高 効率TAクローニングキット

TA-Enhancer Cloning Kit
製品概要
本品は、Tベクターとライゲーション用試薬を組み合わせたTAクローニング用キットです。ライゲーション用試薬は、ニッポン
ジーン独自のバッファー組成と10×Enhancer Solutionに含まれる「PprAタンパク質」によって、これまで効率が低いとされてきたTAクローニングを高効率に行うことができます。

特長

高効率 な

ライゲーションが可能
弊社独自のバッファー組成と10×Enhancer Solutionによって、TAクローニングを高効率に行うことができます。

ここが違う！ ~Enhancer Solution~
PprAタンパク質

DNA断片
200 nm

図1. PprAが二本鎖DNA末端に結合

Enhancer Solutionに含まれるPprAタンパ
ク質は、放射線抵抗性細菌 Deinococcus
radiodurans 由来のDNA修復促進活性を有するDNA結合タンパク質です。PprAは直鎖状二本鎖DNA末端を認識し、インサートとベクターをすばやく、効率よく連結させます。

ライゲーション反応後はそのまま形質転換可能
ケミカルコンピテントセルでの形質転換の場合はそのまま大腸菌の形質転換に使用することができます。

ライゲーション反応は30分間で完了30分間で十分なライゲーション効率が得られます。

資料提供：東洋大学 放射線微生物学研究室 鳴海先生

構成品

ベクターマップ

TA-Enhancer Cloning Kit（25回分）

構成品

容量 ※

pANT Vector（25 ng/μl）

45 μl

5×Ligation Mix

100 μl10×Enhancer Solution

50 μl

Control Insert DNA（10 ng/μl）

10 μl

保存温度 ： -20℃

※ 20 μl 反応系の場合〒930‐0834 富山市問屋町二丁目7番18号
TEL： 076‐451‐6548 FAX： 076‐451‐6547
URL： http://www.nippongene.com

本社 〒540-8605 大 阪 市 中 央 区 道 修 町 三 丁 目 1 番 2 号 TEL ：06-6203-3741 (代表)東京本店 〒103-0023 東京都中央区日本橋本町二丁目4番1号 TEL ：03-3270-8571 (代表)
フリーダイヤル

0120-052-099

フリーファックス

0120-052-806

KpnⅠ(429)
SmaⅠ（433）
EcoRⅠ（440）{HindⅢ（447)}
A PCR ProductA{BglⅡ(452)}
Bam HⅠ（457）
XbaⅠ（465）
SalⅠ（471）
PstⅠ（477）
HindⅢ（489)TA-Enhancer Cloning Kit

詳細情報はこちらから ▶ http://www.nippongene.com/siyaku/

プロトコール
1. インサートDNAの調製

おすすめ① Hot Start Gene Taq NT（Code No. 311-07523）等のTdT活性のあるPCR酵素を用いて目的の配列を増幅する。

①

ECOS TM Competent E. coli
＜ ECOS TM 6分間プロトコール*1＞② PCR反応液の一部をアガロースゲル電気泳動に供して、増幅産物の45 sec.

4. インサートチェック（コロニーPCR）
Gene RED PCR Mix Plus
① 以下の組成で反応液を調製する。

ATA

Amp r

おすすめTLac
Z⑦ プレーティング*1 ニッポンジーンのECOSTM Competent E. coli を用いると6分間の高速プロトコールが利用できます。
*2 形質転換に用いる反応液量はコンピテントセルの10%以下、ECOSTM Competent E. coliを使用する場合は5%以下にして下さい。

Ligation

1.8 μl
x μl
4 μl
2 μl
up to 20 μl⑥⑦ LBプレートに塗布し、37℃で16時間培養。

PCRProductT

Amp r

AA

① 以下の組成でライゲーション液を調製する。
pANT Vector (25 ng/μl）
PCR産物
5×Ligation Mix
10×Enhancer Solution
ddH2OVortex⑥ 1秒間ボルテックス
TpANTVector④ On ice 5 min.
⑤ Heat shock④ 氷上で5分間インキュベート⑤ 42℃で45秒間インキュベート

TA-Enhancer Cloning Kit③③ １秒間ボルテックス④ PCR産物の一部をddH2OまたはTE（pH8.0）で適した濃度に希釈する。

Lac
ZVortex② ①にライゲーション反応液を加える。*2てPCR産物の精製を行う。

2. ライゲーション② ECOS +DNATM

① 氷上でコンピテントセルを融解する。

確認を行い、ISOSPIN PCR Product（Code No.315-08001）等を用い本品

3. 形質転換② 爪楊枝でコロニーを軽く突き、反応液に懸濁する。
③ 以下の条件でPCRを行う。

② 16℃で30分間反応させる。

④ PCR終了後、各反応液をそのままアガロースゲルにアプライし、♦インサート量について電気泳動を行う。

（20 μl反応系：pANT Vector 45 ngの場合）

インサートサイズ

200 bp500 bp

1 kbp

3 kbp

インサート量（ng）

20 - 32

24 - 50

8 - 100

24 - 50

上記は、ニッポンジーンで様々な長さのインサートDNAをライゲーション、形質転換した結果、特定の条件で最も良い結果が得られたインサート量です。

実験例

Gene RED PCR Mix Plus（2×）
2×M13 Primer Mix

25 μl
25 μl

Total

50 μl

94℃ 3 min.
94℃ 20 sec.
55℃ 20 sec.
72℃ 10 sec./kbp

25 cycles

各鎖長のライゲーション効率

各社製品のプロトコールに従ってクローニングを行った。Taq DNA polymeraseで増幅したインサート長 200 bp, 500 bp, 1 kbp, 3 kbp, 5 kbpのPCR産物を用いて、16℃、30分間（A社：室温、60分間）のライゲーション反応を行った。反応後、ECOSTM Competent E. coli JM109へ形質転換（6分間プロトコール）
し、本品とA社製品のライゲーション効率を比較した。

TA-Enhancer Cloning Kit

A社製品

2500

2500

2000

2000

1500

1500

1000

1000

500

500

0200 bp 500 bp 1 kbp

3 kbp

5 kbp

インサートサイズ

0200 bp 500 bp 1 kbp

3 kbp

白コロニー
青コロニー
白コロニー率（%）

5 kbp

インサートサイズ

本品はA社製品と比較して、コロニー数および白コロニー率において優位性が認められた。
キット内容
Code No.
316-08271

製品名
TA-Enhancer Cloning Kit

容量

希望納入価格（税別）

25 回分￥23,000※ TA-Enhancer Cloning Kitは、国立研究開発法人 日本原子力研究開発機構が所有する特許のライセンスを受けて製造販売しております。

関連製品
Code No.

製品名

容量

希望納入価格（税別）

310-06236

ECOS Competent E.coli DH5α50μl×40 本￥40,000316-06233

ECOS Competent E.coli DH5α

100μl×20 本￥36,000

317-06246

ECOSTM Competent E.coli JM109

50μl×40 本￥40,000313-06243

ECOS Competent E.coli JM109

100μl×20 本￥36,000

311-07763

Gene RED PCR Mix Plus

96 回分

￥8,600

TMTMTM