保健科学研究 9(2)：21―26，2019【原著】
カラスの糞における感染症原因菌の保有に関する研究
吉田千賀雄*1

工藤美里*2

吉岡翔*2

野坂大喜*1

藤岡美幸*1（2018 年 10 月 29 日受付，2018 年 12 月 21 日受理）
要旨：青森県弘前地区には野鳥が多数生息しており，糞害や家庭のごみ荒らしが問題となっている。本研究では 2016
年 4 月から 2018 年 9 月の期間に，青森県の弘前地区カラス糞便 159 検体および家庭由来の廃棄食材 29 検体を対象に，ヒト感染症原因菌とされる Campylobacter，Yersinia，Candida などの酵母様真菌類，Vibrio，および下痢原性大腸菌の保有状況を調査した。カラスの糞 159 検体からは C. jejuni 4 検体，Y. enterocolitica 10 検体，C. albicans 23 検体，C. glabrata
12 検体，大腸菌 47 検体が検出され，うち大腸菌 2 検体は下痢原性大腸菌関連遺伝子 astA の保有を認めた。また廃棄
食材 29 検体からは Y. enterocolitica 1 検体，C. glabrata 8 検体が検出された。カラスの糞から種々の病原性細菌類が検出されたことに加え，カラスの糞と廃棄食材との間で共通の感染症原因菌が検出されたことから，両者の関係性について調査を続ける。
キーワード：野鳥の糞，Campylobacter，Yersinia，酵母様真菌，Vibrio，下痢原性大腸菌

Ⅰ．はじめに
野鳥の糞には Campylobacter をはじめとしたヒト感染症

理食塩水 225 g と混和して 1 分間揉み出しを行い，10 倍希釈原液を作製した。いずれの検体も採取後 24 時間以内に実験を行った。

原因菌が含まれているとされ 1-3)，これらがヒト体内に侵入すると感染症を引き起こすと考えられる。現在，青森県弘2．各対象菌の種別

前市では市街地を中心にカラスなどの野鳥が数多くみられ，

1) Campylobacter の種別

それら野鳥による糞害や家庭ごみ荒らしが問題とされてい検体 0.5 mL を HI ブイヨン（日水製薬）2.5 mL および脱る 4)。家庭ごみには廃棄食材が含まれ，ヒトの食べ残しや繊維ウマ血 50 µL，ボルトンサプリメント（Oxoid）30 µL

調理時の食材端で構成されるため，水分が多く富栄養状態と混和し，微好気条件（アネロパック，三菱ガス化学）でである。また，一般細菌類やヒト食中毒の原因となる感染

37±1℃，24 時間選択増菌培養後，バツラー寒天培地（Oxoid）症原因菌も含有することが報告されている 5)。家庭ごみをに 1 白金耳を塗抹し，微好気条件で 37±1℃で培養した。

荒らす野鳥類は廃棄食材も喫食するために，腸管にヒト食培地上に発育したコロニーをグラム染色し，Campylobacter中毒関連菌を保有することが予想される。

を疑うらせん菌が確認された場合，オキシダーゼ試験（日本研究では，弘前市内においてヒトや食物からの分離報告水製薬），馬尿酸塩加水分解試験および PCR を用いて菌種例 6,7,8)もある感染症原因菌 Campylobacter，Yersinia，Candidaの同定を行った。馬尿酸塩加水分解試験は藤岡ら 9)の方法などの酵母様真菌類，Vibrio，下痢原性大腸菌を対象に，カに準じ，1%馬尿酸ナトリウム水溶液 0.4 mL に被検菌を懸ラスの糞および家庭由来廃棄食材における保有状況を調査

濁し，McFarland 2.0 に調整後，37±1℃で 2 時間静置した。

した。

これにニンヒドリン試薬 0.2 mL を加え，37±1℃で 10 分間静置した。判定は濃い青紫色を呈した場合を陽性（C.

Ⅱ．対象と方法jejuni），無色から薄い紫色を呈した場合を陰性（C. coli 等）

1．対象とした。PCR は，対象菌株 1 コロニーを TE 緩衝液（pH8.0，対象は 2016 年 4 月から 2018 年 9 月まで，弘前大学本町

和光純薬工業）1.0 mL に懸濁し，100℃で 5 分間加熱後地区にて採取したカラス新鮮糞便 159 検体および家庭の三10,000 rpm 5 分間遠心した上清をテンプレートとした。標角コーナーより得られた廃棄食材 29 検体とした。糞便は路的遺伝子は Campylobacter 16S rRNA10)，C. jejuni11)，C. coli12)

上に落下したものを滅菌綿棒を用いて約 2 g を採取し，5の同定遺伝子とした。PCR 反応量は 1 検体当たり滅菌蒸留

mL の生理食塩水に懸濁した。また廃棄食材は，25 g を生

水 18.375 µL，10 × Ex TaqTM Buffer (TaKaRa) 2.5 µL，dNTP*1 弘前大学大学院保健学研究科
Hirosaki University Graduate School of Health Sciences〒036-8564 青森県弘前市本町 66-1 TEL:0172-33-5111
66-1, Honcho, Hirosaki-shi, Aomori, 036-8564, Japan*2 弘前大学医学部保健学科
Hirosaki University School of Health Sciences〒036-8564 青森県弘前市本町 66-1 TEL:0172-33-5111
66-1, Honcho, Hirosaki-shi, Aomori, 036-8564, Japanⓒ2019 Health sciences Research.

mixture (TaKaRa) 1.0 µL，10 × 5 U Ex TaqTM polymerase(TaKaRa) 0.125 µL，テンプレート 2.5 µL，25 µM プライマ
ー各 0.25 µL 加え，全量を 25 µL とした。PCR の条件は前熱変性 94℃1 分間とし，熱変性 94℃1 分間，アニーリング

21

カラスの糞における感染症原因菌の保有に関する研究

表1

本研究における使用プライマー塩基配列

SpiciesTargetgene

Sequence (5’ to 3’)

Size(bp)

ReferenceCampylobacter

16S rRNA81610)C. jejuni

cj0414S16111)

C. coliaskt50210)

Yersinia enterocolitica

YST14512)

Diarheagenic Escherichia coli

stx1

GGATGACACTTTTCGGAGCCATTGTAGCACGTGTGTCCAAATAAAGTTAGAGGTAGAATGT
CCATAAGCACTAGCTAGCTGATGGTATGATTTCTACAAAGCGAGATAAAAGACTATCGTCGCGTGGTTAATGCTGTCTTCATTTGGAGCGACATCCCAATCACTACTGACTTCAGTTAATGTGGTGGCGAAGGCACCAGACAATGTAACCGC
TTCGGTATCCTATTCCCGGCGTCATCGTATACACAGGAG
CCCGAATTCGGCACAAGCATAAGC
CCCGGATCCGTCTCGCCAGTATTCG
AATGGTGCTTGCGCTTGCTGCGCCGCTTTATCCAACCTGGTAGTATACACAAAAGAAGGAAGCACAGAATCGTCAGCATCAGC
AACGTTCCGGAGGTCTTATGCAACCTTGTGGTGCATGATGTTCACCTTTCCCTCAGGATGATAGCACCCGGTACAAGCAG
ACTGAATCACTTGACTCTTCATCACAGCAGTAAAATGTGTTGTGCAGGAGCAGATCTTGAAGGAAAGGCACGAGTGACTTTCCCATCAACACAGTATATCCG
ACGGCTTTGTAGTCCTTCCA

34713)

58913)

88114)

32415)

25416)

51113)

17213)

12013)

20813)

10113)

stx2
eae
bfpA
aggR
elt
esth
estp
invE
astA

55℃1 分間，伸長反応 72℃1 分間を 25 サイクル行い，さら白金耳を塗抹して 25±1℃で最大 4 日間培養した。培地上に最終伸長反応 72℃10 分間 1 サイクル行った(i-cycler, Bioに発育したコロニーをグラム染色し，酵母様真菌像を認めRAD)。PCR 産物はエチジウムブロマイド含 2.5 %アガロー

た場合，墨汁染色，発芽管形成試験およびクロモアガーカ

スゲルにて 100V 30 分間，電気泳動（Mupid-21, コスモバ

ンジダ寒天培地（関東化学）を用いて菌種の推定を行った。

イオ社）を行い，UV 照射にて遺伝子の増幅を確認した。

4) Vibrio の種別

2) Yersinia の種別

検体 0.5 mL を 3%食塩加アルカリペプトン水（日水製薬）

検体 0.5 mL を生理食塩水 2.5 mL に加え，4℃で 1 週間低2.5 mL に添加し，37±1℃で 15 時間前培養後，TCBS 寒天温培養を行ったのち，SS 寒天培地，DHL 寒天培地（以上，培地（日水製薬）に 1 白金耳を塗抹し 37±1℃で培養した。

日水製薬）および CIN 寒天培地（関東化学）に 1 白金耳を培地上に発育したコロニーをグラム染色およびオキシダー塗抹し，25±1℃で 48 時間培養を行った。SS 寒天培地上でゼ試験を行い，PCR により菌種の同定を行った。

透明，DHL，CIN 寒天培地上で赤色の Yersinia を疑うコロ

5) 下痢原性大腸菌の種別ニーがみられた場合，これを TSI 寒天培地（関東化学），シ検体 1.0 mL を EC 培地（栄研化学）に混和し 44.5 ± 0.2℃

モンズクエン酸塩寒天培地，0.3%普通寒天高層培地（以上，で 24 時間培養したのち，EMB 寒天培地（栄研化学）に 1栄研化学）およびクリステンセン尿素培地（三光純薬）に白金耳を塗抹して 37±1℃で 24 時間培養を行った。大腸菌塗抹し，クリステンセン尿素培地は 37±1℃で 18 時間，他を疑う金属光沢を伴うコロニーを PCR で菌種同定した。標培地は 37±1℃で 24 時間培養・判定した。さらに腸内細菌的遺伝子は下痢原性大腸菌の各分類 31)の病原遺伝子とし，用同定キット api20E（シスメックス・ビオメリュー）およ

腸管出血性大腸菌（EHEC）は stx1, stx213), eae14)，腸管病

び PCR を用いて 7)，最終同定を行った。また低温培養を 2原性大腸菌（EPEC）は bfpA15)，腸管凝集性大腸菌（EAggEC）

週間行った検体は上記手順を再度実施し，最終確認試験をは aggR16), astA13)，毒素原性大腸菌（ETEC）は elt, esth,行った。

estp，組織侵入性大腸菌（EIEC）は invE13)とした。

3) 酵母様真菌類の種別
検体 0.5 mL を無菌試験用ブドウ糖ペプトン培地（栄研化学）に混和し，25±1℃で最大 10 日間培養を継続し培地のなお，本項で各菌の PCR に使用したそれぞれのプライマーは表 1 にまとめて示した。

混濁を認めた際には，サブロー寒天培地（日水製薬）に 1ⓒ2019 Health sciences Research.

22吉表2田，工藤，吉各検体における対象菌検出結果

岡，野坂，藤岡る 20)。また水道水や井戸水の汚染・消毒不備による水系感

対象菌

野鳥糞便

廃棄食材

染例も報告されており 21)，Campylobacter は低温下で保存

Campylobacter jejuni
Yersinia enterocolitica
Candida albicans
C. glabrataVibrioEscherichia coli

4102312047(2)※0101000

された食品や水中では比較的長期間の生存が可能である※( )：病原遺伝子検出株数20) 。今回Campylobacter がカラス糞便から検出されたことで，カラス腸管内に Campylobacter が存在することが示され，さらに糞便の落下により Campylobacter が直接もしくは雨によって河川や下水道へ流れ込み水系汚染を発生させるなど，新たな Campylobacter 食中毒感染源としてカラスの糞が考えられた。

12345M

Yersinia 属菌のうち，ヒト食中毒菌として病原性を持つものは Y. enterocolitica があげられる 22)。4℃以下でも発育が可能で低温発育性菌として知られており 22) ，米国ではSalmonella 属菌や Campylobacter 属菌による食中毒が夏季に集中する反面，Yersinia 属菌による食中毒は冬季にピークとなっている 23)。また，本菌の病原性は熱安定性エンテロ
トキシン遺伝子 YST をはじめとした遺伝子によりもたらされる 24)。日本においては，以前は沖縄県での集団感染事例や徳島県の事例など西日本における報告 22) が多かった
が，斎藤ら 25)が青森県の事例を報告してから東北地方でも散発事例が多く報告されている。本研究で検出された株か

図1

PCR による astA 遺伝子検出の一例

らはいずれも易熱性エンテロトキシン遺伝子 YST は確認

1：Positive control，2：Negative control，されなかったため，毒素産生性はないと考えられる。しか3：陽性検体 A，4：陽性検体 B，5：陰性検体，

し，本菌はすべて 1～3 月に採取された検体から得られた

M：Marker（100-bp ladder），株であり，外気温が低下する冬季の雪上でも生存すること

Ⅲ．結果
本町地区カラス糞便 159 検体を対象に対象菌の保有調査を行った結果，C. jejuni 4 検体，Y. enterocolitica 10 検体，酵母様真菌類は C. albicans 23 検体，C. glabrata 12 検体が検出された(表 2)。このうち Y. enterocolitica では同定遺伝子である YST のバンドは未検出であった。大腸菌は
47 検体から検出され，このうち 2 検体は下痢原性大腸菌
関連遺伝子 astA の保有を認めた(図 1)。Vibrio は検出されなかった。一方，廃棄食材 29 検体からは Y. enterocolitica
1 検体，C. glabrata 10 検体が検出された(表 2)。この Y.
enterocolitica を対象に PCR を試みた結果，YST のバンドは検出できなかった。

が示された。環境中からヒトへどのように感染するかは明ら か に な っ て い な い が ， 沢 水 が 原 因 と 考 え ら れ る Y.
enterocolitica 感染症の報告例 25)もあることから，カラスの糞便が環境汚染源として一定の役割を持つ可能性が考えられる。
酵母様真菌については，本研究では深在性真菌症の主要原因菌 26)である C. albicans や C. glabrata が検出された。
佐々木ら 27)や三澤ら 28)は，飼いバトやペットショップの小鳥の糞から真菌性の人畜共通感染症原因菌である
Cryptococcus neoformans が検出されたと報告している。今回対象としたカラス糞便から Cryptococcus 属菌の検出は認められなかったが，検出された C. albicans は 1980 年代よりカンジダ感染症の主要菌として検出されており 29) ，C.
glabrata も 1990 年代からカンジダ感染症原因菌としてサーⅣ．考察

ベイランス上位に進出している 29)。そのため，カラス糞便

今回，カラス糞便における感染症原因菌の保有に関する中の C. albicans や C. glabrata が深在性真菌症の発症に関与調査を行った。対象菌群のうち，Vibrio の検出は認められしている可能性があり，今後も継続した調査が必要である

なかったが，複数種類の感染症原因菌が検出された。と考えられる。

Campylobacter 属菌は，ヒト食中毒起因菌の一つとして先Vibrio 属菌は食中毒原因菌として特に V. parahaemolyticus

進国を中心に流行しており 17)，我が国においても細菌性食（腸炎ビブリオ）が知られている 30)。一般的に原因食物は中毒発生件数第 1 位となっている 18)。100 個程度の少量の魚介類とされており 30)，本研究ではカラス糞便および廃棄菌から感染が成立する 19)ことから，Campylobacter 食中毒

食材中からは腸炎ビブリオの検出は認められなかった。渡発生時には感染源を特定することが極めて困難とされてい辺ら 1)は我が国に飛来する水鳥の糞便から Vibrio 属菌の検出を報告しており，鳥類が何らかの形で Vibrio 属菌を腸管ⓒ2019 Health sciences Research.

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カラスの糞における感染症原因菌の保有に関する研究に保有，排出する可能性は高いと考えられる。そのため，野鳥糞便を実験対象とする場合は，対象の糞便を排泄する鳥類の食性・生息環境などの背景を踏まえて実施することが望ましいと考える。
ヒト感染症起因菌としての下痢原性大腸菌は，産生する毒素や主に保有する遺伝子により EHEC，EPEC，EIEC，ETEC，EAggEC に分類される 31)。本実験では EAST1（腸管凝集付着性大腸菌耐熱性エンテロトキシン 1）をコードするとされる astA 遺伝子を複数の検体から検出したが，本遺伝子は健常人も比較的高確率で保有している 32,33)ことや、他に宿主ごとの異なる腸管定着因子を合わせ持つ菌のみが病原性を発揮するとしている報告 34)もあることから，病原性との関連づけは慎重に行っていく必要がある。福山ら 35)
はハトやカラスの糞便から EHEC を検出したと報告しており，鳥糞から検出されうる下痢原性大腸菌の動向について今後も継続して調査を行う必要があると考える。
また，廃棄食材中に含まれる菌について，黄色ブドウ球菌やセレウス菌がわずかに検出されたのみで食中毒菌は検出されなかったとの報告 5)があるが，本実験では廃棄食材中からも Y. enterocolitica や C. glabrata などカラス糞便中と共通の食中毒起因菌が検出された。山辺ら 5)はこれらの菌を対象としておらず，本菌の検出により廃棄食材からカラスの腸管内へ，さらに腸管内から糞中へと菌が移行し，結果としてカラスの糞が食中毒起因菌の媒介手段となっている可能性が考えられた。カラスの糞を介したヒトへの感染や，廃棄食材を介したカラスへの移行による糞便汚染の関係を明らかにするため，今後は廃棄食材由来菌に関するさらなる調査とともに，弘前地域以外のカラス糞由来の食中毒起因菌を調査し，保有細菌の相違を検討したい。
利益相反

本論文に関して，申告すべき利益相反はありません。
謝辞

本研究を行うにあたりご協力いただきました皆様方に深く感謝申し上げます。

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ⓒ2019 Health sciences Research.

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カラスの糞における感染症原因菌の保有に関する研究【Original article】
Prevalence of pathogenic bacteria in crow droppings
CHIKAO YOSHIDA*1 MISATO KUDO*2 SYO YOSHIOKA*2
HIROYUKI NOZAKA*1 MIYUKI FUJIOKA*1（Received October 29 , 2018 ; Accepted December 21, 2018）

Abstract: Many wild birds live in the Hirosaki area of Aomori Prefecture, where they eat household waste and cause fecal
pollution. From April 2016 to September 2018, 159 fresh crow droppings and 29 waste food products were collected from thehouse in Hirosaki to examine for the presence of Campylobacter, Yersinia, yeast-like fungi, Vibrio, and diarrheagenic
Escherichia coli. Among the 159 droppings, 4 C. jejuni, 10 Y. enterocolitica, 23 C. albicans, 12 C. glabrata, and 47 E. coli
strains were detected. Two of the 47 E. coli strains possessed astA, the diarrheagenic E. coli-related gene. On the other hand, 1Y. enterocolitica and 8 C. glabrata strains were detected from the 29 waste food products. Aside from various pathogenic bacteria
in the wild bird feces, similar infectious disease-causing bacteria were detected between the feces and waste foods. Therefore,
we should continue to monitor and investigate the relationship between the fecal and waste food pathogens in order todevelopment bird management strategies to prevent the spread of harmful diseases to the general public.

Keywords: Wild bird droppings, Campylobacter, Yersinia, Yeast-like fungi, Vibrio, Diarrheagenic Escherichia coliⓒ2019 Health sciences Research.

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