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１．ステビア甘味料の定義
ステビア甘味料は菊科植物 “ ステビア ”（Stevia rebaudiana BERTONI ）の葉を原料とし、そこ から水で抽出・精製して得られた天然の高甘味度甘味料です。主要 4 配糖体（ステビオシド、レバウジオシドＡ，レバウジオシドＣ，ズルコシドＡ）含有量80％以上のものを” ステビア抽出物 “ と言います (1)。

なお “ 酵素処理ステビア（α - グルコシルトランスフェラーゼ処理ステビア）” は “ ステビア抽出物 ” に糖転移酵素を作用させて得られたものです (1)。
２．“ ステビア抽出物 ” の安全性
“ ステビア抽出物 ” は国内外の多くの研究者により古くから各種安全性試験が行われています。長期投与及び最新の方法による試験等で安全性を疑わせる結果は出ていません。
これまで実施された主な安全性試験
・急性毒性試験・変異原性試験・繁殖毒性試験・亜急性 / 慢性毒性／ガン原性試験、・催奇性試験

・代謝･吸収試験

復帰突然変異原性試験，小核試験，コメットアッセイ（ア）ステビアのヒト腸内細菌叢代謝試験（イ）ステビオールの in vitro 肝代謝試験（ウ）ステビアのラット小腸における吸収性検討− In vitro 反転腸サック法による吸収性評価（エ）ステビアのラット小腸における吸収性検討−ステビアのラット小腸に経口投与した時の門脈血漿中ステビオールの分析
３．ステビアの安全性試験結果[1] 急性毒性試験
ステビオシド（経口）の LD50 はマウス、ラット、ハムスターで 8.2g/kg 以上であり、ステビオシドが低毒性であることを示しています（3）。
[2] 変異原性試験

Ames 試験，小核試験，コメットアッセイ

ステビオールの変異原性試験では In vitro 前進突然変異試験等の代謝活性化のケースにＤＮＡ損傷性及び染色体異常が報告されていますが、In vitro の Ames, DNA 修復試験，、及び In vi ｖ o のマウス、ラット、ハムスターの小核試験でいずれも陰性の結果が出ています（Table １）。
また高感度の変異原性試験であるコメットアッセイ（多臓器アルカリＳＣＧ法）を In vitro １機関、In vi ｖ o 3 機関で実施しました（22）。In vitro 試験はステビオールについてヒトリンパ芽球細胞株を用いて行い、代謝活性化系の有無に関わらずステビオールはＤＮＡ損傷誘発性を示しませんでした。In vi ｖ o 試験
では、２機関で実施したステビオール 2 例、ステビア抽出物（市販品）1 例のマウスへの500,1000,2000mg/kg 投与は、試験した臓器全てでＤＮＡ損傷性を示しませんでした（22）。一方、ステビオールを用いた 1 機関の試験では 1 臓器（結腸粘膜）に弱い陽性反応が認められました。

しかし、他の 2 機関では同一臓器で陰性である事、国内外の小核試験で陰性の結果が出ていること、発がん性試験においてもがん原性が見られないこと等から、最終的に、肝臓、腎臓、結腸等試験した臓器いずれにおいてもＤＮＡ損傷性を示さない、あるいは示すとしても問題となるものではないことが確認されました（平成１３年１１月、「薬事・食品衛生審議会 食品衛生分科会 毒性・添加物合同部会」）（21）。
[3]

繁殖毒性試験

繁殖毒性では明石ら、森らがラットで、YodyingyuadV らがゴールデンハムスターを用いてそれぞれ試験し、妊娠率、交配率等に影響の無いことを報告しています (Table ２)。
[4]

亜急性 / 慢性毒性／ガン原性試験

慢性毒性，がん原性については山田ら、L.Xili ら、豊田らがそれぞれ 2 年間に渡る試験を実施し、いずれも明確な毒性作用なし、発がん性を認めないと報告しています (Table ３) 。酵素処理ステビアについては 13 週間、5％混餌投与試験（亜慢性毒性試験）で、毒性と思われる所見なしと報告されています (Table ３)。
[5]

催奇性試験

催奇形性では宇佐見らがステビオシドを用い、Wasuntarawat らがステビオールを用いて試験し、ステビオシド、ステビオールに催奇形性作用の無いことを報告しています (Table ４)。

Table 1 「ステビア抽出物（含：ｽﾃﾋﾞｵｰﾙ）」の安全性試験結果
変異原性報

告1978
奥村ら (4)1980
石館ら (5)1985
Pezzuto ら (6)1987
義平、松井ら (7)被験物質
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ
粗結晶純度：95%
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ
純度：85%
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞｽﾃﾋﾞｵｰﾙ
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞｽﾃﾋﾞｵｰﾙ

Ames
試験─In vitro 試験
前進突 DNA 修 Umu
然変異 復試験test──

In vivo 試験
染色体 小核試験 ｺﾒｯﾄ
異常試験
ｱｯｾｲ

─

─
+9mix
─
─

─
+9mix

─
─

─
+9mix

─
+9mix

2000
ｽﾃﾋﾞｵｰﾙ
P.Temcharoen ら (8) 純度：90%
2001（報告資料＊）
2001
佐々木ら (22)＋：陽性＊

ﾚﾊﾞｳﾃﾞｨｵｼﾄﾞ A

─ﾏｳｽ ﾏｳｽ ﾗｯﾄ ﾊﾑｽﾀｰ ─

ｽﾃﾋﾞｵｰﾙ
ｽﾃﾋﾞｱ市販品

─：陰性

薬事・食品衛生審議会、食品衛生文科会、毒性・添加物合同部会（平成１３年１１月６日）資料──Table 2 「ステビア抽出物」の安全性試験結果
繁殖毒性
報告
1975
明石ら (9)1981
森ら (10)

被験物質
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ
粗結晶純度：95%
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ結晶
純度：95.98%

試験系
結果
ﾗｯﾄ（♂、♀）に 21 日間 0.15% 混餌投与後、妊娠率、出産仔数に有意交配な差はなし
交配率、妊娠率、およびﾗｯﾄに 0.15,0.75,3.00% 混餌投与雄：6 週齢から 60 日間投与し、その後交配 胎仔への影響なし
成立まで投与雌：11 週齢から 14 日間投与後交配し、妊娠7 日まで投与
1991
総ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ純度：90% ｺﾞｰﾙﾃﾞﾝﾊﾑｽﾀｰ（♂、♀）、3 世代 0.50,1.0,2.5g/ 生殖に影響無し
Yodyingyuad.Vkg 体重 / 日ら (11)

Table 3 「ステビア抽出物（含：ｽﾃﾋﾞｵｰﾙ、酵素処理ｽﾃﾋﾞｱ）」の安全性試験結果
亜急性 / 慢性毒性・癌原性報告1976
三橋ら (12)1984
山田ら (13)1988
菊池 (14)1991
阿瀬ら (15)

被験物質
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ結晶

投与量
投与期間
0.1,0.5,2.5g/kg ﾗ ｯ ﾄ 経 口 強 制 4 週間投与
0.1,0.3,1.0%
2 年間
ﾗｯﾄ混餌投与ｽﾃﾋﾞｱ抽出物
95.20%(total stevioside)
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ 74.54%
ﾚﾊﾞｵｼﾞｵｼﾄﾞ -A16.27%
α - ｸﾞﾙｺｼﾙｽﾃﾋﾞｵｰﾙ配糖体 0,1.25,2.5,5.0%
13 週間
混餌投与
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ
0.31,0.62,1.25,2.50,5.00% ﾗ ｯ 13 週間
純度 95.6%
ﾄ混餌投与

1992
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ
L.Xili ら (16) 純度 85%
1997
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ豊田ら (17) 純度 95.6%

0.2,0.6,1.2%
ﾗｯﾄ混餌投与
2.5､5.0% ﾗｯﾄに混餌投与

2 年間
2 年間

結果
明確な毒性作用なし
明確な毒性作用なし
発がん性を認めない

毒性と思われる所見なし
明確な毒性作用なし

明確な毒性作用なし
発がん性を認めない
明確な毒性作用及び癌原性は認められない

Table 4 「ステビア抽出物（含：ｽﾃﾋﾞｵｰﾙ）」の安全性試験結果
催奇形性（発生毒性）
報告

被験物質
1995
ｽﾃﾋﾞｵｼﾄﾞ
宇佐見ら (18)
純度 95.6%
1998
ｽﾃﾋﾞｵｰﾙ
Wasuntarawat ら (19) 純度 90%

投与量
投与期間
結果
0.25,0.50,1.00g/kg/ 日、妊娠 6-15 の 10 日間 催奇形性作用なし
水に溶解ﾗｯﾄ♀胃管投与
0.25,0.50,0.75,1.00g/kg/ 妊娠 6-10 の 5 日間 催奇形性作用なし
日 ｺﾞｰﾙﾃﾞﾝﾊﾑｽﾀｰ♀胃管投与 ( ｺｰﾝｵｲﾙ使用 )[6]代謝・吸収試験

試験した全ての配糖体甘味成分（ステビオシド、レバウジオシドＡ，レバウジオシドＣ，ズルコシドＡ）は配糖体のままでは腸内では吸収されず、腸内細菌叢によって徐々にアグリコンであるステビオールに分解され吸収されること、またステビオールは最終代謝物で、これ以外の代謝物は生成せず、さらにステビオールはヒト肝臓においてほとんど代謝を受けないことが報告されています。同様に、酵素処理ステビアも、先ず、元のステビア抽出物に戻り、その後はステビア抽出物と同じ経路をたどって吸収・代謝されることが報告されています。
（ア）ステビアのヒト腸内細菌叢代謝試験
小山らがプールヒト糞便で種々のステビアサンプルをインキュベーションし、被検物質の減少と生成物の同定、及び変化を調べ報告しています（23）。ステビオシド、レバウジオシドＡをそれぞれ別々にインキュベーションすると 0.2mg/mL 濃度では 24hr で完全に消失し相当するステビオールの生成が見られました。４成分混合物（ステビオシド、レバウジオシドＡ，レバウジオシドＣ，ズルコシドＡ）のインキュ
ベーションではステビオシドは 0.2mg/mL では 8hr で消失し 10mg/mL では 24hr で消失しました (Fig1)。
一方レバウジオシドＡは 0.2mg/mL では 24hr で消失しましたが 10mg/mL では 24hr 経てもほとんど変化しませんでした (Fig1)。レバウジオシドＣは糖の分岐構造がレバウジオシドＡに似ていますが0.2mg/mL 10mg/mL の両方とも 24hr で完全に消失しプールヒト糞便ではステビオシドに近い分解を受けることがわかりました。ステビオールをプールヒト糞便でインキュベーションした場合、24hr 後も変化が無くステビオールはヒト腸内細菌叢で代謝を受けないと考えられました (Fig2)。
種々のステビアサンプルのヒト腸内細菌叢での判明した分解経路は以下の通りです。ステビオシドは13 位に結合したソホロシル基の末端の糖（グルコース）が切れ、ルブソシドが生成し、その後は 2 つの径路、一つは 13 位の残りの糖の分解、また一つは 19 位のエステルの加水分解を経てステビオールへ分解します。
レバウジオシドＡの場合には主たる分解径路はステビオシドを経由する径路であり、またマイナーな径路としてレバウジオシドＢを経由する径路があります (Fig3)。

Figure 1 Time-dependency on degradation of stevia components by pooled human fecal homogenates
Stevia (0.2 or 10 mg/mL) was incubated with pooled human fecal homogenates obtained from 5
healthy male volunteers (fece-buffer-ratio: 1:50, w/v) at 37℃ under anaerobic condition. Each point
represents the mean of duplicate determinations.

120% of intial value

100
800.08 mg/mL

600.2 mg/mL

40200081624

Incubation time (hr)Figure 2Time-dependency on degradation of steviol degradation by pooled human fecalhomogenates

Steviol (0.08 or 0.2 mg/mL) was incubated with pooled human fecal homogenates obtained from 5
healthy male volunteers (fece-buffer-ratio: 1:50, w/v) at 37 ℃ under anaerobic condition. Each point
represents the mean of duplicate determinations.

Figure 3 Proposed pathways of rebaudioside A metabolism in human intestinal microﬂora

α―グルコシルトランスフェラーゼ処理ステビアの場合には、新たに付加した糖は容易に外れ元のステビオシ
ド、あるいはレバウジオシドーＡに戻り、その後は既に示された径路でステビオールへ分解します (Fig4)。

Figure 4 Proposed metabolic pathway of α -monoglucosylrebaudioside A in human intestinal
microﬂora

（イ）ステビオールの in vitro 肝代謝試験
小山らはステビオールのヒト肝ミクロソームにおける代謝を調べるとともに、ラット肝ミクロソームでの代謝と比較し、ヒトとラットでは肝ミクロソームにおける酸化代謝の定性的なプロフィールにほとんど種差は認められないこと、活性値はヒトの方がラットに比べて極めて低いことを報告しています（24）(Fig5)。

Figure 5Comparison of steviol metabolic proﬁle between rat and pooled human liver
microsomes

1mmol/L steviol was incubated with rat or human liver microsomes (0.5 mg/mL) at 37 ℃
for 120 min. Data are the mean of triplicate incubations.

（ウ）ステビアのラット小腸における吸収性検討− In vitro 反転腸サック法による吸収性評価
小山らはラットの反転腸を用いてステビオールと４成分混合物の腸管膜の透過性を試験し、ステビオール、コントロールに用いたサリチル酸は容易に腸管膜を透過するが、４成分混合物はほとんど透過しないことを報告しています（24）。

（エ）ステビアのラット小腸における吸収性検討−ステビアのラット小腸に経口投与した時の門脈血漿中ステビオールの分析（−
小山らはラットに経口でステビオール、４成分混合物を投与して門脈血漿中ステビオールを調べ、先の（ア）、（ウ）の In vitro の結果を In vi ｖ o の系で検証･確認しています（24）。

参考文献（1）第三版 既存添加物 自主規格，2002（2）林裕造，既存天然添加物の安全性評価に関する調査研究−平成 8 年度厚生科学研究報告書 -，1998（3）高橋道人，ステビア抽出物の安全性，JAFAN，17，４，115-122，1997（4）奥村昌也，藤田陽子，今村美喜郎，相川清，ステビオサイドの修復試験および復帰変異試験，食衛誌，19，5，486-490，1978（5）石館基，吉川邦衛，祖父尼俊雄，食品添加物の変異原性試験成績，変異原性と毒性，12，82 − 90，1980（6）J.M.Pezzuto,C.M.Compadre,S.M.Swanson,N.P.Dhammika Nanayakkara and A.D.Kinghorn，Metabolically
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