信州医誌，65⑸：267～331，2017

信州大学において審査された医学博士論文要旨
氏
名（所属教室）

学位授与
番
号

授与年月日

博

士

論

文

名

学位審査委員主査

副査

唐 澤 未 佳 甲第1057号（人体構造学）29. 3.31 Effect of graded nerve pressure injuries on 加 藤 博 之motor function（圧迫による神経損傷の程度と運動機能の関係）

山田充彦
多田
剛

楊
沐 甲第1058号（加齢生物学）28. 9.30 Serum amyloid A expression in the breast 伊 藤 研 一
cancer tissue is associated with poor progno­sis（乳がん組織での血清アミロイドＡの発現は予後不良に関連する）

中山
淳
菅野祐幸

山田
靖 甲第1059号
（産科婦人
科学）

28. 3.31 Lipocalin 2 attenuates iron-related oxidative 中 山
stress and prolongs the survival of ovarian
clear cell carcinoma cells by up-regulating
the CD44 variant（リポカリン２は変異型 CD44の発現亢進を介して卵巣明細胞癌細胞の鉄関連
酸化ストレスを減弱し，生存を促進する）

淳

田中榮司
石塚
修

下 平 浩 揮 甲第1060号（運動機能学）28. 3.31 Remnant-Preserving Tibial Tunnel Position­ 角 谷 眞 澄
ing Using Anatomic Landmarks in DoubleBundle Anterior Cruciate Ligament Recon­
struction（二重束 ACL 再建術における解剖学的ランドマークを用いたレムナント温存脛骨骨
孔作成法）

本郷一博
栗田
浩

田中
愛 甲第1061号（循環病態学）28. 3.31 The endothelial adrenomedullin-RAMP2 sys­ 菅 野 祐 幸
tem regulates vascular integrity and sup­presses tumor metastasis（内皮アドレノメデュ
リン―RAMP2系は血管恒常性を維持し，腫瘍転移を抑制する）

多田
剛
田渕克彦

丸 山 康 弘 甲第1062号（内科学⑵）

29. 3.31 Clinicopathological characterisation of duode­ 中 山
nal adenocarcinoma with high CD44 variant 9
expression（十二指腸癌における CD44v9陽性細胞の臨床病理学的特徴）

淳

宮川眞一
伊藤研一

道傳
整 甲第1063号（内科学⑶）

29. 3.31 Clinico-Radiological Characteristics and Patho­ 池 田 修 一
logical Diagnosis of Cerebral Amyloid Angiop­
athy-Related Intracerebral Hemorrhage（ 脳アミロイド血管症関連脳内出血の臨床的・放射線学的特徴と病理学的診断に関する検討）

中山
淳
樋口京一

封
玉 瑶 甲第1064号（代謝制御学）28. 3.31

樋口京一
菅野祐幸

No. 5, 2017

Activation of PPARα by Fatty Acid Accumu­ 山 田 充 彦
lation Enhances Fatty Acid Degradation and
Sulfatide Synthesis（脂肪酸蓄積による PPARα
活性化は脂肪酸分解とスルファチド合成を促進
する）

267

審査学位論文要旨

井 戸 芳 和 甲第1065号（運動機能学）28. 9.30 Postoperative improvement in DASH score, 川眞田樹人 野見山哲生
clinical findings, and nerve conduction velocity
池田修一
in patients with cubital tunnel syndrome（肘部管症候群患者における DASH スコア，身体所見，および神経伝導速度の術後回復）

市川
雪 甲第1066号（内科学⑵）

27. 9.30

Serum Wisteria floribunda agglutinin-positive 本 田 孝 行
human Mac-2 binding protein may predict
liver fibrosis and progression to hepatocellular
carcinoma in patients with chronic hepatitis B
virus infection（血清中の WFA 陽性 Mac-2結合タンパクはＢ型肝炎ウイルス慢性感染患者において，肝線維化および肝細胞癌の発症予測に有用な可能性がある）

竹下敏一
宮川眞一

岡田なぎさ 甲第1067号（分子腫瘍学）28. 3.31

Novel role of ASC as a regulator of metastatic 竹 下 敏 一
phenotype（癌細胞の転移形質制御におけるASC の役割）

伊藤研一
石塚
修

小 林 千 夏 甲第1068号（内科学⑶）

28. 3.31 Increasing Incidence and Age at Onset of 池 田 修 一
Amyotrophic Lateral Sclerosis in Nagano Pre­
fecture, Japan（長野県における ALS の発症者数の増加と発症年齢の高齢化）

加藤博之
中山
淳

黒 岩 正 文 甲第1069号
（脳神経
外科学）

29. 3.31 Morphological analysis of regenerated bulbar 多 田
fibers in relation to neonatal olfaction（新生児ラットの嗅覚機能発現に必要な嗅球由来の再生神経線維の形態解析）

剛

本郷一博
山田充彦

田
洋 洋 甲第1070号（代謝制御学）28. 3.31 Age-dependent PPARα activation induces 山 田 充 彦
hepatic sulfatide accumulation in transgenic
mice carrying the hepatitis C virus core gene
（HCV コア遺伝子トランスジェニックマウスにおけるペルオキシソーム増殖剤活性化受容体α型の加齢依存的活性化は肝臓におけるスルファ
チド蓄積を誘発する）

樋口京一
佐々木克典

大 場 崇 旦 甲第1071号（外科学⑵）

29. 3.31

ABCB1 and ABCC11 confer resistance to山田充彦
eribulin in breast cancer cell lines（ABCB1，
ABCC11は乳癌細胞のエリブリン耐性に関与す
る）

大森
栄
小泉知展

LE THANH 甲第1072号
NHA
UYEN（小児医学）

28. 3.31

Aberrant methylation of protocadherin 17 and 伊 藤 研 一
its prognostic value in pediatric acute lympho­
blastic leukemia（小児急性リンパ性白血病におけるプロトカドヘリン17遺伝子の異常メチル化と予後因子としての有用性の検討）

小泉知展
竹下敏一

浅 野 純 平 甲第1073号（内科学⑵）

29. 3.31 Association Between Immunoglobulin G4- 田 中 榮 司
related Disease and Malignancy within 12
Years after Diagnosis : An Analysis afterLongterm Followup（IgG4関連疾患の診断12
年以内における悪性腫瘍との関連性：長期経過
での解析）

宮川眞一
小泉知展

268

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

金 谷 康 平 甲第1074号
（脳神経
外科学）

29. 3.31 High expression of ADAM10 predicts a poor 多 田
prognosis for patients with glioblastoma（ADAM10高発現は膠芽腫予後不良因子となる）

林
清 永 甲第1075号
（歯科口腔
外科学）

剛

菅野祐幸
小泉知展

28. 3.31

Relationship between the quantity of oral
本田孝行
Candida and immunological vigor（口腔カンジダ菌数と免疫力との関連性）

竹下敏一
小泉知展

原田美貴子 甲第1076号（内科学⑸）

28. 3.31

Importance of cystatin C and uric acid levels 駒 津 光 久
in the association of cardiometabolic risk fac­
tors in Japanese junior high school students（日本人中学生の心血管代謝危険因子との関連における血清シスタチンＣおよび尿酸値の重要
性）

今村
浩
桑原宏一郎

小川
雄 甲第1077号
（スポーツ
医科学）

29. 3.31 Effects of postural change from supine to 川眞田樹人 山 田 充 彦
head-up tilt on the skin sympathetic nerve
桑原宏一郎
activity component synchronised with the
cardiac cycle in warmed men.（ヒト暑熱負荷における30°ヘッドアップティルトが皮膚交感
神経活動・心周期同期成分に与える影響）

二 木 俊 匡 甲第1078号（運動機能学）28. 3.31 Early Postoperative Magnetic Resonance Im­ 川眞田樹人 本 郷 一 博
aging in Detecting Radicular Pain After Lum­角谷眞澄
bar Decompression Surgery
Retrospective Study of the Relationship Be­
tween Dural Sac Cross-sectional Area andPostoperative Radicular Pain（腰椎除圧術後の神経根痛を検出する術後早期 MRI 画像硬膜
管横断面積と術後神経根通の関連についての後ろ向き研究）

小 沢 岳 澄 甲第1079号（画像医学）

28. 3.31

Dosimetric Comparisons of Volumetric Modu­ 小 泉 知 展
lated Arc Therapy with Three-Dimensional
Conformal Radiation Therapy for Locally Ad­
vanced Non-Small Cell Lung Cancer（局所進行非小細胞肺癌に対する強度変調回転放射線治療と三次元原体放射線治療の線量分布比較）

花岡正幸
伊藤研一

浅 香 志 穂 甲第1080号
（病態解析
診断学）

29. 3.31

A novel, rapid point-of-care test for lung can­ 花 岡 正 幸
cer patients to detect epidermal growth factor
receptor gene mutations by using real-time
droplet-PCR and fresh liquid cytology speci­mens（肺癌患者における上皮成長因子受容体
遺伝子変異検出のための液滴型高速 PCR 装置と新鮮液状細胞診検体を用いた新規迅速ポイン
ト・オブ・ケア・テスト）

小泉知展
栗田
浩

安 藤 大 史 甲第1081号
（産科婦人
科学）

29. 3.31 Usefulness of a management protocol for pa­ 菅 野 祐 幸tients with cervical multicystic lesions : A ret­rospective analysis of 94 cases and the signifi­
cance of GNAS mutation（子宮頸部多嚢胞性病変に対する当科の対応と転帰：94例の後方視的検討と GNAS 遺伝子変異の意義）

本田孝行
伊藤研一

No. 5, 2017269

審査学位論文要旨

劉甜 甲第1082号（循環病態学）29. 3.31 Endogenous calcitonin gene-related peptide 菅 野 祐 幸
regulates lipid metabolism and energy homeo­
stasis in male mice（内因性カルシトニン遺伝
子関連ペプチドは，雄マウスの脂質代謝およびエネルギー恒常性を調節する）

多田
剛
田渕克彦

池川香代子 甲第1083号（内科学⑴）

28. 3.31 Lack of association of serotonin 2A receptor 本 田 孝 行
gene in Japanese patients with obstructive
sleep apnea syndrome（日本人における閉塞性
睡眠時無呼吸症候群とセロトニン２Ａレセプター
遺伝子の関連）

宇佐美真一
野見山哲生

堀 内 一 樹 甲第1084号
（病態解析
診断学）

29. 3.31

Addition of thymidine to culture media for ac­ 竹 下 敏 一
curate examination of thymidine-dependent
small-colony variants of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus : A pilot study（メチシリン耐性 Staphylococcus aureus チミジン依存性変異株の正確な検査を行うために培地へチミジンを添加する試験的研究）

中沢洋三
石塚
修

羨
鮮 甲第1085号（循環病態学）29. 3.31 Vasoprotective activities of the adrenomedul­lin-RAMP2 system in endothelial cells（血管内皮細胞のアドレノメデュリン―RAMP2系による血管保護作用）

菅野祐幸

多田
剛
田渕克彦

今井
章 甲第1086号（循環病態学）29. 3.31 Adrenomedullin suppresses VEGF-induced 菅 野 祐 幸
vascular hyperpermeability and inflammationin retinopathy（アドレノメデュリンは，網膜症において，VEGF により誘発される血管透過性亢進と炎症を抑制する）

多田
剛
田渕克彦

吉 長 恒 明 甲第1087号（内科学⑶）

29. 3.31 Marked biochemical difference in amyloid 宮 川 眞 一
proportion between intra- and extraocular tis­sues in a liver-transplanted patient with he­reditary ATTR amyloidosis（肝移植後 FAP 患
者の眼内・眼外沈着アミロイドにおけるアミロ
イド蛋白組成の顕著な生化学的相違）

中山
淳
村田敏規

重 藤 翔 平 甲第1088号
（病態解析
診断学）

29. 3.31

Rapid diagnosis of acute promyelocytic leuke­
mia with the PML-RARA fusion gene using a
combination of droplet-reverse transcriptionpolymerase chain reaction and instant-quality
fluorescence in situ hybridization（液滴型高速 PCR と instant-quality FISH を用いた PMLRARA 融合遺伝子を伴う急性前骨髄性白血病の
迅速診断）

中沢洋三

石塚
修
竹下敏一

北 畠 央 之 甲第1089号（代謝制御学）29. 3.31 Association between endotoxemia and histo­
logical features of nonalcoholic fatty liver dis­ease（非アルコール性脂肪性肝疾患における組織像とエンドトキシン血症との関連）

本田孝行

中山
淳
駒津光久

270

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

新 井 慎 平 甲第1090号
（病態解析
診断学）

29. 3.31 The fibrous form of intracellular inclusion 樋 口 京 一
bodies in recombinant variant fibrinogen-pro­ducing cells is specific to the hepatic fibri­
nogen storage disease-inducible variant fibri­
nogen（異常フィブリノゲン産生細胞における繊維状の細胞内封入体は，フィブリノゲン蓄積
病を引き起こす異常フィブリノゲンに特異的で
ある）

田中榮司
青山俊文

北 沢 将 人 甲第1091号（分子腫瘍学）28. 3.31

ASC Induces Apoptosis via Activation of Cas­ 小 泉 知 展
pase-9 by Enhancing Gap Junction-MediatedIntercellular Communication（ASC はギャッ
プジャンクションを介した細胞間相互作用によりカスパーゼ９を活性化し，アポトーシスを誘
導する）

塩沢丹里
伊藤研一

佐 藤 勇 樹 甲第1092号（皮膚科学）

28. 3.31

Bach2 Controls Homeostasis of Eosinophils by 竹 下 敏 一
Restricting the Type-2 Helper Function of T
Cells.（転写因子 Bach2によるヘルパーＴ細胞を介した好酸球制御機構の解明）

菅野祐幸
駒津光久

田中
学 甲第1093号（運動機能学）29. 3.31

Physico-Chemical, In Vitro, and In Vivo Eval­ 佐々木克典 栗 田浩
uation of a 3D Unidirectional Porous Hydroxy­
森泉哲次
apatite Scaffold for Bone Regeneration（三次元配向連通孔ハイドロキシアパタイト製骨再生用スキャフォルドの物理化学・生体外・生体内的評価）

永松清志郎 甲第1094号（内科学⑶）

28. 3.31

Prevalence of Fabry Disease and GLA c.196G 福 嶋 義 光＞C Variant in Japanese Stroke Patients（日本人脳卒中患者における Fabry 病および GLA
c.196G＞C 変異の頻度）

樋口京一
多田
剛

張
萌 甲第1095号（外科学⑵）

29. 3.31 The histological characteristics and clinical 小 泉 知 展
outcomes of lung cancer in patients with com­bined pulmonary fibrosis and emphysema（CPFE（気腫合併肺線維症）合併肺癌患者の組織学的特徴及び予後）

栗田
浩
花岡正幸

No. 5, 2017271

審査学位論文要旨

氏（所

学位審査委員

名
属）

学位授与
番
号

松清あゆみ
（保健学専攻
生涯保健
学分野
成人保健
学領域 ）

甲第15号

28. 3.31 Relationship between muscle-tendon length, 木 村 貞 治
range of motion, and resistance to passive
movement in children with normal and in­creased tone（筋過緊張を呈する児と定型発達児における MAS（Modified Ashworth Scale）と５kg の伸張刺激前後での筋・腱長と関節可動域の変化との関連性）

百瀬公人
横川吉晴

阿部裕一
（保健学専攻
生涯保健
学分野
成人保健
学領域 ）

甲第16号

29. 3.20

Availability, usage, and factors affecting usage 横 川 吉 晴
of electrophysical agents by physical thera­
pists : a regional cross-sectional survey（物理
療法機器の保有状況，使用状況，および使用に影響を与える要因：理学療法士に対する調査研
究）

木村貞治
百瀬公人

小宅一彰
（保健学専攻
生涯保健
学分野
成人保健
学領域 ）

甲第17号

29. 3.20 Validity of gait asymmetry estimation by us­ 木 村 貞 治
ing an accelerometer in individuals with hemi­paretic stroke（脳卒中片麻痺患者における小型無線加速度計を用いた歩行非対称性評価の妥
当性）GOH AH
CHENG
横川吉晴

授与年月日

博

士

論

文

名

主

査

副

査

Effect of graded nerve pressure injuries on motor function（圧迫による神経損傷の程度と運動機能の関係）唐澤（論文の内容の要旨）【目的】成熟ラットの坐骨神経に強い圧迫損傷を加え

未

佳

価した。
［2］様々な程度の神経損傷と運動機能ると下肢の運動機能は高度に障害されるが，時間の経

下肢の運動機能により大きな影響を与えることが確

過とともに軸索が再生し運動機能は徐々に回復する。

認された総腓骨神経に，杉田クリップまたは止血ク

受傷後の運動機能障害は神経損傷程度に影響されるとリップを用いて圧迫損傷を加えた。損傷の程度は圧迫考えられることから，損傷の程度を変えることによっ

時間を変えることによって調節し，control 群は神経て，残存する軸索数と運動機能の関係について明らか

露出のみとした。損傷の48時間後に SSI による運動にすることを目的として本研究を行った。

機能評価および傾斜歩行試験を行った。傾斜歩行試験【方法】

では30度と45度の傾斜での歩行が可能かどうかを評価［1］脛骨神経と総腓骨神経の切除による運動機能へした。その後灌流固定を行い，総腓骨神経支配筋であの影響る前脛骨筋を採取後，縦断で連続凍結切片（50μm

坐骨神経は膝窩の近位で脛骨神経と総腓骨神経に分厚，600μm 間隔）を作成した。切片は軸索終末を検岐する。成熟ラットの脛骨神経または総腓骨神経を１出するための抗βⅢ-tubulin 抗体とアセチルコリン受

cm の幅で切除し，損傷の24時間後と48時間後に下肢容体を検出するためのα-bungarotoxin を用いた蛍光の運動機能評価を行った。運動機能は採取した foot­

二重染色を行い，蛍光顕微鏡下で神経筋接合部におけprint から static sciatic index（SSI）値を算出して評るβⅢ-tubulin 陽性軸索終末がα-bungarotoxin 陽性

272

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

アセチルコリン受容体に占める割合（陽性率）を計測

以上の結果から，形態的かつ機能的に圧迫損傷を免した。

れた残存する軸索数と運動機能の関係性が明らかにさ

【結果】

れた。

［1］運動機能への影響（論文審査の結果の要旨）

脛骨神経切除ラットの SSI 値は24時間後で－34.2，

本研究で唐澤は，ラットにおける坐骨神経への損傷－35.9，48時間後で－32.2，－47.1でいずれも軽度なの程度が下肢の運動機能に与える影響に関して，SSI

運動機能障害が認められた。一方，総腓骨神経切除で評価される運動機能に対する脛骨神経切除と総腓骨

ラットの SSI 値は24時間後，48時間後ともに－100.0，

神経切除の影響の違い，損傷後に残存する軸索数，軸－100.0で高度な運動機能障害が生じていた。

索残存率と運動機能の関係を明らかにすることを目的［2］神経損傷程度と SSI 値の関係とし，神経切除後の SSI による運動機能評価，およControl 群の SSI 値はすべて－20以上で運動機能はび様々な程度の圧迫損傷後に残存する軸索数の計測と正常であった。Control 群の神経筋接合部における陽SSI・傾斜歩行による２種類の運動機能評価を行った。

性率（βⅢ-tubulin 陽性軸索／α-bungarotoxin 陽性

その結果，唐澤は次の結果を得た。

受容体）は91.9 ％±2.7 ％であった。神経損傷群は

１．運動機能への影響に関しては，脛骨神経切除ラッ

SSI 値が－20以上の機能正常群，SSI 値が－20～－50

トの SSI 値は24時間後で－34.2，－35.9，48時間の軽度機能障害群，SSI 値が－50～－80の中等度機

後で－32.2，－47.1でいずれも軽度な運動機能障害

能障害群，SSI 値が－80以下の高度機能障害群に分類が認められた。一方，総腓骨神経切除ラットの SSI

さ れ た 。Control 群 の 陽 性 率 を 100 と し た と き の 相

値は24時間後，48時間後ともに－100.0，－100.0で対値（軸索残存率）は，機能正常群で67.6 ％±14.2 ％高度な運動機能障害が生じていたことから，SSI で（36.5 ％～88.7 ％），軽度機能障害群で58.6 ％±14.8 ％評価される運動機能には総腓骨神経の損傷がより大（45.9 ％～81.7 ％）， 中等度機能障害群で51.2 ％±きな影響を与えることが明らかとなった。

13.6 ％（35.7 ％～61.2 ％），高度機能障害群で10.2 ％２．神経損傷程度と SSI 値の関係については，con­±4.1 ％（3.7 ％～14.7 ％）であり，SSI 値と軸索残trol 群の SSI 値はすべて－20以上で運動機能は正常

存率には正の相関が認められた（rs＝0.68，p＜0.01）。

であった。Control 群の神経筋接合部における陽性［3］神経損傷程度と傾斜歩行の関係率（βⅢ-tubulin 陽性軸索／α-bungarotoxin 陽性

Control 群はすべて30度と45度での傾斜歩行が可受容体）は91.9 ％±2.7 ％であった。神経損傷群は能であった。神経損傷群は傾斜歩行可能群と不可能群

SSI 値が－20以上の機能正常群，SSI 値が－20～－50に分類された。軸索残存率は，30度の傾斜歩行可能の軽度機能障害群，SSI 値が－50～－80の中等度

群で62.7 ％±16.9 ％（14.7 ％～88.7 ％），不可能群で機能障害群，SSI 値が－80以下の高度機能障害群

14.4 ％±12.4 ％（3.7 ％～35.7 ％）であり，45度の傾斜に分類された。Control 群の陽性率を100としたと歩行可能群で66.2 ％±13.6 ％（39.8 ％～88.7 ％），きの相対値（軸索残存率）は，機能正常群で67.6 ％不 可 能 群 で 26.8 ％±21.6 ％（ 3.7 ％ ～ 62.7 ％ ） で±14.2 ％（36.5 ％～88.7 ％），軽度機能障害群であった。30度と45度のどちらにおいても，傾斜歩行可

58.6 ％±14.8 ％（45.9 ％～81.7 ％），中等度機能能群と不可能群の軸索残存率には有意差が認められた障害群で51.2 ％±13.6 ％（35.7 ％～61.2 ％），高（p＜0.01）。

度機能障害群で10.2 ％±4.1 ％（3.7 ％～14.7 ％）【結論】であり，SSI 値と軸索残存率には正の相関が認めら［1］SSI で評価される下肢の運動機能には脛骨神経

れ（rs＝0.68，p＜0.01），神経損傷後に正常機能をと総腓骨神経のどちらも関係するが，神経切除実験か有するラットではおよそ40 ％以上の軸索が残存しら総腓骨神経の損傷がより大きな影響を与えることがていることが明らかとなった。

明らかとなった。

３．神経損傷程度と傾斜歩行の関係については，con­［2］下肢の運動機能は総腓骨神経の損傷程度と相関

trol 群はすべて30度と45度での傾斜歩行が可能ですることが確認された。また，総腓骨神経が損傷されあった。神経損傷群は傾斜歩行可能群と不可能群にても約40 ％以上の軸索終末が残存していれば正常な分類された。軸索残存率は，30度の傾斜歩行可能群

運動機能を維持できることが明らかとなった。

で62.7 ％±16.9 ％（14.7 ％～88.7 ％），不可能群

No. 5, 2017273

審査学位論文要旨

で14.4 ％±12.4 ％（3.7 ％～35.7 ％）であり，45以上により，ラットにおける坐骨神経損傷後の下肢度の傾斜歩行可能群で66.2 ％±13.6 ％（39.8 ％～の運動機能には総腓骨神経がより大きな影響を与える

88.7 ％）， 不可能群で26.8 ％±21.6 ％（3.7 ％～ことが明らかにされた。また，損傷程度の違いによる

62.7 ％）であった。30度と45度のどちらにおいて

運動機能障害と軸索残存率の関係からおよそ40 ％以も，傾斜歩行可能群と不可能群の軸索残存率には有上の軸索終末が残存していれば正常な運動機能を維持

意差が認められ（ｐ＜0.01），神経損傷後に傾斜歩できることが明らかにされ，形態的かつ機能的に圧迫行可能なラットではおよそ40 ％以上の軸索終末が損傷を免れた残存する軸索数と運動機能の関係性が証残存していることが確認された。

明され，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Serum amyloid A expression in the breast cancer tissue is associated with poor prognosis（乳がん組織での血清アミロイドＡの発現は予後不良に関連する）
楊沐

（論文の内容の要旨）された。がん細胞での SAA タンパク質の発現程度は【背景と目的】慢性炎症に伴う AA アミロイドーシス

TAM での SAA 発現程度と高度に有意な相関を示しの血中前駆タンパク質である Serum amyloid A（SAA）

た（rs＝0.603，p＜0.001）2）FISH 解析では，SAA

は炎症刺激で増加する，最も増大率の高い急性期タンmRNA は主に TAM で発現されており，がん細胞でパク質である。主に肝細胞で産生されるが，血管内皮の陽性率は有意に低いことが観察された（76 ％ TAM細胞や白血球でも産生され，特にマクロファージは中vs 12 ％ がん細胞：p＜0.001）。IHC でがん細胞が心的な肝臓外産生細胞である。SAA が高値を示す病

SAA 陽性の症例でも FISH では主に TAM に mRNA

態は多数あるが，各種のがん（食道，肺，膵臓，卵巣が発現していた。また TAM の SAA mRNA の発現など）での発現も報告されている。しかし，SAA の程度は IHC での SAA 発現程度と相関していた。こ乳がん組織での発現，病理学的分析及び予後との関連

れらの結果から，がん組織で検出された SAA は肝臓については未だ明らかにされていない。この研究ではから産生されたものだけではなく，がん組織微小環境

乳がん患者の病理切片を用いて SAA の発現と予後とにある TAM が SAA の主な産生源であることが明らの関連を明らかにすることを目的とした。

かになった。微小環境での TAM による SAA の過剰【材料および方法】中国天津医科大学腫瘤医院で2011

産生が，がん細胞の SAA タンパク質の発現程度の増年に浸潤性乳がんと診断された患者208症例の乳がん加に関連すると考えられた。3）統計解析ではがん細組織切片を用いて，SAA1と SAA2を認識できる抗体

胞及び TAM の IHC での SAA 陽性レベルと，リンによる免疫組織染色（IHC）でタンパク質発現レベル

パ管浸潤及びリンパ節転移が有意に相関していた。この評価を行った。また，連続切片を用いて腫瘍部分でれらの指標に加えて，TAM の SAA 陽性率はより大の腫瘍関連マクロファージ（TAM） 同定のためにきな腫瘍サイズ，高い組織学的異型度，エストロゲン

CD68染色を行った。2）SAA の主な産生細胞の分布

レセプター及びプロゲステロンレセプターの陰性度，を明らかにするために，208症例中の25症例の連続切HER-2の過剰発現とも相関していた。SAA が乳がん

片 を 用 い て ， Fluorescent in situ hybridization

組織中の TAM によって過剰産生され，がんの進行（FISH）を行った。SAA1と SAA2の mRNA を同時及び転移をもたらす新たな可能性が示唆された。また，に認識できるプローブを使用した。3）がん細胞およ

TAM の SAA 陽性率は，単独で不良な無再発生存期

び TAM の SAA タンパク質発現レベルと患者の生存間と相関することが，多変量回帰モデルで示された。

率及び臨床情報との関連を統計学的に解析した。

これらの結果から SAA 陽性の TAM は乳がんの不良【結果】1）SAA タンパク質は，がん細胞では47.6 ％予後因子になる可能性が示唆された。

（ 99/208 ） の 症 例で，TAM では62.5 ％（130/208 ）【結論】以上の結果から TAM が乳がんを含む微小環の症例で，IHC 陽性であった。さらに CD68染色によ境において，SAA の最も重要で主要な産生細胞でありがん組織微小環境でのマクロファージの浸潤が確認る，という新たな知見が得られた。さらに SAA 陽性

274

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨の TAM が患者の無再発生存率の低下に関係していvs 12 ％：p＜0.001）。IHC でがん細胞が SAA 陽性

ることが明らかになった。これらの知見から，SAAの症例でも，FISH では主に TAM に mRNA が発

陽性 TAM は，乳がん患者の予後不良や再発を予測現していた。また TAM の SAA mRNA の発現程するマーカー候補であること，あるいは，乳がん組織

度は IHC での SAA 発現程度と相関していた。

での SAA の発現抑制が治療のターゲットとなる可能

３．統計解析では，がん細胞及び TAM の IHC でのSAA 陽性レベルと，リンパ管浸潤及びリンパ節転性が示唆された。
（論文審査の結果の要旨）

移が有意に相関していた。これらの指標に加えて，慢性炎症に伴う AA アミロイドーシスの血中前駆TAM の SAA 陽性率は，腫瘍サイズ，組織学的異タンパク質である Serum amyloid A（SAA）は炎症

型度，エストロゲンレセプター及びプロゲステロン

刺激で増加する，最も増大率の高い急性期タンパク質

レセプターの陰性度，HER-2の過剰発現とも相関である。SAA は主に肝細胞で産生されるほか，マクしていた。また，TAM の SAA 陽性率は単独で，ロファージを中心に白血球などでも産出される。近年，不良な無再発生存期間と相関することが，多変量回

SAA が高値を示す病態として，各種のがん（食道，帰モデルで示された。

肺，膵臓，卵巣など）での発現も報告され，予後との以上の結果により，急性期タンパク質である SAA
が乳がん組織中の TAM によって過剰産生され，が関連が示唆されている。
これらの知見に基づき，乳がん患者（中国天津医科んの発達及び転移，さらに再発を引き起こす可能性が大学腫瘤医院の208症例）の病理切片を用いて，SAA

明らかになった。また，SAA 陽性 TAM は，乳がんの乳がん組織での発現，病理学的分析及び予後との関患者の予後不良や再発を予測するマーカー候補であり，連について解析した。

乳がん組織での SAA の発現抑制が治療のターゲット

その結果，楊となる可能性が示された。

沐は次の結論を得た。

１．免疫組織染色（IHC）解析では，SAA タンパク

近年，炎症ががんの発生，進行や転移に関するとい質の発現は，がん細胞よりも腫瘍関連マクロファーう報告がされてきている。がんの進行・転移のメカニジ（TAM）での陽性症例が多かった（47.6 ％ vsズムの解明と再発予防のためには，急性期タンパク質62.5 ％）。CD68染色により TAM のがん組織へのであり，コレステロールの運搬体でもある SAA の作浸潤が確認された。がん細胞での SAA タンパク質

用メカニズムを明らかにすることは重要である。

の発現程度は TAM での SAA 発現程度と高度に有これらの点から，楊 沐の研究成果は乳がんの基礎医学および臨床研究として，充分に意義があることと意な相関を示した（rs＝0603，p＜0.001）。
２．Fluorescent in situ hybridization（FISH）解析
では，SAA mRNA は主に TAM で発現され，がん細胞では陽性率が有意に低いことが観察された（76 ％考えられた。
よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Lipocalin 2 attenuates iron-related oxidative stress and prolongs the survival of ovarian
clear cell carcinoma cells by up-regulating the CD44 variant（リポカリン２は変異型 CD44の発現亢進を介して卵巣明細胞癌細胞の鉄関連酸化ストレスを減弱し，生存を促進する）
山

田靖（論文の内容の要旨）されている。 すなわち， ヘモグロビンから遊離し【目的】子宮内膜症は子宮外に子宮内膜が増殖する疾OEM 内に豊富に蓄積した鉄イオンは，フェントン反患で，卵巣の子宮内膜症では内部に血液が貯留した子応から活性酸素種（ROS：reactive oxygen species）

宮 内 膜 症 性 嚢 胞（ OEM ） が し ば し ば 形 成 さ れ る 。

を発生させ，酸化ストレスを誘導することで発癌に寄OEM の約0.7 ％は癌化し明細胞癌（CCC）や類内膜

与すると考えられている。

癌（EC）が発生するが，特に日本人では，抗癌剤抵Lipocalin 2（LCN2）は鉄輸送蛋白の１つで，炎症抗性で予後不良である CCC の発生頻度が高いことがや種々の癌で高発現が報告されており，細胞内鉄濃度問題である。OEM の癌化では鉄イオンの関与が注目の調節から様々な機能を発現すると考えられている。

No. 5, 2017275

審査学位論文要旨

LCN2はその機能上と OEM との関連が強く示唆され

ROS の産生抑制機序として細胞内の GSH 濃度に注たため，OEM や卵巣癌における LCN2の関与を免目した。ES2，TOV21G 細胞とも LCN2発現増強によ疫組織染色にて検討したところ，LCN2は OEM やり GSH 濃 度 が 上 昇 し ，RMG1 ，OVISE 細 胞 で はOEM から発生する CCC や EC において高発現し，LCN2発現抑制により GSH 濃度が低下することが判

LCN2高発現卵巣癌症例は有意に予後不良であった。

明した。そこで GSH 産生促進に作用する CD44v お

そこで今回我々は，LCN2の機能解析を行うために，

よび xCT の蛋白発現を検討したところ，ES2細胞に卵 巣 CCC 細 胞 株 を 用 い て LCN2 と 特 に 鉄 イ オ ン ，

おいて rLCN2添加および LCN2強制発現により発現

ROS や酸化ストレスとの関係を検討した。

が亢進し，また RMG1細胞においては LCN2発現抑制【 方 法 】 卵 巣 CCC 細 胞 株 で あ る ES2 ，TOV21G ，により発現が低下し，rLCN2添加により発現が回復

RMG1，OVISE を用いた。LCN2低発現株である ES2，した。この結果から LCN2は CD44v と xCT の発現亢

TOV21G に LCN2 cDNA を導入して LCN2強制発現

進を介して細胞内 GSH 濃度を上昇させ，これが ROS

株（ES2-LCN2，TOV21G-LCN2）を樹立した。LCN2の産生を低下させたと考えられた。

高 発 現 株 で あ る RMG1 ，OVISE に 特 異 的 shRNA ，【結論】LCN2は卵巣 CCC 細胞において細胞内鉄濃度

siRNA 導入により LCN2発現抑制（RMG1-shRNA，を上昇させたが ROS 産生はむしろ抑制した。LCN2はOVISE-siRNA）を行った。細胞内の鉄濃度をカルセ

CD44v および xCT の発現上昇を介して細胞内 GSH

イン蛍光で，細胞内の ROS を DCFH-DA 蛍光で，酸濃度を上昇させ ROS 産生を抑制することにより，酸化ストレスを8OHdG 染色，apoptosis を flowcytome­

化ストレス耐性増強や抗癌剤耐性増強に関与すると考try，酸化ストレス耐性，抗癌剤耐性を WST1 assay

えられた。

により評価した。また LCN2による各種の抗酸化酵素（論文審査の結果の要旨）

発現を real-time RT-PCR，Western blot（WB）で比子宮内膜症性嚢胞（OEM）の約0.7 ％は癌化し明較した。さらに抗酸化物質であるグルタチオン（GSH）

細胞癌（CCC）や類内膜癌（EC）が発生する。OEM

量を Luciferin-NT を用いた発光アッセイで評価し，の癌化では，ヘモグロビンから遊離し OEM 内に豊富

CD44 variant isoform（以下 CD44v），xCT 発現を WBに蓄積した鉄イオンが，フェントン反応から活性酸素にて評価した。酸化ストレスとして過酸化水素（H2O2）種（ROS：reactive oxygen species）を発生させ，酸を用いた。

化ストレスを誘導することで発癌に寄与すると考えら【結果】ES2細胞のカルセイン蛍光ではコントロールれている。

細 胞（ ES2-mock ） と 比 べ 遺 伝 子 組 み 換 え LCN2

Lipocalin 2（LCN2）は鉄輸送蛋白の１つで，先行（ rLCN2 ） 添 加 や ES2-LCN2 で は 蛍 光 量 が 減 弱 し ，

実験として OEM や卵巣癌における LCN2の関与を免

LCN2は細胞内鉄濃度を上昇させると考えられた。一疫組織染色にて検討したところ，LCN2は OEM や

方 ROS 産生では，H2O2 添加による DCFH-DA 蛍光OEM から発生する CCC や EC において高発現し，量増加が ES2-mock の3.33倍に対し，rLCN2添加やLCN2高発現卵巣癌症例は有意に予後不良であった。

ES2-LCN2ではそれぞれ1.06倍（P＜0.05），1.25倍そこで今回我々は，LCN2の機能解析を行うために，（P＜0.05）であり，8OHdG 染色でも ES2-mock に比卵 巣 CCC 細 胞 株 を 用 い て LCN2 と 特 に 鉄 イ オ ン ，べ，rLCN2添加や ES2-LCN2で減弱が認められ，予ROS や酸化ストレスとの関係を検討した。

想に反して LCN2は ROS 産生および酸化ストレスを卵 巣 CCC 細 胞 株 に お い て ，LCN2 低 発 現 株 で は軽減すると考えられた。ES2-mock においては H2O2

LCN2 cDNA を導入して LCN2強制発現株を樹立し，による apoptosis の増加を認めたが，ES2-LCN2ではLCN2高発現株では特異的 shRNA，siRNA 導入によ認めなかった。H2O2 添加による酸化ストレスに対す

り LCN2発現抑制を行った。細胞内の鉄濃度をカルセる 耐 性 の WST-1 ア ッ セ イ に よ る 評 価 で は ，ES2-イン蛍光で，細胞内の ROS を DCFH-DA 蛍光で，酸mock に比し ES2-LCN2では耐性の増強を認めた。抗化ストレスを8OHdG 染色，apoptosis を flowcytome­

癌剤（シスプラチン，パクリタキセル）に対しては，try，酸化ストレス耐性，抗癌剤耐性を WST1 assay

ES2細胞と TOV21G 細胞とも LCN2発現増強によりにより評価した。さらに抗酸化物質であるグルタチオ

耐性が増強し，RMG1細胞では LCN2発現抑制によりン（GSH）量を Luciferin-NT を用いた発光アッセイ

耐性が減弱した。

で 評 価 し ，CD44 variant isoform（ 以 下 CD44v ），

276

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

これらの結果より，LCN2は卵巣 CCC 細胞においxCT 発現を WB にて評価した。
その結果，山田 靖は次の結果を得た。

て細胞内鉄濃度を上昇させたが，ROS 産生はむしろ

１．LCN2は細胞内の鉄濃度を上昇させた。

抑制した。LCN2は CD44v および xCT の発現上昇を

２．LCN2は ROS や酸化ストレスを軽減し，酸化ス介して細胞内 GSH 濃度を上昇させることで ROS 産生を抑制し，卵巣 CCC 細胞の酸化ストレス耐性増強

トレスによるアポトーシスを抑制した。
３．LCN2は CD44v，xCT 発現増強を介して，細胞や抗癌剤耐性増強させ，悪性度上昇に関与すると考えられた。よって，主査，副査は一致して本論文を学位

内の GSH 濃度を上昇させた。

論文として価値があるものと認めた。

４．LCN2は酸化ストレスや抗癌剤耐性を増強した。

Remnant-Preserving Tibial Tunnel Positioning Using Anatomic Landmarks in DoubleBundle Anterior Cruciate Ligament Reconstruction（二重束 ACL 再建術における解剖学的ランドマークを用いたレムナント温存脛骨骨孔作成法）
下

平

浩

揮

（論文の内容の要旨）

またこれらの landmark を指標とした骨孔作成法は正【背景と目的】前十字靭帯再建術（ACL reconstruc­

確で再現性があるか，そしてそれはレムナントを温存tion）において，大腿骨及び脛骨骨孔の位置は術後のした上でも可能なのかどうかの検証はなされていない。

膝関節の安定性に寄与する重要な因子である。近年の本研究の目的は，二重束 ACL 再建術において⑴ ６

研究では解剖学的位置に骨孔を作成することが膝の前

つの landmark が鏡視下にレムナントを温存した状態

後及び回旋の安定性をもたらし，臨床的にも優れるこ

でも十分に確認できるかどうか，⑵ これらの land­とを報告している。それゆえに解剖学的な位置に再現

mark を指標とする脛骨骨孔作成が個体間のばらつき性をもって骨孔を作成するための landmark が必要でが少なく再現性があるかどうかを検討することである。

ある。脛骨については骨孔を作成するための標準的な【方法】2009年12月から2014年２月までに１人の術者

landmark は確立されていない。また脛骨側は陳旧例が施行した二重束 ACL 再建術の患者を対象とした。

でも ACL のレムナントが残っていることがほとんど

2012年３月までは脛骨付着部の ACL レムナントは切であり，近年ではレムナントを温存した再建術も報告除し ACL footprint を指標に骨孔を作成し（non-AL

されてきていることから，今後はレムナントを温存し群），2012年４月以降はレムナントを温存した状態でた状態でも確認可能な landmark を用いた骨孔作成法

６つの landmark を指標に骨孔を作成した（AL 群）。

が理想的である。

Non-AL 群では footprint 内に AM 骨孔は前内側部

以前に我々は脛骨付着部周囲の bony/anatomicalに PL 骨孔は後外側部に作成した。AL 群では AM 骨

landmark に関する詳細な報告を行った。ACL 脛骨付

孔は L-shaped ridge の corner からグラフト半径分離

着部は５つの landmark（前方―Parsonsʼ knob，内側

した点を中心に，PL 骨孔は内外側の intercondylar―medial intercondylar ridge，外側―anterior horn

tubercle の中点からグラフト半径分前方に離した点をof lateral meniscus ， 後 方 -anterior borders of the中心に作成した。

medial and lateral tubercles）に囲まれる狭い範囲内に存在し，この５つの landmark で形成される四辺形

以下の２つの評価を行った。
１．landmark 鏡視評価

内に１つもしくは２つの骨孔を作成する方法は，再現

AL 群からランダムに選択した20膝において，術中性をもって解剖学的な位置に骨孔を作成できる可能性に ACL 脛骨付着部を撮影した動画を基に， ６つのがあることを述べた。加えて，medial intercondylar

landmark がレムナントを温存した状態でも確認でき

ridge と Parsonsʼ knob は前内側で結合し１つの構造

るかどうかを３人の検者が２回に分けて判定した。

体を形成しており，これを L-shaped ridge と名付け，

２．骨孔位置画像評価

脛骨骨孔の前内側位置を決定する有用な６つ目のNon-AL 群と AL 群の骨孔位置を術後２週で撮影しlandmark に成り得ることも報告した。しかしながら，た CT 画像を用いて評価した。脛骨関節面を上から見これらの landmark が鏡視下にどの程度確認できるか，下ろす形の3D 画像において，AM 骨孔，PL 骨孔とNo. 5, 2017277

審査学位論文要旨

も脛骨前縁から骨孔中心までの距離と脛骨内側縁から良好な治療成績を生む上で重要である。解剖学的な位

骨孔中心までの距離をそれぞれ脛骨前後長と脛骨内外置に再現性をもって骨孔を作成するためには術中に確側長で除し，百分率として算出した。

認が可能な landmark が必要であるが，脛骨側につい【結果】研究期間中に104例の患者が含まれた（non-ては標準的な landmark は未だに確立されていない。

AL 群54例，AL 群50例）。手術時年齢，性別，身長，また脛骨側は陳旧例でも ACL の遺残組織であるレム

体重，グラフトサイズに２群間に差はなかった。

ナントが残っていることがほとんどであり，近年では

１．landmark 鏡視評価

レムナントを温存した再建術も報告されてきているこ

６つの landmark は検者内，検者間とも高い信頼性とから，今後はレムナントを温存した状態でも確認可をもって確認できた。

能な landmark を用いた骨孔作成法が理想的である。

２．骨孔位置画像評価

先行研究にて，ACL 脛骨付着部は６つの anatomical

骨孔位置は前後方向において AL 群は AM 骨孔

landmark（前方―Parsonsʼ knob，内側―medial in­

30.7±4.5 ％ ，PL 骨 孔 45.2±4.5 ％ ，non-AL 群 は

tercondylar ridge，前内側―L-shaped ridge，外側―AM 骨孔27.8±6.6 ％，PL 骨孔41.4±7.3 ％であり，

anterior horn of lateral meniscus ， 後 方 -anterior

内外側方向において AL 群は AM 骨孔45.7±2.2 ％，borders of the medial and lateral intercondylar tu­

PL 骨孔46.9±2.1 ％，non-AL 群は AM 骨孔46.7±

bercles）で囲まれる狭い範囲内に存在することを明

2.8 ％，PL 骨孔46.1±2.6 ％であった。平均値に差らかにした。下平らは，６つの anatomical landmarkは認めなかったが，ばらつきは AL 群の方が有意に少が鏡視下にレムナントを温存した状態でも十分に確認なかった。

できるかどうかを検討し，これらの landmark を指標【考察】今回の研究により６つの landmark はレムナとする脛骨骨孔作成が個体間のばらつきが少なく再現

ントを温存した状態でも十分に確認でき，これらを指性があるかどうかを検討した。

標として作成した骨孔位置は個体間のばらつきが少な
く再現性があることが明らかとなった。６つの land­

その結果，下平は次の結論を得た。
１．６つの anatomical landmark は鏡視下にレムナン

mark で形成される四辺形内に AM 骨孔と PL 骨孔をトを温存した状態でも十分に確認が可能であった。

作成するという方法は，landmark からの距離による

２．これらの landmark を指標に作成した骨孔位置は，作成ではなく，これらの landmark との位置関係によレムナントを切除して ACL footprint を指標に作成

る新しい作成方法である。これは個々人のサイズの違した骨孔位置と比較して平均値に差はなかったが，いや形態的 variation にも対応できる，再現性が高い

ばらつきは有意に少なかった。

作成方法であると考える。また，作成された AM 骨

３．６つの anatomical landmark を指標に作成した骨孔は ACL 脛骨付着部内のより前内側に位置していた。

孔位置は，ACL 脛骨付着部内のより前内側に位置

これは前内側縁を形成する L-shaped ridge を指標にしており，これは半月板前角損傷のリスクを下げ，AM 骨孔がこの ridge に接するように作成された結果

膝の安定性に繋がる理想的な位置であった。

である。近年，術後の膝の安定性には脛骨骨孔を前内

今回の結果から，６つの anatomical landmark を用側に作成してグラフトに傾斜をつけることが重要とさいた脛骨骨孔作成法は，レムナントを温存した状態でれている。また ACL 脛骨 footprint と外側半月板前も理想的な位置に再現性をもって骨孔が作成できる，

角は近接しており，footprint の中央に骨孔を作成す

有用な作成法であると思われた。

ると半月板前角損傷を引き起こす可能性があることを報告している研究もいくつかある。これらのことから，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

我々の L-shaped ridge を指標に作成した骨孔位置はグラフトの傾斜が得られ膝の安定性に繋がる位置であり，前外側の半月板損傷のリスクを減らすことができる理想的な位置であると考えられる。
（論文審査の結果の要旨）
前十字靭帯再建術（ACL reconstruction）において骨孔を解剖学的位置に作成することは，膝の安定性と
278

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

The endothelial adrenomedullin-RAMP2 system regulates vascular integrity and suppresses tumor metastasis（内皮アドレノメデュリン―RAMP2系は血管恒常性を維持し，腫瘍転移を抑制する）
田中（論文の内容の要旨）

愛次に，原発巣内の腫瘍血管について検討を進めると，【背景と目的】アドレノメデュリン（AM）は，血管

DI-E-RAMP2－/－ で は ， 腫 瘍 内 血 管 内 腔 に CD31

をはじめ全身で広く産生され，多彩な生理活性を有す（血管内皮細胞マーカー）陽性細胞が減少し，αSMAる生理活性ペプチドである。我々は AM ノックアウ（間葉系マーカー）陽性細胞が多数存在していた。こトマウス（AM－/－）と，AM 受容体活性調節タンのことから，DI-E-RAMP2－/－の腫瘍血管では，内パ ク で あ る RAMP2（ receptor activity-modifying

皮間葉系転換（EndMT）が生じていると推測した。

protein 2） のノックアウトマウス（RAMP2－/－）

これを検証するため，ヒト臍帯静脈内皮細胞（HU­が，共に血管の発生異常により胎生致死となることか

VEC）に対し，TGF-βを添加し，EndMT 誘導実験

ら，AM-RAMP2系が，血管新生にも必須であることを行った。その結果，HUVEC に予め AM を投与しを報告してきた。一方，AM は，様々な癌においてておくことで，EndMT 様変化が抑制され，内皮細胞も産生される。本研究では，腫瘍の増殖と転移におけの接着因子である VE-カドヘリンの発現が亢進し，る AM-RAMP2系の意義の検討を行った。

細胞間接着が強固になることが明らかとなった。そこ【材料及び方法】RAMP2－/－は胎生致死のため，成で，肺血管内皮細胞の初代培養を行い，TGF-β添加体での解析が不可能である。 そこで本研究では，による EndMT 誘導実験を行うと，DI-E-RAMP2－/－

RAMP2flox マウスを VE カドヘリン MerCreMer マウの内皮細胞では，間葉系マーカーである FSP-1陽性

スと交配することにより，誘導型の血管内皮細胞特異細胞が野生型マウスと比較し，有意に増加していた。

的 RAMP2ノックアウトマウス（DI-E-RAMP2－/－）

逆に AM-RAMP2系を活性化することで，これらラインを樹立し，成体になってから血管の RAMP2遺の変化が抑制できるか検討した。RAMP2を過剰発現

伝子欠損を誘導することを試みた。DI-E-RAMP2－/－

させた内皮細胞（RAMP2O/E）を樹立し，血管透過性では，タモキシフェン５日間の投与後，２週間後に，

アッセイを行うと RAMP2O/E では，血管透過性が抑血管における RAMP2発現が20 ％以下に低下するこ

制 さ れ て い た 。 さ ら に DsRed を 導 入 し た B16F10とが確認された。

メラノーマ細胞を用いて，内皮細胞と重層培養法にて【結果】DI-E-RAMP2－/－を用いて Sarcoma180肉

接着の評価を行うと，RAMP2O/E では腫瘍細胞の接腫と B16F10メラノーマ細胞の皮下移植実験を行うと，着が抑制されていた。最後に血管内皮細胞特異的にコントロールマウスに比較して，腫瘍内血管新生は減RAMP2を過剰発現させたトランスジェニックマウス

弱し，腫瘍増殖は抑制された。その一方で，B16BL6（E-RAMP2 Tg）を樹立した。B16BL6細胞を移植し，メラノーマ細胞を用いて，原発巣から遠隔臓器への自自然肺転移を観察したところ，E-RAMP2 Tg では，然転移モデルの検討を行ったところ，DI-E-RAMP2

野生型マウスと比較して，腫瘍の転移が抑制され，生－/－では肺への転移率が亢進した。

存率の改善を認めた。

DI-E-RAMP2－/－において転移が亢進するメカニ【結論】以上の結果から，血管内皮細胞の RAMP2欠ズムを明らかとするため，血管の RAMP2欠損誘導後損は，腫瘍血管新生を抑制する一方で，転移を促進すに転移予定先臓器である肺に生じる変化を時系列的にることが明らかとなった。AM-RAMP2系による血管観察した。腫瘍の転移前の早期の段階において，血管恒常性維持機構に着目することで，癌転移を抑制する

壁におけるマクロファージの接着や浸潤，それに伴い，新しい治療法への展開が期待される。

TNF-α，IL-6などの炎症性サイトカインが上昇して（論文審査の結果の要旨）いた。炎症は RAMP2欠損後も持続し，その結果，腫アドレノメデュリン（AM）は，多彩な生理活性を

瘍細胞を転移巣へ誘導するとされる S100A8/A9とそ有するペプチドである。我々は，AM と，受容体活の下流因子である SAA3の発現亢進が確認された。

性調節タンパクの１つである RAMP2のノックアウ

No. 5, 2017279

審査学位論文要旨

トマウス（AM－/－・RAMP2－/－）が，共に血管

５．血管の RAMP2遺伝子欠損により，転移予定先との発生異常により胎性致死となることから，AM-なる肺では，肺血管内皮細胞の形態異常が引き起こ

RAMP2系の血管新生，血管恒常性制御作用を明らか

され，VE-カドヘリンやアクチンの発現も低下してとした。一方，AM や RAMP2は様々な癌との関連性いた。更に，早期の段階から肺内に炎症細胞の集積が報告されている。本研究では，誘導型血管内皮細胞を認め，それに伴い，腫瘍細胞遊走因子とされる

特異的 RAMP2－/－（DI-E-RAMP2－/－）を樹立し，S100A8/A9の発現亢進と共に，その下流標的とな腫瘍の増殖と転移における AM-RAMP2 系の意義をる SAA3の発現も著明に亢進していた。
６．AM を持続投与すると，原発巣内の血管を太く，検討した。

安定化させ，EndMT 様の変化が抑制された。

その結果，田中愛は次の結論を得た。
１．DI-E-RAMP2－/－の腫瘍細胞皮下移植モデルで７．血管内皮細胞において RAMP2を過剰発現させるは，原発巣の血管新生が減弱し，腫瘍増殖が抑制さと細胞間接着が強固になり，血管透過性を抑制した。

れることが明らかとなった。DI-E-RAMP2－/－で更に，RAMP2過剰発現内皮細胞は腫瘍細胞の接着を抑制した。

は，血管先端部の tip 細胞の形成不全による血管新８．血管内皮細胞特異的に RAMP2を過剰発現したト生の低下が認められた。
２．一方，メラノーマ細胞の自然肺転移モデルでは，

ランスジェニックマウス（E-RAMP2 Tg）を樹立

DI-E-RAMP2－/－において，肺への転移率が有意した。E-RAMP2 Tg では自然肺転移が抑制され，に亢進した。

生存率の改善を認めた。
これらの結果から，血管内皮細胞の RAMP2欠損は，

３．DI-E-RAMP2－/－の原発巣内の血管は細く，コイル状になっていた。腫瘍血管内皮細胞間の結合が腫瘍血管新生を抑制する一方で，転移を促進すること

脆く，血管構造が不安定化していた。

が明らかとなった。AM-RAMP2系による血管恒常性

４．DI-E-RAMP2－/－の腫瘍内血管で内皮間葉系転換（EndMT）様の所見が認められた。初代培養肺維持機構に着目することで，癌転移を抑制する新しい治療法への展開が期待される。
以上の結果から，主査，副査は一致して本論文を学

血管内皮細胞に TGF-βを添加し，EndMT 誘導を行うと，DI-E-RAMP2－/－では EndMT が有意に位論文として価値があるものと認めた。

増加した。

Clinicopathological characterisation of duodenal adenocarcinoma with high CD44 variant 9
expression（十二指腸癌における CD44v9陽性細胞の臨床病理学的特徴）
丸

山

康

弘

（論文の内容の要旨）

よび病理組織学的特徴を評価するために，CD44v9，【背景と目的】ヒアルロン酸をリガンドとする接着因MUC2，MUC5AC，および MUC6の免疫組織化学的子の CD44は様々な悪性腫瘍において癌幹細胞のバイな解析を行った。さらに，CD44v9と Ki67（核分裂能オマーカーとされており，本研究ではそのバリアントの評価），cleaved caspase 3（CC3，自己融解能の評のひとつである CD44v9に着目した。 臨床的には，価）との２重免疫蛍光染色法による解析を行った。こCD44v9陽性細胞数は癌患者の生命予後と関連するこの解析では，癌組織の CD44v9陽性細胞が高い割合のとが報告されている。今回我々は，消化管悪性腫瘍の領域と低い割合の領域を，それぞれ CD44v9陽性領域

中でも比較的まれな疾患である十二指腸癌を対象に，および陰性領域として設定した。統計学的な解析には臨床および病理学組織学的な検討を行った。同疾患のカイ２乗検定およびスピアマン解析を用いた。また，

癌幹細胞に関する報告は稀少であることから，特に，十二指腸癌術後の生存期間の比較に関しては Kaplan-

十二指腸癌における CD44v9陽性細胞の癌幹細胞としMeier 法を用いて評価を行った。

ての特徴に注目した。

【結果】CD44v9陽性細胞は弱いながらも炎症細胞浸【材料および方法】長野県内の施設にて診断された十潤（ r＝0.431 と p＝0.020 ） と MUC6（ r＝0.425 と二指腸癌29症例を対象とした。十二指腸癌の臨床お

p＝0.022）との関連があることが示された。CD44v9

280

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

陽性細胞では，Ki67陽性細胞の比率は CD44v9陰性細理組織学的特徴を評価するために，CD44v9，MUC2，胞より低値であった（p＝0.002）。また CD44v9陽性

MUC5AC，および MUC6の免疫組織化学的な解析を

細胞では CC3陽性細胞の比率は，CD44v9陰性細胞よ行った。さらに，CD44v9と Ki67（核分裂能の評価），

り低値であった（p＜0.0001）。生存期間の解析におcleaved caspase 3（CC3，自己融解能の評価）との２

いては，TNM 分類による stage のみが予後因子とし重免疫蛍光染色法による解析を行った。この解析では，て有意差を認めた。
（ハザード比：22.02，95 ％信頼

癌組織の CD44v9陽性細胞が高い割合の領域と低い割

区間：2.795－450.6，および p＝0.0032）

合の領域を，それぞれ CD44v9陽性領域および陰性領【 結 論 】CD44v9 は 十 二 指 腸 癌 に お い て 炎 症 細 胞 浸域として設定した。統計学的な解析にはカイ２乗検定

潤と粘液形質（MUC6）と関係があると考えられた。

およびスピアマン解析を用いた。また，十二指腸癌術

CD44v9陽性細胞は核分裂能が低く，自己融解能も乏後の生存期間の比較に関しては Kaplan-Meier 法を用しいことが示唆された。これらの特徴は，十二指腸癌

いて評価を行った。

において CD44v9陽性細胞が癌幹細胞である可能性をその結果，丸山は次の結論を得た。
１．CD44v9は十二指腸癌において炎症細胞浸潤と粘示唆するものである。
（論文審査の結果の要旨）

液形質（MUC6）と関連していた。また単核細胞はヒアルロン酸をリガンドとする接着因子の CD44は

CD44ｖ9陽性細胞周囲に集簇していた。

様々な悪性腫瘍において癌幹細胞のバイオマーカーと２．CD44v9陽性細胞は核分裂能が低く，自己融解能されており，本研究ではそのバリアントのひとつであも乏しいことから，十二指腸癌における癌幹細胞でる CD44v9に着目した。臨床的には，CD44v9陽性細ある可能性が示唆された。

胞数は癌患者の生命予後と関連することが報告されて３．十二指腸癌の術後の生命予後は病理学的 stage おいる。今回我々は，消化管悪性腫瘍の中でも比較的ま

よび grade と関連したが，CD44v9陽性細胞の有無れな疾患である十二指腸癌を対象に，臨床および病理との関連性は明らかではなかった。

学組織学的な検討を行った。同疾患の癌幹細胞に関す

本研究において，CD44v9陽性細胞が十二指腸癌にる報告は稀少であることから，特に，十二指腸癌におおける癌幹細胞である可能性を示唆した点は新知見でける CD44v9陽性細胞の癌幹細胞としての特徴に注目あり，今後，十二指腸癌の病態解明や治療法の開発にした。

役立つ可能性がある。よって主査，副査は一致して本【対象と方法】長野県内の施設にて診断された十二指論文を学位論文として価値があるものと認めた。

腸癌29症例を対象とした。十二指腸癌の臨床および病

Clinico-Radiological Characteristics and Pathological Diagnosis of Cerebral Amyloid
Angiopathy-Related Intracerebral Hemorrhage（脳アミロイド血管症関連脳内出血の臨床的・放射線学的特徴と病理学的診断に関する検討）
道傳整（論文の内容の要旨）

画像等で高率に検出され，症候性の脳内出血発症前に【背景・目的】脳アミロイド血管症（Cerebral amy­

CAA を疑う契機となりうる。高齢化社会の到来と MRI

loid angiopathy，CAA）は脳血管，特に髄膜，皮質の高い普及率を背景に，今後 CAA の早期診断方法の

血管の中膜・外膜にアミロイド沈着を呈する疾患で，確立が重要になると考えられる。CAA-ICH の臨床診

脳皮質下出血，脳血管炎，認知症などの原因として重断には Boston 基準が用いられ，確実な診断は剖検に要である。特に高齢者において高血圧によらず多発よる全脳の病理学的検討によってなされる。一方，脳性の脳皮質下出血を引き起こし，CAA 関連脳内出血

実質または血腫の生検による診断の精度について詳細（cerebral amyloid angiopathy-related intracerebral

な報告は少ない。今回，我々は CAA をより高い精度

hemorrhage，CAA-ICH）と呼ばれる。また，CAAで診断するために CAA-ICH と臨床診断した症例のでは大脳皮質に微小出血（microbleeds，MBs）など

臨床的・放射線学的特徴と，生検によって得られた病

微細な無症候性の出血性変化が頭部 MRI の T2＊強調

理学的診断について検討した。

No. 5, 2017281

審査学位論文要旨【対象と方法】対象は2006年１月から2013年７月までを引き起こし，CAA 関連脳内出血（cerebral amyloidに相澤病院で診療した連続253例の脳皮質下出血症例

angiopathy-related intracerebral hemorrhage，CAA-のうち，開頭血腫除去術を施行された48例である。そICH）と呼ばれる。また，CAA では大脳皮質に微小のうち血腫，血腫近傍の脳実質，または両者の生検に出血（microbleeds，MBs）など微細な無症候性の出よる病理学的検討がなされた44例を病理学的診断に基血性変化が頭部 MRI の T2＊強調画像等で高率に検出づいて CAA 陽性群22例と CAA 陰性群22例に分類しされ，症候性の脳内出血発症前に CAA を疑う契機とた。 また， 両群を Boston 基準に基づいて Probableなりうる。高齢化社会の到来と MRI の高い普及率を

CAA 群，Possible CAA 群，除外群に分類し，各群背景に，今後 CAA の早期診断方法の確立が重要にな

における臨床的・放射線学的特徴（年齢，性別，高血ると考えられる。CAA-ICH の臨床診断には Boston

圧症・ 認知症・ 抗血栓薬内服の有無，MBs の分布，基準が用いられ，確実な診断は剖検による全脳の病理

白質病変の程度，再出血の有無など）を比較した。ま

学的検討によってなされる。一方，脳実質または血腫

た，生検検体の種類による CAA 検出率の違いについの生検による診断の精度について詳細な報告は少ない。

ても検討した。

本研究では CAA をより高い精度で診断するために【結果】CAA 陽性群は Probable CAA 群７例，Possi­

CAA-ICH と臨床診断した症例の臨床的・放射線学的ble CAA 群15例に分類され，CAA 陰性群は Probable

特徴と，生検によって得られた病理学的診断について

CAA 群２例，Possible CAA 群７例，除外群13例に検討した。

分類された。Boston 基準に基づき CAA-ICH と臨床対象は2006年１月から2013年７月までに相澤病院で診断した CAA 陽性群22例と CAA 陰性群9例を比較診療した連続253例の脳皮質下出血症例のうち，開頭＊したところ，CAA 陰性群において T2 強調画像で確血腫除去術を施行された48例である。そのうち血腫，

認された脳深部および小脳テント下の MBs の個数は血腫近傍の脳実質，または両者の生検による病理学的

CAA 陽性群に比して有意に多かった（p＜0.05）。大検討がなされた44例を病理学的診断に基づいて CAA

脳皮質領域の MBs の個数や高血圧症の有病率等に両陽性群22例と CAA 陰性群22例に分類した。また，両群間で有意差はなかった。生検検体の種類毎の CAA

群を Boston 基準に基づいて Probable CAA 群，Pos­

検出率は血腫のみで50 ％，脳実質のみで61.5 ％，血sible CAA 群，除外群に分類し，各群における臨床腫と脳実質の両者で91.7 ％であった。また，Proba­

的・放射線学的特徴（年齢，性別，高血圧症・認知

ble CAA 群における血腫と脳実質の両者の生検によ症・抗血栓薬内服の有無，MBs の分布，白質病変のる CAA 検出率は100 ％であった。CAA 陽性群にお程度，再出血の有無など）を比較した。また，生検検

いて術後再出血による死亡は２例（9.1 ％）で，いず体の種類による CAA 検出率の違いについても検討しれも血腫量の多い高齢者であった。

た。

【考察・結論】脳深部および小脳テント下の MBs と結果，CAA 陽性群は Probable CAA 群７例，Pos­

CAA-ICH の関連は乏しく，高血圧性が主と考えられsible CAA 群15例に分類され，CAA 陰性群は Proba­

た。一方，大脳皮質領域の MBs への関与は高血圧とble CAA 群２例，Possible CAA 群７例，除外群13例

CAA とで差はなかった。本研究では CAA 陽性群とに分類された。Boston 基準に基づき CAA-ICH と臨CAA 陰性群の間で高血圧症の有病率に有意差がな

床診断した CAA 陽性群22例と CAA 陰性群９例を比かったことから，CAA-ICH の発症に高血圧が関与す較したところ，CAA 陰性群において T2＊強調画像でる可能性が示唆された。生検による CAA の診断精度確認された脳深部および小脳テント下の MBs の個数を高めるには大脳皮質と血腫双方の生検が有用で，かは CAA 陽性群に比して有意に多かった（p＜0.05）。大つ既報告と比較し生検の比較的高い安全性が示された。

脳皮質領域の MBs の個数や高血圧症の有病率等に両（論文審査の結果の要旨）

群間で有意差はなかった。生検検体の種類毎の CAA

脳アミロイド血管症（Cerebral amyloid angiopa­

検出率は血腫のみで50 ％，脳実質のみで61.5 ％，血thy，CAA）は脳血管，特に髄膜，皮質血管の中膜・腫と脳実質の両者で91.7 ％であった。また，Proba­

外膜にアミロイド沈着を呈する疾患で，脳皮質下出血，

ble CAA 群における血腫と脳実質の両者の生検によ脳血管炎，認知症などの原因として重要である。特にる CAA 検出率は100 ％であった。CAA 陽性群にお

高齢者において高血圧によらず多発性の脳皮質下出血

いて術後再出血による死亡は２例（9.1 ％）で，いず

282

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

かったことから，CAA-ICH の発症に高血圧が関与す

れも血腫量の多い高齢者であった。
結論として脳深部および小脳テント下の MBs とる可能性が示唆された。生検による CAA の診断精度

CAA-ICH の関連は乏しく，高血圧性が主と考えられを高めるには大脳皮質と血腫双方の生検が有用で，かた。一方，大脳皮質領域の MBs への関与は高血圧とつ既報告と比較し生検の比較的高い安全性が示された。

CAA とで差は無かった。本研究では CAA 陽性群と以上の結果より，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

CAA 陰性群の間で高血圧症の有病率に有意差がな

Activation of PPARα by fatty acid accumulation enhances fatty acid degradation andsulfatide synthesis（脂肪酸蓄積による PPARα活性化は脂肪酸分解とスルファチド合成を促
進する）
封

玉

瑶

（論文の内容の要旨）唆された。さらに，機能的 PPARα活性化によるスル【背景と目的】極長鎖脂肪酸アシル CoA 脱水素酵素

ファチド合成の増加は硫酸毒性の減少をもたらすこと（VLCAD）はミトコンドリア局在の脂肪酸・酸化反が示唆された。機能的 PPARα活性化は VLCAD 欠

応系の初反応を触媒する４種のアイソザイムのひとつ

損細胞における代償的・防御的対応であると思われた。

である。我々の研究グループは，VLCAD 欠損症の存

フィブラート製剤投与による継続的 PPARα活性化は在および遺伝子変異の同定を報告するとともに，治療

severe type VLCAD 欠損症患者に対する簡便な治療法の開発を試みてきた。本研究は核内受容体 PPAR

法となりうることが提示された。また，VLCAD 欠損の機能変化を探索することを介して，VLCAD 欠損症

細胞において中鎖脂肪酸代謝機能が保全されているこにおける脂質代謝制御をより深く理解し，治療法のとに基づき，長鎖脂肪酸含量の少ない食品を継続的にきっかけを見出すことを目的とした。

摂取することが発症予防になりうることも提示された。

【材料および方法】６名の severe type VLCAD 欠損（論文審査の結果の要旨）

症患者の各々の皮膚から調製された繊維芽細胞試料と極長鎖脂肪酸アシル CoA 脱水素酵素（VLCAD）

３名の健常男性の皮膚から調製された繊維芽細胞試料

欠損症は常染色体劣性遺伝疾患である。VLCAD 蛋白

を用い，遊離脂肪酸含量・PPAR 活性化レベル・脂がほとんど存在しない severe type では多種の臓器や肪酸代謝関連酵素の発現レベル・スルファチド代謝関

組織における脂肪蓄積・肝機能障害・心機能障害・横連酵素の発現変動・スルファチド含量およびスフィン

紋筋機能低下・意識消失発作などを高頻度に呈する特ゴイド組成を測定した。

徴がある。蓄積した中性脂肪に混在する長鎖脂肪酸由【結果】VLCAD 欠損症患者由来の細胞において，３来の毒性（カルボン酸毒性・界面活性剤作用）による

種の PPAR のうち PPARαのみが活性化を生じ，そ細胞死により障害が惹起されると想定されてきた。核の活性化は内在性リガンドである中鎖・長鎖脂肪酸量

内受容体 PPAR は脂肪消費臓器における中性脂肪代の増加に基づくことが示された。PPARα標的遺伝子

謝のマスターレギュレーターの一つであり，VLCAD

産物であることが知られている脂肪酸代謝関連酵素３欠損症の病態変化との関連を研究する発想に至った。

種の発現が PPARα依存的に増加することが明らかに

VLCAD 欠損症患者６名の皮膚由来線維芽細胞を継代された。また，PPARα標的遺伝子産物であることが培養し，細胞内の遊離脂肪酸含量・PPAR 活性化・知られているスルファチド合成酵素２種の発現およびPPAR 標的遺伝子産物（脂肪酸代謝関連酵素）の蛋

スルファチド含量が PPARα依存的に増加することが白および mRNA 発現変化・オクタノイル CoA 脱水示された。スルファチドのスフィンゴイド組成は血清

素反応活性などを定法に従って測定した。また，スにおける組成と全く異なり，PPARα活性化との関連

フィンゴ脂質合成系へのパルミトイル CoA 供給の増は見られなかった。

加が想定され，かつ，２種の PPAR 標的遺伝子産物【結論】機能的 PPARα活性化による長鎖脂肪酸アシが律速酵素と考えられるスルファチド代謝関連酵素群

ル CoA 合成酵素（LACS）の発現増加および脂肪酸の mRNA 発現変化を RT-PCR 法にて測定した。スル

分解能の増加は脂肪酸毒性の減少をもたらすことが示

ファチド含量およびスフィンゴイド組成を MALDI-

No. 5, 2017283

審査学位論文要旨

有意に増加した。

TOF MS 法にて調べた。

以上より，VLCAD 欠損細胞において，PPARα活

その結果，以下の成績を得た。
１．VLCAD 欠損細胞に遊離脂肪酸蓄積が検出された。

性化を介する脂肪酸分解能の増加は脂肪酸毒性の減少

２．VLCAD 欠損細胞において PPARα活性化が生じ，をもたらすことが示唆された。また，PPARα活性化

PPARα標的遺伝子産物である３種の脂肪酸代謝系

を介するスルファチド合成の増加は硫酸毒性の減少を酵素の発現増加が認められた。

もたらすことが示唆された。これらの結果から，簡便

３．VLCAD 欠損細胞において，PPARα標的遺伝子な治療法の可能性が提示された。従って，主査，副査産物である２種のスルファチド合成酵素の発現増加は一致して本論文を学位論文として価値があるものとが認められた。

認めた。

４．VLCAD 欠損細胞において，スルファチド含量がPostoperative improvement in DASH score, clinical findings, and nerve conduction velocity
in patients with cubital tunnel syndrome（肘部管症候群患者における DASH スコア，身体所見，および神経伝導速度の術後回復）
井

戸

芳

和

（論文の内容の要旨）るために，連続変数（１，２，３，４）については線【背景と目的】上肢において２番目に頻度の高い絞扼形混合効果モデル，およびカテゴリー変数（５，６，性神経障害である肘部管症候群に対する治療として，

７）については累積ロジスティック回帰モデルを用い多くの手術手技がある。しかし信頼性，妥当性のあるて解析した。いずれのモデルにおいても，共変量とし方法を用いた術後長期，かつ複数回評価の報告はほとて年齢，性別，術前重症度（McGowan 分類）を投入

んどなく，各手技後の回復には不明な点が多いのが現し，危険率５％未満を有意とした。

状である。今回，術後回復の予測に役立てるため，尺

【結果】24カ月以上の最終観察時まで評価できた症例

骨神経皮下前方移動術後２年以上に渡り患者の主観的は39例であった。術後，すべての評価値は有意に改善

および客観的臨床評価値を追跡し，それらの回復過程していた。DASH スコアは術後６カ月で有意に改善を明らかにした。

した。 しびれおよび SW 分類は術後１カ月， 握力，【方法】尺骨神経皮下前方移動術が行われた，変形性

ピンチ力，2PD 分類および MCV 分類は術後３カ月

肘関節症を合併する肘部管症候群52例の術前，術後経で有意に改善した。主観的評価である DASH および時的臨床評価値を retrospective に収集した。手術時

しびれの値は，年齢，性別，術前重症度の影響を受け

年齢は67.3±8.8歳，男性44例，女性８例，術前尺骨神ていなかった。一方，客観的な筋力，感覚，神経機能経麻痺重症度（McGowan 分類）は Grade Ⅱ（Inter­

評価である握力，ピンチ力，SW 分類，2PD 分類およmediate）25例，Grade Ⅲ（Severe）27例であった。

び MCV 分類は，いずれも術前重症度の影響を受けて【術前，術後臨床評価】術前，術後１，３，６，12カいた。術後12カ月以降，有意に改善した評価項目はな

月，および24カ月以上の最終観察時（24～78カ月，平かった。最終観察時においてしびれが完全に消失した

均34.8カ月） の６時期に， 以下の項目を評価した。

症例は33.3 ％，正常域まで回復した症例は SW 分類，

１）患者立脚型上肢機能評価法である The Disabili­

2PD 分類，および MCV 分類において，それぞれ20.5

ties of the Arm, Shoulder and Hand（DASH）スコ％，35.9 ％，および44.8 ％であった。

ア，２）Visual Analogue Scale（VAS）によるしび【考察】変形性肘関節症を合併する肘部管症候群に対れの程度，３）握力，４）ピンチ力，５）小指の圧感する尺骨神経皮下前方移動術後においては，しびれお覚 で あ る Semmes-Weinstein（ SW ）monofilament

よび小指の圧感覚が早期に回復し，次いで運動機能で

test 分類，６）小指の２点識別距離（2PD）による感ある握力，ピンチ力，運動神経伝導速度が回復した。

覚機能分類，７）尺骨神経の運動神経伝導速度分類

この要因として，術前重症度に関わらず術後早期に神

（MCV）
。

経内の虚血が改善すること，変性した軸索（萎縮した【統計解析】各評価値の術後回復の傾向を明らかにす筋肉）の回復には時間を要することなどが考えられた。

284

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

最終観察時まで追跡できた症例数減少による統計学的（DASH スコアは術後６カ月，しびれおよび SW 分

検出力低下のため，各評価値の術後12カ月以降の有意類は術後１カ月，握力，ピンチ力，2PD 分類およな回復の有無については明らかにできなかった。なおび尺骨神経の MCV 分類は術後３カ月で有意に改善

本研究の結果は，術後回復の予測，術前患者への説明

していた）。

に有用であるが，他の術式，病態および人種にあては

２．術後12カ月以降，有意に改善した評価値はなかった。

めることはできない。
（論文審査の結果の要旨）

３．主観的評価である DASH およびしびれの値は，肘部管症候群の術後回復過程には不明な点が多い。

年齢，性別，術前重症度の影響を受けていなかった。

今回，術後回復の予測に役立てるため，尺骨神経皮下４．客観的な筋力，感覚，神経機能評価である握力，

前方移動術が行われた変形性肘関節症を合併する肘部

ピンチ力，SW 分類，2PD 分類および MCV 分類は，

管症候群52例に対し，術前，術後１，３，６，12カ月，

いずれも術前重症度の影響を受けていた。

および24カ月以上の最終観察時（24～78カ月，平均以上より，変形性肘関節症を合併する肘部管症候群

34.8カ月）に，以下の項目を評価した。１）患者立脚に対する尺骨神経皮下前方移動術後においては，しび型上肢機能評価法である The Disabilities of the Arm,

れおよび小指の圧感覚が早期に回復し，次いで運動機

Shoulder and Hand（ DASH ） ス コ ア ， ２ ）Visual

能である握力，ピンチ力，運動神経伝導速度が回復す

Analogue Scale（VAS） によるしびれの程度， ３）

ることがわかった。この要因として，本研究において握力，４）ピンチ力，５）小指の圧感覚である Sem­

証明はできていないが，変性した軸索（萎縮した筋

mes-Weinstein（SW）monofilament test 分類，６）肉）の回復には時間を要することが考えられた。最終

小指の２点識別距離（2PD） による感覚機能分類，観察時まで追跡できた症例数減少による統計学的検出

７）尺骨神経の運動神経伝導速度分類（MCV）。連続

力低下のため，各評価値の術後12カ月以降の有意な回変数（１，２，３，４）については線形混合効果モデ復の有無については断定できないが，本研究の結果は

ル，およびカテゴリー変数（５，６，７）については術後回復の予測および術前患者への説明に有用である。

累積ロジスティック回帰モデルを用いて解析した。い

変形性肘関節症を合併する肘部管症候群術後におけずれのモデルにおいても，共変量として年齢，性別，る回復過程を詳細に調査した論文は他になく，本研究

術前重症度（McGowan 分類）を投入し，危険率５％

内容は極めて意義深いものである。したがって主査，未満を有意とした。

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

その結果，次の結論を得た。
１． 術後， すべての評価値は有意に改善していた

Serum Wisteria floribunda agglutinin-positive human Mac-2 binding protein may predict
liver fibrosis and progression to hepatocellular carcinoma in patients with chronic hepatitis
B virus infection（血清中の WFA 陽性 Mac-2結合タンパクはＢ型肝炎ウイルス慢性感染患者において，肝線維化および肝細胞癌の発症予測に有用な可能性がある）
市

川（論文の内容の要旨）

雪を検討した。

【背景と目的】WFA 陽性 Mac-2結合タンパクは，Ｃ【方法】当院で肝生検を行い，その後経過観察が可能

型慢性肝炎や原発性胆汁性胆管炎などの慢性肝疾患にであったＢ型慢性肝炎および肝硬変患者112人を対象

おいて非侵襲的線維化マーカーとして有用であることとした。全例，肝生検施行時に抗ウイルス療法は受けが報告されている。本研究では，肝生検を施行したＢていなかった。WFA 陽性 Mac-2タンパクと肝線維化型慢性肝炎および肝硬変患者を対象とし，WFA 陽性

ステージとの関連を検討するとともに，各種肝線維化

Mac-2タンパクの肝線維化ステージ診断能を他の線維マーカー（ヒアルロン酸，Ⅳ型コラーゲン7S，APRI，

化マーカーと比較検討した。さらに，同コホートを対FIB4インデックス，PLT）との関連も解析した。さ象として肝細胞癌の発症予測マーカーとしての有用性

らに，経過観察期間中の肝細胞癌発症と関連する経過No. 5, 2017285

審査学位論文要旨

観察開始時の因子を，WFA 陽性 Mac-2タンパクを含肝硬変患者112例を対象とし，WFA＋－M2BP の肝線めて検討した。

維化ステージ診断能を他の線維化マーカーと比較検討【結果】血清中 WFA 陽性 Mac-2結合タンパク濃度は，した。さらに，同コホートを対象として肝細胞癌の発肝線維化ステージが進行するに伴い上昇し，有意の症予測マーカーとしての有用性を検討した。その結果，（r＝0.325，P＝0.001）相関がみられた。ROC 解析に次の結論を得た。

よると，Ｆ＞２以上の AUROC は0.713であり，他の１．肝線維化進展にともない WFA＋－M2BP 値は上線維化マーカーと比較して非劣性が証明された。肝細昇し，肝線維化ステージと正の相関を認めた。

胞癌発症を予測する因子の単変量解析では，年齢，線２．肝線維化ステージ予測能を ROC で解析すると既維化ステージ，WFA＋－M2BP，ALT，ヒアルロン

存の線維化マーカーであるヒアルロン酸，Ⅳ型コ酸，FIB4インデックス，血小板数，AFP，核酸アナ

ラーゲン7S，APRI，FIB4インデックス，血小板数

ログ治療の有無が有意な因子であった。また，多変量と比較して同等の有用性を認めた。

解析では，性別（男性），WFA 陽性 Mac-2タンパク

３．肝細胞癌発症を予測する因子の単変量解析では，（0.71 COI 以上），ALT（80 IU/ml）以下），血小板

年齢，線維化ステージ，WFA＋－M2BP，ALT，ヒ（14.5万以下）が独立した危険因子として抽出された。

アルロン酸，FIB4インデックス，血小板数，AFP，WFA 陽性 Mac-2結合タンパクの血中濃度0.71以上，

核酸アナログ治療の有無に有意差を認めた。一方，未満の２群に分け，カプランマイヤー法で肝細胞癌の多変量解析では，性別（男性），WFA 陽性 Mac-2

発生率を比較したところ，WFA-M2BP 0.71以下のタンパク（0.71 COI 以上），ALT（80 IU/ml）以下），

群で発症率が有意に低かった（log-rank P＝0.020）。

血小板数（14.5万以下）が独立した危険因子とし【結論】Ｂ型肝炎患者において，WFA 陽性 Mac-2結て 抽 出 さ れ た 。WFA＋－M2BP を カ ッ ト オ フ 値

合タンパクは非侵襲的肝線維化マーカーとして有用で0.71で２群に分け，カプランマイヤー法にて累積肝あった。さらに，肝細胞癌の発症予測マーカーとして細胞癌発症率を比較したところ，0.71以上群で有意も有用である可能性が示唆された。

に高い発症率であった。

（論文審査の結果の要旨）

以上の結果より，WFA＋－M2BP はＢ型肝炎の肝WFA 陽性 Mac-2結合タンパク（WFA＋－M2BP）

線維化マーカーとして有用であると考えられた。さらは，Ｃ型慢性肝炎や原発性胆汁性胆管炎などの慢性に，肝細胞癌発症の予測因子として有用である可能性

肝疾患において，非侵襲的線維化マーカーとして有用が示唆された。

であることが報告されている。本研究では，当院で1998～2013年に肝生検を施行したＢ型慢性肝炎およびよって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Novel role of ASC as a regulator of metastatic phenotype（癌細胞の転移形質制御におけるASC の役割）岡田なぎさ（論文の内容の要旨）

IL-1βが産生される。一方，種々の悪性腫瘍細胞にお【背景と目的】Apoptosis-associated Speck-like pro­いて ASC 遺伝子はメチル化され，がんの進展との関

tein containing a CARD（ASC）は，抗がん剤でアポ連が示唆されているが，浸潤転移における ASC の役

トーシスを誘導した白血病細胞で凝集塊を形成する細割については不明である。我々は，マウス悪性黒色腫

胞質たんぱく質として発見され，カスパーゼ１の活性の細胞株の ASC 発現を抑制し，ASC ががんの進展に化に必須の因子であることが明らかにされた。ASC

どのように働いているのかを調べた。

はＮ末端側に Pyrin と相同な領域 PYD とＣ末端側に【 材 料 お よ び 方 法 】 マ ウ ス 悪 性 黒 色 腫 BL16BL6 細CARD を有し，PYD と LRR を有する細胞質病原体

胞に shASC を導入し ASC ノックダウン細胞（以下センサーNOD-like receptors（NLRs）とカスパーゼ

shASC 細胞）を作成し，細胞増殖アッセイ及び実験

１をリクルートし，インフラマゾームを形成する。こ的肺転移モデルによる転移実験を行った。転移形質をれによりカスパーゼ１が活性化され， 活性 IL-18，

調べるために，スクラッチアッセイ，マトリゲルを用

286

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

いた浸潤アッセイ，ECM 接着アッセイ，浸潤突起形

役割がある。 一方， 種々の悪性腫瘍細胞において成アッセイを行った。マウス悪性黒色腫の別の細胞株

ASC 遺伝子はメチル化され，がんの進展との関連がである B16F10細胞，チオグリコレート誘導マウス腹示唆されているが，浸潤転移における ASC の役割に腔マクロファージでも同様の実験を行った。また，細ついては不明である。今回，マウス悪性黒色腫細胞株

胞の形態を調べるためにＦ-アクチン染色を行った。

の ASC 発現を抑制し，ASC ががんの進展にどのよう細胞運動，浸潤での重要なシグナル伝達分子であるに働いているのかを調べた。

Src との関係について調べた。また，Src によりカス

１．BL16BL6細胞に shASC を導入し作成した ASC

パーゼ８の Tyr380がリン酸化されると細胞運動に関ノックダウン細胞（以下 shASC 細胞）は，コント与するとされること，カスパーゼ８の DED 領域はロール細胞と比較し細胞増殖には差が見られなかっPYD を介して ASC と結合するということが報告されたが，肺転移能は亢進した。このため転移形質に着ているので，カスパーゼ８との関係性を調べた。Src，

目し実験を行った。

カスパーゼ８のリン酸化を調べ，それぞれの阻害剤を２．shASC 細胞は，コントロール細胞に比べ，運動使い同様の実験を行った。

性が亢進した。液性因子の関与は低いと考えられた。

【結果】shASC 細胞は，コントロール細胞と比較し，浸潤アッセイでも，shASC 細胞は浸潤能が亢進し増殖には差が見られなかったが，肺転移能は亢進した。

ていた。接着能に差は見られなかった。

スクラッチアッセイでは，コントロール細胞に比べ，３．shASC 細胞はコントロール細胞とは細胞形態がshASC 細胞の運動性が亢進した。浸潤アッセイでも，異なっており，アクチンのドット様構造が目立って

shASC 細 胞 は 浸 潤 能 が 亢 進 し て い た 。ECM 細 胞見られた。

接着アッセイでは， 接着能に差は見られなかった。

４．浸潤突起形成アッセイでは，shASC 細胞で浸潤

shASC 細胞はコントロール細胞とは細胞形態が異突起が多く観察された。B16F10細胞，チオグリコなっており，F- アクチン染色でラメラポディア様構

レート誘導マウス腹腔マクロファージにおいても同造やアクチンのドット様構造が目立って見られた。浸様であった。以上より，ASC 発現抑制は，細胞運潤突起形成アッセイでは，shASC 細胞で浸潤突起が動能，浸潤突起形成，浸潤能を亢進することが分多く観察された。B16F10細胞，チオグリコレート誘かった。

導マウス腹腔マクロファージにおいても同様に，

５．細胞運動，浸潤での重要なシグナル伝達分子であshASC 細胞で浸潤突起／ポドソーム形成が亢進してる Src との関係について調べた。shASC 細胞では，いた。shASC 細胞では，Src のリン酸化が増強してSrc のリン酸化が増強しており，FAK，Erk1/2のおり，下流のシグナル分子である FAK，Erk1/2のリ

リン酸化も増強していた。Src 阻害剤を作用させる

ン酸化も増強していた。Src 阻害剤であるダサチニブと，shASC 細胞で細胞運動能，浸潤突起形成がよを作用させると，shASC 細胞で細胞運動能，浸潤突り強く阻害された。以上より，ASC の発現が抑制

起形成がより強く阻害された。カスパーゼ８の阻害剤

されると，Src，FAK，Erk のリン酸化を介し，細である z-VAD-fmk，z-IETD-fmk は shASC 細胞の胞運動能や浸潤能が亢進することが分かった。

細胞運動を阻害した。また，shASC 細胞では，カス６．カスパーゼ８は Src により Tyr380がリン酸化さパーゼ８の Tyr380のリン酸化がコントロール細胞にれると細胞運動に関与すると報告されており，また，比べ増強したが，阻害剤を用いるとリン酸化が抑制さ

カスパーゼ８の DED は PYD を介して ASC と結れた。

合することが報告されているため，カスパーゼ８と【結論】ASC 発現が抑制されると，細胞骨格が変化し，の関連性について調べた。カスパーゼ８阻害剤は

Src，FAK，Erk，カスパーゼ８を介し，細胞運動能，

shASC 細胞の細胞運動を阻害した。また，shASC

浸潤突起形成，浸潤能が亢進し，その結果，転移性が細胞では，Tyr380のリン酸化がコントロール細胞

増強しがんの悪性度が増すということが分かった。

に比べ増強したが，阻害剤により抑制された。以上

ASC の発現抑制はがんの予後因子として重要である

より，ASC 存在下では ASC とカスパーゼ８が結合と考えた。

することで Src のカスパーゼ８への接近を抑制し，（論文審査の結果の要旨）

逆に，ASC が欠損すると Src のカスパーゼ８へのASC は，アポトーシス，自然免疫において重要な接近を容易にし Tyr380がリン酸化され，細胞運動No. 5, 2017287

審査学位論文要旨が亢進することが示唆された。

性度が増すということが明らかとなった。主査，副査

以上より，ASC 発現が抑制されると，細胞骨格がは一致して本論文を学位論文として価値があるものと変化し，Src，FAK，Erk，カスパーゼ８を介し，細認めた。

胞運動能，浸潤突起形成，浸潤能が亢進し，がんの悪Increasing Incidence and Age at Onset of Amyotrophic Lateral Sclerosis in the Nagano
Prefecture of Japan（長野県における ALS の発症者数の増加と発症年齢の高齢化）
小

林

千

夏

（論文の内容の要旨）

発症年齢は1984-1989年で55.3±8.48歳，1990-1994【背景】筋萎縮性側索硬化症（ALS）は，一次・二次

年 で 58.8±12.6 歳 ， 1995-1999 年 で 62.2±11.1 歳 ，運動ニューロンが進行性に変性する疾患であり，上下

2000-2004 年 で 62.7±12.9 歳 ，2005-2009 年 で 65.3±

肢体幹の筋力低下の進行とともに呼吸筋や嚥下筋の能

9.26歳，2010-2014年で66.2±11.0歳であり，徐々に力が低下し，発症から３～５年で死に至る。症状は重上昇していた。発症年齢が65歳以降である高齢発症篤であり，栄養管理や気道管理が必須となるため，患ALS の割合は，1984-1989年で17 ％，1990-1994年で者家族の介護負担や必要医療資源も大きく，本疾患が41 ％ ，1995-1999 年 で 54 ％ ，2000-2004 年 で 58 ％ ，

地域医療に与える影響は甚大である。近年，複数の2005-2009 年 で 58 ％ ，2010-2014 年 で 60 ％ で あ り ，国・地域から本疾患の患者数の増加が散発的に報告さ1995年以降は新規 ALS 患者の半数以上は高齢発症者れている。今回我々は信州大学医学部附属病院での患で占められていた。

者数の推移を検討し，同様の傾向がみられるのか否か

患者住所を信州大学医学部附属病院が含まれる松本

について検討した。また患者数増加に関連する要因に医療圏と，それ以外（北信，長野，佐久，上小，諏訪，

ついてもあわせて検討した。

上伊那，飯伊，木曽，大北）の二次医療圏に分類した【対象】1984年から2014年の約30年間に当院を受診ところ，松本医療圏の患者の占める割合は1984-1989

し確定診断された ALS 患者連続症例232名の診断時年で61 ％，1990-1994年で36 ％，1995-1999年で46 ％，診療録を参照し，現在広く用いられている revised El

2000-2004年で37 ％，2005-2009年で46 ％，2010-2014

Escorial 診断基準を満たす199名を対象とした。

年で47 ％であった。直近10年間では松本医療圏の患【方法】対象30年間を５年間ごと６区間に分け，患者者比率は変化がないため，本院における患者数の増加

数，発症年齢，性比，病型について推移を検討した。

は他医療圏からの患者流入が原因ではなく，松本医療【結果】199名のうち，115名が男性，84名が女性で圏内での発症者数の増加が示された。

あった。発症年齢は64.6±12.2歳であった。149名は【考察】 長野県では近年主要医療圏の基幹病院に神四肢脱力が初発症状（limb-onset type）であり，残経内科医を配置する体制を整えており，ALS の診断

り50名は球麻痺症状が初発症状（bulbar-onset type）

は当該病院で完結するようになった。松本医療圏の内であった。

でも診断能力をもった病院が整備されてきており，

1984-89年で18名（男性/女性 6/12名，limb/bulbar

ALS 診断を目的として患者を当院へ紹介する必要性

12/6 名 ），1990-1994 年 で 22 名（ 男 性/女 性 14/8 名 ，は低下してきていると考えられる。患者住所を検討し

limb/bulbar 17/5名），1995-1999年で26名（男性/女

たが松本医療圏外の患者割合の増加はなく，当地での性 15/11名，limb/bulbar 20/6名），2000-2004年で19

ALS 患者数は近年明らかに増加していると考えた。

名（男性/女性 9/10名，limb/bulbar 13/6名），2005-

また，他医療圏からの患者も同様に増加しており，発2009年で50名（男性/女性 31/19名，limb/bulbar 40/症数の増加は松本医療圏を越えた傾向であると考えた。

10 名 ），2010-2014 年 で 64 名（ 男 性/女 性 40/24 名 ，

日本社会は急速に高齢化が進行しており，その傾向

limb/bulbar 47/17名）の患者を新規に診断しており，は長野県でも同一である。高齢発症 ALS 患者の増加

直近10年での新規患者は性別・病型にかかわらず増加

は，発症要因の一つに加齢があることを示唆する。高を認めたが，特に女性，bulbar-onset type での増加

齢化は今後も進行するため，発症者の増加傾向は今後が顕著であった。

も継続する可能性がある。本疾患は経過中に多大な介

288

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

護・医療資源を要求するため，地域医療の中での高齢を認めたが，特に女性，bulbar-onset type での増加

ALS に対する専門的体制の構築が求められる。

が顕著であった。

（論文審査の結果の要旨）

発症年齢は1984-1989年で55.3±8.48歳，1990-1994

筋萎縮性側索硬化症（ALS）は，一次・二次運動

年 で 58.8±12.6 歳 ， 1995-1999 年 で 62.2±11.1 歳 ，

ニューロンが進行性に変性する疾患であり，上下肢体

2000-2004 年 で 62.7±12.9 歳 ，2005-2009 年 で 65.3±

幹の筋力低下の進行とともに呼吸筋や嚥下筋の能力が9.26歳，2010-2014年で66.2±11.0歳であり，徐々に低下し，発症から３～５年で死に至る。症状は重篤で上昇していた。発症年齢が65歳以降である高齢発症あり，栄養管理や気道管理が必須となるため，患者家

ALS の割合は，1984-1989年で17 ％，1990-1994年で族の介護負担や必要医療資源も大きくなり，疾患が地

41 ％ ，1995-1999 年 で 54 ％ ，2000-2004 年 で 58 ％ ，

域医療に与える影響は甚大である。近年，複数の国・2005-2009 年 で 58 ％ ，2010-2014 年 で 60 ％ で あ り ，地域から本疾患の患者数の増加が散発的に報告されて1995年以降は新規 ALS 患者の半数以上は高齢発症者いる。今回信州大学医学部附属病院での患者数の推移で占められていた。

を検討し，同様の傾向がみられるのか否かについて検患者住所を信州大学医学部附属病院が含まれる松本

討した。また患者数増加に関連する要因についてもあ医療圏と，それ以外（北信，長野，佐久，上小，諏訪，

わせて検討した。

上伊那，飯伊，木曽，大北）の二次医療圏に分類した

1984年から2014年の約30年間に当院を受診し診断さところ，松本医療圏の患者の占める割合は1984-1989

れた ALS 患者連続症例232名の診断時診療録を参照

年で61 ％，1990-1994年で36 ％，1995-1999年で46 ％，し，現在広く用いられている revised El Escorial 診断

2000-2004年で37 ％，2005-2009年で46 ％，2010-2014

基準を満たす199名を抽出した。30年間を５年間ごと

年で47 ％であり，各期間に統計学的有意差はみられ６区間に分け，患者数，発症年齢，性比，病型についなかった。患者数の増加は他医療圏からの患者流入がてその推移を検討した。

原因ではなく，松本医療圏内での発症者数の増加が示

199名のうち，115名が男性，84名が女性であった。

された。他医療圏からの患者も同様に増加しており，発症年齢は64.6±12.2歳であった。149名は四肢脱力

発症数の増加は松本医療圏を越えた傾向であると考えが初発症状（limb-onset type）であり，50名は球麻た。

痺症状が初発症状（bulbar-onset type） であった。

日本社会は急速に高齢化が進行しており，その傾向

1984-89年で18名（男性/女性 6/12名，limb/bulbarは長野県でも同一である。高齢発症 ALS の増加は，

12/6 名 ），1990-1994 年 で 22 名（ 男 性/女 性 14/8 名 ，

発症要因の一つに加齢があることを示唆する。高齢化，1995-1999年で26名（男性/女limb/bulbar 17/5名）

は今後も進行するため，発症者の増加傾向は今後も継性 15/11名，limb/bulbar 20/6名），2000-2004年で19続する可能性がある。本疾患は経過中に多大な介護・名（男性/女性 9/10名，limb/bulbar 13/6名），2005-

医療資源を要求するため，地域医療の中での高齢 ALS

2009年で50名（男性/女性 31/19名，limb/bulbar 40/

に対する特別な枠組み構築が求められる。
以上の結果より主査，副査は一致して本論文を学位

10 名 ），2010-2014 年 で 64 名（ 男 性/女 性 40/24 名 ，limb/bulbar 47/17名）の患者を新規に診断しており，論文として価値があるものと認めた。

直近10年での新規患者は性別・病型にかかわらず増加

Morphological analysis of regenerated bulbar fibers in relation to neonatal olfaction（新生児ラットの嗅覚機能発現に必要な嗅球由来の再生神経線維の形態解析）
黒

岩

正

文

（論文の内容の要旨）

本研究では，新生児ラットにおける LOT 切断後の再【目的】外側嗅索（LOT）は，嗅球から嗅皮質への投生について，機能が回復する時期を正確に確定し，さ射線維からなる脳内嗅覚伝導路である。我々は以前にらに機能回復に必要な再生線維量を調べることを目的

新生児ラットで LOT 切断実験を行い，４週間後に切として実験を行った。

断された軸索が再生し嗅覚が回復することを発表した。

【方法】

No. 5, 2017289

審査学位論文要旨⑴

機能回復時期
生後２日（P2）の新生児ラットの左 LOT を切断し（31 ％）であった。
２．機能回復に必要な再生線維量

た。LOT の完全切断は，切断直後に LOT 切断部よLOT の完全切断例において，機能的にまだ回復しり後方の嗅皮質に逆行性の神経トレーサーであるていない時期（P10，n＝５）と機能回復が確認されFast Blue（FB）を注入し，嗅球投射ニューロンがた時期（P12，n＝６）のすべてのラットにおいて，FB で標識されないことにより確認した。哺乳期の切断部より尾側で BDA 陽性の再生線維が検出された。

ラットは嗅覚がないと哺乳できないため，LOT 切断

P10における BDA 陽性部位の面積（嗅結節レベル

ラットの機能再生については，胃の中に存在する哺乳１～４の合計）および密度（嗅結節レベル１～４の平したミルクの有無で判定した。まず，P7，P9，P11で均）は，それぞれ，LOT 切断側（左側）では1.91×

右嗅球を吸引除去し，24時間後（P8，P10，P12）の105μm2および0.13，非切断側（右側）では8.66×105

胃内ミルクを調べた結果，LOT 完全切断例において

μm2および0.34であった。P12における BDA 陽性部

胃内にミルクを認めたラットは P12のみであった。次位の面積（嗅結節レベル１～４の合計）および密度に詳細な再生時期を確定するため，P2で左 LOT を切（嗅結節レベル１～４の平均）は，それぞれ，LOT 切

断したラットの右嗅球を P11（9：00-10：00）で吸引断側（左側）では4.34×105 μm2 および0.21，非切断

除 去 し ，P11 の 14：00 ，17：00 ，20：00 ，23：00 ，側（右側）では11.05×105μm2および0.35であった。

P12 の 8 ： 00 ，11 ： 00 ，14 ： 00 ，17 ： 00 ，20 ： 00 ，

【結論】

23 ： 00 ，P13 の 8 ： 00 ，11 ： 00 ，14 ： 00 ，17 ： 00 ，

１．LOT を切断された新生児ラットの嗅覚は，切断

20：00，23：00に胃内ミルクの有無について調べた。

後10日で回復することが明らかとなった。

⑵

２．LOT を切断された新生児ラットの嗅覚機能回復

機能回復に必要な再生線維量P2ラットの左 LOT を切断し，LOT の完全切断をには， 嗅結節レベルにおいて， 面積では正常の約確認するため同側嗅皮質に FB を注入した。P5で順行

40 ％，密度では正常の約60 ％の再生線維が必要であ性 の 神 経 ト レ ー サ ー で あ る Biotinylated dextran

ることが明らかとなった。

amine（BDA）を両側嗅球に注入した。予備実験の結（論文審査の結果の要旨）

果を踏まえて，機能が回復していない時期（P10）と本研究で黒岩は，新生児ラットでは嗅覚伝導路であ機能回復が確認された時期（P12）における再生線維

る外側嗅索（LOT）を切断しても自然再生すること

量を比較するため，P10および P12で灌流固定を行っに関して，機能が回復する正確な時期を確定し，さらた。脳を採取し，嗅球（矢状断）および嗅球を除いたに，機能回復に必要な再生線維量を調べることを目的

脳（冠状断）から50μm 厚で300μm 間隔の凍結切片として実験を行った。

を６セット作成した。２セット目の切片を蛍光顕微鏡
下で観察し，LOT の不完全切断例を除外した。LOT

その結果，黒岩は次の結果を得た。
１．機能回復時期

完全切断例において，１，３，５セット目の切片を用生後２日（P2）で左 LOT を切断し P11で右嗅球

いて BDA 陽性線維を検出し，LOT 切断部よりも尾を吸引除去したラット（n＝22）の LOT 完全切断側にある嗅結節の４つのレベル（レベル１：嗅結節吻例（n＝13） において， 胃内ミルクを認めた時期

側端，レベル２：嗅結節吻側1/3，レベル３：嗅結節（嗅覚が回復した時期） は，P11が０匹（０％），

尾側1/3，レベル４：嗅結節尾側端）において BDA

P12が９匹（69 ％），P13が４匹（31 ％）であった。

陽性部位の面積および密度を計測した。計測は LOTを切断した左側（再生側）と LOT を切断していない

２．機能回復に必要な再生線維量
LOT の完全切断後，機能的にまだ回復していな

右側（正常側）の両方で行った。

い時期（P10，n＝５）と機能回復が確認された時【結果】

期（P12，n＝６）のすべてのラットにおいて，切１．機能回復時期

断部より尾側で BDA 陽性の再生線維が検出された。

P2で左 LOT を切断し P11で右嗅球を吸引除去した

P10における嗅結節レベル１（嗅結節吻側端），レ

ラット（n＝22）の完全切断例（n＝13）において胃

ベル２（結節吻側1/3），レベル３（嗅結節尾側1/3），

内ミルクを認めた時期（嗅覚が回復した時期） は，レベル４（嗅結節尾側端）での BDA 陽性部位の面P11が０匹（０％），P12が９匹（69 ％），P13が４匹積（嗅結節レベル１～４の合計）および密度（嗅結

290

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

節レベル１～４の平均）は，それぞれ，LOT 切断

また，LOT を切断された新生児ラットの嗅覚機能回

52側（左側）では1.91×10 μm および0.13，非切断

復には，嗅結節レベルにおいて，面積では正常の約

52側（右側）では8.66×10 μm および0.34であった。

40 ％，密度では正常の約60 ％の再生線維が必要であ

P12における BDA 陽性部位の面積（嗅結節レベル

ることが明らかとなった。LOT 切断後の再生に関し

１～４の合計）および密度（嗅結節レベル１～４のて，機能が回復する正確な時期の確定および機能回復

平均） は， それぞれ，LOT 切断側（左側） ではに必要な再生線維量の客観的評価がなされており，生52

4.34×10 μm および0.21，非切断側（右側）では
52

物学的にも臨床医学的にも意義があるものと考えられ，

11.05×10 μm および0.35であった。

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が以上により，LOT を切断された新生児ラットの嗅あるものと認めた。

覚は，切断後10日で回復することが明らかとなった。

Age-dependent PPARα activation induces hepatic sulfatide accumulation in transgenic
mice carrying the hepatitis C virus core gene（HCV コア遺伝子トランスジェニックマウス
におけるペルオキシソーム増殖剤活性化受容体α型の加齢依存的活性化は肝臓におけるスル
ファチド蓄積を誘発する）
田洋

洋（論文の内容の要旨）復投与した。肝組織中のスルファチドは，有機溶媒【背景と目的】 スフィンゴ糖脂質の一種であるスルで抽出し，リゾスルファチドに変換後，質量分析法

ファチドは，癌組織に発現し細胞増殖や遠隔転移を促（MALDI-TOF MS 法）で定量した。また，肝組織中進することが報告されている。従って，スルファチドの mRNA および蛋白発現量を real-time PCR 法およ

代謝に関する研究は癌の予防や治療に関する有益な情

び Immunoblot 法で測定した。加えて，PPARαの特報をもたらす可能性がある。ペルオキシソーム増殖剤

異的応答領域に対する結合能を ELISA 法で測定し，活性化受容体α型（PPARα）は，脂肪酸代謝や発癌

PPARαの転写活性を評価した。

に関わる核内受容体である。PPARαの活性化は，ス【結果】HCVcpTg マウスの肝組織では，スルファチ

ルファチド合成酵素の発現を誘導し， 組織中のスド含有量は加齢依存的に増加し，肝癌サンプルではさ

ルファチド含有量を増加させることを我々は報告しらに増加した。また，スルファチド合成系酵素（SPT，た 。 ま た ，HCV コ ア 遺 伝 子 ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ クCST）および運搬蛋白（GLTP）の発現量は加齢依存（HCVcpTg）マウスは，HCV による肝癌発症機序を的に増加し，その中でも CST 発現は肝癌サンプルで研究する有益な動物モデルである。我々は本マウスに顕著な増加を認めた。加えて，PPARαの発現量と転おいて，PPARαが加齢依存的に活性化し肝癌を発症

写活性の加齢依存的亢進が認められ，肝癌サンプルでさせることを見出したが，この発癌過程におけるスルはさらなる増加が見出された。これらの変化は野生型

ファチドの関与は不明であった。本研究では，この点マウスでは認められず，MK886投与により消失した。

を明らかにするために，HCVcpTg マウスの肝組織を一方，酸化ストレス産生酵素群（Aox，Cyp4A，Nox2）

用いて，PPARα活性化およびスルファチド代謝の加および消去酵素（Cat）の発現量と酸化ストレスマー

齢依存的変化を検討した。

カーである MDA の含有量は加齢依存的に増加した【材料および方法】HCVcpTg および野生型オスマウ

が，肝癌サンプル・非腫瘍肝サンプルの間では統計的ス（C57BL/6）を各々３および16月齢で解析した。16有意差が検出されなかった。

月齢の HCVcpTg マウスでは約30 ％の個体が肝癌を【結論】HCV コア蛋白により誘導される PPARα活性発症したため，肝癌発症個体から採取した癌部を肝癌化はスルファチド合成を促進し，スルファチド蓄積をサンプル，肝癌非発症個体から採取した肝組織を非腫もたらすことが示唆された。肝癌サンプルで PPARα瘍肝サンプルとした。また，一部の16月齢 HCVcpTg

活性化とスルファチド蓄積が共に促進したことから，

マ ウ ス に 対 し て ，PPARα 拮 抗 薬 で あ る MK886 をPPARα活性化を介した肝内スルファチド蓄積が肝癌

解剖日の一週間前から１mg/kg/day で腹腔内に反発症機序に寄与した可能性が示唆された。本研究から，

No. 5, 2017291

審査学位論文要旨

HCV 関連肝癌の発症予防において，肝組織におけるチドに変換後，質量分析法（MALDI-TOF MS 法）

PPARα機能およびスルファチド含量の制御が有用でにより定量した。また，肝組織中の mRNA および蛋ある可能性が示唆された。また，過去の研究において，白発現量を real-time PCR 法および Immunoblot 法で酸化ストレスの増加はスルファチド合成を抑制するこ測定した。また，PPARαの特異的応答領域に対するとが明らかにされている。本研究から，PPARαの活結合能を ELISA 法で測定し，PPARαの転写活性を性化は酸化ストレスの増加よりスルファチド代謝制御

評価した。
その結果，田 洋洋は次の結論を得た。

に強く影響することが示唆された。
（論文審査の結果の要旨）

１．HCVcpTg マウスの肝組織では，スルファチド含

スフィンゴ糖脂質の一種であるスルファチドは，癌

有量は加齢依存的に増加し，肝癌サンプルではさらに増加した。

組織に発現し細胞増殖や遠隔転移を促進することが報告されている。ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体

２．HCVcpTg マウスの肝組織では，スルファチド合

α型（PPARα）は，脂肪酸代謝や発癌に関わる核内成系酵素（SPT，CST）および運搬蛋白（GLTP）

受容体である。我々は，PPARαの活性化がスルファの発現量は加齢依存的に増加し，CST 発現は肝癌

チド合成酵素の発現を誘導し，組織中のスルファチド

サンプルで顕著な増加を認めた。

含有量を増加させることを報告した。一方，我々は，３．HCVcpTg マウスの肝組織では，PPARαの発現

HCV コア遺伝子トランスジェニック（HCVcpTg）マ量と転写活性の加齢依存的亢進が認められ，肝癌サ

ウスの肝臓において，PPARαが加齢依存的に活性化

ンプルではさらなる増加が見出された。

し肝癌を発症させることを見出したが，この発癌過程

４．上記１-３の変化は野生型マウスでは認められず，におけるスルファチドの関与は不明であった。本研究

MK886投与により消失した。

では，HCVcpTg マウスの肝組織を用いて，PPARα

これらの結果より，HCV コア蛋白により誘導され活性化およびスルファチド代謝の加齢依存的変化を検る PPARα活性化はスルファチド合成を促進し，スル討した。

ファチド蓄積をもたらすことが示唆された。肝癌サンHCVcpTg および野生型オスマウス（C57BL/6）を

プルで PPARα活性化とスルファチド蓄積が共に促進

各々３および16月齢で解析した。16月齢の HCVcpTg

したことから，PPARα活性化を介した肝内スルファ

マウスでは約30 ％の個体が肝癌を発症したため，肝チド蓄積が肝癌発症機序に寄与した可能性が示唆され癌発症個体から採取した癌部を肝癌サンプル，肝癌非た。本研究から，HCV 関連肝癌の発症予防において，発症個体から採取した肝組織を非腫瘍肝サンプルとし肝組織における PPARα機能およびスルファチド含量

た。また，一部の16月齢 HCVcpTg マウスに対して，の制御が有用である可能性が示唆された。よって，主PPARα拮抗薬である MK886を解剖日の一週間前か査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があら１mg/kg/day で腹腔内に反復投与した。肝組織中るものと認めた。

のスルファチドは，有機溶媒で抽出し，リゾスルファ

ABCB1 and ABCC11 confer resistance to eribulin in breast cancer cell lines（ ABCB1 ，
ABCC11は乳癌細胞のエリブリン耐性に関与する）
大

場

崇

旦

（論文の内容の要旨）

し て い る こ と が 知 ら れ て お り ， 今 回 ，ABCB1 と【背景と目的】エリブリンは再発乳癌の key drug のABCC11が乳癌細胞のエリブリン耐性に関与している１つであるが，その耐性機構の知見は乏しい。エリブ

か否かについて，エリブリン耐性乳癌細胞株を作成し，リン耐性機構を解明するために，我々はエリブリン耐検討した。

性乳癌細胞株を作成し，耐性に関与する遺伝子の同定【方法】エストロゲン受容体（ER）陽性/上皮細胞増を試みてきたが，ABC トランスポーターの ABCB1

殖因子受容体２型（HER2）陰性乳癌細胞株 MCF7，と ABCC11が候補遺伝子として同定された。ABC ト

ZR75-1，ER 陽性/HER2陽性細胞株 BT474，ER 陰性

ランスポーターは薬剤排泄に働き，抗癌剤耐性に関与/HER2陽性細胞株 SKBR3，ER 陰性/HER2陰性細胞

292

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

株 MDA-MB-231，Hs578T，MDA-MB-157の７つのその耐性機構の知見は乏しい。エリブリン耐性機構を

乳癌細胞株でエリブリン耐性株（MCF7/E，BT474/E，

解明するために，我々はエリブリン耐性乳癌細胞株をZR75-1/E，SKBR3/E，MDA-MB-231/E，Hs578T/E，作成し，耐性に関与する遺伝子の同定を試みてきたが，

MDA-MB-157/E）を樹立し，これらの細胞の ABCB1，

ABC トランスポーターの ABCB1と ABCC11が候補

ABCC11発現を RT-PCR およびウエスタンブロット

遺伝子として同定された。ABC トランスポーターはにて解析し，さらに siRNA で発現を抑制した際のエ薬剤排泄に働き，抗癌剤耐性に関与していることが知

リブリン感受性回復の有無，および HEK293T 細胞にられており，今回，ABCB1と ABCC11が乳癌細胞の強制発現させた際のエリブリン感受性の変化，さらにエリブリン耐性に関与しているか否かについて，エリ

乳癌に対する key drug３剤（エピルビシン，パクリ

ブリン耐性乳癌細胞株を作成し，検討した。

タキセル，フルオロウラシル）に対する感受性変化のエストロゲン受容体（ER）陽性/上皮細胞増殖因子

有無を WST assay にて解析した。

受容体２型（HER2）陰性乳癌細胞株 MCF7，ZR75-【結果】マイクロアレイ解析で MCF7/E では親株と比1 ，ER 陽 性 /HER2 陽 性 細 胞 株 BT474 ，ER 陰 性/

べ ， ABCB1 と ABCC11 の mRNA 発 現 が 56.1 倍 ，HER2陽性細胞株 SKBR3，ER 陰性/HER2陰性細胞株

17.9倍上昇していた。そこで，樹立した７つのエリブ

MDA-MB-231，Hs578T，MDA-MB-157の７つの乳

リン耐性乳癌細胞株で，RT-PCR でこれらの mRNA

癌細胞株でエリブリン耐性株（MCF7/E，BT474/E，発現を解析したところ，その程度は異なるものの７細ZR75-1/E，SKBR3/E，MDA-MB-231/E，Hs578T/

胞株全てで ABCB1と ABCC11発現の上昇を認めた。

E，MDA-MB-157/E） を樹立し， これらの細胞のウエスタンブロット法でのタンパク発現解析でも，７

ABCB1，ABCC11発現を RT-PCR およびウエスタンブ

つのエリブリン耐性株全てで ABCB1，ABCC11の発ロットにて解析し，さらに siRNA で発現を抑制した際現増加を認めた。MCF7/E，BT474/E，MDA-MB-のエリブリン感受性回復の有無， および HEK293T

231/E で siRNA により ABCB1，ABCC11発現をそれ細胞に強制発現させた際のエリブリン感受性の変化，

ぞれ抑制すると，エリブリン感受性の部分的な回復が

さらに乳癌に対する key drug３剤（エピルビシン，

認められた。また，HEK293T 細胞にプラスミドベク

パクリタキセル，フルオロウラシル）に対する感受性

ターを用いて ABCB1，ABCC11をそれぞれ強制発現変化の有無を WST assay にて解析した。

させるとエリブリン耐性が誘導された。これらの結果

その結果，大場は次の結論を得た。

から，ABCB1と ABCC11がエリブリン耐性に関与して

１． 樹立した７つのエリブリン耐性乳癌細胞株で，いると考えらえた。HEK293T 細胞に ABCB1，ABCC11

RT-PCR でこれらの mRNA 発現を解析したところ，をそれぞれ強制発現させると，エピルビシン，パクリ

その程度は異なるものの７細胞株全てで ABCB1とタキセル，フルオロウラシルに対する感受性も低下し

ABCC11発現の上昇を認めた。ウエスタンブロットていたが，MCF7/E と MDA-MB-231/E においても法でのタンパク発現解析でも，７つのエリブリン耐

これらの薬剤に対する交差耐性が認められたた。これ性株全てで ABCB1，ABCC11の発現増加を認めた。

らの細胞で，ABCB1を抑制するとエピルビシン，パ

２．MCF7/E ， BT474/E ， MDA-MB-231/E でクリタキセルの，ABCC11の抑制によりフルオロウラ

siRNA により ABCB1，ABCC11発現をそれぞれ抑シルの感受性が回復したことから，エピルビシン，パ

制すると，エリブリン感受性の部分的な回復が認め

クリタキセルとの交差耐性には ABCB1が，フルオロられた。

ウラシルとの交差耐性には ABCC11が関与している

３．HEK293T 細胞にプラスミドベクターを用いてと考えられた。

ABCB1，ABCC11をそれぞれ強制発現させるとエ【考察】ABCB1と ABCC11は乳癌の subtype によらずリブリン耐性が誘導された。

エリブリン耐性に関与しており，ABCB1や ABCC11

４．HEK293T 細胞に ABCB1を強制発現させると，がエリブリンの効果予測に有用な指標となり，これら

エピルビシン，パクリタキセルの ABCC11を強制を抑制することで，エリブリンの感受性を増強できる

発現させるとフルオロウラシルの感受性も低下し，可能性が示唆される。

MCF7/E と MDA-MB-231/E においてもこれらの（論文審査の結果の要旨）
エリブリンは再発乳癌の key drug の１つであるが，No. 5, 2017

薬剤に対する交差耐性が認められた。
５．MCF7/E と MDA-MB-231/E において ABCB1
293

審査学位論文要旨を抑制するとエピルビシン， パクリタキセルの，ラシルとの交差耐性には ABCC11が関与していると

ABCC11の抑制によりフルオロウラシルの感受性が考えられた。ABCB1や ABCC11がエリブリンの効果回復した。

予測に有用な指標となり，これらを抑制することで，これらの結果より，ABCB1と ABCC11は乳癌のエリブリンの感受性を増強できる可能性が示唆される

subtype によらずエリブリン耐性に関与しており，エ結果と考えられた。よって，主査，副査は一致して本

リブリン耐性乳癌細胞株におけるエピルビシン，パク

論文を学位論文として価値があるものと認めた。

リタキセルとの交差耐性には ABCB1が，フルオロウ

Aberrant methylation of protocadherin 17 and its prognostic value in pediatric acute lymphoblastic leukemia.（小児急性リンパ性白血病におけるプロトカドヘリン17遺伝子の異常メ
チル化と予後因子としての有用性の検討）
Le Thanh Nha Uyen
（論文の内容の要旨）

as controls. We used Infinium Methylation 450K Ar­【 Background 】 The cure rate of childhood acuteray to assess the genome-wide DNA methylation

lymphoblastic leukemia (ALL) has improved overstatus. Methylation status of each individual gene

the past four decades. However, the prognosis of ap­

was then determined by combine bisulfite restriction

proximately 20 % of patients with ALL remains poor

analysis (COBRA) and genome bisulfite sequencing.

because of disease recurrence. In recent years, manymRNA expression was evaluated by reverse tran­

studies have attempted to identify new clinical bio­

scriptase PCR (RT-PCR) and quantitative real-time

markers that can predict high-risk patients andPCR.

serve as targets for novel therapeutic interventions【Results】Cadherin superfamily genes including cad-using gene-expression microarrays, DNA-methyla­

herin (CDH)1, protocadherin (PCDH)8, and PCDH17

tion arrays, and next-generation sequencing. DNA

were selected for analyzing methylation status. In

methylation and histone modifications are two major

40 B-cell precursor (BCP) ALL samples at onset,

epigenetic mechanisms regulating gene expression.

the methylation frequencies of CDH1, PCDH8, andHypermethylation of CpG islands in the promoter

PCDH17 were 62.5 %, 55 %, and 30 %, respectively.

region of tumor suppressor genes that results in

CDH1 and PCDH8 methylation was observed in alltranscriptional silencing plays an important role inleukemic cell lines whereas PCDH17 methylation

lymphoid-lineage leukemogenesis and may be an

was detected in 4 of them. CDH1 and PCDH8 meth­important contributor toward relapse. In addition,

ylation was also detected in 80 % and 20 % of control

DNA methylation profiling is useful for subtype clas­

BM samples, respectively. On the contrary, PCDH17

sification of newly diagnosed ALL patients and pre­was unmethylated in all control BM samples. The

diction of outcome and relapse risk. This study wascorrelation between methylation status and event-

aimed at examination of the methylation status offree survival (EFS) or overall survival (OS) was

cadherin superfamily genes and its prognostic value

evaluated. PCDH17 methylation-positive group wasfor ALL relapse.

profoundly inferior to that of PCDH17 methylation-【 Patient and methods 】 Bone marrow (BM) cells

negative group : 33 % (95 % CI, 10-59) vs. 75 % (95 %were aspirated from 40 children with B-cell precur­

CI, 55-87) ; P＝0.005. A significant difference in thesor (BCP) ALL diagnosed between 1995 and 2008 at

OS was also found between the two groups : 50 % (95Shinshu University. Six ALL cell lines were used.

% CI, 21-73) vs. 82 % (95 % CI, 62-92) ; P＝0.016. Con­

Peripheral blood (PB) mononuclear cells (MNCs)versely, there were no substantial correlations be­from healthy adult volunteers and BM MNCs fromtween neither the methylation status of CDH1 andALL patients at complete remission (CR) were used

EFS or OS, nor the methylation status of PCDH8 and

294

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

EFS or OS. By multivariate analyses, only PCDH17

methylation frequencies of CDH1, PCDH8, andmethylation was associated with increased risk for

PCDH17 were 62.5 %, 55 %, and 30 %, respectively.

relapse and mortality in patients with BCP ALL [HR,However, CDH1 and PCDH8 methylation was

5.23 ; P＝0.016 for relapse and HR, 8.22 ; P＝0.016 foralso detected in 80 % and 20 % of control BM

mortality]. CDH1 and PCDH8 methylation did not

samples, respectively. On the contrary, PCDH17

influence ALL outcomes.

was unmethylated in all control BM samples.

【 Conclusion 】 PCDH17 methylation at onset was

３．The relationship between methylation status ofclosely related to poor prognosis, and thus it could

cadherin superfamily genes at diagnosis and clini­be used as a new biomarker to predict relapse incal characteristics of patients with B-cell precur­

BCP ALL.

sor ALL : Event-free survival (EFS) of PCDH17（論文審査の結果の要旨）

methylation-positive group was profoundly inferi­

The cure rate of childhood acute lymphoblastic

or to that of PCDH17 methylation-negative groupleukemia (ALL) has improved over the past four de­: 33 % (95 % CI, 10-59) vs. 75 % (95 % CI, 55-87) ; P＝cades. However, the prognosis of approximately 20

0.005. A significant difference in the overall% of patients with ALL remains poor because of dis­survival (OS) was also found between the twoease recurrence. In recent years, many studies havegroups : 50 % (95 % CI, 21-73) vs. 82 % (95 % CI,

attempted to identify new clinical biomarkers that62-92) ; P＝0.016. Conversely, there were no sub­can predict high-risk patients and serve as targets

stantial correlations between the methylation sta­for novel therapeutic interventions using gene-tus of CDH1 and EFS or OS, and between theexpression microarrays, DNA-methylation arrays,

methylation status of PCDH8 and EFS or OS. By

and next-generation sequencing. DNA methylation

univariate and multivariate analyses, only PCDH17

and histone modifications are two major epigenetic

methylation was associated with increased risk formechanisms regulating gene expression. Hypermeth­relapse and mortality in patients with BCP ALL

ylation of CpG islands in the promoter region of tu­[HR, 5.23 ; P＝0.016 for relapse and HR, 8.22 ; P＝mor suppressor genes that results in transcriptional

0.016 for mortality]. However, CDH1 and PCDH8

silencing plays an important role in lymphoid-

methylation did not influence ALL outcomes.

lineage leukemogenesis and may be an important

４．There was no correlation between PCDH17

contributor toward relapse. In addition, DNA meth­methylation and mRNA expression levels in ALL

ylation profiling is useful for subtype classification ofsamples and cell lines.

newly diagnosed ALL patients and prediction of out­

【 Conclusion 】 PCDH17 methylation at onset wascome and relapse risk.

closely related to poor prognosis, and thus it could

In this study, we present the results as follows :１．According to genome wide methylation of anal­
ysis of a patient with relapsed B-cell precursor
ALL, cadherin superfamily genes were hyper­

be used as a new biomarker to predict relapse in
BCP ALL.
以上の内容により，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

methylated at relapse, showing the genes as the
top candidate genes with aberrant methylation at
relapse.
２．Methylation status of cadherin superfamily
genes in B-cell precursor ALL : Cadherin (CDH)1and protocadherin (PCDH)8 methylation was obser­
ved in all 6 leukemic cell lines, whereas PCDH17
methylation was detected in 4 of them. In 40 Bcell precursor (BCP) ALL samples at onset, theNo. 5, 2017295

審査学位論文要旨

Association Between Immunoglobulin G4-related Disease and Malignancy within 12 years
after Diagnosis : An Analysis after Longterm Followup（IgG4関連疾患診断12年以内における悪性腫瘍発生との関連性：長期経過での解析）
浅

野

純

平

（論文の内容の要旨）

全体での標準化罹患比は2.01（95 ％信頼区間：1.34-【背景と目的】IgG4関連疾患は血清 IgG4高値と罹患2.69）となり，IgG4関連疾患は悪性腫瘍合併と有意臓器組織における IgG4形質細胞浸潤が特徴的な全身に関連していた。IgG4関連疾患と悪性腫瘍を同時に疾患である。IgG4関連疾患の概念は自己免疫性膵炎

診断された症例であった７例を除外した場合の解析でに併発した膵外病変の検索の過程で確立され，その構も標準化罹患比は1.60（95 ％信頼区間：1.07-2.13）

成疾患は自己免疫性膵炎をはじめ，ミクリッツ病，呼と有意な結果が得られた。自己免疫性膵炎におけるサ

吸器病変，硬化性胆管炎，後腹膜線維症，間質性腎ブグループ解析では膵癌発症における標準化罹患比が炎，前立腺炎と多岐に渡る。近年，IgG4関連疾患に有意ではないものの6.81（95 ％信頼区間：0.13-13.5）

おける悪性腫瘍発症との関連性が論議となっている。

と他臓器癌と比べ高値を示した。悪性腫瘍発症累積率

Yamamoto らは105名の IgG4関連疾患患者が一般人口について日本の一般人口とカプランマイヤー曲線を用と比べ悪性腫瘍を有意に多く発症することを示した。

いて比較すると IgG4関連疾患は診断12年以内に有意

また，Shiokawa らは108名の自己免疫性膵炎を対象に悪性腫瘍を発症し得るとの結果が得られた。悪性腫に同様の結果を得た。一方，Hirano らは113名の IgG4

瘍発症群は非発症群と比べ診断時において血清活動性

関連疾患患者を対象に一般人口と比べ有意に多く悪性マーカーである IgG4，可溶性 IL-2受容体，免疫複合腫瘍を発症しないことを示した。従って，IgG4関連体が有意に高値であった。

疾患と悪性腫瘍の関連については結論が出ていない。

【結論】本研究では IgG4関連疾患は一般人口と比べ悪以上を踏まえ，本研究では IgG4関連疾患患者に悪性性腫瘍を有意に多く発症することを示した。また悪性腫瘍が有意に多く発症するかどうかを検討した。

腫瘍の発症は IgG4関連疾患診断12年以内において有【材料及び方法】 当院で1992年から2012年の期間に意に多かった。自己免疫性膵炎においては膵癌が多く

IgG4関連疾患と診断された158名（男性119名，女性発症する可能性が示唆された。IgG4関連疾患の活動

39名，年齢中央値72歳）を対象とし，診断時から2013

性が悪性腫瘍発症と強く関連していると考えられた。

年12月までの期間に悪性腫瘍を合併したかどうかを検（論文審査の結果の要旨）索し， 悪性腫瘍における標準化罹患比を算出した。

IgG4関連疾患は様々な臓器に腫大や肥厚などの炎

IgG4関連疾患と悪性腫瘍の同時診断例は選択バイア症性変化を来す慢性炎症性疾患と考えられる。慢性炎

スが影響するため，同時診断例を除外した場合の標準症と発癌の関連は以前より指摘されているが IgG4関化罹患比も算出した。悪性腫瘍を発症した臓器を明ら連疾患と発癌の関連に関しては一定のコンセンサスがかにし，各種臓器毎における標準化罹患比を算出した。

得られていない。したがって今回，IgG4関連疾患が以上までの検討を自己免疫性膵炎においてサブグルー

一般人口と比べて悪性腫瘍を有意に多く合併するかをプ解析を行った。発症年齢，性別，血清活動性マー検討した。

カー値等を悪性腫瘍発症群と非発症群において比較し，対象は IgG4関連疾患158名であり年齢中央値は72歳，悪性腫瘍合併の危険因子を検索した。カプランマイ

フォローアップ期間中央値は５年であった。IgG4関ヤー曲線を用い，IgG4関連疾患患者と日本の一般人

連疾患の悪性腫瘍発症における標準化罹患比を算出し口における悪性腫瘍累積罹患率を算出し，悪性腫瘍がた。IgG4関連疾患診断３カ月以内に悪性腫瘍と診断

どの経過の時点で有意に多く発症するかを検討した。

された症例を同時診断例と定義し同症例を除外した場【結果】平均フォローアップ期間5.95±4.48年におい合の標準化罹患比も算出した。カプランマイヤー曲線て IgG4関連疾患158名のうち，34名（21.5 ％）に36を用い IgG4関連疾患と一般人口の悪性腫瘍累積罹患

個の悪性腫瘍発生がみられた。発生臓器の内訳は肺・率を比較した。悪性腫瘍発症に関連するリスク因子を

大腸・前立腺が５例であり，胃・膵が４例であった。

抽出するために各種パラメーターを悪性腫瘍発症群と

296

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

非発症群で比較検討した。自己免疫性膵炎は IgG4関４．悪性腫瘍の発症例においては血清 IgG4，免疫複連疾患における膵病変と位置づけられており，自己免合体，可溶性 IL-2レセプターといった疾患活動性マーカーが診断時に高値であった。

疫性膵炎に限定してのサブグループ解析を行った。

５．自己免疫性膵炎においては有意ではないものの膵

その結果，浅野は次の結論を得た。
１．IgG4関連疾患の悪性腫瘍における標準化罹患比

癌における標準化罹患比が6.81と高値であった。

は2.01（95 ％信頼区間：1.34-2.69）であり一般人

これらの結果より，IgG4関連疾患は悪性腫瘍発症の危険群であると考えられた。診断から12年以内に診口と比べ有意に多く悪性腫瘍を発症した。
２．同時診断例を除外した場合でも標準化罹患比は断時の活動性マーカーが高値である症例については悪1.60（95 ％信頼区間：1.07-2.13）となり一般人口性腫瘍発症をより警戒すべきである。自己免疫性膵炎と比べ有意に多く悪性腫瘍を発症した。

の膵癌リスクに関しては関連の可能性があるが，より

３．カプランマイヤー曲線を用いた累積悪性腫瘍発症

大規模な検討が必要である。よって，主査，副査は一率での比較検討では IgG4関連疾患は診断12年以内致して本論文を学位論文として価値があるものと認めで一般人口と比べ有意に多く悪性腫瘍を発症した。

た。

High expression of ADAM10 predicts a poor prognosis for patients with glioblastoma（ADAM10高発現は膠芽腫予後不良因子となる）
金

谷

康

平

（論文の内容の要旨）

２：34-66 ％の発現，３：67 ％以上の発現とし，発現【背景と目的】膠芽腫は手術や放射線療法などを行っ

強度は０：発現なし，１：弱陽性，２：中等度陽性，ても再発を起こしやすく，予後の悪い腫瘍である。A

３：強陽性とした。発現割合と発現強度をかけた値がdisintegrin and metalloprotease（ADAM）は膜貫通

６以上のものを高発現，６未満のものを低発現と定義

蛋白質を切断して細胞外に ectodomain を遊離するプロした。

テアーゼの一種であり，中でも ADAM10は Notch1【結果】膠芽腫50症例の中で ADAM10高発現は11例にシグナルを活性化させる働きがある。Notch1は胎生見られ，39例は ADAM10低発現であった。ADAM10

発達や癌，血管新生に関与している。また Notch1は高発現例では ADAM10は腫瘍細胞質と核に発現が見ら

glioma 細胞の遊走や浸潤に関わっており，glioma とれ，また腫瘍血管内皮にも弱い発現が見られた。なおの関連があるという報告がある。ADAM10は Notch1

正常脳では ADAM10発現は見られなかった。Notch1

のみだけでなく，cadherin や L1の活性にも関わって

高 発 現 は 12 例 で ，38 例 は Notch1 低 発 現 で あ っ た 。

いる多機能分子であり，培養細胞実験では ADAM10

Notch1高発現例では Notch1は主に腫瘍細胞質に発現を抑制すると glioma 腫瘍形成が阻害される。ADAM10が見られた。Notch1は正常脳において neuron の細胞発現は他の癌腫において腫瘍浸潤や予後との関連が見質にわずかに発現が見られた。

られるという臨床報告があるが，膠芽腫での報告は少ADAM10発現を年齢，性別，術前 KPS，腫瘍サイない。本研究では，膠芽腫における ADAM10の役割を

ズ，Notch1発現でそれぞれ検討を行うと，ADAM10解明するため，膠芽腫の病理検体を用いて ADAM10の発現は Notch1発現においてのみ有意な関連が見られ発現と予後との相関，また ADAM10の発現と Notch1

た（Fisher 正確検定，p＝0.002）。

発現との相関について検討を行った。

ADAM10発現と全生存期間を Kaplan-Meier 法で【症例と方法】1989年から2012年まで信州大学医学部検討すると，全生存期間は ADAM10高発現で478日，附属病院で治療を行った膠芽腫の連続50症例を対象と低発現で633日と ADAM10高発現の方が有意に予後した。膠芽腫はすべて IDH1 wild-type であることをが悪いことがわかった（Log-rank test，p＝0.033）。

免疫組織化学的に確認した。なお正常脳を対照とした。

次に手術摘出率で全摘出または亜全摘出された膠芽腫

ADAM10と Notch1発現を免疫染色で検討し，発現の26例について検討すると，全生存期間は ADAM10高割合と強度で高発現か低発現の２群にそれぞれに分け発現で319日，低発現で725日と ADAM10高発現群にた。発現割合は０：発現なし，１：33 ％未満の発現，おいて有意に予後不良であることがわかった（Log-No. 5, 2017297

審査学位論文要旨

強陽性とした。発現割合と発現強度をかけた値が６以

rank test，p＝0.006）。
また年齢，術前 KPS，手術摘出，ADAM10発現，上のものを高発現，６未満のものを低発現と定義した。
その結果，金谷は次の結論を得た。

Notch1発現において単変量解析，多変量解析を行うと，ADAM10低発現はいずれの解析でも有意差を１．ADAM10は腫瘍細胞質と核，腫瘍血管内皮に発持って全生存期間の危険率を下げることがわかった。

現が見られた。ADAM10高発現は11例に見られ，39【結論】本研究では ADAM10は膠芽腫において22 ％例は ADAM10低発現であった。正常脳では ADAM10が高発現，Notch1は24 ％が高発現を呈し，ADAM10

発現は見られなかった。Notch1は主に腫瘍細胞質に発と Notch1の有意な関連が見られた。また膠芽腫にお現が見られ，Notch1高発現は12例で，38例は Notch1

いて ADAM10の高発現は予後悪化因子であり，正常低発現であった。Notch1は正常脳において neuron

脳に ADAM10発現が無いことから，ADAM10を阻害の細胞質にわずかに発現が見られた。

することによる膠芽腫治療の可能性があると考えられ

２．ADAM10発現は Notch1発現と有意な相関が得られた。

た。
（論文審査の結果の要旨）

３．全生存期間は ADAM10高発現群の方が有意に予A disintegrin and metalloprotease（ADAM）10は後が悪かった。次に手術摘出率で全摘出または亜全摘

Notch1シグナルを活性化させる働きがある。Notch1

出された膠芽腫26例について検討すると，ADAM10は胎生発達や癌，血管新生に関与していると言われて高発現群は低発現群よりも有意に予後不良であった。

いる。ADAM10の発現は他の癌腫において，腫瘍の４ ． 年 齢 ， 術 前 KPS ， 手 術 摘 出 ，ADAM10 発 現 ，浸潤や予後と関連があるという臨床報告があるが，膠Notch1発現において単変量解析，多変量解析を行芽腫での報告は少ないため，膠芽腫の病理検体を用いうと，ADAM10低発現はいずれの解析でも有意差て ADAM10の発現と予後との相関並びに ADAM10を持って全生存期間の危険率を下げることがわかっの発現と Notch1発現との相関について検討した。

た。

1989年から2012年まで信州大学医学部附属病院で治これらの結果より ADAM10は膠芽腫において Notch1

療を行った IDH1 wild-type 膠芽腫連続50症例を対象

シグナル伝達に関与しており，また ADAM10高発現とし，ADAM10と Notch1発現を免疫染色で発現割合

は膠芽腫の予後悪化因子となり得ることが結論づけらと強度の評価を行った。正常脳を正常対照とした。発れた。
以上より，主査，副査は一致して本論文を学位論文

現割合は０：発現なし，１：33 ％未満の発現，２：34-66 ％の発現，３：67 ％以上の発現とし，発現強度として価値があるものと認めた。

は０：発現なし，１：弱陽性，２：中等度陽性，３：

Relationship between the quantity of oral Candida and immunological vigor（口腔カンジダ
菌数と免疫力との関連性）
林

清

永（論文の内容の要旨）

許第4608704号，第5030109号）を用いて評価し，口腔【背景と目的】口腔内のカンジダ菌は免疫力と密接に内のカンジダ菌量と全身の免疫力との関係を調べるこ

関連すると推察されてはいるが，関連性を証明した報ととした。

告はない。理由として，口腔カンジダ菌の検出精度が【材料および方法】本研究に対し同意を得られた38名低いことや，全身の免疫力を数量として評価する検査（患者として信州大学附属病院特殊歯科口腔外科外来，法が存在していなかったことが考えられた。今回，遠相澤病院口腔病センターを受診した24名と，14名の健山らが報告した通常の培養法よりも高い検出率を認め常者）よりうがい液，静脈血を採取した。カンジダ菌る培養法を用いてカンジダ菌量の測定を行い，全身の量の測定（濃縮法）は以下の通り行った。５ml の滅

免疫力については東京医科歯科大学難治疾患研究所内，

菌生理食塩水を口腔内に含み，30秒間含嗽後に全量を株式会社健康ライフサイエンスの免疫力スコア（Scor­回収した。3,200Ｇで20分間遠心分離，上澄み液を廃

ing of Immunological Vigor，東京医科歯科大学

棄し，スピッツ底部に残留した残渣に滅菌水250μl

298

特

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨を追加し再混濁した。再混濁液50μl をクレモアガーを認める培養法を用いて口腔カンジダ菌量の測定を行寒天培地に塗抹し，37 ℃で48時間培養し，コロニー

い，全身の免疫力は東京医科歯科大学難治疾患研究所

数をカウントした。免疫力の検査は静脈血を５ml 採

内，株式会社健康ライフサイエンスの免疫力スコアを取し，健康ライフサイエンス社へ送付して解析を委託用いて評価し，口腔内のカンジダ菌量と全身の免疫力した。Ｔ細胞数，Ｂ細胞数，ナチュラルキラー細胞数，との関係を調べることとした。

＋

＋

＋

ナイーブＴ細胞数，CD8 CD28 Ｔ細胞数，CD4 Ｔ＋

本研究に対し同意を得られた38名（患者24名と，14細胞数・CD8 陽性Ｔ細胞数比，ナイーブＴ細胞・メ名の健常者）よりうがい液，静脈血を採取した。血液モリーＴ細胞比の７項目の検査結果に対して１～３点検査において CRP 値0.30 mg/dl 以上であった６名をの点数が付与され，合計点数（最低７点最高21点）が除外して検討を行った。カンジダ菌量の測定はうがい

免疫力スコアとして報告された。

液にて口腔内より検体を回収，33,500 rpm，20分間【結果】血液検査において CRP 値0.30 mg/dl 以上で遠心分離を行い，スピッツ底部の残渣を再混濁してカあった６名を除外して検討を行った。カンジダ菌はす

ンジダ選択培地に塗抹，37 ℃で48時間培養し，培地

べての検体で検出され，１～3,480 CFU（中央値6.5

１プレート当たりのコロニー数（CFU）を測定した。

CFU）であった。性別によりカンジダ菌量の差は認

免疫力スコアは静脈血を５ml 採取し，健康ライフサ

められなかったが，年齢が高いほどカンジダ菌量が多イエンス社へ解析を委託し報告された。

くなっていた。口腔カンジダ症，義歯の装着，基礎疾

その結果，林清永は次の結論を得た。

患の有無の３項目について，有りの群が無しの群と比べカンジダ菌量が有意に多かった。免疫力スコアは
10～21点（中央値17点）であった。性別による差は認められなかったが，年齢が高くなるほど免疫力スコア

１． カンジダ菌はすべての検体で検出され，1-3，
480 CFU，中央値6.5 CFU であった。
２．口腔カンジダ菌量と年齢との間に正の相関を認めた（相関係数 r＝0.640，P＜0.001）。

は減少した。口腔内灼熱感，口腔カンジダ症，義歯装３．口腔カンジダ症，義歯装着，基礎疾患の３項目に着，基礎疾患の有無の４項目について，有りの群が無ついてありの群の口腔カンジダ菌量が優位に多かっ

しの群と比べ免疫力スコアが有意に低かった。口腔内た。

のカンジダ菌量と免疫力の関係は負の相関を認め（相４．免疫力スコアは10-21点，中央値17点であった。

関係数 r＝0.520，P＜0.05），口腔内のカンジダ菌量

５．免疫力スコアと年齢との間に負の相関を認めたが増えるほど免疫力が低下することが確認された。免（相関係数 r＝－0.510，P＜0.001）。

疫力スコア算出のための各検査項目と，カンジダ菌量

６．口腔カンジダ症，口腔内灼熱感，義歯の装着，基との関係を検討したところ，Ｔ細胞数，ナイーブＴ細礎疾患の４項目について，有りの群の免疫力スコア＋＋

胞数，CD8 CD28 Ｔ細胞数，ナイーブＴ細胞・メモが優位に低かった。

リーＴ細胞比の４項目にカンジダ菌量との間に負の相

７．口腔カンジダ菌量と免疫力スコアとの間に負の相関，ナチュラルキラー細胞数とカンジダ菌量との間に関を認めた（相関係数 r＝－0.520，P＜0.05）。

正の相関が認められた（P＜0.05）。

８．Ｔ細胞数，ナイーブＴ細胞数，CD8＋CD28＋Ｔ細【結論】口腔内のカンジダ菌量と免疫力スコアとの間

胞数，ナイーブＴ細胞・メモリーＴ細胞比の４項目に負の相関を認め，このことより口腔内のカンジダ菌にカンジダ菌量との間に負の相関，ナチュラルキ

量と全身の免疫力との間に関連性があることが示唆さ

ラー細胞数とカンジダ菌量との間に正の相関が認めれた。そのことより口腔内のカンジダ菌量の測定するた。

ことにより，全身の免疫力を推察することが可能にな

これらの結果より，口腔カンジダ菌数と免疫力スコることが示唆された。

アとの間に関連性があることが示唆され，口腔カンジ（論文審査の結果の要旨）

ダ菌数を測定することにより，免疫力を推察すること

口腔内のカンジダ菌は免疫力と密接に関連すると推が可能になることが示唆された。よって，主査，副査

察されてはいるが，関連性を証明した報告はない。口は一致して本論文を学位論文として価値があるものと腔カンジダ菌の検出精度が低い，全身の免疫力を数量認めた。

として評価する検査法が存在していなかったことが原因と考えられた。今回，遠山らが報告した高い検出率
No. 5, 2017299

審査学位論文要旨

Importance of cystatin C and uric acid levels in the association of cardiometabolic risk factors in Japanese junior high school students（日本人中学生の心血管代謝危険因子との関連における血清シスタチンＣおよび尿酸値の重要性）
原

田

美貴子

（論文の内容の要旨）

p＜0.001）， 男子（β＝0.26，p＜0.001）， 女子（β【目的】動脈硬化の早期病変は10歳未満の小児の組織＝0.24，p＜0.001）のいずれにおいても，血清 CysC

でも観察されている。将来心血管イベントを発症すると SUA は関連した。血清 CysC と SUA が共に高値

リスクの高い若年者を同定することは重要である。成をとる被験者では，他の群と比較して，HDL-C が最人ならびに小児においても腎機能低下は心血管疾患とも低く，TG 値が最も高値であり，TG/HDL-C が高の関連が示されているが，成長期の小児において腎機い傾向を認めた。特に男子においては，血清 CysC，能低下を早期に診断することは容易ではない。シスタ

SUA が共に高値の群では，他の３群と比較して有意チンＣ（CysC）は腎機能障害の早期診断に有用であに TG/HDL-C が高値（p＝0.010）であった。

り，成人では血清 CysC 値とメタボリックシンドロー【考察】日本人中学生において血清 CysC は，血清 Cr

ムや心血管疾患との関連が報告されている。本研究でよりも腎機能のスクリーニングに優れた指標である可は，日本の中学生を対象として血清 CysC 値およびそ能性がある。また CysC は SUA と有意に関連した。

の他の心血管代謝危険因子を評価し，それぞれの関連

注目すべきは，血清 CysC と SUA が共に高値をとるを解析することにより若年者の疾患スクリーニングに

被験者では TG/HDL-C が高く，脂質代謝異常との関おける有用性を検討することを目的とした。

連が示唆され，中学生においても生活習慣が関連する【方法】 長野県内３地域の中学校において2012年４

心血管代謝危険因子が集積する傾向が示された点であ月～2014年４月に実施された健診データによる横断研る。

究として，454名（男子216名，女子238名，12.1-15.0

SUA はメタボリックシンドロームや心血管疾患と歳）を対象とした。身体測定・血圧測定を行い，血液検の関連が報告されている一方で，成人では心血管死亡

査では CysC・尿素窒素（BUN）
・クレアチニン（Cr）
・の独立した予測因子にはならないという結果も報告さ

尿酸（SUA）
・グルコース・脂質［中性脂肪（TG）・

れており，SUA を単独でスクリーニングに用いる意

総コレステロール・HDL コレステロール（HDL-C）・

義 は 今 し ば ら く 検 討 が 必 要 で あ る 。 し か し TG/

LDL コレステロール（LDL-C）］を測定した。単変量

HDL-C は成人では心血管イベントや全死亡との関連，解析により血清 CysC 値と関連する因子を検討した。

小児ではメタボリックシンドロームや左室肥大と関連

多 変 量 解 析 で は 性 別 ， 身 長 ，BUN ， グ ル コ ー ス ，が報告されており，SUA と血清 CysC 双方の上昇を

HDL-C，LDL-C，TG で調整し，血清 CysC と関連

スクリーニングに用いることは，将来心血管疾患発症する因子を検討した。また，血清 CysC，SUA の男につながる危険因子を複数有するメタボリックシンド

女 別 中 央 値（ 血 清 CysC ： 男 子 0.93 mg/L ， 女 子

ローム予備群である小児を同定できる可能性がある。

0.78 mg/L；SUA： 男 子 5.8 mg/dL ， 女 子 4.5 mg/（論文審査の結果の要旨）dL）により４群（共に高値，共に低値，いずれかが成人では，従来の心血管危険因子に加え，免疫や炎

高値）に分類し，４群間の因子の相違を一元配置分散症を反映するバイオマーカーが無症候性動脈硬化と関分析により解析した。p＜0.05を有意とした。

係する因子として提示されている。動脈硬化の初期変【結果】血清 CysC は女子と比較し男子で有意に高値

化は10歳未満の小児でも観察され，将来的に心血管イ

で あ っ た（ 0.92±0.10 vs. 0.77±0.08 mg/L ，p＜

ベントを起こし得る小児を早期に同定することは重要

0.001）。血清 Cr と比較して，CysC の分布はより男であるが，従来の小児メタボリックシンドロームの診女差が明確であり，ばらつきが少なかった。CysC は断基準では困難である。

血清 Cr（相関係数 r＝0.47，p＜0.001），SUA（r＝

血清シスタチンＣは早期の腎機能障害検出に有用な

0.55，p＜0.001）と有意な正の相関を認めた。多変

低分子蛋白質であるが，成人ではメタボリックシンド

量解析では，被験者全体（標準化偏回帰係数β＝0.24，

ロームや心血管疾患の関連が報告されている。一方，

300

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

若年者では血清シスタチン C 値と臨床的な疾患の関（全体 r＝0.55，男子 r＝0.33，女子 r＝0.26，いず連について明らかではない。

れも p＜0.001）を示し，多変量解析においても，被験本研究は，日本の中学生において血清シスタチンＣ

者全体（β＝0.24，p＜0.001），男女とも（男子β＝値を測定し，若年者の疾患スクリーニングにおける臨

0.26，女子β＝0.24，いずれも p＜0.001）に関連

床的有用性を評価した。

性が示された。
４．血清シスタチンＣ，尿酸値ともに高値の群では，その結果以下の成績を得た。
１．長野県の３地域の中学生454名（男子216名，女子

TG/HDL-C 比は高値であった。特にその傾向は男238名，12.1-15.0歳）を対象とし，2012年４月～

子で強かった。成人において TG/HDL-C 比は心血2014年４月に横断研究を実施した。身体計測を行い，管イベントや全死亡と関連すると言われている。

通常の学校健診の検査項目に加えて血清シスタチン

本研究では，中学生でも心血管危険因子の重複がある可能性が示された。血清シスタチンＣと尿酸値がとＣを含むその他心血管代謝因子を測定した。
２．血清シスタチンＣは血清クレアチニンや eGFR

もに高値であることが潜在的な脂質異常を示し，将来と比較して性差が明確であり，男子で有意に高値で的に心血管疾患を発症しうるハイリスクな若年者を識あ っ た（ 男 子 0.92±0.10 mg/L ， 女 子 0.77±0.08

別するマーカーとなる可能性があることが示唆され，

mg/L，p＜0.001）。

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が３．血清シスタチンＣ値は尿酸値と有意に正の相関あるものと認めた。

Effects of postural change from supine to head-up tilt on the skin sympathetic nerve activity component synchronised with the cardiac cycle in warmed men.（ヒト暑熱負荷における30°ヘッドアップティルトが皮膚交感神経活動・心周期同期成分に与える影響）
小川雄（論文の内容の要旨）＜0.005）も上昇した。しかし，高体温時において，【背景と目的】高体温を負荷したヒトを臥位から立位

HUT を行うと RAV が低下し（P＜0.008），高体温にに姿勢変換を行うと，血圧維持のために圧受容器の脱よって上昇した CVCchest が低下した（P＜0.019）が，伸展により皮膚血管拡張反応が抑制されることが報告

Total SSNA に変化を認めなかった（P＞0.26）。それされている。もし，この圧反射が正常に働かなくなるに対して，SSNA の心周期同期成分は食道温の上昇にと，熱失神が起こる危険がある。しかし，その遠心路

伴って上昇した（P＜0.015）が，高体温時の HUT でである交感神経活動の電気信号の同定が，まだ行われ減弱した（P＜0.017）。さらに，暑熱負荷前後の姿勢ていなかった。

変換時 SSNA の心周期同期成分と CVCchest を全被験

【方法】この電気信号を同定するために，まず，22-42

者でプールすると，それらの間に高い相関関係が認め歳の健常男性被験者（n＝12）に環流スーツで全身をられた（r＝0.817，P＜0.0001）。一方，MSNA の心覆い，34 ℃の水を流しながら，正常体温において，周期同期成分と CVCchest との間には有意な相関を認め

臥位から30°ヘッドアップティルト（HUT）の姿勢変なかった（r＝0.359，P＝0.085）。

換を行い，その際の，食道温を熱電対法で（n＝12），【結論】以上のことから SSNA の心周期同期成分は，

右心房容量（RAV）を超音波ドップラー法で（n＝６），

高体温時の皮膚血管を能動的に拡張させる神経であり，皮膚血管コンダクタンス（CVCchest）をレーザドップラー

姿勢変換時に，その活動が心肺圧受容器を介して反射法で（n＝12），皮膚交感神経活動（SSNA）と筋交感性に抑制され，血圧維持に働いていることが明らかと神経活動（MSNA）を腓骨神経から微小針電極法でなった。

（n＝６），それぞれ測定した。次に47 ℃の水を環流（論文審査の結果の要旨）

スーツに流して食道温をベースラインから～0.7 ℃上

高体温を負荷したヒトを臥位から立位に姿勢変換を昇させた後に同様の測定を行った。

行うと，血圧維持のために圧受容器の脱伸展により皮【結果】暑熱負荷により食道温が上昇し（P＜0.0001），

膚血管拡張反応が抑制されることが報告されている。

それに伴い CVCchest（P＜0.0001）と Total SSNA（Pもし，この圧反射が正常に働かなくなると，熱失神がNo. 5, 2017301

審査学位論文要旨

起こる危険がある。しかし，その遠心路である交感神

CVCchest が低下した（P＜0.019）が，Total SSNA

経活動の電気信号がまだ同定されていなかった。

に変化を認めなかった（P＞0.26）。

この電気信号を同定するために，まず，22-42歳の３．それに対して，SSNA の心周期同期成分は食道温

健常男性被験者（n＝12）に環流スーツで全身を覆い，の上昇に伴って上昇した（P＜0.015）が，高体温34 ℃の水を流しながら，正常体温において，臥位か時の HUT で減弱した（P＜0.017）。

ら30°ヘッドアップティルト（HUT）の姿勢変換を行

４．さらに，暑熱負荷前後の姿勢変換時 SSNA の心

い，その際の，食道温を熱電対法で（n＝12），右心周期同期成分と CVCchest を全被験者でプールする

房容量（RAV）を超音波ドップラー法で（n＝６），皮と，それらの間に高い相関関係が認められた（r＝膚血管コンダクタンス（CVCchest）をレーザドップラー

0.817，P＜0.0001）。

法で（n＝12），皮膚交感神経活動（SSNA）と筋交感

５．一方，MSNA の心周期同期成分と CVCchest との神経活動（MSNA）を腓骨神経から微小針電極法で間には有意な相関を認めなかった（r＝0.359，P＝（n＝６），それぞれ測定した。次に47 ℃の水を環流

0.085）。

スーツに流して食道温をベースラインから～0.7 ℃上昇させた後に同様の測定を行った。

以上のことから SSNA の心周期同期成分は，高体温時の皮膚血管を能動的に拡張させる神経であり，姿その結果，小川は次の結論を得た。

勢変換時に，その活動が心肺圧受容器を介して反射性

１．暑熱負荷により食道温が上昇し（P＜0.0001），それに伴い CVCchest（P＜0.0001）と Total SSNA（P＜に抑制され，血圧維持に働いていることが明らかとなった。
よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文と0.005）も上昇した。
２．しかし，高体温時において，HUT を行うと RAV

して十分価値のあるものと認めた。

が低下し（P＜0.008）， 高体温によって上昇した

Early Postoperative Magnetic Resonance Imaging in Detecting Radicular Pain After Lumbar Decompression Surgery Retrospective Study of the Relationship Between Dural Sac
Cross-sectional Area and Postoperative Radicular Pain（腰椎除圧術後の神経根痛を検出す
る術後早期 MRI 画像 硬膜管横断面積と術後神経根痛の関連についての後ろ向き研究）
二

木

俊

匡

（論文の内容の要旨）

術後早期 MRI と定義した。2007年～2011年の間に腰【研究の背景と目的】腰椎除圧術後の術後早期 MRI 所

椎除圧手術を行い，術後早期 MRI を撮像した115例に見と臨床症状との関連については議論がある。すなわ

ついて後ろ向きに調査した。男性68例，女性47例，手ち術後臨床症状がない患者においても MRI で硬膜管術時平均年齢は64.6歳であった。術前症状との一致に圧迫所見がみられるという報告がある一方で，術後硬よらず，また疼痛の強弱に関わらず，術後早期に下肢膜外血腫により症状を呈した患者群と症状のない患者痛を訴えた場合を神経根痛発生例としたところ，46例

群を比較すると硬膜管横断面積（DCSA）が有症状群

が神経根痛を訴えていた。神経根痛を認めた症例は全でより小さかったという報告がある。典型的な術後硬例で術後数週間のうちに神経根痛の改善を認めた。術

膜外血腫の症状は，強い創部痛から始まり，下肢のし後早期 MRI で除圧範囲中 DCSA が最も小さい椎間板びれ，神経根痛を経て，両下肢の神経脱落症状に至るレベルを検討対象部位とした。全例で術後硬膜外ドとされる。実臨床において，術後神経根痛は創部痛やレーンを留置し，廃液量が50 ml/day 以下となった時しびれと比較的してより少数であり，より懸念されるに抜去した。術後神経根痛発生に関する危険因子決定症状でもある。本研究の目的は腰椎術後早期 MRI ののためロジスティック回帰分析を行った。受信者動作

DCSA と神経根痛発生との関連を検討することであ特性（ROC） 曲線で神経根痛発生に関する DCSAる。また，サブ解析として MRI 撮像時のドレーン残カットオフ値を求めた。撮影時ドレーン残存の有無と存の有無が術後早期 DCSA に関連するかも評価した。

術後早期 DCSA の関係を調べた。

【方法】腰椎除圧手術後７日以内に撮像された MRI を【結果】単変量および多変量解析の結果，周術期因子

302

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨のうち術後早期 DCSA が小さいことが術後神経根痛
2

本研究は，全例で術後ドレーンを留置しており，留置発生と唯一有意に関連していた（－10 mm あたりオッ

有無の効果を比較検討しているわけではない。しかし，

ズ比1.26）。ROC 曲線で求めた神経根痛発生に関する

本研究の結果から，ドレナージにより術後硬膜外血腫

2

術後早期 DCSA カットオフ値は67.7 mm であったの圧が減少し，術後早期 DCSA が増加，術後の神経（感度56.5 ％，特異度89.9 ％）。便宜的にカットオフ値

根痛軽減につながる可能性が示唆された。

2

2を＜70 mm とした場合，DCSA＜70 mm 患者の神経2（論文審査の結果の要旨）

根痛発生率は74.3 ％，一方 DCSA≧70 mm 患者の神腰椎除圧術後の術後早期 MRI 所見と臨床症状との経根痛発生率は25.0 ％であった（感度74 ％，特異度

関連については議論がある。典型的な術後硬膜外血腫

75 ％）。術後早期 DCSA は MRI 撮像時にドレーンがの症状は，強い創部痛から始まり，下肢のしびれ，神留置されていた患者群で有意に大きかった（119.7±

経根痛を経て，両下肢の神経脱落症状に至るとされる。

2

10.1 v.s. 93.9±5.4 mm ）。

実臨床において，術後神経根痛は創部痛やしびれと比【考察と結論】腰椎除圧術後早期 MRI で DCSA が小較的してより少数であり，より懸念される症状でもあさいほど神経根痛がみられ，神経根痛発生に関してのる。二木らは，腰椎術後早期 MRI の硬膜管横断面積

DCSA カットオフ値は67.7 mm2であった。MRI 撮像（DCSA）と神経根痛発生との関連を検討した。また，

時ドレーンが留置されている症例の方が，すでに抜去

MRI 撮像時のドレーン残存の有無が術後早期 DCSAされていた症例よりも術後早期 DCSA が大きかった。

に関連するかも評価した。

腰椎除圧術後の除圧スペースのほとんどは，拡大し腰椎除圧手術後７日以内に撮像された MRI を術後た硬膜管と硬膜外血腫により占められ，双方の割合は早期 MRI と定義し，腰椎除圧手術を行って術後早期圧バランスで変化すると考えられる。そうした観点か

MRI を撮像した115例について後ろ向きに調査した。

ら，術後症状の多くは硬膜外血腫と術前症状の残存と術前症状との一致によらず，また疼痛の強弱に関わら考えられるが，術後神経根痛の原因がどちらか判断すず，術後早期に下肢痛を訴えた場合を神経根痛発生例

るのは臨床上難しく，また共に術後硬膜管拡張不良のとしたところ，46例が神経根痛を訴えていた。術後早結果と考えれば，それら原因を鑑別する意義は乏しい。

期 MRI で除圧範囲中 DCSA が最も小さい椎間板レベ

いずれにしろ神経根痛は，創部痛や下肢のしびれよりルを検討対象部位とした。術後神経根痛発生に関するも重篤な術後症状である。

危険因子決定のためロジスティック回帰分析を行った。

術後早期 MRI と術後症状に関連があるとした過去

受信者動作特性曲線で神経根痛発生に関する DCSAの報告は，術後硬膜外血腫による重篤な症状に対し殆

カットオフ値を求めた。撮影時ドレーン残存の有無とどが再手術を必要とした患者群と無症状患者群とを比

術後早期 DCSA の関係を調べた。

較していた。しかし，画像上の硬膜外血腫発生率は33-100 ％と報告されるのに対して，術後硬膜外血腫に対する再手術率は0.1-0.2 ％である。過去の報告は，下肢の痛み・しびれなどを症状有りとしなかったのだろう。それに対して，術後神経根痛を有症状群とした
本研究は新たな視点に立っている。
術後早期 DCSA のカットオフ値はすでに，Leonardi
2

その結果，二木は次の結論を得た。
１．腰椎除圧術後早期 MRI で DCSA が小さいほど神経根痛がみられた（－10 mm2あたりオッズ比1.26）。
２．神経根痛発生に関しての術後早期 DCSA カット
オフ値は67.7 mm2（およそ70 mm2）であった
３．MRI 撮像時ドレーンが留置されている症例の方が，すでに抜去されていた症例よりも術後早期 DCSA

らが75 mm として報告している。しかし，そのカットが大きかった（119.7±10.1 v.s. 93.9±5.4 mm2）。

オフ値の決定は，術前 DCSA の報告から得た値を転これらの結果より，術後神経根痛がある患者で術後用しただけである。本研究は術後症状の観点から ROC

早期 DCSA が＜70 mm2であれば，疼痛の原因説明に曲線で術後早期 DCSA カットオフ値を求めた初めて役立つと共に，さらなる症状増悪を見逃さない警鐘との研究である。術後神経根痛がある患者で術後早期なると思われた。また，ドレーンにより術後硬膜外血

2

DCSA が＜70 mm であれば，疼痛の原因説明に役立腫の圧が減少し，術後早期 DCSA が増加，術後の神つと共に，さらなる症状増悪を見逃さない警鐘となる

経根痛軽減につながる可能性が示唆された。よって，だろう。

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が腰椎術後ドレナージの必要性について議論がある。
No. 5, 2017

あるものと認めた。
303

審査学位論文要旨

Dosimetric Comparisons of Volumetric Modulated Arc Therapy with Three-Dimensional
Conformal Radiation Therapy for Locally Advanced Non-Small Cell Lung Cancer（局所進行非小細胞肺癌に対する強度変調回転放射線治療と三次元原体放射線治療の線量分布比較）
小

沢

岳

澄

（論文の内容の要旨）において重要な役割を担うが，周囲臓器の耐容線量を【背景と目的】放射線治療は局所進行非小細胞肺癌の考慮しつつ腫瘍を含む計画標的体積（PTV）へ処方

治療として標準的に行われているが，脊髄や肺，食道線量を投与することはしばしば困難である。今回小沢といった周囲のリスク臓器を避けつつ，腫瘍を含む標

岳澄らは実臨床に即した連続症例において三次元原体

的体積へ処方線量を投与することはしばしば困難であ

放射線治療（3D-CRT）と強度変調回転放射線治療る。この点において強度変調放射線治療の有用性が報（VMAT）の治療計画を直接比較し，VMAT の有用

告されているが，実臨床に即した症例における比較・性を検討した。

報告はほぼ無い。今回，進行期非小細胞肺癌に対する2013年１月から2014年８月までに進行期非小細胞肺

根治的放射線治療として，三次元原体放射線治療（3D-

癌に対する根治的放射線治療を計画した17症例を対象CRT）と強度変調回転放射線治療（VMAT）によるとし，各症例において VMAT と3D-CRT による治療

治療計画を行い，線量分布を比較・検討した。

計画を行った。主要目的として，原発腫瘍および転移【方法】2013年１月から2014年８月までに当院で進行リンパ節を含む計画標的体積の95 ％に60 Gy/30分割

期非小細胞肺癌に対する根治的放射線治療を計画したを投与し，かつ脊髄の最大線量を50 Gy 未満にする治17症例を対象とした。各症例において VMAT と3D-

療計画を作成することとした。副次目的として，他のCRT による治療計画を行った。主要目的として，原リスク臓器の線量を可能な限り低減することとした。

発腫瘍および転移リンパ節を含む計画標的体積の95

統計学的解析ではウィルコクソンの符号順位検定を用％に60 Gy/30分割を投与し，かつ脊髄の最大線量をいて，有意水準は0.05未満とした。

50 Gy 未満にする治療計画を作成することとした。副次目的として，他のリスク臓器の線量を可能な限り低その結果，小沢岳澄らは次の成績を得た。
１．主要目標は，3D-CRT では PTV と脊髄の近接し減することとした。

ていた２例で達成できなかったが，VMAT では全

【結果】3D-CRT では計画標的体積と脊髄の近接して例で達成可能であった。

いた２例で主要目的を達成できなかったが，VMAT

２．3D-CRT および VMAT 双方で許容可能な計画をでは全例で主要目的を達成可能であった。3D-CRT

作成できた15例の検討では，線量収束性，肺の20と VMAT の双方で許容可能な計画を作成できた15例

Gy 以上照射される体積および平均線量，食道の35の検討では，線量収束性や肺の20 Gy 以上照射される

Gy 以上照射される体積について VMAT の方が有体積および平均線量，食道の35 Gy 以上照射される体意に良好であった。

積について VMAT の方が良好な治療計画を作成でき

３．肺の低線量が照射される体積，食道の最大線量おた。肺の低線量が照射される体積や食道の最大線量および平均線量に有意差は認めなかった。

よび平均線量に有意差は認めなかった。

これらの結果より，局所進行非小細胞肺癌の根治的【結論】3D-CRT では標的体積の線量が不十分となる放射線治療における VMAT の有用性が示され，特に症例においても，VMAT では十分な線量投与が可能

PTV と脊髄が近接する症例では VMAT の利用を促であった。3D-CRT および VMAT 共に許容される治進する可能性があると結論した。以上より，主査，副療計画の比較では，VMAT でリスク臓器の線量が低査は一致して本論文を学位論文として価値があるもの

減されていた。3D-CRT に対する VMAT の優位性は，と認めた。

局所進行期肺癌に対する根治的放射線治療におけるVMAT の適切な利用を促進する可能性がある。
（論文審査の結果の要旨）
放射線治療は手術不能局所進行非小細胞肺癌の治療
304

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

A novel, rapid point-of-care test for lung cancer patients to detect epidermal growth factor
receptor gene mutations by using real-time droplet-PCR and fresh liquid cytology specimens（肺癌患者における上皮成長因子受容体遺伝子変異検出のための液滴型高速 PCR 装置と新鮮液状細胞診検体を用いた新規迅速ポイント・オブ・ケア・テスト）
浅

香

志

穂

（論文の内容の要旨）

Refractory Mutation System（ARMS）法の原理に基【背景・目的】非小細胞肺癌に対する上皮成長因子受づいて変異特異的にアニーリングするプライマーと，

容体（EGFR）遺伝子変異検査は，外科的切除不能な蛍光標識プローブを設計した。

進行期非小細胞肺癌症例に対して EGFR チロシンキ

対象患者の新鮮液状細胞診検体の残余検体から DNA

ナーゼ阻害薬（EGFR-TKI）投与の適応を決定するを抽出し，EGFR d-PCR 法を用いてリアルタイム

際に不可欠である。現在，肺癌 EGFR 遺伝子変異検

PCR 検査を行った。 比較対照として， 現在 EGFR

査においては，癌細胞を含む生検材料や手術材料など

遺伝子変異検査の体外診断薬として米国，欧州，日本，のホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）検体から中国などで承認されている therascreen EGFR 変異抽出した DNA を用いて，PCR 法をベースにした検検出キット RGQ「キアゲン」（QIAGEN 社製）とリ査を行うことが一般的である。しかしながら，多くのアルタイム PCR 装置である Rotor-Gene Q（QIAGEN

施設で検体採取から結果報告までおよそ７日から14日

社製）を用いた従来法で同様に検査を行った。両検査間の期間を要している。今回我々は，リアルタイム液法の判定結果と検査時間を比較した。

滴型高速 PCR 装置（セイコーエプソン社）と気管支

さらに，EGFR 遺伝子変異型と野生型の肺癌培養洗浄液および胸水などの新鮮液状細胞診検体を用いて，細胞を用いて，種々の割合の EGFR 変異型陽性細胞

新たな迅速 EGFR 遺伝子変異検査法（EGFR d-PCR

混合液（０％，0.01 ％，0.05 ％，0.1 ％，0.5 ％，１％，法）を開発し，その有用性を検討した。

５％，10 ％，50 ％，100 ％）を作製し，EGFR d-PCR【方法】対象患者は，信州大学医学部附属病院で2014

法の検出限界を検討した。

年の１年間に原発性肺癌が疑われ，気管支洗浄液や胸【結果】対象患者は80名で，それぞれ検体の内訳は77

水などの新鮮液状細胞診検体が病理検査に提出された名が気管支洗浄液検体，２名が胸水，１名が心嚢水で患者245名のうち，細胞診で肺腺癌もしくは特定不能あった。

な非小細胞肺癌と診断された連続患者とした。

EGFR d-PCR 法では，16名が L858R 陽性，８名がEGFR d-PCR 法で用いるリアルタイム液滴型高速E746_A750del 陽性，１名が T790M 陽性と判定され

PCR 装置には，反応時間中一定の温度に保たれる高た。従来法では，16名が L858R 陽性，11名が exon 19

温と低温の２つのヒートブロックを有する。専用オイ

deletions 陽性（このうち８名が E746_A750del 陽性），

ルが充填された反応チューブに PCR 反応液（液滴）１名が T790M 陽性と判定された。 全80名におけるを注入し，このチューブの両端に２つのヒートブロッ

L858R ， E746_A750del ， T790M に 関 す る EGFR

クがくるように設置する。ヒートブロックがモーター

d-PCR 法の結果は従来法と一致した。

によって回転することで，液滴は重力で高温と低温ブ

リアルタイム PCR の反応時間は，EGFR d-PCR

ロック間を移動し，急速な温度変換が行われ，高速法の８分10秒に対し，従来法は１時間45分であった。

PCR 反応が可能となる。蛍光検出器で PCR 反応産物

肺癌培養細胞を用いた EGFR d-PCR 法では，L858Rの蛍光強度を測定する。

検出系で0.5 ％，E746_A750del で0.05 ％，T790M で対象 EGFR 遺伝子変異は，最も高頻度な変異であ

0.5 ％までの EGFR 遺伝子変異陽性細胞混合液で検出る exon21の L858R と exon19の E746_A750del とした。

可能であった。いずれの変異検出系においても，EGFR

この２つの変異を併せて，肺癌関連 EGFR 遺伝子変

d-PCR 法の検出限界は，従来法と同程度あるいはそ異の90 ％以上を占める。加えて EGFR-TKI 耐性遺伝

れ以上の検出感度を有していた。

子変異として最も一般的な exon20の T790M も対象【結語】EGFR d-PCR 法では，従来法と一致する判とした。以上３種類の変異に対して，Amplification

定結果および検査時間の大幅な短縮，同程度の検出限No. 5, 2017305

審査学位論文要旨界が得られた。本法では DNA 抽出過程を含め１時間

EGFR 遺 伝 子 変 異（ exon21 L858R ，exon19 E746_

30分以内で判定結果を得られ，検査当日の結果報告に

A750del，exon20 T790M）とした。次に，肺癌培養より，早期に進行期肺癌患者の EGFR-TKI 治療が開細胞を用いて種々の割合で EGFR 変異陽性細胞混合始できる。

液を作製し，EGFR d-PCR 法の検出限界を検討した。
（論文審査の結果の要旨）

この検討にて，浅香は次の結果を得た。

非小細胞肺癌に対する上皮成長因子受容体（EGFR）

１．対象肺癌患者80名における，対象３種類の EGFR

遺伝子変異検査は，外科的切除不能な進行期非小細胞

遺伝子変異の判定結果は，EGFR d-PCR 法と従来肺癌症例に対して EGFR チロシンキナーゼ阻害薬

法で一致した。

（EGFR-TKI）投与の適応を決定する際に不可欠であ

２．リアルタイム PCR の反応時間は，EGFR d-PCRる。しかしながら，多くの施設で検体採取から結果報法が８分10秒であったのに対し，従来法は１時間45

告までおよそ７日から14日間の期間を要している。今分であった。

回浅香は，リアルタイム液滴型高速 PCR 装置（セイ３．肺癌培養細胞を用いて測定した EGFR d-PCR 法のコーエプソン社）と気管支洗浄液および胸水などの新検出限界は，L858R 検出系で0.5 ％，E746_A750del

鮮液状細胞診検体を用いて，新たな迅速 EGFR 遺伝

で0.05 ％，T790M で0.5 ％あった。

子変異検査法（EGFR d-PCR 法）を開発し，その有EGFR d-PCR 法では，従来法と一致する判定結果
および検査時間の大幅な短縮，同程度の検出限界が得用性を検討した。
まず，肺癌患者検体を用いて本法と従来法［theras­られた。EGFR d-PCR 法では DNA 抽出を含め，検creen EGFR 変異検出キット（QIAGEN 社）と Rotor-

体提出から１時間30分以内に判定結果を得ることがでGene Q（QIAGEN 社）を使用］とで判定結果と検査時きるため，検査当日の結果報告により，早期に進行期間を比較した。対象患者は，新鮮液状検体の細胞診で肺癌患者の EGFR-TKI 治療が開始できる。よって，肺腺癌もしくは特定不能な非小細胞肺癌と診断された

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が連続80名とした。対象遺伝子変異は，主要な３種類のあるものと認めた。

Usefulness of a management protocol for patients with cervical multicystic lesions : A retrospective analysis of 94 cases and the significance of GNAS mutation（子宮頸部多嚢胞性病変に対する当科の対応と転帰：94例の後方視的検討と GNAS 遺伝子変異の意義）
安藤（論文の内容の要旨）

大史

その方法は未だ確立されていない。

【研究の背景と目的】子宮頸部に多嚢胞性病変を呈

我々はこれまでの多施設共同研究により，頸部多嚢する疾患にはナボット嚢胞， 分葉状頸管線過形成

胞性病変の臨床診断と対応のプロトコールを提唱した。

（LEGH），悪性腺腫（MDA）をはじめとする腺癌なこのプロトコールでは，超音波検査などで子宮頸部にどがある。ナボット嚢胞は高頻度にみられる間質内に多発嚢胞を認めた場合，⑴ MRI，⑵ 子宮頸管細胞診，拡張した貯留嚢胞である。LEGH は，頸管内腔側に⑶ 胃型粘液検出［HIK1083ラテックス凝集反応キッ

異型のない粘液産生細胞で構成された小腺腔が分葉状

ト，または細胞診による黄色調粘液の検出（two col­に分布し，その外側に嚢胞状に拡張した大型の貯留嚢

or pattern，TCP）による］の３つの検査を行い，こ胞が配列する良性腺増殖性疾患である。MDA は軽度の結果によって臨床診断し対応する。具体的には MRIの細胞異型を有する腺組織が浸潤性に増殖する高分

上，辺縁明瞭で粗大な嚢胞がみられ，細胞診，胃型粘化型腺癌で， 化学療法に抵抗性で予後不良である。

液ともに陰性の場合はナボット嚢胞の可能性が高く経MDA と LEGH はともに胃型の粘液を産生し，さら過観察とする。MRI で辺縁の不明瞭な充実部がみらに MDA は LEGH を高率に合併することから LEGHれる場合や細胞診で異型がみられる際には MDA やが MDA の前駆病変である可能性が指摘されている。

腺癌などを疑い，積極的な組織診や円錐切除を施行し，日常診療において頸部に多発嚢胞が見られる際はこれ根治術を考慮する。MRI 上，粗大な嚢胞に囲まれたらの病変を正確に診断し適切に対応する必要があるが，微小嚢胞（コスモスパターンと仮称）を認め，細胞診

306

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

は正常か AGC（軽度異常），胃型粘液が陽性の際には（MDA）等の腺癌，分葉状頸管腺過形成（LEGH）やLEGH 疑 い と 診 断 し ， 患 者 の 希 望 に よ り フ ォ ロ ー

ナボット嚢胞などが含まれ，それらを術前に正確に診

アップか子宮摘出を考慮する。今回はこのプロトコー

断し，適切に取り扱う方法はまだ確立されていない。

ルの有効性を検討するために，このプロトコールで対

これまでに信州大学産婦人科では多施設共同研究を行応した多嚢胞性病変94例の経過を後方視的に検討した。

い，⑴ MRI，⑵ 子宮頸管細胞診，⑶ 胃型粘液検出

一方 GNAS 蛋白はアデニル酸シクラーゼと協調し［HIK1083ラテックス凝集反応キット，または細胞診て細胞内の cyclic AMP を調節するが，GNAS 遺伝子

による黄色調粘液の検出（two color pattern，TCP）に活性化変異がおきると細胞内の cyclic AMP の恒常による］の３つの検査を行い，この結果によって臨床的な増加から Protein kinase A-ERK シグナル伝達経診断し対応するプロトコールを提唱した。今回，この路を介して増殖能が亢進する。近年膵臓や消化管の粘プロトコールにより臨床診断と対応を行った，1995年

液産生性腫瘍や LEGH においてこの変異が報告されから2014年までの間に信州大学産婦人科を受診した子ているが，LEGH におけるこの変異の臨床病理学的宮頸部多嚢胞性病変94例の経過を後方視的に検討した。

な意義はまだ不明である。今回は臨床経過が明らかに

また，GNAS 遺伝子に活性化変異が生じると細胞なっている症例において GNAS 遺伝子の活性化変異

内 の cyclic AMP が 恒 常 的 に 増 加 し Protein kinaseの有無とその意義についても検討した。

A-ERK シグナル伝達経路を介して増殖能が亢進する【方法】1995年から2014年までの間に当科を受診した

ことが知られている。近年膵臓や消化管の粘液産生性

子宮頸部多嚢胞性病変94例の臨床経過を後方視的に検腫瘍や LEGH においてこの変異が報告されているが，討 し た 。 ま た GNAS の 変 異 は LEGH 10 例 ，LEGH

LEGH におけるこの変異の臨床病理学的な意義はまwith atypia５例，MDA２例で検討した。各症例のホだ不明である。今回，臨床経過が明らかになっている

ルマリン固定パラフィン包埋切片よりレーザーマイク

LEGH 10症例，LEGH with atypia５症例，MDA２症

ロダイセクションを用いて標的組織を正確に採取し，例において，ホルマリン固定パラフィン包埋切片から抽出したゲノム DNA に対し GNAS 遺伝子を PCR でレーザーマイクロダイセクションで病変を切り出し，増幅後に Sanger 法で配列決定した。

GNAS 遺伝子の変異解析を行いその意義について検【結果】子宮頸部多嚢胞性病変94症例のうち，MDA討した。

または腺癌，LEGH 疑い，ナボット嚢胞と臨床診断

その結果，安藤大史は次の結果を得た。

されたのはそれぞれ10症例，59症例，25症例であった。

１．94症例のうち，MDA または腺癌疑い，LEGH 疑

MDA または腺癌，LEGH と臨床診断された症例のうい，ナボット嚢胞と臨床診断されたのはそれぞれ10

ちそれぞれ10症例が子宮摘出術を受け，正診率は95

症例，59症例，25症例であった。MDA または腺癌％（20症例中19例）であった。LEGH 疑いとされた疑いの全例と，LEGH 疑い症例のうち10症例が子症例のうち12カ月以上フォローアップしたのは42例で宮摘出術を受け，正診率は90 ％であった。

あったが，３症例で病変部の増大が見られたため単純

２．LEGH 疑いと臨床診断した症例のうち12カ月以子宮全摘を行ったところ，２例が LEGH with atypia

上フォローアップしたのは42例であり多くは無変化

で１例はナボット嚢胞であった。GNAS 遺伝子の活であったが，３症例で病変の増大が見られ手術を性化変異は２例の LEGH with atypia でみられ，その行ったところ，病理所見は２例が LEGH with atyp­

うち１例はフォローアップ中にサイズの増大が見られ

ia であり，１例はナボット嚢胞であった。

た症例であった。

３．GNAS 遺伝子変異は２例の LEGH with atypia で【結論】我々が考案したプロトコールは子宮頸部多嚢

みられ，そのうち１例はフォローアップ中に病変の胞性病変の診断と対応において有用と考えられた。特増大が見られた症例であった。

に LEGH のフォローアップに際しては病変の増大がこれらの結果より，本研究で用いているプロトコー

悪性化の徴候として重要である可能性が示された。まルは子宮頚部多嚢胞性病変の診断と対応において有用

た GNAS 遺伝子変異は LEGH の悪性化に関与していと考えられた。LEGH 疑い症例では病変の増大が潜る可能性がある。

在的な悪性病変や悪性化を見出す指標となりうると考（論文審査の結果の要旨）えられた。GNAS 遺伝子変異と LEGH の悪性度上昇

子宮頸部多嚢胞性病変を呈する疾患には悪性腺腫が関連している可能性が示唆された．よって，主査，

No. 5, 2017307

審査学位論文要旨

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Endogenous calcitonin gene-related peptide regulates lipid metabolism and energy homeostasis in male mice（内因性カルシトニン遺伝子関連ペプチドは，雄マウスの脂質代謝およびエネルギー恒常性を調節する）
劉甜

（論文の内容の要旨）

TFAM，ERRα，COXⅣなどの発現が有意に亢進し【背景と目的】カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）ていた。さらに白色脂肪組織における HSL，AMPK

は，カルシトニン遺伝子の alternative splicing からの活性化は脂肪の分解を促進し，インスリン投与によ作られるペプチドであり，血管，心臓，消化管，呼吸り抑制されるが，CGRP－/－では，インスリン投与器，腎臓，神経系などに広く分布する。CGRP はこれ

下でもこれらが保たれていた。一方で，褐色脂肪組織まで主として神経伝達因子や循環調節因子としてとら

における褐色脂肪細胞特異的マーカーや，白色脂肪組

えられてきた。一方で CGRP は，肝臓，脂肪組織，織におけるベージュ脂肪細胞特異的マーカーの発現に骨格筋等の代謝関連臓器にも多く発現しているが，は変化を認めず，褐色脂肪，ベージュ脂肪には両者の間

CGRP の代謝制御における意義は不明である。そこでに大きな変化はないと考えられた。次に，CGRP－/－

本研究では，CGRP ノックアウトマウスを用い，内因および野生型マウスの，普通食負荷時および高脂肪食

性 CGRP と代謝制御の関係について検討した。

負荷時の白色脂肪組織を摘出し，イソプロテレノール【材料および方法】CGRP ノックアウトマウス（CGRP

投与時の培養上清中へのグリセロール放出量を測定す－/－）と野生型の８週齢の雄マウスに対して，高脂ることで，実際に両者の脂肪分解能を検討したところ，

肪食負荷実験を行った。

野生型マウスでは，高脂肪食負荷の脂肪組織の脂肪分【結果】CGRP－/－では，野生型マウスと比較して，解は抑制されているのに対し，CGRP－/－では高脂

体重と内臓脂肪重量増加は共に有意に抑制されていた。

肪食負荷時での脂肪分解が保たれていることが確認さ

CGRP は中枢で多く発現しているが，摂餌量や，視床れた。尿中のカテコールアミン代謝物であるノルメタ

下部における POMC，CART，NPY，AgRP 等の摂ネフリンを計測したところ，CGRP－/－において有食調節因子の発現には変化を認めず，体重の変化は，

意に亢進しており，CGRP－/－では交感神経系が亢

摂餌量の変化によるものではないと考えられた。呼気進していると考えられた。プロプラノロールの投与にガス分析において，CGRP－/－では，普通食下，高より，β受容体をブロックすると，高脂肪食負荷時の，脂肪食下の双方において，野生型マウスより酸素消費

CGRP 欠失による体重増加抑制効果はなくなり，脂肪量および二酸化炭素産出量が有意に亢進していた。次

分解関連因子やミトコンドリア関連因子の発現の亢進

に糖代謝について検討するため，高脂肪食負荷を行っも認めなくなった。

たマウスに対して，糖負荷試験およびインスリン負荷【結論】以上の結果から，内因性 CGRP は，循環調節試験を行ったところ，CGRP－/－では野生型に比較

因子に留まらず，生体内の脂質代謝およびエネルギー

して耐糖能，インスリン感受性が亢進していることが恒常性の重要な調節因子であることが示された。

確認された。さらに，CGRP－/－では血清インスリ（論文審査の結果の要旨）

ンおよびレプチンレベルが野生型に比較して有意に低カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）は，主値であった。高脂肪食負荷 CGRP－/－では，脂肪重として神経伝達因子や循環調節因子としてとらえられ量，除脂肪重量共に野生型に比較して低下しており，てきたが，肝臓，脂肪組織，骨格筋等の代謝関連臓器

脂肪細胞肥大および脂肪肝が抑制されていた。白色脂にも多く発現しており，CGRP の代謝制御における意

肪組織において，CGRP－/－では，脂肪の分解に関義は不明である。

わるβ3-アドレナリン作動性受容体，ホルモン感受性

そこで劉甜は，CGRP ノックアウトマウス（CGRP

リパーゼ（HSL），CGI58，Perilipin，アディポネクチ

－/－）を用いて，10週間の高脂肪食負荷実験を行っ

ン，PPAR などの発現が野生型に比較して有意に亢た。体重，内臓脂肪重量，摂餌量，視床下部における進しており， さらにミトコンドリア機能に関わる

摂食調節因子発現の解析，呼気ガス分析，糖負荷試験

308

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

およびインスリン負荷試験，白色脂肪組織と肝臓の病

４．CGRP－/－では，高脂肪食負荷により，野生型

理解析，白色脂肪組織における脂肪代謝とミトコンド

マウスと比較して，白色脂肪組織における脂肪分解

リア機能に関わる遺伝子の発現，白色脂肪組織におけ系因子やミトコンドリア関連因子の発現亢進を認めるホルモン感受性リパーゼや AMPK の活性のウェスた。

タンブロッティングでの解析，普通食負荷時および高５．高脂肪食負荷 CGRP－/－では，野生型マウスに脂肪食負荷時の摘出した白色脂肪組織の脂肪分解能の比較して，インスリン投与時の白色脂肪組織におけ解析，尿中ノルメタネフリンと活動量の解析，β受容るホルモン感受性リパーゼ，AMPK の活性低下が体遮断薬投与による代謝への影響の解析を行った。

抑制されていた。
６．野生型マウスでは，高脂肪食負荷時の白色脂肪組

その結果，劉甜は次の結論を得た。
１．CGRP－/－では，高脂肪食負荷により，野生型

織の脂肪分解は抑制されているのに対し，CGRP－

マウスと比較して，食欲が変わらずに，体重と内臓/－では高脂肪食負荷時での脂肪分解が保たれてい脂肪重量増加は共に有意に抑制されていた。普通食ることが確認された。

下，高脂肪食下の双方において，野生型マウスより

７．CGRP－/－では交感神経系が亢進していた。β受

酸素消費量および二酸化炭素産出量が有意に亢進し容体をブロックすると，高脂肪食負荷時の，CGRPていた。

欠失による体重増加抑制効果はなくなり，脂肪分解

２．CGRP－/－では，高脂肪食負荷により，野生型

関連因子やミトコンドリア関連因子の発現の亢進もマウスと比較して，耐糖能，インスリン感受性が改認めなくなった。

善していた。CGRP－/－では血清インスリンおよ以上の結果から，劉甜は，内因性の CGRP が，白びレプチンレベルが野生型マウスに比較して有意に

色脂肪組織における代謝制御に関わり生体内のエネル

低値であった。

ギー出納を制御していること，CGRP が肥満およびメ

３．高脂肪食負荷 CGRP－/－では，脂肪重量，除脂肪重量共に野生型マウスに比較して低下しており，
白色脂肪細胞の肥大，炎症細胞浸潤などが抑制された。さらに CGRP－/－では，肝臓重量増加と脂肪タボリックシンドロームに対する新たな治療標的となる可能性を示した。
よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

性肝炎が抑制された。

Lack of association of serotonin 2A receptor gene in Japanese patients with obstructive
sleep apnea syndrome（日本人における閉塞性睡眠時無呼吸症候群とセロトニン２Ａレセプ
ター遺伝子の関連）
池

川

香代子

（論文の内容の要旨）ている。我々は，日本人における HTR2A 遺伝子と【背景】閉塞性睡眠時無呼吸症候群（OSAS）はその

OSAS の関連を検証するため，症例対照比較試験を発症機序において後天的な原因である環境的要素だけ行った。

ではなく遺伝的要素が示唆されている。遺伝的要因と【 方 法 】OSAS 群 は American Academy of Sleep

しては顎顔面の構造や脂肪の分布，上気道の筋肉の調

Medicine（ASSM）の診断基準に従い，終夜睡眠ポリ節機能などがあると考えられている。OSAS の発症機

ソムノグラフィー（PSG）および Epworth Sleepiness序の一因としてオトガイ舌筋の弛緩による舌根沈下がScale（ESS）による問診にて OSAS と診断され，医ある。オトガイ舌筋は舌下神経に支配されており，舌療機関に通院している145例を選択した。対照群として，下神経核ではセロトニン２Ａレセプターが存在し，オ

PSG および ESS にて正常と診断された133例の健常

トガイ舌筋はこのレセプターを介して収縮する。この人を選択した。全例が日本人男性である。HTR2A 遺ため，セロトニン２Ａレセプター（HTR2A）遺伝子

伝子中の rs3803189（3’-UTR），rs977003，rs9567737，の変異が OSAS の発症と関連する可能性があり，単rs9316232 ， rs2224721 ， rs2770296 ， rs731779 ，

塩基多型（SNPs）の研究がいくつかの人種で行われrs9567746，rs2070036，rs6311（5’-UTR） の10カ所

No. 5, 2017309

審査学位論文要旨の SNPs を選択した。OSAS 群・コントロール群からを選択した。全例が日本人男性である。HTR2A 遺伝

採取した血液から DNA を抽出し，TaqMan 法により子中の rs3803189（3’-UTR），rs977003，rs9567737，

10か所の SNPs を解析し，対立遺伝子の頻度および遺rs9316232 ， rs2224721 ， rs2770296 ， rs731779 ，

伝子型の分布を比較した。また，無呼吸低呼吸指数

rs9567746，rs2070036，rs6311（5’-UTR） の10カ所（AHI）と肥満度（BMI）および遺伝子型を用いて多の SNPs を選択した。OSAS 群・コントロール群から重ロジスティック回帰解析を行った。さらに，OSAS

採取した血液から DNA を抽出し，TaqMan 法により患者を重症度（カットオフ値：AHI 40 events/h），肥

10か所の SNPs を解析し，対立遺伝子の頻度および遺2

満度（カットオフ値：BMI 25 kg/m ）で２群に分け，伝子型の分布を比較した。また，無呼吸低呼吸指数

サブ解析を行った。

（AHI）と肥満度（BMI）を用いて多重ロジスティッ【結果】解析した10か所の SNPs について，OSAS 群

ク回帰解析を行った。さらに，OSAS 患者を重症度とコントロール群で対立遺伝子の頻度および遺伝子型（カットオフ値：AHI 40 events/h），肥満度（カットの分布に有意差を認めなかった。多重ロジスティック

オフ値：BMI 25 kg/m2）で２群に分け，サブ解析を解析でも OSAS 群とコントロール群に有意差を認め行った。

なかった。今回選択した10カ所の SNPs はこれら10個

その結果，池川は次の結論を得た。

を含む38個の SNPs のタグ SNPs となっており，これ

１． 解析した10カ所の SNPs について，OSAS 群とら38個の SNPs について OSAS との関連はないと考コントロール群で対立遺伝子の頻度および遺伝子型

えられた。また，OSAS 患者を重症度，肥満度でグの分布に有意差を認めなかった。

ループ分けしたサブ解析でも対立遺伝子の頻度に有意差を認めなかった。

２．多重ロジスティック解析でも OSAS 群とコントロール群に有意差を認めなかった。

【結論】OSAS と HTR2A 遺伝子変異との間に有意な３．今回選択した10カ所の SNPs はこれら10個を含む

関連は証明できなかった。日本人の OSAS 発症に，38個の SNPs のタグ SNPs となっており，これら38

HTR2A 遺伝子変異が関与する可能性は低いと考えら個の SNPs について OSAS との関連はないと考え

れた。

られた。
（論文審査の結果の要旨）

４．また，OSAS 患者を重症度，肥満度でグループ分

閉塞性睡眠時無呼吸症候群（OSAS）はその発症機けしたサブ解析でも対立遺伝子の頻度に有意差を認序において後天的な原因である環境的要素だけではなめなかった。

く遺伝的要素が示唆されている。遺伝的要因としては

これらの結果より，OSAS と HTR2A 遺伝子変異

顎顔面の構造や脂肪の分布，上気道の筋肉の調節機能との間に有意な関連は証明できなかった。日本人のなどがあると考えられている。OSAS の発症機序の一OSAS 発症に，HTR2A 遺伝子変異が関与する可能性

因としてオトガイ舌筋の弛緩による舌根沈下がある。

は低いと考えられた。よって，主査，副査は一致してオトガイ舌筋は舌下神経に支配されており，舌下神経

本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

核ではセロトニン２Ａレセプターが存在し，オトガイ舌筋はこのレセプターを介して収縮する。このため，セロトニン２Ａレセプター（HTR2A）遺伝子の変異が OSAS の発症と関連する可能性があり，単塩基多型（SNPs）の研究がいくつかの人種で行われている。
我々は，日本人における HTR2A 遺伝子と OSAS の関連を検証するため，症例対照比較試験を行った。
OSAS 群は American Academy of Sleep Medicine（ASSM）の診断基準に従い，終夜睡眠ポリソムノグ
ラフィー（PSG） および Epworth Sleepiness Scale（ESS） による問診にて OSAS と診断され， 医療機
関に通院している145例を選択した。対照群として，
PSG および ESS にて正常と診断された133例の健常人
310

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

Addition of thymidine to culture media for accurate examination of thymidine-dependent
small-colony variants of methicillin-resistant Staphylococcus aureus : A pilot study（メチシリン耐性 Staphylococcus aureus チミジン依存性変異株の正確な検査を行うために培地へチミジンを添加する試験的研究）
堀

内

一

樹

（論文の内容の要旨）

さらに，③ チミジンを添加した各社 MRSA スクリー

【背景と目的】Small-Colony Variants（SCVs） は，ニング培地：Chrom ID MRSA（シスメックス・ ビ

野生株に比較し発育が遅く，小型のコロニーを形成す

オメリュー），MS-CFX（日水製薬），CHROMagar

る細菌の変異株であり，発育に様々な栄養素を要求す

MRSA Ⅱ（日本 BD），CHROMagar MRSA（関東化る。SCVs の発生には抗菌薬の長期投与が関与し，抗菌学），MDRS-Ⅱ（極東製薬）への発育を検討した。

薬への感受性低下のため，持続性あるいは再発性の感【結果】対象とした SCVs 10株は，分子生物学的に S.

染症を引き起こすとされている。SCVs のうち，DNAaureus と同定され，栄養要求性試験でチミジン要求合成に関わるチミジンを発育に要求する株を特に，チ性を示した。このうち，４株が mecA を保有する MRSA

ミジン依存性 SCVs（Thymidine dependent SCVs：

TD-SCVs であった。①の検討結果では，すべての株

TD-SCVs）としている。分離頻度の高い Staphylococcus

が最終濃度10μg/mL 以上のチミジンの存在下で最大

aureus TD-SCVs の中には，医療関連感染でしばしの発育を示し，それ以上の濃度では大きく変化しな

ば問題となるメチシリン耐性 S. aureus（MRSA）もかった。したがって，②及び③の検討はチミジンの最含まれており，MRSA TD-SCVs による感染症も報告

終濃度を10μg/mL として検討した。②の検討結果でされている。ゆえに，TD-SCVs についても，正確かつは精度管理株，野生株 MSSA および MRSA において，迅速な薬剤耐性菌の検出が重要となる。しかし，TD-

チミジン添加の有無でオキサシリンとセフォキシチン

SCVs は薬剤感受性試験用培地である Mueller-Hintonの感受性に有意差を認めなかった。同培地を用いて（MH）培地など，チミジンをほとんど含まない培地

SCVs の薬剤感受性試験を行った結果，すべての株がには発育しないことから，臨床微生物検査で頻用され培地へ発育し，MRSA TD-SCVs ４株はすべて，MRSA

る薬剤感受性試験を基本とした MRSA 検出法では判と判定できた。また，MSSA TD-SCVs もすべて MSSA

定が困難である。本研究では，チミジンを MH 培地と判定できた。③の検討結果では，チミジンを添加しあるいは市販の MRSA スクリーニング培地に添加すない場合，ChromID MRSA を除く他の培地には MRSA

る新しい MRSA 検出方法について検討した。

TD-SCVs は発育せず，MRSA として検出できなかっ【材料と方法】対象は，信州大学医学部附属病院臨床た。一方，それぞれの培地にチミジンを添加した場合

検査部で分離した SCVs 10株を用いた。16S rRNA 遺は，すべての培地で MRSA TD-SCVs４株を検出で伝子解析と栄養要求性試験により，それぞれ菌種とチきた。

ミジン要求性を確認し，PCR 法による薬剤耐性遺伝【考察】S. aureus TD-SCVs はチミジン10μg/mL の子 mecA の検出を併せて行った。検討は，① MH 培

存在下で十分な発育を示す。MH 培地への最終濃度10

地にチミジンを最終濃度０，0.1，1.0，10，100μg/

μg/mL のチミジン添加は，オキサシリンおよびセ

mL となるよう添加し，発育曲線よりチミジン添加量

フォキシチンの感受性には影響することはなく，S.

を決定した。 ①で決定したチミジン添加量に従い，

aureus TD-SCVs の発育を支持し，従来通りの判定基② 精度管理株（S. aureus ATCC25923，Enterococcus

準で MSSA と MRSA の鑑別が可能である。また，同

faecalis ATCC29212，Escherichia coli ATCC25922）

様に MRSA スクリーニング培地へチミジンを添加す

および臨床分離株メチシリン感性 S. aureus（MSSA）

ることで，MRSA TD-SCVs のスクリーニングが可と MRSA10株ずつを用いて，MH 培地へのチミジン能である。したがって，TD-SCVs を見落とさないた添加による MRSA 鑑別用薬剤オキサシリンおよびめにも，臨床微生物検査で使用する薬剤感受性用培地

セフォキシチンの MIC 値の変化を検討した。また，や MRSA スクリーニング培地にはチミジンを添加し同培地における SCVs の発育と感受性判定の検討，て検査する必要がある。

No. 5, 2017311

審査学位論文要旨（論文審査の結果の要旨）

クリー二ング培地を用いて，チミジンを添加すること

Small-Colony Variants（SCVs）と呼ばれる細菌ので MRSA TD-SCVs が検出可能であるか検討した。

栄養要求性変異株は，持続性あるいは再発性の感染症を引き起こす。発育にチミジンを要求する株を特にチミジン依存性 SCVs（Thymidine dependent SCVs：

その結果，堀内一樹は次の結論を得た。
１．S. aureus TD-SCVs は10μg/mL 以上のチミジンの存在下で最大の発育を示す。

TD-SCVs）と呼び，Staphylococcus aureus TD-SCVs

２．MH 培地へのチミジン添加は，セフォキシチンおの中には mecA を保有するメチシリン耐性 S. aureus

よびオキサシリンの MIC 値や MRSA 判定に影響（MRSA）TD-SCVs も含まれる。一般的に薬剤感受しない。

性試験に用いられる Mueller-Hinton（MH）培地はチミジンを可能な限り含まない組成となっており，TDSCVs は発育不良で薬剤感受性試験ができず，耐性菌判定も困難である。本研究では，S. aureus TD-SCVsを対象として，チミジンを添加した培地を用いた MRSATD-SCVs の耐性菌判定法と検出法を検討した。

３．MH 培地へのチミジン添加で，MRSA TD-SCVsの耐性菌判定が可能である。
４．市販の MRSA スクリーニング培地へのチミジン添加で，MRSA TD-SCVs を検出できる。
以上の結果より，MH 培地へ10μg/mL チミジン添加で MRSA TD-SCVs の耐性菌判定が可能であり，チミジン濃度を変化させた発育曲線の検討により，

MRSA スクリーニング培地への添加によって，これ培地に添加するチミジン濃度を決定した。野生株と薬まで見逃されていた MRSA TD-SCVs を検出できる

剤感受性試験の精度管理株を対象に，チミジン添加にと結論付けた。臨床微生物検査において一つの課題でよる MRSA 判定用薬剤（セフォキシチンおよびオキ

あった SCVs の耐性菌判定法と検出法に一つの方針をサシリン）の MIC 値への影響を検討し，同じ組成の提示した。

培地で MRSA TD-SCVs を MRSA と判定できるかを確認した。また，５社から市販されている MRSA ス

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Vasoprotective activities of the adrenomedullin-RAMP2 system in endothelial cells（血管内皮細胞のアドレノメデュリン-RAMP2系による血管保護作用）羨鮮（論文の内容の要旨）

RAMP2－/－マウス（DI-E-RAMP2－/－）を用いて，【背景と目的】アドレノメデュリン（AM）は多彩な血管内皮細胞の AM-RAMP2系の役割を検討した。

生理活性を有するペプチドである。AM およびそのさらに骨髄由来細胞の関与を検討するため，骨髄移植

ファミリー因子はカルシトニン受容体様受容体（BMT）を行った後ワイヤー傷害モデルを作成し，新（CLR）を介して作用する。CLR のリガンドに対する生内膜形成に与える影響を検討した。最後に我々は，特異性は，三つの受容体活性調節タンパク質によって内皮前駆細胞（EPC） の増殖および遊走に対する決 定 さ れ る 。RAMP2 ホ モ ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス は ，AM-RAMP2系の意義を検討した。

AM－/－マウスと同様に血管の発達不全によって胎【結果】ワイヤー傷害後の新生内膜形成は，野生型マ

生中期に致死となることから，我々は，RAMP2が，ウスに比較して，RAMP2＋/－において有意に亢進

AM の血管新生作用の重要な規定因子であることをしていた。血管内膜と中膜の面積比も RAMP2＋/－

明らかとしてきた。一方で，AM-RAMP2系の抗動脈において有意に高値であった。CD31とα-SMA の二硬化作用への関与は明らかではない。

重免疫染色の結果では，RAMP2＋/－では傷害後の【材料および方法】本研究では，初めに RAMP2ヘテ

血管の平滑筋細胞増殖が亢進していたが，再内皮化はロノックアウトマウス（RAMP2＋/－） を用いた。

抑制されることが確認された。RAMP2＋/－では傷野生型マウスおよび RAMP2＋/－の大腿動脈に対し害部位の外膜および新生内膜におけるマクロファージてワイヤーを挿入することで血管内膜傷害モデルを作

浸潤が亢進しており，炎症性サイトカインの発現亢進，成し，RAMP2の発現低下による新生内膜形成におよ

NADPH oxidase の発現亢進と酸化ストレスレベルのぼす影響を検討した。次に誘導型血管内皮細胞特異的増強を認めた。

312

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

次に DI-E-RAMP2－/－を用いて，ワイヤー傷害を飾タンパク質 RAMP2が，AM の血管新生作用の重要

加え，新生内膜形成を検討した。DI-E-RAMP2－/－

な規定因子であることを明らかとしてきた。一方で，の血管では，sham 群，ワイヤー傷害群共に AM が代

AM-RAMP2系の抗動脈硬化作用への関与は明らかで償性に発現亢進していた。DI-E-RAMP2－/－では，はない。

新生内膜形成が亢進しており，平滑筋細胞増殖が亢進

そこで羨 鮮は，本研究では RAMP2ヘテロノックしていたが，再内皮化は抑制されていた。病変部の炎

アウトマウス（RAMP2＋/－）を用い，ワイヤー血管症および酸化ストレスレベルも同様に亢進していた。

内膜傷害モデルを作成した。AM-RAMP2系の遺伝子

次に，RAMP2＋/－と野生型マウス，または DI-

発現の解析，EVG 染色で新生内膜形成を解析，CD31

E-RAMP2－/－とコントロールマウスから採取したとα-SMA の二重免疫染色で血管内腔再内皮化と平骨髄細胞を，放射線照射したレシピエントマウスに移

滑筋細胞増殖を解析，F4/80免疫染色で傷害部位のマ植し，血管傷害を加えて新生内膜形成を検討した。そクロファージ浸潤を解析，炎症性サイトカインの遺伝の結果 RAMP2＋/－あるいは DI-E-RAMP2－/－の子発現の解析，NADPH oxidase の発現と酸化ストレ

骨髄を移植したレシピエントマウスでは，新生内膜のスレベルの解析を行った。次に誘導型血管内皮細胞特形成が各々のコントロールと比較して亢進しており，

異的 RAMP2－/－マウス（DI-E-RAMP2－/－） を平滑筋細胞の増殖亢進と，再内皮化の抑制が認められ用いて，ワイヤー傷害を加え，新生内膜形成を解析，た。以上の結果から，骨髄由来細胞における RAMP2

血管内腔再内皮化と平滑筋細胞増殖を解析，傷害部位発現低下が，RAMP2＋/－および DI-E-RAMP2－/－のマクロファージ浸潤を解析，炎症性サイトカインのにおける新生内膜形成亢進に重要な役割を持つことが遺伝子発現を解析，酸化ストレスレベルの解析を行っ示された。

た。次に，RAMP2＋/－と野生型マウス，または DI-

最後に in vitro の系において，内皮前駆細胞（EPC）

E-RAMP2－/－とコントロールマウスから採取したに お け る AM-RAMP2 系 の 役 割 を 検 討 し た 。 ま ず

骨髄細胞を，放射線照射したレシピエントマウスに移DI-E-RAMP2－/－およびコントロールマウスの骨植し，血管傷害を加えて新生内膜形成を検討した。最髄から EPC を初代培養した。EPC 初代培養28日後，後に in vitro の系において，DI-E-RAMP2－/－およDI-E-RAMP2－/－ではコントロールに比較して，Dil-

びコントロールマウスの骨髄から EPC を初代培養

Ac-LDL および BS-Ⅰ lectin の２重陽性を示す EPC

して，細胞の性質の解析を行った。末梢血由来のヒトの数が低下していた。 次に末梢血由来のヒト EPC

EPC（hEPC）を用い，AM 投与による細胞増殖とマ（hEPC）では，AM，RAMP2および CLR の発現が確

トリゲル内での管腔形成の解析を行った。

認された。WST 細胞増殖アッセイにおいて，AM はその結果，羨鮮は次の結論を得た。

濃度依存性に hEPC 増殖を亢進した。さらに AM 投

１．RAMP2＋/－マウスでは，wire injury 後の血管与によって，hEPC によるマトリゲル内での管腔形成

内膜の修復が障害されて，炎症や酸化ストレスが亢は有意に亢進した。これらの結果から，EPC の増殖

進し，平滑筋細胞増殖に関係している可能性が考えおよび遊走が，AM-RAMP2系によって制御されていられた。

ることが示された。

２．DI-E-RAMP2－/－マウスでは，傷害後の血管内【結論】以上の結果から，AM-RAMP2系は血管の恒皮の修復が障害されて，炎症や酸化ストレスが亢進常性を制御し，血管傷害時の新生内膜形成を抑制してし，平滑筋細胞増殖に関係している可能性が考えら

動脈硬化の進展を抑制していることが明らかとなった。

れた。

AM-RAMP2系は動脈硬化や再狭窄に対する新たな治療標的として期待される。

３．骨髄移植とワイヤー血管傷害実験の結果によって，RAMP2＋/－あるいは DI-E-RAMP2－/－の骨髄（論文審査の結果の要旨）を移植したレシピエントマウスでは，新生内膜の形

アドレノメデュリン（AM）は多彩な生理活性を有成が各々のコントロールと比較して亢進しており，するペプチドである。AM およびそのファミリー因

平滑筋細胞の増殖亢進と，再内皮化の抑制が認めら

子はカルシトニン受容体様受容体（CLR）を介して作れた。

用する。CLR のリガンドに対する特異性は，受容体４．マウスの骨髄から EPC を初代培養し，28日後，活性調節タンパク質によって決定され，受容体活性修

DI-E-RAMP2－/－ は コ ン ト ロ ー ル に 比 較 し て ，No. 5, 2017313

審査学位論文要旨

Dil-Ac-LDL および BS-Ⅰ lectin の二重陽性を示す

炎症作用，酸化ストレス抑制により，新生内膜形成を

EPC の数が低下していた。

抑制し，血管保護作用を持つことを示した。また，AM-

５．臍帯血由来のヒト EPC（hEPC）では，AM，RAMP2

RAMP2系は EPC の増殖と遊走を制御して再内皮化

および CLR の発現が確認され，AM は濃度依存的を改善することを示した。AM-RAMP2系は動脈硬化に hEPC の増殖を亢進した。 さらに AM 投与にや再狭窄に対する新たな治療標的として期待される。

よって，hEPC のマトリゲル内での管腔形成は有意

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とに亢進した。

して価値があるものと認めた。

以上の結果から，羨 鮮は，AM-RAMP2系は，抗Adrenomedullin suppresses VEGF-induced vascular hyperpermeability and inflammationin retinopathy（アドレノメデュリンは，網膜症において，VEGF により誘発される血管透過性亢進と炎症を抑制する）
今

井章（論文の内容の要旨）

現により検討した。次に Kimba マウスに対し，AM【背景と目的】アドレノメデュリン（AM）は様々なを硝子体内あるいは全身投与し，網膜血管に与える影

生理活性を有するペプチド因子である。AM には代響を検討した。 さらに培養血管内皮細胞を用いて，表的な血管拡張作用の他にも，抗炎症作用，血管新生

VEGF 単独あるいは AM との共投与を行い，血管透作用など様々な作用が報告されている。一方，眼内で過性，電気抵抗，タイトジャンクション形成，炎症性も AM の高発現が認められる。AM の発現は低酸素

サイトカイン発現，NF-κB シグナルに与える影響をで誘導されることから，我々はこれまで，低酸素誘導検討した。最後に，Kimba マウスへの AM 投与によっ性眼内血管新生モデルである未熟児網膜症（OIR）モて網膜に生じる変化を，包括的なリアルタイム PCR

デルでの検討を行い，AM ヘテロノックアウトマウ

アレイ分析により検討した。

ス，あるいは抗 AM 抗体を硝子体内投与したマウス【結果】Akita マウスでは明らかな網膜症の所見は認において，病的血管新生が抑制されることを報告した。

められなかった。一方 Akimba マウスでは重症型の一方で，代表的な眼内血管病である糖尿病網膜症にお

増殖性変化が顕著であり，網膜剥離が多発していた。

いて，AM の病態生理学的意義は不明である。糖尿これらに対し，Kimba マウスでは網膜出血， 漏出，病網膜症の発症，進展においては，VEGF が重要な

病的血管新生，増殖性変化など，ヒトの糖尿病網膜症

役割を果たすと考えられており，現在抗 VEGF 薬がに類似した一連の所見が確認されたため，以後，糖尿治療に用いられている。我々は，糖尿病モデルマウス

病網膜症のモデルとして，主として Kimba マウスをである Akita マウス，網膜においてヒト型 VEGF を用いて解析した。Kimba マウスでは，網膜毛細血管

過剰発現するトランスジェニックマウス＝Kimba マの脱落，血管漏出に加え，血管脆弱性や網膜内の白血

ウス，さらに両者を交配して得られた Akimba マウ

球の停滞所見が認められ，網膜における炎症性サイトス（Akita＋/－・/Kimba＋/－）を用い，糖尿病網膜

カインや NADPH oxidase の発現の亢進，酸化ストレ症，特に VEGF 誘導性網膜症の病態における AM の

スレベルの上昇を認めた。Kimba マウスに対し，AM

病態生理学的意義を検討した。

の硝子体投与，あるいは浸透圧ポンプを用いた全身持【材料および方法】網膜血管の所見を，TEFI（Topi­

続投与を行ったところ，網膜毛細血管の脱落，血管瘤

cal Endoscopic Fundal Imaging）を用いた眼底撮影，の形成，血管漏出が改善された。培養網膜血管内皮細走査型レーザー検眼鏡（Scanning Laser Ophthalmo­胞における経内皮電気抵抗および FITC-デキストラ

scope：SLO）を用いたフルオレセイン蛍光眼底血管

ン透過性アッセイにおいて，VEGF 投与は血管透過

造影，アクリジンオレンジを用いた網膜生体染色，網性を増強したが，AM の投与により抑制され，血管膜展開標本，電顕標本により評価した。さらに網膜の内皮細胞のタイトジャンクション形成も AM 投与に炎症や酸化ストレスの変化を，リアルタイム PCR により，強固となることが確認された。さらに VEGF

よる遺伝子発現，Western blotting によるタンパク発の投与は，網膜血管内皮細胞における NF-κB シグ

314

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

ナルを増強し，炎症性サイトカイン発現を亢進させた

VEGF 誘導性網膜症の病態における AM の病態生理が，AM の投与により抑制された。実際に Kimba マ

学的意義を，マウスへの全身投与，眼内局所投与を行

ウスへの AM 投与によって，網膜の NF-κB シグナ

い検討した。

ル関連因子の発現が網羅的に抑制された。

その結果，今井 章は次の結論を得た。

【結論】AM は，網膜症において，VEGF による炎症

１．Akita マウスでは顕性網膜症を来さない。Akim­

および血管透過性を抑制することから，糖尿病網膜症

ba マウスでは重症の増殖糖尿病網膜症様網膜症をの病態，特に視力低下の原因となる黄斑浮腫などに対発症する。

して，有用性が期待される。

２．Kimba マウス群では重症度は様々だが，ヒト糖（論文審査の結果の要旨）

尿病網膜症の血管病態とされる炎症，血管脱落，血糖尿病網膜症は高血糖に引き続いて発症する網膜の管新生を認めた。

血管の炎症・脱落・血管新生を病態とする疾患である。

３．Kimba マウスの血管増殖性変化の認めない群に発症には VEGF（vascular endothelial growth factor）

おいて AM の投与を行う事で，血管からの漏出がなどが関与することが知られているが，疾患モデル動物が限られていた。

抑制された。
４．Kimba マウスへの AM 投与によって炎症性サイ

アドレノメデュリン（AM）は様々な生理活性を有トカインの広範な抑制を認めた。メカニズムとしてするペプチド因子である。AM には代表的な血管拡は IKKαのリン酸化抑制を介した NF-κB p65のリ張作用の他にも，抗炎症作用，血管新生作用など様々

ン酸化抑制によるものと思われた。

な作用が報告されている。一方，眼内でも AM の高これらの結果により，Kimba マウスに発症する発現が認められる。AM の発現は低酸素で誘導されVEGF 誘導網膜症においてヒト糖尿病網膜症類似のるものの，糖尿病網膜症において，AM の病態生理

網膜症を発症することを確認し，アドレノメデュリン

学的意義は不明である。糖尿病モデルマウスであるが網膜症の血管透過性亢進を抑制することを確認した。

Akita マウス，網膜においてヒト型 VEGF を過剰発現

また，メカニズムとしては NF-κB を介した炎症のするトランスジェニックマウス＝Kimba マウス，さら抑制が示唆された。

に両者を交配して得られた Akimba マウス（Akita＋/－・/Kimba＋/－）を用い，糖尿病網膜症，特によって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Marked biochemical difference in amyloid proportion between intra- and extraocular tissues in a liver-transplanted patient with hereditary ATTR amyloidosis（肝移植後 FAP 患
者の眼内・眼外沈着アミロイドにおけるアミロイド蛋白組成の顕著な生化学的相違）
吉

長

恒

明

（論文の内容の要旨）

この理由としては，硝子体以外の眼内組織のデータが【背景】生体内における95 ％以上のトランスサイレチ

なく，同一患者での眼内・眼外組織でのアミロイド蛋

ン（TTR）は肝臓で産生されるため，家族性アミロ

白の生化学的解析がなされていないこと，また従来のイドポリニューロパチー（FAP）では，肝移植療法

アミロイド抽出法では，眼組織内部の各部位で，選択が極めて有効な治療法であり，多くの臓器でアミロイ

的にアミロイド蛋白を解析することが不可能であった

ドーシスの進行が抑制されることが報告されている。

ことが考えられる。

しかしながら，生命予後が改善された反面，多くの患

最近我々は，参考論文で示すように，ドミノ肝移植レ

者で移植後に難治性のアミロイド眼症を併発すること

シピエントにおける超早期伝播性アミロイド病変の生が報告されるようになり，患者 QOL を著しく低下さ

化学的特徴について，Laser microdissection（LMD）

せ，臨床的に大きな問題となっている。この術後アミと Liquid chromatography-tandem mass spectro­

ロイド眼症の病態機序については，硝子体切除術時にmetry（LC-MS/MS）によるプロテオーム解析法を得られた数例における硝子体検体で解析されているが，用いて明らかにし，微量沈着アミロイド蛋白の解析法

詳細な分子病態機序は現在も明らかにできていない。

を確立した。本研究では，この解析法を応用し，肝移No. 5, 2017315

審査学位論文要旨

植後10年経過後に角膜穿孔から片眼摘出となったアミロイド蛋白組成の解析結果から，眼内と眼外組織

FAP 患者の眼内・眼外組織アミロイド蛋白を，LMD

では，異なった分子病態でアミロイド線維が構成されを用いて部位選択的に抽出し，LC-MS/MS にて生化ていることが明らかになった。肝移植後アミロイド眼学的解析を行い，肝移植後アミロイド眼症の発症機序症における眼内アミロイド線維形成は，網膜色素上皮を詳細に検討した。

細胞などの眼内局所で産生された変異型 TTR に極め【対象・方法】患者は49歳女性で，TTR 遺伝子変異て強く依存しており，循環血液中の肝臓由来の野生型（Val30Met）陽性である。37歳時に硝子体混濁と末梢TTR の，眼内アミロイド形成に対する影響は少ない

神経障害で発症し，39歳で生体肝移植を施行。その後ものと考えられた。これらの結果は，肝移植では移植

徐々に硝子体混濁が悪化し，41歳で左眼の硝子体切除後のアミロイド眼症の予防，進行抑制が期待できない術が施行された。緑内障も併発し，高度に視機能が低ことを明確に示している。このため今後は，眼内にお下したため，46歳に線維柱帯切除術も施行されている。

ける変異型 TTR の局所産生を抑制，あるいは眼内ア

49歳時に左眼の角膜潰瘍から角膜穿孔を生じ，左眼球

ミロイド蛋白を効率よく turnover させるような新たな摘出術が施行された。

治療法の開発が必要と考えられた。また眼内では，網摘出眼は10 ％ホルマリンで固定後，パラフィン包

膜色素上皮で変異型だけでなく野生型 TTR も同時に埋切片を作製した。組織アミロイドの沈着量に関して産生されているにも関わらず，なぜ眼内では，野生型

は，Congo red 染色標本と抗 TTR 抗体による免疫染

TTR のアミロイド構成における関与が少ないのかと色標本を用いて観察を行った。アミロイド線維蛋白のいう新たな問題点も，今回の研究で明らかになった。

抽出は，LMD を用いて，眼内組織は虹彩，毛様体，可能性として眼内組織では，眼外組織に比べて野生型

網膜，脈絡膜，強膜から，眼外組織は視神経，眼球周TTR がアミロイド線維になりにくい分子機序の存在囲に付着する外眼筋の血管と，以前上部消化管内視鏡も示唆され，術後アミロイド眼症に対する新規治療法

検査で採取した十二指腸粘膜から行った。

開発のためにも，今後明らかにすべき課題と考えられ

LMD を用いて回収したアミロイド陽性組織片は，た。

Zwittergent 緩衝液内で，加熱・超音波振盪にて可溶（論文審査の結果の要旨）化した。その後トリプシン消化を37 ℃で24時間行っ

家族性アミロイドポリニューロパチー（FAP）でた後，TTR 分子の30番目のアミノ酸残基を含むトは，肝移植療法が極めて有効な治療法である一方で，リプシンペプチドを LC-MS/MS で解析し，アミロイ

多くの患者で移植後に難治性のアミロイド眼症を併発

ド線維蛋白における野生型 TTR（Val30）と変異型

し，患者 QOL を著しく低下させる。この術後アミロ

TTR（Met30）の構成比について解析した。

イド眼症の病態機序については，詳細な分子病態機【結果】肉眼的病理所見では，眼球は虚脱し，角膜穿序は現在も明らかにできていない。今回，肝移植後10

孔，ブドウ膜剥離が認められた。顕微鏡的所見では，年経過後に角膜穿孔から片眼摘出となった FAP 患者

抗 TTR 抗体陽性のアミロイド沈着が，眼内および眼の眼内・ 眼外組織アミロイド蛋白を，Laser micro

球外組織に広く認められ，眼内組織では，特に虹彩，

dissection（ LMD ） を 用 い て 部 位 選 択 的 に 抽 出 し ，毛様体，網膜血管壁，網膜の内境界膜に，眼外組織でLiquid chromatography tandem mass spectrometryは視神経鞘に高度なアミロイド沈着が認められた。生（LC-MS/MS）にて生化学的解析を行い，肝移植後ア

化学的解析においては，眼内組織のアミロイド線維はミロイド眼症の発症機序を詳細に検討した。

一様に変異型 TTR から構成され，その比率は80 ％を患者は49歳女性で，TTR 遺伝子変異（Val30Met）

超えていた（84-98 ％）。一方，眼外組織におけるア陽性であり，37歳時に硝子体混濁と末梢神経障害で発ミロイド構成蛋白は，逆に野生型 TTR が優位となり，症し，39歳で生体肝移植を施行。その後徐々に硝子体

外眼筋における野生型 TTR の比率は約71 ％で，十二混濁が悪化し，複数回手術を経験したが悪化し，49歳

指腸粘膜のアミロイドとほぼ同じ比率（69 ％） で時に左眼の角膜潰瘍から角膜穿孔を生じ，左眼球摘出あった。強膜におけるアミロイド蛋白の変異 TTR 比術が施行された。

率は61 ％であり，眼内と眼外組織のほぼ中間の値で摘出眼は10 ％ホルマリンで固定後，パラフィン包あった。

埋切片を作製し，組織アミロイドの沈着量に関しては，【考察・結論】肝移植後 FAP 患者における眼組織のCongo red 染色標本と抗 TTR 抗体による免疫染色標

316

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨本を用いて観察を行った。アミロイド線維蛋白の抽出は約71 ％で，十二指腸粘膜のアミロイドとほぼ同は，LMD を用いて，眼内外組織から採取した検体をじ比率（69 ％）であった。

利用した。アミロイド陽性組織片は，TTR 分子の30

これらの結果より肝移植後 FAP 患者においては眼番目のアミノ酸残基を含むトリプシンペプチドを内と眼外組織では，異なった分子病態でアミロイド線

LC-MS/MS で解析し，アミロイド線維蛋白における維が構成されていることが明らかとなった。特に眼内野生型 TTR（Val30）と変異型 TTR（Met30）の構成

アミロイド線維形成は，網膜色素上皮細胞などの眼内比について解析した。

局所で産生された変異型 TTR に極めて強く依存して吉長は次の結論を得た。

おり，循環血液中の肝臓由来の野生型 TTR の眼内ア

１．アミロイド沈着は，眼内および眼球外組織に広く

ミロイド形成に対する影響は少なく，肝移植はアミロ認められ，眼内組織では，特に虹彩，毛様体，網膜

イド眼症の予防，進行抑制になりえないことを明確に

血管壁，網膜の内境界膜に，眼外組織では視神経鞘示した。このため今後は，眼内における変異型 TTRに高度なアミロイド沈着が認められた。

の局所産生を抑制，あるいは眼内アミロイド蛋白を効

その結果

２．生化学的解析においては，眼内組織のアミロイド
線維は一様に変異型 TTR から構成され，その比率

率よく turnover させるような新たな治療法の開発が必要と考えられた。
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値は80 ％を超えていた（84-98 ％）。一方，眼外組織
におけるアミロイド構成蛋白は，逆に野生型 TTRがあるものと認めた。

が優位となり，外眼筋における野生型 TTR の比率

Rapid diagnosis of acute promyelocytic leukemia with the PML-RARA fusion gene using a
combination of droplet-reverse transcription-polymerase chain reaction and instant-quality
fluorescence in situ hybridization（液滴型高速 PCR と instant-quality FISH を用いた PMLRARA 融合遺伝子を伴う急性前骨髄性白血病の迅速診断）
重

藤

翔

平

（論文の内容の要旨）

でに１日から２日を要す。本研究では，液滴型高速【背景と目的】急性前骨髄性白血病（APL）は急性骨

RT-PCR による PML-RARA 融合遺伝子の検出と，髄性白血病の５～８％を占める病型の一つである。

instant-quality FISH（IQ-FISH）による腫瘍細胞定APL は腫瘍細胞の著明な増加，高度の凝固障害と出量を用いた PML-RARA 融合遺伝子を伴う APL の迅

血を呈する悪性度の高い白血病で，15番染色体と17番

速診断法の検討を行った。

染色体の相互転座ｔ（15；17）（q22；q21）によって【対象と方法】PML-RARA 陽性 APL 患者５例およ形 成 さ れ る PML-RARA 融 合 遺 伝 子 が 顆 粒 球 系 細び対照患者３例の骨髄液および末梢血より得られた胞の分化を妨げることがその発症機序となる。この融RNA 試料およびカルノア固定した間期核細胞を用い合遺伝子に対する分子標的薬オールトランス型レチノ

た。RNA 試料では液滴型高速 PCR 装置（セイコー

イン酸（ATRA）と亜ヒ酸を用いた分化誘導療法は，エプソン株式会社）を用いて，１ステップ RT-PCR

PML-RARA 融合遺伝子を伴う APL において高い寛による増幅効率および反応時間の検討を行った。カル

解導入率と治癒率をもたらす。APL においては一部

ノア固定細胞を用いた FISH 法の検討では，IQ-FISHの症例で ATRA 耐性を示す PML 以外の遺伝子によにおいては IQ-FISH Fast Hybridization Buffer（アる RARA 融合遺伝子によるものがあり，確定診断にジレントテクノロジーズ社）を用いて FISH 法を行い，はｔ（15；17）（q22；q21）や PML-RARA 融合遺伝

融合シグナルを持つ細胞をカウントしハイブリダイ

子を迅速に検出および定量を行うことが必要となる。

ゼーション時間の検討を行った。従来法として Vysis

しかしながら，ｔ（15；17）や PML-RARA 融合遺LSI Hybridization buffer（アボットモレキュラー社）

伝子の検査に用いられる従来の fluorescence in situ

を用いて IQ-FISH と比較した。

hybridization（FISH）や reverse-transcription poly­【結果】液滴型高速 PCR 装置を用いた１ステップ RT-

merase chain reaction（RT-PCR）は，結果を得るまPCR は，５例全ての APL 患者試料で26分以内に PML-

No. 5, 2017317

審査学位論文要旨

RARA 融合遺伝子陽性の判定が可能であった。一方，（IQ-FISH）による腫瘍細胞定量を用いた検査法の検対照患者試料では PCR の増幅は認められなかった。

討を行った。

IQ-FISH は，ハイブリダイゼーション時間を１時間

APL 患者５例および対照患者３例より得られたとした場合，検査開始から４時間以内で結果を得るこRNA 試料およびカルノア固定した間期核細胞を用いとでき，従来法と同等の蛍光シグナルを示した。また，て検討した。RNA 試料では液滴型高速 PCR 装置を

全ての APL 患者試料で，融合シグナルの陽性細胞率

用いて，RT-PCR の増幅効率および反応時間を検討

は従来法と一致した。

した。カルノア固定細胞を用いた FISH 法の検討では，【結論】液滴型高速 RT-PCR と IQ-FISH を用いること

IQ-FISH に お い て は IQ-FISH Fast Hybridization

により，検体提出から４時間以内に APL 患者の PML-

Buffer を用いて，融合シグナルを持つ細胞をカウン

RARA 融合遺伝子の検出および腫瘍細胞の定量を行トしハイブリダイゼーション時間の検討を行い従来法

う検査法を確立した。血液塗抹標本による形態学的検と比較した。
その結果，重藤翔平は次の結論を得た。

査と，これらの遺伝子・染色体検査法を組み合わせれば，迅速かつ確実な PML-RARA 融合遺伝子を伴う

１．液滴型高速 RT-PCR を用いて，26分以内に全例

APL の診断法となる。

の APL 患者試料で PML-RARA 融合遺伝子の増幅【結語】本検査法は，従来１日から２日要していたが認められた。

APL の確定診断を検査当日に可能にし，的確な分化

２．液滴型高速 RT-PCR において，対照試料３例は融合遺伝子の増幅を認めなかった。

誘導療法の開始および選択に貢献すると考えられる。
また液滴型高速 PCR と IQ-FISH は他の項目への応

３．IQ-FISH は，ハイブリダイゼーション時間を１用が容易であり，作業時間の短縮により日常臨床検査時間とした場合，検査開始から４時間以内に結果を業務の効率化に寄与する。

得ることでき，従来法と同等の蛍光シグナルを示し（論文審査の結果の要旨）

た。

PML-RARA 融合遺伝子を伴う急性前骨髄性白血

４ ．IQ-FISH に お い て ， 全 例 の APL 患 者 試 料 の病（APL）は，発病初期に高度な凝固障害および出PML-RARA 融合シグナル陽性細胞率は従来法と血を呈する悪性度の高い白血病である。PML-RARA一致した。

融合遺伝子を伴う APL の治療にはオールトランス型

これらの結果より，液滴型高速 RT-PCR と IQ-FISH

レチノイン酸および亜砒酸による分化誘導療法が用いを用いて， 検体提出から４時間以内に APL 患者のられ，高い確立で寛解が得られる。APL の診断には

PML-RARA 融合遺伝子の検出および腫瘍細胞の定PML-RARA 融合遺伝子の検出および腫瘍細胞の定量を行う検査法を確立した。血液塗抹標本による形態量が不可欠であるが，従来の検査では結果を得るま学的検査と，これらの遺伝子・染色体検査法を組み合でに１日から２日を要す。よって，速やかに分化誘導

わせれば，迅速かつ確実な PML-RARA 融合遺伝子療法を開始するために，より迅速な検査法が求められを伴う APL の診断法となる。よって主査，副査は一る。本研究では，液滴型高速 RT-PCR による PML-

致して本論文を学位論文として価値があるものと認め

RARA 融 合 遺 伝 子 の 検 出 と Instant-quality FISH

た。

Association between endotoxemia and histological features of nonalcoholic fatty liver disease（非アルコール性脂肪性肝疾患における組織像とエンドトキシン血症との関連）
北

畠

央

之

（論文の内容の要旨）

hit が加わり，炎症・線維化が生じると推測されてい【目的】非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）はる 。 そ の hit の 有 力 な 候 補 と し て エ ン ド ト キ シ ン

世界的に罹患率が増加している慢性肝疾患であり，な（LPS）が挙げられる。腸管で産生され門脈を介してかでも肝硬変や肝癌に進展しうる非アルコール性脂肪肝臓に流入する LPS が NASH 発症に関与している可肝炎（NASH）が問題となっている。NASH の発症

能性がマウスの実験で示されているが，ヒト NASH機構として，肝細胞への脂肪沈着（脂肪肝）に様々なではその関与は不明である。また LPS は半減期が短

318

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

く肝臓で処理されるので，門脈血中の濃度を直接測定（EndoCab IgG）が LPS 血症の surrogate marker とするのは困難であり，LPS 結合蛋白（LBP）や抗エして使用されている。我々は，LPS がヒト NASH のンドトキシンコア抗体（EndoCab IgG）が LPS 血症

発症に関与しているとすれば，炎症や線維化の高度なの surrogate marker として使用されている。本研究

症例ほど LPS 血症の surrogate marker が高いのではでは，LBP および EndoCab IgG と NAFLD の病理組ないか，との作業仮説を立てた。そこで2009年から織像の間に関連があるか検討した。

2015年にかけて当院で肝生検を施行し NAFLD と診【方法】2009年から2015年にかけて当院で肝生検を施断された126例を対象とし，LBP・EndoCab IgG と臨行し，NAFLD と診断された126例を対象とした。肝床検査・肝病理所見との関連を解析した。

生検当日に採取・冷凍保存した血清を用いて，ELISA

その結果，北畠央之は以下の結論を得た。

法で LBP・EndoCab IgG を測定した。 生検組織は

１．LBP は脂肪沈着，バルーニングのスコアと有意Brunt らの分類に従い脂肪沈着，肝細胞のバルーニン

かつ正の相関を認めたが，小葉内炎症や線維化のス

グ（風船状膨化変性），小葉内炎症，線維化に関して

コアとは相関を認めなかった。

スコア化し，LBP・EndoCab IgG との関連を検討した。
また血液検査所見についてもその関連性を評価した。
群 間 比 較 に は Kruskal-Wallis test ，Bonferroni 法 ，２．EndoCab は何れの病理スコアとも相関せず，
LBP との間にも相関を認めなかった。
３．LBP は CRP，AST，ALT，フィブリノーゲンな相関解析は Spearman 法を用いた。

どの炎症に関連する臨床データと有意な相関を認め【結果】LBP は脂肪沈着，バルーニングのスコアの増た。

加 に 伴 い 上 昇 す る 傾 向 に あ っ た が（ r＝0.38 ，P＜

４．EndoCab IgG は年齢，IgG，ヒアルロン酸と正の0.0001：r＝0.23，P＝0.01），小葉内炎症や線維化の相関，血小板数と負の相関を認めた。

スコアとは相関を認めなかった。EndoCab は何れの今回の研究は，ヒト NAFLD において LPS 血症の病理スコアとも相関なく，LBP との間にも相関を認

surrogate marker と組織学的重症度との関連を検討めなかった。LBP は CRP，AST，ALT， フィブリ

した，最初の研究である。その結果，マウスの知見とノーゲンなどの炎症に関連する臨床データと有意な相は異なり LPS がヒト NASH 発症への強力な hit と関を認めた。一方，EndoCab IgG は年齢，IgG，ヒア

なっていることは証明できなかった。また LBP が脂ルロン酸と正の相関，血小板数と負の相関を認めた。

肪沈着と相関することから，LBP と脂質代謝との関【結論】本研究からは LPS が NASH 進展への強力な連が示唆された。これらの結果は，NASH と LPS・

hit となっていることは証明できなかったが，新たな腸内細菌叢との関連を議論するうえで重要な知見であLPS surrogate marker の開発により NASH 発症へのると考えられた。従って主査，副査は一致して本論文

LPS の関与が今後明らかになるかもしれない。またを学位論文として価値があるものと認めた。

LBP が脂肪沈着と相関することから，LBP と脂質代謝との関連が示唆された。
（論文審査の結果の要旨）
非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）は世界的に罹患率が増加している慢性肝疾患であり，なかでも肝硬変や肝癌に進展しうる非アルコール性脂肪肝炎（NASH）が問題となっている。NASH の発症機構として，肝細胞への脂肪沈着（脂肪肝）に様々な hit が加わり炎症・線維化が生じると推測されている。そのhit の有力な候補がエンドトキシン（LPS）である。
マウスの実験では腸管からの LPS への暴露が NASHの発症に関与している可能性が示されているものの，
ヒト NASH における LPS の関与は不明である。
LPS の門脈中濃度を直接測定するのは困難なため，
LPS 結合蛋白（LBP）や抗エンドトキシンコア抗体
No. 5, 2017319

審査学位論文要旨

The fibrous form of intracellular inclusion bodies in recombinant variant fibrinogenproducing cells is specific to the hepatic fibrinogen storage disease-inducible variant fibrinogen（異常フィブリノゲン産生細胞における繊維状の細胞内封入体は，フィブリノゲン蓄積病を引き起こす異常フィブリノゲンに特異的である）
新

井

慎

平

（論文の内容の要旨）

FSD 全例で‘F’封入体を認めた。Non-FSD transient【背景と目的】フィブリノゲン蓄積病（fibrinogen stor­

株では stable 株同様に‘F’封入体は認められなかっage disease：FSD）は，肝細胞の小胞体内に異常フィた。ペプチド鎖産生 CHO 細胞では封入体形成は認め

ブリノゲン（Fbg）が蓄積し肝傷害を生じる疾患であず，異常 Fbg 産生 CHO 細胞でのみ認めた。

る。FSD を呈する Fbg 低下症の原因として，６種の【結論】繊維状封入体は，FSD を呈する６種の Fbgγ

Fbgγ鎖の遺伝子異常（284R，314P，316N，ΔG346-

鎖遺伝子変異を導入した培養細胞にのみ認められ，

Q350，366S，375W）が報告されている。γ375W の Fbg

FSD 株に特徴的で あった。細胞内封入体は異常γ鎖産生 CHO 細胞において，Fbg が粗大顆粒状（large

のみでは形成されず，正常 Aα鎖・Bβ鎖とともに異granular：LG）および繊維状（fibrous form：F）を

常 Fbg として組み立てられることで初めて形成され呈し，封入体として存在することを明らかにしている。

た。FSD は稀な疾患であるが致死的であり，先天性

本研究では，細胞内封入体が FSD を引き起こす異常Fbg 低下症を呈した患者において FSD を発症するか

Fbg に特異的な現象かを検討した。

は患者の予後および QOL を左右する重要な因子であ【材料と方法】FSD を呈する上記6種の遺伝子変異，る。本研究から，先天性 Fbg 低下症の患者において，および FSD 報告のない Fbg 低下症（Non-FSD）７

CHO 細胞を用いて異常 Fbg 産生 transient 株を作製

種を対象とした。正常γ鎖 cDNA を有するプラスミ

し蛍光抗体法で繊維状封入体をスクリーニングすれば，ドから遺伝子改変キットを用いて変異γ鎖プラスミド

非侵襲的に FSD 発症の可能性を判断できる。

を作製した。プラスミドを AαBβ産生 CHO 細胞に（論文審査の結果の要旨）

遺伝子導入して安定化発現細胞株（stable 株）を樹立

フ ィ ブ リ ノ ゲ ン 蓄 積 病（ fibrinogen storage dis­

し，Fbg 分泌能（ELISA による培養液中および細胞

ease：FSD）は，肝細胞の小胞体内に異常フィブリノゲ

内 Fbg 濃度の測定）と Fbg の細胞内分布（蛍光抗体

ン（Fbg）が蓄積し肝傷害を生じる疾患である。FSD

法および電子顕微鏡による観察）を検討した。また，を呈する Fbg 低下症の原因として，６種の Fbgγ鎖のCHO 細胞と肝細胞癌由来 HuH-7細胞を用いた一過性

遺伝子異常（284R，314P，316N，ΔG346-Q350，366S，発現細胞株（transient 株）を作製し，遺伝子導入法

375W ） が 報 告 さ れ て い る 。 γ 375W の Fbg 産 生の違いによる細胞内封入体を比較した。さらに，異常CHO 細胞において，Fbg が粗大顆粒状（large granular：

γ鎖を含むペプチド鎖産生 CHO 細胞（正常 Aα鎖＋LG）および繊維状（fibrous form：F）を呈し，封入異常γ鎖，正常 Bβ鎖＋異常γ鎖，異常γ鎖産生細胞）体として存在することを明らかにしている。本研究でを作製し，封入体形成について検討した。

は，細胞内封入体が FSD を引き起こす異常 Fbg に特【結果】FSD および Non-FSD stable 株では， 正常

異的な現象かを検討した。

Fbg 産生 CHO 細胞に比して，細胞内 Fbg 濃度が培FSD を呈する上記６種の遺伝子変異，および FSD

養液中より有意に上昇していた。FSD の3株（314P，

報告のない Fbg 低下症（Non-FSD）７種を対象とし316N， ΔG346-Q350） では， γ375W 同様に‘LG’た。正常γ鎖 cDNA を有するプラスミドから遺伝子および‘F’封入体を認めた。一方，FSD の２株（284R，

改変キットを用いて変異γ鎖プラスミドを作製した。

366S）と Non-FSD 株では‘LG’封入体のみ認めら

プラスミドを Aα Bβ産生 CHO 細胞に遺伝子導入しれた。電子顕微鏡では，FSD 株において拡張した小て安定化発現細胞株（stable 株）を樹立し，Fbg 分泌胞体とその内部に一定の配列を有する構造物を確認し能（ELISA による培養液中および細胞内 Fbg 濃度のた。肝細胞由来の HuH-7細胞においても同様の封入測定）と Fbg の細胞内分布（蛍光抗体法および電子体 が 形 成 さ れ た 。CHO/HuH-7 の transient 株 で は顕微鏡による観察）を検討した。また，CHO 細胞と

320

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

肝細胞癌由来 HuH-7細胞を用いた一過性発現細胞株

transient 株では stable 株同様に‘F’封入体は認（transient 株）を作製し，遺伝子導入法の違いによるめられなかった。

細胞内封入体を比較した。さらに，異常γ鎖を含むペ５．ペプチド鎖産生 CHO 細胞では封入体形成は認め

プチド鎖産生 CHO 細胞（正常 Aα鎖＋異常γ鎖，正ず，異常 Fbg 産生 CHO 細胞でのみ認めた。

常 Bβ鎖＋異常γ鎖，異常γ鎖産生細胞）を作製し，これらの結果より，繊維状封入体は FSD を呈する
６種の Fbgγ鎖遺伝子変異を導入した培養細胞にの封入体形成について検討した。

み認められ，FSD 株に特徴的であった。細胞内封入

その結果，新井慎平 は次の結論を得た。
１．FSD および Non-FSD stable 株では，正常 Fbg

体は異常γ鎖のみでは形成されず，正常 Aα鎖・Bβ

産生 CHO 細胞に比して，細胞内 Fbg 濃度が培養鎖とともに異常 Fbg として組み立てられることで初

液中より有意に上昇していた。

めて形成された。FSD は稀な疾患であるが致死的で２．FSD の３株（314P，316N，ΔG346-Q350）では，あり，先天性 Fbg 低下症を呈した患者において FSD

γ375W 同様に‘LG’および‘F’封入体を認めた。一を発症するかは，患者の予後および QOL を左右する

方，FSD の２株（284R，366S）と Non-FSD 株で重要な因子である。本研究から，先天性 Fbg 低下症

は‘LG’封入体のみ認められた。

の患者において，CHO 細胞を用いて異常 Fbg 産生

３．電子顕微鏡では，FSD 株において拡張した小胞transient 株を作製し蛍光抗体法で繊維状封入体をス体とその内部に一定の配列を有する構造物を確認しクリーニングすれば，非侵襲的に FSD 発症の可能性た。

を判断できることを示した。よって，主査，副査は一４．肝細胞由来の HuH-7細胞においても同様の封入体が形成された。CHO/HuH-7の transient 細胞株

致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

では FSD 全例で‘F’封入体を認めた。Non-FSD

ASC Induces Apoptosis via Activation of Caspase-9 by Enhancing Gap Junction-MediatedIntercellular Communication（ASC はギャップジャンクションを介した細胞間相互作用によりカスパーゼ９を活性化し，アポトーシスを誘導する）
北

沢

将

人

（論文の内容の要旨）

フォーメーションアッセイで評価した。また，同細胞【背景と目的】ASC（apoptosis-associated speck likeをヌードマウスの皮下に移植し，12日目に腫瘍を摘出

protein containing a CARD）は Pyrin と相同な領域

し，腫瘍の大きさと重量を測定した。摘出した腫瘍組

PYD と CARD を有し，炎症とアポトーシスを制御す

織は Tunnel 染色と Ki-67染色を行った。一方，PMX-ることが知られている。多くの癌において，ASC の

IRES-GFP ベクターで遺伝子導入されたコントロール

発現はメチル化により抑制されており，ASC は癌抑細胞と ASC 導入細胞は AnnexinV＋7－AAD で染色制因子と考えられている。本研究では癌の細胞間相互し，細胞死を評価した。また，細胞密度の高い状態と，作用を介した増殖や細胞死に ASC がどのような役割低い状態で mRNA を抽出し，リアルタイム PCR で，を果たしているかを明らかにすることを目的とした。

IL-1β，XIAP の発現量を半定量した。次に遺伝子【方法】 本研究には ASC の発現が欠失したヒト線導入細胞（GFP 陽性）と非遺伝子導入細胞を１：１

維 肉 腫 細 胞 株 HT1080 を 用 い た 。HT1080 細 胞 にに混ぜて，GFP の陽性率をフローサイトメーターでpcDNA3ベクターと PMX-IRES-GFP ベクター（レ測定し，経時的変化を解析した（Competitive assay）。

トロウイルス）を用いてコントロールと ASC を遺伝

Competitive assay は低細胞密度と高細胞密度の２つ子導入し，安定的遺伝子導入細胞を樹立した。また，の条件で開始し，細胞密度による ASC の増殖抑制効

pSINsi-hU6と pSINsi-DK I ベクターを用いて p53，

果の差を評価した。汎カスパーゼ阻害剤（Z-VAD-

p21およびコネキシン43のノックダウンを行った。

fmk），選択的カスパーゼ１阻害剤（Z-YVAD-fmk），

pcDNA3 で 遺 伝 子 を 導 入 し た コ ン ト ロ ー ル 細 胞 とカスパーゼ９阻害剤（Z-LEHD-fmk），ネクローシス

ASC 導入細胞の増殖能はセルカウントとコロニー阻害剤（Necrostatin-1），ギャップ結合阻害剤（Car­No. 5, 2017321

審査学位論文要旨

benoxolone）を用いて，ASC が誘導する細胞死の種

ウエスタンブロッティングで評価した。さらに，その類やメカニズムを評価した。また，p53，21をノック

カスパーゼ９の活性化が細胞密度に依存するか，またダウンした HT1080細胞を用いて，同様の Competi­

ギャップ結合阻害剤やコネキシン43のノックダウンでtive assay を行った。カスパーゼ９のプロセッシング変化するかを検討した。

（活性化）はウエスタンブロッティングで評価した。

その結果，北沢将人は次の結論を得た。

【結果】ASC は HT1080細胞の増殖を抑制した。特に１．ASC は in vivo，in vitro で共に増殖抑制効果を

ASC は細胞密度が高い環境で強力に細胞増殖を抑制示した。ヌードマウスの皮下移植で得られた腫瘍組したが，低い細胞密度ではその効果は低下した。この織の Tunnel 染色と K-67染色の結果，ASC は有意高い細胞密度環境での増殖抑制効果は汎カスパーゼ阻にアポトーシスを増加させたが，細胞周期には有意害剤（Z-VAD-fmk）で有意に減弱した。高い細胞密な差を認めなかった。

度環境において ASC の遺伝子導入によりアポトーシ

２．in vitro で ASC は高い細胞密度環境で細胞死をスが有意に増加することを AnnexinV＋7－AAD 染誘導した。その細胞死はネクローシス阻害剤では抑色で確認した。また，高い細胞密度環境では ASC 導入

制されず，汎カスパーゼ阻害剤で有意に抑制された。

細胞で NF-κB が転写制御している IL-1βと XIAP

３．高い細胞密度環境で ASC は NF-κb が制御するの mRNA 量が有意に低下していた。ASC の増殖抑制は分子である IL-1βと XIAP の mRNA 量を低下させカスパーゼ１阻害剤（Z-YVAD-fmk） や p53，p21

た。

のノックダウンでは変化を認めなかったが，カスパー

４．高い細胞密度環境で ASC が誘導するアポトーシ

ゼ９阻害剤（Z-LEHD-fmk）で有意に減弱した。まスは，カスパーゼ１阻害剤や p53のノックダウンでた，ウエスタンブロッティングにて高い細胞密度環境は抑制されなかったが，カスパーゼ９阻害剤で抑制

で ASC がカスパーゼ９を活性化することが確認されされた。

た。さらに，カスパーゼ９の活性化はギャップ結合阻

５．高い細胞密度で ASC がカスパーゼ９を活性化す

害剤やギャップ結合を形成するコネキシン43のノックることをウエスタンブロッティングで確認した。こダウンにより抑制されることも明らかとなった。

のカスパーゼ９の活性化はギャップジ結合阻害剤や【結論】高い細胞密度環境ではギャップ結合を介したコネキシン43のノックダウンで抑制された。

細胞間相互作用により ASC がカスパーゼ９を活性化

これらの結果より，高い細胞密度環境ではギャップ

し，アポトーシスを誘導することが明らかとなった。

結合を介した細胞間相互作用により ASC がカスパー

ASC は NF-κB を抑制することにより，XIAP の発ゼ９を活性化し，アポトーシスを誘導することが明ら

現量を低下させ，それがカスパーゼ９の活性化を誘導かとなった。ASC は NF-κB を抑制することにより，すると考えられた。ASC は細胞密度のような細胞間XIAP の発現量を低下させ，カスパーゼ９の活性化を相互作用や環境を認識し，腫瘍細胞における細胞競合

誘導すると考えられた。ASC は細胞密度のような細を担っている分子として新たな癌治療の標的分子とな

胞間相互作用や環境を認識し，腫瘍細胞における細胞る可能性が示唆された。

競合を担っている分子として新たな癌治療の標的分子（論文審査の結果の要旨）
本研究はメチル化により ASC の発現が欠失したヒト線維肉腫細胞株 HT1080を用いた。HT1080細胞にとなる可能性が示唆された。
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

ASC の遺伝子導入を行い，in vitro，in vivo で増殖，細胞死の解析を行った。ASC が高い細胞密度環境で誘導する細胞死を Annexin＋7－AAD 染色で測定し，その条件下で mRNA の発現量をリアルタイム PCRで解析した。ASC が誘導する細胞死のメカニズムをカスパーゼ阻害剤，ネクローシス阻害剤，ギャップ結合阻害剤等の薬剤や p53，p21およびコネキシン43のノックダウンを行い解析した。
また，ASC が誘導するカスパーゼ９の活性化は，
322

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

Bach2 Controls Homeostasis of Eosinophils by Restricting the Type-2 Helper Function of T
Cells（転写因子 Bach2によるヘルパーＴ細胞を介した好酸球制御機構の解明）
佐藤（論文の内容の要旨）

勇樹の末梢血中の Il-5の濃度は野生型と比較して，有意に【背景と目的】転写因子 Bach2は，basic region-leucine

増加していた。

zipper 構造を介して，二量体を形成し，Maf recognition【結論】フローサイトメトリーの結果から，Bach2欠

element（MARE）を認識して結合する抑制性転写因

損マウスは複数の臓器で好酸球の増加を示した。しか子である。Bach2は形質細胞分化における抗体遺伝子し，骨髄移植マウスの解析から，Bach2欠損マウスののクラススイッチ組み換えや体細胞超変異に重要な役

好酸球の増加は細胞自律的ではないと考えられる。近割を果たす。近年，Bach2は CD4陽性Ｔ細胞の分化や年，Bach2ノックアウトマウスの CD4陽性Ｔ細胞は，機能を制御しており，抑制性Ｔ細胞（Treg 細胞）のIL-4や IL-5，IL-13などのヘルパーＴ細胞Ⅱ型（Th2）

分化に重要であることが報告されている。Bach2欠損

サイトカインの発現が強く認められると報告されておマウスは，重篤な肺胞タンパク症を発症することから，り，Ｔ細胞を欠損する dKO マウスでは好酸球の増加

Bach2は肺胞マクロファージの機能発現に関与していは認められなかったことから，Bach2欠損マウスで認ると考えられている。このような報告から Bach2は多められた好酸球増加は，Bach2細胞自律性ではなく，様な免疫細胞の分化や機能の制御に重要であると考えBach2を欠損した Th2細胞のサイトカイン発現の変化られる。しかし，Bach2が顆粒球，特に好酸球の分化によるものと考えられる。Bach2はＴ細胞介して好酸や増殖に与える影響の詳細は不明である。本研究では，球の増殖を制御していると考えられ，転写因子 Bach2

Bach2欠損マウスを解析することにより，Bach2が好の変異は喘息などの好酸球が病態にかかわる疾患や一酸球の分化や増殖に与える影響の解明を目指す。

部の原因不明の好酸球増多症のリスクファクターであ【材料および方法】Bach2欠損マウスの脾臓，骨髄，る可能性が示唆される。

末梢血の血球系細胞をフローサイトメトリーで解析し（論文審査の結果の要旨）

た。Bach2欠損マウスで認められた好酸球の増加のBach2は抑制性転写因子であり，Bach2はＢ細胞，メカニズムを解明するため，CD45.2陽性 Bach2欠損

Ｔ細胞，マクロファージなどの様々な免疫細胞の分化

マウスの骨髄有核細胞と CD45.1/CD45.2野生型マや機能の制御に重要であると報告されている。しかし，ウスの骨髄有核細胞を，野生型レシピエントマウスに

Bach2が顆粒球，特に好酸球の分化や増殖に与える影移植した。Ｔ細胞，Ｂ細胞を欠損する Recombination-

響の詳細は不明である。今回，Bach2欠損マウスを解

activating gene 2（Rag2）欠損マウスを用いて，Rag2/

析することにより，Bach2が好酸球の分化や増殖に与Bach2二重欠損（double knock out：dKO）マウスをえる影響の解明を目指した。

作成し，脾臓・骨髄の好酸球をフローサイトメトリー

Bach2欠損マウスの脾臓，骨髄，末梢血の血球系細で解析した。野生型マウスと Bach2欠損マウスの血漿胞をフローサイトメトリーで解析した。Bach2欠損マ

中の Il-5の濃度を ELISA 法により測定した。

ウスで認められた好酸球の増加のメカニズムを解明す【結果】Bach2欠損マウスの組織では，野生型マウス

るため，CD45.2陽性 Bach2欠損マウスの骨髄有核細に比較して FSCmid，SSChigh の集団が多く認められ

胞と CD45.1/CD45.2野生型マウスの骨髄有核細胞を，た。これらの細胞は好酸球の細胞表面マーカーである

野生型レシピエントマウスに移植した。Ｔ細胞，Ｂ細

CCR3，SiglecF が陽性であり，形態学的特徴もあわ胞を欠損す Rag2欠損マウスを用いて，Rag2/Bach2

せて好酸球が増加していると判断された。骨髄移植マ

二重欠損（dKO）マウスを作成し，脾臓・骨髄の好ウスの解析では，Bach2欠損マウス骨髄細胞由来の好酸球を解析した。野生型マウスと Bach2欠損マウスの酸球数と野生型マウス由来の好酸球数に有意差は認め

血清中の Il-5の濃度を ELISA 法により測定した。

られなかった。Bach2欠損マウスと比較して，dKO

その結果，我々は次の結論を得た。

マウスの脾臓や骨髄の好酸球数は低下しており，野生１．フローサイトメリーの結果，Bach2欠損マウスは型マウスと同程度であった。さらに Bach2欠損マウス

脾臓・骨髄・肺で好酸球の増加を認めたが，好中球

No. 5, 2017323

審査学位論文要旨の増加は認められなった。また，好酸球前駆細胞の４．ELISA による血清中の IL-5の測定で，Bach2欠損マウスは野生型マウスに比較して IL-5濃度が優数は両者に差は認められなかった。
２．骨髄移植16週間後のレシピエントマウスの解析の位に増加していた。

結果，各ドナー由来の好酸球数に差は認められず，

上記の結果と Bach2ノックアウトマウスの CD4陽Bach2が好酸球の分化や増殖に与える影響は，非細性Ｔ細胞は，IL-4や IL-5，IL-13などのヘルパーＴ細胞自律的であると考えられた。

胞Ⅱ型（Th2）サイトカインの発現が強く認められる

３．dKO マウスの解析では，Bach2単独欠損マウスという近年の報告から，Bach2欠損マウスで認められで認められた好酸球の増加は，脾臓・骨髄ともに認た好酸球増加は，Bach2細胞自律性ではなく，Bach2

められなかった。このことから Bach2単独欠損マウを欠損した Th2細胞のサイトカイン発現増加によるスで認められた好酸球の増加はリンパ球依存的であものと考えられる。よって，主査，副査は一致して本ると考えられた。

論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Physico-Chemical, In Vitro, and In Vivo Evaluation of a 3D Unidirectional Porous Hydroxyapatite Scaffold for Bone Regeneration（三次元配向連通孔ハイドロキシアパタイト製骨再生用スキャフォルドの物理化学・生体外・生体内的評価）
田中

学（論文の内容の要旨）

して有意に多く細胞を増殖させた（102,479±34,391 vs.

【背景】配向連通孔ハイドロキシアパタイト（unidirec­

32,372±29,061 estimated cells per scaffold ， p＝tional porous hydroxyapatite，UDPHAp）は，軸方0.0495）。 マウス頭蓋骨欠損モデルでは，UDPHAp

向に貫通する連通孔を持った骨再生スキャフォルドでの気孔内に骨梁構造の再生を広範囲に認め，骨梁構造ある。我々は UDPHAp を，組織工学に用いられる三は足場材の深部まで及んでいた。一視野中に再生され次元スキャフォルドとして，現在臨床で広く用いられた骨梁構造の量的な比較においても，UDPHAp はている非配向性の連通孔ハイドロキシアパタイト（in­IP-CHA に 比 較 し て 有 意 に 多 く の 骨 再 生 を 認 め た

terconnected calcium porous HAp ceramic ， IP-（7.045±2.055 ％ vs. 2.514±1.224 ％，p＝0.0209）。

CHA）と比較して評価した。

【結論】気孔率84 ％の UDPHAp は，IP-CHA と同様【方法】我々は，UDPHAp と IP-CHA のμCT によるの強度を持ちながら，高い細胞増殖性・細胞侵入性を

気孔率・比表面積の測定，強度試験，rhBMP-2の徐持ち，より早期に，多くの骨形成を示した。UDPHAp

放能力の評価，SEM による表面の観察を行った後，は，骨補てん剤としてだけではなく，再生医療にも応

in vitro の実験として，接着した細胞形態の観察，蛍用可能な優れた骨形成足場材であると考えらえる。

光顕微鏡による細胞接着様式の観察，Alamar blue

（論文審査の結果の要旨）

assay による細胞増殖性の評価を行い，さらに in vivo の配向連通孔ハイドロキシアパタイト（unidirection­

実験として，recombinant human BMP-2（rhBMP-2）

al porous hydroxyapatite，UDPHAp）は，軸方向にを添加した UDPHAp と IP-CHA をマウス頭蓋骨欠貫通する連通孔を持った骨再生スキャフォルドである。

損部へ移植し，骨形成能を評価した。

田中は UDPHAp を，組織工学に用いられる三次元ス【結果】IP-CHA と比較して，UDPHAp は高い気孔率

キャフォルドとして，現在臨床で広く用いられているを示したが，比表面積は同程度であった。UDPHAp

非配向性の連通孔ハイドロキシアパタイト（intercon­の軸方向への圧縮強度は IP-CHA よりも高く（7.89±

nected calcium porous HAp ceramic，IP-CHA）と1.23 vs. 1.92±0.53 MPa，p＝0.0039），破断エネル

比較して評価した。

ギーは同程度であった（8.99±2.72 vs. 13.95±5.69

田中は，UDPHAp と IP-CHA のμCT による気孔mJ，p＝0.055）。UDPHAp は，IP-CHA よりも緩徐率・ 比表面積の測定， 強度試験，rhBMP-2の徐放に rhBMP-2を放出した。In vitro の実験において，能 力 の 評 価 ，SEM に よ る 表 面 の 観 察 を 行 っ た 後 ，

UDPHAp 上の細胞は， 足場材深部まで接着していin vitro の実験として， 接着した細胞形態の観察，た。細胞増殖試験でも，UDPHAp は IP-CHA に比較

蛍光顕微鏡による細胞接着様式の観察，Alamar blue

324

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

assay による細胞増殖性の評価を行い，さらに in vivo の実験として，recombinant human BMP-2（rhBMP-2）を添加した UDPHAp と IP-CHA をマウス頭蓋骨欠５．細胞増殖試験でも，UDPHAp は IP-CHA に比較して有意に多く細胞を増殖させた。
６．マウス頭蓋骨欠損モデルでは，UDPHAp の気孔損部へ移植し，骨形成能を評価した。

内に骨梁構造の再生を広範囲に認め，骨梁構造は足その結果，田中は次の結論を得た。

場材の深部まで及んでいた。一視野中に再生された

１．IP-CHA と比較して，UDPHAp は高い気孔率を骨梁構造の量的な比較においても，UDPHAp は
IP-CHA に比較して有意に多くの骨再生を認めた。

示したが，比表面積は同程度であった。
２．UDPHAp の軸方向への圧縮強度は IP-CHA より

これらの結果より， 気孔率84 ％の UDPHAp は，
骨補てん剤としてだけではなく，再生医療にも応用可も高く，破断エネルギーは同程度であった。
３．UDPHAp は，IP-CHA よりも緩徐に rhBMP-2

能な優れた骨形成足場材であると考えらえた。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値がを放出した。
４．In vitro の実験において，UDPHAp 上の細胞は，あるものと認めた。

足場材深部まで接着していた。

Shinshu University Graduate School of Medicine Prevalence of Fabry Disease and GLA
c.196G＞C Variant in Japanese Stroke Patients（信州大学大学院医学研究科 日本人脳卒中患者における Fabry 病および GLA c.196G＞C 変異の頻度）
永

松

清志郎

（論文の内容の要旨）

不明88名，脳出血126名，重複14名）。インフォーム【背景】Fabry 病は GLA 遺伝子変異によりαガラク

ド・コンセントを得た後，対象患者の臨床情報を調査

トシダーゼＡ（α-Gal A）が欠損するＸ連鎖性のリ票に記載し，血液サンプル採取した。この血液サンプ

ソソーム蓄積病で腎臓，心臓，脳，皮膚の血管内皮なルを用いて，ELISA 法によるα-Gal 活性の測定およ

どにグルボトリアシルセラミド（GL-3）が蓄積する。

び GLA 遺伝子の検索を行った。GLA 遺伝子解析は，本症は古典型，亜型，女性 Fabry 病に分類されるが，全ての患者で c.196G＞C 変異の有無を ABI TaqMan

亜型や女性 Fabry 病の患者は成人発症のことが多く

allelic discrimination kit and the ABI7500 Sequence

家族歴を認めないこともある。このため，Fabry 病

Detection System を用いてスクリーニングし，本変と診断されず，腎不全，心肥大，脳卒中などの com­

異が判明した場合は GLA 遺伝子の全エクソンおよび

mon disease と誤診されている可能性がある。以前に隣接するイントロン領域をダイレクトシークエンス法

我々は，男性脳梗塞患者における GLA 遺伝子変異をで解析した。さらに，α-Gal 活性が10 AgalU 以下のスクリーニングし，GLA c.196G＞C（p.E66Q）変異

場合にも GLA 遺伝子の全エクソンと隣接領域をダイが高齢日本人男性の小血管性脳梗塞の遺伝的リスク

レクトシークエンス法で解析した。

となっていることを示した。しかし，この研究では酵【 結 果 】 ２ 名 の 女 性 で α-Gal 活 性 が カ ッ ト オ フ 以

素活性が低下している患者のみ遺伝子解析したため

下（＜10 AgalU）で，内１名で GLA 遺伝子 c.2T＞C

c.196G＞C 変異の頻度を過小評価している可能性が（p.M1T）変異（既報告の Fabry 病の病原性変異）をあった。さらに，この研究は女性や脳出血患者を対象認めた。患者は65歳で心原性脳塞栓を発症。Fabryとしていなかった。本研究では女性や脳出血を含めた病の家族歴はなかった。高血圧と左室肥大の既往があ脳卒中患者における Fabry 病の頻度を解析するととり，α-Gal 活性は5.5 AgalU と著減していた。全患

もに，全症例で GLA c.196G＞C 変異のスクリーニン者における GLA c.196G＞C 変異の解析では，本変異グを実施し，本変異の病的意義を検討した。

を男性５名，女性２名で認めた。男性 c.196G＞C 変【方法】2012年５月から2016年３月の期間に長野県

異陽性群のα-Gal 活性は13.1±2.6 AgalU で，変異内の６施設を受診した588名の脳卒中患者を対象とし陰性群（25.2±8.7 AgalU）と比べて有意に酵素活性た（TOAST 分類で大血管性脳梗塞113名，心原性脳が低下していた（P＝0.0005）。一方，本変異を有す

塞栓88名，小血管性179名，その他の分類８名，分類る女性では酵素活性の低下は認めなかった。本変異を

No. 5, 2017325

審査学位論文要旨有する患者の脳卒中の病型は，男性３名が小血管性（p.E66Q）変異が高齢日本人男性の小血管性脳梗塞の脳梗塞，男性２名と女性１名が大血管性脳梗塞，女性

遺伝的リスクであることを示したが，c.196G＞C 変異

１名が心原性脳塞栓であった。脳卒中患者におけるのリスクを過小評価した可能性があった。本研究では，

c.196G＞C 変異の頻度を一般日本人集団と比較すると，女性や脳出血を含めた脳卒中患者における Fabry 病

男性の小血管性脳梗塞およびに非心原性脳塞栓患者の頻度と，全症例で GLA c.196G＞C 変異を解析した。

（小血管性＋大血管性）において本頻度の頻度が有意対象は588名の脳卒中患者。対象患者から血液サンに高かった（小血管性脳梗塞： オッズ比3.94，P＝プルを採取し，全例で ELISA 法によるα-Gal 活性の0.048；非心原性脳梗塞：オッズ比4.08，P＝0.012）。

測定および，ABI TaqMan allelic discrimination kit

一方，女性脳卒中患者における c.196G＞C 変異のand the ABI7500 Sequence Detection System を用い頻度は一般人口との間に有意差がなかった。

た GLA c.196G＞C 変異の有無の検索を行った。α-【考察】脳卒中は Fabry 病の主要な合併症であるが，Gal 活性が10 AgalU 以下の患者と，c.196G＞C 変異を高齢者の脳卒中患者における Fabry 病は非常に稀と有している患者に対しては，GLA 遺伝子全翻訳領域考えられていた。しかし今回，脳卒中患者を対象としのダイレクトシークエンスを行った。

たスクリーニング検査で，はじめて高齢 Fabry 病患者

その結果，永松は次の結果を得た。

が同定された。以上から，高齢脳卒中患者においても，

１． ２名の女性でα-Gal 活性がカットオフ以下で，特に心肥大や腎不全の合併がある場合には，Fabry 病

内１名で GLA 遺伝子 c.2T＞C（p.M1T）変異を認を鑑別診断として考慮する必要があると考えられた。

めた。

また，本研究では小血管性脳梗塞と非心原性脳塞栓症

２．GLA c.196G＞C 変異の解析では，本変異を男性の男性患者において GLA c.196G＞C 変異の頻度が高５名，女性２名で認めた。c.196G＞C 変異の頻度をいことが判明した。本変異は低α-Gal 活性をきたし，

一般日本人集団と比較すると，男性の小血管性脳梗

成人発症の亜型 Fabry 病の原因となると考えられて

塞およびに非心原性脳塞栓患者（小血管性＋大血管いた。しかし最近，本変異は日本人や韓国人で比較性）において本頻度の頻度が有意に高かった（小血的高頻度にみられる正常多型とも報告され，その臨床

管性脳梗塞：オッズ比3.94，P＝0.048；非心原性的な意義は定まっていない。本研究で，GLA 遺伝子

脳梗塞：オッズ比4.08，P＝0.012）。一方，女性脳

c.196G＞C 変異は日本人男性の小血管性脳梗塞と非心卒中患者における c.196G＞C 変異の頻度は，一般

原性脳塞栓患者における危険因子となっている可能性

人口との間に有意差がなかった。

が示唆された。一方，女性においては，本変異は脳卒

３．男性 c.196G＞C 変異陽性群のα-Gal 活性は変異中患者の危険因子となっておらず，c.196G＞C 変異の陰性群に比べて有意に酵素活性が低下していた（P

ヘテロ接合は病原性がないことが示唆された。

＝0.0005）。

（論文審査の結果の要旨）

これらの結果より，GLA 遺伝子 c.196G＞C 変異はFabry 病は GLA 遺伝子変異によりαガラクトシ

日本人男性の小血管性脳梗塞と非心原性脳塞栓患者にダーゼＡ（α-Gal A）が欠損するＸ連鎖性のリソソー

おける危険因子となっている可能性が示唆された。ま

ム蓄積病で腎臓，心臓，脳，皮膚の血管内皮などに糖た脳卒中患者を対象としたスクリーニング検査で，は脂質が蓄積する。本症の亜型や女性患者は，腎不全，

じめて高齢 Fabry 病患者が同定された。

心肥大，脳卒中などの common disease と誤診されている可能性がある。以前に我々は，GLA c.196G＞C

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

The histological characteristics and clinical outcomes of lung cancer in patients with combined pulmonary fibrosis and emphysema（CPFE（気腫合併肺線維症）合併肺癌患者の組織学的特徴及び予後）
張萌（論文の内容の要旨）

emphysema (CPFE) is an important risk factor for【 Background 】 Combined pulmonary fibrosis andlung cancer (LC), because most patients with CPFE

326

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨

are smokers. However, the histological characteris­tics of LC-CPFE in this study.

tics of LC in patients with CPFE (LC-CPFE) remain

We retrospectively reviewed data from 985 patients,

unclear. We conducted this study to explore thewhich were resected for primary lung cancer atclinicopathological characteristics of LC-CPFE.

Shinshu University Hospital between December 1995

【Methods】We retrospectively reviewed data fromand December 2013. Then, according to Cottin et al.’s

985 patients who underwent resection for primary

criteria of lungs with CPFE, we divided lung cancer

LC, and compared the clinicopathological character­patients into four groups (LC-CPFE, LC-PF, LC-

istics of patients with LC-CPFE and non-CPFE LC.

Emp, and LC-Norm) based on their HRCT findings.

【Results】We identified 72 cases of LC-CPFE, which

To evaluate the clinicopathological significance ofwas significantly associated with squamous cell

LC-CPFE patients after lung resection, we comparedcarcinoma (SqCC) histology (n＝46, p＜0.001) andthe clinicopathological characteristics and survival

higher tumor grade (n＝44, p＜0.001), compared tooutcomes of four groups. To explore the histologi­cal

non-CPFE LC. Most LC-CPFE lesions were contigu­

characteristics of LC-CPFE, all histological slides

ous with fibrotic areas around the tumor, and thisfrom LC-CPFE and LC-PF group were histological­

association was independent of tumor location (n＝ly evaluated, and their clinicopathological character­

59, 81.9 %). Furthermore, dysplastic epithelium was

istics were compared, especially for the changes ofidentified in the fibrotic area for 31 (52.5 %) LC-

tumor background (including epithelium changes

CPFE lesions. Moreover, compared to patients withamong tumor surrounding lesions).

pulmonary fibrosis alone in the non-CPFE group (nThe following conclusions are obtained from this＝31), patients with CPFE were predominantly malestudy.

(p＝0.008) and smokers (p＜0.001), with LC-CPFE

１．The patients with LC-CPFE were essentially

predominantly exhibiting SqCC histology (p＝0.01)
and being contiguous with the tumor-associated fi­

smokers, and were predominantly male and older,compared to those with LC-non-CPFE.

brotic areas (p＜0.001). Multivariate analysis revealed

２．The patients with LC-CPFE were diagnosed atthat CPFE was an independent predictor of overall

a relatively high stage, and they exhibited poor

survival (hazard ratio : 1.734 ; 95 % confidence inter­

survival outcomes.

val : 1.060-2.791 ; p＝0.028).

３．Squamous cell carcinoma was a predominant【 Conclusions 】Our results indicate that LC-CPFE

histological subtype in the LC-CPFE patients.

has a distinct histological phenotype, can arise from

４．In the LC-CPFE patients, most lung cancers can

the dysplastic epithelium in the fibrotic area aroundthe tumor, and is associated with poor survival out­

derived from the fibrotic area.
５．CPFE should be considered as an important back­ground disease for patients who have undergone

comes.
（論文審査の結果の要旨）

resection of lung cancer.

Combined pulmonary fibrosis and emphysema

Our study indicate that LC-CPFE has a distinct(CPFE) is an important risk factor for lung cancer

histological phenotype, may arise from the dysplastic(LC), because most patients with CPFE are smokers.

epithelium in the fibrotic area around the tumor, andHowever, the histological characteristics of LC in pa­

is associated with poor survival outcomes.

tients with CPFE (LC-CPFE) remain unclear. There­
fore, we explored the clinicopathological characteris­

No. 5, 2017

以上より，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

327

審査学位論文要旨

Relationship between muscle-tendon length, range of motion, and resistance to passive
movement in children with normal and increased tone（筋過緊張を呈する児と定型発達児における，筋・腱の長さ，関節可動域，他動的運動に対する抵抗性の関係について）
松

清

あゆみ

（論文の内容の要旨）

ed that △ROM had the highest construct validity【目的】５kg の張力を付加する前後での筋腱長と関節(convergent and discriminant) followed by △muscle-

可動域の測定値変化から，他動的運動への抵抗性を定

tendon unit length. Therefore, these parameters

量化し，これらの変化と筋緊張（正常から過緊張ま

may be better alternatives to the MAS for the quan­

で）を比較し相関関係を調べる。

titative assessment of resistance to passive movement【対象と方法】この観察研究はコホートデザインを採

in patients with increased tone.

用した。脳性麻痺児（29名）と定型発達児（12名）が【Conclusion】This study demonstrated that measur­

この研究に参加した。右足関節底屈筋の筋緊張評価とing the change in the passive properties of the mus­し て Modified Ashworth Scale（ MAS ） を 用 い た 。

cle-tendon unit, as well as the corresponding change

超音波画像装置は右腓腹筋内側頭の筋腱長変化を測定

in ROM, might provide better options for assessing

するために用いた。ゴニオメーターは右足関節可動域

resistance to passive movement or muscle tone.

変化（ROM）を測定するために用いた。

（論文審査の結果の要旨）【結果】MAS との比較では，ROM 変化は筋腱複合体

本研究は，脳性麻痺患者等で認められる筋緊張亢進

長の変化に続いて，高い構成概念妥当性（収束的妥当状態である痙性を形態学的・構造学的特性の両面から性と弁別的妥当性）を示した。したがって，これらの定量的に測定し，他動的運動に対する抵抗性との関係

指標は筋過緊張を呈する患者の他動的運動の抵抗性をを調査することを目的としたものである。

定量的評価する際，MAS より良いものとなる可能性

方法として，MAS4に分類される他動的関節運動ががある。

困難な者，研究開始前１年以内に外科的手術を受けた【結論】この研究では筋腱複合体の粘弾性の変化（筋児，研究開始前６カ月以内にボツリヌス菌毒素注射を長と筋腱長変化）を測定することが ROM 変化と同様

受けた児，てんかん等の発作を頻回に呈する児，安静に相当するもので，他動的運動の抵抗性評価のための

腹臥位姿勢を保持できない児，を除外基準とし，５～より良い手法となり得ることを示唆するものである。

18歳までの定型発達児12名と脳性麻痺児29名を対象と【Purpose 】The aim of this study was to quantify

している。そして，過剰に抵抗性の亢進した筋と，神the resistance to passive movement by measuring

経兆候の無い筋で違いを検討することを考え，研究目

changes in muscle-tendon length and joint range of

的は，５kg の力で牽引する前後での筋・腱長と関節

motion (ROM), before and after applying a standard­

可動域（ROM）の変化から他動的関節運動の抵抗性

ized 5-kilogram tension force, and to correlate andと比較した。

compare these changes to muscle tone.

その結果，収束的妥当性では，標準化した腱長変化【Subjects and Methods 】 Children with cerebralと関節抵抗性の相関は見られず，筋長変化はやや相関

palsy (n＝29) and typically developed children (n＝があり，ROM が最も高い相関を示したとしている。

12) participated in this observational study. The

また，判別的妥当性では ROM の結果で，各群間差がmodified Ashworth scale (MAS) was used to assess

みられ，段階を少なくしたスケールでは，ROM だけ

tone in the right plantarflexor muscle. An ultra­

でなく筋長変化でも有意差を認めたが，超音波画像に

sound-imaging device was used to measure △mus­

おける筋の羽状角，筋線維長については，いずれも妥

cle-tendon length in the right medial gastrocnemius

当性を認めなかったとしている。以上のことから，張muscle, and a goniometer was used to measure right

力を規定した状態での ROM の変化や筋長の変化は，

ankle △ROM.

MAS に変わる有益な定量的評価であると考察している。

【Results】Compared with the MAS, the results show­
328

本研究の結果，関節可動域の範囲内で動きがあれば，信州医誌Vol. 65

審査学位論文要旨張力を規定した状態で角度変化を測定することで，脳につながる重要な知見になると考える。
以上より，主査，副査は一致して，本論文を博士後性麻痺患者等の痙性の定量的評価指標として活用できる可能性が示されたことは，理学療法の科学性の向上

期課程の学位論文として価値があるものと認めた。

Availability, usage, and factors affecting usage of electrophysical agents by physicaltherapists : a regional cross-sectional survey（物理療法機器の保有状況，使用状況，および使用に影響を与える要因：理学療法士に対する調査研究）
阿部（論文の内容の要旨）【背景】物理療法は，“use of electrophysical and bio­physical energies for purposes of evaluation, treat­

裕一

年齢31.8（±8.4）歳，臨床経験年数8.6（±7.9）年，
県外養成校卒業者が766名（70 ％）であった。
保有状況について，ホットパックが最も多く（88 ％），ment and prevention of impairments, activity limita­

低周波治療器（76 ％），超音波（68 ％）の順であっtions, and participation restrictions（電気物理学的また。使用状況についてはホットパックが最も使用されたは生物物理学的エネルギーを用い，評価や治療，障ており（72 ％），次いで超音波（61 ％），コールドパッ

害や活動制限，参加制約を予防するため，治療手段とク（59 ％）の順であった。物理療法に対する confi­

して使用する）”と定義され，理学療法士，作業療法

dence についてはホットパックが最も高く（75 ％），士，アスレチックトレーナー，健康産業に関わる人な

次いでコールドスプレー（49 ％）， 超音波（44 ％）どに用いられている。

であった。物理療法機器を使用する際に影響を与え物理療法が理学療法士にとって核となる治療法の一る因子では機器の保有状況が最も高く（80 ％），過

つであることは知られているが，物理療法教育，使用去の経験（79 ％），研究によるエビデンス（79 ％）が方法について，エビデンスやトレンドなどを元に再評続いた。confidence と使用状況について，紫外線，ion­価が必要であるという議論もある。それに関する lon­

tophoresis，magnetic field 以外に相関がみられた。

gitudinal study は日本および海外では行われておらず，【考察】今回調査対象の地域では，物理療法機器は多cross sectional study について，海外では過去数十年

くの病院で保有されていることが明らかとなった。20の間に数カ国で実施されており，物理療法は現在も用年前の報告と比較し，パラフィン，赤外線，マイクロいられているものの以前ほどではないという報告がさ波などいくつかの機器については減少傾向にあった。

れた。日本でも実施されているが，多くの研究が10～

一方で，ホットパック，超音波は大きな変化なく保有

20年前に発表されたものであるのに加え，不十分な報されていることが明らかとなった。使用に影響を与え

告や，被験者の偏りなどもあり，物理療法を使用する

る要因について，外的要因（機器の保有状況，エビデ

際に影響を与える因子については報告されていない。

ンス，ガイドライン，教科書，プロトコル，デモンス

本研究では，長野県内の理学療法士に対し調査票をトレーション）と内的要因（過去の経験，教育）に分配布し，物理療法機器の保有状況，使用状況，および

類することができた。外的要因である機器の保有状況

使用に影響を与える要因について調査を行うことを目と内的要因と直接的に関係がある confidence は，物的とした。本研究は信州大学医倫理審査会の承認を得た。

理療法の使用に最も直接的な影響を与えているもので【方法】2013年度長野県理学療法士会会員所属施設名あると考えられた。外的要因を変化させることは困難

簿を元に，登録されている245施設，1,571名の理学療であるが，内的要因については教育やトレーニングな

法士に対し，2014年７月所属施設宛にアンケートを送どにより影響を与えることができると考える。この外付した。22種類の機器について保有状況，使用状況，

的要因，内的要因の関係性は複雑で，物理療法の変化

使用に影響を与える要因，これらを集計した。また，を理解するには更なる調査が必要である。

使用状況と物理療法機器を使用する際の confidenceとの相関についても検討を行うこととした。

（論文審査の結果の要旨）
本研究は理学療法士が物理療法として使用する治療【結果】有効な返信数は170施設（69 ％），1099通（70機器の保有状況，使用状況，および使用に影響を与え％）だった（男性655名，女性436名）。回答者の平均る要因の３つについて，横断調査を行ったものである。

No. 5, 2017329

審査学位論文要旨

これまで国内外では縦断調査がほとんどなく実態の変用に対する自信を測定する質問紙尺度を作成するなど遷も未確認のままであった。国内では20数年前に実施を今後の研究課題としてもらいたい。

されて以来，大きな規模のものとして行われた。この結果では，保有状況，使用状況，および使用に影響点からも本研究を行う社会的必要性が伺える。対象をを与える要因を示している。保有状況ではパラフィン

長野県理学療法士協会に所属する県内理学療法士としバス，赤外線，マイクロ波が減少傾向にあった。恒常ているが，そのほとんどが養成教育を他県で受けてき的に使用されているものはホットパック，超音波があたことから同一の教育を受けたわけではなく多様であげられた。使用状況では， ホットパック， 超音波，

り，教育課程に違いを持つことである程度一般化できコールドパックの順に使用されていた。使用に影響をる可能性はある。が，無作為抽出を考えるならば，厳与える要因では，機器の保有状況，過去の経験，エビ

密には日本理学療法士協会の協力なども仰いで将来的デンスが大きかった。機器の使用状況と Confidenceには全国的な規模での調査が望ましいと言える。調査

は相関を認めていた。

項目は海外の先行研究による質問紙を参考に作成して考察では，使用状況に最も影響を及ぼす要因としている。この点は，調査項目を独自に作成する手続きを

confidence を論じている。横断調査では因果関係は明予備調査でも踏襲し，先行研究の調査項目を利用して確にはできないことから，考察に記された意見は仮説いることから，ある程度の妥当性を確保したものと思の域を出ない。研究の限界と今後の展望に記された通われる。質問のうち Confidence（使用に対する自信）

り，今回の横断調査データの二次解析や縦断調査が必を訪ねている項目があるが，self efficacy（自己効力要といえる。何れにしても実態を明らかにすることが感）と共通する要素を含んでいると思われる。self ef­

できたので，使用状況への影響を及ぼす要因とその構

ficacy とは行動を起こす前に感じる「遂行可能感」，

造，そして，教育的な立場からの介入研究へと続けて自分がこのようなことができるといった考えを指す。

ゆくといった本研究の社会的意義があると考えられる。

社会心理学で用いられるこのような評価指標を用いた

以上の点から，主査，副査は一致して本論文を学位

ほうが仮説を明確にできる可能性もあることから，使論文として価値があるものと認めた。

Validity of gait asymmetry estimation by using an accelerometer in individuals with hemiparetic stroke（脳卒中片麻痺患者における加速度計を用いた歩行非対称性評価の妥当性）
小

宅

一

彰

（論文の内容の要旨）【方法】対象は，回復期病棟に入院中の初発脳卒中患【緒言】歩行非対称性は，脳卒中片麻痺患者における者24名であった。対象者は，年齢が65.8±12.0歳，男代表的な歩行特性のひとつである。歩行非対称性は，性が18名，脳卒中発症後期間が96.5±45.3日であった

運動学習や転倒リスクの評価，治療効果の予測におい（平均±標準偏差）。麻痺側下肢の運動機能は，Brunn­て重要な指標である。加速度計は，床反力計など従来

strom stage で stage Ⅲが３名，stage Ⅳが５名，stage Ⅴの歩行解析機器に比べ，動作や測定環境の制約が少なが12名，stage Ⅵが４名であった。測定課題は，16 ｍ

く，臨床現場でも使用しやすいという利点がある。体の歩行路において，杖の使用や徒手的な介助がない状

幹前方加速度のピークは歩行時の初期接地に一致する態で至適速度での歩行を５回実施した。計測機器は加と報告されていることから，ステップ時間非対称性は

速度計と床反力計を用い，これらの機器は歩行中に同体幹前後加速度から推定できる可能性がある。また，時にデータを計測した。加速度計は，第三腰椎棘突起

ステップ長の延長に伴い，体幹の上下変位が増加する

部に弾性ベルトで固定し，歩行中の体幹加速度を測定と報告されている。体幹上方加速度は，荷重応答期にした。測定された体幹加速度は，前方加速度のピーク

生じる床反力鉛直成分に相当することから，ステップを初期接地とみなして定常歩行５周期分を加算平均し長の非対称性を反映する可能性がある。そこで本研究た。加速度データの加算平均において，時間軸は１歩では，脳卒中片麻痺患者におけるステップ時間および

行周期が100 ％となるように正規化した。ステップ時

ステップ長の非対称性について，加速度計を用いた評

間非対称性を推定するために，体幹前方加速度ピーク

価の基準関連妥当性を検証した。

の時間間隔を麻痺側および非麻痺側それぞれにおいて

330

信州医誌

Vol. 65

審査学位論文要旨算出した。また，ステップ長非対称性を推定するために，初期接地以降に連続して発生する体幹上方加速度を改善する方法の確立が必要である。
（論文審査の結果の要旨）の積分値を麻痺側および非麻痺側それぞれにおいて算本研究は，脳卒中片麻痺患者における代表的な歩行出した。基準となるステップ時間およびステップ長は，特性のひとつである歩行非対称性を，床反力計など従

歩行路の中央に設置された床反力計で測定した。床反来の歩行解析機器に比べ，動作や測定環境の制約が少力計で算出される足圧中心点を用いて，連続４歩以上

なく，臨床現場でも使用しやすい小型で軽量な加速度のステップ時間およびステップ長を測定し，麻痺側お計を用いて定量的に解析した研究である。

よび非麻痺側それぞれの平均値を求めた。さらに，歩先行研究においては，体幹前方加速度のピークは，

行速度は床反力計を用いて測定した重複歩距離および歩行時の初期接地に一致すると報告されていることか

重複歩時間から算出した。非対称性は，麻痺側の測定

ら，ステップ時間非対称性は体幹前後加速度から推定値を非麻痺側の測定値で除すことで算出した。

できる可能性があり，また，ステップ長の延長に伴い，統計解析には，５回測定した平均値を代表値として体幹の上下変位が増加すると報告されている。体幹上用いた。正規性を検定した結果，歩行速度以外の変数

方加速度は，荷重応答期に生じる床反力鉛直成分に相は正規分布に従わなかったため，統計解析ではノンパ当することから，ステップ長の非対称性を反映する可ラメトリック検定を適用した。ステップ時間およびス能性があるとされている。そこで本研究では，脳卒中

テップ長それぞれの非対称性について，計測機器間の片麻痺患者におけるステップ時間およびステップ長の相関を検定するために Spearman 順位相関係数を用

非対称性について，加速度計を用いた評価の基準関連いた。さらに，加速度計による非対称性の推定誤差と妥当性を検証したものである。

歩行速度の相関を Spearman 順位相関係数で検定し対象は，回復期病棟に入院中の初発脳卒中患者24名た。推定誤差は，計測機器間における誤差の絶対値をで，年齢が65.8±12.0歳，男性が18名，脳卒中発症後

床反力計による測定値で正規化することで算出した。

期間が96.5±45.3日であった（平均±標準偏差）。麻すべての統計解析において，有意水準は５％とした。

痺側下肢の運動機能は，Brunnstrom stage で stage Ⅲ【結果】対象者の歩行速度は，0.82±0.25 m/s であっが３名，stage Ⅳが５名，stage Ⅴが12名，stage Ⅵがた。ステップ時間非対称性は，加速度計による推定値

４名であった。

が1.22（1.10-1.40），床反力計による測定値が1.12

結果として，ステップ時間非対称性は，加速度計に（1.04-1.31）であり（中央値（四分位範囲）），有意なよる推定値が1.22（1.10-1.40），床反力計による測定

正の相関を認めた（rho＝0.83，p＜0.01）。ステップ

値が1.12（1.04-1.31） であり（中央値（四分位範長非対称性は，加速度計による推定値が1.17（0.94-囲）），有意な正の相関を認め，ステップ長非対称性は，

1.41），床反力計による測定値が1.06（1.02-1.19）で加速度計による推定値が1.17（0.94-1.41），床反力計

あ り ， 有 意 な 正 の 相 関 を 認 め た（ rho＝0.64 ，p＜による測定値が1.06（1.02-1.19）であり，有意な正0.01）。ステップ時間非対称性の推定誤差は7.7（4.9-の相関を認めた（rho＝0.64，p＜0.01） ことから，

11.2）％，ステップ長非対称性の推定誤差は14.1（5.9-

小型で軽量な加速度計を用いて，脳卒中患者のステッ

24.1）％であった。歩行速度と推定誤差の関係は，ス

プ時間およびステップ長の非対称性を推定できる可能

テップ時間非対称性（rho＝－0.15，p＝0.48）とス性が示されたとしている。

テップ長非対称性（rho＝－0.21，p＝0.32）のいず

本研究の結果，床反力計や三次元動作解析装置など

れにおいても有意な相関は認めなかった。

の高額で大型の測定機器を用いなくても，小型で軽量【考察】本研究の結果より，加速度計を用いて脳卒中な加速度計によって，脳卒中片麻痺患者の歩行時の非患者のステップ時間およびステップ長の非対称性を推

対称性を定量的に解析できることが示されたことは，定できる可能性が示された。また加速度計による非対理学療法の科学性の向上につながる重要な知見になる

称性の推定誤差は，歩行速度とは関連しないことが明ものと考える。

らかとなった。本研究における加速度計を用いた歩行非対称性の推定方法を臨床応用するためには，今後の以上より，主査，副査は一致して，本論文を博士後期課程の学位論文として価値があるものと認めた。

研究において推定誤差が生じる原因の特定と推定精度

No. 5, 2017

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