宮野構造生物物理研究室
Structural Biophysics Laboratory
主任研究員

宮野

雅司

MIYANO, Masashi
脂質は生体の高密度エネルギー源であり、主要な細胞膜構成成分であり、様々な化学修飾を受け多彩な生理活性信号伝達物
質としても働く。多様な構造・機能を持つ脂質は多くの疾患・病態と連関しているので、脂質関連タンパク質研究は医学薬学分野の応用への基盤情報となる。例えば、ロイコトリエン C4 (LTC4) はアラキドン酸を出発物質として生合成されるエイ
コサノイドの一つで、強力な平滑筋収縮物質として知られ、喘息増悪時に LTC4 産出が増大するので、LTC4 合成酵素の特異的阻害剤は抗喘息抗アレルギー薬候補となる。そこで、未解明の本酵素の立体構造は、特異的薬剤設計の貴重な情報となる。
また、脂質は取り扱いの難しさから、その関連タンパク質、特に膜タンパク質の研究は他のタンパク質に比べて構造・機能研究は遅れている。我々は、基礎生物学としての脂質生物学の発展と医学薬学の基盤、創薬展開を視野に入れ、脂質関連タ
ンパク質の構造・機能研究を中心に行っている。また、応用展開支援として、タンパク質結晶構造解析基盤技術向上のために、結晶イメージの自動判別法開発と、新規分子置換アルゴリズムと高精密化アルゴリズムの検証を共同で進めている。

(2) ロイコトリエン B4 受容体（BLT1）、血小板活性化因（A）脂質関連蛋白質の構造・機能解析(1) ヒト由来ロイコトリエン C4 合成酵素の構造研究（吾 子受容体（PAFR）の結晶化に向けた、酵母による大量発現と精製（堀、佐藤*3、宮野、清水*1、石井（聡）*2）
郷、入倉*3、金岡*2、島村*3、宮野）
膜貫通型タンパク質であるロイコトリエン C４合成酵
ロイコトリエン B4（LTB4）は、炎症反応初期に、炎症
素(LTC4S)は、ロイコトリエンＡ４(LTA4)に還元型グルタ 細胞である白血球や好酸球などを活性化する走化性因子
チオンを付加しロイコトリエン C４(LTC4)を生合成する である。LTB4 は産生細胞において生合成され、炎症細胞酵素である。総称してシステイニルロイコトリエン 表面の BLT1 に作用して炎症細胞を活性化する。血小板(Cys-LT)と呼ばれる LTC4 とその代謝物 LTD4、LTE4 は、 活性化因子（PAF）は、炎症初期に白血球や血小板など
強い平滑筋収縮を伴うアナフィラキシーショック症状の で産生され、細胞遊走や平滑筋収縮、サイトカインの放原因物質 SRS-A (Slow Racting Substance of Anaphylaxis)の 出など多様な生体反応を伝達する。BLT1 や PAFR は G
構成成分で、Cys-LT の平滑筋収縮活性の強さは、よく知 タンパク質共役型受容体であり、リウマチや喘息などのられた炎症性物質であるヒスタミンのおよそ 1000 倍も 創薬ターゲットとなっている。これら受容体の結晶構造ある。気管支平滑筋収縮による喘息発作や、血管平滑筋 解明を目指して、メタノール資化酵母を使用した大量発収縮による毛細血管からの血漿漏出など、急性炎症の諸 現系構築を行った。
BLT1（マウス、ヒト、ラット、モルモット）、PAFR
症状に連関している。また最近の遺伝子欠損動物を用いた肺の慢性炎症モデル実験は、急性炎症だけでなく、慢 （マウス、ヒト、ラット）に対して、N 末に発現タグを性炎症とそれに伴う組織の繊維化にも関わることを示し 融合させたコンストラクトを作成して発現チェックを行ている。LTC4S は Cys-LT による生体反応において鍵と った。N 末タグは、”αPrePro-FLAG, HA, FLAG, His-FLAG,なる酵素で喘息ばかりでなく新たな慢性炎症の創薬ター StrepII-FLAG”の 5 種類で、合計 35 種。3H-LTB4 と PAFR
ゲットとして重要であると考えられている。本研究では、 アゴニストである 3H-WEB2086 の結合活性測定の結果、LTC4S の構造を X 線結晶構造解析によって明らかにし、 αPrePro-FLAG を融合したヒト及びモルモット由来 BLT1
さらに基質認識や触媒反応の構造的基礎を明らかにする。 のみ活性があることが明らかになった。さらに、Scatchard
分裂酵母 Schizosaccharomyces pombe を用いて発現した plot 測定の結果、モルモット由来 BLT1 のみ生体組織と天然型 LTC4S とセレノメチオニン置換 LTC4S の精製・ 同様な 3H-LTB4 親和性があった。モルモット由来 BLT1
結晶化条件を最適化し、3.3Å 分解能の回折能を持つ結晶 に対し、様々な変異体の発現系を構築して Western blotを得た。この結晶を用いて初めてヒト由来膜貫通型蛋白 による発現 BLT1 の評価や活性測定を行った結果、C 末
質 LTC4S の X 線結晶構造解析に成功した。構造解析で に His タグを付加した糖鎖結合部位変異体（N4A）が結は、セレノメチオニン置換 LTC4S の結晶の回折データを 晶化のための大量発現系に適していた（Kd = 4.3nM,
多波長異常分散法で解析し初期モデルを構築した。この Bmax = 40.0pmol/mg）。さらに、ロドプシンの結晶構造モデルを天然型 LTC4S の結晶の回折データに対し精密 から予想された、フレキシビリティーの高い C 末側を欠化し、グルタチオンを結合した LTC4S の結晶構造を決定 損させた変異体 5 種、G-タンパク質αサブユニットとのした。さらに LTC4S/グルタチオン/LTA4 複合体構造をモ 共発現系の検討を行った。
デリングし、酵素反応触媒機構を検討した。二つのアル*3
ギニン残基のグアニジノ基が、それぞれ酸と塩基として (3) 昆虫細胞を用いたGPCR大量発現系の構築（佐藤 、*1*2
機能する位置・立体特異的酸塩基触媒反応機構を提案し 堀、宮野、清水 、石井（聡） ）ヒトゲノム中には 800 を超える G 蛋白共役型受容体
た。現在、提案した構造モデルに基づき、阻害剤開発も(GPCR)がコードされているが、これらの多くが創薬ター
視野に入れて基質認識や触媒反応を検討している。

ゲットとなる可能性を持つ。脂質メディエーター受容体
は GPCR に分類され、最も構造解析が困難な膜蛋白として知られている。構造解析を困難にしている理由としては、まず安定した大量発現が困難であることが挙げられる。本研究では、昆虫細胞にヒト脂質メディエーター受容体を発現させ生理活性の解析を行うと同時に、構造解析を目的とした受容体の大量発現系について基礎的な検討を行っている。
今年度は、高純度精製を念頭においた新たな高発現株の樹立を行った。その結果、これまで使用していた C 末
端タグ(His x6)に対し新たに N 末端タグ(Streptag II)を導入した h-BLT1 受容体高発現株 ST45 の樹立に成功した。特に、ST45 クローン細胞株 D3 はリガンド結合実験
から 10pmol/mg protein を超える発現量を達成した。昨年度に確立した大量培養系を用いることで、１mg 程度の受容体を見込む膜画分が得られることが期待された。
N および C タグに対する特異抗体を用いて、ST45D3
細胞中の hBLT１の分布を観察した。Anti-ST tag および
anti-V5 tag 抗体により見いだされたシグナルはエピトー
プの共在を示しており、ST45D3 で発現している hBLT1がそれぞれのタグを保持していることが確認された。また、アンタゴニストを添加した場合、シグナルの相対的な増強が観察され、ウエスタンブロットの結果と一致した。この状況で観察されるシグナルは細胞膜上に凝集する傾向を示しており、hBLT１はアンタゴニスト依存的に膜上で安定すると結論した。
ST45D3 細胞の膜粗抽出画分を調製し、1%DDM による可溶化と Histidine tag および Streptag II tag に対するア
フィニティ精製を行った。膜画分を 1%DDM で 16 時間可溶化し、上澄を TARON (Co-affinity resin)、さらにStreptactin resin を用いて BLT１の抽出と精製を行った。
溶出画分に受容体タンパクと思われるバンドが確認できたので、質量分析を行い目的タンパクであることを確認した。さらに、ESI-MS による質量分析を行った結果、特定残基にリン酸化が検出された。

質メディエーターである。PGE2 のこれらの作用は種々の標的細胞に存在する情報伝達系を異にする PGE2 特異的な受容体との結合により引き起こされる。これまでタン
パク質と PGE2 複合体の構造解析は報告されておらず、
基質認識機構についてはあまり良く知られていない。
我々は PGE2 と特異抗体の Fab フラグメントとの複合体を目指して、タンパク質の脂質メディエーター分子の認識機構の解明を目指している。今年度は、抗体全長のパパイン消化により Fab フラグメントを高収率で得て、ゲル濾過により PGE2-Fab 複合体を単離した。
（B）その他のタンパク質の結晶学的研究(1) ヒト M1 ファミリー亜鉛アミノペプチダーゼの結晶構造解析（菅原、服部（辻本細胞生化学研究室）、辻本（辻本細胞生化学研究室）、宮野）
哺乳動物において重要な生理機能を担っている糖タン
パク質である M1 亜鉛アミノペプチダーゼのうちヒト由
来の脂肪細胞由来ロイシンアミノペプチダーゼ（A-LAP）
およびアミノペプチダーゼ A（APA）について、天然糖
鎖修飾型および糖鎖のない変異体を昆虫細胞 Sf9 により大量発現および精製を行った。本年度、APA は Ca2+イオンの存在下で 0.１mm 角の結晶が得られたが、構造解析に十分な分解能の回折データは得られていない。
(2) カンピロバクター由来シアル酸転移酵素の大量調製と X 線結晶解析（菅原、梶原*2、宮野）
シアル酸は細胞膜表面のオリゴ糖の末端に存在して、リガンド-受容体および細胞-細胞間相互作用に重要な生物学的機能を担っている。シアル酸転移酵素は糖タンパ
ク質のムチン型糖鎖やアスパラギン結合型糖鎖およびス
フィンゴ糖脂質の非還元末端糖残基（ガラクトース，Nアセチルガラクトサミン，N-アセチルグルコサミン，シアル酸）に CMP-シアル酸を糖供与体として転移する酵素群である。基質とする糖鎖や形成される結合様式の違いにより異なる酵素が関与する。これらの酵素とその変異体を作成し、結晶化および酵素学的な反応メカニズムの検討をおこなっている。

(4) イカロドプシンの構造解析（島村*3、宮野）タンパク質全体の約 30%を占めている膜タンパク質は、細胞の中と外の間の情報、エネルギー、物質の輸送や伝 (3) ヒト由来カルシニューリンホモロガスプロテイン*2
達等で重要な働きを担っている。さらに、創薬ターゲッ (CHP)の結晶化および構造解析（菅原、若林 、宮野）CHP は、細胞に普遍的に含まれ細胞内部の pH を調節
トの約 50%が膜タンパク質である。このようなことから、++
膜タンパク質の立体構造を明らかにすることは、意義が する膜タンパク質である Na -H exchanger (NHE1)に結合ある。しかし膜タンパク質は大量に発現／精製すること し、何らかの制御因子として働くことが示唆されている。
が難しいため、構造が解明された例は、可溶性タンパク NHE1 の CHP 結合配列部分のペプチド断片と CHP を大質に比べて少ない。我々は、サントリー生物有機研究所 腸菌で共発現させて得られた複合体試料の高純度精製にの石黒部長、平木博士等との共同研究で網膜に大量に発 成功し、添加剤としてイットリウムなどを含む条件から現しているロドプシンを、イカの網膜から直接精製する 結晶が得られ、2.7Å 分解能で構造解析を行い、NHE1 の系を確立し、その立体構造の解析を目指した。現在、４ 細胞内 pH 調整機構についてのモデルを提唱した。
Å程度のデータを取得可能な結晶を得ることに成功している。

(5) プロスタグランジン E2 (PGE2) 認識マウスモノクロ
ナール IgG1 の構造解析（菅原、倉橋*2、青山*5、山本*2、
宮野）
PGE2 は、炎症反応、抗炎症反応、血管拡張、血圧降下
および胃液分泌抑制など様々な生理作用を引き起こす脂(4) β-ラクタマーゼ, Toho-1 の高分解能 X 線結晶構造解析（内山*4、島村*3、吾郷、宮野）
β-ラクタマーゼ Toho-1 は、基質特異性拡張型 β-ラクタ
マーゼであり、近年の薬剤耐性菌に対して開発された第三世代セフェム系抗生物質に対しても高い加水分解活性を持つ。既に Toho-1 の立体構造は、酵素-基質複合体のものが高分解能で解明されている。我々は、β-ラクタマーゼを阻害し、重大な感染症の治療に使われる阻害剤の一種イミペネムと Toho-1 との複合体構造の解明を目指した。1.5Åまでの分解能で Toho-1／イミペネム複合体構
造のデータが得られ、現在、精密化を行っている。
(5) アクチンフィラメント上の蛋白質分子の蛍光１分子方位決定法の開発 （山本、Popp*2、中村*2、岡本（河田ナノフォトニクス研究室）、前田（雄）*1）
蛍光顕微鏡による一分子観察は、X線結晶構造解析法
やNMR法などでは解析不可能な蛋白質分子ひとつひとつの動きを可視化する事が可能である。この方法では、
蛋白質分子の動的な情報を得られるため、構造と機能を理解する上で、結晶構造解析のような多数の分子の統計的な情報に基づく方法に対して相補的な役割を担っている。
我々は蛋白質の構造変化を観察するためにαヘリック
スの方向変化を直接観測する蛍光単分子方位計測顕微法を開発している。本手法では、二価性ローダミンで蛋白質の特定のαヘリックスをラベルして、その3次元方位を直接観察するための技術開発を行なった（京都大学、山本行男研との共同研究）。
二価性ローダミンをラベルするためにトロポニン C(TnC) セントラルへリックス(95-102)に変異を導入し、ラベルし、アクチンフィラメント上でトロポミオシン(Tm)およびTnT,TnIの観察をin vitroで行なった。ブラウン運動によるアクチン-Tm-Tn複合体の揺らぎの抑制が重要であり、分子の構造変化を妨げずに分子の揺らぎを抑制する方法について検討している。

結晶は 7 Å 程度の回折斑点しか与えないことがわかった。
各種結晶化改善方法を試みたが、残念ながら改善は見られなかった。
（C）タンパク質構造解析技術の高度化(1) タンパク質結晶化の効率化（菅原、国島（多量体タンパク質構造解析研究チーム）、川端（分散適応ロボテ
ィクス研究ユニット）、宮野）タンパク質の X 線結晶構造解析で、結晶化は最大のボトルネックである。そこで結晶化のための全自動結晶化
観察ロボット（TERA）の開発により、多数の試料の標準条件での結晶化に成功した。ロボットによる実際の稼働によるこれまでの経験と蓄積された膨大な数の結晶化イメージを使って、結晶化写真の自動判別ソフトウェア開発をロボティクス研究グループと共同でおこなっている。
結晶化ドロップの形状と画像の撮影条件の均一化により、90%を越える判別が可能となった。

(2) より正確なタンパク質理解を目指したタンパク質構造解析技術の高度化を目指した研究（吾郷、西堀*2、坂
田*1、戎崎（戎崎計算宇宙物理研究室）、宮野）
超精密構造解析 −タンパク質の構造や機能の源泉となって生体機能発現の中心的役割を果たしている、水の構
造を含む水素結合など非共有結合相互作用を検討する上で、タンパク質の超高分解能精密解析は必須である。しかし、有機小分子、材料結晶などと違い、実在のタンパ
ク質結晶の不完全性、タンパク質結晶の損傷、さらに回(6) Tm フラグメントの結晶構造解析（似内、南方*2、前 折データ収集システムの限界など多くの実験的制約の中田（佳）（X 線構造解析研究チーム）、小田*2、前田（雄） で、水を含む非共有結合相互作用を再検討する基礎デー*1）
タとなりうる、超高分解能解析が出来るタンパク質結晶
昨年度までに、N 末端側に GCN4 配列を付加した Tm の数は少ない。またさらに、現在の結晶解析計算がフーの 176-284 残基目を含む断片(ZrsTm(176-284))について リエ解析に基づいていることによる原理的限界が存在す
2.6 Å 分解能で、また、N 末端側と C 末端側に GCN4 配 る。これまでに C60、シリコン結晶などの超高分解能解
列 を 付 加 し た 176-273 残 基 目 を 含 む 断 片 析に実績があり、フーリエ解析の原理的限界を超えうる(NZrsTm(176-273)NZ)について 2.0 Å 分解能で成功してい 電子密度改良法であるマキシマムエントロピー法 (MEM)た。今年度に入り、二種類目の NZrsTm(162-273)NZ 結晶 を準原子分解能のタンパク質結晶の回折強度データに対の調整、および、結晶構造解析を行うことに成功した。 して適応するための手順について検討を行った。その結これら三種類の結晶構造の比較を詳細に行うことにより、 果、これまでほとんど顧みられなかった、結合水以外のTm 分子の持つ柔軟性についてより深い議論が行うこと 第 2 層、3 層を含む結晶中の水分子を、座標を特定したが可能になった。
構造モデルとして、構造解析計算へ取り込むことが MEM
を準原子分解能のタンパク質結晶の回折強度データに対(7) Tm と Tn の複合体の結晶構造解析（似内、南方*2、前 して適応する上で重要である事を見いだした。1.3Å とい
田（佳）（X 線構造解析研究チーム）、小田*2、前田（雄） う準原子分解能回折強度データを使った従来の精密化で*1）は、十分確認できなかったマルチコンフォーマー残基の回折能ある Tm/Tn 複合体結晶が得られおり、この結晶 特定が、同じ回折強度データ用いた徹底的な MEM によるが本当に Tm と Tn を含む複合体結晶であることについて 電子密度改良による構造モデル改良をすることで可能には SDS-PAGE により確認している。しかしながら、この なった。さらに、多くの水素原子を付加することも出来
複合体結晶の回折能は 20 Å に過ぎず、現在では到底構造 た。これらの結果は、これまでの原子分解能解析での構解析可能とは言えない。各種結晶化改善方法を試みたが 造に照らして妥当であると結論した。
現在のところ改善された例は無い。
分子置換法 − 分子置換法はタンパク質の X 線結晶構
造解析の主要な構造決定法であるが、構造の相同性が十*2(8) Tm と TnT1 複合体の結晶構造解析（似内、南方 、前分高いタンパク質の立体構造モデルがあらかじめ必要で田（佳）（X 線構造解析研究チーム）、小田*2、前田（雄）あると言う制約がある。このためアミノ酸配列の相同性*1）と立体構造の相同性の間の相関が低いタンパク質の構造
His-hcTnT1/ZrsTm(162-284) 、 お よ び 、 hcTnT1/ZrsTmを決定する場合には、解析出来ない。この限界の緩和・(162-284)の組み合わせに関して、結晶が再現性良く得ら解決を目指して、遺伝的アルゴリズムを取り入れた分子
れ、かつ、SDS-PAGE での分析によりこれらの結晶が複置換法 GA−MR 法の開発に参画した。
合体であることを確認した。しかしながら、ほとんどの

*1

客員主幹研究員、*2 客員研究員、*3 協力研究員、*4 ジュ
ニア・リサーチ・アソシエイト、*5 研修生

We have been focusing on the structural-based functional
analyses for enzymes and receptors related to lipids. These
proteins are biologically important and the major targets forthe therapeutics for inflammation and immuno-modulation.
We also develop new technologies for SR protein
crystallography in collaboration.
(A) Structural based functional study of lipid-related
proteins(1) Crystal structure analysis of leukotriene C4 synthase(LTC4S)
LTC4S is the membrane integrated enzyme responsible forbiosynthesis of cysteinyl leukotrienes and a potent target forthe development of therapeutic agents for inflammatory
diseases including asthma. The crystal structure of human
LTC4S was determined by the MAD method at 3.3Åresolution. We proposed the novel acid-base reaction
mechanism to conjugate glutathione to leukotriene A4 inhighly regio- and stereo-specific manner catalyzed by the two
arginine residues, of which one plays as a base to activate
thiol group of glutathione as the reactive species and the otherworks as an acid to supply hydrogen for the hydroxyl anion
growing in the catalysis. The structure based molecularfunction analysis of LTC4S is going on.
(2) Expression studies of G-protein coupled receptors (BLT1
and PAFR) using Pichia pastris
Expression system of BLT1 and PAFR with yeast Pichia
pastris have been constructed. The factors to be examined
were the source of receptors (mouse, human, rat and guineapig), the N-terminal expression tags (αPrePro-FLAG, HA,
FLAG, His-FLAG, StrepII-FLAG) and the sugar chain
deficient mutants (N-terminal and IV-V loop). The 3H-LTB4
binding affinity of guinea pig BLT1 mutant (N4A) was
comparable to that of native guinea pig tissues (Kd = 4.3nM,
Bmax = 40.0pmol/mg) and suitable for the overexpression for
crystallographic strudies.
(3) Expression studies of G-protein coupled receptor using
insect cell
Structural information of GPCRs has significant availabilities
for pharmaceutical studies, and most of them are recognizedas potential therapeutic targets. In some cases, since GPCRs
are extremely low expression in vivo, and have difficulties
with their over-expression and purification in vitro, thedevelopment of efficient heterologous expression systems areindispensable for structural studies.
BLT1 is a major receptor for Leukotriene B4 (LTB4), a
potent chemoattractant involved in inflammation andimmunoresponse, expressed in some myeloid cells andregulates their activities. Although many pharmacologicalstudies have been reported on BLT1, the structural studies of
BLT1 are not advanced, because of insufficiently amount ofphysiological active receptor. Heterologously expressed
human BLT1 using Drosophila Schnider 2 (S2) cells has
physiological activities compared with its native character. On
this point, the systems that we use may combine the two
requisites of efficacy for expression of active GPCRs and of
simplicity for manipulation.
(4) Crystallographic studies of squid rhodopsin

Membrane proteins play a crucial role in many cellularfunctions. Despite the growing need for the structural
information, it is still very difficult to get crystals of
membrane proteins. We succeeded in establishing thepurification system for a membrane protein, squid rhodopsin,and obtaining crystals suitable for X-ray diffraction.
(5) Crystallographic analysis of prostaglandin E2 (PGE2)
specific mouse monoclonal IgG1
PGE2 has both inflammation and anti-inflammation actions,and exerts various physiological functions. We have purified
the Fab fragment of a highly specific anti-PGE2 mousemonoclonal IgG from hybridoma cell. PGE2-Fab complex
were obtained by gel filtration chromatography.
(B) Structural and functional analysis of other proteins.
(1) Structural analysis of the two types of human M1 zincamino peptidases
We have tried to purify and crystallize adipocyte-derived
leucin aminopeptidase (A-LAP) and aminopeptidase A (APA)
including their natives and mutants without modified-sugar
chains expressed by insect cells, Sf9. The crystal with the
0.1mm corner appeared in the presence of a Ca2+ ion about
APA, but the resolution of the diffraction data was not enoughfor structure analysis.
(2) Crystallographic analysis of sialyltransferase fromcampylobacter.
Sialic acid on the end of oligosaccharide of the cell membranesurface takes an important biological function on aligand-acceptor and cell-cell interactions. Sialyltransferases
transaminate CMP-sialic acid as a sugar donor to a
mucin-type sugar chain of glyco-protein, an asparagine boundcarbohydrate chain and a non-reduction end sugar residue ofsphingoglycolipid(galactose,N-acetylgalactosamine,
N-acetylglucosamine and sialic acid). We have been trying topurify the recombinant native and inactive mutant proteins
expressed in E. coli.
(3) Purification and crystallization of human calcineurin
homologous protein (CHP).
CHP binds to Na+-H+-exchanger (NHE1) and regulates
intracellular pH. We have obtained crystals of CHP complex
with NHE1 fragment, which diffracted beyond 3 Å resolution.
(4) High resolution crystal structure of a β-lactamase, Toho-1.
β-Lactamases hydrolytically inactivate β-lactam antibiotics
and thus the expression of β-lactamases is a prevalent
resistance mechanism of pathogenic bacteria to β-lactam
antibiotics. Toho-1 is an extended-spectrum β-lactamase. We
succeeded in collecting a data set for the Toho-1/Imipenem
complex. Refinements are currently in progress.
(5) Three-demensional orientational imaging of single
molecule on actin filaments
Single molecule fluorescence microscopy can visualize thedynamics of a molecule. This method is complemental to themethods based on the static structure of molecules obteind by
X-ray crystallography and NMR method.
We are developing the three-dimensional orientation
imaging method to determine the conformational change of aprotein detected as a change of direction of α-helices. We
used bifunctional rhodamine (BR) to label a specific helix ofprotein.

We used troponin C (TnC) mutant to attach BR-label, andreconstruct thin filament with F-actin, tropomyosin, TnT and
TnI. We have been investigating the method to suppress
fluctuation of complex by Brownian motion without
interference of conformational change.
(6-8) Structural studies of tropomyosin fragments.
We have solved the crystal structures of tropomyosin
fragments past years. In this year, new crystal structure of thesame fragment was solved and this structure included novel
conformation of the molecules. Then, we can make further
discussion about the molecular properties of tropomyosin.
(C) Development of novel methodology in protein
crystallography.
(1) Protein crystal evaluation.
Development of an automatic crystallization observation
robot (TERA) contributed to structure determination of a lotof proteins. We have been developing of automatic crystal
evaluation system for an enormous number of crystallization
images in cooperation with a robotics research group of
RIKEN. By uniformity of crystallization plate andphotographic condition, the correct rate in the evaluation of
crystals reached more than 90%.
(2) Development of novel methodology in protein
crystallography.
High accurate refinement of protein crystal structures – The
accurate protein structure determination at the resolution
where hydrogen atoms are able to be observed in the electron
density map is essential to elucidate details of the non-bonded
interactions maintaining protein structure, but it is rare to geta protein crystal diffracting beyond 1Å resolution at where thehydrogen atoms appear in the map. The MEM (maximum
entropy method) is a potential method to overcome theresolution problem, and is popular among the material sciencebut not for protein crystallography. We are developing theprotocol, especially in modeling of water structure, to apply
the method on the protein crystallographic structuralrefinement.
Molecular replacement method – The structural similarity
between the target and the reference proteins is crucial to themolecular replacement method, because of the fewer
searching parameters of the current MR programs inreciprocal space. We start the development of a newmolecular replacement system based on the genetic algorism
to extend the searching parameters in real space.

Staff
Head
Dr. Masashi MIYANOMembers
Dr. Hideo AGO
Dr. Yasushi NITANAIMr. Akihiro YAMAMOTO
Dr. Tetsuya HORI
Dr. Mitsuaki SUGAHARA
Mr. Daisuke IRIKURA*1
Dr. Yo SATOW*1
Dr. Tatsuro SHIMAMURA*1*1 Contract Researcher

in collaboration with
Dr. Toshikazu EBISUZAKI (Computational Astrophysics
Lab.)
Dr. Akira HATTORI (Cellular Biochemistry Lab.)
Dr. Kuniaki KAWABATA (Distributed Adaptive Robotics
Research Unit)
Dr. Naoki KUNISHIMA (Oligomeric Protein Crystallography
Team)
Dr. Kayo MAEDA (X-ray Structural Analysis Research Team)
Dr. Takayuki OKAMOTO (Nanophotonics Lab.)
Dr. Masafumi TSUJIMOTO (Cellular Biochemistry Lab.)

Visiting Members
Dr. Shuji AKIYAMA (ERATO, JST)
Dr. Kosuke ARITAKE (Osaka Biosci. Inst.)
Dr. Shuichiro GODA (Grad. Sch. Sci. and Tech., Univ.
Nagasaki)Dr. Hiroshi HASHIMOTO (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama
City Univ.)
Ms. Hidemi HIRANO (ERATO, JST)
Dr. Hiroshi IMAI (ERATO, JST)
Dr. Katsuaki INOUE (JASRI)
Prof. Tsuyoshi INOUE (Grad. Sch. Eng., Osaka Univ.)
Dr. Satoshi ISHII (Grad. Sch. Med., Univ. Tokyo)
Mr. Mitsusada IWASA (ERATO, JST)
Prof. Yasuhiro KAJIWARA (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama
City Univ.)
Dr. Yoshihide KANAOKA (Harvard Med. Sch., USA)
Dr. Chieko KIMURA (ERATO, JST)
Dr. Yuko KURAHASHI (Fac. Human Life Sci., Doshisha
Women’s College of Liberal Arts)
Dr. Michael LASSALLE (ERATO, JST)
Prof. Yuichiro MAEDA (Grad. Sch. Sci., Nagoya Univ.)
Prof. Masayoshi MAEJIMA (Grad. Sch. Bioagric. Sci.,
Nagoya Univ.)Dr. Michitaka MASUDA (Nat. Cardiovascular Center)
Dr. Fumiko MATSUMOTO (Neutron Science ResearchCenter, JAERI)
Dr.Yoshiyuki MATSUURA (Grad. Sch. Sci., Nagoya Univ.)
Dr. Vladimir MESHCHERYAKOV (ERATO, JST)
Ms. Shiho MINAKATA (ERATO, JST)
Dr. Naoki MOCHIZUKI (Nat. Cardiovascular Center)
Dr. Nanae NAGATA (Osaka Biosci. Inst.)
Dr. Motoyoshi NAKAMURA (ERATO, JST)
Dr. Akihiro NARITA (ERATO, JST)
Dr. Eiji NISHIBORI (Grad. Sch. Eng., Nagoya Univ.)
Ms. Naoko ODA (ERATO, JST)
Dr. Hirofuni ONISHI (ERATO, JST)
Dr. David POPP (ERATO, JST)
Prof. Makoto SAKATA (Grad. Sch. Eng., Nagoya Univ.)
Prof. Mamoru SATO (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama City
Univ.)
Prof. Takao SHIMIZU (Grad. Sch. Med., Univ. Tokyo)
Dr. Toshiyuki SHIMIZU (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama
City Univ.)
Mr.Shuichi TAKEDA (ERATO, JST)
Dr. Soichi TAKEDA (Nat. Cardiovascular Center)
Dr. Yojiro TAMURA (General Education, Suzuka Natl. Coll.
Technol.)
Prof. Hideaki TSUGE (Inst. Health Sci., Tokushima Bunri
Univ.)

Mr. Takuro UCHIYAMA (Grad. Sch. Biosci. Biotech., Tokyo
Inst. Tech.)
Dr. Yoshihiro URADE (Osaka Biosci. Inst.)
Ms. Hiroko UTSUNOMIYA (Inst. Health Sci., Tokushima
Bunri Univ.)
Dr. Shigeo WAKABAYASHI (Nat. Cardiovascular Center)
Prof. Shozo YAMAMOTO (Grad. Sch. Home Econ., Kyoto
Women’s Univ.)

Trainees
Ms. Mayuko AKABOSHI (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama
City Univ.)
Ms. Sae AOYAMA (Grad. Sch. Home Econ., Kyoto
Women’s Univ.)
Mr. Shuheng DAI (Grad. Sch. Sci., Nagoya Univ.)
Mr. Kodai HARA (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama City
Univ.)
Mr. Hirokazu HIRABAYASHI (Grad. Sch. Int. Sci.,
Yokohama City Univ.)
Mr. Tasuku HIRAYAMA (Grad. Sch. Human andEnvironmental Studies, Kyoto Univ.)
Ms. Asami HISHIKI (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama City
Univ.)
Mr. Tsuyoshi IMAZAKI (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama
City Univ.)
Mr. Toshiyasu INUZUKA (Grad. Sch. Sci., Nagoya Univ.)
Ms. Saki IRIE (Grad. Sch. Home Econ., Kyoto Women’s
Univ.)
Mr. Toyokazu KOMATSUBARA (Grad. Sch. Int. Sci.,
Yokohama City Univ.)
Mr. Tsuyoshi KONUMA (Grad. Sch. Sci., Osaka Univ.)
Mr. Taro KUROSAKI (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama City
Univ.)
Ms. Nahoko NAGASAKI (Grad. Sch. Bioagric. Sci., Nagoya
Univ.)Mr. Yoichi NAOE (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama City
Univ.)Mr. Atsushi NOHARA (Grad. Sch. Sci., Nagoya Univ.)
Mr. Takashi ODA (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama City
Univ.)Mr. Minhao QIAN (Grad. Sch. Sci., Nagoya Univ.)
Mr. Yasuaki TAGAWA (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama City
Univ.)
Mr. Hironobu TANIMOTO (Grad. Sch. Sci., Nagoya Univ.)
Mr. Mayuki YAMABE (Grad. Sch. Int. Sci., Yokohama City
Univ.)
Mr. Kazunari YONEDA (Fac. Eng., Univ. Tokushima)

2315--2325 (2006). ＊Takeda S., Igarashi T., Mori H., and Araki S. :"Crystal structures of VAP1 reveal ADAMs' MDC
domain architecture and its unique C-shaped
scaffold", EMBO J. 25, 2388--2396 (2006). ＊Masuda M., Takeda S., Sone M., Ohki T., Mori H.,
Kamioka Y., and Mochizuki N. : "Endophilin BAR
domain drives membrane curvature by two newly
identified structure-based mechanisms", EMBO J.
25, 2889--2897 (2006). ＊Narita A., Takeda S., Yamashita A., and Maeda Y. :"Structural basis of actin filament capping at thebarbed-end:a cryo-electron microscopy study",
EMBO J. 25, 5626--5633 (2006). ＊Hori T., Ishijima J., Yokomizo T., Ago H., Shimizu T.,
and Miyano M. : "Crystal structure ofanti-configuration of indomethacin and leukotriene
B4 12-hydroxydehydrogenase/15-oxo-prostaglandin
13-reductase complex reveals the structural basisof broad spectrum indomethacin efficacy", J.
Biochem. 140, 457--466 (2006). ＊Aritake K., Kado Y., Inoue T., Miyano M., and Urade
Y. : "Structural and functional characterization of
HQL-79, an orally selective inhibitor of humanhematopoietic prostaglandin D synthase", J. Biol.
Chem. 281, 15277--15286 (2006). ＊Ago H., Oda M., Takahashi M., Tsuge H., Ochi S.,
Katunuma N., Miyano M., and Sakurai J. :"Structural
basis
of
the
sphingomyelin
phosphodiesterase
activityinneutralsphingomyelinase from Bacillus cereus", J. Biol.
Chem. 281, 16157--16167 (2006). ＊Imai H., Narita A., Schroer T. A., and Maeda Y. :"Two-dimensional averaged images of the Dynactin
complex revealed by single particle analysis", J.
Mol. Biol. 359, 833--839 (2006). ＊Onishi H., Mikhailenko S. V., and Morales M. F. :"Toward understanding actin activation of myosin
ATPase: The role of myosin surface loops", Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 103, 6136--6141 (2006). ＊誌 上 発 表Publications[ 雑誌 ]（原著論文）＊印は査読制度がある論文誌
Popp D., Yamamoto A., Iwasa M., and Maeda Y. :"Direct visualization of actin nematic network
formation and dynamics", Biochem. Biophys. Res.
Commun. 351, 348--353 (2006). ＊Bagautdinov B., Sugahara M., and Kunishima N. :"Purification, crystallization and preliminary
crystallographic analysis of archaeal 6-pyruvoyl
tetrahydrobiopterin synthase homologue PH0634
from Pyrococcus horikoshii OT3", Acta Cryst. F 63,
15--17 (2007). ＊Ammar Y. B., Takeda S., Hisamitsu T., Mori H., andWakabayashi S. : "Crystal structure of CHP2
complexed with NHE1-cytosolic region and an
implication for pH regulation", EMBO J. 25,

Sugahara M., Murai S., Sugahara M., and Kunishima
N. : "Purification, crystallization and preliminary
crystallographic
analysisoftheputativethiamine-biosynthesis protein PH1313 from
Pyrococcus horikoshii OT3", Acta Cryst. F 63,

56--58 (2007). ＊Popp D., Yamamoto A., Iwasa M., Narita A., Maeda K.,
and Maeda Y. : "Concerning the dynamic instabilityof actin homolog ParM", Biochem. Biophys. Res.
Commun. 353, 109--114 (2007). ＊Nakayama H., Shimamura T., Imagawa T., Shirai N.,
Itoh T., Sako Y., Miyano M., Sakuraba H., OhshimaT., Nomura N., and Tsuge H. : "Structure of a
hyperthermophilic archaeal homing endonuclease,
I-Tsp061I: contribution of cross-domain polar
networks to thermostability", J. Mol. Biol. 365,
362--378 (2007). ＊Narita A. and Maeda Y. : "Molecular determination byelectron microscopy of the actin filament end
structure", J. Mol. Biol. 365, 480--501 (2007). ＊（総説）
山本 雅貴, 宮野 雅司 : "創薬に役立つタンパク質のX線
結晶構造解析", 放射線と産業 , No. 110, pp.10--16(2006).
[ 単行本 ]
（原著論文）＊印は査読制度がある論文誌
Saito K., Kawabata K., Asama H., Mishima T., andSugahara M. : "Design of classifier to automate theevaluation of protein crystallization states",
Proceedings of the 2006 IEEE International
Conference on Robotics and Automation (ICRA
2006) , Orlando , USA , 2006-- 5 , IEEE
Robotics and Automation Society, Orlando,
pp.1800--1805 (2006). ＊（総説）
Ago H. and Miyano M. : "Structure basis of theunidirectional catalysis of long chain fatty acyl-CoA
synthetase. - Toward the vectorial movement
across the membrane", Functional and Structural
Biology on the Lipo-network , edited by Morikawa
K. and Tate S. , Transworld Research Network,
Keala, pp.95--115 (2006).
Maeda Y., Nitanai Y., and Oda T. : "From the crystal
structure of troponin to the mechanism of calcium
regulation of muscle contraction ", Regulatory
Mechanisms of Striated Muscle Contraction ,Springer, Tokyo, pp.37--46 (2007).
Nitanai Y., Minakata S., Maeda K., Oda N. , andMaeda Y. : "Crystal structures of tropomyosin:
flexible coiled-coil", Regulatory Mechanisms ofStriated Muscle Contraction , Springer, Tokyo,
pp.137--151 (2007).
口(国際会議等)頭発表

Oral Presentations

Saito K ., Kawabata K., Asama H., Mishima T., andSugahara M. : "Design of classifier to automate theevaluation of protein crystallization states", 2006
IEEE International Conference on Robotics andAutomation (ICRA 2006), (IEEE Robotics andAutomation Society), Orlando, USA, May (2006).
Imai H., Narita A. , Schroer T. A., and Maeda Y. :"The dynactin complex structure revealed by single
particle analysis", 2006 Gordon Research
Conference on Three Dimensional Electron
Microscopy, Barga, Italy, June (2006).
Ueda K., Kimura C., Aihara T., Ueki S., Miki M., andArata T. : "Conformational states of tropomyosin
molecule on muscle thin filament as studied bysite-directed spin labeling ESR", 20th IUBMBInternational Congress of Biochemistry andMolecular Biology and 11th FAOBMB Congress,(Japanese Biochemical Society Molecular Biology
Society of Japan ), Kyoto, June (2006).
Akiyama S., Yamada S., Sugimoto H., Kumita H., Ito
K., Fujisawa T., Nakamura H., and Shiro Y. :"Signal transduction pathway in Histidine Kinase
and Response Regulator Complex revealed by joint
usage of Crystallography and small-angle X-ray
scattering", 13th International Conference on
Small-angle Scattering (SAS2006), Kyoto, July
(2006).
Fujisawa T., Kuwamoto S., Maeda Y., and Okamoto
Y. : "The mechanism of pressure-induced
oligomerization of heavy meromyosin molecules
probedbysynchrotron
small-angle
X-ray
scattering", 13th International Conference on
Small-angle Scattering (SAS2006), Kyoto, July
(2006).
Lokanath N. K., Kuroishi C., Sugahara M., andKunishima N. : "Crystal structure of modular
stator subunit E of archaeal H$+-ATPase from
Pyrococcus horikoshii OT3", 2006 Meeting of theAmerican Crystallographic Association (ACA 2006),
Honolulu, USA, July (2006).
Popp D., Yamamoto A., and Maeda Y. : "Crowdedhydrophilic surfaces change annealing dynamics ofactin filaments", 16th International Microscopy
Congress (IMC16), (International Federation ofSocieties for Microscopy), Sapporo, Sept. (2006).
Maeda Y. : "Flexibility and flexibility changes introponin-tropomyosin complex and the mechanismofregulationofmusclecontraction",
Switzerland-Japan Symposium on Structural
Biology 2006 , (National Center of Competence in
Research), Brunnen, Switzerland, Sept. (2006).
Maeda Y. : "A mechanism for how the capping protein(CP) caps the actin filament barbed-end, proposed
based on the single particle analysis of cryo-EMimages", 21st European Cytoskeleton
Biopolis, Singapore, Oct.--Nov. (2006).

Forum,

Iwasa M., Sano K., Maeda K., Oda T., and Maeda Y. :"An establishment and analysis of recombinant
wild-type and mutant human cardiac actins", 5th
East Asian Biophysics Symposium and 44th
Annual Meeting of the Biophysical Society of Japan(EABS and BSJ 2006), Okinawa, Nov. (2006).
Ueda K., Kimura C., Aihara T., Ueki S., Miki M., andArata T. : "Conformational states of tropomyosin
molecule on muscle thin filament", 5th East Asian
Biophysics Symposium and 44th Annual Meeting of
the Biophysical Society of Japan (EABS and BSJ
2006), Okinawa, Nov. (2006).
Yamada S., Sugimoto H., Kobayashi M., Akiyama S.,
Nakamura H., and Shiro Y. : "Crystal structure ofhistidine kinase and response regulator complex",
5th East Asian Biophysics Symposium and 44th
Annual Meeting of the Biophysical Society of Japan(EABS and BSJ 2006), Okinawa, Nov.(2006).
Takiguchi K., Nomura F., Inaba T., Takeda S., Saito A.
H., and Hotani H. : "Direct obsevation of process ofvarious transformations that induced into giant
liposome", 5th East Asian Biophysics Symposium
and 44th Annual Meeting of the BiophysicalSociety of Japan (EABS and BSJ 2006), Okinawa,
Nov. (2006).
Uzawa T., Kimura T., Ishimori K., Morishima I.,
Matsui T., Ikeda-Saito M., Takahashi S., AkiyamaS., and Fujisawa T. : "Generality of initial collapse
demonstratedbyscaling
relationshipforsubmillisecond intermediates of protein folding",
5th East Asian Biophysics Symposium and 44th
Annual Meeting of the Biophysical Society of Japan(EABS and BSJ 2006), Okinawa, Nov. (2006).
Oda T. and Maeda Y. : "Modeling of F-actin", 5th East
Asian Biophysics Symposium and 44th Annual
Meeting of the Biophysical Society of Japan (EABS
and BSJ 2006), Okinawa, Japan, Nov. (2006).
Narita A., Oda T., and Maeda Y. : "Pointed end
structure of Actin-Filament", 5th East Asian
Biophysics Symposium and 44th Annual Meeting of
the Biophysical Society of Japan (EABS and BSJ
2006), Okinawa, Nov. (2006).
Nohara A., Ito K., Maeda Y., Kondo T., and Akiyama
S.
:"Real-Time
SAXS
obsevationofassembling-disassembling cycles of cyanobacterial
circadian clock proteins", 5th East Asian
Biophysics Symposium and 44th Annual Meeting of
the Biophysical Society of Japan (EABS and BSJ
2006), Okinawa, Nov. (2006).
Akiyama S., Nohara A., Ito K., Maeda Y., and Kondo
T. : "Small-angle X-ray scattering studies on

assembling-disassembling
complexesofcyanobacterial circadian clock proteins", 5th East
Asian Biophysics Symposium and 44th Annual
Meeting of the Biophysical Society of Japan (EABS
and BSJ 2006), Okinawa, Nov. (2006).
Bagautdinov B., Sugahara M., and Kunishima N. :"Structure of 6-Pyruvoyl Tetrahydrobiopterin
Synthase from Pyrococcus horikoshii OT3: Novel
Oligomerisation and Substrate Binding Modes",5th East Asian Biophysics Symposium and 44th
Annual Meeting of the Biophysical Society of Japan(EABS and BSJ 2006), Okinawa, Nov. (2006).
Aihara T., Nakamura M., Ueki S., Miki M., and Arata
T. : "Switch action of troponin I on the
Ca2+-regulated thin filament as revealed byspin-labeling
distancemeasurement
using
PELDOR", 5th East Asian Biophysics Symposium
and 44th Annual Meeting of the BiophysicalSociety of Japan (EABS and BSJ 2006), Okinawa,
Japan, Nov. (2006).
Takeda S., Narita A., Morii H., and Maeda Y. : "Thebinding mechanism of capping protein(CP) tobarbed and of actin filament", 5th East Asian
Biophysics Symposium and 44th Annual Meeting of
the Biophysical Society of Japan (EABS and BSJ
2006), Okinawa, Nov. (2006).
Ago H., Oda M., Takahashi M., Tsuge H., Ochi S.,
Katunuma N., Miyano M., and Sakurai J. :"Structural
basis
of
the
sphingomyelin
phosphodiesterase
activityinneutralsphingomyelinase from Bacillus cereus", Joint
Conference of the Asian Crystallographic
Association and the Crystallographic Society ofJapan (AsCA'06/CrSJ), Tsukuba, Nov. (2006).
Narita A., Mizuno N., Kikkawa M., and Maeda Y. : "A
new
image
analysistodeterminethedynein-microtuble complex structure", 51st Annual
Meeting of Biophysical Society, Baltimore, USA,
Mar. (2007).
Iwasa M., Maeda K., Narita A., Maeda Y., and Oda
T. : "Dual roles of Q137 of actin revealed by use ofrecombinant human cardiac α-actin", 51st Annual
Meeting of Biophysical Society, Baltimore, USA,
Mar. (2007).
(国内会議)
Popp D., 山 本 明 弘 , 前 田 雄 一 郎 : "Crowdedhydrophilic surfaces change annealing dynamics ofactin filaments", 理研シンポジウム「理研・分子研合
同シンポジウム： 第3回エクストリームフォトニクス
研究」, 和光, 4月(2006).
山本 明弘, 岡本 隆之, 成田 哲博, Popp D., 前田 雄一
郎 : "Imaging of three-dimensional directions ofsingle fluorophore for determination of $$-helices
orientaions", 理研シンポジウム「理研・分子研合同
シンポジウム： 第3回エクストリームフォトニクス研究」, 和光, 4月(2006).
Popp D., 山 本 明 弘 , 岩 佐 充 貞 , 前 田 雄 一 郎 :"Molecular trapping of SipA induced actin
filaments near crowded hydrophilic surfaces", 理研
シンポジウム「理研・分子研合同シンポジウム： 第3回エクストリームフォトニクス研究」, 和光, 4月(2006).
平山 祐, 山本 行男, 中村 志芳, 前田 雄一郎 : "蛍光1分子方位計測法に使用する2価蛍光色素の合成と蛋白質への結合", 理研シンポジウム「理研・分子研合同シンポジウム： 第3回エクストリームフォトニクス研究」, 和光, 4月(2006).
中村 志芳, 平山 祐, 銭 旻浩, Popp D., 山本 明弘, 前田 雄一郎 : "蛍光1分子方位計測法の筋のカルシウム
調節機構解明への応用", 理研シンポジウム「理研・分子研合同シンポジウム： 第3回エクストリームフォト
ニクス研究」, 和光, 4月(2006).
前田 雄一郎 : "蛋白質分子の動態と機能発現のメカニズ
ムの関係を理解するにはどうしたらよいか", 第2回生
物物理学的アプローチによるゲノム情報解析研究会,(名古屋大学), 名古屋, 9月(2006).
山田 斉爾, 秋山 修志, 杉本 宏, 城 宜嗣 : "X線結晶回
折とX線小角散乱の併用によるセンサーヒスチジンキ
ナーゼ/レスポンスレギュレーター複合体の構造機能解析", 理研シンポジウム「第2回生体分子の分離・解析法の進展：構造生物学の新技術開発とその応用」, 和光, 10月(2006).
成田 哲博, 武田 修一, 山下 敦子, 前田 雄一郎 :"Determination of actin filament end structure bycryo electron microscopy", 日本分子生物学会2006フ
ォーラム「分子生物学の未来」, 名古屋, 12月(2006).
前 田 雄 一 郎 : "Newly emerging possibilities instructural biology", 日本分子生物学会2006フォーラ
ム「分子生物学の未来」, 名古屋, 12月(2006).
前田 雄一郎 : "タンパク質分子の動態と機能の関係：動
きがおかしいタンパク質は病気を起こす？", 第12回
名古屋大学理学懇話会「生命の『核』を衝く：X線でみるタンパク質の動的構造」, (名古屋大学), 名古屋,
12月(2006).
南方 志帆, 似内 靖, 前田 佳代, 小田 直子, 若林 克三,
前田 雄一郎: "ウサギ骨格筋トロポミオシンC末端フラグメントの結晶構造解析と結晶構造から見るるト
ロポミオシンの柔軟性", 2007年生体運動研究合同班
会議, 金沢, 1月(2007).
植田 啓介, 木邑 智恵子, 相原 朋樹, 植木 正二, 三木

正雄, 荒田 敏昭 : "骨格筋の各種再構成フィラメント
におけるトロポミオシンのESR動的解析", 2007年生
体運動研究合同班会議, 金沢, 1月(2007).