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CHIRALPAK®

IA-3 / IB-3 / IB N-3 / IC-3 / ID-3 / IE-3 / IF-3 / IG-3 / IH-3 / IJ-3 / IK-3 / IM-3 / IN-3

カラム 取扱説明書

ご使用の前に必ずお読み下さい
カラムの詳細名CHIRALPAK® IA-3

CHIRALPAK® IB-3/IB N-3

CHIRALPAK® IC-3

CHIRALPAK® ID-3Amylose
tris(3,5-dimethylphenylcarbamate)

Cellulosetris(3,5-dimethylphenylcarbamate)

Cellulosetris(3,5-dichlorophenylcarbamate)

Amylosetris(3-chlorophenylcarbamate)

称不斉
識 別 剤

OR
*OR O nRO

ORCH3O*R:OO*CH3NHsilica-gel

名n*

R:

*N
HO

OR

RO

CH3silica-gel

ORClOOn*

R:

O*ONH

*OR O n

RO

R:

ON
HCl

Cl

silica-gel

silica-gel

CHIRALPAK® IE-3

CHIRALPAK® IF-3

CHIRALPAK® IG-3

CHIRALPAK® IH-3Amylosetris(3,5-dichlorophenylcarbamate)

Amylosetris(3-chloro-4-methylphenylcarbamate)

Amylosetris(3-chloro-5-methylphenylcarbamate)

Amylosetris[(S)-α-methylbenzylcarbamate]

称

不斉
識 別 剤

OR
**
OR O nRO

ORClO
R:OO

*NHCl

称

不斉
識 別 剤

OROClOORROn

*

R:

CH3O

*

N
H

OR

CH3*

OR O

ROn

R:

OO

*N
H

ROCl

silica-gel

silica-gel

silica-gel

名OR

RO

OR

CH3O

CH3O

*
OR O nN
H

R:

silica-gel

CHIRALPAK® IJ-3

CHIRALPAK® IK-3

CHIRALPAK® IM-3CHIRALPAK® IN-3Cellulose
tris(4-methylbenzoate)

Cellulosetris(3-chloro-5-methylphenylcarbamate)

Cellulosetris(3-chloro-4-methylphenylcarbamate)

Amylosetris(5-chloro-2-methylphenylcarbamate)

ORO
*

ORRO

ORO

On

*

R:

ROO

OR

CH3silica-gel

ORCH3O
*

*nR:

OO

*
N
HORROClOROClOn*

R:

CH3O

*RO粒 子 径3µm

カ ラ ム
エ ン ド

ウォーターズタイプ

ClON
H

silica-gel

silica-gel

ORn*

R:

Osilica-gel

NH

CH3

出荷時のn-ヘキサン / 2-プロパノール= 90 / 10 (v/v)
封入溶媒(カラムは全て出荷前に品質検査を実施しています。 検査条件と検査結果およびカラムロット番号は、同封の品質検査レポートをご参照下さい。)
この取扱説明書は、本カラムについてのみ有効です。他のカラムには絶対に適用しないで下さい。
下記のガイドラインに従ってお使い頂ければ、本カラムを長期間安定してお使い頂けます。

カラム使用条件
通液方向

カラムのタグに明示されています。

圧力①カラムを長くお使い頂くため、30MPa を超えない圧力でのご使用をお勧めします。

温度範囲0 ～ 40℃(順相移動相),5 ～ 40℃(pH＜7 の逆相系移動相), 5 ～ 25℃(pH≧7 の逆相系移動相)pH②(逆相移動相)①②③

pH 2.0 ～ 9.0

圧力とは、カラム自体にかかる背圧の最大値のことです。この背圧は、カラムを HPLC 装置に接続し、通液した場合の系内全体の圧力から、同条件でカラムを接続しない場合の系内全体の圧力を差し引いた値になります。
pH 7.0 以上でご使用になる時は、カラム温度は 25℃以下にして下さい。またカラム保護のため必ずガードカートリッジをご使用ください。
一般的な流量範囲は、カラムの内径が 4.6mm の場合、0.5ml/min～3ml/min となります。それ以外のサイズの場合は、末尾の換算表を参考に、カラムの断面積比によって流速を調節して下さい。

-1-

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重要注意事項
 本取扱説明書の内容は、他のダイセルのキラルカラムには適用できません。
 カラムに強い衝撃を与えたり、カラムを分解しないで下さい。
 本カラムの使用に関するご質問、あるいはカラムに関するトラブルについては、キラルヘルプデスク(0120-780-104)または末尾記載の連絡先までお問い合わせ下さい。
 本書の内容に従いカラムを取扱うことで、カラムを長くお使い頂くことができます。

<移動相について>耐溶剤型カラムには、一般にシリカゲルベースの HPLC 用カラムに使用できる移動相であれば、どのような移動相でもご使用いただけます。例えば、アルカン／アルコールの混合系及びアルカンとｔ-ブチルメチルエーテル(MTBE), ハロゲン系溶媒(ジクロロメタン等)などの溶媒の混合系で、より良い分離を得られることが多いようです。
また耐溶剤型カラムは逆相系移動相(水系移動相)も使用できます。一般的な水(塩水溶液)／アセトニトリル, 水(塩水溶液)／アルコールの混合系に加え、水と相溶するテトラヒドロフラン(THF), アセトンのような溶媒も移動相としての使用が可能です。有機溶剤系(順相)移動相から水系(逆相)移動相へ、あるいは水系(逆相)移動相から有機溶剤系(順相)移動相へ置換する場合は、必ず相溶する溶媒(例えばエタノール, 2-プロパノールなど)を介して置換を行ってください。

【順相系移動相の場合】
推奨移動相条件

A 移動相

下表 1 及び 2 に、移動相条件を最適化する際に指針となる情報をまとめました。ハロゲン系溶媒, MTBE, トルエンなど溶出強度の弱い溶媒は、保持が弱い化合物に対して単独で使用することで良い結果が得られることがあります。また THF や酢酸エチルなど溶出強度の強い溶媒の場合には、一般にアルカンとの混合系で使用する方が良い結果が得られることがあります。

【スクリーニング】
様々な化合物の分析条件を決定するためには、まず下記の第一推奨スクリーニング溶媒からお試し下さい。第一推奨スクリーニング溶媒で分離が得られなかった場合や、第一推奨スクリーニング溶媒では化合物が溶解しにくい場合は、第二推奨スクリーニング溶媒をお試し下さい。
表 1. 標準スクリーニング条件
第一推奨スクリーニング溶媒
一般的な初期条件(v/v)

アルカン①/2-プロパノール80/20

アルカン①/エタノール80/20

推奨する組成範囲(v/v)

99/1 ~ 50/50

99/1 ~ 50/50

MTBE②/エタノール

アルカン①/ CH2Cl2③98/250/50

60/40 ~ 100/085/15 ~ 0/100① アルカン類: n-ヘキサン, iso-ヘキサン, n-ヘプタンサンプルによってはアルカンの種類によって多少分離が異なることがあります。
② 比較的溶出力の弱い MTBE 移動相を用いた場合、エタノールを添加して保持の強さやピーク形状の調節により、良好な分離が得られることがあります。逆に極端に保持の弱い化合物に関してはアルカンと MTBE の混合溶媒系が好適な場合があります。
③ クロロホルム、ジクロロメタンなど比較的溶出力の弱い移動相を使用する場合は、アルコール(エタノール, メタノール, 2-プロパノール)を 1～5 %程度添加して保持の強さやピーク形状を調節することによって、より良好な分離が得られることがあります。サンプルの保持が強すぎる場合には、ジクロロメタンに対して～20%のエタノールを添加することが効果的です。
表 2. その他のスクリーニング条件⑥
第二推奨
スクリーニング溶媒

アルカン①/THF

アルカン①/酢酸エチル④アルカン/CHCl3

アセトニトリル/
アルコール類⑤

メタノール/別のアルコール類

一般的な初期条(v/v)
推奨する組成範囲(v/v)

70/30
95/5 ~ 50/50

50/50
99/1 ～ 50/50

30/70
60/40 ～ 0/100

100/0
100/0 ～ 0/100

100/0
100/0 ～ 0/100④ 保持の強い化合物の場合、アルコール (エタノール, メタノール, 2-プロパノール) または THF を酢酸エチルに添加することによって溶出時間を短くすることができます。
④ アルコール類: メタノール, エタノール, 2-プロパノール⑤ 移動相の選択(特にアセトン、酢酸エチル、トルエン、高濃度のクロロホルム等)とサンプルの構造によっては、UV 検出器による検出が困難になる場合があります。その場合は、RI 検出器や蒸発光散乱検出器(ELSD)などをご使用下さい。

B

添加剤
塩基性試料
ジエチルアミン (DEA), エチレンジアミン (EDA)
モノエタノールアミン (MEA), n-ブチルアミン (BA)
通常 0.1% (最大 0.5%)

酸性試料
トリフルオロ酢酸 (TFA), 酢酸, ギ酸 (FA)
通常 0.1% (最大 0.5%)

順相系移動相を用いて酸性試料を分析する際にはトリフルオロ酢酸や酢酸等を、また同様に塩基性試料を分析する際にはジエチルアミン(DEA)やエチレンジアミン(EDA), モノエタノールアミン(MEA)等を、それぞれ 0.1%程度移動相に添加して分析して下さい。コーティ
ング型カラムと異なり、EDA や MEA の使用が DEA よりも高い効果を得ることがしばしばあります。
但し、EDA は DEA に比べて極性の低い移動相と混合しにくいので、2%程度のエタノール又はメタノールを併せて用いると、移動相の二層分離を防止することができます。

-2-

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カラム洗浄及びカラムリセット条件
多糖誘導体キラルカラムの分離特性は、多糖の高次構造に依存します。移動相や温度条件によってはこの高次構造が変化することがあり、そのような条件下で長時間使用されたカラムでは、それ以前の分離が再現できなくなる可能性があります。このような現象が見られた場合には、下記の手順に従ってカラム分離特性の"リセット"(出荷時の状態に戻す)を行って下さい。また下記の手順はカラムの洗浄条件としてもお使い頂けます(但し、下記の溶媒に対する試料又は不純物の溶解度が低い場合には、あらかじめそれらの溶解度が高い移動相を数時間～十数時間通液した後、下記の手順を実施して下さい)。

 塩基性が非常に強い試料、移動相、又は添加剤は、担体であるシリカゲルにダメージを与える可能性が高いので、ご使用をお控え下さい。
CHIRALPAK® IA-3 / ID-3 / IF-3 の場合• エタノールを 0.5 ml/min で 30 分通液した後、N,N-ジメチルホルムアミド(DMF)を 0.4 ml/min で 240 分通液して下さい。
• エタノールを 0.05 ml/min で 600 分通液した後、n-ヘキサン / 2-プロパノール = 90 / 10 (v/v) を 0.5 ml/min で 60 分以上通液して十分平衡化した後、別紙の品質検査レポートと同じ分析条件にてカラムの分離性能をチェックし、出荷時と同等のクロマトグラムが得られるかどうか確認して下さい。

CHIRALPAK® IE-3 / IH-3 / IN-3 の場合• エタノールを 0.5 ml/min で 30 分通液した後、N,N-ジメチルホルムアミド(DMF)を 0.3 ml/min で 180 分通液して下さい。
• エタノールを 0.3 ml/min で 50 分通液した後、n-ヘキサン / 2-プロパノール = 90 / 10 (v/v) を 0.5 ml/min で 60 分以上通液して十分平衡化した後、別紙の品質検査レポートと同じ分析条件にてカラムの分離性能をチェックし、出荷時と同等のクロマトグラムが得られるかどうか確認して下さい。

CHIRALPAK® IB-3 / IB N-3 / IC-3 の場合• 酢酸エチルを 1.0 ml/min で 30 分通液して下さい(添加剤を含む移動相をご使用になっていた場合は、2 時間以上通液して下さい)。
• カラムを装置から取り外し、両端にキャップをして 48 時間以上放置して下さい。
• n-ヘキサン / 2-プロパノール = 90 / 10 (v/v) を 0.5 ml/min で 60 分以上通液して十分平衡化した後、別紙の品質検査レポートと同じ分析条件にてカラムの分離性能をチェックし、出荷時と同等のクロマトグラムが得られるかどうか確認して下さい。

CHIRALPAK® IG-3 / IK-3 の場合• 酢酸エチルを 1.0 ml/min で 60 分通液して下さい(添加剤を含む移動相をご使用になっていた場合は、2 時間以上通液して下さい)。
• n-ヘキサン / 2-プロパノール = 90 / 10 (v/v) を 0.5 ml/min で 60 分以上通液して十分平衡化した後、別紙の品質検査レポートと同じ分析条件にてカラムの分離性能をチェックし、出荷時と同等のクロマトグラムが得られるかどうか確認して下さい。

CHIRALPAK® IJ-3 の場合• エタノールを 0.5 ml/min で 30 分通液した後、ジクロロメタンを 0.4 ml/min で 240 分通液して下さい。
• エタノールを 0.05 ml/min で 600 分通液した後、n-ヘキサン / 2-プロパノール = 90 / 10 (v/v) を 0.5 ml/min で 60 分以上通液して十分平衡化した後、別紙の品質検査レポートと同じ分析条件にてカラムの分離性能をチェックし、出荷時と同等のクロマトグラムが得られるかどうか確認して下さい。

CHIRALPAK® IM-3 の場合• MTBE を 1.0 ml/min で 60 分通液して下さい(添加剤を含む移動相をご使用になっていた場合は、2 時間以上通液して下さい)。
• エタノールを 0.05 ml/min で 100 分通液した後、n-ヘキサン / 2-プロパノール = 90 / 10 (v/v) を 0.5 ml/min で 60 分以上通液して十分平衡化した後、別紙の品質検査レポートと同じ分析条件にてカラムの分離性能をチェックし、出荷時と同等のクロマトグラムが得られるかどうか確認して下さい。

上記の手順でカラムが十分リセットされなかった場合は、再度上記の手順を繰り返して下さい。
(注: 上記の流速は、カラムの内径が 4.6 mm の場合のものです。それ以外のサイズの場合は、末尾の換算表を参考にカラムの断面積比によって流速を調節して下さい)

カラム保存条件
 カラムを 1 週間以上ご使用にならない場合には、エタノールに置換して保存して下さい。ヘキサン等脂肪族炭化水素系の移動相をお使いの場合は、n-ヘキサン / 2-プロパノール = 90 / 10 (v/v) にて保存して頂いても結構です。
 塩基性や酸性の添加剤をお使いになられた場合、又は移動相に塩を加えてお使いになられた場合には、使用後速やかに添加剤や塩を含まない移動相にて置換して下さい。

【逆相系移動相の場合】
推奨移動相条件

A移動相水溶液①

酸性試料

中性試料

塩基性試料④ギ酸水溶液 pH 2.0

水

DEA で pH 9.0 に調整した 20mM NH4HCO3 水溶液

有機溶媒②CH3CN, MeOH, EtOH, IPA, THF

標準的な移動相組成③水溶液 / 有機溶媒 = 60 / 40

DEA：ジエチルアミン, NH4HCO3：炭酸水素アンモニウム, CH3CN：アセトニトリル, MeOH：メタノール
EtOH：エタノール, IPA：2-プロパノール, THF：テトラヒドロフラン-3-①

Imm3NR004.03J
上記移動相で充分な分離が得られない場合には下記の水溶液をお試し下さい。
酸性試料（両性試料）
50～100mM リン酸緩衝液
リン酸水溶液②③

塩基性試料pH 2.0

pH 2.020mM ホウ酸緩衝液

pH 9.020mM リン酸緩衝液pH 8.0

リン酸で pH 2.0 に調整した 100mM KPF6
100mM KPF6（または NaPF6）水溶液（または NaPF6）水溶液
両性試料に関してはリン酸で pH2.0 に調整した 100mM KPF6（または NaPF6）水溶液をお試し下さい。
ただし、塩基性の強い両性試料の場合には 100mM KPF6（または NaPF6）水溶液をお試し下さい。
一般に、有機溶媒の溶出力は THF, アセトニトリル, 2-プロパノール, エタノール, メタノールの順です。
有機溶媒としてアルコールを使用した場合、アセトニトリルに比べて背圧が高くなりますのでご注意下さい。
カラム性能を劣化させる恐れがありますので表記以外の有機溶媒をご使用にならないで下さい。
移動相は、ご使用する前に 0.5µm 程度の多孔質メンブレンフィルターで濾過して下さい。
移動相は、水溶液とアセトニトリルの混合液(組成比 60/40 (v/v))から検討を始めることをお勧めします。
試料の溶出時間を調節したい場合は、移動相の組成比を調整して下さい。
カラム温度を下げると、保持時間が長くなり分離係数が向上する場合があります。
有機溶媒は下表の範囲でご使用いただけますが、移動相の有機溶媒組成比が高くなると塩が析出しカラムの詰りの原因となります。
水溶液 / 有機溶媒
90 / 10④～0 / 100

シリカゲルの劣化を避けるため、強塩基性水溶液 (pH＞9.0)は使用しないで下さい。
pH 7.0 以上でご使用になる時は、カラム温度は 25℃以下にして下さい。またカラム保護のため必ずガードカートリッジをご使用ください。
塩基性が非常に強い試料は、シリカゲルを劣化させる恐れがあります。

試料の調製


試料は可能な限り移動相に溶かし、0.5µm 程度の多孔質メンブレンフィルターで濾過してからご使用下さい。

カラムの洗浄・保管

酸または塩を含む移動相で使用した後は、それらを含まない同一の組成の移動相をカラムに通液し、完全に除去して下さい。
有機溶媒組成の高い移動相に置換する場合は、HPLC 装置とカラムを水/有機溶媒混合液で洗浄し、塩類を完全に除去して下さい。
試料が吸着した場合、アセトニトリルやメタノールなど試料が溶解しやすい溶媒を 0.5ml/min の流速で 2 時間程度通液して下さい(内径 4.6mm カラムの場合)。
逆相条件で継続的にご使用になられる場合は、水/アセトニトリル混合液 (組成比 60/40 (v/v))に置換してカラムを保管して下さい。

（参考）換算表


内径・流速

換算表

内径(mm)

2.1

3.04.6102030

流速(ml/min)

0.21

0.43

1.04.71943

圧力換算表
MPabarkg/cm2

psi

11010.197

145.038

11.02014.5040.981

114.223

6.895×10-2

7.031×10-2

10.1
9.807×10-2

6.895×10-3ダイセルのキラルカラムの詳細については、弊社ホームページ（http://www.daicelchiral.com/）を併せてご覧下さい。
CHIRALCEL, CHIRALPAK, CROWNPAK は、日本、米国、EU、中国、インドにおいて登録された株式会社ダイセルの登録商標です。

日本における商標登録番号：CHIRALCEL（登録商標第 5413634 号）、CHIRALPAK（登録商標第 1814811 号）、CROWNPAK（登録商標第 5413635 号）〒108-8230〒530-0011

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