43●小型グリコヘモグロビン分析計 HLC − 723GX の開発
バイオサイエンス事業部

開発部

セパレーションセンター
システム開発 G
東ソーハイテック 生産技術課

村上 卓司
青柳 雄大
江藤享河村 真成1．はじめに自動グリコヘモグロビン分析計 HLC − 723 シリーズ
は、高速液体クロマトグラフィー法（HPLC 法）を用いて糖尿病の臨床検査項目であるグリコヘモグロビン（HbA1c）を測定する自動分析計である。同シリーズ
は 1983 年の発売以来、糖尿病検査装置として広く普及し、現在では HbA1c 分析計の標準機のひとつとなっている。本分析計は非多孔性陽イオン交換体カラムを用いて不安定型グリコヘモグロビン（L − A1c）と安定型グリコヘモグロビン（s − A1c）を短時間で再現性よく分離できる事が特徴であり、最新モデルである G9

図１

装置外観

は分析時間が 45 秒、処理能力 80 検体／時間の高速・高処理性能有し、高い信頼性と処理能力を必要とする

表１

多くの施設で使用されている。
しかし、高速・高処理性能を追求した本分析計は装置サイズや操作性など検体数の少ない個人病院などでは利用しにくい点があった。
自動グリコヘモグロビン分析計 HLC − 723GX は検体数の少ない施設向けに開発した小型グリコヘモグロビン分析計である。本機は小型でありながら、HPLC 法の特徴である高い再現性を有し、従来機と同等の測定性能を有している。本報告では、この GX の主な仕様およびその基本性能を報告する。

2．装置の外観、仕様
装置の外観を図１に、主な仕様を表１に示す。

3．装置の特徴
GX は検体数が少なく、HPLC 法に不慣れな施設でも安全に使用できるように、装置の小型化と安全装置の強化を行なった。

測定項目
測定対象検体
測定原理
処理時間
検出方式
検体使用量
最大検体搭載数
注入方法
希釈方法
検体容器形状検体 ID 認識
表示装置
入力装置
出力装置
記憶装置
送液部
カラム温調

HLC−723GX の主な仕様

HbA1C（s−A1C）、HbF
全血、希釈溶血液
イオン交換高速液体クロマトグラフィー
2.2min ／検体
2 波長吸光（検出波長 415nm）
全血 3μL、希釈溶血液 120μL
10 検体
サンプルループ方式
希釈槽にて溶血洗浄液で自動希釈
φ12〜φ15×75〜100nm 真空採血管
汎用サンプルカップ
最大 20 桁のバーコード（オプション）
320×240 ドット モノクロ液晶ディスプレイ
圧力感知式タッチパネル／シートキー
サーマルプリンタ
USB メモリー
シングルプランジャーポンプ
電子冷却（25℃）

で覆うことで、動作中の不用意なアクセスを防止し、より安全に使用できる装置とした。
従来機では高速処理を実現するため、検体の前処理においてサンプリング用の精密シリンジ（250μL）

GX では、これまでの外付けのサンプルローダをやと分注用の大型シリンジ（5mL）の 2 つのシリンジをめ、最大搭載数 10 検体のターンテーブル型の小型サ使用していた。GX では後述する異常ヘモグロビンをンプラを採用することで装置の小型化を行なった。ま分離するために分析時間を 2.2 分／検体としたことにた、同サンプラ部をインターロック機能付きのカバーより、前処理時間とともに希釈精度に余裕が生まれた。

TOSOH Research & Technology Review Vol.56（2012）

44

図２

ターンテーブル型サンプラ部

L−A1c

シリンジの精度と容量、動作速度を再検討した結果、

A0s−A1cSA0

中型シリンジ（2.5mL）のみで希釈可能であることを見出し、装置を簡素化することが可能となった。
表２に、従来機との外寸比較を示す。GX は従来機に比べて設置スペースを約 25% 削減し、重量で約 9Kg（A）の小型軽量化を達成した。

（A）健常人表２

HLC−723GX と HLC−723G8 の比較

図３（B）（B）HbS含有サンプル

HLC−723GXの測定結果レポートとクロマトグラム

外寸（mm）
重量（kg）
HLC−723GX 370（W）×525（D）×482（H）
2534
HLC−723G8 530（W）×515（D）×482（H）

161412HLC−723GX

また従来機では、廃液を自然落下により排出するため、廃液タンクを設置台下に設置しなければならなかった。しかしながら、GX ではデスク上に装置と廃108液タンクを並べて設置できるように送液ポンプによる6廃液処理を可能とし、装置設置環境の自由度を高めた。

42y＝1.009x＋0.037
r＝0.999n＝1012464．基本性能

1012141616［1］基本性能

1420mm）と 3 種類の溶離液を用いて、血中ヘモグロビ

12HLC−723GX

GX は非多孔性陽イオン交換カラム（4.6mmI.D. ×
ン中に占める s − A1c の割合を 2.2 分で測定する。分析結果を図３に示す。健常人では、ヘモグロビンを
A1a，A1b，F，L − A1c，s − A1c，A0 の 6 分 画 に 分 離1086し（図３（A））
、異常ヘモグロビン症患者においては、

y＝1.004x−0.007
r＝0.999n＝1014

HbD，HbS，HbC およびこれらに類似する異常ヘモ2グロビンが存在する場合には、これらのヘモグロビン

246810121416HLC−723G8類を分離し、それぞれ H − V0，H − V1，H − V2 として報告する（図 3（B）は HbS 含有例）。

8HLC−723G7

図４

HLC−723GXと前モデルG7、G8とのs−A1c（％）の相関性

図４に GX で得られた s − A1c 値と G7 または G8 で得られた s − A1c 値との相関を示す。相関係数はいずs − A1c 値の異なる検体で評価した結果、すべての検体れも r ＝ 0.999 であり良好な相関性を示した。

で連続再現性、日差再現性ともに CV0.9％以下の良好

表 ３ に 連 続 再 現 性 と 日 差 再 現 性 の 結 果 を 示 す。

な再現性を示した。

東ソー研究・技術報告

表３

シアン酸ナトリウムを全血に添加してインキュベー(n＝10）
MH
7.9910.50
0.030.00
0.40.0L
平均値
5.40SD0.00
CV（％） 0.045（2）カルバミル化ヘモグロビンの影響

s−A1c（％）の再現性結果

連続再現性

第 56 巻（2012）

トするとシアン酸とヘモグロビンが反応しカルバミル化ヘモグロビンが生成する。GX ではカルバミル化ヘモグロビンは L − A1c と一緒に溶出するため、シアン酸ナトリウムの添加量が増加するとともに L − A1c は日差再現性(n＝10）
LH
平均値
5.3410.42SD
0.050.06
CV（％） 0.90.6増加する。しかし、s − A1c 値はほぼ一定で、本試験ではカルバミル化ヘモグロビンの影響はシアン酸ナトリ
ウム添加量で 0.25g ／ L まで認められなかった。
（3）アルデヒド化ヘモグロビンの影響
アルデヒドを添加した場合に増加するアルデヒド化ヘモグロビンは L − A1c と一緒に溶出し、添加量の増［2］修飾ヘモグロビンの影響
s − A1c 測定値に対する各種修飾ヘモグロビンの影響加とともに L − A1c は増加する。しかし、s − A1c 値はを調べるため、健常人血に所定量のグルコース、アセほぼ一定で、本試験ではアルデヒドの影響は添加量でトアルデヒド、シアン酸ナトリウム、アセチルサリチ

0.25g ／ L まで認められなかった。

ル酸を添加し、35℃で１時間インキュベートし調整し（4）アセチル化ヘモグロビンの影響たものを試料として測定した。図５に結果を示す。

アセチルサリチル酸を添加した場合にアセチル化ヘモグロビンが生成するが、本試験ではアセチルサリチ（1）不安定型グリコヘモグロビンの影響
グルコース添加量の増加とともに L − A1c が増加す

ル酸を 0.50g ／ L まで添加したが、L − A1c、s − A1c とるが、s − A1c 値は添加量 10g ／ L までは変化せず、影もに変化は認められなかった。

響のないことを確認した。

8.0
6.0

6.0

5.0

5.0

4.0
3.02.0s−A1c（％）

1.0

L−A1c＋（％）

0.0

0.0

2.0（B）

7.0

Hb（％）

Hb（％）

8.0（A）

7.0

4.0

6.0

8.0

4.0
3.0
2.0

s−A1c（％）

1.0

L−A1c＋（％）

0.0

10.0

0.00

0.05

添加濃度（g／L）
8.0

8.0（C）

7.0

6.0

6.05.05.0Hb（％）

Hb（％）

7.0

4.0
3.0
2.0

s−A1c（％）

1.00.0L−A1c＋（％）
0.00

0.05

0.100.15

0.20

0.25

0.10

0.200.25（D）

4.0

s−A1c（％）

3.0

L−A1c＋（％）

2.0
1.0
0.0

0.00

添加濃度（g／L）

0.10

0.20

0.30

添加濃度（g／L）（A）不安定型グルコース（B）カルバミル化ヘモグロビン（C）アルデヒド化ヘモグロビン（D）アセチル化ヘモグロビン

図５0.15添加濃度（g／L）

修飾ヘモグロビンがs−A1c（％）に及ぼす影響

0.40

0.50

TOSOH Research & Technology Review Vol.56（2012）46

れまで HPLC 法を利用していない施設において幅広く［3］共存物質の影響
血液中に高濃度で共存する可能性のある物質として、遊離型ビリルビン（ビリルビン F）、抱合型ビリルビン（ビリルビン C）、トリグリセリドを全血に添加して、s − A1c 値に対する影響を調べた。結果を図６に示す。遊離型ビリルビンは 0.19 g ／ L まで、抱合型
ビリルビンは 0.20 g ／ L まで、トリグリセリドは 20g ／ Lまで添加の影響を受けなかった。

（A）遊離型ビリルビン
6.0
s−A1c（％）

5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0.0

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.20

0.252025

添加量（g／L）（B）抱合型ビリルビン
6.0
s−A1c（％）

5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0.0

0.00

0.05

0.10

0.15

添加量（g／L）（C）トリグリセリド
6.0
s−A1c（％）

5.04.03.0
2.01.00.0051015

添加量（g／L）

図６

干渉物質がs−A1c（％）に及ぼす影響

5．ま と めGX はこれまで検体数が少なく HPLC 法を利用できなかった施設向けに新たに開発した小型グリコ分析計である。小型分析計でありながら、多検体高処理能力機種と同様に高い再現性を有し、修飾ヘモグロビンおよび干渉物質の影響を受けずに s − A1c を測定可能である。また、3 種の異常ヘモグロビンも分離可能であり、信頼性の高い測定が可能である。前モデルである
G7 および G8 と高い相関性を維持しているため、こ利用されるものと期待される。