福岡県保健環境研究所年報第35号、59－64、2008

原著
福岡県で分離された稀な血清型の志賀毒素産生性大腸菌について
中村祥子、江藤良樹、濱﨑光宏、村上光一、竹中重幸、堀川和美
1996-2008 年（12 年間）に当研究所に搬入された志賀毒素産生性大腸菌 874 株のうち、O157、O26 及び O111 以外の稀な O 群血清型 23 株について、生化学性状、薬剤感受性について試験し、さらに病原因子について調査した。23 株は有症者 16 名（うち 2 名は食品取り扱い従事者定期検便で検出）、無症状者 7 名（うち 4 名は食品取り扱い従事者定期検便で検出）から分離され、O 群血清型及び H 血清型の組み合わせにより 15 種類に分類された。今回の調査の結果、食品取り扱い従事者定期検便から O91が多く分離されたこと、有症者でも eaeA や hlyA が検出されない株があること、血便を呈していても eaeAが検出されない株がある事が明らかになった。
［キーワード：志賀毒素産生性大腸菌、稀な O 群血清型、食品取り扱い従事者定期検便、O91］
１に CT サプリメント（OXOID）を添加した CT-SMAC 寒はじめに
志賀毒素産生性大腸菌感染症は、腹痛、下痢、血便を天培地、無糖の MacConkey Agar Base （Becton, Dickinson

主症状とし、重篤化すると溶血性尿毒症症候群（Hemolyticand Company）に α-L（+）-Rhamnose Monohydrate（和光uremic syndrome: HUS）を引き起こす。2004 年現在、O純薬）と L（-）-Sorbose（和光純薬）をそれぞれ 1 ％ず

1）

、本邦で分離株数の多い血清つ添加した Rhamnose - MacConkey 寒天培地及び Sorbose

型は O157、O26、O111 であるが 2） 、O157、O26、O111- MacConkey 寒天培地並びに Luria Bertani（LB）寒天培

以外の稀な O 群血清型の志賀毒素産生性大腸菌は、食品地（Becton, Dickinson and Company）に塗抹し、35±1 ℃取り扱い従事者の定期検便においても分離され、公衆衛で 22±2 時間培養した。コロニーの色調から糖分解能や生学上重要である。しかし、これら稀な O 群血清型の志酵素の有無について判定した。

群血清型は 181 種類あり寒天平板培地上に発育したコロニーを釣菌し、TSI 寒賀毒素産生性大腸菌は分離株数が少ないため、生化学性天培地（栄研化学）、SIM 寒天培地（栄研化学）、リジン状など不明な点も多い。
そこで我々は、1996 年 4 月から 2008 年 1 月までに、脱炭酸試験用培地（栄研化学）、C-LIG 寒天培地（極東製当研究所に搬入された志賀毒素産生性大腸菌の中で、薬工業）に接種し、35±1 ℃で 22±2 時間培養した。また

O157、O26、O111 以外の稀な O 群血清型の 23 株につい必要に応じて、運動性確認培地（Becton, Dickinson andて、生化学性状と薬剤感受性の試験を行い、さらに病原Company）に接種し、同様に培養した。培地の色調など因子について調査した。

から、糖利用能、ガス産生、硫化水素産生、運動性、インドール産生、リジン脱炭酸酵素、β-グルクロニダーゼ２の有無を判定した。

材料と方法

２・１ 菌株1996 年 4 月から 2008 年 1 月までに、福岡県（福岡市、２・３

血清型別試験

北九州市及び大牟田市を除く）で発生し、福岡県内保健

LB 寒天培地に発育した生菌で凝集が見られない場合は、福祉環境事務所検査課または民間検査機関で分離され、菌体を生理食塩水に懸濁し、121 ℃、15 分間加熱処理後、当研究所に搬入された志賀毒素産生性大腸菌のうち、3000rpm、20 分間遠心し、上清を捨てた沈渣を抗原液とO 群血清型別は、LB 寒天培地に発育した菌を用いた。

O157、O26 及び O111 以外の O 群血清型の 23 株を対象した。抗血清は、病原大腸菌免疫血清「生研」O 群血清とした。

（デンカ生研）を使用した。火炎滅菌したスライドグラ

２・２

生化学性状試験

スに混合 1 から 9 までの病原大腸菌免疫血清を滴下し、23 株を DHL 寒天培地（栄研化学）、クロモアガー O157

抗原液をよく混合して凝集を観察した。混合血清で陽性寒天培地（関東化学）、Sorbitol MacConkey Agar（ OXOID）と判定した場合、その混合血清を構成する単味血清を用

福岡県保健環境研究所（〒 818-0135 太宰府市大字向佐野 39）－59－

Polymerase Chain Reaction（PCR）法により、志賀毒素 1

いて同様に検査を行った。凝集が認められた血清型をそ産生遺伝子（stx1）、志賀毒素 2 産生遺伝子（stx2）、インの株の O 群血清型とした。
H 血清型別は、クレイギー管を中央に立てた 2×Yeast

チミン遺伝子（eaeA）及びプラスミド上にコードされた

Extract Tryptone（2×YT）寒天培地（Becton, Dickinson and

エンテロヘモリシン遺伝子（hlyA）について遺伝子検索Company）に接種し、培地内を通過した菌をクレイギーを行った。DNA の鋳型は、LB 寒天培地上に発育したコ管の外側から釣菌した。この操作を 3 回繰り返し、運動ロニーを釣菌し、25mM の水酸化ナトリウム溶液に懸濁性を増強させた。運動性を増強させた菌体を 2×YT 液体し、95 ℃ 5 分間加熱した後、1MTris-HCl を加えて中和し培地に接種し、35±1 ℃で 22±2 時間静置培養した。2×YT遠心した上清を使用した。サーマルサイクラーは PCR液体培地が混濁し、菌の発育を確認した後、1 ％（v/v）

Thermal Cycler SP（タカラバイオ株式会社）を使用した。

ホルマリン加生理食塩水を等量加え、抗原液とした。抗

stx1、stx2、eaeA、hlyA の検出用プライマーセットは Paton

血清は病原大腸菌免疫血清「生研」H 血清（デンカ生研）及び Paton が報告 3)したものを用いた（表 1）。PCR の反を使用した。22 種類の H 血清をそれぞれの小試験管に 3

応は、95 ℃ 2 分加熱後、94 ℃ 50 秒、62 ℃ 40 秒、72 ℃ 50滴ずつ滴下した。抗原液の自己凝集の対照として、血清秒を 35 サイクル繰り返し、72 ℃ 3 分の伸長反応を行っの代わりに生理食塩液 100μl を加えた小試験管を 1 本用た。PCR 産物は 2 ％（w/v）アガロースゲルで電気泳動意した。23 本全ての小試験管に、1 ％（v/v）ホルマリンした。また、stx1、stx2 検出用プライマーセットについて加生理食塩水で固定した菌液を 0.5ml ずつ加えて振り混は、志賀毒素産生性大腸菌 Stx1 遺伝子検出用 Primer Set

ぜた後、50 ℃の水浴で 1 時間反応させた。試験管内で凝EVT-1、-2 及び Stx2 遺伝子検出用 Primer Set EVS-1、-2集が見られた血清型をその株の H 血清型とした。また、（タカラバイオ株式会社）も併せて使用し、PCR 反応条

型別できなかった菌株の血清型別は、国立感染症研究所

件は取扱説明書に準拠して実施した。に依頼した。
２・４

表1

薬剤感受性試験薬 剤 感 受 性 試 験 は , セ ン シ ・ デ ィ ス ク （ Becton,

病原因子検出用のプライマー３）

プライマーシークエンス（5'-3'）ATAAATCGCCATTCGTTGACTAC
stx1F
stx1R
AGAACGCCCACTGAGATCATC

Dickinson and Company）を用いてディスク法により 12
種類の抗菌剤：アミノベンジルペニシリン（ABPC）、ク

stx2F

GGCACTGTCTGAAACTGCTCC

ロラムフェニコール（CP）、シプロフロキサシン（CPFX）、stx2R

TCGCCAGTTATCTGACATTCTG

セフォタキシム（CTX）、ホスホマイシン（FOM）、ゲン

eaeAF
eaeAR
hlyAF
hlyAF

タマイシン（GM）、カナマイシン（KM）、ナリジクス酸（NA）、ストレプトマイシン（SM）、ST 合剤（ST）、テ

標的遺伝子 PCR産物のサイズ (bp)stx 1180

stx 2255

GACCCGGCACAAGCATAAGC
CCACCTGCAGCAACAAGAGG

eaeA

384

GCATCATCAAGCGTACGTTCCAATGAGCCAAGCTGGTTAAGCTEHEChlyA

534

トラサイクリン（TC）及びトリメトプリム（TMP）に対する感受性を調べた。23 株の志賀毒素産生性大腸菌をTryptone Soya Broth（TSB）培地（OXOID）に接種し、35±1３℃で 2-8 時間振盪培養した。培養菌液をマックファーラ

３・１

結果及び考察志賀毒素産生性大腸菌の血清型別結果

ンド No.0.5 相当に滅菌生理食塩水で希釈し、ミューラー

1996 年から 2008 年までに当研究所に搬入された志賀ヒントンⅡ寒天培地（Becton, Dickinson and Company）に毒素産生性大腸菌の血清型別の株数を表 2 に示した。Oコンラージ棒を用いて塗抹し、上記の 12 種類のディスク群血清型は、毎年、O157、O26 及び O111 の株数が 90 ％をのせて 35±1 ℃で 22±2 時間培養した。ディスク周囲の以上を占めたが、1996 年は O157 のみで、1997 年及び 1998

阻止円直径を計測し、各抗菌剤に対する感受性を調べた。

年は O157、O26 及び O111 の 3 種類の O 群血清型が確認

２・５された。1999 年以降から、毎年これら 3 種類の O 群血清

病原因子の確認

志賀毒素（Stx）産生性は、逆受身ラテックス凝集反応型以外の菌株も確認されている。このことは、検査技術法（Reverse Passive Latex Agglutination：以下 RPLA）にの向上、検査法の確立、O 群血清等の整備などが影響しより VTEC-RPLA「生研」（デンカ生研）を用いて検査していると考えられた。

た。単離された菌株を Casamino Acid Yeast Extract（CAYE）

O157、O26 及び O111 以外の 23 株は 15 種類の血清型培地に接種し、35±1 ℃で 16-20 時間振盪培養した。十分に分類された。血清型の内訳は、O1:H1（1 株）、O8:H16に混濁していることを確認後、3000rpm で 20 分間遠心し、（1 株）、O63:H6（1 株）、O91:H14（2 株）、O91:H21（4上清を試料とした。検査方法及び判定方法は、VTEC-RPLA株）、O103:H2（4 株）、O103:H11（1 株）、O115:H10（1「生研」の取り扱い説明書に従った。

株）、O118:H16（1 株）、O119:H7（1 株）、O121:H14（1－60－歴年度

搬入株数

1996
19971998
1999
2000
2001
2002
2003
2004
2005
20062007
計25504094
1103769116
106567497874

表2福岡県保健環境研究所に搬入された志賀毒素産生性大腸菌の血清型と株数

Ｏ157
25323330100
3556102
95
5158
77
694

Ｏ26
01545480121242119131

O群血清型
Ｏ111
03360000314626Ｏ91
000
2000121006Ｏ165
0002000000013Ｏ103
0000111000025Ｏ150
0000100000001Ｏ1150000010000001Ｏ1190000000100001Ｏ10000000010001Ｏ80000000001001Ｏ1210000000000101Ｏ630000000000011Ｏ118 ＯＵＴ*00000000000000000100001011＊OUT；O群血清型別不能を示す株）、O150:H11（1 株）、O165:H14（2 株）、O165:NM（1行、食事や生活面での自己管理が特に重要であると考え株）、OUT:NM（1 株）であった（NM は運動性の無いこられた。

2）とを意味する）。国立感染症研究所の集計 （2000 年-2007年）では、O 群血清型は O157、O26 及び O111 に次いで7O121、O103、O91 の順に多いと報告されている。今回調6査した 23 株は、O91 及び O103 が 47.8 ％と多かったが、5患者由来株（食品取り扱い従事者定期検便以外で判明した株）

膜から Stx1 産生性の O118:H16 が分離された報告例はあ患者接触者由来株
食品取り扱い従事者定期検便及びその接触者由来株

O121 は 1 株のみであった。O118 は国内で子牛の結腸粘4株
数る 6）が、人から分離された報告例は 2000 年から 2007 年

32までに 1 株だけであった2）。

1図 1 に当研究所に搬入された O157、O26 及び O111 以0外の O 群血清型の菌株数を示した。黒色は食品取り扱い

Ｏ91Ｏ103Ｏ165Ｏ1Ｏ8O63Ｏ115O118Ｏ119O121Ｏ150 ＯＵＴ*

O群血清型

従事者定期検便以外で判明した患者由来株（計 14 株）、灰色は患者の接触者（無症状保菌者）由来株（計 3 株）、白色は食品取り扱い従事者定期検便またはその接触者か

図 1ら検出された株（計 6 株）を示す。23 株のうち分離株数

O111 以外の O 群血清型の志賀毒素産生性大腸菌の株数が多かったのは、O91 で患者から 1 株と定期検便で 5 株

福岡県保健環境研究所に搬入された O157、O26、が分離され、次いで O103 が患者から４株と患者の接触

黒色は患者由来株（食品取り扱い従事者定期検便以外で判明した株）を示し、灰色は患者の接触者由来株、白色は食品取り扱い従事者定期検便及びその接触者由来株を示す。

者から 1 株、O165 が患者から 2 株と患者の接触者から 1＊OUT；O群型別不能を示す

株分離された。O1、O63、O118、O119、O121、O150、OUT
は患者から各 1 株ずつ分離された。O8 は患者の接触者から 1 株、O115 は食品取り扱い従事者の関係者から 1 株が３・２培養結果分離された。食品取り扱い従事者定期検便またはその接培養結果を表 3 に示した。DHL 寒天培地上には 23 株

触者から分離された株は 23 株中 6 株あり、このうち 5 株

全て赤色コロニーが発育し、乳糖と白糖のいずれか、まが O91、残り 1 株は O115 で、O91 は食品取り扱い従事

たは両方を分解することが確認された。CT-SMAC 寒天者由来が多かった。O91 が検出された食品取り扱い従事培地上には、O91:H14（2 株）、 O91:H21（4 株中 3 株）、者 5 名のうち 2 名は症状があり、1 名は焼き肉の喫食歴

O119:H7（1 株）、O165:H14（2 株）及び OUT:NM（1 株）があり検便前から腹痛や水溶性下痢及び軟便を呈していが発育しなかった。Seto ら 11） の報告でも、O91:H14（1た。他は 1 名は喫食歴は不明であったが、腹痛と下痢を株）は CT-SMAC 寒天培地に発育しなかったことから、呈していた。O157、O26 及び O111 以外の血清型の志賀

今回の結果をあわせると、CT-SMAC 寒天培地は O91 の毒素産生性大腸菌においても脳症、HUS、腎機能障害をスクリーニングには使用できない事が示唆された。

引き起こした分離例が報告されている 2） , 7） , 8） , 9） , 10） 。

CT-SMAC 寒天培地に発育した株のうち、O63:H6（1 株）

食品取り扱い従事者においては、日頃からの手洗いの励及び O165:NM（1 株）は Sorbitol を分解しなかった。

－61－

表3血清型

株数（株）

O1:H1O8:H16
O63:H6
O91:H14
O91:H21
O103:H2
O103:H11
O115:H10
O118:H16
O119:H7
O121:H14
O150:H11
O165:H14
O165:NM*OUT**:NM111244111
1
1
12
1
1

O157、O26、O111 以外の O 群血清型の志賀毒素産生性大腸菌の性状CT-SMAC寒天培地
発育Sorbitol分解
発育＋発育＋発育－
発育せず発育せず発育せず***
発育せず***
発育＋
発育＋発育＋
発育＋
発育せず
発育せず
発育＋
発育＋
発育せず
発育せず
発育－
発育せず
発育せず

Rhamnose
分解＋＋＋＋＋＋－＋－＋＋－＋－－

Sorbose
分解＋－＋－－－＋－－－＋＋－－－Lactose分解
Sucrose分解＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋

クロモアガーO157寒天培地上のコロニーの色調
青（ラフ様）薄紫青青薄い青紫～青
薄い青紫
青
青
青
青
青
青（ラフ様）
青（一部ラフ様）
青
水色＊NM；運動性がないことを示す＊＊ＯＵＴ；O群血清型別不能を示す＊＊＊1株のみ、Sorbitol分解コロニーが３コロニー、Sorbitolを分解しない直径1mm以下のコロニーが多数発育した

Rhamnose -MacConkey 寒 天培地上でのコロニーで、剤耐性を示したのは、O119:H7（1 株）であった。耐性を

Rhamnose を分解して赤色を呈したのは、O103:H11（1 株）、示した 10 株はすべて SM 耐性であり、6 株は TE 耐性でO118:H16（1 株）、O150:H11（1 株）、O165:NM（1 株）あった。

及び OUT:NM（1 株）以外の18株であった。Sorbose

３・４-Stx 産生性と病原因子

MacConkey 寒天培地上でのコロニーは、Sorbose を分解

Stx 産生性と病原因子の検査結果を表 5 に示した。stx1

して赤色を呈したのは、O1:H1（1 株）、O63:H6（1 株）、と stx2 の両方を保有していた株は O165:NM のみで、

O103:H11（1 株）、O121:H14（1 株）、O150:H11（1 株）O8:H16、O121:H14、OUT:NM は stx2 のみを保有し、そであった。クロモアガー O157 寒天培地上では O157 様のの他の株は stx1 のみを保有していた。eaeA と hlyA の両藤色コロニーを形成した O8:H16（1 株）以外の株は、水方を保有していた株は、O103:H2（4 株）、O103:H11（1色から青色を呈した。

株）、O165:NM（1 株）、O118:H16（1 株）、O121:H14（1３・３株）、O150:H11（1 株）及び OUT:NM（1 株）であった。hlyA

薬剤感受性試験結果薬剤感受性試験結果を表 4 に示した。23 株中 10 株が 12を保有し eaeA を保有していなかった株は、O1:H1（1 株）、種類の抗菌剤のいずれかに耐性を示した。SM 単剤耐性

O91:H14（1 株）、 O91:21（3 株）及び O165:H14（2 株）を示したのは、O91:H21（2 株）、O103:H2（1 株）及びであった。eaeA を保有し hlyA を保有していなかった株

O150:H11（1 株）で、SM と TE の 2 剤耐性を示したのは、は、O63:H6（1 株）であった。O63:H6 は RPLA で Stx2

O165:NM（1 株）、O91:H21（1 株）、O115:H10（1 株）及に感作ラテックスに 1:16 から 1:32 倍の凝集価を持つび OUT:NM（1 株）であった。SM・TE・ABPC の 3 剤耐Stx2 単独産生株であると確認されたが（データは不掲性を示したのは、O118:H16（1 株）、SM・TE・KM の 3載）、今回用いたプライマーセットでは stx2 は検出されなかった。今回使用した stx2 検出用プライマーは、Stx2、

表423 株の薬剤感受性試験結果耐性を示した
有症者由来株無症状者由来株
抗菌剤*血清型（株数） 血清型（株数）
SM
O91:H21（1） O91:H21（1）O103:H2（1）O150:H11（1）SM, TE
O165:NM**（1） O91:H21（1）O115:H10（1）OUT***:NM（1）SM, TE, ABPC O118:H16（1）SM, TE, KM
O119:H7（1）＊ SM ；ス トレ プ トマ イ シ ン 、TE ；テ トラ サ イ ク リン 、ABPC ；ア ミノ ベ ン ジ ル ペ ニ シ リン 、KM ；カ ナ マ イ シ ン＊ ＊ N M ；運 動 性 が な い こ とを 示 す＊ ＊ ＊ O U T；O 群 型 別 不 能 を 示 すStx2vha、Stx2vhb、Stx2vpl などのバリアントを検出できるプライマーであったが、今回調査した O63:H6 はこれらとは異なる stx2 を保有すると考えられた。また O63:H6は hlyA を保有せず eaeA だけ保有する点で他の eaeA 保有株と異なっていた。今回使用した eaeA 検出用プライマーセットで増幅可能な eaeA を保有したのは、有症者から分離された 16 株のうち 10 株と、無症状者から分離された 7株のうち 1 株であった。eaeA は志賀毒素産生性大腸菌の主要病原因子であるが、Beutin らの報告 12） によれば、人から分離された O157 以外の志賀毒素産生性大腸菌 89 株のうち約 40 ％は eaeA を保有せず、Wang ら 13） は、HUSを発症した患者から分離した志賀毒素産－62－表5Polymerase Chain Reaction 法による病原因子の調査結果及び RPLA 法による志賀毒素型
血清型

症状の有無 株数（株）

O1:H1
O8:H16
O63:H6
O91:H14
O91:H14
O91:H21

O103:H2
O103:H11
O115:H10
O118:H16
O119:H7O121:H14
O150:H11O165:H14*

O165:NMOUT**:NM有無有有有有無無有無有無有有有有有無有有11111112311111111111

志賀毒素型
stx 1(RPLA)
1221111111111121111+22＋－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－＋＋＋＋－

stx 2eaeA

hlyA

血便

－＋－－－－－－－－－－－
－＋－
－
－
＋＋－
－＋－
－－－
－
＋＋＋－＋－
＋＋－
－
＋＋＋－
－
－
＋＋－
＋＋＋＋－＋－＋＋＋＋＋＋＋－－－－－－－＋（1株）－－－－－＋＋－－＋－＊ ＮＭ；運動性がないことを示す＊＊ＯＵＴ；O群血清型別不能を示す

生性大腸菌（O91:H21）は eaeA 非保有株があったと報告文献している。しかし、eaeA には多くのバリアントがあるこ

1）Scheutz F et al. : APMIS （Acta Pathologica,Microbiologica, et Immunologica Scandinavica）., 112とから、eaeA の保有状況については、eaeA バリアントに（9）, 569-584, 2004.

ついても検討が必要であると考えられた。
まとめ

2）

病原微生物検出情報, 29, 117-128, 2008．

3）

Paton AW & Paton JC. : J. Clin. Microbiol., 36 （ 2）,

4）Yang JR et al. : J. Clin. Microbiol., 45（11）,598-602, 1998.

1．O91 のスクリーニングには CT-SMAC 寒天培地が使えないことが示唆された。

3620-2625, 2007.

2．O91 は食品取り扱い従事者の定期検便から多く分離5）された。

Bacteriology, 2nd ed., vol. 2, Part B, 607-624, 2005.

3．有症者由来 16 株中 6 株（37.5 ％）は eaeA 遺伝子を6）保有していなかった。
4．有症者 16 名中 5 名（31.3 ％）は血便を呈していた。
5．全国でも検出例が稀な O118：H16 が 2007 年に検出された。

Scheutz F et al.: Bergey's Manual of Systematic
福井英彦ら. : 日本獣医師会雑誌, 49（8）, 517-522,1996.

7）

Hussein HS. : J. Anim. Sci., 85, E63-E72, 2007.

8）

Beutin L et al. : Appl Environ Microbiol., 73 （15）,4769-4775, 2007.

9）謝辞
本研究の遂行にあたり、ご協力いただきました福岡県

10） Stephan R et al. : J. Dairy Sci., 91 （7）, 2561-2565,
2008.

庁保健衛生課の関係各位、県内保健福祉環境事務所の関係各位に深謝いたします。また、血清型別試験においてご協力いただきました国立感染症研究所細菌第一部
嶋淳先生、伊豫田淳先生に御礼申し上げます。

Frank C et al. : Vector Borne Zoonotic Dis., 2008.

11） Seto K et al. : J. Vet Med Sci., 69（12）, 1215-1222,2007.

寺

12） Beutin L et al. : Emerg Infect Dis., 4（4）, 635-639,
1998.
13） Wang G et al. : J. Clin. Microbiol., 40 （10）,3613-3619, 2001.

－63－（英文要旨）

Minor serogroup Shiga toxin-producing Escherichia coli isolated in Fukuoka prefecture
between 1996 and 2008
Sachiko NAKAMURA, Yoshiki ETOH, Mitsuhiro HAMASAKI, Koichi MURAKAMI,Shigeyuki TAKENAKA, Kazumi HORIKAWA
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, Japan
Minor serogroup Shiga toxin-producing Escherichia coli except O157, O26 and O111 isolated in Fukuoka prefecuture
between 1996 and 2008 were tested about biochemical characteristics and antibiotics susceptibilities and investigated about
pathogenic factors. There were 23 strains that were isolated from 16 patients including two food handlers and seven
asymptomatic individuals including four food handlers. They were classified to 15 serogroups. All strains isolated from foodhandlers were O91. Not all patients had eaeA or hlyA even with bloody diarrhea.
[Key words; Shiga toxin-producing Escherichia coli, minor serogroup, regular fecal examination of food handlers ,O91]－64－