4｀.̀︑

2~2- ジメチJt- l 3‑2ブロパンジオー）しク＞

細回を用し、そf隻 1
奉翠茎匡言式，咤た

厚生省生活斎生局委託

財団法人食品薬品妄全もジク—
秦野研．究所目 次頁
要緒

約 ・‑‑‑‑‑‑、・‑・呵‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑ 1号c::t ・ • • ‑• •・ 一 ・‑‑‑‑‑‑ ‑‑ 疇 ・•••‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑

•

‑‑‑

•

‑‑‑‑‑‑‑‑•‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑••‑‑‑‑・ 疇 ・‑‑‑・2

材料および試験方法—------------------------------------------------------------------------·. 3

試験結果および考察

・‑‑‑‑‑‑
ヽ‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑
疇ー・・‑‑‑‑‑・‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑・7参考
文献．
ー一‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑…
‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑
・ 8
表1 3

要約2,2‑、ジメチル＿ 1,3‑プロパンジオールの変異原性の有無について、細菌を用いる復帰変異試験を実施することにより検討した。
検定菌として、 Sa
L匹 旭 t tat沖hi皿T畑 1 T
AlOO,TA
1535,TA
98,TA
1537およびEscheァichi
acoliWP2uvrAを用い、直接試験および代謝活性化試験のいずれも、用量設定試験は 505000成／ivートの用量で、本試験は 312.
55000μg/ivートの用量で試験を行った。
その結果、 2回の本試験とも、用いた 5種類の検定菌において、いずれの用量でも復帰変異コロニー数の増加が認められなかったことから、 2,2ージメチル＿ 1,3‑プロバンジオールは、用いた試験系において変異原性を有しない（陰性） と判定された。

n9.ィ 7.949︑ ︑ 1 な 項 i．
．
．
．
． 9,．﹃．ら・パq.
．
．
．
．︐．︐ ．

ヽ吋＇ダ打‑1‑

言緒

高生産量既存化学物覧で、現在十分な安全性賓料のない、 2,2ージメチル＿ 1,3‑プ
ロバンジオールについて、 OECDを中心として行われている国際協力による、安全性点検評価事業の一環として、細菌を用いる復帰変異試験をプレート法により実施した。
この試験は、サルモネラ（ネズミチフス菌）におけるヒスチジン要求性から非要(l)求性への復帰変異、ならびに大腸菌におけるトリプトファン要求性から非要求性へ(2)の復帰変異を指標とした変異原の検出系である。
試験は、被験物質をそのまま検定菌に作用させる直接試験と、哺乳動物のもつ薬物代謝酵素 (S9混液）によって産生される被験物度の代謝物の変異原性を試験する代謝活性化試験とからなっている。
本試験は、「新規化学物質に係る試験の方法について」（昭和62年3月31日、環保業第 237号、薬発第 306号
、 62基局第 303号）およびOECD
化学品試験法ガイドラ
イン： 471,472に準拠し、化学物質 GLP （昭和59年 3月31日，環保業第39号、薬発
第 229号，59基局第85号，改訂昭和63年11月18日，環企研第 233号，衛生第38号，63基局第 823号）に基づいて実施した。

,.
,
ヽ・,..

‑2‑

材料および試験方法（検定菌〕

Salmoneliat沖hi皿riumTAlO
O
SaL
mone
LLat沖himuri皿 T
A
1535Escherichiac
oiiW
P2uv
r
A
Salmonellatyphimu.
riwnT
A98Salmonell
at沖himu.
r訟mT.
A1
537s.t沖himuri四の 4菌株は 1975年 10月31日にアメリカ合衆国、のから分与を受けた。

E.coliWP2uvr
A株は 1979年 5月 9日にのから分与を受けた。
検定菌は、ー 80℃以下で凍結保存した。
試験に際して、 0.
5％塩化ナトリウム添加ニュートリエントプロス (Difeo) を入れた L字型試験管に種菌を接種し、 37℃、 10時間往復振とう培茶したものを検定菌液とした。

（被験物蛍〕

2,2‑ ジメチル＿ 1,3‑プロパンジオール (CASNo.
126‑
30‑7、以下 DPDと略）は分子量 104.
17、融点 123127℃、水溶性の白色結晶である。純度99.
15％のもの（ロット番号：）をから供与された。被験物委は、使用時まで室温で遮光して保存した。

DPDは、蒸留水を用いて 50mg／叫になるように調製した後、同溶媒でさらに公比 2ないし 3で希釈したものを、速やかに試験に用いた。
試験の開始に先立って、秦野研究所において DPD水溶液中での安定性試験を行った。安定性試験における溶媒は当研究所で実施される、培茶細胞を用いる染色体異常試験と共通なことから、両試験における最高濃度 (50mg/m2,)および最低濃度(2.5mg/mi)の 2瀑度について室温遮光条件下で実施した。その結果、調製後 3時‑3‑間における各 3サンプルの平均含量は、それぞれ初期値の平均 (0時間）に対して102％および 100％であった。これらの値は、当研究所の標準揉作手順害の基準（初回の測定平均値の 90％以上）を満たしていた (Appendix1)。
また、本試験に用いた調製検体について、含量測定試験を行った結果、 50mg/m、,R3.
125mg／叫の両溶液とも、含量は既定濃度に対し、 101104％であった。これらの値も当研究所の標準揉作手順書の基準（平均含量は添加量の 85％以上）を満たしていた (Appendix2) 。
以上の結果から、 DPDは水溶液中では安定であり、また調製液中の被験物度の含量は所定の値の範囲内にあることが確認された。

〔隅性対照物質〕
用いた陽性対照物蛍およびその溶媒は以下のとおりである。

AF‑
2:フリルフラマイド（上野製薬閥
SA :アジ化ナトリウム（和光純薬工業閥
9‑A
A:9ーアミノアクリジン（東京化成工業閥
2‑A
A:2‑アミノアントラセン（和光純薬工業閥

ロット番号 46,nット番号 TLN5556,
ロット番号訊 01,tIット番号 EDE7881,純度99.9%)
純度＞90%)
純度＞ 98%)
純度＞90%)

AF‑2,9‑AA,2‑A
Aは OMSO （和光純薬工業閥 nット番号 DS
L5887および ECJ7001)に、SA は蒸留水に溶解して試験に用いた。

〔培地および S9混液の維成〕
1) トップアガー(TA菌株用）下記の水溶液 (A) および (B) を容量比 10:1の割合で混合した。
＊(A) ）＼クト •7ガー (Difeo) 0.6%
塩化ナトリウム

0.5%(B)L‑tスチジン 0.
5mM
ビオチン

0.5mM・・* :WP
2用には、 0.
5m
MLートリプトファン水溶液を用いた。

t竺ぷ‑4‑2) 合成培地
培地は、日清製粉株式会社製の最少寒天培地（ロット番号： DJ050GG(1991年 7月 98製造）および D
J060I
G(1991年 9月 3日製造））を用いた。
なお、培地 1fあたりの組成は下記のとおりである。

硫酸マグネシウム・ 1
水和物

0.
2g

リン酸水素 7ン
モニウ
ム
ナ
ト
リ
ウ
t.
.4
水和物 3.
5g

ク
エン
酸・1水和物

2g

グル
コ
ー
ヌ20g

リン酸水素ニカリウL

10g}
¥ク
ト
・
アガー (Difeo)

15g

径 90Dのシャーレ 1枚あたり 30叫を流して固めてある。

9混液 (1叫中下記の成分を含む）
3) S
＊＊0.
1咸NADH4 μmole

塩化マグネシ松

8 μmoleNADP
H4 μmole

塩化訓汎33 μmole

グルコース •6 リン酸

5 μmole0.
2M リン酸緩衝液(pH7.
4) 0.5m,
9S
9** :7週齢の Sprague‑Dawley系雄ラットをフェノバルビタール (PB)、および 5 、 6 —ベンゾフラボン (BF) の併用投与で酵素誘導して作製した S9（キッコーマン閥、ロット番号 RA
A‑
254(1991年 5月23日製造）および RAA‑
258(1991年 8月23日製造））を用いた。 PBおよび B
Fの投与量は 1日目 P
B30mg/k、
g 2日目 P
B60mg/k、g 3日目 PB60mg/kgおよび B
F80mg/k、g 4日目 P
B60mg/kgであり、いずれも腹腔内投与したものである。

〔試験方法〕
プレート法により直接試験および代謝活性化試験を行った。
小試験管中にトップアガー 2戒、被験物蛍凋製液 O.lm~ 、リン酸緩衝液 0. 5￡m（代謝活性化試験においては S9混液 0.
5叫）、検定菌液 O.lm
Qを混合したのち‑5‑合成培地平板上に流して固めた。また、対照群として被験物妥調製液の代わりに蒸留水、または数種の陽性対照物妥溶液を用いた。各検定菌ごとの隔性対照物妥の名称および用量は表中に示した。培養は37℃で 48時間行い、生じた復帰変異コロニー数を算定した。用いた平板は用量設定試験においては、陰性および隅性対照群では 3枚ずつ、各用量については 1枚ずつとした。また、本試験においては両対照群および各用量につき、3枚ずつを用い、それぞれその平均値と標準偏差を求めた。

用量設定試験は 1回、本試験は同ー用量について 2回実施し、再現性の確認を行った。

（判定基準〕
被験物質を含有する平板上における復帰変異コロニー数が、陰性対照のそれに比ペて 2倍以上に増加し、かつ、その増加に再現性あるいは用量依存性が認められた場合に、当該被験物質は本試験系において変異原性を有する（隔性）と判定することとした。

‑6‑

試験結果および考察

試験の全過程を通して、信頼性に悪影響を及ぼすおそれのある予期し得なかった事態および試験計画害からの逸脱はなかった。

（用量設定試験）
結果を表 1に示した。 505000成(ivートの範囲で試験を実施したところ、直接試験および代謝活性化試験において抗菌性が認められなかったことから、本試験における最高用量を、すべての菌種において 5000戚／ivートとし、公比 2で 5用量を設定した。

〔本試験〕
結果を表 2、 3に示した。 DPDについて 312.
55000pg／プV‑卜の範囲で試験を実施した。

2回の試験を通して、用いた 5種類の検定菌の直接試験、代謝活性化試

験のいずれにおいても、用量依存性のある変異コロニー数の増加は認められなかった。また、すべての菌種において抗菌性は認められなかった。

DPDについて実施した試験において、隅性対照群では、いずれの検定茜においても変異コロニー数の増加が認められ、陰性対照群とも計測された変異コロニー数はヒストリカルコントロール値の範囲内であったことから、本試験に用いた各検定菌の感受性および各陽性対照物質の変異原活性についての安定性が確認された。

以上の結果に基づき、 DPDは、用いた試験系において変異原性を有しないもの（陰性）と判定した。

‑7‑

参考文献

(1) Maron, D.M.andAmes,B.N. :MutationResearch. 1
13:173‑215(1983)(2) Green,M.H. :in"HandbookofMutageni
cityTestProcedures." KiIby,B.J.
,Leg
ator・,M.
,、 Nichols,W.andRamel,C.(eds.
)
ElsevierSciencePublisher,
NewYork.(
1984)pp.
161‑
187.

‑8‑

用量設定試験結果表

表 1
褐験暉： 2たジメチルー1.3‑プロパンジトールの塩佃hレト） 有無↑AlOO質 濃溶媒

対

照検媒

対

照検度

¥113 108(106士

一帰置

対基変換2)

18(12土11

フレームシフト型

A樋5.
76)

コロー→也／プレート型

T
A
1535r

異14(15土14↑
屈812(1216t7土7)

TA
lS?
l
195)

8( 6土5os

一

1
1710

150

一98

l7，，3珈

一l侶

16l9

1161
500

一81

11

お11s

5000一1131619196¥＋

109(lCYI11±050＋立3，

150＋101咽＋

1500＋％，

曲＋

13112体溶

復体 血検物

M‑91‑165

体

滋曲を

忠

2114(161士
8晶

611(10土9}.
12)

L57)

429(l)2
士
8ぎ6)，( 8土62167121331141012'll，

18392

13

訂4l.
85)

称

名

AF
20.
01

陽 必要と 濃度（匹／九ート）

SA0.
5

紐20.
0
1

節0.
1

叫

80

しないも性 の対 滋をコ：
プレーっト名600(616位
土27コ紺0(363お土4土9 閉7) 2642呻 241土0 詈l85(29326土6 昂 2詈4) 鴎 (29228)

称叫

必要と 濃度（99月レト）
照 する如D門。
）

フしート

m

1

681(715土叫2Sl(
15.
515土3塁15) l叫

10（鉛6伍士3閉1) 心5

狐0.
5詈4) l侶(15415土5糾A2繋。
）

148{1?
'610土8塁7)

表 2
襴測耀t：幻たジメチル‑1,3‑プロパンジオール

復体 血検
質 濃物

度の塩媒対照検〉

体溶

媒

対照換

TA
1535型

フレームシフト型

A祀T
隅晶

11(151士8f5)

312.5‑ B8(139144土咀。
）

19(14士7贔

8(111土5&)625一139(14115土11ゼ7)

15(11土93.
88)

14(11土8t。)

四一以（四12土0児6)9(81士1ぶ）

11(112500

立3（立立士6唱5)10( 9士8贔

7(101土115よ13)(22士5oooo

立6(11'112士
1陪。
）

14(11士9晶

9(10土6t。)

23（お 2土1忠）

13(161士
0和

16(171士
3だ。
）

19(12士9;4)

15(131土5＋

117（四13士
119i
3 6( 8 8 晶（沿 2土26( 9士8晶

5( 6士，2.
46)16］ E(171士7 晶S)

6( 6土7贔

を1)

8( 7土82.
43)ぎS)

7( 6土5贔息8)

LL{151土4晶

625＋

133(14415土814
15(131土4 恥(131土1問8)

四＋四(130四土嬰，）6(121土512(131土3't9)

碑＋147(1閲11士6詈6)14( 9土614(12士8147(15114土71ゼ，）

11(101土021（お お土29('5l4土2晶 40(38お土 晶 8( 9土13 ふ12土8(11士8 悲晶 41（胡 33)を5}38（ 町汲土｝
t40)
杓 11( 8土7 2.73)
息。
）

12( 7士44.
54)

贔 14(141土3 贔 お(282土8 晶

5( 8土8晶％t5)(342土9称しないもSA0.
50.
0
1既698
コ ：
プレーぅト臨(685土翫 204(217~土郎嬰l)0.
01

286(25925土2既0.
105(58858士2詈3) 6

叫 8020土8詈3) お " 呻22
1553.
43)

称

対 滋を

必要と 濃松ぎ。
）

把。
）

名

29(22泣士土

119（四14土1

名TA
15377)

3
12.5 ＋＋

M‑91‑165
コロー→ル／プレート

1514(16土¥,‑+)
陽 必要と 濃度（匹／1性 の置対異変序7)

5000

滋血を帰131(13013土1＼体

検基TAlOO佃心） 有 無溶

復帰変異試験結果表 I(99／か卜）叫l叫

2照 するものコ：
プレぅ
ート

叫(844四土詈5)231(2Zl
19土4

狐

10〇(549刃土3誓1) 況

狐

0.
529(
33535土3詈8) 32M 2詈，）

189(
19924士2晶復帰変異試験結果表 lI

表 3謁慰置：2.2‑ジメチル‑
1.3‑プロバンジすール
体 ＄糾x

検質 濃物

度

復媒

対照戸一

111 1
17(117土忠5)

18(151
土2312.5 一138(14013土2唱）

15(162士
1迄

一147 148(150土児，）

13(14土141250

一158(1591岱士児2)

10(131土32500

一160(15715士6恥

15(141土65000

一148(11'±511〉＋B8 1
35{100士

忠体

検溶

媒

対照体

検置

岱Mixを

T
A
9823(221299 舟t1)
6)
土（ 以泣土TAI
蕊715i14)(11士8 し15)7
土7 晶
( 8土8 贔晶 13(161土9 晶 2（凶 1晶 12(15土18 晶 15(212土5 名） ，( 8土7 1.80)
168( 8土10(15l土l晶 ぉ(2.5泌土 望1ぎ5))ぶ）
晶 20(151土2 晶 16(161土9 ［5) 10(91土3 ぶ
5( 7土7晶 13(151土6 恥 18(19翌 F7)ぶ）

ゼ5)38(475士4も）14(12士15繁，）

10(121土4晶

17(171土7晶 団(625土9息1)

11(11土，i4)
f島5)

11(141土9f2)

16(141土6＆）

59(58凶土贔7(142土1晶

19(161土5晶 18(161土0 む 44(423土5息，）12(121士
31.0)

141(13315士
5四＋138(1331'士!
1忠4)

碑

＋

1
2
9 1
33(130土

15(121土4限6)

5000＋

115訊）

s)

1
15110(524(1111i0.
5)
閑6)
翌1)
2
5362
1514(1615 む 1(1313 i55)
(5448(12晶7.
1)

3.
88)

12(10士，土土土土土，土称名

SA0.
5AF20.
01即

コ：フしトっ名¥lfalvrA

22(22汎土625

しないも対 滋をフレームシフト型

15)＋

1
お(128土型t匹(
1位14土4換

コロニ→也今九〜・ト

(Z!2士

汲

312.5 ＋9／九＋）
陽 必要と 濃(/J

性 のむ 凶(14土，異変↑A
1535↑AlOO佃心） 有 無溶

対基

塩の帰

M‑91‑l65

即(624土翌，）

1防(17117土1既0.
0168(16315土8把5) 1郎

1息。
）

0.
1

447(46250土3叫80登3) 2644四 244土7 幻認090)

称必要と 濃度 (9ヽ／九—卜）叫

1

糾A2照 するもの
コ：ブレっートm1( ~5863土詈，）2
15 1塁(1$訥A 1
0叫0.
547(557町
土1翡12) 5B6（打1訂土8 予詈3) 2。
）

糾A2

雙

191(51918513.
1)