【三島海雲学術賞】（自然科学部門）

亜鉛トランスポーターの分子機能解明を基軸とした亜鉛欠乏の予防と亜鉛栄養改善に関する研究

神戸

京都大学大学院生命科学研究科緒言

大朋准教授

調的に機能することで、生体内・細胞内の亜鉛ホメオスタシスは厳密に維持される 1, 10）。

飽食の時代をむかえた本邦において懸念される栄養問題の一つに、亜鉛不足が挙げられる。亜鉛は、創傷治

亜鉛ホメオスタシスの制御機構についての研究は、癒や味覚、免疫機能の他、記憶に関連した神経機能な90 年代後半から大きく進展したが、筆者らは、当初かど、多岐にわたって重要な役割を果たす必須栄養素であら本分野の研究に参画し、複数の亜鉛トランスポーターる。そのため、生活の質（以下 QOL と略す）の維持やの同定や機能解析を実施してきた 11 13）。現在、更なる向上に極めて重要な「食」要素となる。しかしながら、解析を進めると同時に 14, 15）、これらを発展させ、亜鉛現在、亜鉛欠乏者の数は世界的に増加しており、特に、トランスポーターに着眼した亜鉛栄養改善に関する研究

高齢者に亜鉛欠乏の傾向が強いことが明らかにされていを実施している。

–

る。さらに、亜鉛は成長著しい乳幼児の発育に必須とな
亜鉛吸収に関する基礎研究：消化管における亜鉛トランるため、乳幼児栄養の観点からも不足することは許されない

1, 2）

スポーター ZIP4 の発現制御。したがって、日常の「食」から、亜鉛栄養の亜鉛ホメオスタシスの維持において、消化管での吸改善が可能となれば、健康な社会生活の実現に大きく貢収過程は最も重要となるが、食品中に含まれる亜鉛の腸献でき、国や世代を超えた波及効果が期待される。

管での吸収効率は 30％程度と低いうえ、摂取亜鉛量の動物細胞における亜鉛トランスポーター増加や加齢に伴い減少する。この事実は、亜鉛欠乏を食亜鉛（亜鉛イオン）の生理機能は非常に多岐にわたっ

品科学的観点から予防するためには、単にサプリメントており、タンパク質の構造因子や酵素の補因子として、などの摂取によって亜鉛摂取量を増やすのみならず、また、細胞内外のシグナル因子として必須の役割を果た吸収効率を上昇させることが、抜本的な解決策となる3–5）。亜鉛は、生体内では二価陽イオンとして安定でことを意味する。そのため、筆者らは、まず、腸管でのあり、その運搬は細胞膜に発現した種々の亜鉛トランス亜鉛の吸収機構の解明を目指した。腸管においては、ポーターが担っている。亜鉛トランスポーターは、細胞複数の亜鉛トランスポーターが発現しているが、ヒトの内や細胞内小器官内の亜鉛濃度を厳密に調節するために先天性亜鉛欠乏症・腸性肢端皮膚炎（す不可欠な分子であり、アミノ酸配列の相同性と亜鉛輸送）の原因遺伝子として同定された ZIP4 がの方向性から、ZIP（Zrt, Irt-like protein）トランスポー食事由来の亜鉛吸収に中心的役割を果たす分子と考えら

ターと ZnT（Zn transporter）トランスポーターの二つれた。筆者らは、ZIP4 が、亜鉛欠乏時に小腸上皮細胞6–9）に大別される （図 1）。ZIP トランスポーターは、細胞頂端膜に蓄積する一方で、亜鉛十分時には速やかに分解外、もしくは、細胞小器官内の亜鉛を細胞質へと輸送すされること16）、さらに、重度の亜鉛欠乏時には、頂端膜ることで細胞質の亜鉛レベルを増加させる方向に機能すに発現する ZIP4 が、タンパク質切断によって制御される。一方、ZnT トランスポーターは、この逆の向きにる（ZIP4 のプロセシング制御）ことを明らかにした17）。

亜鉛を輸送するため、細胞質の亜鉛レベルを減少させる

また、小腸上皮細胞において、亜鉛トランスポーター方向に機能する。哺乳類においては、ZIP トランスポー

ZIP5 が、ZIP4 とは全く逆の発現パターンを示すことを

ターが 14 種類、ZnT トランスポーターが 9 種類存在す明らかにし15）（図 2）、両者の発現量のバランスが体内のることが明らかにされており、両トランスポーターが協亜鉛ホメオスタシスの制御に非常に重要であることを示
1

神

図1

戸大朋

ZIP と ZnT トランスポーターの細胞内局在と亜鉛輸送の方向性

ZIP トランスポーター（赤矢印）は、細胞質内の亜鉛を増加させる向きに、ZnT トランスポーター（緑矢印）は、細胞質内の亜鉛を減少させる向きに機能する。本図には、それぞれの ZIP・ZnT トランスポーターの主たる細胞内局在部位を示している。多くの亜鉛トランスポーターは、亜鉛濃度やサイトカイン等の刺激によって局在部位を大きく変化させるため、この図は、ある一局面を示すものとなっている。

す結果を提示した。さらに、出芽酵母において細胞外から細胞内への亜鉛取り込みに機能する亜鉛トランスポー
ターのオーソログである ZIP1, ZIP2, ZIP3 が、哺乳類の亜鉛吸収においては必須とはならないことを、これら遺伝子の三重欠損マウスを用いた解析にて明示し18）、哺乳動物の消化管からの亜鉛吸収においては、ZIP4 が鍵となる分子であることを実証した。
“ZIP4-targeting” による，食品からの亜鉛吸収促進因子の探索と同定
上述の研究成果より、「ZIP4 発現促進活性を持つ食品
図2の摂取→腸管での ZIP4 の発現促進→亜鉛の吸収効率上

ZIP4 と ZIP5 の亜鉛濃度に依存した発現制御昇→亜鉛欠乏を予防」という亜鉛栄養改善に向けたスト

A. 小腸上皮細胞に発現する ZIP4 と ZIP5 は、食事に含まれる亜鉛の量によって、全く逆の細胞内局在変化を示す。ZIP4 は、亜鉛欠乏に応じて apical（頂端）膜に蓄積し、ZIP5 は、亜鉛十分時に basolateral（側底膜）側に蓄積する。青：DAPI 染色による核、赤：ZIP4、あるいは ZIP5 の局在。B. 小腸上皮細胞から調整した膜画分における ZIP4 と ZIP5 の発現量。ZIP1 の発現には、亜鉛量に応じた変化が認められない。
（文献 16 より改変）

ラテジーを考案した。そこで、亜鉛吸収促進因子の探索
系 と し て、ZIP4 タ ン パ ク 質 を 分 子 標 的 と し（ZIP4targeting）、ZIP4 の発現を促進する（＝亜鉛依存的分解を抑制する）食品因子を探索するスクリーニン

グ系を構築した。本系は、腸管上皮細胞と匹敵する鋭敏な感度で亜鉛依存的に ZIP4 を発現する培養細胞17）と、ZIP4 モノクローナル抗体を活用して直接 ZIP4 タンパク2

亜鉛トランスポーターの分子機能解明を基軸とした亜鉛欠乏の予防と亜鉛栄養改善に関する研究

図3亜鉛欠乏を予防する効果が期待される ZIP4 発現促進因子の同定

大豆抽出物には、ZIP4 の発現と細胞内亜鉛レベルを増加させる活性が含まれており、そこから単離同定したソヤサポニン Bb は、同様の活性を有している。

質の発現を評価できるスクリーニング系となっており、なり、これに合わせるように、初乳に含まれる亜鉛濃度即効性の亜鉛吸収促進効果を持つ因子の同定が可能とな

は母体血清中の亜鉛濃度の 5〜8 倍にも達している1）。そる。本系を用いて、これまでに、多種類の食材・食品のため、低亜鉛母乳を分泌する母親に授乳された母乳哺（穀物、海産物、発酵食品、コーヒー豆、乳製品など約育児は、亜鉛不足に陥り、重篤な皮膚炎などを呈する500 種類）から調製した抽出物のスクリーニングを実施

乳 児 亜 鉛 欠 乏 症（した結果、大豆抽出物中に強い ZIP4 発現促進活性、な1, 2）） を発症する。また、近年増加している早期産らびに亜鉛取り込み活性があることを見出し、さらに、児においては、正期産児に比べると、成長と母乳中亜鉛

この大豆抽出物からソヤサポニン Bb を活性因子として量との間にアンバランスを生じやすく、軽度の低亜鉛母単離同定することにも成功した（図 3）。ソヤサポニン乳であっても亜鉛欠乏に陥りやすい。乳幼児期の亜鉛栄Bb による ZIP4 発現促進効果は、ZIP4 特異的なエンドサ養の不足は、発育不全のみならず、将来の健康をも妨げイトーシスの抑制による分解抑制効果であり、結果、細る要因になるため、母乳中亜鉛の減少を予防する意義は胞膜に局在する ZIP4 の発現量が増加する。これに付随大きい。筆者らは、まず、して、細胞内への亜鉛取り込み量が増加することも確認

ンスポーターを明確に示すため、重篤な亜鉛欠乏状態にしており、ソヤサポニン Bb については、特に亜鉛吸収陥った母乳哺育児の日本人母親（4 名）のゲノム DNA促進効果が期待される。また、キラヤやユッカ抽出物なの解析を行い、それぞれの患者において、亜鉛トランスどにも強い ZIP4 発現促進活性があることもみとめていポーター ZnT2 遺伝子の新規変異を同定した（図 4）。こるため、現在解析を進めている。

れまでに報告されている ZnT2 変異体を含め計 7 例の変,に関連した亜鉛トラ異体の解析を実施し、十分量の亜鉛を母乳中へ分泌する
乳幼児亜鉛栄養に関する基礎研究・応用研究ためには、ZnT2 の完全な亜鉛輸送活性が必要不可欠であることを実証している19）。さらに、

亜鉛は、高齢者の健康に密接に関連する必須栄養素遺伝子に見であるとともに、成長著しい乳幼児の成長にも不可欠で出される一塩基変異多型（SNP）が ZnT2 の機能に及ぼある。出生直後の乳児においてはその要求性が最も高くす影響について解析し、その結果をもとにして低亜鉛母3神戸大朋る。超高齢社会を迎えた本邦を含む各国の人々の健康の実現につなげるため、本成果を、早急に社会に還元できるよう益々研究に邁進したい。
謝辞
この度は、大変栄誉ある三島海雲学術賞を授与して頂き、理事長はじめ公益財団法人三島海雲記念財団関係者の方々、選考委員の先生方、また本賞にご推薦頂きました日本農芸化学会会長の清水誠先生に厚くお礼申し上げます。また、学生時代に研究をご指導頂きました京都
図4

大学名誉教授佐々木隆造先生に心より感謝申し上げま

乳児亜鉛欠乏を引き起こす低亜鉛母乳の原因として同定された遺伝子の変異す。故岩井裕子先生には金属研究の面白さをご指導頂きました。お礼申し上げますとともに、ご冥福をお祈りいZnT2 タンパク質の予想されるトポロジー図。黄色の楕円は、低亜鉛母乳を引き起こすとして同定された遺伝子の変異を示す。また、緑色の楕円は、筆者らが遺伝子の SNPsを解析した結果、亜鉛輸送活性を消失し、低亜鉛母乳を引き起こす確率が高いと判定された SNP（ミスセンス変異）を示す。

たします。また、カンザス大学 Glen K. Andrews 教授には ZIP4 に関する研究を、ミズーリ大学 Michael J. Petris
准教授には銅輸送体 ATP7A に関する研究をご指導頂きました。ここに深謝いたします。本研究の実施にあた乳を発症するリスクを前もって予測できる基盤を確立しり、ご指導・ご協力頂きました先生方、研究を共にしたた。

卒業生・在学生に深く感謝いたします。

また、母乳中への亜鉛輸送に必須の役割を果たす
ZnT2 の発現量を増加させることで、低亜鉛母乳の亜鉛文量を回復させることができると考えられたため、ZnT2

1） T. Kambe, et al.:
, 95: 749–784, 2015.
2） T. Kambe, et al.:
, 71, 3281–3295, 2014.
3） T. Kambe: Encyclopedia of Inorganic and BioinorganicChemistry（V. Culotta and R. A. Scott, eds.）, pp. 301–309, John Wiley & Sons, Ltd., 2013.
4） T. Kambe, et al.: Zinc Signals in Cellular Functions andDisorders（T. Fukada and T. Kambe, eds.）, pp. 27–53,Springer, Tokyo, 2014.
5） T. Kambe:, 534, 77–92, 2014.
6） T. Kambe, et al.:, 61, 49–68, 2004.
7） T. Fukada, T. Kambe:, 3, 662–674, 2011.
8） T. Kambe:, 75, 1036–1043,2011.
9） T. Kambe:, 69, 199–220, 2012.
10） T. Kambe, et al.:, 46, 214–228, 2008.
11） T. Kambe, et al.:
, 277, 19049–19055, 2002.
12） T. Suzuki, et al.:
, 280, 637–643, 2005.
13） T. Suzuki, et al.:
, 280, 30956–30962, 2005.
14） A. Fukunaka, et al.:
, 284, 30798–30806,2009.
15） A. Fukunaka, et al.:
, 286, 16363–16373,2011.
16） B. P. Weaver, et al.:
, 388, 1301–1312, 2007.
17） T. Kambe, et al.:, 29, 129–139, 2009.
18） T. Kambe, et al.:, 294, R1474–1481, 2008.
19） N. Itsumura, et al.:
, 8, e64045, 2013.の亜鉛輸送活性を高める食品因子を同定するための独自のスクリーニング系を、上述の ZIP4 と同様の手法を用いて構築した。これまでに、弱いながらも複数の活性候補因子を見出すことに成功している。これらの成果は、乳幼児の亜鉛栄養改善に大いに寄与するものであり、将来社会を担う乳幼児の健康の実現に貢献することが期待される。
おわりに健康維持に亜鉛が有効であることを支持する結果は、高齢者はもちろん、あらゆる世代において報告されており、体内亜鉛量を高めることは、QOL の向上に必要不可欠である。しかしながら、近年、亜鉛摂取量の不足に加え、亜鉛吸収阻害因子を含む食品の過剰な摂取、投薬治療による吸収抑制や排出量の増大など、亜鉛吸収不全を生み出す要因は増加しており、このような食生活は、今後ますます深まると予想される。日常の「食」から亜鉛栄養の改善が可能となれば、その成果は、国を越え、あらゆる世代の健康増進に貢献する波及効果が期待され

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