プロバイオティック乳酸菌の表層GAPDHの網羅的発現解析と腸管付着性に関する研究
宮城大学食産業学部：木下

要

英樹

約

プロバイオティック乳酸菌を評価する上で重要なファクターの一つに腸管付着性が挙げられるが、腸管付着性試験は操作が煩雑であり、時間とコストがかかるのが難点である。また、最近、乳酸菌の菌体表層にグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素（GAPDH）が発現し、付着因子として作用していることが明らかになった。そこで本研究では、菌体表層GAPDHの網羅解析と酵素活性を指標とした高腸管付着性乳酸菌の新規スクリーニング法の確立を目指して研究を行った。ヒ
ト腸管組織由来乳酸桿菌30菌株および漬物やキムチなど様々なサンプルから単離した47菌株について、GAPDH酵素活性を測定したところ、高頻度でGAPDH活性が検出された。また、SDS-PAGEにおいてもGAPDHと思われる40kDa付近のバンドが確認された。本結果から、乳酸桿菌の菌体表層には、普遍的にGAPDHが存在し、腸管付着性に寄与している可能性が示された。また、BIACORE腸管付着性試験においても、GAPDH活性とSDS-PAGEでのバンドの濃さは、ある程度付着性試験の結果と一致したことから、GAPDH活性を指標とした高腸管付着性乳酸菌のスクリーニング法の可能性が示唆された。しかしながら、GAPDHのみでは、全ての高腸管付着性乳酸菌の選抜をするのは難
しく、複数の酵素を組み合わせたスクリーニング法など更なる改良の余地が残された。
キーワード：プロバイオティクス、グリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素、GAPDH、腸管付
着性、付着因子、アドヘシン、酵素緒

言

プロバイオティクスは、アンチバイオティクス（抗生物質）の対義語として作られた用語であり、1989年、Fullerによって、「腸内菌叢のバランスを改善することにより宿主動物に有益に働く生菌添加物」と定義された1)。現在では、国連食糧農業機関（FAO）/世界保健機構（WHO）により、プロバイオティクスのガイドラインが作成され、「適正量を摂取することにより宿主の健康に有益な作用をもたらす生きた微生物」と再定義されている2)。プロバイオティクスの代表である
Lactobacillus属を含む乳酸菌は、発酵乳や漬物などを通じて古くから利用されており、このような菌群の多くは、FDA（Food and Drug Administration：米国食品医薬品局）により、一般的に安全と認められた食品・食品添加物として、「GRAS（Generally Recognized As Safe）」3, 4)の認証を受けている。
Lactobacillus属には、宿主に対して、整腸作用5)、血中コレステロール低減作用6)、免疫賦活
化作用7)および抗腫瘍作用8)などの様々な生理的効果が報告されているが、これらの諸作用の多くは、プロバイオティック乳酸菌が腸管内に留まり増殖することで、初めて十分な生理的効果が期待できるものと考えられる。そのため、プロバイオティック乳酸菌を評価する上で「腸管付着能」
は、きわめて重要なファクターの一つである。しかしながら、乳酸菌の腸管付着メカニズムはま- 183 -

だまだ不明な点が多いのが現状である。また、腸管付着性の高い乳酸菌（高腸管付着性乳酸菌）を選抜するための付着性試験もお金と手間がかかり、非常に煩雑な作業である。
プロバイオティック乳酸菌の腸管付着能力を評価する場合、その評価系が重要になってくる。
腸管付着性試験は、現在、ヒト腸管モデルとしてヒト腸管上皮細胞のCaco-2細胞やHT29細胞、またはムチンなどの粘液に対して行われている。細胞や粘液に菌体を添加し付着させ、洗浄後に付着能力を測定するという手法である。測定法は、光学または電子顕微鏡を用いて目視で算定する
方法、菌体を放射性同位体ラベルして放射活性量または蛍光ラベルして蛍光強度により定量する研究手法が一般的である 9, 10) 。我々は、二分子間の相互作用を表面プラズモン共鳴（Surface
Plasmon Resonance: SPR）で測定するバイオセンサー装置“BIACORE（ビアコア）”により腸管付着性試験を行っている11)。本手法は、二分子を特別な標識をすることなくリアルタイムで付着量を定量的に解析できる優れた手法である。また、菌体の洗浄作業時などに人為的な操作が全く入らないために、再現性の高いデータが得られる。我々は血液型抗原プローブおよびヒト大腸ムチン（HCM）をリガンドとしてセンサーチップ表面に固定化し、菌体または菌体表層タンパク質をアナライトとして流すことで付着性を定量的に解析している。結合量はResonance Unit （以下，RU）値として表され、1 RUは１mm2当たりにアナライト１pgが結合したことを示す。しかしながら、
上記の「腸管付着性試験」は、いずれも操作が煩雑であり、コストや時間がかかるという欠点がある。
最近、我々は、ヒト腸管組織から直接単離した高腸管付着性乳酸菌Lacatobacillus plantarum
LA318株の菌体表層に、解糖系の酵素であるグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素（GAPDH）が高発現していることを明らかにした。さらに、本表層GAPDHが、HCMやその糖鎖末端に発現している血液型抗原（A型およびB型）へ高い結合性を示す腸管付着因子（アドへシン）であることを明らかにした12, 13)。また、同時期にフィンランドのグループにより乳酸菌の菌体表層にGAPDHやエノラーゼなどが存在していることが明らかとなった14, 15)。これまで報告されてきた腸管付着因
子は、「付着性」以外に評価する指標がなかったが、上記のタンパク質は、「酵素活性を持つ」という特徴を有している。我々は、その特徴にいち早く着目し、酵素活性を利用して新たな腸管付着評価系の構築ができるのではないかと考えた。そこで本研究では、菌体表層に発現している
GAPDHにターゲットを絞り、菌体表層GAPDHの網羅的発現解析とGAPDH酵素活性を指標とした高腸管付着性乳酸菌の新規スクリーニング法の構築を目的とした。

材料と方法
1．ヒト腸管組織由来乳酸菌
ヒト腸管組織由来乳酸桿菌30菌株は、以前ヒト腸管組織の粘液層から直接単離したものを用いた（表1）16)。腸管組織は、がん患者から摘出された腸管組織の患部以外の正常部位を用いた。これらは、手術前2日間の絶食や下剤処理にも耐え、腸管に強固に結合していた乳酸菌である。試験前にMRS broth（Difco Laboratories, Detroit, MI, USA）に2％（v/v）で接種し，37℃で24hr，
2回継代培養を行ってから各試験に供した。
2．グリセルアルデヒド-３-リン酸脱水素酵素（GAPDH）の活性測定
グリセルアルデヒド-３-リン酸脱水素酵素（GAPDH）の活性測定は，Pancholiらの方法17)を参考- 184 -

にして，マイクロプレートに応用して行った。サンプル50μLを96穴マイクロプレートに添加した。マイクロプレートの各ウェルにグリセルアルデヒド-3-リン酸（基質）（47mg/mL，Sigma）1
μL，10mM NAD＋ 25μL，活性測定用バッファー（40 mM トリエタノールアミン，50 mM Na2HPO4，
0.2 mM EDTA，20 mM 2-メルカプトエタノール，0.1％ （v/v）Tween 20，pH 8.6）175μLの混合溶液を添加し，泡立てないように振盪し，5分後にマイクロプレートリーダーにより340nmの吸光度を測定した。コントロールは，グリセアルデヒド-3-リン酸の代わりに活性測定用バッファー
を用い，コントロール値を引いた値を活性値とした（3連）。結果は、酵素活性をタンパク質量で除した比活性として示した。
3．タンパク質量測定
PBS抽出物のタンパク質量は、プロテインアッセイ（BIO-RAD Laboratories,CA, USA）（ブラッドフォード法）または、BCATM Protein Assay Kit (PIERCE, IL, USA)（BCA法）を用いて、BSAにより検量線を作成し、それぞれ付属のマニュアルに従って測定した。
4．SDS-ポリアクリルアミド電気泳動(SDS-PAGE)

SDS-PAGE は，Leammili の方法18)に準じて行った。ゲルは、12.5%ポリアクリルア
ミドゲルを調製するか、または，市販の5-20％濃度勾配ゲル（c-PAGEL、アトー（株）、東京）を購入し用いた。試料は，SDS 化試薬(1%（w/v）SDS, 2% (v/v) Tris-HCl pH6.8,
1%（v/v）2- melcaptoethanol, および20% (v/v) glycerol)に溶解させ，95℃で10min
加熱してSDS 化を行った。各試料溝への試料添加量は， 20μl とした。電気泳動は定電圧125 mA で行い，泳動後、2.5% （ w/v ） Coomasie Brilliant blue(CBB, Fluka
chemie AG, Buchs,Switzerland)溶液（25%（v/v） methanol, 10% Acetic Acid 含む）
を用いて染色した。分子量マーカーは、AE-1440 EzStandard（アトー（株）、東京）を用いた。
5．BIACOREを用いた付着性試験
5-1．BIACOREセンサーチップCM 5への精製HCMの固定化
表面デキストラン層の末端にカルボキシル基が導入されているセンサーチップ CM5（ビアコア（株），東京）への精製HCMの固定化をアミンカップリング反応により行った。Running buffer，
固定化用試薬，およびメンテナンス用試薬は全てビアコア（株）の純正製品を使用した。Running
Buffer としてのHBS-EP buffer（0.01 M HEPES, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% Surfactant P20,
pH 7.4 ）は3μL/minで流し，BIACOREの設定温度は25℃定温とした。実験に先んじて，HBS-EP buffer
でPrime操作を必須とし，必要に応じてDesorb，Sanitize，System Checkによるメンテナンスを行った。実験終了後はMilli Q水にてPrimeを行い，センサーチップは4℃下で乾燥保存した。
精製HCMのセンサーチップ CM5への固定化は，以下の通り行った。センサーチップCM5の4つの経路のフローセル（Fc）中の1つの経路に対して EDC（N -ethyl- N’-（3-dimethylaminopropyl）
carbodiimide hydrochloride）と NHS（N- hydroxysuccinimide）の混合（1：1）試薬70μLをInject（flow rate: 10μL/min, 7 min）し，デキストラン末端に導入されているカルボキシル基を活性化させた。そこへ100μL の固定化用酢酸 buffer（pH 4.0）に精製HCM 0.5mgを溶解した混合- 185 -

溶液を流し，共有結合させた。ついで，エタノールアミンを用いてリガンド未結合の残存活性基のブロッキングを行った。
5-2．アナライトの調製
アナライトとなる乳酸桿菌をMRS 培地にて37℃で12 hrまたは18hr培養した。菌体を遠心（3,000
×g, 10 min）により回収後，滅菌蒸留水を用いて遠心洗浄（8,000×g, 5 min, 4℃）を3回行い，凍結乾燥を行った。凍結乾燥菌体は，付着性試験の前にHBS-EP bufferに0.1mg/mLの濃度に懸濁し，本試料を菌体アナライト溶液とした。
5-3．BIACORE付着性試験
BIACORE 1000に装着したセンサーチップCM5上に固定化した精製HCMに対して，アナライト溶液
15μLをインジェクトした（flow rate 3μL/min, 5 min）。その後，一定時間running bufferを流し，Resonance Unit（RU）値が一定になったところで再生溶液を流し，付着した菌体の解離を行った。再生溶液は基本的に1M GHCl溶液を使用し，必要に応じて添加時間の延長，再生溶液濃度の上昇（4Mまで）を行った。アナライトのインジェクト終了後，200 秒後のRU値からアナライ
ト添加前のベースラインのRU値を引いた値を付着量とした。試験は，3回繰り返し行った。
6．様々な単離源からの乳酸菌の単離
漬物を中心とした様々なサンプルをPBSに懸濁し、懸濁液を乳酸桿菌選択培地であるMRS寒天培
地および変法LBS 培地に塗抹し，嫌気条件下で37℃，48hr 培養した。MRS 寒天培地はMRS 培地（Difco Laboratories, Detroit, MI, USA）に0.8％（w/v）寒天（Agar Bacteriogical Agar No.
1, Unipath Ltd., Basingstoke,Hampshire, UK）を添加して調製した。変法LBS 寒天培地は，LBS
agar（BectonDickinson and Company, Sparks, MD, USA）に0.8％（w/v）Lab-lemcopowder（meatextract powder; total nitrogen 12.4％（w/w）,amino nitrogen2.5％（w/w）, Sodium chloride
5.7%(w/w), pH（1％solution）7.2）（OxoidLtd., Basingstoke, Hampshire, England），0.1 M
酢酸ナトリウム，3.7%（v/v）酢酸を添加し調製した。コロニー形成後，コロニーの色，形態，
大きさの異なるものをそれぞれMRS broth で培養した。培養後，遠心分離（5,000 rpm, 10 min）
により集菌し，30%グリセロールまたは、10%スキムミルクに懸濁し、-80℃で保存した。
7．菌種同定保存した菌をMRS寒天培地で培養し、コロニー形成後、63f(5’-CAGGCCTAACACATGCAAGTC-3’)と518r(5’-ATTACCGCGGCTGCTGG-3’)のプライマーセットを用い、コロニーダイレクトPCRにより
16S rDNA（約450 bp）を増幅した。塩基配列解読は、BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing
Kit（Applied Biosystems, CA, USA）を用いたダイターミネーター法によって行った。プライマーは、63fを用い、Applied Biosystems 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, CA, USA)により配列を解析した。配列解析後、DNA Data Bank of Japan (DDBJ, Mishima, Japan)のFASTA
により、相同性解析を行い、簡易同定を行った。

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結果

ヒト腸管組織由来乳酸桿菌のGAPDH発現解析と腸管付着性との相関性の検討
12時間培養時のヒト腸管組織由来乳酸桿菌30菌株のGAPDH発現解析の結果を図１に示した。菌
体表層GAPDHの酵素活性は、菌株ごとに大きくことなり、培養12時間では、30菌株中21菌株から
GAPDH活性が検出された。図2には、図１の結果を以前行った腸管付着性試験の結果16)と並べて示した。一部を除き、GAPDH活性（比活性）と腸管付着性の結果は、似たような傾向が見られ、活性の高い菌は、腸管付着性も高いという傾向が見られた。図3には、12時間培養時のPBS抽出液のSDS-PAGEの結果を示した。活性の高かったものでは、40kDa付近に明確なバンドとして検出された。
培養時間を18時間にしたところ、全ての菌でGAPDH活性が検出された（図4）。比活性は、12時
間培養時と似たような傾向が見られたが、比活性の値は全体的に上昇した。また、LA305株、LA307
株、LA312株、LA313株、LA314株、LA315株、LA316株、LA324株、LA327株は、比活性の値が0.3以上の高い値を示した。その中で最も高い値を示したのは、LA313株だった。LA318株は、12時間培養では2番目に高い値だったが、18時間培養では全体と比較して中程度の活性値となった。図5には活性の高い菌株（LA305株, 312株, 313株, 316株, 324株, 327株）と低い菌株（301株, 304株,
310株, 311株）のPBS抽出物のSDS-PAGEを示した。活性の高い菌株ではバンドが確認できたが、低い菌株では明確なバンドは得られなかった。図6は、選抜菌のHCMへのBIACORE付着性の結果を示した。LA313株は、腸管付着性試験でも高い付着性を示し、比活性の結果と一致した。SDS-PAGE
におけるGAPDHと思われるバンド（40kDa付近）が濃い程、付着性も高い傾向が見られた。特に、LA305株、LA313株およびLA316株は、付着性と比活性が高く、SDS-PAGEにおいても40kDa付近に明確なバンドとして検出された。
様々な単離源からの乳酸桿菌の単離および菌種同定とGAPDH発現解析
漬物やキムチを中心とした様々な単離源、計57サンプルから乳酸桿菌の単離を試みた。16S rDNA
配列の相同性解析により菌種同定を行った結果、57サンプル中16サンプルから計47菌株の乳酸桿菌を単離・同定することができた（表2）。菌種別では、L. sakeiが13菌株と最も多く、次いでL.
plantarum 5菌株となった。その他、L. coryniformisおよびL. rhamnosusが4菌株ずつ、L. gasseriが3菌株、L. curvatus、L. brevis、L. fermentumおよびL. alimentariusが2菌株ずつ、L. paracasei、
L. caseiおよびL. rossiaeが1菌株ずつとなった。また、複数の候補があり、種まで完全に同定できなかったLactobacillus sp.が計7菌株という結果となった（表3）。
図7には、様々な単離源の乳酸菌47菌株のGAPDH活性を示した。腸管組織由来乳酸桿菌と同様に活性は菌株によって異なる結果となった。比活性の値が0.3以上だった比較的活性の高い菌が16菌株、0.1以上0.3未満の中程度の活性を示した菌が17菌株、0.1未満の低い値を示した菌が14菌株だった。活性値が0の菌株はなかった。

考察

腸管付着性試験は、プロバイオティック乳酸菌を評価する上で欠かせない試験であるが、操作が煩雑であり、コストと時間がかかるのが難点である。本研究では、GAPDHの網羅解析を行うと共に、GAPDH活性を指標にすることで、腸管付着性試験を行うことなく、腸管付着性の高い乳酸菌（高腸管付着性乳酸菌）をスクリーニング可能かを検証した。まず、ヒト腸管組織に強固に付- 187 -

着していた乳酸桿菌30菌株のGAPDH活性を求めた。その結果、12時間培養では、21菌株から、18時間培養では、全ての菌株からGAPDH活性が検出された。酵素活性は、菌株ごとに異なっており、
PBS抽出物のSDS-PAGEにおいて、CBB染色では検出できない菌株もあったが、多くの乳酸菌から菌体表層GAPDHの発現が確認された。しかしながら、詳細な解析には、ウェスタン解析やELISA解析などを行う必要があると考えられた。また、ヒト腸管組織由来乳酸菌のみならず、漬物やキムチなどを中心に様々なサンプルから単離した乳酸桿菌の多くからGAPDH活性が検出されたことから、乳酸菌において菌体表層GAPDHは普遍的に存在している可能性が示唆された。アシドフィルスグ
ループ乳酸菌などで多く見つかっている付着因子としてS-layerタンパク質があるが19)、S-layer
タンパク質を持つ乳酸菌の割合はそれほど高くはない。本実験のように付着因子が高頻度で普遍的に存在している例はほとんどない。Hurmalainenらによって、数菌株での乳酸桿菌において、
GAPDHとエノラーゼの菌体表層での発現が確認されているが14)、今回のように大規模解析において多くの菌から検出されたのは初めてである。LA301株、LA306株、LA308株、LA309株、LA310株、
LA319株、LA323株、LA325株などは、GAPDH活性が検出されない、または低かったが、腸管付着能は有していた（図2）。このような菌株には、GAPDH以外の付着因子が存在していると考えられる。
また、LA324株のような活性は高いが、付着性および抽出タンパク質が少ない菌株は、GAPDHに何らかの構造の違いがあるのではないかと推測された。これについては、X線立体構造解析などの詳細な解析が必要になるだろう。また、SDS-PAGEによるGAPDHと思われる40kDa付近のバンドが濃いものは、腸管付着性も高いという傾向が見られた（図3、5）。もちろん腸管付着性全てをGAPDH
のみで語ることはできないが、本実験により、GAPDHの腸管付着因子としての役割は少なくないのではないかと考えられた。
GAPDHは、菌体内でグリセルアルデヒド-3-リン酸に作用し、1,3-ビスホスホグリセリン酸に変換する解糖系の重要な酵素である。シグナル配列を持たない菌体内酵素の菌体表層への移行メカ
ニズムは解明されていないが、何らかの輸送システムがあり、菌体表層に移行すると思われる。
菌体表層でGAPDHは、乳酸により低pHとなった外部環境で正の荷電を持ち、リポテイコ酸などの負電荷の物質と結合することで菌体表層に留まっていると推測されている15)。表層GAPDHは、口内病原細菌で多く発見されている。Group A Streptococcus (GAS)の表層GAPDHは，SDH（Streptococcal
surface dehydrogenase）と呼ばれ、プラスミン（プラスミノーゲン）20, 21)、フィブロネクチン、
リゾチーム、ミオシンおよびアクチン17)へのマルチバインディング特性を示すことが報告されている。また、SDHは、ヒト咽頭細胞のレセプターであるuPAR (urokinase plasminogen activator
receptor)/CD87を認識し、宿主細胞への付着を媒介している22)。Seifertらは、細胞骨格タンパク
質および細胞外マトリックスタンパク質へgroup B Streptococcus (GBS)が付着することを報告
した23)。Candida albicansでも表層GAPDHの発現が報告され、フィブロネクチンおよびラミニンへの結合性が示された24)。また、Staphylococcus aureusおよびStaph. epidermidisの表層GAPDHは、
ト ラ ン スフ ェリ ン に結 合 する こ とが 明ら か となっ て い る 25) 。 さら に 、歯 周病 細 菌で あ る
Porphyromonas gingivalisの繊毛は、Strep. oralisのGAPDHと共同凝集を起こし、ヒト口腔上皮細胞へ付着すると報告されている26, 27)。また、グラム陰性細菌であるEscherichia coli（大腸菌）においても表層GAPDHが確認されており、プラスミノーゲンとフィブリノーゲンおよびCaco-2細胞への付着が報告されている28)。
乳酸桿菌では、上記でも少し触れたがフィンランドのグループにより、様々な乳酸菌の菌体表- 188 -

層にGAPDHやエノラーゼなどが存在しており、プラスミノーゲンおよびプラスミンに付着性を示すことが報告されている。また、これらの酵素は、組織型プラスミノーゲン活性化因子（tPA）
を活性化することで血栓溶解に関与していることが明らかにされた14, 15)。また、2008年9月に行われた第9回国際乳酸菌シンポジウム（LAB9）では、同研究グループによりGAPDH やエノラーゼ
のみならず、グルタミンシンテターゼ（GS）および、グルコース-6-リン酸イソメラーゼ（GPI）などの菌体内で働く酵素が菌体表層に発現しており、pH依存的に細胞外マトリックスの構成タン
パク質であるラミニン、フィブロネクチンおよびコラーゲンに結合性を示すことが報告された。
また、筆者らの研究において、LA318株の菌体表層にGAPDHが高発現していることが明らかとなり、
GAPDHは、菌体表層でヒト大腸ムチンやその糖鎖末端に発現しているABO式血液型抗原、特にA抗原｛GalNAcα1-3(Fucα1-2)Gal-｝およびB抗原｛Galα1-3(Fucα1-2)Gal-｝へ高い結合性を示す
アドへシンとして作用していることが明らかになった。菌体表層GAPDHは、単糖には結合性を示
さず、結合には、特徴的な血液型三糖構造が重要であることが明かとなり、N-アセチルガラクト
サミン（GalNAc）およびガラクトース（Gal）を認識するレクチン様タンパク質としての特徴を備えていると考えられた12, 13)。また、世界で最もよく研究されている乳酸菌の一つであるLb.
rhamnosus GG（通称LGG）の菌体表層にもGAPDHの他にホスホグリセレートキナーゼが発現しており、付着因子としての働きが推測された17)。さらに、2009年12月には、L. plantarum LM3の菌体
表層にエノラーゼが発現しており、フィブロネクチンへの結合性が報告される29) など、菌体内酵
素群の菌体表層での発現が多く発表されてきている。
このように乳酸菌においても多くの菌株で、菌体表層に菌体内酵素群の発現が確認されているが、その全貌は明らかになっていない。本研究では、GAPDHのみにターゲットを絞り研究を行ったが、乳酸菌には、SlpA19)、CdpA30) 、Mub31)、FbpA32)、CbsA 9)、EF-Tu33)、Msa34)、CnBP （ABCトランスポーター）35)、MapA36)、LspA37)、エノラーゼ14)、細胞壁多糖38)、リポテイコ酸39)など様々な付着因子があることから、GAPDHのみで付着を論ずるのは非常に難しいと考えられる。本実験のように高腸管付着性菌を酵素活性により検出しようとする試みは誰も行っておらず、本研究が初めてである。今後は、GAPDH以外の酵素活性を有する付着因子（アドヘシン）も考慮に入れ、酵素活性を指標とした新規スクリーニング法の確立を目指す予定である。

結論

本研究において、GAPDH活性測定により、多くの乳酸桿菌で普遍的に菌体表層GAPDHが発現している可能性が示された。また、GAPDH発現量と腸管付着性との間には、ある程度の相関性が見られ、GAPDH活性を指標とした高腸管付着性乳酸菌の新規スクリーニング法の可能性が示された。
しかしながら、GAPDHのみでは高い付着性を持つ菌株を全て網羅することはできなかった。今後、乳酸桿菌の菌体表層に普遍的に発現している有用なアドヘシン酵素を網羅解析し、複数の酵素により選抜することで、選抜漏れを極力なくし、幅広い菌株に対応可能な選抜方法の開発を行う予定である。

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謝辞本研究でのBIACORE付着性試験は、東北大学農学研究科の齋藤忠夫教授のご協力を得て実施しました。この場を借りて厚く御礼申し上げます。

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- 200 -

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