9L777
厚生省生活衛生局殿

最終報告書
C.l.ピグメントレッド 22のラットを用いた経口投与による単回投与毒性試験(試験番号:9L777)

1日
2001年 5月 1

株式会社三菱化学安全科学研究所

1

一 一 一 一 一 一 一

9L777

目次
要約・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

7

緒言・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

8

材料および方法・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

9

1.被験物質・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

92.試 験 動 物 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 93.動 物 飼 育 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 104.投与 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 105.群構成・・・・・・・・・..........................................................
1
16.観 察 ・ 測 定 項 目 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・........................................
116.
1 一 般 状 態 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・@・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 1
1
6. 2 体 重 .................................................................
11.
3 病理学的検査・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 1
26LDso値)の算出 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 127.半数致死量(結 果 お よ てF
考察・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

13

1.一般状態・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

1
3

2.体重・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 133.剖検所見・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 1
3
4. 半数致死量(LDso~直)・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・一. ....................
.1
3

5.考察・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 1
3

図および群別表6

9L777

要約
C.I.ピグメントレッド 22を 1群あたり雌雄各 5匹の SD系ラットに 1回経口投与し，そ!
kg， 投与液量はの毒性を検討した.投与用量は雌雄ともに 0，500，1000および、 2000 mg
20mL/kgとし，投与後 14日間の観察を行った.

その結果いずれの被験物質投与群においても死亡例はみられなかった.
一般状態観察において，雌雄とも被験物質様の色調を呈する赤色便および被毛の着色が被験物質投与群でみられたが，毒性変化と考えられる異常はみられなかった.
体重推移および剖検の結果には，いずれの被験物質投与群においても異常はみられなかった.

C.I.ピグメントレッド 22を雌雄のラットに 1回経口投与した結果，半数致死量 (LDso値)
は，雌雄ともに 2000mg!
kg以上と推定した.

7

9L777

緒白
既存化学物質の安全性点検調査事業の一環として，ラットを用いて C.I.ピグメントレッ

ド22の単回投与毒性試験を実施し，生体への毒性学的影響について検討したので報告する.

8

9L777

材料および方法
1.

被験物質から提供された C.I.ピグメントレッド 22(略称:PR22，CASNo.6448・95・9，ロット番号，純度 99wt%以上)を使用した.被験物質は下記の化学名，構造式，分子量および不純物を有し ，7k，熱，光に対して安定で，水，アセトンおよび、 DMSOに不溶な赤色粉末である.被験物質は室温・暗所で保存した.
被験物質の安定性は，被験物質提供者より保証する資料を入手し，確認した化学名: C.
I.PigmentRed22
構造式:N=N̲f、02N
分子量 : 426.
42
不純物: 水分0.15%

水可溶分 0.05%

2.

試験動物
日本チヤールス・リバー鯨:) (生産場所厚木)から 2000 年 4 月 26 白にC
rj:
C
D(SD)
IG
Sラット (SPF)雌雄各 23匹を入手した.
動物入荷後， 5 日間検疫・馴化し，いずれの動物も健康状態が良好なことを確認した.投与前日に，体重層別化無作為抽出法によって各群の平均体重がほぼ均ーとなるように群分けし，雌雄各 20匹を使用した.投与日の週齢は 5週齢，体重範囲は16‑‑127g，雌が 106‑‑124gであった
雄が 1
動物は，尾に油性ペンによる番号付けを行い，個体識別した，ケージには試験番号，被験物質名，試験種，群名(用量)，性別，動物種，系統，動物番号および投与

99L777

期間を記載したラベルを付けた.

3. 動物飼育0

検疫・馴化期間を含む全飼育期間を通して，温度 22土 2C (目標値)，相対湿度 55土 15% (目標値)，換気約 12回/時(オールフレッシュエアー供給)，照明 12時 間 /日 ρ00‑19:00) に自動調節した飼育室 (RM飼育室 2124)を使用した.当研究所で定めた温湿度の許容範囲は 19‑‑‑25t.35‑‑‑75%であり実測値はそれぞれ 20.
6‑‑‑

24.6t，48‑‑‑
74%であった.

動物は，滅菌済の実験動物用床敷(ベータチップ，日本チヤールス・リバー(槻)を敷いたポリカーボネート製ケージ (265WX426DX200Hm m，トキワ科学器械(掬)に，群分け前はケージあたり 5または 3匹(向性)，群分け後はケージあたり 5匹(同性)収容し，スチール製架台(トキワ科学器械(掬)上に配置して飼育した.給餌には滅菌済ステンレス製国型飼料用給餌器(トキワ科学器械(掬)を，給水には滅菌済ポリカーボネート製給水瓶 (700mL，トキワ科学器械(株:))を使用した.ケージ(含床敷)，給餌器および給水瓶は週 1回交換した.
，オリエンタル酵母工業(株:))と， 5μmのフィル
動物には，実験動物用国型飼料 (MFター漉過後，紫外線照射した水道水を自由に摂取させ飼料および飲用水は週 1回交換した.
床敷と飼料中の残留農薬等の汚染物質濃度が，当研究所で定めた基準に適合していることを確認した.また，飲用水は水道法に準拠した水質検査を定期的に実施し，分析値が基準範囲内にあることを確認している.

4.

投与
投与経路は OECD1lイドライン (No.
401，1987) に従い経口，投与回数は 1回とした.
投与前日より約 17時間絶食させたラットに，注射筒に装着した胃ゾンデを用いて強制経口投与し，投与後約 3時間は飼料を与えなかった.
予備試験として，被験物質を 500，1000および、 2000mglkgの用量で 1群雄雄各 3匹の SD系ラットに単回経口投与し，投与後 7日間観察した.その結果，いずれの用量群においても死亡例はみられなかった.このため，本試験の用量は雌雄ともに109L777

2000mglkgを最高用量とし，以下公比 2で 1000および 500mglkgの 3用量を設定した.この他に媒体のみを投与する対照群を設けた.投与液量は 20mL/kgとし，投与直前の体重に基づいて算出した.
投与液の調製は投与 4 目前に行った.被験物質を各用量群ごとに量り，メノウ乳鉢を用いて 0.1%Tween80 添加 0.5%カルポキシメチルセルロース・ナトリウム (CMC‑Na) 水溶液(Tween80:東京化成工業(胤ロット番号 GH01;CMC‑Na:岩井化学薬品(掬，ロット番号 041210) に懸濁させ，投与に供するまで冷蔵保存した.投与前に投与液中の被4 mglmLで 12 日間， 100験物質の均一性および冷蔵保存条件下での安定性を， 0.

mglmLで 8 日間，それぞれ HPLC法により確認した.また，各用量群の投与液をHPLC法により分析し，いずれも設定濃度の土 10%以内であることを確認した(添付資料)・

J5︑
戸AUQU号
一mm

一10201‑1020550201‑
50205J

10301‑1030550301‑50305JFhJ

10401‑
1040550401‑
50405d6.

24E 1iti

J2000mglkg

JJ

1000mglkg

︑戸︑戸戸雄︑
雌園雄 雌︑戸雌 ︑︑戸雄500mglkg

41i

雄5雌54庄法一動物数(匹)4H一ハリハ U

群名omglkg

物
一mm

5. 群 構 成 :

観察・測定項目
次の項目を検査した.なお，日の表記は投与日を第 1日とした.

6.
1 一般状態投与日は投与後 30分， ，
1 3および 6 時間の 4回，以後は 1日 1回 1
4日間にわたって各動物の生死および一般状態を観察した.

6.
2 体重
全動物について投与直前，第 4，8および 15日に上皿電子天秤 (EB・3200S，t株)
島津製作所)を用いて測定した.

119L
7776.
3

病理学的検査観察終了後(第 15日)に生存動物をチオペンタール・ナトリウム(ラボナール，田辺製薬鮒)の腹腔内投与による麻酔下で腹大動脈を切断・放血し，安楽死させた後剖検した.なお，肉眼的異常部位は 10%中性リン酸緩衝ホルマリン液に保存した.

7. 半数致死量 (LDso値)の算出
LDso値)の算出は行わなかった.
死亡例がみられなかったことから，半数致死量 (129L777

結果および考察1. 一般状態 (Table1，
Appendix1)
被験物質と同様の色調を呈する赤色便が，被験物質投与群の雌雄で投与後 6時間から第 3 日の聞にみられ，第 2 日には雌雄全例で認められた.また，この赤色便に由来す る と 思 わ れ る 被 毛 の 着 色 が 第 2日から 4日の間に被験物質投与群の雌雄でみられた.しかし，毒性変化と考えられるような一般状態の変化はいずれの群においても認められなかった.

2. 体重 (Figure1，
Table2，
Appendix2)
雌雄ともいずれの群においても対照群と同様の推移を示した.

3. 剖検所見 (Table3，
Appendix3)
胸腔の横隔膜ヘルニアが 1000 mg!
kg群の雌 1例に認められた.このヘルニアは肝臓の尾状突起部分が胸腔内へ結節状に突出したもので，その一部は胸壁と癒着していた.本変化は 1例のみの発現で用量に関係ないことから，偶発所見と判断した.その他に異常はみられなかった.

4. 半数致死量 (LDso{i直)雌雄ともいずれの被験物質投与群においても死亡例はみられず，半数致死量 (LD50値)は雌雄とも 2000mg!
kg以上と推定した.

5.考察C.I.ピグメントレッド 22を雌雄のラットに 0，500，1000および 2000mg
lkgの用量で 1回経口投与した.その結果，被験物質投与に起因する毒性変化は認められず，雌雄とも死亡例はみられなかった.このことから C.I.ピグメントレッド 22の半数致死量 (LDso値)は，雌雄ともに 2000mg
lkg以上と推定した.

13

9L777

図および群別表
Figur
e1体重・・・

Tabl
e1 一般状態..
.
...
.
.
..
.
..
..
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
..
.
.
...
.
.3
Table
2 体重・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・@・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 5Table
3 剖検所見..
.
.
.
.
.
.
.
.
.・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・........................ 7
5

一一一一一一•一一一一一一一一Study No. 9L777

Figure 1‑1 MeanBodyWe
ight

司

Male

300

250200(凶)
+J.
.
c.~
150
ω

﹄
門官︒
∞三宮

100omg/kg
500mg/kg‑‑*‑1000mg/kg
2000mg/kg

一←‑合一‑
・‑50。
48Day

15

Study No. 9L777

Figur
e 1‑2 MeanBo
dyW
ei
ght

Fe
mal
e

250

200，.
、

d 150
・

4 d.
.
cb.
O

ω
ヨE〉、

~ 100
コロ

一・
‑ 0mg/kg

500mg/kg‑‑*‑
1000mg/kg
2000mg/kg

一合一50‑・‑。
48Day

152L777Stu
dyNo. 9Clinical Sign ‑SummaryTable 1‑ 1Test Substance :PR22Test SubstanceFindings
00se(mg/kg)。 NNoumbAebrnoromfalAniitymals
500

1000

2000

Number of Animals
No AbnormalityColoring offur
Reddish s
tool
Number of Animals
No AbnormaIityColoring offur
Reddish s
tool
Number of Animals
No AbnormalityColoring offur
Reddish s
tool+ Present
1MaIeOayTime 30m 1h 3h 6h555527484 1
510 1
1 1
2 1
3 1

55555555555 5 5 555 5。
45。。。。。。。。
。。。
+ 。。。。
。。。。。。。。。。。。。
+ 。。 45 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5。 。。。。。。。。。
5 555 5 5
5 5 55 5。。。。
。。。
++ 。。。4 5 2 。。。。。。。。。。。。
5 55 5 555 5 5 5 5 5 5 5。
5 5 54 5 5 5 5 5 5 5 5 55。。
。。。。。。。。。
+ 。。。。
+ 。。。4 5 4 。。。。。。。。。。。。
5555

Study No. 9L777

Clinical Sign ‑ Summary
Table 1 ‑ 2Test Substance : PR22
Test SubstanceFindings
Dose(mg/kg)

。
500

1000

2000+，

Number of Animals
No AbnormaIity
Number of Animals
No AbnormaIityColoring of fur
Reddish stool
Number of Animals
No Abnormality
Reddish stool
Number of Animals
No AbnormalityColoring of fur
Reddish stool

Female4DayTime 30m 1h 3h 6h555555589 10111213 141555555555555。 。。。。。。。。。。。。
。。。。
+。。。。。。。。。。。。
+ 。。。
。 。。。。。。。。。。。。
。。。
+。 。。。。。。。。。。。。
。。。。
+。。。。。。。。。。。。
+ 。。。
555553555555555555555555555555555555555555555555555555555555555455555555555523555535Present453

Body Weight ‑ SummaryTable 2 1PR22
Test SubstanceStudy No. 9L777
Unit : g

四Day

Male
4

815Dose(mg/kg)

。

Mean
S.D.
n

1
23.4
2.9
5

1
62.6
4.5
5204.4
6.0
5

2
67.4
15.3

500

Mean
S.D.
n

1
22.2
2.5

1
63.2
2.0
5

2
0
5.0
2.4
52
66.8
3.2
51000

Mean
S.D.
n

1
21.0
3.5
5

1
59.8
6.3

2
00.0
9.3
52
60.0
12.1
52000

Mean
S.D.
n

1
21.8
2.4
5.8
1613.75205.28.0
5269.6
15.7
55

Body Weight ‑ Summary
Table 2 ‑ 2PR22
Test Substance

154DayStudy No. 9L777
Unit : gFemale

Dose(mg/kg)

。

Mean
S.D.
n

1
14.4
2.9
5

1
4
7.8
2.8
5

1
67.4
4.5

1
98.2
5.7
5500

Mean
S.D.
n

1
14.2
3.3
5

1
4
6.0
4.8
5

1
69.2
5.9

1
97.4
6.4

1000

Mean
S.D.
n

1
16.6
4.4
5

1
47.4
3.8
5

1
7O.04.9
5201.8
6.9

2000

MeanS.D.
n

1
15.0
6.6
5

146.6
5.4
5169.8
10.2
5

198.4
9.7
56

Necropsy Findings ‑Summar
yT
able3
TestSubst
ance :PR
22Or
gan
Findings
NoabnormaIityT
hor
acicc
av
it
y
Diaphragmatic herniaSex
Dose(mg/kg)
Nu
mberofAnimals

StudyNo. 9L777

Scheduled Sacrifice(Day15)。 500 Mal1e000 2000

。 500Fema1l0e00 20005555。 。 。 。

75。 。

54。