タカラバイオ マンスリーフォーカス
vol.782022年1月号（1月5日発行）【vol.78の主な内容】
キャンペーン

新PCR酵素 「TaKaRa Ex Premier」 無料お試しキャンペーン 大好評につき期間延長！

耳より

お役立ち情報をご紹介① TaKaRa Ex PremierとIn-Fusion® Snapを組合せた簡単・効率的なクローニング② In-Fusion® Snapユーザー様実施例

セミナー

タカラバイオWEBセミナー 1月～2月の開催スケジュール ご参加まではとっても簡単♪

★ 大好評につき期間延長 ★

新PCR酵素 「TaKaRa Ex Premier」 発売記念
無料お試しキャンペーン 期間： ～2022年2月28日（月）
従来製品の”TaKaRa Ex Taq”を凌駕する成功率、高い正確性、そして高い操作性を持つ画期的なPCR酵素「TaKaRa Ex Premier DNA Polymerase 」が登場しました！
無料サンプル（40回用）お試しキャンペーンは2021年11月末で終了予定でしたが、ご好評の声にお応えして2022年2月末まで延長いたしました！ ぜひこの機会にお試しください。
製 品 名仕 様

製品コード

容 量

TaKaRa Ex Premier DNA Polymerase

Dye-free 2X premix

RR370S

40回

TaKaRa Ex Premier DNA Polymerase
Dye plus

Dye-plus 2X premix

RR371S

40回

通常価格（税別）¥8,000
無料配布中¥8,000
無料配布中★☆★☆ TaKaRa Ex Premier 評価アンケート 中間発表！ ☆★☆★
お試しいただいた結果はいかがでしたか？

実際に使ってみていかがでしたか？

悪い 5%

他製品でかからなかったサンプルもPCRがかかった。

普通11%

非常に良い27%

10k bp以上のPCRに苦戦していましたが、本製品で簡単に増幅することができました。

dyeがすでに入っていると、手間が省けて嬉しいです。

良い56%

量が多くなればなるほど実感できます。

Ex Taqで増幅が見られなかったサンプルでの増幅が見られた。

8割以上の方が高評価！
★無料お試しキャンペーンのお申込みはウェブサイトから！

タカラバイオ キャンペーン

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★ 2022年1月の耳より情報★ お役立ち情報 その① ★

TaKaRa Ex Premier DNA Polymerase Dye plus（色素ありタイプ）とIn-Fusion® Snapを組合せた簡単・効率的なクローニング
TaKaRa Ex Premierを用いた PCR ベースのクローニ ング実験にお役立ていた だ ける 、In-Fusion® Snap
Assembly Master Mixと組合せた効率的なクローニング方法・実施例についてご紹介いたします。
＜クローニング方法の概略＞
TaKaRa Ex Premier DNA Polymerase Dye plus（製品コード RR371S/A/B、色素ありタイプ）で増幅したPCR産物（平滑末端）と線状化プラスミドベクターを用いてIn-Fusion® Snap Assembly Master Mixでクローニングを行い、目的クローンの取得効率を確認した。インサートとなるPCR産物の両末端は、線状化プラスミドベクターの末端15塩基と相同配列となるように設計した。なお、In-Fusion反応の際、Cloning Enhancerを使用することでPCR産物を精製せずに反応に用いた。
＜In-Fusionクローニングの流れ＞＜各種インサートのPCR増幅＞
TaKaRa Ex Premier（製品コード RR371）

1. Amplify

M1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 M2
w/o column purification
w/ Cloning Enhancer

2. Combine

1. PLN(159 bp)
2. FABP3 (402 bp)
3. MYL2(501 bp)
4. CITED2 (813 bp)
5. GATA4 (1,329 bp)
6. ADRB1 (1,434 bp)
7. KCNQ1 (2,031 bp)
8. PKP2(2,514 bp)
9. KCNH2 (3,480 bp)
10. MYH6(5,820 bp)
11. RYR2(14,904 bp)
M1: 100 bp DNA Ladder
M2: λ-Hind III digest

Template:
Human heart cDNA, 500 ng
PCR conditions (for insert):
94℃ 1 min.
↓98℃ 10 sec.
68℃ 30 sec./kb

3. Transform

30 cycles

E. coli HST08

4. Insert check by PCR (using Ex Premier Dye plus)
done with picked up 5 clones

11種類のターゲット遺伝子をTaKaRa Ex Premier DNA
Polymerase Dye plusを用いて増幅し、電気泳動で確認しました。ほぼ全ての遺伝子において非特異的増幅がな
く目的バンドのみ正確に増幅されていたため、Cloning
Enhancerが使用可能であり 、PCR産物の精製をすることなく In-Fusion反応を行うことができました。

＜Ex Premierで増幅したPCRアンプリコンでのクローニング結果＞
Clone #Clone #（derived from PLN amplicon） （derived from GATA4 amplicon）

M1 1 2 3 4 5 M1

M2 1 2 3 4 5 M2
PCR conditions (for colony check):M1: 100 bp DNA Ladder
M2: λ-Hind III digest

94℃ 1 min.
↓98℃ 10 sec.
55℃ 15 sec.
68℃ 30 sec./kb

30 cycles

In-Fusionクローニングで得られた大腸菌コロニーを5個ランダムに選択しPCRでインサートチェックしたところ、全てのクローンにおいて目的インサートを確認することができました。色素ありタイプであるTaKaRa Ex Premier DNA
Polymerase Dye plusで増幅したインサートであっても精製工程を経ずにIn-Fusionクローニングに成功したことから、Dyeを含むPCR増幅産物をダイレクトにIn-Fusionアッセイに使用することが可能であることが示されました。

-2-｜ タカラバイオマンスリーフォーカス

★ 2022年1月の耳より情報★ お役立ち情報 その② ★

In-Fusion® Snapユーザー様実施例のご紹介
シームレスクローニングキットの最新版 In-Fusion® Snap Assembly Master Mixを用いた実施例をユーザー様からご提供いただきました。ぜひ参考にしてください！

酵母ツーハイブリッド法、トランジェントアッセイ用プラスミドの作製【データご提供】 M大学 M様
実施内容
A社PCR酵素αを用いてPCRを行ったベクター断片3種類（5,654 bp、5,456 bp、5,434 bp）とA社PCR酵素βを用いてPCRを行ったインサート断片（1,051 bp）を、それぞれIn-Fusion® Snap Assembly Master Mixを用いてクローニングし、3種類のプラスミド（6,504 bp、6,306 bp、6,284 bp）の作製を行った。コンピテントセルはDH5αを用いた。
結果

図2図1
PCR産物（図1）を精製し、In-Fusion® Snap Assembly Master Mixのプロトコールに従って反応を行った。反応液を用いて大腸菌を組換え、選択培地に撒いた結果、複数のコロニーが出現した。出現したコロニーをピックアップし、コロニーPCRに供した（図2）。コロニーPCRには、vector由来のForward primerおよびinsert由来のReverse primerを使用した。その結果、目的サイズ（1,971 bp）のバンドが得られたため、目的のプラスミドの作製が正確に行われたと考えられる。
In-Fusion® Snapシリーズを使ってみた感想
複数行ったが全て1回で成功し驚いた。実験手順も比較的単純で、クローニング初心者でも成功率が極めて高かった。
In-Fusion® Snapシリーズを使ったことがない方に一言LR反応（他社クローニングシステム）もしくは旧製品のIn-Fusion®などでうまくいかない際は、この In-Fusion® Snapシリーズを試す事をおすすめします。

＜ウインターキャンペーン実施中＞
製 品 名In-Fusion® Snap Assembly
Master Mix

キャンペーン期間：2022年3月31日（木）まで
概 要

In-Fusion Snap Assembly
Master Mixとコントロール
ベクター＆ インサ ートから成るクローニングキット

容 量

製品コード

通常価格

10回

638947¥23,000

キャンペーン価格¥18,400

50回

638948¥113,000¥90,400

250回

638949¥380,000¥304,000

500回

638943¥690,000¥552,000

1,000回

638944¥1,200,000¥960,000★ 弊社ウェブサイトでは、この他にも多数のユーザーズボイスや実施例などをご紹介しています。

ぜひ一度、In-Fusion® Snapシリーズをお試しください！
表示価格はすべて税別です。

-2-｜ タカラバイオマンスリーフォーカス - 3 -vol.78

タカラバイオマンスリーフォーカス vol.78

WEBセミナー詳細とお申込みはタカラバイオ WEBセミナー

1月17日（月）～ 21日（金）

ポイントがわかる！ 遺伝子導入実験 【AAVベクター編】

1月24日（月）～ 28日（金）PCRを利用した遺伝子クローニング

1月31日（月）～ 2月4日（金）

ポイントがわかる！ 遺伝子導入実験 【基礎編】

2月7日（月）～ 10日（木）検索

3つのアプローチで確実に解明！
DNA・RNA・タンパク質レベルの遺伝子機能解析システムのご紹介～ お申込みから参加まで、とっても簡単♪ ～１ 弊社ウェブサイトから希望セミナーの希望日時へ申込み
２ セミナー参加リンクの付いた申込み完了メールを受取りメールから、OutlookカレンダーやGoogleカレンダーへセミナー予定を追加できます！

３ ライブおよびハイブリッド配信時は10分前から参加可能。ハンドアウトや関連資料をダウンロードして、セミナー開始をお待ちください。
録画配信時は、開始時間ちょうどからセミナーシステム説明が始まります。
※マイク機能は不要です。音声は、イヤホンなどをご使用いただくほうが聞きやすいです。

セミナー開始 ～ライブおよびハイブリッド配信では、チャットへのご質問に講師が口頭で回答いたします。
録画配信時にチャットでいただいた質問は、次回ハイブリッド配信時に講師が口頭で回答いたします。
もちろん！セミナー終了後のアンケートからでも質問可能です。
アンケートは1分程度の簡単な内容になっております。セミナー参加後はアンケートへのご協力をお願いいたします！！

・本パンフレットで紹介した製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
・タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
・ライセンスなどに関する最新の情報は弊社ウェブサイトをご覧ください。
・本パンフレットに記載されている会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。
・本パンフレット記載の価格は2022年1月1日現在の希望小売価格です。価格に消費税は含まれておりません。
2021年12月作成G

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