The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.4 No.4 2015

STUDY OF THE CAUSE OF CALF DIARRHEA

総 説

管内の下痢を呈した子牛における腸内細菌叢の判定とクリプトスポリジウム感染状況調査
島田亘 1）、羽石敬史 1）、齋藤雄太 1）、水野ミキ 2）1）千葉県農業共済組合連合会中央家畜診療所（〒 299-0126

千葉県市原市天羽田 736）

2）千葉県農業共済組合連合会南部家畜診療所（〒 294-0005

千葉県館山市安東 86）

連絡担当者：島田亘

Tel:0436-66-8111 Fax:0436-66-8110
E-mail:s-chuo@nosai-chiba.or.jp［要約］

子牛の下痢の原因は，細菌，ウイルス，原虫の感染によるものや食餌性の消化不良によるものなどが考えられるが，日常の診療では原因を特定しないまま抗生物質の投与を続ける治療を長期化させている例も見られる。そこで，今回我々は 2014 年 4 月から 2015 年 3 月の 1 年間，往診依頼があった 60 日齢以下の子牛 473 頭について腸内細菌叢と寄生虫の感染状況を調査した。腸内細菌叢の判定は，糞便を直接塗抹した後，グラム染色により行い，寄生虫の検出はウィスコンシン変法により行った。その結果，腸内細菌叢は正常細菌叢が 72.5％（473 頭中 343 頭），グラム陰性菌主体が 16.7％（473 頭中 79 頭），グラム陽性菌主体が 10.8％（473 頭中 51 頭）であった。また，寄生虫の感染は，クリプトスポリジウム（以下 Cr）が 49.5％（473 頭中 234 頭），コクシジウムが 2.5％（473 頭中 12 頭）であった。下痢の主な原因であると考えていたグラム陰性菌による下痢は比較的少ないと思われ，Cr が子牛下痢の原因の約半数から検出されたことから，初診時や下痢が長引いている場合には，糞便の腸内細菌叢の判定や寄生虫検査を行うことにより，抗生物質の乱用を防ぎ，今後の治療方針の決定や的確な治療に結びつくと思われた。
キーワード：ウィスコンシン変法、クリプトスポリジウム、子牛下痢症、腸内細菌叢、糞便直接塗抹検

査法

473 頭（ホルスタイン種，交雑種および黒毛和［材料および方法］種）。

1. 調査期間
3. 調査方法2014 年 4 月から 2015 年 3 月。

腸内細菌叢の調査は，園部らの方法［12］を
2. 調査対象参考に行った。初診時に直腸検査用手袋を装着

管内の下痢を呈した 1 ～ 60 日齢以下の子牛し調査対象牛の直腸内から直接採取した。糞便は 10g を定量し重量比で約 1：1 になるように水道水で希釈・混和した後，スライドグラスに受理：2015 年 11 月 2 日－ 153 －

家畜感染症学会誌
４巻 4 号 2015

子牛下痢症の原因についての検討

一白金耳塗抹，火炎固定し，グラム染色を実施

4. 調査項目した。グラム染色は，市販の染色キット（フェ1）下痢発症子牛の糞便の腸内細菌叢および Cr

イバー G セット，日水製薬株式会社）を用い検出状況を調査した。

た。判定は染色後，光学顕微鏡によって，油浸

2）下痢発症子牛における生後日齢別，月別のレンズを用い 1,000 倍下で鏡検した。腸内細菌

Cr 検出頭数を調査した。

叢の判定はおおまかに 1 視野中の菌数をカウン3）使用 B 点数・薬価点数・診療回数・補液回トし，様々な種類の細菌が観察されたものを正数をカルテより調査した。

常細菌叢とし，同一染色性・同一形態を示す菌

4）Cr 陽性・陰性別の死亡率を調査した。

が 1 視野中に多く見られた場合を異常とした。

5）Cr が検出された農家を「検出あり農家」，寄生虫はウィスコンシン変法にて検出した。光

下痢を呈したが検出されなかった農家ある

学顕微鏡 400 倍にて 10 視野以上を検査し，Crいは下痢の診療依頼がなく検査しなかった

オーシストが 1 つ以上検出されたものを Cr 陽

農家を「検出なし農家」として下痢発症率性と判定した。糞便を図 1 に示したように性状（下痢発症率＝検査頭数 / 出生頭数）を比較

別で 4 段階（スコア 1：正常便，スコア 2：軟便，した。

スコア 3：泥状便，スコア 4：水様便）にスコアリングした。

図1

スコア１：正常便

スコア２：軟便

ア泥状便
スコア３：泥状便

ア水様便
スコア４：水様便

糞便スコア

図1．糞便スコア－ 154 －The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
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STUDY OF THE CAUSE OF CALF DIARRHEA

表1．子牛下痢症における細菌検査およびCr検出状況
表
子牛下痢症における細菌検査および Cr 検出状況
検出状況
表
1．子牛下痢症における細菌検査および

［結果］

n=473
n473

Cr検出ありCr検出なしび Cr 検出状況を表 1 に示した。腸内細菌叢を頭数(頭)234(49.5%)239(50.5%)

判定した結果，正常細菌叢が 72.5％（343/473），

平均発症日齢(日)**10.3±4.3**
21.1±13.5

グラム陰性菌主体が 16.7％（79/473），グラム

正常細菌叢(頭)164179

寄生虫は Cr が 49.5％（234/473）と約半数感

グラム陰性菌(頭)4336

染していた。コクシジウムは 2.5％（12/473）

グラム陽性菌(頭)2724

下痢発症子牛における腸内細菌叢の判定およ

陽性菌主体が 10.8％（51/473）であった。また，であった。また，Cr 陽性群の平均下痢発症日**p < 0.01

齢は 10.3 ± 4.3 日であり，陰性群の 21.1 ± 13.5
日に比べ有意に低かった。

160

頭ｎ=473

120

陽性

検査
80
頭数

陰性Cr検出されず

40

01-56-1011-15 16-20 21-25 26-30 31-35 36-40 41-60日

生後日齢

図2

下痢発症子牛における生後日齢別の Cr 検査頭数

図2 下痢発症子牛における生後日齢別のCr検査頭数
図2．下痢発症子牛における生後日齢別のCr検査頭数
頭50

陰性陽性(n=360)

40

検査頭数

30
20100
4月 5月 6月 7月 8月 9月 10月 11月 12月 1月 2月 3月
2014年

図3

2015年

下痢発症子牛における月別のCr 検査頭数（20 日齢以下）
図3．下痢発症子牛における月別のCr検査頭数（20日齢以下）－ 155 －

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子牛下痢症の原因についての検討

下痢発症子牛における生後日齢別の Cr 検出

診療病日における糞便スコア 3 以上の割合の頭数を図 2 に示した。Cr が検出された頭数は推移を図 4 に示した。Cr 陽性群・陰性群とも

6 ～ 10 日齢で最も多く，その後は減少していに第 1 病日では糞便スコアが 3 以上の割合は

き 41 日齢以降では検出されなかった。また，80％以上であり第 13 病日には 0％となったが，Cr 陽性子牛の 97.0％（227 ／ 234）が 20 日齢陽性群は陰性群に比べて便性状の改善に時間が以下であったため，以降の検証については 20かかる傾向にあった。

日齢以下を対象とした。尚，20 日齢以下の下Cr 陽性・陰性別に使用 B 点数・薬価点数・

痢 発 症 子 牛 の う ち，Cr 陽 性 率 は 63.1 ％（227診療回数・補液回数を比較すると，補液回数以／ 360）であった。

外の 3 項目で Cr 陽性が陰性に比べて，いずれ下痢発症子牛における月別の Cr 検出頭数をも有意に高かった（図 5）。腸内細菌叢の判定

図 3 に示した。Cr 陽性率は 4 月が高く 8 月が結果と合わせると，Cr 陽性でグラム陽性菌が低い傾向にあったが，年間を通じて Cr の検出主体だった下痢で補液回数がやや多かったものが認められた。の，他の項目では差が見られなかった（図 6）。

90%80
糞便 70
ス
コ 60
ア 50３
以 40
上 30の割 20
合 10

陽性 n=227
陰性 n=13301

図42345678
診療病日

9101113日

診療病日における糞便スコア
3 以上の割合の推移（20日齢以下）
図4．診療病日における糞便スコア3以上の割合の推移
図．診療病日における糞便
ア 以上
割合 推移

（20日齢以下）*点

陽性 ｎ=227
陰性 ｎｎ=133
133

点

*300

使
用 2000
B
点数 1000

薬価 200
点数 10000
陽性

陽性

陰性

陰性

回回
202.0

*

診
療
回 10数

補液
回 1.0数00.0
陽性

図512

陰性

陽性

陰性

* p<0.05

図図5.
Cr陽性・陰性別の使用B点数・薬価点数・診療回数・補液
陽性B 点数・薬価点数・診療回数・補液回数の比較（20陰性
使用 点数 薬価点数 診療 数日齢以下）
補液Cr 要請・陰性別の使用回数の比較(20日齢以下）－ 156 －

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STUDY OF THE CAUSE OF CALF DIARRHEA

点点 3000

薬価点数

2000

主体

主体

点

診療回数）

Ｃｒ陽性

Ｃｒ陰性

点

1210

補液回数

864
20GGG－＋

－

主体

主体

主体

主体

Ｃｒ陽性

Ｃｒ陰性

2.5
21.5
10.50正常－＋－）－）＋）

－主体

主体

主体

主体

主体

主体

主体

主体

GG（）

Ｃｒ陽性Ｃｒ陰性）正常（（（Ｃｒ陽性G（（G＋＋G

（（GG）

G）

正常）

正常正常G＋）

主体

正常（主体0））－50（＋100）－150（＋200）

G250（（正常（G（G）

G）

正常（使 1500
用 1000
B 500
点 0数

350
300

2500

Ｃｒ陰性（n=360)（n360)

図6

図6．Cr・細菌検査結果別の使用B点数・診療点数・回数・補液
細菌検査結果別の使用
B 点数・診療点数・回数・補液回数（20 日齢以下）
回数（20日齢以下）

Cr 陽性・陰性別の死亡率を表 2 に示した。

表33 Cr検出あり・なし農家別の下痢発症率
表3．Cr検出あり・なし農家別の下痢発症率表
Cr 検出あり・なし農家別の下痢発症率

陽性群で 2.6％，陰性群は 2.3％であり有意差は検出あり農家みられなかった。
管内の農家 86 戸の Cr 感染状況と Cr 検出の有無による下痢発症率を表 3 に示した。「検出あり農家」は 42 戸，「検出なし農家」は 44 戸（Cr農家戸数(戸)42

下痢発症率(%)

28.5(336 / 1180)

検出なし農家

検出なし

下痢の診療依頼なし

1331が検出されなかった農家 13 戸＋下痢の診療依
頼がなかった農家 31 戸）であり，下痢発症率は「検出あり農家」で優位に高かった。
表2（下痢発症率＝検査頭数 / 出生頭数）

Cr 陽性・陰性別の死亡頭数と死亡率

表2．Cr陽性・陰性別の死亡頭数と死亡率（20日齢以下）（20 日齢以下）
Cr陽性
n=2273.8(24 / 634)

［考察］
下痢の原因について以前ちば NOSAI でアンCr陰性
n=133

ケートを実施したところ，グラム陰性菌によるものと考えて治療を開始していると回答した人死亡頭数(頭)6が多かった。また，下痢の原因を Cr の感染と3考えている回答はなかった。
死亡率(%)

2.6

しかし，腸内細菌叢の判定をすると，正常細2.3

菌叢が 72.5％と最も多く，グラム陰性菌が主体と思われた下痢は 10.8％であった。食物は，摂取されて消化管を通過していく間に消化吸収されていく。消化管各部位で環境条件が違いそれぞれ最も適した菌種が増殖しては移送されており，連続培養管となっている［6］。哺乳している子牛の腸内細菌叢は，多少の個体差はあるもののさまざまな細菌が混在しているのが正常細菌叢であり，そのバランスが崩れると偏った細－ 157 －家畜感染症学会誌
４巻 4 号 2015

子牛下痢症の原因についての検討

菌叢になっていた。その原因として哺乳していいないため，死亡率については混合感染も含めるミルクの汚染や環境中にある汚染されたものたさらなる検討が必要であると思われた。

を食べてしまうことが考えられたが，下痢の主牛に寄生する Cr には小腸寄生性（小型）のな原因として考えていた細菌感染による割合はC.parvum, C.bovis, C.rynae と第四胃寄生性（大低いと思われた。

型）の C.andersoni の 4 種が知られており，小国内における Cr の感染状況についてはいく

腸寄生性の Cr を顕微鏡観察下での形態的差異つか報告があり，北海道石狩地方の 120 日齢まによって区別するのは困難である。今回検出さでの子牛の調査では 23％（25 ／ 107）［7］，宮れた Cr は形態学的な分類は行っていないが，城県では 2 ～ 90 日齢の下痢症を呈した子牛の高病原性である C.parvum は 1 ヶ月齢以下の子5.6％（5 ／ 90）［10］1，千葉県東部地域では 1 ヶ牛にのみ認められるという報告［11］と、症状月齢以下の子牛の 11.9％（5 ／ 42）［2］，およや発症日齢から小腸寄生性の C.parvum である

び大規模な全国一斉調査では 1 ヶ月齢未満の子可能性が高いと考えられる。

牛で 2.65％［8］の検出率であったと報告してCr に感染した子牛は糞便中に多量のオーシいる。今回の千葉県内の当家畜診療所管内でのストを排出し，排出されたオーシストは自然環

調査では 49.5％と他の報告よりも高い検出率で境中，特に水中や湿潤環境中では数ヶ月以上死あり，管内農家でも約半数の農家に Cr が浸潤滅しないと言われている［9］。また，一般的にしていることが確認された。これらの報告と今市販されている消毒剤の通常使用の濃度では回の調査結果から，Cr は全国的に浸潤していほとんど抵抗性を示すため［1］，Cr オーシスる可能性が示唆される。

トに汚染された農場を清浄化するのは困難でまた子牛における Cr の発症は 1 ヶ月齢以下ある。さらに有効な治療方法がないことから，が多く，1 週齢から 2 週齢がピークとされていCr 陽性の子牛は陰性の子牛よりも便性状の改る［11］。Cr 検出頭数のピークは 6 ～ 10 日齢

善に時間を要し，その結果診療が長引き薬剤のでありそのほとんど（97.0％）が 20 日齢以下，使用量もより多くなる傾向があると示唆され平均発症日齢も 10 日前後であった。稀に 100た。

日齢や 8 ヶ月齢の個体でも Cr が検出されたとCr は出生後間もない時期から感染しているいう報告［3］もあるが，今回の調査で Cr はことが予想され，分娩直後から出生子牛の衛生41 日齢以降では検出されなかった。Cr のプレ管理には十分注意する必要があると考えられパテントピリオドを考えると，Cr の感染のほる。Cr は一旦農場に侵入すると下痢が頻発しとんどは出生後間もない時期（生後 0 ～ 1 日）感染拡大が懸念される上に，子牛の発育遅延やから 1 ヶ月齢以内であると考えられる。

治療の長期化など農家の経済的損失は大きいもCr の感染に季節性はなく年間を通じて検出のと考えられる。Cr が検出された農場から Crされたものの，Cr は単独感染以外に細菌やウを完全に排除するのは困難であり，いかに農場イルスと混合感染することが知られており，混への Cr の侵入を阻止できるかが重要である。

合感染した場合には重篤化しやすく死亡するこ下痢症を呈した子牛の診療の際に細菌性によともあるといわれている。今回の調査では，細るものなのか，また農場での Cr 検出により適菌感染によって重症化した例はなかったと考え切な治療や飼養管理を行うためにも糞便検査はられた。重症化を防ぐには，細菌感染の原因と非常に重要であると感じた。今後はウイルスのして哺乳させているものからなのか，環境性の混合感染についての調査を行うとともに，Crものなのかを見極めて，感染経路を絶ってやるの清浄化対策および予防についても検討すべきことが重要だと考えられた。

であると考える。

Cr 感 染 症 の 死 亡 率 は， 板 倉 ら の 報 告 で は32.1％（9 ／ 38）［3］，佐藤らは 7.8％（7 ／ 90）［10］と報告しているが，今回の死亡率は 2.6％と低く，Cr 検出の有無による死亡率には差が見られなかった。また，ウイルスの調査は実施して－ 158 －The Journal of Farm Animal in Infectious Disease
Vol.4 No.4 2015

STUDY OF THE CAUSE OF CALF DIARRHEA［引用文献］［1］ Fayer, R. 1997. The general biology ofCryptosporidium. In Cryptosporidium andCryptosporidiosis, Fayer R. Ed., CRC Press,
Boca Raton, p1.
［2］ 古屋聡子、村上覚史、斉藤基雄ら . 1997. 子牛のクリプトスポリジウム症の発生と千葉県東部地域における乳牛の本原虫浸潤調査，Journalof Animal Protozooses 11:13-16.
［3］ 板倉智敏、藤原三男、大内紀章ら . 1985. 子牛のクリプトスポリジウム感染症，日獣会誌 . 38（12）: 796-801.
［4］ 家畜共済における臨床病理検査要領 . 1997. 全
国農業共済協会，東京，528-537.
［5］ 前出吉光、小岩政照 . 2002. 新版 主要症状を基礎にした牛の臨床 . デーリィマン社，北海道，
282-288.
［6］ 光岡知足 . 1980. 腸内菌の世界，叢文社，15-24.
［7］ Murakoshi, F., Tozawa, Y., Inomata, A.
et al.2013. Molecular characterization of
Cryptosporidium isolates from calves in
Ishikari District, Hokkaido, Japan. J. Vet. Med.
75（7）:837-840.
［8］ 農林水産省畜産局衛生課 . 1997. 家畜衛生週報，
2480: 5-6.
［9］ Robertson, L. J., Campbell, A. T., Smith, H.
V. et al. 1992. Survival of Cryptosporidium
parvum oocysts under various environmentalpressures. Appl. Environ. Microbiol. 58（11）:3494-3500.
［10］佐藤 繁、南館君夫、高橋清治ら . 1987. 宮城県内の下痢症子牛におけるクリプトスポリジウム
感染 . 家畜診療，285:17-20.
［11］ 志村亀夫 . 2001. クリプトスポリジウム症 . 研
究ジャーナル，24（8）:41-45.
［12］園部隆久 . 2007. 家畜診療 .54（9）:553-557.

－ 159 －家畜感染症学会誌
４巻 4 号 2015

子牛下痢症の原因についての検討

The infection status of intestinal flora and cryptosporidium among calves
with diarrhea within the jurisdictionToru Shimada1）, Takashi Haneishi1）, Yuta Saito1） and Miki Mizuno2）
1）Chiba Prefectural Agricultural Mutual Aid Association Federation Central Veterinary Clinical Center
2）Chiba Prefectural Agricultural Mutual Aid Association Federation Southern Veterinary Clinical Center
Contact person: Shimada Toru
Chiba Prefectural Agricultural Mutual Aid Association Federation Central Veterinary Clinical Center
Amouda 736, Ichihara, Chiba 299-0126,Japan
Phone: 0436-66-8111 Fax: 0436-66-8110
E-mail: s-chuo@nosai-chiba.or.jp［Abstract］
There are a variety of causes of neonatal calf diarrhea, such as dietary indigestion and theinfection of bacteria, viruses, and protozoa. Yet, antibiotics are often administered for a prolonged
period of time without specifying its causes in a daily clinical practice. Therefore, we investigated
the infection status of intestinal flora and parasites among 473 calves from birth to 60 days of age
from April 2014 through March 2015. A smear of stool was examined using Gram’s staining methodfor detecting intestinal flora. The detection of parasites was done by the modified Wisconsin method.
On the intestinal flora normal bacteria flora, gram-negative bacteria, and gram-positive bacteria
were found out in 343（72.5%）, 79（16.7%）, and 51（10.8%）among 473 calves, respectively. On theinfection of parasites cryptosporidium（Cr）and coccidium were found out in 234（49.5%）and 12（2.5%）among473 calves, respectively. The results showed that diarrhea by gram-negative bacteria
was not so common although it has been considered that it was one of the main cause of neonatal
calf diarrhea. The finding that Cr was detected in about a half of cases suggests that the detectionof intestinal flora and parasites in stool samples contributes to decide on courses of treatment andprevent the abuse of antibiotics at the first medical examination or when diarrhea is persistent.
Key words: calf diarrhea, cryptosporidium, direct smear fecal examination, intestinal flora, modified
Wisconsin method－ 160 －