The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.1 No.1 2012

Efficacy of Probiotics for Beef Cattle after Transportation

原著論文

輸送後の黒毛和種肥育素牛に対する生菌剤投与効果
加藤敏英 1） 野崎敏浩 1） 遠藤洋 1） 小形芳美 1） 関

1）山形県農業共済組合連合会

千佳 2） 田中守 2）2）ミヤリサン製薬㈱研究部

連絡担当者：加藤敏英
山形県農業共済組合連合会中央家畜診療所（〒990︲2171
Tel：（023）684︲5531［要山形県山形市大字七浦字北川原 286︲1）

Fax：（023）684︲5538

e-mail：tosihide_katou@yynosai.or.jp

約］

山形県内に沖縄県から導入された黒毛和種肥育素牛 20 頭を用い、生菌剤が輸送後の免疫能や腸内細菌叢に及ぼす効果について調査した。生菌剤（ボバクチン®）は投与群（n＝10）に対して導入日より 1
日 10 g、30 日間経口投与し、非投与牛を対照群（n＝10）とした。供試牛から、導入時、導入後 30 日目および 60 日目に血液ならびに直腸便を採取し、血液および血液生化学的検査、白血球サブポピュレーション解析、糞便では T-RFLP 法による腸内細菌叢解析および T-RF の主成分分析を実施した。また、両群から無作為に抽出した 6 頭の輸送前と導入後 60 日目の体重を測定し増体重量を比較したほか、60日間の臨床所見を観察した。その結果、両群ともに血液および血液生化学的検査成績においてほとんど変化はみられず、白血球サブポピュレーション解析においても群間で有意な差は認められなかった。また、増体重量と臨床所見にも差はみられなかった。一方、T-RF 主成分分析では投与群で導入後 30 日および 60 日目の腸内細菌叢が均一化する傾向が確認された。この変動には、腸内細菌叢の優勢グループである Clostridium coccoides 属と Bacteroides 属が主に関与したことが判明したことから、生菌剤が腸内環境正常化の一因となったことが示唆された。これは、今回用いた生菌剤の第一胃機能改善効果が影響したものと推察された。
キーワード：肥育牛、腸内細菌叢、生菌剤、輸送、T-RFLP 法［緒水などが制限される時間が長いほど、第一胃発論］

酵異常など消化管機能は低下することが予想さ

近年、肥育素牛生産地が各地に形成され肥育れる。加えて、導入後の飼育環境や給与飼料変農場の大型化が急速に進むなか、家畜の移動範更も消化管機能低下を増悪する可能性が高い。

囲は著しく広域化している。そのため、トラッ

したがって、免疫能および消化管機能を維持す

クなどによる輸送が以前に比べ長距離、長時間るためには導入後の適切な飼養管理が求められとなるケースが増えている。輸送は牛にとってる。そこで、今回は牛の第一胃機能改善効果が大きなストレスとなることが知られており［3，確認されている生菌剤［10-12］が導入後の管4］、免疫能低下を招き感染症発症など生産性を理プログラムのひとつに組み込まれる可能性を低下させることが懸念される。特に、飼料や飲探ることを目的として、山形県への移動としては比較的長距離で長時間を要する沖縄県産の肥育素牛に投与し、輸送後の免疫能や腸内細菌叢

受付：2011 年 7 月 9 日
受理：2011 年 8 月 10 日に及ぼす効果について調査した。

－9－

家畜感染症学会誌
1 巻 1 号 2012

輸送後の肥育牛に対する生菌剤投与効果

Biosystems）にて測定した。なお、サイズマー［材料と方法］

カーには 1200LIZ（Applied Biosystems）を使山形県内の 1 大型肥育農場（約 2,500 頭飼養）用した。以上の検査はミヤリサン製薬㈱中央研に沖縄県から導入された臨床的に健康な肥育素究所で実施した。また、各群から無作為に抽出牛 20 頭を用いた。導入時、無作為に投与群（nした 6 頭の輸送前（家畜市場上場時）と導入後＝10）と無投与対照群（n＝10）に分け、投与60 日目の体重から増体量を算出し比較したほ群 に は Lactobacillus plantarum 220、Strepto-

か、導入後 2 ヶ月間臨床所見を観察した。

coccus faecium 26 お よ び Clostridium butyri-［成cum Miyairi を一定量以上含む生菌剤（ボバク績］

1．血液および血液生化学的検査

チン®；ミヤリサン製薬、東京）を 1 日あたり10 g、30 日間経口投与した。調査期間は平成

各群の平均値と標準偏差値を Table 1 に示し

21 年 10 月から 12 月であり、導入時と導入後た。群間の比較では、30 日目の Alb で有意差（P30 日目および 60 日目に頚静脈血を採取し、血＜0.05、一元配置分散分析法）が認められたほ液（ ヘ マ ト ク リ ッ ト 値 Ht； 血 球 自 動 計 算 器かは差が認められなかった。経時的にみると、

K-4500、Sysmex）および血液生化学検査（総両群とも TP はやや低下し T-cho は増加する傾タンパク TP、アルブミン Alb、総コレステロー向が認められた。T-KB は導入時に比べその後

ル T-cho、総ケトン体 T-KB；血液自動分析器の値は低く、30 日目と 60 日目のバラつきは小AU640、OLYMPUS）を行うとともに、北里さかった。

大学に依頼し末梢血白血球サブポピュレーショ
2．白血球サブポピュレーションンを解析した。同時に採取した直腸便を用いて
T-RFLP 法により細菌叢を解析した（60 日目

すべての項目において群間に有意な差は認めのみ投与群 9 頭、対照群 7 頭）。採取した糞便られなかった（一元配置分散分析法）。各群のは－80℃にて保存し、Matsuki らの［5］方法平均値と標準偏差値を Table 2 に示した。両群に準じてビーズ・フェノール法により DNA をにおいて、導入時に比べその後上昇した項目は、抽出した。抽出した DNA は、TE バッファー

CD3＋CD45R－（メモリー T 細胞）、CD8＋（キラーに溶解し－20℃で保存した。T-RFLP 法によるT 細胞）および WC1－N3＋（γδT 細胞）であり、解析は、
Hayashi ら［2］および Sakamoto ら［9］CD335＋（NK 細胞）は 30 日目に上昇し 60 日の方法に準じて行った。すなわち、5ʼ 末端を目に低下した。CD3＋CD45R＋（ナイーブ T 細胞）

6-FAM で 蛍 光 認 識 し た ユ ニ バ ー サ ル プ ラ イ

は、両群とも導入時に比べ 30 日目にやや低下

マ ー 27F と 未 標 識 の 1492R を 用 い て DNAし、60 日目の値は対照群で上昇し導入時より

抽 出 物 の 16SrRNA 遺 伝 子 を 増 幅 し た あ と、も高かったものの、投与群では 30 日目とほとPCR 産物を制限酵素（Hha Ⅰ、Msp Ⅰ）によんど変わらなかった。また CD4＋（ヘルパー Tり消化した。消化された DNA 断片について、細胞）は、投与群で 30 日目さらに 60 日目と上それぞれの DNA フラグメント長（T-RF）を昇したが、対照群では 30 日目に低下していた。

ABIPRISM310 Genetic Analyzer（AppliedTable 1

Blood and serum biochemical values of cattle before and after administration
Ht (％ )

Treated(n＝10)

Control(n＝10)

TP (g/dl)

Alb. (g/dl)

T-cho (mg/dl)

T-KB (μmol/L)

Day-0

41.7±2.0

6.9±0.3

3.7±0.2

109.7±23.6

890.2±151.4

Day-3038.5±1.4

6.6±0.3

3.1±0.2 a)

125.2±12.3

435.7±68.2

Day-6041.8±2.9

6.4±0.3

3.3±0.2

138.8±16.8

439.7±81.8

Day-042.2±1.7

7.1±0.2

3.8±0.1

119.7±15.1

967.5±356.4

Day-3040.7±5.2

7.0±0.3

3.4±0.1 a)

131.3±24.8351.3±92.3

Day-6040.4±1.7

6.6±0.2

3.4±0.2

136.8±13.0

410.8±94.1

Data are presented as mean±S.D. a)-a): P＜0.05－ 10 －The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.1 No.1 2012

Efficacy of Probiotics for Beef Cattle after Transportation

3．糞便細菌叢

イルを Fig. 1 および Fig. 2 に示した。横軸がフ検 体 に 由 来 す る PCR 産 物 を HhaⅠ お よ び

ラグメントの長さ（T-RF（base pairs））、縦軸

MspⅠによって消化した時の T-RFLP プロファが蛍光強度を表す。群ごとに個体の解析結果にTable 2Peripheral leukocyte population of cattle before and after administration

WBC(cells/μL)

PBMC

Granulocyte CD3＋CD45R－ CD3＋CD45R＋

CD4＋

CD8＋

CD335＋ WC1-N3＋

Treated Day-0
9320±1750(n＝10) Day-30 10270±2140

5939±1623

3378±727

880±197780±226604±260 353±90

110±99400±1685493±1269

4774±1357

942±250660±226652±207 397±98169±52432±143

Day-60 10250±1830

6174±1757

4076±1721

1088±267

646±146826±235 465±296 131±102 600±255

Control(n＝10)Day-0

9050±2100

5496±1011

3554±2427

882±149806±296550±197 503±168

Day-308420±1120

4394±1119

4022±1357

1147±559

578±250494±195 711±499 281±157 512±203

Day-609670±2350

5341±1007

4326±2310

1428±355

1027±374878±201 679±282 152±85

Data are presented as mean±S.D. No difference(treated group vs control group)

Fig. 1 T-RFLP patterns of 16S rRNA genes from cattle feces digested with Hha I and Msp I＊1 C. coccoides, Clostridium coccoides; ＊2 C. leptum, Clostridium leptum－ 11 －

60±33

316±163612±147

家畜感染症学会誌
1 巻 1 号 2012

Fig. 2

輸送後の肥育牛に対する生菌剤投与効果

T-RFLP patterns of 16S rRNA genes from cattle feces digested with Hha I and Msp I (Cont.)

大きな差がなったことから、図には各群 1 検体

ク面積比が他の群に比べ、顕著に増加していた。の 成 績 を 示 し た。 総 ピ ー ク 面 積 に 対 す る 各

さらに、推定された分類群ごとのピーク面積比

T-RF のピーク面積比と推定される分類群をを Fig. 3 と 4 に示した。なお、分類群を推定でTable 3 および Table 4 に示した。検出された

きない T-RF については Others とした。HhaⅠ

T-RF に対応する分類群は、解析ソフト（Micro-で消化した場合では群間に差がみられなかった

biota Profiler；infocom）および Ozutsumi ら［8］が、MspⅠで消化した場合、投与群において 60の牛の腸内細菌叢のクローニング解析により得日目の Others の割合が対照群に比べ多かった。

られた菌属・菌群の 16S rDNA 塩基配列から、各検体の HhaⅠおよび MspⅠで消化した場合制限酵素（HhaⅠおよび MspⅠ）により切断さの T-RF の面積比に基づいて、主成分分析をれる予測断片長に基づき推定した。Table 3 の行った結果を Fig. 5 に示した。0 日目では、投結 果 よ り、60 日 目 に お い て 投 与 群 の T-RF；

与群と対照群に違いはみられなかったが、30796-798 のピーク面積比が他の群に比べ、顕著

日目では投与群の個体が左側に集まる傾向がみに増加していた。また、Table 4 でも同様に、られた。この細菌叢の変動に関与している主要60 日目において投与群の T-RF；188-190 のピー

な T-RF は、HhaⅠ；183-186（Clostridium coc-－ 12 －The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.1 No.1 2012

Table 3T-RFsize (bp)

Efficacy of Probiotics for Beef Cattle after Transportation

Predominant terminal-restriction fragments (T-RF) and presumed organisms after digestion with Hha I
Presumed Organisms

Day-0

Day-30Day-60TreatedControl

TreatedControl

TreatedControl
19.8

22-25

9.8

10.3

14.3

10.8

11.4

51-55

1.1

1.40.0

0.0

0.6

0.4

58-59

4.2

7.3

6.6

4.8

1.5

5.7

76-80

2.1

9.2

2.0

4.1

0.0

1.2

84-90

2.5

6.6

2.8

5.8

1.6

5.0

92-97

Bacteroides group

11.4

15.4

16.0

12.6

11.4

16.1

99-100Bacteroides group

1.0

0.5

5.1

0.4

4.7

2.9

115-119

0.0

0.1

3.0

0.5

1.0

0.0

161-166

0.5

0.0

0.0

0.0

0.0

0.3

172-176

C. coccoides group

3.4

2.8

10.3

11.1

4.8

8.7

181

C. coccoides group

0.0

0.0

0.2

0.0

0.5

0.0

183-186

C. coccoides group

10.6

17.7

8.3

15.3

13.2

10.5

192-196

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

2.6

199-202

0.0

0.2

2.1

2.8

3.8

1.2

209-211

Enterococcus

1.2

0.0

1.0

0.0

0.0

0.0

220-225

C. leptum subgroup

2.8

2.1

0.6

0.9

3.5

0.9

238-241

1.0

0.2

0.0

0.0

0.0

0.0

246-247

0.0

0.0

0.3

0.0

0.0

0.0

364-368

Enterobacteriaceae/Bifidobacterium

11.9

6.0

0.0

0.0

0.0

0.0

370-375

C. leptum subgroup

0.1

0.0

2.5

2.4

2.2

4.4

380-384

C. leptum subgroup

8.23.7

0.0

0.8

0.0

0.2

543

C. leptum subgroup

0.0

0.5

0.0

1.0

0.0

0.0

557-559

C. leptum subgroup

0.5

0.2

0.0

0.0

0.0

0.0

570-574

Streptococcus

2.2

0.4

0.0

1.6

0.0

0.0

1.1

0.6

0.0

0.0

0.0

0.0

592
653-654

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

715

0.0

0.2

0.0

0.0

0.0

0.0

7.3

12.0

1.0

1.2

4.5

4.1

2.0

0.7

2.2

0.2

1.2

0.0
15.8

719-725

C. leptum subgroup736-738796-798

4.3

6.0

14.3

25.7

35.6826-830

2.63.70.00.00.00.01018-1023

0.00.00.6

0.3

1.20.01035-1038

0.2

1.70.00.00.00.01042-1046

0.9

0.0

0.0

0.0

0.00.0

These data showed peak area (%)

coides group）、MspⅠ；90-93（Bacteroidesであり、投与群でやや多い傾向がみられたものgroup）であった。また、60 日目では、投与群の、導入時体重を補正した結果、有意な差は認の個体が右側に集まる傾向がみられた。この細められなかった（一元配置共分散分析法）。

菌 叢 の 変 動 に 関 与 し て い る 主 要 な T-RF は、
5．導入後の臨床所見

HhaⅠ；199-202、796-798、MspⅠ；446-449 であっ

両群とも、導入後間もなく呼吸器症状を示した。

たものが 5 頭ずつ認められた。また、投与群の4．体重の変化

1 頭が導入後 2 ヵ月に下痢便を排泄した。

両群の導入時および 60 日目の体重、増体量［考を Table 5 に示した。増体量は投与群で 77.0±察］

トラックなどによる輸送は、牛にとって大き17.0 kg（平均±標準偏差）、対照群で 61.5±9.9 kg－ 13 －

家畜感染症学会誌
1 巻 1 号 2012

輸送後の肥育牛に対する生菌剤投与効果

Table 4T-RFsize (bp)Predominant terminal-restriction fragments (T-RF) and presumed organisms
after digestion with Msp I
Presumed Organisms

61-65
79-82

Day-0

Day-30Day-60TreatedControl

TreatedControl

TreatedControl

0.60.20.00.00.0

0.0
1.4

0.0

0.2

1.9

4.3

0.0

84-88

Bacteroides group

7.6

11.1

4.2

8.0

3.6

7.3

90-93

Bacteroides group

11.1

8.5

15.2

12.8

10.9

25.3

95-97

Bacteroides group

2.6

0.0

0.0

4.9

0.8

6.0

113-115

0.3

0.5

0.0

0.0

0.0

0.0

125-128

1.4

4.1

1.1

3.1

0.0

0.0

0.0

1.5

0.0

0.3

0.0

1.7

145-150

129-130

Bifidobacterium

1.8

0.2

0.6

1.6

4.1

3.0

161-164

3.3

6.0

4.5

8.2

0.5

1.5

183-186

2.9

3.5

4.6

3.6

5.4

2.9
20.9

188-190

6.2

7.7

14.4

19.0

42.0

194-201

0.6

1.9

0.0

0.0

0.0

0.0

6.0

4.5

2.9

2.4

203-208

C. coccoides group

3.0

1.9

214-222

C. coccoides group

16.9

6.0

9.5

6.7

3.2

7.8

0.6

3.7

1.0

1.2

0.0

0.0

250-253273-279

C. leptum subgroup

7.9

12.3

3.9

4.0

2.6

4.3

282-287

C. leptum subgroup

1.1

2.2

4.0

0.7

1.2

0.6

289-294

C. leptum subgroup

14.1

14.1

14.5

8.1

3.3

9.2

300-303

0.0

0.0

0.8

0.0

0.0

0.0

305-309

1.4

1.3

0.0

0.6

0.0

0.0

446-449

1.7

2.2

5.4

7.5

11.7

5.7

458-462

0.5

0.0

0.0

0.0

0.0

2.3

476

6.0

4.5

0.4

0.0

0.0

0.0

6.4

4.3

0.0

0.0

0.0

0.0

498-500

482-487

Enterobacteriaceae

0.4

0.0

0.0

0.7

0.3

0.0

510-514

0.6

0.3

0.5

2.5

1.5

0.0

525-528

0.7

0.2

0.9

1.0

0.0

0.0

532-535

1.5

1.1

1.2

0.6

0.7

1.0

537-540

0.6

0.3

0.0

0.0

0.0

0.0

547-550

Streptococcus

0.2

0.3

0.0

0.00.00.0556-557

Enterococcus

0.50.00.50.0

0.00.0

These data showed peak area (%)

Fig. 3 P eak areas of presumed organisms afterdigestion with Hha I

Fig. 4

なストレスとなることが知られている。Ishizakiの免疫機能に及ぼす影響について調査した。そら［3］は、ホルスタイン種子牛を用いて、4の結果、輸送前と比べ輸送直後および 3 日後の時間（100 km）のトラック輸送が呼吸器局所肺胞マクロファージの化学発光能は減少し、気－ 14 － eak areas of presumed organisms afterP
digestion with Msp I

The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.1 No.1 2012

Efficacy of Probiotics for Beef Cattle after Transportation

Fig. 5 P rincipal components analysis based on T-RFLP profiles from Hha I and Msp I digestion. Z1 and Z2 indicatedthe percentage variation converted by each group I ( ◇ ) and group II ( ◆ ).
Table 5

Change in body weight of cattle before and after administration
Before transportation 1)

After 60 days

Increased volume

Treated (n＝6)

274.5±2.9351.5±15.8

77.0±17.0

Control (n＝6)

255.3±7.9316.8±11.9

61.5±9.9

Data are presented as mean±SD, No difference (treated group vs control group)1) At Livestock market in Okinawa Prefecture.

管支肺胞洗浄液中リンパ球の CD4＋/CD8＋細胞かった。ただ、Odamaki ら［7］の報告によると、比は増加していたという。また、松田ら［4］ヒトの花粉症では糞便中に Bacteroides fragilis

が寒冷期のトラック輸送において着衣によってがシーズン終盤に増加するが、Bifidobacterium保温した群の免疫能は保温しなかった群に比べlongum BB536 を含むヨーグルトを摂取するこ低下の程度が少なかったと報告しているようとで有意に抑制されていた。この Bacteroidesに、各種ストレスは生体の免疫能低下に深く関fragilis group は、Bifidobacterium spp. と比べわっている。今回の末梢血白血球サブポピュ

ヒト末梢血中のインターロイキン（IL）-6 やレーション解析結果では、導入前後での比較はTh2 型サイトカインを増やし、IL-12 など Th2＋＋できなかったものの、CD3 CD45R－や CD8 、－＋型サイトカインを減らすという［6］。以上のこWC1 N3 などが導入時と比較し 30 日後およとは、プロバイオティクスは腸内細菌叢を整えび 60 日後に増加しており、輸送により導入時ることにより結果的に免疫能コントロールの一には低下していた免疫能が徐々に回復したもの助となることを示唆している。したがって、今と考えられた。しかし、この傾向は生菌剤投与回用いた生菌剤が何らかの形で免疫能に影響し群のみならず非投与群でも同等にみられたことた可能性も否定できない。一方、糞便の細菌叢から、投与した生菌剤が免疫能をより高める、について、T-RFLP 解析により得られた T-RFあるいは低下を防ぐという効果は確認できなの主成分分析の結果から、生菌剤を投与するこ－ 15 －

家畜感染症学会誌
1 巻 1 号 2012

輸送後の肥育牛に対する生菌剤投与効果とにより腸内菌叢が変動し、均一な菌叢にまと学部大動物内科学教室大塚浩通先生に深謝いたまっていくことが確認された。この傾向は、導します。

入後 30 日目（薬剤投与最終日）のみならず、60 日目（投与 30 日後）にも認められた。この変動に関与した主な菌種は Clostridium coccoides 属と Bacteroides 属であることが判明した。
辨野［1］は、育成牛の腸内細菌叢を 16SrRNA遺伝子のクローンライブラリー法で解析し、Clostridium leptum subgroup が最優勢であり、C. coccoides group、C. botulinum group および Bacteroidaceae が優勢グループであると報告している。したがって、今回の成績は生菌剤が腸管内環境正常化の一因となったことを示唆している。30 日目および 60 日目で関与した菌種は完全には一致していなかったが、均一な菌叢にまとまることは腸内環境の安定化に寄与するものと期待される。また、成績には示さなかったが、異なる菌種を含む他の生菌剤を同様に30 日間経口投与した群の 60 日目の成績では、菌叢の均一化は認められなかった。このことから、今回の成績は投与した生菌剤が第一胃機能改善効果を有していることが影響したものと推察された。すなわち、生菌剤に含まれる有益菌が、輸送ストレスに加え一週間余り不十分な飼料と水で飼養され低下した第一胃機能を改善したことによって、腸内菌叢均一化が促されたものと考えられた。
第一胃および腸内環境の安定化が食欲を増進させ、増体量を増やす効果も期待されたが、投与群の増体量は対照群のそれと比較し有意に高いものではなかった。また、導入後の臨床所見および疾病発生状況にも全く差がなかった。以上の成績より、今回の調査では使用した生菌剤が導入肥育素牛に対して臨床的に有効な飼養管理プログラムのひとつであると結論付けることはできなかった。この要因のひとつとして、生菌剤投与期間が導入後 30 日間と限定的だったことが考えられたため、今後長期継続投与した場合の効果を調べる予定である。また、輸送前からの投与が輸送ストレスを軽減することも考えられることから、これについても計画したい。
［謝辞］

稿を終えるに当たり、白血球サブポピュレーション解析にご協力をいただいた北里大学獣医－ 16 －［引用文献］
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The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.1 No.1 2012

Efficacy of Probiotics for Beef Cattle after Transportation

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Efficacy of Probiotics for Japanese Black Beef Cattle after Transportation
Toshihide Kato1), Toshihiro Nozaki1), Hiroshi Endo1), Yoshimi Ogata1),
Chika Seki2) and Mamoru Tanaka2)
1) Yamagata Prefectural Federation of Agricalturak Mutual Aid Associations2) Miyarisan Parmaceutical CO., LTD.
Correspondence to: Toshihide KATO
Yamagata P.F.A.M.A.A (286-1 Kitakawara, Nanaura, Yamagata, 990-2171, Japan)
Tel: (023) 684-5531 Fax: (023) 684-5538 e-mail: tosihide_katou@yynosai.or.jp[Summary]
We investigated whether attenuated probiotics improved the immunity and intestinal flora aftertransportation. Twenty Japanese black beef cattle were evaluated after reaching Yamagata prefecture from Okinawa prefecture (day0). Ten of them were fed 10g of attenuated probiotics (Bovactin®)from day0 to day30, while the other half received no treatment and were defined as control group.
Blood and feces were taken from all cattle on day0, day30 and day60. Biochemical examination andleukocyte subpopulation analysis were conducted using blood samples. Intestinal flora and basis of
T-RF were analyzed by T-RFLP method using feces. Furthermore, six cattle were selected randomly
from each group. They were weighed before transportation and on day60 to evaluate somatic growth.
Clinical findings were also recorded from day0 to day60. There were no significant differences on biochemical examination, leukocyte subpopulation, somatic growth and clinical findings between groups.
On day30 and day60, there was a tendency of intestinal flora to being equalized in treated cattle
through basis of T-RF. Clostridium coccoides and Bacteroides, the majority of intestinal flora, affected
predominantly. Therefore, it is indicated that the attenuated probiotics improved intestinal environment, especially the capability of rumen.
Keywords: beef cattle, intestinal flora, probiotics, transportation, T-RFLP method,－ 17 －