鶏由来大腸菌における薬剤耐性の疫学
村瀬敏之
鳥取大学農学部獣医学科獣医微生物学教育研究分野（〒 680-8553

鳥取市湖山町南 4-101）

成，同一農場内の個体差の把握を目的として，抗1 ．はじめに菌性物質を使用した農場と過去 1 年以上使用していない農場において飼養期間中に複数回糞便を採食用動物における抗菌性物質の使用は，各種細取し，1 羽の糞便より分離された 10 菌株を薬剤

菌に薬剤耐性菌株の選択および増加をもたらす要感受性試験およびパルスフィールドゲル電気泳動因である。このことは治療効果を低下させる原因（PFGE）法による型別に供した。

となるのみならず，耐性菌が食物連鎖を介して人

2 ．材料および方法に伝播する可能性をも示唆することから，公衆衛
生学分野の関心が高まっている。したがって，食（1）検体採取用動物における抗菌性物質の使用が薬剤耐性菌の出現にどの程度かかわっているのか，また食用動調査対象 4 農場のうち，2 農場（農場 1 および物から分離される耐性菌が人の健康に対しどの程

2）では，飼養期間を通じ飼料添加物および動物度のリスクとなっているのかを議論するために，用医薬品としての抗菌薬を使用していなかった。

食用動物から分離される菌における薬剤耐性動向

また，過去 1 年以上使用歴がない。農場 3 ではをモニタリングすることが重要である。わが国に

14 日齢以降 7 日間にわたり動物用医薬品として，

おいては，家畜衛生分野における抗菌性物質耐性

200 ppm のオキシテトラサイクリン（OTC），500

調査の体制として Japanes Veterinary Antimicrobial

ppm のスルファジメトキシン（SDMX）およびResistance Monitoring System（JVARM） が 1999

300 ppm のタイロシンを添加した飼料が給与され年より開始された［17］。
coli）は，家禽の腸内菌叢
大腸菌（Escherichia

た。農場 4 では 20 日齢以降 3 日間にわたり動物を形成する菌種と考えられるので，長期間にわ飼料が給与された。農場 1，2 および 4 では開放たり本菌における薬剤耐性の調査が可能であるほ鶏舎，農場 3 ではウインドウレス（無窓）鶏舎にか［18］，本菌の調査により病原菌における薬剤

おいてブロイラー鶏が飼養された。

用医薬品として，500 ppm の SDMX を添加した

耐性を予見できる可能性がある［1］。これまで糞便検体は，2 から 3 日齢（若齢期），14 から

にもブロイラーにおける抗菌性物質の使用が，糞17 日齢（成長期）（農場 3 および 4 では，抗菌性便中の薬剤耐性大腸菌の分離頻度に及ぼす影響が物質を使用する前）および 47 から 50 日齢（出荷前）

検討されている［4, 5, 15］。一方で，発育段階にに採取した。排出されて間もない糞便を 10 検体

応じて調製された配合成分の異なる飼料が順次給採取し，キャリーブレア培地を用いて 4℃で輸送与されるほか，疾病対策のために抗菌性物質が使した。

用される場合がある。そこで，ブロイラーの各発（2）大腸菌の分離

育段階における耐性遺伝子のリザーバーとしての大腸菌耐性菌の分布，一個体中のその耐性菌の構

各糞便検体を DHL 培地に塗布し培養した。大32

村瀬敏之／鶏由来大腸菌における薬剤耐性の疫学／ 32（2010） 33

腸菌を疑うコロニーを釣菌し，API20E を用いてリム（TMP）：16 mg/L とした。SDMX のブレイ同定した，1 検体当たり 10 菌株を以降の実験にクポイントは設定がない。

供した。
（4）PFGE（3）薬剤感受性試験

既報［16］に基づき試料を調製し，XbaI ある
いは SpeI 切断パターンの比較を行った。菌株間Clinical Laboratory Standards Institute［2］に準拠し，平板希釈法により行った。ブレイクポインの遺伝的近縁性を評価した［12, 13］。

トは既報［10］に基づき，
アンピシリン（ABPC）：

3 ．結

32mg/L，セファゾリン（CEZ）：32 mg/L，セフ果チ オ フ ル（CTF）：8 mg/L， ジ ヒ ド ロ ス ト レ プ
トマイシン（DSM）：32mg/L，ゲンタマイシン

分離株における各薬剤の MIC 値の分布ならび（GM）：16 mg/L，カナマイシン（KM）：64 mg/L，に耐性菌株数および耐性菌を保有していた鶏の羽

OTC：16 mg/L，クロラムフェニコール（CP）：

数を表 1 に示した。

32 mg/L，ナリジクス酸（NA）：32 mg/L，エン

ABPC の MIC が 512 mg/L 以上である菌株がロフロキサシン（ERFX）：2 mg/L，トリメトプ

すべての農場において分離された。農場毎の，全

表１
農場

1

2

3

4

分離菌株に対する各薬剤の MIC 分布ならびに耐性菌株数および耐性株を保菌していた鶏の羽数

採材
時期

ABPC

CEZ

CTF

DSM

KM

GM

OTC

CP

NA

ERFX

TMP

若齢期

0.5->512a
19 (6)b

0.5->5128 (4)<0.13-16
8 (4)

2-512
6 (3)

1->5121 (1)0.5-643 (2)1-512
38 (8)

4-256
4 (2)

1->5121 (1)<0.13-16
1 (1)<0.13->512
6 (4)

成長期

1->51246 (9)

1->51222 (9)<0.13-256
15 (7)

2->51241 (10)2->51210 (4)

1-128
22 (9)

1-512
57 (10)

2-256
6 (2)

1-512
25 (9)<0.13-10 (0)<0.13->512
4 (3)

出荷前

0.5->512
49 (7)

0.5->512
19 (7)<0.13-16
15 (6)

2->51225 (8)

2->5122 (1)0.5-321 (1)1-256
45 (10)2-8
0 (0)1->5128 (4)<0.13-16
3 (2)<0.13->512
13 (6)

若齢期

0.5->512
54 (8)

0.5->512
42 (8)<0.13-512
39 (7)

1->51227 (7)

1->51215 (6)

0.25-128
10 (3)

1-512
53 (9)

2-256
10 (3)

2->51216 (6)<0.13-8
11 (4)

0.25-20 (0)成長期

1->51240 (9)

1->5121 (1)<0.13-16
1 (1)4->51221 (8)

2->51218 (7)

0.5-2
0 (0)

1-512
29 (8)

2-512
18 (8)

0.5->512 <0.13-128 <0.13->512
17 (7)
16 (7)
23 (7)

出荷前

1-512
72 (10)

1->51255 (9)<0.13-8
55 (9)

4->51230 (7)

1-512
10 (5)

0.5-1
0 (0)

0.5-51278 (10)

2-128
3 (3)

1->51210 (5)<0.13-16
7 (4)<0.13->512
19 (5)

若齢期

1-512
68 (8)

1-4
0 (0)<0.13-0.5 32->5120 (0)100 (10)

1->51251 (6)

0.25-20 (0)64-512100 (10)

2-512
9 (4)

1-256
3 (1)

<0.13-0.5
0 (0)0.25->512
16 (3)

成長期

0.25->512
26 (7)<0.13->512
2 (2)<0.13-16
2 (2)64->512100 (10)

1->51216 (4)

0.5-4
0 (0)

64-512100 (10)

2-512
5 (5)

1-128
35 (9)<0.13-0.5
0 (0)<0.13->512
11 (3)

出荷前

0.25->51244 (9)<0.13-512
1 (1)<0.13-8
1 (1)16->51274 (10)2->512
3 (1)

1-2
0 (0)

128-512100 (10)4-64
37 (8)

2->51258 (10)<0.13-2
1 (1)<0.13->512
17 (7)

若齢期

2->51295 (10)<0.13-160 (0)<0.13-0.5
0 (0)4->51290 (10)

1-4
0 (0)

0.5-1
0 (0)

1->51267 (10)

1-32
1 (1)

1->51210 (1)<0.13-16
10 (10)0.5->512
47 (9)

成長期

1->51247 (7)

0.5-5121 (1)<0.13-8
1 (1)4->51259 (9)

1->512
4 (3)

0.5-2
0 (0)

1-256
49 (8)

2-64
10 (1)

2->51211 (5)<0.13-16
8 (2)<0.13->512
2 (1)

出荷前

1->51272 (10)

1-256
2 (2)

<0.13-8
2 (2)4->51260 (9)

2->51220 (7)

1->5121 (1)1-512
70 (9)

4-128
20 (8)

2->51234 (9)<0.13-16
15 (7)<0.13->512
12 (4)a MIC（mg/L）の範囲
b 耐性菌株数および括弧内に耐性株を保菌していた鶏の羽数を示す

34 動物抗菌会報 32（2010）

調査期間において分離された菌株に占める ABPC離された。また，農場 3 で分離された株のすべて

耐性株の割合は 38％から 71％であった。農場 1

が多剤耐性であった。農場 1 および 2 で飼養されおよび 2 において分離された ABPC 耐性菌株のた鶏より分離された菌株において，日齢とともに半数以上は，ABPC に加え CEZ および CTF にも多剤耐性株が多数分離される傾向にあった。今回耐性を示した。一方，農場 3 および 4 において分分離されたすべての多剤耐性株は，ABPC，DSM

離された菌株の大多数は CEZ および CTF に感受あるいは OTC のいずれかに耐性であった。

性であった。農場 1 および 2 で分離された CTF

2 剤耐性株では，総計 10 の耐性パターン（耐耐性株においてみられたもっとも高い MIC は性を示す薬剤の組み合わせ）が認められた。その256 あるいは 512 mg/L と，農場 3 および 4 由来

うち 9 つのパターンが農場 1 由来株，また，5 つ

株における値（8 あるいは 16 mg/L）の 32 倍であっが農場 2 由来株で認められた。一方，農場 3 で分た。

離された 2 剤耐性株のすべてが DSM および OTC

農場 3 および 4 において分離された菌株のう耐性，また，農場 4 で分離された 2 剤耐性株の大

ち半数以上が DSM 耐性株で，農場 1 および 2 に多数（13/16）が DSM および CP 耐性株であった。

比べ多数分離された。DSM と同じくアミノグリ

3 剤耐性株のうち，ABPC，CEZ および CTF に耐

コシド系薬である KM に耐性を示す株は，すべ性のものは農場 1 および 2 のみで認められた。こての農場で分離された（4.3％から 23.3％）。一れに対し，農場 3 および 4 において認められた 3

方，もうひとつのアミノグリコシド系薬である剤耐性株の耐性パターンは，ABPC，DSM およ

GM に耐性を示す株の分離頻度は農場 1 で 8.7％

び他の 1 剤あるいは DSM，OTC および他の 1 剤であったのに対し，農場 2（3.1％）および農場 4であった。すべての農場で分離された ERFX ある（0.3％）では低く，農場 3 では分離されなかった。

いは TMP 耐性株の大多数は，他の 2 剤以上に同OTC 耐性株は農場 1，2 および 4 で分離された時に耐性を示した。

菌株の 46％から 62％を占めていた。農場 3 で分発育段階を通じて分離され，同じ耐性パターン

離された菌株のすべてが OTC に耐性を示した。

を示し遺伝的に近縁である菌株が認められた。農CP，NA 又 は TMP に 耐 性 を 示 し た 菌 株 は す

場 1 で若齢期，成長期および出荷前のそれぞれのべての農場で分離され，その頻度は 3.3％から時期に分離された ABPC および OTC の 2 剤耐性20.3％とばらついた。農場 2 および 4 において分株に，PFGE パターンが同一であるものを認めた

離された菌株の，それぞれ 10％以上が ERFX に（図 1）。しかし，当該農場で異なる発育段階で分耐性を示したが，農場 1 および 3 由来株において離 さ れ た，DSM お よ び OTC 耐 性 株 に は PFGE

は数菌株に過ぎなかった。

パターンが同一であるものを認めなかった。

農場 1 および 2 において分離された各発育段階

農場 4 において分離された菌株のうち，ABPC，において分離された菌株の 40 から 100％におい

DSM，OTC，NA お よ び ERFX の 5 剤 耐 性 株，て，SDMX の MIC が 512 mg/L より高かった。

ABPC，DSM，OTC，NA，ERFX および CP の 6

このような高い MIC を示す菌株に加え，成長期剤 あ る い は ABPC，DSM，OTC，NA，ERFX おおよび出荷前に分離された菌株における MIC の

よび TMP の 6 剤に耐性の株の PFGE パターン解

分布は，128 あるいは 256 mg/L にピークを認め

析の結果，これらは遺伝的に近縁であった。5 剤た。農場 3 および 4 において分離された菌株では，耐性株が CP および TMP 耐性遺伝子を獲得した

1 株を除き SDMX の MIC が 128 mg/L 以上であっものと思われた（図 2）。したがって，これらのた。また，発育段階ごとに 74％から 100％の菌株

菌株は，3 剤耐性株が DSM および OTC 耐性遺において MIC が 512 mg/L より高かった。

伝子を獲得した可能性が示唆された。同様の成2 薬剤から 7 薬剤に対し耐性の，多剤耐性株が

績は，農場 2 において分離された菌株でも認め

すべての農場で分離された（表 2 ～ 5）
。農場 2られた。すなわち，ABPC，CEZ および CTF の 3

では，8 薬剤から 10 薬剤に耐性である菌株が分剤に耐性である菌株，ABPC，CEZ，CTF および村瀬敏之／鶏由来大腸菌における薬剤耐性の疫学／ 32（2010） 35

表2

農場 1 より分離された大腸菌株における薬剤耐性パターン

耐 性
薬剤数

耐性パターン

1剤
2剤

採材時期
若齢期

成長期

出荷前

ABPC

4

4

5

OTC

20

3

14

5

1

ABPC-CEZ
ABPC-DSM
ABPC-OTC

7
4

DSM-KM

19
7

DSM-OTC

1

GM-OTC

3

OTC-CP

1

OTC-TMP1

ABPC-CEZ-CTF

1
2

10

14

ABPC-CEZ-OTC

1

1

ABPC-DSM-OTC

1

ABPC-OTC-TMP

3

DSM-OTC-TMP

2

DSM-OTC-CP

1

OTC-NA-ERFX
4剤

ABPC-CEZ-CTF-OTC

2
1

ABPC-CEZ-CTF-DSM

1

DSM-GM-OTC-NA

22

DSM-KM-OTC-NA

3

ABPC-CEZ-OTC-NA

2

ABPC-DSM-OTC-TMP

12

DSM-KM-OTC-TMP

2

DSM-GM-OTC-TMP
5剤

1

ABPC-CEZ-CTF-CP-TMP

1

ABPC-CEZ-CTF-DSM-CP

1

ABPC-CEZ-DSM-OTC-CP
6剤

7剤

3

1

OTC-NA
3剤

61

ABPC-CEZ-CTF-DSM-OTC-CP

1

ABPC-CEZ-CTF-DSM-OTC-KM

1

ABPC-CEZ-CTF-OTC-NA-ERFX

1

ABPC-CEZ-CTF-DSM-OTC-CP-TMP

1
1
3

36 動物抗菌会報 32（2010）
表3

農場 2 より分離された大腸菌株における薬剤耐性パターン

耐 性
薬剤数
1剤

耐性パターン

採材時期
若齢期

ABPC
OTC

成長期
15

3

10

DSM
2剤

1

ABPC-CEZ

2

ABPC-OTC11

DSM-OTC
GM-OTC

1
2
1

ABPC-CEZ-CTF

815

ABPC-CEZ-OTC

1

1

ABPC-DSM-OTC

1

ABPC-OTC-TMP

5

ABPC-DSM-TMP

5剤

6剤

2
1

DSM-KM-OTC
4剤

6

1

OTC-NA
3剤

出荷前

ABPC-CEZ-CTF-OTC

10

DSM-KM-OTC-NA

5

1

9

1

29

ABPC-DSM-OTC-TMP

6

DSM-OTC-NA-ERFX

6

ABPC-CEZ-CTF-DSM-OTC

11

ABPC-DSM-OTC-NA-ERFX

1

1

ABPC-CEZ-CTF-CP-TMP

3

ABPC-CEZ-CTF-OTC-TMP

3

ABPC-DSM-OTC-CP-TMP

1

ABPC-DSM-KM-OTC-CP-TMP

1

ABPC-DSM-OTC-NA-ERFX-TMP

1

ABPC-CEZ-CTF-DSM-KM-OTC

1

7剤

ABPC-CEZ-CTF-DSM-OTC-NA-TMP

3

8剤

ABPC-DSM-KM-OTC-CP-NA-ERFX-TMP

9剤

ABPC-CEZ-CTF-DSM-KM-OTC-NA-ERFX

1

10 剤

ABPC-CEZ-CTF-DSM-GM-KM-OTC-NA-ERFX

916

村瀬敏之／鶏由来大腸菌における薬剤耐性の疫学／ 32（2010） 37

表4

農場 3 より分離された大腸菌株における薬剤耐性パターン
採材時期

耐 性
薬剤数

耐性パターン

2剤

DSM-OTC

3剤

ABPC-DSM-OTC
DSM-KM-OTC
DSM-OTC-NA
OTC-CP-NA
DSM-OTC-TMP

4剤

ABPC-DSM-KM-OTC
ABPC-DSM-OTC-CP
ABPC-DSM-OTC-NA
ABPC-DSM-OTC-TMP
DSM-OTC-CP-NA
DSM-KM-OTC-NA
DSM-OTC-NA-TMP
DSM-OTC-NA-ERFX

51
1

5剤

ABPC-DSM-OTC-CP-TMP
ABPC-DSM-OTC-NA-TMP
ABPC-DSM-OTC-CP-NA

8
3

6剤

ABPC-CEZ-CTF-DSM-OTC-TMP

7剤

ABPC-CEZ-CTF-DSM-OTC-CP-NA
表5

耐 性
薬剤数

若齢期

成長期

32

39

8

16
8
12

18
2
16
26
2

2

1
2

5

1
3
6
6

5

1
6
8

2

農場 4 より分離された大腸菌株における薬剤耐性パターン

耐性パターン

採材時期
若齢期

成長期

ABPC
OTC

2剤

DSM-CP
DSM-OTC
ABPC-OTC

3

10

3剤

ABPC-DSM-OTC
ABPC-DSM-TMP
ABPC-OTC-TMP
ABPC-DSM-KM
DSM-KM-OTC

38
28
8

36

ABPC-DSM-OTC-TMP
ABPC-DSM-GM-OTC
ABPC-DSM-OTC-CP
DSM-KM-OTC-NA
DSM-OTC-NA-TMP

11

2

5剤

8
1

1

1剤

4剤

出荷前

ABPC-DSM-OTC-NA-ERFX
ABPC-DSM-CP-NA-ERFX
ABPC-DSM-KM-OTC-NA
ABPC-DSM-OTC-CP-TMP

6剤

ABPC-CEZ-CTF-OTC-NA-ERFX
ABPC-DSM-OTC-CP-NA-ERFX
ABPC-DSM-OTC-NA-ERFX-TMP
ABPC-DSM-KM-OTC-CP-NA

9剤

ABPC-CEZ-CTF-DSM-KM-OTC-CP-NA-TMP

出荷前
16
8

1

3

10

7

15

2
1
6
2
1
3
7
1

1

2

1
2

4
8
7

38 動物抗菌会報 32（2010）

図2

農場 4 由来大腸菌の PFGE パターン

11000，12000 および 13000 番台は，それぞれ若齢期，成長期および出荷前に採材した糞便より分離された菌株。
レーン左より 11026 から 13034 は，ABPC および OTC の2 剤耐性株。11027 から 13062 は，DSM および OTC の 2剤耐性株。

42000 および 43000 番台は，それぞれ成長期および出荷前に採材した糞便より分離された菌株。レーン左より 42063
から 43062 は，ABPC，DSM，OTC，NA および ERFX の
5 剤 耐 性 株．43024 か ら 43066 は，ABPC，DSM，OTC，
NA，ERFX および CP の 6 剤耐性株。43001 から 43030 は，
ABPC，DSM，OTC，NA，ERFX および TMP の 6 剤耐性株。

OTC の 4 剤に耐性である菌株，また，ABPC，も，飼養期間を通じて遺伝的に近縁な耐性菌株がCEZ，CTF，OTC お よ び DSM の 5 剤 に 耐 性 で存在し続けた。このような菌株は鶏の腸管内に比ある菌株の PFGE パターン解析の結果，これら

較的長い期間定着していたか環境中で生存していは互いに遺伝的に近縁であった（PFGE データ省た可能性が示唆された。実際に，耐性株が農場環略）。

境に生存し続け，新しい鶏群に感染したことを示

図1

農場 1 由来大腸菌の PFGE パターン

1 検体（1 羽）から分離された 10 株すべてが耐す成績が報告されている［6, 7］。抗菌性物質を使性株であるとは限らない。たとえば，農場 1 にお用していない，選択圧のない環境中で耐性菌が存いて若齢期の 10 羽から分離された 100 株のうち続する要因のひとつとして，鶏に順応し同時に耐19 株が ABPC に耐性であったが，ABPC 耐性株性遺伝子を保有する菌株の存在が考えられているを分離した糞便は 6 検体（6 羽）である。そこで，［14］。

1 検体由来の 10 菌株における耐性パターン数を抗菌性物質の使用の有無に関わらず，鶏の腸管算出した。同時期に採取した検体であっても，10に棲息する大腸菌間における耐性遺伝子の水平伝株がすべて同じ耐性パターンである場合と 8 つの達の可能性が示唆された。今回の調査で同一農場

耐性パターンを認めた場合もあった。発育段階毎から分離された，ある耐性パターン示す菌株と，に 10 菌株における耐性パターン数の平均値を比

その菌株が耐性を示す薬剤に加え他の薬剤，すな較したところ，加齢とともに耐性パターン数の平

わち DSM，OTC，CP および TMP，にも耐性で均値が増加した（図 3）。

ある菌株の PFGE パターンが一致した。これらの薬剤に耐性を付与する遺伝子はしばしば，R プ

4 ．考

察

ラスミド，トランスポゾン，インテグロンなどの可動性因子とともに存在することが知られている

コマーシャル・ブロイラー鶏の腸管内に薬剤耐［3, 9, 15］。今回の菌株については耐性遺伝子の特性大腸菌が存在することが明らかとなった。とく定，当該遺伝子の伝達およびそのメカニズムの解に，抗菌性物質を使用していない鶏群において明が必要である。

村瀬敏之／鶏由来大腸菌における薬剤耐性の疫学／ 32（2010） 39

図3

各農場において分離された菌株における耐性パターン数の変化

横軸の 1，2 および 3 は，それぞれ若齢期，成長期および出荷前を示す。デー
タは，採材時ごとの 1 羽由来 10 株に見られた耐性パターン数の 10 羽あたりの平均値±標準偏差で示した。

鶏の加齢に伴い，分離菌株における耐性パター

農場 3 において分離された菌株のすべてが，ン数が増加する，すなわち多様な耐性株を腸管内とくに，2 日齢のヒナから分離した菌においてもに保有する可能性が示唆された。とくに農場 1 お

OTC に耐性であった。当該農場では調査した鶏よび 3 で使用された鶏においては，14 日齢にお群のみならず，1 年以上にわたり OTC を使用し

いて，すでに多様な耐性株を保有していると思わていること，また，ウインドウレス鶏舎で飼養しれた。Lu ら［11］が回腸内および盲腸内の細菌ていることが，OTC 耐性菌株の選択および増加

叢が 14 日齢までの間に変化することを報告してあるいは鶏群内における拡散に関与した可能性がいる点は興味深い。菌叢の変化が，多様な耐性菌示唆された。実験的に OTC を投与した鶏では，株を腸管内に保有する一要因となっている可能性

投与 5 週から 7 週後に OTC 耐性大腸菌株の分離がある。すなわち，それまで鶏の腸管内に存在し頻度が非投与群に比べ高かったという［15］。

ない耐性パターンを示す菌株や耐性遺伝子を保有

今回，1 検体（1 羽）から分離した 10 菌株におする菌株を取り込んだ可能性が考えられる。とくける耐性を検討したところ，同じ鶏群の 10 羽のに農場 3 で使用された鶏は，14 日齢における採

あいだにおいても，多様な耐性パターンが認めら材の後に抗菌性物質を与えられたことから，薬剤れ，耐性株の網羅的な把握が可能と思われた。一の使用が耐性パターンの多様化には直接関与しな

方，鶏群における耐性株の多様性を把握する際は，かったと思われる。一方，抗菌性物質を与えられ同一の PFGE パターンを示す同一個体由来株のなかったブロイラー鶏から分離された菌株におけ重複を避ける必要がある。

る耐性の発現が顕著ではないという報告もある［5］。農場 4 では 20 日齢から SDMX が飼養され，5 ．まとめこの農場の 17 日齢と 47 日齢の鶏から分離した大腸菌を比較すると，後者で耐性パターン数が増加

飼養期間中に抗菌性物質を使用したブロイラーしている。SDMX との共耐性がこの現象の要因

鶏群および使用していない鶏群について，若齢期，であった可能性が考えられる［4, 8］。

成長期および出荷前の糞便より大腸菌を分離し薬40 動物抗菌会報 32（2010）

剤感受性を検討した。すべての農場の鶏群由来大S, Kehrenberg C, Martel JL, Chaslus-Dancla E:

腸菌において，ABPC あるいは OTC に対する耐Plasmid-mediated florfenicol resistance encoded性菌の分離頻度が高かった。抗菌性物質を使用しby the floR gene in Escherichia coli isolatedていない鶏群から，ABPC および OTC の 2 剤にfrom cattle. Antimicrob Agents Chemother, 44,

耐性で PFGE により遺伝的に近縁と判断される

2858-2860 (2000)

菌株が発育段階を通じて分離された。抗菌性物質4 ）da Costa PM, Belo A, Gonçalves J, Bernardo F:

を使用した 1 農場では，遺伝的に近縁で薬剤耐性

Field trial evaluating changes in prevalence andパターンが異なる菌株が分離されたが，R プラス

patterns of antimicrobial resistance among Esch-

ミドのような可動性の因子が耐性パターンの差異

erichia coli and Enterococcus spp. isolated fromに起因した可能性が示唆された。同様の成績は使growing broilers medicated with enrofloxacin,

用していない 1 農場において分離された菌株におapramycin and amoxicillin. Vet Microbiol, 139,

いても認められた。同一鶏群より分離された菌株

284-292 (2009)における薬剤耐性パターンは鶏の加齢とともに多5 ）da Costa PM, Bica A, Vaz-Pires P, Bernardo F:

様化する傾向にあった。以上の成績より，ブロイ

Effects of antimicrobial treatment on selection of

ラーの飼養期間における抗菌性物質の使用に関わresistant Escherichia coli in broiler fecal flora. Mi-

らず，薬剤耐性株が使用期間中鶏群に存在するこ

crob Drug Resist, 14, 299-306 (2008)と，また，R プラスミドのような可動性の因子が6 ）Diar ra MS, Silversides FG, Diar rassouba F,

薬剤耐性パターンの多様化にかかわっている可能Pritchard J, Masson L, Brousseau R, Bonnet C,性が示唆された。

Delaquis P, Bach S, Skura BJ, Topp E: Impact offeed supplementation with antimicrobial agents

6 ．謝

辞

on growth performance of broiler chickens, Clos-

tridium perfringens and enterococcus counts, and
本研究は，農林水産省の「平成 19 年度抗菌性

antibiotic resistance phenotypes and distribution

物質薬剤耐性菌評価情報整備委託事業」において

of antimicrobial resistance determinants in Esch-行われた。

erichia coli isolates. Appl Environ Microbiol, 73,
6566-6576 (2007)

引用文献

7 ）Diarrassouba F, Diarra MS, Bach S, Delaquis P,
Pritchard J, Topp E, Skura BJ: Antibiotic resistance1 ）Aarestrup FM, Bager F, Jensen NE, Madsen M,

and virulence genes in commensal Escherichia coli

Meyling A, Wegener HC: Resistance to antimicro-

and Salmonella isolates from commercial broiler

bial agents used for animal therapy in pathogenic-,

chicken farms. J Food Prot, 70, 1316-1327 (2007)

zoonotic- and indicator bacteria isolated from dif-8 ）Harada K, Asai T, Kojima A, Ishihara K, Takahashi

ferent food animals in Denmark: a baseline study

T: Role of coresistance in the development offor the Danish Integrated Antimicrobial Resistanceresistance to chloramphenicol in Escherichia coli

Monitoring Programme (DANMAP). APMIS, 106,

isolated from sick cattle and pigs. Am J Vet Res,745-770 (1998)

67, 230-235 (2006)

2 ）Clinical Laborator y Standards Institute. 2006.

9 ）Huovinen P, Sundström L, Swedberg G, Sköld O:

Methods for dilution antimicrobial susceptibility

Trimethoprim and sulfonamide resistance. Antimi-

tests for bacteria that grow aerobically. Approved

crob Agents Chemother, 39, 279-289 (1995)

standard M7-A7. Clinical Laborator y Standards10）Kojima A, Asai T, Ishihara K, Morioka A, Akimoto

Institute, Wayne, PA.
3 ）Cloeckaert A, Baucheron S, Flaujac G, Schwarz

K, Sugimoto Y, Sato T, Tamura Y, Takahashi T:
National monitoring for antimicrobial resistance村瀬敏之／鶏由来大腸菌における薬剤耐性の疫学／ 32（2010） 41

among indicator bacteria isolated from food-15）Smith JL, Drum DJ, Dai Y, Kim JM, Sanchez S,

producing animals in Japan. J Vet Med Sci, 71,

Maurer JJ, Hofacre CL, Lee MD: Impact of antimi-

1301-1308 (2009)

crobial usage on antimicrobial resistance in com-11）Lu J, Idris U, Harmon B, Hofacre C, Maurer JJ,

mensal Escherichia coli strains colonizing broiler

Lee MD: Diversity and succession of the intestinal

chickens. Appl Environ Microbiol, 73, 1404-1414

bacterial community of the maturing broiler chick-(2007)

en. Appl Environ Microbiol, 69, 6816-6824 (2003)

16）Someya A, Otsuki K, Murase T: Characterization

12）Nei M, Li WH: Mathematical model for studyingof Escherichia coli strains obtained from layer

genetic variation in terms of restriction endonucle-

chickens af fected with colibacillosis in a com-

ases. Proc Natl Acad Sci USA, 76, 5269-5273 (1979)

mercial egg-producing farm. J Vet Med Sci, 69,13） Nguyen L, Levy D, Ferroni A, Gehanno P, Berche

1009-1014 (2007)

P: Molecular epidemiology of Streptococcus pyo-17）高橋敏雄，浅井鉄夫，小島明美，原田和記，石genes in an area where acute pharyngotonsilitis is

原加奈子，守岡綾子，木島まゆみ，田村

endemic. J Clin Microbiol, 35, 2111-2114 (1997)

家畜衛生分野における耐性菌の現状と今後の対

豊：

応．感染症誌 80, 185-195（2006）

14）Pleydell EJ, Brown PE, Woodward MJ, Davies RH,
French NP: Sources of variation in the ampicillin-18）van den Bogaard AEJM, London N, Stobberingh

resistant Escherichia coli concentration in the feces

EE: Antimicrobial resistance in pig faecal samplesof organic broiler chickens. Appl Environ Micro-

from The Netherlands (five abattoirs) and Sweden.

biol, 73, 203-210 (2007)

J Antimicrob Chemother, 45, 663–671 (2000)

Antimicrobial Susceptibilities in Escherichia coli Isolates Obtained form Broiler chickens
Toshiyuki MURASE
Laboratory of Veterinary Microbiology, Faculty of Agriculture, Tottori University, 4-101 Koyama, 680-8553 Tottori
The use of antimicrobial agents in food-producing animals has increasingly become a public concern. Escherichia
coli isolates obtained from commercial broiler chickens reared on farms with or without use of antimicrobials during maturation were screened for antimicrobial resistance. Ten E. coli isolates were recovered from each of the fecal
samples collected from 10 birds on the farms at the ages of 2 to 3 days, 14 to 17 days, and 47 to 50 days. High prevalence of resistance to antimicrobials including ampicillin (ABPC) (19 to 95% by sampling time) and OTC (29 to 100%)
was detected on all of the farms. Isolates resistant to both ABPC and OTC that were obtained from an untreated flockat different sampling times were closely related each other by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) patterns of
XbaI-digested chromosomal DNA. In E. coli isolates from farms with or without use of antimicrobials, identical PFGE
patterns were found among isolates with certain resistance phenotypes and other isolates that were resistant to additional drugs, including DSM, OTC, CP, and TMP. The numbers of resistance phenotypes observed among isolates
from the birds increased with the growth of the chickens. The present results suggest that commensal E. coli strains
with defined resistance phenotypes may persist in the absence of selective pressure of antimicrobials. It is also impliedthat horizontal transmission of mobile elements such as R-plasmids result in the emergence of different resistancephenotypes even in the absence of antimicrobial administration.

42 動物抗菌会報 32（2010）

討論（座長：江口正志，畜安研）

質問（藤本修平，東海大）

質問（藤本修平，東海大）

腸管内での耐性菌は人だと 10 － 5 ～ 10 － 10 という報人間ではすごく少ない population が耐性を持って告文があるので，便をそのまま選択培地に接種して，いる。そのため，全体を見るのであれば，便自体を耐性菌の有無を調べるのも興味深いといえます。

抗菌性物質含有培地にまいて，発育してきた菌の同①ヒヨコの入手源は農場によって異なるか。（チップ定をする。

はどこからきているのか。）②飼育の様態はどういうものか。（ケージか部屋タイプか，どうやって飼っているか。）③糞口感染がある状態か。（餌は糞に汚染されたもの

答（村瀬敏之）調査目的に応じた採材の方法が必要と思います。
今回は一個体に由来する複数株における耐性パター
ンのバラエティーを検討するため 10 株分離しました。

を食べているのか。）

特定の耐性遺伝子をもった菌を見つけたい場合，ご答（村瀬敏之）指摘のような方法が必要と思います。

①孵化場のデータは持っておらず，今回明らかにしていないが，3 農場は地理的には遠隔であった。雛の入手源は限られている。
②ブロイラーなので，1 つのフロアーで多数の個体が放し飼いになっている。
③餌は餌樋の中に入っているという飼育の様態であ

質問（秋庭正人，動衛研）
薬剤を使用していない農場にも，もともと耐性菌が出ているということだったが，雛の導入元がそれ
ら耐性菌の供給元となっている可能性は考えられますか。
答（村瀬敏之）り，餌だけでなく糞も食べていると思われる。

その可能性は否定できないし，そのような報告は

農場 3 はウィンドレス（窓なし）で環境をコントロー

文献にもある。今回はそこまでは遡った調査はでき

ルされており，これが農場間の違いに関与しているていない。

可能性はある。