豚病会報

No.48

200619

臨床現場で起こったほ乳期又は離乳期下痢に対する殺菌乳酸菌製剤（EC-12）の投与効果
塚原隆充1,2)*、中西信夫2)、松原範宜3)、伊藤貢4)、牛田一成1)（1)栄養・病理学研究所、2)京都動物検査センター、3)コンビ、4)あかばね動物クリニック）   
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んしん SXS、日本配合飼料譁製］を用いた。

現在の養豚では、ほ乳期及び離乳期に多発する下痢に対して、予防及び治療目的で抗菌剤が使用されてい各農場とも試験期間中は飼料及び飲水は自由摂取とる。我が国では BSE 問題以降、養豚分野でも農林水産した。ほ乳期子豚は、母乳も自由摂取していた。その省主導でトレーサビリティ実施の調整が進んでいると他、各農場での飼育管理は、農場毎の慣例に従った。

いう経緯もあり、抗菌剤の適正使用について考えなく２．被験物質の投与被験物質として 
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
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
てはならない時期にさしかかっていると考えられる。

 EC-12 株を加熱一方で、予防的な抗菌剤の投薬を禁止したデンマーク

滅菌した製品［EC-12、コンビ譁製］を用いた。EC-12などでは、かえって治療目的での抗菌剤使用が増加しを各基礎飼料に０．
０５％（w/w）添加した試験飼料を調たという報告がある1)。豚の治療用抗菌剤は、ヒトに製した。

用いられる化学療法剤と同じものもあり、使用の増加

３．試験方法による耐性菌発生の心配はこちらの方が大きく、単に３−１．Ａ農場予防的抗菌剤の投薬を中止するだけでは、養豚分野だ母豚とともに分娩ストールで飼育されていた１８−けでなくヒトの公衆衛生にも悪影響を及ぼしかねない。

２４日齢のほ乳期子豚で下痢症状を認めた３１頭（４腹これらのことから、予防用抗菌剤の使用抑制を議論分）を供試した。供試子豚の２１頭（３腹分）に EC-するならば、それらの代替物質の探索も併せて行うべ

12 添加試験飼料を、残りの１０頭（１腹分）には基礎きであるといえる。今回我々は、畜産資材の一つであ飼料を各々７日間給与した。なお、供試子豚は試験る殺菌乳酸菌 EC-12 を用いて、ほ乳期および離乳期に開始時まで母乳のみで育成されていた。

下痢を発症した子豚に対する投与試験を実施したので投与開始時及び投与開始後７日に体重測定を実施報告する。なお、本報告の一部は、第４回 Joint INRA-した。また投与開始時、投与開始後１、２、３、４

Rowett Symposium にて発表した2)。

及び７日に臨床症状を観察し、表１に示すようにスコア化して記録した。投与開始時及び投与開始後７

材料及び方法日に供試子豚全頭の採糞をスワブで行い、病原因子１．供試動物及び飼料の陽性率を定性的に調査した。
なお、試験期間中に母豚及び子豚に抗菌剤等の治以下に示す３養豚農家で試験を実施した。京都府下療薬は投与されていなかった。の母豚８０頭規模の一貫経営農家をＡ農場、愛知県下の３−２．Ｂ農場

母豚１７０頭規模の一貫経営農家をＢ農場、同じく愛知県母豚とともに分娩ストールで飼育されていた８−下の母豚１７０頭規模の一貫経営農家をＣ農場とした。
どの農家も三元交雑種のみを飼育していた。Ａ及びＢ農場はほ乳期子豚に下痢が頻発し、Ｃ農場では離乳期子豚に下痢が頻発していた。
Ａ及びＢ農場では、試験期間中の基礎飼料として抗菌剤及び生菌剤を含まない市販ほ乳期飼料［SDS No.1、日本配合飼料譁製］を用いた。Ｃ農場
では、同様に基礎飼料として抗菌剤及び生菌剤を含まない市販離乳期飼料［スーパーコロミールあ表１臨床スコア䉴䉮䉝ⷰኤ㗄⋡㪇㪈♮ଢᕈ⁁ర᳇㘩᰼ⵍᲫᱜᏱଢ⦟ᅢ⦟ᅢ
ᱜᏱエଢᷫㅌ
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20Proc Jpn Pig Vet Soc No.48 2006

１８日齢のほ乳期子豚で下痢症状を認めた３８頭（７腹天培地を用いて分離培養することで同定した。
分）を供試した。供試子豚の２８頭（５腹分）に EC-

は Moller らの方法５）に準拠した PCR

12 添加飼料を、残りの１０頭（２腹分）に無添加対照法で同定した。ロタウイルス検出は市販ロタウイル飼料を各々７日間給与した。なお、供試子豚は試験

ス検出キット［ロタチェック、塩野義製薬譁製］を開始時には母乳及び市販ほ乳期餌付け飼料で飼育さ用いた。コクシジウム及びその他寄生虫の検査は、れていた。

ショ糖遠心浮遊法を用いた６）。

Ａ農場と同様に体重測定及び病原因子の調査を実

５．統計学的解析施した。また投与開始時、投与開始後１、２、３及臨床観察結果は観察日毎に Mann-Whitney test をび７日に臨床症状を観察し、Ａ農場と同様に記録し行 っ た。体 重 測 定 結 果 及 び 試 験 期 間 中 増 体 量 は、た。

Student's もしくは Welch's t-test を行った。糞便中のなお、試験期間中に母豚及び子豚に抗菌剤等の治療薬は投与されていなかった。

病原因子は、試験群間の検定は Fisher exact test を行った。投与前及び投与後の検定は Wilcoxon signed
ranks test を行った。ｐ＜０．
０５を有意差有りと判断し３−３．Ｃ農場
４０日齢の離乳期子豚で下痢症状を認めた３０頭を供た。

試した。供試子豚の２０頭に EC-12 添加飼料を、残りの１０頭に無添加対照飼料を各々７日間給与した。な結果

お、供試子豚は試験開始時には市販人工乳後期用飼

１．体重測定結果（図１）

料で飼育されていた。

Ａ、Ｂ及びＣ農場とも、EC-12 投与によって増体が有Ａ農場と同様に体重測定、臨床症状の観察及び病原因子の調査を実施した。
なお、試験期間中子豚に抗菌剤等の治療薬は投与されていなかった。

意に増加した。
２．臨床観察（図２）
Ａ農場では、EC-12 投与によって投与翌日から糞便性状が有意に低値を示し、その傾向は投与開始後７日

４．病原因子の特定まで持続した。投与前から投与開始後７日まで、どの４−１．Ａ農場

供試豚にもその他の項目の異常は認められなかった。

供試豚がほ乳期子豚であったため、スワブを用いて 採 材 し、


spp．

及び溶血性大腸菌の３項目について検査を行った。
４−２．Ｂ農場

(kg)
1.5
1.0

*

A0.5

投与前及び投与開始後７日に糞便を採取し、
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0.0
  、ロタウ
イルス、コクシジウムの検査を行った。なお、糞便が採取できなかった個体については、直腸スワブを採取し、  
spp.、溶血性大腸菌の３項目について検査を行った。

(n=10)(kg)
3.02.0 spp.、溶血性大腸菌、
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
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
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、ロタウイルス、コクシジウ(n=21)*B

1.00.0EC-12ኻᾖ(n=10)

４−３．Ｃ農場
投与前及び投与開始後７日に糞便を採取し、EC-12ኻᾖ

 spp.、溶 血 性 大 腸 菌、

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(kg)
6.04.0(n=28)

*C

2.0

ム及びその他寄生虫の検査を行った。
0.0４−４．検査方法
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  

spp．及び溶血性大腸菌の検査は、Tsukahara and Ushida の方法4) に準拠した。
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ኻᾖ

(n=10)

 は糞便の直接鏡検及び血液寒EC-12(n=20)*p<0.05䉕᦭ᗧᏅ᦭䉍䈫䈚䈢䇯
図１

試験期間中の増体量

No.48

豚病会報

2006211.6

与開始後７日まで持ᐔ㩿ဋ䷸䷲䷡ 㪀ᐔ㩿ဋ䷸䷲䷡ 㪀

2.01.0を示し、その傾向は投C-♮ଢᕈ⁁A-♮ଢᕈ⁁

1.2

*

*

*

*

0.40.00.0B-♮ଢᕈ⁁C-ర᳇

2.52.0 *1.5
1.00.0は、EC-12 投与によっ***ら有意な低値を示し、その傾向は投与開始後７日まで持続した。

0.6

Ｃ農場では、EC-12投与によって糞便性

*

0.0*

*

C-㘩᰼B-ర᳇て投与開始後２日か0.90.3*0.5続した。被毛スコア*0.8状が投与翌日から改善傾向を示し、投与開始後２日には有意な0.60.9

低 値 を 示 し た。EC-0.40.6

12 投与による糞便性

0.20.3**0.0C-ⵍᲫ

0.3

0.60.20.40.10.2***0.0B-㘩᰼

0.0

状の改善は、投与開始

0.000.60.40.20.00*
12*345⹜㛎㐿ᆎᓟᣣᢙ
図２67後７日まで持続した。
投与前に EC-12 投与群が対照群よりも高い元気スコアと食欲スコアを示したが、投与翌日から対照群を

12B-ⵍᲫ0.8***

3*4*5⹜㛎㐿ᆎᓟᣣᢙ67䂾䈲ኻᾖ⟲䉕䋬䂓䈲EC-12ᛩਈ⟲䉕⴫䈜䇯Aㄘ႐䋨ኻᾖ⟲n=10䋬EC-12ᛩਈ⟲n=21䋩䋬Bㄘ႐䋨ኻᾖ⟲n=10䋬EC-12ᛩਈ⟲n=28䋩䋬Cㄘ႐䋨ኻᾖ⟲n=10䋬EC-12ᛩਈ⟲n=20䋩Aㄘ႐䈪䈲䋬ర᳇䋬㘩᰼䋬ⵍᲫ䈱⇣Ᏹ䈲⹜㛎ᦼ㑆ਛ䉕ㅢ䈛䈩⹺䉄䉌䉏䈭䈎䈦䈢䇯*p<0.05䉕᦭ᗧᏅ᦭䉍䈫䈚䈢䇯

下回り、投与開始３日後には有意な低値を示した。この傾向はいずれも投与開始後７ 日 ま で 持 続 し た。
被毛スコアは、EC-12投与によって投与開始後３日から有意に低値を示し、その傾向は投与開始後７日ま試験期間中の平均臨床スコアで持続した。
Ｂ農場では、投与前では対照群よりも高スコアだっ

３．病原因子の特定（図３）た EC-12 投与群の糞便性状が、投与翌日から対照群をＡ農場では、溶血性大腸菌及び   が糞便下回りはじめ、投与開始後２日には有意な改善を示し中から分離された。EC-12 投与によって、投与開始後た。この傾向は投与開始後７日まで持続した。投与前

７日の溶血性大腸菌陽性率が対照群と比較して有意にに EC-12 投与群が対照群よりも高い元気スコアを示し低値を示した。また、EC-12 投与によって投与開始時たが、投与翌日から対照群を下回り、投与開始後２日に５７％だった   陽性率が、投与開始後７日には有意な低値を示した。投与開始後３日には差は認には検出されなくなった。

められなくなったが、投与開始後７日には再び EC-12

Ｂ農場では、  、サルモネラ、ロタウイル

投与群が有意な低値を示した。投与前に EC-12 投与群

ス及びコクシジウムが糞便中から検出された。






が対照群よりも高い食欲スコアを示したが、投与翌日





陽性率が投与開始後７日に EC-12 投与によっから対照群を下回り、投与開始後２日には有意な改善て高値を示したものの、サルモネラ属菌及びロタウイ

22Proc Jpn Pig Vet Soc No.48 2006
A-ṁⴊᕈᄢ⣺⩶90た（図１及び２）。その効60

㓁(ᕈ₸䋦

果は、投与開始１日目以)

㓁(ᕈ₸䋦60まで持続した。

4030

降からうかがわれ、試験終了時（投与開始後７日）20)0

性状及び増体量が改善しB-C. perfringens

*

N.D.

N.D.

0dA-C. perfringens

7d0dB-䉰䊦䊝䊈䊤*

6007dEC-12 は、ヒト用の健康食品として既に市販されている製品で、便通改12善効果7)、リステリア感染
4082040N.D. N.D.
0d07d予 防 効 果 8)、腸 管 内 ビ
フィズス菌増殖効果9) が

N.D.

N.D.
0d7dC-ṁⴊᕈᄢ⣺⩶B-䊨䉺䉡䉟䊦䉴

3012208104

あ る。こ れ ら の 効 果 は、この製品が殺菌菌体であるため他の生菌製剤と違い、腸管の免疫を活性化させた結果起こっていると 考 え ら れ て い る8)。一方で、豚では浮腫病予防

00d07d効果が認められているこN.D. N.D.と が 報 告 さ れ て い る2)。

0d7d

今回の試験では、この時C-䊨䉺䉡䉟䊦䉴

B-䉮䉪䉲䉳䉡䊛

期に発生する下痢の全て4045の病原因子を測定してい30ないため、どの病原因子30に対して予防効果があっ

2015

10
00d07dたのかを断定することは

N.D.
0d7d䂔䈲ኻᾖ⟲䉕䋬䂓䈲EC-12ᛩਈ⟲䉕⴫䈜䇯
Aㄘ႐䈲䋬䉴䊪䊑䈪䈱ណ᧚䈱䈢䉄ṁⴊᕈᄢ⣺⩶䋬C. perfringens෸䈶䉰䊦䊝䊈䊤䈱ᬌᩏ䈱䉂ⴕ䈦䈢䇯䉰䊦䊝䊈䊤䈲ᬌ಴䈘䉏䈭䈎䈦䈢䇯
Bㄘ႐䈲䋬ṁⴊᕈᄢ⣺⩶䋬B. hyodysenteriae෸䈶L. intracellaris䈲ᬌ಴䈘䉏䈭䈎䈦䈢䇯Cㄘ႐䈲䋬C. perfringens䋬䉰䊦䊝䊈䊤䋬B. hyodysenteriae䋬L. intracellaris෸䈶䉮䉪䉲䉳䉡䊛䈲ᬌ಴䈘䉏䈭䈎䈦䈢䇯*p<0.05䉕᦭ᗧᏅ᦭䉍䈫䈚䈢䇯

図３

糞便中の病原因子検査結果できない。しかし、本試
験の２農場で EC-12 投与によって陽性率が低値を示した溶血性大腸菌及びロタウイルスは、少なくとも感染が予防された又は治療された可能性が考

ルス陽性率は投与開始後７日に低値を示した。コクシえられた（図３）。勝田ら10) は、ロタウイルス及び病ジウム陽性率に顕著な変化が認められなかった。

原性大腸菌がほ乳期又は離乳期下痢から最も高率で検Ｃ農場では、溶血性大腸菌及びロタウイルスが糞便出されたとしていることから、EC-12 は多くの養豚場中から検出された。溶血性大腸菌及びロタウイルス陽で、ほ乳期及び離乳期子豚の下痢に効果があることが性率は、投与開始後７日に EC-12 投与で対照群よりも示唆された。

低値を示した。

EC-12 投与による下痢症の改善効果は、作用機序は未だ不明なままであるが、実験動物を用いた実験からまとめ

腸管の IL-12、TNF-αなどのサイトカイン産生亢進8)、ほ乳期及び離乳期に下痢が頻発していた３農場の罹および鶏ヒナの盲腸内 IgA 濃度の亢進11) などの報告が患豚に、殺菌乳酸菌体 EC-12 を投与したところ、糞便ある。これらの報告のように、豚でも腸管免疫を活性豚病会報No.48

200623化させて感染防御を促している可能性は十分に考えら  , weakly beta-haemo-れる。今後、EC-12 投与による下痢予防効果の作用機

lytic intestinal spirochaetes,  , and序については更なる検討が必要である。

haemolytic 



 from swine herds withand without diarrhoea among growing pigs. Vet.

謝辞

Microbiol., 62: 59-72.

本試験を遂行するにあたり、ご協力頂いた養豚農家の方々、病性鑑定を実施して頂いた株式会社京都動物検査センターの林純子、和田直子氏、及び体重測定及６） 平詔亨ら（1995）家畜臨床寄生虫アトラス。チクサン出版社、東京。
７） Tsukahara et al. (2005) Effect of a cell prepara-

び臨床観察をお手伝い頂いた同センターの内海恭太氏

tion of   strain EC-12 on digestaに深謝いたします。

flow and recovery from constipation in a pig modeland human subjects. Microb. Ecol. Health Dis., 17:

引用文献

107-113.

１） 小林秀樹（2004）WHO 報告書−デンマークにお８） Kuramoto et al. (2004) The effect of the heat-

ける成長促進剤としての抗菌性飼料添加物中止の影

killed Enterococci, EC-12, on a host defense mecha-

響についてー。豚病研報、No.45:12-48．

nism in mice after infection with ２） Tsukahara et al. (2004)   cellpreparation (EC-12) significantly alleviating diar-






. J. New Rem. & Clin., 53: 298 - 308.
９） Terada et al. (2004) Effects of the consumption ofrhea diseases in nursing piglets may replaceheat-killed 








  EC-12 preparation

antimicrobials. Reprod. Nutr. Dev., 44: S49.

on microbiota and metabolic activity of the feces in３） Tsukahara et al. (2005) Experimental infection ofhealthy adults. Microb. Ecol. Health Dis. 16: 188-194.

enterotoxemic  associated with por-１０） 勝田賢ら（2005）子豚下痢便からの病原微生物のcine edema disease and its pathologic characteris-検出成績。第 68 回日本豚病研究会研究集会要旨集

tics in the intestine. J. Vet. Med. Sci., 67: 1169-1173.

１１） Sakai et al. (2006) Cell preparation of ４） Tsukahara and Ushida (2001) Organic acid pro-
strain EC-12 prevents vancomycin-resis-

files in feces of pigs with pathogenic or non-patho-tant enterococci colonization in the cecum of newly

genic diarrhea. J. Vet. Med. Sci., 63: 1351-1354.

hatched chicks. Poultry Sci., in press.

５） Moller et al. (1998) Detection of  