要１． ホヤの新疾病（被嚢軟化症）の疫学的研究

旨察を行なったところ，韓国と宮城県の病気被嚢の構造はよく似ており，両海域で発生している

宮城県水産技術総合センター・

病気は同じ被嚢軟化症である可能性が高いと考宮城県水産技術総合センター気仙沼水産試験場えられた。また，宮城県の病気被嚢を用いた感染実験を行ない，病気の発症過程の観察とサン
2007 年冬季から宮城県内のマボヤ養殖で発生プリングを実施した。宮城県の病気被嚢を健常している被嚢軟化症の原因究明と防疫対策の確

ホヤの水槽に 1 週間垂下したところ健常個体に立を目的として，本病の発生状況を調査し，感被嚢軟化症が発生した（発生率 26％）。被嚢の染性を検討した。2007 年と 2008 年にそれぞれ軟化は口から始まり，短時間（1 日程度）で被3 地点と 6 地点（うち 2 地点は 2 年連続）で発嚢全体が軟化し，数日で死亡した。本疾病が感症が確認された。6 月以降急速に病勢が拡大し，染症であることが確認された。さらに，被嚢軟7 ～ 8 月には全滅した群もあった。発症個体は化症の簡便な診断方法の開発を行ない，被嚢の回復せずに死亡したが，8 月下旬にはほぼ終息

厚さおよび被嚢の破けやすさ（張力測定値）のした。軟化被嚢を水槽に垂下する方法により実数値を用いることにより，病気被嚢の診断法が験感染が成立し，感染症であることが確認され確立できた。病気被嚢および健常被嚢の成分分た。感染実験の結果から，凍結やホモジナイズ析（水分，蛋白質，脂質，炭水化物，灰分，食により感染性を失うこと，病原体は 0.45 μ m

物繊維，セルロース）を行なったところ，被嚢を通過しないが１μ m のメッシュを通過する100g あたり（健常 2.5 個体，病気 4 個体分）のこと，15℃で病原性が高くなること等が明らか

成分組成に大きな違いは見いだされなかった。になった。

３． サケ科魚類冷水病の垂直感染防除に関する研究

２．ホヤの新疾病（被嚢軟化症）の病因及び診断方法に関する研究

宮城県水産技術総合センター・北海道大学大学院薬学研究院

 宮城県水産技術総合センター内水面水産試験場

ホヤの被嚢軟化症の原因の解明と診断法の確実験感染における冷水病菌の卵内への侵入条立をめざして本年度は以下の解析を行ない，成件，卵消毒による垂直感染の防除方法を検討果を得た。電子顕微鏡を用いて宮城県の病気おするとともに，養魚場の親魚や発眼卵におけよび健常被嚢の構造の比較を行なったところ，

る冷水病菌の汚染状況を調査した。その結果，

病気被嚢は健常被嚢に比べ被嚢繊維が粗く，不106CFU/mL 以上の菌濃度で人為的に表面を汚均一であり，部分的に繊維構造が壊れている部

染した未受精卵を定法により受精・吸水するこ位があることが明らかになった。一方，表皮細とで卵内感染が成立した。その後，卵内の生菌胞や被嚢細胞の形態には大きな違いはなく，微数は 107CFU/mL まで経時的に増加したが，実生物や寄生虫はいずれの被嚢でも観察されな験感染卵は死亡しなかった。冷水病菌の増殖部かった。同様に韓国の病気被嚢の電子顕微鏡観位は主に卵膜の内側（囲卵腔）であった。実験

的には，媒精前に卵表面の冷水病菌をヨード剤の変化等から供試魚の健康状態に問題があった（50ppm）で消毒する方法により，卵に影響をと考えられた。3) 病型判定に供試したものと同与えることなく垂直感染を防除することが可能

じアユの鰓エタノール固定標本および健常アユであったが，媒精前の PBS による洗卵やヨーの生鮮鰓組織に種々の染色を直接的に施し，異ド剤吸水のみでは防除できなかった。

型細胞が検出可能か検討した。エタノール固2006 ～ 2008 年に合計 13 道県のサケ科魚類

定 標 本 で は 0.05 ～ 0.1 ％ Toluidine blue 染 色，

7 種，66 ロット，5160 尾の体腔液と精液から，

Acetocarmine 染色および 0.5％ Giemsa 染色で冷水病菌の分離を試みた結果，11 道県，46 ロッ異型細胞が検出された。また、生鮮鰓組織ではト（70 ％），932 尾（18 ％） が 陽 性 で あ っ た。

0.1％ Toluidine blue 染色および Acetocarmine

体腔液中の生菌数は平均 101.9CFU/mL（10 ～染色で呼吸上皮細胞が明瞭に検出されたことか

7.7610 CFU/mL） と 低 く，10 CFU/mL 以 上 の 個ら、異型細胞の検出も可能と考えられた。

体は陽性個体の 1％と少なかった。また，サケマス類の未受精卵約 1700 粒，発眼卵約 6900 粒の卵内容物を検査した結果，一部の輸入卵を除

５．アユ「ボケ病」の細菌学的研究

き，冷水病菌は分離されず，国産卵における卵

栃木県水産試験場

内感染の可能性は非常に低いと考えられる。この原因として卵内感染が成立する可能性のある

県内アユ養殖 7 経営体で 47 症例のボケ病を高濃度の冷水病菌を保菌した親魚が少ないこと確認した。その内訳は異型細胞型 38 症例，細が考えられる。

菌性鰓病型 3 症例，混合感染型 6 症例で，BGDの関与なき症例が多かった。
1 経営体の飼育施設で PaPV と BGD 原因菌

４． アユ「ボケ病」の病態生理および診断技術に関する研究
の消長を 2 ヶ月間追跡したところ，6 面で異型細胞型，5 面で混合感染型のボケ病が発生した

日本獣医生命科学大学獣医学部が，物理的に離れた飼育池で散発的に発症した。
塩水浴では，一時的にアンモニア態窒素濃度昨年度に引き続き，養殖アユの「ボケ病」のは高くなるが，数時間後には減少する。塩水浴

病態生理を検討し，簡便な診断法を開発するた

時に水面上には多量の泡が発生するが，この泡めに以下の研究を実施した。1)199 尾の養殖アのアンモニア態窒素濃度はきわめて高く，水面ユの鰓パラフィン切片に H&E 染色等を施し，上の泡除去で塩水浴中のアンモニア態窒素濃度

光学顕微鏡下で病型判定した結果，細菌性鰓病上昇を抑制できる可能性が示唆された。

型が 12 尾，異型細胞型が 40 尾，混合型が 68
尾 で あ っ た。199 尾 中，Plecoglossus altivelis
Poxvirus － PCR（PaPV-PCR）に陽性を示し

６． アユ「ボケ病」のポックスウイルスとの関連に関する研究たのは 146 尾であり，それらのうち異型細胞が観察されたのは 108 尾であった。2) 1.0％塩+

東京海洋大学海洋科学部+

水浴を健常アユに施し，血清電解質（Na , K ,Cl － ）， ア ン モ ニ ア（NH3）， 血 中 尿 素 態 窒 素

感染実験，野生生物や親魚等の PaPV 保有検（BUN），尿素（UA）を経時的に測定したが有査，ボケ病全国調査などを実施した。その結果，意な結果が得られず，塩水浴中の累積死亡数等大量死の再現や感染源の特定には至らなかった

が，PaPV がアユ個体間で水平感染し，親子感ゼおよびインドールを産生せず，その他，糖染の可能性があり，河川棲息のアユからも検出分解能などの生化学的性状において既報の E.

され，日本の広範囲に分布することが明らかに

ictaluri の性状と一致した。また，16S rDNA，なった。また，ボケ病は水温 16℃から 25℃でTypeI 線毛遺伝子，および dnaJ の塩基配列に発生し，魚体サイズや収容密度に無関係に発生おいても既報の E. ictaluri 株と 99.7-100％の相し，病魚の特徴として体を斜傾させ，水面付近同性を示した。一方，近縁種である E. tarda とを遊泳する傾向にあることが判明した。養魚場

は，遺伝学的にも血清学的にも区別された。

では塩水浴処理がしばしば行われ，死亡率全体の平均を見ると処理した方が低かったが，処理を行っても 70％程度の死亡率になる場合もあ９．養殖ブリの不明病の病理組織学的研究

り，その効果は判然としなかった。

東京海洋大学海洋科学部
2003 年以降，愛媛県宇和海の養殖ブリに異常７． アユのエドワジエラ・イクタルリ感染症の疫学的研究

遊泳・脳に発赤を伴う原因不明の死亡が発生している。病理組織学的検査を行ったところ，病

広島県立総合技術研究所

魚の脳および脊髄にグリオーシスおよびグリア



水産海洋技術センター

結節，うっ血または出血，神経細胞の変性，神経線維の膨化を特徴的な症状とする高度な病変2008 年 7 ～ 11 月，アユおよびその他 9 魚種が認められた。さらに，脊髄からは寄生虫シスを対象に E. ictaluri の保菌検査を行った。そのトが確認された。また，5 月から定期的に宇和結果，E. ictaluri は 5 回全ての検査でアユから海より，加えて四国，九州から病魚を集め病理検出され，9 月には 67.2％の保菌率であった。

組織学的な検査をした結果，本寄生虫はすでにまた，ギギ 1 尾からも同菌が検出された。ナマズ，四国，九州に広く存在していること，発病は 8ギギ，アユ，オイカワへの感染実験の結果，ナ月の高水温期からピークを迎えるが，病変や寄マズの感受性が高く，これと比べてアユやオイ生虫シストは 7 月中旬から認められることが明

カワの感受性は低いことが明らかとなった。さら か と な っ た。 さ ら に，in situ hybridization

らに，アユへの同居感染，浸漬感染実験の結果， （ISH）を行い，H-E 染色で確認されていた寄生死亡が見られず感染も成立しなかった。

虫シストを組織切片上で特異的なシグナルとして検出することができた。PCR 診断によって増幅した断片が，この寄生虫を増幅したものであ

８． アユのエドワジエラ・イクタルリ感染症の細菌学的研究


広島大学大学院生物圏科学研究科

り，それは粘液胞子虫であろうと強く示唆された。H-E 染色を用いた病理組織学的検査では，寄生虫シストを見るだけであったが，シスト形成前あるいはシストが崩壊した後と考えられる

2007 年および 2008 年に全国各地の河川アユ単一細胞の存在も明らかにすることが出来た。

から分離された菌株について，それらの細菌

また本病寄生虫は，ISH の特異的なシグナルか学的および遺伝学的特性を検討した。供試しら脊髄・延髄・中脳被蓋に存在することが明らた 106 株はすべて，グラム陰性の微弱な運動性かとなった。

を有する短桿菌で，チトクローム・オキシダーる場合があった。ただし，解剖所見と PCR の１０．養殖ブリの不明病の疫学的研究

診断結果を個体別に照合すると，脳の発赤と寄生との相関関係は高かった。採集された寄生虫

愛媛県農林水産研究所水産研究センター

株の SSU rDNA を系統解析したところ，2 つの愛媛県の養殖ブリでは脳の発赤，異常遊泳，遺伝子型があるように見えたが，ITS 領域の解吻端部や体表のスレ，肥満度の低下などを特徴

析結果からは種苗の由来や養殖場との関連は認とする死亡が発生している。本病の発生状況等められなかった。病ブリ脊髄組織に対して DIGを調べるため，養殖ブリ全小割を対象にアン標識オリゴヌクレオチド・プローブを用いた迅ケート調査を行なった。本病の原因とされる粘速 in situ ハイブリダイゼーションを試みた結液胞子虫 Myxobolus spirosulcatus の感染状況

果，栄養体に陽性反応が見られたことから，今を調べるため，特定小割の種苗を定期的にサン回得られた粘液胞子虫の DNA は組織学的に検プリングし，PCR 検査と病理組織学的検査を行出される栄養体由来のものであることが確認さなった。本病は脳の発赤や異常遊泳に伴って吻れた。2 年間の全体成果としては，不明病の原端や腹部にスレの症状を呈し，夏の高水温期に因が M. spirosulcatus であることが強く示唆さ発症し，水温の低下とともに死亡は終息するが，れ，現場的に応用できる PCR 診断法が開発さ

感染耐過魚の肥満度は低く推移し，翌年の高水れた。しかし，異常遊泳するほどの発病に至る温期に再度発症しやすいことが分かった。PCRにはさらにまた別の要因が関与すると思われ検査では，流れ藻から採捕した種苗では陰性でる。

あったが，漁場導入約 1 ヶ月後には陽性になり，高水温期に向かって PCR 陽性率や病理組織学的検査による神経病変のスコアが高まる傾向に

１２．養殖ブリの抗酸菌症に関する研究あり，本病の発生時期とも合致した。漁場の付

鹿児島県水産技術開発センター

着生物やプランクトンの PCR 検査でも陽性となり，漁場内で感染が起きている可能性が示された。

Mycobacterium marinum を原因菌とする養殖ブリ類の抗酸菌症は南日本の養殖場で発生が確認されており，2004 年以降は増加傾向にある。
本研究では実態調査，菌株同定，MIC 測定によ１１． 養殖ブリの不明病の遺伝子解析およびPCR 診断法に関する研究

東京大学大学院農学生命科学研究科

る薬剤感受性試験，エライザ法と蛍光抗体法を用いた感染時期の推定を行った。養殖ブリでは9 月～ 11 月に 1 才魚以上での発生が多く，菌株は性状試験から全て M. marinum に同定され，近年，愛媛県等の養殖ブリにおいて異常遊泳

MIC 値はストレプトマイシンが他の薬剤と比べや脳脊髄炎を特徴とする不明病が問題になってて低い値を示した。抗体価と菌体観察からブリいる。その原因体と示唆されている粘液胞子虫

は 0 才魚の種苗導入直後には M. marinum に感Myxobolus spirosulcatus の疫学調査を PCR 法染し，翌年までの長い感染期間を経て 1 才魚でにより行うことを目的とした。西日本各地の養発病することが推測された。

殖ブリとカンパチを調べた結果，この寄生虫は四国，九州地方に幅広く分布しており，外観的に発病していない健康魚からも高率で検出され

１３． 魚類病原性ウイルスの防除技術に関す

養殖ヒラメの S. parauberis 感染症の発生状る研究

広島県立総合技術研究所

況，薬剤感受性を調査し，実験感染法の検討を

水産海洋技術センター行った。本症は，大分県では 2005 年に顕在化し，日間死亡率は 0.1 ～ 1.8％，発生時水温は 14 ～種苗生産過程での病原性ウイルス病（ウイル25℃であった。罹病魚の主な症状は，鰓の退色

ス性表皮増生症およびウイルス性神経壊死症）やくされ，肝臓の退色や肥大，腎臓の腫大であっの発生を防除する目的で，吸着体によるウイルた。薬剤感受性試験の結果，供試菌株の 41.5％

スの感染防除効果についての技術開発を行っが OTC に対して低感受性～耐性であった。そた。原因ウイルスの検出系を準備した後，特にの他の供試薬剤に対しては，比較的感受性が高ウイルスの体内増殖や放出に関する知見に乏しかった。実験感染法の検討の結果，腹腔内接種

い表皮増生症ウイルス（FHV）についての実験法および浸漬法ではヒラメの死亡を再現できなを行い，感染 3 日目には 1010 copies/ 尾に FHVかったが，背鰭基部付近皮下に接種した際に，8が増殖し，その1％程度（10 copies/ 尾）が体接種菌量に応じた死亡がみられ，自然感染魚と外に放出されることを明らかにした。また，垂類似した症状が再現された。

直感染防除の観点から，罹患魚のウイルス保有量を追跡し，180 日後には体内からウイルスが検出されなくなることを明らかにした。FHVは，植物性多糖類（フコイダン 5.0 g/L）に吸着し，感染性がなくなった。また，同様に粉体（カオリン，ハイドロキシアパタイト）にも吸着性を示し，ヒラメに対する感染性がなくなった。一方，神経壊死症ウイルス（NNV）は，一部がフコイダンや吸着体に結合するものの，感染力価は若干低下するにとどまった。多糖類や粉体のウイルス吸着効果を説明するために，表面電位（ゼータ電位）を測定したところ，ほとんどの粉体が負に帯電しており，その絶対値が大きいほどウイルス吸着効果が大きい傾向がみられた。これらのことから，種苗生産水槽に吸着体を投入することは，積極的な疾病防除策とは言えないが，感染症リスクの低減に繋がると考えられる。

１４． 養 殖 ヒ ラ メ の 新 型 レ ン サ 球 菌 症（Streptococcus parauberis 感染症）に関する研究

大分県農林水産研究センター水産試験場