鮭稚魚集団 弊死の細菌学的研究 (I)弊死 稚魚、より分離した 桿菌にっいて野―彦□ 海道さけ・ますふ化蜴)

尾西Bacteriolgical Investigations On the DeathObservations

onthe Bacillus

KazuhIko

崎号

志C北悔道さけ・ますふ化場)

ヒ!n groups

isolated fromNISHINO

andYaSuji

DeadOf Salmon

Fry.

Salmon

Fry,

(I)

OZAK1

十勝支場幕月偶串与 場に於いてl955 年， l956 年と 2 ケ 年にわたり養魚池に放養中の鮭碓魚が全放養尾数の夫々40%。

l5%と大景に弊死した。この様な集団
錐死の例は今日迄認めらず，その原因としてはます
水質の汀濁が老之 ．

られる。Mt) 卿化用水引用河川Cm 途ぉ II/lo は両側が畑地であり， これに位用した農薬がT 融水と共に河川に流人して推魚に悪影習を及ぼす可能性がもる。
次いで稚魚管却面又は池白休の欠陥による窒思，その他細荊の感染等も老庖される。
， 更に念のだ比化故肥料を水の汚濁につしては水質調査の結果，影料すべき異常成分は今く認められなかつた

使用して，椎魚の農薬に刈する抵抗試験をL たが姥汗の直接原因とは認め難い，又管理面，池山休の欠陥の有無についても糾魚の交換飼育比較試験の結果何れも其団傑死の原四どは思われなかつた。
発斗の状況から見て病原糸 白菌による弊死の疑いもかなり
g剣a@ っだので吾人十よ病魚 に対L 細菌学的検奇を行つた

結果病原性を保有する桿菌を分離しだ。これら糊閑の性状につぎ穐人検査を統行し，未だ結論を得るには至つていないが，予報どして検索経過の概要を記載する事とする。

なお本武験を失施するに当り，終始倒指導を賜 り倒便宜を討って戴いた市広畜産大才細菌
字教室西武教按，小野悦二SJ傲授 ，並びに試験の機会を与えられた
荒井本場長，
水F@ 叩 十勝支場長に伴甚なる刮恵を表するもC@3 C@@ち・る。
I

幕 別事業場泰 煎 池の構造及び 放養尾数

・

幕別事業場の養魚
池は巾4 門，長さ4S 問，

l92 坪の他が上流部より第 l 巳，第2 ほ， 節 3 区と3 区分され．各甘区は@&@に 縦に 4 列に仕切られている。

人 64 坪で，

l956 年@よ 第 l 巳は2 刀 l8 □ ― 2 月 27 円の問にI， 788 ， l00 尾，
3 ヒは 2 月 6 H‑2

笛 2 区は 2 月 l6 口 ― 2 月 l7 日の 問l， u3 ． 400 尾，

地月 l5 □ の 間l， 685 ， l00 尾を大方放垂L ， 総引4 ， 586 ， 600 尾で第 i ピ と第3 ピは耳当り約30 ， 000尾，第2 区はl6 ， 000 尾"G ，平均坪当り約25 ， 000 尾であつた02・

集団 弊 死の状況

最初に放養した
第 3 区の稚魚が燗化後40‑50の後除ヵにぞの吊欺は旧大@‑，日を経過t‑た 3 月 22 口に約50 ， 000 尾俣度の笠田擁死を発見L ，そl 凋間後には約700 ， 000 尾と 推定された。この姓死尾知は培 3 区放養数の杓40%に半 り ，それ等の碓L は人干碑嚢後叩がま常突出，自変していた， Y 弊汗才免れだ杵魚の門にも相当数の早" 突出を爪め，その皮除々に回仁L 畑嚢* 完十Ll ゑ @@なされ，順調に河川―フ J第 2FM 済されだ。に放垂了みな，椎承にも若干共'M 煎がんめられ :乃 :弊タ L爪は殆んど無く洲東肛堂は吸収ざ刃 L ，，拮 lノ・

59

第口3．

病

魚の症

状

鮎惟魚の棚壷は―般に九味を帯び，徐@eに吸収されるもC@yであるがよ第l 図)に れらの喋死魚は第2 図の様に帖歴後部が異常に突出. ，しか十井端が白変していた。この症状を呈する
前にこの部分が水腫の様に膨降L，， 東いて消散すると同時に突出口変するものの様である。 この庄状の稚魚は死期の切迫に伴つて群団からfn@潮して池底に櫛伝し，時人急激に迎動を門始して去面迄浮上するが，その後は蓮血を停止し，自然に沖んで行く状態を繰返えし，その問 l H‑2

口を経過し遂に錐死するものの様に観察されだ。

――ごわ炎P。 """0，・。
P」"CA)

4．

細菌学的観察分

離力"

第 2 図 異常 鮭 稚魚法

前述のな n ぎ 症状を呈し，穴 ，括逗助を続行している稚魚を掬い揚げ， 70% アルコール中に漬げて休表・山を消 恵し洗い落す。白金線を似つて
併 垂突出部より突き刺して腿裳中火部の太い
血東い‑‑滅菌水中に人れてアルコールを昔涌基八平板培養を経管を破り，附苗した少旦の血液及び拠裳粗織液を昔正寒天斜何に塗抹堵養し，その後更に‑G 市屯粋 分離を行い4 抹 D 細菌を得だ，なお培養の際この他2‑3抹の 紳菌を認めたが，これ等は常には認力 られ如 き討験を安施した。
ず試験の結果により雑菌として処理し， 4 株について後述の分離L だ舌菌株G 形態は石炭酸フ クシン父はグラ・ム 民法による塗抹染色標本若しくはそのまま生理食埠水を以て懸浦標本を作成し蛆微碗を用いて観察しだ。
， 更にこの両者
その結束は第l 表に示しだ様に菌株 l と 4 ， 及び2 と 3 は夫人近似睡か支は同―種と推定ざれ
4 株は相互に―致点を得るものの様に観察されだ。

第l表人きさ(― )CO)
出培 養 所

比山上培地 好哀性37"C!:@おける発育分離子向株分半市?@ 工」 4枚培地上に桟WL， 好女性，37C 。 ， 24TO観牢 」，。 ぞの紅呆は恥2 去の&@ くでもる。

60

培養 L， ， その去而に発育した某芯ノ， P 状を

山野―彦 ・尾崎
岩志一七八
臭 有 クワ上上上i2)

緑伏

第2表

m @本培地 37 。 C におげる発育
皮・液体培地としてBOuillon を選び，これに各菌株を移殖し， 37 。 C ， 2AW 問培養した，ぞの結果は第3 表に示す

Numberノ第3表

菌C ―フC― )(― )(― DC++)て―フ片涌尽大平板培地に於,,‑ れら田桝ば室温 C15"C)
CD)

，卿卯器

「何れも□好な充芭を示l37 。 CD

小牧羊 的 性状分鰍各菌株の生物半的性状とし‑r 理刷性，牛乳に及ぼす影老，インドー;i@及ぴ硫化水素産生性，
葡荷桝， 乳噛ぺプ卜ン， 0 ． 5% ハイポ， 0 5・

なお運酎性，インドール及び硫化水素の産生性杖止培地L ． 肉 '‑ を基礎仁 して 3%% 基入及び0 5% 杓磁液鉄アン干ンを添加しだ。午乳坪地は脱肝乳二指示薬としてB T B を力 nク・，定培地ほ人プトン水に当該
梢煩を 1 % に加え，これに指示薬としてB T B を添加し，舌培地何れも所定の波荷・・・一一・・・‑Milk"""‑Nu―ぶL;f@"""
1@M。T""
LMOtmty",,,.,..
l1ndor1
T ,..TlB
l T B

・

第4 表

HzS ￨Glucose
LaccoseSucrosei摘
廿

―乙卍&L

ttt/@―(ED病原要W 仝 @ y: 黄色WへK : 緑色

tttzA: 菌膜性

川上の舌 性状より4 抹り分離菌株は互 L 同‑ 或いは極めて近似のものと老*‑ られるので， その代女と． して菌株2 を用いてH 炊をした。川 L， 斜imぉ卜養ボ験背低．川を飼
亡 L る方法寸抹WLit)

l本心培養向体か沿水に混入L ，更に午ぽ度に桁卍し，この水中L;，． "%， l 川接梗;棚丈・・拍 l 回接棟試験は300C C杏フラスコ仁咽什川泊水200c c を人れ，これに接唾曲液を似濁良几鮫法によるl0低怖
61

賊化場 試験 報佑

第H 号 0 956)

釈法を用いて第5 表の様な各濃度の菌液を作製浬不 nし ，その申で惟焦をl0 円間飼育観察しだ，なお水中の酸素補給には流水ポンプを使用し，溶存酸素は常に飽和黄になる様羽酊 した， 父接踵試験夫施中のフフ スコ内の水温は11 。 C‑13。 C ，であつた。

その成績は第5 表に示す如 くである。
第5表――Ca)

150,000,000/cci 10MCc)

1,500,000/cC@ I0'/尾l即も Ca)

区は 0l50,000,000/co)

試験開始後? 口日に5 尾， 8 日日に5 尾と弊死し，Cb)1 ピ ， Cc)

区と．濃変の高い順序で弊死した。 しかし対照
IXt@Ul0日目に至る七弊死は認められなかったがH 円日に至り突然全部弊 死しだ。対照区の姥死には実験上の失敗の疑いがあつたので更に尖験を反復した。

(2) 第 2 回接種試験
第 2 回接種試験は
弟 l 回口の試験方法を踏姥 した，叩 :容呈500c.cのフフスコを使用し ，これに300c c・の 午儂庄・の菌液を入れ，24 時問だけその濃度の水中に飼育しその後 満水と取換えて飼育した。その結果は第6 表の如くである。

げ第6表， @ l2l34 l5@6l78 9 llo@尾鼠区分濃Ca)

15,000,000/Cc

10JSCb)1,000,000/CC

IO @i

l50 m 0 /l0J

D「度Cd)

15,000/CC

10//Ce)CfC

l， 500 CCloVノ媒

'牛 存

口口

口日日目

口日

口円日目日目口口日目口口

@ 2尾

4げ

対照

6尾

川ち 2 口 日に各区共姥死し特に菌液濃度の高い順に弊死数が多いが，第 t 回試験の様に全部が弊死した訳‑G は、なかつた。その煉W は24 時間後フブ スコ内の飼台菌液を清水と交換したので菌の息休内浪人の数旦と頻度に差坦のあることに基くものと思われる。なお生存椎魚は肢外こそしていた； ;姥死せず，その後t0 口問の継続観察中も生存した。
以上の接種試験の結果から見ると菌株 2 は病原性を保有するものと推察される。
なお本試験供試魚体は試験夫施の時期的関係から， 恢捷吸収後40‑50日を経過しだ成長稚魚を止むを得ず使用したので，この菌に対する感受性にも或いは左異を来しているのかも知れない。又この試険の姥死魚は自然における集団蝶死の際の症状である 踏漢後部の突出は認められなかつた。

(3) 接碩稚魚の臓器内における接種菌の証明
接鹿1， だ稚魚が』叶4w 状態二 陥り 臥伎乃且込のないものL 推察ざれL 場合，又は蝉L しだ場合商@,MF拐げ，外去画をア >L@コールで減伺し， 魚休を祈刮 @， て ，心臓，肝臓を摘出し，肖臓はその―叩分を抹取して，昔涌客人
平板面に塗抹L ， 37"C ， 94 叫山培i@L ， 柁呆を鈍倹魍祭に刊すと人に。
舌臓ボの准卜伊木を什坦 して面接
庇険 Lた，62

弟 H づ CD56

西野―彦 ・尼崎
岩志

二培養の結束姥死惟魚臓器よりの菌の検出は第7 表のiiHく， 概して蘭の 接踵
号の多い程多く 認められた。
第7表
ぐ・三三二 :‑‑‑‑‑

個体奄号++++++' ++++150,000/CC

2 @

6 "

15,000/Cc 213l， 500/cc 2 日

6 "対照

6 7託

55 口+1+ク―+ は接種菌が認められた臓器，L は肝臓，H は心臓，K は腎臓。

午臓器を面接塗抹してギムザ染色して鏡検に付した場合，接枝菌の培養某上におげる如ぎ菌休は認められず，これより掻かに小さいりヘ 型の球状小粒子が無数に認められた。
本粒子は特に腎臓に多い。これは挺踵菌が生体内に 於いて変異を起したと称して良いかどうかは不明でもるが，培養後には典型的な自休が心 粋に多数訂刈ざれる市

卒から，木菌には培養型の外にかくの如き感染型が存在する七のかも知れない。

CF1

抵抗性出 熱に刈する抵抗性，@) て下@W の怯に耐芯弍険を工施し菌株 l及ぴ2 は右芽胞碕 G ，この芽胞占 ;相当抵抗性の他いものと推察され・小試験管にブイ ョンを分げ l． ，こC 卜に菌 液を l滴つつH‑JtlL 碩 人な ‑@1‑1UlU
度にオ ，叩 1./‑ 汀水はに
「選定 L‑/ ， 叫 itli
紅L，これを取拐け37 。 C に培養して全列」
を徒空し十 ， ，その結斗、 l00@CL・熱湖i@ に 60 士 'ar仕漬 L．で七 托滅を見 ヂ 抵抗性丁極めて強、事を知った。
木苗抹は熱に対する抵抗性ヵ ;強く各極消毒薬に刺して亡抵抗性方 ;強いものと‑考えられ，めで，先ずホルマりン
紡 察し，に 対する抵抗性を吹いで 6 悼如Vf@ 十物質に刈する患受忙、を討験 L，だ。
特にホノし ，マリンを退七だul は以Mg 府ィ h卒業C 作業行程にホルマリン消恵を収人れた事があるから・ c あ る。
菌株 I 及び2 の培養後 2 口を経過し芽胞を形山したものを性用し，これを毛ゆ叱度のホルマりン液に掻偶液として―定時間経過後に斜而培査基に接種培養して発育の有無を検してホルマリンに対する抵抗性を試験した。そ第 8表

卜卜 二‑ 時間

5 時間

5． nワ・++
七ト63

第口ち Q 956―
晒化場 ‑‑試験 報占aD

抗性物質に対する左凝乏性

始め簡単な試験によってぞの妓果を校するため PeniCMnne ，コ

Sulphath@azol， chl0ramphenicol， StreptomyCln， OXytetraCyclineの 6 種領に互る感応錠 CSenSMvity， CM0r[etracyCH‑

TabletS ，デンマーク， 口ス ギルド社

製) を使用しだが本菌ばこれら各抗生物質に対する感哩性が極めて高い。これらの中PenicMnlnycin が比較的安価で事業的に心皮用司首的、 と思われだのてこの両者・二ついてStreptomyCin

PeniCiMn

はに比べて殺カが低かつたのでここではDeM

及ぴ S[rep[0‑抵抗性を試験した。

。 mlnについてだけ記載する。又50unit/c ． C．以上の舌濃度のものは24 時間後何れも―でもつたので省略する。
第9表

マト町
L 生物質名C士 )i

C士 )

C+)

C+)

なお PenJclllin が鮭稚魚に及ぼす影盟については

C士 )

C― )

C― )

C― )

既に通当な鮭碓魚が無かつだa@ で 虹鱒稚魚を代用
供(― )

C‑D

C― )

二一 D

試した処，

・

50unit/c・・・すべきと思考する，

5uuit/c cc・の

PcniCillin 水溶液中で5口問同等変しを認めることなく生存した，
イ

5．

要l955 年， l956 年の2 ケ 年に亘り。 北河道さけ ・ま ‑L 三 、イヒ場 ， 十w@ 支場管 卜幕 別事業蜴養魚池に放養中の鮎稚魚が原因不明のを午大母集団
弊死しだ。
この姥死尾数はl955 年には全放養尾数の約40%,1956 年には約l5% に及んだ。

これ等の弊死惟魚は殆んど榊堂後部が異琳突出し，しかもこの叩分がnGしていだ，かかる
弊死直前乃鮭碓爪

l0 尾より 4 菌株を分離し形態，培養所見，生物学的性状等を検索しだZ' 菌睡の同定については末だ該当する報告に 接していな。。 然して4 菌株中の代表的l 菌株についてのみ
姥稚魚接恥試験を行い，同様4 抹中の2 抹を選択

糖 (+)

グフム染色 C ― コ ，インドール
C‑D， 乳糖 C― ) ， 蕪糖 C+J

CLnXo 5‑0・・，芽胞C+)・接睡試験及び抵抗性の検索を行つだ代芸的俵株の形態は大桿菌，大きさ3 5‑4山・して 熱並びに薬品に刈 する抵抗性を測定しだ。チの結果を要約すれば女の如 くである。
bハ ，四七洋刮

，硫化水素( ― )，牛乳を凝固，酸産生 C‑D ，糖分解性は葡萄， で方 ，る 。

(2@ 接顧試厄険 @よ l5,000,000/c ． C・― l 500/c c 迄の l0 段稀釈菌液申にて鮭唯魚を飼育した
処惟度刀高L 吋 のより・・

順玄弊死し．

・

これらの鮭稚魚L 腿器からは接睡菌が認められた。

[3) 本商抹ほ有芽胞菌であつて l00 。 Cl 叶問の加熱に対しても死滅せ‑グ ，ホルマリンl0% 溶液をもつてしても殺菌には255時門を要するが Pemcilhnに対 L．ては感受性が極めて高くlounit/。．。． 24 時間で容易に
不[/占イ L される。

(4) @a 上の成績より本菌株には札当の病原性を認めるが， 幕別養魚池におげる
稚爪某団弊死の原因か否かについては末だ断定する事は出来ない，

丈谷川 英 ―

献: 水産細菌学 l949

藤田経 "信 : 魚宿学l937

宮路 重嗣 : 微生物学 l949
伝染病研究肝学友会 : 細菌宇夫習提要

浦元 済透

近膝」

E‑

l955

: 御牛仙? 及び悩物病理羊尖防法 け42: 衣帝机菌及び免疫学 D45

I1. S. Davis:

CareandDiseases Of trout

64

1946

FishandWildlifeService