【論文】【論文】

セルトレイを用いたクロマツ菌根苗の簡便な作製方法
松浦 崇遠・佐々木 史
A simple method for preparing mycorrhizal seedlings of Japanese black pine with plug tray

Takatoh MATSUURA, Fumito SASAKI

クロマツの根系と共生する菌根菌の種や系統による機能の違いを調査するため，目的とする菌株のみを感染させたクロマツ苗を簡便に作製する方法について検討した。ショウロまたはアミタケの菌糸を蔓延させたパーライトを調製し，ロックウールブロックに挟み込むようにして，育苗用のセルトレイに積層した。クロマツの種子は上層のロックウールに蒔き付け，種子の発芽が阻害されないよう工夫した。セルトレイを蓋付きの給水用トレイに収納し，隙間をパラフィンフィルムで密封して雑菌の感染を防ぎながら，23℃の恒温下で約 5 か月間養成した。その結果，接種した全ての苗木には細根に菌糸の伸展が観察されたが，菌鞘の形成には系統間に大きなばらつきが認められた。一方，接種していない苗木では，菌糸は確認されなかった。本研究において考案した方法は，無菌状態でない実験室内でも外部からの汚染を防いで，特定の菌株のみを接種することが可能であり，菌根苗を材料とする試験に適していると思われた。
キーワード：菌根菌・セルトレイ・クロマツ・ショウロ・アミタケ
1. はじめに富山県の海岸にはクロマツ（Pinus thun-

樹種であり（Wang and Qiu 2006），菌根菌

bergii）が植栽されることが多く，沿岸部のが十分に定着すると，細根は菌鞘と呼ばれる

保安林は後背の宅地や農耕地を飛砂や潮風構造物に覆われる（松田・小長谷 2022）。

から守る重要な役割を果たしている。しかし土壌からの養水分の吸収は菌根菌を介してながら，砂質に富む土壌は保水性や保肥性に行われ，菌根菌との共生は宿主の成長促進や劣る他，干害や塩害，潮害にも晒されやすく，

環境ストレスへの耐性向上に役立つと考えさらにはマツ材線虫病に起因する枯損被害られている。菌根菌を人工的に接種し，苗木が頻発しているなど，樹勢の衰退による防災の菌根形成を助けることは，植栽後の活着や機能の低下が懸念されている。県内では人工初期成長を増進させる効果が期待できる。

海岸の割合が高く，海岸林は砂地のみならず，

クロマツ（およびアカマツ）の苗木と菌根

汀線の後背に盛り土して造成されているこ菌との共生がもたらす作用に関しては，苗木とも多い。そのため，クロマツ林の再生には，の生育において優位な傾向が得られた複数

造林地の環境に因らず，活着や成長に優れたの事例が報告されている一方（Oh and Park

苗木を，効率的に生産する技術が求められる。

1990；能勢 1992；岡部ら 1994；村山 2004），

植物の根系に共生する菌根菌は，貧栄養の明瞭な効果が見出されなかった事例もある

土壌中において，窒素や燐酸の吸収を担い，（明間 2004）。また，共生がもたらす作用

植物の活着や成長を促すことが知られていは菌種によって一様でなく（Nakashima et al.

る。クロマツを含む多くのマツ類は外菌根性

2016），特定の菌種との組み合わせが高い効12富山森林研報

15（2023）

果を発揮する可能性も指摘されている（松行ったことから，種子の発芽検定も時期を変

田・小長谷 2022）。これらの研究では，菌えて 2 回実施した。各々の検定の，その他の根菌を人工的に接種する，様々な方法も考案

具体的な条件は，表-1 のとおりである。

されているが（赤間 1993；平佐 1995；明間

種子の発芽率について，Fisher の正確確率

ら 2001；玉田・更級 2007），試験的には特検定を用いて系統間の多重比較を行い，有意定の菌種を発芽の段階から，効率的に感染さ差（p＜0.05）の有無を判定した。また，同せる方法が望ましく，かつ苗木生産の現場に方法における有意水準の補正には，Hochbergも応用できる技術が求められる。

法を用いた。統計解析プログラムには，R
4.2.2（R Development Core Team 2022）をそこで，本研究では実験室内でも苗木の養使用した。

成が可能であり，野菜や花卉の栽培に広く使われているセルトレイを用いて，目的とする

2.2 菌根菌資材の作製

菌株のみを感染させたクロマツ苗を作製す

ショウロ（Rhizopogon roseolus）もしくはショウロとアミタケ（Suillus bovinus）

る方法について検討した。

の複数系統（2015 年に氷見市内において採取
2. 材料および方法した菌株を，分離培養したもの）を，2%モル

2.1 種子の発芽検定

ト寒天平板培地で 1 か月程度培養した。予め供試したクロマツ種子（2016 年に射水市内

オートクレーブ滅菌（121℃，1 時間）したパ

において採取，約 5℃で保存）の発芽率を，ーライトをきのこ栽培袋に入れ，2%モルト液

以下の方法にしたがって算出した。

体培地を含浸させた。袋詰めしたパーライト

濾紙を敷き，予め乾熱滅菌（180℃，2 時間）に各系統を接種し，シーラーで袋上部の開口したシャーレに，浸漬・殺菌処理した種子を部を密封した後，約 24℃で 1～2 か月間暗培

1 枚当たり 100 粒ずつ蒔き付け，オートクレ

養し，全体に菌糸が蔓延したものを，苗木にーブ滅菌（121℃，15 分）した蒸留水を注入接種するための菌根菌資材として用いた。

した。シャーレの隙間をパラフィルムで密封

2.3 セルトレイを用いた菌根苗の養成

し， 23℃に設定した人工気象器内において，育苗用セルトレイ（38×38×41mm/セル，

約 6 週間養成した。

東海化成社製）を，蓋付きの給水用トレイ

播種から概ね 1 週間ごとにシャーレの蓋を（270×270×60mm，サカタのタネ社製）に収開けて，種子の様子を観察した。種子鞘が裂納が可能な，5×5 個（計 25 個）のセルのサ開して幼根が確認できる状態を，発芽と判定

イズに裁断した。切り分けた育苗用セルトレした。また，一部の種子には，表面にカビのイと給水用トレイのセットを，接種菌の各系付着が認められた。これらの種子は個数をカ統に対照を加えた個数分用意し，各トレイのウントした上で，シャーレから取り除いた。

表面に 70％エタノールを噴霧した後，滅菌室

発芽率は，シャーレごとに蒔き付けた既定内で乾燥させた。

の 100 個を母数として，期間中に発芽した種

オートクレーブ滅菌（121℃，1 時間）した子の個数を百分率に換算し，それぞれの枚数

ロックウールブロック（31×31×32mm/セル，分を平均して求めた。

日本ロックウール社製）と，前項のとおり作

後述する菌根苗の養成試験を 2 回に分けて製した接種用のパーライトを，2 種類の異な表-1 クロマツ種子の発芽検定の諸条件
検定期間
2017/1/16～2/28

種子の
採取年月
2016/112018/11/26～2019/1/10 2016/11

種子の
種子の
個数
浸漬処理
1,000個静水，（100×10個） 1日間
500個
静水，（100× 5個） 3日間

13

種子の
殺菌処理
チウラム（30％）・チオファネート
メチル（50％） 200倍液，30分間
エタノール（70％），3分間
過酸化水素水（30％），20分間滅菌した蒸留水で洗浄

タイプ A

タイプ B

クロマツ種子（2 粒）
砂土（覆土）

ロックウール

ロックウール

緩効性肥料

ロックウール

菌糸を蔓延させた
パーライト

図-1 セル内における種子と培土の積層形態を示す模式図
る形態によって配置した（図-1）。

に複数の系統が混入しないようにした。また，模式図のタイプ A では，原形のロックウー

それぞれ滅菌済みの，蒸留水を含侵させたパルブロックをそのままセル内に詰め，その上ーライトを用意し，同様の形態で作製したもに厚さ 1cm 程度のパーライトを積層した。セ

のを，菌を接種していない対照として用いた。

ルごとに，浸漬・殺菌処理した種子 2 粒をパそれぞれのタイプに共通して，給水用トレーライト層の上に蒔き付け，予めオートクレ

イの底面には，予めオートクレーブ滅菌

ーブ滅菌（121℃，1 時間）した砂土（芝の目（121℃，1 時間）したペーパータオルを敷き，土，5ml/セル）を振り掛けて被覆した。さら同じく滅菌（121℃，15 分）した蒸留水を注に，固形の緩効性肥料（ハイコントロール オ

いで，十分に湿らせた。播種した育苗用セルール 10-100，0.2g/セル）を表面に散粒して，トレイを給水トレイに収納し（写真-1），透菌根菌への感染が成立した後の，苗木の成長

明色の蓋を被せ，給水トレイと蓋の隙間にはに備えた。

パラフィンフィルム（Parafilm M，Pechiney

模式図のタイプ B では，原形のロックウー
ルブロックを等分し，その間に厚さ 1cm 程度のパーライトを挟み込むように積層した。浸漬・殺菌処理した種子 2 粒は，ロックウール
表面の，既製の窪みに埋め込んだ。なお，このタイプでは，根が菌根菌に接触する前に，肥培が菌根化を阻害する可能性を考慮して，肥料は施用しなかった。
何れのタイプにおいても，育苗用セルトレ
イと給水用トレイのセットを単位として各々の系統を割り当て，同一のトレイセット
写真-1 給水トレイに収めた育苗用トレイ
表-2 クロマツ菌根苗の養成試験の諸条件
培土の
積層形態
タイプ A

養成期間

タイプ B

2018/11/13～2019/ 4/15

2017/ 6/23
～ 10/10

菌種と系統数
ショウロ：10系統
対照

セルの
個数
各25個

種子の
浸漬処理
静水，
1日間

ショウロ：11系統
アミタケ： 2系統
対照

各25個

静水，
3日間

14

種子の
人工気象器内の
殺菌処理
育苗条件
23℃，
エタノール（70％），3分間
次亜塩素酸ナトリウム（10％），3,000lux（12時間/12時間）
10分間滅菌した蒸留水で洗浄
緩効性肥料を施用
トレイと蓋を密封
23℃，
エタノール（70％），3分間
3,000lux
過酸化水素水（30％），20分間（12時間/12時間）
滅菌した蒸留水で洗浄
トレイと蓋を密封富山森林研報

15（2023）

表-4 各トレイセットの発芽率と得苗本数（タイプ A）

表-3 菌根形成能力の評価方法
区分
根の状態
Ⅰ 菌糸なしⅡ 菌糸あり・菌鞘なし
Ⅲ 菌鞘あり：細根端の 0～50％未満
Ⅳ〃：細根端の 50～80％未満
Ⅴ〃：細根端の 80～100％

Plastic Packaging 社製）を巻き付けて密封した。23℃，3,000lux・12 時間/12 時間周期に設定した人工気象器内において，タイプ A
では約 3 か月半，タイプ B では約 5 か月間養成した（表-2）。また，これらの期間中には，
人工気象器内の場所による影響を少なくす

菌種

系統名

ショウロ
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
対照

Rr-01
Rr-02
Rr-03
Rr-04
Rr-05
Rr-06
Rr-07
Rr-08
Rr-09
Rr-10
Ct

苗木の
発生率
（％）
0a
46 cd
4 ab
20 bc
22 bcd
50 cd
42 cd
2 ab
68 d
38 cd
66 d

罹患した
苗木の
本数
0
21
1
3
3
25
11
0
33
15
7

得苗本数
0
1
0
6
6
0
9
1
1
3
18

表中のアルファベットは，共通する文字を含まない
系統間の，苗木の発生率に有意な差（Fisher’s Exact
Test，p＜0.05）があることを示す。

るため，トレイセットの配置を定期的に入れ替えた。
育苗期間中には適宜滅菌した蒸留水で灌水を行いながら，苗木の生育状況を観察した。

苗高と根長については Steel-Dwass の方

このとき，種子や覆土から胚軸が立ち上がっ法を，菌根形成の区分については Fisher のた状態を確認して，苗木が発生したと見なし

正確確率検定を用いて系統間の多重比較をた。セルごとに蒔き付けた 2 粒の種子から，行い，有意差（p＜0.05）の有無を判定した。

2 本の苗木が発生した場合には，競合により統計解析プログラムには，R 4.2.2（R De-

互いの成長が抑制される可能性を考慮して，velopment Core Team 2022）を使用した。

劣勢の一方を，ピンセットを使用して間引きした。種子や苗木の表面にカビが蔓延した場

3. 結果および考察

合には，周辺への感染を防ぐため，当該セル

3.1 種子の発芽検定の種子や苗木をロックウールごと除去した。

クロマツ種子の発芽率は，採取から間もな

萎凋・枯死した苗木も病害に罹患した恐れがい 1 回目の検定では 95.8％を示した。また，あるため，同様に除去した。なお，これらの2 回目の検定でも 90.0％を示し，養成試験に作業は全て，クリーンベンチ内で行った。

おいて播種した何れの時点においても，高いA・B それぞれのタイプに基づいて実施した発芽能力を有していたことがわかった。クロ

試験の，その他の具体的な条件は，表-2 のとマツ種子の発芽率は一般的に高く，また低温

おりである。

下では数年間貯蔵してもあまり低下しない

2.4 苗木の成長と菌根形成の評価

ことが報告されている（中山・小林 1981）。

育苗期間の期末において生存していた全

したがって，前述の結果は，本研究で使用しての苗木をセルトレイから取り出し，根に絡た種子が，良好な状態で保存されていたこと

み付いたロックウールやペーパータオルをを示している。

丁寧に取り除いてから，苗木のサイズを調査

3.2 セルトレイを用いた菌根苗の養成した。苗高は地際から芯の先端までの長さを，タイプ A の試験において，間引きやカビの根長は地際から最も長い根端までの長さを，発生によって除去したものを含めた苗木のそれぞれミリ単位で測定した。さらに，根を発生率と，罹患した苗木の本数，除去後の得

2 枚のガラス板で挟み込み展延させた後，細苗数を，表-4 に示す。各系統の発生率は 0～

根全体を実体顕微鏡下で観察し，菌糸の有無

68％の範囲でばらつき，菌種が同じショウロや菌鞘が形成された細根端の割合（表-3）にであっても顕著な差が認められた。他方，対基づいて，菌根化の程度を評価した。

照の発生率は 66％と，ショウロの系統のうち

15

Rr-01
Rr-04
Rr-07
Rr-10

Rr-02
Rr-05
Rr-08
Ct

Rr-03
Rr-06
Rr-09

苗木の発生率（％）

80
60
40
20
0
0

30

60

90

写真-2 発芽しなかった種子の内部

120

播種からの経過日数

図-2 系統ごとの苗木の発生率の推移
凡例の記号は系統名を表し，表-4 に対応。苗木の発生率には，同一セル内で間引いた個体や，萎凋や病害が発生して取り除いた個体を含む。

表-5 各トレイセットの得苗
本数（タイプ B）
菌種
ショウロ
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
アミタケ
〃
対照

系統名
Rr-01
Rr-02
Rr-03
Rr-04
Rr-05
Rr-06
Rr-07
Rr-08
Rr-09
Rr-10
Rr-11
Sb-01
Sb-02
Ct

得苗本数
24
25
25
25
25
25
25
25
24
24
25
24
25
21

写真-3 セルトレイで養成した苗木の様子
らかでないが，種子もしくは発芽直後の幼根が菌に侵されることによって，以降の生育が阻害された可能性が考えられた。その場合，系統間の発生率の差は，系統ごとの腐生性の違いに起因すると想定された。したがって，
タイプ A の方法は，菌根菌資材の配置に問題があることが示唆された。
タイプ B の試験では，蒔き付けた大半の種

最も高いものとほぼ同等であった。また，シ子が発芽したため，苗木が展葉し始めた 2 かョウロの系統のうち半数では，苗木の発生が月後に間引きした。但し，間引きした苗木の対照よりも 1 か月くらい遅れており（図-2），本数を記録しなかったため，系統ごとの発生

トレイ内での生育が阻害されたと考えられ率は不明である。そこで，間引き・除去後のた。

得苗本数のみを，表-5 に示す。接種群の系統

発芽しなかった種子の一部を取り出したの平均得苗本数は 24.7 本であり，ほぼ全てところ，内部は充実していたが，胚乳は変のセルで苗木を養成することができたが（写色・軟化していた（写真-2）。植物の根系に

真-3），対照の得苗本数は 21 本とやや少な共生する外菌根菌の中には，酸化酵素を有し，かった。2 回目の発芽検定から得られた発芽

弱いながらも腐生性を呈するものがある（水率（90.0％）に基づき，25 個のセルのうち，

谷 2008）。ショウロの腐生性に関しては明同一セルに 1 本以上の苗木が発生する期待値

16

富山森林研報

15（2023）を，苗木が発生したセルの個数と出現確率の表-6 菌種および系統ごとの苗高と根長（タイプ A）

全ての組み合わせから求めたところ，24.8 本と算出され，前述の平均得苗本数とよく一致した。したがって，苗木の発生率は種子の発芽率とほぼ等しく，発芽したほぼ全ての種子が苗木に成長したと推定され，菌根菌資材の配置に関しては，タイプ B の方法がタイプ A

菌種

系統名

ショウロ
〃
〃
対照

Rr-04
Rr-05
Rr-07
Ct

苗高
(cm)
4.7 a
4.7 a
4.5 a
4.6 a

根長
(cm)
15.2 a
9.4 a
9.2 a
7.8 a

表中のアルファベットは，共通する文字を含まない系統間に有意な差（Steel-Dwass
Test，p＜0.05）があることを示す。

よりも優れていることがわかった。一方，対照の得苗本数に相当する苗木の発生率は60％と見積もられ，タイプ A のそれとあまり

a
本数に占める割合（％）

変わらなかった。
タイプ B では，厚さ約 1.5cm のロックウー
ルがパーライトの上に載って，種子と菌根菌資材を隔てており，この程度の間隔を設ければ，種子の発芽には影響がないと考えられた。
筆者らが過去に菌根苗の作製を試みた際には，発生した苗木を一旦掘り取ってから菌根菌を接種し，培土に埋め直す方法を採った

a

a

a

100

Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ

80
60
40
20
0
04 05 07ため（松浦・佐々木 未発表）雑菌に曝されRt-

やすく，接種から 2～3 週間後にはカビが蔓

Ct

菌種・系統名延し，苗木の生育が妨げられた。本研究では発芽の段階から菌根菌資材を配置したため，

図-3 系統ごとの菌根形成の区分（タイプ A）

掘り取りの工程を省くことができた。結果と図中の系統名は表-6 に対応。苗木の得苗本数が比較的多かった（n≧6）系統を抽出。表中のアルファベッ
トは，共通する文字を含まない系統間の，菌根形成の何れかの区分に有意な差（Fisher’s Exact Test，p＜0.05）があることを示す。

して，タイプ A の試験では，播種および接種から 2 か月近くが経過したところでカビが広がり，発生した苗木の 73％が萎凋・枯死した
ものの，残余の 27％は約 3 か月半にわたって生存した（表-4）。タイプ B の試験では，間に収めたセルトレイの上縁から，被せた蓋の引き後に残った苗木は，カビの発生がほとん

内面までの高さは約 6.5cm であり，苗木の地

ど見られないまま，約 5 か月間生存した（表上部の成長には空間に多少の余裕がある状-5）。なお，種子の浸漬および殺菌処理の条態であった。地下部に関しては，根の大部分

件にはタイプ間で異なる点があるものの，タはセル内に収まっており，底穴からはみ出し

イプ A では，カビは播種からかなり遅れて発たのはわずかであった。

生しており，関連性は低いと見なされた。

また，細根における菌根菌の感染状況を調

3.3 苗木の成長と菌根形成の評価

べたところ，接種群にのみ菌糸体が観察されタイプ A の試験では，一部の系統においてたものの，その割合は 50％以下にとどまり，苗木の発生率が低く，十分な本数が得られな

菌根形成の区分に関しても有意な差は検出かったため（表-4），期末時に苗木を 6 本以されなかった（図-3）。これらの要因には，上確保することができた 3 系統（「Rt-04」・

解析に供した苗木の本数が少なかったこと「Rt-05」・「Rt-07」）と対照の苗木を抽出に加え，発芽が遅れたため（図-2），根の成して，多重比較を試みた。その結果，苗高と長も遅れ（表-6），さらには育苗期間がやや根長の双方に関して，系統間に有意な差は検短く，菌糸の伸展や菌鞘の形成があまり進ま出されなかった（表-6）。なお，給水トレイなかったと考えられた。

17

表-7 菌種および系統ごとの苗高と根長（タイプ B）
菌種

系統名

ショウロ
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
〃
アミタケ
〃
対照

Rr-01
Rr-02
Rr-03
Rr-04
Rr-05
Rr-06
Rr-07
Rr-08
Rr-09
Rr-10
Rr-11
Sb-01
Sb-02
Ct

苗高
(cm)
3.9 a
3.8 a
3.8 a
3.8 a
3.6 a
3.5 a
3.6 a
3.6 a
3.7 a
3.7 a
3.8 a
3.6 a
3.5 a
4.0 a

根長
(cm)
26.8 ab23.1 ab24.2 ab17.8 a25.3 b
26.7 b
23.4 ab24.9 ab25.1 ab22.6 ab23.2 ab26.6 ab27.0 b
29.5 b

写真-4 細根端に形成されたアミタケの菌鞘（矢印）がセルの底穴からはみ出して，ペーパータオ

表中のアルファベットは，共通する文字を含まない系統間に有意な差（Steel-Dwass
Test，p＜0.05）があることを示す。

ルの内部まで伸展していた。
苗木の根はセルの外側へ長く伸びていたにもかかわらず，ほとんどの細根はセルの内リンや窒素などの養分が豊富な条件では，部で発生していた。細根における菌根菌の感菌根形成が抑制されることが知られている

染状況を調べたところ，接種群ではショウロ（Ruehle and Wells 1984；Newton and Pigottとアミタケの何れの系統においても，全ての1991）。外菌根の菌株を接種したパーライト

苗木の細根から菌糸が見つかった。細根端ににはモルト液体培地が添加されていた他，タは菌鞘もしばしば観察されたが（写真-4），

イプ A では固形の肥料も施用されており，こ

系統ごとの区分には大きなばらつきが認めれらに含まれる成分によって根系が発達せられた（図-4）。ショウロの「Rt-01」ではず，菌根化が妨げられた可能性も考えられた。

区分Ⅲの割合が最も高く，苗木の 54％が「菌この点からも，タイプ A の方法は，菌根菌資鞘あり」に該当した。アミタケの「Sb-01」

材の配置や肥料の施用に問題があることがでは系統内での区分にばらつきが認められ示唆された。

たものの，苗木の 25％が，菌鞘の形成が細根もう一方のタイプ B では，全ての系統およ端の 50％以上を占める区分Ⅳや区分Ⅴに該び対照において十分な本数が得られたため当した。したがって，これら 2 系統は他の系（表-5），多重比較においても全ての系統お統よりも菌根形成能力に優れていると判断

よび対照の苗木を解析の対象とすることがされた。一方，ショウロの「Rt-07」や「Rt-08」

できた。その結果，苗高に関しては系統間にでは菌鞘は全く観察されず，菌根苗の作製に有意な差は検出されなかった（表-7）。苗高は不適であることが示唆された。また，対照はタイプ A のそれよりも全体的に小さく，地からは菌糸体は一切観察されず，セル内は菌上部の成長には空間にまだ余裕がある状態

根菌から隔離された状態が維持されていた。

であった。根長に関しては，一部の系統間にタイプ B の試験において，接種から 2 か月違いが認められた（表-7）。なお，対照では後に間引きした苗木の一部を掘り取って調

パーライトに菌根菌やモルト液体培地を添べたところ，細根には菌鞘が見られなかった。

加していなかったにもかかわらず，苗高と根タイプ A の試験では，系統によって苗木の発長は最も大きくなり，それぞれが苗木の成長

生が 1 か月くらい遅れた点を加味しても， 3を促す効果は見出されなかった。根長はタイか月程度の育苗期間では，菌根形成能力を判プ A のそれよりも大きく，根のかなりの部分断するには十分とは言えず，タイプ B の 5 か18富山森林研報

15（2023）

本数に占める割合（％）

a ab ab ab ab ab bb ab ab ab ab ab c

100

Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ

80
60
40
20
0
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 01 02
Rt-

Sb-

Ct

菌種・系統名図-4 系統ごとの菌根形成の区分（タイプ B）
図中の系統名は表-7 に対応。アルファベットは，共通する文字を含まない系統
間の，菌根形成の何れかの区分に有意な差（Fisher’s Exact Test，p＜0.05）があることを示す。

月程度を必要とすることが明らかとなった。

本研究の方法は，無菌条件下にない通常の本研究の結果を，同じくクロマツの菌根苗

実験室内でも，外部からの雑菌の侵入や汚染作製を試みた先行研究と比較すると，三角フを防いで，目的とする特定の菌種や系統のみ

ラスコを使用した事例では，ショウロやアミを接種することが可能であり，系統間の菌根タケを接種し，4 か月間養成した苗木の 40～

形成の評価や，苗木と菌根菌との共生による54％に細根端の菌根化が確認された（赤間効果の測定など，菌根苗を材料とする試験に

1993）。培養瓶を使用した事例では，ショウ適していると考えられた。

ロを接種し， 3 か月間養成した苗木の細根に育苗用セルトレイを用いた方法は，厳密な菌糸束の形成が認められたものの，期間中に管理を必要としない半開放化の条件でも，特苗木の半数が枯死した（平佐 1995）。育苗定の菌根菌を接種した苗木を作製できると用セルトレイを用いた本研究の方法は，苗木期待される。また，本研究で採用した培土の1 本ごとの管理がしやすく，かつ給水トレイ

積層構造は，プランタでの栽培にも適応できと合わせても比較的安価に入手できる。また，る。菌根菌資材を播種床に施用する場合には，菌根化に要する期間には，過去の事例と照ら土壌の内部にすき込むなどして，種子もしくし合わせて大きな隔たりがなく，育苗期間中

は発芽直後の幼根が，資材に直接触れないよの雑菌の感染を防ぐ効果も確かめられた。

う配慮するべきであると考えられた。

苗木の発生率が低下する要因には，照度の不足，通気性の不良，培土基材の不適合が指5．謝辞

摘されているが（平佐 1995），本研究では富山県民福祉公園新港の森管理事務所の給水トレイの材質とサイズ，ロックウールや

鶴 克己所長（当時）には，クロマツ種子のパーライトの基材から，照度や通気性，培土採取に当たり，便宜を図っていただいた。森

の適性に関連する問題は出現しておらず，こ林研究所の斎藤真己博士には，セルトレイのれらの資材は菌根苗の作製に際して有用で利用を始め，苗木の養成に関する貴重な御助あると考えられた。

言や御指導を賜った。同じく岡山侑子博士には，本論文の執筆に際して的確な御指摘を賜った。また，森林研究所の諸氏には，調査や

4. おわりに19結果のとりまとめに御協力いただいた。ここすショウロと活性炭の効果．石川県林試研に記して，厚く感謝申し上げる。

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Summary
In this study with a view to examine the function of mycorrhizal fungi species or
strains which lived in a symbiotic relationship with the root of Japanese black pine
(Pinus thunbergii), we investigated the convenient method to synthesize pine seedlings
inoculated with a target strain. In this method, first the perlite medium which werespread with mycelium of two indigenous ectomycorrhizal fungi strains (Rhizopogonroseolus and Suillus bovines) were sandwiched by upper and lower layers of rock woolin plug trays. Pine seeds were put on the upper layers of rock wool to successfully
avoid obstruction to the germination. Secondly plug trays with pine seeds were housedin the water supply vessels with lid, and then pine seedlings were cultivated at theconstant temperature of 23℃ for about five months while sealing gaps between thevessel and the lid by paraffin film and preventing the other fungal contamination fromoutside. As a result, it was observed that the hyphae elongated on the rootlets ofall seedlings inoculated with each fungi strain, and the formation of fungal mantle
had large variation among these strains. On the other hand, the hypha was not foundon the rootlets of the seedlings not inoculated. It was indicated that the method
devised by this study enabled to inoculate a specified strain preventing the contamination of fungi in the non-sterilized laboratory, and was adequate for an examination using mycorrhizal seedlings for material.
Keywords: mycorrhizal fungi, plug tray, Pinus thunbergii, Rhizopogon roseolus, Suillus

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