The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.3 No.3 2014

INTERFERON ADMINISTRATION IN BLV COWS

原著論文

牛白血病ウイルス感染牛に対するインターフェロン-α製剤経口投与後の末梢血白血球ポピュレーションおよびサイトカイン遺伝子発現の変化
柿沼清市＊ 1） 大塚浩通 2） 今内覚 3） 及川正明 2）

1）柿沼獣医科医院
2）北里大学獣医学部獣医学科
3）北海道大学大学院獣医学研究科動物疾病制御学講座感染症学教室＊連絡担当者：柿沼清市
TEL

0495-72-0171

FAX

0495-72-8244

E-mail：fwid6390@mb.infoweb.ne.jp［要約］

乳牛の牛白血病ウイルス（BLV）の感染では液性免疫機能が亢進する一方、細胞性免疫機能が低下する。そこで BLV 感染乳牛に対して IFN 製剤の投与によって細胞性免疫機能を高めることで、地方病性白血病（EBL）やその他の疾病予防効果があるのかどうかを明らかにするために、細胞性免疫の活性効果のある経口用インターフェロン（IFN）-α製剤を BLV 抗体陽性牛に対して投与し、その後の免疫機能の変化を観察した。対象牛は BLV 抗体検査陽性の臨床的に健康なホルスタイン種経産牛 8 頭で、全ての牛に IFN 製剤 200IU を 5 日間連続経口投与した。採血は投与直前、0.5、1、2、および 4 週後の計 5 回実施し、末梢血液中の白血球ポピュレーションおよびサイトカイン遺伝子発現量を解析した。投与前に比べ MHCclass-II＋CD14－B 細胞数は投与 4 週後、また CD4＋T 細胞数は、投与 1、2、および 4週後に有意に減少した。それに伴って CD4＋/CD8＋比が投与 2、および 4 週後に有意に減少した。また、
CD3＋TcR1-N12＋γδT 細胞数は、投与 1 週後に有意に減少した。また、TNF-α遺伝子発現は、投与 1週後に有意に増加し、IL-4 遺伝子発現量は、投与 4 週後に有意に増加した。これらのことから BLV 感
染牛に対する IFN-α製剤の経口投与は細胞性免疫機能に変動を与える可能性がある。
キーワード：乳牛、牛白血病ウイルス、サイトカイン、インターフェロンα製剤、白血球ポピュレーション［緒すると、血清インターフェロン（IFN）-α濃度論］の低下やインターロイキン（IL）-4 濃度の上昇

ヒト免疫不全ウイルス（HIV）と同じレトロの状態となり、細胞性免疫機能が低下するとさウイルス科に属する牛白血病ウイルス（BLV）れている［3］。乳房炎発症への BLV 感染の影

は、地方病性（成牛型）白血病（EBL）の原因響も指摘され、潜在性乳房炎の牛の乳腺組織内となることが知られており、我が国におけるそに BLV が 検 出 さ れ た と す る 報 告［21］ や、の発症報告は年々増加傾向にあり［10］、牛群BLV 感染牛において乳汁中の高体細胞数を指内の半数以上の牛が BLV に感染している農場摘する報告もある［20］。また、BLV 感染牛でも存在する。BLV 感染牛では、末梢血中の Bは、細胞性免疫応答の低下に伴って、乳房炎、細胞数の増加を主体とした免疫異常状態が認め

皮膚糸状菌症などの感染症の他、EBL 以外のられ、持続性リンパ球増多症（PL）へと進行疾病発生のリスクが高まる可能性が指摘され［4，19］、免疫機能低下による疾病多発や経済的損失が危惧されている［8，14，15］。

受理：2014 年 4 月 2 日－ 77 －

家畜感染症学会誌
3 巻 3 号 2014

牛白血病ウイルス感染牛に対するインターフェロン投与

VMRD） お よ び CD14（MY-4, Coulter Immu-IFN-α製剤の経口投与による免疫応答には、Th1 細胞優勢の免疫反応促進、CD8 T 細胞やnology, Hialeash, Florida, U.S.A.） に 対 す る 抗

マクロファージの活性化、腫瘍壊死因子（TNF）-体 を、 二 次 抗 体 に は Goat Anti-Mouse IgG1：αや IFN-γの遺伝子発現の上昇といった細胞RPE（AbD Serotec, Oxford, U.K.）および Goat性免疫および抗ウイルス作用の活性効果がある

Anti-Mouse IgM（μchain）：FITC（Southern［9，18］。ヒトや動物のウイルス感染症に対しBiotech., CA, U.S.A.）を用いた。なお、各細胞て IFN-α製剤の経口投与による効果が報告さ数はフローサイトメーター（FACScan, Becton

れ［2，9］、牛においてはヒト IFN-α製剤の経Diskinson, U.S.A.） に よ り 解 析 し た 比 率 と口投与が子牛の末梢血単球数の増加や IL-12 産WBC 値から算出した。

生促進効果などの細胞性免疫活性効果を持つこ（3）末梢血中サイトカイン遺伝子の発現量の解とが明らかにされている［13］。これらより、

析：末梢血単核球の培養は血液から分離し、5BLV 感 染 牛 に 対 す る IFN-α 製 剤 の 投 与 は、×106 個/ml となるように調整した。これまで

BLV 感染乳牛における細胞性免疫機能の活性の方法と同様に、細胞には 5 μg/ml のフィト効果が期待できる。

ヘマグルチニン（PHA-P；Sigma-Aldrich CO,＋そこで本研究では、臨床的に健康な BLV 感

St. Louis, U.S.A.）を加え、12 時間培養した［12］。

染乳牛に対する IFN-α製剤の投与が、末梢血培養した細胞から RNA を抽出し、サンプルの液中の白血球ポピュレーションおよびサイトカRNA 濃度を測定した。抽出した RNA から定イン遺伝子発現量等の細胞性免疫機能に与える法により、cDNA の合成（逆転写反応）およ影響について検討した。

びリアルタイム PCR を実施した［16］。また、
TNF-α、IFN-γ、IL-4 の各種サイトカインお［材料と方法］

よ びβ-Actin の PCR プ ラ イ マ ー デ ザ イ ン は

1．供試牛

Riollet らの報告に基づいて作製し［16］、各サ寒天ゲル内拡散沈降反応（AGID）にて BLV

イトカイン産生能はβ-Actin を内部標準とし抗体検査陽性と確認された臨床的に健康なホルて、 無 刺 激 の 培 養 細 胞 で の サ イ ト カ イ ン のスタイン種経産牛 8 頭に、経口用 IFN-α製剤（ビmRNA 発現量を 1 とした場合の PHA-P 刺激培

ムロン、バイオベット社、東京）200 国際単位

養細胞におけるサイトカインの mRNA 発現量を 5 日間連続経口投与した。投与から 6 ヶ月間を比較する比較定量法（⊿⊿ Ct 法）によっての疾病発生は認められず、8 頭の調査開始時の算出した。

平均年齢は、5.0±0.6 歳、分娩後日数は、113.3±24.5 日であった（Table 1）。

3．統計学的処理

2．血液検査ンの投与前と投与後各週の比較には、Wilcoxon（1）血液の採材と処理法：供試牛 8 頭の頚静脈の符号付き順位検定を用いた。各測定値は平均

白血球ポピュレーション、およびサイトカイより、投与直前、投与 0.5（3 日）、1、2、4 週後の計 5 回採血し、血清分離剤入りの真空採血

Table 1

管 7 ml、EDTA-2Na 添加真空採血管 5 ml、ヘパリン添加真空採血管 10 ml に分注した。
（2）白血球ポピュレーションの解析：白血球数（WBC 値 ） は、 自 動 血 球 計 算 装 置（PC607,ERMA, Germany）により測定した。白血球ポピュレーションの解析は、定法に従い実施し［16］、 一 次 抗 体 に は CD3（MMIA、VMRD、Pullman, WA, U.S.A.）、CD4（CACT183A,VMRD）、CD8（BAT82A, VMRD）、TcR1-N12（CACT61A, VMRD）、MHCclassII（CAT82A,Age and Days from calvingNo.

AgeDays from calving

Case-1

6.6

180

Case-2

6.4

114

Case-3

6.0

170

Case-4

5.8

11

Case-55.3

148

Case-64.6

19

Case-73.0

180

Case-8

2.1

84

Average5.0±0.6

113.3±24.5

Data expressed as means±SEM.

－ 78 －

The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.3 No.3 2014

INTERFERON ADMINISTRATION IN BLV COWS

classII＋CD14＋ 単球数は、有意差は認められな値±標準誤差で表示した。
［結かったものの投与前に比べて投与 0.5 および 1果］

週後に減少したが、2 および 4 週後に増加し、1．末梢白血球数、単核球数および顆粒球数

MHCclassII－CD14＋単球数は、有意差は認めら

末梢白血球数、および顆粒球数は、投与前にれなかったものの投与前に比べて 0.5、1、2、比べて有意な変化は認められなかった。末梢単および 4 週後まで、徐々に減少した（Table 2）。

核球数は、投与前に比べて投与 4 週後に有意に3．末梢血中サイトカイン遺伝子の解析結果減少した（Table 2）。

TNF-α遺伝子発現量は、投与前（1.23±0.38）
2．白血球ポピュレーションの解析結果＋－に比べて投与 1 週後（7.74±3.80）有意に増加

2

MHCclassII CD14 B 細 胞 数（10 /μl） は、した。IL-4 遺伝子発現量は、投与前（6.15±3.07）

投与前（30.45±8.28）に比べて投与 4 週後（19.76に比べて投与 4 週後（18.29±4.75）有意に増加±4.91）有意に減少した。CD3＋T 細胞数（102/し た。IFN-γ/IL-4 比 は、 投 与 前（2.64±1.09）μl）は、投与前（11.58±1.76）に比べて投与 4に比べて投与 4 週後（0.29±0.10）有意に減少＋した。IFN-γ遺伝子発現量は、有意な変化は

TcR1-N12 γδT 細 胞 数（10 /μl） は、 投 与認められなかったが、投与前に比べて投与 1 週前（4.18±0.96）に比べて投与 1 週後（2.83±0.49）

後増加し、他の時期においては減少した（Table

週 後（7.20±1.13） 有 意 に 減 少 し た。CD3＋2＋22）。

有意に減少した。CD4 T 細胞数（10 /μl）は、投与前（3.52±0.52）に比べて投与 1、2、およ［考び 4 週後（1.96±0.30、2.29±0.35、および 1.78±0.43） 有 意 に 減 少 し た。CD4＋/CD8＋ 比 は、察］動物への IFN-α製剤の経口投与による免疫投与前（2.36±0.47）に比べて投与 2、および 4応 答 に は、Th1 細 胞 優 勢 の 免 疫 反 応 の 促 進、週後（1.43±0.25、および 1.64±0.35）有意に減TNF-αや IFN-γの遺伝子発現の上昇と IL-4 の少した。CD8＋T 細胞数は、投与前に比べて投発現の低下、CD8＋T 細胞の増殖反応、抗ウイ与後に有意な変化は認められなかった。MHC-ルス作用、および抗腫瘍作用の活性化などがあTable 2Leukocyte population and Cytokine mRNA expression levels in PBMC
weeks
pre0.5124WBC（102/μl）

117.13±13.92

112.13±15.19

109.00±14.89

106.75±14.66

108.00±9.67

Granulocyte（102/μl）

59.34±7.1759.28±10.4660.26±8.1853.43±8.92

68.93±6.18

PBMC（102/μl）

57.78±9.32

52.84±8.94

48.74±10.31

53.32±9.43

39.07±5.73 ＊MHC class-II＋CD14－（102/μl）

30.45±8.2830.53±8.25

31.67±9.4531.24±8.72

19.76±4.91 ＊CD3 （10 /μl）

11.58±1.76

9.43±1.24

8.28±1.00

8.94±1.27

7.20±1.13 ＊CD4＋（102/μl）

3.52±0.52

2.78±0.39

1.96±0.30 ＊2.29±0.35 ＊1.78±0.43 ＊1.70±0.30

1.56±0.28

1.52±0.38

1.70±0.27

1.24±0.24

3.38±0.62

3.17±0.62

5.65±0.85

5.14±0.87＋＋22CD8 （10 /μl）＋＋

2CD3 TcR1-N12 （10 /μl）

4.18±0.96

3.69±0.69

2.83±0.49

MHC class-II＋CD14＋（102/μl）

4.42±0.71

3.59±0.56

2.95±0.47－＋

2＊

MHC class-II CD14 （10 /μl）

5.34±0.74

4.95±0.64

3.03±0.70

3.81±0.40

3.07±0.70

CD4＋/CD8＋2.36±0.47

2.17±0.37

1.67±0.36

1.43±0.25 ＊1.64±0.35 ＊IFN-γ

4.63±2.87

0.89±0.33

15.14±8.30

0.47±0.22

2.51±0.67

IL-4

6.15±3.07

2.20±2.127.15±3.54

3.33±2.60

18.29±4.75 ＊TNF-α1.23±0.38

1.58±0.43

7.74±3.80 ＊7.88±6.54

1.36±0.21

IFN-γ/IL-4

2.64±1.09

18.92±11.76

2.77±1.63

1.74±0.66

0.29±0.10 ＊WBC：White blood cell.
PBMC：Peripheral blood mononuclear cell.
Values are expressed as means±SEM.
＊：Denotes significant difference compared to pre administration（p＜0.05）.

－ 79 －家畜感染症学会誌
3 巻 3 号 2014

牛白血病ウイルス感染牛に対するインターフェロン投与

リンパ節において、IFN-γの遺伝子発現の上る［9，18］。
本研究の供試牛では、投与 1 週後の TNF-α

昇と IL-4 の発現の低下、CD8＋T 細胞の増殖反遺伝子発現は有意に増加し、有意差は認められ応といった Th1 サイトカイン反応を引き起こなかったものの投与 2 週後の TNF-α遺伝子発すとされている［18］。しかしながら、本研究現も増加した。IFN-αの刺激により単球からの供試牛の末梢血単核球には、Th1 サイトカの TNF-α産生が促進することから［18］、BLVイン反応は観察されず、なかでも IL-4 遺伝子に感染した乳牛に対して IFN-α製剤の経口投発現が増加した理由については、測定値に個体与により単球が活性化し、TNF-αの分泌が増差が大きく、明らかにすることは出来なかった。

加した可能性がある。

今後は、更なる供試牛の確保、ならびに供試牛＋－投与前の MHCclassII CD14 B 細胞数は、この個体ごとの BLV 感染経過や炎症性疾患履歴等の詳細な比較調査が必要と考えられた。

れまでに我々が BLV 感染の確認された泌乳牛
＋－において観察した高い MHCclassII CD14 B 細

CD4＋T 細胞および CD8＋T 細胞は、B 細胞胞数と近似していたものの、投与 4 週後に減少中の BLV の発育を抑制し、EBL 発症牛のリンした［4］。TNF-αは、BLV 感染細胞表面のレパ組織では、腫瘍免疫においてこれらの T 細セプターのうち TNF receptor typeI（TNF-RI）胞が役割を果たす可能性が示唆されている［1］。に結合するとアポトーシスを誘導し、TNF re-

本研究では、投与 1 週後の末梢血の CD4＋T 細ceptor typeII（TNF-RII）に結合すると増殖を胞（ヘルパー T 細胞）数、および CD3＋TcR1-誘導する［3］。本実験においては、IFN-α製N12＋T 細胞（γδT 細胞）数が減少し、それ剤 の 経 口 投 与 に よ っ て、TNF-α 発 現 増 強 とに伴い CD4＋/CD8＋比も減少した。一方、これ

MHCclassII＋CD14－B 細胞数の減少が誘導されまで腫瘍を持ったマウスへの IFN-αの経口投たことから、供試した BLV 感染牛においては与においても、IFN-αの刺激により活性化しTNF-RI を発現していた感染細胞が多く存在した NK 細胞、B 細胞および T 細胞が早期に末たことが推察された。

梢を循環し、脾臓や末梢リンパ節から腫瘍細胞

1 型 IFN（IFN-α、β、δ、ω、τ）は、細複製の部位を攻撃し、腫瘍細胞を減少させると胞へのウイルス侵入によって産生され、ウイルいわれている［2］。これらのことより、本研究スの増殖を抑制するのに対して、
2 型 IFN（IFN-においても、CD4＋T 細胞ならびにγδT 細胞γ）は、抗原刺激された T 細胞および NK 細が減少していたことから、IFN-α製剤投与刺胞によって産生され、マクロファージや NK 細激によって、供試牛の末梢血およびリンパ組織胞を活性化し、ウイルス増殖を抑制する［17］。に存在する BLV 感染細胞にそれらの免疫細胞

BLV 感染牛では、BLV 感染細胞が増多し PLが移動したことが推察された。また、IFN-αへと進行することによって、液性免疫優位の状製 剤 投 与 4 週 後 に は BLV 感 染 細 胞 で あ る態を示して Th1 細胞に比べて Th2 細胞が優勢

MHCclassII＋CD14－B 細 胞 が 減 少 し た こ と かと な る。 そ の 結 果、IFN-γ の 分 泌 が 減 少 し、ら、IFN-αによる BLV 感染牛に対する治療効

IL-4 の分泌は増加する［3］。また、PL へと病果の可能性が期待された。

態進行した BLV 感染牛のγδT 細胞は、抗ウ以上より、BLV 感染牛に対する IFN-α経口イルス作用を発揮出来なくなるといわれている

投与は、末梢血単核球中のサイトカイン遺伝子［6，7］。これに対して、病態の進行した BLV発現ならびに白血球ポピュレーションに変動を感染牛に対する IFN-γの腹腔内投与により、与え、細胞性免疫機能に影響を与えることが示投与後のγδT 細胞数が増加し、末梢血中の Bされた。また、本研究においては、EBL 治療細胞数およびウイルス量（シンチシウム数）が効果に関して言及する結果は十分に得られてい減少することが明らかにされており［11］、まないが、BLV 感染細胞を減少させる効果が示

た BLV 感染牛に対する IFN-γの皮下投与試験すことが出来たことから、IFN-αの EBL 治療においても、投与後に末梢血中のシンチシウム技術の可能性を示すことが出来た。しかしなが数が減少したことが報告されている［5］。さらら、供試牛において個体差の影響が考えられたに、IFN-α製剤の口腔内投与では、頬粘膜のことから、今後は供試牛の確保ならびに供試牛－ 80 －

The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.3 No.3 2014

INTERFERON ADMINISTRATION IN BLV COWSの疾病歴等を均一化した更なる実験が必要となることが考えられた。
［謝辞］

今研究にあたり、御協力いただいた大日本住友製薬の佐々木文夫氏、バイオベット社の阿部健司氏、埼玉県熊谷家畜保健衛生所の先生方に深謝する。
［引用文献］
1． Chiba, T., Hiraga, M. Aida, Y., Asahina, M.,Wu, D., Ohshima, K., Davis, W. C. and Okada,K. 1995. Immunohistologic studies on subpopulations of lymphocytes in cattle with enzootic bovine leukosis. Vet. Pathol. 32: 513-520.
2． C u mm i ns , J. M. , K rako wka , G. S. a n dThompson, C. G. 2005. Systemic effects of interferons after oral administration in animalsand humans. Am. J. Vet. Res. 66: 164-176.
3． Kabeya, H., Ohashi, K. and Omuma, M. 2001.
Host immune responses in course of bovine
leukemia virus infection. J. Vet. Med. Sci. 63:703-708.
4． 柿沼清市，大塚浩通，大前佳穂里，綾部杏子，柿沼元治，今内覚，及川正明．2011．牛白血病ウイルス感染搾乳牛における末梢白血球ポ
ピュレーション．日獣会誌．64：375-380．
5． Kohara, J. and Yokomizo, Y. 2007. In vitro
and in vivo effects of recombinant bovine interferon-τ on bovine leukemia virus. J. Vet.
Med. Sci. 69: 15-19.
6． 今内覚．2013．牛の感染免疫に関する最近の知見．日獣会誌．66：171-179．
7． Lundberg, P. and Splitter, G. A. 2000. Gammadelta T-Lymphocyte cytotoxicity against envelope-expressing target cells is unique tothe alymphocytic state of bovine leukemia virus infection in the natural host. J. Virol. 74:
8299-8306.
8． Małgorzata, S., Sławomir, Z. and Sylwia, K.
2012. Diagnosis of the bovine leukemia virus
infection in Polish Holstein-Friesian cows andcomparison of their milk productivity. Acta.
Vet. Brno. 81: 353-358.
9． Moore, B. R. 1996. Clinical application of interferons in large animal medicine. J. Am.
Vet. Med. Assoc. 208: 1711-1715.
10． Murakami, K., Kobayashi, S., Konishi, M.,Kameyama, K., Yamamoto, T. and Tsutsui, T.
2011. The recent prevalence of bovine leuke-－ 81 －mia virus (BLV) infection among Japanese
cattle. Vet. Microbiol. 148: 84-88.
11． Murakami, K., Sentsui, Y., Inoshima, Y. andInumaru, S. 2004. Increase in γδ Tcells inblood of cattle persistently infected with bovine leukemia virus following administrationof recombinant bovine IFN-γ. Vet. Immunol.
Immunopathol. 101: 61-71.
12． Ohtsuka, H., Watanabe, C., Kohiruimaki, M.,
Ando, T., Watanabe, D., Masui, M., Hayashi,T., Abe, R., Koiwa, M., Sato, S. and Kawamura,S. 2006. Comparison of two different nutritive
conditions against the changes in peripheral
blood mononuclear cells of periparturient
dairy cows. J. Vet. Med. Sci. 68: 1161-1166.
13． Ohtsuka, H., Tokita, M., Takahashi, K., Masui,M., Kohiruimaki, M., Hayashi, T., Ando, T.,
Watanabe, D. and Kawamura, S. 2006. Peripheral mononuclear cell response in Japanese
black calves after oral administration of IFNalpha. J. Vet. Med. Sci. 68: 1063-1067.
14． Ott, S. L., Johnson, R. and Wells, S. J. 2003.
Association between bovine-leukosis virus seroprevalence and herd-level productivity on
US dairy farms. Prev. Vet. Med. 61: 249-262.
15． Rhodes, J. K., Pelzer, K. D. and Johnson, Y. J.
2003. Economic implications of bovine leukemia virus infection in mid-Atlantic dairy
herds. J. Am. Vet. Med. Assoc. 223: 346-352.
16． Riollet, C., Rainard, P. and Poutrel, B. 2001.
Cell subpopulations and cytokine expressionin cow milk in response to chronic Staphylococcus aureus infection. J. Dairy Sci. 84: 10771084.
17． Tizard, I. R. 2013. Veterinary Immunology.
Ninth ed. Elsevier Inc., New York, pp296-310.
18． Tompkins, W. A. 1999. Immunomodulationand therapeutic effects of the oral use of interferon-alpha: mechanism of action. J. Interferon Cytokine Res. 19: 817-828.
19． Trainin, Z., Brenner, J. Meirom, R. and UgarWaron, H. 1996. Detrimental effect of bovine
leukemia virus (BLV) on the immunologicalstate of catlle. Vet. Immunol. Immunopathol.
54: 293-302.
20． Wellenberg, G. J., van der Poel, W. H. M. andvan Oirschot, J. T. 2002. Viral infections andbovine mastitis: a review. Vet. Micobiol. 88:
27-45.
21． Yoshikawa, H., Xie, B., Oyamada, T., Hiraga,
A. and Yoshikawa, T. 1997. Detection of bovine leukemia viruses (BLV) in mammary tis-家畜感染症学会誌
3 巻 3 号 2014

牛白血病ウイルス感染牛に対するインターフェロン投与

sues of BLV antibody-positive cows affectedby subclinical mastitis. J. Vet. Med. Sci. 59:

301-302.

Changes in peripheral leukocyte population and cytokine expression in dairy cows
infected with bovine leukemia virus after oral administration of interferon-alphaSeiichi Kakinuma1)*, Hiromichi Ohtsuka2), Satoru Konnai3) and Masaaki Oikawa2)

1) Kakinuma Veterinary Hospital.
2) School of Veterinary Medicine, Kitasato University3) Department of Disease Control, Graduate School of Veterinary Medicine, Hokkaido University*Correspondence to: Seiichi Kakinuma[Abstract]
The immune status of bovine leukemia virus (BLV) infected dairy cows tend to skew toward humoral immunity with decreased cellular immunity. The objective of this study was to improve thecellular immunity in order to normalize the immune function, and to prevent against enzootic bovine
leukemia (EBL) and other diseases of BLV infected dairy cows. We investigated effects of oral administration of interferon (IFN)-α on the immune function of BLV infected dairy cows. Eight BLV seropositive clinically healthy Holstein dairy cows in one herd were orally administrated with 200 IU/dayof IFN-α five consecutive days. Blood samples were collected prior to administration and 0.5, 1, 2 and4 week after administration. The leukocyte populations and cytokine mRNA expressions of the peripheral blood mononuclear cells were analyzed. The number of MHCclass-II＋CD14－B cells was remarkably high prior to IFN-α administration, but it decreased significantly at 4 weeks afteradministration compared with pre administration. The number of CD4＋ T cells became significantly
lower at 1, 2 and 4 weeks after administration compared with pre administration. As a consequence
CD4＋/CD8＋ ratio was significantly lower at 2 and 4 weeks after administration compared with preadministration. The number of CD3＋TcR1-N12＋γδT cells decreased at 1 week after administrationcompared with pre administration. The levels of TNF-α showed significantly higher level at 1 week
after administration compared to pre administration. The level of IL-4 increased at 4weeks after administration compared with pre administration. These results suggested that oral administration ofIFN-α affected the cellular immunity in BLV infected dairy cows.
Key words: Bovine leukemia virus, Cytokine, Dairy cows, Interferon-α, Leukocyte population－ 82 －