課題番号
研究課題名：25指103：新規モデルマウスを用いた乾癬の病因、病態の解析および新規治療法の開発
主任研究者名 ：鈴木春巳
分担研究者名 ：土肥多恵子、高木智
キーワード
研究成果

：乾癬、慢性皮膚疾患、Th17 細胞： 我々は T 細胞シグナル伝達に関わる因子である RhoH を欠損するマウスが、BALB/c 背景において乾癬様の慢性皮膚炎を自然発症することを見出した。本年度は、炎症部位の詳細な解析を行い、炎症部位にCD4-T 細胞が浸潤し、IL-17,IL-22, IL-6 などの炎症性サイトカインが過剰に産生されていること、CCR6 陽性の Th17 細胞が多数リクルートされていることを明らかにした。さらに、眼瞼の所属リンパ節である頸部リンパ節においても Th17 細胞および Tc1 細胞が激増していることがわかった。また、リンパ球が分化しない RAG2 欠損マウスと RhoH 欠損マウスを交配したところ、乾癬様慢性皮膚炎の発症が阻止されたことから、この病態形成にはリンパ球が必須であることが明らかとなった。また、IL-22BP-IgFc 融合蛋白質を培養細胞に遺伝子導入し、プロテイン A カラムを用いて培養上清より IL-22BP 蛋白質を調製した。この IL-22BP 蛋白質は電気泳動で主な単一バンドを示し、IL-22 と結合することを確認した。現在、この精製 IL-22BPを RhoH 欠損 BALB/c マウスに静脈投与し、疾患症状の軽減がみられるか検討中である。

Subject No.

：25-103

Title：Analysis of pathogenesis and progression of psoriasis by utilizing novel
psoriasis mouse model.

Researchers：Harumi Suzuki, Taeko Dohi, Satoshi Takaki

Key word：psoriasis, Th17 cells, chronic dermtitis

Abstract：RhoH, a hematopoietic linage cell specific atypical small GTPase, functions as

an adaptor for ZAP70, Syk, and lck, therefore plays an important role ondevelopment and activation of T cells. We found that RhoH deficient micespontaneously developed psoriasis-like chronic dermatitis with age in BALB/cbackground.

This year, we performed precise analysis of inflamed skin tissue,

and fount that a number of CD4-T cells were infiltrated.

High titer of cytokines

such as IL-17, IL-22, IL-6 were detected in the inflamed area, and CCR6 positive,activated Th17 cells were there.

At the same time, massive increase of Th17 andTc1 cells in draining lymph node was observed.

The progression of chronic

dermatitis was shown to be dependent on lymphocytes, because introduction of
RAG deficiency into RhoH-deficient mice showed complete inhibition of thedermatoses.

We prepared IL-22BP-Fc fusion protein by affinity purification, andconfirmed the binding of IL-22 to the protein.

Then, we are currently evaluating

the effect of IL-22BP administration on the recovery of psoriasiform dermatoses in
RhoH-deficient mice.

Researchers には、分担研究者を記載する。

25指103 : 新規モデルマウスを用いた乾癬の病因、病態解析と新規治療法の開発年次計画と 達成状況
3年度

2年度

初年度

RhoH欠損マウス
RhoH+/+

RhoH‐/‐

疾患部位でのIL-17、IL-22の産生増加を認め、さらにCCR6陽性Th17CD4T細胞が集積していることを示した。所属リンパ節においてもTh17が増加していた。Th17支配による慢性炎症であり、乾癬モデルとして適当であると考えられた。

1. モデルマウスの病因、病態の解析
乾癬モデルマウスとしての妥当性

レパトアは変化なし。自己抗体も検出できず。RAG-/-により症状消失することから、Ｔ細胞は必須であることがわかった。

T細胞の関与、レパトアサイトカイン産生の制御
RhoH-CKOマウスを樹立しFoxP3Creマウスと交配を始めた。

発症前から、リンパ節におけるIL-17、IL-23、IL-22の産生が亢進Treg細胞の関与

2. 新たな治療戦略の開発

乾癬症状を抗IL-22BP抗体投与

自然発症
in vivo遺伝子導入
は不成功

IL-22BP遺伝子導入

IL-22BP-Fc融合蛋白を作製、精製し、純度検定および結合活性を確認した。

IL-22BP蛋白による治療

3. ヒト乾癬におけるRhoH遺伝子の寄与
RhoHとTAGAPの細胞内での結合を示した。

TAGAPとの関連性
ヒトDNP解析

数個のSNP変異により蛋白の安定性が減少することが明らかとなった。（SNPと疾患の関連性）

1. モデルマウスの病因、病態の解析

初年度の成果次年度以降の計画

炎症部位でTh17関連サイトカインが上昇、Th17細胞の浸潤を確認した。

皮膚炎発症以前にTh17優性が起こっているかを検討

皮膚炎発症がリンパ球に依存することを証明した。

2. 新たな治療戦略の開発

3. ヒト乾癬におけるRhoH遺伝子の寄与

IL-22BP-Fc融合蛋白を精製することに成功した。IL22との結合活性も確認済。

RhoHとTAGAPは細胞内で結合することを証明した。
（TAGAPは乾癬の疾患関連遺伝子の１つ）
RhoHのヒトSNP変異体は蛋白の安定性が低下していた（ユビキチン依存性分解）

Ｔｒｅｇの関与を検討する（FoxP3-CKOマウス）
Th17細胞の移入で皮膚炎が再現できるか検討

IL-22BPの事前投与によって炎症は軽減されるか（予防）乾癬発症後でのIl-22BP投与でも症状は軽減されるか（治療）TA-GAP KOマウスの作製、表現型の解析
RhoHのSNPとT細胞免疫不全との関連を検討する。

乾癬発症機序の解明と新規治療法の開発

課題番号：25指103
研究課題名：乾癬モデルマウスにおけるＴ細胞分化、活性化の解析
主任研究者名 ：鈴木春巳
分担研究者名 ：鈴木春巳
キーワード
研究成果

：乾癬、Th17、RhoH：我々は T 細胞シグナル伝達に関わる因子である RhoH を欠損するマウスが、BALB/c 背景において乾癬様の慢性皮膚炎を自然発症することを見出した。この慢性皮膚炎が自己免疫疾患なのか、皮膚炎以外に、他の自己免疫応答を起こしているかどうかをまず検討した。自己抗体の存在を検討したところ、肝臓組織に反応するような自己抗体の存在は認められなかった。腸炎、膵炎、肝炎などの症状も認められず、広範に自己免疫症状を呈していることはないことが明らかとなった。TCRVβ鎖のレパトアについても解析したが、特に変化は見られなかった。Treg についても解析を進めているが、現在までのところ大きな変化はみられていない。組織特異的に RhoH を欠損させる RhoH-Flox マウスを作製し、Cre 特異的に RhoH を欠失させることが出来ることを確認した。現在、CD4-Cre、FoxP3-Cre を用いて、Ｔ細胞特異的 RhoH 欠失マウス、Treg 特異的 RhoH 欠失マウスを作製中である。

課題番号：25指103
研究課題名：乾癬モデルマウスにおける慢性皮膚炎症の発症機序の解明
主任研究者名 ：鈴木春巳
分担研究者名 ：土肥多恵子
キーワード
研究成果

：乾癬、炎症、RhoH：我々は T 細胞シグナル伝達に関わる因子である RhoH を欠損するマウスが、BALB/c 背景において乾癬様の慢性皮膚炎を自然発症することを見出した。本年度はまず炎症部位における詳細な解析を行った。
炎症部位には多数の CD4-T 細胞が浸潤していたが、CD8T 細胞の浸潤は殆どみられなかった。また B 細胞、好中球などの浸潤はみられないが、樹状細胞の真皮、表皮への浸潤は観察された。さらに、炎症皮膚組織において、IL-17,IL-22, IL-6 などの炎症性サイトカインが過剰に産生されていること、CCR6 陽性の Th17 細胞が多数リクルートされていることがわかった。同時に、眼瞼の所属リンパ節である頸部リンパ節においても Th17 細胞および Tc1 細胞が激増しており、乾癬に特徴的な Th17 応答が優勢になっていることが明らかとなった。RhoH 欠損マウスを RAG2 欠損マウスと交配し、リンパ球を欠失した状態にすると乾癬様慢性皮膚炎の発症が阻止されたことから、この病態形成にはリンパ球の存在が必須であることが明らかとなった。

課題番号：25指103
研究課題名：乾癬モデルにおけるサイトカインを作用点とした治療戦略の開発
主任研究者名 ：鈴木春巳
分担研究者名 ：高木智キーワード
研究成果：乾癬、IL-22BP、Th17 細胞：本研究は RhoH 欠損マウスにおける乾癬様慢性皮膚炎モデルを対象として、乾癬の新規治療戦略の開発を目的とする。乾癬の病態形成において Th17 細胞による IL-23/IL-17/IL-22 軸の重要性が認識されている。 実際に動物モデルにおいて抗 IL-17 抗体、抗 IL-22 抗体の治療効果は報告されており、実用に向けて治験が進んでいる。本研究では、IL-22 の可溶性デコイ受容体である IL-22BP（IL-22RA2）の治療効果について検討を行う。IL-22BP の乾癬治療についての報告はまだない。本年度は IL-22BP cDNA をクローニングし、IL-22 と結合しない変異体（66A/118A）も作製した。これを IgFc との融合蛋白として発現させるベクターに組み込み、293 細胞に遺伝子導入した。
この培養上清からアフィニティー精製により IL-22BP-Fc 蛋白を調製した。この精製 IL-22BP は電気泳動にてシングルバンドを示し、サンドイッチウエスタン法により、IL-22 との結合を確認した。精製 IL-22BP を毎週 25ug 静脈投与し、RhoH 欠損マウスの乾癬発症を抑制できるか検討中である。In vivo での遺伝子導入も検討したが、発現を確認できなかったので精製蛋白投与実験に集中することにした。

研究発表及び特許取得報告について

課題番号：25-103

研究課題名： 新規モデルマウスを用いた乾癬の病因、病態の解析および新規治療法の開発
主任研究者名：鈴木春巳

論文発表
論文タイトル

著者

掲載誌

掲載号

年

Okada T, Fukuda S, HaseK, Nishiumi S, Izumi Y,
Yoshida M, Hagiwara T,
Microbiota derived lactate accelerates colon Kawashima R, Yamazaki
NatureM, Oshio T, Otsubo T,
epithelial cell turnover in starvation-refed
Communications
Inagaki-Ohara K,mice.
Kakimoto K, Higuchi K,Kawamura YI, Ohno H,Dohi. T.

4

2013

Son A, Oshio T,Kawamura YI, Hagiwara
TWEAK/Fn14 pathway promotes a T helper T, Yamazaki M, Inagaki- Mucosal
2-type chronic colitis with fibrosis in mice. Ohara K, Okada T, Wu P, Immunology
Iseki M, Takaki S, Burkly
LC, Dohi T.

6

2013

Said HS, Suda W,
Nakagome S, Chinen H,Oshima K. Kim S. Kimura
R, Iraha A, Ishida H,
DNA Research
Fujita J, Mano S, Morita
H, Dohi T, Oota H, Hattori
M.

21

2014

Sugiura T, Kageyama S,Andou A, Miyazawa T,Ejima C, Nakayama A,
Dohi T, Eda H.

72013

92014

82013

151

2013

Dysbiosis of Salivary Microbiota in
Inflammatory Bowel Disease and Its
Association With Oral ImmunologicalBiomarkers.
Oral treatment with a novel small moleculealpha 4 integrin antagonist, AJM300,
prevents the development of experimental
colitis in mice.

J Crohns Colitis

Okada T, Nitta T, Kaji K,
Takashima A, Oda H,
Differential function of Themis CABIT domains
Tamehiro N, Goto M,PLoS One
during T cell development.
Okamura T, Patrick MS,Suzuki H.

Zfat-deficiency results in a loss of CD3ζphosphorylation with dysregulation of ERK andEgr activities leading to impaired positiveselection.

Ogawa M, Okamura T,
Ishikura S, Doi K,
Matsuzaki H, Tanaka Y,Ota T, Hayakawa K,
Suzuki H, Tsunoda T,
Sasazuki T, Shirasawa S.

PLoS One

Differential requirement for RhoH indevelopment of TCRab CD8aa IELs and othertypes of T cells.

Hiroyo Oda, Norimasa
Tamehiro, Michael S
Patrick, Kunihiro
Hayamakwa, Harumi
Suzuki .

Immunol. Lett

研究発表及び特許取得報告について

Complete genomic DNA sequence of the East
Asian spotted fever disease agent Rickettsia
japonica.

Matsutani M, Ogawa M,
Takaoka N, Hanaoka N,Toh H, Yamashita A,Oshima K, Hirakawa H,PLoS One
Kuhara S, Suzuki H,
Hattori M, Kishimoto T,
Ando S, Azuma Y, Shirai
M.

9

2013

Adipose natural regulatory B cells negatively
control adipose tissue inflammation.

Nishimura S, Manabe I,
Takaki S, Nagasaki M,
Otsu M, Yamashita H,
Sugita J, Yoshimura K,
Eto K, Komuro I,
Kadowaki T, Nagai R.

18

2013

Nov/CCN3 regulates long-term repopulating
activity of murine hematopoietic stem cells via
integrin αvβ3.

Ishihara J, Umemoto T,
Yamato M, Shiratsuchi Y,Takaki S, Petrich BG,
Int J Hematol.
Nakauchi H, Eto K,
Kitamura T, Okano T.

99

2014

Lnk prevents inflammatory CD8+ T-cellproliferation and contributes to intestinal
homeostasis.

Katayama H, Mori T, SekiY, Anraku M, Iseki M,
Ikutani M, Iwasaki Y,
Eur J Immunol.
Yoshida N, Takatsu K,
Takaki S.

2014 Feb 17.
doi:10.1002/eji.201343883

2014

Kohashi M, Nishiumi S,Ooi M, Yoshie T,
A novel gas chromatography mass spectrometry- Matsubara A, Suzuki M,
based serum diagnostic and assessment approach Hoshi N, Kamikozuru K, J Crohns Colitis.
to ulcerative colitis.
Yokoyama Y, Fukunaga
K, Nakamura S, Azuma T,
Yoshida M.

doi:
10.1016/j.cro
hns.2014.01.
024.

2014

1301

2013

Fukusaki E, Bamba T. Supercritical fluid
chromatography/Orbitrap mass spectrometry
based lipidomics platform coupled with
automated lipid identification software for
accurate lipid profiling.

Yamada T, Uchikata T,Sakamoto S, Yokoi Y,
Nishiumi S, Yoshida M,Cell Metabolism.

J Chromatogr A.

学会発表
タイトル

発表者

Involvement of L1 retrotransposition in murine
experimental colitis-cancer model.

Otusbo T, Kawamura YI,
Ishizaka Y, Dohi T.
Involvement of L1
retrotransposition inmurine experimental
colitis-cancer model.

Dohi T, Kawamura YI,
TWEAK/Fn14 pathway promotes chronic colitis Kawashima R, Son A,
and fibrosis mediated by IL-13-TSLP axis.
Oshio T, Wu P, BurklyLC.

学会名

場所

年月DDW2013

Orlando2013/5/20

Immunology 2013

Honolulu2013/5/7

研究発表及び特許取得報告について

Cell type-specific, genome-wide epigenetic
Otsubo T, Kawamura YI,
analysis for lamina propria cells isolated from theDohi T.
colon with ulcerative colitis.

第42回日本免疫学
千葉会学術集会.

2013/12/1

消化管炎症の重症化・慢性化機構を担う因子.

土肥多惠子

第50回日本消化器
東京
免疫学会

2013/8/1

メタボロミクスの医療応用吉田

第61回 日本質量分
茨城析総合討論会2013/9/12

Cortical thymic epithelial cells control
conventional and innate T cell development

Takeshi Nitta, Ryunosuke
第42回 日本免疫学
Muro, Hiroyo Oda, Shigeo
千葉会学術集会
Murata, Harumi Suzuki

2013年12月

An altered T cell repertoire in mice lacking
cortical thymic epithelial cells.

Ryunosuke Muro, Takeshi 第42回 日本免疫学
千葉
Nitta, Harumi Suzuki会学術集会

2013年12月

Differential function of two CABIT domains inThemis.

Toshiyuki Okada, Takeshi
Nitta, Hiroyo Oda,
第42回 日本免疫学千葉Michael S Patrick, Harumi 会学術集会
Suzuki2013年12月

優A non-synonymous SNP variant of RhoH reduces Norimasa Tamehiro,
TCR mediated signal transducion via
Hiroyo Oda, and Harumi
proteasomal degradation
SuzukiA missense mutation in Psmb11 impairs
thymoproteasome assembly and T celldevelopment”,

Novel mutant mice lacking cortical thymic
epithelial cells”

第42回 日本免疫学
千葉会学術集会

The 35th Naito
Conference “TheTakeshi Nitta, Ryunosuke UbiquitinMuro, Sachiko Nitta,
Proteasome System: Sapporo,Japan
Shigeo Murata, Harumi
From Basic
Suzuki
Mechanisms toPathopysiologicalRoles”,
Takeshi Nitta, Ryunosuke
The 6th InternationalMuro, Sachiko Nitta,
Workshop of Kyoto Kyoto, Japan.
Shigeo Murata, Harumi
T Cell Conference
SuzukiToshiyuki Okada, Takeshi
The 6th International
Differential function of Themis CABIT domains Nitta, Kentaro Kaji,Workshop of Kyoto Kyoto, Japanduring T cell development
Hiroyo Oda, MichaelT Cell Conference
Patrick, Harumi Suzuki

2013年12月

2013.7.9-12

2013.6.3-7

2013.6.3-7

Themis CABIT domains exert distinct functionsin thymocyte positive selection

Toshiyuki Okada, Takeshi
The 15thNitta, Kentaro Kaji,International
Hiroyo Oda, Michael S
Congress ofPatrick and Harumi
Immunology
SuzukiMilan

2013年8月

Lnk/Sh2b3, an intracellular adaptor associatedwith celiac disease and autoimmune diabetes,
regulates accumulation of inflammatory T cells
and prevents intestinal villous atrophy.

Mori T, Katayama H, Iwasaki The 15thY, Seki Y, Iseki M, Ikutani M, International
Yoshida N, Takatsu K, Takaki Congress ofS.
Immunology

Milan

2013年8月

研究発表及び特許取得報告について

An autoimmune disease-associated gene,Mori T, Seki Y, Iwasaki Y,
Lnk/SH2B3 controls production and functions of
第42回 日本免疫学
Yamazaki-Suzuki N, Iseki M,
千葉
DC subsets and regulates inflammatory T cell
会学術集会
Takaki S.
differentiation.

2013年12月

IgE production and germinal center formation are
Iseki M, Kudo F, Takaki
regulated by the adaptor protein Aps/Sh2b2 in BS.
cells.

第42回 日本免疫学
千葉
会学術集会

2013年12月

Lnk/Sh2b3 adaptor protein prevents theSeki Y, Katayama H, Mori 第42回 日本免疫学
accumulation of inflammatory CD8+ T cells and千葉
T, Iseki M, Takaki S.
会学術集会
intestinal villous atrophy.

2013年12月

その他発表(雑誌、テレビ、ラジオ等)
タイトル

発表者

発表先

場所

年月日

該当なし

特許取得状況について※出願申請中のものは(発明名称)記載のこと。
登録番号

該当なし

※該当がない項目の欄には「該当なし」と記載のこと。
※主任研究者が班全員分の内容を記載のこと。

特許権者(申請者） 登録日(申請日)（共願は全記載）

出願国