ISSN 1347－6920

MMRC
ANNUAL REPORT OF MEDICAL MYCOLOGYRESEARCH CENTER, CHIBA UNIVERSITY 2021
千葉大学 真菌医学研究センター

25

令和3年

報告

Content

目次Preface for Annual Report for 2021

はじめに

Organization
機構図

Project for Immune Response in Infections Diseases

感染免疫分野 米山教授 感染応答プロジェクト

Project for Cytokine Research

感染免疫分野 西城准教授 サイトカインプロジェクト

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis
感染免疫分野 後藤准教授 微生物・免疫制御プロジェクト

Project for Control of Infectious Diseases

感染免疫分野 高屋准教授 感染症制御開発プロジェクト

Candida glabrata Phenome Project

病原機能分野 知花准教授 カンジダ・グラブラータフェノームプロジェクト

Project of Clinical Investigation

臨床感染症分野 亀井教授 臨床感染症プロジェクト

Project for Infection Control and Prevention

感染症制御分野 石和田教授 感染症制御プロジェクト

Project for Systems Biology of Microorganisms

微生物資源分野 高橋准教授 微生物創生プロジェクト

Management of Unit of Microbiological Resources

4
6
8
11
13
15
22
27

微生物資源分野 矢口室長 バイオリソース管理室

29

Project for RNA Regulation
RNA 制御治療学共同研究部門 原口特任准教授 RNA 制御プロジェクト

34

Merged Project of Respiratory Pathophysiology and Pathobiology

呼吸器生体制御学研究部門 巽特任教授・呼吸器生体制御学共同研究部門
寺田特任教授 呼吸器生体制御解析プロジェクト

Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology
National BioResource Project Pathogenic Eukaryotic Microorganisms

文部科学省 ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原真核微生物」

36

41

Cooperative Research of Priority Areas with NEKKEN, Nagasaki University
Project for Morphological, Physiological and Molecular Biological Analysis of
Pathogenic Fungi and Actinomycetes Collected in Africa and Vietnam.

長崎大学熱帯医学研究拠点特定領域共同研究「熱帯地域 , 特にアフリカおよびベトナムで発生している真菌症・放射菌症の原因菌の収集と形態学的 , 生理学的 , 分子生物学的解析」プロジェクト

42

The project for prophylaxis, diagnosis, and treatment for aspergillosis and the othermycoses in aged and neonate patients
高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発
プロジェクト43

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for Sustainable
Development（SATREPS）
The establishment of a research and reference collaborative system for the
diagnoses of fungal infections including drug-resistant ones in Brazil and Japan
AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「ブラジルと日本の薬剤耐性を含む真菌感染症診断に関する研究とリファレンス協力体制強化プロジェクト」

45

Generating research infrastructure and novel technologies for anti-infective drug andvaccine discovery, AMED-CREST
Study of the molecular mechanism of persistent infection and identifying novel
privileged molecular structures for the next-generation antibacterial drug discovery

日本医療研究開発機構革新的先端研究開発支援事業 感染症創薬に向けた研究基盤の構築と新規モダリティ等の技術基盤の創出：｢ 難治性感染症制御に資する細菌持続感染機構解明と次世代型抗感染症化合物の創出 ｣48

Leading Research Promotion Program, Institute for Global Prominent Research
Advanced Research of Infection and Immunity Based on Integrative
Understanding of Host-Microbe Interactions

千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラム「 超個体 の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」

miRaX Therapeutics K.K.

49

ミラックスセラピューティクス株式会社

50

2020 Fiscal Year Cooperative Research Program Report
令和２年度 共同利用・共同研究報告

512021 Scientific Meetings & Seminars
2021年講演会

71Preface for Annual Report for 2021
Major challenges facing a super-aging society include rising numbers of immunocompromised
hosts and patients with pneumonia, particularly those with chronic obstructive pulmonary disease（COPD）. Moreover, the dramatic increase in worldwide trade, which has led to the spread ofsevere fungal infectious diseases, is being recognized as a key issue concerning the aging population.
In addition, the increased incidence of pulmonary aspergillosis in patients with COVID-19 has
become a new issue since last year. The Medical Mycology Research Center（MMRC）at Chiba
University has become increasingly important because it serves as a research organization andpromotes educational activities to raise public awareness.
Under these circumstances, MMRC serves as a hub for research on infectious diseases,
immunity, and pathogens at Chiba University, and also acts as a joint usage and research center for
topics such as infectious diseases, immunity, and information life sciences centered on pathogenic
fungi. In 2016, we were recertified by the Minister of Education, Culture, Sports, Science andTechnology, and we are actively engaged in joint usage, joint research, and educational activities
with universities, medical institutions, and companies nationwide. The MMRC group centered on
the field of clinical infectious diseases was adopted by the Japan Agency for Medical Research andDevelopment（AMED）for the Science and Technology Research Partnership for Sustainable
Development（SATREPS）, and since 2016, it has collaborated with the Faculty of Medicine ofCampinas University, Brazil. In the SATREPS project we were able to make great strides in
elucidating the mechanisms of infectious diseases caused by drug-resistant fungi in the field. In
addition, as a National BioResource Project（NBRP）of the Ministry of Education, Culture,
Sports, Science and Technology, MMRC has been engaged in activities such as cell culturecollection, preservation, genome analysis, and the distribution of pathogenic fungi andactinomycetes to researchers. In parallel with these projects, we are promoting basic, productdevelopment, and clinical research by independent research group leaders（referred to as primary
investigators, or PIs ）, as well as collaborative joint research, including young researcher
exchanges, with domestic and overseas research groups. In 2014, the clinical infectious diseaseresearch group opened an outpatient clinic at Chiba University Hospital that specializes in fungal
diseases; this was the first such clinic in Japan. In 2015, we established a BSL-3 facility specializingin highly pathogenic fungi, and in 2018 we also launched a germ-free animal facility to strengthen
our ability to respond to future research issues related to fungal infections. Incidentally, the only
BSL-3 facility on campus has been supporting SARS-CoV-2–related PCR testing by the Divisionof Laboratory Medicine, Chiba University Hospital, since the outbreak of the coronavirus
pandemic in 2020. We are also participating in the Research Institute of Disaster Medicine,which launched in 2021, and will start research and treatment of infectious diseases associated withlarge-scale disasters and pandemics such as COVID-19.
Accordingly, we envision MMRC as the leading scientific research institution in Japan devoted
to excellence in microbiology and immunology, clinical fungal infectious disease research, and theprovision of key resources for research on pathogenic fungi and actinomycetes, with the ultimate
goal of advancing the field of medical mycology and infectious diseases.
January, 2022

Chihiro Sasakawa PhD

Director of MMRC

は じ め に我が国はすでに超高齢社会に突入し , 高度医療や生活習慣病に起因した日和見感染症 ,慢性閉塞性肺疾患（COPD）をはじめとする呼吸器病における真菌・細菌感染症は増加の一途を辿り , また経済のグローバリゼーションに伴う輸入真菌症など , 真菌症をはじめとするさまざまな感染症の脅威に直面しています . さらに昨年来の COVID-19感染症患者に合併する肺アスペルギルス症も新たな課題となっています .
このような状況で , 本センターは , 千葉大学の感染症・免疫・病原体研究のハブとして , さらには病原真菌を中心とする感染症・免疫・情報生命科学を含む領域の共同利用・共同研究拠点として平成28年度に文部科学大臣より再認定を受け , 全国の大学 , 医療機
関 , 企業などと緊密に連携して , 共同利用・共同研究 , 教育活動を積極的に行っています . 本センターの臨床感染症分野を中心としたグループは , 日本医療開発機構（AMED）
による地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）に採択され , 平成28
年度からブラジル・カンピーナス大学医学部と連携し , 現地における薬剤耐性真菌による感染症の実態解明で大きな成果をあげる事が出来ました . また本センターでは , 文部科学
省のナショナルバイオリソースプロジェクト（NBRP）として , 病原真菌や放線菌の収集・保存・ゲノム解析・分与等の活動を行っています . 一方でこれらの事業と平行して , 独立
研究グループリーダーによる基盤研究 , 開発研究 , 臨床研究を推進し , さらに国内はもとより海外の研究拠点と , 若手交流を含む緊密な共同研究を推進しています . 平成26年以来 , 臨床感染症研究分野が , 附属病院において我が国初の真菌症専門外来を開設しました . また , 平成27年には高度病原真菌に特化した BSL-3施設を整備し , 平成30年には無菌動物施設を立ち上げ , 今後待ち受ける真菌感染症のあらゆる研究課題に対応すべく研究機能を強化しました . 因みに BSL-3施設は , 昨年のコロナパンデミックの発生以来 , 大学病院検査部の SARS-CoV-2の PCR 検査業務支援に活用されました . 本センターは , 令和３年度に新設された , 「災害治療学研究所」にも参画し , 大規模災害や COVID-19のようなパンデミックに随伴する感染症の研究と治療にむけた取組も始めます .
以上のように , 本センターでは , 「共同利用・共同研究拠点およびバイオリソース中核拠点」, 「感染症・免疫基盤研究」, 「感染症臨床研究」, 「若手育成」の４つを柱として , 今
後も我が国の真菌医学及び感染症研究の発展に先導的な役割を果たす所存です .
令和4年1月
千葉大学真菌医学研究センター長

笹

川

千

尋

機構図

Organization
センター長
Director

真菌症研究部門
教員会議
Faculty
Meeting
運営協議会
ScientificCouncil

Department of Mycosis Research

感染免疫分野Division of Molecular Immunology

感染応答プロジェクト
Project for Immune Response in Infectious Diseases

サイトカインプロジェクト
Project for Cytokine Research
微生物・免疫制御プロジェクト

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis

感染症制御開発プロジェクト
Project for Control of Infectious Diseases
病原機能分野Division of Molecular Biology

カンジダフェノームプロジェクト
Candida Phenome Project

臨床感染症分野
Division of Clinical Research

臨床感染症プロジェクト
Project to Link Basic Sciences and Clinical Researches
感染症制御分野

Division of Infection Control and Prevention

感染症制御プロジェクト
Project to Link Infection Control and Prevention

微生物資源分野
Division of Bio-resources

微生物創生プロジェクト
Project for Systems Biology of Microorganisms
バイオリソース管理室

Management Unit of Microbiological Resources

RNA制御治療学共同研究部門
Joint Division of RNA Therapy

RNA制御プロジェクト
Project for RNA Regulation
呼吸器生体制御学寄附研究部門
Division of Respiratory Molecular Medicine
呼吸器生体制御学共同研究部門

Division of Respiratory Molecular Medicine；Collaborative Research

呼吸器生体制御解析プロジェクト

Merged Project of Respiratory Pathophysiology and Pathobiology

Project for Immune Response in Infections Diseases
米山ＰＩ（感染応答）プロジェクト
Summary（研究概要）

The innate immune system plays an essential role in self-defense against infection of various pathogens.
We focus on antiviral innate immunity, especially molecular machinery for detecting viral RNA by retinoic
acid-inducible gene I（RIG-I）-like receptors（RLRs）and subsequent immune responses. The results
obtained from the studies will help us to establish a novel therapeutic or preventive strategy against RNA
virus-induced infectious diseases.
感染に対する生体防御は , 自然免疫と獲得免疫によって協調して行われている . 本プロジェクトでは , ウイルス感染に応答した自然免疫誘導機構に注目し , RNA センサー RIG-I-like 受容体（RLR）によるウイルス由来非自己 RNA 検知の分子機構の解明と , それによって引き起こされる免疫応答シグナ
ルの生理機能を解析することにより , ウイルス感染症に対する新たな治療戦略につながる知見を得ることを目指す .
Professor

Assistant Professor

Research Assistant Professor
Research Technician

Research Promotion Technician

教

Mitsutoshi Yoneyama
Koji Onomoto
Kazuhide Onoguchi
Yuna Aoki
Miyuki Takizawa

1. Regulation of RIG-I-like receptor-mediated signaling:

Interaction between host and viral factors.

授

助

教

特

任

助

教

技

術

職

員

技 術 補 佐 員

米山 光俊
尾野本浩司
小野口和英（-2021.5）
青木 友那
滝沢みゆき

cytokines. Recent studies have shown that RLR-mediatedsignaling is regulated by interactions with endogenous RNAs
and host proteins, such as those involved in stress responses

and posttranslational modifications. Since RLR-mediated

Onomoto K, Onoguchi K, Yoneyama M
Division of Molecular Immunology, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba, 260-8673, Japan.

Retinoic acid-inducible gene I（RIG-I ）-like receptors（RLRs）are RNA sensor molecules that play essential roles ininnate antiviral immunity. Among the three RLRs encoded

cytokine production is also involved in the regulation of

acquired immunity, the deregulation of RLR-mediatedsignaling is associated with autoimmune andautoinflammatory disorders. Moreover, RLR-mediatedsignaling might be involved in the aberrant cytokine
production observed in coronavirus disease 2019. Since thediscovery of RLRs in 2004, significant progress has beenby the human genome, RIG-I and melanoma diﬀerentiation-

made in understanding the mechanisms underlying therecruitment domains, are activated upon the detection of viralpathways. Here, we review the recent advances in theassociated gene 5 , which contain N-terminal caspase
RNAs in the cytoplasm of virus-infected cells. Activated

RLRs induce downstream signaling via their interactions withmitochondrial antiviral signaling proteins and activate theproduction of type I and III interferons and inflammatory

4

千葉大学

activation and regulation of RLR-mediated signaling

understanding of regulated RNA recognition and signal
activation by RLRs, focusing on the interactions between
various host and viral factors.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

2. Functional analysis of RNA binding proteins（RBPs）

that are responsible for induction of anti-viral innate
immunity.

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba, 260-8673, Japan.

We are interested in how the ER stress-induced response

Onomoto K, Aoki Y, Ban M, Sakai M, and Yoneyama M

communicates with RLR-mediated signaling in the virus-

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

the activation of both signaling pathways and are analyzing

Research Center, Chiba University, Chiba, 260-8673, Japan.

We demonstrated that viral infection induces RLRs toaccumulate in cytoplasmic granular-like structure, antiviral

stress granule（avSG）. We further revealed that avSG plays acritical role as a platform for initiating RIG-I-mediated type I

interferon production. We are analyzing several RBPs thatplay a role in regulating both RIG-I-mediated signal

infected cells. We have identified a novel molecule involved in

how these two signaling cascades interact to regulate antiviral
immunity.

Publications

１）Onomoto K, Onoguchi K, Yoneyama M. Regulation of

RIG-I-like receptor-mediated signaling: Interaction
between host and viral factors. Cell Mol Immunol,
18:539–555, 2021

activation and avSG formation. We are also trying to identify

２）Hayashi Y, Suzuki H, Nakajima W, Uehara I,

addition, we are analyzing molecular interaction between host

Koyanagi N, Kawaguchi Y, Onomoto K, Kato H,

novel RBPs involved in antiviral innate immune responses. In

factors and viral proteins in response to SARS-CoV- 2

infection using the BSL3 facility of MMRC.

3. Molecular interaction between anti-viral innate

immune responses and endoplasmic reticulum（ER）

Tanimura A, Himeda T, Koike S, Katsuno T, Kitajiri S,

Yoneyama M, Fujita T, Tanaka N. Virus-infection incochlear supporting cells induces audiosensory receptor

hair cell death by TRAIL-induced necroptosis. PLoS
One, 16:e026044318, 2021

stress responses.

Onoguchi K, Suzuki Y, and Yoneyama M

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

5

Project for Cytokine Research

西城ＰＩ（サイトカイン）プロジェクト
Summary（研究概要）

Cytokines play a central role in maintenance of homeostasis. Because, a disease is not caused by only one
problem of an organ, but caused by a systemic disorder, which is regulated by cytokines, it is important tostudy their functions. We aim to find new therapeutic targets for inflammatory diseases and infectious
diseases by investigating the roles of cytokines in pathogenesis.
生体は , 多種多様な細胞や組織が互いに時空的に作用することにより恒常性が維持される一つシス
テムであり , その維持においてサイトカインは中心的な役割を担っている . 多くの疾病は単に一つの臓器 , 組織の異常ではなく , 免疫系を始めとする種々のシステムの異常であることから , これらを統合するサイトカインの役割を知ることは非常に重要である . 本プロジェクトでは , 感染性疾患や炎症性疾患の病態形成におけるサイトカインの役割を解明し , 最終的に新たな治療薬の標的分子を見出すことを目的とする .
Associate Professor

Research Assistant Professor

Research Promotion Technician

准Shinobu Saijo
Fabio Seiti Yamada Yoshikawa
Junko Minakuchi

1. Dectin- 1 and Dectin- 2 in innate immunity against

fungal infection.

教

授

特 任 研 究 員
技 術 補 佐 員

西城忍
ファビオ セイチ ヤマダ ヨシカワ
水口 潤子

resulting in the activation of various genes including those

encoding pro-inflammatory cytokines. Both β-glucans andα-mannans are major cell wall components of fungi including

Shinobu Saijo and Fabio Seiti Yamada Yoshikawa

Candida albicans（C. albicans）and Pneumocystis carinii（P.

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

in protection against P. carinii by inducing reactive oxygen

Research Center, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

Dectin-1 and Dectin-2 are type II transmembrane proteinscarinii）. Recently, it was reported that Dectin-1 is important

species, whereas both Dectin-1 and Dectin-2 play importantroles in defense against C. albicans by preferentially inducing

Th17 cell diﬀerentiation. In this review, we briefly revisit theof the C-type lectin family with single carbohydrate

structures, ligands, signal transduction and functional roles ofThey are expressed mainly in dendritic cells and macrophages.

infection.

signals through its immunoreceptor tyrosine-based activation

2. TARM 1 contributes to development of arthritis byrecognition domains（CRDs）in their extracellular region.

Dectin-1 recognizes β-glucans with its CRD and transduces

motif（ITAM ）-like motif in the cytoplasmic domain,

whereas Dectin-2 recognizes α-mannans and transduces its

signal through association with the ITAM-containing Fc

Dectin- 1 and Dectin- 2 in host defense against fungal

activating dendritic cells through recognition ofcollagensreceptor γ chain. Upon ligand binding, spleen tyrosine kinase

Rikio Yabe1, 2, Soo-Hyun Chung1, Masanori A Murayama1,

domain family member 9（CARD9）–nuclear factor-κB axis,

Maruhashi 1, Akimasa Seno 1, Tomonori Kaifu 1, Shinobu

is recruited to the ITAM and activates the caspase recruitment

6

千葉大学

Sachiko Kubo1, Kenji Shimizu1, Yukiko Akahori2, Takumi

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

K, Akahori Y, Maruhashi T, Seno A, Kaifu T, Saijo S,

Saijo2＊, Yoichiro Iwakura1, 2＊＊
1

2

Iwakura Y. TARM 1 contributes to development of

Equally contributed.

Center for Animal Disease Models, Research Institute forarthritis by activating dendritic cells through recognitionof collagens. Nat Commun. 12（1）: 94. 2021

Biomedical Sciences（RIBS）, Tokyo University of Science,２）Yamaguchi K, Kanno E, Tanno H, Sasaki A, Kitai Y,

Medical Mycobiology Research Center, Chiba University,

Sato Y, Niiyama M, Goto Y, Ishii K, Imai Y, Saijo S,

Noda, Chiba, 278-0022, Japan.

Chiba, Chiba, 260-8673, Japan.

TARM1 is a member of the leukocyte immunoglobulin-likereceptor family and stimulates macrophages and neutrophils

Miura T, Takagi N, Shoji M, Kasamatsu J, Sato K,
Iwakura Y, Tachi M, Kawakami K. Distinct Roles for
Dectin-1 and Dectin-2 in Skin Wound Healing and
Neutrophilic Inflammator y Responses. J Invest
Dermatol. 141（1）: 164-176. e8. 2021

in vitro by associating with FcRγ. However, the function of３）Miyachi H, Wakabayashi S, Sugihira T, Aoyama R,

unclear. Here, we show that Tarm1 expression is elevated in

Matsue H, Nakamura Y. Keratinocyte IL-36 Receptor/

this molecule in the regulation of the immune system is

Saijo S, Koguchi-Yoshioka H, Fujimoto M, Núñez G,

the joints of rheumatoid arthritis mouse models, and the

MyD88 Signaling Mediates Malassezia-Induced IL-17-

suppressed in Tarm1-/- mice. T cell priming against type 2

1753-1765. 2021

development of collagen-induced arthritis（CIA ）is

Dependent Skin Inflammation. J Infect Dis. 223（10）:collagen is suppressed in Tarm1-/- mice and antigen-presenting４）Kitai Y, Sato K, Tanno D, Yuan X, Umeki A,

Tarm1 mouse bone marrow cells is impaired. We show that

Saijo S, Iwakura Y, Ishii K, Kawakami K. Role ofability of GM-CSF-induced dendritic cells（GM-DCs）from-/-

type 2 collagen is a functional ligand for TARM1 on GM-

Kasamatsu J, Kanno E, Tanno H, Hara H, Yamasaki S,

Dectin- 2 in the P hagoc ytosis of Cr yptococcus

DCs and promotes DC maturation. Furthermore, soluble

neoformans by Dendritic Cells. Infect Immun. 89（10）:administration of TARM1-Fc blocks the progression of CIA

５）Yamamoto H, Tomiyama C, Sato K, Kasamatsu J,

stimulating factor of dendritic cell maturation and could be a

E, Tanno H, Yamasaki S, Saijo S, Iwakura Y, Ishii K,

TARM1-Fc and TARM1-Flag inhibit DC maturation andin mice. These results indicate that TARM1 is an important

good target for the treatment of autoimmune diseases.
Publications

１）Yabe R, Chung SH, Murayama MA, Kubo S, Shimizu

千葉大学

e0033021. 2021

Takano K, Umeki A, Nakahata N, Miyasaka T, Kanno
Kawakami K. Dectin-2-mediated initiation of immune

responses caused by influenza virus hemagglutinin.
Biomed Res. 42（2）: 53-66. 2021

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

7

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis
後藤ＰＩ（微生物・免疫制御）プロジェクト
Summary（研究概要）

The gastrointestinal tract is a unique organ that is constitutively exposed by various antigens, including
dietary materials, commensal bacteria, and fungi. In order to exclude pathogens and create a symbiotic
environment for non-pathogenic microorganisms, intestinal epithelial cells（ECs）and immune cells
contribute to establishing the homeostasis of the intestinal microenvironment. Disruption of a symbiotic
relationship between host and commensals predispose to the development of pathogenic infections,inflammatory bowel diseases, and systemic disorders such as obesity and cancers. Therefore, it is importantto understand the mechanism of a symbiotic and homeostatic systems regulated by intestinal ECs andimmune cells. In this project, we aim to uncover the symbiotic system with commensal micro- andmycobiota. We further investigate the role of commensal microbes in the establishment of intestinal
homeostasis and develop novel therapeutic approaches for the treatment of diseases such as infections andcancers caused by disruption of intestinal homeostasis.
腸管は食餌性抗原や腸内細菌・真菌など多種多様な抗原に常に曝されている特殊な組織である . こ
れら無数の抗原に対処するため , 腸管では免疫細胞と上皮細胞が相互に作用しながら病原性微生物を排除し , 非病原性微生物と共存する基盤を形成することで腸管の恒常性維持に寄与している . この腸内微生物との共生関係の破綻は , 炎症性腸疾患に代表される腸疾患のみならず , 肥満や糖尿病などの全身性の疾患発症の素因となることから , 腸内微生物との共生システムや腸管免疫細胞と上皮細胞による腸管恒常性制御システムを理解することは重要な命題である . 本プロジェクトでは , 宿主と腸内細菌間の共生因子であり腸管上皮細胞が発現するαα1, 2- フコースによる腸内細菌との共生機構を明らかにし , 腸管恒常性維持システムの解明とその破綻によって引き起こされる様々な疾患 , 特に感染症や代謝疾患の治療法の開発を目的としている .
Associate Professor
Graduate student
Graduate student

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Commensal bacteria and host immune system regulate

fungal colonization in the gut

1

1

教

授

大

学

院

生

大

学

院

生

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

2

後藤
畢
白
堂前
西藪

義幸
蓓蓓
旭
清香
香織

Division of Mucosal symbiosis, International Research andDevelopment Center for Mucosal Vaccine, Institute for
Medical Science, The University of Tokyo

Akira Haku , Bei Bei Bi , Yoshiyuki Goto1

准Yoshiyuki Goto
Bei Bei Bi
Akira Haku
Sawako Domae
Kaori Nishiyabu

1, 2Tremendous numbers of microorganisms colonize in the

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andgut of their host. Several specific fungi, inc luding

Mycology Research Center, Chiba University

reported to reside in the human gut. Although commensal

Pathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical

8

千葉大学

Saccharomyces cerevisiae and Candida albicans, have been

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

bacteria modulate gut homeostasis and dysbiosis triggers

Medical Science, The University of Tokyo

inflammatory bowel diseases, it is unclear how these

α1, 2-fucosyl linkages located to terminal carbohydrate

various kinds of host diseases, including infections andcommensal fungi colonize in the gut and regulate hostmoiety expressed on intestinal epithelial cells are catalyzed bypathogenic effects in the immunocompromised host andthe symbiotic factors which mediate host–microbiota

candidiasis, one of the serious infectious diseases in thea dietary carbohydrate by various symbiotic bacteria such as

trigger invasive candidiasis. Therefore, it is important toboth in mice and humans and is predisposed to theaim to uncover the mechanism by which commensal fungi

disease. Despite the importance of intestinal and systemic

physiology. In addition, C. albicans are also known to exert

expand to the systemic compartments, called invasive
world. Importantly, colonization of C. albicans in the gut

identify how C. albicans colonize in the gut. In this study, we

colonize in the gut and affect the development of hostdiseases. We identify that commensal bacteria prevent thecolonization of C. albicans in the gastrointestinal tract offucosyltransferase 2（Fut2）. Epithelial α1, 2-fucose is one ofinteraction. For example, epithelial α1, 2-fucose is utilized as

Bacteroides. Therefore, disruption of Fut2 leads to dysbiosis

development of inflammatory diseases such as Crohn ’ shomeostasis, the molecular and cellular mechanisms of theinduction of epithelial Fut2 and subsequent α1, 2-fucosylation

remain unknown. We found that group 3 innate lymphoidm i c e. Fu r t h e r m o re, C . a l b i c a n s c o l on i z i n g i n t h ecells（ILC3）are critical inducers of intestinal epithelial Fut2transplantation, indicating the critical role of commensal

of interleukin 22 and lymphotoxin from ILC3 in a commensal

gastrointestinal tracts was excluded by fecal microbiota
bacteria in preventing infection by pathogenic fungi（Fig. 1）.

expression and fucosylation that is mediated by the production

bacteria–dependent and -independent manner, respectively

We examine the more detailed mechanism by which（Fig. 2）. In addition, IL- 10 -producing CD 4 ＋ T cells

colonization and develop novel therapeutic approaches for the（Fig. 2）. These data unveil a novel function of innate andcommensal bacteria and gut immune system regulate fungal
treatment of infectious diseases.

negatively regulate intestinal epithelial α1, 2-fucosylationacquired immune cells in creating the appropriate symbiotic

environment between commensal bacteria and the hostthrough regulating the epithelial α1, 2-fucosylation.

Fig 1. Commensal bacteria prevent the colonization of C.
albicans in the gut

2. Innate and acquired immune system regulates intestinal

epithelial α1, 2-fucosylation

Bei Bei Bi1, Yoshiyuki Goto1, 2
1Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andPathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical

2

Mycology Research Center, Chiba University

Fig 2. The inductive and regulatory mechanism of epithelial
α1, 2-fucose

Division of Mucosal symbiosis, International Research andDevelopment Center for Mucosal Vaccine, Institute for

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

9

Publications

１）Dainichi T, Kabashima K, Ivanov II, Goto Y. Editorial:

Regulation of Immunity by Non-Immune Cells. Front
Immunol. 12: 770847. 2021

10

千葉大学

２）Shimizu K, Seiki I, Goto Y, Murata T. Measurementof the Intestinal pH in Mice under Various Conditions
Re vea ls Al kal iz a tion Induce d by Antib iot ic s.
Antibiotics. 10: 180. 2021

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Project for Control of Infectious Diseases
高屋（感染症制御開発）プロジェクト
Summary（研究概要）

Excessive antibiotic exposures let bacteria be in a dormant state, in which bacteria can survive in a harshenvironment. By repeating the cycle of proliferation and dormancy, bacteria evolve to develop antimicrobial
resistance. The interaction between bacteria and host immunity also exerts a similar mechanism, leading to
the establishment of persistent or latent infections. This project aims to elucidate the molecular mechanismof bacterial dormancy by analyzing systemic diseases and persistent infection caused by facultative
intracellular bacteria, and to find novel compounds that can control the dormancy of bacteria.
細菌感染症で用いられる抗菌薬を細菌に曝露すると休眠状態となり , 過酷な環境でも生存することができる . 細菌は増殖と休眠を繰り返す間にゲノム変化を引き起こすと , 薬耐性などのゲノム変化が生じる . 更に , 感染で生じる宿主免疫との相互作用でも同様の機構が発揮され , 持続・潜伏感染となり感染症の克服を難しくする . 本プロジェクトでは , 細胞内寄生性を有する病原細菌の全身感染症発症と持続感染機構研究を通して休眠制御の分子機構を解明し , 休眠細胞を制御できる新たな化合物の探索を目的としている .

Research Promotion Technician

1. ATP-dependent Lon protease regulates awakening

from ciprofloxacin-induced persistence

Naoki Maekawa , Kengo Itadera , Junichi Ishihara , Satsuki
1

2

2

Kajiya3, Daiki Tanaka4, Tetsushi Sekiguchi4, Shuichi Shoji3,
Masami Ishibashi , Hiroki Takahashi , Akiko Takaya
1

1

准Akiko Takaya
Yuriko Nomura

Associate Professor

2

1, 2

Department of Natural Products Chemistry, Graduate
School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University,
Chiba, Japan教

授

技 術 補 佐 員

高屋 明子
野村祐理子

antibiotics, which are used for the treatment of different
infectious diseases associated with Enterobacteriaceae.

However, the wide use as well as overuse of quinolones
against diverse infections has led to the increased emergenceof quinolone-resistant bacterial strains. The emergence ofresistant bacteria is thought to be related to the antibiotic-

induced persistence. Here, we focused on how ATPdependent Lon protease regulates the ciprofloxacin-induced
persistence. After treatment with high dose of ciprofloxacin,

1% of wild-type cells were observed at 24 hours. In contrast,

only few colonies of Lon-deficient cells were detected at 3

2

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

3

Department of Nanoscience and Nanoengineering, Faculty

imaging, however, showed that the number of remained cellsJapandepletion. Lon-deficient cells treated with ciprofloxacin were

Chiba, Japanof Science and Engineering, Waseda University, Tokyo,

4

Research Organization for Nano & Life Innovation, Waseda
University, Tokyo, Japan.

Q uinolones such as ciprofloxacin are broad-spectrum

千葉大学

hours and no colonies were observed at 24 hours. Single-cell

after treatment with ciprofloxacin were not influenced by Lon-able to divide in fresh medium, but the cell shape became
significantly smaller than the strain untreated. Furthermore,

expression of lon in the lon-unexpressed cells at 24 hours after

treatment with ciprofloxacin led to detect the number of

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

11

colonies similar to the wild-type. These findings together, it isAmong them, compounds1 and 5 showed strong TRAIL-

ciprofloxacin-induced persistence rather than the formation of

already been revealed. Furthermore, dihydroxanthinin（2）,suggested that Lon protease could regulate awakening frompersisters.

2. TRAIL-resistance-overcoming activity compounds

from the leaves of Murraya exotica

Kritamorn J1, Takaya A1, 2, Hara Y1, Sadhu SK 3, Ahmed F 4,
Ishibashi M

1

1

Department of Natural Products Chemistry, Graduate
School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University,
Chiba, 260-8675, Japan

2

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

3

Pharmacy Discipline, Khulna University, Khulna,

4

Chiba 260-8673, Japan
Bangladesh

Department of Pharmacy, Faculty of Pharmacy, Universityof Dhaka, Dhaka, Bangladesh

Fractionation of the leaf extract from Murraya exotica led tothe successful isolation of 12 compounds（1 - 12）withresistance-overcoming activity, but their mechanisms have

1, 5-dicaﬀeoylquinic acid（7）, and（-）loliolide（8）, which

belong to diﬀerent phytochemical groups, were investigated

for their eﬀects on increasing apoptosis induction to overcome

TRAIL resistance using Western blot analysis. The results
demonstrated that 2, 7, and 8 promoted TRAIL-induced

apoptosis by increasing the expression of several proapoptotic

markers, including cleaved caspases －3 and －8, and suppressing
anti-apoptotic protein Bcl-2.

Publications

１）Kamo T, Kuroda K, Kondo S, Hayashi U, Fudo S,

Yoneda T, Takaya A, Nukaga M, Hoshino T.

Identification of the inhibitor y compounds formetallo- β -lactamases and structural analysis of thebinding modes. Chem Pharm Bull（Tokyo）. 69: 11791183. 2021.

２）Kritamorn J, Takaya A, Hara Y, Sadhu SK, Ahmed F,

Ishibashi M. Bioactivity-guided isolation of TRAIL-

resistance-overcoming activity compounds from theleaves of Murraya exotica. Nat Prod Commun. 2021.

TRAIL-resistance-over-coming activity. Xanthinosin（1）,３）Shoji T, Takaya A, Kusuya Y, Takahashi H, Kawashima（3 ）, 4 α , 1 1 α , 1 3 - t r i h y d r o x a n t h u m i n o l （4 ）,the role of methylation of 23S rRNA nucleotide G748

11α, 13-dihydroxanthinin（2）, 11β, 13-dihydroxanthinosin

desacetylxanthanol（5）, and lasidiol p-methoxybenzoate（6）were sesquiterpenes isolated from this plant for the first time,

H. Ribosome profiling in Streptococcus pneumoniae reveals
on ribosome stalling. J Genet Genomic Sciences. 6: 1-16.

2021

and 3 was isolated from natural sources for the first time.

12

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Candida glabrata Phenome Project

知花ＰＩ（カンジダ・グラブラータフェノーム）プロジェクト
Summary（研究概要）

Using the systematically constructed full genome mutant library in pathogenic yeast Candida glabrata, weare performing development of anti-fungal drugs, gene identification and functional analyses involved inpathogenicity.
病原性酵母カンジダ・グラブラータの全遺伝子改変株を利用し , 抗真菌薬の開発ならびに病原性に関する遺伝子の特定と機能解析を進めている .
Associate Professor

Research Technician

JSPS Research Fellow
Grand Fellow

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

准Hiroji Chibana
Azusa Takahashi
Michiyo Sato
Masashi Yamaguchi
Kaname Sasamoto
Keiko Nakano
Kazue Tsuda

技

教
術

授
職

員

特 別 研 究 員
グランドフェロー
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

知花 博治
高橋
梓
佐藤美智代
山口 正視
笹本
要
中野 恵子
津田 一恵

Rapid Freezing using Sandwich Freezing Device for Good

been used to reveal the ultrastructure of cells and tissues.

Electron Microscopy

handmade sandwich freezing device, and applications to

Ultrastructural Preservation of Biological Specimens in

Masashi Yamaguchi 1, Azusa Takahashi-Nakaguchi 1,

Katsuyuki Uematsu , Masaki Taguchi , Michiyo Sato2

2

Okamoto , Hiroji Chibana
1

1

2

1

Medical Mycology Research Center, Chiba University,
Chiba, Chiba, Japan.

studies in other laboratories have been limited. A new

sandwich freezing device has recently been fabricated and is
now commercially available. The present paper shows how to

use the sandwich freezing device for rapid freezing of
biological specimens, including bacteria, yeast, cultured cells,

isolated cells, animal and human tissues, and viruses. Also

shown is the preparation of specimens for ultrathin sectioning
after rapid freezing and procedures for freeze-substitution,

Marine Works Japan Ltd. , Yokosuka, Japan
Chemical fixation has been used for obser ving theultrastructure of cells and tissues. However, this method does

not adequately preserve the ultrastructure of cells; artifacts andextraction of cell contents are usually observed. Rapid freezing
is a better alternative for the preservation of cell structure.

Sandwich freezing of living yeast or bacteria followed byfreeze-substitution has been used for observing the exquisite

natural ultrastructure of cells. Recently, sandwich freezing ofglutaraldehyde-fixed cultured cells or human tissues has also

千葉大学

These studies have thus far been carried out with aresin embedding, trimming of blocks, cutting of ultrathin
sections, recovering of sections, staining, and covering ofgrids with support films.
Publications

１）Yamaguchi M, Takahashi-Nakaguchi A, Uematsu K,

Taguchi M, Sato-Okamoto M, Chibana H: Rapid

freezing using Sandwich Freezing Device for good
ultrastructural preservation of 4 viruses, yeast, andanimal tissues in electron microscopy. Journal of

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

13

Visualized Experiments, 2021.

Chibana H, Fialho AM, Butler G, Dague E, Teixeira

Nakaguchi A , Chibana H, Arsenio F, Miguel T: Role

human pathogen Candida glabrata: a genome-wide to２）Pedro P, Catarina C, Mónica G, Diana P, Takahashi＊of CgTpo 4 in polyamine and antimicrobial peptide

MC: From the first touch to biofilm establishment by thenanoscale view. Commun Biol. 4（1）2021.

resistance: determining virulence in Candida glabrata.

４）Xinyue C, Iwatani S, Kitamoto T, Chibana H, Kajiwara

３）Cavalheiro M, Pereira D, Formosa-Dague C, Leitão C,

influences biofilm formation of Candida glabrata.

International Journal of Molecular Sciences, 2021.

Pais P, Ndlovu E, Viana R, Pimenta AI, Santos R,

Takahashi-Nakaguchi A, Okamoto M, Ola M,

14

千葉大学

S: The lack of SNARE protein homologue Syn 8
Frontiers in Cell and Developmental Biology, 2021.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Project of Clinical Investigation

亀井ＰＩ（臨床感染症）プロジェクト
Summary（研究概要）

We have been doing basic and clinical research primarily on fungal infections while seeing patients in theSpecialty Clinic for Fungal Infections at the University Hospital. Working as the Reference Center for fungal
infections, we were designated as an Advanced Progressive Laboratory by the Japanese Society for Infectious
Diseases and Japanese Society for Clinical Microbiology and take consulting services on fungal diseases fromall over the country（ca. 400 cases in 2021）. Concerning research activities, we are investigating various
aspects of systemc mycoses with many universities, hospitals, and medical institutions such as NIID. The
main research topics are: the mechanisms and the epidemiology of antifungal resistance, the development of
their diagnostic and therapeutic methods, and the defence mechanism of infection of intractable fungal
diseases.
A collaborative study with Sao Paulo State University of Campinas, Brazil（SATREPS）, which has started
in 2016, has made the last topic as its primary target.

我が国における「真菌症リファレンスセンター」（輸入真菌症を含む）として一般施設では実施困難
な菌種同定 , MIC 測定 , 血清診断（輸入真菌症 , スエヒロタケなどを含む）, 検体からの PCR 検査などの特殊検査を受け入れるとともに , 並行して診療サポートも行なっており , 日本感染症学会 , 臨床微生物学会から先進的感染症検査が実施可能な施設として「先進的感染症検査施設」に指定されている . 2021年の全国の医療機関からの依頼件数は , COVID-19感染の大流行にもかかわらず , 400件あまりに達した . この診療サポートにより全国の医療機関によるネットワークが形成され , 菌株を含めた検体や貴重な臨床情報の収集と研究に役立つとともに , 多くの共同研究を生む母体ともなっている . 診療活動としては , 全国から寄せられる真菌症のコンサルテーションに対応する一方で , 附属病院に真菌症専門外来を設け , 全国からの患者の診療を行なうなど精力的に臨床活動を行っている . 研究面では国立感染症研究所をはじめ帯広畜産大 , 理科大 , NHO 東京病院 , 慶応大学病院 , 東海大学病院など国内のさまざまな研究機関 , 医療施設と協力して臨床・基礎研究を行っており , 難治性真菌症の感染機構や診断・治療法の開発研究を進めている . 中でも三大真菌症の一つであるアスペルギルス症については , 耐性株の疫学と耐性機構や感染機構の研究を進め , 多くの画期的な論文を発表するなど高い成果を挙げた . また , カンジダ症については主要2菌種の耐性機構 , 疫学など研究を, クリプトコッカス症についてはカドミウムに対する反応性の研究を行ない , 多くの論文を発表した . さらに , 国際連携による共同研
究も盛んに行ない , 2016年から開始したブラジル・カンピーナス大学感染症内科との SATREPS（地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム）を精力的に遂行している .
Professor

Associate Professor

Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Researcher

Grand Fellow

Katsuhiko Kamei
Akira Watanabe
Yasunori Muraosa（～ 2021.3.31）
Teppei Arai
Hazim O. Abdelgalil Kahlifa
Akio Toh-e
Hideaki Taguchi
千葉大学

真菌医学研究センター報告

教

授

准

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

特

任

助

教

研

究

員

グランドフェロー

第 25 巻

2021

亀井 克彦
渡辺
哲
村長 保憲
新居 鉄平
ハジム O. A カリファ
東江 昭夫
田口 英昭

15

Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

技

Kyoko Yarita
Rio Seki
Yukiko Tsuchiya
Yasuko Koga
Kyoko Inoue

1. Prevalence of Antifungal Resistance, Genetic Basis of

Acquired Azole and Echinocandin Resistance, andGenotyping of Candida krusei recovered from anInter national Collection. Antimicrob A gents
Chemother, in press.

Khalifa HO, Hubka V, Watanabe A, Nagi M, Miyazaki Y,
Yaguchi T, Kamei K

This study was designed to evaluate the prevalence of

antifungal resistance, genetic mechanisms associated with in

術

職

員

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

鎗田 響子
関
里亜
土屋由紀子
古賀 育子
井上 京子

since realizing that the C. krusei resistance mechanisms andtheir genotyping are crucial for guiding specific therapy andfor exploring the potential infection source.

2. Genetic Basis of Azole and Echinocandin Resistance inClinical Candida glabrata in Japan. Antimicrob Agents
Chemother 64（9）: e00783-20, 2020.

Khalifa HO, Arai T, Majima H, Watanabe A, Kamei K
Infections caused by Candida glabrata have caused

vitro induction of azole, and echinocandin resistance andworldwide concern, especially when they are associated withto fluconazole and is recovered from clinical and non-clinical

we analyzed the molecular mechanisms of azole andgenotyping of Candida krusei, which is intrinsically resistantsources from diﬀerent countries. Our results indicated that all

the isolates were susceptible or had the wild phenotype（WT）

increasing echinocandin and azole resistance. In this study,

echinocandin resistance in C. glabrata isolates obtained from

hospitalized patients in Japan from 1997 to 2019. All isolates

to azoles, amphotericin B, and only 1.27% showed non-WT

were checked phenotypically for resistance and genotypicallyto c aspofungin, none of them were c ategor iz ed as

and HS 3 of FKS 1 , and HS 1 and HS 2 of FKS 2 , and all

for flucytosine. Although 70.88% of the isolates were resistantechinocandin-resistant as all were susceptible to micafunginfor mutations in PDR1, ERG11, hot spot 1（HS1）, HS2,

isolates were genotyped by multilocus sequence typing

and no FKS 1 hotspot 1（HS 1）or HS 2 mutations were

（MLST）. Interestingly, 32.6% of the isolates were resistantresistance confirmed the rapid development of resistance atisolates showed low rates of resistance to azoles, ranging fromdetected. In vitro induction of azole and echinocandin

to caspofungin, and 4.7% were resistant to micafungin. The

low concentrations of fluconazole（4 µg/ml）, voriconazole

2.3% to 9.3%, and only 4.7% of the isolates were non-wilddifference between clinical and non-clinical isolates in the

4.7% of the isolates were identified as multidrug-resistant

FKS1 HS1 mutations were the major mechanisms responsible

novel mutations associated with azole resistance, were

Genotyping of our 79 isolates coupled with 217 other isolates

nonsynonymous mutation was identified in ERG 11 Nine（0 .06 µg/ml ）and micafungin（0 .03 µg/ml ）, with noresistance development. Overexpression of ABC1 gene andfor azole and echinocandin resistance, respectively.

type for flucytosine susceptibility. For the first time in Japan,

strains. Nonsynonymous mutations in PDR1, including two

i d e n t i f i e d i n 3 9 .5 % o f t h e i s o l a t e s , a n d a s i n g l efrom different sources and geography confirmed that theisolates from the same patient harbored nonsynonymous

human clinical material and Asia being more predominant insingle nonsynonymous mutation in HS 1 of FKS 1 MLST

isolates belong to two main subpopulations, with isolates fromcluster 1, and environmental and animals isolates and thosefrom Europe in cluster 2. Our results are of critical concern,

16

千葉大学

mutations in HS1 of FKS2, and a single isolate harbored agenotyping revealed 13 diﬀerent sequence types（STs）, with

3 new STs, and ST 7 was the most prevalent among the

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

patients（35%）and was associated with high resistance rates.

4. Azole and Echinocandin Resistance Mechanisms andthe molecular mechanisms underlying fungal resistance isBoundar y Dissemination and Animal-Human

Our results are of crucial clinical concern, since understanding
imperative for guiding specific therapy for efficient patient
treatment and promoting strategies to prevent epidemic
spread.

3. Genetic system underlying responses of Cryptococcus
neoformans to cadmium.

Curr Genet 68（1）: 125-141, 2022.

Genotyping of Candida tropicalis in Japan: Cross-

Transmission of C. tropicalis Infection. Clin Microbiol

Infect 28（2）: 302. e5-302. e8, 2022
Khalifa HO, Watanabe A, Kamei K

Objectives: To assess the prevalence and genetic basis of

antifungal resistance mechanisms as well as the genotyping of

Candida tropicalis from clinical and non-clinical sources inJapan.

Toh-e A, Ohkusu M, Ishiwada N, Watanabe A, Kamei K
Cryptococcus neoformans, basidiomycetous pathogenic yeast,

is basically an environmental fungus and, therefore,challenged by ever changing environments. In this study, we

Methods: Eighty C. tropicalis isolates, including 32 clinicalisolates recovered from 29 patients and 48 non-clinical isolates

recovered from 24 different sources（animals and theenvironment ）were evaluated. All isolates were tested

focused on how C. neoformans responds to stress caused byphenotypically for resistance to a wide range of antifungals

phenotypes of the resistance or sensitivity to cadmium, weechinocandin. Furthermore, all the isolates were genotyped

cadmium that is one of high-risk pollutants. By tracking
undertook forward and reverse genetic studies to identify

and genotypically for resistance mechanisms to azole andby multilocus sequence typing（MLST）.

genes involved in cadmium metabolism in C. neoformans. We

Results: Phenotypically, 30.2%（16/53）of the isolates weretransporter, Smf1, which is an ortholog of Nramp（naturalclinical isolates（51.7%; 15/29）and low levels（4.2%; 1/24）

found that the main route of Cd2＋ influx is through Mn2＋ ion
resistance-associated macrophage protein 1）of mouse. We

found that serotype A strains are generally more resistant tocadmium than serotype D strains and that cadmium resistanceof H99, a representative of serotype A strains, was found to

be due to a partial defect in SMF1. We found that calcium

azole-resistant, with high levels of azole resistance among
among non-clinical isolates. None of the isolates werereported as echinocandin resistant, with 60.4%（32/53）of theisolates intermediate to caspofungin. Azole resistance wasbasically attributed to high expression levels of drug efflux

transporter genes（CDR2 and CDR3）, transcription factors

channel has a subsidiary role for cadmium uptake. We also

（TAC 1 and UPC 2）and ergosterol biosynthesis pathway

pump for cadmium. We examined the eﬀects of some metals

mutations were detected in any of the isolates. MLST analysis

could exert their protective function against Cd2＋ via restoring

identification of 23 new STs. Phylogenetic analysis confirmed

showed that Pca1（P-type-ATPase）functions as an extrusion

on cadmium toxicity and suggested（i）that Ca

2＋

and Zncadmium-inhibited cellular processes and（ii）that Mg
Mn

2＋

2＋

2＋

and

could have antagonistic roles in an unknown Smf1-

independent Cd

2＋

uptake system. We proposed a model for

Cd 2＋-response of C. neoformans, which will serve as aplatform for understanding how this organism copes with thetoxic metal.

HMG gene. No FKS1 hot spot 1（HS1）or HS2 missense

revealed 36 different sequence types（STs）, with the firstthe close relationship between the clinical and non-clinicalisolates, with identifications of ST232 and ST933 among
patients and marine mammals.

Conclusion: Our results confirmed the emergence of azole

resistance in C. tropicalis in Japan. Furthermore, phylogenetic

analysis confirmed the transboundary dissemination and crosstransmission of C. tropicalis between humans and animals.

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

17

5. Genetic differences between Japan and other countries

in cyp51A polymorphisms of Aspergillus fumigatus .
Mycoses 64（11）: 1354-1365, 2021.

Majima H, Arai T, Kusuya Y, Takahashi H, Watanabe A,
Miyazaki Y, Kamei K

Background: Mutations in cyp51A gene are known as main

6. Hmg 1 mutations in Aspergillus fumigatus and theircontribution to triazole susceptibility.
Med Mycol 59（10）: 980-984, 2021.

Arai T, Umeyama T, Majima H, Inukai T, Watanabe A,
Miyazaki Y, Kamei K

Triazole-resistant Aspergillus fumigatus is a global healthmechanisms of azole resistance in Aspergillus fumigatus,

concern. In general, each triazole resistance pattern caused by（polymorphisms ）. The polymorphisms found in Europe

pattern depending on the mutation site. We evaluated thewhereas azole-susceptible strains also carry cyp51A mutations
mainly consist of two combinations of mutations, that is
combinations of five single-nucleotide polymorphisms（SNPs ）of cyp 51 A, referred to as cyp 51 A- 5 SNPs, andthe specified amino acid substitution of Cyp51A has a typicalcontribution of both Cyp51A and Hmg1 mutations to atypicaltriazole resistance in A. fumigatus. We used clinical triazoleresistant A. fumigatus strains collected in Japan andcombinations of three SNPs of cyp51A, referred to as cyp51A-

investigated the sequences of cyp51A and hmg1 genes. To

cyp51A polymorphisms between diﬀerent regions.

atypical triazole resistance, the mutant hmg1 alleles in clinical

3 SNPs. Few studies have compared the distributions of
Objectives: The aim of this study was to investigate theregional diﬀerences of cyp51A polymorphisms.

Methods: We compared the proportions of cyp 51 A

delineate the association between the hmg1 mutation andmulti-azole resistant strains were replaced with the wild-type

hmg 1 allele by CRISPR/Cas 9 system. In our study, thecombination of Cyp51A mutation and Hmg1 mutation waspolymorphisms in clinical and environmental strains isolated

shown to additively contribute to triazole resistance. We alsousing short tandem repeats（STRs ）and whole-genome

Hmg1 mutation showed a diﬀerent pattern depending on thein various countries, and analysed the strains phylogeneticallysequence（WGS）.

demonstrated that the triazole resistance conferred by themutation site, similar to the Cyp51A mutation. Our results

Results: Among the Japanese strains, 15 out of 98（15.3%）

indicate that focusing on the phenotypes of multiple genes is

had cyp51A polymorphisms. A mutation of cyp51A

mechanism of A. fumigatus.

clinical strains and 8 out of 95（8.4%）environmental strains
N248K

was

the most prevalent polymorphism in both clinical（n = 14,

14.3%）and environmental strains（n = 3, 3.2%）. Only one

environmental strain harboured cyp51A-5SNPs, which wasreported to be the most prevalent in Europe. For phylogenetic
analyses using STRs and WGS, 183 and 134 strains,essential to clarify the overall picture of the triazole resistance

7. Evaluation of Surveyor Nuclease for rapid identificationof FKS genes mutations in Candida glabrata. J InfectChemother 27（6）: 834-839, 2021.

respectively, were employed. They showed that most of the

Khalifa HO, Arai T, Majima H, Watanabe A, Kamei K

those of the strains with cyp51A-5SNPs and cyp51A-3SNPs as

Introduction: Infections with Candida glabrata have recently

strains with cyp51A

N248K

clustered in the clades diﬀerent fromwell as from those with TR34 /L98H mutations.

gained worldwide attention owing to its association with longdiﬀerences between cyp51A polymorphisms of A. fumigatus inhighlighted when the inf ection is associated with

Conclusions: This study suggests that there are genetic

Japan and Europe.

hospitalizations and high mortality rates. This problem isechinocandin resistance, which is used for first-line therapy.

Echinocandin resistance is exclusively attributed to functional

mutations in FKS genes, and especially in hot spot（HS）
regions. Unfortunately, few studies have focused on the rapid

18

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

identification of FKS mutations associated with echinocandinsynergism was among the echinocandin-resistant isolates.

and validate the use of Surveyor nuclease assay（SN）for

produced by antifungal combinations were equal to or greater

resistance in C. glabrata. This study was intended to evaluate
detection of FKS gene mutations.

Methods: SN was evaluated against three segments of FKS1

and FKS2 genes including whole gene, regions including all

HSs, and the region including only HS1.

Disk diffusion assays showed that the inhibition zones

than those produced by single drugs. The time-killing assay

showed the synergistic action of caspofungin combination
with fluconazole, voriconazole, and posaconazole, and theamphotericin B-5-flucytosine combination. Furthermore, forResults: Our results showed that SN results are basicallythe first time, this assay confirmed the fungicidal activity ofInterestingly, SN can detect mutations in the region

combinations. The combination interactions ranged fromdependent on the type of gene as well as the segment type.
containing HS1 in both FKS1 and FKS2 genes. Furthermore,

SN can detect mutations in the segment containing all HS

regions for FKS1 but not FKS2. SN was unable to detectmutations in the whole FKS1 and FKS2 genes.

Conclusions: As far as we know, this is the first study tocaspofungin-voriconazole and amphotericin B-5-flucytosine
synergism to indifference and, most importantly, no
antagonism was reported and most of the synergistic action
was among echinocandin-resistant isolates.
Publications in English

validate SN for rapid identification of FKS gene mutations.

１）Omar NF, Widiasih Widiyanto T, Utami ST, Niimi M,

mutations associated with HS1 region in FKS genes, which

the copper homeostasis of Cryptococcus neoformans

This assay could be used as a sample for rapid identification ofhave a predominant role for echinocandin resistance induction
in C. glabrata.

8. In Vitro Characterization of Twenty-One Antifungal

Combinations against Echinocandin-Resistant and-Susceptible Candida glabrata. J Fungi（Basel）7（2）:108, 2021.

Niimi K, Toh-E A, Kajiwara S: Vph1 is associated withserotype D. J Gen Appl Microbiol 67（5）: 195 - 206 ,2021.

２）Majima H, Arai T, Kusuya Y, Takahashi H, Watanabe

A, Miyazaki Y, Kamei K: Genetic diﬀerences between
Japan and other countries in cyp51A polymorphisms ofAspergillus fumigatus. Mycoses 64（11）: 1354 - 1365 ,2021.

３）Arai, T, Umeyama, T, Majima, H, Inukai, T,

Watanabe, A, Miyaz aki, Y, K amei, K: Hmg 1

Khalifa HO, Majima H, Watanabe A, Kamei K
This study was designed to analyze the interaction of 21

antifungal combinations consisting of seven major antifungal

mutations in Aspergillus fumigatus and their contribution
to triazole susceptibility. Med Mycol 59（10）: 980-984,

2021.

agents against 11 echinocandin- susceptible and six-resistant４）Toyotome T, Kamei K: In Vitro Assay of Translation

major groups and were evaluated by checkerboard, disc

Available System. Toxins（Basel）13（10）: 696, 2021.

C. glabrata isolates. The combinations were divided into five

Inhibition by Trichothecenes Using a Commerciallydiffusion, and time-killing assays. Synergy based on the５）Hino Y, Watanabe A, Seki R, Tsukamoto S, Takeda Y,

in 17.65-29.41% of the cases for caspofungin combinations

Surveillance on Fungal Isolates from Patients withfractional inhibitory concentration index of ≤0.50 was observedwith azoles or amphotericin B. Amphotericin B combination
with azoles induced synergistic interaction in a range of 11.76-

S akaida E, K amei K: A Reference L aborator y
Haematological Malignancy in Japan. J Fungi（Basel）7: 806, 2021.
（10）29.41%. Azole combinations and 5-flucytosine combinations６）Toyotome T, Onishi K, Sato M, Hagiwara D,interactions. None of the 21 combinations showedmutations contributing to azole tolerance of Aspergillus

with azoles or amphotericin B did not show synergistic
antagonistic interactions. Interestingly, 90% of the detected千葉大学

Watanabe A, Takahashi H: Identification of novel
fumigatus through in vitro exposure to tebuconazole.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

19

Antimicrob Agents Chemother 65（9）: e0265720, 2021.

Allergic Bronchopulmonary Aspergillosis/Mycosis andY, Moretti ML, Watanabe A: Development and1268. e5, 2021.

７）Trabasso P, Matsuzawa T, Arai T, Hagiwara D, Mikami

validation of LAMP primer sets for rapid identificationof Aspergillus fumigatus carrying the cyp51A TR46 azole

resistance gene. Sci Rep 11（1）:17087, 2021.

８）Martins AC, Psaltikidis EM, Lima TC, Fagnani R,

Schreiber AZ, Conterno LO, Kamei K, Watanabe A,

Trabasso P, Resende MR, Moretti ML: COVID-19 andinvasive fungal coinfections: a case series at a Brazilian
referral hospital. J Med Mycol 31（4）: 101175, 2021.

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Kanzaki M: Primary cutaneous aspergillosis caused byAspergillus welwitschiae: A case report. J Dermatol 48: e554-e555, 2021.
（11）

Nakamura Y, Suzuki J, Okada N, Tanaka J, Fukutomi21）Itoh N, Akazawa N, Murakami H, Ishibana Y,

K, Taniguchi M, Shimoda T, Oguma T; Japan ABPM

Schizophyllum commune fungus ball in a lung cancer

Y, Ueki S, Fukunaga K, Konno S, Matsuse H, Kamei

research program: New Clinical Diagnostic Criteria for

20

Vitro Characterization of Twenty-One Antifungal

千葉大学

Takahashi Y, Hosoda W, Yaguchi T, Kamei K: A
cavity: a case report. BMC Infect Dis 21（1）: 1052 ,真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

2021.

Disease Due to Exophiala dermatitidis and Two Older

Sotozono C: A Case of Black Fungal Keratitis Caused by

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26）Matsuzaki T, Kasai H, Ikeda H, Tajiri Y, Suzuki K,23）Ando T, Kawakami H, Mochizuki K, Murata K,

treatment of pulmonary mycosis caused by Chrysosporium

2021.

Manabe Y, Takagi D, Yagasaki A, Niwa Y, Yamada N,

Ogura S, Matsumoto K, Morita K, Todokoro D,

Watanabe A, Kamei K, Urushibara T: Voriconazole
zonatum after treatment for pulmonary tuberculosis.
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management of central line-associated blood stream

Schizophyllum commune identified in both patient’s nasal

Yaguchi T, Kamei K: Challenges in the diagnosis andA case of allergic fungal rhinosinusitis caused by

infection due to Exophiala dermatitidis in an adult cancer

sputum and veranda’s soil samples. J Infect Chemother25）Imanaka Y, Taniguchi M, Doi T, Tsumura M, Nagaoka29）Tanaka R, Suzuki Y, Matsumoto H, Yamasue M,

Karakawa S, Arihiro K, Imai K, Morio T, Casanova

Kamei K, Kadota J, Itoh H: Significant elevation of freepatient. J Infect Chemother 27（9）: 1360-1364, 2021.

R, Shimomura M, Asano T, Kagawa R, Mizoguchi Y,

JL, Puel A, Ohara O, Kamei K, Kobayashi M, Okada

S: Inherited CARD9 Deficiency in a Child with Invasive

千葉大学

27（5）: 759-765, 2021.

Umeki K, Hashinaga K, Tatsuta R, Hiramatsu K,

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真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

21

Project for Infection Control and Prevention
石和田ＰＩ（感染症制御）プロジェクト
Summary（研究概要）

Our research focuses on epidemiology and pathogenesis of Haemophilus influenzae , Streptococcus
pneumoniae and Streptococcus agalactiae. We organize several clinical researches for development of diagnostic
and therapeutic methods of intractable respiratory infectious diseases collaborating with clinicians and carefor the patients in Chiba University Hospital. We also recently conduct the research on risk education for
vaccination and rubella elimination.
インフルエンザ菌 , 肺炎球菌 , B 群レンサ球菌（GBS）の病原性解析ならびにインフルエンザ菌感染症と肺炎球菌感染症 , GBS 感染症の疫学研究を継続的に行っている . 結合型ワクチン導入後 , 新しく問題となっているワクチン非含有株の病原因子の解析を行い , 新たな予防法の開発を目指す . また , 難治性呼吸器感染症の診断 , 治療法開発のための臨床研究を実施している . 同時に , 附属病院における診療活動及び学内外でのコンサルテーションも行っている . さらに , ワクチンのリスク教育 , 風疹排除に関する研究にも取り組んでいる .
Professor

Research Assistant Professor
Research Technician

Adjunct Research Technician

教

Naruhiko Ishiwada
Noriko Takeuchi
Misako Ohkusu
Mihoko Ohhata

授

特

任

助

教

技

術

職

員

非常勤技術職員

石和田稔彦
竹内 典子
大楠美佐子
大畑美穂子

1. Epidemiology of hospitalised paediatric community-

5

the introduction of 13-valent pneumococcal conjugate

6

Division of Infectious Diseases, Chiba Children’s Hospital,

Japan

7

Department of Preventive Medicine and Public Health,acquired pneumonia and bacterial pneumonia following

vaccine in the national immunisation programme in

Takeuchi N , Naito S , Ohkusu M , Abe K , Shizuno K ,
1

2

1

3

4

Takahashi Y 5, Omata Y 5, Nakazawa T 5, Takeshita K 2,
Hishiki H2, Hoshino T6, Sato Y7, Ishiwada N1

1

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

2

Department of Paediatrics, Chiba University Hospital,

Research Centre, Chiba University, Chiba, Japan.

Chiba, Japan.

Department of Paediatrics, Seikeikai Chiba Medical
Centre, Chiba, Japan.
Chiba, Japan.

Keio University School of Medicine, Shinjuku-ku, Japan.

Abstract

Studies on community-acquired pneumonia（CAP）and

pneumococcal pneumonia（PP ）related to the 13 -valentpneumococcal conjugate vaccine（PCV13）introduction in
Asia are scarce. This study aimed to investigate theepidemiological and microbiological determinants of
hospitalised CAP and PP after PCV 13 was introduced in3

Department of Paediatrics, Chiba Kaihin Municipal

Japan. This observational hospital-based surveillance study

4

Department of Clinical Laboratory, Chiba Kaihin Municipal

and around Chiba City, Japan. Participants had bacterial

Hospital, Chiba, Japan.
Hospital, Chiba, Japan.

22

千葉大学

included children aged ⩽15 years, admitted to hospitals inpneumonia based on a positive blood or sputum culture for

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

bacterial pathogens. Serotype and antibiotic-susceptibility

levels and pneumococcal opsonophagocytic activity（Pn-testing of Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae

OPA）against some PCV13-contained serotypes（1, 3, 5,

The CAP hospitalisation rate per 1000 child-years was 17.7,

surplus serum samples. In this study, 5 and 13 patients had

in children aged 5 - 15 years in 2008 , 2012 and 2018 ,respectively; however, >5 years had passed since the last dose

isolates from patients with bacterial pneumonia were assessed.

14.3 and 9.7 in children aged <5 years and 1.18, 2.64 and 0.69

6 A, 7 F, 19 A ）in 23 young patients with asplenia using

received PCV13 during routine immunizations and PPSV23,

respectively. There was a 45% and 41% reduction in CAP

in most cases. The geometric mean concentrations（GMCs）

periods, respectively. Significant reductions occurred in theagainst six serotypes, but they were lower than the those of

hospitalisation rates, between the pre-PCV 7 and PCV13
proportion of CAP due to PP and PCV 13 serotypes.

Conversely, no change occurred in the proportion of CAP

of Pn-IgG in all study patients were not under the cutoﬀ levelage-matched healthy controls, as we have previously
published. The patients who had received only PPSV23 hadcaused by H. influenzae. The incidence of hospitalised CAP

in children aged ⩽15 years was significantly reduced after thesignificantly lower GMCs against four serotypes（serotypes 1,

introduction of PCV13 in Japan. Continuous surveillance is

at least one PCV 13 vaccination. The patients who had

2. Pneumococcal serotype-specific IgG and opsonophago-

we measured（serotypes 3, 5, and 19A）than that of thenecessary to detect emerging PP serotypes.

cytic activity in young Japanese patients with asplenia.

Takeshita K , Takeuchi N , Takahashi Y , Fukasawa C ,
1, 2

2

3

4

Hishiki H1, Hoshino T4, Ishiwada N2, Shimojo N5

1

Department of Pediatrics, Graduate School of Medicine,2

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

Chiba University, Chiba-shi, Japan.

received only PPSV23 also had significantly lower geometricmean titers（GMTs）of Pn-OPA against all three serotypes

patients who had received at least one PCV13 vaccination.

Our findings are useful data that can indicate insufficient

immunity in young patients with asplenia against somePCV 13 pneumococci serotypes and suggest the need forappropriate vaccinations in the post-PCV13 era.

3. Population-based study of a free rubella-specificantibody testing and immunization campaign in Chibacity in response to the 2018-2019 nationwide rubella

Research Center, Chiba University, Chiba-shi, Japan.

3

Department of Pediatrics, Seikeikai Chiba Medical Center,

4

Division of Infectious Diseases, Chiba Children’s Hospital,

5

6A, 7 F, and 19A）than that of the patients who had received

Chiba-shi, Japan.

Chiba-shi, Japan.

Center for Preventive Medical Sciences, Chiba University,
Chiba-shi, Japan.

outbreak in Japan.

Takeshita K1, Takeuchi N1, Ohkusu M1, Ohata M1, Suehiro

M2, Maejima H2, Abe H3, Ohta F3, Ohama Y3, Tamai K3,
Haraki M3, Ishiwada N1

1

Abstract

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba, Japan.

Patients with asplenia are at high risks of severe infections

2

Infectious Disease Prevention Division, Chiba City Healthpneumoniae. Thirteen-valent pneumococcal conjugate vaccine

3

Chiba City Medical Association, Chiba, Japan.

caused by encapsulated bacteria, particularly Streptococcus（PCV13）and 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine

Center, Chiba, Japan.

（PPSV 23）are recommended for invasive pneumococcal

Abstract

immunity to pneumococci in young patients with asplenia.

large rubella epidemic has occurred. Considering thedisease prevention; however, little is known about the

We measured pneumococcal serotype-specific IgG（Pn-IgG）

千葉大学

Japan has not been able to eliminate rubella; as a result, thecomplicated history of the vaccine policy in Japan, some

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

23

susceptible populations became infected with rubella,

it in 2013. After that, the immunization rate of HPV vacciner e s u l t i n g i n a n o u t b r e a k . We c o n d u c t e d a l a r g equickly declined in Japan. Health science teachers（HSTs）

free rubella-specific antibody testing and an immunization

health education for students in Japanese schools. HSTs haveserosurveillance against rubella in Chiba city after initiating

campaign during 2018-2019. The total number of rubella
specific antibody tests that was conducted in the nationwide

campaign and Chiba city original campaign was 8277 and

6104, respectively. The proportion of participants with anantibody titer of ≤1:16 using the hemagglutination inhibition

are qualified and licensed teachers in charge of health care andnot recommended HPV vaccination to female students, sinceactive governmental recommendation for HPV vaccination
was halted for 5 y. We conducted a primary survey targeting

HSTs（N = 39）and university students taking the HST

training course（N = 123）. In each group, awareness（HI ）test was higher in those in their 20 - 30 s. On the

regarding HPV vaccine and disease burden was evaluated andof <1:8 using the HI test was higher in men in their 40-50s.

recommendation were identified. The primary survey foundcontrary, the proportion of participants with an antibody titerThis discrepancy possibly reflects the complicated history of

the vaccine policy. The number of participants in thenationwide immunization campaign in this city was 1517,

whereas that in the Chiba city campaign was 3607. The Chibacity campaign was effective against women in their 20-30s（child-bearing generation ）; however, the nationwide

factors related to and barriers to HPV vaccinethat many HSTs and university students recognized theirinsuﬃcient knowledge regarding the HPV vaccine. Based on
the primary survey’s results, infectious disease specialists,collaborating with Japanese HSTs, developed educationalslide sets on HPV vaccine. A secondary survey was conducted
before and after the lecture with HSTs（N = 162）, where we

campaign was not sufficiently effective against men in theirevaluated their intelligibility and intention to recommend

facilities to receive the measles-rubella vaccine.

secondary survey, the number of HSTs who recommended

40 - 50 s because many workers were did not visit medical

4. The effects of health education on health scienceteachers intention to recommend adolescent HPV
vaccine for female students in Japan.

Ishiwada N , Suzuki C , Hasebe S , Tsuchiya A , Takeuchi
1

2

2

2

N1, Hishiki H3, Sato Y4, Sugita K2
1

2

3

4

HPV vaccination for female students. In the post-lecture,

the HPV vaccine to their students had statistically increased

from 76 before the lecture, to 103（p < .05）. An educational

lecture using appropriate materials improved HSTs’ vaccine
confidence and intention to recommend the HPV vaccine totheir students, verifying the study’s hypothesis.

5. Emergence of Haemophilus influenz ae with low

susceptibility to quinolones isolated from pediatricpatients in Japan.

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba-shi, Japan.

Division of Child Health, Faculty of Education, Chiba

Takeuchi N 1, Ohkusu M 1, Hoshino T 2, Yamamoto S 2,

University, Chiba-shi, Japan.

Segawa S3, Murata S3, Ishiwada N1

Chiba-shi, Japan.

1

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

Keio University School of Medicine, Tokyo, Japan.

2

Division of Infectious Diseases, Chiba Children’s Hospital,

Department of Pediatrics, Chiba University Hospital,
Department of Preventive Medicine and Public Health,

Abstract

3

The Japanese government suspended proactive

recommendation of human papillomavir us （H PV ）Research Center, Chiba University, Chiba, Japan.

Chiba, Japan.

Division of Clinical Laboratory, Chiba University Hospital,
Chiba, Japan.

vaccination due to several reports of adverse events related to

24

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Abstract

In 2010, oral fluoroquinolone tosufloxacin（TFX）granules

cytic activity in young Japanese patients with asplenia.
Hum Vaccin Immunother. 17: 3687-3691, 2021

were released as the first oral respiratory quinolone for３）Takei H, Takeuchi N, Hoshino T, Ohkusu M, Segawa

influenzae strains with low susceptibility to quinolones in

Neisseria lactamica isolated from the respiratory tract inchildren in Japan. To investigate the recent trend of H.

children, we analyzed the gene sequences of quinolone

S, Murata S, Ishiwada N. Bacteriological analysis ofJapanese children. J Infect Chemother 27: 65-69, 2021

resistance-determining regions（QRDRs）of gyrA, gyrB,４）Yahaba M, Yamagishi K, Yamazaki S, Takayanagi S,<15 years with an MIC of ≥0.5 μg/mL for TFX from 2010 to

Antibiotics for hospitalized children with community-

parC, and parE of 23 clinical isolates from 15 patients aged
2018. Amino acid substitutions were observed in both GyrA

and ParC in 13 strains（81%, 13/16）, except two strains witha TFX MIC of 0.5 μg/mL with amino acid substitution in

Kawasaki Y, Taniguchi T, Ishiwada N, Igari H.

acquired pneumonia in Japan: analysis based on Japanesenational database. J Infect Chemother 27: 461-465,
2021

only GyrA and one strain with a TFX MIC of 1 μg/mL with５）Takeshita K, Takeuchi N, Ohkusu M, Ohata M,

in 2018, the detection age range was wide（0-7 years）, andTamai K, Haraki M, Ishiwada N. Population-based

no amino acid substitution. Four ST422 strains were observed
the residential city was varied. A total of 3/15 patients had aclear history of TFX treatment. Even for the strain with an
MIC of 0.5 μg/mL for TFX, it is highly possible that it

harbors a mutation in gyrA, which is the first step towardSuehiro M, Maejima H, Abe H, Ohta F, Ohama Y,

study of a free rubella-specific antibody testing andimmunization campaign in Chiba city in response to the
2018–2019 nationwide rubella outbreak in Japan. Hum

Vaccin Immunother. 17: 1779-1784, 2021

quinolone resistance, and it may also harbor mutations in６）Ishiwada N, Fujimaki K, Matsumoto T, Kiyota H,

type quinolone-resistant H. influenzae strains, particularly

Y, Hoshino T, Kuroki H, Iwata S, Tajima T, Horikoshi

both gyrA and parC. Furthermore, several specific sequence
ST422, may be widespread among children in Japan. It isnecessary to investigate changes in resistance both at the MIC
and gene levels. The continuous monitoring of strains and theuse of antimicrobial drugs in treatment should be carefully
observed.

Tateda K, Sato J, Hanaki H, Takayanagi R, Yamaguchi
Y, Shiro H, Bamba M, Kawamura N, Ouchi K,
Matsubara K, Okada T, Furuno K, Tsumura N.

Nationwide surveillance of bacterial pathogens isolated
from children conducted by the surveillance committeeof Japanese Society of Chemotherapy, the Japanese

Association for Infectious Diseases, and the Japanese

Publications

１）Katsuta T, Shimizu N, Okada K, Taya T, Nakano T,

Kamiya H, Amou K , Ishiwada N, Iwata S, Oshiro M,

Society for Clinical Microbiology in 2017 : General
overview of pathogenic antimicrobial susceptibility. J
Infect Chemother 27: 139-150, 2021

Okabe N, Kira R, Korematsu S, Suga S, Tsugawa T,７）Takeuchi N, Ohkusu M, Hoshino T, Yamamoto S,

Mizuno Y, Mine M, Miyairi I, Miyazaki C, Morioka I,

Haemophilus influenzae with low susceptibility to

Nishimura N, Hishiki H, Fujioka M, Hosoya M,

Morishima T, Yoshikawa T, Wada T, Azuma H,

Kusuhara K, Ouchi K, Saitoh A, Moriuchi H. The

clinical characteristics of pediatric coronavirus disease2019 in 2020 in Japan Pediatr Int Jul 7;10.1111/ped.
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千葉大学

Segawa S, Murata S, Ishiwada N. Emergence ofquinolones isolated from pediatric patients in Japan.
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pneumonia in 6 - to 64 -year-olds in Japan. J InfectChemother. 27: 7-18, 2021

９）Oshima N, Hamada H, Hirose S, Shimoyama K,

Fujimori M, Honda T, Yasukawa K, Takanashi J,

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

25

Ishiwada N, Ohkusu M. Panton-Valentine leukocidin-

an emerging strain of penicillin-resistant non-vaccine

methicillin-resistant Staphylococcus aureus meningitis11）Otaki Y, Ogawa E, Higuchi T, Takeshita K, Takeuchi

positive novel sequence type 5959 community-acquiredcomplicated by cerebral infarction in a 1 -month-old

infant. J Infect Chemother 27: 103-106, 2021

10）Minato S, Yoshida M, Shoji K, Yotani N, Takeshita K,

Takeuchi N, Ishiwada N, Kubota M, Ishiguro A,

Miyairi I. A case report of bacterial meningitis caused by

26

千葉大学

Serotype 10A. Jpn J Infect Dis 77: 2021; 477-480, 2021

N, Ishiwada N, Ito K. Invasive Haemophilus influenzae
type b infection in a patient with transient hypogamma-

globulinemia of infancy. J Infect Chemother 27: 17561759, 2021

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Project for Systems Biology of Microorganisms
高橋ＰＩ（微生物創生）プロジェクト
Summary（研究概要）

Our research areas are Bioinformatics and Systems Biology. Our Bioinformatics approach aims to deeply
and clearly understand massive biological experiment data, e. g., sequence data by next generation
sequencers. Systems Biology aims to understand how biological systems work and help the experimental
design mainly by mathematical modelling approach.
我々はコンピュータ解析によって , 次世代シーケンサーを含む様々な生物実験で得られる大量デー
タからの新規生物学的知見の創出 , 並びに , 数理モデルアプローチによる生命現象の解明に取り組んでいます . 大量データによる生命の「構成要素の理解」, 数理モデルによる「挙動の理解」という二つのコンセプトの下 , 病原真菌を含む微生物を対象に細胞機能の分子レベルでの理解を目指しています .
Associate Professor

Research Assistant Professor
Research Assistant Professor

Research Promotion Technician

准Hiroki Takahashi
Yoko Kusuya
Jun-ichi Ishihara
Machiko Zen

1. Investigation of the relationships between heterogeneity

against environmental stresses and pathogenicity inpathogenic fungi Aspergillus fumigatus

Yoko Kusuya, Cai Bian, Yu Lu, Jun-ichi Ishihara, Hiroki
Takahashi

Stress responses and pathogenicity have been extensively

studied in Aspergillus fumigatus, the main causative pathogenof life-threatening aspergillosis. The heterogeneity in thispathogen has recently attracted increasing attention. In thisproject, we used more than 100 clinically isolated strains toinvestigate several properties relevant to the pathogenicity of
A. fumigatus, namely, hypoxia growth, adaptation to
nutrients such as copper, mimicking human lung. We

compared these strains in whole genome level and tried touncover genomic variations. In addition, we conductedcomparative transcriptome analysis to uncover the genes
underpin the heterogeneity.

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

技 術 補 佐 員

高橋 弘喜
楠屋 陽子
石原 潤一
全 真知子

2. Systems biology for understanding the stress responses

in bacteria

Kengo Itadera, Jun-ichi Ishihara, Hiroki Takahashi
It is conceivable that the heterogeneity could be one of theadaptation mechanisms to a diverse of environments inbacteria. We address the heterogeneity of bacteria by two

approaches; one is the systems biology approach where wederive the mathematical model and conduct the simulation oftranscriptional regulation in metal response, and second is the

microfluidic device to directly measure the single cell behaviorof bacteria. We launched the assembling of device andsucceeded the microfluidic device which could be useful todetect the single cell behavior.

3. Development for genome analysis tools and bioinfor-

matic analysis for collaborative projects.

Jun-ichi Ishihara, Masaki Nagayama, Hiroki Takahashi

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

27

Since NGS development, genome and omics data are

Fungal Biol. 2: 656751. 2021.

rapidly accumulating. We collaborate with several researchers５）Yamamoto T, Alimu Y, Takahashi H, Kusuya Y,

overview of the data by using multivariate and statisticaland Characterization of the Polyhexamethylene

to analyze their own genome and omics data, and give theanalysis.

Hosoya K, Shigemune N, Nagai S, Yaguchi T. Isolation
B i g u a n i d e H y d r o c h l o r i d e - R e s i s t a n t Fu n g u s ,Purpureocillium lilacinum. Biocontrol Sci. 26（3）: 157-

Publications

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１）Rai A, Hirakawa H, Nakabayashi R, Kikuchi S,６）Toyotome T, Onishi K, Sato M, Kusuya Y, Hagiwara

Nagasaki H, Fukushi R, Kusuya Y, Takahashi H,

Mutations Contributing to Az ole Tolerance ofHayashi K, Rai M, Tsugawa H, Nakaya T, Mori T,
Uchiyama H, Toyoda A, Hikosaka S, Goto E, Saito K,

Yamazaki M. Chromosome-level genome assembly of

Ophiorrhiza pumila reveals the evolution ofD, Watanabe A, Takahashi H. Identification of Novel
Aspergillus fumigatus through In Vitro Exposure to

Tebuconazole. Antimicrob Agents Chemother. 65（9）:e0265720. 2021.

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７）Takahashi H, Oiki S, Kusuya Y, Urayama SI, Hagiwara２）Shoji T, Takaya A, Kusuya Y, Takahashi H, Kawashima

in multiple strains of Aspergillus fumigatus isolated from2021.

H. Ribosome Profiling in Streptococcus pneumoniae
Reveals the Role of Methylation of 23 S rRNA

D. Intimate genetic relationships and fungicide resistancea plant bulb. Environ Microbiol. 23（9）: 5621-5638.
2021.

Nucleotide G 748 on Ribosome Stalling. J Genet

８）Majima H, Arai T, Kusuya Y, Takahashi H, Watanabe

３）Lv Y, Yi Y, Han R, Tong X, Takahashi H. The

Japan and other countries in cyp51A polymorphisms of

Genomic Sci. 6: 024. 2021.

complete chloroplast genome of Abutilon theophrasti
medic（Malvaceae）. Mitochondrial DNA Part B. 6: 3.
912-913. 2021.

４）Takahashi H, Umemura M, Ninomiya A, Kusuya Y,

Shimizu M, Urayama S-i, Watanabe A, Kamei K,

Yaguchi T, Hagiwara D. Interspecies genomic variationand transcriptional activeness of secondary metabolismrelated genes in Aspergillus section Fumigati. Front

28

千葉大学

A, Miyazaki Y, Kamei K. Genetic diﬀerences between

Aspergillus fumigatus. Mycoses. 64（11）: 1354-1365.
2021.

９）Ivory BJ, Smith HM, Cabrera E, Robinson MR,

Sparks JT, Solem A, Ishihara JI, Takahashi H, Tsuji M,

Segarra VA. ATG8 is conserved between Saccharomyces
cerevisiae and psychrophilic, polar-collected fungi.

MicroPubl Biol. MicroPubl Biol. 2021 : 10 .17912 /micropub.biology.000446. 2021.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Management of Unit of Microbiological Resources
バイオリソース管理室
Summary（研究概要）

We are developing a system for preservation, management and distribution of pathogenic fungi andactinomycetes. We support the base of research and education of mycoses and their pathogens in order tosupply reliable strains that are added new information.
病原真菌・放線菌の「保存・管理・提供」体制を整備し , 最新情報が付加された信頼できる菌株の提供を通じて , 真菌症ならびにその原因菌の研究・教育の基盤を支援している .
Associate Professor
Assistant Professor

Research Technician

JSPS Post Doctoral Fellow

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Isolation and characterization of the polyhexamethylene

biguanide hydrochloride-resistant fungus, Purpureocillium lilacinum.

Yamamoto T 1, Alimu Y 2, Takahashi H 2, 3, 4, Kusuya Y 2,
Hosoya K , Shigemune N , Nagai S , Yaguchi T
1

1

2

3

4

1

准

Takashi Yaguchi
Sayaka Ban
Junko Ito
Vit Hubka
Kaomi Higuchi
Akiko Kota

1

2

R&D-Safety Science Research, Kao Corporation, Tochigi,
Japan

Medical Mycology Research Center, Chiba University,
Chiba, Japan

Molecular Chirality Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

Plant Molecular Science Center, Chiba University, Chiba,Japan

We aimed to examine the presence of microorganisms

highly resistant to polyhexamethylene biguanidehydrochloride（PHMB）—a widely used antimicrobial—witha goal to address public health concerns pertaining to it anddevise strategies to prevent the development of resistance. We

isolated a fungus from a 20% aqueous solution of PHMB and

千葉大学

教

授

助
技

教
術

職

員

学振外国人特別研究員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

矢口 貴志
伴 さやか
伊藤 純子
ヴィト・フブカ
樋口芳緒美
甲田 暁子

examined its morphology and drug resistance profile. Basedon the sequence of the internal transcribed spacer region ofribosomal DNA, the fungus was identified as Purpureocillium

lilacinum. Although the P. lilacinum type and resistant strains

showed similar morphology, the latter had extremely low
PHMB susceptibility and was able to grow in 20% aqueous

solution of PHMB, which eliminated the type strain. The

minimum inhibitory concentration（MIC）of PHMB for the
resistant strain was significantly higher than that of the typestrain and other pathogenic filamentous fungi and yeasts.

Furthermore, we sequenced the genome of the isolate topredict PHMB resistance-related genes. Despite its highresistance to PHMB, no genes homologous to fungal

PHMB-resistant genes were detected in the genome of theresistant strain. In summary, P. lilacinum was found to besignificantly more resistant to PHMB than previously
reported, via an unidentified mechanism of drug resistance.

2. Itraconazole resistance of Trichophyton r ubr um

mediated by the ABC transporter TruMDR2.

Yamada T1, 2, Yaguchi T3, Tamura T4, Pich C5, Salamin K5,

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

29

FIG. 1. （A）
White floating masses in a 20% aqueous solution of polyhexamethylene biguanide hydrochloride（PHMB）. Scalebar = 5 mm. White arrows indicate the floating masses that were observed after leaving the PHMB in polyethylene
containers to stand for more than 1 month. （B）Mycelia and spores of the white floating masses observed in a 20%
solution of PHMB. Scale bar = 20 µm（light microscope）.（C）Colonies formed from mycelium of the floating masses
inoculated on potato dextrose agar at 22.5℃ for 6 days. （D, E）Scanning electron micrographs of Purpureocillium
lilacinum grown on potato dextrose agar at 25℃ for 14 days. IFM 63780（D）, IFM 47467T（E）. Scale bar = 10 µm.

Feuermann M6, Monod M5

Background: Dermatophytes showing reduced sensitivity to1

Teikyo University Institute of Medical Mycology, Tokyo,

terbinafine resistant strain of Trichophyton rubrum,

2

Asia International Institute of Infectious Disease Control,（ITC）and voriconazole（VRC）. The expression of two genes

3

Medical Mycology Research Center, Chiba University,of the ABC family was found to be highly up-regulated in this4

General Medical Education and Research Center, Teikyo

resistance to VRC but only slightly reduced its resistance to5

Depar tment of Der matolog y, Centre HospitalierObjectives: We examined the potential of T. rubrum to

6

Swiss-Prot group, SIB Swiss Institute of Bioinformatics,

Japan

Teikyo University, Tokyo, Japan
Chiba, Japan

University, Tokyo, Japan

antifungal agents have emerged in several countries. One

TIMM20092, also showed reduced sensitivity to itraconazole（TruMDR2 and TruMDR3）encoding multidrug transporters

strain. Deletion of TruMDR3 in TIMM20092 abolished its

ITC.

Universitaire Vaudois, Lausanne, Switzerland

develop resistance to ITC by analysing the mechanism of ITC

Geneva, Switzerland

Methods: The deletion of TruMDR2 by gene replacement was

resistance in TIMM20092.

FIG. 2. Antifungal susceptibility of T. rubrum strain TIMM20092, one TruMDR3 single mutant（Δ TruMDR3-33）,
two TruMDR2 single mutants（ΔTruMDR2-32 and Δ TruMDR2-45）and two TruMDR2/TruMDR3 double
mutants（ΔTruMDR2/3-33-8 and ΔTruMDR2/3-33-10）to VRC and ITC. （A）Serial dilution drug
susceptibility assays for VRC and ITC. T. rubrum spores were spotted at different dilutions on SDA
plates as described in the Materials and Methods section. The plates were incubated at 30℃ for 6 days.

30

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

performed in TIMM 20092 and one TruMDR 3 -lacking

m u t a n t （∆Tr u M D R 3 ）p r e v i o u s l y g e n e r a t e d f r o m

TIMM20092. TruMDR2 single and TruMDR2/TruMDR3

wyomingensis（1 of 3）, and A. pseudoviridinutans（1 of 3）.

Among them, A. felis（1 of 14）and A. pseudoviridinutans（7of 17）demonstrated MICs higher than 8 mg/L for ITCZ

double mutants（∆TruMDR2 and ∆TruMDR2/3）were suc-and VRCZ. These results indicate that A. fumigatus-related

Results: The suppression of TruMDR2 was shown to abolishoutdoor environments in Japan.

cessfully obtained, respectively.

resistance to ITC in TIMM20092 and the TruMDR3-lacking
mutant, strongly suggesting that TruMDR 2 is a major

contributor to ITC resistance in TIMM20092.

species resistant to ITCZ and VRCZ are distributed in

4. An exploratory MALDI-TOF MS library based on

SARAMIS superspectra for rapid identification ofConclusions: Our study highlights the possible role of the

ABC transporter TruMDR2 in ITC resistance of T. rubrum.

3. T he ubiquitous distr ibution of azole-resistant

Aspergillus fumigatus -related species in outdoor

environments in Japan.

2

Ban S1, 2, Kasaishi R2, Kamijo T2, Noritake C2, Kawasaki H2.
1

2

Medical Mycology Research Center, Chiba University,
Chiba, Japan.

Biological Resource Center, National Institute ofTechnology and Evaluation, Chiba, Japan.

Watanabe K1, Yaguchi T2, Hirose D1
1

Aspergillus section Nigri

School of Pharmacy, Nihon University, Chiba, Japan.

Medical Mycology Research Center, Chiba University,
Chiba, Japan.

Aspergillus fumigatus-related species are responsible forcausing aspergillosis, which is a fatal infectious disease.

Recently, there has been a series of reports of A. fumigatus-

related species that are resistant to azole drugs used in clinicalpractice for the treatment of fungal infections. Some of these
species have been isolated from outdoor environments.

Testing the drug susceptibility of the strains from outdoor

Matrix-assisted laser desorption ionization–time-of-flightmass spectrometry（MALDI-TOF MS）is a broadly usedtechnique for identification and typing of microorganisms.

However, its application to filamentous fungi has been

delayed. The objective of this study was to establish a datalibrary for rapid identification of the genus Aspergillus sect.

Nigri using MALDI-TOF MS. With respect to sample
preparation, we compared the utility of using mature mycelia,

including conidial structures, to accumulate a wider range ofproteins versus the conventional method relying on young

hyphae. Mass spectral datasets obtained for 61 strains of 17

environments is important. In this study, we isolated andspecies were subjected to cluster analysis and compared with aoutdoor environment in Japan. The isolates identified via

Specific and frequent mass spectral peaks corresponding tocultured 72 strains of A. fumigatus-related species from themorphological observation and molecular phylogenetic

phylogenetic tree based on calmodulin gene sequences.

each phylogenetic group were selected（superspectra for the

analysis were A. felis, A. lentulus, A. pseudoviridinutans, A.

SARAMIS system）. Fifteen superspectra representing ninesusceptibility testing revealed that A. felis（6 of 14 strains）

identification for 217 spectra was improved from 36.41% toudagawae, and A. wyomingensis. The results of the drugand A. pseudoviridinutans（13 of 17 strains）were resistant toi t r a c o n a z o l e （I T C Z ）, w i t h m i n i m u m i n h i b i t o r yc on c e n t r a t i on s （M I C s ）h i g h e r t h a n 4 m g / L . T h evoriconazole（VRCZ）-resistant strains with MIC higher than

4 mg/L were A. felis（14 of 14）, A. lentulus（4 of 4）, A.

pseudoviridinutans（15 of 17）, A. udagawae（23 of 34）, A.

千葉大学

species were ultimately created. The percentage of correct
86.64% using the revised library. Additionally, 2.76% of thespectra were assigned to candidates that comprised several
related species, including the correct species.
Publications１）Arai M, Ebihara I, Hara Y, Yaguchi T, Ishibashi M,

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

31

FIG. 3. Dendrogram of Aspergillus sect. Nigri constructed from the aggregated mass spectra per strain by the SARAMIS using
single-linkage agglomerative cluster analysis. A: 5 d and B: 10 d incubation on PDA. The scale bar below indicates thesimilarity（%）. Broken horizonal line shows separation of phylogenetic clades. Although the branching order wasdifferent, the clusters in the two dendrograms were roughly equivalent to each other and to those in the phylogenetictree.

Makita Y. Isolation of Nocobactin NAs as notch signal

O kuda T, K asuya T, Nonaka K. Lec anicillium

evolution. J Antibiot. 74: 255-259, 2021.

in Mount Kurohime, Nagano Prefecture, central Japan.

inhibitors from Nocardia farcinica, a possibility of invasive２）Ban S, Kasaishi R, Kmijo T, Noritake C, Kawasaki H.

aphanocladii isolated from Tengu-no-Mugimeshi foundMicrob Resour Syst. 37（1）: 1-12, 2021.

An exploratory MALDI-TOF MS library based on５）Itoh N, Akazawa N, Murakami H, Ishibana Y,

Aspergillus section Nigri. Mycoscience. 62: 224-232,

Schizophyllum commune fungus ball in a lung cancer

SARAMIS superspectra for rapid identification of2021.

Takahashi Y, Yaguchi T, Kamei K, Hosoda W. A
cavity: A case report. BMC Infect Dis. 21: 1052, 2021.

３）Čmoková A, Rezaei-Matehkolaei A, Kuklová I, Kolařík

６）Kashiwada-Nakamura K, Noguchi H, Matsumoto T,

Mi ň ovská V, Najafzadeh MJ, Nouripour-Sisakht S,

Fukushima S, I hn H. S ubcutaneous c y stic

M, S hamsizadeh F, Ansari S, Gharaghani M,

Yaguchi T, Zomorodian K, Zarrinfar H, Hubka V.

Discovery of new Trichophyton members, T. persicum andT. spiralif or me spp. no v., as a c ause of highl yinflammatory tinea cases in Iran and Czechia. Microbiol
Spect. Sep 1; e0028421, 2021.

４）Higo M, Kojima H, IwatsukiM, Tanabe T, Yaguchi T,

32

千葉大学

Yaguchi T, Kamei K, Suzuki T, Makino T, Kajihara I,

phaeohyphomycosis caused by Phaeoacremonium
minimum. J Dermatol. 48（5）: e234-e235, 2021.

７）Kitauchi Y, Kumagai Y, Inoue-Masuda Y, Sugiura M,

Sato T, Yaguchi T, Yokoyama T. Tinea corporis causedby terbinafine-resistant Trichophyton rubrum successfully

treated with fosravuconazole. J Dermatol. 48（7）:

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

e329-e330, 2021.

８）Noguchi H, Matsumoto T, Kimura U, Hiruma M,

K ano R , Yaguc hi T, K ashiwada-Nakamur a K,

Fukushima S. Ungual hyalohyphomycosis caused by
Pe n i c i l l i u m c i t r i n u m s u c c e s s f u l l y t re a t e d w i t hfosravuconazole. J Dermatol. 48（12）: e608-e609, 2021.

14）Takahashi H, Umemura M, Ninomiya A, Kusuya K,

Shimizu M, Urayama S, Watanabe A, Kamei K,

Yaguchi T, Hagiwara D. Interspecies genomic variationand transcriptional activeness of secondary metabolismrelated genes in Aspergillus section Fumigati. Front
Fungal Biol. 2: 656751, 2021.

９）Noguchi H, Matsumoto T, Hiruma M, Kimura U,15）Yamada T, Yaguchi T, Salamin K, Guenova E,

Fukushima S, Kano R. Cluster infection caused by atransporter in dermatophytes that plays a key role in theirfirst case series in Japan. Acta Derm Venereol. 101（9）:J. Fungi. 7（7）, 542, 2021.

Kashiwada-Nakamura K, Kubo M, Yaguchi T,

terbinafine-resistant dermatophyte at a group home: The
adv00563, 2021.

10）Sato T, Kasuya A, Kobayashi H, Asahina Y, Suzuki T,

Aoyama K, Yamazaki K, Yaguchi T. A case of an ez vivo

onychomycosis model introduced with a cultured colony

Feuermann M, Monod M. MFS 1 , a pleiotropic

intrinsic resistance to chloramphenicol and fluconazole.
16）Yamada T, Yaguchi T, Tamura T, Pich C, Salamin K,

Feuermann M, Monod M. Itraconazole resistance ofTrichophyton rubrum mediated by the ABC transporter
TruMDR2. Mycoses 2021. 64（8）: 936-946.

of Kocuria koreensis from a diabetic ingrown toenail. Med17）Yamamoto T, Alimu Y, Takahashi H, Kusuya Y,11）Sklená ř F, Jurjevi ć Z, Houbraken J, Kola ř ík M,

and characterization of the polyhexamethylene biguanide

Mycol J. 62（4）: 89-92, 2021.

Arendrup MC, Jørgensen KM, Siqueira JPZ, Gené J,

Yaguchi T, Ezekiel CN, Silva-Pereira C, Hubka V. Re-

Hosoya K, Shigemune N, Nagai S, Yaguchi T. Isolationhydrochloride-resistant fungus, Purpureocillium
lilacinum. Biocont Sci. 26（3）: 157-166, 2021.

examination of species limits in Aspergillus section18）Yamoto S, Mukai T, Fujita S, Nishimura H, Yaguchi T,

and description of four new species. Stud Mycol. 99:

immunocompetent patient. Medicine: Case Rep Stud

Flavipedes using advanced species delimitation methods
100120, 2021.

Morita Y. An autopsy case of Nocardia meningitis in an
Protocol. 2（4）: e0094, 2021.

12）Suzuki T, Sato T, Horikawa H, Kasuya A, Yaguchi T.

19）Yoneyama T, Iguchi M, Yoshii K, Elshamy A. I, Ban S,

tensurans induced by tropical steroid application. Med

insect pathogenic fungus Conoideocrella luteorostrata

A case of tina pseudoimbricata due to Trichophyton
Mycol J. 62（4）: 67-70, 2021.

Noji M, Umeyama A. Xanthone glucoside from an
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13）Suzuki T, Sato T, Kasuya A, Yaguchi T. A case of tinea

20）Watanabe K, Yaguchi T, Hirose D. The ubiquitousder matophyoma successful l y treated with or al

related species in outdoor environments in Japan. Med

faciei, tinea cor por is and tinea unguium withfosravuconazol l-lisine ethnolate. Med Mycol J. 62（1）:1-4, 2021.

千葉大学

distribution of azole-resistant Aspergillus fumigatusMycol J. 62（4）: 71-78, 2021.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

33

Project for RNA Regulation

原口（RNA 制御）プロジェクト
Summary（研究概要）

Gene regulatory networks determine not only cellular specificity of development, differentiation, andproliferation but also cellular response or competency to viruses, bacteria, and mycetes. This project, which
has started in July 2020, concentrate on miRNA, which suppresses expression of many genes at the posttranscriptional level, to develop basic research of new therapeutic strategies for human diseases such as
cancer.
遺伝子発現の制御ネットワークは , その細胞の発生 , 分化 , 増殖に関する特異性はもちろん , 真菌・細菌・ウイルス等の寄生体に対する宿主の応答性や competency をも規定している . 令和２年７月に開始された本プロジェクトではこのような制御ネットワークを形成する主要な因子として , 多数の遺伝
子群の発現を post-transcriptional レベルで一括して負に制御する miRNA に注目する . そして発現の異常亢進により遺伝子制御ネットワークの乱れの原因となる miRNA を制御する方法論の開発を行い , がんを初めとしたヒト疾患の制圧への基盤研究を展開する .
Research Associate Professor
Research Assistant Professor

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Visiting Professor

特 任 准 教 授

Takeshi Haraguchi
Kazuyoshi Kobayashi
Noriko Sakurai
Naomi Aikawa
Hideo Iba

1. Development of drug delivery system（ DDS ）forSuper-S-TuD to establish RNA medicine for cancer
therapy.

Takeshi Haraguchi, Kazuyoshi Kobayashi and Hideo Iba
Joint Division of RNA Therapy, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

We previously developed the RNA decoy suppressing

特

任

助

教

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
客

員

教

授

原口
小林
桜井
相川
伊庭

健
和善
典子
尚美
英夫

administrated Super-S-TuD into tumor tissues is the major
challenge at present. We previously established basic

formulation for Lipid nanoparticle（LNP）preparation using

COATSOME-X（developed by NOF）and Super-S-TuD

1 4 1 / 2 0 0 c （suppresses the entire miR- 2 0 0 famil y ）encapsulated by such LNPs was shown to suppress the formed
tumors eﬃciently when intravenously administrated into nude
mice bearing tumors formed by a human tumor cell line.

For innovative therapy for broad spectrum of tumors, we

now target miR- 21 , which is expressed in almost all the

specific miRNA activity very eﬃciently, which was designatedepithelial tumors at very high levels and has been shown to be（Synthetic TuD ）, which mimics the unique secondary

important tumor suppressor genes simultaneously. Since miR-

TuD（Tough Decoy）and expressed from viral vectors. S-TuD

structure of TuD was also developed as RNA medicine. It has

strong causative of cancer through inhibition of many
21 is one of the most abundant miRNA species in cancer

been further improved as Super-S-TuD, which showed 3-7

cells, both high dosage of Super-S-TuD21（targeting miR-

inhibition. For the efficient deliver y of systemicallydosage of Super-S-TuD encapsulated by COATSOME-X wasfolds enhancement in its specific activity of the target miRNA

34

千葉大学

21）and efficient DDS would be required. However, high

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

toxic to nude mice. We therefore used COATSOME-Y

tumor bearing mice.

much lower toxicity in mice. We optimized method of

we developed a method to add “active targeting” to LNP byinstead, which shows very eﬀective intracellular delivery and

To improve eﬃciency of LNP encapsulating Super-S-TuD,

preparing LNP composed of COATSOME-Y, helper lipids

modifying the surface layer of LNP with ligand molecules that

encapsulating Super-S-TuD 21 . This LNP encapsulating

ligand molecules are located at the surface layer of the LNP

and PEGylated lipids and established the formulation of LNP

Super-S-TuD21 is about 30nm and can fully suppress miR-21
activity in cancer cell lines at the dosage of 300nM（Nucleic

acids Conc.）. Such LNP showed high retentivity in bloodand good pharmacokinetics with specific accumulation of

LNP into tumor tissues, when administrated into tail vain of

千葉大学

have the ability to bind to target cells. It is important that thefor that the ligand molecules efficiently bind to the target
cells. Therefore, we investigated the method of binding theligand molecule to the tip of the PEG on the surface layer of

LNP using R8 peptide as the ligand molecule and achieved aremarkable increase in the eﬃciency of nucleic acid delivery.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

35

Merged Project of Respiratory Pathophysiology and Pathobiology
巽・寺田（呼吸器生体制御解析）プロジェクト
Summary（研究概要）

When we consider overcoming intractable infections encountered in clinical respiratory medicine, weshould take morphologically / functionally impaired biological structure into consideration other thanpathogens that cause infection. To control intractable infections, elucidation of respiratory biological control
mechanisms could be essential in regard with treatment strategy aimed for recovery and regeneration fromlung injury. Two major topics have been set up since this merged project of respiratory pathophysiology andpathobiology was started.
1）search for new treatment seeds on the basis of combining deep clinical phenotyping and omics analysis.
2）search for mechanistic functions to overcome respiratory infection.
呼吸器内科臨床で遭遇する難治性感染症は , 感染を生じる病原体の問題以外に , 生体構造が形態的／機能的に障害を受けている個体（難病）に発症することが問題となる . 健常人に発症した新型コロナ
ウイルス感染症は , 重篤な肺障害を受けた後でも驚異的な回復をすることを経験する . しかし , 基礎病態のある個体に発症した新型コロナウイルス感染症では後遺症が残る可能性が高い感触がある . 難治
性感染症の制御には , 呼吸器生体制御機構の解明 , その障害からの回復／再生を目指した治療戦略が必要になる .
今年度の主なテーマ（Research Focus）は下記の２点であるが , 呼吸器領域全体を対象として基礎的／臨床的研究を施行することにより , 幅広い視点から呼吸器生体制御に関する知見を得る必要がある .
１）呼吸器生体制御に関する病態解明および新規治療開発に関する研究
２）呼吸器感染症を呼吸器疾患生体制御の観点から研究

Research Professor
Research Professor

Research Associate Professor
Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Research Assistant Professor

Koichiro Tatsumi
Jiro Terada
Yoko Irukayama
Taku Kinoshita
Yasutaka Hirasawa
Hiroyuki Tajima

1. Selective targeting of KRAS-driven lung tumorigenesis

via unresolved ER stress. JCI Insight. 2021; 6: e137876.

Shimomura I, Watanabe N, Yamamoto T, Kumazaki M,
Tada Y, Tatsumi K, Ochiya T, Yamamoto Y

Lung cancer with oncogenic KRAS makes up a significant

proportion of lung cancers and is accompanied by a poor
prognosis. Recent advances in understanding the molecular

36

千葉大学

特

任

教

授

特

任

教

授

特

任

講

師

特

任

助

教

特

任

助

教

特

任

助

教

巽 浩一郎
寺田 二郎
入鹿山容子
木下
拓
平澤 康孝
田島 寛之

pathogenesis of lung cancer with oncogenic KRAS haveenabled the development of drugs, yet mutated KRAS

remains undruggable. We performed small-molecule library
screening and identified verteporfin, a yes-associated protein

1（YAP1）inhibitor; verteporfin treatment markedly reduced

cell viability in KRAS-mutant lung cancer cells in vitro andsuppressed KRAS-driven lung tumorigenesis in vivo.

Comparative functional analysis of verteporfin treatment and
YAP1 knockdown with siRNA revealed that the cytotoxic

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

eﬀect of verteporfin was at least partially independent of YAP1
inhibition. A whole-transcriptome approach revealed thedistinct expression profiles in KRAS-mutant lung cancer cells

between verteporfin treatment and YAP1 knockdown andidentified the selective involvement of the ER stress pathway
in the eﬀects of verteporfin treatment in KRAS-mutant lungcancer, leading to apoptotic cell death. These data provide

novel insight to uncover vulnerabilities in KRAS-driven lungtumorigenesis.

2. Pathophysiological Roles of Stress-Activated Protein

Kinases in Pulmonary Fibrosis. Int J Mol Sci. 2021;
22: 6041.

Kasuya Y, Kim JD, Hatano M, Tatsumi K, Matsuda S
Idiopathic pulmonary fibrosis（IPF）is one of the mostfor the spatial and temporal roles of SAPKs in pulmonary
fibrosis.

3. Multi-institutional prospective cohort study of patientswith pulmonar y hy per tension associated withrespiratory diseases. Circ J. 2021; 85: 333-342.

Tanabe N, Kumamaru H, Tamura Y, Taniguchi H, Emoto
N, Yamada Y, Nishiyama O, Tsujino I, Kuraishi H,

Nishimura Y, Kimura H, Inoue Y, Morio Y, Nakatsumi Y,
Satoh T, Hanaoka M, Kusaka K, Sumitani M, Handa T,

Sakao S, Kimura T, Kondoh Y, Nakayama K, Tanaka K,
Ohira H, Nishimura M, Miyata H, Tatsumi K

Background: There is limited evidence for pulmonary arterial
hypertension（PAH ）-targeted therapy in patients withpulmonary hypertension associated with respiratory disease

symptomatic progressive fibrotic lung diseases, in which（R-PH）. Therefore, we conducted a multicenter prospective

understanding the precise molecular mechanisms underlying

characteristics of responders by evaluating demographics,

patients have an extremely poor prognosis. Therefore,

pulmonary fibrosis is necessary for the development of new
therapeutic options. Stress-activated protein kinases（SAPKs ）, c-Jun N-terminal kinase（JNK ）, and p 38

study of patients with R-PH to examine real-world

treatment backgrounds, and prognosis. Methods and Results:
Among the 281 patients with R-PH included in this study,

there was a treatment-naïve cohort of 183 patients withmitogen-activated protein kinase（p 38）are ubiquitously

normal pulmonary arterial wedge pressure and 1 of 4 major

cellular environmental stresses, including inflammatory andpneumonia [IP], IP with connective tissue disease, orand macrophages are known to participate in the progression

patients had mild ventilatory impairment（MVI）, whereas

regulating the cellular processes and molecular functions intherapies（mainly phosphodiesterase-5 inhibitors）. Among

expressed in various types of cells and activated in response toapoptotic stimuli. Type II alveolar epithelial cells, fibroblasts,of pulmonary fibrosis. SAPKs can control fibrogenesis bydiseases（chronic obstructive pulmonary diseases, interstitial

combined pulmonary fibrosis with emphysema ）; 43 % of
52% had a severe form of PH. 68% received PAH-targetedvarious types of lung cells（including cells of the epithelium,

patients with MVI, those treated initially（i.e., within 2

and lymphoid tissue ）, all aspects of which remain to be

survival than patients not treated initially（3-year survival

interstitial connective tissue, blood vessels, and hematopoietic

months of the first right heart catheterization）had better

elucidated. We recently reported that the stepwise elevation

70.6% vs. 34.2%; P=0.01）; there was no significant diﬀerence

worsening severity of bleomycin-induced fibrosis, indicating（49.6% vs. 32.1%; P=0.38）. Responders to PAH-targeted

pulmonary fibrosis. In addition, a transcriptome analysis ofConclusions: This first Japanese registry of R-PH showed thatof intrinsic p38 signaling in the lungs is correlated with aan importance of this pathway in the progression ofRNA-sequencing data from this unique model demonstrated
that several lines of mechanisms are involved in thepathogenesis of pulmonary fibrosis, which provides a basis forfurther studies. Here, we review the accumulating evidence

千葉大学

in survival in the group with severe ventilatory impairment

therapy were more prevalent in the group with MVI.

a high proportion of patients with MVI（PAH phenotype）
had better survival if they received initial treatment with

PAH-targeted therapies. Responders were predominant in
the group with MVI.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

37

4. Cell tracking suggests pathophysiolog ical andpulmonary arterial hypertension. Mol Med Rep. 2021;

hypoxia rat model of pulmonary arterial hypertension.

２）Miwa H, Sakao S, Sanada TJ, Suzuki H, Hata A,

therapeutic role of bone marrow cells in Sugen5416/
Can J Cardiol. 2021; 37: 913-923.

Miwa H, Sakao S, Sanada TJ, Suzuki H, Hata A, Shiina Y,
Kobayashi T, Kato F, Nishimura R, Tanabe N, Voelkel N,
Yoshino I, Tatsumi K

23: 1. doi: 10.3892/mmr.2021.11866.

Shiina Y, Kobayashi T, Kato F, Nishimura R, Tanabe
N, Voelkel N, Yoshino I, Tatsumi K. Cell tracking

suggests pathophysiological and therapeutic role of bonemarrow cells in Sugen 5416 /hypoxia rat model of

pulmonary arterial hypertension. Can J Cardiol. 2021;
37: 913-923. doi: 10.1016/j.cjca.2021.02.006.

Background: The mechanism of vascular remodelling in３）Takahashi Y, Yamamoto K, Sakao S, Takeuchi T, Suda

Hence, defining the origin of cells constituting intractable

treatment, and survival of portopulmonary hypertension

pulmonary arterial hypertension（PAH）remains unclear.

vascular lesions in PAH is expected to facilitate therapeutic
progress. Herein, we aimed to evaluate the origin of

R, Tanabe N, Tatsumi K. The clinical characteristics,

in Japan. BMC Pulm Med. 2021; 21: 89. doi: 10.1186/
s12890-021-01452-3.

intractable vascular lesions in PAH rodent models via bone４）Tamura Y, Kumamaru H, Abe K, Satoh T, Miyata H,

Methods: To trace BM-derived cells, we prepared chimeric

Fukuda K, Kimura H, Kuwana M, Matsubara H,

marrow（BM）and orthotopic lung transplantation（LT）.

rats transplanted with BM cells from green fluorescent protein（GFP）transgenic rats. Male rats were transplanted withlungs obtained from female rats and vice versa. Pulmonary
hypertension was induced in the transplanted rats via

Sugen5416 treatment and subsequent chronic hypoxia（Su/Hx）.

Ogawa A, Tanabe N, Hatano M, Yao A, Tsujino I,

Tatsumi K. Improvements in French risk stratification

score were correlated with reductions in mean pulmonary

artery pressure in pulmonary arterial hypertension: A

subanalysis of the Japan Pulmonary Hypertension
Registry（JAPHR）. BMC Pulm Med. 2021; 21: 28.
doi: 10.1186/s12890-021-01398-6.

Results: In the chimeric Su/Hx models, GFP-positive cells５）Katayama N, Odagiri K, Hakamata A, Kamiya C,

right ventricular systolic pressure was significantly lower

Watanabe H. Clinical evaluation of drug-drug

were observed in the pulmonary vascular area. Moreover, thecompared with wild-t y pe S u/H x r ats without BM
transplantation（P = 0 .009）. PAH suppression was also

observed in rats that received allograft transplanted BM
transplantation. In male rats that received LT and Su/Hx,

BM-derived cells carrying the Y chromosome were also
detected in neointimal occlusive lesions of the transplanted
lungs received from female rats.

Conclusions: BM-derived cells participate in pulmonary

Uchida S, Tanaka S, Inui N, Namiki N, Tatsumi K,

interactions between the cytochrome P450 substrates

selexipag and clopidogrel in Japanese volunteers. Br J
Clin Pharmacol. 2021; 87: 1903-1911. doi: 10.1111/
bcp.14579.

６）Yamamoto K, Tanabe N, Takahashi Y, Naito A, Sekine

A, Suda R, Jujo Sanada T, Sugiura T, Shigeta A, Sakao

S, Tatsumi K. Characteristics of patients meeting the
new definition of pre-capillary pulmonary hypertension

vascular remodelling in the Su/Hx rat model, whereas BM（N i c e 2 0 1 8 ）i n a s i n g l e J a p a n e s e p u l m o n a r yof PAH.

doi: 10.1186/s12890-021-01623-2.

transplantation may contribute to suppression of development

７）Suzuki Y, Sekine A, Nishiyama A, Sugiura T, Tanabe

Publications

１）Sakao S, Kawakami E, Shoji H, Naito A, Miwa H,

Suda R, Sanada TJ, Tanabe N, Tatsumi K. Metabolic
remodeling in the right ventricle of rats with severe

38

hypertension center. BMC Pulm Med. 2021; 21: 260.

千葉大学

N, Isaka Y, Hashimoto Y, Okaya T, Kuriyama A,

Nagata J, Shigeta A, Sakao S, Tatsumi K, Suzuki T. A

case of pulmonary arterial hypertension with V/ Q
SPECT/CT that showed localized uptake of 99mTc just

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

below the pleura and a unique distribution. Respirol

Kuriyama A, Iawasawa S, Sugiura S, Tanzawa H,８）Arano T, Imamoto T, Suda R, Kasai H, Sugiura T,

osteonecrosis of the jaw complicated by cervical abscess

Case Rep. 2021; 9: e0847. doi: 10.1002/rcr2.847.

Shigeta A, Yamamoto K, Nagata J, Sakao S, Tanabe N,

Tatsumi K. Heritable pulmonary arterial hypertension

Tatsumi K. A case of intractable medication-associatedand sepsis. Chiba Medical J. 2021; 97E: 49-56. doi:
10.20776/S03035476-97E-4-P49.

complicated by multiple pulmonary arteriovenous

14）Kasuya Y, Kim JD, Hatano M, Tatsumi K, Matsuda S.

101352. doi: 10.1016/j.rmcr.2021.101352.【AVM 合 併

Kinases in Pulmonary Fibrosis. Int J Mol Sci. 2021; 22:

malformations. Respir Med Case Rep. 2021 ; 32 :HPAH】

Pathophysiological Roles of Stress-Activated Protein
6041. doi: 10.3390/ijms22116041.

９）Tanabe N, Kumamaru H, Tamura Y, Taniguchi H,15）Kasai H, Shikino K, Saito G, Tsukamoto T, Takahashi

H, Nishimura Y, Kimura H, Inoue Y, Morio Y,

Tatsumi K, Yoshino I, Ikusaka M, Sakao S, Ito S.

Emoto N, Yamada Y, Nishiyama O, Tsujino I, Kuraishi
Nakatsumi Y, Satoh T, Hanaoka M, Kusaka K,
Sumitani M, Handa T, Sakao S, Kimura T, Kondoh Y,

Y, Kuriyama A, Tanaka K, Onodera M, Yokoh H,

Alternative approaches for clinical clerkship during the

COVID-19 pandemic: online simulated clinical practice

Nakayama K, Tanaka K, Ohira H, Nishimura M,

for inpatients and outpatients-A mixed method. BMC

cohort study of patients with pulmonary hypertension

02586-y.

Miyata H, Tatsumi K. Multi-institutional prospective

Med Educ. 2021; 21: 149. doi: 10.1186/s12909-021-

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Yamamoto K, Sugiura T, Matsumura T, Sakao S,

Tanabe N, Tatsumi K. Interventricular septal curvature
as an additional echocardiographic parameter forevaluating chronic thromboembolic pulmonar yhypertension: A single-center retrospective study. BMC
Pulm Med 2021 Oct 20 ; 21（1）: 328 . doi: 10 .1186 /s12890-021-01683-4.

11）Abe M, Tsushima K, Ishii D, Shikano K, Yoshioka K,

Sakayori M, Suzuki M, Hirasawa Y, Ishiwata T,

Kawasaki T, Ikari J, Terada J, Tatsumi K. Risk factors

for acute exacerbation following bronchoalveolar lavage

in patients with suspected idiopathic pulmonary fibrosis:

A retrospective cohort study. Adv Respir Med. 2021; 89:
101-109. doi: 10.5603/ARM.a2021.0012.

12）Suzuki J, Kasai H, Terada J, Shikano K, Sasaki A,

Suzuki H, Nakajima T, Kouchi Y, Shiina M, Kobayashi
T, Ohwada C, Ikeda JI, Yoshino I, Tatsumi K.

Bronchiolitis obliterans after stem cell transplantation forhematologic malignancies rescued by lung transplanta-

Anazawa R, Suzuki M, Masuda Y, Haneishi H,

imaging assessment of areas of the lung during free-breathing of patients with chronic obstructive pulmonary
disease. Acad Radiol. 2021; S1076-6332（21）00205-1.
Online ahead of print. doi: 10.1016/j.acra.2021.03.034.

17）Hirasawa Y, Nakada TA, Shimazui T, Abe M, Isaka Y,

Sakayori M, Suzuki K, Yoshioka K, Kawasaki T, Terada
J, Tsushima K, Tatsumi K. Prognostic value oflymphocyte counts in bronchoalveolar lavage fluid inpatients with acute respiratory failure: a retrospective

cohort study. J Intensive Care. 2021; 9:21. doi: 10.1186/
s40560-021-00536-w.

18）Ishiwata T, Seki T, Gregor A, Aragaki M, Motooka Y,

Kinoshita T, Inage T, Bernards N, Ujiie H, Chen Z,

Eﬀat A, Chen J, Zheng G, Tatsumi K, Yasufuku K. A

preclinical research platform to evaluate photosensitizers
for transbronchial localization and phototherapy of lungcancer using an orthotopic mouse model. Transl Lung
Cancer Res. 2021; 10: 243-251. doi: 10.21037/tlcr-20813.

tion: A report of two cases. Respir Investig. 2021; 59:

19）Hiwasa T, Wang H, Goto KI, Mine S, Machida T,

13）Okunaga I, Shikano K, Kasai H, Koike K, Kawasaki T,

M, Yamagishi K, Iso H, Sawada N, Tsugane S,559-563. doi: 10.1016/j.resinv.

千葉大学

Kobayashi E, Yoshida Y, Adachi A, Matsutani T, Sata

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

39

Kunimatsu M, Kamitsukasa I, Mori M, Sugimoto K,

antibodies as predictive risk markers for acute ischemic

M, Nishi E, Hattori A, Yamamoto M, Maezawa Y,

s12916-021-02001-9.

Uzawa A, Muto M, Kuwabara S, Kobayashi Y, Ohno
Kobayashi K, Ishibashi R, Takemoto M, Yokote K,20）Shimomura I, Watanabe N, Yamamoto T, Kumazaki M,

Nomura F, Arasawa T, Kagaya A, Maruyama T,

targeting of KRAS-driven lung tumorigenesis via

Takizawa H, Kishimoto T, Matsushita K, Kobayashi S,
Matsubara H, Tomiita M, Hamanaka S, Imai Y,

Nakagawa T, Kato N, Terada J, Matsumura T,

Tada Y, Tatsumi K, Ochiya T, Yamamoto Y. Selective
unresolved ER stress. JCI Insight. 2021; 6: e137876.
doi: 10.1172/jci.insight.137876.

Katsumata Y, Naito A, Tanabe N, Sakao S, Tatsumi K,21）Saito G, Ebata T, Ishiwata T, Iwasawa S, Yoshino I,

H, Shirouzu M, Yokoyama S, Kudo T, Doi H, Iwase

events in non-small cell lung cancer patients treated with

Ito M, Shiratori F, Sumazaki M, Yajima S, Shimada
K, Ashino H, Li SY, Kubota M, Tomiyoshi G,

Shinmen N, Nakamura R, Kuroda H, Iwadate Y.

Serum anti-DIDO 1 , anti-CPSF 2 , and anti-FOXJ 2

40

stroke. BMC Med. 2021 ; 19 : 131 . doi: 10 .1186 /千葉大学

Takiguchi Y, Tatsumi K. Risk factors for skeletal-relatedbone-modifying agents. Support Care Cancer. 2021; 29:4081-4088.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology
National BioResource Project Pathogenic Microorganisms
文部科学省

ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原真核微生物」

In FY2002, the Ministry of Education, Culture, Sports,

ごとの見直しを行い，2017年度より第４期が開始された．

BioResource Project（NBRP）to construct the framework for究センター（病原真菌・放線菌）と長崎大学熱帯医学研

bioresources, with a focus on those that required strategic

らの病原微生物株の収集・保存・提供体制を整備して，

the NBRP every five years, in FY2017, the forth phase has

し，感染症と病原体の教育・研究をする人々を支援してChiba University ’s Medical Mycology Research Center

本プロジェクトは，今後いかなる感染症が発生してもScience and Technology（MEXT）implemented the National

NBRP 病原微生物中核機関である千葉大学真菌医学研

systematic collection, preservation, and distribution of究所（病原性原虫）は，相互の機関の連携を図り，これdevelopment by the national government. After the reviewing

高度情報を賦与した信頼できる病原微生物株として提供

stared.

いる．

（ M M R C ）i s t h e “ N BR P C e n t e r ” f o r p a t h o g e n i c

対応できる病原微生物コレクションを目指している．

microorganism, and this project is carried out by MMRC

（pathogenic fungi/actinomycetes）and Nagasaki University’s

Institute of Tropical Medicine（pathogenic protozoa）. Working

together, they cooperate in various eﬀorts to support education

and research pertaining to infectious diseases and pathogens.

Specifically, they are developing a system for collection,
preservation, and distribution of pathogenic microorganisms,

and they supply reliable strains of pathogenic microorganismsthat are backed by high-level information.

The project aims to establish a reliable and suﬃcient at thecollection to deal with infectious diseases carried by any
pathogenic microorganisms.

文部科学省では2002年度からナショナルバイオリソー
スプロジェクト（NBRP）を開始し，国が戦略的に整備することが重要な生物資源について体系的に収集，保存，提供などを行うための体制を整備してきた．その後５年

FIG.1. E xhibition at the 45th Annual Meeting of the Molecular
Biology Society of Japan.

TABLE 1. Results for the fourth quarter of NBRP（strains）.

FY2017FY2018FY2019FY2020

FY2021＊

Collection

626

563

579

886

650

Preservation24, 604

24, 459

24, 89925, 785

26, 435

Provision

1, 429980

1, 319222

1, 246

Number of strains＊: to 31th Dec., 2021

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

41

Cooperative Research of Priority Areas with NEKKEN, Nagasaki University
Project for Morphological, Physiological and Molecular Biological Analysis of Pathogenic
Fungi and Actinomycetes Collected in Africa and Vietnam.

長崎大学熱帯医学研究拠点特定領域共同研究「熱帯地域 , 特にアフリカおよびベトナムで発生している真菌症・放射菌症の原因菌の収集と形態学的 , 生理学的 , 分子生物学的解析」プロジェクト
明らかにしてきた . その結果は , 現地のマスコミにも取Under assistance of Kenya Research Station, Inst.

NEKKEN, Nagasaki univ. , we are analy zing toxins

り上げられた .

and also producer fungi. We found the local foods are

生し , 小麦汚染については世界的に調査されているが ,international standards. The result has been announced in

い . そこで , ケニアのコーンからカビを分離するととも

Fumonisins are produced by Fusarium, a pathogen of wheat,

これらの研究は地球のグローバル化 , 温暖化 , 環境・

contaminating major local grains（maze, wheat）and milks,

また , フモニシンは小麦の病原菌である Fusarium が産

ケニアの主食であるコーンに関する研究はほとんどな

contaminated by the toxins at concentrations far above theにフモニシン産生量を測定した .

newspapers, and received large attention.

食糧事情の悪化が進む中で , ケニアばかりでなく日本のand while wheat contamination has been investigated

人々の医療や QOL の維持にも , 将来大きく貢献するはworldwide, there is little research on corn, a staple food in

ずである .

Kenya. In this study, we isolated the fungus and measured
fumonisin production from corn in Kenya.

These studies should contribute significantly to the future ofhealth care and quality of life for the people of Japan as well as

Kenya in the face of globalization, global warming anddeteriorating environmental and food conditions.

長崎大学熱帯医学研究所ケニア拠点の助力を得て , ケ

ニアを中心に上記プロジェクトを展開している . 現在までにケニア各地の主要穀物（コーン , 小麦）やミルクなどを汚染するカビ毒（発がん性アフラトキシン他）とそFIG.1. F usarium verticillioides causing corn Fusarium headblight. （A）Colony, PDA, 25℃ , 7 days. （B）Conidiogeneses and macroconidia. Scale = 10 µm.

の生産菌の解析を進め , 現地の食糧の多くが , 世界の安全基準値を大きく上回るカビ毒で汚染されていることを

TABLE 1. Fusarium sprcies isolated from corn in Kenya.

Fusarium species
F. andiyazi

F. verticillioides
F. temperatum

42

RegionRift Valley（n ＝11）

Lower Eastern（n ＝41）

Total（n ＝52）

6（54.5%）36（87.8%）42（80.8%）5（45.5%）

0

千葉大学

（0%）

4（ 9.8%）1 （2.4%）

真菌医学研究センター報告

第 25 巻9（17.3%）

1 （1.9%）2021

The project for prophylaxis, diagnosis, and treatment for aspergillosis
and the other mycoses in aged and neonate patients
高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発プロジェクト
This project aims to cope with the intractable fungal disease,conducted a nationwide retrospective survey in order toinvestigating the epidemiology, exacerbating factors andBased on this background, we reported the utilize of gastricaspergillosis particularly in elderly and neonates, bydetermine numbers of invasive fungal infections（IFI）in Japan.

obstacles for treatment such as drug resistance. Fungal

aspirate fungal culture for the diagnosis of infantile fungal

investigation, and is another target of this project.

neonatal meningitis and ventriculitis caused by Aspergillus

fumigatus has become a growing serious threat. Mutation in

fluid voriconazole concentration was useful for the appropriate

infections in neonates have been an unexplored field of

The development of azole-resistance among Aspergillus

Cyp51A is known to be one of the critical mechanisms of azole
resistance in A. fumigatus. We had already reported a novel

mechanism of azole-resistance（Hmg1 mutation）previously

pneumonia caused by Rasamsonia piperina. We also reported
fumigatus. The continuous monitoring of serum and cerebral

treatment of this severe case. In this year, we analyzed another

Aspergillus fumigatus strain isolated from neonatal invasive

deep-seated mycosis. We compared above two strains using（2018）. This year, we analyzed the Hmg1 mutation in detail

STRs analysis and the two strains were of diﬀerent background.

Medical Mycology（2021）. In addition, we investigatedneeded for preventing deep-seated mycosis in extremely

using the CRISPR/Cas9 system and reported it as an article in

cyp51A gene polymorphisms of the fungal strains isolated inJapan and overseas, compared them with other countries（particularly Europe, where resistant strains are frequently

isolated）, and reported in Mycoses（2021）. Furthermore, we

also investigates the azole-resistance caused by an amino-acidsubstitution in other protein participating in the lipid
metabolism, and will present these results in an international

Environmental fungal survey in neonatal intensive care unit ispremature and low birth weight infant. Above study results
gave us the important information for the establishment of

diagnosis, and treatment for aspergillosis and the other mycosesin neonate patients.

先進各国と同様に我が国で最も死亡者が多い深在性真菌症（内臓真菌症）はアスペルギルス症であり , 特に我conference.

が国では高齢化や慢性閉塞性肺疾患（COPD）等の慢性

aspergillosis is critical to prevent its exacerbation. To this end,

ことから , 本疾患の研究は社会的意義が大きい . 更に

candidates for exacerbation. This year, we clarified how the

くのアスペルギルス症の合併（CAPA: COVID-Associatedsystem（in preparation for submission）.

ギルス症の重要性は世界的に再認識されている . 本プロ

major domestic hospitals, in the cases of fungal infections

化因子である薬剤耐性（とくに主力薬剤であるアゾール

aspergillus antibody testing is reduced compared with the ones

児を中心とした新生児等の真菌症の解析により , 新規診

The investigation into the mechanism of the development of

we have been analyzing proteins in the fungal cell wall as

fungal cell wall proteins interact with the host’s innate immune
Through collaboration with Keio University and some other

肺疾患に好発する慢性肺アスペルギルス症の頻度が高い
は , 現在世界中を混乱に陥れている COVID-19感染に多Pulmonary Aspergillosis）がみられたことから , アスペル

ジェクトはこれらの疾患の疫学 , 増悪因子 , 重要な難治

caused by non-fumigatus Aspergillus, the sensitivity of serum薬に対する耐性）に関する研究 , さらに早産低出生体重

caused by A. fumigatus, and reported in Journal of Clinical

断法 , 治療法 , 予防法の開発により本疾患の制圧を目指

Microbiology（2021）. We are carrying out further analysis on

the detail of the resistant isolates.

For the study of deep-seated mycosis among neonates, we

千葉大学

すものである .

耐性菌はアスペルギルスにおいてもきわめて深刻な問題となりつつあるが , 耐性菌研究には , 数多くのさまざ

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

43

まな症例からの最新の検体と臨床情報の収集が不可欠である . 本センターは日本感染症学会及び日本臨床微生物（論文準備中）.

また , 慶應大学病院等との国内共同疫学研究では , A.

学会により「先進的感染症検査施設」に認定され , 真菌fumigatus 以外の Aspergillus spp. による感染で血清を用いの検査依頼 , 診療サポートを引き受けていることから ,. 現在収して報告を行った（J Clin Microbiol 誌にて発表）

症リファレンスセンターとして全国の医療施設から種々多 く の 検 体 を 集 め る こ と が 出 来 て い る. 今 年 はた抗体検査の感度が低下することを明らかにし , 論文と集した薬剤耐性菌株についてさらに詳細な解析を進めてCOVID-19の流行にもかかわらず , 検査依頼400件あまいる .

染制御部・感染制御センター及び NHO 東京病院も加え

深在性真菌感染症発症状況全国調査を実施し , 国内の実

ギルス症難治化の一因である Aspergillus fumigatus 耐性化

糸状菌感染症診断を試みたところ , 真菌に易感染性を示の新規耐性メカニズム（Hmg1変異）について , CRISPR/

Rasamsonia piperina の 分 離 に 成 功 し , 論 文 を 公 表 し た .

告した（Med Mycol 誌にて発表）. また , 我が国及び海外炎症例に対して , 血中と髄液中のボリコナゾール濃度をりに達した . これらに加えて , 慶應大学呼吸器内科／感たより緻密な共同研究ネットワークを構築し , アスペルの研究を続けている . 令和３年度は我々が報告した本菌

Cas9システムを用いて詳細な解析を行い論文として報新生児領域における研究に関しては , これまで新生児態を明らかにした . また , 乳児の胃液の真菌培養によるすことで知られる慢性肉芽腫症の乳児肺炎症例からまた , 新生児の Aspergillus fumigatus による髄膜炎・脳室の分離株を対象に遺伝子多型の調査を行い , 諸外国（特経時的に測定することで , 適切な治療を行うことが出来報告を行った（Mycoses 誌にて発表）. また脂質代謝に関

襲性アスペルギルス感染症症例から分離されたに耐性株が多い欧州）との比較を行いその知見について与する別のタンパクの変異によるアゾール薬耐性化につた症例を経験し . 論文公表した . 本年は , 別の新生児侵Aspergillus fumigatus 株と上記髄膜炎・脳室炎症例の分離

いて解析を進め , 成果を国際学会において発表予定であ株について STRs（microsatellite）解析を実施したが , 異子の新たな候補であるアスペルギルス細胞壁タンパク質

生体重児で , 皮膚症状を初発症状としており , 新生児集る . 一方 , 難治化克服のための基礎研究として , 病原因の存在を示唆してきたが , 今年は更に研究を進めて宿主の自然免疫がアスペルギルス細胞壁タンパク質によって誘導される機序を in vitro および in vivo の実験によって証明するなど , 多くの画期的な知見を得ることが出来た

44

千葉大学

なる株と判断された . いずれの症例も , 超早産・超低出中治療室（NICU）の管理方法 , 環境中の真菌に関する調査を行うことを計画している . これらの検討結果は ,新生児アスペルギルス症の診断・治療法策定において極めて重要な情報を提供する .

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for
Sustainable Development（SATREPS）
The establishment of a research and reference collaborative system for the diagnoses of fungal infections
including drug-resistant ones in Brazil and Japan

AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「ブラジルと日本の薬剤耐性を含む真菌感染症診断に関する研究とリファレンス協力体制強化プロジェクト」
The number of fungal infections has been increasing in recent

years because of clinical practice advances such as hematopoietic

stem cell transplantation and solid organ transplantation. Also,patients with chronic lung disease（pulmonary tuberculosis,

COPD, and others）are generally susceptible to pulmonary

fungal infection. Recently, many cases of invasive fungal

infection in COVID-19 patients have been reported, andresearchers put considerable emphasis on fungal infections. In
general, fungal infections are refractory diseases, and theirmortality is high. In these aspects, the impact of fungal

infections is too high, not only in the medical field but also insociety.

Recently, various fungi possessing resistance to antifungals

have become a severe problem. In 2019, CDC in the US had

mechanism of antifungal drug resistance might diﬀer depending

The emergence and increase of drug-resistant fungi are expectedshould be considered when developing a method for detecting a

has been reported that infections caused by drug-resistant fungi

We are developing resistance gene detection methods based

listed drug-resistant fungi as one of the five “urgent threats. ”

to lead to refractory disease and increased mortality directly. It

have a higher mortality rate than the ones caused by drug-sen-on the region/country, and it was confirmed that each situation
resistance gene.

on LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）. Using

sitive fungi. However, South America, particularly in Brazil,

several resistant strains, we partially established the detection

situations, this project was started between the Medical

Besides, we examined clinical and environmental isolates ofhas been little investigated and remains unclear. Given thesemethod by LAMP and published as an article.

Mycology Research Center, Chiba University, and the

Candida krusei and C. tropicalis, whose antifungal resistance is

Due to the COVID-19 pandemic worldwide, we are actively

reported their antifungal mechanisms and phylogenetic analysis.

University of Campinas.

conducting research meetings and sharing experimental

one of the clinically facing problems worldwide. We have

As a research network tool in Brazil, REDCap®, a systemprocedures using remote video systems.

for data collection and management developed by Vanderbilt

genes in Japan are significantly diﬀerent from those in Europe

Several medical institutions in Brazil have participated in a

We have already found that mutation patterns of drug target

and Brazil. In other words, it was suggested that the

千葉大学

University, was introduced to the University of Campinas.

multi-center database of mycosis cases, and more than 250 cases

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

45

have already been enrolled.

患者 , また慢性肺疾患（肺結核症や肺気腫など）を基礎

Besides, using this consortium, a bio-resource bank for

疾患に有する患者等の局所的免疫低下患者などが増えて

the fungal preservation. The preserved strains are clinical fungal

る . さらに新型コロナウイルス感染症（COVID-19）患

the soil, air, plants, or natural water）.

す重要視されている . 一般に深在性真菌症は難治で致死

fungal strain has been established, and we have already started
isolates from several hospitals and environmental isolates（fromおり , そのような患者の発症頻度が高いことが挙げられ者に合併した深在性真菌症症例が多数報告され , ますま
率が高いことが知られており , その意味で , 真菌感染症のインパクトは医療分野のみならず社会的にも極めて高いと言える .

さらに加えて近年 , ヨーロッパ諸国を皮切りに抗真菌薬に対する耐性を有した多種多様な真菌が問題となりつつある . 2019年 , 米国 CDC は , 最も差し迫った脅威となる５種の微生物のうちのひとつに薬剤耐性真菌をリストアップした . 薬剤耐性真菌の出現 , 増加は疾病の難治

化 , 致死率の上昇に直結することが予想される . 実際 ,薬剤感性真菌による感染症よりも薬剤耐性真菌による感染症の方が致死率が高いとの報告もある . 一方で , ブラジルを含めた南米での状況はほとんど調査されておらず , 不明のままであったため , その早急な実態解明はまさに社会的要請である .

本研究では , ブラジルのサンパウロ州立カンピーナス

大学と連携し , カンピーナス首都圏における耐性真菌による感染症の実態を明らかにし , 耐性真菌の検出法を開発することを通じ , ブラジルにおける難治性真菌感染症の治療戦略を構築するとともにブラジルにおけるカン
ピーナス大学を中心とした耐性真菌感染症研究拠点研究
ネットワークの構築を目指す .

今般の COVID-19の世界的な蔓延のため , 遠隔ビデオシステムを用いた研究ミーティングや実験手技共有を積極的に行っている .

我が国における薬剤の標的遺伝子の変異パターンは欧州及びブラジルとは大きく異なることをすでに我々は見出している . すなわち , 抗真菌薬耐性のメカニズムは国や地域によって異なる可能性が示唆され , 耐性遺伝子検出法を開発するうえで国情を考慮すべきであることが確認された .

以上のようなブラジルの状況を踏まえ , 耐性遺伝子検出法の開発を開始している . ブラジルで検出された遺伝真菌感染症患者数は近年増加の一途をたどっている . その背景として , 免疫抑制薬の投与 , 造血幹細胞移

植や固形臓器移植を受けている等による全身的免疫低下

46

千葉大学

子変異タイプの耐性株を用い , LAMP（Loop-Mediated

Isothermal Amplification）法による検出法を確立し論文として報告した . また抗真菌薬耐性を有する菌種として臨床的に問題となっている Candida krusei および C. tropicalis

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

について , 系統解析および耐性メカニズムの探索を行

これまでに250症例を超える症例数が登録されている .

ブラジル国内の研究ネットワークのツールとして導入た真菌株保存バンクを設立し , 実際に複数の医療機関かい , 論文発表を行った .

した , REDCap（米国 Vanderbilt 大学が開発したデータ集

積管理システム）を基盤とした真菌症の症例データベー
スは , 多施設共同で真菌症の症例が集積されつつあり ,

千葉大学

また , このコンソーシアムを利用し , 研究機関も含め

らの臨床分離株に加え , 環境（土壌 , 空気 , 植物 , 水など）からの分離真菌株の保存を開始している .

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

47

Generating research infrastructure and novel technologies foranti-infective drug and vaccine discovery, AMED-CREST
Study of the molecular mechanism of persistent infection and identifying novel privileged
molecular structures for the next-generation antibacterial drug discovery

日本医療研究開発機構革新的先端研究開発支援事業
感染症創薬に向けた研究基盤の構築と新規モダリティ等の技術基盤の創出：「難治性感染症制御に資する細菌持続感染機構解明と次世代型抗感染症化合物の創出」

Antibiotics have helped control various bacterial infections

infection-controlling compounds, based on the molecular

but have also promoted bacterial evolution to acquire resistantmechanism of bacterial persistence infection, and identify novel

worldwide. Therefore, a novel therapeutic approach requires

Our multi-faceted project will enable a novel and uniquebacterial evolution.

tolerance and resistance.

genes, leading to the emergence of multidrug-resistant bacteria
both the inhibition of bacterial growth and the deceleration ofBacterial evolution is triggered when bacteria survive in lethal

environments, such as in the presence of antibiotics and hostimmune responses. Bacteria survive with minimal cellular

activity in harsh environments and re-grow after stress removal,

privileged molecular structures for antimicrobial drug discovery.

discovery of next-generation therapeutics to overcome bacterial

抗菌薬開発の成功は , 多くの細菌感染症制御を可能としたが , 多剤耐性菌など新たな難治性感染症の要因をも生み出した . 現在 , 既存抗菌薬では制御不能な難治性感

during which they epigenetically memorize stresses and improve

染症の克服が喫緊の課題となっている .

increased tolerance, called persisters, continue to infect the hostに関わる . 感染時 , 細菌は , 増殖と細胞活動が最小限の

their tolerance to such environments. Bacterial cells with

細菌進化は , 過酷なストレス環境での生存機構と密接

for an extended period. While surviving continuous exposure to

休眠状態を繰り返す . この間ストレスを記憶 , 寛容性を

resulting in the generation of descendants exhibiting new

抗菌薬投与 , 免疫応答等の環境変化に耐えながら , ゲノ

stress, bacteria gain genetic mutations and exogenous genes,

向上させ , 持続的な宿主内生存を可能とする . 同時に ,phenotypes. We believe that understanding bacterial tolerance

ムアレンジを引き起こし , 新たな表現型を示す細菌へと

therapeutics.

は , 新規感染症薬の標的となる .

is essential for the discover of next-generation antimicrobial
One of the hurdles in antibiotics development is the quality

変容する . 従って , 過酷な環境で働く細菌の制御因子
以上を背景に , 本研究では「抗菌薬・免疫応答依存的of the compound library. We will overcome this hurdle byな細菌持続感染症の分子機構解明」と「難治性感染症制Natural products are attracting attention as novel resources for

シスターを制御する次世代型抗感染症薬の創出への貢献

using an original, unconventional natural product library.

drug discovery.

This project aims to find novel screening targets for

48

千葉大学

御のための次世代型感染症創薬研究」を両輪とし , パーを目指している .

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Leading Research Promotion Program, Institute for Global Prominet Research
Advanced Research of Infection and Immunity Based on
Integrative Understanding of Host-Microbe Interactions

千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラム「 超個体の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」

The research group, composed of the researchers in MMRC,

School of Medicine, Faculty of Pharmaceutical Sciences, andUniversity Hospital, was selected as the Leading Research

Promotion Program of Chiba University. The members focus

幹」を設置しており , 当センター教員が中心となった研究プロジェクト「“ 超個体 ” の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」が , リーディング研究

育成プログラムに採択され , 活動を実施している . 本プon the understanding of molecular interactions between hosts

ログラムでは , 感染免疫分野の教員が中心となり , 医学

the model assay systems targeting the skin, respiratory, and

微生物と宿主である個体の免疫システムとの相互作用 ,and microbes, especially commensal fungi and bacteria, usingdigestive organs. The members aim to reveal the molecularmachinery underlying the disruption of homeostatic balance inthe hosts by invasive pathogens, which induce infectious

研究院 , 薬学研究院 , 附属病院の研究者と連携し , 共生
そこへ侵入する病原体による恒常性の破綻と感染症の発症機序などについての基礎研究を , 皮膚 , 呼吸器 , 消化器など各種器官でのモデル実験系を用いて解析し , そこdiseases. The findings obtained from the project will help toから得られる成果を統合的に理解することで , 感染症・

diseases and lead to the improvement of human health.

「感染制御学」を創出し , 我々の健康維持と感染症など

create innovative achievements in therapeutics of infectious

千葉大学では , 学内での研究の核となる新たな研究グ

ループの創出を目指す「グローバルプロミネント研究基

千葉大学

免疫制御の分子メカニズムを明らかにする次世代型のの克服へつながる新規イノベーション創生を目指している.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

49

miRaX Therapeutics K.K.
ミラックスセラピューティクス株式会社
MiRaX Therapeutics K.K. , established in May 2020, is adrug discovery venture company originated from Chiba Univer-sity and the University of Tokyo. Our main targets are “Development of nucleic acid drugs using miRNA inhibition technology” and “Development of novel NF-κB inhibitors”.

1. Development of nucleic acid drugs using miRNA

inhibition technology

The miRNA inhibition technology developed by the founders

has already been licensed out as a research reagent in many

countries and highly evaluated for its strong and long-lasting

inhibitory effects. Our mission is to apply this technology topharmaceuticals and create nucleic acid medicine for diseases
with unmet medical needs.

2. Development of NF-κB inhibitor

NF-κB and SWI/SNF complexes.
当社は , 2020年５月に設立された千葉大学・東京大学

発の創薬ベンチャー企業です . 主な事業は「miRNA 阻害技術を活用した核酸医薬品開発」と「新規 NF-κB 阻害薬の開発」です .

1. miRNA 阻害技術を活用した核酸医薬品開発

創業者らが開発した miRNA 阻害技術は , すでに研究用試薬として世界各国で販売されており , 阻害効果の強さや持続の長さで , 高い評価を得ています . この技術を医薬品に応用し , 治療法の確立されていない疾患に対する核酸医薬品を生み出すことを目標としています .
2. NF-κB 阻害薬の開発

転写因子 NF-κB は多くの炎症疾患やがんなどで構成

Since the transcription factor NF-κ B is constitutively

的に活性化されているため , その活性化に至る経路は ,and is a promising therapeutic target. However, the molecules

し既存の NF-κB 阻害剤の多くの標的分子は , シグナル

located at the cross-road of signal transduction pathway.

広範囲に及んでしまう欠点があります . そこで我々はspecific. To develop specific inhibitor for NF-κB, we focus on

質として転写活性化を担う d4ファミリータンパク質

activated in inflammatory diseases and many types of cancers
targeted by most of the currently available NF-κB inhibitors are
Therefore, their biological eﬀects are inevitably broad and not

d4 family proteins（DPF1, DPF2, DPF3a/b）which are crucial
for NF-κB transactivation as adaptor proteins connecting

これらの治療の有望な標的となると考えられます . しか伝達経路の交差点に位置していて , その生物学的効果は

NF-κB と SWI/SNF 複合体をつなぐアダプタータンパク（DPF1, DPF2, DPF3a/b）に着目し , NF-κB の阻害剤の開発を進めています .

HP: https://www. mirax-t. co. jp

50

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

2020 Fiscal Year Cooperative Research Program Report

令和２年度 共同利用・共同研究報告
研究課題

’20－１

ルス感染により発現誘導された LGP2は , RNA サイレン

Analysis of microRNA-mediated human defense
system induce by viral infection
Kumiko Ui-Tei

シングの主要因子である TRBP と相互作用することで ,TRBP によって生合成されるはずであった microRNA の生合成を阻害することを見出した . さらに , 生合成が阻害された microRNA による RNA サイレンシングが起こらなくなるため , その標的遺伝子であるアポトーシス関（Graduate School of Science, The University of Tokyo）

連遺伝子群の発現が誘導されることを見出した . 本研究（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

す , 合成核酸である poly（I:C）を用いて LGP2と TRBP

（Graduate School of Science and Engineering, Saitama

ネットワークの全貌の解明を目指した. その結果,

Mitsutoshi Yoneyama, Koji Onomoto
Tomoko Takahashi
University）

ウイルス感染で誘発される microRNA によるヒトの新しい生体防御機構の解明

では , ウイルス感染と同様のインターフェロン応答を示の相互作用を介した microRNA の制御による遺伝子発現

LGP2-TRBP 相互作用によって生合成過程が抑制される
microRNA 群は特徴的な二次構造をもつことを明らかにした . すなわち , 塩基対合確率（Base pairing probability）の高い siRNA は TRBP と結合しやすいことを明らかにした . さらに , それらが発現制御する mRNA 群をウェブ

程久美子

ツールによる予測と RNA シークエンシングによる予測（東京大学大学院理学系研究科）

を組みあわせることによって特定し , microRNA-mRNA

米山光俊・尾野本浩司

ネットワークの詳細を明らかにした . poly（I:C）によっ（千葉大学真菌医学研究センター）て駆動する microRNA を介した遺伝子発現制御ネット

高橋朋子

ワークは , 極めて複雑であるにもかかわらず , 最終的に（東京大学大学院理学系研究科）

はアポトーシス経路に収束するという興味深い結果が得られた . 本成果は現在論文投稿準備中である .

研究成果
哺乳類細胞にウイルスが感染すると , ウイルスセン

サータンパク質を介して I 型インターフェロンを誘導して細胞を防御する . 一方で , ウイルス感染細胞はアポトーシスによって自滅することで周辺の細胞を守ることが知られている . 両者はともにウイルス感染から自身を守る , 哺乳類のみに保存された高次生体防御機構である

研究課題

’20－２

Development of a novel vaccine for preventing
infectious diseases caused by Cr yptococcus

neoformans

が , アポトーシスが起こるメカニズムは , これまで不明

Kazuyoshi Kawakami, Jun Kasamatsu

ンパク質である RIG-I like receptors（RLRs）として RIG-

Katsuhiko Kamei, Susumu Kawamotoであった . 受入教員の米山教授は , ウイルスセンサータ

I, MDA5, LGP2といった３つの因子を見出している .

RIG-I と MDA5はそれぞれ異なる特徴をもつウイルス性（Tohoku University Graduate School of Medicine）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

RNA を認識し IFN を誘導するのに対し , LGP2はその機能が不明であった . 我々はこれまでの研究により , ウイ

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

51

クリプトコックス感染症の発症予防を目指した新規ワクチンの開発
川上和義・笠松純（東北大学大学院医学系研究科）

亀井克彦・川本進（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果
クリプトコックス症は , エイズ , 糖尿病 , 膠原病 , 腎

発表論文１）Sato Y, Sato K, Yamamoto H, Kasamatsu J, Miyasaka
T, Tanno D, Miyahara A, Kagesawa T, Oniyama
A, Kawamura K, Yokoyama R , Kitai Y, Ishizuka
S, Takano K, Shiroma R, Nakahata N, Kawakami
K, Kanno E, Tanno D, Yamasaki S, Hara H, Ishii
K, Kawakami K: Limited role of Mincle in the hostdefense against infection with Cryptococcus deneoformans.
I n f e c t . I m m u n ., 8 8 : e 0 0 4 0 0 - 2 0 . d o i : 1 0 . 1 1 2 8 /IAI. 00400-20, 2020.

疾患 , 血液悪性疾患など免疫低下を伴う基礎疾患や免疫

２）Sato K, Yamamoto H, Nomura T, Kasamatsu J, Miyasaka症は免疫不全を背景として発症するため , 難治化しやす

A, Zong T, Oniyama A, Kawamura K, Yokoyama

抑制剤の使用により発症する真菌感染症である . 本感染
く臨床上問題となっている . 特に , クリプトコックス髄膜炎は , 世界的に結核に次いでエイズ死因の第２位とされている . このため , ワクチンによる発症予防法の開発が期待されているが , 現時点では臨床で使用可能なワクチンは存在しない .

本研究では , クリプトコックスの主要な T 細胞抗原として知られる chitin deacetylase 2（Cda2）を直径100nm のT, Tanno D, Matsumoto I, Kagesawa T, Miyahara
R , Kitai Y, Ishizuka S, Kanno E, Tanno H, Suda

H , M o r i t a M , Ya m a m o t o M , I w a k u r a Y, I s h i i
K, Kawakami: Production of IL-17A at innate immune

phase leads to decreased Th 1 immune response andattenuated host defense against infection with

Cr yptococcus deneoformans. J Immunol, 205 : 686 698, 2020.

酸化鉄ナノ粒子に結合させ（Cda2-NP）, C57BL/6マウス

３）Dobashi-Okuyama K, Kawakami K, Miyasaka T, Sato

誘導効果について解析した . Cda2単独では気管支肺胞洗J, Yamamoto H, Tanno D, Kanno E, Tanno H, Kawanoの気道内に投与することで抗原特異的な気道粘膜免疫のK, Ishi K, Kawakami K, Masuda C, Suzuki S, Kasamatsu

浄液中の Cda2特異的 IgG がほとんど検出できなかった

T, Takayanagi M, Takahashi T, Ohno I: A novel Toll-like

た . しかし , IgG 産生のほとんどが Th2型の IgG1であっattenuates Th 2 -type immune responses in asthma.

が , Cda2-NP では顕著な IgG 及び IgA の産生が観察されたため , アジュバントとして Poly（I:C）を併用することで Th1型の Cda2特異的な IgG2c の顕著な産生が検出された . 併せて , 所属リンパ節で Cda2特異的な Th1細胞の分receptor 9 agonist derived from Cryptococcus neoformans

International Archives of Allergy and Immunology, 181:651-664, 2020.

化誘導が検出されたが , 感染部位である肺そのものでは研究課題

真菌医学研究センターにて分子生物学的に解析を行った

Comprehensive screening of inhibitory receptors
recognizing pathogenic fungi

IFN-γ 産生の増強は観察されなかった . また , 千葉大学
クリプトコックス株を用いた感染実験では , Cda2-NP による感染防御効果は認められなかった .

以上の結果から , Cda2-NP/Poly（I:C）の気道投与によって顕著な抗原特異的粘膜免疫の誘導が観察されたが , クリプトコックス感染防御に必要な Th1細胞の効率的な誘導には至らなかった . 今後は , 所属リンパ節から実効臓器への Th1細胞のマイグレーションがみられな’20－３

Yasunobu Miyake, Hiroki Yoshida（Saga University, Faculty of Medicine）

Shinobu Saijo, Sho Yamasaki（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

かった原因を探るとともに , 他のアジュバントへの変更

等 , 効率的な感染防御効果の誘導へ向けた開発を進めていきたい .

52

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

臨床分離真菌を認識する免疫抑制型受容体の網羅的探索（佐賀大学医学部）

忍・山崎

’20－４

Transcription regulation of antifungal drug
resistance and biofilm formation in Candida
glabrata : aiming improved diag nosis andtherapeutics

三宅靖延・吉田裕樹
西城

研究課題

晶

（千葉大学真菌医学研究センター）

Miguel C Teixeira

研究成果
免疫抑制型受容体いわゆる免疫チェックポイント分子
は , がん治療の分野において画期的な治療標的として注目を集めている . 病原体感染の分野でも免疫チェックポ

イント分子の存在が報告されており , 治療標的としての可能性が検討されている . しかしながら , 真菌を認識す

る免疫抑制型受容体はほとんど知られていない . そこで本共同研究では , 千葉大学真菌医学センターが保有する

病原性真菌株および佐賀大学医学部附属病院検査部にて分離された真菌株から , 免疫抑制型受容体が認識する真菌の探索を行なった . 免疫抑制型受容体レポーター細胞（リガンド認識を GFP 発現によりモニターできる細胞株）47種類を用いて探索を行なった結果 , アスペルギル（Institute for Bioengineering and Biosciences, Instituto

Superior Técnico/Bioengineering Department）

Hiroji Chibana, Michiyo Sato-Okamoto, Azusa
Takahashi-Nakaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
This is the second term of our project, and we havepublished a paper as we did last year. The abstract of the paper
has been attached below.
Candida glabrata adheres to human epithelial mucosa andforms biofilm to cause persistent infections. In thisproject, Single-cell Force Spectroscopy（SCFS）was used to

ス 属（ A. fumigatus, A. flavus, A. nidulans） と 白 癬 菌 属

glimpse at the adhesive properties of C. glabrata as it interacts

疫抑制型受容体を複数見出した. ヒト単球系細胞株

formation. Following a genetic screening, RNA-sequencing（T. rubrum, T. mentagrophytes, T. tonsurans）を 認 識 す る 免

U937細胞に , これらの免疫抑制型受容体を過剰発現させると , アスペルギルス属や白癬菌属に対する免疫応答が減弱したことから , 免疫チェックポイント分子として機能し得ることが明らかとなった .

with clinically relevant surfaces, the first step towards biofilm

revealed that half of the entire transcriptome of C. glabrata is
remodeled upon biofilm formation, around 40% of which

under the control of the transcription factors CgEfg1 andCgTec 1 . Using SCFS, it was possible to obser ve that

現在は , 免疫抑制型受容体が認識するリガンド分子のCgEfg 1 , but not CgTec 1 , is necessar y for the initial

効果の検討を行なっている . 前者に関しては , クロロホ

epithelial cells, while both transcription factors orchestrate

同定と , 免疫抑制型受容体に対する中和抗体による治療

ルムメタノール抽出物にリガンド活性が認められたことから脂溶性リガンドを想定して , TLC によるリガンド分子の単離精製を進めている . 後者に関しては , 中和抗体による免疫応答の増強効果を in vitro で確認済みであり , in vivo における治療効果を検討するための条件検討を進めている .

interaction of C. glabrata cells with both abiotic surfaces andbiofilm maturation. Overall, this study characterizes the

network of transcription factors controlling massive

transcriptional remodelling occurring from the initial cellsurface interaction to mature biofilm formation. The gatheredknowledge is also expected to guide the delineation ofstrategies to surpass the widespread of multidrug resistanceamong fungal pathogens with implications in Human Healthand Biotechnology.

発表論文１）Cavalheiro M, Pereira D, Formosa-Dague C, Leitão

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

53

C, Pais P, Ndlovu E, Viana R, Pimenta AI, Santos

ゲノム編集技術による変異導入のためのプラスミドベク

Chibana H, Fialho AM, Butler G, Dague E, Teixeira

行った .

human pathogen Candida glabrata: a genome-wide to

gatus で 応 用 し , 次 世 代 シ ー ケ ン サ ー と 組 み 合 わ せ た

R, Takahashi-Nakaguchi A, Okamoto M, Ola M,

MC. From the first touch to biofilm establishment by thenanoscale view. Commun Biol. 2021 Jul 20; 4（1）: 886.

研究課題

’20－５

昨 年 度 ま で , CRISPR/Cas9ゲ ノ ム 編 集 技 術 を A. fumi

CRISPR スクリーニングを行うことによって , 血清存在下の生育に必須と予想される遺伝子の取得を試みていた . 本年度は , CRISPR ライブラリに挿入する変異導入

Screening of novel genes involved in biofilm
formation and antifungal resistance in Aspergillus
fumigatus

標的配列として , Af 293株のゲノム配列にコードされていると予想される全9,840遺伝子のうち9,807遺伝子について設計し , negative control としてゲノム配列上に存在しない配列と合わせて , 10,403種類の pooled oligo DNA を合成した . 合成した pooled oligo DNA を CRISPR/Cas9ベ

Takashi Umeyama, Yoshitsugu Miyazaki

クターにクローニングし , 大腸菌 NEB10-beta 株に形質（National Institute of Infectious Diseases）

転換することにより CRISPR ライブラリを作製した .

Hiroki Takahashi, Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

アスペルギルスのバイオフィルム形成および抗真菌薬耐性に関連する新規遺伝子群の探索
梅山

ターにクローニングし , プラスミドライブラリの作製を

pooled oligo DNA の導入効率を調べるために , CRISPR

ライブラリのガイド RNA 配列の周辺を PCR により増幅

し , イルミナシークエンサーMiSeq もしくはナノポア

シークエンサーMinION によるアンプリコン解析を行った . 最終的に , １つのライブラリ中に10,371種類の配列が含まれていることが確認でき , 設計した配列の99.7%

隆・宮﨑義継を網羅できていることを確認できた . 今後 , 作製した

（国立感染症研究所）

CRISPR ライブラリを A. fumigatus に形質転換し , CRISPR

高橋弘喜・亀井克彦

スクリーニング法を確立することにより , 血清刺激に応（千葉大学真菌医学研究センター）

答するシグナル伝達機構の解明を目指す .

研究課題

研究成果
深在性真菌症の中でも Aspergillus fumigatus を主要病原菌とするアスペルギルス症は増加傾向にあり , 予後が非

常に悪い . 近年 , アスペルギルスのバイオフィルム形成がアスペルギルス感染に関与することが示唆されている . 特にアスペルギローマの菌糸塊に見られる菌糸周囲には厚い細胞外マトリクスが観察されている . このようなバイオフィルムを形成する状態では , いくつかの抗真菌薬に対する感受性が低下する現象が示され , 難治性の原因の１つになっていると考えられる . しかしながら ,バイオフィルム形成 , および , それによる抗真菌薬耐性の詳細な分子メカニズムは不明な点が多い . 本研究で’20－６

Pathophysiological analysis of aspergilloma
Masato Tashiro（Department of Infectious Diseases, Nagasaki University

Graduate School of Biomedical Sciences）

Katsuhiko Kamei, Akira Watanabe, Teppei Arai

（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

アスペルギローマの病態解析

は , バイオフィルム形成に関わる新規遺伝子を同定し ,田代将人

抗真菌薬耐性との関連性を明らかにすることを目的とす（長崎大学大学院医歯薬学総合研究科）

る . 2020年度では , A. fumigatus の全遺伝子から設計した

亀井克彦・渡辺

ガイド RNA に対する pooled oligo DNA を CRISPR/Cas9

54

千葉大学

哲・新居

鉄平

（千葉大学真菌医学研究センター）

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

研究成果

研究成果

我々は近年 , 慢性アスペルギルス症の特徴の１つであるアスペルギローマに近似した病態を実験的にマウスの皮下に再現したモデルの作成に成功した . 本モデルを使用することで , アスペルギローマにおけるアスペルギル

スの振る舞いの解析 , および生体反応の解析が可能となった .

2020年度は , 千葉大学真菌医学研究センター臨床感染

本プロジェクトは , 知花博士が作製したユニークな組換え体コレクションを活用して , Candida glabrata と Candida

albicans 栄養素とストレスの適応を制御する調節回路の進化的な再配線を明らかにする . 初年度１年間は , 今後の研究発展を目的に英国の大規模な助成金である

Wellcome Trust の獲得に向けて , 予備実験と綿密なメー本プロジェクトは，知花博士が作製したユニークな組換
ル会議を繰り返すことによって申請書の作成について検症分野より分与いただいた gliA（グリオトキシン産生ク. 予備実験については, 千葉大学真菌医学研究セ
討した
albicans 栄養素とストレスの適
CandidaglabrataとCandida

謝 産 物 産 生 調 節 因 子 ）欠 損 A. fumigatus を 用 い , A.

株を用いてハイスループット解析の条件検討を進めえる影響の解析を進めた . 我々は , in vitro で作成した菌, ゲノム内に組み込まれてい測定する既知の方法としてって申請書の作成について検討した．
予備実験については，

ラスター遺伝子）欠損 Aspergillus fumigatus, laeA（二次代

ンターにおいて , 組換え体コレクションの中から1,000な再配線を明らかにする．初年度１年間は，今後の研究発展

fumigatus の二次代謝産物がアスペルギローマの病態に与Trustの獲得に向けて，予備実験と綿密な多数の組み換え体を混合した状態で各株の優占率をた .であるWellcome

球を健常マウスの皮下空洞に直接留置すると , １週間後

る96種類の signature tag sequence を用いてマイクロアレには組織侵襲を起こすことを見出していることを利用

1,000株を用い

し , laeA 欠損株と gliA 欠損株の組織侵襲度を親株と比較した . その結果 , laeA 欠損株では親株と比較し明らかに件検討を進め

組織侵襲度が低下することを見出し , 種々の二次代謝産た状態で各株物が組織侵襲に必要である可能性が示唆された . gliA 欠法として，ゲ

損株では親株の組織侵襲度が低かったため , 親株との侵襲度の差異は認めなかった .

類のsignature

さらに , 千葉大学真菌医学研究センター臨床感染症分アレイ法やN

野より分与いただいた GFP 発現 A. fumigatus によるアス

し，本コレ

ペルギローマモデルマウスを作成し , 長崎大学に設置されている発光 in vivo イメージングシステム IVIS Lumina

sequenceが組

Ⅱによるアスペルギローマの非侵襲的検出条件を検討

方法を構築すし , 体内に留置した菌球を体外から観察することに成功

96wellプレした . さらに適切な観察条件の検討を継続中である .

研究課題

’20－７

において，組イ法や NGS によって実施される . しかし , 本コレクショ

し，OD600を回収しイルミナ次世代シークエンサーHiseqを用いて各菌株

Rewiring of the regulatory circuitry underlying
the expression of key fitness attributes in major
fungal pathogens of humans

ンには signature tag sequence が組み込まれていないため

挿入周辺領域のシークエンスリード数を測定した．その結果.
新たな方法を構築する必要があった96
well プレートを用いて菌株を個別に培養し, OD600にはR２= 0.6の相関関係（右図）で，各菌株の菌数がリーを測定後 , 全菌体を混合し DNA を回収しイルミナ次世

認された．さらに既存の方法とは異なり混合可能な株数が9代シークエンサーHiseq を用いて各菌株に由来する形質

Alistair J. P. Brown

4,000株の同時解析が可能か否か検討中である．
転換マーカー挿入周辺領域のシークエンスリード数を測

Exeter, UK）

R2＝0.6の相関関係（図）で , 各菌株の菌数がリード数と（ MRC Centre for Medical Mycology, University of

定した . その結果 , 各菌株の OD とリード数の間にはHiroji Chibana, Azusa Takahashi-Nakaguchi, Michiyo
Sato-Okamoto. さらに既存の方法として反映されることが確認された
研究課題 ʻ20－８（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

は異なり混合可能な株数が96以内に限定されないため ,約4,000株の同時解析が可能か否か検討中である .

Analysis of mycovirus affecting secondary metabolism
千葉大学

55
Daisuke Hagiwara, Syun-ichi Urayama, Akihiro
Ninomiya

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021（Faculty of Life and Environmental Sciences, University of
Takashi Yaguchi

研究課題

’20－８

決定 , ウイルスを除去したウイルスフリー株を作製し ,ウイルスの有無による宿主の二次代謝の違いを比較す

Analysis of mycovirus affecting secondar ymetabolism in Aspergillus species
Daisuke Hagiwara, Syun-ichi Urayama, Akihiro
Ninomiya（Faculty of Life and Environmental Sciences, Universityof Tsukuba）

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Aspergillus 属菌の二次代謝に影響を及ぼすマ
イコウイルスの探索と解析
萩原大祐・浦山俊一・二宮章洋

る.

発表論文
１）Chiba Y, Oiki S, Yaguchi T, Urayama S, Hagiwara
D. Discovery of divided RdRp sequences and a hitherto
unknown genomic complexity in fungal viruses. Virus
Evol. 7（1）, veaa101（2020）

研究課題

’20－９

Establishment of an assay to evaluate
trichothecene toxicity in vitro
Takahito Toyotome（筑波大学生命環境系）（Department of Veterinary Medicine, Obihiro University

矢口貴志

of Agriculture and Veterinary Medicine）

Katsuhiko Kamei（千葉大学真菌医学研究センター）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
マイコウイルスは糸状菌宿主に持続的に感染し , 生理

in vitro でのトリコテセン類毒性評価法の確立

機能に大きな影響を及ぼすことが近年報告されている . 糸状菌は天然化合物の探索源 , 物質生産宿主として

豊留孝仁

ら , 本研究では糸状菌二次代謝に対するマイコウイルス

亀井克彦の機能性に優れ , 種々の産業で利用されていることかの影響を体系的に理解することを目的とした .

これまでに , 155株の病原菌 Aspergillus fumigatus を対象とした探索において19株のウイルス感染を見出している . さらに解析対象を広げて , 代表的なカビ毒生産菌で（帯広畜産大学獣医学研究部門）（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果
トリコテセン類は , 食の安全を脅かすカビ毒として知あるA. flavus, A. parasiticus, A. ochraceus, A. terreus の計194られている . ムギ類で赤カビ病を引き起こす病原菌がトだき探索を進めた . マイコウイルスの検出は , 各株の培ることがよく知られている . 日本でも , 天候不順等によにより判定した . その結果 , RNA ウイルス由来と考えら

キシニバレノール汚染につながることから , 非常に重要

parasiticus：65.8%（25/38株）, A. ochraceus：25%（5/20株）, A.

の化合物群であることも一つの特徴である . これらの毒に渡るマイコウイルスの大規模探索は世界的にも例がなた方法が報告されている . しかし , 動物を用いた方法に株を , 千葉大学真菌医学研究センターから分譲していた養菌体から dsRNA を抽出し , アガロースゲル電気泳動, A.
れるバンドを示した株は A. flavus：13.9%（10/72株）

terreus：20.3%（13/64株）となった . これまで , 複数の種

リコテセンの一種であるデオキシニバレノールを産生する赤カビ病発生およびそれに伴う小麦の質的低下がデオ視をされるカビ毒である . トリコテセン類は200種以上性を評価・比較する方法として , 動物や培養細胞を用いい . 本研究により , Aspergillus 属菌において , マイコウイ

おいては , 個体差やその手法の煩雑さなどの問題があなった . 今後は , ゲノム解析により感染ウイルスの種をた培養細胞株で , その結果が異なるという問題点もあルスが一定の割合で広く感染している実態が明らかに

56

千葉大学

り , 培養細胞も由来となった動物種や組織等により , ま

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

る.

本研究ではこのような不安定性等を取り除くために , in vitro におけるトリコテセン類の評価方法の確立を目指した . 本研究ではトリコテセン類が示す主要な毒性機構であるタンパク質合成阻害に焦点を絞り , 迅速・簡
便に化合物同士の比較が可能な手法を検討した . その結

MDR3が TIMM20092で過剰発現していることを突き止めた . しかしながら , ミュータントを利用した遺伝学的解析の結果 , VRC 低感受化の主要因は MDR3の過剰発現であるものの , ITC 低感受性化には別のトランスポー

ターが関与していることが強く示唆された . そこで , 先の６個の薬剤排出トランスポーターのうち , ITC 排出機

果 , 市販のキットを用いて0.5mLPCR チューブでの反応能を有する可能性が見出された MDR2, MDR5およびした . 難水溶性を示すトリコテセン類も存在するため ,解析を行った結果 , MDR3と同じ ABC 型トランスポー

リコテセン類でも利用が可能であることを明らかとし

ITC 低感受性化の主要因であることが判明した .

と引き続く酵素活性測定による迅速・簡便な方法を確立
さらに検討を進め , 本法がアセトニトリルに溶解したト
た . 本研究で開発した方法はトリコテセン類の毒性評価に広く応用できると期待する .

研究課題’20－10

Elucidation of the mechanisms of az ole
resistance in dermatophytes
Tsuyoshi Yamada（Institute of Medical Mycology, Teikyo University）

Takashi Yaguchi, Sayaka Ban（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

白癬菌に拡がるアゾール系抗真菌薬耐性化の分子メカニズムの解析
山田

MFS1について , 再びミュータントを利用した遺伝学的タ ー で あ る MDR2の 過 剰 発 現 が TIMM20092に お け る

発表論文
１）Yamada T, Yaguchi T, Tamura T, Pich C, Salamin
K, Feuermann M, Monod M: Itraconazole resistance ofTrichophyton rubrum mediated by the ABC transporter
TruMDR2. Mycoses 64: 936-946, 2021.

研究課題’20－11

Identification of transcriptional regulation of
CgATG32 in Candida glabrata
Minoru Nagi

（National Institute of Infectious Diseases）

Hiroji Chibana, Michiyo Sato, Azusa Takahashi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

剛

Candida glabrata におけるマイトファジー関連遺伝子ATG32 の転写調節機構の解明（帝京大学医真菌研究センター）

矢口貴志・伴さやか（千葉大学真菌医学研究センター）

名木
研究成果

稔

（国立感染症研究所）

申 請 者 ら が 見 出 し た 臨 床 分 離 白 癬 菌 株 Trichophyton

rubrum TIMM20092は , テルビナフィン（以下 , TBF）に加え , アゾール系抗真菌薬であるイトラコナゾール（以知花博治・佐藤美智代・高橋梓（千葉大学真菌医学研究センター）

下 , ITC）およびボリコナゾール（以下 , VRC）に低感受研究成果と , 本株の ITC・VRC 低感受性化の要因の解析を進める

選択的オートファジー（マイトファジー）を活性化させ

ター（MDR1, MDR2, MDR3, MDR5, MFS1および MFS2）

量が増加し , マイトファジーに必須である ATG32に着目性を示す . 申請者らは , 分子生物学的アプローチのも

病原真菌 Candida glabrata は鉄欠乏下でミトコンドリア

過程で , アゾールの排出機能を示す６個のトランスポー

るが , その活性調節機構は不明である . 鉄欠乏下で発現を見出した . そして , ABC 型トランスポーターである

し , ATG32の発現調節機構を解明することを本研究の目

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

57

的とした . 2019年度までに , ATG32の転写調節に必要なして , 原因菌である Aspergillus fumigatus が耐性を示すよ

写因子候補遺伝子を複数同定した . 2020年度は , 各候補

いる . アゾール薬は真菌細胞膜の主成分である ergosterol

プロモーター領域の同定を行い , その領域に結合する転タンパク質の遺伝子破壊株を作製し , ATG32発現解析をうになってきており , 新しい抗真菌薬の開発が望まれての合成を阻害することにより作用を発揮するため,行った . その結果 , エキソリボヌクレアーゼ XRN1の遺CYP51遺伝子の突然変異がアゾール耐性に関与するこ

除されることを見出し , ATG32発現調節において XRN1

性との関連については未解決の問題が多く残されていた . HA タグを付加した XRN1発現株を作製し , ウエス

い CYP51の下流の遺伝子の機能を分析し , 新規抗真菌薬

伝子破壊株において , 鉄存在下での ATG32発現抑制が解が鉄依存的リプレッサーとして働くことが示唆されタンブロットおよびクロマチン免疫沈降アッセイを行った結果 , XRN1は鉄依存的に ATG32上流領域に結合してい る こ と が 示 唆 さ れ た . 現 在 , XRN1の RNase 活 性 とATG32発現調節の関係について調べている .

研究課題とが明らかになってきているが , ergosterol 合成経路と耐る . そこで本研究では , これまで詳細に研究されていなの開発の端緒となることを目指す .

2020年は当初 , COVID-19の pandemic により中国 , 日

本とも研究活動に大きな支障が生じたため , 研究の遂行が困難な状態が続いた . 後半より徐々に活動が可能となったため研究を開始し , ergosterol 生合成の下流域で働’20－12

く酵素の解析をするにあたって生合成の速度決定酵素とE d i t i n g b y C RI S P R - C a s 9 o f e r go s t e ro lbiosynthesis in Aspergillus fumigatus: Effects ofsterol composition on fungal g rowth anddevelopment
Ruoyu Li, Wei Liu

して機能する HMG-CoA 還元酵素の解析を行った . この 理 由 と し て , Hmg1変 異 を 伴 う ト リ ア ゾ ー ル 耐 性

A. fumigatus の報告が相次いでおり , 現在 , Hmg1変異によるトリアゾール耐性 A. fumigatus は国際的な注目を集めていることが挙げられる . A. fumigatus の HMG-CoA

還元酵素は , Hmg1と Hmg2の２つが存在する事が知られているが , 今回 , この２つ isozyme の細胞生存におけ（Beijing University First Hospital）

る役割を検討した .

Yoshitsugu Miyazaki

hmg1と hmg2の発現量を解析した結果 , 発現量に顕著（National Institute of Infectious Diseases）

な差があり hmg1が優位に発現していることがわかっ（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

置換した形質転換体を作成し , Hmg1が生存に必須であKatsuhiko Kamei, Akira Watanabe, Teppei Arai

ゲノム編集を用いたAspergillus fumigatus における erogsterol 生合成遺伝子の機能解析

た . そ こ で hmg1の promoter を 条 件 付 き 発 現 promoter にるか検証した結果 , A. fumigatus の細胞生存に Hmg1が必.
須であることが確認された . （投稿準備中）

研究課題
李

若瑜・劉

偉（刘

Analysis of Sequence-Based Identification and
Antifungal Susceptibility of Aspergillus from
Clinical Respiratory specimens（北京大学第一医院皮膚科学教室）

宮﨑義継（国立感染症研究所真菌部）

亀井克彦・渡辺哲・新居鉄平Junko Suzuki, Keita Takeda（千葉大学真菌医学研究センター）（ Center for Respiratory Diseases, National Hospital

研究成果
アスペルギルス症は患者数が多く , 予後も不良であることから , 世界で最も重要な真菌感染症の一つと考えられる . 近年 , 本疾患の主力薬剤であるアゾール薬にたい

58’20－13伟）

千葉大学

Organization, Tokyo National Hospital）

Akira Watanabe, Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

Aspergillus 呼吸器検体臨床分離株の菌種同定・薬剤感受性の検討

resistance. Medical Mycology. 2021; 59（4）: 327-334.

研究課題’20－14

鈴木純子・武田啓太（国立病院機構東京病院呼吸器センター呼吸器内科）

渡辺哲・亀井克彦

（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果
2013年の研究開始から2021年３月までの間に , 国立病院機構東京病院の呼吸器疾患患者の下気道検体から検出

De velopment of molecular diag nosis of
antifungal resistant fungi
Maria Luiza Moretti, Plinio Trabasso, Mariangela
Resende, Angelica Schreiber, Cibele Tararam, Larissa
levy, Erivan Olinda（School of Medical Science, University of Campinas）

された Aspergillus または担子菌の菌種同定・感受性を千Marcia Melheim

件同定している . 当院慢性肺アスペルギルス症患者呼吸Akira Watanabe, Katsuhiko Kamei, Teppei Arai

を 検 討 し , A. fumigatus 陽 性104名120株 に つ い て , A.

Tetsuhiro Matsuzawa

葉大学真菌医学研究センターにて行い , これまで計388器検体から検出された Aspergillus の菌種同定薬剤感受性

fumigatus のアゾール耐性株は全体では8.3％であったがアゾール使用例での耐性率は21.3％に上昇していることを確認した .

また今年度から検討を追加した担子菌については ,2014年７月から2019年８月の間に , 東京病院における呼吸器検体から同定された18検体の担子菌の同定と , 臨床所見との関連性を検討した . 症例は17例で , 喀痰から８

検体 , 気管支鏡検体から２検体検出され , 菌種はスエヒ

ロタケ４検体 , ヤケイロタケ２検体 , シイサルノコシカ

ケ , アラゲカワラタケ , カワラタケ , ウスバタケが１検（ADOLFO LUTZ）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Faculty of Nursing and Nutrition（Siebold Campus）,

University of Nagasaki）

研究成果
Infections due to triazole resistant Aspergillus fumigatus are
increasingly reported worldwide and are associated withtreatment failure and mortality. The principal class of azole
resistant isolates is characterized by the presence of tandem
repeats within the promoter region of the cyp51A gene. We

developed e a Loop-mediated isothermal amplification

体ずつ同定された . 全ての症例が肺に基礎疾患（陳旧性（LAMP）assay method to detect the tandem repeat insertion

例 , 間質性肺炎２例 , 気管支喘息１例）を有していた .

primer sets. Our method is specific, rapid, and also provides

肺結核２例 , 肺非結核性抗酸菌症５例 , 気管支拡張症２

スエヒロタケの症例でアレルギー性気管支肺真菌症が１例, 慢性肺真菌症疑いを１例認め, その他の症例はcolonization と考えられた .

発表論文
１）Keita Takeda , Junko Suzuki, Akira Watanabe, Teppei
Arai, Tomohiro Koiwa, Kyota S hinfuku, Osamu
N a r u m o t o , M a s a h i r o K a w a s h i m a , Ta k e s h i
Fukami, Atsuhisa Tamura, Hideaki Nagai, Hirotoshi
Matsui, Katsuhiko Kamei High detection rate of azoleresistant Aspergillus fumigatus after treatment with azole
antifungal drugs among patients with chronic pulmonary
aspergillosis in a single hospital setting with low azole

千葉大学

in the cyp51A gene promoter region based on novel LAMP
crucial insights to enable development of novel antifungal

therapeutic strategies against severe fungal infections due to
A. fumigatus with tandem repeats.

発表論文１）Trabasso P, Matsuzawa T, Arai T, Hagiwara D, Mikami
Y, Moretti ML, Watanabe A. De velopment andvalidation of LAMP primer sets for rapid identificationof Aspergillus fumigatus carrying the cyp51A TR46 azole
resistance gene. Sci Rep 11（1）: 17087, 2021.

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

59

研究課題

’20－15

Analysis of antimicrobial susceptibility, drug
resistance, and pathogenic genes of major
pathogenic bacteria derived from pediatricclinical specimens
Tadashi Hoshino

発表論文
１）Takeuchi N, Ohkusu M, Hoshino T, Yamamoto
S, Segawa S, Murata S, Ishiwada N. Emergence ofHaemophilus influenzae with low susceptibility toquinolones isolated from pediatric patients in Japan. J
Infect Chemother. 2021 Mar 1 :S 1341 - 321 X（21）00062-3. doi: 10.1016/j. jiac. 2021.02.022.

（ Division of Infectious Diseases, Chiba Children ’ s

研究課題

Naruhiko Ishiwada, Noriko Takeuchi, Misako
OhkusuFunctional analysis of RNA-binding proteins in
antiviral innate immunity

Hospital）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

小児臨床検体由来の主要病原細菌の抗菌薬感
受性と薬剤耐性 , および病原遺伝子に関する検討
星野’20－16

Takashi Fujita（Institute for Frontier Life and Medical Science, Kyoto

University）

Hiroki Kato

（University Hospital of Bonn, Germany）

直

Mitsutoshi Yoneyama, Koji Onomoto（千葉県こども病院感染症科）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

石和田稔彦・竹内典子・大楠美佐子

抗ウイルス自然免疫誘導における RNA 結合タ
ンパク質の機能解析（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果
小児用キノロン製剤（TFLX）のインフルエンザ菌臨

床分離株に与える影響を調べる目的で , 千葉県こども病

藤田尚志（京都大学ウイルス・再生医科学研究所）

院において2010年〜2018年の期間に , 小児から分離され加藤博己（ボン大学）
米山光俊・尾野本浩司

16株 に つ い て , キ ノ ロ ン 耐 性 決 定 領 域（GyrA, GyrB,（千葉大学真菌医学研究センター）

たインフルエンザ菌のうち , TFRX の MIC ≥0.5μg/mL のParC, ParE）変異の有無について検討を行った . 16株中13株（81％）で GyrA と ParC の両方に変異が認められ ,研究成果

0.5μg/mL と低値であった .

疫において重要な役割を担うウイルス感染センサーであ同一であったが , 年齢や居住地は異なり , 関連性は認め

分子機構と生理機能について継続して解析を行ってきも , 複数の変異を有する株があり , また , 特定の ST 株

た I 型インターフェロン（IFN）遺伝子の発現を増強さノロン薬耐性状況について , 監視していく必要性が示唆

解析を継続実施した . 当該分子は , 培養細胞での解析にうち10株は MIC 1µg/mL 以上を示したが , ３株は MIC

MLST 解析では , 2018年分離株のうち４株が ST422となかった . 本研究の結果 , MIC 0.5μg/mL の株であってが複数分離されていることから , インフルエンザ菌のキされた .

本研究では , 高等脊椎動物における抗ウイルス自然免

る RIG-I-like 受容体（RLR）によるウイルス RNA 検知のた . 2020年度の研究では , 以前の共同研究で見出していせる宿主 RNA 結合タンパク質に焦点をあて , その機能

おいて IFN プロモーター活性を増強することが明らか

で あ る 一 方 で , RLR の 下 流 シ グ ナ ル ア ダ プ タ ー 分 子（IPS-1/MAVS）や転写因子（IRF-3/7）の活性化を直接

60

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

誘導しないこと , また当該分子が , ウイルス感染によっ行った . 呼吸器感染症由来の NTHi と比較し , 侵襲性感

ルス RNA と共局在することから , RLR と協調してウイ

た . バイオフィルム内の状況を確認するために呼吸器由て誘導される細胞内ストレス顆粒（SG）に RLR やウイ

ルス核酸認識に関与している可能性が示唆された . 一

方 , CRISPR/Cas9によるゲノム編集により作出していた

ノックアウトマウスについてさらに詳細な解析を実施
し , A 型インフルエンザウイルス（IAV）を経鼻感染させ染症由来の NTHi はバイオフィルムを多く形成してい来の NTHi １株を侵襲性感染症由来の NTHi ３株を対象として Drip flow assay を行った . Cover slip 上に形成されたバイオフィルムの average thickness, biomass を比較するとともに LIVE/DEAD stain で染色しバイオフィルム

た場合に , 肺における抗ウイルス活性が顕著に減弱する

内の菌の分布および生菌の割合を評価した . 侵襲性感染とから , この分子が抗ウイルス応答の誘導に重要な役割

来 NTHi と比較して高値であり , バイオフィルム内に含と共に , IAV 感染に対するマウスの生存が抑制されたこを担うことが動物個体レベルでも確認された .

研究課題’20－17症由来 NTHi は average thickness, biomass ともに呼吸器由まれる菌の密度も高く , 死菌よりも生菌が著しく多く分布していた . 通常 , バイオフィルム内は quorum sensing
機構により autoinducer を介して菌量は制御されるが , 侵

Pathological analysis of invasive infectious
disease due to nont y peable Ha emophilus
inf luenzae

襲性感染症由来 NTHi は通常とは異なる制御機構でバイオフィルムの制御を行っている可能性が考えられ , また

バイオフィルム内で菌同士が接着している可能性も考えられるため接着因子に関しても解析を行っていく予定である .

Kenji Gotoh（ Department of Infection Control and Prevention,

研究課題

Naruhiko Ishiwada

Elucidation of antifungal resistance mechanisms
in Candida auris

Kurume University School of Medicine）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

無莢模型インフルエンザ菌による侵襲性感染症の病態解析

’20－18

Taiga Miyazaki（Faculty of Medicine, University of Miyazaki）

Maiko Kiyohara

後藤憲志（Nagasaki University Graduate School of Biomedical（久留米大学医学部感染制御学講座）

Sciences）

石和田稔彦

Hiroji Chibana, Michiyo Sato

（千葉大学真菌医学研究センター）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Candida auris の抗真菌薬耐性機序の解明

研究成果
2020年度は呼吸器感染症由来の無莢膜型インフルエン
ザ菌（non typeable Haemophilus influenzae : NTHi）と千葉

宮崎泰可

大学真菌医学研究センターから分与して頂いた侵襲性感（宮崎大学医学部）染症由来の菌株を用いてバイオフィルムの産生能につい清原舞子て検討した . まず対象菌株の分子疫学的背景として莢膜（長崎大学大学院医歯薬学総合研究科）

に関する bexA, bexB 遺伝子 , および Cap（a-f ）遺伝子の解析を行った . 上記遺伝子の保有はなく , 無莢膜型イン

知花博治・佐藤美智代（千葉大学真菌医学研究センター）

フルエンザ菌であることを確認した . これらの菌株を用いてバイオフィルム産生能の解析を Plate assay を用いて

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

61

研究成果
近年 , 抗真菌薬に耐性を示す Candida auris のアウトブ
レイクが世界各国で問題となっている . 抗真菌薬耐性C. auris 株による侵襲性カンジダ症は致死率が高く , 新
たな治療戦略の開発が必要である . C. auris のキャンディン系薬耐性機序として , 薬剤標的である FKS 遺伝子のS639F 変異が知られているが , 当該アミノ酸変異を有していない C. auris 耐性株も臨床分離されている . 本研究では , 新規薬剤耐性遺伝子あるいは遺伝子変異を同定
し , キャンディン系薬への耐性機序を明らかにすることを目的とした .
これまでに我々は , S639F 変異を持たない C. auris 臨床
分離株から , 薬剤耐性に関与すると予想される新規遺伝
子変異を複数同定している . これらの変異遺伝子の影響を調べるため , ゲノム編集技術 CRISPR-Cas9を C. auris

高橋弘喜（千葉大学真菌医学研究センター）

高屋明子（千葉大学・大学院薬学研究院）

研究成果
我々はこれまでの研究により , 健常乳児期の皮膚では黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）のクオラムセンシ

ング領域に変異が誘導され , 排除される一方で , アト

ピー性皮膚炎（Atopic dermatitis, 以下 AD）の皮膚では機能が維持され , 皮膚炎のつながっている可能性を見出

し , 報 告 し た 論 文1）. 検 体 は , 千 葉 大 学 小 児 科 が 出 生 コ

ホート研究で採取した S. aureus 菌株約270株を全ゲノム

シークエンス行い , 生後１ヶ月から６ヶ月に同一クローンが生着し続けた場合に , 健常皮膚と , AD 発症皮膚でで応用し , 感受性株に変異遺伝子を挿入することに成功の特徴的なゲノム変化が病原微生物に誘導されるかを検培養すると耐性を示したことから , 当該遺伝子変異が薬に生着中に Agr クオラムセンシング領域に変異が誘導さした . 得られた変異挿入株をキャンディン系薬存在下で討した . その結果 , 健常皮膚でのみ , S. aureus のゲノム

. 他
剤耐性に関与していることが示唆された（未発表）

れるという現象を見出した . この変異は機能喪失型の変の遺伝子変異も同様の耐性を示すか , 引き続き確認を進めている .

研究課題

異であり , 実際に健常皮膚では , 生後１ヶ月に比べ ,６ヶ月で S. aureus の生着数は減少した . マウスモデル
で , 野 生 型 及 び , Agr 欠 損 株 を 用 い て 検 討 し た と こ’20－19ろ , Agr クオラムセンシングの発現が , 皮膚の生着にはDevelopment of novel therapeutic approach forskin persister infections
Yumi Matsuoka（ Immunolog y Frontier Research Center, Osaka

University）

Hiroki Takahashi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Akiko Takaya（Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

University）

皮膚を場としたパーシスター感染症克服法の開発必須であり , AD における皮膚炎の発症に関与していることが示された .

発表論文
１）Nakamura Y（ 松 岡 悠 美 ペ ン ネ ー ム ）*, ○ Takahashi
H*, Takaya A*, Inoue Y, Katayama Y, Kusuya Y, Shoji
T, Takada S, Nakagawa S, Oguma R, Saito N, Ozawa
N, Nakano T, Yamaide F, Dissanayake E, Suzuki
S, Villaruz A, Varadarajan S, Matsumoto M, Kobayashi
T, Kono M, Sato Y, Akiyama M, Otto M, Matsue
H, Núñez G and Shimojo N. Staphylococcus Agrvirulence is critical for epidermal colonization andassociates with atopic dermatitis development. Science
Translational Medicine 12（551）: eaay4068. 2020.

松岡悠美（大阪大学・免疫学フロンティア研究センター）

62

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻

2021

研究課題

’20－20な限り低く抑えることが望ましい」とされており , 近年

Characterization and ecological sur vey ofphomopsin-producing fungi

その安全性が注目されている . しかしながら , ホモプシン類産生菌の国内における分布はほとんど調査されていない . そこで本研究では , 国内のマメ科植物を中心にホモプシン類産生菌の存在を調査することを目的としToshiki Furuya

た . 昨年度の研究において設計した , ホモプシン類合成

Science）

子の検出を試みたところ , 真菌 Beauveria bassiana および（Faculty of Science and Technology, Tokyo University of

Takashi Yaguchi, Sayaka Ban（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Maiko Watanabe, Haruo Takahashi（National Institute of Health Sciences）

遺伝子を検出可能な PCR プライマーを用いて当該遺伝

Colletotrichum gloeosporioides において DNA 増幅が確認された . これらの微生物はホモプシン類産生能を有することが予想されたため , 培養液から化合物を抽出し , LC-MSにより分析した . 昨年度の研究において確立した分析手

Kazuhiro Hashimoto（National Hospital Organization Sagamihara National

Hospital）

Hiroyuki Nakagawa（National Agriculture and Food Research Organization）

Takahito Toyotome（Obihiro University）

法により , B. bassiana においてホモプシン類と推定される化合物が検出された . 一方 , 北海道に自生するマメ科植物のルピナスからホモプシン類産生菌の分離を試みたが , 現在までのところ見つかっていない . また , これらのルピナス試料について成分抽出を行い , LC-MS 分析に供したが , ホモプシン類は検出されていない . 今後

は , B. bassiana が産生するホモプシン類の構造の決定を

カビ毒ホモプシン産生菌の機能解析および生態学的研究

試みるとともに , マメ科植物におけるホモプシン類産生菌およびホモプシン類の存在について , 継続的に調査す

る.

研究課題

古屋俊樹

’20－21（東京理科大学理工学部）

矢口貴志・伴さやか

Analysis of environmental fitness through highthroughput phenotyping of Aspergillus fumigatus（千葉大学真菌医学研究センター）

渡辺麻衣子・髙橋治男

Darius Armstrong-James（国立医薬品食品衛生研究所）

橋本一浩（ Faculty of Medicine, Department of Infectious（国立病院機構相模原病院）

Disease, Imperial College London）

中川博之

Hiroki Takahashi, Yoko Kusuya, Cai Bian

（農業・食品産業技術総合研究機構）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

豊留孝仁

研究成果

（帯広畜産大学）

病原真菌 Aspergillus fumigatus は , 肺アスペルギルス症

研究成果
ホモプシン類は , 真菌 Diaporthe toxica の代謝産物としの主要な原因菌である . 本菌の感染は , 特定の病原因子ではなく , 多数の因子から決定される環境適応能が感染て単離・構造決定されたカビ毒で , 産生菌の着生したマ成立と密接に関わっていることが明らかとされてきた

知られている . 欧州食品安全機関（EFSA）の報告によ

我々は , 菌株の有する表現型 , 特に宿主肺環境で晒さ

メ科植物を家畜が摂取すると肝障害を引き起こすことがると , 「ヒト及び家畜のホモプシン類への暴露量を可能

千葉大学

が , いまだその全容は明らかとなっていない .

れる環境ストレスに本菌がどのように応答するのかに着

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

63

目して, それと密接に関わる因子の探索を進めてい補化合物の薬剤標的分子を同定し , 新規抗真菌薬の創出

る . 本年度は , 低酸素応答が長期的に獲得されうるかどをめざしている . 令和元年度には , 600種類の天然化合

トレス耐性が向上した株を取得できた . 作出した株につダ・グラブラータの薬剤高感受性株を用いて生育阻害活原性が向上していたことから , 低酸素適応能と病原性がプルに生育阻害活性が確認され , 二次スクリーニングへ

うかを低酸素下での長期培養によって試験し , 低酸素ス物コレクション（大村ライブラリー）に対してカンジ

いて , カイコ感染モデルで病原性を評価したところ , 病性を指標に一次スクリーニングを実施した結果 , 80サン

密接に関連していることが示唆された . その他の表現型と移行した . 二次スクリーニングでは , 48種類の病原性についても変化の有無を調べることで , 長期培養によってどのような環境因子に対する応答が変化しうるかの評
価を進めることを計画している .

当初計画していた相互訪問による表現型解析の実施

真菌について , 生育阻害活性を測定し , それぞれの菌種について MIC を決定した . さらに , 培養細胞を用いた呼吸阻害活性を測定した . これらの結果より , ８サンプ

ルが真菌特異的に阻害活性を有しており , 抗真菌薬シー

は , COVID-19の影響により見合わせた .

ズ候補として選抜した .

研究課題

８種の化合物について Candida glabrata 遺伝子組み替え体

令和２年度には , 抗真菌薬シーズ候補として選抜した’20－22

Search for anti-fungal seeds using geneticallyengineered Candida glabrata library

ライブラリーを用いた標的分子探索を実施し , ２種類について特異的な候補遺伝子を抽出することができた . 現
在 , 標的分子について検証実験を進めている .

Masato Iwatsuki, Kenichi Nonaka, Satoshi Omura

研究課題

Hiroji Chibana, Azusa Takahashi

Development of antifungal drugs from naturalchemical compound library（OSMI, Kitasato University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Candida glabrata 遺伝子組み替え体ライブラ
リーを用いた抗真菌薬シーズの探索
岩月正人・野中健一・大村

Masayuki Igarashi（IMC, Lab. Head, Microbial Chemistry）

Hiroji Chibana, Michiyo Sato, Azusa Takahashi

智（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（北里大学大村智記念研究所）

知花博治・高橋’20－23

天然化合物ライブラリーを用いた抗真菌薬の開発研究

梓（千葉大学真菌医学研究センター）

五十嵐雅之

研究成果
令和元年度より千葉大学真菌研究センターとの共同研究を開始し , 初年度分を報告する . 深在性真菌症の適応

薬は , 核酸合成を阻害するピリミジン系 , エルゴステ
ロールと結合するポリエン系 , エルゴステロール合成酵（微生物化学研究所第２生物活性研究部）

知花博治・佐藤美智代・髙橋

梓（千葉大学真菌医学研究センター）

素の阻害剤であるアゾール系 , 細胞壁合成阻害剤である

研究成果

用や耐性菌の出現が問題になっており , 新規の作用機序

な薬剤シーズを開発することは重要な研究課題であ

画では , 北里大学大村智記念研究所が保有する化合物ラを踏まえ , 微生物化学研究所でも抗真菌薬開発の重要性

エキノキャンディン系の４系統しかなく , いずれも副作

本邦において分離された天然化合物資源の中から様々をもつ抗真菌薬の開発が必要である . そこで , 本研究計る . 重篤な真菌感染症が世界的に問題となっている現状

イブラリーを用いたスクリーニングによって得られた候を認識していたが , 抗真菌薬開発においては , 常に副作

64

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

用の問題が存在し , 専門的な研究手技や知識が必要とさ現が寄与する . 又 , 宿主腸内細菌叢によって形成されるれるため , 抗真菌薬を専門とする担当研究部が存在せず腸内環境が細菌侵入に影響する . 我々はこれまでに , サ

学研究センター知花准教授と共同研究を進めスクリーニ

毛機能発現に関わることを見出していたが , その制御機

着手することができなかった . そこで , 千葉大学真菌医

ングを進めている . 2020年度は , 2,400種類の天然化合物について Candida glabrata の高感度薬剤感受性株Δ pdr1を用いて生育阻害活性物質の一次スクリーニングを終了しルモネラ分子シャペロンである DnaJ が SPI1およびべん構は不明であった . DnaJ への基質の受け渡しに , リボ

ソ ー ム に 近 接 す る 分 子 シ ャ ペ ロ ン Tig が 一 部 寄 与 す

る . そこで今回 , サルモネラ全身感染発症における Tig

た . その結果 , 48種類の化合物について生育阻害活性がの寄与を調べたところ , Tig は全身感染発症に寄与する

Candida auris, Aspergillus fumigatus, Cryptococcus neoformans 等

ん毛機能発現は野生株と同レベルであった . そこで ,認められた . これらの化合物について Candida albicans,の主要な病原真菌に対して生育阻害活性が確認された . 次にこれらの化合物について , マウスの培養細胞を用いて呼吸阻害活性を指標とした細胞毒性を測定したと
ころ , ６種類の化合物に細胞毒性が確認されず , 抗真菌ことを見出した . しかしながら , Tig 欠損株の SPI1, べ

DnaJ・Tig2重欠損株を構築し性状を調べたところ , 顕著
な細胞侵入能低下と細胞分裂阻害が観察された . 液体培
地で繰り返し培養したところ , 細胞分裂が回復する株を得 た . 細 胞 分 裂 が 阻 害 さ れ た DnaJ・Tig2重 欠 損 株 の薬「シーズ候補」とした . 現在 , これら６種類の化合物

SPI1及びべん毛発現は DnaJ 欠損株よりも減少したものる.

べん毛の機能が回復した . DnaJ 欠損株でもわずかに細胞について , マウスを用いた in vivo での効果を調査中であ研究課題の , 細胞分裂が回復した DnaJ・Tig2重欠損株では SPI1・分裂阻害がみられるが , これは環境ストレス依存的な変’20－24化が寄与することが示唆された . 以上より , サルモネラ

は腸内環境ストレスに応答して変化するタンパク質活性

Effect of gut microbe on Salmonella systemic
infection

を Tig-DnaJ 分子シャペロンネットワークにより適切に制御することで , 細胞分裂と細胞侵入に関わる病原因子の発現をコントロールし , 全身感染発症を可能にするとAkiko Takaya（Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

University）

Yoshiyuki Goto

（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

サルモネラ全身感染制御における腸内細菌叢の影響考えられる .

研究課題’20－25

Study on the relativeness of simultaneous growthamong mite and fungi in house
Kazuhiro Hashimoto, Yuma Fukutomi（National Hospital Organization Sagamihara National

高屋明子

Hospital）

Takashi Yaguchi, Sayaka Ban（千葉大学・大学院薬学研究院）

後藤義幸（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Maiko Watanabe, Haruo Takahashi（千葉大学真菌医学研究センター）（National Institute of Health Sciences）

研究成果
サルモネラは , 経口から感染後 , 腸管上皮細胞から侵入し全身感染を発症させる . 腸管上皮細胞からの侵入に

Yuji Kawakami, Hisayuki Oda（FCG Research Institute, Inc. ）は , サルモネラが発現する Salmonella pathogenicity island

1（SPI1）とべん毛の２つの３型分泌システムの機能発千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

65

室内に分布するダニおよび真菌の増殖に関する研究

今後は , 今回の手法を用いて , 住宅で検出されやすい又はアレルギー性の高い真菌種を増やし , 継続的に調査する .

橋本一浩・福富友馬

研究課題（国立病院機構相模原病院）’20－26

矢口貴志・伴さやか

Functional analysis of the enzymes involved ingalactomannan biosynthesis in Aspergillus（千葉大学真菌医学研究センター）

渡辺麻衣子・髙橋治男

fumigatus（国立医薬品食品衛生研究所）

川上裕司・小田尚幸

Takuji Oka（エフシージー総合研究所）（Department of Applied Microbial Technology, Sojo

研究成果
住宅室内では , アレルゲンとなる真菌およびダニ類によってしばしば同時に高度に汚染されることから , これらの増殖は互いに関連している可能性がある . そこで ,両者の増殖の関連性に関するエビデンスを取得することを目的とした検討を行った .

これまでの成果から , ダニ類は複数菌種のカビよりも酵母である Candida albicans に対して走性が強く , 共培養した際に増殖効率が高いことが示されている . そこで
2020年度は , ダニは C. albicans のみを好むのか , 又はその他の酵母類も好むのかを明らかにする目的で , ハウス

ダストの真菌叢を優占的に構成する酵母である Malassezia

furfur を選定し , 2019年度に用いた手法に改良を加え , 走

University）

Katsuhiko Kamei, Akira Watanabe（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Daisuke Hagiwara（ Microbiology Research Center for Sustainability,

University of Tsukuba）

Yutaka Tanaka, Nobuyuki Shibata（Department of Infection and Host Defense, Tohoku

Medical and Pharmaceutical University）

Aspergillus fumigatus のガラクトマンナン生合成酵素の機能解明

性を確認するための実験を行った .

岡

試験方法」で定める「侵入阻止法」を応用した . 即ち ,亀井克彦・渡辺の中央に４種の真菌（表参照）各々の凍結粉末0.05 g を萩原大祐

照区としてダニ類の飼料として用いる酵母粉末を用い

田中 大・柴田信之

た . これを大シャーレ中央に設置し , 小シャーレ周囲に（東北薬科大学感染生体防御学研究室）

実験手法としては JIS L1920「繊維製品の防ダニ性能

標準布（JIS L0803 綿3-1号）を小シャーレ内に敷き , そ

置き試験区とした . 陰性対照区として綿布のみ , 陽性対

ヤケヒョウヒダニ約10,000頭を撒き , 暗条件・26℃で

拓二（崇城大学応用微生物工学科）

哲（千葉大学真菌医学研究センター）（筑波大学糸状菌相互作用講座）

24h 静置した . その後 , 小シャーレ内のダニを計数し研究成果比を求めた .

ターゲットとして期待されている . 我々は , 細胞壁他棟

た . この操作を３回ずつ実施し , 試験区÷陰性対照区の真菌の細胞壁とその生合成酵素は , 新規抗真菌剤の結果 , 今回の真菌種の中では M. furfur において最も高の中でもガラクトマンナンという多糖の生合成に着目しする誘引効果を持つこと , さらに2019・2020年度の研究

定および機能解明を行った真菌型ガラクトマンナンのコ

唆された .

素（CmsA/Ktr4; Onoue T. et. al., Sci. Rep., 2020）の立体構

い試験区 / 陰性対照区の比を示し , 当該酵母はダニに対成果を総合すると , ダニは酵母類に誘引されることが示

66

千葉大学

て研究を進めてきた . 今年度は , 本共同研究において同- 1→2）- マンノース転移酵
アマンナン生合成を担う , α（

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

造を1.95Å の分解能で X 線結晶構造解析により明らかにした . また , CmsA/Ktr4と Mn2+/GDP 複合体の立体構造

も1.90Å の分解能で明らかにすることができた . CmsA/

千葉市における大学・行政・医師会が連携した風疹対策共同研究

Ktr4タンパク質は , ドナー基質である GDP- マンノース

玉井和人

に対する高度に保存された結合ポケットを持つだけでな（千葉市医師会）

く , その N- 末端領域と C- 末端領域によって形成される

末廣真美子

あるマンナン鎖を認識することが期待された . また , こ

石和田稔彦

ユニークな大きな凹み構造を持ち , アクセプター基質でれらの結晶構造をもとに , アクセプター基質のモデル構（1→6）-α-Man（1→2）-α-Man-OMe を造 と し て α-Man-（千葉市保健福祉局）（千葉大学真菌医学研究センター）

用いて , ドッキングおよび分子動力学シミュレーション

研究成果

提 示 し た . CmsA/Ktr4は , こ れ ま で に 知 ら れ て い た α-

ン５期定期接種が国事業として開始された . 千葉市では部位に大きな凹み構造を持つことで比較的長い鎖長の糖価の低い妊婦 , これらの配偶者・家族に対する抗体検査

により作成した酵素 - 基質複合体の３次元構造モデルを（1→2）- マンノース転移酵素とは異なり , その糖鎖認識

鎖を認識していることが示唆された . さらに , その凹み

国内での風疹流行に対して2019年４月より MR ワクチ

以前より市独自事業として , 妊娠希望の女性や風疹抗体助成 , 風疹抗体価が低い全ての人を対象とした MR ワク（1→6）-α-Man 構造との親和性も構造と末端の α-Man-

チン接種助成を行ってきた . 私たちは千葉市在住の対象として利用できる特異的な α- マンナン生合成阻害剤を検査申込書 , MR ワクチン接種予診票を , 個人情報を削高いことが示唆された . これらの結果は , 医薬品や農薬開発するための基礎情報となると考えている .

発表論文
１）Structural basis for the core-mannan biosynthesis of cellwall fungal-type galactomannan in Aspergillus fumigatus.
Hira D., Onoue T., Oka T., J. Biol. Chem. 295, 1540715417（2020）.

研究課題者に対して行われた国事業および千葉市事業の風疹抗体除した後に全例回収し , 千葉大学真菌医学研究センター

にて集計・傾向を分析した（当センター倫理審査委員会
承認番号 No. 18）. 解析を終えた範囲での抗体検査結果において MR ワクチン接種対象基準値未満の人の割合
は , 国事業で約15%, 千葉市事業で約35% であった . 年
代別に見ると HI 法で1：16以下の割合は20歳代男性が最も多く約50%, 次いで20歳代女性で約40% であったが ,HI 法 で1：8未 満 の 割 合 は40歳 〜50歳 代 男 性 が 多 く 約’20－27

15％であった . また , 千葉市事業においては , 抗体検査

Joint Research for Fight against Rubella inChiba City by University, Health Center andMedical Association
Kazuto Tamaiに基づく接種だけでなく , 妊婦健診の抗体検査に基づく接種が多いことが明らかになった . さらに , 千葉市の事業を利用して抗体検査を受ける男性の多くは土曜日を選択している一方 , 国の事業を利用して抗体検査を受ける

男性は , 土曜日だけでなく平日も選択していたが , 千葉
市外や千葉県外の検査機関を積極的に利用していること（Chiba City Medical Association）

が明らかになった . 子育て世代の女性に関しては千葉市（Chiba City Health Center）

国事業の MR ワクチン接種は進んでおらず , 勤労世代ゆMamiko Suehiro

Naruhiko Ishiwada

事業の有効性が示唆されたが , 40-50歳代男性に対する（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

千葉大学

えの受診の困難さが影響している可能性が考えられた .

発表論文
１）Takeshita K, Takeuchi N, Ohkusu M, Ohata M, Suehiro
M, Maejima H, Abe H, Ohta F, Ohama Y, Tamai

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

67

K, Haraki M, Ishiwada N. Population-based study of afree rubella-specific antibody testing and immunization

類縁体（P1, P2）はほとんど活性を示さなかったが , 長

鎖炭化水素を有する類縁体（P3, P4, P5）の中で P3のみ

campaign in Chiba city in response to the 2018-2019

が , 肺炎連鎖球菌などのグラム陽性菌に対して高い抗細Immunother. 2021; 17（6）: 1779-1784.

シェアリライド類縁体の炭化水素部位の構造最適化を進

nationwide rubella outbreak in Japan. Hum Vaccin

研究課題

菌活性を示すことが明らかになった . 今後 , さらにユー

めたい .

’20－28

研究課題

Antibacterial/antimicrobial activity analysis of
newly developed macrolide antibiotics
Isamu Shiina（Department of Applied Chemistry, Faculty of Science

Division I, Tokyo University of Science）

Naruhiko Ishiwada, Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

新規マクロライド系抗菌剤の抗真菌活性ならびに抗細菌活性研究
椎名

Biological function of secretory cyclic peptides
widely and diversely produced by fungi
Maiko Umemura（Bioproduction Research Institute, National Institute ofAdvanced Industrial Science and Technology（AIST））

Daisuke Hagiwara（Faculty of Life and Environmental Sciences, Universityof Tsukuba）

Takahito Toyotome（Department of Veterinary Medicine, Obihiro University

勇（東京理科大学理学部第一部’20－29

応用化学科）

石和田稔彦・亀井克彦

of Agriculture and Veterinary Medicine）

Takashi Yaguchi, Akira Watanabe, Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（千葉大学真菌医学研究センター）

真菌類が広く多様に産生する分泌性環状ペプ
チド群の生物学的機能解明

研究成果
これまでの共同研究で , ユーシェアリライド（天然24員環マクロライド）と比較し , カンジダ , アスペルギル

梅村舞子

陽性菌に対する抗細菌活性が , いずれも高いユーシェア

萩原大祐

スなどに対する抗真菌活性および MRSA を含むグラム

リライド類縁体（EU-N）を見出し , その供給法を確立（産業技術総合研究所生物プロセス研究部門）（筑波大学生命環境系）

した . さらに構造活性相関解析から , ユーシェアリライ

豊留孝仁

ドに含まれるホスホリルコリン基が活性の発現に必須の（帯広畜産大学獣医学研究部門）

官能基であることを見出した . すなわち , 活性発現の端矢口貴志・渡辺緒となるユーシェアリライド分子の細胞膜表面への静電的な結合におけるコリン残基の関与が示唆された .

一方で , ユーシェアリライドの炭化水素を主成分とす

哲・亀井克彦

（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果

る大環状構造が活性発現に必須であるか否かは不明で真菌において近年見出された分泌性環状ペプチド生合あった . そこで大環状構造を有さない新規ユーシェアリ

成因子は , ほぼ全てのカビ・キノコに広く多様に保存さライド類縁体（P1-P5）を考案し , 種々のグラム陽性菌

れている . これまでの報告や実験結果から , 強い微小管な脂環式炭化水素あるいは単鎖脂肪酸エステルを有するや宿主免疫系制御といったカビの生態において重要な機に対する活性試験を行っていただいた . その結果 , 単純

68

千葉大学

形成阻害活性を示すカビ毒としての作用の他 , 接合因子

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

能を示すものが多く含まれ , 特に子嚢果形成への関与が示唆された（1）. そこで本年度は , 千葉大学真菌医学研究センターが保有する真菌リソースの中から , Aspergillus

皮膚創傷治癒過程における Dectin-1と Dectin2の役割の相違

nidulans および Neosartorya fischeri それぞれについて子嚢果

菅野恵美・川上和義・丹野寛大の違いを比較した . ４株のうち , A. nidulans IFM 60678

西城

形成度の異なる２株ずつを選択し , 本因子群の数や配列と N. fischeri IFM 65258は基準株でありすでにゲノム情報が公開されているが , その他の２株についてはまだで（東北大学大学院医学系研究科）

忍（千葉大学真菌医学研究センター）あったため , ゲノム抽出・解析を行った . 参照アセンブ

研究成果はなかったもののゲノム全体が10カ所程度で大きくリア物由来）やダメージに関連した内因性分子が存在し , パ

リの結果 , A. nidulans の２株間では , 大きな欠損・挿入

レンジメントしていた . 一方 N. fischeri の２株は , ゲノム

配列がほぼ相同であった . 得られたゲノム配列から本因子群を独自アルゴリズムで抽出したところ , A. nidulans

皮膚が損傷後の創傷部位には様々な外因性分子（微生ターン認識受容体による認識を介した ‘ 炎症反応の制御 ’
が治癒の鍵を握る . 真菌は難治性創傷の創面から検出されることが報告されており , 創傷治癒との関連が示唆さで３つ , N. fischeri で５つ見出され , それらのアミノ酸配れている . さらに真菌の細胞壁を構成する β- グルカン

本因子群を含むすべての遺伝子発現状態の違いを見るた

ループにより , α- マンナンを創傷に塗布すると治癒が遅列は対応する２株間で全く同じであった . そこで現在 ,を創傷に塗布すると治癒が促進すること , また我々のグ

め , 子嚢果形成プレート上で培養した菌体から RNA を延することが報告されているが , 詳細な炎症誘導メカニである .

受容体である Dectin-1, α- マンナン受容体である Dectin-2,

発表論文
１）Umemura M: Peptides derived from Kex2 -processed
repeat proteins are widely distributed and highly diversein the Fungi kingdom. Fungai Biol Biotechnol 7 :にすることを目的とし解析を行った. まず, 野生型

精製し , トランスクリプトーム解析を行っているところ

ズムは明らかではない . そこで , 本研究では β- グルカン

それぞれの生理的な創傷治癒過程における役割を明らか

11, 2020.

（WT）マウスと Dectin-1, および Dectin-2それぞれの欠損（KO）マウスの背部に全厚の創傷を作成し , これらの分子の欠損による影響と , リガンドである β グルカン ,あるいは α マンナンの投与による影響を調べた . その結２）Umemura M, Kuriiwa K, Tamano K, Kawarabayasi Y:

果 , Dectin-1 KO マウスでは WT マウスと比較して創傷

between Aspergillus flavus and Ustilaginoidea virens.

が促進することから , Dectin-1を介したシグナルは創傷

Ustiloxin biosynthetic machinery is not compatible
Fungal Genet. Biol 143: 103434, 2020.

研究課題

治癒が遅延すること , 逆に Dectin-2 KO マウスでは治癒治癒を促進すること , Dectin-2のシグナルは創傷治癒を阻害することが明らかとなった . また , Dectin-1は初期’20－30段階の好中球集積を誘導することで創傷治癒の促進に寄与するのに対し , Dectin-2は好中球反応の遷延や好中球

Distinct roles for Dectin-1 and Dectin-2 in skinwound healingの細胞外トラップ形成（NETs）形成に関与し , 創傷治癒

Emi Kanno, Kazuyoshi Kawakami, Hiromasa Tanno

た . これらの結果から , Dectin-1と Dectin-2は , 好中球反Shinobu Saijo

を果たしていることが示された .

（Tohoku University Graduate School of Medicine）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

千葉大学の遅延につながることがわかった . さらに , Dectin-2の欠損は , コラーゲンの沈着や TGF-β1の発現を改善し応に対する影響の違いを通じて , 創傷治癒に異なる役割

発表論文
１）Yamaguchi, K., Kanno E., Tanno H., Sasaki A., Kitai

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

69

Y., Miura T., Takagi N., Shoji M., Kasamatsu J., SatoK., Sato Y., Niiyama M., Goto Y., Ishii K., Imai Y., Saijo
S., Iwakura Y., Tachi M., Kawakami K. Distinct Roles
for Dectin-1 and Dectin-2 in Skin Wound Healing and

Neutrophilic Inflammator y Responses. J. Invest.
Dermatol., 2021, 141, 164-176.

研究課題’20－31Bacterial analysis of S. pneumoniae isolated frompediatric invasive disease in Yogyakarta
Eggi Arguni（ Department of Child Health, Faculty of Medicine,

Public Health and Nursing Universitas GadjahMada, Indonesia）

Naruhiko Ishiwada, Noriko Takeuchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
The purpose of the research is to obser ve invasive
pneumococcal disease（IPD）incidence, serotype distribution,
and antibiotic susceptibility of Streptococcus pneumoniae
isolated from pediatric IPD patients in Yogyakarta, Indonesia.
This study is act as baseline data of clinical profiles of pediatric
IPD in Dr. Sardjito General Hospital in Yogyakarta,
Indonesia. Bacterial analysis of S. pneumoniae isolates from
IPD patients is performed in Eijkman Institute in Jakarta, thenational reference center of S. pneumoniae in Indonesia.
Dr. Dodi Safari is responsible for the bacterial analysis in
Eijkman Institute in Jakarta. This study will be able toestimate the impact of pneumococcal conjugate vaccine
introduction in Indonesia based on the established active
surveillance system of pediatric IPD in Japan. The study
started from August 2020 because of the influence of

COVID-19 epidemic in Indonesia. We collected about 10

strains of S. pneumoniae those were sent to Dodi’ s lab at
Eijkman Institute in Jakarta for serotyping and genotyping.

We are also writing a short manuscript of a case series ofS. pneumoniae in children collaborating with Dr. Ishiwada.

70

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

2021 Scientific Meetings & Seminars

2021年講演会「東京大学医科学研究所─千葉大学真菌医学研究セン

小澤

ター「A 型インフルエンザウイルス感染動態を反映する新規

国際共同利用・共同研究拠点事業

2020年度成果

報告会」

真（鹿児島大学）

ポリメラーゼ活性測定法の確立」

日時：令和３年３月９日（火）〜３月11日（木）浦木隆太（名古屋市立大学）

場所：オンライン開催「制御性 T 細胞を標的としたインフルエンザ感染症に対する新規治療法の開発」

令和３年３月10日（水）【特別講演】
竹内

佐々木泉（和歌山県立医科大学）

理（京都大学大学院医学研究科）「RNA 分解による免疫応答の制御機構」「コレラ毒素の免疫アジュバント活性を制御する分子基盤の解明」【合同成果報告会（千葉大学真菌医学研究センター）】
程久美子（東京大学）「microRNA を介したウイルス応答の制御によるヒトの「真菌医学研究センター セミナー」

新しい生体防御機構の解析」

全てオンライン開催

名木

１. 令和３年２月９日（火） 16：00〜17：00

稔（国立感染症研究所）「Candida glabrata におけるマイトファジー関連遺伝子

ATG32の転写調節因子の同定」

梅村舞子（産業技術総合研究所）「病原性真菌が産生する新規分泌性環状ペプチド群の生

河岡義裕（東京大学医科学研究所

教授）「新型コロナウイルス：これまでにわかったこと」
２. 令和３年５月６日（木） 16：00〜17：00
石井健（東京大学医科学研究所

教授）「ワクチン開発研究の新展開；mRNA ワクチンと核

理機能解明」酸アジュバントの次へ」椎名勇（東京理科大学）「新規マクロライド系抗菌剤の抗真菌活性ならびに抗細３. 令和３年10月５日（火） 16：00〜17：00
荒瀬

菌活性研究」

尚（大阪大学免疫学フロンティア研究セン

ター・微生物病研究所教授）【領域３：感染症・免疫共同研究領域】「新型コロナウイルスに対する感染増強抗体と中和

辻抗体」

典子（産業技術総合研究所）「小腸自然免疫レセプターの機能解析」

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

71

Tendai

To Narita

To Anagawa I.C

Chib

Route 14

Chiba

16

National

Inohana
CampusteLinea LineuRo

Keisei Chibal

JR Sobu

n
tio

ail

hiba

Midoridai

NaorHigashi-ChibaNishi-C

To Keisei-Tsudanuma

To Tokyoon

To TokyoaM

Nishi-Chiba
Campus

Yamato Bridge

Keisei-ChibaPrefecturalOﬃce

Chiba-Chuo

Inohana Park

Chiba City Hall

Hon-Chiba
Miyako River

Memorial Hall,
School of Medicine

To

To

C

hi

Facilities for Student's
Circle Activity
Library of Health Sciences
Lecture Building of
School of Nursing

ha

ra

K

is

ar

da

az

u

i

University Hospital
Gymnasium

Medical Mycology
Research Center
School of Medicine

Center Gate

Kyodokan
Bus Stop

School of Medicine
Bus Stop

Faculty of Pharmaceutical Sciences
Bus Stop

Medical andPharmaceutical
Science Building

令和 4 年 3 月発行
発行者

March 2022

千葉大学真菌医学研究センター
センター長

笹川

〒260-8673

千葉市中央区亥鼻 1−8−1

電話

Chibadai Inohana
Innovation Plaza千尋

043−222−7171（代表）

Published by

Chihiro Sasakawa, Ph.D.

Director, Medical Mycology Research Center
Chiba University

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千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 25 巻2021

CHIBA UNIVERSITY
2021