博 士 （ 水産 学 ）ホ セ ファ

タ ン ・ ファ ー ミ ン

学位論 文題名

Endocrinologicalstudieso
nfi
nalm
aturationi
nt
heAsia
nc
at
fis
hCl
ari
as7n
acr
oc
ep
hal
us(Gunther)（ア ジァナマ ズの最終 成熟に関する内分泌学的研究）

学位論文内容の要旨
フイリピン在来の淡水魚であるC
laria
sma
croc
ep
halus(Gunther)
は、主にフイ
リピン、マレーシアおよびタイに．おいて食用として利用されており、非常に需要が 高い。しかし、その天然資源は近年減少傾向にある。その原因としては、
197
0年代以来、タイから導入された成長の早いC．

barrachusにより、在来種のc． macrocephal
usの生息域が狭められたと考えられている。フイリピンでは、
c． macrocep
halusはその風味および食感においてC．batr
achusよりも好まれており、そ の天然資 源回復の ため、人為 的な増養 殖が試み られてい る。天然のC
macrocephal usの繁殖時 期は3‑10月の 雨期の間 であるが 、飼育環 境下では 自発 的な排卵 はせず、 雌の卵巣 卵は一年 中卵黄形成後期の状態で卵母細胞の発達が停止し ている。 従って、卵母細胞の最終成熟および溂I卵の誘導はホルモン処理によって 行われて いる。排 卵された 卵が得ら れると、雄から貯精嚢を取り出し、それ を細断し たものを 受精に使 用している。しかし、現在行われている方法は 受精率が低 く、雌の 最終成熟 および排 卵の誘起および精子の調整法において多く の問題点が ある。そこで本研究は、C． macrocephalusの効率の良い最終成 熟誘導 法および人 工受精法 を開発す ることを 目的とし て1）雌の 卵巣の発達

と血 中性ステ 口イドホ ルモンの 周年変化 の解析、 2）ホルモン 処理によ る最終成熟 および排卵 誘導の検 討、3）ホ ルモン処 理を行う 最適な時 期の検討、4）
雄の精巣 の発達およ び血中ス テロイド ホルモン の周年変 化の解析 、5）受精時の精子の調整方法の検討を行った。
まず、飼育 下の雌の 生殖腺体 指数(GSI)、卵 径および 抱卵数等 の成熟度の指標と、血 中ステロイドホルモン量の周年変化を調べた。その結果、GSI、卵径、抱 卵 数お よ び血 中 テ スト ス テロ ン (T)量と も に、 1・ 4月 の間が 最も低値 を示し た 。 ま た 、 血 中 エ ス ト ラ ジ オ ー ル ‑17p量 は1月に 最 も 低く 、 12月 に 最も高値 を示した 。これらを総合して考慮すると、C． mac
roce
phalu
sの雌は周年成熟リ ズムを持 ち、1‑3月は最 終成熟お よび排卵 を誘導す るには最 も不適切 な時
期 で あ り 、 7‑9月 が 最 も 適 切 な 時 期 、 4‑6月 お よ び 10‑12月 は そ れ ら の 中
間的 な時期で あることが示唆された。C． mac
roce
phal
usの最終成熟誘起ステロ
イ ド ホ ル モ ン で あ る と 考 え ら れ る 17＆ .20ロ ‑dihydroxy‑4‑pregnen‑3‑one（ DHP)は年 間 を 通し て 血 中に検出さ れなかっ た。また 、周日採 血を行っ た場
合で も、DHPは検 出されなか った。従 って、C．macrocephalusが飼育下で最終成 熟 を 起 こ さ な い 原 因 は 、 DHPが 産 生 さ れな い た めで あ ると 考 え られ た 。
次に 、 最終 成 熟 を誘 導 するため の黄体形 成ホルモ ン放出ホ ルモンア ナログ（ LHRHa)お よ びピ モ ザ イド （ドーバミ ン拮抗剤 ）の複合 投与によ るホルモ ン処 理 の条 件 を検 討 し た。 LHRHa 0.01か ら 0.10メ g/g‑体 重お よびピモ ザイドlp g/g‑体 重 の 複合 投 与に よ っ て、 そ れ ぞれ 注 射後 12から 15時間 の 間に 最 終
成熟 および粥 I卵を誘導す ることが できた。 中でも、 LHRHaをO．05pg/g．体重処 理 で16‑20時 間 後 に搾 出 した 卵 を 人工 受 精 させ た 場合 、受精 率および 孵化率において最も良好な結果が得られた。
また、上記で最も良好な結果が得られた方法を用いて、様々な時期の個体の排卵を誘導すると、1・3月以外では、搾出される卵の数、受精後の孵化率およびその後の生存率において良好な結果が得られた。1・3月に排卵処理を行った
場合 では 、卵 質お よび 稚魚の生存率が低下していた。従って、排卵処理は1・3月以 外に 行うことが適当であると結論された。ホルモン処理後、何れの時期の 個 体 で も 血中 DHP量 は 上 昇 し た が 、 1‑3月 に はそ の上 昇値 はそ の他 の時 期の個 体に比べほぼ半分の量であった。この時期の個体が良好に最終成熟が誘導され ない のは 、卵 黄形 成を完 了し てい る卵 母細 胞数 が少 ない ことおよび血中DHPが 十 分 に 上 昇 し な い こ と に 起 因 し て い る と 考 え ら れ た 。
次 に、雄の精巣の発達および血中ステ口イドホルモン量の周年変化を調べた
結 果 、 GSIは 6月 に 最 も 高 く 、 12、 2お よ び 4月 で 最 低 で あ っ た 。 ま た 、 1
年中 精巣 中に は精 原細 胞、精 母細 胞、精細胞、および精子が観察されたが、1月の み精 子の 減少 が認 められ た。 血中 11‑ケト テス トステ ロン 量は1月に最低で、 9月に ピー クを 示し た。 T量で は大 きな 変動 はみ られ なか った。従って、雄で は1月 を除 いて は、 常に 人工 受精に使用可能な精子を得ることができることが 明ら かと なっ た。 血中DHPは 検出されたが、その量は年間を通して極めて低値 であ った 。
次 に、受精時に使用する精液の運動活性を最大にするための人工精漿または精液 の希釈液の検討を行った。先ず、C，macrocephalusの精子運動の活性化は主に 浸透圧の減少によって惹き起こされることを明らかにした。また、様々な希釈 液を 検討 した 結果 、pH6.4の 低張の（200mOsm）電解質液（NaCl、CaCl2、KCl)およ び非 電解 質液 （マ ンニトール）またはpH7．4・8.6の等張の電解質液(NaCl‑KCl）で精液を希釈した場合、精子運動が著しく活性化されることを示した。次に、ナマズ人工精漿を用いた精液の希釈率が受精率に与える影響を調べた 。そ の結 果、 精液 を1： 100の割合で人工精漿に希釈し、0.6％NaCIで精子運動を活性化し、5 ‑10gの卵と受精させた場合に、89・94％の最も高い受精率が得られた。
以上の結果より、まず、C． macrocephalusのホルモン処理を行う最適の時期が示された。次に、雌の最終成熟および排卵を誘導するための簡便かつ効果的なホルモン処理法が示された。また、雄の精子運動を最大に活性化し、高い受精率が得られる精液の希釈法が示された。以上本研究により、C．m
acro
cephaんsの最終成熟の誘導法、その後の人工受精法の改良がされ、効率的種苗生産が可能となった。本成果はフイリピンにおける本種の増養殖に大きく貢献すると期待される。

学位論文審査の要旨
主査
副査
副査
副査

教授
教授
助教授
助教授

山内晧平
山崎文雄
上田 宏
足立伸次

学 位 論 文 題 名Endocrinological studiesonfinalmaturationin theAsian catfish Clarias 7nacrocephalus (Gunther)（アジアナマズの最終成熟に関する内分泌学的研究）

フ イ リ ピ ン 在 来 の 淡 水 魚 で ある Clarias macrocephaん S(Gunther)
は、主 にフ イリピ ン、 マレー シア および タイ におい て食 用として利用さ れて いるが 、そ の天然 資源 は近年 減少 傾向に ある 。現在、それら の資 源回復 のた め、人 為的 な増養 殖が 試みら れて いるものの 、 飼 育 環 境 下 で は 自 発 的 な 排 卵 iま し な い た め 、 卵母 細 胞 の 最 終
成熟お よび 排卵の 誘導 はホル モン 処理に よっ て行わ れて いる。しかし、 現在 行われ てい る方法 は受 精率が 低く 、雌の 最終 成熟およぴ 瑚 5卵 の 誘 起 お よ ぴ 精 子 の 調 整 法 に お い て 多 く の 問題 点 が あ る 。
そ こ で 本 研 究 は 、 C． macrocephaん sの 効 率 の 良 い 最 終 成 熟 誘 導 法
およぴ 人工 受精法 を開 発する こと を目的 とし て、最 終成 熟の内分泌学的 解析 を行う とと もに、 それ をもと に人 工受精 の方 法を検討した 。
ま ず 、 飼 育 下 の 雌 の 生 殖 腺 体 指 数 (GSI)、 卵 径 お よ ぴ 抱 卵 数 等の成熟 度の 指標と 、血 中ステ 口イ ドホル モン 量の周 年変 化を調べた 。 C． macrocephalusの 雌 は 周 年 成 熟 リ ズ ム を 持 ち 、 1‑3月 は 最終 成 熟 お よ び 粥 I卵 を 誘 導 す る に は 最 も 不 適 切 な 時 期で あ り 、 7， 9
月が 最 も 適 切 な 時 期 で あ る こ とが示 唆さ れた 。C． macrocephalusの最 終 成 熟 誘 起 ス テ 口 イ ド ホ ル モ ン で あ る と 考 え ら れる 17ば ， 20p．
dihydroxy‑4‑pregnen‑3‑one (DHP)は 年 間 を 通 し て 血 中 に 検 出 さ
れな か っ た 。 従 っ て 、 C． macrocephaん sが 飼育 下で 最終 成熟を 起こ

さ ない原因は、DHPが産生されないた めであると考えられた。
次に、最終成熟を誘導するための黄体形成ホルモン放出ホルモン アナ口グ(LHRHa)およぴピ モザイド（ドーバ ミン拮抗剤）の複合投与によるホルモン処理の条件を検討した。LHR
Ha0.01からO.10ルg/g‑体重およびピモザイド1〆 g/g‑体重の複合投与によって 、 それ ぞれ 注 射後 12か ら15時間の間 に最終成熟および排 卵を誘導することができ、搾出した卵を人工受精させた場合、受精率 およ び 孵化 率に おい て最 も良好な結果が得られた。
また、上記で最も良好な結果が得られた方法を用いて、様々な時期の個体の排卵を誘導し、搾出される卵の数、受精後の孵化率
およぴその後の生存率を調べたところ、排卵処理は1‑3月以外に行うことが適当であると結論された。ホルモン処理後、何れの時期の個体でも血中DHP量は上昇したが、卵黄形成を完了している卵母細胞数が少ないため、1・3月にはその上昇値j
まその他の時期の個体に比べほぼ半分の量であった。
次に、雄の精巣の発達および血中ステロイドホルモン量の周年
変 化 を調 べた 結 果、 GSIは6月に最も高 く、12、2および 4月で低値であった。また、1年中精巣中には精子を含めた全ての生殖細胞が観察されたが、1月のみ精子の減少が認められた。血中11‑ケ トテストステロン量は1月に最低で、9月にピークを示した。
一方、血中DHPは検出されたが、その量は年間を通して極めて低値であった。これらのことより、雄では1月を除いては、常に人工受精に使用可能な精子を得ることができることが明らかとなった。
最後に、受精時に使用する精液の運動活性を最大にするための人 工 精 漿 の 検 討 を 行 い 、 pH6.4の 低 張 （ 200m〇 sm)電解 質液(NaCl、CaC12、KCl)および非電解質液（マンニトール）またはpH7.4‑8.6の等張の電解質液(NaCl‑KCl）で精液を希釈した場合、精子運動が著しく活性化されることを示した。次に、精液を1:100の割合で人工精漿に希釈し、0.
6％NaClで精子運動を活性化し、5・10gの卵と受精させた場合に、89‑94％の最も高い受精率が得られた。
上述のように本研究はC． macrocephaんsの最終成熟に関する内分泌要因を解析し、これを基に雌の最終成熟および粥5卵を誘導するための簡便かつ効果的なホルモン処理法を提示した。また、雄の精子運動を最大に活性化し、高い受精率が得られる精液の希釈法が示された。これらの結果はC． macrocephalusの効率的種苗生産を可能とし、フイリピンにおける本種の増養殖に大きく貢献したものと高く評価され、本論文が博士（水産学）の学位請求論文として相当の業績があると認定した。