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ver.1.9

山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センター(遺伝子実験施設)
利用の手引き1．利用の手引きについて
以下に示します山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センター(遺伝子実験施設)利用方法に関する説明は，実際に施設を利用する人の便宜および円滑な運営を図るため，利用細則を補完するものです。利用負担や研究所内通行に関する事項は，変更される場合があることをご了承ください。遺伝子実験施設は，遺伝子に関する基礎および応用研究（特にマウス発生工学を用いた研究）の促進と，遺伝子組換え実験技術の教育訓練，共同実験機器の利用促進等を目的に山形大学医学部キャンパス内に設置が認められ，2 名の専任教員が、各々の研究の歴史と経歴を踏まえた異なる研究テーマで、独自に研究教育業務に取り組み、各自が研究業績をあげてきました(中島:5-ALA 合成酵素
(ALAS), 5-アミノレブリン酸の生理作用;

岡野:生物時計タンパク質 CRY, 亜鉛結合不全型 CRY が生体に及ぼす影響)。医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センターは,同研究所 動物実験センターと直接つながっておりますが、令和 4 年 4 月 1 日を持って研究所内通行は停止となり,同研究所動物センター棟への通行は,緊急時の避難時のみ可能となります。
メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センターは、医学部の他のどの棟とも、直接の接続はありません。実習等で訪れる研究者及び学生諸君は、来所時は遺伝子棟正面玄関を利用してください。

   1

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ver.1.9

2．山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設利用申請についてメディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設の利用を希望する場合，所定の様式の申請書を提出する必要があります。また，実験の種類によっては，各種実験室の利用申請書を提出する必要があります。各様式のファイルは、ホームページ（http://www.id.yamagata-u.ac.jp/Gen/riyou.html）より
ダウンロードして下さい。提出方法は、書面の郵送（学内便）にてお願いします。

2-1

各様式共通の記入のポイント

医学部メディカルサイエンス推進研究所は個人申請が原則です。実験計画については行う実験の種類を明確にして記入してください。医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設に設置されている機器の利用予定も記入してください。各申請書の承認は，書面にて通知します。

2-2

各様式について

様式１：医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設利用申請書
利用者全員が，年度ごとに提出する必要があります。組換えＤＮＡ実験を行う場合は，山形大学
組換えＤＮＡ実験安全管理規則に基づく当該実験計画の承認書の写しを添付してください。また，
申請内容に変更がある場合も，提出してください。利用申請が承認された人には，個別に入退出用
IC カード（セコム）を配布します。登録後，最初の来館時に，申請者本人に直接，カードを渡します。
ただし，セコム IC カードをすでに利用している人（特に医学部メディカルサイエンス推進研究
所動物実験センター・生化学解析センター・臨床棟・基礎棟入退用の SECOM カードを利用している場合）は，共用が可能ですので，カード裏面に記載されているカード番号をお知らせください（23 参照）。施設側で，登録作業を行うだけで，利用可能となります。
様式２：医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設・Ｐ３レベル実験室利用申請書
Ｐ３レベル実験室であるメディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設３階ウィルス感染実
験室の利用に当たって提出する必要があります。利用承認を受けて，初めて利用可能となります。
様式３：メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設・SPF マウス実験区域利用申請書
施設２階の各マウス飼育室，または，胚操作室を利用して，SPF マウスを用いた実験を行うに当たって提出する必要があります。利用承認を受けて，初めて利用可能となります。管理上の観点か
ら，現在飼育している実験動物の有無についても，記入してください。
様式４：メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設・細胞培養実験室利用申請書
医学部メディカルサイエンス推進研究所 遺伝子実験センター２階細胞培養実験室の利用に当たって提出する必要があります。利用承認を受けて，初めて利用可能となります。

2-3

SECOM IC card について2

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ver.1.9【発行】非所持；メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設で用意したカードを配付します。
初回に施設に来られた時に、カードをお渡しします。
【登録】既に所持している方：遺伝子実験施設側での登録作業が済み次第、使用可能となります。
SECOM IC card の登録には、カード No.が必要です。
カード No.

カード裏面、右下１行目の７桁中下４桁【操作方法】
カード読み取り装置のセンサー部にカードを触れますと、解錠となり、自動ドアが作動します。

3

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ver.1.9

3．山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設利用上の一般的ルール等について医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設の入退館管理は，終日，利用者個人単位で配布する入退出用 IC カード（セコムシステム）を基に行われています。利用者は，入退館に際して，カード操作を行い，電気錠を解錠します（退館時でもカード操作が必要です）。カード管理システムのため，夜間および休日利用のための入館に，制限は設けません。ただし，常駐の施設教職員・大学院生が帰宅する際に，一部の部屋（一階 器材室・管理室，教官控室，専任教官室，遺伝子組換実験室，図書・コンピュータ室）の施錠を行いますので，これらの部屋については，夜間・休日での利用が出来ない場合があります。なお，２階細胞培養実験室，SPF マウス実験区域への入退も電気錠で管理します。

3-2

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設入退出用 IC カード

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設入退出用 IC カード（セコム システム）は，利用者個人ごとに配布され，裏面のカード番号が，管理上の利用者 ID となります。個人単位で利用してください。他者への貸し借りはしないでください。電子錠の解錠に当たっては，カード操作が必要となり，利用者のカード番号が読みとられ，利用者個人が識別されます。
紛失した場合は，速やかに医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設まで連絡してください（再発行については，カードの実費 1500 円を請求します）。施設の利用を中止する場合，速やかにカードを返還してください。

3-3

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設内での履物

管理上の観点から，施設内は，土足禁止とします。入館の際に，医学部メディカルサイエンス推進研
究所遺伝子実験施設のスリッパあるいは，利用者が用意する専用館内履きに，履き替えてください。動物実験施設区域への境界部でも履き替えてください。外履きは，玄関に設置された下駄箱に保管して
ください。

3-4

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設内の喫煙・飲食

防災上および研究教育上の観点から，全館禁煙としますので，館内での喫煙は，ご遠慮ください。また，実験室内での飲食は，原則として禁止とし，１階教官控室・１階施設長室兼会議室・３階更衣室に限ります。飲食に伴うゴミは直接，廊下に設置したゴミ箱へ廃棄してください。

3-5

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設内ロッカーの利用

メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設では，３階更衣室および３階遺伝子実験実習室内に，外来利用者用ロッカーを設置しています。３階更衣室内のロッカー（原則として，施錠はしません。貴重品は携帯するか，３階遺伝子実験実習室内のコインロッカーを利用してください）は，更衣用

4

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ver.1.9のものです。また，退館時には保管物は持ち帰ってください。
メディカルサイエンス推進研究所３階遺伝子実験実習室内のロッカーは，コイン返還タイプのコイ
ンロッカーで，実験用小器具および試薬類などの一時的保管場所として利用できます。退館後も引き続き利用する場合は，利用記録簿にロッカー番号・利用開始日・所属・氏名・連絡先等を記入してください。なお，鍵を紛失した場合は，シリンダー交換となりますので，これに要する実費（3500 円）を請求します。ロッカー内に長期間，放置された保管物は，施設側で廃棄する場合があります。

3-6

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設内電話機の利用

外来利用者の施設内の電話機の利用は，原則として内線または館内内線に限ります。外線利用を希望する方は施設教職員に相談してください。

メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センター番号表
館内内線

5901 5902 5903 5904 5905

108

玄関風除室

103

専任教官室 (中島）

●

●

104

教官控室 (岡野)

●

●

●

●

●

109

器材室・管理室

●

●

●

●

●

107

遺伝子組換実験室(木村)

●

●

●

●

●

102

施設長室兼会議室

101

図書・ｺﾝﾋﾟｭｰﾀ室●

105

DNA 解析室

●

106

組織解析室

●

112

細胞培養室

●

111

胚操作室

●

110

２階 SPF 区域廊下

113

動物細胞感染実験室●

114

植物遺伝子操作室●

115

ｳｲﾙｽ感染実験室 P3●

116

遺伝子実験実習室●

117

蛋白質解析室

●

118

低温実験室

●

学内から上記学内内線番号のついている部屋で呼出音が鳴ります。

学内から各部屋を直接呼び出すことはできません。館内内線
は館内でのみ使用可能です。

●●

5（5901〜5905）にかけると、●

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ﾜﾝﾀｯﾁｷｰｾﾚｸﾄｷｰ
外線ｷｰ
内線ｷｰ
ｽﾋﾟｰｶｷｰﾀﾞｲﾔﾙｷｰ
保留ｷｰ

発信方法＜学内内線＞「受話器を上げる →「 [０]ﾀﾞｲﾔﾙ →＜施設内内線＞[０]ﾀﾞｲﾔﾙ → 学内内線番号」

学内内線番号 →受話器を上げる」「受話器を上げる → 施設内内線番号」「受話器を上げる → ﾜﾝﾀｯﾁｷｰ 」「ﾜﾝﾀｯﾁｷｰ → 受話器を上げる」「ｽﾋﾟｰｶｰｷｰ→

施設内内線番号 → 受話器を上げる」

注意）ﾜﾝﾀｯﾁｷｰの LIST の中２段の部屋にかけるときは、ｾﾚｸﾄｷｰを押した後、ﾜﾝﾀｯﾁｷｰを押して下さい。

館内放送の方法
各部屋の電話機を利用して、全館放送が行えます。 「受話器を上げる →

3-7

＊９０」

メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設内照明および空調・換気の利用
メディカルサイエンス推進研究所各実験室の照明については，利用時に点灯し，退室時に消灯してください。空調・換気についても，同様ですが，適正な利用を心がけてください。なお，夏期に常時空調している部屋がありますので，これら（１階 DNA 解析室，１階図書・コンピュータ室，2 階細胞解析室）については停止する必要はありません。

3-8

異常時・緊急時の対応について

館内での異常を認めた場合は，速やかに，館内放送等の利用により，施設教職員に連絡してください（全館放送「＊９０」、もしくは、内線 5901,5902,5903）。絶対に，放置しないでください。施設教職員が不在の場合は，防災センター（内線 5110）へ連絡してください。

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3-9

火災等緊急時の避難経路および医学部メディカルサイエンス推進研究所物実験センター連絡通路について
医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センターは，医学部メディカルサイエンス推進研究所動物実験センターと連結された形になっています。各階の動物実験施センター側連絡通路への通行は現在のところ鉄扉で遮断されております。火災等、災害、その他不測の事態の緊急時は，1F 鉄
扉を開けて，動物実験施センターへの避難が可能です。緊急時の避難経路として，玄関側（北側）の階段で 1F に降り，遺伝子実験センターの正面玄関あるいは動物実験センター側の出口（南側）を使うことになります。

3-10

医学部メディカルサイエンス推進研究所監視カメラについて

管理上の理由から，１階玄関廊下, ２階廊下, ３階廊下に監視カメラが設置されています。

7

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4．山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設における研究・教育利用に関するルール

4-1

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設実験機器の利用について原則として，医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設内に設置された実験機器の利用において，消耗品の使用を伴わない場合は利用者に負担を求めることはありません。ただし，今後の利用状況によっては，一部負担を求める場合もあります。

4-2

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設実験台およびデスクの利用
医学部メディカルサイエンス推進研究所 3 階遺伝子実験実習室の実験台およびデスクは、学生実習
等の実施期間を除いて，自由に利用してください。その他の実験室の実験台の利用は，機器の利用に際するもの以外は，施設教職員に相談してください（内線 5902 または iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。
ただし，実験台の利用は，原則として，実験単位を原則とします。一つの実験が終了して，退館（一時的な外出は除く）するまでに，次の利用者が利用可能な状態（実験開始前の状態）に戻してください。連続して実験を行う場合でも，退館する場合は，実験ごとに，実験台を空けてください。
なお，長期間，専有的（利用可能な者を限定して）利用の必要があると，施設側が認めた場合に限り，期間を区切り専有的利用が可能となります。

4-3

一般消耗品・使い捨て器具・ガラス器具の使用

原則として，一般消耗品（ペーパータオル・手袋など），使い捨て器具（チップ・遠心管など）
・ガラス器具（三角フラスコ・ビーカーなど）は，利用者の持ち込みが原則です。ただし，今後利用状況を考慮して，施設側で用意する場合もあります。

4-4

試薬等について

一部の機器利用に必要な試薬を除いて，共通利用の試薬類は，本施設では用意していません。原則として，利用者側で用意してください。ただし，今後，利用状況を考慮して施設側で，用意する場合もあ
ります。

4-5

試薬・サンプル等の保存について

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設での利用者の試薬・サンプルの保存に，冷蔵庫（4℃），
冷凍庫（-20℃/-30℃/-80℃）が必要な場合は，施設教職員に相談してください（内線 5902）。
ただし，本施設での実験遂行上，必要な場合に限ります。また，医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設３階遺伝子実験実習室ロッカー利用以外に，器具等の保管を希望する場合も，施設8

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教職員に相談してください(5902, または iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。

4-6

機器の搬入について

メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設内の実験室に一定期間，定常的に実験機器（特に大型装置など）設置する場合に，様式５：山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センター・機器搬入申請書を提出して，許可を得る必要があります。ただし，共同利用が条件となります。

4-7

医学部推進研究所機器設置実験室（１階遺伝子組換実験室，DNA 実験室，組織解析室，暗室，３階蛋白質解析室，機器解析室，植物遺伝子操作室 P2）の利用
機器類が設置された実験室の利用は，各機器の利用ルール（後述）に従い，利用してください。実験
台は，原則として，機器の利用の際に使用してください。

4-8

医学部推進研究所遺伝子実験センター１階各部屋の利用について

4-8-1 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設器材室・管理室
器材室・管理室には，医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設の防災管理機器が設置されていますので，これらの機器には，手を触れないでください。試薬・使い捨て器具等（施設教員研究用）が保管され，秤，pH メーター，製氷器が設置されています。外来利用者は秤・pH メーター・製氷器のみ利用可能です。

4-8-2 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 DNA 解析室
DNA シークエンサー，プラスミド自動抽出機，PCR，安全キャビネット，超純水製造装置，自動器具洗浄機等が設置されています。各機器の利用ルール（後述）に従い，利用してください。実験台は，原則として，機器の利用の際に使用してください。機器利用に必要な消耗品は，利用者負担となります。
•

DNA シークエンサー「SeqStudio」による DNA 配列解析利用案内（担当：木村, 内線 5903 またはiden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）
DNA シークエンサー「SeqStudio」利用のメリットは、

1. 基本的に、バッファーやマトリックスのセット不要で、操作が非常に簡便。1 度、経験すれば、操作に不安な点はありません。
2. インターネット経由でクラウドデータベースの解析済みデータを PC・スマホから確認可能（Thermo
Fisher アカウントが必要）
3. 一般的な 8 連 PCR チューブに入ったサンプルを直接セットできるため、残サンプルが必要なければ、解析終了時に機器に戻る必要はありません（次利用者が廃棄。以前の機器ではサンプルセット用専用 96 穴プレートを回収・洗浄するため、戻る必要あり）
4. 最新のマトリックス POP1 を使用するため、シークエンス性能が向上（350/500bp 以下なら 1 run、

9

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ver.1.930/45 分）4 連キャピラリーのため、サンプル数が一定数以上あり、シークエンサーを自身で操作して、データをいち早く欲しい場合の利用に、特に適しています。
1 run あたり、1,000 円（1 run につき、最大 4 サンプル解析可能で、1 サンプルあたり 250 円）のご負担をお願いします。医学部メディカルサイエンス推進研究所推進研究所遺伝子実験センター機器
利用予約サイト(医学部メディカルサイエンス推進研究所生化学解析センター予約サイト)
http://mksun2.id.yamagata-u.ac.jp/cgi-bin/cb/ag.exe より、予約の上、ご利用ください。
なお、節電の為,電源を落としてカートリッジを取りはずしている場合があります。カード管理シス
テムのため，休日利用のためのメディカルサイエンス推進研究所当センター入館に，制限は設けません。センター職員不在の際にも利用できるよう,初回の利用時にカートリッジ取り付けの方法について
職員から教わり習熟してください。

4-8-3 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設遺伝子組換実験室
常駐の施設教員・技官および大学院生の居室, および実験スペースとして，利用しています。機器類は，卓上遠心機，吸光度計，-80℃ディープフリーザー等が設置されています。吸光度計は，利用ルールに従って利用可能です。実験台，吸光度計以外の機器の利用については，施設教職員に相談してください。

4-8-4 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設組織解析室
組織解析用各機器，動物用血球計数器，動物用生化学分析器が設置されています。また，組織染色実
験用実験台を設けています。試薬・器具・染色液・スライドガラス・切片作製用刃・カバーガラス類等については持ち込みが原則です。機器利用に必要な消耗品は，利用者負担となります。オールインワン
蛍光顕微鏡 BZ-X700 顕微鏡が設置されています。

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設設置オールインワン蛍光顕微鏡 BZ-X700 使用の注意事項(手順等，不明な点は岡野[iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp]にお尋ねください)◆予約時間は原則で最大 3 時間までとします。3 時間以上連続使用する場合は、予約時間経過後、改めて予約してください。
◆予約の際、メモ欄に「所属、使用者名、連絡先」を必ず記入してください。
◆混み合っている場合，長時間の予約は可能な限り控えるようご協力をお願いします。
◆取得した画像はデスクトップに置かないで，所定のフォルダにおいてください。
◆管理上，予告なく PC 内の画像データは消去することがあります。データは速やかに移動させてください。
◆油浸レンズ(X100)を使用した場合は，X100 と X40 のレンズを手順にしたがってクリーニングしてください。油がついたままですとカビが生えてレンズが使えなくなります。

10

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4-8-5 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設暗室
暗室は，顕微鏡類・デジタルカメラが設置されています。遮光が必要な蛍光観察等も可能です。

4-8-6 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設長室兼会議室（セミナー室）
施設長室兼会議室は，セミナー等に利用可能です。ただし，予約優先としますので，事前に、施設職員（内線 5902）に連絡して予約して下さい。ドアに設置したホワイトボードに，予約状況を表示します。予約が入っている時間帯，または，使用中の場合（表示板があります）は、その関係者以外は入室を控えて下さい。空室，または，予約が入っていない時は、食事・休憩等にも利用出来ます。
また，本室でのセミナー等において，液晶プロジェクターの利用が可能です。利用を希望される方は，施設教職員まで連絡してください。

4-8-7 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設図書・コンピュータ室
図書・コンピュータ室は，閲覧・データ処理・データベース検索等の目的で，雑誌・コンピュータ・プリンタの利用が可能です。ただし，雑誌の室外への持ち出しは禁止です（施設職員私費購入のため）。
外来利用者によるコンピュータのハードディスク個人利用は，原則として禁止です。室内での飲食は禁止です。

4-8-8 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設教官控室・専任教官室
施設専任教員(中島・岡野)の居室として利用しています。冷蔵庫・ポットが設置されています。利用を希望する場合は，施設教職員に連絡してください（連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。

4-9

２階各部屋の利用について

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設２階部分は，SPF マウス実験区域・細胞培養
実験室から，構成され，利用申請以外に，別の申請が承認されて，初めて利用可能となります。これらの利用承認を受けていない利用者の立ち入りは，原則禁止です。

4-9-1 医学部推進研究所 SPF マウス実験区域（各マウス飼育室・胚操作室）
医学部メディカルサイエンス推進研究所 動物実験センターの支援・協力により，マウス飼育スペー
スの効率的配置が可能になり，２階部分に，マウス飼育室８室，1400 ケージ，最大 1 万匹の飼育ができます。医学部メディカルサイエンス推進研究所 遺伝子実験センターでは，２階の各マウス飼育室および胚操作室を含むスペース（SPF マウス実験区域）を，遺伝子改変マウスの作製およびこれらを用いた実験が中心をとした，SPF マウスのみを用いる動物実験を遂行する実験区域と位置づけ，それ以外の実験室とは区別して，管理運用を行います。当区域の入退の管理は，IC カード照合により行われます。
SPF マウス実験区域で，実験を行うに当たっては，様式３：医学部メディカルサイエンス推進研究所

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遺伝子実験施設 SPF マウス実験区域利用申請書を提出し，承認を受ける必要があります。
SPF マウス実験区域の胚操作室には，トランスジェニックマウスや遺伝子破壊マウスの作製に必要な機器が整備されています。また，マウス個体レベルでのイメージングが可能な IVIS も利用できます。
詳細は，6. SPF マウス実験区域の利用に関するルールを参照してください。状況により、使用ルールなどは変更されることがありますので, SPF マウス実験区域に関してご不明な点はお問い合わせください。
（iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）

4-9-2 医学部メディカルサイエンス推進研究所細胞培養実験室•

細胞培養実験室は、遺伝子破壊マウス作製に必要な ES 細胞の培養や，培養細胞の実験を行う部屋です。利用するためには，様式４：医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設細胞
培養実験室利用申請書を提出して，承認を受ける必要があります。入室は，IC カードにより管理されます。前室が設けられており，前室で専用のサンダルに履き替えて入室する必要があります。
利用に際しては，必ず，施設教職員の説明を事前に受けてから，利用してください。滅菌器具の使用は，使い捨て器具によるか，滅菌器具の持込で対応してください。

•

液体窒素タンクでの凍結チューブ保管
医学部メディカルサイエンス推進研究所 遺伝子実験施設２階培養細胞実験室内に設置している
液体窒素タンクでの凍結チューブ保管サービスを開始しました。分散保管や、液体窒素タンクを維持するには不経済な少数の凍結チューブ保管に適しています。1 ケース（凍結チューブ最大 25
本まで）
・1 ヶ月あたり、500 円のご負担をお願いします。希望される方は、山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所 遺伝子実験センターまで、お問い合わせください。（連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）

4-9-3 医学部メディカルサイエンス推進研究所 SPF マウス実験準備室
医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF マウス実験区域へ入る前に，予防衣に着替えるための部屋です。SPF マウス実験区域を利用する人以外は，入室しないでください。

4-10

医学部メディカルサイエンス推進研究所 3 階各部屋の利用について

4-10-1 医学部メディカルサイエンス推進研究所 遺伝子実験施設 ウィルス感染実験室 P3
ウィルス感染実験室 P3 を使用する場合は、予め『医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実
験施設・Ｐ３レベル実験室利用申請書』（様式２）に必要事項を記入し、メディカルサイエンス推進研
究所遺伝子実験施設に提出して、承認を得る必要があります。実験計画に不備が認められる場合は，防災上の問題から承認出来ないことがあります。なお，利用者がいない場合は，空調停止・常時施錠しています。

4-10-2 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設低温実験室

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利用される方は申請書の提出は必要ありませんが，事前に必ず医学部メディカルサイエンス推進研
究所遺伝子実験施設までご連絡ください（連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。低温実験の他サンプルの保存にも利用可能です。設定温度は 4℃です。

4-10-3 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設遺伝子実験実習室設置された実験台およびデスクは、研修等の実施期間を除いて利用可能です。冷蔵庫，冷凍庫，PCR，
パルスフィールド電気泳動槽，ホモジナイザー, 微量冷却遠心機，温水浴，ブロックヒーター等およびコインロッカー（保管用）が設置されています。

4-10-4 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設蛋白質解析室・機器解析室
蛋白質解析室に設置されておりました質量分析システムは,故障の為利用できません。詳細は山形大学医学部ディカルサイエンス推進研究所 遺伝子実験センターまでお問い合わせください（連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。

4-10-5

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設植物遺伝子操作室（P2）, 動物細胞

感染実験室
P2 レベルの実験室です。植物遺伝子操作室には，安全キャビネット，オートクレーブ，インキュベータ等が設置されています。医学部メディカルサイエンス推進研究所生化学解析センターの step one
plus (ABI, real-time PCR 装置)が設置されています（step one plus の詳細は医学部メディカルサイ
エンス推進研究所生化学解析センター,内線 5474 にお尋ねください）。本 real-time PCR 装置は,医学部基礎系分野の業務に優先利用される場合があります。動物細胞感染実験室は施設職員以外の立入りは厳禁です。

4-11

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センター利用報告について利用者は，年度末ごと，あるいは利用の終了または中止した場合，様式６：山形大学医学部メディカ
ルサイエンス推進研究所 遺伝子実験施設・利用報告書を提出して，医学部推進研究所遺伝子実験施設を利用して得られた研究成果（学会発表・発表論文・著書など）について報告してください。

4-12

メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センター利用者負担金について

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設では、山形大学教職員によるメディカルサ
イエンス推進研究所遺伝子実験施設でのマウス飼育管理及び遺伝子改変マウス作製等に関する取扱規則に基づき、一部の機器利用等について、利用者の皆様に消耗品等の経費負担をお願いしています。
遺伝子実験施設では、山形大学教職員によるメディカルサイエンス推進研究所 遺伝子実験施設でのマウス飼育管理及び遺伝子改変マウス作製等に関する取扱規則に基づき、一部の機器利用等につい13

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ver.1.9て、利用者の皆様に消耗品等の経費負担をお願いしています。詳細は医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設まで、お問い合わせください（連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。

【利用者負担金一覧】【負担金】

動物用全自動血球計数器（日本光電,Celltacα）¥50/sample

動物用生化学自動分析装置（FUJIFILM,ドライケム 3500V）¥30/sample

ゲル撮影装置（bio-craft,MJ-300E）¥10/枚

標本脱水置換装置（Leica,TP1020）¥750/run

パラフィン包埋装置（Thermo,ヒストスター）¥50/block

遺伝子塩基配列決定ｼｽﾃﾑ（SeqStudio）
1 run あたり、1,000 円（1 run につき、最大 4 サンプル解析可能で、1 サンプルあたり 250 円）のご負担をお願いします。

5． 山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設の実験機器利用上のルール

5-1

一般ルール

•

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設機器の初回使用前に、あらかじめ説明を受けて下さい（担当:岡野）。突然の場合は、対応不可能な場合もありますので、事前に連絡を下さい（連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。

•

機器などの操作は原則として利用者自身が行ってください。機器毎の簡単な使用方法・注意事
項は機器本体もしくは「使用記録簿」に貼紙があるので、見て下さい。なお、使用方法、操作などに習熟していない場合は予め岡野または施設職員による説明を受けてください。
「とりあえずいじってみる」というようなことは、決してしないで下さい。誤使用・過失などによる機器破損の場合
は、原状回復にかかる費用を負担していただく場合があります。

•

機器の使用予約は、(医学部メディカルサイエンス推進研究所生化学解析センター予約サイト)
http://mksun2.id.yamagata-u.ac.jp/cgi-bin/cb/ag.exe から行って下さい。
機器の使用後に必ず、各機器に備え付けの「使用記録薄」に日付・時刻・使用者名・所属などを書き込んで下さい(守らないと利用停止となる場合があります)。予約の中止や変更の場合は、速やかに予約取り消しの処
置をして下さい。予約時間から３０分経過しても利用が開始されない場合は、基本的にキャンセル扱いとさせていただきます。使用開始前に必ず、予約の有無を確認して下さい。また、利用者負担金は「使用記録薄」を基に計算します。

•

使用に必要な消耗品などは、利用者による持ち込みを原則としております。しかし、機器によっては施設で一括購入・管理し、使用に応じて「利用者負担」とするものがありますので、施設職員に確認してください。

•

恒温器などにサンプルをいれる場合には、ラックに記名するなどして、必ず所有者が分かるよ14

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ver.1.9
うにして下さい。無記名のまま長期間放置されているサンプルなどは、施設側の判断で廃棄します。
•

機器使用時に汚してしまった時（浸透培養器内に培養液をこぼした場合など）は、すぐに掃除をして下さい。汚したまま放置した場合は、機器使用停止とさせていただくことがあります。故障の原因と判断される場合は，原状回復にかかる費用を負担していただく場合があります。

•

使用後は、翌日の使用予定に関わらず、実験台および実験機器周辺を片づけて下さい。不都合な場合はあらかじめ相談してください(連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp)。

5-2

機器別注意事項

利用状況により、医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設の使用ルールは変更していく予定ですので、希望がある場合は連絡して下さい(連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp)。利用者の意見をまとめてより使用しやすい環境にしていく予定です。

5-2-1．遺伝子塩基配列決定ｼｽﾃﾑ（SeqStudio）
精 密 機 械 で す の で 、 各 自 で 操 作 す る 場 合 に は 、 必 ず 事 前 に 担 当 施 設 職 員 ( 木 村 ,5903 ：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp)による説明を受けて、取り扱いに習熟して下さい。インターネットで予約の際に、連絡先に内線番号を、メモにラン回数を記入して下さい。なお、節電の為,電源を落としてカートリッジを取りはずしている場合があります。センター職員不在の際にも利用できるよう,初回の利用時にカートリッジ取り付けの方法について職員から教わり習熟してください。

5-2-2．質量分析システム
現在質量分析システムは故障の為利用できません。詳細はメディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設まで、お問い合わせください。
（連絡先：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。

5-2-3．超純水製造システム（ミリポア Milli-Q IQ 7003/7005）
基本的に採水は自由ですが、Elix 純水・MilliQ 超純水ともに、残量には十分に注意して使用して下さい(貯蔵タンク: 25Ｌ)。残量 20％ (5Ｌ) 以下のときは、使用を控えて下さい。詳細は装置前の注意
書きをご覧ください。使用量を所定の記録紙に記録してください。ご不明な点がありましたら施設職員にお尋ねください。

5-2-4．安全キャビネット（SANYO MHE-130AJ）
１階「DNA 解析室」
、３階「植物遺伝子操作室 P2」に一台ずつあります。１階「DNA 解析室」を，優先的に利用して下さい。

5-2-5．恒温振盪培養器（TAITEC,BR-160LF,BR-40LF）

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ver.1.9
１階「DNA 解析室」
（TAITEC,BR-160LF）は、基本的には常時３７℃で使用して下さい。１階にスペー
スが無くなったとき、もしくは、３７℃以外で培養したい時に、３階「植物遺伝子操作室 P2」（TAITEC,
BR-40LF）を使用して下さい。１階の培養器の温度設定を変更したい場合には、施設教職員に相談して下さい。培養器内にサンプルを入れる場合は、誰のサンプルか分かるようにして下さい。利用者が分からず、長期間放置されているサンプルは、施設側の判断で廃棄します。培養液をこぼしたときなどは、
特に速やかに、きれいに掃除して下さい。異臭および機械の故障の原因となります。

5-2-6．核酸増幅装置（PCR9700）
１階「DNA 解析室」に 3 台、３階「蛋白質解析室 P2」に 1 台あります。PCR 反応終了後４℃で保持する場合、４時間以内にして下さい。長時間の冷却は機械に負担がかかり、故障の原因となります。PCR
反応終了後 25℃で保持する設定に御協力お願いします。オーバーナイトでセットしたい場合は、
PCR9600 を利用して下さい。

5-2-7．顕微鏡・写真撮影装置（キーエンス, Leica, 担当: 岡野, 5902, iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）
顕微鏡は精密機械ですので、利用される方は注意をして下さい。基本的な操作法は、簡易マニュアルを用意していますので、そちらを参考にして下さい。
「とりあえずいじってみる」というようなことは、
決してしないで下さい。設定が変わってしまうと、正確な観察ができなくなってしまいます。使用方法などで困った時は質問して下さい。

5-2-8．凍結切片作製装置（Leica,CM 3050S, 担当: 岡野 5902, iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）
刃物を使用する機械ですので、怪我をしないように十分に注意して下さい。替え刃は利用者が用意してください。施設でも用意しますが、１枚 200 円となります。コンプレッサーへの負担を減らすた
めに、未使用時は、凍結チャンバー内温度は−１５℃、試料冷却機能は OFF になっていますので、使用前に希望温度に設定して下さい。
（終了後、設定を元に戻して下さい。
）自動霜取サイクルが、毎日午前
４：００から８分間行われます。サイクル終了後４時間は、装置の使用ができませんので、ご注意下さい。どうしても上記時間内に使用したい場合は、自動霜取時間を変更して下さい（終了後、設定を元に戻して下さい）。使用方法などで困った時はご相談ください。

5-2-9．パラフィン包埋装置（Thermo,ヒストスター: 岡野 5902,iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）
装置故障の原因となるので、パラフィンの再利用はせずに新しいパラフィンを補充してください。
使用方法など不明な点はご相談ください。

5-2-10．核酸自動分離装置（ｸﾗﾎﾞｳ,PI-50α）｢プラスミド調製用プロトコール使用の場合｣
運転開始時のライン洗浄等で試薬消費の理由から、多検体処理の方が割得です。１回の処理サ

16

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ver.1.9ンプル数は、12,24,36,48 のいずれかとなります。遠心操作を行なう際のバランスを取るために必要な措置で、もし大腸菌培養液が 20 本しか無い場合でも、あと 4 本は水を入れて 24 サンプル処理するという形になります。処理時間は 12,24 サンプルで約 3 時間、36,48 サンプルで約 5.5
時間となります。処理の過程で，フェノールを含む廃液が装置内部のタンクに排出されますので，
プラスミド回収時までに，指定の廃液タンクに廃棄してください。なお，遺伝子実験施設では，コスト削減のため、プラスミド調製用の一部試薬は施設側で自作しています。自作試薬を用いても，基本的には，シークエンスグレードのプラスミドが，調整可能です。
｢マウステール DNA 調整用プロトコール使用の場合｣各研究室で専用試薬キットを購入して下さい。
（NR-201、約 650 sample、￥43000）
処理時間は 12,24 サンプルで約 2.5 時間、36,48 サンプルで約 4.5 時間となります。
｢専用チューブに関して｣
PI-50α専用６連チューブは、施設側で，共通用として６４個用意します。利用者が責任をもって、使用後，直ちに洗浄・滅菌・乾燥を行って，戻して下さい。洗浄不備によるコンタミネーシ
ョン等が起こる場合があります。共通用チューブに関するトラブルは，利用者間で解決してください。これらの問題を避けたい場合や、処理数の多い研究室は、購入することを御奨めします。
（６連チューブ、PT-5000、６４個入り、￥11500）

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ver.1.95-3

消耗品等の持ち込みが必要な医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実

験施設の機器
当該機器を使用する場合に、利用者による消耗品等の持ち込みの必要な機器の例です。ここに示す機器以外にも必要な場合が出ることがありますので、事前に施設教職員に確認して下さい。

【機器】【持ち込み】

核酸自動分離装置

KURABO,PI-50α

専用６連ﾁｭｰﾌﾞ

ゲル撮影装置bio-craft,MJ-300E

Floppy DISK

核酸増幅装置Applied Biosystems,GeneAmp

PCR tube

Gradient PCR

MJ Research,PTC-200

PCR tube

ﾙﾐﾉﾒｰﾀｰ

berthold,MiniLumat LB 9506

専用ﾁｭｰﾌﾞｴﾚｸﾄﾛﾎﾟﾚｰｼｮﾝｼｽﾃﾑ

日本ﾊﾞｲｵﾗｯﾄﾞ,GenePulser II

cuvette

標本脱水置換装置

Leica,TP1020

ｶｾｯﾄ

動物用生化学自動分析装置

FUJIFILM,ﾄﾞﾗｲｹﾑ 3500V

専用ｶｰﾄﾘｯｼﾞ

集細胞遠心装置

ThermoShandon,Cytospin4

ﾌｭｰﾈﾙｽほか

凍結切片作製装置

Leica,CM 3050S

替え刃

パラフィン切片作製装置

Leica,CM 3050S

替え刃

ﾊﾟﾙｽﾌｨｰﾙﾄﾞ電気泳動槽

日本ﾊﾞｲｵﾗｯﾄﾞ,CHEF-DRIII

泳動ﾊﾞｯﾌｧｰなど

ﾎﾓｼﾞﾅｲｻﾞｰ撹拌装置

池本理科,60-079

ﾎﾓｼﾞﾅｲｻﾞｰ

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ver.1.9

6.山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF マウス実験区域の利用に関して

6-1

利用について6-1-1 遂行可能な実験内容
山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設２階 SPF 実験区域内では，SPF マ
ウスの飼育及びこれを用いた胚操作実験等を遂行することが出来ます。飼育できる実験動物は，SPF マウスのみです。医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF マウス実験区域利用に関して不明な点がありましたら,中島 内線 5901：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp までお尋ねください。

6-1-2 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF 実験区域利用手続き
SPF 実験区域内のマウス飼育室および胚操作室を利用するためには，様式１の利用申請書および様式
３の SPF 実験区域内利用申請書を事前に提出する必要があります。また，各部局における動物実験・
DNA 組換え実験（遺伝子改変マウスを利用する場合）に係る所定の手続きを事前に行ってください。

6-1-3

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設での飼育管理

遺伝子実験施設では教職員が，給餌・給水および，使用済みケージの洗浄滅菌，ブリーダーからの搬
入，微生物モニタリング， SPF 実験区域内の清掃，消耗品の補充，マウスのケージ交換，ラック・自動給水装置等の保守管理，飼育経費算出のための利用ケージ数の管理を行っています。

6-1-4

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設飼育経費の負担について

現時点では，ケージ洗浄滅菌費用および消毒用アルコール・エサ・手袋等の使い捨て消耗品などの購入費（ラック・ケージ等の購入費用は含まれていません），微生物モニタリング費用について，飼育経費として利用者に負担して頂きます。利用実績から，飼育経費負担は，ケージ 1 日あたりの利用が，算出単位となり，30 円/ケージ/日となります。
例：42 ケージ（1 ラック分，平均 5 匹/ケージで約 200 匹）で 1 年間飼育した場合，
42 cagesＸ365daysＸ30 円 = 459,900 円

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ver.1.9

6-2

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF 実験区域内各実験室について
6-2-1 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF 実験準備室
SPF 実験区域内専用の青色の実験衣，上着，または白衣等を一時保管するロッカーおよびマウス死体
保管用冷蔵庫があります。この部屋で，専用実験衣（青衣）に着替えて，さらに，SPF 実験区域入口で，SPF 実験区域内専用青色サンダルに履き替えてから，区域内へ入る必要があります。

6-2-2

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設洗浄室

オートクレーブ，洗浄用流しが設置されています。使用済みのケージ（ケージ交換あるいは飼育終了したケージ）については，洗浄室に直接持ち込まず,飼育室前の張り紙の指示に従ってください。

6-2-3

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設胚操作室

インジェクション用倒立顕微鏡，実体顕微鏡，プラー，マイクロフォージ等が設置されています。遺伝子改変マウスの作製実験や，移植実験等を行うことが出来ます。ただし，実験に利用できるマウス
は，医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設で飼育されているマウス，または，ブリー
ダーから直接購入した SPF マウスです。入室は，電気錠により管理していますので，登録が必要となります。

6-2-4 山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設一般飼育室（交配室・純系化
室・飼育室 1・同 2・同 3・遺伝子改変マウス飼育室 1）
SPF マウス専用の飼育室です。各部屋に前室が設けられています。前室には，実験台および流しがあります。飼育スペースへ入る場合は，前室で青色実験衣から，飼育スペース専用黄色実験衣に着替え，専用緑色サンダルに履き替える必要があります。飼育スペースには，陽圧式飼育ラック，作業台が設置
してあります。

6-2-5 山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設導入室
ブリーダー以外の他施設より，搬入されたマウスを一時的に飼育するための部屋です。前室が設けられ，実験台および流しがあります。飼育スペースへ入る場合は，前室で青色実験衣から，使い捨てガ
ウンに着替える必要があります。この部屋で飼育されているマウスは，検疫終了後，SPF と確認されたものについて，医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設一般飼育室への移動が可能となります。飼育スペースには，個別ケージアイソレーション型ラック，作業台が設置してあります。なお,イメージング装置（IVIS Imaging System）はメディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF
実験区域内導入室前室に設置してあります。利用希望の方は iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp まで,お問い合わせください。

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6-2-6 山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設滅菌済み器材保管室（遺伝子改変マウス飼育室 2）
本来は，医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設の一般飼育室ですが，現時点では滅菌済みケージ等の保管に利用しています。ケージ交換やケージ補充のために，この部屋から担当者が滅菌済みケージを各飼育室へ持ち込みます。

21

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ver.1.9

6-3

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF 実験区域利用方法

6-3-1 初回利用時
医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設 SPF 実験区域を最初に利用する前に，必ず，施設教職員から利用に関する現場での説明を受けてください。また，メディカルサイエンス推進研究
所 動物実験センターの講習会を受けおいてください。ご不明な点はメディカルサイエンス推進研究所
遺伝子実験センターまで、お問い合わせください。
（中島 内線 5901：iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）。

6-3-2 入室
① 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施 SPF 実験準備室で左側にかけてある専用青衣に着替える。
（館内履きでは，黄線（テープ）で囲まれている内側には入らない。各自の上着等は，準備室内右側のロッカーへ）② 館内履きを脱いで，青いスノコにのり，準備室手前左側の館内履き用下駄箱に入れる。
③ 靴箱上部に置いてあるキャップ着用。
④ 青いスノコを渡り，青いスノコ上で，手や足下を消毒用アルコールで噴霧して消毒後，手袋・マスク着用。
⑤ SPF 区域手前右側の扉付き靴箱内にある青色サンダルを，黄線内側においてからはき，指紋照合して入室。
（外部からものを持ち込む場合は，よくアルコール消毒すること）⑥ 各飼育室の前室で，青衣を脱ぎ，飼育室内専用黄衣に着替える。
（このとき，青衣と黄衣は接触不可）⑦ 消毒用イソプロパノールを，手袋・足に噴霧。
⑧ 入室時，飼育室内の専用赤色サンダルに履き替える。
注意点●

直近の入浴後に，医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施以外の動物（特に，マウス，ラット，ハムスターなど）と接触した場合，入室は禁止。入浴・着替の後，入室してください。また，他施設・研究室のコンベなどで，感染の恐れがある実験動物（齧歯類）と接触した場合は，１週間入室禁止。感染事故が発生した場合，莫大な損害が，利用者全体に及ばされる可能性があります。充分に注意を払ってください。

●

機器等を持ち込む場合は，施設教職員に相談してください。

6-3-3 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設飼育室での作業の注意点
ラックの使用●

ラック前面のアクリル扉は，ケージの出し入れの後は，必ず，閉めてください。
（ラック背部
穴から吹き出す清浄空気の流れが，開放されたところに，偏ってしまうため）

ケージの取扱い●

ケージは，床に直接，置かず，作業台に置くこと

2222.03.29
ver.1.9●

ケージのフタは，金具部分で，ケージ本体と固定されるように取り付けること。
（フタの取り付けが不完全な場合，マウスが逃亡することがある）●

洗浄済みケージは，ラック上部に少数置いてあるものは，使用可．ケージが足りない場合は，滅菌済み器材保管室（メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施遺伝子改変マウス飼育
室２）から，各飼育室へ持ち込む．飼育ケージを増やす場合，週１回のケージ交換以外に使用する場合は，使用したケージ数を専用のノートへ記入すること（30 円/ケージ）。ただし，導入室や洗浄室へ入室した後での機材保管室への立ち入りは，不可です。どうしても必要な場合は，施設職員に相談してください。

●

新しいケージをラック内へ設置する場合は，給水ノズルがあること，およびノズルから水が出ることを必ず確認してから，ラック内の棚にケージを置き，ノズルがケージ内へ挿入されたことを確認してください。ケージの増減は，入口ホワイトボードへ記入。

●

ケージ位置を移動する，または，ケージの使用を終了する場合は，使用済み給水ノズルを取り外し，前室流し台のカゴへ入れてください。

●

エサは，各飼育室作業台下に設置しているエサ箱に保管してある。無くなった場合は，職員に連絡，または，入口ホワイトボードへ記入。その他，アルコール・手袋等の備品についても同様です。

●

飼育室内で，tail cut などを長時間しない．
（短時間は可．長時間の時は前室で．
）●照明点灯時間は，5:00-19:00 の間。前室照明スイッチはタイマーに優先するので，消し忘れ注意。作業は，照明点灯時間に行い消灯後の作業は原則禁止。例外的に止むを得ず消灯後に入室する場合は，事故防止のため前室にある懐中電灯を用いるか，前室の照明スイッチにより一部点灯して入室し，作業後速やかに消灯する。

前室での作業●

tail cut・採血などを，前室で行う場合は，青衣に着替えて行う。
（黄衣の使用は，飼育室内のみ）●

備品等は飼育室間で移動しないこと。

●

前室可動キャビネット内のキムタオル，キムワイプ，ビニール袋，カード，マジック，ビニールテープ，耳タグ取付け用ペンチ（タグは利用者ごとに用意してください）等は，利用可
能。外部から持込みは，出来るだけ避け，チューブ等はマウス飼育室専用とすること。

6-3-4 医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設飼育室での実験終了後の作業① 作業台を前室流しにある雑巾で拭いた後，消毒用アルコールで滅菌。
② 各飼育スペース内置いてあるホウキ，チリトリで床に散乱にした床敷や糞を掃除。
③ 使用済みケージは，各飼育スペース前の所定の入れ物に入れる。
④ 実験区域専用青色サンダルを下駄箱へ戻し，スノコを渡って，館内履き用下駄箱で，館内履きを黄線枠外で履き替える。

23

22.03.29
ver.1.9⑤ 実験に伴うマウス死体は準備室冷凍庫へ保管する。
⑥ 使い捨て手袋，キャップ，マウスなどを廃棄して，青衣を所定の場所にいれる。
注意点●

マウス死体に金属製タグなどの不燃物がついている場合は，準備室で取り外しておく。

●

洗浄室へ入る場合は，専用のサンダル（黄土色）に履き替える。

●

実験区域専用青色実験衣は，ロッカーへは戻さないこと。

●

実験のため，マウスを SPF 実験区域外へ持ち出す場合は，当該マウスの，メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施 SPF 実験区域内への再持込は厳禁です。

●

マウスの SPF 実験区域外への持ち出しのために，飼育用ケージは利用しないでください。前室に，滅菌した，持ち出し用小ケージを用意していますので，これを利用するか，各自で用意してください。小ケージを利用した場合は必ず，洗浄してから，所定の場所へ返却してください。

6-3-5 各飼育室間の移動に関して（上位・下位）
感染拡大防止の観点から，複数の推進研究所遺伝子実験施飼育室間での作業は，必要最低限にしてください。ただし，以下に示す，清浄度の下位の部屋から２段階以上の上位の部屋に入り直す場合（例：
導入室で，作業後に，一般飼育室前室へ入ろうとする場合）は，着衣の交換ならびに入浴してから，入室してください。

上位

下位

6-4

１

滅菌済み器材保管室，各一般飼育室飼育スペース

２

一般飼育室前室，胚操作室

３

導入室前室

４

導入室飼育スペース

５

洗浄・滅菌室

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センターSPF 実験区域内へのマウスの搬入・搬出
6-4-1 ブリーダーからの搬入
ブリーダーからの搬入マウスは，SPF グレードものに限ります。現時点（平成 19 年 3 月）では，注
文は，各利用者が個別に行ってください。搬入場所は，医学部遺伝子実験施設と指定してください。搬入作業の都合上，搬入日，マウスの種類，雌雄，週齢，匹数，ブリーダー名を前日までに，メール（Email: iden@mws.id.yamagata-u.ac.jp）で連絡してください。

6-4-2 他施設からの搬入
メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施 SPF 実験区域導入室で受入が可能です。ただし，所24

22.03.29
ver.1.9
定の手続き等が必要となります。前もって，施設教職員と相談してください。

6-4-3 他施設への搬出所定の手続き等が必要となります。前もって，施設教職員と相談してください。

6-5

緊急時の対応異常事態・機器の不調等を発見した場合は，必ず施設教職員に知らせてください。全館放送（＊90）
か，内線 5902 を利用してください。教職員不在の場合，ホワイトボードに，その旨，記入してください。緊急を要する場合は，防災センター（内線 5110）へ連絡してください。

6-6

メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センターマウス受託作製

医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設では，研究支援活動として，トランスジェ
ニックマウスの受託作製を行っています(担当：木村,中島)。詳しい内容については，中島 (内線 5901；
nakajima@med.id.yamagata-u.ac.jp）まで，お問い合わせください。トランスジーンコンストラクトや遺伝子破壊マウスの作製に関するご相談も受け付けます。ゲノム編集(Crispr/Cas9)による遺伝子改変マウス（ゲノム編集マウス）の受託作製も開始しました(担当者：木村,中島; 連絡先: 中島 内線 5901；
nakajima@med.id.yamagata-u.ac.jp）。山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施
設 ゲ ノ ム の Crispr/Cas9 を 用 い た 編 集 マ ウ ス 受 託 作 製 の 依 頼 手 順 に つ い て は こ ち ら（https://www.id.yamagata-u.ac.jp/Gen/syorui/gene.edit.tebiki.pdf）を参照ください。

6-6-1 依頼者側の必要な準備
トランスジーンの構築，ベクター切り離しに必要な制限サイトの確認，トランスジーン精製に必要なプラスミドの調製（〜100µg）。トランスジーン陽性個体識別のための，PCR スクリーニング条件の確立。PCR スクリーニングは，インジェクション後，6 週間の猶予がありますが，プラスミド調製までの準備が出来れば，施設側でのトランスジーン精製後，インジェクションが可能になります。

6-6-2 山形大学医学部メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験施設受託業務内容①

トランスジーンの調製（プラスミド〜100 µg を依頼者より預かり，施設側で，ベクター部分からのトランスジーンの切り出しおよび精製を行います）②

BDF1 同士の交配で得られる受精卵（1 回のインジェクションで〜200 個使用）に対し，精製済みト

ランスジーン DNA を顕微鏡下でインジェクション（2〜3 回）および偽妊娠マウスへの卵管移植③

卵管移植により出生後 3 週前後のマウスからのスクリーニング用尾部の回収および依頼者への送付（依頼者は，PCR 等により，トランスジーン陽性の個体をスクリーニング）④

出生後 6 週間まで飼育。これ以降の施設での飼育は，飼育経費を別途負担して頂きます。

⑤

移送が必要な場合は，マウスの移送箱へ梱包等の作業および移送業者への引渡（移送経費は依頼

25

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ver.1.9
者の負担になります）

26

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ver.1.9
6-6-3 トランスジェニックマウスを用いた研究例について
１．cDNA を発現させる場合
l

組織特異的過剰発現による，生体内での遺伝子機能の解析

l

ドミナントネガティブ体の組織特異的過剰発現による遺伝子機能破壊

l遺伝病における変異体の発現等による病態モデルの確立

２．KO マウスの解析に用いる場合
l

当該遺伝子の組織特異的発現による組織特異的レスキューl

Cre-loxP システムにおける組織特異的 Cre リコンビナーゼの発現による組織特異的遺伝子破壊l

tet-ON/OFF システムなどもトランスジェニックマウスで応用されています。

３．レポーター遺伝子（GFP, LacZ など）を発現させる場合
l

組織特異的プロモーターを利用した特殊細胞などへのマーキング（GFP によるマーキングにより，フローサイトメーターによる解析や分離を可能にする）

l

組織特異的転写制御シス因子の同定（細胞株等の利用では不可能な組織や細胞の場合に特に有用）l

GFP を利用した遺伝子発現の，個体内での視覚化

l

毒素遺伝子（ジフテリアトキシンなど）を組織特異的に発現させて，特定の組織のみを破壊するのに用いる場合もあります。

KO マウス技術と比較した場合，トランスジェニックマウス技術の利点は，その簡便性にあります。
作製には，最短で２ヶ月程度で済みますし，ES 細胞や特殊血清など，作製効率を左右する希少な材料を必要としません。そのため，費用も比較的安価となります。トランスジーンのコンストラクション
も，KO 技術と比べますと，制約が遙かに少なく，工程数も僅かで済む場合がほとんどです。任意のプ
ロモーターに，発現させる任意の cDNA を連結させることが基本デザインとなります（ただし，細胞レベルで転写活性化能があるプロモーターでも，マウス組織内で発現しない場合があり，プロモーターの選択には注意を払う必要があります）。これらの特徴から，KO マウスと異なり，比較的多種類のトラ
ンスジェニックマウスを容易に実験に用いることが出来ます。
欠点としては，ゲノムへの挿入様式がランダムであるため，挿入部位の周囲の影響を受けやすく，ゲ
ノムへの挿入が確認されてもトランスジーンが発現しなかったり，異所性発現が認められる場合があることが挙げられます。この点については，複数のラインで，同様の発現や表現型を確認することで解決できます。そのため，同一トランスジーンで，３〜４ラインは作製する必要があります。

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