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中味研報告 第36号（2015）ɁͲ˩ȻӦᑩ‫ᦀ᥾ے‬ɁͲ˩ȻፀɆȷȠᴩ॑ᚌከጕ

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味噌腹腔内単回投与

味噌腹腔内連続投与
195

195salt injection

MISO*p<0.05（vs 0hr）

185
175
165
155
145
135
*

0

after 2hours

after 4hours

after 24hours

125

Blood pressure（mmHJ㸧MISO injection

190

salt

185

*
*p<0.05（vs 0 day） #p<0.05（vs salt）
*

180
175
170
#

165

#

160
*

155
150

Time（hour）

0*

the third day

the ﬁfth day

Time（days）

図１．味噌上清の腹腔内投与による Dahl 食塩感受性ラット血圧抑制効果
Ǌ ´± Ǌ
中味研報告 第36号（2015）ɕɒɜɟȲȦȻȞɜᴩԨˢ਽ґȾɛɞժᑤॴȟᇉɝᴩ഍ɔȹျ৊ᄑȽ᪃٢ɥᤎ਽ȪȹȗɞȻᐎțɜ‫ד‬ȨɟȲǿ

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Mean Plot of 14days@SBP grouped by TX
Sheet 1 in imported frm exl 42v*26c

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14days@SBP（mmHJ㸧

200
190

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160ɜᴩᚌ٢ᝩኮȻȻɕȾ᪩޼ൡࣃɋɁᄽ૚ᄑȽί឴

150
140

ӛ౓ɥᐎțɞ॒ᛵȟȕɞǿ֞‫أ‬ȾɂᛓୣɁൡࣃɥ

130̿Ȭɞᚌ٢ੱҤӛ౓ȟȕɞȦȻɂᴩˢᣵɁᆅሱȞ120

ɜ஥ɜȞȾȽȶȹȗɞȟᴩȰɁᒨ‫ب‬ί឴ӛ౓Ⱦȷ

110

HS

TX

ȗȹɂԚґȽሱ஥ȟȽȨɟȹȗȽȗǿ޴᪨ᴩ֞‫أ‬LS

Treatment GroupɁऐӌȽ੷ᥣԇͽႊɥᐎਁȬɞȻᴩюᄠί឴ᴩᚌ

図２．味噌上清の持続的皮下投与による Dahl 食塩感受性ラットの高血圧抑制効果

ከ‫ے‬ί឴Ɂ‫ސ‬٣ȟऐȢᇉ‫ד‬ȨɟɞǿǽɢɟɢɟɂᴩÄÓ ʳʍʒᑢ᥂‫۾‬ӦᑩȞɜ‫۾‬Ӧᑩ

Ǌ ´² Ǌ
中味研報告 第36号（2015）過酸化脂質量DPPHラジカル消去作用
5

water*p<0.05（vs VitaminC）
VitaminC
MISO with DPPH
MISO
*
*

*p<0.001（vs control）
0.12

4

Absorbancy at 520nm

LPO generation by brain tissue（nJ/mJ protein/30 min㸧

0.14

0.10
0.08
0.06
*

0.04

*

3

*

2

MISO

*

VitaminC

*

*

1

*

-1

control 3kDa MISO

water

MISO with DPPH

0control

*

*

0.02
0.00

*

0

Group

*

*

*

*

* MISO

30

60

90

120

150

The volume of sample（uL）

図３．味噌上清中の抗酸化活性
左図は抗脂質過酸化活性を、右図はラジカル DPPH の消去活性を示す。

0.5

脳内 SOD 活性
20*p<0.05（vs 0.5%DS）

LPO

SOD generation by brain tissue（U/mJ protein㸧

LPO generation by brain tissue of Rat（nJ/mJ protein/30 min㸧

脳内過酸化脂質量

0.4

0.3

*

0.2

0.1

0.0
control

0.5%DS

15

10

5

0

MISO

*p<0.05（vs 0.5%DS）*

SOD

controlGroup

0.5%DS

MISO

Group

図４．Ex vivo での味噌長期摂取中の活性酸素消去効果
左図は味噌摂取中の脳内過酸化脂質含量を、右図は SOD 活性示す。味噌摂取により SOD 活性が増加していること、脂質の過酸化が抑制されていることを示す。Dahl 食塩感受性ラットを用いた。

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ᴮᴦÖÓÍÃ Ɂςӏ஽ᩖ º ÍÉÓÏ ຍӏᏰ ¾ âõææåò

ᴥఝᄉ᚜ʑ˂ʉᴦǿຍӏᏰǽᚌከ᪩޼ɂᴩюᄠϾ޼Ⱦɛɞᚌߴ౉ൡᑤɁ̫᣹

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中味研報告 第36号（2015）ȹȗɞժᑤॴȟᯚȗǿஓట᭥ɁȽȞȾɂᴩᚌከછ

ᴰᴦÇ±¯Ó ఙȾպᝩȪȲ ÖÓÍÃ ‫ۄ‬඾ᩒܿȞɜ ±¸ ஽ᩖऻɁ ÄÎÁ ֆᦀ º ³ëÄá ÍÉÓÏएȾɛɝ᭥‫ں‬৞ՙॴᯚᚌ٢ɥੱҤȬɞȟᴩᑷȺɁƼ ÍÉÓÏ ¼ âõææåò

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味噌摂取が食塩感受性体質を食塩抵抗性に変える機序
Na・水利尿因子

抗利尿ホルモンの低下

中枢神経系血圧調節機構

抗酸化作用

交感神経系：ドパミン分泌促進

SOD 活性維持
酸化ストレスの低下

血管拡張因子水利尿（浸透圧低下）

血管壁弛緩

血管壁弛緩

心臓不全抑制腎機能保護

自由水クリアランスの上昇

CAVI の低下（ヒト）

体液量の低下

血
2012

圧

低

下

Kyoritsu Womenʼs University

33

図５．味噌摂取により食塩感受性高血圧が抑制され、高血圧性臓器障害が抑制される仮説

9-13)

Ǌ ´´ Ǌ
中味研報告 第36号（2015）éî Äáèì Óáìô­óåîóéôéöå Òáôó® Îõôòéôéïî ²°±² »᭥‫ں‬৞ՙॴʳʍʒɁᯚᚌ٢ᄉდɥੱҤȬɞᴫቼ²¸ ¨¹© º¹²´­¹³±®ǽäïéº±°®±°±¶¯ê®îõô®²°±±®°¹®°±°®

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中味研報告 第36号（2015）ᆅ ሱ ‫֖ ڨ‬፷ᘖ Ãáåîïòèáâäéôéó åìåçáîó қ͍‫ڗ‬᭴ጯᑛɥႊȗȲ֞‫أ‬ႏ఼ᩋߧ࿎᠎Ɂ૘ጪธ᥿ǽǽऐǽÁ óåáòãè ïæ ìéæåóðáî­åøôåîäéîç óõâóôáîãåó äåòéöåä æòïí íéóï õóéîç áðòéíáòù ãõìôõòå ïæ ôèå îåíáôïäå Ãáåîïòèáâäéôéó åìåçáîó
Ôóõùïóèé ËÁ×ÁÎÏ
Äåðáòôíåîô ïæ Âéïòåóïõòãå Óãéåîãåó¬ Æáãõìôù ïæ Áçòéãõìôõòå¬ Ôïôôïòé Õîéöåòóéôù´­±°± Íéîáíé¬ Ëïùáíá­ãèï¬ Ôïôôïòé ¶¸°­¸µµ³¬ Êáðáî

ち，寿命制御タンパクの挙動を生きたまま観察でᴮᴫᑔ௑Ȼᄻᄑ

きる。特筆すべきは，寿命を制御するインスリ

我が国は超高齢化社会を迎え，医療費等の増大が見込まれることから，日常的な介護を必要とせン / インスリン様成長因子 -1 シグナルはヒト・C.

elegans に共通に存在することである。

ず自立した生活ができる生存期間である「健康寿

そ こ で 本 研 究 で は， 優 れ た モ デ ル 生 物 C.

命」への関心が一層高まっている。「食」と「長寿」

elegans を用いて，① 味噌の長寿効果を検証し，の関係に関心が寄せられる中，味噌を始めとする② 味噌に含まれる長寿（延命）物質を探索し単離・発酵食品は健康に良いと言われているが，味噌を構造解析を行うことを目指す。寿命制御機構には寿命の観点から科学的に評価する方法は確立されインスリン様シグナル経路に加え，Sirtuin 経路，ていないと考えられる。ヒトを対象とした疫学調

TOR 経路が知られているが，本研究では，報告

査では「食」以外の要素が寿命へ影響することを者が寿命研究の標的としているインスリン様シグ

考慮せねばならず，また，マウスを用いた実験でナル経路に特化した展開を図る。

は最低でも 3 年以上の期間を要する。
こ れ ま で 報 告 者 は， モ デ ル 生 物 で あ る 線 虫

Caenorhabditis elegans を用いて寿命制御に関する研究に従事してきた。C. elegans は自家受精により増殖するため個体差が極めて少なく，寿命がᴯᴫᆅሱ஁ศ
ᴥయ୳ᴦ

約 4 週間と短いことから，寿命研究のための格使用した味噌は赤味噌（米辛口赤色系味噌）6

好の生物材料である，と考えられる。さらに，体種（長野，宮城，新潟，徳島），豆味噌 1 種（愛が透明であることから，生きたまま蛍光タグを付知），麦味噌 2 種（長崎，大分），白味噌（甘味噌）

加したタンパクを観察することができる。すなわ（京都）の 10 種である。

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Ǌ ´¶ Ǌ
中味研報告 第36号（2015）

線虫 Caenorhabditis elegans として，野生株な100

らびに TJ356 株（インスリン様シグナル下流の転写因子 DAF-16 に GFP が連結した融合タンパ

80

ク DAF-16::GFP を構成的に発現）を用いた。
生存率︵％︶ᴥéî öéöï ߧ֤ລްᴦ
線虫個体を用いた寿命測定を行った。① みそ

6040

懸濁液（10％）に野生株（50 匹）を 1 昼夜浸漬し，寿命測定培地（通常飼育に用いる NGM 培地

20に FUdR を添加後，餌となる大腸菌を塗布）に移し，寿命測定を行った。② 寿命測定培地に味噌00を 10％あるいは 5％添加し，大腸菌の増殖を抑

10

20

30

40

生存日数

えるためにアンピシリンを添加した寿命測定培地
図１． 赤みその延命効果（カプランマイヤー法）

上で野生株の寿命を測定した（50 匹）。

* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10ᴥéî öéôòï ߧ֤ລްᴦ

表１．ログランクテストによる有意差検定

初代培養細胞を用いた細胞レベルでのインスリ֞ǽ‫أ‬ǽᝁǽ୳ǽ

ン様シグナルの変動を観測した。TJ356 株を液ǪǪǪǽᠣɒȰᴥᇻႎᴦ

体培養により大量調製し，アルカリブリーチ法

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ǽᠣɒȰᴥ޺‫ڌ‬ᴦ

により卵を分離した。コラゲナーゼ処理後，卵ǋ

殻を破砕することにより個々の細胞に分離した。

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ǽǪǪǪǽᠣɒȰᴥᩋ᥿ᴦ

この状態では DAF-16::GFP が核に局在（長寿状ǪǪǪǽᠣɒȰᴥᩋ᥿Ḩᴦ態）していることから，遺伝子組換えインスリ

ǽ

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Ǫ
Ǫ
ǽᠣɒȰᴥोࡀᴦǋ

ン（MBP::INS-6）を添加し，DAF-16::GFP を細胞ǽ

ᵍǽϏ
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ǋ°®°¸··
ǽ°®°°±²
ǋ
ǋ

質に移行させた。その後，試料を添加し，DAF16::GFP の挙動（核移行）を共焦点レーザー顕微鏡で観察した。

加）と比較して有意な延命効果が認められた（َ
ᴮ,

᚜ᴮ）。

次いで，豆みそ・麦みそ・白みその延命効果を検証したところ，麦みそ（長崎産，大分産）ならᴰᴫᆅሱፀ౓

びに白みそ（京都産）に対照区（試料無添加）と線虫を味噌試料に一昼夜浸漬した後に寿命測定を行ったところ，特段に寿命延長効果は認められ比較して有意な延命効果が認められた（َᴯ,᚜ᴯ）。

なかった。そこで，寿命測定培地に味噌試料を添

そこで，麦みその延命効果がインスリン様シグ

加し，恒常的に味噌を摂食させる状態で寿命測定

ナルによるものかどうかを，TJ356 株初代培養を行った。

細胞を用いて検証した。

10％の味噌を含む培地ではおそらく浸透圧の調製した初代培養細胞はインスリン様シグナ

影響により早期に死滅する線虫が認められた。そルが亢進していないため，リン酸化を受けない

こで，培地に添加する味噌試料を 5％として寿命

DAF-16::GFP が核に局在する（َᴰࡿ）。これは測定を行った。

寿命延長時の DAF-16 の挙動と一致する。そこにまず，
赤味噌 6 種の延命効果を検証したところ，

インスリン様分子（MBP::INS-6）を添加すると，3 種（宮城，新潟，徳島産）に対照区（試料無添

DAF-16::GFP がリン酸化され細胞質に移行した

Ǌ ´· Ǌ
中味研報告 第36号（2015）

100
100

（39）
80

80

︵％︶

生存率︵％︶

60

60

40
40

20

20

0

（6）
（0）
核

両方

細胞質

0
0

10

20

30

40

図４．インスリン様分子を添加した際の DAF-16::
GFPの細胞内局在生存日数* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10

図２． 豆みそ・麦みそ・白みその延命効果（カプランマイヤー法）* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10

味噌試料を添加し DAF-16::GFP の挙動を観察し表２．ログランクテストによる有意差検定֞ǽ‫أ‬ǽᝁǽ୳ǽǽ

た。なお，味噌試料に含まれる NaCl の影響を勘案して，活性炭クロマトグラフィーに吸着・洗ᵍǽϏ

浄・メタノール溶出したものを試料とした。

°®°·µ±
ǽ°®°°±·ǋǋǪǪǪǽំɒȰᴥঢ়ᅺᴦ

ǽǪǪǪǽᲶɒȰᴥᩋࡆᴦ

ǋ

インスリン様分子を含む 5％味噌試料を添加した場合には，細胞質の局在していた DAF-16::GFP°®°°³²ǽ°®°°¸±ǋǋǪǪǪǽᲶɒȰᴥ‫۾‬ґᴦ

ǋ

ǋ
ǋ

ǽ

Ǫ
Ǫ
Ǫ
ǽᄌɒȰᴥ̱᥆ᴦ

ǋ

が核に移行し，約 80％の細胞で核・細胞質に，約 20％の細胞で核のみに DAF-16::GFP が観察された（َᴲ）。
また，10％味噌試料を添加した場合には，細胞質の局在していた DAF-16::GFP が核に移行し，ほぼ全ての細胞で核のみに DAF-16::GFP が観察された（َᴳ）。以上の結果から，延命効果を示
す麦みそ試料は濃度依存的に DAF-16::GFP の核

5 μm

移行（延命）を促進することが判明した。現在，

5 μm

活性炭処理した麦みそ試料の延命効果を個体レベ
図３． TJ356 初代培養細胞のインスリン様分子添
加前後の共焦点レーザー顕微鏡写真* : P<0 05** : P<0 01 vs Con

バーは標準偏差ルで検証している。

n=10ᴱᴫ፱જȻ̾ऻɁࠕఖ

（َᴰծ）
。
DAF-16::GFP は殆どの細胞で細胞質に移行し，本研究において，10 種の味噌の延命効果を検

核・細胞質両者に認められる細胞もあった。しか証した。赤みそ 3 種，麦みそ 2 種，白みそに有しながら，核のみに DAF-16::GFP が認められる

意な延命効果が認められた。試験に赤みそ 6 種

細胞は皆無であった。

のうち，3 種のみが延命効果を示したことは興味

そこで，インスリン様分子を添加し DAF-16::深い。成分分析の結果を詳細に比較することによ

GFP を細胞質に移行させた（通常寿命状態）後，り，延命効果を示す成分が見出せるのではないか

Ǌ ´¸ Ǌ
中味研報告 第36号（2015）

100

100

（36
（36）
36）

（46）
80

80

︵％︶

︵％︶

60

40

20

60

40

20

（8）

（2）

（1）
0

0
核

両方

細胞質

核

両方

（0）
細胞質

図５．麦みそ試料 5 % を添加した際の DAF-16::
GFP の細胞内局在

図６．麦みそ試料 10%を添加した際の DAF-16::
GFP の細胞内局在* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10と考えている。長寿（延命）物質の単離・構造解システムは迅速に延命効果（DAF-16::GFP の核移析も重要なテーマであると考えられる。

行）を検出できることから，長寿（延命）物質のまた，延命効果を示す麦みそに関して，寿命を制御するインスリン様シグナル依存的な延命効果

単離の際に用いるアッセイ系として，非常に優れていると考えられる。

か否かを検証した。その際，試料に関する感受性が高い初代培養細胞を用い，かつ，TJ356 株を用いることで DAF-16::GFP の細胞内局在の変動により延命効果を検証した。麦みそ試料は濃度依ᴲᴫពᢷ

存的に DAF-16::GFP の核移行を促進したことか

本研究に対して多大なるご支援を賜りました一ら，その延命効果はインスリン様シグナル依存的

般社団法人中央味噌研究所に心よりお礼申し上げであることが判明した。初代培養細胞を用いた本ます。

Ǌ ´¹ Ǌ
中味研報告 第36号（2015）ᆅ ሱ ‫֖ ڨ‬֞‫˹أ‬Ɂൡᑤ਽ґᴥᯚᚌ٢ᴩᯏዮᯫდᴩᑥ᠎͍ពᴦɁ
ᚌ˹ӦৰȾᩜȬɞᆅሱ ᴪƋᴪธరǽࢶ᪽ǽÓôõäéåó ïî áâóïòðôéïîáì óôáôéãó ïæ âéïæõîãôéïîáì ãïíðïîåîôó òåìáôåä ôïèùðåòôåîóéïî¬ ïóôåïðïòïóéó¬ áîä ìéðéä íåôáâïìéóí éî Íéóï ᴪƋᴪÙõëéï ËÁ×ÁÍÕÒÁ
Äåðáòôíåîô ïæ Æïïä Âéïãèåíéóôòù¬ Ëùïôï ÷ïíåî§ó Õîéöåòóéôù
³µ ëéôáèéùïóèé­ãèï Éíáëõíáîï¬ Èéçáóèéùáíá­ëõ¬ Ëùïôï¬ ¶°µ­¸µ°±¬ Ëùïôï¬ Êáðáî

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Ǌ µ° Ǌ
中味研報告 第36号（2015）ᴥçìõãïóåᴦɁߴᒅᒒɁᣥᤈȾՒɏȬ֞‫أ‬Ɂᯚґ‫ފ‬ȲǿȰɁऻᴩԚ̝ᒅᴩሳᒅᴩ‫و‬ᒅ᥂ȾґᫌȪ˿Ⱦ႕ґɁफᬭɥ೫᜞ȬɞȾȕȲɝᴩɑȭՕᢆᒅከᒒ

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図１．ラットの摘出消化管図（胃部から大腸・直腸まで）
Ǌ µ± Ǌ
中味研報告 第36号（2015）ɁɒȲɦɄȢ᠎ɥӏțȲ޴᮷Ԗɥͽ਽ȪȲǿɑȲᴩȲɦɄȢ᠎ɥӏțȽȗ޴᮷Ԗɥɽʽʒʷ˂ʵȻȪȲǿǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽǽ
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図２．トランスウェル装置

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水─Naclफᬭ

NaCl 濃度（mJ /L 㸧

2000

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1000

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60

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120

（分）

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図３．NaCl の人工膜透過と小腸膜の透過の比較ᦀᴥᣥᤈᣱ࣊ᴦɂ۹Ȣᴥ‫۾‬ȠȢᴦ
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中味研報告 第36号（2015）

OVA 人工膜

OVA 小腸膜
2000

NaCl 濃度（mJ/L㸧

NaCl 濃度（mJ/L㸧

2000
1500
1000
500
0

1500
1000
500
0

30

60

120

30

60

（分）
水 ─ Nacl

水─OVA

OVA ─OVAβラクトグロブリン人工膜

βラクトグロブリン小腸膜
2000

NaCl 濃度（mJ/L㸧

NaCl 濃度（mJ/L㸧

2000
1500
1000
500
0

1500
1000
500
0

30

60

120

30

（分）
水 ─ Nacl

60

120

（分）

水 ─ βラクトグロブリン

βラクトグロブリン─βラクトグロブリン

SPI 人工膜

SPI 小腸膜
2000

NaCl 濃度（mJ / L 㸧

2000

NaCl 濃度（mJ / L 㸧

120

（分）

1500
1000
500
0

1500
1000
500
0

30

60

120

30

（分）

60

120

（分）
水 ─ Nacl

水─SPI

SPI─SPI

図４．NaCl の膜透過に及ぼす食品タンパクの影響* : P<0 05** : P<0 01 vs Con

バーは標準偏差n=10ȺɂߴᒅᒒɁጙ ² ςȺȕȶȲǿ±²° ґऻᴩ̷ࡾᒒ

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中味研報告 第36号（2015）

BSA 人工膜

BSA 小腸膜
2000

NaCl 濃度（mJ/ L 㸧

NaCl 濃度（mJ/ L 㸧

2000
1500
1000
500
0

1500
1000
500
0

30

60

120

30

60

（分）
水 ─ Nacl

水 ─ BSA

BSA ─ BSA

γグロブリン人工膜

γグロブリン小腸膜
2000

NaCl 濃度（mJ /L 㸧

2000

NaCl 濃度（mJ /L 㸧

120

（分）

1500
1000
500
0

1500
1000
500
0

30

60

120

30

（分）
水 ─ Nacl

60

120

（分）
水 ─ γグロブリン

γグロブリン ─ γグロブリン

図５．NaCl の膜透過に及ぼす血清タンパクの影響* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10᭥ֿʉʽʛɹ᠎Ɂफᬭᴷ̷ࡾᒒɁ ÎáÃì Ɂᒒᣥᤈ᥂ɰɱʵɁɒȾ ÓÐÉ ɥӏțȲɕɁɂ ÓÐÉ ɁоȶǽȾߦȬɞ᭥ֿʉʽʛɹ᠎᭒Ɂफᬭɂᴩ
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中味研報告 第36号（2015）ɥӏțȲɕɁɛɝ ÎáÃì ɁᣥᤈᦀȟߵȽȢᴩɑ᠎ɁоȶȹȗȽȗɽʽʒʷ˂ʵɛɝ˩᥂ɰɱʵɁȲ ÓÐÉ Ⱦɛɞ๝ᣥ٢ɁफᬭȟȽȢȽɝᴩÎáÃìɒᴩ˨˩ɰɱʵȾʉʽʛɹ᠎ɥӏțȲ‫ک‬նɁ஁ȟɁᣥᤈᦀȟɽʽʒʷ˂ʵȻɎɏպȫȾȽȶȲǿນߵϿտȾȕȶȲǿˢᓐȾ᭥̜ᄽऻɂᴩߴᒅюʉᚌຏʉʽʛɹ᠎Ɂफᬭᴷ̷ࡾᒒɁ ÎáÃì Ɂᒒᣥᤈʽʛɹ᠎ɗʤʡʋʓ༟࣊ȟᯚȗȻᐎțɜɟɞ̜ȞǽȾߦȬɞ᭥ֿʉʽʛɹ᠎᭒ɁफᬭɂᴩᴥƕᴦÂÓÁɜᴩߴᒅᒒɁю۶Ⱥʉʽʛɹ᠎༟࣊ɁࢃȟႆȫጕȺɂ ÂÓÁ ɁоȶȹȗȽȗɽʽʒʷ˂ʵȻȹȗɞȻȬɟɃᴩ᭥̜˹Ɂʉʽʛɹ᠎ɁᦀȻ࿑

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中味研報告 第36号（2015）

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時間（分）

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図６．グルコースの小腸膜透過と人工膜透過の比較ɕɁȟᣥᤈɥᄽ૚ੱҤȪȲ̜ɥᇉȬȻᜓ᥺ȺȠ* : P<0 05** : P<0 01 vs Con

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中味研報告 第36号（2015）

グルコースの透過（SPI）

グルコースの透過（OVA）

濃度（nmol/ mL㸧

グルコースの透過（ラクトグロブリン）

400．000

350．000

600．000

300．000

500．000
300．000

250．000

400．000

200．000
200．000

300．000

150．000
200．000

100．000

100．000
100．000

50．000
0.000

0.000
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50

100

150

0.000
0

50

時間（分）

100

150

0

50

時間（分）

100

150

時間（分）

上：0.9％ NaCl 下：グルコース

上：0.9％ NaCl 下：グルコース

上：0.9％ NaCl 下：グルコース

上：0.9％ NaCl 下：SPI＋グルコース

上：0.9％ NaCl 下：OVA＋グルコース

上：0.9％ NaCl 下：ラクトグロブリン＋グルコース

上：SPI 下：SPI＋グルコース

上：OVA 下：OVA＋グルコース

上：ラクトグロ 下：ラクトグロブリン
ブリン＋グルコース

図７．グルコースの小腸膜透過に及ぼすタンパク質の影響* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10ȾԨˢȲɦɄȢ᠎ȞɜȽɞɁȺɂȽȢͷሗȞɁȲȥɞǿ֞‫أ‬ᝁ୳Ɂ૬ΖȾȷȗȹɂյᇋɁȧԦӌɥɦɄȢ᠎Ɂຉն࿎ȺȕɞȲɔᴩᴥᴯᴦÓÐÉ ȟ ÏÖÁीɑȪȲǿ৞ពᒵȪɑȬǿɗ ÌÇ ɁɛșȽӦ࿎ॴȲɦɄȢ᠎Ȼ෗Ɍȹᴩ೤

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±²ᴦÔåòõùïóèé Ôáîáëá¬ Èáîêõî Ôáîç¬ Æåîçîéáî

æòáãôéïîó éîèéâéôéîç Áîçéïôåîóéî É­ãïîöåòôéîçÙõ¬ Óåé÷á Íéãèéèáòá¬ Ùõëé Õúá÷á¬åîúùíå® Áóéáî­Áõó® Ê® Áîéí® Óãé ®¬²°°³¬Îïâõèéòï Úáéíá¬ Ôåôóõùá Íïòéùáíá¬ áîä±¶º±³¸´Ùõëéï Ëá÷áíõòá¬ ËõäúõᴥÐõåòáòéá ìïâáôá ᴦ

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Ùõëé Õúá÷á¬ Ôáôóõùá Íïòéùáíá¬ áîäåîúùíå äéçåóôéïî® Áóéáî­Áõóô® Ê® Áîéíáì

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öáòéïõó íéóï ðáóôåó íáîõæáãôõòåä éî Êáðáî® Êðåðôéäå äåòéöåä æòïí ðïòãéîå ôòïðïîéî Ã®¬Îõôò Óãé Öéôáíéîïì ® ²°±³» µ¹º ´¶²Áîéíáì Óãéåîãå Êïõòîáì ¬ ²°°³¬ ·´º µ³±µᴦÔáôóõùá ÍÏÒÉÙÁÍÁ¬ Åòéëá ÙÁÎÏ¬ᴶᴦÙ á ó õ ë ï Í á ë é î ï ­ × á ë á ç é ¬ Ù õ ë é è é ò ïËáúõíé ËÉÔÔÁ¬ Óèéî­éãèé ËÁ×ÁÍÏÔÏ¬Ùïóèéíõòá¬ Ùõëé Õúá÷á¬ Îïâõèéòï Úáéíá¬Ùõëéï ËÁ×ÁÍÕÒÁ¬ áîä Óåôóõëï

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Óïùâåáî Áììåòçåî Ìåöåìó Âéïóãé®¬ Âéïôåãè¬òåóéóôéî óåãòåôéïî âù á îïöåì òåçõìáôïòù

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中味研報告 第36号（2015）

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A
（％）

900

100

500

50

）CH3CN
concentration

750

0

（

）Abs. 210nｍ

（mAU）

250
0

（

0

5

10

15

20

25

28

Retention time（min）

C

1.8

MeOH
━

抽 出

1.5

欠 乏

通 常

ZIP4 mRNAの発現量の相対値

B

サ ポ
━
0.01
0.02 （％）

1.0

ZIP4
0.5

tubulin
0
通常

抽出

サポ

図１．単一化合物として得られたソヤサポニンの ZIP4 発現促進効果

A

MT-I mRNAの発現量の相対値

Ａ．HPLC による単一化合物であることの確認。 Ｂ．ソヤサポニン（サポ），あるいは精製前の大豆抽出物は，ZIP4 のmRNA の発現には大きな影響を与えない。 Ｃ．精製前の大豆抽出物と同様に，ソヤサポニン（サポ）は ZIP4 タンパク質の発現を増加させる。

B

6

（-）

欠乏

亜鉛

抽出

通常

5
4
3
2
1
0
通常

C

抽出

サポ

吸光度（595 nm）

1.2
1.0
0.8
0.6

図２．ソヤサポニンを含む大豆抽出物の細胞への影響の評価

0.4
0.2
0
0.02
0
0.05 （％）━
抽 出

Ａ．ソヤサポニン（サポ）と精製前の大豆抽出物は，MT-I の発現量を増加させる。 Ｂ．ソヤサポニンを含む大豆抽出物は，Texas Red で標識されたトランスフェリンの細胞内への取り込みに影響を与えない（細胞内に赤い小胞に変化がないことがわかる）。（ - ）はトランスフェリンの処理がない場合。 Ｃ．大豆抽出物（終濃度を%で示した）が細胞毒性を与えないことを示す MTT アッセイの結果。MTT アッセイでは，細胞死が起こると 595 nm の波長が減少する。

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1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

N2

11

12

13

サ ポ

抽 出

N1

14

ZIP4

コントロール

図３．ヒト ZIP4 の発現に及ぼす味噌抽出物の影響
いくつかの味噌抽出物において，MDCK 細胞の膜表面に発現させたヒト ZIP4 量を増加させる活性があることがわかる。
N は処理無しを示す。ソヤサポニンと精製前の大豆抽出物にもヒト ZIP4 の発現を増加させる活性が確認できる。

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中味研報告 第36号（2015）ᆅ ሱ ‫֖ ڨ‬৻ॴકశʃʒʶʃȾɛɞᑲൡᑤͲ˩ɥ୎‫ױ‬Ȭɞ֞‫˹أ‬Ɂႆျ๊ॴʤʡʋʓɁ૘ጪ
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中味研報告 第36号（2015）

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中味研報告 第36号（2015）

10

Relative Ratio of body weight gain from 0 day
on the CRS treatment（％ of 0 day）

A

5

0

-5

-10

-15

-20
─

─

No.1

No.2

No.3

No.4

No.5

No.6

No.7

No.8

No.9

No.10

No.11

No.8

No.9

No.10

No.11

Chronic restraint stress（CRS）

B
Corticosterone conc.（pJ/mL）

500

400

300

200

100

0
─

─

No.1

No.2

No.3

No.4

No.5

No.6

No.7

Chronic restraint stress（CRS）

図１．慢性拘束ストレス負荷および仙台味噌摂取による体重増加率の変化および血清中コルチコステロン
濃度の変化

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Ǌ ¶· Ǌ
中味研報告 第36号（2015）

Relative Ratio of body weight gain from 0 day
on the CRS treatment for 3 weeks（％ of 0 day）

A

14
12
10
8
6
4
2
0
-2
-4
-6

─

─

W

>3kDa

<3kDa

W

No.4

>3kDa

<3kDa

W

No.5

>3kDa

<3kDa

No.7

B

Relative thymus weight（thymus/b.w.）

Chronic restraint stress（CRS）
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
─

─

W

>3kDa

<3kDa

W

No.4

>3kDa

<3kDa

W

No.5

>3kDa

<3kDa

No.7

Chronic restraint stress（CRS）

C
Relative adrenal gland weight（adrenal gland/b.w.）

0.25

0.20

0.15

0.10

0.05

0
─

─

W

>3kDa

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No.4

W

>3kDa

<3kDa

No.5

W

>3kDa

<3kDa

No.7

Chronic restraint stress（CRS）

図２．慢性拘束ストレス負荷および仙台味噌摂取による体重増加率の変化および臓器重量の変化
Ｗ ： 分画していない味噌サンプル溶液>3kDa：3kDa 以上のペプチドを含む味噌サンプル溶液の分画<3kDa：3kDa 以下のペプチドを含む味噌サンプル溶液の分画

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中味研報告 第36号（2015）

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1000

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＊
＊

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0
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─

W

>3kDa

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W

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No.4

<3kDa

No.5

W

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No.7

Chronic restraint stress（CRS）
The asterisks indicate signiﬁcant diﬀerences from CRS group（＊ P < 0.05）

図３．慢性拘束ストレス負荷および仙台味噌摂取による血清中コルチコステロン濃度の変化
Ｗ ： 分画していない味噌サンプル溶液>3kDa：3kDa 以上のペプチドを含む味噌サンプル溶液の分画<3kDa：3kDa 以下のペプチドを含む味噌サンプル溶液の分画

VehicleCRS

CRS + No. 4 > 3 kDa

海馬

視床下部室傍核

図４．慢性拘束ストレス負荷および仙台味噌 No. 4 の 3 kDa 以上のペプチド分画摂取による GR の局在および発現変化GR は DAB 染色，核はメチルグリーンにより染色して検出した。
GR は正常時に CA1 および DG に好発現しているのだが，CRS により海馬全体で DAB の色調が強くなった。

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中味研報告 第36号（2015）

Vehicle

CRS

CRS + No.4 > 3 kDa

図５．慢性拘束ストレス負荷および仙台味噌 No. 4 の 3 kDa 以上のペプチド分画摂取によるアポトーシ
ス陽性細胞の変化
アポトーシス陽性細胞は DAB + Ni 染色，核はメチルグリーンにより染色して検出した。
矢印の濃く染まった細胞がアポトーシス陽性細胞である。

VehicleCRS

CRS + No. 4 > 3 kDa

図６．慢性拘束ストレス負荷および仙台味噌 No. 4 の 3 kDa 以上のペプチド分画摂取による神経系前駆細胞（ Brd U 陽性細胞 ）の変化
神経系前駆細胞（ Brd U 陽性細胞 ）は DAB + Ni 染色，核はメチルグリーンにより染色して検出した。
点線で囲った海馬 DG 付近に濃く染まった神経系前駆細胞が多く観察できる。

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表１．本研究に用いた味噌とその原料

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図１．スクリーニング試料の分画スキームÈåÌá ȾຍӏȪᴩʜʃʒʽ È³ Ɂ ¹ ႭᄻɁʴʂʽ
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中味研報告 第36号（2015）

Fraction

Layer

RP CC

Control--miso 2-2

CHCl3

70％ MeOH

miso 3-3

CHCl3

70％ MeCN

miso 3-10

H2O

70％ MeOH

miso 6-4

CHCl3

80％ MeCN

miso 8-2

CHCl3

70％ MeOH

miso 8-10

H2O

70％ MeOH

miso 15-1

CHCl3

50％ MeOH

miso 15-9

H2O

50％ MeOH

H3K9me3

H3K27me3

H3K27ac

HeLa

H3K9me3

H3K27me3

H3K27achTERT-RPE1

図２．味噌画分によるヒストン修飾変化
活性画分（画分番号，液層，RP CCでの溶出液）と，HeLa および hTERT - RPE1 細胞それぞれにおけるヒストン修飾に対する各画分の影響。顕著な変化を及ぼした画分についてのみ免疫染色の結果を示した。

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中味研報告 第36号（2015）

Controlmiso 2-2

ControlCompound 2

H4K16ac

H4K16ac

図３．画分 2-2 の H4K16ac に対する効果
HeLa 細胞に画分 2-2 を 30 µg/mL で添加し， H4K16acを免疫染色により検出した。

図４．化合物１および２が H4K16ac に対する効果
HeLa 細胞に化合物１１および２２を 40 µg / mL で添加し，
H4K16ac を免疫染色により検出した。

*

70

*

70

*

60

60

50

50

Astrocyte / ％Neuron / ％Compound 1

40
30

40
30

20

20

10

10

0

0
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Compound 2

Control■ 0.1 μ㹥/ mL

Compound 1■ 1 μ㹥/ mL

Compound 2■ 0.1 μ㹥/ mL

図５．化合物１および２がニューロン・アストロサイト分化におよぼす影響
神経幹細胞をニューロンまたはアストロサイトへ分化誘導する際に，化合物１１および２２を終濃度 1 および 0.1 µg / mLとなるように添加し，３日後にニューロンおよびアストロサイトに対する特異的な抗体を用いて免疫染色を行い，Hoechst
陽性細胞数に対する各抗原陽性細胞数の割合から分化効率を算出した（左：ニューロン分化効率，右：アストロサイト分
化効率，* p < 0.05）。

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中味研報告 第36号（2015）

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中味研報告 第36号（2015）ɺʳʂɲʽʒ໎ᫌᴦȺյႆ਽࿎ɁԨᫌˁጀᛏɥᚐȶáãéä °®µ ç ᴩ°®² Í ðèïóðèáôå âõææåòᴥðÈ ·®°ᴦȲǿ±²®µ íìᴩ ɿ ʽ ʡ ʵ ໎ ๬ ² íìᴥ ɽ ʽ ʒ ʷ ˂ ʵ ɂǽǽÕ®Ð®×®ᴦɥຉնȪᴩ²´ ஽ᩖ µ°ƇȺɮʽɷʯʣ˂

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中味研報告 第36号（2015）

Abs. at 420 nm Abs. at 350 nm Abs. at 625 nm

Blue-M1
Blue-M1

Peak-1
Blue-M1

Peak-23 daysPeak-3Blue-M1

0

5

10 15 20 25 30 35 40 45

05Retention Time (min)10 15 20 25 30 35 40 45

Retention Time (min)図２．Blue -M1 のインキュベーション溶液の逆相系 H PLC* : P<0 05** : P<0 01 vs Con

バーは標準偏差

n=10

COOH

12 COOH

CH 2

1 CH 2

N

N
7

H2C
14 9
CHO

CHO

CHOH

11

8

10

N

N

CH 2

2 CH 2COOH

13 COOH

CH 2 OH** : P<0 01 vs Con

5 CHOH
4 CH 2 OH

図３．Peak - 2の化学構造（PPA-1）* : P<0 05

6

3
CHOH

バーは標準偏差

図４．Peak-1の化学構造（PPA-2）
n=10* : P<0 05** : P<0 01 vs Con

バーは標準偏差n=10ፀ౓ᴩÐåáë­± ɂَᴱɁʞʷʷʞʷ˂ʵɬʵʑʜ

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中味研報告 第36号（2015）

表１．Peak-1 の NMR データ
Îï®

±³

±

Ãᴥððíᴦ

³Èᴥððíᴦ

表２．Peak - 3 の 1 H- NM R データ

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Èᴥððíᴦ±´¸®·±´®¹´ᴥᵰᴦ

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ǽ

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ż

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COOH

e CH

a CH

²®¹° ­ ³®°µ°ǽǽǽᴥᵪᴦ

COOH
e’

2

CH 2

N

N

f

CHOH

2

O

c
d CHOHc’d’ CHOHghb CH 2 OHN+N

b’ CH 2 OH

ie’’’ CH 2

e’’ CH 2

COOH

COOH

図５．Peak - 3（Yellow - M1）の推定構造* P 0 05** P 0 01

C

バ

は標準偏差

10

ʽȪᴩᥣጨՁ‫ފ‬ȻፀնȪȹȗɞժᑤॴɥᇉ‫ד‬ȪȹሱȺᴩÂìõå­Í± Ɂɮʽɷʯʣ˂ʁʱʽȺ୿ȲȾȗɞǿɑȲᴩ᳁ᓨɥ֔ȬɞȦȻȞɜ Âìõå­Í± ɁÐÐÁ­±ᴩÐÐÁ­²ᴩÙåììï÷­Í± ȟႆ਽ȬɞȦȻȟцमഫᣲȟҒ୽ȨɟȲȻ૜ߔȪȲǿ͏˨Ɂፀ౓ᴩ

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中味研報告 第36号（2015）ᴯᴦÐÐÁ­± Ɂ੷ᥣԇॴôïãïðèåòïì ຍ ӏ ஽ Ɂ ÐÏÖ Ɂ ੱ Ҥ လ ɥ ᇉ Ȫ ȲǿǽØùì­Çìù ጕɁᠣᓨᓨጨȾȷȗȹɂᴩႆ਽ᦀɁ

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200 μM PPA-1

500 μM PPA-1

1000 μM PPA-1

2000 μM PPA-1
0

20

40

60

80

POV Inhibition (%)（ｂ）

500 μM PPA-1
500 μM Blue-M1
500 μM PA

0.015 % Red Fraction
0.015 % Xyl-Gly Mel
500 μM Ascorbic acid
500 μM -Tocopherol
0

20

40

60

80

100

POV Inhibition (%)
図６．リノール酸の自動酸化に対する抗酸化性（ａ）PPA - 1 ;（ｂ）各種試料
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中味研報告 第36号（2015）ᴯᴦ ຝ ᣃ ߑ ̷ᴩ ஗ ང ୫ ‫ޔ‬ᴩ ԇ ‫ ޙ‬Ȼ ႆ ࿎ᴩµ°¨²©¬ពǽᢷ¸°­¸²ᴥ²°±²ᴦᴫǽటᆅሱɂᴩ
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Í® Íéõòá¬ Ô® Çïíùï¬áîä È® Ëáôï¬ Âéïóãé®

Èáùáóå¬ Âéïóãé® Âéïôåãèîïì® Âéïãèåí® ·³¬Âéïôåãèîïì® Âéïãèåí® ¬ ¶³¬ ±µ±²­±µ±´ ¨±¹¹¹©®

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Ôïíïùõëé ÙÁÍÂÅ¬ Èéäåëáúõ ÍÉÕÒÁ¬ Ùáóõùõëé ÓÈÉÒÁÉÓÈÉ
Éîóôéôõôå ïæ Äåöåìïðíåîô¬ Áçéîç áîä Ãáîãåò¬ Ôïèïëõ Õîéöåòóéôù´­± Óåéòùï­íáãèé¬ Áïâá­ëõ¬ Óåîäáé ¹¸°­¸µ·µ¬ Êáðáî

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ðòïèéâéôåä âåæïòå ôèå åøðåòéíåîôó® Ôùðå ÁటᓨȾ۹Ȣֆ఍Ȩɟɞ֞‫أ‬Ɂᒲऺᇘጽൡᑤӛ౓Ⱦâåèáöéïò ðáôôåòî¬ èïóôéìéôù óãïòå¬ áîä âåãëาᄻȪᆅሱɥᚐȶȲǿϧ࣐Ƚԗ‫ޙ᥂ޙ‬ႆȽȼɥߦ

äåðòåóóéïî óãáìå ÷åòå ãáìãõìáôåä æòïí ôèå៎Ⱦ᭥ႆ๊ʛʉ˂ʽȻ॑ᒨȻӦᑩɁᚌ٢Օߪൡᑤ

Ñõåóôéïîîáéòå âåæïòå ôèå íåáóõòåíåîôó®

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âáòïòåæìåø æõîãôéïî ÷áó ãáìãõìáôåä æòïí ôèååöáìõáôéîç äåöéãåᴥÊðî Ðô®´·¸¹²°³ᴦèáóóìïðå ïæ ôèå òåçòåóóéïî ìéîå âåô÷ååî ôèå âìïïä

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中味研報告 第36号（2015）ðòåóóõòå ãèáîçå áîä ÈÒ® Áîä âáòïòåæìåø
æõîãôéïî ïæ ôèå áòôåòù ÷áó ãáìãõìáôåä æòïíôèå òåçòåóóéïî ìéîå âåô÷ååî ðõìóå ôòáîíéóóéïî
ôéíåᴥÐÔÔᴦáîä âìïïä ðòåóóõòå ãèáîçåó ÷éôèôéíå ìáç ãáìãõìáôåä æòïí ôèå ãòïóó ãïòòåìáôéïî
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äáôá áîä Íéóï éîôáëå èáâéô áîä èåíïäùîáíéã
óðåãôòáì äáôá® Ïõò òåóõìôó èáä óõççåóôåä ôèáôåáôéîç èáâéô èáä ôèå åææåãô ïî ôèå áõôïîïíéã
îåòöïõó óùóôåí âáòïòåæìåø óåîóéôéöéôù®

図１．遠心式補助人工心臓 EvaHeart を応用した
両心室置換 ﬁtting studyǽ* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10

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中味研報告 第36号（2015）

脈波 ＋ 心電図 → P T T

Pulse wave transmission timeőŶŭŴŦġŸŢŷŦ

（PTT ）

心電図

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光電センサ

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安価・小型で装着が簡単

脈波

データ収集装置

図２．味噌などの発酵食品が血圧反射に与える影響の解析装置* : P<0.05，** : P<0.01 vs. Con．バーは標準偏差，n=10Ⱥȕɞǿɛɞɬʽɻ˂ʒᝩ౼ɥᚐȗᴩ֞‫أ‬Ɂଈ՘Ȼᴩᚌ٢

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表１．タイプＡスケーリング（Type A scale）
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中味研報告 第36号（2015）

MSS2 : Frequent Miso customs,
Related to Total amount of Miso

MSS1 : Miso Ratio
586Frequency

Frequency

4

3

2

4

2

1

0

0
0

20

40

60

0

20

40

mss1

60

80

mss2

図３．生活習慣における味噌摂取回数と頻度͍ȾɬʫʴɵɁʟʴ˂ʓʨʽȻʷ˂ʆʽʨʽɁᄉ

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30

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25

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0.508

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ǽ

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15

10

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0
0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Miso Standard Scale

図４．味噌摂取習慣とタイプＡスケーリングລȟժᑤȺȕȶȲǿ
Ǌ ¸· Ǌ

中味研報告 第36号（2015）

Miso SS vs Beck Depression Inventory
30

Correlation
0.2447Beck Depression Inventory

25

Ｐ＞┃ｔ┃
0.094

20

15

10

5

ｙ= 0.1142x - 1.4113
0
0

20

40

60

80

100

Miso Standard Scale

図５．味噌摂取習慣とベックうつ病スケール

Miso SS vs Hostility Scale
30

Correlation
0.2787

Hostility Scale

25

Ｐ＞┃ｔ┃
0.905

20

15

ｙ= 0.1418x + 4.4624

10

5

0
0

20

40

60

80

100

Miso Standard Scale

図６．味噌摂取習慣とホスティリティスケール

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中味研報告 第36号（2015）

立位

Ｐ＞┃ｔ┃
0.620

0.59
0.58

Correlation-0.1256

ρmax 血圧─心拍変動

0.57
0.56
0.55
0.54
0.53

ｙ= -0.0004x + 0.5392

0.52
0.51
0.50
0.49
0

20

40

60

80

100

120

MSS2

図７．心拍変動と血圧変動の線形性と味噌摂取パターンʢʍʓɬʍʡʐɭʵʒȽȼɁՙӦᄑͶͱ۰૰ɗᴩ

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中味研報告 第36号（2015）Ô¬ Ùïóèéúá÷á Í¬ Æõëõäï Ó¬ Æõëõäá È¬ÒÈ¬ ÂÙÅÒÓ Ó® Ãéòãõìáôéïî® ±¹¶´ Êõî»²¹º¸·´­Ëá÷áóèéíá Ò¬ Óèéúõëá Ë¬ Îáîëá Ó¬ Ôáîáëá¸¶Á¬ Áâå Ë¬ Óèïõêé Ô¬ Èïîçï Í¬ Ôáâáùáóèé Ë¬

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中味研報告 第36号（2015）