ヒトマスト細胞活性化阻害をターゲットとしたアレルギー性疾患（アトピー性皮膚炎等）の新規治療薬

所属

日本大学医学部医学教育センター准教授
日本大学医学部附属板橋病院アレルギーセンター センター長

岡山 吉道
2021年12月21日

従来技術とその問題点

マスト細胞は、アレルギー炎症のコンダクターであり、IgE依存性のマスト細胞の活性化の制御が治療の一つの鍵になる。
ヒト化抗ヒトIgE抗体はIgEと高親和性IgE受容体FceRIの結合を阻害し、ヒトマスト細胞の活性化を阻害し、重症アレルギー性喘息、重症スギ花粉症および重症慢性特発性蕁麻疹の治療に極めて有効であるが、高価である。

新技術の特徴

IgE

新技術と従来技術との比較

可変部（相補性決定領域）

IgE

ヒトIgE、Cε3結合部分（マウスモノクローナル抗体抗ヒトIgE抗体
MAE11由来）（分子全体の5％未満)

オマリズマブ

Ce3領域
定常部

ヒトIgG1骨格（分子全体の約95％)

Logsdon SL et al: Curr Top Microbiol Immunol 388. 39. 2015
Hochhaus G et al: Curr Med Res Opin 19. 491. 2003

なぜFceRIb鎖に着目したか
FceRIb鎖はアレルギー性の結膜炎の炎症局所のマスト細胞で高発現している
アトピー性角結膜炎 患者結膜FceRIbtryptase

tryptase + FceRIb

上輪部角結膜炎 患者結膜tryptase + FceRIb

FceRIb + FceRI aDonor 1

Donor 2

FceRIbchymasechymase + FceRIb

アレルギー疾患

非アレルギー疾患
Okayama Y, Matsuda A et al Immunol Methods 336. 229. 2008
Matsuda A, Okayama Y et al Invest Ophth Vis Sci 50. 2871. 2009

なぜFceRIb鎖に着目したか
FceRIb鎖はアトピー性皮膚炎の炎症局所のマスト細胞で高発現している
B 乾癬A アトピー性皮膚炎 (AD)Tryptase

FceRIbabc

Tryptase

FceRIbmergedab

mergedc

FceRIb+ cells
tryptase+ cells
Ratio of FceRIb+ cells(/mm2, mean±SD) (/mm2, mean±SD) to tryptase+ cells (mean±SD)AD26.4 ± 8.4**
27.7 ± 8.8**
0.95 ± 0.05**
Psoriasis 0.5 ± 0.9
8.1 ± 4.1
0.08 ± 0.13**P < 0.01 compared with psoriasis (Mann-Whitney U-test)なぜFceRIb鎖に着目したか
FceRIb鎖はFceRIのシグナル増幅因子である□ non-transduced*:p<0.05***:p<0.005****:p<0.001▨ non-targeted shRNA120PGD2 production (pg/mL)

Histamine release (%)■ FceRIb shRNA
1008060* ***40200spon 0.01 0.1 1.0 1010-6M

CRA1 (mg/ml) A23187**** *** ****** *** ****

800600400***

2000spon 0.01 0.1 1.0 10 10-6M

CRA1 (mg/ml) A23187(aFceRIa mAb)
Okayama Y et al Allergy 67. 1241. 2012

FceRIb鎖の発現抑制によるLynの局在の変化
FceRIb鎖の発現抑制

FceRIab2

FceRIa2

IgE依存性の脱顆粒, PGD2産生、サイトカイン産生が抑制された

control shRNA

FceRI
aggregation image FceRIb

LynFceRIb shRNA
image FceRIb Lyn(1 min)+FceRIb の発現抑制によりFceRIaの架橋によるヒトマスト細胞のLynの細胞内局在の変化は抑制されたOkayama Y et al Allergy 67. 1241. 2012

FceRIb鎖YpYpYpとLynの会合
YpYpYpは細胞内Lynと会合する
U937 cell

Mast cell(peptide E’) Biotin- FceRIb N terminus(peptide D’) Biotin- YpYpYp(peptide A’) Biotin- YYY

IB: anti-Lyn

1234567 8Pull-down assay
50kDa

Lyn

Okayama Y et al Allergy 67. 1241. 2012

新技術の実証データ
phosphorylated FceRIb immunoreceptor tyrosine-based activation motif(peptide A) membrane-translocating motif +YYY -FITC(peptide B) membrane-translocating motif +YYpY-FITC(peptide C) membrane-translocating motif + YpYYp -FITC(peptide D) membrane-translocating motif + YpYpYp -FITC(peptide E) membrane-translocating motif + N terminus-FITC(peptide F) membrane-translocating motif + C terminus1-FITC(peptide G) membrane-translocating motif + C terminus2-FITC
Peptide D(YpYpYp)

Yp ; phospho-Y

X1000 3.7
X500 6.3

Okayama Y et al Allergy 67. 1241. 2012

新技術の実証データ

Histamine Release (%)

YpYpYpはIgE依存性のヒトマスト細胞からの脱顆粒を有意に抑制***********706050***40*:p<0.05**:p<0.01***:p<0.00530***
**
** **
****

DMSO
peptide A
peptide B
peptide C
peptide D
peptide E
peptide F
peptide G

**

20
10YYY
YYpY
YpYYp
YpYpYpN terminus
C terminus1
C terminus20Spon

aIgE(1 mg/ml)

aIgE(10 mg/ml)

A23187(10-6M)
Okayama Y et al Allergy 67. 1241. 2012

新技術の実証データ

PGD2 production (pg/mL)

YpYpYpはIgE依存性のヒトマスト細胞からのPGD2産生を有意に抑制*:p<0.05**:p<0.01***:p<0.005** ***** ***

5000

**

4000

** ***

3000*** ***

2000** ***

DMSO
peptide A
peptide B
peptide C
peptide D
peptide E
peptide F
peptide G

** **

1000
0Spon

aIgE
(1 mg/ml)

YYY
YYpY
YpYYp
YpYpYpN terminus
C terminus1
C terminus2

A23187aIgE-6(10 mg/ml) (10 M)
Okayama Y et al Allergy 67. 1241. 2012

新技術の実証データ
YpYpYpは内在性のLynに結合し、細胞活性化後に細胞膜への移行を阻害
N-terminus-FITC LynCAIgE

aIgE+aIgE
B

dImagebce
YpYpYp-FITCf
LynIgE

aIgE+aIgEbc*:p<0.05**:p<0.01
Redistribution frequency (%)

Image

**
10080**60
40200IgE - + +aIgE - - +- + +- - +control
peptideYpYpYppeptide

Ring-like stained cells for anti-Lyn mAb were counted
as positive cells.

defOkayama Y et al Allergy 67. 1241. 2012

新技術の実証データ
FceRIb鎖のITAM のチロシン残基をリン酸化させたペプチドがアレルギー患者の粘膜組織におけるヒトマスト細胞の活性化をex vivoで抑制した＋ anti-IgE% Net histamine release

peptide YYYorpeptide YpYpYp**:p<0.01***:p<0.005**
40***3020100None

YYY YpYpYp

春季カタルの巨大乳頭手術組織切片
Okayama Y et al Allergy 67. 1241. 2012

想定される用途

FceRIb鎖のITAMのチロシン残基をリン酸化させたペプチドがアレルギー患者の粘膜組織におけるヒトマスト細胞の活性化をex vivoで抑制した結果から、このペプチドはアレルギー疾患の新規治療薬となりうるということである。特に、軟膏、点眼、点鼻、吸入といった局所投与での効果が期待できる。

対象疾患：アトピー性皮膚炎、花粉症、アレル
ギー性喘息

安全性について

FceRIb鎖はマスト細胞と好塩基球にしか発現しておらず、しかも、ヒトのアレルギー疾患の病変部でのFceRIb鎖は発現増強しており、FceRIb鎖を治療標的としているため副作用の危険性が低いと考えられる。

実用化に向けた課題

１．ペプチドはプロテアーゼによって分解される。
2．細胞内デリバリーの問題。

３．アレルギー疾患の新規治療薬として開発するためには 25アミノ酸からなるため、このなかで必須のアミノ酸だけを残し、 短縮する必要がある。
AAVLLPVLLAAP-KVPEDRV-pY-EELNI-pY-SAT-pY-SELEDPG-NH2

membrane-translocating motif

FceRI b ITAM

25 アミノ酸

課題への取り組み
N末C末を削ったペプチドも細胞内移行した

YpYpYpCell counts

Donor 1

Donor 2YpYpYp∆N ∆CmutatedYpYpYp∆N∆C

mutated YYY∆N∆C

企業への期待

1.ペプチド薬の投与方法の技術。

2.細胞内導入ペプチド部分を、企業が特許を持つシークエンスあるいは、企業と共同で探索したシークエンスに変えること。

本技術に関する知的財産権• 発明の名称 ：アレルギー性疾患治療• 登録番号 ：特許第5858402号• 出願人
：日本大学
• 発明者
：岡山 吉道、羅 智靖

産学連携の経歴• 平成23年度-24年度 JST A-STEP FS探索タイプに採択お問い合わせ先
日本大学産官学連携知財センター
ＴＥＬ03-5275-8139
ＦＡＸ03-5275-8328
e-mailnubic@nihon-u.ac.jp