lSSN

Japanese

Joumalof Tropical Medicine

and第11巻第3／4号

Hygiene昭和58年12月15日

内原O304−2146

容著

ビオチン・アベジン酵素抗体法による狂犬病ウイルスの中和抗体測定感度とワクチン接種者の血清抗体価の測定について（英文）・・七條 明久，三舟求真人，坂本 国昭，山田昭217−224

フィラリア旧流行地，・長崎県五島の2地区住民のフィラリア抗体価と成人丁細胞白血病
ウイルス抗体価との関連について
・・藤田紘一郎，田島 和雄，月舘 説子，小由力，黒川 憲次，

Ligia

Moncada，上田

正勝，森

章夫，日沼

頼夫225−233

実験的各種寄生虫感染に於いて出現する抗胸腺細胞自己抗体に関して（英文）一小早川隆敏，川端 真人，朝日 博子，熊田 三由，保阪幸男235−241

アフリカで感染したと思われる日本人のオンコセルカ腫瘤の1症例（英文）一吉村 裕之，近藤力王至，赤尾 信明，大西 義博，井門 慎介，宮脇晴夫243−248

ケニア諸地域住民の腸管寄生原虫感染状況（英文）一井関 基弘，林薫，SIMo寅，M．GATIKA，T．K

短ARAP SIoNGoK249−256

報
青年海外協力隊員の消化管系寄生虫検査成績（1981，1982）

・山浦常，白坂 龍暖，松本 克彦，和田

芳武，小林

和代，岡本

雅子257−260

学術記録
日本熱帯医学会第7回九州支部総会講演要旨

261−275

投稿規定

日熱医会誌
Japan．J．T．M．H．

日

本熱帯医学会Japan. J. Trop. Med. Hyg.. Vol. 1 1, No. 3/4, 1983, pp. 217‑224

217

SENSITIVITY OF THE BIOTIN‑AVIDIN‑PEROXIDASE (BAP)

TECHNIQUE FOR RABIES VIRUS NEUTRALIZINGANTIBODY ASSAY AND THE MEASUREMENT
OF NEUTRALIZING ANTIBODIES OFVACCINATED HUMAN SERAAKEHISA SHICHIJO1, KUMATO MIFUNE1, KUNIAKI SAKAMOT02

AND AKIRA YAMADA2
Received March 7 1983 / A*̲cepted July 15 1983

Abstract : The biotin‑avidin‑peroxidase (BAP) technique for measuring serum
neutralizing (NT) antibody against rabies virus in human sera was established. When thefocus reduction rates with serial serum dilutions were plotted on a probit chart, a linear

regression line was drawn. The slopes (b‑value) of the regression lines were identicalirrespective of the different test samples. The sensitivity of the BAP test for detecting NT

antibody was highest when compared with that of the rapid fluorescent focus inhibition
test (RFFIT) and mouse neutralization test. In addition, Iow level‑antibody titer (< I : 5)

which could not be detected by mouse neutralization test was detected by the BAP test andthe RFFIT. Serum NT antibody response was easily followed by the BAP test withindividuals who received 3 doses of preexposure preventive rabies vaccine. Most of thevaccinees produced a detectable amount ofserum NT antibody by a single dose ofvaccine
and after the second vaccination, all vaccinees produced high level of the antibody and thetiters increased continuously until day 2 1 , however, the titers on day 78, two months after

the last vaccination, showed a tendency ofdecline.

INTRODUCTION
NT antibody to rabies virus has been mostly measured by mouse neutralization
test (Atanasiu, 1973) and rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT) (Smithet al., 1 973). The former method requires a large number of mice and at least
2 weeks of long period until the final results can be obtained. The latter method ismuch more superior to mouse neutralization test for detecting antibody in every
respect of the sensitivity, reproducibility and rapidity. However, this method has
a disadvantage that the fluorescent staining is unstable and the stained cells easily
fade out and has a difficulty in testing many specimens collectively. In order toresolve this problem, we previously studied the biotin‑avidin‑peroxidase (BAP)
technique for measurement of rabies virus infectivity and the NT antibody to rabies
virus (Shichijo et al., 1 982). The BAP technique provides such advantages thatthe specimens can be examined under an ordinary microscope and can be stored for1 Department of Microbiology, Medical College of Oita, Oita 87( 9 1 , Japan 2 The Chemo‑Sero‑
Therapeutic Research Institute, 668 Shimizu Machi, Kumamoto 860, Japan218

long period since the staining is stable.

In the present paper, we compared the sensitivity of the BAP test for detecting

NT antibody with that of the RFFIT and mouse neutralization test and described
the results of a trial for measuring human serum NT antibodies after the vaccinationby the BAP test.

MATERIALS AND METHODS
I . Virus : The challenge virus standard (CVS) strain of rabies virus was
successively passaged for 6‑8 times in murine neuroblastoma (N‑18 clone) cells andthe extracellular virus with an infectivity titer of 108 focus forming units (FFU)/ml

was used as the test virus. The CVS strain‑infected mouse brain suspehsion wasused for measuring NT antibody titer by mouse neutralization test and its infectivity
was 106 mouse intracerebral 50 per cent lethal dose (MIC LD50) i0.03 ml.

2. Cells : The N‑18 cells were grown in the Dulbecco's modified Eagle's
minimum essential medium (MEM) containing 5 per cent fetal calf serum (FCS),
5 per cent calf serum (CS) and 3 g/1 of N HC03' CER cells used for measuring
NT antibody titer by the BAP test and the RFFIT were grown in the Eagle's
MEM containing 5 per cent FCS and 5 per cent CS.
3. Sera : Fifty‑two serum specimens were collected from 1 2 research staffs
who had received preventive rabies vaccination. They received 2 doses of one mlof vaccine subcutaneously on days O and 7 and 0,1 ml of vaccine intradermallyon day 21. Blood were taken on days O, 7. 14, 21 and 78. The vaccine used in
the study was prepared from chick embryo cell cultures infected with HEP‑Fluryattenuated strain of rabies virus and inactivated with p‑propiolactone as originallydeveloped by Kondo , (1977). All the serum specimens were inactivated at 56'C
for 30 min before the test.
4. Staining of infected foci by the BAP technique : Infected foci were stained as
described previously (Shichijo et al., 1 982) and shown in Figure I .

5. Measurement of NT antibody titer by the BAP test : Serum specimens diluted
at I : I O were subjected to two‑fold serial dilution. Each diluted serum specimen
was dispensed into a tube in the amount of 0.3 ml and mixed with an equal amountof virus suspension with a titer of 4 X 103 FFU/ml. Each virus‑serum mixture wasneutralized at 36'C for 90 min in a water bath. As a virus control, the same virus
suspension was mixed with an equal volume of the diluent instead of the serum andtested simultaneously. After neutralization, 0.05 ml/well of each mixture was in‑oculated onto two wells of the previously prepared CER monolayers. Afterincubation in a 5 per cent C02 incubator for 36 hrs, infected cells were harvested
and fixed with cold acetone at 4'C for 20 min and processed for the BAP staining.

The number of infected foci was counted and NT antibody titer (FR50) was
calculated as described below. The number of foci at each serum dilution was
divided by the number of foci in the virus control to determine a focus reduction
rate. As described in the previous paper (Shichijo et al., 1 982), those focus reduction

rates were transformed into probits and a linear regression line (Y=bX+a) was
caluculated against the logarithm of serum dilution. The serum dilution which

219
Rabies virus infected CER cells

Rinsed with PBS(BAP staining)(FA staining)lFixation : acetone, 4'C, 20 min Fixation : acetone, 1 20'C. 30 minlStaining I : anti‑rabies virus Staining: anti‑rabies virus

mouse serum, 37'C, 60 min goat globulin FITC conjugated,

l 37'C, 60 min

Washing: PBS, 5 min, x 3lStaining 2 : anti‑mouse lgG Washing : PBS, 5 min, x 3
goat biotin conjugatedl

Washing : PBS, 5 min, x 3 Sealing with buffered glycelin‑PVAlStaining 3 : avidin PO
conj ugatedl

Washing : PBS, 5 min, x 3lPO reaction : with 30 mg DAB in
0.01"//. H202 PBS 150 mllWashing : PBS, 5 min, x 3
iSealing with buffered glycelin‑PVA

Figure I Procedures for the BAP staining and direct FA staining.

Abbreviation : PBS, phosphate buffered saline ; PO, peroxidase ; DAB,3, 3‑diaminobenzidine tetrahydrochloride; PVA, polyvinyl alcohol;
FITC, fluorescent isothiocyanate.

inhibits focus formation by 50 per cent (FR50) was read from the intersecting pointof the linear regression line and the probit 5 and the point was then transformed into
antilogarithm.
6. Measurement of NT antibody titer by mouse neutralization test : Mouse neu‑

tralization test was performed according to the standard procedure recommended
by WHO (Atanasiu, 1973). Five weanling mice were used for each serum dilution.
After neutralization of the virus suspension containing I OO MIC LD50 With anequal amount of serial serum dilutions for I hr at 37'C, an aliquot of 0.03 ml/mouseof the mixture was inoculated into mice intracerebrally and observed for the deathfor two weeks. Antibody titer was expressed as a reciprocal of the serum dilution
which inhibits the death by 50 per cent calculated by the method of Reed and Muench( 1 978) .

7. Measurement of NT antibody titer by the RFFIT: In this method, NT antibody
titer was measured as described by Smith et al. ( 1 973). Each diluted serum wasdispensed in the amount of 0.1 ml into 2 chambers of 8 chamber slide (Lab‑Tek
Products, Miles Laboratries, Naperville. Ill. USA) and incubated for 90 min at 36'C
in 5 per cent C02 mcubator with 0.1 ml of virus suspension whose infectivity titer
was adjusted to yield 20 to 30 stained cells in 200 X magnification of the fluorescent

microscope in virus control. Then, 0.2 ml of CER cell suspension containing
l .6 X I 05 cells which were treated with DEAE‑dextran at a final concentration of220

l O pg/ml was introduced in each well. After incubation at 36'C for 24 hrs in a
5 per cent C02 mcubator, the chamber slides were harvested and fixed with acetone
at ‑20'C for 30 min and processed for fluorescent antibody staining with anti‑rabies

goat globulin conjugated with FITC (BBL, Becton, Dickinson & Co., Cockeysville,
Md. USA) as shown in Figure I . The number of virus‑infected fluorescent cells
was counted under a fluorescent microscope. The reciprocal of the serum dilution
which reduced fluorescent infected cells by 50 per cent was regarded as a NT antibody
titer.

RESULTS
1 . Measuremeht of NT antibody titer in human sera by the BAP test : After neu‑

1

l

5

.

/ .

d

,J

O

.
O

.O

20

O
O

LL

6

.

'/ ^

d'

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5

.

50
.
o

./^

lp

O

7

80

4

.

95

JL

3

99

2

3

Serum dilution (loglO)
Figure 2

Neutralization of rabies virus by human sera. Stock virus containing 4 x I 08

FFU/ml was dispensed into a tube in the amount of 0.3 ml and mixed with anequal volume bf human serum diluted by two‑fold serial dilution (humanserum :e e, a; A JL, b; OO , c). Control virus was

mixed with an equal volume of a diluent. Each virus‑serum mixture wasneutralized at 36'C for 90 min in water bath, then 0.05 ml/well of each mixture

was inoculated onto CER cells for assaying the infectivity of surviving virus.

ao
a

221
tralizationof serial serum dilutions withfbci

causedbysurvivingof

in免cted

fbci

was

were

virus

counted

calculated．When

were

and

these

then

were

constant

stainedfbcus

in免ctivity

with

the

reductiontranshmed

intotiter of

BAP

rates

virus，in免cted

technique．The

of

each

serum

probitsandplottednumberdilutiononapr・bitchart，alinearregressi・nlinewasdrawn・Inhumanserum（a）・itsvalue・f
Table

I

Comparisonofneutralization

tralization test，rapid

antibody

fluorescent

titersfocus

obtained

inhibition

by

mouse

neu・

test（RFFIT）andbiodn−avidin−peroxidase（BAP）test
Antibody

Serum

＜

titer

RFFIT

BAP

5

14

25

7

50

70

60
62

100

250

56

80
320

126

110

350

166

180

500

mouse NT︾ρ﹄〇一旧12345678

﹄﹄﹂﹂醒

400

No，

12

15

56

180

500

n＝8
●

y＝0．46x−4．5

300

ン﹁O﹄噂 60 0C旧輔噌一〇﹄一コO＝

r：0．8799

200

●

●

100

●

●

●

●

髄eutralizing

Figurc3

Correlation

ofthe

test（RFFIT）andNT

antibody

400

300

200

100

aotlbody

titersobtained

titer
by

by

rapid

biotin−avidin−peroxidase（BAP）test．

BAP

500

test

fluorescenサbcus

inhibition

222

the slope (b‑value) was 2.38 and showed a linear regression line of t=2.38X‑0.867(Figure 2). In human sera (b) and (c), the same b‑value was obtained. The
regression lines with the same b‑value were also obtained in other human sera within
the focus reduction rates ranging from 20 to 80 per cent, and the slopes inclined to
become small below the 20 per cent or above the 80 per cent and the lines eventuallybecame sigmoid curve (Data not shown). NT antibody titers of human sera (a),‑(b) and (c) estimated from the probit chart were I : 320, I : 500 and I : 270, re‑spectively. These results suggest that under the experimental condition tested,

NT antibody titers of human sera can be determined from the linear regression
line with a b‑value of 2.38 which can be drawn with focus reduction rates of a single
or a few points of the appropriate serum dilution.
2. Comparison of the sensitivity of the BAP test for detecting NT antibody with mouseneutralization test and the RFFIT: NT antibody titers of vaccinated human sera were
measured by the BAP test, mouse neutralization test and the RFFIT and the results
were compared for their sensitivity for detecting NT antibody. As shown in Table I ,although antibody titers obtained by the three kinds of tests shows a parallel fluctuationand the antibody titers obtained by the RFFIT were closely correlated with thoseby the BAP test with r value of 0.889, (P<0.01 ) (Figure 3) , the ntibody titers obtainedby the BAP test were higher than those by the RFFIT and mouse neutralization test.

!

I

I

1 ooO

l,‑
o

e
:
1o

I OO

JQ

,

17

･C

10

ll

O

7

14

21

78

Days after the initial vaccinatlon
Figure 4 Production of serum NT antibodies after vaccination by human individuals. The
arrows indicate the time of vaccination.

22 3

In addition, Iow level of antibody ( < I : 5) which could not be detected by mouseneutralization test was detected by both the BAP test and the RFFIT. These results
indicate that the BAP test is the most sensitive assay method among the three kindof tests examined.
3. Production of serum NT antib04y in vaccinees as measured by the BAP test : Fifty‑

two serum specimens were collected from 1 2 individuals who had received 3 doses ofvaccination on days O, 7 and 2 1 . The sera were collected on days O, 7, 14, 2 1 and78. On the 8th day after the flrst vaccination, NT antibody was detectable in mostof the vaccinees, though it was low (Figure 4), but was undetectable in 2 (16.70/0)of them. However all of the vaccinees produced fairly high titer of antibody after

the 2nd vaccination and the antibody titers increased until day 2 1 . Geometricmean titer on days 7, 14 and 21 was I : 7.8, I : 78.9 and I : 128.7, respectively. On
the 78th day which is about two months after the third vaccination, geometric mean
antibody titer was I : 9 1 .9, showing a tendency of decrease in the antibody titer.

DISCUSSION

In the present study, immuno‑peroxidase staining technique, the BAP test wastried to measure serum NT antibody to rabies virus in fairly large number of humansera and the sensitivity of the test was compared with that of the RFFIT and mouseneutralization test. The results demonstrated that when the focus reduction rates
were plotted on a probit chart, a linear regression line was obtained and that the slopesof the line was constantly 2.38 in all of the sera tested, if the focus reduction rates

were at least ranging within 20 and 80 per cent. This might suggest that the NT
antibody can be accurately assayed by the BAP test zind the titer can be determinedfrom the regression line drawn by plotting only single or a few points of focus reduction
rates, if the test serum was appropriately diluted. The sensitivity of the BAP test andthe RFFIT was apparently higher than that of mouse neutralization test as expected
especially in detecting low level of NT antibody. The BAP test also appeared tohave higher sensitivity than the RFFIT in detecting NT antibody.
The production and transition of the serum NT antibody was easily monitoredby the BAP test in many individuals after three doses of rabies vaccine of chickembryo cell culture origin. Most of the vaccinees produced a detectable amount ofNT antibody after a single dose of vaccine and all of them produced NT antibody
by at least two doses of vaccine. The antibody le:vels increased continuously withthe doses of vaccine until day 2 1 , although the tendency of decrease was observed
on day 78, about two months after the last (3rd) vaccination.' Similar observations

have recently been reported in the follow up studies of NT antibody levels inhuman after administration of vaccines of human or rhesus diploid cell cultures
origin (Bernard et al., 1982; Mertz et al., 1982 ; Berlin et al., 1982).

Although the BAP test requires more staining steps than the RFFIT and may
seem tedious, the test has several advantages and is easy to perform once the ex‑perimental conditions are established and should provide a new tool in the seroepi‑
demiological studies of rabies in which a large number of specimens have to be tested
at the same time.

ジ

224

REFERENCES
1）

Atanasiu，E（1973）：Quantitative assay andpotency

test ofantirabies

serum

and

immuno−globulin，WHO Monogr．Ser．ラ23，314−3182）Berlin・B・s・・Mitchell，J・R・，Burgoyne，G．H．，01eson，D、，Brown，w．E．，Goswick，c，，
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4）or

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subcutaneous doses，J．A．M．A．，247，1138−ll42

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7）Shich弓o，A．，Mifhne，K．and Lin，WJ．（1982）：R．apid

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8）Smith・J

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Baer，G・M・，（1973）：A

rapid

reproducible

tcst「fbrdetermining

antibody，Bull．WHO，48，535−541

ビオチン・アベジン酵素抗体法による狂犬病ウイルスの中和抗体
測定感度とワクチン接種者の血清抗体価の測定について七條明久1・三舟求真人1・坂本国昭2・山田 昭2

ビオチン・アベジン酵素抗体法（BAP）法によって，迅速な狂犬病ウイルスの感染価の測定，及び中和抗体測定が可能であることは，先に報告した。今回，BAP法による中和抗体測定の検出感度を，従来から用いられてきたマウスを使用する方法，及び迅速螢光フォーカス形成抑制法（RFFIT）による測定法とで比較した結果，BAP法は抗体検出感度の点で，最もすぐれていることが判明した。次
いで，この方法により多数の狂犬病ワクチン接種者の血中の中和抗体を測定した結果，中和抗体価の推移を鋭敏に測定することが可能であった。BAP法は，このような結果に加えて，RFFITと異なり，染色標本は非常に安定であり，長期の保存に耐えること，螢光顕微鏡を要せず，通常の顕微鏡で観察可能なこと等，多くの利点があり，多数の検体処理を必要とする血清疫学的研究に有用な方法であると思われる。

1大分医科大学微生物学講座

2化学及血清療法研究所

日本熱帯医学会雑誌

第11巻

第3／4号

225

1983225−233頁

フィラリア旧流行地，長崎県五島の2地区住民のフィラリア抗体価と成人丁細胞白血病
ウイルス抗体価との関連について
藤田紘一郎1・田島和雄2・月舘説子1
小田 力1・黒川憲次1・Ligia Moncada1・4
上田正勝1・森 章夫1・日沼頼夫3
昭和58年6月1日 受付／昭和53年9月15日 受理

緒調査方法ならぴに実験方法

冨

わが国におけるフィラリア症の新しい盛染は，

長崎県・五島の長手及び大宝の両地区に在住す

1976年の鹿児島県の報告を最後に，現在は全く消る20歳以上の成人男女，それぞれ214名，241名と，滅したものと考えられる（鹿児島県衛生部報告，対照として選んだ愛知県の2地区，南知多町及び1980）。しかし，かつては青森県以南の日本各地

日進町の住民，それぞれ179名，117名にっいて，に，フィラリアの散在した流行地があり（佐々，糞便採取と共に血清を採取した。採取した血清は，

1962），特に，南九州とその離島に浸淫が著し

ドライアイスで凍結し，・糞便は10％ホルマリン中

く，新しい感染は現在なくなったものの，象皮に保存して，それぞれの研究室に持ち帰った。な病，陰嚢水腫，乳魔尿などのフィラリア症で，お，過去Mfを保有したと記録されている長手地

今なお苦しんでいる住民は相当数認められてい区の21名の男子及び13名の女子については，別にる。

夜間の10時から12時に採血し，厚層塗抹標本を作

われわれは，日本各地の旧フィラリア流行地のり，ギムザ染色後Mfの有無を調べた。糞便にっ

住民について，その臨床症状の有無及びフィラリ

いては，MGL集卵法によって腸内寄生虫卵の有ア仔虫（Mf）保有の状況について再調査し，併せ無を検索した。

て血清疫学的調査により，フィラリア流行の終焉

血清については，同一血清を大きく二分し，一の時期を推定してきた。前回の福井県勝山地方

方の血清は56。C，30分間非働化後さらに3分し，の調査（吉村ら，1979）に続いて，今回は，長崎

1つは犬フィラリア粗抗原，他の1つはアニサ

県・五島の2地区，長手及び大宝地区の各住民に

キス粗抗原によって，それぞれ間接赤血球凝集反ついて，フィラリア症についての同様の調査を

応（IHA）を行い，住民のフィラリア抗体価及行った。なお，大宝地区は，ジエチルカルバマ

びアニサキス抗体価を求めた。これらの抗原のジン（DEC）による薬剤治療により，また長手地区

作製及びIHAの術式は，Fujita（1975）に準じ

は，媒介蚊の駆除によって，1971年にはそれぞれた。

新しいフィラリアの感染から免れた地域である（0血oriε∫01．，1972）。

フィラリア抗原とアニサキス抗原との交差反応を除くため，第3番目の血清画分については，まずアニサキス抗原で吸収後，犬フィラリア抗原によるIHAを行った。すなわち，長崎市で得られ1長崎大学医学部医動物学教室 2愛知県がんセンター疫学部
療部 4現所属：国立コロンビア大学医学部寄生虫学教室

3京都大学ウイルス研究所予防治226

たサバの内臓よりアニサキスを集め，生理食塩水
で十分に洗浄した後，凍結乾燥し，pH7．2のリン成

酸緩衝液中で，ガラス及びテフロンホモジナイ
ザーで微細化後，13，000G，30分間遠心し，その績

1・粗抗原による住民のフィラリア抗体価

長崎県・五島の長手及び大宝地区と愛知県の南上清部分を乾燥させた。次いで，血清1m1に対して乾燥重量10mgの割合でアニキサス抽出液 知多，及び日進地区のそれぞれの住民について，を加え，室温で1時間反応後，さらに4。Cで24 犬フィラリア由来の粗抗原による地域別抗体価を時間反応させた。反応後，4，000回転，10分間遠求めた。フィラリア感染が10数年前まで確認され心して上清部分をとって，アニキサス吸収血清とている五島の2地区住民の抗体価は，愛知県の2した。このアニキサス吸収血清と，犬フィラリア

地区住民の抗体価より，全般的に，いずれも高く抗原を吸着した羊赤血球との間で，IHAを起こなった。また，各地区において，住民の年齢別

させ，フィラリア抗体価を求めた。なお，抗体価

抗体価を求め，比較したところ，図1に示すようは2の羅数で表わした。

に，内陸地の愛知県・日進地区を除き，他の3地

他方の血清画分については，Hinumaε αム区において，40歳代以前の青壮年齢層の抗体価が，（1981）の方法に従い，間接螢光抗体法により，成老年層の抗体価より幾分高めになった。長手や大人丁細胞白血病ウイルス（ATLV）に対する抗体

宝地区では，10数年前よりフィラリアに感染する（ATLA抗体）を測定した。

機会は全くなくなっており，われわれの過去の調査結果から類推すると，40歳以上の年齢層で，むNagate》Daiho（Nagasaki）

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35
50

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41
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19

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鵠●

20

嚢齢澤

●■・
■●

2

h℃0∩﹇一ρq而

●

60

70

21

25
80

禽mean±SE of IHA antibody
FigurelAge■specific

39

20

30

against

crude

29

40

23
50

2
60

titre

antibody titres

filarial

an㎡gen．

70

NumberAge

227

しろフィラリア抗体価が高くなることが考えられ的に高めになった。また，年齢別に抗体価を調べた。たとえば，前回の福井県勝山地区の調査では，

ると，日進地区を除く他の3地区では，若年層ほ

40歳以上の住民のフィラリア抗体価が，それ以下

ど高い抗体価を示し，フィラリアの抗体価は，アの年齢層に比べ有意に高い値を示した（吉村ら，

ニサキスとの交差反応の影響を多分に受けている

1979）。今回，五島の2地区住民の青壮年層のフィことが考えられた。

3．アニサキス抗原吸収後血清でのフィラリア

ラリア抗体価が高めになった理由として，五島に抗体価供給されているサバ・イカなどがアニサキスに高率に感染しており，青壮年層がより高度にアニサ

アニサキスとの交差反応を除くため，あらかじ

キスに感作され，その結果，フィラリア抗原と交めアニサキス抗原で血清を吸収後，再び犬フィラ差反応を示したものと考えられる。

リア抗原による抗体価を，各地区別，年齢別に求

2．アニサキス抗原による住民の抗体価めた。その結果，表1に示すように，犬フィラリ

長崎県及び愛知県のそれぞれ2地区において，

ア粗抗原による結果とは多分に異なる値を得た。

住民のアニサキス抗体価を同様にIHAで求めた。

すなわち，愛知県の2地区での，若年層の抗体価

結果は，犬フィラリア粗抗原で得られたものとほが高い傾向には変化がなかったが，五島の2地区

ぼ同様であった。すなわち，葦島の2地区住民のにおいては，60歳以上の老年層の抗体価が相対的

抗体価は、愛知県の2地区住民の抗体価より全般に高くなった。また，大宝地区の20歳代の年齢層

Table lAge−and

LocationSex

sex−speci6c

filarial

antibody

titres

Age
31−40

21−30

absorption

withanisakisantigen

group

41−50

51−60

61−70

71−80

total

total

O．75二上0．13＊0．88±0．130．77士0．080．74∫±：0．10 1．20±0、22 1．03＝ヒ0．260．87±＝0．06

male

O．50士0．000．75土0．160，70圭0．110．69士0．U1．12±0．310．83±0．330．80二LO．09

飴male

O．77土0．140．99土0．180．73土0．210．78土0．151．26±0．30LO7土0．310．90±0．08

totall．58二L（12）＊＊
Nagate，

after

Nagasaki

（1）

（24）

（37）

（8）

（ll）
O．19

（19）

（47）

（15）

（16）

（22）

（30）

（18）
（29）

（17）

（13）

（3）

（17）

（14）

（167）

（58）
（109）

0．85圭0．15 0．86士0．37 0．73±0．17 0．94±0．18 1．13士0．28 0．95圭0．07

（！7）

（47）

（49）

（47）

（38）

（237）

male，L71±0・290・71土0・180・73土0・180・53士0・170・42±0・141・33二L（L360・82」二〇・10

Daiho，

Nagasaki

（7）
館male

（21）

l．50土0、26

（12）
total

Minami−male（16）

O．78士0．11

0．68士0．07

（18）

（40）

（15）

（19）

（32）

（95）

（20）

（142）

0．69士0．070．59±0．050．60士0．090．61土0．07

0．65土0．03

（37）

（34）

（34）

（28）

（20）

（11）

（20）

（18）

（16）

（19）

（11）

fヒmale O．79士0．180．80土0．130．71土0．100，67士0．090．61士0．l

（7）
total

（18）

（168）

O．77土0．140．55土0．050，67士0，090．50士0．000．59±0．090．77士0，150．62士0．04

chita，

Aichi

（15）

1．03±0．240．92」二〇．170．82土0．231．29±0．270．95士0．291．04士0．10

l．10±0．25

（20）

（19）

（18）

l

（9）

（9）

（10）

0．62±（｝＝130．28土0．100．59土0．170．00±0．00

（24）

（39）

（29）

（23）

（13）

（17）

（12）

（5）

（2）

（117）
0．40士0．11

（2）

（49）

飴male1．55±0．390．77土0．200，29土0．110．75±0．20（11）＊mean土SE＊＊number

expressed byofpersons（22）
thetestedsecond（17）
exponent

ofthe

0．77±0．12（18）
filarial（83）
0．62土0．08

Nisshin，male O．73±0．300，41土0．150．25±0．180・00士0・000・00土0．00

Aichi

（85）

O．50土0．0σ0．69±0．05（68）antibody

titre

228
べ，有意（P＜0・1％）に高くなった。また，両地区の抗体価が異常に高くなったり，同地区の60歳代の男女の抗体価の差が，著しく開くという結果とのATLA抗体陰性者の平均のフィラリア抗体価なった。このように今回の調査では，実際にフィが，愛知県の2地区住民のフィラリア抗体価とほラリア感染を受けた年齢層と，そうでない年齢層

とんど同じ値になったことは興味深い。

上記と同様な調査を，フィラリア粗抗原やアニとの間に，フィラリア抗体価に関して一定の関係

サキス抗原を使って得た抗体価で比較検討すると，を見出すことができなかった。

生長崎県・五島の2地区におけるATLA抗体
陽性者のフィラリア抗体価

図3のようになった。図からわかるように，いず

長崎県・五島は，過去のフィラリア濃厚流行地

それぞれの抗体価において高い値を示したが，今であると共に，現在では成人丁細胞白血病（ATL）

回は，両者の間で有意の差は認められなかった。

れの場合もATLA抗体陽性者は，陰性者に比べ，5．ATLA抗体陽性者の年齢別フィラリア抗体が好発する地域であることが知られている。そこ

価で，われわれは，フィラリアの抗体価を測定した

長崎県・五島の2地区住民を，ATLA抗体陽性

同じ血清について，各地区住民のATLA抗体価を測定した。その結果，長手及び大宝の20歳以上の者群と陰性者群とに分け，年齢別にフィラリア抗健康成人の25．4及び28．7％が，それぞれATLA

体価（アニサキス抗原吸収後）を求め，比較した。

抗体陽性となった。対照に選んだ愛知県の2地区

図4に示すように，長手地区の2Q歳代の1例を除
き，両地区の各年齢層において，ATLA抗体陽性

では，全く陽性者が見られなかった。

次いで，五島の2地区住民をATLA抗体陽性

者のフィラリア抗体がいずれも高くなった。特に，者と陰性者とに分けて，各地区ごとのアニサキス

長手地区の60歳代で，P＜5％，大宝地区の50歳代，吸収後のフィラリア抗体価を比較したところ，図60歳代及び70歳以上の各年齢層において，いずれ2のようになった。図から明らかなように，長手もP＜1彪の危険率で，それぞれATLA抗体陽及び大宝両地区において，ATLA抗体陽性者群のフィラリア抗体価は，陰性者群の抗体価に比性者群のフィラリア抗体価が陰性住民のそれよりも有意に高くなった。

囮團

positives

ATLA Ab negatives

2＊王mean±SE＊へ∠Φい﹇ρ一一 ＞℃Oρ州一q◎ H幻一﹄OH州h

ATLA Ab

12443

16968

117
q

・H

Φ

一

σ、

奄咽

口調

・■

d

・H

邸
o

Nagasaki Pref．
（GotO IslandS）

応

目4」

〇
調

d

名

168
I

Number

・H

二

切

㎝

O

・r→

芝

2

Aichi

Pref．

★Pく0．1宅F三gure2

Filarial

antibody

antigenamong

groupstitresofafter abso甲tion with anisakis

antibody

andnegative

ATLA

personswithantibod》へ

positive

ATLA

229

Antibody

aqainstAntibody against

crudefilarialantigen

crude

aniεakisantigen

ハ∠

妬

Ab

positives

囮A皿AAbnegati▽es

22

Imean±SE212︽∠

Φ臼ρ一一 h℃Oρ↓ρ目邸 く旨H

22221ATLA

12643

16968

179

118

I

口

12643

Φ
・■邸
引
．p
o
日．P
．q
応
調
而・■
の
o
・■
qニ
ロ
o
応
・■o
・■

呂

o

国

−
応
σ、
邸

呂

NagasakiPref．AichiPref．

Antibody

titresagainstpositive ATLA

cmde

antibody

filarialandロ

国

Number

q

■
詔
㎝
の
■

＝

（Go七〇

antigennegativeorATLA

工slands｝

anisakisantigenamong

personswithantibody．

画 ATLA Ab negati▽es

2︑

Φ臼■嗣ρ

囮ATLAAbp。si七ives

ρく

★

2

．﹇剣一拍応一一﹄

竺
ll

21 3

l
30

20

32
40

3116

5

1713
60

50

Number

12 5

80

無

献

Age

2

2

Φ﹄ρ耐■

70

Daiho

ρく

一

献

2

1

H邸一臼邸．﹇一h1620Age−specificpersonswith3611 321フ 3314

3 31 640

30

獣

Figure4

o
』
・H
o

H応
日一
心一H
ロ
・HO

115

NagasakiPref・AichiPref・（Goto Islands）

Figure3

80
l

Φ

2

16968

filarial

P＜1亀

★Pく5亀

antibody titres

positive

ATLA

60

50

antibody

70

80

Age

王mean±SEa丘er absorption

andNumber2117

negativewith anisakis antigen among

ATLA

antibody．

230のフィラリア抗体価を求めた。この結果，34名中，
Φh一一ρ

ATLA抗体陽性者が10名検出され，陽性率は

212

29・4彩となった。対照として，Mf陽性の既往の＞℃Oρ唄ρO邸ない長手地区の133名の陽性率を求めると，24．4％
28となり，Mf陽性既往者のATLA抗体陽性率が●％・●●・亀 ●
鱒●

＞1日臼く

2妬

…

■．●●・●●● ●・総…・・響・、 ・〜●

高いことが判明した。特に，Mf陽性既往の女性●●●から46％という高率でATLA抗体陽性者が出現・していることがわかった。これは，対照の28．6％に比ぺ，はるかに高い値を示しており，注目される（表2）。なお，男性の場合でも，Mf陽性既往
22

Filarial
Figure526

2与antibody者の方が，ATLA抗体陽性になりやすく（19．0彩，
対照は13．5％），いずれの結果も，フィラリアのtit二reCorrelation between filarial antibody

感染が完全に成立した人は，その他の長手地区住titresafter

民より高率にATLA抗体が陽性になっているこ

antigenand ATLA antibody

personsinabsorption
Gotowith母nisakis

titresofとが判明した。

Islands of Nagasaki

Prefヒcture．

しかし，Mf陽性既往者群のフィラリア抗体価
は，対照に比べ，特に差は認められなかった。

7．他の諸検査結果・

しかし，ATLA抗体価とフィラリア抗体価と各地区住民爾腸管内寄生虫卵の検索を行ったが，の間には，特別な相関が見られなかった（図5）。 全員陰性であった。その他，尿，血液生化学， 貧6．Mf陽性既往者のATLA抗体陽性の割合 血などのスクリーニング検査を施行したが，五島とフィラリア抗体価の2地区で貧血が割合多く認められた以外には，

長手地区で，約10年前，Mfを確実に有してい特に重要な所見は得られなかった。

たと記録されている34名（男21名，女13名）にっいて，今回は特に夜間10時以降に採血し，厚層塗考

抹標本においてMfの有無を調べた。しかし，彼らからMfは全く検出されなかった。

察

成人丁細胞白血病（ATL）は，九州，南四国，次いで，これらの住民の血清について，ATLA

南紀地方の海岸線に近い過疎地域を中心に好発し，抗体を測定すると共に，アニサキス抗原で吸収後

特異的な臨床病態像を有する新しい疾患概念としTable2

Percent

of ATLA

antibody

positiveswith anisakis antigen among

NagasakiMf pastin thepositive

negative

personsandantibody titres af㌃er absorption
in thepast at

Nagate district，Prefヒcture

percent ofATLA antibody

filarial

positives

male

琵male

19．0

46．0

male

total
29．4

0．74±0．15＊（21）＊＊ （13）

（34）

（21）

13．5

24．4

0．84ま二〇．ll

28．6（37） （96） （133）＊mean土SE expressed by the＊＊numberfilarial

ofMfpositive

ofpersonstestedsecond（37）
exponent

antibody

titre

恥male

total

1．04土0．14

0．82士0．17（13）
O．91土0．10（96）ofthe飢arial antibody titre（34）
0．89＝L

O．07

（133）

231

て，現在確立しつっある。最近，Hinuma8oムス感染によって引き起されるものであるならば，（1981）は，ATLの原因と推察されている一種のフィラリアと同様，蚊によって媒介されることもレトロウイルスを発見し，成人丁細胞白血病ウィ考えられる。しかし，犬フィラリアは日本国内のルス（ATLV）と命名した。このATLVに対する抗体（ATLA抗体）は，ATL患者のほとんど全

犬の間でほぼ全国的に感染が認められ，ヒトには例の血清中に存在するが，健康成人中にも認めらと，またフィラリアを媒介する蚊は，フィラリア

れることが，Hinumaε01．（1982）によって明ら

旧流行地以外にも現在広く日本で存在しているこかにされた。われわれが今回調査した長崎県・五とから，これらの問題点は一応除外して考えるこ

島の2地区における20歳以上の健康成人のATLAとができるものと思われる。

抗体保有率は，それぞれ25．4彩及び28．7％であっ免疫反応を示すほどの感染はないと考えられるこ

かつて，日本では青森県以南の海岸地帯には，数多くのフィラリア流行地が散在していた。それた。

一方，このATLの地理的発生分布をみると，らの地域に在住していた現在40ないし50歳以上の25年前に実施されたフィラリア感染調査における成人が，フィラリア抗原に繰り返し暴露されていフィラリア仔虫（Mf）保有者の分布と，ほとんどたことは十分考えられる。ATLは，最近，九州・完全に一致している。この事実から，．田島（1982）

南四国や南紀以外にも佐渡ケ島や能登半島，秋田

は，ATLの発症が昔のフィラリア感染と何らかなどの海岸地方にも低いながら集積されて発見さの関係があるのではないかと推測した。

れている。この地域は，南日本のATL発症地域

そこで，われわれは，旧フィラリア流行地，長と同様に，いずれも，かつてのフィラリア流行地

崎県・五島の2地区を選んで，フィラリアの抗体である。しかし，フィラリアの新しい感染が全く

価と，ATLA抗体陽性率との関係を調べた。その消滅した現在，ATLの発症が逆に増加しつつあ

結果，ATLA抗体陽性者群のフィラリア抗体価が，る現状を考えると，今後，この両者の関係をさら陰性者群の抗体価より有意に高いことがわかった。

に追求する必要があると思われる。

また，過去フィラリア仔虫を有したことのある人

フィラリアは，ヒトのリンパ組織に寄生し，宿達は，より多くの割合で，ATLA抗体が陽性に主の免疫能を撹乱することが知られている。また，なっていることが判明した。Tajimaθ

o ．（1983）

丁細胞に作用して，細胞性免疫能を低下させるとは，同じく，五島の長手，大宝両地区住民についいう報告も多い（Weller，1978）。このフィラリアて，フィラリア抗体の低値を示した群，中等度の値を示した群，及び高値を示した群と3段階に分感染あるいはフィラリアの抗原刺激が，ATLVの増殖にどのように関与しているか，今後の重要なけて，ATLA抗体の陽性率を比較した。その結果，課題である。

低値群のATLA抗体陽性者の占める割合を1とすると，中等度群で男は4，女は2．6，高値群で男は8，女は7．4と，フィラリア抗体価が高くなるに

要

約

つれて，ATLA抗体陽性者の割合が増えているこ．

フィラリアの旧流行地，長崎県・五島の2地区とを示した。以上の結果は，ATLVのウィルス血住民のフィラリア抗体価を調べた。フィラリア抗症を発現させる因子の1つに，フィラリア抗原の体価は，血清をアニサキス抗原で吸収後，犬フィ刺激が関与していることを示すものであろう。

ラリア抗原による間接赤血球凝集反応で求めた。

なお，フィラリア感染とATL発症との関係に

一方，同一血清にρいて，成人丁細胞白血病ウっいてのこの研究結果の解釈には問題点も多い。

イルスに対する抗体価（ATLA抗体価）を螢光抗

たとえば，フィラリア抗体価を犬フィラリア抗原体法で調べた。ATLA抗体陽性者群のフィラリアで測定したので，犬フィラリア感染との関係につ抗体価は，いずれの地区においても陰性者群の抗いて述べる必要のあること，またATLがウィル 体価より有意に高く，この傾向は住民の各年齢層

232でみられた。また，過去において確実にフィラリ

かに高い陽性率を示した。以上の事実から，フィア仔虫を有していた人達のATLA抗体陽性率は，ラリァ感染は，ATLVのウィルス血症発現に何ら

同地区の住民より高く，特に女性の場合は，はるかの意味で関与していることが推察される。

文
1）

Fujita，K（1975）：Separationof

献P〃φ1αr如in7ηi漉allergen

from

the

IgG−inducing

anti−gens，Jap．J．Med．Sci．Biol．28，139−149

2）Hinuma，Y，Nagata，K，Hanaoka，M．，Nakai，M．，Matsumoto，T．，Kinoshita，K，Shirakawa，
S．and

tion

Miyoshi，1．（1981）：AdultofT−cell leukemia；Antigen in

antibodies to the antigen in

human

an ATL cell line and detec−

sera，Proc・NatL

Acad．Sci．U，S，A．，78，6476−

64803）Hinuma，Y，Komada，H・，Chosa，T・，Kondo，T．，Kohakura，M．，Takenaka，T．，Kikuchi，M．，

Ichimaru，M，Yunoki，K，Sato，1．，Matsuo，R．，Takiuchi，Y．，Uchino，H．and（1982）：Antibodies to adult T−cellleukemiavirus−associatedpatients

Japan；Anationwide

with ATL

andcontrols in

Hanaoka，M．

antigen（ATLA）in

seroepidemiologic

sera

from

study，Int．J．

Cancer，29，631−635

4）鹿児島県衛生部報告書（1980）5）Omori，N．，Wada，Yinthecontrolfilariasis

6）佐々

and

of

and Oda，T．（1972）：Eradication
vectormosquitos

inNagateschistosomiasis2，21−30，University

学（1962）：experimentof bancroftian

Village，NagasakiParknlariasis

Prefecture，Research

in

Press

日本におけるバンクロフト糸状虫症の分布，日本における寄生虫学の研究2，

1−34，目黒寄生虫館

7） 田島和雄（1982）：成人丁細胞白血病・リンパ腫の疫学的研究，癌の臨床，28，930−938
8）Tajima，K，Fujita，K，Tsukidate，S．，Oda，T．，Tominaga，S。，Suchi，T．and

Seroepidemiological studies on thee∬ectscell

Islands，Japan，Gann，74，188−191

leukemia

virus

in

the

Goto

9）Weller，P．E（1978）：Cell−mediatedfilarial

immunity intivity to marial stage−specific antigen

chronic

of

and

to

parasiteson

Hinuma，Y．（1983）：

infestation

of

adult

experimental且1ariasis；Lymphocyte
B−and

T−cellmitogens

during

T・

reac・

acute

and

infection，Cell，Immunol．，37，369−382

10） 吉村裕之，近藤力王至，大西義博，赤尾信明，森下 薫，池田照明，藤森千衣子，藤田紘一郎他（1979）：福井県勝山地方の旧フィラリア流行地におけるフィラリア症のその後の疫学調査，公衆衛生，43，512−517

233

CORRELATION BETWEEN FILARIAL , ANTIBODY
TITRE AND ADULT‑T‑CELL LEUK MIA VIRUS
ANTIBODY TITRE IN INHABITANTS OF
GOTO ISLANDS, NAGASAKI JAPAN.
KOICHIRO FUJITAl, KAZUO TAJIMA2, SETSUKO TSUKIDATE1TSUTOMU ODA1, KENJI KUROKAWAl, LIGIA MONCADAl'4
MASAKATSU UEDAl,, AKIO MORll AND YORIO HINUMA3
Received June I i983/Accepted September 15 1983

Goto Islands belong to Nagasaki Prefecture, and bancroftian filariasis had been endemic in thesesubtropical islands. For about 20 years, we have carried out the eradication program of bancroftian

filariasis in two villages, Nagate and Daiho Village of Goto Islands. The eradication program wasplanned mainly through control of vector mosquito in Nagate Village and through treatment of persons
with drug in Daiho Village. As a result of this program, no new filaria infection was found recently inthese areas.

On the other hand, Goto Islands are known as endemic areas of adult‑T‑cell leukemia (ATL).
In this time, we have carried out a seroepidemiological study, and found that the groups of persons withpositive ATLA antibody had significantly higher filarial antibody titre than those of persons withnegative ATLA antibody in Nagate and Daiho Village.
Thirty‑four persons who were recorded as microfilaria carriers about I O years ago showed higher
positive rate of ATLA antibody than that of the others in Nagate Village.
These data suggested that the filarial antigen stimulation might act as a factor in ATLV infection

and/or proliferation among inhabitants in the endemic areas of filariasis and ATL.

l Department of Medical Zoology, School of Medicine, Nagasaki University, Nagasaki 852, Japan.
2 Division of Epidemiology. Aichi Cancer Center Research Institute, Nagoya 464, Japan. 3 Institutefor Virus Research, Kyoto University, Kyoto 606, Japan. 4 Present Address : Department of
Parasitology. School of Medicine, Universidad Nacional de Colombia, Vogota Colombia.

Japan. J. Trop. Med. Hyg., Vol. I l, No. 3/4, 1983, pp. 235‑241

235

THYMOCYTOTOXIC AUTOANTIBODIES INDUCEDBY VARIOUS PARASITIC INFECTIONS IN MICETAKATOSHI KOBAYAKAWA, MASATO KAWABATA, HIROKO AsAHI.
MITSUYOSHI KUMADA AND YUKIO HOSAKA
Received May 27 1 983 / Accepted September 1 1 983

Abstract : The development of thymocytotoxic autoantibodies was investigated inmice infected with Schistosoma japonicum. Schistosoma mansoni, Echinococcus multilocularis.
Nematospiroides dubius. Trichinella spiralis, Trichuris muris, Hymenolepsis nana. Toxoplasma

gondii, Plasmodium vinokei, Plasmodium berghei and Plasmodium chabaudi. The infections withall of these parasite species induced thymocytotoxic autoantibodies, although the levels of

their cytotoxic activity were varied in different host‑parasite combinations. The highest
titer up to I : 1 6 was observed in the sera of mice infected with S. japonicum and S. mansoni.

They have generally an optimal reactivity at 4'C but some showed greater cytotoxicity at

37'C. The cytotoxicity was completely absorbed with thymocytes. The possible
mechanisirn (s) responsible for the production of these autoantibodies and their in vivo role

were discussed,

INTRODUCTION
Several strains of mice are prone to spontaneously develop autoimmune disorders
and some normal strains of mice are well known to develop antithymocyte antibodies(NTA) as well as other variety of autoantibodies (Schlesinger, 1 965 ; Howie andHelyer, 1968; Shirai and Mellors, 1971; Auer et al., 1974; Harbeck et al., 1978;
Eisenberg et al., 1979).

On the other hand, in certain parasitic infections, the production of autoanti‑
bodies including those to the liver, kidney, erythrocyte, nucleic acid and globulins has
also been already documented (Hillyer, 1971 ; Lehman et al., 1972; Jones et al., 1976;

Jones, 1 977; Kobayakawa et al., 1 979). In addition, the occurrence of such NTA
like autoantibodies has been recently reported in murine African trypanosomiasis
and schistosomiasis japonica by the authors (Kobayakawa et al., 1 979 ; Kawabata etal., 198 1 ) . Although it is not clear whether those thymocytotoxic autoantibodies are
the cause or the result of the pathological process, taken together with the fact overall
parasitic infections cause the generalized immune suppression to heterologous antigens(Terry, 1977), we have examined the possible presence of thymocytotoxic autoanti‑
bodies in the sera of mice infected with various parasites.

Department of Parasitology, National Institute of Health, Tokyo, 2‑ I 0‑35, Kamiosaki, Shinagawa‑ku, Tokyo 141, Japan.

236

GO (1 ) ( 2 ) ( 3)
e

50 .

:

20
u
x
o
o
:h
u
o

¥ ¥> ¥

30:hcreacti ontemperaturelO(QC) 4 37 37 37 37

:

v
ox
o
:h
u
oE

( Io)

C9)

50
40

+'

J::

'",

(7)

60

.̲̲. ¥ ¥¥'¥¥¥ ̲ .>

30
20

d

10

reaction
temperature(oc) 4 37 37
C 1 2)(1 1))

4

4

37

(13)

e

:h

u
ox
o
:h
u
oE
:h

x:

50

40

:¥

30

:

¥ i

20

¥ ;
reacti ontemperature (eC)

Figure 1437

4

4 37 437

37

Thymocytotoxic activity of serum of mice infected with various kinds of parasites.
Each bar represents the thymocytotoxic activity of serum of individual mouse. Test

serum without complement and complement without test serum were employed as
negative controls ( < 50/0 ) '(2)parasite :S. japonicum

S. japonicum

S. japonicum

S. mansoni

source & route ,of infection '50 cercariae
ip*

50 cercariae

50 cercariae

ip

ip

l 50 cercariae
iptime after ,10 weeks

1 O weeks

1 O weeksl O weeksstrain of mice :C3H/HeJms

ddY

C57BL/6J

ddY

infection '

237
(8)

(9)

(10)

N. dubius

T. murisorallyI OO eggs
orallyH. nana
50 eggs

E. multilocularis

300 Iarvae

7 weeksl O weeks

BALB/C

ddY

(6)

(7)

T. spiralis

T. spiralis

500 Iarvae

500 Iarvae

orallyorallytime after
infection

2 1 weeksstrain of mice

ddY

(5)

parasitesource & route .
of infection ': T. gondii
source & route . 250 trophozoites
parasiteof infection ' 'rp
1 O weeksstrain of mice

: ddY

* : intraperitoneally

300 protoscoleceslp

6 weeks

4 weeks

60 weeks

ddY

ddY

ddY

(13)

(12)

(11)

time after
infectionorally#( 1 4)

P. chabaudi

P. vinckei

P. berghei

l06 infected rbc#
ip

l 06 infected rbc
ip

l 06 infected rbc

9 days9 days8 days

ddY

ddY

ddY

i p

red blood cells

MATERIALS AND METHODS
Mice

Female C57BL/6J, C3H/HeJms and BALB/C mice were obtained from theInstitute of Medical Science, Tokyo University. An outbred strain of female ddY
mice was bred and maintained in our colony. All the infections were performed attheir age of 6 weeks.
Parasites and infection

Stages of parasites used for the infection and the route of the infection are indi‑cated in Figure I .
Cytotoxicity assay

Single thymocyte suspensions were obtained by teasing the thymus gently withforceps in minimal essential medium. After gravity sedimentation of tissue debris

the cells were washed twice with minimal essential medium. Test procedure ofcytotoxicity test is as follows. A mixture of 50pl of serum frorri infected mice withrespective parasites to be tested and 25pl of C57BL/6J mice thymus cell suspension(l07 cells/ml) in minimal essential medium was incubated for 60 min at 4'C or 37'C.
The cells were washed twice with cold medium containing 3 per cent fetal calf serumand further incubated for 30 min at 37'C with 50pl of guinea pig serum at a dilutionof I : I O as a source of complement. The percentage of dead cells was determined by
the trypan blue dye exclusion test.
Absorption test

Absorption was carried out by mixing an equal volume of serum samples withpacked C57BL/6J thymus cells. The mixtures were incubated for 60 min at 4'C.
After centrifugation, the supernatants were tested for residual cytotoxicity.

238

RESULTS
The infections with all the parasite tested induced thymocytotoxic autoantibodies
in the mice (Figure I ) and this cytotoxicity was confirmed to be complement depend‑

ant since test serum and complement alone showed no more than 5 per cent deadcells. However, the cytotoxic activity of these autoantibodies is varied in different
species of parasite and individual mice with the same parasite.
Titrations of the thymocytotoxic autoantibodies were carried out in some repre‑
sentative sera from mice infected with different parasite species ; S. japonicum, S.
mansoni, P. vinckei. P. chabaudi and T. gondii. The cytotoxic titers were varied indifferent parasite species, ranging I : 8 to I : 1 6, if the dilution of the serum sample
causing more than I O per cent dead cells is considered to be the titer (Figure 2).

60

50

40
oo

.

*

' o 30
*o

*h
8

:l

‑ 20

10

1 /1 1 /4 1 /1 6 1 132
1 12

1 18

serumdilu tion

Figure 2

Titrations of thymocytotoxic autoantibodies in representative sera from mice
infected with following parasites.

ddY mouse infected with S. mansoni 8 weeks (e), p. vinokei 9 days ( <3> ), P.
chabaudi 9 days ( (p ), S. japonicum 8 weeks (A ) and T. gondii 10 weeks (A ), eachpreviously.

239

These autoantibodies have, as a rule, an optimal reactivity at 4'C, althoughsome sera with rare exception showed stronger reactivity at 37'C, suggesting that
more than a single antibody moiety appear to be involved in this cytotoxic reaction.
On the other hand, thymocytotoxic activity of control sera from two to three age
matched normal mice at each group of infection never exceeded 5 per cent with two
exceptions, 7.2 and 8.6 per cent respectively.

Thymocytotoxic activity of the sera from mice infected with S. japonicum. S.
mansoni, T. spiralis, P. vinckei and T. gondii was completely absorbed with thymocytes(Table I ) .

Table I Absorption of cytotoxic effect of parasite‑induced thymocytotoxic autoantibodies

with thymocytes*
StrainParasiteS. japonicum

S. mansoni
T. spiralis

P. vinokei

T. gondii

of

mice

ddY
ddY
ddY
ddY
ddY

Dead thymocytes ( o/o )Time after
infection

Beibre Afterabsorption absorption

1 O weeks

46.6

6.9

1 O weeks

57.2

8.0

2 1 weeks

29,0

5. 1

8 days62,3

l0.5

l O weeks

25.7

6.0

* Sera were incubated with an equal volume of thymocytes from 2‑month‑old C57BL/6J

mice at 4'C for 60 min with occasional pipetting. 'DISCUSSION

Mechanism(s) by which these thymocytotoxic autoantibodies are induced by
the parasite infections is at present unknown. The occurrence of similar thymocyto‑
toxic autoantibodies as well as other autoantibodies with various specificities found inmurine African trypanosomiasis and schistosomiasis japonica has been reported to be
associated with the increase of the number of lgM antibody‑producing cells in theirspleen (Kobayakawa et al., 1979; Kawabata et al., 1981). On the other hand, theTrichinella spiralis infected mice which were found to produce the thymocytotoxic
autoantibodies in this present study did not increase the number of antihapten plaqueforming cells in their spleen (data not shown) . In pararell, the genetic studies byusing New Zealand mice and their hybrid showed no correlation between the spon‑taneous production of NTA and polyclonal B‑cell activations (Hirose et al., 1 980).
Therefore, it could be conceivable that more than a single underlying mechanisms ineven single host‑parasite system and/or different species of parasite are likely to involvein the production of these thymocytotoxic autoantibodies. 'The biological and pathological significance of these thymocytotoxic autoanti‑
bodies is at present unknown. If these thymocytotoxic autoantibodies were to havea regulatory role on thymocytes and thymus derived lymphocytes in vivo, they could
influence manv of the cellular events involved in the induction of cellular and humoral

immunity. I

fact, parasitic infections, as a whole, develop depressed cellular240

immune functions. Immune responses shown to be impaired in them include skinallograft rejection (Wedderburn, 1 974; Araujo et al., 1 977), increased susceptibility

to oncogenic viruses (Jerusalem, 1 968; Wedderburn, 1 970), contact sensitivity tooxazolone (Jayawardena et al., 1 975), effectiveness of spleen cells in inducing GVH
reaction (Freeman, 1 975) and reactivity of cultured spleen cells to allogeneic cells andto other mitogenic agents (Pelly et al., 1 976; Corsini et al., 1 977; Jayawardena andWaksman, 1 979). Therefore, further studies are required to elucidate whether or
not those defect in cellular immune functions in mice with parasite infections arecausally related to the development of thymocytotoxic autoantibodies which even‑tually leads to the elimination of a certain T‑cell subpopulation.

ACKNOWLEDGEMENT
This work was partly supported by a grant of the Ministry of Health and Welfare,Japanese Government.

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7) Hillyer, G. V. ( 1 971) : Deoxyribonucleic acid (DNA) and alrtibodies to DNA in the serum of
hamsters and man infected schistosomes, Proceedings of the Society for Experimental Biology

and Medicine, 136, 88C 883
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Immunol., 9, 215‑264lO) Jayawardena, A. N., Targett, G. A., Leuchars, E., Carter, R. L., Doenhoff, M.J. and Davis,
A. J. S. (1975) : T cell activation in murine malaria. Nature (Lond.), 258, 149‑151
1 l) Jayawardena, A. N. and Waksman, B. H. (1979) : Suppressor cells in experimental trypano‑somiasis, Nature (Lond.), 265, 539‑541
l 2) Jerusalem, C. ( 1 968) : Relationship between malaria infection (Plasmodium berghei) and malignant

lymphoma in mice, Z. Trop. Parasitol., 1 9, 94 l0813) Jones, C.. E., Lewert, R. M. and Ozcei, M. A. (1976) : Anti‑liver antibody in rabbits infectedwith Schistosowajaponicum, Am. J. Trop. Med. Hyg., 25, 613‑616

241
14）

Jones，C，E．（1977）：Soh魏030mσゴψoη伽羅anti−DNA

cryoprecipitation

phenomenain

in距ctedresponses，serum

15）Kawabata，M・，HosakaンY・，KumadaンM・，Matsu三，N・and
mocytotoxic

autoantibodies

fbund

in

mice

in飴ctcd

32，438−442
16） Kobayakawa，T．，Louis，J．，Izui，S．and
DNA，redblood cells and thymocyte

duringexperimental

17）

A伍can

with

S

S

Kobayakawa，T・（1981）：Thy−h∫5050規αゴψoη蜘肌，In色ct．Immun．，

Lambert，P．H．（1979）：Autoimmune

antigensinassociation

withpolyclonal

response

antibody

tosynthesis

trypanosomiasis，J、Immunol．，122，296−301

Lehman，J．s．JL，Higashi，G．1．，Bassily，s。andS伽o御〃αandcryogelatification，andrabbits，Exp、ParasitoL，42，261−273

Farid，z、（1972）：Rhematoidfゑctorsin

廊050規αin琵ctions，Trans・R・Soc・Trop．Med．Hyg．，66｝125−129
e価ct ofa chronic helminth18）Pelley，R P．，Rumer，J・J・and warren，K．s・（1976）：supPressivein琵ction，S

h耐050，ηα規αη30η

，onthe伽痂roresponsesofspleen

and

lymph

node

cells

to

the

T

cell mitogens Phytohaemagglutinin and Concanavalin A，In色ct．Immm．，13，1176−118319）Shiral，T・and Mellors，R・C・（1971）：Natural thymocytotoxic autoantibody and rcactive anti−
gen in New Zealand Black and other mice，Proceedings of the National Academy of Sciences
ofthe

U．S．A．，68，1412−141520）Schlesinger，M．（1965）：Spontaneous

in
21）

the

sera

ofmiceoccurrence of autoantibodies

cytotoxic to

thymuscells

ofthe129strain，Nature（Lond、），207，429430

Terry，R・J．（1977）：Immunodepression inparasite

infヒctions，Immunity

malaria

in免ctioninParasitic

Diseases（inserm，Paris），172，161−17922）Wedderbum，N．（1970）＝E価ct
lymphomain

BALBlcofcocurrent

mice，1・ancetondevelopment23）Wedderbum，N・（1974）：Immungdepressionproducedbymalarialin琵ctionininthe

immunized

host：mechanism

ofvirus・induced

ii，1114−ll16

ofsurvival，Ciba

Foundation

mice。Parasites

Symposium，25，124−135

実験的各種寄生虫感染に於いて出現する
抗胸腺細胞自己抗体に関して
小早川隆敏・川端真人・朝日博子
熊田三由・保阪幸男

Schs∫oso惚ノ卯on∫c麗御，Schf3030灘襯nson∫，Ech加ooooc硲〃2μ1∫ Joc〃1αr s，1〉θ〃10纏ρ ro∫漉5吻伽s，

TrJ ：h翫θ〃αερ∫r 〜1∫s，Tr∫ch麗r∫3 ημr∫s，πソ〃2εno1砂s∫s

．P1αS

π04

μ〃2わの帥8∫，P10S〃！04

μ〃1C加加μ4

n伽o，τoxρρ10sη2z8・o

4だ，pJαs；o漉μη！v

を実験的に感染させたマウス血清中に於ける補体依存性の抗胸腺細胞自己抗体の出現を，C57BL／6Jマウスの胸腺細胞を標的としたtrypan blue

sion

noたθち

dye

exclu−

testで検索した。上記寄生虫感染は，種及び感染個体により胸腺細胞殺滅効果に差はみられたが，何れの種も同自己抗体の産生を誘導した。力価は，翫海s∫030加o／4ponloμ遡，Sヒ配5

oso吻α規αn50n∫

感染血清に於いて，最高16倍であった。反応至適温度は，概して4。Cであったが，37。Cの方がより強い殺滅効果を示す例もあり，冷式型のみでなく，温式型の抗体も関与するものと考えられる。なお
同自己抗体は，マウス胸腺細胞で完全に吸収される。

国立予防衛生研究所寄生虫部

Japan. J. Tro p . Med . Hyg., Vol. 1 1, No. 3/4, 1983, pp. 243‑248

243

AN ONCHOCERCAL NODULE FOUND IN A
JAPANESE lNFECTED IN AFRICA*

HIROYUKI YOSHIMURA2, KAORU KOND02, NOBUAKI AKA02
YOSHIHIRO OHNISH12, SHINSUKE IKAD03 AND HARUO MIYAWAK14
Received May 18 1983 / Accepted September 1 1983

Abstract : We report a case ofonchocercal nodule (30 x 20x 20 mm) Iocated at the
subcutaneous tissues of the left hip of a 34‑year‑old Japanese who had lived in the Republicof Guinea and the Gabonese Republic for one year and a half.

INTRODUCTION
In recent years, the number of reports on the imported parasitic infections, suchas malaria from tropical or subtropical countries have increased in Japan.
The present paper deals with the first case of Onchocerca volvulus infection of aJapanese man probably infected during residing in Africa for a year and half. The
clinicopathological and parasitological flndings were ptesented and the results ofhistomorphological comparison with other human and animal filarias were discussed.

CASE REPORTThe patient is a 34‑year‑old male engineer living in Ina City, Nagano Prefecture,

Japan. He was admitted to the hospital on March 16, 1980, because of a
subcutaneous nodule located in the left upper quadrant of his left hip. He had lived
in the mountainous and river‑side areas of the Republic of Guinea, January to May

1974 and from October 1974 to May 1975. He suffered from bites by mosquitos
and probably black flies while staying there. Then he moved to a remote village ofthe Gabonese Republic in May 1 977 and stayed there for six months. He wasafflicted with insect‑bites likewise in the Republic of Guinea. Afterwards, he resided

in the Hashemite Kingdom ofJordan for two months in 1 978. During the stay in the
Republic of Guinea, he suffered from hepatitis with jaundice and high fever (malaria?)

and receieved medication.
In May 1'979, the patient noticed a plum‑size itchy mass at the upper quadrantof his left hip, the size of which gradually increased. Three years later, on Marchl The study was supported by a Grant‑in‑Aid for Scientific Research (No. 56570159) from The
Ministry of Education, Science and Culture of Japan. 2 Department of Parasitology, School of
Medicine, Kanazawa University, Kanazawa 920, Japan. 3 The Second Department of Pathology,
School of Medicine, Shinshu University, Matsumoto 390. Japan. 4 Department of Orthopedic
Surgery, Tenryu Kahan Hospital, Ina 396, Japan.

244

l 6, 1 982, the tumor was surgically removed. The nodular mass measuring ap‑
proximately 30 x 20 x 20 mm was elastic and sharply demarcated. White blood cellcount before operation was 6, I OO/cmm and, 8 per cent of them were eosinophils. On
April 23, 1 983, a year after the surgical treatment, skin snip examinations were
performed on the calf, iliac area, forearm and scapula of right and left sides according
to the technique of Tada et al. ( 1 973). No microfilaria was found in all specimens.

The blood smears taken at daytime and midnight were also negative for microfllariaeof any species of filarias.

OBSERVATION
Histologic sections of 5 pm thickness were stained with hematoxylin and eosin.
PAS, trichrome stain and Heidenhein's Azan.
Approximately 7‑lO cross and oblique‑10ngitudinal sections of the nematode wer
seen in fibrous granulation tissues composed of numerous mononuclear cells, someeosinophils, giant cells and collagenous connective tissues. No microfilaria, how‑ever, was found in the tissues (Figure I ) .

The morphological features of the worm were relatively well preserved. The
sections of the worm measured 360 x 220 pm on the average diameter. The cuticle
was approximately 5 to 7 pm thick and distinctly two‑layered. On the outer layerof the cuticle in oblique‑longitudinal sections, 3 pm high transverse ridges regularly
spaced at intervals of approximately 4,0,,. pm were clearly seen, but some ridges wereinconspicuous in other sections. The number of striae of the inner layer corre‑
sponding to every one external ridge was two (Figure 2).

The lateral chords were extensive and divided into two bands or sublateralbands, and two small round nuclei were seen at the base of the chord.

The paired uterine wall was thin and contained numerous developing embryos
or microfilariae. The pigmented intestine measured 20‑40 pm in diameter werelocated in the body cavity near the uteri. Although, the muscle layer was somewhat
degenerated, muscle cells and fibrillar elements were still recognized (Figure 3).
Based on the above mentioned morphological characteristics which coincided withthe features by Beaver and Orihel (1965) and Neafie (1972), the nematode was
identified as an adult female Onchocerca volvulus.

Five months after nodulectomy, Iatex agglutination test on the patient's serum
revealed antibody titers of I : 32 and I : 1 6 with O. volvulus and O. gutturosa antigens,respectively. Precipitation test using Ouchterlony's technique demonstrated two
and one precipitin bands each against O. gutturosa and D. immitis antigens, respectively.

DISCUSSION
The filarial worm from a nodular mass in the subcutaneous tissue of this patient
was identified as a female O. volvulus, due to its morphological features coinciding
with the descriptions by Neafie ( 1 972). This is the first record of the Japanese case
infected with O. volvulus. The infection was seemed to be aquired in the Republicof Guinea or the Gabonese Republic which are endemic areas of onchocerciasis.

245

The species identification of filarial worms in sectioned tissues of man andanimals has been made based on the morphological characteristics of worm size ordiameter, cuticle, Iateral chords, muscle layer and reproductive organ, particularly
paired uteri harboring microfilariae (Beaver and Orihel, 1 965 ; Eberhard, 1 979;

Orihel and Beaver, 1 965). Among those morphological features, the cuticulararchitecture is most important; and then followed thickness, Iaminated structure,ridges, striations on the outer layer, number of cuticular striae in the inner layer,

distance between adjacent ridges and the ratio of worm diameter to the distance
between ridges. For the identification of filarial worm of the present case, it wasneeded to distinguish them not only from human filarias such as Wuchereria bancrofti,
Loa loa. Dipetalonema perstans. D. streptocerca which are widely distributing in Africa(Sasa, 1 976), but also from animal Onchocerca such as O. gutturosa or O. cervicalis.
Furthermore it must be morphologically distinguished O. volvulus from D. immitis.

D. repens and D. tenuis which have been regarded as causative agents of zoonotic
filariasis. Three authentic cases resembling O. gutturosa infection were reported by
Azarova et al. (1965) in U. S. S. R., Siegenthaler and Gubler (1965) in Switzerland
and Beaver et al. ( 1 974) in U. S. A. . The cuticle of O. vulvulus is relatively thinand the number of striae of the inner layer corresponding for each external ridge istwo. On the contrary, the cuticle of O. gutturosa is thick and the number of striae
is 3 or 4 between each ridge on outer layer, thus it is distinguishable from that of O.
volvulus.

Some cases involving subcutaneous nodules due to W. bancrofti have been re‑ported from various countries (Gupta, 1 964 ; Miller and Moore, 1 965; Cahill, 1 967;

Yuehan and Qun, 1 981). Sixteen human cases of pulmonary infection with D.
immitis and eight cases of cutaneous dirofilariasis have been reported from Japan(Yoshimura et al., 1 980 ; Yoshimura, 1 983). The study of comparative mor‑
phology between D. immitis and W. bancrofti was made by Yoshimura et al. ( 1 981).
MacLean et al. ( 1979) reported a case of subcutaneous nodule with D. repens in

Okinawa, Japan. The feature of sectioned tissues of D. repens, however, can beeasily differrentiated from those of D. immitis and D. tenuis.

ACKNOWLEDGEMENT
The authors wish to thank Dr. Paul C. Beaver, Professor Emeritus of Depart‑
ment of Tropical Medicine, Tulane University, U. S. A. for his helpful advice toidentify the parasite in our present case.

REFERENCES
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Canad. Med. Ass. J., 93, 71 1‑714

9) Neafie, R. C. (1972) : Morphology of Onohecerca volvulus, Am. J. Clin. Pathol., 57, 574 586
10) Orihel, J. C. and Beaver, P. C. (1965) : Morphology and relationship of Dirofilaria tenuis andDirofilaria conjunctivae. Am. J. Trop. Med. Hyg., 14, 1030‑l043
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12) Siegenthaler, R, and Gubler, R. (1965) : Der interessante Fall : Paraarticulares Nema‑todengranulom (einheimische Onchocerca), Schweiz. Med. Wochenschr. 33, I 102‑1 104

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16) Yoshimura, H. (1983) : Human dirofilariasis. Pathology and Clinical Medicine, I , 1392‑1400l 7) Yuehan, C. and Qun, X. ( 1981) : Filarial granuloma of the female breast: A histopathologicalstudy of 131 cases, Am. J. Trop. Med. Hyg., 30, 1206‑1210

247

i j; ."w

Figure 1Thansverse and longitudinal ection

were surrounded by fibrous granulation tissues withgiant cclls.

(hematoxylin=eosin stain)

Figure 2

Two‑layered cuticle was clearly seen. External ridges on outer layer and striae of inner
layer of cuticle were recogniaable.

(Heidenhain's Azan stain)

Figure 3

The transverse section of the p rasite. Paited uteri, intestine, extensively developed
lateral chords and muscle layers were clearly seen.
(hematoxylin‑eosin stain

I : intestine 11: inner layer Lc : Iateral chord M : muscle layer Ol : outer layer

Ov: oviduct R: ridge S: stria U: uterus

248

アフリカで感染したと思われる日本人のオンコセルカ腫瘤の1症例
吉村裕之1・近藤力王至1・赤尾信明1
大西義博1・井門慎介2・宮脇晴夫3

患者は34歳男，測量技師，現在長野県伊那市に居住。主訴：左上磐部腫瘤。1974年1月より約1年間，アフリカギニア共和国の山岳河川流域で測量工事に従事。1977年5月より約半年間，ガボン共和国にてギニアと同様の環境で生活従業した。この間，飛来昆虫による刺咬に甚しく悩まされた。帰国後の1979年，左上磐部に腫瘤を認め次第に増大した。1982年3月16日皮下腫瘤摘出術施行。腫瘤の大きさ30×20×20mm。割面灰白色結合織性。病理組織所見：多数の好酸球と円形細胞の浸潤を伴う
限局性線維性肉芽組織内に線虫の断面像を7〜10箇認める。虫体横断像で大きさ

360×220μm（平均），角皮の厚さは5〜7μmで2層からなり，外層にほぼ40μmの間隔で突起（transverse ridges）
が配列している。内層には前記の各突起間に2本の線条（striae）が認められる。体腔内に2箇の子宮腔の断面があり，腔内には発育卵細胞とミクロフィラリアが多数認められる。以上の形態学的所見を
Nea6e（1972），Beaver

andOrihel（1965）らの記載と照合して0，volvμ1麗の雌成虫と同定した。本例は日本人の0．v．感染例として最初の報告例である。

1金沢大学医学部寄生虫学教室
形外科

2信州大学医学部第2病理学教室

3長野県伊那市天龍河畔病院整Japan. J. Trop. Med. Hyg., Vol. 1 1, No. 3/4, 1983, pp. 249‑256

249

THE PREVALENCE OF INTESTINAL PROTOZOA INNAIVASHA, KITUl, MACHAKOS, TAVETA AND
NANDI HILLS AREAS IN KENYA*
MOTOHIRO ISEKll, KAORU HAYASH12, SIMON M. GATIKA
AND T. K. ARAP SIONGOK3
Received July 18 1983 / Accepted October 1 1983

Abstract : During the period from May to November in 1 980, a total of 2,1 1 4 stool

specimens were collected from individuals living in Naivasha, Kitui, Machakos, Taveta

and Nandi Hills areas in Kenya, and they were examined for intestinal protozoa byformol‑ether concentration method followed by idoine‑staining.

Out of 2,114 specimens 673 (31.80/0) were positive for Entamoeba histolytica, 1,l05(52.30/0) for Entamoeba coli, 102 (4.80/0) for Endolimax nana, 184 (8.70/0) for lodamoeba butschlii,

1 76 (8.30/0) for Giardia lamblia, and 220 (10.40/0) for Chilomastix mesnili. The total positive

rate, which means the percentage of positive persons for any kinds of intestinal protozoa,
was 75.1 per cent.

INTRODUCTION
In developing countries in tropical area, the health of people and thesocio‑economical development have been seriously damaged and hampered byparasitic diseases. The same is true in Kenya. Malaria, trypanosomiasis,leishmaniasis and other helminthic diseases are widespread. For the purpose ofcontrolling these parasitic diseases many researchers in KEMRI (Kenya Medical
Research Institute) , KETRI (Kenya Trypanosomiasis Research Institute), DDC & R(Division of Disease Control and Research, Ministry of Health) , ICIPE (International

Center of Insect Physiology and Ecology) , University of Nairobi and some otherlaboratories have made various efforts. However, there have been few reports
relating to the epidemiological survey on the intestinal protozoa in Kenya.
The infection of intestinal protozoa, including some medically important species
such as Entamoeba histolytica and Giardia lamblia, occurs through the intake of foodand water contaminated with the faecal material containing protozoal cysts. There‑
fore, the incidence of intestinal protozoa in a certain area may indicate the level ofsanitary conditions in the respective area.
l Department of Medical Zoology, Osaka City University Medical School, Osaka 545, Japan. 2
Department of Virology, Institute for Tropical Medicine, Nagasaki University, Nagasaki 852,
Japan. 3 Division of Disease Control and Research, Nairobi, Kenya.
* This work was carried out under the Communicable Disease Research and Control Project of Kenya‑

Japan Medical Cooperation Program, supported by the Japan International Cooperation Agency,
started in 1979.

250

In this report, the authors present the result of stool examinations carried out

in several areas of Kenya during the period from May to November in 1 980. The
objective was to make clear the prevalence of intestinal protozoa in Kenya andto provide with a guide in planning the communicable disease control program by
the Government of Kenya.

MATERIALS AND METHODS
A total of 2,ll4 stool specimens were collected from individuals living in
Naivasha, Kitui, Machakos, Taveta and Nandi Hills during the period from Mav.
to November in 1 980. Most of specimens were originally collected for the study ofschistosomiasis by the staff members of Division of Disease Control and Research(DDC & R) , Ministry of Health, Nairobi. The location where this survey was
conducted is shown in Figure I . The number of specimens and the type of popula‑tion in each location are shown in Table I .
The stool specimens were emulsified in 10 per cent formol‑saline at each location,and transported to the laboratory of DDC & R, Nairobi. After the helminthic ova
examination, the specimens were used for the present study. They were examinedby formol‑ether concentration method followed by iodine‑staining.

SUDAN

ETHIOPIA
IAKE
TURKANAUGANDAKENYASOMAL I

of

IAKE
VICT

G)

¥

TANZAN I AI NAIROBIlO @NAIVASHA

INDIAN

KITUI

OCEAN

MACHAKOSTAV ETA

NANDI HILLS
Figure I Map of Kenya showing locations where this survey was conducted.

25 lTable 1

Stool specimens exammed

Number ofType of population

Location

specimen

Naivasha

Farmers and their families

Kitui

General inhabitants

276
980

Masinga
MigwaniMutonguni
Machakos

Primary school children

780

TavetaGeneral inhabitants

43

Nandi Hills

Primary school children

35

Kangundo

2,1 14

Total

RESULTS
The prevalence of Entamoeba histolytica. Entamoeba coli. Endolimax nana. Iodamoebabtitschlii. Giardia lamblia and Chilomastix mesnili in each location is shown in Table 2.
The infection rates of E. histolytica. E. coli. G. Iamblia and C. mesnili by age and by sex

are shown in Table 3 and Table 4 respectively. 'The results are summarized as follows ;E. histolytica

Out of 2,1 14 specimens examined 673 (31.80/0) were positive for this parasite.

The highest positive rate was 35.1 per cent in Machakos and the lowest was 27.9
per cent in Taveta. By age, the lowest positive rate, 20.0 per cent, was seen in
the youngest age group (0‑4 years old). The rates gradually increased up to the
middle ag group and, thereafter, declined slightly. The highest positive rate
appeared in the age group of 40‑49 years old. The infection rates in the maleand female were 27.8 per cent and 32.5 per cent respectively, but there was no
Table 2 Prevalence of intestinal protozoa m Narvasha Kitui, Machakos, Taveta

and Nandi Hills
Locationexam

positive

E. coli E. nana I butsined

E. hist.

Naivasha

276

34. 1

44.2

Kitui

980
780

28.8
35. 1

43
35

27.9

Machakos
TavetaNandi Hills
Total

Total

Percentage of infection

Number

G. Iamb. C. mesn.

rate (o/o)

75.0

5.6

22.5

9.0

7.9

9.6

70.6

9.2

10.0

7.4

8 1 .4

2.3

2.3

64.0

17.1

14.3

74.3

1 0.4

75. l

2.9

5.8

46,4

5.0

63.3

4.7

51.2

2.3

l I .6

3 1 .4

34.3

20.0

8.6

2,1 14 31 8

52.3

4.8 8.7

8.3

252
Table 3 Infection rates of intestinal protozoa among various age groups in
Naivasha and Kitui

Agegrou p(years)Percentage of infection

Numberexamined

E. hist. E coli G Iamb C. mesn.

0

125

20.0

26.4

16.8

6.4

5‑9
10‑14

32 1

25.5

42.4

10.0

l0.6

243

34.6

46. 1

8.2

13.2

l 5‑19

135

33.3

50.4

5.2

13.3

2C 29
30‑39

151

35.8

55.6

5.3

12.6

1 03

30. l

57.3

1 .9

16.5

64
46
34

43.8

64.0

l .6

15.6

30.4

54.3

2.2

21.7

32.4

58.8

2.9

20.6

22

22.7

54.5

O

13.6

1 ,244

30.4

46.9

7.3

12.9

40 9
50‑59

60 '9
70‑
Total

Table 4 Infection rates of intestinal protozoa by sex in Naivasha and Kitui

Sex

Male
FemalePercentage of infection

Numberexamined

E. hist. E coli G. Iamb. C. mesn.

5 64

27.8

42 .4

7.3

1 1.0

680

32.5

50.7

7.4

14.4

statistically significant difference detected between them by X2‑test.
E. coliE, coli was the most common species among the intestinal protozoa detected,
and evenly widespread in each location. The highest infection rate was 63.3 per centin Machakos and the average in five locations was 52.3 per cent. The change of
its infection rate by age showed the same tendency as the case of E, histolytica. The
infection rate in female, 50.7 per cent, was higher than in male, 42.4 per cent. Thisdifference is statistically significant (P<0.01 ) in X2‑test.
E. nana and I. btitschlii

Positive rates of these two species were rather low. The average rates in five
10cations wer.e 4.8 per cent for E. nana and 8.7 per cent for I. btitschlii respectively.

G. Iamblia

The average positive rate for this parasite was 8.3 per cent. The highest rate,l 6.8 per cent, was seen at the youngest age group. The rate gradually declined as
the host ages became older, and especially it became extremely low at the age of
30 onward. There was no significant difference in the infection rates betweep themale and female in X2‑test.

253

C. mesnili

The highest, the lowest and the average positive rates for this species were22.5, 2.3 and I 0.4 per cent respectively. The lowest positive rate among age groups
was 6.4 per cent in the youngest age group. Among other age groups and between
the male and female there was no significant difference in the infection rate.
Total positive rate

The total positive rate, which means the percentage of infected persons withany kinds of mtestmal protozoa was 75 1 per cent on the average. The highest one
was 8 1 .4 per cent in Machakos and the lowest one was 60.0 per cent in Taveta.

Other intestinal protozoa detected

Entamoeba hartmanni and Trichomonas hominis were detected in a few cases but
Balantidium coli and isosporan oocysts were not detected.

DISCUSSION

The Republic of Kenya stands almost exactly astride the Equator. However,the climate of all the locations where this survey was conducted is different from thenormal limits of the textbook type of an equatorial region with its high temperature,high humidity, thick forests and heavy rainfall. The locations, except Taveta, Iie
on the highlands of this country. Their actual altitudes are between I !OO0‑2,000 m.

In Nairobi, for example, temperatures are as follows ; absolute maximum : 29.7'C,

mean maximum: 23.6'C, mean minimum: I 1.6'C, and absolute minimum: 2.50C.
The relative humidity at 3 p.m. in Nairobi, is about 50 per cent, and the meanannual rainfall is 750 to I .OOO mm. In Kenya there are two main rainy seasons ;the long rains from March to May and the short rains from November to December.
The climate of Naivasha, Kitui, Machakos and Nandi Hills is roughly the sameas of Nairobi. Taveta locates at the foot of Mt. Kilimanjaro, near Kenya‑Tanzania
border, and its altitude is about 500 m. Therefore, the annual mean temperature
is a little higher than other locations.

The inhabitants of these locations are mainly engaged in maize, wheat, cotton,
sugar, banana and, partly in Taveta, sisal production.

The stool specimens for this survey were collected from May in the long rains,through the dry season, to November in the short rains. The main purpose of thiswork was to make the prevalence of intestinal protozoal infections clear in eachlocations. Therefore, analysis of the seasonal results was not done.

Althogh the iron hematoxylin staining or the trichrome staining method isrecomended for the identification of amoeba species, the formol‑ether concentration
method followed by iodine staining was carried out in this work. Because, all the
specimens had been flxed in 10 per cent formol‑saline at each location for the purposeof the detection of schistosoma eggs prior to the examination of protozoa.
The results show that the intestinal protozoal infection is widespread in Kenya.

About 75 per cent of specimens examined were positive for one or more protozoal

254

species. It is noticeable that a considerable number of children less than 5 years old
has already been highly infected. This result was obtained from a single examination

per petson. As an infected patient does not always discharge cysts, the actual
positive rate should be higher than this result in reality.

Among the intestinal protozoa detected the most common species was E. coli
followed by E. histolytica, C. mesnili and G. Iamblia. The life cycle of these parasites

is rather simple. The infective cysts, which are resistant to environmental changes,
are passed out in the faeces of infected persons, and then they are ingested by a
new host. Drinking water and food, therefore, are most likely highly contaminatedwith faecal materials in the locations where this work was conducted.
Odhiambo and Konyango ( 1 980) reported the prevalence of intestinal protozoa

in an urban situation in Kisumu Municipality near Lake Victoria in Kenya, theystated that out of I ,432 stool specimens 338 (26.30/0) were positive for amoebic
infection. Kamunvi and Situbi ( 1 981) reported the prevalence of intestinal protozoa

in rural communities in South Nyanza, Kisumu Municipality. They showed thatout of 906 patients 26.7 per cent were positive for E. histolytica, and 3 1 .6 per centfor E. coli. As the stools were examined by direct method in these two surveys, thepositive rates in their data might be lower than the rate obtained by concentration
method as shown in the present data.
As our results and these two reports show, it is clear that E. histolytica infection

is widespread in Kenya. And, as Rees et al. ( 1974) has already pointed out, amoebic

dysentery and amoebic liver abscess are also not uncommon problem in Keny ,although the incidence of these invasive amoebiases are not clear both in the country
as a whole and in individual districts.
For the prevention and control of these parasitic diseases, it is important topromote ( I ) the mass‑survey and treatment, (2) improvement ofsanitary environment,(3) education of hygiene for school children and, finally, (4) massive campaign
against parasitic diseases for general public.

These parasite control measures gave a good successful result in Japan.
Morishita ( 1 975) described on it, an excerpt of which is as follows ;The parasitic infection was originally quite common in Japan. Indeed, theresult of the stool examination carried out during 1 922‑1926 showed that out ofl,157,322 specimens 709,438 (61.30/0) were positive for Ascaris, 269,656 (23.30/0)
for hookworm, and the total egg positive rate was 73.8 per cent. Though its incidence
declined year by year until the Second World War, its infection occured explosively
after the War. In 1 950, the total egg positive rate in 7,026,499 specimens examinedrose again to 63.8 per cent. Then the national attention focussed to this problem andthe nationwide parasite control activities started. Besides the Health Center's
activity, the Japan Association of Parasite Control was organized and its activities
started in many Prefectures in 1 949. The juridical ground of the parasite control
activities in Japan is 'The Parasite Control Act ( 1 931)'. Since the parasite infection
after the last War became a serious public health problem, the Ministry of Healthand Welfare stipulated in order to clarify the details of control operation. They were :'General Essentials of Parasite Control ( 1 959)', 'Essentials of Mass‑Treatment ofAscaris and Hookworm Infection ( 1 960) ', and 'Mass‑Treatment of Pinworm Infe tion

.255

( 1 960)' etc. 'School Hygiene Act ( 1 958)' enacted by the Ministry of Education
stipulated that primary, secondary and high school pupils should undergo examination
for Ascaris and hookworm at least once a year. In 1 960 the Act was partly revised toinclude all kinds of parasites found in pupils' stool examination. Since these oper‑
ations started, the incidence of all kinds of parasites has been remarkably reduced year
by year. In 1 965, the result of the stool examination on 1 2,720,3 1 5 specimens showedthat the total egg positive rate became 8.7 per cent. And, at last, the rate fell to

0.49 per cent in 1980.

Among several Asian countries. The Asian Parasite Control Organization was
founded and its cooperative activities started in 1974. Good results have been
accumulating in these member countries.
Also in African countries including the Republic of Kenya, the soil‑transmitted
parasite is a quite big problem as well as the vector born parasite such as Plasmodia
and Schistosome. The most important measure for the control of parasitic diseases

must be the mass‑survey and the mass‑treatment. For performing this operation, asuitable system and actual Acts should be prepared.
Though it may take a long period of time and require intensive efforts to control
the parasitic diseases, it can be done with satisfactory results as proven in Japan.

ACKNOWLEDGEMENT
We wish to thank Mr. M. Masika, a laboratory assistant, and other staff membersof the Helminthology Section of DDC & R, Nairobi, for their warm cooperation in
performing this investigation.

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protozoa among patients attending rural health units in South Nyanza, 2nd Annual Medical
Conference of Kenya Medical Research Institute and Kenya Trypanosomiasis Research Institute,
Nairobi2) Morishita. K. (1975) : The Japan Association of Parasite Control and its activities, The Japan
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Municipality, I st Annual Medical Conference of Kenya Medical Research Institute and Kenya
Trypanosomiasis Research Institute, Nairobi
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African Literature Bureau, Nairobi

256

ケニア諸地域住民の腸管寄生原虫感染状況
井関基弘1・林薫2・SIMoNM．GATIKA3
T．K．ARAp SIoNGoK3

1980年5月から11月の間にケニアのNaivasha，Kitui，Machakos，Taveta及びNandi

HiIlsの住民

2，114人から採取した糞便についてホルマリン・エーテル法により腸管寄生原虫のシストの検査を行い感染状況を調査した。

その結果，赤痢アメーバは3L8％，大腸アメーバは52。3％と極めて高率を示し，その他は小形ア
メーバ4．8彩，ヨードアメーバ8．7彩，ランブル鞭毛虫8．3％，メニール鞭毛虫10．4％であった。腸トリコモナス及びEn∫o〃10θ加hor

ηonn∫も少数例検出されたが，大腸バランチジウムやイソスポーラなどは検出されなかった。総陽性率（陽性総数／検査総数）は75．1鰯にも及び，飲料水，食物など生活環境が糞便によって高度に汚染されていることが示唆された。陽性率に男女間の有意差は認められなかった。年齢別にみると，4歳以下の乳幼児でもすでにかなり高率に感染がみられるが，ランブル
鞭毛虫を除き，特に30歳代から40歳代で最高値を示した。ランブル鞭毛虫は若年齢層ほど高い陽性率を示し，4歳以下が最高であった。

本調査は日本国際協力事業団（JICA）の医療協力「ケニア伝染病研究対策プロジェクト」の一環として行われたものであり，その撲滅対策を，戦後日本で実施され成果をあげた寄生虫予防対策事業との関連において考察した。

。f

1大阪市立大学医学部医動物学教室 2長崎大学熱帯医学研究所ウイルス学部門（現在：大分県公害

衛生センター）3ケニア共和国保健省

日本熱帯医学会雑誌

短

第11巻

257

第3／4号 1983257−260頁

報

青年海外協力隊員の消化器系寄生虫
検査成績（1981，1982）
山浦
和田常・白坂 龍暖・松本 克彦一芳武・小林 和代・岡本 雅子

昭和58年3月2日

受付／昭和58年6月1日 受理

著者ら（山浦ら，1976，1981）は，輸入消化器前報（山浦ら，1981）の成績を含めた帰国年度

系寄生虫病の現状について調査してきた。今回は，別寄生虫感染率はTable1の通りである。本調

1981年から1982年度に帰国した，青年海外協力隊

査での感染率は28．4彩及び23．2％，6年間合計の隊員716名（男性602名，女性114名）についての感染率は28．2％で共に前報で対照とした渡航前

引続き調査した。隊員の滞在期間は2年以上，滞の隊員の感染率2．5％より有意に高率であった（P在地の内訳はTable2の如く26力国である。隊＜α001）。前報合計の感染率30．7彩と本報合計の員の寄生虫検査は，前回同様，ホルマリン・エー

感染率を比較すると，本報に若干感染率の低下がテル法，硫酸亜鉛遠心浮遊法，試験管濾紙培養法認められる（P＜0．05）。原虫感染率は，前報23．5彩，の3法で行った。原虫類のシストの検出にはヨー本報21．5％とほとんど変化はなかったが，線虫感

ド染色を用い，アメーバ類の同定には別にハイデ

染率は前報の14．4％に対し本報では9．2彩と低下

ンハイン鉄ヘマトキシリン染色を行った。

した（P＜α01）。性別感染率は，男性26．6％，女Table1

Thc casesof intestinal

Volunteers

whoparasiteretumed血om

infbction

developing

among

countries

Japan

and

Overseas

Cooperation

their infbction

rates．

（1977−1982）

Cases

Year

PositiveNo．

examined

cases

Nematoda（％）（％）

parasitized

Trematoda
Cestoda（％）

byProtozoa
（％）

1977

115

35（30．4）

15（13．0）4（3．5）

27（23．5）

1978

73（32．4）

41（18。2）6（2．7）

47（20。9）

1979

225
284

82

38（13．4）

3（1．1）

65（22、9）

1980

126

40（3L7）14（lLl）

3（2．4）

37（29．4）

Subtotal

750

230（30．7）

108（14．4）

1981

328

93（28．4）31（9．5）7（2．1）

79（24、1）

1982

388

90（23．2）35（9．0）5（1．3）

75（19．3）

Subtota1

716

183（25．6）66（9．2）12（1．8）154（21．5）

174（1L9）28（L9）

330（22．5）

Total
＊The

in館ction413（28、2）＊

1シ466

rate

in

（28、9）

volunteers

東京女子医科大学寄生虫学教室

befbredeparture

was2．5per16（2・1）

176（23．5）

cent（5／198）（Yamaura6∫α乙，1981）

258

性20・2％で，男女間の感染率に有意差は認められ

生虫感染者183名中2種感染24名（13．1％），3種ない。

感染11名（6．0％），4種以上感染3名（1．6％）

1981−1982年度帰国隊員の虫種別，滞在国別寄が認められ，混合感染の割合は高率であった。隊

生虫感染状況はTable2に示した。中でもラン員が滞在した26力国のうち，バングラデシュ隊員

ブル鞭毛虫感染者が90名（12．6％）と最も多く，の感染率68．0％とネパール隊員の56．1彩が他の国

赤痢アメーバが16名（2．2％）に検出された。寄合計の感染率に比べて有意に高く（P〈0．001），モ

Table2The

countries

where

volunteers

visited andthe casesαf

intestinal parasite

infbction（1981−1982）

Country

Hw．Het．Opi．Tae．Eh．Ec．En．Ib．Ih．Ibe．G1．Cm．

Tt．

34（68．0）2

723（56．1）

5

1724（33．3）2

3

Tonga

1

10

Peru
BoliviaParaguay
Tunisia

Morocco％＊AL：」45

3

5
1

1

1

1

6
3

1

1

1 1

1（3．3）

9（26．5）

1

10（10．0）14（34．1）

3（ll・5）11

1

9（8。9）

4

144111921

716 18325．6

2，0

副3伽ηゐrゴ

1．5

1．3

0．3

0，1

1

16

20

19

1

7

1

90

2．2

2。8

2．7

0．1

1．0

0．1

12．6

1

0．1

o肋3，Tt、：7物加r醜吻h勉rα，Hw．Hookwoom，Het．：Hcterophyidae，Opi．：Opisthorchioidea，
En．：Eη吻」加砿π観α，

5．7

1

1

Total

3（15．0）1

Botswana8（29．6）n∠2Ethiopia

3

1

Marawi

1

1

5
6
2

1

20乙121

Tanzania
Zanbia1

4（19．0）

11

Kenya

1
2
1
1

1

1

Liberia

10

5

Ghana

4

41141263

Senegal1

3

13

Costarica2

2 2

10（17．9）

4

SolomonHonduras

2

31

New Guinea

2

04

Samoa

infヒction

50乙

West

＊AL

10（50・0）4

Syria・

parasite

ワ轟3

Malaysia

intestinal

21

PhilipPines

（％）

O
173
2
13
3
70187601465
54
52
2 60
22
11
3 3
3
1 0420Maldive

of

ロユロ

ined

Bangradesh
Nepal

Cases

No． Positive

Tae．：Tσ傭α sp．， Eh．：E撹α伽8加

Ib．：乃伽η206加ゐ偽σhJ露，αα1伽」α励伽，Cm．：碗Jo伽藤彫5幽．

h魏o伊5

Ih．：むoψor腐ho2η海5，o，Ec．：E．ooJら

Ibe．五ゐ8」あ，

GL：

259
ロッコ，ケニア，マラウイでは有意に低かった。

つと思われる（P＜0．05）。なお，ガーナ隊員34名

滞在国における感染虫種についてみると，アジ中5名（14．7％）に赤痢アメーバが認められたこ

ア地域（中近東を含む），太平洋地域では線虫感染とは注目された。

者がおのおの54名（22．3％），4名（13．3％）に対前報後，渡航前の隊員については，寄生虫病にし，原虫感染者はおのおの74名（30．6彩），5名

対する教育の強化が行われているが相変わらず輸（16．7％）でほぼ同程度であった。一方，中南米

入寄生虫感染の多いことは否めない。前回の調査

地域，アフリカ地域では線虫感染者おのおの7名

成績に比べて，本報の感染率に若干の低下が認め（9．6％），1名（0・3彩）に対し原虫感染者はおのられることが渡航前の教育の効果であるならば幸おの16名（21．9％），61名（16．4％）で線虫感染率いである。

の低い点が目立った。前述の線虫感染率が前報より低下しているのは，アジア地域における鞭虫を中心とした線虫感染率が，前報では29．5彩あった

青年海外協力隊事務局野村忠策氏，同診療室各位，及び当教室員の協力に感謝します。

ものが本報では22．3％に低下したことが要因の1

文

1）

山浦

献

常，和田芳武，松本克彦，鈴木雅子，白坂龍暖（1976）：海外駐在員の寄生虫感染一青年

海外協力隊員の感染状況から一，熱帯，10（1），18−20

2）

山浦常，松本克彦，和田芳武，小林和代，岡本雅子，白坂龍噴（1981）：海外長期滞在者の消化器系寄生虫検査，寄生虫誌，30（1），85−89

260

Short communication

A SURVEY ON INTESTINAL PARASITE INFECTION
OF JAPAN OVERSEAS COOPERATIONVOLUNTEERS (1981‑1982)
HISASHI YAMAURA, RYUKOH SHIRASAKA, KATSUHIKO MATSUMOTO,YOSHITAKE WADA, KAZUYO KOBAYASHI AND MASAKO OKAMOTO
R***i+*d M**ch 2 1 983 / A'cept*d Jun* 1 1 983

The stool examinations on long‑term visitets to developing countries were carried out to inyestigate

the epidemiology of parasitosis imported to Japan. The subjects of the investigation were 7 1 6 Japan
Overseas Cooperation Volunteers who returned in 1 98 1 ‑ 1 982. The infection rates of parasitosis among

the volunteers before departure (Yamaura et al., 1981) were compared as controls of this survey.

Formalin‑ether sedimentation method, zinc sulfate centrifugation‑flotation method and Harada &Mori's test‑tube cultivation method were used for stool examination. Rizopoda was identified byHydenhain's iron‑hematoxylin staining.
The results are summarized in Table I and Table 2 :1) The infection rates among returned volunteers (28.40/0 in 1981 and 23.20/0 in 1982) were muchhigher than the rate before departure (2.50/0' 5/198) (Table 1). No relation between infection rateand sex of the volunteers was recognized.
2) The highest infection rate was found for Giardia lamblia ( 12.60/0' 90/716). Entamoeba histolytica wasobserved in 2.2 per cent ( 16/716). High infection rate of E. histolytica was observed among thevolunteers returned from Ghana ( 1 4.70/0 ' 5134) . More than two species of parasites were found in
20.7 per cent of positive cases (Table 2).

3) The infection rates of volunteers returned from Bangradesh and from Nepal were 68.0 per centand 56. I per cent respectively.

These two rates were found to be significantly higher than that from other 24 countries. The ratioof helminth infection to protozoa infection in African and Central‑ and South American countries
was lower than that in Asian and Oceanian countries (Table 2).

Department of Parasitology, Tokyo Women's Medical College. Kawadacho I O, Shinj uku‑ku. Tokyo
1 62, Japan.

日本熱帯医学会雑誌

第11巻 第3／4号

261

1983261−275頁

日本熱帯医学会第7回九州支部総会講演要旨
期場長会会会

昭和58年1月23日（日）福岡大学医学部第2中講堂
福岡大学医学部 木船 悌嗣

4

染色体分析

Special Gues亡ReOort Speecb
Onchocerciasis

inJ．Onof士e

of

平井 啓久

Arguirre（グアテマラ・オンコセルカ症プロジェ（Department

Robres Diseases，National

Malaria

クト）

5

Eradication Services，Guatemala）

キンパラナガハシカにみられる酵素多形

塚本

特

別 講

宮城 一郎

大

講

に対する感受性について小田力（長崎大・医・医動物）五十嵐章（長崎大・熱帯医研・ウイルス）演森章夫

1ビルハルッ住血吸虫症患者尿中における虫堀田（長崎大・医・医動物）進（神戸大・医・国際交流センター）

卵周囲沈降反応平田瑞城（久留米大・医・寄生虫）

嶋田雅暁（長崎大・熱帯医研・寄生虫）n（琉球大・医・医動物）

ヒトスジシマカの生態とデング熱ウイルス（鹿児島大・医・第二病理）

一 般

Koech，E。Wambayi（DVBD，Kenya）

7

狂犬病ウイルス赤血球凝集抑制（Hl）試験

実用の試み
万年 和明，石川8ケニア国におけるロタウイルス検出の年間

質の好酸球遊走活性について
真，堀井洋一郎，石井和正，三舟求真人（大分医大・微生物）

2 日本住血吸虫とマンソン住血吸虫の虫卵物
大橋政博

6 インドネシアにおけるネッタイシマカ及び（長崎大・医・医動物）

IIハブーその毒と駆除一
木原

増久，堀尾

（産業医大・医動物）

演

1熱帯地域の水質と寄生虫感染
藤田紘一郎（熊本大・医・寄生虫病）

上本 膜一

GuatemaraOchoa

グアテマラ産s加麗riμ〃200hrαc創〃！の唾腺明（宮崎医大・寄生虫）

推移
牧野

芳大

3ベネズエラで経験したスナノミ症（熊本大・医・寄生虫）（長崎大・熱帯医研・ウイルス）松本 一郎（岩手医大・細菌）

多田

功

鈴木

博

千葉

（長崎大・熱帯医研・ウイルス）

0．A．Mohammed，P．0．Ogaja，

高岡 宏行（大分医大・医動物）

野田 伸一（鹿児島大・医。医動物）

靖夫（札幌医大・小児科）

A．M．Kibue，J．M．Muli，

G．W．Nakitare（VRC，Kenya）

262

9 ケニア国における細菌性下痢症の疫学調査
宇都宮明剛，森賢治，林岩永 正明，内藤

達郎

敏明，

12

戦後沖縄の医療事情とその社会的背景
照屋

寛善，平良

一彦，宮城

重二

（琉球大・医・保健・保健管理）（長崎大・熱帯医研・病原細菌）

Z．W。Gatheru，F．Sang，N．Koske

海外レポート（KEMRI，Kenya）
10（NPHLS，Kenya）

暑熱順化の形成機序に関する研究
小坂

大渡

光男，土屋

勝彦，井元

伸，藤原真理子

一特にブラジル北東部の課題評価とラテンアメリカにおける健康指標の多変量解析一
克己，城石

ケニア

野島 尚武

11ラテンアメリカにおける社会医学的諸問題

誠哉，加納

ベネズエラ

多田功 （熊本大・医・寄生虫病）

孝章，（長崎大・熱帯医研・疫学）

山口ー一︵∠34

J．N．Kaviti

幸博（筑波大・社会医学）（鹿児島大・医・医動物）サモア

木村 英作 （長崎大・熱帯医研・寄生虫）

中華人民共和国

石井 洋一（九大・医・寄生虫）

263

Special Guest Report

ONCHOCERCIASIS IN GUATEMALA
J. Onofre Ochoa A.
Departynent of Robles Diseases (Onchocerciasis)
National Malaria Eradication Service

Guatemala Guatemala C. A.
After several times ofnegotiation, the cooperative project ofthe Government ofJapan and Republicof Guatemala for research and control of the onchocerciasis was established in July 1 975. A five years

plan including the preparatory, attack and evaluation phases, start in October 1975. In May 1980,
JICA extend the project for another three consecutive years ( 1981 to 1983) in order to establish theeffective methods for vector control and suggest the future plan to be widely applicable in Guatemala.

During the period, 43 Japanese experts and 28 Guatemalan people from different academic level
worked together on research and vector control. Until now in the present time actually there are about

60 peoples includingJapanese experts. The project will be end this year in September 1983.

Until now forty scientiflc papers were published and about 45 more will be also published at theend of the project.

After the first extensive study made by Dalmat in 1 955, a lot of new information on Guatemala
onchocerciasis had been added by Japanese experts in our project and most of them can be acquired in
the available data already published. The most revelant results obtained are : a) the possibility ofcarry out a vector control using larvicide for interrupt the transmission of the onchocerciasis. b)
to discover that the more efficient vector in Guatemala is S. ocraceum. c) to find and select the m:ainstreams in which S. ochraceum breed. d) to clear that S. ochraceum is not a single species but a species

complex in which are at least four subspecies. e) to establish a practical and standardized methods
for diagnosis.

With regards to the first successufully experimental control with Temephos (abate) in a small
scale, the application has been extended to the other region of the Pilot Area of San Vicente Pacaya,

E cuintla. The preliminary results show marked reduction of the blackfly population; mainly in S.
ochraceum the main target.

At the present time, there is no possibi.lity to use chemoterapy or prophilaxis in the control pro‑gram as a mass treatment but experimental trials with DEC has been conducted at one of the hospital,

with good‑results. There is also the possibility to launch in 1 983 a small scale experimental mass
treatment with DEC in one of the localities of the endemic area. Several experimental investigations

which were done from the begining of the project are still under observation, specially those in the

immunological and entomological side.
The investigations for vector control and the onchocerciasis eradication are satisfactory andprogressing every day, but biside the progress and the basic information obtained, we are facing one of
the more delicated year, because this year is the end of our project and we Japanese and Guatemalansmust obtain promissory results and to prepare the recomendations for future vector control in
Guatemala.
If the program suddenly stopped in September 1 983, there would be Chaos in the maintainance ofOnchocerciasis Department and, frankly speaking, I don't know exactly what will be the future of ourprogram ifJICA abandon his medical. cooperation. We are very worry about this problem and one ofour delirium is how to obtain financial budget to follow the recomendations given by the Japanes

264
mission．Alsowe

arewo皿yto continue thee皿adication of

JICA

for

this

The

becauseweare

con丘onting

thepresence

thc onchocerciasis

and

to

maintaintheand trained

valuedequipment

t6chnicians
donatedbyprqject・

mind

is

to

step，fbllowing

main

the

recomendations

andsuggestionsof theoumear

is

to

more

economical

waycontrolofqualified

objectiveinchoosealaunch a

integralsuch

vectorJapaneseascontrol in the endemic

mission・If

nodulectomy

the飴asibilityof theerradication of theonchocerciasis．Chemotherapyas
way ifwe can use

as a mass treatment・andaareas，stcp by

it

will

not

to

continuebepossibleinvestigatingcomplement，seems

suitable

265

特別 講 演 1

熱帯地域の水質と寄生虫感染
藤田紘一郎（長崎大・医・医動物）

最近，わが国企業の熱帯地域への進出及び一般

1978年度の邦人の腸管内寄生虫感染率は8．0％で邦人の渡航が著しく増加しているが，彼らが熱帯あった。また，嶢虫感染率も8．3彩であった。こ地域で罹患し，苦しんでいる病気は，A型肝炎，

れらの陽性者にコンバントリンを1クール分だけ腸チフス，アメーバ赤痢などの経口感染症である。与えて翌年まで放置し，さらに翌年検査したとこ
我々は，これらの経口感染症の重要な感染源が，ろ，腸管内寄生虫陽性率は4．8％に減少していた。

熱帯地における飲料水にあると考え，世界各地のしかし，蝿虫の感染率はあまり変化せず，むしろ発展途上国の飲料水を細菌学的及び化学的に調査 最近では逆に増加する傾向がみられた。腸管内寄した。同時に，飲料水とこれら経口感染症との関 生虫のうちで，回虫は感染率の減少傾向が著し連をみるため，これらの飲料水を使用している邦

かったが，鞭虫の感染率にはほとんど変化がみら

人の腸管寄生虫の感染率を調べた。なお，別に，れなかった。

邦人の子供を対象にセロファンテープ法による嶢

一方，インドネシアの飲料水の汚染度は，経年虫検査を行った。

的に変化なく，最近でもかなりの割合で糞便系汚その結果，在留邦人の糞便から主として回虫卵染にさらされていることが判明した。次いで，寄が見出され，その他，鞭虫，無鉤条虫，肝吸虫な生虫陽性者が飲用している水のみを取り上げて，どの虫卵が検出された。腸管寄生虫感染率はイン全体の水質検査成績と比較したところ，腸管内寄ドネシア在留邦人に最も高く，次いで，南西アジ 生虫陽性者が飲用している水は，全体の成績より

ア，東アフリカ，中南米などに在留する邦人の順

かなり汚染された飲料水であることが判った。たであり，中近東のカタール在留邦人の場合は全員

とえば，1979年の寄生虫陽性者全員が，大腸菌群

陰性であった。また，これらの在留邦人が飲用し陽性の飲料水を使用していることが明らかにされている水から，多くの割合で大腸菌群が検出され，た。

この割合と邦人の腸管寄生虫陽性率との間に，高，在留邦人は，糞便系汚染のある飲料水を，煮沸い相関（rニ0．957）が認められた。しかし，寄生虫して飲用しているが，日常生活において生活用水

感染率と飲料水の過マンガン酸カリ消費量との間として使用している限り，何らかのルートで経口には相関関係は見出されなかった。また，在留邦的に体内に摂取し，経口感染症に罹患しているも人の子供を対象に施行した嶢虫感染の有無は，飲 のと考えられる。すなわち，腸チフス，流行性肝料水の汚染とは全く無関係であった。

炎，アメーバ赤痢及ぴ種々の腸管寄生虫のような以上の事実は，腸管寄生虫と同じように糞便を 経口感染症を予防するには，ただ単に，飲料水の介して感染するとされるA型肝炎など，重篤なみを煮沸するだけでは不十分であることが示され

経口感染症の伝播に，飲料水が重要な役割を演じた。インドネシアのように，飲料水が高度に糞便ていることを思わせる。

系の汚染にさらされているような国においては，

次に，インドネシア在留邦人について，その腸管寄生虫感染率の経年的変化と，飲料水水質検査
結果の変化を比較して，その相関関係を調べた。

飲料水のみでなく，生活用水全体を浄水濾過殺菌することが必要であろう。

266

特

別 講

演 皿

ハブーその毒と駆除一木原大（鹿児島大・医・第二生理）

蛇毒はその強い生理活性から，古くより研究者の興味をひいてきた。毒蛇による被害の多い国で発現に重要な役割を担っているものと考えられる。

PLA2はBrCNで処理すると，ただ1個含まはその治療法の改良のために，蛇毒の研究が盛んれるメチオニル結合が切断され，2個の断片になに行われたことは当然として，一方蛇毒の成分がる。この2個の断片を適当な条件下で一一諸にするタンパクであることが分るにつれ，生化学領域でと，分子の再構成が起こり活性が再現する。

も重要な研究課題として取りあげられている。

演者は以前よりハブ毒の研究に従事してきたが，一方ハブの血液中にはこのPLA2に対するイ
ンヒビターが存在し，両者はモル比1：1で結合として良く知られているホ

し，PLA2活性を完全に阻害する。ハブ血液中にスホリパーゼA2（以後PLA2）や，そのインヒはこの外，プロティナーゼや出血因子に対するイ

ピターの精製，あるいは血液凝固に関与する酵素

ンヒビターも存在し，治療への利用の可能性につ等について検討してきた。

いて興味をひかれる。

その間に

溶血毒素

このような毒の研究あるいは治療法の研究が進

ハブ毒中のプロティナーゼはフィブリンを溶解

むにつれ，ハブに対する恐怖はかなり薄れてきた

し，プラスミン様の活性を持っている。またハブが実際に咬傷は依然として発生しており，完全に毒中にはカゼイン分解能は持たないが，フィブリ

安全であるためにはハブを駆除する以外に方法が・

ノーゲンを分解する酵素が存在する。ハブ毒を特ない。

徴づける出血因子やこれらの諸活性を総合して考1977年に奄美ハブ駆除対策研究会が組織され，えると，ハブ毒は生体に対して強い出血をひき起演者もメンバーの一員として駆除対策の調査を進こし，かつ凝固を阻害するというのがその本質でめてきた。その中で主に誘引捕獲に関連した仕事はないかと思われる。

について紹介してみたい。

蛇毒から既に20種を越える酵素が報告されていまたハブ毒PLA2は動物に注射することにより，壊死を起こす。そしてPLA2注射後血中のCPK活性を測定してみると，時間とともに増大する。このCPK活性の上昇は咬症患者でも認める。演者はハブ毒中のPLA2について研究を行っられており，PLA2は現在ハブ咬症の後遣症とし

1．ハブ毒についてた。PLA2は蛇毒を代表する酵素の1つで，inて恐れられている，壊死の原因物質の1つである

vitroで溶血作用を持つことから「溶血因子」と可能性がある。

称されてきた。ハブ毒中のPLA2はゲル濾過，
イオン交換クロマトの組合わせで均一に精製でき，

2．ハブ駆除について

分子量は14，000で通常ダイマーとして存在する。

南西諸島の住民がハブの恐怖からのがれる為に

pI7．9の弱塩基性タンパクで，N端はPyr．Glu．

は，できるだけハブの生息数を減らすことが必要

で始まる点が他の蛇毒にみられない特徴である。

である。この目的で1977年に「奄美ハブ駆除研究

1／2Cys．残基を14個も持っており，これが本酵素会」が発足した。この中で演者は主に誘引捕獲のの安定性の一因であろうと考えられている。また研究に従事してきた。野外において適当な構造を1個しか含まれていないHis．残基をBPBで修持つ捕獲箱を設置することにより，ハブを捕獲す

飾すると，完全に失活することからHis．が活性ることが可能である。しかしこの時，ハブに対し

267て誘引作用を持つものを捕獲箱中に置く事が必要れることが望まれている。

である。現時点では生きたネズミでのみ成功してまた捕獲されたハブの性比の調査から，著しいいる。しかし生きたネズミを用いる限り管理の煩偏りがあることが分った。その原因として雌雄の雑さや，トラップ構造に対する制約等から事業の行動の差が考えられていたが，艀化実験の結果，大規模化は難しい。そこで生きたネズミ以外の誘艀化時に既に偏りがあることが判明した。

引物質の開発が強く望まれてきたが，誘引効果判

このようにハブの行動あるいは生態には未知の定法がなく著しく支障をきたしている。しかし最問題が数多く残されており，その一端について紹近になりハブの舌の出し入れを利用した判定法が介した。

開発されつつある。一日も早くこの方法が確立さ

268

一一

1

般

ピルハルツ住血吸虫症患者尿中における虫卵周囲沈降反応平田瑞城（久留米大・医・寄生虫）

嶋田 雅暁（長崎大・熱帯医研・寄生虫）

D．Koech，E．Wambay（DVBD，Kenya）

講 演

虫卵抽出液（SEA）の抗原性の違い及び虫卵に含まれるSEAの含量の違いなどが考えられるが，今厨の実験は好酸球遊走因子（ECF）に着目し，両者のSEAに含まれるECFの成分の比較をした。好酸球遊走活性はケモタキシスチェンバーを用い，ミリポアフィルター内に遊走したモルモッ
ト好酸球の数をカウントした。遊走活性はdose−

dependentであり，同一蛋白濃度ではSj SEAのピルハルツ住血吸虫症の高浸淫地であるKwale

方がより高い活性を示した。Checker−board as．
District（Kenya）の小学生より尿を集め，Taw盒k sayによりSEAのケモタキシス活性が証明され
andGalil（1977）に従い虫卵を洗浄，回収した。

たが，幾分かのケモカィネシス活性も認められた。

光顕下に虫卵を観察した時，虫卵周囲沈降物様のSephadex

存在を認めた。沈降物はトリプシン処理（PH8．0）子と低分子のECFの存在が認められ，両ECF

で解離せず，ペプシン処理（pH2．8）で消失した。

の活性の強さはほぼ同じであった。これらの性質

G150でSEAをゲル濾過すると高分

螢光抗体法にて1一グロブリンの検索を行った所， は，SjとSmで共通であった。高分子ECFは，沈降物に一致してIgG，IgMの沈着を認めた。

100。Cの熱処理及びプロナーゼ処理には安定であ

また尿上清の硫安沈殿法で7一グロブリン分画にるが，過ヨーソ酸処理によりほぼ完全に失活した。

COP反応活性がみられた。ペプシン処理虫卵で尿中COP反応の再現を試みた時31／49（65．3彩）これらの性質もsjとSmで共通であった。一方
低分子のECFは熱，プロナーゼ及びカルボキシにCOP陽性であった。radial

immunodi鉦usion

ペプチダーゼA処理に対して安定であった。まで尿中の血清成分の測定を行ったが，沈降物形成たトルエンにより抽出される事実より，低分子のに関与する成分，IgG，IgM，IgA，C3の含有を認

ECFは疎水性の強い物質であることが示されめた。尚COP陽性となった尿では全例IgG陽た。以上の結果より好酸球遊走因子に関しては性であった。ビルハルッ住血吸虫症の免疫診断にsj

SEA力斗SmSEAよりも高い比活性をもつこと

ヒト由来の虫卵を使用したCOP反応の有用性が が示されたが，ECFの組成の違いは明示されな報告されているが，いずれも虫卵は生理的食塩水

かった。また住血吸虫虫卵由来のECFは今まで洗浄のみで使用されており，特に尿中COPに注 報告されているECF−A，ECF一《〕，ECF−L，ECF−
目した報告をみない。無処理の虫卵では誤った陽G等とは分子量，化学性状などの違いより別個性判断が下される危険性があるため，注意されるの物質であることが示された。

ぺき現象と考えられる。

目本住血吸虫とマンソン住血吸虫の虫卵物
質の好酸球遊走活性について

真，堀井洋一郎，石井明（宮崎医大・寄生虫）

日本住血吸虫（Sj）とマンソン住血吸虫（Sm）感

岡田
高野

大橋

ベネズエラで経験したスナノミ症

田木
多鈴

3
2

功

（熊本大・医・寄生虫病）

博（長崎大・熱帯医研・ウイルス）宏行（大分医大・医動物）

伸一 （鹿児島大・医・医動物）

染における虫卵結節形成の免疫機構の違いが多く患者らは1982年10月10日から12月7日までベネの研究によって指摘されてきた。この原因としてズエラを訪間し，その期間のうち10月19日から11269

月2日までブラジル国境に近いParimaに滞在し6集団の451個体を分析した結果多くの逆位多た。メンバー4人のうち3人がそこでスナノミ

型及びバンド多型が観察された。6集団の内，（T〃㎎oρθnθFinca

耀π5）の寄生を受けた。スナノミは中Brote（FB），Finca

lasCascadasdeNica

南米・アフリカに分布し，雌雄とも吸血するが，（FCN）及びFinca

受精した雌はさらに人や他の哺乳類の真皮内に侵ンコセルカ症高浸淫地である。また，Finca

入する寄生性のノミである。患者らの症状は異物

Rincon（FRS）及びFinca San Isidro（FSI）（以感と痛みであったが，時間が経過しノミが大きく

前は中程度の流行地であった）は非常に低い流行なると異物感と痛みが増し，化膿する場合もあっ地であり，そしてFinca

た。治療は外科的に除去し抗生物質軟膏を塗布し行地である。

た。虫体を除去した後は異物感と痛みは消えた。

Recreo（FRY）の3集団はオlaelRuda（FRQ）は非流

今回は，これらの集団において観察された多く

症例1：0木○，男43歳。

の染色体多型の中から雄性決定因子に関連した多左足の第4指の爪下1カ所に寄生をうけた。除くなり，すでに化膿し，除去時に出血が見られた。

型に着目した。逆位IL−3は第1染色体の20A2〜22Aバンド間の逆位であるが，FB，FCN及びFRYの雄にそれぞれ38彩，33％及び45％の頻度

除去後の傷口は直径5mmあり，その後2カ月でヘテロIL−3が出現した。IL−1（26A〜31B、），は色素斑が見られた。

lL−2（34B〜41A、）及び39A、ヘテロバンドは，去したのがParimaを離れて7日後でかなり大き症例2：0田O一，男34歳。
左足の母指の爪廓1ヵ所，右足の母指の爪廓1

低い頻度（8彩〜33％）ではあるが，FRQ以外の5集団の雄だけに見られた（全てヘテロ）。

カ所，爪下2カ所，底側1カ所の合計5カ所に寄 IllL−11は第3染色体長腕の非常に大きな逆位であるが，FRQ集団だけの雄100％に観察された。
生を受けた。4ヵ所はParimaを離れる1日前，他の1カ所はParimaを離れて1日後に除去した。 IL−1，IL−2及び39A、ヘテロバンドは常に同時に除去が早かったので出血は見られなかった。

同個体に出現した。またこれらの多型群がIL−3

症例3：0田○，男48歳。
左足の第4指の爪廓，爪下，左足の母指と第2及びIIIL−11と同時に出現することはなかった。

指の間，第3指爪下各1カ所の合計4ヵ所に寄生をうけた。Parimaを離れる日，離れて5日後とのである。

すなわちこれら3種の多型はそれぞれ独立したも以上の様にこれら5種の多型は雌個体には全く7日後に各1カ所を除去したが他の1カ所は 見られず雄だけに出現するものであり雄性決定因
Parimaを離れて25日後に除去したため非常に大子を含む染色体多型だと考えられるρRothfelsら

きくなり，除去後の傷口も大きくなった。

は，姉妹種間における染色体の相違は固定された逆位，性染色体部位の違い，及びその集団に特異

4 グアテマラ産酬脚伽卿oc伽σcεπ配の唾
腺染色体分析
平井

啓久

上本

駿一

な染色体多型が大きな特徴であるとしている。このことから＆ocかαo釧脚には少なくとも3種の（熊本大・医・寄生虫病）（グアテマラ・オンコセルカ症
プロジェクト）グアテマラ共和国におけるオンコセルカ症の主姉妹種が存在することが推測された。

5

キンパラナガハシカにみられる酵素多形
塚本増久，堀尾 政博
（産業医大・医動物）

宮城一郎（琉球大・医・医動物）

要伝播ブユはS加麗伽配oc伽αc釧〃2である。最近
この種における姉妹種の存在の有無が問題となっキンパラナガハシカTr卯θro∫漉s加用加soは台ている。これを細胞遺伝学的に検討するため幼虫

湾から日本本土，朝鮮半島，中国大陸へと広く南の唾腺染色体を分析した。

北に分布する蚊であるが，宮古島，沖縄本島，奄270
美大島に至る列島弧には生息せず，また西表島，
石垣島にのみ別の亜種ア昭即〃！θnsなが生息するという奇妙な分布を示している。そこで台湾，八重山列島，屋久島，九州北部の各地から得られた幼虫を用いて，アクリルアミドゲル電気泳動法による酵素多形の有無，地理的変異，亜種間の差の有無などを生化学的に比較した。その結果，エステ
ラーゼやロイシンアミノペプチダーゼでは何本かの主要活性バンドが検出され，どの地方の材料でも顕著な多形現象（個体変異）が示されて，各亜種または地理的分布を反映するような特徴的なア
イソザイムは認められなかった。一方，乳酸脱水素酵素（LDH）の場合には西表島，石垣島及び屋久島からの材料では共通の1本のバンドしか示さなかったのに対し，九州北部の各地から採集された材料では泳動度の変異が著しく，基本的なバンドのみを示すもの，泳動度の遅いバンドを示すもの，これらの雑種と考えられるバンドを呈するものなどが混在していた。LDHでこのような顕著な多形現象を示した蚊は今のところ日本ではこのキンパラナガハシカのみであるのは注目すべきであろう。このようなLDHの多形が九州南部にも存在するかどうか，また九州以外の日本本土ではどうなのかを知ることは極めて興味深い。
Trゆ∫8ro漉s属の蚊は日本ではこの1種のみであるが，熱帯のフィリピン及びニューギニアではそれぞれ30数種も知られており，この属の分化の中心地であると言われている。その分布の北辺日本
では目下種の分化が行われつつあるのではなかろうか。また，宮古島から奄美大島迄の列島弧には

なぜこの普通種が分布していないのか，それが何を意味しているのかなどは大きな謎として残されたままである。

（神戸大・医・国際交流センター）

1982年1月にインドネシアのジャカルタ市でデング出血熱の研究の一環としてネッタイシマカとヒトスジシマカの生態の調査とこれらの蚊成虫についてウイルス分離を実施した。一般にネッタイ

シマカは人家内で，ヒトスジシマカは屋外で採集された。デング熱の流行地で採集したネッタイシ
マカからはデングウイルス1型が分離されたが，ヒトスジシマカからはデングウイルスは検出されなかった。しかし，ネッタイシマカから2〜4型のウイルスが・ヒトスジシマカからはどの型のウイルスも分離されなかった理由については未解決のままになっている。今回はこれらの点について検討した。蚊からのウイルス分離とは別に1981及び1982年にインドネシア大学付属病院で患者の血液からウイルス分離を実施したところ，2と3型ウィルス保有患者が多く，1型ウイルスを持ったものは少なかったが，流行地において1型ウィルスが存在していることが確認された。一方，採集したネッタイシマカは19個体と極めて少なかった。

以上のことから，偶然1型ウイルス保有蚊だけが採集されてウイルス分離に供されたものと想像される。デングウィルス（2型）をジャカルタ系のヒトスジシマカに実験的に感染させた結果，感受性があることがわかった。ウイルス分離に供した
ヒトスジシマカの大多数は流行地よりかなり離れたインドネシア大学医学部構内で採集されたものである。この蚊の個体群の年齢構成を不定期に調査したところ，その大多数は未経産雌であった。

これらの事実を考え合せると，ウイルス分離に使用したヒトスジシマカは一般に羽化して間もなく吸血に来たものであって，デングウイルスを保有
していなかったものと考えられる。

6

インドネシアにおけるネッタイシマカ及ぴヒトスジシマカの生態とデング熱ウイルスに対する感受性について
小田

五十嵐

力一

（長崎大・医・医動物）

7

狂犬病ウイルス赤血球凝集抑制（HI）試験

実用化の試み万年

和明，石川和正，三舟求真人（大分医大・微生物）章（長崎大・熱帯医研・ウイルス）

狂犬病ウイルスのHl試験について，使用赤血森章夫（長崎大・医・医動物）球の検討，血清中のインヒピターの除去法の検討

堀田

を行った。

進

271

1）

プロメリンで処理したヒト赤血球では従来

ケニアにおけるロタウイルスの流行がどのよう使用されているガチョウ赤血球に比べて8倍ないなものであるかを知るために，毎月，セントラル

し16倍感度が上昇した。走査型電顕で観察すると

州ニエリ地区（海抜1，800m）で1981年9月一1982

ヒト未処理赤血球への吸着ウィルス粒子数にくら

年9月の期問，及びコースト州モンバサ地区（海べて・ブロメリン処理ヒト赤血球に吸着するウイ

抜20m）で1981年7月一1982年9月の期間，州立

ルス粒子数ははるかに多かった。このことから，

病院・クリニック等で，5歳以下の小児の便を採ブロメリン処理によってウイルス吸着に対する感取し，市販のロタウイルス検出用キット（ロタザ

度が非常によくなることが示唆された。

ィム）及び我々の試作したELISA法を用いて，

2）研リポプロテインであると言われている

ロタウイルス抗原の検出を行った。高地で，やや血清中のインヒビターの除去には従来カオリンが涼しい環境にあるニエリ地区では，ロタウイルス

用いられてきたが，完全に除去できない場合があは7月以外の毎月検出され，ピークは1月及び9る。そこで局法軽質無水ケイ酸（アエロジル）を月に見られた（胃腸炎患者の34．3彩及び2L4％）。

用いてインヒビターを完全に除去できる血清の最一方・低地で暑い環境にあるモンバサ地区では，低希釈濃度・処理条件・アエロジル除去の条件等

ロタウィルスは毎月検出され，そのピークは7月について検討した結果，4％アエロジルと1：2

及び1月に見られた（胃腸炎患者の51．5％及び希釈血清とを等量にまぜて室温20分処理すると完

29・5彩）。調査期間中，ニエリ地区では55／454検

全にインヒビターが除去できることがわかった。

体（12・1％）が，またモンバサ地区では151／741

処理後の血清中にごく微量のアエロジル粒子が除検体（20．4％）がロタウィルス陽性を示した。ロ

去しきれずに残って自然凝集反応の一因となった

タウイルスの流行と気候との明確な相関は見られが最終処理検体をさらに1：2に希釈して反応をなかったが，乾期に多く雨期に少なくなる傾向が開始することで問題はなくなった。またアエロジ見られた。年齢分布では，6ヵ月未満の乳児で最ルが水中で負に荷電しているので陰イオン交換樹も高いロタウイルスの検出率を示した。

脂で抗体グロブリンに影響することなく取り除くことができ，この条件については検討中であ9る。

3）血清をアエロジル処理することと，ブロメ

ケニアにおける細菌性下痢症の疫学調査

宇都宮明剛，森

賢治，林

岩永

達郎

正明，内藤

（長崎大・熱帯医研・病原細菌）

リン処理ヒト赤血球を使用することとの組み合せ

Z．W．Gatheru，F．Sang，N．Koske

でHI試験を行うと，ヒト免疫血清，マウス免疫（KEMRI，Kenya）

腹水とも従来の方法と比較して，4〜8倍の感度
J．N．Kaviti

で高くHI抗体を検出できた。またこの方法により20倍以下のHl抗体の動きを検索することが可能となった。

8

敏明，（NPHLS，Kenya）

国際協力事業団の「ケニア国伝染病研究対策プ
ロジェクト」の目的としての下痢症の解明においケニア国における回タウイルス検出の年間て，細菌学的な分野から原因菌の疫学調査を行っ推移た。ケニア南部海岸地区を対象とし，6医療施設

牧野 芳大への外来下痢患者の下痢便を検体とし，1981年10（長崎大・熱帯医研・ウイルそ）松本一郎（岩手医大・細菌）千葉靖夫（札幌医大・小児科）

月から1982年7月までの，10カ月間の成績を報告した。

999検体から赤痢菌228株，病原大腸菌80株，サ

0．A．Moha㎜ed，P．0．Ogaja，

ルモネラ35株，計343株（34．3％）であったが，AM．Kibue，J．M．Muli，

コレラ菌，腸炎ビプリオは検出されなかった。分

G．W．Nakitare

離率が最も高かったのは，最大雨期5月の57．5％（VRC，Kenya）

272（赤痢菌42．4彩，病原大腸菌7・0彩，サルモネラ

して温度順化ウサギを作成し，人工気象室にて，

これらウサギに皮膚温度刺激を加えて体温調節の7．9％）であった。

年齢群別では，5歳以上での検出率は34〜42％

熱産生や熱放散反応を誘起させ，特に今回は後者であったが，0−4歳では20．8％であり，この年齢の反応に注目して直腸温，耳介皮膚温，呼吸頻度群ではロタウイノレス，キャンピロバクターなどのを同時連続記録しそれをコンピュータ解析した。

可能性が考えられた。また血液便163検体からは

結果：①温度刺激に対する諸生体反応の発現温

赤痢菌が76彩に検出され，病原大腸菌4．9％，サ

度閾値に関しては無傷の寒冷順化ウサギの直腸温ルモネラ2．4％であったが，陰性の結果が18．4％

は対照の温度非順化ウサギの直腸温に比し低温側であり，赤痢アメーバなどの原因が推定された。

に移動，②無傷の暑熱順化ウサギでは対照ウサギ

赤痢菌の血清型別では，亜群Bフレキシネルがのそれに比し高温側に移動する。③一方，暑熱順

73．6％，亜群Dソンネが12．2％であり，個々の菌化や寒冷順化ウサギの両群で体温調節反応の量的型では，フレキシネル2aが3L1％，フレキシネ

変化をみると順化初期で増加，順化の進行に伴っ

ル1bが17．1％で優位であった。病原大腸菌ではて減少があり，所謂，Habituation（慣れ）の現象

0124：K72が11株，サルモネラではB群が17株を呈する。④正常対照ウサギとPO／AH破壊ウ

で優勢であった。

サギとでは耳介皮膚血管拡張反応の量に有意の差

当地区では下痢症の治療には，殆どの場合TCはなく，panting（浅速呼吸）の量を比較するとが用いられている。TC，SM，CP，AB−PC，NAに対する薬剤感受性試験を行って，100mcg／m1以上

PO／AH破壊ウサギで25％の有意な減少が認めら

耐性の高度耐性菌の頻度を見ると，赤痢菌の場合

群で直腸温を比すると前群は後群より常に0．3〜

TC単独耐性が12．2％，TC・SM2剤耐性が2・9％，

0．5。C下降，放熱反応の発現温度閾値も前群は後れた。⑤PO／AH破壊の寒冷順化と暑熱順化の両

TC・AB−PC2剤耐性が0．4％，TC・SM・AB−PC 群より低温側に移動。⑥皮膚血管拡張やpanting
3種の病原菌を通の量を⑤の2群のウサギで比較すると寒冷順化群

じて，SMは最も効果がなく，NAが最も抗菌力は暑熱順化群より有意に減少しており，PO／AH

が良好であった。

破壊・寒冷順化ウサギにも熱保存反応の残存を示

3剤耐性が0，4％に見られた。

住民の利用する飲料水の定性試験で，病原大腸菌086a：K61が検出され，水系感染の危険性がPO／AH破壊暑熱順化・寒冷順化ウサギにおける体温調節反応発現温度閾値変化や反応量の変化の10暑熱順化の形成機序に関する研究
大渡

結語：体温調節や温度順化の中枢機序はCNSの階層状機構によって調節されている事が今回の示唆された。

小坂

唆する結果である。

光男，土屋

勝彦，井元

孝章，

解析によって明らかになった。

伸，藤原真理子（長崎大・熱帯医研・疫学）

体温調節の中枢神経系における階層状機構や視床下部外中枢温度感受性の概念に立脚して，暑熱・寒冷順化ウサギに温度刺激を加えて体温調節

11ラテンアメリカにおける社会医学的諸問題
一特にブラジル北東部の課題評価とラテンアメリカにおける健康指標の多変量解析一
山口

誠哉，加納

克己，城石

幸博

（筑波大・社会医学）

反応を誘発し，その発現温度閾値や反応量を指標として体温調節や温度順化の中枢機序を究明している。

まずブラジル北東部住民の健康水準を評価するとともに，ラテンアメリカ24力国を対象に，特に方法：正常・対照ウサギや視床下部の視束交叉

社会医学的に国民の健康に関係すると思われる指前部（PO／AH）をX一線の多門照射にて局所破壊

標を用い，種々の解析を行い，それぞれの国の特したウサギを更に暑熱及び寒冷環境条件下で飼育徴を補足することを目的としたが，因子分析及び

273

クラスター分析により24力国のそれぞれの特徴を国勢調査）をかかえ，それらは環海性・狭小性・見ることができた。年間一人当たりの収入からみ隔絶性等により経済・社会の発展が遅れている。

てもわかるようにラテンアメリカ諸国は世界全体

沖縄は去る大戦で，地上戦を展開した全国唯一のの諸国の中でも発展途上の国が多く，しかも人口県であるが，当時の戦没者総数中約65％が県民で増加率も高い。国民の健康，生活に関し，特に大あり，環境の破壊と社会秩序の荒廃は激しかった。

国であるブラジルの将来は決して手をこまねいて医師・歯科医師等の人的資源及び病院・診療所等座視しうる現状ではないことがわかる。特にブラの物的資源は全国平均の60％以下の低い状況にあジル北東部，アマゾン地区の開発は総合的視野かり，保健医療供給体制の確立には困難な状況にあら，あらゆる分野にわたっておし進めなければなる。戦後一貫して社会防衛的な感染症対策と救急らないであろう。

医療に重点が置かれ，特にマラリアは米軍によるこの諸調査研究にて将来さらに詳細に解明せね

資材供与，DDT導入のほか，防圧班を組織し軍ばならない点が多く見い出されたが，その中の重民一体となってその防圧に努めた。その結果，要な項目をあげて，将来のラテンアメリカ研究に

1963年以来今日まで新発生はない。結核と性病はおける社会医学的目標を示したい。

米軍の基地建設に並行して1940年代の末頃から猛クラスター分析の結果，2つのクラスターと見烈に流行した。早速保健所が地区毎に建設され両なされるグループが認められたが，．それらをクラ疾患の無料治療制度がとられたが，当初は必ずしスターに集めた要因としては，因子分析で見る限も成功しなかった。軍用地料の改善と恩給，見舞り生活程度，生活様式が主たる役割を果たしてい金等日政援護金の支給並ぴに地場産業に対するると思われる。

日政特恵措置や輸出拡大・資本導入等日琉一体化

一方，アルゼンチン，バルバドスは他の諸国か政策が1960年以降とられるに従って沖縄経済は活ら遠く離れ，その国の特徴は極めて異質なものと気を呈した。電気水道も普及し初め寄生虫・トラみなされる。

12

コーマが，次いで結核事情が明るい見通しとなっ

戦後沖縄の医療事情とその社会的背景
照屋 寛善，平良 一彦，宮城重二（琉球大・医・保健・保健管理）てきた。罹患率の外に感染症は死因統計上も年々減少し，悪性新生物・脳血管疾患・心疾患等が1960年代以降逆に上昇して現在では全く逆転している。フィラリアは1965年以降撲滅対策が進めら

戦後沖縄の医療事情は，沖縄戦・米軍占領・異れ日本復帰後も継続されたが，ミクロフィラリア

民族統治・日本復帰と，政治的にも経済社会的にが集検で発見されないところから1980年以降，そも大きな変動に伴い，独特な推移と展開をたどっの対策は打ち切られた。基地派生の公害問題は現てきた。行政区域的には東西1，000km，南北400

在でも随時随所に折々発生している。

kmに及ぷ広大な海域に42の有人離島（昭和55年

274

海外レポー

ト

以下のことを行った。東海岸に近いKwale地区
1 ベネズエラでビルハルッ住血吸虫症の浸淫が再確認されたこ

多田とから，その疫学調査を行っている。その一環と功（熊本大・医・寄生虫病）

1982年10月から11月にかけての1カ月間，私達して比較研究の為，媒介貝の生態を通してケニア

は文部省海外学術調査「南米型及び中米型オンコ

でのビルハルッ住血吸虫症及びマンソン住血吸虫

セルカ症伝搬機構の比較研究」のためベネズエラ症の広がりをみることになった。先に演者は媒介

国アマゾナス州に滞在した。同州のオンコセルカ

貝の卵子の発育に及ぼす温度のみならず気圧の影

流行地はアマゾナス州南東部のパリマ山脈とその響を認め，アフリカ・中近東に生息する貝の分布西側である。この地域からブラジルにかけてはヤを説明する一要因に気圧の影響を追加した。そしノママ族とよばれるインディオが居住している。

て今回は媒介貝が有する乾燥に対する抵抗性

ヤノママは世界でも最も未開な種族の1つであり， とその貝類の広がりとの関係についてみてみた。
調査地区は乾季はよく干上がって，連日の太陽
日常の生活は殆ど裸体である。シャボノと呼ばれる集合家屋に60−80人程度の男系大家族をなしては水源という水源を干していく。ついには貝が生住み，簡単な農業（バナナ，キャッサバ）と狩を息する池，河川から全ての水生生物が消え失せ，

行って暮している。文字は無いが独特の言語系をコンクリート様に固まった土塊のみを露出させ，持っている。数字は3以上を識別できないとされ時に数カ月を経る。

ている。特徴的なことは一人一人が固有の姓名をしかしこの時，魚，カエル，カニそして媒介貝持たないことである。更に名をたずねることは現はどこかに生息していて，再び現われたのは驚異

地でのタブーの1つである。一種の麻薬を有するである。

が酒類を知らない。政府はこの居住地を保護区と先ず，3カ月も干上がった池の底で媒介貝類のし，その生存をおびやかす外来者（物）を制限し検出を行う目的で，野外で土塊を水槽に投入するている。ヤノママはNa塩を全く摂取しないためと，多数のカエルの他に少数のカニと目的の媒介に年齢と共に血圧が上昇することが無いので知ら貝が出現した。この事実をきっかけに実験室内でれている。彼らの塩は専らある種の植物に由来す

貝の乾燥に対する抵抗性が検討された。その結果，るK塩である。このようなヤノママは特にパリマ

湖に住む貝と河川に住む貝とに乾燥に対する抵抗

山地では非常に高いオンコセルカ症浸淫に悩んで性の違いをみた。同心円に中に向って乾燥し，時いる。その実態はまだ明らかでない。私達は伝搬に完全に乾燥する湖での自然条件に対し，泉水をブユの自然感染，実験感染，吸血習性，発生源な源とする河川での自然条件がそれぞれlakesnail，

どの諸調査，更にはヒトにおける仔虫保有状況な

canal

どの調査とを行った。これらの結果を中米の場合両方ともかなりの乾燥抵抗性を有し，lakeと比較し，南アメリカ大陸の同症についてのプロが更に強い抵抗性を示して4カ月以上の夏眠をす

フィール作製とを目ざしている。なお今回のレるものさえいることが判明した。苛酷な自然のア

ポートではベネズエラ側共同研究者との申し合わ

フリカで現在の媒介貝類の広がりがなるほどと納せにより研究成果にはふれなかった。

得できる貝の生物学的特性をかいま見岸気がした。

2 ケニア
野島 尚武（鹿児島大・医・医動物）
昨年（1982）のほぼ1年間，ケニア国に滞在し・

snai1にどう影響したかは不明であるが，

snail

275

3 サモアー西サモアにおけるフィラリア症の研究コントロール対策一
木村英作

集団治療は4年間継続される予定で，現在第1年
次治療の効果判定，第2年次治療の準備等の作業がすすめられている。

（長崎大・熱帯医研・寄生虫）

4 中華人民共和国
石井 洋一

西サモア国では，昼間亜定期出現性のバンクロ

フト糸状虫の流行がみられる。主な媒介蚊は，
オ4θ3poり〃εs 8〃s∫s及び！｛asα〃！oα耀5の2種で，前者は昼間吸血性，後者は夜間吸血性である。

（九大・医・寄生虫）中国医学科学院の招聴により北京，西安，上海の医学科学院，及び関連研究所・病院を訪問した。

目的は学術交流であったが，各所で今後の交流の1964年よりWHO及びUNICEFの援助のもと あり方についての協議及び講演が計画され，友好にフィラリア症対策が開始され，全島民を対象と交流の道がさらに限りなく広いものとなることをしたジエチルカルバマジン（DEC）による集団治願っての晩秋の14日間の旅であった。．熱帯医学領療が1965−66年（総量90mg／kg，体重）及び1971

域では，中国医学科学院基礎医学研究所，北京友

年（総量72mg／kg）の2回実施された。これら

誼医院熱帯医学研究所，中国医学科学院寄生虫病の治療により，仔虫保有率は1964年の20彩より，研究所，上海第二医学院免疫学研究所などで日本

1967年約2％，1972年約0．2％と著明な減少をみ

住血吸虫症，肺吸虫症，フィラリア症，マラリア，た。その後既知の陽性者のみを対象にDEC治療 リーシュマニア症などの疫学から診断，治療にわを続けていたが，仔虫保有者率は次第に増加し，

1979年には1m1ヌクレポァーフィルター法及び60cmm厚層塗沫法でそれぞれ4，5％，3．8％という結果が得られた。

仔虫保有者数の急激な増加が危惧されたため，たる広範な研究が実施されていた。

これら内容の解説論文を参考まで記した。
1）Mao

Shou−pai

Schistosomiasis

lic

of

and

Shao

controlin

Bao−ruothe（1982）：

Peoples

Repub−

China，Am・J．Trop．Med．Hyg．，31（1），

再度DECによる集団治療が考慮され，その中92−99

でDEC年1回投与法の検討がなされた。DEC

progress

60mg／kg・体重の年1回投与法は，仔虫陽性者をgonimiasis2）ZhonginHui−1anθ∫αム（1981）：

studies

controlof」Por㎎onin〃躍s

China，ChineseandRecentpara−Med．」．，

陰転化させる効果は著明でないものの，仔虫密度

94（8），483−494

を80〜90％減少させ，毎年繰返すことによってPresent

フィラリア症伝搬のポテンシャルを著明に減少さ

nese Med．J．，94（9），567づ844）Zhong Huilan

せることができると考えられた。

ααム（1982）：New

1982年6月より，このDEC年1回投与法によmaniasis3）Zhong

situation

inoffilariasis

types

of

China，Chinese

る集団治療法が，蚊コントロール対策，健康教育

3065）Zhouと平行して開始され，第1年次治療はすでに完了

ation

in

し，90％以上の高い治療率が得られている。この

W．H．0．，59（6），931−936

theHui−1aiθ∫o乙（1981）：

in

lymph

China，Chi−

gland

Zu−jie（1981）：The

malaria

Peopleofsleish−

Med．J．，95（4），303−

Republic

situ−

China，Bull．

JAPANESE JOURNALOF
TROPICALMEDICINE

AND

HYGIENE
December，1983

Vo1．11No．3，4

CONTENTS
Original

articleSHIcHIJo，A，，MIFuNE，K．，SAKAMoTo，K．AND

YAMADA，A．

Sensitivity of the Biotin−Avidin−Peroxidase（BAP）Technique for Rabies Virus
NeutralizingAntibody Assay and the Measurement of Neutralizing Antibodies of
Vaccinated

Human

Sera

＿．＿．．．

217−224

FuJITA，K．，TAJIMA，K。，TsuKIDATE，S．，ODA，T．，KuRoKAwA，K，MoNcADA，L、，UEDA，M．，
MoRI，A．AND HINuMA，Y．
Correlation Between Filarial Antibody Titre and Adult−T−Cell Leukemia Virus
Antibody Titre in lnhabitants of Goto Islands，Nagasaki，Japan（in Japanese）＿．＿225−233

KoBAYAKAwA，T．，KAwABATA，M．，AsAHI，H．，KuMADA，M．AND
ThymocytotoxicAutoantibodies

Inducedby

VariousParasitic

HosAKA，Y
Infections

in

Mice…

235−241

YosHIMuRA，H．，KoNDo，K．，AKAo，N．，OHNIsHI，Y，IKADo，S．AND MIYAwAKI，H．
A血Onchocercal Nodule Found in a

Japanese

Infectedin Africa．．＿．

IsEKI，M．，HAYAsHI，K，GATIKA，S．M．AND SIoNGoK，T．K．A．
The Prevalence of Intestinal Protozoa in Naivasha，Kitui，Machakos，Taveta．．243−248

andNandi Hills Areas in Kenya．＿．．＿＿．．層．＿．，＿．＿＿．．．

249−256

Sbor亡communication

YAMAuRA，H．，SHIRAsAKA，R．，MATsuMoTo，K．，WADA，Y，KoBAYAsHI，K．ANDOKAMoTo，M．

ASurveyonIntestina1ParasiteInfectionofJapanOverseasCooperationVolunteers（1981−1982）（inJapanese）

＿

．

．＿

．257−260

PublishedJAPANEsE
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Medicine，Nagasaki

MEDIcINE

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124 Sakamoto−machi，Nagasaki，852，Japan