殺生物性製品を備えた試験片の殺ウイルス活性の試験

改変ワクシニアウイルスアンカラ（MVA）に対する RKI ガイドライン（1995）に従った
実践近キャリア試験システムを使用した殺ウイルス活性化合物を備えた試験面の検査-スクリーニング試験 S1l 日付 26.05.2021

短縮報告書：スクリーニングテスト S1l

Principal：dyphox®HygieneSolutions(主体主)TriOptoTec GmbHAm Biopark 13
D-93053 Regensburg/Germany

製品：•検体品：ロック 3

食品用ニス VGFL 510;

3 種の製品;検体提供者：
Varcotec GmbH、CuriestralSe 2、D-70563 シュトゥットガルト/ドイツ•試験面：PVC フォイルから 1.6 cm x 6 cm の寸法分(ニス塗工したもの、または塗工されていないもの)を切り取ります•検体セット＃1：PVC フォイル、ニス塗工をしたフォイル/ロット番号：1296 検体セット、VFFGL 40-20、(i)光増感剤なしニス(-PS）および、(ii）PS(増感剤)入りのニス(+PS）•検体セット＃2：PVC フォイル、ニス塗工したフォイル/ロット番号：1318 検体セット、VGFL 510-40、(i)光増感剤なしニス(-PS）および、（ii）PS(増感剤)入りのニス(+PS）•検体セット＃3：PVC フォイル、ニス塗工したフォイル/ロット番号：：1371 検体セット、VJTICGGL 43-20、(i)光増感剤なしニス(-PS）および、（ii）PS(増感剤)入りのニス(+PS）
テストパラメータ：•ウイルス材料：ウイルス懸濁液[2％FCS]（または非ウイルス制御の場合は細胞培養培地[2％FCS]。それぞれ 4 倍希釈(PBSで希釈)で試験を実施）•ウイルス懸濁液/培地を 5 x 10 pL の部分で試験片に置き、曝露を開始する前にランニング作業台の下で乾燥させました(乾燥時間 t = 35 分)。
•露光条件：a）、Dyphox 社によって提供された照明装置/光源の下、2.4mWatt / cm2 に調整。または b）暗闇の中で、各定時点; t = 240 分(4 時間)を採用
テストシステム：•改変ワクシニアウイルスアンカラ（MVA）（原産地：IDT Biologika GmbH、デッサウロスラウ、ドイツ）•DF-1 セル
（原産地：IDT Biologika GmbH、デッサウロスラウ、ドイツ）
スクリーニングテスト手順：•キャリアテスト実験は、RKI ガイドライン(1995)に従って実施されました。
表 1：概要-テストサンプル
指定

意味

説明/製品

地点ごと測定回数

ウイルス汚染ウイルス制御（ライトなしの入力）

汚染に使用されるウイルス材料
光照射なしの基準点

一般管理- PS /- 光/ + ウィル
ス

2 滴定
2

不活性化

光照射での主検体+ PS /+ 光/+ウィルス

2

細胞毒性制御細胞毒性+ PS /+ 光/-ウィルス

1

Virucidal activity „printer varnish" vs. BoCV - Short report / Screening test S6 date 07.12.2020 - page 2

試験結果：
観察：•異常は見られず、予期せぬ事態は記録されていません。
ウイルス滴定：表 3.1：ウイルス汚染（希釈を制限することによるウイルス滴定）

Inp-laサンプル

фInp-lb50pL ウイルス汚染/ 5,15mL 培地中

力価/試験 vol.

6,0 ±0,6(Ig ID50)

5,7 ± 0,49

平均力価

5,85

6,85 ± 0,38/mL± K (95%)1

1 = DW / RKI-Leitlinie によるウイルス力価とその 95％信頼区間の計算
表 3.2：ウイルス制御/ PS(増感剤)なし塗工、またはコーティングなし（限界希釈によるウイルス滴定）

VK-la

VK-lb

ф

VK-2a

VK-2b

ф

VK-3a

VK-3b

ф

サンプル1296 (-PS)
力価/試験 vol.
(Ig ID50)

4,5

平均力価
± K (95%)1
減少 2(Ig ID5o ± K [95%])

4,51318 (-PS)
4,54,2

4,351371 (-PS)
4,28

3,15

3,63,38

5,50 ± 0,33/mL

5,28 ± 0,27/mL

4,38 ± 0,35/mL

1,35 ± 0,50 (vs. Aus)

1,57 ± 0,46 (vs. Aus)

2,47 ± 0,52 (vs. Aus)

1 = DW / RKI-Leitlinie によるウイルス力価とその 95％信頼区間の計算
2 =ウイルス減少：ウイルス入力(ウイルス制御)の lgID5o からサンプルの lgID50 を引いたもの(規定時点)
表 3.3：ウイルスの不活化/ + 製品 / + 光/ +ウイルス(限界希釈によるウイルス滴定）
サンプルIn-la(Ig IDso)
平均力価± K (95%) 1減少 2(Ig IDso ± K [95%])фln-2a1296 (+PS)

製品
力価/試験 vol.

ln-lb

1,81,95ln-2b

ф

ln-3a1318 (+PS)
1,88

0,450,75ln-3b

ф

1371 (+PS)
0,60,45<0,3<0,38

2,88 ± 0,22/mL

1,60 ± 0,27/mL< 1,38/mL

2,62 + 0,40 (ln-1 vs. VK-1)

3,68 + 0,38 (ln-2 vs. VK-2)

3,0 + 0,38 (ln-3 vs. VK-3)

1 = DW / RKI-Leitlinie によるウイルス力価とその 95％信頼区間の計算
2 =ウイルスの減少：ウイルス入力（ウイルス制御）の IgID50 からサンプルの IgID50 を引いたもの（規定時点）

Virucidal activity „printer varnish" vs. MVA - Short report / Screening test Sil / dated 22.06.2021 - page 3 (of 6)

表 3.4：ウイルスの不活化/+製品/+光/+ウイルス（滴定中間板[LVP大判]）
サンプル

ln-1

ln-2

ln-2

製品1296 (+PS)

1318 (+PS)

1371 (+PS)

5 mL (a) + 5 mL (b) = 10 mL

5 mL (a) + 5 mL (b) = 10 mL

5 mL (a) + 5 mL (b) = 10 mL

希釈係数（VF）

222

細胞培養ユニット

969696

ウイルス陽性9690

46

比率 p 2

1,00,90,479>1,82

1,600,98

分析サンプル量 1

残留ウイルス (IgID5o per 1 mL)減少 3 (Ig ID50 ± Cl

< 3,68 ± 0,33 (ln-1 vs. VK-1)
3,67 + 0,27 (ln-2 vs. VK-2)[95%])
1 =細胞培養に移された最初のウイルス不活化試験サンプルの量。

3,40 ± 0,35 (ln-3 vs. VK-3)2 =細胞培養の総数に対するウイルス陽性細胞培養ユニットの比率。
3 =ウイルスの減少：ウイルス制御の力価(表3.1を参照)からサンプルの力価を引いたもの（Ig ID50）
表 3.5：細胞毒性制御/ +製品/ +光/-ウイルス（限界希釈によるウイルス滴定）

Sample

T-l

T-2

T-3

製品

1296 (+PS)

1318 (+PS)

1371 (+PS)< 1,3/mL< 1,3/mL< 1,3/mL

力価/試験 vol(Ig ID50）1

1 = DW / RKI-Leitlinieによる細胞毒性力価の計算

virus susceptibility of the detection cells)
Tab.3.6：コントロール－感受性試験（検出細胞のウイルス感受性）
3.6: Control - Susceptibility test
表VK/EE-lE-2E-3-1296 (+PS)

1318 (+PS)

1371 (+PS)

6,68 ± 0,25

6,90 ± 0,02

6,75 + 0,30

6,60 ± 0,35

力価 2--0,22 + 0,25-0,07 + 0,39

0,08 + 0,43

感受性 3-はいはいはい

サンプル
製品

力価/試験vol（Ig IDso）1

1 = DW / RKI-Leitlinie によるウイルス力価とその 95％信頼区間の計算
2 =ウイルスコントロールの力価(lg ID50)からサンプルの力価(lg ID50)を引いたもの
3 = 力価 <Ig 1,0（EN14776）の場合、検出セルの感受性は与えられたとおりに受け入れられます。

Virucidal activity „printer varnish" vs. MVA - Short report / Screening test Sil / dated 22.06.2021 - page 4 (of 6)

結果：•ウイルス汚染懸濁液(5,15mL の再懸濁溶液で 50pL）を滴定すると、lg ID50 = 6,85±0.38 / mL になりました（表 3.1 を参照）。
•コーティングされた PVC テストキャリアから、光の影響を受けずに室温でインキュベートした場合、4 時間後に次の量のウイルスが回収されました（VK;表 3.2 を参照）
：VK-1 = Ig ID50 = 5,50±0.33/mL(ロット 1296）、VK-2 = lg ID50 = 5,28±0.27 / mL(ロット 1318）および、VK-3 = Ig IDso = 4,38±0.35/mL（ロット 1371)。
•ウイルス汚染のウイルス力価(Inp;表 3.1 を参照)と比較した場合、ウイルスの減少は RF =1,35±0,50(VK-1)、RF = 1,57±0,46(VK -2)、RF = 2,47±0,52（VK-3）および RF = 1,42±0,50（VK-4）に達しました。（表 3.2 を参照）。
•PS 含有製品（+ PS）でコーティングされた主要な試験片を 4 時間露光すると、少量片から非常に少量の試験ウイルスが検出されました。ウイルス制御サンプル（VK）と比較すると、ウイルスの減少
は RF = 2,62 + 0,40（ln-1）、RF = 3,68±0,38（ln-2）、および RF = 3,0+ 0,38（ln-3）に達しました。
（表 3.3 を参照）。
•さらに、主要な試験サンプルのウイルス滴定には、大容量板(LVP)法が適用されました。この手法を使用すると、より多くのテスト量を分析できます。現在のテストでは、利用可能な全量の再懸濁溶液を細胞培養に移しました（2 x 5 mL = 10mL）。その後、以下の結果が得られました（表 3.4 を参照）。
最初の製品(ロット 1296)では、96 個の接種細胞培養物すべてがウイルス陽性になりました。したがって、テストシステムの検出上限に到達/超過しました。適用されたテイラー式を使用して、(仮想)ウ
イルス力価は lg ID50> 1,82 / mL と計算され、VK-1 で RF <3,68±0.33（ln-1）の(仮想)ウイルス減少をもたらしました。
2 番目の製品(ロット 1318)では、96 個の接種細胞培養のうち 90 個がウイルス陽性になりました。テ
イラー式を適用すると、ウイルス力価は Ig ID50 = 1,60 / mL と計算され、RF = 3,67±0.27 のウイルス減少が得られました。
3 番目の製品(ロット 1371)では、96 個の接種細胞培養のうち 46 個がウイルス陽性になりました。テ
イラー式を適用すると、ウイルス力価は Ig ID50 = 0,98 / mL と計算され、RF = 3,40±0.35 のウイルス減少が得られました。
•PS 含有製品(+ PS)でコーティングされた試験片で、試験項目が 4 時間光にさらされた後、細胞毒性は 3 つの製品ロットすべてで検出セルに転送されませんでした。これは Ig の細胞毒性力価に相当します。 TD50 <1.3 / mL（表 3.5 を参照）。
さらに、感受性試験では、細胞にLVP試験サンプルを接種した場合、検出細胞は試験ウイルスに対して完全に感受性を維持していることが示されています（表3.6を参照）。

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結論：•限界希釈法を使用した細胞毒性制御実験では、3 つの製品すべてがウイルス検出またはウイルス定量化に悪影響を及ぼさなかったことが示されています。同じことが LVP(大量板)テストサンプルにも当てはまりました。
•製品でコーティングされているが PS がないテスト項目を使用し、暗所でのインキュベーション後、汚染懸濁液と比較した場合、特定のウイルスの減少（1.3〜1,57 Log）が観察されました。これは、ウイルス材料の乾燥の結果である可能性があります。基本コーティング 1371 を使用すると、このウイルスの減少は約 1 Log 高くなりました(RF=2,47）。そのコーティングで、追加の要因が効果を発揮した可能性があります。
•PS を含むコーティングされたテスト項目を使用し、光を照射した後、3 つの製品すべてで少量から非常に少量の残留テストウイルスを検出できました。ウイルス制御(-PS;暗所でのインキュベーション)を参照して、ウイルスの減少は RF=2,63±0,40（ロット 1296）、RF=3,68±0,38（ロット 1318）および RF=3,0±0.38（ロット 1371）と決められました。
•この結果は、LVP 滴定法で確認され、RF=3,67±0,27（ロット 1318）および RF = 3,40±0.35（ロット 1371）にウイルスが減少しました。
•得られた結果に基づいて、この印刷ニスの光増感剤の量がウイルスの減少に寄与したと結論付けることができます。

殺ウイルス活性に関する注釈：EN14476 によると、改変ワクシニアウイルスアンカラ（MVA）は、いわゆる「限定的な殺ウイルス活性」の（唯一の）テストウイルスです。この有効性の主張には、エンベロープウイルス（HIV、HCV、HBV、インフルエンザウイルス、SARS-CoV-1 および SARS-CoV-2 [およびその他]など）に対する有効性が含まれます。
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