TM
CloverDirecttRNA Reagents for Site-Directed Protein Functionalization

Catalogue 2013/04

目次
製品概要
CloverDirect TM 試薬について
CloverDirect TMを用いた非天然アミノ酸導入の原理
製品構成
実験手順
ご使用にあたっての注意点
製品リスト
ピンポイント蛍光標識 [for Fluorescence Labeling]
CloverDirect TM CR110-X-AF-tRNA
CloverDirect TM HiLyte FluorTM 488-AF-tRNA
CloverDirect TM TAMRA-X-AF-tRNA
CloverDirect TM ATTO 633-AF-tRNA
CloverDirect TM ATTO 655-X-AF-tRNA……………………………………………………2……………………………………………………4……………………………………………………6……………………………………………………7……………………………………………………8……………………………………………………9

ピンポイントビオチン標識 [for Biotin Labeling]
CloverDirect TM Biotin-AF-tRNA
CloverDirect TM Biotin-X-AF-tRNA
CloverDirect TM Biotin-XX-AF-tRNA
翻訳後修飾 [for Post-translational Modification]
CloverDirect TM Tyr(PO3H2)-tRNA
CloverDirect TM Lys(Me)-tRNA
CloverDirect TM Lys(Me2)-tRNA
CloverDirect TM Lys(Ac)-tRNA
非天然アミノ酸導入 [for Unnatural Mutagenesis]
PEG標識アミノ酸
CloverDirect TM PEG4-AF-tRNA
CloverDirect TM PEG8-AF-tRNA
CloverDirect TM PEG12-AF-tRNA
架橋アミノ酸CloverDirect TM BPA-tRNA
CloverDirect TM AcPhe-tRNA
光異性化アミノ酸
CloverDirect TM azoAla-tRNA
受託合成サービス
非天然アミノ酸tRNA受託合成サービス
非天然アミノ酸導入タンパク質の受託合成サービス……………………………………………………11

アプリケーション
ピンポイント標識タンパク質の発現例
ピンポイント標識タンパク質の使用例……………………………………………………12

参考文献
製品についてのお問い合わせ……………………………………………………141

製品概要[CloverDirect TM 試薬について]CloverDirect TM tRNA Reagents for Site-Directed Protein Functionalizationは、無細胞翻訳系を利用してタンパク質の指定した部位に非天然アミノ酸を導入するための試薬です。蛍光基、ビオチン、PEG鎖、架橋剤を側鎖に持つ非天然アミノ酸や、翻訳後修飾アミノ酸などが用意されています。アンバーコドンまたは4塩基コドンを組み込んだ遺伝子と本製品を無細胞翻訳系に加えるだけで、非天然アミノ酸導入タンパク質を短時間で効率よく合成することができます。
CloverDirect TM tRNA Reagents for Site-Directed Protein Functionalizationは、以下の4つに分類されます。
なおこの他に、ご希望の非天然アミノ酸を導入する受託サービスもあります。詳細はp.11をご覧下さい。

CloverDirectTM
tRNA Reagents for Site-Directed Protein Functionalization

ピンポイント蛍光標識
for Fluorescence Labeling

ピンポイントビオチン標識
for Biotin Labeling

機能性非天然アミノ酸導入
for Unnatural Mutagenesis

翻訳後修飾
for Post-Translational Modification

ピンポイント蛍光標識[ for Fluorescence Labeling ]化学標識法ではタンパク質中の指定した部位のアミノ酸のみを100%の効率で標識することは一般的に困難です。
CloverDirect TM tRNA Reagents for Site-Directed Fluorescence Labelingは、蛍光標識した非天然アミノ酸を指定した部位のみに定量的に導入できます。蛍光基として各種レーザー(488nm, 543nm, 633nm)に対応したものが選択できます。
ピンポイント標識法

NONHO-OTAG

HNNNOOOOOO

H 2NONH-N+NOO

H
NO

O

N
H-N+O

O

H
NO+AUC

CloverDirect TM 試薬
Template DNA

化学標識法

NOOONNOOO

O

NH2-ONH-O

O

O

N+N+H
N

N+NH2OO

ONH

N

NH2O-O

N

2O

O

化学標識試薬NH2

活性を維持した
標識タンパク質が得られる

指定した部位を100%の効率で標識+O

NH2N

標識が活性に影響を与える可能性がある

製品概要
ピンポイントビオチン標識[ for Biotin Labeling ]CloverDirect TM tRNA Reagents for Site-Directed Biotin Labelingは、ビオチン標識した非天然アミノ酸をタンパク質の指定した部位のみに定量的に導入できます。ビオチン標識タンパク質は、配向性を持たせて基板やビーズ表面にアビジンを介して固定化することができます。また、リンカー長の異なるものが選択できます。
ピンポイントビオチン標識タンパク質
SHNO

N
H

H
N
O

アビジンを介して固定化

HNOS

アビジンプレート

HNSNH

HN

OO

NH
HN

O

配向性を持たせて固定化できる
翻訳後修飾[for Post-Translational Modification]
特定部位のアミノ酸を翻訳後修飾(リン酸化、メチル化等)したタンパク質を得ることは一般的に容易ではありません。
CloverDirect TM tRNA Reagents for Site-Directed Post-Translational Modificationは、あらかじめ修飾されたアミノ酸を導入することで、指定した部位のアミノ酸を翻訳後修飾したタンパク質が合成できます。
HOO

OH
PO

OH
O P OH
OO

H2 NO

TAG

AUC

CloverDirect TM 試薬

指定した部位のアミノ酸を修飾化アミノ酸に置換できる

導入位置をTAGコドンで指定
機能性非天然アミノ酸導入[for Unnatural Mutagenesis]

側鎖に機能基を持つ非天然アミノ酸を導入することで、様々な人工機能タンパク質を設計・合成することができます。
CloverDirect TM tRNA Reagents for Site-Directed Unnatural Mutagenesisは、PEG鎖、架橋剤などの機能基を側鎖に持つ非天然アミノ酸を導入した人工機能タンパク質の合成を可能にします。
例) BPA (p-benzoyl-phenylalanine)OO

光
指定した部位へ導入

OH

光照射によって相互作用分子が架橋されるOOH

共有結合

光3製品概要[CloverDirect TMを用いた非天然アミノ酸導入の原理]
導入部位の指定は終止コドンであるUAGコドン(アンバーコドン)もしくはCGGGコドン(4塩基コドン)で行います。
CloverDirect TM tRNA Reagents for Site-Directed Protein Functionalizationに含まれる非天然アミノ酸-tRNAは、無細胞翻訳中でアンバーコドンもしくは4塩基コドンを読み取って、非天然アミノ酸に翻訳します。これにより、指定した部位に非天然アミノ酸の導入されたタンパク質が合成されます。
また、アンバーコドンと4塩基コドンを同時に使うことで、2種類の非天然アミノ酸をタンパク質に同時に導入することも可能ですので、FRET(蛍光共鳴エネルギー移動)を用いる実験などに利用できます。
[アンバーコドン用tRNAを用いる場合]
導入部位の指定は終止コドンの１つであるUAGコドン(アンバーコドン)で行います。
まず、UAGコドンを挿入または置換した遺伝子を構築します。 この遺伝子を、本製品の非天然アミノ酸-tRNAとともに無細胞翻訳系に加えると、tRNAがUAGコドンを読み取り、指定された位置に非天然アミノ酸が導入されます。この際、UAGコドンを終結因子が読み取った場合には、その時点でタンパク質合成が停止します。したがって、完全長タンパク質として合成されたものは、100%の効率で非天然アミノ酸が導入されていることになります。
なお、非天然アミノ酸の種類によっては、導入部位によりその導入効率が大きく異なるものがありますので、使用の際は、製品の詳細にてご確認下さい。

非天然アミノ酸を結合させた
アンバーサプレッサーtRNA（非天然アミノ酸-tRNAamber）

MetAla

リボソーム

Thr
His

Xaa

SerMet Ala

ThrXaa

His
Ser

Xaa
Arg

AUCmRNA+UCG

AUC

AGC

UAG CGU AAU

AsnGlnGlySer

UAG

非天然アミノ酸-tRNAamberがUAGコドンを読み取る。

非天然アミノ酸の導入部位にUAGコドンを組み込んだmRNAMet

Ala

TyrLys

指定した部位に非天然アミノ酸が導入されたタンパク質

Thr
His
Ser
Met AlaThr
His

Release factor I

UCG
AGC

Ser

UAG CGU AAU

UAGコドンが Release factor Iに読み取られる。

4

途中で合成が停止した
短いタンパク質製品概要[CGGGコドン用tRNAを用いる場合]
導入部位の指定はCGGGコドン(4塩基コドン)で行います。
まず、CGGGコドンを挿入または置換した遺伝子を構築します。 この遺伝子を、本製品の非天然アミノ酸-tRNAとともに無細胞翻訳系に加えると、tRNAがCGGGコドンを読み取り、指定された位置に非天然アミノ酸が導入されます。
この際、CGGコドンを認識するArg-tRNAが読み取った場合には、読み枠がずれて下流の終止コドンによりタンパク質合成が停止しますが、CGGコドンは使用頻度が低いコドン（マイナーコドン、レアコドン）のためにその可能性は低くなっています。
なお、非天然アミノ酸の種類によっては、導入部位によりその導入効率が大きく異なるものがありますので、使用の際は、製品の詳細にてご確認下さい。
4塩基アンチコドンCCCGを持ち非天然アミノ酸を結合させたtRNA（非天然アミノ酸-tRNAcccg）

MetAla

リボソーム

Thr

Met Ala

Thr

His

Xaa

Ser

Xaa

His
Ser

Xaa
Arg

mRNA

UCG
AGC

GCCC+CGGG

GCCC

Asn

CGGG CGU AAU

非天然アミノ酸-tRNAcccgがCGGGコドンを読み取る。

非天然アミノ酸の導入部位にCGGGコドンを組み込んだmRNAMet

GlyGln
Ser Tyr Lys

指定した部位に非天然アミノ酸が導入されたタンパク質

Ala
Thr

Arg

リボソーム

His
SerArgMet Ala

Thr
His

GCC

Ser

3塩基コドンCCGを持つ
天然アミノ酸-tRNA

UCG

GCC

AGC

CGG GUC UAA U

Arg
Val

UAA = Stop

CGGコドンが天然のアミノ酸-tRNAに翻訳される。 途中で合成が停止した→読み枠がずれて下流の終止コドンによりタン短いタンパク質パク質合成が停止する。

(注意) 標識のためにCGGGコドンをN末端領域(2～20残基程度)へ挿入、置換した場合、周辺配列によってはフレー
ムシフト等の影響により、標識されていないタンパク質が発現してしまう場合があります。CGGGを使用してN末端領域を標識する場合は、弊社が開発したオリジナルのペプチドタグ(ProX®tag)を用いることをお奨めします。

5'-AUG

UCU

AAA

CAA

AUC

GAA

GUA

AAC

CGGG

UCU

AAU

GAG

Met

Ser

Lys

Gln

Ile

Glu

Val

Asn

Xaa

Ser

Asn

Glu

ProX®tag-3'配列

5製品概要【製品構成】
・非天然アミノ酸-tRNA・tRNA buffer1本1本※ 1本につき300μLの翻訳反応が行えます。小スケールで反応を行う場合、非天然アミノ酸-tRNAを溶解して使用後、残りの溶液は、-80℃にて2ヵ月間保存できます。

【別途用意する試薬】(タンパク質発現)・無細胞翻訳系試薬(大腸菌由来)(例 : RYTS kit; プロテイン・エクスプレス, #CF002)
・導入部位にUAG(もしくはCGGG)コドンを持つ発現遺伝子 (環状DNA, 直鎖上, またはmRNA)(ご使用になる無細胞翻訳系に最適なベクターをご使用ください。)(精製・バッファー置換、濃縮)・精製用カラム(レジン), およびバッファー(例 : His SpinTrapTM kit; GEヘルスケアバイオサイエンス, #28-9321-71)
・Ultrafiltration Membrane, およびバッファー(例 : ULTRAFREE®-0.5 Centrifugal Filter Devices 10k; ミリポア, UFV5BC00)※ 他社製試薬キットの使用は一例です。ご使用目的に合わせて変更してください。

6製品概要【実験手順】
Step 1 タンパク質合成
tRNA bufferに溶解させた非天然アミノ酸-tRNAを、template DNAとともに無細胞翻訳系へ添加します。これにより、UAGもしくはCGGGで指定した部位へ非天然アミノ酸が導入されたタンパク質が合成されます。
Step 2 精製
反応液の中には無細胞翻訳系由来のタンパク質が混在し、またタンパク質に取り込まれなかった非天然アミノ酸も含まれていますが、His tagなどのタグを使用した精製によって、非天然アミノ酸導入タンパク質を単離することができます。
Step 3 バッファーの置換、濃縮限外ろ過(UF)カラムを用いることで、短時間でバッファー置換と濃縮を行うことできます。得られた非天然アミノ酸導入タンパク質は、そのまま実験に用いることができます。

1 hour

Step1
CloverDirect

Template DNA＊1 Cell-free translation
systemMix CloverDirect,
template DNA, and cellfree translation systemTranscription
mRNATranslation＊1: Amber codon (TAG) or fourbase codon (CGGG) is assigned
to unnatural amino acid (Xaa).

30 min

Step2
Purification
by affinity column
Wash

Elution30 min

Step3
Buffer exchange andconcentration byultrafiltration membraneIn
2 hours
Purified protein

Technical Overview of CloverDirect TM7

製品概要【ご使用にあたっての注意点】
1. タンパク質発現確認
ご使用になるタンパク質が、大腸菌無細胞翻訳系で発現できることを確認してください。
Wild-Type(UAGコドンやCGGGコドンを挿入していない遺伝子)にて発現量が著しく低い場合は、遺伝子配列の最適化やN末端tagの付加等により発現量の改善を行ってください。弊社では無細胞翻訳系でのタンパク質発現サービスや遺伝子合成サービスを提供しておりますのでご利用下さい。
2. 導入部位についての注意点
非天然アミノ酸の種類によっては、導入可能な部位に制限が生じる場合があります。
製品リストにてご確認ください。
導入可能部位(注釈)N末端領域

ピンポイント 蛍光標識[ for Fluorescence Labeling ]CR110-X-AF

内部C末端領域

認識
コドン

NH2+

[5-CR110-X : Abs/Em = 498/521nm]
OOH

OO
NH2N
H

○×H
N

CGGG

O

製品
コード300 µL

CLD1001

5 X 300 µL

CLD2001

5 X 300 µL

CLD2002

Amber

-O
O

容量(translation)

NH2

Amber

○ : 導入可能△ : 部位によっては導入が可能
× : 導入は困難
N末端領域とは、N末端のメチオニンから20残基程度までを表します。

(注意) 導入のためにCGGGコドンをN末端領域(2～20残基程度)へ挿入、置換した場合、周辺配列によってはフレームシフト等の影響により、標識されていないタンパク質が発現してしまう場合があります。CGGGを使用してN末端領域を標識する場合は、弊社が開発したオリジナルのペプチドタグ(ProX®tag)を用いることをお奨めします。
5'-AUG

UCU

AAA

CAA

AUC

GAA

GUA

AAC

CGGG

UCU

AAU

GAG

MetSer

LysGlnIleGluVal

Asn

XaaSerAsn

Glu

ProX®tag-3'配列

3. 非天然アミノ酸-tRNA
リスト以外に、ご希望の非天然アミノ酸(標識アミノ酸、機能性アミノ酸など)を結合させたtRNAを作製いたします。
オリジナルの非天然アミノ酸導入タンパク質の合成が可能になります。
●

非天然アミノ酸-tRNA受託合成サービス……………………………….p.11

また、オプションで変異遺伝子の作製、無細胞翻訳系におけるタンパク質発現を含めた非天然アミノ酸導入タンパク質のトータルサービスもございます。
●

8

非天然アミノ酸導入タンパク質の受託合成サービス…………………p.11

製品リスト
導入可能部位(注釈)N末端領域

ピンポイント蛍光標識[ for Fluorescence Labeling ]CR110-X-AF

内部
C末端領域

認識
コドンNH2+[5-CR110-X : Abs/Em = 498/521nm]
OOH
O

O

NH2○×

H
N

N
H

CGGG

O

NH2HiLyte FluorTM 488-AF○

構造は非公開
O

OH

5OO
NH2×
CGGG

N+O-Amber

HNN
H

300 µL

CLD1001

5 X 300 µL

CLD2001

5 X 300 µL

CLD2002

300 µL

CLD01※1

5 X 300 µL

CLD05※1

5 X 300 µL

CLD2004

300 µL

CLD02※1

5 X 300 µL

CLD06※1

Amber[HiLyte FluorTM 488 : Abs/Em = 497/525nm]

TAMRA-X-AF

製品
コードAmber-OO

容量(translation)

○O×O

6

[5(6)-TAMRA-X : Abs/Em = 546/575nm]

CGGG

N

ATTO633-AF

オリンパス社より販売300 µL

CLD03※1

5 X 300 µL

CLD07※1

5 X 300 µL

CLD2008

300 µL

CLD1009

5 X 300 µL

CLD2009

300 µL

CLD10105 X 300 µL

CLD2010Amber

5 X 300 µL

CLD2101CGGG

5 X 300 µL

CLD2102Amber

5 X 300 µL

CLD2103CGGG

5 X 300 µL

CLD2104

300 µL

CLD04※1

5 X 300 µL

CLD08※1

5 X 300 µL

CLD2106

Amber[ATTO633 : Abs/Em = 629/657nm]○×

構造は非公開CGGG

ATTO655-X-AF

Amber[ATTO655-X : Abs/Em = 663/684nm]○×

構造は非公開CGGG

ピンポイントビオチン標識[ for Biotin Labeling ]Biotin-AF

OH[Biotin]OO
NH2O

HN○○NHN
HS
O

Biotin-X-AF

OH
HN[Biotin-X]

OO
NH2NHNH

○H
N

○S
O

Biotin-XX-AF

Amber[Biotin-XX]

OH
O

O
NH2N
H

O

H
NO

N
H

HN

O

○NH
S

(注釈)導入可能部位
非天然アミノ酸の種類によって、導入可能な部位が異なります。
○ : 導入可能△ : 部位によっては導入が可能
× : 導入は困難△CGGG[価格はお問い合わせ下さい]※1 : フナコシ社から購入できます。

9

製品リスト
導入可能部位翻訳後修飾[for Post-Translational Modification]
Tyr(PO3H2)[O-phospho-Tyr]

N末端領域

内部
C末端領域

○△OH
O
NH2Lys(Me)[ε-methyl-Lys]

OH
POH
OO

OH

H
NO

○○NH2Lys(Me2)[ε-dimethyl-Lys]

OH
NO

○OH

○

H
NO
NH 2

容量(translation)

製品
コードAmber

5 X 300 µL

CLD2201CGGG

5 X 300 µL

CLD2202Amber

5 X 300 µL

CLD2203CGGG

5 X 300 µL

CLD2204Amber

5 X 300 µL

CLD2205CGGG

5 X 300 µL

CLD2206Amber

5 X 300 µL

CLD2207CGGG

5 X 300 µL

CLD2208Amber

5 X 300 µL

CLD2301CGGG

5 X 300 µL

CLD2302Amber

5 X 300 µL

CLD2303CGGG

5 X 300 µL

CLD2304Amber

5 X 300 µL

CLD2305CGGG

5 X 300 µL

CLD2306Amber

5 X 300 µL

CLD2321CGGG

5 X 300 µL

CLD2322Amber

5 X 300 µL

CLD2323CGGG

5 X 300 µL

CLD2324Amber

5 X 300 µL

CLD2331CGGG

5 X 300 µL

CLD2332○NH2Lys(Ac)[ε-acetyl-Lys]

認識コドン

○O

非天然アミノ酸導入[for Unnatural Mutagenesis]
PEG標識アミノ酸
PEG4-AF[Methyl-PEG4]OH
O

PEG8-AF[Metyl-PEG8]

CH3N
H

O

○○4OH
O

O
CH3NH2

PEG12-AF[Methyl-PEG12]

O
NH2N
H

O

○○8OH
O

O
CH3NH2N
HO○△12架橋アミノ酸OH

BPA[p-benzoyl-phenylalanine]O○NH2○OAcPhe[p-acetyl-phenylalanine]

OH○O
NH2○O

光異性化アミノ酸
azoAla[p-phenylazophenyl-alanine]

OH
O
NH2N

N

○○

[価格はお問い合わせ下さい]10受託合成サービス[非天然アミノ酸-tRNA受託合成サービス]
ご希望の非天然アミノ酸を結合させたtRNAを作製いたします。オリジナルの非天然アミノ酸導入タンパク質の合成が可能になります。
NH2N

OH
HO P O

O

N

NH2N

O

ご依頼
非天然アミノ酸

RO

O
HO P O

O

N

N

pdCpA

O

NH2O

-酵素的Ligation-

N

O
O

O

H2N

R

OH

非天然アミノ酸

tRNA
非天然アミノ酸AUC

納品(ⅱ) 非天然アミノ酸-tRNA合成(ⅰ) 非天然アミノ酸-pdCpA合成
AUC

3’末端のCAが欠損したtRNA

非天然アミノ酸-tRNA受託合成サービス[非天然アミノ酸導入タンパク質の受託合成サービス]
UAGコドンあるいはCGGGコドンを用いて、ご希望の非天然アミノ酸を目的の部位へピンポイントに導入したタンパク質を、E.coli由来の無細胞発現系を用いて合成いたします。また、設立以来、組み換えタンパク質生産の専門技術を持つ会社として蓄積されたタンパク質発現に関わる知識とノウハウを活かして、遺伝子の合成からタンパク質の精製までトータルサポート致します。
TAG
Introduction
ご依頼遺伝子
転写ベクターへのクローニング
非天然アミノ酸の導入部位をTAGコドン(または4塩基コドン)に置換した発現用DNAの作製

mRNA

翻訳

精製Xaa

非天然アミノ酸
導入タンパク質

納品

ご依頼
非天然アミノ酸

AUC
非天然アミノ酸-tRNA合成

E.coli無細胞翻訳系(転写/翻訳)

非天然アミノ酸導入タンパク質のトータル受託合成サービス11

アプリケーション[ピンポイント標識タンパク質の発現例]
非天然アミノ酸導入タンパク質は、SDS-PAGEで分離し、蛍光色素の場合は、直接ゲルを蛍光イメージャーで検出できます。また、その他非天然アミノ酸を導入した場合は、タグペプチド抗体などによるウエスタンブロットによっても検出することができます。通常は1レーン当たり、0.25～1 μLの無細胞翻訳反応液で十分検出できます。
※ 反応液の中にはタンパク質に取り込まれなかった遊離の標識アミノ酸が多く含まれています。この遊離の標識アミノ酸はSDS-PAGEでの検出において泳動先端に確認されます。

2UAG

ProX tag

2UAG

ProX tagInterleukin2
MBP
Streptavidin
scFv
CAT
DHFR
FKBP12Thioredoxin

Interleukin2
MBP
Streptavidin
scFv
CAT
DHFR
FKBP12Thioredoxin

Interleukin2
MBP
Streptavidin
scFv
CAT
DHFR
FKBP12Thioredoxin

TAMRA

Interleukin2
MBP
Streptavidin
scFv
CAT
DHFR
FKBP12Thioredoxin

HiLyte Fluor 488

2UAG

ProX tagInterleukin2
MBP
EGFP
scFv
CAT
DHFR
FKBP12Thioredoxin

ProX tagInterleukin2
MBP
EGFP
scFv
CAT
DHFR
FKBP12Thioredoxin

2UAG

Interleukin2
MBP
Streptavidin
scFv
CATDHFRFKBP12Thioredoxin

BiotinInterleukin2
MBP
Streptavidin
scFv
CATDHFRFKBP12Thioredoxin

ATTO633

標識タンパク質の発現確認
2UAG: 開始AUG直後にUAGコドンを挿入した遺伝子
ProX tag : ProX tag(UAG)を付加した遺伝子
ゲルへのアプライ量 : 翻訳反応液 0.25μL相当量
蛍光イメージャー検出波長 (上図)HiLyteFluor488 励起488nm / 検出520 nm
TAMRA
励起532nm / 検出580 nm
ATTO633
励起635nm / 検出670 nm
ウエスタンブロット(下図) : 抗His tag抗体を使用(ビオチン標識タンパク質の検出には抗ビオチン抗体を使用)

12

アプリケーション[ピンポイント標識タンパク質の使用例】
本試薬を用いて合成した蛍光標識タンパク質は、以下のような測定に用いることができます。
・1分子蛍光分析を利用した相互作用解析
・分子間, 分子内においての蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)
・細胞内でのタンパク質機能分析・タンパク質アレイを利用した相互作用解析
・SDS-PAGEによるタンパク質発現解析

蛍光標識タンパク質バイオイメージング

タンパク質機能解析
1分子蛍光分析システム

リガンドスクリーニング
分子間相互作用解析

立体構造変化解析

SDS-PAGE

プロテインアレイ

発現解析

タンパク質相互作用解析

13参考文献 / 製品についてのお問い合わせ[参考文献]
1) FRET analysis of protein conformational change through position-specific incorporation of fluorescent amino acids
Daisuke Kajihara, Ryoji Abe, Issei Iijima, Chie Komiyama, Masahiko Sisido, Takahiro Hohsaka
Nature Methods., 3, 923-929 (2006).
2) Position-specific incorporation of biotinylated non-natural amino acids into a protein in a cell-free translation
systemTakayoshi Watanabe, Norihito Muranaka, Issei Iijima, Takahiro Hohsaka
Biochem. Biophys. Res. Commun., 361, 794-799 (2007)
3) Comprehensive screening of amber suppressor tRNAs suitable for incorporation of non-natural amino acids in acell-free translation system
Hikaru Taira, Yosuke Matsushita, Kenji Kojima, Kaori Shiraga, Takahiro Hohsaka
Biochem. Biophys. Res. Commun., 374, 304-308 (2008).
4) Efficient Incorporation of Nonnatural Amino Acids with Large Aromatic Groups into Streptavidin in In Vitro Protein
Synthesizing Systems
Takahiro Hohsaka, Daisuke Kajihara, Yuki Ashizuka, Hiroshi Murakami, Masahiko Sisido
J. Am. Chem. Soc., 121, 34-40 (1999).
5)遺伝暗号を拡張した人工タンパク質合成系の開発と応用, 芳坂貴弘
生物物理, 47(2), 124-128 (2007).
6)無細胞翻訳系における非天然アミノ酸の導入技術の開発とその応用, 芳坂貴弘
生化学, 72(3), 247-253 (2007).

[製品についてのお問い合わせ]株式会社プロテイン・エクスプレス
URL : http://www.proteinexpress.co.jp〒260-0856 千葉県千葉市中央区亥鼻1-8-15
千葉大亥鼻イノベーションプラザ内
TEL : 043-202-5755
FAX : 043-202-5756
E-mail : tech@proteinexpress.co.jp

14

CloverDirectTM
tRNA Reagents for Site-Directed Protein Functionalization

株式会社プロテイン・エクスプレス
URL : http://www.proteinexpress.co.jp〒260-0856 千葉県千葉市中央区亥鼻1-8-15
千葉大亥鼻イノベーションプラザ内
TEL : 043-202-5755
FAX : 043-202-5756
E-mail : tech@proteinexpress.co.jp

Catalogue 2013/04