総説

毒性概念の変遷と毒性試験の動向
大沢基保
Conceptual Shift of Toxicity and Current Vision of Toxicity Testing
Motoyasu OHSAWA

Toxicity of chemical substances to humans is considered as inherent property of an agent to cause
an adverse biological effect on human health. It has been evaluated at non-clinical stage by toxicity
testings mainly using animals. Recent development in life science at cellular and molecular levels,
however, promotes to innovate new toxicity testings under adverse outcome pathway (AOP) for
regulation. It also makes us distinguish toxicity from adversity. Moreover concept of target toxicity
should be differentiated between chemical substances and drugs. Particularly novel biotechnology
products change concept of toxicity targets and availability of animal experiments. Toxicity testings
should be reorganized in response to such changes in meaning of toxicity. This review will coverrecent conceptual shift of toxicity and the prospects for future development of toxicity testings.

はじめに（毒性とその評価）

毒性試験が対象とする毒性とは，多様な意味で生活環境中の諸物質のヒトの健康への有害性

使われてきたが，一般には生物に傷害，機能障は，リスク（危険度）
として評価される．リスク評

害，致死などの有害影響（Adverse effect）を生じ

価（Risk assessment）は，対象物質の 1）ヒトの健る物質の性質やその能力，と説明されてきた 3,4）.

康への有害性の確認と 2）その有害性の量－反応

WHO の IPCS
（国際化学物質安全性計画）事業に

評価，3）ヒトへの実際の暴露評価，および 4）そよるリスク評価関連用語でも，毒性は「有害な生の物質による有害影響発生のリスク推定，の 4 つ物影響を引き起こす物質に固有の性質（Inherentのプロセスからなる．はじめの 2 つの段階はproperty of an agent to cause an adverse biological

有害性評価に関することであり，物質の毒性評価

effect）」とされている 1）．いずれも毒性を物質に固（Toxicity assessment）
が基本となる .

有の性質として定義している．以前は毒物学と訳

1,2）

安全性評価という言葉があるが，化学物質に関されていた Toxicology は，今日では毒性の特徴して考えると有害性評価と安全性評価は表と裏のや強さなどを研究する毒性学として，個体レベル関係であろう．生活環境物質や食品成分のようにでの一般毒性や細胞レベルでの毒性に関する毒性暴露が避けがたい物質や原材料となる新規な物質試験を中心に発展してきた．近年，リスク評価にのリスク評価は，有害性評価がまず必要となる．

よる有害性評価と有害因子の規制の重要性が増す

一方，暴露の経路や量を限定しうる医薬品，医療につれ，毒性試験による毒性評価はレギュラト

材料・機器，食品添加物などの製品のリスク評価

リーサイエンス（評価 / 規制科学）の重要な要素とは，有害性がコントロール可能な範囲内であるこなっている．それに伴い毒性の捉え方は，基礎的とを確認する作業といえる安全性評価が目的であな有害性検索段階（物質の毒性反応誘発能を検索）る．生活環境中の諸物質の有害性評価 / 安全性評と実用的なリスク評価段階（動物実験や臨床 / 疫

価は毒性試験による毒性評価に基づくため，毒性学試験などで個体やヒト集団での有害影響度を検試験は欠かせない .

証）とで異なってきた．
近年の生物科学やバイオテクノロジーを含む物

秦野研究所研究顧問
8

質科学の展開は，対象物質の種類や用途の多様化

総説

や毒性試験の進歩をもたらし，毒性の具体的内容

あるいは適応反応であり，回復できない程度や質も個体・器官から細胞，分子レベルの事象にまでの生体変化が生じた場合，毒性反応となる．毒性

深められてきた．それらの変化に応じた新しい発現の過程が分子レベルで研究されるようにな

ヴィジョンとして 21 世紀の毒性試験は，1）化学り，毒性とは一定の暴露条件で毒性反応を生じさ物質の特性解明（Chemical characterization），2）

せうる物質固有の性質であり，生体側の毒性反応

毒性経路分析（Toxicity pathway assays）と標的とは本来区別されている．しかし，量－反応関係試験（Targeted testing）からなる毒性評価試験，

ではそれらは密接に関連するため，その区別は必

3）量－反応関係解析とモデルによるヒトへの外ずしも明確ではない．また，量－反応関係は，従5）

挿，の各要素から構成されることが提唱された ．

来は生体にとっては異物の暴露による影響を主対

さらに，新技術を基に生産される新規物質や医薬品象としてきたが，今日では生体物質やその類似物の毒性の評価や規制のための安全性科学も，科学分

質が医療や保健目的でヒトに投与あるいは摂取さ

野の新しいカテゴリーとして捉えられはじめた ．

れるようになり，それらの影響も対象とする必要

ここでは，諸物質のヒトへの健康影響に関するが生じている．この場合の量と反応については，

毒性概念の変化をたどり，非臨床段階の毒性試験

生体での存在量やその生理的反応を考慮する必要との関係を中心に毒性評価の展望を試みる．

がある．

6）

（2）毒性感受性（Toxic susceptibility）：同一物質
1．毒性物質と毒性でも毒性反応の量－反応関係は，生物種，同種内

1.1

すべての物質は毒性を生じうる？

の個体や性などの差，個体内でも細胞種や器官に（量−反応関係）

よって異なる．
このような毒性出現における差は，毒性に関連する用語が近年増えている．まずそ

生体側の毒性感受性の差とされる．すなわち，毒れらを毒性の基礎概念に照らして少し整理してみ性の発現は，物質に固有の物性と生体への暴露条

たい．

件（暴露経路・形態・量など）と，その物質に対す生命活動に有害な影響を与える物質は毒性物質

る生体の生理・生化学的，遺伝的な反応条件（体（Toxic substance）と総称され，その特性を毒性

内動態，代謝，共役因子・受容体の有無などによ（Toxicity）という．極少量の摂取でも重篤な毒性

る毒性感受性）によって規定される．このため，を示すものを一般に毒物（Poison）と呼び，健康毒性評価には，対象となる暴露条件に応じた各種被害の経験から特に注意が喚起されてきた．毒性

生物試験系による毒性試験が必要とされる．

物質のうち，生物由来のものを毒素（Toxin）
，そ

1.2

選択毒性

れ以外の自然あるいは人工由来のものを有毒物質

ある物質の毒性が，特定の生物種に対してのみ（Toxicant）とに分けることがある．Toxicology の毒性影響を生じることがある．この生物種による祖と称される Paracelsus（パラケルスス，16 世紀）

毒性影響出現の差を選択毒性（Selective toxicity）

は，「すべての物質は有毒であり，ある物質が毒と言う 7）．選択毒性は，生物種や生体の細胞 ･ 組

物でないのは単にその用量によるものである」と

織種に固有の有毒物質の代謝（代謝活性化や解毒唱えた．以来，すべての物質は生体に摂取された代謝）能力の差や，その物質の作用部位での受容量に応じて毒性を示しうると考えられ，量－反応体の有無や親和性の差などの宿主の感受性要因に関係（Dose-response relationship）は毒性評価の起因している．

基礎概念となっている．ここで注意すべきは，量この考え方を利用して有機リン系殺虫剤が開発－反応関係とは，物質
（量）
－生体
（反応）
関係に関

された．この殺虫剤は，ヒトや動物では有機リンする概念である．

構造が容易に代謝分解されるが，駆除対象の昆虫（1）毒性反応（Toxic response）：毒性評価の量－では代謝されにくい．そのため，量－反応関係の反応関係における反応とは，物質の毒性に対して差に従って昆虫では選択的に毒性反応（アセチル

生じる生体反応のことである．生体の恒常性を回コリンエステラーゼ阻害）が現れやすい．ヒトや復しうる範囲内の生体変化は単なるストレス反応

家畜とそれ以外の生物の代謝能の差による選択毒9

秦野研究所年報 Vol. 41. 2018

性は，農作物の有害生物やヒトの病原体の排除のところ，選択的な毒性影響は主に器官レベルの器

ための農薬や，抗菌薬・寄生虫駆除薬などの開発

質や機能の障害として検出されることから，標的原理に利用された．さらに，ヒトではがん細胞の器官が毒性標的として扱われることが多い．

ような異常細胞と正常細胞との間の選択毒性とし

1.4

医薬品と毒性て，化学療法剤の開発に応用された．今日まで，医薬品は，特異的な効果を期待する本来の標

化学合成薬やバイオ医薬による薬物治療では，程的（On-target）と は 異 な る 組 織 / 細 胞 / 分 子（Off-

度の差こそあれ，種々の疾病において病原細胞のtarget）にも効果を及ぼすことがある．核酸医薬

選択的排除が必要な場合は，この選択毒性の考えや分子標的薬などの開発過程でその発生頻度が高方が適用されてきた．

いことから，分子レベルの標的では特異的効果のヒトと身近な動物種の間では，食物成分による確保が大きな課題となっている．このため近年，中毒にも選択毒性がみられる．タマネギ，ニンニ

薬物では本来の目的とする標的部位への効果をオ

クなどのネギ属に含まれる有機イオウ成分は，ヒン・ターゲット効果（On-target effect），それ以

トでは通常は無害だが，イヌ，ネコ，ウサギなど外の部位への効果をオフ ･ ターゲット効果（Off-では溶血性貧血などの中毒症状を起こすことがあtarget effect）と称し，分けるようになった．オる．この逆の事例もあるので，ヒトへの毒性影響

フ ･ ターゲット効果は副作用（Side effect）であるを動物実験で調べる場合は，ヒトと用いる動物種

が，通常は治療目的に適さない有害影響（因果関の間の選択毒性の有無に気をつける必要がある．

係を問わない場合は有害事象，Adverse event）

1.3と解されている．

標的

特定の物質の選択的な作用部位を標的（Target）

医薬も過量に用いると本来の薬理作用の標的にという．その部位が特定の器官や組織であれば対しても毒性を示す．このため，医薬の有害な副標的器官（Target organ）となり，特定の細胞や作用はオン・ターゲット毒性（On-target toxicity）

生 体 分 子 で あ れ ば 標 的 細 胞/分 子（Target cell/とオフ ･ ターゲット毒性（Off-target toxicity）に分

molecule）となる．近年この標的の概念は，医薬けて論じられる 10-12）．オン・ターゲット毒性は多の開発においては特に重視され，医薬の及ぼす標量の薬物暴露により標的の構造や機能に過大な薬的効果（Target effect），すなわち薬効（Efﬁcacy）
が理効果による有害影響や非特異的な有害影響が発より選択的であることが目標とされた．さらに，生する場合で，一般に用量依存的に毒性が発現す分子生物学の発展に伴い，標的は分子レベルでもる．オフ・ターゲット毒性は，本来の標的と生物捉えられ，特定の受容体分子や分子構造部位を標学的な関連があるか，あるいは全く関連がない他的とする分子標的薬や核酸医薬などが出現してきの標的の変調により有害影響が生じる場合であた．このような標的効果を発現する物質の特性は，る．この例として，免疫抑制薬であるシクロス

生物種，同一個体内の組織，細胞のレベルでは選ポリン A やタクロリムスによる高血糖があげられ

択性（Selectivity）と，細胞成分 ･ 分子レベルでは特る．これら薬物の薬効を仲介する特異的受容体タ

異性（Speciﬁcity）とに区別されている ．

ンパク質は，薬効標的であるＴリンパ球以外に膵

8）

また，薬物効果の対象となる標的を薬効標的

臓のランゲルハンス細胞にも存在するため，イン（Efﬁcacy target）とし，毒性物質の毒性標的と区スリンの産生を阻害してオフ ･ ターゲット毒性と別する考えもある ．ある薬物の薬効は，特定のして高血糖を生じる．これらを含め薬物の毒性に一つの標的に限定されるよりは，複数種の標的がついては，その機序から 5 つのカテゴリー（オン・

関与する複合的薬理効果（Polypharmacological

ターゲット毒性，過敏症および関連免疫反応，オ

effects）として効能が生じることが多い．一方，

フ ･ ターゲット毒性，毒性代謝物への生物活性化，

毒性物質の場合は全身的な影響を示すことが多い

特異体質毒性）分類が提起されている 10）．

9）が，メチル水銀の中枢神経障害のように特定の器副作用とされたオフ･ターゲット効果から，適応官に顕著な影響が表れるとき，それを毒性標的

外の薬効や新たな創薬の標的の発見につながるこ（Toxicity target）の一つと見なしている．現在のともある．既存薬のオフ･ターゲット効果を新たな

10

総

説

薬効として適応拡大に結びつけること（既存薬再開抗体や生理活性分子などのタンパク質医薬は，低発，Drug repositioning）
は創薬の方法の一つになっ分子医薬のようなオフ ･ ターゲット毒性を示す可ている．その一例として，かつて鎮静・催眠薬と能性は低いが，その生理機能の過剰により免疫的，して妊婦に用いられたサリドマイドがあげられる．

生理的ホメオスタシス（恒常性）
を乱して有害影響

サリドマイドは妊婦においては催奇形性の副作用をもたらすことになる．これは，物質に固有の物のため禁止されたが，その後ハンセン病結節性紅性としての毒性とは異なり，物性として生体物質

斑や多発性骨髄腫に対する薬効が知られ，妊娠期との不適合性や，オン ･ ターゲット効果である生およびその可能時期を除いてそれらの治療に用い物活性のバランス撹乱によるホメオスタシスの破られている．このように，医薬の標的による毒性

綻，というような新たな毒性とその影響の概念を

分類は，その適応目的によって変わりうる．

もたらした．

1.5

化学物質と毒性

標的によるオン / オフ・ターゲット毒性の分類
は，化学療法剤や生物製剤の開発のために適用さ2．毒性概念の変化と毒性試験
2.1

毒性の評価
（Toxicity と Adversity）

れているが，生体異物であるより広範な化学物質

Toxicology は化学物質の毒性を予測評価するたによる生体毒性の分類にも用い得るとする説もあめの科学として発展してきたが，対象となる物質

る．しかし，生体異物である生活化学物質やの種類や用途の多様化や，個体から細胞，分子レ

環境汚染物質については暴露量や標的が未知であベルの事象にまで深められてきた毒性指標やハイるか明確でないことが多い．

スループットの in vitro 試験やコンピューターモ

13）

食品，生活化学品や生活環境中の化学物質の毒性

デルの導入などに応じて，毒性の捉え方が分化し評価は，標的が未知の場合はその特定が前提となる．

つつある
（表 1）
．また，リスクの有無の評価を試

さらに，標的器官には標的となる細胞や標的分子がみる基礎科学の視点と，リスクの制御のためにリ存在することも前提である．一般に，暴露された化

スクの程度を評価する実用科学の視点でも，毒性学物質の体内濃度が最も高い部位がその物質の標的の捉え方が分化しつつある．例えば，「有害な生器官となると予想されるが，それと異なる部位が標物影響」とは，一見明らかな急性障害から細胞や的器官となることも多々知られている．つまり，生分子レベルの生体恒常性の撹乱影響までも含むよ

活環境中の一般の化学物質の毒性は，化学物質やそうになった．これに伴い諸物質の毒性評価も，細の代謝物の物理化学的性質（物性）と，その作用の標

胞や分子レベルの反応（毒性反応）から有害反応的となる細胞器官や生体膜，代謝経路などへの効果（Adverse response），それに基づく組織や個体（生物活性）に関係するからである．

さらには集団レベルに出現する有害影響あるいは

このため，一般の化学物質の毒性評価は，基礎有害事象に区別されるようになった 14）．

的な物性評価と，毒性試験による新規毒性の検出

近年，化学物質暴露をはじめ種々のストレス因も含めた標的と毒性影響の探索と，標的の毒性影

子による炎症の出現は，細胞レベルのストレス反響に関する量－反応関係の確認が基本となる．総応や防御反応を経たホメオスタシスの乱れや破綻

合的なリスク評価は，この毒性試験に暴露条件をによる結果として捉えるべきことが指摘されてい加味して判断される．

る 15）．化学物質に対する毒性反応から有害影響の1.6

出現の過程も，ストレス反応に始まる一連のプロ

バイオ物質と毒性

バイオテクノロジーの発達によって，治療用のセスを含むものと考えられる．一方，ヒトにおけ抗体，核酸，遺伝子，細胞などの新規医薬が急速る影響を有害か否か識別するリスク評価の観点かに開発されている．また，遺伝子組換え技術にら，有害影響の種類や程度を Adversity（有害性）

よって生産された食材とその成分，それらの加工として論じるようになってきた 16）．また，リス品の利用も増えている．これらバイオ物質は，ヒ

ク評価の観点からは，対象物質の暴露から毒性反トや動植物の生体物質と同一か同質の類似物質で応の誘発，それに伴う有害影響の出現までの一連あり，一般の化学物質に比べ反応の特異性が高い．

の経過である Adverse Outcome Pathway
（AOP:
11

秦野研究所年報 Vol. 41. 2018

有害転帰経路）を毒性評価の論理的根拠として重念とされつつある．

視するようになった（図 1） ．毒性の研究が定性

2.2

17）

毒性発現経路的なものから定量的なものへ，また，有害影響の

有害物質の暴露により個体に有害な影響が生じ

観察記述から分子機構の解明へと発展する経過のるリスクを予測するために，各種の毒性指標とそ中で，Toxicity と Adversity は連続する個別の概れを用いた毒性試験が提案されている．OECD

表１

化学的性質による毒性の分類

分類

毒性の特徴

毒性反応例

有害影響
（直接影響）

物質例

①高浸透圧

非特異的

細胞膜破損，タンパク質変性

細胞死，炎症

塩化ナトリウム②強酸 / アルカリ性

非特異的

細胞膜破損，タンパク質変性

細胞死，炎症

硫酸，塩酸/水酸化ナトリウム③強酸化 / 還元

非特異的

細胞膜破損，タンパク質変性

細胞死，炎症

オキシダント / 硫化水素

蓄積部位特異的

物理化学的刺激肺線維症，中皮腫

アスベスト，二酸化ケイ素① 親電子性物質による共有結合リガンド特異的（低特異性）

核酸塩基やタンパク質修飾 ･ 付加

細胞死，核酸・酵素機
能阻害，増殖増殖阻害

アルキル化剤，
多環芳香族炭化水素類② オキシダント/ラジカルによる過酸化リガンド特異的（低特異性）

核酸/タンパク質/脂質の機能阻 細胞死，核酸・酵素機
害，タンパク質・脂質の過酸化能阻害，増殖増殖阻害

オゾン，塩素ガス，
パラコート③ SH 基親和性物質
による配位結合

リガンド特異的（低特異性）

タンパク質の機能阻害 / 修飾

水銀，鉛などの重金属塩，
アレルゲン

物理化学的性質

④難溶性
化学反応性

酵素・タンパク質機能の阻害，アレルギー性
接触皮膚炎

生化学的反応性① 受容体への結合
i) 受容体活性化の阻害/亢進
ii) 毒性物質の仲介②抗原抗体反応

炎症，免疫 / 内分泌 /
神経異常 ,
特異的受容体のシグナル伝達阻害/亢進

細胞受容体への 遺伝子活性化 / 発現阻害
結合を介して標的分子に結合・作用．高特異性特異的

図1

タンパクの生物活性阻害，免疫反応誘発酵素活性阻害，
神経毒性

有機リン系殺虫剤

内分泌撹乱，免疫毒性

環境エストロゲン，
ダイオキシン類，
シクロスポリン A

アレルギー，自己免疫

食物アレルゲン，
抗体等タンパク医薬

Adverse Outcome Pathway（AOP）概念の模式図（文献 14 の図を一部改変）

12

総

図2

説

皮膚感作に至る経路のフローチャート（文献 18 から引用）

図3

ストレス反応から有害影響への毒性移行に関する暴露－影響連関（Exposure-to-outcome continuum）（文献 2 の図を一部改変）

では化学物質の規制のためにそれらの毒性試験をる重要な要因であることから，暴露に関する新分用いるためには，毒性指標を AOP のプロセスに野として暴露科学（Exposure science）が分離形成位置付けて，その意義を明確にすることを求めてされている．

いる．その具体例として皮膚感作性試験の各バイ

2.3

物性としての毒性

オマーカーの毒性発現経路における位置付けが，

AOP の初期段階である毒性反応の過程では，AOP として示されている（図 2） ．また，種々の毒性を有する物質は標的となる生体分子や細胞に関連科学の発展に伴い，化学物質の暴露に始まり，作用する．ある物質が接触部位において生体分子

個体や人口集団における有害事象の出現に至るプや細胞に影響し，その分子や細胞の機能維持に不ロセスは，暴露－影響連関（Exposure-to-outcome

利な不可逆的な変化を生じるとき，その物質は毒

continuum，図 3） として整理されている．その性を有するとされる．そのような毒性反応を生じ連関では，物質の暴露条件が毒性の発現を左右す

る物質の性質にはどのようなものがあるだろう

18）

2）

13

秦野研究所年報 Vol. 41. 2018

か．これには，物質の異常濃度による細胞環境のに選択的であるが非特異的な毒性を生じる．

浸透圧や酸塩基性，酸化還元性などの物理化学的2.4

生物活性としての毒性性質の変化による非特異的な毒性があげられる．

暴露された物質が，標的に存在する受容体分子

この場合，細胞膜の破損やタンパク質の変性などのリガンドとして結合し不可逆的化学反応を生じの細胞構造の変化により，細胞死や組織変性などる場合は，特異性の高い毒性が発生する 2,10）．受の有害影響が生じる．このような物理化学的性質

容体（Receptor）
は，体内外からの物理的あるいはによる毒性は，通常は物質の高濃度暴露で生じる

化学的な刺激を受けとる分子やその複合体のこと

非特異的なものである．高濃度暴露は，通常体外で，刺激の細胞や組織へのシグナル伝達に関わる．

の物質環境に直接曝される消化器，肺や，体内へ受容体は，細胞外に存在するものもあるが，多くの吸収や排泄の過程に関わる肝，腎などの上皮組は標的細胞の表面や細胞質あるいは核内に存在す織で起こるが，これらの組織では機能維持のためる．このような受容体との結合による特異的毒性に損傷細胞の速やかな補充回復が起こる．その回は，典型的なリガンド物質と比べて構造活性相関

復能力を超える細胞死がもたらされると，毒性影により検索される場合もあるが，一般には種々の響として有害性が生じる．

生物活性測定系を用いた毒性試験によって，本来細胞損傷による細胞死が顕著でなくても正常なの生物活性の拮抗 / 非拮抗的な阻害，生物活性の生理機能の撹乱が生じうる．細胞膜のイオンチャ異常（異常亢進あるいは質的変化など）
やそれによ

ネルやイオンポンプが種々の物質に影響される

る有害影響から検出される．

と，神経毒性が生じうる．DDT のナトリウムチャ

生物活性としての毒性は，受容体の活性化が細ネルの阻害による神経毒性や，各種の有機溶媒の胞の生理機能に直結する場合と，受容体が暴露物

非特異的な膜効果（脱分極）による中枢神経抑制

質の細胞内の標的部位 ･ 分子への運搬役である場は，この例にあたるだろう．

合とで異なる．後者の場合は，有害物質が一次的一方，化学的な性質により，特定の分子に親和な標的である細胞受容体に結合してその生物活性性が高く反応する場合がある．タンパク質や核酸

シグナルに異常を生じ，これを介して二次的な標などの生体高分子では電子密度の高い部位を持つ的部位に連鎖的に有害影響を生じるものである．

ことが多い．親電子性が強い物質は，細胞の核酸

これらの生体反応機構に従って発現する毒性をシ

–

–

–

塩基やタンパク質側鎖の SH ，NH2 ，OH 基のグナル毒性（受容体原性毒性，Signal toxicity）とような親核部位に共有結合により付加体を形成し，する概念が提唱されている 19）．薬物による肝細核酸やタンパク質の機能を阻害する．親電子性が胞障害に炎症性サイトカインの撹乱のように複数低い化学物質でも，肝臓などで代謝されて親電子のシグナル毒性が関わるとき，ネットワーク毒性性物質になると，代謝活性化と言われるように生（Network toxicity）と称している場合もある 20）．

体高分子に付加して毒性を示す．また，ラジカル

シグナル撹乱による免疫系，内分泌系，神経系な形成物質は細胞膜の脂質を過酸化する．その結果，どへの有害影響は，生活環境のリスク評価の今日

酵素タンパクの機能阻害や細胞増殖，免疫反応を的課題になりつつある．バイオテクノロジーやナ障害する．このような物理・化学的な物質の特性は，ノテクノロジーによる新規医薬品では，それらに接触する細胞や生体成分に非特異的に作用し，細よるシグナル撹乱を介した免疫系への有害影響

胞傷害などの非特異的な毒性として発現する．こが，毒性評価の課題になっている 21）．

れらは，直接暴露による短期毒性として多くは検2.5出される．しかし，細胞のDNAに生じた障害が修生 体恒常性維持機能の撹乱としての毒性 –システム毒性

復されうる場合，修復ミスによる突然変異が定着

生体異物暴露によるストレスに対し，ヒトの健康

すると，細胞死以外の細胞のがん化や遺伝子障害

は体内の生理的，生化学的，免疫的な防御機能によっなどの有害影響に発展しうる．また，アスベストてその恒常性（ホメオスタシス）が保たれる．化学物のように体液への溶解度が低い固体物質は，局所質によって異常な生物活性が誘導される場合でも，に蓄積して物理化学的刺激を繰り返し，蓄積部位

その変化が生体機能の回復・修復といった生体防御

14

総

説

能力の範囲内であれば，生体機能の恒常性は保たれ反応（Adaptive response）の 3 つに分けられる 23）．

て有害影響は生じない．化学物質の毒性による変化

すなわち，毒性物質の暴露により生体に生じたスが特定の臓器器官のホメオスタシス維持の能力を超トレス反応は，物質の質と量に応じて回復可能な

え，その機能に有害影響が生じる場合，これを標的

反応→毒性反応→有害反応または適応反応に発展

器官毒性（Target organ toxicity）と称する．また，そするとされる．さらに，生体側に生理的あるいはの影響が発生や生殖，免疫などに関わる器官システ

遺伝的な感受性要因が存在するときには，有害反ムに及ぶ場合は，器官システム毒性（Organ system

応が増大し有害影響の重篤化をもたらすことにな

toxicity）と称することもある ．

る．暴露から有害影響出現までの生体反応は，急22）

免疫機能の撹乱により，時間を経て感染や発が性中毒の場合には，暴露→炎症反応→有害反応→

ん，さらにアレルギーや自己免疫のような有害影

障害・疾病・死のプロセスを，慢性中毒の場合には，響を生じることがある．これは免疫系への毒性反化学ストレスの反復 ･ 継続によりプロ炎症反応，応（免疫毒性）の累積による防御反応の抑制 / 亢進

炎症反応の繰り返しを経て，暴露→ストレス反応や過誤によるものである．これらは代謝系，内分→プロ炎症反応→炎症反応→有害反応→障害・疾泌系，神経系，免疫系などの恒常性維持機能の撹

病・死のプロセスをたどると考えられる．

乱により有害影響を生じる一例で，ホメオスタシ
ス維持のネットワーク毒性あるいはシステム毒性

3．毒性試験の進歩
生活化学物質の増加に伴い，その毒性と有害影とも言えよう．
ホメオスタシスには，全身レベル，組織レベル，

響の事前予測が重視されるようになった．レギュ

細胞レベルの維持機構がある ．全身レベルではラトリーサイエンス分野では各種の毒性試験項目

体温や体液・血液のイオンバランスやpH，栄養成

が毒性/安全性評価基準として体系化された（表2）．

分濃度などの体内環境について，組織レベルでは組

表中の毒性試験の項目名は，対象物質の暴露 / 投

織構造や構成細胞の組成や代謝機能について，細与形態により急性毒性や亜急性～慢性毒性あるい胞レベルでは細胞成分組成やpH，膜電位などの細は単回投与毒性，反復投与毒性などの表現が用い

胞内環境について，それぞれ恒常性が維持されてられている．

いる．恒常性の維持には環境変化の監視・検知が

3.1

15）

バイオマーカー必要であるが，全身ホメオスタシスは内分泌系－

ある物質の毒性評価は，通常実験動物モデルで自律神経系が，細胞ホメオスタシスは熱ショックの毒性試験で一般の毒性影響（生死，臨床症状，体に対するHSF-1のようなシグナル伝達タンパク質

重変化，各臓器の病理観察，血液学的指標の変化がセンサーの役割を担っている．組織ホメオスタなど）の観察とその発現の用量－反応関係の測定

シスでは，組織常在のマクロファージやマスト細から推測されてきた．その後，毒性の標的の概念

胞などの免疫細胞や体性感覚神経などのセンサーが形成されるに従い，標的となりうる各器官別にを除き多くは不明である．細胞や組織の傷害や，その機能に対する毒性試験項目が加えられた．職

病原体やアレルゲン，毒素の侵入の場合は，死細業環境や一般生活環境では，有害物質の暴露状況

胞の遊離成分や侵入因子の構成成分などのDanger

が未知かつ多様で，また暴露から毒性反応，有害signal（危険信号）
が，刺激として樹状細胞などの免影響出現までに長期間を要することが多いため，疫細胞に感知されると，ストレス反応あるいは免ヒトでの暴露と反応状況の早期検出と早期の防止

疫系による生体防御反応が働く．この結果，炎症対策が重視される．そのため問題となる化学物質

反応を介して異物排除と組織修復がなされ，恒常について，ヒトへの暴露（Exposure），影響（Effect），

性が維持される．この刺激が持続的であると慢性影響の感受性（Susceptibility）
に関する各種のバイ

炎症に発展し，有害影響を生じることになる．

オマーカー（Biomarker，この場合は生体指標のこ一方，生体に有害影響を生じる毒性物質の暴露と）が開発され，その変化から原因物質とその有の場合，生体の反応は回復可能な反応（Reversible

24）
害影響の関係が推定されるようになった（図 4）．

response），有害反応（Adverse response），適応

生活化学物質の毒性予測・評価のための非臨床毒
15

秦野研究所年報 Vol. 41. 2018

性試験でも，迅速かつ低コストと予測性の高い指く異なる場合，あるいは対象物質に由来する毒性標を求めて，ヒトのバイオマーカーの利用や新た代謝物の産生状況が異なる場合などでは，動物実なバイオマーカーの開発が行われた．

験の必須性の根拠は乏しくなる 25,26）．種々の急性

3.2

炎症における遺伝子発現状態が，その疾病状態の動物実験の 3Rs 原則

実験動物を用いた毒性試験は，毒性未知物質のヒトとマウスモデルで一致しないことが多いこと

毒性検索におけるゴールドルールとされてきた．

も指摘されている 27）．少なくとも，分子レベル

実験動物種によっては対象物質についてヒトの場の毒性反応では種差がかなりあることに留意すべ

合に相当する標的や受容体がないか感受性が著しきである．
このため毒性試験結果の証拠価値には，

表2

化学物質別の各種毒性試験（非臨床試験）
規制担当機関（国内/国際）
厚労・通産・環境省/OECD
物質分類
化学物質（化学品）1）

試験項目
毒性試験（医療機器の場合は生物学的安全性試験）
①急性毒性
△急性毒性

（表中の○印は各物質別の適用試験項目を示す．）

厚労省 /JECFA
食品添加物○急性毒性＊

厚労省 /ICH
医薬品○反復投与毒性（28 日，90 日）○亜急性毒性（短期毒性）③がん原性 ･ 慢性毒性

○がん原性・慢性毒性○発がん性/1年間反復投与毒性（長期毒性）④生殖毒性○生殖/出生前発生毒性⑤遺伝毒性⑥皮膚感作性 / 免疫毒性

○遺伝毒性
△感作性

○生殖 / 出生前発生毒性 ○生殖発生毒性
○遺伝毒性
○遺伝毒性
○免疫毒性

⑦安全性薬理⑧その他の試験

○一般薬理
○一般薬理
△刺激性（皮膚，眼） ○アレルゲン性
△腐食性
（抗原性）

関連する
国際試験法ガイドライン

図4

○体内動態

○がん原性

○がん原性
○生殖発生毒性
○遺伝毒性
○免疫毒性

○薬理試験
○安全薬理
○光安全性評価 ○免疫原性○局所刺激性○遺伝毒性○感作性 #○刺激性○埋植○発熱性物質○血液適合性○薬物動態/○薬物動態/
トキシコキネティクス トキシコキネティクス○反復投与組織分布 ○反復投与組織分布

OECD TG400 Series

CODEX STAN 192-1995 ICH S1〜9

1）
化審法・REACH 対象となる新規化学物質．
△ REACH 対応の追加
試験項目．

＊
日本の基準には記載な
し，（ ）内 は JECFA の
項目名称．

ICH S6

各種バイオマーカー種（枠内記載）の毒性影響発現過程における関係略図

実線の矢印は次過程のマーカーへの進行を示している．破線の矢印は個体の感受性が毒性影響の進
行度合に影響することを示している．
（文献 24 の図を一部改変）

16

厚労省 /ISO
医療機器○単回投与毒性 ○単回投与毒性 ○細胞毒性○反復投与毒性 ○反復投与毒性 ○亜急性全身毒性（1〜6ヵ月）（1〜7ヵ月）②亜急性 / 亜慢性毒性

生体内運命試験（暴露評価）
①物質動態
○毒物動態

厚労省 /ICH
バイオ医薬品ISO-10993#

生体との接触があれば接触部位によらず実施されるべき項目．

総説

量－反応関係と種間での毒性作用様式の一致の程のニーズが高まっている．In vitro 試験系では複度が，重要とされている

28）

数種のヒト細胞株を系統的に用いた BioMAP の一方，1959年に英国の研究者（RusselとBurch）
がような優れた試験系が開発されている 6）．ここで動物福祉のために動物実験の代替（Replacement）

留意しなければならないのは，現在までのところと使用動物数の削減（Reduction），動物に与える標的となる細胞種が限られ，細胞種間の情報交換

苦痛の改善（Reﬁnement）という動物実験の 3Rs 原も限定されるため，一般的な個々の細胞毒性を比則（3Rs concept）を提唱した．この考えが近年普及較検索することはできても，細胞種毎に特異的なし，動物実験による毒性試験でも動物使用基準に取シグナル変化を介するシグナル毒性や細胞 ･ 組織

り込まれている．しかし，使用動物数を安易に削減

間のネットワーク毒性の評価は難しい．また，ヒすると動物実験の再現性が悪くなり，結局実験を繰

ト化動物では，免疫系の種特異性の問題をクリアり返すため動物数の削減にならない可能性も指摘さできても，標的の有害影響をヒトに外挿できるかれていた ．現実に一般の動物実験では統計学的不明である．さらに，動物個体を用いない代替法に適切な数が用いられない傾向が増えたことから，

は予測性に優れた面があるが，単一の in vitro 代

結果の信頼性に問題が生じている ．さらに，動替法試験では AOP を十分にカバーできず，複数物数の削減とともに苦痛の改善の試みも進んでいの毒性試験法を組み合せた試験バッテリーによるる．一例をあげると長期間にわたる皮膚感作性試

評価が必要なことが指摘されている 33）．しかし，

験に代わる短期間の試験法として，局所リンパ節

ヒト標的細胞の分化機能をバイオマーカーとする

試験（LLNA） が開発・実施されている．

各種の in vitro 試験系が確立されれば，それら試

3.3

験法のバッテリーを体系化することにより，代替

．

29）

30）

31）

代替試験法

3Rs 原則に沿って動物数の削減と苦痛の改善に法による医薬品や化粧品などの成分物質の毒性評

加えて，動物個体を用いない毒性試験の代替法

価は可能となろう．

（Alternative test methods: in vitro 試 験 系 や in

3.4

システム毒性学

silico 試験系）の開発も進み，レギュラトリート

近年注目されているシステム生物学（Systems

キシコロジー分野でも数多くの試験系が提案されbiology）では，生物は各種の生体システムから構るようになった．In silico 試験系では，既知化学

成され，生命現象はそのシステム間のネットワー

物質の毒性データベースを参照し，新規化学物質

クによって調節されていることを重視し，生命現の物性や構造活性相関（SAR or QSAR）を考慮し象の網羅的解析やその複雑な仕組みをコンピューてコンピューター上で毒性を予測する．バイオターの手法で解明する試みがなされている．そのインフォマティクスの一分野である．この場合応用であるシステム毒性学（Systems toxicology）

は，実際の生体系で有害影響が生じるか動物実験

は，毒性影響を各種の生体システム内あるいはシなどで最終的に確認する必要がある．そのため，ステム間での毒性反応を統合的に解析しようとす

in silico アプローチによる毒性評価を規制行政にるものである 34）．これは，当初細胞内の遺伝シス適用するには課題が多いが，DNA 反応性不純物

テムにおける遺伝毒性 35）や細胞内外のシグナル毒のように化学反応性が直接に関わる遺伝毒性試験

性 36）の解析に用いられた．その後ゲノミクス，トでは，復帰突然変異試験に代わる in silico 試験のランスクリプトミクス，プロテオミクス，メタボ

適用が有望視されている．一方，新規開発のロミクスなどの“オミクス（Omics）”指標を用いた

抗体医薬や再生医療製品などはヒト種特異性が顕

毒性影響の解析に拡大されている．生体の個々の著なため，従来の小動物を用いた試験では非臨床細胞 ･ 組織に生じた毒性反応（すなわち個々の細段階の毒性 / 安全性評価は難しい．そこで，各種

胞毒性やシグナル毒性反応，オミクス指標の毒のヒト細胞や組織を用いた in vitro 試験系や，ヒ性反応）が，生体内の情報ネットワークを介してト細胞を生着させた免疫不全マウス（例：NOG マ

不可逆的な有害影響に発展し，器官や個体に障害ウス）やヒト遺伝子を導入したトランスジェニッが発生する一連の過程を解明する有力なアプロー

ク動物のようなヒト化動物を用いた毒性評価試験

チになりつつある 37-39）．この分野では，個々の in

32）

17

秦野研究所年報 Vol. 41. 2018

vitro 試験系を組合せ，組織，器官系，個体での混合毒性のデータベースの充実が必要である．

毒性影響を予測評価することが必要となろう．既

混合毒性の評価は，製品から抽出される混合物

存物質の毒性情報の集積により，ビッグデータがや，類縁体を多く含むことがある貝毒などの自然蓄積されて人工知能（AI）も活用できるようにな

毒素の毒性力価の決定において重要である．致死れば，in silico 試験系による毒性の一次スクリー

性の毒素は類縁体が混在することが多く，それらニングの確度も増し，確定あるいは確認試験としの毒性総和値である毒性力価は，現在有効な代替ての毒性試験の実施範囲も絞られてこよう．実際

法がないため実験動物の致死効果から求められに，欧州の REACH 登録の毒性データベースを用ている．ダイオキシン類の毒性評価 42）に習って，い，テスト化合物の REACH 規制対象の健康有害

自然毒素の成分分析値から計算によって毒性等量

性（9 種）を予測するモデルソフトウェアが提示さ（Toxicity equivalency quantity: TEQ）として毒れた．急性の有害影響の予測精度が高いことが性総和値を求めることが望まれるが，麻痺性貝報告されているが，毒性試験項目全般に適用する毒については毒性等価係数（Toxicity equivalencyにはまだ課題が多い．

factor: TEF）のデータ集積が試みられている 43）．

40）

システム毒性学は，毒性物質と生体構成物質との現在のところ混合物の毒性総和値は，各単一物質相互作用に始まり，生体のホメオスタシスの乱れかの毒性等価値が相加するものとして求められている

ら有害影響出現に至る過程に関わるもので，この過が，相乗的あるいは拮抗的などの可能性も解析する

程の知識は先に述べたAOPのことである．この必要があろう．特に，低濃度長期の複合暴露の影響

ような進展に伴って，OECD では毒性物質の有評価には，複合暴露による複合毒性反応，複合有害

害性評価のために，毒性物質の暴露によって生体影響についてAI機能のような新しい方法を用いたに検出される分子的事象が毒性影響から有害影響評価が必要となる時期がくるかもしれない．

38）に発展しうる過程を，AOP モデルとして示すこ
おわりにとを推進している．
3.5

混合物の毒性評価

生活環境における種々の物質について，実験動

今日では，単体の化学物質の一般毒性の情報物を主体とする毒性試験データの蓄積により，強はかなり豊富になり，種々の毒性データベース

い毒性を有する物質や標的特異性の高い物質の毒が開発されている（例：OECD QSAR Toolbox, 化性については，一定の毒性･有害性評価体系が確立

学物質総合情報提供システム（CHRIP）, US-EPA

され，毒性物質の法的規制も大いに進展したよう

Aggregated Computational Toxicology Resourceに思われる．一方で，ヒトの物質環境は不断に変（ACToR）, 既存化学物質毒性データベース

化している．種々の物質の混合・複合製品，既存（JECDB）など）．新規化合物の開発のたびに，化の物質と異なる形質の新規物質とその新たな利用・

学品や医薬品などの原料物質の毒性試験データが暴露形態が生じている．形質においては種々のバ蓄積されてきた．しかし，化学的に全く新規の単イオ医薬やナノテク製品，利用・暴露形態におい体物質が単離あるいは合成される機会は減り，新ては医療材料･機器，新規食品・香粧品・生活用品

規に開発される物質の毒性試験データも減ってきなど，評価対象の多様化は留まることがない．

た．一方，多数の化学物質が混合された生活化学

急性の有害性を有する物質については毒性評価

製品や医薬品，化粧品，医療材料・機器などにつにより使用規制が進んでいる．長期に暴露される

いて，それらの安全性評価の一環として混合物の弱毒物質や新規物質では，毒性反応による毒性影

毒性試験を行う機会は増えている．混合物では，

響（組織の肥厚や免疫亢進など）が必ずしも有害影

個々の物質の毒性が減弱（拮抗的，非拮抗的）や増響に結びつかず，それらの毒性や試験法について

強（相加的，相乗的）され，場合によっては許容効

まだ未知のことが多い．しかし，図 3 に示したよ果によって著しく変化する可能性がある．混合暴

うに，毒性反応を指標にして毒性影響から有害影露が常態である環境汚染の影響評価

はもとよ響に転じる際の毒性と有害性の識別法の開発が今り，そのような混合物の毒性試験の効率化には，後の毒性評価の鍵となろう．毒性試験により対象

18

41）

総

説

物質の有害影響誘発の予測性を高めるためには，

toxicologic effects. Toxicol. Pathol. 2013； 41: 310-

スクリーニングとして効率の良い in silico 試験法

314と，生体系の毒性影響であるホメオスタシスの破綻を示すバイオマーカーを指標とする in vitro/in
vivo 試験法の確立が望まれるところである．

14) OECD: Proposal for a template, and guidanceon developing and assessing the completeness ofadverse outcome pathways. Appendix I. Collection
on working deﬁnitions. 2012; p.5
15) Chovatiya R, Medzhitov R: Stress, inﬂammation,

文献
1)and defense of homeostasis. Molecular Cell. 2014;
WHO/IPCS: IPCS Risk Assessment Terminology(Harmonization Project Document No.1), WHO,

2)

Geneva, 2004; p.15

“adversity”of pathology findings in nonclinical

National Academies of Sciences, Engineering,

toxicity studies: Results from the 4th ESTP Inter-and Medicine (NASEM): Using 21st Century

national expert workshop. Toxicol. Pathol. 2016;

Science to Improve Risk-related Evaluations. The
National Academic Press, Washington,DC. 2017;
3)

4)
5)

assessing adverse outcome pathways. (OECD

WHO: Principles and Methods For Evaluating

Environment, Health and Safety Publications

the Toxicity of Chemicals, Part 1 (Environmental

Series on Testing and Assessment No. 184). ENV/

Health Criteria 6), WHO, Geneva. 1978; p.19

JM/MONO 2013; 6: p.9-10

Loomis TA: Essentials of Toxicology, Henry8)9)18) OECD: The adverse outcome pathway for skin

Kimpton Pub., London. 1978; p.2-3

sensitisation initiated by covalent binding to

National Research Council (NRC): Toxicity

proteins. Part 1: Scientific Evidence. ENV/JM/

A Strategy. The National Academic Press,

7)

44: 810-824
17) OECD: Guidance document on developing and1-182 (doi:10.17226/24635)

Testing in the 21st Century, A Vision and

6)

54: 281-288
16) Palazzi X, Burkhardt JE, et al.: Characterizing

MONO, 2012; 10(PART1): p.27
19) Kanno J: 毒性学イノベーション：生体反応機構

Washington,DC. 2007; 1-196に 則 っ た 共 通 基 本 概 念 と し て の｢ シ グ ナ ル 毒 性｣Institute of Medicine (IOM): Emerging safety（Biomechnism-based innovation of toxicology byscience: Workshop summary. The National

the fundamental concept of“Signal Toxicity”）．

Academic Press, Washington, DC. 2008; 1-134

Bull. Natl. Inst. Health Sci. 2015; 133: 21-28

Albert A: Selective Toxicity, 5th edn. Chapman20) Cosfrove BD, Alexopoulos LG, Hang T, Hendriksand Hall Ltd., London. 1973; p.3-6

BS, Sorger PK, Griffith LG, Lauffenburger DA:

Aldridge WN: Mechanisms and Concepts in

Cytokine-associated drug toxicity in human

Toxicology. Taylor & Francis Ltd., London.1996;

hepatocytes is associated with signaling network

p.29, p.153

dysregulation. Mol. Biosyst. 2010; 6: 1195-1206

Santos R, Ursu O, Gaulton A, Bento AP, Donadi21) Ohsawa M: 新規医薬品の開発と免疫毒性評価の課題

RS, Bologa CG, Karlsson A, Al-Lazikani B, Hersey(Emerging issues in immunotoxicology evaluation

A, Oprea TI, Overington JP: A comprehensiveof newly developed pharmaceutical products). Ann.

map of molecular drug targets. Nat. Rev. Drug

Rep.Hatano Res.Inst. 2016; 39: 16-24

Discov. 2017; 16: 19-34

22) National Toxicology Program (NTP): Annual

10) L i e b l e r D C , G u e n g e r i c h F P : E l u c i d a t i n gReport for Fiscal Year 2016. 2016; https://ntp.

mechanisms of drug-induced toxicity. Nature Rev.

niehs.nih.gov/annualreport/2016/research/

Drug Discov. 2005; 4: 410-420

testing_tox_studies_subsec/org_sys_tox/index.

11) G u e n g e r i c h F P , M a c D o n a l d J S : A p p l y i n gmechanisms of chemical toxicity to predict drug

html23) Maronpot RE： Adverse, non-adverse andsafety. Chem. Res. Toxicol. 2007; 20: 344-369

adaptive responses in toxicologic pathology. 32nd12) Muller PY, Milton MN: The determination and

JSTEP Annual Meeting, Takamatsu, Japan,

interpretation of the therapeutic index in drug

2016; https://www.slideshare.net/ToxPath/development. Nature Rev. Drug Discov. 2012; 11:

adverse-nonadverse-and-adaptive-responses-in-

751-761

toxicologic-pathology-jstp13） Rudmann DG: On-target and off-target-based24) National Research Council (NRC): Biological19

秦野研究所年報 Vol. 41. 2018

markers in environmental health research.
Environ.Health Perspect. 1987; 74: 3-7
25) Saio T, Kurihara C: 動物実験のヒトへの外挿可能性に

35) Waters M, Fostel JM: Toxicogenomics andsystems toxicology: aims and prospects. Nature
Rev. Genet. 2004; 5: 936-948

ついて (On extraporation of animal experimentations

36) Plavec I, Sirenko O, Privat S, Wang Y, Dajee

to humans). Rinsho Hyoka (Clin. Eval.), 2010; 38: 385-

M, Merlose J, Nakao B, Hytopoulos E, Berg

392

EL, Butcher E: Method for analyzing signaling

26) Leist M, Hartung T: Inflammatory findings on
species extrapolations: human are definitely no
70-kg mice. Arch. Toxicol. 2013; 87: 563-567
27) Seok J, Warren HS, et al.; Genomic responses inmouse models poorly mimic human inﬂammatory
diseases. PNAS. 2013; 110: 3507-3512

networks in complex cellular systems. PNAS.
2004; 101: 1223-1228
37) Hartung T, van Vliet E, Jaworska J, Bonilla
L, Skinner N, Thomas R: Systems toxicology.
ALTEX. 2012; 29: 119-128
38) Sturla SJ, Boobis AR, FitzGerald RE, Hoeng J,28) Meek ME, Boobis A, Cote I, Dellarco V, Fotakis G,

Kavlock RJ, Schirmer K, Whelan M, Wilks MF,

Munn S, Seed J, Vickers C; New developments in

Peitsch MC: Systems toxicology: From basic

the evolution and application of the WHO/IPCS

research to risk assessment. Chem. Res. Toxicol.

framework on mode of action/species concordance
analysis. J. Appl.Toxicol. 2014; 34: 1-1829) F r e c k n e l l P : R e p l a c e m e n t , r e d u c t i o n a n d
reﬁnement. ALTEX. 2002; 19: 73-78

2014; 27: 314-329
39) Plant NJ: An introduction to systems toxicology.
Toxicol. Res. 2015; 4: 9-2240) Luechtefeld T, Marsh D, Rowlands C, Hartung30) Cressey D: UK funders demand strong statistics

T: Machine learning of toxicological big

for animal studies. Nature. 2015; 520: 271-272

data enables read-across structure activity31) Kimber I, Basketter DA, Gerberick GF, Ryan

relationships (RASAR) outperforming animal

CA, Dearman RJ: Chemical allergy: Tranlating

test reproducibility. Toxicol. Sci. 2018; https://doi.

biology into hazard characterization. Toxicol. Sci.

org/10.1093/toxsci/kfy152

2011; 120: S238-S268
32) Woolley D, Woolley A: 5. Toxicology in silico.

41) Monosson E: Chemical mixtures: Considering theevolution of toxicology and chemical assessment.

(In: Practical Toxicology: Evaluation, Prediction,

Environ. Health Perspect. 2005; 113: 383-390

and Risk, 3rd edn) CRC Press/Taylor & Francis42) Van den Berg M, Birnbaum LS, et al.: The 2005

Group, LLC, Boca Rayton. 2017; p.119-132

World Health Organization re-evaluation of33) Urbisch D, Mehling A, et al.: Assessing skinhuman and mammalian toxic equivalency factors

sensitization hazard in mice and men using non-for dioxins and dioxin-like compounds. Toxicol.

animal test methods. Regul. Toxicol. Pharmacol.

Sci. 2006; 93: 223-241

2015; 71: 198-204

43) B u r r e l l S , C r u m S , F o l e y B , T u r n e r A D :34) Waters M, Boorman G, et al.: Systems toxicology

Proficiency testing of laboratories for paralytic

and the chemical effects in biological systems

shellfish poisoning toxins in shellfish by( C E B S ) k n o w led ge base. E nviron. H e al t h

QUASIMEME: A review. TRAC. 2016; 75: 10-23

Perspect. 2003; 111: 811-824

20