構造生物化学研究室
Structural Biochemistry Laboratory
主任研究員

前 田 雄 一 郎
MAÉDA, Yuichiro

細胞において，アクチンフィラメントは様々な重要な機能を担う。我々はアクチンフィラメン
トは極めて動的でその構造は多くの準安定な構造の間を揺らいでいる，そして特定の準安定状態
が特定のメカニズムに関与していると考えている。我々はアクチンフィラメントの “静的” な原子構造を解明しながら，その言葉で “動態” を捉え，さらに動態と機能の関係を解明するという，
現代生物学の中心問題の 1 つに迫る。
本年度は筋収縮のカルシウム調節の中心を担うトロポニンの結晶構造を解明して発表した。今後の研究では，第一に，より大きな複合体，特にアクチンフィラメント全体の結晶構造を解明すること，第二に，アクチンフィラメント上での蛋白質の動き（構造変化）を捉えることである。
また当研究室には藤澤哲郎先任研究員らのグループが所属し，SPring-8 の蛋白質小角散乱ビー
ムライン（BL45-XU）の運用とそれを使っての研究を担当している。このビームラインは，高輝度であると同時に単色性がよくかつ寄生散乱が最小に抑えられているため，高速混合型フローセルと併用することにより，精度のよい散乱強度分布をサブミリ秒の時間分解能で測定できる
SPring-8 の唯一のビームラインである。本年度は，アポミオグロビンの折れ畳み過程の中間体を捉える研究で進展があった。
1. 筋（骨格筋・心筋）のカルシウム調節のメカニズムの研究（1）トロポニン・トロポミオシン複合体の構造解析（山下；前田（佳）＊1 （細胞情報伝達研究室））
骨格筋および心筋の収縮調節は筋肉の細いフィラメント
（アクチン・トロポニン（Tn）
・トロポミオシン（Tm）複合体）に担われている。本年度はトロポニンの機能部分の構造解析を終了し，論文として発表した。収縮調節機構をさらに詳しく知るためには Tn/Tm 複合体の結晶構造が必要である。すでに Tn と（Tn 結合領域を含む）短い Tm 断
片との共結晶化が得られているが，解析に進むためには一層の結晶の改良が必要であろう（国立循環器病センター 武
田壮一博士との共同研究）。
（2）筋肉の細いフィラメント複合体の構造：電子顕微鏡
像の単粒子解析法（成田 ＊2 ）筋収縮のカルシウム調節のメカニズムとしてトロポミオ
シンの立体阻害説が提唱されている。これは，トロポミオシ
ンがアクチン上で動き，それによってアクチン上のミオシン結合部が覆われるとの説である。しかしトロポミオシンの位置移動の証拠はない。この問題に決着を付けるために，
我々はヘリックス対称性を前提としないで，アクチンフィ
ラメント複合体の電子顕微鏡写真を解析する方法を開発してきた。本研究ではこれを用いてフィラメント複合体の構造を，カルシウム結合型と非結合型の双方について，20 Å
前後の分解能で解明することを目標としている。本年度は解析ストラテジーを改良しながら画像の収集を進めた。
（3）筋肉の細いフィラメント複合体の構造：フィラメン
ト配向ゾルの X 線繊維回折法（小田）ウシ心筋から分離精製した天然アクチンフィラメント（トロポミオシン・トロポニンを含む）複合体をガラス細管中874に配向させたゾルから X 線繊維回折強度を得た。それから
アクチン重合体の配向ゾルからの強度を差し引いた差強度
分布を高低カルシウム濃度について得て，それぞれの円筒
パターソン関数を得た。低カルシウム濃度ではトロポミオ
シンの位置は揺らいでいるらしく明瞭ではないが，高カル
シウム濃度で明瞭になる。カルシウム結合によりトロポニ
ンは位置を変えフィラメント軸により近くなる。従来，筋から得られた回折強度の変化はトロポミオシンの位置の変化を示すと解釈されてきたが，今回の結果は従来の解釈の変更を迫るものである。
（4）トロポミオシンの結晶化（前田（佳）＊1 ，
Meshcheryakov＊1 ）トロポミオシン (Tm) の機能を理解するには分子の柔軟性を原子構造から理解する必要がある。原子座標解明に適した結晶を得るために，一方では高等生物の Tm より短い
酵母の Tm の結晶化を試みている。他方，Tm の立体構造を認識する抗体を得て，この抗体の Fv 断片と Tm の共結晶を得ることを目標としている。強い抗原性を示すロブス
ター Tm を材料に選び，これまで立体特異的なモノクロー
ナル抗体を発現しているハイブリドーマ細胞を 7 つ得た。
本年度はそのうち 1 つの抗体分子の Fv 断片を大腸菌で発現する系を確立した（マックスプランク生物物理学研究所
Dr. Carola Hunte と Prof. Hartmut Michel からの技術支援を受けている）。
（5）トロポニン C の構造変化（松本 ＊1 ，前田（佳）＊1 ）アクチンフィラメント複合体中でのトロポニン C (TnC)の構造変化を知るために，TnC の選択的重水素化とコント
ラスト変調法を組み合わせた中性子散乱法を適用し TnC の構造情報を抽出した。TnC は互いによく似た球状ドメイン
が中央の一本のヘリックスで連結されている。本研究によ平成 15 年度

と構造の解明（1）CapZ のアクチンフィラメント・キャッピングのメカ
ニズム（山下，成田 ＊2 ）細胞内でのアクチン重合体は絶えず形成と崩壊を繰り返す動的な構造である。CapZ はその “アクチン・ダイナミッ
クス” の中で最重要な蛋白質の 1 つである。我々は 2003 年に CapZ 全分子（α-, β-ヘテロダイマー）の結晶構造を解明し，それぞれのサブユニットの C 端部分 20〜30 残基が分子から “触角” のように突出しこの部分がアクチン重合
体 B 端に結合するとの “触角” 説を提案した。本年度は多数の変異蛋白質を調製しこの “触角” 説が正しいことを証明すると同時に，1 対の “触角” が同等ではないとの新たな知見を得た（米国 ワシントン大学 J. Cooper 研との共同研究）。また電子顕微鏡像の単粒子解析法を新たに発展させ，
アクチン重合体の B 端に CapZ が結合した複合体の構造解
析を進めている。新規の解析ストラテジーを確立し，画像の収集を続けている。
（2）Actin-related protein 1 (Arp1) ミニフィラメントの構造解析（今井 ＊1 ，成田 ＊2 ）2. アクチンフィラメントの原子モデルの構築と動態のアクチンファミリーの中で骨格筋のアクチンと最も相同解明性が高い actin-related protein 1 (Arp1) は，生体内で長さ（1）アクチン重合体の最良の原子モデルの確立（小田）の揃ったミニフィラメントを形成し，ダイナクチン複合体
アクチン重合体が担う種々の機能を理解するには重合体 （11 種類の蛋白質から成る分子量約 1MDa）の中核を形成すの原子構造が必須である。我々はまずアクチンフィラメン
る。ミニフィラメント構築原理の解明と細胞内輸送の調節
トをガラス細管中に高濃度・高配向度に配向させたゾルの装置としての機能を解明するために，電子顕微鏡像単粒子系を独自に確立した。次にそのゾルからの X 線繊維回折強解析法を用いて，ダイナクチン複合体の構造解析を行って度と氷包埋した重合体の電顕写真からの位相を総合して， いる。本年度は，精製試料の均一性の定量的評価をめざし，
アクチン重合体の原子モデルを確立した。本年度は，基準
6 通りのダイナクチン複合体精製方法を比較検討した。ま
モード解析法などを用いて精密化を実行し，現在の技術でた均一性の面からニワトリ胚からの精製も検討した（米国
到達可能な最良の原子モデルを確立した（ドイツ・ハイデ
ジョンズ・ホプキンズ大学 T. A. Schroer 研との共同研究）。
ルベルグ マックスプランク医科学研究所 Dr. R. Schröder（3）アクチンの単量体と重合体の性質の違い（似内）らとの共同研究）。この原子モデルは，アクチン・フィラ
アクチン結合蛋白質の多くはアクチン単量体には結合しメント軸に直角方向のサブユニット間結合は弱く，それはないが，アクチン重合体には強固に結合する。そもそも，数2 つのサブユニット間のヘリックス・ヘリックス相互作用個の単量体からなる短い重合体において，重合体としてのによることを示す。配向ゾルの X 線回折法を用いてアクチ
性質は徐々に現れるのか，特定の長さで突然変化するのか，
ン重合体安定化分子（ファロイジン，ドラスタチン 11）のまたその長さと重合の核との関係はどのようなものか，いアクチン重合体への結合位置を決定したところ，それら安ずれもまだ解明されていない。現在，蛍光交差分光法等で定化分子はヘリックス・ヘリックス相互作用を補強するこ
アクチンの数をモニターしながら，これとアクチン結合蛋とで重合体を安定化すると理解された（米国アリゾナ大学
白質との相互作用の検出を試みている。
Bates 研との共同研究）。
（2）昆虫細胞を用いた高効率アクチン発現系の構築（岩4. 新しい方法の開発，その他
佐 ＊1 ，前田（佳）＊1 ）（1）全反射蛍光単分子方位計測顕微法の開発（山本，Popp＊1 ；岡本（ナノフォトニクス研究室））
アクチンフィラメントの構造変化と機能発現の関係を深く理解するためには，アクチンを組換え蛋白質として大量昨年度構築した全反射蛍光顕微鏡 (TIRFM) を使った一に得ることが不可欠である。本研究は，世界のどこでも成功
分子イメージングシステムの励起光源の 2 波長化を行い，していない，高等生物のアクチンを構造生物学研究に十分
複数の分子の方位を測定できるように改良した。また，四な量を発現することを目標にしている。昨年度までの研究
次元光学顕微鏡の立ち上げおよび，それに実装する一分子で，独自に開発したベクターを使用して昆虫細胞（Sf9）でイメージングシステムについて技術的検討を行った。
の組換えアクチン発現量を飛躍的に増加できることを示し（2）アクチンフィラメント上の蛋白質分子の方位決定法
た。本年度は C 端にタグを付けての発現を試みたが，N 端の開発（山本，Popp＊1 ，成田）側の修飾の異常によるのかタグ自体の影響によるのか，発アクチンフィラメント上にあるトロポニンはカルシウム
現アクチンは重合能が不全であった。それゆえ N 端にタグを受容しそのシグナルはアクチンフィラメント全体を “活を付して発現後切除する系を試みている。
性化” し，筋収縮を開始する。我々の結晶構造解析の結果
は，トロポニンはヘリックスに富む蛋白質であり，その多く
3. 短く長さの揃ったアクチンフィラメントの構築原理
はカルシウム結合により方向を大きく変化すると示唆する。
り，低カルシウム濃度ですでに伸展している TnC の中央ヘ
リックスはカルシウム結合によってさらに伸展するとの結果が得られた。この TnC の伸展はアクチンフィラメント
複合体中の他分子との相互作用による他律的変化であろう。
また同様の方法をアクチンフィラメント複合体中のトロポ
ニン I（TnI）に適用する実験を開始し，重水素化率 98.2%の TnI を調製し，それを交換導入してカルシウム調節能を94% 保持する複合体を調製することができた（日本原子力研究所先端基礎研究センター 藤原悟氏との共同研究）。
（6）単量体アクチンとトロポニンの複合体の創生（似内）アクチンとトロポニンの相互作用を原子レベルで理解するために，両者の複合体結晶の調製を目指している。複合体結晶を得るためには，まずアクチンの無秩序な重合を防ぎ，アクチンを単量体の状態に保つ必要がある。そのため
DNase I やゲルソリンセグメント 1 など重合阻害蛋白質を使用したが，これら蛋白質が結合するとトロポニンがアクチンに結合しないことが判明した。今後は，低分子性のア
クチン重合阻害剤を試みる。

理研研究年報875

ヘリックスの方向変化を直接観測するため蛍光単分子方位
計測顕微法を開発している。本年度は 4 つの問題の解決にあたった。（i）蛍光双極子の方位決定の信頼性を増すために光学系に検光子を挿入する改良法を考案した。（ii）1 分子像から精度よく方位を決定するため，電子顕微鏡像単粒子解析の手法を応用したパターンマッチングのソフトウエ
アを開発した。
（iii）機能を損なわない範囲でフィラメント
の熱揺動を最小に抑える方法を検討した。
（iv）トロポニンの機能への影響を最小とする蛍光標識分子を合成した（京都大学 山本行男研との共同研究）。
（3）平滑筋ミオシンの構造変化（弟子丸 ＊1 ）平滑筋（血管・消化器官など）の調節はミオシン制御軽鎖のリン酸化による。リン酸化によってミオシン分子が折り畳まれたコンパクトな形態から伸長した形態へ遷移し，ア
クチン・ミオシンの ATP 加水分解が活性化する。この形態
変化と活性化の関係を知るために，本年度はまずミオシン
分子の双頭を含む断片 HMM の形態の変化を中性子散乱法
で測定し，その慣性半径はリン酸化で増加し，また ATP で減少することを解明した。また，中性子溶液散乱法を使ってミオシン分子中での制御軽鎖の形態を知るために，本年度は重水素化した制御軽鎖を交換導入する条件を最適化した（日本原子力研究所先端基礎研究センター 藤原悟氏，創価大学 丸田晋策氏，大阪大学大学院基礎工学研究科 若林克三
氏，大阪大学大学院理学研究科 荒田敏昭氏との共同研究）。
（4）ホタテ貝ミオシンのアクチンフィラメントとの相互作用（Popp＊1 , 成田）
哺乳類骨格筋はアクチンフィラメントによって調節されるが，ホタテ貝ミオシンはミオシン自体へのカルシウム結合によっても調節される。両者で収縮メカニズムは共通と考えられるので，両者を比較することによって一見異なる調節機構に共通な側面が解明されると期待される。昨年度
はホタテ貝から純度の高いミオシン S1 断片を得たが，本年度は迅速凍結・負染色試料のクライオ電子顕微鏡法を使ってこの S1 とアクチンフィラメントの複合体の構造解析を実行した。この研究の過程でアクチン-S1 複合体の太さの試料では凍結時の水の層の厚さが緊要であることが判明しそれを実現する方法を検討した（ドイツ・ハイデルベルグ
マックスプランク医科学研究所 Dr. R. Schröder との共同
研究）。
5. 大型放射光施設を利用しての生体高分子溶液および筋肉中での蛋白質の構造研究（1）理研ビームラインⅠ（BL45-XU）の高度化（藤澤，飯塚 ＊3 ，秋山 ＊2 ）理研構造生物学ビームライン BL45XU は 1997 年の建設より 6 年以上の歳月が経ち，老朽化による不具合が顕著になっている。そのため，ビームラインの改造を念頭に入れた作業を技術開発室と共同で行った。本年度はビームライン
改造に関する調査，概念設計を行う一方，BL45XU-SAXSと BL45XU-PX の分光器，光学系のソフトを統一化する作業を行った。これにより，JASRI 共用ビームラインとの整合性が増し，効率的なメンテナンスが期待される。また，現状でもユーザーの要望を実現できるよう，中広角取得のた
めの 15 cm と 30 cm の小角カメラを作製した。
（2）高圧下での蛋白質相互作用研究システムの構築と筋876

蛋白質への応用（桑本 ＊1 ，秋山 ＊2 ，藤澤）
昨年度観測された骨格筋 HMM の圧力応答の絶対転移圧
力を求めるため，X 線小角散乱用高圧ジャンプ装置の絶対圧力校正を新規製作の低容量圧力計を用いて求め，圧力計なしの状態での圧力校正方法を確立した。
（3）X 線回折強度とミオシン頭部結合数の関係（田村 ＊1 ，
若山 ＊1 ，岩本 ＊4 ，藤澤）
X 線回折強度とその構成蛋白質の個数の関係を知ることは非常に重要なことである。過伸張された骨格筋に外部から様々な濃度のミオシン頭部 S1 を加え，X 線回折強度を測定して細いフィラメントに結合する S1 量を推定した。その結果，理論上結合数の 2 乗と比例関係にあるべき回折強度が S1 低濃度では系統的に小さくなった。モデル計算の結果，これは S1 の細いフィラメントに対する協同的な結合を示唆する（高輝度光科学研究センター 八木直人氏との共同
研究）。
（4）X 線小角散乱法による CooA の転写調節メカニズムの解明（秋山 ＊2 ，藤澤）
Rhodospirillum rubrum において CO の酸化反応を担う酵素群の発現量は，CO 結合ヘム蛋白質である CooA によって制御されている。近年米国のグループにより CooA の CO
非結合型（-CO 型）の結晶構造が解明されたが，CO 結合型（+CO 型）の結晶構造は知られていない。そこで我々は，
CO 存在下・非存在下における CooA の X 線小角散乱曲線を測定し，溶液構造の変化から転写調節メカニズムを明らかにすることを試みた。CO の存在に関わらず，観測された散乱曲線は既知の結晶構造から全く説明できなかった。そこで，実験から得られた散乱曲線に合致する低分解能電子密度像を計算し，さらに rigid body refinement を行った。
得られたモデル構造は，これまでに提唱されてきた仮説と一線を画するものであり，-CO 型の段階で既に DNA 結合ドメインがヘムドメインの近傍に位置していることが明らかとなった。CO の結合に伴い，DNA 結合ドメインは分子の回転対称軸に沿っておよそ 8 度回転しつつ，僅かにヘムドメインから離れることが示唆された（京都大学大学院工学研究科 石森研との共同研究）。
（5）X 線小角散乱によるヒスチジンキナーゼの低分解能構造解析（秋山 ＊2 ；山田（生体物理化学研究室））
ヒスチジンキナーゼは，結合した ATP の γ リン酸基を自身のヒスチジン残基に転移させ，さらにレギュレーター
蛋白質へと転移させる。ヒスチジンキナーゼを構成するサブドメインの単体構造は，NMR や結晶構造解析によって研究されてきた。近年，それら単体構造とジスルフィド・
マッピングの結果を基にしたヒスチジンキナーゼの全体構造モデルが報告された。我々は，提唱されている全体構造モデルの妥当性を検証するに止まらず，リン酸転移を起こす際に形成される「ヒスチジンキナーゼとレギュレーター
蛋白質の複合体」についても研究することを目的とし，X線小角散乱測定するための予備実験を行った。
（6）時分割溶液散乱によるアポミオグロビンの折れ畳み過程の研究（鵜沢 ＊5 ，木村 ＊5 ，高橋 ＊4 ，秋山 ＊2 ，藤澤）
我々は，高速混合型フローセルと X 線小角散乱法を用いることで，アポミオグロビンの折れ畳み運動をサブミリ秒領域で追跡している。折れ畳み運動開始後 300 マイクロ秒

平成 15 年度

以内に大規模な主鎖の収縮が起きた後，2 次構造と 3 次構
造が段階的に形成することが判明した。この結果から，折り畳みの初期に疎水性残基が集合した収縮ドメインが形成し，主鎖の立体自由度を大幅に制約する疎水性環境を作り出すことで，2 次構造と 3 次構造の形成が誘起されるという折れ畳み運動を提案した。
（7）生分解性プラスチックフィルムの結晶核形成および結晶相転移機構の初期過程の構造学的研究（藤澤；岩田，青柳，藤田（高分子化学研究室））
生分解性プラスチック，ポリ [(R)-3-ヒドロキシブチレー
ト] の引張り過程とらせん構造の変化を知るため，BL45XUSAXS にて張力と X 線回折の同時時分割測定を行った。降伏点までは，2 回らせん構造から構成される α 結晶に由来
する回折点の回折強度，面間隔値，長周期に変化はなかった。降伏点を超えると，α 結晶に由来する回折点の回折強度は減少し，(110), (020) などの面間隔値も減少した。それに対し，(012) の面間隔は増大し，平面ジグザグ構造の発現を示唆する新たな回折点が赤道線上に現れた。小角領域でも赤道線上の変化は確認された。
＊1

協力研究員,＊2 基礎科学特別研究員,＊3 テクニカルスタッフ, ＊4 共同研究員,＊5 研修生

In living cells, the actin filament plays a wide spectrumof important roles through realizing various conformations.
Populations of molecules at particular conformations may
be increased or decreased by the interaction with a particular actin binding protein. In order to understand how theactin filament works, we will have to know the structure of
the multiple conformations together with the equilibriumand kinetic constants associated therewith. We aim at, on
one hand, elucidating the “static” atomic structures of theactin filament complexes and, on the other, understanding the dynamic properties of the complexes. In doing so,
we would like to establish the strategies for understanding
the mechanisms from the atomic structures, which is oneof the central questions the modern biology is addressing.
1. Mechanism of calcium regulation of muscle
contraction in skeletal and cardiac muscle
The crystal structure of troponin (the core domain),which plays the central roles in the calcium regulation ofmuscle contraction, has elucidated intra-molecular structural changes of troponin. X-ray fiber diﬀraction study oforiented actin filament complexes in glass capillaries indicated that the Ca2+ binding diminishes the positional fluctuation of the tropomyosin strands, bringing into a specificposition, and shifts the position of troponin closer to thefilament axis. The neutron scattering in combination withthe contrast variation method have elucidated that Ca2+ induced conformational changes of troponin C within theactin/Tm/Tn complex. At the low [Ca2+ ], troponin C,
that consists of two similar lobes being connected with asingle α-helix, is in a fully extended conformation, whereas
upon Ca2+ binding, troponin C is further extended passively probably due to the interactions with other components within the complex.
2. Atomic structure and dynamic properties of
the actin filament
We have completed our modeling for the atomic struc-

理研研究年報ture of polymerized actin (F-actin). First, well oriented Factin sols were prepared in glass capillaries. Combining the
X-ray diﬀraction intensities from the sols with the phase
information from the cryo-EM picture of a single F-actin,
we have obtained an electron density map of F-actin at 20
Å resolution. This year, by use of the normal mode analysis and others, we have refined the atomic model, resulting
in the best F-actin model. The model indicates that theinter-subunit interactions between the diagonally related
subunits are weaker, being contributed by the helix-helix
interaction between the two subunits. By use of the X-ray
fiber diﬀraction from oriented sols, the positions of F-actin
stabilizing agents, phalloidin and dolastatin-11, were determined on F-actin. The results indicated that F-actin isstabilized by the enforcement of the helix-helix interactions
by these agents.
3. Short actin filaments of a specific length; understanding the design principles and elucidationof the atomic structure
The above described atomic model of F-actin, though
it is the best at present, does not tell us details of the intermonomer interactions, which are of crucial importance toknow the functions. Therefore, the crystal structure of theactin filament is essential. In order to crystallize the actin
filament, mini-actin filaments of a specific length are to
be prepared. On one hand, we want to learn the designconcept from the naturally occurring mini-filaments, andon the other we want to assemble artificial mini-filamentsfrom capping proteins and tropomyosin as a ruler. In 2003,
we published the crystal structure of the actin filament Bend-capping protein CapZ (an α-, β- hetero-dimer). The
structure made us propose that C-terminal 20-30 residuesof each subunit may be protruded from the molecule, being responsible for actin binding. By mutagenesis experiments, we have proven that the “tentacle” hypothesis iscorrect. Moreover the results also indicated that a pair of“tentacles” are substantially diﬀerent.
4. Establishing new methods for studying motions of large protein complexes
In order to visualize conformational changes of troponinmolecules within the actin filament complex, we are developing a new optical microscopy method for determining
the direction of a single fluorophore attached to the protein.
5. Structural studies on protein solutions usingsynchrotron small-angle X-ray scattering
The sub-group within our lab, led by Dr. Tetsuro Fujisawa, is in charge of up-grading the SPring-8 beam line
BL45XU-SAXS (for the small angle diﬀraction) and interacting with outside users of the beam-line. The beam-line
has been designed for recording the entire intensity profile with high precision after a short period of time. In
combination with the high speed mixing flow cell that waspreviously developed in collaboration with the lab of Takahashi in Kyoto Univ., we have captured a folding intermediate of short life-time (200 µsec). As an in-house project,
we have been constructing an experimental apparatus formeasuring protein conformations under high hydrostaticpressure.

Research Subjects and Members of the Structural Biochemistry Laboratory877

1. Mechanism of calcium regulation and muscle contraction in skeletal and cardiac muscle
2. Atomic structure and dynamic properties of the actin
filament
3. Short actin filaments of a specific length; understanding the design principles and elucidation of the atomic
structure
4. Establishing new methods for studying motions oflarge protein complexes
5. Structural studies on protein solutions using synchrotron small-angle X-ray scattering

Head
Dr. Yuichiro MAÉDA

Members
Dr. Tetsuro FUJISAWA
Dr. Toshiro ODA
Dr. Atsuko YAMASHITA
Dr. Yasushi NITANAIMr. Akihiro YAMAMOTO
Dr. Akihiro NARITA＊1
Dr. Shuji AKIYAMA＊1
Dr. Hiroshi IMAI＊2
Dr. Michael W. LASSALLE＊2
Dr. David POPP＊2
Dr. Vladimir A. MESHCHERYAKOV＊2
Dr. Shungo DESHIMARU＊2
Dr. Junichi WAKAYAMA＊2
Mr. Mitsusada IWASA＊2
Mr. Shigeo KUWAMOTO＊2
Ms. Fumiko MATSUMOTO＊2
Mr. Takumi TAMURA＊2＊1＊2

Special Postdoctoral Researcher
Contract Researcher

Technical Staﬀ
Mr. Takashi IIZUKAAssistants
Mr. Syogo TAKEUCHI
Ms. Sachiko YUKI
Ms. Junko ITO
Ms. Junko NAKAMURA

in collaboration with
Dr. Takayuki OKAMOTO (Nanophotonics Lab.)Mr. Yoshihiro AOYAGI (Polymer Chemistry Lab.)
Dr. Masahiro FUJITA (Polymer Chemistry Lab.)
Dr. Tadahisa IWATA (Polymer Chemistry Lab.)
Dr. Seiji YAMADA(Biophysical Chemistry Lab.)
Dr. Kayo MAEDA (Cellular Signaling Lab.)

Visiting Members
878

Dr. Satoru FUJIWARA (JAERI)
Dr. Hiroyuki IWAMOTO (JASRI)
Dr. Soichi TAKEDA (Res. Inst., Natl. Cardiovasc.
Cen.)
Dr. Takayoshi MATSUBARA (Res. Inst., Natl. Cardiovasc. Cen.)
Ms. Shiho MINAKATA (Sch. Eng. Sci., Osaka Univ)
Dr. Satoshi TAKAHASHI (Sch. Technol., Kyoto Univ.)
Dr. Yojiro TAMURA (Suzuka Natl. Coll. Technol.)Dr. Jin-Ye WANG (Shanghai Inst. Org. Chem., Chi.
Acad. Sci., China)
Dr. Kazuo ONUMA (Natl. Inst. Adv. Ind. Sci. Technol.)Dr. Sugie FUJIME (JST)Trainees
Mr. Yoshikazu TAKAHASHI (Toray Res. Cen., Inc.)
Mr. Tetsunari KIMURA (Sch. Technol., Kyoto Univ.)
Mr. Takanori UZAWA (Sch. Technol., Kyoto Univ.)誌 上 発 表 Publications［雑誌］（原著論文） ＊印は査読制度がある論文
Fujisawa T., Kostyukova A., and Maéda Y.: “The shapes
and sizes of two domains of tropomodulin, the P-end
capping protein of actin-tropomyosin”, FEBS Lett. 498,
67—71 (2001). ＊Kimura C., Maeda K., Hai H., and Miki M.: “Ca2+ - andS1-induced movement of troponin T on mutant thin filaments reconstituted with functionally deficient mutant
tropomyosin”, J. Biochem. 132, 345—352 (2002). ＊Yamashita A., Endo M., Higashi T., Nakatsu T., Yamada
Y., Oda J., and Kato H.: “Capturing enzyme structure prior to reaction initiation: tropinone reductaseII-substrate complexes”, Biochemistry 42, 5566—5573(2003). ＊Wear M. A., Yamashita A., Kim K., Maéda Y.,
and Cooper J. A.: “How capping protein binds thebarbed end of the actin filament”, Curr. Biol. 13, 1531—
1537 (2003). ＊Fujisawa T., Nishikawa Y., Yamazaki H., and Inoko Y.:“Evaluation and improvements of the Rigaku imaging
plate reader(R-Axis IV++) for the use in synchrotron
X-ray solution scattering”, J. Appl. Cryst. 36, 535—539(2003). ＊Takahashi Y., Nishikawa Y., and Fujisawa T.: “Evaluation of three algorithms for ab initio determination of
three-dimensional shape from one-dimensional solution
scattering profiles”, J. Appl. Cryst. 36, 549—552 (2003).
＊
Tanaka M., Machida Y., Nishikawa Y., Akagi T.,
Hashikawa T., Fujisawa T., and Nukina N.: “Expansion of polyglutamine induces the formation of quasiaggregate in the early stage of protein fibrillization”, J.

平成 15 年度

Biol. Chem. 278, 34717—34724 (2003). ＊Oda T., Crane Z. D., Dicus C. W., Sufi B. A., and Bates
R. B.: “Dolastatin 11 connects two long-pitch strands inF-actin to stabilize microfilaments”, J. Mol. Biol. 328,
319—324 (2003). ＊Takeda S., Yamashita A., Maeda K., and Maéda Y.:“Structure of the core domain of human cardiac troponinin the Ca2+ -saturated form”, Nature 424, 35—41 (2003).
＊
郭志徹, 高増潔, 山本明弘, 和田智之, 洲之内啓, 加瀬究, 田代
英夫: “波長走査干渉計における信号処理”, 精密工学会誌
69, 831—835 (2003). ＊（総 説）
前田雄一郎, 山下敦子: “アクチン・ダイナミクスとアクチン・キャッピングタンパク質の結晶構造”, 遺伝子医学 7,
418—422 (2003).
前田雄一郎, 武田壮一, 森本幸生, 大槻磐男: “トロポニンの結晶構造とカルシウム調節のメカニズム”, 蛋白質 核酸
酵素 48, 1877—1889 (2003).
前田雄一郎: “アクチンフィラメント：複合体の構造解明か
ら動的性質の解明へ”, 日本結晶学会誌 45, 32—36 (2003).
口 頭 発 表 Oral Presentations（国際会議等）
Oda T., Heiko S., Makino K., Hasegawa K., Schroeder
R. R., Namba K., and Maéda Y.: “3D reconstructionof F-actin using amplitudes from x-ray fibre diﬀraction
and phase from cryoelection microscopy”, Gordon Research Conf. on Muscle: Contractile Proteins, New London, USA, June (2002).
Maéda Y.: “The actin filament-One motion mode: onefunction?”, Mini-Symp. with Ken Holmes, (Osaka University), Osaka, Mar. (2003).
Nukina N., Tanaka M., Machida Y., Nishikawa Y., Akagi
T., Hashikawa T., and Fujisawa T.: “Structural basis forpolyglutamine disease pathogenesis: therapeutic strategy”, Gordon Research Conf. on CAG Triplet Repeat
Disorders 2003, Barga, Italy, May (2003).
Kostyukova A., Krieger I., Fujisawa T., Tiktopulo E.,
Yamashita A., Maeda K., Nitanai Y., Greenfield N.,
Hitchcock-DeGregori S., and Maéda Y.: “Tropomodulin: from expression to atomic structure”, Int. Symp.
on Diﬀraction Structural Biology (ISDSB2003), (The
169th Committee of JSPS), Tsukuba, May (2003).
Maéda Y.: “Application for Biology”, Int. Workshop on
Laser Wire Monitors and Laser-Compton X-ray Generation, Kyoto, Nov. (2003).
Oiwa K., Nakamori R., Fujisawa T., Iwamoto H.,
and Sakakibara H.: “Conformational changes of chlamydomonas inner-arm dynein subspecies C coupled to ATPhydrolysis studied by tryptic digestion and SAXS analysis”, 43rd Ann. Meet. of American Soc. for Cell Biology,
San Francisco, USA, Dec. (2003).
Tamura T., Wakayama J., Yagi N., and Iwamoto H.:“Behavior of thin-filament-based X-ray reflections from

理研研究年報skeletal muscle fibers during force development”, 48th
Ann. Meet. of Biophysical Soc., Baltimore, USA, Feb.
(2004).
Wakayama J., Tamura T., Yagi N., and Iwamoto H.:“Mechanism of relaxation of slow skeletal muscle fibers
from rigor after caged ATP photolysis”, 48th Ann. Meet.
of Biophysical Soc., Baltimore, USA, Feb. (2004).
Iwamoto H., Wakayama J., Tamura T., and Yagi N.: “Xray cryomicrodiﬀraction of myofibrils”, 48th Ann. Meet.
of Biophysical Soc., Baltimore, USA, Feb. (2004).
（国内会議）
若山純一, 田村巧, 井上勝晶, 岡俊彦, 八木直人, 岩本裕之:“Caged ATP 光分解にともなう筋収縮蛋白構造変化の超高速時分割 X 線回折”, 第 40 回日本生物物理学会年会, 名
古屋, 11 月 (2002).
若山純一, 田村巧, 井上勝晶, 岡俊彦, 八木直人, 岩本裕之:“Caged ATP 光分解に伴う遅筋型収縮蛋白の構造変化の高速時分割 X 線回折”, 2003 年生体運動研究合同班会議,
福岡, 1 月 (2003).
前田雄一郎, 小田俊郎: “アクチンフィラメントに複数の状態は存在するか？”, 2003 年生体運動研究合同班会議, 福岡, 1 月 (2003).
瀧景子, 成田哲博, 前田雄一郎, Schroer T.: “ダイナクチン
複合体の構成蛋白質の配置”, 2003 年生体運動研究合同班
会議, 福岡, 1 月 (2003).
三木正雄, 海宏, 佐伯喜美子, 志鷹裕司, 佐野健一, 前田
雄一郎, 若林健之: “筋肉の細いフィラメント上でのトロ
ポミオシンの C 端側の構造変化について”, 2003 年生体運動研究合同班会議, 福岡, 1 月 (2003).
松本富美子, 牧野浩司, 前田佳代, 前田雄一郎, 藤原悟: “中性子散乱による細いフィラメント上のトロポニン C の構造研究”, 2003 年生体運動研究合同班会議, 福岡, 1 月(2003).
岩田忠久, 青柳佳宏, 藤田雅弘, 藤澤哲郎, 土肥義治: “大型放射光を用いたポリ [(R)-3-ヒドロキシブチレート] フィ
ルムにおける平面ジグザグ構造発現機構の解析”, 第 52回高分子学会年次大会, 名古屋, 5 月 (2003).
前田雄一郎: “生体中のフィラメント構造をどのように解明するか”, 理研シンポジウム「次世代の生命科学を拓くオングストローム X 線レーザー」, 和光, 6—7 月 (2003).
岩本裕之, 若山純一, 八木直人, 田村巧, 藤澤哲郎: “急速凍結した各種動物横紋筋の筋原線維からの X 線回折”, 日本
動物学会第 74 回大会, 函館, 9 月 (2003).
岩佐充貞, 佐野健一, 前田佳代, 前田雄一郎: “ヒト筋肉アクチン発現系の構築”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9 月 (2003).
田村巧, 若山純一, 井上勝晶, 岡俊彦, 八木直人, 岩本裕之:“骨格筋張力発生に伴う細いフィラメント由来 X 線反射の 2 次元高速時分割測定”, 第 46 回日本神経化学会
年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟,
9 月 (2003).
藤原悟, 米澤康滋, 弟子丸俊吾, 藤澤哲郎, 松本富美子: “X
線小角散乱及び CD 測定によるリゾチームアミロイドプ
ロトフィラメント形成過程の解析”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟,879

9 月 (2003).
鵜澤尊規, 木村哲就, 高橋聡, 石森浩一郎, 森島績, 秋山修志,
藤澤哲郎: “アポミオグロビンの折れ畳み過程における主鎖の収縮と三次構造の構築”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9 月(2003).
桑本滋生, 藤澤哲郎, 秋山修志, 前田雄一郎, 岡本洋: “骨格筋 HMM の溶液中での圧力応答”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9
月 (2003).
秋山修志, 藤澤哲郎, 前田雄一郎, 石森浩一郎, 森島績, 青野
重利: “X 線小角散乱法で CooA の転写調節メカニズムに迫る”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9 月 (2003).
松藤智洋, 神保雄次, 和泉義信, 能野秀典, 藤澤哲郎: “ストップドフロー小角散乱によるカルモジュリンの標的分子認
識機構解明，2”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回
日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9 月 (2003).
岩本裕之, 上田太郎, 片山栄作, 若山純一, 田村巧, 大岩和弘,
藤澤哲郎: “粘菌変異ミオシン G680V-S1 を灌流した骨格
筋線維の X 線回析”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9 月 (2003).
若山純一, 田村巧, 井上勝晶, 岡俊彦, 八木直人, 岩本裕之:“Caged ATP 光分解に伴う遅筋型筋収縮蛋白の構造変化の超高速時分割二次元 X 線回折”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9
月 (2003).
小田俊郎, 前田雄一郎: “F-actin の構造解析”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会,
新潟, 9 月 (2003).
木邑智恵子, 志鷹裕司, 前田佳代, 三木正雄: “カルシウム結合解離に伴う細いフィラメント上のトロポニン T の動きの速度”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9 月 (2003).
成田哲博, 牧野浩司, 山下敦子, 前田雄一郎: “フィラメント
結合タンパク質構造の一般解法を目指して”, 第 46 回日
本神経化学会年会・ 第 41 回日本生物物理学会年会合同880

年会, 新潟, 9 月 (2003).
松浦圭益, 木邑智恵子, 前田佳代, 三木正雄: “蛍光エネル
ギー移動法でみる TnC 分子内，及び Tn 複合体内部での構造変化”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9 月 (2003).
前田雄一郎, 武田壮一, 小田俊郎: “原子構造から見たアクチンフィラメントの柔らかさ”, 第 46 回日本神経化学会
年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9 月(2003).
松本富美子, 牧野浩司, 前田佳代, Patzelt H., 前田雄一郎,
藤原悟: “細いフィラメント上における収縮調節蛋白質の中性子溶液散乱による構造解析”, 第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会年会合同年会, 新潟, 9
月 (2003).
弟子丸俊吾, 丸田晋策, 松本富美子, 荒田敏昭, 若林克三,
藤原悟: “平滑筋ヘビーメロミオシンの中性子小角散乱”,第 46 回日本神経化学会年会・第 41 回日本生物物理学会
年会合同年会, 新潟, 9 月 (2003).
岩田忠久, 青柳佳宏, 藤田雅弘, 山根秀樹, 土肥義治, 藤澤
哲郎, 鈴木芳夫, 竹内晃久, 上杉健太郎: “ポリ ([R]-3-ヒド
ロキシブチレート) の高強度化，高次構造および生分解性”, 第 52 回高分子討論会, 山口, 9 月 (2003).
田村巧: “骨格筋張力発生に伴う細いフィラメント由来 X 線
反射の 2 次元高速時分割測定”, 理研シンポジウム「理研構造生物 IX シンポジウム Part1. 脂質メディエーター関
連タンパク質の生物学からその応用発展 Part2. 放射光
構造生物の進展とさらなる飛躍を目指して」, 播磨, 1 月(2004).
成田哲博, 牧野浩司, 山下敦子, 前田雄一郎: “フィラメント
結合タンパク質構造の一般解法を目指して”, 2004 年生体運動研究合同班会議, 東京, 1 月 (2004).
田村巧, 若山純一, 井上勝晶, 八木直人, 岩本裕之: “細いフィラメント活性化過程の 2 次元高速 X 線時分割解析”, 2004
年生体運動研究合同班会議, 東京, 1 月 (2004).
弟子丸俊吾, 丸田晋策, 松本富美子, 荒田敏昭, 若林克三,
藤原悟: “平滑筋ヘビーメロミオシンの中性子小角散乱”,2004 年生体運動研究合同班会議, 東京, 1 月 (2004).

平成 15 年度