ImmunoAssist MG-PP Reは、ピロリン酸マグネシウムを主成分とするセラミックスタイプの分離精製剤です。血清や腹水、培養上清などから簡単な操作で純度良くIgMやIgGを精製できます。

特徴
簡単な分離操作幅広い分離対象

夾雑タンパク質を含む試料から粗精製することなく使用できます

動物種に関わりなく精製できます※抗体の性質によっては保持が弱い場合があります

抗体活性の保持デリケートな抗体をマイルドな中性条件下で精製できます

優れた耐久性

セラミックスタイプの素材であり、アルカリ洗浄やオートクレーブ滅菌が可能です

高回収率と精製能力

非特異的な吸着はなく、IgMやIgGはほぼ定量的に回収できますImmunoAssist MG‐PP Reは物理化学的に安定なピロリン酸マグネシウムを主成分とする多孔性球状粒子のセラミックスタイプの担体です。有機高分子系材料にみられる膨潤収縮は無く、取扱いも簡単です。関東化学では本品の物理的性状がIgMやIgG等の分離剤として優れた特性を示すことを見出し、分離精製剤として製品化しました。
IgMやIgGは静電的な相互作用によりImmunoAssist MG-PP Re に保持されます。イオン強度の異なる緩衝液を通液することで目的物を容易に回収することが可能です。

無血清培養上清からのマウスIgM抗体の精製実験例（スピンカラム法）（データ提供：国立研究開発法人 理化学研究所 脳科学総合研究センター 神経膜研究チーム 平林義雄様、長塚靖子様のご厚意による）無血清培養上清50 mLに対して0.2 gのImmunoAssist MG-PP Reを加え、必要に応じて500 mM

1リン酸緩衝液（pH 6.6)を加えてpHを6.6前後に調整しローテーターで一晩混和する。

◀ピロリン酸マグネシウム■使用緩衝液組成
緩衝液

対象調製方法

緩衝液１：10 mMリン酸緩衝液、pH 6.8

IgG

10 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と、10 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。
リン酸緩衝液、pH6.8

緩衝液2：300 mM 塩化ナトリウム溶液,
10 mM リン酸緩衝液、pH 6.8

IgM
IgG

300 mM 塩化ナトリウム溶液, 10 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と、300 mM塩化ナトリウム溶液, 10 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。

緩衝液3：300 mM リン酸緩衝液、pH 6.8

IgM
IgG

300 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と300 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。

2

ImmunoAssist MG-PP Re沈殿を回収し、10 mM リン酸緩衝液(pH 6.6)で懸濁した

3

10 mM リン酸緩衝液 (pH 6.6)1 mLで5回wash(ﬂow through画分、1,200 rpm, 2分間遠心分離）
し、4300 mM リン酸緩衝液(pH 7.1)1 mLで5回elute(IgM画分、1,200 rpm,2分遠心）し、ImmunoAssist MG-PP Reスラリーを空のスピンカラム（例：Bed Volume 1.2 ml）に充填する。

溶出液（フラクションナンバー：1〜5）を回収する。

操作手順フローチャート

溶出画分確認A280

BCA法による溶出画分のタンパク質量比較
0.35

3.500.30

3.00

0.25

2.500.20

2.000.15● IgGの分離精製

血清・腹水培養上清

緩衝液
2緩衝液
31.00

0.05

0.50

123456789100.00

12

フラクションナンバー

血清・腹水培養上清

不溶分除去
pH・イオン強度調整

1.50

0.100.00● IgMの分離精製

ELISA法による溶出画分のIgM活性比較

A415

精製対象の溶出夾雑物の溶出

試料の負荷

カラムの初期化

イオン強度調整

不溶分除去

操作方法の概略（オープンカラム法）

溶出液（フラクションナンバー：6〜10）を回収する。

緩衝液
1緩衝液
2

不溶分除去
pH・イオン強度調整

345678

フラクションナンバー
平均収量：1.5 mg IgM/ 100 mL

分離精製が難しいIgMをマイルドな中性条件下で活性を保持したまま精製できます。
夾雑タンパク質
IgG
IgM

夾雑タンパク質
IgG

夾雑タンパク質、IgGの溶出

IgMの溶出IgM

夾雑タンパク質の溶出

IgGの溶出910

ImmunoAssist MG‐PP Reは物理化学的に安定なピロリン酸マグネシウムを主成分とする多孔性球状粒子のセラミックスタイプの担体です。有機高分子系材料にみられる膨潤収縮は無く、取扱いも簡単です。関東化学では本品の物理的性状がIgMやIgG等の分離剤として優れた特性を示すことを見出し、分離精製剤として製品化しました。
IgMやIgGは静電的な相互作用によりImmunoAssist MG-PP Re に保持されます。イオン強度の異なる緩衝液を通液することで目的物を容易に回収することが可能です。

無血清培養上清からのマウスIgM抗体の精製実験例（スピンカラム法）（データ提供：国立研究開発法人 理化学研究所 脳科学総合研究センター 神経膜研究チーム 平林義雄様、長塚靖子様のご厚意による）無血清培養上清50 mLに対して0.2 gのImmunoAssist MG-PP Reを加え、必要に応じて500 mM

1リン酸緩衝液（pH 6.6)を加えてpHを6.6前後に調整しローテーターで一晩混和する。

◀ピロリン酸マグネシウム■使用緩衝液組成
緩衝液

対象

調製方法

緩衝液１：10 mMリン酸緩衝液、pH 6.8

IgG

10 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と、10 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。
リン酸緩衝液、pH6.8

緩衝液2：300 mM 塩化ナトリウム溶液,
10 mM リン酸緩衝液、pH 6.8

IgM
IgG

300 mM 塩化ナトリウム溶液, 10 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と、300 mM塩化ナトリウム溶液, 10 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。

緩衝液3：300 mM リン酸緩衝液、pH 6.8

IgM
IgG

300 mM リン酸二水素ナトリウム溶液と300 mM リン酸水素二カリウム溶液を混合し、pHを6.8に調整します。

2

ImmunoAssist MG-PP Re沈殿を回収し、10 mM リン酸緩衝液(pH 6.6)で懸濁した

3

10 mM リン酸緩衝液 (pH 6.6)1 mLで5回wash(ﬂow through画分、1,200 rpm, 2分間遠心分離）し、

4

300 mM リン酸緩衝液(pH 7.1)1 mLで5回elute(IgM画分、1,200 rpm,2分遠心）し、ImmunoAssist MG-PP Reスラリーを空のスピンカラム（例：Bed Volume 1.2 ml）に充填する。

溶出液（フラクションナンバー：1〜5）を回収する。

操作手順フローチャート

溶出画分確認A280

BCA法による溶出画分のタンパク質量比較
0.35

3.50

0.30

3.00

0.25

2.500.20

2.000.15● IgGの分離精製

血清・腹水培養上清緩衝液
2緩衝液
31.00

0.050.50

123456789100.00

12

フラクションナンバー

血清・腹水培養上清

不溶分除去
pH・イオン強度調整

1.50

0.100.00● IgMの分離精製

ELISA法による溶出画分のIgM活性比較

A415

精製対象の溶出夾雑物の溶出試料の負荷

カラムの初期化

イオン強度調整

不溶分除去

操作方法の概略（オープンカラム法）

溶出液（フラクションナンバー：6〜10）を回収する。

緩衝液
1緩衝液
2

不溶分除去
pH・イオン強度調整

345678

フラクションナンバー
平均収量：1.5 mg IgM/ 100 mL

分離精製が難しいIgMをマイルドな中性条件下で活性を保持したまま精製できます。
夾雑タンパク質
IgG
IgM

夾雑タンパク質IgG

夾雑タンパク質、IgGの溶出IgMの溶出IgM

夾雑タンパク質の溶出IgGの溶出910仕様
平均粒径85 ‒ 105 μm

BET法

比表面積8 ‒ 18 m2/g

乾式法

沈降容積

2.0 ‒ 2.5 mL/g

湿式法

2.4 ‒ 2.9 mL/g

●ImmunoAssist MG-PP Re γグロブリン保持量評価時のLC分析チャート
カ1.50

カラムサイズ ：Φ1 ㎝×10 ㎝

30.0

緩 衝 液 3 ：300 mM リン酸緩衝液、pH 6.820.0

検10.00.00

0.00
A280（UV)

ｍS/ｃｍ
06080

100minム ：本製品2 gを約10 mLの緩衝液1で懸濁40.0

1.000.50

ラ

緩 衝 液 1 ：10 mM リン酸緩衝液、pH 6.8
流

速 ：1.0 mL/min

試料 ：ウサギγグロブリン

出 ：UV（280 nm）

タイムプログラム
0-52 分：試料

52-80 分：緩衝液1 100 %80-95 分：緩衝液3 100 %95-125 分：緩衝液1 100 %120

保持量：14.1 ㎎/g

青線：UV 280 nmの吸光度、赤線：電気伝導度●様々な動物種のIgGの保持量比較
動物種

保持量（㎎/g）

動物種

保持量（㎎/g）

マウス

１８．７

ウシ

２７．１

ウサギ

１４．１

ウマ

１８．２

ラット
ヒト

１７．１
３９．２

ヒツジ

２７．２

吸着条件：10 mM リン酸緩衝液、pH 6.8保持されたIgGはいずれも緩衝液3（300 mM リン酸緩衝液、pH ６．８）で全量回収された※IgGの種類によってはImmuno Assist MG‐PP Reへの保持が弱い場合もあります

文献情報1）S. Inoue and N. Ohtaki, J. Chromatogr., 645 (1993) 57.
2）大瀧 伸之・井上 千也、分析化学, 44 (1995) 8753）大瀧 伸之・井上 千也、CHEMICAL TIMES, 165 (1997) 21

製品情報
製品番号

製品名

容量

希望価格

20352-33

ImmunoAssist MG-PP Re

25 g

37,000 円

20352-23

ImmunoAssist MG-PP Re

100 g

★

BBz -13(202301)