138 モダンメディア

51巻６号 2005〔医学検査のあゆみ − ２〕

医学検査のあゆみ ─ 2Paul-Bunnell 反応
名古屋大学大学院 医学系研究科小児科学

木村宏

し，最後に 2,500 回転５分間遠心したものをもとはじめにに 0.5％赤血球浮遊生理食塩液を作製する。
⑵

Paul-Bunnell 反応は Epstein-Barr（EB）ウイルス

患者より採血後，血清を分離し，56℃，30 分間加温して補体を不活性化する。の初感染である伝染性単核球症の古典的な診断方法⑶

小試験管を用いて７倍から 1,792 倍の被検血清であり，標準的な教科書・医学書にも記載が多い。

希釈系列を作り，0.5％ヒツジ赤血球浮遊生理食しかし近年，EB ウイルス特異的抗体診断方法の普塩液を加える。

及や核酸診断法の進歩もあいまって，Paul-Bunnell⑷

振盪混和後 10 〜 20℃に一晩放置し，赤血球凝反応が日常の臨床に用いられることは少なくなって集反応の有無を観察する。凝集を示す最高希釈倍きている。本稿では同法の歴史的背景，原理と手数をもって凝集素価とする。

技，問題点等につき概説する。また，Paul-Bunnell

Ⅲ．検査値の解釈反応に置き換わりつつある新しい検査法についても述べる。

正常者では 112 倍以下であり，224 倍以上は陽性

Ⅰ．Paul-Bunnell 反応の歴史と判定する。ただし，112 倍以下であっても１〜２週間の間隔をおいて，初回検査時の４倍以上の凝集EB ウイルスの初感染を受けると，患者血清中に素価上昇が認められた場合には陽性と解釈してよい３）。

一過性に出現する異種動物の赤血球を凝集させる抗体（heterophil antibody：異染性抗体）を検索するのが Paul-Bunnell 反応検査である。
1932 年，Paul と Bunnell は伝染性単核球症の患者血清中にヒツジの赤血球を凝集させる抗体が多量

Niederman らによれば白人の伝染性単核球症でヒツジ赤血球を用いた場合の Paul-Bunnell 反応陽性率は，発病第１週が 38％，第２週が 60％であり，第３週以降は 80％の陽性率であったという４）。に出現していることを見出した１）。その後，この抗ヒツジ赤血球を凝集させる異染性抗体は，伝染性体はヒツジ赤血球のみならず，ウマ，ウシ，および単核球症以外の免疫や正常人の血清中でも認められヤギの赤血球も凝集させることが判明した。この抗る。これら種々の異染性抗体の鑑別には，1937 年

体は，赤血球を凝集させることから赤血球凝集素とに Davidsohn が報告したモルモット腎煮沸抽出液呼ばれ，この凝集素価検査が伝染性単核球症の診断とウシ赤血球煮沸抽出液を用いた患者血清の吸収試に利用されるようになった。

験が行われる５）。
Paul-Bunnell 反応により異染性抗体が陽性で，しⅡ．検査方法

かも Davidsohn 吸収試験によって患者血清中のヒツジ赤血球凝集素が Paul-Bunnell 特異的であること

ヒツジの赤血球を用いた熊谷の変法により凝集素価を測定する⑴

２，３）。以下にその概略を示す。

が確認されれば，その患者が伝染性単核球症である確率は極めて高い。

市販のヒツジ赤血球を生理食塩水でよく洗浄（ 10 ）

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持続する。これら EB ウイルス関連抗原に対する抗Ⅳ．Paul-Bunnell 反応の問題点

体反応の組み合わせにより，EB ウイルス初感染・既感染の診断が行われる。VCA-IgM 抗体陽性の場

本法は簡便に行い得ること，特殊な機器を必要と合，初感染が強く疑われる。また，VCA-IgG 抗体しないなどの利点があり，長期にわたり伝染性単核が陽性かつ EBNA 抗体が陰性の場合にも初感染が球症の診断法として用いられてきた。

示唆される。VCA-IgG 抗体，EBNA 抗体ともに陽しかし，典型的な伝染性単核球症と考えられる症

性の場合は既感染を，ともに陰性の場合は未感染を例でも日本人の場合 Paul-Bunnell 反応が陰性に出る示す。VCA-IgG 抗体の急性期から回復期にかけてことが少なくない。このことは白人の伝染性単核球の有意な上昇も，初感染を示す指標となる。一方，症患者では，80％が Paul-Bunnell 反応陽性となるこ

EA 抗体は EB ウイルス初感染初期に認められるが，とと相反する。また，発症後早期の感染が必ずしも健常既感染者においても 20 〜 30％で陽性となる。

高くないため，急性期の診断法としては不十分であウイルス特異的抗体測定は，Paul-Bunnell 反応にることは否めない。各種抗 EB ウイルス抗体の詳細置き換わって，現在では EB ウイルス初感染診断のな検索が可能となった現在では，以前に比較して最も標準的な検査法と言える。しかし，欧米ではPaul-Bunnell 反応の臨床的意義は薄れつつある。

EB ウイルス初感染の指標とされる VCA-IgM 抗体が，わが国では必ずしも陽性にならないこと，殊にⅤ．その他の EB ウイルス感染症診断法

乳児期では定型的な抗体反応をとらないことなど血清学的診断には限界もある。
従来これらの EB ウイルス感染抗体は，VCA 抗１．EB ウイルス特異的抗体

体・EA 抗体は蛍光抗体法，EBNA 抗体は蛍光抗体

図に EB ウイルス初感染後のウイルス特異的抗体

補体法で測定されることが多かった。蛍光抗体法

反応の推移を示す。病初期には viral-capsid antigen

は，IgG，IgM などのクラス別に測定できる，定量（VCA）-IgM および IgG 抗体と early antigen（EA）性があるなどの利点がある。一方，蛍光抗体法は手抗体が出現し，次いで現れる VCA-IgG 抗体は終生技が煩雑であること，非特異的反応があること，検持続する。EB virus nuclear antigen（EBNA）抗体

査者によって結果が異なる可能性があるなどの欠点

は初感染後，１〜数カ月を経て出現し，やはり終生も あ る。 近 年， 蛍 光 抗 体 法 に 代 わ り 酵 素 抗 体 法��� �� �� ���� ����������������������������������������� ��� �� ������ ��� �� ��������������������� ��� �� ����� �� �� ���������������������

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図 EB ウイルス初感染後の抗体反応（The G: Viral oncology, Raven Press, 1980）（ 11 ）

140（EIA 法）がしばしば用いられるようになってき

一方，同法は施行可能な施設が限られること，健保た。同法は比較的簡便で感度に優れ，検査者間での採用されていないことなど，今後 EB ウイルス感染結果のばらつきが少ないという利点がある。しか症診断法として普及するには問題点も多い。

し，EIA 法は定量性に欠け，キット，検査会社が異文なる場合，値を比較できないなどの問題もある。以献上より，既往の有無をワンポイントで調べるには
EIA 法が優れているが，経時的な変化をみるには蛍

１）Paul J.R., Bunnell W.W.: Presence of heterophilic antibodies in infectious mononucleosis. Am J. Med. Sci. 183:90 -104,1932.

光抗体法が望ましいと考えられる。

２）熊谷直秀：伝染性単核球症（腺熱）の血清診断（1）．
日新医学 38: 679-684, 1951.

２．核酸診断法
近年，伝染性単核球症患者血清中に EB ウイルスDNA が存在するとの報告が相次いでいる。EB ウイ
ルスは B 細胞に潜伏感染するため，健常既感染者
でも血球中に EB ウイルス DNA が認められることは多い。しかし，通常血清中にはウイルス DNA は存在しない。このことを利用して，伝染性単核球症の急性期診断に PCR 法などの核酸診断を応用することが可能である。
われわれは，発熱などで救急外来を受診した小児のわずか２％にしか血清中 EBV-DNA が認められないこと６），一方伝染性単核球症患者血清中にはほぼ100％ EBV-DNA が検出されることを報告した７，８）。
定量的解析により，伝染性単核球症患者急性期では平均 102.4copies/ml の EBV が検出され，通常の場合，発症から約 45 日間以内には血清から消失する。
PCR 法は感度も高く，陽性診断率も極めて高い。

３）厨 信一郎：Paul-Bunnell 反応「広範囲血液，尿化学検査，免疫学的検査」．日本臨床 53; 243-245, 1995.
４）Niederman J.C.: Heterophil antibody determinationin
aseries of 166 cases of infectious mononucleosis listed according to various stages of the disease. Yale J. Biol.
Med.; 28: 629, 1956.
５）Davidsohn I.: Serologic diagnosis of infectious mononucleosis. JAMA 108: 289-295, 1951.
６）Hara S., Kimura H., Hoshino Y., Tanaka N., Nishikawa K.,Ihira M., Yoshikawa T., Morishima T.: Detection of herpesvirus DNA in the serum of immunocompetent children. Microbiol Immunol 46: 177-180, 2002.
７）Kimura H., Morita M., Yabuta Y., Kuzushima K., Kato K.,Kojima K., Matsuyama T., Morishima T.: Quantitativeanalysis of the Epstein-Barr virus load using a real-time
PCR assay. J. Clin. Microbiol. 37: 132-136, 1999.
８）Kimura H., Nishikawa K., Hoshino Y., Sofue A., Nishiyama Y., and Morishima T.: Monitoring of Cell-Free Viral
DNA in Primary Epstein-Barr virus infection. Med Microbiol Immunol 188: 197-202, 2000.

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