愛知学院大学薬学会誌 第１１巻

エルロチニブとトラメチニブの併用投与はcis-Apc/Smad4 マウスの腸管腫瘍形成を抑制する
津田都子

愛知学院大学 薬学部【概要】

生体有機化学講座
が腺がん形成や浸潤に対する抑制効果はほとんど認められなかった(4)。

2017 年 9 月、パシフィコ横浜で開催された「第76 回 日本癌学会学術総会」に参加し、以下の卒

本研究では、エルロチニブとトラメチニブの併業研究の一部をポスター発表した。

用が cis-Apc/Smad4 複合変異マウスの腸管腫瘍形成を抑制する可能性について検証した。

【背景・目的】日本における死因の第一はがんであり、未だ増【方法】

加傾向である。近年では食の欧米化に伴い大腸が1.使用動物と薬剤んによる死因が男女とも増加しており、男性では13 週齢前後の雌の cis-Apc/Smad4 マウス３位、女性では１位であることが報告されている。

（C57BL/6N）に、トラメチニブ（1 mg/kg/day）と大腸がんの治療の第一は外科的切除であり、浸エルロチニブ（50 mg/kg/day）または対照群として潤・転移のない場合、予後は極めて良好である。

溶媒（vehicle 投与）を 2 週間または 8 週間経口投

一方、浸潤・転移のある大腸がん患者は予後が極与した。

めて悪いことから、浸潤・転移を標的とした治療法の開発が急務である。

2.腸管腺がん形成数の測定

細胞の増殖や成長において上皮増殖因子受容体小腸及び大腸を切除後、PBS で洗浄し、長軸方（EGFR）経路や分裂促進因子活性化タンパク質向に切開した。10%ホルマリン-PBS で一晩固定後、キナーゼ（MAPK）経路が重要な役割を果たして腺がんの数と大きさを実体顕微鏡下で測定した。

おり、この経路の阻害薬は様々ながん治療に使用されている。EGFR の過剰発現や活性化変異が高3.細胞増殖の測定頻度で確認されていることから、肺がんではEGFR チロシンキナーゼ阻害薬であるゲフィチニブやエルロチニブが既に使用されている視野（400 倍）あたりの BrdU（ブロモデオキシウリジン）陽性腺がん細胞数を算出した。

（1）

。また

悪性黒色腫では BRAF 遺伝子変異が高頻度で確認

4.タンパク質発現解析

されており、BRAF 阻害薬ダブラフェニブや MEK阻害薬トラメチニブなど MAPK 経路を標的とした治療が行われている（2）

回腸腺がん及びその周辺の正常組織を採取し、ウエスタンブロット法により評価した。

。

p-EGFR(Y1068)、 EGFR、 p-c-Fos (S32)、 c-Fos、

家族性大腸ポリープ症モデルマウスである Apc

COX2、p-ERK1/2 (T202/Y204)、β-ACTIN に対す遺伝子変異マウスに EGFR 阻害薬エルロチニブまる抗体を使用した。

たは MEK 阻害薬トラメチニブをそれぞれ投与したところ、腸管腫瘍形成を有意に抑制した(3)。

5.組織学的解析

浸潤性大腸がんにおける EGFR 経路や MAPK 経

ホルマリン固定パラフィン包埋組織切片を用い路の役割を検証するため、浸潤性大腸がんモデル

ヘマトキシリン&エオジン（HE）染色及び免疫染マウスである cis-Apc/Smad4 複合変異マウスにエ色（p-EGFR、p-ERK1/2、p-c-Fos）を行った。

ルロチニブまたはトラメチニブを単独で投与した- 32 -

と MAPK 経路からそれぞれ独立して制御を受け6.腺がん浸潤深度の評価
2 mm 以上の腸管腺がん組織切片（4 µm）を 200ている可能性が示唆された。

µm 毎に回収し、HE 染色を行い、腺がん浸潤先端さらに、エルロチニブとトラメチニブを 8 週間が最も深く到達した領域を、粘膜、粘膜下層、粘併用投与した cis-Apc/Smad4 マウスの腸管腺がん膜筋板、漿膜に分類・評価した。の浸潤能を評価した。これまでの研究により浸潤深度は腸管腺がんの大きさに比例し、2 mm 以上【結果】の腺がんで確実に浸潤が確認できることから、各エルロチニブとトラメチニブの併用投与は群 2 mm 以上の腺がんを浸潤の評価対象とした（5）。

cis-Apc/Smad4 マウスの 1.5 mm 以上の腺がん（ポエルロチニブとトラメチニブの併用投与群及びコリープ）数をコントロール群（vehicle 投与）と比ントロール群の腸管腺がんは共に 30%以上が最もべて有意に減少させた。

深い漿膜にまで浸潤先端が到達しており、粘膜かBrdU 染色において、コントロール群（vehicleら漿膜へ向かう浸潤様式に有意な差は認められな投与）と比較して、エルロチニブとトラメチニブかった。の併用投与によって BrdU 陽性細胞数が有意に減少しており、EGFR と MAPK 経路の同時阻害は腸【考察】

管腫瘍細胞の増殖を抑制させることが示唆された。
また、ウエスタンブロット法を用いてエルロチニブとトラメチニブの長期間の併用により腺がん形成数が有意に抑制されたことから、

cis-Apc/Smad4 マウスの回腸正常部及び腸管腺がこの併用療法は浸潤性大腸がん治療の選択肢の一んの EGFR、ERK のリン酸化状態の検証を行ったつとなる可能性がある。また、エルロチニブとトところ、EGFR のリン酸化は腺がん組織においてラメチニブの併用投与は c-Fos の発現を抑制した

増大し、ERK のリン酸化では減少が認められた。

ことから、これらを介して腺がん形成を抑制した

そしてこれらの活性化はエルロチニブとトラメチと考えられる。

ニブの併用投与によって強力に抑制された。また

免疫染色によって EGFR 経路と MAPK 経路は腫MAPK 経路によって制御される転写因子であり、瘍内で別々に活性化がみられたことから、それぞがん遺伝子産物でもある c-Fos は正常組織に比べれを抑制することで強力に腫瘍形成を抑制できる腺がんでのタンパク及びリン酸化レベルともに増ことを示唆している。

大しており、エルロチニブとトラメチニブの併用

これらの結果から、EGFR 阻害薬と MEK 阻害薬投与によりいずれも減少した。の併用は大腸がん治療における選択肢の 1 つとな

さらに、エルロチニブ及びトラメチニブの単独るかもしれないことが示唆された。

投与はコントロールと比べ c-Fos タンパクレベル及びリン酸化レベルを減少させたが、併用により【参考文献】

さらなる減少が認められたことから、EGFR の活（1） Sharma SV, et al. Epidermal growth factor

性化も c-Fos の発現に関与しており、腺がん形成

receptor mutations in lung cancer. Natureを促進させる可能性が示唆された。

Reviews cancer. 2007. 7:169-181.

cis-Apc/Smad4 マウスの腸管腺がんにおける（2） Flaherty KT, et al. Combined BRAF andEGFR 経路及び MAPK 経路活性化細胞及びリン酸

MEK Inhibition in Melanoma with BRAF

化 c-Fos 発現細胞を、EGFR、ERK1/2、c-Fos のリ

V600 Mutations. N Engl J Med. 2012. 367:

ン酸化抗体を用いた免疫染色により検証した。そ1694-1703.の結果、リン酸化 EGFR、リン酸化 ERK1/2、リン（3） Fujishita T, et al. Antitumor activity of the

酸化 c-Fos はそれぞれ腺がん組織における陽性細MEK inhibitor trametinib on intestinal polyp胞の局在と異なることから、cis-Apc/Smad4 マウス

formation in Apc716 mice involves stromalの腸管腺がんにおける c-Fos の発現は EGFR 経路COX2. Cancer Sci. 2015. 106:692-629.（未発33表データ）（4） Fujishita T, et al.Tumor microenvironment
confers mTOR inhibitor resistance in invasive
intestinal adenocarcinoma. Oncogene. 2017.
(online publication)（5） Kitamura T, et al. SMAD4-deficient intestinal
tumors recruit CCR1+ myeloid cells that
promote invasion. Nat Gene. 2007.
39:467-475.
【感想】
卒業研究を通して多くのことを学ぶことができ、今回の日本癌学会での発表は私にとって大変貴重な経験でした。愛知学院大学薬学会の援助により学会へ参加させて頂き、様々な方の研究発表や講演を聴くことでがん研究の最先端について触れ、これからのがん治療についての知識を深めることができ、とても有意義な時間を過ごすことができたと思います。
最後に、卒業研究及び学会発表を行うにあたり、多くの先生方にご指導をいただき、感謝の気持ちでいっぱいです。

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