要約

１．二枚貝類の生体防御に関する研究の研究を行った。まず、わが国のアサリにはPerkinsus olseni とP. honshuensis の ２ 種 が 寄

東北大学大学院農学研究科生していることが報告されたことから、培養株
海産二枚貝の生体防御機構において重要な２を用いた攻撃試験を行うために培養株からの遊つの液性因子、殺菌因子であるリゾチームと、走子の作出法の開発を試みた。培養した栄養体凝集活性やオプソニン活性を持つレクチンにつを道東産の無感染アサリ軟組織とともにホモジいて、マガキ、ムラサキイガイおよびアサリをネートし、RFTM培地で培養して前遊走子嚢を材料として活性の季節変動と体内分布、遺伝子作出した。P. honshuensis では、20 ～ 30℃の海の発現等を調べ、生体内での役割を考察した。

水中で培養することで、40％以上の高い累積遊ムラサキイガイのリゾチーム活性はマガキの36走子放出率を得たが、P. olseni では、累積遊走～ 100倍と非常に高く、組織では外套膜と消化子放出率が最大でも約４％程度と極めて低かっ盲嚢で高い活性を示した。反応温度による活性た。そのため、攻撃試験では自然感染個体からの違いが認められ、マガキでは37℃で、ムラサ得た虫体を用いることとした。アサリに寄生すキイガイでは25℃で高い値を示した。これらのるパーキンサス属原虫の種を明らかにするた結果から、リゾチームには生体防御と消化といめ、PCR-RFLP法による同定法を開発し、瀬戸う２つの機能があり、組織により異なると考え内海産アサリについて調べた結果、P. olseni とられた。また、マガキ、ムラサキイガイともにP. honshuensis の２種が感染し、その中でもP.

複数のリゾチーム遺伝子を持ち、ムラサキイガ

olseni が優占種であることを明らかにした。次イでは外套膜と消化盲嚢において発現遺伝子がに、瀬戸内海産アサリ組織をRFTM培地で培養異なることを示した。アサリのレクチンを血漿して得た前遊走子嚢を用いて、無感染の北海道から精製した。このレクチンは、二枚貝幼生の産アサリ稚貝とパーキンサス属原虫に低レベル病原菌であるVibrio tubiashii に対する血球の貪に感染している東京湾産アサリ稚貝を供試して食能を有意に高め、オプソニンとして働くこと攻撃試験を行ったところ、いずれも遊走子105個を明らかにした。供試した３種類の細菌に対し以上の攻撃区では、対照区に比較して明らかにて殺菌能は示さなかったが、増殖抑制作用が認低い生残率を示し、パーキンサス属原虫がアサめられた。マガキにVibrio 菌を接種した細菌刺リ稚貝に致死的影響があることが明らかとなっ

激では、血リンパのレクチンが応答して活性がた。

有意に上昇した。今後は、生体防御機構と感染症との関連を検討する必要がある。

３． ホヤの新疾病（被嚢軟化症）の疫学的研究
２．貝類の寄生虫症に関する研究宮城県水産研究開発センター・

宮城県気仙沼水産試験場

東京大学大学院農学生命科学研究科
パーキンサス属原虫のアサリ稚貝に対する影

2007年２月に宮城県で初めて確認されたマボ

響を実験的に評価することを目的として以下

ヤ被嚢軟化症について、県内の発生状況および種苗導入実績などの疫学的情報を集めるとと宮城県養殖場で発生したマボヤ被嚢軟化症のもに、感染性の有無を評価するため発症漁場へ原因を解明し、簡便な診断方法の確立を目的とのマボヤの試験垂下、室内における感染実験をして以下の解析を行なった。健常個体の組織お行った。併せて、各種組織の病理組織学的検討

よび体液、病気個体（軽症）の体液を用いてセを行った。マボヤ被嚢軟化症は、2004年夏に韓ルロース分解酵素活性を調べた結果、肝膵臓に国産種苗が導入された海域でのみ発生が確認さ高いセルラーゼ活性が検出された。病気の有無れ、韓国産種苗との関連が伺われた。また、試にかかわらず体液にはセルラーゼ活性は検出さ験垂下および室内感染実験では、これまでのとれなかった。また、病気発症海域および非発症ころ発症個体は確認されず、感染性については海域のモニタリング用ホヤ16個体の被嚢および不明である。病理組織学的検討を行ったところ、内部組織の重量を測定し、被嚢重量指数（＝被顕著な病変は被嚢にのみ認められ、被嚢組織の嚢重量/内部組織重量）を求めて比較したとこ

観察により診断が可能であると考えられた。

ろ、病気個体の指数が一番低いこと、また、病気発生海域のホヤの指数が経時的に低くなっていく傾向がみられた。

４．ホヤに寄生する原生生物に関する研究

筑波大学大学院生命環境科学研究科
６． アユ「ボケ病」の病態生理および診断技術に関する研究

ホヤ被嚢軟化症の原因が、原生生物の寄生によるものかどうか解明するための基礎的知見を

日本獣医生命科学大学獣医学部得ることを目的として、ホヤの発症個体・健常個体の血球からのDNAを解析した。パラミク

アユ「ボケ病」の病態生理を明らかにし、簡サおよびケルコゾアに特異的なプライマーによ便な診断手法を開発するために以下の研究をるSSU rRNA遺伝子のPCRによる増幅や、コロ行った。１）病理組織学的検査による病型判定

ニーハイブリダイゼーションを利用した手法にのため、503尾の病アユの鰓切片にH&E染色等より、ホヤ血球内の寄生原生生物の配列の検出を施し、光学顕微鏡下で観察した結果、細菌性を試みたが、その存在を示唆する配列は検出さ鰓病型が29尾、異型細胞型が63尾、その混合型れなかった。さらに、光学顕微鏡および電子顕が31尾であった。２）155検体の病アユ血清の微鏡観察でも原生生物の存在を支持する結果は血清電解質、アンモニア、尿素態窒素、尿酸を得られなかった。しかし、コロニーハイブリダ自動測定装置を用いて測定した結果、細菌性鰓イゼーション法では、コントロールとして用い病型および混合型では電解質バランスが損なわた他の生物ではプローブが結合していないことれ、窒素代謝産物が増加していることが判明しから、原生生物の存否を確認するのための有効た。３）異型細胞の染色特性を明らかにするたな手法であると考えられる。

め、鰓切片に17種類の染色を施して光学および蛍光顕微鏡で観察した結果、異型細胞は光顕観
察ではGill’s hematoxylin No. ５染色、蛍光顕観

５． ホヤ新疾病（被嚢軟化症）の病因及び診断方法に関する研究

北海道大学創成科学共同研究機構

察ではAcridine orange染色によく染色され、実用的な簡易判別に使用しうると考えられた。

のと推定された。

７．アユ「ボケ病」の細菌学的研究

９．養殖ブリの不明病の疫学的研究



栃木県水産試験場

愛媛県魚病指導センター

養殖現場で発生しているアユ「ボケ病」と愛媛県の養殖ブリに数年前から発生しているされる症例について飼育状況や死亡状況、処異常遊泳、肥満度の低下、吻端部から腹部に置方法の調査を実施した。併せて細菌性鰓病

かけてのスレや発赤、腹腔内および脳の発赤を原 因 菌Flavobacterium branchiophilum のPCR

主な症状とする原因不明の死亡について、疫学や、新たに開発されたアユポックスウイルス

調査により発生状況を調べるとともに、養殖現（PaPV） のPCRに よ る 検 査 も 実 施 し、 ボ ケ 病

場で経験的に知られている本病発病と給餌方法研究としては初めて病原体に着目した症例調査の関連を飼育試験により調べた。疫学調査の結を行った。その結果、生産者がボケ病と自己診

果、稚魚では愛媛県内外の種苗餌付け漁場のほ断した７症例全てでPaPVが検出され、そのうか、愛媛県内の養殖漁場においても感染していち４症例で発症時にF. branchiophilum が検出る可能性が示唆された。成魚では、稚魚期に感された。病理組織学的に観察される長桿菌とF.

染した群では、再度発病しやすいことが明らか

branchiophilum との関連については明らかにはとなった。飼育試験では、飽食給餌に比べて制できなかったが、PaPVとF. branchiophilum が限給餌では、脊髄の病変が軽度であり、制限給

ボケ病発症に強く関与していることが示唆され餌が本病の症状進行の抑制に有効なことが示唆た。

された。

８． アユ「ボケ病」のポックスウイルスと10．養殖ブリの不明病の病理組織学的研究の関連に関する研究

東京海洋大学海洋科学部

東京海洋大学海洋科学部
昨年度および本年度に得られた病理組織学的ア ユ ポ ッ ク ス ウ イ ル ス（ 仮 称PaPV） の 感所見から、不明病に特徴的な診断基準を４つ設

染とボケ病との因果関係を明らかにする目的けた。すなわち、脳と脊髄における１. グリオーで、主として栃木県でボケ病と判断された症

シスとグリア結節、２. 神経食現象を伴う大型例についてPaPV感染の有無を調査するととも神経細胞の変性、３. うっ血または出血、４. 神に、アユに対する感染実験を行った。その結果、経線維の膨化と断裂である。また、愛媛県産ブPaPVは少なくとも栃木県、岐阜県、熊本県に

リでは、不明病に特徴的な病変および寄生虫シ分布し、栃木県ではボケ病の発生と強く関連しスト様構造物は７月から確認され始め、病状のていた。一方、PaPVはアユ体内で少なくとも程度のピークは８～９月であった。昨年度の結10℃～ 25℃の範囲で増殖するが、PaPV感染を果も考え合わせると、この疾病は愛媛県のほか原因とする死亡は確認できなかった。栃木県でに、高知県や鹿児島県でも発生していると考えはボケ病非発症群からもPaPVが複数例検出さられた。大分県や宮崎県では未発生であるが、れたことから、PaPVはアユを宿主とするウイ種苗を愛媛県に導入し、養殖すると発生するこルスであるが、その感染単独では大量死を引きとが分かった。越冬した越年病魚にも特徴的な起こさず、大量死の誘因として関与しているも病変と寄生虫シスト様構造物が確認された。

グを除く３種のフグでは、魚種ごとに寄生種は11． 養殖ブリの不明病の遺伝子解析およびPCR診断法に関する研究

東京大学大学院農学生命科学研究科

異なり、中国や若狭湾産のトラフグ寄生種とも異なった。寄生率は調査地点ごとに大きく異なった。トラフグ、ヒガンフグ、クサフグ種苗を2007年７月から12月まで香川県において網生

近年、脳脊髄炎を特徴とする養殖ブリの「不け簀で飼育し、その間に４回、各魚種それぞれ明病」が問題になっている。その原因体と疑わ42尾を採材したが、血管内吸虫の寄生は確認でれている粘液胞子虫の遺伝子を解析して、分類きなかった。

学的位置を推定すること、およびPCR診断法を確立することを目的とした。ブリ病魚の脊髄から粘液胞子虫のSSU rDNAをシーケンスして系

13． ブリの再興感染症（ノカルジア症）に関する研究統解析した結果、ブリやカンパチの胆管に寄生す るMyxobolus spirosulcatus の 塩 基 配 列 と 約

大分県農林水産研究センター水産試験場99％以上一致した。得られた遺伝子情報に基づき、種特異的で検出感度の高いPCR法を開発し近年のノカルジア症の増加要因として、飼育た。しかし、外観・剖検による診断結果とPCR魚の体表損傷機会の増加と修復機能の低下がによる診断結果が必ずしも一致しなかったこと関与しているとの疑いがもたれたことから、本から、この粘液胞子虫と不明病との因果関係の症の感染助長要因の検討、体表の強化を目的と証明についてさらに調査が必要と考えられた。

した飼料添加物による抗病性向上の検討を行った。また、養殖環境における原因細菌の分布調査による感染機会の多寡の評価とあわせて、飼12．養殖トラフグの血管内吸虫に関する研究

育管理技術の改良によって本症被害の低減を図ることを目的とした。その結果、体表の損傷は東京大学大学院農学生命科学研究科本症の感染助長要因となることが示され、ま2007年12月に５県の養殖トラフグ０～１歳魚た、ハダムシの寄生も本症感染を助長することの26ロット、計124尾についてPsettarium 属血から、本症を防ぐ上で寄生虫対策も重要である管内吸虫の寄生の有無を調べたが、寄生は確認と考えられる。飼料の面からは、安易な魚粉含できなかった。前年度同様、中国産種苗とと量の低下は、飼育魚の体表修復機能を低下させ、もに日本に持ち込まれた血管内吸虫の生活環が本症感染のリスクを高める恐れがあると考えら国内で完結しているという証拠は得られなかっれる。また、低魚粉飼料を給餌しても、V. C、た。しかし、2007年10月と12月に調査した中国

パントテン酸を強化すれば、体表修復機能を維の養殖トラフグ２ロットのうち、１ロットのす持・亢進することで、本症感染をある程度予防べての脾臓に少数の虫卵が確認され、中国におできる可能性が実験的に示された。

いてはいまだに血管内吸虫の感染があることがわかった。2007年４月～ 2008年１月に４県の天然トラフグ属フグ７種、計338尾を調査した結果、ヒガンフグ、クサフグ、コモンフグ、ショウサイフグにPsettarium 属血管内吸虫の寄生を確認した。虫体が得られなかったショウサイフ

14． 魚類病原性ウイルスの防除技術に関する研究広島県立総合技術研究所水産海洋技術センター

種苗生産過程でのウイルス病発生を防除するために、ヒラメ仔魚に発生する表皮増生症を16． サケ科魚類冷水病の垂直感染防除に関する研究モデルとした技術開発を行った。原因ウイルスの定量PCR系を用いて罹患魚のウイルス量の

宮城県内水面水産試験場

10経時的検討を行い、感染から90日後までは10copies/尾を保有していること、その後ウイルス13道県のサケ科魚類７種（ニジマス、ヤマ

量は急減し、180日後には検出限界以下となる

メ、イワナ、アマゴ、ギンザケ、ヒメマス、シことを明らかにした。水中のカオリンがウイルロサケ）、35ロット、2,687尾の体腔液と精液かスを吸着する量を調べるため、感染実験を行っ

ら、冷水病菌の分離を試みた結果、９道県、20たところ、カオリン1.6 g/L以上で疾病の発生がロット、411尾が陽性で、体腔液中の生菌数が抑制された。また、カオリン量が0.8 g/L、原因107.7CFU/mLの個体もみられた。一方、輸入ギウイルスの量が104.3 copies/mLの時に50％の確ンザケ卵内から冷水病菌が分離（180粒中４粒）率で感染が成立した（カオリン非投入の場合はされたが、５種の国産卵（未受精卵660粒、発103.2 copies/mL）。さらに、ウイルス吸着能があ眼卵1,380粒）はすべて陰性で、前年に保菌親魚る吸着体の表面電位（ゼータ電位）は負に帯電から生産した稚魚を追跡調査したが、垂直感染していることを明らかにした。

は確認されなかった。実験的には、媒精前に卵表面の冷水病菌をヨード剤（50ppm）で消毒し、媒精後に200ppm以下の濃度のヨード剤で吸水15． アユ冷水病の高度診断技術等に関する研究


する方法により、卵内感染を防除することが可能であった。

群馬県水産試験場
昨 年 度 に 引 き 続 き、Bsp 119Iを 用 い たPCR-

RFLP法による冷水病菌株の遺伝子タイピング

17．サケ科魚類の未侵入病原体に関する調査宮城県内水面水産試験場と、鰓洗浄液等からのgyrB （新規法）およびparE （従来法）を標的としたPCR法による冷水特定疾病に指定されているサケ科魚類のピシ病菌の検出を行った。冷水病菌の新規遺伝子タ

リケッチア症とレッドマウス病が宮城県内に未イピング領域として、トポイソメラーゼⅣのA侵入であるか否かを明らかにする目的で、2007サブユニット領域（parC ）を選択し、冷水病菌

年３～ 12月にピシリケッチア症を対象に海面養27株においてその塩基配列を決定した。アマゴ殖ギンザケ（正常遊泳魚３ロット180尾, 病魚24由来の２株に12塩基（４アミノ酸）の挿入配列

ロット, 200尾）を、レッドマウス病を対象に内が見られ、これがアマゴ由来株の特徴的な遺伝

水面養魚場で養殖されているニジマス等のサケ子型を示すものと考えられた。冷水病を実験感科魚類（正常遊泳魚12ロット720尾, 病魚37ロッ

染させたアユの飼育排水を冷水病菌フリーの藻ト501尾）をそれぞれ培養法およびPCR法を用類が付着した植木鉢にかけ流して、冷水病発生

いて検査した。その結果、いずれの個体からも河川の付着藻類の状況を実験的に再現した。そ両疾病の病原体は確認されなかったことから、の結果、従来のPCR法によって付着藻類から冷未侵入であると判断された。

水病菌を検出することができた。

18． クルマエビ類の特定疾病に関する疫学的調査


水産大学校生物生産学科
持続的養殖生産確保法において、特定疾病に指定されたエビ類の重大疾病の原因ウイルスが、輸入冷凍エビから生活排水等を介して、養殖クルマエビや天然資源に伝播することが懸念されている。そのため、クルマエビが養殖されている３県のスーパーマーケットの輸入冷凍エ
ビ、生活排水が流入する河川の野生甲殻類および養殖クルマエビについて、WSV、IHHNV、YHV、TSVの保有状況をPCR法によって調べた。その結果、輸入冷凍エビ580尾の35.9％からWSVが、11.0％からIHHNVが、また5.5％からYHVが検出されたが、TSVは検出されなかった。また、野生甲殻類および養殖クルマエビの、それぞれ14.6、11.0％からWSVのみが検出された。