JAPANESE ASSOCIATION FOR LACTOFERRIN

Lactoferrin NEWS日本ラクトフェリン学会ニュースレター�第14号

2015年6月

巻頭言

第12回国際会議開催にあたって
津田�洋幸

Hiroyuki TSUDA

名古屋市立大学津田特任研究室�教授
1．�巻頭言国際ラクトフェリン会議は1992年からほぼ隔年に開催され、2015年の本会議第12回国際会議開催にあたっで12回目になります。ラクトフェリンは当初見出された抗菌、抗ウィルス、免疫能て���津田�洋幸

増強作用に加えて、炎症と感染防御、創傷治癒促進、がん・疾病予防・抗がん作用、中枢神経の発達への関与、鎮痛作用、歯周病治療、肥満予防等について次々

2. 学会賞受賞研究報告

ラクトフェリンの電荷的相互作用による好中球細胞外トラップ放出 �大久保�光修と新しい作用が判ってきました。単一の乳タンパク質がこのような多機能を担うということは驚きであり、科学的に魅力のある物質であり、本会議において、さらに多くのことが明らかになると期待されます。今回の国際会議は、11月2日（月）から6日（金）まで名古屋市のWestin Nagoya Castle Hotelにて開催されます。アメリカ、カナダ、メキシコ、南米、ヨーロッパ各国、シンガポール、中国、韓国等およそ30カ国の第一線の研究者が参加します。演題は国内外23人の学術委員によって

3.セミナー開催報告

選考されます。詳細な内容、演題申し込み、登録は国際会議ホームページ

HFE/ifiaJAPAN2015第3回<http://plaza.umin.ac.jp/~lactoferin12/greeting.html>をご覧ください。

「日本ラクトフェリン学会セミ

主なカテゴリーは以下のとおりです：ナー」開催報告��村越 倫明

Structure and gene expression（構造と遺伝子発現）
Receptors and localization（受容体とその分布）
Immunomodulating activity（免疫調節作用）
Recombinant and active peptides（組み換え蛋白質と活性ペプチド）
Cell proliferation and differentiation（細胞増殖・細胞分化）
Antimicrobial, antiviral, anti-parasitic activity（抗菌・抗ウィルス・抗原虫)
Neonatal infections (新生児感染症予防と治療)
Brain and CNS development (脳・中枢神経への作用)
Chemopreventive and therapeutic applications (がんと疾病予防)
Dental application (歯科領域への応用)
Weight gain and body composition and obesity control (体重コントロール)
Disease biomarker（疾患バイオマーカー）
Breast milk and Infant formula（母乳・育児用ミルク）
Pregnancy, perinatal and newborn diseases（妊娠・周産期・新生児疾患）
Injury repair（創傷治癒効果）

4.ラクトフェリンセミナープロシーディ
ング＜前半＞✦光老化モデルにおけるラクトフェリンの経口摂取による皮膚状態改善効果��村田 麻衣✦高コレステロール血症・動脈硬化症モデルに対する腸溶
ラクトフェリンの有用性とその作用機序について��中村 佳菜恵
http://lactoferrin.jp/

会員の皆様の積極的な学会発表と参加をお待ちしております。

"1

⽇日本ラクトフェリン学会ニュースレター 　第14号                                                                                                                          2015年年６⽉月

ラクトフェリンの電荷的相互作⽤用による好中球細胞外トラップ放出
大久保 光修�����������������
Koshu OKUBO

慶応義塾大学病院
血液浄化・透析センター

好中球は貪食・脱顆粒に加え自らのクロマチン線維から成る好中球細胞外traps: NETsを細胞外に放出し生体を防御する。NETsは外来微生物を捕捉し生体を防御する一方で自己免疫性疾患、炎症性疾患、血栓症の病態に深く関与する。我々は好中球顆粒成分の一つラクトフェリンが活性酸素発生系と独立にNETs形成を抑制すること、放出されたNETsを凝集させることを見出した。ラクトフェリンの炎症性疾患を始めとするNETs関連疾患への応用が期待される。

好中球は貪食、脱顆粒により生体を防御している重要な役割を持つ白血球である。最近、好中球がクロマチン線維および顆粒蛋白から構成される網目状構造物；NETs(neutrophil extracellular traps)を細胞外に放出し外来微生物を補捉することが新たな生体防御機構として報告されている（図1）。一方でNETsの制御不全は自己免疫性血管炎や、敗血症等の炎症状態、また深部静脈血栓症等の血栓性疾患の病態形成に深く関与していることも明らかにされている。これらのことから安全なNETs制御法の開発は重要な課題となっている。
ラクトフェリン(Lf)は母乳や涙液等の外分泌液や好中

図1�好中球細胞外トラップ(NETs)

球顆粒内に含まれる多機能蛋白であり、炎症状態において生体に保護的に作用するという報告や免疫調整作用

SCG/kjマウスの生存を改善させる物質をスクリーニングを持つという報告がある。臨床的には重症敗血症の新生することでLfを抽出し、LfがNETsの過剰な産生を抑制

児においてLfが生命予後を改善させたという無作為化

し生体に対し保護的に作用するという仮説を立て検証し試験があり、Lfの持つ抗炎症効果が注目を集めている。

た。ヒト末梢血由来好中球にphorbol 12-myristate

我々は自己免疫性血管炎の自然発症モデル動物で13-acetateによる薬理学的な刺激、また、より生理的ヒトの急速進行性糸球体腎炎に類似した病態を呈する

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刺激として活性化血小板、さらには抗好中球細胞質抗"2

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体といった種々の刺激を加え、各々により惹起されたNETsNETsが電荷的に結合すること、さらに陽性電荷を消失さ形成が刺激の種類に関わらず外因性のLfにより顕著にせたLfではNETs形成の抑制が不可能になることを見出抑制されることを、共焦点顕微鏡下生細胞観察およびした。またin vivoにおいて免疫複合体により惹起される培養上清DNAの定量を用いて見出した。また、ヒト骨髄

NETs形成がLf投与によって有意に抑制されることを球系白血病細胞株であり好中球と同様にNETs形成をintravital microscopyにより確認した。本研究におい起こすことが知られているHL-60細胞では、siRNA処置て我々はLfがNETs形成の強力な抑制物質であることをによるLf蛋白のノックダウンによりNETs形成が増強する発見し、そのメカニズムはLfが持つ強い陽性荷電であることが判明し、Lfが内因性のNETs抑制物質であることと考えられた。敗血症をはじめとした炎症状態や血栓性が示唆された。NETs形成におけるLfの局在を免疫染色疾患、あるいは自己免疫性疾患にNETsが深く関連するにより観察したところ、刺激後その局在が細胞質から細ことが明らかにされていることから、Lfがこれらの病態に胞膜に移行した。また、活性酸素産生を検出するプロー対する新たな治療薬として臨床応用されることに期待がブを用いることにより、LfがNETs形成の中心的な役割を寄せられる。

持つとされる活性酸素種産生系とは独立してNETs形成を抑制することが分かった。DNA電気泳動によりLfとhttp://lactoferrin.jp/"3

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HFE  /  ifia  JAPAN  2015  第3回「⽇日本ラクトフェリン学会セミナー」開催報告
村越�倫明�����������������
Michiaki MURAKOSHI

ライオン株式会社
生命科学研究所 所長

本学会は、5月20日（水）に、東京ビッグサイトで開

生方と、次代を担う若手企業研究者に、ラクトフェリンの催されたHFE/ifia JAPAN 2015（第20回国際食品素

様々な機能に関する最新の研究成果について、大変分材/添加物展・会議、日本食品化学新聞社主宰、出展企

かりやすく講演して頂きました。詳細につきましては、各業数；443社、来場者数；31,280人）において、第3回講演者のプロシーディングをご参照頂ければと存じま「日本ラクトフェリン学会セミナー」を開催しました。本セす。

ミナーは隔年開催されている学術集会とは趣を変え、食本セミナーと国際ラクトフェリン会議が、ラクトフェリン品研究の専門家のみならず、一般の方にもラクトフェリンの知名度向上のきっかけになり、ラクトフェリン研究と事に関する知識を深めて頂き、健康づくりに役立てて頂く業の更なる活性化に繋がれば、大変ありがたいことであことを目的に開催致しております。お陰様で今年も100�
名を越える聴講者にご参集頂き、セミナー会場が満席にると願っております。また、日本への国際ラクトフェリン学なる程の盛況ぶりでした。

す。参加者は国内200名、国外150名を予定しておりま会の招聘は、1999年の札幌大会に続き2回目となりま

本年のセミナーのテーマは2015年11月2日（月）〜す。皆様のふるってのご参加をお待ちしております。

6日（金）に名古屋市のウェスティンナゴヤキャッスルで末筆となりますが、本セミナー開催にあたり、講演者開催を予定しております第12回国際ラクトフェリン会議の先生方、スタッフの皆様のご尽力に心から感謝申し上(http://www.lactoferrin-conference.com/）のごげます。

紹介で、新たに国際学会の実行委員になって頂いた先セミナーの様子

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セミナーの講演者とスタッフ一同"4

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光⽼老老化モデルにおけるラクトフェリンの経⼝口摂取による⽪皮膚状態改善効果  村田 麻衣�����������������
�Mai MURATA

森永乳業株式会社
食品基盤研究所

ラクトフェリン（LF）は、抗菌・抗ウイルス作用や抗炎症作用、抗酸化作用など多彩な生理機能を示す乳タンパク質である。哺乳動物の乳や粘膜に存在し、生体がさらされる様々な局面において防御機能を発揮しているものと推察される。
我々の研究グループでは、感染防御作用を起点として、ヒトの健康維持に有用なLFの生理機能について研究を重ねてきた。本稿では、光老化モデルを用いた検討において新たに見出した皮膚老化に対するLFの効果について紹介する。

1.光老化モデルにおけるLFによる皮膚

これまでのin vitro研究では、LFが紫外線によるDNA障害を減弱すること1,2)、皮膚由来の表皮角化細胞や線の保護効果

維芽細胞の増殖や遊走活性を制御すること3,4)、ヒアル

皮膚は、生体のホメオスタシスを維持し、外界からのロン酸やコラーゲンの合成を促進すること5)が報告され刺激や病原体から防御するバリア機構である。紫外線へている。一方で、in vivoにおけるLFの皮膚に対する作用の曝露は、活性酸素の生成や炎症を引き起こし、やがては未知であり、我々はLFの摂取が紫外線に対して保護皮膚のバリア機能の低下や乾燥、しわに代表される光老的に作用し皮膚に有益な効果をもたらすことを期待し、化を誘導する。

光老化モデルを用いて検討を行った。

図1�光老化モデルにおけるLFの皮膚バリア機能の改善*p < 0.05 vs. UV照射対照群(Murata et al., J Dairy Sci, 2014)

http://lactoferrin.jp/"5

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図2�UVB照射による表皮層の肥厚に対するLFの抑制作用(Murata et al., J Dairy Sci, 2014)

ヘアレスマウスに紫外線B波（UVB）を反復的に照射物の投与により、‘しわ’の深さがいずれも有意に低下しする光老化モデルを用いて、LFの投与による皮膚バリアていた。さらに病理組織学的観察を行ったところ、表皮機能および皮膚水分量に及ぼす影響を検討した。

層や基底膜の状態に改善が認められた。以上の結果か

LF（1600 mg/kg/day）の経口投与と同時にUVB照射

ら、ペプシンによる消化を受けたLF分解物においても、による皮膚の光老化を誘導し、皮膚状態の評価を行っ

LFと同様にUVB照射による表皮の構造変化やバリア機た。その結果、LFの投与により、皮膚のバリア機能低下能を改善し、‘しわ’形成を抑制したことが明らかになっが改善し、皮膚水分量の低下が軽減された（図1）。さらた（図3）。経口摂取したLFやその分解物は、腸管免疫に、UVB照射で亢進する皮膚の炎症パラメーターを介して全身の免疫系へ作用し、さらに抗炎症作用を発（IL-1）が抑制され、表皮角化細胞の過増殖や重層化を揮したと考えられるが、さらなる作用機序の解明が期待改善する様子が確認された（図2）。これらのことから、される。

LFは皮膚局所における炎症をおさえ、表皮層や基底膜総括の状態を正常化することで皮膚状態を改善した可能性が示唆された6)。

本研究では、新たなLFの生理機能として、紫外線による光老化に対する皮膚状態の改善効果を見出した。

2.LF・LF分解物による‘しわ’の予防効果

LFは、ほぼ全ての哺乳類の体内に存在し仔に哺乳するつぎに、未分解のLFとの比較として、胃消化酵素で成分である。出生直後の新生児は、胎内とは異なる環あるペプシンで加水分解したLF分解物を用いて光老化境中の病原体や紫外線、活性酸素などのストレス因子モデルにおける‘しわ’の予防効果を検証した。LFまたはにさらされるが、母乳中のLFは急激な環境変化への適LF分解物（各50, 200 mg/kg/日）を経口投与しなが応機構として機能していることが考えられる。こうした紫ら反復的にUVB照射し、ヘアレスマウスの背部皮膚外線に対するLFの防御作用は、乳児のみならず大人にに’しわ’形成を誘導した。その結果、LFおよびLF分解おける機能性食品素材としても活用が期待される。

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図3�LF・LF分解物による皮膚状態改善の作用機序

謝辞

参考文献
1) Shimmura, S., et al., Exp Eye Res 63(5):519-526,

本研究は、東京農工大学農学部との共同研究として

1996.

実施し、野村義宏先生のご指導を賜りました。ここに深く

2) Ogasawara, Y., et al., Int J Mol Sci 15(1):

感謝の意を表します。

1003-1013, 2014.
3) Tang, L., et al., Wound Repair Regen 18(1):123-131, 2010.
4) Tang, L., et al., Br J Dermatol 163(1):38-47, 2010.
5) Saito, S., et al., Biotechnol Lett 33(1):33-39, 2011.
6) Murata, M., et al., J Dairy Sci 97(2):651-658,
2014.

http://lactoferrin.jp/"7

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⾼高コレステロール⾎血症・動脈硬化症  モデルに対する腸溶ラクトフェリンの有⽤用性
中村�佳菜恵������
Kanae NAKAMURA

ライオン株式会社
生命科学研究所

1.メタボリックシンドロームと動脈硬化症について

2.腸溶ラクトフェリンの高コレステロール血症・動脈硬化症予防作用

メタボリックシンドロームは、内臓脂肪型肥満に加え、我々はこれまでに肥満傾向の健康な日本人男女26高血糖、高血圧、脂質異常のうち2つ以上を合併した状人を対象として、二重盲検群間比較試験を実施し、腸溶態を指す。メタボリックシンドロームは動脈硬化症の発症ラクトフェリン(LF)が内臓脂肪を有意に低減させることをリスクを高めること、動脈硬化症は心疾患や脳血管疾患明らかにしている。そこで我々は、LFが動脈硬化症に対などの重篤な疾患を引き起こすことが知られており、メタしても抑制作用を示すと予想し、鹿児島大学の川口准教

ボリックシンドローム及び動脈硬化症の予防は、日本医授らがマイクロミニピッグを用いて確立した、食餌誘導性療における重要な課題であると言える。

動脈硬化症モデルにて、腸溶LFの有効性を評価した。

図1. マイクロミニピッグの動脈の組織学的解析結果(左) 右冠状動脈の組織学的解析結果(右) 組織学的解析結果に基づき分類した、各動脈における動脈硬化度
http://lactoferrin.jp/"8

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図2.LFのコレステロール吸収抑制作用仮説(HFCD)及び腸溶LF(LFとして500 mg/body/day) を3.ラクトフェリンのコレステロール吸収抑制作用8週間投与したところ、HFCD投与により上昇した血清総� 食物から摂取されたコレステロールは、小腸に到達後、コレステロール及びLDLコレステロール濃度が、有意に胆汁酸等が構成するミセルに溶け込み、体内へと吸収さ低下した。一方、HDLコレステロールに関しては、腸溶LFれる。塩基性蛋白質であるLFは、小腸内ではプラスに帯投与による低下は認められなかった。また、15の動脈を電する為、マイナスに帯電する胆汁酸と小腸内で相互作組織学的に解析したところ、HFCD投与により複数の動用すると推察される。我々は、この相互作用により、コレス脈に動脈硬化層が形成されたのに対し、腸溶LFを投与テロールのミセルへの可溶化が阻害され、小腸におけるすると動脈硬化層の形成が抑制されることが示された

コレステロール吸収が抑制されると考えた。そこで、本仮(図1)。

説を検証するために、以下の3つの検討を実施した(図マイクロミニピッグに、高脂肪高コレステロール餌

2)。

これらの結果より、腸溶LFは、高コレステロール血症及び動脈硬化症に対して予防効果を発揮することが示された。

http://lactoferrin.jp/"9⽇日本ラクトフェリン学会ニュースレター 　第14号                                                                                                                                                            2015年年6⽉月

図3.LFのコレステロール吸収抑制作用仮説の検証結果(左) ラットにおけるLFのコレステロール排出促進効果(右)モデル小腸内溶液におけるLFのコレステロール不溶化作用①LFによる糞中へのコレステロール排出量の増加の相互作用が確認された。さらに、小角X線散乱法を用

高コレステロール負荷ラットに対してLFを3週間混餌いた解析から、LF添加によって、モデル小腸内溶液中の投与し、最後の二日間の糞を回収した。摂取したコレスミセルサイズが増大すると共にミセル形状が球状から楕

テロールの一部は、腸内細菌によってコプロスタノール円状に変化することを確認した。我々は、これらの変化へと代謝されることから、コレステロール排出促進の指が、LFのコレステロール吸収抑制作用に関与しているの標として、コレステロールとコプロスタノールを合算したではないかと推察している。

中性ステロイドを測定した。その結果、LF投与による、以上の検討より、LFのコレステロール吸収抑制作用糞中への中性ステロイド排出量の有意な増加が認めらは、LFの高コレステロール血症及び動脈硬化症予防作れた(図3.左)。

用に寄与していることが示唆された。

②モデル小腸内溶液における可溶化コレステロール量の減少

謝辞

高コレステロール負荷ラットの小腸内脂質組成を解

本研究は、鹿児島大学 谷本昭英教授、鹿児島大学析し、その組成を基にモデル小腸内溶液を作製した。こ川口博明准教授、東京大学 加藤久典特任教授、東北の溶液にLFを添加したところ、LF濃度依存的に可溶化大学 池田郁男教授、京都府立医科大学 西野輔翼特任

コレステロール量が減少した(図3.右)。

教授のご指導を賜りました。ここに深く感謝の意を表しま③LFと胆汁酸の相互作用す。

等温滴定型熱量測定より、LF溶液に対する胆汁酸溶液の滴下による吸熱ピークが観測され、LFと胆汁酸

http://lactoferrin.jp/"10

⽇日本ラクトフェリン学会ニュースレター 　第14号                                                                                                                                                          2015年年６⽉月

第12回国際ラクトフェリン会議  優秀演題賞のご案内  本年11月に、第12回国際ラクトフェリン会議が名古屋市のウェス日本ラクトフェリンチンナゴヤキャッスルで開催されます。国内外のラクトフェリン研究

学会ニュースレター者が一同に会する貴重な機会ですので、会員の皆様には奮ってご参加いただき、活発なご意見や討論をお願いいたします。

第14号（2015年年6⽉月発⾏行行）  なお、2015年11月2日現在で35歳以下の学部学生、大学院生（修fellow）を選考対象とした優秀演題賞を国内外から最大10名までニュースレター編集日本ラクトフェリン学会選考のうえ授与します。副賞は、65,000円の宿泊費（ビジネスホテ広報委員会士課程及び博士課程在籍者）および博士研究員（postdoctoral

ル5泊相当額）とGala Dinnerの招待券です。
優秀演題賞の申請には、年齢を証明する学生証のコピー（pdf）（ま高山喜晴

たは在籍証明書）および英文による指導者の推薦状（発表内容要旨農業・食品産業技術総合研究と申請者の貢献を明記、300語程度）を津田洋幸学会長

機構

畜産草地研究所

島崎敬一（htsuda@phar.nagoya-cu.ac.jp）にメールで提出してください。
締め切りは2015年8月30日です。

北海道大学名誉教授

����国際ラクトフェリン会議ホームページ（和文）����http://plaza.umin.ac.jp/~lactoferin12/awards.html

日本ラクトフェリン学会
事務局                    事務局   　 　 　名古屋市⽴立立⼤大学 　津⽥田特任教授研究室  〒232-‐‑‒0024    横浜市南区浦⾈舟町4-‐‑‒57                        〒467-‐‑‒8603 　名古屋市瑞穂区⽥田辺通3-‐‑‒1                          TEL  /  FAX：052-‐‑‒836-‐‑‒3497  横浜市⽴立立⼤大学附属  市⺠民総合医療療センター                          第12回国際ラクトフェリン会議 　運営事務局                          株式会社JTB中部  GLOBAL 　MICE事業部 　   　 　 　 　コンベンションデスク内                          〒460-‐‑‒0002 　名古屋市中区丸の内1-‐‑‒17-‐‑‒19   　 　 　 　キリックス丸の内ビル7F                          TEL：052-‐‑‒211-‐‑‒6733 　FAX：052-‐‑‒231-‐‑‒1322 　   　     　TEL:  045-‐‑‒261-‐‑‒5656         　 　 　 　 　 　  内線1871          FAX:  045-‐‑‒253-‐‑‒9902 　 　E-‐‑‒mail:     　lacto@yokohama-cu.ac.jp

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