Cellartis® 幹細胞研究用製品ガイド〜 培地・分化誘導キット 〜

2018 年 4 月版

基礎研究から創薬スクリーニング・再生医療応用に
幹細胞培養用培地（ヒト、マウス、ラット）
胚体内胚葉、肝細胞分化誘導キット
初代肝細胞用培地
間葉系幹細胞用培地
神経分化用培地・神経幹細胞
細胞関連抗体Cellartisは、幹細胞の基礎研究から応用までを支援する
タカラバイオのブランドです。
タカラバイオでは、幹細胞の基礎研究から分化細胞応用に至るまで、様々な場面に適したツールをご用意しています。
幹細胞の基礎研究に・・・

ヒトiPS／ES細胞をフィーダーフリー培養 条 件下で未 分化状 態を維持したまま培養できる【Cellartis ® DEF- CS™
500 Culture System】やヒト間葉系幹細胞用Xeno-Free培地【Cellartis® MSC Xeno-Free Culture Medium】、
マウスES細胞用培地【iSTEM™】・【GS2-M ®】などがおススメです。また【NDiﬀ® 227】のヒトナイーブ型iPS／ES細胞への利用も注目されています。

分化誘導研究に・・・

多能性幹細胞から胚体内胚葉（DE）細胞、肝細胞への分化誘導を楽に進めることができる【Cellartis ® iPS Cell to
Hepatocyte Diﬀerentiation System】や、神経幹細胞の維持や神経分化に適した【RHB-A®】などの完全合成無血清培地をラインナップしています。

再生医療や疾患の研究、創薬スクリーニングに・・・

ロット間差が少なく高品質な、ヒトiPS細胞由来の肝細胞、膵β細胞などを提供しています。

本カタログでは、数多くのCellartis製品のうち、培地および分化誘導キットについてご紹介します。

iPS細胞誘導から分化細胞応用までの実験フロー
外胚葉
受精卵

ES細胞

神経細胞 表皮細胞 毛根細胞

分化
誘導

体細胞

中胚葉

iPS細胞

誘導

■ 幹細胞培養用培地■ ヒトES細胞由来
間葉系前駆細胞■ 初代肝細胞培養用
培地

骨

肝細胞

膵細胞

腸細胞

分化

分化細胞応用■ 内胚葉細胞・肝細胞
分化誘導キット■ ヒトiPS細胞由来分化細胞■ 神経細胞分化用培地

・心筋細胞 ・血管内皮細胞■ 神経幹細胞＆培地
キット■ 培地添加剤

1

心筋細胞

内胚葉

増殖維持

■ ヒトiPS細胞株

赤血球｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

・肝細胞
■ 抗体

・膵β細胞

幹細胞／初代細胞用培地

選択ガイド● ヒトiPS／ES細胞用培地【DEF-CS™】
製 品 名

製品コード

特長・用途

キット内容

掲載ページ

Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture System

Y30010

スタンダードタイプ

基本培地
培地添加剤
コーティング剤

p.3 - 4

Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning
DEF-CS™ Culture Media Kit

Y30021

基本培地
ゲノム編集／シングルセル
培地添加剤
クローニング用に最適化（※）
コーティング剤

p.9 - 10

Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free
Culture Medium w/o antibiotics

Y30045

Xeno-Freeタイプ
前臨床での使用に最適

基本培地
培地添加剤

p.11

Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free
GMP Grade Basal Medium

Y30071

Xeno-FreeタイプのGMP grade品

基本培地

p.12

Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free
3D Spheroid Culture Medium w/o antibiotics

Y30047

Xeno-Freeの3Dスフェロ
イド培養用。培養のスケールアップに有用

基本培地
培地添加剤

p.12

※スタンダードタイプ（製品コード Y30010）と比較して、シングルセルクローニングに合わせて COAT-1 の仕様・容量および GF-3 の容量を最適化しています。

● マウス・ラットES／iPS細胞用培地
製品コード

動物種

細胞種*

掲載ページ

®

製 品 名

Y40030マウス・ヒトES、iPS

p.15

GS1-R™

Y40020

ラット

ES、EG

p.15

iSTEM™

Y40010

マウス

ES

p.16

GS2-M

● ナイーブ型iPS細胞研究用培地
製 品 名

製品コード

動物種

細胞種*

掲載ページ

Y40002

ヒト・マウスヒト ナイーブ型iPS、
マウスES

p.17

製品コード

動物種

細胞種*

掲載ページ

Cellartis MSC Xeno-Free Culture Medium

Y50200

ヒト

MSC

p.18

RHB-A®

Y40001

マウス・ヒト

NS

p.19

製品コード

動物種

細胞種*

掲載ページ

RHB-Basal™

Y40000マウス・ヒトNS

p.20

NDiff® N2

Y40100ヒト・マウス

ES、NS

p.20

NDiff® N2-AF

Y40110ヒト・マウス

ES、NS

p.20

NDiff® 227● 体性幹細胞用維持培地
製 品 名®

● 神経分化用培地・添加剤
製 品 名● 肝細胞分化誘導キット・初代肝細胞長期維持培地
製 品 名

製品コード

特長・用途

掲載ページ

Cellartis iPS Cell to Hepatocyte
Differentiation System

Y30055iPS細胞から肝細胞への分化誘導キット

p.21 - 23

Cellartis® Definitive Endoderm Differentiation
Kit with DEF-CS™ Culture System

Y30035iPS細胞から胚体内胚葉（DE）細胞への分化誘導キット

p.21 - 23

Cellartis® Hepatocyte Differentiation Kit

Y30050

DE細胞から肝細胞への分化誘導キット

p.21 - 23

Cellartis® Power™ Primary HEP Medium

Y20020

ヒト初代肝細胞の長期維持培養

p.24 - 25®

*ES： embryonic stem iPS： induced pluripotent stem EG： embryonic germ MSC： mesenchymal stem NS： neural stem
｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド2

ヒトiPS／ES細胞培養システム＜スタンダードタイプ＞

Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture System● シングルセル継代で単層培養でき、再現性の高い培養が可能● オンフィーダー培養からフィーダーフリー培養への移行が簡単● 長期間の未分化維持培養が可能● 培地添加剤とコーティング剤を含むオールインワンキット● 高効率なシングルセルクローニングが可能
製 品 名

内 容

容 量

製品コード

価格（税別）

Cellartis®
DEF-CS™ 500
Culture System

DEF-CS 500 Basal Medium 500 ml
DEF-CS 500 COAT-1
4 ml ・・・プレートコーティング剤
DEF-CS GF-1
750 μl×2
DEF-CS GF-2
500 μl ・・培地添加剤
DEF-CS GF-3
200 μl

1 Kit

Y30010¥59,800【シングルセルにしたiPS細胞が単層状に増殖していく様子】
0 hours（トリパンブルー染色）

Day1

Day2

Day3

図1.
ヒトiPS細胞株（253G1）を本製品のプロトコールに従いシングルセルにまで分散し、トリパンブルーで染色した。ほとんどの細胞が生細胞であることを確認後、本培地にて細胞を播種し培養を行った。

Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemを用いて、シングルセルに分散した状態からの効率のよい増殖が確認できた。単層状に均一な培養ができ、シングルセル継代による安定した維持培養が可能である。
★弊社ウェブサイトで培養実験動画もご覧ください

http://movie.takara-bio.co.jp/【馴化後の培養細胞の形態を比較】①On feeder

②本製品

③A社培地

④B社培地

図2.
以下の各培地・培養条件でヒトiPS細胞株（253G1）を培養した。培養条件・コーティング剤は、各培地の推奨プロトコールに従った。
①On feeder（MMC処理STO細胞使用）
②本製品
③A社培地
④B社培地
馴化後に継代し5日目の培養細胞を写真で示した。

シングルセル継代が可能なCellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemでは、継代後も再現性の良い維持培養が（弊社比較データ）可能である。

3｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

ヒトiPS／ES細胞培養システム（前ページから続く）【未分化マーカーの発現を比較】

10 3

10 4

Mean :15767

10 5

④B社培地

88.5%

25

50

25 50 75 100 125
10 2

③A社培地

10 3

10 4

10 5

Mean :27042

0

0
10 2

74.6%

25 50 75 100 125

98.3%

75 100②本製品

025 50 75 100 125
0TRA1-60①On feeder 95.9%

10 2

10 3

10 4

10 5

10 2

Mean :8976

10 3

10 4

10 5

Mean :6366

図3.
図2の培養条件（① 〜 ④）でヒトiPS細胞株（253G1）を5週間培養後、細胞を回収して未分化マーカーTRA1-60の発現をフローサイト
メトリーにて解析した。

Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemで培養した細胞は高い陽性率と発現強度を示した。 （弊社比較データ）【培養5週間後の細胞の形質を比較】
②本製品

③A社培地

④B社培地

SSC

①On feeder

FSC
図4.
各培地・培養条件（①〜④）でヒトiPS細胞株（253G1）を5週間培養後、細胞を回収し、フローサイトメトリーにて解析した（FSC対SSC）。
培養条件・コーティング剤は、各培地の推奨プロトコールに従った。

Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemで培養した細胞はOn feederで培養した細胞に類似した形質を示した。

（弊社比較データ）

高いSSC値が、未分化マーカー発現率とシングルセルで継代した時のコロニー形成効率に相関することを示した報告は、以下の参考文献をご参照ください。

参考文献
・ Ramirez JM, et al, Side scatter intensity is highly heterogeneous in undifferentiated pluripotent stem cells and predicts clonogenic
self-renewal. Stem Cells Dev. 2013 Jun 15; 22(12):1851-1860.

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無料サンプル申し込みフォーム https://www.takara-bio.co.jp/research/sample/DEF1/｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

4

ヒトiPS／ES細胞培養システム
Application Note 1

Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemを用いたiPS細胞のフィーダーフリー培養への移行
はじめに

Cellartis ® DEF-CS™ 500 Culture Systemは、フィーダーフリー条件下でiPS細胞を培養することができるシステムです。
本Application Noteでは、マウスフィーダー細胞上で維持培養したヒトiPS細胞株（201B7および253G1）を、Cellartis ®
DEF-CS™ 500 Culture Systemにてフィーダーフリー培養へと移行した実験例をご紹介します。

【方法】

マウスフィーダー細胞（※）上で維持培養したヒトiPS細胞株（※MMC処理STO細胞を使用）
TrypLE Select（Thermo Fisher Scientiﬁc社、Cat. No.12563029）を用いてシングルセルに分散

継代（Passaɡe1）

DEF-CS完全培地（GF-1、GF-2、GF-3含有）にて細胞を播種［細胞密度：2×104 cells/cm2］培地交換（※）

継代（Passaɡe2）

DEF-CS完全培地（GF-1、GF-2、GF-3含有）にて細胞を播種［細胞密度：2×104 cells/cm2］培地交換（※）※培地交換のスケジュール
day1：培地交換
day2：なし
day3：培地交換
day4：培地が黄色くなっていたら交換
day5：培地交換
day6：継代細胞を回収し、FACS解析／継代維持
注：細胞株の種類によっては、細胞播種密度や培地交換
頻度は変わる場合があります。

【結果】
ヒトiPS細胞201B7株

ヒトiPS細胞253G1株

Day6

Day5

Day7

Day6

Day5
Day6

Passaɡe15

Day1

Passaɡe1

Day1

Passaɡe2

Day1

Passaɡe1

図5. フィーダーフリー培養へ移行後の細胞の様子
Cellartis DEF-CS 500 Culture Systemでオンフィーダーからフィーダーフリー培養へ移行した細胞は単層状態で培養できた（253G1株のPassaɡe1は7日まで培養した）。さらに、253G1株では15継代まで継続して安定な単層培養が可能であった。
5｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

ヒトiPS／ES細胞培養システム

Application Note 1（続）DEF-CS培地に移行

オンフィーダー培養

DEF-CS培地に移行

50 100 150 200 250

50 100 150 200 250

99.9%

50

10 3

104

10 5

10 3

25 50 75 100 125
104

10 5

98.8%

0

0

25
0
102

102

102

10 3

104

10 5

102

150

10 5

10 3

104

10 5

104

10 5

99.8%

100

104

97.2%

50

10 3

100 150 200 250

025 50 75 100 125
0

102

Count

98.3%

98.5%

50

0

10 5

25 50 75 100 125

104

50 100 150 200 250

25 50 75 100 125

Count

10 3

Count

75 100

95.7%

Count

0 10 2030 405060 7080

96.2%

102

SSEA4

50 100 150 200 250

50 100 150 200 250
0 10203040506070 8090

TRA1-60

SSC

SSC（×A1,000）

SSC（×A1,000）

50 100 150 200 250

オンフィーダー培養

FSC

ヒトiPS細胞253G1株（Passaɡe16）

50 100 150 200 250

ヒトiPS細胞201B7株（Passaɡe2）

102

10 3

104

10 5

102

10 3

図6. 未分化マーカーの発現確認
各条件で培養したヒトiPS細胞（201B7株は2継代後、253G1株は16継代後）を回収し、未分化マーカー（TRA1-60、SSEA4）の発現をフロー
サイトメトリーにて解析した。Cellartis DEF-CS 500 Culture Systemで培養した細胞は、オンフィーダー培養細胞と同等の高い陽性率を示した。

DEF-CS
A社培地
B社培地

累積細胞数

On feeder（control）

移行5継代目

培養日数

16継代目

図7. 長期培養における細胞増殖
各種培地でフィーダーフリー培養へ移行したヒトiPS株（253G1）について長期培養試験を実施した。7日毎の継代時に生細胞数を計測し、累計細胞数を算出した。Cellartis DEF-CS 500 Culture Systemで培養した細胞の増殖曲線は高い直線性を示し、回収細胞数は最も多かった。B社培
地では本培養条件で増殖を維持できなかった。
（弊社比較データ）

結論
Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemの利用により、オンフィーダー培養したヒトiPS細胞をフィーダーフリー培
養へ簡単に移行することができました。さらに、オンフィーダー培養細胞と同等の未分化マーカーを発現し、未分化状態を維持していることも確認できました。
各社培地にてフィーダーフリー培養へ移行し長期培養した結果から、Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemで培養したヒトiPS細胞は、シングルセル分散によるハンドリングの容易さから安定した継代作業が可能であり、増殖曲線は高い直線性を示し、回収細胞数も最も多く、未分化細胞の拡大培養に適していることが示されました。

｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

6

ヒトiPS／ES細胞培養システム
Application Note 2

Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture SystemによるiPS細胞のシングルセルクローニング
はじめに

ゲノム編集技術の発展により、現在ではさまざまな生物のゲノムに変異導入が可能です。ヒトiPS細胞からも、さまざまな病態疾患モデルとなる細胞や、再生医療を目的としたゲノム改変細胞の作製が可能となりました。
これまでiPS細胞を未分化状態で増殖させるためには他のiPS細胞やフィーダー細胞との細胞間接触が必要であり、シングルセルからのクローニングが困難でしたが、最近ではシングルセルクローニングを可能にする培養システムの開発が進められています。
本Application Noteでは、Cellartis ® DEF-CS™ 500 Culture System（製品コード Y30010）を用いてヒトiPS細胞のシン
グルセルクローニングを行った実験例と、他社製品よりも高いクローニング効率、良好な増殖結果を紹介します。

【材料および方法】
細胞培養

Cellartis® human iPS cell line 12、18および22（製品コード Y00285、Y00305、Y00325）は、あらかじめCellartis ®
DEF-CS™ 500 Culture Systemまたは他社培地中で各推奨
条件にて3週間の馴化培養を行った後、シングルセルクローニ
ング試験に供した。各細胞を段階希釈後、96ウェルプレートに1細胞／ウェルで播種し、それぞれの培地で培養を行った。

実験フロー
iPS細胞

各培地への細胞馴化（3週間）

クローニング効率と未分化維持の確認

iPS細胞を1細胞／ウェルで播種して10日間培養した後、顕微鏡観察により確かに1細胞から増殖したウェル数をカウントし、全ウェルに対するクローニング効率（Cloninɡ Eﬃciency）を算出した。さらにシングルセルから増殖したクローンの一部を継代し、9〜11日間、拡大培養を行った。増殖したウェル数をカウントし、自己増殖可能なクローンの取得率（Expanded Clones）とした。
シングルセル播種から19日間培養後、増殖したiPS細胞クローンについて未分化マーカー発現を確認した。Alexa Fluor 488
標識抗TRA1-60抗体とPhycoerythrin標識抗SSEA4抗体
を用いて二重染色後、フローサイトメトリー解析により各マーカー陽性の細胞パーセントと発現強度を算出した。

限界希釈／播種
1 cell/well

クローン候補選択／拡大培養
96 → 48 or 24 well plate

細胞観察、FACS解析【結果】
表1． シングルセルクローニングにより得られたクローン数
hiPS Cell line

Cellartis human iPS
cell line 12

Cellartis human iPS
cell line 18

Cellartis human iPS
cell line 22

MediumSeeded
Wells

Total
Clones(a)Isolated
Clones(b)Cloning
Eﬃciency(c)ExpandedClones(d)Cellartis DEF-CS

96

28

26

27.1 %

5/5

B社培地

96

27

24

25.0 %

5/5

A社培地

96

5

5

5.2 %

3/5

Cellartis DEF-CS

96

33

29

30.2 %

5/5

B社培地

96

21

20

20.8 %

1/5

A社培地

96

0

0

0.0 %

0/0

Cellartis DEF-CS

96

32

30

31.3 %

5/5

B社培地

96

31

28

29.2 %

5/5

A社培地

96

0

0

0.0 %

0/0

(a) Day10に増殖が見られたウェル数(b) Day10に増殖が見られたウェルの内、1クローン／wellであったウェル数(c) 1クローン／wellで増殖が見られたウェルの割合=(b)/96(d) 1クローン／wellで得られたクローン 5ウェルを9-11日間拡大培養し、増殖が確認された割合

7｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド（弊社比較データ）

ヒトiPS／ES細胞培養システム

Application Note 2（続）■Cellartis DEF-CS™
■B社培地
■A社培地

図8. シングルセルクローニングの効率
表1の結果をグラフ化した。DEF-CSシステムは、3種のiPS細胞株において、他社培地と比較して最も高いシング（弊社比較データ）
ルセルクローニング効率を示した。

（a）

クローン＃
12

iPS cell line

18

22

12

Cellartis DEF-CS（b）

iPS cell line 12

Cellartis
DEF-CS™

®

iPS cell line 18

18
B社培地

22

12
A社培地

iPS cell line 22

0.75%

97.50%

4.34%

95.26%

1.27%

98.35%

1.71%

0.04%

0.24%

0.16%

0.16%

0.22%

1.37%

1.19%

5.83%

9.95%

8.11%

51.77%

97.45%

0.00%

84.06%

0.16%

39.98%

0.14%

35.01%

62.49%

B社培地

A社培地

SSEA4

N.D.

2.50%

TRA1-60

0.00%

N.D.

図9. TRA1-60、SSEA4未分化マーカーの発現確認
シングルセルクローニング後、拡 大 培養したクローン細胞について、TRA1-60とSSEA4の発現をフローサイトメトリーで解析した。
全クローンのマーカー陽性率（a）と、各クローン#1のFCプロット図（b）を示す。
DEF-CSで取得したクローンは、未分化マーカーの高い陽性率と発現強度を示した。一方、他社培地で得られたクローンは、未分化マーカーの発現が一部またはほとんど消失していた。

（弊社比較データ）

結論
Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemを用いたヒトiPS細胞のシングルセルクローニングを検討した結果、他社製品と比較して高効率にiPS細胞のシングルセルクローニングが可能であり、iPS細胞がより安定に増殖することがわかりました。さらに、クローニング後のiPS細胞の未分化状態は、Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture Systemでは高く維持できていましたが、他社製品では未分化マーカーの発現が一部またはほとんど消失していました。

｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

8

ヒトiPS／ES細胞培養システム〜シングルセルクローニング用〜＜ゲノム編集
ゲノム編集・シングルセルクローニングに最適＞

Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™
Culture Media Kit● ヒトiPS／ES細胞の単層培養、シングルセル継代に対応したDEF-CS培養システムの機能をそのままに、製品仕様を高効率なシングルセルクローニング専用に最適化（※）● 長期間の未分化維持培養が可能● 培地添加剤とコーティング剤を含むオールインワンキット● ゲノム編集試薬とのお得なセット品もラインナップ※従来のDEF-CS培地（製品コード Y30010）と比較して、シングルセルクローニングのためにCOAT-1の仕様と容量、およびGF-3の容量を最適化しています。
製 品 名

内 容

容 量

製品コード

価格（税別）

Cellartis® iPSC
Single-Cell
Cloning DEF-CS™
Culture Media Kit

DEF-CS 500 Basal Medium： 500 ml
iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS COAT-1 ： 800 μl ×2
DEF-CS GF-1
： 750 μl ×2
DEF-CS GF-2
： 500 μl
DEF-CS GF-3
： 500 μl

1 Kit

Y30021¥65,000★ゲノム編集試薬とのお得なセット品
製 品 名

製品説明

容 量

製品コード

価格（税別）

Cellartis® iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle
and Single-Cell Cloning System
ラ 営

エキソソーム様小胞（Gesicle）による
Cas9/sgRNA導入システムと上記DEF-CS培地（Y30021）のセット品

1 Kit

632642¥193,000

Cellartis® iPSC rCas9 Electroporationand Single-Cell Cloning SystemtranscriptionによるsgRNA調製
用試薬、高濃度Cas9タンパク質、
DEF-CS培地（Y30021）のセット品

1 Kit

632643¥216,000

Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning
DEF-CS™ Culture Media Kit
with Cas9 Protein

高濃度Cas9タンパク質、
DEF-CS培地（Y30021）のセット品

1 Kit

Y50100¥85,000

ラ ご購入に際してライセンス確認書が必要となります。
詳細はお問い合わせください。

営 営利施設の場合、ご購入前にライセンス（有償）を取得する必要があります。

【ヒトiPS細胞へのCRISPR/Cas9導入方法と特徴】

Cas9

gRNA

DNA

DNA

(

)
-

RNA

9

Gesicle｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

ヒトiPS／ES細胞培養システム 〜シングルセルクローニング用〜（前ページから続く）
今注目のCas9タンパク質／sgRNA導入によるiPS細胞のゲ
目のCas9タンパク質／sgRNA導入によるiPS細胞のゲノム編集例【その1】エレクトロポレーションによる導入
100

ヒトiPS細胞（DEF-CS培養）

80
s
ll
e 60
c
f
o
40

Cells (%)

細胞回収・懸濁（シングルセル化）

20
0#1

Cas9タンパク質

#3

#4

#5

#6

CD81 KO（％） TRA1-60 +（％）

ゲノム編集iPSCプール

シングルセルクローニング#2#7

ChiPSC18
SSEA-4 +（％）

図10. DEF-CS培養システムとRNPを用いたゲノム編集によるCD81ノックアウト（KO） hiPS細胞クローンの取得
Guide-it Recombinant Cas9(Electroporation-Ready)（ 製 品コー ド 6 3 2 6 4 1 ）とs g R N Aより調 製した 複 合 体（RNP）をhiPS細胞（ChiPSC18株）にエレクトロポレーションにより導入した後、CD81 KO株をDEF-CS培養システムを用いてクローン化した（左図フロー）。得られたCD81 KO株のCD81、TRA1-60、SSEA4発現量をフローサイトメトリー
にて解析したところ、いずれのクローンでも高い未分化マー
カー発現が確認された（右グラフ）。
※#1は片アリルのみのCD81 KO株sɡRNA【その2】エキソソーム様小胞（Gesicle）による導入
Cas9タンパク質

CherryPicker

Gesicleとは・・・?
・ 細胞膜に親和性を持つNanovesicle-inducing Glycoprotein（NIGP）を表面に有する粒子
・ NIGPを発現するプロデューサー細胞を用いて産生され、プロデューサー細胞内に存在するタンパク質・核酸等の封入が可能
・ 様々な細胞に融合し、粒子内に封入された物質移送が可能

NIGP

・ 表面にCherryPicker™赤色蛍光タンパク質がついており、蛍光によるGesicleの産生および導入効率のモニターが可能

sgRNA

Cas9/sgRNA Gesicle
Cas9 Gesicles : 24 hr

Cas9/gRNA(RNP)
ヒトiPS細胞（DEF-CS培養）

細胞接着性タンパク質

CountsCas9 Gesicles : 6 hr

43% knockout
M1

M2

49% knockout

M2

M1

蛍光タンパク質

Fluorescence

ゲノム編集iPSCプール

Fluorescence

図11. DEF-CS培養システムとCRISPR/Cas9 Gesicleによる
hiPS細胞のCD81ノックアウト
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System（製品コード 632613）を用いて調製したCRISPR/Cas9 Gesicleを、DEF-CS
培養システムを用いて培養中のhiPS細胞に直接添加した後、6、24時
間培養後に培地交換を行い、さらに7日間培養を継続後、CD81の発現状態をフローサイトメトリーにより解析した（左図フロー）。その結果、6時間または24時間CRISPR/Cas9 Gesicleと接触した細胞でそれぞれ43、49%のCD81 KO細胞が確認された（右図）。

｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

10Xeno-FreeのヒトiPS／ES細胞用培地＜再生医療研究に＞

Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free Culture Medium
w/o antibiotics● 動物・ヒト由来成分を含まない（ケミカリーディファインド）● シングルセル継代とLot間差の少ない安定した性能による再現性の高い培養を実現● 長期間の未分化維持培養が可能● 前臨床での使用に最適● GMPグレードバージョン、3D培養バージョンとの高い互換性
内 容

製 品 名

Cellartis®
DEF-CS™ 500
Xeno-Free
Culture Medium
w/o antibiotics

DEF-CS 500 Xeno-Free Basal Medium w/o antibiotics： 500 ml
DEF-CS Xeno-Free Additive 1 ： 500 μl
DEF-CS Xeno-Free Additive 2 ： 200 μl

容 量

製品コード

価格（税別）

1 Kit

Y30045¥42,000※別途、プレートコーティング剤が必要です。
［推奨］ iMatrix-511（製品コード 892011）、Corning Synthemax Ⅱ-SC Substrate（Corning社, Cat. No. 3535）※本製品には抗生物質が含まれておりません。
抗生物質を添加する場合は、Gentamicin（50 mg/ml, Thermo Fisher Scientiﬁc社, Cat. No. 15750060）を1/1,000量添加してください。

【長期間培養後の多分化能を確認】

βIII-tubulin

ASMA

SOX17

HNF4α

図12.
本製品を用いてヒトiPS細胞の継代を10回行った後、外胚葉、中胚葉、内胚葉への分化能が維持されていることを各胚葉特異的抗体での免疫染色（外胚葉ではβIII-tubulin、中胚葉ではASMA、内胚葉ではSOX17およびHNF4αを検出）で確認した（上段）。下段はDAPIによる核染色の結果を示す。

11｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

Xeno-FreeのヒトiPS細胞培養システム（GMPグレード／3D培養バージョン）＜GMPグレードバージョン＞＜G
GMPグレードバージョン＞

C ll ti ® DEF
Cellartis
DEF-CSCS™ 500 X
Xeno-FreeF
GMP Grade
G dBasal Medium● 動物・ヒト由来成分を含まないケミカリーディファインドな基本培地● GMP基準に準拠した製造・品質管理● DEF-CS™ 500 Xeno-Free、3D培養バージョンとの高い互換性
製 品 名

Cellartis DEF-CS™ 500 Xeno-Free GMP Grade
Basal Medium
®

容 量

製品コード

価格（税別）

500 ml

Y30071¥48,000※本製品は、医薬品医療機器総合機構の原薬等登録原簿（マスターファイル）に登録されています。
※別途、培地添加剤およびプレートコーティング剤が必要です。 ※本製品には抗生物質が含まれておりません。

＜3D培養バージョン＞

Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free 3D Spheroid
Culture Medium w/o antibiotics● 動物およびヒト由来成分を含まない（ケミカリーディファインド）● 培養器材面積に依存しない3Dスフェロイド培養で、ヒトiPS/ES細胞培養のスケールアップに有用● 最適化されたプロトコールと培地添加剤による優れた拡大培養効率（800倍／11日間）● 3D分化誘導の前培養プロトコールとしても最適● 安定した核型と分化誘導能を維持
製 品 名

内 容

容 量

製品コード

価格（税別）

Cellartis®
DEF-CS™ 500
Xeno-Free 3D Spheroid
Culture Medium
w/o antibiotics

DEF-CS 500 Xeno-Free Basal Medium w/o antibiotics： 500 ml
DEF-CS Xeno-Free 3D Spheroid Additive 1 ： 500 μl
DEF-CS Xeno-Free 3D Spheroid Additive 2 ： 200 μl
DEF-CS Xeno-Free 3D Spheroid Additive 3 ： 400 μl

1 Kit

Y30047¥44,000

Cellartis®
DEF-CS™ 500
Xeno-Free 3D Spheroid
Additives

DEF-CS Xeno-Free 3D Spheroid Additive 1 ： 500 μl
DEF-CS Xeno-Free 3D Spheroid Additive 2 ： 200 μl
DEF-CS Xeno-Free 3D Spheroid Additive 3 ： 400 μl

1 Set

Y30048¥14,000※Basal MediumはGMPグレード品（製品コード Y30071）もラインナップしています。
ご利用の際はCellartis DEF-CS™ 500 Xeno-Free 3D Spheroid Additives（製品コード Y30048）と組み合わせてお使いください。

図13.本製品を用いた、ヒトiPS細胞の3Dスフェロイド培養の様子｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド12マウス・ラットES／iPS細胞用培地

Introduction
多能性幹細胞の“Ground State”の効果的維持
基底状態“Ground State”とは・・・

受精卵より樹立される多能性幹細胞であるES細胞（Embryonic Stem Cell： 胚性幹細胞）は、適切な培養条件下で安定して増殖・維持できる（自己複製能）ほか、三胚葉を経て様々な体細胞へと分化する能力（多能性または多分化能）を有します。また、マウスES細胞では、胚盤胞移入を経て、ES細胞の形質（遺伝型）を有する個体（キメラマウス）の発生と、その後の生殖系列寄与（germline transmission）による子孫への形質伝播が可能であることが確認されています。
多能性を有するマウスES細胞として、ナイーブ型のES細胞とプライム型のエピブラスト幹細胞が存在することが知られており、中でも多能性細胞の基底状態にあることで高いキメラマウス形成、生殖系列寄与を示す状態を“Ground State”と呼びます。
また、ナイーブ型（Ground State）のマウスES細胞は、培養環境等の影響を受けて可逆的にプライム型に変化することが報告されています。

ES

Ground State図14. 多能性幹細胞の基底状態“Ground State”

13｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

マウス・ラットES／iPS細胞用培地（前ページから続く）

2i／3iテクノロジーによるマウスES細胞の “Ground State” 維持
1 LIF＋

BMP

2 2i

FGF4

BMP

MEK
FGF4

P

P

MEK
K

MEK
K
ERK
K

P

ERK
K

GSK

GSK

LIF

3 3i

P

GSK

FGFR-TK

図15. 2i／3iテクノロジーによるマウスES細胞のGround State
維持のメカニズム

MEK

FGF4
P

【1】従来のES細胞維持培養用培地で必須の添加因子として用いられてきたBMPやLIFは、培養中に生じる分化や増殖・生存を妨げるシ
グナルを下流側で阻害する。

MEK
K

ERK
K

P

【2】2iテクノロジーで用いられる2種類の低分子化合物は、分化や増殖・生存維持低下につながるシグナルを従来培養の添加因子よりも上流側（MEK, GSK）で阻害し、より強力に制御する。
GSK

GSK

【3】3 i テクノロジ ー で は 2 i で 用 いら れ る 低 分 子 化 合 物 に 加 え 、
FGFR-TK阻害剤を用いることで、より厳密に分化シグナルを制御する。
※参考文献：Nature 453, 519-523（2008）★Cellartisでは、2i／3iテクノロジー採用の培地をラインナップしています。

2i

GS2-M®

製品コード Y40030■ ERK/MEK、GSK3β阻害剤（2iテクノロジー）により培養中の分化誘導シグナルをシャットアウト
マウスES細胞のGround Stateを安定・高効率に維持培養
高効率なキメラマウス作製が可能■ フィーダー細胞 & 血清フリー！

LIF添加なしでも培養可能

フィーダー細胞の準備やロット毎の血清品質チェック不要■ LIF添加によりマウスpartial iPS細胞やpre-iPS細胞を完全な多能性iPS細胞へ
変換可能

3i

iSTEM™ 製品コード Y40010■ ERK/MEK、GSK3β、FGFR-TK阻害剤（3iテクノロジー）により厳密に分化誘導シグナルをシャットアウト
樹立困難なマウス種からのES細胞株の樹立時にも使用可能

製品詳細は15〜16ページをご覧ください。
｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド14マウス・ラットES／iPS細胞用培地
2iテクノロジー採用のマウス・ヒトES／iPS細胞用培地

GS2-M®

容 量

製品コード

価格（税別）

100 ml

Y40030¥29,800● 2種類の低分子阻害剤（CHIR99021, PD0325901=ʻ2iʼ）存在下でマウスES細胞株、iPS細胞株を培養するために調製された化学的成分
既知の無血清培地● 2種類の低分子阻害剤はそれぞれ、GSK3β、またはERK / MEKからの分化誘導シグナルを抑制する効果を持ち、細胞の生存を促進（上）GS2-M培地で培養したマウス
ES細胞E14Tɡ2A株（下）アルカリホスファターゼ染色【GS2-MによるマウスES細胞のGround Stateの高効率維持】

GFP 陽性細胞（％）

80
60
40
20
0

＋血清＆LIF 培地

GS2-M

図16.
Ground State状態にあるマウスES細胞（ナイーブ型mES）のマーカー
遺伝子Rex1のプロモーター下流に蛍光タンパク質（GFP）遺伝子を挿入したmES細胞株（Rex1GFPd2レポーター株※）を、血清&LIF培地（10%FBS＋LIF）とGS2-M培地を用いて各々3継代の間培養し、GFP
陽性細胞（Ground State状態にあるmES細胞）の割合を評価した。
その結果、GS2-Mを用いた場合に70%を超えるGFP陽性細胞が検出され、GS2-Mの高効率なGround State維持が確認された。

※参考文献：Nat Cell Biol. 13, 838–845（2011）

Application◆ LIFの添加培養により、マウスのpartial iPS細胞やpre-iPS細胞を完全な多能性iPS細胞に変換可能（参考文献 1、2）
◆ ナイーブなGround Stateマウス多能性幹細胞の長期間の維持は、GS2-M ®培地だけで可能◆ 2i 阻害剤は、生殖系列に分化可能なES細胞を得ることが困難であったマウスの種からの誘導や、ナイーブなヒトおよび
家畜iPS細胞を作製する目的にも使用されている。
（参考文献 3、4、5）

参考文献
1. Silva J, et al, Promotion of reprogramming to ground state pluripotency by signal Inhibition. PLoS Biol. 2008; 6:e253.
2. Silva J, et al, Nanog is the gateway to the pluripotent ground state. Cell. 2009; 138(4):722-737.
3. Nichols J, et al, Validated germline-competent embryonic stem cell lines from non-obese diabetic mice.

Nat Med. 2009; 15:814-818.
4. Wang W, et al, Rapid and efficient reprogramming of somatic cells to induced pluripotent stem cells by retinoic acidreceptor gamma and liver receptor homolog. PNAS (USA). 2011; 108(45):18283-18288.
5. Malaver-Ortega LF, et al, Reviewed in: Theriogenology. 2012; 78(8):1749-1762.

ラットES細胞、EG細胞の誘導、維持に

GS1-R™

容 量

製品コード

価格（税別）

100 mlY40020¥29,800● ナイーブなGround Stateで、ラットES細胞、EG細胞を誘導、維持、増殖させるために調製された化学的成分既知の無血清培地＜2iテクノロジー採用＞
Application◆ 本製品により維持されたラットES細胞は生殖系列への分化が可能であり、相同組換えやゲノム編集技術を用いること
によりトランスジェニックラットやノックアウトラットを作製することができる。
15｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

マウスES細胞用培地
3iテクノロジー採用のマウスES細胞用培地

iSTEM™

容 量

製品コード

価格（税別）

100 mlY40010¥42,000● 無血清、フィーダーフリー、サイトカイン無添加の条件下で、ナイーブなGround Stateを維持した
ままマウスES細胞の培養が可能な完全合成培地（参考文献 1）● 分化誘導シグナルを抑え、刺激性サイトカイン無しに多能性を維持しながら増殖させる働きをもつ3種類の低分子阻害剤を含有● iSTEM™培地で培養したマウスES細胞は、LIF（Leukemia Inhibitory Factor）、BMP（BoneMorphoɡenetic Protein）の存在下での培養と同程度の増殖能と、これより優れたキメラ形成
能を保持【C57BL/6Nマウスでのキメラ率の比較】
iSTEM™培地

C社培地

国立研究開発法人 理化学研究所 生命システム研究センター
細胞デザインコア合成生物学研究グループ 鵜飼 英樹先生よりデータをご提供いただきました。

図17.
ジーンターゲティングを目的として、iSTEM培地および C社培 地で10継代培 養したマウスES細胞（C57BL/6Nマウス由来）を8細胞期胚（CD1(ICR)）にインジェクションし、翌日移植して生まれてくるマウス個体の毛色にてキメラ率を検証した。
その結果、iSTEM培地を使用した場合、マウスは
全てC57BL/6N由来の黒い毛色であり、キメラ率が良好であることが確認できた。

【未分化状態の確認】
iSTEM™培地

G-MEMベースの慣用培地

図18.
iSTEM培地、または慣用培地で培養したマウスES細胞E14Tɡ2A株（左）とアルカリホスファターゼ染色画像（右）。
iSTEM培地で培養した細胞は、ムラのない染色像から均一な未分化細胞であることが分かる。

Application◆ C57BL/6NマウスでのGerm-line transmission効率が良好（参考文献 2）◆ 難誘導マウス種からのES細胞株の誘導時にも使用可能（参考文献 3）

参考文献
1. Ying QL, et al, The ground state of embryonic stem cell self-renewal. Nature. 2008; 453:519-523.
2. Kiyonari H, et al, Three Inhibitors of FGF receptor, ERK, and GSK3 establishes germline-competent embryonic stem cells of
C57BL/6N mouse strain with high efficiency and stability. Genesis. 2010; 48:317-327.
3. Iijima S, et al, Effect of different culture conditions on establishment of embryonic stem cells from BALB/cAJ and NZB/BINJ
mice. Cell Reprogram. 2010; 12(6):679-688.
4. Ukai H, et al, Production of knock-in mice in a single generation from embryonic stem cells. Nature Protocols. 2017; 12(12):2513-2530.
｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

16ナイーブ型iPS細胞研究用培地

NDiﬀ® 227

容 量

製品コード

価格（税別）

500 mlY40002¥48,000● ヒトのナイーブ型iPS細胞誘導の研究に使用（参考文献 6）● 接着単層培養条件下でのマウスES細胞の神経分化に適した完全合成無血清培地● 適切な因子の添加によるマウスES細胞の培養も可能

多能性

NDiff ® 227+ 2i, + hLIF, +DOXES iPS
DOX
KLF2,
NANOG
PSC
+ FGF, + KSR, - DOX

図19. NDiﬀ 227を用いたナイーブ型ヒトES／iPS細胞の維持
DOX誘導性のとを導入したヒトES/iPS細胞（プライム型）を2i、hLIF、DOXを含有するNDiﬀ 227で培養維持することで、ナイーブ型の特徴を有するヒトES/iPS細胞へと可逆的にリセットし維持できた（参考文献6）。

Application◆ NDiﬀ® 227培地のみでマウスES細胞を神経細胞へ分化させることができる。
（参考文献 1）
◆ 添加因子を加えることにより、マウスES細胞の無血清、フィーダー細胞非存在下での培養にも使用できる。
（参考文献 2）
◆ 増殖因子を添加することにより、ヒトES細胞の培養（参考文献 3、4）や、Ground StateでのヒトiPS細胞培養（参考文献 6）にも利用できる。
◆ bFGFを添加することにより、 NDiﬀ® 227培地はマウスES細胞から、肝臓や膵臓へ分化できるADE（AnteriorDeﬁnitive Endoderm）前駆体を生じることも可能である。
（参考文献 5）

参考文献

※文献中には「N2B27」と表記されています。

1. Ying QL, et al, Conversion of embryonic stem cells into neuroectodermal precursors in adherent monoculture.
Nature Biotechnology. 2003; 21:183-186.
2. Ying QL, et al, BMP induction of Id proteins suppresses differentiation and sustains embryonic stem cell self-renewal incollaboration with STAT3.
Cell. 2003; 115:281-292.
3. Li Y, et al, Expansion of Human Embryonic Stem Cells in Defined Serum Free Medium Devoid of Animal Derived Products.
Biotechnology and Bioengineering. 2005; 91:688-698.
4. Yao S, et al, Long term self renewal and directed differentiation of human embryonic stem cells in chemically definedconditions.
PNAS. 2006; 103(18):6907-6912.
5. Morrison G, et al, Anterior Definitive Endoderm from ESCs reveals a role for FGF signaling.
Cell Stem Cell. 2008; 3:402-415.
6. Takashima Y, et al, Resetting transcription factor control circuitry toward ground-state pluripotency in human.
Cell. 2014 Sep; 158(6):1254-1269.

17｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

Xeno-Freeのヒト間葉系幹細胞用培地

Cellartis® MSC Xeno-Free Culture Medium● 動物由来成分を含まない（Xeno-Free）● プレートコーティング剤不要（※）● 優れた細胞増殖を実現● 未分化状態を維持した培養が可能※プレートコーティング剤として RetroNectin®（製品コード T100A/B）またはフィブロ
ネクチン（ヒト）を使用することで、増殖性などを高く維持できる場合があります。
内 容

製 品 名

Cellartis MSC Xeno-Free
Culture Medium®

MSC Xeno-Free Basal Medium ： 475 ml
MSC Xeno-Free Supplement ： 25 ml

容 量

製品コード

価格（税別）

1 Kit

Y50200¥49,800【コーティング剤フリーでの各種間葉系幹細胞（MSC）の長期維持培養】
ヒト骨髄由来間葉系幹細胞
1.E+10

累積細胞数

1.E+09
1.E+081.E+07
1.E+06
1.E+05ヒト脂肪組織由来間葉系幹細胞
1.E+12

1.E+12

1.E+11

1.E+11

1.E+101.E+10

1.E+09

1.E+09

1.E+081.E+081.E+07

1.E+07

1.E+06

1.E+06

1.E+05

1.E+05

1.E+04

1.E+040

48

ヒト臍帯マトリックス由来間葉系幹細胞

12 16 20 24

1.E+040

48

12 16 20 24

0

4

8

12

16

20

24

培養日数
図20.
本製品を用いて骨髄、脂肪組織、臍帯マトリックス由来の凍結ヒト間葉系幹細胞を22日間培養した。いずれの細胞も高い増殖性を示した。

【間葉系幹細胞（MSC）の分化誘導実験】
A

B

C

図21.
本製品を用いてコーティング剤フリーで培養したヒト骨髄由来間葉系幹細胞の分化誘導実験を行った。
（A）脂肪細胞分化培地2（製品コード C-28016）により脂肪細胞へ分化誘導した細胞のOil Red O染色（B）軟骨細胞分化培地（製品コード C-28012）により軟骨細胞へ分化誘導した細胞のAlcian Blue染色（C）骨芽細胞分化培地（製品コード C-28013）により骨芽細胞へ分化誘導した細胞のAlizarin Red S染色｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド18

神経幹細胞維持／神経分化培地

RHB-A®

容 量

製品コード

価格（税別）

500 mlY40001¥43,000● マウス・ヒトの神経幹（NS）細胞の維持や神経分化に適した完全合成無血清培地【RHB-A
HB A を用いたHuman Neural Cor
Cortex Stem Cell Lineの長期培養】
12

RHB-A
他社製品A

10

Fold Expansion

他社製品B

8
6
4
2
0
0

10

20

30

40

day

DAPI / Nestin

図22.
Human Neural Cortex
Stem Cell LineをRHB-A
を用いて培養した。増殖能
および未分化状態（Nestin発現）を維持していることが確認できた。

Application◆ EGFやFGF-2を加えて、グリオーマ神経幹細胞株の増殖に使用できる報告もある。
（参考文献 6）
◆ 増殖因子を加えずに本培地で神経幹細胞を接着培養すると、神経細胞に機能的に分化させることができる。
（参考文献 1）◆ in vitroでのヒト脳の器官初代培養において、放射状グリア由来の神経幹細胞の拡大培養や分化にも使用できる。
（参考文献 9）参考文献
1. Sun Y, et al, Long-term tripotent differentiation capacity of human neural stem (NS) cells in adherent culture. Molecular andCellular. Neuroscience. 2008; 38:245-258.
2. Conti L, et al, Niche-Independent symmetrical selfrenewal of a mammalian tissue stem cell.
PLoS Biology . 2005; 3(9): e283.
3. Pollard SM, et al, Adherent Neural Stem (NS) cells from fetal and adult forebrain. Cerebral Cortex. 2006; 16:112-120.
4. Ying QL, et al, Conversion of embryonic stem cells into neuroectodermal precursors in adherent monoculture.
Nature Biotechnology. 2003; 21:183-186.
5. Pollard SM, et al, Fibroblast growth factor induces a neural stem cell phenotype in foetal forebrain progenitors and during
embryonic stem cell differentiation. Mol Cell Neurosci. 2008; 38(3):393-403.
6. Pollard SM, et al, Glioma stem cell lines expanded in adherent culture have tumor specific phenotypes and are suitable forchemical and genetic screens. Cell Stem Cell. 2009; 4:568-580.
7. Diogo MM, et al, Optimization and integration of expansion and neural commitment of mouse embryonic stem cells.
Biotechnology and Applied Biochemistry. 2008; 49:105-112.
8 Abranches E, et al, Neural differentiation of embryonic stem cells in vitro: A road map to neurogenesis in the embryo.
PLoS ONE. 2009; 4 (7): e6286.
9. Hansen DV, et al, Neurogenic radial glia in the outer subventricular zone of human neocortex.
Nature. 2010; 464(7288):554-561.

19｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

神経分化用培地／添加剤／神経幹細胞キット

RHB-Basal™

容 量

製品コード

価格（税別）

500 mlY40000¥27,000● 増殖因子や神経細胞用の添加因子を含まない無血清基本培地
Application◆ マウス・ヒト神経幹（NS）細胞の接着培養での維持、拡大培養◆ マウスES細胞の単層培養での神経分化◆ マウスES細胞、胎児・成体組織からの神経幹（NS）細胞の誘導◆ マウス・ヒト神経幹（NS）細胞の神経細胞への分化◆ グリオーマ神経幹（GNS）細胞株の維持、拡大培養

ヒト・マウスES細胞や神経幹細胞の培養に適した培地添加剤

NDiﬀ® N2／NDiﬀ® N2-AF

製 品 名

容 量

製品コード

価格（税別）®

NDiff N2

5 ml

Y40100¥33,000

NDiff® N2-AF

5 ml

Y40110¥45,000● Bottensteinらの組成に基づく。
● マウスES細胞が単層培養条件下で神経細胞へ分化するように至適化● 無血清、フィーダーフリー培養条件下でマウス、ヒト神経幹（NS）細胞やマウスES細胞の誘導、維持、培養に使用可能ヒト胎児脳組織由来の神経幹細胞とRHB-A で構成したキット

Human Neural Stem Cell Line Kit
製 品 名

由 来

容 量

製品コード

価格（税別）

Human Neural Cortex Stem Cell Line Kit

Cortex（皮質）1 Kit

Y40050¥220,000

Human Neural Hindbrain Stem Cell Line Kit

Hindbrain（後脳）1 Kit

Y40060¥220,000

Human Neural Mid Forebrain Stem Cell Line Kit

Mid Forebrain（中、前脳） 1 Kit

Y40070¥220,000

Human Neural Spinal Cord Stem Cell Line Kit

Spinal Cord（脊髄）1 Kit

Y40080¥220,000

Human Neural Temporal Lobe Stem Cell Line Kit

Temporal Lobe（側頭葉）1 Kit

Y40090¥220,000【Human Neural Cortex Stem Cellの分化誘導前後の様子】
神経細胞に分化誘導（28日間）

アストロサイトに誘導（22日間）

誘導法A

誘導法B

GFAP / MAP2

図23.
RHB-Aを用いて長期間培養した
h N S C（ C o r t e x ）を 、R H B - A（RHB-Basal）をベースとした分化培地によりそれぞれ28日間（分化誘導法A）、22日間（分化誘導法
B）分化誘導することで、MAP2陽性細胞（神経細胞／左図）、GFAP
陽性細胞（アストロサイト／右図）
をそれぞれ取得した。

GFAP / MAP2

分化誘導前Application◆ 接着単層での拡大培養◆ 生物学的、機能的神経分化の特性の研究◆ 接着単層培養での神経分化◆ 化合物のライブラリースクリーニング｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

20

ヒトiPS細胞から肝細胞への分化誘導システム

Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Diﬀerentiation System● iPS細胞⇒胚体内胚葉（DE）細胞⇒肝細胞への分化誘導を可能にするオールインワンキット● 25種類以上のヒトiPS／ES細胞株にて肝細胞への分化誘導を確認● 分化した肝細胞は高純度かつCYP活性を有し、長期毒性試験やウイルス感染試験に最適

胚体内胚葉
Day 7

iPS cells

腹側前腸
Ventral Foregut
Day 8‒10

肝芽細胞
Hepatoblast
Day 11‒14

Fetal-likeHepatocyte
Day 15‒20

Hepatocyte
Day 21‒

多能性幹細胞は、肝細胞への分化に適したサイトカインなどの液性因子を作用させることにより、各段階を経て肝細胞へ分化することが知られています。
この複雑な分化誘導工程を効率よく簡便に行うことができるシステムを用意しました。

タイプ

製 品 名

◆

iPS細胞から肝細胞への分化誘導キット◆

iPS細胞からDE細胞への分化誘導キット

Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation
System ※Cellartis® Definitive Endoderm Differentiation
Kit with DEF-CSTM Culture System◆

DE細胞から肝細胞への分化誘導キット

Cellartis® Hepatocyte Differentiation Kit◆

Y30050のコンポーネントの別売りCellartis® Hepatocyte Maintenance Medium◆

胚体内胚葉細胞Cellartis® Definitive Endoderm Cells(from ChiPSC18)

容 量

製品コード

価格（税別）

1 Kit

Y30055¥138,000

1 Kit

Y30035¥57,000

1 Kit

Y30050¥86,000

50 ml×2

Y30051¥25,000

1 vial（6×10 6 cells)

Y10040¥67,000®

※本製品にはiPS細胞用の維持培地、分化誘導用培地、コーティング剤が含まれており、3×10 6個のiPS細胞から5×10 6個の肝細胞が作製できます。

◇製品を使用したiPS細胞から肝細胞への分化誘導フロー◇

hPSC

DEFINITIVE ENDODERM

HEPATOCYTESCellartis human iPS& ES cell line

Cellartis Definitive
Endoderm ChiPSC18

Cellartis Enhanced
hiPS-HEP

Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
Cellartis DEF-CS
Culture System

21

Cellartis
Definitive
Endoderm
Diff Kit｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

Cellartis
Hepatocyte
Diff Kit

Cellartis Hepatocyte
MaintenanceMediumヒトiPS細胞から肝細胞への分化誘導システム（前ページから続く）

分化誘導の流れiPS細胞をDEF-CS™
Culture Systemへ移行

約7.5×106 cells（75 cm2）のDE細胞に分化iPS細胞を
3×106 cells用意

約5×106 cells（24 well plate 1枚分）の肝細胞に分化【胚体内胚葉細胞 Cellartis ® Deﬁnitive Endoderm Cells（from ChiPSC18）の免疫染色】

SOX17

OCT4

DAPI

※Cellartis Deﬁnitive Endoderm
Cells（from ChiPSC18）は、Cellartis
human iPS cell line 18からCellartis
Deﬁnitive Endoderm Diﬀerentiation
Kitを用いて分化誘導した胚体内胚葉
細胞です。

図24.
Cellartis Deﬁnitive Endoderm Cells（from ChiPSC18）を2日間培養した後、胚体内胚葉マーカーSOX17と未分化マーカーOCT4の免疫染色を行った。その結果から、90%以上の細胞が胚体内胚葉細胞であることが確認できた。

【胚体内胚葉細胞から肝細胞への分化誘導（Cellartis® Hepatocyte Diﬀerentiation Kitを使用）】
HNF4α

CK18

Day14

HNF4α

CK18

Day21

Albumin CYP3A

Albumin CYP3A

Day28

Day37

図25.
Cellartis Deﬁnitive Endoderm Cells（from ChiPSC18）とCellartis Hepatocyte Diﬀerentiation Kitを使用して分化誘導した肝細胞を肝マーカー抗体にて免疫染色した結果、培養14日目、21日目においてHNF4α（赤）、CK18（緑）の高い発現が確認できた。
28日目からはCYP3A（赤）、アルブミン（緑）の発現がみられ、37日目ではmetabolic zonation（代謝機能の領域特異性）がみられた。

d11 d14 d18 d21 d25 d28 d32calibr.

Albumin

1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
d11 d14 d18 d21 d25 d28 d32calibr.

7

CYP3A4CYP2C95432
1
d11 d14 d18 d21 d25 d28 d32calibr.

CYP1A2

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0

d11 d14 d18 d21 d25 d28 d32calibr.

6

0

1.2
RNA expression
relative to calibrator

18
16
14
12
10
8
6
4
2
0

1.2
RNA expression
relative to calibrator

RNA expression
relative to calibrator

1.4

AFP
RNA expression
relative to calibrator

9
8
7
6
5
4
3
2
1
0

RNA expression
relative to calibrator

RNA expression
relative to calibrator【肝細胞への分化誘導過程における遺伝子発現プロファイリング】

d11 d14 d18 d21 d25 d28d32calibr.

PXR

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0

d11 d14 d18 d21 d25 d28d32calibr.

図26.
Cellartis Deﬁnitive Endoderm Cells（from ChiPSC18）とCellartis Hepatocyte Diﬀerentiation Kitを使用して分化誘導した肝細胞について、肝マーカー遺伝子とCYP遺伝子のmRNA発現量をRT-qPCRで解析した。その結果、11日目から32日目にかけて肝細胞へ分化していることが確認できた。
｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

22

ヒトiPS細胞から肝細胞への分化誘導システム（前ページから続く）【Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Diﬀerentiation Systemを用いて分化誘導した肝細胞のCYP活性】
400
350pmol/24 well

300

CYP1A

250

CYP3A

200

CYP2C9150

図27.
C e l l a r t i s D e ﬁ n i t i ve E n d o d e r m C e l l s（from ChiPSC18）とCellartis Hepatocyte
Diﬀerentiation Kitを使用して分化誘導した細胞のCYP活性を測定した。その結果、21日目から35日目にかけてCYP1A、CYP3A、CYP2C9の活性が認められた。

100
50
0

Day
21

Day
23

Day
25

Day
28

Day
30

Day
32

Day
35

参考文献
25種のヒトiPS／ES幹細胞株にて肝細胞への分化誘導を確認した報告です。

· Annika A, et al, One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying
Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells.
Stem Cell Rev. 2016 Feb; 12(1): 90-104.

関連製品

肝細胞分化状態のモニタリングに最適なツール

多能性幹細胞から肝細胞への分化誘導状態を様々な指標で評価することができます。
指標

製 品 名

容 量

製品コード

価格（税別）

ミトコンドリアDNA（下記参考文献）

Human Mitochondrial DNA (mtDNA)
Monitoring Primer Set

50回

7246

¥35,000

肝細胞分化時に発現変動のある88種類の遺伝子

PrimerArray® Hepatic Differentiation (Human)

1 Set

PH017

¥68,000

0.1 mɡ

M225¥66,000

96回

MK151

¥111,000

0.1 mɡ

M226¥66,000

96回

MK132

¥110,000

Anti-Human Alpha Fetoprotein, Monoclonal
初期段階の指標である
αフェトプロテイン

成熟過程の指標である
ヒトアルブミンタンパク質

IHC

WB

Human Alpha Fetoprotein (AFP) EIA Kit ※Anti-Human Albumin, Monoclonal(Clone hAlb 3-7A)
Human Albumin EIA Kit ※

IHC

WB

※培養上清中のAFP、Albumin量を測定できます。

参考文献
iPS細胞等の多能性幹細胞から肝細胞方向への分化・誘導過程でmtDNAコピー数が増加することが報告されています。

· Yu Y, et al, Hepatocyte-like cells differentiated from human induced pluripotent stem cells: relevance to cellular therapies.
Stem Cell Research 2012 Nov; 9(3): 196-207.

23｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

ヒト初代肝細胞の長期間維持培地

Cellartis Power™ Primary HEP Medium● ヒト初代肝細胞を2D培養下で4週間維持培養が可能● 培地交換は2日に1回、土曜・日曜の培地交換は不要● 長期間維持後の肝細胞においても、薬物代謝機能、薬物誘導能などの各種機能を保持● 長期間の毒性試験や薬物代謝試験への利用にも最適
製 品 名Cellartis® Power™ Primary HEP Medium

容 量

製品コード

価格（税別）

250 mlY20020¥53,000※別途、ラット尾由来Collagen （Corning社,
lCat. No. 354236など）またはCollagen l コートプレート（Corning社, BioCoatなど）が必要です。

【培養28日目の初代肝細胞の顕微鏡像】

図28.
ドナーの異なる2種類の初代肝細胞を、Cellartis PowerPrimary HEP Mediumで28日間培養した。顕微鏡像か
ら、細胞の良好な状態が確認できた。

【長期培養した初代肝細胞中のATP量推移】

50

ATP (luminescence, x1000)

donor A40

donor Bdonor C30

donor Ddonor E20

donor F

10
0
0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

24

26

28

day

図29.
ドナーの異なる6種類の初代肝細胞をCellartis Power Primary HEP Mediumで28日間培養したところ、培養期間を通じて培養開始初期と同等以上の細胞中ATP量（生細胞）の維持が確認された。

｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド24ヒト初代肝細胞の長期間維持培地（前ページから続く）【長期培養における初代肝細胞中のCYP活性推移】

donor A

donor Blog (pmol/mg protein/min)

1.E+04
1.E+03
1.E+02
1.E+01
1.E+001.E - 01
1.E - 0200 2 44 61214 16
16 18 20
20 22 24
24 26 2828
88 10 12

0

2 4

6

8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28

day

day
CYP1A

CYP3A

CYP2C9CYP2B6

CYP2D6

図30.
ドナーの異なる2種類の初代肝細胞をPower Primary HEP Mediumで28日間培養したところ、培養期間を通じて一定値以上のCYP活性を保持していることが確認できた。

【長期培養した初代肝細胞のCYP誘導能】

CYP2B6donor A donor B donor C

donor A

donor Bdonor C

Rif

PB

DMSO

PB

DMSO

PB

Ome

DMSO

Ome

0
DMSO

2

0
Ome

10

DMSO

4

20

DMSO

6

30

Rif

8

40

DMSO

10

50

80
70
60
50
40
30
20
10
0
Rif

12

60

CYP3A4

DMSO

70

DMSO

fold induction

CYP1A2

donor A donor B donor C

図31.
ドナーの異なる3種類の初代肝細胞をPower Primary HEP Mediumで26日間培養した。3種のCYP（1A2、2B6、3A4）について各誘導剤*を添加してさらに2日間培養したところ、CYP活性の上昇がみられ、薬物誘導能が維持されていることが確認できた。
*使用したCYP誘導剤
1A2 - Ome : omeprazole
2B6 - PB
: phenobarbital
3A4 - Rif
: rifampicin

25｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

細胞関連抗体
神経系細胞関連抗体● 免疫組織染色、免疫蛍光染色に利用可能● 移植後のヒト細胞の検出に有用

製 品 名

特 異 性

用途

サブクラス

容 量

製品コード

価格（税別）

STEM101®

ヒトKu80細胞核マーカーと反応するマウスモノクローナル抗体。脳を含むさまざまなヒト組織の細胞に反応

IHC、IF

IɡG1

50 μɡ

Y40400¥32,000

STEM121®

ヒト細胞の細胞質内タンパク質（※）と反応するマウス
モノクローナル抗体※ヒトの脳、肝臓、膵臓を含むさまざまな組織の細胞に存在。特に中枢神経系細胞で最もよく発現

IHC、IF

IɡG1

50 μɡ

Y40410¥32,000

STEM123 ®

ヒトGFAP（※）と反応するマウスモノクローナル抗体※グリア細胞線維性酸性タンパク質：アストロサイトやアストログリア系の細胞に高発現している。

IHC、IF

IɡG1

50 μɡ

Y40420¥32,000

Application◆ STEM121®、STEM101®はマウスやラットに移植されたヒト細胞の生着、移行（移走）や分化の検出に使用可能◆ STEM123 ®はマウスやラットに移植されたヒト神経幹細胞に由来するアストロサイトの検出に使用可能【STEM121®を用いたアプリケーション例】
1a

1b

1c

1d

2a

2b

2c

2d

＜正常ヒト組織アレイの詳細＞
1a：海馬／側頭皮質 1b：延髄
1c：大脳、白質 1d：小脳、白質
2a：橋 2b：小脳、白質 2c：小脳、皮質
2d：大脳基底核／内包 3a：橋
3a

図32.
正常ヒト組織アレイTissue Microarray Human Normal Tissue (Normal Adult Brain)（製品コード 401 1210）を用いて、STEM121による免疫組織染色を行った。2次抗体にはTaKaRa POD Conjuɡate Anti Mouse, For Tissue（製品コード MK204)、TaKaRa DAB Substrate（製品コード MK210）を使用した。
その結果、脳組織の多くの部位で細胞質タンパク質が確認でき、特に海馬では発現が高いことが確認できた。

ヒトES／iPS細胞関連抗体● 免疫染色、フローサイトメトリー、磁気細胞分離に利用可能
製 品 名

特 異 性

用

途

サブクラス

容 量

製品コード

価格（税別）

IɡG1

150 μɡ

Y20010¥95,000

hES-Cellect™

ヒトES細胞およびヒトiPS細胞と反応する。

ICC、FCMMCS

ES-Cellect™

ヒトES細胞、ヒトiPS細胞、マウスES細胞と反応する。

ICC、FCMMCS―

150 μɡ

Y20011¥95,000

hFF-Cellect™

ヒト包皮線維芽細胞（Human Foreskin
Fibroblast：hFF）と反応する。

ICC、FCMMCS―

150 μɡ

Y20012¥95,000

Application◆ フィーダー細胞や分化した細胞から、磁気分離またはセルソーターを用いてヒトES細胞やヒトiPS細胞の分離が可能−hES-Cellect™は、ヒト幹細胞に利用可能−ES-Cellect™は、ヒトおよびマウスの幹細胞に利用可能−hFF-Cellect™は、ヒトフィーダー細胞の有無の確認や、ヒトiPS細胞誘導時にリプログラミングされなかった線維芽細胞の同定に利用可能｜ Cellartis 幹細胞研究用製品ガイド

26

関連製品 〜iPS細胞株、iPS細胞由来分化細胞

他〜■ ヒトiPS細胞株● 各細胞のドナー情報、核型、分化誘導能などをウェブカタログの製品ページにて公開中● 遺伝子解析のインフォームドコンセントを取得済み
製 品 名

Cellartis human iPS cell line 12(ChiPSC12) Kit
Cellartis® human iPS cell line 18(ChiPSC18) Kit

製品説明

®

ラ 営
ラ 営

ラ ご購入に際してライセンス確認書が必要となります。

ドナーの異なる6種類のヒトiPS細胞株をラインナップ。
専用培地DEF-CS Culture System（サンプルサイズ）を
添付

容 量

製品コード

価格（税別）

1 Kit

Y00285¥340,000

1 Kit

Y00305¥340,000

営 営利施設の場合、ご購入前にライセンス（有償）を取得する必要があります。

■ ヒトiPS細胞由来分化細胞● 初代細胞では安定確保が困難な体細胞を複数ラインナップ！
● 毒性試験、薬剤スクリーニング、再生医療研究などに
製 品 名

容 量

製品コード

価格（税別）

Cellartis® Enhanced hiPS-HEP v2(from ChiPSC18) Kit

ヒトiPS細胞由来肝細胞。バージョンUPにより長期の培養が可能になり、薬剤代謝酵素活性、アルブミン発現量、グ
リコーゲン蓄積能がヒト初代肝細胞に近似。由来iPS細胞と薬物代謝特性の異なる3種の細胞をラインナップ

製品説明

1 Kit

Y10134¥250,000

Cellartis® hiPS Beta Cells(from ChiPSC12) Kit

ヒトiPS細胞由来膵β細胞。インスリンやC-ペプチドなどを高発現。由来iPS細胞の異なる2種の細胞をラインナップ

1 Kit

Y10100¥200,000

MiraCell® Cardiomyocytes(from ChiPSC12) Kit

ヒトiPS細胞由来心筋細胞。
自律拍動能を保持し、種々の解析装置による薬理作用・毒性解析が可能1 Kit

Y50015¥200,000

MiraCell® Endothelial Cells(from ChiPSC12) Kit

ヒトiPS細胞由来血管内皮細胞。
前期・前駆型血管内皮細胞の特性に注目した研究に最適

1 Kit

Y50055¥180,000

容 量

製品コード

価格（税別）

1 vialY10090¥215,000■ ヒトES細胞由来間葉系前駆細胞
製 品 名Cellartis® hES-MP 002.5

製品説明
ヒトES細胞由来の間葉系前駆細胞で、成人ヒト間葉系
幹細胞（hMSC）に高い類似性を有する。

■ iPS／ES細胞の培養基質

製造元

製 品 名

株式会社ニッピ

製品説明
ラミニン511E8断片の高純度精製品。
フィーダーフリー条件下でヒトiPS/ES細胞を効率よく増殖させることが可能

iMatrix-511■ 幹細胞の保存に最適化した凍結保存液
製 品 名

STEM-CELLBANKER® GMP grade

製造元

日本全薬工業株式会社

製品説明
ケミカリーディファインドで動物由来成分不含。GMPに準拠した製造および品質管理を実施（★）

発売元

株式会社マトリクソーム

容 量

製品コード

価格（税別）

350 μg892011¥28,000

1,050 μg

892012¥72,000

発売元

ゼノアックリソース株式会社

容 量

製品コード

価格（税別）

100 mlCB045¥28,000

20 ml×4

CB047¥28,000★ STEM-CELLBANKER GMP ɡrade は、STEM-CELLBANKER として原薬等登録原簿（マスターファイル）に登録されています。

製品詳細や参考文献等については、タカラバイオウェブカタログをご覧ください。
・本パンフレットで紹介した製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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・ライセンス情報については弊社ウェブサイトにてご確認ください。
・本パンフレットに記載された社名および製品名は、特に記載がなくても各社の商標または登録商標です。
・本パンフレット記載の価格は2018年4月1日現在の希望小売価格です。価格に消費税は含まれておりません。

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2018年4月作成20K