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オオムラサキ成虫抽出液の抗酸化作用の検討（徳島大学

技術支援部 1、徳島大学大学院

北池 秀次 1、庄野 正行 2
医歯薬学研究部 法医学分野 2）

KITAIKE Syuji, SHONO Masayuki:
Evaluation of the antioxidant ability of extracted from Sasakia charonda
The present study, the Celtis in which Sasakia charonda like is a compound of flavonoids, amide derivatives, and has provenpharmacologic features. We revealed the bioactivated compounds of beings and report with the assessment of the antixide capacity
Sasakia charonda.

1． はじめに

これらの化合物をふまえ、エノキの葉とオオムラサ

蝶の食樹や食草は、種ごとで決まっていることが知キの抗酸化能、その抽出液を加えた肝臓内赤血球におられている。蝶の成虫は特定の植物の葉などに産卵し、ける抗酸化能について測定した。

幼虫はその植物を摂食する。例えばオオムラサキの幼(1) 試薬および実験材料

虫は、エノキやエゾエノキの葉を好み、他の植物の葉DAPI（同仁化学）、PBS(-)（富士フィルム和光純薬は食さない。嗅覚や味覚といった化学受容に関わる分株式会社）、L-アスコルビン酸（富士フィルム和光純薬

子機構により、幼虫時代に食した植物の成分を体内に株式会社）、市販ホワイトリカー（35 容量%）、エノキ蓄積して、エネルギー的なものから各種化合物の認識の葉（奈良県）、オオムラサキ成虫の雄・雌（オオムラに至るまで何世代にも亘って長年繰り返されることでサキ研究所）、ニワトリの肝臓は徳島県内で購入した。

種分化へ繋がっている。これまでオオムラサキが好む(2) 抽出とサンプル準備

エノキには、生物学的に活性なフラボノイドやアミド乾燥させたエノキの葉（10g）およびオオムラサキ成誘導体などの化合物が含まれていることが明らかにな虫（20 体）の雄と雌を、無極性成分を除去するためにり、薬理学的特性が証明されつつある。

ホワイトリカー（200ml）で各々約３ヶ月間抽出した。

本研究では、エノキの生物活性化合物について着目

それぞれの抽出物は、マイクロチューブに 1ml ずつ採し、オオムラサキ成虫が持つ抗酸化能を評価したので取して 3 本（合計 3ml）を 12000rpm で 10 分間遠心分報告する。

離を行った。
(3) 蛍光・励起スペクトル分析

2．方法

遠心分離した上澄み液を石英セルに入れて、蛍光分

エノキの植物化学に関するデータは殆どないが、光光度計（Jasco FP-6600）で蛍光スペクトルおよび励

Abisola Grace Ayanlowo ら によって、エノキ抽出物の起スペクトルを測定した。

中から抗酸化成分を同定している（表 1）。

(4) 蛍光顕微鏡を用いた細胞核の抗酸化能の確認

1)

抗酸化能は我々が本研究会にて報告 2)した方法で、表1． エノキの抽出物から単離された化合物の文献データ

ニワトリの新鮮な肝臓の一部をメスで切断後、その断面を 35mm プラスチックシャーレにスタンプして風乾N-trans-p-coumaroyloctopamine

し、99.5%エタノール液を 2ml 入れて 15 分間固定して

N-trans-feruloyloctopamine

肝臓内赤血球（有核細胞）の標本を作製した。標本は、

N-trans-caffeoyltyramine

DAPI(4’、6-diamidino-2-phenylindole、1μg/mL/PBS、12-trans-3-(4-hydroxyphenyl)-N-[2-(4- hydroxyphenyl)-2ox時間)で核染色後、PBS 緩衝液で 3 回洗浄し、蛍光減衰oethyl]prop-2-enamide防止剤として各抽出液を封入した。

N-trans-p-coumaroyltyaramine
N-trans-feruloyltyramine

蛍光画像撮影は、キーエンス蛍光顕微鏡（BZ-9000）を使用して励起光源は超高圧水銀ランプ（120W）、励

生物学・生理学技研報 202244起光量 100%で蛍光画像撮影の最適な条件を検討し、4．考察

励起波長 360nm、露光時間 1/3.5s、観察レンズ 20 倍で今回の実験データより、エノキ抽出液の抗酸化能は撮影した。測定時間は 5 分毎 30 分間のタイムラプス撮

低いが、エノキの葉を食べてきたオオムラサキから得影を行い、各抽出液の蛍光強度を経時的に追跡した。

た抽出液は、高い抗酸化作用があることを示唆した。

得られた蛍光画像は、画像解析ソフト ImageJ を用いて、T.S.M.A.El-Alfy ら 3)は、エノキの樹皮から調製した赤血球核相対蛍光強度を算出した。

煎じ薬を月経中の補助薬や喉の痛みを和らげるために使用し、抽出物は黄疸の治療に使用したと報告してい3．結果る。エノキの抽出物から単離された化合物の中で，2エノキの葉とオオムラサキ成虫の雄・雌の蛍光・励つのフェニルプロパノイドアミド（N-trans-p-coumaroy起スペクトルを測定した結果、エノキの葉は励起波長

loctopamine、N-trans-feruloyloctopamine）は、高い抗酸445nm で 520nm に僅かな蛍光ピークを観測した。オオ化作用を持つニンニクの皮の主要な抗酸化成分としてムラサキの雄と雌は、励起波長 336nm で 428nm に蛍光同定されている。アミドの特性はあまり知られていなピークを観測し、それぞれ雄と雌の蛍光・励起強度にいが、Zheng-Rong Wu ら 4)は、ラットの NASH（非ア大きな違いはなかった（図 1）。

ルコール性脂肪肝炎）モデルに対する抗酸化物質の保護効果として重要な役割を果たすことを報告している。
オオムラサキ成虫抽出液は，抗酸化物質におけるヒトの治療アプローチとして、酸化ストレスが大きく、抗酸化防御が小さい不均衡な肝臓疾患に役立つことが期待される。
5. 謝辞
本研究において、オオムラサキの雄・雌の成虫を提供していただいた日本の国蝶オオムラサキ研究所 5) 林

図 1． エノキの葉、オオムラサキ成虫の雄雌の励起・蛍光ス

太郎氏に感謝いたします。

ペクトル

次に、肝臓内赤血球における抗酸化能を測定した。
相対蛍光強度は、PBS(-)の初期値を 100%に換算してエ

参考文献
1)

Abisola Grace Ayanlowo et al (2020) UHPLC-DP

ノキの葉、オオムラサキの雄と雌の蛍光減衰曲線を比PH method reveals antioxidant tyramine and octop較した。結果、参考物質の L-アスコルビン酸ナトリウ

amine derivatives in Celtis occidentalis.

ム（1%）に対し、エノキの葉とオオムラサキの雌は抗2)

北池秀次、庄野正行 (2020) 蛍光顕微鏡を用い酸化力が低く、30～35%の蛍光減衰となった。一方、

た簡易抗酸化力評価の検討 生理学技術研究会報

オオムラサキの雄は 15%程度の蛍光減衰に留まり、L-

告第 42 号

アスコルビン酸ナトリウムに次ぐ高い抗酸化力を発揮

3)していることが確認できた（図 2）。

T.S.M.A.El-Alfy, H.M.A.El-Gohary, N.M.Sokkar,
S.A.El-Tawab, D.A.M.Al-Mahdy (2011) Botanicaland genetic characteristics of Celtis australis L. andCeltis occidentalis L.grown in Egypt, Bull.Fac.Pharm.
Cairo Univ. 494)

Z.R. Wu, Yang-Li Peng-Chen, J.Y. Li, Yong-Wan
g Xin-Wang, D.D. Guo, Q.G. Lei-Cui, H.Y.Li Guan (2015) Two cinnamoyloctopamine antioxidants
from garlic skin attenuates oxidative stress and liv
er pathology in rats with non-alcoholic steatohepat
itis, Phytomedicine. 22

図 2． エノキの葉、オオムラサキ成虫の雄雌、L-アスコルビン酸ナトリウムの蛍光減衰曲線455)

日本の国蝶オオムラサキ研究所ホームページ

生物学・生理学技研報 2022