JAPANESE ASSOCIATION FOR LACTOFERRIN

Lactoferrin NEWS日本ラクトフェリン学会ニュースレター�第10号

2014年2月

巻頭言“これまでのこと、これからのこと”
島崎�敬一

Kei-ichi SHIMAZAKI

北海道大学�名誉教授
1� 巻頭言これまでのこと、これからのこと 島崎�敬一

ラクトフェリンが牛乳から見いだされ、1939年に赤色タンパク質として報告されてから75年、国内でのラクトフェリン研究が開始されてから数えても早や50年以上が経ちました。

2 学会報告私がラクトフェリンの精製と抗血清の調製に手を染めたのは帯広畜産大学の第11回国際ラクトフェリン

助手となった時で、翌1976年の紀要に乳房炎乳に分泌される抗菌性タンパク質

会議参加報告 小野 知二・

濃度について書いたのがラクトフェリンに関する最初の報告でした。その時に目を森下�聡通したのは、牛乳からラクトフェリンを分離精製するGroves(1960)の報告で、当3�冨田賞受賞研究報告

ラクトフェリン受容体を高発現するヒト腸上皮様Caco-2 細胞における牛乳
ラクトフェリンの取り込みと時はカゼインに結合したラクトフェリンを遊離させてクロマトグラフィーで分離していました。それから10年後に本格的にラクトフェリン研究に取り組むこととなりまし
たが、目を通したラクトフェリンの論文の中には、いつかは自分もこのようなインパ
クトのある論文を書きたいものだと思ったものがありました。今となっては古典的な価値しかありませんが、この機会に記憶にある幾つかを紹介したいと思います。

断片化および放出

なお、インパクトある論文執筆という野望は果たせなかったこと、最初にお断りし秋山 友香ておきます。
1960年代には、Nature誌やScience誌にラクトフェリンの抗菌性に関する論

iFIA2014日本ラクトフェリン文が掲載されていました。1970年代の我が国では、血清トランスフェリンと鉄代学会セミナーのお知らせ

謝に関連する医学分野の研究者がラクトフェリンにも関心を向けていた程度でした。他には母乳育児という観点から一部の小児科医や、育児用調整粉乳を作っていた大手の乳業会社が研究対象としていました。たとえば、日本小児科学会
誌に児玉が母乳中のラクトフェリンが抗菌作用を示すが、ビフィズス菌に対しては生育促進作用があることを発表しています(1983)。また、高柳らが小児科臨床に書いたラクトフェリンの機能についての解説(1986)があります。その論文の結びに「ラクトフェリンは抗菌物質としてばかりでなく、炎症や免疫のケミカルメディエ
イターとして今後新たな研究の発展が望まれる」とあり、まさに現在そのようになっていると実感しています。

http://lactoferrin.jp/

1

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2014年2月

1980年代はオンラインデータベースの利用が普及の兆しを見せ、研究環境が変わりつつある時期で、ラクトフェリンに関する基礎的な知見が充実してきました。フランスのSpikらのグループによるヒトラクトフェリンの全アミノ酸配列(1984)は、ペプチドシークエンサーを用いる方法でしたが、同じグループのラ
クトフェリン糖鎖に関する報告とともに私たちの研究に大きな指針を与えてくれるデータでした。その後は遺伝子技術の急速な発展にともなって、クローニン
グ、cDNAからのアミノ酸配列の決定、組換えラクトフェリンの作成、トランス
ジェニック牛Hermanの作出などの報告が続々と出るようになったことはご存知の通りです。さらにニュージーランドのBakerらのグループが発表したX線結晶解析による高次構造の論文(1987)も衝撃的なもので、ラクトフェリンの立体構
造が目に見える形で提示されたのは、ラクトフェリン研究者が待ち望んでいたものでした。また、ヒューストン(USA)のHutchensらのグループによる母乳中のラクトフェリンが乳児の尿に検出されたという報告(1989)も、ラクトフェリンの生理的な機能を考えるうえで示唆に富む論文でした。森永乳業研究グループによる抗菌ペプチド・ラクトフェリシンの最初の論文が発表されたのは1991年
で、翌1992年にラクトフェリン・シンポジウム（現在、国際ラクトフェリン会議として継続）がホノルルで開催されることとなったのも、ここで述べたような背景があってラクトフェリン研究の展望が大きく開け、さらに弾みが付いた状況になったためでした。次のステップとしては、さまざまな生体関連物質との相互作用を解明することが、ラクトフェリンの機能発現メカニズムの解読とその応用の鍵を握っていると思われます。
今年の秋には筑波で日本ラクトフェリン学会の第6回学術集会が、さらに来年には名古屋で第12回の国際ラクトフェリン会議が開催されます。ラクトフェリ
ンは研究対象として興味あるだけではなく、その応用において非常に奥深い可能性を秘めています。皆さま方の研究がますます進展するとともに、私どもの健康の維持・向上にラクトフェリンがさらに役立つ道筋を作って頂きたく、今後に期待しております。

http://lactoferrin.jp/2

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第10号

2014年２月

第11回国際ラクトフェリン学会参加報告小野 知二・森下�聡
Tomoji ONO, Satoru MORISHITA

ライオン株式会社
生命科学研究所

��1. 学会概要
2013年10月6日~10日の5日間にかけて、第11

回

開催年

開催地

1

1992

Honolulu, Hawaii

2

1995

Honolulu, Hawaii

3

1997

Le Touquet, France

4

1999

札幌、日本

5

2001

Banff, Canada

6

2003

Capri, Italy

7

2005

Honolulu, Hawaii

います。本会議は、アジア、ヨーロッパ、北米の地域の持

8

2007

Nice, France

ち回りで開催され、毎回、約150名のLF研究者を集め

9

2009

北京、中国

ています。決して大きな会議ではありませんが、国内外

10

2011

Mazatlan, Mexicoの最先端の研究機関のLF研究者と密に情報交換が出

11

2013

Roma, Italy

回国際ラクトフェリン学会がイタリアのローマにてSapienza大のPiera Valenti先生の主催で開催されました。本学会は1992年にハワイで第1回大会が開催され、以降ほぼ2年毎に開催されています（表1）。その名の通り、ラクトフェリン（以下、LF）という素材の研究に特化した国際会議であり、たった一つの素材で20年間にも渡り隔年国際会議が開かれることからも、LFの機能が多様であり、多面的な研究がなされていることを示して来る貴重な場です。

表1 国際LF学会の開催年と開催地

今回もBaker先生、Lönnerdal先生、Vogel先
生、Schryvers先生、津田先生、島崎先生らの著名な研究者によるレビューやオリジナルデータに加えて、基日本からは、日本ラクトフェリン学会理事長の名古屋

礎研究、応用研究の報告が、口頭発表57題、ポスター

市立大・津田先生をはじめとし、北大・島崎先生、名古発表53題、合計110題と、多くの発表がありました。研

屋市立大・飯郷先生、昭和大・大槻先生、農研機構・高究分野を主に分類すると表2のとおりです。Plenary

山先生、広島大・高田先生、デイリーテクノ・冨田社長な

lectureはCalifornia大学Davis校のBo Lönnerdal先ど、30名程度の研究者が出席し、前回のメキシコ大会

生が、LFの活性に対する鉄の関与について概説されたから大幅に増えていました（表3）。これもローマという観後、Milan大のGaetano Cairo先生が感染・炎症時の細光名所で開催された効果かもしれません。

胞内における鉄の代謝について最近の知見をお話いた

学会会場はバチカン市国のサンピエトロ大聖堂に程だきました。主催者のValenti先生がLFと鉄の臨床研究近いホテルを借りて開催され（写真1）、学会期間中にシを行われている関係で、鉄にフォーカスしたPlenary

スティーナ礼拝堂ツアーも組まれていました（写真2）。ミ

lectureとなりました。

ケランジェロらが描いた天井画や壁画は圧巻であり、時http://lactoferrin.jp/

3日本ラクトフェリン学会ニュースレター

第10号

2014年２月

写真1�学会会場風景(左上)サンピエトロ大聖堂、赤矢印が学会会場のホテル (右上)�口頭発表会場(左下)�ポスター会場(右下)�受付嬢

表2�各セッションの演題数
口頭(件）

ポスター(件)計

plenary section

2

0

2

LF structure

2

2

4

LF gene expression

2

2

4

LF receptors and localization

4

1

5

LF and immunomodulating activity

5

4

9

LF and iron homeostasis

3

0

3

LF and its derivative peptide

8

9

17

LF and obesity

2

0

2

LF as a biomarker

2

2

4

LF : cell proliferation and differentiation

4

3

7

recombinant and transgenic LF

3

12

15

round table on breast milk and infant formula

3

4

7

round table on LF and neonatal infection

6

2

8

LF application

8

7

15

LF novel use

3

5

8

合計

57

53

110

セッション名http://lactoferrin.jp/

4日本ラクトフェリン学会ニュースレター

第10号

2014年２月

写真2�システィーナ礼拝堂ツアー(左)�学会会場ホテルに集合 (右)�館内説明、頭一つ出ているのがBo Lönnerdal先生
礼拝堂は写真撮影不可でした

間が経つのも忘れるぐらいだったのですが、如何せん時り恐縮ですが、興味深かった演題に関してご紹介いたし間が短いため、すぐそばに有名なラファエロの間があるます。

にもかかわらず足早に出なければなりませんでした。次大久保先生（東大）らは、免疫細胞である「好中球」にに来たときにはじっくり見物できればと思います。余談で対するLFの新しい作用に関してご報告され、日本人ですが、Calgary大のVogel先生は、LF中に存在するシスは初めてStudent Awardsに選ばれました。好中球はテイン（cysteine）結合とシスティーナ（Sistina）礼拝堂

外来病原菌などの異物に対して、貪食作用や、脱顆を引っ掛けてご講演されたり、システィーナ礼拝堂のミ

粒、また、内在性のLFを放出することにより、外敵を除ケランジェロの天井画が米国医師会雑誌JAMAで取上去していると考えられています。近年、好中球の新たなげられたこともご説明されていました。ミケランジェロは機能として自己DNAを網のように広範に放出することに解剖学に関しても造詣が深く、「アダムの創造」という天よる捕獲機能（neutrophil extracellular traps

井画に描かれた神は、実は脳の形をしているという解釈(NETs)）が明らかにされました。一方、このNETsは、自ができるそうです。神は人間の頭の中に宿っているとい

己免疫疾患や炎症性疾患及び血栓形成の進展に関わうことでしょうか？アダムの創造を行ったのは神ですが、るとの報告もされており、生体防御とその防御機構の破その神を創造したのは人間である。当時、そんなことを綻の両側面に関与する作用として認知されつつありま

おおっぴらに口にすることは出来なかったでしょうから、す。本報告では、好中球には高濃度でLFが存在し、外せめてその考えを絵画の中に描いたものと想像されま

敵認識時に放出されることに着目し、LFがNETs形成にす。翌日にシスティーナ礼拝堂ツアーが控えていること

与える影響を解析しました。その結果、hLFやbLFをinも踏まえて、とてもユーモアのあるご講演をされていた

vitroで好中球に添加するとNETsの形成が阻害されるのが印象的でした。

ことを明らかにしました。そのメカニズムとして、カチオン性のLFがアニオン性のDNAに結合し、NETsをシュリ

2. 基礎研究分野のトピックンクさせることを示していました。また、動物でのエビデンスも紹介され、自己免疫疾患による血管炎モデルや

表2に示すように、基礎研究分野としては、LFの構血栓モデルマウスに対してbLFの投与が有効であること

造、遺伝子発現、受容体、免疫調節機能、ペプチド、なが示されました。内因性LFが自己免疫疾患の調整をどを中心に発表がありました。その中で筆者の独断とな

http://lactoferrin.jp/

行っているという非常に新しい知見であり、食品成分とし

5

日本ラクトフェリン学会ニュースレター

第10号

2014年２月

写真3�ガラディナー(左)�昭和大学とサラヤさんのテーブル(右)�宴もたけなわて日本国内で広く使用されているbLFでも効果が認めら能性が考えられました。症状が顕在化してからの対処れたことから、bLFの日常的な摂取による自己免疫疾患

は医薬品ですら満足できるものがなく、予防技術の開発の予防・改善につながる可能性を秘めたインパクトあるが今のポイントとなっています。そのためには、早期診データでありました。今後、本研究の動向は是非とも注

断マーカーの確保が非常に重要であり、本報告はその目していきたいと思います。

マーカーとしてLFが活用できるのではないかとのことでSokolovらは、アルツハイマー病（AD）の発症への非常に興味深かったです。しかし、ポスターの前で待っ関与が報告されている好中球に含まれる顆粒の中ていたにも関わらず、演者とディスカッションできず非常に、LFとミエロペルオキシダーゼ（MPO）が含まれているに残念でした。論文もまだ公開されていないようですの

こと、さらに急性期タンパク質であるセルロプラスミン

で、今後の動向を見守っていきたいと思います。

（CP）と3者の複合体を形成することに着目し、これら血中炎症メディエーターのAD診断前の判定マーカーとし

3. 応用研究分野のトピックスての可能性を検討しています。本研究では、3つのス

今回の学会で応用研究分野に関するトピックスの特テージ（mild, moderate, severe）の37名のAD患者と徴は、母子に対するLFの作用にフォーカスを当てていた

32名の健常人を被験者とし、ADの判定は点かと思います。中でも妊婦の鉄欠乏性貧血に対するICD-10（1994年に世界保健機関が設定した研究用診

研究と、乳児に対するLFの有用性に関する研究が目を断基準、International Classification of Disease

引きました。

10th revision）とNINCDS-ADRDA（米国国立神経障

鉄欠乏症は世界で最も一般的な栄養障害であり、そ害・脳卒中研究所とアルツハイマー病・関連障害協会がの数は世界で20億人にも上ります。鉄欠乏症、貧血は

1984年に合同で作成）で行いました。その結果、AD患

仕事の効率を下げるため、経済的に不利益であり、鉄欠者において、CP活性の低下、LF濃度の減少及びMPO濃乏症・貧血への対処により生産性を20％上げられるとい度の減少が有意に認められました（P < 0.0001）。これ

うことがWHOから報告されており、鉄欠乏症に対する対らのマーカーの変動はmildのステージにおいて既に有意処は大きな社会的な意義があります。鉄欠乏症、貧血差が認められており、血漿LF、MPOの減少及びCPの活は特に妊婦に多く、発展途上国では56%、先進国でも性低下は、好中球の機能変化に付随して起きていること

14%程度が鉄欠乏性貧血であり、死産、早産、低体重が示唆され、ADの早期診断マーカーとしての利用の可

http://lactoferrin.jp/

児出産、新生児の死亡率、等のリスクを上げるほか、新6日本ラクトフェリン学会ニュースレター

第10号

2014年２月

写真4�ローマの休日（ではなく平日です）(左)�トレビの泉でコインを投げる森下 (右)�コロッセオを歩く森下生児の鉄状態悪化は、母子のコミュニケーション悪化、

ループがイタリア、オーストラリア、イギリスで形成されて認知機能、言語能力、運動能力発達遅延にも繋がるそいます。今回の学会でオーストラリアの研究グループかうです。これまでにValenti先生の研究グループから、鉄ら、鉄欠乏性貧血妊婦を対象とし、上述と同様の試験を欠乏性貧血に対するbLFの有効性を、鉄剤（FeSO4）と800名規模で実施する計画があることをご報告されて比較された報告があり、bLFは血中の鉄、ヘモグロビン、

おり、今後の研究の発展が非常に期待できる分野だと

フェリチン、赤血球などのパラメーターを改善するほか、感じました。結果次第では、20億人の貧血患者の炎症マーカーであるIL-6の濃度を下げることがわかってファーストチョイスになるかもしれないと締めくくられておいます。逆に鉄剤は、LFほどの効果が認められないほ

りました。

か、IL-6についてはむしろ濃度が上昇しており、吐き気、乳児に対するLFの応用では、遅発性敗血症や壊死

便秘、腹痛などの副作用もあることから、決してベストな性腸炎等に関するご報告がMissouri大のSherman先治療法ではないことを報告されていました（Int J

生、Peruana Cayetano Heredia大のOchoa先Immunopathol Pharmacol. 23, p577-87, 2010）。

生、SantʼAnna 病院のManzoni先生らからありまし今回の学会では、Valenti先生より遺伝性血栓症の妊た。壊死性腸炎や敗血症は特に早期産児によく起こる婦に対するbLFの有効性についてご報告がありましそうで、日本では年々早産、低体重児出産の傾向が強た。242名の患者をbLF投与群とFeSO4投与群の2群まっていることから、今後国内でも重要な課題になるかに分けて試験をしたところ、前述の試験結果とほぼ同様もしれません。この分野では、2009年にManzoni先生の結果が得られておりbLFの有用性が示されました。特がJAMAに投稿された論文が有名です。この論文では、筆すべきはその副作用のなさで、FeSO4投与群で出生時体重1500g以下の472名の乳児をbLF100�

は、114名中38名が副作用、流産などで試験をリタイ

mg群、bLF100mg+乳酸菌（Lactobacillus GG 60億

ヤしていましたが、bLF投与群では128名中126名が個）群、プラセボ群の3群に分けて試験をしました。その試験を完了しており、副作用、流産などは1名もいらっ

結果、遅発性の敗血症の発症率はbLF群で5.9％

しゃらなかったとのことです。妊婦の鉄欠乏性貧血に関(RR=0.34)、bLF＋乳酸菌群で4.6％ (RR=0.27)、プする研究では、現在Lactoferrin in Anaemia of

ラセボ群で17.3％であり、bLF、bLF＋乳酸菌群で有意Pregnancy Collaborative Study Groupという研究グに発症率を抑制しました。また壊死性腸炎の発症率でhttp://lactoferrin.jp/

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投資家通信 - 第 3 号
日本ラクトフェリン学会ニュースレター

2009 年秋
2014年２月

第10号

表3�日本人発表者リスト
名前
口頭発表

所属

タイトル

15件

Hidefumi KUWATA

NRLファーマ

Evaluating the conformation-dependent activities of lactoferrin
for rigorous quality control

Jasushi SUZUKI

サラヤ

Lactoferrin can be internalized by dermal fibroblasts andstimulates gene expression

Yuka AKIJAMA

名古屋大学

Subcellular co-localization with intelectin-1 and polarized releaseof lactoferrin internalized by human intestinal epithelial-cell lines

Koshu Okubo

東京大学

Lactoferrin a suppressor of neutrophil extracellular traps in
inflammation

Masaaki IIGO

名古屋市立大学

Effect of oral ingestion of bovine lactoferrin on immune cells in
the large intestine and polyps

Kei-ichi SHIMAZAKI

北海道大学

Lactoferrin as a prophylactic and therapeutic agent for bovine
mastitis

Tomoji ONO

ライオン

Reducing Effect of Enteric-coated Lactoferrin on Visceral Fat
Accumulation in Japanese Men and Women with Abdominal
Obesity and its Possible Mechanisms

Satoru MORISHITA

ライオン

Potent lipolytic action of lactoferrin in rat mature adipocytes andits molecular mechanism

Toshihiro INUBUSHI

広島大学

Bovine lactoferrin enhances osteogenesis through TGF-beta
receptor signaling.

Hirotsugu ODA

森永乳業

Generation of a Bifidogenic peptide, BLP by pepsin hydrolysis ofbovine lactoferrin

Hiroyuki TSUDA

名古屋市立大学

Inhibition of intestinal polyp growth by oral ingestion of bovine
lactoferrin and immune cells in the large intestine

Hiroyuki
WAKABAYASHI

森永乳業

Protective effect of lactoferrin against familiar infections causedby viral pathogens including norovirus

Tomohiro OBA

昭和大学

Efficacy of lactoferrin in a patient with multiple episodes ofrecurrent pregnancy loss thought to be caused by refractory
bacterial vaginosis

Manabu NAKANO

森永乳業

Effects of bovine lactoferrin and lactoperoxidase-containing
tablets on oral malodor and periodontitis

Takashi TAKATA

広島大学

Oral administration of liposomal bovine lactoferrin is useful for
prevention and control of periodontitis

も前述の3群でそれぞれ1.9%(RR=0.24)、0%

でおりましたが、この結果においても重度壊死性腸炎ま

(RR=0.11)、6.0%であり、こちらも有意に発症率を抑たは死亡の発生率は、bLF群で4.0％ (RR=0.39)、bLF

制しており、bLFの有効性が大いに期待できる結果でし＋乳酸菌群で3.8％ (RR=0.37)、プラセボ群で10.1％

た(JAMA. 302, p1421-8, 2009)。JAMAでの発表であり、bLF、bLF＋乳酸菌群で有意に発症率を抑制し後も引続き試験は推進されており、800名まで症例登録ました。現在では前述のように、Manzoni先生以外にもを増やし、重度の壊死性腸炎や死亡率を抑制できるか

低体重児出産の乳児を対象とした壊死性腸炎、遅発性検討されていました。既に752名まで症例登録が進ん敗血症に対するLFの有効性を検討されている方が増え

http://lactoferrin.jp/

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投資家通信
-第3号
日本ラクトフェリン学会ニュースレター

2009 年秋
2014年２月

第10号

表3�日本人発表者リスト(続き）
名前
ポスター発表

所属

タイトル

12件

Yoshiharu TAKAYAMA

農研機構

Role of CXCR4 on lactoferrin-induced activation of PI-3K
signaling pathway

Ken ANDO

東京薬科大学

TLR4-dependent regulation of intestinal immune responses bylactoferrin

Hiroshi KAWAKAMI

共立女子大学

Effects of enteric-coated lactoferrin supplementation on the
immune markers in serum of healthy elderly individuals:
randomized, double-blind, placebo-controlled trial

Kei-ichi SHIMAZAKI

北海道大学

Screening of functional peptides from transferrin family proteinsof marine organism

Chea Chanbora

広島大学

The Inhibitory Effects of Bovine Lactoferrin on Growth and BoneInvasion of Oral Squamous Cell Carcinoma

Toshiaki KOKUBO

放射線医学研究所

The usefulness of lactoferrin to protect against X-ray-induced
mouse thymic lymphomas

Nanase ISHII

サラヤ

Effect of lactoferrin in the presence of sophorolipid on
melanogenesis in cultured melanocytes

Yuki SHIGA

東京工科大学

Development of a human lactoferrin Fc fusion protein as apharmaceutical agent

Yuki SHIGA

東京工科大学

Human lactoferrin-IgG Fc fusion protein for therapeutic use

Tomohiro OBA

昭和大学

Efficacy of lactoferrin in a patient with multiple episodes ofrecurrent pregnancy loss thought to be caused by refractory
bacterial vaginosis

Hiroyuki TSUDA

名古屋市立大学

Inhibition of intestinal polyp growth by oral ingestion of bovine
lactoferrin and immune cells in the large intestine

Tetsuya KAWAKITA

慶應大学

The Role of Oral Lactoferrin in Dry Eye Patientsてきています。症例数の関係でManzoni先生ほどのき

4.Obesity（肥満）が始めてセッションに

れいな有意差が得られているわけではないようでした

本会では初めてObesityのセッションが設定され、が、それぞれ同様のbLFの有効性が認められていまし小野より「腸溶bLFのヒトにおける内臓脂肪低減効果(Brた。LFの作用機序については、腸内菌叢への影響や抗J Nutr., 104, p1688-95, 2010)及びマイクロミニ

炎症作用などが考えられますが、特にビフィズス菌の増ピッグに対する動脈硬化予防効果に関して」、森下より

殖促進作用がkeyなのではないかとの議論がありまし「bLFの内臓脂肪低減メカニズムとして、脂肪細胞に対た。ちなみにビフィズス菌といえば森永乳業の織田氏

する脂肪分解促進効果(Biosci Biotechnol Biochem.,

が、LF分解物に含まれるビフィズス菌増殖ペプチドBLP

77, p566-71, 2013)の分子機構に関して」口頭発表のご報告をされておりました。こちらも今後の研究の発しました。本内容につきましては、これまでに本ニュース

展が期待されます。

レターでご報告しているので割愛させていただきますが、発表後、多くの質問が寄せられ、一定の関心を持っhttp://lactoferrin.jp/

9日本ラクトフェリン学会ニュースレター

第10号

2014年２月

写真5�大会最終日の様子(左)�津田先生から次回開催地の日本の名所についての紹介（地獄谷温泉のニホンザルの入浴風景）(右)�日本人参加者集合写真（最終日だったので全員は取れませんでした。すいません）て頂けたと感じました。Lönnerdal先生とSchryvers先と感じています。ご興味のある先生がいらっしゃいました

生からは「bLFの内臓脂肪低減効果は腸内細菌層の変ら、是非一緒に検討をさせて頂ければ有難い限りです。

化と関連があるのではないか」とのコメントを頂くなど貴重なご意見を伺えました。ただせっかくセッションができ

5.次回開催地は名古屋に決定！

たのですが、発表をしたのは当社の2名のみであり、存会議期間中に国際組織委員により次回開催地の選在感を示すことができた反面、より多くの研究者にLFと考が行われ、2015年に開催される第12回国際ラクト

脂質代謝の関係について興味を持って頂きたいと思って

フェリン会議は、本会の津田理事長が組織委員長となおります。この分野では鳥取大の竹内先生が2004年にり、名古屋で開催されることが決定しました。会議の最マウスで脂質代謝が改善することを示されたのを皮切り

終日に、国際組織委員長のBo Lönnerdal 教授から開に（Br. J. Nutr., 91, p533-558, 2004）、Moreno-

催地が発表された後、津田理事長より、名古屋市と会Navarrete先生が血中のLF濃度はBMIや血糖、血中脂議場の概要と、市内・近郊の名所について熱のこもった質と逆相関するという興味深い報告をされた他（Clin

ご紹介がありました（写真5）。日本での国際ラクトフェ

Chem., 54, p301-9, 2008）、細胞レベル、動物レベ

リン会議は、1999年に北大の島崎先生が組織委員長

ルでいくつかの報告がされています。中でも疫学研究やとなった第4回が札幌で開催されて以来、実に16年ぶ細胞実験を幅広く検討されているMoreno-Navarrete

り2度目となります。これまで国際会議ではなかなか発先生が、当初Valenti先生から招待されていたので、今表できなかった方もいるのではないかと思いますが、次回初めてお会いできるかと楽しみにしていたのですが、回は名古屋に海外の著名なLF研究者をお招きして会

ご都合が合わなかったようでした。LFと脂質代謝の研究議を開催できる貴重な機会です。是非多くの研究者にはまだまだ発展途上の段階であり、特にヒトのエビデン

2015年の国際会議への参加・発表して頂き、一緒にスは我々が報告した一報のみでまだまだ十分ではない

http://lactoferrin.jp/

本会議を盛り上げて行ければと考えております。

10日本ラクトフェリン学会ニュースレター

第10号

2014年２月

ラクトフェリン受容体を高発現するヒト腸上皮様Caco-2細胞における牛乳ラクトフェリンの取り込みと断片化および放出秋山�友香�����������������
Yuka AKIYAMA名古屋大学大学院�

生命農学研究科
ラクトフェリン（LF）は腸上皮細胞頂端側に発現するインテレクチン（IntL）を介して細胞内に取り込まれると推定されている。本研究では、IntL安定発現Caco-2細胞を用いて、LFの取り込みとその後の放出、また細胞内局在について解析した。LFは対照タンパク質と比較して効率的に細胞内に取り込まれ、一部は断片化されて培養上清中に放出されること、さらに取り込まれたLFの大部分は核の頂端側近傍においてIntLと共局在することが示唆された。
LFはLF特異受容体として考えられているIntLを介40%まで低下したことが報告されている 2） 。このようしたエンドサイトーシスによって細胞内に取り込まれるとに、Caco-2細胞によるヒトLFの吸収にIntLの発現量が推定されている。これまでに、IntLを高発現する形質転関与している可能性が示唆されているが、細胞内に吸換Caco-2細胞において、細胞表面へのLF結合能が増収されたLFのその後の動態や安定性については明らか

加したこと、また鉄結合型LFとしての鉄吸収量が増加しとされていない。そこで、IntL依存的に取込まれたLFのたこと 1） が報告され、さらにRNA干渉によって内在性

細胞内動態についてさらに解明するため、IntL安定過剰

IntLの発現を抑制したCaco-2細胞ではLFの吸収量が発現Caco-2細胞(IntL-Caco-2)を用いて、サンドイッチ

図1�形質転換Caco-2細胞によるLFの取り込み量、および放出量の定量的解析スキーム
http://lactoferrin.jp/

11日本ラクトフェリン学会ニュースレター

第10号

2014年２月

図2�蛍光免疫染色法による形質転換Caco-2 細胞により細胞内に取り込まれたLFおよびIntLの検出
形質転換Caco-2細胞をカバースリップ上で10日間培養した後、培養上清をLF（0.1mg/ml）を含む新しい培地と交換し、3時間培養した。その後細胞を固定し、膜透過処理を行った後、抗LF抗体、抗IntL抗体、および蛍光標識二次抗体を用いて蛍光免疫染色を行った。共焦点レーザースキャン顕微鏡によりLFおよびIntLを検出した時のX-Y平面画
像（A）およびX-Z画像（B）を示した。（緑：LF、赤：IntL、青：核）ELISAや免疫ブロット法、また共焦点顕微鏡法により、とMock-Caco-2での有意な差はみられなかったが、細細胞内に吸収されたLFの安定性や細胞内局在について

胞溶解液中のLF濃度はOVA濃度の約10倍であり、LF

解析した3)。

に特異的な細胞内取り込み機構の存在が示唆された。

図1Aに示す方法によって、IntL-, Mock-Caco-2細図1Bに示す方法によって細胞内に取り込まれたタンパ

胞により取り込まれるLFの濃度および比較対象としてのク質のその後の動態について定量的に解析した結果、OVAの濃度を定量的に解析した。培養時間の増加に伴

細胞溶解液中のLF濃度は経時的に減少する一方で、い、細胞溶解液中に含まれるLFおよびOVAの濃度は上

培養上清中LF濃度は経時的に増加しており、一旦細胞昇した。LFとOVAの取り込み量について、IntL-Caco-2

内に取り込まれたLFは再び培養上清中に放出されるこ

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第10号

2014年2月とが示唆された。OVA については、細胞溶解液中の濃これらの結果より、Caco-2細胞により取り込まれたLF

度はLFと同様に経時的に減少するが、LFに比べて顕著

はIntLと結合すること、またLFとの結合によってIntLのに低い濃度であった。さらに免疫ブロット法において細胞

細胞内局在が変化し、LFとIntLの複合体としてエンド内に蓄積しているOVAは検出感度以下であったのに対ソームのような特定の細胞内小器官に安定的に蓄積さし、大部分のLFは無傷の状態で検出されたことから、LFれることが示唆された。このようにIntLは腸管上皮細胞

は細胞内に取り込まれた後一定時間は安定に細胞内にによるLFの取り込みのみならず、取り込まれたLFの細胞

留まることが示唆された。また培養上清中のLFは40

内局在および細胞内での安定性に関与する可能性があkDa付近のバンドとして検出されたことから、断片化されると考えられる。

たLFは速やかに細胞外へ放出されることが示唆され
た。

参考文献

1) Suzuki YA. et al., Biochemistry 40, 15771-15779(2001)
2) Jiang R. et al., J Cell Physiol 226, 3022-3031(2011)
3) Akiyama Y. et al., J Biochem 154, 437-448(2013)

次に、蛍光免疫染色法により細胞内に発現するIntL、および培養3時間で細胞内に取り込まれたLFを可視化したところ、IntL-Caco-2細胞において、取り込まれたLFのシグナルがMock-Caco-2と比較して顕著に明瞭であり（図2A）、LFがIntLと頂端側核近傍において共局在している様子が観察された（図2B）。さらに、LF存在下で培養することによってIntL安定過剰発現Caco-2のIntLのシグナルがより明瞭になることから、LFの存在により細胞内でのIntLの局在が変化することが示唆された。

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第10号

2014年2月

日本ラクトフェリン学会
セミナー開催のご案内
2014年5月21日(水)から23日(金)まで、東京ビッグサイトで、第19回 国際食品素材／添加物展・会議 (ifia JAPAN 2014・主催：

日本ラクトフェリン学会ニュースレター
第10号（2014年2月発行）

日本食品化学新聞社)が開催されます。本学会では、昨年に引き続き、食品研究の専門家のみならず、一般の方にもラクトフェリンに関す

ニュースレター編集る知識を深めていただくため、ifia JAPAN 2014で「日本ラクトフェリ

日本ラクトフェリン学会

ン学会セミナー」を開催し、5人の講師の先生方に、ラクトフェリン研

広報委員会

究の基礎から最新の知見までご紹介します。会員の皆様には奮ってご参加いただき、活発なご意見や討論をお願いいたします。

高山喜晴

農業・食品産業技術総合研究

日本ラクトフェリン学会セミナー
日時：5月21日（水）13:00~16:00
場所：東京ビッグサイト�会議棟�

機構

畜産草地研究所吉江弘正

新潟大学大学院

平橋淳一先生（東京大学医学部）

研究科

医歯学総合

教授

森下聡氏（ライオン（株）生命科学研究所）
大槻克文先生（昭和大学医学部）

島崎

中野学氏（森永乳業（株）食品基盤研究所）

北海道大学名誉教授

敬一

小久保年章先生（（独）放射線医学総合研究所）
日本ラクトフェリン学会
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