“In-Fusion”で、研究の進捗速度をと進めませんか？

グーン

時短クローニングのススメ
タカラバイオ 研究活動応援キャンペーン実施中 （期間： ～2021年3月31日まで）！
今ならディスカウント価格でお試しいただけます！

時短のワケ
その1

In-Fusionは反応時間が短く、操作ステップも少ない！

■ In-Fusionクローニングの流れ
相同な配列はもともとベクターにあった配列なので、余分な配列の付加はありません！

線状化
ベクター

挿入したい位置からイン
バースPCRもしくは制限酵
素処理でベクターを線状化

In-Fusion Snap Assembly Master Mix & dH2Oにベクターと目的遺伝子を加えてIn-Fusion反応

そのまま形質転換へ

PCR

反応は50℃でわずか15分！

ベクターの両末端と相同な配列15塩基を付加したプライマーで目的遺伝子をPCR■代表的なクローニング法の操作ステップの比較

In-Fusionクローニング

制限酵素／ライゲーション

TAクローニング

PCR増幅

PCR増幅

増幅確認

PCR増幅

増幅確認
1日目

増幅確認
1日目

1日目

In-Fusion反応

増幅産物精製増幅産物精製形質転換

ライゲーション

制限酵素消化・精製

形質転換

ベクター脱リン酸化

目的クローン取得

2日目

目的クローン取得

制限酵素／ライゲーション法と比べて、実験時間を約1日分カットできます！

2日目

ライゲーション

2日目

形質転換目的クローン取得

3日目

時短のワケ
その2

クローニング効率が抜群に高く、失敗した場合のやり直しが不要！

2020年に発売したIn-Fusion® Snap Assembly Master Mixは、既存品 In-Fusion® HD Cloning Kitのバージョンアップ品です。In-Fusion® HDや他社同タイプキットと比べて、クローニング効率が大きく向上しました。

進化した 2つのポイントに注目！
ポイント ①

ポイント ②

既存品に比べ、一挙に複数DNA断片を挿入する

高い正確性を維持したままマルチクローニングの効率が向上

他社同タイプキットより多くのコロニーを取得

5つの異なるサイズのインサート300（405 bpから1,005 bp）を同時にクローニング1つのインサート（3.8 kb）をクローニング# of colonies

200150100（TB USA社取得データ）

10090%90%50# of colonies（×103）

250

90807060504030201000
In-Fusion Snap
Assembly

In-Fusion Snap
Assembly

In-Fusion HD（既存品）

In-Fusion® Snap Assemblyを使用した場合、InFusion® HDの4倍以上のコロニーが得られた。
また、選択したコロニーのうち90%以上に正しい配列が挿入されていることを確認した。

他社同タイプキット
他社同タイプキット

In-Fusion® Snap Assembly は 、 他 社 同 タ イ プ
キットの2倍以上のコロニーが得られた。また、選択したコロニーのうち95%以上に正しい配列が挿入されていることを確認した。
※データの詳細は弊社ウェブサイトをご覧ください。

得られたコロニーに対して、100%に近い割合で正しい配列を持つクローンを取得できます。
つまり、失敗による時間のロスがなく、迅速に目的クローンを取得することが可能です！
なぜIn-Fusionは正しい配列のクローンを得られるの？ －他社同タイプキットとの比較－★ 他社同タイプキットによるクローニングでは…

★ In-Fusionクローニングでは…

ポリメラーゼDNAリガーゼ

ベクターとインサートをつなぐために、ポリメラーゼとDNAリガーゼを使います。そのときにMutationが入ると考えられます。

ベクターとインサートをつなぐために、ポリメラーゼもDNAリガーゼも使用しません（ギャップが生じても大腸菌形質転換後に自動的に埋まります）。このため、Mutationが入らず、より正確性の高いクローニングが可能となります。

In-Fusionは、結合時にポリメラーゼもDNAリガーゼも使いません。
だから余計なエラーが入らず、正確性が高いのです！
動画で分かりやすく解説しています！

-1-｜ 時短クローニングのススメ

時短のワケ
その3

関連製品が充実し、上流／下流の実験操作も簡単・迅速！
※製品リストは本パンフレット裏表紙をご覧ください。

■ In-Fusionクローニングの基本フローとおススメの関連製品

1

高い正確性に加え、5秒／kbの高速伸長能をもつPCR酵素

PCR増幅によるベクターとインサートの調製

PrimeSTAR® Max DNA Polymerase
だから時短！

2

操作時間はわずか10分！ PCR産物のゲル精製用カラム

スピンカラムを用いた
PCR産物の精製

NucleoSpin® Gel and PCR Clean-up
だから時短！

3

In-Fusion反応によるクローニング

4

大腸菌への形質転換

5In-Fusion® Snap Assembly Master Mix

クローニング効率のよい高品質なコンピテントセル

E. coli HST08 Premium CompetentCells

だから時短！

Dye入りプレミックスPCR試薬なので操作時間を短縮

コロニーPCRによるインサートチェック

EmeraldAmp® MAX PCR Master Mix
だから時短！

何といってもクローニングには正確性が重要！ 高正確性PCR酵素 PrimeSTAR® シリーズ
★ 圧倒的に低いエラー率！ PrimeSTAR®シリーズと各種PCR酵素との正確性の比較
PrimeSTAR® Max

5 kb以下の比較的短鎖の増幅にPrimeSTAR® HS
PrimeSTAR® GXL

5～10 kbを超える長鎖の増幅に

Pfu DNA Polymerase
Tks Gflex™

PrimeSTARシリーズの各PCR酵素は、増幅産物約50万塩基をシーケンシングして、エラーがわずか10～30塩基のレベルです。High Fidelity PCR酵素の原点であるPfu DNA Polymeraseの正確性を上回ります！

PrimeSTARシリーズで増幅できないターゲットに

A社高効率酵素
rTaq DNA Polymerase
00.01

0.02

0.03

0.04

0.05 （％）

GCリッチで変異が入りやすいTthゲノムDNAを鋳型として、任意に選択した10領域（各約500 bp）をPCR増幅後ベクターにクローニングし、各配列について複数クローンをピックアップしてシーケンシングにより塩基配列を確認した。解析した総塩基数に対するエラー塩基数から、エラー率（Mutant frequency）を求めた。

正確性が非常に高いPrimeSTAR® シリーズとIn-Fusion® を組み合わせて用いることで、極めて効率の高いクローニングができます。特に高速PCRが可能なPrimeSTAR® Maxを用いれば、大幅に反応時間を短縮でき、迅速なクローニングが可能です。

｜時短クローニングのススメ-2-※1 ： 研究応援活動キャンペーン in Winter（期間：2020年11月16日～2021年3月31日）のキャンペーン価格です。
※2 ： NucleoSpin Gel and PCR Clean-up（製品コード 740609.10） は※1のキャンペーンの対象外です。

■ 製品一覧
製 品 名キット構成

・5X In-Fusion Snap
Assembly Master Mix
・pUC19 Control Vector
・Control Insert®

In-Fusion Snap AssemblyMaster Mix

通常価格
（税別）

キャンペーン価格（税別）※1容 量

製品コード10回

638947¥23,000¥18,400

50回

638948¥113,000¥90,400

250回

638949¥380,000¥304,000

500回

638943¥690,000¥552,000

1,000回

638944¥1,200,000¥960,000- PCR産物の精製には別途、NucleoSpin Gel and PCR Clean-up（製品コード 740609.10）などの精製用スピンカラムをご用意ください。
- In-Fusion HDと同様に、Cloning Enhancer（製品コード 639613など）とも組み合わせてご利用いただけます。

■ 関連製品
製 品 名

PCR産物のゲル精製用カラム®

NucleoSpin Gel and PCR Clean-up

容 量

製品コード

通常価格
（税別）

キャンペーン価格（税別）※110回

740609.10¥5,300※250回

740609.50¥13,500¥8,100250回

740609.250¥50,000¥30,000

100回

R045A

¥31,500¥22,050

400回

R045B

¥101,000¥70,700

ク ロ ー ニ ン グ に最 適な高正確性PCR酵素

PrimeSTAR® Max DNA Polymerase

高効率コンピテントセル

E. coli HST08 Premium CompetentCells（100 μl×10）

9128¥23,100¥18,480

Dye入りプレミッ クス
PCR試薬

EmeraldAmp® MAX PCR Master Mix

160回

RR320A¥7,000¥5,600

1 Set

ユーザーズボイス 一挙大公開！
これまでにIn-Fusionをご使用になったお客様の喜びの声をご紹介します！
In-Fusionに出会ったことで、研究の進捗速度が大幅に変わりました。これ一つで、コスト削減だけでなく時間も短縮される、私にとってこれは魔法の製品です。使わないと損です。
初めての時はとにかく驚きました。３つの断片をベクターに組み込んだり、変異、欠失を導入したり、それまでsite-directedmutagenesisやオーバーラップ領域を使ったPCRでの遺伝子融合で苦労していた部分があっという間に解消しました。
通常の制限酵素を使った方法では何か月もうまくいかなかったのが、この商品を使ったら一発で構築できました。
時間短縮されるだけでなく成功率の高さに驚いています。制限酵素によるクローニングよりも成功率が高く、“使わなければ損”だと感じました。
クローニングの実験ってCase by Caseでうまくいかないことが多いですが本製品を使ってから安定性が高まりました！
翌日、ポジティブコロニーを見るのが楽しみになります。

非常に便利で高効率。ベクター作製の印象が変わった。

・本パンフレットで紹介した製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
・タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
・本パンフレットに記載された社名および製品名は、特に記載がなくても各社の商標または登録商標です。
・ライセンス情報については弊社ウェブサイトにてご確認ください。
・本パンフレット記載の価格は2020年12月1日現在の希望小売価格です。価格に消費税は含まれておりません。
2020年11月作成G

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