学術情報 ～会員企業のプロバイオティクス研究のいま～

小岩井乳業株式会社
設

立 1976年6月

はじめにていませんでした。そこで当社とキリンの研究

小岩井乳業株式会社（以下、小岩井乳業）は、キ性化する乳酸菌の探索を開始しました。

チーム（以下、研究チーム）は2010年、pDCを活リングループの一員として、キリン株式会社（以pDCのヒト末梢血単核球に占める割合は1%に下、キリン）の基盤技術研究所と共同で乳酸菌にも満たないため、ヒトpDCを単離してスクリーニ関する研究を進めています。その研究の中で、免ングを行うのは現実的ではありません。そこで、

疫細胞の一種であるプラズマサイトイド樹状細胞マウス骨髄細胞からFlt-3Lによって誘導可能なを直接活性化するLactococcus lactis JCM5805

pDC/ミエロイド樹状細胞（以下、mDC）混合培養（以下、JCM5805）を発見、商品化に結びつけて細胞を用いてスクリーニングを行うことにしましいます。数々の研究から、JCM5805は「免疫賦活た。31菌種125株にわたる乳酸菌を添加してIFN-効果」や、それによる「風邪・インフルエンザ予防αの産生（すなわちpDC活性）を調べた結果、3株効果」、「ロタウイルス感染の症状緩和効果」、さにおいてIFN-α産生が認められました。そのうらには「寿命延長効果」などが示されています。そち 最 も 安 定 的 にpDCを 活 性 化 し 得 る 菌 と し ての主な研究成果について、小岩井乳業を訪れお話

Lactococcus lactis subsp. lactis JCM5805を選択しを伺いました。

しました。
また、pDCにJCM5805を添加し顕微鏡で形態1. JCM5805 の持つ免疫賦活効果観察を行った結果、無刺激ではpDCは丸い状態のままでしたが、JCM5805を添加したpDCでは樹JCM5805（写真1）は、プラズマサイトイド樹状細胞（pDC）と呼ばれる免疫細胞を活性化する、極めて稀な乳酸菌です。pDCはウイルス感染時に活性化し、インターフェロンα（IFN-α＊1）を放出してウイルスを排除する働きを持つことがわかっています。また、pDCはNK細胞やキラー T細胞、B細胞などの免疫細胞も活性化させる働きもあり、いわば対ウイルス感染における司令塔的な役割を担っています（図1）。
これまでpDCを直接活性化する乳酸菌は知られ▲写真1

JCM5805

pDC

活性化

JCM5805

様々な免疫細胞を活性化
NK細胞

キラーT細胞

B細胞

マクロファージ

ウイルス感染防御
図1

JCM5805によるウイルス感染防御の仕組み状突起が認められ、活性化している様子を観察することができました（写真2）。さらに、免疫賦活作用のメカニズムについて解析を行ったところ、pDCの活性化における作用レセプターはTLR9＊2であることが判明しました。これにより、TLR9を作用点としてウイルス感染防御における免疫賦活作用を有することが明らかになりました。

2. 風邪・インフルエンザの予防効果■パラインフルエンザウイルスの感染予防（マウス実験）
パラインフルエンザウイルスは、小児を中心とした急性呼吸器感染症の主要な原因ウイルス研究チームはこの乳酸菌を「プラズマ乳酸菌」との一つとされています。研究チームは、マウス命名し、更なる機能解明に着手しました。
〔以上、に致死量のマウスパラインフルエンザウイルス

文献1、2より〕（センダイウイルス）を経鼻感染させ、JCM5805*1：インターフェロン（IFN）は、ウイルスや腫瘍などの異物に反応して細胞から分泌される蛋白質。ウイルスや腫瘍の増殖を抑制する作用を持つ。αやβ、γなど様々な種類があるが、中でもIFN-αは抗ウイルス作用の中心的役割を果たす。
*2：TLR（Toll-like receptor）は、トール様受容体とも呼ばれる、細胞の内外にある受容体蛋白質。外敵の侵入を感知する役割を担う。TLR9は、特に外敵のDNA成分に反応すると言われている。

を1日1mg餌に加えて投与したマウス（13匹）と、標準食を投与したマウス（12匹）を比較しました。
なお、両群とも餌はウイルス接種14日前まで与えました。
その結果、標準食群はウイルス感染後10日以内に12匹全てが死亡したのに対し、JCM5805群

無刺激のpDC▲写真2

pDCが活性化すると、写真の矢印で示した部分のように、樹状突起が発生する。

JCM5805を添加したpDC

100（％）
累積生存率8060

標準食40

JCM5805200

2週間予防投与

051015

感染後の日数

ウイルス接種

図2

JCM5805摂取がパラインフルエンザウイルス感染に及ぼす影響

は13匹中9匹が15日後に生存していました（図2）。

人ボランティアを対象とした二重盲検試験を行いまた、JCM5805群は運動低下や不整呼吸などのました。

病気症状もほとんど認められませんでした。
〔以上、文献3より〕

20代から50代の被験者38名を無作為に19名ずつ2グループに分け、それぞれJCM5805を含む飲料、またはプラセボ飲料を4週間（2011年8月）飲■風邪・インフルエンザ様疾患の発症抑制（ヒト試験）
マウスを用いた実験でJCM5805がパラインフルエンザウイルスに対し予防効果があることが確用してもらいました。試験開始時と終了時にそれぞれ採血を行い、末梢血単核球を調製しpDC活性化度をHLA-DR＊3及びCD86＊4の発現量で評価しました（図3）。

認 さ れ た こ と か ら、 さ ら に ヒ ト に お け る

その結果、本試験期間中両グループでpDC活性JCM5805の摂取の効果を検討するために、健常は低下しましたが、JCM5805を含む飲料摂取グ

HLA-DR

CD86

［MFI］
5500

［MFI］
350

5000

300

4500

250

＊

4000

200
150

3500
3000

＊

0100

開始時

終了後

0＊両グループ間にp＜0.05で有意差有り

図3

JCM5805含有ヨーグルト飲料摂取のヒトpDCに対する効果

開始時

終了後

JCM5805

プラセボ

ループではpDCの低下が小さく留まり、試験終了

また、低温・長時間発酵が必要なことや、凝時にpDC上の活性化マーカーであるHLA-DR、固しにくいこともJCM5805の特徴なのだそうでCD86ともにプラセボグループに比べて有意に高す。前者については、『生乳100％ヨーグルト』のい値を示しました。

長時間発酵技術を活かすことで解決。後者に関このことから、ヒトにおいてJCM5805を経口しては、ドリンクタイプの開発を先行させ、十摂取することによりpDC活性が低下するような環分な粘性が必要なプレーンタイプは時間をかけ境・コンディションにおいても平常値に維持されて開発することにしたのだそうです。現在、発ることが示されました。
〔以上、文献4より〕

酵乳市場はドリンクタイプの伸び率が圧倒的に＊3：HLA-DRは、ヒトの細胞にある表面抗原の一種。体内に侵入した抗原（ウイルスなど）を樹状細胞が取り込んで分解すると、細胞上にHLA-DRが発現して抗原を提示する。
T細胞などの免疫細胞はこれを認識して活性化する。

高いため、結果的にこの判断は正しかったといえそうです。

＊4：CDも細胞の表面に存在する抗原で、多くの種類・働きがある。CD86は樹状細胞などに発現し、T細胞といった免疫細胞が活性化するための補助スイッチのような働きをする。

レーンタイプと乳飲料タイプ（宅配専用）の3つを現在、商品としてドリンクタイプを含め、プラインアップしており、この3商品をいかに市場に定着させるかがこれからのテーマだそうです。
キリングループ全体では、JCM5805を使用した～今後の展望～

ペットボトル飲料やサプリメントの展開も行っ

Lactocossus lactis はチーズ製造に用いられるがら、ブランド認知を高めていきたいとのこと

まとめ

乳酸菌であることから、JCM5805を使用した発ており、それらの商品と相乗効果を生み出しなです。

酵乳の商品化にあたってチーズのような香味が課研究に目を向けると、JCM5805は、寿命延長題だったそうです。そこで、風味や物性面で高評効果及び老化形質抑制効果が動物実験において価が得られている『生乳100％ヨーグルト』をブレ認められているほか、ロタウイルスなどのインンドするとともに、不快な香味をマスキングする

フルエンザ以外のウイルスに対する効果も検討

技術を駆使。さらに最適なフレーバーを選定するが行われているそうです。体内の免疫システムことで、長く飲み続けてもらえる癖のない風味をを直接活性化するJCM5805（ プラズマ乳酸菌）に実現したといいます。

関する、今後の研究成果が非常に期待されます。

《今回の記事は、以下の文献・学会発表を参考にまとめました》
1）Kenta Jounai, et al. Spherical Lactic Acid Bacteria Activate Plasmacytoid Dendritic Cells
Immunomodulatory Function via TLR9-Dependent Crosstalk with Myeloid Dendritic Cells. PLosONE., Volume 7, Issue 4 (2012)2）Kenta Jounai, Daisuke Fujiwaraほか. Identification of lactic acid bacteria that directly stimulate
plasmacytoid dendritic cell to produce IFN-α. 第59回日本ウイルス学会学術集会（2011年9月）
3） 城内健太ほか. パラインフルエンザウイルス感染マウスにおけるLactococcus lactis JCM5805（JCM5805）
摂取の効果. 第60回日本ウイルス学会学術集会（2012年11月）
4）Tetsu Sugimura, et al. Immunomodulatory effect of Lactococcus lactis JCM5805 on humanplasmacytoid dendritic cells. Clinical Immunology., Volume149 509-518（2013）《取材・編集：（株）BBプロモーション 髙林 昭浩》