シリーズ : 世界の健康食品のガイドライン・ガイダンスの紹介
第3回―欧州食品安全機関 (EFSA).
抗酸化・酸化的損傷に関する機能性評価―
鈴木 直子 (SUZUKI Naoko) *1
波多野 絵梨 (HATANO Eri)
1中村 駿一 (NAKAMURA Shunichi)
1
馬場 亜沙美 (BABA Asami)
1

野田金子
柿沼山本

和彦 (NODA Kazuhiko)1
拓矢 (KANEKO Takuya)
1
俊光 (KAKINUMA Toshihiro)
1
和雄 (YAMAMOTO Kazuo)
1

Key Words：欧州食品安全機関 , ヒト試験 , 健康食品 , 抗酸化 , 紫外線 , DNA 鎖切断

Introduction to Guidelines or Guidance for Health Food Productsin the World: European Food Safety Authority (EFSA) series—Functional Assessment of antioxidants and oxidative damage—Keywords: European food safety authority, clinical trials, health food, anti-oxidant, UV light, DNA strand breaks

Authors:Naoko Suzuki1)*, Kazuhiko Noda1), Eri Hatano1), Takuya Kaneko1), Shunichi Nakamura1),
Toshihiro Kakinuma1), Asami Baba1), Kazuo Yamamoto1)*Correspondence author: Naoko Suzuki1)

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New Food Industry (New Food Indust.) 2022 Vol.64 No.5 305

シリーズ : 世界の健康食品のガイドライン・ガイダンスの紹介

はじめに

第 3回

1-2．生体内における抗酸化作用

前回に引き続き，欧州食品安全機関（EuropeanEFSA ガイダンスでは，抗酸化作用は栄養素によFood Safety Authority: EFSA）の発行するガイダンス

るものと栄養素以外によるものがあると記載されて（以下，EFSA ガイダンス）について隔月で紹介する。

いる。そこで，栄養素による抗酸化作用と栄養素以今回は，EFSA ガイダンスの「抗酸化・酸化的損傷外による抗酸化作用について説明する。

に関する機能性評価」の中のアウトカムの設定や科学的根拠の説明などの内容を説明する。

1-2-1．栄養素による抗酸化作用
栄養素であるビタミンや必須ミネラルの中には，

1．抗酸化に関するヘルスクレーム 1）

細胞や分子を酸化的損傷から保護する酵素を活性化

EFSA ガイダンスでは，抗酸化作用を評価するたさせるものがあることが分かっており，ビタミン C，めのアウトカムの種類などが記載されている。そこ

ビタミン E およびセレンは，DNA，タンパク質おで，抗酸化作用を評価するためのアウトカムの種類，よび脂質を酸化的損傷から保護する役割や作用機序注意点などについて以下で説明する。

が確立されていると述べている。また，これらの栄養の必須性については，栄養素の確立された生化学

1-1．光酸化（紫外線）を含む酸化的損傷からの体細胞および分子（タンパク質，脂質，DNA）に対する抗酸化物質の保護作用

タンパク質，脂質，DNA などを紫外線などの光酸化（紫外線）を含む酸化的損傷から保護すること的役割，ヒトの抗酸化ネットワークもしくは抗酸化防御系にかかわる欠乏症状またはそれら全てに基づいて検証されていた。ヒト抗酸化ネットワーク / 抗
酸化防御システムにおけるこれらの役割は，多くの科学的根拠に基づき確立されている。

は，有益な生理学的効果があると考えられている。
実証の際，酸化的損傷からの保護を評価するアウトカムとして，総抗酸化能（Total Reactive Antioxidant

1-2-2．栄養素以外による抗酸化作用
栄養素以外による抗酸化作用は存在するが，以下Potential; TRAP），トロロックス等価抗酸化能（Trolox-のような注意点を述べている。

Equivalent Antioxidant Capacity; TEAC），第二鉄還元 /①ヒトにおける抗酸化ネットワークに属する酵素の抗酸化能（Ferric Reducing Antioxidant Potential; FRAP），機能に関与しているビタミンや必須ミネラルが供酸 素 ラ ジ カ ル 吸 収 能（Oxygen Radical Absorption

給されている状況では，細胞や分子の酸化的損傷

Capacity; ORAC），鉄酸化性キシレノールオレンジからの保護について，抗酸化酵素の誘導が栄養素法（Ferrous Oxidation–Xylenol Orange; FOX）が用い以外による影響とするには不十分である。
同様に，られている。注意点については以下のように記載さ血漿の全体的な抗酸化能の非特定的な変化も十分れている。

な根拠とできない。

①ヨーロッパで発売される健康食品のヘルスクレー②栄養素以外を評価するうえで，抗酸化酵素 { スームは，一般的に欧州連合が定めた食品の強調表示

パ ー オ キ シ ド デ ィ ス ム タ ー ゼ（SOD），カタ

規 則（Regulation（EC）No 1924/2006） に 定 め ら

ラーゼ（CAT），グルタチオンペルオキシダーゼ

れているが，in vitro でのフリーラジカル消去能（GSH-Px），ヘムオキシゲナーゼ（HO）など } のに関する，foods/constituents の特性などの評価は，特異的な誘導や，タチオンやグルタチオン / グル

ヒトにおいても同様の生理学的な効果を発揮するタチオンジスルフィド（GSH/GSSG）比の低下抑か明確ではない。

制の測定結果は，これらの変化により体細胞や分②血漿全体の抗酸化力の評価は，EC No 1924/2006 で子が酸化的損傷から保護される場合にのみ，有要求されるヒトにおける有益な生理学的効果を示

益な生理学的効果があると見なされ，生理学的すかどうかという点において，議論の余地がある。

効果は，in vivo（ヒト）での評価が求められる。

③「早期老化からの細胞の保護」，「健康的な老化」

TRAP，FRAP，TEAC，ORAC ま た は FOX も 同などのヘルスクレームは，EC No 1924/2006 で定様に，血漿の全体的な抗酸化能の非特異的な変化められた基準に準拠していない。

を in vivo（ヒト）での評価が求められる。

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―欧州食品安全機関 (EFSA). 抗酸化・酸化的損傷に関する機能性評価―③紫外線などの光酸化によるダメージを含む酸化合わせることで in vivo において可能である。なお，的損傷から生体内の細胞，分子（a. タンパク質，免疫学的測定は，他のプロスタノイドとの交差反b. 脂質，c. DNA）を保護するといったヘルスク応の可能性があるため，特異性が低く，F2- イソレームは，in vivo（ヒト）での評価が求められる。

プロスタンの測定には適していない。

a~c に対する酸化的損傷は，少なくとも 1 つの適②特異的なモノクローナル抗体などの免疫学的手切なバイオマーカーが必要であるが，これらは損法を用いて血液中の酸化 LDL を測定することで，傷と修復の 2 つのプロセスを含んでいる可能性

in vivo における脂質過酸化の評価が可能である。

や，他の無関係な物質やプロセスの影響を受ける③化学発光液体クロマトグラフィー（CL-LC）を可能性があるため，単独のバイオマーカーで評価用いた血液や組織中の脂質ヒドロペルオキシすることはできない。

ド（ホスファチジルコリンヒドロペルオキシド ;PCOOH など）の測定は in vivo の脂質過酸化のマー

EFSA ガイドラインでは，a~c に関する評価方法カーとして用いられているが，PCOOH と F2- イがまとめられているので，以下でそれらについて紹ソプロスタンを組み合わせて測定することが望ま介する。

しい。
④ 脂 質 過 酸 化 の 評 価 指 標 と し て， チ オ バ ル ビa：タンパク質の酸化的損傷からの保護

ツ ー ル 酸 反 応 性 物 質， マ ロ ン ジ ア ル デ ヒ ド① in vivo のタンパク質の酸化的損傷の直接的な測（Malondialdehyde; MDA）
，パラオキソナーゼおよ定（タンパク質中のアミノ酸の酸化変化の測定なび共役ジエンなどは適切ではないが，血液や組織ど）は，血漿中の分子を他の物質（チロシンニトの MDA 濃度は，MDA 分析に適切な方法（液体ロ化生成物など）から同定・分離することが可クロマトグラフィーなど）が使用された場合のみ，能であれば，液体クロマトグラフィー質量分析

科学的根拠を支持するデータとして用いることが法（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry; LC-できる。

MS）などを使用する。
②ジニトロフェニルヒドラジン誘導体を用いた酵素

c：DNA の酸化的損傷からの保護結 合 免 疫 吸 着 法（Enzyme-Linked Immunosorbent①細胞の DNA 損傷を評価するコメットアッセイAssay; ELISA）によるタンパク質酸化生成物（タ（Single-cell Microgel Electrophoresis; SCGE） の 改

ンパク質カルボニルなど）の測定 { ジニトロフェ

良版（酸化したピリミジンを検出するためにエニ ル ヒ ド ラ ジ ン（dinitrophenylhydrazine; DNPH）

ンドヌクレアーゼ III，酸化したプリンを除去す誘導体後の抗ジニトロフェニル（antidinitrophenyl）るためにホルムアミドピリミジン DNA グリコシ抗体を使用 } は，血液また標識組織（皮膚など）ラーゼを使用など）を用いて，DNA の酸化的損で直接評価する場合にのみ，in vivo のタンパク質傷（DNA の塩基の酸化）を in vivo で直接測定すの酸化的損傷を測定する直接的なバイオマーカーることができる。ただし，この方法は絶対値の測と組み合わせて使用する。また，カルボニル基の定ができず，対照との定量的な比較に使用する。

DNPH 誘導体を含む比色分析などの従来の分析

例えば，生体内を循環しているリンパ球の評価は，は，血漿サンプルに対して，in vivo におけるタン細胞内 DNA の酸化的損傷を直接反映する。

パク質の酸化的損傷の少なくとも 1 つの直接的な②従来の SCGE を用いた DNA 損傷の測定は，DNAバイオマーカーと組み合わせて使用する。

鎖の切断を検出するものであり，酸化的損傷を特異的に評価するものではない。また，ex vivo でb：脂質の酸化的損傷からの保護の Pro-oxidant challenges は，酸化的修飾に対する①脂質の酸化的損傷（脂質過酸化）の直接的な評価抵抗性を確認する方法であり，in vivo での DNAは，24 時間尿中の F2- イソプロスタンの変化をの酸化的損傷の評価として適切ではない。

適切なクロマトグラフィーと質量分析（ガスクロ③血液（リンパ球など），組織（皮膚など）およマトグラフィー質量分析や LC-MS など）を組みび尿中の 8- ヒドロキシ -2- デオキシ - グアノシ
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第 3回ン（8-OHdG） の 測 定 は，DNA の 酸 化 的 損 傷 の① DNA の鎖切断の抑制をヘルスクレームとした食評価に用いられる。尿中の 8-OHdG は，細胞内品は，他の研究での再現性や，作用機序の根拠をの DNA 酸化を直接反映しないが，分析に適切な示すべきである。

方法（液体クロマトグラフィーなど）が使用されていれば，DNA への酸化的損傷の直接測定と組おわりにみ合わせて用いることができる。ただし，遊離の抗酸化作用を有する成分には，栄養素と栄養素以8-OHdG は，酸化的損傷と切除修復に起因し，遊外のものが存在する。特定の栄養素に関しては，科離塩基やヌクレオチドの酸化，他の核酸の酸化，学的根拠の存在が EFSA ガイドラインに記載されてサンプルの処理時の人為的な影響も関与する可能おり，栄養素以外については科学的根拠を明確化さ性がある。

せるための様々な評価法が紹介されていた。また，栄養素以外については，ヘルスクレームに対する適2．DNA 鎖切断からの保護に関するヘルスクレーム

1）

切性を評価するために，1 つの測定方法だけでなくDNA の鎖切断は，DNA 修復過程で自然発生する様々な測定を併せた総合的な判断が求められるものが，環境因子（変異原性物質，酸化促進物質およも存在する。また，
DNA 鎖切断から保護することは，び放射線など）によっても誘発される。このよう細胞機能を維持するうえで重要であるが，このヘルな DNA の鎖切断は，DNA の特性を変化させ，DNAスクレームを謳う際には，作用機序の根拠や再現性の複製や翻訳の過程で異常を引き起こす可能性がを示すことが求められている。

ある。したがって，細胞の機能を維持するために

本稿では，EFSA ガイダンスの中で「抗酸化・酸DNA を鎖切断から保護することは重要である。そ化的損傷に関する機能性評価」について紹介した。

こで，アウトカムは，in vivo で SCGE を測定する方次回は EFSA ガイダンスである「骨・骨粗鬆症リス法としていた（1-2-2 ③ c: DNA の酸化的損傷からのク低減に関する機能性評価」について，アウトカム保護を参照）。注意点は以下の様に記載されている。の種類や注意点等について説明する。

参考文献
1．Turck D, Bresson J, Burlingame B, Dean T, Fairweather-Tait S, et al.: Guidance for the scientiﬁc requirements for health claims related
to antioxidants, oxidative damage and cardiovascular health. EFSA J. 16(1): 1–21, 2018

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