ヒト生体試料中ダイオキシン類
微量分析法の開発㈱エスアールエル 医科学分析センター ○深津英夫、上瀧智巳、山崎直樹、中原理慧
千葉大学大学院医学研究院 森千里
山梨大学医学部 星和彦

Development of micro analytical method for Dioxin with blood andbiological sample of human
Hideo FUKATSU Tomomi JOTAKI Naoki YAMAZAKI Rie NAKAHARA（NAKAHARA（SRL.inc ）,Chisato MORI（MORI（Graduate School of Medicine,Chiba Univ.））
Univ.）, Kazuhiko HOSHI（HOSHI（Dept. of Obstetrics and Gynecology, Yamanashi Univ. School of Medicine
Medicine）

各生体試料中ダイオキシン類前処理方法の概要

計3回

母乳 1g
飽和ｼｭｳ酸ﾅﾄﾘｳﾑ 0.20mL
ｴﾀﾉｰﾙ 1mL
ｼﾞｴﾁﾙｴｰﾃﾙ 1mL
ﾍｷｻﾝ 0.6mL
液-液抽出
静置有機層

水層

水洗
5％NaCl水溶液3mL×2
脱水
無水硫酸Na濃縮
エバポレーターにて
風乾秤量瓶に移し替え
室温下で風乾脂肪測定・再溶解

臍帯 20g血液・臍帯血 10ｇ
飽和硫酸ｱﾝﾓﾆｳﾑ 6mL
25% ｴﾀﾉｰﾙ/ﾍｷｻﾝ 24mL
液-液抽出 計3回
ﾍｷｻﾝ20mL×2回 振とう 30min

細切秤量
試料量を秤量25% ｴﾀﾉｰﾙ/ﾍｷｻﾝ 100mL
無水硫酸Na 50g
固-液抽出
計3回
氷冷 ホモジネート
25% ｴﾀﾉｰﾙ/ﾍｷｻﾝ
吸引濾過
100mL
残渣

水層

水洗
蒸留水 20mL
脱水
無水硫酸Na濃縮
エバポレーターにて
風乾秤量瓶に移し替え
室温下で風乾脂肪測定・再溶解

抽出液
水洗
計3回
ﾍｷｻﾝ洗浄水
水層

有機層
脱水
無水硫酸Na濃縮
エバポレーターにて
風乾秤量瓶に移し替え
室温下で風乾脂肪測定・再溶解

連結多層シリカカラム

活性炭シリカカラム

試料負荷
洗浄分画

ヘキサン多層ｼﾘｶｶﾗﾑ取外し

Fra.1 溶出分画
25%ｼﾞｸﾛﾛﾒﾀﾝ50mL
最終濃縮
GC/MS測定
Mono-ortho Co-PCBs 測定

有機層

Fra.2 溶出分画
ﾄﾙｴﾝ100mL
最終濃縮
GC/MS測定
PCDDs + PCDFs 測定
Non-ortho Co-PCBs 測定

連結カラム

ブランク対策
The chemicals hazard room

The tube for blood collection
The glasswares

HRGC／HRMS測定
Solvent Cut Large Volume injection system

各生体試料中のダイオキシン類含有量の比較
3.000

2.000

血液 （10g）
母乳 （1g）
臍帯 （25g）
臍帯血 （10g）

血液 （10g）
母乳 （1g）
臍帯 （25g）
臍帯血 （10g）

600.000

ダイオキシン類含有量（pg）

ダイオキシン類含有量（pg）

2.500

700.000

1.500

1.000

0.500

500.000

400.000

300.000

200.000100.000

0.000

0.000
2,3,7,8TetraCDD

1,2,3,7,8PentaCDD

1,2,3,4,7,8HexaCDD

1,2,3,6,7,8HexaCDD

1,2,3,7,8,9HexaCDD

1,2,3,4,6,7,8HeptaCDD

2,3,3',4,4'PeCB(105)

OctaCDD

2,3,4,4',5PeCB(114)

0.700

2',3,4,4',5PeCB(123)

2,3,3',4,4',5- 2,3,3',4,4',5'- 2,3',4,4',5,5'- 2,3,3',4,4',5,5
HxCB(156)
HxCB(157)
HxCB(167) '-HpCB(189)

3.500

0.500

0.400

0.300

0.200

0.100

3.000

ダイオキシン類含有量（pg）

血液 （10g）
母乳 （1g）臍帯 （25g）臍帯血 （10g）0.600

ダイオキシン類含有量（pg）

2,3',4,4',5PeCB(118)2.500

血液 （10g）
母乳 （1g）
臍帯 （25g）
臍帯血 （10g）

2.000

1.500

1.000

0.500

0.000

0.000
2,3,7,8TetraCDF

1,2,3,7,8PentaCDF

2,3,4,7,8PentaCDF

1,2,3,4,7,8HexaCDF

1,2,3,6,7,8HexaCDF

1,2,3,7,8,9HexaCDF

2,3,4,6,7,8HexaCDF

1,2,3,4,6,7,8HeptaCDF

1,2,3,4,7,8,9HeptaCDF

OctaCDF

3,3',4,4'-TeCB(77) 3,4,4',5-TeCB(81)3,3',4,4',5PeCB(126)3,3',4,4',5,5'HxCB(169)各ヒト生体試料中ダイオキシン類濃度（毒性等量；pg-TEQ/g-fat）73

血液母乳臍帯臍帯血5血液母乳
臍帯臍帯血2.5ダイオキシン類濃度（pg-TEQ/g-fat）

ダイオキシン類濃度（pg-TEQ/g-fat）643221.5

10.5

100
2,3,7,8TetraCDD

1,2,3,7,8PentaCDD

1,2,3,4,7,8HexaCDD

1,2,3,6,7,8HexaCDD

1,2,3,7,8,9HexaCDD

1,2,3,4,6,7,8HeptaCDD

OctaCDD

2,3,3',4,4'PeCB(105)

2,3,4,4',5PeCB(114)

2,3',4,4',5PeCB(118)7

2,3,3',4,4',5HxCB(156)

2,3,3',4,4',5'HxCB(157)

2,3',4,4',5,5'HxCB(167)

2,3,3',4,4',5,5'-HpCB(189)

75432

1

6
ダイオキシン類濃度（pg-TEQ/g-fat）

血液母乳
臍帯臍帯血

6
ダイオキシン類濃度（pg-TEQ/g-fat）2',3,4,4',5PeCB(123)5血液母乳臍帯臍帯血432

1002,3,7,8TetraCDF

1,2,3,7,8PentaCDF

2,3,4,7,8PentaCDF

1,2,3,4,7,8HexaCDF

1,2,3,6,7,8HexaCDF

1,2,3,7,8,9HexaCDF

2,3,4,6,7,8HexaCDF

1,2,3,4,6,7,8HeptaCDF

1,2,3,4,7,8,9HeptaCDF

OctaCDF

3,3',4,4'-TeCB(77)3,4,4',5-TeCB(81)3,3',4,4',5PeCB(126)3,3',4,4',5,5'HxCB(169)まとめ
今回開発した分析方法により、各生体試料（血液、母乳、臍帯、臍帯血）においてダイオキシン類の高感度な分析の実施が可能となった。前処理においても、脂肪抽出1日、クリーンアップ1日の計2日に短縮でき、かつクリーンアップ操作を各生体試料共通の条件にて行えるため、より迅速で簡便な測定が可能となった。
ヒト生体試料中ダイオキシン類の異性体分布は、血液、母乳、臍帯、臍帯血においてほぼ同一な生体パターンをとった。ただし胎児由来の組織である臍帯と臍帯血は、その濃度レベルやTEQに対する異性体比率が近似しており、Co-PCBsの比率など血液、母乳との相違点も示唆された。