Eastern Clinical

全性とその有用性を検討した。

Oncology Group（ ECOG） performance status

細胞診および組織学的に診断確定された75歳以下の（PS）で０‑１，測定可能な病変部位のあること，予臨床病期 stage Ⅲの，未治療の非小細胞肺癌患者を対測余命が３カ月以上，充分な骨髄機能を有し，呼吸・象とした。ドセタキセル20mg/m を day１，８，15

肝・腎機能障害を認めない患者とした。対象患者にはに，シスプラチン80mg/m を day1に点滴静注した。

インフォームド・コンセントを文書で確認した。薬剤の４週を１コースとし，治療継続困難な有害事象の出現

投 与 は ，DOC20mg /m をday１ ，８ ，15に ，CDDP

もしくは腫瘍の明らかな増大を認めない限り最低２80mg/m をday1に点滴静注した。４週を１コースとし，コース行った。胸部放射線照射療法は，化学療法開始

治療継続困難な有害事象の出現もしくは腫瘍の明ら２日目から併用し，１回 2Gyを30回，計60Gyで６週かな増大を認めない限り最低２コース行った。胸部放間に分けて照射を行った。毒性については National

射線照射療法は，化学療法開始２日目から併用し，Cancer Institute Common Toxicity Criteria Ver 2.0

１回 2Gy を30回，計60Gy で６週間に分けて照射をに従い評価した。治療後90日を越える遅発性放射線毒行った。毒性については National Cancer Institute

性については Late Radiation Morbidity Scoring

Common Toxicity Criteria Ver 2.0に 従 い 評 価 しScheme に従い評価した。抗腫瘍効果は，２コースのた。治療後90日を越える遅発性放射線毒性については

化学療法終了後に WHO 基準に従い評価した。生存

Late Radiation Morbidity Scoring Scheme に従い評期間は治療開始日から死亡日までとし，生存曲線は価した。抗腫瘍効果は，２コースの化学療法終了後

Kaplan‑Meier 法で作成した。

に WHO 基準に従い評価した。生存期間は治療開始

1998年４月から2004年３月までの期間で34名の患者日から死亡日までとし，生存曲線はKaplan‑Meier法（男性32名，女性２名）が登録された。年齢は45歳かで作成した。

ら75歳で平均年齢は61.4歳であった。組織型は腺癌19【結果】1998年４月から2004年３月までの期間で34名

名，扁平上皮癌14名，大細胞癌１名であった。臨床病の患者（男性32名，女性２名）が登録された。年齢は期では，stage ⅢＡが３名，ⅢＢが31名であった。抗

45歳から75歳で平均年齢は61.4歳であった。組織型は腫瘍効果は，21名の患者で有効と判断され，奏効率

腺癌19名，扁平上皮癌14名，大細胞癌１名であった。

61.8％であった。生存期間中央値は26.4カ月，１年

臨床病期では，stage ⅢＡが３名，ⅢＢが31名であっ生存率は76.5％，２年生存率は52.9％であった。血た。血 液 毒 性 は，grade3以 上 の 好 中 球 減 少 は ８ 例

液毒性は，grade3以上の好中球減少は８例（23.5％）（23.5％）に認められたが，発熱性好中球減少症の合に認められたが，発熱性好中球減少症の合併は認めな

併は認めなかった。Grade3以上の血小板減少は，３かった。Grade3以上の血小板減少は，３例（8.8％）

例（8.8％）に認められた。非血液毒性では，１例でに認められた。非血液毒性では，１例で虚血性腸炎の

虚血性腸炎のため化学療法を中止した。Grade3以上

ため化学療法を中止した。Grade3以上の食道炎が６名の食道炎が６名（17.7％）に，うち１名が治療終了（17.7％）に，うち１名が治療終了後に食道気管支瘻

後に食道気管支瘻を生じた。Grade3以上の放射線肺を生じた。Grade3以上の放射線肺臓炎を４名（11.8％）

臓炎を４名（11.8％）に生じた。治療完遂率も85.3％に生じた。

であった。抗腫瘍効果は，21名の患者で有効と判断さこれらの結果より，シスプラチン併用ドセタキセル

れ，奏効率61.8％であった。生存期間中央値は26.4

週分割投与に同時胸部放射線照射法を併用した化学療

カ月，１年生存率は76.5％，２年生存率は52.9％で法は，他の報告に比し毒性が少なく認容性に優れた治あった。

療法であり，また抗腫瘍効果においても他の報告と遜（論文審査の結果の要旨）

局所進行性非小細胞肺癌に対する治療として，同時
336

色なく優れた治療法のひとつとして有用であるとの結論を得た。
信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨

中村勝は，本研究において，実際の患者の治療を担

平均年齢は52.8歳であった。Grade4は平均52.8歳，当し，登録症例のデータ収集解析を中心的に行い，本

11例全例膠芽腫であった。p57，p53，p16は悪性度が論文の作成を行った。よって主査，副査は一致して本高まるほど陽性率が高まる傾向があったが，統計学論文を学位論文として価値があるものと認めた。

的には有意差は認められなかった。良性星状細胞腫（grade1，2）と悪性星状細胞腫（grade3，4）の Ki‑67

Antigen p57/Kip2 as a potential negative
regulator of human astrocytoma growth（p57/Kip2が持つヒト星状細胞腫に対する腫瘍増殖抑制効果の可能性）
赤

石

江太郎

（論文の内容の要旨）

陽性率については有意に悪性群で高かった（p＜0.05）。
p57の陽性率が10％を超した群とそれ以下の群を比すると，高い群で p16と p53の陽性率が有意に高かった（p＜0.05）。Ki‑67陽性率も p57陽性率が10％を超す群で高い傾向があったが，有意差は認められなかった。p57陽性率と，年齢，性別，生存期間については有意な関連は見られなかった。

【背景】頭蓋内原発脳腫瘍のうち，神経膠腫は約26％【考察】pRB 遺伝子の欠落や p53遺伝子の欠失もしくを占める。手術療法，化学療法，放射線療法の単独もは p53の変異が種々の悪性腫瘍で見つかったことを皮しくはその組み合わせが長い間工夫されてきたが，特切りに，悪性神経膠腫における遺伝子異常が解明されに悪性度の高いものについては未だに腫瘍死は免れなつつある。cell cycle に関連する Cyclin‑Dependent

い。他方，様々な遺伝子が，星状細胞腫の診断治療の，pRB の発現抑制もしくは，そ れ
Kinases（CDKs）

ために研究が進められてきた。この中で，悪性神経膠腫

ら蛋白の変異，あるいは Cyclin‑Dependent Kinase

cell line に対して p57/Kip2（p57）がその発育や悪Inhibitors（CKIs）の発現に関しては，CKIs family

性度に対して抑制的に働きうることが実験的に示されの CIP/KIP familyに属する p57が他の腫瘍でも臨床た。そこで実際の臨床におけるヒト星状細胞腫におい的に細胞周期に対して抑制的に働きうることが報告さて，p57が悪性度や他の因子とどのような関連がある

れているが，星状細胞腫でも増殖を抑制し，腫瘍の悪かを検証した。

性度を減ずることが報告されている。我々の研究でも【実験の方法】1997年から2000年まで信州大学医学部

Ki‑67抗体と，p57の発現には逆相関があるらしいこ

附属病院にて手術的に摘出された 神経膠腫 50症例とが示唆されている。最近 p57の発現消失には p53抑について検討を行った。８例の神経上衣腫，１例の上制因子の発現に関連することが報告されている。しか衣下細胞腫，２例の希突起神経膠腫例は腫瘍の持つ特し我々のシリーズでは p57と p16の発現には正の相関

殊性より，今回の分析からは除外した。その他摘出時が示唆されたが，p57と p53の発現には特にはっきりの操作により挫滅損壊が著しい標本は対象から除外しとした相関は認められなかった。以前 p57が in vitro

た。最終的に36例の星状細胞腫の病理検体について検で星状細胞腫の増殖を抑制することが示されたが，星討を実施した。切片は全例パラフィン包埋切片より新状細胞腫の増殖抑制は他の因子も関与していることもたに切り出し，同条件にて p57，p53，p16，Ki‑67に事実である。例えば，精巣 B‑cell lymphoma では正よる免疫染色を実施した。光学顕微鏡強拡大にて視野

常組織に比べて p57の発現が，強く抑制されているが，中の全細胞数と免疫染色陽性細胞数をそれぞれカウン

我々のシリーズの星状細胞腫では良性で弱い発現が見トし，陽性率＝陽性細胞数/全細胞数とし，５視野のられていたのに対して，神経膠芽腫では核内・細胞質

平均値をその検体の陽性率と定義した。

双方に発現を見ている例も散見された。これらは星状【結果】性別については男性23例，女性13例で有意差は細胞腫の細胞周期が非常に多くの因子が複雑に絡みつ認められなかった。手術時の年齢は平均43.7歳（１〜つコントロールされていることを示しており，それが72歳）であった。Grade別では，２例の症例はgrade1

とりもなおさず，単一の細胞周期抑制因子のみでは星であり，いずれも毛様性星状細胞腫であった。６例の状細胞腫の増殖を抑制することが難しいことの理由のgrade2は平均年齢が39.8歳で，２例は原線維性星状１つであろうと考えられる。

細胞腫であり，４例は肥胖性星状細胞腫であった。17【結論】p57は p16と共に協同的にヒト星状細胞腫増殖

例の grade3のうち，２例は PNET（未分化神経外胚の抑制をすることが示された。今後は，単一ではなく，

葉性腫瘍）であり，15例は退形成星状細胞腫であった。

複数の抑制因子を使ったより強力な増殖抑制系が試さ

No. 6, 2010337

審査学位論文要旨れるべきであろう。
（論文審査の結果の要旨）
CDK inhibitor の CIP/KIP familyの一員である
p57/Kip2は glioblastoma の cell line における実験において，その悪性度や成長を抑制する働きが示された。
一方，p57は他の癌において，発現が抑制されていることが知られている。そこで赤石は未だに治療法が確立されない非常に予後不良な脳腫瘍 glioblastoma にMultiple roles of PPARαin brown adipose
tissue under constitutive and cold conditions（褐色脂肪組織における α型ペルオキ
シソ−ム増殖剤活性化受容体の新機能の解
明）
小

松

万喜子

おいて，実際の手術症例標本を用いて p57が臨床診断（論文の内容の要旨）や予後判定に有用であるか，またどんな関連があるか【背景と目的】褐色脂肪組織（BAT）は寒冷条件下でを他の p16，p53，Ki67などと比 検討した。

熱産生を行い，体温の維持に貢献している。この機能

その結果，以下の成績を得た。
１）p57は核内のみならず，細胞質においても陽性を示す症例が散見された。

を果たすため，BAT はミトコンドリア内で２つの経路から供給されるエネルギー源を使用するとされている。その１つは糖を取り込んで分解する経路，もう１２）検討した36例の内訳は，女性13例，男性23例であつは脂肪酸またはトリグリセリドを分解する経路であり，両群間に p57の発現に有意差を認めなかった。

る。この両者のエネルギー産生系に関与する重要な因

３）年齢層は１歳から72歳までであったが，年齢と子の１つとして α型ペルオキシソーム増殖剤活性化

p57の陽性率には関連がなかった。

受容体（PPARα）がある。本受容体はステロイドホ

４）Grade 別の p57の発現は，悪性度が増すに連れ，

ルモン受容体スーパーファミリーに属する核内受容体

発現が増強される傾向を認めたが，有意差は認めなであり，脂肪の輸送，貯蔵および代謝の制御や，細胞かった。

内における多様な生理機能に関与することが報告され

５）p57の陽性率が高い群で p16と p53の陽性率が高ている。しかし，BAT における PPARαの生理的役くなる傾向が認められた。Ki‑67は逆の関係を示し

割についてはほとんど知られていない。私たちは，た（p16のみ有意差あり p＜0.05）。

PPARαのノックアウトマウスを用いて，BAT の熱６）p53の陽性率が高い群で p57も陽性率が高くなる
傾向が認められたが，有意差は認められなかった。
７）p16の陽性率が高い群で p57の発現が高くなる傾向が認められた（p＜0.05）。
８）Ki‑67の高陽性群で p57の発現が低くなる傾向が認められた。
９）p57の陽性率が高い群で survival が延長される傾産生系に関与する PPARαの生理機能調節機構の多様性を解析した。
【方法】ノックアウ ト マ ウ ス の BAT に お け る タ ン
パク質の発現を２次元電気泳動法（SDS‑PAGE）
で解析し，異常に強く発現しているタンパク質をマ
トリックス支援飛行時間型マススペクトロメトリー（M ALDI‑TOF‑M S）を用いたプロテオーム解析に向を認めたが，有意差は認められなかった。

より同定した。BAT は寒冷暴露下で強力に活性化さ以上より，p57は他の抑制系因子と関連性を持ちなれる組織であることを利用して，BAT 内で熱産生にがら，glioma の成長を抑制している可能性が示唆さ使用される２種類のエネルギー源（糖及び脂肪）の分れた。また，将来 p57自身のリン酸化と非リン酸化を解に関与する諸タンパク質や諸酵素の発現を解析した。

区別して染色することにより，p57に対する抑制系もこれらの酵素またはタンパク質の発現量は定量 PCR

明らかになる可能性がある。これらの考察は極めて法もしくは酵素活性の測定によった。

難治性で未だに治療法が確立されていない glioblas-【結果】ノックアウトマウスの BAT におけるタンパ

toma の成長が何故抑制されにくいかを解明する一助

ク質の発現を SDS‑PAGE で解析した結果，異常に強になる可能性が示され，将来的には glioblastoma のく発現しているタンパク質が検出された。このタン

予後判定あるいは治療の改善に繫がる可能性が示されパク質は MALDI‑TOF‑M S を用いたプロテオームた。従って，主査，副査は一致して本論文を学位論文

解析によりピルビン酸デヒドロゲナーゼの βサブユ

として価値があるものと認めた。

ニット（PDHβ）と同定された。ピルビン酸デヒドロ
ゲナーゼは解糖系とクエン酸回路の接点にあり，アセ338

信州医誌 Vol. 58

審査学位論文要旨

チル CoA を産生する糖分解系の重要な酵素の１つでクアウトマウスの BAT に差はないが，４℃では野ある。このプロテオーム解析の結果は，PPARαが生型マウスの脂肪滴の減少が顕著であった。トリグ

PDHβの発現調節に直接関与することを示唆した。

リセリド蓄積量の測定結果も同様の結果を示した。

そこで，BAT を寒冷暴露により活性化させ，PDHβ３）PDHβは23℃でも４℃でもノックアウトマウスは野が関与する糖分解系の諸酵素と脂肪分解系に関与する

生型マウスより顕著な発現がみられた。PDK2/4

諸酵素の発現変動を解析した。糖分解系では，既に報の mRNA 発現は，寒冷曝露によって著明に増えて告のあるピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ2/4のいた。糖分解系の PC，M ‑PK，HK‑Ⅱの mRNA増加のほかに，ノックアウトマウスでの PDHβの発発現量は４℃で野生型とノックアウトマウスで差が現増加が顕著であった。また，PDH 活性は寒冷暴露

なく，PPARαが PDHβの発現を特異的に抑制しによってノックアウトマウスでも野生型でも低下してていることが明らかとなった。PDH 酵素活性の測いた。脂肪分解系では，多くの PPARα/γの標的遺定結果も mRNA の発現解析の結果を支持した。

伝子の発現増加が寒冷処理によって引き起こされてお４）β酸化系のタンパク質，すなわち，LACS，CPT1b，り，なかでも野生型での発現増加が特に顕著であった。

MCAD の mRNA 発現量は，寒冷曝露によって野生【結論】BAT 内で熱産生に使われるエネルギー源と型もノックアウトマウスも増加していたが，23℃して糖と脂肪が使われることは知られていたが，それでの野生型マウスで顕著であった。β酸化酵素活性

らの２つのエネルギー供給源の代謝がいかにしてコンも同様の結果を示した。

トロールされるかは十分に解明されていなかった。本５）脂肪酸取り込み系のタンパク質，すなわち，FAT，研究では，PPARαがこの２つのエネルギー供給源のFATP，LPL の mRNA 発現量は，23℃では野 生

代謝を一方は抑制，他方は促進させるという双方向の型とノックアウトマウスで差はなく，４℃では野生制御をすることを初めて明らかにした。すなわち，型マウスで３種すべて，ノックアウトマウスではBAT が活性化された状況下では，PPARαは PDHβFATP と LPL の発現が増加した。

の発現を抑制する方向に働き，一方，脂肪分解に関与

６）脂肪酸合成系のタンパク質，すなわち，ACC‑1，するタンパク質の発現を増加する方向に働くと考えら

FAS の mRNA 発現量は，23℃でも４℃でも野生れた。このことから，PPARαは BAT 内においては型とノックアウトマウスで差がなく，４℃でも増加

脂肪をエネルギー源として優先的に使用し，使用用途はなかった。

が広範なブドウ糖の使用は極力制限して他の生命維持

７）PGC‑1αの mRNA 発現量は４℃で野生型もノッ活動のために温存しておく方向に働くものと推定されクアウトマウスもともに顕著に増加し，寒冷暴露下た。

での PGC‑1αの関与が示唆された。
（論文審査の結果の要旨）

以上の研究結果により小松は次の結論を得た。

本論文において小松は，PPARαノックアウトマウ

BAT 内で熱産生に使われるエネルギー源となる糖スを用いて BAT の熱産生系に関与する PPARαのと脂肪の代謝に関して，BAT が活性化された状況下

生理機能調節機構の多様性を解析し，以下の新知見をでは，PPARαは PDHβの発現自体を特異的に抑制得た。

する方向に働き，一方，脂肪分解に関与するタンパク

１）２次元電気泳動法によりノックアウトマウスで異質の発現を増加する方向に働くと考えられた。このこ

常に強く発現しているタンパク質を見出し，このタとから，PPARαは BAT 内においては脂肪をエネル

ンパク質をプロテオーム解析により PDHβと同定

ギー源として優先的に使用し，ブドウ糖の使用は制限した。

して他の生命維持活動のために温存する方向に働くも

２）BAT を寒冷暴露下で強力に活性化したところ，
その重量は野生型もノックアウトマウスもともに肥大した。組織学的解析では，23℃では野生型とノッ

No. 6, 2010のと推定された。
以上の研究内容に対して，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

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