18 動物抗菌会報 29（2007）

乳房炎起因菌の薬剤耐性化の現状とバンコマイシン耐性腸球菌（VRE），基質拡張型β-lactamases（ESBLs）産生菌，
Metallo- β-lactamase（MBL）産生菌，
多剤耐性緑膿菌（MDRP）の分離状況
大西守

根室地区 NOSAI 検査室（〒 086-1105 北海道標津郡中標津町西 5 条南 11 丁目 5 番地）

近年，根室地方における乳牛の乳房炎起因菌のの薬剤耐性と，これらの菌種での MBL 産生菌，

うち，腸球菌や腸内細菌群で薬剤耐性化が進行し

MDRP，extended spectrum β-lactamases（ESBLs）

つつある。また，国内のヒトやニワトリ，ウシな産生菌，VRE の分離状況に関する著者らの研究

どの家畜から，欧州でのアボパルシンの飼料添と，乳牛における多剤耐性菌の今後の展望を述べ

加が原因となり鶏由来とされるバンコマイシン

る。

耐性腸球菌（VRE）［9，12］や，日本，極東，欧１．供試菌株と細菌検査法

州，南米で広まっている CTX-M 型のβ-lactamase（BL）を 産 生 す る Escherichia coli，Klebsiella

１）供試菌株pneumoniae が分離されている［15，16，21］。この型の BL は Kluyvera 属菌が保有する染色体性ク2005 年 9 月〜 2007 年 8 月に根室支庁全域の乳牛

ラス A の BL に酷似していて，
セフタジジム（CAZ）の 主 に 臨 床 型 乳 房 炎 乳 汁 か ら 分 離 さ れ た P.

よ り セ フ ォ タ キ シ ム（CTX），セ フ ポ ド キ シ ム

aeruginosa 200 株，S. marcescens 64 株，耐性 E.coli（CPDX）を効率よく分解する。

（アンピシリン（ABPC），オキシテトラサイク

ま た，新 た な 院 内 感 染 菌 と し て Pseudomonas

リン（OTC），スルファメトキサゾール・トリ

aeruginosa，Serratia marcescens などで，イミペネ

メトプリム（ST）の 3 剤以上に耐性）28 株，K.

ム（IMP）などのカルバペネム系（CAPMs）を分

pneumoniae 14 株，Klebsiella ozaenae 1 株 お よ び

解する IMP-1 型の metallo- β-lactamase（MBL）

耐性 E. faecium（ベンジルペニシリン（PCG），

産生菌［1，2］や，CAPMs に加え，アミノグリ

ABPC の 2 剤以上に耐性）9 株を供試した。

コシド系（AGs），フルオロキノロン系（FQs）のまた，診療カルテから臨床症状と予後を調査し

3 系 統 の 抗 菌 剤 に 耐 性 を 示 す Multiple-drug-

た。

resistant Pseudomonas aeruginosa（MDRP）が 出
現し問題化している［2，6］。これらの多剤耐性菌

２）採材と細菌培養
消毒液に浸したタオルとアルコール綿で乳頭，はプラスミド媒介性に耐性遺伝子を接合伝達する

乳頭口を清拭し，雑菌が入らないように乳汁を採と共に，動物にも感染する可能性がある。
本稿では乳房炎起因菌のうち多剤耐性傾向が取 し た。乳 汁 25 μl を 5％ 羊 血 液 加 寒 天 培 地

み ら れ る P. aeruginosa，S. marcescens，E. coli，K.

（BBL）の 1/4 区画に，10 μl をマンニット食塩

pneumoniae および Enterococcus faecium の 5 菌種培地（栄研化学）の 1/8 区画に綿棒を用いて塗布18大西守／乳房炎起因菌の薬剤耐性と多剤耐性菌の分離状況／29（2007） 19

し，35 ± 2℃ で 18 〜 42 時間，好気培養した。

度に生理食塩液を用いて調整した菌液 50 μl を３）起因菌の有意菌数種・撹拌し，オプトパネル（極東製薬）に 100 μl

12ml の Mueller-Hinton ブ ロ ス（極 東 製 薬）に 接
乳汁約 25 μl 中の P. aeruginosa と E. faecium はず つ 分 注 し，20 時 間 培 養 後 に 判 定 し た［7］。P.

菌数が≧ 30 個なら 2 菌種発育しても有意，≧ 10 〜

aeruginosa，S. marcescens，E. coli，K. pneumoniae

30 個なら純培養的に発育したものを有意とした。

および K. ozaenae には 12 剤 8 濃度で MIC を測定

S. marcescens，E. coli および K. pneumoniae は≧ 10

し，E. faecium には自家製 MIC パネル（15 剤 12

個で純培養的に発育したものを有意と判定した濃度）を用いた。判定は両方法とも CLSI の動物［19］。

用 M31-A2 と M100-S16 のブレイクポイントに準
拠した。

４）同定法
腸球菌はカタラーゼ陰性，食塩抵抗性（弱＋），７）高度耐性菌のスクリーニング検査・確認検査

ピロロリドニルアリルアミダーゼ（PYR）試験（1）MBL：IMP の MIC が≧ 8 μ g/ml をスクリー（関東化学）陽性株から，胆汁エスクリン寒天培

ニング陽性とした。

地（BBL）でエスクリン加水分解陽性集落を分離（2）ダブルディスクシナジーテスト（DDST）：2

し，ラピッド ID32 ストレップアピ（日本ビオメ

枚の CAZ ディスクを 3cm 以上離して置き， 一方リュー）を用いて同定した。

のディスクの中心から中心までの間隔が 1.5 〜

E. coli は灰色集落，K. pneumoniae は灰白粘調

2cm になるように置かれたメルカプト酢酸ナトリ

性の集落，S. marcescens は桃色〜赤褐色の集落でウム（SMA）ディスク（栄研化学）とを結ぶ軸とオキシダーゼ陰性の株を ID テスト EB20（日水製

垂直方向に CAZ の阻止円が 5mm 以上拡大したも薬）を用いて同定した。

のを IMP-1 型 MBL 陽性と判定した［2，3］。

P. aeruginosa はβ溶血緑灰色集落でオキシダー（3）MDRP：MIC が IMP ≧ 16 μg/ml，ア ミ カ

ゼ陽性株を ID テスト NF18（日水製薬）を用いてシン（AMK）≧ 32 μg/ml，シプロフロキサシン

同定した。

（CPFX）≧ 4 μg/ml の全条件を満たすものを
MDRP と判定した［2］。

５）O 抗原血清型別試験
P. aeruginosa と S. marcescens については，それ（4）ESBLs 検査：E. coli および K. pneumoniae について，CLSI 基準に従い阻止円直径が CAZ ≦ぞれの O 群型別免疫血清（デンカ生研）を用いて22mm，CTX ≦ 27mm，CPDX ≦ 17mm の 場 合型別した。

ESBLs 産生を疑い，確認検査において CAZ，CTX，
CPDX ディスクのいずれかの阻止円直径よりも，

６）薬剤感受性検査

クラブラン酸（CVA）添加ディスク（栄研化学）（1）ディスク拡散法（CLSI 標準法）
：McFarlandの直径が 5mm 以上拡大したものを陽性とした［7，

No.0.5 の標準液（栄研化学）と同じ濁度に生理食

24］。また，発色性 cephalosporin・HMRZ-86 を基塩液を用いて調整した菌液を綿棒に適量採取し，質とするシカβⅠテスト（関東化学）で試験紙がMueller-Hinton Ⅱ寒天培地（BBL）に 3 重に全面

黄色から赤褐色に変化した株を ESBLs，MBL，プ

塗布し，SN ディスク（日水製薬）を置き，18 時間

ラスミド性 AmpC β-lactamase（AmpC BL）のい

培養後に判定した［7］。なお，E. faecium には羊血

ずれかが陽性と判定した［10］。

液加 Mueller-Hinton Ⅱ寒天培地（極東製薬）を用（5）VRE：PCR 法により Kariyama ら［13］のプいた。グラム陰性の 4 菌種は 19 剤（表 1，2，4，

ライマーを用い，VanA，B，C，C2/C3 を検査し5），E. faecium は 21 剤（表 3）について検査した。

た。

（2）微量液体希釈法（CLSI 標準法）
：McFarland
No.0.5（吸 光 度 波 長 530nm）：0.08 〜 0.1）の 濁

20 動物抗菌会報 29（2007）

２．P. aeruginosa の薬剤耐性

し て い た。PCs，第 一，第 二 世 代 セ フ ェ ム 系（CEPs），グリコペプチド系（GPs）に対する自本菌は発熱を伴う（甚）急性乳房炎を起こし，然耐性である。第一，第二世代 CEPs に対する耐症状はしばしば重症であり，慢性化しやすく，予性は，シカβⅠテストを行った 200 株は全て陰性

後は必ずしも良くなかった。発生は散発的であっであり，染色体性の誘導型 AmpC BL の産生によた が，特 定 の 農 場 で 多 発 し た。検 査 頭 数 中 のるものと考えられた。ESBLs 確認検査では 200 株

0.5％から分離された。

中 188 株で CTX の阻止円直径が CVA 添加により

P. aeruginosa の耐性菌の出現率を表 1 に示した。

9mm 以上縮小した。これは，CVA は AmpC BL を

MIC を測定した全株とも IMP が＜ 8 μg/ml であ誘導しやすく，AmpC BL が CVA などの BL 阻害

り，ディスク検査を行った全株も IMP に対し感受薬に耐性であるためであることが知られている性であったことから，全株がスクリーニング検査［24］。またクロラムフェニコール（CP），ST，カ

で MBL 陰性と判定された。また，全株が DDST

ナマイ（KM）および OTC に対しても耐性率が高で MBL 陰性であった。

く，これは能動排出ポンプなどの耐性機構による

また，AMK，CPFX に対して，MIC を測定したと考えられた［2］。

全株とも MDRP の基準値以下であり，ディスク

抗緑膿菌薬剤である AGs，CAPMs，FQs におい検査を行った 100 株中 99 株が感受性，1 株が中間てゲンタマイシン（GM）耐性が 1 株みられたのであり，全株とも MDRP ではないと判定された。

みであり，これらの薬剤に対する獲得耐性化がみ

P. aeruginosa の薬剤感受性は一定の耐性型を示られなかった。これは農業共済制度では抗緑膿菌

表 1 Pseudomonas aeruginosa における耐性菌の出現状況
薬剤
ABPC
CEZ
CEPR
CXM
KM
OTC
CP
ST
GM
ABK
AMK
IMP
ERFX
CPFX
LVFX
VCM
TEIC
CAZ
CTX
CPDX

微量液体希釈法

ディスク拡散法

供試株数

耐性株数（％）

供試株数

耐性株数（％）

100
100
0
100
100
100
100
100
100
0
100
100
100
100
0
0
0
0
0
0

100（100）
100（100）

100
100
200
100
100
100
100
100
100
200
100
100
0
100
200
200
200
200
200
200

100（100）
100（100）
200（100）
100（100）
99（ 99）99（ 99）98（ 98）96（ 96）01（ 0.5）00100（100）
91（ 91）88（ 88）100（100）
97（ 97）
1（ 1）
0
0
4（
0

4）

0
0
200（100）
200（100）
0
11（ 5.5）200（100）

ABPC：アンピシリン，CEZ：セファゾリン，CEPR：セファピリン，CXM：セフロキシム，KM：カナマ
イシン，OTC：オキシテトラサイクリン，CP：クロラムフェニコール，ST：スルファメトキサゾール・
トリメトプリム，GM：ゲンタマイシン，ABK：アルベカシン，AMK：アミカシン，IMP：イミペネム，
ERFX：エンロフロキサシン，CPFX：シプロフロキサシン，LVFX：レボフロキサシン，VCM：バンコマ
イシン，TEIC：テイコプラニン，CAZ：セフタジジム，CTX：セフォタキシム，CPDX：セフポドキシム

大西守／乳房炎起因菌の薬剤耐性と多剤耐性菌の分離状況／29（2007） 21

薬剤として AGs，CAPMs および FQs の使用が認

試験期間中に，根室地区で初めて P. aeruginosa

可されておらず，P. aeruginosa 性乳房炎で使用さ性乳房炎の集団感染が 1 農場で発生し，搾乳パーれたのは GM の適応外使用だけであることによる

ラー内の環境材料，飲水槽，治療後の慢性感染牛と考えられる。

を搾乳後のミルカーおよび非臨床型乳房炎乳汁かO 血清型は 200 株中，OG：77 株（38.5％），OA：

ら同じ血清型の P. aeruginosa が分離された。この35 株（17.5％）OB：20 株（10％），OI：16 株

事例は治療後の多数の慢性感染分房が感染源と，OE：8 株（4％），OK（8％），OF：9 株（4.5％）

なって牛群内の保菌圧が高まり，ミルカーを介し，と OC 各 7 株（各 3.5％），OD：1 株（0.5％）て伝染したもので，粗飼料の品質の低下による免，型別不能：19 株
OE・OF 複合型：1 株（0.5％）

疫能の低下も宿主側の危険因子となった。米国で（9.5％）であった。このうち後述の 1 農場からも搾乳パーラー内の乳房洗浄用の水，ホース類のOG：51 株，OA と OC 各 5 株，OI：3 株，その他

P. aeruginosa 汚染によるアウトブレイクが起きてOB，OK など計 73 株が分離された。1972 年に全いる［8，14］。

国の牛乳房炎乳汁から分離された P. aeruginosa

３．Serratia marcescens，Enterococcus
faecium の薬剤耐性

144 株の O 血清型は，Honma の分類の O6（現在の OF に相当する），O8(OG)，O1(OA) が多く，次
いで O10(OI)，O4(OD)，O5(OE)，O2(OB)，O3(OC)が多かった［20］。今回の成績では OF が少なかっ

S. marcescens による乳房炎は軽症であったが，たが，OG，OA が多い点や分離株の O 血清型の種慢性化し再発しやすく，予後は必ずしも良くな類はほぼ一致していたことから，牛由来分離株のかった。発生は散発的で，本菌の分離率は検査頭

O 血清型の種類は比較的決まっているものと推測

数の 0.13％と低率であった。感染源は汚染した水された。ヒトでも OE，OG，OA，OI が多く［18］，や敷料のオガ屑であるとされている［4］。
S. marcescens の耐性菌の出現率を表 2 に示し

牛分離株と似ている。

表 2 Serratia marcescens における耐性菌の出現状況
薬剤
ABPC
CEZ
CEP Ｒ
CXM
KM
OTC
CP
ST
GM
ABK
AMK
IMP
ERFX
CPFX
LVFX
VCM
TEIC
CAZ
CTX
CPDX

微量液体希釈法
供試株数
50
50
0
50
50
50
50
50
50
0
50
50
50
50
0
0
0
0
0
0

ディスク拡散法

耐性株数（％）48（ 96）50（100）50（100）1（ 2）50（100）5（ 10）
0
0
0
0
0
0

供試株数

耐性株数（％）

14
14
62
14
6
14
14
14
14
64
14
14
0
14
64
59
59
64
64
64

14（100）14（100）62（100）10（71.4）
014（100）01（7.1）
02（3.1）000
059（100）59（100）0
00

22 動物抗菌会報 29（2007）

た。MIC を測定した 50 株とディスク検査を行っ

O16，O6・O16 複合型が各 2 株（3.1％），O1，O3，た 14 株の全 64 株とも MBL 陰性であった。そのO8，O10 が各 1 株（1.6％），型別不能：5 株（7.8％）

うち 44 株について DDST を行ったが，MBL 陰性であった。乳牛では O6，O5 型が多く，ヒトではであった。

施設間で差があるものの O2，O14 が優勢で，O6，

S. marcescens の薬剤感受性は一定の耐性型を示していた。特にセファゾリン（CEZ）に高度耐性

O5 は少ないことが，疫学的関連性が低いものと考えられるとの報告もある［17］。

であった。第一，第二世代 CEPs や ABPC に耐性

耐性 E. faecium による乳房炎は軽症で予後も良を示したが，第三世代 CEPs に耐性を示した株は好であった。分離率は 0.03％と非常に低率であっほとんどなく，シカβⅠテストを行った 45 株もた。乳房炎症例での腸球菌の分離率は 2 〜 3％と全て陰性であったことから，染色体性の誘導型推定されている［25］。乳牛における腸球菌はヒAmpC BL の産生によるものと考えられた。ESBLs

トと同じく日和見感染で，組織侵襲性や外毒素は確認検査では 45 株中 2 株で CPDX の阻止円が CVA

明らかでなく病原性は低いと考えられている［9］。

により 18mm 以上縮小した。また CAPMs，AGs，FQs，ST に対する耐性化はみられなかった。

E. faecium の耐性菌の出現率を表 3 に示した。
PCG，ABPC，OTC に耐性株が存在し，PCs 耐性

O 血清型は 64 株中 O6：32 株（50.0％），O5：

E. faecium は PC 結合蛋白の変化による耐性であ14 株（21.9％)，次いで O14：3 株（4.7％），O2，

る［12］。供試した 9 株のうち PCR を行った 6 株

表 3 Enterococcus faecium における耐性菌の出現状況
薬剤
PCG
ABPC
CEZ
CEPR
CXM
NFPC
MDIPC
MPIPC
CFX
KM
OTC
EM
CP
ST
GM
ABK
VCM
TEIC
TP
TMS
OBFX
NFLX
CAZ
CTX
CPDX

微量液体希釈法

ディスク拡散法

供試株数

耐性株数（％）

供試株数

耐性株数（％）

6
6
6
6
0
6
6
0
0
6
6
6
0
6
0
0
6
0
6
6
6
6
0
0
0

5（83.3）6（100）
6（100）
6（100）

3
3
3
3
9
3
2
9
9
3
3
3
9
3
9
9
3
7
0
0
0
0
7
7
6

3（100）
3（100）
3（100）
3（100）
9（100）
3（100）
2（100）
9（100）
9（100）
3（100）
3（100）
2（66.7）3（33.3）1（33.3）4（44.4）4（44.4）006（100）
6（100）

5（83.3）5（83.3）2（33.3）2（33.3）04（66.7）2（33.3）5（83.3）
判定不能

7（100）
7（100）
6（100）

PCG：ベンジルペニシリン，NFPC：ナフシリン，MDIPC：ジクロキサシリン，MPIPC：オキサシリン，
CFX：セフォキシチン，EM：エリスロマイシン，TP：チアンフェニコール，TMS：チルミコシン，
OBFX：オルビフロキサシン，NFLX：ノルフロキサシン

大西守／乳房炎起因菌の薬剤耐性と多剤耐性菌の分離状況／29（2007） 23

は全て VanA，B，C，C2/C3 遺伝子を保有せず，を測定した 22 株とディスク検査を行った 6 株の全

また他の 3 株もバンコマイシン（VCM），テイコ

28 株が MBL 陰性であった。そのうち 24 株についプラニン（TEIC）に対して感受性であり，9 株とて DDST を行なったが，全て MBL 陰性であり，も VRE ではないと考えられた。

27 株について ESBLs 確認検査を行なったが，全以上の成績は，国内各地のブタ，ニワトリ，肥て陰性であった。供試菌株は ABPC，OTC，ST，育牛の E. faecium，E. faecalis やヒトの腸球菌の耐KM の 4 剤に高度の獲得耐性であった。
さらに CP，性率と同様の傾向であった［12，22］。今回の耐性GM に加え，一部の株で第一，二世代 CEPs に対

腸球菌は全て E. faecium であった。ウシでは E.

して耐性であった。E. coli は染色体性の構成型

faecium が E. faecalis より優勢であるためと考えら

AmpC BL を産生するが，誘導され難く CEPs に感れた。腸球菌はグラム陽性菌のなかでも最も多剤受性である。今回の CEPs 耐性は，全株が ESBLs

耐性菌が多く，VCM 耐性遺伝子を含むプラスミ

陰性であり，シカβⅠテストを行った 14 株が全てドのほか，数種の高頻度水平伝達性プラスミドが陰性であったことから，第一，第二世代 CEPs の存在する。

選択圧の上昇により，染色体性 AmpC 遺伝子の過剰発現株が選択されたものと推定された。

４．Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae
および Klebsiella ozaenae の薬剤耐性

米国では子牛の下痢症から第三世代 CEPs，テ
トラサイクリン (TC)，AGs，FQs などに対する多剤耐性 E. coli が分離され，この第三世代 CEPs 耐耐性 E. coli は甚急性の重症乳房炎を起こし，予性は染色体性 AmpC BL の過剰発現によるか，

後は悪かった。分離率は推定で検査頭数の 0.5 〜

TEM 型のクラス A - BL との共働によるもので，第1％であった。乳房炎症例での E. coli の分離率は三世代 CEPs の使用が過剰発現株を選択させたと

5 〜 10％と推定された。

推測されている［5］。今回，第三世代 CEPs 耐性

E. coli の耐性菌の出現率を表 4 に示した。MIC

E. coli は CPDX にみられた 3 株だけであった。以

表 4 耐性 Escherichia coli における耐性菌の出現状況
薬剤
ABPC
CEZ
CEPR
CXM
KM
OTC
CP
ST
GM
ABK
AMK
IMP
ERFX
CPFX
LVFX
VCM
TEIC
CAZ
CTX
CPDX

微量液体希釈法

ディスク拡散法

供試株数

耐性株数（％）

供試株数

耐性株数（％）

22
22
0
22
22
22
22
22
22
0
22
22
22
22
0
0
0
0
0
0

22（100）5（22.7）

6
6
27
6
6
6
6
6
6
28
6
6
0
6
28
28
24
27
27
27

6（100）
1（16.7）14（51.9）1（16.7）2（33.3）6（100）
4（66.7）6（100）
2（33.3）0002（9.1）
19（86.4）22（100）11（50）
22（100）5（22.7）
0
0
0
0

0
0
28（100）24（100）003（11.1）

24 動物抗菌会報 29（2007）

上の成績は国内各地の病牛から分離された E. coliに耐性化していた。K. pneumoniae は染色体性のの耐性化の傾向とほぼ一致したが［11］，今回の成誘導型 AmpC BL がなく，CEPs に感受性である

績ではエンロフロキサシン（ERFX）耐性株は分が，一部の株で CEPs 耐性がみられ，うち 1 株は離されていない。これは ABPC，KM，OTC，ST

Klebsiella ozaenae であった。全株で第三世代 CEPs

はウシの臨床で多用され選択圧を高めてきたが，には耐性がみられず，シカβⅠテストは 8 株で陰ERFX はサルモネラ症以外では使用頻度が低いた性であり，Klebsiella oxytoca でみられる染色体性めと思われた。

クラス A-BL による CEPs 耐性かもしれない。

K. pneumoniae は急性乳房炎を起こすが，全身症状は E. coli より軽く，予後は耐性 E. coli ほど悪５．乳牛の獣医臨床と多剤耐性菌の展望くなかった。敷料にオガ屑を使用している農場で近年，国内のと殺牛の糞便中やと体から CTX-の発生が多かった。分離率は推定で 0.5 〜 1％でM-2 型（従来の Toho 型-1）の BL 産生性 E. coli があった。
Klebsiella sp. の耐性菌の出現率を表 5 に示した。

分離されている［21］。ヒトでは同型の菌が抗菌

MIC を測定した 6 株とディスク検査を行った 9 株

剤を未投与の尿路感染症などの外来患者から散発の 計 15 株 が MBL 陰 性 で あ っ た。ま た 15 株 は的に分離される傾向にあり，第三世代広域スペク

DDST で MBL 陰性であった。ESBLs 確認検査をトラムの CEPs に高度耐性であるため，健康キャ行なった 14 株は全て陰性であった。

リアーの存在が推測され，ウシ由来説が提唱されK. pneumoniae の ABPC 耐性率は高かった。こている［21］。また，同型の BL 産生プラスミド

れは K. pneumoniae が染色体性のクラス A-BL を

は KM，TC にも耐性であり，同型の BL 産生 E.

産生するためである［24］。また一部の株で OTC

coli は国内の河川の水からも分離されている。英をはじめ，CP，ST，KM，第一，第二世代 CEPs

国でも同一農場の子牛下痢と成牛から CTX-M 型

表 5 Klebsiella pneumoniae および Klebsiella ozaenae における耐性菌の出現状況
薬剤
ABPC
CEZ
CEPR
CXM
KM
OTC
CP
ST
GM
ABK
AMK
IMP
ERFX
CPFX
LVFX
VCM
TEIC
CAZ
CTX
CPDX

微量液体希釈法

ディスク拡散法

供試株数

耐性株数（％）

供試株数

耐性株数（％）

6
6
0
6
6
6
6
6
6
0
6
6
6
6
0
0
0
0
0
0

5（83.3）1（16.7）

9
9
15
9
9
9
9
9
9
15
9
9
0
9
15
15
10
15
14
14

9（100）
1（11.1）2（13.3）01（11.1）1（11.1）1（11.1）1（11.1）001（11.1）01（16.7）02（33.3）1（16.7）1（16.7）
0
0
0
0
0

0
0
15（100）10（100）0
00

大西守／乳房炎起因菌の薬剤耐性と多剤耐性菌の分離状況／29（2007） 25

BL を産性し，染色体性 AmpC のプロモーター領のメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）や域に変異をもつ第三世代 CEPs 耐性の E. coli が分

CTX-M-2 型，CMY-2 型 BL 産 生 菌 の 分 離 状 況 か離された［16］。また米国では CMY-2 型のプラス

ら，今後これらの監視を強化する必要がある［6，

ミド性 AmpC BL を産生する第三世代 CEPs 耐性21］。多剤耐性菌の防除対策としてはサルモネラ

Salmonella がウシ，ブタ，ヒトから分離され，CAZ，症や黄色ブドウ球菌性乳房炎の対策を参考に，農セフトリアクソンに交差耐性であったと報告され場の早期清浄化と周辺農場への感染蔓延を阻止すている［26］。国内のブロイラーから CTX-M 型

ることに重点を置き対応したい。

BL や CMY-2 型 BL の遺伝子を有し，AmpC のプ
ロモータ領域に変異をもつ E. coli が分離された

謝

辞が，広域 CPEs 使用との直接的関係はなく，環境要因との関係が推測されている［15］。米国では終わりに，P. aeruginosa に関する貴重なご助言

獣医領域の抗菌薬の規制が緩やかで，第三世代を頂いた国立感染症研究所荒川宜親細菌第二部

CEPs の使用と腸内細菌群の第三世代 CEPs 耐性

長，また乳房炎起因菌検査について永年ご助言をの関係が疑われながら，CTX-M-2 型 BL は優勢で頂いた元北海道 NOSAI 家畜臨床講習所長安里章はない。日本の獣医療における CEPs の年間使用

博士に深謝致します。

量 は 約 2,000kg で あ り，大 半 が 乳 牛 用 で あ る［23］。1990 年代前半にウシで第一，二世代 CEPs

要約が認可され，大半は乳房注入薬としての使用である。また第三世代 CEPs も 2006 年に認可されてい2005 年 9 月〜 2007 年 8 月に根室支庁全域の乳牛

るが乳牛での適応は主に趾間腐爛で，現在までのの乳房炎乳汁から，Pseudomonas aeruginosa 200

使用量は僅かである。CTX-M 型 BL の生成に最初

株，Serratia marcescens 64 株，耐 性 Enterococcusに選択圧をかけたのは，ヒト医療なのか獣医療な

faecium 9 株，耐性 Escherichia coli 28 株，Klebsiellaのか不明であるが，国内のウシにすでに浸潤してpneumoniae 14 株，Klebsiella ozaenae 1 株を分離しいる可能性がある。ウシの腸管内は耐性プラスミ

た。それらについて CLSI 標準法の微量液体希釈

ド の 水 平 伝 達 に 好 適 で，多 剤 耐 性 E. coli や法と Disk 法により薬剤感受性検査を行い，各菌

Salmonella の保菌場所であることが指摘されてい種の耐性化の状況と，VRE，ESBLs 産生菌，MBLる［16，21，26］。

産生菌，MDRP の分離状況を調査した。

今回報告した，各菌種の薬剤耐性の成績から，

P. aeruginosa では ABPC，CEZ，CXM に全株が乳房炎の抗菌薬治療では，感受性のある抗菌スペ耐性で，CP，ST，KM，OTC などで高率に耐性でクトラムの狭い旧来型抗菌薬を第一選択薬とし，あったが，IMP，アミノグリコシド系（AGs），フ特定の抗菌薬に偏らない使用法を心懸けても十分

ルオロキノロン系（FQs），CAZ，CTX などでは低治療可能であると考えている。今後も乳牛の獣医率であった。PC 系，第一，第二世代セフェム系療においては食品媒介性感染症を予防するうえ（CEPs）に対する自然耐性と考えられた。全株がで，第一，第二，第三世代 CEPs や FQs などの選

MBL（基 準；MIC が IMP ≧ 8μg/ml）陰 性，ま択圧を高めることにより，多剤耐性菌の起源となた全株が DDST でも MBL 陰性であった。また全らないよう留意したい。農業共済において乳牛で株 が MDRP（基 準；MIC が IMP ≧ 16μg/ml，は，CAPMs，ERFX 以外の FQs，ストレプトマイ

AMK ≧ 32μg/ml，CPFX ≧ 4μg/ml）ではなかっシン，KM 以外の AGs，GPs は認められていない。

た。O 抗原血清型は G，A，B，I，F，E 型が多く，今回の成績においても，これらの抗菌薬に対するヒトでの分布と近似していた。

耐性菌は出現しておらず，今後 MBL，MDRP，VREが分離される可能性は低いと思われた。
一方，国内のヒトやイヌ，ウシ，ニワトリから

S. marcescens 64 株 の 耐 性 率 は ABPC，CEZ，
CXM，OTC で高く，IMP，AGs，FQs，第三世代
CEPs，ST，CP などで低かった。第一世代 CEPs

26 動物抗菌会報 29（2007）

に対する自然耐性と考えられた。
全株が MBL 陰性

６）CDC（満田年宏訳）: CDC Guideline, Managementであった。O 血清型は 6，5，14 型が多く，ヒトof Multidrug-Resisatant Organisms In Healthcare

での分布と異なっていた。

Settings, 2006, 11-71, 74-87, ヴァンメディカル，東

耐性 E．faecium 9 株の耐性率は PCG，ABPC や京（2006）他のβ- ラクタム系，KM，
OTC で高く，
VCM，TEIC

７）Clinical and Laboratory Standards Institute:

で 0％であった。PCG，ABPC に獲得耐性と考え

Performance Standards for Antimicrobial Diskられた。PCR 検査を行った 6 株は VanA，B，C，and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria

C2/C3 を保有しなかった。耐性 E. coli は ABPC，

Isolated from Animals; Approved Standard––

OTC，ST，KM に高度の獲得耐性と考えられた。

Second Edition, 13-72 (2002)

IMP，AGs，FQ，第三世代 CEPs で耐性率が低かった。しかし，CP，GM，第一，第二世代 CEPs，
CPDX で耐性化が進みつつあった。全株が ESBLs（CLSI の基準；CAZ，CTX，CPDX の阻止円直径がクラブラン酸添加により 5mm 以上拡大）陰性
で，MBL 陰性であった。
K. pneumoniae と Klebsiella ozaenae で は ABPCの耐性率が高く，IMP，AGs，FQs，第三世代 CEPs

８）Erskine RJ, Unflat JG, Eberhart RJ, et al.: J Am
Vet Med Assoc, 191, 811-816 (1987)
９）藤田直久，小森敏明：臨床病理，特集 111，132141（2000）
１０）Hanaki H, Kubo R, Nakano T, et al.: J Antimicrob
Chemother, 53, 888-889 (2004)
１１）Harada K, Asai T, Kojima A, et al.: J Vet Med Sci.
67, 999-1002 (2005)

で低かった．一部の株で OTC をはじめ CP，ST，

１２）池

第一，第二世代 CEPs に耐性化していた。ESBLs

１３）Kariyama R, Mitsuhata R, Chow JW, et al.: J Clin

確認検査では 14 株が陰性で，全株が MBL 陰性であった。
S. marcescens，耐 性 E. faecium は 分 離 率 が 低
く，また乳房炎の症状も軽症で，臨床上大きな問
題点は見られなかった。緑膿菌性乳房炎は症状が重症であり，フリーストール牛群での集団発生例が見られた。
今回の供試菌株から VRE，ESBLs 産生菌，MBL
産生菌および MDRP の多剤耐性菌は分離されな

康嘉：臨床病理，特集 111，26-35 (2000)

Microbiol, 38, 3092-3095 (2000)
１４）Kirk JH, Bartlett, P.C.: J Am Vet Med Assoc, 184,671-671 (1984)
１５）Kojima A, Ishii Y, et al.: Antimicrob Agents
Chemother, 49, 3533-3537 (2005)
１６）Leibana E, Batchelor M, Hopkins KL, et al.: J Clin
Microbiol, 44, 1630-1634 (2006)
１７）丸 茂 健 治，田 口 和 三：臨 床 病 理．45，787-791（1997）

かったが，今後も監視を強化したい。

１８）中埜茂子，他：日本化学療法学会雑誌．43，525-

引用文献１９）National Mastitis Council: Labolatory and Field

１）荒川宜親：日本臨床微生物学雑誌，13，150-159２０）清水530（1995）
Handbook on Bovine Mastitis (1987)（2000）
２）荒川宜親：柴田尚宏：臨床病理，特集 111，100116（2000）
３）Arakawa Y, Shibata N, Shibayama K, et al.: J Clin
Microbiol, 38, 40-43 (2000)
４）Bowman GL, Hueston WD, Boner GJ, et al.: J Am
Vet Med Assoc, 189, 913-915 (1986)
５）Bradford PA, Petersen PJ, et al.: J Antimicrob
Chemother, 44, 607-610 (1999)

健：家畜衛生週報，1257，254-255（1973）

２１）Shiraki Y, Shibata N, Doi Y, et al.: Emerg InfectDis. 10, 69-75 (2006)
２２）高橋敏雄，他：感染症学雑誌，80，185-195（2006）２３）田村豊：日獣会誌，56，685-691（2003）

２４）Thomson K S: Emerg Infect Dis, 7, 333-336 (2001)
２５）Todhunter DA, Smith KL, et al.: J Dairy Sci. 78,
2366-2374 (1995)
２６）Winokur P. L, et al.: Antimicrob Agents Chemother,44, 2777-2783 (2000)

大西守／乳房炎起因菌の薬剤耐性と多剤耐性菌の分離状況／29（2007） 27

Anitmicrobial Resistance of Bacterial Isolates from Bovine Mastitic Milk and Surveillance for
Vancomycin Resistant Enterococci, Extended Spectrum β-Lactamases Producers,
Metallo- β-Lactamase Producers and Multiple-Drug -Resistant Pseudomonas aeruginosa in
Nemuro District, Japan
Mamoru OHNISHI
Clinical Laboratory, Nemuro District Agricultural Mutual Aid Association,
11-5 Minami, 5-Joh Nishi, Nakashibetsu-cho, Shibetsu-gun, Hokkaido 086-1105, JapanThe susceptibility of 200 Pseudomonas aeruginosa isolates, 67 Serratia marcescens isolates, 9 Enterococcus faecium
isolates, 28 Escherichia coli isolates, 14 Klebsiella pneumoniae isolates and 1 Klebsiella ozaenae isolate from bovine
mastitic milk in Nemuro district from September 2005 to August 2007 was determined against over 20 antimicrobials
by broth microdilution method and disk diffusion method, and multi-drug-resistant isolates of them were surveyed.
All P. aeruginosa isolates were highly resistant to ampicillin (ABPC), cefazolin (CEZ) and cefuroxime (CXM). The
antimicrobial resistance rates of the isolates to chloramphenicol (CP), sulfamethoxazole・trimethoprim (ST),kanamycin (KM) and oxytetracyclin (OTC) were very high, whereas those to imipenem (IMP), aminoglycocides(AGs), fluoroquinolones (FQs), ceftazidime (CAZ) and cefotaxime (CTX) were very low. All the isolates were
negative for metallo- β- lactamase (MBL) screening test (criterion MIC for IMP: 8 μ g/ml) and for double disk
synergy test (DDST) with CAZ and sodium mercaptoacetate. Moreover, these isolates were not multiple -drugresistant (criterion MIC for IMP: 16μg/ml, for amikacin: 32μg/ml, for ciprofloxacin: 4μg/ml). The serotypes of the
200 isolates were O-G (38.5%), O-A (17.5%), O-B (10%), O-I (8%), O-F (4.5%), O-E (4%) and others.
The resistance rates of 64 S. marcescens isolates to ABPC, CEZ, CXM and OTC were very high, but those to IMP,
AGs, FQs, 3rd-generation cephalosporins (CEPs), ST and CP were very low. All the isolates were negative for MBL
screening. The serotypes of the isolates were O6 (50.0%), O5 (21.9%), O14 (4.7%) and others. The resistance rates of
9 E. faecium isolates to benzylpenicillin (PCG), ABPC, the other β-lactam antibiotics, KM and OTC were very high.
These isolates were thought to be acquired resistant to PCG and ABPC. However, these isolates were susceptible toglycopeptides. PCR analysis demonstrated that 6 E. faecium isolates did not carry VanA, VanB, VanC and VanC2/C3
genes.
Twenty-eight E. coli isolates were highly resistant to ABPC, OTC, ST and KM. The resistance rates of the isolates
to IMP, AGs, FQs, 3rd-generation CEPs were low. However, those to CP, gentamicin, 1st- ・2nd-generation CEPs andcefpodoxime (CPDX) have been increasing. All the isolates were negative for extended spectrum β-lactamases(ESBLs) comfirmatory tests (5mm increase in a zone diameter for either CAZ, CTX, CPDX by testing in combination
with clavulanic acid), and negative for MBL screening. Fifteen Klebsiella sp. isolates were negative for MBL
screening, and negative for ESBLs confirmatory tests.
The isolation rates of S. marcescens and E. faecium from bovine mastitic milk were low, and the clinical symptom in
mastitis due to those bacteria were mild. Hence there were no major problems clinically. The clinical symptom in P.
aeruginosa mastitis were severe. The major outbreak of P. aeruginosa mastitis occurred in a large free-stall herd. The
multi-drug-resitant organisms were not isolated in this study. However, the surveillance of them must be strengthen.

28 動物抗菌会報 29（2007）

討
質問（大西

論（座長：阪野哲也 科飼研，青木 宙 東京海洋大）守，根室地区 NOSAI）

高度耐性菌の病院内・患者・医療従事者⇔健康人⇔
愛玩動物⇔産業動物間の生態，疫学にお詳しい荒川先Aspergillus，酵母また Klebsiella による乳房炎についてはいかがですか。
答（大西守）

生にお聞きしたいのですが，今後高度耐性菌が産業動

Aspergillus はあまり分離した経験がありません。そ物の間で伝播・定着し，増加してくることはあるのでの原因の一つに培養を 18 〜 42 時間しか行っていない

しょうか。

ことがあるのかも知れません。また牛の粗飼料がサイ

答（荒川宣親，国立感染研）

レ−ジ主体になり，以前のようにあまりかびた乾草を

そういうことはあまり考えられない．例えば腸球菌

給与しなくなったからではないでしょうか。

はヒトと動物では型が違い，ヒトの耐性菌が動物に感染し動物体内に定着するとは考えにくい。

酵 母 性 乳 房 炎 は か な り 発 生 率 が 高 く（数 ％），Candida によるものが主体である。症状は軽く微熱は

質問（藤倉孝夫）

あるが，食欲はあまり落ちないのが特徴です。大腸菌

私が JICA から派遣されたある国では，Staphylococcus

性乳房炎とともに症状に特徴があり，経験を積んだ獣

aureus（SA）性乳房炎は多剤耐性で困っていた。また医師は初診時にほぼ診断可能です。ナイスタチンは副デッピングが乳房炎予防上非常に効果であったので作用が強く，イソジンの靜注や乳房内注入，頻回搾乳

すが。

で治療し，予後は良好です。

答（大西

守）

最近，Klebsiella による乳房炎が 1 農場で多発し，敷根室地方でも SA 性乳房炎は農場単位で 7 〜 8 割，

料のオガ屑を廃棄し新しいものにしたらその後 1 頭も頭数で 10％前後感染しており，起因菌のうちで，伝染発生しなくなりました。検査室は感染制御の役割を性，治療抵抗性，清浄化困難性から最も重要である。

担っているので，診療獣医師と緊密に感染症の情報交

農家や農協は熱心に防除対策に努力しているが，あま換を行っている。平成になり再興・新興感染症が増加

り効果は上がっていない。その大きな要因は潜在性感しており，産業動物獣医師は感染症に対する力量が問

染牛が非感染牛に混ざり搾乳され，SA がミルカーをわれている。

介して伝播されていくからである。乳房清拭の一頭一質問（大西

布やデッピングは効果が大きいが，ミルカーを介した

以前，乳房炎乳から S.agalactiae とは異なった，見SA の伝播にはあまり効果はない。また SA の耐性化は慣れないβ溶血性連鎖球菌を純培で分離したことが守）

PCG や ABPC に対するβ-lactamase による耐性ぐらいあります。菌名は忘れたが，同定を依頼した先生によであまり進んでいない。その一つの要因として，SAると魚の連鎖球菌であると言われました。どの様な菌感染牛は 3 〜 4 産ぐらいで淘汰され，長期間牛群にいが考えられますか。35℃ で培養しました。

ないこと，抗生剤の種類が制限されていること，治療期間があまり長期にわたらないことなどが考えられる。
質問（岡野圭介，シェリングプラウアニマルヘルス）答（片岡康，日獣大）

おそらく，Streptococcus dysgalactiae D だと考えられます。