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膜 期 目 ・ 広E
裏腹自では卵黄蛋白質は非常によく類似している
畠山正統・高寺憲司・大石陸生，2) and Kugao OISIMasatsugu HATAKEYAMA1) 区enjiTAKADERA王子):Similarities inv
itellin antigenicity and Vg mRNA nucleotide sequence among Symphyta(Hymenoptera)*1)
2)

Department01Biology，Facul
η 01Science，KobeUniv
ersity，Nada，Kobe，Hyogo65
えJapanOsakaSeかakuCO.Ltd，3‑2‑4Takaida‑hondori，Higashi‑osaka，Osaka577，Japan~E訟の卵黄蛋白書室は、一般に i壌の絡総体で合成されて体液中に分泌され (vitellogenin: Vg)、発育やの卵母細viteIlin:Vn) ことが知られている (Wyatt，1991;RaikhelandDhadialla，1992)。
胞に絞り込まれて蓄えられる (thaliarosaeを含むいくつかの昆虫で卵黄蛋白質 cDNAがクローニングされ、そ最近になって、カブラハパチ A
randis:Trewittetal.，1992，Heilmannetの構造が保存されていることがわかってきた(鞘麹目 Anthonomusg
993;双麹ElAedesaegypt
I:Ch叩 eta，.
l1994;膜主翌日 Athaliarosae:Kageyamaeta，.
l1994;鱗銀問 Bombyxa，.
l1ta，.
l1994)
0 しかしながら、これまで、昆虫の卵黄蛋白質の類似性を広く誘べた研究は i
茨られて
mori:YanoeShirk，1987)。そこで、今回は際主翌日、広腰互在日内での卵黄議自質の類似性を潟べ、た。
いる (カツ、ラハパチの卵黄蛋白質は、JIItの脂肪体中で 6.
5kbの mRNAから翻訳された 1本の長いポリペプチドが二李総総に蓄積される (L‑Vn，つに切断されて体液中に放出され江戸 Vg=180kDa，S‑Vg=50kDa)、それぞれ卵 fS‑Vn) (Hatakeyamaetal.，1990;Kageyamaeta，.
l1合9針。野外で採集した広藤蛮滋の 2科 12罵21獲について、‑および抗 S‑Vn抗体を用いたウエスタンプロッティング法で、ま卵黄援白質の抗原共通性をカブラハパチ抗 L'末端付近(プローた、卵黄蛋白質 mRNAの塩基配列の類似性については、カブラハパチ卵黄蛋白質 cDNAの 5品フa)、S‑Vg‑L‑Vg境界部分(プローブ b)、3'末端付近(プロープ c)の三つの断片をプローブにしたノーザン
ブロッティング法を Fおいて調べた (Fig.1)。

Table1にまとめたように、卵抽出物の SDSーポリアクリルアミドゲル電気泳動 (SDS‑PAGE) の結果、調L) と 1ないし数本の 40‑60kDaのポリベブチド (S)べたすべての種で、 l本の 180‑200kDaのポリペプチド (lkb'‑
一一一‑ω‑'acb5'BSSIPSBKBI至E 渡竃 .III11 I

BSSISS

11K3'

織機畿幾綴綴縁側繁; 議 長 議 議 繍 鰍 機 総 務 総 納 滋 撚jS‑Vg

L‑VgthaliarosaeVgcDNA (middle)andthreefragmentsusedFig.1 Restrictio
nmapoftheclonedAithinformationontranslatedsinglelon
gpolypeptidetob
eprocessedtoasprobes(top)，w:Sac1，SI:Sal1，P:
L‑VgandS‑Vgi
nthefemalef
atbodycells(bottom).B:BamHI，SPst1，K:Kpn1，H:HindI
II，E:EcoRI*Abstractofpaperreada
tthe3
1stAnnualMe巴tingofArthropodanEmbryologicalSocietyofJapan，Junel…2，1995(Higashi也u，Shizuoka).

Proc.Arthropod.E
mbryol.Soc.Jpn.β1)(1996)

54が検出され、 Lポリペプチドは抗 L‑Vn抗体とのみ、 Sポリペプチドは抗 S‑Vn抗体とのみ反応した。ミフシハ、 ArgenigrinodosaとAr.nipponensisは L、Sポリペプチドに加えて 100‑140kDaの l本の M ポ
バチ科の 2種リペプチドが検出され、これらはともに抗 L‑お よ び 抗 S‑Vn抗 体 の 両 方 に 反 応 し た 。 ハ パ チ 科 の Tenthredo
おでは L、Sポリペプチドに加えて 100‑140kDaの 2本の M ポリペプチドが検出され、高分子量のもhokkaidonの (M1) は抗 L‑Vn抗体と、低分子量のもの (M2) は抗 S‑Vn抗体と反応した。

haracteristic
sofyolkprotein
sandVgmRNAsin2
1symphytanspecies (Hymenoptera).
Table 1 CSpecies〆
U

一十一・+一+一+一+一+一十一十一+一十一十一+一 一十+一+一+一十一+

噌一++一++一+一十Aneugmenus kiotonおワラビノ、ノ fチ
Dolerussimilis
オスグロハパチ
Dolerussubfasciatus
スギナハパチ
Priophorus nigricans
ヘビイチゴハパチ
Athaliarosae車 場
カブラハバチAthaliainfu
mata**
セグロカブラハパチ
Athaliajaponica**
ニホンカブラハパチ
Athaliakashmirensis宇 *イヌノフグリハノ TチAnαntusluctザaハグロハパチ
Taxonusminomensis
ツマジロクロハパチ
Aglaostig
ma occかげosa*ホハラアカアシナガハパチ
Rhogogaster nigriv
entris
セマダラハバチ
Tenthredohokkaidonis

S‑Vn+一+一+一十一+一+一十一十一十一+一+一十一十十一

Tenthredinidae

L‑Vn

十+一++一+一+一

Arge
similisルリチュウレンジArge
captiva
ニレチュウレンジtAη
L M S L M S L S L S LSLSLSLSLSLSLSLSLSLSLSLSLMMSLSLSLSLS

ホ*aeoジηレωι即ンュチmゥン
日スe ヵ山伊ア
ほAA

Argenipponensis
ニホンチュウレンジ

Westernblotr
eactiontoantiseraMacrophya crassulifor
mis
コマルクロハパチ
Macrophya ignav
a**
クロハパチ
Macrophya malaisei
マライセクロハパチ
Pachyprotasis sp.

++++AJ四)Ndb
R 凶km伽 (Polypeptidedetectedon
SDS‑PAGEホFamilyGenus

6.
5Northernblothybridizationwit
hprobesab

十+ND ND ND

6.
5ND+NDND ND ND
ND.
‑ ND ND

6.
5十十ND

ND ND ND
ND ND ND

+ +6.
5十6.
5+ +十6.
5++十6.
5+++

ND ND ND

6.
5+ +ND6.
5十++6.
5十十ND

6.
5++十6.
5+ +6.
5+6.
5+ +NDND NDND

ND ND ND

ND:notdone*
L:1
80‑200kDa，M:100‑140kDa，S:40‑60kDa*事 Bothfemaleandmalehaemolymphs
ampleswerea
nalyzedandVgsweredetectedonlyi
nfemales.

55
これらのうち、 2科 4腐 7稜で体液蛋白質をウエスタンプロッティング法で調べたところ (Table1中の**印)、卵 f
白出物で検出されたボリペプチドに対応、するものは雌体液中にのみ検出され、卵抽出物中のポリペプチ
ドを Vn、体液中のポリペプチドを Vgと決定できた。
さらに、 2科 8属 14種について縦脂肪体から捻出した全 RNAについて議べたところ、非常に厳しい条件下で、カブラハパチ卵黄蛋白質 cDNAの三つのどのヅロープとも反応する 6.5kbのバンドが検出され、これらは卵黄蛋白質 (Vg) の mRNAであると結論した。しかしながら、 M‑Vnをもっ 2種のうち、 ArgenigrinodosaのmRNAはプロープ cとは&:Jt.せず、また、 Tenthredohokkaidonisの mRNAはプローブ bとの反応性がプロープa，との反応性に比べて非常に弱かった。
これらの結果から、草案惣 g広綾蛮呂内では卵黄蛋白質 i
こ非常に高い抗原共通性があり、 mRNAの一次構造もよくま質似していることがわかった。広腰亜践ではカブラハパチの場合と同様に、 i
雌の脂肪体中で 6.
5悼 のmRNAから翻訳された 1本のポリペプチドが切断されて体液中に分泌され、発育中の卵母細胞に取り込まれるものと考えられる O また、 M‑Vnを持つ 2種、 Argenigrinodosaと Tenthredohokkaidon
かでは、抗体との反応、lf
立とは異なる選択的切断部位が存在す性と用いたプロープ断片との反応性の違いから、 L‑Vnと S‑Vnの切断音Iる可能性が示唆される (Fig.2)。
害事業援自愛の特徴をもとに主主虫をグループ分けした場合、これまでのところ、複数のボリペプチドからなる卵黄家自質をもっ多くの E忠良(今回の結果から広綾互li:13も含まれる)と、分子量の大きな i本のポリペプチドからなる卵黄蛋白質をもっミツバチ A
pismelliferaなどの細腰亜日 (WheelerandKawooya，1990;Oishieta，.
l1993) は、別々のグループとして扱われている (HarnishandWhite，1982)が、同じ白内でも亜日の違いによって卵黄潔白質の特徴が異なるのは何に起因するのか興味のもたれるところである。今後さらに、細腰亜日の卵黄蚕El号室およびその mRNAを調べることにより、広腰亜日との違いについて検討する予定である。

Argenigrinodosa‑‑a=コbS‑
VnM‑Vn
組長ーしVn(+)‑Vn(+)
antIS目Tenthredohokkaidonisca圃 酬 酬cbv
しVnM‑Vn(M2)
an!
I‑
L‑
Vちゃ)
an!
I‑
SωVn(+)M‑
Vn(Ml)
朗話ーしVn(+)
却ti‑
S‑
Vn(ー}

Fig.2 Possiblepres
叩 ceo
falter
nativ
ec
lcav
ag
esites(arrowheads)int
hetwospecies，Argenigrι
nodosaandTenthredohokkaidonisbothhav
ingM Vnsi
nadditiontoL andS‑Vn.Theprobeshybridizedwel
landonlyweakl
ywiththeVgmRNAsa
reindicatedb
ysoli
dboxesanddotte
dboxes，res
pectively.Thep
robew
hic
hdidnothybridizei
sindicatedbya
nopen
box.
司輪

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