多量体タンパク質構造解析研究チーム
Oligomeric Protein Crystallography Team
チームリーダー国 島

直 樹

KUNISHIMA, Naoki
当チームでは、多量体で機能するタンパク質に焦点を当て、タンパク 3000 プロジェクトの一環として結晶構造解析を用いた構造ゲノム的研究及び関連技術開発を行っている。多量体形成の生物学的役割の体系的理解を目指すため、我々は大規模な構造解析の結果得られる数多くの結晶構造を比較する手法をとっている。また、大規模構造解析を効率良く行うために、自動解析システム・構造評価システム・回折チェックロボット等の新技術を開発している。我々はこれらの研究及び技術開発を通じて構造ゲノム科学とその産業応用に貢献したいと考えている。

1．構造ゲノム科学的観点からのオリゴマー蛋白質の研究
オリゴマー状態で機能する蛋白質の結晶構造解析を行い、蛋白質機能とオリゴマー状態との相関関係を体系的に研究した。今年度当チームでは、高度好熱菌 Thermus
thermophilus HB8 お よ び 超 好 熱 古 細 菌 Pyrococcus
Horikosii OT3 由来蛋白質の網羅的構造解析を進め、73 件の PDB 登録を行った（担当者：国島、淺田、Bagautdinov、
Lokanath、水谷、清水、菅原、山本）。
(1) PaaI 蛋白質の非対称誘導適合反応機構（国島、淺田、菅原）
多くの蛋白質は外的刺激を受けてその立体構造に変化を起こし、その構造変化が各々の蛋白質に特有の機能を発揮させるための引き金になっている。蛋白質の構造変化と機能の因果関係を明らかにすることは病気などのメカニズム解明に必須なステップであるが、結晶構造解析などで観測される構造変化は多くの場合ごくわずかである。従って、これまでは幸運にして大きな構造変化が観測される場
合にしかメカニズム解明ができなかった。我々は、蛋白質の構造変化をとらえる「多重重ね合わせ法」を開発し、エ
イズウイルス（HIV）の感染に関わる蛋白質に良く似た蛋
白質「アシルコエンザイムＡチオエステラーゼ PaaI」の微
妙な構造変化を捉えることに成功した。新しいエイズ（AIDS）治療薬の開発につながると考えている（Kunishima
et al. (2005) J. Mol. Biol. 352, 212-228）。
(2) NADP 依 存 性 脱 水 素 酵 素 HIBADH の 結 晶 構 造（Lokanath）
バリンの中心的な代謝中間体である 3-ヒドロキシイソ
酪酸は、3-ヒドロキシイソ酪酸脱水素酵素（HIBADH）と呼ばれる特異的な脱水素酵素によりメチルマロン酸セミ
アルデヒドへと可逆的に酸化される。その酵素反応メカニ
ズムを原子レベルで明らかにするため、我々はThermus
thermophilus HB8 由来HIBADHの結晶構造を決定した。本結晶構造では、特徴的な４量体の会合様式や補因子NADP+の結合が見つかった。これは真核生物由来HIBADHがNADを補因子とするのと対照的であり、バクテリア酵素はNADPを補酵素として好むことが新たに確かめられた。また、４量体の隣り合ったサブユニットが活性部位を形作っていることから、観察されたオリゴマー構造は酵素機能に重要であると考えられる。さらに、本研究で得られた構造
的および生化学的証拠からHIBADHの活性残基がLys165

であることが確かめられた（Lokanath et al. (2005) J. Mol.
Biol. 352, 905-917）。
(3) ビオチンプロテインリガーゼの結晶構造（Bagautdinov）
ビオチン蛋白質リガーゼ（BPL）は、様々な生物において脂質生合成の最初の段階、すなわちアセチル CoA カル
ボキシラーゼの特異的なリジン残基をビオチンで翻訳後修飾する反応を触媒する重要な酵素である。我々はPyrococcus horikoshii OT3 由来 BPL の結晶構造を決定した。
さらに様々なリガンド（ビオチン・ADP・ビオチニル５ʼAMP）との複合体の構造決定も行い、本酵素の反応中間体を視覚化することに初めて成功した。リガンド結合は BPLの活性部位ループ部のオーダー・ディスオーダー転移と共役していた。これらの結果に基づいて、我々は BPL によるビオチン活性化機構を提唱した（Bagautdinov et al. (2005)
J. Mol. Biol. 353, 322-333）。
(4) ATP 依存性ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼの結晶構造（菅原）ATP 依存性ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（PEPCK）の誘導適合機構および耐熱化機構を明らかにするため、我々は Thermus thermophilus HB8 由来酵素
（TtPEPCK）の結晶構造を決定し、結晶構造が報告されている他の常温生物由来酵素と比較した。これら PEPCK のオルソログは、open/closed のドメイン間配置を持つ良く似たプロトマー構造を共通して持っていた。さらにリガンドである ATP との複合体の結晶構造も決定し、本酵素のʻconformational selectionʼと呼ばれる誘導適合機構を明らかにすることに初めて成功した。また、TtPEPCK の耐熱化に寄与すると考えられる因子として、Ｎ末端ドメイン内に見つかった結合カルシウム・疎水的相互作用・イオン結合・エントロピー効果が示唆された（Sugahara et al. (2005)
Acta Crystallogr. D 61, 1500-1507）。
(5) Ｘ線構造解析と示差走査熱量計を用いたトリプトファ
ン合成酵素αサブユニットの安定化機構の検討（淺田）
高度好熱菌 Thermus thermophilus HB8 由来トリプトファ
ン合成酵素のαサブユニット(Tt-α-subunit)の安定化機構を検討するために、結晶構造解析と示差走査熱量計による測定を行い、既に報告されている常温菌 S. typhimurium と超高熱菌 P. furiosus のトリプトファン合成酵素・サブユニット(St-α-subunit, Pf-α-subunit)と比較検討した。示差走査熱量
計 に よ る 測 定 の 結 果 、 Tt-α-subunit の 変 性 温 度 は 、

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平成 17 年度 研究年報

St-α-subunit よりも高く Pf-α-subunit よりも低かった。しかしながら Tt-α-subunit のエンタルピーと熱容量は、これらのタンパク質の中で一番小さな値となった。このことから
Tt-α-subunit ではエントロピー効果が安定性に寄与していることが示唆された。結晶構造解析から、St-α-subunit と比較すると、ループ領域の欠失、イオン結合の増加、キャビ
ティー容量の減少が見られた。これらの要因もまたTt-α-subunit の安定化に寄与していると考えられる（Asadaet al. (2005) J. Biochem. 138, 343-353）。
(6) マロニル-CoA：ACP アシル転移酵素の結晶構造解析（岬*1）
製薬協蛋白質構造解析コンソーシアムは、タンパク 3000
プロジェクトの一環として、Thermus thermophilus HB8 由
来マロニル-CoA：ACP アシル転移酵素（MCoA-ACPT）の結晶構造解析を理研と共同で行った。MCoA-ACPT は、微生物の脂肪酸生合成においてマロニル-CoA のマロニル基を ACP に転移する酵素である。高等動物においてこのマロニル基転移反応は別の酵素で触媒されることから、
MCoA-ACPT は抗生物質の開発ターゲットとして有望である。本構造は既に報告されている大腸菌由来 MCoA-ACPTの結晶構造座標を基に分子置換法（Molrep）で決定した。
本研究は耐熱生物由来 MCoA-ACPT の結晶構造に関する最初の報告である。本研究で得られた耐熱性 MCoA-ACPTの活性部位の立体構造は、MCoA-ACPT 酵素機能の解明および有用な阻害剤の設計について重要な示唆を与えた（Misaki et al. (2005) XX Congress of the International Unionof Crystallography, Florence, Italy）。
2．構造ゲノム科学推進のための技術開発
ソフトウェア開発（国島、淺田、菅原、高*１）
構造解析効率化のためのソフトウェア開発として、前年度開発した自動解析システム・構造評価システム・重原子
検索システムの高度化を行った。また、研究者による試験的運用を行い、今後の解析未経験者による運用に備えた。
自動解析システムは、当グループで標準化された解析手順を自動化することにより、経験の浅い担当者でも正しい
手順で解析ができるようにすることを目的としたシステムであり、位相計算・自動モデル構築・構造精密化を視野に入れている。これらの機能は X 線構造解析・計算機に関する最小限の知識で操作できる。また手順が規格化されていることから、指導者による助言が容易になる。平成 17
年度は、現在最も手間のかかっているモデルチェック作業の効率化を行った。このモデルチェック機能により、アミノ酸配列の確認・立体化学的妥当性の確認・結合水の妥当性の確認・水素結合など非共有結合相互作用の妥当性の確認が自動的に行える。PDB 登録前のモデル確認のみならず、経験が十分でない解析担当者が構造精密化を効率的に進めるためにも役立つ。
構造評価システムは、解析された結晶構造から論文作成等に必要な構造評価基礎データを自動的に作成すること
により、研究者による同作業を効率化することを目的としたシステムである。今まで研究者が手間と時間をかけて行っていた構造評価作業が効率化できる。また、将来的にタンパク質の耐熱性や結晶性などのタンパク工学的手法による改善技術の開発基盤となることが期待される。平成１
７年度は、現在最も手間のかかっているタンパク質の分子表面解析、すなわち、パターン分析（保存度・疎水性・電荷等の分子表面における分布の評価）および結晶パッキン
グ評価の自動化を行った。
重原子検索システムは、既知の重原子誘導体をデータベース化することにより、経験の浅い担当者でも実験すべき
重原子試薬が簡単に検索できるようにすることを目的としたシステムである。Ｈ17 年度は、ホモロジーモデリン
グ・二次構造予測・重原子結合モチーフ等を考慮した検索を導入することによる高度化を行った。その結果、候補の重原子試薬に成功期待値（スコア）が付くため、そのスコア順に重原子化実験を行うことでより効率的な重原子誘導体作成が可能になった。また、論文発表（Sugahara et al.
(2005) Acta Crystallogr. D 61, 1302-1305）および、本システ
ムのWEBでの公開（http://hatodas.harima.riken.go.jp/）を行った。
*1 客員研究員

As a part of the protein 3000 project, we perform thestructural genomics oriented study on the structure-function
relationship of oligomeric proteins and undertake relevant
technological development. Through these research anddevelopment, we would like to contribute the structural
genomics and the relevant industrial application.
1. Study on Protein Oligomerization from a View Point ofStructural Genomics
In order to obtain the systematic understanding for the
biological role of protein oligomerization, we compare the huge
number of crystal structures from the large-scale structural
analysis. In this fiscal year, we performed structural
determination of 73 proteins from thermophilic organisms.
(1) A novel induced-fit reaction mechanism of asymmetric hot
dog thioesterase PaaI (Kunishima et al. (2005) J. Mol. Biol. 352,
212-228). Here we developed a new method to describe theconformational change precisely and succeeded to capture a
subtle conformational change of ‘acyl-CoA thioesterase PaaI’
which had a similarity with a protein relevant to the HIV
infection.
(2)
Crystalstructureofnovel
NADP-dependent
3-hydroxyisobutyrate
dehydrogenase
from
Thermusthermophilus HB8 (Lokanath et al. (2005) J. Mol. Biol. 352,
905-917). 3-Hydroxyisobutyrate, a central metabolite in thevaline catabolic pathway, is reversibly oxidized tomethylmalonate semialdehyde by a specific dehydrogenase,3-hydroxyisobutyrate dehydrogenase (HIBADH). To gain
insight into the function of this enzyme at atomic level, we havedetermined the first crystal structures of HIBADH from
Thermus thermophilus HB8.
(3) Crystal structures of biotin protein ligase from Pyrococcus
horikoshii OT3 and its complexes: structural basis of biotin
activation (Bagautdinov et al. (2005) J. Mol. Biol. 353,
322-333). Biotin protein ligase (BPL) catalyzes the firstcommitted step of lipid biosynthesis in various organisms,
where a specific lysine residue of the acetyl-CoA carboxylase isposttranslationally modified by biotin. Here, we present the
crystal structure of the BPL from Pyrococcus horikoshii OT3.
The determination of the complex structures with biotin, ADP,
and biotinyl-5'-AMP provided the first exact location of theactivated intermediates.
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平成 17 年度 研究年報

(4) Structure of ATP-dependent phosphoenolpyruvatecarboxykinase from Thermus thermophilus HB8 showing thestructural basis of induced fit and thermostability (Sugahara etal. (2005) Acta Crystallogr. D 61, 1500-1507). In order tounderstand the induced-fit and the thermo-stabilization
mechanisms of the ATP-dependent phosphoenolpyruvatecarboxykinase, the crystal structure of the enzyme from
Thermus thermophilus HB8 (TtPEPCK) was determined andcompared to those of orthologues of known structure from two
mesophilic organisms.
(5) Stabilization mechanism of tryptophan synthase α-subunit
from Thermus thermophilus HB8: X-ray crystallographic
analysis and calorimetry (Sugahara et al. (2005) J. Biochem.
138, 343-353). In order to elucidate the thermo-stabilization
mechanism of the tryptophan synthase α-subunit from theextreme thermophile Thermus thermophilus HB8 (Tt-α-subunit),
its crystal structure was determined and its stability was
examined using DSC.
(6) Crystal structure of MCoA-ACPT from Thermus
thermophilus HB8 (Misaki et al. (2005) XX Congress of theInternational Union of Crystallography, Florence, Italy). As apart of Protein 3000 project in Japan, joint research group of
PCprot has solved the crystal structure of malonyl-CoA:ACP
transacylase (MCoA-ACPT) from Thermus thermophilus HB8
by collaboration with RIKEN. The obtained three-dimensional
structure of the active site of thermostable MCoA-ACPT
provides insights into the enzyme mechanism and the design ofuseful inhibitors.
2. Technological Development for Structural Genomics
Software development
We enhanced the automated analysis system, the structureevaluation system, and the heavy-atom database system.
Heavy-atomDatabase
System(HATODAS
http://hatodas.harima.riken.go.jp/) is a web based tool designed
to assist the heavy-atom derivatization of proteins. Conventional
procedure for the preparation of derivatives is usually a time
consuming ‘trial and error’ process. The present programprovides a solution for this problem using a database of known
heavy-atom derivatives (Sugahara et al. (2005) Acta Crystallogr.
D 61, 1302-1305).

Staff
Head
Dr. Naoki KUNISHIMA

Members
Mr. Yukuhiko ASADA
Dr. Bagautdin, BAGAUTDINOVDr. Neratur LOKANATH
Dr. Hisashi MIZUTANIDr. Katsumi SHIMIZU
Dr. Michihiro SUGAHARA
Mr. Hitoshi YAMAMOTO

Technical Staff
Mr. Yuichi KAGEYAMA
Mr. Mitsugu KOSAKA

Mr. Yoshinori MATSUURA
Ms. Yuko MISUMI
Mr. Hiroshi MIWA
Mr. Takanobu NAKAMOTO
Dr. Yoichi NOBUHARA
Ms. Naoko ONO
Mr. Hiroki SHIMADA
Ms. Yoshiko TERAO
Ms. Ayako YOSHIDA

Visiting Members
Mr. Masahiko BANDO (Otsuka Pharm. Co., Ltd)Dr. Khoon-Tee CHONG (Taiho Pharm. Co., Ltd)Dr. Shoko FUJIMOTO (Eisai Co., Ltd)
Dr. Akira HARA (Gifu pharmaceutical Univ.)
Mr. Tatsuya HORIO (Nippon Shinyaku Co., Ltd)
Ms. Maki KUMEI (TANPAKU Consortium)
Dr. Shintaro MISAKI (Shionogi Co., Ltd)
Dr. Makoto MIYATA (Osaka City Univ.)Dr. M.R.N. MURTHY (Indian institute of Science, Bangalore,
India)
Dr. Chikahiro NAGATA (Daiichi Pharm. Co., Ltd)Mr. Yuichiro NAKAISHI (Otsuka Pharm. Co., Ltd)
Dr. Masahiro SAKURAI (Eisai Co., Ltd)Mr. Ikuya SHIROMIZU (Mochida Pharm. Co., Ltd)Dr. Shigetoshi SUGIO (Mitsubishi Pharma Corp.)
Dr. Kenji SUZUKI (Dainippon Pharm. Co., Ltd)Mr. Hideyuki TAKA (Hitachi Software Engineering Co., Ltd)
Ms. Izumi WADA (TANPAKU Consortium)

Trainee
Mr. Satoshi IIMURA (Kwansei Gakuin Univ.)誌 上 発 表Publications[ 雑誌 ]（原著論文）＊印は査読制度がある論文誌
Yokoyama T. ,Chong K. ,Miyazaki G. ,Morimoto H. ,Shih D.
T. ,Unzai S. ,Tame J. R. ,and Park S. : "Novel mechanisms of
pH sensitivity in tuna hemoglobin: A structural explanationof the root effect", J. Biol. Chem. 279, No. 27,
pp.28632--28640 (2004). ＊Sugahara M. ,Asada Y. ,Ayama H. ,Ukawa H. ,Taka H. ,and
Kunishima N. : "Heavy-atom Database System: a tool for the
preparation of heavy-atom derivatives of protein crystals
based on amino-acid sequence and crystallization conditions",
Acta Cryst. D 61, 1302--1305 (2005). ＊Sugahara M. ,Ohshima N. ,Ukita Y. ,Sugahara M. ,and
Kunishima N. : "Structure of ATP-dependent
phoshoenolpyruvate carboxykinase from Thermus
thermophilus HB8 showing the structural basis of induced fit
and thermostability", Acta Cryst. D 61, 1500--1507 (2005).
＊
Lokanath N. K. ,Yamamoto H. ,Matsunaga E. ,Sugahara M. ,and
Kunishima N. : "Purification,crystallization and initial X-ray
crystallographic analysis of the putative GTPase PH0525
from Pyrococcus horikoshii OT3", Acta Cryst. F 61,
892--894 (2005). ＊Taka J. ,Ogasahara K. ,Jeyaraman J. ,Kunishima N. ,Kuroishi
C. ,Sugahara M. ,Yokoyama S. ,and Yutani K. :"Stabilization due to dimer formation of phosphoribosyl
anthranilate isomerase from Thermus thermophilus HB8:

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X-ray analysis and DSC experiments", J. Biochem. 137, No.
5, pp.569--578 (2005). ＊Asada Y. ,Sawano M. ,Ogasahara K. ,Nakamura J. ,Ota
M. ,Kuroishi C. ,Sugahara M. ,Yutani K. ,and Kunishima
N. : "Stabilization mechanism of the tryptophan synthaseα-subunit from Thermus thermophilus HB:8 X-ray
crystallographic analysis and calorimetry", J. Biochem. 138,
No. 4, pp.343--353 (2005). ＊Kunishima N. ,Asada Y. ,Sugahara M. ,Ishijima J. ,Nodake
Y. ,Sugahara M. ,Miyano M. ,Kuramitsu S. ,Yokoyama
S. ,and Sugahara M. : "A novel induced-fit reaction
mechanism of asymmetric hot dog thioesterase PaaI", J. Mol.
Biol. 352, 212--228 (2005). ＊Lokanath N. K. ,Ohshima N. ,Takio K. ,Shiromizu I. ,Kuroishi
C. ,Okazaki N. ,Kuramitsu S. ,Yokoyama S. ,Miyano M. ,and
Kunishima N. : "Crystal structure of novel NADP-dependent
3-hydroxyisobutyrate dehydrogenase from Thermus
thermophilus HB8", J. Mol. Biol. 352, 905--917 (2005). ＊Bagautdinov B. ,Kuroishi C. ,Sugahara M. ,and Kunishima N. :"Crystal structures of biotin protein ligase from Pyrococcus
horikoshii OT3 and its complexes: structural basis of biotin
activation", J. Mol. Biol. 353, 322--333 (2005). ＊口 頭 発 表 Oral Presentations(国際会議等)
Suzuki K . ,Misaki S . ,Shiromizu I . ,Takimoto-Kamimura
M . ,Bando M . ,Kunishima N . ,Nodake Y . ,Sugahara
M . ,and Nishijima K . : "Crystal structure of MCoA-ACPT
from Thermus thermophilus HB8", 20th Congress of theInternational Union of Crystallography (IUCr2005) ,Florence , Italy , Aug. (2005).
Bagautdinov B . ,Kuroishi C . ,Sugahara M . ,and Kunishima N . :"Crystal structure of the biotin protein ligase from
Pyrococcus horikoshii OT3: insights into the mechanism of
biotin activation", 20th Congress of the International Unionof Crystallography (IUCr2005) , Florence , Italy , Aug.
(2005).
Lokanath N. K . ,Ohshima N . ,Takio K . ,Shiromizu I . ,Kuroishi
C . ,Okazaki N . ,Kuramitsu S . ,Yokoyama S . ,Miyano
M . ,and Kunishima N . : "Crystal structure of theNADP-dependent 3-hydroxyisobutyrate dehydrogenase",
20th Congress of the International Union of Crystallography(IUCr2005) , Florence , Italy , Aug. (2005).
Iimura S . ,Ogasahara K . ,Noda Y . ,Segawa S . ,and Yutani K . :"Kinetic stabilization of pyrrolidone carboxyl peptidase froma hyperthermophile", International Chemical Congress ofPacific Basin Societies (PACIFICHEM 2005) , Honolulu ,USA , Dec. (2005).
(国内会議)
飯村 哲史,小笠原 京子,野田 康夫,瀬川 新一,油谷 克英: "超好熱菌由来のpyrrolidone carboxyl peptidaseの速度論的安定化のメカニズム", 第5回日本蛋白質科学会年会 ,福岡 , 6--7月 (2005).
岬 真太郎,鈴木 健司,白水 郁也,上村 みどり,板東 政彦,粂井 麻希,和田 いづみ,国島 直樹,野嶽 勇一,菅原 光明,
西嶋 和三: "Crystal structure of MCoA-ACPT from
Thermus thermophilus HB8", 理研シンポジウム「高度好熱菌丸ごと一匹プロジェクト」第4回連携研究会 , 播
磨 , 8月 (2005).
Bagautdinov B . ,Sato Y . ,菅原 光明,国島 直樹: "Crystal
structures of shikimate 5-dehydrogenase from Thermus
thermophilus HB8 and its cofactor and substrate complexes:
insights into the enzymatic mechanism", 理研シンポジウ
ム「高度好熱菌丸ごと一匹プロジェクト」第4回連携研究会 , 播磨 , 8月 (2005).
菅原 道泰,淺田 征彦,阿山 晴彦,卯川 尚史,高 秀幸,国島 直
樹: "Heavy-atom database system: a tool for the preparationof heavy-atom derivatives of protein crystals based on aminoacid sequence and crystallization condition", 理研シンポジ
ウム「高度好熱菌丸ごと一匹プロジェクト」第4回連携研究会 , 播磨 , 8月 (2005).
仲野 徳,粂井 麻希,稲垣 栄二,田中 智之,新海 ふじ江,倉光成紀,瀧尾 擴士,新海 暁男,横山 茂之: "Thermus
thermophilus HB8由来TT0972タンパク質の構造", 理研
シンポジウム「高度好熱菌丸ごと一匹プロジェクト」第4回連携研究会 , 播磨 , 8月 (2005).
岡崎 伸生,仲野 徳,粂井 麻希,佐藤 伸哉,満足 美穂,倉光 成紀,白水 美香子,新海 暁男,横山 茂之: "Thermus
thermophilus HB8由来機能未知タンパク質TT1045，およびTT1515のX線結晶構造解析", 理研シンポジウム「高度好熱菌丸ごと一匹プロジェクト」第4回連携研究会 , 播
磨 , 8月 (2005).
飯村 哲史,梅嵜 太郎,八木 宏昌,小笠原 京子,阿久津 秀雄,
野田 康夫,瀬川 新一,油谷 克英: "NMRによる超好熱菌
由来蛋白質の異常に遅いフォールディング機構の解明：NMRスペクトルの帰属とHD交換反応", 第43回日本
生物物理学会年会 , 札幌 , 11月 (2005).
国島 直樹: "構造ゲノミクス推進のための自動結晶構造解
析ソフトの開発", 創薬産業BL成果発表会記念シンポジ
ウム , (蛋白質構造解析コンソーシアム), 大阪 , 12月(2005).
岡崎 伸生,菅原 光明,仲村 勇樹,田中 智之,粂井 麻希,宮野雅司,横山 茂之: 第6回計測自動制御学会システムイン
テグレーション部門講演会(SI2005) , 熊本県西合志町 ,12月 (2005).
山本 等,三輪 洋司,国島 直樹: "Thermus thermophilus HB8由来のグルコース-6-ホスフェートイソメラーゼの結晶構造", 日本結晶学会2005年度年会および総会 , 姫路 ,12月 (2005).
清水 勝美,藤本 弥生,菅原 光明,国島 直樹: "Pyrococcus
horikoshii OT3 由来の推定ペプチジル-tRNA 加水分解
酵素の結晶構造", 日本結晶学会2005年度年会および総会 , 姫路 , 12月 (2005).
Bagautdinov B . ,Sato Y . ,国島 直樹: "Crystal structures of
shikimate 5-dehydrogenase from Thermus thermophilus HB8
and its cofactor and substrate complexes", 日本結晶学会
2005年度年会および総会 , 姫路 , 12月 (2005).
菅原 道泰,国島 直樹: "タンパク質結晶スクリーニングのための汎用クライオプロテクタント", 日本結晶学会2005
年度年会および総会 , 姫路 , 12月 (2005).
淺田 征彦,澤野 雅英,小笠原 京子,中村 順司,太田 元規,黒石 千寿,菅原 光明,油谷 克英,国島 直樹: "X線構造解析と示差走査熱量測定(DSC)を用いた高度好熱菌 Thermus
thermophilus HB8 由来トリプトファン合成酵素αサブユ
ニットの安定化機構の検討", 日本結晶学会2005年度年
会および総会 , 姫路 , 12月 (2005).
水谷 尚志,国島 直樹: "高度好熱菌由来HpcCの結晶構造",
日本結晶学会2005年度年会および総会 , 姫路 , 12月(2005).
山本 雅貴,新海 暁男,国島 直樹: "X線関連技術", 文部科学
省タンパク3000プロジェクト 第3回産学連携フォーラ
ム , 東京 , 2月 (2006).

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