第75回日本大学歯学会総会・学術大会

プ ロ グ ラ ム
講演内容要旨

期日

令和 5 年 5 月 21 日（日）会場

日本大学歯学部

創設百周年記念講堂

第 75 回日本大学歯学会総会・学術大会

一般講演・特別講演タイムテーブル
5 月 21 日（日）
時間

番号

8:55

講演者

所

属

座長・副座長

開会の辞，会長挨拶

9:00

1

近藤

宏樹

歯科保存学第Ⅲ講座

9:10

2

渡邉

泰斗

歯科保存学第Ⅲ講座

9:20

3

仮谷

仁志

歯科矯正学講座

9:30

4

庄司

元音

歯科保存学第Ⅰ講座

9:40

5

岩瀬

慶

歯科保存学第Ⅰ講座

9:50

6

嘉月

駿

歯科保存学第Ⅰ講座

10:00

7

南里

圭哉

小児歯科学講座

10:10

8

米山

敏弘

歯科矯正学講座

10:20

9

宮田

泰伎

歯科保存学第Ⅱ講座

10:30

10

笹川

剛志

歯科矯正学講座

10:40

11

森山

鮎子

病理学講座

10:50

12

市川

理沙

歯科保存学第Ⅲ講座

11:20

評議員会

12:20

総会・奨励賞表彰
特別講演

12:50

山岡

大

教授

基礎自然科学分野

座長：山﨑

洋介

副座長：中山
座長：小泉

渕利
寛恭

副座長：中嶋座長：清水昭
治

副座長：菅野座長：二宮直之
禎

副座長：清水

康平

座長：新井

嘉則

座長：近藤

真啓

13:50

13

澤田

憧

口腔外科学第Ⅱ講座

14:00

14

大熊

理沙子

歯科矯正学講座

14:10

15

長谷

賢知

小児歯科学講座

14:20

16

今岡

紗耶

病理学講座

座長：田村

14:30

17

堤

法医学講座

副座長：田邉

14:40

貴通

閉会の辞
白抜

は奨励賞対象者

1

副座長：小柳裕子
宗明奈津子

第 75 回 日 本 大 学 歯 学 会 総 会 ・ 学 術 大 会
会場 日本大学歯学部
令和 5 年 5 月 21 日（日）一

創設百周年記念講堂

般講

演

1．ラット下顎角骨欠損モデルにおける BMP-9 添加コラーゲンメンブレンの骨増生に及ぼす効果◯近藤宏樹 1,2，髙山忠裕 2,3，渡邉泰斗 1,2，小澤康正 2，尾崎愛美 4，佐藤秀一 2,3
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 2
日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3
日本大学歯学部衛生学講座 4

2．GBR 法における遅延型吸収性メンブレンの有用性◯渡邉泰斗 1,2，蓮池

聡 2,3，近藤宏樹 1,2，小澤康正 2,3，佐藤秀一 2,3

日本大学大学院歯学研究歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科保存学教室第Ⅲ講座 2
日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3

3．Leptin receptor 陽性細胞に発現する LRP1 の骨形成に与える影響◯仮谷仁志 1,2，二宮

禎 3,4，髙橋富久 3,4，本吉

満 2,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部歯科矯正学講座 2
日本大学歯学部解剖学第Ⅰ講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 4
日本大学歯学部総合歯学研究所臨床研究部門 5

4．亜鉛ガラス含有グラスアイオノマーセメントの根面齲蝕進行抑制効果◯庄司元音 1,2，黒川弘康 2,3，三枝

眞 1,2，須田駿一 2，宮崎真至 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科保存学第Ⅰ講座 2日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 3

5． ユニバーサルアドヒーシブ応 用型 2 ステップ接 着システムのエナメル質 初 期 接 着 強さの経 時 的 変 化◯岩瀬

慶 1,2，高見澤俊樹 2,3，崔慶一 2，石井亮 2,3，黒川弘康 2,3，宮崎真至 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯学科保存学第Ⅰ講座 2日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 32

6．ボンディング材の塗布法の違いがユニバーサルアドヒーシブ応用型 2 ステップ接着システムの象牙質接着耐久性に及ぼす影響◯嘉月

駿 1,2，髙見澤俊樹 2,3，柴崎

翔 2，白𡈽康司 2,3，陸田明智 2,3，宮崎真至 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯学科保存学第Ⅰ講座 2日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 37．リン酸酸性フッ化ナトリウム溶液塗布がアクリルレジン系 CAD/CAM ブロックに及ぼす影響◯南里圭哉 1,2，小泉寛恭 3,4，平場晴斗 3,4，菊入

崇 2，米山隆之 3,4

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部小児歯科学講座 2
日本大学歯学部歯科理工学講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 4

8．有限要素法を用いた口蓋正中部の歯科矯正用アンカースクリュー周囲骨への応力解析◯米山敏弘 1,2，内田靖紀 2,3，稲葉瑞樹 2,3，納村泰弘 2,3, 新井嘉則 4，本吉日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野

満 2,3

1

日本大学歯学部歯科矯正学講座 2
日本大学歯学部総合歯学研究所臨床研究部門 3
日本大学歯学部歯科放射線学講座 49．歯根肉芽腫中の Epstein-Barr ウイルス感染がサイトカインの発現に及ぼす影響◯宮田泰伎 1,2，田村隆仁 2，今井健一 4,5，武市

収 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科保存学第Ⅱ講座 2
日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3
日本大学歯学部感染症免疫学講座 4
日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 5

10．IL-1R1 シグナル伝達における TIR ドメインの重要性◯笹川剛志 1,2，浅野正岳 3，本吉満2

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部歯科矯正学講座 2
日本大学歯学部病理学講座 3

11．IL-1R1 の検出と核内機能の解明◯森山鮎子 1,2，浅野正岳 2,3
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部病理学講座 2
日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 3

3

12．ヒト歯肉上皮癌細胞株 Ca9-22 細胞が上皮バリア機能に及ぼす AGEs の影響○市川理沙 1,3，田邉奈津子 2,4，富田景子 3,5，小野美紗恵 1,3，間中総一郎 3,5，鈴木直人 2,4，佐藤秀一 3,5
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部生化学講座 2
日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 4
日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 5

特

別

講

演

物理学の歯科医学への応用“歯科用医療機器開発への挑戦”
日本大学歯学部基礎自然科学分野
山岡

一

般

講

大

演

13．咬筋の持続的収縮により生じる咬筋痛に対する ADP の役割○澤田

憧 1,3，人見涼露 2,4，林良憲 2,4，米原啓之 3,5，岩田幸一 2,4，篠田雅路 2,4

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部生理学講座 2
日本大学歯学部口腔外科学第Ⅱ講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 4
日本大学歯学部総合歯学研究所系統生物学・腫瘍学部門 5

14．歯根膜感覚に対するマウスの中枢情報処理機構の検討〇大熊理沙子 1,2，小林秀太朗 4，小林理美 5，本吉

満 2，藤田智史 5，小林真之 3

日本大学大学院歯学研究科歯学專攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部歯科矯正学講座 2
日本大学歯学部薬理学講座 3
日本大学歯学部口腔外科学第Ⅰ講座 4日本大学歯学部基礎自然科学分野（生物学）515．株化ヒト歯根膜細胞の低酸素暴露とその後の酸素化が遺伝子発現に及ぼす影響について〇長谷賢知 1,2，石山未紗 2，星まなみ 2，白川哲夫 2，菊入日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部小児歯科学講座 24

崇2

16．IL-1αにおける receptor-2 の調節機構について○今岡紗耶 1,2，浅野正岳 2,3
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部病理学講座 2
日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 3

17．頰粘膜由来 DNA のメチル化率を指標にした年齢推定〇堤

貴通 1,2，小方彩乃 2,3，岡野雅春 2,3，生木俊輔 4,5，米原啓之 4,5，近藤真啓 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1
日本大学歯学部法医学講座 2
日本大学大学院総合歯学研究所社会歯学研究部門 3
日本大学歯学部口腔外科学第Ⅱ講座 4日本大学大学院総合歯学研究所系統生物学・腫瘍学部門 55

6

第 75 回 日 本 大 学 歯 学 会 総 会 ・ 学 術 大 会
期日 令和 5 年 5 月21日（日）
会場 日本大学歯学部 創設百周年記念講堂《特別講演》《一般講演》

物理学の歯科医学への応用“歯科用医療機器開発への挑戦”

1．ラット下顎角骨欠損モデルにおける BMP-9 添加コ
ラーゲンメンブレンの骨増生に及ぼす効果

山岡大◯近藤宏樹 1,2，髙山忠裕 2,3，渡邉泰斗 1,2，小澤康正 2，

日本大学歯学部基礎自然科学分野

尾崎愛美 4，佐藤秀一 2,3

現代の物理学は，主に力学，熱学，波動，電磁気学，そして日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

量子力学の 5 本柱の学問領域で成り立っている。これら領域は

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 2

歯科医学と深い関わりを持ち，その基礎知識は歯科医療の現場

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3で導入されている歯科用医療機器に広く利用されていることは

日本大学歯学部衛生学講座

周知のとおりである。我々は，この物理学の 5 本柱の中で力目的学，電磁気学，量子力学の 3 つの領域の基礎知識に基づいて，
主に歯科用医療機器の開発および診断法の基礎的研究を行って現在，歯周病による欠損部位への治療法として，歯科インプ

きた。1984 年には電磁気学領域において，電気的根管長測定

ラント治療が応用される。しかしながら，インプラント体埋入法で相対値法を提唱し，その原理による根管長測定器を開発しに十分な骨幅や骨の高さが不足している場合には骨再生誘導て臨床の現場に導入した。その後，根管長測定器の開発時に研（Guided bone regeneration; GBR）法を検討する必要がある。

究対象となったリーマーの電気化学的な知見を発展させて，口GBR 法では，スペースメイキングを目的としてバリアメンブ

腔内のインプラント材と上部構造物との異種金属の接触で生じレンを使用する。その代表例としてコラーゲンメンブレン

るガルバニ疼痛の惹起および腐食・変色の加速などを，定電位（collagen membranes; CMs）が知られている。我々の研究グ法による分極曲線を測定することで定量的に分析できることをループでは以前より CMs に生体為害性のない成長因子を添加

明らかにした。この定量分析では，インプラント材と上部構造する新規再生ユニットを考案し，歯槽骨再生量の更なる改善や物の個々の分極曲線を測定し，それらの分極曲線を重ね合わせ

歯槽骨再生に要する治癒期間短縮の必要性について継続的に研たときの陽分極曲線と陰分極曲線の交点から接触時の電流値を究を行ってきた。そこで本研究では，骨形成関連成長因子であ求めることができ，その電流値から腐食における金属イオンのる骨形成タンパク（bone morphogenetic protein, BMP）-9 を

溶出量の換算が可能であることを示した。また，力学領域におCMs に添加した再生ユニット（CMs/BMP-9）を考案し，骨再生

いては，これまでの術者の視覚による主観的で個人差が生じやに及ぼす影響についてラット下顎角骨欠損モデルを用いて検討

すい歯の動揺度の評価を客観的に判定する歯の動揺度測定法の

した。
材料と方法

開発を行った。この開発では，対象歯に強磁場の磁石を固着させ，その磁石に交番磁界を印加して強制振動させて，レーザー

雄性近交系ラット（F344/jcl）8 週齢の下顎角両側に，内径 4.0変位計を用いて振動状態を非接触で測定する方法を考案した。

mm のトレファインバーで下顎角骨欠損モデルを作製した。欠そして，強制振動する振動数を変化させた周波数応答特性から損のみ（control 群），欠損をコラーゲンメンブレンで被覆（CMs

共振周波数，弾性係数および粘性係数を得て，これによって対群），CMs に BMP-9 を低用量 0.5 µg 添加（BMP-9［L］群），高

象歯を支える周囲の性状を判別する方法を確立した。

用量 2.0 µg 添加（BMP-9［H］群）し被覆した 4 群に分けた。実

量子力学領域では，現在，当該領域で発展を成し遂げた CT

験動物用 3D マイクロ CT（マイクロ CT）
によるエックス線学的

や MRI 等の診断装置の利用法を発展させた 3 次元的な分析法

観察と HE 染色による組織学的評価を術後 6 週において行った。
結果と考察の研究が多く成されている。我々はこの量子力学領域の産物である歯科用 CT において，CT から得られる DICOM データをエ ッ ク ス 線 学 的 観 察 か ら，control 群，CMs 群 と 比 較 し，利用した 3D プリンタによる下顎骨の生成や，その当該下顎骨

CMs/BMP-9 群で骨欠損部に骨様組織の再生を認めた。また，に対する有限要素法による応力解析など，口腔外科学の術前計

BMP-9［L］群と比較した際に BMP-9［H］群の方が欠損部に骨画をサポートする支援システムの開発に取りかかっている。

様組織の再生を認めた。組織学的観察から，control 群，CMs

今回は，現在まで挑戦してきた歯科用医療機器の開発および群と比較し，CMs/BMP-9 群で骨芽細胞，血管新生，破骨細胞診断法の基礎研究について提示し，今後の歯科用医療機器の更が多く観察された。以上のことから，CMs/BMP-9 群は骨再生なる開発につなげていきたいと考えている。

を顕著に促すことが示唆された。

7結論

3．Leptin receptor 陽性細胞に発現する LRP1 の骨形成に与える影響

CMs/BMP-9 群は，control 群および CMs 群と比較して，骨欠損部に骨様組織の再生を認めたことから，新規骨再生ユニットとして応用される可能性が考えられる。

○仮谷仁志 1,2，二宮

日本大学歯学部歯科矯正学講座 2

聡 2,3，近藤宏樹 1,2，小澤康正 2,3，

日本大学歯学部解剖学第Ⅰ講座 3佐藤秀一 2,3

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 4

日本大学大学院歯学研究歯学専攻 応用口腔科学分野
日本大学歯学部歯科保存学教室第Ⅲ講座

満 2,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

2．GBR 法における遅延型吸収性メンブレンの有用性◯渡邉泰斗 1,2，蓮池

禎 3,4，髙橋富久 3,4，本吉日本大学歯学部総合歯学研究所臨床研究部門 5

1

2

目的

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3

歯科矯正治療の歯牙移動に伴い，間葉系幹細胞から分化した

目的

骨芽細胞は移動後の歯槽骨形成に深く関与している。Leptin

歯科インプラント治療は，欠損補綴の選択肢として広く普及

receptor（Lepr）陽性細胞は間葉系幹細胞の特徴をもち，低密度している。しかしながら，歯周病患者ではインプラント埋入部

リポタンパク受容体関連タンパク （1 LRP1）を発現する。しかの骨量が不足し，骨再生誘導法（guided bone regeneration, GBR）

しながら，LRP1 の骨形成に与える影響については不明な点がが必要となる症例が少なくない。GBR では手術回数および裂多い。そこで本研究は，Lepr 陽性細胞の LRP1 発現を欠失さ開リスクの低減から，吸収性メンブレンが用いられることが多せた場合の骨形成に及ぼす影響について検討した。

いが，従来の吸収性メンブレンでは吸収速度が速く，十分に骨材料および方法

再生が得られない懸念がある。そこで本研究では，遅延型吸収Leprcre マウスと LRP1flox マウスを交配して，Lepr 陽性細胞性メンブレンの骨再生に対する影響をラット頭頂骨 GBR モデ（cKO）マウスを得の LRP1 遺伝子を欠損させた Leprcre LRP1flox

ルにて検証した。

た。cKO マウスと野生型（WT）マウスをマイクロ CT で撮影し，材料および方法

頭頂骨と大腿骨の骨微細構造を評価した。同時に，カルセイン

ラット頭頂骨左右両側に骨髄穿通させた実験母地を作製しで骨組織をラベルした後，非脱灰凍結切片を作製して，頭頂骨た。骨移植材，炭酸アパタイト（CO3AP）及び脱タンパク牛骨と大腿骨の石灰化速度について検討した。さらに，頭頂骨からミネラル（DBBM）を填入した筒状のプラスチックを設置し，L-採取した骨芽細胞（Obs）を BMP2 で刺激し，骨芽細胞分化マー

ラクチド -εカプロラクトン共重合体 P（LA/CL）膜もしくはブカーの発現を qPCR によって評価した。

タ 1 型及び 3 型コラーゲン膜を筒状プラスチック天井部に設置結果および考察し，復位縫合した。動物実験用マイクロ CT による観察を 24

cKO マウスは，頭頂骨の厚さと大腿骨の海綿骨量が減少し，週間行った後，組織切片を作製し比較検討した。

WT マウスの約 80％の値となり，骨梁幅や骨梁数も減少傾向

成績および考察を示した。頭頂骨の石灰化速度も cKO マウスは WT マウスと動物実験用マイクロ CT 観察では，各群ともに新生骨様組織比べて低下し，得られた cKO Obs を BMP2 刺激しても，alp，と思われる不透過像が経日的増加を認めたが，群間に統計学的

osterix，osteocalcin の発現レベルは，WT Obs と比べて著し有意差は認められなかった。組織学的評価では各群ともに残留く低かった。以上の結果から，Lepr 陽性細胞の LRP1 欠損は，骨移植材を認め，骨移植材周囲に新生骨様像を認めた。ブタ 1

骨芽細胞への分化能と石灰化能を低下させ，その結果，骨形成型及び 3 型コラーゲン膜群ではメンブレンの残留は確認され量が減少したと考えられた。つまり，LRP1 は，生体におけるず，P（LA/CL）膜群ではメンブレンの残留を認めた。また，組骨形成促進因子の一つであることが明らかになった。

織切片の高さ評価では，ブタ 1 型及び 3 型コラーゲン膜群より

4．亜 鉛ガラス含有グラスアイオノマーセメントの根面齲蝕進行抑制効果

P（LA/CL）
膜群が優位に高い結果を示した。
以上の結果より，GBR 法における遅延型吸収性メンブレン
では，長期間にわたって再生スペースが維持され，垂直方向へ○庄司元音 1,2，黒川弘康 2,3，三枝の骨増生に対し一助となることが示唆された。

宮崎真至

眞 1,2，須田駿一 2，2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科保存学第Ⅰ講座 2日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 3

目的
亜鉛ガラス
（ZnG）を含有したグラスアイオノマーセメント（GIC）は，Zn2+ を徐放することで，根面齲蝕病巣におけるコラーゲン層の分解を抑制する可能性があるものの，詳細は不明

8

である。そこで，ZnG 含有 GIC が，象牙質の脱灰抑制ならび

ジン修復歯には，光照射直後から重合収縮に伴う応力あるいはに再石灰化に及ぼす影響について，超音波透過法を用いて検討

研磨時の外力による負荷が接着界面に生じている。従って，充した。

填直後の初期接着強さの推移について検討する必要がある。そ

材料および方法

こで，剪断接着強さ試験およびアドヒーシブの微小硬さ試験か

ZnG 含有 GIC としてケアダインレストア（CA，ジーシー）を，らユニバーサルアドヒーシブ応用型 2 ステップアドヒーシブのエナメル質に対する初期接着性の経時的変化について検討した。

ZnG 未含有 GIC としてフジⅦ（FU，ジーシー）を用いた。

材料および方法

1．根面齲蝕モデルの製作
ウシ歯歯根部象牙質を 4 × 4 × 1 mm に整形した後，0.5 M

ユニバーサルアドヒーシブ応用型 2 ステップ接着システムのEDTA（ニッポンジーン）に 6 日間浸漬した。これを精製水中でG2-Bond Universal とともに，対照として 2 ステップセルフ

3 日間撹拌洗浄し，デシケーター内に 24 時間保管したものをエッチアドヒーシブの Clearfil Mega Bond 2 および OptiBond

根 面 齲 蝕 モ デ ル と し た。 ま た， 各 GIC の 硬 化 体（4 × 4 × 1

eXTRa とともに，ユニバーサルアドヒーシブの Scotchbondmm）を，CA および FU 試片とした。

Univesal Plus の 4 製品を用いた。ウシ歯冠部エナメル質を被2．根面齲蝕モデルの保管条件

着質面とし，歯面処理条件としては，アドヒーシブ塗布に先

根面齲蝕モデルを以下に示す条件で保管した。

立ってリン酸エッチングを行った条件（ER モード）およびこれ

1）GIC-：根面齲蝕モデルを人工唾液中に 28 日間保管。

を行わなかった条件（SE モード）の 2 条件として，各製造者指

2）CA+：根面齲蝕モデルと CA 試片を人工唾液中に 28 日

示条件に従ってアドヒーシブを塗布，照射を行った。次いで，
レジンペーストを塡塞，照射を行ったものを接着試験用試片と間保管。

した。試片は，37℃精製水中に 5 分，1, 6, 12 および 24 時間保

3）FU+：根面齲蝕モデルと FU 試片を人工唾液中に 28 日間保管。

管した後，万能試験機を用いて剪断接着強さを測定した。ま

3．超音波測定

た，接着試験と同様な保管条件で硬化アドヒーシブのヌープ硬超音波測定装置を用いて，各条件で保管した根面齲蝕モデル

さを測定した。
成績および考察を伝搬する縦波音速を求め，これを歯質の状態変化の指標とした。超音波の測定時期としては，根面齲蝕モデル製作時およびいずれのエッチング条件においても，全ての接着システムで実験開始から 7 日まで 1 日毎，および 14，21 および 28 日後と保管時間の延長に伴ってその接着強さは向上する傾向を示した

した。

一方，その向上傾向はアドヒーシブの種類およびエッチング

成績および考察モードによって異なるものであった。また，アドヒーシブの根面齲蝕モデルの縦波音速は，EDTA 浸漬前と比較して浸ヌープ硬さは保管期間の延長に伴って経時的に向上する傾向を

漬 6 日後で有意に低下した。一方，根面齲蝕モデルを各条件で示した。アドヒーシブの KHN と初期接着強さの間には強い正保管した試片の縦波音速は，いずれの保管条件においても実験の相関が認められた。

期間を通して上昇したが，とくに CA+ 群で著明であり，実験

6．ボ ンディング材の塗布法の違いがユニバーサルア
ドヒーシブ応用型 2 ステップ接着システムの象牙質接着耐久性に及ぼす影響

開始 2 日以降で，他の保管条件と比較して有意に高い値を示した。
硬組織中を伝播する超音波の縦波音速の変化は歯質の石灰化の程度と相関があり，無機成分の増減に伴って変化する。した〇嘉月

駿 1,2，髙見澤俊樹 2,3，柴崎がって，CA は，Zn2+ を徐放することで再石灰化を促進する可陸田明智 2,3，宮崎真至 2,3能性が示唆された。

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻

慶 1,2，高見澤俊樹 2,3，崔慶一 2，石井日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 3

目的

亮 2,3，

ユニバーサルアドヒーシブをプライマーとして用いる 2 ス

黒川弘康 2,3，宮崎真至 2,3
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野

応用口腔科学分野 1

日本大学歯学部歯学科保存学第Ⅰ講座 2

5．ユニバーサルアドヒーシブ応用型２ステップ接着シ
ステムのエナメル質初期接着強さの経時的変化〇岩瀬

翔 2，白𡈽康司 2,3，

テップ接着システムが開発，臨床使用されている。この接着シ

1ステムは，HEMA フリーであるとともに高い疎水性のボンディ

日本大学歯学部歯学科保存学第Ⅰ講座 2

ング材を採用しているところから，接着耐久性に優れた接着シ

日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 3ステムとして期待されている。しかし，この接着システムは臨目的床使用されて日も浅いところから不明な点が多いのが現状であユニバーサルアドヒーシブを，2 ステップ接着システムのプラる。そこで，この接着システムの象牙質接着耐久性についてボイマーとして用いているシステムが臨床応用されている。このンディング材の塗布法の違いが及ぼす影響について温熱負荷後

接着システムは，HEMA フリーのプライマーと高い疎水性をの剪断接着試験から検討した。

示すアドヒーシブから構成されている。一方，コンポジットレ

9材料および方法

測定は算術平均粗さ（Ra），三次元算術平均粗さ（Sa）及び走査

ユニバーサルアドヒーシブ応用型 2 ステップ接着システムの電子顕微鏡（SEM）にて評価を行った。PMMA 系 CAD/CAM

G2-Bond Universal を，対照として 2 ステップセルフエッチア

ブロックは Aadva PMMA DISK
（ジーシー），M-PM-Disk（Merz

ドヒーシブの Clearfil Mega Bond 2 および OptiBond eXTRa

Dental Gmbh），及び Telio CAD（イボクラールビバデント）のを用いた。ウシ歯冠部象牙質を被着質面とした。歯面処理条件

3 種 類 を 使 用 し， 比 較 対 象 と し て は コ ン ポ ジ ッ ト レジン系

としては，プライマー塗布に先立ってリン酸エッチングを行っ

CAD/CAM ブロックの Enamic（VITA Zahnfabrik）
を用いた。

た条件（ER モード）
およびこれを行わなかった条件（SE モード）

成績および考察の 2 条件とした。また，プライマー塗布後のボンディング材塗

APF 塗布後，PMMA 系 CAD/CAM ブロックでは 3 種すべ

布に際しては，ボンディング材塗布後 i）強圧エアブロー，ii）てで光沢度が有意に増加した。APF 塗布前後で Ra 及び Sa とマイルドエアブローおよび iii）ボンディング材の 2 度塗りとし，もに有意差は認められなかった。また，SEM 像においてもボンディング材層の厚みを異なるものとした。次いで，ボンPMMA 系 CAD/CAM ブロックすべてで表面性状の変化は認

ディング材塗布面を 10 秒間照射し，レジンペーストを塡塞，められなかった。一方，Enamic は光沢度及び表面性状ともに照射を行ったものを接着試験用試片とした。試片は，5～55℃

大幅に低下した。このことから，コンポジットレジン系 CAD/のサーマルサイクル（TC）を 10,000 および 30,000 回負荷した。

CAM ブロックの乳歯冠への応用は，光沢度の減少による審美

TC 終了後の試片について万能試験機を用いて各条件の剪断接性の低下に加え，表面性状の低下によるプラークの蓄積を引き

着強さを測定した。なお，試験片製作後，24 時間水中浸漬し起こす可能性が考えられた。したがって，小児患者への審美的たものをベースラインとした。

な 治 療 に お い て，APF 塗 布 な ど の う 蝕 予 防 を 考 慮 す る と，

成績および考察PMMA 系 CAD/CAM ブロックによる歯冠補綴が効果的であいずれのエッチング条件においても全ての接着システムで，ることが示唆された。

ボンディング材へのマイルドエアブローが高い接着強さを示し

8．有 限要素法を用いた口蓋正中部の歯科矯正用アン
カースクリュー周囲骨への応力解析た。また，ユニバーサルアドヒーシブ応用型 2 ステップ接着シ
ステムの G2-Bond Universal は，接着システムに比較して同等以上の象牙質接着耐久性を示した。

○米山敏弘 1,2，内田靖紀 2,3，稲葉瑞樹 2,3，納村泰弘 2,3，
新井嘉則 4，本吉

7．リ ン酸酸性フッ化ナトリウム溶液塗布がアクリル
レジン系 CAD/CAM ブロックに及ぼす影響〇南里圭哉 ，小泉寛恭 ，平場晴斗 ，菊入
1,2

3,4

3,4

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部歯科矯正学講座 2

崇 ，
2

日本大学歯学部総合歯学研究所臨床研究部門 3

米山隆之 3,4

日本大学歯学部歯科放射線学講座 4

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

背景および目的日本大学歯学部小児歯科学講座 2
日本大学歯学部歯科理工学講座

満 2,3

歯科矯正用アンカースクリュー（以下 OAS）は外科的侵襲が3

極めて少なく術式が比較的容易であること，患者の協力度に依日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門 4

存せず治療目標を達成できることから，様々な部位に応用され目的ている。口蓋正中部に前後的に植立した 2 本の OAS に口蓋側

現在，審美的な治療に対する要望が高まっており，小児歯科固定装置（以下装置）を装着し上顎歯列遠心移動を行う際，牽引治療においても例外ではない。ステンレス鋼を用いた乳歯冠は時に OAS に対しどのような応力がかかっているかについて詳

金属色であるため，審美的な理由で敬遠される場合がある。そ細な報告はない。そこで，上顎歯列遠心移動時の OAS への応

こで，審美性に考慮した乳歯冠にも適応可能な歯科材料が求め力，植立位置による差異について有限要素法を用いて検討しられている。乳歯ではう蝕予防や再石灰化などを目的にフッ化た。

物の歯面塗布が実施されるため，乳歯冠に使用する材料にはリ材料および方法

ン酸酸性フッ化物（APF）に対する耐腐食性が必要である。歯3 次元 CAD ソフトウェアを用いて、上顎骨モデル（皮質骨、

冠色の歯冠用材料としてレジン系 CAD/CAM ブロックがある

海綿骨、正中口蓋縫合部），OAS，装置からなるモデルを作成

が，その耐酸性や APF 塗布の影響は不明である。本研究の目した。OAS の位置は，正中口蓋縫合上（以下 A モデル）と縫合

的は，フィラーを含有しないアクリルレジン系 CAD/CAM ブ

から 2 mm 側方に離した部位（以下 B モデル）の 2 種とした。

ロックを用いて，APF 塗布後の表面性状の変化について光沢

これらに水平的に前方方向への牽引力として片側 2N を負荷す

度及び表面粗さの評価を行い，審美的な小児用の歯冠用材料とる設定とした。これらの条件にて OAS 周囲骨へかかる von

しての適性を検討することである。

Mises 応力の解析を行った。

材料および方法

結果および考察APF（東洋製薬化成）塗布後のレジン試料表面への影響を評

後方 OAS の周囲骨では，前方より大きい応力を認めた。B

価するために，光沢度と表面粗さの測定を行った。表面粗さのモデルは A モデルより，特に皮質骨で応力が大きく，OAS 先

10端付近では遠心部の海綿骨に応力を認めた。後方 OAS 周囲骨4．統計分析

の大きい応力は，前後 OAS を連結するクリップ部が装置の構

Real-time PCR 法で得られた BZLF-1 とサイトカイン遺伝子

造上，力が主に後方 OAS へ水平的にかかり，前方 OAS へは発現量についてピアソンの相関係数を用いた統計分析を行い ,垂直的にかかるためと考えられた。また，B モデルでは OAS

有意水準 0.05 にて相関性の検討を行った。

頚部の皮質骨に応力が集中するため，それを支点とし OAS 先

結果および考察端部の骨では遠心部に応力を認めたと考えられた。A モデルで蛍光二重免疫染色法を行った結果，B 細胞による ZEBRA とは OAS の支持が主に皮質骨であるため OAS への応力が広範

IL-1β，IL-6 または RANKL の共発現を認めた。また，Real-囲に現れたと思われた。ただし，A モデルは OAS 全体の周囲

time PCR 法で得られた BZLF-1 と各サイトカイン遺伝子の発骨に力が分散されて負荷されるが，年齢にかかわらず縫合の未現量に相関関係が認められた。以上の結果から，歯根肉芽腫中癒合があるとする報告もあるため，B モデルでの応力の状況をの再活性化 EBV は，IL-1β，IL-6 および RANKL 発現を誘導

参考として縫合を避けた植立を行うことが重要であると思われする可能性が示唆された。

た。

10．IL-1R1 シグナル伝達における TIR ドメインの重要性9．歯根肉芽腫中の Epstein-Barr ウイルス感染がサイ
トカインの発現に及ぼす影響〇宮田泰伎 ，田村隆仁 ，今井健一 ，武市
1,2

2

4,5

収

〇笹川剛志 1,2，浅野正岳 3，本吉

2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

日本大学歯学部歯科矯正学講座 2

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅱ講座 2

日本大学歯学部病理学講座 3

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門

3

目的

日本大学歯学部感染症免疫学講座 4
日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門

満2

IL-1α は， 細 胞 の 壊 死 な ど に 際 し て 細 胞 外 に 放 出 さ れ る

5alarmin であり，細胞膜上に発現する IL-1R1 と結合することで背景および目的

シグナル伝達が行われる。この際，IL-1R1 の細胞内存在する

当講座では，Epstein-Barr ウイルス
（EBV）が歯根肉芽腫組

toll/IL-1R（TIR）ドメインが極めて重要とされている。一方，

織に浸潤した B 細胞に感染していることや根尖性歯周炎関連

IL-1R2 は TIR ドメインを持たず，シグナル伝達することがで細菌である Fusobacterium nucleatum が EBV を再活性化する

きないことから，decoy レセプターと呼ばれている。本研究でことなどを明らかにしてきた。しかし，再活性化した EBV がは，IL-1R1 および 1L-1R2 の細胞内領域を相互に置換すること

根尖性歯周炎の病態にどのように関与するかについては明らか

によって，シグナル伝達がどのように変化するか解析することにされておらず，不明な点が多い。そこで本研究では，再活性を目的とした。

化した EBV が根尖病変の歯槽骨吸収に及ぼす影響を検討する

材料および方法

目的で，骨吸収を誘導する炎症性サイトカイン（IL-1β，およIL-1R1 および IL-1R2 の細胞内領域を相互に置換した mutantび 6）および破骨細胞の分化誘導に関与する RANKL の発現が，の発現ベクターを quick change 法によって構築した。HeLa に再活性化 EBV によって誘導される可能性について検討するこtransfection した後，タンパク質の発現を western blot にて確ととした。

認した。さらに，それぞれの mutant を IL-1R1 を欠失した細材料および方法

胞（CR-R1-4 細胞）に transfection し，IL-1αの存在化または非1．供試試料存在下で 6 時間培養し，培養上清中の IL-8 濃度を ELISA によ

外科的歯内治療が適応とされた患者から根尖病変組織を採取り測定した。

し，速やかに二分割したのち，凍結標本の作製およびパラフィ

成績および考察

ン包埋を行った。また，完全水平埋伏智歯の抜去の際に採取しWestern blot の結果，mutant は wild type に比較して分子た健常歯肉組織をコントロールとして用いた。なお，歯学部倫量に変化がみられ，細胞質内領域が相互に置換されていること

理委員会の承認（倫許 EP21D012）の元 , 試料を採取した。

が明らかとなった。それぞれの mutant の transfectant の IL-1α

2．病理組織学的検索・蛍光抗体染色法

に対する反応性の変化については，現在確認中であり，その成

試料のパラフィン切片を用いてヘマトキシリン・エオジン染果を発表する予定である。

色を行い，歯根肉芽腫と診断した組織を以降の実験に供した。
また，B 細胞による ZEBRA およびサイトカイン発現の局在を検索するため，蛍光二重免疫染色法を行った。
3. 分子生物学的検索
凍結標本から RNA を抽出し，相補的 DNA 作製後，Realtime PCR 法を用いて BZLF-1 およびサイトカインの遺伝子発現を検索した。

1111．IL-1R1 の検出と核内機能の解明

12．ヒト歯肉上皮癌細胞株 Ca9-22 細胞が上皮バリア機能に及ぼす AGEs の影響〇森山鮎子 1,2，浅野正岳 2,3○市川理沙 1,3，田邉奈津子 2,4，富田景子 3,5，小野美紗恵 1,3，

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部病理学講座

間中総一郎 3,5，鈴木直人 2,4，佐藤秀一 3,52

日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部生化学講座 2

目的

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 3細胞の壊死などに際して細胞外に放出される，代表的な

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 4alarmin である IL-1αは細胞膜上に発現する IL-1R1 に結合する

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 5

ことによりシグナル伝達されるが，IL-1R1 の細胞内局在について検討したところ，核に集積していることが解った。また，

目的

IL-1R1 の細胞膜上での検出は極めて困難であることが知られ歯周病は糖尿病の合併症の 1 つで，過去の疫学調査では，糖ている。この事から IL-1R1 は細胞膜でのシグナル伝達だけでまた，制御不能な高血糖状態で生成される終末糖化産物

なく，核内で何らかの機能を担っているのではないかと考え，（Advanced Glycation Endproducts, AGEs）が糖尿病合併症を本研究では IL-1R1 の安定的な検出と核内機能の解明を目的と引き起こす要因の 1 つである可能性が報告されている。さらした。

に，2 型糖尿病患者の歯肉溝浸出液の AGEs 濃度は，非糖尿病

材料・方法

患者と比較して高いことが過去の報告で示されている。しかし実験にはヒト子宮癌由来細胞である HeLa 細胞，HeLa 細胞ながら，糖尿病と糖尿病合併症である歯周病の重症化との関係

における IL-1R1 を CRISP/Cas9 システムによって欠失させたを示すメカニズムは，まだ不明な点が多い。そこで，血中や歯CRISP4 細 胞 を 用 い た。 ま た，wild type と し て IL-1R1 を肉溝滲出液に含まれる AGEs が歯肉上皮のバリア機能を崩し，

pMKIT-neo ベクターに subcloning し，IL-1R1 の N 末端・C 末

歯周組織へ侵襲が加わることが，糖尿病罹患者での歯周病重症端に，HiBiT タグを付与した mutant，IL-1R1 の細胞膜貫通領化を惹起する要因の 1 つではないかと考え，本研究を企図し域を欠失した mutant を quick change site-directed mutagenesis

た。具体的には，歯肉上皮癌由来細胞（Ca9-22 細胞）を AGEs

法により作製した。HeLa 細胞，CRISP4 細胞に上記ベクター

で刺激し，上皮のバリア機能に関与するタイトジャンクションの主要なタンパク質 Claudins（CLDNs）の遺伝子発現に及ぼすを導入し解析をした。

AGEs の影響を調べた。

成績・考察

材料および方法

IL-1R1 の C 末端に HiBiT タグを付与すると，ウェスタンブ
ロットや蛍光免疫染色により検出感度が顕著に向上した。しかCa9-22 細胞を 60 mm dish に 4.0 × 104 cells/cm2 の密度で播し，N 末端への HiBiT タグ付与では検出感度の向上は見られ

種し，AGEs（100 μg/ml）の添加・非添加（control）
下で最大 14なかった。また，N 末端，C 末端に HiBiT タグを付与した IL-

日間培養した。その後，細胞を回収し，サンプルとして用い

1R1 は wild typeIL-1R1 と同様に細胞外から作用した IL-1 に反た。各サンプルの CLDNs の遺伝子発現を real-time PCR 法を応し，IL-8 産生を増強させた。

用いて調べた。
結果

IL-1R1 の細胞膜貫通領域を欠失させた mutant では，IL-1 に培養 3 日目において，AGEs 添加群は，非添加群と比較して，対する反応は消失し，IL-8 産生増強は認められなかった。以上

CLDNs 遺伝子発現の有意な低下が認められた。

より，IL-1R1 の検出には C 末端へのタグの付与が極めて有用

結論であり，IL-1R1 の細胞膜上での発現は IL-1 シグナル伝達にとっAGEs は歯肉上皮細胞の CLDNs の発現を低下させることで ,て必須であることが示唆された。

歯肉上皮のバリア機能に影響する可能性が示唆された。

12

13．咬 筋の持続的収縮により生じる咬筋痛に対するADP の役割○澤田

憧 1,3，人見涼露 2,4，林

岩田幸一 ，篠田雅路
2,4

14．歯根膜感覚に対するマウスの中枢情報処理機構の検討

良憲 2,4，米原啓之 3,5，

〇大熊理沙子 1, 2，小林秀太朗 4，小林理美 5，本吉藤田智史 ，小林真之

2,4

5

満 2，

3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学專攻 口腔構造機能学分野 1

日本大学歯学部生理学講座 2

日本大学歯学部歯科矯正学講座 2

日本大学歯学部口腔外科学第Ⅱ講座

日本大学歯学部薬理学講座 33

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門

日本大学歯学部口腔外科学第Ⅰ講座 44日本大学歯学部総合歯学研究所系統生物学・腫瘍学部門

日本大学歯学部基礎自然科学分野（生物学）5

5

目的

目的

顎関節症（Ⅰ型）は，咀嚼筋痛とそれによる機能障害を主徴候

ラットの口腔感覚の情報処理には，大脳皮質の一次体性感覚とする病変である。咀嚼筋痛は様々な要因で発症すると考えら野（S1）と二次体性感覚野と島皮質の境界領域（S2/IOR）が主にれているが，その詳細なメカニズムは不明な点が多い。われわ

関わることが，膜電位感受性色素を用いた光学計測法で明らか

れは，咬筋への圧刺激により筋組織からアデノシン三リン酸になっている。一方，マウスの歯根膜に反復刺激を行ったカル（ATP）が放出されることを報告している。本研究では，咬筋シウム応答では，S1，S2，IC（島皮質）の 3 か所に分かれて誘過収縮による咬筋痛モデルを作製し，咬筋痛発症に対する咬筋

発されることが最近示された。しかしながら，マウスにおける組織内 ATP の役割を解明することを目的とした。

歯根膜感覚情報処理については不明な点が多く，このような応準備および方法

答の違いが生じる理由には不明な点が多い。そこで本研究で三種混合麻酔薬の腹腔内投与による深麻酔下にて SD ラット

は，マウスの歯根膜感覚の情報を処理する部位を明らかにする（7w, male）の咬筋直上に電極を刺入し，電気刺激（1 hour/day,

目的で，膜電位感受性色素による光学計測法を行い，大脳皮質

7 日間）により咬筋を収縮させた。覚醒下にてデジタルフォンの応答性を検討した。

フライを用いて咬筋に圧刺激を加え，逃避反射閾値を計日的

材料および方法（21 日間）に測定した。電気刺激開始後 7 日目に咬筋を摘出しウレタン（1.7 g/kg, i.p.）による全身麻酔をマウスに行い，上たのち咬筋への圧刺激を行い，咬筋組織から放出される ATP，

下左右の臼歯歯根膜に刺激電極を刺入後，骨窓を形成し，膜電ADP および AMP 量を，高速液体クロマトグラフィーを用い

位感受性色素（RH-1691）を左側の大脳皮質表層に負荷した。歯て 測 定 し た。 ま た，P2Y12 受 容 体 ア ン タ ゴ ニ ス ト ま た は根膜に電気刺激を行い，蛍光輝度の変化を CMOS カメラにて

P2Y13 受容体アンタゴニストを電気刺激により収縮させた咬観察した。ラットにおける過去の報告と同様の刺激となる短時筋へ連日投与し，逃避反射閾値の変化を計日的に測定した。

間刺激（5 V，20 ms 間隔，5 回）と，マウスにおける近年の報結果および考察

告と同様の刺激となる長時間刺激（5 V，2.5 Hz，60 秒間）を行

電気刺激開始後 3 日目から 17 日目まで咬筋への圧刺激に対い，平均加算して得られる応答を抽出した。

する逃避反射閾値が有意に低下した。電気刺激開始後 7 日目，

結果および考察

咬筋への圧刺激により放出される ATP, ADP および AMP 量

1 か所のみの応答（S2/IOR），2 か所の応答（S1 と S2/IOR），が有意に増加した。電気刺激による逃避反射閾値の低下は，

3 か所の応答（S1，S2，IC）の応答パターンが認められた。短時

P2Y12 受容体アンタゴニストまたは P2Y13 受容体アンタゴニ

間刺激では観察側（左側）の刺激では主に S2/IOR と推定されるスト投与により抑制された。

1ヶ所に応答が認められ，反対側（右側）の刺激では主に S1 と以上より，電気刺激による咬筋の持続的収縮により生じる咬S2/IOR の 2 か所と推定される応答が認められた。一方で，長筋痛は，咬筋への圧刺激により放出される ATP の代謝産物で時間刺激を行った時には，S1，S2，IC と推定される 3 か所のある ADP の P2Y12 または P2Y13 を介したシグナルが関与す

応答パターンを示す例が認められた。これらのことから，マウることが示唆された。

スでも臼歯歯根膜からの感覚情報は S2/IOR に投射され，持続するような感覚情報処理に，S2 が関わることが示唆された。

13

15．株化ヒト歯根膜細胞の低酸素暴露とその後の酸素化が遺伝子発現に及ぼす影響について

16．IL-1αにおける receptor-2 の調節機構について○今岡紗耶 1,2，浅野正岳 2,3〇長谷賢知 1,2，石山未紗 2，星まなみ 2，白川哲夫 2，菊入崇

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 12

日本大学歯学部病理学講座 2

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 3

日本大学歯学部小児歯科学講座 2

目的

目的

IL-1R2 は，細胞質内に Toll/IL-1 receptor domain を有しな歯の外傷では受傷歯の歯根膜組織に損傷が生じ，治癒不全をいことからシグナル伝達を惹起できないデコイ受容体として知起こす場合がある．強い外力を受けた歯根膜では，局所的な循

られており，マクロファージなど特定の細胞においてのみ機能

環障害により虚血状態となり，歯根膜細胞が低酸素状態に置かするとされている。本研究では IL-1R2 のデコイ受容体としてれると考えられる．しかし，低酸素暴露に対する歯根膜細胞のの機能が，なぜ細胞種特異的であるのか，その機序の解明を目

遺伝子発現応答について，その後の酸素化がどのように影響す的とする。

るのかは明らかではない．そこで今回，ヒト乳歯由来の株化歯材料および方法

根膜細胞（SH9）を用いて，低酸素暴露時と低酸素暴露後に酸素実験にはヒト子宮癌由来培養細胞である HeLa を用いた。

化を行なった時の，血管新生や細胞増殖に関わる遺伝子の発現IL-1R2 の 様 々 な deletion mutant の 発 現 ベ ク タ ー を 構 築 し，について検討した．

IL-1α発現ベクターと共に transfection を行った。IL-1αの分材料および方法

泌効率は ELISA kit を用いて検索した。

SH9 を使用し，10％ FBS 添加αMEM を培地とし，95% 大成績および考察

気，5%CO2，37℃の条件で培養を行い Control 群とした．低酸

IL-1αをコントロールと共に共発現させた細胞における IL-1α素群は O2 濃度を 1％，CO2 濃度を 5% として 24 時間培養を行なっ

量を 100% としたとき，wild type IL-1R2 と IL-1αを共発現さた．再酸素化群は，前述の低酸素下で 24 時間培養した後に，せた細胞では，IL-1α量は 47.0 ± 0.2% に低下した。一方，細95% 大気，5%CO2 で 24 時間あるいは 48 時間培養を行なった．

胞膜貫通領域および細胞質領域を欠失した mutant では，分泌各条件で培養した SH9 について，CREB，SETD8，angiogenin抑制が見られなかった。以上のことから transmembrane 領域（ANG），VEGF の mRNA 発現量を RT-qPCR 法で測定した．

が IL-1αの細胞外分泌抑制に大きな役割を持つことが示唆され結果および考察た。

CREB，SETD8 の mRNA 発現量は，Control 群に比べ低酸

IL-1R2 の HeLa における強制発現は，IL-1R1 によるシグナ

素暴露群で有意に減少し，24 時間の再酸素化後は通常環境でル伝達を阻害しない。また，IL-1R2 の細胞膜上での発現は極の発現レベルまで回復した．CREB と SETD8 は細胞増殖に関めて少量であることから，本研究の結果は，IL-1R2 がこれま与しており，O2 濃度 1% の低酸素環境ではこれらの因子の減でに明らかになっていない細胞内での未知の機能を備えている

少 が SH9 の 増 殖 能 を 低 下 さ せ る こ と が 考 え ら れ た．ANG，可能性を示唆するものであった。

VEGF の mRNA 発現量は共に低酸素曝露で Control 群に比べ17．頰粘膜由来 DNA のメチル化率を指標にした年齢
推定

有意に増加したが，ANG は 24 時間の再酸素化後に一旦減少したのち 48 時間後に通常の発現レベルまで回復した．一方，
VEGF の mRNA の発現量は，24 時間の再酸素化により通常の〇堤

貴通 1,2，小方彩乃 2,3，岡野雅春 2,3，生木俊輔 4,5，

レ ベ ル ま で 戻 っ た が，48 時 間 後 に は さ ら に 増 加 を 認 め た．

米原啓之 4,5，近藤真啓 2,3

ANG と VEGF はともに血管新生に関わる遺伝子であり，低酸

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

素環境で発現量が増加することが知られているが，再酸素化後

日本大学歯学部法医学講座 2の変動パターンは異なっていた．

日本大学大学院総合歯学研究所社会歯学研究部門 3

今後は，低酸素暴露と再酸素化がどのような機序で細胞増殖

日本大学歯学部口腔外科学第Ⅱ講座 4

あるいは血管新生に影響を及ぼすかについてタンパク発現レベ

日本大学大学院総合歯学研究所系統生物学・腫瘍学部門 5ルならびに細胞の増殖速度等も含めて検討する予定である．
目的

現場に残された検体から犯人の年齢を推定することは，容疑者が特定されていない犯罪捜査において重要である。最近我々は，リアルタイムメチル化特異的 PCR（RT-MSP）を用い，抜去歯に由来する 2 遺伝子（ELOVL2，EDARADD）のメチル化率を指標に年齢推定式を算出した。DNA のメチル化状態は，臓器特異性があると報告されている。そこで本研究では，頰粘膜

14

から DNA を単離し，2 遺伝子のメチル化率を半定量すると同時に，年齢推定のための回帰式を算出することを目的とした。
試料および方法
本学歯科病院口腔外科を受診した患者 14 名（22〜54 歳）の頰
粘膜を試料として用いた。通法に従いゲノム DNA を抽出した
後，バイサルファイト処理を行い，DNA のメチル化状態を塩基情報に変換した。次に，標的遺伝子に対するメチル化認識
primer，およびヒト ALU 配列に対する primer を用いて RTMSP を行い，メチル化率（PMR）を算出した。そして，PMRを説明変数，暦年齢を目的変数とした回帰式を算出した。
結果および考察14 名 の 頰 粘 膜 由 来 ELOVL2 の PMR は 17.8〜77.8 で あ り，
年齢と強い正の相関を示した（r2 ＝ 0.70）。一方，EDRADD のPMR は 37.1〜79.3 で，年齢との相関は認められなかった
（r2 ＝
0.01）
。そこで，今回得られた ELOVL2 の PMR を用いて年齢推定のための回帰式 y ＝ 0.049x ＋ 14.259 を算出した。次に，内部試料を用いて推定年齢を算出した結果，推定年齢と実年齢との差の絶対値は 0.11〜11.27，その平均値は 4.33 であった。
以上の結果から，頰粘膜由来の DNA を試料とした場合，抜去歯の場合と異なり，ELOVL2 のメチル化状態のみを指標としても比較的精度の高い年齢推定が可能であることが示された。今後は外部試料を用い，年齢推定式の精度を検証してい
く。

15

MEMO

日本大学歯学会〒101-8310 東京都千代田区神田駿河台 1-8-13
電話 03（3219）8060

日本大学歯学部内