The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.10 No.1 2021

ENZOOTIC BOVINE LEUKOSIS IN YOUNG CATTLE

症例報告

25 ヵ月齢黒毛和種肥育牛のリンパ球増多症を伴わない
地方病性牛伝染性リンパ腫
前澤誠希 1, 2） 川上侑記 1） 佐藤陽輔 1） 菅生樹春 3） 渡邉謙一 1）
堀内雅之 1） 松本高太郎 1, 2） 古林与志安 1, 2） 猪熊壽 4）1）

帯広畜産大学獣医学研究部門（〒 080-8555 北海道帯広市稲田町西 2 線 11）2）

岐阜大学大学院臨床獣医学連合講座（〒 058-1193 岐阜県岐阜市柳戸 1-1）

3）

菅生家畜診療所（〒 089-0242 北海道上川郡清水町字美蔓西 22 線 120）4）東京大学大学院農学生命科学研究科

連絡責任者氏名：前澤

動物医療センター（〒 113-8658 東京都文京区弥生 1-1-1）

誠希

連絡先：〒 080-8555 北海道帯広市稲田町西 2 線 11帯広畜産大学獣医学研究部門

TEL/FAX: 0155-49-5372
E-mail: obihiro_23035@yahoo.co.jp［要約］

25 ヵ月齢の黒毛和種肥育牛が成長不良を主訴に受診した。身体検査により、体表リンパ節の腫大が認められた。血液検査ではリンパ球数は正常範囲内であり、血液生化学検査では、乳酸脱水素酵素活性およびチミジンキナーゼ活性の高値が認められた。牛伝染性リンパ腫ウイルス（bovine leukemiavirus: BLV）遺伝子および BLV 抗体は陽性であった。病理学的検索では全身のリンパ節は腫大しており、病理組織学的に B 細胞性リンパ腫と診断された。PCR を用いた B 細胞遺伝子のクローナリティ解析では B 細胞のモノクローナルな増殖が確認され、inverse-PCR では BLV プロウイルスのバイクローナルな組込みが認められた。以上の検査より、本症例は地方病性牛伝染性リンパ腫と診断された。
キーワード：早期発症、地方病性牛伝染性リンパ腫、inverse-PCR18］。しかし近年、3 歳齢未満の肥育牛におけ緒言る EBL 発症症例［3, 20］、およびと畜場におけ地方病性牛伝染性リンパ腫（enzootic bovine

る若齢肥育牛の EBL 発生率の増加が報告され

leukosis: EBL）は牛伝染性リンパ腫ウイルスている［17］。今回、25 ヵ月齢黒毛和種肥育牛（bovine leukemia virus: BLV）感染によって Bにおける、リンパ球増多症を伴わない EBL 発細胞が腫瘍化する疾患であり［16］、その病態症症例に遭遇したためその概要を報告する。

はその他の動物種では悪性リンパ腫と定義される［8］。BLV 感染牛は無症状キャリアとなり、症例

3 年以上の潜伏期を経て、末梢血リンパ球増多症例は黒毛和種肥育牛、去勢雄、25 ヵ月齢で、症、様々なリンパ節の腫大およびそれに関連す同居牛に比べて成長が悪いことを主訴に受診しる臨床症状を発現するのが一般的である［16,た。身体検査にて、体表リンパ節の腫大が認められ、牛伝染性リンパ腫が疑われたため、病性鑑定を目的に帯広畜産大学に搬入された。搬入

受理：2020年6月17日－ 19 －

家畜感染症学会誌
10 巻 1 号 2021

若齢肥育牛における地方病性牛伝染性リンパ腫

時、 体 温 40.3 ℃、 心 拍 数 108 回 / 分、 呼 吸 数

活性値、LDH-2 活性値、LDH-3 活性値および84 回 / 分で、体高は目測で約 140 cm、活力はチミジンキナーゼ活性値の高値が認められた正常であった。耳下腺リンパ節、下顎リンパ節、［9, 19］。 病 原 学 的 検 査 と し て、nested

浅頚リンパ節および腸骨下リンパ節が腫大してpolymerase chain reaction（PCR） を 用 い た

おり、直腸検査にて複数の腫瘤を触知した。左BLV 特異遺伝子検査［4］および牛白血病エラ

腸骨下リンパ節の細針吸引検査（fine needle

イザキット（JNC, 東京）を用いた BLV 抗体検aspiration: FNA）を行ったところ、明瞭な核査を実施したところ、結果はどちらも陽性で小体を有する中型から大型の異型リンパ球があった。

84% 認められ、有糸分裂も散見された（図 1）。
4

症例は搬入翌日に病理解剖に供された。全身血液検査では、赤血球数（671 × 10 /µL）、白のリンパ節（下顎、浅頚、肺門、胃周囲、腸間血球数（10,200 /µL）、リンパ球数（3,978 /µL）膜、肝門、腎門、腸骨下、骨盤腔内、大動脈周4および血小板数（519 × 10 /µL ）は正常範囲

囲および膝窩リンパ節）は最大 20 × 5 × 5 cm内であった［7］。血液生化学検査では、総乳酸大に腫大していた（図 2）。腫大リンパ節の割脱水素酵素（lactate dehydrogenase: LDH）総面は乳白色髄様で、一部で出血巣が認められた。

Fig. 1. Cytological finding of FNA of the left subiliac lymph
node. The population is composed of large sized
lymphoid cells that have finely stippled chromain.
Wright-Giemsa stain.

Fig. 2. Enlarged left superficial cervical lymph node (arrowheads).

－ 20 －

The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.10 No.1 2021

ENZOOTIC BOVINE LEUKOSIS IN YOUNG CATTLE

また、第四胃周囲および腸間膜に脂肪壊死が認

末梢血、左浅頚リンパ節より FNA にて採材められた。検索した範囲では実質臓器に肉眼的した組織および病理解剖時に採取した組織から異常は認められなかった。病理組織学的検索で抽出した DNA を用い、PCR による B 細胞遺は、腫大リンパ節において、大型の核をもつ異伝 子 の ク ロ ー ナ リ テ ィ 検 査（B-cell clonality型リンパ球様細胞のびまん性増殖が観察され、PCR）［4, 6］を行ったところ、末梢血ではバン多数の核分裂像が認められた（図 3）。実質臓ドが認められず、浅頚リンパ節由来の材料では器での腫瘍細胞の増殖は、検査を実施した範囲いずれも明瞭な 1 本のバンドが確認された（図では認められなかった。免疫組織化学では、腫5）。また、同じ検体を用いて、inverse-PCR に瘍細胞は B 細胞マーカーである BLA36 陽性、よる BLV プロウイルス組込み部位のクローナT 細胞マーカーである CD3 陰性であり（図 4）、リティ検査［12］を行ったところ、末梢血では病理学的に B 細胞性リンパ腫と診断された。

バンドが認められず、浅頚リンパ節由来の材料

Fig. 3. Histopathology of superficial cervical lymph nodes.
Diffusely proliferation of neoplastic lymphoid cells wasobserved. Hematoxylin and eosin stain. Bar = 20 μm.

Fig. 4. Immunohistochemistry of superficial cervical lymph
node. Neoplastic cells were immunopositive for
BLA-36 (A) and negative for CD3 (B). Mayer’s
hematoxylin counterstain. Bar = 20 μm.

－ 21 －家畜感染症学会誌
10 巻 1 号 2021

若齢肥育牛における地方病性牛伝染性リンパ腫

Fig. 5. Result of PCR analysis for immunoglobulin heavy chain
gene clonality. Lane 1: blood; Lane 2: FNA; Lane 3: lymphnode; Lane 4: positive control (typical EBL); Lane 5:negative control (DW); M: molecular weight marker.

Fig. 6. Result of inverse-PCR. Lane 1: blood; Lane 2: FNA;
Lane 3: lymph node; Lane 4: positive control (typicalEBL); Lane 5: negative control (DW); M: molecularweight marker.
ではいずれも明瞭な 2 本のバンドが認められた牛で発症するとされていること［16］、および（図 6）。

BLV 感染の散発性牛伝染性リンパ腫症例が報告されていること［1］より、臨床および病理考察

学的検索のみでは EBL と確定できなかった。

本症例はリンパ球増多症が認められなかった

B 細胞は、分化の過程において免疫グロブリ

ものの、身体検査、FNA による細胞診およびン遺伝子の再構成を行うことで、抗原認識の多血液生化学検査より臨床的に牛伝染性リンパ腫様 性 を 獲 得 し て い る。 免 疫 グ ロ ブ リ ン 重 鎖と診断された。加えて、病理学的検索により、（immunoglobulin heavy chain: IgH）遺伝子は、B 細 胞 性 リ ン パ 腫 と 診 断 さ れ た。 本 症 例 は可変領域である V、D および J 領域をコードす

25 ヵ月齢であり、BLV 遺伝子および抗体が陽る遺伝子、およびそれに続く定常領域をコード性であったが、EBL は一般的に 3 歳齢以上のする C 遺伝子によって構成される［15］。DNA－ 22 －

The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.10 No.1 2021

ENZOOTIC BOVINE LEUKOSIS IN YOUNG CATTLEの再編成の際、任意の V、D および J 遺伝子がいなかったと考えられる。また、腫瘍細胞の血選択されるため、その組み合わせ数は膨大であ行性転移が起こらなかったために、病理学的検るが、B 細胞がモノクローナルな増殖をしてい索において実質臓器に腫瘍細胞が認められなる B 細胞性リンパ腫細胞では、単一の組み合かったと考えられた。EBL の病態は悪性リンわせとなる［15］。そのため、IgH 遺伝子の可パ腫であり［8］、EBL 症例では必ずしも末梢変領域を PCR で増幅すると腫瘍化 B 細胞集団

血中の腫瘍化リンパ球出現を伴わないことを再では、一定の長さの PCR 産物が形成され、電認識した。

気泳動により明瞭なバンドがみられる。一方、本症例は発育不良を主訴に受診しているが、非腫瘍化 B 細胞集団では、様々な長さの PCR発育不良の原因となり得る下痢や肺炎などの既産物が形成され、電気泳動像はスメア状となる。

往歴は無く、身体検査においてもリンパ節腫大

本症例はリンパ節を材料とした B-cell clonality

および直腸検査にて腫瘤を触知したこと以外のPCR により、明瞭な 1 本のバンドが認められ異常は認められなかった。加えて、病理学的検たことから、リンパ節における B 細胞のモノ索においてリンパ節腫大および腹腔内の脂肪壊クローナルな腫瘍性増殖が示唆された。

死以外に著変は認められなかった。このことか

EBL 発 症 牛 で は、 腫 瘍 化 B 細 胞 に お け る

ら、発育遅延はリンパ系組織における腫瘍細胞

BLV プロウイルスの組込み部位は 1 ないし複増殖による栄養不良が関係しているものと考え数個所の特定部位に集中している［3-5, 10-13］。

られた。また、第四胃周囲および腸間膜に認め一方、非 EBL 発症牛では BLV プロウイルスられた脂肪壊死による消化管機能の抑制も、食は様々な部位に組み込まれる［11］。そのため、欲低下を引き起こし、ひいては発育不良の一因

サザンブロットや inverse-PCR を用いた BLVであったと考えられた。

プロウイルス組込み部位のクローナリティ解析

本症例はリンパ球増多症が認められなかったは、EBL の診断法の 1 つとして用いられる［3,が、体表リンパ節腫大が認められ、FNA 検査4, 10, 13］。 本 症 例 は リ ン パ 節 を 材 料 に し たにより牛伝染性リンパ腫と判定するのは比較的inverse-PCR により明瞭な 2 本のバンドが認め容易であった。牛伝染性リンパ腫を疑ったものられた。このことは、リンパ節中の腫瘍細胞にのリンパ球増多症が認められない症例に遭遇しBLV プロウイルスがバイクローナルに組み込たとき、体表リンパ節の FNA 検査を行うことまれていることを示しており、本症例が EBLが牛伝染性リンパ腫の診断に有用であると再確であることを支持する。以上の検査より、本症認した。加えて、FNA より採材した組織を用例は 25 ヵ月齢と若齢牛ではあったものの、最い た B-cell clonality PCR お よ び inverse-PCR

終的に EBL と診断された。

を行うことで EBL であると診断することがで若齢牛における EBL 発症に関与する要因ときた。リンパ球増多症を伴わない EBL 症例でし て、BLV プ ロ ウ イ ル ス 組 込 み 部 位［5］、は、 リ ン パ 節 由 来 の 材 料 を 用 い た B-cell

BLV の子宮内感染［14］および BLV 株の違い

clonality PCR および inverse-PCR が有用であ［2］が報告されている。本症例においてもこれると考えられた。

らの要因が関与している可能性が考えられた

謝辞が、これらの検索は行っておらず、本症例のEBL 発症要因は不明である。

本研究の一部は JSPS 科研費 20H03142 およ

本症例ではリンパ球増多症が認められず、末び 20J10567 の助成を受けたものです。

梢 血 を 用 い た B-cell clinarity PCR お よ び
inverse-PCR においてバンドが認められなかっ

引用文献

主にリンパ節などのリンパ系組織で増殖をして［1］ Duncan, R. B., Scarratt, W. K. and Buehring, G. C.
2005. J. Vet. Diagn. Invest. 17: 190-194.
［2］ Inoue, E., Matsumura, K., Soma, N., Hirasawa, S.,
Wakimoto, M., Arakaki, Y., Yoshida, T., Osawa, Y.
and Okazaki, K. 2013. Vet. Microbiol. 167: 364-371.

おり、末梢血中に腫瘍細胞はほとんど存在して［3］ 前澤誠希，嘉陽静香，三浦沙織，小熊圭祐，泉た。一方、リンパ節由来の材料を用いた B-cellclonality PCR および inverse-PCR にて明瞭なバンドが認められた。したがって、腫瘍細胞は－ 23 －家畜感染症学会誌
10 巻 1 号 2021

若齢肥育牛における地方病性牛伝染性リンパ腫

對 博，堀内雅之，古林与志安，古岡秀文，猪熊 壽．2016．産業動物臨床医誌，6: 161-164.
［4］ Maezawa, M., Watanabe, K., Horiuchi, N.,
Matsumoto, K., Kobayashi, Y. and Inokuma, H.
2018. Jpn. J. Vet. Res. 66: 209-213.
［5］ Maezawa, M. and Inokuma, H. 2020. Arch. Virol.
165: 179-183.
［6］ Maezawa, M., Watanabe, K., Horiuchi, N.,
Matsumoto, K., Kobayashi, Y. and Inokuma, H.
2020. J. Vet. Med. Sci. 82: 61-63.
［7］ Mekata, H., Yamamoto, M., Kirino, Y., Sekiguchi, S.,
Konnai, S., Horii, Y. and Norimine, J. 2018. J. Vet.
Med. Sci. 80: 316-319.
［8］ Miller, J. M. and Van der Maaten, M. J. 1982. J.
Dairy Sci. 65: 2194-2203.

107-112.
［13］Oguma, K., Suzuki, M. and Sentsui, H. 2017. Virus
Res. 233: 120-124.
［14］Sajiki, Y., Konnai, S., Nishimori, A., Okagawa, T.,
Maekawa, N., Goto, S., Nagano, M., Kohara, J.,
Kitano, N., Takahashi, T., Tajima, M., Mekata, H.,
Horii, Y., Murata, S. and Ohashi, K. 2017. J. Vet.
Med. Sci. 79: 2036-2039.
［15］Schatz, D. G., Oettinger, M. A. and Schlissel, M. S.
1992. Annu. Rev. Immunol. 10: 359-383.
［16］Smith, B. P. 2015. Large Animal Internal Medicine.
5th ed. CV Mosby company, St. Louis［9］ 三浦沙織，猪熊 壽．2015．産業動物臨床医誌．
6: 149-153.
［10］Miura, S., Horiuchi, N., Matsumoto, K., Kobayashi,Y., Kawazu, S. and Inokuma, H. 2015. J. Vet. Med.
Sci. 77: 883-887.
［11］Miyasaka, T., Oguma, K. and Sentsui, H. 2015.
Arch. Virol. 160: 39-46.
［12］Murakami, H., Yamada, T., Suzuki, M., Nakahara, Y.,Suzuki, K. and Sentsui, H. 2011. Virus Res. 156:

［17］宗村佳子 , 小川 仁 , 杉山恵美 , 藤川 浩 , 村上賢二．2014. 日獣会誌．67: 523-528.
［18］田島誉士．2002．牛白血病．主要症状を基礎にした牛の臨床 .（前出吉光 , 小岩政照 監修）．
DAIRYMAN，北海道，pp 614-618.
［19］Tawfeeq, M. M., Miura, S., Horiuchi, N., Kobayashi,Y., Furuoka, H. and Inokuma, H. 2013. J. Vet. Med.
Sci. 75: 1167-1172.
［20］若槻拓司，杉山 定，高岡亜沙子，橋田明彦，
水上智秋，廣瀬友理，門田耕一，竹嶋伸之輔，間 陽子．2019．日獣会誌．72: 608-613.

－ 24 －The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.10 No.1 2021

ENZOOTIC BOVINE LEUKOSIS IN YOUNG CATTLE

A clinical case of enzootic bovine leukosis without lymphocytosis
in a 25-month-old Japanese black beef cattle
Masaki Maezawa1,2), Yuki Kawakami1), Yosuke Satou1), Kiharu Sugo3), Ken-ichi Watanabe1)
Noriyuki Horiuchi1), Kotaro Matsumoto1,2), Yoshiyasu Kobayashi1,2), Hisashi Inokuma4)1) Department of Veterinary Science, Obihiro University of Agriculture & Veterinary Medicine, Inada, Obihiro, Hokkaido080-8555, Japan2) 
United Graduate School of Veterinary Sciences, Gifu University, 1-1, Yanagido, Gifu 501-1193, Japan3) Sugo Animal Hospital, Biman, Shimizu, Kamikawa, Hokkaido 089-0242, Japan4) Veterinary Medical Center, Graduate School of Agriculture and Life Science, The University of Tokyo, 1-1-1 Yayoi,
Bunkyo-ku, Tokyo 113-8657, Japan
Corresponding to: Masaki Maezawa
Department of Veterinary Medicine, Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Inada,Obihiro, Hokkaido, 080-8555, Japan
TEL/FAX: 0155-49-5372
E-mail: obihiro_23035@yahoo.co.jp【Abstract】
A 25-month-old Japanese black beef cattle was presented with a chief complaint of poor growth. Physicalexamination revealed enlarged superficial lymph nodes. Hematology examination showed no lymphocytosis.
Serum biochemical findings included elevated lactate dehydrogenase activity and thymidine kinase activity. Nested
polymerase chain reaction (PCR) for bovine leukemia virus (BLV) and antibody against BLV were both positive.
At autopsy, generalized swelling of lymph nodes was observed. Histopathological analysis revealed diffuse
proliferation of large round neoplastic cells that were positive for BLA-36, and negative for CD3. Monoclonal
growth of B-cells was confirmed by B-cell clonality test. Inverse-PCR demonstrated biclonal integration of BLV
proviral DNA in the host genome. Based on these findings, it was diagnosed with enzootic bovine leukosis
occurred in young fattening cattle.
Keywords: early onset, enzootic bovine leukosis, inverse-PCR－ 25 －