福岡県保健環境研究所年報第36号，83－84，2009

短報
福岡県における2008/2009シーズンのオセルタミビル耐性インフルエンザウイルスの出現
世良暢之・中山志幸・石橋哲也・千々和勝己
平成20年度（2008/2009シーズン）において福岡県ではインフルエンザ集団発生事例より A/H1
N1亜型が8株、A/H3N2亜型が1株、感染症発生動向調査事業により A/H1N1亜型が1株、A/H3N2亜型が3株及び B 型が3株分離された。A/H1N1亜型9株のうち解析できた8株全てにオセルタミビル耐性に必要なアミノ酸変異が認められ、平成19年度がすべて感受性であったことと比較すると、わずか一年で状況が急変していた。A/H1N1亜型は NA 遺伝子の系統樹上でクレード2B 及びクレード2C に、さらにクレード2B は北欧系統とハワイ系統に細分され、平成20年度の8株はすべて北欧系統に属していた。オセルタミビル使用量の非常に多い日本においては耐性株による集団感染事例の発生が憂慮されており、今後も耐性株出現の監視を続けていく必要があると考えられる。
［キーワード：インフルエンザウイルス、オセルタミビル耐性］
１

業より分離された1株）について、変異の有無を検討しはじめにノイラミニダーゼ（Neuraminidase, NA）蛋白質の275た。オセルタミビルの標的蛋白質である NA のアミノ酸番目のアミノ酸がヒスチジン（Histidine） からチロシンをコードする遺伝子領域を RT-PCR 法により増幅し、予（Tyrosine） に置換し（H275Y と表記する）、インフル

想された PCR 産物が得られた場合は、ダイレクトシー

エンザ治療に用いられているノイラミニダーゼ阻害薬

クエンス法により275番目のアミノ酸変異の有無を調べ、（Neuraminidase Inhibitor, NAI）であるオセルタミビル

オセルタミビル耐性の指標とした。PCR に用いたプラ（Oseltamivir、 商品名タミフル）に対して強い耐性とな

イマーは N1-F671-693

った A 型インフルエンザウイルス H1N1亜型（以下、A/(TGAGAACACAAGAGTCTGAATGT) 及び N1-R1079-

H1N1亜型）が、2007年11月頃からヨーロッパ諸国全体

1057(CCTATCCAAACACCATTACCATA) 、 反 応 は RTで高頻度で検出されるようになった 1)。このため、世界

反応条件50℃で30分間、最初の変性反応94℃で2分間、保健機関（World Health Organization、 WHO）はグロー

PCR 条件として94℃で2分間、45℃で1分間、72℃で2分

バルインフルエンザサーベイランスネットワークにより間を30サイクルとして実施し、最後の伸長反応は72℃で全世界的な NAI 耐性株サーベイランスを強化し、各国10分間行った。得られた塩基配列は遺伝子配列解析ソフ2)における耐性株出現状況を報告するように要請した 。

トウェア SeqScape（ Applied Biosystems 社 ）及び MegAlign

このような背景から、日本においても耐性株の高頻度出（DNASTAR 社 ）により解析、分子系統樹解析を行った。

現が危惧され、国立感染症研究所からの依頼により、平成20年度（2008/2009シーズン）に福岡県内で分離され３た A/H1N1亜型に対する耐性変異の有無を調査した。

結果
平成20年度は4事例のインフルエンザ集団発生事例で25検体の咽頭拭い液が搬入され、3事例から A/H1N1亜２型が8株、1事例から A/H3N2亜型が1株分離された。ま検査方法
オセルタミビルに対する耐性変異の解析には、耐性のた感染症発生動向調査事業によりインフルエンザ感染症獲得に重要であると報告されている NA 遺伝子のアミノ疑いで14検体の咽頭拭い液が搬入され、A/H1N1亜型が1酸変異の有無（H275Y）を調べることで行った。平成20

株、A/H3N2亜型が3株及び B 型3株が確認され、今年度年度に分離された A/H1N1亜型9株（インフルエンザ集のインフルエンザ感染症は平成19年度に引き続き A/H1団発生事例より分離された8株、感染症発生動向調査事N1亜型が流行した3)。

福岡県保健環境研究所（〒818-0135

福岡県太宰府市大字向佐野39）―83―

型は2006/2007シーズン16%、2007/2008シーズン44%、

F I1 9 2 0 0 8 -N A
F I2 2 2 0 0 8 -N A

福岡県内での分離株

F I1 8 2 0 0 8 -N A
F I1 7 2 0 0 8 -N A
F I1 6 2 0 0 8 -N A

2008/2009シーズン92%と急速に広がっており、アメリ
カで97%、ヨーロッパ諸国で98%と世界各地で高頻度でF I9 2 0 0 8 -N A
F I7 2 0 0 8 -N A
F S 1 3 7 2 0 0 8 -N A

検出されるようになっている5)。

A / Y o k o h a m a / 7 7 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 )A / E n g la n d / 5 5 7 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / P a ris / 5 7 7 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))北欧系統

A/H1N1亜型は NA 遺伝子の系統樹上でクレード2B 及

A / Y o k o h a m a / 7 9 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 )A / Y o k o h a m a / 7 8 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 )びクレード2C の2つのサブクレードに分かれ、更にクレA / P a ris / 6 4 4 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / Illin o is / 1 0 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / In d ia n a / 0 1 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 ))ード2B は北欧系統とハワイ系統に細分される4)。当所でA / W is c o n s in / 0 1 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 ))A / A riz o n a / 1 5 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / P a ris / 1 1 7 0 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 ))

平成20年度分離された8株はすべて北欧系統に属してい

A / F lo rid a / 0 2 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 ))A / Y o k o h a m a / 3 1 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 )A / Y o k o h a m a / 3 0 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 )た（図1）。全国で分離された耐性 A/H1N1亜型もすべて

A / Y o k o h a m a / 3 5 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 )A / Y o k o h a m a / 3 4 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 )北欧系統に属していたことが報告されている4)。

In fu l-H 1 N 1 (H 2 7 5 Y )A / H a w a ii/ 2 1 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / H a w a ii/ 2 8 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))これまでのところ日本では耐性 A/H1N1亜型の大規模

A / P a ris / 9 6 3 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 ))ハワイ系統

A / Illin o is / 1 1 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / B ris b a n e / 5 9 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))流行はないが、オセルタミビル使用量の非常に多い日本

A / E n g la n d / 5 4 5 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / H a w a ii/ 3 1 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))においても耐性 A/H1N1亜型による集団感染事例の発生

A / P a ris / 1 1 4 9 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 ))A / H a n o i/ T X0 9 / 2 0 0 6 (H 1 N 1 ))A / M a s s a c h u s e t t s / 0 1 / 2 0 0 8 (H 1 N 1 ))が憂慮されており、今後も耐性株出現の監視を続けていA / C o lo ra d o / U R 0 6 -0 0 5 3 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / H a w a ii/ 1 9 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 ))A / Y o k o h a m a / 9 1 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 )A / Y o k o h a m a / 1 0 0 / 2 0 0 7 (H 1 N 1 )く必要があると考えられる。

*F I1 2 0 0 7
A / H a n o i/ B M 3 4 4 / 2 0 0 6 (H 1 N 1 ))A / S o lo m o n Is la n d s / 3 / 2 0 0 6 (H 1 N 1 ))A / C a n t e rb u ry / 1 0 6 / 2 0 0 4 (H 1 N 1 ))文献

A / N e w C a le d o n ia / 2 0 / 1 9 9 9 (H 1 N 1 ))A / H a n o i/ Q 1 3 7 / 2 0 0 6 (H 1 N 1 ))A / N e w Y o rk / 2 2 1 / 2 0 0 3 (H 1 N 1 ))1) European Centre for Disease Prevention and Control

0 .0 0 5(http://ecdc.europa.eu/en/healthtopics/Pages/

図１ 2008/2009シーズンのA型インフルエンザウイルス
H1N1亜型のNA遺伝子の分子系統樹解析
塩基配列は「FI」（集団発生事例）または「FS」（感染症発生動向調査事業）に続く検体
番号、流行シーズン及び解析したノイラミニダーゼ遺伝子「NA」で表記した。感受性株として平成19年度（2007/2008シーズン）に分離された株（FI1 2007（*で示す））を用いた。

Antivirals_and_Antiviral_Resistance_Influenza. aspx).
2) World Health Organization ( http://www. who.int/csr/

平成20年度に分離された A/H1N1亜型9株のうち解析

disease/influenza/h1 n1_table/en/index. html)，できた8株全てに薬剤耐性に必要なアミノ酸変異が認められ、平成19年度は A/H1N1亜型55株全てが薬剤感受性

2009.5.21.
3) 福岡県結核・感染症発生動向調査事業資料集平成20であったことと比較すると、わずか一年で状況は一変し年，平成21年3月.ていた。全国的に見ても平成19年度はオセルタミビル耐4) 世界各国の A/H1N1耐性出現頻度（http://www.who.

性 A/H1N1亜型の発生頻度は2.6%（1,734株中45株）でint/csr/disease/influenza/h1 n1_table/en/index. html）.

あったのに対し、平成20年度は99.6%（1,239株中1,2375) 2008/2009インフルエンザシーズンにおけるインフル4)株）となり 、国内においても耐性 A/H1N1亜型が劇的エンザ（A/H1N1）オセルタミビル耐性株（H275Y）に増加し、全国的に蔓延していることが明らかとなった。の国内発生状況【第2報】，病原微生物検出情報，30，

また、WHO によると世界各国における耐性 A/H1N1亜101-106，2009.

（英文要旨）

Emergence of oseltamivir resistant influenza A(H1N1) in Fukuoka prefecturein the 2008-2009 season
Nobuyuki SERA, Shiko NAKAYAMA, Tetsuya ISHIBASHI, Katsumi CHIJIWA
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, Japan
In the 2008-2009 season, eight Influenza A (H1N1) viruses isolated in Fukuoka Prefecture were all resistant to oseltamivir.
The percentage of oseltamivir resistant Influenza viruses has drastically increased, compared to that in the 2007-2008 season.
All eight oseltamivir-resistant Influenza viruses were classified into clade 2B, and showed a genetic relationship with Europeanstrains.
[Key words ; Influenza virus, oseltamivir resistant]―84―