核酸合成用試薬
2'-フルオロ、2'-アミノRNAアミダイトと固相合成用支持担体
2'-Amino Cytidine

CE Amidite

2'-Amino Uridine

500Å CPG

1000Å CPG

CE Amidite

2'-Fluoro Adenosine (N,N-DMF)

500Å CPG

1000Å CPG

CE Amidite

2'-Fluoro Adenosine (N-Bz)

500Å CPG

1000Å CPG

CE Amidite

2'-Fluoro Cytidine (N-Ac)

500Å CPG

1000Å CPG

CE Amidite

2'-Fluoro Guanosine (N,N-DMF)

500Å CPG

1000Å CPG

CE Amidite

2'-Fluoro Guanosine (n-ibu)

500Å CPG

1000Å CPG

CE Amidite

2'-Fluoro Uridine

500Å CPG

1000Å CPG

CE Amidite

RNAは核酸分解酵素で急速に分解されます。そのため、治療薬や診断薬用に、2'-O-アルキルや2'-フルオロなどの2'修飾のRNAモノマーが合成されてきました。2'-フルオロ修飾は2'修飾の中では最も有望な候補であることがわかっています。未修飾のRNAオリゴヌクレオチドと比較すると、2'-フルオロ核酸は、2’－ヒドロキシル基が存在しないため高いpHでの加水分解に対して安定です。2'－デオキシ-2'-フルオロRNAオリゴヌクレオチド誘導体は、核酸分解酵素耐性であり長時間分解されにくくなります。
2'-ヒドロキシル基と同様に、2'-フルオロもRNA中のリボースの5員環はC3'-エンド型です。したがって、2'-フルオロのオリゴヌクレオチドは標的のストランドとハイブリダイゼーションして、A型二重らせん構造をとります。2'-フルオロRNAオリゴヌクレオチドは、一般的なDNAオリゴヌクレオチドと同じ方法で精製することができます。2'-フルオロモノマー修飾されたオリゴヌクレオチドは、天然のRNA:RNA、DNA:DNAとの2本鎖に比べて、ターゲットのRNAに対しては、1個の修飾につき1-2℃、DNAに対しては1個の修飾につき1.3℃、熱安定性が高くなります。2'-フルオロは、マイナーグルーブ側には、水素結合のアクセプターがありませんが、2'-OHはマイナーグルーブ側では水分子と水素結合を形成します１。2'-フルオロのオリゴヌクレオチドの熱力学的データは、その高い安定性がエントロピーではなくエンタルピーに基づいていることを示しています２。
2'-デオキシ-2'-フルオロリボヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、リボザイム３、アンチセンス４、siRNA5、miRNA6、アプタマー７をベースにした核酸医薬品に使われてきました。さらに、2'-フルオロリボヌクレオチドを持つアン
チセンスオリゴヌクレオチドは、他の2'-修飾体と比較して、スプライシングの調節に優れた特性を示すことも報告されています８。2’-デオキシ-2'-フルオロヌクレオシドは、ヌクレオシドおよび三リン酸として重要な生物学的活性を示すこともわかっており、DNAおよびRNAポリメラーゼのプローブとして多く使われています９。2'-フルオロピリミジンで修飾されたsiRNAは、核酸分解酵素耐性を示し、免疫刺激は減少し、修飾されていないコントロールのRNAと比較して、in vitro およびin vivo で良好な活性を示したものもありました10。ただし、2'-フルオロオリゴヌクレオチドとRNAの二本鎖は、RNase Hでは切断されません。2'-フルオロを含むアプタマーは、修飾なしのRNAアプタマーより高い親和性で標的分子に結合し核酸分解酵素耐性があります。

これら2'-フルオロ-2'-デオキシ修飾の特性から、2'-フルオロアミダイトとその固体支持担体は多くの需要があります。
ChemGenesでは、2'-フルオロのA, C, G, Uの4種類のアミダイトと固体支持担体を取り揃えています。

脱保護と精製の方法
ステップ1：

シアノエチル基をいずれかの方法で除きます。

a) 10％ ジエチルアミン in アセトニトリル11(v/v) で室温3分b) 50% トリエチルアミン in アセトニトリル (v/v)で室温で30分
ステップ２：

塩基の保護基の脱保護を、濃アンモニア水（30%）で37℃、16時間で行ないます。

ステップ３：

精製①カートリッジ精製
クルードの2'-フルオロRNAオリゴは、ChemGenesのpuri-pak 精製カートリッジ（ChemGenes カタログ番号#CSS3920)を使用して精製が可能です。
ChemGenesの精製カラムを用いれば、オリゴヌクレオチドを迅速に脱塩できます。これは、その都度の使い捨てのカラムで、50 OD ユニット（0.2 μmスケールのオリゴ合成）をロードできます。
②HPLC精製
カートリッジ精製で得られた2'-フルオロRNAをさらに精製する必要がある場合には、HPLCで精製を行います。
References:
1) Egli, M. et. al. Biochemistry 1996, 35, 8489.
2) Pallan, P. S. et. al. Nucleic Acids Res. 2011, 39, 3482.
3) Pieken, W. A. Science 1991, 253, 314.
4) Kawasaki, A. M. et. al. J. Med. Chem. 1993, 36, 831.
5) Allerson, C. R. et. al. J. Med. Chem. 2005, 48, 901.
6) Davis, S. et. al. Nucleic Acids Res. 2009, 37, 70.
7) Ng, E.W. M. Nat. Rev. Drug Discovery 2006, 5, 1238) Rigo, F. et. al. Nat. Chem. Biol. 2012, 8, 555.
9) Viani, F., V.A. Ed. Chapter 13, pp 419-449, John Wiley & Sons Ltd. 1999; Wright G.E. et. al. Ther. Pharmacol. 1990, 47, 447.
10) Manoharan, M. et. al. Angew. Chem. Int. Ed. 2011, 50, 2284.
11) Bhan A. Et al. US Patent 6,887,990.

品名

商品コード概要

容量FW

2'-Amino Cytidine CED
PhosphoramiditeANP-5322

100 μmol944.93

化学式 C48H52F3N6O9P

250 mg
輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

100 mg, 1 g
1000Å CPG2'-Amino Uridine 3'-lcaa
CPGN-9010-10

pack 40.2µmol, 1.0µmol

500Å CPGN-9010-05

pack 100.2µmol, 1.0 µmol

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

構造式

品名

商品コード

概要

容量
FW

2'-Amino Uridine CED
phosphoramidite

ANP-9403

100 μmol841.81

化学式 C41H47F3N5O9P

250 mg
輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

100 mg1000Å CPG2'-Fluoro Adenosine(N,N-DMF) 3'-lcaa CPG

N-1067-10

pack 40.2µmol, 1.0µmol

500Å CPGN-1067-05

pack 100.2µmol, 1.0 µmol

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

FW826.90

250 mg2'-Fluoro-2'-deoxy
Adenosine (N,N-DMF)

500 mg
ANP-9157

CED Phosphoramidite

1g2g5g

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

100 mg1000Å CPG2'-Fluoro Adenosine (NBz) 3'-lcaa CPG

N-1058-10

pack 40.2µmol, 1.0µmol

500Å CPGN-1058-05

pack 100.2µmol, 1.0 µmol

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

FW875.92

250 mg2'-Fluoro-2'-deoxy
Adenosine (n-bz) CED

500 mg
ANP-9151

Phosphoramidite

1g2g5g

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

★

金額はお問い合わせください。

★

規格外の容量をご希望の方はお問い合わせください。

構造式

品名

商品コード

概要

容量

100 mg1000Å CPG2'-Fluoro Cytidine 3'-lcaa
CPG

N-1057-10

pack 40.2µmol, 1.0µmol

500Å CPGN-1057-05

pack 100.2µmol, 1.0 µmol

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

FW789.83

化学式C41H49FN5O8P

250 mg2'-Fluoro-2'-deoxyCytidine (n-ac) CED

500 mg
ANP-9152

phosphoramidite

1g
2g5g

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

100 mg1000Å CPG2'-Fluoro Guanosine(N,N-DMF) 3'-lcaa CPG

N-1069-10

pack 40.2µmol, 1.0µmol

500Å CPGN-1069-05

pack 100.2µmol, 1.0 µmol

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

FW842.89

250 mg2'-Fluoro-2'-deoxyGuanosine (N,N-DMF)

500 mg
ANP-9159

CED Phosphoramidite

1g
2g5g

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

100 mg1000Å CPG2'-Fluoro Guanosine (nibu)-3'-succinyl lcaa CPG

N-1055-10

pack 40.2µmol, 1.0µmol

500Å CPGN-1055-05

pack 100.2µmol, 1.0 µmol★

金額はお問い合わせください。

★

規格外の容量をご希望の方はお問い合わせください。

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

構造式

品名

商品コード

概要

容量FW857.91

化学式C44H55FN7O7P

250 mg2'-Fluoro-2'-deoxy
Guanosine (n-iBu) CED

500 mg
ANP-9153

Phosphoramidite

1g2g5g

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

100 mg1000Å CPG2'-Fluoro Uridine 3'-lcaa
CPG

N-1056-10

pack 440 nmol, 0.2µmol, 1.0µmol

500Å CPGN-1056-05

pack 1040 nmol, 0.2µmol, 1.0 µmol

250 mg2'-Fluoro-2'-deoxy
Uridine CED

500 mg
ANP-9154

phosphoramidite

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

FW748.78

化学式C39H46FN4O8P

1g2g5g

輸送上の注意高温多湿に注意。速やかな輸送が好ましい。

★

金額はお問い合わせください。

★

規格外の容量をご希望の方はお問い合わせください。

構造式