ISSN 1347－6920

MMRC
ANNUAL REPORT OF MEDICAL MYCOLOGYRESEARCH CENTER, CHIBA UNIVERSITY 2018
千葉大学 真菌医学研究センター

22

平成30年

報告

目

次

Content

はじめに

Preface for Annual Report for 2018

感染免疫分野 米山教授 感染応答プロジェクト

Project for Immune Response in Infections Diseases

3

Project for Cytokine Research

5

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis

7

Candida glabrata Phenome Project9

Project of Clinical Investigation

11

Project for Host Response Network of Bacterial Infection

16

Project for Infection Control and Prevention

19

感染免疫分野 西城准教授 サイトカインプロジェクト
感染免疫分野 後藤准教授 微生物・免疫制御プロジェクト

病原機能分野 知花准教授 カンジダ・グラブラータフェノームプロジェクト
臨床感染症分野 亀井教授 臨床感染症プロジェクト
臨床感染症分野 山本特任教授 感染宿主応答ネットワークプロジェクト
感染症制御分野 石和田准教授 感染症制御プロジェクト

RNA 感染治療学分野 伊庭特任教授 RNA 制御プロジェクト
Project for RNA Regulation

24

Project for Systems Biology of Microorganisms

27

Management of Unit of Microbiological Resources

29

Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology National
BioResource Project Pathogenic Eukaryotic Microorganisms

33

Cooperative Research of Priority Areas with NEKKEN, Nagasaki University
Project for Collections, and morphological, physiological and molecular biologicalanalysis of human pathogenic fungi and actinomycetes in Africa

34

The project for prophylaxis, diagnosis, and treatment for aspergillosis and the othermycoses in aged and neonate patients

35

微生物資源分野 高橋准教授 微生物創生プロジェクト
微生物資源分野 矢口室長 バイオリソース管理室

文部科学省 ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原微生物」

長崎大学熱帯医学研究拠点特定領域共同研究「アフリカで発生している真菌症・放線菌症の原因菌の収集と形態学的 , 生理学的 , 分子生物学的解析」プ
ロジェクト

高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発プロジェクト

AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「ブラジルと日本の薬剤耐性を含む真菌感染症診断に関する研究とリファレンス協力体制強化プロジェクト」

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for Sustainable
Development（SATREPS）
The establishment of a research and reference collaborative system for the
diagnoses of fungal infections including drug-resistant ones in Brazil and Japan

37

感染症研究革新イニシアティブ（J-PRIDE）
Japanese Initiative for Progress of Research on Infectious Disease for Global Epidemic（J-PRIDE）

39

Leading Research Promotion Program, Institute for Global Prominent Research
Advanced Research of Infection and Immunity Based on Integrative
Understanding of Host-Microbe Interactions

40

千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラム「 超個体 の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」

平成29年度 共同利用・共同研究報告2017 Fiscal Year Cooperative Research Program Report

感染症グローバルネットワークフォーラム2017
The 6th Global Network Forum on Infection and Immunity
2018年講演会
2018 Scientific Meetings & Seminars

41
60
61

は じ め に我が国はすでに超高齢社会に突入し , 高度医療や生活習慣病に起因した日和見感染症や呼吸器疾患を基礎疾患として , 真菌感染症は増加の一途を辿っています。また経済と観光のグローバル化に伴う輸入真菌感染症等 , 真菌症をはじめとするさまざまな感染症の脅威にも直面しています。このような背景から , 我が国唯一の真菌症の研究拠点に求められる役割は以前にも増して重要となります。したがって本センターでは , 病原真菌の研究を基軸に , 感染症 , 免疫 , 創薬 , 情報生命科学等を含む領域の共同利用・共同研究拠点として ,国内外の大学はもとより , 研究機関 , 医療機関 , 企業等とも活発な共同研究を展開しています。

本センターでは , 千葉大学附属病院と連携して臨床活動を積極的に行っています。我が国初の真菌症専門外来を開設するとともに , 小児科とも連携して小児感染症の臨床研究も行っています。また米国 , ドイツ , 英国 , ポルトガル , 中国 , ブラジル等の真菌感染症研

究拠点とも活発な共同研究を実施しています。この一環として , 臨床感染症分野は , ブラ

ジ ル・ カ ン ピ ー ナ ス 大 学 医 学 部 と 連 携 し て , 平 成28年 度 の 日 本 医 療 研 究 開 発 機 構（AMED）における地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）に採択され , 現地における薬剤耐性真菌による感染症の実態解明を目指して , 若手研究者の交流も含め積極的に共同研究を推進しています。

微生物資源分野は , 世界レベルの規模を有する病原真菌バイオリソースを有し , 病原真菌の収集 , 保存 , 分与 , オミックス解析等を通じて , 共同利用・共同研究拠点活動および国際共同研究を支えています。平成30年度には , 旧ラジオアイソトープ実験室をバイオリ
ソース管理室としてリニューアルし , 真菌講習会およびバイオリソースのさらなる機能強化を目指しています。

本センターでは , 感染症 , 免疫 , 病原真菌 , 情報生命科学等の基礎的研究も若手研究者を中心に活発に行われ , 本年度も国際的に注目される多くの研究成果を得ることができました。また真菌感染症をテーマに , 第７回感染症研究グローバルネットワークフォーラム

2018を開催し , その結果国内の真菌コミュニティーはもとより , 海外真菌研究拠点との連携も一段と強化され , 多くの国際共同研究が立ち上がりました。

本年度も , 千葉大学 , 本センターの運営協議会メンバー , 特任教授 , 兼任教授 , 客員教

授 , グランドフェローはじめ , 国内外の多くの共同研究者による御指導 , 御支援に対して心より感謝致します。
平 成 31 年 4 月

千葉大学真菌医学研究センター長

笹

川

千

尋

Preface for Annual Report for 2018
Our country has already become a super-aged society, and the incidences of fungal infectious

diseases are steadily increasing due to the increase in advanced medical care and lifestyle-relateddisorders in patients with opportunistic infectious diseases and respiratory diseases. Moreover, thedramatic increase in worldwide trade and tourists from abroad, along with the spread of severe
fungal infectious diseases, is recognized as a key issue within the aging population. The Medical
Mycology Research Center（MMRC）at Chiba University has become increasingly importantbecause it serves two functions: as a research organization and as a promoter of educational activities
aimed at raising public awareness.

MMRC has been certified as a Joint Usage/Research Center by the Ministry of Education,

Culture, Sports, Science and Technology（MEXT）since 2011. Since then, MMRC has been
actively engaged in medical mycology research and related fields, such as infection immunology,

infection biology, information biology, and infection disease sciences through partnerships with
universities, public institutions, medical institutions, hospitals, and pharmaceutical companies. In

2014, we opened a specialty clinical research facility for fungal infectious diseases at Chiba

University Hospital, which is the only outpatient clinic for such diseases in Japan.

We are also enthusiastic about promoting international collaborations with several outstanding

fungal research groups in the US, UK, China, Portugal, and Brazil. For example, in 2016, a teamof the Division of Clinical Research at MMRC was adopted by SATREPS, a Japanese government

program that promotes international joint research. As part of this program, our team has led acollaboration with the fungal research team in Campinaus University in Brazil aimed atinvestigating the impact of drug resistance on fungal infectious diseases in Brazil.

Finally, we wish to highlight that in 2018, MMRC received high commendation by MEXT for

our research, as well as our collaborative research activities. Accordingly, we envision MMRC as
the leading institution for excellent scientific research in fungal infectious research, as well as a key
resource for research on pathogenic fungi, which will ultimately advance the field of medical
mycology.

April, 2019

Chihiro Sasakawa

Director of MMRC

米山ＰＩ（感染応答）プロジェクト
Project for Immune Response in Infections Diseases
研究概要（Summary）

感染に対する生体防御は , 自然免疫と獲得免疫によって協調して行われている . 本プロジェクトでは , ウイルス感染に応答した自然免疫誘導に注目し , 感染センサー RIG-I-like 受容体（RLR）によるウイルス由来の非自己 RNA 検知の分子機構の解明と , それによって引き起こされる免疫応答の生理機能を解析することにより , ウイルス感染症に対する新たな治療戦略の開発を目指した解析を行っている.

Innate immune system plays an essential role in self-defense against infection of a variety of pathogens. In
this project, we focus on antiviral innate immunity, especially molecular machinery for detection of viral
RNA by retinoic acid-inducible gene I（RIG-I）-like receptors（RLRs）and subsequent immune responses.
The results obtained from the studies will help us to establish a novel therapeutic or preventive strategy
against RNA virus-induced infectious diseases.

教

授

助

教

特

任

助

教

技

術

職

員

技 術 補 佐 員

米山 光俊
尾野本浩司
小野口和英
常喜 儒彦
滝沢みゆき

Professor

Assistant Professor
Assistant Professor

Research Technician

Research Promotion Technician

1. LGP2 virus sensor regulates gene expression network

mediated by TRBP-bound microRNAs.

Takahashi T , Nakano Y , Onomoto K , Murakami F ,
1

1

2

3

Komori C1, Suzuki Y3, Yoneyama M2, Ui-Tei K1, 3.

Mitsutoshi Yoneyama
Koji Onomoto
Kazuhide Onoguchi
Michihiko Jogi
Miyuki Takizawa

enhancer of RNA silencing, and functions to recruit
precursor-miRNAs（pre-miRNAs）to Dicer that processes

pre-miRNA into mature miRNA. Viral infection activatesthe antiviral innate immune response in mammalian cells.

RLRs, including RIG-I, melanoma-diﬀerentiation-associatedgene 5（MDA5）, and LGP2, function as cytoplasmic virus

1

Department of Biological Sciences, Graduate School ofsensor proteins during viral infection. RIG-I and MDA5 can

2Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

antiviral cytokines, including type I interferon. However, the3

Science, The University of Tokyo

Research Center, Chiba University

Department of Computational Biology and Medical

Sciences, Graduate School of Frontier Sciences, The
University of Tokyo

We show that virus sensor protein, laboratory of genetics

and physiology 2（LGP2）, regulates gene expression networkof endogenous genes mediated by TAR-RNA binding protein（TRBP ）-bound microRNAs（miRNAs ）. TRBP is an

千葉大学

distinguish between diﬀerent types of RNA viruses to produce
role of LGP2 is controversial. We found that LGP2 bound to

the double-stranded RNA binding sites of TRBP, resulting ininhibition of pre-miRNA binding and recruitment by TRBP.

Furthermore, although it is unclear whether TRBP binds tospecific pre-miRNA, we found that TRBP bound toparticular pre-miRNAs with common structuralcharacteristics. Thus, LGP 2 represses specific miRNA

activities by interacting with TRBP, resulting in selective
regulation of target genes. Our findings show that a novel

真菌医学研究センター報告

第 22 巻20183

function of LGP2 is to modulate RNA silencing, indicating

be recognized by RIG-I in vitro. We are now trying to

mammalian cells.

RNP-recognition by RIG-I.

the crosstalk between RNA silencing and RLR signaling in

2. Functional analysis of RNA binding proteins（RBPs）

that are responsible for induction of anti-viral innate
immunity via RNA-granule formation.

Onomoto K, Ban M, Miyamoto E, Kuroki Y, Tsutsuba C,
Watanabe Y, Onoguchi K, and Yoneyama M.

identify a regulatory molecule（s ）that can be involved in

4. Molecular interaction between anti-viral innate

immune responses and endoplasmic reticulum（ER）
stress responses.

Onoguchi K, Mochizuki Y, and Yoneyama M.
We are interested in how ER stress-induced response

Previously, we demonstrated that viral infection induces

communicates with RLR-mediated signaling in the virus-

antiviral stress granule（avSG）. We further revealed that（s）that is involved in activation of both signaling pathways,

RIG-I-mediated antiviral signaling. We are analyzing several

inducible signaling cascades.

RLRs to accumulate in cytoplasmic granular-like structure,

avSG plays a critical role as a platform for the initiation of

RBPs that play a role for regulation of both RIG-I-mediatedsignal activation and avSG formation. Furthermore, we aretrying to identify a novel RBPs that can be involved in antiviral innate immune responses using several biochemical
approaches.

3. Recognition of viral ribonucleoprotein complex（RNP）

by RLRs.

infected cells. Recently, we have identified a novel moleculesuggesting a molecular interaction between these two stress-

These works were supported by JSPS KAKENHI, Grant-

in-Aid for Scientific Research（B ）（18 H 02660）and forYoung Scientists（B）（17K15699）.

Publications

１）Takahashi T, Nakano Y, Onomoto K, Murakami F,

Komori C, Suzuki Y, Yoneyama M, Ui-Tei K: LGP2

virus sensor regulates gene expression network mediatedby TRBP-bound microRNAs. Nucleic Acids Res, 46:

Jogi M, and Yoneyama M.

9134-9147, 2018.

It is unclear how RIG-I detects viral ribonucleoprotein２）Takahashi T, Nakano Y, Onomoto K, Yoneyama M,

viral proteins, in the virus-infected cells. As a model RNP,

interference by interacting with TRBP through LGP2 incomplex（RNP）, which consists of viral genomic RNA and

we prepared artificial influenza A virus（IAV）RNP generated
in HEK293T cells, and examined whether the viral RNP can

4

千葉大学

U i -Te i K : V i r u s s e n s or RI G-I re p re s s e s RNA

mammalian cells. Genes, 9: E511, 2018.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

西城ＰＩ（サイトカイン）プロジェクト
Project for Cytokine Research
研究概要（Summary）

生体は , 多種多様な細胞や組織が互いに時空的に作用することにより恒常性が維持される一つシス
テムであり , その維持においてサイトカインは中心的な役割を担っている . 多くの疾病は単に一つの臓器 , 組織の異常ではなく , 免疫系を始めとする種々のシステムの異常であることから , これらを統合するサイトカインの役割を知ることは非常に重要である . 本プロジェクトでは , 感染性疾患や炎症性疾患の病態形成におけるサイトカインの役割を解明し , 最終的に新たな治療薬の標的分子を見出すことを目的とする .

Cytokines play a central role in maintenance of homeostasis. Because, a disease is not caused by only one
problem of an organ, but caused by a systemic disorder, which is regulated by cytokines, it is important tostudy their functions. We aim to find new therapeutic targets for inflammatory diseases and infectious
diseases by investigating the roles of cytokines in pathogenesis.

准
特

教
任

授
助

教

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

西城
矢部
峰
鈴木

忍
力朗
良子
智明

Associate Professor

Research Assistant Professor

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Dectin- 1 and Dectin- 2 in innate immunity against

fungal infection.

Shinobu Saijo
Rikio Yabe
Ryoko Mine
Tomoaki Suzuki

domain family member 9（CARD9）-nuclear factor-κ B axis,

resulting in the activation of various genes including those

encoding pro-inflammatory cytokines. Both β-glucans andα-mannans are major cell wall components of fungi including

Shinobu Saijo and Rikio Yabe
Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

Candida albicans（C. albicans）and Pneumocystis carinii（P.

carinii）. Recently, it was reported that Dectin-1 is important

Research Center, Chiba University, Chiba 260-8673, Japanin protection against P. carinii by inducing reactive oxygen

Dectin-1 and Dectin-2 are type II transmembrane proteinsroles in defense against C. albicans by preferentially inducing

recognition domains（CRDs）in their extracellular region.

structures, ligands, signal transduction and functional roles ofDectin-1 recognizes β-glucans with its CRD and transduces

infection.

motif（ITAM ）-like motif in the cytoplasmic domain,

2. Suppression of IL-17F, but not of IL-17A, providesof the C-type lectin family with single carbohydrate
They are expressed mainly in dendritic cells and macrophages.

signals through its immunoreceptor tyrosine-based activation

whereas Dectin-2 recognizes α-mannans and transduces its

signal through association with the ITAM-containing Fc

receptor γ chain. Upon ligand binding, spleen tyrosine kinase
is recruited to the ITAM and activates the caspase recruitment

千葉大学

species, whereas both Dectin-1 and Dectin-2 play important

Th17 cell diﬀerentiation. In this review, we briefly revisit theDectin- 1 and Dectin- 2 in host defense against fungal

protection against colitis by inducing Treg cells throughmodification of the intestinal microbiota

Ce Tang1, 2, Shigeru Kakuta2, 3, Kenji Shimizu1, 2, 4, Motohiko

真菌医学研究センター報告

第 22 巻20185

Kadoki1, 2, 5, Tomonori Kamiya1, 2, 6, Tomoyuki Shimazu1, 7,
Sachiko Kubo , Shinobu Saijo , Harumichi Ishigame ,
1, 2

2, 8

2, 9

Susumu Nakae and Yoichiro Iwakura
2

1

1

Center for Animal Disease Models, Research Institute for
Biomedical Sciences, Tokyo University of Science, Noda-

2shi, Chiba, Japan.

Center for Experimental Medicine and Systems Biology,

Institute of Medical Science, the University of Tokyo,

3

Minato-ku, Tokyo, Japan.

Department of Biomedical Science, Graduate School of
Agricultural and Life Sciences, the University of Tokyo,

4

Bunkyo-ku, Tokyo, Japan.

Division of Immune Regulation, Institute for Genome
Research, Tokushima Universit y, Tokushima-shi,5

Tokushima, Japan.

Center for Computational and Integrative Biology,
Massachusetts General Hospital, Boston, MA, USA.

6

Department of Pathophysiology, Graduate School of

7

Department of Food, Agriculture and Environment, Miyagi

Medicine, Osaka City University, Osaka-shi, Osaka, Japan.
University, Sendai-shi, Miyagi, Japan.

8

Medical Mycobiology Research Center, Chiba University,

9

RIKEN Center for Integrative Medical S ciences,

Chiba-shi, Chiba, Japan.

Yokohama, Kanagawa, Japan.

The cytokines IL-17A and IL-17F have 50% amino-acidan increase in intestinal regulatory T cells（T reg cells ）.

Clostridium cluster XIVa in colonic microbiota capable ofinducing Treg cells was increased in both Il17f-/- mice and mice

given transfer Il17f-/- T cells, due to decreased expression of agroup of antimicrobial proteins. There was substantial

production of IL-17F, but not of IL-17A, not only by naive

T cells but also by various colon-resident cells underphysiological conditions. Furthermore, antibody to IL-17F

suppressed the development of colitis, but antibody to IL-

17A did not. These observations suggest that IL-17F is aneﬀective target for the treatment of colitis.
Publications

１）Tang C, Kakuta S, Shimizu K, Kadoki M, Kamiya T,

Shimazu T, Kubo S, Saijo S, Ishigame H, Nakae S,
Iwakura Y. Suppression of IL-17F, but not of IL-17A,

provides protection against colitis by inducing T（reg）

cells through modification of the intestinal microbiota.
Nat Immunol. 19: 755-765. 2018２）Hashiguchi Y, Yabe R, Chung SH, Murayama MA,

Yoshida K, Matsuo K, Kubo S, Saijo S, Nakamura Y,

Matsue H, Iwakura Y. IL- 36α from Skin-Resident

Cells Plays an Important Role in the Pathogenesis of
Imiquimod-Induced Psoriasiform Dermatitis by Forminga Local Autoamplification Loop. J Immunol. 201: 167-

182. 2018３）Kamiya T, Tang C, Kadoki M, Oshima K, Hattori M,

Saijo S, Adachi Y, Ohno N, Iwakura Y. β-Glucans in

identity and bind the same receptor; however, their functional

food modify colonic microflora by inducing antimicrobial

mice resisted chemically induced colitis, but Il17a mice diddependent manner. Mucosal Immunol. 11: 763-773.

diﬀerences have remained obscure. Here we found that Il17f-/-/-

not, and that Il17f CD45RB CD4 T cells induced milder
-/-

hi

＋

protein, calprotectin, in a Dectin-1-induced-IL-17F2018

colitis in lymphocyte-deficient Rag2-/- mice, accompanied by

6

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

後藤ＰＩ（微生物・免疫制御プロジェクト）
Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis
研究概要（Summary）

腸管は食餌性抗原や腸内細菌・真菌など多種多様な抗原に常に曝されている特殊な組織である . こ
れら無数の抗原に対処するため , 腸管では免疫細胞と上皮細胞が相互に作用しながら病原性微生物を排除し , 非病原性微生物と共存する基盤を形成することで腸管の恒常性維持に寄与している . この腸内微生物との共生関係の破綻は , 炎症性腸疾患に代表される腸疾患のみならず , 肥満や糖尿病などの全身性の疾患発症の素因となることから , 腸内微生物との共生システムや腸管免疫細胞と上皮細胞による腸管恒常性制御システムを理解することは重要な命題である . 本プロジェクトでは , 宿主と腸内細菌間の共生因子であり腸管上皮細胞が発現する α1, 2-フコースによる腸内細菌との共生機構を明らかにし ,腸管恒常性維持システムの解明とその破綻によって引き起こされる様々な疾患 , 特に感染症や代謝疾患の治療法の開発を目的としている .

Gastrointestinal tract is a unique organ which is constitutively exposed by various antigens including
dietary materials and commensal bacteria and fungi. In order to exclude pathogens and create symbiotic
environment to non-pahogenic microorganisms, intestinal epithelial cells（ECs ）and immune cells
contribute to establish homeostasis of intestinal microenvironment. Disruption of symbiotic relationshipbetween host and commensals predispose to the development of inflammatory bowel diseases and systemic
disorders such as obesity and diabetes. Therefore, it is important to understand the mechanism of symbiotic
and homeostatic condition regulated by intestinal ECs and immune cells. In this project, we aim to uncover
the symbiotic system with commensal micro- and mycobiota mediated by epithelial α1, 2-fucose. We further
investigate the role of commensal microbes in the establishment of intestinal homeostasis and develop novel
therapeutic approaches for the treatment of diseases such as infection and metabolic syndrome caused by the
disruption of intestinal homeostasis.

准

教

後藤
畢
松尾
白
寺山
藤本

授

大

学

院

生

大

学

院

生

大

学

院

生

大

学

院

生

技 術 補 佐 員

義幸
蓓蓓
謙蔵
旭
千晶
恭子

Associate Professor
Graduate student
Graduate student
Graduate student
Graduate student

Research Promotion Technician

1. Innate and acquired immune system regulates intestinal

epithelial α1, 2-fucosylation

Yoshiyuki Goto33, 4

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andPathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical

千葉大学

Mycology Research Center, Chiba University

Division of Mucosal symbiosis

International Research and Development Center for
Mucosal Vaccine, Institute for Medical Science, The, and Hiroshi Kiyono

1, 2, 3

1

2

Yoshiyuki Goto
Bei Bei Bi
Kenzo Matsuo
Akira Haku
Chiaki Terayama
Kyoko Fujimoto

4

University of Tokyo

Division of Mucosal Immunolog y, Department ofMicrobiology and Immunology, The Institute of Medical

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

7

Science, The University of Tokyo

Terayama1, Yoshiyuki Goto1, 2

α1, 2-fucosyl linkages located to terminal carbohydrate

1

moiety expressed on intestinal epithelial cells is catalyzed byfucosyltransferase 2（Fut2）. Epithelial α1, 2-fucose is one ofsymbiotic factors which mediate host-microbiota interaction.

For example, epithelial α1, 2-fucose is utilized as a dietarycarbohydrate by various symbiotic bacteria such as Bacteroides.

Therefore, disruption of Fut2 leads to dysbiosis both in miceand human and predisposed to the development of

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andPathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical

2

Mycology Research Center, Chiba University,

Division of Mucosal symbiosis, International Research andDevelopment Center for Mucosal Vaccine, Institute for
Medical Science, The University of Tokyo,

Tremendous numbers of microorganisms colonize in the

inflammatory diseases such as Crohn’s disease. Despite of thegut of their host. Several specific fungi including Saccharomyces

molecular and cellular mechanisms of the induction of

the human gut. Although commensal bacteria are known toimportance for intestinal and systemic homeostasis, theepithelial Fut2 and subsequent α1, 2-fucosylation remain

unknown. We found that group 3 innate lymphoid cells（ILC 3）are critical inducers of intestinal epithelial Fut 2

expression and fucosylation that is mediated by the productionof interleukin 22 and lymphotoxin from ILC3 in a commensal

bacteria-dependent and -independent manner, respectively.

In addition, IL- 10 -producing CD 4＋ T cells negatively

regulate intestinal epithelial α1, 2-fucosylation. These data
unveil a novel function of innate and acquired immune cells increating the appropriate symbiotic environment throughregulating the epithelial α1, 2-fucosylation.

2. Commensal bacteria and host immune system regulate

fungi colonization in the gut

Haku Akira 1, Bei bei Bi 1, Kenz o Matsuo 1, Chiaki

8

千葉大学

cerevisiae and Candida albicans have been reported to reside inmodulate gut homeostasis and dysbiosis triggers various kindsof host diseases including infection and inflammatory bowel
diseases, it is unclear how these commensal fungi colonize

and aﬀect host physiology. In addition, C. albicans are also
known to exert pathogenic eﬀects in the immunocompromised

host and expand to the systemic compartments, which iscalled invasive candidiasis, one of the serious infectious

diseases in the world. Importantly, colonization of C. albicans
in the gut trigger invasive candidiasis. Therefore, it isimportant to identify how C. albicans colonize in the gut. In

this study, we aim to uncover the mechanism by which
commensal fungi colonize in the gut and affect thedevelopment of host diseases. We examine the role ofcommensal bacteria and gut immune system in the regulationof fungi colonization and develop novel therapeutic
approaches for the treatment of host diseases.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

知花ＰＩ（カンジダ・グラブラータフェノーム）プロジェクト
Candida glabrata Phenome Project
研究概要（Summary）

病原性酵母カンジダ・グラブラータの全遺伝子改変株を利用し , 抗真菌薬の開発ならびに病原性に関する遺伝子の特定と機能解析を進めている .
Using the systematically constructed full genome mutant library in pathogenic yeast Candida glabrata, weare performing development of anti-fungal drugs, gene identification and functional analyses involved inpathogenicity.

准
技

教
術

授
職

員

特 別 研 究 員
グランドフェロー
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

知花 博治
高橋
梓
佐藤美智代
山口 正視
笹本
要
野村祐理子
大岩 真理
中野 恵子
津田 一恵

Associate Professor

Research Technician

JSPS Research Fellow
Grand Fellow

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. A Method for Obtaining Serial Ultrathin Sections ofMicroorganisms in Transmission Electron Microscopy

Hiroji Chibana
Azusa Takahashi
Michiyo Sato
Masashi Yamaguchi
Kaname Sasamoto
Yuriko Nomura
Mari Ohiwa
Keiko Nakano
Kazue Tsudaof hair strands when retrieving a group of serial sections onto
the slit grids; 3）to use a ‘Section-holding loop’ and avoid

mixing up the order of the section groups; 4）to use a ‘Water-

surface-raising loop’ and make sure the sections are positioned

Yamaguchi M, Chibana H
Medical Mycology Research Center, Chiba University,
Chiba, Chiba, Japan.

Observing cells and cell components in three dimensions aton the apex of the water and that they touch the grid first, inorder to place them in the desired position on the grids; 5）touse the support film on an aluminum rack and make it easierto recover the sections on the grids and to avoid wrinkling of
the support film; and 6）to use a staining tube and avoid

high magnification in transmission electron microscopy

accidentally breaking the support films with tweezers. This

Although preparing serial ultrathin sections is considered todifficulty. The method makes it possible to analyze cellrequires preparing serial ultrathin sections of the specimen.
be very diﬃcult, it is rather easy if the proper method is used.

In this paper, we show a step-by-step procedure for safely
obtaining serial ultrathin sections of microorganisms. The key

points of this method are: 1）to use the large part of thespecimen and adjust the specimen surface and knife edge sothat they are parallel to each other; 2）to cut serial sections ingroups and avoid diﬃculty in separating sections using a pair

千葉大学

new method enables obtaining serial ultrathin sections without
structures of microorganisms at high resolution in 3D, whichcannot be achieved by using the automatic tape-collecting
ultramicrotome method and serial block-face or focused ion
beam scanning electron microscopy.
Publications

1.

Cavalheiro M, Costa C, Silva-Dias A, Miranda I,

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

9

Wang C, Pais P, Pinto S, Mil-Homens D, SatoOkamoto M, Takahashi-Nakaguchi A, Silva R, Mira
N, Fialho A, Chibana H, Rodrigues A, Butler G,

7.

Teixeira M: A Transcriptomics Approach To Unveiling2018.

Hirao T, Yamaguchi M, Kikuya M, Chibana H, Ito K,

resistance and adaptation to the human host in Candida
8.

Yaguchi T, Yamaguchi M, Kamei K, Gonoi T.

Aspergillus fumigatus adhesion factors in dormant
conidia revealed through comparative phenotypic andtranscriptomic analyses. Cell Microbiol. 20（3）: e12802,
4.

2018.

Stepanova A, Vasilyeva N, Yamaguchi M, Chibana H,

Bosak, Filippova L: Ultrastructural patterns ofinteractions between murine lung macrophages and yeast
cells of Cryptococcus neoformans strains with diﬀerent
5.

virulence. Med Mycol J, 59（1）E1-E6, 2018.

9.

（7）, 2018.

Tanaka Y, Sasaki M, Ito F, Aoyama T, Sato-Okamoto

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Cooperation between ER stress and calcineurin signaling

contributes to the maintenance of cell wall integrity in
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Mycobacterium smegmatis, Expresses Morphological
Phenotypes Much More Similar to Escherichia coli Than
Mycobacterium tuberculosis in Quantitative Structome

Analysis and CryoTEM Examination. Front Microbiol,

Cooperation between ER stress and calcineurin signaling

11. Takahashi-Nakaguchi A, Hagiwara D, Takahashi H,

M, Takahashi-Nakaguchi A, Chibana H, Shibata N:

Candida glabrata. Fungal Biol, 122（1）: 19-33, 2018

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Tanaka Y, Sasaki M, Ito F, Aoyama T, Sato-Okamoto

contributes to the maintenance of cell wall integrity in
6.

A, Takahashi H, Imuta N, Nishi J, Shibayama K,

influenzae strains isolated from children with invasive

131, 2018.

Hagiwara D, Toyotome T, Chibana H, Watanabe A,

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Japanese. 2018.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

亀井ＰＩ

臨床感染症プロジェクト

Project of Clinical Investigation
研究概要（Summary）

我が国における「真菌症リファレンスセンター」（輸入真菌症を含む）として一般施設では実施困難
な菌種同定 , 遺伝子検査などの特殊検査を受け入れているが , その件数は年々増加し , 毎年400-500件
あまりに達している . これと並行して , 全国から寄せられる真菌症のコンサルテーションに対応している . また附属病院に設置した真菌症専門外来も , 全国から患者が来院するなど , 活発な臨床活動を行っている . 研究面では国内のさまざまな研究機関 , 医療施設と協力した臨床・基礎研究を行っており , ア
スペルギルス症に代表される難治性真菌症の感染機構や診断・治療法の開発研究を進めているが , その中でもアスペルギルス耐性株の疫学と耐性機構の研究などに特に力を入れ , 多くの画期的な論文を発表するなど高い成果を挙げている . また , 2016年から開始したブラジル・カンピーナス大学感染症内科との SATREPS（地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム）に代表されるように , 国際連携による共同研究も盛んに行っている .

We have been doing basic and clinical research primarily on fungal infections along with seeing patients in
the Specialty Clinic for Fungal Infections at the University Hospital. Working as the Reference Center for
Fungal Infections, we also take consulting services on fungal diseases from all over the country（ca.400-500
cases/year ）. With regard to research activities, we are investigating the mechanisms of infection of
intractable fungal diseases and the development of their diagnostic and therapeutic methods in collaboration
with various universities/pharmaceutical companies. The epidemiology and mechanisms of antifungal
resistance also hold a prominent part of our research, and a collaborative study with Sao Paulo State
University of Campinas, Brazil（SATREPS）, which has started in 2016, has made this topic as its main
target.

教

授

准

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

研

究

員

グランドフェロー
技

術

職

員

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
外国人研究者

亀井 克彦
渡辺
哲
村長 保憲
新居 鉄平
東江 昭夫
田口 英昭
鎗田 響子
八尋 真希
関
里亜
土屋由紀子
井上 京子
賀
丹

Professor

Associate Professor

Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Researcher

Grand Fellow

Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Foreign Visiting Researcher

千葉大学

真菌医学研究センター報告

Katsuhiko Kamei
Akira Watanabe
Yasunori Muraosa
Teppei Arai
Akio Toh-e
Hideaki Taguchi
Kyoko Yarita
Maki Yahiro
Rio Seki
Yukiko Tsuchiya
Kyoko Inoue
Dan He

第 22 巻201811

1. Detection of mutation cyp51A of Azole drug-resistant
Aspergillus fumigatus using Surveyor Nuclease

Teppei Arai, Hidetaka Majima, Akira Watanabe, Katsuhiko
Kamei

Azole-resistant Aspergillus fumigatus has been detected

Akira Watanabe, Katsuhiko Kamei
Fusarium is a large genus of filamentous fungi, widelydistributed in soils and plants. Currently, the genus Fusarium

comprises at least 300 phylogenetically distinct species and 20
species complexes. Human fusariosis has mainly two types ofinfection, invasive fusariosis（IF）and superficial fusariosis

throughout the world. Two types of Azole-resistant strain（SF）. IF occurs mostly in immunocompromised patients.

major cause of the decrease in drug aﬃnity due to an amino

infection in the patient’s room but remains unclear. SF occurs

have been reported. Azole-resistant strain is thought to be a

The infection route of IF is suspected to be the airborne

acid mutation in CYP51A of the drug target molecule. And it

mainly in immunocompetent patients after injury of eye, skinto the difference of mutated amino acids. For this reason,such as branches of the tree. In our previous study of Fusarium

is known that the azole-resistant pattern shows diﬀerent due
detection of the mutation pattern of CYP51A is considered to

be important data for early treatment of aspergillosis andelucidation of the mechanism provided azole resistance. In
addition, in order to prepare epidemiological data including

the detection frequency of azole-resistant strains, screening
work to select strains having a mutation in CYP51A frommany environmental and clinical isolates is necessary. Thereand nail, mostly if the injury was caused by plant material
species causing IF and SF in Japan between 1998 and 2015.

Fusarium solani species complex（FSSC）was predominately

isolated from both patients with IF and SF（IF, 77.8% andSF, 67.6%）. Distribution of the species belonging to FSSC

isolated from patients with IF and SF exhibited different

spectra; specifically, F. keratoplasticum（25.0%）was the mostfrequent isolate from patients with IF, whereas F. falciforme

are many mutation sites conferred azole resistance in（32.4%）was the most frequent isolate from patients with SF.

conceivable.

from both patients with IF and SF（IF, 22 .2 % and SF,

CYP51A, and the existence of an unknown mutation is also

Fusarium sp.（FSSC 5）was the second most frequent isolate

In this study, we tried a detection method of cyp 51 A

24.3%）. Notably, F. petroliphilum was isolated only from

Surveyor Nuclease recognizes and cleaves mismatches due to

we investigated the relationship between the causativesmall insertions or deletions. Detection of mutant cyp51A byresidential environments.

mutation using Surveyor Nuclease which is an endonuclease.

the presence of single nucleotide polymorphisms（SNPs）orSurveyor Nuclease could be used as a screening method. By

this method, the time required to obtain mutation

patients with IF（Muraosa et al., 2017）. In the present study,

Fusarium species of fusariosis and fungal flora in the
We isolated filamentous fungi from the indoor air and drain

ports at 6 medical institutions and 15 residences in Chiba

information on azole resistance could be shortened. In

pref ecture. Fungal isolates were pre-identified by

one primer set, it is fit for primary screening in which

real-time PCR（Muraosa et al., 2014）. Fusarium isolates

addition, because multiple mutations can be detected with
mutation is detected from a large amount of sample.

Furthermore, new mutations within the targeted region could
be detected.

2. Study on the relationship between the causative
Fusar ium species of human fusar iosis andenvironmental fungal flora

Yutaro Hino, Yasunori Muraosa, Maki Yahiro, Kyoko Yarita,

12

千葉大学

morphological observation and Fusarium- and FSSC-specificwere identified by the internal transcribed spacer（ITS）regionof ribosomal RNA and elongation factor １（EF1）-α genesequencing. Non-Fusarium isolates were identified by the ITS
sequencing.

A total of 142 and 108 filamentous fungi were isolated fromthe air and drain ports, respectively. Two Fusarium wereisolated from in the air（2/142 isolates, 1.4%）, whereas 29

Fusarium were isolated from in the drain ports（29 / 108
isolates, 27%）. In the Fusarium isolates from the drain ports,

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

F. petroliphilum（a member of the FSSC）was predominately
isolated following by F. keratoplasticum（a member of the

FSSC）. Distribution of the Fusarium species isolated from

Watanabe, Katsuhiko Kamei
A portion of the environmental and clinical isolates ofdrain ports exhibited similar spectra of that isolated from

Cryptococcus neoformans and related species stored in Medical

critical infectious sources of IF.

to examination for their response to cadmium（Cd2＋）. We

patients with IF, suggesting that the indoor drain ports are

3. Characterisation of novel-cell-wall LysM-domain

proteins LdpA and LdpB from the human pathogenic
fungus Aspergillus fumigatus

Yasunori Muraosa, Takahito Toyotomea（Obihiro Universityof Agriculture and Veterinary Medicine, Japan）, Maki Yahiro
and Katsuhiko Kamei

Mycology Research Center, Chiba University were subjectedfound serotype A strains are generally more tolerant to Cd2＋
than serotype D strains. The common highly conserved Cd2＋
detoxification mechanism is operating in Cryptococcus.

Internalized Cd2＋ is detoxified by a series of steps including

formation of a conjugate with glutathione, followed bysequestration in vacuole. Mutants in the detoxification

pathway displayed the Cd 2＋-sensitive phenotype. Cd 2＋-resistant mutants were isolated from the wild type strain of
Cryptococcus neoformans（serotype D ）. Ten mutants wereAspergillus fumigatus, a filamentous fungus that is

randomly picked up and we found that they were independent

pulmonary disorders, including chronic and acute invasive

group. We identified SMF1 as the gene responsible for theubiquitous in the environment, causes several humanmutants and belonged to one and the same complementation

infections and allergic diseases. Lysin motif（LysM）is a

Cd2＋-resistant phenotype of the mutants. Smf1, a metal

fungal cell wall polysaccharides. Several secreted LysM-

analyzed the Cd2＋-resistant trait of H99 and found that Smf1

small protein domain that binds chitin, a major component of

domain proteins without catalytic function（LysM eﬀectors）

transporter, is a counterpart of Nramp 1 of mouse. We

of H99 is partially defective. We found that Cryptococcus gattii

have been identified. They act as virulence factors in plant

R265, a Vancouver outbreak strain, possesses the partiallyby chitin; however, LysM proteins in mammalian pathogenic

a defective allele of SMF1 prompted us to examine whether

LysM-domain proteins, LdpA and LdpB, in A. fumigatus.

using the mouse infection model. We observed that mice tailpathogenic fungi by preventing the immune response induced
fungi remain largely unexplored. We describe two novel

Functional analyses of single and double knockouts revealed
no significant effects on cell wall chitin content, cell wall

integrity, fungal morphology and fungal growth. Fluorescentsignals from LdpA-green fluorescent protein（GFP ）and

LdpB-GFP were observed in the cell wall and extracellularmatrix. In a mouse model of invasive pulmonary aspergillosis,

survival did not differ between Δ ldpA/B and wild-type
infection; however, further studies are required to reveal theirfunctions in fungal-host interactions.

4. Metal t r anspor ter（ Nr amp/SMF 1 ）is a major

determinant of cadmium-resistance in Cryptococcus

neoformans species complex and Cryptococcus gattii

Akio Toh-e, Misako Ohkusu, Naruhiko Ishiwada, Akira

千葉大学

defective SMF1 gene. The tendency that virulent strains have
the SMF1 gene may have some roles in expression of virulencevein injected with the smf1 mutant of the serotype D strain

began to express the disease symptoms earlier than thoseinjected with the wild-type strain, implying that the SMF1

gene down-regulates the virulence of Cryptococcus at an earlystage of infection.
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真菌医学研究センター報告

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14

千葉大学

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真菌医学研究センター報告

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真菌医学研究センター報告

第 22 巻201815

山本（感染宿主応答ネットワーク）プロジェクト
Project for Host Response Network of Bacterial Infection
研究概要（Summary）

本プロジェクトでは , 細菌感染と発症のメカニズムを分子レベルで解明し , 研究成果を感染症の予防と治療へ役立てることを目指している . 感染現象は , ２つの異なる生物（病原体と宿主）の間に形成される新たな生命現象である . 細菌感染のメカニズムを分子レベルで解き明かすことにより , 細菌と生体の間に展開される複雑系の生命現象を解き明かすことを合わせて目指している .
「主要な研究テーマ」（Ⅰ）サルモネラ属細菌をモデルとした , 食細胞内寄生性を有する病原細菌の全身感染症発症機序並びに持続感染機構の解明（Ⅱ）AAA＋プロテアーゼ ClpXP の研究成果に基づいた慢性感染症治療薬となる anti-persister の探索研
究Research Focus（Ⅰ）Dissecting the molecular mechanisms of systemic infection and persistent infection by facultative
intracellular bacteria through the study of Salmonella -host interplay: We focus on the Salmonella

effectors, which we have identified through a meta-analytic approach to the accurate prediction ofeffectors, to elucidate the dynamic interplay with their host targets and bacterial strategies forwithstanding the host innate- and acquired-immune systems.
（Ⅱ）Identification and development of anti-persister compounds as a new class of antibiotics to treat chronic
infection: Our previous studies on the AAA＋ protease, ClpXP allowed us to hypothesize that thedysregulation of proteolysis by activation of ClpP core in the absence of the regulatory ClpX ATPasemay lead to corruption of bacterial physiology and eventually death of dormant cells. The compounds
leading such uncontrolled proteolysis could be potential as a new class of antibiotics to treat chronic
infection.
特

任

教

山本 友子
野村祐理子

授

技 術 補 佐 員

Professor

Research Promotion Technician

1. Diminished nuclear RNA decay upon Salmonella

Tomoko Yamamoto
Yuriko Nomura

School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University

infection upregulates antibacterial noncoding RNAs

2

Laboratory of Molecular and Cellular Biochemistry, Meiji

Imamura K1, Takaya A1, Ishida YI2, Fukuoka Y3, Taya T3,

3

Agilent Technologies Japan, Ltd., Tokyo, Japan.

Onoguchi-Mizutani R , Akizuki G , Tanu T , Tao K ,5Isotope Science Center, The University of Tokyo, Tokyo,

TH8, Akimitsu N5

6Department of Medical Genome Sciences, Graduate School

Nakaki R4, Kakeda M5, Imamachi N5, Sato A5, Yamada T2, 5,
5

5

5

5

Miyao S , Suzuki Y , Nagahama M , Yamamoto T , Jensen
2

1

6

2

7

Laboratory of Microbiology and Immunology, Graduate

16

4

千葉大学

7

Pharmaceutical University, Tokyo, Japan

Rhelixa, Inc., Tokyo, JapanJapan

of Frontier Sciences, The University of Tokyo

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

8

Medical Mycology Research Center, Chiba University

incompletely understood. Here, we investigated chaperone-

University, Aarhus C, Denmarkin the T3SS encoded by Salmonella pathogenicity island 2

Department of Molecular Biology and Genetics, Aarhus

Cytoplasmic mRNA degradation controls gene expression

to help eliminate pathogens during infection. However, it hasremained unclear whether such regulation also extends tonuclear RNA decay. Here, we show that 145 unstable nuclear

RNAs, including enhancer RNAs（eRNAs ）and longnoncoding RNAs（lncRNAs ）such as NEAT 1 v 2 , arestabilized upon Salmonella infection in HeLa cells. In

uninfected cells, the RNA exosome, aided by the Nuclear
EXosome Targeting（NEXT）complex, degrades these labiletranscripts. Upon infection, the levels of the exosome/NEXT
components, RRP 6 and MTR 4 , dramatically decrease,resulting in transcript stabilization. Depletion of lncRNAs,

NEAT1v2, or eRNA07573 in HeLa cells triggers increased

susceptibility to Salmonella infection concomitant with themediated secretion switching from early to middle substrates（SPI 2）, essential for systemic infection. Our findings

revealed that the protein encoded by ssaH regulates thesecretion of an inner rod and early substrate, SsaI. Structuralmodeling revealed that SsaH is structurally similar to class Ⅲ

chaperones, known to associate with proteins in various
pathogenic bacteria. The SPI2 protein SsaE was identified asa class V chaperone homolog and partner of SsaH. A
pulldown analysis disclosed that SsaH and SsaE form aheterodimer, which interacted with another early substrate,

the needle protein SsaG. Moreover, SsaE also helped
stabilize SsaH and a middle substrate, SseB. We also foundthat SsaE regulates cellular SsaH levels to translocate the earlysubstrates SsaG and SsaI and then promotes the translocationof SseB by stabilizing it. In summary, our results indicate thatthe class Ⅲ chaperone SsaH facilitates SsaI secretion, and aderegulated expression of a distinct class of immunity-related

heterodimer of SsaH and the type V chaperone SsaE thenRNAs contributes to antibacterial defense. Our resultschaperone system that regulates both early and middle

genes, indicating that the accumulation of unstable nuclear

highlight a fundamental role for regulated degradation of
nuclear RNA in the response to pathogenic infection.

2. Chaperone-mediated secretion switching from early toswitches secretion to SsaG. This is the first report of a
substrates during substrate switching for T3SS assembly.

3. Salmonella SiiE prevents an eﬃcient humoral immune

response by inter fer ing with IgG ＋ plasma cell

middle substrates in the type Ⅲ secretion system
encoded by Salmonella pathogenicity island 2

Tomoko Yamamoto1, Yuriko Nomura1, Akiko Takaya2

persistence in the bone marrow

Akiko Takaya1, Christian Männe2, Tomoko Yamamoto3, Koji
Tokoyoda2

1

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,

1

Laboratory of Microbiology and Immunology, Graduate

2

Laboratory of Microbiology and Immunology, Graduate

2

Rheumatism Research Center Berlin, Germany

Medical Mycology Research Center, Chiba University
School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University

The bacterial type Ⅲ secretion system（T3SS）delivers

virulence proteins, called effectors, into eukaryotic cells.

3School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,
Medical Mycology Research Center, Chiba University

Serum IgG, which is mainly generated from IgG-secreting

T3SS comprises a transmembrane secretion apparatus and aplasma cells in the bone marrow（BM）, protects our body

substrates to this secretion apparatus. However, the regulation

SiiE of Salmonella is both required and suﬃcient to prevent ancomplex network of specialized chaperones that target proteinof secretion switching from early（needle and inner rod）tomiddle（tip/filament and translocators ）substrates is

千葉大学

against various pathogens. We show here that the protein

efficient humoral immune responseagainst the pathogen by

selectively reducing the number of IgG-secreting plasma cells

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201817

in the BM. Attenuated SiiE-deficient Salmonella induces highallowed us to hypothesize that the dysregulation of proteolysis

IgG, and qualifies as a novel efficient vaccine against

ClpX ATPase may lead to corruption of bacterial physiology

and lasting titers of specific and protective Salmonella-specificSalmonella. A SiiE-derived peptide with homology to laminin

β1 is suﬃcient to ablate IgG secreting plasma cells from theBM, identifying laminin β1 as a novel component of niches

for IgG-secreting plasma cells in the BM, and furthermore,qualifies it as a unique therapeutic option to selectively ablate

IgG-secreting plasma cells in autoimmune diseases andmultiple myeloma.

4. Identification and development of anti-persistercompounds as a new class of antibiotics

Tomoko Yamamoto , Akiko Takaya , Yuriko Nomura ,1

2

1

Walid Houry3

1

2

3

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,by activation of ClpP core in the absence of the regulatory
and eventually death of dormant cells. The compounds

leading such uncontrolled proteolysis could be potential as a
new class of antibiotics to treat chronic infection. To identify

those compounds, we established a system for evaluating
ClpP proteolysis in vitro. Then, we have been conducting ahigh-through-put screening by exploiting various chemical
libraries. Very recently, we have found that one of suchc o m p o u n d s , AC P b 1 （AC P : A c t i v a t o r s o f S e l f Compartmentalizing Protease）originally showing no antimicrobial activity can kill a variety of bacteria under certain
condition.

Publications

1.

Miyao S, Suzuki Y, Nagahama M, Yamamoto T, Jensen

Laboratory of Microbiology and Immunology, Graduate

TH, Akimitsu N. Diminished nuclear RNA decay upon

School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University

Salmonella infection upregulates antibacterial noncoding

Department of Biochemistry, University of Toronto, Canada
Chronic infections are difficult to treat with antibiotics,

inactive in dormant persisters, leading to tolerance. We
reasoned that a compound capable of corrupting a target indormant, energy-deprived cells could kill persisters. Our

previous studies on the energy-dependent ClpXP-protease

18

千葉大学

Nakaki R, Kakeda M, Imamachi N, Sato A, Yamada T,

Onoguchi-Mizutani R, Akizuki G, Tanu T, Tao K,

Medical Mycology Research Center, Chiba University

which kill bacteria by corrupting their targets but these are

Imamura K, Takaya A, Ishida Y, Fukuoka Y, Taya T,

2.

RNAs. EMBO J. 37（13）e97723, 2018.

Xu J, Suita K, Okuno K, Takaya A, Yamamoto T,

Isogai E. Membrane vesicle protein PagC as a novel

biomarker for detecting pathogenic Salmonella in theviable but not culturable state. J Vet Med Sci. 80（1）:133-137, 2018.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

石和田（感染症制御）プロジェクト
Project for Infection Control and Prevention
研究概要（Summary）

インフルエンザ菌の病原性解析ならびにインフルエンザ菌感染症 , 肺炎球菌感染症 , B 群溶血性レンサ球菌感染症の疫学調査を継続的に行っている . 結合型ワクチン導入後 , 新しく問題となっているワク
チン非含有型株による病原因子の解析を行い , 新たな予防法の開発を目指す . BCG 感染症の迅速診断 ,黄色ブドウ球菌の病原性解析も行っている . また , 難治性呼吸器感染症の診断 , 治療法開発のための臨床研究を実施している . 同時に , 附属病院における小児科・感染症内科での診療活動及び学内外でのコンサルテーションを行っている .
Our research focuses on sero-epidemiology and pathogenesis of Haemophilus influenzae Streptococcus
pneumoniae and Streptococcus agalactiae. The pathogenic analysis of Staphylococcus aureus and the rapid

diagnosis of BCG infection are also our research theme. We organize several clinical researches for thedevelopment of diagnostic and therapeutic methods for respiratory infectious diseases and also care forpatients in the clinic of the University Hospital.
准

教

授

特

任

助

教

技

術

職

員

石和田稔彦
竹内 典子
大楠美佐子

Naruhiko Ishiwada
Noriko Takeuchi
Misako Ohkusu

Associate Professor
Assistant Professor

Research Technician

1. A nationwide population-based surveillance of invasive

Haemophilus influenzae diseases in children after the

introduction of the Haemophilus influenzae type b

vaccine in Japan.

67

8

Suga S1, Ishiwada N2, Sasaki Y3, Akeda H4, Nishi J5, Okada

9

Dental Sciences

Fukuoka Nursing College

Department of Pediatrics, Kochi Medical School, Kochi
University, Kochi, Japan.

Okayama University Graduate School of Health Sciences
Department of Pediatrics, Kawasaki Medical School

K , Fujieda M , Oda M , Asada K , Nakano T , Saitoh A ,10Shibayama K

11

6

7

8

1

9

10

Hosoya M , Togashi T , Matsuoka M , Kimura K ,
11

12

3

3

3

1

2

3

4

5

Department of Pediatrics, Niigata University Graduate
School of Medical and Dental Sciences

Department of Pediatrics, Fukushima Medical University
School of Medicine

Infectious Disease Center and Department of Clinical12

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

BackgroundDepartment of Bacteriology Ⅱ, National Institute ofas a voluntary vaccine in December 2008 and was included in

Research, National Hospital Organization Mie Hospital
Research Center, Chiba University

Infectious Diseases

Hokkaido Anti-Tuberculosis Association

Haemophilus influenzae type b（Hib）vaccine was introduced

the national routine immunization program in April 2013 in

Okinawa Prefectural Nanbu Medical Center & Children’s

Japan. Currently, no nationwide data are available to evaluate

Kagoshima University Graduate School of Medical andMethods

Medical Center

千葉大学

the eﬀectiveness of Hib vaccine in Japan.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201819

To evaluate the effectiveness of Hib vaccine in Japan,

nationwide active population-based surveillance of culture-3

was performed in 2008 - 2017 in 10 prefectures in Japan4

proven invasive infections caused by H. influenzae in children（covering approximately 23 % of the total Japanese

Department of Microbiology, Kagoshima University
Graduate School of Medical and Dental Sciences

Department of Bacteriology Ⅱ, National Institute of
Infectious Diseases

population）. Clinical data were recorded on a standardized

case repor t form. Capsular t ype and antimicrobial

Chiba, Japan

Haemophilus influenzae type b（Hib）conjugate vaccines

susceptibility of the H. influenzae isolates were examined. The

have led to dramatic reductions in Hib disease among youngwere calculated to compare data from 5 years before and that

now the major cause of invasive H. influenzae infections. We

incidence rate ratio（IRR）and its confidence interval（CI）
from after the introduction of the national routine Hib vaccine
immunization program.
Results

D uring the 10 -year study period, 566 invasive H.

influenzae disease cases including 336 meningitis cases werechildren worldwide. Nontypeable H. influenzae（NTHi）isinvestigated the clinical characteristics of invasive NTHi

diseases among children in Japan, to clarify the pathogenicity
of isolated NTHi strains. The mortality rate was 10.7%, withdeaths occurring mainly among children with underlying
comorbidities. Biotypes Ⅱ and Ⅲ were the most common,

identified. The average number of invasive H. influenzae

and most strains（64 .3 % ）had multiple amino acid2017 decreased by 93 %（IRR: 0 .07 , 95 %CI 0 .05 - 0 .10 ,377 sites of penicillin-binding protein 3. Two strains were

Hib strains have not been isolated from invasive H. influenzae

Biofilm indices varied widely, and IS1016 was detected inand H. influenzae type f isolates have been noted as causes ofvariation in the characteristics of invasive NTHi strains.

disease cases among children <5 years of age during 2013p < 0.001）compared with those occurring during 2008-2012.

disease cases since 2014; however, non-typeable H. influenzae

invasive H. influenzae diseases among children <5 years in the

post-Hib vaccine era.
Conclusions

After the governmental subsidization of the Hib vaccine,invasive Hib disease cases decreased dramatically in the study

population, as per our surveillance. Continuous surveillanceis necessary to monitor the eﬀectiveness of Hib vaccine andfor detecting any emerging invasive capsular types.

substitutions at the Asp-350, Ser-357, Ser-385, and/or Met-β-lactamase positive and ampicillin-clavulanate resistant.

10 .7 % of the strains tested. Moreover, there was wide

NTHi strains, showing great genetic diversity, are responsible
for most invasive H. influenzae infections in children in the

postvaccine era. Continuous monitoring of NTHi strains
responsible for invasive diseases in children is important todetect changes in the epidemiology of invasive H. influenzae
infections in the postvaccine era.

3. Capsular serotyping of Haemophilus influenzae by using

matrix-associated laser desorption ionization-time of

2. Clinical and bacteriologic analysis of nontypeable

Haemophilus influenzae strains isolated from children

with invasive diseases in Japan from 2008 to 2015.

Naito S1, Takeuchi N2, Ohkusu M2, Takahashi-Nakaguchi

A 2, Takahashi H 2, Imuta N 3, Nishi J 3, Shibayama K 4,
Matsuoka M , Sasaki Y , Ishiwada N
4

1

2

4

flight mass spectrometry.

Takeuchi N 1, Segawa S 2, Ishiwada N 3, Ohkusu M 1,

Tsuchida S4, Satoh M4, Matsushita K2, Nomura F4
1

2

2

Department of Pediatrics, Chiba University Graduate

3

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

4

School of Medicine

20

千葉大学

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center

Division of Laboratory Medicine and Clinical Genetics

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center

Division of Clinical Mass Spectrometry, Chiba University

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

Hospital

2

Department of Emergency and General Paediatrics,
Shizuoka Children’s Hospital

Haemophilus influenzae is a major pathogenic bacteria

3

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

serotypes（a-f）and non-typeable（NT）strains. Capsular

4

Division of Infectious Diseases, Chiba Children’s Hospitalserological methods and more recently by PCR methods.

6

In the present study, matrix-associated laser desorption

8

causing invasive disease, which is classified into six capsular

serotyping of H. influenzae is traditionally determined by

5

However, these methods are time-consuming and expensive.

7

ionization-time of flight mass spectrometry（MALDI-TOF

Division of Clinical Laboratory, Chiba University Hospital

Division of Clinical Laboratory, Chiba Children’s Hospital

Department of Pediatrics, Chiba Kaihin Municipal Hospital
Department of Clinical Laboratory, Chiba Kaihin Municipal
Hospital

MS ）was evaluated as an alternative method for capsular

serotyping of H. influenzae clinical strains. We created an in-

Research Center, Chiba University

Although invasive meningococcal disease is rare in Japan

house database of all six serotypes and NT H. influenzae（0.028 cases per 100,000 population ）, its incidence is 10

to the default parameters in MADI-TOF MS. We evaluatedprerequisite for invasive meningococcal disease. However, no

strains using the main spectrum creation standard method set

the performance of the in-house database using 79 clinicalstrains already identified by PCR and 58 prospectively

collected clinical strains. Measurements were performed using

times greater in many other countries. Colonization is a
study in Japan has involved specifically analyzing the carriage

rate of Neisseria meningitidis in children. During 5 months in2015 , the respiratory tract specimens of patients who

the Bruker MALDI BioTyper system. The peak list waspresented to 3 hospitals with respiratory symptoms were

pattern algorithm of the software. The best-matched spectrum

a meningococcal detection kit and the serogroup was identified

matched against the reference library using the integrated

was considered the serotyping result. All 137 test strains werecorrectly identified as H. influenzae using MALDI-TOF MS.
The sensitivity and specificity for identification for type b,

cultured. The bacteria were identified in selective media using
using polymerase chain reaction analysis. In 389 patients aged

≤15 years with respiratory symptoms, the N. meningitidis

isolation rate was 0.26%（1/389）. The serogroup of the only

type e, and type f capsular serotypes and NT H. influenzaechild who tested positive was Y. In this study, we detected a

97.4%/97.9%, and 85.5%/99.2%, respectively. Our findings

increasing globalization, the risk of invasive meningococcal

using MALDI-TOF MS were 100%/94.3%, 94.7%/97.9%,

indicate that MALDI-TOF MS is a useful alternative method

for capsular serotyping of H. influenzae strains. This method
is faster and more cost-eﬀective than traditional methods andwill therefore be useful for routine applications in clinicallaboratories.

4. Isolation rate of Neisseria meningitidis in Japanesechildren with respiratory tract infections.

low meningococcal isolation rate in pediatric patients. Due todisease is likely increasing in Japan. Accordingly, invasive
meningococcal diseases should be continuously monitored inJapan. Future large-scale studies should assess meningococcal
isolation rates and corresponding serogroups.

5. Nationwide survey of neonatal invasive fungal infectionin Japan.

Ishiwada N1, Kitajima H2, Morioka I3, Takeuchi N1, Endo

Takei H1, 2, Ishiwada N3, Takeuchi N3, Ohkusu M3, Hoshino

M4, Watanabe A1, Kamei K1

Shimojo N1

1

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

2

Department of Neonatology, Osaka Medical Center and

T , Murata S , Sato H , Abe K , Shizuno K , Hishiki H ,
4

1

5

6

7

8

1

Department of Pediatrics, Chiba University Graduate
School of Medicine

千葉大学

Research Center, Chiba University

Research Institute for Maternal and Child Health

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

21

3

4

Department of Pediatrics, Kobe University Graduate School

Hoshino T, Murata S, Sato H, Abe K, Shizuno K,

Department of Pediatrics, Chiba University Hospitalmeningitidis in Japanese children with respiratory tractof Medicine

Hishiki H, Shimojo N. Isolation rate of Neisseria
infections. Jpn J Infect Dis 71: 244-246, 2018

Invasive fungal infection（IFI）is a life-threating infectious３）Takeshita K, Ishiwada N, Takeuchi N, Takahashi Y,

prevention of IFI in neonates in Japan remain unclear. We

N. Pneumococcal IgG levels against 13 -valentdisease in high-risk neonates. Strategies for the treatment andconducted a nationwide retrospective survey to determine IFI

incidence between January 2014 and October 2015. Primary

survey questionnaires were submitted to 309 medical facilities

Naito S, Nagasawa K, Hishiki H, Hoshino T, Shimojo
pneumococcal conjugate vaccine serotypes in Japanesechildren with a medical history of hematopoietic
neoplasms and solid tumors. JJA 71: 13-21, 2018that regularly treat high-risk neonates. The questionnaire４）Sano T, Suzuki T, Nishigori A, Miyatake C, Koizumi S,

preventing fungal infection in early delivery neonates, andN, Asano T. The incidence of pediatric invasive bacterial

assessed IFI incidence during the study period, methods formethods for preventing mother-to-child fungal transmission.

The secondary questionnaire was for facilities that had IFI

cases and replied to the primary questionnaire. In total, 128

Kaizu K, Fujita A, Kamisago M, Chang B, Ishiwada
diseases in Nippon Medical School Chiba Hokusoh
Hospital before and after the introduction of conjugate
vaccines. J Nippon Med Sch 85: 34-38, 2018

m e d i c a l f ac i l i t i e s （4 1 .4 % ）c om p l e t e d t h e p r i m a r y５）Nagasawa K, Takeshita K, Taniguchi H, Suzuki H,

probable IFI cases. Estimated annual IFI incidence was

Shimojo N, Ishiwada N. Microfloral analysis of pediatricquestionnaire, 17 / 128 facilities recorded 23 proven or
0.33/1000 live births of hospitalized neonates. Patient data at

IFI onset were available for all 23 patients. Birth weight was <Naito S, Hishiki H, Hoshino T, Kimura H, Suzuki,

respiratory syncytial virus infection, with and without
the use of antibiotics. JJA 71: 81-91, 2018

1000 g in 18 patients. Causative microorganisms were

６）Takeuchi N, Segawa S, Ishiwada N, Ohkusu M,

most common pathogens, and one patient had mucormycosis.

Capsular serotyping of Haemophilus influenzae by using

identified in 22 patients. Candida species（n = 21）were the

The mortality rate was 17.4%. Regarding neonatal fungal

prophylaxis, 55/128 facilities（43.0%）reported administering

therapy. The most frequently used prophylactic drugs were

Tsuchida S, Satoh M, Matsushita K, Nomura F.

matrix-associated laser desorption ionization-time offlight mass spectrometry. J Infect Chemother. 24: 510514, 2018

fluconazole, then micafungin. Fungal prophylaxis for mothers７）Naito S, Takeuchi N, Ohkusu M, Takahashi-Nakaguchi

facilities（23.4%）. Oxiconazole vaginal tablets were mostMatsuoka M, Sasaki Y, Ishiwada N. Clinical andwho showed fungal colonization was performed in 30/128
commonly used as prophylaxis for high-risk mothers. In

Japan, the diagnosis, treatment, and prevention of neonatal
IFI varied. Continuous surveillance and treatment regimen
for neonatal IFI are required to improve outcomes in highrisk neonates.

bacteriologic analysis of nontypeable Haemophilus

influenzae strains isolated from children with invasive

diseases, Japan, 2008 - 2015 . J Clin Microbiol 56 :e00141-18, 2018.

８）Suga S, Ishiwada N, Sasaki Y, Akeda H, Nishi J,

Okada K, Fujieda M, Oda M, Asada K, Nakano T,

Publications: original articles

１）Ishiwada N, Kitajima H, Morioka I, Takeuchi N, Endo

M, Watanabe A, Kamei K. Nationwide survey of

neonatal invasive fungal infection in Japan. Med Mycol
56: 679-686, 2018

２）Takei H, Ishiwada N, Takeuchi N, Ohkusu M,

22

A, Takahashi H, Imuta N, Nishi J, Shibayama K,

千葉大学

Saitoh A, Hosoya M, Togashi T, Matsuoka M, Kimura
K, Shibayama K. Nationwide population-based

surveillance of invasive Haemophilus influenzae diseases inchildren after the introduction of the Haemophilus

influenzae type b vaccine in Japan. Vaccine 36: 56785684, 2018

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018９）Toh-E A, Ohkusu M, Shimizu K, Ishiwada N,

Watanabe A, Kamei K. Novel biosynthetic pathway for

streptococcus serotype VIII in a type 2 diabetes mellitus

patient J Infect Chemother 24: 401-403, 2018

sulfur amino acids in Cryptococcus neoformans. Curr

11）Abe N, Fujieda Y, Nagaoka K, Ohkusu M, Yasuda S,10）Omura Y, Kusama Y, Takeuchi N, Ishiwada N.

Bronchiolitis and Cellulitis. Am J Respir Crit Care

Genet. 64: 681-96, 2018

Mediastinal subcutaneous and multiple muscularabscesses after esophageal perforation caused by group B

千葉大学

Kamei K, Atsumi. Disseminated Cryptococcosis with
Med. 2018 [Epub ahead of print]

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201823

伊庭ＰＩ（RNA 制御）プロジェクト
Project for RNA Regulation
研究概要 （Summary）

細胞内でみられる遺伝子発現の制御ネットワークは , その細胞のもつ発生 , 分化 , 増殖に関する特異性はもちろん , 真菌・細菌・ウイルス等の寄生体に対する宿主の応答性や competency をも規定している . 平成28年４月に開始された本プロジェクトではこのような制御ネットワークを形成する主要な因子として１）各遺伝子のプロモーター上で作用する転写制御因子 , ２）クロマチンの活性化状態を規定するクロマチン構造変換因子 , ３）多数の遺伝子群の発現を post-transcriptional レベルで一括して負に制御する miRNA の３者に注目する . そして疾患の原因となる遺伝子制御ネットワークの乱れの原因を解明し , それを制御する方法論を開発する橋渡し研究を展開して感染症 ､ がんを初めとしたヒト疾患の制圧をめざす .

Gene regulatory networks in a cell determine not only cellular specificity of development, diﬀerentiation,and proliferation but also cellular response or competency to virus, bacterial, and mycete. Whereas gene
expression patterns are regulated by many factors, this project, which has started in April 2016, concentrateon the following three factors; 1）transcriptional factors, which operate on the promoter region of their target
genes, 2）chromatin remodeling factors that modulate epigenetical states of these genes, 3）miRNA, which
suppresses expression of many genes at the post-transcriptional level to develop translational research of new
therapeutic strategies for human infectious diseases and cancer.

特

任

教

授

特

任

助

教

特 任 研 究 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

伊庭
原口
小林
桜井
相川

英夫
健
和善
典子
尚美

Professor

Research Assistant Professor
Research Fellow

Research promotion Technician
Research promotion Technician

1. Establishment of RNA medicine for cancer therapy

using Super-S-TuD

Takeshi Haraguchi, Kazuyoshi Kobayashi and Hideo Iba
Division of RNA Therapy, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

We previously developed the RNA decoy suppressing

specific miRNA activity very eﬃciently, which was designated

TuD（Tough Decoy）and expressed from viral vectors. S-TuD（Synthetic TuD ）, which mimics the unique secondary

structure of TuD was also developed as RNA medicine. It has

24

千葉大学

Hideo Iba
Takeshi Haraguchi
Kazuyoshi Kobayashi
Noriko Sakurai
Naomi Aikawa

been further improved as Super-S-TuD, which showed 3-7

folds enhancement in its specific activity of the target miRNA

inhibition. Importantly, we previously established basic
formulation for Lipid nanoparticle（LNP）preparation using

COATSOME-X. Such LNPs was used to encapsulate SuperS-TuD 141/200c（suppresses the entire miR-200 family）andwas systemically administrated into nude mice bearing tumors

formed by a human mammary tumor cell line and was shownto suppress the formed tumors eﬃciently.

For innovative therapy for epithelial tumors, we now target

miR-21, which is expressed in almost all the epithelial tumors

at very high levels and has been shown to be importantcausative of cancer through inhibition of many important

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

tumor suppressor genes such as PDCD4, PTEN, SPRY1/2,

In this project, we address the isolation of low-molecular

FOXO1 and RECK, simultaneously. We will specificallyweight inhibitors of NF- κ B. In collaboration with

For this purpose, we encapsulate Super-S-TuD21 using a newscreening based on the binding using a compound library fromtarget such refractory cancers as pancreatic and lung cancer.

synthetic lipid, COATSOME-Y, developed by DDS
Research Institute of NOF very recently and introduce these

LNPs intravenously into tumor bearing nude mice. We havebeen screening optimum formulations of LNP by evaluating

its disposition after introduction. We found a few LNP

formulations, which can deliver Super-S-TuD21 specificallyinto tumor tissues with a limited delivery to liver, kidney andspleen. We are now further optimizing the formulation by

SEEDSUPPLY INC., which can perform high-throughput

Takeda Pharmaceutical Company as an index, we havealready screened binding compounds to DPF1 and DPF3a

proteins, which were expressed and purified from E. coli. By
monitoring the inhibitory eﬀects of the obtained a hundred ofbinding compounds on the induction of NF-κB target genes,

such as IL 6 and IL- 8 after stimulating A 549 cells with

TNF- α , we have now isolated several compounds thateﬀectively inhibit NF-κB activity at the dosage of 1μM. Mostchanging particle diameter of LNP, the species and contentsof them were shown to simultaneously inhibit anchorage

COATSOME-Y- based LNPs have shown to have muchcontinue the project by structural expansion of theseof accessory lipids and PEGlylated lipids. Importantly, somesuperior properties such as lower toxicity and high targeting
activity to tumor tissues when compared with the previous
COATSOME-X.

2. Isolation of small-molecular weight NF-κB inhibitors

Kazuyoshi Kobayashi, Takeshi Haraguchi, and Hideo Iba1, 2, 4
Division of RNA Therapy, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba 260-8673, JapanThe transcription factor NF- κ B is involved in many

inflammatory responses and replication of microorganisms. It
is also constitutively activated in many epithelial tumors canbe a promising target for cancer therapy. But most of thecurrently available NF- κ B inhibitors do indirectly target

independent growth of several tumor cell lines. We will

compounds to isolate compounds with higher specific activity
for useful medicine for inflammation and cancer.

3. Development of armed Oncolytic Virus by introducing

shRNA expression unit

Takeshi Haraguchi1, Kazuyoshi Kobayashi1, Tomoki Todo2
and Hideo Iba1

1

2

Division of RNA Therapy, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

Division of Innovative Cancer Therapy, and Department ofSurgical Neuro-Oncology, The Institute of Medical Science,
The University of Tokyo, Tokyo 108-8639, Japan

Glioblastoma is a highly malignant tumor and new

NF-κB, such as IKKs. Since these molecules often locate attherapeutic approach has been needed. We have previously

effects are inevitably broad and not specific. We previously

factor, the SWI/SNF complex associates with a novel

DPF3a/b）function as adaptor proteins linking NF-κB withlarger complex,（2）DPF1 or DPF3a（d4-family members）

the cross-road of signal transduction pathway, their biologicalreported that the d 4 -family proteins（DPF 1 , DPF 2 ,the SWI/SNF complex. We have demonstrated that theirN-terminal regions retain full adaptor function and theshown that（1）in glioblastoma cells, a chromatin remodelingcorepressor complex including TLX and LSD 1 forming afunctions as an adaptor protein linking these two complexes,

a n d （3 ）k n o c k d ow n o f e i t h e r D P F 1 o r D P F 3 a i n

C-terminal regions include essential domains for NF-κ B

glioblastoma primary cells originated from patients（TGS-O1）

promising targets that directly suppress trans-activation

marker of cancer stemness. In this project, we haveactivation, and further that the d 4 -family proteins areactivity of NF-κB.

千葉大学

strongly suppresses the neurosphere formation in vitro, a good

introduced the shDPF1 or shDPF3a expression unit into the

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201825

third-generation oncolytic herpes virus, G47Δ to enhance its

its oncolytic activity of the parental G47Δ. We expect theseThis year, we designed several sequences of shDPF1 andcancer stem cells that are escaped from lytic infection by theefficiency without affecting expression levels of other d4-

To obtain in vitro proof that siDPF1 or DPF3a can suppress

anti-oncogenic activity.

shDPF 3 a, respectively and evaluated each knockdown

family members using lentivrus vectors carr ying theshDPF1 and DPF3a eﬃciently function to prevent survival of

immunological response induced by oncolytic virus infection.

tumors formed by TGS 01 inoculation into nude micecorresponding shRNA expression unit. We finally selectedindependent of G47Δ infection. We have now successfully

and both were integrated into G47Δ in Todo lab. We havenucleotides in the sequence of the corresponding shRNAs toshDPF1-3’UTR#4 and shDPF3a-3’UTR#4, respectively,

further analyzed basic virological properties of these armed
G47Δ, T-h7SK-shDPF1 and T-h7SK-shDPF3a and foundno difference in cell-killing activity and induction kinetics

viral protein synthesis after infection into TGSO1, between

parental G47Δ and these two viruses. These results indicatethat insertion of these shRNA expression units never aﬀects

26

千葉大学

designed siDPF1 and siDPF3a by modification of several
give resistance to RNase in vivo without affecting their

original knockdown eﬃciency. These synthesized siRNA will

be used to introduce into the tumor bearing nude mice
subcutaneously after encapsulating into lipid nanoparticles

using a newly developed non-cationic lipid, COATSOME-X.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

高橋ＰＩ（微生物創生）プロジェクト
Project for Systems Biology of Microorganisms
研究概要（Summary）

我々はコンピュータ解析によって , 次世代シーケンサーを含む様々な生物実験で得られる大量デー
タからの新規生物学的知見の創出 , 並びに , 数理モデルアプローチによる生命現象の解明に取り組んでいます . 大量データによる生命の「構成要素の理解」, 数理モデルによる「挙動の理解」という二つのコンセプトの下 , 病原真菌を含む微生物を対象に細胞機能の分子レベルでの理解を目指しています .

Our research areas are Bioinformatics and Systems Biology. Our Bioinformatics approach aims to deeply
and clearly understand massive biological experiment data, e. g., sequence data by next generation
sequencers. Systems Biology aims to understand how biological systems work and help the experimental
design mainly by mathematical modelling approach.

准

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

高橋 弘喜
楠屋 陽子
石原 潤一
守
涼子
八原あずさ
辺
彩

Associate Professor

Research Assistant Professor
Research Assistant Professor

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Investigation of the relationships between heterogeneity

against environmental stresses and pathogenicity inpathogenic fungi Aspergillus fumigatus

Yoko Kusuya, Cai Bian, Jun-ichi Ishihara, Hiroki Takahashi

Hiroki Takahashi
Yoko Kusuya
Jun-ichi Ishihara
Ryoko Mori
Azusa Yahara
Cai Bian（〜 2017/9）

2. D e v e l o p m e n t f o r g e n o m e a n a l y s i s t o o l s a n dbioinformatic analysis for collaborative projects.

Mohammad Vahed, Jun-ichi Ishihara, Hiroki Takahashi
Since NGS development, genome and omics data are

Stress responses and pathogenicity have been extensively

rapidly accumulating. We collaborate with several researchersof life-threatening aspergillosis. The heterogeneity in thisoverview of the data by using multivariate and statisticalstudied in Aspergillus fumigatus, the main causative pathogen
pathogen has recently attracted increasing attention. In thisproject, we used more than 100 clinically isolated strains toinvestigate several properties relevant to the pathogenicity of
A. fumigatus, namely, hypoxia growth, adaptation to
nutrients such as copper, mimicking human lung. We

compared these strains in whole genome level and tried touncover genomic variations. In addition, we conductedcomparative transcriptome analysis to uncover the genes
underpin the heterogeneity.

to analyze their own genome and omics data, and give theanalysis. In addition, we developed novel tools to help us
more deeply understand and more eﬃciently extract biologicalmeanings from the data. DIpartite is able to detect de novotranscription factor binding motifs.
Publications

１）Hara S, Hara Y, Arai AM, Kusuya Y, Takahashi H,

Yaguchi T, Ishibashi M. Isolation of nabscessin C from
Nocardia abscessus IFM 10029 T and a study on

biosynthetic pathway for nabscessins. Chem Pharm Bull

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

27

（Tokyo）. 66（10）: 976-982. 2018.

２）Hagiwara D, Takahashi H, Takagi H, Watanabe A,

Kamei K. Heterogeneity in Pathogenicity-related

Properties and Stress Tolerance in Aspergillus fumigatus
Clinical Isolates. Med Mycol J. 59（4）: E63-E70. 2018.

３）Hagiwara D, Arai T, Takahashi H, Kusuya Y,

Watanabe A, Kamei K. Clinical isolates of non-cyp51A

azole-resistant Aspergillus fumigatus harboring amutation in hmg1 gene encoding HMG-CoA reductase.

Emerg Infect Dis. 24（10）: 1889-1897. 2018.

４）Toyotome T, Hagiwara D, Takahashi H, Watanabe A,

Kamei K. Emerging Antifungal Drug Resistance inAspergillus fumigatus and Among Other Species ofAspergillus. Current Fungal Infection Reports. 12（3）:105-111. 2018.

28

千葉大学

５）Naito S, Takeuchi N, Ohkusu M, Takahashi-Nakaguchi

A, Takahashi H, Imuta N, Nishi J, Shibayama K,

Matsuoka M, Sasaki Y, Ishiwada N. Clinical and
Bacteriologic Analysis of Nontypeable Haemophilus
influenzae Strains Isolated from Children with Invasive
Diseases in Japan from 2008 to 2015. J Clin Microbiol.
56（7）, pii: e00141-18. 2018.

６）Takahashi-Nakaguchi A, Sakai K, Takahashi H,

Hagiwara D, Toyotome T, Chibana H, Watanabe A,

Yaguchi T, Yamaguchi M, Kamei K, Gonoi T.

Aspergillus fumigatus adhesion factors in dormant
conidia revealed through comparative phenotypic andtranscriptomic analyses. Cellular Microbiology. 20（3）.
2018.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

バイオリソース管理室
Management of Unit of Microbiological Resources
研究概要（Summary）

病原真菌・放線菌の「保存・管理・提供」体制を整備し , 最新情報が付加された信頼できる菌株の提供を通じて , 真菌症ならびにその原因菌の研究・教育の基盤を支援している .

We are developing a system for preservation, management and distribution of pathogenic fungi andactinomycetes. We support the base of research and education of mycoses and their pathogens in order tosupply reliable strains that are added new information.

准

教

授

助

教

助

教

技

術

職

員

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

矢口 貴志
田中 玲子
伴 さやか
伊藤 純子
長村 由美
山中 美花

Associate Professor
Assistant Professor
Assistant Professor

Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Antifungal susceptibility of the Aspergillus viridinutans

complex: comparison of two in vitro methods.

Lyskova P , Hubka V
1, 2, Svobodova L , Barrs V ,1, 3, 41

5

Dhand N5, Yaguchi T6, Matsuzawa T7, Horie Y6, Kolarik

7
8

Takashi Yaguchi
Reiko Tanaka
Sayaka Ban
Junko Ito
Yumi Osamura
Mika Yamanaka

University of Nagasaki, Nagasaki, Japan

Laboratory of Clinical Mycology, Institute of Public
Health, Ostrava, Czech Republic

Cryptic species of Aspergillus fumigatus, including the

M , Dobias R , Hamal P

Aspergillus viridinutans species complex, are increasingly

Department of Microbiology, Faculty of Medicine andidentification is clinically relevant, as these species frequently

3, 4

1

2

1, 8

1

Dentistry, Palacky University, Olomouc, Czech Republic

Laborator y of Medical Mycolog y, Depar tment of
Parasitology, Mycology and Mycobacteriology Prague,

Public Health Institute in Usti and Labem, Prague, Czech
3

4

5

have intrinsic resistance to common antifungals. We evaluatedthe susceptibilities of 90 environmental and clinical isolates

from the A. viridinutans species complex, identified by DNA

sequencing of the calmodulin gene, to seven antifungals

Republic（voriconazole, posaconazole, itraconazole, amphotericin B,

University, Prague, Czech Republic

re f e re n c e E u ro p e a n C om m i t t e e o n An t i m i c ro b i a l

Department of Botany, Faculty of Science, Charles
Laboratory of Fungal Genetics and Metabolism, Institute ofMicrobiology of the CAS, Prague, Czech Republic

anidulafungin, micafungin, and caspofungin ）using theSusceptibility Testing（EUCAST）method. The majority of

species demonstrated elevated MICs of voriconazole

Sydney School of Veterinary Science and Marie Bashir（ge om e t r i c m e a n [ G M ] M I C , 4 .4 6 m g / l i t e r ）a n dof Sydney, Camperdown, NSW, Australia

susceptibility to amphotericin B（GM MIC, 2.5 mg/liter）.

Chiba, Japaneﬀective concentrations of echinocandins were low. The results

Institute of Infectious Diseases and Biosecurity, University

6

reported to be causes of invasive aspergillosis. Their

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

千葉大学

itraconazole（GM MIC, 9.85 mg/liter）and had variable

Overall, the MICs of posaconazole and the minimum

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201829

obtained by the EUCAST method were compared with theresults obtained with Sensititre Yeast One（YO ）panels.

Aspergillus is a speciose genus with almost 400 speciesclassified into six subgenera and approximately 25 sections

Overall, there was 67% agreement（95% confidence interval（Samson et al. 2014, Jurjević et al. 2015, Hubka et al. 2016,

EUCAST method and those obtained with YO panels whenet al. 2017, Tanney et al. 2017）. The species are widely[CI], 62 to 72 % ）between the results obtained by the2017, Chen et al. 2016, 2017, Kocsubé et al. 2016, Sklenář

the results were read at 48 h and 82% agreement（95% CI, 78

distributed in nature and have a significant economic impact

significant difference in agreement between antifungals;

allergies and respiratory problems associated with presence ofto 86%）when the results were read at 72 h. There was aagreement was high for amphotericin B, voriconazole, andposaconazole（70 to 86% at 48 h and 88 to 93% at 72 h）but

was very low for itraconazole（37% at 48 h and 57% at 72 h）.
The agreement was also variable between species, with thein human and animalhealth（causative agents of aspergillosis;
fungi in the indoor environment）, the food industry（sourceof enzymes and organic acids for fermentation, food and feeds p o i l a g e , p r o d u c t i o n o f h a z a r d o u s m y c o t o x i n s ）,biotechnology and pharmacology（production of bioactive

maximum agreement being observed for A. felis isolates（85substances, heterologous proteins）（Pitt & Hocking 2009,

voriconazole and itraconazole were cross-correlated, but there

2015 , Gautier et al. 2016）. Aspergillus sect. Fumigati

and 93% at 48 and 72 h, respectively）. Elevated MICs of

was no correlation between the other azoles tested.

2. Unravelling species boundaries in the Aspergillus

Meyer et al. 2011 , Frisvad & Larsen 2015 , Sugui et al.

includes approximately 60 species occurring predominantly insoil（Hubka et al. 2017）. Many are of considerable medical
importance as they cause human and animal infections

viridinutans complex（section Fumigati）: opportunistic（Balajee et al. 2005, 2009, Katz et al. 2005, Yaguchi et al.

hybridization.

fumigatus is usually reported as both the most common

human and animal pathogens capable of interspecific

Hubka V1, 2, 3, Barrs V , Dudová Z , Sklenář F , Kubátová
4

1, 3

1, 2

A , Matsuzawa T , Yaguchi T , Horie Y , Nováková A ,
1

5

6

6

2

2007, Hubka et al. 2012, Talbot & Barrs 2018）. Aspergillus

member of the section in soil worldwide and the mostcommon cause of aspergillosis（Klich 2002, Domsch et al.

2007, Mayr & Lass-Flörl 2011）. A series of recent studies

Frisvad JC7, Talbot JJ4, Kolařík M2

highlighted the high prevalence（11-19%）of so-called cryptic

1

Department of Botany, Faculty of Science, Charles

Alastruey-Izquierdo et al. 2013, Negri et al. 2014, Sabino et2

Laboratory of Fungal Genetics and Metabolism, Institute ofdemonstrate drug resistance to commonly used antifungals,

3First Faculty of Medicine, Charles University, Prague,

Reliable identification of clinical isolates to the species level

4

Sydney School of Veterinary Science, Faculty of Science,

University, Prague, Czech Republic

Microbiology of the CAS, Prague, Czech RepublicCzech Republicand Marie Bashir Institute of Infectious Diseases &Biosecurity, University of Sydney, Camperdown, NSW,

567Aspergillus species in clinical samples（Balajee et al. 2009,

al. 2014）. Their identification is clinically relevant since many

thus their recognition influences therapeutic management.

and susceptibility testing by reference methods is thus
warranted（Lyskova et al. 2018）. Many of these less common
pathogens belong to sect. Fumigati and the highest numbersof infections are attributed to A. lentulus, A. thermomutatus

Australia（syn. Neosartorya pseudof ischeri ）and species from A.

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

2006, Sugui et al. 2010, 2014, Barrs et al. 2013, Talbot &University of Nagasaki, Nagasaki, Japan
Chiba, Japan

Department of Biotechnology and Biomedicine, Technicalviridinutans species complex（AVSC）（Balajee et al. 2005,

Barrs 2018）.

University of Denmark, Kongens Lyngby, Denmark

30

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

3. Moniliella sojae sp. nov., a species of black yeasts

isolated from Vietnamese soy paste（ tuong ）, andcasei sp. nov., CBS 157.58T=IFM 60348T and MB 822872;

nov., and Moniliella macrospora emend. comb. nov.

11527T）and MB 822874.

Thanh VN1, HienDD1, Yaguchi T2, Sampaio JP3, Lachance
M-A

4

Center for Industrial Microbiology, Food Industries
Research Institute, 301-Nguyen Trai, Thanh Xuan, Hanoi,

23VietnamM. macrospora emend. comb. nov., CBS 221.32T（=MUCL

Publications

１）Furuya M, Kobayashi H, Baba M, Ito T, Tanaka R,

Nakatani Y. Splice-site mutation causing partial
retention of intron in the FLCN gene in Birt-HoggDube syndrome: a case report. BMC Med Genomics.
11: 42, 2018.

Medical Mycology Research Center, Chiba University,２）Hara Y, Arai AM, Sakai K, Ishikawa N, Gonoi T,

UCIBIO-REQUIMTE, Departamento de Ciéncias daisolated by a co-culture of Nocardia tenerifensis IFM

Chiba, Japan

Vida, Faculdade de Ciéncias e Tecnologia, Universidade4

sp. nov., PYCC 6800T=CBS 15203T and MB 823030; M.

reassignment of Moniliella suaveolens strains to

Moniliella pyrgileucina sp. nov., Moniliella casei sp.

1

126448T=NRRL Y-48680T and MB 822871; M. pyrgileucina

Nova de Lisboa, Caparica, Portugal

Department of Biology, University of Western Ontario,
London, Canada

The presence of yeasts at diﬀerent steps of Vietnamese soypaste production was studied. Yeast growth occurred during

Yaguchi T, Ishibashi M. Dehydropropylpantothenamide
10554T in the presence of animal cells. J Nat Med. 72:
280-289, 2018.

３）Hara Y, Arai AM, Toume K, Masu H, Sato T,

Komatsu K, Yaguchi T, Ishibashi M. Co-culture of apathogenic actinomycete and animal cells to produce

nocarjamide, a cyclic nonapeptide with Wnt signalactivating eﬀect. Organic Letters. 20: 5831-5834, 2018.

primary soybean fermentation, with the cell density reaching４）Hirose M, Noguchi H, Yaguchi T, Matsumoto T,

dominant species were Pichia kudriavzevii and Millerozyma

caused by Aspergillus subramanianii. J Dermatol. 45:

4.106 cfu/ml and terminated during brine fermentation. The

farinosa. Over the span of 14 years, nine strains of Moniliella

Hiruma M, Fukushima S, Ihn H. Onychomycosis
1362-1366, 2018.

were isolated. The strains had identical PCR fingerprints５）Hubka V, Barrs V, Dudová Z, Sklenář F, Kubátová A,internal transcribed spacer（ITS）sequences. A D1/D2-based

Frisvad JC, Talbot JJ, Kolařík M. Unravelling species

generated with primer（GAC）5 and identical D1/D2 andphylogeny indicated that the strains were closest to a group of

Matsuzawa A, Yaguchi T, Horie Y, Nováková A,

boundaries in the Aspergillus viridinutans complex

four previously assigned as Moniliella suaveolens strains.

（section Fumigati）: opportunistic human and animal

all known species, including M. suaveolens（over 12 .7 %Persoonia. 41: 142-174, 2018.

Together they form a new lineage that is well separated from

pathogens capable of interspecific hybridization.

divergence）. ITS sequences indicated the presence of four６）Inoue N, Wakana D, Takeda H, Yaguchi T, Hosoe T.

Moniliella sojae sp. nov. is proposed to accommodate thebiological responses for Shimbu-to extract. J Nat Med.

species differing from each other by 9 - 57 nt. The namestrains isolated from Vietnamese soy paste, Moniliella

Production of an emericellin and its analogues as fungal
72: 357-363, 2018.

pyrgileucina sp. nov. is proposed for PYCC 6800 and

７）Inoue N, Wakana D, Takeda H, Yaguchi T, Hosoe T.

emended combination Moniliella macrospora is proposed for

production in Emericella nidulans. JSM Mycotoxins. 68:

Moniliella casei sp. nov. is proposed for CBS 157.58. An

CBS 221 .32 and CBS 223 .32 . The type strains and

MycoBank numbers are: M. sojae sp. nov., SS 4.2 =CBST

千葉大学

Effect of Shakuyaku-kanzo-to for sterigmatocystin
19-25, 2018.

８）Ishikawa K, Wakana D, Itabashi T, Takeda H, Yaguchi

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201831

T, K a w a i K , H o s o e T. Fo u r c yc l o d i p e p t i d e s ,asnovolenins A-B and asnovozines A-B, from Aspergillus
novofumigatus. Heterocycles. 96: 1053, 2018.

９）Kato I, Furuya M, Matsuo K, Kawabata Y, Tanaka R,

Ohashi K. Giant cell tumours of bone treated withdenosumab: Histologic, immunohistochemical, andH3F3A mutation analyses. Histopathology. 72: 914922, 2018.

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Tinea corporis on the arm caused by Nannizzia gypsea

with dermatoscopic images. J Deutschen Dermatol
Gesellschaft. 16: 784-786, 2018.

11）Lyskova P, Hubka V, Svobodova L, Barrs V, Dhand N,

Yaguchi T, Matsuzawa T, Horie Y, Kolarik M, Dobias
R, Hamal P. Antifungal susceptibility of the Aspergillus

viridinutans complex: comparison of two in vitro

methods. Antimicrob Agents Chemother. 62 . pii:

e01927-17, 2018.

12）Matsumoto K, Udaka N, Hasumi H, Nakaigawa N,

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Histopathological analysis of aggressive renal cell

carcinoma harboring a unique germline mutation in
fumarate hydratase. Pathol Int. 68: 473-478 2018.

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32

千葉大学

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18）Takahashi-Nakaguchi A, Sakai K, Takahashi H,

Hagiwara D, Toyotome T, Chibana H, Watanabe A,

Yaguchi T, Yamaguchi M, Kamei K, Gonoi T.

Aspergillus fumigatus adhesion factors in dormant conidia

re vealed through compar ative phenot y pic andtranscriptomic analyses. Cellular Microbiol. 20: e12802,
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19）Thanh VN, HienDD, Yaguchi T, Sampaio JP, Lachance

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isolated from Vietnamese soy paste（tuong ）, andreassignment of Moniliella suaveolens strains to Moniliellapyrgileucina sp. nov., Moniliella casei sp. nov., andMoniliella macrospora emend. comb. nov. Int J Syst Evol
Microbiol. 68: 1806-1814, 2018.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018文部科学省 ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原真核微生物」
Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology

National BioResource Project Pathogenic Eukaryotic Microorganisms
文部科学省では2002年度からナショナルバイオリソー

BioResource Project（NBRP）to construct the framework for

スプロジェクト（NBRP）を開始し , 国が戦略的に整備

systematic collection, preservation, and distribution of

存 , 提供などを行うための体制を整備してきた . その後

development by the national government. After the reviewing

れた .

started.

ることとなり , NBRP 病原真核微生物には千葉大学真菌

Mycology Research Center（pathogenic fungi/actinomycetes）,

することが重要な生物資源について体系的に収集 , 保
５年ごとの見直しを行い , 2017年度より第４期が開始さ第４期より病原細菌と病原真菌・原虫は別々に活動す

医学研究センター（病原真菌・放線菌 , 中核機関）と長

bioresources, with a focus on those that required strategic

the NBRP every five years, in FY2017, the forth phase hasThis project is carried out by Chiba University’s Medical

and Nagasaki University ’s Institute of Tropical Medicine

崎大学熱帯医学研究所（病原性原虫）は , 相互の機関の（pathogenic protozoa）. Together, they cooperate in various

体制を整備して , 高度情報を賦与した信頼できる病原微diseases and pathogens. Specifically, they are developing

連携を図り , これらの病原微生物株の収集・保存・提供

eﬀorts to support education and research pertaining to infectious

生物株として提供し , 感染症と病原体の教育・研究をすa system for collection, preservation, and distribution of

本プロジェクトは , 今後いかなる感染症が発生してもpathogenic microorganisms that are backed by high-level

る人々を支援している .

対応できる病原真核微生物コレクションを目指している .

In FY2002, the Ministry of Education, Culture, Sports,

Science and Technology（MEXT）implemented the National

千葉大学

pathogenic microorganisms, and they supply reliable strains of

information.

Even if any infection develops, the project aims at thepathogenic microorganism collection to deal with it.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201833

長崎大学熱帯医学研究拠点特定領域共同研究「アフリカで発生している真菌症・放線菌症の原因菌の収集と形態学的 , 生理学的 , 分子生物学的解析」プロジェクト

Cooperative Research of Priority Areas with NEKKEN, Nagasaki University
Project for Collections, and morphological, physiological and molecular biological analysis
of human pathogenic fungi and actinomycetes in Africa
長崎大学熱帯医学研究所ケニア拠点の助力を得て , ケ

ニア国周辺の食糧のカビ毒汚染やヒト真菌症に関するプ
ロジェクトを展開しています . 現在までにケニア全土の主要穀物（トウモロコシ , 小麦）やミルクなどを汚染するカビ毒（発がん性アフラトキシン他）とその生産菌の解析を進め , 現地食物の多くが , 世界の安全基準値を大きく上回るカビ毒で汚染されていることを明らかにしま
した . 結果は , 現地のマスコミにも取り上げられ , 大きな反響を呼び起こしました . また現地に滞在する米国医医療に貢献し , 人々の生活の質（QOL）の向上を図り ,さらに日本との友好を深めるために努力を重ねています .

Under assistance of Kenya Research Station, Inst.

NEKKEN, Nagasaki univ., we are anal y zing toxins

contaminating major local grains（maze, wheat）and milks,

and also producer fungi. We found the local foods were
contaminated by the toxins at concentrations far above theinternational standards. The result has been announced in師らと協力し , エイズ患者の命を奪う主な原因である真newspapers, and received large attention. A new project forに疫学的調査を計画しています . さらに環境中のアスペ

wss launched in collaboration with Kenya Medical Res.

菌感染症 , 特にクリプトコッカス属菌による感染を中心

ルギルス症原因菌種の抗真菌薬に対する耐性 , 耐性部位などの調査も始めました . 海外での研究は , 現地の研究者や監督官庁と信頼関係を築き , 許可を得るなど多くの問題を解決しなければ前進できません . しかし , 現地の

34

千葉大学

epidemiological study of Cryptococcus in HIV-infected patients
Institute（ KEMRI ）and doctors f rom UCSF, USA.

Furthermore, we have examinated the resistance properties

agaist antifungals and resistance mechanism on the isolatescausative aspergillosis in the environment.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発プロジェクト
The project for prophylaxis, diagnosis, and treatment for aspergillosis
and the other mycoses in aged and neonate patients

先進各国と同様に，我が国で最も死亡者が多い深在性報告はなく，病原診断の難しさが根底にあるのではない

真菌症（内臓真菌症）はアスペルギルス症であり，そのかと考えた . そこで，本年は，乳児結核の診断で有用と中でも特に高齢者や慢性閉塞性肺疾患（COPD）等の慢される胃液検査が新生児の糸状菌感染症の診断に有用でることから，本プロジェクトはこれらの疾患の疫学，増不全症の代表的な疾患であり，且つ真菌に易感染性を示性肺疾患に好発する慢性肺アスペルギルス症が重要であないかと考え臨床検討を行った . その結果，原発性免疫

悪因子，重要な難治化因子である薬剤耐性（とくに主力すことで知られる慢性肉芽腫症の乳児肺炎症例に対し薬剤であるアゾール薬に対する耐性）に関する研究，さて，胃液真菌培養を行うことで，糸状菌のひとつである

らに早産低出生体重児を中心とした新生児等の真菌症のRasamsonia piperina の分離に成功した . さらに分離菌の薬解析により，新規診断法，治療法，予防法の開発を通じ剤感受性に基づいた治療により臨床症状の改善が認めらた本疾患の制圧を目指している .

れた . また，新生児の Aspergillus fumigatus による髄膜炎・

ネットワークに慶應大学呼吸器内科および感染制御部・度を経時的に測定することで，適切な治療を行うことが感染制御センターも加えた共同研究を継続しており，ア出来た . 上記の点に関して学会発表を行い，論文公表を当センターの真菌症リファレンスセンターを通じた脳室炎症例に対して，血中と髄液中のボリコナゾール濃スペルギルス症難治化の一因である Aspergillus fumigatus

予定している . これらの検討結果は，新生児アスペルギ

れまでに知られていなかった新しい耐性機構（HMG-

提供する .

における耐性化率が著しい上昇していること，さらにこCoA reductase の変異によるもの）などの新規知見を見出したが，本年度はこの新規耐性機構とこれを裏付けるエルス症の診断・治療法策定において極めて重要な情報をWe found a novel antifungal-resistant mechanism（due to a

ルゴステロール産生量のデータを加え，米国 CDC の発

mutation of HMG-CoA reductase）of Aspergillus fumigatus

した . また，慶應大学病院等との国内共同疫学研究では，

of resistant and susceptible A. fumigatus strains and published aに加え，肺結核・肺非結核性抗酸菌感染症後遺症についEmerging Inf ectious Diseases. Furthermore, we are

行する Emerging Infectious Diseases 誌（IF 7.42）にて公表

患者の基礎疾患としての慢性肺疾患をこれまでの COPDても解析の対象として拡大し，薬剤耐性株が検出されたほぼ全症例に抗真菌薬投与歴があることが明らかになった . 一方，慢性肺アスペルギルス症の起因菌種の解析では， 欧 米 を 含 め た 諸 外 国 と は 異 な り Aspergillus section

last year. We additionally analyzed the production of ergosterol

paper regarding this antifungal-resistant mechanism ininvestigating an unknown resistant mechanism using the fungal

strains stored in MMRC. Collaborative studies with otherdomestic hospitals such as Keio University Hospital, we
enrolled the cases with non-tuberculous mycobacteriosis in

Nigri が極めて多いことが確認された . 現在さらに同大

addition to the cases with COPD. We found in almost all casesの耐性機構を持つ菌株について解析を進めている .

exposure. We also found that the spectrum of causative fungi

児成育医学会・感染対策予防接種委員会の協力を得て実ones in European countries or US; i. e., Aspergillus section

学から供与された株及び本センター保存株を用い，未知
一方，新生児領域における研究に関しては，日本新生

施した新生児深在性真菌感染症発症状況調査において，国内の実態を明らかにしたが，本調査で糸状菌分離例の千葉大学

isolated antifungal-resistant strains had a history of antifungalof chronic pulmonary aspergillosis in Japan is distinct from the
Nigri is comparatively major as a responsible pathogen in ourcountry.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201835

For the study of deep-seated mycoeis among neonates, we

conducted a nationwide retrospective survey in order todetermine numbers of invasive fungal infections（IFI）in Japan（ Medical Mycology 56 : 679 - 686 , 2018）. Through thiswas isolated from gastric aspirate. The patient was treated withmicafungin based on the drug susceptibility test and clinically

improved. We also experienced neonatal meningitis andventriculitis caused by Aspergillus fumigatus. The continuous

surveillance, the situation of neonatal IFI in Japan was clarified.

monitoring of serum and cerebral f luid voriconazole

survey because of the diﬃculty of pathogenic diagnosis. In thissevere case. Above study results gave us the important

chronic granulomatous disease which was diagnosed fungal

for aspergillosis and the other mycoses in neonate patients.

However, no neonatal mold infection was reported in thisyear, we experienced the case of a 2 month-old boy withpneumonia using gastric aspirate culture. Rasamsonia piperina

36

千葉大学

concentration was useful for the appropriate treatment of thisinformation for the establishment of diagnosis, and treatment

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「ブラジルと日本の薬剤耐性を含む真菌感染症診断に関する研究とリファレンス協力体制強化プロジェクト」

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for
Sustainable Development（SATREPS）

The establishment of a research and reference collaborative system for the diagnoses of fungal infections
including drug-resistant ones in Brazil and JapanSATREPS（感染症分野）とは , 国立研究開発法人日本医療研究開発機構（AMED）と独立行政法人国際協力機構（JICA）が共同で実施している , 地球規模課題解決と将来的な社会実装に向けて日本と開発途上国の研究者が共同で研究を行う研究プログラムである . 本課題は平成28年に採択 , 事業は平成29年度から開始されている .

真菌感染症患者は世界的に急増している . なかでも薬剤耐性真菌による感染症は致死率が極めて高い . 真菌が耐性を獲得するメカニズムについては十分に解明されていないが , 農地に散布される農薬（抗真菌薬類似の成分を含む）の影響によるもの , 慢性真菌感染症患者に対するアゾール系抗真菌薬の長期使用などが原因として考えられている . その一方 , ブラジルでは薬剤耐性真菌の実態は十分解明されていない状況にある . 本研究では , ブ

ラジルのサンパウロ州立カンピーナス大学と連携し , カ

ンピーナス首都圏における耐性真菌による感染症の実態を明らかにし , 耐性真菌の検出法を開発することを通じ ,ブラジルにおける難治性真菌感染症の治療戦略を構築するとともにブラジルにおけるカンピーナス大学を中心とした耐性真菌感染症研究拠点研究ネットワークの構築を目指す . ブラジルにおいてはカンピーナス大学附属病院とサンパウロ州の複数の医療機関との研究ネットワーク
が始動し , 平成30年より RedCap データベースを用いた

第７回 Global Network Forum on Infection and Immunity においてブラジル人研究者２名のポスターによる研究発表
およびブラジル側 project manager の Moretti ML 教授による招請講演が行われた .

SATREPS is a Japanese government program that promotesinternational joint research. The program is structured as acollaboration between the Japan Agency for Medical Researchand Development（ AMED）which provides competitive

research funds for science and technology projects, and theJapan International Cooperation Agency（ JICA ）which

provides development assistance（ODA）. Based on the needsof developing countries, the program aims to address global

issues and lead to research outcomes of practical benefit to both
local and global society. Our proposal was selected in 2016, andthe project started in 2017FY.

The incidence of fungal infections is increasing worldwide.

The fungi’s drug resistance has strengthened along with theincreased frequency, and the mortality rate of the patients
having contracted drug-resistant fungal infections is high. The

mechanism how fungi gain drug resistance has not beenclarified. For example, it could be through the exposure topesticides containing ingredients similar to medical antifungal

真菌症の症例登録 , 菌株収集が開始された . 平成30年３

drugs in the fields（fungicides）, or in the body of a patient

し , カンピーナス大学において第一回 Joint Coordinating

using azole-based drugs for a long time. Moreover, there are

月には研究代表者を含めた日本人研究者チームが参加

with chronic fungal infection who has undergone a treatment

Comittee が開催された . また平成30年８～９月，同11～

few public data within Brazil that shows the frequency of

１か月間真菌研究に関する講義や研修を受けるとともにIn this situation, we planned our project in collaboration with

12月にはそれぞれ３名のブラジル人研究者が来日し , 約

千葉大学

identification regarding fungal strains that cause drug resistance.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201837

the State University of Campinas in Brazil（UNICAMP）.
Aims of our project are to clarify the epidemiology of drug-

resistant f ungi causing drug resistance in Campinas
Metropolitan area, develop a new detection method for thefungal strains were started using RedCap database. In March2018 , 1 st Joint Coordinating Committee was held at

UNICAMP. Six Brazilian researchers visited and stayed inJapan for about 1 month to receive lectures and training on

drug-resistant fungi and establish an optimum treatment system

fungal research（ from August to September and from

UNICAMP.

Global Network Forum in Infection and Immunity, 2 Brazilian

medical institutes in Sao Paulo State has already established andthe project manager of this program, delivered an invitedand research network regarding the drug-fungi centered in
The research network between UNICAMP and several

enrolling clinical cases of fungal infection and collecting clinical

38

千葉大学

November to December）. During their stay in Japan, on 7th

researchers gave poster presentations and Prof. Moretti ML,
lecture.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

感染症研究革新イニシアティブ（J-PRIDE）
Japanese Initiative for Progress of Research on

Infectious Disease for Global Epidemic（J-PRIDE）
病原真菌 Aspergillus fumigatus によるアスペルギルス症

p u l m o n a r y a s p e r g i l l o s i s（ I PA ）, particular ly in

は先進国を中心に増加傾向にある . 既存の抗真菌薬の抗immunocompromised individuals. The efficacy of antifungal

薬開発が求められている . 我々はこれまでに , 臨床分離

resistance strains worldwide. Besides, the molecular mechanisms

菌力は十分とは言えず極めて難治であるため , 新規治療

therapy is, however, incomplete, because of emergence of

株と次世代シーケンサー（NGS）技術を活用して , A.

of pathogenicity in A. fumigatus has not been fully elucidated

獲得するという環境適応進化ともいうべき現象を明らか

mechanisms behind infections with A. f umigatus. In thisfumigatus が感染中に薬剤耐性のみならず , 高温耐性能をにしてきた . 本プロジェクトでは , 自然環境中での形質変化をモデル化することで病原性を規定する形質の同定を目指す . 「どのような形質変化がどのような環境因子によって生み出されるか」を明らかにして , 病原性と環境因子を繋げることを計画している .

Aspergillus fumigatus is a major cause of aspergillosis fromallergic bronchopulmonary aspergillosis（ABPA）to invasive

千葉大学

yet. Of critical importance is further understanding of the

project, we propose the elucidation of the quantitative eﬀect ofenvironmental conditions related with adaptation in
A. fumigatus. Toward this goal, we explore the statisticalmodelling framework to decipher the phenotypic heterogeneityof A. fumigatus. We utilize both clinical isolates and strainsobtained by experimental evolution to derive and validate themodel, where phenotypic heterogeneity can be explained bytranscriptome data.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201839

千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラム「 超個体の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」

Leading Research Promotion Program, Institute for Global Prominet Research
Advanced Research of Infection and Immunity Based on
Integrative Understanding of Host-Microbe Interactions
千葉大学では , 学内での研究の核となる新たな研究グ

ループの創出を目指す「グローバルプロミネント研究基幹」を設置しており , 当センターの教員が中心となった

研究プロジェクト「“ 超個体 ” の統合的理解に基づく次世

provides protection against colitis by inducing Treg cells

through modification of the intestinal microbiota. Nat
Immunol, 19, 755-765, 2018.

The research group composed of the researchers in MMRC,

代型「感染制御学」研究推進拠点」が , リーディング研

School of Medicine, Faculty of Pharmaceutical Sciences andプログラムでは , 感染免疫分野及び微生物資源分野の教Promotion Program of Chiba University. In this program, the究育成プログラムに採択され , 活動を実施している . 本

University Hospital was selected as the Leading Research員が中心となり , 医学研究院 , 薬学研究院 , 附属病院のmembers focus on the understanding of molecular interactions

システムとの相互作用 , そこへ侵入する病原体による恒bacteria, using the model assay systems targeting skin,

研究者と連携して , 共生微生物と宿主である個体の免疫常性の破綻と感染症の発症機序などについての基礎研究

between hosts and microbes, especially commensal fungi andrespiratory and digestive organs. The members aim to reveal theを , 皮膚 , 呼吸器 , 消化器など各種器官でのモデル実験

molecular machinery underlying the disruption of homeostatic

解することで , 感染症・免疫制御の分子メカニズムを明

infectious diseases. The findings obtained from the project will

健康維持と感染症などの克服へつながる新規イノベー

infectious diseases and lead to the improvement of human系を用いて解析し , そこから得られる成果を統合的に理らかにする次世代型の「感染制御学」を創出し , 我々のション創生を目指している .

balance in the hosts by invasive pathogens, which induce

help to create innovative achievements in therapeutics of thehealth.

主な発表論文１）Otsubo R, Mimuro H, Ashida H, Hamazaki J, Murata S,
Sasakawa C. Shigella effector IpaH 4 . 5 targets 26 S
proteasome subunit RPN13 to dampen cytotoxic T
lymphocyte activation. Cell Microbiol, e12974, 2018.
２）Tanaka S, Suto A, Iwamoto T, Kageyama T, Tamachi T,
Takatori H, Suzuki K, Hirose K, Ohara O, Lefebvre V,
Nakajima H. Sox12 promotes T reg differentiation in the
periphery during colitis. J Exp Med , 217, 2509-2519,

2018.

３）Tang C, Kakuta S, Shimizu K, Kadoki M, Kamiya T,

Shimazu T, Kubo S, Saijo S, Ishigame H, Nakae S,

Iwakura Y. Suppression of IL-17F, but not of IL-17A,

40

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

平成29年度 共同利用・共同研究報告2017 Fiscal Year Cooperative Research Program Report
研究課題

’17－１

た . １）CnT-Ⅱマウスの肺内に本真菌を感染させたとこ

新興強毒性真菌Cryptococcus gattii の高病原性機序の免疫学的解析

胞腔内を充満していた . ２）CG では感染後の Th1免疫応答が低下した . ３）CG の菌体成分が本真菌特異的なTh1細胞の分化誘導を抑制した .

川上和義・石井恵子

一方で , 本真菌の病原性に重要な莢膜多糖から CTAB

（東北大学大学院医学系研究科）

亀井克彦・川本

ろ , CG では CN に比べ肉芽腫反応に乏しく , 菌体が肺非結合分画を採取し , さらに ConA-sepharose 4B カラム

進に結合する成分を精製し Dectin-2との応答性を解析した（千葉大学真菌医学研究センター）

ところ , 以下のことが明らかになった . １）CN 由来で

Immunological analysis of a mechanism for highpathogenicity of Cryptococcus gattii

は Dectin-2への結合性 , Dectin-2レポーター細胞の活性化, 骨 髄 由 来 樹 状 細 胞 の 活 性 化 を 示 し た の に 対 して , CG 由 来 で は い ず れ の 活 性 も 低 下 し て い た . ２）

ConA に結合する莢膜多糖成分として galactoxylomannan

Kazuyoshi Kawakami, Keiko Ishii（GalXM）, mannoprotein（MP）が 知 ら れ て い る が , 抗

Katsuhiko Kamei, Susumu Kawamoto

性は GalXM とは異なる可能性が示唆された . ３）本真菌（Tohoku University Graduate School of Medicine）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果

GalXM 抗血清 , 精製 GalXM を用いた解析から目的の活の主要な MP である chtin deacetylase によって Dectin-2レ

ポーター細胞の活性化が観察された .

以上の結果から , C. gattii と C. neoformans は Dectin-2へ

1999年にカナダのバンクーバー島で Cryptococcus gattiiの異なる刺激活性を示すことで , その後の Th1免疫応答

その後アメリカ合衆国の北西沿岸地域を中心に拡大しつ可能性が示唆された . 両真菌種で異なる Dectin-2のリガによるクリプトコックス症のアウトブレイクが発生し ,つある . 2007年には , わが国でも国内感染と考えられるが異なり , このことが両真菌の病原性の違いに関与する

ンド候補として MP の可能性が考えられ , 今後はその構

C. gattii によるクリプトコックス症例が報告され , その造の違いとの関連性についてさらに解析を進める予定でリプトコックス症と異なり , 健常者でも中枢神経感染症て報告した .

後も症例が増加している . 通常の C. neoformans によるクを発症し , その高い致死率から高病原性クリプトコック

ある . これらの成果は , 第46回日本免疫学会学術集会にス症とも呼ばれており , 今後新興感染症として重要な問研究課題（CG）と C. neoformans（CN）に対する免疫応答性を比較

真菌病原性発現機構と宿主自然免疫応答の解析

題に発展することが懸念される . 本研究では , C. gattii
することで , 本感染症の病態解明の手掛かりを探ること’17－２を目的とした .

倉田祥一朗

細胞抗原である98kDa manno protein（MP98）を認識す

知花博治・佐藤美智代・髙橋

これまでに我々は , Cryptococcus spp. が有する主要な T

る抗原受容体遺伝子を導入したトランスジェニックマウ（東北大学大学院薬学研究科）

梓（千葉大学真菌医学研究センター）ス（CnT-Ⅱ）の作成に成功している . 本研究では , このマウスを用いることで以下のことが明らかとなっ千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201841

Study of fungal pathogenicity and host innate
immune responses
Shoichiro Kurata

研究課題

感染に応答した自然免疫誘導の分子機構の解析（Graduate School of Pharmaceutical Sciences）

藤田尚志（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

加藤博己

Hiroji Chibana, Michiyo Sato , Azusa Takahashi’17－３（京都大学ウイルス・再生医学研究所）（京都大学ウイルス・再生医学研究所）

米山光俊

研究成果
日和見感染症に代表される感染症を引き起こす病原真菌の病原性発現機構は , 依然として不明であり , 大きな脅威となっている . 真菌医学研究センター知花准教授

は , Candida glabrata を用いて , 5150遺伝子を組換えた変異体ライブラリーを作成している . このリソースを用い

ると , 病原性の発現に関わる遺伝子をゲノムワイドに探索できる . しかしながら , マウスなどの哺乳動物を宿主（千葉大学真菌医学研究センター）

尾野本浩司（千葉大学真菌医学研究センター）

Innate immune responses against pathogen
infectionとして用いて網羅的に解析することは , 現実的に不可能

Takashi Fujita

ウジョウバエは , 生活環が短く網羅的解析に優れてい

Hiroki Kato

ソースを利用して , ショウジョウバエでの解析から , 病

Mitsutoshi Yoneyama

的の同定を目指した .

Koji Onomoto

である . 一方 , 自然免疫研究によく利用されているショ

る . そこで , 本研究では , センターの有する真菌のリ
原真菌の病原性発現機構の解明と , 新たな抗真菌薬の標

そのために , 平成26年度に確立したショウジョウバエ

網羅的感染実験系を用いて（採択番号14-11）, 平成27年度に通常の培養条件では生育に必須ではない遺伝子を欠損した変異体2026系統を解析し , ショウジョウバエに対（Institute for Virus Research, Kyoto University）（Institute for Virus Research, Kyoto University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
本共同研究では , 高等脊椎動物における抗ウイルス自する病原性が低下した系統を57系統同定した（採択番号

然免疫において重要な役割を担うウイルス感染センサー

15-13）. 平成28年度は , これらの内 , 宿主体内での増殖である RIG-I-like 受容体（RLR）に着目し , それらによ必要な遺伝子を同定した（採択番号16-6）. そこで , 本年

続して解析を行っている . 特に近年は , 細胞内ストレス

子が , マウスを宿主とした際にも , 体内での増殖に関わいて解析しており , これまでに Pumilio の機能解析などた宿主の自然免疫応答を解析した . ショウジョウバエでCurr Opin Immunol, 2015）. 本年度は , 昨年度に同定した路が制御している . 当研究室では , この Toll 経路を制御ての機能解析を実施した . これまでの解析から , この能が低下していた11系統を解析し , 宿主体内での増殖に度は , ショウジョウバエを用いて同定したこれらの遺伝るのかどうか検討すると共に , ショウジョウバエを用い

は , 真菌に対する免疫応答は , NF-κB 経路である Toll 経する新規受容体を同定しているが , 今回 , この新規受容体は真菌に対する抵抗性の発現には関わらない事が明らるウイルス RNA 検知の分子機構と生理機能について継顆粒（SG）の形成を介した RLR 活性化の分子機構につ複 数 の 報 告 を 行 っ て き た（PLoS Pathogens, 2016, 2014;

SG に局在する新規 RNA 結合タンパク質（RBP）につい
RBP の遺伝子破壊細胞において RNA ウイルス感染に応答した I 型インターフェロン（IFN）遺伝子誘導すなわ

ち抗ウイルス自然免疫応答が顕著に減弱していたことかかとなった .

ら , この分子が抗ウイルス応答を正に制御する因子であることが強く示唆されていた . さらにこの分子は , ウイ

42

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

ルス非感染細胞で RLR の一つである LGP2と構成的に会（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

減弱する結果が得られている . これまでに LGP2がウイ

研究成果
昨年度 , 化学変異源を用いて Aspergillus fumigatus のハ
イグロマイシン B 耐性株を作製し , 二次代謝が活性化した変異株を見出した . 今年度は , 化学変異源の濃度 , 処
理時間 , 選抜時のハイグロマイシン B の濃度を変化させ , ハイグロマイシン B 耐性株を20株程度取得した . それぞれ培養すると , 二次代謝の活性化の様式がいくつかのパターンに分類された . それぞれ , 数株ずつピックアップして , 次世代シーケンサーを用いて網羅的な変異解析を行った . どの株でも数十の変異が導入されていた
ため , 容易にどの変異が二次代謝活性化に寄与しているかは特定することが難しかったものの , 耐性株間に共通合しており , ウイルス感染刺激に応答して両者の会合がルス非感染細胞で複数の RBP と会合していることを報告しており , ウイルス感染に応答したこの複合体の変化

が , 抗ウイルス応答に関与することが予想された . 現
在 , これに注目した生化学的な解析および会合している

RNA の 同 定 を 含 め た 解 析 を 実 施 し て い る . 一 方
で , CRISPR/Cas9系を用いたこの分子のノックアウトマ

ウスを作出し , in vivo における抗ウイルス応答への関与について検討が進行中である .

研究課題

’17－４

Aspergillus fumigatus リボソーム標的薬剤耐性株における二次代謝活性化機構の解明

詳細な解析を行っている . また , 他の Aspergillus 属菌についてもハイグロマイシン B 耐性株の中に二次代謝活性浅井禎吾

化株を見出している . 今後これらの株の変異解析を行（東京大学大学院総合文化研究科）

い , 種を越えて共通の変異を見出すことで , ハイグロマ

亀井克彦

イシン B 耐性化と二次代謝活性化に寄与する変異を特定（千葉大学真菌医学研究センター）渡辺

する変異もいくつか見出しており , 現在それらについてして行く予定である .

哲

研究課題

（千葉大学真菌医学研究センター）

’17－５

萩原大祐

Antifungal drug resistance in Candida glabratafrom transcriptional control to drug extrusion:
aiming improved diagnosis and therapeutics（千葉大学真菌医学研究センター）

矢口貴志（千葉大学真菌医学研究センター）

Activation of secondary metabolism in Aspergillus
fumigatus strains with resistance to ribosometargeting chemicals
Teigo Asai

（Graduate School of Arts and Sciences, The Universityof Tokyo）

Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Tetsu Watanabe（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Daisuke Hagiwara（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Takashi Yaguchi

千葉大学

Miguel C Teixeira（Institute for Bioengineering and Biosciences, Instituto

Superior Técnico/Bioengineering Department）

Hiroji Chibana（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
Candida glabrata はアゾール低感受性であるために近年患者数が増加しているが , 耐性機序において , 未解明な点が多い . そこで当研究課題では , トランスクリプトー
ム解析によって C. glabrata におけるアゾール耐性新規メ
カニズムの探索を目的にしている . C. glabrata 臨床分離株を用いて , ポサコナゾール , クロトリマゾール , フル
コナゾール , ボリコナゾールに20-45日間暴露すること

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

43

によって , 各アゾールに対してそれぞれ感受性が低下した株（進化株）を取得することができた . 生化学的解析の結果 , いずれ株もエルゴステロール合成量には変化がなく , アゾールの細胞内蓄積量に減少が確認された . ゲ

ノム解析並びにトランスクリプトーム解析の結果 , ４つアゾールに対して耐性を示した株では , 多剤耐性排出ポン プ を 制 御 因 子 で あ る RDR1に 突 然 変 異 が 確 認 さ れた. ポサコナゾール／クロトリマゾール耐性株ではEpa3付着因子の高発現が確認された . Epa3はバイオフィ

Search for innate immune receptors for thefungal cell wall component
Taro Kawai（Graduate School of Science and Technology, Nara

Institute of Science and Technology）

Mitsutoshi Yoneyama（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

ルム形成に必要な遺伝子であり , アゾール耐性に関与す研究成果

結果をまとめ , Antimicrobial Agents and Chemotherapy へ

キチンに対する自然免疫応答について解析を行った . 植

る報告はこれまでになく , 新しい知見となった . 以上の投稿した . 現在 , revice version を作成中である .

発表論文
１）Mafalda Cavalheiro, Catarina Costa, Ana Silva-Dias,
Isabel M. Miranda, Can Wang, Pedro Pais, Sandra N.
Pinto, Dalila Mil-Homens, Sato-Okamoto Michiyo,
Takahashi-Nakaguchi Azusa, Raquel M. Silva, Nuno P.
Mira, Arsénio Fialho 1 , Hiroji Chibana, Acácio R.

Gonçalves, Geraldine Butler, Miguel C. Teixeira:
Unveiling the mechanisms of in vitro evolution towards

アレルギーや炎症を引き起こす真菌成分の一つである物のキチン受容体の一つとして知られる CERK1受容体のキチン認識モチーフ Lysine motif（LysM）と相同性を示すヒト及びマウスの蛋白質をデータベース検索から６種 類（LysM1-6と す る ）見 つ け 出 し た . う ち ４ 種 類（LysM1-4とする）は , 互いに高い相同性を示すことから, まずこの４つに着目して解析を行った. 本年度

CRISPR/Cas9システムを用いたゲノム編集により , これら４種類をそれぞれ欠損するマウス樹立に成功した . キ
チン投与後の自然免疫応答について , 肺胞洗浄液中の免疫細胞（好中球 , 好酸球 , マクロファージ等）の集積や

fluconazole resistance of a Candida glabrata clinical

炎症関連遺伝子（IL-6等）の発現を中心に解析を行ってAntimicrobial Agents and Chemotherapy.

マウスと野生型に大きな差は認められなかった . そこ

isolate: a transcriptomics approach. Submitted to２）Romão D, Cavalheiro M, Mil-Homens D, Santos R,

Pais P, Costa C, Takahashi-Nakaguchi A, Fialho AM,

Chibana H, Teixeira MC. A New Determinant of

Candida glabrata Virulence: The Acetate Exporter

CgDtr1. Front Cell Infect Microbiol. 2017 Nov 14; 7:473. doi:10.3389/fcimb.2017.00473. eCollection 2017.

研究課題

’17－6

いる段階である . 予備的ではあるが , これら遺伝子欠損

で , これら４種類すべてを欠損する四重欠損マウスの樹立を現在行なっている . ２種類（LysM2, 4）を欠損する
二重欠損マウスの樹立に成功したが , このマウスにおいても免疫細胞の集積に差は認められなかった . また , 残りの２種類（LysM5, 6）についても遺伝子欠損マウスの樹立を行なっているところである .

研究課題

真菌細胞壁成分に対する自然免疫応答機構の
解析

’17－７

Candida glabrata 細胞壁構築関連遺伝子欠損
が菌体の性質に及ぼす影響

河合太郎

柴田信之・佐々木雅人・伊藤文恵・田中（奈良先端科学技術大学院大学先端科学技術研究科）（東北医科薬科大学）

米山光俊

知花博治・山口正規（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）

44

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

大Deletion effect of genes related to the cell wallarchitecture of Candida glabrataNobuyuki Shibata, Masato Sasaki, Fumie Ito,
Yutaka Tanaka（Tohoku Medical and Pharmaceutical University）

Hiroji Chibana, Masaki Yamaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
近年 , 病原性酵母 Candida glabrata の細胞壁は , 環境ス

ン酸化亢進 , 小胞体ストレスマーカー遺伝子 KAR2や

BAG7の mRNA 転写活性化も同時に認められた . 興味深いことに , カルシニューリン阻害剤 FK-506を処理した
ところ , これら変異株における細胞壁キチン含量はさらに増大し , かつ CWI を司る MAP キナーゼである Slt2pのリン酸化が極端に亢進することがわかった. 加えて , cne1遺伝子欠損株に FK-506 を処理したところ , 細胞
周期の停止および細胞死と異形細胞凝集像が観察された . 以上のことから , cne1遺伝子欠損株も KRE5遺伝子発現抑制株と同様の表現型を示し仮説モデルに沿った細胞応答を示すことがわかった . 次に , 小胞体 - ゴルジ体 - 分

トレス応答をきっかけにダイナミックにヘテロ再構築さ

泌経路が細胞壁生合成に重要な働きをしていることに着れること , またこの現象が既存の抗真菌薬への耐性や致

目し , 各オルガネラに局在して細胞壁生合成に関与する

死的な環境ストレスからの防御などの面で有利に働くことが相次いで報告された . このことは , 細胞壁構造最適

遺伝子を選抜して解析した . 小胞体に局在してカルネキ

シンシャペロンを補助する ROT2, ゴルジ体に局在して化（Cell Wall Integrity: CWI）の仕組みと C. glabrata の病

細胞壁マンナン生合成を担う MNN2, MNN11, HOC1,あることを示唆している . 我々は , C. glabrata CBS138 株を担う KRE1, KRE11のそれぞれ遺伝子欠損株を解析し

ら , 特にⅰ）小胞体 - ゴルジ体 - 分泌経路をコードする遺のいずれの表現型も示さなかった一方で , rot2, kre1, kre11

ペロン遺伝子群の欠損株を中心に , 細胞壁糖鎖構造構築

子欠損株と同様に , 細胞壁構造の異常や FK-506高感受

いて解析している .

MAP キナーゼシグナル伝達を中心として , 小胞体ストンパク質 Kre5p をコードする KRE5遺伝子の発現抑制にる , という仮説モデルを支持するものと考えられる .

胞壁キチン含量の代償的な増加 , ③ MAP キナーゼタン

発表論文
１）Yutaka Tanaka, Masato Sasaki, Fumie Ito, Toshio
Aoyama, Michiyo Sato-Okamoto, Azusa TakahashiNakaguchi, Hiroji Chibana, Nobuyuki Shibata:
Cooperation between ER stress and calcineurin signaling
requires maintaining the cell wall integrity in Candida
glabrata, Fungal Biology, 122（1）: 19-33

原性 , および抗真菌薬耐性とのあいだに密接な関わりがの全遺伝子について作製した変異株ライブラリの中か

伝子 , およびⅱ）糖タンパク質の品質管理に関わるシャと環境ストレス応答能 , および CWI に及ぼす影響につ
我々は昨年度までに , 小胞体局在型分子シャペロンタ

より , ①細胞壁 β グルカン構造の異常・含量低下 , ②細パク質 Slt2p のリン酸化亢進 , ④小胞体（ER）ストレス

応答活性化 , ⑤免疫抑制剤 FK-506に対する超高感受性がそれぞれ観察されることを明らかにしていた . しかし , これらの現象にそれぞれ相関があるかどうかはよくわかっていなかった . 従って今年度は , 細胞壁 β グルカ

ン へ の ダ メ ー ジ が ER ス ト レ ス 応 答 を 誘 導 し , Slt2p

MAP キナーゼの活性化を経てキチン生合成を活性化す

る , という仮説モデルを立て , 様々な遺伝子欠損株ライ
ブラリを用いて仮説モデルを検証した .

CNE1は糖タンパク質品質管理を担うカルネキシン型

分子シャペロン Cne1p をコードしている . Cne1遺伝子欠損株の細胞壁を解析した結果 , KRE5遺伝子発現抑制株と同様に , β1-6グルカン含量の減少と , 細胞壁キチン含量の増加が認められた . 加えて , Slt2 MAP キナーゼのリ

千葉大学

細胞膜上〜ペリプラスム間隙に局在して β グルカン合成たところ , mnn2, mnn1, hoc1遺伝子欠損株は上記①〜⑤遺伝子欠損株では , KRE5遺伝子発現抑制株や cne1遺伝性が観察された . これらのことは , C. glabrata の CWI は
レス応答やカルシニューリン経路がこれを制御してい２）Fumie Itoh, Shizuka Takahashi, Yutaka Tanaka, Atsushi

Kudoh, Masato Sasaki, Michiyo Okamoto, Azusa
Takahashi-Nakaguchi, Masashi Yamaguchi, Kazuyoshi

Kawakami, Hiroji Chibana and Nobuyuki Shibata:Glycosyltransferase Alg6 is required for cell wall integrity

and virulence of Candida glabrata, FEBS Journal（Under

revision）

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

45

研究課題

’17－８

PDB 培地及び米固体培地 , 25℃でそれぞれ１週間もしく

薬剤耐性および感受性Aspergillus fumigatus
株の代謝産物のメタボローム解析

した . 培養の結果 , 両培地とも菌の発育は観測されたものの , PDB 培地培養では特徴的な代謝産物は観測されなかった . 米固体培地培養では保持時間25.7分のピークが細江智夫

ほ ぼ す べ て の 菌 株 で 共 通 し て 観 測 さ れ た . ま た , A.

（星薬科大学薬化学教室）

武田は２週間培養を行い , 得られた培養エキスを HPLC 分析

viridinutans と A. lentulus は共通性の高い HPLC プロファ

尚イルを示したが , A. udagawae は上記２菌種とは異なり ,（星薬科大学薬化学教室）

高極性化合物を多数産生することが明らかとなった .

若菜大悟

今後 , 更に培地種 , 培養温度等の検討を行い最適な培（星薬科大学薬化学教室）

養条件を設定した後, 各菌株の培養エキスについて

矢口貴志

1

（千葉大学真菌医学研究センター）

H-NMR スペクトルを用いたメタボローム解析を行う予定である .

Metabolome analysis based on fungal metabolitesof drug-resistant mutant Aspergillus fumigatus
Tomoo Hosoe（Department of Organic chemistry, Hoshi University）

研究課題

’17－９

アスペルギルスのバイオフィルム形成および抗真菌薬耐性に関連する新規遺伝子群の探索

Hisashi Takeda

梅山

Daigo Wakana

高橋弘喜・亀井克彦（Department of Organic chemistry, Hoshi University）（Department of Organic chemistry, Hoshi University）

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
我 々 は , 近 年 発 生 し 問 題 と な っ て い る Aspergillus

隆・宮㟢義継（国立感染症研究所）（千葉大学真菌医学研究センター）

Screening of novel genes involved in biofilm
formation and antifungal resistance in Aspergillus
fumigatus

fumigatus の薬剤耐性株を , 化学成分の観点から感受性株

Takashi Umeyama, Yoshitsugu Miyazaki

みている . 昨年度は , AMPH 耐性及び感受性 A. fumigatus

Hiroki Takahashi, Katsuhiko Kameiと判別することが可能ではないかと考え , その検討を試を PDB 培地を用い , 25℃もしくは５％ CO2 条件下37℃の２種の条件での培養を行い , その代謝産物の1H-NMR
スペクトルを用いメタボローム解析を行ったところ , 感

受性株が特徴的に産生する芳香族化合物由来ピークから感受性株と耐性株の分類が可能と判断した . 本年度は ,上記検討を拡大し , 当センターが保有するアゾール系薬

物耐性菌 A. fumigatus 類縁菌 , A. lentulus, A. udagawae 及び（National Institute of Infectious Diseases）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
深在性真菌症の中でも Aspergillus fumigatus を主要病原菌とするアスペルギルス症は増加傾向にあり , 予後が非

常に悪い . 近年 , アスペルギルスのバイオフィルム形成がアスペルギルス感染に関与することが示唆されていA. viridinutans を対象に , その培養及び HPLC プロファ

る . 特にアスペルギローマの菌糸塊に見られる菌糸周囲の探索を行った .

なバイオフィルムを形成する状態では , いくつかの抗真イル解析を実施し , 耐性株の相似性に関与する化学成分

A. lentulus, A. udagawae 及 び A. viridinutans 各 ８ 菌 株 を

46

千葉大学

には厚い細胞外マトリクスが観察されている . このよう菌薬に対する感受性が低下する現象が示され , 難治性の真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

原因の１つになっていると考えられる . しかしながら ,バイオフィルム形成 , および , それによる抗真菌薬耐性の詳細な分子メカニズムは不明な点が多い . 本研究では , バイオフィルム形成に関わる新規遺伝子を同定し ,抗真菌薬耐性との関連性を明らかにすることを目的とす
る . 平成29年度では , 前年度までに Cas9/CRISPR ゲノム
編集技術を用いたスクリーニングで得られた , 血清存在下での生育に必須と予想される遺伝子の検討を行った .

Cas9/CRISPR ゲ ノ ム 編 集 技 術 を A. fumigatus で 応 用

し , 次世代シーケンサーと組み合わせた CRISPR スク

亀井克彦（千葉大学真菌医学研究センター）

Enantioselective synthesis of new antibacterial
and antifungal agents and evaluation of its
activity
Isamu Shiina（Department of Applied Chemistry, Faculty of Science,

Tokyo University of Science）

リーニングを行うことによって , 血清存在下の生育に必

Minehiko Ishiwada

していた . 得られた遺伝子が予想通りに血清存在下で必Katsuhiko Kamei

須と予想される26種類の候補遺伝子を前年度までに取得

須かどうかを確認するために , 26種類全ての遺伝子について , A. fumigatus AfS35株を宿主として , ハイグロマイ（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

シン耐性遺伝子の挿入による遺伝子破壊を行った . それ

研究成果

ぞれの遺伝子破壊株を血清存在下で培養し生育を比較し東京理科大学理学部第一部応用化学科 椎名研究室でたが , いずれの破壊株も生育の低下を示すものは確認では2016年に Eupenicillium shearii より単離・構造決定されによる変異導入の効率を上げるためのプラスミドベク

全合成方法を確立した . また , 独自の不斉合成技術によきなかった . この結果を踏まえて , 今後 , Cas9/CRISPR
タ ー を 開 発 し, 新 し く 遺 伝 子 ラ イ ブ ラ リ を 作 製

し , CRISPR スクリーニング法を確立することにより ,血清刺激に応答するシグナル伝達機構の解明を目指す .

発表論文
１）Takashi Umeyama, Yuta Hayashi, Hisaki Shimosaka,
Tatsuya Inukai, Satoshi Yamagoe, Shogo Takatsuka,
Yasutaka Hoshino, Minoru Nagi, Shigeki Nakamura,
Katsuhiko Kamei, Kenji Ogawa, Yoshitsugu Miyazaki:
Cas 9 /CRISPR genome editing to demonstrate theたユーシェアリライド天然物（24員環マクロライド）のりユーシェアリライド類縁体（光学異性体およびジアス

テ レ オ マ ー）の ラ イ ブ ラ リ ー を 構 築 し て い る . さ らに , 2017年には置換基を天然のものから違えた構造に変換した非天然型のユーシェアリライド類縁体の合成を実施し , 数種類の人工化合物の製造を行なった . 平成29年度の共同研究では , カンジダやクリプトコッカスなどの真菌と MRSA などの多剤耐性グラム陽性菌に対するユーシェアリライド立体異性体（８種類）の発育阻止効
果試験に加え , 上記非天然型ユーシェアリライドを用いた真菌とバクテリアに対する発育阻止効果試験を実施しcontribution of Cyp51A Gly138Ser to azole resistance in

た . その結果 , 天然物よりも抗真菌活性と抗細菌活性と10.1101/311712）.

を確認した . 平成30年度の共同研究においても , これら

Aspergillus fumigatus. bioRxiv. May 1, 2018. （DOI:

研究課題

新規化合物を用いた真菌とバクテリアに対する活性調査’17－10試験を継続する予定である .

新規抗真菌剤の合成および活性評価研究
椎名もに高い人工型のユーシェアリライド類縁体があること

勇（東京理科大学理学部第一部応用化学科）

石和田稔彦（千葉大学真菌医学研究センター）

千葉大学

発表論文
１）Takayuki Tonoi, Inohana, Takehiko Inohana, Teruyuki
Sato, Tomoki Yoshida, Isamu Shiina: Total Synthesis
and Antimicrobial Activities of All Stereoisomers of（16Z, 20E）-Eushearilide and（16E, 20E）-Eushearilide:

The Journal of Organic Chemistry 83, 印刷中（doi: 10.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201847

1021/acs.joc.8b00774）.

研究課題

現在 , 他競争的資金にて引き続き解析を進めており ,耐性クローンにおいてゲノムワイドでの解析を行い , 複’17－11

数 の 変 異 箇 所 を 同 定 済 み で あ る . ４ 株 共 通 し て major

アゾール系農薬テブコナゾールによる選択で得られた耐性Aspergillus fumigatus 株の解析

facilitator superfamily（MFS）タンパク質に点変異を生じていることが明らかになっている . 今後このタンパク質の薬剤耐性への寄与について解析を進める予定である .

研究課題

豊留孝仁

’17－12（帯広畜産大学獣医学研究部門）

千葉大学が保有するオリジナル化合物ライブ
ラリーを用いた抗真菌薬シーズの開発

亀井克彦（千葉大学真菌医学研究センター）

Analysis of azole-resistant A. fumigatus clones
selected with a fungicide, tebuconazole
Takahito Toyotome

荒井孝義（千葉大学大学院理学研究科）

知花博治・佐藤美智代・髙橋

梓（千葉大学真菌医学研究センター）（Depar tment of Veterinar y Medicine, O bihiro

University of Agriculture and Veterinary Medicine）

Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
近年 , Aspergillus fumigatus のアゾール薬耐性化が問題となってきている . 農地等外部環境中で用いられているアゾール系抗カビ剤が耐性化成因の一つとして挙げられている . 農薬での選択で生じる耐性化は十分に明らかとなっておらず , 今後も新たな耐性菌の出現が懸念される . 我々はこれまでに日本で使用量が最も多いアゾール

Development of antifungal seeds from chemicalcompound library owned by Chiba University
Takayoshi Arai

（Graduate School of Science, Chiba University）

Hiroji Chibana, Michiyo Sato, Azusa Takahashi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
千葉大学が保有する1,000種類のオリジナル合成化合物のうち450種類の化合物については , 一次スクリーニ

系抗カビ剤テブコナゾールを用いて A. fumigatus の選択

ングを終了した . その結果 , ６種類の化合物について特ローンを取得してきた . 本研究ではこれらクローンの耐550種類の化合物について , Candida albicans, C. glabrata,

を行い , テブコナゾールに対する感受性の低下した４ク

許出願中である（特願2016-058951）. 平成28年度は残る

性化要因の解明を行った .

Aspergillus fumigatus, Cryptococcus neoformans 等の主要な病原

ゾール薬に対する感受性を評価した . その結果 , テブコ

化合物について , マウスの培養細胞を用いて呼吸阻害活

まず , これまでに得られているクローンの医療用ア

ナゾール耐性株はいずれもボリコナゾールに耐性を示す
ことが明らかになった . また , 株によってはイトラコナ

ゾールに対しても耐性を示すことが明らかとなった . 標

的酵素である Cyp51A のプロモーター領域およびコード

真菌に対して生育阻害活性が確認された . 次にこれらの性を指標とした細胞毒性を測定したところ , １種類の化合物に細胞毒性が確認されず , 抗真菌薬「シーズ候補」とし , 現在作用点の解析を進めている .

領域を解析したが, いずれも変異は認められなかった . これらの結果から , Cyp51A に依らない未知の機構

によりアゾール系抗真菌薬への耐性を獲得していることが推測された .

48

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

研究課題

’17－13究を発展させる .

Aging associated tissues dysfunction throughregulation of micbrobiota and metabolites
早野元詞（Genetics Department, Harvard Medical School）

研究課題’17－14

ITAM 共役受容体 Trem2のカンジダ感染防御における役割の解明

後藤義幸

原（千葉大学真菌医学研究センター）（鹿児島大学大学院医歯学総合研究科）

Motoshi Hayano

西城（Genetics Department, Harvard Medical School）

Yoshiyuki Goto

（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
腸内細菌叢と肥満 , がん , 炎症などについてはさまざ

まな報告があがってきているが , 一方で老化と腸内細菌叢の関係は不明である . 本研究は腸内細菌による記憶や筋肉など多臓器への影響を含む「老化」制御の可能性を探り , 腸内細菌やメタボライトの制御を介した臓器機能の回復を検討することを目標とした .

博満・豊永憲司
忍（千葉大学真菌医学研究センター）

Studies on the role of the ITAM-coupled
receptor Trem2 in anti-fungal defense
Hiromitsu Hara, Kenji Toyonaga（Kagoshima University Graduate School of Medical and

Dental Sciences）

Shinobu Saijo（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Inducible changed in Epigenome）マウスは Harvard Medical

研究成果
DAP12会合型 ITAM 共役受容体である Trem2を欠損す
る（Trem2–/–）マクロファージは , 真菌受容体である C 型

る（unpublished data）. ICE マウスでは野生型の老化マウすることを見出した . そこで , カンジダ感染防御におけれ , FOXO や CTCF 結合領域特異的な H3K27ac, H3K56ac

ウスを用いた Candida albicans 感染試験を貴センター実験

葉大学真菌医学研究センターにおいて , ICE マウスや野

マウスは野生型コントロールマウスに比べて有意に死亡

イクログリアやアストロサイトの上昇 , そして Fluoro

TNF の上昇と IL-10産生の減少の傾向が見られた . ２回

I-PpoI と呼ばれるエンドヌクレースを用いた DNA 損

傷誘導型のエピゲノム変化による早老症モデル , ICE

School の David A. Sinclair 研究室において構築されていス同様に記憶や筋肉における機能低下が観察さ

そして DNA methylation の変化が観察される . 今回 , 千

レクチンを介したサイトカイン／ケモカイン応答が増強
る Trem2の生理的役割を明らかにするため , Trem2–/– マ

施設にて実施した . 初回の感染実験において , Trem2-/-生型の老化マウスの脳において , 炎症マーカーであるマ

率の減少が観察された . 感染臓器内（感染後４日目）でJade C staining に よ る Neuronal Degeneration が 確 認 さ れ

目の感染試験においても , 有意差は無いものの , やはり

た . これらの結果から ICE マウスにおいて記憶障害は異常な炎症応答を介していることが明らかになった . 今

後 , この炎症惹起の要因について , 腸内細菌叢と代謝産

Trem2欠損マウスで死亡率の改善が観察されたが , 感染

臓器内（感染後７日目）でのサイトカイン産生に有意な差は認められなかった . 従って次年度は , この実験結果

物について検討するとともに , 腸管の感染制御に関わるの追試を実施し , さらに詳細に経時的にカンジダ感染後

Citrobactor rodentium 感染がどのように老化を制御する

グナルの役割をより明確にするとともに , Trem2による

α1, 2- フ コ ー ス 発 現 と そ れ に 対 す る S. Typhimurium やかを引き続き検討する . 特に老化において腸内細菌叢による代謝産物が体全体の DNA やヒストン修飾をどのよのマウスを解析し , カンジダ感染防御における Trem2シ

CLR シグナル抑制の分子メカニズムの解明を目指す .

うに制御し , 疾患を誘導するかに焦点をあてて , 共同研

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

49

研究課題

’17－15

ち , LGP2が TRBP と 相 互 作 用 す る こ と で , そ れ ま で哺乳類特異的な自然免疫応答機構と RNA サイ
レンシング機構における相互作用の解明

TRBP が 結 合 し て い た RNA サ イ レ ン シ ン グ に 関 わ る
microRNA を 遊 離 す る こ と が 明 ら か に な っ た . そ こ

で , TRBP が結合する microRNA（miRNA）を同定するために RNA 免疫沈降シークエンスをおこない , TRBP と程久美子

共免疫沈降する miRNA を網羅的に同定した . これらの（東京大学大学院理学系研究科）

miRNA は TRBP か ら 遊 離 放 出 さ れ る こ と で , 前 駆 体

高橋朋子

miRNA から成熟型 miRNA への生合成過程が阻害されて（東京大学大学院理学系研究科）

いるがノーザンブロットによって明らかになった . さら

米山光俊に , それらの標的遺伝子群を情報科学的に推定し , 実際

（千葉大学真菌医学研究センター）にそれらの遺伝子の発現が上昇することも RT-PCR 法

尾野本浩司

によって証明した .

（千葉大学真菌医学研究センター）

今後は抗ウイルス応答により RNA サイレンシングがMolecular interaction between gene silencing
and innate immune responses in mammaliancells
Kumiko Ui-Tei（Graduate School of Science, The University of Tokyo）

Tomoko Takahashi（Graduate School of Science, The University of Tokyo）

Mitsutoshi Yoneyama抑制される生物学的意義について , ゲノムワイドな遺伝

子発現変動の解析により明らかにする .

なお , 本研究成果の一部は , 現在論文投稿中である .

研究課題

臨床検体から分離されたテルビナフィン低感
受性（耐性）白癬菌株における耐性化メカニ
ズムの解明（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

山田（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

矢口貴志

研究成果
我々は , RNA によって惹起されるという点で共通の分子機構である RNA サイレンシングと抗ウイルス応答の両方の経路に関わる初めての分子として TAR-RNAbinding protein（TRBP）を同定した . TRBP は RNA サイ
レンシングに関わる Dicer タンパク質と相互作用する二本鎖 RNA 結合タンパク質であるが , 抗ウイルス応答に
お い て は 細 胞 内 ウ イ ル ス セ ン サ ー で あ る RIG-I-likereceptors（RLRs）の １ つ で あ る LGP2と も 相 互 作 用 する . 抗ウイルス応答により RLRs の発現量が上昇すると , LGP2と TRBP は 相 互 作 用 し , TRBP の RNA サ イ レ

田中玲子

Koji Onomoto

ンシング促進機能を抑制すると考えられる結果を得ていたが , その作用機序は不明であった . しかし , 我々はTRBP が二本鎖 RNA と結合する部位と同じ部位を介し’17－16剛（帝京大学医真菌研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）

Terbinafine resistance of Trichophyton clinicalisolates caused by specific point mutations in thesqualene epoxidase gene.
Tsuyoshi Yamada（Teikyo University Institute of Medical Mycology）

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Reiko Tanaka（Medical Mycology Research Center, Chiba University）て LGP2と相互作用することを明らかにした . すなわ

50

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

研究課題

研究成果
申請者らとスイス・ローザンヌにある Centre Hospitalier

Universitaire vaudois（CHUV） の 共 同 研 究 グ ル ー プ

は , 2013年〜2016年にかけて CHUV を拠点に収集した臨床分離白癬菌2,056株を対象に , 白癬の治療に広く使’17－17

アスペルギルス症原因菌が産生する環状ペプ
チドの宿主免疫応答反応への影響用されているテルビナフィン（TBF）を含むサブローデ

梅村舞子

株の培養陽性株を見出した . これらの TBF 低感受性株

豊留孝仁

をコードする SQLE 遺伝子の ORF 内にアミノ酸置換を

亀井克彦・渡辺キストロース寒天培地を用いた簡易培養試験を行い , 17

では , TBF の作用標的であるスクワレンエポキシダーゼ
生 じ る 幾 つ か の 点 変 異（SNP）が 認 め ら れ た . そ こ

で , TBF に 感 受 性 を 示 す 白 癬 菌 Arthroderma

vanbreuseghemii に遺伝子操作を行い , 内在性の SQLE 遺伝子に同様の SNP を導入した複数の変異株を作出した . これらの SQLE 変異株の幾つかについて , CLSI 法に
よる TBF 感受性評価を行ったところ , 全ての変異株で明確な感受性低下が認められた . これより , 本研究で見出された臨床分離白癬菌株における薬剤耐性化の主原因
は , SQLE 遺伝子に生じた点変異によるタンパク質のア
ミノ酸変異に伴う立体構造の変化であることが示唆された.

一方 , 今回見出された臨床分離 TBF 低感受性白癬菌

株の中には , SQLE タンパク質内に Phe

397➡ Leu 変異を有する複数の株が含まれていた. これらの株について , CLSI 法 に よ る TBF 感 受 性 評 価 を 行 っ た と こ

ろ , TIMM20,092株のみ , その他の株に比べ , より一層

（産業技術総合研究所生物プロセス研究部門）（帯広畜産大学動物 ･ 食品検査診断センター）

哲・萩原大祐（千葉大学真菌医学研究センター）

Effect of cyclic peptides produced by pathogenic
Aspergillus species on host immune response
Maiko Umemura（Bioproduction Research Institute, National Institute ofAdvanced Industrial Science and Technology）

Takahito Toyotome（Diagnostic Center for Animal Health and Food Safety,

Obihiro University of Agriculture and Veterinary
Medicine）

Katsuhiko Kamei, Akira Watanabe, Daisuke
Hagiwara（Medical Mycology Research Center, Chiba University）の感受性低下が認められた . これより , TIMM20,092株

研究成果

加え , 別の要因が関与している可能性が示唆された . 現

flavus において , 近年 , カビで初めてのリボソームペプの TBF 低感受性化には , SQLE 遺伝子に生じた点変異に
在 , 薬剤の排出に関わるトランスポーター遺伝子の発現

ア ス ペ ル ギ ル ス 症 の 原 因 菌 で あ る 糸 状 菌 Aspergillus

チド生合成経路が研究代表者によって見出された . 本経レベルの解析を行っているところである .

路では環状ペプチド化合物の骨格構造が前駆体遺伝子に

発表論文
１）Yamada T, Maeda M, Alshahni MM, Tanaka R,
Yaguchi T, Bontems O, Salamin K, Fratti M, Monod
M. Terbinafine resistance of Trichophyton clinical isolatescaused by specific point mutations in the squalene
epoxidase gene. Antimicrob Agents Chemother. 61（7）:存されている . また生合成される環状ペプチドの一つでe00115-17, 2017.

直接書き込まれており , ほぼすべてのカビ・キノコに保ある ustiloxin は強い微小管重合形成阻害活性を有することから , 宿主の正常な免疫反応を抑制する可能性が高

い . そこで本研究では , 本リボソームペプチド生合成経路で生合成される環状ペプチドが新規病原因子として機能するかを , 当該経路遺伝子破壊株を用いた動物細胞感
染実験等から検証する .

Aspergillus fumigatus Af293株は , ust-RiPS 経路における前駆体ペプチド様遺伝子を２つ保有する（rps1a およびrps2a と呼称）. これまでの Transwell システムを用いたヒ

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201851

ト肺上皮細胞（Calu-3）への侵入試験および免疫抑制マ

ウスへの感染実験から , rps2a 破壊株において細胞侵入活性が優位に低く , またマウス肺増殖率が低い傾向が見られた . そこで本年 , マクロファージ食作用に対する本経路の影響を観察するため, マウスのマクロファージ

RAW264.7細胞に A. fumigatus rps1a および rps2a 破壊株を作用させて , 食作用アッセイを行った . FITC で染色しFunct ional anal y sis of g alactofur anosecontaining oligosaccharides in the pathogenicityof Aspergillus fumigatus
Takuji Oka（Department of Applied Microbial Technology, Sojo

University）

た胞子をガラスボトムプレート上で培養した RAW264.7

Katsuhiko Kamei, Akira Watanabe

した. 細胞を固定化した後, マクロファージ細胞をDaisuke Hagiwara

細胞に添加して , 37度で１時間５％ CO2培養器にて培養

CellMask にて染色し , 共焦点顕微鏡にて細胞内に取り込

ま れ た 胞 子 の 数 を カ ウ ン ト し た . 結 果 , rps1a 破 壊
株 , rps2a 破壊株ともに , 捕食された胞子の割合は親株と有意な差を示さなかったことから, 本経路はマクロファージによる食作用に影響を及ぼさないと結論付け
た . しかし本経路による細胞傷害性とマウス肺内における増殖性への影響が見られていることから , 引き続き他の真菌に数多く存在する同経路を分類した上で , 宿主への作用を調べる予定である .

発表論文
１）Hagiwara, D., Sakai, K., Umemura, M., Nogawa, T.,
Kato, N., Osada, H., Watanabe, A., Kawamoto, S.,
Gonoi, T., Kamei, K., Temperature during conidiation
affects stress tolerance, pigmentation, and trypacidin
accumulation in the conidia of the airborne pathogen
Aspergillus fumigatus, PLoS One, 12, e0177050, 2017
（doi: 10.1371/journal.pone.0177050）.

研究課題’17－18

Yutaka Tanaka, Nobuyuki Shibata（Department of Infection and Host Defense, Tohoku

Medical and Pharmaceutical University）

研究成果
今年度の特筆すべき成果として Galf 転移酵素活性測定

系を改良したことが挙げられる . Galf 転移酵素活性の検出 に 用 い る UDP-Galf は 不 安 定 な 稀 少 物 質 で あ り , 且

つ , 試薬として販売されていない . そこで , これまでは

UDP-Galp から UDP-Galf を合成する酵素である Glf の組
換 え 体 を 作 製 し , UDP-Galp か ら 生 合 成 し た も の を

HPLC によって精製して使用していた . そのため , UDP-

Galf を準備することが研究推進における律速因子となって い た . こ の 状 況 を 打 破 す る た め に , 反 応 系 に UDP-

Galf を入れる代わりに UDP-Galp と Glf を添加する方法

転移酵素活性の検出が可能となった . この連続反応系を用いて , GfsA および GfsC の Galf 転移酵素活性を検出したところ , 両酵素共に単独の酵素で Galf を最大で５個ま∆ gfsC, ∆ gfsAC およびそれらの相補株に焦点を当ててFTGM の 解 析 を1H-NMR 解 析 お よ び メ チ ル 化 分 析 に哲

よって実施した . その結果 , ∆ gfsC 株では β1, 5-Galf 残基（千葉大学真菌医学研究センター）が著しく減少し , ∆ gfsAC 株では , β1, 5-Galf 残基が全く

萩原大祐（筑波大学・生命環境系・糸状菌相互応答講座）

大・柴田信之（東北薬科大学・感染生体防御学研究室）

52

University of Tsukuba）

で転移する活性を有することが明らかになった . また ,（崇城大学・応用微生物工学科）

田中

Biology, Faculty of Life and Environmental Sciences,

応系を用いることで UDP-Galf を準備することなく Galf

拓二

亀井克彦・渡辺（Laboratory of Fungal Interaction and Molecularを考案した . 反応条件を最適化したところ , この連続反Aspergillus fumigatus の病原性におけるガラ
クトフラノース含有糖鎖の機能解析
岡（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

千葉大学

検出されなくなることが明らかになった . 以上の結果か

ら , Aspergillus fumigatus の全ての β1, 5-Galf 糖鎖は GfsA とGfsC が協調的に働くことで生合成されることを明らかにすることができた . また , ガラクトマンナン中のコア

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

マ ン ナ ン 鎖 合 成 を 担 う α1, 2- マ ン ノ ー ス 転 移 酵 素 が研究成果

真菌薬に対する感受性が増加していることを共同研究に究を開始し , 初年度分を報告する . 深在性真菌症の適応

CmsA であることを明らかにし , ∆ cmsA 株では各種の抗平成29年度より千葉大学真菌研究センターとの共同研

よって明らかにすることができた. この成果は現在

薬は , 核酸合成を阻害するピミミジン系 , エルゴステ

ある .

素の阻害剤であるアゾール系 , 細胞壁合成阻害剤である

Scientific Reports 誌に投稿中であり , 査読を受けところで発表論文
１）Oka T. Biosynthesis of galactomannans found in
filamentous fungi belonging to Pezizomycotina. Biosci.
Biotechnol. Biochem.（2018）82, 183-191.

２）Katafuchi Y, Li Q, Tanaka Y, Shinozuka S, Kawamitsu

ロールと結合するポリエン系 , エルゴステロール合成酵

エキノキャンディン系の４系統しかなく , いずれも副作用や耐性菌の出現が問題になっており , 新規の作用機序をもつ抗真菌薬の開発が必要である . そこで , 本研究計
画では , 微生物化学研究所が保有する化合物ライブラ

リーを用いたスクリーニングによって得られた候補化合物の薬剤標的分子を同定し , 新規抗真菌薬の創出をめざ

Y, Izumi M, Ekino K, Mizuki K, Takegawa K, Shibata

している . 平成29年度は , 本研究で使用する化合物につβ1 , 5 -galactofuranosyltransferase involved in the

め , MTA の締結に至った . 解析予定の1,000種類の化合galactomannan in Aspergillus fumigatus. Glycobiology.

ならびに二次スクリーニング終了した . 一次スクリーニ

N, Goto M, Nomura Y, Ohta K, Oka T. GfsA is abiosynthesis of the galactofuran side chain of fungal-type（2017）27, 568-581.

いて , 提供機関との打合せメールなどでの打合せを進物のうち今年度は644種類について一次スクリーニング

ングでは , カンジダ・グラブラータを用いて生育阻害活

３）Matsunaga E, Higuchi Y, Mori K, Yairo N, Toyota S,性を指標にした . その結果 , 140サンプルに生育阻害活PA14 domain-containing galactofuranose-specific β-D-

スクリーニングでは , ８種類の病原性真菌について , 生

Biotechnol. Biochem.（2017）81, 1314-1319.

決定した . さらに , 培養細胞を用いた呼吸阻害活性を測

Oka T, Tashiro K, Takegawa K. Characterization of agalactofuranosidase from Streptomyces sp. Biosci .

研究課題’17－19性が確認され , 二次スクリーニングへと移行した . 二次育阻害活性を測定し , それぞれの菌種について MIC を定した . これらの結果より , ６サンプルが抗真菌薬シーズ候補として選抜することができ , 今年度の研究計画を

天然化合物ライブラリーを用いた抗真菌薬の開発研究順調に進めることができた . 次年度は , 得られた抗真菌活性物質の作用分子の同定と未解析化合物からの抗真菌活性物質のスクリーニングを継続する .

研究課題

五十嵐雅之

’17－20（微生物化学研究所第２生物活性研究部）

知花博治・佐藤美智代・髙橋

未利用微生物を素材とした新しい抗真菌薬
シーズの探索梓（千葉大学真菌医学研究センター）

Development of antifungal drugs from naturalchemical compound library
Masayuki Igarashi

久保田高明（昭和薬科大学）

矢口貴志（千葉大学真菌医学研究センター）（IMC, Lab. Head, Microbial Chemistry）

Hiroji Chibana, Michiyo Sato, Azusa Takahashi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

千葉大学

Search for new antifungal drug seeds fromunutilized microorganism.

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201853

Takaaki Kubota

Kiyofumi Ohkusu

Takashi Yaguchi

Naruhiko Ishiwada, Misako Ohkusu, Noriko Takeuchi（Showa Pharmaceutical University）（Department of microbiology. Tokyo Medical University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果

海綿動物からは多くの生物活性天然物が単離 , 構造決

定されており , それらをもとに新たな医薬品が開発されている . 近年 , メタゲノム解析により , これら生物活性

天然物の真の生産者は海綿動物に共生する難培養性微生物であることが明らかになってきている . 一方 , 微細藻

結核の中蔓延国である日本では BCG（ワクチン）接種率が高く , 小児の重症結核予防効果は高いが , 接種後の副反応としてリンパ節腫脹や皮膚疾患 , 稀に骨炎や全身感染症が問題となる . 症状が重篤な場合には , ヒト型結核菌との鑑別を行った上で , 抗結核薬による治療が考慮類の一群である渦鞭毛藻は , 他の生物種からは得られなされるが , 現在 , 検査室で通常実施している PCR 法ではず , 医薬品シード化合物探索の素材としてあまり注目さは , BCG 特異プライマーによる PCR および日本で使用

び渦鞭毛藻を対象に , 深在性真菌症の原因真菌に対してが知られている RD16領域のシークエンス解析を行うこい特異な化学構造のマクロリドを生産するにも関わられていない . 今回 , 沖縄で採取した数種の海綿動物およ抗真菌活性を示す新たな生物活性天然物の探索を行った .

ヒ ト 型 結 核 菌 と BCG の 鑑 別 は 出 来 な い . 私 た ちされている BCG 東京株特有の塩基配列欠損があることとで , BCG とヒト型結核菌を迅速に鑑別出来る方法を

その結果 , Amphimedon 属海綿から２個の新規マンザミ確立した . 実際に , リンパ節炎の生検組織 , 膿汁 , 骨髄新規メロテルペノイド関連化合物を , Pseudoceratina 属海とが可能であった . 検査結果は , 臨床経過や病理組織

を , Hyrtios 属海綿から２個の新規インドールアルカロイ

ら直接解析することにより , 検体採取から数日以内に結ン関連アルカロイドを , Hippospongia 属海綿から２個の綿から２個の新規ブロモチロシンアルカロイド
ドを , Dysidea 属海綿から２個の新規ポリヒドロキシステ

ロールを , Symbiodinium 属渦鞭毛藻から２個の新規マクロリドを , Amphidinium 属渦鞭毛藻から２個の新規マクロリドを , それぞれ単離 , 構造決定した .

現在 , これらの新規化合物および同時に得られた既知化合物の , 深在性真菌症原因真菌に対する抗真菌活性の評価に向けて準備を進めている .

研究課題炎の骨髄などの検体から直接 BCG 東京株を検出するこ像 , 培養検査結果と一致していた . 本解析方法は検体か果が判明するために , 臨床的にも大変有用な検査法と考えられた .

発表論文
１）Otsuka T, Hosokai R, Watanabe T, Ishiwada N, Saitoh
A. Subcutaneous chest wall abscess as a complication of
BCG vaccination. Pediatr Int. 2017 Oct 3. doi: 10.
1111/ped. 13382.

’17－21

研究課題
BCG 東京株による感染症の迅速診断と病原性に関する研究大楠清文（東京医科大学’17－22

小児無脾症患者における肺炎球菌血清型特異IgG 抗体・オプソニン活性 , インフルエンザ菌
b 型特異抗体価保有状況に関する検討

微生物学）

石和田稔彦・大楠美佐子・竹内典子

星野直・竹下健一（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉県こども病院感染症科）

石和田稔彦・竹内典子

Rapid diagnosis and pathogenicity of theinfection caused by BCG Tokyo strain.
54

千葉大学

（千葉大学真菌医学研究センター）

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

The analysis of serotype specific IgG antibody,opsophagoc y t ic act ivit y of S t r e p toc oc c u s
p n e u m o n i a e and ant i pol y r ibosy l r ibitol
phosphate antibody of Haemphilus influenzae
among children with asplenia

に向けて
松浦

彰

（千葉大学大学院理学研究院／大学院融合科学研究科）

久保田俊介（千葉大学大学院融合科学研究科）

高橋弘喜・亀井克彦・川本Tadashi Hoshino, Kenichi Takeshita（Chiba Children’s Hospital）

進・東江昭夫（千葉大学真菌医学研究センター）

Naruhiko Ishiwada, Noriko Takeuchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
無脾症は , 肺炎球菌・インフルエンザ菌莢膜株に感染

Towards development of novel therapeuticstrategies targeting the unique mechanism of
genome maintenance in Cryptococcus neoformans

すると重症化しやすいため , 海外では Hib ワクチン , 肺

Akira Matsuura内における無脾症患者のリスクとワクチン接種推奨に関Shunsuke Kubota

炎球菌ワクチンの接種による予防が推奨されている . 国
する評価をする目的で小児無脾症患者23名の肺炎球菌血
清 型 特 異 IgG 抗 体（ 血 清 型1・3・5・6A・7F・19A）と抗 PRP 抗体（Hib）の測定を行った . その結果 , いずれ

かの血清型に対する肺炎球菌特異抗体価が陽性基準値（0.35μg/ml）以 下 で あ っ た 症 例 が10例 認 め ら れ た . ま

た , 抗 PRP 抗体が陽性基準（1μg/ml）以下であった症例が13例認められた . この中には , 定期接種対象外の年齢層の症例も含まれていた . 日本小児感染症学会会員を対象とした免疫不全状態の小児（無脾症含む）に対するHib ワクチン , 肺炎球菌ワクチン接種の実態調査を行っ（Graduate School of Science, Chiba University）（Graduate School of Advanced Integration Science,

Chiba University）

Hiroki Takahashi, Katsuhiko Kamei, Susumu Kawamoto,
Akio Toh-e（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
Cryptococcus neoformans は環境に常在する担子菌酵母であり , 主に免疫機能の低下した人に感染し重篤なクリプ
トコックス症を引き起こす日和見感染真菌として知られたところ , 施設間に差が認められたことから , これらのている . 本菌は , 環状プラスミドが維持できない , 遺伝

スケジュールの提示が必要と考えられた .

DNA 断片の末端に高頻度でテロメア反復配列が付加さ基礎疾患を有する小児に対する接種勧奨と具体的な接種

発表論文
１）Takeshita K, Ishiwada N, Takeuchi N, Takahashi Y,
Naito S, Nagasawa K, Hishiki H, Hoshino T, Shimojo
N. Pneumococcal IgG levels against 13 -valentpneumococcal conjugate vaccine serotypes in Japanesechildren with a medical history of hematopoietic
neoplasms and solid tumors. 71: 13-21, 2018

研究課題

’17－23子ターゲティングの効率が悪く, 導入された直鎖状

れる , など DNA 修復に関連するユニークな性質をもつ

ことが明らかにされている（Edman, 1992）. 本研究では , C. neoformans 染色体末端近傍でのゲノム変化に注目

し , テロメア末端および DNA 損傷末端で作用する分子の機能とゲノム変化 , 感染サイクルとの関連を明らかにするとともに , それを標的とした新規治療戦略の開発を目指している .

これまでに , DNA 末端を維持・修復する過程に関する C. neoformans 特有の現象を主として遺伝学的 , 分子生物学的手法を用いて解析をしている . 前年度までに ,我々が同定した染色体末端を伸長する酵素であるテロメ

Cryptococcus neoformans のユニークなゲノ
ム維持機構を標的とした新規治療戦略の開発

千葉大学

ラーゼの触媒サブユニット CnEST2の欠損細胞が , 一倍体で致死性を示すことを見出した . 他の多くの生物種で真菌医学研究センター報告

第 22 巻201855

は , テロメラーゼの欠損は直ちには致死とはならないこ

研究成果て利用できる可能性が考えられた .

用により引き起こされる相互の遺伝子発現やタンパク質

C. neoformans に投与したところ , CnEST2遺伝子のコピー

マウス感染時に起こる病原細菌遺伝子発現の網羅的解析とから , この違いが C. neoformans 特異的な治療戦略とし感染症の理解には , 病原微生物と宿主細胞との相互作

そこで , 既知のヒトテロメラーゼ阻害剤を増殖中の産生の変化を解明することが重要である . サルモネラの数と相関して増殖の低下がみられることが明らかになっを行うため , 蛍光タンパク質を恒常的に発現するサルモ

た . さらに , 薬剤添加時の遺伝子発現変化を RNA-Seq

ネラ（Salmonella enterica serovar Typhimurium）を用いて宿る特異的な遺伝子発現変化が見出され , テロメラーゼをた . サルモネラを腹腔内に投与し , 経時的に腹腔内の免により調べたところ , テロメラーゼ阻害剤の添加に対す標的とする C. neoformans 特異的治療戦略の有効性が確認された（論文準備中）.

現在入手可能なテロメラーゼ阻害剤は , C. neoformansのテロメラーゼ活性を阻害する活性が低いことが示唆されている . 千葉大学分子キラリティー研究センターの化

主内感染細胞での動態を検討し , 分取することを試み

疫 担 当 細 胞 を 解 析 し た と こ ろ , 感 染 初 期 に は Large

Peritoneal Macrophage（LPM）に特異的に感染するものの , 感染24時間後に LPM が完全に消失した . 腹腔内マ

ク ロ フ ァ ー ジ と し て LPM と 共 に 骨 髄 由 来 の Small

Peritoneal Macrophage（SPM）が検出されるが , SPM も感合物ライブラリーを用いて , より特異的に C. neoformans

染３日後には消失していた . 一方 , 単球の数は増加して

ろ , 類似構造をもついくつかの候補化合物が単離された . 又 , 脾臓内のサルモネラも単球に局在していた .

のテロメラーゼを阻害する化合物の候補を探索したとこた . 今後は , この化合物による阻害機序の解明 , およびより活性の高い阻害剤の探索を行う予定である .

研究課題’17－24

おり , 感染３日後には単球内にサルモネラが局在していSPM は炎症性マクロファージであり , 細菌感染においては単球から分化する . これまでサルモネラの感染では , マクロファージ内で増加するといわれてきたが , 本研究から , 単球内で増加することで炎症性マクロファー

マウス感染時に起こる病原細菌遺伝子発現の網羅的解析

ジへの分化抑制に寄与する可能性が示唆された .

感染早期に誘導される LPM の消失が , サルモネラ感

染による細胞死によるものが検討したが , 特異的な細胞死の誘導はみられなかった . LPM は LPS 等の刺激を受

高屋明子

けるとリンパ節の一つとして考えられる Omentum に移（千葉大学・大学院薬学研究院）

動する . そこで , 標識した LPM を含む細胞とサルモネ

後藤義幸

ラを同時に投与したところ , 投与24時間後に標識した（千葉大学真菌医学研究センター）

LPM が Omentum で検出された . このことから , 腹腔内

山本友子に投与されたサルモネラは LPM に特異的に貪食された（千葉大学真菌医学研究センター）

後 , LPM の移動に伴って Omentum 内に移行することがTr a n s c r i p t o m e a n a l y s i s o f S a l m o n e l l a

Typhimurium during infection of mouse
Akiko Takaya（Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

University）

できると考えられる .

研究課題

腸内細菌叢と腸内真菌の相互作用により構築される粘膜免疫システムの解明

Yoshiyuki Goto

佐野晃之

Tomoko Yamamoto

後藤義幸（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

56

千葉大学

’17－25（ニューヨーク大学医学部スカボール研究所）（千葉大学真菌医学研究センター）

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

Understanding the intestinal immune responses
orchestrating by gut microbiota andmycobacteria
Teruyuki Sano

研究課題

Candida glabrata におけるミトコンドリア選
択的オートファジー活性検出系の開発（New York University, School of Medicine Skirball

名木Yoshiyuki Goto

知花博治

Institute of Biomolecular Medicine）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
本研究では , 抗生物質で腸内細菌叢を攪乱したマウスの腸管における真菌の増殖および宿主免疫細胞に対する’17－26

稔（国立感染症研究所）（千葉大学真菌医学研究センター）

Measurement of mitophagic activity in Candida

glabrata

影響について解析を試みた . 野生型マウスに代表的な病

Minoru Nagi

ころ , 約１ヵ月後に腸管から完全に排除された . 一方 ,Hiroji Chibana

原性真菌の一つである Candida albicans を経口投与したと事前にβ - ラクタム系抗生物質の一つであるアンピシリンを処理したマウスに C. albicans を経口投与したとこ（National Institute of Infectious Diseases）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

ろ , 消化管である胃 , 小腸 , 盲腸 , 大腸のいずれの部位

研究成果

え , ３か月以上経過しても腸管における C. albicans の数

Candida glabrata のミトコンドリア選択的オートファジー

においても多数の C. albicans が検出されたことにくわ本共同研究の初年度における報告である . 病原真菌量は維持されていた . 一方 , メトロニダゾールやストレ（マイトファジー）は病原性と鉄欠乏環境における生存に C. albicans は腸管から排除された . 以上の結果から ,おける詳細な役割はわかっていない . また , C. glabrata

プトマイシン処理したマウスでは , 野生型マウスと同様の維持に関与している事が明らかにされたが , 病原性に

特定の抗生物質で腸内細菌叢が攪乱されると C. albicans

ではマイトファジー活性の検出系が未確立であり , そのが腸管に定着することが示され, 特定の腸内細菌が点がマイトファジーの役割を解明することの妨げとなっ

C. albicans の消化管における定着を制御していることがている . 本研究では , マイトファジー活性を効率よく検次に C. albicans が腸管に定着したマウスにおいて宿主をコードする PEP4の C. glabrata におけるホモログであ示唆される .

出することを目的とし , 出芽酵母の液胞内プロテアーゼ

免疫細胞の動態を解析したとこと , 腸管膜リンパ節中でる CAGL0M02211g の破壊株（真菌センター分与株）にて増加していたことにくわえ , 腸管粘膜固有層におけるロ葉酸リダクターゼ（mtDHFR-GFP）を高発現させた加していることを見出した . 一方 , 樹状細胞やマクロ

トコンドリアに局在した mtDHFR-GFP はミトコンドリ

観察される CD4陽性 T 細胞数が非定着マウスと比較しIgA 陽性細胞ならびに Roryt 陽性の Th17細胞の割合が増

ファージなどの自然免疫系細胞の割合に変化は見られなかった . これまでに , Th17細胞は喘息をはじめとするア

レルギー反応の誘導にも寄与していることが報告されて
おり , 真菌の定着によって誘導される腸管 Th17細胞と宿主のアレルギー応答の関係性については大変興味深
く , 今後の検討課題と考えられる .

ミトコンドリア移行シグナルと GFP を付加したジヒド菌株を作製した . マイトファジーが活性化した場合 , ミ

アと共に液胞へと運ばれて分解を受けるが , CAGL0M02211gの破壊株では液胞内へと運ばれた後分解を受けずに液胞内に蓄積したため , このタンパク質の GFP シグナルを観察することでマイトファジー活性化の有無を確認する
ことができた . 以上のように , 蛍光顕微鏡観察によって効率よくマイトファジー活性を測定することができる実験系を確立した . 今後これらの株を用いて , 感染臓器内におけるマイトファジー活性の測定を進めていく .

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

57

研究課題

’17－27

研究課題

マウス細菌性肺炎モデルにおけるシベレス
タットとトロンボモジュリンによる炎症反応制御’17－28Aspergillus fumigatus 関連種の日本国内における分布の実態解明
廣瀬大

渡邉栄三・川口留以（日本大学薬学部）（千葉大学大学院医学研究院・救急集中治療医学）

矢口貴志

石和田稔彦

（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）

Regulation of inflammator y response withsivelestat and thrombomodulin in murine
bacterial pneumonia model
Eizo Watanabe, Rui Kawaguchi（Department of Emergency and Critical Care Medicine,

Chiba University）

Investigation of distribution on the related
species of Aspergillus fumigatus in JapanDai Hirose（School of Pharmacy, Nihon University）

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果

Naruhiko Ishiwada（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
マウス肺炎球菌肺炎モデルにおけるリコンビナント・
トロンボモジュリン（rTM）の敗血症病態への効果を明

本年度は伊豆諸島神津島の自然環境中におけるAspergillus 属相を明らかにした . 2017年10月に神津島の7地点において５-10 m 間隔で12箇所 , 計84箇所において土壌試料を採取した . 各土壌試料について滅菌したコーンを用いたベイト法により Aspergillus 属の分離培養をらかにする目的で , マウスに肺炎球菌を気管内に注入し行った . 各分離菌株について形態観察およびカルモジュ

対し菌液投与３時間後に rTM を腹腔内投与し , 菌液投点における各菌種の出現頻度を算出した . それらの結肺炎モデルを作成し検討を行った . 肺炎モデルマウスに

与24時間後に犠死させたマウスにおいて , rTM 投与の有無につき , 血清 cytokine 濃度 , HMGB1, syndecan-1, 肺血リン遺伝子の部分塩基配列に基づき種同定を行い , 各地

果 , ３ 節 ９ 種（sect. Fumigati: A. fumigatus, A. felis; sec.

Flavi: A. nomius; sect. Nigri: A. neoniger, A. brasiliensis,

管内皮 , 上皮 , 血球系細胞群における cytokine 発現率を

A. tubingensis, A. japonicus, A. welwitschiae,

いて , rTM 投与によって血清 TNF, IL-10濃度はいずれ

fumigatus 関連種の A. felis は , 森林環境に比べ荒原環境に

経時的に比較検討した . その結果 , 肺炎球菌注入群におも低下傾向となった . HMGB1は rTM 投与で有意に低下 , syndecan-1も rTM 投与で低下傾向を認めた . 一方 ,肺血管内皮細胞において菌液注入後12時間で IL-10発現率は低下し , rTM 投与によって上昇した（p ＜0.05）. まA. brunneoviolaceus） の 分 布 が 確 認 さ れ た . Aspergillus
おける出現頻度が著しく高かった . 本種11菌株について , イトラコナゾールに対する薬剤感受性を Etest により評価した結果 , 36％にあたる４株で MIC が12 μg/mL以上を示すことが明らかとなった . Aspergillus felis を除く

た菌液注入24時間後では , 肺血管内皮および血球系細胞

８種に関しては森林環境における出現頻度が高く , sect.

発現率は血管内皮細胞のみで上昇傾向を示した . 以上の高い傾向がみられた . sect. Nigri の各種に関してもイト炎症作用が認められた . また rTM 投与によって , glycocalyx

neoniger と A. tubingensis においてそれぞれ54％と53％の群両方で , rTM 投与によって TNF 発現率は低下 , IL-10

ことからマウス肺炎球菌肺炎モデルに対する rTM の抗

layer 障害が軽減される可能性も示唆された .

58

千葉大学

Nigri の種については加えて低標高の地域で出現頻度がラコナゾールに対する薬剤感受性を評価した結果 , A.

株で MIC が4 μg/mL 以上を示すことが明らかとなった .

真菌医学研究センター報告

第 22 巻

2018

研究課題

’17－29Naruhiko Ishiwada, Noriko Takeuchi, Misako Ohkusu

保育園児から分離される肺炎球菌無莢膜株の病原性解析（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
肺炎球菌結合型ワクチン導入後 , 東京都内の保育園５

和田紀之

か所に通園している児から分離されるようになった肺炎（和田小児科医院）

球菌無莢膜株に関する検討を行った . 保育園児からの肺黒澤サト子

炎 球 菌 無 莢 膜 株 の 分 離 率（ 保 菌 率 ）は12 ％ で あ っ（くろさわ子ども＆内科クリニック）

た . MLST 解析を行ったところ複数の Sequence type に分

石和田稔彦・竹内典子・大楠美佐子

類されたが , 同じ保育園で同じ時期に分離される ST 型

（千葉大学真菌医学研究センター）は一致しており , 無莢膜株の水平伝播が疑われた . 無莢Pathogenesis of non-encapsulated Streptococcus
pneumoniae isolated from nursery school
Noriyuki Wada

膜株は , β- ラクタム系抗菌薬 , マクロライド系抗菌薬の耐性に関与する遺伝子を保有しており , 莢膜株と比較しバイオフィルム産生能が高い株が有意に多かった . 今回の検討から肺炎球菌無莢膜株は , 今後呼吸器感染症の起炎菌になる可能性があり , また , 難治化に関与する可能（Wada Pediatric Clinic）

性が示唆された . 継続して保育園児から分離される無莢（Kurosawa Children’s and Internal Medicine Clinic）

関しても検討していく必要があると思われた .

Satoko Kurosawa

千葉大学

膜株の病原性解析を進めると同時に , 治療 , 予防対策に

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201859

感染症グローバルネットワークフォーラム2017
The 6th Global Network Forum on Infection and Immunity
主催：千葉大学真菌医学研究センター共同利用・共同研
究拠点「真菌感染症研究拠点」
共催：千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リー
ディング研究育成プログラム「“ 超個体 ” の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」
日時：平成29年10月29日“MelLec: A new player in antifungal immunity”

３．Dr. Glen N. Barber（University of Miami, USA）

“The STING controlled innate immune signaling

pathway, infectious disease, inflammation and cancer”

９：30〜17：30

場所：千葉大学医学部附属病院３階

２．Dr. Gordon Brown（University of Aberdeen, UK）

ガーネットホール【午後の部】（International forum）

世話人：

座長：高橋弘喜

松江弘之（千葉大学大学院医学研究院皮膚科学教授）（千葉大学真菌医学研究センター）

松岡悠美（千葉大学大学院医学研究院皮膚科学助教）

１．冨田秀太（岡山大学医歯薬学総合研究科）

鈴木敏彦（東京医科歯科大学
植松

教授）

智（千葉大学医学研究院粘膜免疫学教授）

米山光俊（千葉大学真菌医学研究センター教授）

２．松岡悠美（千葉大学大学院医学研究院皮膚科学）“Cutaneous acquisition of Staphylococcus quorum-

研究成果
感染症研究のネットワーク構築を目指し , 平成24年度から開始された「千葉大学感染症研究ネットワーク」
は , 平成29年度で第６回目の開催となった . 本年度は ,千葉大学附属病院皮膚科学の松江弘之先生に世話人をお願いし , 国内外の著名な研究者を招聘し , すべてを英語での国際フォーラムとして開催した . 特に , 宿主と微生物との相互作用についての最先端の研究成果についての発表がなされ , 活発な議論を通じて新しい国際ネット
ワーク形成を目指した有意義な意見交換が行われた .

【午前の部】

sensing agr mutations protects against atopic dermatitis
development”

３．中島沙恵子（京都大学医学部付属病院皮膚科）“Candida albicans skin colonization exacerbates the

inflammation of imiquimod induced psoriasis-likedermatitis in mice”

座長：後藤義幸（千葉大学真菌医学研究センター）
４．鎌田信彦（University of Michigan, USA）

“The mouth-gut axis in gastrointestinal diseases”【開会の挨拶】

５．植松

徳久剛史（千葉大学学長）

智（千葉大学大学院医学研究院粘膜免疫学）“Comprehensive analysis of intestinal virome”

座長：松江 弘之
（千葉大学大学院医学研究院皮膚科学）
１．天谷雅行（慶應義塾大学医学部皮膚科）“Stratum corneum as niche to control skin microbiota”
座長：西城“Comparative genomics with strain-level resolution”

忍

６．清野

宏（東京大学医科学研究所炎症免疫学分野）“Gut Multi-ecosystem of Epithelial Cells, Immune Cells

and Commensal Microbiota for Symbiosis andInflammation”（千葉大学真菌医学研究センター）

60

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

2018年講演会
2018 Scientific Meetings & Seminars
The 7th Global Network Forum on Infection and Immunity
Poster Session

日時：平成30年11月30日「Crosstalk between microbiota and host immune systemaffects the outcomes of hematopoietic stem cell

14：30〜16：30

場所：千葉大学医学部附属病院３階

Daigo Hashimoto（Hokkaido University）

セミナー室３transplantation」

Koichi Hirose（International Health and Welfare University ）Oral Presentation

日時：平成30年12月１日「Roles of Dectin-1 in allergic airway inflammation」

９：30〜16：15

場所：千葉大学医学部附属病院３階

ガーネットホール

Taiga Miyazaki（Nagasaki University）「Translational research on invasive candidiasis」【特別講演】【International Speakers】

Kiminori Shimizu（Tokyo University of Science）

Alistair Brown（University of Aberdeen, UK）「Adaptation to specific host signals triggers immune evasion

in Candida albicans, a major fungal pathogen of humans”」

Matthew C. Fisher（Imperial College, UK）「Emergence of antifungal resistance – challenges to humanhealth」「Involvement of PMT 2 gene of the human pathogen

Cryptococcus neoformans in fungal taxonomy」

Takahito Toyotome（Obihiro University of Agriculture andVeterinary Medicine）「Biofilm formation by Aspergillus fumigatus」

Keigo Ueno（National Institute of Infectious Diseases）

Ruoyu Li（Peking University, China）「CARD9 deficiency and dematiaceous fungal infections」

Maria Luiza Moretti（University of Campinas, Brazil）「Neglected endemic mycoses in Brazil」「A dendritic cell-based systemic vaccine induces long-lived

lung-resident memory Th17 cells and ameliorates pulmonary
cryptococcosis」「東京大学医科学研究所─千葉大学真菌医学研究セン

Mihai G. Netea（Radboud University Medical Center, theター「Functional genomics identification of novel pathways of

日時：平成30年３月６日（火）【Japanese Speakers】【午後の部】「Discovery of a novel regulator of azole drug response in

山﨑Netherlands）

human antifungal immune responses」

共同利用・共同研究拠点事業

平成29年度 合同

成果報告会」
場所：東京大学医科学研究所

Daisuke Hagiwara（Tsukuba University）【特別講演】

Aspergillus fumigatus」（大阪大学微生物病研究所）

２号館２階大講義室

晶「レクチン受容体を介する病原体認識機構」

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201861

【合同成果報告会】

性の検討」《千葉大学真菌医学研究センター成果報告》
鈴木
椎名

勇

志穂

（東京医科歯科大学）「細菌感染時におけるインフラマソーム活性化の制御メ（東京理科大学）「新規抗真菌剤ユーシェアリライド類の合成および活性

カニズム」

評価研究」
新澤
山田

剛

直明

（東京医科歯科大学）（帝京大学）「スイス・ローザンヌで分離された複数のテルビナフィ「類鼻疽菌の細菌競合と宿主病原性の関連性 , およびそれに関わる遺伝子領域の解明」

ン低感受性白癬菌株と薬剤感受性低下要因の解析」
東
鈴木

純子

秀明

（北海道大学）（国立病院機構東京病院呼吸器センター）「Aspergillus 呼吸器検体臨床分離株の菌種同定・薬剤感受性の検討」「Bacillus anthracis 病態発症に係る毒素合成機構の解明」
三室仁美（東京大学医科学研究所）
程久美子「H. pylori の病原性に関わる形態変化の遺伝的基盤の解析」（東京大学）「RIG-I 様受容体を介した自然免疫応答における microRNAによる遺伝子発現制御機構」

慎太郎（大阪大学微生物病研究所）「ヒト正常上皮細胞層を用いた , ヒトノロウイルスの侵《感染症・免疫共同研究領域》
中川

佐藤

入に関与するレセプターの同定 , および侵入様式の解明」

良

朴

恩正

（東京大学医科学研究所）（三重大学）「抗腫瘍免疫リガンド MICA の新規制御剤探索」「老化に伴う腸上皮バリア機能障害の分子基盤の解明」

杉田

大森

征彦

深雪

（沖縄科学技術大学院大学）（東京女子医科大学）「エボラウイルス・ヌクレオキャプシドの極低温電子顕「アレルギー反応を調節する樹状細胞サブセットの同定

微鏡解析」
廣松

および機能解析」

賢治（福岡大学）「真菌医学研究センター市民向け公開セミナー」「肺炎クラミジア感染細胞からの FABP4の分泌 , および ,日時：平成30年3月17日

その制御機構」

14：00〜16：00

場所：千葉大学医学部附属病院３階

セミナー室３「怖いカビの話」
一戸

猛志

講演１ 「カビは退治できるの？」
矢口貴志（真菌医学研究センター 准教授）

（東京大学医科学研究所）「内在性自己 RNA である , small nuclear RNA の免疫賦活

62

千葉大学

講演２ 「エッ！カビで病気？」

真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018亀井克彦（真菌医学研究センター 教授）

Colonization and Inflammatory Disease」（千葉大学 GP リーディング研究育成プログラム「“ 超個体 ”の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」「真菌医学研究センターMonthly セミナー」

研究推進拠点」第４回感染制御学セミナーと共催）

場所：真菌医学研究センター

大会議室１）日時：平成30年４月10日

16：00〜17：00

遠藤（※開催場所：薬学部創立120周年記念講堂）

剛（千葉大学大学院理学研究院教授）

DA-Raf によるがん抑制と肺胞形成の機構：肺腺がんの抑制と COPD の治療に向けて
２）日時：平成30年４月16日

16：00〜17：00

５）日時：平成30年７月24日
常世田

11：00〜12：00

好司（ドイツリウマチ研究センター・グループリーダー）「免疫記憶を制御する」（千葉大学 GP リーディング研究育成プログラム「“ 超個体 ”の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」
研究推進拠点」第５回感染制御学セミナーと共催）

Mounira Chelbi-Alix（Université Paris Descartes, Paris, France）「Role of PML nuclear bodies in protein degradation andantiviral defense」

６）日時：平成30年11月７日

18：00〜19：00

Nobuhiko Kamada（千葉大学 GP リーディング研究育成プログラム「“ 超（Division of Gastroenterology, Department of Internal

研究推進拠点」第３回感染制御学セミナーと共催）「The Gut Microbiota and IBD: Moving from Correlation

個体 ” の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」

３）日時：平成30年５月22日

16：30〜17：30

Eggi Arguni（Eliminate Dengue Project Yogyakarta, Faculty of

Medicine, Universitas Gadjah Mada）「Wolbachia Aedes aegypti: an alternative strategy indengue elimination」

４）日時：平成30年６月28日

17：00〜18：30

Medicine, The University of Michigan Medical School

to Causation」（千葉大学 GP リーディング研究育成プログラム「“ 超個体 ”の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」
研究推進拠点」第６回感染制御学セミナーと共催）

７）日時：平成30年11月20日

17：00〜18：00

Glen N. Barber（Department of Cell Biology, University of Miami

School of Medicine, USA）

Gabriel Nuñez「STING: Innate immune signal, inflammation andCenter, University of Michigan, Ann Arbor, MI,（千葉大学 GP リーディング研究育成プログラム「“ 超「Role of the Microbiota in Intestinal Pathogen

研究推進拠点」第７回感染制御学セミナーと共催）（Department of Pathology and Comprehensive Cancer

USA）

千葉大学

cancer」

個体 ”の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」

真菌医学研究センター報告

第 22 巻201863平成 31 年 3 月発行
発行者

千葉大学真菌医学研究センター
センター長

笹川

〒260-8673

千葉市中央区亥鼻 1−8−1

電話千尋

043−222−7171（代表）March 2019
Published by

Chihiro Sasakawa, Ph.D.

Director, Medical Mycology Research Center
Chiba University

1-8-1 Inohana, Chuo-ku, Chiba 260-8673, Japan

TEL: 81-43-222-7171
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真菌医学研究センター報告

第 22 巻2018

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2018