研究物語

酵素を“誤作動”させて行う有機合成―― 酵素反応を有機化学に利用するための反応制御

荘司長三 ・渡辺芳人
11酵2

名古屋大学大学院理学研究科・2 同大学物質科学国際研究センター素のシトクロム P450（P450）に，本来の対基質（compound I）によって，不活性な有機化合物の水酸化を行に形状がよく似た疑似基質（デコイ分子）を取りうことが知られている．なかでも，細菌由来の P450 は触媒込ませ，意図的に誤作動を引き起こす新しいバイオ触媒系を開発した．この反応システムにより，通常は反a）b）応しない有機化合物を P450 で酸化することができた．

N

酵素反応を不活性化合物へ応用する

N

水酸化反応は，医薬品に代表される機能性物質の合成に不可欠な重要な反応であるが，高温・高圧など過酷な条件を必要とする場合が多く，より環境に配慮した合成法が求められている．一方，生体内で活躍する多くの金属酵素は，常温・常HOOCヘムc）HHO3＋S

おり，これらの酵素反応を高度に制御できれば，環境負荷の­Cys

S4＋

千葉大学大学院自然科学研究科博士後期課程修了，＜研究テーマ＞バイオ触媒の開発，細菌由来タンパク質の機能化，＜趣味＞コーヒー

わたなべ・よしひと ● 名古屋大学理事・副総長（併任），同大学物質科学国際研究センター教授，1982 年筑波大学大学院化学研究科博士課程修了，＜研究テーマ＞生物無機化学，＜趣味＞スキー，ドラム，エレキギター

S

­Fe

­S

S2＋

­

Cys

compound I＋S

S

H2O2

Cys

S3＋

­

Cys

H2O

e

H
S＋OO

H

3＋

FeS

Cys
O2
O・OFe

過酸化水素
シャントパス­系から供給される電子とプロトンを使って酸素分子を還元的

しょうじ・おさみ ● 名古屋大学大学院理学研究科准教授，2002 年

COOH

3＋OFeをもっている．そして P450 は図 1（c）の外側の経路で還元種であるオキソフェリルポルフィリン π- カチオンラジカル

H 2O

3＋

酸化物 SO

その中心部分にヘムと呼ばれる鉄ポルフィリン錯体（図 1 b）に活性化し，通常よりヘムの酸化当量が高い状態の酸化活性eFeFe

低い理想的な物質生産が可能になると考えられてきた．
に存在する酵素群で，三角形プリズム型の構造をしており，S

基質SFe圧の温和な条件下で，不活性化合物の化学変換反応を行って

図 1（a）に示すシトクロム P450（P450）は，生物界に広範

N＝飽和炭化水素や芳香族化合物などの不活性な有機化合物の

N

3＋

Fe

­＋HS

OH

O3＋Fe

­Cys

S

Cys＋HS­OOFeS­3＋­Cys

図 1 シトクロム P450a）後述するフェノールの合成を達成したシトクロム P450BM3 の結晶構造（ PDB ID：1fag），b）ヘムの構造，c）シトクロム P450 の反応機構．S が長鎖脂肪酸に対応し，長鎖脂肪酸が取り込まれると，ヘムに配位していた水分子が取り除かれると反応が始まる．

化学 Vol.68 No.9
（2013） 39

研究物語
活性が非常に高いために，バイオ触媒への利用が期待されてを生成し，長鎖脂肪酸を水酸化する 3）．安価で取り扱いやす

きたが，基質特異性（基質に対する選択性）の高さから対象のい過酸化水素を利用できる長所はあるが，P450BSβ は基質に基質以外とは反応せず．汎用が困難であった．本来の基質以対する選択性が非常に高く，長鎖脂肪酸以外を水酸化するこ外の化合物を水酸化させるにはこの高い基質特異性を変えるとはできなかった．なぜなら，基質のカルボキシ基が酸化活必要があり，遺伝子操作によって酵素を構成するアミノ酸を性種の生成に不可欠なため，長鎖脂肪酸以外を水酸化しない変更する変異導入を繰り返す手法を中心に多くの研究が展開ように精密に設計されていたからである．パルミチン酸結合されてきた．型の P450BSβ の X 線結晶構造解析から 1），長鎖脂肪酸のカルボキシ基がヘム近傍の 242 番目のアルギニン（Arg242）と静電過酸化水素駆動型 P450 との出合い相互作用して固定され（図 2 a），このカルボキシ基が過酸化筆者（荘司）が P450 の研究を始めたのは，博士研究員と水素を用いた酸化活性種生成反応において，プロトンの受けして名古屋大学の渡辺芳人研究室に着任した 2005 年からで渡しを行う一般酸塩基触媒として機能するために，高い基質あった．筆者は高分子化学で学位を取得後，博士研究員とし特異性を示していた（図 2 b）．

てポルフィリン超分子組織体の研究を 3 年間行ったのち名古屋にやって来たので，タンパク質を取り扱った経験はなく，思いついた「デコイ」分子タンパク質や酵素に関してはまったくの素人であった．接点

試行錯誤を繰り返しながら研究を続けて半年ほど経ったあといえば，P450 が鉄ポルフィリン錯体を含むヘムタンパクる日，それ自体は水酸化されないが，カルボキシ基をもつた質であるということだけだった．しかし，逆に素人であっために酸化活性種は生成されてしまう疑似基質（デコイ分子とことが幸いし，P450 の先行研究に縛られず，後述する少し命名）を取り込ませて P450BSβ を強制的に「ON」の状態にして変わった発想で研究を展開できたのだと自負している．

しまおうとの発想が生まれた．デコイとは，カモ（鳥）に似せさて，過酸化水素を触媒反応に利用可能な珍しい P450 がてつくられた模型で，標的をおびき寄せる仕掛けや囮を意味とのことで，この P450 を使って実用的なバイオ触媒する．デコイ分子を取り込ませることで P450BSβ の酸化活性を開発しようと決め，当時学部 4 年生であった藤城貴史君

種は生成されても消費されずに残ってしまうはずなので，ことともに研究を始めたのだが，この過酸化水素駆動型 P450の活性種と目的の第二の基質を反応させればよいのでは，との反応機構が特殊であったため，しばらくは進展もなく時間単純に考えたのである（図 3）．

ある1,2）だけが過ぎていった．研究対象としたのは，枯草菌（納豆菌

この発想は，実験的事実に裏付けられたものであった．

も枯草菌の仲間）由来の P450BSβ で，例外的に図 1（c）の中央

P450BSβ は炭素数が 14 前後の長鎖脂肪酸（ミリスチン酸）をを通る過酸化水素シャントパスと呼ばれる経路で酸化活性種効率よく水酸化するが，鎖長が短くなるにつれて水酸化活性a）

242Argb）Arg242

N H

H2N ＋ N H
長鎖脂肪酸O­（CH2）
9CH3
O

H

H

Arg

H2O2

N H

H2N ＋ N H

H

O

242

Fe（CH2）9CH3O

H

H2O3＋O
­H

Feヘム

図2242

N H

H2N ＋ N H
過酸化水素駆動型のシトクロム
P450BSβHa）長鎖脂肪酸結合型の活性部位の構造（ PDB
ID：1izo），b）過酸化水素を利用する酸化活性種の生成と長鎖脂肪酸の水酸化反応の反応機構．

40 化学 Vol.68 No.9（2013）（収率32％）OHHO（CH2）
9CH3OHO242（収率58％）
Arg

OArg

O
­S363（CH2）
9CH3
O4＋

FeH 2O＋N H

H2N ＋ N H

O

HO（CH2）
9CH3
O

HO O
FeH3＋

­

­S

363

Cys

Cys

ミリスチン酸
（CH2）
9CH3

HOH

3＋

­

­SO

O

363

Cys

S

363

Cys

酵素を“誤作動”させて行う有機合成
エチルベンゼン

長鎖脂肪酸
242

Arg

Arg242

デコイ分子

Arg242
Arg242

3＋

Fe

3＋

Fe3＋

Fe
H2O2
H2O

H2O23＋

Fe

P450BSβH2O

OH

Arg242

Arg242

OH4＋

酸化活性種

O
＝ C （CH2）
CH3nO

O
Fe＋＝O

C （CH2）12 CH3
ミリスチン酸
HO4＋FeHO＋HO
n ＝2〜8短鎖アルキルカルボン酸

図 3 シトクロム P450BSβ による水酸化反応の模式図
長鎖脂肪酸の水酸化反応（左）とデコイ分子（鎖長の短いアルキルカルボン酸）を用いるエチルベンゼンの水酸化反応（右）．

が減少し，炭素数位 10 以下のアルキルカルボン酸になるとことで，結果的にさまざまなデコイ分子を試すことができた

水酸化することができなくなる．また，長鎖脂肪酸の水素原のは，まさに「塞翁が馬」であった．

子を重水素で置換した重水素化長鎖脂肪酸の場合には，反応ヘキサン酸がデコイ分子として働くのかを確認するため，速度が遅くなることがすでに報告されていた ．そこで，鎖グアイアコールの一電子酸化反応を行った．グアイアコール

長が短く，すべての水素原子が重水素化された重水素化ヘキは，酸化されると可視光領域に吸収をもつ二量体を形成する

4）

サン酸を使おうと試薬カタログを調べてみると，非常に高価ため（表 1 参照），反応溶液が褐色に変化するので，視覚的な代物であった（2013 年 7 月現在で 1 g ＝ 6 万円，CasNo：に反応の進行を確認できる．ヘキサン酸のエタノール溶液を95348-44-0）．「鎖長が短いヘキサン酸は，そもそも酸化さP450BSβ とグアイアコールの混合液に加え，最後に過酸化水れないはずなのだから重水素化する必要はない」と自分にい素を加えてみると，驚くほど早く溶液が褐色に変化した．「久い聞かせ，高額な重水素化ヘキサン酸の購入を諦めて 25 mL

しぶりに化学の神様のご褒美をいただいた」と感じた瞬間でで 1500 円程度であったヘキサン酸を購入し，仮説を実証すあった 5）．さらに興味深かったのは，デコイ分子のアルキルる実験を開始した．このときに重水素化物を使用しなかった鎖長により酸化活性が変化し，なかでもヘプタン酸が最大の

表1

グアイアコールの一電子酸化反応活性とアルキルカルボン酸（デコイ分子）の鎖長の関連

OOOH

P450BSβ，H2O2O

O・

デコイ分子

デコイ分子（炭素数）
な し酢 酸（C2）プロピオン酸（C3）ブタン酸（酪 酸）（C4）ペンタン酸（吉 草 酸）
（C5）ヘキサン酸（カプロン酸）（C6）
ヘプタン酸（エナント酸）（C7)
オクタン酸（カプリル酸）（C8)ノナン酸（ペラルゴン酸）（C9）
デカン酸（カプリン酸）（C10)
ミリスチン酸（C14）O

回転数 / 分
0026
230
1900
2420
3750
2490
2380
2360
14

表2

デコイ分子存在下での P450BSβ による酸化反応
OSO

P450BSβ，H2O2S＊O

P450BSβ，H2O2＊O­1ヘキサン酸（C6）OH
P450BSβ，H2O2＊

330 min
80 ％ e.e.
（S）­128 min
68 ％ e.e.
（R）

ヘプタン酸（C7）O­1514 min
29％ e.e.（R）ヘプタン酸（C7）OP450BSβ，H2O2­1112 min

ヘプタン酸（C7）OH

化学 Vol.68 No.9（2013） 41

研究物語活性を与えたことである．すなわち，デコイ分子の構造によ能しなかった．PFC の疎水的な性質により，親水的な過酸り酵素反応活性を制御できることを示していた（表 1）5）．

化水素が取り込まれにくくなったためと，電気陰性度の高い大学院入試に無事合格し，研究を再開した藤城君にこれフッ素の影響で PFC のカルボキシ基の酸性度が低い（すなわらの実験事実を伝えると，彼は表 2 のような長鎖脂肪酸ちより酸性である）ため，PFC のカルボキシ基は過酸化水素とはまったく構造の異なるさまざまな基質の酸化反応が，を利用する酸化活性種の生成反応で一般酸塩基触媒としてはP450BSβ にデコイ分子を添加するだけで達成できることを，機能しなかったのではないかと考えている．

．また，デコイ分子デコイ分子としては使えないと諦めていた PFC に再び着が長鎖脂肪酸と同じように P450BSβ に取り込まれているこ

目したのは，P450 のなかでも最大の活性をもつことで知らとを X 線結晶構造解析により明らかにし，本反応が P450BSβれる巨大菌由来の P450BM3（図 1 a）にデコイ分子を適用さが鎖長の短いアルキルカルボン酸を長鎖脂肪酸と勘違いした

せようと研究を開始してすぐのことであった．この研究は，あっという間に明らかにしてくれた

5 〜 7）

博士研究員の川上了史博士とともに 2009 年から始めた．川誤作動による反応系であることを実証した ．
8）

さらに藤城君は，別の過酸化水素を利用可能な P450SPα9）

上博士は，ホヤによるバナジウムの濃縮に関する研究で博士にもデコイ分子を利用する手法が適用できること，また号を取得後，すぐに博士研究員として着任したので，ゼロかP450SPα ではデコイ分子にイブプロフェン（カルボキシ基をらバイオ酵素の開発に挑戦したことになる．渡辺研は，筆者もつ解熱鎮痛剤）が利用でき，イブプロフェンの α 位の不斉らを含め異分野からの挑戦者が多く，少し変わった研究が育によって不斉選択的な酸化反応が可能であることも発見してつ土壌があり，P450BM3 の研究も川上博士との議論を繰りくれた．デコイ分子を用いて，生成物のエナンチオ選択10）性をも制御可能な反応系を開発することができたことになる．

返すことで成熟されていった研究であったと思う．

P450BM3 は，ほかの P450 と同じく酸素分子を還元的に活性化して酸化活性種を生成し（図 1 c），炭素数が 16 前後のフッ素で酵素を騙す

11,12）．
長鎖脂肪酸のアルキル鎖末端部分を水酸化する（図 4 b）

フッ素の原子半径は水素原子に近く，基質の水素をフッP450BSβ とは長鎖脂肪酸の取り込まれる向きが逆で，カル素で置換したフッ素化物の構造は，本来の基質によく似たボキシ基はタンパク質の外側にある 47 番目のアルギニンものになる．一方で，C­F 結合は C­H 結合よりも安定で， （Arg47）および 51 番目のチロシン（Tyr51）と相互作用するのP450 は C­F 結合を水酸化することができないため，フッだが（図 4 a）13），P450BM3 も長鎖脂肪酸の取り込みが反応素化物は水酸化されない不活性な基質となる．筆者らは，研開始のトリガーとなっていて，長鎖脂肪酸が適切な位置に取究の早い段階でフッ素化物がデコイ分子として利用できるのり込まれた場合にのみ酸化活性種を生成するように設計されではないかと考えていた．しかし，前述の過酸化水素駆動型ている．したがって，長鎖脂肪酸と構造が大きく異なる基質の P450BSβ では，長鎖脂肪酸の水素をフッ素に置換したパーの場合には酸化活性種が生成されず，酸化反応は進行しない．

フルオロアルキルカルボン酸（PFC）はデコイ分子としては機

そこで，鎖長の短いアルキルカルボン酸を P450BM3 に取り込ませれば，長鎖脂肪酸以外の基質

Oa）b）
OH

長鎖脂肪酸

4751

ヘムOOH
OH 収率 43 ％OOHしてしまい，筆者の思い描いた第二の基質が優先的に酸化される反応系にはならなかった．

O42 化学 Vol.68 No.9（2013）

では，酸化活性は低いものの，鎖長が短いカルボン酸が水酸化される反応が進行

OHOH 収率 23 ％を水酸化できるだろうと考えた．しかし，そうは問屋が卸さなかった．P450BM3Tyr

P450 BM3O 2 ＋ NADPH

OH 収率 34 ％Arg

デコイ分子の水酸化を防ごうと議論し
図4

長鎖脂肪酸水酸化酵素のシトクロム P450BM3a）シトクロム P450BM3 が行う長鎖脂肪酸の水酸化反応，b）活性部位の構造（ PDB ID：1fag）．

ているうちに，デコイ分子として忘れ去られていた PFC の存在を思いだした．
過酸化水素駆動型の P450BSβ とは異なり，P450BM3 では，長鎖脂肪酸のカルボキ酵素を“誤作動”させて行う有機合成
長鎖脂肪酸4747Arg

プロパンArg

47Arg

デコイ分子H2O3＋3＋Fe＋H­Arg

HOFe47O2 ＋ 2H＋＋2e­H2O

H2O

3＋O2 ＋ 2H ＋2eFe

H2O47

Arg

3＋FeP450BM3Arg47
OHO
4＋FeO

OH＋4＋Fe＋プロパノール OH
O＝ HOOH H H H H H H H H H H H H H

H H H H H H H H H H H H H H
パルミチン酸H

H
H

F F F F F F

＝ HOF

F
F

F F F F F F F F
パーフルオロアルキルカルボン酸

図 5 シトクロム P450BM3 による水酸化反応の模式図
長鎖脂肪酸の水酸化反応（左），デコイ分子（パーフルオロアルキルカルボン酸）を用いるプロパンの水酸化反応（右）．

シ基は酸化活性種生成には直接に関与していないので，PFC

PFC のアルキル鎖長により P450BM3 の反応空間サイズのは単純に水酸化されないデコイ分子として利用できるはずと制御が可能であった 14）．ほかにも，加圧下（5 気圧）ではある予想したのだ（図 5）．

が，不活性なエタンの水酸化に成功し，エタンを直接的にエ「PFC でやってみよう」との結論に達してほどなくして，タノールに変換することができた 15）．

川上博士がガス状アルカンであるプロパンの水酸化実験を行ったところ，PFC の効果は絶大であった．筆者らの狙い

ベンゼンの水酸化によるフェノールの合成

どおり，P450BM3 は長鎖脂肪酸と構造の似た PFC を対象

ベンゼンは非常に安定な芳香族化合物であり，ベンゼン基質と勘違いして取り込み，P450BM3 のスイッチは強制をフェノールに変換する工業的手法は，ベンゼンを 250 ℃，的に「ON」の状態になった．フッ素を使って P450BM3 を騙30 気圧でプロピレンと反応させてクメンに変換し，クメンすことができたのだ．表 3 に P450BM3 によるさまざまなを酸化してフェノールを合成するクメン法が主流である．ク．プロパンの水酸化反応では，

メン法はベンゼンを高温・高圧で反応させる必要があるだけ

毎分 68 回転とガス状アルカンの水酸化としては比較的高いでなく，副生成物として多量のアセトンが生成してしまうた

触媒活性を示した 14）．さらに興味深いことに，プロパンのよめ，ベンゼンを出発物質とする新たなフェノール合成法の開うな小さなアルカン分子の場合には鎖長の長い PFC（炭素発が求められてきた．また，ベンゼンを水酸化して得られる

数 10）が，シクロヘキサンのような比較的大きなアルカンのフェノールは，ベンゼンよりも酸化されやすく，過剰酸化物場合には鎖長の短い PFC（炭素数 9 と 8）が効果的に機能し，を形成してしまうことが多いため，ベンゼンの直接酸化反応基質の水酸化反応を示す

14 〜 16）

表3基質

PFC（デコイ分子）存在下での P450BM3 の活性14～16）
生成物

エタン（5 気圧） エタノール
プロパン

最大活性を与える
デコイ分子（炭素数）

回転数 / 分パーフルオロデカン酸（PFC10）0.67

パーフルオロノナン酸（PFC9）113

パーフルオロノナン酸（PFC9）

120

2 - プロパノール

パーフルオロデカン酸（PFC10）シクロヘキサン

シクロヘキサノール

ベンゼン

フェノール

パーフルオロノナン酸（PFC9）

ブタン

2 - ブタノール

67110

化学 Vol.68 No.9
（2013） 43

研究物語
表4

PFC（デコイ分子）存在下での P450BM3による一置換ベンゼンの水酸化反応
基

質
CH3Cl

主生成物
CH3OH

NO2によるアミノ酸置換を繰り返す「人工進化法」に代表される変回転数 / 分

異導入が一般的で効果も大きいが，本手法は，天然に存在する酵素をそのまま利用でき，遺伝子操作によってタンパク質220自体の改変をする必要がない．変異導入と組み合わせて利用することも可能であるので，本手法を酵素の機能改変法のもCl
OH

OCH3での展開を紹介した．酵素の機能改変というと，遺伝子操作

OCH3OHう一つの柱として確立することを目指して，第二世代のデコ120イ分子の合成と機能評価を行っている．
筆者は研究を進めるにあたり，遊び心をもって研究を楽し260

むことを大切にしている．現在の研究は，天然に存在するタンパク質が自然界では滅多に接することがない化学物質と出NO2OH合うと，通常とは異なるタンパク質のリアクションがあると0.9信じて，「タンパク質を相手にした悪戯」を繰り返しているといったところだろうか．科学の研究というと，どうしても堅によるフェノールの合成では，このフェノールの過剰酸化反苦しく考えがちであるが，遊び心をもつことを忘れなければ，応をいかにして抑制するかも重要であった．人とは違う独創的な研究を発想できるのではないかと思ってガス状アルカンの水酸化が一段落ついたころ，「デコイ分いる．

子を利用するシステムで，ベンゼンを水酸化できたらインパクトありますね」と何気なく話していたところ，川上博士からベンゼンの水酸化反応が進行するデータを見せられた．
「室温でベンゼンが水酸化できるの？ これすごくない？」と驚い

謝辞：本稿で紹介した研究は，博士研究員と学生諸氏の努力の賜物であり，心から感謝いたします．また，国内外の多くの共同研究者の方がたおよび研究を支援いただいた研究室のみなさまに深く感謝いたします．本稿で紹介した研究成果は，文部科学省科学研究費補たのを覚えている．そして当時，修士 1 年生であった國松助金基盤研究 S，若手研究 A，新学術領域研究「直截的物質変換をめ辰弥君がこの反応を丹念に調べて，ベンゼンからフェノールざした分子活性化法の開発」の研究助成により行われました．この場が選択的に得られることを明らかにしてくれた（表 3） ．
16）を借りて感謝申し上げます．

フェノールが過剰に酸化されることがなかったのは，疎水性のアミノ酸から構成される P450BM3 の活性部位と PFCの疎水的な性質のため，親水的なフェノールはただちに活性

参考文献1 ）D.-S. Lee, A. Yamada, H. Sugimoto, I. Matsunaga, H. Ogura, K.
Ichihara, S.-I. Adachi, S.-Y. Park, Y. Shiro, J. Biol. Chem., 278, 9761
部位から放出されたからと考えられる．期せずして，ベンゼ（2003）．2）I. Matsunaga, A. Ueda, T. Sumimoto, K. Ichihara, M. Ayata,ンの水酸化に理想的な反応空間が形成されていたのだ．さH. Ogura, Arch. Biochem. Biophys., 394, 45（2001）．3）I. Matsunaga, A.らに國松君は，一置換ベンゼン（トルエン，クロロベンゼン， Ueda, N. Fujiwara, T. Sumimoto, K. Ichihara, Lipids, 34, 841（1999）．4）I.
Matsunaga, A. Yamada, D.-S. Lee, E. Obayashi, N. Fujiwara, K. Kobayashi,アニソール）などをオルト選択的に水酸化できることを発見
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Fujishiro, H. Nakajima, M. Kim, S. Nagano, Y. Shiro, Y. Watanabe, Angew.してくれた．メタ配向性のニトロベンゼンやアセチルベンゼ
Chem., Int. Ed., 46, 3656（2007）．6）O. Shoji, C. Wiese, T. Fujishiro,
ンでさえもオルト位が選択的に水酸化されるのは驚愕である
C. Shirataki, B. Wünsch, Y. Watanabe, J. Biol. Inorg. Chem., 15, 1109
（表 4）16）．筆者らはこれを位置選択的な芳香環の水酸化の第 （2010）．7）T. Fujishiro, O. Shoji, Y. Watanabe, Tetrahedron Lett., 52,395（2010）．8）O. Shoji, T. Fujishiro, S. Nagano, S. Tanaka, T. Hirose,一歩と考えており，今後はデコイ分子の構造を変えることで， Y. Shiro, Y. Watanabe, J. Biol. Inorg. Chem., 15, 1331（2010）．9）T.
Fujishiro, O. Shoji, S. Nagano, H. Sugimoto, Y. Shiro, Y. Watanabe, J. Biol.
この位置選択制を制御できる反応システムへと展開しようと
Chem., 286, 29941（2011）．10）T. Fujishiro, O. Shoji, N. Kawakami, T.
Watanabe, H. Sugimoto, Y. Shiro, Y. Watanabe, Chem. Asian J., 7, 2286している．
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12）S. S. Boddupalli, B. C. Pramanik, C. A. Slaughter, R. W. Estabrook, J.
●A. Peterson, Arch. Biochem. Biophys., 292, 20（1992）．13）H. Y. Li, T. L.
Poulos, Nat. Struct. Biol., 4, 140（1997）．14）N. Kawakami, O. Shoji, Y.
以上，基質特異性の高い細菌由来の P450 にデコイ分子を
Watanabe, Angew. Chem., Int. Ed., 50, 5315（2011）．15）N. Kawakami,
O. Shoji, Y. Watanabe, Chem. Sci ., 4 , 2344（ 2013）． 16 ）O. Shoji, T.
添加し，意図的に誤作動を引き起こすと，酵素の基質特異性
Kunimatsu, N. Kawakami, Y. Watanabe, Angew. Chem., Int. Ed., 52, 6606
を大きく変換することができる新規手法の発見経緯とこれま （2013）．

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