乳成分中の骨の成長に関わる成分と軟骨内骨代謝に関する研究
明海大学協号明日産量解剖第一 教授

久米 J
I
I i
E女王

1舗 は じ め に寺再しゃのカルシウムが、カルシウム吸収め後ま患や後綴奪還絞め改善 iこ効果があ号、脅~Ji立を高言語うることは数多く事長告されている。しかし、ぎしゃの成分ゃには、カルシウム以外 i
こも脅代裁に総与する効策治安
幸子設することが明らかにされている。例えば、今季しゅの孝Li禽謀議分には、骨芽細胞を増殖・分化させた
誉総君主 (J)活性化を苦手j御する成分が平子平定することが紛らかとなっている。
り、護主f
主受章し紛の脅 i
主、軟管内管化様式によって長記録する。この婚の成長にも乳成分は深く関わっていることが考えられる。しかし、乳成分の骨足立後への作潟については、解明が進んでいない。授乳期における乳幼児の~の成長は、主として軟骨内骨代謝機式によっておこる。これまでに、我々は、大阪大学の関先般らと共同研究で、軟骨基質から軟管内骨化に関係している成分を分離してきた。そのゆに Angiogeninが火設に含まれており、血管新生とともに費支管紛胞の形成・活性化に関与することを明らかにした。
ヨド者背予もでは、事しゃのAngiog，出 inを大量に精製し、程度脅綴稔にますTる効系を競べた。
四 inを多く会主F
乳清潔
また、手奇襲是滋殺で手専られる Angiogs
J
電 (wp)ii
額分 (AngiogeninrichWP) を空言語舎郊のう77トに投与してその効薬を毅ペた。

ム方法
2‑1.牛乳からの Angiogeninの籍軍基米殺閣の牛乳401を脱脂し、 pH4.6にしてカゼインを沈殿させて除いた。そして、 80'C、 10分間加∞熱して 5，0 rpmマ 心 し て t.
r
脅を 301得た。これを濃縮して、 101にした後、淡章者総燥した。凍結乾0，(∞ωpmで遠心して上告号を得た。さらに、エタノールで最終j
農燥後、 41のイオンラど換水で溶解し 1oc

度
地主主0%となるようにして、 4 で一晩放援した。沈殿を遠心によ布緩め、 70%アルコ ‑ J
レで淡い、アルコール咲き￨告義過後j
猟車窓によ号絞り除き、 11の蒸留水で溶解したむこの綴滋分を MonoSクロマ"流し、リン護委B
uffとr(pH7ρ} で洗浄した。淡浄後、 1MのNaCIを会主f1)ン
護
費
トに流速 1m1/mine

Buffer(pH7.
0) で淡If主主義ei
務総し、 Angio草加訟を多く含む経言語}分をき尋丈:。この書量伶を 3おi
綴:持返した。さらにおpe掲鵠訟によ存分5
議後、 MonoQI
こよ存分璽した。最後に ODSO
つ義主将クロマトによ与分麗して、 Angiogeninを得た。;こ (J)潔ぷのアミノ酸霊三列 i
立、気根アミノ竣成!j草l分析善意畿で篠宮棄した。

‑18百一

2‑2. ~1誉総砲を用いた'It級以評価法

金脅絡胞は、 13B量舎のマウスの大盗塁脅から蓄電ま悲した。摘出したすきの教組織を耳立ち徐き、 M E
液中で 5分間解書目線 i
まさみを用いて豪語かく破僻した。この彼砕物をさらにチニぇ…ブミキサーで30秒
罪言語
ましく後衿し、 4分間総撃をすることにより大きな破砕物を除いた。生細胞主主 i
立、鹿球計測量芸で測定し、李総苦きと骨芽細胞は、それぞれtart
掛 か 路sist
削 t隣国oh翻 se(TRAP) とalkalinephoso註at
出 e(ALP)
破fの染色を行うことにより識別した。塁走存の破常総5きによる骨吸収総伎は、 3xlO'僚の細胞を含んだ 5%FBSを織った200μIの α会館五遣を 96穴ブ。レートゅの議長玉手兵上;こ播毒患し、 2雲寺間培養した後、試C
ト3M1，25(OH)2D3を添加することにより行った。主査雪量終了後.
96/
ミプレー
穀物j1{を添加した培地に 1

ト中でおandyEngi恥{吉回総工) f
こブラシを号車絞することによって綴絡を取り除き acidl
滞 在latoxylin(Si墨田a) で 3分際染色した。絞殺意義胞によって形成された pJtの総菱重機 i
土、画像処王室塁走後 (PIASLA555) を用いて計測した。

2…3. 勤務3経験
3遊詩告のSprag
関 心awley
系雌ラットを 1週間予告憲章第資した後、 1孝喜 31
1!
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ず
つ Z苦手に分けた。飼育
2時間ごとの現時サイクルの環境‑cfflt¥ 鰐科およびイオン交換水をお銭安建取させた。主導終は、;
主、 1
AIN‑76をま察本室長成として、まえ験者季に粗A
ngiogenin閥分0.1%言語総した。 4還砲の飼予約麦、麻酔下で霊園

f
守を摘出し、ホルマリンで固定した。そして、脱以後、ミクロトームマ簿切して鋭重きした。

3̲ 結 祭
3‑1.Angiogeninのや撃しからの精製

牛乳 1201から、方法でおi携したように行い、 Angiogeninを舎か綴函分として、 14.
5gを得た。さら扇分を得るために、さらに 3stepで精製して、貴重終的に約 10r喝の純話tlJ)潔いAngioに、純度IJ)議い i輔が滋inを得た。設終の Angiogenin精霊誌のクロマトチャートを Fig.
1に示した。機られた様55を気相アミI分析装置で機長訟を比較した章者主義、 Fig.
2
1ニヌますように機主主が一致した。
ノ談調主要J

3‑2. Angio
喜朗1mの費支骨細胞に女まする作用
AngiogeninIJ)長主管細胞に対する作胤を競べるために、マウスの紋惨事器磁を含む骨級協会活いて検討した。既存の破級協に対する効主義の意書条を Fig.
31
こぶした。既存の護主資細胞にたいして、 Angi‑ogenini立、 1農度依存喜告に伶吸収を促進した。組長骨綴砲の形成による作用の結身もを Fi草.
4に示した。そngiogeni
設は、濃度依存長告に'符吸収を促進の結果、絞殺主義君主の新たな河主主主とその活性においても、 Aした。
3‑3. Aぉ説。genin
粗官割分 (Angiogeninrichwp) の幼若動物への投与
Angiogeninの軟骨組織への効来を把握するために、幼若ラット;こ Angiogenin
級官駒子を投与した。
‑190…

4通話語脅から 7適量全まで飼育して、ぞのま換す舎のう誉主義成長板について観察した。その悲喜然、Fi罫.
5↓こ示したように、 AngiogeninrichWP
裁で、車士号の号李総括支j主主援が傍受されていることがわかった。さらに、その主義さを iJtlJ
定したところ、現らかに f
誉会議長主総級会ぎ羨くなっていることが残認されたやさらに、令議長記録絞♂〉是主主主事支脅層の下に手手芸まする絞殺惨事懇総会霊場金号していた。

214nmh。

醐3嗣

醐・

280n行yi、 隆 隆a・

棚日etentlon Time

Fig.1 .
Re¥ler器edphasecolumnchromatography01畠ngiogeninfr
畠ctionfrommilk.

samplelYDAKPKGRNDE・AQDDYRYIHFLγQトbO¥
lineangiogenin

AQDDYRYIHFLTQHYDAKPKGRNDE.

Fig.2 Comparisonofaminoacidsequencebetw
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10

3.3

Angiogenin(ng/ml)、

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Fig.
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Fig.5 E

260I
同本﹄ミ )EpmWCω﹂(FH240220

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Fig.6 部 ecto
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4. 考 察n

授乳織の骨は、絞殺内管化様式によって成長する。 会泥英語では軟骨モデルが主体で、出産量後急激に成長する。車交守号室露磁の士宮殖・王子{とそして秋f
守護主霊堂のまヨ灰化を最長与返して怜 l
ま長くなる。次いで、石灰1tした事id
李総笈全血後の新生と彼傍細胞によって吸収して、骨髄をつくるとともに、 2次海綿背'を造って骨へと変化する。このような令の形成によって身体を支え遂綴)IJ)起点と令る骨格が形成される。
この骨の成長}こまし成分は深く総わっていることが考えられる。授乳期における乳幼児の管の草案髭は、として鉄骨内骨代紛争霊式によっておこる。1fの軟 f
華内務'化の i
銭華患にぎL
成分がどう mlわってい A与のかを紛らかにすることは、たいへん幾重喜であると考えている。これま‑r:の我々の検討において、教令滋賀から多く見いだされたAngiogeninが殺の或長に後与することが考えられた。
開泌を務そこで学しゅの Angiogeninに没浸して、その作用を語調べることとした。まず、乳から Angiog
201から Angiog
出 inを含む粗醤分として 14.5gを?撃た。さらに、終疫の言者い爾製することとした。牛乳 1分を繰るために、さらにみ tepで精製して、主主柊語告に約 1伽19の純度の潟い Angiog
開訟を争奪た。
AngiogeninlJ)号
車f
守細胞に対する作用を綴べるために、マウスの被骨細胞を含む合細胞を煎いて検討した。この骨子価系は、;ストロー γ 縮施などの破骨叙胞以外の産自胞も含むため、より主主体 iこ近い形で認べることができる。そして、分総統設に含まれている彼骨級抱に女守する効果と新たに形成される若葉狩細胞の渓牲を分けて評録することが1iJ書きである。既存の滋脅細胞に立すして、 AngiogeninI主、 i
康度依存告さに管高託収を促進した。このことは、 Angiog
田泌が管吸収を俊滋することを示している。さらに、破J
t依存的 tこ督吸収を俊t撃した。このこ竹細胞の新たな形成とその活性においても、 Angiogeninは、議!とからも Angiog
間泌が後背細胞の談話事もすることがわかった o Angiog
開 Ihは、なぜ被f
手織胞の骨吸紋
ま骨設業義援にとって後れているとされているが、を高めるかについて興味深いことと思われる。牛乳 l
立、牛殺吸収が潟まる成分が存在することはかえって惑いことのように考えられる。この総量霊IJ)解決 l
乳の特に対する作用をみる上で譲渡である。こIJ)作用がどのように働くかを災警告の動物で確かめることとした。
Angiogeninの章夫寺雪組織への効果を抱強震寸るために、幼若ラット}こ Angiog
開閉経蕊王子安投与した。 4j駁鈴から 7滋鈴まで飼育して、その頚骨1J)1
号機成長桜について露見番号した。その結果、 Fig.
51
こ示したように、 Angiog削 linrichW P
鮮で軟努の骨ま諸島立後4震が{中長されていることがわかった。さらに、ぞのま造さを測定したところ、明らかに肴端氏疑者Zが長くなっていることが総量まされた。このことは、このAngiogenin
籾函分を淑えた群で軟骨内骨化が活性化された可能性があち、気"の形成治安主義まったと考えられる。そして、骨務総長板の主主主主軟骨胤の下に存在する被敦守誉棄揺胞が増加しておち invi加の童書糸と一致した。このことから、 Angiogeninが敦脅から脅への形成になんらかの主主主長を及ぼすことが推定苔
こ手専度動物悪童を行い、破軟食事襲君主と骨芽細主主との関係を明らかにしていきたい。
れた。次若手度以際 i
課題としては、なぜAngíog.叩mが軟骨モ多く見いだされ、議士f料金骨 1~ にどのようなメカニズムで働くか会詳しく解明する必要きがある。そして、 Angiogeni
怨がなぜ牛乳に多く存従するかである。玉県袋、194‑

終淡の喜善い Angiogeninを大量に務塁塁できたことから、まずま会めに軟骨絡胞にますする作用、管善事総主主に
嘉iogeninをえさ若/;j:;ラット iこ投与すること
対する作織について議べていきたい。そして、総攻11)通話いAnを針言語している。牛乳の菅に対する後詰告をきく鳴る j二でもさらなる検討が必要でおる。

‑195…