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膜麹自における卵黄蛋白質遺伝子の保存性
畠山正統・高寺憲司・大石臨生
MasatsuguHATAKEYAMA竺区enjiTAKADERA2)andKugaoOISIま12): Homoloぉrcon‑
servationofv
itellogeni
ngenesandthei
rproductsamonghymenopterani
nsects*Div
isiono[Scienceo[Biolog
icalResources，GraduateSchoolo[ScienceandTechnoiogy，KobeU
niv
ersity，Nada，Kobe，Hyogo657，Japan勾 Departmento[Biology，Facultyo[Science，KobeUniversity，Nada，Kobe，Hyogo657，Japan1)

様々な昆虫で卵黄蛋白質が調べられており、それらは主に搬の脂肪体で合成されて体液中に分泌され(vitellogenin:Vg)、発脊中の卵母細胞に取り込まれて貯えられる (vitellin:Vn) ことが知られている (Wyatt，1991)。また、昆虫の卵黄綬自質はその産生機式の特徴から 3つのグループに分けられている (HarnishandWhite，1982)。これまでに膜麹呂昆虫の卵黄潔白質を広く調べたところ、広腰主主践はグループ 1 (1本のボリペプチドが 2つに切断されて卵母継胞に取り込まれるタイプ〉に療し、総楼主主 EHまグループ 2 行本のボリペプチドが切断されずに卵母綴胞に取り込まれるタイプ)に滋することがわかった。さらに、カブラハパチ
Athaliarosae(広腰亜自、ハパチ科)の卵黄議自質、 L‑Vn (分子量:180kD) およびらVn (分子量:50kD)に対する特異抗体を用いてウエスタンブロット解析を行うと、制ぺたすべての広勝B
在日で高分子量(約 180kD)の Vnには抗 L‑Vn抗体が、低分子量(約 50kD) の Vnには抗ふ Vn抗体がそれぞれ反応し、数種の細腰iJliElでは 1:<ドの高分子量{約 180kD) の Vnl
こ対して照方の抗体が反応し、膜麹呂昆虫内で互互呂を越えて草野災遺言自質の抗原共通牲が見いだされた (Oishieta，.
l1993)。これらの結采から、摸麹§昆E
誌の卵黄蛋白質は、見かけよ、広腹立在留と細腰亜日で異なっているもののその遺伝子は保存されていて、合成、分泌の過程でポリペプチドのプロセッシングが多少呉なっているのではないかと推測される O
これまでに、私たちはカブラハパチ Vgのほぼ会長にあたる cDNA(6.
0kb) をクローン化して一部損基配列を決定し、 S‑Vgはその ‑5'末端側に、 L‑Vgはその 3'末端側にコ…ドされていることを確認している (Kageyamaetal.，1994)。そこで、このカブラハパチ VgcDNAの一部をプローブにして、模懇窃昆虫の卵黄主主白繁遺伝子について mRNAレベルでの保存牲を調べた。今回は広務亙 132科 S種、紹媛主主 132科 3種について議ぺた。これらはすべて六甲山麓で採集したものである。
thaliainfu
mata、ニホンカブラハパチ
広勝耳夏目は、カブラハパチの近縁種であるセグロカブラハパチ AAthaliajaponica、 イ ヌ ノ フ グ リ ハ バ チ Athaliakashmirensisの 3種と、ハノ tチ 科 の 2種 、 ク ロ ハ パ チ
Macrophyai
gnava、オスグロハバチ Dolerussimilis、および、ミフシハパチ科のアカスジチュウレンジ Ar
宮Enigrinodos
aを誘べた o cDNAの 5'末端付近の 500bp (S‑Vgをコードしている部分)をプローブにしてノーザンブロット解析を行うと、すべての種でカブラハパチと同じ 6.
5kbの 1本の mRNAのバンドが検出され、科を越えて卵黄蛋白質 mRNAが保存性されていた (Fig. 1)。近縁 3穫では特に反応性が高く、 S‑Vg::J…ド領域については非常に保存性が高いことが示された 一方、 3'末端付近の L‑Vgをコ…ドしている領域との反応性は 弱 し こ れ ら の VgmRNAはよく似ているものの同一ではないことが示唆される。
olistesrothneyi、セグロアシナガパチ Polistesjadw
igaeとコシ
総腹立夏E1!土、スズメパチ科のキアシナガパチ Pブ い サ バ チ 科 の ク マ バ チ Xyゐcopaappendiculataを調べた c スズメバチ科の 2穫についてはカブラハバチの抗 Vn抗体に対する抗涼共通性が高いことがわかっている (Oishietal.，1993)。しかしながら、今醤は 3穏とも5'末端領域、 3'末端領域のいずれをプローブに用いても mRNAは検出されなかった。この結果から、1)細腰
亜白の卵黄蛋白質ではその分子量(約 180kD) をあわせて考えると VgmRNAの阿末端が欠けていで、 s‑Vgと L‑Vgの境界部分が保存されている、 2)用いた個体はすべて野外採集したものでその卵黄形成過絞が不詳であるため、そもそも卵焚主景色質遺伝子の転写が行われていなかったか、あるいはあったとしても会 RNAにQ

*Abstracto
fpaperreadatthe30t
hAnnualMeetingofArthropodanE
mbr
y
610g
icalSocietyofJapan，
June
3
ω4，
1
994(Sugadaira，Nagano).

Proc.Arthropod Embヴ'
01.Soc.Jpn.(30)(1995)
蜘40ArAiA
jAkArMi05An

6.5kb̲

Fig.1 Northernblotanalysiso
ftotalRNAs (1‑5μg) eachextractedfromasinglefemaleofsymphytanspecies.Theprobeusedwasa500bp‑
long5'‑terminalregionofAthaliarosae
VgcDNAwhichencodesapartofS‑Vg，andhybr
idizationwasperformedunderthehigh‑tal.(1994).Arrowheadi
ndicatesaeststringencyconditionsasdescribe
dinKageyamae
thaliarosae(1μgtotalRNA)，
6.
5kbsinglemRNAbandd
etectedineachspecies.Ar:AAi:Athaliainfumata(1μg)，Aj:Athaliajaponica(1μg)，Ak:Athali
akashmirensis(1μg)，
Mi:Macrophyai
gnaνa(5μg)，Ds:Dolerussimilis(5μg)，An:Argenigrinodosa(2.
5μg).

対する VgmRNAの割合が少なくて検出不能であった、 3)ハイブリダイゼーション、洗浄共に厳しい条件でノーザンプロット解析を行ったため、検出できなかった、などの可能性が考えられる 。
以上のように、広腰亜日ではかなりよく卵黄蛋白質遺伝子が mRNAレベルで保存されていることがわかった。
さらに膜麹目内での保存性を幅広く調べると共に、特に細腰亜日については卵黄形成過程のわかっている径を選んで mRNAレベルだけでなく、ゲノム DNAレベルまで調べる必要性があると恩われる 。
引用文献

Harnish，D.G.andB.N.White (1982)J.Mo.
lEvol.，18，404‑
413.
Kageyama，Y.，T.K
inoshita，Y.Umesono，M.Hatakeyamaa
ndK.Oishi(1994)InsectB
iochem.Mol.Biol.，
24，599‑605.
.，M.Yamashita，Y. Kageyama，M. Hatakeyamaa
ndT.Naito(1993)Proc.Arthropod.E
mbryol.
Oishi，K，(28)，27‑
29.
Soc.Jpn.
.R.(1991)Inv
ert.Reprod.Dev.，20，1‑
35.
Wyatt，G