（社）大分県臨床検査技師会
平成24年度第2回移植検査部門講演会

現場で役立つ輸血検査
こんな時、どうする！！（第2弾）
鹿児島大学病院 輸血部
舞木 弘幸

大分赤十字病院院 2013.1.26

九州ブロック各県赤十字血液センター
業務集約化についてのお知らせ
平成19年11月29日

血液型検査にて異常を呈した場合

血液型検査にて異常を呈する要因●血液型亜型 Ａxの１家系、A1Bmの１例●型転移酵素活性の低下による抗原減弱●無γグロブリン血症による抗体欠損の１例●自己抗体による偽陽性反応●血液型ウラ試験での弱陽性反応●血液型Ａ、Ｂキメラ●ＡＢＯ不適合移植後の血液型キメラ●異型適合血輸血後の血液型キメラ

血液型検査にて反応結果に差を認めたＡｘの１家系

輸血検査所見
１．血液型検査
ABO式血液型
Rh式血液型
２．不規則性抗体検査
３．レクチンとの反応
４．抗体価

オモテ試験：抗A抗体（１+mf）、抗B抗体（－）
ウラ試験：A1血球（２+）、B血球（４+）
抗D血清（４+）
ブロメリン法（－）、Peg-IAT法（－）
抗A1レクチン（－）、抗Hレクチン（４+）
抗A1抗体価：８倍、抗B抗体価：１２８倍

５．型転移酵素活性A-transferase ０倍（対照A型512倍）
B-transferase ０倍（対照B型32倍）
６．抗A抗体を用いた吸着解離試験 A1血球（４+）、B血球（－）、O血球（－）
７．爪を用いたAB型物質の検出 A1血球（+ｗ）、B血球（－）

８ ．各社抗Ａ抗体との反応 バイオクロン抗Ａ以外にセラクローン抗Ａ、ワコーモノクロ抗Ａ、ワコー動免抗Ａに凝集を認めた
９ ．家系調査 患者以外に母親、第１子からＡ抗原が検出された

各メーカーの試薬との反応性の比較
各社抗Ａ抗体各社抗Ｄ抗体血清学的方法による家系調査結果
Ｂ型

Ｏ型

Ａx型

Ａx型

Ａx型

Ｏ型

NTNT:Not testedカラム凝集法による血液型検査結果
患者

１２３４

母親

５６１２１２５６

第１子３４３４５６吸着解離試験、型転移酵素活性の測定が有用であった抗体欠損（低下）、A1Bmの各１例

抗Ａ，抗Ｂ血清を用いた吸着解離試験（熱解離試験）に必要な機材、試薬
52℃前後の温度設定可能な恒温槽

吸着させる抗Ａ、抗Ｂ抗体および解離液と反応させるＡ血球、Ｂ血球

型転移酵素活性試薬 ガルサーブＡＢ

Ａ、Ｂ緩衝液とＡ、Ｂ基質

カラム凝集法による血液型検査結果
１２３ゲルカラム凝集法

症例１：抗Ｂ抗体欠損（低下）のＡ型
吸着解離試験：Ｂ抗原陰性
Ｂ型転移酵素活性：陰性

ビーズカラム凝集法

症例２：A1Bm型
吸着解離試験：Ｂ抗原陽性
Ｂ型転移酵素活性：16倍４５６Ａ型転移酵素の低下によりＡ抗原の減弱を呈した

１症例

症例提示

入院時検査所見：白血球数6300／μL、赤血球数404万／μL、血小板数3.9万／μLと軽度の貧血と血小板減少症を呈していた。
輸血検査所見：ABOオモテ試験が抗A抗体（2+mf）、抗B抗体（－）でありウラ試験はA1血球（－）、B 血球（4+）であった。
A型転移酵素活性は8倍（対照A型256倍）であった 。
尚、治療後にフローサイトメトリーにてA抗原の発現量を測定したところ陽性率は増加していたことから、抗A抗体に部分凝集を呈した要因は血能の低下に伴った型転移酵素活性の低下によるものと考えられた。

ゲルカラム凝集法を用いた血液型検査結果

１２３４５６

フローサイトメトリーを用いたＡ抗原量の測定

無γグロブリン血症による抗体欠損（低下）の１例

検査データ●血液型検査（試験管法）
オモテ試験 抗Ａ抗体（０） 抗Ｂ抗体（０）→Ｏ型
ウラ試験 Ａ血球（０）Ｂ血球（０）

４℃にて Ａ血球（1+）

Ｂ血球（０）→AB型●生化学検査TP：6.5g／dL（6.7～8.3ｇ／dL）
IgG：626mg／dL（680～1620mg／dL）↓

IgA：<1.0mg／dL（84～438mg／dL）↓
IgM：2.0mg／dL（57～288mg／dL）↓↓

イムノグロブリンの低下

ゲルカラム凝集法による血液型検査
オモテ試験:Ｏ型、ウラ試験:AB型

ビーズカラム凝集法による血液型検査
オモテ試験:Ｏ型、ウラ試験:保留抗Ｂ抗体のみ特異的に欠損したＯ型の１例

症例提示
輸血検査所見１. ABOオモテ試験Ｏ型、ウラ試験Ｂ型であった。
２. 抗Ｂを用いた吸着解離試験にてＢ抗原陰性であった。
３. Ｂ型転移酵素活性も陰性であった。

抗Ａ抗体 抗Ｂ抗体 Ａ1血球

Ｂ血球血液型

患者

004*0

判定保留

長男

0

0４＋4+Ｏ型

長女

0４＋４＋0Ｂ型

ゲルカラム凝集法による血液型検査結果

自己抗体によりABO、RhD血液型判定が困難であった症例

症例提示

血液型検査：オモテ試験 抗A抗体（4+）、抗B抗体（1+）
ウラ試験

A血球（０）、B血球（2+）

RhD血液型抗D抗体（4+）、Ctrl（1+）

追加検査：DATが陽性であったことから自己抗体による影響が考えられ、自己抗体の吸収処理を行った。
クロロキン処理にて吸収後、再度血液型検査を行いA型RhD陽性と判明した。

自己抗体吸収処理前後の血液型査結果
１２

クロロキン未処理

クロロキン処理後

３４５６第44回九州医学検査学会: 佐世保. 2009

血液型ウラ試験での弱反応性についてーAel、AelB症例から考えるー

鹿児島大学病院輸血部
舞木 弘幸

外室 善英

迫田 みどり尾前古川 良尚歩はじめにＡＢＯ血液型検査においてオモテ試験の結果とウラ試験の結果が一致した場合、血液型は確定されている。オモテ試験での弱反応性については、糖鎖が未発達である新生児以外は通常、異常と考えられている。一方、ウラ試験での弱反応性については具体的には基準が定められていないのが実情である。また、最近普及してきているカラム凝集法によるウラ試験での弱反応性についても同様に具体的な判定基準が設定されていない。
今回、ウラ試験にて弱反応性を呈した症例について吸着解離試
験を実施してAel型、AelB型と判定された症例を経験したことから血液型検査のウラ試験の弱反応性の対応、解釈について考えてみたいと思う。

症例１Ａel型
血液型検査

試験管法による結果

抗Ａ抗体 抗Ｂ抗体 抗Ｄ抗体
OO4+

Ctrl
0

Ａ 1血 球2+

抗Ａ1レクチン（ー）抗Ｈレクチン（3+）
抗Ａ抗体を用いた吸着解離試験の結果

Ａ1血球（1+）、Ｂ血球（ー）でＡ抗原を検出した。

Ｂ血球4+

ゲルカラム凝集法による血液型検査結果

１２３４５６

ビーズカラム凝集法による血液型検査結果
１２３４５６

症例２ＡelＢ型

血液型検査
試験管法による結果

抗Ａ抗体 抗Ｂ抗体 抗Ｄ抗体
04+4+

Ctrl
0

Ａ 1血 球2+

抗Ａ抗体を用いた吸着解離試験の結果
Ａ1血球（1+）、Ｂ血球（ー）でＡ抗原を検出した。

Ｂ血球0ビーズカラム凝集法による血液型検査結果
１２３４５６

ＡＢＯ亜型での血液型検査結果

症例１

症例２Ａ2Ａ3
Ａm
Ａx
ＡelＢ3Ｂm
Ｂx
ＢelＡ xＢ
Ａ 1Ｂ x
Ａ mＢ
Ａ 1Ｂ mＡ e lＢＡ 1Ｂ e l

抗 Ａ 抗 体 抗 Ｂ 抗 体 Ａ 1血 球
4+001+ mf
00000w+
0w+
001+
01+ mf
4+
0
04+
0w+
4+
004+w+
4+w+
4+w+
0
04+
04+
0004+
1+4+
00

Ｂ血球
4+
4+
4+
4+
4+
00w+
1+0w+0001+

まとめ
ＡＢＯ血液型検査のウラ試験においてたびたび弱反応を呈することがあり、判定に苦慮することがある。

今回、ウラ試験において弱反応を呈した２症例に対して吸着解離試験を行いAel型、AelB型を検出した。
ＡＢＯ血液型検査でのウラ試験での弱反応性については具体的な判定基準がないのが実情である。
今後は、日本輸血・細胞治療学会等においてＡＢＯ血液型検査での具体的な判定基を設定したガイドラインの作成をお願いしたい。

血液型検査にてキメラが考えられる場合

フローサイトメトリーにより診断しえた
Ａ，Ｂキメラの１例

症例提示
血液型検査結果

抗Ａ血清 抗Ｂ血清 抗Ｄ血清
1+ mf
4+ mf4+Ctrl
0

Ａ 1血 球0

Ｂ血球0

各種血液型表現型：CCDee，Le(a-b+)，P2，NNss，Fy(a+b-)，Jk(a+b+)
フローサイトメトリーの結果

Ａ型とＢ型のキメラと判明した。陽性率は、Ａ型8.0％、Ｂ型92.0％であった。

ゲルカラム凝集法を用いた血液型検査結果

１２３４５６

ビーズカラム凝集法による血液型検査結果
１２３４５６

抗Ｂ（Mouse IgM，FITC）

フローサイトメトリーを用いたTwo color
解析によるＡ，Ｂキメラの診断
Ｂ型92.0％

Ａ型8.0％

抗Ａ（Human IgM，PE）

ＡＢＯ不適合造血幹細胞移植後長期間混合キメラを呈している１例

CD34陽性細胞移植後13年目の各種血液型検査結果
MTSによる検査結果
１２３４５６

各種血液型検査の反応結果
A1CｃEe

M

N

S

ｓ2+mf

4+4+4+4+2+mf

3+mf

04+

H

Fya

Fyb

Jka

Jkb

Xga

Dia

P14+mf4+2+mf4+1+mf1+mf

01+mf

異型適合血輸血後キメラを呈した１例

異型適合血輸血を受けて緊急搬送された症例
AB型の患者にA型のRCC-LR 2単位輸血

不規則抗体検査にて異常を呈した場合

間接抗グロブリン試験にて自己対照を含めすべての血球に凝集を呈する症例に対しての輸血の選択

鹿児島大学医学部附属病院輸血部
舞木 弘幸 丸山 芳一

肥後 恵子

宮路 由香 渡辺 紘子丸山 征郎

検査所見

１血液検査：WBC 10200／μl，RBC 147万／μl，Hb 5.8g／dl，Plt 34.9万／μl，Ret 238‰
２生化学検査：LDH 984IU／L，T-Bil 2.3mg／dl，ID-Bil 1.6mg／dl，TP 7.4g／dl（Alb 57.1％，α1G 3.6％，α2G 6.2％，βG 9.9％，γG 23.2％），IgG 2146mg／dl， IgA 449mg／dl，IgM 56.7mg／dl，IgD 2.0mg／dl，C3 126.8 mg／dl，C4 24.8mg／dl
３輸血検査：A型 R1r（CcDee，クロロキン処理後の赤血球使用）

DAT：4+（1024倍），Peg-IAT：3+（256倍）

カラム凝集法による血清からの自己抗体の同定

カラム凝集法による解離液からの自己抗体の同定
抗ｅ自己抗体を検出

PDN 5mg／day
Hb g／dl
12DAT(+)↓

10LDH

LDH IU／L
1000

800

8600

Hb64004200

2012／2002001 2／7

2／19

2／26

3／5

臨床経過 （AIHA 75yr／M）

3／123／21

自己抗体保有８例に対しての解析結果

鹿児島大学病院輸血部

舞木 弘幸

田之上 三喜恵 迫田 みどり 外室 喜英
古川 良尚

第55回総会・第76回例会日本輸血・細胞治療学会九州支部会,佐賀.2008

今回、自己抗体保有症例について検討、報告してみようと思った理由は平成20年1月より九州ブロックの血液センターの検査業務が久留米市の九州血液センターに集約化されました。

血液センターへの赤血球系の主な依頼検査は●血液型検査精査：吸着解離試験、糖転移酵素活性●不規則性抗体同定：パネル血球による抗体同定

DAT陽性による抗体解離試験
高頻度抗原に対する抗体の同定は病院レベルでは困難。
自己抗体保有症例での抗体同定は実施可能か。

直接抗グロブリン試験および間接抗グロブリン試験
陽性にて自己抗体の精査を行った８症例
症例

診断名

年齢

性別

1

SLE Evans症候群

38歳

女性

2

AIHA

9歳

女性

3

大動脈弁狭窄症

84歳

女性

4

潰瘍性大腸炎

36歳

女性

5

IgA腎症

31歳

女性

6

慢性腎不全

57歳

男性

7

膀胱腫瘍

77歳

男性

8

SLE

62歳

女性

自己抗体、同種抗体の精査の方法●血清からの自己抗体、同種抗体の検出
クロロキンにて自己吸収処理を行った。

●赤血球からの自己抗体の検出
酸解離にて自己抗体の検出を行った。

自己抗体の吸収方法●ZZAPによる吸収操作●PEGによる吸収操作●クロロキンによる吸収操作検査成績１
症例

診断名Bro法

IAT法

吸収後解離液抗体同定

1

SLE Evans症候群

2＋2+～3+抗S

2+吸収後血清2AIHA

NT

抗C 抗e

抗C 抗e

抗C 抗e

3

大動脈弁狭窄症

0～2+3+2+0なし

4

潰瘍性大腸炎4+3+2+0～2+なし

5IgA腎症

抗E

抗E 2+

抗E 1+

1+～2+

血清

6

慢性腎不全

02+

1+

抗E 1+

解離液

7

膀胱腫瘍

3+2+～3+

抗e

2+

吸収後血清

8

SLE

3+4+2+～3+2+なし

血清解離液

自己抗体保有症例に対しての輸血は？

自己抗体保有症例に対しての輸血症例

診断名

自己抗体

同種抗体 RCC

12345678

SLE Evansなし

抗S2Ｕ

3.4

6.7

121

NTAIHA

抗C 抗e

なし

なし

5.5NT358NT

大動脈弁狭窄症

なし

なし

22Ｕ

12.214188

215

潰瘍性大腸炎なし

なし

なし

11NT132

NT

IgA腎症

なし

抗E18Ｕ

11.910162189

慢性腎不全

抗Eなし

12Ｕ

11.310.4171171

膀胱腫瘍なし抗eなし

12.9NT193

NTSLEなし

なし

4Ｕ

5.88.3369

348

Hb前 Hb後 LDH前LDH後

まとめ●自己抗体保有8例に対して、精査を行い5例に特異性を認める自己抗体もしくは同種抗体を検出した。

●吸収処理後の患者血清を用いて不規則性抗体同定検査を行ったところ血清中から同種抗体3例（抗E 1例、抗e 1例、抗S 1例）、自己抗体1例（抗E 1例）を検出した。

●患者赤血球の解離液からは自己抗体1例（抗C＋抗e）を検出した 。
●Rh表現型がCCDee、ccDEEの症例5例中4例にRh系の自己抗体もしくは同種抗体を検出しており、輸血時の血液製剤のRh表現型の選択には注意が必要と考えられた。

Auto Vue Innova陽性、Peg-IAT法陰性を呈した

ミミッキング抗体と思われる１例

不規則抗体スクリーニング結果

1232+1+00.8%RCD法

不規則抗体の精査●食塩水法：陽性、特異性を認めなかった。

●Peg-IAT法：陰性、抗体は検出されなかった。
●Auto Vue Innova：陽性を呈し、抗Ｎ様の抗体を検出した。

●Micro Typing System：陰性、抗体は検出されなかった。
●DAT試験：陰性 抗IgG(ー)、抗C3b,C3d(ー)●各種タイピング MNss、 CcDEe、Le(a-b+)、P2、Jk(a-b+)、Fy(a+b-)

Auto Vue Innovaによる間接抗グロブリン試験の結果

12345678910112+01+0w+

01+2+w+00

抗Ｎ同定Micro Typing Systemによる間接抗グロブリン試験の結果

1234560000007080

不規則抗体：陰性

91011000