福岡県保健環境研究所年報第37号，77－80，2010

資料
食中毒菌汚染実態調査実施要領の内容変更に伴うサルモネラ寒天平板培地の比較
村上光一・市原祥子・江藤良樹・濱﨑光宏・竹中重幸・堀川和美
食中毒菌汚染実態調査実施要領の内容変更に伴い、従来当所で食中毒菌汚染実態調査に使用していた寒天培地が使用できなくなった。そのため、新実施要領に定められたサルモネラ検出用寒天平板培
地の性能を、従来使用していた寒天平板培地等と、その性能を比較した。その結果、硫化水素産生性以外を鑑別の徴表とする培地では CHROMagar™ Salmonella（クロモアガーサルモネラ）が、硫化水素産生性を鑑別の徴表とする培地では、DHL 寒天培地が優れていることが判明した。

［キーワード：サルモネラ、培地、チフス菌、非定型的サルモネラ］
１

はじめに表１ 鶏肉等 35 検体におけるサルモネラ検出状況

サルモネラは公衆衛生上重要な病原体である。この病原体は、チフス性のサルモネラと非チフス性のサルモネラにXLD
クロモアガー
サルモネラ
SM2

分類されるが、前者はヒトに腸チフスあるいはパラチフスを起こし、後者は主として急性腸炎（サルモネラ症）を惹起する。非チフス性サルモネラは、食品を媒介とするもの

陰性24検出2偽陽性*
933203410*サルモネラでない集落がサルモネラの様に視認されるもの

や、カメなどの動物を介してヒトに感染することが多い。
飲食物がサルモネラを媒介してヒトにサルモネラ症を起XLD: XLD寒天培地
クロモアガーサルモネラ: CHROMagar™ SalmonellaTM
SM2: ＣhromID Salmonella Agar (SM2)

こした場合は、食中毒として取り扱われる。
これらサルモネラの検出において検査法、特に培地の性能が試験結果を左右することは言を待たない。そのため、多くのサルモネラ検出用培地が開発されてきた。近年、BioMérieux）、ES サルモネラ II（栄研化学）及びスルファ

C8-esterase 活性をサルモネラが比較的特異的に有するこピリジン添加ブリリアントグリーン寒天培地（BGS）の中とから、5-bromo-6-chloro-3-indolyl-octanoate などの特定酵から一種類選択することが定められた。
また、この新たな寒天培地の指定は、現在、国立医薬品素基質を利用した培地の開発が盛んとなった1)。
一方、当所では、食品の食中毒菌汚染実態調査を厚生労食品衛生研究所で進められている公定法の制定に関連し働省からの委託事業として実施している。この事業の検査ていると考えられ、我々も当該通知による培地の指定を蔑法も、前述の培地開発の流れを受け、サルモネラの検査法、ろにできない。

特に使用培地が新たに指定されることとなった（平成 21この結果、従来当所で当該事業に使用してきた寒天平板

年 6 月 23 日付食安発第 0623005 号厚生労働省医薬食品局培地である SMID 寒天培地（BioMérieux）、及び XLT4 寒食品安全部長通知）。この通知のなかで、サルモネラの検天培地（BD）は指定培地でなくなった。そのため、今回査では、（サルモネラが硫化水素を産生することを徴表と指定された培地の中で、より性能の高い寒天平板培地を選して分離する培地のうち）DHL 寒天培地、MLCB 寒天培択する必要が発生した。今回、我々は、新たに当該通知で地、及び XLD 寒天培地の中から一種類選択し、（サルモ指定された培地のうち数種類を選び、従来使用してきた培ネラが硫化水素を産生することを徴表とせずに分離する地等とその性能を比較した。
比較項目は、検出率、発育支持性等である。サルモネラ培地のうち）CHROMagar™ Salmonella（クロモアガーサルの食中毒において、非チフス性サルモネラを媒介する飲食モネラ、BD）、ChromID™ Salmonella Agar （SM2、福岡県保健環境研究所 （〒818-0135 太宰府市大字向佐野 39）

―77―

表2

鶏肉 15 検体（いずれかの培地にてサルモネラが検出された検体）を用いての各寒天培地におけるサルモネラ検出結果の比較1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

鶏肉

クロﾓア
ガーサル
モネラ

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

SM2++

++

+++

++

++

++

+

++

++

++

++

++

++

++

SMID

++

++

++

++

++

++

++

+

++

++

++

++

++

++

++

SS

++

++

++

++

++

+

++

++

++

++

++

++

++

++

++

DHL

++

++

++

++

++

不検出++

+

++

++

++

++

++

++

++

XLD

+++++

++

+

不検出++

+

++

++

++

XLT4

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

++

＋：サルモネラを疑うことが可能な集落が10未満出現したこと、＋＋は10以上出現したことを示す。

クロﾓアガーサルモネラ: CHROMagar™ Salmonella
SM2: ＣhromIDTM Salmonella Agar (SM2)
SMID: SMID 寒天培地
SS: SS 寒天培地
DHL: DHL 寒天培地
XLD: XLD寒天培地
XLT4: ＸＬT4寒天培地

表 3 各培地の発育支持性（菌液を 10 倍ずつ希釈し、105 倍希釈からパラチフスA菌

チチフス菌株A

1012 倍希釈液を 1 μL ずつ接種)

株B株C

パラチフスB菌株D株E

株F

1回目

2回目

1回目

2回目

1回目

2回目

1回目

2回目

1回目

2回目

1回目

2回目

SM210^510^510^510^510^510^610^610^610^510^510^5-

クロモアガーサルモネラ

10^610^510^510^510^510^610^510^610^5-

-

-

SMID

10^510^510^510^510^510^510^510^5-

-

-

-

SS

10^510^510^510^510^510^5-

-

10^5-

10^5-

DHL

10^510^610^510^510^710^510^510^510^610^610^5-

XLD

10^610^510^510^510^510^610^610^510^510^510^5-

XLT410^610^510^510^510^610^510^510^510^5---

各培地の略語は表２脚注のとおり
510^5: 10 を表す。

―78―

乳糖を利用し酸を産生する菌株培地

SM2

クロモアガー
サルモネラ

SMID

図１

写真

リシン脱炭酸陰性菌株

結果：各培地で示すべきサルモネラの特徴を、コロニーが示しているか

結果：各培地で示すべきサルモネラの特徴を、コロニーが示している
か

写真

○○

×

○

○

○

○

（発育せず）

×（発育せず）

SS

×

○×

DHL

×

○×

XLD

×

○×

XLT4×

○×

サルモネラの各培地の比較（各培地の略語は表２脚注のとおり）

検査材料として、既にサルモネラを含んでいること。そのため、今回は鶏肉を中心とした食品検体中が、他の試験にて明らかとなっている 15 検体の鶏肉をのサルモネラを対象にその性能を比較した。
２

写真

結果：各培地で示すべきサルモネラの特徴を、コロニーが示しているか×

物の種類は多いが、最も主要なものは鶏卵と鶏肉である
1), 2), 3)

硫化水素非産生菌株中心とした食品を用い、検査を実施した。用いた寒天培

方法

地は、クロモアガーサルモネラ、SM2、SMID 寒天培地、２・１ 検出率の比較１

SS 寒天培地、 DHL 寒天培地、 XLD 寒天培地及 び

検査材料として、35 検体の鶏肉を中心とした食品をXLT4 寒天培地であり、方法は｢2・1検出率の比較１｣

用い、検査を実施した。検体 約 25 g を秤量し、これをのとおりである。

ストマッカー用の袋にいれ、225 ml の緩衝ペプトン水

２・３ 発育支持性を加えた後、ストマッカーにて 1 分間ストマックした。

ミスラ法による発育支持性の評価を行った。用いた菌これを 35℃ にて 20 時間培養した。ついでラパポート株は、チフス菌（2 株）、パラチフスA菌（2 株）及びバシリアディス及びテトラチオン酸塩培地に、培養液をパラチフス B 菌（2 株）である。比較した培地は、SM2、それぞれ 0.1 ml 及び 1 ml 接種し、42℃ にて 18 時間

クロモアガーサルモネラ、SMID 寒天培地、SS 寒天培培養した。その後、ラパポートバシリアディス培養物を地、DHL 寒天培地、XLD 寒天培地及び XLT4 寒天培

XLD 寒天培地、クロモアガーサルモネラ及び SM2 に地である。

塗抹し、同様にテトラチオン酸塩培地の培養物も両寒天

２・４ 菌の集落形成の確認

培地に塗抹した。寒天培地は 35℃ にて 18 時間培養し、非定形的性状のサルモネラである乳糖を分解し酸をサルモネラを疑う集落を釣菌した。釣菌は TSI 寒天培地

産生するサルモネラ、リシンを脱炭酸しないサルモネラ、等を既報

５）のとおりに用い、サルモネラであるか同定

通常の条件では硫化水素を産生しないサルモネラを用した。

い、これらの集落がどのように形成されるか観察した。

２・２ 検出率の比較2

比較した培地は、SM2、クロモアガーサルモネラ、SMID―79―

寒天培地、SS 寒天培地、DHL 寒天培地、XLD 寒天培

brij-58 等の界面活性剤を添加する必要があるためであ地及び XLT4 寒天培地である。

る6)。以上の点から、その実用性に鑑み、クロモアガー

３結果サルモネラを以降の食中毒菌汚染実態調査では使用す３・１ 検出率の比較１ることとした。

表 1 に示すようにクロモアガーサルモネラが最も良好な結果を示した。XLD 寒天培地は偽陽性が多く、検文献査時間に無駄が多く発生した。

1) M. Manafi: New developments in chromogenic and３・２ 検出率の比較2

fluorogenic culture media, Int. J. Food Microbiol., 60,

表 2 に示すように DHL 寒天培地及び XLD 寒天

205-218, 2000.

培地に難が認められた。特に XLD 寒天培地は発育す

2) K. Murakami, K. Horikawa, K. Otsuki: Epidemiologicalるサルモネラの集落数も少ない傾向が認められた。

analysis of Salmonella enteritidis from human outbreaks by

３・３ 発育支持性

pulsed-field gel electrophoresis. J. Vet. Med. Sci.; 61，

表 3 に示すように、サルモネラの中で最も発育条件

439-42，1999．

が制限されるとされる血清型の一つ、パラチフス B 菌3) K. Murakami, K. Horikawa, K. Otsuki: Genotypicの発育結果を見ると、SM2、XLD 寒天培地及び DHL

characterization of human and environmental isolates of寒天培地が優れていた。

Salmonella choleraesuis subspecies choleraesuis serovar

３・４ 菌の集落形成の確認

Infantis by pulsed-field gel electrophoresis. Microbiol.

図 1 に示すように SM2、クロモアガーサルモネラ

Immunol. 43, 293-6, 1999．

及び SMID 寒天培地の中では、SM2 が優れていた。
４4) T. Noda, K. Murakami, Y. Ishiguro et al.: Chicken meat is考察

an infection source of Salmonella serovar Infantis for

これらの結果から、選択すべき（サルモネラが硫化水

humans in Japan, Foodborne Pathog. Dis., 7, 727-735,

素を産生することを徴表として分離する）培地の中では、XLD 寒天培地よりも DHL 寒天培地が優れているこ

2010.
5) K. Murakami, K. Horikawa, T. Ito et al.: Environmentalとが明らかとなった。また、サルモネラが硫化水素を産

survey of salmonella and comparison of genotypic character

生することを徴表とせずに分離する培地の中では、SM2with human isolates in Western Japan. Epidemiol. Infect.,

及びクロモアガーサルモネラの何れが優れているか顕

126, 159-172, 2001.

著な差は認められなかったが、今回の検討において

6) 村上光一，長野英俊，野田多美枝ら：赤痢菌を検出す

SM2 の発育集落は、何れも扁平で、限界不明瞭な集落るための固形培地および培養方法，特願 2005-9673，平で、近隣の集落とあまりに近接するものが多かった。こ成 17 年 3 月 30 日（特許出願），2005.

れは含有する界面活性剤の成分あるいは含量に由来するものでないかと考えられる。特定酵素基質培地では、特定酵素基質を倍地中に溶解することに困難さが伴い、―80―