豚病会報

No.
80 2022

17

原著論文

i
nobacill
uspl
eur
opneumoniae（App）血清型２の関与が示唆される
豚の Act縦隔の多発性肉芽腫性リンパ節炎
3)
井上諒子1)、中島芳恵1)、松尾保雄1)、山口智洋1)、芝原友幸2.

（1)長崎県諫早食肉衛生検査所、2)農研機構・動物衛生研究部門

病態研究領域、3)

大阪府大・大学院・生命環境科学研究科）

I
noue,R.
,Nakashima,Y.
,Matsuo,Y.
,Yamaguchi,T.andShi
bahara,T.(2022)
.
Mul
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pl
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anul
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ymphade
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uspleuropneumoniaeserot
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Proc.Jpn.Pi
gVet.So
c.80,1721.

Abstractに搬入された肥育豚において、と畜検査で豚胸膜肺炎

Multi
ple granuloma
to
us lympha
deni
tis was de-が高率に認められていた。これらの結果から、特徴的

tectedint
heme
diastinum ofslaughteredpi
ga
ged6

な組織所見を示した豚の肉芽腫性炎に、App血清型２mont
hs.Ma
croscopically,themasswa
senca
psulated,が関与している可能性が高いと考えられた。

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査、豚、肉芽腫性リンパ節炎

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i-Actinobacillusp
leuropneumoniae(App)【はじめに】

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s.InActinobacill
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leuropneumoniae（App）は、パスツレ

thefarm,porci
nepleuropneumoniahadoccurredin

ラ科、アクチノバシラス属の細菌で、豚に線維素性胸t
hepasta
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umoniawitht
heAppwa
soccasion-

膜肺炎を主徴とする豚胸膜肺炎を起こす9)。Appは、

allyconfirme
din aslaughterhousetestbefor
ethis

球桿状を呈するグラム陰性の小桿菌であり、V-因子pig broughttot
he farm.The
se datai
ndicatethat

NADの要求性により１型と２型の２つの生物型に分App serot
ype2would bea
ssociated wit
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けられる9)。生物型１による疾病が問題となることが

gr
anul
omatouslymphadeni
ti
soft
hepi
g.

多く、本菌は１～１９の血清型に型別される7)。国内では血清型２が多く、次いで血清型１と血清型５が多く分

Key word:Actinobacill
usple
uropneumoniae,meati
n-離されている2)。Appに汚染された豚群では、不顕性

specti
on,pig,
gr
anul
omat
ousl
ymphadeni
tis

感染豚が数多く存在しキャリアーとなる。不顕性感染
豚は、ストレスや他の病原体の感染が引き金となり発要約病する場合や、発病しないまま感染源となり、一度汚と畜場に搬入された約６カ月齢の肥育豚において、染された農場の清浄化を妨げる要因となるため、疫学解体検査時に縦隔に腫瘤が認められた。腫瘤は、肉眼上重要である9)。と畜場搬入豚における Appが原因の的に、被嚢化された乳白色充実性で、部分的に黄土色病変は、豚胸膜肺炎以外にも報告があり、そのうち、を呈していた。組織学的に、グラム陰性桿菌を伴った5)肉芽腫を形成する病変としては、肉芽腫性肺炎4,、肉アステロイド体を形成する、多発性肉芽腫性リンパ節芽腫性肝炎5)、肉芽腫性リンパ節炎6)の報告があるが、炎を認めた。当該桿菌は、免疫組織化学的検査によっその報告数は限られている。また、肉芽腫を形成したて、抗 Ac
tinobacill
usple
uropneumoniae（App）血清型

原因菌は、いずれも App血清型２と同定されている4-6)。

２抗体に陽性反応を示した。発生農場において、過去今回、長崎県内のと畜場に搬入された肥育豚に、縦隔に豚胸膜肺炎が発生していた。また、本症例の導入前の白色腫瘤が認められた。と畜検査では、縦隔に腫瘤

18ProcJpn Pi
gVetSocNo.
80 2022やリンパ節の腫大が認められ、豚の白血病や非定型抗子特異的 PCR8)を実施した。FFPEからの DNA抽出酸菌症が疑われた場合は、と体を保留し精密検査を行は、DEX PAT（TakaraBio,Shiga,Japan）を用いて10)う 。本症例について、精密検査を実施したところ、行った。

App血清型２の関与が示唆される縦隔の多発性肉芽腫性リンパ節炎が認められたので概要を報告する。

＜疫学調査＞
当該農場の過去の豚胸膜肺炎の発生状況及び App【発生状況】の分離歴、Appワクチンの使用状況、飼養形態につい

２０
２１年４月、長崎県内のと畜場に搬入された約６カて、管轄家畜保健衛生所へ聞き取り調査を行った。ま

月齢の肥育豚のうち、去勢雄１頭に、解体後検査で、た、長崎県の食肉検査システムに記録された検査成績

縦隔に白色腫瘤を認めた。本症例は、縦隔型の豚リンから、当該農場の豚胸膜肺炎の発生率を求めた。食肉

パ性白血病を疑い保留となった。なお、本症例は、解検査システムには、肺葉に充出血や肝変化が認められ体前検査において異常は認められず、健康畜として解たものを「豚胸膜肺炎出血型」、膿瘍や肉芽腫の形成に体された。

よる結節性の病変が認められたものを「豚胸膜肺炎膿瘍型」として入力し、出血型と膿瘍型の合計を「豚胸【材料及び方法】

膜肺炎」として算した。

＜病理組織学的検査＞
腫瘤部、主要臓器（心臓、肝臓、脾臓、腎臓）及びリンパ節（内腸骨、浅頚、腎門）を採取し、１０％中性【結果】＜肉眼所見＞

緩衝ホルマリン溶液で室温固定後、パラフィン包埋切

解体後の内臓検査において、縦隔部に直径５～１５cm片（厚さ約３ mm）を作製した。ヘマトキシリン・エオ大の腫瘤が連なるように認められた（図１）。腫瘤は硬ジン染色（HE染色）及びグラム染色を行い、顕微鏡結感があり、被嚢化されていた（図２）。割面は、乳白下で観察した。

色充実性、平滑で光沢があり、部分的に黄土色を呈していた（図３）。肺には胸膜炎が認められたが、肺門リ＜免疫組織化学的検査＞
ホルマリン固定パラフィン包埋切片（厚さ約３ mm）

ンパ節に著変はなかった。脾臓はやや腫大していた。
その他の臓器及びリンパ節に著変は認められなかった。

について、抗 App血清型１、２及び５ａウサギポリクローナル抗体を一次抗体として用いた免疫染色を実施
3,6)＜病理組織学的所見＞

し た 。３ ％ 過 酸 化 水 素 加 メ タ ノ ー ル で 処 理 後、腫瘤の辺縁には、残存するリンパ組織が認められた

０．
１％アクチナーゼ E溶液で３７℃、２０分間抗原賦活化（図４）。腫瘤は、リンパ球、形質細胞、好中球、マクを行った。一次抗体は、抗体希釈液（S３０２２，Dako

ロファージが巣状に浸潤し、その周囲を線維芽細胞がNo
rthAmericaInc.
,Carpinteria,CA,USA）
で各々５１２、取り囲むように増殖する肉芽腫性炎が主体を成してい４，０９６、２，０４８倍に希釈し、市販キット（HistofineSim-た（図５－ａ）。ラングハンス型巨細胞や好酸球の浸潤

pleSt
ainMAXPO（MULTI）、ニチレイ、東京）の添もみられた（図６）。ところどころにスプレンドール・付文書に従って反応させた。発色は AEC基質（Sim-ヘップリ現象によるアステロイド体が形成され、そのpleStainAEC溶液、ニチレイ、東京）を用い、室温中央にはしばしば菌塊が認められた（図５－ａ）。菌塊で５分間反応させたのち、ヘマトキシリンで対比染色は、グラム染色でグラム陰性桿菌が認められた（図５した。陰性対照は、一次抗体として正常山羊血清を用－ｂ）。その他の臓器について、特記すべき所見は認めいた。陽性対照として App血清型１、２、５ａ、５ｂられなかった。

及び７抗原を含むパラフィンブロックを用いた。
＜免疫組織化学的所見＞＜分子生物学的検査＞
腫瘤部のホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）
ブロックからの抽出 DNAについて、App血清型１、２、５、７、１５、omlA遺伝子1)及び A.porcitonsillarum遺伝

アステロイド体の中央に認められたグラム陰性桿菌に一致して、抗 App血清型２抗体に対する陽性反応のみが認められた（図５－ｃ）
。

豚病会報

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80 202219

図１

解体後の内臓。縦隔部に直径５～１５cm大の白色腫瘤（矢頭）が複数個認められる。

図２

白色腫瘤の割面。乳白色充実性、平滑で光沢がある。硬結感があり、被嚢化される。

図３

白色腫瘤のホルマリン固定後の割面。部分的に黄土色を呈する。

図４腫瘤。辺縁に、残存するリンパ組織が認められる。HE染色。（Bar＝５０μm）

図５－ａ 腫瘤。アステロイド体を伴う肉芽腫性炎がみられる。HE染色。（Bar＝５０μm）
図５－ｂ ａと同視野。グラム陰性桿菌がアステロイド体の中央にみられる。グラム染色。（Bar＝２０μm）
図５－ｃ ａと同視野。グラム陰性桿菌は抗 App血清型２抗体に陽性を示す。免疫染色。
（Bar＝２０μm）

20

Pr
ocJpn PigVetSocNo.
80 2022

図６

腫瘤。ラングハンス型巨細胞や好酸球の浸潤がみられる。HE染色。
（Bar＝５０μm）
ᑖᯂ஑ᆈ๢Ⴭཡ༇৅ে૨ ਫ਼ਪা

図７

当該農場における、２０２０年４月から２０２１年９月の豚胸膜肺炎の発生状況を発生率で示した。

＜分子生物学的検査＞
腫瘤部の FFPEブロックからの抽出 DNAを用いたApp血清型１、２、５、７、１５、oml
A遺伝子及び A.

１
２月１０．
６％であった（図７）。本症例がと畜されたのは２０２１年４月上旬で、その月の豚胸膜肺炎の発生率は１．
０％であった（図７）。

porcitonsillarum遺伝子特異的 PCRにおいて、増幅産物は確認できなかった。

【考察】
以上の結果から、腫瘤を App血清型２の関与が示唆＜疫学調査結果＞される縦隔の多発性肉芽腫性リンパ節炎と診断した。

当該農場は肥育農場で、子豚を９０日齢で導入してい発生部位は、位置関係から、気管気管支リンパ節や後た。当該農場では、Appワクチンは使用されておらず、縦隔リンパ節と考えた。リンパ節における App血清

２０１０年１月、２０１２年１１月、２０１３年３月及び９月に豚胸型２が関与する肉芽腫性炎については、Ohbaらが膜肺炎が発生しており、Appが分離されたが、型別は２０１０年に初めて報告しているが6)、その他の報告は見実施されていなかった。２０２０年４月から２０２１年９月の当たらない。Ohbaらの報告によると、１５１，６５３頭のとと畜検査では、豚胸膜肺炎の発生率が２０２０年１１月まで畜場搬入豚を調査したところ、６頭の去勢雄に App血は２．
３～６．
５％で推移していたが、１２月には１９．
４％に増清型２による肉芽腫性リンパ節炎が認められている。

加していた。そのうち、膿瘍型の発生率は、
１１月５．
３％、これらのリンパ節は直径２～８cmに腫大し、被嚢化さ

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れており、割面には黄白色の病巣がみられた。病理組
織学的に、腫大リンパ節には、多数の好中球、好酸球、【利益相反状態の有無】
著者は開示すべき利益相反はない。

類上皮細胞、異物型巨細胞及び膠原線維で構成される肉芽腫が形成され、菌塊周囲にはアステロイド体がみ【引用文献】られた。アステロイド体の中央には、免疫組織化学的

１）I
toH,etal.
(2015)Develo
pme
nto
famul
ti
plexpo-に App抗原の分布が確認された。著者らが経験した

lyme
rasec
hainreactionmethodforc
pstypingof

本症例は、去勢雄であること、肉眼所見、組織所見及Actinobacilluspleuropneumoniaeserovars1,2,5,7,

び免疫組織化学的所見が、Ohbaらの報告と合致して

and15.
JpnAgricResQ,
49:277280.

いた。生材料が入手できなかったことから、FFPEブ２）伊藤博哉（２０２１） Ac
tinobacilluspleuropneumoniae

ロックを材料に PCRを行ったが、App特異遺伝子はの生物型および血清型について－アップデート検出されなかった。検出されなかった理由としては、

２０２１－，北獣会誌，６５：１４９１５６．

１）抽出された Appの DNA量が少なかった、２）
ホルマ３）OhbaT,etal.(2007)Granulomatouslymphadeni-

リン固定の過程で DNAが断片化した、３）増幅する遺tisa
ndpne
umoni
aassociatedwi
thAc
tinobacillus

伝子サイズが大きかった、４）Appではない可能性のporcitonsillarum inaslaught
erpi
g.
JCompPathol,3)４つが考えられた。４つ目について、Ohbaらは 、

137:
8286.

Appと溶血性と生化学的性状が類似する Ac
tinobacil-４）OhbaT,etal.(2009)Prevalenceo
fgranulo
ma-l
usporcitonsi
llarumが、肉芽腫性リンパ節炎を誘発する

to
uspl
euro
pne
umo
ni
aasso
ciate
d wi
th Actinoba-可能性があること、免疫組織化学染色で App血清型２cill
usp
leuro
pne
umo
ni
aeserot
ype 2 inslaught
er

及び１２と交差性があることを報告している。しかし、

pi
gs.
JVetMedSc
i,
71:10891092.

その後、著者らは免疫組織化学染色の条件を検討し、

５）大場剛実ら（２００９）と畜場搬入豚の Ac
tinobacillus

今回実施した条件で抗 App血清型２は App血清型２pleuropneumoniae2型による多発性肉芽腫肝炎．に特異的に反応し、App血清型１、５ａ、５ｂ、６、７、

豚病会報，５４：２７．

１１、１２、１５、A.por
citonsillarum、A.minor及び A.suis６）OhbaT,etal.(2010)Granulomatousl
ympha
deni-には反応しないことを明らかにしている6)。また、A.

tisassociatedwithActinobacilluspleuropneumoni
aeporcito
nsillarum遺伝子特異的 PCRにおいて、増幅産物

serot
ype2i
nslaughterba
rrows.CanVetJ,51:が確認されなかったことから、原因菌が A.porcito
nsilla-733737.

rumである可能性は低いと考えられた。更に、本症例

７）Stringe
rOW,etal.(2021)Proposalo
fAc
tinobacil-

は、２０２１年１月上旬に肥育農場へ導入され、その少し

luspleuropneumo
niaeserovar19,and reformula-前である２０２０年１１～１２月に、豚胸膜肺炎の慢性感染豚

tionofprevi
ous multi
plex PCRs forc
apsule-が多数認められたことから、キャリアーとなった不顕

specifictypi
ngo
fallknownserovars.
Vet.
Micro-9)性感染豚から Appに感染した と推察される。また、当該農場で過去に Appが分離されていることから、

biol,
255:
109021.
８）To
npi
takW,etal.
(2007)Prevalenceo
f“Actinoba-App血清型２に起因した、縦隔の多発性肉芽腫性リンcill
uspor
ci
to
nsillarum”in porci
netonsilsa
nd de-パ節炎である可能性が高いと考えられた。

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exPCRdi
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i
ati
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t
we
en
“Acti
nobacill
uspor
ci
to
nsillarum”and

【謝辞】

Acti
nobacill
us pleurop
neumoniae. Vet Microbiol,

本症例の免疫組織化学的検索にご協力いただいた千
葉県中央家畜保健衛生所島田果歩先生、福島県中央家畜保健衛生所

岩永海空也先生、疫学調査にご協力い

ただいた、長崎県諫早食肉衛生検査所国見支所及び長122:157165.
９）山本孝史（１９９９）豚胸膜肺炎.山本孝史ら編
病学

第４版，p
３
６２３６７，近代出版，東京．

１０）全国食肉衛生検査所協議会（２０１１）と畜検査．全

崎県県南家畜保健衛生所職員の皆様に深謝いたします。

国食肉衛生検査所協議会編

また、本報告をまとめるにあたり、ご助言いただいた

ニュアル，p１
２７５，中央法規出版，東京．

岐阜大学応用生物科学部共同獣医学科の酒井洋樹教授に感謝いたします。

豚

新・食肉衛生検査マ