Instrucciones de uso

SSP disponible en EUDAMED

380236-D
Español

972000a) La ADN polimerasa de Bst obtenida a partir de Bacillus
stearothermophilus es una ADN polimerasa con actividad dedesplazamiento de la hebra que carece de actividad exonucleasa
en sentido 53.
b) Cebadores diseñados en la gyrB y la región de la SI del ADN
genómico de MTBC, purificados por HPLC a partir deoligonucleótidos sintéticos.
c) El PC MTB contiene un producto resultante de la amplificación invitro de un ADN genómico molde procedente de Mycobacterium
tuberculosis H37Rv (núm. de GenBank NC_000962).
Las abreviaturas de los siguientes reactivos, el n.º de lote y elfabricante (EKN) figuran en los envases como se muestra en la tabla:

Loopamp MTBC Detection Kit
USO PREVISTO
Loopamp MTBC Detection Kit es una prueba cualitativa dediagnóstico in vitro para detectar el ADN del complejo de Mycobacterium
tuberculosis (MTBC) extraído del esputo de pacientes con síntomas
indicativos de infección por MTBC. El kit sirve de ayuda en el
diagnóstico de la infección por MTBC y está destinado a ser utilizado enlaboratorios profesionales y hospitales por personal debidamente
capacitado. El resultado puede interpretarse mediante un turbidímetro
automático o visualmente bajo irradiación UV.

Reactivos
Control positivo MTBControl negativo MTB

PRINCIPIOS DE LA PRUEBA
Este producto se basa en la amplificación isotérmica mediada por
bucle (LAMP), un método de amplificación de ácidos nucleicosdesarrollado por Eiken Chemical Co., Ltd.
Estas son las características del método de LAMP: (1) solo necesita
una enzima y la reacción de amplificación se produce en condiciones
isotérmicas;1),2) (2) tiene una especificidad extremadamente alta gracias
al uso de cuatro cebadores que reconocen seis regiones distintas en laregión de interés; (3) tiene una alta eficiencia de amplificación y puede
producir una alta concentración de producto amplificado en poco tiempo,
lo que hace posible la detección visual o automatizada.3),4)
Los cebadores proporcionados con este producto están diseñados enla subunidad B de la ADN girasa (gyrB) y la región de la secuencia deinserción (SI) IS6110 del ADN genómico del MTBC, que se haconfirmado mediante análisis de la alineación de las secuencias debases seleccionadas del MTBC y micobacterias no tuberculosas quetienen una secuencia de bases bien conservada en el MTBC.
El ADN del esputo no tratado o tratado con NALC-NaOH se extrae
con el Loopamp PURE DNA Extraction Kit (vendido por separado). A
continuación, la solución de ADN se dispensa en un tubo de reacción.
La ADN polimerasa con actividad de desplazamiento de la hebra, losdesoxinucleótidos trifosfatos (dATP, dCTP, dGTP y dTTP), la calceína,
los tampones de reacción y los cebadores específicos para MTBC seconservan en seco en la tapa del tubo de reacción. Este reactivo LAMP
seco (reactivo de detección de MTBC (dMTB)) se disuelve al añadir lasolución de ADN. A continuación, el tubo de reacción se incuba a 67 °C
y el ADN se amplifica mediante catálisis por la ADN polimerasa con
actividad de desplazamiento de la hebra en la reacción de LAMP.
La detección de los productos amplificados se hace mediante
determinación de la turbidez producida por un subproducto, el
pirofosfato de magnesio (precipitado de color blanco).3) Comoalternativa, en lugar de mediante determinación de la turbidez, ladetección se puede hacer a simple vista con radiación UV. Antes de lareacción, la calceína en el reactivo se encuentra en estado apagado
debido a los iones de manganeso unidos a ella; sin embargo, una vez
iniciada la reacción LAMP, se generan iones de pirofosfato que se unena los iones de manganeso y la calceína se vuelve fluorescente.4)

Etiquetado en el tubo
PC MTB
N.º de lote, EKN
NC MTB
N.º de lote, EKN

Cód. en la tapa
PC
MTB
NC
MTB

*Información de trazabilidad metrológica
El control positivo procede del producto de la amplificación de un ADN
genómico procedente de Mycobacterium tuberculosis H37Rv (núm. de
GenBank NC_000962). La región específica de Mycobacterium
tuberculosis H37Rv, que es la región de interés, sirve como molde parala amplificación del fragmento de ADN de PC MTB. Este fragmento se
cuantifica con un análisis fotoespectrométrico, y su concentración de
ADN de PC MTB se ajusta a 1000 copias/μL.

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES(1) Únicamente para uso diagnóstico in vitro.
(2) Este producto está diseñado únicamente para el diagnósticoclínico de MTBC a partir de muestras de esputo de origen humano.
No utilizar para otros fines.
(3) Siga siempre estas instrucciones de uso al utilizar este producto.
(4) No congele los reactivos.
(5) No utilice reactivos caducados.
(6) No mezcle lotes diferentes.
(7) No reponga ningún reactivo.
(8) La calidad de los resultados obtenidos con el Loopamp MTBC
Detection Kit depende de la destreza del operador y delcumplimiento de las instrucciones del procedimiento. Las pruebas
deben ser realizadas por personal debidamente cualificado
siguiendo estrictamente las instrucciones proporcionadas.
(9) Retire solo el número necesario de tubos de reacción del embalajeantes de utilizarlos y vuelva a sellar la bolsa de aluminio
inmediatamente.
(10) No retire el desecante de la bolsa de aluminio. Un exceso de
humedad puede deteriorar el reactivo seco de LAMP en los tubos
de reacción.
(11) La exposición al calor, la humedad y la luz podría deteriorar eldMTB. Por lo tanto, retire solo el número necesario de tubos dereacción (total de muestras y controles) y vuelva a sellar la bolsa
de aluminio inmediatamente.
(12) Lea el manual de instrucciones y asegúrese de que dispone de losequipos necesarios (turbidímetro o incubadora) antes decomenzar el procedimiento.
(13) Las muestras de esputo suponen un riesgo de infección. Tometodas las medidas preventivas necesarias para evitar el riesgo
biológico.5)(14) El PC MTB y el NC MTB contienen una pequeña cantidad de azida
sódica que actúa como conservante. La azida sódica está
clasificada como tóxica, por lo que debe evitar todo contacto con
los ojos, la boca o la piel.
(15) En caso de contacto accidental de cualquiera de los reactivos con
los ojos, la boca o la piel, enjuague inmediatamente la zona
afectada con agua abundante y acuda al médico.
(16) No diluya ni añada PC MTB a las muestras. En su lugar, utilice el
PC MTB solo según se detalla en este manual para evitar lacontaminación con ADN.
(17) Conserve el PC MTB y todas las muestras de esputo positivas por
separado de los demás reactivos del kit.
(18) La tapa de cada uno de los tubos de reacción contiene dMTB en
forma seca. No toque el interior de la tapa.

CONTENIDO DEL KIT
Los reactivos son estables hasta la fecha que figura en la etiqueta,
suponiendo que el envase permanezca sin abrir a una temperatura deconservación de 230 °C. Los reactivos también son estables despuésde abrir el envase si se siguen estas instrucciones de uso.
Reactivo de detección de MTBC ···················· 2 x 48 tubos
Cada uno de los tubos de reacción contiene lossiguientes reactivos en forma seca:
ADN polimerasa de Bst a)
Desoxinucleótidos trifosfato
Sulfato de magnesio
Calceína
Cloruro de manganeso
Cebadores b)
Control positivo de MTB (PC MTB) c) ················· 1 × 0,4 ml
Control negativo de MTB (NC MTB) ·················· 3 × 0,5 ml
Cuentagotas de 30 µl ························· 1 × 18 cuentagotas

11(19) Antes de utilizar los tubos de reacción, compruebe detenidamente
si presentan grietas o arañazos. Los tubos dañados podrían dar
resultados falsos y provocar la contaminación con ADN de la
incubadora y de la zona de trabajo.
(20) No exponga los tubos de reacción a la luz UV antes de la
finalización de la reacción de LAMP. La exposición prolongada ala luz UV podría dañar los tubos y dar resultados falsos.
(21) No mire directamente la luz UV cuando esta se utilice para lavaloración de la fluorescencia a simple vista. Dado que la luz UV
es perjudicial para la vista, incluso si se observa durante un breve
periodo de tiempo, puede producir irritación ocular y síntomas
similares a los de la conjuntivitis. Por lo tanto, utilice una pantalla
de cristal, gafas de seguridad o una máscara ocular con
protección UV siempre que mire directamente a la luz UV.
(22) Consulte el manual de la incubadora. Si utiliza el HumaLoop M oel turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A, retire
cuidadosamente los tubos de reacción de la incubadora paraevitar quemaduras.

denominará «solución de control negativo») siguiendo las
instrucciones.

Nota: Siempre se debe incluir un control negativo.
（3）Control positivo de MTB（PC MTB）
Golpetee o centrifugue el tubo para que el contenido se acumule
en el fondo.

Nota: El PC MTB se debe analizar siempre.

PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
Extracción de ADN
Para extraer el ADN de la muestra de esputo de 60 µl, siga las
instrucciones del Loopamp PURE DNA Extraction Kit (se vende por
separado). Dispense 60 µl de la muestra de esputo en el tubo decalentamiento y colóquelo en el HumaHeat o en el termobloqueprecalentado a 90 °C. Utilice el esputo más purulento posible.
Mezcla de reactivos y muestras(1) Encienda el HumaLoop M o el turbidímetro en tiempo real
HumaTurb C+A.
(2) Dispense 30 µl de la solución de la muestra en un tubo de reacción
utilizando el Loopamp PURE DNA Extraction Kit y cierre la tapa.

ELIMINACIÓN DE DESECHOS(1) No abra los tubos después de la amplificación del ADN. Deje latapa cerrada y deseche los tubos usados con los residuos
biológicos para su incineración o deséchelos mediante embolsado
doble con bolsas de plástico sellables.
(2) Nunca esterilice en autoclave los tubos de reacción ni los reutilice,
de lo contrario, los productos amplificados se dispersaránproduciendo contaminación.
(3) El material principal de los tubos de reacción y los tubos dereactivos es el PP; de la bandeja de los tubos de reacción, el PET;de la bolsa de aluminio, el aluminio; y del estuche del kit, el papel.
(4) Deseche todos los demás reactivos, el envase o el material delaboratorio usados de acuerdo con la normativa local.

Nota: El volumen entre las dos líneas del tubo de reacción
corresponde a aproximadamente 30 µl.
(3) Dispense 30 µl de solución de control negativo en un tubo dereacción utilizando el Loopamp PURE DNA Extraction Kit ycierre la tapa.

Nota: El volumen entre las dos líneas del tubo de reacción
corresponde a aproximadamente 30 µl.
(4) Dispense 30 µl de PC MTB en un tubo de reacción utilizando elcuentagotas suministrado y cierre la tapa.
(5) Golpetee o centrifugue todos los tubos para que la solución seacumule en el fondo.

Nota: Asegúrese de que el nivel de líquido se encuentra entre
las dos líneas del tubo de reacción para garantizar que se
pipetean 30 µl.

RECOGIDA DE MUESTRAS(1) Utilice la parte más purulenta de la muestra de esputo.
(2) Las muestras de esputo se deben utilizar inmediatamente
después de su recogida.
(3) La recogida de muestras de esputo se ha de hacer en una salaindependiente de la sala de amplificación por LAMP. Durante larecogida de muestras de esputo se pueden generar aerosoles que
contienen ADN de MTBC, lo que podría provocar contaminación.

(6) Reconstituya los reactivos secos en la tapa invirtiendo los tubos
de reacción y recogiendo la solución de ADN en la tapa. Deje lostubos boca abajo durante 2 minutos para reconstituir los reactivos
secos.
(7) Invierta los tubos de reacción cinco veces para mezclar elcontenido. Asegúrese de que los reactivos secos en la tapa estáncompletamente disueltos.
(8) Golpetee o centrifugue todos los tubos para que la solución seacumule en el fondo.

MATERIALES REQUERIDOS, PERO NO INCLUIDOS
・ Loopamp PURE DNA Extraction Kit
・ Pipette-60 Set
Para la detección de fluorescencia a simple vista(Para HumaLoop T)
・ HumaLoop T

Amplificación
Para la detección de fluorescencia a simple vista（Para HumaLoop T）(1) Compruebe que la temperatura en el HumaLoop T es de 67,0 °C.
(2) Coloque los tubos de reacción en el HumaLoop T y pulse el botón
verde para iniciar la reacción de LAMP (40 minutos a 67,0 °C).
Consulte el manual de instrucciones del HumaLoop T paraobtener información sobre el funcionamiento de la incubadora.
(3) Confirme la finalización de la inactivación de la polimerasa(completada automáticamente por el HumaLoop T). Retire todos
los tubos de reacción del HumaLoop T.
（Para otra incubadora con luz UV）(1) Fije la temperatura de la incubadora a 67,0 °C (con la temperaturadel capó caliente fijada a 10 °C por encima de la temperatura dereacción o lo más cerca posible de esta cifra; exactitud de latemperatura: 0,5 °C).
(2) Coloque los tubos de reacción y, a continuación, inicie la reacciónde amplificación (durante 40 minutos a 67,0 °C).
(3) Después de 40 minutos, inactive la polimerasa utilizando el
HumaHeat o el termobloque (durante 5 minutos a 80 °C o durante
2 minutos a 95 °C) para parar la reacción.

(Para otra incubadora con luz UV)・ Incubadora (precisión de la temperatura: 0,5 °C; con cubierta
caliente)・ HumaHeat u otro termobloque・ Luz UV o luz LED azul (longitud de onda: 240-260 nm y350-370 nm)
・ Gafas de seguridad o máscara ocular con protección UV(opcional)
Para la detección de la turbidez en tiempo real・ HumaTurb C+A・ HumaHeat u otro termobloquePara la mezcla de reactivos y muestras
・ Centrífuga para microtubos (opcional)
・ Centrífuga para ocho tubos conectados (opcional)・ HuMax ITA, microcentrífuga (opcional)

PREPARACIÓN DE REACTIVOS（1）Reactivo de detección de MTBC
Retire el número necesario de tubos de la bolsa de aluminio ycolóquelos en la gradilla (total de muestras y controles).

Para la detección de la turbidez en tiempo real con HumaTurb C+A(véase el diagrama de flujo del procedimiento)(1) Configure el turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A para la
detección con este producto.
(2) Compruebe si la temperatura mostrada en la pantalla alcanza los
67,0 °C (deje que el turbidímetro se caliente durante 20 minutos
antes de utilizarlo).
(3) Coloque los tubos de reacción e inicie el análisis.
(4) Observe la pantalla del turbidímetro para comprobar si loscontroles positivo y negativo presentan un aumento de la turbidez.

Nota: una vez retirados los tubos necesarios, vuelva a sellar
inmediatamente la bolsa de aluminio con los tubos que no hayautilizado.
（2）Control negativo MTB（NC MTB）
Golpetee o centrifugue el tubo para que el contenido se acumule
en el fondo. Pipetee 60 µl de NC MTB en el tubo de calentamiento
suministrado en el LoopampPURE DNA Extraction Kit. Realice eltratamiento del NC MTB (en adelante, el NC MTB extraído se12Si la turbidez aumenta en el control positivo, pero no en el control
negativo, la reacción de amplificación está teniendo lugar
correctamente (Fig. 1). Si no es así, la reacción de amplificación
podría estar teniendo lugar de manera incorrecta. En ese caso,
vuelva a analizar las muestras afectadas.
(5) Confirme la finalización de la inactivación de la polimerasa(completada automáticamente por el turbidímetro). Retire todos
los tubos de reacción del turbidímetro en tiempo real
HumaTurb C+A y deséchelos sin abrirlos.

(12) Golpetee o centrifugue el tubo de PC MTB antes de utilizarlo paraque el contenido se acumule en el fondo. Cierre el tubo
inmediatamente después de dispensar el PC MTB.
(13) Cuando se utiliza el HumaLoop T o el turbidímetro en tiempo real
HumaTurb C+A, la inactivación de la polimerasa se realiza
automáticamente.
(14) Para otras incubadoras, cuando se seleccione como criterio la
fluorescencia a simple vista, inactive la polimerasa (durante
5 minutos a 80 °C o durante 2 minutos a 95 °C) antes de hacer lalectura, o de lo contrario se generarán resultados falsos.
(15) Para otras incubadoras, cuando la detección se hace por luz UV,
no la mire directamente. En su lugar, utilice una pantalla de cristal,gafas de seguridad o una máscara ocular con protección UV
siempre que mire directamente a la luz UV.
(16) Nunca abra los tubos de reacción una vez iniciada la reacción de
LAMP o después de terminada. Tenga cuidado al retirar los tubos
de reacción de la incubadora para no abrirlos accidentalmente.
(17) No reutilice ningún producto amplificado en los tubos paraelectroforesis u otras aplicaciones.

Gráfico de amplificación
Muestra negativa
Muestra positiva 1
Muestra positiva 2

0,7

0,7

0,6

0,6

0,5

0,5

Turbidez

Turbidez

Control negativo
Control positivo

0,4
0,3

0,4
0,3

0,2

0,2

0,1

0,1

0

0
0

0

5 10 15 20 25 30 35 40

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

5 10 15 20 25 30 35 40

Tiempo (min)Fig. 1: Gráficas de amplificación
correspondientes a los controles.

Detección de fluorescencia a simple vista(Para HumaLoop T)
Coloque cada uno de los tubos de reacción en la unidad dedetección de fluorescencia, y a continuación irradie y observe el tubo
desde un lado.
(Para otra incubadora con luz UV)
Irradie el fondo de cada uno de los tubos de reacción y observe
desde un lado a través de gafas de seguridad o de una máscaraocular con protección UV.
Para que la tanda analítica sea válida, se deben obtener lossiguientes resultados: Control positivo: se emite luz fluorescente verde Control negativo: no se emite luz fluorescente
Si algún control es inválido, todas las muestras de la serie analítica
deben reportarse como inválidas y la prueba debe repetirse.
Una vez se haya confirmado que la serie analítica es válida, evalúe
las muestras de la siguiente manera:
 Muestra positiva: se emite luz fluorescente verde.
 Muestra negativa: no se emite luz fluorescente.
Detección de la turbidez en tiempo real con el HumaTurb C+A
Una vez se haya confirmado que la turbidez aumenta en el control
positivo, pero no en el control negativo, evalúe las muestras
atendiendo a los siguientes criterios (Figs. 1 y 2).
 Positivo: se observa un cierto aumento de la turbidez.
 Negativo: no se observa un aumento de la turbidez.
Notas:(1) La sensibilidad mínima detectable de este producto es de 0,38
equivalentes genómicos por prueba. Incluso con una prueba
negativa, los pacientes con cualquier síntoma persistenteindicativo de una infección por MTBC deben hacerse otra prueba.
(2) Aunque los cebadores se han diseñado para dirigirse a una región
que contenga un número relativamente pequeño de variaciones,
es posible que el MTBC adquiera variaciones adicionales en esta
región y se vuelva menos sensible a este producto. Por lo tanto,
que una prueba haya dado negativo no siempre permite descartar
la infección por MTBC.
(3) Los resultados analíticos se pueden ver afectados por la recogida
y el transporte de las muestras, la preparación de las muestras,
los inhibidores y otros errores del procedimiento en el laboratorio.
Una prueba que haya dado negativo no permite descartar lapresencia de MTBC en la muestra. Al hacer un diagnóstico clínico,
hay que tener en cuenta el estado clínico del paciente y todos losdemás resultados analíticos disponibles.
(4) Este producto es un kit para la detección cualitativa; no estádiseñado para la determinación cuantitativa. La intensidad de laluz fluorescente observada o el tiempo de aumento de la turbidez
determinado por el turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A no
guarda relación con la concentración de ADN molde.

Tiempo (min)Fig. 2: Gráficas de amplificación
correspondientes a las muestras.

NOTAS SOBRE EL PROCEDIMIENTO(1) La reacción de LAMP es muy sensible y cualquier contaminante,
incluso con pequeñas cantidades de producto amplificado, podría
dar falsos positivos.
(2) Separe las zonas de recogida de muestras de esputo de la zonadonde se realizan las pruebas de LAMP.
(3) Antes y después de realizar la prueba, limpie las mesas de trabajo
con una solución de hipoclorito de sodio con una concentraciónde al menos un 0,5 %.
(4) Adopte las medidas necesarias para evitar la contaminación, en
particular, cámbiese los guantes después de transferir el esputo osi los guantes entran en contacto con la solución de ADN.
(5) Al manipular este producto, evite la contaminación con microbios
ynucleasas.
Inclusounapequeña
cantidaddedesoxirribonucleasa transmitida por el sudor o la saliva al tubo dereacción podría descomponer el ADN y causar un resultado falso.
(6) No utilice muestras de esputo que contengan una gran cantidad
de sangre, ya que esto puede afectar a las determinaciones.
Consulte el «Manual de Microbiología Clínica, 12ª edición»6) si
tuviera que realizar un pretratamiento de la muestra.
(7) Lo ideal es utilizar la solución de ADN inmediatamente despuésde su preparación; si no es posible, la solución de ADN se puede
conservar a temperatura ambiente y usar en un plazo de 72 horas.
(8) Al dispensar la solución en el tubo de reacción, evite el contacto
entre la tapa de inyección suministrada en el Loopamp PUREDNA Extraction Kit y la pared interior de los tubos de reacción.
Mantenga la gradilla del tubo en posición vertical y llene el tubo
hasta que el nivel de la solución de ADN esté entre las dos líneas
(30 µl). De no hacer esto correctamente (por encima de la línea
superior o por debajo de la línea inferior), la calidad de losresultados se podría ver afectada.
(9)（Para HumaLoop T o cualquier otra incubadora con luz UV）
Si hubiera burbujas, golpetee los tubos (o centrifúguelos) paraeliminarlas.
（Para el turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A）
Las burbujas en la solución de reacción interfieren con ladeterminación de la turbidez y producen resultados falsos. Evite laformación de burbujas al mezclar el reactivo y la solución
problema. Si hubiera burbujas, golpetee los tubos o centrifúguelos
para eliminarlas.
(10) El dMTB debe estar completamente disuelto. Toda porción nodisuelta podría afectar a la calidad de los resultados, por ejemplo,
causando una disminución de la sensibilidad. En particular,mantenga los tubos en posición invertida durante 2 minutos.
(11) El PC MTB contiene un elevado número de copias de ADN decontrol. Evite la contaminación de otras muestras con el PC MTB.
Dispense las muestras y la solución de control negativo y cierre
todos los tubos de reacción antes de dispensar el PC MTB.

SUSTANCIAS INTERFERENTES
Nuestros estudios internos han revelado que la determinación no seve afectada por la presencia de bilirrubina libre (91,0 mg/dl), bilirrubina
conjugada (101,0 mg/dl), quilo (turbidez de formazina: 7,300) y
hemoglobina hemolítica (2,475 mg/dl).

13

En cuanto a los fármacos, nuestros estudios internos han revelado
que la determinación no se ve afectada por la presencia de isoniazida(100 µg/ml), etambutol (20 µg/ml), rifampicina (100 µg/ml), pirazinamida(500 µg/ml), kanamicina (20 µg/ml), y estreptomicina (500 µg/ml).

producida por la sangre). Por lo tanto, consideramos que los dos
tipos de evaluaciones son idénticas. Las tablas a continuación
muestran los resultados obtenidos mediante detección de laturbidez en tiempo real. Cabe destacar que los resultados obtenidos
mediante detección de la fluorescencia a simple vista por el
HumaLoop T fueron los mismos que los obtenidos mediante elturbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A.

PARÁMETROS DE CALIDAD
1. Exactitud
En los análisis de las siguientes muestras:
 muestra
negativa(concentración:0
equivalentes
genómicos/prueba)
 muestra positiva 1 (1,875 equivalentes genómicos/prueba)
 muestra positiva 2 (125 equivalentes genómicos/prueba)
La muestra negativa debe dar negativo, mientras que lasmuestras positivas 1 y 2 deben dar positivo.
2. Reproducibilidad intraserie
Si se analizan simultáneamente cinco muestras negativas y cinco
positivas, las muestras negativas deben dar siempre negativo,
mientras que las muestras positivas deben dar siempre positivo.
3. Límite de detección
0,38 genomas equivalentes/prueba
4. Reactividad cruzada
En cuanto a las micobacterias no tuberculosas (Mycobacterium
asiaticum, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium marinum,

LAMP
Positivos
Negativos
Tasa de concordancia global
Sensibilidad diagnóstica
Especificidad diagnóstica
Valor predictivo positivo
Valor predictivo negativo
Coeficiente de probabilidad +(sensibilidad/(1-especificidad))

Esputo no tratado

PCR
Positivos
Negativos
196
7
20
95
91,5% (291/318)
90,7% (196/216)
93,1% (95/102)
96,6% (196/203)
82,6% (95/115)
13,1

Coeficiente de probabilidad ((1-sensibilidad)/especificidad)

0,0999LAMP

Mycobacterium simiae, Mycobacterium scrofulaceum, Mycobacterium
szulgai,
Mycobacterium
gordonae,
Mycobacterium
xenopi
Mycobacterium avium, Mycobacterium intracellulare, Mycobacterium
gastri, Mycobacterium haemophilum, Mycobacterium malmoense,
Mycobacterium chelonae, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium

Positivos
Negativos
Tasa de concordancia global
Sensibilidad diagnóstica
Especificidad diagnóstica
Valor predictivo positivo
Valor predictivo negativo
Coeficiente de probabilidad +(sensibilidad/(1-especificidad))
Coeficiente de probabilidad ((1-sensibilidad)/especificidad)

Esputo pretratado

flavescens) (1,0 x 104 genomas equivalentes por prueba) y bacteriasde enfermedades respiratorias (Streptococcus pneumoniae,
Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis,
Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Legionella pneumophila,
Pseudomonas aeruginosa, Mycoplasma pneumoniae (I), Mycoplasma
pneumoniae (II)) (1,0 x 105 genomas equivalentes por prueba), el

sistema de medición dio resultados negativos para todas las
especies bacterianas; no se produjo ninguna reacción cruzada.
5. Reactividad frente a MTBC
Se confirmó la reactividad frente a Mycobacterium tuberculosis,
Mycobacterium bovis y Mycobacterium africanum.
6. Información sobre un calibrador
En la evaluación de los parámetros de calidad de este producto
se utilizó el ADN plásmídico que contiene el gyrB y la región IS delADN del genoma de Mycobacterium tuberculosis H37Rv (núm. de
GenBank NC_000962) como calibrador.
7. Rendimiento clínico
Hasta la fecha, la tuberculosis sigue siendo una de las infecciones
más importantes del mundo. A nivel mundial, el número total
estimado de nuevos casos de tuberculosis es de unos 10 millones,y el de esputo con baciloscopia positiva es de unos 4,3 millones.7)
En Japón, en 2008 se registraron 24 760 nuevos pacientes
afectados por la tuberculosis, de los cuales 2216 fallecieron.8)
A fin de comprobar la eficiencia en el diagnóstico de pacientes
que podrían tener tuberculosis, este producto se examinó en dos
centros médicos designados para enfermedades infecciosas declase 2 (centros médicos designados que tenían camas exclusivas
para pacientes con tuberculosis). Junto con la PCR y TRC, ambos
ya aprobados en Japón, este kit se utilizó para analizar muestras deesputo recogidas durante 2 días (320 muestras de 160 sujetos), yse compararon los resultados obtenidos con cada kit. En particular,las pruebas realizadas con este producto incluían evaluaciones dela solución de ADN extraído de esputo no tratado (en adelante,
LAMP para esputo no tratado) y de la solución de ADN extraído deesputo pretratado con NALC-NaOH y algún otro proceso (enadelante, LAMP para esputo pretratado).
Como se muestra en las tablas siguientes, la tasa deconcordancia global fue favorable, como se indica a continuación:
LAMP para esputo no tratado frente a PCR: 91,5% (291/318
sujetos); LAMP para esputo pretratado frente a PCR: 92,1%(293/318); LAMP para esputo no tratado frente a TRC: 94,3%(230/244); LAMP para esputo pretratado frente a TRC: 93,0%(227/244) Además, las evaluaciones realizadas mediante detecciónde la turbidez en tiempo real y detección de la fluorescencia a simple
vista concordaban perfectamente, excepto para una muestra (esta
muestra era esputo sanguinolento y dio un falso negativo en ladetección de la fluorescencia a simple vista debido a la alteración

PCR
Positivos
Negativos
194
3
22
99
92,1% (293/318)
89,8% (194/216)
97,1% (99/102)
98,5% (194/197)
81,8% (99/121)
31,0
0,105

TRC
Positivos
Negativos
163
5
9
67
94,3% (230/244)
94,8% (163/172)
93,1% (67/72)
97,0% (163/168)
88,2% (67/76)

LAMP
Positivos
Esputo no
tratadoNegativos
Tasa de concordancia global
Sensibilidad diagnóstica
Especificidad diagnóstica
Valor predictivo positivo
Valor predictivo negativo
Coeficiente de probabilidad +(sensibilidad/(1-especificidad))
Coeficiente de probabilidad ((1-sensibilidad)/especificidad)

13,9
0,0451TRC
Positivos
Negativos
157
2
15
70
93,0% (227/244)
91,3% (157/172)
97,2% (70/72)
98,7% (157/159)
82,4% (70/85)

LAMP
Positivos
Esputopretratado
Negativos
Tasa de concordancia global
Sensibilidad diagnóstica
Especificidad diagnóstica
Valor predictivo positivo
Valor predictivo negativo
Coeficiente de probabilidad +(sensibilidad/(1-especificidad))
Coeficiente de probabilidad ((1-sensibilidad)/especificidad)

32,6
0,0895

INFORMACIÓN PARA PEDIDOS
Cód. del Nombre delContenido
producto producto
Loopamp MTBC
97200096 pruebas
Detection Kit
980000970000964000

14

HuMax ITA
Loopamp PUREDNA Extraction Kit
Incubadora
HumaHeat

Microcentrífuga
90 pruebas
TermobloqueCód. del Nombre delproducto producto

Contenido

971000

1 pipeta, 4 x 96 puntas

961000963200

Pipette-60 Set
HumaLoop T
HumaTurb C+A

1 unidad principal
1 unidad de detección
fluorescencia
1 unidad de control
1 unidad de amplificación

TABLA DE SÍMBOLOS
Número decatálogo
Dispositivo médico
para diagnóstico in
vitro

de

Código del lote

Consulte las
instrucciones de uso

Fecha de caducidad

Fabricante

Límite de temperatura

Contenido suficientepara <n> pruebas

Representante
autorizado en la
Comunidad Europea

AVISO
En caso de producirse cualquier incidente grave relacionado con el
producto, notifique al representante autorizado, al fabricante y a laautoridad competente del Estado miembro en el que esté establecido elusuario y/o el paciente.

REFERENCIAS
1) Notomi T., et al.: Nucleic Acids Research 28, No. 12, e63 (2000)
2) Nagamine K., et al.: Clin. Chem. 47, No. 9, 1742–1743 (2001)
3) Mori Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 289, No. 1, 150–
154 (2001)
4) Tomita N., et al.: Nat. Protoc. 3, No. 5, 877–882 (2008)
5) The guideline for the bio-safety and bio-hazard (by the JapaneseSociety for Bacteriology): Japanese Journal of Bacteriology 54, No.
3, 667–715 (1999)
6) Isabella MGaby EP and Nicole P., et al.: Manual of ClinicalMicrobiology, 12th edition, ASM PRESS, 558–575 (2019)
7) WHO global TB database:https://www.who.int/teams/global-tuberculosis-programme/data
https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/336069/9789240
013131-eng.pdf
8) Kekkaku No Tokei 2009 (Statistics of TB 2009): Japan AntiTuberculosis Association

Diagrama de flujo
Procedimiento para la detección de la turbidez en tiempo
real
Preparación de la solución problema y de la solución de control
Pipetee 60 µl de muestra y de NC MTB.
Con el Loopamp PURE DNA Extraction Kit,
extraiga el ADN de la muestra de esputo recogida ydel NC MTB. Las soluciones obtenidas se utilizan
como la solución problema y la solución de control
negativo, respectivamente.
Preparación de losreactivos

Retire el número necesario de tubos dereacción del dMTB.

Mezcla del reactivo yla solución problema(Para las muestras, el control
negativo y el control positivo)

Transfiera 30 µl de solución problema o solución decontrol a cada uno de los tubos de reacción.
Utilice la solución de control negativo como control
negativo.
Utilice el PC MTB como control positivo.
(El control positivo debe prepararse al final).
Invierta los tubos de reacción para recoger la solución
en la tapa. Espere 2 minutos.
Espere 2 minutos con los tubos de reacción invertidos.
Invierta los tubos de reacción cinco veces para mezclar
el contenido y, a continuación, centrifúguelos.
(Evite la formación de burbujas)
Amplificación
Coloque los tubos de reacción en el bloque de reaccióndel turbidímetro.

Importador

HUMAN Gesellschaft für Biochemica
und Diagnostica mbH
Max-Planck-Ring 21, 65205 Wiesbaden (Alemania)

Como se indica en las instrucciones de uso delturbidímetro, inicie la reacción y, a continuación,
determine y evalúe la turbidez (durante 40 minutos a
67,0 °C).
Confirme la finalización de la inactivación de la polimerasa (durante
5 minutos a 80 °C o durante 2 minutos a 95 °C). Retire todos los tubos
de reacción del turbidímetro y deséchelos sin abrirlos. Tenga cuidado
de no dañar los tubos.

https://www.eiken.co.jp/en*Fecha de revisión: 2023-10-31

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