福岡県保健環境研究所年報第36号，105－106，2009

資料
鶏肉・鶏卵におけるStx2f型志賀毒素産生性大腸菌の汚染状況調査
江藤良樹・村上光一・堀川和美
我々は、平成20年度に経験した Stx2f型志賀毒素産生性大腸菌による感染事例から、鶏が感染源の一つになっているのではないかと推測した。そこで、この仮説を検証するために、市販されている鶏肉及び鶏卵からの分離を試みることとした。市販の加熱調理用鶏肉44検体、生食用鶏肉12検体、未殺菌液卵（全卵）2検体の計58検体を対象とし検査を実施した。しかし、全ての検体で stx2f の遺伝子は検出されなかった。
［キーワード：腸管出血性大腸菌、志賀毒素、stx2f、鶏肉、鶏卵］
１

かったことから、病因物質の特定には至らなかった。

はじめに
Stx2f 型志賀毒素産生性大腸菌は下痢症患者からのこれらのことから、我々は食用の鶏肉が Stx2f 型志賀分離は非常に稀であり、本邦では現在までの報告で毒素産生性大腸菌の感染源となっているのではない

は主に小児の下痢症患者より分離されているが、こかと推測した。従来、多くの検査施設において、鶏。分離報告が稀な肉及び鶏卵を対象に stx2f の検査を全く行なってこな理由の一つとして、市販の志賀毒素検出キットとのかった。そこで、検証を行うために、生食用鶏肉、低反応性 や、その他の stx2 と遺伝子配列が大きく異

加熱調理用鶏肉、鶏卵（液卵）を対象に Stx2f 型志賀なることから PCR において一般的な stx2 プライマー

毒素産生性大腸菌の検出を試みることとした。

れらの感染源は全て不明である

1,2)

3)

では増幅が非効率的であることが考えられる。そのため、通常の細菌検査において見逃されている可能２性が考えられる。

２・１

方法
検体

諸外国の環境調査では、野鳥、特に鳩の糞便から

平成 20 年 12 月 18 日から平成 21 年 1 月 20 日にかけ多くの Stx2f 型志賀毒素産生性大腸菌の分離例が報告て購入した市販の加熱調理用鶏肉 44 検体、生食用鶏肉、また、Sonntag らは、鳩がヒトへの感12 検体、未殺菌液卵（全卵）2 検体の計 58 検体を対象されており4-7)染源である可能性があると報告している が、鳩からとし、検査を実施した。

ヒトへの感染が直接証明された事例は報告されてい２・２ 検査方法8)

ない。一方、本邦においては、東京湾の野鳥の調査

鶏肉は、検体 25 g に Buffered peptone water (BPW) を9)

225 ml 加えストマッキングし、37 ℃又は 42 ℃で一晩において鳩、ツバメ等からの分離が報告されていることから、野鳥が Stx2f 型志賀毒素産生性大腸菌のレ培養した。また、液卵の検査は、検体 500 ml に BPWゼルボアの一つになっている可能性が考えられる。

を 5000 ml 加えて攪拌し、42 ℃で一晩培養した。

このような状況のなか、我々は平成 20 年 10 月に培養液 100 μl を遠心し上清を捨て、TE を 100 μl 加え本県の食中毒疑い事例において、成人の下痢症患者て 100 ℃で 5 分間加熱し、遠心した上清 1 μl を PCR のよ り Stx2 f鋳型とした。PCR による stx2f の検出には、Nakao らの型の志賀毒素を産生する大腸菌（O115:HNM） を分離した。疫学調査により、患者

プライマー （G3-F：TTTACTGTGGATTTCTCTTCGC、は発症の約 13 時間前に鶏ささみユッケ、生の鶏卵、G3-R： TCAGTAAGATCCTGAGGCTTG） を 使 用 し 、

10)

11)

生野菜等を喫食していたことや、同じ料理を喫食しGoTaq Green Master Mix（プロメガ）の 25μl 系で反応た友人（当研究所には検体が搬入されなかった）もを行った。PCR の増幅条件は 94 ℃ 30 秒、61 ℃ 30 秒、72下痢症状を示していたから、これらの食品が下痢症℃ 60 秒を 35 サイクル行い、最後に 72 ℃で 10 分間伸の原因と疑われた。しかし、食品残品が確保できな
福岡県保健環境研究所（〒 818-0135 太宰府市大字向佐野 39）―105―

長反応を行なった。反応終了後、2%アガロースゲルで行われるが、この方法では鶏肉を含む食肉は培養法の電気泳動を行い、増幅産物（773bp）の確認を行なった。

みで検査が実施され、鶏肉の遺伝子検査が行われる機会は少ないことから、現在まで見逃してきた可能性が３考えられる。これらのことから、今後、多くの検査機検査結果

加熱調理用鶏肉 44 検体、生食用鶏肉 12 検体及び未関で stx2f のプライマーを使用し、分離の機会を増やす

殺菌液卵（全卵）2 検体の計 58 検体を対象に検査を実ことが重要である。これにより、より多くの Stx2f 型施したが、いずれの検体の培養液からも stx2f 遺伝子は志賀毒素産生性大腸菌が分離され、解明されていない検出されなかった。

感染ルートの解明に役立つであろう。

４

文献考察
今回の調査では、鶏肉 56 検体と鶏卵 2 検体の BPW増菌液を対象に stx2f 遺伝子の検出を試みたが、全て陰

1) 磯部順子ら：感染症誌, 78, 1000-1005, 2004.
2) 山口仁孝ら：長崎公衛生公害研究所報, 47, 21-28,性であった。しかし、stx2f を保有する大腸菌が下痢症

2001.

患者より分離されることは非常に稀であることを考え

3) 甲斐明美ら：感染症誌，71，248-253，1997.

ると、仮に鶏がヒトへの主な Stx2f 型志賀毒素産生性

4) H. Schmidt et al.： Appl. Environ. Microbiol.， 66，

大腸菌の感染源であったと仮定しても、その保菌率は非常に低いと考えられる。そのため、今回調査を行っ1205-1208， 2000.
5) K. Großmann et al.： Berl. Münch. Tierärztl.

た検体数では、鶏における保菌の有無を検証するには

Wochenschr.， 118，456-463，2005.

不十分である。また、今回用いた培養方法や遺伝子検

6) S. Morabito et al. : Vet. Microbiol.， 82，275-283，2001.

査法についても、当該菌を検出するのに最適な方法で

7) S. Farooq et al. : Lett. Appl. Microbiol.， 48，692-697，

あるか、十分に検証されていないことから、今後、これらの問題点を踏まえ、改めて再検討を行いたい。

2009.
8) A. Sonntag et al.： Berl. Münch. Tierärztl.

一方、全国の検査体制を考えると、stx2f は、その他の stx2 とは塩基配列が大きく異なることから、stx2 をWochenschr.， 118，464-470，2005.
9) H. Kobayashi et al.： Appl. Environ. Microbiol.， 75,

対象とした一般的なプライマーでは増幅効率が低く、292-295，2009.

検出が困難であると考えられこと、さらに、通常、食10) Y. Etoh et al. : Jpn. J. Infect. Dis.，62，315-317，2009.

品を対象とした腸管出血性大腸菌の検査では、平成 1811) H. Nakao et al. : FEMS Immunol. Med. Microbiol.，13，

年 11 月 2 日食安監発第 1102004 号「腸管出血性大腸菌 O157 及び O26 の検査法について」に準じて検査が―106―

34，289-97，2002.