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タンパク質のアミノ酸配列決定�

Figure 7-4 The Edman degradation.

The hypothetical rate of thecarboxypeptidase-catalyzed
release of amino acids.	 
(a) All bonds cleaved at the samerate.(b) Ser slow, Tyr fast, andLeu intermediate.	

蛍光付加物の作成

アミノ酸組成の決定�
加水分解後、蛍光付加物にして分析�Page 169

Figure 7-6 The reversephase HPLC separation ofOPA-derivatized aminoacids.
蛍光付加アミノ酸の分析�

Figure 7-6

Amino acid analysis.

Figure 7-7 The amino acid sequence of a polypeptide chain.

Figure 7-8a The generation of the gas phase ions required for the mass
spectrometric analysis of proteins. (a) By electrospray ionization (ESI).
LysやArgにプロトン化した電荷により分離（0.5~2電荷／kD）�

Figure 7-8b The generation of the gas phase ions required for the mass
spectrometric analysis of proteins. (b) By matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI).

Page 172

Figure 7-8c The generation of the gas phase ions required for the mass
spectrometric analysis of proteins. (c) By fast atom bombardment (FAB).

Figure 7-9

The ESI-MS spectrum of the 16,951-D horse heart
protein apomyoglobin.

m/z=（16,951＋19）÷ 19 =893

98.9%12C, 1.1%13C
0.8%33S, 4.2%34S, 95%35Sの同位体効果�

MALDI-TOF mass spectrometry
コバルトとグリセリンを混ぜたものを田中さんはマトリックスとして用いた。	

matrix-assisted laser
desorptiion-ionization (MALDI)
time of flight (TOF)

MALDI-TOF mass spectrum ofisulin and b-lactoglobulin(5733.5)(18,388)

Figure 7-10

The use of a tandem mass spectrometer (MS/MS) in amino acidsequencing.

Figure 7-11
The tandem mass spectrum of the doubly charged
ion of the 14-residue human [Glu1]fibrinopeptide B (m/z = 786).

m/z=1572/2=786

MW=1572

熱力学の法則１） エンタルピーの定義：H = U + PV
ΔH = ΔU +PΔV, ΔU = ΔQ - ΔW
（第一法則）

U：エネルギー
P：圧力
V：体積
Q：熱
W：仕事

ΔH = ΔQ - ΔW +PΔV = ΔQ - ΔW’
２）エントロピー：Ｓ dS = dQ/T (可逆過程）	
水の蒸発のΔHvap=40.7 kJmol-1でT=373 °Kであるから	

３） ギブスの自由エネルギー：G = H - TS

蒸気になるときのエンタルピー変化	

ΔSvap= 109.1 JK -1
1N = 1 Kg・m・s-2[N・m] = [J]ΔG = ΔH - TΔS（等温条件）	

0.24 cal = 1J = 1 Kg・m2・s-2
1/2・mv2 = 1/2・(2 kg)・(1 m・s-1)2 = 1 Kg・m2・s-2 = 1Nm
質量2 kgが1 m・s-1の速さで動いているものの運動エネルギーに1Jが対応	化学ポテンシャル
化学ポテンシャル（部分モル自由エネルギー）
outin

Ao

Ai

µo = µ゜+ RT・lnAoµi = µ゜+ RT・lnAi!µ = µi"µo = RT・ln(Ao/Ai)
T: Kelvin 温度
R: ガス定数(2cal・mol-1・K-1)

電気ポテンシャル
電気ポテンシャル---電荷を分子がもってい	 ���������れば電位ができる	 
out	in	+	Ao	 	+	Ai		Vo	 	Vi		Go	 =	 FV	 +	 o	 Z	 G゜	 	 Gi		 = Z	 	FVi	 + G゜	 	 	 	-	 Gi	 	 = 	ZF(V	o	 - 	Vi		 )		

Δ	G	 = G	 o

V: 電位		 F: ファラディー常数(2.3 x 104 cal・V-1	・mol -1� )	

(96500クーロン・mol -1�Z:	 電荷数	 )	

電荷をもった物質の濃度差の持つエネルギー!µ+z" = !µ ＋# !G = RT・ln(Ao/Ai) + ZF(Vo - Vi )Vo= 0 mVとすると	 
!µ+z" = -ZF・Vi + RT・ln(Ao/Ai)
ここで平衡時を考えると	 +z!µ" = 0

ZF・Vi = RT・ln(Ao/A i)

Vi = RT/ZF・ln(Ao/Ai) ------ネルンストの式	 
Vo= 0 mVとしたときの平衡時の電気化学ポテンシャル	 平衡電位を求める

RT/ZF=

ジュールmol・K゜
(z)

K゜

ジュール
ボルト・mol= ボルト

平衡電位（ΔΨ）= RT/ZF・ln(Ao/Ai)
8.314 x 298=x 2.303・log(Ao/Ai)
1 x 96500= 0.059・log(Ao/Ai)---volt

平衡膜電位の実際例
平衡電位（ΔΨ）= 0.059・log(１/１０)
outin+1mM Na+10 mM Na

0 mV-59 mV
電位+Na釣り合った状態（平衡電位）= -59 mV ----拡散電位

１ΔpH = -59 mV

バクテリアの運動ペーパークロマトグラフィー1

ペーパークロマトグラフィー2

液体クロマトグラフィー液体クロマトグラフィー
AKTAシステム種々のイオン交換体

pHや塩濃度を変化	させることで調節�

R+A- + B- ⇆ R+ B- + A- 	R+ = 陰イオン交換体�Page 136	

Table 6-2

Some Biochemically Useful Ion
Exchangers.

ゲル濾過クロマトグラフィー（分子量の推定や脱塩も行える）�
VX(ビーズ容積）�

VO(ボイド容量）�

VT,（ベッド容量）＝ VO +VX	

ブルーデキストラン＝	VOのマーカー	よく使われるゲル濾過剤