Instrumental Analysis Services

Amino Acid Analysis

アミノ酸組成分析をご依頼の⽅へ•

当部⾨のアミノ酸組成分析•

提出試料の調製及び提出上の注意点•

スムーズなご依頼のためのヒント•

データの読み⽅•分析申込上の注意点•

分析スケジュール

2019年5⽉版
北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨

1

当部⾨のアミノ酸組成分析

Amino Acid Analysis

分析項⽬

標準分析

⾼感度分析

遊離アミノ酸分析

測定アミノ酸17アミノ酸17アミノ酸40アミノ酸測定⽅法

ニンヒドリン法

NBD-F法ニンヒドリン法

使⽤機種

L-8900(⽇⽴)

LaChromUltra(⽇⽴)

L-8900(⽇⽴)

2時間

10分間

5時間

測定時間/1測定
定量範囲

0.2〜20nmol(アミノ酸種により異なります)

20pmol〜

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨

0.2〜20nmol(アミノ酸種により異なります)2

当部⾨のアミノ酸組成分析
分析⽅法Amino Acid Analysis

ー 標準分析 ー試料秤量
共沸塩酸(ミクロ天秤)
添加

ガラス細工

減圧脱気，封管加⽔分解

110℃
24hr加熱開管， 0.02M塩酸
減圧乾固 に再溶解

アミノ酸
分析計
で測定

データ
解析

ニンヒドリン反応

タンパク質，ペプチドはアミノ酸鎖

Asp

Thr

His

LysSer・・・

共沸塩酸(約6M)，110℃24hr

キリヤ化学http://www.kiriyachem.co.jp/q&a/q54.html
His

アミノ酸

LysSer

Asp
Thr

L-8900(アミノ酸⾃動分析計)

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨

3

当部⾨のアミノ酸組成分析
分析⽅法Amino Acid Analysis

ー 遊離アミノ酸分析 ー

必要に応じて，0.02M塩酸を加える

アミノ酸
分析計
で測定

データ
解析

ニンヒドリン反応

L-8900(アミノ酸⾃動分析計)

キリヤ化学http://www.kiriyachem.co.jp/q&a/q54.html

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨4

提出試料の調製及び提出上の注意点

Amino Acid Analysis【標準分析，遊離アミノ酸分析共通事項】
・

浮遊物の混⼊に注意して下さい。

・

塩類は除いて下さい。
測定の妨害または装置不調を招く場合があります。

【標準分析】
・

試験管で提出される場合はΦ12×120mmの⼤きさのものを使⽤して下さい。
(当分析室では耐久性，清浄性を確認したガラス試験管を⽔洗後，500℃で4時間以上加熱処理したものを使⽤しています)・

試験管でご提出の場合は，底にのみ溜まるようにして下さい。
（管の真中より上部は切断するため加⽔分解されない場合があります。)

加⽔分解における試験管の形状変化
管上部に付着した試料
管底へ
落せた試料

ガラス細⼯

焼切り
封かん

分解されない部分→誤差の原因に
加⽔分解，分析へ

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨5

スムーズなご依頼のためのヒント

⼀般的なアミノ酸

Amino Acid Analysis

共沸塩酸(約5.7M,0.1%フェノール含有)で110℃，24時間加⽔分解•

⼀般的な加⽔分解法ですが，アミノ酸によっては分解してしまうものもあるため(Ser，Thrなど)，分解時間を変えると結果が変わります。継続実験
は途中で分解条件を変えないことをお勧めします。

•

Asn，Glnは酸化され，Asp，Gluとして検出します。

•

Trp，Cystine，Cysteineは⼤部分が分解してしまうため，定量が必要な場合，別の⽅法を選択して下さい。

•

疎⽔性アミノ酸の完全加⽔分解は⻑時間を要します。この場合の定量は要相談です。

•

内標準物質の添加をご希望の場合，n-Leuを使⽤しますので，申込の際に「n-Leu」もご選択下さい。

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨6

スムーズなご依頼のためのヒント

その他

Amino Acid Analysis

トリプトファン
4Mメタンスルホン酸(0.2%トリプタミン含有)で110℃，22時間加⽔分解
3Mメルカプトエタンスルホン酸に変わって，Trpが回収される⽅法として検討しました。
60kDaの純タンパクにおけるトリプトファン回収率は，90%程度です。
試料特性による影響は未確認の部分もあることをご理解の上，ご利⽤ください。

シスチン，システイン，メチオニン「過ギ酸酸化法」または「還元法」で定量が可能になります
過ギ酸酸化法 － 加⽔分解前に過ギ酸酸化処理を⾏い，システイン酸及びメチオニンスルホンとして定量します。
他のアミノ酸は分解される場合もあるため，酸化処理をせずに加⽔分解し測定することをお勧めします。
申込の際，CysO3H，MetO2をご選択下さい。

還元法 － 加⽔分解前に2-メルカプトエタノール等の還元剤で還元処理を⾏い，S-カルボキシメチルシステインとして定量します。他のアミノ酸については過ギ酸酸化法と同様です。
申込の際，CM-Cysをご選択下さい。

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨7

データの読み⽅
標準分析
1頁目

①

Amino Acid Analysis

3頁目（nmol/40μL）

それぞれのアミノ酸の定量範囲から外れた値は正しく定量されていないことがあります。誤差を少なくするためには，提出サンプル量を増やす，希釈測定を希望するなどして，再度依頼して下さい。
表⽰値は測定機に注⼊した溶液中(40μL)のアミノ酸量です。
ご⾃分の欲しい単位量に換算して下さい。

（nmol/40μL）

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨「アミノ酸分析をご依頼の⽅へ」を同封していますので，データを読む際の参考にして下さい。

8データの読み⽅
遊離アミノ酸分析
1頁目②

Amino Acid Analysis

3頁目（nmol/40μL）

定量範囲はアミノ酸により異なります。
概ね，同封の標準溶液濃度の1/10〜10倍です。
この範囲から外れた値は正しく定量されていないことがあります。
しかし，｢Trace」でも良い場合があります。
先⾏⽂献を参考に，再測定が必要かご判断下さい。
表⽰値は測定機に注⼊した溶液中(40μL)のアミノ酸量です。
ご⾃分の欲しい単位量に換算して下さい。

2頁目「アミノ酸分析をご依頼の⽅へ」を同封していますので，データを読む際の参考にして下さい。

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨

9

分析申込上の注意点

Amino Acid Analysis

申込⽅法

ログイン
分析申込分析項⽬選択

申込内容⼊⼒
申込内容⼊⼒北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨

10

分析申込上の注意点

Amino Acid Analysis

申込⼊⼒内容試料名は英数字10⽂字以内分析項⽬を選択。
分析回数も必須です。

＊

は，⼊⼒必須項⽬です。
⼊⼒漏れがあると，申込みを進められなくなっています。

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨

11

分析申込上の注意点

Amino Acid Analysis

申込⼊⼒内容分析の参考にご記⼊ください。
「試料の由来」はデータベース上に保存しません。

⼊⼒必須項⽬。
再測定の要不要を指⽰してください。

⼊⼒必須項⽬。
タンパク質含有率と提出試料量より，アミノ酸検出値を予測し，分析フローを作成します。

適した分析を⾏うための調査です。

適した保管条件をお知らせください。

ご⾃⾝でご選択，ご指定ください。
函館キャンパスの⽅は，学内便をご利⽤いただけます。

＊は，⼊⼒必須項⽬です。

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨12

分析申込上の注意点
参考情報̶Amino Acid Analysis

標準分析における必要試料量試算とアミノ酸定量可否を試算するための計算例—

タンパク質を構成するアミノ酸を20種，分⼦量は各アミノ酸で異なるため，平均分⼦量を100として試算例を⽰します。
測定機の定量範囲は，0.2 〜 20 nmol / 40μL，即ち5 〜 500 nmol / 1mLとします。

[分析申込̶申込⼊⼒内容̶試料情報1]【 例1 】タンパク質を含む固体試料 100μg を加⽔分解して，アミノ酸を定量分析①

タンパク質含有率が100%の試料の場合アミノ酸の平均分⼦量100で割り，総アミノ酸モル数にします。
100μg ÷ 100 = 1 μmol（総アミノ酸モル数）
タンパク質が，20種のアミノ酸で平均的に構成されているとして，1種のアミノ酸モル数にします。
1 μmol ÷ 20 = 0.05 μmol（1アミノ酸当たりのモル数）
加⽔分解後に塩酸を留去した後，0.02M塩酸で再溶解する溶液量を400 μLとします。
0.05 μmol ÷ 400 μL = 0.000125 μmol / 1 μL = 0.125 nmol / 1μL（1アミノ酸当たりの濃度）
測定機に注⼊する40 μL当たりの濃度にするため，分⺟及び分⼦に40を掛けます。
0.125 nmol /1 μL ×40/40 = 5 nmol /40 μL > 0.2 nmol /40 μL〇 定量範囲内。

②

タンパク質含有率が1%の試料の場合※ ここに関係

試料量は100μgで可タンパク量を求める。
100 μg × 0.01 = 1 μg
以下①と同様に求める。
1 μg ÷ 100 = 0.01 μmol（総アミノ酸モル数）0.01 μmol ÷ 20 = 0.0005 μmol（1アミノ酸当たりのモル数）
0.0005 μmol ÷ 400 μL = 0.00000125 μmol / 1 μL = 0.00125 nmol / 1μL（1アミノ酸当たりの濃度）
0.00125 nmol /1 μL × 40/40 = 0.05 nmol /40 μL < 0.2 nmol /40 μL【 例2 】タンパク質を含む培地溶液試料 100μL を加⽔分解して，アミノ酸を定量分析。塩類を10％含み，タンパク質含有率は30％。

× 定量範囲外。試料量は400μg以上必要。

タンパク量を求める。
100 μL × 0.3 = 30 μg
以下【例1】①と同様に求める。
30 μg ÷ 100 = 0.3 μmol（総アミノ酸モル数）
0.3 μmol ÷ 20 = 0.015 μmol（1アミノ酸当たりのモル数）
0.015 μmol ÷ 400 μL = 0.0000375 μmol / 1 μL = 0.0375 nmol / 1μL（1アミノ酸当たりの濃度）
0.0375 nmol /1 μL × 40/40 = 1.5 nmol /40 μL < 0.2 nmol /40 μL

× 定量範囲外。試料量は130μL以上必要。

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨13

分析スケジュール
予約制

Amino Acid Analysis

アミノ酸組成分析は１度に，標準分析では10試料，遊離アミノ酸分析では5試料程度ずつ分析するのが効率的です。そのため，コストパフォーマンスとスタッフ体制並びに過去の受託実績を考慮して，予約制にしております。予約はお電話にて承り，ご依頼内容を確認の上，分析予定⽇をご案内させていただきます。
分析予定および予約状況は，WEBからもご確認いただけます。

標準分析

遊離アミノ酸分析
または10試料毎

5試料毎＊

2週毎に分析

不安定試料(グルタミン測定など)，多数同時申込，及び緊急を要する申込の際には，どうぞご相談ください。

WEBサイト– 装置稼働状況より確認したい週の⽉曜⽇の⽇付にポインターを当てると，予約状況を確認できます
北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨14

Amino Acid Analysis

参考資料があります。
WEBサイトもご覧下さい。
ご不明な点はお気軽にお問い合わせ下さい。
内線9247E-mailaaa@gfc.hokudai.ac.jp【アミノ酸組成分析】
https://www.gfc.hokudai.ac.jp/system/ias/doc/aaa_top

北海道⼤学 創成研究機構 グローバルファシリティセンター 機器分析受託部⾨15