原著論文

診療と新薬 2022; 59: 275-281

サガラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮エキスを配合した化粧品による診療と新薬 Web

フィラグリンタンパク質産生促進効果の検証植松史帆 1）／竹田竜嗣 2）● 要旨
フィラグリンは，皮膚のバリア機能に重要な役割を果たす角層のタンパク質として知られている。我々は，これまでにサガラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮エキスに，フィラグリン産生促進の可能性があることを遺伝子発現試験により確認した。本研究では，フィラグリンタンパク質の産生促進効果を確認するため，3 次元培養皮膚モデルを用いた，ドットブロッティング法によるフィラグリン産生確認試験を実施した。試験には，サガラメエキスおよびマンダリンオ
レンジ果皮エキスを用い，各単品および組み合わせによるフィラグリン産生促進効果を確認した。さらに，ローションとクリームの製品にこれらの成分を配合し，両エキス非配合品との比較も実施した。その結果，試験品添加 72 時間後のフィラグリン量は，サガラメエキス単品添加群において Control と比較して有意な増加が認められた。また，サガラメエキスとマンダリンオレンジ果皮エキスの組み合わせによる混合物においても，フィラグリン量は有意な増加が認められた。さらに，製品を用いた評価においては，サガラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮エキスを配合した製品が有意にフィラグリン量を増加させた。一方，両エキスを配合しない製品におけるフィラグリン量は，Control と比較して有意な変化は認められなかった。これらの結果から，両エキスを配合した製品は，保湿効果だけでなく，フィラグリン量を増加させることで，保湿効果やバリア機能の維持に役立つことが示された。フィラグリンタンパク質の産生促進は，アトピー性皮膚炎（AD）発症の抑制やアレルギーマーチの抑制が期待できると考えられる。今後は，ヒトにおける知見をさらに確認する必要はあるが，両エキスを配合した製品は，乳幼児などバリア機能の未熟な方に効果的なスキンケア製品として期待されることが示された。
Key words：フィラグリン，皮膚バリア機能，サガラメエキス，マンダリンオレンジ果皮エキス，アレルギーマーチ

1．緒

言

ヒトの皮膚の最も重要な役割は，バリア機能であ1）皮，さらにその表面の角質層を形成することであり，角化して細胞死に至った表皮細胞の層である角質層が，皮膚バリア機能において重要な役割を果たると言われる 。ヒトは，進化の過程で，乾燥したしている。この角質層内の天然保湿因子と脂質層の外界に対する防御システムとして表皮の角化機構を形成によって，体表面からの水分蒸散量はコント発達させたとされる。「角化」とは皮膚の表面の表ロールされ，かつ，外界からのアレルゲン等の異物

1）ピジョンホームプロダクツ株式会社（〒 417-0826 静岡県富士市中里 2608-31 富士市浮島工業団地）
2）関西福祉科学大学 健康福祉学部福祉栄養学科（〒 582-0026 大阪府柏原市旭ケ丘 3-11-1）
投稿代表者：竹田竜嗣（関西福祉科学大学 健康福祉学部福祉栄養学科 〒 582-0026 大阪府柏原市旭ケ丘 3-11-1）
TEL: 072-978-0088 e-mail: rtakeda@tamateyama.ac.jp

52 （276）

診療と新薬・第 59 巻

第 5 号（2022 年 5 月）の侵入が防がれている。このバリア機能に重要な役

近年，フィラグリンの発現をコントロールするこ割を果たしている皮膚のタンパク質の 1 つが，フィとで AD の発症を抑制することができるかが検討さラグリンであるとされる。

れている。大塚らは，培養表皮細胞および 3 次元培

アトピー性皮膚炎（AD）は，慢性的なかゆみを養皮膚モデルを用いて約 1200 程度の化合物から伴う皮膚疾患である。発症には，遺伝的要因を背景フィラグリン遺伝子の発現を亢進する化合物をスクに環境因子が加わる多因子性疾患として考えられてリーニングし，その後 mRNA レベルだけでなく，2）いる 。従来，免疫学的異常が背景として考えられタンパク質レベルでもフィラグリンの産生を亢進すてきたが，2006 年に Palmer らが表皮組織のバリアる化合物を確認 11） している。また，この化合物が機能関連タンパク質であるフィラグリンの遺伝子変

マウス AD モデル（NC/Nga マウス）において AD

3）

異が AD 発症の重要な因子であることを報告 して症状の改善を示したことから，フィラグリン遺伝子以来，表皮組織のバリア機能について着目されていの発現亢進によって，AD 症状が改善することが示る。先行研究において，乃村らは日本の AD 患者に唆されている。

おけるフィラグリンの遺伝子異常を解析した結果，30％程度が遺伝子異常を持つことを報告

4）〜 7）

我々は，化粧品原料として用いられ，フィラグリしてンの産生促進効果が示唆されるサガラメエキスとおり，フィラグリンの異常は AD 発症と関連性が深フィラグリンの分解促進効果が示唆されるマンダリいといえる。また，アトピー性皮膚炎の発症を機ンオレンジ果皮エキスに着目してきた。サガラメエに，連鎖的にアレルギー疾患が生じるアレルギー

キスは，海藻のサガラメ（Eisenia arborea Areschoug）

マーチという言葉が近年よく知られるようになっから抽出されたエキスである。サガラメは，コンブた。アレルギーマーチは，乳幼児期に発症した AD科アラメ属の褐藻類で御前崎から紀伊半島までの狭に続き，食物アレルギー・気管支喘息・アレルギーい地域で水揚げされるものを指し，鳥羽市内では性鼻炎と子供の成長に従い連鎖的に様々なアレル「あらめ巻き」などの伝統料理として食されているギー性疾患が出現する。これらの原因は，皮膚バリ植物で，ヒト正常表皮細胞においてフィラグリンのア機能の障害によって，皮膚へのアレルゲン曝露産生効果が知られている 12）。マンダリンオレンジ果（経皮感作）が生じ，その後，食物アレルギーや

皮 エ キ ス は， マ ン ダ リ ン オ レ ン ジ（Citrus

AD の悪化につながると示唆されており，AD が食reticulata ）の果実の果皮から作られたエキスであ物アレルゲンへの感作や食物アレルギーの発症に先る。マンダリンオレンジは，ミカン属の常緑低木で

8）

白い花をつけ，秋から冬に食用となる果実をつけされるなど，AD が成長期におけるアレルギー性疾る。果皮が薄く手でむくことができるのが特徴であ患へ大きく関わっていることが示唆されてきた。

る。マンダリンオレンジ果皮エキスはヒト表皮角化

行するとされるシステマティックレビューが公表

フィラグリンは，上述したように，皮膚のバリア細胞においてカスパーゼ 14 産生促進作用が知られ機能に重要な役割を果たす角層のタンパク質であている 13）。この作用により，NMF の産生が示唆さる。角層には，約 10 層程度の脱核した細胞が重層れ，皮膚のバリア機能改善が見込まれている。

化しており，フィラグリンはその重要な構成要素で
9）

我々は以前，サガラメエキスおよびマンダリンオ

ある 。バリア機能としての役割の他にも，フィラレンジ果皮エキスについて，3 次元培養皮膚モデル

グリンは角層内における強度，柔軟性の維持，pHへ添加し，培養することでフィラグリン遺伝子の発の調整など，重要な役割を担っている。また，角層現が無添加の場合と比較して，有意に上昇したこと

内で，カスパーゼ 14 によってフィラグリンはそのを報告した 14）。さらに，クリームや乳液などにこれ一部が分解され，さらにカルパイン，ブレオマイシらを配合し，同様に皮膚モデルへ添加したところ

ン分解酵素による分解過程を経て，天然保湿因子フィラグリン遺伝子の発現上昇が認められていた。

（NMF）として作用している。NMF は，角層におそこで，本研究では，フィラグリンのタンパク質いて水分保持量を高め，pH を調整するバッファーレベルでの増加を確認するため，先行研究と同様作用により，細胞の正常分化を促進し，病原性細菌に，エキス原料そのものだけではなく，各エキスを10）のコロニー形成を阻止する役割を持っている 。

含む製剤の評価を 3 次元培養皮膚モデルへ添加する

診療と新薬・第 59 巻

第 5 号（2022 年 5 月）

53 （277）

Table 1 Relative ﬁlaggriprotein content ratio of each product（Control as 100％）
Item
Control
Sagarame extract 0.002％
Mixture of Sagarame extract 0.002％ and Mandarine orange peel extract 0.006％
Baby Lotion（involved Extract）
Baby Lotion（no Extract）
Baby Cream（involved Extract）
Baby Cream（No Extract）

Protein ratio

p-value（％）（vs Control）

100.0 ± 4.8
127.6 ± 5.8
150.0 ± 5.3
160.2 ± 5.0
100.4 ± 4.5
146.4 ± 5.1
100.9 ± 5.1

0.003＜ 0.001＜ 0.001
0.929＜ 0.0010.842−

ことによって実施し，ドットブロッティング法によの上部へ原料は 50 µL，製品は 0.1 g 添加し，72 時るフィラグリンの定量実験を行った。

間培養した。また，Control として，試験品の代わ2．方2-1．試りに PBS（−）50 µL を添加した。各試験区（コン法

トロールおよび各試験品）は，1 つの試験区で 3 個の皮膚モデルを用いた。培養終了後，PBS（−）で薬サガラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮エ

皮膚モデル表面を十分洗浄した。ヒト 3 次元培養皮

キスは，一丸ファルコス社製のものを用いた。3 次膚モデルを回収し，フィラグリンタンパク質の抽出

元培養皮膚モデルは，Mattek 社（クラボウ）の EPI-を行うまで− 80℃にて保存した。

ⓇⓇ200 を用いた。NucleoSpin RNA，PrimeScript RTⓇ

2-3．ヒト 3 次元培養皮膚モデルからのMaster Mix，SYBR Premix Ex Taq II（Tli RNaseH

フィラグリンタンパク質抽出およびPlus）（2X）は，タカラバイオ社のものを用いた。フィドットブロッティング法によるラグリンおよびハウスキーピング遺伝子の cDNA

フィラグリンタンパク質の定量は，タカラバイオ社のものを用いた。
製品評価には「ピジョン フィルベビー ベビー

ヒト 3 次元培養皮膚モデルは，0.5％ Triton-X100を用いて超音波処理破砕した。得られた細胞溶解液ピジョン株式会社）

は， ニ ト ロ セ ル ロ ー ス 膜（Bio-rad 製 ） に ブ ロ ッ

ベビークリーム」

ティングを行った。その後，ニトロセルロース膜をピジョン株式会社）を用いた。本剤は，室温で一晩乾燥させ，1％ウシアルブミン含有 PBS

サガラメエキス，マンダリンオレンジ果皮エキスに（−）を用いて 1 時間室温でブロッティングを行っ加えて保湿成分としてグリセリン，パルミチン酸エた。ブロッティング後は，0.1％ Triton-X100 含有

チルヘキシル，水添ナタネ油アルコール等を配合しPBS（−）を用いて，ブロッティング膜を洗浄した O/W 型製剤であり，皮膚の保湿効果を持続させた。その後，一次抗体として，抗ヒトフィラグリンるように保湿成分と油分量のバランスを工夫してい抗体（コスモバイオ社製）を 1：200 に希釈し，室る。さらに，着色料や香料，エタノールを含んでお温で 1 時間インキュベートを行った。さらに，二次らず，安全性にも配慮した製剤設計になっている。

抗体として，ヒストファインシンプルステインにて比較製品としてサガラメエキスおよびマンダリンオ

室温 1 時間でインキュベートを行った。その後，

レンジ果皮エキスを配合しない同成分のローション

0.1％ Triton-X100 含有 PBS（−）で洗浄を実施しとクリームも用いた。

た。 発 光 基 質 と し て は，Lumi-Light Western

ミルクローション」（発売元と「ピジョン（発売元

フィルベビー

2-2．3 次元培養皮膚モデルの培養

Blotting 基質（Thermo Fisher 製）を用い，ブロッヒト 3 次元培養皮膚モデル（Mattek，EPI-200）

ティング膜に添加を実施した。その後，発光強度をは， 添 付 の EPI-100-NMM 培 地 を 用 い て，37 ℃，

ImageQuant LAS 500 にて撮影し，Image Quant TL

CO2 5％雰囲気下の CO2 インキュベーターにて 18にて撮影画像を解析し，各タンパク質の抽出液のタ時間前培養した。その後，Table 1 に示した濃度でンパク質量で除したものをフィラグリン量として，調整した各試験品溶液をヒト 3 次元培養皮膚モデル

無添加のコントロール区と比較した。

54 （278）

診療と新薬・第 59 巻

180$$

***

160
Filaggrin production rate（％）

第 5 号（2022 年 5 月）

***
***

**

1401201008060＊＊：p<0.01, ＊＊＊：p<0.001 （vs Control）

40$$：p<0.01（Sagarameextract 0.002％ vsMixture of Sagarameextract 0.002％ andMandarine orange peel extract 0.006％）

200Control

123456Fig.1 Relative ratio of ﬁlaggrin protein（Control as 100％）2-4．統計処理

ンの皮膚内での増加に寄与する化合物について研究

測定結果は，平均値±標準偏差で表し，Controlを実施してきた。その結果，先行研究において，サとの比較を Student の t 検定で実施した。統計計算

ガラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮エキス

は，JMP 13.0（SAS 社製）を用いた。に，遺伝子レベルでのフィラグリンの発現促進を確3．結果認できた。また，本研究では実際にタンパク質レベルでの増加も確認でき，サガラメエキスおよびマンFig. 1 に Control を基準としたフィラグリンタン

ダリンオレンジ果皮エキスがフィラグリンの産生促パク質の相対比率を示した。原料の添加において進に寄与することが示された。AD の発症について

は，サガラメエキス単独およびサガラメエキスおよは，皮膚の乾燥が背景にあることが知られてきておびマンダリンオレンジ果皮エキスの混合物に，フィり 15），これまでに実施された AD 15） や老人性乾皮

ラグリンタンパク質の発現が Control と比較して有症 16） などのドライスキンの研究からも，乾燥した意に増加した。さらに，サガラメエキス単独とサガ

肌で角層水分量とともに角層アミノ酸量が低下する

ラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮エキスのことが報告 17）されている。アミノ酸は，NMF を構混合物を比較したところ，サガラメエキスおよびマ成する要素であると考えられ，通常は，フィラグリンダリンオレンジ果皮エキスの混合物方が有意にンの分解により供給されるものである可能性が高フィラグリンタンパク質の発現が増加した。また，い。これらのことは，フィラグリンはバリア機能の製品を用いた評価では，サガラメエキスおよびマン改善だけでなく，保湿にも重要な役割を担っている

ダリンオレンジ果皮エキスを配合したローション，と考えられる。また，AD の発症と皮膚の保湿やバクリームいずれの製品においても Control と比較しリア機能に強い関連があることが示されており，乳て有意にフィラグリンタンパク質が増加した。一幼児における保湿剤の使用によって，AD の発症リ方，サガラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮スクを低減させることが示されている。また，ADエキスを配合していないローションとクリームではの発症リスクを下げることにより，アレルギーマー

Control と比較して有意な差は認められなかった。

チの抑制にも寄与することが示唆されている。さら4．考察に近年，「スキンケアでは保湿成分が配合されている保湿剤の方が効果的である」という提案もなされ我々は，フィラグリンの皮膚のバリア機能に重要ており，油分と保湿成分をバランスよく含んだ保湿な役割や AD 発症との関連性に着目し，フィラグリ剤の効果がさらに注目されることが考えられる 17）。

診療と新薬・第 59 巻

今回，先行研究の結果を受け，フィラグリン遺伝子の発現を上昇させたサガラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮エキスのフィラグリンタンパク質

第 5 号（2022 年 5 月）

55 （279）

Date．日本香粧品学会誌 38：22-27，2014．
2）森実

真：アトピー性皮膚炎と表皮角化細胞産生カリ

クレイン関連ペプチダーゼ．岡山医学会雑誌 131：1721，2019．の発現への影響について検討した。本結果から，遺3）Palmer CN, Irvine AD, Terron-Kwiatkowski A, Zhao Y,伝子の発現と同様に，サガラメエキスにフィラグリ

Liao H, Lee SP, Goudie DR, Sandilands A, Campbell

ンタンパク質の増加も認められた。さらに，サガラ

LE, Smith FJ, O'Regan GM, Watson RM, Cecil JE, Bale

メエキスとマンダリンオレンジ果皮エキスを組み合

SJ, Compton JG, DiGiovanna JJ, Fleckman P, Lewis-

わせることで，サガラメエキス単体と比較し，フィJones S, Arseculeratne G, Sergeant A, Munro CS, El
Houate B, McElreavey K, Halkjaer LB, Bisgaard H,ラグリンタンパク質の発現が有意に増加した。マンMukhopadhyay S, McLean WH: Common loss-of-

ダリンオレンジ果皮エキスは，均一な角質層形成を

function variants of the epidermal barrier protein

促進することが分かっている13）
18）。また，フィラグリンは，角化とともにプロフィラグリンから切り出される 19）。そのため，プロフィラグリンの産生だけ

filaggrin are a major predisposing factor for atopic
dermatitis. Nat Genet 38: 441-446, 2006.
4）Nomura T, Sandilands A, Akiyama M, Liao H, EvansAT, Sakai K, Ota M, Sugiura H, Yamamoto K, Sato H,

でなく，角化の促進や，ターンオーバーの正常化に

Palmer CN, Smith FJ, Mclean WH, Shimizu H: Unique

よって，フィラグリン量の増加につながることが考mutations in the ﬁlaggrin gene in Japanese patients with

えられる。今回，マンダリンオレンジ果皮エキスのichthyosis vulgaris and atopic dermatitis. J Allergy Clin

配合によって，角化の促進や，ターンオーバーの正常化の相乗的な効果があったことが，フィラグリン

Immunol 119: 434-440, 2007.
5）Nomura T, Akyama M, Sandilands A, Nemoto-Hasebe I,Sasaki K, Nagasaki A, Ota M, Hata H, Evans AT, Palmerのタンパク質量が増加した一因と考える。また，こCN, Shimizu H, McLean WH: Specific filaggrin

れらの両エキスを配合した製品についても，先行研

mutations cause ichthyosis vulgaris and significantly

究同様に本研究においても確認したところ，フィラ

associated with atopic dermatitis in Japan. J Invest

グリンのタンパク質量を増加させた。これらの原料の安全性については，皮膚一次刺激性・感作性試験

Dermatol 128: 1436-1441, 2008.
6）Nomura T, Akiyama M, Sandilands A, Nemoto-Hasebe
I, Sasaki K, Nagasaki A, Palmer CN, Smith FJ, McLeanなどにより確認されており，乳幼児などバリア機能WH, Shimuzu H: Prevalent and rare mutations in theの未熟な方への使用も問題ないと考えられる。よっgene encoding filaggrin in Japanese patients withて，先行研究および本研究の結果から，両エキスをichthyosis vulgaris and atopic dermatitis. J Invest

配合した製品は乳幼児などのバリア機能の未熟な方

Dermatol 129: 1302-1305, 2009.
7）乃村俊史：フィラグリンをターゲットにしたアトピーへの保湿効果やバリア機能の維持についても期待で性皮膚炎の新規治療法の開発．Cosmetology 24：124-

き，AD 発症の抑制やアレルギーマーチの抑制につ128，2016．

ながる効果的なスキンケア製品である可能性が示唆された。これは，化粧品の効能効果で認められている肌に外側からうるおいを与える保湿効果だけでな

8）Tsakok T, Marrs T, Mohsin M, Baron S, du Toit G, TillS, Flohr C: Does atopic dermatitis cause food allergy? Asystematic review. J Allergy Clin Immunol 137: 10711078, 2016.

く，フィラグリンのタンパク質産生を促進し，角層9）Horimukai K, Morita K, Narita M, Kondo M, Kabashima

内から肌本来の機能を高めることで，保湿効果やバS, Inoue E, Sasaki T, Niizeki H, Saito H, Matsumoto K,

リア機能の維持に役立つことが示された。今後は，Ohya Y: Transepidermal water loss measurement during

本研究の結果をもとに，ヒトでの検証が進むことでサガラメエキスおよびマンダリンオレンジ果皮エキスの機能についてより多くの知見が得られることがinfancy can predict the subsequent development ofatopic dermatitis regardless of filaggrin mutations.
Allergol Int 65: 103-108, 2016.
9）大塚篤司，椛島健治：専門医のためのアレルギー学講
座 1．バリア機能と皮膚免疫．アレルギー 64：1189-

期待される。

1195，2015．
5．参 考 文 献10）Weidinger S, Illig T, Baurecht H, Irvine AD, Rodriguez1）秋山真志：教育セミナー：ドライスキンのサイエンス

E, Diaz-Lacava A, Klopp N, Wagenpfeil S, Zhao Y, Liao

〜原点から最前線まで〜皮膚バリアの基礎知見 Up-to-H, Lee SP, Palmer CN, Jenneck C, Maintz L, Hagemann56 （280）

診療と新薬・第 59 巻

第 5 号（2022 年 5 月）

T, Behrendt H, Ring J, Nothen MM, McLean WH,15）Tanaka M, Okada M, Zhen YX, Inamura N, Kitano T,Novak N: Loss-of-function variations within the ﬁlaggrin

Shirai S, Sakamoto K, Inamura T, Tagami H: Decreased

gene predispose for atopic dermatitis with allergic

hydration state of the stratum corneum and reduced

sensitizations. J Allergy Clin Immunol 118: 214-219,

amino acid content of the skin surface in patients with2006.

seasonal allergic rhinitis. Br J Dermatol 139: 618-621,

11）Otsuka A, Doi H, Egawa G, Maekawa A, Fujita T,

1998.

Nakamizo S, Nakashima C, Nakajima S, Watanabe T,16）Horii I, Nakayama Y, Obata M, Tagami H: Stratum

Miyachi Y, Narumiya S, Kabashima K: Possible newcorneum hydration and amino acid content in xerotic

therapeutic strategy to regulate atopic dermatitis
through upregulating ﬁlaggrin expression. J Allergy Clin
Immunol 133: 139-146, 2014.
12）一 丸 フ ァ ル コ ス： 新 原 料 紹 介．FRAGRANCEJOURNAL 37：111-112，2009．
13）桝谷昇明，カザール ボロン ビスワス，小島弘之，伊藤skin, Br J Dermatol 121: 587-92, 1989.
17）Boralevi F, Saint Aroman M, Delarue A, Raudsepp H,Kaszuba A, Bylaite M, Tiplica GS: Long-term emollient
therapy improves xerosis in children with atopic
dermatitis. J Eur Acad Dermatol Venereol 28: 14561462, 2014.

賢一：マンダリンオレンジエキスの表皮構造強化機能

18）杉浦義正，臼井将勝，宮田昌明：マウス耳介浮腫に対及び，角質透明感改善作用．第 40 回日本香粧品学会講する褐藻サガラメ由来の脂溶性成分による抑制効果．

演要旨集 p90，2015．

水産大学校研究報告 65：245-250，2017．

14）神保希望，植松史帆，木内めぐみ，黒河正司，岡沢唯19）藤田宏志，片桐千華，太田直美，和田元次，大田正弘，香，武藤友瑛，竹田竜嗣：サガラメエキスおよびマン

平尾哲二：乾燥によるフィラグリンとアミノ酸の減少

ダリンオレンジ果皮エキスを配合した化粧品によるを防ぐ Palo Azul．日本化粧品技術者会誌 37：84-91，

フィラグリン遺伝子の発現促進効果の検証．診療と新2003．

薬 57：239-246，2020．

診療と新薬・第 59 巻

第 5 号（2022 年 5 月）

57 （281）Veriﬁcation of the Eﬀect of Cosmetics Containing Sagarame Extract andMandarin Orange Peel Extract on Filaggrin Protein Production
Shiho UEMATSU 1）／ Ryuji TAKEDA 2）
1）Pigeon Home Products Corporation: Fuji City Ukishima Industrial District 2608-31 Nakazato Fuji-City, Shizuoka 417-0826, Japan
2）Kansai University of Welfare Sciences Department of Nutritional Sciences for Well-being, Faculty of Health Sciences for Welfare:
Asahigaoka 3-11-1, Kashiwara-City, Osaka 582-0026, JapanAbstract
Filaggrin is known as a protein in the stratum corneum that plays an important role in the skinbarrier function. We have conﬁrmed that sagarame extract and mandarin orange peel extract
promote ﬁlaggrin gene expression. In this study identiﬁed the eﬀect of each test article, i.e.,
Sagarame and mandarin orange peel extracts, either alone or in combination, on ﬁlaggrin protein
expression using a three-dimensional cultured skin model by dot blotting method. In addition,these extracts were also added to the lotion and cream products and compared to the products
without both extracts. As a result, addition of the sagarame extract increased the amount ofﬁlaggrin protein compared with the control after 72h. A signiﬁcant increase in the amount ofﬁlaggrin was also observed in the mixture of the combination of sagarame extract and mandarinorange peel extract. Furthermore, signiﬁcant eﬀects were also observed in the lotion and creamproducts containing the combination both extracts. On the other hand, there was no signiﬁcantdifference in the products without neither extracts compared to the control. These results
indicate that products containing both extracts not only have the moisturizing eﬀect, but also
support maintain the moisturizing eﬀect and barrier function by increasing ﬁlaggrin protein. It issuggested that the promotion of ﬁlaggrin protein expression can be expected to inhibit the onsetof atopic dermatitis（AD）and allergic march. Although we need further studies on human, theproducts containing both extracts are expected to be eﬀective skin care products for not only
infants but also other people with immature barrier functions.
Key words: Filaggrin, skin barrier function, sagarame（Eisenia arborea ）extract, mandarinorange peel extract, allergy march