Immune function and mammary gland immunity in cows

総説

ウシの免疫機能と乳腺免疫山口高弘
東北大学大学院農学研究科（〒 981-8555 仙台市青葉区堤通雨宮町１－１）

末梢血中の白血球や T 細胞サブセットの存

細胞は免疫抑制的に作用している。しかしなが在比率やバランスは、免疫応答を把握する上でら、ウシのγδ T 細胞サブセット機能の詳細

重要な指標となるが、ウシの末梢血における白は十分に理解されていない。

血球（顆粒球、T 細胞、B 細胞、単球）および++シンポジウムでは、ウシの末梢血での T 細T 細胞サブセット (CD4 、CD8 、γδT細胞 )胞サブセット、γδ T 細胞サブセットの存在の出現割合は十分に把握されていない。

割合、機能的特性と乳腺免疫に関する我々の知ウ シ γ δ T 細 胞 は、Workshop Cluster

見を中心に紹介する。

1（WC1） と CD8 の 発 現 パ タ ー ン に よ っ て、
WC1+CD8 － γ δ T 細 胞、WC1 ー CD8+ γ δ－１）ウ シ末梢血の白血球とT細胞サブセットの－T 細胞と WC1 CD8 γδ T 細胞のサブセッ

出現割合

トに分類され、WC1 と CD8 を共に発現する

黒毛和種の 1 ヵ月齢の子牛において、雌でγ δ T 細 胞 は 存 在 し な い。WC1 分 子 は、は顆粒球が、雄では T 細胞がそれぞれ高い出

215kDa の膜糖タンパク質であり、ウシのγ現率を示した。B 細胞と単球の割合、T/B 細

δ T 細胞でのみ発現し、ヒトやマウスの T 細胞比に雌雄間の有意な差は認められなかった。

胞では認められない。機能的には、IL-2 のシ

2 ヶ月齢の雌において、顆粒球の割合が 1 ヶグナルを制御することでγδ T 細胞の増殖を

月 齢 の 47.3 ％ か ら 2 ヶ 月 齢 の 33.0 ％ に、B+細胞の割合が 12.3％から 23.5％に有意に変化抑制することが知られている。また、WC1γδ T 細胞はレプトスピラやマイコバクテリ

した。T 細胞割合の変化は認められなかった。

アなどの感染病原体を認識して、活性化や増殖

そ の 結 果 T/B 細 胞 比 は 2.4 か ら 1.4 に 低 下+を行う。さらに、WC1 γδ T 細胞は、子ウした。

シの末梢血中に非常に高い割合で存在すること

T 細胞サブセットの出現割合は、雌雄間で有から、幼若期のウシの免疫機能の恒常性の維持

意な差は認められず、CD4+/CD8+T 細胞比はに重要な役割を持つと考えられている。CD8+雌雄ともに 2 以上であった。1 ヵ月齢から 2γδ T 細胞は脾臓や粘膜組織に多く存在し、ヶ 月 齢 に か け て、 雄 の γ δ T 細 胞 の 割 合 が+マイクロアレイ解析では WC1 γδ T 細胞が－53.2％から 42.1％に有意に減少し、なかでもWC1 γδ T 細胞より細胞増殖に関連した遺WC1+ γδ T 細胞の割合が著しい減少を示し伝子の発現が高いことが報告されている。したた。これらのことから、黒毛和種新生子牛では、がって、WC1 分子の発現の有無が、ウシのγ

雌雄間の免疫応答に違いがある可能性が示さδ T 細胞サブセットの機能に深く関与していれた。

ることが予想される。一方で、乳腺ではγδ T－ 109 －

一方、育成過程の日本短角種牛では、顆粒
Journal of Japanese Society for Clinical Infectious Disease
in Farm Animals Vol.5 No.3 2010

ウシの免疫機能と乳腺免疫ǕƳƔƬƨŵ6 ኬᏘǵȖǻȃȈƷлӳƸŴȭȞȁȳƕ‫ٶ‬ƘŴኬᏘ‫ܫ֥ݱ‬Ʒႆᢋƕᚇ‫ݑ‬

6 ኬᏘƕஇǋ᭗Ƙ ᳸ưŴƞǕƨŵɟ૾Ŵ9%Ყ6 ኬᏘƸൔ᠋ႎ%& 6 ኬᏘŴ%& 6 ኬᏘƷ᪯ưƋǓŴ‫ݱ‬ƞƘŴఋƸό࢟ǛƠƯƓǓŴኬᏘឋƷႆ

6 ኬᏘưƸ 9% 6 ኬᏘƕΟѬǛҩ
球は 20.8～ 24.3%、T細胞は33.5 ～ 42.7%、
%&
6 ኬᏘൔƸ ˌɦư
Ǌƨŵ%&

ᢋƸʅƠƔƬƨŵAで推移し、有意な変動は認められなかった。TƸ 9% 6 ኬᏘưஇǋ᭗ƘЈྵƠƨŵ
細胞サブセットの割合は、γδT 細胞が最もƜƷƱƔǒŴଐஜჺᚌᆔཅƸӷஉᱫƷ᱅ൗB+ᧈƴˤƬƯஊॖƴถ‫ݲ‬ƠƨƕŴ%& 6ኬᏘƷлӳƸŴ঺ᧈƴˤƏ‫٭‬ѣƸƳƘŴɟと形態学的特徴‫ܭ‬ƠƯ˯ƍлӳưƋƬƨᲢ‫׋‬ᲫᲣŵƜƷƜƱ

黒毛和種牛の末梢血γδ T 細胞サブセット

ƔǒŴ঺ᧈƴˤƏ6 ኬᏘƷлӳƷ˯ɦ

の割合を解析したところ、WC1+ γδ T 細胞は、ƸŴɼƴ 9% 6 ኬᏘƷ˯ɦƴឪ‫׆‬Ƣ

成長に伴って有意に減少したが、CD8+ γδ T細胞は、成長に伴う変動はなく、一定して低い

a-c:p<0.05
x-z:p<0.05

a
ab

40

x

x

ab

abc

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x

y

20

ab
y

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c
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1

2

12

6

18

adult

CD4䠇㼀⣽⬊
CD8䠇㼀⣽⬊100๭ ྜ 䠄䠂䠅

T 細胞が優勢を占めた。CD4 /CD8 T 細胞比

２）末梢血γδ T 細胞サブセットの出現割合

60

᭶ 㱋

細胞の順であり、γδ細胞では WC1+ γδ%& %& 6 TኬᏘൔƕǍǍ˯ƍƜƱƕᅆƞǕƨŵƜƷƜƱƸŴǦǷƷԼᆔƴǑƬƯは 1.5 以下であった。また、CD25 陽性の活஛ఴᘉƷႉᘉྶƳǒƼƴ 6 ኬᏘǵȖǻȃȈ
性型 T 細胞は WC1+ γδ T 細胞で最も高く出Ʒ‫נ܍‬лӳƕီƳǔƜƱǛᅆƢŵ現した。このとから、日本短角種牛は同月齢の

黒毛和種牛に比べてγδ T 細胞の割合が高く、ᲬᲣ஛ఴᘉ6 ኬᏘǵȖǻȃȈƷЈྵл
CD4+/CD8+T 細胞比がやや低いことが示されӳƱ࢟७‫ܖ‬ႎཎࣉた。以上より、ウシの品種によって末梢血の白᱅ൗԧᆔཅƷ஛ఴᘉ6 ኬᏘǵȖǻȃ
血球ならびに T 細胞サブセットの存在割合がȈƷлӳǛȕȭȸǵǤȈȡȸǿȸưᚐௌƠ
異なることが示された。
ƨƱƜǖŴ9% 6 ኬᏘƷлӳƸŴ঺

80

0

T 細胞、CD8+T
高く 43.4～ 48.3%で、CD4+ኬᏘƷлӳƕ᭗ƘŴԧᆔཅƴൔǂ6+

JG
WC1䠇JG
CD8䠇JG100๭ ྜ 䠄䠂䠅

B 細胞は28.5 ～ 36.2%、単球は6.9 ～ 8.9%ƋƬƨŵǇƨŴ%&ࣱᨗƷ෇ࣱ‫׹‬6 ኬᏘ

a-c䠖p䠘0.05

80
60
40

b
ab

ab

a

ab

ab

20
0

0.5

1

2

6

᭶ 㱋

図１

a

12

18

adult

䠄36䡚41䠅

末梢血
T 細胞サブセットの出現割合ᅗ䠍㻌ᮎᲈ⾑ 㼀 ⣽⬊䝃䝤䝉䝑䝖䛾ฟ⌧๭ྜ㻌３）末梢血γδ T 細胞サブセットの機能特性ᲭᲣ஛ఴᘉ6 ኬᏘǵȖǻȃȈƷೞᏡཎ
MACS 法 で 調 整 し た WC1 ＋ γ δ T 細
ࣱ
胞 と WC1 － γ δ T 細 胞 に、FITC 標 識 の/#%5 ඥưᛦૢƠƨ 9%Ქ6 ኬᏘ
Concanavalin A（ConA）を添加して 12 時
Ʊ 9% Ყ   6 ኬ Ꮨ ƴ Ŵ (+6% ೅ ᜤ Ʒ間後の結合能を測定した。その結果、WC1 ＋%QPECPCXCNKP#Ტ%QP#ᲣǛชьƠƯ γ δ T 細 胞 の ConA 結 合 能 は WC1 － γ δ T଺᧓ࢸƷ %QP# ኽӳᏡǛย‫ܭ‬ƠƨŵƦƷኽ細胞より高かった（図２）。このことから、末ௐŴ9%Ქ6 ኬᏘƷ %QP# ኽӳᏡƸ
梢血γδ T 細胞サブセットは細胞表面の糖鎖9%Ყ6 ኬᏘǑǓ᭗ƔƬƨᲢ‫׋‬ᲬᲣŵƜ
構造に違いがあることが示された。そこで、割合であった（図１）。このことから、成長にConA 刺激 (24 時間 ) 下で T 細胞活性化マー2
カ ー（IL-2R α ） の 発 現 を 解 析 し た と こ ろ、伴うγδ T 細胞の割合の低下は、主に WC1+

WC1 ＋ γδ T 細胞は無刺激状態で Il-2R αのγδ T 細胞の低下に起因することが示された。

発現が高く、ConA 刺激によってさらに発現が+また、CD4 T 細胞は成長に伴って増加したが、増強されることが判明した。一方、WC1 － γ

CD8+T 細胞の割合には変動が見られなかった。

δ T 細胞は ConA 処理でほとんど影響が認め

γ δ T 細 胞 サ ブ セ ッ ト を Magnetic cell

られなかった。

sorting（MACS）法により、WC1 ＋γδ T 細次に、同様に分離した WC1 ＋ γδ T 細胞と胞と WC1 － γδ T 細胞とに調整し、形態学的WC1 － γδ T 細胞の ConA 刺激 (12 時間 ) 下

特徴を観察した。光学顕微鏡下ではこれらサブでのサイトカイン mRNA 発現を解析した。そセットの染色性に大きな違いは見られなかっの結果、WC1 ＋γδ T 細胞は、IFN- γ、GM-た。透過型電子顕微鏡下で、WC1 ＋ γδ T 細

CSF、TNF- β、IL-2、IL-6、TNF- α、TGF-

胞は比較的大きく、核が多形で分葉しているもβの mRNA を発現した。一方、WC1 － γδ Tのが認められ、ユークロマチンが多く、細胞小細胞は ConA 刺激の有無に関わらず TGF- β－器官の発達が観察された。一方、WC1 γδ

の mRNA のみ発現しており、その他のサイト

T 細胞は比較的小さく、核は卵円形をしており、カインの mRNA 発現は認められなかった。

細胞質の発達は乏しかった。
日本家畜臨床感染症研究会誌
５巻３号 2010－ 110 －

ǘǒƣ
ǘǒƣ 6)(Ʒ
6)(Ʒ O40#
O40# ƷǈႆྵƠƯƓƷǈႆྵƠƯƓ

ȖǻȃȈǛȖǻȃȈǛ +.+. ưХນƠŴưХນƠŴ෇ࣱ҄ƴˤƏƜ
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ႆྵǕǒƷǵȖǻȃȈƷǨȕǧǯǿȸኬᏘǁƷǕǒƷǵȖǻȃȈƷǨȕǧǯǿȸኬᏘǁƷƸᛐǊǒǕƳƔƬƨŵƸᛐǊǒǕƳƔƬƨŵ

Immune function and mammary gland immunity in cowsЎ҄Ʊ෇ࣱ҄ƠƨǵȖǻȃȈƷೞᏡႎཎࣉ
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ǛᚐௌƠƨŵǛᚐௌƠƨŵ
䠉JGT⣽⬊
WC1
WC1䠉
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100
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๭
๭ ྜ
ྜ (%)
(%)

WC1
WC1++JGT⣽⬊
JGT⣽⬊

7.9%
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25.3%
25.3%

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60
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40
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䠆
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20
20
00

CD4
CD4

Con
Con A-FITC
A-FITC

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CD8

JG
JG

JG WC1WC1䠇䠇JGJG WC1WC1㻙㻙JG
JG
CD8CD8䠇䠇JGn=3
n=3 䠆䠖p<0.05
䠆䠖p<0.05

 γδT 細胞サブセットの ConA 結合能
図2


00day
day
11day
day
33day
day
77day
day

䠆
䠆

䠆
䠆

ᅗ
㻟㻌
㻟㻌 㻵㻸㻙㻞
㻵㻸㻙㻞 ่⃭䛻䜘䜛JG䠰⣽⬊䝃䝤䝉䝑䝖䛾ㄏᑟ㻌่⃭䛻䜘䜛JG䠰⣽⬊䝃䝤䝉䝑䝖䛾ㄏᑟ㻌
図 3 IL-2ᅗ
刺激によるγδT 細胞サブセットの誘導ᅗᅗ JGTJGT ⣽⬊䝃䝤䝉䝑䝖䛾⣽⬊䝃䝤䝉䝑䝖䛾 㻯㼛㼚㻭㻯㼛㼚㻭 ⤖ྜ⬟㻌
⤖ྜ⬟㻌

 ஛
஛ఴ
ఴᘉ
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ఋྶ
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Ტ 2$/%
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Ǜ +.
+.
発現は、1 日目で WC1 ＋ γδＴ細胞が約 75%
6 ኬᏘƱኬᏘƱ 9%
9% 
ƞǒƴŴƞǒƴŴ9%
9% 6
Ტ7ONᲣưХນǛᘍƍŴ6
Ტ7ONᲣưХນǛᘍƍŴ6ኬᏘǵኬᏘǵ
細胞のアポトーシス関連遺伝子発現についてであるのに対し、WC1 ー γδＴ細胞は約 30%
66 ኬᏘƷǢȝȈȸǷǹ᧙ᡲᢡˡ‫܇‬ႆྵƴƭኬᏘƷǢȝȈȸǷǹ᧙ᡲᢡˡ‫܇‬ႆྵƴƭȖǻȃȈƷлӳ‫҄٭‬ǛȕȭȸǵǤȈȡȸǿȖǻȃȈƷлӳ‫҄٭‬ǛȕȭȸǵǤȈȡȸǿ＋γδ T 細胞であった。このことから、WC1検討した。アポトーシス抑制遺伝子（Bcl-xL、ᲥᲥƍƯ౨᚛ƠƨŵǢȝȈȸǷǹ৮Сᢡˡ‫܇‬ƍƯ౨᚛ƠƨŵǢȝȈȸǷǹ৮Сᢡˡ‫܇‬
6
6
ኬᏘƸХນ
ኬᏘƸХນ


ȸư౨᚛Ơƨŵ9%
ȸư౨᚛Ơƨŵ9%
は IL-2 の刺激に対して WC1 ーγδＴ細胞より
Bcl-2）の mRNA 発現は WC1 ＋γδ T 細胞で
Ტ$ENZ.Ŵ$ENᲣƷᲢ$ENZ.Ŵ$ENᲣƷ
O40#
O40# ႆྵƸႆྵƸ 9%
9%
ଐႸˌᨀஊॖƴ‫ف‬ьƠƨᲢ‫׋‬ଐႸˌᨀஊॖƴ‫ف‬ьƠƨᲢ‫ ׋‬ᲣᲣŵ+.ŵ+. ХХーγδT
細胞では認められな認められ、WC1
速やかに活性化されることが示された。増殖活
Ქ
Ქ
ȷȷ
ȷȷ 6
6 ኬᏘưႆྵƠŴ9%
ኬᏘưႆྵƠŴ9%ȸȸ66 ኬᏘ
ኬᏘນƠƨ6ນƠƨ6 ኬᏘǵȖǻȃȈưƷ
ኬᏘǵȖǻȃȈưƷ +.4
+.4
か っ た。 一 方、 ア ポ ト ー シ ス 誘 導 遺 伝 子
性 は IL-2 刺 激 を し た WC1 ＋ γ δ T 細 胞 で、ưƸႆྵƠƳƔƬƨŵɟ૾ŴǢȝȈȸǷǹưƸႆྵƠƳƔƬƨŵɟ૾ŴǢȝȈȸǷǹ᳎ኬᏘƕኖƷႆྵƸŴ
ƷႆྵƸŴଐႸưଐႸư 9%
9%ᲥᲥ᳎ኬᏘƕኖ
WC1 － γδ T 細胞より高いことが示された。
（caspase-3、caspase-8）の mRNA 発現は、ᛔ‫ݰ‬ᢡˡ‫܇‬ᲢECURCUGŴECURCUGᲣᛔ‫ݰ‬ᢡˡ‫܇‬ᲢECURCUGŴECURCUGᲣ᳎ኬᏘƸ
ưƋǔƷƴ‫ݣ‬ƠŴưƋǔƷƴ‫ݣ‬ƠŴ9%
9%ȸȸ᳎ኬᏘƸ
細胞傷害活性に関連する遺伝子発現は、WC1
WC1 ＋γδ T 細胞と WC1 ーγδ T 細胞でともᲥᲥ
6 ኬᏘƱኬᏘƱƷƷ O40#
O40# ႆྵƸŴႆྵƸŴ9%
9%ᲥᲥ6ኖኖ ưƋƬƨŵƜƷƜƱƔǒŴ9%
ưƋƬƨŵƜƷƜƱƔǒŴ9%
＋γδ T 細胞と WC1 ー γδ T 細胞では共に、に発現した。これらのことから、WC1 ＋ γδ
さらに、WC1 ＋ᲥᲥγδ T 細胞と WC1 －ᲧᲧγδ T

T 細胞と WC1 － γδ T 細胞ではアポトーシス＋の 誘 導 は 起 こ る が、WC1 γ δ T 細 胞 で は

33

IL-2 刺 激 に よ り Perforin と GranzymeB のmRNA 発現が増加し、また IL-2 の刺激の有無

WC1 ー γδ T 細胞とは異なり、アポトーシスに関わらず、恒常的に Bo-lysin と NKp46 のの抑制機能が働くことが示された。

mRNA を発現した。

以上のことから、ウシ末梢血中のγδ T 細

以上のことから、IL-2 刺激により WC1 ＋ γ胞は、WC1 分子の発現の有無により機能が異δ T 細胞が速やかに活性化され、エフェクタ＋

なり、WC1 γδ T 細胞は活性化状態で機能ー細胞に分化することが示された。

的であること、WC1 ー γδ T 細胞は不活性化状態であることが判明した。

５）ウシの乳腺での免疫機能
ウシの乳腺内には腸管のようなリンパ組４）γ δ T 細胞サブセットの活性化に伴う機織は存在しない。しかしながら、末梢血に比べ T 細 胞 の 存 在 割 合 が 高 く、 乳 腺 上 皮 細 胞

能的特徴
IL-2 は T 細胞の増殖と分化を促すサイトカ

間 に は リ ン パ 球 (mammary intraepithelial

インである。そこで、ウシγδ T 細胞サブセ

lymphocytes: mIEL) が存在する。この mIEL

ットを IL-2 で刺激し、活性化に伴うこれらのがサイトカインを介して乳腺上皮細胞の機能にサブセットのエフェクター細胞への分化と活性影響し、また mIEL 存在様式が泌乳期と乾乳期化したサブセットの機能的特徴を解析した。

で異なる。そこで、mIEL のサイトカイン産生

末 梢 血 単 核 球（PBMC） を IL-2（20U/と乳腺上皮細胞との相互作用、乳腺上皮細胞でml）で刺激を行い、γδ T 細胞サブセットのの Toll like receptor (TLRs) の発現と TLRs＋

割合変化を検討した。WC1 γδ T 細胞は刺を介する免疫作用について検討した。

激 1 日目以降有意に増加した（図 3）。IL-2 刺激したγδ T 細胞サブセットでの IL-2R αの－ 111 －

Journal of Japanese Society for Clinical Infectious Disease
in Farm Animals Vol.5 No.3 2010

ウシの免疫機能と乳腺免疫（イ）mIEL のサイトカイン産生と乳腺上皮細胞との相互作用αと TLR-4 の mRNA 発現が増強した。刺激
3 時間後には IL-1 β、6 時間後に IL-6、IL-8

乳 汁 中 で は、CD4+T 細 胞 は 乾 乳 期 に、+の mRNA 発現が増強し、IL-1 αが新たに発現CD8 T 細胞は泌乳期に多く存在した。MACSした。泌乳期の正常ホルスタイン牛の乳腺では、法で得られた T 細胞サブセットはサイトカイ

TLR-2、-4、の発現が確認され、実験感染乳

ン発現が泌乳期と乾乳期で異なり、CD4+T 細房炎牛の乳腺では、これらの発現が増加した。

+

胞は乾乳期で、CD8 T 細胞は泌乳期でサイト

一方、SEC 刺激では、BMEC のサイトカイン

カイン発現が高かった。CD8+T 細胞で高発現産生ならびに TLRs 発現は影響されなかった。

し た TGF- β、TNF- α、c-kit、IL-2R は γ

このことから、SEC と LPS の乳腺上皮細胞へ

δ T 細胞でさらに増強した。γδ T 細胞は IL-の作用は異なり、LPS の TLR-4 を介する乳腺

10、GM-CSF、IFN- γ、TGF- β、TNF- α、上皮細胞でのサイトカイン産生が示された。こc-kit、FasL、IL-2R を発現することが確認さの知見は、黄色ブドウ球菌と大腸菌の感染に伴れた。一方、培養乳腺上皮細胞（BMEC）は‫ࢍف‬ƠƨŵХນ  ଺᧓ࢸƴƸ +.Ŵ ଺ う乳房炎発症機序の相違を示すものであり、乳ƢǔƜƱƕᅆƞǕƨŵ
᧓ࢸƴ
+.Ŵ
+.
Ʒ O40# ႆྵƕ‫ࢍف‬ƠŴ
stem cell factor(SCF)を発現した。c-kitは腺上皮細胞の感染性を解明する上で重要である。
+.ƕૼƨƴႆྵƠƨŵඣʐ஖Ʒദࠝț
SCF のレセプターであり、泌乳期ではγδT

TLR1 :421bp

TLR6 :679bp

TLR2 :274bp

TLR7 :180bp

TLR3 :327bp

TLR8 :393bp

TLR4 :237bp

TLR9 :408bp

C
PB
M

PB
M
C

EC

Bovine TLRs

BMECƷႆྵƕᄩᛐƞǕŴ᬴ܱज़௨ʐ৐໒ཅƷʐ

増殖あるいはサイトカイン産生を増加する。こBovine TLRs

BMȫǹǿǤȳཅƷʐᐄưƸŴ6.4ŴŴ

細胞は乳腺上皮細胞由来の SCF で活性化され、

ɟ૾Ŵ2CO%5- ХນƸ $/'% ưƷ໒ᐄưƸŴƜǕǒƷႆྵƕ‫ف‬ьƠƨŵɟ૾Ŵ

のように、乳腺上皮内では mIEL と上皮細胞間5'% ХນưƸŴ$/'% ƷǵǤȈǫǤȳငにサイトカイン - サイトカインレセプター情報ဃƳǒƼƴ 6.4U ႆྵƸࢨ᪪ƞǕƳƔƬ

伝達（イントラネット）機構が存在し、これらƨŵƜƷƜƱƔǒŴ5'% Ʊ .25 Ʒʐᐄɥ
細胞間相互作用で乳腺上皮細胞ならびにႝኬᏘǁƷ˺ဇƸီƳǓŴ.25mIEL
Ʒ 6.4
の分化ならびに機能が制御される可能性が考えられる。

ǛʼƢǔʐᐄɥႝኬᏘƷǵǤȈǫǤȳ

TLR10: 303bp

図4ငဃƕᅆƞǕƨŵƜƷჷᙸƸŴ᰾ᑥȖȉᅗ 㻠㻌での㻮㻹㻱㻯TLRs䛷䛾 㼀㻸㻾㼟
䛾Ⓨ⌧㻌
BMEC
の発現

ၐࣱǵǤȈǫǤȳƱǱȢǫǤȳƷ O40#

LPS 刺激による NF κ B の活性化に関して、

ǦྶᓏƱ‫ٻ‬ᐂᓏƷज़௨ƴˤƏʐ৐໒ႆၐೞ

ႆྵƕஊॖƴ‫ࢍف‬ƠƨŵƜƷƜƱƔǒŴǦ

（ロ）乳腺上皮 細 胞 の Toll like receptors
無刺激のBMEC では、I κ B αの明確な発現ࡀƷႻᢌǛᅆƢǋƷưƋǓŴʐᐄɥႝኬᏘ
ǷʐᐄɥႝኬᏘƸ 6.4 ǛʼƠƯŴᓏ˳ᐏƷज़௨ࣱǛᚐଢƢǔɥư᣻ᙲưƋǔŵ(TLRs)の発現と TLRs を介する LPSが認められたが、リン酸化I κ B αの発現は弱঺ЎǛᛐᜤƠŴ໒ၐࣱ‫܇׆‬Ʒᛔ‫ݰ‬ƴ᧙ɨƢ

0($ Ʒ෇ࣱ҄ƴ᧙Ơ かった。LPSCSKХນƴǑǔ
と Pam3.25
刺激後、30 分後にはリン酸化
I%5- ХນƠƨǔƜƱƕᅆƞǕƨŵ2CO
4 の作用ƯŴ໯ХນƷ
$/'% ưƸŴ+$ƷଢᄩƳƷؔ᫱ɥฌƸŴชьЎࢸƔǒ᫄
BMEC で のToll like receptor(TLR) -2、
κ $/'%
B の発現が増強され、Iκ B αがリン酸化さႆྵƕᛐǊǒǕƨƕŴȪȳᣠ҄ +$ƷႆቩྶƷᢂឥ෇ࣱǛᛔ‫ݰ‬ƠŴƦƷ෇ࣱƸ
れてNF κ B が活性化されることが示された。

ガンドである Pam3CSK4 と LPS の TLRs でྵƸࢊƔƬƨŵ.25 ХນࢸŴ ЎࢸƴƸЎࢸǇưஊॖưƋƬƨŵƜƷƜƱƔǒŴ
また、免疫組織染色法で、LPS
刺激後 30 分の認識とそのシグナル伝達、さらには TLRs
に NF κ
B が核内へ移行することが確認され依存性のサイトカイン産生を解析し、乳房炎のた。CD14 は TLR4 の LPS 認識に必要であり、-4、-9 の 発 現 を、 ま た TLR-2、TLR-4 の リȪȳᣠ҄ +$ Ʒႆྵƕ‫ࢍف‬ƞǕŴ+$ƕȪȳᣠ҄ƞǕƯ 0($ ƕ෇ࣱ҄ƞǕǔƜƱƕᅆƞǕƨŵǇƨŴβ၃ኵጢ௨ᑥඥưŴ

2CO %5- ХນƴǑƬƯŴ$/'% ƕငဃƢǔ෩ࣱ‫܇׆‬ƕŴ᫄ቩྶƴჺ଺᧓ư˺ဇƠŴƦƷᢂឥᏡǛ‫ࢍف‬ƢǔƜƱƕᅆƞǕƨŵ

起炎菌による乳腺上皮細胞の活性化と乳房炎に.25 Хນࢸ  Ўƴ 0($ ƕఋϋǁᆆᘍ CD14 抗体はその機能をブロックする。LPSˌɥǑǓŴǦǷƷʐᐄƴƓƍƯŴO+'.

伴う免疫応答に対する関与を検討した。
ƢǔƜƱƕᄩᛐƞǕƨŵ%& Ƹ 6.4 Ʒ 刺激前に抗 CD14 抗体（10 μ g/ml）で 1 時
ƱʐᐄɥႝኬᏘ᧓ƷǵǤȈǫǤȳȷǵǤȈ

BMEC は TLR１、-2、- ３、-4、-6 %&( 図 ৴˳ 間処理し、LPS で 30 分間刺激した。その結果、.25 ᛐᜤƴ࣏ᙲưƋǔƱƞǕŴ
ǫǤȳȬǻȗǿȸǤȳȈȩȍȃȈƕʐᐄɥƸƦƷೞᏡǛȖȭȃǯƢǔŵ.25ХນЭƴ NFႝኬᏘƷೞᏡƞǒƴƦƷᐏɥƴႆྵƢǔ4) と MD-2、CD14、IL-1
β、IL-6、TNF- α
κ B は核内へ移行せず、無刺激と同様に核৴ %& ৴˳Ტ IONᲣư
の mRNA を恒常的に発現した。LPS
刺激の1 ଺᧓ϼ の周囲に強い陽性反応が観察された。このこと
6.4Ŵ+. ǛʼƢǔʐ৐໒ឪ‫׆‬ᓏƷЎ‫܇‬ྸƠŴ.25 ư  Ў᧓ХນƠƨŵƦƷኽௐŴನᡯƷᛐᜤƴ᧙ɨƠŴʐᐄβ၃ƷࣖሉǛࡽ
時間後に新たにIL-8 の発現が認められ、TNFより、BMECに発現している TLR-4 は CD140($ ƸఋϋǁᆆᘍƤƣŴ໯ХນƱӷಮƴ
日本家畜臨床感染症研究会誌
５巻３号 2010ఋƷԗ‫׊‬ƴࢍƍࣱᨗӒࣖƕᚇ‫ݑ‬ƞǕƨŵƜ

－ 112 －Ʒ Ɯ Ʊ Ǒ Ǔ Ŵ $/'% ƴ ႆ ྵ Ơ Ư ƍ ǔ
6.4 Ƹ %& ǛʼƠƯŴೞᏡႎƴ˺ဇƖឪƜƢƜƱƕᅆƞǕƨŵImmune function and mammary gland immunity in cows

を介して、機能的に作用することが示された。

は、Pam3CSK4 刺激によって、BMEC が産生する液性因子が、顆粒球に短時間で作用し、そ

一方、Pam3CSK4 刺激は BMEC での炎症性の遊走能を増強することを意味する。

サイトカインとケモカインの mRNA 発現を有以上より、ウシの乳腺において、mIEL と乳意に増強した。このことから、ウシ乳腺上皮

腺上皮細胞間のサイトカイン - サイトカインレ

細胞は TLR2 を介して、菌体膜成分を認識し、セプターイントラネットが乳腺上皮細胞の機能

炎症性因子の誘導に関与することが示された。

さらにその膜上に発現する TLR2、IL-4 を介

Pam3CSK4 刺激した BMEC の培養上清は、添する乳房炎起因菌の分子構造を認識し、乳腺免

加 10 分後から顆粒球の遊走活性を誘導し、そ疫応答の制御に関与することが示された。

の活性は 45 分後まで有意であった。このこと

Immune function and mammary gland immunity in catele
Takahiro Yamaguchi
Graduate School of Agriculture Science, Tohoku University(Sendai, 981-8555.JAPAN)－ 113 －

Journal of Japanese Society for Clinical Infectious Disease
in Farm Animals Vol.5 No.3 2010