ドライアイス凍結粉砕法と STQ 法を用いたTPN、キャプタン、カプタホール、ホルペットの分析法の検討○佐々野 僚一 1, 土居 恵子 1, 小西 賢治 1, 斎藤 勲 2
1
株式会社アイスティサイエンス, 2 公益財団法人科学技術交流財団【目的】食品中残留農薬分析において、

試料 ： キャ ベツ 、 タマ ネギ 、 大根 、キ ュウ

TPN、キャプタン、カプタホール、ホルペッ

リ、 ト マト 、レ タ ス、 ほう れ ん草 。添 加濃ト等は試料粉砕時に分解することが知られて

度：試料中0.1ppm。添加後30分放置。

いる。そのため、個別法ではリン酸添加を行

固 相 ﾐﾆｶﾗﾑ： Smart-SPE、 自 動 前 処 理 装 置 ：うことで、QuEChERS法では凍結状態

1),2)

で粉ST-L300 、 GC 大 量 注 入 口 装 置 ： LVI-S200

砕することで分解を防いでいる。また、キャ（AiSTI製）。GC-MS：Q1000GC（JEOL製）。

ベツやタマネギが試料の場合、精製に用いた【結果と考察】１．常温粉砕と凍結粉砕の比固相PSAがTPN消失の要因の可能性があるとも

較：各試料についてそれぞれの添加回収試験

報告 3) されている。そこで、これらの情報をを行ったところ、ドライアイス凍結粉砕する基に、ドライアイス凍結粉砕法とSTQ法を用ことで回収率が向上した。

いた分析法の検討を行ったので報告する。

２．疑似マトリクスPEGの影響：PEG共注入し【方法】予冷方式ドライアイス凍結粉砕法。

た場合、キャプタン、カプタホール、ホルペ

添加農薬：0.1%ギ酸含有混合標準溶液

ットのピーク面積値の減少がみられた。PEGにより、注入口で気化する時の温度が高くな試料 10gるために分解されたものと考えられる。本法

ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ 10mL
撹拌 （手で振とう, 1分）
撹拌 （手で振とう, 1分）
遠心分離（5分, 3500rpm）

食塩 1g
ｸｴﾝ酸3Na2水和物 1g
ｸｴﾝ酸水素2Na1.5水和物 0.5g
無水硫酸ﾏｸﾞﾈｼｳﾑ 4g

分取1mL（ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ層）
添加 ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ-水（1/1） 1mL

ではPEG共注入を使用せずに評価を行った。
３．添加時の標準溶液の溶媒について：添加時の混合標準溶液にギ酸を加えることで、キャプタン、カプタホール、ホルペットの回収抽出液率が大きく向上した。

《自動前処理装置》

４．固相ミニカラムPSAについて：キャベツ

分取 1 mL
Smart-SPE C18-30mg（精製）
洗液 ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ-水(4/1) 1mL
流出液
食塩水20mLを加え希釈
Smart-SPE C18-50mg（保持）乾燥（窒素ガス）
連結固相 PSA-30mg or AXi3-20mg （精製）
溶出 ｱｾﾄﾝ-ﾍｷｻﾝ（1/3） 1mLやタマネギなどの硫黄化合物の夾雑成分を含む試料においては固相PSAを用いず、代わりに固相SAXや固相AXを用いたところ、TPNの回収率が大きく向上した。その他の試料に関しては、固相PSAを用いて、アセトン-ヘキサン（１／３）で溶出させた。

溶出液定容（1mL, ｱｾﾄﾝ-ﾍｷｻﾝで調整）
GC/MS（SCAN） 大量注入（25μL）
Scheme 1. 試験溶液の調製法【参考文献】
1) M.Anastassiades; www.quechers.com
2) 斎藤勲ら、日本食品衛生学会第98回A-17（2008）3) 永井ら、日本農薬学会誌,37(4),362-371(2012)

○佐々野 僚一1, 土居 恵子1, 小西 賢治1, 斎藤 勲21株式会社アイスティサイエンス, 2公益財団法人科学技術交流財団

TPN、キャプタン、カプタホール、ホルペットの分析について《試料粉砕工程》
・試料粉砕時に分解することが知られている。

‣個別法：「リン酸添加」‣QuEChERS法：「凍結粉砕」《精製工程》

・硫黄夾雑成分を含む試料（キャベツや玉ねぎ）の場合、精製に用いた固相PSAがTPN消失の要因の可能性がある。

【目的】「ドライアイス凍結粉砕法」と「STQ法」を用いた分析法の検討

１．疑似マトリックスPEGの影響
２．常温粉砕と凍結粉砕の比較
３．添加時の標準溶液の溶媒について
４．固相ミニカラムPSAについて

TPN（Chlorothalonil）
N
MW：265.9LogPOW=2.9Captan
MW：300.6LogPOW=2.8

ﾋｯﾄ#:1 類似度:915 化合物名: Tetrachloroisophthalonitrile

ﾋｯﾄ#:1 類似度:922 化合物名: Captan

Cl100

ClON

S
ClCl100
266O79ClCl
N5050Cl10962749886149
107

124 133

159

100

168231

194

150

65200

Folpet
MW：296.6LogPOW=3.1134

ClCl

ﾋｯﾄ#:1 類似度:885 化合物名: Folpet

150200

Captafol
MW：349.1LogPOW=3.8SClNSClClClO100260250O

ﾋｯﾄ#:1 類似度:941 化合物名: cis-Captafol

O264

182

156

100

O100

70250

N117

79Cl10476

13050501172976381 9095

100

15017823254200

150200250

3007085 92

107114121130

100149150

167

183200250300予冷方式ドライアイス凍結粉砕
試料 10g20ppm ギ酸含有混合
標準溶液を50µL添加後、30分間冷凍庫で静置

アセトニトリル 10mL
ホモジナイズ
NaCl（食塩） 1g

クエン酸3Na2水和物 1g
クエン酸水素2Na1.5水和物 0.5g
MgSO4（無水硫酸ﾏｸﾞﾈｼｳﾑ）4g
手で振とう ：1分間
遠心分離（3500rpm 5分間）
アセトニトリル層
分取 1mL

アセトニトリル-水 1mL
抽出液≪ 自動前処理装置 ST-L300 ≫分取 1mL（試料：0.5g相当）
Smart-SPE C18-30 mg：精製
洗液 ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ-水（4/1）1 mL
流出液
水 20mL
Smart-SPE C18-50mg：保持乾燥（窒素ガス 2分）
連結 Smart-SPE PSA-30mg：精製＊硫黄成分含有試料の場合：AXi3-20mg
溶出 ｱｾﾄﾝ-ﾍｷｻﾝ（1/3）1mL
溶出液
定容（1 mL, ｱｾﾄﾝ-ﾍｷｻﾝで調製）
GC/MS（大量注入25 uL）

TPN

120

CaptanFolpetCaptafol

混合標準溶液100

・濃度：50ppb
・アセトン-ヘキサン（1/3）

80

共注入物質

60

・ギ酸：1%
・PEG：200ppm

40

注入口条件

200
無ギ酸

PEG

ギ酸＋PEG

・注入量：25µL
・注入口温度70℃-120℃/min-240℃50℃/min-280℃（26min）

標準溶液共注入物質
PEG共注入した場合、ピーク面積値の減少が若干みられた。PEG共注入により、注入口で気化する時の温度が高くなるために分解することが懸念された。本研究ではPEG共注入を使用せずに評価を行うこととした。

回収率（％）
140

TPN

120

CaptanFolpetCaptafol

100806040200
ギ酸無 ギ酸無 ギ酸有 ギ酸無 ギ酸無 ギ酸有 ギ酸無 ギ酸無 ギ酸有 ギ酸無 ギ酸無 ギ酸有
常温

凍結

常温

トマト

添加回収試験
・試料中濃度100ppb
・精製固相：PSA・溶出：アセトン-ヘキサン（1/3）

凍結
キュウリ

常温

凍結
大根

常温

凍結
キャベツ

 ドライアイス凍結粉砕により、回収率が向上した。
 添加時のギ酸含有混合標準溶液により、キャプタン、ホルペット、カプタホールの回収率が向上した。

回収率（％）

120

TPN

CaptanFolpetCaptafol

100NH28060

PSA

4020SAX0NH2PSA

SAX

AX

添加回収試験
・試料：キャベツ
・試料中濃度100ppb（ギ酸含有）・凍結粉砕
・溶出：アセトン-ヘキサン（1/3）

AX

各固相によるSCANクロマトグラム

SAXやAXを用いることでTPNの回収率が向上したが、精製度は悪くなった。

回収率（％）

140120TPN

CaptanFolpetAXPSAAXCaptafol

100806040200PSA

玉ねぎ

白ネギ

添加回収試験
・試料中濃度100ppb（ギ酸含有）・凍結粉砕
・溶出：アセトン-ヘキサン（1/3）

PSA

AX

キャベツ

PSA
大根

AX

PSA

AX

キュウリ

PSA

PSA

レタス ほうれん草

特に硫黄化合物の夾雑成分を含む試料において、固相PSAを用いず、代わりに固相AXを用いることでTPNの回収率が向上することが分かった。

（単位：％）

化合物名

添加-1 添加-2 添加-3 添加-4 添加-5Ave.

RSD

TPN

949996819693

7.6

Captan10111810696107106

7.8

Folpet1151211201111201183.7Captafol

1231311311221261273.4

添加回収試験
・試料：キャベツ
・予冷方式凍結粉砕
・試料中濃度100ppb（ギ酸含有）・固相：AX・溶出：アセトン-ヘキサン（1/3）

「予冷方式ドライアイス凍結粉砕法」と「STQ法」を用いてTPN、キャプタン、ホルペット、カプタホールの分析法の検討を行い以下のことが分かった。


予冷方式ドライアイス凍結粉砕により、試料粉砕時の分解を抑えることが分かった。



添加時の混合標準溶液にギ酸を含有させることにより、キャプタン、ホルペット、カプタホールの回収率が向上した。

硫黄夾雑成分を含む試料（キャベツや玉ねぎ）において固相NH2やPSAを用いた場合、TPNの回収率が減少することが分かった。

硫黄夾雑成分を含む試料の場合、固相PSAの代わりにSAXやAXを用いることでTPNの良好な回収率を得ることができた。

 1) M.Anastassiades; www.quechers.com
 2) 斎藤勲ら、日本食品衛生学会第98回A-17（2008） 3) 永井ら、日本農薬学会誌,37(4),362-371(2012)