2011/11/10

フードセーフティーセミナー

食品の輸入時におけるアフラトキシン検査と検査の注意点及び食品の汚染原因菌について

財団法人マイコトキシン検査協会
岡野 清志

財団法人マイコトキシン検査協会の沿革
１９７１年輸入ピーナッツバターからアフラトキシンが検出された。当初は、輸入落花生は国立予防衛生研究所（現国立感染症研究所）、国立衛生試験所（現国立医薬品食品衛生研究所）で検査された。
１９７２年マイコトキシン検査協会が専門機関として設立された。現在、輸入食品の検査と依頼検査を受託し、アフラトキシンの検査と他のマイコトキシン（カビ毒）の検査を実施している。

協会の方針
検査の良質、アフラトキシン及びその他のマイコトキシンについて汚染情報の提供や汚染原因の調査研究、相談事業等を行い、輸入業者及び加工業者に情報を提供することにより消費者の「食の安全」「安心」に貢献する。

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アフラトキシンの発見
１９６０年 イギリス 七面鳥 １０万羽斃死
原因不明： Ｘ病 （Turkey Ｘ disease）

原因： 輸入ピーナッツミール

ピ−ナッツミール抽出物に強い毒性
ぺーパークロマト：青い蛍光物質

ピ−ナッツミールから分離した：カビAspergillus flavus に毒性

Aspergillus flavus：代謝産物（青い蛍光物質）

物質名はカビの名から AFLATOXIN と命名された
AFLATOXIN は肝臓毒で天然で最強の発癌物質

アフラトキシンによる人の健康被害
国名

患者数

死者数

原因食

１９６７年

台湾

263

米

１９７４年

インド

397

106

トウモロコシ

１９８２年

ケニア

2012

トウモロコシ

２００４年

ケニア

317125

トウモロコシ

急性肝障害

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マイコトキシン（カビ毒）とは糸状菌類（カビ類）の二次代謝産物で、人あるいは家畜、魚類など高等動物に対して急性、もしくは慢性の生理的あるいは病理的障害（機能的あるいは器質的障害）を与える物質群にあたえられた総称である。

食品を汚染するカビ毒名
アフラトキシン

オクラトキシン

主な汚染する食品

毒性（摂食 ：肝障害）

落花生、ナッツ類（アーモンド等）、トウモロコシ、(長期 ：肝臓癌）

ハトムギ、乾燥果実（イチジク等）香辛料（ナツメグ等）

腎毒性

コーヒー豆、カカオ豆、乾燥果実（ブドウ等）

発癌性

香辛料（パプリカ等）、麦類、トウモロコシ等

デオキシニバレノール胃腸障害（嘔吐麦類、トウモロコシニバレノール下痢）免疫低下

パツリン

脳、肺浮腫

リンゴ、リンゴ加工品

ゼアラレノン

エストロゲン作用

麦類、トウモロコシ、ハトムギ

アフラトキシン汚染の原因菌

産生菌
Aspergillus flavus
Aspergillus parasiticus
Aspergillus nomius

アフラトキシン産生
Ｂ１ ，Ｂ２ or 非産生
Ｂ１ ，Ｂ２ ，Ｇ１ ，Ｇ２
Ｂ１ ，Ｂ２ ，Ｇ１ ，Ｇ２3

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薄層クロマトグラフィー

アフラトキシン
B１，B2

アフラトキシン標準
B1,B2,G1,G2

薄層クロマトグラフィー

アフラトキシB1,B2,G1,G24

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アフラトキシン産生菌

Aspergillus flavus

Aspergillus parasiticus

アフラトキシン産生菌Aspergillus nomius

Aspergillus flavus,S.strain

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Aspergillus flavus

日本におけるカビ、カビ毒検査
１９５２年

黄変米事件

輸入米のカビ検査

１９７１年

アフラトキシンＢ１規制（分析法の検出限界10ppb）

２００２年

デオキシニバレノール暫定基準（1.1ppm）

２００３年

パツリン規格基準（0.050ppm）

２０１１年

総アフラトキシンＢ１，Ｂ２，Ｇ１，Ｇ２(基準値10μg/kg)

１９６０年 アフラトキシン発見

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厚生労働大臣食品衛生登録検査機関とは食の安全を確保するため食品衛生法に基づき、厚生労働大臣の厳格な登録基準の要件に適合することにより登録することが出来る。

食品衛生登録検査機関が行う輸入検査
命令検査、自主検査（輸入）
厚生労働省の委託による検査（アウトソーシング）

我が国で輸入時に実施されている検査
１．命令検査２．自主検査（輸入）
３．モニタリング検査
１．命令検査とは輸入時の違反状況、危害が発生する恐れのある食品輸入者に対し厚生労働大臣が検査命令を出し検査させる
検査は輸入者依頼→登録検査機関→検査結果→検疫所→合否判定
命令検査項目：アフラトキシン、残留農薬、食中毒菌、貝毒、放射線等

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２．自主検査（輸入）とは輸入者、製造者は、食品の安全性を確認する責務がある
輸入の際に自主的に検査をする（検疫所指導有）
検査は輸入者依頼→登録検査機関→検査結果→輸入者→検疫所→合否判定
検査項目：添加物、器具・容器包装、冷凍食品規格等

３．モニタリング検査とは
厚生労働省検疫所が輸入される様々な食品について幅広く実施し安全性を確認する
モニタリング検査の違反は、命令検査へ移行し監視の強化に役立てる
厚生労働省の検査：横浜・神戸検疫センター、各検疫所

アフラトキシン命令検査対象食品（平成２３年９月２１日）
種類
豆類
ナッツ類

食 品

落花生
アーモンド、クルミ、ピスタチオナッツ、ヘーゼルナッツ、ブラジルナッツ
穀類
トウモロコシ、ジャイアントコーン、ハトムギ
香辛料 チリペッパー、ナツメグ、ターメリック
種実類 綿実、ごま乾燥果実 イチジク
その他 ケツメイシ、ハスの種子

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主な国のアフラトキシン基準値
国名

対象食品

日本
コーデックス

ＥＵ

基準値(μg/kg)

全ての食品
B1+B2+G1+G2
加工原料
落花生、アーモンド、ピスタチオ、クルミ等
B1+B2+G1+G2
直接消費用
B1+B2+G1+G2
食品、加工品（ピーナッツ、ナッツ類等）
食品、加工品（ドライフルーツ）
穀物、穀物を利用した加工品
B1
B1+B2+G1+G2
食品原料で選別前か物理的処理前

香辛料
アメリカ

10151024

ピーナッツ B18

B1+B2+G1+G2
ナッツ類、トウモロコシ
B1
B1+B2+G1+G2
B1
B1+B2+G1+G2
全ての食品
B1+B2+G1+G2

1551051020ＥＵ，アメリカ：2003

食安発０３３１第６号（平成２３年３月３１日）１０月実施
基準値
総アフラトキシン（Ｂ１＋Ｂ２＋Ｇ１＋Ｇ２ の合算） １０μｇ／ｋｇを超えると違反
サンプリング（試験品採取）
粒状食品は１，０００粒以上、１０，０００粒以上で精密度が高まると通知された。
ロットとは ： 製造又は生産された限定した製品で均一と仮定されたもの。
輸入品であれば原産地、製造所、包装者、包装形態、輸入者が同一であるもの。

検査命令対象食品
１粒の重量

種類
豆類
ナッツ類

0.1ｇを超える

0.1g以下

穀類
香辛料
乾燥果実
その他
種実類
その他

食 品
落花生
アーモンド、クルミ、ピスタチオナッツ、ヘーゼルナッツ、ブラジルナッツ
トウモロコシ、ジャイアントコーン、ハトムギ
チリペッパー、ナツメグ、ターメリック
イチジク
ハスの種子
ごま、綿実
ケツメイシ
0.1gを超えるものを加工したもの

粉末は0.1g以下と同じ

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採取 モデルアフラトキシンの検査
サンプリング（試験品採取）

誤差：約７０〜９０％

試料の調製（粉砕）

誤差：約２０％

化学分析

誤差：約１０％

検査結果各区分の誤差の順位
サンプリング＞試料の調製＞化学分析

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食品１粒重量が ０．１ｇ 以下 の場合
１．袋詰めで内容量がおおむね２０ｋｇ以上のもの
ロットの大きさサンプル抽出のため
Ｂａｇ数（Ｎ）のＢａｇ数（ｎ）≦ 280
32281 〜 500
50
501 〜 1,200
80
1,201 〜 3,200130（65×2）≧ 3,201210（70×3）＊複数の検体について、１検体でも基準値を超える場合は違反とする。

採 取 量（ｋｇ）
1
1
12(1kg×2)
3(1kg×3)

検体数

採 取 量（ｋｇ）
12((0.5kg×2)×2)
3((0.5kg×2)×3)

検体数

採 取 量（ｋｇ）
１ｻﾝﾌﾟﾙの最小採取単位は150gとし、150g未満にあっては必要量をあつめてこれを１ｻﾝﾌﾟﾙとする。

検体数11123２．缶入り又はカートン入りで内容量４．５ｋｇ以上のもの
ロットの大きさサンプルの大きさ
缶又はｶｰﾄﾝ数（Ｎ）（ｎ）≦ 50
251 〜 500４（２×２）≧ 501
６（２×３）＊複数の検体について、１検体でも基準値を超える場合は違反とする。

123３．小型容器包装に入れられたもの
ロットの大きさ缶又はｶｰﾄﾝ数（Ｎ）≦ 50

サンプルの大きさ（ｎ）
２（２×１)

51 〜 500
３（３×１）
501 〜 3,200
６（3×2）≧ 3,201９（３×３）＊複数の検体について、１検体でも基準値を超える場合は違反とする。

112311

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食品１粒重量が ０．１ｇ を超える 場合
１．袋詰めで内容量がおおむね２０ｋｇ以上のもの
ロットの大きさサンプル抽出のため
採 取 量のＢａｇ数（ｎ）（ｋｇ）
Ｂａｇ数（Ｎ）≦ 280
325281 〜 500
505805501 〜 1,200
1,201 〜 3,200
130（65×2）
10(5kg×2)≧ 3,201210（70×3）
15(5kg×3)＊複数の検体について、１検体でも基準値を超える場合は違反とする。

検体数
1
1123

２．缶入り又はカートン入りで内容量４．５ｋｇ以上のもの
ロットの大きさサンプルの大きさ
採 取 量
缶又はｶｰﾄﾝ数（Ｎ）
（ｎ）
（ｋｇ）
25
≦ 50
51 〜 500４（２×２）
10((2.5kg×2)×2)≧ 501
６（２×３）
15((2.5kg×2)×3)＊複数の検体について、１検体でも基準値を超える場合は違反とする。

検体数
1
23

３．小型容器包装に入れられたもの
ロットの大きさ缶又はｶｰﾄﾝ数（Ｎ）≦ 50

サンプルの大きさ（ｎ）
２（２×１)

採 取 量（ｋｇ）
１ｻﾝﾌﾟﾙの最小採取単位は150gとし、150g未満にあっては必要量をあつめてこれを１ｻﾝﾌﾟﾙとする。

51 〜 500３（３×１）
501 〜 3,200
６（3×2）
９（３×３）≧ 3,201＊複数の検体について、１検体でも基準値を超える場合は違反とする。

検体数
1123

生産工場でのサンプリング
・通知のサンプリング法を参考にする
・生産ラインから１５ｶ所から一定の間隔で１０ｋｇ採る
・小容器（４．５ｋｇ未満）であれば通知法を参考にする
・サンプリングする重量は５００ｇ〜５ｋｇ(1,000〜10,000粒）
・１ｋｇづつ数回採取することで減毒率が高まる（１回検出で陽性）12

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試料の調製（粉砕）
試料の調製誤差（約２０％)
注意点
・サンプリングした試料の全量を粉砕する
・落花生などのアフラトキシン汚染は粒単位の汚染なので粉砕したものが均一であることが要求される・試料が１０，０００粒に１粒が汚染している場合もあり、粉砕した試料のメッシュの大きさが重要となる・粉砕した試料のメッシュは、汚染粒の混入した粒数にもよるが少なくとも１〜2mm以下にする必要がある落花生 粉砕

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化学分析（試験検査）
アフラトキシン分析法（通知法）の推移
1971年3月16日

2000年3月26日

2006年7月13日
2008年7月28日

2011年8月16日

2011年8月16日「環食第１２８号」
アフラトキシンＢ１試験法
抽出：メタノール、クロロホルム
精製：シリカゲルカラム（オープンカラム）
検出：薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）「食環発第０３２６００１号」
アフラトキシンＢ１試験法
抽出：アセトニトリル
精製：多機能カラム
検出：液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）「食安監発第０７１３００１号」
トウモロコシ中のアフラトキシン試験法
簡易測定法 4ppb未満は陰性、以上は化学分析「食安監発第０７２８００４号」
アフラトキシンＢ１試験法
抽出：アセトニトリル
精製：多機能カラム、イムノアフィニティカラム
検出：液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）「食安発０８１６第２号」
総アフラトキシン試験法
抽出：アセトニトリル
精製：多機能カラム、イムノアフィニティカラム
検出：液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）「食安発０８１６第７号」
トウモロコシ中の総アフラトキシン試験法
簡易測定法 4ppb未満は陰性、以上は化学分析

食安発０８１６第２号（平成２３年８月１６日）
総アフラトキシンの試験法について
総アフラトキシンの定量計算
B1+B2+G1+G2＝合算値μｇ／ｋｇ（定量限界１．０μｇ／ｋｇ）
１０μｇ／ｋｇを超えた場合・・・・違反
１０．５μｇ／ｋｇ・・・１１μｇ／ｋｇ（例）８．７＋１．２＋６．３＋１．０＝１７．２μｇ／ｋｇ
報告値：１７μｇ／ｋｇ
１０μｇ／ｋｇ以下の場合 ・・・・適合
１０．４μｇ／ｋｇ・・・１０μｇ／ｋｇ（食品衛生法第６条第２項の取り扱い）

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化学分析法（全ての食品）
精製するカラムは対象食品及び使用器材（メーカー）のちがい毎に回収率等を確認する（初心者はメーカーの指導が必要）

簡易測定法（トウモロコシ）
エライザ法、ラテラル法などがある。対象食品と測定器材の種類
及び手技により正しい結果が得られないことがあるため始める前にメーカーの指導が必要である。
特に測定値のバラツキに注意すること。

カビ毒検査の安全対策･汚染を広げない。
･カビ毒は次亜塩素酸ナトリウム水溶液で分解する。
･次亜塩素酸ナトリウムで拭いた後は必ず水で拭き塩素剤を除く。
･カビ毒を取扱う場合（粉砕、分析）
作業着、防塵マスク、手袋、保護眼鏡等･清掃、洗浄1.0〜5.0%次亜塩素酸ナトリウム水溶液
床溶液、粉末が落ちた場合
0.25〜1.0%次亜塩素酸ナトリウム水溶液
粉砕機： 1.0%
ホモジナイザー、遠心機等： 0.25〜1.0%
実験台、ドラフト
0.5〜1.0%次亜塩素酸ナトリウム水溶液
使用した器具 ２時間以上浸漬

手にカビ毒がついた場合
次亜塩素酸ナトリウム水溶液、水、石鹸で洗う･陽性検体の廃棄焼却152011/11/10

アフラトキシンＢ１規制から総アフラトキシン規制になった場合の陽性増加予測

品名年
試験数
落花生
2002-2006 7,898
落花生加工品 2005-2009 17,845
ピスタチオ
2005-2009 1,797
イチジク
2005-2009 1,362
アーモンド
2005-2009 7,468
ナツメッグ
2005-2009 117

基準超過事例（B1≧10ppb) 基準超過事例（Total＞10ppb) 総AF＞10ppb-AFB1≧10ppb
検出数％
検出数％
陽性検数増加
81
1.03
105
1.33
24
220.12340.19
12
90.5
90.5
0
40.29
80.59
4
130.17160.21332.5632.56
0

落花生陽性検体から分離したアフラトキシン産生菌とカビの種類
Detection of aflatoxin and aflatoxin-producing fungi imported peanuts
Sample (Origin)
No.1 S.Aflica
No.5 China
No.11 China

B111.89.1
59.8

Aflatoxin(μg/kg)
B2G1G2
1.2
88.2
15.8
1.8
56.9
11.4
4.8
ND
ND

Aflatoxin-prducing fungi
B&G
B 1 ,B 2 /test
48/1550/6
07/10

Total
118
79.2
64.6

Morphological and metabolic characters of isolates from imported peanuts
Aflatoxin production(YES-broth)
SampleColony color B 1
B2
G1
No.1 P-1-1 yellow green ＋＋＋ー
P-1-4 yellow green ＋＋＋ー
P-1-8 dark green＋±＋
No.5 P-5-1 dark green ＋＋＋＋＋
P-5-4 dark green＋
ー＋
No.11 P-11-1 yellow green ＋＋＋
ーG2ーー±＋ーー

Species
Aspergillus flavus (S)Aspergillus flavus
Aspergillus parasiticus
Aspergillus parasiticus
Aspergillus parasiticus
Aspergillus flavus

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ナッメグの陽性検体から分離したアフラトキシン産生菌とカビの種類
Detection of aflatoxin and aflatoxin-producing fungi in imported nutmeg
Sample
141
311
2308

Sample
141
311
2308

(Origin)Indonesia
Indonesia
Indonesia

B1
44
3167

Aflatoxin(μg/kg)
B2
G16
ND
1.7
5.5
5.5
22

G2ND
ND
0.4

Total
50
38.2
94.9

Aflatoxin-producing fungi
B&GB 1 ,B 2 /test
015 /1530/314/10

Morphological and metabolic characters of isolates from imported nutmeg
Aflatoxin production(YES-broth)Colony color
B1B2
G1G2Species＋＋＋ーー
Aspergillus flavus
N-1 yellow green＋＋＋ーー
N-3 yellow green
Aspergillus flavus＋＋＋＋＋
N-2 yellow green ＋＋
Aspergillus nomius＋＋＋＋＋
N-3 yellow green ＋＋
Aspergillus nomius＋ーー
N-5 yellow green ＋＋
Aspergillus flavus＋＋＋＋＋＋
N-9 yellow green
Aspergillus nomius

液体クロマトグラフィー（HPLC)

標準アフラトキシン（トリフルオロ酢酸処理）B1,B2,G1,G2172011/11/10

液体クロマトグラフィー（HPLC)

落花生 アフラトキシンB1,B2

液体クロマトグラフィー（HPLC)

落花生 アフラトキシンB1,B2,G1,G218

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液体クロマトグラフィー（HPLC)

ナツメグ アフラトキシンB1,B2,G1,G2

財団法人 マイコトキシン検査協会が実施している検査
アフラトキシン、アフラトキシン以外のカビ毒、残留農薬、有害物質（AV,POV,メタノール、有害金属等）
食品の成分規格(冷凍食品、食肉製品、清涼飲料水等）
食品中の食品添加物（保存料、酸化防止剤、着色料等）、食品添
加物規格（グルタミン酸ナトリウム等）、器具・容器包装、乳等省令（脱脂粉乳、バター、チーズ、アイスクリーム等）
栄養成分、細菌検査、カビの同定、異物等

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