目次

特集：新規に開発された産業動物用抗菌性物質の基礎と応用
今回のシンポジウムにあたって……………………………………小久江栄一………………… １
１．トビシリンについて……………………………………………井上喜久治………………… ２
２．セフキノムについて……………………………………………渡辺典夫・遠山俊光……… １
１
３．セフチオフルについて…………………………………………岩隈昭裕…………………… ２
１
４．ジフロキサシンについて………………………………………松本修治…………………… ３
１
５．バルネムリンについて…………………………………………梶原敬太…………………… ３
７
投稿論文：
犬における歯周病に対する塩酸クリンダマイシン経口投与剤の臨床的効果……………………………………………………………中出哲也ほか……………… ４５動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止濃度（MIC）測定法（改訂）………………

５
２

The Determination Method of Minimum Inhibitory Concentration（MIC）of
Antimicrobials against Bacteria Isolated from Animals（revision） ……………………………… ６４
会務報告………………………………………………………………………………………………… ７５
動物用抗生物質・合成抗菌剤略語表（系統別およびアルファベット別）……………………… ８３
会員名簿………………………………………………………………………………………………… ９５

□□□／26（2004） 1

特集：新規に開発された産業動物用抗菌性物質の基礎と応用
Symposium : The Properties and Clinical Application of New Antimicrobials
for Farm Animal Use
今回のシンポジウムにあたって
小久江栄一（動物用抗菌剤研究会理事長）

今年のシンポジウムについて，1 月にメンバー

シンポジウムに先立つ特別講演では，国立感染が集まりテーマを検討した。いろいろな意見と症研究所の渡辺治雄先生に「FAO/OIE/WHO 合

テーマ候補が出たが，結局，新たに承認を受けた同ヒト以外の抗菌性物質の使用と薬剤耐性に関す

産業動物用抗菌剤について，その製剤の性格や使る専門家会議の概要」について，ご報告をいただ

い方を各社から解説していただくことをテーマにいた。この専門家会議は WHO の主導で昨年 12 月

選んだ。理事の中からは，新薬の紹介だけでは魅に急遽開催されたもので，内容については非公

力に欠けるのではという意見も出されたが，新た開，日本からは渡辺先生がただお一人参加されたに開発された動物用抗菌剤を会員に紹介し正しくので，その分，貴重なご報告であった。飼料添加

理解することは本会の務めであり，設立の主旨にで動物に投与される成長促進用抗生物質により動も適うことである，ということでそうなった。動物の腸管内に産生された耐性菌が人の腸管に定着物用抗菌剤の開発が華やかだった頃は，2，3 年にし，公衆衛生上の危険をもたらすのではないかと

一度はこのテーマでシンポジウムが開かれていたいう提議について，世界中で十年以上も激しい科が，ここ十年近くこの企画がなく，未紹介の新製学論争が続けられてきた。当研究会でも，昨年の剤がかなりの数になったという背景もあった。シ

シンポジウムで勉強会を開いた大きな関心事でンポジウムで紹介された抗菌剤は，ペニシリン Gあった。合同会議では，「成長促進用として飼料添

プロドラッグの水産用トビシリン（武田シェリン

加で動物に投与される抗菌薬により動物の腸管内

グプラウアニマルヘルス；井上喜久治氏），第三で耐性菌が産生され，その耐性菌が人の腸管に定世代セフェムである牛の肺炎に使うセフキノム

着して耐性形質を人の腸内細菌叢に伝播すること（三鷹製薬；渡辺典夫氏），同じく第三世代セフェはあり得る」という結論が採択された。一応そう

ムで，牛や豚の肺炎に使うセフチオフル（ファイいう結論にして果てしない科学論争は終えて，マザー；岩隈昭裕氏），フルオロキノロンで豚用のネージメント（規制）面での工夫により，現実的

ジフロキサシン（大日本製薬；松本修治氏），ジテ

な 問 題 を 処 理 す る と い う 方 針 な の で あ ろ う。

ルペン系抗生物質で豚用のバルネムリン（ノバルWHO の思惑通りの決論，というのが渡辺先生のティスアニマルヘルス；梶原敬太氏）の 5 つで感想であった。

あった。

本特集は 2004 年 4 月 24 日に開催された本会主催の第 31 回シンポジウムの講演要旨である。

1

2 動物抗菌会報 26（2004）

トビシリンについて
井上喜久治
武田シェリング・プラウアニマルヘルス株式会社（〒 541-0046 大阪市中央区平野町 2-3-7）

ブリの養殖業において甚大な被害を与える魚病

日本名：(+)-3- イソブチリルオキシメチルフェ

として類結節症とレンサ球菌症が挙げられる。ブニ ル (2S,5R,6R)-3,3- ジ メ チ ル-7- オ キ

リのレンサ球菌症の起因菌であるα溶血型の

ソ-6-(2- フェニルアセトアミド )-4- チ

Lactococcus garvieae（以下 L. garvieae）は Kusuda

ア-1- アザビシクロ [3.2.0] ヘプタン-2-

らの報告（1974）［1］以降，Streptococcus 属に分類

カルボキシレートされてきたが，1991 年に Enterococcus seriolicida，

英

名：(+)-3-isobutyryloxymethylphenyl (2S,5R,6R)-1996 年に L. garvieae のジュニア・シノニムである

3,3-dimethyl-7-oxo-6-(2-phenylacetamido)-と報告され，現在に至っている［2 − 4］。

4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylate
CAS No. 151287-22-8

レンサ球菌症の治療には，マクロライド系抗生分子量：510.61

物質，リンコマイシンおよびフロルフェニコール
製剤が用いられるが，マクロライド系抗生物質に

TBPC の重量と単位：TBPC 1mg=1163 単位耐性化した L. garvieae が分離されるようになり，

TBPC の特長は，親化合物の PCG に比べ，脂溶治療効果が得られにくい状況にあった。養殖現場

性が著しく増大しており，水にほとんど溶けず，からはマクロライド系抗生物質の耐性菌に有効な

広範囲の pH の水溶液に対し安定で，生体への吸新規薬剤の上市が切望されていた。

収性も高められている点にある。
生物学的特徴は，

このような状況を踏まえ，トビシリン（以下

抗菌活性を有さず，吸収の際にエステラーゼなど

TBPC）をブリのレンサ球菌症に対する新しい治の酵素により加水分解を受け，PCG として抗菌活療薬として開発することで養殖業に貢献できると性を発現する点である。

考えて開発検討を開始し，2001 年に商品名フジペ
ニン 40 でスズキ目魚類のレンサ球菌症を対象とした動物用医薬品として承認された。

１．TBPC の性状
TBPC はペニシリン G（以下 PCG）のプロドラッグ化を目的に，1991 年に藤沢薬品工業株式会
図1

社の特薬研究所で創製された新規化合物で，PCG

TBPC の構造のカリウム塩と 3-hydroxybenzyl isobutyrate をエ

２．TBPC の毒性

ステル縮合させることにより合成された。1996 年
7 月 31 日の医薬品名称調査会で，一般的名称が以１）急性毒性下のように決定された。

ICR 系（Crj：CD-1）SPF マ ウ ス お よ び SD 系

JAN（日本名）トビシリン（英名）tobicillin2

井上喜久治／トビシリンについて／26（2004） 3（Crj：CD）SPF ラットに TBPC を経口，皮下お般的に認められる薬効的な変化以外に毒性変化

よび腹腔内に投与したが，2,000mg/kg の投与では認められなかった。しかし，10mg/kg 以上のも死亡例はなかった。

投与群で早産および流産が認められ，TBPC の

２）亜急性毒性

母動物の妊娠維持に対する毒性変化からみた無1 群当たり，雌雄各 10 匹の SD 系（Crj：CD）

影響量は 3.3mg/kg，一般毒性学的な毒性変化

ラットに TBPC の 200，650 および 2,000mg/kg をからみた無影響量は，30mg/kg，また，胎子に

1 日 1 回，28 日間反復経口投与した結果では，対する一般毒性学的な毒性変化からみた無影響

2,000mg/kg 投与でも死亡例はなく，抗菌性物質の投与で一般的に観察される変化以外には，毒性変化は認められなかった。
３）慢性毒性
1 群当たり，雌雄各 10 匹の SD 系（Crj：CD）

量は 30mg/kg であると推察された。
５）細菌を用いる復帰変異試験
試験菌に Salmonella Typhimurium TA100，TA1535，
TA98 および TA1537 ならびに Escherichia coli WP2
uvrA 株を用いて，プレインキュベーション法によ

ラットに TBPC の 200，650 および 2,000mg/kg をり，非代謝活性化系（S9 mix 無添加）および代謝

1 日 1 回，3 カ月間反復経口投与した。2,000mg/kg

活性化系（S9 mix 添加）で検討した。その結果，投与でも死亡例はなく，亜急性毒性試験で得られ変異コロニー数の顕著な増加は認めれず，細菌にた所見と同様に，抗菌性物質の投与で一般的に観対する変異原性は有しないと判断されたことか察される変化以外には，毒性変化は認められず，ら，TBPC の遺伝子突然誘発作用は極めて少ない

また，これらの変化の程度の増強も認められなと予測された。

かった。

６）哺乳類の培養細胞を用いる染色体異常試験

４）催奇形性チャイニーズハムスター肺由来の繊維芽細胞株

ア．ラット（CHL/IU）を用いて，哺乳類の培養細胞に対すSD 系（Crj：CD）妊娠ラットに TBPC の 200，

る染色体異常誘発性を直接法および代謝活性化法

650 および 2,000mg/kg を胎子の器官形成期に（S9 mix 添加，無添加）で検討した。その結果，相当する妊娠 7 日から 17 日まで 1 日 1 回経口投直接法および代謝活性化法ともに，顕著な染色体

与し，母動物および胎子におよぼす影響につい異常構造を有する細胞の増加は認められず，TBPCて検討した。

の哺乳類の培養細胞に対する染色体異常誘発性

母動物について，一般状態では，200mg/kg
以上の投与群で軟便および摂餌量の減少が認めは，極めて少ないと判断された。
７）マウスを用いる小核試験られた。また，2,000mg/kg 投与群で，投与期雄の ICR 系（Crj：CD-1）マウスを用いて骨髄

間中の体重増加抑制が認められた。解剖所見で細胞における小核試験により，小核誘発性を検討

は，用量相関的に盲腸の拡張が認められたが，した結果では，TBPC は小核誘発性を認めないとその他には母動物の一般状態，生産能力および判断された。

胎子に対して，TBPC によると思われる異常は認めなかった。

３．吸収・排泄・分布・代謝以上の結果より，TBPC の母動物および胎子に対する一般毒性学的な毒性変化からみた無影

TBPC の薬物動態学的検討および生体内運命の響量は 2,000mg/kg であると推察された。

検討をラットで詳細に行い，得られた知見をブリイ．ウサギで確認した。

ニュージーランドホワイト種（Kbl：NZW）

なお，吸収挙動の検討の結果，TBPC 自体は生妊娠ウサギで，母動物および胎子に及ぼす影響

体内に移行しないことが確認されたため，吸収・について検討した。

分布および生物学的同等性の検討は，血液あるい

母動物ではウサギへの抗菌性物質の投与で一は組織中の PCG 濃度を指標に行った。

4 動物抗菌会報 26（2004）

１）TBPC のラットおよびブリでの消化管におけるブリにおける検討では，肝門脈血中に TBPC が

吸収挙動

検出されず，PCG が検出されることを確認し，ブラットにおける検討で，TBPC は消化管内からリにおいてもラットと同様の吸収挙動を示すもの

血液中に移行する際に，分子構造中のエステルがと考えられた。

加水分解され，門脈血液中には TBPC として移行

また，ブリに TBPC の乳糖散剤（20 万単位 /g）

しないことが確認された。同時に TBPC の構成化

で 100 万単位 /kg を投与し，心臓から採取した血合物である 3- ヒドロキシベンジルイソブチレー

中 の TBPC お よ び PCG 濃 度 を 経 時 的 に 調 べ たトも血液中には検出されず，3- ヒドロキシベンジ

が，いずれの時点でも TBPC は検出されず，PCG

ルイソブチレートがさらに加水分解された m- ヒのみが検出されている。

ドロキシベンジルアルコールが血液中に移行していることが確認された（図 2）。
また，TBPC のラットにおける亜急性毒性試験の中で，TBPC の 2,000mg/kg 量を 28 日間連続投与した翌日の各種臓器（肝臓，腎臓，筋肉および脂肪）中の TBPC および PCG 濃度を測定したが，いずれの臓器でも TBPC は検出されず，PCG のみが検出された。
このため，TBPC の吸収挙動は，既知のバカン
ピシリンなどのエステル誘導体と類似であり，消化管粘膜を通過時にはエステル部位が加水分解され，血液中には TBPC を構成する PCG，m- ヒド
ロキシベンジルアルコールおよびイソ酪酸として移行するものと考えられた（図 3）
。

図3

図2

TBPC 172mg（20 万単位）/kg を投与した時のラット門脈血中の TBPC，PCG および m- ヒド
ロキシベンジルアルコール濃度の推移

TBPC および他のプロドラッグの吸収挙動

井上喜久治／トビシリンについて／26（2004） 5

２）TBPC のラットおよびブリでの吸収

シベンジルアルコールおよびイソ酪酸として血中TBPC をラットに 20 万単位（172mg）/kg を強に移行すると考えられるため，代謝の検討ではこ制経口投与した時の，血中 PCG の最高濃度到達

れらの各化合物毎の代謝についての既知情報を整

時 間（Tmax）は 投 与 後 1 時 間，最 高 到 達 濃 度

理し，未知の部分が多かった m- ヒドロキシベン（Cmax）は 0.47μg/g であった。投与後 24 時間

ジルアルコールの代謝経路の確認を行った上で，には，10 例中 2 例で PCG が検出された（0.11μg/g

TBPC の 代 謝 経 路 の 全 貌 に つ い て 検 討 し た。

および 0.09μg/g）が，その他の個体では定量下TBPC は経口投与されると，消化管粘膜通過時に限（<0.05μg/g）を下回った（図 4）。

PCG，m- ヒドロキシベンジルアルコールおよびラットと同量の TBPC を，海水温が異なる時期

イソ酪酸まで分解されて血液中に移行し（図 6），（26℃ と 21℃）に飼育されたブリに混餌投与した

PCG は図 7 に示した経路で〔5〕，イソ酪酸は図 8

時，Tmax は い ず れ の 時 期 も 投 与 後 3 時 間 で，に 示 し た 経 路 で，m- ヒ ド ロ キ シ ベ ン ジ ル ア ルCmax は高水温期の方が高く，1.02μg/g であっコールは図 9 に示した経路を経て代謝され，体外た。低水温期の Cmax は，0.65μg/g であった。

に排泄されていくものと考えられた。

投与後 24 時間には，低水温期の 10 例中 3 例で PCGが検出されたが（0.10 〜 0.11μg/g），その他の個体では定量下限（<0.05μg/g）を下回った（図 5）。
３）TBPC の代謝
TBPC は経口投与されると PCG，m- ヒドロキ

図4

ラットに TBPC 20 万単位（172mg）/kg を経口投与した血中 PCG 濃度の推移

図5

海水温の異なる時期にTBPC 20万単位（172mg）/kg
を経口投与したブリの血中 PCG 濃度の推移

図6

TBPC の一次代謝（腸管粘膜内での変換）

図7

PCG の生体内での代謝（清水

1970）
［5］

6 動物抗菌会報 26（2004）

図8

イソ酪酸の生体内での代謝（細胞機能と代謝マップ｡ 細胞の代謝・物質の動態
社団法人 東京化学同人編 1997）

図9

m- ヒドロキシベンジルアルコールの代謝経路

試験 A では，最終投薬後 1 日目の腎臓（1 検体）

４．残留

で PCG が検出されたが，3 日後以降は全ての組織・臓器で検出限界（0.05μg/g）未満となった。

TBPC の残留性に関する検討は，投薬・採材 2

試験 B では，最終投薬後 1 日目の腎臓（1 検体）

施設，分析 1 施設に委託し，2 試験を実施した。

および肝臓（2 検体）で検出されたが，2 日後以降

試験期間中の水温および供試魚の群分け時の平は全ての組織・臓器で検出限界未満となった。

均体重は以下の通りであった。
水
試験 A
試験 B

温

20.9 〜 23.3℃
18.5 〜 22.9℃

魚体重
163g
1120g

５．薬

理

１）TBPC および PCG の抗菌活性
TBPC の抗菌活性を調べるため，グラム陽性菌

いずれの試験も，養殖ブリに TBPC の乳糖散剤

4 株，グラム陰性菌 5 株を供試して，TBPC およ（20 万単位 /g）を，臨床予定最高用量の 2 倍量

び PCG と，それぞれの豚肝臓エステラーゼ加水である 40 万単位 /kg（魚体重）となるように餌料

分解物に対する阻止円形成の有無を見た結果，に混合し，1 日 1 回，5 日間連続で自由摂餌により

TBPC は菌の生育を阻害せず，TBPC の豚肝臓エ投薬した。最終投薬終了後経時（日）的に採取しステラーゼ加水分解物では阻止円が形成されたた血液，筋肉，肝臓および腎臓中の PCG 濃度を

（表 1）
。

高速液体クロマトグラフ法で測定した。

また，TBPC の豚肝臓エステラーゼ加水分解物

なお，分析対象を PCG とした根拠は，TBPC のおよび PCG カリウムをバイオオートグラフィー

吸収挙動の検討により，生体内には TBPC としてにより比較した結果，TBPC の豚肝臓エステラー

は吸収されず，PCG として吸収されることが判

ゼ加水分解物では，PCG の Rf 値にほぼ対応する

明しているからである。

位置に阻止円が認められた。

井上喜久治／トビシリンについて／26（2004） 7

これらのことから，TBPC 自体は抗菌活性を持

６．臨

床たず，加水分解を受けた結果として PCG を生成し，PCG として抗菌活性を発揮すると考えられた。また，TBPC の加水分解物の中で抗菌活性を１）検討方法TBPC の乳糖散剤（20 万単位 /g）を用いた治験は，5 カ所の治験機関，12 施設で実施した。治験有するものは，PCG のみであった。
このため，TBPC の一般細菌および魚病菌に対実施施設の所在地域は，愛媛県，大分県，長崎県，

する抗菌活性は，PCG カリウムを用いて測定した

熊本県，宮崎県および鹿児島県の 6 県であった。

が，一般細菌ではグラム陽性菌および一部のグラム

治験の期間は 1996 年から 1998 年の 3 年間であっ陰性菌，魚病菌では L. garvieae および Pasteurella

た。

piscicida に対して強い抗菌活性を示した。
（表 2 〜

疾病の診断は，「疾病診断マニュアル」〔（財）日4）。また，エリスロマイシン耐性の L. garvieae

本水産資源保護協会〕に準拠して実施した。但し，は，PCG に感受性を示したが，アンピシリン耐性

同マニュアルで確定診断の根拠とされている免疫の P. piscicida は交差耐性を示した。

組織学的検査は実施していない。
供試薬剤は，モイストペレットに混合，または

表1

TBPC および TBPC の豚肝臓エステラーゼ加水分解物の抗菌活性阻止円径（mm）

供試菌株
Staphylococcus aureus ATCC29213
Staphylococcus epidermidis ATCC12228
Streptococcus faecalis ATCC29212
Streptococcus faecium ATCC19434
Escherichia coli ATCC27166
Salmonella Typhimurium 1406
Salmonella Enteritidis 1891
Shigella dysenteriae FP49
Shigella sonnei JEW-33

PCG

TBPC

PCG ＋
エステラーゼ＊TBPC ＋
エステラーゼ＊

27
24
30
33
35
34
32
25
22

–
–
–
–
–
–
–
–
–

22
21
27
29
29
26
27
23
20

20
19
25
27
28
22
23
22
18

−：阻止円を認めず。
＊：薬剤 10mg に豚肝臓エステラーゼ（約 500 単位／ mL）5mL を加え，30℃，60 分間反応させ，反応後同量のメタノールで反応を中止し，遠心分離（3,000rpm，10 分間）した上澄液を用いた。
（注）PCG をエステラーゼ処理した例で，阻止円径が未処理のものに比較して小さくなる傾向があるが，処理過程での分解によるものと考えられた（豚肝臓エステラーゼとは結合していないことを確認した）。

表2

PCG の一般細菌（グラム陽性菌）に対する抗菌活性菌株

Staphylococcus aureus ATCC29213
Staphylococcus epidermidis ATCC12228
Staphylococcus saprophyticus ATCC15305
Staphylococcus sciuri ss sciuri ATCC29062
Streptococcus agalactiae 126
Streptococcus mitis ATCC9811
Streptococcus pneumoniae ATCC6305
Streptococcus pyogenes ATCC8668
Micrococcus luteus ATCC9341
Bacillus subtilis ATCC6633

MIC（μg/mL）
0.20
0.20
0.10
0.10
0.025
0.10
0.025
≦ 0.0125≦ 0.01250.025

8 動物抗菌会報 26（2004）
PCG の一般細菌（グラム陰性菌）に対する抗菌活性

表3菌MIC（μg/mL）

株

Escherichia coli NIHJ JC-2
Escherichia coli ATCC25922
Salmonella Typhi T287
Enterococcus cloacae ATCC 13047
Haemophilus influenzae ATCC49247
Klebsiella pneumoniae JCM1662
Pseudomonas aeruginosa ATCC27853
Neisseria gonorrhoeae ATCC49226

表4

帰式から有効性の判定を行った。
魚病菌に対する抗菌活性前期の直線回帰の傾きが負（−）記号の場合は，MIC（μg/mL）
菌

3.13
25
0.39
>100
12.5
50
>100
0.20

株

Lactococcus garvieae
EH8632*
NUF545*
TRM-2*
HY89038r
Pasteurella piscicida
SP93-184**
P90052**
NG8325
H82084
Vibrio anguillarum
A-80081**
PT-8341**
H-83061
SHA8325
Edwardosiella tarda
U-81015
U-81017
MOS9233

PCG

エリスロ
マイシン

0.78
0.78
0.78
0.78

>100
>100
>100
0.20

>100
>100
0.10
0.10

6.25
12.5
6.25
6.25

>100
>100
100
50
3.13
1.56
6.25

100
100
12.5
12.5
25
12.5
25

投薬開始時点ではすでに死亡尾数が減少局面にあり，その後の死亡尾数が減少しても薬剤の効果か
自然治癒かが判別できないために

判定不能

例

とし，有効性検討には採用しなかった。但し，前期の直線回帰の傾きが負（−）記号の場合で，後期の直線回帰の傾きが正（＋）記号の場合は，薬剤の効果がなかったか悪化したものと判断し，無効例とした。
後期の死亡尾数から求めた直線回帰の傾きが正（＋）記号，即ちその後の死亡尾数に増加傾向がうかがえる場合は無効例とした。また，後期の直線回帰式の傾きが負（−）記号であっても，この式から死亡尾数が 0（Y ＝ 0）になる時点（Y＝ 0 を代入して求められる X の値）が 14 より大
きい場合は

無効

とした。

今回採用した判定基準により

有効

と判定さ

れるものは，前期の死亡尾数が増加傾向にあり，且つ，後期の死亡尾数の推移から投薬 3 日目以降*：エリスロマイシン耐性株

14 日以内で死亡尾数が 0 になると予測される症例**：アンピシリン耐性株のみである。
統計処理は，「2 つの比率の差の検定」で行い，ドライペレットに展着させて，自由摂餌で 5 日間

（枠内度数が全て 5 以上
症例数により「χ2 検定」

連続，経口投与した。

（枠内度数
のとき），
「χ2 検定 Yates の補正付き」

効果の判定は，投薬 5 日前から投薬終了後 5 日のどれか 1 つが 5 未満のとき）または，「Fisher

目までの日間死亡尾数を指標に行った。投薬 5 日の直接確率計算法」（枠内度数の 2 つ以上が 5 未満

前から投薬 3 日目までの期間（前期）と，投薬 3のとき）を使い分けた。なお，危険率はいずれも日目から投薬終了後 5 日目までの期間（後期）に5％で計算した。

区分し，前期の死亡尾数から求められる直線回帰２）検討結果の傾きから有効性評価に採用するか否かの妥当性

今回の治験では，いずれの症例も本品を餌料にを検討し，後期の死亡尾数から求められる直線回

混合して経口投与されたため，用法の検討は行わ井上喜久治／トビシリンについて／26（2004） 9

ず，用量のみの検討とした。

発展することに少しでも役に立てることが出来れ本品の用量は，魚体重 1kg 当たり 1 回量としば幸いである。

て，5 万単位から 20 万単位の範囲で設定し，投与期間はいずれも 5 日間であった。このため，用量（参考）TBPC の製剤名と承認事項および使用上毎の有効率を算出し，対照薬の有効率との比較あの注意は表 6 の通りである。

るいは用量間の比較を行った。
薬剤毎・用量別の有効率のまとめを表 5 に示し参考文献た。用量別の対照薬剤との比較では，TBPC はい
ずれの用量でも対照薬剤あるいは用量間で統計的

１）Kusuda R, Kawai K,Toyoshima T, Komatu I: A

な差（危険率 5％）はなく，5 万単位 /kg 〜 20 万

new pathogenic bacterium belonging to the genus

単位 /kg の範囲で対照薬と同等の効果を示した。

Streptococcus, isolated from an epizootic of cultured
yellowtail. Bull. Jpn. Soc. Sci. Fish., 42 (12), 1345-

７．結び

1352 (1976)
２）Kusuda R, Kawai K, Salati F, Banner CR, Fryer F:

以上，新規抗生物質 TBPC の，ブリのレンサ球

Enterococcus seriolicida sp. Nov., a fish pathogen.

菌症への応用について述べてきたが，水産養殖にInt. J. syst. Bacteriol., 41 (3), 406-409 (1991)

おける各種疾病は避けて通れない関門になってい３）Teixeira LM, Merquior VLC, Dac M, Vianni E,る。近年，ワクチンの普及が広まりつつあり，治Fracalanzza SEL, Steigerwalt AG, Brenner DJ,

療から予防への意識が高まりつつある。安定した

Facklam RR: Phenotypic and genotypic chalacterization

養殖事業の運営には望ましい傾向であり，今後，of atypical Lactococcus garvieae strains isolated

ワクチンと治療薬との併用でますます水産養殖がfrom water buffalos with subclinical mastitis and

表5

用法および用量の検討（用量別の有効率のまとめ）

薬剤名

投薬量

有効率
（有効例数 / 投与例数）

判定不能例数

TBPC

5 万単位 /kg
10 万単位 /kg
15 万単位 /kg
20 万単位 /kg

60.0％（ 3/ 5）
84.6％（11/13）
0％（ 0/ 1）
81.8％（ 9/11）

1
3
0
2

対照薬剤

−

55.6％（ 5/ 9）

1

表6

製剤名と承認事項および使用上の注意

製 剤 名：水産用フジペニン 40
製 造 元：セラケム株式会社
販 売 元：武田シェリング・プラウアニマルヘルス株式会社
成分分量：1g 中，トビシリン 40 万単位，安定剤ブチルヒドロキシアニソール 1mg を含有する。
効能効果：ベンジルペニシリン感受性菌に起因する下記疾病魚類の死亡率の低下
スズキ目魚類：レンサ球菌症
用法・用量：魚体重 1㎏ 当たり，1 日量トビシリンとして下記量を餌料に均一に混ぜて 5 日間投与する。
スズキ目魚類：10 万単位（本剤として 0.25g）
使用上の注意：使用説明書を参照のこと。休薬期間 スズキ目魚類（ぶり，まだい，まあじ，ティラピアを除く）：4 日有効期間：3 年
注意：「使用基準」の定めるところにより使用すること。使用禁止期間 ぶり，まだい，まあじ，ティラピア：4 日

10 動物抗菌会報 26（2004）
confirmation of L. garvieae as a senior subjective

is a junior synonym of Lactococcus garvieae, asynonym of Enterococcus seriolicida. Int. J. syst.

causative agent of septicemia and meningoencephalitis

Bacteriol., 46 (3), 664-668 (1996)

in fish. Curr. Microbiol., 32. 85-88 (1996)

４）Eldar A, Ghittino C, Asanta L, Bozzetta E, Goria

５）清水喜八郎：抗生物質の生体内代謝．代謝，7（4），M, Prearo M, Bercovier H: Enterococcus seriolicida

246-254（1970）

Tobicillin
Kikuzi INOUE
Takeda Schering-Plough Animal Health K.K., 2-3-7, Hiranomachi, Chuo-ku, Osaka 541-0046, JapanEnterococcosis in yellowtail Seriola quinqueradiata, a bacterial infection casused by Lactococcus garvieae is a major
problem of Japanese marine fish farm. Macrolides such as erythromycin and spiramycin have been used as
chemotherapeutic agents for the traetment of enterococcosis. However, in recent years, these antibiotics havebecome ineffective against Lactococcus garvieae. Therefore, the development of a new drug having a different
mechanism of action from macrolides has been awaited. Tobicillin, an ester derivative of penicillin G, was examined
as a treatment for enterococccosis in yellowtail. The results indicated that tobicillin will be one of the effective
antibiotics for the treatment of enterococcosis in yellowtail.

討論（座長：澤田拓士，日獣大）

質問（佐藤静夫，全農家衛研）① PCG でなくドビシリンとして開発された理由は。
②脂溶性であるが，残留の心配は。
答（井上喜久治）①水産用治療薬としては，経口投与で効果を発揮する

答（井上喜久治）①ブリでの吸収％に関しては厳密な測定はしていない。
② TBPC は 1 日後，PCG は 9 日後にほぼ分解する。
また，TBPC の分解産物は 10 日までに分解する。

ことが重要な条件になる。PCG を飼料に混合してなお，TBPC および PCG 以外に抗菌活性を有する

投与した場合，PCG では効果が不十分であり，より物質は検出されていない。

有効な TBPC を開発した。

質問（福本一夫，日本イーライリリー）②ブリに用量の 4 倍量を 5 日間連続で経口投与した試

現在，食の安全性から残留に関し，今度，MRL が験では，2 日目以降で肝臓を含む全ての測定臓器で規定されるといわれている。水産薬に関しわが国にお検出限界（0.05μg/g）以下であった。

ける取り組みの現状は。

質問（小久江栄一，農工大）①経口投与において吸収される割合は何％位か。

答（井上喜久治）
MRL に関しては，現在厚労省がパブリックコメント② VICH では環境毒性が大きな問題とされている。吸を募集しているので，自社の製品について，MRL 値

収されずに海水中に排泄されるが，海水中での分解が妥当か否か検討して，問題があれば，厚労省へコメは。

ントする予定である。

渡辺典夫・遠山俊光／セフキノムについて／26（2004） 11

セフキノムについて
渡辺典夫 1）・遠山俊光 2）1）

川崎三鷹製薬株式会社（〒 210-0818 神奈川県川崎市川崎区中瀬 3-19-11）

2）

三共ライフテック株式会社（〒 113-0033 東京都文京区本郷 4-23-14）

スポリン骨格の 7 位にアミノチアゾリル基とメト１．開発の経緯

キシイミノ基を導入したアミノチアゾリル・オキ
シム型誘導体で 3 位に複素環であるシクロへキセ

硫酸セフキノム（Cefquinome，CQN）は，ドイ

ノピリジンを導入している。

ツ国ヘキスト社（現インターベットインターナ

一般的名称：Cefquinome（セフキノム）

ショナル社）で開発されたセフェム系の動物用抗化学名：1–［（6R，7R）–7–［–2–（2– アミノ–4– チアゾリル）グリオキシルアミド］–2– カ

生物質である。
CQN の抗菌スペクトルは多くのグラム陽性菌

ル ボ キ シ–8– オ キ ソ–5– チ ア–1– ア ザ

およびグラム陰性菌に対して優れた抗菌活性を示

ビシクロ［4．2．0］オクト–2– エン–3–

し，牛由来臨床分離株である Pasteurella multocida

イル］– メチル］–5，6，7，8– テトラヒ

および Mannheimia haemolytica に対して強い抗菌

ドロキノリニウムヒドロキシド，分子力を有する。

内 錯 塩，72–（Z）–（O– メ チ ル オ キ シム），サルフェート（WHO）

我が国では牛の肺炎を適応症とする油性懸濁注

分子式：C23H26N6O9S3

射剤として開発され，川崎三鷹製薬㈱からはセ

分子量：626.70

ファガード ，三共ライフテック㈱からはコバク

原体は白色〜淡黄白色の結晶性の粉末で，水にタン ，という製品名でそれぞれ販売されている。

溶けにくく，メタノールに極めて溶けにくく，ク

海外においては動物専用セフェム系抗生物質とロロホルムにほとんど溶けない。炭酸ナトリウムして本剤と同一の油性懸濁注射剤が，当初，P.

水溶液には塩を形成して溶ける（ヘキスト社社内

multocida および M. haemolytica による牛の急性呼吸資料，1991）。
CQN2.5％注射液は帯黄乳灰白色の懸濁液であ器病の治療薬として開発され，その後効能拡大により，現在では上記疾病の他に牛の趾間腐爛および大る。製剤は 25℃ の条件で 2 年間安定であることが腸菌性急性乳房炎，子牛の大腸菌性敗血症，豚の呼確認された（ヘキスト社社内資料，1993）。

吸器感染症および MMA（乳房炎−子宮炎−無乳症症候群）を効能として，EU 諸国をはじめ，その他
ヨーロッパ，アジア・オセアニア，中南米など，世界
約 40 カ国で承認されている。更に，乳牛の泌乳期の乳房炎治療を効能に乳房注入剤も製品化されている。

２．物理化学的性状
図1

CQN の構造式は図 1 のとおりであり，セファロ
11構造式

12 動物抗菌会報 26（2004）

３．毒性１）急性毒性

４．安全性
CQN2.5％注射液を子牛の筋肉内または皮下に

6 週齢の ICR 系マウスおよび SD 系ラットでの

1 日 1 回，15 日間反復注射する安全性試験は CQN

LD50 値はマウスにおいて，経口投与では雌雄ともとして 2mg（力価）/kg（2 倍量），6 mg（力価）/kg

2000mg/kg 以上，皮下投与では雌雄とも 5000mg/（6 倍量），10mg（力価）/kg（10 倍量）またはkg 以上，腹腔内投与では雄が 4524mg/kg，雌が20mg（力価）/kg（20 倍量）で検討した。
（ただ

4322mg であった。ラットにおいては，経口投与でし，20mg（力価）/kg 注射群は 5 日間反復）は雌雄とも 2000mg/kg 以上，皮下投与では雌雄

その結果，2 倍量，6 倍量および 10 倍量では，

とも 5000mg/kg 以上，腹腔内投与では雌雄とも注射部位の変化（腫脹を主とする）を除き，投薬5000mg/kg 以上であった（ヘキスト社社内資料，による異常は見られなかった。20 倍量群では，上

1995）
。

記の変化に加え，摂餌量の減少，体重の減少が見

２）亜急性毒性られた。

ラット（SD 系）を用いて 3 週間の皮下投与によ注射部位の反応は投与 8 回目以降に発現していり実施した。無毒性量（NOAEL）は 50mg/kg/ 日，

るが，CQN の最大注射回数は 5 回であることか

最 小 中 毒 量 は 500mg/kg/ 日，中 毒 量 は 500mg/

ら実用上の安全性に問題はないものと考えられ

kg/ 日を超えるものと結論された（ヘキスト社社

た。（Wray ら，Horton Feedlot and Research Center

内資料，1995）。

（米国），1990，未発表）

３）慢性毒性ラットおよびビーグル犬を用いて 3 カ月間の経

５．吸収・分布・代謝・排泄

口投与により，GLP に従って実施した。
ラットおよびビーグル犬に対する無作用量

牛に 14C 標識した CQN を 1mg（力価）/kg/ 日（NOEL）は，各々 25mg（力価）/kg/ 日，320mg

で 5 回筋肉内注射した。

（力価）/kg/ 日と結論された（ヘキスト社社内資１）吸収（全血中および血漿中濃度）

料，1989）。

全血中および血漿中濃度を図 2 に示した。全血

４）特殊毒性中の濃度は，投与後速やかに上昇し，約 1 時間後

各種変異原性試験（V79 チャイニーズハムスに最高に達した。また，投与回数の増加に比例しター細胞での染色体異常試験，ヒト株細胞 A549て投与後の最高濃度は高くなった。
（初回投与後：での不定期 DNA 合成試験，マウスの小核試験），

平均 1.37μg 当量 /g，5 回目投与後：平均 1.83μg

ラットおよびウサギにおける催奇性試験の結果，当量 /g）。血漿中の濃度は平均で全血中より約

CQN は両試験ともに陰性であると判断された。
CQN の主要な分解物である 2,3– シクロヘキセノ
ピリジンの変異原性についても陰性であると判断された（ヘキスト社社内資料，1988，1989，1992）。
５）一般薬理マウス，犬，ラットおよびモルモットを用い，中枢神経系への影響，心臓血管試験，代謝機能への影
響，および分離器官への影響について検討した。その結果，CQN は各パラメーターに有意な影響を示さず，臨床用量で特に問題となる作用を示さないものと考えられる（ヘキスト社社内資料，1989）。

図2

牛に繰り返し 5 回筋注した後のセフキノムの全血中および血漿中濃度

渡辺典夫・遠山俊光／セフキノムについて／26（2004） 13

40％高く，全血中濃度と同様の推移を示した（ヘ菌に対して優れた抗菌活性を示した（表 2）。
ペニシリン耐性および感受性のブドウ球菌に

キスト社社内資料，1988）。

対する CQN の最小発育阻止濃度（MIC）は 0.156２）分布（器官・組織残留濃度）
CQN5 回目の投与 24 時間後および 48 時間後の

〜 0.625μg（力価）/mL であり，セフロキシムおよびセフォペラゾンよりも低い MIC 値を示し

CQN の残留量を表 1 に示した。
注射部位筋肉が最も高い値を示し（24 時間後：た。血清型 A，B，C の Streptococcus 属菌に対す

5.01μg 当量 /g，48 時間後：1.96μg 当量 /g）腎る CQN の MIC は 全 て 0.1mg（力 価）/mL 以 下臓，注射部位皮膚，肝臓，肺の順であった（ヘキであった。Escherichia coli の全菌株に対して，

スト社社内資料，1988）。

CQN は 0.1μg（力価）/mL 以下の MIC を示し，

３）排泄

セフォペラゾンに対して耐性である TEM–1–

牛に筋注後の CQN は主に尿中に排泄された。5β– ラクタマーゼ産生性の E.coli に対しても抗回目の投与 24 時間後には平均で総投与量の約

菌活性を示した（ヘキスト社社内資料，1987）。

95％が尿中に排泄された。なお，糞便中の排泄は②野外分離株における薬剤感受性

総投与量の約 4.5％であった（ヘキスト社社内資

ドイツ，ベルギー，フランス，オランダにお料，1988）。

いて臨床的に分離された M. haemolytica および４）代謝

P. multocida の MIC50，MIC90，MIC の範囲を表

尿中の主要排泄物は未変化体の CQN であった

3 に，MIC 分布を図 3 〜 4 に示した。

（89 〜 95％）。14C 標識した CQN を無処置の牛，CQN の M. haemolytica および P. multocida に犬，ラ ッ ト の 尿 に 溶 解 し，TLC linear analyzer

対する MIC50 値はともに≦ 0.06μg（力価）/mL，system LB284 を用いて評価したところ，CQN は

MIC90 値はともに 0.12μg（力価）/mL であり強不安定（分解率 2 〜 15％）であり，尿中で速やかい抗菌活性を示した。また，CQN の MIC 分布に分解されることが確認された（ヘキスト社社内

は単峰の分布を示した。
一方，他剤についてはセフチオフルを除き何

資料，1998）。

れの薬剤も CQN に比べて MIC 値は高く，また６．抗菌活性

多くの薬剤の MIC 分布は多峰性であった。同様に E. coli，Salmonell 属，Klebsiella pneumoniaeに対する MIC 分布を図 5 〜 7 に示した。CQN

１）抗菌スペクトル①一般細菌

はいずれの菌株においても強い感受性を示した

CQN は多くのグラム陽性およびグラム陰性
表1（ヘキスト社社内資料，1993）。

牛に 14C 標識硫酸セフキノムを 1mg（力価）/kg/ 日で 5 日間筋注した後の各器官・組織における残留量

器官・組織
腎
肝
心

臓
臓
臓

肺
骨 格 筋
皮 下 脂 肪後腹膜脂肪
注射部位筋肉注射部位皮膚

牛 C1（最終投与 24 時間後）
1.29
0.5226<0.03220.1004<0.0352<0.0597<0.0515
5.009
0.7293

単位：μg 当量 /g

牛 C2（最終投与 48 時間後）
1.097
0.47820.04140.0816<0.0352<0.0579<0.05151.957
0.6382

14 動物抗菌会報 26（2004）
表2

硫酸セフキノムの一般細菌に対する抗菌力
MIC（mg（力価）/mL）

菌株

名

セフロキシムセフォペラゾン

硫酸セフキノム（第二世代）（第三世代）（新第三世代）

0.313
1.250
1.250
1.250
1.250
0.078
0.004
0.015
0.031
0.008
250.000>1000.000
1.560
0.031
100.000
0.031
0.781
1000.000
0.039
500.000
500.000>1000.000
12.500
2.500
0.195
2.500
5.000
6.250
5.000
0.156
5.000
125.000
62.500

0.783
1.560
3.130
3.130
3.130
0.250
0.250
0.125
0.125
0.125
7.810
62.5001.560
0.031
50.0000.031
0.500
25.000
1.000
6.250
6.250
50.000
0.313
0.156
0.062
0.313
0.625
500.000
3.130
0.625
1.250
25.000100.000

0.391
0.313
0.625
0.625
0.156
0.062
0.015
0.031
0.061
0.031
3.130
6.250
0.625
0.008
25.0000.062
0.195
50.000
0.313
6.250
3.130
6.250
6.250
0.031
0.015
0.031
0.031
0.125
0.039
0.062
0.062
0.125
0.500

Staphylococcus aureus SG 511
Staphylococcus aureus Giorgio
Staphylococcus aureus 209 P
Staphylococcus aureus 285
Staphylococcus aureus 503
Micrococcus luteus ATCC 9341
Streptococcus pyogenes 308
Streptococcus aronson
Streptococcus agalactiae
Streptococcus equi ATCC 6580
Streptococcus faesium
Streptococcus faecalis ATCC 10541
Streptococcus durans
Pneumococcus mucosus
Listeria monocytogenes
Erysipelothrix insidiosa
Bacillus subt. ATCC 6633
Bacillus cereus ATCC 9634
Bacillus mycoides
Bacillus megatherium
Psuedomonas aeruginousa ATCC 9027
Psuedomonas aeruginousa 77/2
Psuedomonas aeruginousa NCTC 10701
Escherichia coli (E6) O 4
Escherichia coli O 26
Escherichia coli O 78
Escherichia coli O 126
Escherichia coli TEM
Citrobacter freundii ATCC 8090
Klebsiella pneumoniae ATCC 10031
Klebsiella pneumoniae A 9977
Enterobacter cloacae
Enterobacter cloacae 417

表3
菌

種

Mannheimia haemolytica
Pasteurella multocida

海外における臨床分離株に対する硫酸セフキノムの MIC
株

数

178
246

（μg
（力価）/mL）

MIC50

MIC90

MIC 範囲Break Point

耐性率≦ 0.06≦ 0.060.12
0.12≦ 0.06 〜 2≦ 0.06 〜 4

1
1

0.60％
0.40％

国 内 に お い て 臨 床 的 に 分 離 さ れ た M.

は 0.05μg（力価）/mL，P. multocida に対しては

haemolytica および P. multocida の MIC50，MIC90，

0.012μg（力価）/mL，MIC90 値は M. haemolytica

MIC の範囲を表 4 に示した。

に対しては 0.2μg（力 価）/mL，P. multocida に

CQN の MIC50 値は，M. haemolytica に対して対しては 0.025μg（力価）/mL，であり強い抗渡辺典夫・遠山俊光／セフキノムについて／26（2004） 15

図3

図4

図6

臨床により分離された Salmonella spp. に対する MIC 分布図7

臨床により分離された Klebsiella pneumoniae に対する MIC 分布

臨床により分離された Mannhemia haemolytica
に対する MIC 分布

臨床により分離された Pasteurella multocida に対する MIC 分布

菌活性を示した。また，CQN は単峰性を示していた（吉田孝治ら，日獣大，1997，未発表）。
２）耐性獲得CQN の試験管内耐性獲得，β– ラクタマーゼに対する安定性および親和性，ならびにペニシリ
ン結合タンパク（PBP）への結合性について調査した。
①試験管内耐性獲得
E. coli, Staphylococcus aureus の 20 代継代培養
によっていずれの菌株においても CQN の MIC
は 3 希釈段階のみ上昇し，他の抗生物質に対して問題となる MIC 値の上昇を誘発しなかった

図5

臨床により分離された Escherichia coli に対する
MIC 分布（ヘキスト社社内資料，1997）。
②β– ラクタマーゼに対する安定性
表 5 に示すとおり，CQN は各種菌株由来のβ– ラクタマーゼに対して非常に安定であった

16 動物抗菌会報 26（2004）

ペニシリン G 感受性 Streptococcus pneumoniae, E.

（ヘキスト社社内資料，1987）。
③ペニシリン結合タンパク（PBP）への結合性

coli, Salmonella spp. K. pneumoniae, Haemophilus

E. coli 由来の PBP への結合性を試験した結（力価）
influenzae に対して MIC90 が 0.012 〜 0.78μg

果，CQN は 0.5μg（力価）/mL の濃度で PBP3，/mL で強い抗菌力を示した（三共㈱社内資料，

3a および 3b に結合し，10μg（力価）/mL の濃1997）。

度ではさらに PBP1 に結合し，PBP への幅広い７．臨床試験

結合性を示した（ヘキスト社社内資料，1987）。
３）ヒト臨床分離菌株に対する抗菌力
CQN のヒト臨床分離株に対する MIC50，MIC90 お臨床試験は，動物用抗菌剤研究会の「牛の細菌よび MIC の範囲を表 6 に示した。CQN はメチシリ性肺炎に対する抗菌剤の臨床試験実施基準試案」

ン感受性 Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes,（動物用抗菌剤研究会報第 18 号，1997）に従って

表4
菌

日本国内における臨床分離株に対する硫酸セフキノムの MIC

種

株

MIC90

MIC 範囲

耐性率

0.05
0.012

0.2
0.025

0.012 〜 2
0.06 〜 0.025

0.00％
0.00％

硫酸セフキノムのβ– ラクタマーゼに対する安定性

β– ラクタマーゼの由来

セファロジン

硫酸セフキノム

セファペラゾン

Escherichia coli TEM IEnterobacter cloacae P99
Klebsiella spp. 1082E
Citrobacter freundii J20

100
100
100
100

＜1
＜1
＜1
＜1

27.3
1
1
4.8

表6
菌

MIC50

25
27

Mannheimia haemolytica
Pasteurella multocida

表5

数

（μg
（力価）/mL）

種

Staphylococcus aureus (MSSA)
Staphylococcus aureus (MRSA)
Staphylococcus epidermidis (MSSE)
Staphylococcus epidermidis (MRSE)
Streptococcus pyogenes
Streptococcus pneumoniae (PSSP)Streptococcus pneumoniae (PRSP)Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Salmonella spp.
Klebsiella pneumoniae
Enterobacter cloacae
Pseudomonas aeruginosa
Haemophilus influenzae
Bacteroides fragilis

ヒト由来臨床分離株に対する各種薬剤の MIC
株数
27
26
26
26
27
24
27
27
27
27
27
27
27
26
27

CQN

CTF

MIC50

MIC90

MIC の範囲

MIC50

MIC90

MIC の範囲

0.78
25
0.78
1.56
≦ 0.006
0.025
0.39
6.25
0.05
0.10
0.10
1.56
12.5
0.05
25

0.78
50
1.56
12.5
0.012
0.20
1.56
50
0.10
0.20
0.78
12.5
25
0.10
>100

0.39-1.56
1.56-50
0.20-3.13
0.78- >100
≦ 0.006-0.012
0.012-0.39
0.39-1.56
3.13-50
0.012-0.10
0.025-1.56
0.025-0.78
0.05-25
3.13-25
0.025-0.20
12.5- >100

1.56
>100
1.56
3.13
≦ 0.006
0.025
0.78
>100
0.39
0.78
0.78
100
50
0.012
6.25

1.56
>100
6.25
100
≦ 0.006
0.20
3.13
>100
0.78
1.56
3.13
>100
>100
0.025
50

0.78-1.56
6.25- >100
0.20-6.25
1.56- >100
≦ 0.006
0.012-0.78
0.39-6.25
25- >100
0.05-1.56
0.10-1.56
0.20-3.13
1.56- >100
3.13- >100
≦ 0.006-0.10
1.56-100

CTF：セフチオフル MSSA：メチシリン感受性 S. aureus MSSE：メチシリン感受性 S. epidermidis
MRSE：メチシリン耐性 S. epidermidis PSSP：ペニシリン G 感受性 S. pneumoniae PRSP：ペニシリン耐性 S. pneumoniae渡辺典夫・遠山俊光／セフキノムについて／26（2004） 17

８．残留性

設計し，また農林水産省 GCP 基準に準拠して実施した。投薬期間中，最終投薬 1 〜 2 日後に呼吸

１）子牛状態，呼吸音，鼻汁，発咳，活力，食欲，体温の項目について観察を行いスコア化した。効果判定

ホルスタイン種系雌子牛に CQN として体重 1kg

は臨床観察スコアーを計算式に当てはめて改善率

あたり 1mg（力価）（常用量）および 2mg（力価）を求めた。求めた改善率を表 7 のように分類し有（2 倍量）相当量の CQN2.5％注射液を 1 日 1 回，効率を求めた。

5 日間筋肉内に連続注射した結果，最終投与後 6 日
以降は 1mg（力価）/kg および 2mg（力価）/kg とも改善率＝（投薬前の合計スコアー−最終投薬に全ての臓器および組織で検出限界（0.02μg（力1 〜 2 日後の合計スコアー）／価）/g）以下になった（丸山賀子ら，畜安研，1997，

投薬前の合計スコアー× 100

未発表）。
２）乳牛

P. multocida または M. haemolytica による呼吸器
疾 患 罹 患 牛 203 頭 に 対 し，CQN2.5％ 注 射 液 を

ホルスタイン種系雌泌乳牛に CQN として体重CQN と し て 1.0mg（力 価）/kg/ 日，1 日 1 回，31kg あたり 1mg（力価）（常用量）および 2mg（力〜 5 日間筋肉内注射した。その結果を表 8 および価）（2 倍量）相当量の CQN2.5％注射液を 1 日 1

表 9 に示した。CQN は最終投薬 1 日後において回，5 日間筋肉内に連続注射した結果，最終投与87.1％，2 日後において 91.0％の高い有効率を示

後 24 時間以降は 1mg（力価）/kg および 2mg（力した。対照薬剤のセフチオフルの有効率と統計学

価）/kg ともに全ての臓器および組織で検出限界

的な有意差は認められなかった（帯畜大他，1999，（0.02μg（力価）/g）以下になった（内田一成

未発表）。

ら，畜安研，2002，未発表）
。
表7

有効率

９．海外の使用例 （公表文献から）

改善率85 ≦ 〜 ≦ 100
70 ≦ 〜 ＜ 85
50 ≦ 〜 ＜ 70
0 ≦ 〜 ＜ 50

著効
有効
やや有効
無効

１）牛の呼吸器疾患に対する CQN の効果
呼吸器症状（輸送熱）を呈している体重 170 〜
280kg の牛 177 頭を供した。そのうち，60 頭に CQN

表8
観察時点

薬

投与 1 日後投与 2 日後剤

臨床スコアーによる分類

対象例数

著効

有効

やや有効

無効

CQN
CTF

70
28

42
15

19
9

8
2

1
2

CQN
CTF

67
25

53
20

8
3

3
1

3
1

表9
観察時点

薬

投与 1 日後投与 2 日後臨床スコアーから求めた有効率
剤

対象例数

有効例数

有効率

有意差

CQN
CTF

70
28

61
24

87.1％
85.7％

なし

CQN
CTF

67
25

61
23

91.0％
92.0％

なし

有効例数＝著効＋有効
有効率：有効例数 / 判定例数× 100

18 動物抗菌会報 26（2004）
表 10 牛の呼吸器性疾患に対するセフキノムの効果薬剤

投与量（mg/kg)

投与経路

供試牛数（頭）再発率（％）

死亡率（％）

1
1.1

筋肉
筋肉

60
117

8.3
28.2

1.7
4.3

CQN
CTF

表 11 牛の細菌性蹄病に対するセフキノムの効果薬剤

投与量（mg/kg)

供試牛数（頭）

1
7

125
110

CQN
AMPC

治癒率（％）
3 日間投薬5 日間投薬

69.6
61.4

90.6
80.3

再発率（％）
9.4
19.7

表 12 豚の呼吸器疾患に対するセフキノムの効果て治癒率を算出した。その結果は表 12 に示すとお薬り，治癒率および再発率ともに CQN 投与区はセフ

剤

CQN
CTF

治

癒

無

効

63（65.6％） 33（34.4％）60（51.7％） 56（48.3％）

再発1（1.6％）
2（3.3％）

チオフル投与区に比べ，優れた成績であった［3］。

備考：頭数（％），再発は治癒後 5 日目に判定。

１
０．製剤名および承認事項

を 1mg/kg（力価）/ 日，1 日 1 回，3 〜 5 日間筋肉１）製剤名

セファガード内注射し，117 頭にセフチオフルを 1.1mg（力価）（川崎三鷹製薬株式会社），/kg/ 日，1 日 1 回，3 〜 5 日間筋肉内注射した。

コバクタン

表 10 に示すとおり，再発率および死亡率ともに（三共ライフテック株式会社）

CQN 投与区がセフチオフル投与区に比べ有意に

２）製造元 インターベット・インターナショナル

低かった［1］。

３）輸入総販売元

２）牛の細菌性の蹄病に対する CQN の効果

４）販売元

細菌感染で蹄病に罹患している牛 235 頭を供し三共ライフテック株式会社

５）成分・分量 本品 1mL 中，硫酸セフキノム
25mg（力価）を含有た。64％が趾皮膚炎（Digital Dermatitis），37％が
趾間フレグモーネ（Interdigital Phlegmon）であった。そのうち，125 頭に CQN を 1mg（力価）/kg/

川崎三鷹製薬株式会社

６）効能または効果
有効菌種：マンへミア（パスツレラ） へモリ

日，1 日 1 回，3 〜 5 日間筋肉内注射し，110 頭にティカ

アモキシシリンを 7mg（力価）/kg/ 日，1 日 1 回，

パスツレラ ムルトシダ

3 〜 5 日間筋肉内注射した。表 11 に示すとおり，

適応症

3 日間投薬の治癒率，5 日間投薬の治癒率および再７）用法・用量

牛：肺炎

発率（初回投薬から 42 日後に判定）のすべてにお牛に 1 日 1 回体重 1kg 当り，本品 0.04mL（硫いて CQN 投与区はアモキシシリン投与区より良酸セフキノムとして 1mg（力価），を 3 〜 5 日

好な成績を示した［2］。

間筋肉内に注射する。

３）豚の呼吸器疾患に対する CQN の効果
呼吸症状を呈している豚 212 頭を供した。その

８）使用上の注意（一般的注意）うち，96 頭に CQN を 2mg（力価）/kg，1 日，1 回（1） 本剤は定められた用法・用量を厳守するこ

筋肉内注射し，116 頭にセフチオフルを 3mg（力と。なお，用法・用量に定められた期間以内

価）/kg，1 日，1 回筋肉内投与した。直腸温，一の投与であってもそれを反復する投与は避け

般状態，呼吸困難，咳および鼻漏をスコアー化しること。

渡辺典夫・遠山俊光／セフキノムについて／26（2004） 19（2） 本剤の使用に当たっては，耐性菌の発現等考えられるので，観察を十分に行い，症状がを防ぐため，原則として感受性を確認し，適あらわれた場合は投与を中止し，適切な処置

応症の治療上必要な最小限の期間の投与に止を行うこと。

めること。

（8） 副作用（3） 本剤は原則として第一次選択薬が無効の症例のみに限り使用すること。
（4） 本剤は効能・効果において定められた適応症の治療にのみ使用すること。
（5） 本剤は「使用基準」の定めるところにより使用すること。

本剤の投与により，注射部位にときに一過性の腫脹が起こることがある。
（取扱上の注意）
使用済みの空容器等は適切に処分すること。
（保管上の注意）
小児の手の届かないところに保管すること。

注意：本剤は薬事法第 83 条の 4 の規定に基づき
上記の用法および用量を含めて使用者が参考文献

遵守すべき基準が定められた動物用医薬品ですので，使用対象動物［牛］につい

１）Gibbs HA: The use cefquinome in the treatment ofて上記の用法および用量並びに次の使用

respiratory disease in cattle. Proceedings XVIII

禁止期間を遵守して下さい。

World Buiatrics Congress, Bologna; 535-538 (1994)
２）Gibbs HA: The efficacy of cefquinome in the

使用対象動物

使用禁止期間treatment of bacterial infections of the bovine

牛

食用に供するためにと殺する
前 7 日間または食用に供するために搾乳する前 36 時間（6） 本剤は要指示医薬品であるので獣医師の３）Langi I, Rose M, Thomas E, Zschiesche E: A field

処方せん・指示により使用すること。

foot.Proceedings XIX World Buiatrics Congress,
Edinburgh, 580-583 (1996)
study of cefquinome for the treatment of pigs with

（対象動物に対する注意）

respiratory disease. Revue Med Vet, 153, 8-9, 575-

（7） 制限事項

580 (2002)

本剤は，まれに過敏症反応を起こすことが20 動物抗菌会報 26（2004）

Cefquinome
Norio WATANABE1) and Toshimitsu TOYAMA2)
1)

Kawasakimitaka Seiyaku K.K., 3-19-11, Nakase, Kawasaki-ku Kawasaki, Kanagawa 210-0818, Japan

2)

Sankyo Lifetech Co., LTD, 4-23-14, Hongo, Bunkyo-ku, Tokyo 113-0033, Japan

Cefquinome (CQN) is a new third generation semisynthetic cephalosporin antibiotic developed by the former
Hoechst AG in Germany (present Intervet International b.v.). CQN has been on the market in Japan under the
product name of COBACTAN® (Sankyo Lifetech CO., LTD) and CEFAGUARD® (Kawasakimitaka Seiyaku K.K.).
CQN showed a broad and potent in vitro activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria. It has also provento be effective against field-isolate of Pasteurella. multocida and Mannheimia haemolytica (MIC90 are 0.12μg/mL).
The good pharmacokinetic property of CQN was proven in cattle after intramuscular administration. After
intramuscular administration to cattle, CQN was quickly absorbed and well distributed to almost all the tissues. 95% ofadministered CQN was excreted in urine mainly as the unchanged original compound. No drug-related toxicologicaleffects were noted in cattle treated with CQN in 2 to 20 times higher than those for therapy.
In the residue study, the excretion periods were established at 7 days for cattle and 36 hours for milk.

討論（座長：澤田拓士，日獣大）

質問（岡野圭介，武田シェリングプラウ）① MRSA に対する抗菌活性は？
② MBC は（MIC との比は）？
答（渡辺典夫）か？
答（渡辺典夫）①出血性敗血症
牛の出血性敗血症の原因菌である血清型 6：B ま①ヒトの臨床分離由来 methicillin 耐性 S. aureus（MRSA）

たは 6：E の P. multocida に対して CQN の感受性試

26 菌株に対して CQN は 1.56 〜 50μg /mL の MIC

験成績はなく，臨床試験もない。セフキノムに限ら分布を示し，MIC90 は 50μg /mL であった。対照薬

ず P. multocida の場合血清型が相違しても感受性はのセフチオフルは 6.25 〜＞ 100μg /mL の MIC 分

変わらないため，効果は期待できることが考えら布を示し，MIC90 は＞ 100μg /mL であった。
②一般的にセフェム系抗生物質は MBC と MIC 値が変わらないと言われている。
セフキノムの MBC の成績は無いが，MIC との比は 1：1 と考えられる。
質問（藤倉圭介，日本シルバーボランティアズ）
パスツレラに対する抗菌力との関連で，①出血性敗血症，② Shipping Fever，の予防・治療，また，③
口蹄疫の二次感染菌の抑制にも効果が期待されるのれる。
② Shipping Fever の予防，治療
ヨーロッパでは CQN が輸送熱の予防・治療に使用されており，エンロフロキサシン投与に比べ良好な成績がある。
③口蹄疫の二次感染菌の抑制
成績はないが，セフキノムに感受性がある細菌であれば抑制の可能性はあると考えられる。

岩隈昭裕／セフチオフルについて／26（2004） 21

セフチオフルについて
岩隈昭裕
ファイザー株式会社農産事業部（〒 151-8589 東京都渋谷区代々木 3 丁目 22-7）製剤の開発に成功し，2004 年に上市された。国１．開発の経緯

内においては 1996 年にナトリウム塩が牛の肺炎および豚胸膜肺炎の適応症にて承認されている。

セ フ チ オ フ ル（Ceftiofur，以 下 CTF）は 米 国

以下，本文中に紹介する成績はすべてナトリウムアップジョン社（現ファイザー社）が 1980 年初頭

塩を用いたものである。

より動物専用として製剤化に着手したセファロス

２．物理化学的性状

ポリン系抗生物質である。当初，ナトリウム塩の製剤化に着手し，同剤は注射用水にて用時溶解して用いる粉末剤として，1988 年米国，カナダなど

図 2 に CTF の化学構造式を示した。分子式はにて上市された。現在，CTF はナトリウム塩およC19H16N5NaO7S3，分子量は 545.55 である。本剤はび溶解済みである塩酸塩の各注射剤および注入剤

人体用の第 3 世代セファロスポリン系抗生物質でが世界数十カ国にて牛，豚，馬，羊，山羊，鶏，あるセフォタキシムと化学構造上近縁である。

七面鳥，犬などへ応用されている。注射剤として＜性状＞白色〜微黄褐色の粉末または塊で水に溶けやすい。pH は 5.6 〜 6.0 である。

のナトリウム塩と塩酸塩では製剤構成成分が異なるが，種々の薬物動態学的パラメーターの比較に＜安定性＞原体は熱にやや不安定，光に安定であ

おいては極めて近似しており（図 1）［1］，臨床効

り，溶液中では中性付近で最も安定である。室果 も 同 等 で あ る と さ れ て い る。1990 年 代 に は温保存において 24 カ月規格値を保持した。まCrystalline Free Acid（結晶 CTF）を用いた持続型

た，溶解後の 1 日当たりの力価減少量は冷蔵保存（5℃ ± 2℃）
で約 0.23％，室温保存で約 2.1％である（図 3 および 4）（黒崎雄一郎ら，社内資料，1995。清水利恵子ら，社内資料，1995）。

図1

CTF の塩酸塩およびナトリウム塩をそれぞれ豚に 5mg/kg 筋肉内注射した後の血漿中濃度の推移（Brown ら［1］）

図2

21

CTF の化学構造式

22 動物抗菌会報 26（2004）

図3

CTF の溶解後力価の推移（室温保存）

図4

CTF の溶解後力価の推移（5℃ ± 2℃ 保存）（社内成績：Hahn DA ら）

３．毒性（社内成績：Hahn DA ら）

S ら，社内資料，1991。Marshall RR ら，社内資料，
1991。Gudi R ら，社内資料，1992。Sorg RM ら，
社内資料，1991。Basil KJ ら，社内資料，1985）。

１）急性毒性経口投与によるマウスおよびラットを用いた急性毒性試験における LD50 値はマウスで雌雄とも４．安全性

2,000mg/kg 以上，ラットでは 7,760mg/kg 以上であった。皮下投与ではマウス雄：2,993mg/kg，

１）牛

雌：2,190mg/kg，ラ ッ ト 雄：2,146mg/kg，雌：CTF を常用量最高投与量である 2mg/kg および1,680mg/kg であり，CTF の安全域は広い（Cole

2 倍量である 4mg/kg の用量にて 1 日 1 回 5 日間SL ら，社内資料，1985。山本

筋肉内投与した結果，全身性への影響を示唆する

譲ら，畜安研，

1994；未発表）。

変化はなく，投与局所においても肉眼的に腫脹や

２）亜急性毒性および慢性毒性

硬結は認められず，顕鏡下にて針の刺入による組

ラットを用いた 21 日間皮下投与による試験

織学的に極めて軽度な変化しか認められなかっの 結 果，無 毒 性 量 は 30mg/kg，最 小 中 毒 量 はた。また，この部位は 7 日以内に治癒傾向が認め

150mg/kg，中毒量は 700mg/kg であった。一方，られた（山本譲ら，畜安研，1994；未発表）。米

ラットを用いた 90 日間経口投与による試験の結国において，常用量最高投与量，3，5 および 10

果，無毒性量は 100mg/kg，300mg/kg で軽微な倍量に相当する，それぞれ 2.2，6.6，11 および毒性，1,000mg/kg で中等度の毒性，3,000mg/kg

22mg/kg を 1 日 1 回 15 日間連続筋肉内投与したで重度の毒性の発現が認められた（Kakuk TJ ら，が，極めて僅かな筋肉刺激性が一過性にあること

社内資料，1985。伊藤義彦ら，畜安研，1994；未が示唆された以外，何ら異常は認められなかった

発表）。

（Kakuk TJ ら，社内資料，1985）。

３）特殊毒性２）豚

代謝産物も含めた遺伝子突然変異誘発性，染色CTF を常用量最高投与量である 3mg/kg および体異常誘発性，催奇形性，吸入毒性の各試験にお2 倍量である 6mg/kg の用量にて 1 日 1 回 3 日間筋

いて CTF は陰性あるいは有害な影響をもたらさ

肉内投与した結果，全身性への影響を示唆する変ないと結論された（Show CI ら，社内資料，1985。

化はなく，投与局所においても肉眼的に腫脹や硬野田結は認められず，牛の場合と同様に，顕鏡下にて篤ら，畜安研，1994；未発表。小熊義弘ら，㈱ビー・エム・エル，1994；未発表。Mazurek JH

極めて軽度な変化しか認められなかった（中村ら，社内資料，1985。 Harbach PR ら，社内資料，

寛ら，畜安研，1994；未発表）。また，米国にお1983。Zimmer DM ら，社内資料，1985。McEnaney

いて 5（最高常用投与量の 1.6 倍量），15（同 5 倍

岩隈昭裕／セフチオフルについて／26（2004） 23量）および 25mg/kg（同 8.3 倍量）を 1 日 1 回 15
日間連続筋肉内投与したが，極めて僅かな筋肉刺
激性が一過性にあることが示唆された以外，何ら異常は認められなかった（Elliot GA ら，社内資料，1989）。

５．吸収・分布・代謝・排泄
CTF は体内に投与されると極めて速やかにチオエステル結合が切断され，一次代謝産物である
Desfuroylceftiofur（DFC）に変化し，その後さらに二次代謝産物であるジスルフィド体として

図5

Desfuroylceftiofur cysteine disulfide（DCD），3, 3 -

CTF 1mg/kg を子牛に単回筋肉内あるいは静脈内投与した際の血漿中濃度の推移（社内成績：Banting A ら）

desfuroylceftiofur disulfide（DFC-Dimer），Ceftiofur
sulfoxide cysteine thioester（CSCT），Desfuroylceftiofurprotein（DFC-P）などに変化する。蛋白結合型代謝産物も含めてジスルフィド体代謝産物は DFCと可逆的な反応を起こすことが推定されている［3］。このことから，CTF 関連代謝産物の測定には遊離型と結合型の DFC および CTF の未変化体を定量する必要があるため，ジチオエリスリトー
ルを含む溶媒で処理して DFC を生成し，さらにDesfuroylceftiofur acetamide（DCA）に誘導体化して定量する方法を確立した。
１）牛
約 3 カ月齢の牛に CTF 4mg/kg を単回筋肉内投CTF 4mg/kg を子牛に単回筋肉内投与 1 時間後の主要組織内濃度

与したところ，0.5 〜 1 時間で最高血中濃度に達（未発表：青木葉一ら（畜安研））

図6し，その後減衰した（青木葉一ら，畜安研，1995；未発表）。また，約 1 カ月齢の牛に CTF 1mg/kg をは投与後 0 〜 6 時間帯に最高排泄量が観察され，単回筋肉内または静脈内投与した場合も，最高血投与後 96 時間までに約 43％が排泄されたが，糞中濃度を除き，薬物動態に差は認められず，本剤

中排泄は腸内細菌により CTF の分解が起こる［2］は極めて吸収されやすいことが推察された（図ことから微量に止まった（Johnson DB ら，社内

5）。また，24 時間間隔で 5 回筋肉内に反復投与し資料，1986。Jaglan PS ら，社内資料，1989。青木ても蓄積性が無いことが明らかになった（Banting

葉一ら，畜安研，1995；未発表）。

A ら，社内資料，1989）。

２）豚約 3 カ月齢の牛に CTF 4mg/kg を単回筋肉内投

約 2 カ月齢の豚に CTF 6mg/kg を単回筋肉内投

与後 1 時間目における体内分布は，胆汁中に最高与したところ，0.5 時間で最高血中濃度に達し，濃度が検出され，次いで血漿中，腎臓，肝臓，心その後減衰した（青木葉一ら，畜安研，1995；未臓，脂肪，肺，小腸，脾臓，筋肉の順に分布した

発表）。また，24 時間間隔で 3 回筋肉内に反復投

（図 6）
。

与しても蓄積性が無いことが明らかになった

子牛に CTF 4mg/kg を単回筋肉内投与し，尿および糞中排泄を経時的に追跡したところ，尿中に（Yein FS ら，社内資料，1990）。
約 2 カ月齢の豚に CTF 6mg/kg を単回筋肉内投24 動物抗菌会報 26（2004）

与 1 時間後における体内分布は，血漿，胆汁，腎よび糞中排泄を経時的に追跡したところ，尿中に臓，肺，心臓，肝臓，小腸，脾臓，脂肪，筋肉のは投与後 0 〜 6 時間帯に最高排泄量が観察され，順に多く分布した（図 7）。

投与後 120 時間までに約 47％が排泄されたが，糞子豚に CTF 6mg/kg を単回筋肉内投与し，尿お

中排泄は腸内細菌により CTF の分解が起こる［2］ことから観察されなかった（青木葉一ら，畜安研，1995；未発表）。

６．抗菌活性
１）各種動物の主要疾病由来菌に対する抗菌スペ
クトル
家畜由来の各種細菌 65 株に対する CTF の抗菌スペクトルについて検討した（表 1，2，3）。その結果，CTF はグラム陽性菌およびグラム陰性菌の図7

各菌に対して高い抗菌活性を示した。しかし，作CTF 6mg/kg を子豚に単回筋肉内投与 1 時間後の主要組織内濃度

用点のない Mycoplasma 属あるいは腸球菌に対しては低い抗菌活性を示した。

（未発表：青木葉一ら（畜安研））

表1
菌

グラム陽性菌に対する CTF の最小発育阻止濃度（MIC）

種

Staphylococcus aureus
Staphylococcus xylosus
Staphylococcus cohnii
Staphylococcus haemolyticus
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus hyicus subsp. hyicus
Staphylococcus sciuri subsp. lentus
Streptococcus agalactiae
Streptococcus bovis
Streptococcus dysgalactiae
Streptococcus uberis
Streptococcus wquisimilis
Streptococcus pyogenes
Streptococcus suis
Enterococcus faecalisEnterococcus faecium
Erysipelothrix rhusiopathiae
Bacillus anthracis
Bacillus cereus
Clostridium chauvoei
Clostridium perfringens A
Clostridium perfringens C
Clostridium septicum
Clostridium perfringens A
Clostridium novyi
Clostridium perfringens B
Eubacterium suis

名由来

MIC（μg/ml）

KK-103
KK-105
KK-106
KK-107
KK-108
KK-109
KK-110埼 55- Ⅰ-1
埼 8- Ⅲ-7
埼 63- Ⅰ-3
埼 29- Ⅰ-7
3384
福島
S-9
香川
58-58E1
NF 4-E1
Ⅱ苗 H
AC-7
沖縄
CP-23
CP-46
44
W-1
1025
CPB-01
54001

牛
牛
牛
牛
牛
豚
豚
牛
牛
牛
牛
豚
豚
豚
鶏
豚
豚
牛
牛
牛
牛
牛
牛
鶏
羊
豚
豚

0.78
0.39
0.39
0.39
0.39
0.78
0.39
0.025
≦ 0.01250.20
0.78≦ 0.01250.025≦ 0.0125
25
＞ 100
0.05
1.56
3.13
≦ 0.01250.10
0.05≦ 0.01250.05≦ 0.0125
0.10
12.5

株

（未発表：奥村融ら（京動検））岩隈昭裕／セフチオフルについて／26（2004） 25

表2
菌

グラム陰性菌に対する CTF の最小発育阻止濃度（MIC）

種

Actinobacillus pleuropneumoniae 1
Actinobacillus pleuropneumoniae 2
Actinobacillus pleuropneumoniae 3
Actinobacillus pleuropneumoniae 5
Haemophilus paragallinarum (A 型 )Haemophilus paragallinarum (C 型 )Haemophilus parasuis
Haemophilus somnus
Mannheimia haemolytica
Mannheimia haemolytica
Pasteurella multocida
Pasteurella multocida
Bordetella bronchiseptica
Moraxella bovis
Escherichia coli (K-99 陽性 )Escherichia coli (O-8)
Escherichia coli (O-2)
Escherichia coli (O-78)
Escherichia coli
Escherichia coli (K-88 陽性 )Salmonella Dublin
Salmonella Enteritidis
Salmonella Typhimurium
Salmonella Choleraesuis
Salmonella Derby
Salmonella Enteritidis
Salmonella Sofia
Salmonella Typhimurium

名由来

MIC（μg/ml）

NB001
SHP-17
Shop1421
Hi-1
221
HK-1
HS-2
23N2359
N791
S801
PMC-458
TS-8
A-19
65L
B-41
I-01
K-1
K-2
E-10
G1253
L-775
S-48
SIC-8401
L-97
L-688
L-47
L-65
L-748

豚
豚
豚
豚
鶏
鶏
豚
牛
牛
鶏
牛
豚
豚
牛
牛
牛
鶏
鶏
豚
豚
牛
牛
牛
豚
豚
豚
豚
豚

0.025
≦ 0.0125≦ 0.0125≦ 0.0125≦ 0.01250.025
0.39≦ 0.0125≦ 0.0125≦ 0.0125≦ 0.0125
0.39
25
0.05
0.20
0.39
0.20
0.39
0.39
0.39
0.20
0.78
0.78
0.78
0.39
0.10
1.56
0.78

株

（未発表：奥村

表3

融ら（京動検））マイコプラズマおよびスピロヘータに対する CTF の最小発育阻止濃度（MIC）
種

株

名

由来

MIC（μg/ml）

Mycoplasma arginini
Mycoplasma bovigenitalium
Mycoplasma bovirhinis
Mycoplasma bovis
Mycoplasma dispar
Mycoplasma gallisepticum
Mycoplasma hyopneumoniae
Mycoplasma hyorhinis
Brachyspira hyodysenteriae
Brachyspira innocens

G-230
PG11
PG43
Donetta
462/2
KP-13
J
BTS-7
S-5
P-27

牛
牛
牛
牛
牛
鶏
豚
豚
豚
豚

＞ 100
＞ 100
＞ 100
＞ 100
＞ 100
＞ 100
＞ 100
＞ 100
0.78
0.39

菌

（未発表：奥村２）β– ラクタマーゼに対する安定性

融ら（京動検））３）牛由来 Mannheimia (Pasteurella) haemolytica,

標準株およびヒト由来臨床分離株 57 株を用い

Pasteurella multocida および豚由来 Actinobacillusて検討した結果，CTF はβ– ラクタマーゼに対し

pleuropneumoniae, Pasteurella multocida にてほぼ安定であった（出口浩一ら，東京総臨検セ，
1995；未発表）。

対する抗菌力国内において 1985 年から 1992 年の間に肺炎症

26 動物抗菌会報 26（2004）

状を示す牛の鼻汁および肺から分離された M.

0.0125μg/ml 以下であった。牛の P. multocida にhaemolytica，P. multocida 各 60 株および 1988 年か

対しては 0.0125 以下〜 0.39μg/ml の範囲にあり，ら 1993 年の間に斃死豚の肺から分離された A.

そのピークは 0.05μg/ml であった。一方，豚のpleuropneumoniae 1，2，5 型 お よ び P. multocida

A. pleuropneumoniae 1，2，5 型および P. multocida

各 30 株に対する CTF の抗菌力を各種抗菌剤と比に対しては全て 0.025μg/ml 以下であった。また，

較検討した（表 4，5）
。その結果，CTF はいずれ

国内において，上市後 2004 年までの 7 年間，前述の菌種においても強い抗菌力を有していた。牛のの菌種における耐性の報告はない。

M. haemolytica に対する MIC 値の範囲は 0.0125 以

４）耐性獲得および消失試験

下 〜 0.20μg/ml の 範 囲 に あ り，そ の ピ ー ク は
表4菌

牛由来 M. haemolytica および P. Multocida 各 60 株に対する CTF の最小発育阻止濃度（MIC）

種

薬剤

MIC（μg/ml）≦ 0.0125 0.025 0.05 0.10 0.20 0.39 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5

M. haemolytica CTF
ERFX
ABPC
CEZ

23

CTF
ERFX
ABPC
CEZ

6
5

P. multocida

CTF: セフチオフル

表5

牛由来 M. haemolytica，P. multocida および豚由

8
15

12
11
1

17
35
7
19
19
22

ERFX: エンロフロキサシン

11
9
24
12
15
11

1
1
23
2
7
10
13

2
9

15

3
20

25

50

100 MIC90

4

0.10
0.10
0.39
3.13

4

0.20
0.20
0.78
3.13

1
10

4
6
11

7
3

ABPC: アンピシリン

29

13

CEZ: セファゾリン（未発表：奥村融ら（京動検））豚由来 A. pleuropneumoniae 1, 2, 5 型および P. multocida 各 30 株に対する CTF の最小発育阻止濃度（MIC）

菌

種

薬剤

MIC（μg/ml）≦ 0.025 0.05 0.10 0.20 0.39 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5 25

A. pleuropneumoniae CTF
1 型 ERFXABPC
SMX+OMP30
26

A. pleuropneumoniae CTF
2 型 ERFXABPC
SMX+OMP30
26

A. pleuropneumoniae CTF
5 型 ERFXABPC
SMX+OMP

30
25

CTF
ERFX
ABPC
SMX+OMP30
30

P. multocida

50 >50≦ 0.025
0.05
1.56
12.5

4
11

14
1

1
2

1
3

11

10

1
3

2

≦ 0.025
0.05
0.39
1.56

4
3

26
2

1
20

7

1

4

≦ 0.025
0.05
0.39
3.13

5

≦ 0.025≦ 0.025
0.20
>50

5
1

18

11
17

8

21

9

1
1

2

MIC90

11

5

1

2

3

CTF: セフチオフル ERFX: エンロフロキサシン ABPC: アンピシリン SMX+OMP: スルファメトキサゾール＋オルメトプリム（未発表：菊入鉄大ら（日清製粉㈱ 検査センター））岩隈昭裕／セフチオフルについて／26（2004） 27

来 A. pleuropneumoniae，P. multocida の CTF に対ら既に 10 数年経過する米国・カナダにおいても，する耐性獲得および耐性消失の程度をエンロフロ

継続的に耐性モニタリング調査を実施している

キサシン（ERFX），セファゾリン（CEZ）およびが，前述のいずれの菌種においても MIC90 に変化

カナマイシン（KM）と試験管内において比較検はなく，CTF は強い抗菌力を維持していること討した（図 8）
。その結果，供試菌の耐性獲得状況がわかる（表 6）。また，その他の菌種においてもは極めて緩慢であり，その後の耐性消失試験にお同様のことが判明している。これは，CTF が腸内いて段階的に耐性の消失を認めた。また，交差耐細菌により分解される［2］ことや，一般の飼養管性の検討において，CTF は CEZ 耐性菌に対して理形態では尿と糞が環境中に一定時間混在するたも優れた抗菌力を発揮することが認められた（奥め，尿中に排泄された CTF も環境中で極めて速村融ら，京動検，1995）。

やかに分解されることも耐性菌が生じにくい一因

一方，CTF が一般臨床現場で使用され始めてかではないかと推察できる。

７．残留

前述のように，CTF の二次代謝産物であるジスルフィド体は，蛋白結合型代謝産物も含めて DFCと可逆的反応を起こすこと，遊離型代謝産物は原体とほぼ同等の抗菌作用があること（Yancey Jr.
RJ ら，社内資料，1986），さらに，蛋白結合型代
謝産物は遊離型代謝産物としても排泄されること
図8

A. pleuropneumoniae 1 型（NB001 株）の 各 種
抗菌剤に対する耐性獲得（左）及び耐性消失（右）試験成績
CTF：セフチオフル ERFX：エンロフロキサシン
KM：カナマイシン CEZ：セファゾリン（未発表：奥村 融ら（京動検））

表6から，残留分析法として微生物学的分析法ではな
く，
関連化合物を誘導体化した DCA について高速
クロマトグラフ法を用いて分析した。
１）牛CTF を常用量最高投与量である 2mg/kg および有効菌種（臨床分離株）の CTF に対する耐性モニタリング調査成績
種

由来

調査年

供試株数

MIC90（μg/ml）

M. haemolytica

牛P. multocida

牛A. pleuropneumoniae

豚

P. multocida

豚1988-1992
1997-1998
1998-1999
2000
2001
1988-1992
1997-1998
1998-1999
2000
2001
1988-1993
1999
2000
1988-1993
1999
2000

461
110
139
209
189
318
107
181
208
259
30
97
126
30
114
173

0.06
0.06
≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.030.06≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.03≦ 0.03

菌（社内成績）

28 動物抗菌会報 26（2004）

2 倍量である 4mg/kg の用量にて 1 日 1 回 5 日間

外は無効とした。供試牛に対しては試験開始前後

筋肉内投与した。その結果，常用量最高投与量群の鼻汁および斃死牛の肺からの細菌学的検査およにおいては投与終了後 15 日目に全試料が検出限び類症鑑別として各種ウイルス抗体価による血清界（0.05μg/g，mL）以下となった（青木葉一ら，学的検査を並行して実施した。

畜安研，1995；未発表）。

その結果，斃死牛の肺からは M. haemolytica，また，搾乳牛を用いて CTF を 1 日 1 回 5 日間投

P. multocida あ る い は Mycoplasma 属 が 分 離 さ れ

与する乳汁中残留試験を実施した結果，常用量最た。CTF 投与により，臨床スコアは試験開始後 3

高投与量群は各投与回の投与後 24 時間目には全日以内に生食群に比べて早期に臨床症状を改善す

試料で検出限界以下となり，2 倍量投与群においることが明らかとなった。また，CTF1mg/kg 以てもほぼ同様の成績が得られた（内田一成ら，畜上の用量群において有効以上と判定された症例の安研，1996；未発表）。

割合は対照薬群より有意に高かった（図 9 左，２）豚P<0.05）。

CTF を常用量最高投与量である 3 mg/kg およ

また，PCG ＋ DSM あるいはオキシテトラサイ

び 2 倍量である 6mg/kg の用量にて 1 日 1 回 3 日

クリン（OTC）注射剤にて加療されたが，症状が間筋肉内投与した。その結果，常用量最高投与量改善されず，無効と判定された他剤無効症例に対群においては投与終了後 7 日目に全試料が検出限して CTF 2mg/kg を 1 日 1 回 3 日間投与した結果，界以下となった（青木葉一ら，畜安研，1995；未70％に有効以上の効果が認められた。

発表）
。

２）豚

８．臨床応用した。また，他剤無効症例に対する野外臨床試験

野外臨床試験は全国 5 カ所の試験施設にて実施
を 1 カ所の試験施設において実施した。
１）牛試験開始前の斃死豚の剖検結果から，肺より A.

野外臨床試験は全国 4 カ所の試験施設にて実施

pleuropneumoniae が分離された豚と同一豚群にした。また，他剤無効症例に対する野外臨床試験

おいて，40℃ 以上の発熱，元気・食欲の消失，発を 1 カ所の試験施設において実施した。

咳などの呼吸器症状が認められた豚 509 頭を供試

39.6℃ 以上の発熱，咳，鼻汁漏出，呼吸速迫おした。供試豚に対して CTF を 0.5，1，3 および

よび異常呼吸音を呈し，臨床的に肺炎と診断され5mg/kg にて 1 日 1 回 3 日間筋肉内投与し，生理た牛 651 頭に対して CTF を 0.25，0.5，1，2 および食塩液を投与した生食群あるいは既に国内におい3mg/kg にて 1 日 1 回 3 〜 5 日間筋肉内投与した。

て豚の肺炎あるいは胸膜肺炎に対して認可されて生理食塩液を投与する生食群および既に国内においるアンピシリン（ABPC，10mg/kg）あるいは

いて肺炎に対して認可されているベンジルペニシ

ERFX（5mg/kg）の各注射剤の対照薬群と治療効

リンプロカインと硫酸ジヒドロストレプトマイシ

果を比較検討した。なお，効果判定は臨床症状

ンの合剤（PCG ＋ DSM，それぞれ 1 万単位 /kg（体温，元気，食欲，被毛状態，呼吸状態，呼吸

お よ び 12.5mg/kg），KM（10mg/kg）あ る い は数，発咳）の程度をスコア化し，試験開始前後にERFX（5mg/kg）の各注射剤の対照薬群を設定し，おけるスコアの改善率にて実施した。すなわち，

CTF 投与群と治療効果を比較検討した。なお，効試験開始後 3 日目に 80％以上のスコア改善が認め

果判定は臨床症状（体温，元気，食欲，呼吸数，られた症例を著効，試験開始 7 日目に 80％以上の呼吸音，発咳）の程度をスコア化し，試験開始前

改善が認められた症例を有効，それ以外は無効と後におけるスコアの改善率にて実施した。すなわした。供試豚のうち，一部は A. pleuropneumoniae

ち，試験開始後 3 日目に 80％以上のスコアの改善の感染を確認する目的で試験終了後に剖検し，細が認められた症例を著効，試験開始後 5 日目に菌学的検査に供した。

80％以上の改善が認められた症例を有効，それ以その結果，剖検した豚からは A. pleuropneumoniae岩隈昭裕／セフチオフルについて／26（2004） 29

1，2 あるいは 5 型が分離された。CTF 投与によまた，斃死豚から A. pleuropneumoniae 2 型が分り，臨床スコアは CTF 1mg/kg 以上の用量群にお離された豚群において，ABPC 注射剤 10mg/kg

いて早期に改善され，有効以上と判定された症例にて 2 日間加療されたが症状の改善が認められの割合も対照薬群より有意に高かった（図 9 右，ず，無効と判定された症例に対して CTF 3mg/kg

P<0.05）。

を 1 日 1 回 3 日間投与した結果，全ての供試豚が有効以上と判定された。
以上，CTF は牛の肺炎および豚胸膜肺炎に対して対照の既存薬剤より優れた効果を有する薬剤であると判断された。

１
０．参

考

CTF の製剤名と承認事項および使用上の注意
図9

CTF の牛肺炎および豚胸膜肺炎に対する野外臨床試験成績まとめ（社内成績）
表7

は表 7 の通りである。

CTF（ナトリウム塩）の製剤名と承認事項および使用上の注意

製 剤 名：エクセネル注
製造所名：ファイザー株式会社
成分分量：1 バイアル（20mL 容器）中にセフチオフルナトリウム 1g（力価）を含有する。
1 バイアル（80mL 容器）中にセフチオフルナトリウム 4g（力価）を含有する。
効能効果：適 応 症：牛：肺炎 豚：豚胸膜肺炎
有効菌種：パスツレラ ヘモリチカ，パスツレラ マルトシダ，アクチノバチルス プルロニューモニエ
用法用量：本剤は，表示力価に従い 1mL 当たり 50mg（力価）となるよう注射用水で溶解して用いる。
通常 1 日 1 回体重 1kg 当たりセフチオフルとして下記のとおり筋肉内に注射する。
牛：1 〜 2 mg（力価），3 〜 5 日間 豚：1 〜 3 mg（力価），3 日間
使用上の注意：［一般的注意］（1）本剤は定められた用法・用量を厳守すること。なお，用法・用量に定められた期間以内の投与であってもそれを反復する投与は避けること。
（2）本剤の使用に当たっては，耐性菌の発現等を防ぐため，原則として感受性を確認し，適応症の治療上必要な最小限の期間の投与に止めること。
（3）本剤は第一次選択薬が無効の症例のみに限り使用すること。
（4）本剤は効能・効果において定められた適応症の治療にのみ使用すること。
（5）本剤は「使用基準」の定めるところにより使用すること。
（6）本剤は要指示医薬品であるので獣医師の処方せん・指示により使用すること。
［対象動物に対する注意］
１．副作用
本剤は，まれに過敏症反応を起こすことが考えられるので，観察を十分に行い，症状があらわれた場合は投与を中止し，適切な処置を行うこと。
２．適用上の注意
本剤を投与する時，同一部位に連続投与しないこと。
［取扱上の注意］
本剤の溶解後，室温保存の場合は 12 時間以内に，冷蔵保存の場合には 7 日以内に使用すること。
注意：獣医師の処方せん・指示により使用すること
注意：使用基準の定めるところにより使用すること
注意：本剤は薬事法第 83 条の 4 の規定に基づき上記の用法及び用量を含めて使用者が遵守すべき基準が定められた医薬品ですので，使用対象動物（牛，豚）について上記の用法及び用量並びに次の使用禁止期間を遵守して下さい。
牛：食用に供するためにと殺する前 20 日間，又は食用に供するために搾乳する前 24 時間
豚：食用に供するためにと殺する前 10 日間

30 動物抗菌会報 26（2004）

参考文献

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antibiotic. Role of animal excreta in its decomposition.

１）Brown SA, Hanson BJ, Mignot A, et al.: Comparison

J Agric Food Chem, 38, 890-894 (1990)

of plasma pharmacokinetics and bioavailability of３）Jaglan PS, Kubicek MF, Arnold TS, et al.: Metabolism

ceftiofur sodium and ceftiofur hydrochloride inof Ceftiofur. The nature of urinary and plasmapigs after a single intramuscular injection. J Vet

metabolites in rats and cattle. J Agri Food Chem,

Pharmacol Ther 22, 35-40 (1999)

37, 1112-1118 (1989)

２）Gilbertson TJ, Hornish RE, Jaglan PS, et al.:Ceftiofur
Akihiro IWAKUMA
Pfizer Animal Health, Pfizer Japan Inc., 3-22-7, Yoyogi, Shibuya-ku, Tokyo 151-8589, Japan
Ceftiofur (CTF) is a new broad spectrum veterinary cephalosporin, and the development was started in the early
1980s by The Upjohn Company (present Pfizer Inc.). In 1988, its sodium salt preparation was launched in the USA,
Canada and other several countries. In 1996, the product was approved for treatment of the bovine pneumonia andpleuropneumonia of swine in Japan. At present, its sodium salt and hydrochloride salt are available in dozens ofcountries in the world for cattle, swine, horse, sheep, chicken, dog and other species.
CTF is closely related with cefotaxime, the 3rd generation cephalosporin for human use, however the activity andspectrum of CTF are considered to be more or equal. CTF has powerful activity against Gram-positive and Gramnegative bacterial pathogens and shows resistance against bacterial ß-lactamase. CTF is metabolized rapidly toseveral substances and also absorbed and distributed to organs speedily after injection intramuscularly. The main
excretion route is in urine and the activity is devitalized by intestinal microflora. Bacterial resistance against CTF is
acquired very slowly and no in vitro resistance of targeted bacteria, such as Mannheimia haemolytica, Pasteurella
multocida, Haemophilus somnus or Actinobacillus pleuropneumoniae, has been reported since its launch. CTF has nosystemic toxic effect when injected intramuscularly into cattle and pig at ten times of the standard dosage forconsecutive 15 days injection, therefore CTF has a wide margin of safety.
In the field clinical studies for both bovine pneumonia and pleuropneumonia of swine, CTF has shown statistically
excellent results compared with general present drugs and also has shown good efficacy against no effective casetreated by other antimicrobials. The withdrawal period for beef, milk and pork are required for 20 days, 24 hours and
10 days respectively.

討論（座長：澤田拓士，日獣大）

質問（松本修治，大日本製薬）

答（岩隈昭裕）

溶解した薬剤の安定性を示しておられたが，紫外線日光による影響はほとんど受けない。示したデーの影響は受けないか。

ターにおける紫外線の量は不明です。

松本修治／ジフロキサシンについて／26（2004） 31

ジフロキサシンについて
松本修治
大日本製薬株式会社アニマルサイエンス部（〒 541-0045 大阪市中央区道修町 2-6-8）

用法用量：1 日 1 回，
（豚の）体重 1kg 当たり，ジ１．開発の経緯

フロキサシンとして 2.5 〜 5.0mg（本剤として 10 〜 20mg）を飲水に均一に

ジフロキサシン（Difloxacin；DFLX）は 1984 年

溶かして 3 日間経口投与する。

にアボット社（米国）で合成されたニューキノロ

３．飲水添加投与のメリット

ン（NQ）系抗菌剤であり，豚の細菌性肺炎の治療薬としてベテキノン可溶散 25％の製品名で大日本製薬により販売されている。DFLX は，他の①肺炎罹患時には飼料摂取量が低下する場合がNQ 同様に以下に示すような優れた特長を有してあるが，水は通常通り飲むため，病豚にも確いる。

実な投薬ができる。

①グラム陽性菌，グラム陰性菌（アクチノバシ②飼料添加剤と異なり，投与の開始および中止

ラス・プルロニューモニエ，パスツレラ・ム

が容易にできるため，休薬期間遵守の観点からも適している。

ルトシダ），マイコプラズマなどに広い抗菌③注射剤に比べて投薬が簡便であり，豚に対すスペクトルと強い抗菌作用を示し，その作用

るストレス負荷が少なく，注射痕の問題も起は殺菌的である。

きない。

②主要な臓器に血漿中濃度より高い濃度移行する。

４．抗菌活性③豚に対する安全性が高く，休薬期間も動物用
NQ の中で最短（7 日間）である。

１）抗菌スペクトル

本剤は，飲水添加用の製剤として承認を取

DFLX は広い抗菌スペクトルを有し，グラム陽得し 1996 年からわが国で販売されている。

性菌およびグラム陰性菌に対して強い抗菌作用を

２．製剤名，成分及び承認事項示した（表 1，2）。
２）豚呼吸器感染症由来菌の薬剤感受性

製剤名：ベテキノン可溶散 25％（100g × 5：アル

豚呼吸器感染症由来のアクチノバシラス・プル

ミ袋入）成

ロニューモニエ，パスツレラ・ムルトシダおよび分：1g 中 に 塩 酸 ジ フ ロ キ サ シ ン 272.8mg

マイコプラズマ・ハイオニューモニエに対する（DFLX として 250mg 相当量）を含有す

DFLX の MIC は，それぞれ 0.025 〜 0.05，0.013 〜

る。

0.025 および 0.2μg/mL で，概して DFLX の MIC
が他系統の抗菌剤の値より小さい値であった（表

効能効果：有効菌種；アクチノバシラス・プルロ

3）。

ニューモニエ，パスツレラ・ムルトシダ
適応症；豚

細菌性肺炎
31

32 動物抗菌会報 26（2004）
表1
供ジフロキサシンと関連薬剤の抗菌スペクトル（グラム陽性菌）
試菌

Staphylococcus aureus 209P JC-1
Staphylococcus aureus Terajima
Staphylococcus aureus Smith
Staphylococcus aureus 252R
Staphylococcus aureus 199R
Staphylococcus epidermidis Kawamura
Enterococcus faecalis CN-478
Bacillus subtilis ATCC 6633

DFLX

ERFX

OFLX

OA

0.39*
0.78
0.2
0.39
0.2
0.2
3.13
0.1

0.1
0.2
0.1
0.2
0.1
0.1
0.78
0.05

0.39
0.39
0.2
0.39
0.39
0.39
1.56
0.1

3.13
3.13
3.13
3.13
3.13
6.25
25
0.2

DFLX：ジフロキサシン，ERFX：エンロフロキサシン，OFLX：オフロキサシン，
OA：オキソリン酸*MIC：μg/ml

表2
供

ジフロキサシンと関連薬剤の抗菌スペクトル（グラム陰性菌）
試菌

Escherichia coli NIHJ JC-2
Escherichia coli KC-14
Salmonella Typhi T-58
Salmonella Typhimurium S-9
Shigella sonnei EW 33
Klebsiella pneumoniae PCI-602
Klebsiella pneumoniae 5038
Proteus mirabilis TU-1698
Morganella morganii Kono
Citrobacter freundii GN-346
Enterobacter cloacae TU-680
Serratia marcescens OU-29
Pseudomonas aeruginosa TU-408
Pseudomonas aeruginosa 4098

DFLX

ERFX

OFLX

OA

0.39*

0.05
0.025
0.1
0.05
0.05
0.2
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.39
0.78
0.78

0.1
0.1
0.1
0.05
0.1
0.2
0.2
0.1
0.1
0.1
0.1
0.39
0.78
0.78

0.39
0.2
0.39
0.2
0.2
0.78
0.78
0.1
0.2
0.39
0.78
0.39
3.13
6.25

0.1
0.39
0.39
0.2
0.78
0.39
0.78
0.78
0.2
0.2
1.56
0.78
0.78

DFLX：ジフロキサシン，ERFX：エンロフロキサシン，OFLX：オフロキサシン，
OA：オキソリン酸*MIC：μg/ml

表3

ジフロキサシンと関連薬剤の抗菌スペクトル（豚呼吸器感染症起因菌）

供

試

菌

Actinobacillus
pleuropneumoniae s-1536（2 型）
Actinobacillus
pleuropneumoniae CH-1（2 型）
Actinobacillus
pleuropneumoniae NB001（1 型）
Actinobacillus
pleuropneumoniae YN (1)Pasteurella multocida Kobe
Pasteurella multocida TS-8
Pasteurella multocida Pm204
Mycoplasma hyopneumoniae J 24

DFLX*

OA

AMPC

OTC

LCM

TS

0.05**

0.1

0.05

0.39

NT

NT

0.025

0.1

0.05

0.39

NT

NT

0.05

0.2

0.1

1.56

NT

NT

0.05
0.013
0.025
0.013
0.2

0.2
0.05
0.05
0.1
6.25

0.1
0.2
0.2
0.2
NT

1.56
0.39
0.39
0.78
0.2

NT
NT
NT
NT
0.2

NT
NT
NT
NT
0.1

*DFLX：ジフロキサシン，OA：オキソリン酸，AMPC：アモキシシリン，

OTC：オキシテトラサイクリン，LCM：リンコマイシン，TS：タイロシン**MIC：μg/mL，NT：not tested

松本修治／ジフロキサシンについて／26（2004） 33

５．吸収・分布・代謝・排泄

果，胆汁が最高濃度（50.7μg/g）を示し，次いで胃，肝臓，小腸，腎臓，脾臓の順であり，その濃度

１）血漿中濃度14C-DFLX の 5 あるいは 10 mg/kg/ 日を 3 日間，はそれぞれ 17.0，15.3，11.3，10.8 および 10.8μg/gであった。脂肪以外の組織では，血漿中濃度より連続飲水投与し，豚における DFLX の血漿中濃度

高濃度の薬剤移行が認められた（図 2）。

の推移を検討した。その結果，DFLX の血漿中濃３）代謝及び排泄度は投与開始直後より徐々に増加し，投与開始 72

14

C-DFLX の 10mg/kg を強制経口投与した犬の時間後にピークに達し，その濃度は 5 および 10

尿および糞における未変化体と各代謝物の放射能

mg/kg/ 日の用量でそれぞれ 0.26，0.53μg/mL で活性を調べ，投与量（投与放射能活性）に占めるあった。

測定値の比率を求め，尿，糞およびその合計（尿主要な起因菌であるアクチノバシラス・プルロ糞計）の値を表 5 に示した。

ニューモニエおよびパスツレラ・ムルトシダに対尿と糞の総放射能活性合計を見た場合，それぞす る MIC（表 3）が 0.013 〜 0.05μg/mL で あ っれ，14.0％および 79.2％であり，糞の値の方が尿たことから，これらの MIC 濃度以上の血漿中濃よりも 5.7 倍大きい値であった。尿糞計を見ると，度が，投与開始より約 80 時間持続している。こ未変化体が 64.5％ で最も多く，次に，グルクロンの高濃度に達した血漿中の薬剤は，休薬後，約 30酸抱合体（12.4％）と N- デスメチルジフロキサシ

時間で血漿から消失した（図 1）。

ン（11.6％）の代謝物が続いた（表 5）。

次に，14C-DFLX の 10mg/kg を 1 回静脈内あるいは経口投与してラットとイヌにおける血漿中濃６．臨床試験

度の薬動力学的パラメーターを算出した。その結果，いずれの動物種においても静脈内および経口

アクチノバシラス・プルロニューモニエによる投与で得られた 半減期（t1/2）および血中濃度時

胸膜肺炎罹患豚 60 頭（一群各 20 頭）に対して間曲線下面積（AUC）に投与ルートの違いによる差は認められなかった（表 4）。

表4

したがって，本剤は，経口投与後の腸管からのラットとイヌに DFLX を投与した時の薬動力学的パラメーター

吸収が非常に良く，また，肝臓における代謝を受け難い事が推察された。

動物種

薬動力学的
パラメーター

静脈内投与

経口投与

２）組織中濃度ラット

t1/2 (hr)

5.2*

4.7

AUC (μg・hr/ml)

21.8

20.1

t1/2 (hr)

8.1

8.3

AUC (μg・hr/ml)

33.7

34.2

DFLX の 10mg/kg を強制経口投与し，その 2 時
間後の豚における組織中濃度を測定した。その結

イヌ＊

平均値（n ＝ 4）

図1

豚にジフロキサシン飲水投与後の血漿中濃度（n = 3）（投与期間：投与開始 0 〜 72 時間）

図2

豚におけるジフロキサシン 1 回経口投与 2 時間
後の組織中濃度（10mg/kg, n = 3）

34 動物抗菌会報 26（2004）
表5

14

C– ジフロキサシンをイヌに経口投与（10mg/kg）した時の尿および糞中の未変化体と代謝物の割合（n ＝ 4）
未変化体及び代謝物の割合（％）

未変化体
N-oxide- ジフロキサシン
未同定代謝物N- デスメチルジフロキサシン
3 -oxo- ジフロキサシン
グルクロン酸抱合体
合 計

尿

糞

尿糞計

2.8 ± 1.1*

61.7 ± 4.7
ND
2.1 ± 1.3
5.7 ± 4.9
0.1 ± 0.2
9.6 ± 3.6
79.2 ± 4.3

64.5
2
2.6
11.6
0.2
12.4
93.2

2.0 ± 0.6
0.5 ± 0.1
5.9 ± 2.3
0.1 ± 0.1
2.8 ± 1.0
14.0 ± 3.5＊ mean ± S.D.

DFLX の 2.5，5.0mg/kg/ 日あるいはアモキシシ

臓および小腸の残留濃度が高い傾向が見られた

リン（AMPC）10mg/kg/ 日を 3 日間飲水投与した。

が，投与終了後 5 日目には，調査した全組織で検その結果，DFLX の 2.5 および 5.0mg/kg/ 日の投出限界以下となった。以上の結果より，休薬期間

与により，いずれも 100％の有効率（全体に占めは 7 日間と設定された。

る著効例と有効例の合計の比率）が得られ，対照薬（AMPC）の有効率 40％との間に有意差（p<0.01）が認められた（図 3，表 6）。
以上の様に，DFLX 投与により AMPC よりも高い臨床効果が得られた。

７．残留性
DFLX の 5 あるいは 10mg/kg/ 日を 3 日間連続飲水投与し，豚における血漿中濃度および組織（筋
肉，肝臓，腎臓，脂肪，小腸，肺）中濃度を測定した。その結果，5mg/kg/ 日投与群では，腎臓の残留濃度が最も高い傾向が見られたが，投与終了
後 5 日目には，調査した全組織（全検体）で検出

図3

臨床スコアによるジフロキサシンの薬効評価（診断名：豚胸膜肺炎））

限界以下となった。10 mg/kg/ 日投与群では，腎表6

臨床試験効果判定のまとめ

試験群

供試頭数

著効

有効

無効

有効率（％）

5mg/kg2.5mg/kg
AMPC 10mg/kg

20 頭
20 頭
20 頭

9（45）*9（45）1（ 5）

11（55）
11（55）
7（35）

0（ 0）
0（ 0）
12（60）

100**
100**
40

* 頭数（割合；％），**AMPC 投与群との間に有意差有り（p<0.01）

有効率（％）＝（著効例＋有効例）/ 供試例数× 100

松本修治／ジフロキサシンについて／26（2004） 35

Difloxacin
Shuji MATSUMOTO
Animal Science Division of Dainippon Pharmaceutical Co. Ltd., 6-8, Doshomachi 2-chome, Chuo-ku, Osaka, Japan
Difloxacin (DFLX) was synthesized by Abbott Laboratories Inc. in 1984. DFLX is a new quinolone and has been on
the market in Japan under the product name of “Vetequinon”. DFLX is characterized by its broad spectrum and highbioavailability. DFLX is now being developed exclusively for animal use in some countries in the world. In 1996, DFLX
was approved of application for bacterial pneumonia of swine in Japan.
The good pharmacokinetic property of DFLX was proved in swine administered by drinking water at 3-day dose of
5 mg/kg/day. As a result of this test, the Cmax value in the plasma was 0.26 μg/mL. The tissue levels of DFLX wereequal to or higher than the plasma level. In swine, DFLX is excreted 14.0 % in urine and 79.2 % in feces.
In the residual study, the excretory periods were established at 7 days for swine. No drug-related toxicologicaleffect was noted in swine treated with DFLX in 2 to 10 times higher doses than those required for actual therapy.
DFLX has a broad antibacterial spectrum. The good efficacy of DFLX was demonstrated against bacterial
pneumonia in swine.

討
質問（関論（座長：澤田拓士，日獣大）誠，川崎製薬）答（松本修治）

静脈内投与と経口投与で血中濃度がほぼ同等との人工光を直接当てた場合，30 分以内に薬液中の薬ことであるが，これは肝腸循環することによると考え剤の 80％が分解された。他の動物用ニューキノロンてよいか。

（類似 NQ 剤）の水溶液を直射日光に当てたところ，答（松本修治）やはり短期間で，分解した。ただし，実際に，直射日

重要なポイントは，ニューキノロン共通の特徴であ

光の当たらない養豚場の屋根の下あるいは養豚場内

る「腸管（おそらく腸管上部）からの吸収が，非常にに類似 NQ 剤の水溶液を放置した結果，24 時間の放優れていること」加えて「腸管から吸収された場合，

置でもほとんど分解されなかった。よって，ジフロキ

薬剤は大半が肝臓を通過する。その際，本剤はほとん

サシン溶液でも，直射日光に当てないで，養豚場（現ど代謝を受けないこと」この 2 点が，最も関係してい在は薄暗い養豚場が多い）内に薬液を置いておけば直ると考えられる。

射日光や光線による分解等の問題は避けられると考質問（福本一夫，日本イーライリリー）
飲水添加において「苦み」により飲水量の低下はな
いか。

える。
質問（藤倉孝夫，日本シルバーボランティアズ）
豚の肺炎（細菌性，マイコプラズマ性）に対する評答（松本修治）価試験において，臨床所見以外に肺病変についても発売当初心配されていましたが，実際の用量および観察されたか。

濃度では飲水量および飲水欲の低下は認められてい答（松本修治）ません。

確定診断のために，投薬前に病豚の剖検所見，肺の質問（佐藤静夫，全農家衛研）

病変所見の検討および起因菌の分離同定を実施した

光線による失活が早いとのことであるが，開放豚が，投薬開始後における病理解剖は実施しなかった。

舎等での使用に問題がないか。

診断確定後は，細菌性肺炎に特徴的な調査項目（咳，36 動物抗菌会報 26（2004）
鼻汁，体温他）を毎日調査し，投与終了後 4 日目の臨による問題はないか。

床スコアを投薬前のスコア合計と比較して薬効を判答（松本修治）

定した。
質問（金井

重篤発病な豚，飲水の戦いに敗れた豚では飲水量
久，群馬県）

注射による投与では全頭に一律に投与されるが，飲水投与では発病中の豚では飲水量が減少するなどが減少する場合がある。この様な豚には別途投与や隔離などの手当を指導している。

梶原敬太／バルネムリンについて／26（2004） 37

バルネムリンについて
梶原敬太
ノバルティス アニマルヘルス株式会社（〒 105-6137 東京都港区浜松町二丁目 4 番 1 号

世界貿易センタービル 37 階）

は白色〜淡黄色の非結晶性の粉末で，においはな

１．開発の経緯

いか又はわずかに特異なにおいがある。また，やや吸湿性がみられる。水，メタノール，エタノー

塩酸バルネムリン（以下，VML）は，ノバルティ

ルによく溶け，エーテルにはほとんど溶けないス社の前身であるサンド社で 1989 年に創製された（社内資料：未発表）。

ジテルペン系抗生物質で，プレウロムチリン環側鎖のアミノ基に D– バリンを修飾させた構造を有

一般名：塩酸バルネムリン（valnemulin hydrochloride）

する半合成抗生物質である。本剤は Mycoplasma

号：VML

hyopneumoniae，Brachyspira hyodysenteriae，Brachyspira略pilosicoli，Lawnosia intracellularis に対して強い抗化学名：（1S,2R,3S,4S,6R,7R,8R,14R）-4-ethenyl-

菌力を有し，豚の呼吸器および腸管疾患治療薬と3-hydroxy-2,4,7,14- tetramethyltricyclo

して開発が行われた。現在のところ飼料添加剤以[6.3.0.31,7]tetradecan-9-oxo-6-yl[2-(2R)-

外の剤形は開発されていない。わが国では 2003

2-amino-3-methylbutyrylamino]-1,

年 4 月に「エコノア 1％プレミックス」および

1-dimethylethylthio]acetate monohydrochloride「エコノア 10％プレミックス」として承認さ

分子式：C31H52N2O5S・HCl

れ，その効能は豚マイコプラズマ肺炎（MPS）およ

分子量：601.29

び豚赤痢である。なお，本剤は動物用専門薬で，

３．安定性

人の医療分野では類似した構造を有する抗生物質
は存在しない。なお，と畜場法施行規則の一部改正が 2004 年 2 月 27 日に施行され，家畜伝染病予

VML 原体，エコノア 1％プレミックスおよび防法に規定されている法定・届出伝染病がすべて

エコノア 10％プレミックスの安定性に関して検査対象に含まれることになった。したがって，は，長期保存試験，苛酷試験および加速試験の結豚赤痢も今後は検査の対象となり，検査時に発症または異常が認められるものについては，と畜・解体禁止または全廃棄となることから，使用禁止
期間が短く（2 日間），B. hyodysenteriae に対する抗菌力に優れる本剤の有用性が期待されるところである。

２．物理化学的性質
VML の構造は図 1 に示したとおりである。VML

図1

37

VML の構造式

38 動物抗菌会報 26（2004）

果から 3 年間の安定性が保証されている。但し，た。ま た，5 週 齢 の 子 豚 を 用 い た 安 全 性 試 験

光苛酷試験において類縁物質のわずかな増加が認（VML として 10mg/kg，14 日間強制経口投与）にめられたため，遮光性の容器に保存することが必

おいても VML に起因する異常を認めなかった（社

要であると判断された（社内資料：未発表）。

内資料：未発表）。

４．毒６．薬理作用性１）単回および反復投与毒性
急性毒性試験では，マウス（雄，雌：経口投与）

１）作用機序および抗菌スペクトラム
VML の作用機序は，細菌のタンパク合成阻害の 50％致死量は雄 1,675 mg/kg，雌 1,943 mg/kg，作用であり，同系統であるフマル酸チアムリン

ラット（雄，雌：経口投与）では雌雄ともに 2,000（TML）と同様にグラム陽性菌，一部のグラム陰mg/kg 以上であった。ラットを用いた 13 週間投性菌，Brachyspira 属および Mycoplasma 属に対し与試験（0，8，16，32，64mg/kg/ 日：混餌投与）て抗菌力を有する。VML の抗菌スペクトラムをの 無 毒 性 量（以 下，NOAEL）は，雌 ラ ッ ト で

表 1 に示した。

8mg/kg/ 日，雄ラットで 16mg/kg/ 日であった。

２）M. hyopneumoniae および B. hyodysenteriae

また，ビーグル犬を用いた 13 週間投与試験（0，10，30，100mg/kg/ 日：強制投与）の NOAEL は，に対する抗菌力
我が国の野外分離株である B. hyodysenteriae（40雌雄ともに 30mg/kg/ 日であった。

株）および M. hyopneumoniae（40 株）の VML お

２）生殖毒性よび対照薬剤（TML，リン酸タイロシン（TS），塩マウスおよびラットにおける催奇形性試験なら酸リンコマイシン（LCM））に対する感受性分布をびにラット 2 世代繁殖毒性試験において生殖能お表 2 に示した。測定方法は B. hyodysenteriae につよび次世代の発生に影響を認めなかった。

いては動物用抗菌剤研究会報に準ずる寒天培地希

３）その他の毒性

釈法〔1 − 3〕によって，また M. hyopneumoniae に細菌を用いる復帰突然変異試験，哺乳動物の培

ついては同研究会報による試験管ブイヨン希釈法

養細胞を用いる染色体異常試験，マウスを用いる〔4〕によりマイクロプレートを用いて実施した。

小核試験の結果，VML は変異原性を有しないこi）B. hyodysenteriaeとが確認された。ウサギの眼刺激性試験では軽度

VML の MIC は 0.0125 〜 0.10μg/mL，TML

な刺激性がみられた。ウサギの皮膚刺激性試験おは 0.025 〜 0.20μg/mL に分布した。一方，TS はよびモルモットの皮膚感作性試験ではいずれも皮≧ 100μg/mL が 24 株，LCM は 12.5 〜 50μg/mL

膚刺激性および皮膚感作性を認めなかった（社内が 24 株あり，薬剤耐性が示唆された菌株が認

資料：未発表）。

められた。
ii）M. hyopneumoniae

５．安全性

VML の MIC は全株が≦ 0.00625μg/mL であり，TML は 0.0125 〜 0.20μg/mL，TS は 0.25

9 〜 10 週 齢 の 豚 に VML を そ れ ぞ れ 429ppm（15mg/kg），1,286ppm（45mg/kg）および 2,143ppm（75mg/kg）を 4 週間飼料添加投与し安全性を検〜 0.39μg/mL，LCM は 0.10 〜 0.78μg/mL の範囲にあった。
３）豚赤痢菌実験感染豚における治療効果討した。その結果，1,286ppm および 2,143ppm を豚赤痢菌実験感染豚に対する VML の有効性試験

投与した豚には，血液生化学的所見に軽度な変化

は，欧州で 6 週齢の豚 45 頭（5 群；無投与対照群，がみられたが，429ppm を投与した豚では，一般

VML 投与群（20ppm，30ppm，40ppm），TML30ppm

状態，血液および血液生化学的所見ならびに病理投与群）を用いて実施された。B. hyodysenteriae

所見において VML に起因する異常を認めなかっ

P18A 株を全供試豚に経口接種し，その翌日から

梶原敬太／バルネムリンについて／26（2004） 39

表1

抗菌スペクトラム（μg/mL）

VML

TML

TS

Mycoplasma hyopneumoniae HL 8/77
Mycoplasma hyopneumoniae HL 55/77
Mycoplasma hyosynoviae AMRC/104
Mycoplasma gallisepticum S6 USA
Brachyspira hyodysenteriae 34
Brachyspira hyodysenteriae 65

0.00780.00780.03120.0156
0.06250.06250.03120.03120.25
0.0156
–
–

1
4
4
1
–
–

Escherichia coli 5b/03
Pasteurella multocida 1297
Salmonella Cholerasuis 4466
Salmonella Typhimurium 4465
Salmonella Gallinarum 4462
Mannheimia haemolytica 63/1
Bordetella bronchiseptica BB1
Actinobacillus pleuropneumoniae 2
Actinobacillus pleuropneumoniae 3
Straphylococcus aureus
Streptococcus agalactiae
Streptococcus disgalactiae
Streptococcus uberis
Enterococcus faecalis 2428/1

8
0.25
16
2
8
0.0312
0.25
0.125
0.25
0.25
0.25
0.03120.03120.0312

> 32
0.5
> 32
4
8
0.125
0.5
2.0
4.0
0.25
0.5
0.25
0.25
0.25

> 32
4
> 32
2
16
1.0
1.0
1.0
1.0
16.0
4.0
32.0
1.0
1.0

菌

株

接種菌量：106CFU/mL

表2（社内資料：未発表）

野外分離株の薬剤感受性分布i）B. hyodysenteriae（豚由来 40 株，1988 〜 1999 年）
MIC（μg/mL）≦ 0.00625 0.0125 0.025 0.05 0.10 0.20 0.39 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5
VML

2

TML

9

22

7

3

12

11

25

50

100 >100

14

TS

6

10

6

14

4

≦ 0.00625 0.0125 0.025 0.05 0.10 0.20 0.39 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5

25

50

LCM

5

10

1

24

接種菌量：106CFU/mLii）M. hyopneumoniae（豚由来 40 株，1996 〜 1999 年）
MIC（μg/mL）
VML

100 >100

40

TML

1

TS
LCM
6

接種菌量：10 CFU/mL

9

19

7

4

6

7

11

15

1

15

17

7

1
（日本獣医畜産大学：未発表）

40 動物抗菌会報 26（2004）

所定の薬剤を 20 日間飼料添加投与し，その間の投与群で 3.4％，同 200ppm 投与群で 2.6％，TML

臨床症状の観察，B. hyodysenteriae の糞中への排無投与対照群を 100
300ppm 投与群で 3.1％であり，

菌および病理学的検査により治療効果を評価しとした場合の指数は，それぞれ 63，23，18，22 でた。無投与対照群では，88％の供試豚に豚赤痢のあり，VML を 50ppm 以上飼料添加投与（7 日間）

症状が発現し，全頭に糞便中から B. hyodysenteriae

することで MPS に対して治療効果を示すと判断が検出され，病理検査でも病変部位が確認されされた。

た。また，TML30ppm 投与群では 22％の供試豚に

５）豚由来腸内細菌に対する交差耐性確認試験

豚赤痢の症状がみられ，2 頭の供試豚の糞中から

豚由来の腸内細菌（Escherichia coli 2 株，Enterococcus

B. hyodysenteriae が確認された。一方，VML30ppm

faecalis 2 株 お よ び Enterococcus faecium 2 株）に投与群では供試豚の 1 頭に豚赤痢の症状がみられ対する VML，オキシテトラサイクリン（OTC），

たが翌日には正常に復した。それ以外の VML 投

エンロフロキサシン（ERFX），エリスロマイシン

与群では，豚赤痢の症状はみられず，また糞便中（EM），セファゾリン（CEZ）およびセフトリア
キソン（CTRX）の MIC を測定した。次に，当該に B. hyodysenteriae は検出されなかった。
以上の結果から，VML を 20ppm 以上飼料添加菌に対する VML の最高耐性濃度を求め，その 1投与することにより豚赤痢に対して治療効果が認段階下の濃度で当該菌株を 20 代継代して VML 耐められた。

性獲得株を作成した。VML の耐性獲得株に対す

４）実験的 MPS に対する治療効果

る OTC，ERFX，EM，CEZ および CTRX の MIC

M. hyopneumoniae を離乳子豚 25 頭に経鼻接種を測定し交叉耐性について検討した。

し，実験的に MPS を発症させた。無作為に 1 群

そ の 結 果，表 4 に 示 し た よ う に，わ ず か に

5 頭に分け，そのうち 3 群には菌接種 1 日目より

ERFX の E.coli 野外分離株 No. 2 に MIC の上昇が

VML を所定量（25，50，200ppm）7 日間飼料添加みられたが，他薬剤においては，MIC の変動を示投与した。他の 2 群は TML 投与群（300ppm，7 日

さず交差耐性は認められなかった。

間）および無投与対照群とした。菌接種 35 日後に７．吸収・分布・排泄剖検に伏して，MPS 肺病変面積率（背側面・腹側面の平均値）を算出した。その結果，表 3 に示

１）ラット

すように，MPS 肺病変面積率では無投与対照群

放射能標識 VML を静脈内（6mg/kg）および経で 14.3％，VML25ppm 投与群で 8.9％，同 50ppm
表3

薬

剤

実験的豚マイコプラズマ肺炎に対する治療効果−菌接種後 35 日目の MPS 肺病変平均面積率−
肺表面積（cm2） 病変面積（cm2） 面積率（％）

投与量（ppm）

指数

無投与対照群

0

平均
標準偏差

361.1
33.8

49.3
37.6

14.3
11.7

100

VML

25

平均
標準偏差

376.3
54.3

29.6
34.6

8.9
12.0

63

VML

50

平均
標準偏差

440.0
55.4

14.8
9.8

3.4
2.2

23

VML

200

平均
標準偏差

326.0
57.3

8.4
6.7

2.6
2.2

18

TML

300

平均
標準偏差

3971
43.4

12.3
7.0

3.1
1.8

22

（（株）京動検：未発表）

梶原敬太／バルネムリンについて／26（2004） 41

表4

豚由来の腸内細菌におけるバルネムリン耐性獲得株の MIC 測定結果
薬

菌株名

剤

（μg/mL）

名

VML

OTC

ERFX

EM

CEZ

CTRX

E. coli
野外分離株 No. 1

耐性獲得前
耐性獲得時

12.5
100

>100
>100

0.10
0.10

>100
>100

3.13
3.13

0.05
0.05

E. coli
野外分離株 No. 2

耐性獲得前
耐性獲得時

6.25
50

>100
>100

0.05
0.10

>100
>100

3.13
3.13

0.10
0.10

E. faecalis
NVAL-Efs-1

耐性獲得前
耐性獲得時

12.5
200

50
50

0.78
0.78

>100
>100

25
25

>100
>100

E. faecalis
NVAL-Efs-2

耐性獲得前
耐性獲得時

25
400

50
50

0.78
0.78

0.78
0.78

50
50

>100
>100

E. faecium
NVAL-Efm-1

耐性獲得前
耐性獲得時

6.25
200

0.78
0.78

0.78
0.78

0.05
0.05

100
100

6.25
6.25

E. faecium
NVAL-Efm-3

耐性獲得前
耐性獲得時

0.05
0.10

25
25

0.39
0.39

0.05
0.05

25
25

0.78
0.78

接種菌量：106CFU/mL（日本獣医畜産大学：未発表）

表5

口投与（20mg/kg）した場合の薬物動態パラメー

ラットにおける 3H-VML の薬物動態

タを表 5 に示した。いずれの投与経路においても，VML の吸収および排泄は速やかで，排泄経路は表 6 に示したように大部分が胆汁排泄であり，尿排泄はわずかであった。
２）豚8 〜 12 週齢の豚に VML15mg/kg を単回強制投与し，投与後 1，2，4，6，9，12 および 24 時間目に採血し，血清中の VML 濃度を HPLC 法で分析

静脈内投与

経口投与

3.02
5分
2.1
6.15

3.47
3 時間
2.1
19.6

a)
max

C
(mg/mL)
Tmaxb)
T1/2c)(h)AUCd) (mg・h/mL)a)

最高血中濃度
最高血中濃度到達時間
c)
半減期
d)
血中濃度時間曲線下面積b)（社内資料：未発表）

した。投与 4 時間後に最高血中濃度（0.97μg/mL）に達した後，消失過程に入り，投与後 24 時間では検出限界未満（<0.05μg/mL）となった。主要表6

ラットにおける 3H-VML の排泄

排泄経路はラットと同様に胆汁排泄であった。

８．臨床試験
１）豚赤痢

総投与量に対する回収率（％）
投与経路

尿

静脈内投与
経口投与

2.44
1.33

中

糞

中

92.9
95.0

残

留

0.47
0.31

合

計

96.2
100.5

（社内資料：未発表）

愛知県内 2 農場において豚赤痢と診断された豚90 頭を対象に 60 頭には VML を 30ppm，残りの目には 60 頭中 49 頭で豚赤痢の臨床症状が消失し，

30 頭には陽性対照薬として TML を 50ppm をそれ

7 日目（投与最終日）には全頭が正常となった。

ぞれ 7 日間飼料添加投与した。なお，投与開始前

また，投与期間終了後 7 日間に再発はみられなに分離された B. hyodysenteriae に対する VML とかった。TML50ppm 投与群では，7 日目（投与最TML の MIC はそれぞれ 0.0125 〜 0.20μg/mL お

終日）までに 30 頭中 27 頭は豚赤痢の臨床症状がよび 0.025 〜 1.56μg/mL であり，VML の方が低消失したが，3 頭は投与期間終了 2 日目に軽度のい値を示した。VML30ppm 試験群は投与開始 4 日

軟便や泥状便がみられた。投与開始日および投与

42 動物抗菌会報 26（2004）

期間終了 2 日目の糞便中の B. hyodysenteriae 検査

９．残留性

結果は表 7 に示したとおりであった。
以上のことから，野外における豚赤痢発症症例に対して VML（30ppm，7 日間飼料添加投与）は

国内 2 試験施設において，8 〜 9 週齢の豚におTML（50ppm，7 日間飼料添加投与）と同等以上

ける残留性試験を実施した。VML の常用量最高投の治療効果を示すことが確認された。

与量（200ppm）およびその 2 倍量を投与する群を２）MPS

設定し，VML を 7 日間飼料添加投与した。被検臓

京都府および愛知県内の各 1 農場において，あ器組織として，血清，脂肪，筋肉，肝臓，腎臓おらかじめ鑑定殺を行い肺に MPS 病変が確認され

よ び 小 腸 を 採 材 し た。濃 度 測 定 は Micrococcus

た豚群を対象に，VML50ppm および 200ppm を 7

luteus ATCC 9341 を試験菌とするマイクロバイオ

日間飼料添加投与したところ，表 8 に示したよう

アッセイ法によった。本法による検出限界は 0.05に，出荷時の MPS 肺病変面積および肺病変スコμg（力価）/g であった。試験の結果，全ての供試

アの改善がみられた。なお，投薬を開始する前に動物における被検臓器組織中に VML が検出され

鑑 定 殺 で 肺 病 変 部 位 か ら 分 離 同 定 さ れ た M.

なくなった投与終了後の時点は，1 日目であった。

hyopneumoniae に対する VML，TML，TS，LCM お

なお，使用禁止期間は食用に供するためにと殺す

よび ERFX の MIC は表 9 に示したとおりであった。

る前 2 日間に設定された（（財）畜安研，（株）京

表7

糞便中の B. hyodysenteriae 検査結果（陽性率）
直接鏡検 a）

治験群（％）

菌分離 b）

投与開始日

投与終了 2 日目

投与開始日

投与終了 2 日目

VML30ppm 投与群

100

0

100

0

TML50ppm 投与群

100

3

100

3

a）

新鮮便 1g に生理食塩水を 9mL を加え 10 倍希釈し，この液 0.03mL をスライドグラスに取り 400 倍で鏡検した。
b）
新鮮便 1g に生理食塩水を 9mL を加えて希釈し，この液 0.1mL を分離培地に塗抹し，42℃ で 5 日間嫌気培養した。
（（株）京動検：未発表）

表8

MPS の臨床試験成績

投与終了 2 日目 a）

出荷時

肺病変

試験群

肺病変

面積率
（％）

指数

スコア

M. hyopneumoniaeの分離率（％）

面積率
（％）

指数

スコア

M. hyopneumoniaeの分離率（％）

無投与対照群

20.8

100

2.8

50

18.4

100

2.2

67

VML50ppm
投与群

8.7

42

1.0*

17

2.0**

11

0.9**

17

VML200ppm
投与群

2.8

13

0.8*

0

1.1*

6

0.8**

0

a）

投与最終日（7 日目）からの日数* P<0.05 で無投与対照群との間に有意差あり** P<0.01 で無投与対照群との間に有意差あり（（株）京動検：未発表）

梶原敬太／バルネムリンについて／26（2004） 43

表9

M. hyopneumoniae に対する MIC 測定結果（μg/mL）

動物番号

VML

TML

TS

LCM

ERFX

A-2
A-3
U-1
U-3

≦ 0.00625≦ 0.00625≦ 0.00625≦ 0.00625

0.10
0.10
0.05
0.05

0.20
0.10
0.05
0.05

0.10
0.39
0.10
0.39

0.025
0.025
0.01250.025（（株）京動検：未発表）

表 10 製剤名，成分・分量，効能・効果および使用禁止期間
製剤名エコノア 1% プレミックス

成分・分量

本剤 100g 中にバルネムリン 1g（力価）含有する

効能・効果

有効菌種：本剤感受性のブラキスピラ ハイオディセンテリー，マイコプラズマ ハイオニューモニエ
適 応 症：豚；豚赤痢，豚マイコプラズマ肺炎

使用禁止期間豚：食用に供するためにと殺する前 2 日間

動検：未発表）。

会報，6，24-28（1985）
２）山崎俊幸：Treponema hyodysenteriae に対する抗

１０．参

考

菌剤の MIC 測定法に関する検討−特に接種菌液調整における考察−．家畜抗菌剤研究会報，6，「エコノア 1％プレミックス」の成分・分量，
効能・効果および使用禁止期間を表 10 に示した。

29-33（1985）
３）足立吉数：Treponema hyodysenteriae の薬剤感受性試験方法の検討（追加発言）．家畜抗菌剤研究

参考文献

会報，6，34-35（1985）
４）山本孝史，跡部ヒサエ：豚由来マイコプラズマの

１）内田幸治，原田良昭，杉村雄二：抗菌性物質に対する Treponema hyodysenteriae の試験管内感受性
試験方法についての若干の検討．家畜抗菌剤研究

MIC 測定法に関する検討．家畜抗菌剤研究会報，
6，9-13（1985）

44 動物抗菌会報 26（2004）

Valnemulin
Keita KAJIWARA
Novartis Animal Health K.K., World Trade Center Bldg. 37F, 2-4-1, Hamamatsu-cho, Minato-ku, Tokyo 105-6137, Japan
Valnemulin is a new active substance for exclusive use in veterinary medicine. This is an antibiotic belonging to thepleuromutilin group,which acts by inhibition of initiation of protein synthesis at the level of the bacterial ribosome.
Valnemulin has activity against a wide range of bacteria including those responsible for enteric and respiratory
diseases in pigs. It shows high activity particularly against Mycoplasma hyoneumoniae, Brachyspira hyodysenteriae,
Brachyspira pilosicoli and Lawnosia intracellularis. The MIC (range) data for the organism M. hyoneumoniae and B.
hyodysenteriae isolated in Japan were <0.00625 μg/mL and 0.0125-0.10 μg/mL, respectively. In pigs, after oral single
dose of radio-labeled valnemulin, >90% absorption was demonstrated. After repeated dosing, slight accumulation
occurred and a steady state was achieved within 5 days. It was also demonstrated in pigs that valnemulin was
extensively metabolized, and excretion of parent molecule and metabolites occurred mainly via bile.
ECONOR® 1% and 10% premix, antibiotic premix presented in microgranules containing 1 g and 10 g valnemulin
respectively per 100 g as the active ingredient for oral administration to pigs, were registered in Japan on April 28th,
2003 for the treatment of swine mycoplasma pneumonia and swine dysentery.
A local clinical trial against pigs affected with swine dysentery has confirmed that ECONOR® 1% premix at a levelof 3 kg/tone feed almost improved clinical signs within 4 days of treatment, and all pigs returned normal after 7 daysof treatment. Similarly, the trial feeding of ECONOR® 1% premix at a level of 5 kg/tone feed for 7 days demonstrated
remarkable reductions of clinical signs for the pigs affected with swine mycoplasmal pneumonia. No additional
medication was required afterwards with the significantly low lung lesions area at the slaughter when compared tothe placebo group. A withdrawal period of 2 days was justified based on the residue trials conducted in Japan.

討論（座長：澤田拓士，日獣大）

質問（渡辺典夫，三鷹製薬）

るが，MG についてどうか。

ポリエーテル系薬剤との併用は。

答（梶原敬太）

答（梶原敬太）

鶏由来株についての薬剤感受性試験は実施していチアムリンと同様にポリエーテル系薬剤との相互作用による副作用がでることがある。
質問（中村修，日本配合飼料）

国内でローソニアの試験を実施されているか。海外での成績があれば提示願いたい。
答（梶原敬太）
ローソニアの国内試験の実施はこれから検討する。
欧米ではなされている。
質問（佐藤静夫，全農家衛研）
豚のマイコプラズマには極めて有効とのことであるが，本剤の鶏への適用は現在検討していない。
発言（金井久，群馬県）

全ての演者へのお願いであるが，フィルドでの指導の参考にしたいので，開発時のみでなく，使用 3 年，
5 年後と経時的に感受性の状況を示していただきたい。
答（梶原敬太）
発売後の再審査用としても調査を行うので活用したい。

中出哲也ほか／犬歯周病に対するクリンダマイシンの効果／26（2004） 45

犬における歯周病に対する
塩酸クリンダマイシン経口投与剤の臨床的効果
中出哲也 1）・横山 滋 2）・網本昭輝 3）・幅田 功 4）・藤田桂一 5）・安田英巳 6）・
花澤豊次 7）・松尾直樹 8）・山崎 剛 9）・山下時明 10）・立花 徹 11）・前谷茂樹 12）・
井関敦公 13）・川名友巳 4）・小林なぎさ 5）・中台共美 12）・高井光一 13）・
奥村 融 14）・和田直子 14）・三高 正 15）・藤井 武＊15）
１）酪農学園大学（〒 069-8501

江別市文京台緑町 582）
兵庫県神戸市灘区大和町 2-3-1）３）アミカペットクリニック（〒 775-0023 山口県宇部市恩田町 3-2-2）
２）アイヴィヨコヤマ ペットクリニック（〒 657-0027

４）センターヴィル動物病院（〒 152-0035

東京都目黒区自由ヶ丘 1-15-18）
埼玉県上尾市春日 1-2-53）
６）安田獣医科医院（〒 152-0034 東京都目黒区緑が丘 1-5-22）
７）花澤犬猫病院（〒 106-0032 東京都港区六本木 5-5-8）８）野幌南どうぶつ病院（〒 067-0826 江別市あさひが丘 13-17）９）大麻３番通り動物病院（〒 069-0845 江別市大麻 107-2）
１０）真駒内どうぶつ病院（〒 005-0012 札幌市南区真駒内上町 5 丁目 4-2）
１１）北光犬猫病院（〒 065-0014 札幌市東区北 14 条東 2 丁目 5）１２）まえたに動物病院（〒 002-8003 札幌市北区太平 3 条 1 丁目 1-7）
１３）いせき動物病院（〒 004-0062 札幌市厚別区厚別西 2 条 1 丁目 3-7）１４）京都動物検査センター（〒 612-8073 京都市伏見区下板橋町 585）
１５）ファイザー株式会社農産事業部（〒 151-8589 東京都渋谷区代々木 3 丁目 22-7）
５）フジタ動物病院（〒 362-0074の犬の歯周病に対する臨床的治療効果を野外にお１．緒言いて再確認するとともに，分離菌の薬剤感受性を調査した。

クリンダマイシン（以下 CLDM）はリンコマイ

２．材料および方法

シン系の半合成抗菌薬でグラム陽性菌および嫌気性菌に対し広域かつ強い抗菌力を有し［10］，これ

１）治療試験

ら細菌に起因する膿瘍，骨髄炎，歯周病，軟部組
織および創傷感染に効果が認められている［1 −2003 年 5 月から 10 月に一般動物病院（北海道，3，8，9］。また CLDM は血漿中に比べ歯肉溝滲出

東京都，埼玉県，兵庫県および山口県の計 12 ヵ

液中により高濃度に分布することから［12］，歯科所）および大学付属動物病院（酪農学園大学）の領域で広く適用されており，犬の歯周病に対する外来患犬を対象に歯周病に対する CLDM の治療有効性が報告されている［4，7］。日本国内におい効果を検討した。
治療試験に用いた犬は，メス 56 頭およびオス 55ては 1998 年から犬の歯周病に効能を有する経口

頭（合計 111 頭），1 〜 14 歳，体重 1.9 〜 33.6 kg

投与剤が市販されている。
本試験では，市販開始約 5 年後における CLDMであり，いずれも歯肉炎あるいは歯周炎の臨床症
45

46 動物抗菌会報 26（2004）状（口臭，歯肉出血，歯肉腫脹，歯肉潰瘍，流涎
および歯根膜炎）を呈し，歯科的診察により歯肉炎・歯周炎と診断された。

２）効果判定基準
個体ごとに各観察項目の数値を合計したものを臨床スコアとし，投薬開始時と投薬終了後の臨床供試犬に，アンチローブ 25（1 錠あたり塩酸ク

スコアをもとに，下記の式に基づいて，試験開始

リ ン ダ マ イ シ ン を CLDM と し て 25 mg 含 有，時の臨床スコアに対する投薬終了後の臨床スコア

ファイザー（株））を体重 1 kg あたり CLDM としの減少率を臨床スコア改善率として算出した。

て 5 mg を 12 時間間隔で 5 〜 10 日間経口投与した。試験期間中に他の抗菌剤の投与は歯科用軟膏
等の局所投与も含め行わなかった。本剤投薬前に臨床スコア改善率（％）＝（投薬開始時臨床スコア−投薬終了後臨床スコア）
投薬開始時臨床スコア

必要に応じてスケーリングを併用した。

× 100

投薬開始時に体重測定，臨床観察および細菌学的検査を実施し，投薬終了後 1 週以内に再診し，臨床スコア改善率が 85％以上の症例を著効，

再度，臨床観察を実施した。臨床観察は担当獣医

70％以上の症例を有効，70％未満の症例を無効と師が個体ごとに口腔内の臨床症状を観察し，口判定した。

臭，歯肉の充血・出血・腫脹・潰瘍，流涎および

３）データ解析

歯根膜炎の重症度に応じ，表 1 の基準に従いスコ

スケーリングの併用症例と非併用症例に分類しそれぞれ別々に，ならびに総合して解析を行っア付けした。

表1

臨床症状観察項目と臨床スコア判定基準
スコア

観察項目
口

0

1（軽度）

2（中度）

3（重度）

臭

なし

わずかに匂う明らかに匂う

かなり匂う

歯肉充血

なし

わずかに赤色が認められる

軽度と重度の中間のもの

明らかに強い赤色が認め
られる

歯肉出血

強く圧迫しても出血しない強く圧迫するとわずかに出血する

軽く圧迫すると出血する

そっと圧迫しただけでも出血する。または自然出血
している

歯肉腫脹

なし

軽度の腫脹が辺縁歯肉に認められる腫脹が付着歯肉部に及ぶ

激しく腫脹し，歯冠部の一
部を被う

歯肉潰瘍

なし

局所に米粒大の潰瘍が認められる

小豆大の潰瘍，または多数の米粒大の潰瘍が認められる

小豆大以上の潰瘍，または多数の小豆大の潰瘍が認
められる

流

なし

わずかに認められる

少量認められる（軽度と重度の中間のもの）

多量に認められる

歯肉溝の深さが 2 mm よ り
深いもの

歯肉溝の深さが，2 mm 以 複 根 歯 に お い て 歯 周 ポ
下のもの
ケットが歯槽骨頂部に達するもの（探子が歯槽骨頂部に入るもの）歯の動揺があるもの

X 線診断の場合：歯根膜線 X 線診断の場合：歯根膜線
維の歯槽頂線維あるいは水 維の斜線維の破壊されたもの平線維の破壊されたもの

X 線診断の場合：歯根膜線
維の根端線維の破壊され
たもの

涎

歯根膜炎

中出哲也ほか／犬歯周病に対するクリンダマイシンの効果／26（2004） 47

た。臨床スコアを投薬前および再診時との間の有ブイヨン（日水），MIC 測定用培地に変法 GAM 寒意差を対応のある Wilcoxon 検定で解析した。ま天培地（日水）を用いた。供試菌株を増菌用培地にた，スコア減少率についてはスケーリング併用症

接種し，37℃ 下 24 時間培養後，約 1 × 106CFU/mL

例と非併用症例との間の有意差を Mann-Whitneyに調整した接種菌液をタイピング接種器でスポッ

U 検定で解析した。統計学的有意差は P<0.05 で判ト接種し，37℃ 下で 48 時間，嫌気培養した。菌の定 し た。デ ー タ 解 析 に は 市 販 ソ フ ト ウ エ ア

発育を阻止する抗菌剤の最小濃度をもって MIC（StatView Ver. 4.5, ABACUS 社）を用いた。

とした。

４）細菌学的検査
全例について，投薬前に口腔内病変部からシー

３．成績

ドスワブ 2 号（栄研）を用いスワブ試料を採取した。なお，病変部が明瞭ではない時は歯肉と歯の１）治療試験の結果
供試犬 111 頭のうち 3 頭については再来院がな

間から採材した。
材料をバクテロイデス寒天培地（日水），FM 寒

いため脱落とし，18 頭については規定どおりの投天培地（日水），BL 寒天培地（日水）および 5％羊薬がなされなかったため，ならびに 7 頭について

血液添加ハートインフュージョン寒天培地（Difco）

は投薬終了後再診までの期間が規定の 1 週間を越（以下 BA）にそれぞれ塗抹・画線した。FM 寒えたため評価判定から除外した。効果判定に供し天培地，バクテロイデス寒天培地および BL 寒天

た 83 頭中 58 頭がスケーリング併用症例，25 頭が培地については 37℃ で 48 時間嫌気培養し，BA はスケーリング非併用症例であった。

37℃ で 24 時間好気培養した。各培地で分離された

投薬開始時の平均臨床スコア（合計）は，スケー細菌のうち肉眼的に性状の異なるコロニーをそリング併用症例で 10.22，スケーリング非併用症

れ ぞ れ の 選 択 培 地 で 純 培 養 し た。Streptococcus

例では 7.36，両者を合算した総症例では 9.37 で属 お よ び Staphylococcus 様 コ ロ ニ ー に つ い て はあった。しかし投薬終了後 1 週以内に行った再診

BA で純培養し，グラム染色および菌形を確認

時には，それぞれ 2.25，3.08 および 2.50 と，いず

後，市販の同定キット（アピストレップ 20 およれも投薬開始時より有意な（P < 0.05）低下を認め

びアピスタフ：BIOMERUX 社）を用いて同定をた（表 2）。また，口臭，歯肉充血，歯肉腫脹，歯行った。Bacteroides 属，Fusobacterium 属および

肉潰瘍，流涎および歯根膜炎の各項目別では，ス

Peptpstreptococcus 属については好気条件下での発クーリング非併用症例の歯肉潰瘍を除き，いずれ

育の有無，グラム染色および菌形を確認した後，の項目においてもスコアの有意な（P < 0.05）低下

市販の同定キット（アピケンキ：BIOMERUX 社）

を認めた。

を用いて同定を行った。

スコア減少率（平均値）はスケーリング併用症

分離菌株について CLDM およびオキシテトラ

例で 79.0％，スケーリング非併用症例で 55.8％，

サイクリン（OTC）の最小発育阻濃度（MIC）を，ならびに総症例で 42.0％であり，スケーリング併

動物用抗菌剤研究会標準法［11］に準ずる寒天培用症例とスケーリング非併用症例との間で有意差

地 希 釈 法 で 測 定 し た。Staphylococcus 属 お よ び（p=0.0002）が認められた（表 3）。

Streptococcus 属には，増菌用にミュラーヒントン

臨床効果判定の結果，著効率はスケーリング併用

液体培地（Difco）を，ならびに MIC 測定用にミュ症例で 46.6％，スケーリング非併用症例で 8.0％，

ラーヒントン寒天培地（Difco）をそれぞれ用い総症例で 36.1％であり，有効率はスケーリング併た。供試菌株を増菌用培地に接種し，37℃ 下 18 時

用 症 例 で 74.1％，ス ケ ー リ ン グ 非 併 用 症 例 で6間培養後，約 1 × 10 CFU/mL に調整した接種菌

36.0％，総症例で 71.1％であった（表 3）。

液をタイピング接種器でスポット接種し，37℃

２）細菌学的検査の結果

下 で 18 時 間 培 養 し た。Bacteroides 属 お よ び

111 頭からの分離菌の内訳は Staphylococcus 属

Fusobacterium 属に対しては，増菌用培地に GAM

では，S. aureus が 13 株，S. chromogenes が 4 株，

48 動物抗菌会報 26（2004）
表2

平均臨床スコア

投薬開始時
症例
カテゴリー

口臭

平均 2.14
SD 0.82
p 値 1）
スケーリング併用 平均 2.24
SD 0.82(n = 58)
p 値 1）
スケーリング非併用 平均 1.92
SD 0.81(n = 25)
p 値 1）
総症例(n = 83)

再 診 時

歯肉 歯肉 歯肉 歯肉
歯根流涎
合計
充血 出血 腫脹 潰瘍膜炎
1.87 1.64 0.45 0.45 0.57 1.50 9.37
0.92 0.96 0.86 0.86 0.91 1.26 4.80
1.98 1.78 0.54 0.54 0.59 1.81 10.2
0.90 0.97 0.92 0.92 0.97 1.24 2
4.82
1.60 1.32 0.24 0.24 0.52 0.76
0.91 0.90 0.66 0.66 0.77 0.97 7.36
0.97

口臭

歯肉
充血

歯肉
出血

歯肉
腫脹

歯肉
潰瘍

流涎

歯根
膜炎

合計

0.55
0.65
0.12
0.52
0.11
0.14
0.40
2.50
0.59
0.65
0.33
0.59
0.31
0.35
0.66
2.28
<0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001
0.51
0.59
0.10
0.46
0.12
0.12
0.36
2.25
0.60
0.62
0.30
0.57
0.33
0.33
0.58
2.31
<0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001
0.64
0.80
0.16
0.68
0.08
0.20
0.52
3.08
0.57
0.71
0.37
0.63
0.28
0.41
0.82
2.16
<0.0001 0.0002 0.0004 0.0008 0.1797 0.0196 0.0339 <0.0001

1）
平均スコアにおける帰無仮説（投薬開始時＝再診時）に対する有意水準（対応のある Wilcoxon 検体）
SD: 標準偏差表3
症例カテゴリー総症例
スケーリング併用症例
スケーリング非併用症例

評価対
象頭数
83
58
25
p 値 3）

臨床効果判定結果

スコア減少率 1）（％）

臨床効果判定（頭数）

平均

標準偏差

著効

有効

無効

著効率
（％）

72.0
79.0
55.8

26.1
22.2
27.7

30
27
2

29
16
7

24
15
16

36.1
46.6
8.0

有効率 2）
（％）
71.1
74.1
36.0

0.0002

1）

スコア減少率＝ （投薬開始時スコア＋再診時スコア）{/ 投薬開始時スコア｝× 100
有効率＝｛（著効＋有効）/ 評価対象頭数｝× 100
3）
平均スコア減少率における帰無仮説（スケーリング併用症例＝スケーリング非併用症例）に対する有意水準（MannWhiteny U 検定）2）

ならびに S. epidermidis，S. xylosus および S. caprae

0.39，MIC90；50）の範囲にあり，明らかな二峰性が各 2 株の合計 23 株であった。Streptococcus 属での分布を示した（表 4）。

は S. mitis が 26 株，S. bovis が 18 株，S.constellatus

Streptococcus spp. に対する CLDM の MIC 値はが 13 株，S. pneumoniae が 9 株，S. canis が 6 株，

<0.025 〜 0.78μg/mL（MIC50；<0.025，MIC90；0.20）

S. intermedius が 5 株，S. suis，S. sanguis お よ び

で，1 株（S. sanguis）が CLDM 低感受性（0.78μg/

S. equisimilis が各 2 株，ならびに S. acidominimusmL）であった。OTC の MIC 値は 0.05 〜 12.5μg/

および S. equinus が各 1 株の合計 85 株であった。

mL（MIC50；0.78，MIC90；6.25）の範囲であった

Bacteroides 属では B. stercoris が 4 株，B. uniformis

（表 5）
。

および B. fragilis が 各 1 株の合計 6 株であった。

Bacteroides spp. に 対 す る CLDM の MIC 値 はFusobacterium 属は F. necrophorum が 30 株であっ<0.025 〜 6.25μg/mL（MIC50；0.05，MIC90；6.25）

た。Peptostreptococcus 属は分離されなかった。

で，1 株が CLDM 低感受性（6.25μg/mL）であっ

Staphylococcus spp. に対する CLDM の MIC 値は0.10 〜 >100μg/mL（MIC50；0.10，MIC90；>100）

た。OTC の MIC 値は 0.10 〜 3.13μg/mL（MIC50；1.56，MIC90；3.13）の範囲であった（表 6）。

に分布し，4 株（S. aureus，S. epidermidis およびFusobacterium spp. に対する CLDM の MIC 値はS. xylosus）が CLDM 耐 性（>100μg/mL）で あ っ<0.025 〜 1.56μg/mL（MIC50；<0.025，MIC90；0.05）

た。OTC の MIC 値は 0.20 〜 100μg/mL（MIC50；

で，1 株（F. necroforum）が CLDM 低感受性（1.56

中出哲也ほか／犬歯周病に対するクリンダマイシンの効果／26（2004） 49

表4

犬歯周病由来 Staphylococcus spp. の各種薬剤に対する MIC 分布

薬剤名

MIC（μg/mL）
供試
株数 <0.025 0.05 0.10 0.20 0.39 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5

25

50

100 >100

CLDM
OTC

23
23

4

1

2

16

表5

3
6

4
10

MIC（μg/mL）
供試
株数 <0.025 0.05 0.10 0.20 0.39 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5

CLDM
OTC

85
85

16
1
表6

薬剤名
CLDM
OTC

2
2

14
2

28

1
24

17

2

8

1

2

表7

1
1

1

50

>100
50

MIC50

MIC90

<0.025
0.78

0.20
6.25

MIC50

MIC90

0.05
1.56

6.25
3.13

MIC50

MIC90

<0.025
0.39

0.05
1.56

100 >100

25

50

100 >10013

2

犬歯周病由来 Fusobacterium spp. の各種薬剤に対する MIC 分布

MIC（μg/mL）
供試
株数 <0.025 0.05 0.10 0.20 0.39 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5

CLDM
OTC

30
30

8

0.10
0.39

犬歯周病由来 Bacteloides spp. の各種薬剤に対する MIC 分布

薬剤名

19

25

1

MIC（μg/mL）
供試
株数 <0.025 0.05 0.10 0.20 0.39 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5
6
6

MIC90

犬歯周病由来 Streptococcus spp. の各種薬剤に対する MIC 分布

薬剤名

52

MIC50

2
11

2

4

8

25

50

100 >1001
5μg/mL）であった。OTC の MIC 値は 0.10 〜 1.56μg/mL（MIC50；0.39，MIC90；1.56）の範囲であった（表 7）。

の有効率 74.1％と類似していた。
一般に犬の歯周病からは，好気性菌としては
Actinomyces 属および Streptococus 属，ならびに嫌気性菌としては Bacteroides 属および Fusobacteroides

４．考察

属が高率に分離されるが［5，6］，今回の調査においては，検索の対象としなかった Actinomyces 属

本試験における有効率は，スケーリングの非併を除く 3 属ならびに Staphyrococcus 属の菌株が分離用症例に比べ併用症例の方が有意に高く，歯周病

された。特に Streptococus 属および Fusobacteroides

に対するより効果的な治療にはスケーリングなど属が高率に分離され，これらの菌が歯周病の原因の外科療法の併用が推奨されることが示唆され菌として重要であると考えられた。

た。Henke ら［4］はスケーリングなどの外科療

国内で本剤が市販される前の 1993 年 11 月から

法 を 併 用 し た 108 例 の 犬 に お け る 治 療 試 験1995 年 9 月 に か け て 実 施 し た 臨 床 試 験 で は，

（CLDM 5.5 mg/kg を 12 時間間隔で 10 日間投与）

Staphylococcus 属で CLDM 耐性菌が 27％（26 株中で有効率 91％であったと報告しており，評価基7 株）認 め ら れ た が，そ の 他 の 有 効 菌 種 で は準は異なるものの今回のスケーリング併用症例でCLDM に対する耐性および低感受性株は分離さ

50 動物抗菌会報 26（2004）

れていなかった（社内資料）。一方，今回の試験で周病の治療に対して有効であることが示された。

は CLDM 低感受性株が Streptococcus 属で 1％（85株 中 1 株）
，Bacteroides 属 で 17％（6 株 中 1 株）

文献

お よ び Fusobacteroides 属 で 3％（30 株 中 1 株），
ならびに耐性菌が Staphylococcus 属で 17％（23 株１）Berg JN, Scanlan CM, Buening GM, et al: Clinical

中 4 株）みられたが，いずれも少数であり，動物

models for anaerobic bacterial infections in dogs

用 CLDM 製剤の市販開始約 5 年後においても耐性

and their use in testing the efficacy of clindamycin化の問題は起きていないことが示唆された。またand lincomycin. Am J Vet Res, 45, 1299-1306 (1984)

分離菌株に対する CLDM の MIC50 および MIC90 は２）Braden TD, Johnson CA, Gobel CL, et al: Posologic

OTC のものより低く，分離菌株の CLDM に対す

evaluation of clinidamycin, using a canine model

る高い感受性が認められた。

pf posttraumatic oesteomyelitis. Am J Vet Res, 48,

以 上 の 結 果 か ら，今 回 の 調 査 に よ り CLDM
5mg/kg BID の 5 〜 10 日間経口投与は犬の歯周病治療に有効であることが確認された。

1101-1105 (1987)
３）Branden TD, Johnson CA, Wakenell P, et al: Efficacy
of clindamycin in the treatment of Staphyrococcus
aureus osteomyelitis in dogs. J Am Vet Med Assoc,

要約192, 1821-1725 (1988)
４）Henke CL, Colmery BH: Treating canine dental

犬における歯周病に対するクリンダマイシン（CLDM）の有効性を 13 ヵ所の動物病院で，口臭，

infections with oral clindamycin hudrochloride.
Vet Med, 82, 197-199 (1987)

歯肉出血，歯肉腫脹，歯肉潰瘍，流涎および歯根

５）Hennet PR, Harvey CE: Aerobes in periodontal

膜炎などの歯周病の臨床症状を呈するイヌ 111 頭

disease in the dog: A review. J Vet Dent, 8, 9-11

を供試し評価した。CLDM は 5 mg/kg の用量を(1991)

経口的に 1 日 2 回，5 日から 10 日投薬した。なお，

６）Hennet PR, Harvey CE: Anaerobes in periodontal

スケーリング併用例は 75 頭，非併用例は 36 頭で

disease in the dog: A review. J Vet Dent, 8, 18-21あった。最終投薬日から 7 日以内に臨床的評価を(1991)

行い，臨床スコアが 70％以上改善した場合を有効と判定した。
脱落あるいは除外例計 28 頭を除く 83 頭について効果を判定した結果，口臭，歯肉出血，歯肉腫

７）Johnson LA, Renz A, Weiskopf S: Clinical efficacy
of clindamycin (Cleorobe) in infections of dental,
oral and mandibular infections in dogs. Praktische
Tierarzt, 73, 94-98 (1992)

脹，歯肉潰瘍，流涎及び歯根膜炎を指標とした臨

８）Prescott JF: Chapter 11. In: Antimicrobial therapy in

床スコアの有意な（P<0.05）低下が認められ，有veterinary medicine thirdEd., Iowa State University

効率は 71.1％（59/83）であった。また , スケーリ

Press, 229-262 (2000)

ング併用例 / 非併用例別の有効率は，それぞれ

９）Scott DW, Beningo KE, Miller WH, et al: Efficacy

74.1％（43/58）および 36.0％（9/25）であった。分

of clindamycin hydrochloride capsules for the

離菌に対する CLDM の MIC50 は，Staphylococcus

treatment of deep pyoderma due to Staphylococcus

spp.（n = 23）に対しては 0.10μg/mL，Streptococcus

intermedius infection in dogs. Canadian Vet J, 39,

spp.（n = 85）に対しては <0.025μg/mL，Bacteroides

753-756 (1998)

spp.（n = 6）に対しては 0.05μg/mL，ならびに１０）Spizac J, Rezanka T:Lincomycin, clindamycin andFusobacterium spp.（n = 30）に対しては <0.025μg/mL

their applications. Appl. Microbiol Biotechnol, 64,であった。

455-464 (2004)

以上の成績から，CLDM は犬の歯周病起因菌に対して強い抗菌力を有し，その経口投与は犬の歯

１１）高橋勇，内田幸治，吉村治郎ら：動物由来の細菌に対する薬剤の最小発育阻止濃度（MIC）測定中出哲也ほか／犬歯周病に対するクリンダマイシンの効果／26（2004） 51

法（動物用抗菌剤研究会標準法）．動物用抗菌剤

with its minimal inhibitory concentrations for

研究会報，18, 40-41 (1997)

periodontal bacteria. Antimicrob Agents Chemother,１２）Walker CB, Gordon JM, Comwall HA, at al: Gingival

19, 867-871 (1981)

crevicular fluid levels of clindamycin compared

Clinical Efficacy of Clindamycin HCL Oral Capsule against the Periodontal Disease in Dogs
Tetsuya NAKADE, Shigeru YOKOYAMA, Akiteru AMIMOTO, Isao HABATA, Keiichi FUJITA,
Hidemi YASUDA, Toyoji HANAZAWA, Naoki MATSUO, Tsuyoshi YAMAZAKI, Tokiaki YAMASHITA,
Tooru TACHIBANA, Shigeki MAETANI, Atsukiyo ISEKI, Tomomi KAWANA, Nagisa KOBAYASHI,
Tomomi NAKADAI, Kouichi TAKAI, Toru OKUMURA, Naoko WADA, Tadashi SANTAKA, Takeshi FUJII**Corresponding author: Animal Health Group, Pfizer Japan Inc. 22-7 Yoyogi 3-chome, Shibuya-ku, Tokyo 151-8589

The efficacy of clindamycin (CLDM) in the treatment of canine periodontitis was examined. The study was
conducted according to a common protocol at 13 sites in Japan. One hundred and eleven adult dogs presenting
clinical signs of periodontal disease, i.e., halitosis, gingival bleeding, gingival swelling, gingival ulcer, salivation anddental periostitis, and for which infection could be confirmed by bacterial culture, were enrolled in the study.
CLDM was orally administered twice daily at a dosage of 5 mg/kg body weight. In consequence, 75 dogs received
the scaling the prior to the drug administration. Duration of therapy was determined by the investigator based onclinical judgment but was within the range of 5-to-10 days. The dogs were re-examined for clinical evaluation among
7 days after the final drug administration. Determination of “success” was based on > 70% reduction of clinical signs
scores. As excluding 28 dogs that dropped out of the study before their final evaluations, data from 83 dogs was
employed to further study. Clinical scores for halitosis, gingival bleeding, gingival swelling, gingival ulcer, salivationand dental periostitis were significantly (P<0.05) decreased after treatment with CLDM. The clinical “success” rate
was 71.1% (59/83) of all cases, while it was 74.1% (43/58) in the cases in which surgical scaling was applied and was
36.0% (9/25) in the cases in which scaling was not applied. MIC50 value of CLDM was 0.10 μ g/mL against
Staphylococcus spp. (n = 23), < 0.025μg/mL against Streptococcus spp. (n = 85), 0.05μg/mL against Bacteroides spp.
(n = 6), and < 0.025μg/mL against Fusobacterium spp. (n = 30).
The results indicate that CLDM has strong in vitro antibacterial activities against the isolates from periodontal
disease and oral administration of CLDM is efficacious in the treatment of periodontal disease in dogs.

52 動物抗菌会報 26（2004）

動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止濃度（MIC）測定法（動物用抗菌剤研究会 2003 年改定標準法）
２００３年９月６日（改定）
２００４年１０月３０日（改訂）

今後，動物由来細菌の抗菌性物質（抗生物質お参考資料 3 として，現在わが国で実施されていよび合成抗菌剤）に対する感受性は，ここに示しる 薬 剤 耐 性 モ ニ タ リ ン グ（Japanese Veterinary

た寒天平板希釈法もしくは微量液体希釈法（動物Antimicrobial Resistance Monitoring Program: JVARM）

用抗菌剤研究会 2003 年改定標準法）により測定〔10〕で対象となっている薬剤および菌種を示しすることを推奨する。この方法は原則として，米たので，あわせて薬剤感受性試験の参考にされた

国臨床検査標準委員会（NCCLS）により提唱さい。

れた標準的試験法（2002）〔1〕に準拠した方法で

１．寒天平板希釈法ある。1997 年制定の動物用抗菌剤研究会標準法〔2〕による MIC 測定は，動物用抗菌剤研究会
2003 年改定標準法による成績と比較する目的以（1）一般細菌（ミューラーヒントン培地に 35℃，好気的条件で発育する細菌）

外では使用しないことが望ましい。
なお，これまでに動物用抗菌剤研究会が報告した

以下の項目以外の術式は，NCCLS により提唱

豚呼吸器病原因菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,

された標準的試験法〔1〕に準拠する。

Pasteurella multocida, Mycoplasma hyopneumoniae），牛

ア．供試材料

呼吸器病原因菌（Pasteurella multocida, Mannheimia

感受性測定用培地：ミューラーヒントン

haemolytica, Mycoplasma spp.），豚・牛下痢病原因

寒天培地（報告書などには製造所を明記す

菌（Escherichia coli），牛乳房炎起因菌の薬剤感受る。）

性試験法〔3，4，5，6，7，8，9〕はマイコプラ

増殖用培地：トリプチックブロース（報ズマの薬剤感受性試験法を除き廃止する。

告書などには製造所を明記する。
）

多くの研究者などによる測定 MIC の共有，比薬剤原液の希釈用液：滅菌蒸留水または較のためには MIC の精度管理が極めて重要とな

表 1 に示した 0.1M リン酸塩緩衝液（pH6.0

る。今般の改定に当たり，NCCLS 法と同様の精または pH8.0）

度管理用菌株を内部精度管理を目的として指定

イ．薬剤の調製

し，それらの菌株については，NCCLS が規定し薬剤の入手ている薬剤の MIC の範囲（精度管理限界値）を常用標準品またはその同等品を入手してそのまま記載した。さらに，NCCLS が規定して供試する。なお，動物専用の薬剤について

いない薬剤，菌種についても，農林水産省動物医は農林水産省動物医薬品検査所で配布して薬品検査所その他で実施された試験データに基づいるものもあるので相談願いたい。

き設定した暫定的な精度管理限界値（参考値）を薬剤（標準品粉末）の保存方法

参考資料 1 および 2 に記載したので，薬剤感受性

薬剤は，吸湿防止のためにデシケーター

試験の実施に際しては，精度管理の参考とされたに入れ− 20℃ 以下で保存する。使用に際い。なお，外部精度管理も重要であるが，現時点しては，常温に戻してから秤量する。吸湿ではその方法や実施機関が未定であることから今牲 の も の も あ る の で，秤 量 は 相 対 湿 度回の改定には含めないこととし，将来の課題とし45％以下の条件下で行う。

た。

薬剤の溶解
52

動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止濃度（MIC）測定法（改訂）／26（2004） 53

表 1 試験薬剤の溶解に使用する溶媒と希釈液
薬

剤

略号

溶

媒

希釈液

アモキシシリンAMPC

緩衝液-11)

緩衝液-11)

アンピシリン

ABPC

緩衝液-22)

緩衝液-11)

ペニシリン

PC

蒸留水

蒸留水

CEZ

緩衝液-1

蒸留水

セフチオフル

CTF

蒸留水

蒸留水

セフロキシム

CXM

緩衝液-1

蒸留水

アプラマイシン

APM

蒸留水

蒸留水

デストマイシン A

DM-A

蒸留水

蒸留水

ジヒドロストレプトマイシン

DSM

蒸留水

蒸留水

ゲンタマイシン

GM

蒸留水

蒸留水

カナマイシン

KM

蒸留水

蒸留水

スペクチノマイシン

SPC

蒸留水

蒸留水

エリスロマイシン

EM

95％エタノール

蒸留水

ジョサマイシン

JM

95％エタノール

蒸留水

キタサマイシンKT

95％エタノール

蒸留水

スピラマイシンSP

95％エタノール

蒸留水

タイロシン

TS

95％エタノール

蒸留水

LCM

蒸留水

蒸留水

コリスチン

CL

蒸留水

蒸留水

ノシヘプタイド

NHT

ジメチルホルムアミド

蒸留水

バンコマイシン

VCM

蒸留水

蒸留水

バージニアマイシン

VGM

少量のメタノール＋緩衝液-1

蒸留水

SLM

メタノール

蒸留水

OTC

少量の 0.1N HCl ＋蒸留水

蒸留水

アビラマイシン

AVM

アセトン

蒸留水

バシトラシン

BC

蒸留水

蒸留水

ビコザマイシン

BCM

蒸留水

蒸留水

クロラムフェニコール

CP

95％エタノール

蒸留水

エフロトマイシン

EFM

メタノール

蒸留水

ホスホマイシン

FOM

蒸留水

蒸留水

ノボビオシン

NB

蒸留水

蒸留水

ペニシリン系抗生物質

セフェム系抗生物質
セファゾリン

アミノグリコシド系抗生物質

マクロライド系抗生物質

リンコマイシン系抗生物質
リンコマイシンペプチド系抗生物質

ポリエーテル系抗生物質
サリノマイシンテトラサイクリン系抗生物質
オキシテトラサイクリン
その他の抗生物質

54 動物抗菌会報 26（2004）
キノロン系合成抗菌薬
ERFX

下記 3) 参照

蒸留水

ミロキサシン

MLX

3)

下記 参照

蒸留水

ナリジクス酸NA下記 3) 参照

蒸留水

オキソリン酸

OA

3)

下記 参照

蒸留水

オフロキサシン

OFLX

下記 3) 参照

蒸留水

SDMX

下記 4) 参照

蒸留水

SMMX

4)

下記 参照

蒸留水

フルメキン

FMQ

下記 3) 参照

蒸留水

オラキンドックス

ODX

ジメチルホルムアミド

蒸留水

チアンフェニコール

TP

95％エタノール

蒸留水

フロルフェニコール

FF

95％エタノール

蒸留水

トリメトプリム

TMP

1/10 量 0.05 N HCl ＋蒸留水

エンロフロキサシン

サルファ剤
スルファジメトキシン
スルファモノメトキシン
その他合成抗菌薬

温かい蒸留水

１）0.1 M リン酸塩緩衝液（pH6.0）の調製法
リン酸二水素カリウム（KH2PO4）7.0g，リン酸一水素ナトリウム（Na2HPO4・12H2O）6.0g に蒸留水約750mL を加え，1 分間以上煮沸して溶かす。必要があれば，1N NaOH またはリン酸を用いて pH を 5.9 〜 6.1に調整した後，更に蒸留水を加えて 1,000mL とする。
２）0.1 M リン酸塩緩衝液（pH8.0）の調製法（1）リン酸一水素カリウム（16.73 g）／リン酸二水素カリウム（0.523 g）（2）リン酸一水素カリウム（無水）（13.2 g）／リン酸二水素カリウム（0.91 g）（1）または（2）の処方による。いずれも上記分量をとり，蒸留水約 750mL を加えて溶かし，必要があれば，リン酸を用いて pH を 7.9 〜 8.1 に調整した後，更に蒸留水を加えて 1,000mL とする。
３）蒸留水 1/2 容量を加えた後，1N NaOH を溶解するまで滴下し，蒸留水でメスアップする。
４）熱い蒸留水 1/2 容量を加えた後，2.5N NaOH を溶解するまで滴下し，蒸留水でメスアップする。

水溶性の薬剤は原則として，全て滅菌蒸留は下記の計算式により計算する。
溶媒量（mL）＝薬剤の力価（μg/mg）

水を用いて溶解する。ただし，水に不溶性な

×秤量（mg）÷原液の濃度（μg/mL）

いし難溶性の薬剤については，必要に応じてエタノールや水酸化ナトリウム溶液などの溶

ウ．MIC 測定法の実際媒を用いて，できるだけ少量に溶解した後，薬剤の希釈

滅菌蒸留水で希釈して薬剤原液を調製する。

表 2 の（1）に 例 示 し た 方 法 な ど に よ

薬剤原液は通常，5,120μg/mL またはμg

り，5,120μg/mL を薬剤原液とした 2 倍段（力価）/mL の濃度に調整する。
ほとんどの薬剤原液はガラス，ポリエチ
レン，ポリプロピレンまたはポリスチレン
製の滅菌バイアルに入れて，− 70℃ 以下

表 2 薬剤の希釈調製法の例（1）寒天平板希釈法のための希釈例
マスター希釈の保存条件で，約 6 ヶ月間は保存可能であ

5,120μg/mL …… A 液る。ただし，一度融解したものは，全てそ1,280μg/mL …… B 液 A 液 1 容＋蒸留水※ 3 容の日のうちに使用しなければならない。

160μg/mL …… C 液 B 液 1 容＋蒸留水 7 容

薬剤濃度の調整法

20μg/mL …… D 液 C 液 1 容＋蒸留水 7 容

供試薬剤を秤量後，表 1 に例示した規定

2.5μg/mL …… E 液 D 液 1 容＋蒸留水 7 容の溶媒で溶解する。溶解に必要な溶媒の量※：ABPC の場合は，0.1M リン酸塩緩衝液を用いる。

動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止濃度（MIC）測定法（改訂）／26（2004） 55

薬剤の溶液
段階

濃度
μg/mL

容量
mL

＋蒸留水＊
mL

中間濃度
μg/mL

1

5,120 （A 液）

−

−

5,120

512

9

2

5,120 （A 液）

1.0

1.0

2,560

256

8

3

5,120 （A 液）

1.0

3.0

1,280

128

7

4

1,280 （B 液）

1.0

1.0

640

64

6

5

1,280 （B 液）

1.0

3.0

320

32

5

6

1,280 （B 液）

1.0

7.0

160

16

4

7

160 （C 液）

1.0

1.0

80

8

3

8

160 （C 液）

1.0

3.0

40

4

2

9

160 （C 液）

1.0

7.0

20

2

1

10

20 （D 液）

1.0

1.0

10

1

0

11

20 （D 液）

1.0

3.0

5

0.5

−1

12

20 （D 液）

1.0

7.0

2.5

0.25

−2

13

2.5（E 液）

1.0

1.0

1.25

0.125

−3

寒天での 1：10 希釈における最終濃度（μg/mL）*：ABPC の場合は 0.1M リン酸塩緩衝液，pH6.0 を用いる。

（2）微量液体希釈法のための希釈例
マスター希釈1,280μg/mL …… A 液
160μg/mL …… B 液

A 液 1 容＋蒸留水 7 容

20μg/mL …… C 液

B 液 1 容＋蒸留水 7 容

2.5μg/mL …… D 液 C 液 1 容＋蒸留水 7 容

薬剤の溶液
濃度
μg/mL

容量
mL

＋ CAMHB*mL

11,280 （A 液）

2.0

18.0

128

7

2

1,280 （A 液）

1.0

19.0

64

6

3

1,280 （A 液）

0.5

19.5

32

5

4

160 （B 液）

2.0

18.0

16

4

5

160 （B 液）

1.0

19.0

8

3

6

160 （B 液）

0.5

19.5

4

2

7

20 （C 液）

2.0

18.0

2

1

8

20 （C 液）

1.0

19.0

1

0

9

20 （C 液）

0.5

19.5

0.5

−1

10

2.5（D 液）

2.0

18.0

0.25

−2

11

2.5（D 液）

1.0

19.0

0.12

−3

12

2.5（D 液）

0.5

19.5

0.06

−4

段階

*CAMHB：陽イオン調整ミューラーヒントン液体培地。

最終薬剤濃度
μg/mL

log2

log2

56 動物抗菌会報 26（2004）

階希釈例（3 連続以上の希釈を行わない）
を作製する。

エンドポイントの決定原則として，接種菌の薬剤含有培地で薬剤含有感受性測定用寒天培地の調製の発育が完全に阻害された薬剤の最小濃ミューラーヒントン寒天培地を溶解，滅度をエンドポイントと判定し，その値を菌して 48 〜 50℃ に保持する。前項で調製

最 小 発 育 阻 止 濃 度（Minimum Inhibitory

した薬剤の各希釈液 1：培地 9 の割合（直Concentration: MIC）とする。

径 90mm のシャーレを使用する場合には希釈液 2mL と培地 18mL）で十分に混合し，混合液をシャーレに分注した後に固化させ単独のコロニーの発育または軽微な発育は無視し，発育阻止とみなす。
精度管理

る。最終的な寒天培地の厚さは，約 4mm

薬剤感受性試験法の精度と正確性を確保にしなければならない。同時に，薬剤無添

す る 目 的 で，Staphylococcus aureus ATCC加の対照平板も作成する。室温で固化させ29213（JCM 2874），Enterococcus faecalis

た寒天培地は，使用前に，約 30 分間ふ卵ATCC 29212（JCM 7783），Escherichia coli

器内で寒天表面を乾燥させ，表面に水滴がATCC 25922（JCM 5491）および Pseudomonas

付いていないことを確認する。

aeruginosa ATCC 27853（JCM 6119）を精度

接種用菌液の調製管理用菌株に定め，NCCLS が提示してい寒天平板培地で純粋培養した被検菌株のる各菌株に対する薬剤ごとの MIC の精度

3 − 5 コロニーの先端を白金耳で触れ，増管理限界値（MIC 範囲）を表 3 に示した。

殖用培地に接種し，35℃ で培養後，約 1 〜

なお，NCCLS が規定していない薬剤につ2 × 108CFU/mL（McFarland 標準液 No. 0.5

いては，下記に示す NCCLS ガイドラインに相当）となるように濃度を調整する。接に記載されているその基本的な考え方に準種 用 に 直 径 1mm の 金 属 製 ピ ン（0.5μL/

拠し，薬剤ごとに精度管理限界値を各試験spot）を使用する場合には，希釈せずにそ施設が独自に規定しなければならない。更のまま接種用菌液とする。ただし接種用にに 詳 細 な 精 度 管 理 の 手 法 に つ い て は，

直径 3mm の金属製ピン（2μL/ spot）を使

NCCLS ガイドラインを参照されたい。試用する場合には，さらに 10 倍希釈して接行的に本稿では，NCCLS が規定していな

種用菌液とする。なお，濃度調整した菌液

い薬剤についても，農林水産省動物医薬品

は，調製後 30 分以内に使用しなければな

検査所で実施された試験成績に基づき暫定らない。

的に設定した精度管理限界値（参考値）を接種用菌液の平板への接種

参考資料 1 に示した。

前項で調製した接種用菌液を，ミクロ

ａ．NCCLS の精度管理限界値設定におけプランターなどにとり，これを薬剤含有

る基本的考え方

平板もしくは対照平板に静かにスポット

・3 ロットのミューラーヒントン寒天培する。接種の順番は最初に対照平板へ接地を用い，複数の試験施設で上記の精種し，次いで薬剤ごとに最も低濃度の薬

度管理用菌株について実施した少なく剤を含む平板培地から接種を開始し，次とも 7 回の試験で得られた成績に基づ

第に高濃度の培地に接種していく。雑菌

き，NCCLS 小委員会が一定のルールの混入がないことを確かめるために，少に従って精度管理限界値を設定する。

なくとも最初と最後に対照平板に接種す

・理想的には設定する MIC 範囲は，少る。平板表面の菌液が乾いた後，シャーなくとも 95％信頼限界を含むことがレを反転し，35℃ で 16 〜 20 時間培養し，判定を行う。

望ましい。
・精度管理限界値は 3 管以内での設定が動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止濃度（MIC）測定法（改訂）／26（2004） 57

表 3 NCCLS が規定する薬剤における MIC（μg/mL）の精度管理限界値（1）一般細菌の精度管理限界値
薬剤

ABPC CEZ CTF APM GM KM EM VCM CP NA ERFX TMP TS
精度管理用菌株
S. aureus
ATCC29213 0.5-2 0.25-1 0.25-1 2-8 0.12-1 1-4 0.25-1 0.5-2 2-8- 0.03-0.12 1-4 0.5-4
E. faecalis

ATCC29212 0.5-2

-

4-16

16-64

1-4

1-4

4-16

-

≦1

0.5-4

E. coli

ATCC25922

2-8

1-4

0.25-1 2-16 0.25-1

-

-

1-4

-

-

2-8

1-4 0.008-0.03 0.5-2>32

P. aeruginosa ATCC27853

-

-

16-64

-

-

-

-

-

>32

2-16

0.5-2

0.12-1
1-4>64（2）Campylobacter spp. の精度管理限界値
薬剤

EM

GM

NA

CPFX

DOXY

TC

1-8

0.5-4

8-32

0.12-10.5-2

1-4

精度管理用菌株
ATCC33560

C. jejuni（3）微量液体希釈法による Actinobacillus pleuropneumoniae および Haemophilus somnus の精度管理限界値
薬剤

CTF

FF

GM

PC

TC

TML TMS

0.004-0.015 0.015-0.06

0.25-18-32

0.12-10.25-28-32

4-32 0.015/0.28-0.06/1.14

ATCC700025 0.0005-0.004 0.015-0.06 0.12-0.5 8-32 0.015-0.06 0.12-1-

2-16 0.03/0.57-0.125/2.38

A. pleuropneumoniae ATCC27090
H. somnus

TMP-SMX(1/19)

ERFX

精度管理用菌株

薬剤の略号は動物用抗菌剤研究会報最新号の動物用抗生物質・合成抗菌剤略語表を参照。

望ましいが，実際には 4 管以内の設定が必要となる場合もある。
ｂ．精度管理用菌株の入手法
理化学研究所（JCM 菌株番号）および ATCC の規程上，他機関へ当該菌株を再分与することは禁じられている。従って，薬剤感受性試験を実施する場合にあっては，各機関は理化学研究所あるいは ATCC（国内代理店を通じて）から直接，精度管理用菌株を購入されたい。
ｃ．精度管理用菌株の保存
各精度管理用菌株は安定剤中で− 60℃
以下または凍結乾燥状態で保存する。保存菌株は寒天平板培地で 2 回継代培養した後に使用する。
（2）特殊細菌（特殊な発育条件を必要とする細菌）

somnus
感受性測定用培地：チョコレート寒天培
地（基礎培地としてはミューラーヒントン
寒天培地を用いて調製）。
MIC 判定のための培養温度ならびに時
間：35℃，5 〜 7％CO2，20 〜 24 時間
精度管理：精度管理限界値の設定については今後，検討することとする。
イ．Campylobacter spp.
感受性測定用培地：5％の割合に羊脱線維素血液を添加したミューラーヒントン寒天培地（報告書などには製造所を明記する。
）
菌浮遊用液：ミューラーヒントン液体培
地（報告書などには製造所を明記する。），
滅菌蒸留水または生理食塩液
薬剤含有感受性測定用寒天培地の調製：

以 下 の 項 目 以 外 は，１．寒 天 平 板 希 釈 法，

ミューラーヒントン寒天培地を溶解，滅菌（1）一般細菌の試験法に準拠して実施するこ

して 48 〜 50℃ に保持する。使用時に 5％ととする。
ア．Actinobacillus pleuropneumoniae および Haemophilusの割合で羊脱線維素血液を添加し，感受性
測定用寒天培地とする。以降の調製は一般

58 動物抗菌会報 26（2004）

細菌と同様に行う。
接種用菌液の調製：5％羊脱線維素血液
加ミューラーヒントン寒天平板培地で 37℃ 48 時間または 42℃ 24 時間，微好気下（10％ CO2，5％ O2，85％ N2）で培養した被検菌株のコロニーをミューラーヒント
ン液体培地，蒸留水または生理食塩液にびに時間：25℃，24 時間
ｂ．MIC 判定のための培養温度ならびに
時間：25℃，24 時間
Edwardsiella tardaａ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：25 〜 30℃，24 時間
ｂ．MIC 判定のための培養温度ならびに直接浮遊させる。その菌液は約 1 〜 4 ×

時間：25 〜 30℃，24 時間

108CFU/mL（McFarland 標 準 液 No. 0.5 に

Flavobacterium columnare（syn. Chondrococcus

相当）となるように濃度調整する。以降のcolumnaris）

調製方法は一般細菌と同様に行う。

ａ．感受性測定用培地：Cytophaga 寒天培

接種用菌液の平板への接種：一般細菌の地〔0.05％（w/v）tryptone，0.05％（w/v）

平板への接種法に準拠して接種した後，35

yeast extract, 0.05％（w/v）sodium acetate,〜 37℃ 微好気下（10％CO2，5％O2，85％

0.02％（w/v）beef extract, 1.0％（w/v）

N2）で 48 時間培養し，判定を行う。
精度管理：薬剤感受性試験法の精度と正agar，pH 7.2 〜 7.4，滅菌方法：121℃，
15 分〕確性を確保する目的で，Campylobacter jejuni

ｂ．増 殖 用 培 地：Cytophaga 液 体 培 地

ATCC 33560（本菌種の基準株）を精度管（Cytophaga 寒天培地から寒天を除いた

理用菌株に定め，NCCLS が提示している
各菌株に対する薬剤ごとの MIC の精度管
理限界値を表 3 に示した。
ウ．魚類由来病原細菌
魚類由来病原細菌の薬剤感受性は，以下の項目以外は 1．寒天平板希釈法，（1）一般培地）
ｃ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：20 〜 25℃，48 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびに時間：20 〜 25℃，48 時間
Flavobacterium psychrophilum（syn. Cytophaga

細菌の試験法に準拠して実施することとす

psychrophila）

る。なお，精度管理限界値の設定については

ａ．感受性測定用培地：Cytophaga 寒天培

今後，検討することとするが，参考資料 2 に地もしくは TYE 寒天培地〔0.4％（w/v）

掲げた ATCC 菌株を暫定的な精度管理用菌株

tryptone, 0.04％（w/v）yeast extract, 0.05％に定め，暫定的に設定した精度管理限界値（w/v）MgSO・
4 7H2O, 0.05％（w/v）CaCl・
2（参考値）を示した。

2H2O, 1.0％（w/v）agar，pH 7.2，滅菌方

Aeromonas hydrophilaａ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：25℃，24 時間
ｂ．MIC 判定のための培養温度ならびに
時間：25℃，24 時間
Aeromonas salmonicida
ａ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：20℃，24 時間
ｂ．MIC 判定のための培養温度ならびに時間：20℃，24 時間
非定型 Aeromonas salmonicida
ａ．接種用菌液調製のための培養温度なら

法：121℃，15 分〕
ｂ．増殖用培地：Cytophaga 液体培地もし
くは TYE 液体培地（TYE 寒天培地から寒天を除いた培地）
ｃ．接種用菌液調整のための培養温度ならびに時間：15 〜 20℃，96 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびに時間：15 〜 20℃，96 時間
Flavobacterium branchiophilumａ．感受性測定用培地：Cytophaga 寒天培
地
ｂ．増殖用培地：Cytophaga 液体培地

動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止濃度（MIC）測定法（改訂）／26（2004） 59

ｃ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：15 〜 20℃，96 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびに時間：15 〜 20℃，96 時間
Lactococcus garvieaeａ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：25℃，24 時間
ｂ．MIC 判定のための培養温度ならびにP. plecoglossicida. P. anguilliseptica)ａ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：25℃，24 時間
ｂ．MIC 判定のための培養温度ならびに
時間：25℃，24 時間
Renibacterium salmoninarum
ａ．感受性測定用培地：KDM-2 寒天培地
〔0.05％ (w/v) yeast extract, 0.1％ (w/v)

時間：25℃，24 時間

L-cystein-HCl, 1.0％ (w/v) tryptone, 20％

Mycobacterium sp.

(v/v) bovine serum, 1.5％ (w/v) agar,

ａ．感 受 性 測 定 用 培 地：Middlebrook

pH7.2, 滅菌方法：121℃，15 分〕

ADH enrichment 添 加 Middlebrook 7H11ｂ．増殖用培地：KDM-2 液体培地

寒天培地

ｃ．接種用菌液調製のための培養温度ならｂ．増 殖 用 培 地：Middlebrook ADH
enrichment 添加 Middlebrook 7H11 液体培地
ｃ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：25℃，144 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびに
時間：25℃，144 時間
Nocardia seriolae
ａ．感 受 性 測 定 用 培 地：Middlebrook

びに時間：18℃，24 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびに時間：18℃，24 時間
Streptococcus iniaeａ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：25℃，24 時間
ｂ．MIC 判定のための培養温度ならびに
時間：25℃，24 時間
Tenacibaculum maritimum (syn. Flexibacter

ADH enrichment 添 加 Middlebrook 7H11

maritimus)

寒天培地

ａ．感受性測定用培地：30％以上の海水をｂ．増 殖 用 培 地：Middlebrook ADH

用いて作製した Cytophaga 寒天培地もし

enrichment 添加 Middlebrook 7H11 液体

くは TCY 寒天培地〔0.1％（w/v）tryptone，培地

0.1％（w/v）casamino acids，0.02％（w/v）

ｃ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：25℃，96 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびに
時間：25℃，96 時間
Photobacterium damselae subsp. piscicida

yeast extract，3.13％（w/v）NaCl，0.07％（w/v）KCl，1.08％（w/v）MgCl2・6H2O，0.1％（w/v）CaCl2・2H2O，1.0％（w/v）agar，pH
7.2，滅菌方法：121℃，15 分〕
ｂ．増殖用培地：30％以上の海水を用いて（Pasteurella piscicida）

作製した Cytophaga 液体培地もしくはａ．感受性測定用培地：2％NaCl −ミュー

TCY 液体培地（TCY 寒天培地から寒天

ラーヒントン寒天培地
ｂ．増殖用培地：2％NaCl −ミューラーヒ
ントン液体培地
ｃ．接種用菌液調製のための培養温度ならびに時間：25 〜 30℃，24 〜 48 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびにを除いた培地）ｃ．接種用菌液調整のための培養温度ならびに時間：20 〜 25℃，48 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびに時間：20 〜 25℃，48 時間
Vibrio spp. (V. anguillarum, V. alginolyticus,

時間：25 〜 30℃，24 〜 48 時間

V. parahaemolyticus, V. damsela)

Pseudomonas spp. (P. fluorescens, P. putida,ａ．感受性測定用培地：2％NaCl −ミュー

60 動物抗菌会報 26（2004）

ラーヒントン寒天培地

ウ．MIC 測定法の実際

ｂ．増殖用培地：2％NaCl −ミューラーヒ

薬剤含有感受性測定用液体培地の調製
表2のントン液体培地
ｃ．接種用菌液調製のための培養温度ならに例示した方法などにより，1,280μg/mL の薬剤原液を 128，64，32，16，
8，
4，
2，1，0.5，
0.25，0.12，0.06μg/mL となるびに時間：25℃，24 時間
ｄ．MIC 判定のための培養温度ならびに

よう CAMHB で希釈（3 連続以上の希釈は行わない）し，薬剤含有感受性測定用液体

時間：25℃，24 時間

培地を作製する。この感受性測定用液体培

２．微量液体希釈法

地をマイクロプレートの 1 ウェルあたり0.1 ± 0.02mL 分注する。

（1）一般細菌（ミューラーヒントン培地に 35℃，

感受性測定用培地は検査当日に作製す

好気的条件で発育する細菌）る。もし，当日使用しない場合は 4℃ ある

以下の項目以外の術式は，NCCLS により提唱

いは氷水中で保存する。

された標準的試験法〔1〕に準拠する。

接種用菌液の調整
MHB で McFarland 標 準 液 の No. 0.5 のア．供試材料
感受性測定用培地：陽イオン調整ミュー

濁度まで増菌，あるいは寒天平板培地のラーヒントン液体培地（CAMHB）（報告書

新鮮培養菌を用いて McFarland 標準液のなどには製造所を明記する。
）

No. 0.5 の 濁 度 に 調 整 す る（1 〜 2 × 108

Ca2+：20 〜 25mg/L お よ び Mg2+：10 〜

CFU/mL）。いずれの場合も CAMHB で 1012.5mg/L に調整された市販品を使用する。

倍希釈し，接種用菌液とする（1 〜 2 × 107

Ca2+ お よ び Mg2+ が 調 整 さ れ て い な いミューラーヒントン液体培地（MHB）（報
告書などには製造所を明記する。）を使用

CFU/mL）。
接種用菌液の感受性測定用液体培地への接種

する場合は，蒸留水で下記に示す CaCl2 お

マイクロプレートに分注した 0.1mL の感

よび MgCl2 の溶液を事前に作製し，ろ過滅

受性測定用液体培地に接種用菌液を菌（メンブランフイルター；ポアサイズ

0.005mL（5μL）添加する。従って，各ウェ

20μm）後，4℃ に保存しておく。これら

ルの菌数は約 5 × 104CFU になる。

の 溶 液 は MHB の 1L 当 た り CaCl2 溶 液 は培養

5mL，MgCl2 溶液は 2.5mL を添加・混和し菌接種後 35℃ で 16 〜 20 時間培養し，判て感受性測定用液体培地とする。

定する。なお，標準的には菌接種後，15 分

CaCl2 溶液：CaCl2・2H2O の 3.68g を 100mL2+に溶解する（Ca ；10mg/mL）

エンドポイントの決定

MgCl2 溶液：MgCl2・6H2O の 8.36g を 100mL2+に溶解する（Mg ；10mg/mL）の 96 穴マイクロプレート

全に阻止された最小濃度を MIC とする。
精度管理

薬剤原液の希釈用液：１．寒天平板法，
薬剤原液の希釈用液と同じ。
薬剤の調製は１．寒天平板法，精度管理は１．寒天平板希釈法，
般 細 菌，ウ．MIC 測 定 法 の 実 際，

一
精度管理と同じ。
（2）特殊細菌（特殊な発育条件を必要とする細菌）

イ．薬剤の調製
菌，イ．薬剤の調製と同じ。

接種菌の薬剤含有培地での発育を対照培
地での発育と比べ，肉眼的に見て発育が完マイクロプレート：滅菌処理された U 型

一般細菌，ア．供試材料，以内に培養を始める。

一般細

以下の項目以外は，２．微量液体希釈法，

一

般細菌の試験法に準拠して実施することとする。

動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止濃度（MIC）測定法（改訂）／26（2004） 61

ア．Actinobacillus pleuropneumoniae および Haemophilus somnus

disk and dilution susceptibility tests for bacteria
isolated from animals. Second edition, Approved

感受性測定用培地：1L あたり下記の成Standard. NCCLS document M31-A2, 22 (6) (2002)

分を含む VFM 培地（Veterinary Fastidious

２）動物用抗菌剤研究会 MIC 測定法改訂委員会（高Medium）。

橋勇，内田幸治，吉村治郎，高橋敏雄，澤田拓

CAMHB

22 g

士），動物由来の細菌に対する薬剤の最小発育阻

Beef extract3g

止 濃 度（MIC）測 定 法，動 物 用 抗 菌 剤 研 究 会

Acid hydrolysis casein

17.5 g

Starch1.5 gYeast extract

20 g

器病原因菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）の薬

馬溶血液＊

20 mL

剤感受性試験法，動物用抗菌剤研究会報，18，

Supplement C (Difco)

20 mL

p51-52（1997）

報，18，p40-41（1997）
３）動物用抗菌剤研究会臨床評価検討委員会，豚呼吸

４）動物用抗菌剤研究会臨床評価検討委員会，豚呼＊馬溶血液の作製法
馬血液を 3 回，凍結融解（凍結温度：− 20℃ も し く は そ れ 以 下）し た 後，
3,000 × g で 20 分間遠心し，その上清を吸器病原因菌（Pasteurella multocida）の薬剤感受性 試 験 法，動 物 用 抗 菌 剤 研 究 会 報，18，p52（1997）
５）動物用抗菌剤研究会臨床評価検討委員会，豚呼馬溶血液として使用する。

吸器病原因菌（Mycoplasma hyopneumoniae）の薬

接 種 用 菌 液 の 調 製：一 夜（20 〜 24 時

剤感受性試験法，動物用抗菌剤研究会報，18，間）培養した寒天平板から直接釣菌し，滅

p52-53（1997）

菌した CAMHB，蒸留水あるいは 0.9％食６）動物用抗菌剤研究会臨床評価検討委員会，牛呼塩水を用いて McFarland 標準液の No. 0.5

吸器病原因菌（Pasteurella multocida, Pasteurellaに調整したものを接種菌液とする。粘性をhaemolytica）の薬剤感受性試験法，動物用抗菌剤

示 す Actinobacillus pleuropneumoniae の 菌
株では菌数調整が難しいこともあるので注意が必要である。
培養：35℃，5 〜 7％CO2，20 〜 24 時間
精度管理用菌株：VFM 培地を使用した研究会報，18，p53（1997）
７）動物用抗菌剤研究会臨床評価検討委員会，牛呼吸器病原因菌（マイコプラズマ）の薬剤感受性
試 験 法，動 物 用 抗 菌 剤 研 究 会 報，18，p53-54（1997）

微量液体希釈法における精度管理用菌株

８）動物用抗菌剤研究会臨床評価検討委員会，豚・Actinobacillus pleuropneumoniae ATCC 27090

牛下痢病原菌（E. coli）の薬剤感受性試験法，動お よ び Haemophilus somnus ATCC 700025

物用抗菌剤研究会報，18，p54（1997）の MIC（μg/mL）の精度管理限界値を表3 に示した。

９）動物用抗菌剤研究会臨床評価検討委員会，牛乳房炎起因菌の薬剤感受性試験法，動物用抗菌剤
研究会報，19，p45（1998）

参考文献

１０）田村 豊，高橋敏雄，守岡綾子，石原加奈子，菊間令子，家畜衛生分野における薬剤耐性モニタリ

１）National Committee for Clinical Laboratory
Standards: Performances standards for antimicrobial

ン グ 体 制，日 本 獣 医 師 会 雑 誌，55（2），p126-129（2002）

62 動物抗菌会報 26（2004）
参考資料 1 NCCLS が規定していない薬剤の寒天平板希釈法による MIC（μg/mL）の精度管理限界値（参考値）
薬剤
精度管理用菌株
S. aureus
ATCC29213
E. faecalis
ATCC29212
E. coli
ATCC25922
P. aeruginosa ATCC27853
薬剤
精度管理用菌株
S. aureus
ATCC29213
E. faecalis
ATCC29212
E. coli
ATCC25922
P. aeruginosa ATCC27853

CXM

DM-A

DSM

LCM

CL

BC

NHT

VGM

SNM

0.25-2-0.5-232-256

1-8

32-128≦ 0.008≧ 256
16-12816-128

16-64
1-4
4-32

0.25-2
8-32
≧ 256
≧ 256

64-128

≧ 64
2-8
≧ 128

≧ 256
0.5-2
0.5-2

32-128≧ 256≧ 256≦ 0.015-

0.25-1
1-4
-

OTC

AVM

BCM

EFM

OA

OFLX

ODX

SDMX

≦1
4-16
0.25-22-16

1-4
0.25-2
-

≧ 512
≧ 512
16-64
≧ 512

≧ 128
≧ 128
≧ 128
≧ 128

0.25-24-32≦ 0.25
8-64

≦ 0.5
1-4
≦ 0.25
1-4

8-32
-

≧ 256
≧ 256
≧ 512

0.5-2

薬剤の略号は動物用抗菌剤研究会報最新号の動物用抗生物質・合成抗菌剤略語表を参照。
参考資料 2 魚類由来病原細菌の MIC（μg/mL）の精度管理限界値（参考値）
Lactococcus garvieae の MIC 測定条件時（25℃，24 時間）
薬剤
精度管理用菌株
S. aureus
ATCC29213
E. faecalis
ATCC29212
E. coli
ATCC25922
P. aeruginosa ATCC27853
A. salmonicida ATCC33658
L. garvieae
ATCC49156
L. garvieae
ATCC49157
薬剤
精度管理用菌株
S. aureus
ATCC29213
E. faecalis
ATCC29212
E. coli
ATCC25922
P. aeruginosa ATCC27853
A. salmonicida ATCC33658
L. garvieae
ATCC49156
L. garvieae
ATCC49157

ABPC

CP

DSM

EM

EREX

FOM

FF

≦ 0.5
0.25-1
2-4≧ 256≦ 0.125
0.25-10.25-1

0.5-2
0.5-2
2-8
16-64
0.25-1
0.5-2
0.5-2

1-4
16-64
1-4
2-8
2-8
32-12816-64<0.125
0.5-2
4-16
8-32
1-4
<0.125<0.125<0.125≦ 0.5<0.125≦ 0.5<0.1250.25-10.25-1

1-4
8-32
2-8
2-8
0.5-2
64-256
8-32

0.5-2
0.5-2
2-8
16-64
0.25-1
0.5-2
0.5-2

FMQ

GM

KM

LCM

OTC

SMMX

TMP

0.25-1
8-32
≦ 0.5
2-8
<0.125
8-32
8-32

≦ 0.5
8-32
0.25-10.25-10.25-1
4-16
2-8

0.5-2
16-64
0.5-2
>512
1-4
16-64
8-32

0.25-1
4-16
≧ 256
≧ 256
128-512<0.125<0.125<0.125
1-4
≦ 0.5
0.5-2
<0.125<0.125<0.1258-32>512128-512
≧ 512
≧ 256
>512
>512

≦ 0.5
<0.1250.5-164-256
0.25-14-16
2-8

Photobacterium damselae subsp. piscicida の MIC 測定条件時
薬剤
精度管理用菌株
S. aureus
ATCC29213
E. faecalis
ATCC29212
E. coli
ATCC25922
P. aeruginosa ATCC27853
A. salmonicida ATCC33658
P. damselae
ATCC51736
P. damselae
ATCC17911

ABPC

BCM

CP

DSM

ERFX

FF

FMQ

0.25-10.25-11-4>512<0.125<0.125<0.125

>512
>512
16-64
>512
8-32
2-8
2-8

1-4
1-4
1-4
64-256≦ 0.5
0.25-10.25-1

8-32
32-128
4-16
8-32
4-16
8-32
4-16

<0.1250.25-1<0.1250.5-2<0.125<0.125<0.1251-4
1-4
2-8
64-256
0.25-1≦ 0.5≦ 0.5

0.25-1
16-64
≦ 0.5
8-32
<0.125<0.125<0.125

動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止濃度（MIC）測定法（改訂）／26（2004） 63

薬剤

FOM

精度管理用菌株

GM

KM

OA

OTC

SMMX

TMP

ATCC29213

2-8

2-8

4-16

0.25-1

≦ 0.5

8-32

0.25-1

E. faecalis
ATCC29212
E. coli
ATCC25922
P. aeruginosa ATCC27853
A. salmonicida ATCC33658
P. damselae
ATCC51736
P. damselae
ATCC17911

16-64
1-4
4-16
0.5-2
1-4
0.25-132-128
1-4
2-8
0.5-2
4-16
2-8

64-256
4-16
>512
2-8
8-32
4-16

8-32
<0.1254-16<0.125<0.125<0.125

4-16
0.5-2
1-4
≦ 0.5
<0.125<0.125>51264-256≧ 512
128-51232-1284-16<0.125
1-4
64-256
1-4
0.25-1≦ 0.5

S. aureus

薬剤の略号は動物用抗菌剤研究会報最新号の動物用抗生物質・合成抗菌剤略語表を参照。
参考資料 3 国内家畜衛生分野におけるモニタリングの調査対象薬剤および菌種
対象菌種
薬剤感受性
検査の対象抗菌性物質
アンピシリン
セファゾリンセフチオフルアプラマイシンジヒドロストレプトマイシン
ゲンタマイシンカナマイシン
エリスロマイシン
リンコマイシン
コリスチン
ノシヘプタイド（ABPC）
（CEZ）
（CTF）
（APM）
（DSM）
（GM）
（KM）
（EM）
（LCM）
（CL）
*
（NHT）

バンコマイシンバージニアマイシン

（VCM）
*
（VGM）

サリノマイシン

*（SNM）

オキシテトラサイクリン
アビラマイシン

（OTC）（AVM）*

バシトラシン
ビコザマイシンクロラムフェニコール
ナリジクス酸
エンロフロキサシン
スルファジメトキシン
オラキンドックス

（BC）
（BCM）
（CP）
（NA）
（ERFX）（SDMX）（ODX）*

トリメトプリム（TMP）* は飼料添加物専用抗菌性物質

サルモネラ

大腸菌

カンピロバクター

腸球菌

○
○
○
○
○
○
○
×
×
○

○
○
○
○
○
○
○
×
×
○

×
×
×
×
○
○
×
○
×
×

○
×
×
×
○
○
○
○
○
×

×
×

×
×

×
×

○
○

×

×

×

○

×
○

×
○

×
○

○
○

×
×
○
○
○
○
○

×
×
○
○
○
○
○

×
×
×
○
○
○
○

○
○
×
○
×
○
×

○
○

○
○

○
×

×
×

64 動物抗菌会報 26（2004）

The Determination Method of Minimum Inhibitor y Concentration(MIC) of Antimicrobials against Bacteria Isolated from Animals(Revised Standard Method of the Japanese Society of
Antimicrobials for Animals in 2003)
Proceeding of the Japanese Society of Antimicrobials for Animals, 26 (2004), 64-74
October 30, 2004 (revision)

Hereafter, it is recommended that the susceptibility

strains as in the NCCLS method are designatedof bacteria isolated from animals to antimicrobials

for the purpose of internal quality control. For(antibiotics and synthetic antimicrobials) should

these strains, the ranges of MIC of antimicrobials

be determined by the agar dilution method or thedefined by NCLLS (quality control limit) are

broth microdilution method described here (Revised

described as they are. Though external quality

Standard Method of the Japanese Society ofcontrol is also important, it shall not be included

Antimicrobials for Animals in 2003). This method,in this revision as methods or implementing

in principle, complies with the Standard Methodorganizations have not been decided yet. This

(2002) (1) advocated by the National Committee

should be discussed as a future issue.

for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) of the

1. Agar dilution method

USA. It is desirable that the current MIC
determination method by the Standard Method of
the Japanese Society of Antimicrobials for Animals(1) General bacteria (bacteria which grow in(2) should not be used except for the purpose of

Mueller-Hinton medium at 35 ℃ undercomparing the results to those obtained with the

aerobic condition)
The techniques except for items below shall be

Revised Standard Method of the Japanese Society

complied with the Standard Method (1) advocatedof Antimicrobials for Animals in 2003.

by NCCLS.

In addition, the antimicrobial susceptibility test
methods for porcine respiratory disease pathogens(Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida,

I. Reagents and materials

Mycoplasma hyopneumoniae), bovine respiratory( i ) Medium for susceptibility determination:disease pathogens (Pasteurella multocida, Mannheimia

Mueller-Hinton agar medium (manufacturer

haemolytica, Mycoplasma spp.), porcine and bovine

shall be specified in reports or the like)diarrhea pathogens (Escherichia coli) and bovine( ii ) Growth medium: Tryptic soy broth (manufacturer

mastitis pathogens reported by the Japanese

shall be specified in reports or the like).

Society of Antimicrobials for Animals (3, 4, 5, 6, 7,(iii) Diluent for stock solution of antimicrobials:

8, 9) shall be abolished except for antimicrobial

sterilized distilled water or 0.1 M phosphatesusceptibility test methods for mycoplasma.

buffer (pH 6.0 or pH 8.0) in Table 1.

Quality control of MIC determination method isextremely important in order that many researchers

II. Preparation of antimicrobials

can share and compare the MIC values. In revising( i ) Acquisition of antimicrobials

the method this time, the same quality control

Antimicrobial standards, reference powders
64

The Determination Method of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of Antimicrobials against Bacteria Isolated from Animals (revision) ／26（2004） 65

Table 1. Solvents and diluents used for dissolution of test antimicrobials
Antimicrobial
Penicillin antibiotics
Amoxicillin
Ampicillin
Penicillin
Cephem antibiotics
Cefazolin
Ceftioful
Cefuroxime
Aminoglycoside antibiotics
Apramycin
Destomycin A
Dihydrostreptomycin
Gentamycin
Kanamycin
Spectinomycin
Macrolide antibiotics
Erythromycin
Josamycin
Kitasamycin
Spiramycin
Tyrosine
Lincosaminid antibiotics
Lincomycin
Peptide antibiotics
Colistin
Nosiheptide
Vancomycin
Virginiamycin
Polyether antibiotics
Salinomycin
Tetracycline antibiotics
Oxytetracycline
Other antibiotics
Avilamycin
Bacitracin
Bicozamycin
Chloramphenicol
Efrotomycin
Fosfomycin
Novobiocin
Quinolone antimicrobials
Enrofloxacin
Miloxacin
Nalidixic acid
Oxolinic acid
Ofloxacin

Abbreviation

Solvent

Diluent

AMPC
ABPC
PC

Buffer 11)
Buffer 22)
Distilled water

Buffer 11)
Buffer 11)
Distilled water

CEZ
CTF
CXM

Buffer 1
Distilled water
Buffer 1

Distilled waterDistilled waterDistilled water

APM
DM-A
DSM
GM
KM
SPC

Distilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistllled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled water

EM
JM
KT
SP
TS

95% ethanol
95% ethanol
95% ethanol
95% ethanol
95% ethanol

Distilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled water

LCM

Distilled waterDistilled water

CL
NHT
VCM
VGM

Distilled water
Dimethylformamide
Distilled water
Small amount of methanol ＋
Buffer 1

Distilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled water

SLM

MethanolDistilled water

OTC

Small amount of 0.1N HCl ＋
Distilled waterDistilled water

AVM
BC
BCM
CP
EFM
FOM
NB

AcetoneDistilled waterDistilled water
95% ethanol
MethanolDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled water

ERFX
MLX
NA
OA
OFLX

Refer to the note3) below
Refer to the note3) below
Refer to the note3) below
Refer to the note3) below
Refer to the note3) below

Distilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled water

66 動物抗菌会報 26（2004）
Sulfa drugs
Sulfadimethoxine
Sulfamonomethoxine
Other synthetic antimicrobials
Flumequin
Olaquindox
Thiamphenicol
Florfenicol
Trimethoprim

SDMX
SMMX

Refer to the note4) below
Refer to the note4) below

Distilled waterDistilled water

FMQ
ODX
TP
FF
TMP

Refer to the note3) below
Dimethylformamide
95% ethanol
95% ethanol
1/10 amount of 0.05 N HCl ＋
Distilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled waterDistilled water
Warm distilled water

1) Preparation method of 0.1 M phosphate buffer (pH 6.0)
About 750 mL of distilled water is added to 7.0 g of potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) and 6.0 g of sodiumhydrogen phosphate (Na2HPO4・12H2O). The solution is dissolved by boiling for more than one minute. If necessary,
pH is adjusted to 5.9-6.1 with 1N NaOH or phosphoric acid. Distilled water is further added to make 1000 mL solution.
2) Preparation method of 0.1 M phosphate buffer (pH 8.0)
(1) Potassium hydrogen phosphate (16.73 g) / potassium dihydrogen phosphate (0.523 g)(2) Potassium hydrogen phosphate, anhydrate (13.2 g) / potassium dihydrogen phosphate (0.91 g)(1) or (2) is used. In each case, the amount mentioned above is weighed, to which about 750 mL of distilled water
is added and dissolved. If necessary, pH is adjusted to 7.9-8.1 with phosphoric acid. Distilled water is further
added to make 1000 mL solution.
3) After 1/2 volume of distilled water is added, 1 N NaOH is dropped until the antimicrobial is dissolved. Then, thesolution is adjusted with distilled water.
4) After 1/2 volume of hot distilled water is added, 2.5 N NaOH is dropped until the antimicrobial is dissolved. Then,the solution is adjusted with distilled water.

or the equivalent shall be obtained and used forpossible such as ethanol or sodium hydroxide

tests. Some of antimicrobials exclusively forand diluted with sterilized distilled water toanimals may be distributed by the National

obtain the stock solutions of antimicrobials. The

Veterinary Assay Laboratory of the Ministry ofstock solutions of antimicrobials are usually

Agriculture, Forestry and Fisheries. Please contact

prepared at 5,120μg/mL orμg (potency)/mL.

the division in charge.
( ii ) Storage condition of antimicrobials (standards

Most stock solutions can be stored in glass,polyethylene, polypropylene or polystyrene sterileor reference powders)

vials under -70℃ for about 6 months. However,To avoid moisture absorption, antimicrobials

once thawed, it should be used within the day.

shall be stored in a desiccator under -20℃. The(iv) Concentration adjustment

antimicrobials shall be brought to room temperature

After weighing the test antimicrobials, they

and weighed before use. As some may be

are dissolved in the solvents designated in Table

hygroscopic, they should be weighed at relative

1. The volume of solvent required for dissolution ishumidity under 45%.

calculated by the following formula.

(iii) Dissolution of antimicrobials

Volume of solvent (mL) = Potency of antimicrobial

All water-soluble antimicrobials, as a rule,(μg/mg) × Weight (mg) ÷ Concentration

shall be dissolved in sterilized distilled waterof stock solution (μg/mL)

but antimicrobials which are insoluble in wateror hardly soluble in water, if necessary, shall beIII. Determination of MIC

dissolved in as small amount of solvent as( i ) Dilution of antimicrobials

The Determination Method of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of Antimicrobials against Bacteria Isolated from Animals (revision) ／26（2004） 67

Table 2. Example of dilution method(1) Dilution example for agar dilution method
Master dilution
5,120μg/mL
1,280μg/mL
160μg/mL
20μg/mL
2.5μg/mL※

Solution A
Solution B
Solution C
Solution D
Solution E

1 volume of Solution A ＋ 3 volumes of distilled water ※1 volume of Solution B ＋ 7 volumes of distilled water
1 volume of Solution C ＋ 7 volumes of distilled water
1 volume of Solution D ＋ 7 volumes of distilled water

0.1M phosphate buffer (pH6.0) is used for ABPC.

Antimicrobial solution
Stage

Concentration ofmaster dilution(μg/mL)

Volume ofmasterdilution
(mL)

Added
distilIed
water* (mL)Intermediateconcentration(μg/mL)

Final concentrationin agar at 1 : 10
dilution(μg/mL)

log2

1

5,120

(Solution A)

−

−

5,120

512

9

2

5,120

(Solulion A)

1.0

1.0

2,560

256

8

3

5,120

(Solulion A)

1.0

3.0

1,280

128

7

4

1,280

(Solution B)

1.0

1.0

640

64

6

5

1,280

(Solution B)

1.0

3.0

320

32

5

6

1,280

(Solution B)

1.0

7.0

160

16

4

7

160

(Solution C)

1.0

1.0

80

8

3

8

160

(Solulion C)

1.0

3.0

40

4

2

9

160

(Solulion C)

1.0

7.0

20

2

1

10

20 (Solution D)

1.0

1.0

10

1

0

11

20 (Solution D)

1.0

3.0

5

0.5

−1

12

20 (Solution D)

1.0

7.0

2.5

0.25

−2

13

2.5 (Solution E)

1.0

1.0

1.25

0.125

−3

* 0.1 M phosphate buffer (pH 6.0) is used for ABPC.

(2) Dilution example for broth microdilution method
Master dilution
1,280μg/mL
160μg/mL
20μg/mL
2.5μg/mL

Solution A
Solution B
Solution C
Solution D

1 volume of Solution A ＋ 7 volumes of distilled water
1 volume of Solution B ＋ 7 volumes of distilled water
1 volume of Solution C ＋ 7 volumes of distilled water

68 動物抗菌会報 26（2004）
Solution of antimicrobials
Stage

Concentration ofmaster dilution(μg/mL)

Volume ofmasterdilution
(mL)

Added
CAMHB*(mL)

Final
concentration(μg/mL)

log2

1

1,280

(Solution A)

2.0

18.0

128

7

2

1,280

(Solution A)

1.0

19.0

64

6

3

1,280

(Solution A)

0.5

19.5

32

5

4

160

(Solution B)

2.0

18.0

16

4

5

160

(Solulion B)

1.0

19.0

8

3

6

160

(Solution B)

0.5

19.5

4

2

7

20

(Solution C)

2.0

18.0

2

1

8

20

(Solution C)

1.0

19.0

1

0

9

20

(Solution C)

0.5

19.5

0.5

−1

10

2.5 (Solution D)

2.0

18.0

0.25

−2

11

2.5 (Solution D)

1.0

19.0

0.12

−3

12

2.5 (Solution D)

0.5

19.5

0.06

−4

* CAMHB is cation-adjusted Mueller-Hinton broth.

According to an example of dilution method(iii) Preparation of inoculum

indicated in Table 2, 5,120 μg/mL stock solution

A top of 3-5 colonies of pure cultures of theis sequentially diluted by two-fold dilution method

test strains cultivated on the agar plate medium(more than three consecutive dilution shall not

is touched with a wire loop and inoculated into

be conducted).

the growth medium. After incubation at 35 ℃,( ii ) Preparation of antimicrobial-containing agar

the concentration is adjusted to be about 1-2 x

medium for susceptibility determination

108 CFU/ml (equivalent to the McFarland

Mueller-Hinton agar medium is dissolved,

Standard Solution No. 0.5). When a metal pin

sterilized and maintained at 48-50℃. One partwith 1 mm of diameter (0.5 μL/spot) is used forof each diluent of antimicrobials prepared in the

inoculation, the solution is used for inoculation

previous section is mixed thoroughly with nine

without dilution. However, when a metal pin withparts of the medium (when a Petri dish with the

3 mm of diameter (2μL/spot) is used for inoculation,

diameter of 90 mm is used, 2 mL of the diluent

ten-fold dilution is used. The concentration-adjusted

and 18 mL of the medium are mixed). The

inoculum should be used within 30 minutes

mixture is dispensed into a Petri dish andsolidified. Final thickness of the agar medium

after preparation.
(iv) Inoculation of inoculum onto plateshould be about 4 mm. Control plates without

The inoculum prepared in the previous section

antimicrobials are also prepared simultaneously.

is spotted gently onto the plates containing

The solidified agar medium at room temperature

antimicrobials or the control plates using ashall be put in an incubator prior to use formicroplanter or the like. First, the inoculum isabout 30 minutes to dry the surface of the agar.

inoculated onto the control plate, and then, onto the

It should be confirmed that there are no drops

plate containing each antimicrobial of from lowerof water on the surface of the agar.

concentration to higher concentration sequentially.

The Determination Method of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of Antimicrobials against Bacteria Isolated from Animals (revision) ／26（2004） 69

To confirm that there is no contamination, theATCC 25922 (JCM 5491) and Pseudomonas

inoculum shall be inoculated onto the control

aeruginosa ATCC 27853 (JCM 6119) are designatedplates at least at the beginning and at the last.

as quality control strains. The quality control

After the culture inoculum on the surface of thelimits of MIC (MIC range) of these antimicrobials

plates is dried, the Petri dish is reversed andagainst each strain presented by NCLLS are

incubated at 35℃ for 16-20 hours.

shown in Table 3. For the antimicrobials of
which NCCLS has not established MIC ranges,(v) Determination of endpoint
As a rule, the lowest concentration of aneach test laboratory should independently

antimicrobial which completely inhibits theestablish the quality control limits for thesegrowth of the culture on the medium containing

antimicrobials in accordance with the fundamental

it is considered to be an endpoint and theconcept described in the NCCLS Guideline.

concentration is regarded as the minimum

For the detailed technique for quality control,

inhibitory concentration (MIC). A single colonyrefer to the NCCLS Guideline.

or faint haze caused by inoculum is regarded asa. Fundamental concept on establishment ofquality control limits by NCCLS

growth inhibition and neglected.

・Based on the results obtained in at least 7(vi) Quality control
In order to secure accuracy and precision oftests conducted in plural laboratories using

antimicrobial susceptibility tests, Staphylococcus

the aforementioned quality control strains in

aureus ATCC 29213 (JCM 2874), Enterococcus

3 lots of Mueller-Hinton agar medium, an

faecalis ATCC 29212 (JCM 7783), Escherichia coli

NCCLS subcommittee establishes quality control

Table 3. Quality control limits of MIC (μg/mL) of antimicrobials defined by NCCLS(1) Quality control limit of general bacteria
Antimicrobail

ABPC CEZ CTF APM GM KM EM VCM CP NA ERFX TMP TS
Quality control strain
S. aureus
ATCC29213 0.5-2 0.25-1 0.25-1 2-8 0.12-1 1-4 0.25-1 0.5-2 2-8- 0.03-0.12 1-4 0.5-4
E. faecalis

ATCC29212 0.5-2-

E. coli

ATCC25922

2-8

P. aeruginosa ATCC27853

-

-

-

4-16

16-64

1-4

1-4

4-16

-

≦1

0.5-4

1-4

0.25-1 2-16 0.25-1

1-4

-

-

2-8

1-4 0.008-0.03 0.5-2

>32

-

16-64

-

-

-

-

-

>32

2-16

0.5-2

0.12-1
1-4>64(2) Quality control limit of Campylobacter spp.
Antimicrobial
Quality control strain
ATCC33560

C. jejuni

EM

GM

NA

CPFX

DOXY

TC

1-8

0.5-4

8-32

0.12-1

0.5-2

1-4(3) Quality control limit of Actinobacillus pleuropneumoniae and Haemophilus somnus with broth microdilution method
Antimicrobial

FF

GM

PC

TC

TML TMS

0.004-0.015 0.015-0.06

0.25-18-32

0.12-10.25-28-32

4-32 0.015/0.28-0.06/1.14

ATCC700025 0.0005-0.004 0.015-0.06 0.12-0.5 8-32 0.015-0.06 0.12-1-

2-16 0.03/0.57-0.125/2.38

Quality control strain
H. somnus

TMP-SMX(1/19)ERFX

A. pleuropneumoniae ATCC27090

CTF

As for the abbreviation of antimicrobials, refer to the Abbreviation Table for Antibiotics and Synthetic Antimicrobials for Animals
in the latest Proceedings of the Japanese Society of Antimicrobials for Animals.

70 動物抗菌会報 26（2004）

limits in compliance with a certain rule.

defibrinized blood at a rate of 5% (manufacturer

・Ideally, it is advisable that the established range

shall be specified in reports or the like).

of MIC contains at least 95% confidence limit.

( ii ) Reagents for preparing inoculum: Mueller-

・It is desirable to establish the quality control

Hinton broth (manufacturer shall be specified

limit by using within 3 serial dilution ( × 23), but

in reports or the like), sterilized distilledactually sometimes it is necessary to establish it
by using within 4 serial dilution ( × 24).
b. Acquisition of quality control strains

water or physiological saline.
(iii) Preparation of antimicrobial-containing agar
mediumforsusceptibility

determination:

The regulations of Japan Collection of

Mueller-Hinton agar medium is dissolved,

Microorganisms (JCM), the Institute of Physicalsterilized and maintained at 48-50 ℃. In use,

and Chemical Research and ATCC prohibit re-ovine defibrinized blood is added at a rate ofendowment of the strains which are endowed

5%. The same procedure as for general bacteria

by those organizations to other organizations.

is used for subsequent preparation.

Therefore, in implementing antimicrobial(iv) Preparation of inoculum: The colonies of thesusceptibility tests, each laboratory shalltest strains which were cultured on Mueller-

purchase the quality control strains directly

Hinton agar plate medium containing 5%

from JCM or ATCC (via domestic agents).

ovine defibrinized blood at 37℃ for 48 hours

c. Storage of quality control strains

or at 42 ℃ for 24 hours under microaerobic

Each quality control strain shall be storedcondition (10% CO2, 5% O2, 85% N2) arewith stabilizer under -60 ℃ or in lyophilized

directly suspended in Mueller-Hinton brothcondition. The stored strains are used afteror sterilized distilled water or physiological

two subcultures on agar plate medium.

saline. The concentration of the inoculum
shall be adjusted to about 1-4 x 108 CFU/mL(2) Special bacteria (bacteria which require
special growth conditions)(equivalent to the McFarland Standard Solution
No. 0.5). The same procedure as for general

The techniques except for items below shall bebacteria is used for subsequent preparation.

complied with 1. Agar dilution method, (1)(v) Inoculation of inoculum onto plates: After the

General bacteria.

inoculum is inoculated onto agar plates incompliance with the inoculation method forI. Actinobacillus pleuropneumoniae and Haemophilus
somnus( i ) Medium for susceptibility determination:
Chocolate agar medium (basic medium is
Mueller-Hinton agar medium).

general bacteria, it is incubated at 35-37℃ for
48 hours under microaerobic condition (10%CO2, 5% O2, 85% N2).
(vi) Quality control: In order to secure accuracy
and precision of antimicrobial susceptibility( ii ) Incubation temperature and period for MIC

tests, Campylobacter jejuni ATCC 33560 (reference

determination: 35℃, 5-7% CO2, 20-24 hours.

strain for C. jejuni) is established as a quality(iii) Quality control: Establishment of quality control

control strain. Quality control limits of thelimit shall be discussed in the future.

antimicrobials against this strain presentedby NCCLS are shown in Table 3.

II. Campylobacter spp.
( i ) Medium for susceptibility determination:
Mueller-Hinton agar medium containing ovine

III. Bacterial pathogens isolated from fishes
Antimicrobial susceptibility of bacterial pathogens

The Determination Method of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of Antimicrobials against Bacteria Isolated from Animals (revision) ／26（2004） 71

isolated from fishes is tested in compliance with 1.

0.05%(w/v) MgSO4・7H2O, 0.05%(w/v) CaCl2・

Agar dilution method, (1) General bacteria except

2H2O, 1.0%(w/v) agar, pH7.2, Sterilization: 121

for the following items. Establishment of quality℃, 15 minutes)

control limits shall be discussed in the future.
( i ) Aeromonas hydrophilaa. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 25℃, 24 hours.
b. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25℃, 24 hours.
( ii ) Aeromonas salmonicida
a. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 20℃, 24 hours.
b. Incubation temperature and period for MIC
determination: 20℃, 24 hours.
(iii) Atypical Aeromonas salmonicida
a. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 25℃, 24 hours.
b. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25℃, 24 hours.
(iv) Edwardsiella tarda
a. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 25-30℃, 24 hours.
b. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25-30℃, 24 hours.
( v ) Flavobacterium columnare (syn. Chondrococcus
columnaris)a. Medium for susceptibility determination:b. Medium for growth: Cytophaga broth or TYE
broth (agar is removed from TYE agar medium)c. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 15-20℃, 96 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC
determination: 15-20℃, 96 hours.
(vii) Flavobacterium branchiophilum
a. Medium for susceptibility determination:
Cytophaga agar medium
b. Medium for growth: Cytophaga brothc. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 15-20℃, 96 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC
determination: 15-20℃, 96 hours.
(viii) Lactococcus garvieae
a. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 25℃, 24 hours.
b. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25℃, 24 hours.
(ix) Mycobacterium sp.
a. Medium for susceptibility determination:
Middlebrook-ADH-enrichment-added
Middlebrook 7H11 agar medium.
b. Mediumforgrowth:Middlebrook-ADH-

Cytophaga agar medium (0.05%(w/v) tryptone,enrichment-added Middlebrook 7H11 broth

0.05%(w/v) yeast extract, 0.05%(w/v) sodium

c. Incubation temperature and period for adjustment

acetate, 0.02%(w/v) beef extract, 1.0%(w/v)
agar, pH7.2-7.4. Sterilization: 12l℃, 15 minutes)
b. Medium for growth: Cytophaga broth (agaris removed from Cytophaga agar medium)c. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 20-25℃, 48 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC
determination: 20-25℃, 48 hours.
(vi) Flavobacterium psychrophilum (syn. Cytophaga
psychrophila)
a. Medium for susceptibility determination:
Cytophaga agar medium or TYE agar medium(0.4%(w/v) tryptone, 0.04%(w/v) yeast extract,of inoculum: 25℃, 144 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25℃, 144 hours.
( x ) Nocardia seriolae
a. Medium for susceptibility determination:
Middlebrook-ADH-enrichment-added Middlebrook
7H11 agar medium.
b. Mediumforgrowth:Middlebrook-ADH-

enrichment-added Middlebrook 7H11 broth.
c. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 25℃, 96 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25℃, 96 hours.

72 動物抗菌会報 26（2004）(xi) Photobacterium damselae subsp. piscicida (Pasteurella
piscicida)a. Medium for susceptibility determination: 2%
NaCl・Mueller-Hinton agar medium
b. Medium for growth: 2% NaCl・Mueller-Hinton
brothc. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 25-30℃, 24-48 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25-30℃, 24-48 hours.
(xii) Pseudomonas spp. (P. fluorescens. P. putida, P.
plecoglossicida, P. anguilliseptica)
a. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum fluid for inoculation: 25 ℃, 24
hours.
b. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25℃, 24 hours.
(xiii) Renibacterium salmoninarum

with more than 30% of sea waterb. Medium for growth: Cytophaga broth or TCY
broth (agar is removed from TCY agar medium)
prepared with more than 30% of sea waterc. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 20-25℃, 48 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC
determination: 20-25℃, 48 hours.
(xvi) Vibiro spp. (V. anguillarum, V. alginolyticus, V.
parahaemolyticus, V. damsela)a. Medium for susceptibility determination: 2%
NaCl・Mueller-Hinton agar medium
b. Medium for growth: 2% NaCl・MuellerHinton brothc. Incubation

temperature

andperiodforadjustment of inoculum: 25℃, 24 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25℃, 24 hours.

a. Medium for susceptibility determination:
KDM-2 agar medium (0.05%(w/v) yeast

2. Broth microdilution method

extract, 0.1%(w/v) L-cystein-HCl, 1.0%(w/v)
tryptone, 20%(v/v) bovine serum, 1.5%(w/v)(1) General bacteria (bacteria which grow inagar, pH7.2. Sterilization: 121℃, 15 minutes)

Mueller-Hinton medium at 35 ℃ underb. Medium for growth: KDM-2 broth

aerobic condition)c. Incubation temperature and period for adjustment

The techniques except for items below shall beof inoculum: 18℃, 24 hours.
d. Incubation temperature and period for MIC

complied with the Standard Method (1) advocatedby NCCLS.

determination: 18℃, 24 hours.
(xiv) Streptococcus iniae
a. Incubation temperature and period for adjustment
of inoculum: 25℃, 24 hours.
b. Incubation temperature and period for MIC
determination: 25℃, 24 hours.
(xv) Tenacibaculum maritimum (syn. Flexibacter
maritimus)
a. Medium for susceptibility determination:

I. Reagents and materials( i ) Medium for susceptibility determination: cationadjusted

Mueller-Hinton

broth(CAMBH)(manufacturer shall be specified in reports or
the like).
Commercially available products (adjusted
to Ca2+: 20-25 mg/L and Mg2+: 10-12.5 mg/L)
shall be used.

Cytophaga agar medium or TCY agar medium

When Mueller-Hinton broth without adjustment(0.1%(w/v) tryptone, 0.1%(w/v) casamino

of Ca2+ and Mg2+ (MHB) (manufacturer shallacids, 0.02%(w/v) yeast extract, 3.13%(w/v)

be specified in reports or the like) is used,

NaCl, 0.07%(w/v) KCl, 1.08%(w/v) MgCl2・

the CaCl2 and MgCl2 solution mentioned

6H2O, 0.1%(w/v) CaCl2・2H2O, 1.0%(w/v) agar,

below are prepared previously, sterilized by

pH7.2. Sterilization: 121℃, 15 minutes) preparedfiltration (membrane filter) and stored at 4℃.

The Determination Method of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of Antimicrobials against Bacteria Isolated from Animals (revision) ／26（2004） 73

5 mL of CaCl2 solution and 2.5 mL of MgCl2(1-2 x 108 CFU/mL). In each cases, 10-foldsolution per 1 L of MHB are mixed to obtain

dilution is conducted with CAMHB to obtainthe medium for susceptibility determination.

culture fluid for inoculation (1-2 x 107 CFU/mL).

CaCl2 solution: 3.68 g of CaCl2・2H2O is(iii) Inoculation of inoculum into broth fordissolved in 100 mL (Ca2+: 10 mg/mL)
MgCl2 solution: 8.36 g of MgCl2・6H2O issusceptibility determination
0.005 mL (5μ L) of inoculum is added to 0.1

dissolved in 100 mL (Mg2+: 10 mg/mL)

mL of the broth for susceptibility determination( ii ) Microplate: sterilized U type 96 well microplate

dispensed in microplates. Therefore, the number(iii) Diluent for stock solution of antimicrobials:of bacteria in each well is about 5 x 104 CFU.

Same as 1. Agar dilution method, (1) General
Bacteria, I. Reagents and materials, (iv)
Concentration adjustment.

(iv) Incubation
After inoculation, plates are incubated at 35℃ for 16 to 20 hours. Ordinarily, incubation
starts within 15 minutes after inoculation.

II. Preparation of antimicrobials( v ) Determination of end point

Preparation of antimicrobials is conducted in

The lowest concentration of an antimicrobial

the same manner described in 1. Agar dilution

which macroscopically inhibits the growth of

method, (1) General bacteria, II. Preparation of

the bacterium in the medium containing it

antimicrobials.

completely compared to that in the control
medium is considered to be end point and theIII. Determination of MIC( i ) Preparation of antimicrobial-containing brothfor susceptibility determination

concentration is regarded as MIC.
(vi) Quality control
Quality control is implemented in the same

According to an example of dilution methodmanner described in 1. Agar dilution method,

indicated in table 2, 1,280μg/mL stock solution(1) General bacteria, III. Determination ofof microbial is diluted with CAMHB to

MIC, (vi) Quality control.

prepare 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25,
0.12 and 0.06μg/mL solution (more than three(2) Special bacteria (bacteria which requireconsecutive dilution shall not be conducted).

special growth conditions)

These are antimicrobial-containing broth for

The techniques except for items below shall besusceptibility determination. 0.1 ± 0.02 mL of

conducted in compliance with 2. Broth microdilution

these broth for susceptibility determination ismethod, (1) General bacteria.

dispensed into each well of microplates.
The broth for susceptibility determination
is prepared on the day of tests. If it is not
used on the day, it shall be stored at 4℃ or in
ice water.
( ii ) Preparation of inoculum
Bacteria is augmented to the turbidity of

I. Actinobacillus pleuropneumoniae and Haemophilus
somnus( i ) Medium for susceptibility determination:
VFM medium (Veterinary Fastidious Medium)
containing the following components per 1 L
of it.

the McFarland Standard Solution No. 0.5 with

CAMHB

22 g

MHB or adjusted to the turbidity of the

Beef extract

3g

McFarland Standard Solution No. 0.5 withAcid hydrolysis casein

17.5 gfreshly cultured bacteria on agar plate medium

Starch1.5 g

74 動物抗菌会報 26（2004）

Yeas extract

20 g

Equine hemolyzed blood*

20 mL

Supplement C (Difco)

20 mL

method with VFM are shown in Table 3.

References* Preparation method of equine hemolyzed blood:

After freezing and thawing of equine blood is１）National Committee for Clinical Laboratory

repeated three times (frozen temperature: -20℃

Standards, NCCLS document M31-A2, 22(6)or under), it is centrifuged at 3,000 x g for 20(2002)

minutes and the supernatant is used as theequine hemolyzed blood.
( ii ) Preparation of inoculum: The culture collected２）Proceeding of the Japanese Society of
Antimicrobials for Animals, 18, 40-41 (1997)
３）Proceeding of the Japanese Society of

directly from the agar plate incubated overnight

Antimicrobials for Animals, 18, 51-52 (1997)(20-24 hours) is adjusted to the turbidity of４）Proceeding of the Japanese Society of

the McFarland Standard Solution No. 0.5 with

Antimicrobials for Animals, 18, 52 (1997)

sterilized CAMHB or distilled water or 0.9%５）Proceeding of the Japanese Society ofsaline. This is the inoculum. Attention should be

Antimicrobials for Animals, 18, 52-53 (1997)

paid for viscous Actinobacillus pleuropneumoniae６）Proceeding of the Japanese Society ofas it may be difficult to adjust the number ofbacteria.
(iii) Incubation: 35℃, 5-7% CO2, 20-24 hours.
(iv) Quality control strain: The quality control limits

Antimicrobials for Animals, 18, 53 (1997)
７）Proceeding of the Japanese Society of
Antimicrobials for Animals, 18, 53-54 (1997)８）Proceeding of the Japanese Society ofof MIC (μg/mL) of quality control strains, A.

Antimicrobials for Animals, 18, 54 (1997)

pleuropneumoniae ATCC 27090 and Haemophilus９）Proceeding of the Japanese Society ofsomnus ATCC 700025 with the broth microdilution

Antimicrobials for Animals, 19, 45 (1998)

会務報告／26（2004） 75

会

務

報

告

４）平成 15 年度定期総会の開催

１．平成 16 年度定期総会の報告

平成 15 年 4 月 26 日（土）に開催した。

平成 16 年度定期総会は，平成 16 年 4 月 24 日

５）第 30 回シンポジウムの開催（上記定期総会（土）午前 10 時から日本獣医畜産大学動物医療センター C-502 講義室において，後述の第 31 回シン

に引き続き開催）
特別講演として，農林水産省動物医薬品検ポジウムに先立って行われた。
最初に小久江栄一理事長から挨拶の後，恒例に査所の遠藤裕子先生に「動物用医薬品の環境

従って同氏が議長となり，執行部から提出された影響評価」と題して，化学物質および動物用

以下の各議案について審議が行われた。

医薬品有効成分の環境影響評価について解（1） 平成 15 年度事業報告

説，世界の現状について説明いただいた。次
いで，「抗菌性飼料添加物を巡る世界情勢と年度内に次の事業が実施されたことの報告がな

わが国の取組み」と題するシンポジウムで農された。
１）会報第 25 号（90 頁）を発行・配布した。

林水産省動物医薬品検査所の田村豊先生に動物由来細菌に対する抗菌性物質の最小発「抗菌性飼料添加物に対する世界の規制動向」

育阻止濃度（MIC）測定法の掲載（動物用抗を，日本イーライリリー（株）の福本一夫先

菌剤研究会 2003 年改定標準法）。

生に「ヨーロッパにおける抗菌性飼料添加物

２）創立 30 周年記念号を会報 25 号増刊号とし禁止後の影響」を，（社）日本科学飼料協会の
米持千里先生に「日本における抗菌性飼料添て発行・配布した。
回想録，特別寄稿，今までの事業概要，歴加物の役割と課題」を，（社）日本薬事協会の代理事，賛助会員名簿，会員名簿等を記載した。

大島３）動物用抗菌剤研究会公式ホームページの開慧先生に「米国における動物用抗菌剤の公衆衛生に対するリスク評価の考え方」に設ついて講演していただいた。これらの内容の要旨を会報 25 号に掲載した。

下記のホームページを開設した。

６）30 周年記念祝賀会の開催
上記シンポジウム終了後，日本獣医畜産大学において本会設立 30 周年記念祝賀会を開催した。
７）事業報告MIC 測定法標準化検討事業①

委員会（江口委員長，甲斐，田村，桑野，高橋，廣野，片岡各委員，アドバイザー：
田村）
委員会原案を平成 15 年 6 月 21 日の第 4
動物用抗菌剤研究会公式 HP アドレス（URL）：

回委員会で決定し，原案に対する行政関係

http://www.jantianim.jp/

部局担当者，各理事及び関係企業，団体などの意見等は同年 9 月 6 日に開催した第 5

動物用抗菌剤研究会公式メールアドレス：
info@jantianim.jp

回委員会で検討し，動物用抗菌剤研究会報
75

76 動物抗菌会報 26（2004）（2003 年，第 25 号，47-72 頁）に「動物由ii．人の臨床試験ガイドラインについ来細菌に対する抗菌性物質の最小発育阻止て濃度（MIC）の測定法」を掲載した。
②

iii．小動物の臨床試験実施基準作成の出版事業ための具体案
第 2 回委員会

委員会（田村委員長，内田，江口，大島，桑野，小久江，澤田，高橋各委員）

i．文献整理動物用抗菌剤研究会編「動物用抗菌剤マii．臨床評価における問題点

ニュアル」として，平成 16 年 4 月 12 日にiii．皮膚感染症の定義，臨床的評価基（株）インターズーから発行した。
③

準，耐性菌問題
第 3 回委員会

犬および猫における抗菌剤の使用実態調
査事業

i．犬の細菌性膿皮症に対する臨床試委員会（片岡委員長，左向，内田，熊井各委員，アドバイザー：内野）
第 3 回委員会を平成 16 年 3 月 8 日に開催
し，以下の事項について検討した。
i．抗菌剤使用状況に関するアンケートの内容
ii．アンケート実施動物病院リストの作
成（2） 平成 15 年度収支決算報告
別表 1 のとおり決算報告があり，引き続き監査報告が行われた。
以上 2 議案が一括審議され可決・承認された。
（3）平成 16 年度事業計画
基本方針として，動物（魚類を含む）における化学療法の基礎及び応用面に関する問題点ならび現在，アンケート結果の集計作業を行っている。
④

験ガイドライン魚類用抗菌剤耐性菌と公衆衛生の検討事
業に動物の耐性菌に関する問題点を取り上げるとともに，薬剤感受性試験方法の国際標準化並びに抗菌剤ごとの耐性限界値の制定を行う。併せて，会の事業拡大と会員の増加を計ることが提案され委員会（青木委員長，畑井，廣野各委員）た。

i．魚類病原菌，Pasteurella piscicida 由来

平成 16 年度の事業計画として，上記の平成 15の薬剤耐性プラスミドの全ゲノム解析

年度事業をほぼ承継・発展させる考えから，下記を行った。

の事項が提案された。

ii．マイクロアレイを用いた魚類病原菌の薬剤耐性株の迅速検出法の開発を

１）抗菌性物質および耐性菌に対する技術・知識の普及
会報第 26 号を発行・配布する。

行った。
⑤

小動物における臨床試験評価基準の検討
事業２）犬および猫における抗菌剤の使用実態調査
事業委員会（岩崎委員長，深田，浅井，澤田，
桑野，内田，中田，片岡各委員）
第 1 回委員会を平成 15 年 9 月 27 日に，
第 2 回委員会を平成 15 年 12 月 26 日に，第3 回委員会を平成 16 年 4 月 1 日に開催し，
以下の事項について検討した。
第 1 回委員会

３）魚類用抗菌剤耐性菌と公衆衛生の検討事業
４）小動物における臨床試験評価基準の検討事
業５）新規事業第 1 回日本獣医内科学アカデミー総会への参加
動物用抗菌剤研究会として教育講演を開催

i．臨床試験実施基準（牛，豚）およびする。

動物用ワクチン臨床試験ガイドライ

日

ンについて

程：平成 16 年 8 月 8 日（日）15：45 〜 16：30

会務報告／26（2004） 77

第 4 会場

場

所：都市センターホテル

演

題：「小動物における抗菌剤の使用と耐性菌」

６）平成 16 年度定期総会の開催（4） 平成 16 年度事業計画
別表 2 の予算案が執行部から提出され，補足説明が行われた。
上記 2 議案を一括審議のうえ，承認・可決されまず，特別講演として，国立感染症研究所の渡辺治雄先生に「FAO/OIE/WHO 合同ヒト以外の抗菌性物質の使用と薬剤耐性に関する専門家会議の概要」について講演いただき，国際機関における直近の検討概況を紹介いただいた。
続いて，シンポジウムでは「新規に開発された
産業動物用抗菌性物質の基礎と応用」をテーマとして，
武田シェリング・プラウアニマルヘルス（株）た。

の井上喜久治先生に「トビシリン」を，三鷹製薬（5） その他（株）の渡辺典夫先生に「セフキノム」を，ファ理事の追加として高橋敏雄氏（農林水産省動物医薬品検査所）が提案され，承認された。

イザー製薬（株）の岩隈昭裕先生に「セフチオフ
ル」を，大日本製薬（株）の松本修治先生に「ジフロキサシン」を，ノバルティス・アニマルヘル

２．第 31 回シンポジウムの開催

ス（株）の梶原敬太先生に「バルネムリン」につ

上記の総会に引き続き，4 月 24 日（土）午前 10

いて講演いただき，各製剤の特徴，効能効果，適時 30 分から同講義室において，第 31 回シンポジ

正使用等について紹介いただいた。このシンポジウムが行われた。

ウムの内容は本号に特集として掲載されている。

78 動物抗菌会報 26（2004）

（別表１）
収入の部
科

平 成１
５年 度 収 支 決 算 書
目

予算額

個 人 会 費賛 助 会 費
繰
越
金
雑
収
入
合

比較増減

決算額

増

513,000
468,000
540,000
510,000
1,684,538 1,684,538
200,000
208,010

計2,937,538 2,870,548

目

予算額

備

減

考

45,000 3,000 × 156 名分
30,000 10,000 × 51 口分
シンポジウム，会報資料販売

8,010
66,990

支出の部
比較増減
科

決算額

備
増

事

務

費
当
費
費
費
費
費

200,000
50,00015,00040,00025,00060,00010,000159,767
38,8003,000
24,3403,727
89,900
0

会 議 費
総
会
費
役 員 会 議 費
専門部会会議費

475,000
200,000
75,000200,000

247,984
200,000
47,9840

227,016

1,670,000
40,000300,000
650,000
20,000650,000
10,000935,987
4,080
230,754382,2980318,8550734,01235,92069,246
267,702
20,000331,145
100,000

費392,5380

392,538

特別事業等積立金

200,000

200,000

事
印
通
消
交
雑

務

手
刷
信

耗

品
通

事

業 費
資 料 配 布 費
講 演 会 費会 報 発 行 費
資 料 収 集 費
他 の 事 業 費
雑
費

予

備

小
計
次年度繰越
合

計

考

減
40,233
11,20012,00015,66021,27329,90010,00027,016200,000

1,543,738
1,326,810
2,937,538 2,870,548

66,990繰越金 1,326,810 東京三菱銀行普通預金 967,709
郵便貯金
326,578
特別事業等積立金 東京三菱銀行普通預金 200,000
監査の結果，以上の通り相違ありません
平成 16 年 4 月 10 日

郵便振替
現金

0
32,523

印
監事 小野浩臣 ○印
監事 佐藤静夫 ○会務報告／26（2004） 79

（別表２）
収入の部
科

平 成１
６年 度 収 支 予 算 書
目

個 人 会 費賛 助 会 費
繰
越
金
雑
収
入
合

平成１６年度 平成１５年度
予算額
予算額
489,000
513,000
550,000
540,000
1,326,810 1,684,538
200,000
200,000

計2,565,810 2,937,538目

平成１６年度 平成１５年度
予算額
予算額

比較増減
増

備

減
24,00010,000考3,000 × 163 名分
10,000 × 55 口分（25 会員）

357,728
シンポジウム（70 ＋ 20 名）
371,728

支出の部

科

事

務 費
事 務 手 当印
刷費
通信費
消 耗 品 費交通費H P 維 持 費
雑
費

会

議 費
総
会
費
役 員 会 議 費
専門部会会議費

事

業 費
資 料 配 布 費
講 演 会 費会 報 発 行 費
資 料 収 集 費
調 査 事 業 費
雑
費

予

備

240,000
50,00015,00040,00025,00060,00040,00010,000200,000
50,00015,00040,00025,00060,0000
10,000

325,000
50,00075,000200,000

475,000
200,000
75,000200,000

1,470,000 1,670,000
40,00040,000300,000
300,000
650,000
650,000
20,00020,000450,000
650,000
10,00010,000

費

330,810392,538

特別事業等
積立金支出

200,000

200,000

合計2,565,810 2,937,538

比較増減
備
増

考

減

40,000
印刷代，コピー代
切手代，はがき代
事務用品
通勤費，都内交通費
プロバイダー料金等

40,000150,000
150,000 総会資料印刷代
会場使用量，交通費等
会場使用料，交通費等200,000
封筒印刷代，タックシール代
謝礼，要旨印刷等
編集・印刷費，送料等
文献・資料収集費
200,000 新規事業費を含む
61,728
特別事業等
371,728

80 動物抗菌会報 26（2004）

役員及び所属

（任期 平成 15 年 4 月〜平成 18 年 3 月）

顧

問

柴田

顧

問

高橋

重孝 （麻布大学名誉教授）
勇 （日本獣医畜産大学名誉教授）

顧

問

鈴木

昭 （元北里大学）

理

事

熊谷

進 （東京大学大学院農学生
命科学研究科獣医公衆衛生学講座）

理事長

小久江栄一 （東京農工大学農学部家

副理事長

澤田

理

事

桑野

昭 （第一製薬（株）東京研究

理

事

阪野

哲也 （
（株）科学飼料研究所）

開発センター）

畜薬理学教室）拓士 （日本獣医畜産大学獣医学部獣医微生物学教室）
事務担当理事片岡

康 （日本獣医畜産大学獣医学部獣医微生物学教室）

理

事

桜井

健一 （埼玉県熊谷家畜保健衛生所）

理

事

左向

敏紀 （日本獣医畜産大学獣医学部獣医内科学教室）

理

事

神保

勝彦 （東京都健康安全研究セ
ンター）

監

事

小野

浩臣 （元日本獣医畜産大学）

監

事

佐藤

靜夫 （（株）科学飼料研究所）

理

事

青木

宙 （東京海洋大学資源育成

理事

五十君靜信 （国立医薬品食品衛生研

理

事

高橋

雄二 （（財）畜産生物科学安全研究所）

究所食品衛生管理部）

理

事

田村

豊 （酪農学園大学獣医学部

理

事

内田

幸治 （ファイザー（株）農産事業部）

理

事

江口

正志 （（独）動物衛生研究所 疫

理

事

＊高橋

敏雄 （農林水産省動物医薬品
検査所検査第二部抗生物質製剤検査室）

学専攻遺伝生化学講座）

獣医公衆衛生学教室）
理

事

中田

学研究部）

勝久 （大日本製薬（株）アニマ
ルサイエンス部研究所）

理

事

岡野

圭介 （武田シェリング・プラウ

理

事

貝塚

理

事

加地

理

事

中村

一郎 （（社）日本動物用医薬品協会）

理事

野沢雄一郎 （神奈川県食肉衛生検査所）

祥文 （厚生労働省健康局結核感染理事

畑井喜司雄 （日本獣医畜産大学獣医

アニマルヘルス（株））

政幸 （北里大学獣医畜産学部
家禽疾病学教室）症課感染症情報管理室）

学部魚病学教室）

理事

金井久 （群馬県中部家畜保健衛生所）

理

事

金子

一幸 （麻布大学獣医学部臨床
繁殖学研究室）理事

八木澤守正 （（財）日本抗生物質学術協議会）

理

事

鎌田

寛 （日本大学生物資源科学部

理

事

山根

理

事

福安

嗣昭 （麻布大学獣医学部衛生学第二研究室）

獣医微生物学研究室）＊：新任理事義久 （東京農工大学農学部獣医外科学教室）会務報告／26（2004） 81

賛助

旭ヴェット株式会社 製造部研究課〒 059-0913 北海道白老郡白老町緑町 724-1

会員
ノバルティス アニマルヘルス株式会社〒 105-6137 東京都港区浜松町 2-4-1
世界貿易センタービル 37 階

株式会社科学飼料研究所〒 101-0047 東京都千代田区内神田 2-1-2
第 5 中央ビル

バイエル・メディカル株式会社〒 108-0074 東京都港区高輪 4-10-8

共立製薬株式会社 薬事事業部〒 102-0073 東京都千代田区九段北 1-12-4
徳海屋ビル 1F

ファイザー株式会社 農産開発部〒 160-0490 東京都新宿区西新宿 2-1-1
新宿三井ビル私書箱 226

コーキン化学株式会社 開発部〒 579-8014 大阪府東大阪市中石切町 3-7-49

フォート・ダッジ株式会社〒 104-0031 東京都中央区京橋 1-10-3
服部ビル 9F

三共エール薬品株式会社〒 101-0111 東京都千代田区神田佐久間町 4-20
三共神田佐久間町ビル 5 階
三共ライフテック株式会社〒 113-0033 東京都文京区本郷 4-23-14
武田シェリング・プラウ アニマルヘルス株式会社
事業企画本部マーケティング部〒 102-0075 東京都千代田区三番町 5-7
第一製薬株式会社 特薬マーケッティング部〒 104-8369 東京都中央区京橋 2-16-1
京橋清水ビル
大日本製薬株式会社 動物薬品部〒 541-0045 大阪市中央区道修町 2-6-8
日本イーライリリー株式会社
エランコアニマルヘルス事業部〒 651-0086 兵庫県神戸市中央区磯上通 7-1-5
三宮プラザビル
日本全薬工業株式会社〒 963-0196 福島県郡山市安積町笹川字平ノ上 1-1

フジタ製薬株式会社 東京研究所臨床センター〒 193-0942 東京都八王子市椚田町 1211
ベーリンガーインゲルハイム
シオノギベトメディカ株式会社 開発事業部〒 666-0193 兵庫県川西市矢問 3-10-1
川崎三鷹製薬株式会社〒 210-0818 神奈川県川崎市川崎区中瀬 3-19-11
明治製菓株式会社 動薬飼料部開発グループ〒 104-0031 東京都中央区京橋 2-4-16
全農飼料畜産中央研究所〒 300-4204 茨城県つくば市作谷 1708-2
全農家畜衛生研究所〒 285-0043 千葉県佐倉市大蛇町 7（財）日本抗生物質学術協議会〒 141-0032 東京都品川区上大崎 2-20-8（社）日本動物用医薬品協会〒 103-0023 東京都中央区日本橋本町 4-6-10
サトービル 6F

82 動物抗菌会報 26（2004）

会員の拡充・投稿論文募集のお願い
会員の拡充については毎年お願いしているとこで，本会の活動をより活発なものとするたころではあります。これまでのところ本会々員

め，各会員の周辺におられる方々に積極的に入の内訳をみると，家畜衛生や公衆衛生関係の官会を呼びかけて下さい。

公庁，製薬や飼料会社の勤務獣医師が大半で，

また，会報のさらなる充実を図るため，本臨床関係者や水産関係者はあまり多くありませ研究会の主旨に合致した研究論文の投稿を広ん。

く受け付けております。会報 25 号増刊号（創近年，本会では薬剤耐性菌問題や抗菌剤の適立 30 周 年 記 念 号）お よ び 本 会 ホ ー ム ペ ー ジ

正使用に係わる内容に重点をおいた運営を行っ（http://www.jantianim.jp/）に投稿規程を掲載ています。特に，重要な課題については専門家

しておりますので，積極的な投稿をお願い致しによる委員会を設置し，検討を重ねております。

ます。

今まで以上に牛，豚，鶏のみならず小動物の臨

入会希望者は，本会ホームページ（http://

床獣医師にも役立つ抗菌剤の適正使用に関する

www.jantianim.jp/）の入会フォームまたは葉書情報の提供ができると考えています。また，水に住所（会報等発送先），氏名，年齢，勤務先名産・魚病関係における抗菌剤の使用，残留や耐を明記し，本会事務局に連絡下さい。（年会費性菌に対する関心も高まっており，本会もこれ3,000 円）ら分野への事業の拡充を計りつつあります。そ動物用抗菌剤研究会報 第２６号
2004 年 12 月 28 日 発

行

動

抗

発行所

物

用

〒180−8602

菌

剤

研

究

会

東京都武蔵野市境南町 1 − 7 − 1

日本獣医畜産大学獣医微生物学教室
電話0422−31−4151（内線253〜255）

FAX

0422−31−4560

HPアドレス（URL）：http://www.jantianim.jp/
メールアドレス：info@jantianim.jp
振替発行者

00140−0−145535

小久江栄一

編集委員 阪野哲也，桜井健一，金子一幸，鎌田 寛
査読委員 澤田拓士，高橋敏雄，片岡

製 作

佐藤印刷`

〒305-0051

康

茨城県つくば市二の宮 4 −4 −2 1