2014 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡二級技士技術認定試験問題
問 1．正しいのはどれか．

Ａ．グルタルアルデヒドに比べて架橋が安定している

Ａ．微小管は直径 24 nm の管状構造を示す

Ｂ．カルノフスキー固定液はグルタルアルデヒドとの混合液である

Ｂ．膠原線維の縦断面像では 60 ～ 70 nm の周期的な横縞が見られる

Ｃ．四酸化オスミウムに比べて速やかに組織内へ浸透する

Ｃ．線毛の横断面ではアクチンフィラメント線維の束が芯となる構造が見Ｄ．タンパク質を架橋する速度は 4°C の方が室温よりも速い
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤられる

問 10．四酸化オスミウムで正しいのはどれか．

Ｄ．細胞膜は厚さ 10 nm の２層構造を示す
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．二重固定の場合，通常，グルタルアルデヒド固定の前に使用する

問 2．大きさの順で正しいのはどれか．

Ｂ．通常１～２％濃度で使用する

1．リボソーム＜ウイルス＜赤血球＜ミトコンドリア＜ゾウリムシ

Ｃ．安全な薬品である

2．ウイルス＜ミトコンドリア＜リボソーム＜ゾウリムシ＜赤血球

Ｄ．結晶は無色～淡黄色の塊状または針状である

3．リボソーム＜ウイルス＜ミトコンドリア＜赤血球＜ゾウリムシ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

4．ウイルス＜リボソーム＜ミトコンドリア＜赤血球＜ゾウリムシ

問 11．脱水で正しいのはどれか．

5．ウイルス＜リボソーム＜ゾウリムシ＜ミトコンドリア＜赤血球

Ａ．超薄切片を作製可能な樹脂に包埋するために行う

問 3．正しいのはどれか．

Ｂ．キシレンがよく用いられる

Ａ．原生動物は真核生物である

Ｃ．脱水操作中にタンパク質が抽出されることはない

Ｂ．真菌は多糖体性の細胞壁を有する

Ｄ．低濃度のエタノールから徐々に濃度を上昇させる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．細菌は細胞小器官を多く含む

問 12．脱水剤としてアセトンを使用する利点はどれか．

Ｄ．ウイルスは細胞分裂して増殖する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．アクリル樹脂包埋に適する

問 4．原核生物はどれか．

Ｂ．エタノールに比べ吸湿性が低い

Ａ．細菌

Ｃ．エポキシ樹脂包埋時に置換剤が不要である

Ｂ．真菌

Ｄ．エタノールに比べ組織内の物質の抽出が少ない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．ラン藻

問 13．樹脂廃液処理として正しいのはどれか．

Ｄ．原生動物
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．大量の水と一緒に流す

問 5．固有の DNA を持つ細胞小器官はどれか．

2．溶媒で希釈した後に流す

Ａ．ミトコンドリア

3．重合硬化させてから廃棄する

Ｂ．色素体

4．焼却炉で焼く

Ｃ．ペルオキシソーム

5．一般ゴミとして廃棄する

Ｄ．ゴルジ装置

問 14．エポキシ系樹脂に使用する置換剤はどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．キシレン

問 6．固定剤で正しいのはどれか．

Ｂ．酸化プロピレン

Ａ．グルタルアルデヒドは四つのアルデヒド基を持つ

Ｃ．n-ブチルグリシジルエーテル（QY-1）

Ｂ．パラホルムアルデヒドは水酸化ナトリウムを加えて溶解する

Ｄ．DMP-30
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．四酸化オスミウムは電子染色効果を有する問 15．薄切の際にボート内の切片が見にくい原因はどれか．

Ｄ．タンニン酸は架橋剤として使用する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．ボートの水量が多すぎる

問 7．固定剤で正しいのはどれか．

Ｂ．ナイフの背面に水がついている

Ａ．グルタルアルデヒドは重合すると 500 nm の紫外線吸収のピークを示す

Ｃ．試料ブロックの硬さが均一でない

Ｂ．パラホルムアルデヒドは通常８％濃度で使用する

Ｄ．照明の角度が適切でない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．四酸化オスミウムは通常１～２％濃度で使用する

問 16．超薄切片の干渉色が銀色なのはどの厚さか．

Ｄ．過マンガン酸カリウムは主に植物や微生物などの固定に使用する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．60 nm 未満

問 8．動物組織の固定で正しいのはどれか．

2．60 ～ 90 nm

Ａ．固定液は一般的に体液の浸透圧より低めに調製する

3．90 ～ 150 nm

Ｂ．固定液の pH は一般的に 6.5 ～ 7.0 の範囲が適正である

4．150 ～ 190 nm

Ｃ．組織への浸透性はグルタルアルデヒドよりホルムアルデヒドの方がよ

5．190 ～ 240 nm

い

問 17．超薄切片の回収法で正しいのはどれか．

Ｄ．細胞膜のリン脂質をよく固定するのは四酸化オスミウムである

Ａ．押し付け法では切片にしわが入ることがある

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 9．ホルムアルデヒドで正しいのはどれか．

Ｂ．引き上げ法ではグリッドを切片の真下に沈め，水面に平行に引き上げ
る

（ 1 ）

Ｃ．ループ法ではループは疎水性の方がよい

Ａ．5’-ヌクレオチダーゼ

Ｄ．ループ法では外径 3 mm，内径 2 mm のループを使用する

Ｂ．Na+, K+-ATPase

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 18．厚い切片と薄い切片が交互に切れる原因で正しいのはどれか．

Ｃ．グルコース-6-ホスファターゼ
Ｄ．酸性ホスファターゼ
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．ナイフの締め付けがゆるい
Ｂ．切削面が大きすぎる

問 27．ペルオキシダーゼの検出法で使用する試薬はどれか．

Ｃ．ナイフに微細な刃こぼれがある

Ａ．3,3’-ジアミノベンチジン（DAB）

Ｄ．切削のスピードが遅すぎる

Ｂ．過酸化水素水

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 19．ミクロトーム室の環境として適切なのはどれか．

Ｃ．水酸化ナトリウム
Ｄ．ニトロブルーテトラゾリウム（NBT）

Ａ．湿度が高い

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．埃が少ない

問 28．免疫電顕法の包埋後染色法を行ったところ，非特異的反応が強Ｃ．空気流が強い

かった．対策として正しいのはどれか．

Ｄ．振動が少ない

Ａ．抗体の希釈率を上げる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．反応温度を高くする

問 20．電子染色で正しいのはどれか．

Ｃ．反応時間を長くする

Ａ．酢酸ウラニルはリン酸緩衝液と混ぜて使用する

Ｄ．切片の洗浄回数をふやす

Ｂ．酢酸ウラニルは核質やリボソームなどのコントラストを高める

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．鉛染色は細胞膜系やグリコーゲンなどのコントラストを高める

問 29．ペルオキシダーゼ標識抗体法を使用した免疫電顕法で正しいのは

Ｄ．鉛染色は 30 分間以上行うとよい

どれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．包埋後染色法の一つである

問 21．電子染色で正しいのはどれか．

Ｂ．包埋前染色法の一つである

Ａ．ネガティブ染色はウイルスを染めて観察する方法である

Ｃ．多重染色が可能である

Ｂ．散乱コントラストを高める

Ｄ．オスミウムブラックを観察している
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．原子番号の大きい金属が用いられる

問 30．包埋後免疫染色法によく使用される樹脂はどれか．

Ｄ．染色された組織像は蛍光板上で明るく見える
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．Epon 812

問 22．準超薄切片の染色手順で正しいのはどれか．

Ｂ．LR White

Ａ．厚さ 0.5 mm 程度の切片を作製する

Ｃ．Lowicryl K4M

Ｂ．水洗する

Ｄ．Spurr 樹脂
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．沸騰しない程度に加熱して乾燥させる

問 31．氷包埋法で正しいのはどれか．

Ｄ．スライドグラスの水滴上に移す

Ａ．生体高分子やウイルスの観察に適する

Ｅ．トルイジンブルー染色液を切片上に滴下する
1．ＡＣＤＢＥ

2．ＡＣＢＤＥ

3．ＡＤＣＥＢ

Ｂ．試料の凍結には液体窒素が適する

4．ＡＤＣＢＥ

5．ＡＤＥＣＢ

6．ＡＥＢＤＣ

Ｃ．液体窒素で冷却したクライオトランスファーホルダーを用いて観察す

問 23．準超薄切片をトルイジンブルーで染色したところ，試料の周辺部

る

分が中心よりも濃く染色された．正しいのはどれか．

Ｄ．散乱吸収コントラストを利用して観察する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．エポキシ樹脂の重合が不十分であるＢ．周辺部分は固定が良好である

問 32．凍結法で正しいのはどれか．

Ｃ．四酸化オスミウムの浸透が中心部分まで達していない

Ａ．浸漬法には融点－沸点間温度差が小さい冷媒が適している

Ｄ．脱水が不十分である

Ｂ．凍結速度が遅いと氷晶が大きくなる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 24．超薄切片観察時にコントラストを高める対策で正しいのはどれか．

Ｃ．ガラス状氷の凍結状態が得られた後は温度を上げても構造は保たれる
Ｄ．凍結試料を凍結したまま薄切し超薄切片を作製することができる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．加速電圧を下げる
Ｂ．試料にカーボンを蒸着する

問 33．オートラジオグラフィーで正しいのはどれか．

Ｃ．対物絞りの孔径を小さくする

Ａ．3H は g 線を出す放射性核種である

Ｄ．アンダーフォーカス量を小さくする

Ｂ．放射性同位元素の放射能は時間に比例して減少する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 25．画像ファイル形式のうち，非圧縮方式で保存できるのはどれか．

Ｃ．b 線は電子の流れである
Ｄ．乳剤の潜像は放射線イオン化力が強いほどよく形成される
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．BMP
Ｂ．GIF

問 34．走査電顕試料作製で正しいのはどれか．

Ｃ．JPEG

Ａ．O-D-O 法は膜構造の細胞内小器官を観察する方法である

Ｄ．TIFF

Ｂ．臨界点乾燥には t- ブチルアルコールを使用する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 26．細胞膜の指標酵素はどれか．

Ｃ．乾燥した生物試料をそのまま走査電顕観察すると帯電する
Ｄ．コーティング粒子は金，白金パラジウム，白金の順に大きくなる（ 2 ）1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．ペニング真空計で測定できる範囲は 103 ～ 10-1 Pa である

問 35．走査電子顕微鏡の作動距離を短くした際の効果で正しいのはどれ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

か．

問 43．走査電子顕微鏡で対物絞りの孔径を大きくした効果で正しいのは

Ａ．電子線の開き角が大きくなる

どれか．

Ｂ．分解能が低くなる

Ａ．電子線の開き角が小さくなる

Ｃ．焦点深度が浅くなる

Ｂ．焦点深度が浅くなる

Ｄ．低倍観察として有効な操作である

Ｃ．分解能が低くなる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．レンズ収差が小さくなる

問 36．正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．電子の移動する方向と電流の流れる方向は同じである

問 44．走査電子顕微鏡の信号検出で正しいのはどれか．

Ｂ．干渉は電子の波動性に基づく現象である

Ａ．エッジコントラストを軽減するため二次電子を検出した

Ｃ．電子が障害物の影に回り込む現象が弾性散乱である

Ｂ．組成コントラストを得るため反射電子を検出した

Ｄ．原子と衝突してエネルギーを失った電子を非弾性散乱電子と呼ぶ

Ｃ．チャージアップの影響を軽減するため二次電子を検出した

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．試料表面の微細な形状を観察するため二次電子を検出した

問 37．レンズの収差で正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．色収差はレンズ周辺部を通る電子線がレンズの軸近くを通る電子線よ問 45．走査電顕像で正しいのはどれか．

りも強く曲げられるために生じる

Ａ．試料の組成の違いによるコントラストも含まれる

Ｂ．非点収差はレンズの磁界や電界が軸対称でないために生じる

Ｂ．加速電圧を高くすると表面の凹凸に忠実なコントラストが得られる

Ｃ．球面収差はレンズ励磁電流の変動や電子の初速度の広がりのために生

Ｃ．チャージアップはコントラストに影響しない

じる

Ｄ．試料の突起部分は平坦な部分よりもコントラストが高くなる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．歪像収差は光軸からの距離によって倍率が変わるために生じる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 46．走査電顕観察時の試料汚染で正しいのはどれか．

問 38．電子銃で正しいのはどれか．

Ａ．真空度に依存する

Ａ．フィラメントを加熱して電子を放出させる方式を電界放出型電子銃とＢ．試料台に素手で触れても影響しない

呼ぶ

Ｃ．観察前に試料が損傷しない範囲で加熱乾燥すれば軽減する

Ｂ．フィラメントは正電位である

Ｄ．同じ部位を繰り返し観察してもおこらない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．クロスオーバーが実質的な電子源サイズとなる

問 47．写真処理で正しいのはどれか．

Ｄ．アノードはアース電位（０ボルト）である
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．電顕用フィルムの標準現像時間は１分である

問 39．透過電子顕微鏡で正しいのはどれか．

Ｂ．停止液には 1.5％酢酸水溶液を使用する

Ａ．電子回折パターンは対物レンズの後焦点面に形成される

Ｃ．定着時間は長いほどよい

Ｂ．制限視野絞りは試料面に挿入する

Ｄ．水洗は流水中で行う
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．イメージワブラーはビームの軸合わせに利用する

問 48．デジタル画像で正しいのはどれか．

Ｄ．試料の位置や傾斜を調整する機構をゴニオメータと呼ぶ
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．デジタル信号量の最小単位をビットという

問 40．支持膜の特性で正しいのはどれか．

Ｂ．１インチの長さに含まれる画素数の単位を dpi という

Ａ．カーボン支持膜は導電性がある

Ｃ．８ビットの画像は最大 16 階調のグレーレベルを表現できる

Ｂ．プラズマ重合支持膜は導電性がある

Ｄ．ダイナミックレンジは写真フィルムよりも狭い
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．プラスチック支持膜に比べカーボン支持膜の方が電子線に対して弱い
Ｄ．プラズマ重合支持膜はカーボン支持膜と同じくらい電子線に対して強問 49．元素分析の方法で正しいのはどれか．

いＡ．多元素同時マッピングを行うため WDS を使用した
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．絶縁物の分析を行うためにカーボンを蒸着した

問 41．蒸着法で正しいのはどれか．

Ｃ．WDS では試料表面はできるだけ平坦であることが望ましい

Ａ．蒸着装置の排気系はターボ分子ポンプと油拡散ポンプの組合せになっ

Ｄ．EDS は WDS に比べプローブ電流を多くする
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤている
Ｂ．レプリカ膜の作製には試料を回転させながらカーボン蒸着をする

問 50．共焦点レーザー顕微鏡で正しいのはどれか．

Ｃ．シャドウイング法は金属を試料の真上からコーティングする方法であＡ．焦点の合った面以外からの光をピンホールで排除する

る

Ｂ．通常の光学顕微鏡より高さ方向の分解能は低い

Ｄ．電子線加熱法は高解像度のシャドウイング法に用いられる

Ｃ．通常の光学顕微鏡より焦点深度が深い

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．蛍光標識した試料の観察に用いられる

問 42．真空ポンプや真空計で正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．油拡散ポンプはターボ分子ポンプの補助ポンプとして使われている
Ｂ．ダイヤフラムポンプはターボ分子ポンプの補助ポンプとして使われている
Ｃ．スパッタイオンポンプでは不活性ガスも排気できる（ 3 ）2014 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅰ（生物）12 題の問題のうち，問１～問６は全問解答し，問７～問 12 はその中から 4 問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

問 4． 次の文章は包埋後染色法を使用した免疫電顕法について記述したも【必須問題】のである．（問 1． 写真はある細胞小器官を撮影した走査電顕像である．
（）にあ）にあてはまる語句を語群から選び，記号で答えなさい．（10 点）てはまる最も適切な語句を語群から選び，記号で答えなさい．
（10点）

（

１

）は，リボソームが付着していない（

な袋状の（

３

は構造的および機能的な（
た（

３

４

）は全体として湾曲しており，その凸面は，（その凹面は，（
１

７

１））が存在する．すなわち，積み重なっられてきた内容物を受け取る側であり，（（

２ ）で囲まれた扁平）がいくつか積み重なった構造体である．（

６）が形成される側であり，（）では，タンパク質の（

９

）や（

５

）から送

）と呼ばれる．一方，

10８）と呼ばれる．

）が行われる．

【語群】
Ａ．粗面小胞体
Ｄ．極性

Ｂ．滑面小胞体

Ｅ．ゴルジ層板

Ｇ．トランス側Ｋ．シス側Ｈ．分泌顆粒Ｌ．薬物の解毒

Ｎ．ゴルジ装置

Ｐ．合成

ラットの膵臓をグルタルアルデヒドと四酸化オスミウムで二重固定後，Ｃ．二重膜

エポキシ樹脂に包埋した．0.5 M トリス―塩酸緩衝液（pH 9.0）中で１時

Ｆ．修飾

間加熱処理した切片（写真Ｂ）と，未処理の切片（写真Ａ）を使用して，Ｊ．単位膜

a-アミラーゼの免疫組織化学反応を行った．その後，酢酸ウラニルとクエ

Ｍ．選別

ン酸鉛で電子染色をして電顕観察をした．二次抗体として（

Ｑ．ミトコンドリア

問 2． 次の対象をグルタルアルデヒド―四酸化オスミウム二重固定し，透抗体が使用されていると思われ，陽性反応は（
加熱処理をすることによって（電子密度が低下している．したがって加熱処理によって抗原が賦活化された原因の一つは（（

3．動物培養細胞【語群】

4．中枢神経Ａ．フェリチン5．肺胞壁

Ｄ．分泌顆粒問 3． 次の文章は包埋剤について記したものである．（）にあてはエポキシ系樹脂にはエポン 812 系樹脂，（

１）系樹脂，（樹脂などがある．エポン 812 系樹脂は硬さの調節に用いる（）および加速剤である（５２３）で構成されており，（の 処 方 で 調 製 さ れ る こ と が 多 い． ア ク リ ル 系 樹 脂 に は（
（

４

７

）

）と
６

）

４

５

Ｈ．DNA

Ｎ．オスミウム

Ｌ．鉄）のＣ．金コロイド

Ｆ．リボソーム

Ｊ．リン脂質Ｍ．カルシウム

Ｐ．マグネシウム

Ｓ．水酸化ナトリウム問 5． 次の文章中の（３）が使用されることがある．

Ｂ．ペルオキシダーゼ
Ｅ．ミトコンドリア

Ｇ．ゴルジ装置

Ｒ．酢酸）の膜や矢印に示す（）が除去されたためであると思われる．また）を除去する目的のため（

Ｋ．グリコーゲン

まる最も適切な語句を答えなさい．（10 点）

４）標識

えなさい．（10 点）
2．骨格筋細線維の暗帯・明帯（

１）に認められる．

過電子顕微鏡で観察したい．前固定時に推奨される事項を簡潔に答
1．微小管

２

２

Ｑ．塩酸
Ｔ．過ヨウ素酸ナトリウム）にあてはまる最も適切な語句を語群から選び，記号で答えなさい．（10 点））や凍結固定は，組織や細胞内の水を凝固させることによる（

８ ）がよく用いられており，これらの樹脂は熱重合させることもで１）であきるが，低温下において紫外線重合させることもできる．ただし，固定る．水を冷却していくと，まず小さな氷晶が形成された後，氷晶は成長しに（続ける．これを（９）を用いると紫外線重合を妨げるので使用出来ない．また，これらの樹脂は酸素によっても重合が阻害されるので，脱水にはなるべく（10）を使用しない方がよい．

止まる．この（細胞では約（

（ 4 ）

５

２

３

）と呼ぶ．（３）に到達すると氷晶の成長は）の温度は，純水では約（４ ），含水量 80％の）である．結晶速度が遅いと，氷晶は凍結が完了する

まで成長を続けることとなる．（

３）に到達するまでの結晶速度が十【選択問題】

分に速ければ結晶は成長せず，電顕下では構造の認められない微結晶の状態となる．この状態を（６）と呼び，組織・細胞の微細形態保持のために欠かせない凍結状態である．蒸留水で（は 105 K/sec［0 K =（織・細胞の（８７

６ある．使用した顕微鏡を語群から選び，記号で答え，それぞれの原）］以上の凍結速度が必要であるが，通常の組理と特徴を記入しなさい．（10 点））は 70 ～ 80％であり，塩類などさまざまな溶質を含んでいるので，104 K/sec 以上の凍結速度があれば（６（）が起こりにくく，

８

問 7． 写真は，ウサギ骨格筋の筋線維を四種類の顕微鏡で撮影したもので）を得るために）が低く，溶質濃度が高い場合には，（２）が得られる．

良好な凍結状態を得やすい．一度非晶質状態が得られた試料でも，その後の保存や処理過程で温度の（で，（３）により水の（ 10９）が起こるの）以下の温度を保つよう試料の取り扱いに注意を要する．

【語群】
Ａ．-50°C

Ｂ．-80°C

Ｄ．-273°C

Ｅ．再結晶化

Ｇ．ガラス状氷
Ｋ．上昇

Ｃ．-143°C
Ｆ．物理的固定

Ｈ．氷晶形成

Ｌ．下降

Ｊ．含水量

Ｍ．再結晶化点

Ｎ．ダイヤモンド状氷

Ｐ．融解

Ｑ．凝固点

問 6． 写真は，細胞骨格観察法を用いてプラスチックシャーレに単層培養したグリア細胞を臨界点乾燥法で処理して走査電子顕微鏡で観察したものである．分裂中の細胞には，左右に移動した染色体と細胞の形態を維持する中間径フィラメントなどが観察される．この試料作
製手順を記しなさい．（10 点）【語群】
Ａ．微分干渉顕微鏡
Ｄ．ラマン顕微鏡

Ｂ．透過電子顕微鏡
Ｅ．走査電子顕微鏡

問 8． 写真はラットの硬組織の細胞の（像である．動物は灌流固定し（（３４Ｆ．原子間力顕微鏡
１２）染色法を用いた免疫電顕）で脱灰し，10 mm の厚さの）切片を作製した．これに細胞表面抗原に対する一次抗体を反応させ，さらに（（Ｃ．共焦点レーザー顕微鏡

４）で標識した二次抗体を反応させた．

）は図中に矢じりで示してある．免疫反応後，四酸化オス

ミウム後固定，脱水し，エポキシ系樹脂に包埋したものを使用した．
超薄切片を作製しウラン・鉛の二重染色をして観察した．次の設問に答えなさい．（10 点）

１）文章中（１）～（４）に最適な語を語群より選び，記号で解答欄に記入しなさい．
【語群】
Ａ．FITC

Ｂ．塩酸

Ｃ．ギ酸

Ｄ．EDTA Ｅ．パラフィン

Ｆ．凍結

Ｇ．HRP

Ｊ．コロイド金Ｈ．フェリチンＫ．凍結超薄切片

Ｌ．包埋前

Ｍ．包埋後

２）（ア）で示している最適な語を次のＡ～Ｃより選び，記号を解答欄に記入しなさい．

（ 5 ）ａ．微小管ｂ．アクチンフィラメント

ｃ．中間径フィラメント

説明しなさい．

３）（イ），（ウ）はそれぞれ細胞間結合装置を示している．最適な名称を問 12．写真は急速凍結法（浸漬法）
・凍結置換固定法で固定し，エポキシ樹
脂包埋した結核菌の超薄切像である．次の設問に答えなさい．
（10点）

解答欄に記入しなさい．
４）＊はアポトーシスによって取り込まれた細胞断片を示す．アポトーシ
スの特徴を解答欄に記入しなさい．
問 9． 写真はある植物組織の透過電顕像である．次の設問に答えなさい．
スケールバーは 10 mm（左図），1 mm（右図）を示している．（10 点）

１）急速凍結法（浸漬法）で使用する冷媒の名称を記載し，冷媒として選んだ理由を述べなさい．
２）結核菌は原核生物に属する細菌の一種である．原核生物と真核生物の１）左図のＡで示した構造とＢで示した細胞内小器官の名称と機能を記し
なさい．
２）右図のＣで示した細胞内小器官と矢印で示した構造の名称と機能を記
しなさい．
３）デンプン粒を多く含んだ組織の超薄切片を作製する上で，特に難しい点を記しなさい．
問 10．写真はある植物組織の横断面の透過電顕像である．次の設問に答えなさい．スケールバーは 50 mm を示している．（10 点）

１）グリッドは通常 150 ～ 400 メッシュを用いるが，ここで用いたグリッ
ドは何メッシュか．また解答を導いた計算式を示しなさい．
２）このグリッドの特徴を述べなさい．
３）単孔グリッドやスリットグリッドはどのような時に用いるか述べなさ
い．
４）グリッドに乾式でプラスチック支持膜を張るときの手順で，膜厚の決定にかかわることを二つ，また膜厚の均一化にかかわることを一つ，それぞれ挙げなさい．
５）この組織の形態学的な特徴を二つ挙げなさい．
問 11．ネガティブ染色法は，ウイルスや鞭毛，単離したタンパク質分子など微細な外観を観察するときに用いる．次の設問に答えなさい．
（10 点）
１）染色剤を二つ挙げなさい．
２）実際の手順を記しなさい．
３）像は陰影像として観察されるが，何故，陰影像として観察されるのか（ 6 ）細胞の共通点と相違点を三つずつ箇条書きで述べなさい．

2014 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅱ（鏡体・共通技術）
13 題の問題のうち，問１～問７は全問解答し，問８～問 13 はその中から３問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

【必須問題】

Ｇ．立体的

Ｈ．平面的

Ｋ．真空蒸着問 1． 下記の語群から電子の波動性に関連した語句を二つ選び解答欄に記号を記しなさい．また，それらについて簡単に説明しなさい．
（10 点）【語群】

Ｌ．グリセリン

Ｎ．斜め上

Ｐ．真上

Ｒ．90 度前後
Ｗ．雲母板

Ａ．反射

Ｂ．非弾性散乱Ｄ．回折収差

Ｇ．二次電子放出

Ｆ．干渉

Ｈ．弾性散乱問 2． 次の文章中の（Ｍ．エタノール

Ｑ．４度前後

Ｓ．レプリカ膜

Ｔ．蒸着膜

Ｘ．金属板

問 4． 走査電顕像に及ぼす加速電圧効果の特徴について以下の設問に答え

Ｃ．球面収差Ｅ．後方散乱Ｊ．乾燥なさい．（10 点）

Ｊ．電磁偏向１）写真【Ａ】と【Ｂ】ではどちらが高加速電圧で撮影した写真か．理由）にあてはまる最も適切な語句を語群から選とともに答えなさい．

び，記号で答えなさい．（10 点）１）レンズの周辺部を通る電子線がレンズの軸近くを通る電子線より
も（

１

（

）収差の影響は小さな（２）曲げられるために生じる収差を（３

２）収差と呼ぶ．

）を使うことで低減出来る．

２）レンズの磁界や電界が軸対称でない時に生じる収差を（
という．（

４

の穴の縁の（
では（

５

６

４

）収差

）収差の影響は，低倍率ではカーボングリッドなど）の間隔が周辺全体で一様になるように，高倍率）薄膜の像に方向性がなくなるように補正装置を使って補正することで低減出来る．
３）（

７）収差は，電子の波長によって焦点位置が異なることによる収差で，レンズ励磁電流の変動や電子の初速度の広がり，試料中での電子の（８）などによって影響が生じる．

４）光 軸 か ら の 距 離 に よ っ て 倍 率 が 変 わ る 事 に よ っ て 生 じ る 収 差 を（

９）収差という．（

９）収差は糸巻き型やたる型に像が歪む問題を生じ，中間レンズや投影レンズを（ 10２）以下の文章は低加速電圧と高加速電圧で撮影した像の特徴について記している．（）倍率で用いる場合）にあてはまる適切な語句を語群から選び記号で答えなさい．

に顕著になる．

低加速電圧では（【語群】

１）が大きく，画像もソフトであるが，分解能

Ａ．球面

Ｂ．歪像

Ｃ．わん曲

は（

２

）なる．これに対して高加速電圧では分解能は（

Ｄ．非点

Ｅ．コマ

Ｆ．色

が，（

１

）が小さくなり，エッジ効果による（

Ｇ．結晶質

Ｈ．多結晶

Ｋ．回折斑点Ｎ．非弾性散乱Ｒ．絞り

問 3． 次の文章中の（Ｗ．低い）にあてはまる最も適切な語句を語群から選び，記号で答えなさい．（10 点）ウイルスや生体高分子はコントラストが低いため，そのまま観察することは困難である．（

１

により，試料に（）なコントラストをつけ，電顕観察を可能にす

３）は，重金属を（２る方法である．タンパク質を観察する際には，（
６

４）による分子形態
５）を）により雲母板の新しい劈開面に噴射する．その後直ちに真空装置に入れて，高真空状態にして乾燥させる．
（

７ ）を作製するために，白金線をタングステン線に巻き付けて角度を（８）にして蒸着し，さらに（９）などによって像質が悪くなることがあり，試料損傷もＡ．増加

Ｂ．二次電子放出率

Ｄ．高く

Ｅ．エスケープ長

Ｇ．減少

Ｈ．原子番号効果

問 5．（）の角度で（10 ）を施す．装置から取り出した雲母板を蒸留水に沈めてはがれてくる（７））にあてはまる最も適切な語句を語群から選び，記号で答

走査電顕観察では（は（２３Ｃ．イオンビームスパッタ法
Ｆ．スプレー法５

４）），鏡体組み立て時に使用した

有機溶剤，試料に存在する有機物である．試料汚染を防止するには，
（

４

）の油は（

使用，（
10

８

６

）に交換し，O リングの（

）は（
９

７

）

），また

）などには素手で触れないようにするなど，常に鏡体内を清潔に【語群】
Ａ．グリース（ 7 ）５）の使用，試料の冷却，観察前に試料の（することが必要である．
Ｅ．蒸着法）ガスである．その主な発生原は，（の油，O リングに付着している（（

Ｂ．カーボン蒸着）の経過とともに，炭化物が試料表面に付），試料，観察条件等に依存する．汚染の原因は鏡体内の残留ガスで，大部分は（をグリッドですくい取り，乾燥後に観察する．

Ｄ．シャドウイング法

１

着し，試料観察の妨げとなる．これを試料汚染という．試料汚染の程度

【語群】
Ａ．導電性

Ｃ．低く
Ｆ．異常コントラスト

えなさい．（10 点））から蒸着することの変形をなるべく少なくするために精製タンパク質溶液に（加え，窒素ガスを用いた（

）なる

【語群】

Ｑ．小さく

Ｔ．高い

５

３

）や，チャージ

生じやすい．

Ｍ．弾性散乱

Ｐ．大きく

Ｓ．倍率

アップの（

Ｊ．非晶質

Ｌ．フレネル縞

４Ｂ．試料台

Ｃ．試料汚染Ｄ．フィルム
Ｇ．真空度

Ｅ．塩化水素Ｈ．窒素

問 11．文章中の（Ｆ．真空ポンプ

Ｊ．炭化水素系）にあてはまる最も適切な語句を語群から選び，記号で答えなさい．（10 点）

Ｋ．酸素

Ｌ．電子線照射時間

Ｎ．多量

Ｐ．加熱乾燥

Ｑ．有機溶剤

Ｍ．汚染防止装置（

Ｒ．少量

Ｓ．長い時間Ｔ．定期的の走査と同期して X-Y

走査電子顕微鏡は，電子銃から放出された電子をコンデンサレンズと１ ）で細く絞り，（２ ）の磁界変化により，表示ディスプレイ

二次元走査をしながら拡大像を得る．真空中でＷ．繊維

電子線を物体（試料）表面に照射すると，電子と試料の相互作用により

問 6． ターボ分子ポンプの到達圧力，動作原理，使用上の注意点を答えな（

さい．（10 点）

３），（），特性 X 線，陰極光などが生じることが知られてい４

る．走査電顕観察において，特に高い分解能の像を得る場合は（

問 7． 走査プローブ顕微鏡に関する以下の設問に答えなさい．（10 点）が，原子番号に依存した像を得る場合は（１）基本原理について簡潔に説明しなさい．

４

試料の種類や観察目的に合わせて加速電圧，（２）走査プローブ顕微鏡のうち生体試料観察に最も利用されるのは原子間力顕微鏡である．その理由を２つ述べなさい．

（

７

の（
（

３

）

）が用いられている．
５

），（

６

），

），コンデンサレンズ電流，絞りの孔径などを設定する．また，像
８

）や（

９

）は随時，像が見やすいように調整する．最後に10 ），焦点合わせを行い，再度（

８

），（

９

）を調整して画像を取得する．

【選択問題】【語群】
Ａ．反射電子

Ｂ．非点補正Ｃ．電子問 8． 電子回折の実験に関する以下の設問に答えなさい．（10 点）

Ｄ．チャージアップ

１）未知試料の電子回折パターンを観察したところ，細かい点がリング状

Ｇ．対物レンズ

Ｈ．試料傾斜角度に観察された．試料は単結晶，多結晶，非晶質の何れと考えられるか．

Ｋ．走査コイル

Ｌ．作動距離２）１）で観察した試料に対して，ある絞りを入れた所，細かいリング状の点から規則正しい斑点に変化した．挿入した絞りの名称を答えなさい．

Ｎ．焦点深度かった．以下の設問に答えなさい．（10 点）１）絞りを利用し像のコントラストを向上させるには，どの絞りを使用すの（１）が悪いため（の（４） に グ リ ッ ド を 並 べ， 真 空 度（（

）V，電流（６７

２）をする必要がある．方法は（する．

３）絞りを用いずに試料の輪郭や孔の部分のコントラストを向上させるに

【語群】
Ｂ．粘着性

４）３）で得られるコントラストを何と呼ぶか．

Ｄ．撥水性

Ｅ．真空蒸着装置

５）回折図形を観察したところ，幾つかの斑点が得られた．その回折斑点

Ｇ．陽極

Ｍ．50

Ｎ．500 Ｐ．5000

Ｑ．数十

Ｒ．数百

Ｔ．エッチング

えなさい．（10 点）

Ｗ．親水化処理セラミックス，ポリマーなどの導電性がない不導体材料と，金属，カーボンなど導電材料とが混在する（

１）を SEM 観察すると，（が試料内に蓄積し観察像に影響を生じる．この現象を（観察像にコントラストの異常や歪み，その他の（を防ぐ方法として，（
（

５

に，（

５

３

）といい，

下の設問に答えなさい．（10 点）
１）このネガ全体を引き伸ばすためには少なくとも何 mm の焦点距離の）を生じる．これ

引き伸ばしレンズが必要か．

３

ところ 1 mm であった．写しこまれている画像の倍率は何倍か．

）を防止すると同時
７），二次電子の３）この画像を３倍に引き伸ばしたときに写真に入れる 1 mm のスケール

放出を試料のごく表面だけに限定するなどの像質向上にも効果がある．使ある．方法には（

９

）法，（

10

８ ），白金，カーボンなどが）法，電子ビーム蒸着法，イオンビームスパッタ法がある．
【語群】
Ａ．導電材料

Ｂ．金属コーティング

Ｄ．複合材料Ｅ．電荷
Ｈ．反射電子Ｋ．蒸着法

Ｌ．抵抗加熱蒸着

Ｎ．白金パラジウム
Ｒ．鉄

Ｓ．銅

Ｃ．帯電（チャージアップ）

Ｆ．二次電子

Ｇ．像障害

Ｊ．損傷の軽減
Ｍ．イオンビーム

Ｐ．イオンスパッタ

Ｙ．撥水化処理

２）ネガに写しこまれている直径 20 nm の金コロイドの直径を測定した）の発生効率増大と電子線による試料（

用される材料には金，金パラジウム，（

Ｘ．粘着処理問 13．透過電顕像を撮影した画像サイズ 12 cm × 9 cm のネガについて以））法がある．

）膜は，試料に導電性を付与して（

６

４

２

）秒グロー放電

Ｆ．イオンスパッタ装置

Ｋ．1 ～ 10 Ｌ．5
Ｓ．蒸着

８）され，（ 10 ）になる．

Ｊ．0.1 ～ 1

された．この像を何と呼ぶか．
）にあてはまる最も適切な語句を語群から選び，記号で答

）

Ｃ．親水性

のひとつを対物絞りで選択し結像したところ，明るく光る領域が確認
問 10．
（

９

３

） パ ス カ ル， 電 圧）は消失するので使用する直前にグリッドを処理

Ａ．接着性

Ｈ．陰極

５

）mA 程度の条件で，（を行う．この処理でグリッド表面は（２）１）で得られるコントラストを何と呼ぶか．
は，何を変化させればよいか．

Ｑ．倍率）にあてはまる最も適切な語句を語群から選市販のグリッドは改めて洗浄する必要はないが，そのままでは切片と１時間程度で（ 10

ればよいか．

Ｊ．電界放出型電子銃
Ｍ．二次電子び，記号で答えなさい．（10 点）

実効カメラ長を 2.0 m，加速電圧を 100 kV（波長 0.0037 nm）とした時，この回折斑点に対応する面間距離は何 nm か．

Ｆ．収差

Ｐ．コントラスト問 12．次の文章中の（３）２）で得られた斑点の一つの透過波からの距離は 37 mm であった．

問 9． 透過電子顕微鏡で薄い試料を観察したところ，コントラストが低

Ｅ．明るさ

Ｑ．ネガティブ染色

Ｔ．蓄積

（ 8 ）

は何 cm になるか．