26ProcJpn Pi
gVetSocNo.
66 2015

原著論文
徳島県で確認された離乳豚での豚痘井口陽香1)、小島久美子1)、鈴木幹一郎1)、山本由美子1)、尾川誠次郎2)、芝原友幸3)、猪島康雄4)（1)徳島家畜保健衛生所、2)徳島家畜保健衛生所 阿南支所、3)国立研究開発法人 農業・食品
産業技術総合研究機構 動物衛生研究所、4)国立大学法人 岐阜大学）
I
guc
hi,H.
,Koj
ima,K.
,Suz
uki,K.
,Yamamoto,Y.
,Ogawa,S.
,Shi
bahar
a,T.andI
noshima,Y.(
2015)
.
Occur
re
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gletsinTokus
hima
Proc.Jpn.Pi
gVet.Soc.66,2629.

キーワード：離乳豚、豚痘、豚痘ウイルス、電子顕微て異なるが通常３～１６日で、全経過は３０～４５日とされている1)。発生は豚群に広範囲に広がり、日齢に関係な鏡、徳島く発生し、発病率は高い場合と散発的な場合とがある。

要約

ブドウ球菌や大腸菌などの混合感染のない場合は致死

２０１４年１月、母豚数２００頭規模の一貫経営養豚農家率は低く、自然治癒する場合が多いので詳細に解析しにおいて離乳豚（４０～５０日齢）数頭の両耳介、頸部背た報告は少ない。しかし、出生直後の子豚にも発生が側、前肢端に褐色発疹～円形黒色痂皮形成を認め、約認められる場合があり、経胎盤感染の可能性が示唆さ２週間で消失する症例に遭遇した。重度な病変形成を5)れる3,。

示す２頭の耳端を材料に病性鑑定を実施した。病理組

今回、徳島県内の養豚農家において、離乳豚の耳介、織学的検査では、有棘細胞の増生、風船様膨化および頸部および前肢に黒色円形の痂皮形成が認められ豚痘好酸性細胞質内封入体が確認された。電子顕微鏡下でが疑われたので、見過ごされがちな豚痘に関する情報はレンガ状の成熟ポックスウイルス粒子が認められた。の蓄積のため病理学的及びウイルス学的解析を行った。

ウイルス学的検査では、皮膚乳剤から豚痘ウイルスの遺伝子を検出したが、ウイルス分離は陰性だった。以材料

上より豚痘と診断した。豚痘は不顕性感染が多く見過

２０１
４年１月、徳島県内の母豚２００頭規模の一貫経営ごされることが多い疾病だが、胎内感染による死産も農場において、４０～５０日齢の離乳豚の耳介に痂皮形成報告されており、経済的影響が考えられることから、を認める病性鑑定の依頼があった。立ち入り検査では、衛生管理の徹底による感染経路の遮断が重要である。

同一豚房２～３頭の、両耳介に黒色痂皮形成を多数確認し、背側頸部および前肢端にも少数の病変形成を確背景と目的認した。本症発見当初は耳介部付け根に米粒大の赤色

豚痘は、ポックスウイルス科スイポックスウイルス発疹を確認し、小豆大～１円玉大に進行、発疹の大き属の豚痘ウイルスの感染によって起こる豚の皮膚病でさが増すにつれ赤色～暗赤色～黒色へと変化した。発5)ある 。豚痘の発生は、ヨーロッパ・米国・アフリカ・症部位も、耳介から顔面、前肢、背側頸部へと拡大しオーストラリアなど世界各地で認められており、日本た。下痢、呼吸器症状は認めなかった。この農場は飼7)では１９５３年 Te
rakado が報告したのが最初で、それ以1,8)

養衛生管理基準を遵守しており、豚ボルデテラ感染症

降は散発的に発生している 。近年では、鹿児島県や不活化・パスツレラ・ムルトシダトキソイド・豚丹毒

宮崎県の新生豚に死亡例を伴う発生の報告があっ

不活化混合（アジュバント加）ワクチン、大腸菌不活化・

2,4)。本病は、接触感染もしくはブタジラミやサシバ

クロストリジウムトキソイド混合ワクチン、内外寄生エなどの昆虫による機械的伝播により感染し、好発部虫駆除薬、抗コクシジウム剤、マイコプラズマ・ハイ

位は下腹部、内股部、腋窩部で、ブタジラミの寄生部

オニューモニエ感染症不活化ワクチン、豚サーコウイ

た5)

位と一致する 。発痘は、発赤、丘疹、水疱、膿疱、痂

ルス２型感染症不活化ワクチンを接種していた。重度

皮形成、落下の経過をとり、潜伏期間は研究者によっな病変形成を示す２頭の耳端を切断採取し、それぞれ

豚病会報

No.
66 201527

No
１.、２としたものを材料に、病理組織学的検査、電3’）、GoTaqGreenMasterMix（Promega,Madison,

子顕微鏡検査、ウイルス学的検査を実施した。

WI,USA）を用いてコロニー PCRを実施した。コロ
ニー PCRでクローニングが確認できた大腸菌クロー方法

ンを、乳剤サンプル１と２についてそれぞれ４クロー

病理学的検査では、耳端円形黒色痂皮について病理ン ず つ 選 択 し、BigDyeTerminatorv3.
1CycleSe-

解剖学的検査を行い、壊死脱落した痂皮を除去し、実quencingKit（AppliedBiosystems,FosterCity,CA,質を１０％中性緩衝ホルマリン液で固定した。パラフィUSA）を用いてサイクルシークエンシング反応を行っン包埋後薄切し定法に従い、ヘマトキシリン・エオジた。DyeEx2.
0SpinKit（Qiagen）を用いて精製後、ン（HE）染色標本を作成し、病理組織学的検査を行っ

オ ー ト シ ー ク エ ン サ ー（310GeneticAnalyzer,Ap-た。

pliedBioSystems）により、４クローンの両鎖を解析

電子顕微鏡検索では、皮膚における細胞質内封入体し、塩基配列を決定した。のウイルス粒子の観察を目的として、パラフィンブロックから病変部位を切り出した後、キシレンで脱パ

結果ラフィン後細切した。さらにキシレン・プロピレンオ

外貌所見では、豚の両耳介に直径８～１５mm、頸部キサイド（PO）等量混合液で処理し、０．
０１％トルイジ背側、前肢端に直径２～５mm の境界明瞭な褐色～黒ンブルー・無水エタノールで染色した。PO・エポキシ色の発痘が多数認められ、中心部が陥没し痂皮形成し樹脂等量混合液とエポキシ樹脂で浸透させ、エポキシたものもみられた（図１）。他の部位に発痘は見られな樹脂に包埋、超薄切片作成後、酢酸ウラニル・クエンかった。

酸鉛による二重染色を行い、透過型電子顕微鏡（H７５００、日立製作所、東京）にて観察した。
ウイルス学的検査では、No１.、２の皮膚を抗生物質
添加 Ea
gle’sMEM（日水製薬，東京）で１０％乳剤とし、
１，
７１０× g、１０分間遠心後の沈渣を材料として、ウイルス遺伝子検査を実施した。ウイルス分離では、１０％乳剤を CPK細胞（動物衛生研究所より分与）及び PK１５細胞（ATCC）に接種し、３７℃、５％炭酸ガス下で静置培養した。遺伝子検査では、材料から市販キット（QIAampDNA MiniKit,
Qiagen,Hilden,Germany）にて DNAを抽出し、市販の PCRキット（TaqPCRCoreKit,
Qiagen）と是枝らの豚痘ウイルス p４２遺伝子を増図１ 離乳豚（豚 No.
１）の外貌耳介、前肢端に褐色～黒色痂皮形成幅するプライマー2)を用い PCRを実施した。PCR反応
条件は、９４℃２分で前熱変性を行い、熱変性９８℃５秒、アニーリング５０℃５秒、伸長反応７２℃１０秒を３５サイク

病理学的検査では、発痘部の表皮では細菌塊およびル後、伸長反応を７２℃７分間実施した。得られた PCR細胞退廃物を含む痂皮形成があり、真皮では好酸球お産物は、１．
５％アガロースゲルにて電気泳動し、豚痘よび類上皮細胞を主体とする炎症細胞の高度浸潤を認ウイルスに特異的な遺伝子の増幅を確認した。PCRめた。また、有棘細胞の風船様膨化や好酸性の細胞質産物は、QI
AquickPCRPurificationKit（Qiagen）で内封入体などの豚痘特有の所見が多数認められた（図精製後、クローニングプラスミド pTAC2（BioDynam-２）。

icsLaboratory，東京）にクローニング、大腸菌 DH５

透過電子顕微鏡検索では、細胞質内封入体が認めらa（NipponGene，富山）に形質転換し、アンピシリンれた皮膚の有棘細胞の細胞質内に、ポックスウイルス５０mg/mlを含む LB寒天培地に塗布し３７℃で一晩培養に特徴的な約２５０～３１０nm×１５０～２００nm のレンガ状した。翌日、得られたコロニーを、T７プライマー（5’-の成熟ウイルス粒子や一層の表層膜を有した未熟なウ

TAA TAC GAC TCA CTA TAG G3’）
、M13Re-イルス粒子が観察された（図３）。

verseプライマー（5’CAGGAA ACA GCT ATGAC-

ウイルス学的検査では、CPK細胞による３代盲継代

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的検査の結果から、豚痘と診断した。本症例の外貌所見では、８～１５mm の黒褐色痂皮が多数見られ、病理組織学的検査所見では、表皮で無構造となった細胞退廃物を含む痂皮形成が確認され、ポックスウイルスの病変経過の末期にみられる所見と一致したことから感染末期と考えられた6)。今回、Tokus
hima
１４株の p４２遺伝子領域は国内で発生が報告されている豚痘ウイルスと塩基配列が完全に一致した。このことから、PCRのターゲットとした p４２遺伝子領域は国内で発生が報告されている豚痘ウイルスでは高度に保存されていることが示唆された。
図２ 皮膚（豚 No.
２）の HE染色
有棘細胞の風船様膨化（矢頭）と好酸性細胞質内封入体（矢印）（Bar＝５０μm）

国内では豚痘は散発的に発生しているが、皮膚病変が主で病勢が弱いため、ほとんどの豚は自然治癒し、重要視されていないことなどから、文献上の報告例が少ない。しかし、罹患すると成長が遅れ経済的な被害を受けたり、病変部に細菌の二次感染を受けた場合に病状が悪化することがある9)。また、一度発生した農場
では常在化して再発することがあり、出荷による他農場への感染拡大が危惧される1)。当該農場においても、育成豚や母豚など日齢に関係なく軽度の発症と治癒が長期間繰り返されており、ウイルスが常在している可能性が考えられた。現在豚痘に対する治療薬はないが、発症豚は健康豚から隔離し、伝播動物の駆除と併せて豚舎消毒を行い、豚舎の換気改善・密飼いを避けるなどの飼養管理改善の指導を行うことが重要である1)。
当該農場においては、発症豚の患部消毒、豚舎の消毒による伝播動物の駆除と発症豚の隔離飼育の指導を行ったところ、現在までに再発は認められていない。

図３ 皮膚（豚 No.
２）の透過型電子顕微鏡像
約２５０～３１０nm×１５０～２００nm のレンガ状の成熟ウイルス粒子（Bar＝５００nm）

感染経路や感染時期など、未だ不明な点が多い疾病だが、経済的な損害が見逃すことのできない伝染病の一つである。引き続き豚痘の病態解明のための情報の蓄を実施したが細胞変性効果（CPE）は認められず、ウ積と農場内での飼養衛生管理指導の徹底、感染拡大防イルスは分離されなかった。遺伝子検査では、PCRに止と再発阻止を行う必要がある。

より No
１.、２の検体から、豚痘ウイルスに特異的な８８０bpの PCR産物が得られた。シークエンスにより、謝辞

プライマー結合部位を除く８３４bpの塩基配列を決定し、本症例の、ウイルス学的検査にご協力いただいた宮検出した豚痘ウイルスを To
kushima
１４株とした（Ac-崎県宮崎家畜保健衛生所、堀内早苗先生に深謝いたし

cessionNo.LC016618）。Tokushima
１４株 の 塩 基 配 列ます。

は、BLAST 検 索 に よ り 鹿 児 島 県 で 報 告 が あ っ た、
Kagoshima
１１株2)の塩基配列（AB７９３２９２）と完全に一引用文献致していた。

１）界外昇（１９８５）豚痘．石井泰明ら編

考察２）是枝輝紀ら（２０１３）先天性豚痘の病理学的及びウ説
本症例は外貌所見、病理組織学的検査、ウイルス学

豚病臨床図

第１版，p４
６５２，日本畜産振興会，東京．

イルス学的解析．日獣会誌，６６:
４６８４７３．

豚病会報

No.
66 201529３）久保正法ら（２００９）豚痘．豚病診断カラーアトラ
ス－同一症例に迫る臨床と病理－，p１
５０１５１，ベネット，東京．
４）丸田哲也（２０１４）新生子豚の豚痘性皮膚炎．日獣会誌，６７:
７５９７６０．
５）森田千春（１９９９）豚痘．柏崎守ら編

豚病学

第４版，p２
１３２
１４，近代出版，東京．
６）大内紀章ら（１９８８）岡山県下の一地区における豚痘の集団発生．日獣会誌，４１:
８７０８７４．
７）TerakadoY.
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pox，農林省
家畜衛生試験場研究報告，２６:
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８）Thi
baultS,etal.(1998)Conge
nitals
wi
nepo
x:
As
por
adics
ki
ndi
sor
deri
nnur
si
ngpi
glets.Swi
neHealt
hProd,
6:276278.
９）吉田勲（１９７１）豚の衛生（１２）豚痘．日獣会誌，
２４:３
１３３．