課題番号：24指101

研究課題名：Ｃ型慢性肝炎に対するペグインターフェロン・リバビリン・テラプレビル併用療法における有害事象発現に関与する宿主側因子、および耐性ウイルスの出現動態に関する多施設共同前向き研究（２年目）

主任研究者名 ：正木尚彦
研究協力者名 ：山極洋子、溝上雅史、考藤達哉、村田一素、是永匡紹、今村雅俊、西田奈央、杉山真也、青木孝彦、柳瀬幹雄、野崎雄一、姜 貞憲、松居剛志、滝川康裕、宮坂昭生、小松眞史、中根邦夫、上野義之、渡辺久剛、高木均、小池和彦、建石良介、石井耕司、高亀道生、今関文夫、神田達郎、米田政志、中尾春壽、田中靖人、熊田卓、豊田秀徳、山本和秀、池田房雄、道堯浩二郎、前城達次

キーワード：Ｃ型慢性肝炎、テラプレビル、GWAS、耐性ウイルス

研究成果：難治例である 1 型高ウイルス量の C 型慢性肝炎の治療において、2011 年 11 月に承認されたプロテア―ゼ阻害剤テラプレビルを加えた３剤併用療法による著効率は 70％以上と飛躍的に向上した。しかしながら、重篤な皮膚障害、高度貧血などの有害事象が治療の支障となるため、個別化医療としての適応として有害事象に関連する因子の検索が必要と考えている。また、テラプレビルをはじめとする直接的抗ウイルス剤を用いた治療法が今後 C 型慢性肝炎の治療において主流となるが、その作用機序のため耐性ウイルスの出現が問題となっている。次世代のプロテアーゼ阻害剤への交差耐性も認められているため、本療法における耐性ウイルスの出現動態の把握は必須である。そこで、多施設共同前向き研究班を組織し、臨床情報およびリンパ球由来ヒト DNA、血清を収集ののち、当センターが保有する GWAS、高速シーケンサーを用いて解析を行う。
本研究班では、研究班全体のテーマを「テラプレビルによる重症薬疹発現に関与する SNPs の検索」とし、分担研究のテーマとして「テラプレビル３剤療法によるウイルス学的治療効果予測因子の検討」を行った。１）皮膚障害に関与する SNP 同定を目的として、他の研究班の協力を得て384 検体を収集した。SNP typing を行ったところ、平均 Dish QC 0.950, overall call rate 99.0%と data quality は良好であった。さらに、SNP QC:Call rate>95%、HWEp>0.001、MAF>0.05、Sample
QC:Call rate>95%の SNP filtering の条件下に 380 検体、417769 SNP に絞り込み、Control(皮疹なし)182 検体、Case (Grade 3)52 検体について解析を行った。P = 5.0x10-8 レベルの SNP は認められなかったが、第 5 染色体上に top hit となった SNP を認めた。通常は、解析結果の再現性を確認するために、異なったサンプル群における replication study を行うべきであったが、収集検体数の伸び悩みのため、Imputation 解析に変更したところである。２）分担研究「テラプレビ
ル３剤療法によるウイルス学的治療効果予測因子の検討」では、多施設共同研究で収集した 1 型・高ウイルス量群の患者のうち、「テラプレビル投与期間 8 週以上、かつ、ペグインターフェロン・リバビリン（P/R）投与期間 24 週以上」を満たす 121 例を対象に検討した。特に、P/R２剤併用療法の治療効果予測において IL28B SNP とともに有用性が報告されている治療前血清 IP-10 値測定の意義について検討した。その結果、３剤併用療法による RVR（治療開始４週目までの HCV RNA消失）に寄与する因子として、治療歴と IP-10 低値が検出された。SVR（著効）に寄与する因子として、血清アルブミン高値、IL28B TT-genotype、リバビリン初回投与量 600mg 以上/日が検出された。血清 IP-10 値をカットオフ値 450 でカテゴリー化すると、IL28B TT-genotype では IP-10低値群で有意に RVR が高率であったが（91％対 72%）、SVR には全く関連しなかった。一方、non-TTgenotype では、IP-10 低値群で有意に RVR が高率であること（74％対 42%）、さらに、IP-10 低値＋RVR 群と IP-10 高値＋非 RVR 群とでは SVR 率において 82％対 27％と有意差を認めており、３剤併用療法においても治療前血清 IP-10 値測定は治療効果予測に有用であることが示唆された。

Subject No.

：24A101

Title：A prospective multi-center study: analysis of genetic factors of patients with severe
adverse events and evaluation of resistant variants in treatment with telaprevir(TVR), peg-interferon (peg-IFN) and ribavirin (RBV) therapy for chronic
hepatitis C patients.

Researchers ：Naohiko Masaki, Yoko Yamagiwa, Masashi,Mizokami, Tatsuya Kanto, Kazumoto
Murata, Masaaki Korenaga, Masatoshi Imamura, Nao Nishida, Masaya
Sugiyama, Yoshihiko Aoki, Mikio Yanase, Yuichi Nozaki, Jong-Hon Kang,Takeshi Matsui, Yasuhiro Takikawa, Akio Miyasaka, Masafumi Komatsu, KunioNakane, Yoshiyuki Ueno, Hisayoshi Watanabe, Hitoshi Takagi, Kazuhiko Koike,
Ryosuke Tateishi, Koji Ishii, Michio Kogame, Fumio Imazeki, Tatsuro Kanda,
Masashi Yoneda, Haruhisa Nakao, Yasuhito Tanaka, Takashi Kumada,Hidenori Toyoda, Kazuhide Yamamoto, Fusao Ikeda, Kojirou Michitaka, andTatsuji Maeshiro.
Key word：chronic hepatitis C, telaprevir, GWAS, resistant variants

Abstract：Our aims are to analyze genetic factors of patients with severe adverse eventswith genome-wide association study (GWAS) and to evaluate resistant variants using
deep-sequencing analysis, induced by TVR, the first direct-acting antiviral agent against
hepatitis C virus (HCV).
Patients treated with TVR/peg-IFN/RBV therapy for HCV genotype 1 infection with highviral load have been enrolled since February 2012.
1) As for the host factors for serious skin rash, analysis with GWAS was performed in ourinstitute. So far 384 DNA samples were collected and applied for SNP typing. We confirmed
the excellent data quality with mean Dish QC (0.950) and overall call rate (99.0%). Under theconditions of SNP filtering for SNP QC (call rate > 95%, HWEp > 0.001, MAF > 0.05) andsample QC (call rate > 95%), we have selected 380 DNA samples and 417769 SNPs. By
comparing control group (no skin rash; n = 182) and case group (grade 3 skin rash; n = 52), noSNPs which could achieve P value less than 5.0 x 10-8 were revealed, however on the 5thchromosome, one candidate SNP was discovered. Since the replication study could not beperformed, due to shortage of the enrolled patients in this prospective study, we are now
doing imputation analysis instead. 2) As for the predicting factors for sustained virologicalresponse (SVR) to the triple therapy, we included 121 patients in whom the treatment
durations were longer than 8 weeks of telaprevir and longer than 24 weeks of peginterferon
and ribavirin. In this study, we evaluated the role of pretreatment measurement of serumIP-10 (interferon-γ inducible protein 10), as previously reported in peginterferon ribavirindual therapy. With respect to the predictive factors for RVR (rapid virological respone =disappearance of serum HCV RNA until 4 weeks of treatment), history of previous interferon
therapy and serum IP-10 were selected in multivariate logistic regression analysis. When
IP-10 levels were categorized at cut-off value of 450 pg/mL, SVR rates were siginificantly
different between low IP-10/RVR group and high IP-10/non-RVR group (82% vs 27%), in thepatients with IL28B non-TT genotype. In conclusion, pretreatment measurement of serum
IP-10 levels were useful, in part, even in the triple therapy.
Researchers には、分担研究者を記載する。

ロードマップ

テラプレビル薬疹に関連する宿主因⼦

症例登録、リンバ球由来DNA/⾎清収集
既知宿主、ウイルス因⼦解析
臨床データ収集⽪膚障害関連因⼦のGWAS
テラプレビル耐性ウイルスの解析

2012.2

2012.112013.82014.2

2014.8-・GWASプラットホームとしてAxSYMを⽤い、380検体
417769 SNPsを検討（タイピングのクオリティは平均
Dish QC 0.95/Overall call rate 99.0%/で、
SNP filtering条件はSNP QC call rate>95%/
HWE p<0.001/MAF>0.05/Sample QC callrate>95%）。
・さまざまな組み合わせでグレード間の⽐較検討を実施したところ、第5染⾊体上にp<10-6以上の候補SNPが選択された（下記マンハッタン・プロット参照）。

・収集し得た検体のN数が⼗分ではないため、GWAS結果をreplicationすることは断念した。このプラット
ホームに載っていないSNPで有意なものがあるかを調べる⽬的で、現在fine mappingは⾏わず、In silicoのImputation作業を実施している（健常⼈対照として1000⼈ゲノム検体、HapMap検体160例を想定）。
・これで有意なSNPsが⾒出せれば、TaqMan法にて収集検体を⽤いた測定を⾏う予定。

ペグインターフェロン/リバビリン/テラプレビル3剤併⽤療法における⾎清IP-10値による治療効果予測の検討（全国21施設の協⼒を得て実施）

⾎清IP-10値測定はIL28B non-TT群で有⽤課題番号：24指101

研究課題名：Ｃ型慢性肝炎に対するペグインターフェロン・リバビリン・テラプレビル併用療法における有害事象発現に関与する宿主側因子、および耐性ウイルスの出現動態に関する多施設共同前向き研究（２年目）

主任研究者名 ：正木尚彦
分担研究者課題名：Ｃ型慢性肝炎に対するペグインターフェロン・リバビリン・テラプレビル併用療法の治療効果予測因子に関する検討
分担研究者名 ：正木尚彦
研究協力者名 ：山極洋子、溝上雅史、考藤達哉、村田一素、是永匡紹、今村雅俊、西田奈央、杉山真也、青木孝彦、柳瀬幹雄、野崎雄一、姜 貞憲、松居剛志、滝川康裕、宮坂昭生、小松眞史、中根邦夫、上野義之、渡辺久剛、高木均、小池和彦、建石良介、石井耕司、高亀道生、今関文夫、神田達郎、米田政志、中尾春壽、田中靖人、熊田卓、豊田秀徳、山本和秀、池田房雄、道堯浩二郎、前城達次

キーワード：Ｃ型慢性肝炎、テラプレビル、GWAS、耐性ウイルス

研究成果：難治例である 1 型高ウイルス量の C 型慢性肝炎の治療において、2011 年 11 月に承認されたプロテア―ゼ阻害剤テラプレビルを加えた３剤併用療法による著効率は 70％以上と飛躍的に向上した。しかしながら、重篤な皮膚障害、高度貧血などの有害事象が治療の支障となるため、個別化医療としての適応として有害事象に関連する因子の検索が必要とされている。また、テラプレビルをはじめとする直接的抗ウイルス剤を用いた治療法が今後 C 型慢性肝炎の治療において主流となるが、その作用機序のため耐性ウイルスの出現が問題となっている。次世代のプロテアーゼ阻害剤への交差耐性も認められているため、本療法における耐性ウイルスの出現動態の把握は必須である。そこで、多施設共同前向き研究を組織し、臨床情報およびリンパ球由来ヒトDNA、血清を収集ののち、当センターが保有する GWAS、高速シーケンサーを用いて解析を行う。
このうち、ペグインターフェロン・リバビリン（P/R）併用療法の宿主側治療効果予測因子として有用であることを 2009 年に報告した IL28B SNP に関する検討を分担研究として行っているが、特に平成 25 年度は、P/R２剤併用療法の治療効果予測において IL28B SNP とともに有用性が報告されている治療前血清 IP-10 値測定の意義についても検討した。多施設共同研究で収集した 1 型・高ウイルス量群の患者のうち、「テラプレビル投与期間 8 週以上、かつ、P/R 投与期間 24 週以上」を満たす 121 例を対象に検討した。その結果、３剤併用療法による RVR（治療開始４週目までのHCV RNA 消失）に寄与する因子として、治療歴と IP-10 低値が検出された。SVR（著効）に寄与する因子として、血清アルブミン高値、IL28B TT-genotype、リバビリン初回投与量 600mg 以上/日が 検 出 さ れ た 。 血 清 IP-10 値 を カ ッ ト オ フ 値 450 (pg/mL) で カ テ ゴ リ ー 化 す る と 、 IL28B
TT-genotype では IP-10 低値群で有意に RVR が高率であったが（91％対 72%）、SVR には全く関連しなかった。一方、non-TT genotype では、IP-10 低値群で有意に RVR が高率であること（74％対42%）、さらに、IP-10 低値＋RVR 群と IP-10 高値＋非 RVR 群とでは SVR 率において 82％対 27％と有意差を認めており、３剤併用療法においても治療前血清 IP-10 値測定は治療効果予測に有用であることが示唆された。

研究発表及び特許取得報告について

課題番号：24指101

研究課題名：Ｃ型慢性肝炎に対するペグインターフェロン・リバビリン・テラプレビル併用療法における有害事象発現に関与する宿主側因子、および耐性ウイルスの出現動態に関する多施設共同前向き研究
主任研究者名：

正木尚彦

論文発表
掲載号

年

Ex vivo induction of IFN-k3 by a TLR7
agonist determines response to PegIFN/Ribavirin therapy in chronic
hepatitis C patients.

論文タイトルJ Gastroenterol
Murata K,
Sugiyama M,
Kimuta T,
Yoshio S, Kanto
T, Kirikae I,
Saito H, Aoki
Y, Hiramine S,
Matsui T, Ito
K, Korenaga M,
Imamura M,
Masaki N,
Mizokami M.

著者

掲載誌

2013. DOI
10.1007/s00535-013-0814-1.

2013

IL28B polymorphisms and clinicalimplications for hepatitis C virus
infection in Uzbekistan.

Khudayberganova PLoS ONE
D, Sugiyama M,
Masaki N,
Nishida N,
Mukaide M,
Sekler D,
Latipov R,
Nataliya K,
Dildora S,
Sharapov S,
Usmanova G,
Raxmanov M,
Musabaev E,
Mizokami M.

2014 Mar24;9(3):e93011. doi:
10.1371/journal.pone.0093011. eCollection

2014

学会発表
タイトル

発表者

学会名

場所

年月東京

2013年10月

APASL Liver Week
2013

SingaporeJune, 2013

発表先

場所

年月日

多施設共同研究における３剤併用療法のウイ 山極洋子、正木 第17回日本肝臓学
尚彦、西田奈会大会
ルス学的効果と副作用の検討．
央、杉山真也、 （JDDW2013）
竹田努、青木孝彦、是永匡紹、村田一素、今村雅俊、溝上雅史．
Regional differences should beconsidered
for the more effective interferon
treatment of chronic hepatitis C:
Evidences on Japanese nation-wide
その他発表(雑誌、テレビ、ラジオ等)

Masaki N,
Yamagiwa Y,
Mizokami M.

タイトル

発表者

該当なし
特許取得状況について※出願申請中のものは(発明名称該当なし)記載のこと。
登録番号

特許権者(申請者）
登録日(申請日)（共願は全記載）

出願国