LAMP 法用核酸増幅試薬

LAMP MASTER シリーズ
マニュアル（第 2 版）CN2409

Ⅰ 製品説明Ⅲ プロトコール

本品（2×LAMP MASTER）は、LAMP 法による等温核酸増幅のためのマスターミックス試薬です。LAMP 法に必要な耐熱性鎖置換型 DNA ポリメラーゼ、Mg2+、dNTPs、至適化されたバッファーなどを含むため、2×LAMP MASTER にプライマーと試薬の調製方法①

対象ごとに適した方法を用いて鋳型核酸を調製する。
重要 試験環境の汚染を避けるため鋳型核酸の調製は本品を使用

鋳型核酸を混合して等温で反応させるだけで DNA を増幅するする区域とは区別して行って下さい。

ことができます。また、本品と蛍光試薬のセット品もあり、DNA増幅の検出方法に合わせてお選びいただけます。
②

標的遺伝子に対して 6 種類（または 4 種類）の LAMP プ＜使用上の注意＞

ライマーを混合して、10×LAMP Primer Mix を調製する。

・ 本品は試験研究用ですので、医薬品、その他の目的にはご使用にな例）10×LAMP Primer Mix: 16 µM FIP, 16 µM BIP, 2 µM F3 Primer,れません。また、試薬についての基本的な知識のある方以外は取り

2 µM B3 Primer, 8 µM Loop Primer F, 8 µM Loop Primer B, 10 mM

扱わないで下さい。

Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT

・ 本品の取り扱いはマニュアル記載内容通りに行って下さい。マニュアル記載内容と異なった取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いかねます。

③2×LAMP MASTER、鋳型核酸、プライマー等、使用する
試薬*3) を室温で溶解する。各試薬をボルテックスミキサ

・ LAMP 法は栄研化学株式会社により開発された日本産の等温遺伝ーにて 1 秒間×3 回混合して均一にした後、スピンダウン子増幅法です。

して氷上に静置する。
*3) 10×Intercalation Mix または 25×Visible Dye は、アルミ袋内

Ⅱ 製品内容で溶解する、もしくはアルミホイル等でチューブを覆うなど、で本品（Code No. 311-08961） 濁度検出用

きる限り遮光して下さい。

LAMP MASTER for Turbidity
2×LAMP MASTER *1)

625 µl×6 本－20℃

反応液の調製方法*1) 本品のラベルに使用期限が表示されております。使用期限を守っ④てご使用下さい。

1.5 ml あるいは 2.0 ml チューブに次ページの反応例を参考に鋳型核酸以外の試薬を必要反応分ずつ分注し、ボルテックスミキサーにて 1 秒間×3 回混合した後、スピンダウセット品（Code No. 317-08941） 蛍光検出用ンを行い、これをマスターミックスとし、氷上に静置する。

LAMP MASTER for Fluorescence
本品（2×LAMP MASTER）*1)

625 µl×6 本－20℃

参考 RT-LAMP 法において AMV Reverse Transcriptase を使用

10×Intercalation Mix *2)

750 µl×1 本－20℃遮光する場合は、25 µl の反応系あたり 0.2 units を添加して下さい。

*2) 遮光保存して下さい。溶解時も遮光を推奨します。

⑤セット品（Code No. 314-08951） 目視判別用

ックスを分注し、鋳型核酸またはコントロール*4) を～5 µl

LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye)

添加し全量 25 µl とする。

本品（2×LAMP MASTER）*1)

625 µl×6 本－20℃

25×Visible Dye *2)

300 µl×1 本－20℃遮光*2) 遮光保存して下さい。溶解時も遮光を推奨します。

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使用する装置の推奨チューブに 1 反応分ずつマスターミ*4) まず、陰性コントロール（ddWater 等）を調製する。次に、鋳型核酸を添加し、最後に陽性コントロールを添加してキャップを閉じる。このとき、ピペッティングまたはキャップを閉めた上TEL 076-451-6548

でのタッピングでよく混合した後、スピンダウンして下さい。また、混合の際は気泡が立たないように注意する。

⑥

LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye) 反応例

検出装置にチューブをセットし、60～68℃*5) で 30～60 分
間*6) の LAMP 反応を行う。
*5) 設計したプライマーによって最適な温度が異なるので、あら2×LAMP MASTER

12.5 µl

25×Visible Dye

1.0 µl10×LAMP Primer Mix

2.5 µl

鋳型核酸～5 µl

ddWaterup to 25 µl

かじめ条件検討を行ってから反応温度を決定する。

60～68℃、40 分間（LAMP 反応）*6) 反応時間は、下記の反応例を参考にする。

80℃、5 分間（反応停止）
目視判定

LAMP MASTER for Turbidity 反応例＜目視判定＞

2×LAMP MASTER

12.5 µl

可視光下で、陰性では淡い赤色を呈し、陽性では鮮明な黄緑色

10×LAMP Primer Mix

2.5 µlを呈する。この発色は蛍光に由来しているため、紫外線照射下鋳型核酸～5 µl

ではより正確な判定が可能である。

ddWater

up to 25 µl

60～68℃、60 分間（LAMP 反応）

重要

目視判定の場合、必ず陰性コントロールと陽性コントロールを同時に反応させ、コントロール液の発色の有無を確認してから、検体の判定を行う（60 分間まで反応時間を長くすることも可能だが、その場合、陰性コントロールで非特異反応がないことを確認する。）＜濁度測定＞

注意

LAMP 法による DNA の増幅によって反応副産物であるピロリ光の発色あるいは消光が起こり誤判定の原因となるため、反応停止後、ン酸マグネシウムが蓄積されて反応液が白濁する。この濁度を速やかに目視判定を行う。また、反応液を調製する際、EDTA 等の金属濁度測定装置で測定することにより、増幅の有無を判定できる。

キレート化合物を含む TE 等を用いない。

LAMP 反応液を長時間放置すると、反応の進行に関わらず、蛍LAMP MASTER for Fluorescence 反応例
2×LAMP MASTER

12.5 µl

10×Intercalation Mix

2.5 µl10×LAMP Primer Mix

2.5 µl

鋳型核酸～5 µl

ddWater

up to 25 µl

60～68℃、30 分間（LAMP 反応）＜重要＞
増幅産物による汚染を防ぐため、反応後のチューブのキャップは開けず、ジップ袋等に密閉した上で廃棄して下さい。蒸気により増幅産物が拡散するおそれがあるため、廃棄の際はオートクレーブを行わないで下さい。特に反応チューブを装置から取り出すときにチューブのキャップが開かないよう注意して下さい。

会合曲線解析もしくは融解曲線解析＜蛍光測定＞
二本鎖 DNA に結合して蛍光を発するインターカレーターを反OK（ヒンジに指をかける）

NG（つばに指をかける）

応系に添加し、DNA 増幅に伴う蛍光を検出する。
蛍光検出用装置として、リアルタイム PCR 装置を使用する場
合は、蛍光波長の設定を ResoLight Dye もしくは SYBR™

製品安全データシートや、実験例など詳細は、ニッポンジーン

Green I を測定する波長に設定する。のホームページをご覧ください。

注意

10×Intercalation Mix は蛍光検出用試薬のため、濁度測定装置に本品は、試薬(試験研究用)として販売しているものです。

は使用できません。

医薬品の用途には使用しないでください。

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