Uracil-DNA Glycosylase (UNG)
I.

Description

VII.

Usage

E.coli Uracil-DNA Glycosylase (UNG) removes uracil fromTo prevent carryover contamination in your qPCR, use aDNA by hydrolysis of the N-glycosidic bond between uracil

qPCR master-mix reagent that contains dUTP, and addbase and deoxyribose sugar, leaving an apyrimidinic site

UNG in reaction mix and incubate at 40°C for 2 min priorin the DNA.

to starting qPCR reactions.

UNG prevents carry-over of DNA in PCR products
incorporating dU-nucleotides. To eliminate carryover ofAn example of using GeneAce Probe qPCR Mix II

PCR products from previous reactions, use a qPCR

(Code No. 313-08823):

master-mix reagent that contains dUTP, and add the UNG
treatment step prior to starting PCR.

II. Storage
Store at –20°C

Component

VolumeVolumeUNG (1 ng/μL)

0.5 μL0.25 μL

2 x GeneAce Probe qPCR Mix II

25.0 μL

12.5 μL

25 μM Forward Primer

1.0 μL0.5 μL25 μM Reverse Primer

1.0 μL0.5 μL1.0 μL0.5 μLIII. Source

10 μM TaqMan® Probe

Escherichia coliTemplate DNA*1)

d.d.H2OIV.

up to5.0 μL

2.5 μL50.0 μL

25.0 μL

Components
ProductConc.

100 ng

Uracil-DNA Glycosylase (UNG)

1 ng / μL

100 μL x 1

V. Purity
1 ng of the enzyme and 1 µg of substrate DNA (normalDNA not containing uracil) were reacted at 37°C for 16
hr in 50 µL of the reaction volume and then agarose gelelectrophoresis was performed. The result indicated nodegradation of DNA.

UNG and PCR conditions
40°C

2 min.

UNG treatment

95°C

10 min.

Heat-inactivate UNG *2)

95°C

30 sec.

60°C

1 min.

45 cycles*1) TaqMan® is registered trademarks of Roche Molecular Systems, Inc..
*2) When GeneAce Probe qPCR Mix II is used, the PCR must startwith initial 10 minutes incubation at 95°C to activate the chemicallymodified hot-start Taq DNA polymerase.

1 ng of the enzyme and 1 µg of substrate RNA werereacted at 37°C for 2 hr in 50 µL of the reaction volume
and then agarose gel electrophoresis was performed.
The result indicated no degradation of RNA.

VIII. Related productA set of qPCR reagent and UNG
Code No.

VI. Notes

314-09051

ProductSizeGeneAce Probe qPCR Mix II

1 Setwith UNG(200 rxns)

Too much UNG may inhibit the PCR. Suitable amount of
the enzyme is commonly in the range between 0.1-1 µL
in a 50 µL reaction volume.

A qPCR reagent

Do not use this product for One-step RT-PCR

Code No.

application as the UNG would active on uracil in cDNA
among 55°C.

NIPPON GENE CO., LTD.
www.nippongene.com

313-08823

ProductSize

GeneAce Probe qPCR Mix II

200 rxns(1.25 ml x 4)

For Research Use OnlyUracil-DNA Glycosylase (UNG)
I.

VII. 使用例

製品説明

本品は、E. coli 由来のウラシル DNA グリコシラーゼ（UNG）＜キャリーオーバー防止の使用例＞です。ウラシルを含む DNA のデオキシリボースとウラシル残dUTP を含む GeneAce Probe qPCR Mix II （Code No.

基の間の N-グリコシド結合を加水分解し、脱ピリミジン部位を313-08823）を用いてリアルタイム PCR を行う際、UNG（本つくります。

品）を添加して 40℃, 2 分の UNG 処理を行ってから、95℃,UNG は、PCR のキャリーオーバー対策に利用できます。

10 分の PCR 用酵素活性化処理（UNG 不活化）と PCR 増幅

PCR を行う際、UNG 処理を行うことで、前の反応から持ち込を行います。

まれた PCR 産物（ウラシルを含む）を除くことができます。

II. 保存－20℃
III. 起源
Escherichia coli

Uracil-DNA Glycosylase (UNG)[ 50 μL 系 ][ 25 μL 系 ]UNG (1 ng /μL)

0.5 μL0.25 μL2 x GeneAce Probe qPCR Mix II

25.0 μL

12.5 μL

25 μM Forward Primer

1.0 μL0.5 μL25 μM Reverse Primer

1.0 μL0.5 μL

10 μM TaqMan® Probe *1)

1.0 μL0.5 μL

Template

5.0 μL

2.5 μL50.0 μL

25.0 μL

d.d.H2O

IV. 製品内容
試 薬＜反応液（例）＞濃 度[ 100 ng ]1 ng/μL

100 μL x 1 本

V. 純度
1 ng の本酵素と 1 μg の基質 DNA（ウラシルを含まない）
を 50 μL の反応液中で 37℃、16 時間反応させても、DNAのアガロースゲル電気泳動パターンに変化は認められない。
1 ng の本酵素と 1 μg の基質 RNA を 50 μL の反応液中でup to＜反応条件例＞
40℃

2 min.

UNG 処理95℃

10 min.

UNG 不活化・PCR 酵素活性化 *2)

95℃

30 sec.

60℃

1 min.

＊1)＊2)

45 cycles

TaqMan®は、Roche Molecular systems 社の商標です。
GeneAce Probe qPCR Mix II を使用する場合、PCR酵素活性化ステップ（95℃, 10 分間）を必ず実施してください。

37℃、2 時間反応させても、RNA のアガロースゲル電気泳動パターンに変化は認められない。

VI. 注意PCR反応液中へ本酵素の持ち込み量が多くなりすぎるとPCR反応を阻害することがあります。 酵素の使用量は、VIII. 関連製品
リアルタイム PCR 用試薬と本酵素のセット品
Code No.
314-09051

50 μL の反応液中、0.1～1 μL を目安にしてください。

製品名

包装単位

GeneAce Probe qPCR Mix II1 Set

with UNG(200 回用)

本酵素は 55℃でも部分的に活性を有するため、1 step
RT-PCR には使用しないでください。

リアルタイム PCR 用試薬（蛍光標識プローブ検出系）
Code No.

製品名313-08823

GeneAce Probe qPCR Mix II

包装単位
200 回用(1.25 ml x 4)

本製品は、試薬（試験研究用）として販売しているものです。
医薬品の用途には使用しないでください。

株式会社ニッポンジーン

TEL 076-451-6548

www.nippongene.com
マニュアル第 1 版_SKosR210