保健科学研究8(2)：1―5，2018【原著】
弘前地区における下痢症患者由来 Campylobacter の分離状況
佐藤瑠海* 佐藤拓弥*

藤岡美幸*（2017 年 9 月 28 日受付，2017 年 12 月 18 日受理）

要旨：Campylobacter は世界中で流行している細菌性食中毒起因菌である。本研究では 2016 年 4 月から 2017 年 3 月の期間に，青森県弘前地区の医療検査機関で分離された腸炎由来 Campylobacter 230 株について，検出状況と薬剤耐性を調査した。薬剤感受性試験ではオフロキサシン (OFLX)，シプロフロキサシン (CPFX)，エリスロマイシン (EM)，ホスホマイシン (FOM)，テトラサイクリン (TC)の 5 薬剤を用いた。種別の結果，230 株中 C. jejuni が 200 株 (87.0%)，
C. coli が 28 株 (12.2%)，C. lari が 2 株 (0.9%)検出された。1 年を通した月別の検出状況では，総数は 6 月から 9 月にかけて多く，菌種別では C. jejuni は 7，9 月，C. coli は 2 月に最も多く検出された。薬剤耐性において，OFLX，CPFX，EM，TC において C. jejuni より C. coli の耐性率が高いことが示された。FOM においては C. jejuni で耐性が 200 株中 2株 (1.0%)，C. coli では 28 株すべてが感受性であった。また 1 剤以上の耐性率は C. jejuni が 200 株中 58 株 (29.0%)，
C. coli が 28 株中 15 株 (53.6%)と C. jejuni と比較して C. coli の耐性率が高いことがわかった。
キーワード：細菌性食中毒，Campylobacter 腸炎，Campylobacter jejuni，Campylobacter coli，薬剤耐性2．菌の種別Ⅰ．背景1) 馬尿酸塩加水分解試験

Campylobacter は先進国を中心に世界中で流行している

藤岡ら 10)の方法に準じ，1%馬尿酸ナトリウム水溶液 0.4

ヒト腸炎を引き起こす食中毒起因菌の一つである 1)。厚生

mL に被検菌を懸濁し，McFarland 2.0 に調整後，37±1℃で労働省が 1982 年に C. jejuni /coli を食中毒起因菌に指定し2 時間静置した。これにニンヒドリン試薬 0.2 mL を加え，て以降 2)，本菌が原因の食中毒事例は年間 200 件以上報告

37±1℃で 10 分間静置した。判定は濃い青紫色を呈した場されており，細菌性食中毒事件数第一位となっている 3)。

合を陽性 (C. jejuni)，無色から薄い紫色を呈した場合を陰本菌は鶏肉を主として豚肉，牛肉から検出され，感染する性 (C. coli 等)とした。と 2 日～7 日間の潜伏期を経て発病し，下痢，腹痛，発熱，

2) multiplex PCR

頭痛，嘔吐などの症状を認める 4)。さらに C. jejuni 感染症

対象菌株を TE 緩衝液（pH8.0，和光純薬工業）1.0 mL にの後続症として，感染数週間後に手足の麻痺や筋力低下な懸濁し、100℃で 5 分間加熱後 10,000 rpm 5 分間遠心した上ど を 引 き 起 こ す Guillain-Barré syndrome も あ る

清をテンプレートとした。標的遺伝子は Campylobacter 16S5) 。

感 染 症 の 種 別 起 因 菌 に つ い てrRNA，C. jejuni，C. coli，C. lari の同定遺伝子とし，使用プ

国立感染症研究所の報告では C. jejuni が 90%以上を占めてライマーを表 1 に示す。PCR 反応量は 1 検体当たり滅菌蒸おり 6)，伊藤らは C. jejuni 96.5%，C. coli 3.5%7)，Kabir らは留水 18.375 µL，10 × Ex TaqTM Buffer (TaKaRa) 2.5 μL，dNTP

C. jejuni 96.6%，C. coli 3.4%8)としている。また農林水産省

mixture (TaKaRa) 1.0 μL，10 × 5 U Ex TaqTM polymeraseの報告によると C. coli は薬剤に対する耐性が C. jejuni より(TaKaRa) 0.125 μL，テンプレート 2.5 μL，25 μM プライマ

高く 9)，抗生物質による治療の難化が危惧される。そのたー各 0.25 μL 加え，全量を 25 μL とした。PCR の条件は前め本研究では年間を通じての本菌の分離状況と薬剤耐性菌

熱変性 94℃1 分間とし，熱変性 94℃1 分間，アニーリングの出現状況を調査した。

55℃1 分間，伸長反応 72℃1 分間を 25 サイクル行い，さらCampylobacterに最終伸長反応 72℃10 分間 1 サイクル行った (i-cycler，Ⅱ．対象および方法

Bio RAD)。PCR 産物はエチジウムブロマイド含 2.5%アガ

1．対象菌株

ロースゲルにて 100V 35 分間，電気泳動（Mupid-21，コス

対象は 2016 年 4 月から 2017 年 3 月までに弘前市医師会モバイオ社）を行い，UV 照射にて遺伝子の増幅を確認し健診センターで分離された下痢症患者便由来

た（図 1）。

Campylobacter spp. 230 株とした。

3．薬剤感受性試験
薬剤感受性試験にはエリスロマイシン 15 μg (EM)，シプ*弘前大学大学院保健学研究科
Hirosaki University Graduate School of Health Sciences〒036-8564 青森県弘前市本町 66-1 TEL:0172-33-5111
66-1, Honcho, Hirosaki-shi, Aomori, 036-8564, Japanⓒ2018 Health sciences Research.

ロフキサン 5 μg (CPFX)，オフロキサシン 5 μg (OFLX)，ホスミシン 1 μg (FOM)，テトラサイクリン 30 μg (TC)の 5 薬剤（以上，センシ・ディスク BD）のディスクを用いた。

1弘前地区における下痢症患者由来 Campylobacter の分離状況

表1Species
Campylobacter
C. coli

使用プライマー塩基配列

Size

Target(bp)gene816

16S rRNA

502

Primeraskt

C. lari251

glaA

C. jejuni

161

cj0414S

Sequence（5' to 3'）

C412F

GGATGACACTTTTCGGAGC

C1228RCATTGTAGCACGTGTGTCCC18F

GGTATGATTTCTACAAAGCGAG

CC519RATAAAAGACTATCGTCGCGTG

CLF

TAGAGAGATAGCAAAAGAGA

CLR

TACACATAATAATCCCACCC

C-1

CAAATAAAGTTAGAGGTAGAATGT

C-3CCATAAGCACTAGCTAGCTGAT

5%ウマ血加 HI 寒天培地（栄研）で純培養した菌株を滅菌であった。また C. coli が FOM 以外の薬剤に対して C. jejuni

生理食塩水で McFarland 0.5 に調整後，5%ウマ血加 MH 寒よりも高い耐性率となった（図 2）。

天培地 (Oxoid)に接種し，各薬剤のディスクを配置した。
その後，微好気環境下（アネロパック，三菱ガス化学）で，

M

12

3

42 ± 1 ℃，48 ± 2 時間培養し，阻止円径を測定した。

Ⅲ．結果
1．菌種の同定
同定対象 Campylobacter230 株を種別した結果，C. jejuni
200 株 (87.0%)，C. coli 28 株 (12.2%)，C. lari 2 株 (0.9%)であった。月別検出状況では，6 月から 9 月にかけて検出数が増加し，特に 7 月に最も多く検出された（表 2）。
2．薬剤感受性
薬剤感受性試験の結果，C. jejuni では EM、FOM に対して耐性を示す株がそれぞれ 1，2 株と少なく，C. coli ではFOM に耐性を示す株が確認されなかった。C. lari では分離された 2 株いずれも OFLX に耐性であった（表 3）。1 薬剤

図1

PCR による遺伝子検索結果の一例

以上に耐性であったのは C. jejuni が 200 株中 58 株 (29.0%)，

M：Marker (100-bp ladder)，1：C. jejuni (161 bp)

C. coli が 28 株中 15 株 (53.6%)，C. lari が 2 株中 2 株 (100%)

2：C. coli (502 bp)，3：C. lari (251 bp)

表2下痢症患者由来 Campylobacter の分離結果

4月

5月

6月

7月

8月

9月

10 月

11 月

12 月

1月

2月3月

合計

C. jejuni

121222272227161214111510200

C. coli

10243023145328

C. lari

0100100000002

合計131324312627181515152013230ⓒ2018 Health sciences Research.

2佐表3

藤，佐5 薬剤における薬剤感受性試験結果

藤，藤岡

国内，国外問わず EM に対する耐性菌の報告もあり 13-16)，

C. jejuni

C. coliC. lari(n=200)(n=28)(n=2)

本調査においても耐性菌が確認された。
FOM は主に細菌性胃腸炎において起因菌が不明な場合

S・I

R

S・IR

S・IR

OFLX

152

4820802CPFX161

3920820EM199122620FOM198228020TC17921161220に選択剤として用いられる 17)。竹田らの報告では C. jejuni
524 株中 106 株(19.2%)が耐性を示しているが 18)，本調査において，C. jejuni では 200 株中 2 株 (1%)が耐性であり，C.
coli では耐性株は認められなかった。この原因について，家畜やヒトの腸炎へ FOM を投与することにより耐性化した可能性が考えられ，今後詳細な検討が必要である。
CPFX，OFLX 等のニューキノロン系薬剤は、主にグラム陰性菌を原因とした感染症に対する治療薬として EM と共に第一選択剤として推奨されていた 12)が，近年同薬剤に対する耐性菌が増加している 19, 20)との報告もある。カンピロ(S：感受性、I：中間、R：耐性)

バクター・レファレンスセンターによると，ニューキノロン系薬剤に対する耐性率は，2014 年に C. jejuni が 57.1%，

50

C. coli が 82.4%となっており増加傾向を示している 21)。今45

C. jejuni

回 CPFX，OFLX いずれかに耐性を持つ株が C. jejuni，C. coli，4035

C. lari で複数見られ，Campylobacter 感染症に対するニューC. coli

キノロン系の治療効果の低下が確認された。

薬 30剤
耐 25
性 20
率15%
10

TC はテトラサイクリン系薬剤の１種であり C. jejuni では 200 株中 21 株 (10.5%)，C. coli では 28 株中 12 株 (42.9%)(が耐性であった。現在テトラサイクリン系薬剤は疾病の治)療を目的とした動物用抗菌剤や食用動物における「発育促進」，「飼料効率の改善」を目的に鶏用飼料への添加が認め5られおり 22)，家畜由来 Campylobacter の薬剤感受性試験に

0OFLX

図2CPFXEMFOMTC

C. jejuni および C. coli における薬剤別耐性率がある 23,24)。このことから，家畜用飼料などによって家畜体内で耐性を獲得していた菌種に感染し，耐性菌として検Ⅳ．考察出されている可能性が考えられる。

近年，細菌性食中毒は全体として減少傾向にあるがCampylobacter 食中毒は発生数，患者数ともに増加傾向にあると報告されている 4)。今回の調査では年間 230 検体，月当たり 13～31 検体検出され，特に 6 月から 9 月にかけて検体数が増加傾向にあることを確認した。Campylobacter の培養法は定められた方法が国内外で確立されていないが，一般的に湿潤環境での培養が良いとされている

おいて C. jejuni /coli が TC に対する耐性率が高いとの報告

11) 。これはCampylobacter が乾燥に弱く 4,11)，そのため湿度が上昇する梅雨～夏期に多く検出されると考えられる。また，Campylobacter 腸炎では C. coli は数%程度であるとの報告
6-8)が多いが，本調査では年間 12.2%と高い割合であった。

C. jejuni /coli の薬剤耐性について，農林水産省の報告 9)では ABPC，SM，EM，TC，NA，CPFX において C. coliと C. jejuni と比べると耐性率が高く，本研究でも EM，TC，CPFX において同様の傾向がみられた。しかしながら C. coli
は散発性下痢症患者からの分離報告が少ないことや
Guillain-Barré syndrome など後続症の発症事例もない 4)ことから研究が活発に行われておらず，原因は明らかとなっていない現状である。また本研究では，弘前地区において C.
coli の分離割合が有意に高く，今後弘前地区における喫食食品等をはじめとした保有調査等が急務である。
Campylobacter 食中毒は現在も増加傾向にあることから，

C. coli は C. jejuni よりも環境中の抵抗力が弱いとされてい出現状況や同菌の薬剤耐性についてモニタリングの継続がるが 4)，その C. coli が高率に分離された原因の一つとして，必要である。加えて，感染を未然に防ぐために食品を取り豚の腸管内から検出される Campylobacter はほとんどが C.

扱う施設における徹底した衛生管理や各家庭での調理時のcoli であることから 4)，豚肉類の喫食等が関係している可

衛生的な取り扱いについて，一層の注意が重要になると考能性が考えられる。

える。

マクロライド系薬剤である EM は Campylobacter 感染症
で第一選択剤とされ 12)，今回，C. jejuni では 200 株中 1 株(0.5%)，C. coli では 28 株中 6 株 (21.4%)が耐性であった。

ⓒ2018 Health sciences Research.

利益相反

本論文に関して，申告すべき利益相反はありません。

3弘前地区における下痢症患者由来 Campylobacter の分離状況

謝辞

本研究を行うにあたり，貴重な菌株の提供をしてinfection. In Campylobacter, 2nd Edition,Nachamkin, I. and Blaser,くださいました弘前市医師会健診センターの皆様に深く感謝申し上げます。

MJ(ed).ASMPress, Washington, D.C.:69-88, 2000.
13) Vanhoof

R,

VanderlindenMP,

etal:SusceptibilityofCampylobacter fetus subsp. jejuni to twenty-nine antimicrobial

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12) Skirrow MB, Blaser MJ: Clinical aspects of Campylobacterⓒ2018 Health sciences Research.

4佐藤，佐藤，藤岡【Original article】
The study of Campylobacter isolated from diarrheal patientsin Hirosaki area
RYUNA SATO*TAKUYA SATO*MIYUKI FUJIOKA*（Received September 28 , 2017 ; Accepted December 18, 2017）

Abstract: Campylobacter species cause foodborne diarrheal disease worldwide. During the period between April 2016 andMarch 2017, we collected Campylobacter spp. isolated from patients with enteritis at a medical laboratory in the Hirosaki areaof Aomori Prefecture. In this study, the isoletes were identified as C. jejuni, C. coli and C. lari using the hippurate hydrolysis
test and multiplex polymerase chain reaction. In addition, antimicrobial susceptibility tests using the Kirby Bauer method wereperfomed with ofloxacin (OFLX), ciprofloxacin (CPFX), erythromycin (EM), fosfomycin (FOM) and tetracycline (TC). We
obtained 230 isolates of Campylobacter spp. (200 C. jejuni, 28 C. coli, and 2 C. lari). The prevalence of Campylobacter spp.
peaked during the summer (June-September). C. jejuni was most prevalent in July and September and C. coli was mostprevalent in February. In the antimicrobial susceptibility tests, higher resistance to OFLX, CPFX, EM and TC was observedfor C. coli than C. jejuni. Among C. jejuni isolates, 1.0% (2/200) were resistant to FOM, but none of the C.coli isolates wasresistant to the antibiotic. A total of 29.0% (58/200) of C. jejuni isolates and 53.6% (15/28) of C. coli isolates were resistant toat least one of the antibiotics.
Keywords: Food borne pathogen, Campylobacter infections, Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Antimicrobial
resistanceⓒ2018 Health sciences Research.

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