信州医誌，60⑸：261〜341，2012

信州大学において審査された医学博士論文要旨
氏
名(所属講座)

学位授与
番
号

授与年月日

博

士

論

文

名

学位審査委員主査

副査

天 野 勇 治 甲第871号（免疫･微生物学）

23. 3.31 Hrs recognizes a hydrophobic amino acid 鎌 田
cluster in cytokine receptors during ubiquitin‑
independent endosomal sorting（ユビキチン
非依存的な小胞輸送において Hrs はサイトカ
イン受容体の疎水性アミノ酸クラスターを認識する）

三 澤 由 佳 甲第872号（小児医学）

23. 3.31 Vitamin D induces expression of human 小 池 健 一 塩 沢 丹 里
谷口俊一郎
cathelicidin antimicrobial peptide 18 in newborns（新生児においてビタミンＤ は humancathelicidin antimicrobial peptide 18の発現を誘導する）

池 川 茂 樹 甲第873号
（スポーツ
医科学）

23. 3.31 Eﬀects of hypohydration on thermoregula- 岡 元 和 文 久 保 惠 嗣
川眞田樹人
tion during exercise before and after 5‑day
aerobic training in a warm environment inyoung men（若年者における急性低体液量負荷
が５日間の暑熱下トレーニング前後の運動時体温調節反応に与える影響）

一 瀬 泰 之 甲第874号
（器官制御
生理学）

23. 3.31 Prospective Randomized Comparison of 田 中 榮 司 大 橋 俊 夫
宮川眞一
Cold Snare Polypectomy and Conventional
Polypectomyfor Small Colorectal Polyps（大腸 小 ポ リ ー プ に 対 す る Cold polypectomyとConventional polypectomyの有用性の比 ）前 島 大 輔 甲第875号
（器官制御
生理学）

23. 3.31 Platelet‑derived‑growth factor (PDGF)‑BB 山 田 充 彦 池 田 宇 一
奥山隆平
produces NO‑mediated relaxation and PDGF‑
receptor beta‑dependent tonic contraction inmurine iliac lymph vessels（PDGF‑BB によるマウス腸骨リンパ管における NO 依存性の弛緩反応と PDGF‑β受容体を介した収縮反応の機能特性）

川 口 政 徳 甲第876号
（循環器
病態学）

23. 3.31 Inﬂammasome Activation of Cardiac Fibrob- 瀧
lasts Is Essential for Myocardial Ischemia/
Reperfusion Injury（心筋虚血再灌流傷害における心線維芽細胞のインフラマソーム活性化の役割）

高 橋 京 子 甲第877号（代謝制御学）23. 3.31 Pretreatment by low‑dose ﬁbrates protects 田 中 榮 司 西 澤理
山田充彦
against acute free fatty acid‑induced renal
tubule toxicity by counteracting PPARαdeterioration（低用量フィブラートの前治療
は，ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体 α型の機能低下を阻止して，遊離脂肪酸による急性
腎尿細管毒性に対し保護作用を発揮する）

No. 5, 2012

徹 谷口俊一郎
中山
淳

伸介 天野
純
山田充彦

261

審査学位論文要旨

渡 辺 智 治 甲第878号（画像医学）

23. 3.31 Infraorbital nerve swelling associated with 田 中 榮 司 村 田 敏 規
中山淳
autoimmune pancreatitis（自己免疫性膵炎に伴う眼窩下神経腫大）髙津亜希子 甲第879号（分子腫瘍学）22. 9.30 Preoperative Diﬀerential Diagnosis of Mini- 中 山

堀 込 充 章 甲第880号
（循環器
病態学）

23. 3.31 Risk Evaluation for Coronary Artery Disease 駒 津 光 久 天 野純
角谷眞澄
in Patients with Impaired Glucose Tolerance
after a Successful Coronary Intervention（経皮的冠動脈形成術後の耐糖能異常患者における冠動脈疾患のリスク評価）

NUNUNG 甲第881号
NUR
RAHMAH（脳神経外科学）

23. 9.30 Correlation between squamous suture and 角 谷 眞 澄 森 泉 哲 次
池田修一
Sylvian ﬁssure:Osirix DICOM viewer study（鱗状縫合とシルビウス裂溝の関係― Osirix
DICOM VIEWER を用いて―）王
立 軒 甲第882号（代謝制御学）23. 9.30 Kidney transplantation recovers the reduc- 山 田 充 彦 佐々木克典
駒津光久
tion level of serum sulfatide in ESRD patients

mal Deviation Adenocarcinoma and Lobular
Endocervical Glandular Hyperplasia of the
Uterine Cervix
A Multicenter Study of Clinicopathology andM agnetic Resonance Imaging Findings（子宮頸部最小偏倚腺癌および分葉状頸管腺過形成の術前診断に 関 す る 臨 床 病 理 学 的 因 子 お よ び
M RI 画像による多施設研究）

淳 本田孝行西澤理

via processes correlated to oxidative stressand platelet count（腎移植は，酸化ストレスや血小板数と関連した機構により，末期腎機能障害患者の血清スルファチド値を回復させる）
張暁
甲第883号（代謝制御学）24. 3.31 Acute kidney injury induced by protein‑over- 山 田 充 彦 佐々木克典
駒津光久
load nephropathy down ‑regulates gene
expression of hepatic cerebroside sulfotransferase in mice, resulting in reduction of liverand serum sulfatides（蛋白質過負荷腎症マウスに生じる急性腎障害は，肝臓セレブロシドス
ルホトランスフェラーゼの遺伝子発現を抑制し，肝臓及び血清中のスルファチド量を減少させる）王
耀 勇 甲第884号（加齢生物学）23. 9.30 ApoA‑ deﬁciencyin mice is associated with 谷口俊一郎 青 山 俊 文
鈴木龍雄
redistribution of apoA‑ and aggravated
AApoA amyloidosis（マウスアポリポタン
パク質Ａ‑ の欠損はアポリポタンパク質Ａ‑の再分配と AApoA アミロイドーシスの悪化を伴う）

青 木 哲 宏 甲第885号（運動機能学）24. 3.31 Generation of induced pluripotent stem cells 佐々木克典 池 田 宇 一
西澤理
from human adipose‑derived stem cells without c‑M YC（c‑MYC を用いないヒト脂肪組
織由来幹細胞からの人工多能性幹細胞の樹立）

262

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

齋 藤 章 治 甲第886号（小児医学）

23. 3.31 Genetic analysis of TP53 in childhood 谷口俊一郎 宇佐美真一
福嶋義光
myelodysplastic syndrome and juvenile
myelomonocytic leukemia（小児骨髄異形成症
候群および若年性骨髄単球性白血病における
TP53遺伝子の解析）

荻 原 裕 明 甲第887号（外科学⑴）

24. 3.31 Role of Deletion Located between the Inter- 宮 川 眞 一 中 山
淳
竹
下
敏
一
mediate and M iddle Regions of the
Helicobacter pylori vacA Gene in Cases
of Gastroduodenal Diseases（Helicobacter
pylori vacA遺伝子内のintermediate region とmiddle region の間に存在する塩基配列欠損の
胃十二指腸疾患における役割について）荒 居 琢 磨 甲第888号
（発生再生
医学）

24. 3.31 Induction of LYVE‑1/stabilin‑2‑positive 樋 口 京 一 福 嶋 義 光中山淳
liver sinusoidal endothelial ‑like cells
from embryoid bodies by modulation ofadrenomedullin‑RAM P2 signaling（ES 細 胞
胚様体分化系を用いた，アドレノメデュリン‑
RAMP2シグナル制御によるLYVE‑1/stabilin‑2陽性肝類洞内皮様細胞の分化誘導）横 山 隆 秀 甲第889号（外科学⑴）

23. 3.31 Transabdominal preperitoneal repair for 西 澤
obturator hernia（閉 鎖 孔 ヘ ル ニ ア に 対 する Transabdominal preperitoneal repair（TAPP）法による腹腔鏡下ヘルニア修復術）

日根野晃代 甲第890号（内科学⑶）

23. 3.31 Ceruloplasmin Protects Against Rotenone‑ 森 泉 哲 次 樋 口 京 一
鈴木龍雄
Induced Oxidative Stress and Neurotoxicity（セルロプラスミンはロテノンによる酸化スト
レスと神経毒性に対して防御的作用を有する）

牛 木 淳 人 甲第891号（内科学⑴）

23. 3.31 Bronchoscopic M icrosampling for Bacterial 本 田 孝 行 竹 下 敏 一
駒津光久
Colony Counting in Relevant Lesions inPatients with Pulmonary Mycobacterium
avium Complex Infection（気管支鏡下マイク
ロサンプリング法を用いた肺 Mycobacterium
avium complex 感染症患者の病変局所における菌量の検討）羽 田 健 紀 甲第892号
（循環器
病態学）

23. 3.31 Critical role of Th17 cells in inﬂammation 中 山
and neovascularization after ischaemia（虚血下の炎症および血管新生における Th17細胞の重要な役割）山田
哲 甲第893号（画像医学）

23. 3.31 Quantitative Evaluation of Liver Function 宮 川 眞 一 田 中 榮 司
山田充彦
with Use of Gadoxetate Disodium‑enhanced（ガドキセト酸ナトリウム造影
M R Imaging
M RI を用いた定量的肝機能評価）

内 川 裕 司 甲第894号（外科学⑴）

24. 3.31 Administration of dalteparin based on the 池 田 修 一 天 野純田中榮司activated clotting time for prophylaxis ofhepatic vessel thrombosis in living donorliver transplantation（生体肝移植時の抗肝血管血栓療法としての活性化凝固時間に基づいた
ダルテパリン投与）

No. 5, 2012

理 田中榮司塩沢丹里

淳 山田充彦天野純

263

審査学位論文要旨

上條
敦 甲第895号（内科学⑵）

24. 3.31 Cytokine proﬁles aﬀecting the pathogenesis 瀧

伊 藤 哲 也 甲第896号（内科学⑵）

24. 3.31 A Novel Heterophilic Antibody Interaction 田 中 榮 司 宮 川 眞 一
本田孝行
Involves IgG4（異種動物抗体に対するヒト
IgG4抗体の特異な反応性）

原
一 生 甲第897号（運動機能学）24. 3.31 Evaluation of CNT toxicitybycomparison to 佐々木克典 久 保 惠 嗣
塩沢丹里
tattoo ink（刺青用インクと比 することによるカーボンナノチューブの毒性評価）

兼 山 友 輝 甲第898号（病理組織学）24. 3.31 Tranilast modulates ﬁbrosis, epithelial ‑ 菅 野 祐 幸 佐々木克典
西澤理
mesenchymal transition and peritubular capillary injury in unilateral ureteral obstruction
rats（トラニラストは，片側尿管結紮ラットにおいて，腎間質の線維化，上皮‑間葉分化転換，
尿細管周囲毛細血管の障害を緩和する）

石 川 雅 邦 甲第899号（泌尿器科学）23. 3.31 A Galenical of Traditional Chinese Herbal 川眞田樹人 天 野
大森
M ixture (THC‑002) Reduces Expression ofof autoimmune hepatitis in Japanese patients（日本人の自己免疫性肝炎患者におけるサイト
カインの動向と病態との関連）

伸介 宮川眞一
駒津光久

純
栄Tachykinin Peptides within Urethras of
Spontaneously Hypertensive Rats（自然発症
高血圧ラット（SHR）尿道における生薬エキス（THC‑002）のタヒキニン類発現の抑制効
果についての検討）
市川比奈子 甲第900号（組織発生学）23. 3.31 Gene pathway analysis of the mechanism by 山 田 充 彦 天 野純
池田宇一
which the Rho‑associated kinase inhibitor Y‑
27632 inhibits apoptosis in isolated thawed
human embryonic stem cells（単離凍結解凍
後ヒト ES 細胞の ROCK 阻害剤Ｙ‑27632によるアポトーシス抑制機序の遺伝子パスウェイ解析）堀
綾 甲第901号（衛生学公衆衛生学）

23. 3.31 Eﬀects of weather variability and air pollut- 福 嶋 義 光 池 田 宇 一
岡元和文
ants on emergency admissions for cardiovas（環境要因
cular and cerebrovascular diseases
が救急外来における心血管疾患及び脳血管疾患の緊急入院数に及ぼす影響について）

横 山 俊 樹 甲第902号（内科学⑴）

23. 3.31 Potential beneﬁts of earlycontinuous positive 岡 元 和 文 池 田 修 一
川眞田樹人
pressure ventilation in patients with rapidly
progressive interstitial pneumonia（急速進行性間質性肺炎に対する非侵襲的人工呼吸の早期導入の有効性）吾 妻 俊 彦 甲第903号（内科学⑴）

23. 3.31 Combination Chemotherapy with Doxor- 本 田 孝 行 宮 川 眞 一
塩沢丹里
ubicin, Vincristine, Cyclophosphamide, andPlatinum Compounds for Advanced Thymic
Carcinoma（手術不能進行胸腺癌に対する白金製剤，ドキソルビシン，ビンクリスチン，シクロホスファミド併用化学療法の検討）

264

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

鈴 木 英 二 甲第904号（分子薬理学（薬剤））23. 3.31 Eﬀects of Hypoxia‑Inducible Factor‑1α 大 橋 俊 夫 西 澤
能勢Chemical Stabilizer, CoCl and Hypoxia on
Gene Expression of CYP3As in Human Fetal
Liver Cells（ヒト胎児肝細胞のCYP3A遺伝子
発 現 に 対 す る 低 酸 素 誘 導 因 子 ‑1α安 定 化 剤
CoCl と低酸素の影響）史
峻 甲第905号
（加齢病態
制御学）

23. 3.31 American Ginseng Improves Neurocognitive 谷口俊一郎 樋 口 京 一
天野直二
Function in Senescence‑Accelerated Mice:

荻 原 伸 英 甲第906号（運動機能学）23. 3.31 Biocompatibility and bone tissue compatibil- 天 野陳磊 甲第907号（加齢生物学）24. 3.31 Cheetahs Have 4 Serum Amyloid A Genes 谷口俊一郎 鈴 木 龍 雄
竹下敏一
Evolved through Repeated Duplication
Events（チーターは複数回の遺伝子重複により形成された４個の serum amyloid A 遺伝子をもつ）

松 澤 直 樹 甲第908号（分子薬理学（薬剤））24. 3.31 Inﬂuence of Cytochrome P450 2C19 gene 山 田 充 彦 福 嶋 義 光
田中榮司
variations on pharmacokinetic parameters ofthalidomide in Japanese patients（日本人におけるサリドマイドの薬物動態学パラメータとCYP2C19遺伝子多型の影響）

清 水 政 幸 甲第909号（運動機能学）23. 3.31 Carbon Nanotubes Induce Bone Calciﬁcation 山 田 充 彦 福 嶋 義 光
池田宇一
by Bidirectional Interaction with Osteoblasts（カーボンナノチューブは，骨芽細胞との双方
向性の相互作用により，骨の石灰化を誘導する）

好沢
克 甲第910号（外科学⑴）

24. 3.31 IL‑15‑High‑Responder Developing NK Cells 小 池 健 一 田 中 榮 司
竹下敏一
Bearing Ly49 Receptors in IL‑15 Mice（IL‑15欠損マウスにおける IL‑15高応答性 Ly49受
容体陽性未熟 NK 細胞）

伊勢真美子 甲第911号
（循環器
病態学）

24. 3.31 Targeting N‑acetylglucosamine‑bearing pol- 大 森
ymer‑coated liposomes to vascular smoothmuscle cells（血管平滑筋細胞へのＮ‑アセチ
ルグルコサミン修飾リポソームの標的化）

柴將 人 甲第912号
（形成再建
外科学）

23. 3.31 Evaluation of muscle hyperactivity of the 池 田 修 一 宇佐美真一
森泉哲次
grimacing muscles by unilateral tight eyelid
closure and stapedius muscle tone（片側の強い閉瞼とアブミ骨筋の筋緊張による，しかめ顔筋の過緊張の評価）

No. 5, 2012

理博

Possible Role of the Upregulated Insulin andCholine Acetyltransferase Gene Expression（アメリカ人参による老化促進マウスの認知機能改善：脳内インスリンと ChAT 遺伝子の発現増加の役割）

ity of alumina ceramics reinforced with carbon nanotubes（カーボンナノチューブを強化材として複合したアルミナセラミックスの生体親和性および骨親和性）

純 中山
淳
奥山隆平

栄 中山
天野

淳
純

265

審査学位論文要旨

山﨑秀 甲第913号（分子腫瘍学）24. 3.31 ASC plays a role in the priming phase of the 竹 下 敏 一 樋 口 京 一
池田修一
immune response to type collagen in collagen‑induced arthritis（コラーゲン誘発関節炎の 型コラーゲンに対する初期免疫反応における ASC の役割）

内 藤 康 介 甲第914号（内科学⑶）

23. 3.31 Intravenous immunoglobulin (IVIg) with 加 藤 博 之 森 泉 哲 次
川眞田樹人
methylprednisolone pulse therapy for motor
impairments of neuralgic amyotrophy:clinical observations in 10 cases（神経痛性筋委縮症における運動症状に対するメチルプレドニゾ
ロン大量静注療法および免疫グロブリン大量静注療法の有効性：10症例の臨床的検討）

関 口 泰 之 甲第915号（人体構造学）24. 3.31 Functional correlation between olfaction and 多 田
various sectioning of the lateral olfactory
tract（外側嗅索切断と嗅覚機能の相関）

剛 本郷一博
山田充彦

唐 澤 文 寿 甲第916号（分子病理学）23. 3.31 Essential role of gastric gland mucin in 瀧
preventing gastric cancer in mice（マウスの胃発癌を抑える胃腺粘液の持つ必須の役割）

伸介 森泉哲次田中榮司中川
幹 甲第917号（代謝制御学）23. 3.31 PPARα is down‑regulated following liver 田 中 榮 司 浅 村 英 樹
本田孝行
transplantation in mice（マウスにおいて α型
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体の発現は肝移植後に低下する）

伊 藤 勅 子 甲第918号（外科学⑵）

23. 3.31 Alteration of Y‑box Binding Protein‑1 塩 沢 丹 里 谷口俊一郎
中山淳
Expression Modiﬁes the Response to Endocrine Therapy in Estrogen Receptor Positive
Breast Cancer（エストロゲン受容体陽性乳癌において，YB‑1発現の変化が内分泌療法剤に対する感受性を変化させる）

布施谷千穂 甲第919号（分子腫瘍学）23. 3.31 Involvement of pelvic inﬂammation‑related 本 田 孝 行 中 山淳
菅野祐幸
mismatch repair abnormalities and microsatellite instability in the malignant transformation of ovarian endometriosis（卵巣子宮内膜症の悪性転化における骨盤炎症に関連するミスマッチ修復異常とマイクロサテライト不安定性の関与）竹澤崇 甲第920号（分子薬理学（薬剤））24. 3.31 Lower expression of HNF4α and PGC1α 青 山 俊 文 池 田 宇 一
駒津光久
might impair rifampicin‑mediated CYP3A4
induction under conditions where PXR overexpressed in human fetal liver cells（HNF4α
および PGC1αの低発現が要因と考えられる
PXR 過剰発現ヒト胎児肝細胞におけるリファ
ンピシンによる CYP3A4の誘導障害）

生
暁 娜 甲第921号（代謝制御学）24. 3.31 Attenuation of kidney injuries maintains 佐々木克典 山 田 充 彦
多田剛
serum sulfatide levels dependent on hepatic
synthetic ability: a possible involvement ofoxidative stress（腎障害の軽減に伴う酸化ス
トレスの抑制は，肝スルファチド合成の機能維持を介して，血清スルファチド値を維持する）

266

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

甲第922号KAJLASEHELI（分子細胞生化学）

23. 3.31 A crucial role for Nox 1 in redox‑dependent 竹 下 敏 一 谷口俊一郎
宮川眞一
regulation of Wnt‑β‑catenin signaling（Wnt‑
β‑カテニンシグナルのレドックス反応による制御における Nox1の重要な役割）

Hrs recognizes a hydrophobic amino acid cluster in cytokine receptors during ubiquitin‑independentendosomal sorting（ユビキチン非依存的な小胞輸送において Hrs はサイトカイン受容体の疎水性アミノ酸クラスターを認識する）
天

野

勇

治

（論文の内容の要旨）

両受容体共に疎水性アミノ酸クラスターに変異導入し【背景と目的】細胞膜上にある種々の受容体のリソたものは Hrs との結合が見られなくなった。また蛍ソームへの輸送･分解に，ユビキチンが選別シグナルと

光免疫染色により，野生型受容体は恒常的に細胞内へして働くことが広く知られている。ユビキチン化されと取り込まれ，定常状態で後期エンドソーム/リソソー

た受容体はエンドサイトーシス後，ユビキチン結合モ

ムマーカーである LAMP1と共局在するのに対し，疎チーフを持つ Hrs により捉えられ，リソソームへと

水性アミノ酸クラスター変異受容体は，恒常的に細胞輸送される。ユビキチン化を受けていない受容体は，内へと取り込まれるが LAMP1区画への輸送は阻害さ

Hrs に認識されず細胞膜上へとリサイクルされるこれ，Transferrin 受容体陽性のリサイクルエンドソーとから，リソソームへの選別輸送にユビキチン化は必ムや LBPA 陽性の Multivesicularbodyに観察された。

須であると考えられてきた。近年我々は IL‑2受容体

また分解アッセイから，野生型に対し疎水性アミノ酸

β鎖（IL‑2Rβ）が，ユビキチン非依存的に Hrs と結クラスター変異受容体の分解抑制が確認された。

合し，恒常的にリソソームへと運ばれていることを明【結論】IL‑2Rβ及び IL‑4Rαは，細胞内領域に保有らかにした。Hrs とのユビキチン非依存的な会合をする疎水性アミノ酸クラスターで Hrs とユビキチン

介してリソソームへと運ばれる受容体は他に例がなく，非依存的に会合することが示唆された。また疎水性ア

その詳細は解っていない。本研究では，IL‑2Rβと同ミノ酸クラスター変異受容体はリソソームへの輸送・様の輸送制御を受ける受容体として IL‑4受容体 α鎖分解が阻害されたことから，疎水性アミノ酸クラス（IL‑4Rα）を見出し，その比ターを介したHrsとのユビキチン非依存的会合により，検討からユビキチン

非依存的な結合に関わる選別輸送シグナルの同定を試

IL‑2Rβ及び IL‑4Rα両受容体は正確にリソソーム輸

みた。

送され分解を受けると示唆された。

【材料及び方法】HEK293T 細胞に Hrs と IL‑2Rβ，（論文審査の結果の要旨）

IL‑4Rαまたはこれらの変異体を過剰発現させ，免疫細胞膜上にある種々の受容体のリソソームへの輸送

沈降法により両者の会合を確認した。大腸菌発現系にに，ユビキチンが選別シグナルとして働くことが広く

より IL‑2Rβ，IL‑4Rα及び Hrs の精製タンパク質を知られている。ユビキチン化された受容体は，ユビキ

得た後，これらの会合をプルダウンアッセイにより確

チン結合モチーフを持つHrsにより捉えられリソソー認した。MEF 細胞及び BAF 細胞に IL‑2Rβ，IL‑4

ムへと輸送される。従って，リソソームへの選別輸送

Rαまたはこれらの変異体を導入した受容体安定発現に受容体のユビキチン化は必須であると考えられてき株を構築した。MEF 安定発現細胞を用いて蛍光免疫

た。近年我々は IL‑2受容体 β鎖（IL‑2Rβ）がユビキ

染色を行い，受容体の細胞内局在及び細胞内輸送を共

チン非依存的な Hrs との会合を介してリソソームへ

焦点レーザー顕微鏡により観察した。抗受容体抗体及と輸送されることを明らかにした。Hrs とのユビキ

びリガンド（IL‑2，IL‑4）を125‑I で放射性標識し，チン非依存的な会合によりリソソームへと運ばれる受これらの BAF 安定発現細胞での分解を確認した。

容体は他に例がなく，その詳細は解っていない。本研【結果】免疫沈降及びプルダウンアッセイから，IL‑2

究では，IL‑2Rβと同輸送制御を受ける受容体として

Rβ，IL‑4Rαの野生型は Hrs と結合するのに対し，

IL‑4受容体 α鎖（IL‑4Rα）を見出し，両受容体を比No. 5, 2012267

審査学位論文要旨

検討することにより Hrs との会合モチーフ探索を

３．疎水性アミノ酸クラスターへの変異導入により，行った。また Hrs とのユビキチン非依存的な会合がIL‑2Rβ，IL‑4Rα両受容体のリソソームにおける

IL‑2Rβ，IL‑4Rαの細胞内輸送に与える影響を，免分解が抑制された。

疫蛍光染色及び分解アッセイにより確認した。

４．疎水性アミノ酸クラスター変異受容体発現細胞でその結果，天野は以下の結論を得た。

は，リガンドである IL‑2及び IL‑4の分解が抑制さ

１．Hrs とのユビキチン非依存的な直接的会合に必れた。

須な領域として，IL‑2Rβ及び IL‑4Rα両受容体のこれらの結果より，IL‑2Rβ及び IL‑4Rαは，細胞細胞内領域の疎水性アミノ酸クラスターを同定した。

内領域に保有する疎水性アミノ酸クラスターで Hrs

２．IL‑2Rβ，IL‑4Rα共に野生型は恒常的に細胞内とユビキチン非依存的に会合し，この会合が両受容体へと取り込まれ，定常状態で後期エンドソーム/リの正常なリソソーム輸送及び分解に必須であることがソソームマーカーである LAM P1と共局在した。一示唆された。受容体の細胞内動態は，受容体を起点と方，疎水性アミノ酸クラスターに変異導入した受容するシグナル伝達と密接に関連する。従って，IL‑2，体は恒常的に細胞内へと取り込まれるが，リソソー

IL‑4受容体の小胞輸送制御に示唆を与える本研究は，ムへの輸送が阻害され，Transferrin 受容体陽性のリンパ球細胞の分化増殖の新たな制御機構の解明に繫

リサイクルエンドソームや，LBPA 陽性の M ulti-

がるものである。よって，主査，副査は一致して本論

vesicularbodyに観察された。

文を学位論文として価値があるものと認めた。

Vitamin D induces expression ofhuman cathelicidin antimicrobial peptide 18 in newborns（新生児においてビタミンＤ は human cathelicidin antimicrobial peptide 18の発現を誘導する）
三

澤

由

佳

（論文の内容の要旨）

導体1α，25dihydroxy‑22‑oxacalcitriol（以下 OCT）

【はじめに】新生児における細菌感染症は重症化しやを10 Ｍ濃度で添加し，48時間培養することにより検すく，死亡率増加の重要な原因となる。Human cath-

討した。また，臍帯血単核球に対する VD の効果も

elicidin antimicrobial peptide 18（以下 hCAP）は好検討した。さらに，未熟児くる病に対してアルファカ

中球二次顆粒中の自然免疫を担う殺菌タンパクの一つ

ルシドールが投与された４例において，投与前後でで，hCAP 遺伝子の転写制御には，骨髄球系特異的転hCAP の発現量を比 した。

写因子で あ る CCAAT/enhancer binding protein【結果】末梢血好中球の hCAP の平均陽性率は，新生

epsilon（C/EBPε）と vitamin D

receptor（以下児で37.1％，成人で85.2％で，新生児では有意に低VDR）が関与する。hCAP は，Toll‑like receptor

値 で あ っ た（p＜0.05）。他 の 好 中 球 二 次 顆 粒 殺 菌（TLR）を介して VDR および VD 活性化酵素を誘導

タ ン パ ク で あ る NGAL も 同 様 で あ っ た。hCAP，することが報告されている。本研究では，好中球におNGAL の発現強度も新生児の方が成人よりも明らか

ける hCAP の新生児期の発現とその後の年齢的変化，に 低 値 で あ っ た。一 方，一 次 顆 粒 タ ン パ ク で あ る

および活性型 VD の hCAP 発現に対する促進効果に

myeloperoxidase の発現には差を認めなかった。末ついて検討した。

梢血単球における hCAP の陽性率および MFI は新生【対象】日齢０〜５（平均２日，男児13人，女児12人）

児と成人で差を認めなかった。新生児，小児および成の新生児と，21〜46歳（平均28歳，男性12人，女性13人における hCAP と NGAL の陽性率と M FI を比人）の成人を対象とした。

したところ，両者とも年齢依存性に発現が増強した。

【方 法】新 生 児 と 成 人 の 末 梢 血 好 中 球 を 用 い て，

血 漿 中 の hCAP，NGAL 濃 度 は 新 生 児 と 成 人 の 間

hCAP と neutrophil gelatinase‑associated lipocalin

で有意差を認めな か っ た。Ｕ 937細 胞 を VD お よ び（以下 NGAL）の陽性率と発現強度（mean ﬂuores-

OCT で刺激したところ，hCAP の発現はそれぞれ2.2

cence intensity，以 下 MFI）を フ ロ ー サ イ ト メ ト倍，2.1倍に増加した。臍帯血単核球においても VD

リーにより比した。hCAPの発現に対す る VD の添加後に hCAP mRNA が平均16.8倍に増加した。未効果は，白血病細胞株Ｕ937細胞を VD および VD 誘

熟児くる病に対してアルファカルシドールが投与され268

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨た４例と，ほぼ同月齢の VD 非投与例５例を比検さらに，未熟児くる病に対してアルファカルシドール

討した。内服前にフローサイトメトリーによる hCAPが投与された４例において，投与前後で hCAP の発陽性率が50％以下の乳児において検討したところ，現量を比 した。

アルファカルシドール内服前の hCAP 陽性率は24.2

その結果，三澤らは以下の結果を得た。

％であったが，内服４週間後には83.8％に増加した。

１．末梢血好中球の hCAP と NGAL の平均陽性率は，一方，非内服群はそれぞれ21.8％と43.5％であった。

い ず れ も 新 生 児 で は 有 意 に 低 値 で あ っ た（p＜【考察】新生児における hCAP および NGAL の発現

0.05）。hCAP，NGAL の発現強度も新生児の方がは成人に比べ明らかに低値であり，易感染性の一因で成人よりも明らかに低値であった。一方，一次顆粒あることが示唆された。新生児期における hCAP のタンパクである myeloperoxidase の発現には差を増強に VD 投与が有効であることが示唆され，新生認めなかった。末梢血単球における hCAP の陽性

児に VD あるいは VD 誘導体を投与することにより，率および MFI は新生児と成人で差を認めなかった。

重症感染の予防または治療的アプローチが出来る可能性があることが示された。VD と協働して働く薬剤な
どの投与は，hCAP18の誘導を増強する可能性が考えられた。

２．新生児，小児および成人におけるhCAPと NGALの陽性率と M FI は，年齢依存性に発現が増強した。
３．血漿中の hCAP，NGAL 濃度は新生児と成人の間で有意差を認めなかった。

（論文審査の結果の要旨）

４．Ｕ937細胞を VD および OCT で刺激したところ，新生児における細菌感染症は重症化しやすく，死

hCAPの発現はそれぞれ2.2倍，2.1倍に増加した。臍

亡率増加の重要な原因となる。Human cathelicidin

帯血単核球においても VD 添加後に hCAP mRNA

antimicrobial peptide 18（以下 hCAP）は好中球二が平均16.8倍に増加した。未熟児くる病に対してア

次顆粒中の自然免疫を担う殺菌タンパクの一つで，ルファカルシドールが投与された４例のうち，内服

hCAP 遺伝子の転写制御には，骨髄球系特異的転写因

前にフローサイトメトリーによる hCAP 陽性率が子である CCAAT/enhancer binding protein epsilon

50％以下の乳児において検討したところ，アルファ（C/EBPε）と vitamin D receptor（以 下 VDR）がカ ル シ ド ー ル 内 服 前 の hCAP 陽 性 率 は24.2％ で関与する。hCAP は，Toll‑like receptor（TLR）をあったが，内服４週間後には83.8％に増加した。

介して VDR および VD 活性化酵素を誘導すること

一方，非内服群はそれぞれ21.8％と43.5％であっが報告されている。今回三澤らは，好中球におけるた。

hCAP の新生児期の発現とその後の年齢的変化，およ以上より，新生児における hCAP および NGAL のび活性型 VD の hCAP 発現に対する促進効果につい発現は成人に比べ明らかに低値であり，易感染性の一て検討した。

因であることが示唆された。新生児期における hCAP

日齢０〜５の新生児と21〜46歳の成人を対象とし，の増強に VD 投与が有効であることが示唆され，新新 生 児 と 成 人 の 末 梢 血 好 中 球 を 用 い て，hCAP と生児に VD あるいは VD 誘導体を投与することによneutrophil gelatinase‑associated lipocalin（以下り，重症感染の予防または治療的アプローチが出来る

NGAL）の 陽 性 率 と 発 現 強 度（mean ﬂuorescence

可能性があることが示された。フローサイトメトリー

intensity，以下 M FI）をフローサイトメトリーによによる好中球 hCAP18の発現スクリーニングが，感染り比リスクの高い新生児の特定に利用できる可能性があるした。hCAP の発現に対する VD の効果は，白血病細胞株Ｕ937細胞を VD および VD 誘導体1α，25 dihydroxy‑22‑oxacalcitriol（以 下 OCT）を10と考えられた。
新生児期の自然免疫能の解明と感染症治療に関するＭ濃度で添加し，48時間培養することにより検討した。

重要な知見であり，主査，副査は一致して本論文を学

また，臍帯血単核球に対する VD の効果も検討した。

位論文として価値があるものと認めた。

No. 5, 2012269

審査学位論文要旨

Eﬀects of hypohydration on thermoregulation during exercise before and after 5‑day aerobic training
in awarmenvironment in young men（若年者における急性低体液量負荷が５日間の暑熱下トレー
ニング前後の運動時体温調節反応に与える影響）
池川（論文の内容の要旨）【目的】従来から，比的短期間の暑熱環境下における運動トレーニングが皮膚血管拡張・発汗の体温調節

茂樹反応の亢進にはそれ以外のメカニズムも関与している
ことが明らかとなった。
（論文審査の結果の要旨）

反応を改善することが知られているが，本研究では，

比 的短期間の暑熱環境下における運動トレーニン

これが主として循環血漿量の増加に起因する，というグが皮膚血管拡張・発汗の体温調節反応を改善するこ仮説を検証することを目的とした。

とが知られているが，本研究では，これが主として循

【方法】７名の若年男性を被験者とし，気温30℃，相環血漿量の増加に起因する，という仮説を検証するこ

対湿度50％に設定された人工気象室において，連続とを目的とした。

５日間，最大酸素摂取量の70％の強度で30分間の有７名の若年男性を被験者とし，気温30℃，相対湿

酸素トレーニングを行った。トレーニングの前後で正度50％に設定された人工気象室において，連続５日

常体液量及び低体液量の２条件を設定し，それぞれの間，最大酸素摂取量の70％の強度で30分間の有酸素条件下でトレーニング前の最大酸素摂取量の65％のトレーニングを行った。トレーニングの前後で正常体

強度で30分間運動させ，その間の食道温，前腕皮膚血

液量及び低体液量の２条件を設定し，それぞれの条件

管コンダクタンス，発汗速度，循環血漿量を測定した。

下でトレーニング前の最大酸素摂取量の65％の強度

低体液量条件は体重の３％減を目標とし，それを測定で30分間運動させ，その間の食道温，前腕皮膚血管コ

48時間前から減塩食摂取と測定４時間前の利尿剤投与

ンダクタンス，発汗速度，循環血漿量を測定した。低によって達成した。

体液量条件は体重の３％減を目標とし，それを測定48【結果】運動トレーニング後に循環血漿量は10％増加

時間前から減塩食摂取と測定４時間前の利尿剤投与にし，皮膚血管拡張及び発汗反応の食道温閾値はそれぞよって達成した。

れ0.3℃，0.2℃低下した（Ｐ＝0.008，Ｐ＝0.012）。

その結果，次のような結果を得た。

トレーニング前後で利尿剤投与によって循環血漿量を

暑熱トレーニングにより増加した循環血漿量を急性

トレーニング前より10％低い同等のレベルにまで低に低下させると，下させると，皮膚血管拡張の食道温閾値はトレーニン

１．皮膚血管拡張反応の亢進は消失した。

グ前後で同等の値にまで上昇した（Ｐ＝0.093）が，２．発汗反応の亢進は一部維持された。

一方，発汗反応の食道温閾値はトレーニング後では前

３．一回心拍出量の増加は消失した。

に比べて有意に低い値を維持した（Ｐ＝0.004）。すな

これらの結果から，短期間の暑熱環境下運動トレー

わち，運動トレーニングによって増加した循環血漿量

ニングによって引き起こされる皮膚血管拡張反応の亢を急性に元に戻すとトレーニング後に亢進した皮膚血

進は主に血漿量の増加によって引き起こされること，

管拡張反応は元に戻ってしまうが，亢進した発汗反応

発汗反応の亢進にはそれ以外のメカニズムも関与しては一部維持された。

いることが明らかとなった。

【結論】以上から短期間の暑熱環境下運動トレーニン
グによって引き起こされる皮膚血管拡張反応の亢進は

以上，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

主に血漿量の増加によって引き起こされること，発汗270

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Prospective Randomized Comparison of Cold Snare Polypectomy and Conventional Polypectomy for
Small Colorectal Polyps（大腸小ポリープに対する Cold polypectomyと Conventional polypectomyの有用性の比 ）
一

瀬

泰

之

（論文の内容の要旨）

完全ポリープ除去率は２群間で同等（96％（97/101）【背景および目的】大腸ポリペクトミーは大腸癌予防

対96％（100/104））であったが，内視鏡治療時間でに有用な内視鏡治療法であることが立証され，世界中

は，コールドポリペクトミー群が通常ポリペクトミーで広く施行されている。大腸小ポリープの除去法とし群に比べて有意に短かった（18分間対25分間，Ｐ＜て，高周波装置を使用しないコールドスネアの絞扼に0.0001）。ポリペクトミー後２週間以内の消化器症状よる除去法（コールドスネアポリペクトミー）が偶発

はコールドポリペクトミー群では，通常ポリペクトミー症の発症率低下をもたらすという報告があるものの，群に比べて有意に少なかった（2.5％（１/40）対20％

その有用性は明らかではなかった。また，通常の大腸（８/40），Ｐ＝0.029）。

ポリペクトミー施行後に消化器症状が出現する症例が【結論】コールドポリペクトミー群は，通常ポリペク

知られていたが，その理由も明らかではなかった。こトミー群に比べて出血のリスクおよび完全ポリープ除

れらの消化器症状は，除去された大腸ポリープ数に関去率については有意な差を認めないものの，内視鏡治連することや，ポリペクトミー後２週間以内に症状が療時間およびポリペクトミー後の消化器症状について消失することから，高周波電流による熱傷との関連がは有意に優れていた。コールドポリペクトミー群は高示唆されていた。そこで，本研究では，コールドスネ

周波装置を使用しないために準備にかかる時間を節約

アポリペクトミーと高周波装置を使用した通常の大腸

でき，高周波電流により生じる熱傷が発生しないこと

ポリペクトミーを内視鏡治療時間，ポリープ除去率，によると考えられた。以上より，大腸小ポリープの除出血，ポリペクトミー後の消化器症状について比 検去法としては，コールドポリペクトミーは通常の大腸討した。

ポリペクトミーより有用な方法と思われた。

【方法】最大８mm までの大腸ポリープを有する患者（論文審査の結果の要旨）をコールドスネアポリペクトミー群（コールドポリペ

大腸ポリペクトミーは大腸癌予防に有用な内視鏡治

クトミー群）と通常の大腸ポリペクトミー群（通常ポ療法であることが立証され広く施行されている。大腸

リペクトミー群）の２群に無作為に分けた。主要評価

小ポリープの除去法として，高周波装置を使用しない

項目はポリペクトミー後２週間以内の消化器症状（下コールドスネアの絞扼（コールドスネアポリペクト

痢，便秘，腹痛，腹部不快感），副次的評価項目は大ミー）による除去法が偶発症の発症率低下をもたらす

腸ポリープの除去率および出血とした。すべての大腸という報告があるものの，その有用性は明らかではな

ポリープについて，大きさ，形態，部位が記録され，かった。また，通常の大腸ポリペクトミー施行後に消ポリープ除去率は，病理組織学的に評価された。ポリ化器症状が発症する症例が知られているが，除去されペクトミー後の出血は，内視鏡的止血術を必要とする

た大腸ポリープ数や高周波電流による熱傷との関連が症例とした。

示唆されていた。そこで，本研究では，コールドスネ【結果】80症例がエントリー後，コールドポリペクト

アポリペクトミーと高周波装置を使用した通常の大腸

ミー群40例，通常ポリペクトミー群40例に無作為化さポリペクトミーを内視鏡治療時間，ポリープ除去率，れた。２群間に年齢，性別，検査契機，盲腸到達時間

出血，ポリペクトミー後消化器症状について比 検討の臨床的特徴においては有意差を認めなかった。除去した。

された大腸ポリープについては，コールドポリペクト

その結果，一瀬泰之らは次の成績を得た。

ミー群ではポリープ数101個，１症例当たり平均2.5個，１．コールドポリペクトミー群40例，通常ポリペクト

ポリープの平均大きさは5.7mm であった。通常ポリ

ミー群40例に無作為化した結果，２群間に年齢，性ペクトミー群では104個，１症例当たり平均2.6個，平別，検査契機，盲腸到達時間の臨床的特徴において

均大きさ5.5mm で２群間に有意差を認めなかった。

有意差を認めなかった。

No. 5, 2012271

審査学位論文要旨

２．除去された大腸ポリープに関し，コールドポリペ

４．ポリペクトミー後２週間以内の消化器症状はコー

クトミー群ではポリープ数101個，１症例当たり平ルドポリペクトミー群では，通常ポリペクトミー群

均2.5個，平均大きさは5.7mm であった。通常ポに比べて有意に少なかった（2.5％（１/40）対20

リペクトミー群では104個，１症例当たり平均2.6個，％（８/40），Ｐ＝0.029）。

平均大きさ5.5mm で２群間に有意差を認めなかっこれらの結果より，コールドポリペクトミー群は，た。

内視鏡治療時間およびポリペクトミー後の消化器症状

３．完全ポリープ除去率は２群間で同等（96％（97/について有意に優れていた。大腸小ポリープの除去法

101）対96％（100/104））であったが，内視鏡治療としてコールドポリペクトミーは有用な方法であるこ

時間ではコールドポリペクトミー群が通常ポリペクとが示唆され，主査，副査は一致して本論文を学位論

トミー群に比べて有意に短かった（18分間対25分間，文として価値があるものと認めた。

Ｐ＜0.0001）。

Platelet‑derived growth factor (PDGF)‑BB produces NO‑mediated relaxation and PDGF‑receptor
beta‑dependent tonic contraction in murine iliac lymph vessels（PDGF‑BB によるマウス腸骨リン
パ管における NO 依存性の弛緩反応と PDGF‑β受容体を介した収縮反応の機能特性）
前

島

大

輔

（論文の内容の要旨）

PDGF‑BB のリンパ管に対する反応を解析するため，【目的】PDGF‑BB はリンパ管の機能に重要な役割をリンパ管内皮細胞の有無における反応性を比 検討し果たしていることが知られており，PDGF‑BB あるた。内皮細胞のいは PDGF‑β受容体遺伝子を欠損した遺伝子改変動に灌流することで行った。次に内皮細胞 離標本を用物が致死を引き起こすという報告や，組織間隙内の組

いて，PDGF‑BB の時間依存ならびに用量依存反応

織液中に存在する PDGF が組織間隙の内圧調節を維を調べた。次に PDGF‑BB による収縮反応の細胞内持するなどの報告がみられる。近年，PDGF‑BB がシグナル伝達機構ならびに収縮反応に関与する Ca

リンパ管内皮細胞の M AP キナーゼ活性を介して細胞の由来を調べるために，imatinib，GW 5074（Raf‑1の遊走を促進する働きや，マウスの線維芽細胞におけ

キ ナ ー ゼ 阻 害 剤）
，Ｕ ‑73122（PLC 阻 害 剤）
，xes-

る PDGF‑BB の発現亢進がリンパ管新生を誘起し，

tospongin C 処理による PDGF‑BB の収縮反応に及リンパ節へのガン転移を促進させることが明らかにさぼす影響を比れている。一方で PDGF は血管のトーヌス制御にもス液，１mM EGTA Ca ‑free クレブス液，high‑K

関わっており，血管平滑筋の収縮反応や内皮細胞にお溶液を用いて PDGF‑BB の収縮反応の発生機序を詳ける NO 産生を介した弛緩反応を引き起こすことな細に解析した。

どが知られている。しかしながらリンパ管における【結果】

PDGF の急性反応については今まで明らかにされて

１．リンパ管内皮細胞健常標本では，PDGF‑BB はきていない。そこで今回，マウス摘出腸骨リンパ管に弛緩反応を引き起こした。同一の標本に５×10 M

対して PDGF‑BB がどのような反応を引き起こすか

L‑NAM E 処理を行うと，弛緩反応は収縮反応に逆を詳細に解析し，あわせてリンパ管平滑筋の収縮反応転した。内皮細胞における Ca の由来について検討した。

縮反応を惹起した。

離は0.3％ CHAPS を3.5分間内腔検討した。最後に，Ca ‑free クレブ

離標本では，PDGF‑BB は収【方法】ddY マウス（雄・４〜７週齢）をペントバル

２．PDGF‑BB は90分の間隔で投与すれば，反応のビタールで麻酔後脱血・屠殺し，腸骨リンパ管を摘出

減弱化は生じないことを確認した。0.1〜５ng/ml

し，両端をガラス製マイクロピペットに挿入して灌の範囲において PDGF‑BB は内皮流標本を作製した。標本内腔に４cmH Oの 内 圧 を依存的な収縮反応を誘起した。

離標本で用量負 荷 し，５％ CO ‑95％ N を 通 気 し た ク レ ブ ス 液

３．10 または10 M の imatinib 前処理によって，（pH7.4，37℃）で標本外腔側を灌流しながらリンパ0.5ng/ml の PDGF‑BB 収縮反応は有意に抑制さ

管の直径変化を経時的に 計 測 し た。ま ず は じ め に

れた。

272

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

４．10 M の GW 5074前 処 理 に よ っ て，１ng/ml のを行うと，弛緩反応は収縮反応に転じた。内皮細胞

PDGF‑BB 収縮反応は完全に抑制された。10 M

離標本では，PDGF‑BB は収縮反応のみを引きのＵ‑73122前処理で１ng/ml の収縮反応は有意に抑制された。

起こした。
２．PDGF‑BB は90分間隔で投与すれば，反応の減５．10 M の xestospongin C 前処理で，１ng/ml の弱化は生じなかった。0.1〜５ng/ml の範囲におい

PDGF‑BB 収縮反応は有意に抑制された。

て PDGF‑BB は用量依存的な収縮反応を誘起した。

６．５×10 M の nifedipine 前 処 理 で，１ng/ml の３．10 または10 M の imatinib 前処理によって，PDGF‑BB 収縮反応は有意に抑制された。

0.5ng/ml の PDGF‑BB 収縮反応は有意に抑制さ

７．５分間の Ca ‑free クレブス液の前処理によって，１ng/ml の PDGF‑BB 収縮反応は完全に抑制されれた。
４．10 M の GW 5074前 処 理 に よ っ て，１ng/ml のた。

PDGF‑BB 収縮反応は完全に抑制された。10 M

８．High‑K 溶液で細胞膜を完全に脱分極させた条のＵ‑73122前処理で１ng/ml の収縮反応は有意に件においても，高濃度（３ng/ml）のPDGF‑BBは収縮反応を誘起した。

抑制された。
５．10 M の xestospongin C 前処理で，１ng/ml の９．１mM EGTA Ca ‑free high‑K 溶液環境下においても，高濃度（５ng/ml）の PDGF‑BB は 収 縮

PDGF‑BB 収縮反応は有意に抑制された。
６．５×10 M の nifedipine 前 処 理 で，１ng/ml の反応を誘起した。

PDGF‑BB 収縮反応は有意に抑制された。

【結論】以上から，PDGF‑BB はマウス腸骨リンパ管

７．５分間の Ca ‑free クレブス液の前処理によって，内皮細胞に作用し内因性 NO を産生・放出してリン

１ng/ml の PDGF‑BB 収縮反応が抑制された。

パ管平滑筋の弛緩反応を引き起こすことが明らかと８．High‑K 溶液で細胞膜を完全に脱分極させた条なった。また PDGF‑BBはリンパ管平滑筋に存在す

件においても，高濃度（３ng/ml）の PDGF‑BB はる PDGF‑β受容体に直接作用し細胞外からの Ca の収縮反応を誘起した。

流入と細胞膜結合型の Ca ならびに細胞内 Ca 貯蔵

９．１mM EGTA Ca ‑free high‑K 溶液環境下にお部位からの Ca 放出によってリンパ管平滑筋収縮をいても，高濃度（５ng/ml）の PDGF‑BB は収縮反誘起することが証明された。

応を誘起した。

（論文審査の結果の要旨）

以上の結果から，PDGF‑BB はマウス腸骨リンパPDGF‑BBはリンパ管の機能に重要な役割を果たす

管内皮細胞に作用し，内因性の NO を産生してリンという報告が見られるが，リンパ管における PDGF

パ管平滑筋の弛緩反応を引き起こすことが明らかとの急性反応については今まで明らかにされていない。

なった。また，PDGF‑BBはリンパ管平滑筋に存在

そこで前島らは，マウス摘出腸骨リンパ管に対するする PDGF‑β受容体に作用し，細胞外からの Ca 流

PDGF‑BB の反応を詳細に解析し，リンパ管平滑筋

入と細胞膜結合型の Ca ならびに細胞内 Ca 貯蔵部

収縮反応の Ca の由来について検討した。

位からの Ca 放出によってリンパ管平滑筋収縮を誘以下に研究結果を示す。

起することが証明された。

１．リンパ管内皮細胞健常標本では，PDGF‑BB は弛緩反応を引き起こし，５×10 M L‑NAME 処理

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Inﬂammasome Activation of Cardiac Fibroblasts Is Essential for Myocardial Ischemia/Reperfusion
Injury（心筋虚血再灌流傷害における心線維芽細胞のインフラマソーム活性化の役割）
川

口

政

徳

（論文の内容の要旨）

序で炎症反応が誘導されるのかは未だよく解明されて【目的】組織の虚血再灌流時において誘導される炎症いない。近年，組織傷害後に起こる無菌性の炎症反応

反応は，虚血再灌流傷害の発生において重要な役割をは，インフラマソームと呼ばれる多重蛋白複合体を介果たしている。しかし，虚血再灌流時にどのような機して誘導されることが示されている。これは，自然免No. 5, 2012273

審査学位論文要旨

疫機構の一つであり，生体に加わるさまざまな dan-

役割を果たしていることが示され，インフラマソーム

ger signal を細胞内の Nod‑like receptors が感知し，が心筋虚血再灌流傷害を抑制する新たな治療の標的とアダプター蛋白である Apoptosis‑associated speck‑なる可能性が示唆された。
（論文審査の結果の要旨）

like protein containing a caspase recruitment
domain（ASC）を介して Caspase‑1をリクルートし組織の虚血再灌流時において誘導される炎症反応は，重合体（＝インフラマソーム）を形成する。ここで虚血再灌流傷害の発生において重要な役割を果たしてCaspase‑1が活性化され，炎症性サイトカインであるいる。近年，組織傷害後に起こる無菌性の炎症反応は，

インターロイキン（IL）‑1β，IL‑18の前駆体をプロインフラマソームと呼ばれる多重蛋白複合体を介してセッシングし，活性型 IL‑1β，IL‑18を産生・分泌す誘導されることが示されている。また，インターロイ

る。IL‑1βは，心筋虚血再灌流傷害時の初期の重要

キン（IL）‑1βは，心筋虚血再灌流傷害時の初期のな炎症メディエーターであり，その抑制により心筋虚重要な炎症メディエーターであり，その抑制により心血再灌流傷害は軽減されることが報告されている。そ

筋虚血再灌流傷害は軽減されることが報告されている。

こで本研究は，IL‑1βの産生の際に必須であるイン

今回川口は，IL‑1βの産生の際に必須であるインフフラマソームに着目し，心筋虚血再灌流傷害におけるラマソームに着目し，心筋虚血再灌流傷害におけるそその役割を明らかにすることを目的とした。

の役割を明らかにすることを目的とした。インフラマ【方法】インフラマソームの構成蛋白である ASC とソームの構成蛋白の Apoptosis‑associated speck‑

Caspase‑1のノックアウトマウスを用い心筋虚血再灌like protein containing a caspase recruitment

流モデルを作製し，その傷害に対する影響を評価した。

domain（ASC）と Caspase‑1のノックアウトマウス，

また，野生型マウスの心筋組織でインフラマソーム

および野生型のマウスを用い心筋虚血再灌流モデルをの局在を調べ，炎症性サイトカインの産生量，炎症

作製し，その傷害に対する影響，炎症性サイトカイン

細胞浸潤，組織障害，心筋リモデリングの程度等をの産生量の変化，炎症細胞浸潤，組織障害，心筋リモした。最後に，どの細胞でインデリングの程度等を比 検討した。また，どの細胞でフラマソームの活性化が起きているのか，またそのインフラマソームの活性化が起きているのか，またそ

インフラマソーム活性化の機序を解明 す る た め，のインフラマソーム活性化の機序を解明するため，

ASC

ASC

マウスと比

の骨髄移植マウスを用いた虚血再灌流モデル

ASCの骨髄移植マウスを用いた虚血再灌流モデルの作製，in vitro 実験では心筋細胞，心線維芽細胞をの作製，in vitro 実験では心筋細胞，心線維芽細胞を用い低酸素/再酸素化実験などを行い評価した。

用い低酸素/再酸素化実験などを行い評価した。

【結 果】ASCと Caspase‑1 マ ウ ス で は，野 生 型

その結果，川口は次の結論を得た。

に比べて48時間後の心筋虚血再灌流傷害が有意に抑制

１．ヒト，及び野生型マウスの心筋梗塞後心筋組織でされており，心筋組織における IL‑1βをはじめとす

は，浸潤炎症細胞（好中球とマクロファージ）と心る種々の炎症性サイトカイン産生量，炎症細胞浸潤，筋間質細胞で ASC と Caspase‑1の明らかな発現を慢性期の心筋リモデリングも有意に抑制されていた。

認めており，同細胞群におけるインフラマソームのASCの骨髄移植マウスを用いた虚血再灌流実験によって，心筋組織における虚血再灌流後超初期のイン局在が示唆された。
２．ASCと Caspase‑1 マウスでは，野生型に比フラマソームの活性化と IL‑1βの産生は，骨髄由来

べて心筋虚血再灌流傷害が有意に抑制されており，の炎症細胞だけでなく，心筋組織構成細胞でも起こる

心筋組織における IL‑1βをはじめとする種々の炎ことが明らかとなった。In vitro 実験では，低酸素/症性サイトカイン産生量，炎症細胞浸潤，慢性期の再酸素化刺激により，心筋細胞ではなく心線維芽細胞

心筋リモデリングも有意に抑制されていたことより，のインフラマソームが活性化されることが示され，そインフラマソームは虚血再灌流傷害の発生に関与しの活性化の機序には活性酸素と細胞内カリウム濃度低ていることが示唆された。

下が関与していることが示唆された。

３．ASCの骨髄移植マウスを用いた虚血再灌流実【考察】これらの実験結果より，心筋虚血再灌流傷害

験によって，骨髄由来の浸潤炎症細胞におけるインの発症には，心線維芽細胞のインフラマソームの活性

フラマソームが重要であることが示されたが，同様化が虚血再灌流傷害の初期の炎症反応の誘導に重要なに心筋組織構成細胞におけるインフラマソームも虚274

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

血再灌流傷害に影響を与えることが示された。

ンフラマソームの活性化が重要であり，とくに虚血再４．培養心筋細胞と心線維芽細胞を用いた in vitro 実

灌流超初期の炎症反応の誘導には心線維芽細胞が重要験より，
低酸素/再酸素化刺激によるインフラマソーな役割を果たしていることが示された。これらの細胞

ムの活性化と IL‑1βの産生は，主に心線維芽細胞におけるインフラマソームが，心筋虚血再灌流傷害をで起こり，その活性化の機序には活性酸素と細胞内抑制する新たな治療の標的となる可能性があることをカリウム濃度低下が一部関与していることが示され示唆した臨床的にも有用な論文であり，主査，副査はた。

一致して本論文を学位論文として価値があるものと認

これらの実験結果より，心筋虚血再灌流傷害の発生めた。

には骨髄由来の浸潤した炎症細胞と心線維芽細胞のイ

Pretreatment by low‑dose ﬁbrates protects against acute free fatty acid‑induced renal tubule toxicity
by counteracting PPARα deterioration（低用量フィブラートの前治療は，ペルオキシソーム増
殖剤活性化受容体 α型の機能低下を阻止して，遊離脂肪酸による急性腎尿細管毒性に対し保護作用を発揮する）
高

橋

京

子

（論文の内容の要旨）

溶液（BSA 溶液）を連日腹腔内投与し蛋白尿を誘導【背景と目的】近年，腎機能低下と密接に関連する尿することで，尿細管に遊離脂肪酸負荷を行った。尿量細管間質障害の原因として，尿蛋白に伴う遊離脂肪変化，尿蛋白量変化，腎機能変化，腎病理変化（光顕

酸尿細管毒性が注目されている。ペルオキシソーム像における糸球体病変・尿細管病変の半定量）につい

増殖剤活性化受容体 α型（Peroxisome Proliferatorて評価し，さらにクロフィブラートの薬効機序の解明

Activated Receptor α：PPARα）は脂肪酸代謝を支のために，① 脂肪酸代謝の変化（血清中および腎内配する主要な核内転写調節因子である。以前我々は，遊離脂肪酸量変化，腎 β酸化能および β酸化関連酵素

PPARα遺伝子欠損マウスで大量の外来性蛋白尿を誘群の蛋白量変化）② 腎における酸化ストレス変 化

導し遊離脂肪酸尿細管負荷モデルを作成した場合，（過酸化脂質マーカーの定量変化，酸化ストレス防御

近位尿細管における脂肪酸代謝障害から強い近位尿酵素群の蛋白変化）③ アポトーシス変化（TUNEL

細管障害が出現することを報告した。この結果は，染色性変化，Bcl 酵素群の蛋白変化）④ 炎症性反応

PPARαが尿蛋白に伴う遊離脂肪酸尿細管毒性の解除

変化（腎皮質のマクロファージ染色による定量的変化，に必須であることを示すとともに，PPARα作動薬にNFkB 経路の抑制因子である IkBαおよび標的遺伝

よる PPARαの活性化が脂肪酸代謝の強化を通して

子 で あ る COX2，TNFα，ICAM 1の mRNA 変 化）

尿細管保護的に機能する可能性を示唆している。今回，について解析した。

この仮説を検証するため，PPARα作動薬であるクロ【結果】野生型マウス Fib 群では通常食群と比フィブラートを用いて遊離脂肪酸負荷モデルマウスに遊離脂肪酸の大量負荷に伴う急性尿細管障害が軽減しおける尿細管保護作用について検討した。予備実験でた。Fib 群では，PPARαの発現量や腎脂肪酸 β酸化は，高用量クロフィブラート投与では，クロフィブ

能力が補強され，大量の遊離脂肪酸負荷によって引きラートの血中濃度が異常上昇し，尿細管障害が増悪す起こされる PPARαの腎内発現量の減少，尿細管へることが観察されたため，今回の研究では低用量クロの脂肪酸流入量の増大，腎脂肪酸 β酸化能の低下，おフィブラートの前投与による腎保護効果について検討

よび過剰遊離脂肪酸の細胞内蓄積が軽減した。またクした。

ロフィブラートの前投与は，酸化ストレス防御酵素群【材料および方法】野生型マウスと PPARα欠損マウ（カタラーゼ，SOD，グルタチオンペルオキシダー

スを用いて，低用量クロフィブラート含有食（0.1％

ゼ），ア ポ ト ー シ ス 抑 制 蛋 白 群（Bcl2，Bcl‑xL），w/w）を遊離脂肪酸負荷の２週間前より開始し観察

NFκB 抑制蛋白（IkBα）の腎内発現を上昇させ，抗期間中継続した。通常食群とクロフィブラート食群

酸化ストレス作用，抗アポトーシス作用，抗炎症作用（Fib 群）の２群に，脂肪酸含有ウシ血清アルブミンを発揮し，尿細管障害を軽減している可能性が考えら

No. 5, 2012

し，

275

審査学位論文要旨れた。これらの一連の効果は，PPARα遺伝子欠損マ

ラートも尿細管保護的に機能するか検討するため，野ウスでは認められないことから，クロフィブラートの生型マウスにフェノフィブラートとベザフィブラートPPARα転写活性亢進による PPARα依存性の尿細を投与後，遊離脂肪酸負荷腎症を作成し比管保護作用と考えられた。同様の効果は，ベザフィブ

PPARα欠損マウスに遊離脂肪酸負荷腎症を作成し，ラートおよびフェノフィブラートでも認められ，フィフィブラートの腎保護効果が PPARα依存性である

ブラート系薬剤に共通の効果であることが判明した。

かの検討も行った。

興味深いことに，PPARα欠損マウス Fib 群では，した。

その結果，高橋は以下の結論を得た。

逆に尿細管病変が悪化することも判明した。これは，

１．フィブラート食群では，通常食群と比 し遊離脂

クロフィブラートの PPARα非依存性尿細管障害作

肪酸負荷による BUN 蓄積が抑えられ，尿細管障害用を示す可能性がある。

を示す病理所見が軽減していた。

【結論】以上の結果から，低用量のクロフィブラート

２．フィブラート食群では，通常食群と比 し遊離脂は，尿蛋白によって引き起こされる遊離脂肪酸尿細管

肪酸負荷に伴う血中および腎内の脂肪酸増加が抑制

毒性と PPARα機能の低下に対し，PPARαの転写

され，脂肪酸代謝能力が保持されていた。

活性を亢進させることで脂肪酸代謝の恒常性の維持作

３．フィブラート食群では，通常食群と比 し遊離脂用，抗酸化ストレス作用，抗アポトーシス作用，抗炎肪酸負荷に伴う脂質過酸化マーカーの増加が抑えら症作用を発揮し，PPARα依存性の尿細管保護作用をれ，酸化ストレス防御酵素群（カタラーゼ，SOD，表出させることが判明した。しかし，フィブラート製

グルタチオンペルオキシダーゼ）の腎内発現の上昇剤には，尿細管に対する保護作用と毒性作用の二面性を認めた。

がある可能性があり，有益な薬理効果を得るためには，

４．フィブラート食群では，通常食群と比しアポPPARα依存性の尿細管保護効果が PPARα非依存

トーシス抑制蛋白群（Bcl2，Bcl‑xL）の腎内発現の性の尿細管毒性効果を上回る必要性がある。この微妙上昇を認めた。

なバランスはフィブラートの投与量や血中濃度により５．フ ィ ブ ラ ー ト 食 群 で は，通 常 食 群 と 比して影響される可能性がある。フィブラートは腎排泄性でNFκB 抑制蛋白（IκBα）の腎内発現の上昇を認めあり腎障害時には血中濃度が高くなりやすいため，実た。

用化には腎障害時のフィブラートの適切な用量を設定

６．フェノフィブラートおよびベザフィブラートも同することが必要である。一方，腎障害下であっても血様に，尿細管保護効果が用量依存性に認められた。

清中の薬物濃度が安定するような，新たな PPARα７．PPARα欠損マウスのフィブラート投与群では，作動薬を検討することも有用と思われた。
（論文審査の結果の要旨）

遊離脂肪酸負荷により，改善効果を認めず，逆に尿細管病変が悪化した。

腎機能低下は，尿細管，間質障害と強く相関するた

低用量クロフィブラートの尿蛋白に付随する遊離脂め，その対策は重要である。近年，尿蛋白に伴う遊離肪酸尿細管毒性に対する保護作用を示した。
フィブラー

脂肪酸尿細管毒性が注目されているが，本研究では

トは，脂肪酸代謝の恒常性の維持，抗酸化ストレス，

フィブラートによる PPARαの活性化が，脂肪酸代抗アポトーシス，抗炎症作用を発揮して尿細管保護作

謝の強化を通して尿細管保護的に働くか検討した。野用を表出させることを解明した。また，フィブラート

生型マウスに通常食と0.1％クロフィブラート食を２には尿細管保護作用だけでなく，毒性作用の二面性が週間与えた後，遊離脂肪酸負荷腎症を作成した。各群ある可能性が示唆された。低用量フィブラートは腎疾間の血清検査，腎病理変化を検討し，クロフィブラー

患治療薬となりうる可能性が示唆された。

トによる腎保護効果を確認後，機序の解明のため腎脂肪酸代謝，酸化ストレス，アポトーシス，炎症反応変

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

化について解析を行った。また，他のタイプのフィブ

276

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Infraorbital nerve swelling associated with autoimmune pancreatitis（自己免疫性膵炎に伴う眼窩下
神経腫大）
渡

辺

智

治

（論文の内容の要旨）めてである。今回の結果では涙腺や唾液腺は両側性の【背景】自己免疫性膵炎は様々な膵外病変を合併する腫大を呈し，これらはミクリッツ病として矛盾しない。

ことが知られており，現在は IgG4関連全身性疾患の一方，眼窩下神経や下歯槽神経，外眼筋については片一つとして捉えられているが，三叉神経腫大を伴った側性の腫大例も存在したが，自己免疫性膵炎に伴う神報告はない。

経や筋の腫大が腺組織とは異なり左右非対称な理由は【目的】自己免疫性膵炎と，三叉神経の分枝である眼不明である。頭頚部領域の神経腫大の鑑別として，悪窩下神経の腫大との関連を調べる。

性リンパ腫，癌の神経周囲進展，神経鞘腫，CIDP，【対象と方法】1999年７月から2008年８月までに当院

炎症性偽腫瘍，神経線維腫症などが挙げられるが，自で自己免疫性膵炎と診断された71症例中，12例で臨床

己免疫性膵炎に伴う眼窩下神経腫大はその支配域に神的に涙腺や唾液腺の腫大，あるいは慢性副鼻腔炎が疑

経学的異常を認めない点が，他のニューロパチーと比われ，頭頚部の MRI が施行された。このうち MRIし特徴的と思われる。眼窩下神経の腫大は涙腺や唾液冠状断で眼窩下神経が全長にわたり描出されていた11腺など他の頭頚部病変に比し，病変として目立ちにく例（男性10例，女性１例，平均年齢61.2歳）を対象とい。したがって，涙腺や唾液腺の腫大を呈する症例にした。また，2008年６月から2008年７月までに頭頚部は眼窩下神経にも注意を払い，腫大している場合にはの MRI が施行された自己免疫性膵炎以外の連続した自己免疫性膵炎や IgG4関連疾患を考慮し，膵精査や20例（男性10例，女性10例，平均年齢63.3歳）をコン

血清 IgG4の測定が望まれる。逆に，自己免疫性膵炎

トロール群とした。画像評価にはＴ1強調像，Ｔ2強調と診断されている症例に眼窩下神経腫大を認めた場合

像，脂肪抑制Ｔ2強調像，STIR いずれかの冠状断をには，非腫瘍性病変の可能性が高いと言える。

用い，自己免疫性膵炎群およびコントロール群の眼窩【結論】自己免疫性膵炎ではコントロール群に比し眼下神経の厚みを左右それぞれ計測した。自己免疫性膵

窩下神経腫大を伴う頻度が高く，膵外病変の一つと考炎のうち９例はステロイド治療後にも頭頚部の MRIえられる。

が施行され，治療後の画像でも神経の厚みを計測した。

（論文審査の結果の要旨）

また，自己免疫性膵炎群では眼窩下神経支配領域の疼

自己免疫性膵炎は様々な膵外病変を合併することが痛や異常感覚といった神経学的所見の有無も調べた。

知られており，現在は IgG4関連全身性疾患の一つと【結果】自己免疫性膵炎群では11例中５例（眼窩下神して捉えられている。自己免疫性膵炎に伴う涙腺や唾

経22本中８本）に厚み５mm 以上の腫大を認めた。

液腺の腫大はミクリッツ病と同様の病態と考えられて

両側性の腫大は３例，片側性は２例であった。一方，いるが，三叉神経腫大を伴った報告はない。したがっコントロール群ではいずれも厚みは５mm未満であって今回，自己免疫性膵炎と三叉神経の分枝である眼窩た。ステロイド治療前後の比 では，治療前に９例中下神経腫大との関連を調べた。

３例（18本中５本）で厚み５mm 以上の腫大が認め

対象は自己免疫性膵炎症例のうち臨床的に涙腺や唾られ，いずれも治療後に腫大が軽減した（Ｐ＜0.05）。

液腺腫大，あるいは慢性副鼻腔炎が疑われ，頭頚部領

眼窩下神経以外では，２例に両側前頭神経腫大，２例

域の M RI が撮像された11例とし，コントロール群とに片側性の下歯槽神経腫大，１例に両側耳下腺腫大，して自己免疫性膵炎以外で頭頚部の M RI を施行され７例に両側顎下腺腫大，１例に片側性の外眼筋腫大がた連続した20例を選んだ。眼窩下神経の評価として認められた。いずれの症例も眼窩下神経支配領域に神M RI 冠状断における神経の頭尾方向の厚みを計測し，経学的異常は認められなかった。

自己免疫性膵炎群とコントロール群との差異，自己免【考察】近年，自己免疫性膵炎に伴う涙腺や唾液腺の疫性膵炎群における眼窩下神経の左右差，およびステ腫大はミクリッツ病と同様の病態として認識されていロイド治療前後での変化についてそれぞれ検討した。

るが，頭頚部領域における神経種大の報告は今回が初

また，自己免疫性膵炎群では眼窩下神経以外の臓器

No. 5, 2012277

審査学位論文要旨（涙腺，耳下腺，顎下腺，前頭神経，下歯槽神経，外眼筋）についても腫大の有無，およびステロイド治療
前後での変化について調べた。

４．ステロイド治療後はいずれも眼窩下神経腫大が軽減した。
５．眼窩下神経以外の臓器についても，下歯槽神経のその結果，渡辺は次の結論を得た。

除き，いずれもステロイド治療後に腫大が軽減した。

１．自己免疫性膵炎では11例中５例に眼窩下神経腫大

これらの結果より，涙腺や唾液腺の両側性腫大（ミを認めた。一方，コントロール群では腫大例は認めクリッツ病）とは異なり，眼窩下神経腫大には片側例られなかった。

も存在した点は解釈困難であったが，いずれもステロ

２．眼窩下神経腫大を呈した５例中，３例は両側性，
２例は片側性であった。

イド治療に反応しており，同神経の腫大は自己免疫性
膵炎の膵外病変と考えられた。よって，主査，副査は

３．涙腺や唾液腺，前頭神経の腫大はいずれも両側性，
下歯槽神経および外眼筋の腫大はいずれも片側性で一致して本論文を学位論文として価値があるものと認
めた。

あった。

Preoperative Diﬀerential Diagnosis of Minimal Deviation Adenocarcinoma and Lobular Endocervical
Glandular Hyperplasia of the Uterine Cervix
A Multicenter Study of Clinicopathology and Magnetic Resonance Imaging Findings（子宮頸部最小偏倚腺癌および分葉状頸管腺過形成の術前診断に関する臨床病理学的因子および MRI 画像による多施設研究）高津亜希子（論文の内容の要旨）

検出結果を含む臨床病理学的特徴を解析し，各検査の【背景と目的】子宮頸部最小偏倚腺癌または悪性腺腫

診断上の意義を検討した。また治療法と治療成績につ（minimal deviation adenocarcinoma，M DA）は 超

いて解析し，診断と治療に関する指針を提案した。

高分化型の粘液性腺癌で頸部腺癌全体の１〜３％を占【結果】全国の研究参加施設から集積された112例の病める。組織学的には良性の病変に類似するにもかかわ理組織を CPR で検討した結果，ナボット嚢胞（NC）

らず，早期にリンパ節転移や播種をきたす予後不良な

37例，LEGH54例，MDA６例，腺癌11例，その他の疾患である。臨床的には大量の水様帯下や子宮頸部の良性疾患４例と診断された。LEGH はしばしば子宮

腫大，嚢胞性病変を特徴とするが，組織学的に正常頸

頸部上皮内腺癌や MDA，粘液性腺癌と合併していた。

管腺に類似し，細胞異型に乏しいため，細胞診や組織CPR での診断と各参加施設での診断を比診による術前診断は困難であると考えられてきた。

CPR で MDA，腺癌と診断された症例の各施設でのさ ら に 近 年 形 態 学 的 に M DA に 類 似 し た 良 性 病 変診断はほぼ一致していたが，CPR で LEGH とされたとして分葉状頸管腺過形成（lobular endocervical

症例には各施設で MDA と診断されていた症例が26

grandular hyperplasia，LEGH）が提唱されたが，例含まれていた。臨床経過では３例の M DA 症例で

LEGH も MDA に類似した臨床病理学的特徴を有す再発がみられたのに対し，LEGH 症例では手術術式

るため，より正確な治療前の診断と適切な対応が必要にかかわらず再発は見られなかった。MRI 検査におとなってきた。しかし MDA や LEGH は比

的まれ

いて，LEGH では中心部に充実性部位，周辺部に嚢な疾患であるため，単一施設の検討では限界がある。

胞部位が存在する特徴的な所見がみられたが，MDA

MDA と LEGH の術前診断および治療方針を確立す

は主に充実性腫瘍を呈した。M RI 検査の正診率は，るため，後方視的多施設研究を行った。

NC や LEGH 等の良性疾患では86.7％，M DA や腺【方法】M DA を疑われ円錐切除術もしくは子宮摘出癌では66.7％，全体では81.7％であったが，LEGHの術を施行された症例を全国24施設から112症例集積し，一部に MDA や腺癌が存在する症例では画像診断がまずこれらの症例に対して central pathological re-

困難であった。子宮頸部細胞診，胃型粘液検出の単独

view（CPR）を施行した。さらに各症例の M RI 検査，での診断能は限定されていたが，MRI 検査とこれら

子宮頸部細胞診および組織診，頸管粘液中の胃型粘液の検査を組み合わせることが術前診断に有用と考えら

278

すると，

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨れた。MRI 上内部に充実部をともなう嚢胞構造を呈組織を CPR で検討した結果，ナボット嚢胞（NC）

し，腺細胞に軽度の異形と胃型粘液をともなっている

37例，LEGH54例，M DA６例，腺癌11例，そ の 他

場合は LEGHが強く疑われ（24/26，92％），MRI上の良性疾患４例と診断された。CPR で LEGH と診

充実性で細胞診陽性の場合は MDA や腺癌の可能性

断された症例には参加施設で M DA と診断されてが高くなると考えられた（５/５，100％）。

いる症例が多数見られた。

【結論】各施設で MDA と診断され拡大手術を施行さ

２．細胞診単独，あるいは胃型粘液の同定だけでは術れた症例には，LEGH だった症例が多く存在したこ

前診断に不十分であった。

とから，病理診断の標準化が期待された。また MRI

３．MRI 検査において，LEGH では中心部に充実性検査，頸部細胞診，胃型粘液を組み合わせることで，部位，周辺部に嚢胞部位が存在する特徴的な所見

MDA および LEGH の術前診断の正診率を改善できがみられることを見出した。一方，M DA は主に充る可能性が示された。LEGH が予想される症例では実性腫瘍を呈した。M RI 検査の正診率は，NC や拡大手術は必要ない可能性が示唆された。

LEGH 等の良性疾患では86.7％，
M DA や腺癌では（論文審査の結果の要旨）

66.7％，全体では81.7％と良好であったが，LEGH

子宮頸部最小偏倚腺癌（minimal deviation adeno-の一部に M DA や腺癌が存在する症例では画像診

carcinoma，M DA）は超高分化型の粘液性腺癌で予断が困難であった。

後不良な疾患である。組織学的に正常頸管腺に類似し，４．LEGH はパンチ生検では術前診断が困難であっ細胞異型に乏しいため，細胞診や組織診による術前診

たが，円錐切除による診断は最終診断との一致率が断は困難であると考えられてきた。さらに近年形態学高かった。

的に MDA に類似した良性病変として分葉状頸管腺

５．単独の検査による診断能は限定されていたが，過形成（lobular endocervical grandular hyperplasia，

MRI 検査とこれらの検査を組み合わせることによ

LEGH）が提唱されたが，LEGHも M DAに類似したり術前診断の精度が向上すると考えられた。

臨床病理学的特徴を有するため，より正確な治療前の６．治療成績では M DA には拡大手術が施行されて診断と適切な対応が必要となってきた。今回 MDAといたにも拘わらず３例で再発がみられた。一方，

LEGH の術前診断および治療方針を確立するため，

LEGH 症例では拡大術式を含む各種の手術術式が後方視的多施設研究を行った。

施行されていたが，術式にかかわらず再発や死亡例

全国24施設から112症例を集積し，まずこれらの症は見られなかった。

例に対して central pathological review（CPR）を施

これらの結果より，M DA および LEGH の病理診行した。さらに各症例の MRI 検査，子宮頸部細胞診断の標準化が期待された。また MRI 検査，頸部細胞および組織診，頸管粘液中の胃型粘液検出結果など臨診，胃型粘液などを組み合わせることで，MDA およ

床病理学的特徴を解析し，各検査の診断上の意義を検び LEGH の術前診断の正診率を改善でき，不要な拡討した。また治療法と治療成績について解析し，術前大手術が回避できる可能性が示唆された。

診断と治療の方向性の指針を提案した。

よって主査，副査は一致して本論文を学位論文としその結果，高津は次の結論を得た。

て価値があるものと認めた。

１．全国の研究参加施設から集積された112例の病理

Risk Evaluation for Coronary Artery Disease in Patients with Impaired Glucose Tolerance after a
Successful Coronary Intervention（経皮的冠動脈形成術後の耐糖能異常患者における冠動脈疾患のリスク評価）堀込充章（論文の内容の要旨）の内皮機能の評価法として寒冷昇圧試験（CPT）に【序論】内皮機能障害は明らかな動脈硬化性変化がな

対する血管の反応を測定する方法が確立されており，

い時期から冠危険因子と関連が強く，進行した動脈硬Ｎ ‑13ア ン モ ニ ア を 使 用 し た ポ ジ ト ロ ン 断 層 撮 影化症を示す部位ではより顕著であると考えられる。こ（PET）は，心筋血流の定量測定が可能であることか

No. 5, 2012279

審査学位論文要旨

ら，安静時と CPT による負荷時の心筋血流量を計測

有意差は認めなかった。正常群，狭窄群，PCI 群のすることで内皮機能を定量的に評価できる。内皮機能％増加率は，それぞれ33±22％，21±23％，およびの評価は，今まで主にごく早期の動脈硬化性変化が研

26±23％であった。冠危険因子と％増加率との間に究対象とされており，既に進行した冠動脈疾患を有すは狭窄群でのみ，％増加率対空腹時血糖（r＝‑0.64，

る患者においてはほとんど研究されていない。実際，，HbA1c（r＝‑0.74，p＜0.05），総コ レ ス テ
p＜0.05）

冠危険因子の修正は，冠動脈疾患を有する患者の予後

ロール（r＝‑0.87，p＜0.05），中性脂肪（r＝‑0.71，を改善することが明らかにされている。そこで，既知

p＜0.05）および LDL コレ ス テ ロ ー ル（r＝‑0.92，の冠動脈疾患を有する患者の内皮機能を調査し，冠危

p＜0.005）と有意な負の相関が認められた。

険因子が内皮機能に及ぼす影響を評価することが冠危【考察】Ｎ‑13アンモニアと PET を用いた心筋血流の険因子管理に有効であると考えられる。本研究の目的

定量評価は，１型糖尿病，２型糖尿病，耐糖能障害，は，既知の冠動脈疾患を有する耐糖能異常患者に対し

高脂血症，喫煙などと内皮機能障害と関連していると

Ｎ‑13アンモニア PET を行い，冠動脈内皮機能を定いう報告が既にされている。本研究では，狭窄群にお

量的に測定し，内皮機能と冠危険因子間の相関を評価

いてのみ冠動脈危険因子と心筋血流の％増加率との間することで，冠危険因子管理の有効性を示すことにあに有意な負の相関が認められ，特に LDL コレステる。

ロール値と内皮機能の間に強い負の相関が認められた。

【方法】対象として2005年11月から2007年11月の間にこれは，狭窄部において，将来更に動脈硬化性変化が信州大学病院で耐糖能障害を有し冠動脈疾患の治療を進展することを予防するために脂質コントロールが非受けた狭心症患者から14人を登録した。冠動脈造影検常に重要であることを示唆している。この狭窄部は査にて75％以上の冠動脈狭窄を有意狭窄とし責任病

PCI はせず保存的に加療されているため，潜在的な変に経皮的冠動脈形成術（PCI）を行った。PCI 施行

組織虚血を来していると考えられる。組織虚血は活性後約１カ月で PET 撮影を行い，撮影当日全患者に冠酸素類の産生を加速させ，内皮由来の一酸化窒素がそ危険因子の評価目的の採血を行った。PET 撮影のプの解消に使用されるため血管拡張作用が低下すると報ロ ト コ ー ル は，ま ず 安 静 時 に Ｎ ‑13ア ン モ ニ ア400

告されていることから，狭窄部群のみでこのような結MBq を静注し心筋血流を測定，50分の休憩後に CPT果が得られた可能性が高いと考える。

を行い CPT 開始１分後にＮ‑13アンモニア400M Bq【結語】耐糖能異常を有し冠動脈狭窄に対し PCI を受を静注し負荷時の心筋血流を測定した。測定結果は，けた患者では CPT に対する反応が保たれていたが，16分割された左室心筋の分画をポラーマップに要約

有意狭窄が残存する部位ではその内皮機能と冠動脈危（総分画224分画）し，冠動脈造影と照合しながらこの険因子との間に負の相関関係が認められた。従って冠16分画をそれぞれ，75％以上の残存狭窄血管の灌流

動脈危険因子は PCI が施行された患者における残存域を狭窄部，バルーンや Stent による PCI 施行血管する冠動脈病変の進展に影響すると推測される。

の灌流域を PCI 部，その他の部位を正常部に分類し，（論文審査の結果の要旨）

各部の心筋血流の平均値を解析に使用した。冠動脈の血管内皮細胞は，血管のホメオスタシスの調整に重内皮機能は，心筋血流の％増加率として定義し，各灌要な役割を果たしているが，冠危険因子はこの内皮機流域での％増加率と冠危険因子（総コレステロール，能を低下させ，動脈硬化の進展や心血管イベントを誘

LDLおよびHDLコレステロール，中性脂肪，HbA1c，発する。従って内皮機能評価は，冠動脈疾患のリスク

空腹時インスリン，インスリン抵抗性指数，空腹時血評価や冠動脈硬化症の進展などを予測する上で有用で糖など）との相関を検討した。

ある。冠動脈の内皮機能は寒冷負荷試験（CPT）前後【結果】冠動脈造影検査の結果，１枝病変は３人，２の心筋血流量（MBF）を，陽電子断層撮影法（PET）

枝病変は９人，３枝病変は２人で，責任病変以外に有を利用して測定し，その増加率から定量評価可能であ意狭窄が残存した患者が８人であった。各灌流域の分る。今回，堀込充章は耐糖能異常（IGT）を有する狭画 数 は 各々PCI 部76/224分 画（PCI 群），狭 窄 部38/心症に対して経皮的冠動脈形成術（PCI）を施行した

224分画（狭窄群），正常部110/224分画（正常群）で14名を対象とし，冠動脈内皮機能と冠危険因子との関あった。CPT は全ての群で有意に心筋血流を増加さ係について検討した。

せ，群間で安静時，負荷時，％増加率の心筋血流量に280

冠動脈造影にて75％以上の冠動脈狭窄を有意狭窄
信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨とし責任病変に PCI を行った。PCI 施行後約１カ月向であった。

後に PET を行い，撮影当日に冠危険因子の評価目的

３．冠危険因子と MBF の増加率の関係については，に採血を行った。PET では安静時と CPT 負荷時で狭窄群でのみ認められ，HbA1c，空腹時血糖，お各々にMBFを測定し，測定結果は16分画のポラーマッ

よび中性脂肪値との間で負の相関を認め，LDL お

プ上に集約した。各分画は75％以上の残存狭窄血管

よび総コレステロールとの間では特に強い負の相関の灌流域（狭窄部），バルーンや Stent による PCI 施が認められた。

行血管の灌流域（PCI 部），その他の部位（正常部）

これらの結果より，冠動脈狭窄に対し PCI を受けに分類し，各部の MBF の平均値で解析した。冠動脈

た耐糖能異常を有する患者では PCI 部や正常部はの内皮機能は，安静時から負荷時の M BF の増加率とCPT に対する反応が保たれていたが，有意狭窄が残して定義し，各灌流域の増加率と冠危険因子との相関存する部位ではその内皮機能は低下しており，冠動脈を検討した。

危険因子との間に負の相関関係があることが明らかとその結果，堀込充章は次の結論を得た。

なった。従って冠動脈危険因子は PCI が施行された

１．すべての群で内皮機能は保たれており，CPT 後患者における残存する冠動脈病変の進展に影響すると心筋血流量は有意に増加し，安静時，負荷時ともに推測される。冠動脈疾患患者の管理上重要な知見であ３群間で有意な差は認めなかった。

り，よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文

２．狭窄群の安静時 M BF は他群より高い傾向にあっとして価値があるものと認めた。

たが，CPT 後の M BF の増加率は他群より低い傾Correlation between squamous suture and Sylvian ﬁssure:Osirix DICOM viewer study（鱗状縫合とシルビウス裂溝の関係―Osirix DICOM VIEWER を用いて―）
ヌヌン

ヌル

ラーマー

（論文の内容の要旨）

OM line.Inferior Rolandic point,which corresponds

Objective: Sylvian ﬁssure (SF) is an importantto the central sulcus inferior extent,was found to becorridor in neurosurgery, and the end of Sylvian

at 2 cm from OM line. The eSF was identiﬁed at 0

ﬁssure (eSF) represents the optimal target area to

cm anteriorly from OM ,and perpendicularly 1.5 cm

expose suitable recipient artery in STA‑M CA by-

above SS. 50 % patients had Chaterʻs point (CP)pass. Unfortunately little have been addressed con-above eSF. Average value for CP was 0.01 below

cerning its relationship with external cranial sur-eSF,giving a signiﬁcantly closer value compared to

face.Correlation between squamous suture(SS)andthe one of SS (p＜0.01).However,SS showed consis-

SF was investigated.

tent value of 1.5 below SF. Furthermore, SS is a

Methods: 50‑adult 3D‑CTA images were studied

bony landmark, which has no shifting eﬀect during

using OSIRIX DICOM viewer. The measurement

surgery, therefore drawing a 1.5‑cm line upward

points were determined from the external auditory

from SS could lead to exact location of eSF.

meatus 0, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5 and 4‑cm anteriorly,

Conclusion :The course of SF and its correlation toperpendicular from the orbitomeatal(OM )line.The

SS have been identiﬁed, and this is also the ﬁrst

distance of SF was compared with the one of SS.

study to investigate the relationship of SS and eSF

The results were also applied in actual STA‑MCA

using OSIRIX DICOM viewer. SS is also compa-

bypass cases.

rable to CP, therefore it is usable for a simple

Results:SSs were all located below SF at 0 cm.At

landmark of eSF.

a distance of 0 to 1.5 cm, SSs were located above

Keywords: Sylvian ﬁssure, Squamous suture,SF, then started to merge and went side by side

Chaterʻs point, Osirix dicom viewer

from 2 cm anteriorly. Anterior sylvian point, themost anterior part of SF, was found at 4 cm fromNo. 5, 2012

（論文審査の結果の要旨）
The Sylvian ﬁssure (SF) became microneurosur281

審査学位論文要旨

gical corridor to the base of the brain. Careful

templates employed together with MRI during

technique of its dissection is the real key to success-presurgical planning. These procedures did give a

ful operations, and well‑planned surgical orienta-

proper location of eSF,however,the use of templatetion is a prerequisite. Several authors have

was not an aﬀordable method in all centers. Our

mentioned detailed descriptions of the SF anatomy

study was based on this consideration. The use ofand opening technique, however, little attentions

bone marking is reliable and is easily employed inhave been addressed concerning its relationshipall centers. In this study, we found that CP waswith the external cranial surface.Therefore in thislocated within 1 cm above and below SF, and SS

study we are aiming at ﬁnding out the actual corre-

was located within 0.5 to 2 cm below SF.Therefore

lation between the two from patientʻs images.

drawing a line 1.5 cm from SS in perpendicular

Fifty consecutive adult patients from Shinshu

direction to OM line is a reliable option to ﬁnd eSF.

University Hospital who underwent three‑dimen-

Interestingly in our present study,we found out thatsional computed tomography angiography (3D‑

SF intersects with SS from 2‑4 cm in front of EAM.

CTA)and showed no mass‑eﬀect intracranial lesion

Our result conﬁrmed the other studies regarding thewere included in the study.The study group includ-

Anterior Sylvian Point (ASP), and it gives more

ed 25 men and 25 women with a mean age of 59

details concerning the course of SF along SS inyears (range 22‑82 years).Images were acquired on

actual patients.Our clinical application also proved

a General Electric 64‑row scanner (GE Yokogawa

its eﬃcacy. By placing the SS as the center of theMedical systems, Tokyo, Japan). Osirix 3.3.2‑

craniotomy,SF was clearly viewed at the center of

DICOM viewer for Mac OS X was used. Images

the operative ﬁeld without any necessary advanced

were viewed using two‑dimensional (2D) multiguidance system.eSF and its adjacent arteries wereplanar reconstruction (M PR). The length ofalso successfully identiﬁed in all 5 patients withinsquamous suture (SS) was created by drawing a

the distance of 1.5 cm above SS perpendicular toperpendicular line from OM to the point of SS

OM line.

observed on coronal view. The length of SF was

Despite advancement in image guidance, includ-

also created in a similar fashion.The length of bothing real time ones,not infrequently we encountered

SS and SF was measured at 0,1,1.5,2,2.5,3,3.5,and

equipment malfunction or navigational shifts and/4 cm from EAM , respectively. Region of interest

or errors. In this situation, neurosurgeon should(ROI) was saved as distance value (in centimeter).

possess the anatomic knowledge to ʻ
conventionallyʻMeasurement was performed on right and left sides.

correct or continue the scheduled surgery. In

Statistical analysis was performed using SPSS 14

another instance, where image guidance or real

for windows. T test was used to compare meanstime navigation tools are not available in hospitals,

between two independent variables. The level ofneurosurgeon is expected to perform eﬃcient sur-signiﬁcance (p)was set at a probability value of lessgery with whatever available tools. In regards tothan 0.05.

simple and reliable landmarks, this is where SS

eSF has been used widely to ﬁnd the suitablecomes in merits for clinical application. The sur-donor artery in STA‑MCA bypass. Several tech-geon can perform precise craniotomy without theniques to point the exact location have been em-

necessity of using any advanced image guidance;ployed, ranging from superﬁcial landmarks toand it is reliable since it is a bony landmark,there-

image‑guided landmark. First skin‑marking study

fore it is not shifted.

was described in 1976 by Norman Chater et al.
However, the study was based on cadaveric study

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

using skin marking,therefore there might have been
bias of results.Other authors also designed marking
282

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Kidneytransplantation recovers the reduction level ofserum sulfatide in ESRD patients via processes
correlated to oxidative stress and platelet count（腎移植は，酸化ストレスや血小板数と関連した機構により，末期腎機能障害患者の血清スルファチド値を回復させる）
王

立軒（論文の内容の要旨）

依存性に増加するが，その回復速度は腎機能の改善よ【背景と目的】スルファチドは血清リポ蛋白質を構成

り遅く腎移植１年後に健常者レベルに到達した。７種するスフィンゴ糖脂質の主要成分である。
血清スルファ

類のリゾスルファチドの構成比率には変化なく，血清チドの生理的意義に関する過去の報告では，血清スル

スルファチド値の回復は質的変化を伴わない量的変化

ファチドは血液凝固阻害作用および血小板凝集阻害作によるのと推定された。腎移植後に血清クレアチニン

用を持つ内因子であることが推測されている。血清スが急速に改善する急性期と血清クレアチニンが定常状

ルファチド値は，血液透析患者で著しく低下しており態になる安定期の２つの時相を，移植後100日以降の心血管病の罹患率と強く相関することが報告され，血平均クレアチニン値＋19.6SD を閾値にして分離し，

清スルファチドが腎機能障害患者において多発する心それぞれの時相毎に血清スルファチド値と相関する因血管病の発症に関連する可能性が示唆されている。

子を重線形回帰分析により検討した。急性期および安しかしながら，腎機能障害患者における血清スルファ

定期とも，最も血清スルファチド値と相関する因子はチド値の動態や，ヒトの内因性血清スルファチドの機

腎移植後の時間対数であった。安定期においては，血能に関しての情報は，非常に少ない。

清スルファチド値は，酸化ストレスマーカーである

今回の研究では，腎移植による血清スルファチドの

M DA と逆相関，そして血小板数と正相関を示した。

動態変化を観察することで，腎機能の回復とスルファ【結論】腎移植により腎機能が回復すると，低下してチド値の関連を明らかにすることを試みた。

いた血清スルファチド値は時間依存性に回復すること

また，血清スルファチド値に関連する因子についてが初めて明らかとなった。腎機能の改善より緩徐に回

多変量解析を試み，血清スルファチドの体内動態機序

復する血清スルファチド値の体内動態からは，腎機能や機能について明らかにすることを試みた。

と血清スルファチド値の間に存在する因子の存在が考【材料および方法】信州大学附属病院にて2007年からえられた。

2009年の間に腎移植を受け，保存血清採取とスルファ

今回の統計学的解析から，腎移植による血清スルファ

チド測定に同意した５人の腎移植患者を対象とした。

チド値の回復機序として，全身的な酸化的ストレスの保存血清検体を用いて，血清スルファチドを測定し，改善を介している可能性が示唆された。以前に王らの様々な臨床データとの相関解析を行った。また酸化ス

グループは，腎機能障害マウスを用いた動物実験によトレスマーカーとしてマロンジアルデヒド（MDA）

り「腎機能障害に伴う全身的な酸化ストレスの上昇がの測定も行い併せて検討した。

肝臓でのスルファチド産生を抑制し血清スルファチド

血清スルファチド値は，血清脂質を抽出しスルファチ

値を低下させる」というメカニズムを提唱しているが，ドをリゾスルファチドに変換後，マトリックス支援レー

今回の腎移植患者における血清スルファチドの動態は，

ザー脱離イオン化飛行時間型質量分析器（MALDI‑

そのメカニズムを裏付ける可能性がある。

TOF M S）を用いて，その含有量を測定した。M DA

また，今回示された血清スルファチド値と血小板数

測定は，過酸化脂質比色定量用キットを用いて測定しとの相関は，内因性血清スルファチドの生理的機能がた。統計解析ソフト（SPSS ver. 18.0J）を用い，血血小板機能と関連する可能性を示唆している。腎移植

清スルファチド値と相関する因子をSpearman相関係患者では，透析患者に比 し著明に心血管病リスクが数にて抽出後，重線形回帰分析を行い血清スルファチ

減少することが知られているが，腎移植による血清ス

ド値の関連因子を特定した。

ルファチドの回復が血小板機能に影響を及ぼし腎移植【結果】腎移植後，すべての患者で１カ月以内に血清患者の予後を改善させている可能性が考えられた。

クレアチニンは急速に低下し，その後定常状態となっ（論文審査の結果の要旨）た。腎機能の回復に伴い，血清スルファチド値は時間
No. 5, 2012

スルファチドは血清リポ蛋白質を構成するスフィン283

審査学位論文要旨

ゴ糖脂質の主要成分であり，血液凝固阻害作用およびた。

血小板凝集阻害作用を持つ。血清スルファチド値は血３．７種類のリゾスルファチドの構成比率には変化な

液透析患者で著しく低下しており心血管病の罹患率とく，血清スルファチド値の量的回復は質的変化を伴強く相関することが報告されているが，腎機能障害患わなかった。

者における血清スルファチド値の動態や，ヒトの内因

４．急性期および安定期とも，最も血清スルファチド

性血清スルファチドの役割に関しての情報は非常に少値と相関する因子は腎移植後の時間対数であった。

ない。そこで，今回，腎機能の回復による血清スルファ

５．安定期においては，血清スルファチド値は，酸化チドの動態変化を観察することで，腎機能とスルファ

ストレスマーカーである M DA と逆相関，そしてチド値の関連を明らかにすることを試みた。2007年〜

血小板数と正相関を示した。

2009年の間に信州大学附属病院で腎移植を受けた患者

腎機能の回復が血清スルファチド値を強力に改善さを対象に，血清スルファチド値の変化について検討しせることを示したが，緩徐に回復する血清スルファチ

た。腎移植の過程として，腎不全状態から腎機能が安ド値の体内動態からは，腎機能と血清スルファチド値

定状態に至るまでの急性期と，それ以後の安定期に分の間に存在する因子の存在が考えられた。今回の統計

け，それぞれの時相について血清スルファチド値に関学的解析から，腎移植による血清スルファチド値の回連する因子について多変量解析を試み，血清スルファ

復は，全身的な酸化的ストレスの改善を介している可チドの体内動態やその機能について明らかにすること能性が考えられた。

を試みた。

また，今回示された血清スルファチド値と血小板数

その結果，王は以下の結論を得た。

との相関は，内因性血清スルファチドの生理的機能が１．腎移植後，すべての患者で１カ月すると腎機能は血小板機能と関連する可能性を支持している。腎移植

定常状態となり，腎機能の回復に伴い血清スルファによる血清スルファチドの回復が血小板機能に影響を

チド値は時間依存性に増加した。

及ぼし腎移植患者の予後を改善させている可能性が考

２．血清スルファチド値の回復速度は腎機能の改善より遅く腎移植１年程度かけて健常者レベルに到達しえられた。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Acute kidney injury induced by protein‑overload nephropathy down‑regulates gene expression ofhepatic cerebroside sulfotransferase in mice, resulting in reduction of liver and serum sulfatides（蛋白質過負荷腎症マウスに生じる急性腎障害は，肝臓セレブロシドスルホトランスフェラーゼの遺伝子発現を抑制し，肝臓及び血清中のスルファチド量を減少させる）張暁（論文の内容の要旨）き，今回張暁 は，マウスレベルで腎機能障害と血清【背景と目的】スルファチドはスフィンゴ糖脂質の一スルファチド低値の関連性について検証を行った。

種であり，セレブロシドのガラクトースＣ‑3位に硫酸【材料及び方法】PPARα遺伝子欠損マウスに対し，基が結合した化学構造を有する。生体内では，ミエリ

BSA を１日当たり0.4g の投与量で腹腔内投与し，蛋ン構成脂質として神経伝達に関わるほか，腎臓や肝臓

白質過負荷腎症を誘導した。張暁 らのグループは過などに存在が認められている。また，血清リポ蛋白に

去に，同マウスに対する BSA 処理が極めて短期間含まれる主要な糖脂質としても知られている。張暁（４日以内）に重度の腎障害を誘導することを証明しらのグループは，家族性高コレステロール血症の動物た。本研究では，過去の研究成果に基づき，BSA 投

モデルを用いた10年以上に渡る研究成果に基づき，血与１日目及び４日目に血清，肝臓，腎臓を回収し，経清スルファチドの血栓形成阻害作用を提案してきた。

時的な解析を行った。血清及び組織中のスルファチド

そして最近，末期腎不全透析患者において，血清スル

は HIP 法により抽出し，アルカリ鹼化処理により脂ファチド値が健常者の値に比べて著しく低いこと，さ肪酸を除去したリゾスルファチドに変換後，MALDI‑

らに，それが心血管障害の発症に強く関連することを

TOF MS 法で分析した。７種類のリゾスルファチド

報告している。この臨床試験から得られた知見に基づの含有量を算出し，これらの総量をスルファチドの値

284

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨とした。また，各組織中の蛋白及び mRNA 発現量は，それぞれイムノブロット法及びリアルタイム PCR 法

ルファチド低値の関連について検証を行った。
PPARα遺伝子欠損マウスに対し，BSA を１日当にて測定した。

たり0.4g 腹腔内投与し，蛋白質過負荷腎症を誘導し【結果】BSA 処理により，血清及び肝臓のスルファチ

た。同マウスに対する BSA 投与は極めて短期間（４ド値はいずれも時間依存的に低下した。一方，腎臓で日以内）に重度の腎障害を誘導するので，投与１日目

は，同処理によるスルファチド量の増加が認められた。

及び４日目に血清，肝臓，腎臓を回収した。血清及びスルファチドの組成（７種類のリゾスルファチドの含

組織中のスルファチドは HIP 法により抽出し，脂肪有比）は，BSA 処理の有無に関わらず，血清型と肝酸を除去したリゾスルファチドに変換後，MALDI‑

臓型で一致しており，腎臓型の組成とは大きく異なっ

TOF MS 法で分析した。７種類のリゾスルファチドていた。スルファチドの量的変化に関する分子レベルの総量をスルファチドの値とした。各組織中の蛋白及の情報を得るため，スルファチド代謝関連酵素群の発び mRNA 発現量は，それぞれイムノブロット法及び現量変化を調べた。スルファチドの生合成に働くセレ

リアルタイム PCR 法にて測定した。

ブロシドスルホトランスフェラーゼの肝臓発現量は，その結果，張は次の結論を得た。

蛋白及び mRNA レベルで共に時間依存的に減少して１．BSA 処理により，血清及び肝臓のスルファチド

いた。一方，腎臓では，同酵素の発現量の増加が観察

値はいずれも時間依存的に低下した。一方，腎臓でされた。その他の関連酵素については，いずれの組織

は，スルファチド値の上昇が認められた。

においても有意な発現量変化は認められなかった。

２．スルファチドの組成は，BSA 処理の有無に関わ

BSA 処理により，腎臓では炎症細胞浸潤・酸化スト

らず，血清型と肝臓型で一致しており，腎臓型の組

レスの著増が観察された。一方，肝臓では，炎症・細成とは大きく異なっていた。

胞傷害は確認されなかったが，BSA 処理に伴う過酸

３．BSA 処理により，スルファチド生合成酵素：セ化脂質の増加や NADPH oxidase の発現亢進が認めレブロシドスルホトランスフェラーゼの肝臓発現量

られ，急性腎障害に起因する全身性の酸化ストレスのは，蛋白及び mRNA レベルで共に時間依存的に減増加が示唆された。

少した。一方，腎臓では，同酵素の発現量増加が観【結論】BSA 誘導性の急性腎障害を呈する本マウスで察された。

は，肝臓のスルファチド生合成の抑制が生じており，

４．BSA 処理により，腎臓では炎症 や 酸 化 ス ト レ

その結果，血中へのスルファチド分泌量が減少したもスの著増が観察された。一方，肝臓には炎症は生のと考えられた。そのメカニズムとしては，腎機能障

じていなかったが，過酸化脂質の増加や NADPH

害に起因する全身的な酸化ストレスの増加が，肝臓のoxidase の発現亢進が認められた。

スルファチド合成機能に影響を及ぼした可能性が示唆

これらの結果により，BSA 誘導性の急性腎障害をされた。以上の成果は，末期腎不全透析患者において呈する本マウスでは，肝臓のスルファチド生合成の抑

血清スルファチドが低値である機構を理解する上で，制が生じており，その結果，血中へのスルファチド分

有用な情報を提示するものと思われた。本研究から，泌量が減少したものと考えられた。そのメカニズムとスルファチド代謝に関する腎肝連関の新たな概念を提しては，腎機能障害に起因する全身的な酸化ストレス

案することができた。

の増加が，肝臓のスルファチド合成機能に影響を及ぼ（論文審査の結果の要旨）した可能性が示唆された。以上の成果は，末期腎不全

スルファチドは血清リポ蛋白に含まれる代表的なス

透析患者において血清スルファチドが低値である機構

フィンゴ糖脂質であり，血栓形成阻害作用を有するこを理解する上で，有用な情報を提示するものと思われとが指摘されている。最近張 暁た。本研究から，スルファチド代謝に関する腎肝連関らのグループは，末期腎不全透析患者において，血清スルファチド値がの新たな概念を提案することができた。よって，主査，

健常者の値に比べて著しく低いこと，さらに，それが副査は一致して本論文を学位論文として価値があるも心血管障害の発症に強く関連することを報告している。

のと認めた。

今回張 暁

は，マウスレベルで腎機能障害と血清ス

No. 5, 2012285

審査学位論文要旨

ApoA‑ deﬁciency in mice is associated with redistribution of apoA‑ and aggravated AApoA
amyloidosis（マウスアポリポタンパク質Ａ‑ の欠損はアポリポタンパク質Ａ‑ の再分配とAApoA アミロイドーシスの悪化を伴う）
王耀

勇（論文の内容の要旨）で解析した。HDL 及びリポタンパク質分析：水ある【背景と目的】血清高密度リポ蛋白質（HDL）では，主

いは AApoA アミロイド線維を投与後０，２，４カなアポリポタンパク質はapoA‑ （約70％）と apoA‑

月のマウス（２，４，６カ月齢に相当）から絶食後に（約20％）である。ApoA‑ はすべての脊椎動物

血漿を採取した。① 血漿および HPLC で分離した各に存在し，コレステロールの逆輸送の促進や，酸化ス

リポタンパク質分画の総，及び HDL コレステロール，

トレスの抑制により，心血管疾患に対する防御効果をトリグリセリドを定量した。② Sudan Black B で染持つことが報告されてきた。一方，apoA‑ はヒト，

色した血漿を native‑PAGE により分離して，HDL

マウス，ラット，魚類にのみ存在し，HDL の維持，の分布を調べた。Western blot 法によってアポリポ

高脂血症の誘導，炎症反応やインスリン抵抗性の促進

タ ン パ ク 質（apoA‑ ，Ａ‑ ，Ｅ，Ａ‑ ，Ｃ‑ ）等の重要な生理的な機能を持っていることが報告されの分布を調べた。③ SDS‑PAGE/western blot 法にている。またapoA‑ はマウス老化アミロイドーシス

よって血漿アポリポタンパク質（apoA‑ ，apoE）のアミロイド線維（AApoA ）の前駆蛋白である。

濃度を調べた。
６カ月齢
Apoa2 mRNA の発現量：２，

生理的状況では apoA‑ はＡ‑ /Ａ‑ リポ蛋白質のの WT，Apoa1

みに存在し，Ａ‑ /Ａ‑ リポ蛋白質は密度が一番高を分取し，RT‑PCR と real‑time‑PCR により，
Apoa2

い HDL3に存在する。ApoA‑ や apoA‑ の欠損患

mRNA 発現量を調べた。

者の心血管疾患の発症率に関しての統一的な見解はま【結果】Apoa1

だなく，ApoA‑ とapoA‑ の機能やその相互作用に

HDL コレステロール，トリグリセリドが WT マウス

ついては不明点がまだ多く残されている。
また ApoA‑

より著しく減少したが，apoE は約２倍に増加した。

の新たな機能としてアルツハイマー病での Aβアミ

その後，加齢に伴いapoA‑ ，総，及び HDL コレス

ロイド線維の形成，沈着を抑制することが報告されてテロール，トリグリセリドが有意に増加した。② 加

いるが，そのメカニズムや，他のアミロイドーシスと齢に伴い，apoA‑ ，コレステロールが HDL3からの関係も解明されていない。本研究では，apoA‑

分子量の大きい HDL1に再分配した。③ AApoA ア

欠損（Apoa1）マウスを用いて，apoA‑ やその他

ミロイド線維を投与後，全身の線維沈着量が有意に増のアポリポタンパク質の加齢に伴う変化や，HDL な

加したが，特に心臓での沈着増加は顕著であった。④

どのリポタンパク質への分配を検討し，apoA‑ アミ

肝臓，心臓での Apoa2 mRNA の発現量が加齢に伴ロイドーシスの発症への影響を解析した。

い増加した。⑤ 重篤な AApoA アミロイドーシス【材料及び方法】マウス：C57BL/6J（WT）マウスはは血漿apoA‑ やコレステロール濃度の減少を引き起日本エスエルシーから，Apoa1

こした。

マウスは Jackson

マウスの肝臓と心臓から総 mRNA

マウスでは，① ２月齢で，総，及びLaboratoryより購入し，信州大学ヒト環境科学研究【結論】本研究では，apoA‑ は血漿 apoA‑ やコレ

支援センター動物実験施設で繁殖/飼育した。けんか

ステロール濃度や，各リポタンパク質分画への分配をによる影響を回避するため，雌マウスを使用し，5.6

調節する作用を持つことが示された。また ApoA‑％脂肪量を含む餌を自由摂取させた。アミロイドーシの欠損に対してapoA‑ は代償作用を持っていること

スの誘発：重度にアミロイド線維が沈着した SAMR1も明らかになった。リポタンパク質やapoA‑ の分布

C（Apoa2 ）マウス肝臓よりアミロイドーシス誘発の変動（再分配）は AApoA アミロイドーシスの発用の AApoA アミロイド線維を分取した。２カ月齢症に重要な役割を果たすことが示唆されたが，そのメの WT，Apoa1

アミ

カニズムに関しては検討が必要である。

ロイド線維を投与後，２カ月と４カ月後に屠殺した。

（論文審査の結果の要旨）

マウスの 尾 静 脈 に AApoA

全身のアミロイド沈着程度をコンゴ赤染色，免疫染色286

血清高密度リポ蛋白質（HDL）では，主なアポリ
信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

ポタンパク質は apoA‑ （約70％）と apoA‑ （約テロール，トリグリセリドが WT マウスより減少20％）であり，apoA‑ ，apoA‑ とも重要な生理し た が，そ の 後，加 齢 に 伴 い 有 意 に 増 加 し た。

機能を担当すると考えられている。生理的状況ではApoE は２カ月齢で約２倍に増加したが，加齢変化

apoA‑ は主に密度が一番高いHDL3のＡ‑ /Ａ‑ リ

はなかった。WT マウスでは加齢に伴う変化は認

ポタンパク質のみに存在するが，ApoA‑ と apoA‑

められなかった。

の機能やその相互作用については不明な点がまだ多② Native PAGE 及びゲル濾過 HPLC 法で調べたく残されている。また ApoA‑ の新たな機能として

結果，ApoA‑ とコレステロールが加齢に伴い，アルツハイマー病での Aβアミロイド線維の形成と沈HDL3から分子量の大きい HDL1に再分配されたこ

着を抑制することが報告されているが，そのメカニズ
ムや，他のアミロイドーシスでの効果は解明されていない。本研究では，apoA‑ 欠損（Apoa1とが明らかになった。
③ Apoa1）マ ウ スを用いて，apoA‑ の代謝（apoA‑ やその他のアポマウスでは，全身（特に心臓）でのAApoA アミロイドーシスが悪化した。
④ Apoa1

マウ ス で は，肝 臓 で の Apoa2 mRNA

リポタンパク質の加齢に伴う量の増減やリポタンパクの発現量が加齢に伴い有意に増加した。Apoa1

質への分配）と，AApoA アミロイドーシス発症へ

マ ウ ス で は，心 臓 で の Apoa2 mRNA の 発 現 量の影響を解析した。

がWT に比２，４，６カ月 の Wild‑type（WT），Apoa1

マmRNA の増大が AApoA アミロイドーシス悪化

ウスでの① 血漿中アポリポタンパク質（apoA‑ ，
apoE）の濃度や総，及び HDL コレステロール，ト

して増加した（約５倍）。このようなに関係すると考えられる。
⑤ Apoa1

マウスでの重篤な AApoA

アミ ロ イ

リグリセリド濃度を解析した。② アポリポタン パ

ドーシスはapoA‑ ，コレステロール濃度の減少を

ク 質（apoA‑ ， apoA‑ ， apoE， apoA‑ と引き起こしたが，リポタンパク質の分配は変化しな

apoC‑ ）とコレステロールのリポタンパク質への分かった。

配を，Native PAGE，ゲル濾過 HPLC で調べた。③以上の結果は，apoA‑ の欠損はapoA‑ の加齢に２カ齢の WT，Apoa1

マ ウ ス に AApoA

アミロ

伴う代謝とリポタンパク質への分配に影響することを

イド線維を投与してアミロイドーシスを誘発し，２カ示し，apoA‑ を介した新たなリポタンパク質調節機

月と４カ月後に屠殺して全身のアミロイド沈着程度を構を示唆した。またapoA‑ の欠損が AApoA アミ

解析した。④ ２，６カ月齢の WT，Apoa1

マウス

ロイドーシスを悪化することも示唆された。このようの肝臓と心臓の Apoa2 mRNA 発現量を調べた。⑤な王 耀勇の研究成果は，ApoA‑ とapoA‑ の相互

アミロイドーシス発症が apoA‑ 及び HDL コレス

作用の解明や，アミロイドーシスの発症抑制機構の解テール濃度とリポタンパク質の分配に及ぼす影響を解明と予防法の開発に新たな視点を与えるものであり，析した。

非常に重要であり，かつ意義あることと考えられた。

その結果，王耀勇は次の結論を得た。
① ２，４，６カ月齢の Apoa1

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とマウスでは，２カ

して価値があるものと認めた。

月齢で apoA‑ ，総コレステロール，HDL コレス

Generation of induced pluripotent stem cells from human adipose‑derived stem cells without c‑MYC（c‑MYC を用いないヒト脂肪組織由来幹細胞からの人工多能性幹細胞の樹立）
青

木

哲

宏

（論文の内容の要旨）

疾患の治療に用いてきた。間葉系幹細胞は骨髄のみな【背景と目的】近年，損傷を受けた様々な組織を再生

らず，脂肪組織内おいても存在することが分かっておする可能性を持つ幹細胞治療が注目されている。ヒト

り，脂肪組織は有害事象が少ない脂肪吸引術により容幹細胞には，胚性幹細胞（ESCs）と成人幹細胞とに

易にかつ大量に採取され得る。実際，肥満者が増加す大別される。われわれはこれまで，骨軟骨分化能をもる欧米や我が国においても脂肪吸引術は普及した術式

つヒト骨髄由来間葉系幹細胞（成人幹細胞）を骨軟骨である。脂肪組織には間葉系幹細胞，すなわちヒト脂No. 5, 2012287

審査学位論文要旨

肪組織由来幹細胞（hASCs）が存在し，hASCs もいて導入された c‑MYC の再活性化による腫瘍形成がくつかの疾患の治療に応用されている。しかし，この報告されており，c‑MYC を用いることは好ましくなような間葉系幹細胞の増殖能や分化能は継代を繰り返

いと考えられる。c‑MYC を導入しない，もしくは遺すことにより低下することが分かっている。一方，

伝子を導入しない方法により樹立効率が低下しても，

ESCs は継代を繰り返しても低下しない増殖能と三胚

親株細胞数が豊富にあれば iPSCs の絶対数は多く得葉への分化能を併せ持っているが，ESCs は受精卵かられる為，その点で多量に採取され得る脂肪組織はら採取するという倫理的な問題があり，さらに ESCs

cell source として好ましい。われわれは，hASCs かは同種移植を行う場合に拒絶反応が生ずる可能性があら c‑MYC なしでも iPSCs が樹立可能であり，このる。また，ESCs は疾患特異的に樹立することが困難得られた iPSCs は，ESCs と同様の未分化性を持ち，である。Takahashi らが最初に報告したヒト人工多in vitro/vivo において三胚葉への分化能があること

能性幹細胞（iPSCs）は，これらの ESCs が包含するを示した。

問題を解決した。iPSCs は成人体細胞へ山中ファク（論文審査の結果の要旨）

ターと呼ばれる導入因子 OCT3 /4，SOX2，KLF4，

近年，損傷を受けた様々な組織を再生する可能性を

c‑MYC を導入することで樹立されるが，親株細胞（cell持つ幹細胞治療が注目されている。ヒト幹細胞には，

source）によりその樹立速度や効率に相違があること

胚性幹細胞（ESCs）と成人幹細胞とに大別される。

が様々な報告により知られている。また，親株細胞は，われわれはこれまで，骨軟骨分化能をもつヒト骨髄由採取が容易で多量に得られるものが望ましいと考え，

来間葉系幹細胞（成人幹細胞）を骨軟骨疾患の治療にわれわらはそのような条件を満たす hASCs に注目用いてきた。間葉系幹細胞は骨髄のみならず，脂肪組

し，hASCsがガン遺伝子であるc‑MYC を用いずとも

織内おいても存在することが分かっており，脂肪組織

iPSCs の cell source に為り得るか検証した。

は有害事象が少ない脂肪吸引術により容易にかつ大量【方法】市販の hASCs2株を親株細胞として用い，山に採取され得る。実際，肥満者が増加する欧米や我が中ファクターと呼ばれる導入因子 OCT3 /4，SOX2，国においても脂肪吸引術は普及した術式である。脂肪KLF4，c‑MYC から c‑M YC を除く３因子をレトロ

組織には間葉系幹細胞，すなわちヒト脂肪組織由来幹ウイルスベクターにより導入し，ESCs 様のコロニー細胞（hASCs）が存在し，hASCs もいくつかの疾患をそれぞれの親株細胞より得た。これらのコロニーをの治療に応用されている。しかし，このような間葉系

拡大培養し，これらの細胞の未分化性や多分化能を検幹細胞の増殖能や分化能は継代を繰り返すことにより証し，さらに核型解析及び STR 分析を行った。

低下することが分かっている。一方，ESCs は継代を【結果】得られたコロニーは，20回以上の継代を行っ繰り返しても低下しない増殖能と三胚葉への分化能をても形態を維持する自己複製能を示した。また，これ併せ持っているが，ESCs は受精卵から採取するといらのコロニーは免疫染色により ESCs 特異的な表面

う倫理的な問題があり，さらに ESCs は同種移植を抗原と転写因子を示し，さらにコロニーから採取し行う場合に拒絶反応が生ずる可能性がある。また，た RNA は RT‑PCR により ESCs 特異的未分化マー

ESCs は疾患特異的に樹立することが困難である。

カー遺伝子の発現を示し，その未分化性が確認された。

Takahashi らが最初に報告したヒト人工多能性幹細また，これらの細胞は in vitro 及び in vivo いずれに胞（iPSCs）は，これらの ESCs が包含する問題を解

おいても三胚葉への分化を示し，ESCs と同様の多分決した。iPSCs は成人体細胞へ山中ファクターと呼ば化能を示した。核型は正常であり，STR 分析から他れる導入因子 OCT3 /4，SOX2，KLF4，c‑MYC をの iPSCs の混入がなくそれぞれの親株細胞由来であ導入することで樹立されるが，親株細胞（cell source）

ることを確認した。

によりその樹立速度や効率に相違があることが様々な【考察及び結論】皮膚線維芽細胞，ケラチノサイト，

報告により知られている。また，親株細胞は，採取が容血液細胞など，様々な cell source からのヒト iPSCs

易で多量に得られるものが望ましいと考え，われわらの樹立がすでに報告されている。それらの報告から，はそのような条件を満たす hASCs に注目し，hASCs

cell source の違いにより導入因子数や樹立効率に違がガン遺伝子である c‑MYC を用いずとも iPSCs のいがあることが考えられる。また，がん遺伝子である

cell source に為り得るか検証した。

c‑MYC を導入因子に含めると，キメラマウスにおい288得られたコロニーは，20回以上の継代を行っても形
信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

態を維持する自己複製能を示した。また，これらのコ考えられる。また，がん遺伝子である c‑MYC を導

ロニーは免疫染色により ESCs 特異的な表面抗原と転入因子に含めると，キメラマウスにおいて導入された

写因子を示し，さらにコロニーから採取した RNA は

c‑MYC の再活性化による腫瘍形成が報告されており，

RT‑PCR により ESCs 特異的未分化マーカー遺伝子

c‑MYC を用いることは好ましくないと考えられる。

の発現を示し，その未分化性が確認された。また，こc‑MYC を導入しない，もしくは遺伝子を導入しない

れらの細胞は in vitro 及び in vivo いずれにおいても方法により樹立効率が低下しても，親株細胞数が豊富

三胚葉への分化を示し，ESCs と同様の多分化能を示にあれば iPSCs の絶対数は多く得られる為，その点した。核型は正常であり，STR 分析から他の iPSCs

で多量に採取され得る脂肪組織は cell source としての混入がなくそれぞれの親株細胞由来であることを確好ましい。われわれは，hASCs から c‑MYC なしで認した。

も iPSCs が樹立可能であり，この得られた iPSCs は，

皮膚線維芽細胞，ケラチノサイト，血液細胞など，

ESCs と同様の未分化性を持ち，in vitro/vivo におい

様々な cell source からのヒト iPSCs の樹立がすでにて三胚葉への分化能があることを示した。主査，副査報告されている。それらの報告から，cell source のは一致して本論文を学位論文として価値があるものと違いにより導入因子数や樹立効率に違いがあることが認めた。

Genetic analysis of TP53 in childhood myelodysplastic syndrome and juvenile myelomonocytic leukemia（小児骨髄異形成症候群および若年性骨髄単球性白血病における TP53遺伝子の解析）
齋

藤

章

治

（論文の内容の要旨）

17）（p10；q10）が唯一の染色体異常であった。免疫【背景と目的】癌抑制遺伝子である TP53遺伝子は，染色ではクロット標本の約20％，骨髄単核球サイト

17番染色体上に座位し，細胞増殖抑制因子として働く

スピン標本の約50％の細胞に p53の過剰発現を認め

成人の骨髄異形成症候群（MDS）
p53をコードしている。

た。FISH では骨髄細胞の半数に TP53の欠失を認め

および急性骨髄性白血病（AM L）患者に お い て，た。また，末梢血と骨髄細胞に TP53のヘテロ点突然

TP53変異は約10％の症例で認められ，特に17番染色

変異（410Ｔ＞Ａ）がみられた。この患者は化学療法

体短腕の欠失や複雑核型を持ち，治療抵抗性で病期がや放射線療法に抵抗性を示し，２度の造血幹細胞移植進行した例に高頻度に認められることが報告されていにもかかわらず診断後２年で原病死した。この患者はる。しかし，小児の血液腫瘍性疾患における TP53異精神発達遅滞と低身長を合併しており，先天的な遺伝

常の頻度については不明な点が多い。このため，われ子異常が示唆された。しかし，爪から抽出した DNA

われは９例の小児 MDS と18例の若年性骨髄単球性白では TP53変異は認めず，既知の先天性骨髄不全症候

血病（JM M L）患者について，直接シークエンス，

群を支持する臨床所見や遺伝子異常は認められなかっ

FISH，免疫染色を用いて TP53の変異，欠失，p53過た。

剰発現の有無を検討した。

この患者の末梢血細胞から各細胞系列に分離した細【方法】変異解析は TP53の exon5‑9領域を PCR で増胞集団と，骨髄前駆細胞から作製したコロニー構成細幅させた後に，直接シークエンスで変異の有無を解析

胞を用いて TP53異常を解析した。その結果，CD14/した。免疫染色はマウス抗 p53抗体を，FISHは TP53

15陽性細胞，顆粒球・マクロファージ（GM ）および（LSI p53），M LL（LSI MLL）領域を標的としたプ

赤芽球系コロニー構成細胞ほぼすべてにおいて，シーローブを用いて行い，カットオフ値は正常コントロー

クエンスで TP53変異アレルのみを認め，FISH 解析

ル＋2S.D.とした。

で90％以上の細胞に TP53欠失がみられた。従って，【結果】MDS９例中１例にTP53遺伝子の異常を認めた

この患者の骨髄系細胞においては，TP53の１アレル

が，JM ML では18例全例（PTPN11変異７例，KRASが欠失し，残りの１アレルが変異していることから，

変異４例，NRAS 変異５例，NF1異常２例）で TP53

両アレルの TP53が不活化されていることが示唆され異常を認めなかった。

た。一方，リンパ球系細胞では TP53の欠失も変異もTP53遺伝子異常を認めた Case６では，der（５；No. 5, 2012

認めなかった。また，初診時から der（５；17）
（p10；
289

審査学位論文要旨q10）が唯一の染色体異常であり，初診時から９カ月例に高頻度に認められることが報告されている。しか前（生後８カ月時）の末梢血では TP53変異は認めらし，小児の血液腫瘍性疾患における TP53異常の頻度れなかった。

については不明な点が多い。本研究では９例の小児

さらに Case６について FISH で MLL 遺伝子のコ

M DS と18例の若年性骨髄単球性白血病（JMML）患

ピー数を検討したところ，MLL を３コピー持つ細胞者について，直接シークエンス，FISH，免疫染色を

は初診時末梢血細胞では１％であったが，初診時の骨用いて TP53の変異，欠失，p53過剰発現の有無を検髄細胞から作製した GM および赤芽球コロニー構成

討した。

細胞のそれぞれ80％，65％は M LL を３コピー有し

その結果，齋藤は次の結論を得た。

ていた。TP53欠失と変異に加えて MLL を３コピー

１．小児 MDS９例中１例に TP53異常を認めた。一有する細胞は，経過中に増加し，最終的には患者末梢方，JMML では TP53異常を認めず，病態には深血細胞中の88％に達した。

く関与していないと考えられた。

【結論】⑴ 小児 M DS９例中１例に TP53異常を認め

２．TP53異常を認めた M DS 症例（Case６）では，先た。一方，JMML では TP53異常を認めず，病態に天的な異常が示唆されたが，germline では TP53

は深く関与していないと考えられた。⑵ TP53異常を変異は認めず，既知の先天性骨髄不全症候群を示唆認めた M DS 症例（Case６）では，先天的な異常がする所見を認めなかった。

示唆されたが，germline では TP53変異は認めず，

３．この患者の両アレルで TP53が不活化されている既知の先天性骨髄不全症候群を示唆する所見も得られ（１アレルが欠失，１アレルが変異）白血病クローなかった。⑶ この患者の両アレルで TP53が不活化さ

ンは，骨髄球系および赤芽球系細胞への分化能を有れている（１アレルが欠失，１アレルが変異）白血病する幹細胞に由来したと考えられた。

クローンは，骨髄球系および赤芽球系細胞への分化能

４．この患者においては後天的な TP53両アレルの不を有する幹細胞に由来したと考えられた。⑷ 本例で活化が MDS の発症に重要な役割を演じたと推定さは後天的な TP53両アレルの不活化が，MDS の発症れた。

に重要な役割を演じたと推定された。⑸ 本例では発５．この患者では発症時からTP53異常とM LLコピー症時から TP53異常と MLL コピー数の過剰を併せ持数の過剰を併せ持つクローンがごく少数存在したこつクローンがごく少数存在したことが示唆され，このとが示唆され，このクローンが本例における抗がんクローンが本例における抗がん剤や放射線治療に対す剤や放射線治療に対する抵抗性と関連していると思る抵抗性と関連していると思われた。

われた。

（論文審査の結果の要旨）

今回の研究で，９例の小児 MDS 中１例に後天的な癌抑制遺伝子である TP53遺伝子は，17番染色体上TP53変異を認めた。一 方，JMM L で は18例 全 例 でに座位し，細胞増殖抑制因子として働く p53をコード

TP53異常を認めなかった。後天的な TP53変異を持している。成人の骨髄異形成症候群（M DS）および

つ小児 MDS についてはこれまで報告がなく重要な知

急性骨髄性白血病（AM L）患者において，TP53変異

見と思われ，主査，副査は一致して本論文を学位論文は約10％の症例で認められ，特に17番染色体短腕のとして価値があるものと認めた。

欠失や複雑核型を持ち，治療抵抗性で病期が進行した

RoleofDeletion Located between theIntermediateand MiddleRegions oftheHelicobacter pylori vacA
Genein Cases ofGastroduodenal Diseases（Helicobacter pylori vacA 遺伝子内の intermediateregionと middle region の間に存在する塩基配列欠損の胃十二指腸疾患における役割について）
荻

原

裕

明

（論文の内容の要旨）

middle 領域（ｍ領域）の遺伝子多型により，in vitro【背景と目的】Helicobacter pylori の vacA 遺伝子 はにおける培養細胞の空胞形成の活性が異なることが胃上皮粘膜細胞の空胞化を誘導することが以前より知示されている。近年，vacA遺伝子内のｓ領域とｍ領域られており，vacA 遺伝子内の signal 領域（ｓ領域）との中間に存在する intermediate 領域（ｉ領域）
が vacA290

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨の活性を決定する第３の遺伝子多型として報告され，i‑領域の遺伝子多型と比胃癌との関連性が示唆された。vacA 遺伝子の塩基配び粘膜萎縮に対するより優れた予測因子となる可能性

列を検索すると，新たに vacA 遺伝子内のｉ領域とｍが示唆された。

領域の間に81塩基対の塩基配列欠損（ｄ領域）が存在

して，組織学的な炎症およ（論文審査の結果の要旨）する株が存在することが分かった。そこでこの塩基配

Helicobacter pylori の病原因子として VacA（細胞列欠損に注目し，H. pylori 関連疾患および病理組織

空胞化毒素）があり，vacA の遺伝子多型として sig-

学的変化における塩基配列欠損（ｄ領域）の役割を明，intermediate 領域（ｉ領域），
nal 領域（ｓ領域）

らかにするために本研究を行った。

middle 領域（ｍ領域）の遺伝子型が報告されてきた。

【材料および方法】西洋圏（アメリカ，コロンビア）

今回，このｉ領域とｍ領域の間に81塩基対の塩基配列

および東アジア圏（日本，韓国）で採取分離された欠損を認める株が存在することを発見し，この領域を

H. pyloriのvacA遺伝子内におけるｓ，ｍ，ｉ，そしてｄ領域と定義し，ｄ領域の塩基配列欠損の胃十二指腸ｄ領域の遺伝子型を PCR 法にて検索し，その株が分疾患における役割につき検討した。

離された患者の胃粘膜病理組織学的所見と比 検討しHelicobacter pylori はアメリカ合衆国，コロンビア，

た。

韓国，日本の Helicobacter pylori 感染患者より採取【結果】東アジア圏で分離された株（東アジア株）のした菌株を用いた。アメリカ合衆国，コロンビアの株

92.6％（226/241）は s1‑i1‑m1‑d1で あ り，vacA 遺を西洋株，韓国，日本の株を東アジア株と分類した。

伝子の遺伝子多型と疾患および病理組織学的変化とのHelicobacter pylori の vacA の遺伝子型および cagA間に関係は認められなかった。しかし，西洋圏で分離の有無につき PCR 法にて検索した。vacA の遺伝子された株（西洋株）においては s1，m1，i1，d1（塩型と疾患および組織学的所見との関係性につき検討し基配列欠損なし）の遺伝子型は，それぞれ，s2，m2，

た。

i2，d2（塩基配列欠損あり）の遺伝子型と比して有その結果，荻原裕明は次の結論を得た。

意に胃癌発生の危険度が高いことが示された。（ad-１．東アジア株では，92.6％（226/241）が s1‑i1‑m1‑

justed odds ratios，3.17［95％ conﬁdence intervald1であり，vacA 遺伝子の遺伝子多型と疾患および｛CI｝，1.07 to 9.45］for s1，10.65［95％ CI，3.36

病理組織学的変化との間に関係は認められなかった。

to 31.35］for m1，8.57［95％ CI，2.85 to 25.81］

２．西洋株において，s1，m1，i1，d1の各遺伝子型

for i1，and 8.04［95％ CI，2.67to 24.16］for d1）

はそれぞれ s2，m2，i2，d2の遺伝子型と比胃炎患者のうち，胃粘膜萎縮の軽度な OLGA 分類の癌の発生の危険度が有意に高かった。

stage０と stage の患者と比し胃すると，s1，m1，i1，

３．組織学的変化においては，西洋株において s1，d1の遺伝子型は，胃癌のみならず胃潰瘍，十二指腸m1，i1，d1の各遺伝子型は有意に胃粘膜への好中潰瘍との関連性が単変量解析では示された。しかし，

球浸潤および胃粘膜萎縮を有意に引き起こすことが重回帰分析では関連性を示すことはできなかった。胃

単変量解析にて示された。

粘膜の組織学所見との比では，s1，m1，d1，i1の４．多変量解析において，ｄ領域のみが胃粘膜への好各遺伝子型は，単変量解析において優位に好中球浸潤

中球浸潤および胃粘膜萎縮との関連性が示された。

と胃粘膜萎縮を誘導することが示されたが，重回帰分

これらの結果より，西洋株において vacA 遺伝子の析では d1のみ胃体部および胃前庭部の胃粘膜内のｄ領域に81塩基対の塩基配列欠損を認めない d1遺伝

好中球浸潤および胃粘膜萎縮と関係することが示され子型の存在は，これまでに報告されてきたｓ領域，ｍた。（好 中 球 浸 潤：partial regression coeﬃcients，

領域，ｉ領域の各遺伝子型と比 して，胃粘膜の高度

1.12±0.17 in the antrum and 0.94±0.17 in theの炎症および胃粘膜萎縮に関するより感度の高い予測

corpus；Ｐ＜0.001 for both comparisons，胃粘膜萎因子となりうると考えられ，胃癌および消化性潰瘍の縮：partial regression coeﬃcients，0.60±0.30in the

危険因子の一つとなる可能性が示唆された。よって，

antrum and 0.63±0.35 in the corpus；Ｐ＝0.04 for

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値あboth comparisons）

るものと認めた。

【結論】vacA 遺伝子の d1遺伝子型は，西洋株において，これまで報告されてきた vacA 遺伝子の s‑，m‑，No. 5, 2012291

審査学位論文要旨

Induction of LYVE‑1/stabilin‑2‑positive liver sinusoidal endothelial‑like cells from embryoid bodies
by modulatin of adrenomedullin‑RAMP2 signaling（ES 細胞胚様体分化系を用いた，アドレノメ
デュリン‑RAMP2シグナル制御による LYVE‑1/stabilin‑2陽性肝類洞内皮様細胞の分化誘導）
荒居（論文の内容の要旨）

琢磨

類洞内皮細胞に発現するとされる LYVE‑1，stabilin‑

再生医療への応用が期待される細胞ソー
ES細胞は，

2が有意に上昇し，同時投与群ではその効果は相乗スである。一方で，現在，成熟した機能的肝細胞の再的であった。同時投与群における免疫染色において生およびその移植治療には限界がある。肝発生およびCD31/LYVE‑1/stabilin‑2陽性内皮細胞が確認でき，再生において，非実質細胞，特に血管内皮細胞が重要

その一部には有窓様構造が認められた。また，Ac‑

であることは周知されており，再生医療を実現させる

LDL の取り込みが亢進しており，類洞内皮特異的遺ためには肝細胞のみならず，非実質細胞を含めた再生伝子（Ｆ8，Mrc1，Fcgr2b）の発現が有意に上昇しが必要と考えられる。今回，われわれは肝再生においていた。さらに，LYVE‑1陽性内皮細胞とアルブミンて肝脈管系に特徴的な，肝類洞内皮細胞を分化させる

陽性細胞集塊が近接し肝様構造が構築され，成熟肝細ことが重要ではないかと仮定した。他方，アドレノメ

胞遺伝子発現が上昇していることが確認された。他方，

デュリン（AM ）は，多彩な生理活性を有する内因性

RAM P2ノックアウトマウスの胎仔肝における肝類洞

生理活性ペプチドとして知られている。われわれは，内皮細胞の LYVE‑1の発現は有意に低下しており，

AM およびその受容体補助タンパク RAMP2のノッ

類洞構造の破綻を示唆する所見も認められた。

クアウトマウスを作成し，いずれも胎生中期に全身のES 細胞胚様体系において，類洞内皮様細胞の分化出血および著明な浮腫により致死となることを報告

誘導が可能であった。また，類洞内皮細胞の発生およした。この結果から，AM ‑RAM P2シグナルは，血び成熟化において，AM シグナル刺激および TGFβ管・リンパ管の形成・成熟に必須であることが明らか

シグナル抑制が重要であることが示唆された。近年，となった。更に，AM および RAMP2ノックアウト

急性肝障害や肝硬変に対して血管前駆細胞の経門脈的マウスの出血性変化は肝臓の組織内でも認められるた移植が肝機能を改善させたとする報告や，血友病モデ

め，AM ‑RAMP2シ グ ナ ル が 肝 類 洞 内 皮 細 胞 の 発

ルマウスに類洞内皮細胞を経門脈的に移植したところ，生・成熟にも関与していることが示唆された。

血友病が改善したという報告がみられる。また，肝細方法であるが，ES 細胞の懸滴培養により胚様体を胞および非実質細胞を含めたバイオ人工肝による透析形成させ，４日目にこれを接着培養に移行させた。接治療の実験も進められている。本実験系で得られた知着培養後，時期を振り AM を添加し，血管内皮およ

見は将来，前述したような再生医療に活用できる可能

び肝細胞・肝類洞内皮特異的遺伝子の発現を評価した。

性が示唆された。

更に TGFβ1受容体キナーゼ阻害剤である SB431542
が，肝類洞内皮細胞の分化・成熟を促進するという報告があることから，AM との比（論文審査の結果の要旨）
再生医療への応用が期待される細胞ソー
ES細胞は，

および両者の併用スである。一方で，現在，成熟した機能的肝細胞の再の検討を行った。また，RAMP2ノックアウトマウス

生およびその移植治療には限界がある。肝発生およびの胎仔肝における肝類洞内皮の解析も追加検討した。

再生において，非実質細胞，特に血管内皮細胞が重要

胚様体形成４日目に接着培養した直後から14日目ま

であることは周知されており，再生医療を実現させるで AM を添加した際，血管内皮マーカーである CD31

ためには肝細胞のみならず，非実質細胞を含めた再生が陽性の細胞群が AM 用量依存的に増加したが，リが必要と考えられる。

ンパ管および肝類洞内皮に発現する LYVE‑1の発現以前に，荒居らのグループは，AM およびその受は認められなかった。さらに，培養後期14日目から容体補助タンパク RAM P2のノックアウトマウスを作

AM および SB431542（TGFβ1受容体キナーゼ阻害成し，いずれも胎生中期に全身の出血および著明な浮剤）を添加し，血管内皮および肝細胞特異的遺伝子の腫により致死となることを報告した。この結果から，発現を評価した。AM 単独群，SB431542単独群ともAM ‑RAMP2シグナルは，血管・リンパ管の形成・292

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

成熟に必須であることが明らかとなった。更に，AM

その効果は相乗的であった。

および RAM P2ノックアウトマウスの出血性変化は肝２．同時投与群における免疫染色にて CD31/LYVE‑

臓の組織内でも認められるため，AM ‑RAM P2シグ

1/stabilin‑2陽性内皮細胞が確認でき，その一部にナルが肝類洞内皮細胞の発生・成熟にも関与しているは肝類洞内皮細胞に特徴的な有窓様構造が認められことが示唆された。本研究では，ES 細胞胚様体分化

た。

系を用いて，AM の内皮細胞に対する作用を検討し３．同時投与群における内皮細胞群では Ac‑LDL のた。

取り込みが亢進しており，肝類洞内皮特異的遺伝子方法であるが，ES 細胞の懸滴培養により胚様体を形成させ，４日目にこれを接着培養に移行させた。接の発現が有意に上昇していた。
４．同時投与群における LYVE‑1陽性内皮細胞とア着培養後，時期を振り AM を添加し，血管内皮およ

ルブミン陽性細胞集塊が近接し肝様構造が構築され，び肝細胞・肝類洞内皮特異的遺伝子の発現を評価した。

成熟肝細胞遺伝子発現が上昇していた。

更に TGFβ1受容体キナーゼ阻害剤である SB431542

これらの結果より，ES 細胞から肝類洞様細胞の分が，肝類洞内皮細胞の分化・成熟を促進するという報化誘導が可能であると考えられた。また，肝類洞内皮告があることから，AM との比細胞の発生および成熟化において，AM シグナル刺および両者の併用の検討を行った。

激および TGFβシグナル抑制が重要であることが示

その結果，荒居琢磨は次の結果を得た。

唆された。本実験系で得られた知見は将来，再生医療

１．培養後期からの AM および SB431542添加によに活用できる可能性が示唆された。

り，肝類洞内皮細胞に発現するとされるLYVE‑1，
stabilin‑2の発現が有意に上昇し，同時投与群では以上の結果に対して，主査，副査は一致して，本論
文を学位論文として価値があるものと認めた。

Transabdominal preperitoneal repair for obturator hernia（閉鎖孔ヘルニアに対する Transabdominal
preperitoneal repair（TAPP）法による腹腔鏡下ヘルニア修復術）
横

山

隆

秀

（論文の内容の要旨）へ変更した。二期的ヘルニア修復術について以下に示【背景と目的】閉鎖孔ヘルニアに対する腹腔鏡下修復す。ファーストステージ：小開腹創を追加して，この術はまだ一般的に広くは行われていない。そこで，創から壊死腸管の切除と吻合，ヘルニア門の腹膜を単我々は閉鎖孔ヘルニアに対する Transabdominal pre-

純縫合閉鎖する。セカンドステージ：後日，Kugel 法

peritoneal repair（TAPP）法による腹腔鏡下ヘルニにて閉鎖孔ヘルニアの修復を行う。全閉鎖孔ヘルニア

ア修復術の有用性を検討した。

症例において，術後合併症，周術期死亡，再発を認め【方法】2001年から2010年５月までに鼠径ヘルニア症ていない。

例，659例に対して TAPP 法による腹腔鏡下ヘルニア【結論】両側の鼠径部領域の評価だけでなく，同時に修復術を施行した。同期間に８例の閉鎖孔ヘルニア症

嵌頓腸管の評価も行えることから，不顕性や嵌頓閉鎖例を認め，これを対象とした。

孔ヘルニアの治療に TAPP 法によるヘルニア修復術【結果】８例中３例は手術中に偶然発見された不顕性は適切な手術法と思わる。二期的ヘルニア修復術は嵌症例であり，他の５例は術前に超音波検査および CT

頓腸管の切除を要する患者にとって適した手技である。

検査にて診断された嵌頓症例であった。両側性の閉鎖（論文審査の結果の要旨）

孔ヘルニアは８例中５例（63％）であり，片側また閉鎖孔ヘルニアに対する腹腔鏡下修復術はまだ一般

は両側に鼠径部領域のヘルニアを合併していた症例は的に広くは行われおらず，閉鎖孔ヘルニアに対する８例中７例（88％）であり，この７例は全例，大腿Transabdominal preperitoneal repair（TAPP）法

ヘルニアを合併していた。腸閉塞を呈していた５例のによる腹腔鏡下ヘルニア修復術の有用性を検討した。

嵌頓症例中，４例は腹腔鏡にて腸管の評価を行い，腸2001年から2010年５月までに鼠径ヘルニア症例，

切除不要と判断した。腸切除を必要と判断した１例は659例に対して TAPP 法による腹腔鏡下ヘルニア修復

メッシュ感染を回避するために二期的ヘルニア修復術術を施行し，同期間に８例（1.2％）の閉鎖孔ヘルニ

No. 5, 2012293

審査学位論文要旨

ア症例を認め，80歳以上の女性ヘルニアの24％を占以下に示す。ファーストステージ：嵌頓整復後，小開めた。

腹創を追加して，この創から壊死腸管の切除と吻合，症例は全例女性であり，痩せ型，高齢であった。閉

ヘルニア門の腹膜を単純縫合閉鎖する。
セカンドステー

鎖孔ヘルニア８例中３例は手術中に偶然発見された不ジ：約２‑３週間後，全身状態と炎症反応の改善を待っ顕性症例であり，他の５例は術前に超音波検査およびて，Kugel 法にて閉鎖孔ヘルニアの修復を行う。全閉

CT 検査にて診断された嵌頓症例であった。両側性の鎖孔ヘルニア症例において，術後合併症，周術期死亡，閉鎖孔ヘルニアは８例中５例（63％）であり，片側再発を認めていない。

または両側に鼠径部領域のヘルニアを合併していた症

本研究から得られた新たな知見としては以下があげ

例は８例中７例（88％），この７例は全例，大腿ヘルられる。閉鎖孔ヘルニアは両側例が多い。また，併存

ニアを合併していた。腸閉塞を呈していた５例の嵌頓

ヘルニア，特に大腿ヘルニアを有することが多い。両症例中，３例は手術施行時には自然還納していた。手側の鼠径部領域の評価だけでなく，同時に嵌頓腸管の術時にも嵌頓が継続していた２例中１例は嵌頓整復後，評価も行えることから，不顕性や嵌頓閉鎖孔ヘルニア

腹腔鏡下に腸管の評価を行い，腸切除不要と判断した。

の治療に TAPP 法によるヘルニア修復術は適切な手腸切除を必要と判断した１例はメッシュ感染を回避す

術法と思わる。二期的ヘルニア修復術は嵌頓腸管の切るために新たに考案した二期的ヘルニア修復術へ変更除を要する患者にとって適した手技である。

した。二期的ヘルニア修復術は腸管切除を必要とする
嵌頓症例に対し，メッシュを使用する手術法であり，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Ceruloplasmin Protects Against Rotenone‑Induced Oxidative Stress and Neurotoxicity（セルロプラ
スミンはロテノンによる酸化ストレスと神経毒性に対して防御的作用を有する）
日根野

晃

代

（論文の内容の要旨）

レスに対する神経保護作用を調べるために，セルロプ【背景】セルロプラスミン（Cp）は，銅輸送蛋白であラスミン遺伝子（CP ）欠損マウスにロテノンを投与

るがフェロキシダーゼとしての鉄代謝への関与も重し運動機能，脳組織における酸化ストレスマーカーを要な役割である。Cpは脳内では主にアストロサイト

測定した。

から産生され，細胞膜上に膜結合型（GPI‑anchored【方法】週齢13週の CP 欠損マウスと野生型マウスにform）として発現している。フェロキシダーゼとしおいてそれぞれ投与群/非投与群（計４群）に分け，て二価鉄（Fe ）を三価鉄（Fe ）に酸化し，次い投与群にはロテノン10mg/kg/dayを４週間投与しで Fe はトランスフェリンに結合し神経細胞へ取りた。１週毎に体重，運動機能解析として footprint・こまれる。セルロプラスミン欠損状態では Fe が酸

rotarod 試験を行った。４週後に脳と肝臓を取り出し，化されずフリーラジカルであるハイドロキシラジカル

ミトコンドリア複合体 酵素活性を測定した。また脳（OH・）が産生され，神経細胞に酸化ストレスをか組織において，酸化ストレスマーカーとして4‑ヒドロ

ける。無セルロプラスミン血症では，肝臓や脳など全キシ‑2‑ノネナール（HNE），ヘキサノ イ ル リ ジ ン

身の諸臓器に鉄沈着を来し，脳における神経細胞死の（HEL），カルボニル化蛋白をウェスタンブロット法

要因として酸化ストレスの亢進が示されている。一方，

や ELISA 法を用いて解析し，鉄沈着の有無や HNE，

パーキンソン病やアルツハイマー病など神経変性疾患

HEL の蓄積を組織学的に検討した。

でも鉄蓄積の関与がいわれている。パーキンソン病で【結果】４群共に実験中死亡例はなく体重に有意差はは過剰な鉄蓄積がミトコンドリア複合体 活性を低下なかった。CP 欠損マウス・野生型マウスいずれにおさせる。ロテノンはミトコンドリア複合体 を阻害し，いても脳・肝臓共にロテノン投与によるミトコンドリ

パーキンソン病を誘導する農薬の一種として知られてア複合体 酵素活性の低下は認めなかった。運動機能

おり，ハイドロキシラジカル産生を介して神経毒性をは野生型マウスでは明らかな変化がみられなかったが，誘導する。またパーキンソン病と Cp の関与を示唆す

CP 欠損マウスではで歩幅は変化しないものの前肢/る報告がなされている。本研究では，Cp の酸化スト

後肢のずれが増大する傾向を認め，ロテノン投与群で294

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

はさらに増強していた。４週後において野生型ロテノ

されず細胞障害性の強いフリーラジカルであるハイドン非投与群に比べ，CP 欠損ロテノン投与群は前肢/

ロキシラジカル（OH・）が産生される。無セルロプ

後肢のずれが有意に増大していた。rotarod 試験ではラスミン血症では脳など全身諸臓器に鉄が沈着し酸化CP 欠損マウスで野生型と比し落下時間の短縮が認

ストレスが惹起される。一方，パーキンソン病では過められたが，
ロテノン投与の有無による差は認めなかっ

剰な鉄蓄積がミトコンドリア複合体 活性を低下させた。一方，脳組織におけるウェスタンブロット法ではる。ロテノンはミトコンドリア複合体

HNE・HEL 共に CP 欠損ロテノン投与群で増加し，キンソン病を誘導する農薬の一種であり，OH・産生

ELISA 法でも HNE・カルボニル化蛋白が CP 欠損

を介して神経毒性を誘導する。本研究では，Cp の酸

ロテノン投与群で野生型と比 し有意に増加していた。

化ストレスに対する神経保護作用を調べるために，セ

組織学的には HE 染色で脳に４群共に有意な変化は

ルロプラスミン遺伝子（CP ）欠損マウスにロテノン

認めず，鉄染色においても脳・肝に鉄の沈着は認めなを投与し運動機能，脳組織の酸化ストレスマーカーをかった。HNE・HEL 免疫染色では，CP 欠損ロテノ測定した。

を阻害しパー

ン非投与群で線条体ニューロンの細胞質に陽性所見を運動機能は野生型マウスではロテノン投与による変認めたが，CP 欠損ロテノン投与群でより顕著であっ化は認めなかった。CP 欠損マウスではロテノン非投た。

与群で前肢/後肢のずれが増大し，rotarod 試験で落【考察】CP 欠損マウスはロテノン非投与群でも野生下時間の短縮する傾向を認め，ロテノン投与群ではさ型に比べ軽度の運動機能の低下を認めたが脳組織の酸らに増強していた。CP 欠損ロテノン投与群では脳組化ストレスマーカーに有意差は認めなかった。野生型

織におけるウェスタンブロット法で4‑ヒドロキシ‑2‑ではロテノン投与による神経障害は認めなかった。まノネナール（HNE），ヘキサノイルリジン（HEL）

た，野生型マウスも CP 欠損マウスにおいてもロテが増加し，ELISA 法でも HNE・カルボニル化蛋白ノンによるミトコンドリア複合体 活性の変化は脳・が有意に増加していた。HNE・HEL 免疫染色では，

肝ともに確認されなかった。これはロテノン投与量がCP 欠損ロテノン投与群で線条体ニューロンの細胞質少なく，ミトコンドリア複合体 活性の値を低下させに陽性所見を認めた。

るほどではなかったためと考えられた。しかしながら本研究では CP 欠損，ロテノン投与それぞれ単独

CP 欠損状態では，野生型では変化が起きない程度のでは明らかな神経障害はおこさないものの CP 欠損

低用量のロテノン投与でも運動機能の低下を認め，生にロテノン負荷を行うことで神経障害が惹起された。

化学的・組織学的にも脳組織の酸化ストレスマーカー

しかし脳・肝臓共にミトコンドリア複合体 酵素活性の亢進が確認された。過去にもロテノンがミトコンド

低下は認めず，鉄染色で鉄沈着も認めなかった。このリア複合体 活性低下によらず神経細胞死を惹起したことはミトコンドリア複合体 活性以外の経路により報告があり，本研究でもミトコンドリア複合体 活性

神経毒性が誘導された可能性や，Cp は鉄代謝以外に低下以外の経路により神経毒性が誘導された可能性がもカテコラミンなど芳香族アミンなどの基質の酸化や考えられた。また CP 欠損マウスではロテノン投与

スーパーオキシドラジカルの捕捉などの働きが報告さの有無にかかわらず脳への鉄沈着を認めなかった。こ

れていることから，CP 欠損マウスでは鉄沈着以外ののことは CP 欠損マウスでは鉄沈着以外の要因で酸要因で酸化ストレスの亢進が生じたことが示唆された。

化ストレスの亢進が生じたことを示唆していた。Cp

本研究は，CP 欠損状態では低用量のロテノン投与

は鉄代謝以外にもカテコラミンなどの芳香族アミンなで運動機能低下，脳組織における酸化ストレスマーカー

どの基質の酸化や，スーパーオキシドラジカルの捕捉

亢進を見出し，Cp が酸化ストレスに対する神経保護などの働きが報告されている。本研究では，Cp が酸作用を有することを確認した。さらにそれがフェロキ化ストレスに対する神経保護作用を有することが確認

シダーゼ機能を介さない抗酸化作用である可能性を示されたが，それがフェロキシダーゼ機能を介さない抗

唆した。よって，主査・副査は一致して本論文を学位

酸化作用である可能性が示唆された。

論文として価値があるものと認めた。

（論文審査の結果の要旨）
セルロプラスミン（Cp）は，フェロキシダーゼとして鉄代謝に関与する。Cp 欠損状態では Fe が酸化
No. 5, 2012295

審査学位論文要旨

Bronchoscopic Microsampling for Bacterial Colony Counting in Relevant Lesions in Patients with
Pulmonary Mycobacterium avium Complex Infection（気管支鏡下マイクロサンプリング法を用いた肺 Mycobacterium avium complex 感染症患者の病変局所における菌量の検討）
牛木（論文の内容の要旨）【背景と目的】肺 Mycobacterium avium complex 感

淳人

た ELF 中の菌量が不変群のそれと比して有意に多かった（p＜0.001）。ELF 中の菌量は，空洞病変が結染症（肺 M AC 症）は近年その患者数の増加が指摘さ節・気管支拡張病変のそれと比 して有意に多かったれている。肺 MAC 症の予後は致死的に至る症例から（p＜0.05）。気管支洗浄液中の菌量は不変群と比自然軽快するものまで様々であるが，その予後を規定て増悪群で有意に多かったが（p＜0.05），結節・気する因子ははっきりとしていない。喀痰中の菌量が治

管支拡張病変，浸潤性病変，空洞病変の３群間では有療反応性と相関することは報告されているが，自然経

意差がなかった。また ELF 中の菌量と洗浄液中の菌過における予後との相関は不明である。一方，気管支量に相関は認めなかった。

鏡下マイクロサンプリング法（bronchoscopic micro-【考察】経気管支鏡的に病変部より検体を採取する方

sampling：BMS）は成人呼吸窮迫症候群症例でその法としては気管支肺胞洗浄やブラシによる擦過といっ病態解明のために経気管支鏡的に病変局所の気道上皮た方法が報告されている。しかし気管支肺胞洗浄では被覆液（bronchial epithelial lining ﬂuid：ELF）を

生理食塩水注入により呼吸状態を悪化させる可能性が低侵襲に採取することを目的に開発され，in vitro のあり，擦過による方法では細菌培養した際の定量性が実験では細菌の定量採取の手段としての有用性も報告劣るとされている。BMS はプローブを挿入するだけされている。本研究では肺 M AC 症の病態を解明するであり呼吸状態の悪化をきたす危険性が少なく，またために患者の病変局所より BMS を用いて ELF を採菌の濃度を変えることなく回収できるため定量性に優取し定量培養を行い，その菌量と予後および胸部 CTれていると考えられる。本研究では増悪群で ELF 中

所見の比 を行った。

の菌量が有意に多く，予後予測因子となりうることが【方法】調査対象は当院を受診した他疾患を有さない示唆された。また胸部 CT 所見で空洞病変を呈した症

肺 MAC 症患者26名で，全員に対して自覚症状を確認

例は全例増悪しており，予後予測因子となりうると考し，血液検査で白血球や CRP，血沈などの炎症反応えられた。浸潤性病変は不変群，増悪群ともに認めらや総蛋白値やアルブミン値を測定した。肺 MAC 症のれたが，ELF 中の菌量が6,000CFU/mL 以上の症例予後の評価には胸部 CT を用いた。BMS は責任気管は全例増悪しており，菌量により予後が予測できると支へ超音波プローブを挿入し病変の同定を行い，同部考えられた。洗浄液中の菌量も増悪群で有意に多く予位へガイドシースを留置した。次いでガイドシースを後予測因子になりうると考えられたが，CT 所見の違通じて BMS プローブを病変へ誘導し ELF を採取しいによる有意差は認めなかった。この理由としては洗た。その後ガイドシースを抜去し生理食塩水20mL

浄液が20mL と少量であり正確に病変局所より回収

で気管支洗浄を行い，その洗浄液を回収した。ELF

できていない可能性や，注入した生理食塩水の回収率と 洗 浄 液 は7H11agar に 塗 布 し37℃，５％ CO で 抗が症例により異なることなどが考えられた。

酸菌を４週間培養後にコロニーカウントを行った。

【結論】肺 MAC 症の予後は様々であり，診断後早期【結果】胸部 CT 上，不変群11名，増悪群15名であっの治療を必要としない症例も多い。本研究結果より胸た。年齢，性別，血液検査所見などに有意差はなかっ

部 CT 所見で空洞病変や浸潤性病変を持つ症例（特にたが，増悪群で自覚症状として血痰を有する例が多かっ

菌量が多い症例）では病状が増悪する可能性が高く，た。不変群における胸部 CT 所見は結節・気管支拡張

早期に治療を開始することが望ましいと考えられた。

病変８名（73％），浸潤性病変３名（27％）であった。

（論文審査の結果の要旨）

増悪群における胸部 CT 所見は結節・気管支拡張病変

肺 Mycobacterium

avium

し

complex 感 染 症（肺１名（７％），浸潤性病変６名（40％），空洞病変８名

M AC 症）の予後を規定する因子ははっきりとしてい（53％）であった。増悪群では BMS を用いて採取しな い。一 方，気 管 支 鏡 下 マ イ ク ロ サ ン プ リ ン グ 法296

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨（bronchoscopic microsampling：BM S）は経気管支その結果，下記の結果を得た。

鏡的に気道上皮被覆液（bronchial epithelial lining

１．不変群における胸部 CT 所見は結節・気管支拡張ﬂuid：ELF）を低侵襲に採取することが可能であり，病変８名（73％），浸潤性病変３名（27％）であっ

in vitro の実験では細菌の定量採取の有用性も報告さた。増悪群における胸部 CT 所見は結節・気管支拡れている。今回は肺 M AC 症の病態を解明するために張病変１名（７％），浸潤性病変６名（40％），空患者の病変局所より BMS を用いて ELF を採取し定洞病変８名（53％）であった。

量培養を行い，その菌量と予後および胸部 CT 所見の２．増悪群では BMS を用いて採取した ELF 中の菌比 を行った。

量が不変群のそれと比 して有意に多かった。

調査対象は当院を受診した他疾患を有 さ な い 肺

３．空洞病変の ELF 中の菌量は，結節・気管支拡張

MAC 症患者26名で，全員に対して自覚症状を確認し，病変のそれと比 して有意に多かった。

血液検査で白血球や CRP，血沈などの炎症反応や総４．気管支洗浄液中の菌量は不変群と比 して増悪群

蛋白値やアルブミン値を測定した。肺 M AC 症の予後で有意に多かったが，結節・気管支拡張病変，浸潤の評価には胸部 CT を用いた。BM S は責任気管支へ性病変，空洞病変の３群間では有意差がなかった。

超音波プローブを挿入し病変の同定を行い，同部位へ

これらの結果により胸部 CT 所見で空洞病変や浸潤ガイドシースを留置した。次いでガイドシースを通じ性病変を持つ症例（特に菌量が多い症例）では病状がて BM S プローブを病変へ誘導し ELF を採取した。

増悪する可能性が高く，早期に治療を開始することがその後ガイドシースを抜去し生理食塩水20mL で気望ましいと考えられた。

管支洗浄を行い，その洗浄液を回収した。ELF と洗浄 液 は7H11agar に 塗 布 し37℃，５％ CO で 抗 酸 菌

以上をもって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

を４週間培養後にコロニーカウントを行った。

Critical Role of Th17 Cells in Inﬂammation and Neovascularization After Ischaemia（虚血下の炎症および血管新生における Th17細胞の重要な役割）
羽

田

健

紀

（論文の内容の要旨）【方法と結果】まず CD4陽性Ｔ細胞の血管新生におけ【背景と目的】急性動脈閉塞，慢性閉塞性動脈硬化症

る役割について確認すべく，CD4中和抗体を腹腔内投などの疾患では虚血後の側副血行の発達が組織の修復与したマウスに下肢虚血モデルを作製し，レーザードッにおいて重要である。虚血後の側副血行の発達においプラーにより下肢血流を追跡した。CD4中和抗体投ては，ケモカインや炎症性細胞浸潤など，炎症性の反与群の下肢虚血モデルにおける血流の回復はコント応が重要な役割を担っていることが明らかにされ，特ロール（PBS投与）群に比し明らかに低下していた。

に単球/マクロファージやそれらのケモカインである

CD4陽性Ｔ細胞が血管新生において重要な役割を担っ

MCP‑1が中心的な存在であることが報告されている。

ていることが確認され，さらにその役割について明ら

最近ではそれに加え虚血後の側副血行路の発達にかにすべく CD4陽性Ｔ細胞のどのサブセットが血管CD4陽性Ｔ細胞が関与していることが報告されており，新生に関与しているかについて実験を行った。虚血下

様々な報告がなされているが，CD4陽性Ｔ細胞の中の肢におけるサイトカイン発現について FACS を用い

どのサブセットが寄与しているかなどのメカニズムにて検索したところ，IL‑17の inducer である IL‑6が高

ついてはいまだよく解明されていない。Th17細胞は発現を示した。この結果から虚血下肢における IL‑17

近年新たに見出された CD4陽性Ｔ細胞のサブセットとその regulator である RORγt の発現を real time

であり，インターロイキン‑17（IL‑17）の産生細胞

PCR を用いて評価したところ，IL‑17や RORγt が虚であるが，今回我々はこの Th17細胞に注目し，虚血血下肢において高発現していることが見出された。こ後の血管新生における CD4陽性Ｔ細胞および Th17細のため血管新生における Th17細胞の寄与を検討すべ胞の役割を明らかにすることを目的とし，下記の実験

く，次の実験として IL‑17ノックアウトマウスに下肢を行った。

虚血モデルを作製し検討を行った。結果レーザードッ

No. 5, 2012297

審査学位論文要旨

プラーにて IL‑17ノックアウトマウスの血流回復が明下肢虚血モデルの虚血下肢において IL‑17の inducer

らかに低下しており，その他 IL‑17ノックアウトマウ

である IL‑6が高発現していることが認められたため，

スの虚血下肢では免疫染色や FACS にて毛細管形成

虚血下肢における IL‑17および IL‑17の regulator での減少，好中球，単球/マクロファージおよび CD4陽ある RORγt の発現について評価した。その結果から性Ｔ細胞の浸潤の著明な 減 少 が 認 め ら れ た。ま た次に IL‑17ノックアウトマウスの下肢虚血モデルにおELISA では血管新生サイトカイン で あ る IL‑1β，ける血流評価，および虚血下肢における炎症性細胞浸VEGF の有意な発現の低下が認められた。骨髄移植

潤や血管新生サイトカインの発現などを免疫染色やモデルでも検討を行ったところ，IL‑17ノックアウト

ELISA，real time PCR にて評価を行った。さらに

マウス骨髄由来の骨髄移植モデルで有意に血流回復がIL‑17ノックアウトマウスの骨髄移植モデルにおける低下し，骨髄由来の Th17細胞の血管新生への寄与が血流回復の検討や，ヌードマウスに作製した虚血下肢示唆された。さらに IL‑17ノックアウトマウスの脾臓へIL‑17ノックアウトおよび野生型マウス由来の CD4由来の CD4陽性Ｔ細胞をヌードマウスの虚血下肢に陽性Ｔ細胞を細胞移植するモデルでも検討を行った。

注入したところ，野生型脾臓由来の CD4陽性Ｔ細胞

その結果，羽田健紀は今回の実験で以下の結論を得に比べ有意差をもって血流回復が低下していた。

た。

【結論】これらの実験から，新たな CD4陽性Ｔ細胞サ

１．CD4陽性Ｔ細胞の中和により血管新生が抑制されブセットである Th17細胞は下肢虚血における血管新生に寄与し，CD4陽性Ｔ細胞の血管新生亢進に関するメカニズム解析に新たな情報が得られた。また虚血性の心血管疾患に対する Th17細胞の治療応用への可能性も示唆された。

た。
２．Ｂ6マウスの虚血下肢において IL‑17，RORγt が高発現していた。
３．IL‑17ノックアウトマウスでは野生型に比し血管新生が有意に減弱し，さらにその虚血下肢における（論文審査の結果の要旨）

炎症性細胞浸潤の低下や血管新生サイトカインの発

虚血後の側副血行路の発達に CD4陽性Ｔ細胞が関与していることを示すデータが報告されているが，CD4陽性Ｔ細胞の中のどのサブセットが寄与している現の低下が認められた。
４．骨髄由来の Th17細胞の欠損により血管新生は減弱した。

かについては明らかにされていない。Th17細胞は近５．野生型由来の CD4陽性Ｔ細胞に比し，IL‑17ノッ

年新たに見出された CD4陽性Ｔ細胞のサブセットでクアウトマウス由来の CD4陽性Ｔ細胞では虚血下あり，インターロイキン（IL）‑17の産生細胞である肢へ移植した場合の血流回復の効果が弱いことが認が，今回我々はこの Th17細胞に注目し，虚血後の血められた。

管新生における CD4陽性Ｔ細胞および Th17細胞の役

これらの結果から，Th17細胞は下肢虚血における割を明らかにすることを目的として実験を行った。

血管新生に寄与していることが示された。さらには虚まず８週齢のＢ6マウスに CD4中和抗体を腹腔内投

血性の心血管疾患に対する Th17細胞の治療応用への与し，下肢虚血モデルを作成してその血流回復の過程

可能性が示唆された。よって，主査，副査は一致してをレーザードップラーで解析した。またＢ6マウスの本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Quantitative Evaluation of Liver Function with Use of Gadoxetate Disodium‑enhanced MR Imaging（ガドキセト酸ナトリウム造影 MRI を用いた定量的肝機能評価）山田哲（論文の内容の要旨）

以下 EOB と表記）は細胞外液性造影効果と肝細胞特【背景と目的】肝機能の定量的評価法としてインドシ

異性造影効果を併せ持つ MR 造影剤であり，肝細胞

アニングリーン（indocyanine green，ICG）試験がへの取り込みはICGと類似のトランスポーターの関与

臨床応用されているが，部分肝機能を評価できないとが示唆されている。本研究の目的は EOB 造影 M RI

いう問題点がある。ガドキセト酸ナトリウム（一般を用いて ICG 試験によって表される肝機能を定量評

名：gadoxetate disodium，略号：Gd‑EOB‑DTPA，

価可能か検討することである。

298

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨【方法】本後ろ向き研究は本学倫理委員会の承認を受がある。ガドキセト酸ナトリウム（一般名： gadox-

け，対象被検者への説明と同意義務は免除された。信

etate disodium，略号：Gd‑EOB‑DTPA，以下 EOB

州大学医学部附属病院において2008年６月から2009年と表記）は細胞外液性造影効果と肝細胞特異性造影効

12月までの間に術前評価として同一撮像条件による果を併せ持つ M R 造影剤であり，肝細胞への取り込

EOB 造影 M RI と ICG 試験が施行された連続23患者

みは ICG と類似のトランスポーターの関与が示唆さをデータベースから抽出した。EOB（0.025mmol/

れている。今回，EOB 造影 MRI を用いて ICG 試験

体重［kg］）投与20分後に撮像した脂肪抑制併用3Ｄ

によって表される肝機能を定量評価可能か検討した。

グラジエントエコー法Ｔ1強調像上の肝体積（V ），信州大学医学部附属病院において2008年６月から

肝平均信号強度（L ），脾平均信号強度（S ）から

2009年12月までの間に術前評価として同一撮像条件にHepatocellular Uptake Index（HUI）を次の式を用

よる EOB 造影 M RI と ICG 試験が施行された連続23

いて求めた。HUI＝V ［（L /S ）‑1］
。ICG 血漿消患者を対象とした。EOB（0.025mmol/体重［kg］）

失率（ICG plasma disappearance rate，ICG‑PDR）

投与20分後に撮像した脂肪抑制併用3Ｄグラジエンと L お よ び HUI の 相 関 係 数 の 平 均 値 お よ び 平 均

トエコー法Ｔ1強調像上の肝体積（V ），肝平均信号値の95％信頼区間を bootstrap法にて評価した。さ強度（L ），脾平均信号強度（S ）から Hepatocel-

らに ICG‑PDR と MR 画像から得られた様々な因子

lular Uptake Index（HUI）を次の式を用いて求め（HUI，肝および脾への鉄および脂肪沈着，脾体積

た。HUI＝VL［（L /S ）‑1］
。ICG血漿消失率（ICG（V ）を含む）の相関を重回帰分析（ステップワイズ

plasma disappearance rate，ICG ‑PDR）と MR 画法）にて評価した。肝機能の不均一性が認められた４像から得られた様々な因子（HUI，肝および脾への患者において全肝 HUI に対する残肝 HUI（rHUI）

鉄および脂肪沈着，脾体積（V ）を含む）の相関をの 比（rHUI/HUI）と 全 肝 体 積 に 対 す る 残 肝 体 積

重回帰分析（ステップワイズ法）にて評価した。肝機（rV）の比（rV /V ）の差の平均値および平均値の能の不均一性が認められた４患者において全肝 HUI

95％信頼区間を評価した。

に対する残肝 HUI（rHUI）の比（rHUI/HUI）と全【結果】ICG‑PDR との相関係数の平均値および平均肝体積に対する残肝体積（rV）の比（rV /V ）の差

値 の95％ 信 頼 区 間 は L で0.634（95％ 信 頼 区 間：を評価した。

0.629，0.640），HUI で 0.721（95％ 信 頼 区 間 ：0.717，0.726）であった。重回帰分析の結果，HUIと V のみが ICG‑PDR と有意に相関する因子であった（Ｒ＝0.87）。rHUI/HUI‑rV /V の平均値は0.18，
95％信頼区間は0.01から0.34であった。
【結論】EOB 造影 M R 画像上の肝および脾の信号強

その結果，山田は次の結論を得た。
１．HUI と ICG‑PDR の相関係数は，L と HUI の相関係数と比べて有意に高かった。
２．HUI と V のみが ICG‑PDR と有意に相関する因子であった（Ｒ＝0.87）。
３．rHUI/HUI は有意に rV /V より大きかった。

度ならびに体積を用いて ICG‑PDR によって表されこれらの結果より，EOB 造影 MR 画像上の肝およる肝機能を定量評価可能であり，部分肝機能評価に役

び脾の信号強度ならびに体積を用いて ICG‑PDR に立つ可能性がある。

よって表される肝機能を定量評価可能であり，部分肝（論文審査の結果の要旨）
肝機能の定量的評価法としてインドシアニングリー
ン（indocyanine green，ICG）試験が臨床応用され機能評価に役立つ可能性が示唆された。よって，主査，
副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

ているが，部分肝機能を評価できないという問題点

No. 5, 2012299

審査学位論文要旨

Administration of dalteparin based on the activated clotting time for prophylaxis of hepatic vessel
thrombosis in living donor liver transplantation（生体肝移植時の抗肝血管血栓療法としての活性化凝固時間に基づいたダルテパリン投与）
内

川（論文の内容の要旨）

裕

司られなかった。

【背景と目的】肝移植後の再建肝動脈，門脈の血栓症【結論】これらの結果より，ACT に基づいた定期的は，グラフト不全に直結する重篤な合併症であり，そなダルテパリンの投与は，生体肝移植後の再建肝動脈，の予防が肝移植の成績を左右する因子の一つである。

門脈血栓の予防だけでなく，出血性合併症を減少させ

しかしながら，血栓予防に至適な抗凝固療法や，ベッると考えられ，ベッドサイドモニタリングの可能なドサイドでの簡便なモニタリング方法に関しては一定

ACT 測定は，生体肝移植時のダルテパリンの抗凝固の見解が得られていない。我々は2003年までに施行し効果を評価する上で，簡便で信頼性の高い方法である

た生体肝移植症例207例の多変量解析の結果，代謝性と思われた。

肝疾患に対する肝移植が肝動脈血栓発症に関係する危（論文審査の結果の要旨）

険因子であるという結果を得た。家族性アミロイドポ

肝移植後の再建肝動脈，門脈血栓症は，グラフト不リニュロパチーや 型シトルリン血症などの代謝性肝全に直結する重篤な合併症であり，その予防が肝移植疾患では肝機能自体に異常はなく，凝固能や血小板数の成績を左右する因子の一つである。しかしながら，も正常範囲内である。そこで，代謝性疾患における正血栓予防に至適な抗凝固療法や，ベッドサイドでの簡常な凝固能が移植後肝動脈血栓発症に関係していると便なモニタリング方法に関しては一定の見解が得られ考え，生体肝移植後の抗凝固療法を強化する目的で，ていない。我々は2003年までに施行した生体肝移植症

2004年より活性化凝固時間（ACT）が140〜150秒に例207例の多変量解析の結果，代謝性肝疾患に対するなるようにダルテパリンを肝移植術中・術後に投与し肝移植が肝動脈血栓発症に関係する危険因子であるとてきた。今回，この ACT に基づいたダルテパリンのいう結果を得た。そこで，代謝性疾患における正常な投与による抗凝固療法の妥当性を，以前に当施設で施凝固能が肝動脈血栓発症の危険因子であるという結果行していた抗凝固療法と比に関係していると考え，2004年より生体肝移植後の再し検証した。

【対象】1993年から2003年までの症例（Ａ群：32例）

建血管の血栓予防として，定期的に活性化凝固時間では，抗凝固療法として術直後よりダルテパリン（50（ACT）を測定し，その値が140〜150秒になるように

IU/kg）とメシル酸ガベキサート（１mg/kg/hr）がダルテパリンを肝移植術中・術後に投与してきた。今投与され，抗凝固能の定期的なモニタリングはなされ

回，ACT に基づいたダルテパリン投与による抗凝固ていなかった。また，凝固因子，抗凝固因子補給の目療法の妥当性を，以前に当施設で施行していた抗凝固的で，ドレーンからの体液喪失分に見合う新鮮凍結血療法と比 し検証した。

漿（FFP）を補充した。2004年以降の症例（Ｂ群：

1993年から2003年までの症例（Ａ群：32例）では，10例）は肝移植術中から６時間〜８時間毎に ACT を

抗凝固療法としてダルテパリン（50IU/kg）とメシ

測定し，その値を140から150秒に保つように術中無肝

ル酸ガベキサート（１mg/kg/hr）が投与され，抗凝期よりダルテパリンを投与し，FFP 投与量は PT，固能の定期的なモニタリングはなされていなかった。

APTT 値を参考に凝固因子補充に必要と思われる量

また，凝固因子，抗凝固因子補充の目的で，ドレーンにとどめた。この２群において，術後凝固能，肝機能，からの体液の喪失分に見合う新鮮凍結血漿（FFP）

肝動脈血栓症，門脈血栓症等の比 検討を行った。

を補充した。2004年以降の症例（Ｂ群：10例）は肝移【結果】Ｂ群はＡ群より有意に多量のダルテパリンが植術中から６時間〜８時間毎に ACT を測定，その値投与され，FFP 投与量は少なかった。その結果，Ｂを140から150秒に保つようにダルテパリンを投与し，群ではＡ群と比し，APTT の延長，FDP D‑D の低FFP 投与量は PT，APTT 値を参考に凝固因子補充

下，AST の低下が有意であった。Ｂ群では肝動脈，に必要と思われる量にとどめた。この２群において，門脈の血栓性合併症はなく，また出血性合併症も認め

術後凝固能，肝機能，肝動脈血栓症，門脈血栓症等の300

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

比 検討を行い，以下の結果を得た。

の投与は，生体肝移植後の再建肝動脈血栓，門脈血栓

１．Ｂ群はＡ群より有意に多量のダルテパリンが投与の予防だけでなく，出血性合併症を減少させると考えされた。

られ，ベッドサイドモニタリングの可能な ACT 測定

２．Ｂ群はＡ群より少量の FFP が投与された。

は，生体肝移植時のダルテパリンの抗凝固効果を評価

３．Ｂ群ではＡ群と比し，APTT の延長，FDP D‑Dする上で，簡便で信頼性の高い方法であると思われた。

の低下，AST の低下が有意であった。

本論文は肝移植のさらなる成績向上に寄与する価値の４．Ｂ群では肝血管血栓による合併症はなく，また出血性合併症も認められなかった。

高い研究であると考えられ，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

これらの結果より，ACT に基づいたダルテパリン

Cytokine proﬁles aﬀecting the pathogenesis of autoimmune hepatitis in Japanese patients（日本人の自己免疫性肝炎患者におけるサイトカインの動向と病態との関連）上條

敦（論文の内容の要旨）

サイトカインのうち，治療前の臨床データとの相関に【目的】自己免疫性肝炎（AIH）の病態にサイトカイ

ついては，IP‑10と相関を示したものは AST と ALTンの関与が示唆されているが，今までの報告では数種（そ れ ぞ れ

類のサイトカインの測定に限られ，十分なコンセンサを示したものは AST（ ＝0.033）であった。T ‑Bil，＝0.007， ＝0.032），MIP‑1αと 相 関スはえられていなかった。本研究では，AIH 治療前IgG と相関を示したものはなかった。

および治療後寛解期におけるサイトカインを包括的に【考察】ナイーブ CD4陽性細胞が，各サイトカインに測定し，その動向よりAIHの病態とサイトカインネッ

より Th1細胞，Th2細胞，Th17細胞，Treg などに分トワークとの関連を解明することを目的とした。

化し，それぞれ AIH の病態に関与していると考えら【方法】ステロイド単独治療で完全寛解に至った AIHれている。本研究 に お い て は，IL‑12p40，IP‑10，

患者40例を対象とした。年齢の中央値は57歳，性別は

M IP‑1α，MIP‑1βなどの Th1系，および IL‑17F，女性33例，男性７例であった。また，治療前の臨床

IL‑23などの Th17系のサイトカインが急性期に上昇

データについては，AST，ALTの中央値はそれぞれし，寛解期に有意に低下した。したがって，AIH の

578IU/L，564IU/L で あ り，T ‑Bil，IgG の 中 央 値

病態に Th1，Th17系の関与が強く示唆され，IP‑10，はそれぞれ2.4mg/dl，3,032mg/dl であった。全例

M IP‑1α，M IP‑1βなどの炎症性ケモカイン，IL‑12で抗核抗体陽性であった。AIH 治療前および 治 療

p40の関与が示唆される制御性Ｔ細胞の抑制，および後寛解期の保存 血 清 を 用 い て Luminex

cytokine

IL‑17F，
IL‑23などの Th17系サイトカインなどのネッassay system にて，28種類（IL‑1β，IL‑2，IL‑4，

トワークが AIH 発症や病態形成に重要な役割を演じ

IL‑6，IL‑10，IL‑12p40，IL‑12p70，IL‑13，IL‑17A，ている可能性が示唆された。AIH 発症に関わるサイ

IL‑17F，IL‑18，IL‑20，IL‑21，IL‑22，IL‑23，IL‑

トカインネットワークの更なる解明には，今後より多31，IFN ‑α，IFN ‑γ，TNF ‑α，IL ‑8，Eotaxin，

くのサイトカインを用いて経時的にその動向を解析す

IP ‑10，MCP ‑1，M IP ‑1 α，MIP ‑1 β，NGF，る必要があると考えられた。

RANTES，TGF‑β）のサイトカインを同時に測定【結語】AIH における肝障害では，Th1系の活性化，した。

炎症性ケモカインの増加，制 御 性 Ｔ 細 胞 の 抑 制 と【結果】急性期に上昇し，寛解期に有意に低下したサ

Th17細胞の活性化を中心としたサイトカインのネッ

イトカインは IL‑12p40，IL‑17F，IL‑18，IL‑23，IP‑

トワークが重要な役割を担っていると考えられた。

10，M IP‑1α，M IP‑1βの７種類であ っ た（そ れ ぞ（論文審査の結果の要旨）

れ＝ 3.79× 10 ，0.0025，2.104× 10 ，0.0445，

自己免疫性肝炎（AIH）の病態にサイトカインの1.868×10 ，1.364×10 ，2.190×10 ）。残 り21種

関与が示唆されているが，これまでの報告では数種類類のサイトカインは測定感度以下あるいは急性期と寛のサイトカインの測定に限られていた。本研究では，解期に有意差を認めなかった。治療前に上昇していたステロイド単独治療で完全寛解に至った AIH 患者40

No. 5, 2012301

審査学位論文要旨

例（女性33例，男性７例，中央値は57歳）を対象とし，（ ＝0.033）に相関がみられた。T ‑Bil，IgG と相AIH の病態とサイトカインネットワークとの関連を関を示したものはなかった。

解明するため，AIH 治療前および治療後寛解期にお３．AIH の病態に Th1，Th17系の関与が強く示唆さける28種類のサイトカインを包括的に測定し，解析をれ，IP‑10，MIP‑1α，MIP‑1βなどの炎症性ケモ行った。

カイン，IL‑12p40の関与が示唆される制御性Ｔ細

その結果，上條は以下の結論を得た。

胞の抑制，および IL‑17F，IL‑23などの Th17系サ

１．急性期に上昇し，寛解期に有意に低下したサイト

イトカインなどのネットワークが AIH 発症や病態

カインは IL‑12p40，IL‑17F，IL‑18，IL‑23，IP‑形成に重要な役割を演じている可能性が示唆された。

10，MIP‑1α，M IP‑1βの７種類であった（それぞれ今回の研究は日本人 AIH 患者に対し，治療前およ＝3.79×10 ，0.0025，2.104×10 ，0.0445，

び治療後寛解期におけるサイトカインの動向を包括的

1.868×10 ，1.364×10 ，2.190×10 ）。残り21種に測定し，解析を行った最初の研究である。AIH の類のサイトカインは測定感度以下，あるいは急性期発症に関わるサイトカインネットワークを明らかにすと寛解期に有意差を認めなかった。

ることで AIH の病態解明に寄与するもので，AIH の２．治療前に上昇していたサイトカインのうち，治病態や予後の解明，将来的には治療法の開発にもつな療前の臨床データとは，IP‑10は AST と ALT（そがると考えられる。よって，主査，副査は一致して本れぞれ論文を学位論文として価値があるものと認めた。

＝0.007， ＝0.032），MIP ‑1αは AST

A NovelHeterophilicAntibodyInteraction Involves IgG4（異種動物抗体に対するヒト IgG4抗体の特異な反応性）伊藤哲也（論文の内容の要旨）

ヒト IgG4の反応性を検討した。また，マウス IgG サ【背景と目的】自己免疫性膵炎症例（AIP）の90％でブクラス（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3）についても

血清 IgG4高値を認めるが，IgG4が果たす役割は未だ同様に検討した。⑵ Western blotting 法にてウサギ

充分解明されていない。健常者の血清において，ヒト

IgG とヒト IgG4，IgG4 F(abʼ) 領域，IgG4 Fc 領域とIgG4はヒト IgG に対して結合性を有し，その反応はの反応性を検討した。⑶ ELISA 法にてウサギ IgG とリウマトイド因子（RF）のように Fab‑Fc を介した各疾患群および健常者血清 IgG4との反応性を検討しものではなく，Fc‑Fc を介したものであったる。ヒた。また，IgG4濃度が既知である AIP 症例のプール

ト RF は異種動物 IgG の Fc にも結合するので，ヒト血清を標準抗体とし，ウサギ IgG に結合した各疾患

IgG4にも同様の異種動物 IgG との結合が認められる群のヒト IgG4濃度を測定した。

か，また，それが Fc‑Fc 結合を介するものかを検討【結果】⑴ ELISA 法にてヒト IgG4はマウスとウサギした。

IgG と強い反応を示したが，モルモット，ウシ，ヤギ，【方法】AIP65症例，アルコール性もしくは特発性慢

イヌとは中等度の反応を呈し，ウマとラットはほとん

性膵炎111症例，膵癌96症例，自己免疫性肝炎40症例，

ど 反 応 し な か っ た。マ ウ ス IgG サ ブ ク ラ ス で は，

原発性胆汁性肝硬変39症例，原発性硬化性胆管炎20

IgG2a と最も強い反応を示した。⑵ Western blot-

症例，SLE13症例，Sjogren症候群７症例，健常人130

ting 法にてウサギ IgG は puriﬁed IgG4と IgG4 Fc に

名 の 血 清 を 対 象 と し た。Aﬃnity chromatography

強く反応したが，IgG4 F(abʼ) と反応しなかった。⑶に て AIP 65症 例 分 の プ ー ル 血 清 か ら 純 粋 な IgG 4

ELISA 法 に よ る ウ サ ギ IgG と 各 疾 患 群 ヒ ト 血 清（puriﬁed IgG4）を作成した。また，puriﬁed IgG4を用

IgG4の反応性では，AIP 症例で反応性が高く，他疾いIgG4F(abʼ) 断片，IgG4Fc断片，HRP標識puriﬁed

患群，健常人ではほとんど認められなかった。AIP 症

IgG4を作成した。標識抗体として，ヒト IgG4 Fc 領域

例では，血清 IgG4値とウサギ IgG に結合する IgG4を認識するHRP標識抗ヒトIgG4マウス抗体と，ヒト量に強い相関を認めたが，血清RF値とは相関しなかっ

IgG4 F(abʼ) 領域を認識する HRP 標識抗ヒト κ鎖ヤ

た。

ギ 抗 体 を 用 い た。⑴ ELISA法 に て 異 種 動 物 IgG と【考察】ヒト IgG4は様々な異種動物 IgG と結合する

302

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

が，マウス IgG サブクラスの検討より，各動物にお化 IgG4を抽出し，さらにパパイン，ペプシンで処理

けるそれぞれの IgG サブクラスと異なる親和性を持し IgG4 Fc 領域，IgG4 F(abʼ) 領域を抽出した。異種つことが示唆された。ヒト IgG4は Fc 領域を介して動物 IgG としてブタ，ニワトリ，ハムスター，モル

ウサギ IgG と結合していると考えられた。また，ウモット，ヤギ，ウマ，ヒツジ，ウシ，イヌ，ラット，

サギ IgG に結合するヒト IgG4値と血清 IgG4値は強ウサギ，マウスを用いた。ヒト IgG と異種動物 IgG

い相関を示しており，ヒト IgG4が異種動物 IgG に対の結合能の評価に ELISA 法を，ヒト IgG4およびヒし結合能をもつことが示唆された。今回の研究の結果

ト IgG4断片とウサギ IgG の反応性について Westernより，異種動物抗体を用いたヒト IgG4測定系では，

blotting 法にて検討した。

IgG 抗体の Fc 部分を除く工夫が必要なことを示してその結果，伊藤哲也は次の結果を得た。

いる。

１．ヒト IgG4は各種異種動物 IgG と結合性を示した。

【結語】ヒト IgG4は RF のように様々な異種 動 物 の２．ヒト IgG4と各種異種動物 IgG との結合性は Fc‑

IgG と結合するが，この結合は抗原抗体反応ではなくFc‑Fc を介した相互作用によるものであった。

Fc を介するものであった。
３．ウサギ結合性 IgG4値は自己免疫性膵炎例で有意（論文審査の結果の要旨）に高値であり，
その他の疾患や健常人では低値であっ従来のリウマチ因子（IgM ‑RF）は免疫グロブリンた。

に対する自己抗体として知られており，ヒト IgG の４．自己免疫性膵炎では，ウサギ結合性 IgG4値は血みならず，異種動物 IgG にも結合する。リウマチ因清 IgG4値と有意な相関を示し，RF 値とは相関を子はその Fab 領域を介して IgG Fc 領域に結合するこ示さなかった。

とが証明されている。一方，ヒト IgG4もリウマチ因

これらの結果より，ヒト IgG4はその Fc 領域を介子様の作用を持つとされ，ヒト IgG4がその Fc 領域

して異種動物 IgG の Fc 領域に結合することが明らか

を介しヒト IgG Fc 領域と結合することが明らかにさとなった。このことは，IgG4高値検体では，異種動れた。今回，ヒト IgG4が異種動物 IgG に結合能を有物 IgG を用いた抗原の測定系に干渉作用を持ち得る

するか，また，どの領域を介した結合であるかを，ことを示唆している。一方で，自己免疫性膵炎症例で

ELISA 法および Western blotting 法を用いて検討しは血中 IgG4とウサギ IgG に結合した IgG4値が強いた。

正の相関を示しており，新たな IgG4測定系の確立に

自己免疫性膵炎65例，アルコール性もしくは特発性寄与する可能性が示唆された。本研究の成果は，未だ

慢性膵炎111例，膵癌96例，自己免疫性肝炎40例，原不明な点の多い IgG4の性質に注目し，IgG4がリウマ

発性胆汁性肝硬変39例，原発性硬化性胆管炎20例，

チ因子とは異なる機序で異種動物 IgG と結合するこSLE 13例，Sjogren 症候群７症例，健常人130名の血とを明らかにした点で極めて意義のあるものである。

清を対象とした。また，自己免疫性膵炎65症例のプーよって主査，副査は一致して本論文を学位論文として

ル血清からアフィニティークロマトグラフィーにて純価値があるものと認めた。

Evaluation of CNT toxicitybycomparison to tattoo ink（刺青用インクと比ボンナノチューブの毒性評価）
原

一することによるカー

生（論文の内容の要旨）を向上させる取り組みもあり，CNT を臨床に応用す【背景と目的】現在，様々な分野 に お い て，Carbon

ることができれば，医学の様々な分野で進歩が期待で

nanotube（CNT）を応用した高機能材料の研究開発

きる。このように CNT を生体材料に用いる場合，が進んでいる。CNT の医学への応用も注目されておCNT に対する組織や細胞の反応を評価し，生体安全

り，CNT を癌の治療に用いる研究，生体イメージン性を明らかにすることが最も重要であるが，これまで

グの基材として診断に用いる研究，再生医療においての研究では一定の結論を導くことができなかった。そ足場材として用いる研究などが行われている。また，の最大の理由は，生体安全性が確認されている最適な

CNT を他の生体材料と複合してインプラントの機能

ナノサイズ粒子の対照物質がなく，安全性を評価する

No. 5, 2012303

審査学位論文要旨基準を決められなかったためである。

（論文審査の結果の要旨）

我々は古来より多数の人体に埋め込まれている刺青

現 在，様々な 分 野 に お い て，Carbon nanotube

用インクを，歴史的に生体安全性が実証された生体材（CNT）を応用した高機能材料の研究開発が進んでい料ととらえ，CNT の安全性を検討するにあたり刺青る。CNT を他の生体材料と複合してインプラントの用インクを対照物質として比 することが有用である

機能を向上させる取り組みもあり，CNT を臨床に応と考えた。本研究の目的は CNT と刺青用インクの類用することができれば，医学の様々な分野で進歩が期

似点・相違点を比 し CNT の対照物質になりうるか

待できる。一方で CNT を生体材料として用いた際のを検討すること，また刺青用インクを対照物質として安全性については，これまで一定の結論を導くことが

CNT の安全性を評価することである。

できなかった。その理由は，最適なナノサイズ粒子の【方法】走査型電子顕微鏡･透過型電子顕微鏡（TEM ）対照物質がなく，安全性を評価する基準を決められなにて市販の刺青用黒色インクを観察し，エネルギー分かったためである。

散型Ｘ線分光法による元素組成分析およびラマン分光

我々は古来より多数の人体に埋め込まれている刺青分析を行った。また TEM ・ラマン分光分析において用インクを，歴史的に生体安全性が実証された生体材は一般のカーボンブラックとの比 を行った。刺青用料ととらえ，CNT の安全性を検討するにあたり刺青

インクと CNT の安全性評価のために，マウス背部皮用インクを対照物質として比 することが有用である

下に刺青用インク・CNT を注入した際の１‑26週後と考え，CNT と刺青用インクの類似性を明らかにし，の組織像およびハムスター由来肺線維芽細胞へ接触さ

刺青用インクを対照物質として CNT の安全性評価をせた時のコロニー生成阻害の程度を評価した。骨髄由行った。

来マクロファージと刺青用インク・CNT を接触させた時の，培地中の炎症性サイトカインである Inter
leukin(IL)‑6・Tumor Necrosis Factor(TNF)‑α・IL‑
1b を測定した。

その結果，原は次の結論を得た。
１．刺青用インクは，ナノサイズの工業用カーボンブ
ラックそのものであった。
２．刺青用インクと CNT は１週後にはマクロファー【結果】刺青用インクを分析したところ99.5％以上をジに貪食され，それ以降もマクロファージ内に留ま炭素成分が占める球形のカーボンブラック粒子そのもり続け，短・長期どちらでも強い炎症反応は呈さなので，その直径は30‑50nm と CNT と同じくナノス

かった。

ケールであることが明らかとなった。安全性試験の組

３．CNT のコロニー生成阻害は濃度依存的で，細胞織像では刺青用インクと CNT は１週後にはマクロ

毒性は刺青と同等もしくはそれ以下であった。

ファージに貪食され，それ以降もマクロファージ内に４．骨髄由来マクロファージに CNT・刺青用インク

留まり続け，短・長期どちらでも強い炎症反応は呈さを貪食させた時の，培地中の炎症性サイトカインをなかった。CNT のコロニー生成阻害は濃度依存的で，測定したところ，CNT・刺青用インクともに IL‑

細胞毒性は刺青と同等もしくはそれ以下であった。ま

6・TNF‑α・IL‑1b は検出されなかった。

た CNT・刺青ともに IL‑6・TNF‑α・IL‑1b は検出

これらの結果より，今後 CNT のようなナノサイズ

されなかった。

のカーボンを生体材料に応用するための安全性試験で【考察】生体内分布や遺伝毒性・発癌性など様々な検は，ナノサイズのカーボンブラックを対照物質として討する必要があるが，CNT に対する基本的な生体反評価し議論するべきであると考えられた。また刺青用

応は刺青と同等に安全性が高く生体材料に使用できるインクを対照物質として CNT の安全性を評価したと可能性がある。また，今後 CNT のようなナノサイズ

ころ，CNT と刺青用インクの安全性は同等であるこのカーボンを生体材料に応用するための安全性試験でとが示された。本論文により，CNT の生体材料としは，刺青に使用されてきたカーボンブラックを基準とての安全性評価研究が急速に進み，臨床応用が実現すして評価し 議 論 す る べ き で あ る。本 論 文 に よ り，れば，様々な分野で医学が進歩する可能性があると考CNT の生体材料としての安全性評価研究が急速に進える。

み，臨床応用が実現すれば，様々な分野で医学が進歩する可能性がある。

304

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Tranilast modulates ﬁbrosis, epithelial‑mesenchymal transition and peritubular capillary injury inunilateral ureteral obstruction rats（トラニラストは，片側尿管結紮ラットにおいて，腎間質の線維化，上皮‑間葉分化転換，尿細管周囲毛細血管の障害を緩和する）
兼

山

友

輝

（論文の内容の要旨）

ある pSmad2の発現を有意に抑制した。② 腎間質に【背景と目的】現在，我が国の慢性腎臓病（CKD）患

おいて，Fibronectin などの細胞外基質が有意に減少

者数は1,330万人と推定されている。これは，成人のし，腎間質の線維化を抑制した。③ 尿細管上皮細胞

８人に１人が CKD に罹患していることになり，CKD

における増殖やアポトーシスが有意に減少し，尿細管は新たな国民病として認識されつつある。また，国内

上皮細胞の障害を抑制した。④ 尿細管上皮細胞においの腎不全による透析患者数は28万人を超え，毎年１万て，E‑cadherin の発現が保たれると共に，Vimentin

人規模で透析患者数が増加している。その結果，医療の発現を抑制するに伴い，EMT 様変化を緩和した。

費の増大をきたし，医療経済的な面からも腎不全へのまた，EMT を誘導する転写因子である Snail1の発現進行防止は社会的な課題であると言える。しかしながも有意に抑制した。⑤ 尿細管基底膜破壊酵素である

ら，CKD の進行を防ぐ治療法や，腎不全へと進行す

M MP2の発現が有意に抑制されたと共に，尿細管基る機序の解明は未だ確立されておらず，治療法の開発

底膜の障害を緩和した。⑥ 腎間質における aSM A，は急務である。

S‑100A4陽性細胞が有意に減少し，筋線維芽細胞の集腎不全は病理組織学的に，糸球体の荒廃と腎間質の積を抑制した。⑦ 腎間質におけるマクロファージの線維化で特徴付けられる。特に腎間質線維化は腎機能浸潤を有意に抑制した。⑧ 尿細管周囲毛細血管にお低下を反映すると報告されており，腎間質線維化を抑ける VE‑cadherin の発現低下を緩和すると共に，超制することが，腎不全予防へ繫がると考えられている。

微形態的に血管内皮細胞の障害を緩和した。

腎間質の線維化は，主に間質に浸潤した炎症性細胞な【結論】Tranilast は TGF‑β1の産生を抑制するに伴どが，TGF‑β1を産生することで開始されると考えらい，腎間質の線維化や EM T 様変化，尿細管周囲毛細れている。この TGF‑β1は筋線維芽細胞の活性化や，血管の障害を緩和するという結論を得た。また，腎間尿細管上皮細胞の上皮間葉分化転換（EMT），血管内質線維化における TGF‑β1の役割が明らかになると皮細胞の内皮間葉分化転換（EndM T）を惹起し，線共に，その抑制による病態制御の可能性も示唆された。

維形成を促進する。一方で抗アレルギー薬として使用（論文審査の結果の要旨）され て い る Tranilast は，様々な 細 胞 か ら の TGF‑

腎間質の線維化は，主に間質に浸潤した炎症性細胞

β1産生を抑制することで，ケロイドや肥厚性瘢痕になどが，TGF‑β1を産生することで開始されると考え対する抗線維化薬としても使用されている。そこで本られている。この TGF‑β1は筋線維芽細胞の活性化

研究では，TGF‑β1抑制作用が知られる Tranilast をや，尿細管上皮細胞の上皮間葉分化転換（EMT），血

用いて，腎間質線維化に及ぼす効果を解析した。

管内皮細胞の内皮間葉分化転換（EndMT）を惹起し，【方法】腎間質線維化の動物実験モデルとして片側尿線維形成を促進する。一方で抗アレルギー薬として使管結紮（UUO）ラットを使用した。この UUO ラッ

用されている Tranilast は，様々な細胞からの TGF‑

トは早期段階において糸球体障害を欠き，腎間質の線β1産生を抑制することで，ケロイドや肥厚性瘢痕に維化のみが惹起されるため，腎間質線維化に対する対する抗線維化薬としても使用されている。そこで本

in vivo の研究で頻繁に使用されている。この UUO

研究では，TGF‑β1抑制作用が知られる Tranilast をラットに対して Tranilast（400mg/kg/day）を12時

用い，腎間質線維化に及ぼす効果を解析した。

間毎に強制経口投与を行い，投与開始から７日後，14腎間質線維化を呈する動物実験モデルとして，今日後に解剖を行い，各種の線維化マーカーを病理組織

回我々は片側尿管結紮（UUO）ラットを作製した。

学的，分子生物学的に解析した。

UUO ラットに対して Tranilast（400mg/kg/day）を【結果】UUO ラットに対し Tranilast を投与すること12時間毎に強制経口投与を行い，投与開始から７日後，により，① TGF‑β1並びに下流シグナルタンパクで14日後に解剖を行った。解析は，各種の線維化マーNo. 5, 2012305

審査学位論文要旨

カーやEMT様変化，血管内皮細胞障害などに焦点を意に抑制されたと共に，尿細管基底膜の障害を緩和

当て，病理組織学的，分子生物学的に解析した。そのした。

結果，兼山友輝は今回の実験で以下の結果を得た。

６．腎間質における aSMA，S‑100A4陽性細胞が有UUO ラットに対し Tranilast を投与することにより，

意に減少し，筋線維芽細胞の集積を抑制した。
７．腎間質におけるマクロファージの浸潤を有意に抑１．TGF‑β1並びに下流シグナルタンパクである制した。

pSmad2の発現を有意に抑制した。

８．尿細管周囲毛細血管における VE‑cadherin の発２．腎間質において，Fibronectin などの細胞外基質現低下を緩和すると共に，超微形態的に血管内皮細が有意に減少し，腎間質の線維化を抑制した。

胞の障害を緩和した。

３．尿細管上皮細胞における増殖やアポトーシスが有

これらの結果から，Tranilast は TGF‑β1の産生を意に減少し，尿細管上皮細胞の障害を抑制した。

抑制するに伴い，腎間質の線維化や EMT 様変化，尿４．尿細管上皮細胞において，E‑cadherin の発現が細管周囲毛細血管の障害を緩和するという結論を得た。

保たれると共に，Vimentin の発現を抑制するに伴

本論文は TGF‑β1を介した腎間質線維化の機序を明い，EMT 様変化を緩和した。また，EMT を誘導

らかにすると共に，薬剤によるその制御の可能性を示

する転写因子である Snail1の発現も有意に抑制し唆するものである。慢性腎臓病の病態改善に寄与するた。

基礎的研究であると考えられ，主査，副査は一致して５．尿細管基底膜破壊酵素である M M P2の発現が有本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

A Galenical of Traditional Chinese Herbal Mixture (THC‑002) Reduces Expression of Tachykinin
Peptides within Urethras of Spontaneously Hypertensive Rats（自然発症高血圧ラット（SHR）尿道における生薬エキス（THC‑002）のタヒキニン類発現の抑制効果についての検討）
石川（論文の内容の要旨）

雅邦て，尿道組織を膀胱から５‑８mm 部位の前立腺内尿【緒言】高齢男性における排尿後の尿滴下は

味地黄

道，および約10mm 部の前立腺外尿道に分けた。採丸などの漢方製剤によって改善すると報告されている。

取した尿道組織 の タ ヒ キ ニ ン mRNA 発 現 を real‑

しかし，その作用機序については不明な部分が多い。

time RT‑PCR によって半定量的解析を行った（n＝われわれは漢方製剤による排尿障害の改善機序の一つ

６）。さらにタヒキニン抗体を用いて免疫組織染色をとして膀胱のＣ線維活性化の抑制作用を報告している。

行い，タヒキニン類の発現部位についての評価，およ本研究は尿道にもＣ線維が存在することが報告されてび抗体陽性部位を画像解析によって半定量的解析をいることから，漢方製剤による尿滴下改善の機序とし行った（n＝６）。また免疫組織染色においては，Ｓ100て尿道のＣ線維の活性化に関与するとされるタヒキニ

抗体を用いた神経細胞の検討も同時に行った。

ン類（ニューロキニンＡ，ニューロキニンＢ，サブス【結果】前立腺内尿道において，40週齢無処理群 SHRタンスＰ）に着目し，それらの発現をは，10週齢無処理群 SHR と比味地黄丸からして，ニューロキニ

抽出した生薬エキス（THC‑002，ハルンケア ）が抑

ンＢ mRNA と蛋白，および，サブスタンスＰ mRNA

制するかについて検討した。

の発現が有意に増加した。同部位の40週齢 SHR で【方法】10および40週齢雄 SHR を，無処理群，塩分は，無処理群と塩分負荷群の間でニューロキニンＡ

負荷群，および THC‑002投与群の３群に，それぞれmRNA と蛋白，および，サブスタンスＰ蛋白の発現

12匹ずつ分けた。塩分負荷群では，0.9％食塩含有溶が有意に増加した。前立腺外尿道においては，40週齢液を経口投与した。THC‑002投与群は，0.9％食塩

無処理群 SHR のニューロキニンＢ蛋白発現のみが，含有溶液を経口投与して１時間後に，100ml/５ml/

10週齢無処理群 SHR と比kg THC‑002を経口投与した。塩分負荷，および，部位の10週齢 SHR ニューロキニンＡ mRNA，およTHC‑002投与は１日１回，１週間施行した。投与７

び，40週齢 SHR ニューロキニンＡ蛋白発現が，塩分日後，膀胱から尿道球部までの組織を摘出した。続い負荷によって有意に増加した。10週齢 SHR において，

306

して有意に増加した。同信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

前立腺内尿道のサブスタンスＰ mRNA，および，前た。タヒキニン類蛋白の発現を免疫組織学的に検討し

立腺外尿道のすべてのタヒキニン類 mRNA 発現は，画像解析を行った。

THC‑002投与により有意に低下した。40週齢 SHR に

週齢によるタヒキニン類 mRNA の発現を比する

おいては，前立腺外尿道のニューロキニンＡ mRNAと，前立腺内尿道では10週齢 SHR と比して40週齢を除いて，すべてのタヒキニン類 mRNA，および，SHR のニューロキニンＢ，サブスタンスＰ mRNA蛋白の発現は，THC‑002投与によって有意に低下しの発現が有意に増加した。前立腺外尿道ではタヒキニ

た。また，THC‑002の投与によって，尿道に存在す

ン類 mRNA の発現に増加傾向はあったが有意差は認るＳ‑100陽性神経細胞の減少は認められなかった。

められなかった。

【考察】40週齢 SHR において，加齢，あるいは，塩

塩分負荷によるタヒキニン類 mRNA の発現変化を分負荷によって増大したタヒキニン類蛋白の発現は，みると，前立腺内尿道では40週齢 SHR のニューロキ

THC‑002により有意に抑制された。本研究では排尿

ニンＡ mRNA の発現が有意に増加した。前立腺外尿後尿滴下とＣ線維の関与を機能生理実験によって明ら道では10週齢 SHR のニューロキニンＡ mRNA の発かにしていないが，THC‑002によるタヒキニン類の現が有意に増加した。

発現抑制がＣ線維が原因と考えられる排尿後尿滴下のTHC‑002投与によるタヒキニン類 mRNA の発現改善に対して有効であることが示唆される。

抑制効果をみると，前立腺内尿道では10週齢 SHR の【結語】SHR では加齢とともにタヒキニン類の発現サブスタンスＰ mRNA の発現と40週齢 SHR のタヒが増加し，THC‑002によって，タヒキニン類の発現

キニン類すべての mRNA の発現が THC‑002を投与が一部抑制された。

することにより有意に減少した。前立腺外尿道では10（論文審査の結果の要旨）
高齢男性における排尿後尿滴下の機序は解明されていないが，20‑50代の男性の約１割から３割で認めら

週齢 SHR のタヒキニン類すべての mRNA の発現と40週齢 SHR のニューロキニンＢ，サブスタンスＰ
mRNA の発現が有意に減少した。

れているとの報告がある。経験的に 味地黄丸などの蛋白の発現を画像解析により比 すると，無処理群

漢方製剤はその症状を緩和，改善するといわれている。

では10週齢より高齢である40週齢の方がニューロキニ

本研究は漢方製剤による尿滴下改善効果の機序解明を

ンＢ蛋白の発現が有意に増加し，さらに40週齢 SHR

目指し，尿道の知覚神経であるＣ線維に注目し，生薬で塩分負荷によりニューロキニンＡ，サブスタンスＰ

エキス（THC‑002 ）がタヒキニン類の発現を抑制す蛋白の発現は有意に増加し，THC‑002投与によってるか検討した。タヒキニン類にはニューロキニンＡ，

タヒキニン類すべての蛋白の発現が有意に減少した。

ニューロキニンＢ，サブスタンスＰがあり，タヒキニ
ン類の発現増加はＣ線維活性化の指標となる。

本研究では排尿後尿滴下とＣ線維の関与を機能生理実験によって明らかにしていないが，SHR の尿道に10週齢と40週齢自然発症高血圧ラット（SHR）のおいて加齢によりタヒキニン類が増加することと，尿道におけるタヒキニン類 mRNA および蛋白の発現

SHR の尿道において塩分負荷によりタヒキニン類がについて検討し，THC‑002が尿道におけるタヒキニ

増加すること，また，これに THC‑002を投与するとン類の発現を抑制するのか検討した。10週齢および40

加齢，塩分負荷によって増加した尿道タヒキニン類が週齢の雄 SHR を無処理群，塩分負荷群，塩分負荷＋減少したことから，排尿後尿滴下の機序には尿道のＣ

THC‑002投与群の３群にわけた。塩分負荷は20ml/

線維活性化が一部関与していると考えられた。

kg の0.9％生理食塩含有溶液を毎日１週間投与した。

排尿後尿滴下の機序として尿道Ｃ線維の活性化といその１時間後に塩分負荷群では THC‑002を含まなう新たな視点から検討を加え，これが THC‑002によい５ml/kgの水を加え，塩分負荷＋ THC‑002群ではり抑制されるといる臨床的に意義のある成績を得たこ

THC‑002を投与した。尿道は前立腺内尿道と前立腺とから，主査，副査は一致して本論文を学位論文とし外尿道に分け摘出した。タヒキニン類 mRNA の発現て価値があるものと認めた。

を Real‑Time RT ‑PCR によって半定量解析を行っ

No. 5, 2012307

審査学位論文要旨

Gene pathway analysis of the mechanism by which the Rho‑associated kinase inhibitor Y‑27632
inhibits apoptosis in isolated thawed human embryonic stem cells（単離凍結解凍後ヒト ES 細胞のROCK 阻害剤Ｙ‑27632によるアポトーシス抑制機序の遺伝子パスウェイ解析）
市

川

比奈子

（論文の内容の要旨）

最も細胞生存率が高く，増殖・コロニー形成も良好で【背 景 ・ 目 的】ヒ ト 胚 性 幹 細 胞（embryonic stem

あった。解凍後のヒト ES 細胞に起きたアポトーシス

cell：ES 細胞）は，多能性を持ち様々な細胞に分化

は，ギムザ染色と TUNEL 法により，継時的に解析できるため，基礎研究や再生医療の重要な細胞供給源した。その結果アポトーシスは解凍後12時間でプラとして注目されている。また，ヒト ES 細胞を用いたトーに達した。また，凍結解凍後に生存したヒト ES

細胞移植療法や再生医療を実現するためには，機能性細胞は，Ｙ‑27632の有無に関係なく，数回の継代後にの高い細胞や組織を作成する必要性とともに，細胞・おいても未分化マーカの Oct‑4，Nanog の発現が見

組織の長期保存，目的地への運搬，緊急時の迅速な細られ，未分化が保たれることが確認された。また，解胞供給が求められる。そのために必要な技術の一つに凍直後のヒト ES 細胞を SCID マウスの腎被膜下に移細胞・組織の凍結法があげられる。しかし再生医療の植したところＹ‑27632添加系に奇形腫が形成された。

有力な担い手であるヒト ES 細胞は極めて凍結に弱く，これらは，三胚葉由来の組織から形成されており多凍結解凍後の生存率が極端に低い。この理由として，能性も維持されていることが示された。また，解凍後

ヒト ES 細胞は，細胞を一個一個分離した場合，生存の ES細胞を用いて胚様体を形成し分化させたとこすることが極めて難しい細胞であるため，コロニーとろ Nestin，Soxa2，Brachyuryの遺伝子発現が見らいう細胞の塊として凍結しなければならないことがあれ，三胚葉に分化できることが確認された。DNA mi-

げられる。これが，ヒト ES 細胞の凍結の効率を著し

croarrayを用いて凍結解凍における細胞死機序の解く下げている要因である。最近，この単離による細胞明をしたところ，Ｙ‑27632無添加のものは MAPK 経

死を抑制するのに Rho‑associated kinase（ROCK）

路で IL‑1βと TGF‑βとそれらの受容体の発現上昇

inhibitor が有効であると報告された。ヒト ES 細胞がみられ，またその下流の標的である caspase‑8と10の凍結保存技術は改善されてきているが，まだ十分の活性がみられた。よって，これらの分子がヒト ESとはいえず，安定した生存率も確保できていない。本細胞の凍結解凍後のアポトーシスに関連しているこ研究では，ヒト ES 細胞の凍結解凍時に ROCK in-とがわかった。また，TGF‑β受容体拮抗剤である

hibitor を用いた場合，細胞死（アポトーシス）は抑SB431542と p38MAPK inhibitor の SB203580は，ア制されるのか，その際どのような機序で行われるのか，

ポトーシス抑制に効果はなかったが，SB203580とＹ‑

ROCK inhibitor を用いた細胞凍結は新たな凍結技法

27632との組み合わせは，生存率増加につながった。

として有用であるかを検討した。

これはアポトーシスの開始がサイトカインの活性に依【方 法】ヒ ト ES 細 胞（KhES ‑1，KhES ‑3）を コ ロ

存することを示唆した。

ニーより0.25％ Trypsinにて単離し，ES培地＋10％【結論】Ｙ‑27632を用いた凍結保存法は，簡単で効率

DM SO の凍結保護液に ROCK inhibitor Ｙ‑27632を的な方法としてヒト ES 細胞にとって有効であり，こ10μM 添加しその有無で生存率，性状を比，同様の方法で未分化能，多分化能が失われることはなかっに解凍後の ES 培地についてもＹ‑27632添加の有無にた。また，Ｙ‑27632を使用していない場合，凍結解凍よる影響について比 検討を行った。凍結方法は，凍後12時間以内にヒト ES 細胞は自らサイトカインを産結コンテナを用いて‑80℃まで緩徐に冷却その後液体生し，それらの受容体を活性化することで細胞内の窒素にて保存，解凍は37℃恒温槽で行った。解凍後

caspase を活性化しアポトーシスを促すことが示唆さのアポトーシスの解析は，ギムザ染色，TUNEL 法，れた。ROCK inhibitor Ｙ‑27632は，これらの経路を

DNA microarrayおよびReal‑time PCRを用いて行っ抑制して細胞死（アポトーシス）の活性化を低下させた。

ることがわかった。

【結果】凍結保護液と解凍後の培地にＹ‑27632添加が308

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨（論文審査の結果の要旨）

トーシスの解析は，ギムザ染色，TUNEL 法，DNA

ヒト ES 細胞の凍結保存後の生存率は極端に低く，この問題に対して様々な試みが行われてきたが解決に

microarrayおよび Real‑time PCR を用いて行った。
その結果，市川は次の結論を得た。

は至っていない。生存率が低い原因に細胞を単離する

１．単離ヒト ES 細胞において凍結解凍後，サイトカ

ことができずコロニー状態のままで凍結することが挙

インが産生され，それらの受容体を活性化することげられる。しかし，ROCK inhibitor を使用すること

で細胞内の caspase が活性化しアポトーシスを促で，ヒト ES 細胞の単離が可能になった。今回，ヒト

すことが認められた。

ES 細胞の凍結解凍時に ROCK inhibitor を用いた場
合，細胞死（アポトーシス）は抑制されるのか，その２．ROCK inhibitor Ｙ‑27632は，上記の経路を抑制
して細胞死を低下させることが認められた。

際どのような機序で行われるのか，ROCK inhibitor

３．ROCK inhibitor を用いた凍結保存法は，ヒトを用いた細胞凍結は新たな凍結技法として有用である

ES 細胞特有の性質である，未分化能，多分化能にかを検討した。

影響を及ぼさず，簡単で効率的な方法であることがヒト ES 細胞（KhES‑1，KhES‑3）をコロニーより認められた。

0.25％ Trypsin にて単離し，ES 培地＋10％ DMSO

これらの結果より，ヒト ES 細胞の凍結解凍時の細の 凍 結 保 護 液 に ROCK inhibitor Ｙ ‑27632を10μM

胞死は一つの要因としてサイトカイン産生が関係して添加しその有無で生存率，性状を比 ，同様に解凍後いることが明らかになった。また，その経路を Rhoの ES 培地についてもＹ‑27632添加の有無による影響

kinase を抑制する阻害剤が抑えることが確認された。

について比検討を行った。凍結方法は，凍結コン

今後，ヒト ES 細胞の凍結保存法の改良への応用が期テナを用いて‑80℃まで緩徐に冷却その後液体窒素に待される。よって，主査，副査は一致して本論文を学て保存，解凍は37℃恒温槽で行った。解凍後のアポ位論文として価値があるものと認めた。

Eﬀects of weather variability and air pollutants on emergency admissions for cardiovascular andcerebrovascular diseases（環境要因が救急外来における心血管疾患及び脳血管疾患の緊急入院数に及ぼす影響について）
堀綾（論文の内容の要旨）といった気象要因，日平均 NO ，日平均 O ，日平均

【背景】気温などの気象要因，二酸化窒素をはじめとSO ，日平均 SPM といった大気汚染物質を調べ，総する大気汚染物質と死亡率，疾患の発症との関係につ

入院数および疾病毎の入院数と関連があるか検討した。

いては，近年になって研究が進んでいる。一方で，こ統計解析は，年，季節，曜日，インフルエンザ，RS

れらの個々の疾患に分類して検討した報告や，気候因

ウイルス流行を調整し，一般化線形モデルによる時系

子の重要な一要素である気圧の効果について分析した

列分析を行った。

研究が少ない。更に，最近本邦においても重要視され【結果】2006年４月から2010年３月までに4,355名の緊ている大気汚染物質の影響に関して，疾病の発症に関急入院が認められた。平均気温が１℃低いと，総入院する研究報告が，特に本邦で少ないのが現状である。

は3.24％（95％ CI 1.25‑5.18），急性冠症候群と心そこで，上伊那地域における気象要因，大気汚染物質不全による入院は7.83％（95％ CI 2.06‑13.25），脳と，個々の疾患における発症，特に各心血管疾患，各出血による入院は35.57％（95％ CI 15.59‑59.02），

脳血管疾患との関連について検討した。

脳梗塞による入院は11.71％（95％ CI 4.1‑19.89）【方法】対象は，2006年４月から2010年３月までの，増加した。気圧変化では，気圧が１hPa 低下すると伊那中央病院における救急外来を経由した緊急入院患

総入院は0.95％（95％CI 0.37‑1.52），
脳出血による入院者とし，総緊急入院数および急性冠症候群，心肺停止，は3.25％（95％ CI 0.94‑5.51），心不全による入院は心不全，くも膜下出血，脳出血，脳梗塞，大動脈解離

3.56％（95％ CI 1.09‑5.96），大動脈解離と大動脈瘤と大動脈瘤破裂による日毎の入院数を調査した。その破裂による入院は6.1％（95％ CI 2.29‑9.76）増加

上で，日平均気温，気温変化，日平均気圧，気圧変化

した。大気汚染物質では，NO が１ppb 高いとくも膜

No. 5, 2012309

審査学位論文要旨

下出血による入院は6.59％（95％CI 0.79‑12.73），
SO患に分類して検討した報告や，気候因子の重要な一要

が １ppb 高 い と 急 性 冠 症 候 群 に よ る 入 院 は18.9％

素である気圧の効果について分析した研究が少なく，（95％ CI 4.98‑34.66），Ox が１ppb 高いと大動脈解

大気汚染物質の影響に関しても本邦における報告が特離 と 大 動 脈 瘤 破 裂 に よ る 入 院 は4.48％（95％ CIに少ないのが現状である。今回堀は，2006年４月から

1.39‑7.66）増加した。総緊急入院数で検討した場合，2010年３月までの４年間に，伊那中央病院における救75歳以上のグループでは，それより若年者と比 して，

急外来を経由した緊急入院患者4,355名において，気気温，気圧変化による，入院リスクの増加を認めた。

象要因，大気汚染物質と，個々の疾患における発症，また，男性は女性に べ，気温，気圧変化による，入特に各心血管疾患，各脳血管疾患との関連を検討した。

院リスクの増加を認めた。

その結果，堀は次の結論を得た。

【考察】寒冷が脳血管疾患と心血管疾患による入院を１．平均気温が１℃低いと，総入院は3.24％（95％増加させたことは一部の先行研究と一致した。寒冷に，急性冠症候群と心不全による入院
CI 1.25‑5.18）

より，脳出血のリスクの増大が認められ，くも膜下出は7.83％（95％ CI 2.06‑13.25），脳出血による入血のリスクの増大が認められなかったことは，日本に院は35.57％（95％ CI 15.59‑59.02），脳梗塞によおける先行研究と一致した。

る入院は11.71％（95％ CI 4.1‑19.89）増加した。

また，心血管疾患より脳血管疾患が寒冷の影響をよ

２．気圧変化では，気圧が１hPa 低下すると総入院はり強く受けていることは，他の先行研究と一致してい0.95％（95％ CI 0.37‑1.52），脳出血による入院はた。また，総緊急入院数で検討した場合，男性と高齢3.25％（95％ CI 0.94‑5.51），心不全による入院は者では，寒冷による入院リスクの上昇が認められてお3.56％（95％ CI 1.09‑5.96），大動脈解離と大動脈り，これらの群では特に寒冷に注意すべきと考えられ

瘤破裂による入院は6.1％（95％ CI 2.29‑9.76）

る。

増加した。

気圧の変化については，先行研究で，気圧の低下は

３．大気汚染物質では，NO が１ppb 高いとくも膜下心筋梗塞のリスクを高めるとの報告があったが，本研出血による入院は6.59％（95％ CI 0.79‑12.73），

究では急性冠症候群に対する効果は認めなかった。しSO が１ppb 高いと急性冠症候群による入院は18.9

かし，脳出血では，他の先行研究と同様，気圧低下が％（95％ CI 4.98‑34.66），O が１ppb 高いと大動リスクを増大することを認めた。本研究では，気圧そ脈解離と大動脈瘤破裂による入院は4.48％（95％のものより，気圧変化が脳出血の件数とより直線状にCI 1.39‑7.66）増加した。

相関しており，気圧変化が脳出血の発症により関連していることが示唆された。

４．総緊急入院数で検討した場合，75歳以上のグルー
プでは，それより若年者と比 して，気温，気圧変

大気汚染物質では，NO がくも膜下出血，SO が急化による，入院リスクの増加を認めた。また，男性性冠症候群，O が大動脈解離および大動脈瘤破裂のは女性に べ，気温，気圧変化による，入院リスク

リスクを増大することが示されたが，先行研究ではその増加を認めた。

れぞれの物質によりリスクを増大する疾患が必ずしもこれらの結果より，寒冷と気圧の低下は心血管疾患

一致せず，今後のさらなる研究が必要と考えられた。

と，脳血管疾患を増加させることが分かった。特に男【結論】寒冷と気圧の低下は心血管疾患と，脳血管疾性と高齢者では，寒冷による入院リスクの上昇が認め患を増加させた。大気汚染物質は，心血管疾患と脳血られており，特に寒冷に注意すべきと考えられる。大管疾患に関連がみとめられるものがあった。

気汚染物質は，心血管疾患と脳血管疾患に関連がみと（論文審査の結果の要旨）められるものがあったが，先行研究と同様に主となる気温などの気象要因，二酸化窒素をはじめとする大有害物質および疾患が特定されず，さらなる研究が必

気汚染物質と死亡率，疾患の発症との関係については，

要と考えられた。この内容に対し，主査，副査は一致

近年になって研究が進んでいるが，これらの個々の疾して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

310

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Potential beneﬁts of earlycontinuous positive pressure ventilation in patients with rapidlyprogressiveinterstitial pneumonia（急速進行性間質性肺炎に対する非侵襲的人工呼吸の早期導入の有効性）
横

山

俊

樹

（論文の内容の要旨）

nia：RPIP）として報告されるようになってきている。

【背景】特発性肺線維症の急性増悪をはじめとして，

RPIP は両側肺のびまん性の炎症から始まり，急速に急速進行性間質性肺炎（Rapidly progressive inter-

肺の線維化を呈すると考えられる。一般に，治療としstitial pneumonia；RPIP）は急性期死亡率80〜90％てステロイド療法やその他の免疫抑制剤による治療をと言われており，極めて死亡率が高いことが知られて施行されるが，重篤な急性呼吸不全を呈し，難治性でいる。一部では集中治療室での管理や挿管人工呼吸管あることが知られている。しかし，人工呼吸管理の有理の予後に及ぼす有効性を疑問視する報告もある。

効性は確立されていない。

一方，非侵襲的人工呼吸（NIV）は，呼吸不全を一方，非侵襲的人工呼吸（Noninvasive ventilation

呈する様々な疾患に対して幅広く使用されるようになっ： NIV）は挿管管理を回避できることから，免疫抑てきており，特に免疫抑制状態にある呼吸不全におい制された患者において人工呼吸器関連肺炎等の感染のて，感染の合併の防止の観点から有効性が考えられて合併を予防し，予後を改善する可能性が指摘されていいる。本研究ではRPIPを呈した患者に対する急性期

る。一般に，RPIP 患者では，ステロイド等の免疫抑人工呼吸管理として NIV を使用し，有効性について

制治療を行うため，NIV による呼吸管理が有効であの評価を行った。

ると考えられる。今回，RPIP において NIV の効果【方法】NIV として BiPAP Vision を使用した。臨を確認し，予後に関わる因子について検討した。

床背景は診療録より後方視的に取得した。検査値，酸2005年１月から2010年12月までの間に信州大学医学素化の指標は入院時及び NIV 開始時のものを取得し部附属病院において呼吸管理を行った RPIP38症例をた。NIV 開始後30日における生存・死亡を調査し，対象とした。NIV 開始後，30日目における生存/死亡

それぞれ生存群・死亡群として比 検討を行った。

を調査し，生存群・死亡群に分けて比【結果】RPIP に対して38例で NIV を使用した。生存更に，30日目での生存/死亡に関わる因子を検討する群と死亡群の入院時 PaO /F O には統計学的有意差ため，ロジスティック回帰分析を用いて単変量解析をを 認 め な か っ た が，NIV 開 始 時 PaO /F O が 死 亡行った。

群では有意に低かった（Ｐ＝0.0054）。また入院から検討を行った。

その結果，横山は以下の結論を得た。

NIV 開始までの期間は死亡群のほうが有意に長かっ１．全38症例中，30日生存したのは26例（68.4％）

た（Ｐ＝0.0006）。NIV開始時の血清中 KL‑6及び LDHであり，生存退院できたのは20例（52.6％）だっも死亡群において有意に高値を示した（KL‑6，Ｐ＝た。

0.022；LDH，Ｐ＝0.044）。死亡群において NIV 開始

２．生存群・死亡群の比では，生存群で NIV 導入のタイミングが遅かった傾向があり，その間に呼吸不直前の酸素投与濃度が低く，入院から NIV 導入ま全が増悪していた可能性が考えられた。

での期間も短かった。

更に，ロジスティック解析を用いた単変量解析では，

３．入院時・NIV 導入時の各パラメーターの比でNIV の早期導入，NIV 開始時の PaO /F O ，LDH，は，両群の入院時の値に有意な差を認めなかったが，KL‑6を30日生存に影響する因子として認めた。

死亡群で NIV 導入時の PaO /F O ，KL‑6，LDH【結語】NIV の早期導入は RPIP における30日生存を高めるための呼吸管理として有効であると考えられた。
（論文審査の結果の要旨）
経過中に急性に呼吸不全を呈する間質性肺炎は様々が有意に悪化していた。
４．ロジスティック解析による30日生存にかかわる予測因子の検討（単変量解析）では，生存群の方が死亡群より NIV の導入が有意に早く，NIV 開始時のな集中治療管理を行っても予後不良であることが知ら

PaO /F O ，KL‑6，LDH が有意に低かった。

れている。最近では，これらの疾患を急速進行性間質

これらの結果より，RPIP の呼吸管理として NIV性肺炎（Rapidly Progressive Interstitial Pneumo-が有効であり，また，軽症例においてより早期に導入

No. 5, 2012311

審査学位論文要旨することが有用性が高まると考えられた。その理由とられた。以上より，本研究は臨床的に有用であり，主しては，NIV の早期導入により PEEP による有効性

査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があがより大きくなり，吸入酸素濃度を低下させるため，るものと認めた。

高濃度酸素投与による肺損傷を軽減できるためと考え

Combination Chemotherapy with Doxorubicin, Vincristine, Cyclophosphamide, and Platinum Compounds for Advanced ThymicCarcinom（
a 手術不能進行胸腺癌に対する白金製剤，ドキソルビシン，ビンクリスチン，シクロホスファミド併用化学療法の検討）
吾

妻

俊

彦

（論文の内容の要旨）

効率（RR）および病勢コントロール率（DCR）はそ【背景と目的】胸腺癌は稀な胸腺上皮性悪性腫瘍であれ ぞ れ50.0％，88.2％ で あ っ た。生 存 期 間 中 央 値

り，胸腺腫と比（M ST）は21.3カ月で，１年および３年生存率はそれしてより進行性で高頻度に遠隔転移を来す性質を有し，予後不良な疾患である。そのため，ぞ れ72.7％，34.4％ で あ っ た。PR 群，SD 群，PD

切除不能進行胸腺癌において全身化学療法の果たす役

群の MST はそれぞれ25.3カ月，37.2カ月，8.1カ月

割は大きいと考えられるが，稀な疾患であることからで，PR 群と SD 群には有意差を認めな か っ た が，標準治療は確立していない。また多数例を集積し治療

PD 群とはそれぞれ有意差を認めた。シスプラチン投

成績を検討した報告もない。当教室では本疾患に対し

与 群 の RR，DCR，MST は そ れ ぞ れ55.2％，89.7て初期治療としてシスプラチン，ドキソルビシン，ビ％，23.8カ月で，カルボプラチン投与群の RR，DCR，

ンクリスチン，シクロホスフ ァ ミ ド 併 用 化 学 療 法

M ST はそれぞれ20.0％，80.0％，7.7カ月であった。

（ADOC 療法）を行ってきた。本研究では，切除不能

有害事象としては，Grade３以上の白血球減少，好中

進行胸腺癌に対する白金製剤，ドキソルビシン，ビン

球減少をそれぞれ70.6％，76.5％に認め，発熱性好クリスチン，シクロホスファミド併用化学療法の有効

中球減少症は11.8％に認めた。嘔気，食欲不振はそ

性と忍容性に関して後方視的に検討した。

れぞれ20.6％，23.5％に認めたが，いずれも治療延【対象と方法】1996年８月から2010年３月までに当科期や中断となる毒性には至らなかった。

に入院した切除不能進行胸腺癌38例のうち，初期治療【考察】進行胸腺癌に対する化学療法の報告は散見さとして白金製剤，ドキソルビシン，ビンクリスチン，シれるが，すべて少数例での検討であり本研究の症例数

クロホスファミド併用化学療法が施行された34例を対ほどの報告はない。今回の ADOC 療法の奏効率およ象とした。29例にシスプラチン50mg/m （Day１）

び生存期間から，本疾患に対して有用な治療法である＋ドキソルビシン40mg/m （Day１）＋ビンクリス

可能性が示唆された。有害事象に関しては，消化器症

チン0.6mg/m （Day３）＋シクロホスファミド700状および白血球/好中球減少がみられるものの，許容mg/m（Day４）が３〜４週毎に投与された（ADOC範囲と考えられた。高齢者などに対するカルボプラチ

療法）。腎機能障害，高齢などの理由で，５例にはシス

ン投与は，病勢制御において考慮され得る可能性が示

プラチンに代えてカルボプラチン AUC 3.0（Day１）唆された。以上より，白金製剤，ドキソルビシン，ビが投与された。34例における化学療法の治療成績およンクリスチン，シクロホスファミド併用化学療法は，び有害事象について検討した。

切除不能進行胸腺癌に対して考慮される治療法の一つ【結 果】男 性22例，女 性12例 で，年 齢 中 央 値 は56歳であると考えられた。

（36‑82歳）であった。ECOG performance status は（論文審査の結果の要旨）

０‑１が28例，２が６例。組織型は扁平上皮癌25例，胸腺癌は稀な胸腺上皮性悪性腫瘍であり，胸腺腫と小細胞癌２例，大細胞神経内分泌癌１例，未分化癌６

比 してより進行性で高頻度に遠隔転移を来す性質を例。臨床病期は正岡分類

ｂ期22例で有し，予後不良な疾患である。そのため，切除不能進あった。化学療法は１〜６サイクル施行され，抗腫瘍

行胸腺癌において全身化学療法の果たす役割は大きい

効果は partial response（PR）17例，stable diseaseと考えられるが，稀な疾患であることから標準治療は（SD）13例，progressive disease（PD）４例で，奏確立していない。また多数例を集積し治療成績を検討

312

ａ期12例，

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

した報告もない。今回，手術不能進行胸腺癌34例を対PD 群に比し，それぞれ有意差を認めた。

象として，初期治療として白金製剤，ドキソルビシン，

４．シスプラチン投与群の RR，DCR，MST はそれ

ビンクリスチン，シクロホスファミド併用化学療法をぞれ55.2％，89.7％，23.8カ月で，カルボプラチ

行い，その有効性と忍容性に関して後方視的に検討しン投与群の RR，DCR，MST はそれぞれ20.0％，

た。ADOC 療法としてシスプラチン50mg/m （Day80.0％，7.7カ月であった。

１）＋ドキソルビシン40mg/m（Day１）＋ビンクリ

５．有害事象としては，Grade３以上の白血球減少，

スチン0.6mg/m（Day３）＋シクロホスファミド700

好中球減少をそれぞれ70.6％，76.5％に認め，発mg/m（Day４）を３〜４週毎に投与した。高齢者・

熱性好中球減少症は11.8％に認めた。嘔気，食欲腎障害例には，シスプラチンに代えてカルボプラチン

不振はそれぞれ20.6％，23.5％に認めたが，いずAUC3.0（Day１）を投与した。

れも治療延期や中断となる毒性には至らなかった。

その結果，以下の成績を得た。

上記の結果より ADOC 療法が胸腺癌に対して良好１．症例は男性22例，女性12例で，年齢中央値は56歳

な抗腫瘍効果を有す可能性が示唆された。高齢者など（36‑82歳）で あ っ た。ECOG performance status

へのカルボプラチン投与は，病勢制御において考慮さは０‑１が28例，２が６例。組織型は扁平上皮癌25れ得る可能性が示唆された。有害事象に関して，消化例，小細胞癌２例，大細胞神経内分泌癌１例，未分器症状および白血球/好中球減少がみられたが，認容化癌６例。臨床病期は正岡分類 ａ期12例， ｂ期性に支障はないものと考えられた。進行胸腺癌に対す22例であった。

る化学療法の報告は散見されるが，すべて少数例での２．化学療法は１〜６サイクル施行され，抗腫瘍効果検討であり本研究の症例数を解析した報告はない。今は partial response（PR）17例，stable disease

後，前向き試験などで検証されることが望ましいもの（SD）13例，progressive disease（PD）４例で，の，本論文は，白金製剤，ドキソルビシン，ビンクリ

奏効率（RR）および病勢コントロール率（DCR）

スチン，シクロホスファミド併用化学療法が，切除不はそれぞれ50.0％，88.2％であった。生存期間中

能進行胸腺癌に対して考慮される治療法の一つである

央値（MST）は21.3カ月で，１年および３年生存率ことを示唆する貴重な報告と考えられる。

はそれぞれ72.7％，34.4％であった。

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文と３．PR 群，SD 群，PD 群の MST はそれぞれ25.3カ

して価値があるものと認めた。

月，37.2カ 月，8.1カ 月 で，PR 群 お よ び SD 群 はEﬀects ofHypoxia‑InducibleFactor‑1αChemical Stabilizer,CoCl and Hypoxiaon GeneExpressionof CYP3As in Human Fetal Liver Cells（ヒト胎児肝細胞の CYP3A 遺伝子発現に対する低酸素
誘導因子‑1α安定化剤 CoCl と低酸素の影響）
鈴

木

英

二

（論文の内容の要旨）

皮 増 殖 因 子 vascular endothelial growth factor【目 的】薬 物 代 謝 酵 素 は，薬 物 動 態 に 大 き な 影 響（VEGF）がある。その低酸素状態で様々な遺伝子発現を及ぼす因子であり，その中でも Cytochrome P450

調節を制御する因子の一つとしてHypoxia‑Inducible（CYP）は酸化反応を触媒する最も重要な酵素である。

Factor‑1α（HIF‑1α）が知られている。HIF‑1αは肝に発現する主要な分子種のうち CYP3A4はヒト成

通常酸素濃度下での半減期は５‑８分と非常に短時間

人肝における総 CYP 含量の約30％を占めると共に，であることが知られており，
HIF‑1αを安定化させる擬現在市販されている医薬品の半数以上の代謝に関与す

似低酸素誘導化合物として塩化コバルト（CoCl ）がる最も主要な分子種である。また，CYP3A7は胎児肝多くの研究で用いられている。そこで，本研究では，胎総 CYP の約50％を占めるが，出産後２週間でピーク

児の低酸素環境に及ぼす CYP3A 遺伝子発現への影響となった後その発現量は急速に減少し，成人肝ではほを解明するために，ヒト胎児肝細胞（HFL 細胞）をとんど検出されない。一方，低酸素状態において複数用いて CYP3A 遺伝子発現に対する CoCl と低酸素のの遺伝子の転写が活性化されるが，その一つに血管内影響を明らかにし，HIF‑1αの寄与について検討した。

No. 5, 2012313

審査学位論文要旨【方法】HFL 細胞は，米国 Applied Cell Biology Re-（論文審査の結果の要旨）

search Institute 社より取得したヒト胎児初代肝細胞

薬物代謝酵素は，薬物動態に大きな影響を及ぼす因（６胎児肝混合，胎齢約13週）を用いた。細胞を播種子であり，その中でも Cytochrome P450（CYP）は

後，CoCl を経時的に添加し，CYP3A の遺伝子発現に酸化反応を触媒する最も重要な酵素である。肝に発現及ぼす影響について検討した。また低酸素の影響につする主要な分子種のうち CYP3A4はヒト成人肝においては，３％ O /５％ CO /92％ N 条件下 CO M ulti‑

ける総 CYP 含量の約30％を占める。一方，CYP3A7

gas Incubator 中37℃にて経時的に培養し検討した。

は胎児肝総 CYP の約50％を占めるが，出産後２週間

CYP3Aおよび VEGFに対する影響は，mRNAの発現でピークとなった後その発現量は急速に減少し，成人

を RT‑PCR 法にて解析した。HIF‑1αのタンパク質

肝ではほとんど検出されない。また胎児の環境は成人レベルでの発現解析は Western blot 法にて行った。

に比べ顕著な低酸素状態にある。その低酸素状態ではCYP3A 遺伝子上の転写活性については，
Promoter 領

様々な遺伝子発現調節を制御する因子の一つとして域 を 含 む CYP3A4の 上 流 約10kb と CYP3A7の 上

Hypoxia‑Inducible Factor‑1α（HIF‑1α）が知られ流約12kbの Reporter plasmidを導入した HFL細胞ている。HIF‑1αは通常酸素濃度下での半減期は５‑を用いて Reporter gene assayにて測定した。

８分と非常に短時間であることが知られており，
HIF‑【結果】HFL細胞における CYP3A4と CYP3A7の1αを安定化させる擬似低酸素誘導化合物として塩化mRNA 発現レベルは，CoCl 処理において有意に抑コバルト（CoCl ）が多くの研究で用いられている。

制された。また３％ O 条件下においては，CYP3A7

そ こ で，本 研 究 で は，胎 児 の 低 酸 素 環 境 に 及 ぼ すの mRNA 発現レベルの抑制傾向を示した。HIF‑1α

CYP3A 遺伝子発現への影響を解明するために，ヒトのタンパク質含有量は CoCl 処理および３％ O 条件

胎児肝細胞（HFL 細胞）を用いて CYP3A 遺伝子発下 で 有 意 に 増 加 し た。VEGF の mRNA 発 現 レ ベ

現に対する CoCl と低酸素の影響を明らかにし，HIF‑

ルは３％ O 条件下 で 有 意 に 上 昇 し た。CYP3A4と1αの寄与について検討した。

CYP3A7の転写活性は，３％ O 条件下において変化しないが，CoCl 処理で有意に抑制された。

その結果，鈴木は次の結論を得た。
１．HFL 細 胞 に お け る CYP 3A 4と CYP 3A 7の【考察】酸素濃度依存である HIF‑1αの安定化には２mRNA 発現レベルは，CoCl 処理において有意に％‑３％の低酸素状態が必要になる。HIF‑1αの増加抑制された。

による VEGF の mRNA 発現誘導は，HIF‑1αを介する低酸素による応答反応と一致していた。しかし，２．CYP3A7の mRNA 発現レベルは３％ O 条件 下において抑制傾向を示した。

CYP3A7の mRNA が，３％ O 条件下において抑 制

３．HIF‑1αにより転写が活性化される遺伝子の一つで傾向を示したことから，HFL 細胞において HIF‑1αある血管内皮増殖因子vascular endothelial growth

が CYP3A7の遺伝子発現抑制には関与しないことがfactor（VEGF）があるが，VEGF の mRNA 発現考えられた。また CYP3A4と CYP3A7の転写活性でレベルは３％ O 条件下で有意に上昇した。

CoCl により有意に抑制 さ れ た 結 果 は，CYP3A4とCYP3A7の mRNA 発現における CoCl の影響と一致

４．HIF‑1αのタンパク質含有量は CoCl 処理および３％ O 条件下で有意に増加した。

していた。しかし，HIF‑1αは CoCl 処理または低酸

５．CYP3A4と CYP3A7の転写活性は，３％ O 条件

素条件において有意に増加した。これらの結果より，

下において変化しないが，CoCl 処理で有意に抑制

CoCl の胎児肝細胞における CYP3A 遺伝子発現の制された。

御メカニズムとして，HIF‑1αは直接 CYP3A4およ

これらの結果より，胎児肝細胞における低酸素および CYP3A7の遺伝子発現調節に関与していないこと

び CoCl による CYP3A 遺伝子発現を制御するメカニが示唆された。

ズムとして，HIF‑1αは CYP3A4および CYP3A7の遺伝子発現調節に直接は関与していないことが示唆された。これらの内容に対して，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

314

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

American Ginseng Improves NeurocognitiveFunction in Senescence‑Accelerated Mice:PossibleRoleof the Upregulated Insulin and Choline Acetyltransferase Gene Expression（アメリカ人参による老化促進マウスの認知機能改善：脳内インスリンと ChAT 遺伝子の発現増加の役割）
史

峻（論文の内容の要旨）

脳内のブドウ糖利用が認知機能維持に重要な役割を果【背景と目的】高齢化に伴う認知症の患者数が年々増たしていると考えられた一方，アメリカ人参の摂取は加傾向にあり，近年認知症と糖尿病の関連も新たに注

高齢者の認知症治療に有用である可能性が示唆された。

目を浴びている。一方，加齢に伴った脳内ブドウ糖利

今後，アメリカ人参は臨床上認知機能改善薬として期用の低下が認知症の促進因子の一つと考えられており，待できると思われる。

我々は老化促進マウスを用いて，アメリカ人参の摂取効果をマウスの認知機能と脳内糖代謝の両面から観察（論文審査の結果の要旨）
高齢化に伴う認知症の患者数が年々増加傾向にあり，し評価を試みた。

近年認知症と糖尿病の関連も新たに注目を浴びている。

【材料及び方法】生後６週齢雄性の老化促進モデルマウ

一方，加齢に伴った脳内ブドウ糖利用の低下が認知症

ス（SAM P10）36匹と老化促進耐性マウス（SAMR1）の促進因子の一つと考えられており，史は老化促進マ

24匹を用いた。実験は一群を12匹とし，其々に満10月

ウスを用いて，アメリカ人参の摂取効果をマウスの認齢まで，アメリカ人参添加食またはコントロール食

知機能と脳内糖代謝の両面から観察し評価を試みた。

を摂取させた。毎月の体重，空腹時血糖値（ FPG）及実験は６週齢雄性の老化促進モデルマウス（SAMP-

び老化度をモニターし，またストレスのないポジティ

10）36匹と老化促進耐性マウス（SAMR1）24匹を用いブキュータスクを利用した KUROBOX で，９月齢マた。一群を12匹とし，其々に満10月齢まで，アメリカ

ウスの認知機能を評価した。さらに，脳内ペルオキシ

人参添加食またはコントロール食を摂取させた。毎月ソーム増殖因子活性化受容体（PPAR‑δ），インスリの体重，空腹時血糖値（FPG）と老化度をモニター

ン，コリンアセチルトランスフェラーゼ（ChAT）とし，ストレスのないポジティブキュータスクを利用しアミロイド前駆体タンパク質（APP）の遺伝子発現

た KUROBOX で，９月齢マウスの認知機能を評価し（mRNA）をリアルタイム定量的逆転写ポリメラーゼた。最後に，脳内ペルオキシソーム増殖因子活性化受

連鎖反応アッセイによって測定した。

容体（PPAR‑δ），インスリン，コリンアセチルトラ【結果】アメリカ人参添加食の摂取によって，老化促

ンスフェラーゼ（ChAT）とアミロイド前駆体タンパ

進モデルマウス SAMP10で FPG は上昇し，老化促

ク質（APP）の遺伝子発現（mRNA）をリアルタイ

進耐性マウス SAM R1で FPG は低下した。認知機能

ム定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応アッセイによっ（正しい訪問率）について，SAMR1マウスに比べてて測定した。

SAM P10マウスは低下していたが，コントロール食アメリカ人参の摂取効果からみて，史は次のような摂取群に比べアメリカ人参添加食摂取群は有意に上昇

結果を得た。

した。アメリカ人参添加食による認知機能の改善は

１．SAMP10マウスの体重増加が明らかで，SAMR1

SAM P10のみならず SAMR1でも観察された。脳内マウスに有意差はなかった。

インスリンとChAT遺伝子（mRNA）の発現は SAMP-

２．SAMP10マウスの老化度は対照群より低く，老10，SAM R1ともに，アメリカ人参添加食摂取群で有化は有意に抑制された。SAMR1に同様な効果は見意に増加した。
【結論】アメリカ人参の長期間摂取によって，老化促
進モデルマウスにおける認知機能低下は有意に改善さられなかった。
３．SAMP10マウスで FPG は有意に上昇し，
SAMR1マウスで FPG は有意に低下した。

れたが，その機序として脳内ブドウ糖利用の上昇が関４．認知機能（正しい訪問率）は SAMP10，SAMR1

与しているものと推測された。脳内のインスリンとともに，アメリカ人参添加食の方が有意に高かった。

ChAT 遺伝子の発現は，ブドウ糖利用を介した認知５．インスリンと ChAT の遺伝子発現は SAMP10，

機能改善に関与していると考えられた。臨床的には，

SAM R1ともに有意に増加した。PPAR‑δ，APP に

No. 5, 2012315

審査学位論文要旨

有意差はなかった。

を介した認知機能改善に関与していると考えられた。

これらの結果から，
アメリカ人参の長期間摂取によっ

臨床的には，脳内のブドウ糖利用が認知機能維持に重て，老化促進モデルマウスにおける認知機能低下は有要な役割を果たしていると考えられた一方，アメリカ

意に改善されたが，その機序として脳内ブドウ糖利用

人参の摂取は高齢者の認知症治療に有用である可能性の上昇が関与しているものと推測された。脳内のインが示唆された。よって，主査，副査は一致して本論文

スリンと ChAT 遺伝子の発現増加は，ブドウ糖利用を学位論文として価値があるものと認めた。

Biocompatibility and bone tissue compatibility of alumina ceramics reinforced with carbon nanotubes（カーボンナノチューブを強化材として複合したアルミナセラミックスの生体親和性および骨
親和性）
荻

原

伸

英

（論文の内容の要旨）

カリフォスファターゼ（ALP）活性とカルシウム（Ca）【背景と目的】カーボンナノチューブ（CNT）は，他濃度を測定した。１日または５日間培養した骨芽細の材料との複合により強度が増すことから生体材料で胞の cDNAを作製し，real‑time PCR検査を行い，の応用が期待されている。アルミナセラミックス（アRunx2，Osteocalcin の発現量を調べた。

ルミナ）は，耐熱性，耐摩耗性，生体親和性に優れて【結果】試料の力学的強度では，CNT/アルミナ複合

いるが脆いという欠点がある。我々は，従来のアルミ

体の曲げ強度は向上しなかったが，破壊 性はアルミ

ナに強化材として CNT を複合した CNT/アルミナ

ナに比べて20％向上した。皮下組織反応において，複合体を開発し，破壊 性の向上を得た。本研究の目

１週後，両試料周囲にリンパ球を中心とした炎症性細的は，この CNT/アルミナ複合体の生体親和性およ胞を認め，白血球や壊死などの強い炎症性変化は示さ

び骨親和性をアルミナ単体と比 して明らかにするこなかった。４週後，両試料周囲に薄い線維性被膜が形とである。

成され，その周りに好中球やリンパ球などの炎症性細【材料および方法】CNT/アルミナ複合粉末は，0.8

胞を認めず，炎症反応は消失していた。骨組織反応に

wt％濃度 CNT を高圧エタノール溶液中で超微細化

おいて，12週後，両試料周囲には新生骨が形成され，装置を使用しアルミナ粉末に均一分散することで作製

24週後に両試料とも骨組織と全周にわたり間隙なく接された。CNT/アルミナ複合粉末とアルミナ粉末から，着し，骨の中に完全に試料が取り込まれ，骨欠損が修実験に使用する円盤状試料を作製した。アルミナと復されていた。細胞付着試験において，４種類の細胞

CNT/アルミナ複合体の力学的強度を測定した。生体とも，時間とともに付着数が増加したが，骨芽細胞が内試験として皮下埋め込み試験，骨埋め込み試験を

最も付着数が多かった。試料間に有意差を認めなかっ行った。皮下埋め込み試験は，６週齢マウス背部皮下た。電顕では，両試料とも骨芽細胞は試料表面の溝にに試料を埋め込み，１週と４週後に周囲の皮膚と筋組付着し周囲に広がっていた。ALP 活性，Ca 濃度，

織を含めて試料を採取した。組織をパラフィン包埋し，

Runx2，Osteocalcin の発現量は，試料間に有意差を薄切標本を HE 染色して光学顕微鏡で観察した。骨認めなかった。

埋め込み試験は，15週齢白色兎の大腿骨に試料を埋め【結論】CNT とセラミックスの均一分散した複合体

込み，術後12週と24週で大腿骨を採取した。樹脂包埋の形成は難しく，強度はあまり向上しないとされていし，薄切標本を HE 染色して光学顕微鏡で観察した。

たが，機械的な応力を利用して高分散処理した CNT

生体外試験として細胞付着試験を行った。新生児マウを用いることにより，均一分散した CNT/アルミナ

ス頭蓋冠から分離培養された骨芽細胞を試料上に複合体を作製した。現時点で CNT の複合率は0.4‑

3,500cells/cm 濃度で培養し，付着した細胞を DAPI

2.5wt％と少ないが，複合体の破壊靱性はアルミナ単染色し蛍光顕微鏡で計数した。比 のためマウス軟骨

体よりも，平均で20％，最大で約69％向上した。こ細胞，マウス胚線維芽細胞，ヒト平滑筋細胞についての破壊靱性の向上は，CNT/アルミナ複合体を生体材同様の試験を行った。試料上の骨芽細胞を走査電子顕料に用いる際に大きな利点となる。CNT/アルミナ複微鏡で観察した。また，７日間培養の骨芽細胞のアル合体を生体材料として臨床応用する場合に最も重要な

316

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

点は，生体安全性である。我々は，最も基本的な生体

いた細胞付着試験を行った。試料上の骨芽細胞を電子内，生体外試験を，ISO10993に準拠して行い，CNT/

顕微鏡で観察した。骨芽細胞の石灰形成機能を比

アルミナ複合体がアルミナ単体と同等の生体親和性おるために ALP 活性と Ca 濃度，分化機能を比よび骨親和性をもつことを示した。CNT/アルミナ複ために Runx2，Osteocalcin の発現量を測定した。こ合体を骨欠損の修復や骨接合材料に応用する場合に，れらの試験は ISO10993に準拠して行われた。

アルミナの骨親和性が保たれたまま強度が向上することは，極めて重要なことである。生体外試験において，
CNT/アルミナ複合体が細胞毒性を示さないことが明すする

その結果，荻原は次の結論を得た。
１．力学的強度では，CNT/アルミナ複合体の破壊性はアルミナに比べて20％向上した。

らかになった。細胞付着試験では，CNT/アルミナ複２．皮下組織反応では，１週後に両試料周囲にリンパ合体の付着能はアルミナ単体と同等という結果であっ球を中心とした炎症性細胞を認めたが，４週後にはた。ALP 活性と Ca 濃度が CNT/アルミナ複合体と周囲の好中球やリンパ球などの炎症性細は認めず，

アルミナに差がなかったことから，CNT を複合して炎症反応は消失していた。

も骨芽細胞の石灰形成機能は保持されていた。また，

３．骨組織反応では，12週後に，両試料周囲に新生骨

Runx2と Osteocalcin の発現に差がなかったことから，が形成され，24週後に骨の中に完全に試料が取り込

CNT の複合の影響は骨芽細胞の分化に対しても少なまれていた。

いと考えられた。以上から，CNT/アルミナ複合体の４．細胞付着試験では，４種類の細胞とも，時間とと生体安全性がアルミナ単体と同程度であれば，機械的もに付着数が増加したが，骨芽細胞が最も付着数が特性が向上した新規高機能生体材料として人工関節な多かったが，試料間に有意差を認めなかった。電顕

どへの臨床に応用することが期待できる。

では，両試料とも骨芽細胞は試料表面の溝に付着し（論文審査の結果の要旨）

周囲に広がっていた。ALP 活性，Ca 濃度，Runx2，

カーボンナノチューブ（CNT）は，他の材料とのOsteocalcin の発現量は，試料間に有意差を認めな複合により母材の強度を増す性質をもっている。アル

かった。

ミナセラミックス（アルミナ）は，耐熱性，耐摩耗性，これらの結果より，強度が向上した CNT/アルミ

生体親和性に優れているが脆いという欠点がある。今ナ複合体は従来のアルミナと同等の生体親和性と骨親回，アルミナに強化材として CNT を複合した CNT /和性をもつことが明らかになった。また，CNT を複

アルミナ複合体を作製し，この複合体の生体親和性と合しても骨芽細胞の石灰形成機能は保持され，骨芽細骨親和性をアルミナ単体と比 検討した。

胞の分化に対しても影響が少ないと考 え ら れ た。

0.8wt％濃度 CN/アルミナ複合体とアルミナ試料

CNT/アルミナ複合体の生体安全性がアルミナ単体との力学的強度を測定した。生体内試験としてマウス皮同等であれば，機械的特性が向上した新規高機能生体下埋め込み試験，兎大腿骨骨埋め込み試験を行い，試材料として人工関節などの臨床に応用することが期待

料周囲組織の組織学的検討を行った。生体外試験としできる。よって，主査，副査は一致して本論文を学位て骨芽細胞，軟骨細胞，平滑筋細胞，線維芽細胞を用論文として価値があるものと認めた。

Cheetahs Have 4 Serum Amyloid A Genes Evolved through Repeated Duplication Events（チーターは複数回の遺伝子重複により形成された４個の serum amyloid A 遺伝子をもつ）
陳磊

（論文の内容の要旨）ることである。ヒトにおいては SAA 蛋白質をコード【背景と目的】ある種の疾患への感受性に特定の遺伝する SAA 遺伝子の多型を含む特性が血中 SAA レベ子の特性が関与することがある。AA アミロイドーシ

ル，さらには AA アミロイドーシス発症に対する感スは慢性の炎症性疾患に続発し，急性期蛋白質である

受性を決定する一因であることが想定されている。

serum amyloid A（SAA）由来のアミロイドが全身

AA アミロイドーシスはネコ科の哺乳動物であるチーに沈着する疾患である。AA アミロイドーシス発症のターにおいても罹患率が急速に高まりつつあり，その重要な要因の一つは高い血中 SAA レベルが継続され

主要な死因の一つとなっている。ヒトと同様，
チーター

No. 5, 2012317

審査学位論文要旨の SAA 遺伝子の特性が，この動物種が AA アミロイ

わせにより，51個体のチーター集団中には９種類のハ

ドーシスに高い感受性を示す一因である可能性がある。

プロタイプが存在する事を明らかとした。しかしなが申請者はこの仮説を検証するために，チーターの SAAら，これらの SAA ハプロタイプ，または SAA 遺伝

遺伝子のクローニング，およびその塩基配列，多型性，

子型と AA アミロイドーシスの重篤度との間には明転写発現プロファイルなどの特性を解析した。さらに，

らかな相関は認められなかった。
51個体のチーターにおこれらの SAA 遺伝子の進化的な形成過程に関して考ける SAA 遺伝子の RT ‑PCR 解析 の 結 果，SAA1A

察した。

遺伝子は肝臓において発現しており，特に炎症，また【材料と方法】日本国内の動物園で死亡した51個体のは AA アミロイドーシスを発症したチーターの肝臓

チーターの臓器（肝臓，胃，腸）を入手し，ゲノムでは高い転写活性が認められた。SAA1B 遺伝子は調

DNA，および mRNA を調製した。このうち32個体

査したいずれの臓器でも転写発現が認められなかった。

は一つの大家系に，３個体は小家系に属した。また，

SAA3A，および SAA3B 遺伝子の転写発現は肝臓，28個体には軽〜重度の AA アミロイド沈着が認めら

および胃において検出された。胃での転写発現レベルれた。ゲノム歩行法により，未知であった SAA 遺伝

は炎症，または AA アミロイドーシスの重篤度とは

子の５ʼ
上流域，および３ʼ
下流域の塩基配列を取得し相関していなかった。一方，肝臓での転写発現レベル

た。この塩基配列情報に基づき，SAA 遺伝子のコー

は炎症，または AA アミロイドーシス発症と相関しド領域全長を PCR 増幅可能なプライマーを設計し，ていた。これらの結果は，個々の SAA 遺伝子が独自

SAA 遺伝子を PCR クローニングした。この PCR 産の転写発現制御を受けていることを示唆した。さらに，物の塩基配列を決定し，チーター個体間で比 するこ

上記のデータ，およびマウス，ヒトなど他の哺乳動物とにより，多型部位を同定した。mRNA より cDNAの SAA 遺伝子の塩基配列との比を逆転写調製し，RT ‑PCR 法により SAA 遺伝子の４種の SAA 遺伝子は，複数回の遺伝子重複，および転写発現プロファイルを調査した。

遺伝子変換により形成されたことが示唆された。本研【結果と考察】ゲノム歩行法，および PCR クローニ究において得られたデータは，チーターにおける AA

ングの結果，チーターゲノム中には４種類の SAA 遺アミロイドーシスの発症機序を解明し，さらに予防法

伝子（SAA1A，SAA1B ，SAA3A，SAA3B ）が存在を確立する上で有用である。

することを明らかとした。51個体のチーターから得らから，チーターの（論文審査の結果の要旨）

れた４種類の SAA 遺伝子の PCR 産物の塩基配列をチーターは高い AA アミロイドーシス発症率をも比 した結果，多数の塩基多型を同定することができ

ち，その発症機序の原因解明のための良いモデルであた。すなわち，SAA1A 遺伝子に関しては８カ所の塩ると考えられる。申請者の陳磊は，「チーターにおけ基多型と，その組み合わせによる４種類の対立遺伝子る高い AA アミロイドーシス発症率は，この動物種を同定した。同じく SAA1B 遺伝子に関しては６カに特有の serum amyloid A（SAA）遺伝子の特性に

所の塩基多型と６種類の対立遺伝子を，SAA3A 遺伝起因する」との仮説を立てた。そこで，チーターの子に関しては14カ所の塩基多型と７種類の対立遺伝子

SAA 遺伝子群の包括的クローニング，およびその塩を，SAA3B 遺伝子に関しては３カ所の塩基多型と４基配列の調査，チーター個体間の塩基配列多型性とそ種類の対立遺伝子を同定した。SAA1A と SAA1B 遺の遺伝性の調査，転写発現プロファイルを解析し，そ伝子の間，および SAA3A と SAA3B 遺伝子の間での検証を試みた。
さらに得られたデータに基づき，
チー

は，それぞれ高度な塩基配列の相同性が認められた。

ターにおける SAA 遺伝子群の進化的な形成過程に関また，これらの塩基多型は全てコード領域外にあり，しても考察した。

したがって蛋白質レベルではチーターの SAA1，およ

日本国内で死亡した51個体のチーターの臓器（肝臓，び SAA3はそれぞれ単一であることが判明した。この胃，腸），剖検時の病理所見データ（AA アミロイドー

チーターがAAアミロイドー
SAA1蛋白質の単一性が，シス，およびその他の炎症性所見の有無），および個シスに高い感受性を示す一因である可能性が考えられ

体間の血縁関係（家系図）を入手し，解析に用いた。

た。４種類の SAA 遺伝子の遺伝子型を家系追跡した

始めに１個体のチーターに関し，ゲノム歩行法により，結果，これらの SAA 遺伝子は全て同一の染色体上に未知であった SAA 遺伝子の５ʼ
上流域，および３ʼ
下存在し，４種類の SAA 遺伝子上の遺伝子型の組み合

流域の塩基配列を取得した。この塩基配列情報に基づ

318

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

き，個々の SAA 遺伝子に特異的で，かつその全長をてに関して複数個の塩基多型があり，それらは全て

PCR 増幅可能なプライマーを新たに設計した。51個

コード領域外にある。

体のチーターから抽出したゲノム DNA をテンプレー

４．４種類の SAA 遺伝子は同一の染色体上に存在し，

トとして PCR を行い，それぞれの SAA 遺伝子を含それぞれの遺伝子上の対立遺伝子の限られた組み合

むDNA断片を取得した。このDNA断片をTA‑クロー

わせのハプロタイプとして遺伝されている。

ニングし，その塩基配列を決定し，チーター個体間で５．４種類の SAA 遺伝子のうち，SAA1A 遺伝子の比 することにより，各 SAA 遺伝子内での塩基多型

肝臓における転写発現パターンと，炎症性所見，お部位，および対立遺伝子を同定した。これらの対立遺よび AA アミロイド‑シス発症の有無に強い相関が伝子のチーター家系内での遺伝パターンから，SAAある。

遺伝子群から構成されるハプロタイプを推測した。さ６．チ ー タ ー の SAA 遺 伝 子 群 は，SAA1 と SAA3

らに，RT ‑PCR 法により SAA 遺伝子の転写発現プ

遺伝子それぞれが重複されるという，ヒトやマウス

ロファイルを調査した。

とは異なる過程を経て形成されている。

その結果，陳 磊は次の結論を得た。

以上の結果より，チーターは SAA 遺伝子に関して

１．チーターは４種類の SAA 遺 伝 子（SAA1A，

ユニークな特性を有し，特に SAA1蛋白質のアミノ酸

SAA1B ，SAA3A，SAA3B ）を保有する。

配列レベルでの単型性が，チーターが AA アミロイ

２．SAA1A と SAA1B ，SAA3A と SAA3B の 間 では高度な塩基配列相同性がある。

ドーシスの高い発症率を示す一因である可能性が示された。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論

３．チーター集団中には，４種類の SAA 遺伝子の全文として価値があるものと認めた。

Inﬂuence of Cytochrome P450 2C19 gene variations on pharmacokinetic parameters of thalidomide inJapanese patients（日本人におけるサリドマイドの薬物動態学パラメータと CYP2C19遺伝子多
型の影響）
松

澤

直

樹

（論文の内容の要旨）言われる。そのため，サリドマイドの光学異性体を分【目的】サリドマイドは，近年血管新生抑制作用や離し血中濃度を測定することで，サリドマイドの副作

TNF‑α阻害作用などの新しい薬理作用が見出され，用を回避しながら治療を継続できると考えられた。本通常の治療では困難とされる多発性骨髄腫（Multiple

研究の目的は，① CYP2C19 遺伝子多型を簡便かつMyeloma，MM ）などに対し極めて高い治療効果を正確に解析できるようにする，② サリドマイドの示すことが明らかとなり，本邦でも2008年10月，およ及び 体を分離して測定できるように条件検討を行う，

そ50年ぶりに製造が認可・承認された。サリドマイド③ CYP2C19 遺伝子多型とサリドマイドの血中濃度は非酵素的に加水分解するものとされていたが，ラセについて相関性を検討する，以上の３点を明らかにす

ミ体のサリドマイドはヒト肝ミクロソーム中の CYP2

ることである。

C19により一部が水酸化を受けることが報告された。

【方法】従来から行われている CYP2C19多型解析法

一方，CYP2C19にはエクソン４とエクソン５に表現（PCR‑RFLP）は，PCR 反応に３時間以上かかる上，型に影響を及ぼす一塩基多型（SNP）の存在が知ら目的のバンドが得られなかったり，不要なバンドが確れており，日本人の場合，この２つの SNP を調べる

認されたりと正確性に欠けていた。今回，ポリメラー

こ と で CYP2C19 遺 伝 子 多 型 を ほ ぼ 100％ 判 定 可

ゼに KOD FX を用いた新しい PCR‑RFLP 法を開発

能と言われている。CYP2C19は，日本人の約２割がし，CYP2C19の迅速かつ正確な確認ができるか検討

CYP2C19の欠損した Poor M etabolizer であるため，を行った。次に，サリドマイドの光学異性体を分離患者間でサリドマイドの血中濃度に差が生じることがし，血中濃度を測定するため HPLC カラムに CHIR-考えられるが，これまでに報告はされていない。また，

ALPAK AD‑RH を用い，内標準物質にフェナセチ

サリドマイドはラセミ体であるが，抗腫瘍効果やアザンを使用して検討を行った。以上の条件検討を確立しラシ肢症といった副作用にはた後，信州大学医学部附属病院に入院し，サリドマイ

No. 5, 2012‑体が関与していると

319

審査学位論文要旨

ド治療された全患者（６名）から文書による同意を得れており，日 本 人 の 場 合，こ の ２ つ の SNPを 調 べ

た上で，CYP2C19の遺伝子多型解析とサリドマイドることで CYP2C19 遺伝子多型をほぼ100％判定 可の血中濃度を測定した。

能と言われている。また，サリドマイドの抗腫瘍効【結果】Polymerase として KOD FX を用いた改良法

果やアザラシ肢症といった副作用には

では，前処理として血液から DNA の抽出をする必要ると報告されているため，サリドマイド服用患者のがなくなり，かつ PCR の時間短縮（１時間程度で完CYP2C19 遺伝子多型を判定し，サリドマイド光学異了）と目的のバンドを正確に確認することができるよ性体の血中濃度を測定することで，副作用を回避しなうになった。また，サリドマイドのがら治療を継続できると考えられた。

及び

‑体及び

‑体が関与すフェナセチンを良好に分離できる HPLC の条件を確

１．ポリメラーゼに KOD FX を用いた新しい PCR‑

立することができた。サリドマイド治療を受けている

RFLP 法を開発し，CYP2C19の迅速かつ正確な判入院患者から採血を行った結果，CYP2C19ヘテロ変定方法を確立した。

異は４名，ホモ変異の患者は２名であり，野生型の患

２．HPLC カラムに CHIRALPAK AD‑RH を用い，者はいなかった。サリドマイドの AUC（μg・hr/L）

内標準物質にフェナセチンを使用することで，サリは，ドマイドの光学異性体を良好に分離できる測定方法

及び ‑体共にCYP2C19ヘテロ変異の患者よりホモ変異の患者でおよそ1.5倍上昇していた。

を確立した。

【考察】本研究により，CYP2C19の遺伝子多型の迅速３．サリドマイド治療を受けた全入院患者（６名）かかつ正確な確認方法と，HPLC によるサリドマイド

ら文書による同意を得た上で，CYP2C19 遺伝子多の光学異性体分離法を確立することができた。また，

型解析とサリドマイドの血中濃度を測定した結果，

CYP2C19ホモ変異の患者はヘテロ変異の患者よりサ

CYP2C19 ヘテロ変異は４名，ホモ変異の患者は２リドマイドの血中濃度が上昇する傾向が示唆された。

名であった。サリドマイドの AUC（μg・hr/L）は，

サリドマイド導入後より呼吸困難を副作用として認め及び‑体共に CYP2C19 ヘテロ変異の患者よりた患者がおり，内服中止により症状の改善が認められホモ変異の患者でおよそ1.5倍上昇していた。

たことから，CYP2C19ホモ変異の患者はサリドマイ

本研究により，CYP2C19 遺伝子多型の迅速かつドの血中濃度が上昇し，副作用も発現しやすい可能性

正 確 な 確 認 方 法 と，HPLCに よ る サ リ ド マ イ ド のが考えられた。以上の結果より，サリドマイド治療を

光学異性体分離法を確立することができた。また，受ける場合は，CYP2C19の遺伝子多型を確認した上CYP2C19 ホモ変異の患者はヘテロ変異の患者よりサで投与量を設定することで，より副作用の少ない治療

リドマイドの血中濃度が上昇する傾向が示唆された。

を提供できると考えられる。

CYP2C19 ホモ変異の患者で，サリドマイド導入後よ（論文審査の結果の要旨）

り呼吸困難を副作用として認めた患者がいたことから，

サリドマイドは，近年，通常の治療では困難とされ

CYP2C19 ホモ変異の患者はサリドマイドの血中濃度

る多発性骨髄腫などに対し極めて高い治療効果を示すが上昇し，副作用も発現しやすい可能性が考えられた。

ことが明らかとなり，本邦でもおよそ50年ぶりに製造以上の結果より，サリドマイド治療を受ける場合は，が認可・承認された。サリドマイドは非酵素的に加水

CYP2C19の遺伝子多型を確認した上で投与量を設定分解するものとされていたが，ヒト肝ミクロソーム中することで，より副作用の少ない治療を提供できるとの CYP2C19により一部が水酸化を受けることが報告考えられる。

された。一方，CYP2C19にはエクソン４と５に表現型に影響を及ぼす一塩基多型（SNP）の存在が知ら

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Carbon Nanotubes Induce BoneCalciﬁcation byBidirectional Interaction with Osteoblasts（カーボン
ナノチューブは，骨芽細胞との双方向性の相互作用により，骨の石灰化を誘導する）
清

水

政

幸

（論文の内容の要旨）の生体材料への応用が注目され，その一つに再生医療【背景と目的】近年，カーボンナノチューブ（CNTs）の足場材としての有用性が報告されている。我々は，

320

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

2008年に生体内で骨組織を再生する実験で，CNTs

め石灰化物質はHAであることが示された。MWCNTs

を複合した足場材料を用いると骨形成が促進されるこは増殖への影響はなかったが，分化後期のマーカーでとを初めて報告した。しかしそのメカニズムは不明のある Osteocalcin の発現は MWCNTs 群で有意に高ままであり，本研究の目的は，CNTs が骨形成を促かった。培養液中の Ca 濃度を高くすると ALP 活性

進するメカニズムを明らかにすることである。

は高くなり，Osteocalcin の発現が有意に増え，分化【方法】骨形成タンパク rhBMP‑2を用い，マウス背を促進する可能性が考えられた。NIH3T3と ST2に

筋筋膜下における異所性骨形成実験を行い，μCTで骨rhBMP‑2を作用させると，ST2のうち MWCNTs 群形成を評価した。次にマウス頭蓋骨から採取した骨のみ石灰化を認めた。この石 灰 化 が 起 こ る 状 態 で芽細胞様ストローマ細胞（OB）を培養し，多層CNTs

ALP 阻害薬の DHP を作用させると，その濃度依存（M WCNTs）および同じナノサイズのカーボン粒子

的に ALP が低下し，石灰化も抑制された。すなわち

である，カーボンブラック（CB）を対照とし加えた。

ALP は MWCNTs の石灰化を誘導する重要な因子で３週間培養し，アリザリン染色で石灰化を評価し，あると考えられた。

また電子顕微鏡で観察した。MWCNTs添加による【考察および結論】本研究で解明した MWCNTs が骨骨芽細胞増殖に対する影響を alamar blue assayで形成を促進するメカニズムは，骨芽細胞との相互作用評価した。real timeRT‑PCRにより，分化初期のマーであり，M WCNTs が Ca を引き寄せ，骨芽細胞周囲カー（Runx2）と後期のマーカー（Osteocalcin）の発の Ca 濃度を上昇させ，未分化な骨芽細胞が Ca 濃度

現を，それぞれ培養１，５日目に定量化した。次に骨の上昇を感知し，成熟骨芽細胞に分化して，骨形成を芽細胞が存在し な い 培 養 液 中 に M WCNTs ま た は開始するが，この過程で骨芽細胞から多量の ALP が

CBを加え，１週間後にプレート底面に集積したCaを周囲に放出され，ALP 濃度が上昇することにより，定量した。次に培養液中の Ca 濃度による骨芽細胞へ

M WCNTs の周囲に石灰化が誘導される。このようの影響見るため，Ca 濃度が異なる培養液で骨芽細胞に MWCNTs と骨芽細胞の相互作用が相乗的に繰りを培養 し，５ 日 目 に alkaline phosphatase（ALP）

返され，石灰化が急速に進行して，骨形成が促進され染色を行い，骨芽細胞の成熟に伴う機能を評価した。

ると考えられた。このように MWCNTs は生化学的また培養１日と５日にそれぞれ Runx2，Osteocalcin

な生体活性を有することが明らかになり，全く新しいを定量化した。最後に，骨芽細胞以外の細胞が産生す

機能性生体材料として，今後の医療を大きく変える可る ALP でも，骨芽細胞と同様に MWCNTs 周囲に能性があると考えられた。

石灰化を誘導できるか評価するため，線維芽細胞様（論文審査の結果の要旨）

細胞株の NIH 3T 3と ST 2に 対 し MWCNTsと CB を清水らは2008年に生体内で CNTs を複合した足場

作用させて培養し石灰化の確認をした。
次に ST2に材料を用いると骨形成が促進されることを初めて報告

rhBMP‑2を作用させ石灰化能を誘導し，石灰化を確した。今回 CNTs が骨形成を促進するメカニズムを認し，石灰化能が誘導されるのは，ALP を発現した検討した。骨形成タンパク rhBMP‑2を用いたマウス

ことによるのかを検討した。MWCNTs を含む培養

異所性骨形成実験で，μCT で骨 形 成 を 評 価。骨 芽液で，rhBM P‑2で処理した ST2に，ALP 阻 害 作 用

細胞様ストローマ細胞（OB）を培養し，多層 CNTs

を 持 つ dehydropeptidase（DHP）加 え た 時 の ALP（M WCNTs）およびカーボンブラック（CB）を加え，活性および石灰化について評価した。

３週後に石灰化を評価，透過型電子顕微鏡（TEM ）【結果】異所性骨形成実験の術後10，21日目に３次元で観察した。alamar blue assayで骨芽細胞増殖を，

骨形態計測を行うと，bone volume（BV，mm ），real time RT ‑PCR で分化初期と後期のマーカー

BV/tissue volume（TV mm ）と Trabecular thick（Runx2と Osteocalcin）を定量し分化を評価した。

ness（Tb.Th，μm）の増加量は，全てMWCNT群の方

骨芽細胞が存在しない培養液に MWCNTs，CB を加が有意に高かった。OBの培養３週目では，MWCNT群

え，１週間後プレート底面の Ca を定量した。Ca 濃は50μg/mlで有意に強い石灰化を認めた。MWCNTs

度が異なる培養液で OB を培養し，alkaline phos-の周囲を透過型電子顕微鏡（TEM ）で観察すると，

phatase（ALP）染色し，分化も評価した。線維芽細

針状構造の結晶があり，Diﬀraction モードでは，既胞 様 細 胞 株（NIH 3T 3，ST 2）に M WCNTs，CB

知の Hydroxyapatite（HA）のピークと一致したたを 加 え 石 灰 化 を 評 価 し，さ ら に ST2に rhBM P ‑2

No. 5, 2012321

審査学位論文要旨を作用させ石灰化を誘導し M WCNTsと ALP阻害薬

存的に ALP が低下し，石灰化も抑制され，ALP は（DHP）加えた時のALP活性および石灰化を評価した。

M WCNTs の石灰化誘導の重要な因子だった。

結果は異所性骨形成実験で術後10から21日目の骨量，本研究で MWCNTs が骨形成を促進するメカニズ

骨量/組織量，骨梁幅の増加量は，M WCNT群で有意

ムは，骨芽細胞との相互作用であり，MWCNTs がに高く，OB培養３週目では，MWCNT群は50μg/ml

Ca を引き寄せ，Ca 濃度を上昇させ，骨芽細胞を成熟で有意に強い石灰化を認めた。TEM 観察ではMWCNTs

骨芽細胞に分化させ，骨形成を開始した。骨芽細胞かの周囲に針状構造の結晶があり，Hydroxyapatite のらの ALP により M WCNTs 周囲に石灰化が誘導さ結晶であった。M WCNTs は増殖への影響はなかっれた。このように MWCNTs と骨芽細胞の相互作用

たが，Osteocalcin の発現は有意に高かった。培養液が相乗的に繰り返され，石灰化が急速に進行して，骨中のCa濃度依存性にALP活性は高くなり，Osteocalcin形成が促進されると考えられた。

の発現も有意に増え，分化促進した。NIH3T3とST2に rhBMP‑2を作用させると，ST2のうち MWCNTs

よって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

群のみ石灰化した。ここに DHPを加えると濃度依

IL‑15‑High‑Responder Developing NK Cells Bearing Ly49 Receptors in IL‑15
損マウスにおける IL‑15高応答性 Ly49受容体陽性未熟 NK 細胞）
好沢Mice（IL‑15欠

克（論文の内容の要旨）

よびＢリンパ球を欠損する RAG 欠損マウスと IL‑15【背景と目的】NK 細胞は，特異的抗原レセプターを欠損マウスを交配して作製した IL‑15/RAG 欠損マウ

もたず，抗原感作がなくとも腫瘍細胞やウイルス感染

スを用いて NK 細胞の分化段階の検討を行ったとこ

細胞を殺傷できることから，自然免疫系を担うリンパろ，CD11b CD27 DX5 という未熟 NK 細胞の段階

球として，ウイルス感染，腫瘍の免疫監視，骨髄移植まで分化が進んでいることが認められた。これらの細の拒絶反応などで重要な役割を果たしていると考えら

胞では，成熟型 NK 細胞でみられるような CD51，

れている。NK 細胞の分化・成熟・生存に関しては，

CD127，c‑kit の downregulation はまだ認められなIL‑15が必須な役割を果たしているといわれているが，かったが，Ly49分子はすでに発現されており，IL‑15

IL‑15が NK 細胞の分化過程においてどの段階でどの受容体の構成成分である CD122が高発現していた。

ように作用しているか未だ不明な点が多い。今回我々

また，IL‑15の存在下で IL‑15欠損マウスの脾臓細胞

は，IL‑15欠損マウスを用いて，IL‑15による NK 細を培養すると，Ly49陽性細胞が顕著に増加したが，胞の分化，増殖過程について検討した。

IL‑15欠損マウス脾臓由来 NK 細胞から Ly49陽性細【方法】実験動物には野生型マウス，IL‑15欠損マウ

胞を除去した後に IL‑15存在下で培養しても，Ly49

スおよび両者より作製された放射線照射骨髄キメラ，

G2および Ly49D 発現細胞は再出現しなかった。IL‑RAG 遺伝子欠損マウスおよび IL‑15/RAG 遺伝子欠

15は Ly49の発現を誘導するといわれているが，IL‑損マウスを用いた。それぞれの骨髄，脾臓に存在する

15は Ly49を誘導するのではなく，既存の Ly49陽性細

NK 細 胞 に つ い て ﬂow cytometryに よ り 細 胞 表 面

胞を選択的に増殖させていることが示された。次に，マーカーを解析するとともに，細胞培養系を用いて未IL‑15が NK 細胞分化過程のどの段階で作用している

熟 NK 細胞の IL‑15応答性について検討した。

のかを明らかにするために，野生型マウス脾臓 NK【結果】混合放射線照射骨髄キメラを用いた系では，細胞を CD11b，DX5の発現により分離し，CFSE に

IL‑15欠損マウスの骨髄細胞では未熟 NK 細胞数が野よりラベルし IL‑15に対する増殖速度について調べて生型マウスに比べ，およそ１/10にもかかわらず，ほみると，CD11b NK 細胞 よ り も CD11b NK 細 胞 のぼ同等の速度で成熟型 NK 細胞が発生した。In vitro

方が増殖速度は速かった。さらに CD11b DX5 NK

では，IL‑15欠損マウスの骨髄，脾臓由来の未熟 NK

細胞は CD11b NK 細胞全体や CD11b DX5細胞は，野生型マウスの未熟 NK 細胞に比べ速やか

胞よりも増殖が速かった。

に IL‑15に反応し，効率よく増殖が誘導された。Ｔお【結論】以上の結果より，IL‑15欠損マウスでは NK

322

NK 細

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

細胞分化は IL‑15高応答段階で停止し，IL‑15存在下

２．Flow cytometryによる解析の結果，IL‑15欠損

では，すでに Ly49を発現しているステージの未熟

マ ウ ス の NK 細 胞 は ス テ ー ジ

NK 細胞に IL‑15が作用し，急速に増殖することが明CD27 CD51 c ‑kit ）とらかになった。このことからウイルス感染時には IL‑

CD51 c‑kit ）の間で分化が停止していることが明15が産生され，脾臓や肝臓に存在する IL‑15高応答未らかになった。また，これらの未熟な NK 細胞は

熟 NK 細胞が急速に増殖し，末梢組織への NK 細胞

骨髄だけでなく脾臓・肝臓にも存在していた。

供給が増加することによって，ウイルスにより効率よ３．In vitro の培養系においても，放射線照射骨髄キ

く対抗する可能性が示唆される。

（CD11b DX5（CD11b DX5 CD27

メラの解析でみられたのと同様，IL‑15欠損マウス（論文審査の結果の要旨）

由来の NK 細胞の方が IL‑15に対する増殖能が高NK 細胞は，特異的抗原レセプターをもたず，抗原いことが明らかになった。

感作がなくとも腫瘍細胞やウイルス感染細胞を殺傷で４．In vitro の培養系では，IL‑15欠損マウスにおいきることから，自然免疫系を担うリンパ球として認識て分化の停止している段階の NK 細胞は Ly49分子

されてきた。現在，NK 細胞はウイルス感染，腫瘍のをすでに発現し，IL‑15受容体 β鎖の発現は最も高免疫監視，骨髄移植の拒絶反応などで重要な役割を果

く，また増殖能も最も高いことが明らかになった。

たしていると考えられている。造血細胞の分化には

５．IL‑15欠損マウス脾臓由来 NK 細胞から Ly49陽様々なサイトカインが必須な役割を果たしていること

性細胞を除去した後に IL‑15存在下で培養しても，はよく知られており，NK 細胞の分化・成熟・生存に

Ly49G2および Ly49D 発現細胞が再出現しなかった

関しては，IL‑15が必須な役割を果たしている。しかことから，IL‑15は既存の Ly49陽性細胞を選択的し，IL‑15が NK 細胞の分化過程でどのように作用しに増殖させていることが示された。

ているかについては未だ不明な点が多い。本研究では，

６．野生型マウスの脾臓 NK 細胞でも，IL‑15に対し野生型マウス，IL‑15欠損マウスおよび両者より作製て CD11b DX5 NK 細胞が最も高い増殖能を示しされた放射線照射骨髄キメラ，RAG 遺伝子欠損マ

た。

ウスおよび IL‑15/RAG 遺伝子欠損マウスを用いて，以上の結果から，IL‑15欠損マウスでは，IL‑15にそれぞれの骨髄，脾臓に存在する NK 細胞について

高応答であって Ly49を発現している未熟ステージで

ﬂow cytometryにより細胞表面マーカーを解析する

NK 細胞の分化が停止しており，IL‑15存在下では，とともに，細胞培養系を用いて IL‑15による NK 細この段階の未熟 NK 細胞は他の分化段階にある NK胞の分化，増殖過程および未熟 NK 細胞の IL‑15応細胞に比べて，より急速に増殖するという結論を得た。

答性について検討した。

本論文は IL‑15に反応する最も初期の NK 細胞を同その結果，好沢 克は今回の実験で次の結果を得た。

定し，IL‑15の NK 細胞の分化・増殖過程における役

１．放射線照射骨髄キメラの解析から，IL‑15欠損マ

割の一端を明らかにするとともに，ウイルス感染時のウスの NK 細胞は細胞数が10分の1以下であるにも末梢に存在する未熟 NK 細胞の初期免疫応答への関かかわらず，野生型と同等以上の効率で成熟 NK

与の可能性を示唆するものであり，主査，副査は一致細胞に分化した。

して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Targeting N‑acetylglucosamine‑bearing polymer‑coated liposomes to vascular smooth muscle cells（血管平滑筋細胞へのＮ‑アセチルグルコサミン修飾リポソームの標的化）
伊

勢

真美子

（論文の内容の要旨）

ポソームが，心筋細胞に特異的に取り込まれることが【背景と目的】経皮的冠動脈インターベンションが引見出され，心筋組織を標的とした薬物輸送システムにき起こす血管再狭窄の治療において，血管傷害部位を有益であることが報告された。さらにこの心筋細胞の選択的に標的化する薬物輸送システムが開発できれば，GlcNAc 修飾リポソームの取り込みは，細胞骨格分子より平易な治療が可能になり大変有用である。近年，であるビメンチンやデスミンが細胞表面に出現してＮ‑アセチルグルコサミン（GlcNAc）を修飾したリ

GlcNAc 結合性のレクチン活性を有することで行われ

No. 5, 2012323

審査学位論文要旨

ることも報告された。このようなことから本研究では，（論文審査の結果の要旨）

血管平滑筋細胞がビメンチンを発現することを踏まえ

経皮的冠動脈インターベンション（PCI）は，治療て，血管平滑筋細胞に対する GlcNAc 修飾リポソー

した血管部位に再狭窄を引き起こすことが問題となっムを用いた選択的な取り込みについて解析した。さらている。近年，心筋細胞や血管平滑筋細胞などのビメに，血管傷害部位においては血管平滑筋細胞が内壁にンチンやデスミンを発現する細胞が，細胞表面でＮ‑露出することから，露出した細胞に対する GlcNAc

アセチルグルコサミン（GlcNAc）結合レクチン活性修飾リポソームを用いた選択的な薬物輸送システムのを持つことが報告されている。また，血管傷害部位で可能性について検討した。

は，血管内皮細胞が 離して中膜平滑筋細胞が表面に【方法】GlcNAc 修飾リポソームは，
エクストルーダー

露出することや露出した血管平滑筋細胞ではビメンチを用いて直径100nm の大きさで，リポソーム表面にンの発現が上昇することも報告されている。従って，GlcNAc ポリマーをコーティングすることによって

血管平滑筋細胞のビメンチンやデスミンを標的とすれ作製した。コントロールとしてグルコース（M A）をば，インターベンション部位への特異的な薬剤送達シ

修飾したリポソームを作製した。これらのリポソーム

ステム（DDS）の構築，そして再狭窄予防が期待でと血管平滑筋細胞の相互作用をフローサイトメトリー

きる。そこで，GlcNAc を修飾したリポソームを作製

および蛍光顕微鏡によって検討した。またマウスの右し，このリポソームが血管平滑筋細胞と相互作用を持

足動脈内部の血管内皮細胞を 離した血管傷害モデル

ち，血管傷害部位へ集積するかについて検討した。さマウスを作製し，この血管傷害部位へのGlcNAc修飾

らに NF‑κB を抑制する NF‑κB デコイを封入した

リポソームの集積を確認した。さらに抗炎症性薬剤とリポソームを作製し，このリポソームの取り込みによして NF‑κB の活性を抑制するオリゴヌクレオチド

る血管平滑筋細胞に対する抗炎症効果を検討した。

NF‑κB decoyを GlcNAc リポソームに封入して，血管平滑筋細胞への取り込みと炎症抑制作用を検討した。

その結果，伊勢真美子は次の結論を得た。
１．GlcNAc 修飾リポソームは，ラット血管平滑筋細【結果】GlcNAc 修飾リポソームおよび MA 修飾リポ

胞の GlcNAc と特異的に相互作用すること，対照

ソームの血管平滑筋細胞への取り込みをフローサイトのグルコース（MA）修飾リポソームは，ほとんどメトリーで検討したところ，GlcNAc 修飾リポソーム

血管平滑筋細胞と相互作用しないことが示された。

の血管平滑筋細胞への高い相互作用が観察された。ま一方，ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）と GlcNAc

た血管傷害モデルマウスに GlcNAc 修飾および MA

修飾リポソームの相互作用は顕著ではなかった。

修飾リポソームを尾静脈より投与し，血管傷害部位へ

２．マウス大腿動脈にワイヤーを挿入し血管内皮細胞の集積を組織切片により観察したところ，傷害血管壁を 離した血管障害モデルマウスを作製した。このに MA 修飾リポソームよりも GlcNAc 修飾リポソー

マウスに尾静注にて GlcNAc 修飾リポソームを投ムの高い集積が観察された。正常血管では，集積は観与したところ，血管傷害部位に集積することが観察察されなかった。NF‑κB decoyを封入した GlcNAc

された。一方，正常な血管には GlcNAc 修飾リポ

修飾リポソームの血管平滑筋細胞への取り込みを IL‑

ソームの集積は観察されなかった。対照として用い

6の産生抑制によって検討したところ，GlcNAc 修飾

た MA 修飾リポソームの集積は有意に少なかった。

リポソームによって NF‑κB decoyが細胞内に効率的

３．GlcNAcおよび M A修飾リポソームに NF‑κBデに取り込まれることが明らかとなった。この時 IL‑6

コイを封入して，血管平滑筋細胞に取り込ませた。

の産生抑制がリアルタイム PCR によって確認された。

MA 修飾リポソームと比【考察】GlcNAc 修飾リポソームを用いる事で，血管ソームを取りこんだ血管平滑筋細胞において，IL‑

平滑筋細胞を特異的に標的化できることが示された。

6の産生が抑制された。

また血管傷害部位選択的な GlcNAc 修飾リポソーム

これらの結果より，GlcNAc 修飾リポソームを用の標的化の可能性も示唆され，血管傷害部位を標的化いることで，PCI治療後の再狭窄を抑制するためのする薬物輸送システムの開発の一助となることが期待

DDS 構築の可能性が示された。

された。

して GlcNAc 修飾リポ

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

324

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Evaluation of muscle hyperactivity of the grimacing muscles by unilateral tight eyelid closure andstapedius muscle tone（片側の強い閉瞼とアブミ骨筋の筋緊張による，しかめ顔筋の過緊張の評価）
柴（論文の内容の要旨）將人
ンプライアンスの変化を調べた。

【緒言】外眥の皺や眉間の縦皺は，それぞれ眼輪筋や【結果】

皺眉筋の過緊張により起こると考えられている。この

１）40名は対側の眉頭高の変化が両側で認められず，ような眼輪筋や皺眉筋などの顔をしかめる筋（以下，９名は両側で認められた。両群間の静的コンプライ

しかめ顔筋）が過緊張になると，眉毛の位置は下垂す

アンスを比 したところ，認められた群の静的コンる。一方で前頭筋が過緊張となると，眉毛は挙上されプライアンスは，認められなかった群と比 して有る。前頭筋では運動皮質からの上位運動ニューロン支

意に低下していた（p＝0.00490）。

配は両側性であるため，左右対称性に眉毛が挙上され

２）対側眉頭高の変化は，眉頭高が高い側を強く閉瞼る。しかし，しかめ顔筋については運動皮質からの支した際には認められたが，低い側では認められなかっ配について，これまで十分に検討されてこなかった。

た。静的コンプライアンスは，眉頭高が低い側が，高顔面神経支配であるアブミ骨筋の筋収縮は，これまで

い側と比 して有意に低下していた（p＝0.0000557）。

の報告より，しかめ顔筋の筋収縮と関連している可能

眉頭高の左右差（右‑左）と静的コンプライアンス

性がある。

の左右差（右‑左）は有意な正の相関を認めた（r＝アブミ骨筋が収縮すると鼓膜のコンプライアンスは低下することから，しかめ顔筋が過緊張となった場合，
アブミ骨筋も過緊張となり静的コンプライアンスが低0.9347，p＝0.00000836）。
３）10名中６名で，強い閉瞼に伴う同側静的コンプラ
イアンスの低下を認めた。

下する可能性が考えられる。これらのことより本研究【考察】一側のみの強い閉瞼を行った結果から，運動では，一側のしかめ顔筋に対する両側の運動皮質の支皮質のしかめ顔筋に対する神経支配は３群に分類でき配の程度と，眉毛の位置に対する影響，しかめ顔筋にると考えられた。

対する運動皮質の支配とアブミ骨筋の筋緊張の関連，

片側支配群）対側での眉頭高の変化が両側で認められさらに片側の強い閉瞼がアブミ骨筋の筋緊張に及ぼすなかった40名：対側の優位性が強い両側支配影響を調査した。

両側支配群）対側での眉頭高の変化が両側で認められ【方法】瞼裂幅の左右差や非対称性の後天性眼瞼下垂た９名：対側の優位性が弱い両側支配症がなく，ティンパノグラムが正常（typeＡ）である

非対称支配群）眉頭高に左右差の認められた12名：眉71名が研究に参加した。

頭高の低い側が対側の優位性が弱い両側支配，眉頭高１）眉頭の高さ（以下，眉頭高）が左右対称な49名にの高い側が対側の優位性が強い両側支配つき，一側のみ強い閉瞼（しかめ顔筋の収縮を伴う

両側支配群の静的コンプライアンスは，片側支配群程度）を両側で行わせ，対側の眉頭高に５％以上のと比 して有意に低下していた。さらに，非対称支配変化があるか調べ，両側で対側の眉頭高に５％以上

群では，眉頭高の低い側が，眉頭高の高い側と比の変化が認められた群と認められない群の間で，静て静的コンプライアンスが有意に低下していた。この的コンプライアンスに有意差が認められるか検討しことは，しかめ顔筋の筋緊張が高くなる程，アブミ骨た。

筋の筋緊張が上がる可能性を示唆している。非対称支し２）眉頭高が非対称な12名につき，１）と同様に眉頭配群の静的コンプライアンスの左右差と眉頭高の左右高の変化を調べた。加えて眉頭高が高い側と低い側

差は正の相関を示していることから，しかめ顔筋とアの間の静的コンプライアンスに有意差があるか，両ブミ骨筋は同様の運動皮質支配を受けている可能性を者に相関が認められるか調べた。

示している。しかし，眉毛下垂の代償による前頭筋の

３）健常成人10名につき，音刺激なしに片側のしかめ収縮があることから，眉頭高は個人間で大きく異なる

顔筋の収縮を伴う強い閉瞼を行い，その際の鼓膜コため，眉頭高の群間の比 はできなかった。しかめ顔

No. 5, 2012325

審査学位論文要旨

筋の収縮を伴う強い閉瞼を行った際，10名中６名で鼓弱い両側支配であると考えられた（以下，両側支配

膜コンプライアンスが低下した。これはしかめ顔筋の群）。40名においては変化が認められず，しかめ顔収縮に伴ってアブミ骨筋も収縮する可能性を示す。強筋は対側の優位性が強い両側支配であると考えられ大音に対してアブミ骨筋反射で間に合わないので，人た（以下，片側支配群）。両側支配群の静的コンプはとっさに顔をしかめてアブミ骨筋を収縮させている

ライアンスは片側支配群より低下していた。

のかも知れない。両側支配群では，しかめ顔筋は両側２．眉頭高が非対称な12名につき，１．と同様に眉頭の運動皮質に支配され，結果として筋緊張が強くなる。

高の変化を調べたところ，眉頭高が高い側を強く閉

片側支配群では，しかめ顔筋は主に対側の運動皮質に瞼した際には変化が認められたが，低い側では認め支配され，筋緊張が低くなると考えられる。

られなかった。静的コンプライアンスは，眉頭高が【結語】片側のしかめ顔筋の収縮を伴う閉瞼と静的コ

低い側が，高い側と比 して有意に低下していた。

ンプライアンスの測定により，しかめ顔筋の筋緊張を

眉頭高の左右差と静的コンプライアンスの左右差は検出できる可能性が示された。さらなる研究が必要で有意な正の相関を認めた。これら12名のしかめ顔筋はあるが，しかめ顔筋の過緊張は，顔面の加齢をよりとアブミ骨筋は，眉頭高が高い側が対側の優位性が進めうるかも知れない。

強い両側支配，低い側が対側の優位性が弱い両側支（論文審査の結果の要旨）配であると考えられた。

眼輪筋や皺眉筋などの顔をしかめる筋（以下，しか３．健常成人10名につき片側のしかめ顔筋の収縮を伴め顔筋）が過緊張になると，眉毛の位置は下垂する。

う強い閉瞼を行ったところ，10名中６名で強い閉瞼

しかめ顔筋については運動皮質からの支配について十に伴い同側鼓膜コンプライアンスの低下を認めた。

分に検討されてこなかった。アブミ骨筋としかめ顔筋

しかめ顔筋とアブミ骨筋は同一の神経支配で収縮しの収縮は関連している可能性が複数の報告により示唆ていると考えられた。

されている。本研究では，しかめ顔筋の神経支配の個以上の結果より，柴は以下のような結論を得た。

人間における違い，しかめ顔筋とアブミ骨筋の神経支

１）しかめ顔筋の神経支配の個人間における違いは，配の関連と，その筋緊張が同期しているか調べてある。
瞼裂幅の左右差や非対称性の後天性眼瞼下垂症がなく，片側の強い閉瞼を行うことで検出しうる
２）しかめ顔筋とアブミ骨筋の神経支配は関連し，そティンパノグラムが正常（typeＡ）であった71名が研の筋緊張は同期している可能性がある究に参加した。

片側の強い閉瞼とアブミ骨筋の筋緊張（静的コンプ１．眉頭の高さ（以下，眉頭高）が左右対称な49名で，一側のみしかめ顔筋の収縮を伴う強い閉瞼を両側で行わせ，対側の眉頭高に５％以上の変化があるか調べた。９名において両側で対側の眉頭高に５％以上

ライアンス）測定により，しかめ顔筋の筋緊張が評価できる可能性が示された。
以上をもって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

の変化が認められ，しかめ顔筋は対側の優位性がASC plays a role in the priming phase ofthe immuneresponseto type collagen in collagen‑induced
arthritis（コラーゲン誘発関節炎の 型コラーゲンに対する初期免疫反応における ASC の役
割）
山

﨑

秀

（論文の内容の要旨）に関わる炎症性サイトカインとして IL‑1βや IL‑18【背景と目的】関節リウマチ（RA）は，持続性の関も重要な役割を果たしていることが明らかにされてい節炎を引き起こす自己免疫異常による疾患であるが，る。Apoptosis ‑associated speck ‑like protein

詳細な病態は解明されていない。近年，TNFαや IL‑

containing a caspase recruit domain（ASC）は，IL‑6などの炎症性サイトカインが，RA の病態に関与し

1β，IL‑18が活性化される際に作用する caspase‑1の

これらのサイトカインを阻害する生物学的製剤によりアダプター分子として知られていることから，RA に

RA を寛解に導くことが可能となっている。更に RA

おける ASC の大きな役割が示唆された。本研究の目

326

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

的は，RA のモデル動物であるコラーゲン誘発関節炎

関わる経路を阻害することによって，RA 病態の解明において ASC が関節炎の病態に関与しているかを明と新しい治療薬の開発につながる可能性が示された。

らかにし，ASC の発現低下により IL‑1β，IL‑18の発（論文審査の結果の要旨）

現が抑えられ，滑膜炎症，骨・軟骨破壊が抑制される

IL‑1β，IL‑18が関節リウマチ（RA）の病態に深くかを検討した。

関与していることから，それらのサイトカインの活性【方法】マウスに 型コラーゲン誘発関節炎を起こし，化に関わる Apoptosis‑associated speck‑like protein

関節内の ASC，IL‑1βおよび IL‑18の発現の有無をcontaining a caspase recruit domain（ASC）もまた免疫染色の手法で確認した。次に野生型および ASC

RA の病態に深く関与している可能性が推測される。

欠失マウスに対して， 型コラーゲン誘発関節炎を起

山﨑は，ASC が RA の病態に関わっている可能性を

こし，IL‑1βおよび IL‑18の発現量と関節炎および骨検討するために RA の実験モデルである

破壊の状態を，病理組織学的評価，免疫染色およびゲン誘発関節炎（CIA）および抗 型コラーゲン抗体

ELISA の手法で検討した。さらに，
ASC が誘発関節炎（CAIA）を用いて ASC の役割を検討し型コラー

ゲン誘発関節炎の 型コラーゲンに対する免疫反応においてどのような役割を果たしているかを確認するために，野生型および ASC 欠失マウスに対して抗

型コラー

た。
CIA マウスの膝関節における ASC，IL‑1β，IL‑18型の発現を，免疫染色，Western blot analysis で検討

コラーゲン抗体誘発関節炎を誘導し，IL‑1βおよびした。次に ASC 欠失マウスと野生型マウスに CIA，

IL‑18の発現量と関節炎および骨破壊の程度を同様のCAIA を誘導し関節炎の程度を組織学的に評価し，関手法で検討した。

節内の IL‑1β，IL‑18発現を免疫染色で 評 価，血 中【結果】型コラーゲン誘発関節炎マウスの滑膜に

IL‑1βを ELISAで 測 定，関 節 内 IL‑18を ﬂuorescent

ASC が IL‑1β，IL‑18と同様に発現しており，ASCintensityで評価した。その結果，以下の結論を得た。

の関与が示された。 型コラーゲン誘発関節炎は，対１．CIA マウスの滑膜に ASC が IL‑1β，IL‑18と同照マウスに比べ ASC 欠失マウスにおいて，有意に抑制され，IL‑1β，IL‑18の発現も低下していた。一方，
抗型コラーゲン抗体誘発関節炎マウスでは，ASC

欠失マウスの関節炎は抑制されず，IL‑1β，IL‑18の発現は対照群と同等であった。

様に発現しており，ASC の関与が示された。
２．CIA では，野生型マウスに比べ ASC 欠失マウス
において関節炎が有意に抑制され，IL‑1β，IL‑18の発現も低下していた。
３．CAIA では，ASC 欠失マウスの関節炎は野生型【結論】IL‑1β，IL‑18活性化に主として関わる ASCと同様に抑制されず，IL‑1β，IL‑18の発現は野生は，型と同等であった。

型コラーゲン誘発性関節炎に関与しているが，抗 型コラーゲン抗体誘発関節炎では関与が認められなかったことから，ASC は型コラーゲン誘発関節

IL‑1β，IL‑18活性化に主として関わる ASC は，
CIA に関与しているが，CAIA では関与が認められ炎において 型コラーゲンに対する抗体産生以前の免なかったことから，ASC は CIA において型コラー

疫反応初期段階で関与していることが示唆された。

ゲンに対する抗体産生以前の免疫反応初期段階で関与

ASC 欠失マウスにおいても IL‑1β，IL‑18が発現してしていることが示唆された。以上より ASC の関与すいたことは，IL‑1β，IL‑18の別の活性化経路の存在

る IL‑1β，IL‑18の上流に関わる経路を阻害することを示唆するものである。実際，ASC および caspase‑によって，RA 病態の解明と新しい治療薬の開発につ1の関わらない IL‑1β，IL‑18活性化経路の存在が報ながる可能性が示された。主査，副査は一致して本論告されている。

文を学位論文として価値があるものと認めた。

以上より ASC の関与する IL‑1β，IL‑18の上流に

No. 5, 2012327

審査学位論文要旨

Intravenous immunoglobulin (IVIg)with methylprednisolone pulse therapy for motor impairments ofneuralgic amyotrophy:clinical observations in 10 cases（神経痛性筋萎縮症における運動症状に対するメチルプレドニゾロン大量静注療法および免疫グロブリン大量静注療法の有効性：10症例の臨床的検討）内藤（論文の内容の要旨）【目的・方法】神経痛性筋萎縮症（以下 NA）は一側

康介（論文審査の結果の要旨）
神経痛性筋萎縮症（以下 NA）は一側上肢に起こる，上肢に起こる，急性の神経原性疼痛とこれに続いて起急性の神経原性疼痛とこれに続いて起こる筋力低下，こる筋力低下，筋萎縮をもって特徴づけられる末梢神筋委縮をもって特徴づけられる末梢神経疾患である。

経疾患である。腕神経叢に対する免疫反応によって引腕神経叢に対する免疫反応によって引き起こされるもき起こされるものと考えられており，特別な治療を行のと考えられており，特別な治療を行わなくとも機能

わなくとも機能的予後は比

的予後は比 的良好であると考えられていた。しかし的良好と考えられていた。

しかし近年の報告によるとその長期的予後は必ずしも近年の報告によるとその長期的予後は必ずしも良好と良好とはいえない。本疾患に対しプレドニゾロンの内はいえない。本疾患に対しプレドニゾロンの内服が罹

服が罹患期間を短縮させたとの報告はあるものの，免患期間を短縮させたとの報告はあるものの，免疫療法

疫療法の有効性についてはなお確立されていない。我々の有効性については尚，確立されていない。本論文はは自験例のうちメチルプレドニゾロン大量静注療法お自験例のうちメチルプレドニゾロン大量静注療法およよびガンマグロブリン大量静注療法が施行された10例

びガンマグロブリン大量静注療法が施行された10例をを臨床的に検討し，本疾患の運動機能障害に対する免臨床的に検討し，本疾患の運動機能障害に対する免疫疫療法の有効性について検証した。

療法の有効性について検証したものである。

【結果】NA と診断された連続15の自験例のうち，10

NA と診断された連続15の自験例のうち，10例でメ

例でメチルプレドニゾロン大量静注療法およびガンマ

チルプレドニゾロン大量静注療法およびガンマグロブ

グロブリン大量静注療法が施行されていた。１〜60カ

リン大量静注療法が施行されていた。
１〜60カ月のフォ

月のフォローアップ期間において，このうち９例に運ローアップ期間において，このうち９例に治療後短期動機能の臨床的改善がみられた。これらの結果は本疾間での運動機能の臨床的改善がみられていた。これら患の臨床経過について近年報告されているものより良の結果は本疾患の臨床経過について近年報告されてい好なものであった。

るものより良好なものであった。

【考察】限られた症例での検討ではあるが，自験例に限られた症例での検討ではあるが，今回の研究におおいてメチルプレドニゾロン大量静注療法およびガン

いてメチルプレドニゾロン大量静注療法およびガンマ

マグロブリン大量静注療法が NA の運動症状に対しグロブリン大量静注療法が NA の運動症状に対し有有効である可能性が示唆されたものと考えられた。同

効である可能性が示唆されたものと考えられた。本治時に本治療の有効性の確立には，様々な重症度や罹患療の有効性の確立には，今後様々な重症度や罹患期間期間において，より確証性の高い試験が必要と思われにおいてより確証性の高い試験が必要と思われたが，た。

NA による上肢機能の低下は ADL を著しく障害するものであり，早期に本治療を施行する重要性を示唆する知見が得られたものと判断する。主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

328

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Functional correlation between olfaction and various sectioning of the lateral olfactory tract（外側嗅索切断と嗅覚機能の相関）
関

口

泰

之

（論文の内容の要旨）

覚識別の正解率：83％±１％）の外側嗅索切断部位【目的】嗅覚情報は嗅球から外側嗅索を経由して，周は，中大脳動脈より前方0.8‑2.4mm
（n＝８）
であっ

辺の嗅皮質へ伝えられる。しかし，外側嗅索の傷害部た。

位と嗅覚機能の関係に関してはこれまでに知見が得ら【結論】中大脳動脈から約2.5mm の外側嗅索は，それていない。そこで，外側嗅索を様々なレベルで切断の近傍の傷害により嗅覚機能の有無を左右する重要なし，個々の外側嗅索切断ラットの嗅覚機能を調べ，無部位であると結論された。また，嗅覚機能維持に最低嗅覚をきたす外側嗅索傷害部位の同定を行った。

限必要な大脳皮質（嗅皮質）のサイズは，１側の嗅球【方法】

後端から約2.5mm の比⑴ 嗅皮質のマッピング：嗅球から入力投射を受ける

ものと推定された。

脳領域を正確にマッピングするために，嗅球に順行的狭い領域で十分機能する（論文審査の結果の要旨）

性の神経トレーサー Biotinylated dextran amine

本研究で関口は，外側嗅索を経由して嗅球からの投（BDA‑10000）を注入し，３日後に還流固定し，脳射線維を受ける脳領域について，神経トレーサーを用を採取した。嗅球・脳の連続凍結切片を作成し，いて詳細な解析を行った。さらに，様々なレベルで外DAB 反応により BDA 陽性の嗅球由来の神経線維

側嗅索を切断した実験動物を作成し，外側嗅索の切断を可視化し，嗅皮質のマッピングを行った。

部位と嗅覚機能の関係を明らかにすることを目的とし⑵ 手術：成熟ラットの右側の嗅球を吸引除去し，左側の外側嗅索を嗅球後端から中大脳動脈までの様々なレベルで鋭利に切断した。

て研究を行った。
その結果，関口は次の結論を得た。
１．順行性神経トレーサーの嗅球注入により，嗅球か⑶ 嗅覚機能検査：３日間絶水させたのち，水と0.01％

らの入力投射を受ける広汎な脳領域（前嗅核・嗅結

シクロヘキシミド溶液を用いて，嗅覚機能（olfactory

節・梨状皮質）が同定され，脳表面上に正確に嗅皮

discrimination test）を調べた。

質をマッピングすることができた。

⑷ 外側嗅索切断部の計測と神経トレーサーによる完２．嗅覚（−）ラットの外側嗅索切断部位は，中大脳全切断の確認：嗅覚機能検査後，外側嗅索が完全に動脈より前方2.5‑4.2mm（n＝10）であり，嗅覚（＋）

切断されていることを確認する目的で，左嗅球に順

ラットの外側嗅索切断部位は，中大脳動脈より前方

行性の神経トレーサーを注入した。３日後に還流固

0.8‑2.4mm（n＝８）であった。

定を行い，脳を採取した。0.1mm スケールのマイ３．中大脳動脈から約2.5mm の外側嗅索は，その近クロメジャーを用いて，中大脳動脈から外側嗅索切傍の傷害により嗅覚機能の有無を左右する重要な部

断部までの距離を計測した。

位であった。

【結果】⑴ 嗅球から入力投射を受ける脳領域を正確にマッピ

以上により，ラット嗅皮質が正確に同定され，さらに嗅覚機能維持に最低限必要な大脳皮質（嗅皮質）のングすることができ，前嗅核・嗅結節・梨状皮質をサイズは，１側の嗅球後端から約2.5mm の比的狭中心とした広汎な脳領域が同定された。

い領域で十分に機能することが明らかになった。生物⑵ 嗅覚（−）ラット（嗅覚識別の正解率：48％±

学的にも臨床医学的にも意義があるものと考えられ，１％）の外側嗅索切断部位は，中大脳動脈より前方

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が2.5‑4.2mm（n＝10）であり，嗅覚（＋）ラット（嗅あるものと認めた。

No. 5, 2012329

審査学位論文要旨

Essential role of gastric gland mucin in preventing gastric cancer in mice（マウスの胃発癌を抑える
胃腺粘液の持つ必須の役割）
唐

澤

文

寿

（論文の内容の要旨）の影響についても検討した。一方，ヒトの胃高分化型【目的と背景】胃粘膜の深層から分泌される腺粘液に

腺癌標本54検体および胃腺種標本12検体に対して免疫は非還元末端に α１，４結合したＮ‑アセチルグルコ

組織学的手法にて αGlcNAc とそのコア蛋白である

サミン（αGlcNAc）残基を有する‑グリカンが含まれている。この αGlcNAc 残基を有する

M UC6の発現を評価した。

‑グリカ【結果】免疫染色ならびに M ALDI‑TOF‑MS によりンはピロリ菌に対して細胞壁の構成要素であるコレス

A4gnt KO マウスの胃粘膜で αGlcNAc の欠損が確

テリル‑α‑Ｄ‑グルコピラノシドの生合成を妨げるこ

認され，α4GnT が αGlcNAc の生合成に関わる唯一とによりピロリ菌の増殖を妨げることが明らかにされの糖転移酵素であることが示された。次に，A4gntている。しかしながら，αGlcNAc 残基の生体内におKO マウスの胃粘膜では週齢を重ねるにしたがって肉

け る 役 割 は 不 明 で あ っ た。本 研 究 で は αGlcNAc

眼的に幽門部粘膜の肥厚が顕著となった。マウスの解の持つ生物学的機能を個体レベルで解明するため，

剖１時間前に BrdU を腹腔内投与し，BrdU に対する

αGlcNAc の生合成に関わる糖転移酵素である α１，免疫染色を行って細胞分裂Ｓ期の細胞数および陽性率

４‑ ‑アセチルグルコサミン転移酵素（α4GnT）をを検討したところ，胃粘膜における BrdU 陽性細胞

コードする A4gnt 遺伝子を破壊した A4gnt ノックア

数は10週齢以上の固体において A4gnt KO マウスでウトマウス（A4gnt KO マウス）を作出し，病理学

有意差（ ＜0.01）をもって増加していた。BrdU 標的な検討を行った。併せてヒトの胃分化型腺癌および識率 も30週 齢 以 上 で A4gnt KO マ ウ ス が 野 生 型 マ

胃腺種の病理標本に対する組織化学的検討を行い，腫ウスを上回っており，とりわけ40・50週では有意差瘍における αGlcNAc の発現意義について検討した。

（ ＜0.05）が認められた。組織学的には５週齢です【方法】マウス A4gnt 遺伝子の翻訳領域は exon2とでに幽門部粘膜に過形成を認め，10週齢では軽度異exon3に存在することから，exon2から intron を含み形成を，20週齢では高度異形成を示し，30週齢から

exon3の翻訳領域までを PGK‑neo カセット置換，さは一部固体にて高分化型腺癌を，50週齢以上では全らにその5ʼ
‑ﬂanking region にジフテリ ア 毒 素 Ａ カ

固体に高分化型腺癌が認められた。これら結果からセットを付けたターゲティングベクターを構築し，
相同αGlcNAc は胃の分化型腺癌の発生に対して抑制的に組み換えを行うことで，マウス A4gnt 遺伝子座の片作用していることが示された。一方，ヒトの胃分化型

側アレルが欠損した ES 細胞株を樹立した。この ES

腺癌標本および胃管状腺腫の病理組織検体に対する免細胞を C57BL/6マウスの初期胚に注入した後，仮親疫染色の結果，病変部では MUC6の発現と比の子宮に移植，キメラマウスを得た。さらに，キメラ

αGlcNAc の発現低下あるいは消失が確認され，このマウス同士を交配することで，A4gnt KO マウスをことからも αGlcNAc がヒトにおいても胃分化型腺作出した。A4gnt KO マウスの胃粘膜に対して，抗癌の発症に対して抑制的に作用していることが示唆さ

αGlcNAc 抗体である HIK1083による免疫染色，な

れた。

し，

らびに M ALDI‑TOF‑MS により αGlcNAc の発現

A4gnt KO マウスならびに野生型マウスの胃粘膜の有無を解析した。A4gnt KO マウスと野生型マウを対象にマイクロアレイおよび定量 PCR を用いて比スを対象に，５週齢および10週齢以降10週ごとに60週分析した結果，A4gnt KO マウスでは野生型マウ

齢までのマウスから胃を摘出し，病理学的検討を行っスに比た。また５週齢，10週齢および50週齢の固体の胃粘膜

モカイン，Il‑1b・や Il‑11 などのサイトカイン，さから採取した total RNA より得た cDNA を用いてマら に は 胃 Hgf や Fgf7 な ど の 成 長 因 子 な ど が 有 意

イクロアレイ解析を行い，この結果をもとに同週齢固に多く発現していることが明らかになった。実際に体の胃粘膜パラフィン切片より得た total RNA に対A4gnt KO マウス胃粘膜中の単核球および好中球のする定量 PCR を行った。さらに，COX‑2阻害薬投与

浸潤についてスコア化して検討したところ，週齢を重330

して，Ccl2，Cxcl1，Cxcl5 などの炎症性ケ

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

ねるにしたがってより多くの炎症性細胞が遊走してい量 PCR による発現遺伝子の評価，⑤ 幽門腺粘膜におることが確認された。また５週齢および50週齢の検体

ける炎症性細胞浸潤および血管新生の比に対して CD31陽性細胞数をカウントすることで血管COX‑2阻害薬経口投与個体に対する幽門腺粘膜厚の新生の評価を行うと，50週齢では野生型マウスに比べ検討，の６項目である。一方，ヒトの胃分化型腺癌標て A4gnt KOマウスで有意差（＜0.01）をもって本および胃管状腺腫標本に対して腺粘液のコアタンパ

CD31陽性細胞数の増加が確認され，A4gnt KO マウクである MUC6ならびに αGlcNAc に対する免疫染スにおいて血管新生が亢進していることが示された。

色を行い，両者の発言を比 解析した。

これら結果は A4gnt KO マウスの胃粘膜において炎検討。⑥

その結果，唐澤文寿は次の結論を得た。

症を介した発癌機序が働いていることを示していると

１．A4gnt ノックア ウ ト マ ウ ス で は 胃 腺 粘 液 中 の考えられた。しかしながら，A4gnt KO マウスに対αGlcNAc が完全に欠損しており，A4gnt 遺伝子がして COX‑2阻害薬を投与しても有意な組織像の改善

コードする α4GnT が，αGlcNAc の生合成に関与は認められなかった。

する唯一の糖転移酵素であることが示された。

【結論】A4gnt KO マウスでは胃において分化型腺

２．A4gnt ノックアウトマウスの胃幽門腺粘膜は週癌の発症が確認された。マイクロアレイおよび定量

齢が同じ野生型マウスと比 し有意に厚く，病理組

PCR での検討では，炎症を介した発癌に関与する遺織学的には過形成・異形成を経て分化型腺癌が発症

伝子の発現が野生型マウスと比した。

して A4gnt KO マ

ウスで有意に増加しており，αGlcNAc の欠損が胃粘３．A4gnt ノックアウトマウスの胃幽門腺粘膜では膜における炎症を介した発癌の引き金となっているこ

野生型マウスに比べて BrdU で標識されたＳ期のとが示された。それゆえ αGlcNAc 残基を有する胃腺粘液はピロリ菌の増殖を抑えるのみならず，胃粘膜細胞数が有意に増加していた。
４．ヒトの胃分化型腺癌および胃管状腺種標本でも胃において炎症を介した発癌を阻害することにより胃分腺粘液の発現と比化型腺癌の発症を抑制するという二重の役割を担っては消失がみられた。

いることが明らかとなった。

５．DNA マイクロアレイおよび定量 PCR の結果，（論文審査の結果の要旨）

A4gnt ノックアウトマウスの胃粘膜では Cxcl1，

胃腺粘液には非還元末端に α１，４結合したＮ‑ア
セチルグルコサミン（αGlcNAc）残基を有する

して αGlcNAc の減少ないし‑グリカンが存在しているが，これまで αGlcNAc の個体レベルでの役割は不明であった。本研究ではこの点を明らかにするため，αGlcNAc の生合成に関与すCcl2，Cxcl5 からなるケモカイン，Il1b，Il11からなる炎症性サイトカイン，およびHgf，Fgf7 からなる成長因子などの発現が増加していた。
６．A4gnt ノックアウトマウスの幽門腺粘膜では炎症性細胞の浸潤や血管新生が亢進していた

る糖転移酵素である α１，４‑ ‑アセチルグルコサミ

７．A4gnt ノックアウトマウスの炎症性病変に対す

ン転移酵素（α4GnT）
をコードする A4gnt 遺伝子を破る COX‑2阻害薬の抑制効果は認められなかった。

壊した A4gnt ノックアウトマウスを作出し，A4gnt

これらの結果より，A4gnt ノックアウトマウスでノックアウトマウスと野生型マウスとの間で以下の手は胃幽門腺粘膜において炎症を介して分化型腺癌が発法を用いて病理組織学的検討を加えた。すなわち，①

生することが示された。αGlcNAc は胃分化型腺癌のαGlcNAc に特異的な抗体である HIK1083による免発生を抑制する作用のあることが明らかになったこと

疫染色ならびに質量分析による表現型の検討，② 幽門から，αGlcNAc に対する更なる研究は今後，胃癌の腺粘膜厚測定および有意差検定と幽門腺粘膜の病理組新たな予防法や治療法の開発に寄与できるものと期待

織所見検討，③ 抗 BrdU 抗体による免疫染色を行い，される。よって，主査，副査は一致して本論分を学位

細胞増殖能を評価，④ DNA マイクロアレイおよび定論文として価値があるものと認めた。

No. 5, 2012331

審査学位論文要旨

PPARαis down‑regulated following liver transplantation in mice（マウスにおいて α型ペルオキシ
ソーム増殖剤活性化受容体の発現は肝移植後に低下する）
中

川（論文の内容の要旨）幹せた。このようなクロフィブレートの作用は PPARα【目的】グラフト肝の機能不全は肝移植後の重大な合依存的に観察された。

併症の一つであり，その病態を理解することが肝移植【結論】グラフト肝では移植後数日の経過で PPARα

成績の向上につながると考えられているが，グラフトとその下流遺伝子の発現が著明に低下する。この代謝

肝で生じる移植後の様々な変化とその分子機構は未だ

変化は肝臓での酸化ストレスを最小限にしようとする適不明である。脂肪肝をグラフトに用いると移植後に機応反応であると考えられた。さらに移植後の PPARα

能不全に陥りやすいこと，そして α型ペルオキシソー低下を阻害する因子はグラフト肝に傷害を与えうるこ

ム増殖剤活性化受容体（Peroxisome proliferator‑とが示唆された。これらの結果は，移植後の肝臓で生

activated receptor α，PPARα）が肝臓における脂じる代謝変化を理解する上で，重要な知見を提示する

質代謝に重要な役割を担っていることから，PPARα

ものと考えられた。

が肝移植後の代謝変化に影響を与えているのではないかと予想した。今回我々はマウスモデルを用いて，肝（論文審査の結果の要旨）
グラフト肝の機能不全は肝移植後の重大な合併症の移植における PPARαの役割を検証した。

一つであり，その病態を理解することが肝移植成績の【方法】野生型および PPARα欠損オスマウス（12週

向上につながると考えられているが，グラフト肝で生齢，Sv/129系統）から同系の野生型オスマウスに同じる移植後の様々な変化とその分子機構は未だ不明で所性に肝臓を移植し，移植後１，３，６日目のグラフある。脂肪肝をグラフトに用いると移植後に機能不全

ト肝を組織学的，生化学的手法を用いて解析した。

に陥りやすいこと，そして α型ペルオキシソーム増殖【結果】肝細胞の傷害は PPARα欠損マウスのグラフ剤活性化受容体（Peroxisome proliferator‑activat-

ト肝を用いた群の方が野生型マウスのグラフト肝を用

ed receptor α，PPARα）が肝臓における脂質代謝にいた群よりも軽度であった。PPARα欠損マウスの肝重要な役割を担っていることから，PPARαが肝移植

臓では，野生型に比べて移植後の過酸化脂質含量が少後の代謝変化に影響を与えているのではないかと予想なかった。この理由として，PPARαの標的遺伝子でした。今回我々はマウスモデルを用いて，肝移植におあり酸化ストレスの主な発生源でもある脂肪酸 β酸化

ける PPARαの役割を検証した。

系酵素（acyl‑CoA oxidase，medium‑chain acyl‑

野生型および PPARα欠損オスマウス（12週齢，

CoA dehydrogenase など）の発現量が PPARα欠損

Sv/129系統）から同系の野生型オスマウスに同所性マウスで定常的に低いことが考えられた。実際，野生に肝臓を移植し，移植後１，３，６日目のグラフト肝型マウスのグラフト肝において，PPARαやこれらのを組織学的，生化学的手法を用いて解析した。

脂肪酸 β酸化系酵素の発現は経時的に減少し，移植後その結果，中川 幹は次の結論を得た。

６日目では移植前の30％程度にまで減少していた。

１．肝細胞の傷害は PPARα欠損マウスのグラフト

移植後の PPARαの低下は，炎症反応を制御する転肝を用いた群の方が野生型マウスのグラフト肝を用写因子である nuclear factor‑κB の活性増加とそれにいた群よりも軽度であった。

伴う tumor necrosis factor‑αの発現増加に関連して

２．PPARα欠損マウスの肝臓では，野生型に比べているものと考えられた。これらの結果から，移植後の移植後の過酸化脂質含量が少なかった。この理由

PPARαの低下は酸化ストレスを極力減らそうとするとして，PPARαの標的遺伝子であり酸化ストレス

適応反応であると予測し，PPARα活性化剤であるクの主な発生源でもある脂肪酸 β酸化系酵素（acyl‑

ロフィブレートを持続投与したマウスの肝臓を移植す

CoA oxidase，medium‑chain acyl‑CoA dehy-

る実験をさらに行った。クロフィブレート投与は移植

drogenase など）の発現量が PPARα欠損マウス

後の PPARα低下を阻害し，過酸化脂質量を著明に増で定常的に低いことが考えられた。

大させ，移植後の肝細胞壊死とアポトーシスを増悪さ
332

３．野生型マウスのグラフト肝において，PPARαや信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

これらの脂肪酸 β酸化系酵素の発現は経時的に減少のようなクロフィブレートの作用は PPARα依存

し，移植後６日目では移植前の30％程度にまで減的に観察された。

少していた。

グラフト肝では移植後数日の経過で PPARαとそ４．移植後の PPARαの低下は，炎症反応を制御すの下流遺伝子の発現が著明に低下したが，この代謝変る転写因子である nuclear factor‑κB の活性増加と化は肝臓での酸化ストレスを最小限にしようとする適それに伴う tumor necrosis factor‑αの発現増加に応反応であると考えられた。さらに移植後の PPARα

関連しているものと考えられた。

低下を阻害する因子はグラフト肝に傷害を与えうるこ

５．PPARα活性化剤であるクロフィブレートを持続とが示唆された。これらの結果は，移植後の肝臓で生投与したマウスの肝臓を移植する実験をさらに行っじる代謝変化を理解する上で，重要な知見を提示する

たが，クロフィブレート投与は移植後の PPARα

ものと考えられた。よって，主査，副査は一致して本低下を阻害し，過酸化脂質量を著明に増大させ，移論文を学位論文として価値があるものと認めた。

植後の肝細胞壊死とアポトーシスを増悪させた。こAlteration of Y‑box Binding Protein‑1 Expression Modiﬁes the Response to Endocrine Therapy in
Estrogen Receptor Positive Breast Cancer（エストロゲン受容体陽性乳癌において，YB‑1発現の変化が内分泌療法剤に対する感受性を変化させる）
伊

藤

勅

子

（論文の内容の要旨）

応答エレメント（以下 ERE）活性をそれぞれ解析し【背景】Y‑Box binding protein‑1（以下 YB‑1）は，た。また，wild‑type M CF7細胞の内因性 YB ‑1を細胞に加わる様々なストレスに応答する転写因子であsiRNA を用いて抑制（knock down）した際のタンる。YB‑1は定常状態では大部分が細胞質に存在する

パク発現の変化を解析した。さらに，術前化学療法をが，抗癌剤や紫外線などの刺激により核内へ移行する。

施行した症例の乳癌組織で化学療法前後でのタンパク

抗癌剤耐性や増殖因子発現調節など癌細胞の様々な性発現を免疫染色で解析した。

質や悪性度に関与していることが示されており，乳癌【結果】の臨床検体での解析でもその発現と予後との相関が最

１）MCF7‑YB‑1では MCF7‑vector に比べ，ERα発

近報告されている。今回，エストロゲン受容体（以下現は低下し AIB1，HER2，リン酸化 Erk（p‑Erk），ER）陽性の乳癌細胞において，YB‑1が ER や上皮細total Akt，c‑Myc の発現が増加していた。逆に

胞増殖因子受容体（以下 EGFR）familyの発現や，siRNA を用いた wild‑type M CF7の内因性 YB‑1

ER や増殖因子受容体を介するシグナル伝達に及ぼす発現抑制により，ERαの増加，p‑Erk，c‑M yc，作用を解析し，また ER 陽性乳癌で YB‑1発現を変化

AIB1の低下が認められた。

させることで，内分泌療法剤に対する感受性に変化が

２）選 択 的 エ ス ト ロ ゲ ン 受 容 体 modulator で あ る誘導されるか検討した。

tamoxifen（TAM ）と選択的エストロゲン受容体【方法】ER 陽性乳癌細胞株 M CF7に YB‑1遺伝子をdown regulator で あ る fulvestrant（FUL）を 投導入した YB‑1過剰発現細胞株（YB‑1‑M CF7），およ与 し た 際 の 増 殖 抑 制 効 果 は，M CF7‑YB ‑1で はびvectorのみを導入した対照細胞株（ M CF7‑vector）

MCF7‑vestor に比べ増殖抑制の低下を認めた。特を樹立した。これらの細胞株を用いて，YB‑1導入にに FUL で増殖抑制の低下が著明であった。さらに，

よるERα，ヒト上皮細胞増殖因子受容体２型（HER2），

MCF7‑YB‑1ではTAM またはFULにより誘導されシグナル伝達に関与するタンパク発現の変化を West-るアポトーシスと G1 arrest の抑制が認められた。

ern blot 法で，抗エストロゲン剤に対する感受性を

３）TAM や FUL を投与した際の諸因子の発現は，WST 法で，さらに薬剤により誘導されるアポトーシ

FUL投与によりERαはMCF7‑YB‑1，MCF7‑vector

スおよび細胞周期制御や抗エストロゲン剤投与時ののどちらにおいても低下していたが，MCF7‑YB‑1

MCF7‑YB‑1と M CF7‑vector でのシグナル伝達経路

では，TAM または FUL 投与時も AIB1，HER2，のタンパク発現およびリン酸化の違いやエストロゲン

c‑Myc，p‑Erk 発現の増加が持続していた。

No. 5, 2012333

審査学位論文要旨

４）YB ‑1導 入 に よ り MCF7の ERE 活 性 は 約50％

受容体（EGFR）familyの発現やそれらを介するシ低下していた。TAM 添加時の ERE活性の低下はグナル伝達に及ぼす作用，ならびに内分泌療法剤の感M CF7‑YB‑1と MCF7‑vector で差を認めなかった

受性に及ぼす影響について検討した。

が，（１nM ）のFULでERE
MCF7‑YB‑1はより低濃度
活性の有意な抑制が認められた。

ER 陽性乳癌細胞株 M CF7に YB‑1遺伝子を導入した過剰発現細胞株（YB‑1‑MCF7），およびvectorを導５）術前化学療法を行った ER 陽性乳癌23例の臨床入した対照細胞株（MCF7‑vector）を樹立し，関連検体を用いた解析では９例で化学療法施行後に核因子の発現や抗エストロゲン剤に対する感受性，誘導

での YB‑1発現が認められ，YB‑1の核での発現とされるアポトーシスおよび細胞周期制御の変化や，エHER2発現に有意な相関が認められた。

ストロゲン応答エレメント（ERE）活性を解析した。

【考察】

また，wild‑type MCF7の内因性 YB ‑1を siRNA で

１）YB‑1発現の増加により HER2やその下流の因子抑制した際のタンパク発現の変化を解析し，さらに，の発現やリン酸化の増加が，YB‑1発現の抑制によ

術前化学療法を施行した乳癌組織を免疫染色で解析しりこれらの因子の低下が認められたことから YB‑1た。

が増殖因子受容体経路を介したシグナル伝達を活性化させることで細胞増殖を促進していると考えられた。

その結果，今回の研究で次の結果を得た。
１．MCF7‑YB‑1では，ERα発現低下，AIB1，HER2，リン酸化 Erk（p‑Erk），total Akt，c‑Myc 発現が２）YB‑1を強制発現させた M CF7では，HER2およ増 加 し て い た。逆 に siRNA を 用 い た wild‑type

び AIB1発現の増加と抗エストロゲン剤に対する感

MCF7の内因性 YB‑1発現抑制により，ERαの増

受性の低下（耐性）が誘導されたことから YB‑1の加，p‑Erk，c‑M yc，AIB1の低下が認められた。

発現が ER 陽性乳癌細胞の抗エストロゲン剤に対す２．MCF7‑YB‑1では tamoxifen（TAM ）と fulves-

る耐性の獲得に関与している可能性が考えられた。

trant（FUL）による増殖抑制の低下を認めた。さ３）YB‑1を強制発現させた M CF7では，ERE 活性

らに，M CF7‑YB‑1ではTAM またはFULにより誘が低下しているにも関わらず抗エストロゲン剤に対導されるアポトーシスと G1 arrest の抑制が認めらする感受性が低下していた。
YB‑1が ER 陽性乳癌細れた。

胞のER経路と増殖因子受容体（HER2/EGFR）経３．MCF7‑YB‑1では，TAM または FUL 投与時も路との crosstalk において，増殖因子受容体経路を

AIB1，HER2，c‑M yc，p‑Erk 発現の増加が持続

より活性化させることで乳癌細胞を ER 依存性からしていた。

ER 非依存性に変化させ，抗エストロゲン剤に対する耐性を誘導している可能性が推測された。
４）化学療法剤などのストレスで YB‑1の核移行また

４．YB‑1導入によりM CF7のERE活性の低下が認められ，M CF7‑YB ‑1は よ り 低 濃 度 の FUL で ERE
活性の有意な抑制が認められた。

は発現が増加することにより ER 陽性乳癌細胞の抗５．術前化学療法を行った ER 陽性乳癌臨床検体を用

エストロゲン剤に対する感受性に変化が誘導される

いた解析では，化学療法後の YB‑1の核での発現と可能性が考えられた。

HER2発現に有意な相関が認められた。

（論文審査の結果の要旨）

これらの結果から，YB‑1が ER 陽性乳癌で増殖因

Y‑Box binding protein‑1（YB‑1）はストレスに子受容体経路を活性化させることで，乳癌細胞を ER応答する転写因子であり，抗癌剤耐性や増殖因子発依存性から ER 非依存性に変化させ，抗エストロゲン

現など癌細胞の悪性度に関与しているが，乳癌内分泌剤に対する耐性を誘導している可能性が示唆された。

療法剤の感受性との関連についてはこれまで明らか

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文としにされていない。本研究では，エストロゲン受容体て価値があるものと認めた。

（ER）陽性乳癌で，YB‑1が ER や上皮細胞増殖因子334

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Involvement of pelvic inﬂammation‑related mismatch repair abnormalities and microsatellite instability
in themalignant transformation ofovarian endometriosis（卵巣子宮内膜症の悪性転化における骨盤炎症に関連するミスマッチ修復異常とマイクロサテライト不安定性の関与）
布施谷

千

穂

（論文の内容の要旨）② 免疫組織染色を行った症例のうち卵巣子宮内膜症【背景と目的】子宮内膜症は，子宮以外に子宮内膜組

27例，子宮内膜症合併卵巣癌12例，卵巣癌23例（明織が増殖する疾患で，生殖可能年齢女性の約10％に細胞腺癌10例，類内膜腺癌７例，漿液性腺癌６例）認められる。中でも，卵巣に発生する卵巣子宮内膜症からマイクロダイゼクション法にて DNA を抽出し，は，月経様の出血がチョコレート状の液体として貯留（M SI は５カ所のマーカー
MSI の有無を解析した。

する良性腫瘍である。しかし，これまでに卵巣子宮内で解析し，不安定性が２カ所以上の部位で認められ膜症から発生したと考えられる卵巣癌（主に明細胞腺た場合 M SI‑H（high），不安定性が１カ所で認め癌と類内膜腺癌）の症例が報告されており，卵巣子宮られた場合あるいは不安定性が認められなかった場

内膜症は癌化する可能性があるとされている。近年の合 MSI‑S（stable）と分類した。）

研究で，卵巣子宮内膜症から卵巣癌への悪性転化にお③ MSI 検 討 症 例 で，MM R 機 構 異 常 に 関 連 す る

いていくつかの分子生物学的異常（p53異常，PTEN

TGF ‑βRII，PTEN，BAX，hMSH6と HNF ‑1β突然変異，K‑ras 突然変異，HNF‑1β高発現）が報遺伝子（MSI ターゲット遺伝子）におけるモノヌ

告されているが，未だ詳細は不明である。

クレオチドリピート変異の有無を解析した。

子宮内膜症は形態学的，内分泌学的特徴から，発癌④ MSI‑H 症例と MSI‑S 症例で，方法③のモノヌク過程における子宮内膜癌との類似性が示唆される。子

レオチドリピートを含まない領域における PTEN

宮内膜癌は，発生の初期に DNA 複製時のエラーを修

遺伝子変異の頻度を比 した。

復するミスマッチ修復（mismatch repair；MMR）⑤ MSI‑H 症例と MSI‑S 症例で，年齢，腫瘍径，

蛋白異常が関与しており，その結果マイクロサテライ

症状出現から手術までの期間，血清 CA125レベル，

ト DNA リピート数が変化し，マイクロサテライト不白血球数，血清 CRP レベル，MMR 蛋白発現を比安定性（microsatellite instability；M SI）陽性とな検討した。

り，癌化するとされている。子宮内膜症は子宮内膜組【結果】

織から構成されることから，その癌化過程に MMR① hMLH1と hMSH2蛋白発現は，正所性子宮内膜，機構の異常が関与していることが推測される。また，

卵巣子宮内膜症，子宮内膜症合併卵巣癌の内膜症部

骨盤内炎症性疾患が，卵巣癌発生に役割を果たすとさ分，癌部分，卵巣癌の順に減少していた。hMLH1

れているが，卵巣子宮内膜症の癌化において，子宮内および hMSH2と Ki‑67タンパク発現は，正所性子膜症によって誘導される局所炎症が，M MR 機構の異宮内膜で強い相関関係が認められたが，卵巣子宮内常と関与しているかはこれまで検討されていない。

膜症では相関関係が認められなかった。

そこで，卵巣子宮内膜症の悪性化の要因を MMR② MSI‑H の頻度は，正所性子宮内膜０％（０/６），

機構に着目し，その発癌過程に関連する分子病理学的

卵巣子宮内膜症14.8％（４/27），子宮内膜症合併

因子を明らかにすることを目的とした。

卵巣癌の内膜症部分16.7％（２/12），癌部分25％【方法】（３/12），明細胞腺癌40％（４/10），類内膜腺癌42.9① 正所性子宮内膜30例，卵巣子宮内膜症27例，子宮％（３/７），漿液性腺癌０％（０/６）であり，正内膜症合併卵巣癌（子宮内膜症と癌が共存し，子宮所性子宮内膜と比 して卵巣子宮内膜症で，卵巣子内膜症から癌への移行像が認められた症例）25例，

宮内膜症と比 して明細胞腺癌と類内膜腺癌で有意

卵巣癌39例（明細胞腺癌14例，類内膜腺癌12例，漿

に高値であった。また，M SI と MM R 蛋白発現の液性腺癌13例）における，MM R 機能蛋白である関連を解析したところ，子宮内膜症合併卵巣癌の癌

hM LH1と hM SH2蛋白発現と増殖マーカーである

部分で MSI 陽性であった６例中２例において，内Ki‑67蛋白発現を免疫組織染色で検討した。

膜症部分と癌部分ともに MMR 蛋白発現が低下しNo. 5, 2012335

審査学位論文要旨ており，同じ部位で MSI が検出された。
③ M SIターゲット遺伝子のモノヌクレオチドリピー

よって誘導される局所炎症が，M MR 機構の異常に関与しているかは不明である。

ト変異は，TGF ‑βRII 遺伝子において MSI‑H 子

そこで，卵巣子宮内膜症の悪性化の要因を MMR

宮内膜症合併明細胞腺癌１例の癌部分のみで認めら機構に着目し，その発癌過程に関連する分子病理学的れ た。PTEN ，BAX ，hMSH6 と HNF ‑1β遺 伝 子

因子を明らかにするために，正所性子宮内膜30例，卵では認められなかった。

巣子宮内膜症27例，子宮内膜症合併卵巣癌25例，卵巣④ PTEN 遺伝子変異は，MSI‑H 症例で，卵巣子宮癌39例にお け る，M M R 機 能 蛋 白 で あ る hMLH1と内膜症25％（１/４），子宮内膜症合併卵巣癌の内

hMSH2の発現と増殖マーカーであるKi‑67発現を免疫膜症部分100％（２/２），癌部分66.7％（２/３），

組織染色にて検討した。さらに，M SI を含む MMR

明細胞腺癌25％（１/４），類内膜腺癌33.3％（１/

機構異常とPTEN 点突然変異，臨床病理学的因子との３）であった。MSI‑S 症例では，卵巣子宮内膜症

関連を解析した。
（MSI‑H；M SI ２カ所以上，MSI‑

8.3％（１/12），子宮内膜症合併卵巣癌の内膜症部

S；MSI １カ所あるいはなし）

分０％（０/10），癌部分０％（０/９），明細胞腺癌
０％（０/４），類内膜腺癌25％（１/４），漿液性腺その結果，布施谷は次の結論を得た。
１．MMR 蛋白発現は，正所性子宮内膜，卵巣子宮内癌０％（０/３）で，PTEN 遺伝子変異の頻度は，膜症，子宮内膜症合併卵巣癌の内膜症部分，癌部分，

M SI‑S 症例と比卵巣癌の順に減少していた。MMR と Ki‑67蛋白発

して MSI‑H 症例で有意に高値であった。
⑤ M SI と臨床病理学的背景を比現は，正所性子宮内膜で相関関係を認めたが，卵巣すると，年齢，腫瘍径，症状出現から手術までの期間，血清 CA125

子宮内膜症では認めなかった。
２．MSI‑H の頻度は，正所性子宮内膜と比して卵レベルに有意差はなかったが，MSI‑H 症例で白血

巣子宮内膜症で，卵巣子宮内膜症と比 して明細胞球数と CRP レベルが有意に高値であり，hMLH1

腺癌と類内膜腺癌で有意に高値であった。

および hM SH2蛋白発現は有意に低値であった。

３．子宮内膜症合併明細胞腺癌２例では，内膜症部分【結論】子宮内膜症において M M R 機構の異常が存在と癌部分ともに MM R 蛋白発現が低下し，同じ部

し，骨盤内炎症によって誘導される M M R 機構の異位で MSI が検出された。

常が子宮内膜症から卵巣癌への発癌過程に関与する可能性が示唆された。
（論文審査の結果の要旨）

４．検討症例における M SI ターゲット遺伝子候補では，有意なモノヌクレオチドリピート変異を認めなかった。

子宮内膜症は，子宮以外に子宮内膜組織が増殖する

５．PTEN 点突然変異は，卵巣子宮内膜症，子宮内婦人科疾患である。特に卵巣に発生する卵巣子宮内膜膜症合併卵巣癌の内膜症部分，癌部分で観察され，症は良性腫瘍であるが，近年卵巣癌（主に明細胞腺癌

MSI‑H 症例で MSI‑S 症例と比と類内膜腺癌）へ悪性転化すると報告されている。そであった。

の分子生物学的異常がいくつか報告されているが，未だ詳細は不明である。
子宮内膜症は形態学的，内分泌学的特徴から，発癌６．MSI と臨床病理学的背景を比して有意に高値
すると，MSI‑H

症例で白血球数と CRP 値が有意に高く，MMR 蛋
白発現は有意に低値であった。

過程における子宮内膜癌との類似性が推察される。子以上の結果より，子宮内膜症では MMR 機構の異宮内膜癌は，発生初期にミスマッチ修復（MMR）蛋常が存在し，骨盤内炎症によって誘導される MMR

白異常が関与しており，その結果 microsatellite in-機構の異常が子宮内膜症から卵巣癌への発癌過程に関stability（M SI）陽性となり癌化するとされている。

与する可能性が示唆された。

また，骨盤内炎症が卵巣癌発生に関与するとされているが，卵巣子宮内膜症の癌化において，子宮内膜症に336

よって主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

Lower expression ofHNF4αand PGC1αmight impair rifampicin‑mediated CYP3A4 induction underconditions where PXR overexpressed in human fetal liver cells（HNF4αおよび PGC1αの低発現が要因と考えられる PXR 過剰発現ヒト胎児肝細胞におけるリファンピシンによる CYP3A4の
誘導障害）
竹

澤

（論文の内容の要旨）

崇およびレポータージーンアッセイにて，核内受容体お【目的】妊婦に対して薬物療法を行う場合，薬物が胎よび転写因子の発現量は RT‑PCR を用いて解析した。

児に与える影響の有無を予測することは重要であるが，【結果・考察】HepG2細胞では PXR アゴニストによ

薬物の胎児への影響を臨床試験で検討することは倫理

る CYP3A4 mRNA の発現量の顕著な増加が確認さ的に不可能であり，実験動物による毒性試験等で代替

れ，PXR 過剰発現によりさらに発現量は増加した。

されている。しかし，薬物代謝酵素の発現量や性質に一方，HFL 細胞ではデキサメタゾン以外の PXR ア

は種差が存在するため，酵素誘導や阻害，催奇形性のゴニストによる CYP3As の誘導は認められず，PXR

予測は動物実験のみでは不十分である。したがって，

過剰発現条件下においては，誘導は認められたもの

ヒト胎児に対する薬物の影響を予測し得る系の確立がのその程度は HepG 2細胞に比べ明らかに小さかっ必要である。その一つとして，ヒト胎児肝細胞（HFLた。レポータージーンアッセイでも，HFL 細胞では細胞）を用いる試験モデルが有用と考えられるが，ヒPXR 過剰発現条件下での RIF による CYP3A4転写ト胎児由来の培養細胞を用いた薬物代謝研究はほとん

活性の増加は HepG2細胞に比べ小さいものであった。

ど行われていない。M atsunagaら（Biochem Biophys

HFL 細胞における PXR の低発現が RIF で CYP3A4Res Commun 318：428‑434，2004）は，HFL 細胞のが誘導されない原因であると推察してきたが，PXR

CYP3A4はデキサメタゾンにより強く誘導されるのに以外の他の因子も RIF による誘導に関与しているこ

対し，核 内 受 容 体 pregnane X receptor（PXR）のとが推察された。そこで，CYP3A4の転写活性に関与

アゴニストであり，ヒト成人肝細胞においてCYP3A4するコアクチベーターとコリプレッサーの mRNA のの強力な誘導剤であるリファンピシン（RIF）では全発現量を HFL 細胞，HepG2細胞および成人の肝臓とく誘導されないことを明らかにしている。その原因と比して，PXR mRNA が検出されなかったことから，

ターであるhepatocyte nuclear factor 4α（HNF4α），

HFL細胞ではPXRの発現が極めて低いか未発現状態

peroxisome proliferator activated receptor γであることが推察された（Maruyamaet al， Biol Pharm（PGC1α）が HepG2細胞および成人のcoactivator 1α。本研究は，HFL 細胞に
Bull 30：2091‑2097，2007）

肝臓と比べ，
発現量が低いことが明らかになった。
さらにおいて CYP3A4が RIF によって誘導されない原因が

HNF4αと PGC1αによって発現が調節されている

PXR の低発現のみにあるのかを明らかにするため，

遺伝子 ApoC および PEPCK の発現は，HFL 細胞

HFL 細胞に PXR を過剰発現した場合の CYP3As 誘において RT‑PCR で検出限界以下であった。以上の導におよぼす影響について検討した。また，RIF に

結果より，HNF4αおよび PGC1αの発現量 の 低 下

よる CYP3As の誘導に関与すると考えられる転写調が PXR過剰発現 HFL細胞における RIFの CYP3A4

節因子の発現量について HFL 細胞，HepG2細胞，ヒ誘導を阻害している可能性が示唆された。

ト成人肝臓で比検討した。

した。その結果，HFL 細胞ではコアクチ ベ ー（論文審査の結果の要旨）【方法】HFL 細胞は，米国 Applied Cell Biology Re-

我々は，ヒト成人肝細胞における CYP3A4の強力

search Institute 社より研究用に取得されたヒト胎児な誘導剤であるリファンピシン（RIF）がヒト胎児肝初代肝細胞（胎齢約13週，６胎児肝混合）を用い，HFL

細胞（HFL 細胞）では全く誘導しないことを明らか

細胞の比対象としてヒト肝癌由来の HepG2細胞をにしており，原因として HFL 細胞において PXR のポジティブコントロールとして使用した。PXR の遺発現が極め て 低 い こ と が 示 唆 さ れ た。本 研 究 は，

伝子導入はアデノウイルスベクターを用いて行った。

HFL細胞において CYP3A4が RIFによって誘導され薬物による CYP3As の誘導はリアルタイム RT‑PCR

ない原因が PXR の低発現のみに限定されるか否かをNo. 5, 2012337

審査学位論文要旨明らかにすることを当初の目的とした。HFL 細胞にる CYP3A4の誘導が認められた。しかし，HepG2

PXR を過剰発現させ，薬物による CYP3A4誘導への細胞に比べ誘導が十分でないことから，PXR 以外

影響，エピジェネティクス制御の影響，CYP3A4発現の因子の影響が考えられた。

に関与する転写調節因子の発現について検討を行った。

２．メチル化阻 害 剤5‑AzadC 処 理 後 の RIF に よ る

本研究において用いた HFL 細胞は胎齢約13週・６

CYP3A4の誘導を検討したが，RIF による誘導は

胎児肝混合のヒト胎児初代肝細胞であり，HFL 細胞の比認められなかった。

対象として，ヒト肝癌由来 HepG2細胞を使用

３．転写因子の発現を検討したところ，HNF4αおよした。転写調節因子の発現量についてはヒト成人肝臓

び PGC1αの mRNA が成人肝臓に比べ低発現であ由来の total RNA をポジティブコントロールとした。

ることを確認した。

PXR 遺伝子導入はアデノウイルスベクターを用いた。

４．HNF4αおよびPGC1αにより調節されるApoC ，

薬物による CYP3As の誘導はリアルタイム RT‑PCRPEPCK の発現が HFL 細胞で認められなかった。

およびレポータージーンアッセイで解析した。核内受

HFL 細胞では HNF4α，PGC1αによる転写調節

容体および転写因子の発現は RT‑PCR を用いて調べが不十分である可能性が考えられた。

た。エピジェネティクス制御の影響についてはメチル

これらの結果は，RIF で CYP3A4が誘導されない化阻害剤で処理後，RIF による CYP3A4誘導をリア

原因として，PXR の低発現に加え，転写因子 HNF4

ルタイム RT‑PCR で検討した。

αおよび PGC1αの発現量が低いことが影響している

その結果，竹澤は次の結論を得た。

可能性を示すものであり，主査，副査は一致して本論

１．HFL 細胞に PXR を過剰発現させると RIF によ

文を学位論文として価値があるものと認めた。

Attenuation of kidney injuries maintains serum sulfatide levels dependent on hepatic synthetic ability:
apossibleinvolvement ofoxidativestress（腎障害の軽減に伴う酸化ストレスの抑制は，肝スルファチド合成の機能維持を介して，血清スルファチド値を維持する）
生

暁娜

（論文の内容の要旨）をマウスに施し，先行研究で見出した血清スルファチ【背景と目的】スルファチドは血清リポ蛋白に含まれド値の低下や肝臓スルファチド代謝に生じた変化が，る主要なスフィンゴ糖脂質であり，主に肝臓で合成さ本当に腎障害に起因するか検証した。

れる。我々は，末期腎不全透析患者において，血清ス【材料及び方法】26週齢の Sv/129メスマウスを二群にルファチド値が著明に低下すること，また，この低下

分け，通常食と0.1％クロフィブラート食で各々飼育した値は腎移植後に正常レベルまで回復することを見した。後者の飼育は，BSA 投与の２週間前から実験出した。この現象に関し，代表的な腎障害マウスモデ

期間終了まで行った。我々は，このクロフィブラート

ル：protein‑overload nephropathyを用いて解析し処理により，BSA 投与に伴う腎障害がほとんど生じたところ，血清スルファチド値の低下と共に，肝臓のないことを過去に報告した。両群について，BSA を

スルファチド合成酵素：セレブロシドスルホトランス

一日当たり0.375g 腹腔内投与し，17日間継続投与しフェラーゼ（CST）の発現低下並びに肝臓酸化スト

た。投与終了後，血清，肝臓，腎臓を回収した。血清

レスの増加を検出した。これらの結果を基に，我々は，及び組織中のスルファチドは HIP 法により抽出し，腎障害に起因する全身的な酸化ストレスの増加が，肝アルカリ処理により脂肪酸を除去したリゾスルファチ

臓のスルファチド産生を抑制し，血清スルファチド値

ドに変換後，MALDI‑TOF MS 法で分析した。７種を低下させる機構を推察した。一方，protein‑over-

類のリゾスルファチドの総量をスルファチドの値としload nephropathyでは，マウスに牛血清アルブミン

た。また，組織中の蛋白及び mRNA 発現量は，各々（BSA）を大量投与することで腎障害が誘導されるた

イムノブロット法及びリアルタイム PCR 法で測定しめ，同マウスに観察された現象に BSA そのものが影た。

響している可能性が懸念された。今回我々は，BSA【結果】通常食飼育群では，BSA 大量投与に伴い，血大量投与下でも正常レベルの腎機能が維持される処理

清及び肝臓スルファチド値の低下，肝臓 CST の発現338

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

低下，肝臓の過酸化脂質：マロンジアルデヒドの増加

マウスを二群に分け，通常食と0.1％クロフィブラーが観察された。一方，クロフィブラート食飼育群では，ト（CF）食で飼育した。後者の飼育は，BSA 投与２

BSA 大量投与に伴うこれらの現象は認められなかっ週間前から実験期間終了まで行った。生 暁娜らは，た。クロフィブラート単独投与群において，スルファ

この CF 処理により BSA 投与に伴う腎障害がほとん

チドの量的変化・代謝酵素の発現変動は確認されず，ど生じないことを過去に報告している。両群について，

上記の肝臓スルファチド代謝に関連する諸変化は腎機

BSA を0.375g/日で17日間継続して腹腔内投与した。

能の状態に強く関連することが示された。

投与終了後，血清，肝臓，腎臓を回収した。血清及び【結語】マウス protein‑overload nephropathyにおい

組織中のスルファチドは，脂肪酸を除去したリゾ体にて生じる血清スルファチド値の低下並びに肝臓 CST

変換後，MALDI‑TOF MS 法で分析した。７種類のの発現低下は，明らかに腎障害に起因していた。本研

リゾ体の総量をスルファチドの値とした。また，組織究から，血清スルファチドの濃度調節に，肝機能が重中の蛋白及び mRNA 発現量は，各々イムノブロット

要であることが示唆された。末期腎不全透析患者では，

法及びリアルタイム PCR 法で測定した。

血清スルファチドの低値が心血管障害の発症に強く相

その結果，生 暁娜は次の結論を得た。

関する。本研究成果は，同患者における新たな治療法

１．通常食群では，BSA 投与に伴い，血清及び肝臓を模索する上で，有用な情報を提示するものと思われスルファチド値の低下，肝臓 CST の発現低下，肝た。

臓 MDA 量の増加が観察された。
（論文審査の結果の要旨）

２．CF 食群では，BSA 投与に伴うこれらの現象はスルファチドは血清リポ蛋白に含まれる主要なスフィ
ンゴ糖脂質であり，主に肝臓で合成される。生 暁娜見られなかった。
３．CF 単独投与群ではスルファチドの量的変化・代らのグループは，腎機能障害に伴い血清スルファチド

謝酵素の発現変動は確認されなかった。

値が低下する機構として「腎障害に起因する全身的なこれらの結果により，既述した腎障害マウスに生じ酸化ストレスの増加が，肝臓のスルファチド産生を抑る血清スルファチド値の低下は，腎障害に起因するこ制する」可能性を報告している。この機構は腎障害マとが明らかとなった。本研究から，血清スルファチド

ウスモデル：protein‑overload nephropathyを用いの濃度調節に，肝機能が重要であることが示唆された。

た試験結果に基づくが，このモデルはマウスに BSA

末期腎不全透析患者では，血清スルファチドの低値がを大量投与することで作成するため，生じる現象に

心血管障害の発症に強く相関する。本研究成果は，同

BSA が影響している可能性が懸念される。今回，生患者における新たな治療法を模索する上で，有用な情

暁娜は，BSA 投与下でも正常レベルの腎機能が維持報を提示するものと思われた。よって，主査，副査はされる処理をマウスに施し，既述した腎障害マウスに一致して本論文を学位論文として価値があるものと認生じる血清スルファチド値の低下が本当に腎障害に起めた。

因するか検証した。

A crucial role for Nox1 in redox‑dependent regulation of Wnt‑β‑catenin signaling（Wnt‑β‑カテニ
ンシグナルのレドックス反応による制御における Nox1の重要な役割）
Seheli Kajla（論文の内容の要旨）

Wnt/β‑catenin signal transduction by modulating【Background】Wnt signaling pathway is evolu-

the redox‑dependent interaction between the thior-tionally conserved from nematodes to mammals

edoxin‑like protein NRX and Dvl. However, it

and plays an essential role in tissue homeostasis.

remained unclear which ROS‑generating enzymes

Dysregulation of the Wnt pathway has been as-

engage the NRX‑mediated Wnt action and how thesociated with many cancers. A recent discovery

intracellular level of ROS is regulated.This led theunveiled novel redox‑regulation of Wnt signaling.

authors to investigate whether superoxide generat-

ROS mayfunction as positive signaling molecules ining enzyme, Nox1 is involved in this process.

No. 5, 2012339

審査学位論文要旨【M aterials and M ethods】Cells were transfectedof Wnt signaling promotes cancer, this redox regu-

with diﬀerent plasmids by using Lipofectamine 2000

lation may have signiﬁcant implication in under-

and with siRNAs with oligofectamine. Cells werestanding Wnt‑dependent carcinogenesis.Her princi-

harvested 36‑48 h after transfection and were lysedpal aim in this study was to investigate whether

in Buﬀer A or RIPA buﬀer.They were then subject-superoxide‑generating enzyme Nox1 is involved in

ed to immunoprecipitation and immunoblotting.For

Nucleoredoxin (NRX)‑regulated Wnt signaling inreporter assay, luciferase assay system was used.

intestinal and colon epithelial cells and to explore

Luminol assay determined the ROS production.The

how the intracellular level of ROS is regulated.

level of activated Rac1 was determined by incubat-

It was found that,ing cells lysates with GST‑PAK1 agarose followed

1. Wnt induces Nox1‑mediated ROS production,by immunoblotting with anti‑Rac1 antibodies.

leading to accumulation of β ‑catenin in both【Results】It is demonstrated that Wnt3a rapidly

mouse ﬁbroblast L cells and rat intestinal epith-induced superoxide generation in a dose‑and time‑elial IEC‑6 cells.

dependent manner. Furthermore, Wnt3a‑induced

2. Over expression of Nox1 with NOXO1 and

ROS production was inhibited by treatment of the‑IAF labeling
NOXA1 markedly suppressed the 5ʼ

cells with the general Nox inhibitor DPI or transfec-

of exogenously expressed NRX as compared withtion of Nox1 siRNA into the cells. This study alsothat of control vector. At the same time en-

showed that Nox1 ‑derived ROS

oxidatively

dogenous Dvl bound to NRX is also decreased byinactivate NRX and thereby alter the interaction

Nox 1 overexpression. The amount of the oxid-between NRX and Dvl. It was then tested whether

ized NRX was signiﬁcantly reduced in Nox1KO

NRX and Nox1 act antagonistically with regard tomice as compared with that in wild‑type mice

β‑catenin stabilization. Immunostaining showedsuggesting the Nox1 oxidizes NRX, suppressingthat over expression of GFP‑NRX abolished Wnt‑

the interaction of NRX with Dvl.

induced accumulation of β‑catenin.In contrast,co‑

3. It was then examined whether Nox1 directs theexpression of Nox1 had the reverse eﬀect. Thistranscriptional activity of TCF, a downstream

Nox1 action is regulated byWnt‑induced activationeﬀector of Wnt‑ β ‑catenin signaling. Nox1 siR-of the Rac1‑GEF Vav2 via Src kinase. It is also

NAs abrogated Wnt3a‑stimulated TCF‑lucifer-found that ablation of the Nox1 activity down‑

ase reporter activity in IEC‑6 cells. Correlating

regulated the Wnt‑induced expression of TCF/LEF

with this, expressions of c‑M yc and cyclin D1,

target genes such as Cyclin D1 and c‑Myc andwell‑characterized TCF‑target genes were down‑

concomitantly blocked Wnt‑induced cell prolifera-

regulated in Nox1 siRNA‑introduced cells.

tion. Nox1 mediates Wnt‑induced cell growth in

4. When Vav2‑speciﬁc siRNA was introduced intocolon cancer cells with the normal Wnt pathway.

IEC‑6 cells, both activation of Rac1 and accumu-【Conclusions】In conclusion, this study emphasizes

lation of β ‑catenin were signiﬁcantly down‑

the important biological function of Nox1 as aregulated.

signal transducer and provides a mechanistic insight

5. The inhibition of Src by Src inhibitor PP2

into the Nox1‑dependent redox‑regulation oftreatment markedly reduced the level of Wnt ‑canonical Wnt signaling cascade.

induced tyrosine phosphorylation of Vav2 in IEC‑

（論文審査の結果の要旨）

6 cells compared with that in untreated cells,

ROS may function as signaling molecules in Wnt/

suggesting Vav2 mediates Wnt‑induced activa-

β‑catenin signal transduction by modulating thetion of Rac1 and β‑catenin through Src‑depen-

redox‑dependent interaction between NRX and Dvl.

dent tyrosine phosphorylation.

Given that high levels of ROS are frequently

6. DPI treatment signiﬁcantly attenuated the Wnt

produced in cancer cells and that aberrant control

induced cell proliferation in L cells. When NRX

340

信州医誌 Vol. 60

審査学位論文要旨

was over expressed in RKO cells, Wnt‑induced

dependent redox‑regulation of canonical Wnt signa-

cell proliferation was suppressed,but restored byling cascade. Since Wnt‑induced cell growth was

Nox1 co expression. Taken together, these

inhibited by Nox1 ablation, deregulation of Nox1

results suggest that the Nox1‑NRX axis iscould be an additional approach for treating Wnt‑

involved in Wnt‑dependent cell proliferation.

dependent cancers and other Wnt‑related diseases.

In summary, her study emphasizes the important

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値

biological function of Nox1 as a signal transducerがあるものと認めた。

and provides a mechanistic insight into the Nox1‑

No. 5, 2012341