12資Pr
ocJpn Pi
gVetSocNo.
80 2022
料
豚熱エライザ S/
P値による中和抗体価推定表の作成
小林憲一郎（長野県佐久家畜保健衛生所）
Kobayashi,K.(2022)
.Esti
mati
onofclassic
alswi
nefeverne
utr
alizi
ngant
i
bodyt
ite
rbyELISAS/PvalueProc.Jpn.Pi
gVet.Soc.80,1216.

キーワード：豚熱，エライザ，中和抗体価，Receiver

られた接種適齢期にワクチンを接種することが必要でoperating character
isticanalysis，推 定ある。現在のように、農場によって繁殖豚の抗体分布表が異なる状況では、子豚のワクチン接種は農場ごとの子豚の移行抗体保有状況に応じて、適切な時期に行う

２０１８年９月、岐阜県において国内で２６年ぶりとなることが重要である7)。そのためには、各農場における子豚熱が発生した。その後、愛知県、長野県、大阪府、豚の移行抗体保有状況を調査することが必要である。

滋賀県、三重県、福井県及び埼玉県の養豚場で豚熱が指針では、豚熱の抗体検査方法として、中和試験続発したことを受けて、長野県では２０１
９年１０月から豚（NT）とエライザ法が示されている8)。エライザ法は多熱ワクチンの接種を開始した。しかし、全国的な豚熱検体処理に適した方法で簡便なことから、ワクチン接発生状況を見ると、豚熱ワクチン接種農場において豚種農場における免疫付与状況等確認検査（確認検査）

9)

熱の発生が継続している 。農場の初回ワクチン接種などに広く活用されているが、抗体量は測定できない。

以前に生まれた繁殖豚（第１世代）と、ワクチン接種

一方で、NTは作業が煩雑で検査に時間を要するが、抗から３０日以上経過してから生まれた繁殖豚（第２世代体量を測定できることから、ワクチン接種適齢期の推以降）では、抗体の保有状況が異なっており、第２世定に活用されている。

代では抗体分布のばらつきが大きく、抗体価の低い個7)ワクチン接種を実施している全ての農場の移行抗体体も増加していることが報告されている 。第１世代の保有状況を知るため、NTを行うことは多大な労力と第２世代が混在している農場では、子豚の移行抗体を要する。中根らは、市販の豚熱エライザキット（エの保有状況のばらつきが大きくなり、ワクチン接種適ライザキット）の S/P値と中和抗体価との間に相関関齢期の幅が広がると推測される。豚熱ワクチンは生ワ係があることを報告している10)。そこで、筆者は豚熱クチンであるため、ワクチンテイク（テイク）は移行ワクチンの接種適齢期をより簡易的に判定するため、11)抗体の影響を受ける 。ワクチン接種時の移行抗体がエライザ法の S/
P値から中和抗体価を推定するための中和抗体価１６倍以下であれば、全ての個体がワクチン表（推定表）を作成した。推定表は、野外の検体につ11)による免疫を獲得することが示されている 。また、いて行ったエライザ法の S/P値と、NTの中和抗体価

野外応用試験において、ワクチン接種時の移行抗体がをもとに作成した。推定表は中和抗体価と S/
P値の単１２８倍以下であれば、高率に免疫を獲得することが示さ

回帰分析、４係数のロジスティック曲線による非線形れている11)。繁殖豚の世代交代が進んでいる農場にお回帰分析6)及び Receiveroper
ati
ngc
har
act
er
i
st
i
canal
y-

いては、繁殖豚の抗体保有状況を考慮し、ワクチン接

sis（ROC解析）により作成した5)。また、３つの方法7)

種時期についてより柔軟に対応することが求められる 。

により作成した推定表を用いてエライザ法の S/
P値か「豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針」（指針）のら推定した中和抗体価（推定値）と実際の NTによる8)基準である 、８割のテイク率を実現するには、移行抗測定結果（実測値）の一致度について k係数を求めて体がテイクを見込める値まで減少してからワクチン接比較し、推定表が接種適齢期の推定に利用可能か検討

種をしなければならない。しかし、移行抗体が減少すした。

るにつれて、子豚群の免疫も低下する。子豚群の免疫を維持しながら８割のテイクを達成するためには、限豚病会報

No.
80 202213

材料及び方法２～８倍の検体を一致する検体として k係数を計算し推定表の作成：確認検査のため、長野県内の養豚場た。また、それぞれの中和抗体価における推定値の感において２０１９年１０月から２０２１年３月に採取した豚血清度及び特異度を求めた。さらに、子豚において豚熱ワのうち、エライザ法とあわせて NTを実施した６５６検

クチンのテイクが見込まれる移行抗体量である、中和体のデータを用いた。エライザ法及び NTは、指針の抗体価２～１６倍又は２～１２８倍の範囲の検体における8)規定に準じて実施した 。すなわち、エライザ法は、エ実測値と推定値の一致度について k係数、陽性的中率ライザキット（豚熱エライザキットⅡ、株式会社ニッ及び陰性的中率を求めた。陽性的中率と陰性的中率かポンジーン、日本）を用いて、添付の使用説明書に従っら、検体の８割が中和抗体価２～１６倍又は２～１２８倍て実施した。NTは、５６℃３０分間非働化した豚血清をとなると予想される推定値の割合を求めた。k係数の２～２０４８倍に２倍階段希釈したのち、CPKNS細胞と計算には EZRを用いた。また、k係数の評価は Byrt－

豚熱ウイルス GPE 株を使用したマイクロプレート法

が提唱した基準に従った1)。

で実施した。検査は長野県松本家畜保健衛生所で行っ結果た。
推定表の作成にあたっては、単回帰分析及び４係数
ロジスティック回帰曲線による非線形回帰分析により、推定表の作成：単回帰分析の結果は式１となった。
８５であった（図１）。
決定係数（R2）は０．

それぞれモデルとなる方程式を求めて中和抗体価２～２０４８倍に相当する S/P値を計算した。また、ROC解析

S/P値＝０．
１０２log2中和抗体価－０．
０９３（式１）

により中和抗体価２～２０４８倍それぞれに対応する S/P
値のカットオフ値を求めた5)。ROC解析のカットオフ

非線形回帰分析の結果は式２となった。

値は、中和抗体価２倍の場合、６５６検体のうち中和抗体価２倍未満を陰性、２倍以上を陽性と判定したときに、感度と特異度の和が最大となる S/P値とした。中和抗

2.
923S/
P値＝１．
６７５－１．
６５４（/１＋（log2中和抗体価/８．
５３１））

（式２）

体価４～２０４８倍も同様にカットオフ値を設定した。これら３つの方法により推定表を作成した。
単回帰分析及び ROC解析は統計解析ソフト EZR（自治医科大学さいたま医療センター，日本）を用い4)た 。非線形回帰分析は統計解析ソフト R（R Core

また、ROC解析により、各中和抗体価に相当するS/P値のカットオフ値を求めた。これらの結果をもとに、推定表を作成した（表１）。
一致度の比較：２
５２検体の実測値ごとの検体数と S/P値の分布、推定値と比較した際の感度、特異度を表２

Team,Austria）を使用した。
一致度の比較：推定表の作成に使用した検体とは別に示す。の豚血清２５２検体を使用して、推定値と実測値の一致度

全体の一致度は、単回帰分析による推定値が k＝を比較した。２０２
１年４～９月に長野県佐久家畜保健衛

０．
８３、非線形回帰分析及び ROC解析による推定値が生所管内の８養豚場で実施した確認検査のうち、エラk＝０．
８８で、全て Verygoodagreement
（０．
８１～０．
９２）

イザ法とあわせて NTを実施した２５２検体のデータをの範囲であった1)。

用いた。エライザ法及び NTは、推定表の作成と同じ推定値２倍未満～２０４８倍以上について、各中和抗体方法により実施した。エライザ法の S/P値をもとに、価の推定値と実測値の一致度を図２に示す。単回帰分

中和抗体価２倍未満～２０４８倍以上までの１２段階の推定

析の k係数は０．
１９～０．
６３、非線形回帰分析の k係数は値をそれぞれ求め、実測値との一致度を評価した。全０．
１８～０．
７９、評価は Pooragreement
（０．
０１～０．
２０）か体の一致度については、重みつけ k係数により評価しら Goodagreement（０．
６１～０．
８０）の範囲であった。こ3)

た 。重み付け k係数の計算は Rを用いた。また、中れ に 対 し て、ROC 解 析 の k係 数 は０．
２２～０．
８３で、和抗体価２～２０４８倍それぞれにおける推定値と実測値

Slightagreemen（t０．
２１～０．
４０）から Verygoodagree-2)の一致度を、k係数を求めて評価した 。実測値と推mentの範囲であった。中和抗体価１０２４倍以下に限定値の一致度の計算にあたっては、目的とする中和抗定すると、単回帰分析の k係数は０．
１９～０．
６３で Poor

体価±１管までを許容範囲とした。すなわち、中和抗agree
mentから Goodagreementの範囲であった。非体価４倍の検体の一致度を求める場合は、中和抗体価

線形回帰分析の k係数は０．
３２～０．
７９で、Sl
ighta
gree-

14Pr
ocJpn PigVetSocNo.
80 20221.0⥺ᙧᅇᖐศᯒ

0.9༢ᅇᖐศᯒ㠀⥺ᙧᅇᖐศᯒROCゎᯒ᳨య (n=656)

㠀⥺ᙧᅇᖐศᯒ

0.8

ROCゎᯒ

0.7

κ ಀᩘS/P್

0.6

0.5

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
000

<224

386

916 32 64 128 256 512 1024 Ӎ2048

஦࿪߇ରՃ୰࿴ᢠయ౯
図１

୰࿴ᢠయ౯୰࿴ᢠయ౯

豚熱エライザ S/P値と中和抗体価の分布

図２ 中和抗体価の推定値と実測値の一致度（n＝２５２）⾲ࠉ୰࿴ᢠయ౯ࡈ࡜ࡢ㇜⇕࢚ࣛ࢖ࢨ63್࡜ࠊ63್࡟ᇶ࡙ࡃ୰࿴ᢠయ౯ࡢ᥎ᐃ୰࿴ᢠయ౯ӍྜィDQ

ᖹᆒ s ᶆ‽೫ᕪs s s s s s s s s s s s 

༢ᅇᖐศᯒ
63್

 DӍ㠀⥺ᙧᅇᖐศᯒ
63್

Ӎ

52&ゎᯒ
63್Ӎ᭱ᑠ್௨ୖ᭱኱್ᮍ‶⾲ࠉྛ᥎ᐃ⾲ࢆࡶࡕ࠸࡚᳨యࡢ63್࠿ࡽồࡵࡓ୰࿴ᢠయ౯᥎ᐃ್ࡢឤᗘ࣭≉␗ᗘ
63್༢ᅇᖐศᯒ㠀⥺ᙧᅇᖐศᯒ୰࿴ᢠయ౯Q
ᖹᆒ s ᶆ‽೫ᕪឤᗘ≉␗ᗘឤᗘ≉␗ᗘ  s   s   s   s   s   s   s   s   s   s   s Ӎ
 s 

52&ゎᯒឤᗘ≉␗ᗘ豚病会報

No.
80 202215⾲ࠉᏊ㇜ࡢ㇜⇕࣡ࢡࢳࣥ࡟㐺ࡋࡓ୰࿴ᢠయ౯ࡢᐇ୰࿴ᢠయ౯᭱ᑠ್᭱኱್್࡜᥎ᐃ್ࡢ୍⮴⋡ࠊ㝧ᛶⓗ୰⋡ཬࡧ㝜ᛶⓗ୰⋡⥺ᙧᅇᖐศᯒ㠀⥺ᙧᅇᖐศᯒ52&ゎᯒȡಀᩘ

339

139$

ȡಀᩘ

339

139$

ȡಀᩘ339139$























$ ๭ࡢ᳨యࡀ୰࿴ᢠయ౯ಸཪࡣಸ࡜࡞ࡿ࡜ண᝿ࡉࢀࡿ᥎ᐃ್ಸཪࡣಸࡢ᳨యࡢ๭ྜ
339㝧ᛶⓗ୰⋡ࠊ139㝜ᛶⓗ୰⋡

mentから Gooda
gree
ment
、ROC解析の k係数は０．
４４と判断した。とくに、ROC解析では中和抗体価２倍～０．
８３で Faira
gree
mentから Verygoodagree
mentの k係 数 が０．
８３で あ り、Byrtの 基 準 で Verygoodであった。

agreementであったことから、ROC解析による推定値

子豚のワクチンテイクが見込まれる範囲の移行抗体は、低濃度の中和抗体価の推定に適していると考えらの実測値と推定値の一致度、陽性的中率及び陰性的中れた。しかし、ROC解析による推定値２倍未満の感率を表３に示す。ROC解析による推測値と実測値の度は０．
８６、特異度は０．
９６であった。このことは、S/P一致度が、中和抗体価２～１６倍の場合（k＝０．
７６）と、値０．
０１７未満の個体の１４％は実測値が２倍以上、０．
０１７２～１２８倍の場合（k＝０．
６５）ともに他の２つの推定表以上の個体の３％は実測値が２倍未満であったことをと比較して高く、評価は Goodagreementであった。

示している。この事から、厳密な判断を要する場合な

また、ROC解析による推定表では、推定値２～１６倍のどは NTを行う必要があると考察した。

割合が０．
９５となった場合、８割の検体が実測値２～１６

単回帰分析による推定表では、中和抗体価２倍のと倍になると予想された。また、推定値２～１２８倍の割合

きの k係数が他の２つの方法に比べて低かった。このが０．
８３となった場合、８割の検体が実測値２～１２８倍ことは、エライザ法において、中和抗体価２倍は単回となると予想された。

帰式に近似しない区間であることが原因と推察した。
また、単回帰分析による推定値８～３２倍のときの k係考察数が、他の２つの方法に比べて低いのは、単回帰分析２６年ぶりとなる豚熱の国内発生を受けて、豚熱ワクのモデルが実際の S/P値の分布に適合していないこと

チンの接種を開始してから２年が経過し、各農場の母を反映しているためと思われる（図１）。単回帰分析に豚における抗体保有状況にばらつきがあることがわ比べて、非線形回帰分析の重みつけ k係数が高いこと

7)かってきた 。そのような状況において、豚熱ワクチからも、S/P値と中和抗体価の関係は、単回帰よりもンを子豚へ適切に接種するためには、各農場の子豚のロジスティック曲線に近いものと推察される。

移行抗体の保有状況を調査する必要がある。そこで今３つの推定表全てにおいて、１６倍以上の k係数は回、筆者は多検体処理に適したエライザ法の S/P値を０．
６０以下であった。中和抗体価の上昇に伴い、S/P値基に、中和抗体価を簡易的に推定する推定表を作成しの標準偏差は増加している（表１、表２）。近接する中た。

和抗体価の S/P値の分布に重なりが見られたことから、推定表の作成のため、単回帰分析、非線形回帰分析6)

S/P値を基準として明確に推定値を判別することが難及び ROC解析を実施して、各中和抗体価に対応するしいことが、k係数が低下した原因と考えられる。とS/P値を求めた。推定表は、推定値と実測値との一致くに、中和抗体価１６倍以上における推定値は、８倍以度が高いことが求められる。そこで、実測値と３つの下よりも一致率が低いことに注意が必要である。しか方法により求めた推定値を比較したところ、単回帰分し、ワクチンテイクが見込まれる中和抗体価２～１６倍

析に比べて非線形回帰分析と ROC解析による推定値又は２～１２８倍の推定値と実測値の k係数はともに０．
６の一致度が高かった。また、中和抗体価１０２４倍以下の以上（Goodagreement）であったことから、S/P値にROC解析による推定値と実測値の一致度は、０．
４（Fairよる中和抗体価の推定は、一定の精度を有することがagreement）以上であったが、他の２つの方法は０．
４を示された。他の２つの推定表よりも一致度が高い、下回る一致度が見られた事から、中和抗体価１０２４倍以ROC解析による推定表を使用することで、より NTに下において、ROC解析による推定表の信頼性が高い近い結果が得られることが期待される。

16ProcJpn Pi
gVetSocNo.
80 2022

豚熱ワクチン接種適齢期を推定するにあたり、S/P(ELISA).
JI
mmuno
lMe
t
ho
ds,
103:
189194.

値と中和抗体価の分布から、推定値をそのまま中和抗７）農林水産省（２０２１）飼養豚への豚熱ワクチン接種体価と見なすことは難しいことが示唆された。しかし、後の免疫付与状況等について ht
tps:
//
www.
maff.

本研究で得られたように、陽性的中率と陰性的中率を

go.
jp/j/council/seisaku/eisei/
usibuta_si
ppei/
78/

用いることで、８割の検体が、ある一定の中和抗体価

at
t
ach/
pdf/index7.
pdf（２０２２年３月１３日閲覧）の範囲内に収まるために必要な、推定値の検体数を求８）農林水産省（２０２１）豚熱に関する特定家畜伝染病めることができる。このような工夫により、エライザ

防疫指針（令和３年１０月１日一部改訂）htt
ps://

法の S/
P値が子豚のワクチン接種適齢期の推定に利用

www.
ma
ff.
go.
jp/
j/s
yo
ua
n/
doue
i/
ka
t
i
ku_yo
bo/
k_

可能となることが示唆された。

bousi/（２０２２年３月１３日閲覧）

中和抗体価と S/P値の一致状況については検査機関

９）農林水産省（２０２１）豚熱ワクチン接種農場におけごとに異なっている可能性があるため、今回作成した

る豚熱の患畜確認に伴う今後の発生予防対策（提推定表が他の検査機関で準用可能かについては、検査言）htt
ps://www.
maff.
go.
jp/
j/syouan/douei/csf/

機関ごとに検討する必要がある。

att
ach/
pdf
/
domestic29.
pd（f２０２２年３月１３日閲覧）

本研究では、エライザ法の結果から中和抗体価を推１０）中根崇ら（２００２）新たに開発された ELISAキッ定する推定表を作成した。ROC解析により作成したトと中和試験による豚コレラウイルス抗体検出の推定表は、他の方法と比較して実測値との一致度が良比較．日獣会誌，５５：７８３７８８．

好であった。このことから、多検体処理が可能なエラ

１１）豚コレラ防疫史編集委員会（２００９）豚コレラ防疫イザ法を、移行抗体保有状況の調査に応用可能と考え

史．p８８１２２，全国家畜畜産物衛生指導協会・畜産られた。現在、豚熱ワクチン接種農場で発生している技術協会，東京．

豚熱の多くが、哺乳豚または離乳豚での発生である。
本研究の成果を活用することで、より多くの農場で各農場の接種適齢期にあわせた豚熱ワクチン接種が可能となり、農場での豚熱発生リスクが低減されることが期待される。

利益相反状態の有無
著者は開示すべき利益相反はない。

引用文献
１）ByrtT (1996)How goodisthatagreement?Epidemiology,
7:561.
２）Cohen J(1960)A coefficientofagreementf
ornominals
cales.
EducPsycholMeas,
20:
3746.
３）Co
henJ(1968)We
i
ght
edKa
ppa.
Ps
yc
ho
lBul
l,
70:
213220.
４）KandaY (2013)I
nve
st
i
gat
ionoft
hef
r
eelya
va
ila
blee
asytousesoftwar‘eEZR’forme
dicalstatistics.
Bo
neMa
rrow Trans
plant,
48:
452458.
５）神田善伸（２０１５）定性・定量テストの正確度の評
価．EZRでやさしく学ぶ統計学 第２版，p２７９２９２，中外医学社，東京．
６）Kar
pi
ns
kiKF,etal.(1987)St
at
i
st
i
calcons
i
der
at
i
ons
i
nt
hequant
i
t
ati
onofs
er
um i
mmunogl
obul
i
nl
evels
us
i
ng t
he enz
yme
li
nke
di
mmuno
sor
be
nta
ssay