データシート菌体カクテル（ NBRC Microbial Cell Cocktail）
製品

Cell-Mock-001

名BK1902001

ロット番号

1. 仕様

2. 検証結果（ロット番号 BK1902001）

・内容量・細胞数・保存溶媒
・保存形態
・構成

100 µl ※1×5本
9.1×108 cells/100 µl
15% glycerol in PBS (pH7.4)－80℃
本製品は、NBRCが保有する微生物株のうち、15株を使用し、それぞれの細胞数が等量となるよう混合したものです。

2-1. DNA抽出結果• ビーズ法（ISOSPIN Fecal DNA（ニッポンジーン社））を用いて同一ロット内の18サンプルからDNA抽出を実施しました。破砕はFastPrep24（MP-Bio社）を用い、6.0 m/s、60秒を3セットで行いました。
• Quant-iT™ PicoGreen™ dsDNA Assay Kit（Thermo Fisher Scientific社）を用いて抽出DNAの濃度を測定しました。
表2 BK1902001の細胞数とDNA抽出量

表1 Cell-Mock-001の作製に使用した微生物株※2の情報

DNA抽出量NBRC
番号グラム染色Bacillus subtilis subsp. subtilis

13719T陽性

ゲノムサイズ(Mbp)
4.3

Bifidobacterium pseudocatenulatum

113353陽性

2.356.4

51

Clostridium butyricum13949T

陽性

4.7

28.8

111

Corynebacterium striatum

15291T陽性3.159.1

41*

Cutibacterium acnes subsp. acnes

107605T

陽性2.560.031*

Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii

3202T

陽性

1.950.181

Staphylococcus epidermidis

100911T

陽性2.432.3

61

Streptococcus mutans

13955T陽性

2.036.951

Acinetobacter radioresistens

102413T

陰性

3.441.4

61Bacteroides uniformis

113350陰性

5.046.2

41*Enterocloster clostridioformis

113352陰性

5.748.9

51*

Comamonas terrigena

13299T

陰性

4.765.071

Escherichia coli（K-12株）

3301

陰性

4.850.771

Parabacteroides distasonis

113806陰性

5.245.071

Pseudomonas putida

14164T

陰性

6.262.371*

学名

GC含量(%)
43.3※1：容器には110 µL程度入っています。
※2：本製品に使用した微生物はNBRCにおいて品質確認されたもので、個別に購入できます。

バイオ16S rRNA
セーフティ
コピー数レベル101

理論DNA量ビーズ法※

6.1 µg2.4±0.3 µg※：記号±の数値は、DNA抽出量の実験標準偏差（n=18）を表す。

2-2. 各株の検出割合
各株においてシングルコピーの遺伝子にプライマー/プローブセットをそれぞれ設計し、QX200™ Droplet Digital™ PCRシステム（ddPCR, Bio-Rad社）を用いて2-1.で抽出したDNA中のコピー数を測定しました。本測定は、本ロットからランダムに18本抽出して行いました。
表3 ddPCRを用いた15株の検出割合
NBRC
番号

理想値
(%)

各株の検出割合(%) ※3

同一ロット内での均質性 (%)※4Bacillus subtilis subsp. subtilis

13719T

6.7

9.3±0.3

1.0

Bifidobacterium pseudocatenulatum

1133536.7

6.9±0.20.9

Clostridium butyricum13949T

6.77.5±0.3

1.4

Corynebacterium striatum

15291T

6.7

5.4±0.2

0.6

Cutibacterium acnes subsp. acnes

107605T

6.7

15.6±0.4

1.4

Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii

3202T

6.7

14.0±0.4

1.4

Staphylococcus epidermidis

100911T

6.7

4.5±0.1

0.4

Streptococcus mutans

13955T

6.7

5.2±0.2

0.7

Acinetobacter radioresistens

102413T

6.7

6.3±0.3

0.8

Bacteroides uniformis

1133506.7

3.6±0.1

0.4

Enterocloster clostridioformis

1133526.7

5.0±0.2

0.6

Comamonas terrigena

13299T

6.7

4.1±0.21.0

Escherichia coli（K-12株）

3301

6.7

3.7±0.1

0.6

Parabacteroides distasonis

1138066.7

4.4±0.20.9

Pseudomonas putida

14164T

6.74.7±0.21.0

学名※3：本値は、ddPCRを用いて測定した各株の検出割合の平均と標準偏差を表したもの。
※4：各株の均質性を、その株の検出割合（％）の最大値と最小値の差（変動幅）で示したもの。

3. 使用例

4. 取り扱いの注意事項

16S rRNA遺伝子の可変領域であるV1V2領域とV3V4領域を対象にして、MiSeqシステム（Illumina社）を用いてメタ16S解析を実施しました。
表4 16S rRNA遺伝子を対象にしたメタ16S解析
NBRC
番号

理想値(%)

BK1902001
V1V2領域 (%) ※BK1902001
V3V4領域 (%) ※Bacillus subtilis subsp. subtilis

13719T

10.5

13.6±0.513.3±0.9

Bifidobacterium pseudocatenulatum

1133535.3

4.7±0.6

5.3±0.4

Clostridium butyricum13949T

11.6

14.4±0.8

20.1±1.4

Corynebacterium striatum

15291T

4.2

3.6±0.3

3.8±0.4

Cutibacterium acnes subsp. acnes

107605T

3.2

5.1±0.3

0.3±0.1

Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii

3202T

8.4

11.4±1.1

10.9±1.1

Staphylococcus epidermidis

100911T

6.3

4.4±0.2

4.1±0.4

Streptococcus mutans

13955T

5.3

5.1±0.2

3.7±0.5

Acinetobacter radioresistens

102413T

6.3

7.6±0.4

8.0±0.5

Bacteroides uniformis

1133504.2

3.5±0.2

3.7±0.3

Enterocloster clostridioformis

1133525.3

3.3±0.3

6.4±0.5

Comamonas terrigena

13299T

7.4

7.2±0.4

4.3±0.4

Escherichia coli（K-12株）

3301

7.4

4.4±0.3

5.1±0.3

Parabacteroides distasonis

1138067.4

5.4±0.2

5.6±0.4

Pseudomonas putida

14164T

7.4

6.4±0.3

5.2±0.3

学名・別紙の、NBRC微生物カクテルの提供と使用に関する同意書（以下同意書）を必ず一読し、同意書に定める利用条件に従い本製品をご使用ください。
・利用者は、本製品をヒト（治療、診断、飲食物、その他）に直接使用しないでください。
・本製品は、生物又は生体物質であり性質が変化すること、欠陥を持つ可能性や潜在的な危険性があることを認識し、適切な設備のもと知識および技術のある方がお取り扱いください。
・本製品から、複製物の作製をしないでください。
・本製品を、有償で第三者に提供又は分与をしないでください。また、同意書の利用条件に違反しない限り、本製品を第三者にご利用いただくことができます。この場合、利用者は第三者に同意書の内容を厳守してもらい、責任は利用者にかかります。
・利用者は、本製品の利用により得られた成果を公表する場合には、NBRCから本製品の提供を受けた旨を公表データに記載し、公表後にNBRCにその情報をお知らせください。
・本製品を同意書等に基づいて、商業的に利用した場合は、実施後NBRCにその情報をお知らせください。（事前にNBRCが認めた場合は除く。）
・提供した本製品が雑菌混入などNBRCの責任による不具合の場合は、原則として発送後60日以内に連絡をいただければ、同一NBRC微生物カクテル又はそれに相当するNBRC微生物カクテルを1回に限り無償で利用者に送付いたします。
・再凍結をすると菌株が劣化します。その場合の品質の保証はいたしかねます。

理想値は16S rRNA遺伝子のコピー数の割合を表す。
※ ：記号±の数値は、各領域におけるメタ16S解析で測定した検出割合の実験標準偏差(n=18)を表す。
V1V2領域の解析に使用したプライマー：27Fmod (5’- AGRGTTTGATYMTGGCTCAG -3’),
338F (5’- TGCTGCCTCCCGTAGGAGT -3’)
( Kim SW et al., DNA Res., (2013) 20:241-253 )V3V4領域の解析に使用したプライマー：Bakt_341F (5’- CCTACGGGNGGCWGCAG -3’),
Bakt_805R (5’-GACTACHVGGGTATCTAATCC -3’)
( Herlemann DPR et al., ISME J., (2011) 5:1571-1579 )表5 メタ16S解析結果

お問い合せ先独立行政法人 製品評価技術基盤機構（NITE）
バイオテクノロジーセンター（NBRC）生物資源利用促進課（NBRC微生物カクテル担当）〒292-0818 千葉県木更津市かずさ鎌足２-５-８
TEL.0438-20-5763 FAX.0438-52-2329 ✉mock@nite.go.jp