2011 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡二級技士技術認定試験問題
問１．直径のサイズで正しいのはどれか．

Ｂ．固定液の浸透圧の調整に役立つ

Ａ．中間径線維―約 15 nmＣ．固定液の pH を一定に保つ

Ｂ．リボソーム―

約 20 nmＤ．タンパク質に対する固定効果をもつ

Ｃ．微小管

―

約 25 nm

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．核膜孔

―

約 30 nm

問 10．８％パラホルムアルデヒド水溶液 100 ml を作製する手順で正しい

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤのはどれか．

問２．生体膜構造をもたないのはどれか．

Ａ．フラスコに 8 g のパラホルムアルデヒドを入れる

Ａ．中心体

Ｂ．60 ～ 70°C に加温しながら撹拌する

Ｂ．ライソソーム

Ｃ．室温に戻してから，蒸留水を加えて全量を 100 ml にする

Ｃ．ゴルジ装置

Ｄ．1 N NaOH 水溶液を数滴加えて溶解する

Ｄ．リボソーム

Ｅ．蒸留水を約 90 ml 入れる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問３．細胞小器官で正しいのはどれか．
Ａ．ミトコンドリアは固有の DNA をもち自己増殖ができる

1．ＡＢＣＤＥ

2．ＡＣＤＢＥ

3．ＡＤＢＥＣ

4．ＡＥＤＣＢ

5．ＡＥＢＤＣ6．ＡＣＢＤＥ問 11．酸素で重合が阻害される樹脂はどれか．

Ｂ．酵母では液胞がライソソームの働きを示す

Ａ．Lowicryl K4M

Ｃ．自由リボソームは細胞質にのみ存在する

Ｂ．Araldite

Ｄ．ゴルジ装置のシス側で分泌顆粒が形成される

Ｃ．Epon 812

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．LR White
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問４．細胞分裂で正しいのはどれか．
Ａ．有糸分裂と無糸分裂がある

問 12．包埋後染色法で免疫染色性がよい樹脂はどれか．

Ｂ．細胞質分裂と核分裂は同時に起こる

Ａ．Epon 812

Ｃ．核膜は分散する

Ｂ．LR White

Ｄ．染色体の移動には中間径線維が関与している

Ｃ．Styrene 樹脂

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．Lowicryl K4M
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問５．透過電顕写真では細胞膜が三層構造として観察され，外側から順に
外葉，中間葉および内葉と呼ぶ．正しいのはどれか．

問 13．試料処理で誤っているのはどれか．

Ａ．細胞膜はタンパク質二重層である

1．低濃度エタノール脱水は低温で行う

Ｂ．細胞膜は脂質三重層である

2．アクリル系樹脂の脱水にはアセトンを避ける

Ｃ．中間葉は他に比べて電子密度が低い

3．アセトンはエタノールよりも吸湿しやすい

Ｄ．外葉は脂質の親水性末端である

4．アセトン脱水後は，置換剤を使用せずにエポキシ樹脂に包埋できる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

5．エタノール脱水中に最も抽出されやすいのはタンパク質である

問６．グルタルアルデヒドで正しいのはどれか．

問 14．置換剤はどれか．

Ａ．１％水溶液の浸透圧は約 300 mOsm である

Ａ．エタノール

Ｂ．紫外線吸収スペクトルで 280 nm のピークをもつ

Ｂ．酸化プロピレン

Ｃ．組織浸透速度がアルデヒド系固定剤で最も速い

Ｃ．DMP-30

Ｄ．アルデヒド基を二つもつ

Ｄ．n-ブチルグリシジルエーテル（QY-1）

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問７．四酸化オスミウムで正しいのはどれか．

問 15．厚さ 70 nm のエポキシ樹脂切片の干渉色はどれか．

Ａ．不飽和脂肪酸をよく固定する

1．紫色

Ｂ．揮発性がある

2．金色

Ｃ．常温で黒色の針状結晶である

3．銀色

Ｄ．分子量は約 100 である

4．青色

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

5．緑色

問８．タンパク質をよく固定するのはどれか．

問 16．超薄切片が連続してリボン状に切れない原因はどれか．

Ａ．四酸化オスミウム

Ａ．薄切にガラスナイフを使用した

Ｂ．グルタルアルデヒド

Ｂ．樹脂の重合が不完全である

Ｃ．過マンガン酸カリウム

Ｃ．試料の上下端がナイフエッジに対して平行でない

Ｄ．ホルムアルデヒド

Ｄ．試料を水溶性樹脂に包埋した

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ問９．緩衝液の役割として正しいのはどれか．

問 17．薄切時にブロック試料面に水滴がつく原因はどれか．

Ａ．固定剤を活性化する

Ａ．樹脂が疎水性である（ 1 ）Ｂ．ボートの液面が刃先より高い

Ａ．四酸化オスミウムは酵素を失活させる

Ｃ．ナイフの逃げ角が小さすぎる

Ｂ．酵素細胞化学の固定にはパラホルムアルデヒド単独がよい

Ｄ．切削速度がはやい

Ｃ．ホスファターゼ酵素検出にはリン酸緩衝液を使用する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．ジアミノベンチジン（DAB）重合物は四酸化オスミウムと反応する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 18．超薄切片作製で誤っているのはどれか．
1．60 ～ 80 nm の厚さの切片を扱うことが多い

問 27．物質を同定する方法で正しいのはどれか．

2．空気流が大きく影響する

Ａ．タンパク質3．輻射熱は影響を及ぼさない

Ｂ．核酸

―

―

抗体を使用した免疫電顕法

核酸プローブを使用した in situ hybridization 法

4．ダイヤモンドナイフのクリーニングには 10％ NaOH を使用するのがよい

Ｃ．糖類

―

プロテイン A を使用したオートラジオグラフィー法

5．ダイヤモンドナイフの親水化処理はイオンスパッタ装置を使用する

Ｄ．脂質

―

四酸化オスミウムを使用したフリーズレプリカ法

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 19．グリッドと試料支持膜または切片との接着性を高めるために有効な処理はどれか．

問 28．包埋前染色法の手順で正しいのはどれか．

Ａ．グリッドにカーボン蒸着する

Ａ．４％パラホルムアルデヒド液で固定

Ｂ．グロー放電によりグリッドの表面を処理する

Ｂ．超薄切片作製

Ｃ．グリッドを温める

Ｃ．エポキシ樹脂包埋

Ｄ．ネオプレンゴムのトルエン溶液をグリッドに滴下する

Ｄ．免疫反応1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｅ．電顕観察問 20．電子染色効果をもつのはどれか．

1．ＡＢＣＤＥ

2．ＡＣＢＤＥ

3．ＡＣＢＥＤ

Ａ．酢酸ウラニル

4．ＡＤＢＥＣ

5．ＡＤＣＢＥ

6．ＡＥＣＢＤ

Ｂ．四酸化オスミウム

問 29．ペルオキシダーゼ標識抗体法を使用した免疫電顕法で正しいのは

Ｃ．タンニン酸

どれか．

Ｄ．炭酸鉛

Ａ．オスミウムブラックを観察している

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．内因性ペルオキシダーゼ活性は検出できない

問 21．酢酸ウラニルで正しいのはどれか．

Ｃ．アルブミンでブロッキングを行うと，抗体の非特異的反応が抑えられる

Ａ．二酸化炭素が混じると沈殿を生じる

Ｄ．多重染色を行うことができる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．リン酸緩衝液に溶解して使用する
Ｃ．アルコールに溶ける

問 30．免疫電顕法でよく使用されるコロイド金粒子の径はどれか．

Ｄ．核質をよく染める

1．0.1 ～ 1 nm

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

2．1 ～ 50 nm

問 22．トルイジンブルー染色で試料の中心部分が周辺より薄く染色され3．50 ～ 100 nm

た．正しいのはどれか．

4．100 ～ 200 nm

Ａ．周辺部分は固定が良好である

5．200 ～ 500 nm

Ｂ．グルタルアルデヒドが変性している

問 31．急速凍結法で正しいのはどれか．

Ｃ．エポキシ樹脂の重合が不十分である

Ａ．氷晶は凍結速度が速いと大きくなる

Ｄ．四酸化オスミウムの浸透が不十分である

Ｂ．冷媒は沸点と融点の差が大きいものがよい

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 23．準超薄切片の作製の手順で正しいのはどれか．

Ｃ．浸漬法の場合，気化した冷媒の気体は試料の冷却を妨げる
Ｄ．金属圧着法の場合は金属の表面積を増加させるために表面は凹凸にす

Ａ．片刃のカミソリで試料ブロックをトリミングするる

Ｂ．ガラスナイフで荒削りした後，新しいナイフで厚さ 0.5 ～ 1.0 μm の切片を作製する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 32．氷包埋法で正しいのはどれか．

Ｃ．ウルトラミクロトームに装着し，面合わせをする

Ａ．生体高分子を溶液中の分子形態を保ったまま観察できる

Ｄ．0.5 ～ 1％トルイジンブルー染色液を切片上に滴下し，加温染色する

Ｂ．グリッドに滴下した試料溶液を直ちに浸漬凍結し厚みのある氷を作製

Ｅ．切片をスライドガラスの水滴上に移し，ホットプレート上で乾燥させる

する

1．ＡＢＣＤＥ

2．ＡＣＢＤＥ

3．ＡＣＢＥＤ

Ｃ．液体エタンは試料溶液の浸漬凍結には適さない

4．ＡＤＢＥＣ

5．ＡＥＢＤＣ

6．ＡＥＣＢＤ

Ｄ．最少電子線照射による観察を行うことが重要である
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 24．超薄切片のコントラストを高める対策で正しいのはどれか．
Ａ．弱い電子線をしばらく照射する

問 33．オートラジオグラフィーで正しいのはどれか．

Ｂ．加速電圧を下げる

Ａ．分解能は乳剤の種類と切片の厚さに依存する

Ｃ．試料に薄くカーボンを蒸着する

Ｂ．β 線は高エネルギーである

Ｄ．対物絞りの孔径を小さくする

Ｃ．ラジオアイソトープの半減期は放射能活性が半分になる期間である

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．主な放射性核種の一つに 35Sr がある

問 25．２万倍で撮影したネガを 1.4 倍に引き伸ばした．このプリントに

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1 μm のスケールバーを入れるには，長さを何 mm にすればよいか．数値

問 34．走査電顕試料を金属コーティングする目的で正しいのはどれか．

を解答欄に記せ．

Ａ．試料表面に導電性を与える

問 26．細胞化学法で正しいのはどれか．

Ｂ．二次電子の発生量を増す（ 2 ）1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．試料の組成の違いを際立たせる
Ｄ．試料の内部構造を観察する

問 43．グリッドで正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．スリットメッシュは連続切片の観察に適さない

問 35．走査電子顕微鏡で高分解能を得るための操作はどれか．

Ｂ．種類にはハンドルグリッド，ダブルグリッド，単孔メッシュがある

Ａ．照射電流を多くする

Ｃ．材質には銅，ニッケル，カーボン，ナイロンがある

Ｂ．対物可動絞りの孔径を小さくする

Ｄ．メッシュの網目の大きさは 1 mm 長に含まれる孔の数で表す

Ｃ．コーティング金属を薄くする

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．試料を対物レンズに近づける

問 44．生物切片の透過電顕観察中での電子線損傷を少なくする方法はど

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

れか．

問 36．正しいのはどれか．

Ａ．加速電圧を高くする

Ａ．磁界と平行に進む電子の軌道は変わらない

Ｂ．照射電流密度を大きくする

Ｂ．電界と同じ向きに進む電子は加速される

Ｃ．試料を冷却する

Ｃ．回折収差は電子の波動性に起因する

Ｄ．照射時間を短くする
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．円形孔のフラウンホーファー回折像の主極大部をクロスオーバーと呼ぶ

問 45．デジタル画像で正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．1 GByte（GB）は 103 KByte（KB）である

問 37．透過電顕像の収差で正しいのはどれか．

Ｂ．256 階調の表記には 8 bit が必要である

Ａ．試料が厚いと色収差により像のボケが大きくなる

Ｃ．dpi は１インチあたりのドット数を表す

Ｂ．試料が厚いと球面収差により像のボケが大きくなる

Ｄ．同じ画素数の白黒画像もカラー画像も情報量は同じである
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．観察倍率が低いと歪像収差により像のボケが大きくなる
Ｄ．加速電圧が低いと回折収差により像のボケが大きくなる

問 46．フィルムの現像処理で正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．現像液は一定の温度を保たねばならない

問 38．透過電顕像で非点収差が発生するのはどれか．

Ｂ．現像液は酸性である

Ａ．対物絞りが帯電した

Ｃ．定着時間は長いほどよい

Ｂ．ウェーネルト電極が帯電した

Ｄ．乾燥は 60°C 以下で行う
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．試料が帯電した
Ｄ．主蛍光スクリーンが帯電した

問 47．走査電子顕微鏡で作動距離を短くしたときの効果で正しいのはど

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

れか．

問 39．正しいのはどれか．

Ａ．分解能が高くなる

Ａ．ショットキータイプ電界放出型電子銃のエミッタ材料は LaB6 である

Ｂ．電子線の開き角が小さくなる

Ｂ．超高真空環境下でなければ熱電子放出型電子銃の安定動作は得られな

Ｃ．焦点深度が浅くなるいＤ．焦点距離が長くなる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．ウェーネルトバイアス電圧を大きくする（深くする）とビームが暗くなる

問 48．走査電子顕微鏡の加速電圧設定で正しいのはどれか．

Ｄ．コールドタイプ電界放出型電子銃ではトンネル効果で電子が放出される

Ａ．スポットサイズを小さくするために高加速電圧にした
Ｂ．試料損傷を低下させるために高加速電圧にした

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 40．透過電顕像のコントラストで正しいのはどれか．

Ｃ．二次電子放出効率を向上させるために高加速電圧にした
Ｄ．チャージアップ現象を低下させるために低加速電圧にした
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．同じ材質の試料では厚さの差による散乱コントラストは生じない
Ｂ．対物絞りを小さくすると散乱コントラストが高まる

問 49．元素分析の方法で正しいのはどれか．

Ｃ．位相コントラストは焦点はずれ量に依存する

Ａ．凹凸のある試料を WDS で分析した

Ｄ．電子染色は位相コントラストを高める

Ｂ．多元素同時マッピングを行うため EDS を使用した

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．絶縁物の分析を行う場合は金を蒸着する
Ｄ．WDS は EDS に比べプローブ電流を多くする

問 41．走査電顕像のコントラストで正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．試料の突起部分は平坦な部分よりもコントラストが高くなる
Ｂ．チャージアップはコントラストに影響しない

問 50．走査プローブ顕微鏡で正しいのはどれか．

Ｃ．試料を傾斜させるとコントラストが高くなる

Ａ．走査トンネル顕微鏡は水中の試料を観察できない

Ｄ．作動距離を短くするとコントラストが低くなる

Ｂ．原子間力顕微鏡は水中の試料を観察できる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 42．試料コーティング法で正しいのはどれか．

Ｃ．コンタクトモードは試料へのダメージが最も小さい
Ｄ．共振モードは力の変化を振幅の変位量として測定する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．イオンスパッタ法は陰極側に試料を置く
Ｂ．イオンビームスパッタ法は蒸着金属のイオンビームを試料に直接照射する
Ｃ．電子線加熱法は真空中で電子線を蒸発用金属に照射して加熱する
Ｄ．抵抗加熱法は真空中で金属あるいはカーボンに通電して加熱する（ 3 ）2011 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅰ（生物）12 題の問題のうち，問１～問６は全問解答し，問７～問 12 はその中から４問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

により可視化し，電顕観察する方法である．その手技の注意点として，基本【必須問題】

的には形態観察を目的とする操作手順に準じるが，途中に酵素反応を行う
問１．次の（）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，核膜で囲まれた核は，（１）やラン藻などの（ない．また，哺乳類の（３）のように消失しているものもある．核はふつう細胞１個あたり１個であるが，（り，また，（

５

径（

８

４

２

）には存在し）では２個あることがあ）では多数存在する．

核は内外２枚のそれぞれ厚さ約（われている．２枚の膜の間には（）の単位膜からなる核膜でおお）のスペースがある．核膜には直）の孔があり，核と細胞質を連絡し，種々の物質が核内外に移

核の中には１個ないし数個の（９にして反応させる．反応液に浸漬する際，基質の pH や浸透圧に留意するよう努めるが，反応温度は一般に（Ａ ）°C，反応時間は（Ｂ ）分間くらいを目安に反応させる．また酵素反応が標的酵素の分布局在を示しているか否かについては２）対照実験により確認する必要がある．

６
７

行する．外側の核膜は，ときに（必要がある．酵素反応を実施する際，１）反応液に浸漬する試料の厚みは，
マイクロスライサーやクライオスタットなどで 40 μm の組織切片を目安

記号で答えなさい（10 点）．

）とつながっていることがある．

1．（）の中にあてはまる適当な数値を記しなさい．

2．下線部１）の理由を述べなさい．
3．下線部２）としてどのような実験が必要か一例をあげなさい．
4．免疫組織化学法でも酵素の局在を検出することができるが，両者の違10 ）が存在する．

いを述べなさい．

【語群】（
問５．以下の文章は免疫電顕法について記述したものである．

Ａ．ウイルス
Ｆ．核小体

Ｂ．赤血球
Ｇ．骨格筋

Ｌ．真核生物

Ｃ．上皮細胞

Ｈ．白血球

Ｍ．ゴルジ装置

Ｊ．細菌

Ｎ．小胞体

Ｒ．20 ～ 50 nm Ｓ．50 ～ 100 nm

Ｄ．原核生物Ｅ．肝細胞）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさ

Ｋ．中心体い（10 点）．

Ｐ．8 nm Ｑ．16 nm

免疫電顕法の固定では微細構造と抗原性の保存が要求される．これら

Ｔ．100 ～ 150 nmの要求を満たすため，（

問２．以下の文章は胎盤絨毛の透過電顕写真の説明である．ａ～ｅの構造名を記しなさい（10 点）．

１）を主成分とする固定液が通常，使用される．包埋前染色法では組織を固定後，スライスして一次抗体を反応させる．二次抗体としては（２）を使用することが多い．DAB（ジアミノベンチジン）反応産物は，四酸化オスミウムで後固定することによって電子密度の高い（）を形成する．脱水後，（

３て超薄切片を作製する．（

３

）は（

５

４

）樹脂に包埋し）染色によるコントラストの増加と似ているので，最初は電子染色を行わないで電顕観察をする．反応陽性部位を確認した後に，必要であれば電子染色を行う．包埋後染色法
では，固定をした組織を脱水して，（埋する．前者は（

８

６

）樹脂や（

）重合を，後者は（

９

７

）樹脂に包

）重合を行うことが多い．超薄切片に一次抗体，標識抗体を反応させた後，電顕観察する．標識
10 ）を使用することが多い．

抗体は（
【語群】

Ａ．グルタルアルデヒド
Ｄ．四酸化オスミウム

Ｂ．ホルムアルデヒド

Ｃ．アクロレインＥ．金コロイド標識抗体

Ｆ．蛍光標識抗体

Ｇ．ペルオキシダーゼ標識抗体
Ｋ．ポリエステル

Ｊ．エポキシＭ．Lowicryl K4M

Ｌ．LR-White

Ｎ．ルテニウムレッド
Ｒ．クエン酸鉛

Ｈ．フェリチン標識抗体

Ｐ．オスミウムブラック

Ｓ．酢酸ウラニル

Ｑ．オスミウムレッド

Ｔ．タンニン酸

Ｕ．熱

Ｗ．紫外線
頂 上 側 に は（（ｂａ

） が 観 察 さ れ る． 細 胞 膜 の 一 部 が 陥 入 し，）の形成を認める．細胞内は，（た，数層の層板からなる（

ｄｃ

問６．以下の文章は走査電子顕微鏡を使用した試料の観察法である．次の）がよく発達している．ま（）も観察される．その上方に，エンド）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい（10 点）．

ソーム膜がさらに内向きに陥入して形成される小さな腔内膜小胞を含む

生物試料の走査電顕観察では，通常，試料は真空中に置かれるため乾燥する．乾燥した生物試料は（１

問３．下記固定法の手技および長所と短所を説明しなさい（10 点）．

（）を発生しにくいため，通常，金属をコー

問４．以下の文章は酵素細胞化学について記述したものである．次の設問

ティングする．この方法には金属に通電して加熱する（（ｅ）を認める．

に答えなさい（10 点）．

３

や（酵素細胞化学法は，生体における酵素の局在を微細構造と酵素活性の両）する．また（６

４）法等があるが，（用している．また，現在は（６８）が無いために，（

２
５）法は低真空中での（

）によって
）蒸着法
７

）試料を観察する装置として低真空型方を保持しながら，酵素自身の活性を利用して，反応液中の基質を分解し，走査電顕もあるが，この装置は試料室を低真空にする事により（反応産物を重金属などでその場に電子密度の高い沈着として捕捉すること

や（

（ 4 ）

９ ）と（

）を使

10 ）が衝突・イオン化し（２ ）３ ）が中和される

ため，乾燥した生物試料を（８）で通常は（９）を使用して観察するが，分解能は高真空タイプよりは劣る．

Ｆより選び，それぞれ解答欄に記入しなさい．また，核小体の働きを【語群】

解答欄に説明しなさい．

Ａ．電子ビーム

Ｂ．無蒸着

Ｃ．反射電子Ｅ．残留ガス分子

Ｆ．オージェ電子

Ｊ．注入ガス分子

Ｋ．二次電子

Ｎ．入射電子Ｐ．含水

Ｑ．蒸着

Ｓ．オスミウムプラズマ重合

2．＊で示される円形の空所が細胞の外と連絡しているかいないかを示す

Ｄ．導電性

Ｇ．帯電

Ｌ．高真空

Ｈ．グロー放電方法の一つは連続切片法である．
（1）連続切片法に適したグリッドを語群１より二つ選びなさい．

Ｍ．絶縁性（2）１枚が 100 nm 厚の切片を連続に作製するとき，直径 1 μm の球体

Ｒ．抵抗加熱Ｔ．イオンスパッタ

Ｕ．コロナ放電をすべて観察するには何枚の切片を作製すればよいか．語群２よＷ．低真空

り選びなさい．ただし，連続切片の１枚目にはこの球体の端が含まれるとする．
【語群１】【選択問題】

Ａ．単孔グリッド

問７．写真は平衡斑の有毛細胞と軸索終末の接合部で，ある膜タンパク質【語群２】

Ｂ．400 メッシュのグリッド

Ｄ．スリットグリッド

Ｃ．マイクログリッド

Ｅ．ハンドルグリッド

Ｂ．10 ～ 11 枚

Ｃ．50 ～ 55 枚

Ｄ．100 ～ 110 枚を検出するために，ペルオキシダーゼ標識二次抗体を使用して包埋

Ａ．５～６枚前免疫染色法を行い，観察した透過電顕像である．次の各設問に答Ｅ．500 ～ 550 枚

えなさい（10 点）．

問９．以下の文章を読み，次の各設問に答えなさい（10 点）．
写真は日本を代表する（１）材の走査電顕像で，（内に散在するために散孔材に分類される．（
う（

２

１

２

）が年輪

）材は，通水機能を担）や力学的支持機能を担う木部繊維というように，機能分化しているのが大きな特徴の一つである．細胞壁の主要成分はセルロース，ヘミセルロースおよび（３）である．それらの成分のうち，細胞壁の力
４

学的な性能に大きく影響し，電子線回折図を与える成分は（

）であ

る．

1．ペルオキシダーゼ標識二次抗体を使用した包埋前免疫染色法の手順をなるべく詳細に説明しなさい．
2．写真では①，②のどちらの膜に反応しているのかがよくわからない．
なぜこのようなことが起こるのか説明しなさい．
3．①，②のどちらの膜に反応しているのかを区別したい．どのような方法が考えられるか，一つあげなさい．
問８．写真は血管の中にみられた細胞の透過電顕像である．次の各設問に答えなさい．スケールは 1 μm である（10 点）．

1．（1）～（4）の中に適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．
2．（1）が水を通す様子を走査電顕観察するためには，どのような方法が考えられるか簡単に記しなさい．
【語群】
Ａ．ペクチン

Ｂ．広葉樹

Ｆ．柔細胞

Ｇ．師管

Ｌ．常緑樹

Ｍ．樹脂道

（ 5 ）

Ｃ．セルロース

Ｈ．仮道管

Ｄ．針葉樹

Ｊ．タンニンＮ．ヘミセルロース

Ｅ．リグニン

Ｋ．道管

問 10．写真は吸水発芽中のアズキ種子の胚軸皮層細胞の透過電顕像であ

1．写真のスケール（12 mm）は，次のどれを示すか．記号で答えなさい．

る．次の各設問に答えなさい．スケールは 1 μm（10 点）．

ａ．1 nm ｂ．10 nm

ｃ．100 nm ｄ．1 μm

ｅ．10 μm2．高倍率で撮影する場合には，支持膜の選択が重要で，この写真はプラ
ズマ重合ナフタレン支持膜（スーパー支持膜，厚さ 15 nm）を 400 メッ
シュグリッドに貼って撮影した．この支持膜以外で高倍率撮影に適したものは次のうちどれか．最も適したものを一つ選び，記号で答えな
さい．
ａ．マイクログリッドに貼った薄いカーボン膜
ｂ．100 メッシュグリッドに貼った薄いカーボン膜
ｃ．400 メッシュグリッドに貼った薄いコロジオン膜
ｄ．400 メッシュグリッドに貼った薄いフォルムバール膜
ｅ．400 メッシュグリッドに貼った薄いフォルムバール膜に薄くカーボ
ン蒸着したもの
3．この試料を作製するための具体的手順を記しなさい．

1．写真中のＡ～Ｇはそれぞれ何か，名称を書きなさい（名称は重複してもよい）．
2．二重の膜で囲まれているのはＡ～Ｇのどれか．
3．写真から考えられるこの細胞の機能を一つあげなさい．
問 11．写真は分裂酵母細胞の透過電顕像である．次の各設問に答えなさい（10 点）．
1．①～⑤の名称を記しなさい．
2．この電顕像から考えられる固定剤を記しなさい．
3．この固定剤によって得られる電顕像の特徴を記しなさい．

問 12．写真は A 型インフルエンザウイルスの精製ヘムアグルチニン抗原の 12 万倍の透過電顕像である．次の各設問に答えなさい（10 点）
．

（ 6 ）

2011 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅱ（鏡体・共通技術）
13 題の問題のうち，問１～問７は全問解答し，問８～問 13 はその中から３問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

問３．透過電顕像のコントラストについて述べた次の文章の（【必須問題】）の中にあてはまる最も適切な語句を語群から選び，記号で答えなさい
問 １． 以 下 の 文 章 は 電 子 の 性 質 に つ い て 記 述 し た も の で あ る． 次 の（で答えなさい（10 点）．
電 子 は（１ ） 性 と（ると，試料片の端や孔の周囲に白や黒の線状の（２ ） 性 を 併 せ 持 っ て い る． 磁 界 を 通 過する電子の軌道解析では電子を（１ ）として扱うことができる．一方，（３ ）が障害物の陰に回り込む（４ ）現象や，あるいは二つの（３ ）が重ね合わさった時の（５ ）現象の解析では電子を（（10 点）．
透過電顕観察で，試料片や小さな円形の孔を焦点はずれの状態で観察す）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号２ ）として扱う必要がある．焦点はずれの透過電顕像に見られるがある．過焦点では（
れる．（

４

（

７

ずる．

り（ 10 ）面に結像し，投影レンズで蛍光板に投影したものである．

Ａ．入射方向

【語群】

Ｆ．白い線

９

【語群】

Ｂ．像

Ｃ．コンデンサー

Ｇ．回折

Ｌ．エアリーディスク

Ｄ．粒子

Ｅ．電子回折Ｈ．フラウンホーファー
Ｍ．後焦点

Ｎ．波動

Ｊ．干渉

）が見られること
３

６

）が見ら
５

）コ

）と呼ばれている．この種のコントラストは）に通過した電子波と試料により異なる方向に（子波との（ある．また，（ ７ ）パターンは（ ８ ）回折を（ ９ ）レンズによ

Ｆ．電子波

１

）が見られ，不足焦点では（）ではこの白黒の縞模様は消滅する．これは（ントラストの一種で（（ ６ ）縞は試料端における（ ３ ）の（ ４ ）により生じたもので

Ａ．散乱

２

）により生ずるので，
（

８

）した電

10 ）をはずした場合でも生

Ｂ．正焦点

Ｃ．干渉

Ｄ．縞模様

Ｇ．対物絞りＨ．散乱

Ｊ．フレネル縞

Ｅ．位相
Ｋ．黒い線

問４．透過電顕観察において試料汚染の原因を簡単に述べ，その防止方法

Ｋ．対物を三つ記しなさい（10 点）．

Ｐ．フレネル）の中にあてはまる最も問５．真空計について述べた次の文章の（適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい（10 点）．

Ｑ．制限視野問２．写真はドリフトのないアモルファスカーボン支持膜の透過電顕像である．次の（）の中にあてはまる最も適切な語句を語群よ

真空計は，その測定原理によって，ある面積にかかる（する真空計，気体の（２）を測定する真空計，（

３

１

）を測定

）に依存する

り選び，記号で答えなさい．同じ語句を重複して選択してもよい

物理量を測定する真空計に分類することができる．電子顕微鏡の圧力測定（10 点）．

には（

４

（

４

）は圧力によって真空の（の（７）が変わることを利用して圧力を測定する．測定できる範囲は

（

８
（

）と（

５

）がよく使用される．
６）が変化してフィラメント

）Pa である．
）は電極間に磁界を加えて 0.1 Pa 以下の高真空でも放電を持続５するのに十分なイオンが得られるようにし，この（の測定を行う．測定できる範囲は（９）によって圧力10 ）Pa である．

【語群】
Ａ．圧力

Ｂ．ペニング真空計−1−6Ｆ．10 ～ 10

Ｅ．力

Ｋ．電流

Ｌ．質量

Ｃ．イオン電流Ｇ．熱伝導率Ｄ．電気抵抗値

Ｈ．分子密度

Ｍ．ピラニー真空計

Ｊ．電圧

Ｎ．電離真空計

Ｐ．103 ～ 10−1
問６．走査電顕観察で試料を観察用試料台へ接着する方法について答えな
さい（10 点）．
この像で一番大きな収差は（１）収差であり，（

２）を調整

1．接着材料に必要な性質を三つ記しなさい．

することにより除くことが可能である．高倍で上記収差を補正するとき

2．接着材料の種類を二つ記しなさい．

は支持膜の（

問７．写真Ａ，Ｂは珪藻試料の同一視野を異なる加速電圧で観察したもの

３）が等方的になり，正焦点近傍でコントラストが殆ど消失するように合わせる．ビームが蛍光板の中心にあるにも関わらずである．低加速電圧で観察した写真を選び，その理由を記しなさい

補正が不可能な時は電子顕微鏡の（４（10 点）．

あり，（）の調整が必要である．また，

（

７

も（

５

）や（

）絞りとビーム（
８６）がずれていることが原因で）の帯電や，対物レンズ絞りの（

９

）がずれて

10 ）収差が発生する．

【語群】
Ａ．球面

Ｂ．フォーカス

Ｆ．絞り

Ｇ．結晶性

Ｍ．位置

Ｎ．コンデンサー

Ｃ．非点

Ｈ．粒状性

Ｄ．回折
Ｊ．異方性

Ｐ．対物

Ｅ．非点補正装置
Ｋ．光軸

Ｑ．シフト

Ｌ．電圧

Ｒ．チルト

Ｓ．試料

（ 7 ）

市販のグリッドはクリーニングされて容器に入れられており，改めて【選択問題】

１

洗浄する必要はない．しかし，そのままでは（
問８．写真は 100 kV（λ = 0.00370 nm），カメラ長 1 m で撮影した制限視野電子回折パターンである．文章の（）内を埋め，面間隔を

有効数字３桁で求めなさい（10 点）．
この回折パターンは（ングと言われ，金の（１２を行う．この処理でグリッド表面は（

）結晶

性は（

）nm

（

８

４ ）

）され，親水性になる．親水）程度で消失するので，使用する（７）にグリッドを処）で処理しても親水化できるが，10 ）で処理しても効果は小さい．

）や（Ａ．グロー放電

第３リング直径 51.4 mm の面間
４

９

５

【語群】

隔は 0.204 nm
隔は（６理する．グリッド（金属製）を（

第２リング直径 36.3 mm の面間））の陽極にグリッドを並べ，真空度 1 ～３

10 Pa，電圧 500 V，電流 5 mA 程度の条件で，数秒～数十秒間（

第１リング直径 31.5 mm の面間３２

染色中にはがれたりすることがある．これを防ぐためにグリッドに親水化処理を行う．方法は（）リからの電子線回折である．
隔は（

）との（

が悪く，ボートに浮いている切片を回収できなかったり，回収できてもＦ．アセトン）nm

Ｋ．10 分

Ｂ．エッチング

Ｃ．切片

Ｇ．イオンスパッタ装置

Ｌ．１時間前

Ｄ．接着性

Ｈ．１時間

Ｍ．アーク放電

Ｅ．直前

Ｊ．エタノール

Ｎ．真空蒸着装置

Ｐ．10％硝酸問９．図は透過電子顕微鏡の試料から第１中間レンズまでの部分を示した

問 11．以下の文章は走査電子顕微鏡の二次電子像コントラストに関するものである．試料の拡大像（A’B’）が対物レンズ像面上に形成さ説明である．コントラスト名と成因を記しなさい（10 点）．
1．スキャン速度によってコントラストが変わる．

れている．次の各設問に答えなさい（10 点）．

2．試料の傾きによってコントラストが変わる．
問 12． 以下の文章の（）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい（10 点）．
真 空 中 で 電 子 線 を 物 体（ 試 料 ） 表 面 に 照 射 す る と， 電 子 と 試 料 の
（

１

）により（

２

）
，（

），特性 X 線，陰極線蛍光などが生

３

じる．これらすべてが走査電子顕微鏡の試料情報媒体として利用されているが，特に高い分解能の像を得るには（
理由は，（
（

４

２

）が用いられる．その２ ）のエネルギーが低く（数十 eV 以下），試料表面から約）以内の深さで発生した（

２）のみが真空中に脱出して像形成に寄与するため，高い分解能が期待できるからである．
SEM の観察では，試料の種類や観察の目的に合わせて，加速電圧，
（

５

），（

６

），コンデンサーレンズ電流，絞りの孔径などを設定する．また，像の（

７

），（

８

）は随時，見易いように調整する．続いて，軸があっているかどうか確認し，軸ズレがある場合は軸合わせを行う．像が得られたら，低倍率で試料微動装置を用いて目的の視野を選択する．最後に（９），（

10 ）を行い，倍率，（

７

），（

８

）を

調整して写真撮影を行う．
【語群】
Ａ．試料傾斜角度

Ｂ．収差

Ｅ．電界放出型電子銃

Ｃ．対物レンズ

Ｆ．焦点合わせＨ．作動距離（WD） Ｊ．相互作用
Ｌ．非点補正Ｍ．明るさ

Ｄ．10 nmＧ．二次電子Ｋ．チャージアップ（帯電）Ｎ．コントラストＰ．100 nmＱ．反射電子問 13． 原子間力顕微鏡の測定モードについて，次の各設問に答えなさい（10 点）．
1．測定モードには大きく分けると二種類ある．それらの名称と方法を記
しなさい．
2．生物試料の観察にはどちらのモードが適しているか．その理由ととも
１）光路図を描いて対物レンズの後焦点面の位置を図中に「両矢印の線」
で示しなさい．
２）第１中間レンズの像面に試料の拡大像が投影されているとき，この中心Ｃに投影されている物点の位置を図中に▲印で示しなさい．
３）第１中間レンズの像面に回折パターンが投影されているとき，この中
心 C に投影されている物点の位置を図中に■印で示しなさい．
問 10．グリッドの親水化処理について述べた次の文章の（）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい（10 点）．

（ 8 ）に記しなさい．