ISSN 1347－6920

MMRC
ANNUAL REPORT OF MEDICAL MYCOLOGYRESEARCH CENTER, CHIBA UNIVERSITY 2022
千葉大学 真菌医学研究センター

26

令和4年

報告

Content

目次Preface for FY 2022 Annual Report
はじめに

Organization
機構図

Project for Immune Response in Infections Diseases

感染免疫分野 米山教授 感染応答プロジェクト

Project for Cytokine Research

感染免疫分野 西城准教授 サイトカインプロジェクト

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis
感染免疫分野 後藤准教授 微生物・免疫制御プロジェクト

Project for Control of Infectious Diseases

感染免疫分野 高屋准教授 感染症制御開発プロジェクト

Candida glabrata Phenome Project

病原機能分野 知花准教授 カンジダ・グラブラータフェノームプロジェクト

Project of Clinical Investigation

臨床感染症分野 渡邉准教授 臨床感染症プロジェクト

Project for Infection Control and Prevention

感染症制御分野 石和田教授 感染症制御プロジェクト

Project for Systems Biology of Microorganisms

微生物資源分野 高橋准教授 微生物創生プロジェクト

Management of Unit of Microbiological Resources

4
6
9
11
13
16
21
26

微生物資源分野 矢口室長 バイオリソース管理室

28

Project for RNA Regulation
RNA 制御治療学共同研究部門 原口特任准教授 RNA 制御プロジェクト

34

Merged project of respiratory pathophysiology and pathobiology

呼吸器生体制御学研究部門 巽特任教授・呼吸器生体制御学共同研究部門
寺田特任教授 呼吸器生体制御解析プロジェクト

Project for Evolution and Reproduction

進化生殖学寄附研究部門 生水特任教授 進化生殖プロジェクト

Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology
National BioResource Project“Pathogenic Microorganisms”

文部科学省 ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原微生物」

36
42

45

International Collaborative Research Program for Tackling the NTDs（Neglected
Tropical Diseases）Challenges in African Countries“Research on the diagnostics of early or latent eumycetoma: Search for new
biomarkers, POC diagnostics, and development of a clinical epidemiology platform”
アフリカにおける顧みられない熱帯病（NTDs）対策のための国際共同研究プログラム「早期・潜在性真菌腫診断に関する研究：バイオマーカーの探索・
POC 診断と臨床疫学プラットフォームの開発」

47

The project for prophylaxis, diagnosis, and treatment for aspergillosis and the othermycoses in aged and neonate patients
高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発
プロジェクト49

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for Sustainable
Development（SATREPS）“The establishment of a research and reference collaborative system for the
diagnoses of fungal infections including drug-resistant ones in Brazil and Japan”
AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「ブラジルと日本の薬剤耐性を含む真菌感染症診断に関する研究とリファレンス協力体制強化プロジェクト」

51

Generating research infrastructure and novel technologies for anti-infective drug andvaccine discovery, AMED-CREST“Study of the molecular mechanism of persistent infection and identifying novel
privileged molecular structures for the next-generation antibacterial drug discovery”
日本医療研究開発機構革新的先端研究開発支援事業 感染症創薬に向けた研究基盤の構築と新規モダリティ等の技術基盤の創出：｢ 難治性感染症制御に資する細菌持続感染機構解明と次世代型抗感染症化合物の創出 ｣53

Japan Agency for Medical Research and Development（AMED）
Japan Initiative for World-leading Vaccine Research and Development Centers
Chiba University“Synergy Institute for Futuristic Mucosal Vaccine Research andDevelopment”
AMED ワクチン開発のための世界トップレベル研究開発拠点の形成事業

ワクチン開発のための世界トップレベル研究開発拠点群 千葉シナジーキャンパス（千葉大学 未来粘膜ワクチン研究開発シナジー拠点）

Research Institute of Disaster Medicine
災害治療学研究所

The training course of pathogenic fungi

真菌医学研究センター病原真菌講習会

miRaX Therapeutics K.K.

54
55
56

ミラックスセラピューティクス株式会社

57

2021 Fiscal Year Cooperative Research Program Report
令和３年度 共同利用・共同研究報告58

The 9th Global Network Forum on Infection and Immunity
感染症研究グローバルネットワークフォーラム2022

77

2022 Scientific Meetings & Seminars
2022年講演会

79Preface for FY 2022 Annual Report
As the Japanese population rapidly ages, the risks of serious opportunistic fungal infections are
increasing, particularly among patients with chronic obstructive pulmonary disease（COPD）,
hematopoietic malignancies, and other immunocompromising chronic conditions. Moreover,growing attention is being paid worldwide to the risks of imported fungal infections arising frominternational trade and globalization, as well as to the life-threatening risks of pulmonary
aspergillosis and mucormycosis in patients with COVID-19 infection.
In FY 2021 , the Medical Mycology Research Center（ MMRC ）was granted extended
certification as the National Joint Usage/Research Center for Fungal Infection by the Minister of
Education, Culture, Sports, Science and Technology（MEXT）. To support research, education,and clinical activities in the academic, public, and private sectors, the MMRC actively promotes
joint projects and the use of shared facilities. As part of the MEXT’s National Bioresource Project,
the MMRC collects, stores, provides, and genetically analyzes pathogenic fungi andactinomycetes. In tandem with these activities, research groups at the MMRC pursue independent
basic, applied, and clinical research projects. The MMRC has been supporting clinical practice at
two outpatient clinics of Chiba University Hospital that specialize in invasive fungal infections（onestarted in 2014 and the other in 2016）.
The MMRC established the first biosafety level 3 laboratory at Chiba University in 2015, and agerm-free animal facility in 2018. To facilitate research on pathogens, infection, and immunity,
the MMRC conducts joint research with other organizations at Chiba University, including the
Graduate School of Medicine, University Hospital, Graduate School of Pharmaceutical Sciences,and Graduate School of Science. The results of these projects will inform clinical practice.
Several MMRC faculty members serve as adjunct faculty staff of the Research Institute ofDisaster Medicine established in 2021. The MMRC partners with this institution to accelerate
research and treatment related to emerging pandemics and post-disaster infections. The MMRC
continued joint academic activities with overseas centers in FY 2022, leveraging its international
cooperative network.
The MMRC will continue to be a pioneer in antifungal medicine and infection prevention
research, emphasizing the following areas of activity:（i）initiatives as a joint usage/research centerand bioresource center, （ii）fundamental research on infections and immunity, （iii）clinicalresearch on infection prevention and control, and（iv）support for junior researchers.
January, 2023

Chihiro Sasakawa, PhD,

Director of the MMRC

は じ め に我が国はすでに超高齢社会にあり , 慢性閉塞性肺疾患（COPD）等の呼吸器病や造血器
悪性腫瘍 , あるいは先進医療や慢性疾患に起因する日和見感染症に伴う真菌感染症が益々
大きな脅威となっています . 一方で経済のグローバル化に伴う輸入真菌症に加え , コロナ
禍においては COVID-19感染症患者に合併する肺アスペルギルス症や致死性のムコール症も国際的な新たな脅威となっています .
このような背景で , 本センターは病原真菌を中心とする感染症・免疫・病原微生物・情報生命科学を含む領域の共同利用・共同研究拠点として , 2021年度に文部科学大臣より再認定を受け , 大学 , 国公立研究・医療機関 , 企業等と緊密に連携した共同利用・共同研
究 , 教育・医療活動を積極的に推進しています . また本センターでは , 文部科学省のナ
ショナルバイオリソースプロジェクト（NBRP）として , 病原真菌や放線菌の収集・保存・
ゲノム情報解析・分与等の活動を行なっています . 一方でこれら事業と平行して , 独立研
究グループリーダーによる基盤研究・開発研究・臨床研究を推進し , さらに2014年および2016年以来 , 臨床系の２分野が付属病院において感染症に関連する専門外来を開設しました . また2015年には本学初の BSL-3施設を整備し , 2018年には無菌動物施設も立ち上げました . 一方 , 学内においても , 千葉大学の感染症・免疫・病原体の研究と医療活動の更なる活性化を図るため , 医学研究院 , 付属病院 , 薬学研究院 , 理学研究院等と活発に共同研究を展開しています . さらに2021年に設立された「災害治療学研究所」にも参画し , 大規
模災害やコロナパンデミックに随伴する感染症の研究と治療に向けた取り組みも始めています . 本センターでは , これまでの国際共同研究で築かれた国際連携の枠組みを積極的に活用して , 2022年度も海外の真菌研究拠点と国際共同研究を活発に行いました .
以上のように , 本センターは ,「共同利用・共同研究拠点及びバイオリソース中核拠点」,「感染症・免疫基盤研究」, 「感染症臨床研究」, 「若手育成」の４つを柱として , 今後も真菌医学および感染症研究の発展に先導的な役割を果たす所存でございます .
2023年 1 月
千葉大学真菌医学研究センター長

笹

川

千

尋

機構図

Organization
センター長
Director

真菌症研究部門
教員会議
Faculty
Meeting
運営協議会
ScientificCouncil

Department of Mycosis Research

感染免疫分野Division of Molecular Immunology

感染応答プロジェクト
Project for Immune Response in Infectious Diseases

サイトカインプロジェクト
Project for Cytokine Research
微生物・免疫制御プロジェクト

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis

感染症制御開発プロジェクト
Project for Control of Infectious Diseases
病原機能分野Division of Molecular Biology

カンジダフェノームプロジェクト
Candida Phenome Project

臨床感染症分野
Division of Clinical Research

臨床感染症プロジェクト
Project to Link Basic Sciences and Clinical Researches
感染症制御分野

Division of Infection Control and Prevention

感染症制御プロジェクト
Project to Link Infection Control and Prevention

微生物資源分野
Division of Bio-resources

微生物創生プロジェクト
Project for Systems Biology of Microorganisms
バイオリソース管理室

Management Unit of Microbiological Resources

RNA制御治療学共同研究部門
Joint Division of RNA Therapy

RNA制御プロジェクト
Project for RNA Regulation
呼吸器生体制御学寄附研究部門
Division of Respiratory Molecular Medicine
呼吸器生体制御学共同研究部門

Division of Respiratory Molecular Medicine；Collaborative Research

呼吸器生体制御解析プロジェクト

Merged Project of Respiratory Pathophysiology and Pathobiology

Project for Immune Response in Infections Diseases
米山ＰＩ（感染応答）プロジェクト
Summary（研究概要）

The innate immune system plays an essential role in self-defense against infection of various pathogens.
We focus on antiviral innate immunity, especially molecular machinery for detecting viral RNA by retinoic
acid-inducible gene I（RIG-I）-like receptors（RLRs）and subsequent immune responses. The results
obtained from the studies will help us to establish a novel therapeutic or preventive strategy against RNA
virus-induced infectious diseases.
感染に対する生体防御は , 自然免疫と獲得免疫によって協調して行われている . 本プロジェクトでは , ウイルス感染に応答した自然免疫誘導機構に注目し , RNA センサー RIG-I-like 受容体（RLR）によるウイルス由来非自己 RNA 検知の分子機構の解明と , それによって引き起こされる免疫応答シグナ
ルの生理機能を解析することにより , ウイルス感染症に対する新たな治療戦略につながる知見を得ることを目指す .
Professor

Assistant Professor

Research Technician

Research Promotion Technician
Visiting Researcher

Mitsutoshi Yoneyama
Koji Onomoto
Yuna Aoki
Miyuki Takizawa
Yoshihiko Muromaki（2022.10.1～）

1. Inactivation Effects of Iodine on SARS-CoV-2
1

2, 5

3

and Kaiho T

4, 5

1

2

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

助
技

教
術

職

員

技 術 補 佐 員
外部機関共同研究員

米山 光俊
尾野本浩司
青木 友那
滝沢みゆき
室巻 良彦

have an inactivating effect on severe acute respiratory

syndrome coronavirus-2（SARS-CoV-2）. However, there
are still many unclear points concerning their inactivation

abilities since iodine exists in various forms. In this study, we
examine the inactivating eﬀect on SARS-CoV-2 of diﬀerent

Research Center, Chiba University, 1-8-1, Inohana, Chuo-

forms of iodine, including free iodine, iodide ion, andIse Chemicals Corporation, 1-3-1, Kyobashi, Chuo-ku,

which are the main constituents of iodine-based disinfectants.

ku, Chiba 260-8673, JapanTokyo 104-0031, Japan

3

Nippo Chemicals Co. , LTD. , 4 - 8 - 15 , Nihonbashi-

4

Godo Shigen Co. , LTD. , 2-12-6, Kyobashi, Chuo-ku,

5

授

Iodine-based disinfectants have recently been reported to

Onomoto K , Yoneyama M , Asakura S , Matsumoto S ,1

教

Honchou, Chuo-Ku, Tokyo 103-0023, JapanTokyo 104-0031, Japan

Chiba Iodine Resource Innovation Center, Chiba

polyiodide ion, such as triiodide ion and povidone-iodine,

The results indicate that although iodide ion is not involved in

the inactivation of SARS-CoV- 2 , iodine complex andpolyiodide significantly contribute to the inactivation, in
addition to free iodine, which was known as the main
component of disinfection activity.

University, 1-33, Yayoi-cho, Inage-ku, Chiba 263-8522,

Japan

4

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

3. Identification of natural compounds targeting SARS-

CoV-2.

Aoki Y, Onomoto K, and Yoneyama M
Division of Molecular Immunology, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba, 260-8673, Japan.

More than 300 middle-molecular compounds prepared by

2. Functional analysis of host proteins that are responsiblefor induction of anti-viral innate immunity.

Onomoto K, Aoki Y, Ban M, Sakai M, Suzuki Y, Luo J,

the Faculty of Pharmaceutical Sciences, Chiba University,

were screened for antiviral activity against SARS-CoV-2 byexamining the eﬀects on virus-induced cytotoxic activity. Four

middle-molecular compounds showed significant antiviral
activity against SARS-CoV-2 infection. Among them, twoand Yoneyama M

were implicated in antiviral activity by inhibiting the activity

Division of Molecular Immunology, Medical Mycologythat four plant-derived middle-molecular compounds are

Research Center, Chiba University, Chiba, 260-8673, Japan.

In the previous studies, we revealed that viral infection

induces RLRs to accumulate in cytoplasmic granular-likestructure, antiviral stress granule（avSG）, and avSG plays acritical role as a platform for initiating RIG-I-mediated type I
interferon-inducing signaling. We are now analyzing several

RNA-binding proteins and avSG-localizing proteins that playa role in regulating RIG-I-mediated signal activation. In
addition, we are analyzing molecular interaction between hostfactors and viral proteins in response to SARS-CoV- 2
infection using the biosafety level 3（BSL 3）facility ofMMRC.

of papain-like proteases of SARS-Cov-2. The results indicate
candidates for developing new antiviral agents to treat
COVID-19.

Publications１）Kojima I, Onomoto K, Zuo WJ, Ozawa M, Okuya K,

Naitou K, Izumi F, Okajima M, Fujiwara T, Ito N,

Yoneyama M, Yamada K, Nishizono A, Sugiyama M,

Fujita T, Masatani T. Amino acid at position 95 inmatrix protein of rabies virus is involved in antiviral stressgranule formation in infected cells. J Virol. 96 :e0081022, 2022.

２）Onomoto K, Yoneyama M, Asakura S, Matsumoto S,

Kaiho T. Inactivation eﬀects of iodine on SARS-CoV-2.
J Antibacterial Antifungal Agents. 50: 97-103, 2022.

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

5

Project for Cytokine Research

西城ＰＩ（サイトカイン）プロジェクト
Summary（研究概要）

Cytokines play a central role in maintenance of homeostasis. Because, a disease is not caused by only one
problem of an organ, but caused by a systemic disorder, which is regulated by cytokines, it is important tostudy their functions. We aim to find new therapeutic targets for inflammatory diseases and infectious
diseases by investigating the roles of cytokines in pathogenesis.
生体は , 多種多様な細胞や組織が互いに時空的に作用することにより恒常性が維持される一つシス
テムであり , その維持においてサイトカインは中心的な役割を担っている . 多くの疾病は単に一つの臓器 , 組織の異常ではなく , 免疫系を始めとする種々のシステムの異常であることから , これらを統合するサイトカインの役割を知ることは非常に重要である . 本プロジェクトでは , 感染性疾患や炎症性疾患の病態形成におけるサイトカインの役割を解明し , 最終的に新たな治療薬の標的分子を見出すことを目的とする .
Associate Professor

Research Assistant Professor

Research Promotion Technician

Shinobu Saijo
Fabio Seiti Yamada Yoshikawa
Junko Minakuchi

1. Dectin- 1 and Dectin- 2 in innate immunity against

fungal infection.

准
特

教
任

授
助

教

技 術 補 佐 員

西城忍
ファビオ セイチ ヤマダ ヨシカワ
水口 潤子

resulting in the activation of various genes including those

encoding pro-inflammatory cytokines. Both β-glucans andα-mannans are major cell wall components of fungi including

Saijo S and Yoshikawa YFS

Candida albicans（C. albicans）and Pneumocystis carinii（P.

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

in protection against P. carinii by inducing reactive oxygen

Research Center, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

Dectin-1 and Dectin-2 are type II transmembrane proteinscarinii）. Recently, it was reported that Dectin-1 is important

species, whereas both Dectin-1 and Dectin-2 play importantroles in defense against C. albicans by preferentially inducing

Th17 cell diﬀerentiation. In this review, we briefly revisit theof the C-type lectin family with single carbohydrate

structures, ligands, signal transduction and functional roles ofThey are expressed mainly in dendritic cells and macrophages.

infection.

signals through its immunoreceptor tyrosine-based activation

2. Epidermal clearance of C. albicans is mediated by IL-17

recognition domains（CRDs）in their extracellular region.

Dectin-1 recognizes β-glucans with its CRD and transduces

motif（ITAM ）-like motif in the cytoplasmic domain,

whereas Dectin-2 recognizes α-mannans and transduces its

Dectin- 1 and Dectin- 2 in host defense against fungal

but independent of fungal innate immune receptors

signal through association with the ITAM-containing Fc

Iwasawa MT1, Miyachi H1, Wakabayashi S1, Sugihira T2,

is recruited to the ITAM and activates the caspase recruitment

Hara H4, Iwakura Y3, 5, 6, Matsumoto M7, 8, Inohara N7, 8,

receptor γ chain. Upon ligand binding, spleen tyrosine kinasedomain family member 9（CARD9）–nuclear factor-κB axis,

6

千葉大学

Aoyama R 2, Nakagawa S 1, Katayama Y 1, Yoneyama M 3,
Koguchi-Yoshioka H2, Fujimoto M2, 9, Gabriel Núñez G7, 8,

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Matsue H1, Nakamura Y1, 2, 9 and Saijo S3

epidermal colonization model. We found that group 3 innate

Department of Dermatology, Graduate School of Medicine,producers in the epicutaneous candidiasis model. Analyses of1

2

Chiba University, Chiba-shi, Chiba 260-8670, Japanproduction of IL-17A and IL-17F by ILC3s was suﬃcient for

Suita-shi, Osaka 565-0871, Japanneutrophils impaired C. albicans clearance in the epidermal

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba-shi, Chiba 260-

48673, Japan

colonization model. Taken together, these findings indicate acritical and redundant function of IL- 17 A and IL- 17 F

produced by ILC3s in host defense against C. albicans in theepidermis. The results also suggest that epidermal C. albicans

shi, Kagoshima 890-8544, Japanthese receptors act redundantly in fungal recognition andCenter for Experimental Medicine and Systems Biology,

The Institute of Medical Science, The University of Tokyo,

6

C. albicans clearance. Finally, we found that depletion of

Department of Immunology, Graduate School of Medical

and Dental Sciences, Kagoshima University, Kagoshima-5

Rag 2 －/－ mice and Rag 2 －/－Il 2 rg －/－ mice revealed that

Department of Dermatolog y, Course of Integrated
Medicine, Graduate School of Medicine, Osaka University,

3

lymphoid cells（ILC3s）and γδT cells were the major IL-17

Minato-ku, Tokyo 108-8639, Japan

Center for Animal Disease Models, Research Institute forclearance is independent of innate immune receptors or thatclearance.

3. Dectin- 1 /IL- 15 pathway affords protection against

extrapulmonary Aspergillus fumigatus infection by

Biomedical Sciences, Tokyo University of Science, Noda-

7

8

9

shi, Chiba 278-0022, Japan

Department of Pathology, University of Michigan Medical
School, Ann Arbor, MI 48109, USA

Comprehensive Cancer Center, University of Michigan

regulating Natural Killer cell survival.

Yoshikawa YFS 1, Wakatsuki M 1, Yoshida K 1, Yabe R 1,
Torigoe S2, Yamasaki S1, 2, 3, 4, Barber GN5, Saijo S1

Medical School, Ann Arbor, MI 48109, USA

1

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

Center, Osaka University, Suita-shi, Osaka 565 - 0871 ,2

Department of Molecular Immunology, Research InstituteIL-17 plays important roles in host defense against Candida

3

Cutaneous Immunology, Immunology Frontier ResearchJapan

for Microbial Diseases, Osaka University, Suita, Osaka,

albicans at barrier surfaces and during invasive infection.

However, the role of IL-17 in host defense after colonization

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Japan

Laboratory of Molecular Immunology, Immunology
Frontier Research Center, Osaka University, Suita, Osaka,Japanof the epidermis, a main site of C. albicans infection, remains

4

Division of Molecular Design, Medical Institute ofcandidiasis without skin abrasion, we found that skin5

Department of Cell Biology, University of Miami, Miller

poorly understood. Using a murine model of epicutaneous

inflammation triggered by epidermal C. albicans colonization

was self-limiting with fungal clearance completed by day 7

after inoculation in wild-type mice or animals deficient in IL-

Bioregulation, Kyushu University, Fukuoka, Japan
School of Medicine, Miami, Florida, USA

Aspergillus fumigatus（A. fumigatus）is a ubiquitous, yet

1 7 A or I L- 1 7 F. In contr ast, marked neutrophilicpotentially pathogenic, mold. The immune system employs

were observed in mice lacking both IL-17A and IL-17F.

pathogens, but the immunological networks that afford

Dectin- 2 , CARD 9（caspase-recruitment domain family,of dectin-1 in anti-A. fumigatus response in an experimental

inflammation in the epidermis and impaired fungal clearance
Clearance of C. albicans was independent of Dectin- 1 ,member 9）, TLR2（Toll-like receptor 2）and MyD88 in the

千葉大学

innate receptors, such as dectin- 1 , to recognize fungal

protection are poorly explored. Here, we investigated the rolemodel of acute invasive aspergillosis. Mice lacking dectin-1

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

7

presented enhanced signs of inflammation, with increased

Aoyama R, Nakagawa S, Katayama Y, Yoneyama M,

infiltration, quickly succumbing to the infection. Curiously,

Koguchi-Yoshioka H, Fujimoto M, Núñez G, Matsue

production of inflammatory cytokines and neutrophil
resistance did not require T/B lymphocytes or IL-17. Instead,the main eﬀector function of dectin-1 was the preservation of

the NK cell population in the kidneys by the provision of thecytokine IL-15. While the depletion of NK cells impaired

Hara H, Iwakura Y, Matsumoto M, Inohara N,

H, Nakamura Y, Saijo S. Epidermal clearance ofCandida albicans is mediated by IL-17 but independentof fungal innate immune receptors. Int Immunol.

34（8）: 409-420. 2022.

host defense in wild-type mice, IL-15 administration restored

２）Makusheva Y, Chung SH, Akitsu A, Maeda N,

uncover a new effector mechanism for dectin- 1 in anti-

Tang C, Iwakura Y. The C-type lectin receptor Clec1A

antifungal responses in dectin-1 deficient mice. Our results

Aspergillus defense, adding an alternative approach tounderstand the pathophysiology of this infection.
Publications

千葉大学

plays an impor tant role in the development ofexperimental autoimmune encephalomyelitis byenhancing antigen presenting ability of dendritic cells

１）Iwasawa MT, Miyachi H, Wakabayashi S, Sugihira T,

8

Maruhashi T, Ye XQ, Kaifu T, Saijo S, Sun H, Han W,

and inducing inflammatory cytokine IL-17. Exp Anim.

71（3）: 288-304. 2022.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis
後藤ＰＩ（微生物・免疫制御）プロジェクト
Summary（研究概要）

The gastrointestinal tract is a unique organ that is constitutively exposed by various antigens, including
dietary materials, commensal bacteria, and fungi. In order to exclude pathogens and create a symbiotic
environment for non-pathogenic microorganisms, intestinal epithelial cells（ECs）and immune cells
contribute to establishing the homeostasis of the intestinal microenvironment. Disruption of a symbiotic
relationship between host and commensals predispose to the development of pathogenic infections,inflammatory bowel diseases, and systemic disorders such as obesity and cancers. Therefore, it is importantto understand the mechanism of a symbiotic and homeostatic systems regulated by intestinal ECs andimmune cells. In this project, we aim to uncover the symbiotic system with commensal micro- andmycobiota. We further investigate the role of commensal microbes in the establishment of intestinal
homeostasis and develop novel therapeutic approaches for the treatment of diseases such as bacterial andfungal infections caused by disruption of intestinal homeostasis.
腸管は食餌性抗原や腸内細菌・真菌など多種多様な抗原に常に曝されている特殊な組織である . こ
れら無数の抗原に対処するため , 腸管では免疫細胞と上皮細胞が相互に作用しながら病原性微生物を排除し , 非病原性微生物と共存する基盤を形成することで腸管の恒常性維持に寄与している . この腸内微生物との共生関係の破綻は , 炎症性腸疾患に代表される腸疾患のみならず , 肥満や糖尿病などの全身性の疾患発症の素因となることから , 腸内微生物との共生システムや腸管免疫細胞と上皮細胞による腸管恒常性制御システムを理解することは重要な命題である . 本プロジェクトでは , 宿主と腸内細菌や腸内真菌との共生機構を明らかにし , 腸内微生物による腸管恒常性維持システムの解明とその破綻によって引き起こされる様々な疾患 , 特に細菌や真菌感染症の治療法の開発を目的としている .
Associate Professor
Graduate student
Graduate student
Graduate student

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

准Yoshiyuki Goto
Akira Haku
Qiongyuan Zhang
Yuni Sun
Sawako Domae
Kaori Nishiyabu

1. Commensal bacteria and host immune system regulate

fungal colonization in the gut

教

授

大

学

院

生

大

学

院

生

大

学

院

生

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

後藤
白
張
孫
堂前
西藪

義幸
旭
瓊元
宇霓
清香
香織

Tremendous numbers of microorganisms colonize in thegut of their host. Several specific fungi, including Saccharomyces
cerevisiae and Candida albicans, have been reported to residein the human gut. Although commensal bacteria modulate

Akira Haku, Yoshiyuki Goto
Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andPathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical
Mycology Research Center, Chiba University

千葉大学

gut homeostasis and dysbiosis triggers various kinds of hostdiseases, including infections and inflammatory bowel

diseases, it is unclear how these commensal fungi colonize inthe gut and regulate host physiology. In addition, C. albicans

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

9

are also known to exer t pathogenic eff ects in theboth in mice and humans and is predisposed to thecompartments, called invasive candidiasis, one of the serious

disease. Despite the importance of intestinal and systemic

immunocompromised host and expand to the systemic

infectious diseases in the world. Importantly, colonization of
C. albicans in the gut trigger invasive candidiasis. Therefore,

it is important to identify how C. albicans colonize in the gut.

development of inflammatory diseases such as Crohn ’ shomeostasis, the molecular and cellular mechanisms of theinduction of epithelial Fut2 and subsequent α1, 2-fucosylation

remain unknown. We found that group 3 innate lymphoid

In this study, we aim to uncover the mechanism by whichcells（ILC3）are critical inducers of intestinal epithelial Fut2

development of host diseases. We identify that commensal

of interleukin 22 and lymphotoxin from ILC3 in a commensal

commensal fungi colonize in the gut and affect thebacteria prevent the colonization of C. albicans in theexpression and fucosylation that is mediated by the production

bacteria–dependent and -independent manner, respectively

gastrointestinal tract of mice. Furthermore, C. albicans（Fig. 2）. In addition, IL- 10 -producing CD 4 ＋ T cells

microbiota transplantation, indicating the critical role of（Fig. 2）. These data unveil a novel function of innate andfungi（Fig. 1）. We examine the more detailed mechanism byenvironment between commensal bacteria and the hostcolonizing in the gastrointestinal tracts was excluded by fecal

commensal bacteria in preventing infection by pathogenic

which commensal bacteria and gut immune system regulate
fungal colonization and develop novel therapeutic approaches

negatively regulate intestinal epithelial α1, 2-fucosylationacquired immune cells in creating the appropriate symbiotic
through regulating the epithelial α1, 2-fucosylation.

for the treatment of infectious diseases.

Fig 1. Commensal bacteria prevent the colonization of C.
albicans in the gut

２. Innate and acquired immune system regulates intestinal

epithelial α1, 2-fucosylation

Yoshiyuki Goto

Publications

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andPathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical
Mycology Research Center, Chiba University

α1, 2-fucosyl linkages located to terminal carbohydrate

moiety expressed on intestinal epithelial cells are catalyzed byfucosyltransferase 2（Fut2）. Epithelial α1, 2-fucose is one of

the symbiotic factors which mediate host–microbiota

interaction. For example, epithelial α1, 2-fucose is utilized asa dietary carbohydrate by various symbiotic bacteria such as
Bacteroides. Therefore, disruption of Fut2 leads to dysbiosis

10

Fig 2. The inductive and regulatory mechanism of epithelial
α1, 2-fucose

千葉大学１）Kamioka M, Goto Y, Nakamura K, Yokoi Y, Sugimoto

R, Ohira S, Kurashima Y, Umemoto S, Sato S,
Kunisawa J, Takahashi Y, Domino SE, Renauld JC,
Nakae S, Iwakura Y, Ernst PB, Ayabe T, Kiyono H.,

Nakamura K, Yokoi Y, S ugimoto R , Ohira S,

Kurashima Y, Umemoto S, Sato S, Kunisawa J,

Takahashi Y, Domino SE, Renauld JC, Nakae S,

Iwakura Y, Ernst PB, Ayabe T, Kiyono H. Proc Natl
Acad Sci USA. 119: e2115230119, 2022２）Goto Y. Unique symbiont-derived sphingolipids: Dietaryamino acids source branch formation. Cell Host
Microbe. 30: 3-5, 2022

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Project for Control of Infectious Diseases
高屋（感染症制御開発）プロジェクト
Summary（研究概要）

Excessive antibiotic exposures let bacteria be in a dormant state, allowing bacteria to survive in harshenvironments. This phenomenon called persisters also causes the emergence of drug-resistant bacteria andintractable bacterial infections such as persistent bacterial infections. In this project, we aim to elucidate themolecular mechanism of persister control through research on developing systemic infections and persistentinfections and to create new compounds that can control dormant cells. In this fiscal year, we searched thenatural product library for compounds that can reduce persisters and found several candidate compounds.
細菌感染症で用いられる抗菌薬を細菌に曝露すると休眠状態となり , 過酷な環境でも生存することができる . この現象は薬剤耐性菌出現や細菌持続感染などの難治性細菌感染症の原因ともなる . 本プロ
ジェクトでは , 病原細菌の全身感染症発症と持続感染機構研究を通して休眠制御の分子機構を解明し ,休眠細胞を制御できる新たな化合物の創出を目指している . 本年度は天然物ライブラリーから細菌休
眠状態を制御できる化合物を探索し , 複数の候補化合物を見出した .
Associate Professor

Research Promotion Technician

准Akiko Takaya
Yuriko Nomura

Agr-quorum sensing system of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus

Junpei Yamaguchi , Teruhisa Manome , Yasumasa Hara ,1

1, 2

Yuriko Yamazaki3, Yuumi Matsuoka4, Masami Ishibashi1, 2,
Akiko Takaya

1, 2, 51

Department of Natural Products Chemistry, Graduate
School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University,

2
3

4
5

授

技 術 補 佐 員

1. Molecular mechanism of Physalin H to suppress the

1教

Chiba, Japan

高屋 明子
野村祐理子

treat because of antibiotic resistance. One major virulence

modulator of S. aureus is the accessory gene regulator（Agr）-quorum sensing（QS）system that coordinates cell behavior

in response to bacterial density. Inhibition of the Agr-QS

system possibly reduces MRSA pathogenesis by decreasing

virulence. This study aims to identify the small molecules that
reduce the expression of the Agr-QS system from our natural

product library. Several products were obtained as candidates
from a screening of the natural product library using a strain
with a reporter gene that depended on the Agr-QS system.

Among them, physalin H, isolated from the Physalis minima

Plant Molecular Science Center, Chiba University, Japan（Eggplant）, suppressed the Agr-QS system in the type agr I

Japan

transcriptional regulator to bind the P3 promoter and has

Graduate School of Medical Sciences, Osaka University,

strain and in the different type agr III strain. AgrA is a

IFReC, Osaka University, Japanhighly conserved sequences among all types of agr. The

Chiba, Japan

C-terminal AgrA protein could bind to the DNA fragment ofMedical Mycology Research Center, Chiba University,

An infection caused by methicillin-resistant Staphylococcus

aureus（MRSA）is a global health problem that is diﬃcult to

千葉大学

electrophoretic mobility-shift assay revealed that purified
the P3 promoter. In contrast, its binding was abolished when
physalin H was added together. These results suggest thatphysalin H suppresses the Agr-QS system by preventing the

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

11

interaction of AgrA with the P3 promoter.

compounds, except for 7, exhibited weak-to-strong TRAIL-

2. New polyoxygenated cyclohexenes isolated from Uvaria

cell line（AGS）inhibition by 17-32% as compared to therufa and cinnamtannin B1 isolated from Nephelium

hypoleucum with TRAIL-resistance-overcoming activity

Kritamorn Jitrangsri , Yasumasa Hara , Akiko Takaya ,
1, 2

2

2

Masami Ishibashi

2

1
2

resistance-overcoming activity and an increased gastric cancer

treatment with the compounds alone. Compounds 3 and 9

were studied for their ability to overcome TRAIL resistanceusing western blot analysis, which indicated that they

sensitized AGS cells to apoptosis via both extrinsic andintrinsic pathways by increasing the expression of several

proapoptotic proteins（cleaved caspase －3, －8, and －9）andFaculty of Pharmacy, Silpakorn University, Thailand

by decreasing the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2.

School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University, Japan

Publications

Department of Natural Products Chemistry, Graduate

Bioactivity-guided isolation of Uvaria rufa leaves andNephelium hypoleucum bark resulted in the successful isolation

１）Kritamorn J, Hara Y, Takaya A, Ishibashi M. New

polyoxygenated cyclohexenes isolated from Uvaria rufa

and cinnamtannin B1 isolated from Nephelium hypoleucumof nine compounds（1 - 9）bearing a new polyoxygenated

w i t h T R A I L - r e s i s t a n c e - o v e r c o m i n g a c t i v i t y.

（2）, microcarpin A（3）, uvarigranol F（4）, quercetin（5）,２）Hara Y, Watanabe K, Takaya A, Ebihara I, Manome T,

epicatechin（8）and cinnamtannin B 1（9）from N.

compounds, Uniformides A and B, isolated from acyclohexene scaﬀold: zeylenol-6-shikimate（1）, （-）-zeylenol

kaempferol（6）, and p-coumaric acid（7）from U. rufa, andhypoleucum. The structures of the isolated compounds were
elucidated using various spectroscopic techniques. All

12

千葉大学

Phytochemistry Letters 52: 7-9. 2021.

Arai M, Yaguchi T, Ishibashi M. Two bioactive

culture of Nocardia uniformis IFM0856T in the presenceof animal Cells. Organic Letters 24: 5867-5867 2022.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Candida glabrata phenome project

知花ＰＩ（カンジダ・グラブラータフェノーム）プロジェクト
Summary（研究概要）

Using the systematically constructed full genome mutant library in pathogenic yeast Candida glabrata, weare performing development of anti-fungal drugs, gene identification and functional analyses involved inpathogenicity.
病原性酵母カンジダ・グラブラータの全遺伝子改変株を利用し , 抗真菌薬の開発ならびに病原性に関する遺伝子の特定と機能解析を進めている .
Associate Professor

Research Technician

Research Assistant Professor
Grand Fellow

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

准Hiroji Chibana
Azusa Takahashi
Michiyo Sato
Masashi Yamaguchi
Kaname Sasamoto
Keiko Nakano
Kazue Tsuda

教

授

技

術

職

員

特

任

助

教

グランドフェロー
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

知花 博治
高橋
梓
佐藤（岡本）美智代
山口 正視
笹本
要
中野 恵子
津田 一恵

Erg 25 Controls Host-Cholesterol Uptake Mediated byfound to decrease lethality of infected mice. ERG 25

Candida glabratasterol importer Aus 1 p, suggesting that the accumulated

Aus 1 p-Associated Sterol-Rich Membrane Domains in

Michiyo Okamoto, Azusa Takahashi-Nakaguchi, Kengo

knockdown impairs the plasma membrane localization of the4, 4-dimethylzymosterol destabilizes the lipid domain withwhich Aus 1p functionally associates. ERG 25 knockdown

Tejima, Kaname Sasamoto, Masashi Yamaguchi, Toshihiro

further influences the structure of the membrane compartment

Miyazaki, Hironobu Nakayama, Chihiro Sasakawa, Susumu

but not the localization of the membrane proteins Pma1p andAoyama, Minoru Nagi, Kohichi Tanabe, Yoshitsugu

Kajiwara, Alistair J P Brown, Miguel C Teixeira, Hiroji
Chibana

The uptake of cholesterol from the host is closely linked toof Can1p（MCC）/eisosomes（ergosterol-rich lipid domains）,
Hxt1p, which localize to sterol-poor domains. In the sterol-rich lipid domain, Aus 1 p-contining domain was mostly
independent of MCC/eisosomes, and the nature of these

domains was also different: Ausp1-contining domain was athe proliferation of pathogenic fungi and protozoa during

dynamic network-like domain, whereas the MCC/eisosomes

important strategy for decreasing susceptibility to antifungals

eisosomes was observed to influence the localization of Aus1p

infection. For some pathogenic fungi, cholesterol uptake is anthat inhibit ergosterol biosynthesis. In this study, we show

was a static dot-like domain. However, deletion of MCC/
after Aus1p was transported from the endoplasmic reticulumthat Candida glabrata ERG25, which encodes an enzyme that（ER）through the Golgi apparatus to the plasma membrane.

cholesterol uptake from host serum. Based on the screening

stabilizing sterol-rich lipid domains, constituting a promisingdemethylates 4 , 4 -dimethylzymosterol, is required forof C. glabrata conditional knockdown mutants for each gene

involved in ergosterol biosynthesis, ERG25 knockdown was

千葉大学

These findings suggest that ERG 25 plays a key role incandidate target for antifungal therapy.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

13

WT_Aus1G/Pma1R cells were observed at the cell surface（Top）and transverse region（Middle）using a high-resolution
confocal fluorescence microscope in real time. Each area enclosed by the dashed lines also is provided as a magnified image.
In the magnified image of the transverse region, intensity profiling of GFP（green）and mCherry（magenta）on the plasma
membrane was carried out in the direction shown by the arrow. Scatterplots of green and magenta pixel intensities in eachpanel were indicated.

U ltrastructural Examination of Mouse Glomerular

freeze-substitution after glutaraldehyde fixation may more

Substitution.

conventional chemical fixation and dehydration at room

Capillar y Loop by Sandwich Freezing and Freeze-

Masashi Yamaguchi, Azusa Takahashi-Nakaguchi, Katsuyuki
Uematsu, Hiroyuki Yamada, Michiyo Sato-Okamoto, Hiroji
Chibana

Sandwich freezing is a method of rapid freezing bysandwiching specimens between two metal disks and has beenused for observing exquisite the close-to-native ultrastructureof living yeast and bacteria. Recently, this method has beenfound to be useful for preser ving cell images ofglutaraldehyde-fixed animal and human tissues. In the present

study, this method was applied to observe the fine structure ofclosely reflect the living state of cells and tissues thantemperature and conventional rapid freezing-freezesubstitution of excised tissues without glutaraldehyde fixation.

Sandwich freezing-freeze-substitution techniques should be

used routinely as a standard method for observing the closeto-native ultrastructure of biological specimens.
Publications

１）Pedro P, Monica G, Takahashi-Nakaguchi A, Chibana

H, Miguel C. T: Multiple genome analysis of Candida

glabrata clinical isolates renders new insights into genetic
diversity and drug resistance determinants. Microbial
Cell, 13; 9（11）: 174-189. 2022.

mouse glomerular capillary loops. Morphometry was then２）Konuma R, Watanabe M, Irikura D, Sugita-Konishi Y,

obtained by an in vivo cryotechnique, which may provide theH, Onami J, Kamata Y: Polymorphism of Aspergillus

performed, and the results were compared with the dataclosest ultrastructure to the native state of living tissue. The
results show that the ultrastructure of glomerular capillaryloops obtained by sandwich freezing-freeze-substitution after

Yamazaki A, Yanagi U, Doha Y, Kobayashi N, Chibana
Fumigatus Major Allergen Genes Associating with Their
Isolated Sites Affects Their IgE Epitope Structures.
Fungal Genomics & Biology, 12. 4: 1000195, 2022.

glutaraldehyde fixation was close to that of the ultrastructure３）Okamoto M, Takahashi-Nakaguchi A, Tejima K,

cell image but also in quantitative morphometry. They

Tanabe K, Miyazaki Y, Nakayama H, Sasakawa C,

obtained by in vivo cryotechnique not only in the quality ofindicate that the ultrastructure obtained by sandwich freezing-

14

千葉大学

Sasamoto K, Yamaguchi M, Aoyama T, Nagi M,

Kajiwara S, Brown AJP, Teixeira MC, Chibana H:

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Ultrathin sections of mouse kidney prepared by sandwich freezing and freeze-substitution after glutaraldehyde fixation. （a）
Nucleus and nucleolus of endothelial cell and foot processes of glomerular capillary loop. （b）Tangential section of footprocesses of glomerular capillary loop. （c）Tight junction. （d）Nuclear membrane and nuclear pores. （e）Mitochondria. F, footprocess; M, mitochondria; N, nucleus; NM, nuclear membrane; NP, nuclear pore; Nu, nucleolus; T, tight junction.

Erg25 Controls Host-Cholesterol Uptake Mediated by

Ya m a d a H , S a t o - O k a m o t o M , C h i b a n a H :Candida glabrata. Front Cell Dev Biol, 24; 10: 820675,

capillar y loop by sandwich freezing and freeze-

Aus1p-Associated Sterol-Rich Membrane Domains in
2022.

４）Pais P, Galocha M, California R, Viana R, Ola M,

Ultrastructural examination of mouse glomerular
substitution, Microscopy（Oxf）, 6; 71（5）: 289-296.
2022.

Okamoto M, Chibana H, Butler G, Teixeira MC:

６）Yamaguchi M, Takahashi-Nakaguchi A, Sato-Okamoto

Factor CgMar1: Role in Azole Susceptibility. J Fungi

sandwich freezing and freeze-substitution. Cytologia 87:

Characterization of the Candida glabrata Transcription（Basel）, 7; 8（1）: 61. 10, 2022.

５）Yamaguchi M, Takahashi-Nakaguchi A, Uematsu K,

千葉大学

M, Chibana H: Electron microscopy of mouse tissues by
149-155, 2022.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

15

Project of Clinical Investigation

渡邉ＰＩ（臨床感染症）プロジェクト
Summary（研究概要）

We have been doing basic and clinical research primarily on fungal infections while seeing patients in theSpecialty Clinic for Fungal Infections at the University Hospital. Working as the Reference Center for fungal
infections, we were designated as an Advanced Progressive Laboratory by the Japanese Society for Infectious
Diseases and Japanese Society for Clinical Microbiology and take consulting services on fungal diseases fromall over the country（ca. 200 cases in 2022）. Concerning research activities, we are investigating various
aspects of systemc mycoses with many universities, hospitals, and medical institutions such as NIID. The
main research topics are: the mechanisms and the epidemiology of antifungal resistance of Candida species
and Aspergillus species, the development of their diagnostic methods, and establishment of a consensus ontreatment outcome definitions of Chronic pulmonary aspergillosis.
The SATREPS project between Sao Paulo State University of Campinas, Brazil（UNICAMP）and
MMRC had been finished in 2022, but we still continue a collaborative study with UNICAMP.

我が国における「真菌症リファレンスセンター」（輸入真菌症を含む）として一般施設では実施困難
な菌種同定 , MIC 測定 , 血清診断（輸入真菌症 , スエヒロタケなどを含む）, 検体からの PCR 検査などの特殊検査を受け入れるとともに , 並行して診療サポートも行なっており , 日本感染症学会，臨床微生物学会から先進的感染症検査が実施可能な施設として「先進的感染症検査施設」に指定されている . 2022年の全国の医療機関からの真菌症治療相談依頼件数は200件あまりに達した．この診療サポー
トにより全国の医療機関によるネットワークが形成され，菌株を含めた検体や貴重な臨床情報の収集と研究に役立つとともに , 多くの共同研究を生む母体ともなっている．診療活動としては，全国から寄せられる真菌症のコンサルテーションに対応する一方で，附属病院に真菌症専門外来を設け，全国からの患者の診療を行うなど精力的に臨床活動を行っている．研究面では国立感染症研究所をはじめ
帯広畜産大，東京理科大，NHO 東京病院，慶應大学病院など国内のさまざまな研究機関，医療施設と協力して臨床・基礎研究を行っており，難治性真菌症の感染機構や診断・治療法の開発研究を進めている . 中でもカンジダ症およびアスペルギルス症の原因菌について，耐性株の疫学と耐性機構や感染機構 , 診断法についての研究を進め，多くの画期的な論文を発表するなど高い成果を挙げた . また , 慢
性肺アスペルギルス症の治療効果判定についての国際的コンセンサスのとりまとめをおこなった．
2016年から開始したブラジル・カンピーナス大学感染症内科との SATREPS（地球規模課題対応国
際科学技術協力プログラム）は2022年に事業終了したが , その後も積極的に共同研究を継続している．

Grand Fellow

Katsuhiko Kamei（～2022.3.31）
Akira Watanabe
Teppei Arai
Hazim O. Abdelgalil Khalifa（～2022.3.31）
Hidetaka Majima（2022.4.1～）
Akio Toh-e（～2022.3.31）
Hideaki Taguchi

16

千葉大学

Professor

Associate Professor

Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Researcher

真菌医学研究センター報告

教

授

准

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

特

任

助

教

研

究

員

グランドフェロー

第 26 巻

2022

亀井 克彦
渡辺
哲
新居 鉄平
ハジム O. A カリファ
馬嶋 秀考
東江 昭夫
田口 英昭

Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

Kyoko Yarita
Rio Seki（～2022.3.31）
Yukiko Tsuchiya
Yasuko Koga
Kyoko Inoue（～2022.3.31, 2022.10.1～）

技

術

職

員

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

鎗田 響子
関
里亜
土屋由紀子
古賀 育子
井上 京子

1. Azole and echinocandin resistance mechanisms andConclusion: Our results confirmed the emergence of azole

boundar y dissemination and animal-humananalysis confirmed the transboundary dissemination and cross-genotyping of Candida tropicalis in Japan: crosstransmission of C. tropicalis infection.

resistance in C. tropicalis in Japan. Furthermore, phylogenetictransmission of C. tropicalis between humans and animals.

2. Prevalence of Antifungal Resistance, Genetic Basis of

Khalifa HO, Watanabe A, Kamei K
Objectives: To assess the prevalence and genetic basis of

antifungal resistance mechanisms as well as the genotyping of

Candida tropicalis from clinical and non-clinical sources inJapan.

Methods: Eighty C. tropicalis isolates, including 32 clinicalisolates recovered from 29 patients and 48 non-clinical isolates

recovered from 24 different sources（animals and theAcquired Azole and Echinocandin Resistance, andGenotyping of Candid krusei recovered from anInternational Collection.

Khalifa HO, Hubka V, Watanabe A, Nagi M, Miyazaki Y,
Yaguchi T, Kamei K

This study was designed to evaluate the prevalence ofenvironment ）were evaluated. All isolates were tested

antifungal resistance, genetic mechanisms associated with inand genotypically for resistance mechanisms to azole andgenotyping of Candida krusei, which is intrinsically resistantphenotypically for resistance to a wide range of antifungals
echinocandin. Furthermore, all the isolates were genotyped
by multilocus sequence typing（MLST）.

Results: Phenotypically, 30.2%（16/53）of the isolates wereazole-resistant, with high levels of azole resistance among

vitro induction of azole and echinocandin resistance andto fluconazole and is recovered from clinical and nonclinicalsources from diﬀerent countries. Our results indicated that all

the isolates were susceptible or had the wild phenotype（WT）

to azoles, amphotericin B, and only 1.27% showed non-WT

clinical isolates（51.7%; 15/29）and low levels（4.2%; 1/24）

for flucytosine. Although 70.88% of the isolates were resistantreported as echinocandin resistant, with 60.4%（32/53）of theechinocandin-resistant as all were susceptible to micafunginamong non-clinical isolates. None of the isolates wereisolates intermediate to caspofungin. Azole resistance wasto c aspofungin, none of them were c ategor iz ed as
and no FKS 1 hot spot 1（HS 1）or HS 2 mutations werebasically attributed to high expression levels of drug efflux

detected. In vitro induction of azole and echinocandin（TAC 1 and UPC 2）and ergosterol biosynthesis pathway

low concentrations of fluconazole（4 μg/ml）, voriconazole

transporter genes（CDR2 and CDR3）, transcription factors

resistance confirmed the rapid development of resistance at

HMG gene. No FKS1 hot spot 1（HS1）or HS2 missense（0 .06 μ g/ml ）, and micafungin（0 .03 μ g/ml ）, with norevealed 36 different sequence types（STs）, with the firstresistance development. Overexpression of ABC1 gene andmutations were detected in any of the isolates. MLST analysis
identification of 23 new STs. Phylogenetic analysis confirmed

difference between clinical and nonclinical isolates in the

FKS1 HS1 mutations were the major mechanisms responsible

the close relationship between the clinical and non-clinicalfor azole and echinocandin resistance, respectively.

patients and marine mammals.

from different sources and geography confirmed that theisolates, with identifications of ST232 and ST933 among

千葉大学

Genotyping of our 79 isolates coupled with 217 other isolates

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

17

isolates belong to two main subpopulations, with isolates fromhuman clinical material and Asia being more predominant incluster 1, and environmental and animals isolates and thosefrom Europe in cluster 2. Our results are of critical concern,

since realizing that the C. krusei resistance mechanisms andtheir genotyping are crucial for guiding specific therapy andwith a negative Aspergillus precipitin test; this finding may
prevent diagnostic delay or misdiagnosis for CPA.

4. Treatment outcome definitions in chronic pulmonary

aspergillosis: a CPAnet consensus statement.

for exploring the potential infection source.

Van Braeckel E, Page I, Davidsen J, Laursen C, Agarwal R,

3. Non- fumigatus Aspergillus Infection Associated with aCornely O, Denning D, Flick H, Gangneux JP, Godet C,

Negative Aspergillus Precipitin Test in Patients with

Chronic Pulmonary Aspergillosis.

Takeda K, Suzuki J, Watanabe A, Narumoto O, Kawashima
M, Sasaki Y, Nagai H, kamei K, Matsui H

Alastruey-Izquierdo A, Barac A, Cadranel J, Chakrabarti A,

Hayashi Y, Hennequin C, Hoenigl M, Irfan M, Izumikawa

K, Koh WJ, Kosmidis C, Lange C, Lamprecht B, Laurent
F, Munteanu O, Oladele R, Patterson T, Watanabe A,
Salzer H

Chronic pulmonary aspergillosis（CPA）is a severe fungal

Aspergillus antibody testing is key for the clinical diagnosis

infection of the lung with a high morbidity and mortality. It

sensitivity. However, false-negative results in patients withdisorders. Clinical presentation is nonspecific and often

of chronic pulmonar y aspergillosis（CPA ）with high
CPA might be obtained, depending on the Aspergillus species.

The aim of this study was to investigate which factors areassociated with false-negative results in Aspergillus precipitin
tests and whether the sensitivity of precipitin tests in CPA is
influenced by Aspergillus fumigatus and non-fumigatus

Aspergillus species. Between February 2012 and December

2020, 116 consecutive antifungal treatment-naive patientsis usually seen in immunocompetent patients with respiratory
overlaps with the symptoms and the radiological patterncaused by the underlying disease. Many patients with CPA

respond well to antifungal therapy, but others do not. Many
aspects of this neglected disease are unknown and the disease
therefore requires multinational and multicenter cooperation.

To meet this challenge, the Chronic Pulmonary Aspergillosis

Network（CPAnet ）was established in March 2017 towith CPA were identified and included in this retrospective

promote clinically oriented research. One of the key researchtract of patients were identified by DNA sequencing.

on treatment outcome definitions. This is important, because

chart review. Aspergillus species isolated from the respiratory
Characteristics of patients with positive and negative resultsfor Aspergillus precipitin tests were compared. The sensitivityof the Aspergillus precipitin tests was compared between

patients with A. fumigatus-associated CPA and non-fumigatuspriorities of the network was the establishment of a consensus

harmonization of endpoints will enable comparison of study
results leading to a better understanding of CPA treatment
and management.

Aspergillus-associated CPA. A non-fumigatus Aspergillus

5. Evaluation of the Sensititre YeastOne and Etest in

negative Aspergillus precipitin test results in patients with CPA

Susceptibility Testing of Three Azoles, Amphotericin

species was the only factor significantly associated within the multivariate analysis（hazard ratio, 8.3; 95% confidence

interval, 3 .2 to 22 .1 ; P < 0 .0001）. The positivity of theAspergillus precipitin test for patients with non-fumigatus

Aspergillus-associated CPA was lower than that for patientswith A. fumigatus-associated CPA（84.8% versus 37.9%; P <0.0001）. These results revealed that the presence of non-fumigatus Aspergillus-associated CPA should be considered

18

千葉大学

Comparison with CLSI M 38 -A 2 for Antifungal

B, Caspofung in, and Anidulafung in, ag ainst

Aspergillus fumigatus and Other Species, Using New

Clinical Breakpoints and Epidemiological Cutoff
Values.

Melhem MSC, Coelho VC, Fonseca CA, Oliveira L,
Bonfietti LX, Szeszs MW, Magri MMC, Dorneles FS,

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Taguchi H, Moreira DVS, Motta AL, Batista MV, Kamei
K, Shikanai-Yasuda MA

Aspergillosis is an invasive fungal disease associated withhigh mortality. Antifungal susceptibility testing（AFST）is

receiving increasing consideration for managing patients, aswell as for surveilling emerging drug resistance, despite

having time-consuming and technically complex reference

tropicalis Infection. Clin Microbiol Infect 28（2）: 302.
e5-302. e8, 2022.

３）Hase I, Kagatani J, Suzuki S, Yoshida S, Sakamoto K,

Maitani F, Horinouchi H, Kamei K, Tateno H:
Successfully treated bronchopulmonary oxalosis caused
by Aspergillus tubingensis in a non-neutropenic patient: A

case report and review of the literature. J InfectChemother 28（2）: 299-303, 2022.

methodologies. The Sensititre YeastOne（SYO）and Etest

４）Takeda K, Suzuki J, Watanabe A, Sekiguchi R, Sano T,

extensively evaluated for Aspergillus isolates. We obtained

Tamura A, Nagai H, Matsui H, Kamei K: The accuracy

methods are widely utilized for yeasts but have not been

Posaconazole（POS）, Voriconazole（VCZ）, Itraconazole（ITC）, Amphotericin B（AMB）, Caspofungin（CAS）, andAnidulafungin（AND）minimum inhibitory concentrations

Narumoto O, Kawashima M, Fukami T, Sasaki Y,

and clinical impact of the morphological identification ofAspergillus species in the age of cryptic species: A singlecentre study. Mycoses 65（2）: 164-170, 2022.

（MICs）for both the Etest（n = 330）and SYO（n = 339）

５）Toh-E A, Ohkusu M, Ishiwada N, Watanabe A,

fumigatus, we analyzed the performance of both commercial

Cryptococcus neoformans to cadmium. Curr Genet 68（1）:methods for 106 sequenced clinical strains. For 84 A.

methods in comparison with the CLSI-AFST, using available

Kamei K: Genetic system underlying responses of125-141, 2022.

cutoﬀ values. An excellent correlation could be demonstrated６）Khalifa HO, Hubka V, Watanabe A, Nagi M, Miyazaki

of AMB, VCZ, and POS resulted in excellent essential

Resistance, Genetic Basis of Acquired Azole andfor Etest-AMB and Etest-VCZ（p &lt; 0.01）. SYO-MICs

agreement（&gt; 93%）, and &gt; 80% for AMB, VCZ, and
ITC Etest-MICs. High categoric agreement was found for

AMB, ITC, and CAS Etest-MICs（&gt; 85%）and AMB

Y, Yaguchi T, Kamei K: Prevalence of Antifungal

Echinocandin Resistance, and Genotyping of Candid
krusei recovered from an International Collection.
Antimicrob Agents Chemother 66（2）: e0185621, 2022.

SYO-MICs（&gt; 90%）. The considerable number of major/

７）Takeda K, Suzuki J, Watanabe A, Narumoto O,

to the proposed cutoffs and associated with the less time-Non-fumigatus Aspergillus infection associated with avery major errors found using Etest and SYO, possibly related
consuming processes, support the need for the improvementof commercial methods for Aspergillus strains.

Kawashima M, Sasaki Y, Nagai H, kamei K, Matsui H:
negative Aspergillus precipitin test in patients withchronic pulmonary aspergillosis. J Clin Microbiol 60（2）:e0201821, 2022.

Publications in English

１）Watanabe C, Kimizuka Y, Fujikura Y, Hamamoto T,

Watanabe A, Yaguchi T, Sano T, Suematsu R, Kato Y,

Miyata J, Matsukuma S, Kawana A: Mixed infection of８）Takamatsu A, Yaguchi T, Tagashira Y, Watanabe A,

Honda H: Nocardiosis in Japan: a multicentric

retrospective cohor t study. Antimicrob Agents
Chemother 66（2）: e01890-21, 2022.

cytomegalovirus and pulmonary nocardiosis caused by

９）Miyazawa H, Matsuda Y, Sakai S, Kamei K, Wada T:

technology: A case report. Intern Med 61（10）: 1613-

Calmette-Gu rin and Phialemonium sp. in chronic

Nocardia elegans diagnosed using nanopore sequencing
1617, 2022.

Mesenteric abscess caused by coinfection with Bacillus
granulomatous disease. IDCases 27: e01375, 2022.

２）Khalifa HO, Watanabe A, Kamei K: Azole and10）Kaneko H, Yamazaki S, Uchida M, S uzuki T,

of Candida tropicalis in Japan: Cross-Boundar yof voriconazole trough levels during therapy with enteral

Echinocandin Resistance Mechanisms and Genotyping
Dissemination and Animal-Human Transmission of C.

千葉大学

Murakami K, Matsubara H, Kamei K, Ishii I: Decreasenutrition: a case report. J Pharm Health Care Sci 8（1）:

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

19

6, 2022.

Mycol Case Rep 36: 5-9, 2022.

11）Arasaki R, Tanaka S, Okawa K, Tanaka Y, Inoue T,14）K o d a m a T, K a m e i K , K i c h i k a w a Y: A l l e r g i c

Muraosa Y, Kamei K, Kadonosono K: Endophthalmitis

commune Presented as a Lung Mass. Arch Bronconeumol

Kobayashi S, Maruyama-Inoue M, Yamaguchi T,

outbreak caused by Fusarium oxysporum after cataract

Bronchopulmonary Mycosis Due to Schizophyllum
58（8）: 613, 2022.

surgery. Am J Ophthalmol Case Rep 26: 101397, 2022.

15）Melhem MSC, Coelho VC, Fonseca CA, Oliveira L,

Agarwal R, Alastruey-Izquierdo A, Barac A, Cadranel

Taguchi H, Moreira DVS, Motta AL, Batista MV,

12）Van Braeckel E, Page I, Davidsen J, Laursen C,

J, Chakrabarti A, Cornely O, Denning D, Flick H,
Gangneux JP, Godet C, Hayashi Y, Hennequin C,

Hoenigl M, Irfan M, Izumikawa K, Koh WJ, KosmidisC, Lange C, Lamprecht B, Laurent F, Munteanu O,

Oladele R, Patterson T, Watanabe A, Salzer H:
Treatment outcome definitions in chronic pulmonary

aspergillosis: a CPAnet consensus statement. Eur Respir
J 29（6）: 2102950, 2022.

Bonfietti LX, Szeszs MW, Magri MMC, Dorneles FS,

Kamei K, Shikanai-Yasuda MA: Evaluation of theSensititre YeastOne and Etest in Comparison with CLSI

M38-A2 for Antifungal Susceptibility Testing of Three
A z o l e s , A m p h o t e r i c i n B, C a s p o f u n g i n , a n d
Anidulafungin, against Aspergillus fumigatus and Other

S pecies, Using Ne w Clinic al Breakpoints andEpidemiological Cutoﬀ Values. Pharmaceutics 14（10）:2161, 2022.

13）Pontes L, Gualtieri Beraquet CA, Arai T, Watanabe A,

16）Ryu K, Fukutomi Y, Sekiya K, Saito A, Hamada Y,

fumigatus isolates carrying the G 448S substitution in

Kamei K: Identification of fungi causing humidifier lung:

Moretti ML, Schreiber AZ: Selection of Aspergillus
CYP 51 A gene af ter long-term treatment withvoriconazole in an immunocompromised patient. Med

20

千葉大学

Watai K, Kamide Y, Taniguchi M, Araya J, Kuwano K,

2 rare cases and a review of the literature. Asia Pac

Allergy 12（4）: e43, 2022.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Project for Infection Control and Prevention
石和田ＰＩ（感染症制御）プロジェクト
Summary（研究概要）

Our research focuses on sero-epidemiology and pathogenesis of Haemophilus influenzae Streptococcus
pneumoniae and Streptococcus agalactiae. The pathogenic analysis of Staphylococcus aureus and the rapid
diagnosis of BCG infection are also our research theme. We organize several clinical researches for thedevelopment of diagnostic and therapeutic methods for intractable respiratory infectious diseases and alsocare for patients in the clinic of the University Hospital.
インフルエンザ菌の病原性解析ならびにインフルエンザ菌感染症 , 肺炎球菌感染症 , B 群溶血性レンサ球菌感染症の疫学調査を継続的に行っている . 結合型ワクチン導入後 , 新しく問題となっているワク
チン非含有型株による病原因子の解析を行い , 新たな予防法の開発を目指す . BCG 感染症の迅速診断 ,黄色ブドウ球菌の病原性解析も行っている . また , 難治性呼吸器感染症の診断 , 治療法開発のための臨床研究を実施している . 同時に , 附属病院における診療活動及び学内外でのコンサルテーションを行っている .
Professor

Assistant Professor

Research Technician

Adjunct Research Technician
Adjunct Research Technician
Visiting Professor
Visiting Lecturer

1. Epidemiology and bacterial characteristics of invasive

group B streptococcus disease: a population-based study
in Japan in 2010-2020

Takeuchi N , Chang B , Takeshita K , Naito S , Takahashi
1

2

Y , Hishiki H , Ishiwada N
3

1

2

3

3

教

Naruhiko Ishiwada
Noriko Takeuchi
Misako Ohkusu
Mihoko Ohhata
Tomoko Ogawa
Katsuhiko Kamei
Akio Toh-E

3

3

1

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

授

特

任

助

教

技

術

職

員

非常勤技術職員
非常勤技術職員
特任

教

授

特別協力研究員

石和田稔彦
竹内 典子
大楠美佐子
大畑美穂子
小川 知子
亀井 克彦
東江 昭夫

study of invasive group B streptococcus（GBS）disease amongchildren aged <15 years conducted over a period of 11 years inJapan. This study investigated the incidence and clinicalmanifestations of invasive GBS disease in children in Chiba
Prefecture, Japan, and analysed the serotypes and drug
susceptibility of GBS strains isolated during the study period.

Overall, 127 episodes of invasive GBS disease were reported
in 123 patients. Of these, 124 were observed in 120 patients

aged <1 year, and the remaining three episodes were reported

Department of Bacteriology I, National Institute of

in a 9 -year-old child and two 14 -year-old children with

Department of Pediatrics, Chiba University Graduate

rate per 1000 live births was 0.24（0.15-0.36）. The incidences

Infectious Diseases, Tokyo, Japan

underlying disease. For patients aged <1 year, the incidence

School of Medicine, Chiba, Japanof early-onset disease and late-onset disease were 0.04（0.0-This is the first report on a population-based prospective

meningitis was 45.2%, and the incidence of GBS meningitis

千葉大学

0 .09）and 0 .17（0 .08 - 0 .25）, respectively. The rate of

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

21

was higher than that of other invasive diseases among children

pneumococcal meningitis, 6 had sequelae, and 4 died. Ninein Japan. Of the 109 patients for whom prognosis was（26.5%）strains were resistant to penicillin; five（15%）strains

total, 68 strains were analysed. The most common weresusceptible to vancomycin and linezolid. Daptomycin ’ s

ST17 strains（n = 22, 32.4%）. This study showed that theAmong the tested strains, only four were PCV13 serotypes.

available, 7（6.4%）died and 21（19.3%）had sequelae. In
serotype III strains（n = 42, 61.8%）, especially serotype III/

incidence of invasive GBS disease among Japanese children

to meropenem, with an MIC of 0.5 μg/mL. All strains were
MIC50 was 0.064 μg/mL and MIC90 was 0.094 μg/mL.

Penicillin-resistant S. pneumoniae was isolated from 30.0% of

was constant during the study period. Because of the highthe patients with sequelae and death. Particularly, thestrategies, such as GBS vaccine, are essential.

was significantly higher than that in the complete recovery

incidence of meningitis and disease burden, new preventive

2. Clinical and Bacteriological Analysis of PediatricP n e u m o c o c c a l M e n i n g i t i s a f t e r 1 3 - Va l e n t
Pneumococcal Conjugate Vaccine Introduction inJapan

Kurihara E1, Takeshita K2, Tanaka S3, Takeuchi N4, Ohkusu

M , Hishiki H , Ishiwada N
4

1

2

3

4

2

4

Department of Pediatrics, Chiba Kaihin Municipal
Hospital, Chiba, Japanproportion of serotype 10A in the sequelae and deceased cases
cases. We should carefully monitor the serotype and drug

susceptibility of S. pneumoniae strains isolated from patientswith meningitis after the PCV 13 era and reconsider thetreatment strategy to prepare against further drug-resistantpneumococcal strains.

3. Epidemiological characteristics in serotype 24

paediatric invasive pneumococcal disease according toan 11-year population-based study in Japan

Takeshita K1, 2, Takeuchi N2, Ohkusu M2, Hishiki H1, Shiko

Department of Pediatrics, Chiba University Hospital,

Y3, Kawasaki Y3, 4, Chang B5, Ishiwada N2

Department of Pediatrics, Chiba Rosai Hospital, Chiba,

1Chiba, Japan

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Streptococcus pneumoniae is one of the leading causes ofmeningitis in children. In Japan, since the introduction of the

2

3

4

susceptibility of isolated S. pneumoniae strains from pediatric5pneumococcal meningitis, we clinically and bacteriologicallyDepartment of Infectious Diseases, Medical Mycology
ku, Chiba-shi, Chiba, Japan

Biostatistics Section, Clinical Research Center, Chiba
University Hospital, 1-8-1 Inohana, Chuo-ku, Chiba-shi,

serotypes in children has increased. To clarify the clinicaloutcomes, serotype distributions, and antimicrobial

Chiba, Japan

Research Center, Chiba University, 1-8-1 Inohana, Chuo-

13-valent pneumococcal conjugate vaccine（PCV13）, thenumber of pneumococcal meningitis due to non-PCV13

Department of Pediatrics, Graduate School of Medicine,
Chiba University, 1-8-1 Inohana, Chuo-ku, Chiba-shi,

Japan

Chiba, Japan

Faculty of Nursing, Japanese Red Cross College of Nursing,
4-1-3 Hiroo, Shibuya-ku, Tokyo, Japan

Department of Bacteriology I, National Institute of
Infectious Diseases, 1-23-1, Toyama, Shinjuku-ku, Tokyo,

analyzed 34 cases of pediatric pneumococcal meningitis thatJapan

median age at diagnosis was 1 year（range: 3 months- 13

After the introduction of the 13 -valent pneumococcal

were reported after the PCV13 introduction era in Japan. The
years ）. Ten（29 .4 % ）patients had underlying diseases.

conjugate vaccine（PCV 13）, serotype replacement hasof any pneumococcal vaccine. Of the 34 patients with

common serotype in paediatric invasive pneumococcal disease

Twenty-nine（85.3%）patients had received at least one dose

22

千葉大学

occurred in Japan, and serotype 24 has become the most

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

（IPD）. To understand the characteristics of serotype 24-IPD

Chiba, Japan

retrospective study in children aged ≤15 years from 2010 toHematological malignancy and solid tumor are major risks

in Japanese children in the post-PCV13 era, we conducted a2020 using a database of paediatric IPD surveillance in Chibafor invasive pneumococcal disease. Thirteen-valentcollected clinical information on 225 cases（24: 32 cases, non-for immunocompromised patients aged 6 years and older andprefecture, Japan. We identified a total of 357 IPD cases and

24: 193 cases）. Compared with the non-serotype 24-IPD,

serotype 24-IPD was independently related to be <2 years ofage [odds ratio（OR）3.91, 95% confidence interval（CI）

pneumococcal conjugate vaccine（PCV13）is recommended
adults who had not received the vaccine previously. However,vaccination for these individuals is not publicly subsidized inJapan. We measured pneumococcal serotype-specific IgGs

1.47-10.44; P = 0.0064] and bacteremia（OR 2.28, 95% CI（Pn-IgGs ）and opsonophagocytic activities（Pn-OPAs ）regression analysis. We also conducted a bacterial analysis,

patients with hematological malignancies and solid tumors

susceptible（24: 100.0%, non-24: 61.3%; P < 0.0001）andvaccination at baseline and at １ and 6 months after the first

1 .01 - 5 .13 ; P = 0 .0475）, as a result of the multivariate

and the isolates of serotype 24-IPD had tendencies of PCG-

macrolide-resistance（24 : 100 .0 %, non- 24 : 87 .3 %; P =0 .0490）. Their multilocus sequence typing was mostly

against PCV13 serotypes（1, 3, 5, 6A, 7F, and 19A）in

who were outside the recommended age range for routine
dose of PCV13. Pneumococcal serotype-specific memory B

cells（Pn-MBCs）against serotype 3 were measured from a

ST2572 and the variants, which were unique to Japan. This

portion of the study samples. Thirty-seven patients（30 in theJapanese PCV13 immunisation programme.

completed the study. Pn-IgGs were significantly elevated at 1

tendency might have been a result of the progress made in the

4. Immunogenicity and safety of routine 13 -valentp n e u m o c o c c a l c o n j u g a t e v ac c i n a t i o n o u t s i d e
recommended age range in patients with hematologicalmalignancies and solid tumors

Takeshita K1, Ishiwada N2, Takeuchi N2, Ohkusu M2, Ohata

M , Hino M , Hishiki H , Takeda Y , Sakaida E , Takahashi
2

3

3

4

4

young patient group and 7 in the adult patient group ）month post-vaccination and persisted in protection level for 6
months after the first vaccination against all six serotypes

measured except serotype 3 . Pn-OPAs were significantly

elevated and persisted as well against all six serotypes. PnMBCs were measured in 10 patients, and 90% of them had atleast one detectable Pn-MBC, and 70% of them showed anincreased frequency of Pn-MBCs against serotype 3 . No
serious adverse events were observed up to 1 month after

Y , Shimojo N , Hamada H

vaccination. PCV13 is thus safe and immunogenic, including

Department of Pediatrics, Graduate School of Medicine,malignancies and solid tumors outside the recommended age

5

1

6

3

Chiba University, Chiba, Japan. Electronic address:2

take1nek@chiba-u. jp

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba, Japan3

Department of Pediatrics, Graduate School of Medicine,4

D e p a r t m e n t o f E n d o c r i n o l o g y, H e m a t o l o g y a n d

Chiba University, Chiba, Japan

Gerontology, Graduate School of Medicine, Chiba

5

6

University, Chiba, Japan

Department of Pediatrics, Seikeikai Chiba Medical Center,
Chiba, Japan

Center for Preventive Medical Sciences, Chiba University,

千葉大学

against serot ype 3 , in patients with hematologicalrange for routine vaccination.
Publications

１）Nagasawa K, Ishiwada N. Disease burden of respiratorysyncytial virus infection in the pediatric population in
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真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

23

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14）Takeshita K, Ishiwada N, Takeuchi N, Ohkusu M,

Ohata M, Hino M, Hishiki H, Takeda Y, Sakaida E,

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and safety of routine 13-valent pneumococcal conjugate

invasive pneumococcal disease according to an 11-year

vaccination outside recommended age range in patients

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Nakano T, Kamiya H, Amo K, Ishiwada N, Iwata S,
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Tsugawa T, Nishimura N, Hishiki H, Fujioka M,

Moriya A, Ohkusu K. Bacillus subtilis variant natto
Dis. 28: 1718-1719, 2022.

16）Arasaki R, Tanaka S, Okawa K, Tanaka Y, Inoue T,

Kobayashi S, Ito A, Maruyama-Inoue M, Yamaguchi T,

Muraosa Y, Kamei K, Kadonosono K. Endophthalmitis
outbreak caused by Fusarium oxysporum after cataract
surgery. Am J Ophthalmol Case Rep. 26: 101397, 2022.

Hosoya M, Mizuno Y, Mine M, Miyairi I, Miyazaki17）K o d a m a T, K a m e i K , K i c h i k a w a Y. A l l e r g i c

Azuma H, Kusuhara K, Ouchi K, Saitoh A, Moriuchi

presented as a lung mass. Arch Bronconeumol. 58: 613,

C, Morioka I, Morishima T, Yoshikawa T, Wada T,

H. The clinical characteristics of pediatric coronavirus

bronchopulmonary mycosis due to Schizophyllum commune
2022.

disease 2019 in 2020 in Japan. Pediatr Int. 64: e14912,

18）Hase I, Kagatani J, Suzuki S, Yoshida S, Sakamoto K,

11）Ono R, Tsumura M, Shima S, Matsuda Y, Gotoh K,

Successfully treated bronchopulmonary oxalosis caused

2022.

24

千葉大学

Maitani F, Horinouchi H, Kamei K, Tateno H.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

by Aspergillus tubingensis in a non-neutropenic patient: A

case report and review of the literature. J InfectChemother. 28: 299-303, 2022.

19）Kaneko H, Yamazaki S, Uchida M, S uzuki T,

Murakami K, Matsubara H, Kamei K, Ishii I. Decreaseof voriconazole trough levels during therapy with enteralchronic granulomatous disease. J Infect Chemother.
S1341-321X（22）00298-7, 2022.

25）Miyazawa H, Matsuda Y, Sakai S, Kamei K, Wada T.

Mesenteric abscess caused by coinfection with Bacillus
Calmette-Guérin and Phialemonium sp. in chronic
granulomatous disease. IDCases. 27: e01375, 2022.

nutrition: a case report. J Pharm Health Care Sci. 8: 6,

26）Takeda K, Suzuki J, Watanabe A, Sekiguchi R, Sano T,20）Takeda K, Suzuki J, Watanabe A, Narumoto O,

Sasaki Y, Tamura A, Nagai H, Matsui H, Kamei K.

2022.

Kawashima M, Sasaki Y, Nagai H, Kamei K, Matsui

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21）Ryu K, Fukutomi Y, Sekiya K, Saito A, Hamada Y,

Watai K, Kamide Y, Taniguchi M, Araya J, Kuwano K,

Kamei K. Identification of fungi causing humidifier lung:2 rare cases and a review of the literature. Asia Pac

Allergy. 12: e43, 2022.

Watanabe M, Narumoto O, Kawashima M, Fukami T,

The accuracy and clinical impact of the morphological

identification of Aspergillus species in the age of cryptic
species: A single-centre study. Mycoses. 65: 164-170,
2022.

27）Khalifa HO, Hubka V, Watanabe A, Nagi M, Miyazaki

Y, Yaguchi T, Kamei K. Prevalence of antifungal
resistance, genetic basis of acquired az ole andechinocandin resistance, and genotyping of Candidakrusei recovered from an international collection.
Antimicrob Agents Chemother. 66: e0185621, 2022.

22）Kohno S, Izumikawa K, Takazono T, Miyazaki T,28）Melhem MSC, Coelho VC, Fonseca CA, Oliveira L,

K, Tateda K, Mukae H, Miyazaki Y, Okada F, Kanda

Taguchi H, Moreira DVS, Motta AL, Batista MV,

Yoshida M, Kamei K, Ogawa K, Taniguchi S, Akashi
Y, Kakeya H, Suzuki J, Kimura SI, Kishida M,

Matsuda M, Niki Y. Eﬃcacy and safety of isavuconazole
against deep-seated mycoses: A phase 3, randomized,

Bonfietti LX, Szeszs MW, Magri MMC, Dorneles FS,

Kamei K, Shikanai-Yasuda MA. Evaluation of thesensititre yeastone and Etest in comparison with CLSI

M38-A2 for antifungal susceptibility testing of threeopen-label study in Japan. J Infect Chemother. S1341-

azoles, amphotericin B, caspofungin, and anidulafungin,23）Shinfuku K, Suzuki J, Takeda K, Kawashima M, Morio

new clinical breakpoints and epidemiological cutoff

321X（22）00293-8, 2022.

Y, Sasaki Y, Nagai H, Watanabe A, Matsui H, Kamei
K Validity of platelia aspergillus IgG and aspergillus

precipitin test to distinguish pulmonary aspergillosis fromcolonization. Microbiol Spectr. 8: e0343522, 2022.

24）Yada Y, Shiraishi A, Ishimura M, Eguchi K, Motomura

Y, Kibe Y, Kamei K, Ohga S. Post-transplant
Schizophyllum commune abscess in a pediatric patient with

千葉大学

against Aspergillus fumigatus and other Species, using
values. Pharmaceutics. 14: 2161, 2022.

29）Khalifa HO, Watanabe A, Kamei K. Azole andechinocandin resistance mechanisms and genotyping of
Candida tropicalis in Japan: cross-boundary dissemination
and animal-human transmission of C. tropicalis
infection. Clin Microbiol Infect. 28: 302. e5-302. e8,2022.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

25

Project for Systems Biology of Microorganisms
高橋ＰＩ（微生物創生）プロジェクト
Summary（研究概要）

Our research areas are Bioinformatics and Systems Biology. Our Bioinformatics approach aims to deeply
and clearly understand massive biological experiment data, e. g., sequence data by next generation
sequencers. Systems Biology aims to understand how biological systems work and help the experimental
design mainly by mathematical modelling approach.
我々はコンピュータ解析によって , 次世代シーケンサーを含む様々な生物実験で得られる大量デー
タからの新規生物学的知見の創出 , 並びに , 数理モデルアプローチによる生命現象の解明に取り組んでいます . 大量データによる生命の「構成要素の理解」, 数理モデルによる「挙動の理解」という二つのコンセプトの下 , 病原真菌を含む微生物を対象に細胞機能の分子レベルでの理解を目指しています .
Associate Professor

Research Assistant Professor
Research Assistant Professor

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Investigation of the relationships between heterogeneity

against environmental stresses and pathogenicity inpathogenic fungi Aspergillus fumigatus

Yoko Kusuya, Cai Bian, Yu Lu, Jun-ichi Ishihara, Hiroki
Takahashi

Stress responses and pathogenicity have been extensively

studied in Aspergillus fumigatus, the main causative pathogenof life-threatening aspergillosis. The heterogeneity in thispathogen has recently attracted increasing attention. In thisproject, we used more than 100 clinically isolated strains toinvestigate several properties relevant to the pathogenicity of
A. fumigatus, namely, hypoxia growth, adaptation to
nutrients such as copper, mimicking human lung. We

compared these strains in whole genome level and tried touncover genomic variations. In addition, we conductedcomparative transcriptome analysis to uncover the genes
underpin the heterogeneity.

26

准Hiroki Takahashi
Yoko Kusuya（～2022.8）
Jun-ichi Ishihara
Machiko Zen
Emi Shirai（2022.11～）

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

高橋 弘喜
楠屋 陽子
石原 潤一
全 真知子
白井 江美

2. Systems biology for understanding the stress responses

in bacteria

Jun-ichi Ishihara, Hiroki Takahashi
It is conceivable that the heterogeneity could be one of theadaptation mechanisms to a diverse of environments inbacteria. We address the heterogeneity of bacteria by two

approaches; one is the systems biology approach where wederive the mathematical model and conduct the simulation oftranscriptional regulation in metal response, and second is the

microfluidic device to directly measure the single cell behaviorof bacteria. We launched the assembling of device andsucceeded the microfluidic device which could be useful todetect the single cell behavior.

3. D e v e l o p m e n t f o r g e n o m e a n a l y s i s t o o l s a n dbioinformatic analysis for collaborative projects.

Jun-ichi Ishihara, Masaki Nagayama, Hiroki Takahashi

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Since NGS development, genome and omics data are５）Bian C, Kusuya Y, Hagiwara D, Ban S, Lu Y,

to analyze their own genome and omics data, and give theprotein AfgapA contributes to hypoxia fitness inrapidly accumulating. We collaborate with several researchers

overview of the data by using multivariate and statisticalanalysis.

Nagayama M, Takahashi H. Dysfunction of Ras-GAP
Aspergillus fumigatus. Curr Genet. 68（5-6）: 593-603.
2022.

６）Tonoki A, Nagai S, Yu Z, Yue T, Lyu S, Hou X,

Publications

１）Bian C, Kusuya Y, Sklenář F, D’hooge E, Yaguchi T,

Ban S, Visagie CM, Houbraken J, Takahashi H, Hubka

V. Reducing the number of accepted species in Aspergillus
series Nigri. Studies in Mycology. 102: 95-132. 2022.

２）Tsuji M, Ishihara JI, Toyoda A, Takahashi H, Kudoh S.

Genome Sequence of Basidiomycetous Yeast Mrakia
gelida MGH-2, Isolated from Skarvsnes Ice-Free Area,

Onuki K, Yabana K, Takahashi H, Itoh M. Nitricoxide-soluble guanylyl cyclase pathway as a contributor
to age-related memory impairment in Drosophila. Aging
Cell. 21（9）: e13691. 2022.

７）Tsuji M, Ishihara JI, Toyoda A, Takahashi H. High-

Quality Genome Sequence of Cystobasidium tubakii JCM
31526T, Isolated from East Ongul Island, Antarctica.

Microbiol Resour Announc. 11（10）: e0074122. 2022.

East Antarctica. Microbiol Resour Announc. e0106422.

８）Tsuji M, Ishihara JI, Gotoh Y, Hayashi T, Takahashi H.

３）Miyakoshi M, Morita T, Kobayashi A, Berger A,

Strains Isolated from Areas near Syowa Station, East

2022.

Takahashi H, Gotoh Y, Hayashi T, Tanaka K.

Glutamine synthetase mRNA releases sRNA from its

Draft Genome Sequences of Five Cystobasidium ongulense
Antarctica. Microbiol Resour Announc. e 0022422 .
2022.

3’UTR to regulate carbon/nitrogen metabolic balance in９）Alimu Y, Kusuya Y, Yamamoto T, Arita K, Shigemune

４）Kusuya Y, Bian C, Hagiwara D, Ban S, Takahashi H.

Po l y h e x a m e t h y l e n e B i g u a n i d e R e s i s t a n c e i nEnterobacteriaceae. eLife. 11: e82411. 2022.

A novel Zn2-Cys6 transcription factor clcA contributes tocopper homeostasis in Aspergillus fumigatus. Curr Genet.

68（5-6）: 605-617. 2022.

千葉大学

N , Ta k a h a s h i H , Ya g u c h i T. M e c h a n i s m o f
Purpureocillium lilacinum strains. Biocontrol Sci.
27（3）: 117-130. 2022.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

27

Management of Unit of Microbiological Resources
バイオリソース管理室
Summary（研究概要）

We are developing a system for preservation, management and distribution of pathogenic fungi andactinomycetes. We support the base of research and education of mycoses and their pathogens in order tosupply reliable strains that are added new information.
病原真菌・放線菌の「保存・管理・提供」体制を整備し , 最新情報が付加された信頼できる菌株の提供を通じて , 真菌症ならびにその原因菌の研究・教育の基盤を支援している .

Assistant Professor

Research Technician

Post Doctoral Fellow

JSPS Post Doctoral Fellow

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. M e c h a n i s m o f Po l y h e x a m e t h y l e n e B i g u a n i d e

Resistance in Purpureocillium lilacinum strains.

Alimu Y , Kusuya Y , Yamamoto T , Arita K , Shigemune
1

N , Takahashi H
2

1

2

3

1

2

2

, Yaguchi T

1, 3, 4

准Takashi Yaguchi
Sayaka Ban
Junko Ito
Isato Yoshioka
Vit Hubka
Kaomi Higuchi
Akiko Kota
Yu Uehara

Associate Professor

1

Medical Mycology Research Center, Chiba University,
Chiba, Japan

R&D-Safety Science Research, Kao Corporation, Tochigi,

Japan

Molecular Chirality Research Center, Chiba University,

教

授

助
技

教
術

職

員

特 任 研 究 員
学振外国人特別研究員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

矢口 貴志
伴 さやか
伊藤 純子
吉岡 育哲
ヴィト・フブカ
樋口芳緒美
甲田 暁子
上原 ゆう

resistant（IR）strains IFM 67050（IR）and IFM 65838（IR）

from the type strain P. lilacinum CBS 284.36T via cultivation
in a medium containing high concentrations of PHMB. We

then analyzed the DNA sequences via Illumina sequencing toevaluate the presence of genetic mutations in IFM 65838（IR）. Further, we established an IFM 65838（IR）uridine/uracil auxotrophic strain, and using the orotidine- 5’ -decarboxylase gene（pyrG）as a selection marker, we tried toknockout a mutant gene in IFM 65838（IR ）using the

CRISPR-Cas9 genome-editing technique. The growth ratesof IFM 67050（IR ）and IFM 65838（IR ）in medium

Chiba, Japan

containing PHMB increased, and the minimum inhibitoryJapan（Fig. 1）. Based on the DNA sequence analysis, we found a

Purpureocillium lilacinum has been recently found to（G779A）in IFM 67050（IR）and IFM 65838（IR）. Thispolyhexamethylene biguanide hydrochloride（PHMB）. We

that cause partial sequences deletion（p. Y251_G281del）in

4

Plant Molecular Science Center, Chiba University, Chiba,

contaminate a 20%（200, 000 µg/mL）aqueous solution of

aimed to elucidate the mechanism underlying the resistance of
P. lilacinum to PHMB. First, we induced the PHMB-

28

千葉大学

concentrations（MICs ）against PHMB also increased

nonsynonymous point mutation in the gene PLI-008146

point mutation leads to site combinations of splicing changes
the ∆PLI-008146 locus of IFM 65838（IR）, and deletion

sequences include partial adenosine/AMP deaminase motif

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

（PF 00962）orthologous to adenosine deaminase（ADA ）（GeneBank: OA Q82383 .1）（Fig. 2）. Furthermore, themutant gene ∆ PLI-008146 was successfully knocked out fromthe resistance-induced strain using a novel CRISPR-Cas9

gene transformation method. A considerable reduction in
growth rate and MIC against PHMB was observed in theabsence of the mutant gene. Therefore, ADA may represent
an important resistance factor in PHMB-resistant P. lilacinum.

FIG. 2. Growth rate of P. lilacinum in different concentrationof PHMB. PDA contained PHMB concentration: 0µg/mL, 10, 000 µg/mL, 20, 000 µg/mL and 30, 000µg/mL. Concentration of conidia suspension 106
conidia/mL. Incubated in 25℃ for 7 and 10 days.
（R）: PHMB-resistant strain, （IR）: Induced PHMBresistant strain, （KO）: The mutant gene ∆PLI-008146
knockout strain.

2. Molecular phylogenetic study of strains morphologically

identified as Exophiala dermatitidis from clinical andenvironmental specimens in Japan.

Alimu Y1, Ban S1, Yaguchi T1
１

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

In this study, we aimed to clarify the phylogenetic

distribution of Exophiala dermatitidis in Japan and describe thecharacteristics of each genotype. We examined 67 clinical andenvironmental isolates that were morphologically identified

FIG. 1. The predicted protein domain structure on ∆PLI008146 locus. The figure indicates partial deletion（p. Y251_G281del）of the adenosine/AMP deaminasemotif （PF00962）in the ∆PLI-008146 locus of IFM
65838（IR）.

and preser ved as E. dermatitidis, and confirmed theidentification based on the ribosomal DNA internaltranscribed spacer（ITS）region. Genotype analyses werealigned and compared using maximum likelihood phylogenetic
tree analyses of the ITS1 region. Additionally, the strains ofeach gene type were tested for mycological characteristics,

such as growth temperature, growth rate, and drug
sensitivity. The 67 strains examined were isolated from Japan,

the United States, Brazil, Venezuela, and China. According
to the establishment of a phylogenetic tree for the ITS1

region, 45 of the 49 Japanese strains were classified as
genotype A, two as genotype B, and two as genotype D（A2according to the method of Matos et al.（2003））. Chinesestrains were divided into genotypes A and D（A 2）, and千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

29

South American strains were classified as genotype A, B, B2,

and C2, while all strains from the USA belonged to genotype

A（Fig. 1）. Namely, New genotype groups B2 and C2 wereidentified among some Japanese and Venezuelan strains.

There were no specific differences among the genotypes or
isolated regions in the antifungal susceptibility for all E.

dermatitidis isolates. However, genotypes B2 and D（A2）exhibited growth at higher temperatures than the othergenotypes（Fig. 2）.

FIG. 2. Growth characterization on PDA medium. 104 cells/
ml（10 µl）, incubated in 30, 37, 40, 42 and 44℃
on PDA, 14 days. The hyphal and the conidia wereobserved by the SEM.

3. Gene amplification of CYP51B: a new mechanism of

resistance to azole compounds in Trichophyton

indotineae.

Yamada T 1, 2, Yaguchi T 3, Maeda M 1, Alshahni MM 1,

Salamin K4, Guenova E4, 5, Feuermann M6, Monod M4, 5
FIG. 1. T he phylogenetic tree calculated by maximum
likelihood method based on the sequences of the
ITS1 region from the 78 members of Exophiala
dermatitidis and relatives. Exophiala heteromorpha CBS
232. 33 was taken as an outgroup. The bootstrap
values shown over than 50%. There were a total of
176 positions in the final dataset. BRA: Brazil, ZA:
South Africa, JPN: Japan, CHN: China, USA:
United States, VEN: Venezuela, SI: Slovenia.

1

2

3

4

5

Teikyo University Institute of Medical Mycology, Tokyo,
Japan

Asia International Institute of Infectious Disease Control,
Teikyo University, Tokyo, Japan

Medical Mycology Research Center, Chiba University,
Chiba, Japan

Depar tment of Der matolog y, Centre Hospitalier
Universitaire Vaudois, Lausanne, Switzerland

Faculty of Biology and Medicine, University of Lausanne,
Lausanne, Switzerland

30

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

6

Swiss-Prot Group, SIB Swiss Institute of Bioinformatics,
Geneva, Switzerland

Trichophyton indotineae causes dermatophytosis that is

resistant to terbinafine and azole compounds. The aim of thisstudy was to determine the mechanisms of resistance toitraconazole（ITC）and voriconazole（VRC）in strains of T.

indotineae. Two azole-sensitive strains（ITC MIC < 0.125

mg/mL; VRC MIC < 0.06 mg/mL）and four azole-resistantstrains（ITC MIC > 0.5 mg/mL; VRC MIC > 0.5 mg/mL）
were used for the investigation. The expression of MDR genes
encoding multidrug transporters of the ABC family for which
orthologs have been identified in Trichophyton rubrum andthose of CYP51A and CYP51B encoding the targets of azole

V. Reducing the number of accepted species in Aspergillus
series Nigri. Stud Mycol. 102: 95-132, 2022.

４）Čmoková A, Kolařík M, Guillot J, Risco-Castillo V,

Cabañes FJ, Nenoﬀ P, Uhrlaß S, Dobiáš R, Mallátová
N, Yaguchi T, Kano R, Kuklová I, Lysková P, Mencl

K, Hamal P, Peano A, Hubka V. Host-dr iven

subspeciation in the hedgehog fungus, Trichophyton
erinacei, an emerging cause of human dermatophytosis.
Persoonia 48: 203-218, 2022.

５）Glässnerová K, Sklenář F, Jurjević Ž, Houbraken J,

Yaguchi T, Visagie CM, Gené J, Siqueira JPZ, A.

Kubátová A, Kolařík M, Hubka V. A monograph of

Aspergillus section Candidi. Stud Mycol 102 : 1 - 51 ,2022.

antifungal compounds were compared between susceptible６）Hara Y, Tanimura D, Manome T, Arai MA, Yaguchi T,

overexpressed in T. indotineae resistant strains. However,from the culture of Nocardia arthritidis IFM 10035T inand resistant strains. TinMDR 3 and TinCYP 51 B were

only small diﬀerences in susceptibility were observed between
TinMDR3 disruptants and parental strains overexpressing

Ishibashi M. Isolation of peptidolipin NA derivatives
the presence of mouse macrophage cells. Heterocycles.

104（1）: 185-190, 2022.

TinMDR3. In contrast, whole-genome sequencing revealed７）Hara Y, Watanabe K, Takaya A, Manome T, Yaguchi T,

repeats at the specific position of their genomes in three

A and B, isolated from a culture of Nocardia uniformis

the creation of a variable number of TinCYP 51 B tandem

resistant strains. Downregulation of TinCYP51B by RNA
interference（RNAi ）restored the susceptibility of azole-

Ishibashi M. Two Bioactive Compounds, Uniformides
IFM 0856T in the presence of animal cells. Org Lett.
24: 4998-5002, 2022.

resistant strains, while overexpression of TinCYP 51 B

８）Higuchi S, Noguchi H, Matsumoto T, Kashiwada-

conclusion, the reduced sensitivity of T. indotineae strains to

Fukushima S. Dermatophyte antigen kit in diagnosis ofconferred resistance to a susceptible strain of T. indotineae. In
azoles is mainly due to the overexpression of TinCYP51B
resulting from additional copies of this gene.

Nakamura K, Kudo M, Kano R, Yaguchi T, Sato T,
onychomycosis caused by Fusarium solani. J Dermatol.
2022. DOI:10.1111/1346-8138.16693

９）Hirose D, Tokiwa T, Yaguchi T. Two novel Oidiodendron

Publications１）Alimu Y, Ban S, Yaguchi T. Molecular phylogenetic

study of strains morphologically identified as Exophiala

species isolated from roots of Vaccinium boninense in the
Bonin Islands, Japan. Phytotaxa 566（1）: 89 - 104 ,2022.

dermatitidis from clinical and environmental specimens

10）Hirose D, Watanabe K, Hagiuda R, Tachikawa R,

２）Alimu Y, Kusuya Y, Yamamoto T, Arita K, Shigemune

distribution of Aspergillus fumigatus and its related species

in Japan. Med Mycol J. 63（1）: 1-9, 2022.

N , Ta k a h a s h i H , Ya g u c h i T. M e c h a n i s m o fpolyhexamethylene biguanide resistance inKamijo T, Yaguchi T, Hirota M. Diversity andin Izu and Ogasawara islands, Japan. Med Mycol J.
63（4）: 99-107, 2022.

Purpureocillium lilacinum strains. Biocont Sci. 27（3）:11）Ishikawa K, Ishii M, Yaguchi T, Katada T, Ichinose K,

３）Bian C, Kusuya Y, Sklenář F, D’hooge E, Yaguchi T,

novofumigatus inhibits NF-kB activity induced by

117-130, 2022.

Ban S, Visagie CM, Houbraken J, Takahashi H, Hubka

千葉大学

Oh a t a S. e p i - A s z o n a l e n i n B f ro m A s pe r g i l l u s
ZFTA-RELA fusion protein that drives ependymoma.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

31

Biochem Biophys Res Commun 596: 104-110, 2022.

12）Inoue Y, Ohashi Y, Shimomura Y, Sotozono C,

Hatano H, Fukuda M, Eguchi H, Araki Sasaki K,

Suzuki T, Hoshi S, Asari S, Sunada A, Kimura K,

Yaguchi T, Makimura K, Multicenter Study Group of19）Noguchi H, Matsumoto T, Kubo M, Kimura U,

H i r u m a M , Ya g u c h i T, Ya m a d a T, K a n o R .

Dermatophytoma caused by terbinafine-resistant

Trichophyton rubrum treated with fosravuconazole. J
Dermatol. 49: e407-e408, 2022.

Fungal Keratitis in Japan. Multicenter prospective20）Noguchi H, Matsumoto T, Kimura U, Hiruma M,

of culture positive cases. Jpn J Ophthalmol. 66（3）: 227-

Fukushima S. Empiric antifungal therapy in patientsobservational study of fungal keratitis in Japan: analyses
239, 2022.

13）Kano R, Satoh S, Yaguchi T, Masuda M, Makimura K,

de Hoog GS. Phenotypic characteristics of Prototheca
species occuring in humans and animals. Med Mycol J.
63（1）: 21-24, 2022.

14）Kashiwada-Nakamura K, Noguchi H, Hiruma M,

Tanaka M, Yaguchi T, Kusaba Y, Miyashita A, Hayashi

H, Fukushima S. Dermoscopic findings of sporotrichosis

Kano R, Yaguchi T, Kubo M, Kashiwada-Nakamura K,

with cutaneous and subcutaneous phaeohyphomycosis. J.
Dermatol. 49: e564-e571, 2022.

21）Noguchi H, Matsumoto T, Kubo M, Kimura U,

Hiruma M, Tanaka M, Yaguchi T, Yamada T, Kano R.

Effective response of dermatophytoma caused byterbinafine-resistant Trichophyton interdigitale solely to
topical efinaconazole. Mycopathologia. 187: 421-422,
2022.

manifesting as a punched-out ulcer. J Dermatol. 49:

22）Oiki S, Yaguchi T, Urayama S, Hagiwara D. Wide

15）Khalifa H, Hubka V, Watanabe A, Nagi M, Miyazaki

iprodione in Penicillium species. PLoS One. 17（1）:e449-e450, 2022.

Y, Yaguchi T, Kamei K. Prevalence of antifungal

e0262521, 2022.

resistance, genetic basis of acquired az ole and23）Sklenář F, Glässnerová K, Jurjević Ž, Houbraken J,

recovered from an international collection. Antimicrob

Chen AJ, Nováková A, Yaguchi T, Kolařík M, Hubka

echinocandin resistance, and genotyping of Candid krusei

Samson RA, Visagie CM, Yilmaz N, Gené J, Cano J,

Agents Chemother. 66（2）: e0185621, 2022.

V. Taxonomy of Aspergillus series Versicolores: species

Shimomura Y, Sotozono C, Hatano H, Fukuda M,

variability. Stud Mycol. 102: 53-93.

16）Kimura K, Inoue Y, Asari S, Sunada A, Ohashi Y,

reduction and lessons learned about intraspecificEguchi H, Araki Sasaki K, Suzuki T, Hoshi S, Tobe T,24）Takamatsu A, Yaguchi T, Tagashira Y, Watanabe A,

Fungal Keratitis in Japan. Multicenter prospective

retrospective cohor t study. Antimicrob Agents

Yaguchi T, Makimura K, Multicenter Study Group ofobservational study of fungal keratitis in Japan: analyses
of in vitro susceptibility tests for combinations of drugs.
Jpn J Ophthalmol. 66（3）: 240-253, 2022.

17）Mohamed A, Obanda BA Njeri HK, Loroyokie SN,

Honda H. Nocardiosis in Japan: a multicentric
Chemother. 66（2）: e01890-21, 2022.

25）Yamada T, Yaguchi T, Maeda M, Alshahni MM,

Salamin K, Guenova E, Feuermann M, Monod M.

Gene amplification of CYP51B: a new mechanism ofMashedi OM, Ouko TT, Gatumwa EM, Korir RK,

resistance to azole compounds in Trichophyton indotineae.

pulmonary aspergillosis in tuberculosis patients in Kenya.

2022.

Yaguchi T, Bii CC. Serological evidence of chronic
BMC Infect Dis. 22: 798-806, 2022.

18）Noguchi H, Matsumoto T, Kimura U, Hiruma M,

K ano R , Yaguchi T, K ashiwada-Nakamur a K,

Fukushima S. Textbook case of onychomycosis caused by
Scopulariopsis brevicaulis. J Dermatol. 49（1）: e38-e39,
2022.

32

distribution of resistance to the fungicides fludioxonil and千葉大学

Antimicrob Agents Chemother. 66（6）: e 0005922 ,26）Yasuda-Sekiguchi F, Kamata A, Hosokawa R, Kouno

M, Takahashi S, Yaguchi T, Aoyama K, Sato T. A caseof kerion celsi caused by Trichophyton tonsurans, a plateculture of which showed yellow-green fluorescence under
UVA light. Med Mycol J. 63（2）: 37-41, 2022.

27）Yoneyama T, Elshamy AI, Yamada J, El-Kashak WA,

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Kasai Y, Imagawa H, Ban S, Noji M, Umeyama A.

30）Watanabe C, Kimizuka K, Fujikura Y, Hamamoto T,

MurE ligase and histidine kinase via in silico study. Appl

Miyata J, Matsukuma S, Kawana A. Mixed infection of

Antimicrobial metabolite of Cordyceps tenuipes targeting
Microbiol Biotechnol. 106（19）: 6483-6491, 2022.

28）Yoneyama T, Takahashi H, Grudniewska A, Ban S,

Umeyama A, Noji M. Ergostane type sterols from

Watanabe A, Yaguchi T, Sano T, Suematsu R, Kato Y,

cytomegalovirus and pulmonary nocardiosis caused by

Nocardia elegans diagnosed using nanopore sequencing
technology. Intern Med. 61（10）: 1613-1617, 2022.

several Cordyceps strains. Natural Product31）Watanabe Y, Yoshida Y, Tokiwa T, Higo M, Ban S,29）Yoshioka I, Nakagawa H, Kirimura K. Non-production

Yaguchi T, Iwatsuki M. Hakuhybotric acid, a new

Communications. 17（6）: 1-8, 2022.

of mycotoxins by citric acid hyperproducer Aspergillus

tubingensis（A. niger ）WU- 2223 L: Evidence for its

biosafety based on genome sequence and metabolite
analyses. JSM Mycotoxins. 75-83, 2022.

千葉大学

Ikeda A, Noguchi Y, Hirose T, Sunazuka T, Nonaka K,

antifungal polyketide produced by a mycoparasitic fungus
Hypomyces pseudocorticiicola FKI- 9008 . J Gen Appl
Microbiol. 68: 200-206, 2022.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

33

Project for RNA Regulation

原口（RNA 制御）プロジェクト
Summary（研究概要）

Gene regulatory networks determine not only cellular specificity of development, differentiation, andproliferation but also cellular response or competency to viruses, bacteria, and mycetes. This project, which
has started in July 2020, concentrate on miRNA, which suppresses expression of many genes at the posttranscriptional level, to develop basic research of new therapeutic strategies for human diseases such as
cancer.
遺伝子発現の制御ネットワークは , その細胞の発生 , 分化 , 増殖に関する特異性はもちろん , 真菌・細菌・ウイルス等の寄生体に対する宿主の応答性や competency をも規定している . 令和２年７月に開始された本プロジェクトでは , このような遺伝子制御ネットワークの乱れの原因となる因子として , 多数の遺伝子群の発現を post-transcriptional レベルで一括して負に制御する miRNA に注目し , その制御法の開発を行い , がんなどのヒト疾患の制圧への基盤研究を展開する .
Research Associate Professor
Research Assistant Professor

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Visiting Professor

特 任 准 教 授

Takeshi Haraguchi
Kazuyoshi Kobayashi
Noriko Sakurai
Naomi Aikawa
Hideo Iba

1. Development of drug delivery system（ DDS ）forSuper-S-TuD to establish RNA medicine for cancer
therapy.

Takeshi Haraguchi, Kazuyoshi Kobayashi and Hideo Iba
Joint Division of RNA Therapy, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

We previously developed the RNA decoy suppressing

specific miRNA activity very eﬃciently, which was designated

TuD（Tough Decoy）and expressed from viral vectors. S-TuD（Synthetic TuD ）, which mimics the unique secondary

特

任

助

教

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
客

員

教

授

原口
小林
桜井
相川
伊庭

健
和善
典子
尚美
英夫

challenge at present. We previously established basic

formulation for Lipid nanoparticle（LNP）preparation using

COATSOME-X（developed by NOF）and Super-S-TuD

1 4 1 / 2 0 0 c （suppresses the entire miR- 2 0 0 famil y ）encapsulated by such LNPs was shown to suppress the formed
tumors eﬃciently when intravenously administrated into nude
mice bearing tumors formed by a human tumor cell line.

For innovative therapy for broad spectrum of tumors, we

now target miR- 21 , which is expressed in almost all theepithelial tumors at very high levels and has been shown to bestrong causative of cancer through inhibition of many

important tumor suppressor genes simultaneously. Since miR-

21 is one of the most abundant miRNA species in cancer

structure of TuD was also developed as RNA medicine. It has

cells, both high dosage of Super-S-TuD21（targeting miR-folds enhancement in its specific activity of the target miRNAdosage of Super-S-TuD encapsulated by COATSOME-X wasadministrated Super-S-TuD into tumor tissues is the major

instead, which showed very eﬀective intracellular delivery andbeen further improved as Super-S-TuD, which showed 3-7
inhibition. For the efficient deliver y of systemically

34

千葉大学

21）and efficient DDS would be required. However, hightoxic to nude mice. We therefore used COATSOME-Y

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

much lower toxicity in mice. We optimized method ofmodifying the surface layer of LNP with ligand molecules thatand PEGylated lipids and established the formulation of LNP

ligand molecules are located at the surface layer of the LNP

preparing LNP composed of COATSOME-Y, helper lipids
encapsulating Super-S-TuD 21 . This LNP encapsulating

Super-S-TuD21 is about 30nm and can fully suppress miR-21
activity in cancer cell lines at the dosage of 300nM（Nucleic
acids Conc. ）. Such LNP showed high retentivity in blood

have the ability to bind to target cells. It is important that thefor that the ligand molecules efficiently bind to the target
cells. Therefore, we investigated the method of binding theligand molecule to the tip of the PEG on the surface layer of

LNP using R8 peptide as the ligand molecule and achieved aand good pharmacokinetics with specific accumulation ofremarkable increase in the eﬃciency of nucleic acid delivery.

tumor bearing mice.

high blood retention and accumulation in tumor tissue in

LNP into tumor tissues, when administrated into tail vain of
To improve eﬃciency of LNP encapsulating Super-S-TuD,

we developed a method to add “active targeting” to LNP by

千葉大学

Furthermore, this LNP modified with R8 peptide showed

xenograft mouse.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

35

Merged project of respiratory pathophysiology and pathobiology
巽・田邉・寺田（呼吸器生体制御解析）プロジェクト
Summary（研究概要）

When we consider overcoming intractable infections encountered in clinical respiratory medicine, weshould take morphologically / functionally impaired biological structure and functions in hosts into
consideration other than pathogens that cause infection. To control intractable respiratory diseases including
intractable respiratory infections, elucidation of respiratory pathobiological control mechanisms could be
essential in regard with treatment strategy aimed for recovery and regeneration from lung injury.
Three major topics have been set up since this merged project of respiratory pathophysiology andpathobiology was started.
1）search for new treatment seeds based on the combining deep clinical phenotyping and omics analysis.
2）search for mechanisms of disordered respiratory control of breathing during sleep, and search forneurotransmitters and neuromodulators associated with disordered respiratory control of breathing.
3）search for mechanistic functions to overcome respiratory infection.
呼吸器臨床で遭遇する真菌を含む難治性感染症は , 感染を生じる病原体 pathogen の問題以外に , 生体構造が形態的／機能的に障害を受けている host に発症することが問題となる . 難治性呼吸器感染症
を含む難治性呼吸器病態の制御には , 呼吸器生体制御機構の解明 , その障害からの回復／再生を目指した治療戦略が必要になる .
呼吸器生体制御解析プロジェクトの立ち上げ以来 , ３つの主な研究テーマ（Research Focus）を挙げており , 呼吸器領域全体を対象として基礎的／臨床的研究を施行することにより , 幅広い視点から呼吸器生体制御に関する知見を得る必要がある .
１）難治性呼吸器疾患に対する新規治療戦略の探索
２）睡眠調節障害の病態の解明と神経伝達物質／神経修飾物質の観点からの新規治療法の開発
３）生体制御の観点からの呼吸器感染症の病態解明

Research Assistant Professor

Koichiro Tatsumi
Nobuhiro Tanabe
Jiro Terada
Naoko Kawata
Yoko Irukayama
Takayuki Jujo
Rika Suda
Ayumi Sekine
Hiroyuki Tajima
Hideki Mikami

36

千葉大学

Research Professor
Research Professor
Research Professor

Research Associate Professor
Research Associate Professor
Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Research Assistant Professor

真菌医学研究センター報告

特

任

教

授

特

任

教

授

特

任

教

授

特 任 准 教 授
特

任

講

師

特

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助

教

特

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教

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助

教

特

任

助

教

特

任

助

教

第 26 巻

2022

巽
浩一郎
田邉
信宏
寺田
二郎
川田奈緒子
入鹿山容子
重城
喬行
須田
理香
関根亜由美
田島
寛之
見上
英樹

1. Stratifin as a novel diagnostic biomarker in serum for

diffuse alveolar damage. Nat Commun 2022 Oct 4; 13（1）: 5854.

Arakawa N, Ushiki A, Abe M, Matsuyama S, Saito Y,

Kashiwada T, Horimasu Y, Gemma A, Tatsumi K, Hattori

underlying mechanism remains unclear. Recently, altered gut

microbiota were found in patients with pulmonary arterial
hypertension（PAH）and in experimental PAH models. The

aim of this study was to characterize the gut microbiota inpatients with CTEPH and assess the relationship between gut
dysbiosis and inflammation in CTEPH.

N, Tsushima K, Miyashita K, Saito K, Nakamura R, Toyoda

Methods: In this observational study, fecal samples were

Izumi T, Ohno Y, Saito Y, Hanaoka M

participants. The abundance of gut microbiota in these fecal

T, Ogawa K, Sato M, Takamatsu K, Mori K, Nishiya T,

Among the various histopathological patterns of drug-

induced interstitial lung disease（DILD）, diffuse alveolar
damage（DAD）is associated with poor prognosis. However,there is no reliable biomarker for its accurate diagnosis. Here,collected from 11 patients with CTEPH and 22 healthy

samples was assessed using 16S ribosomal ribonucleic acid（rRNA ）gene sequencing. Inflammatory cytokine andendotoxin levels were also assessed in patients with CTEPH
and control participants.

Results: The levels of serum tumor necrosis factor- α

we show stratifin/14-3-3σ（SFN）as a biomarker candidate（TNF- α）
, interleukin（IL ）- 6 , IL- 8 , and macrophage

independent cohorts（including totally 26 patients with

with CTEPH. Plasma endotoxin levels were significantly

found in a proteomic analysis. The study includes twoDAD）and controls（total 432 samples）. SFN is specificallyelevated in DILD patients with DAD, and is superior to the

known biomarkers, KL-6 and SP-D, in discrimination of

inflammatory protein（MIP）-1α were elevated in patients
increased in patients with CTEPH（P < 0.001）, and werepositively correlated with TNF-α, IL-6, IL-8, and MIP-1α

levels. The 16S rRNA gene sequencing and the principal

DILD patients with DAD from patients with other DILD

coordinate analysis revealed the distinction in the gut

from patients with idiopathic DAD, and in lung tissues andcontrol participants as well as the decreased bacterial alpha-patterns or other lung diseases. SFN is also increased in serum
bronchoalveolar lavage fluid of patients with DAD. In vitro
analysis using cultured lung epithelial cells suggests thatextracellular release of SFN occurs via p 53 -dependent
apoptosis. We conclude that serum SFN is a promising

microbiota between patients with CTEPH（P < 0.01）anddiversity in patients with CTEPH. A random forest analysis
for predicting the distinction in gut microbiota revealed an
accuracy of 80.3%.

Conclusion: The composition of the gut microbiota in patientsbiomarker for DAD diagnosis.

with CTEPH was distinct from that of healthy participants,

2. Altered gut microbiota and its association withcytokines and endotoxins in CTEPH.

inflammation in patients with chronic thromboembolic
pulmonary hypertension: A single-center observational
study in Japan. BMC Pulm Med 2022 ; 22 : 138 .
doi:10.1186/s12890-022-01932-0.

Ikubo Y, Sanada TJ, Hosomi K, Park J, Naito A, Shoji H,

Suda R, Sekine A, SugiuraT, Shigeta A, Sakao S, Tanabe
N, Mizuguchi K, Kunisawa J, Suzuki T, Tatsumi K

Background: The pathogenesis of chronic thromboembolic

pulmonary hypertension（CTEPH ）is considered to be

associated with chronic inflammation; however, the

千葉大学

which may be associated with the elevated inflammatory

3. Effects of the combination of atomoxetine andoxybutynin in Japanese patients with obstructive sleep
apnea: A randomized controlled crossover trial.
Respirology 2022 Oct 2. doi:10.1111/resp.14383.

Kinouchi T, Terada J, Sakao S, Koshikawa K, Sasaki T,

Sugiyama A, Sato S, Sakuma N, Abe M, Shikano K, Hayama
N, Siko Y, Ozawa Y, Ikeda S, Suzuki T, Tatsumi K

Background and objective: The possibility of combination

therapy with atomoxetine（ATO）and oxybutynin（OXY）

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

37

has been suggested for obstructive sleep apnoea（OSA ）.

nodes have been recognized to play an essential role inuninvestigated in Japanese OSA patients. Therefore, we

blood mononuclear cells（PBMCs ）consist of several

However, the effectiveness of this treatment remains

performed a randomized, crossover, phase II, single-centre
prospective trial to examine the eﬀects of ATO-OXY therapy
in Japanese OSA patients.

Methods: In total, 17 OSA patients participated in thisstudy. The effects of one night of 80-mg ATO plus 5-mg

granuloma formation in pulmonary sarcoidosis. Peripheral

immunocompetent cells and have been shown to play amechanistic role in the pathogenesis of sarcoidosis. However,

the genetic modifications that occur in bulk PBMCs of
sarcoidosis remain to be elucidated.

Purpose: This study aimed to explore the pathobiological

OXY administration were compared with those of nomarkers of sarcoidosis in PBMCs by comparing thesecondary outcomes comprised the apnoea-hypopnoea index

pulmonary sarcoidosis with those of healthy controls by RNA

medication administered before sleep. The primary and（AH I ）and nadir S pO 2, S pO 2 drop time and sleep

architecture, respectively. The safety endpoints included drugtranscriptional signature of PBMCs from patients withsequencing.

Methods: PBMC samples were collected from subjects withside eﬀects and adverse events.

pulmonary sarcoidosis with no steroid/immunosuppressant

desaturation index（ODI）, 4% ODI, and SpO2 drop time of2020 to April 2021, and RNA sequencing was performed

Results: The values of AHI, nadir SpO 2, 3 % oxygen<90% did not significantly differ between patients receiving

ATO-OXY administration and no medication. Sleep

drugs（n = 8）and healthy controls（n = 11）from Augustwith the PBMC samples.

Results: Principal component analysis using RNA sequencing

architecture exhibited a significant change: ATO-OXY

datasets comparing pulmonary sarcoidosis with healthy（p = 0 .03）, rapid eye movement（p < 0 .0001）and sleep

differentiated, in which 270 differentially expressed genes

increased sleep stage N1（p < 0.0001）and decreased stage N2

eﬃciency（p = 0.02）. However, the subanalysis demonstrated
an obvious decrease in AHI in five responder patients. Total

sleep time and basal sleep eﬃciency tended to be lower in the
responders compared with nonresponders（p = 0.065）. No
patients experienced severe adverse events or side eﬀects.

controls revealed that the two groups appeared to bewere found in PBMCs between sarcoidosis and healthy

controls. Enrichment analysis for gene ontology suggested

that some biological processes related to the pathobiology ofsarcoidosis, such as cellular response to interleukin（IL）-1

and IFN-γ, regulation of IL-6 production, IL-8 secretion,

Conclusion: Overall, ATO-OXY therapy does not reduce

regulation of mononuclear cell migration, and response to

in a proportion of patients. Future studies for identifying

KEGG pathway indicated the involvement of tumor necrosis

AHI in Japanese OSA patients, although AHI was decreased
treatment response group characteristics are warranted.

4. Tr a n s c r i p t o m e a n a l y s i s o f p e r i p h e r a l b l o o dfactor（TNF）, toll-like receptor signaling, IL-17 signaling

pathways, phagosomes, and ribosomes. Most of the genes

involved in TNF and IL- 17 signaling pathways andmononuclear cells in pulmonary sarcoidosis.

phagosomes were upregulated, while most of the ribosome-fmed.2022.822094.

Conclusion: The present study demonstrated that bulk gene

Front Med（Lausanne）2022; 9: 822094. doi:10.3389/

Yoshioka K, Sato H, Kawasaki T, Ishii D, Imamoto T, Abe
M, Hasegawa Y, Ohara O, Tatsumi K, Suzuki T

Background: Sarcoidosis is a granulomatous systemic diseaseof unknown etiology. Mononuclear cells such as macrophages
or lymphocytes in lung tissue and hilar or mediastinal lymph

38

lipopolysaccharide, were involved. Enrichment analysis of the

千葉大学

related genes were downregulated.

expression patterns in PBMCs were diﬀerent between patientswith pulmonary sarcoidosis and healthy controls. The changes
in the gene expression pattern of PBMCs could reflect theexistence of sarcoidosis lesions and influence granuloma

formation in sarcoidosis. These new findings are important tostrengthen our understanding of the etiolog y andpathobiolog y of sarcoidosis and indicate a potential

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

therapeutic target for sarcoidosis.

Sugiyama A, Sato S, Sakuma N, Abe M, Shikano K,

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Tatsumi K. Effects of the combination of atomoxetine

Hayama N, Siko Y, Ozawa Y, Ikeda S, Suzuki T,１）Arakawa N, Ushiki A, Abe M, Matsuyama S, Saito Y,

Kashiwada T, Horimasu Y, Gemma A, Tatsumi K,
Hattori N, Tsushima K, Miyashita K, Saito K,

Nakamura R, Toyoda T, Ogawa K, Sato M, Takamatsu

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真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

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真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

41

Project for Evolution and Reproduction
生水・長田（進化生殖）プロジェクト
Summary（研究概要）

Reproduction is essential to living organisms; Through evolution, organisms have changed theirreproductive strategies, from leaving many offspring for a chance of survival to leaving a few offspring andnursing them for assured survival. In vertebrates, the number of eggs laid at one time has been reduced frommillions in fish to one in humans. Nevertheless, humans produce nearly ７ million oocytes during the fetal
period and allow more than 30 follicles per cycle to grow during adulthood, suggesting that humans haveacquired special mechanism to reduce the number of offspring during evolution. We are exploring thismechanism in the hope that it may serve as a new strategy for treating infertility.
生殖は生物の本質に関わる機能であり , 生物進化に伴なって生殖は大きく変化してきた . 低コストで多くの子孫を作る戦略から , コストをかけて少ない子孫を育てる方向への変化である . 哺乳類においても , 一度に生む卵子数は魚類の数百万からヒトの１個にまで漸減した . しかし , ヒト胎児は700万個に迫る数の卵子を有しており , 月経周期当たり30個以上の卵胞が発育することなどから , ヒトは進化の過程で積極的に子供の数を減らす機序を獲得してきたと考えられる . われわれは , この産子数減少機序を明らかにすることで , 不妊症治療にあらたな展開をもたらすことができると考えて研究をおこなっている .
Professor
Professor

Makio Shozu
Hisao Osada

1. Evolution based approach to infertility.

特

任

教

授

特

任

教

授

生水真紀夫
長田 久夫

centromere antibodies using a mouse in vitro maturation

Autoantibodies may affect reproductive function. Some

antiphospholipid antibodies are responsible for recurrent
pregnancy loss. Antinuclear antibody-positive individuals may
lose the number of oocytes more rapidly than usual, leading
to premature ovarian insufficiency; however, the details

model. Furthermore, we are developing a new therapy totarget anti-centromere antibodies.

2. Sex differences in the COVID-19.

Messenger RNA COVID- 19 vaccines are effective inremain to be determined. We screened infertile patients forpreventing severe diseases. After the implementation of theantibody is associated with fertility outcomes. We have foundadverse events that are rare but severe and unique to theantinuclear antibodies to explore which types of antinuclear

the titer-dependent association of anti-centromere antibodies
and IVF failure. Anti-centromere antibodies are characteristic

autoantibodies in scleroderma and have been suggested to be
associated with decreased fertility in scleroderma. Therefore,mRNA vaccines, the real-world survey revealed several
mRNA vaccines: pericarditis in young males, cerebral venous

sinus thrombosis, and Guillain-Barre syndrome. There are
gender diﬀerences in the incidence of adverse eﬀects, as in theincidence of COVID-19. The sex-dependent diﬀerence in the

our findings are consistent with the previous observation that

endocrine environment, such as estrogens and androgens, andare currently investigating the mechanism of action of

events. We are focusing on vulvar ulcers as an unrecognizedscleroderma patients often have long periods of infertility. We

42

千葉大学

immunity may be responsible for the differences in adverse

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

adverse effect of COVID- 19 vaccines. We are analyzing

cancer. BMC Cancer, 2022. 22（1）: p. 753.

public databases such as VAERS to prove that acute vulvar４）Ishikawa, H. and M. S hozu, Ear l y per itoneal

3. Symbiosis with commensal candida during pregnancy.

５）Ishikawa, H. and M. Shozu, Modified Leak-Proof

ulcer is a rare but unique adverse event in young women.

Vaginal candidiasis is a condition that causes itching andvaginal discharge and is often associated with vulvar skinlesions. Although no benefit has been reported for commensal

pregnancy in the pouch of Douglas identified bytransvaginal ultrasound. Int J Gynaecol Obstet, 2022.

Puncture Technique for the Aspiration of Giant Ovarian

Cysts by Instantly Mounting a Plastic Wrap and Gauzewith Cyanoacrylates: A Retrospective Observational
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candida, we are interested in the possible merit of commensal

６）Kai, K., K. Koga, M. Yamamoto, S. Nakagawa, T.

commensalism is reported for intestines. Vaginal candida is

Shozu, Factors affecting the recruitment of new

candida because the immunological benefit of candida
most common in women of reproductive age, especiallyduring pregnancy. Candida is detected in the vaginal for 10-

40 % or more asymptomatic pregnant women. In Japan,

universal screening for vaginal vaginosis（including a test for

Kojima, K. Togashi, Y. Kurihara, H. Sato, and M.

obstetrician-gynecologists in Japan: A report of the
MIRAI Committee of the Japanese Society of Obstetrics

and Gynecology. J Obstet Gynaecol Res, 2022. 48（7）:p. 1961-1967.

candida）is performed during early pregnancy. In the present

７）Kobayashi, T., A. Mitsuhashi, P. Hongying, M.

of asymptomatic commensal candida, its association with

Shozu, Bexarotene-induced cell death in ovarian cancer

study, we analyze the screening data to examine the incidence

bacterial vaginosis, and its contribution to vaginal discharge
or other symptoms or signs.

Shioya, K. Kojima, K. Nishikimi, K. Yahiro, and M.

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Metformin attenuates the production and proliferative
acetate during fertility-sparing treatment for endometrial

千葉大学

2453-2460.

Otsuka, and M. Shozu, Serum FSH as a Useful Marker

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

43

for the Diﬀerential Diagnosis of Ovarian Granulosa Cell

Kobanawa, K. Numata, A. Kawasaki, and M. Shozu,

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千葉大学

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真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology
National BioResource Project Pathogenic Microorganisms
文部科学省

ナショナルバイオリソースプロジェクト ｢病原微生物｣

In FY2002, the Ministry of Education, Culture, Sports,

Science and Technology（MEXT）implemented the National
BioResource Project（NBRP）to construct the framework forsystematic collection, preservation, and distribution ofbioresources, with a focus on those that required strategic

development by the national government. After the reviewing

the NBRP every five years, in FY2022, the fifth phase has

to maintain MALDI-TOF MS data.

The project aims to establish a reliable and suﬃcient at thecollection to deal with infectious diseases carried by any
pathogenic microorganisms.

文部科学省では2002年度からナショナルバイオリソース
プロジェクト（NBRP）を開始し , 国が戦略的に整備するこstared.

とが重要なものについて体系的に収集 , 保存 , 提供などを（MMRC）is the “NBRP Center” for pathogenic microorganism,を行い , 2022年度より第５期が開始された .

actinomycetes）and Nagasaki University’s Institute of Tropicalセンター（病原真菌・放線菌）と長崎大学熱帯医学研究所

Chiba University ’s Medical Mycology Research Centerand this project is carried out by MMRC（pathogenic fungi/行うための体制を整備してきた . その後５年ごとの見直し

NBRP 病原微生物中核機関である千葉大学真菌医学研究

Medicine（pathogenic protozoa）. Working together, they

（病原性原虫）は , 相互の機関の連携を図り, これらの病原pertaining to infectious diseases and pathogens. Specifically,

賦与した信頼できる病原微生物株として提供し , 感染症とcooperate in various eﬀorts to support education and research

微生物株の収集・保存・提供体制を整備して , 高度情報を

they are developing a system for collection, preservation, and

病原体の教育・研究をする人々を支援している . さらに ,reliable strains of pathogenic microorganisms that are backed by

ソースセンター, 岐阜大学微生物遺伝資源保存センターとdata for quality control of stored strains, we are collaboratingを行っている .

Conservation of Microbial Genetic Resources, Gifu University

応できる病原微生物コレクションを目指している .

distribution of pathogenic microorganisms, and they supply

high-level information. Furthermore, in order to utilize thewith the RIKEN BioResource Center and the Center for

保存株の品質管理に活用するため , 理化学研究所バイオリ

連携し , MALDI-TOF MS のレファレンスライブラリー整備
本プロジェクトは , 今後いかなる感染症が発生しても対TABLE 1. Results for the fourth quarter of NBRP（strains）.

FY2018FY2019FY2020

FY2021

FY2022＊

Collection

563

579

886

837

455

Preservation

24, 459

24, 89925, 785

26, 591

27, 036

Provision

1, 152

1, 112

222

1, 319580

Number of strains＊: to 30th Dec., 2022

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

45

FIG.1. E xhibition at the 46th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan.

46

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

International Collaborative Research Program for Tackling the NTDs
（Neglected Tropical Diseases）Challenges in African Countries
Research on the diagnostics of early or latent eumycetoma: Search for new biomarkers, POC diagnostics,
and development of a clinical epidemiology platform

アフリカにおける顧みられない熱帯病（NTDs）対策のための国際共同研究プログラム「早期・潜在性真菌腫診断に関する研究：バイオマーカーの探索・POC 診断と臨床疫学プラットフォームの開発」

This research program is led by Prof. Satoshi Kaneko,

Institute of Tropical Medicine, Nagasaki University, incollaboration with the Institute of Transf ormative
Bio-Molecules, Nagoya University, Tokai National Higher

Education and Research System, the Medical Mycology

Ltd. Furthermore, guidelines will be developed for implementation at medical institutions in areas where facilities are notavailable.

本研究プログラムは , 長崎大学熱帯医学研究所

金子Research Center, Chiba University, the Graduate School of

聰先生がプロジェクトリーダーとなり , 名古屋大学 ト

the Mycetoma Research Center, University of Khartoum. The

医学研究センター, 神戸大学大学院 人間発達環境学研究

Human Development and Environment, Kobe University, andgoals of the project are as follows:（1） Identification of metabolites detected in mycetoma patientsthat can be used as a guide for early diagnosis andランスフォーマティブ生命分子研究所 , 千葉大学 真菌科 , ハルツーム大学 マイセトーマ研究センターが協力し推進する . その目標は以下の通りである .

（1）早期診断・治療終了の目安となるマイセトーマ患者

completion of treatment, and development of diagnostic

から検出される代謝物の特定と特定された代謝物を（2） Development and evaluation of a rapid PCR diagnostic（2）LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification） 法

tools targeting the identified metabolites

method using the LAMP（Loop-Mediated Isothermal

Amplification）method that can be performed at rural

medical facilities with limited facilities.

（3） Establishment of a technique for measuring environmental

DNA from soil to determine the geographic distributionof mycetoma-causing fungi for diagnosis and prevention
measures, and development of a system for measuring
geographic distribution.

標的とした診断ツール開発に向けての検討を用いた設備の整わない地方の医療施設において実施可能な迅速 PCR 診断法の開発と評価（3）診断並びに予防対策に向けてのマイセトーマ原因真菌の地理的分布を把握するための土壌から環境

DNA 測定技術の確立と地理分布測定に向けての仕組みの開発

当センターは , （2）を担当する . ハルツーム大学とマイセトーマ原因菌とその情報を共有し , LAMP 法プライ

The Center will be responsible for（2）. Sharing myceto-

マーの設計と栄研化学（株）の支援による LAMP 診断

Khartoum, designing LAMP primers and creating a prototype

ない地域の医療機関での実施に向けたガイドラインを作

ma-causing fungi and their information with the University of

LAMP diagnostic kit with the support of Eiken Chemical Co,

千葉大学

キットのプロトタイプを作成する . さらに , 設備の整わ成する .

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

47

FIG.1. F inding POC diagnosis using LAMP method of mycetoma infection.

FIG.2. T he Mycetoma Research Center, University of Khartoum and cooperative institutions.
Chiba University is referred as a collaborator of Mycetoma Research Center（rightpanel; indicated by arrow）

48

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

The project for prophylaxis, diagnosis, and treatment for aspergillosis
and the other mycoses in aged and neonate patients
高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発プロジェクト
Aspergillosis is a disease in which Aspergillus spp. , such as

spectrum. 03435-22）. In addition, in collaboration with aAspergillus fumigatus, mainly infect the lung and often lead toEuropean research group, we made recommendations formany countries, and in Japan chronic pulmonary aspergillosis is

aspergillosis and published them in a paper in European

death. Aspergillosis is the most common cause of death indetermining treatment efficacy in chronic pulmonar yparticularly serious due to the growing number of patients

Respiratory Jounrnal（doi:10.1183/13993003.02950-2021）. In

COVID-19, many cases of CAPA（COVID-AssociatedAspergillus cell wall proteins can be new candidates forparticularly among COPD and the aged. In the pandemic ofPulmonary Aspergillosis）with high mortality were reported

terms of the basic research on pathogenic factors, we believe
pathogenic factors, and have been making their analysis. In theworldwide, and the importance of aspergillosis was reaﬃrmed.

current fiscal year, we obtained many groundbreaking findings

exacerbating factors, and drug resistance（especially to azoles,

is induced by the chitin-related protein in the cell wall. These

chronic infection. Another focus of our projectcs mycosis ininfection and are currently submitted for publication.

Our project focuses on the epidemiology of these diseases,

the first-line drug）, which is an important refractory factor inneonates, which has tended to be overlooked until now. We

aim is to find a way to control this disease by analyzing fungal

infections in neonates, especially premature low-birth-weight

infants, and to develope new diagnostic, therapeutic, andprophylactic methods.

The emerging azole-resistance among A. fumigatus has

to show the mechanism by which innate immunity of the hostresults are deeply related to the mechanism of Aspergillus

For the study of deep-seated mycosis among neonates, we

conducted a nationwide retrospective survey in order todetermine numbers of invasive fungal infections（IFI）in Japan.

Based on this background, we reported the utility of gastricaspirate fungal culture for the diagnosis of infantile fungal

pneumonia caused by Rasamsonia piperina. We also reported

become a serious threat to our society. Mutation in Cyp51A is

neonatal meningitis and ventriculitis caused by Aspergillus

A. fumigatus. We had already reported a novel mechanism of

fluid voriconazole concentration was proved useful for the

known to be one of the critical mechanisms of the resistance inthe resistance（Hmg1 mutation）（2018, 2021）along with theinvestigation of cyp51A gene polymorphisms to find out thediﬀerence between Japan and the other countries（2021）.

fumigatus. The continuous monitoring of serum and cerebral

appropriate treatment of this severe case. In this year, weanalyzed two Aspergillus fumigatus strains isolated fromneonatal invasive deep-seated mycosis. We compared above twoThis fiscal year we found that mutations in proteins involved

strains using STRs analysis and found two strains were ofnow, are also involved in azole resistance, and presented as aneonatal intensive care unit is needed for preventing deep-seated

Medical Mycology（ ISHAM 2022 , New Delhi, India ）.

We conducted environmental fungal survey in several NICU inin lipid metabolism, which have not received attention until

new mechanism of resistance at the International Society for
Furthermore, we made a comparison of assay methods ofantibody titer determination, which is an important diagnostic
method for aspergillosis, between the conventional preticipating

method and a newly developed IgG antibody method. The
result was published in Mocrobiology Spectrum（10. 1128/

千葉大学

different background strain. Environmental fungal survey inmycosis in extremely premature and low birth weight infant.

Chiba prefecture and pathogenic fungi were detected. Abovestudy results gave us the important information for theprevention, establishment of diagnosis, and treatment foraspergillosis and the other mycoses in neonate patients.

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

49

アスペルギルス症は主に Aspergillus fumigatus が肺を中表）
. またこれまで注目されてこなかった脂質代謝に関我が国においても欧米諸国と同じく最も死亡者が多い深を明らかにし，新たな耐性機序として , その成果を国際心とした内臓に感染してしばしば死に至る疾患であり ,与するタンパクの変異がアゾール薬耐性化に関与する事

在性真菌症（内臓真菌症）となっている . 特に我が国で医真菌学会（ISHAM2022, インドニューデリー）におい等の慢性肺疾患が多い事から，これらに好発する慢性肺スペルギルス症の治療効果判断についての提言をまとは高齢化が進んでいる事や慢性閉塞性肺疾患（COPD）て発表した . また欧州研究グループとの共同で慢性肺ア

アスペルギルス症の症例が多く , 本疾患の研究は社会的め , 論文として発表した（Eur Respir J 誌にて発表）. さら

こした COVID-19感染症では , 致死率の高いアスペルギ

関する本質的な基礎研究が不可欠であるため , 病原因子に特に重要である . 加えて，世界中に pandemic を引き起ル ス 症 の 合 併（CAPA: COVID-Associated Pulmonaryに , 予防，治療や難治化克服のためには菌の病原因子にの新たな候補であるアスペルギルス細胞壁タンパク質のAspergillosis）が頻発し , アスペルギルス症の重要性は世研究を進めてきた . 今年度は更に研究を進めて宿主の自れらの疾患の疫学，増悪因子，慢性感染で重要な難治化によって誘導される機序を in vitro および in vivo の実験界的に再認識させることとなった . 本プロジェクトはこ因子となる薬剤耐性（特に主力薬剤であるアゾール薬に対する耐性）に関する研究，さらにこれまでともすれば
見逃されがちであった新生児における真菌症に注目し，早産低出生体重児を中心とした新生児等の真菌症の解析等を行い，新規診断法，治療法，予防法の開発へと導く事により本疾患の制圧を目指すものである .

耐性菌はアスペルギルスにおいてもきわめて深刻な問

然免疫がアスペルギルス細胞壁の chitin 関連タンパク質によって証明するなど , 多くの画期的な知見を得た . これらの成果はアスペルギルスの感染機序に深く関与するものであり , 現在論文投稿中である．

新生児領域における研究では，これまでに新生児深在性真菌感染症発症状況の全国調査を実施し , 初めて国内の実態を明らかにした . 加えて，これまで非常に困難とされてきた乳児の糸状菌感染症の診断法に関して , 胃液

題となりつつあるが､ 耐性菌研究には､ 数多くのさまざを使用する真菌培養での診断に成功し論文として公表しまな症例からの最新の検体と臨床情報の収集が不可欠でた . さらに，治療が難しいとされる新生児の A. fumigatus

ある．本センターは日本感染症学会及び日本臨床微生物による髄膜炎・脳室炎症例に対して，血中と髄液中のボ学会により「先進的感染症検査施設」に認定され，真菌リコナゾール濃度を経時的に測定することで，適切な治症リファレンスセンターとして全国の医療施設から種々療を行うことができる可能性を明らかにし．論文にて公の検査依頼､ 診療サポートを引き受けていることから ,表した．また , 皮膚病変を初発症状としていた超早産・多くの検体を集めることができている．令和３年度は夏

超低出生体重児の髄膜炎・脳室炎２例において , 分離さから冬にかけて強烈な COVID-19の第５波，第６波に襲れた A. fumigatus の STRs（microsatellite）解析を実施し ,た．これらに加えて , 慶應大学呼吸器内科 / 感染制御部・た . さらに , このような新生児における真菌症の感染源

な共同研究ネットワークを構築し，アスペルギルス症難（NICU）の管理方法 , 環境中の真菌に関する調査を行われたにもかかわらず , 300件を超える検査依頼があっ

感染制御センター及び NHO 東京病院も加えたより緻密
治化の一因である Aspergillus fumigatus 耐性化の研究を続けることができた . これらの活動により，アスペルギル

２症例は異なった株による感染であることを明らかにしを明らかにするため，千葉県内の新生児集中治療室

い , 環境中から , 病原性のある真菌を検出した . これらの検討結果は，今後の新生児アスペルギルス症の予防，ス症の重要な診断法である抗体検査法について，従来の診断・治療法策定において極めて重要な情報を提供する

沈降抗体法と新規に開発された IgG 抗体測定法の比較検ものである .

討を行い論文として報告した（Mocrobiol Spectr 誌にて発

50

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for
Sustainable Development（SATREPS）
The establishment of a research and reference collaborative system for the diagnoses of fungal infections
including drug-resistant ones in Brazil and Japan

AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「ブラジルと日本の薬剤耐性を含む真菌感染症診断に関する研究とリファレンス協力体制強化プロジェクト」
The number of fungal infections has been increasing in recent

developing a method for detecting a resistance gene.

stem cell transplantation and solid organ transplantation. Also,

LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）.

COPD, and others）are generally susceptible to pulmonary

for data collection and management developed by Vanderbilt

infection in COVID-19 patients have been reported, andfar, more than 300 cases of invasive mycoses of several medical

years because of clinical practice advances such as hematopoietic

patients with chronic lung disease（pulmonary tuberculosis,

fungal infection. Recently, many cases of invasive fungal

researchers put considerable emphasis on fungal infections. In

We developed resistance gene detection methods based on

As a research network tool in Brazil, REDCap®, a system

University, was introduced to the University of Campinas. So

institutions in Brazil have been enrolled and the registration ofgeneral, fungal infections are refractory diseases, and theirclinical cases are still continued.

infections is too high, not only in the medical field but also infungal strain has been established, and we continue the fungal

Recently, various fungi possessing resistance to antifungals

from several hospitals and environmental isolates（from the soil,

mortality is high. In these aspects, the impact of fungal
society.

have become a severe problem. In 2019, CDC in the US had

listed drug-resistant fungi as one of the five “urgent threats. ”
The emergence and increase of drug-resistant fungi are expected

Besides, using this consortium, a bio-resource bank forpreservation. The preserved strains are clinical fungal isolates

air, plants, or natural water）.

真菌感染症患者数は近年増加の一途をたどっていto lead to refractory disease and increased mortality directly. It

る . その背景として , 免疫抑制薬の投与 , 造血幹細胞移

have a higher mortality rate than the ones caused by drug-sen-

患者 , また慢性肺疾患（肺結核症や肺気腫など）を基礎

has been reported that infections caused by drug-resistant fungi

植や固形臓器移植を受けている等による全身的免疫低下

sitive fungi. However, South America, particularly in Brazil,

疾患に有する患者等の局所的免疫低下患者などが増えて

situations, this project was started between the Medical

る . さらに新型コロナウイルス感染症（COVID-19）患University of Campinas.

す重要視されている . 一般に深在性真菌症は難治で致死

patterns of drug target genes in Japan are significantly diﬀerentのインパクトは医療分野のみならず社会的にも極めて高has been little investigated and remains unclear. Given these
Mycology Research Center, Chiba University, and theThis project was finished in 2022. We found that mutation

おり , そのような患者の発症頻度が高いことが挙げられ者に合併した深在性真菌症症例が多数報告され , ますま
率が高いことが知られており , その意味で , 真菌感染症

from those in Europe and Brazil. In other words, it was

いと言える .

might differ depending on the region/country, and it was

薬に対する耐性を有した多種多様な真菌が問題となりつsuggested that the mechanism of antifungal drug resistanceconfirmed that each situation should be considered when

千葉大学

さらに加えて近年 , ヨーロッパ諸国を皮切りに抗真菌つある . 2019年 , 米国 CDC は , 最も差し迫った脅威とな

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

51

る５種の微生物のうちのひとつに薬剤耐性真菌をリストアップした . 薬剤耐性真菌の出現 , 増加は疾病の難治ワークの構築を目指した .

我が国における薬剤の標的遺伝子の変異パターンは欧化 , 致死率の上昇に直結することが予想される . 実際 ,州及びブラジルとは大きく異なることを見出した .

染症の方が致死率が高いとの報告もある . 一方で , ブラ

伝子変異タイプの耐性株を用い , LAMP（Loop-Mediated

薬剤感性真菌による感染症よりも薬剤耐性真菌による感ジルを含めた南米での状況はほとんど調査されておらず , 不明のままであったため , その早急な実態解明はままた耐性遺伝子検出法としてブラジルで検出された遺Isothermal Amplification）法による検出法を確立した .

ブラジル国内の研究ネットワークのツールとして導入

さに社会的要請である .

した , REDCap®（米国 Vanderbilt 大学が開発したデータ

クトではブラジルのサンパウロ州立カンピーナス大学とベースは , 多施設共同で300症例を超える真菌症の症例

本プロジェクトは2022年に事業終了した．本プロジェ

集積管理システム）を基盤とした真菌症の症例データ

連携し , カンピーナス首都圏における耐性真菌による感が集積されている .

ことを通じ , ブラジルにおける難治性真菌感染症の治療た真菌株保存バンクを設立し , 実際に複数の医療機関か染症の実態を明らかにし , 耐性真菌の検出法を開発する戦略を構築するとともにブラジルにおけるカンピーナス
大学を中心とした耐性真菌感染症研究拠点研究ネット

52

千葉大学

また , このコンソーシアムを利用し , 研究機関も含め

らの臨床分離株に加え , 環境（土壌 , 空気 , 植物 , 水など）からの分離真菌株の保存が続けられている .

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Generating research infrastructure and novel technologies foranti-infective drug and vaccine discovery, AMED-CREST
Study of the molecular mechanism of persistent infection and identifying novel privileged molecular
structures for the next-generation antibacterial drug discovery

日本医療研究開発機構革新的先端研究開発支援事業
感染症創薬に向けた研究基盤の構築と新規モダリティ等の技術基盤の創出：｢難治性感染症制御に資する細菌持続感染機構解明と次世代型抗感染症化合物の創出｣

Infections caused by multidrug-resistant bacteria are

多剤耐性菌を原因とする感染症では , 既存抗菌薬での

becoming a global problem because they are diﬃcult to control

制御が困難となることが世界的な問題であり , 新たな感

infectious disease control drugs is an urgent issue. Recent菌の出現には , 耐性遺伝子を獲得していない抗菌薬寛容with existing antibacterial drugs. The development of newstudies have revealed that the emergence of antimicrobi-

al-tolerant cells, “persisters, ” which have not acquired resistancegenes, contributes to the emergence of drug-resistant bacteria.

染症制御薬の開発が喫緊の課題となっている . 薬剤耐性性細胞 “ パーシスター” の出現が寄与することが明らかとなってきた . パーシスターのような細菌性状は , 宿主

免疫にも誘導され , 持続感染・潜伏感染の要因となるこ

Bacterial properties such as persisters are also induced by hostとが示唆されている . 本研究では , パーシスター分子機

and latent infections. In this project, we aim to identify target

リーニングから因子の活性を制御できる化合物候補を得

to obtain compound candidates that can regulate the activity of

される天然物ライブラリーを用いて黄色ブドウ球菌のimmunity and have been suggested to be a factor in persistent

構研究を通して標的となる因子を同定し , 化合物スク

factors through research on persister molecular mechanisms andることを目的としている . これまでに約1200種から構成

factors through compound screening. Using a natural productパーシスターに関連する細菌因子の活性を阻害する化合

inhibit the activity of bacterial factors associated with the

果 , 数種の化合物に阻害活性を見出した . スクリーニン

library of about 1200 species, we screened compounds that

物スクリーニングを実施した . スクリーニングした結

persisters of Staphylococcus aureus. As a result of screening,

グ株以外での化合物活性についても調べるため , 院内ア

compounds. To investigate the activity of compounds other

リーニング株と同様に化合物による活性抑制を見出し

nosocomial outbreaks. We found that the compounds inhibited

検証に用いるための細菌感染マウスモデルでの抗菌薬投

inhibitory activity was found in several natural productウトブレイクに関わる臨床分離株を用いたところ , スク

than the screening strains, we used clinical isolates related to

た . また , 得られた新規天然物候補化合物の in vivo 効果

the activity like the screening strains. In addition, we are

与解析を行っている .

conducting an analysis of antibacterial drug administration in amouse model infected with bacteria to verify the in vivo eﬀects
of the obtained new natural product candidate compounds.

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

53

Japan Agency for Medical Research and Development（AMED）
Japan Initiative for World-leading Vaccine Research and Development Centers
Chiba University Synergy Institute for Futuristic Mucosal Vaccine Research and Development

AMED ワクチン開発のための世界トップレベル研究開発拠点の形成事業
ワクチン開発のための世界トップレベル研究開発拠点群 千葉シナジーキャンパス（千葉大学 未来粘膜ワクチン研究開発シナジー拠点）
As uncovered by the recent COVID-19 pandemic, research

今般の新型コロナウイルスによるパンデミックで顕在

on infectious diseases and the development of vaccines in Japan化したように , 我が国における感染症研究やワクチン開lagged behind Western countries. In addition to infectious

発は欧米諸外国に比して後塵を拝している状況にあdisease research during normal times, AMED will continue to

る . AMED では , 今後のパンデミックに備えるため , 平

support research and development using cutting-edge

時から感染症研究に加え , 最先端アプローチによる研究

approaches over the long term to equip for future pandemics.

開発を長期継続的に支援する「ワクチン開発のための世In fiscal 2022, AMED launched the “Japan Initiative for

界トップレベル研究開発拠点の形成事業」を2022年度かWorld-leading Vaccine Research and Development Centers. ”

ら開始した .

Currently, most developed vaccines are injection-type andinduced blood IgG antibodies alone that cannot effectively
prevent the invasion of pathogens on mucosal surfaces. As oneof the synergy institutes, Chiba University will develop andimplementation of mucosal vaccines that are expected to both

現在 , 開発されているワクチンのほとんどが注射型のワクチンであり , ワクチン接種によって誘導される血中IgG 抗体だけでは粘膜面における病原体の侵入は効果的に防げていない . この課題に対し , 千葉大学は本事業におけるシナジー拠点の一つとして , 呼吸器や腸管などのprevent infection and avoid exacerbation of diseases based on

粘膜面における感染性病原体の感染機序および宿主粘膜

the understanding of the mechanism of infection by pathogens

免疫システムの理解を基盤とした , 病原体の感染阻止とat the mucosal sites such as respiratory and intestinal tracts andthe host mucosal immune system. In addition, we will promote

重症化回避の両側面が期待できる粘膜ワクチンの開発と実装化を目的として研究に取り組む . さらに , 本研究を

the commercial licensing of mucosal vaccines and mucosal

通して開発された粘膜ワクチンや粘膜アジュバントの企

adjuvants developed through this research. We aim to

業導出を進め , 新規ワクチンモダリティーとしての粘膜

implement and market mucosal vaccines as a new vaccine
modality.

54

千葉大学

ワクチンの実用化と市場展開の実現を目指す .

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Research Institute of Disaster Medicine
災害治療学研究所
In October 2021, Chiba University established the ResearchInstitute of Disaster Medicine, which aims to protect the healthand safety of the people, the environment, and social activities
against threats such as natural disasters and pandemics. The
Institute brings together researchers from diverse backgrounds
from the departments of Chiba University to promote interdisciplinary research and to conduct co-creative research anddevelopment and social implementation through collaboration
between industry, academia, and government.
Faculty members of the MMRC join the institute as
members of the “Division of Pandemic and Post-disaster
Infectious Diseases” in collaboration with the Department of
Infectious Diseases of the Chiba University Hospital. We willconduct basic and clinical research on various infectious
diseases, such as severe respiratory disorders caused by
SARS-CoV-2 infection, complex infectious diseases caused byimmune suppression, and respiratory infectious diseases causedby stress and dust inhalation associated with natural disasters.
The division also manages the biosafety level 3（BSL3）facilities
and conducts advanced basic research and human resource
development leading to the diagnosis, prevention, and千葉大学

treatment of infectious diseases.
URL: https://www.ridm.chiba-u.jp/en/index.html
千葉大学では , 2021年10月に自然災害やパンデミックなどによる社会的脅威に対して , 国民の健康・安全および社会の環境・活動性を守ることができる「災害レジリ

エントな社会」を構築することを目標に , 千葉大学が有する多様な部局から多彩なバックグラウンドを有する研究者が集結し , 学際的研究の推進と , 産学官が連動した共創的な研究開発と社会実装を目指して , 災害治療学研究所を設立しました .

真菌医学研究所の教員も本研究所に参画し , 「災害感染症部門」のメンバーとして附属病院の感染制御部と連携し , 新型コロナウイルス感染症に伴う重篤な呼吸器障

害 , 免疫低下に起因する複合感染症や自然災害に伴うス

トレス・塵埃吸入等に起因する呼吸器感染症等の多様な感染症に関する基礎・臨床一体型研究を推進しています . また当部門では BSL3施設を管理し , 感染症災害に対する診断・予防・治療につながる先端基礎研究と人材育成を実施しています .

URL: https://www.ridm.chiba-u.jp/

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

55

The training course of pathogenic fungi
真菌医学研究センター病原真菌講習会
We annually hold the training course of pathogenic
fungi to learn knowledge and technique in order totreat pathogenic fungi and actinomycetes and thenumber of participants is 10. Every year, a number ofapplication is over the participant and the course has
been in a great demand. But due to the COVID-19, thecourse was cancelled in FY2020 and FY2021. In
FY2022, the course content was reviewed and thenumber of participants was limited to 8.
Practice/Lect ures: Pathogenic yeasts, pathogenic
Aspergillus, causative agents of dermatological mycoses,
imported and emerging pathogenic f ungi, pathogenic
zygomycetes, pathogenic actinomycetes, drug susceptibility

病原真菌講習会は , 病原真菌・放線菌の基本的取り扱いの知識と技術を習得するために , 本センターが実習を中心にして実施し , 年1回定員10名で開催している . 例

年 , 定員大きく超える応募があり , 大変好評を得ていたが , 2020, 21年度はコロナ禍の影響で講習会は中止となった . 2022年度は , 実施期間を３日に短縮 , 参加者を８名に限定するなど感染防止措置を万全にする代わりに , 外部
講師を招聘したり講習内容を見直して実施した .

実習・講義内容：病原性酵母 , 病原性アスペルギルス ,皮膚科領域真菌症原因菌 , 輸入および新興病原真菌 , 病

原性接合菌 , 病原性放線菌 , 薬剤感受性試験法 , MALDI-

TOF MS 迅速同定法 , 菌株保存法 , 感染症法など

testing methods, MALDI-TOF MS rapid identification
methods, strain preservation methods, infectious diseasemethods, etc.

FIG 1. Scenes from the training course of pathogenic fungi.

56

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

miRaX Therapeutics K.K.
ミラックスセラピューティクス株式会社
MiRaX Therapeutics K. K., established in May 2020, is adrug discovery venture company originated from Chiba
University and the University of Tokyo. Our main targets are“Development of nucleic acid drugs using miRNA inhibition
technology” and “Development of novel NF-κB inhibitors”.
1. Development of nucleic acid drugs using miRNA

inhibition technology

The miRNA inhibition technology developed by the founders
has already been licensed out as a research reagent in many
countries and highly evaluated for its strong and long-lasting
inhibitory effects. Our mission is to apply this technology topharmaceuticals and create nucleic acid medicine for liver

当社は , 2020年5月に設立された千葉大学・東京大学

発の創薬ベンチャー企業です . 主な事業は「miRNA 阻害技術を活用した核酸医薬品開発」と「新規 NF-κB 阻害薬の開発」です .

1. miRNA 阻害技術を活用した核酸医薬品開発

創業者らが開発した miRNA 阻害技術は , すでに研究用試薬として世界各国で販売されており , 阻害効果の強さや持続の長さで , 高い評価を得ています . この技術を医薬品に応用し , 肝疾患に対する核酸医薬品を生み出すことを目標としています .

2. NF-κB 阻害薬の開発

転写因子 NF-κB は多くの炎症疾患やがんなどで構成的に活性化されているため , その活性化に至る経路は ,diseases.
2. Development of NF-κB inhibitor

Since the transcription factor NF-κB is constitutively

activated in inflammatory diseases and many types of cancers
and is a promising therapeutic target. However, the molecules
targeted by most of the currently available NF-κB inhibitors arelocated at the cross-road of signal transduction pathway.
Therefore, their biological effects are inevitably broad and not
specific. To develop specific inhibitor for NF-κB, we focus ond4 family proteins（DPF1, DPF2, DPF3a/b）which are crucial
for NF-κB transactivation as adaptor proteins connecting
NF-κB and SWI/SNF complexes. We identified compounds
that bind to these adaptor proteins, and are in the process of

これらの治療の有望な標的となると考えられます . しかし既存の NF-κB 阻害剤の多くの標的分子は , シグナル伝達経路の交差点に位置していて , その生物学的効果は広範囲に及んでしまう欠点があります. そこで我々は

NF-κB と SWI/SNF 複合体をつなぐアダプタータンパク質として転写活性化を担う d4ファミリータンパク質（DPF1, DPF2, DPF3a/b）に 着 目 し ま し た . こ れ ま でに , 低分子化合物のスクリーニングを行い , これらのアダプタータンパク質に結合する化合物の同定に成功して
おり , これらの化合物の NF-κB の阻害活性能の検証を進めています .

verifying the inhibitory activity on NF-B.

HP: https://www.mirax-t.co.jp

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

57

2021 Fiscal Year Cooperative Research Program Report

令和３年度 共同利用・共同研究報告
研究課題

’21－１

分野より分与いただいた gliA（グリオトキシン産生クラPathophysiological analysis of aspergilloma
Masato Tashiro

スター遺伝子）欠損 Aspergillus fumigatus, laeA（二次代謝産物産生調節因子）欠損 A. fumigatus を用い , アスペルギ
ローマ内における A. fumigatus の二次代謝産物生合成遺伝子発現解析および二次代謝産物解析を行っ（Department of Infectious Diseases, Nagasaki University

Graduate School of Biomedical Sciences）

Katsuhiko Kamei

た . RNA-seq 解析により , マウスに留置していない菌球をコントロールとして遺伝子発現量を比較すると , 留置
７日後の菌球では , コントロールに比して複数の二次代（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

謝産物の生合成遺伝子が高発現であり , 特に gliotoxin 生（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

より , アスペルギローマにおける A. fumigatus の二次代謝（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

次代謝産物を解析すると , 野生株のアスペルギローマに

Akira Watanabe
Teppei Arai

アスペルギローマの病態解析

合成遺伝子発現が著明に増加していた . これらの結果に産物の生合成活性化が示唆された . さらに , 菌球内の二おいて , Gliotoxin, Fumagilin, Pseurotin A の産生が認められたが , Δ laeA 株では認めず , A. fumigatus が生体内のア

スペルギローマで二次代謝産物を産生していることを明

田代将人

らかに出来た . さらに , サイトカイン等の生体反応や ,（長崎大学大学院医歯薬学総合研究科）

病理学的なアウトカムとの関連性について , 解析を継続

亀井克彦

中である .

（千葉大学真菌医学研究センター）

渡辺

研究課題

哲

’21－２

（千葉大学真菌医学研究センター）

新居鉄平

Analysis of Sequence-Based Identification and
Antifungal Susceptibility of Aspergillus from
Clinical Respiratory specimens（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果
我々は近年 , 慢性アスペルギルス症の特徴の１つであるアスペルギローマに近似した病態を実験的にマウスの皮下に再現したモデルの作成に成功した . 本モデルを使用することで , アスペルギローマにおけるアスペルギル

スの振る舞いの解析 , および生体反応の解析が可能となった .

Junko Suzuki, Keita Takeda（ Center for Respiratory Diseases, National Hospital

Organization, Tokyo National Hospital）

Akira Watanabe, Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

2021年度は , まずアスペルギルス二次代謝産物がアス

ペルギローマの組織侵襲に与える影響の解析を試みたが , 満足の行く結果が得られなかった . そこで組織侵襲に関与する二次代謝産物そのものをターゲットとした計画に変更し , 千葉大学真菌医学研究センター臨床感染症

58

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

Aspergillus 呼 吸 器 検 体 臨 床 分 離 株 の 菌 種 同定・薬剤感受性の検討

T, Watanabe M, Narumoto O, Kawashima M, Fukami

鈴木純子（国立病院機構東京病院呼吸器センター呼吸器内科
医長）

T, Sasaki Y, Tamura A, Nagai H, Matsui H, Kamei

K. The accuracy and clinical impact of the morphological
identification of Aspergillus species in the age of cryptic

武田啓太（国立病院機能東京病院呼吸器センター呼吸器内科
医員）

渡辺

発表論文
１）Takeda K, Suzuki J, Watanabe A, Sekiguchi R, Sano

species: A single-centre study. Mycoses. 2022 Feb; 65（2）:164 - 170 . doi: 10 .1111 /myc.13397 . Epub 2021 Nov
27. PMID: 34783396.

哲（千葉大学真菌医学研究センター 准教授）

亀井克彦

２）Ta k e d a K , S u z u k i J , Wa t a n a b e A , N a r u m o t oO, Kawashima M, Sasaki Y, Nagai H, Kamei K, Matsui

H. Non-fumigatus Aspergillus infection associated with

（千葉大学真菌医学研究センター 教授）

a negative Aspergillus precipitin test in patients withchronic pulmonary aspergillosis. J Clin Microbiol. 2022

研究成果
2013年の研究開始から2022年３月までの間に , 国立病院機構東京病院の呼吸器疾患患者の下気道検体から検出された Aspergillus または担子菌の菌種同定・感受性を千Feb 16; 60（2）: e0201821. doi: 10.1128/JCM.02018-21.

Epub 2021 Dec 8 . PMI D: 34878803 ; PMCI D:

PMC8849204.

葉大学真菌医学研究センターにて行い , これまで計482

研究課題

器検体から検出された Aspergillus の菌種同定薬剤感受性

Development of novel therapeutic approach forsystemic persister infections

件同定している . 当院慢性肺アスペルギルス症患者呼吸を検討し , A. fumigatus 陽性257株について , A. fumigatusのアゾール耐性株は20株 , 7.8％であった .

当院肺アスペルギルス症の患者から得られた下気道検体で真菌培養陽性となり形態学的に Aspergillus 属と診断された126検体で形態学的診断と遺伝子学的診断の菌種’21－３

Yumi Matsuoka（ Immunolog y Frontier Research Center, Osaka

University）

名が（狭義で）一致したのは70.6%（89/126）, 形態学的

Hiroki Takahashiは95.2%（120/126）で あ っ た . 関 連 種 の 割 合 が A. niger

Akiko Takaya

かった . A. fumigatus complex において関連種の割合が少University）

診断と広義の菌種の菌種名（Complex レベル）での一致

complex で は96.8 ％ で , A. fumigatus の1.2 ％ に 比 較 し 高なく , 形態学的診断が臨床に与える影響は少ないことが推測された . 一方 A. niger complex においては関連種の割合が多く , 更にその関連種はアゾールに低感受性の（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

パーシスター全身感染症克服法の開発

A. tubingensis の割合が高く , 形態学的診断のみでは不適

松岡悠美

また当院で Aspergillus 培養陽性の慢性肺アスペル症

高橋弘喜

討したところ , fumigatus では84.8％に対し non-fumigatus

高屋明子

切な抗真菌薬治療になる可能性があると考えられた .

（CPA）116例の菌種別のアスペルギルス抗体陽性率を検では37.9％と低く , non-fumigatus が原因の CPA の診断に（大阪大学免疫学フロンティア研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学大学院薬学研究院）

おいては注意が必要と考えられた .

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

59

研究成果
本年度は , 計画通りパーシスター全身感染症克服法を研究成果
近年 , クリプトコックス症は潜在性感染から内因性再開発するために , 既存の抗生剤に抵抗性の黄色ブドウ球

燃により発症すると考えられるようになった . しかし ,染直後に抗生剤を投与した場合の効果に比較して , 感染

真菌に対するＴ細胞応答を効率的に解析する目的で , そ

菌感染症動物モデルを新規に確立した . 実験系では , 感
後期では , 同様の投与量では , 抗生剤治療を回避して ,生体内で生き残る細菌の集団が出現することが明らかとこの仮説の真偽を検証した報告はない . 申請者らは , 本の主要な T 細胞抗原である chitin deacetylase 2（Cda2）をMHC クラス II 拘束性に認識する T 細胞受容体を高発現なり , 難治化してしまうモデルが確立できた . 本研究するトランスジェニックマウス（CnT-II）を樹立するこた研究基盤の構築と新規モダリティ等の技術基盤の創では , このマウスを用いることで潜在性クリプトコック

チームは , 2021年度 AMED-CREST「感染症創薬に向けとに成功した . （J. Immunol. 205: 686-698, 2020）本研究出」（代表：高屋明子 , 2021-2026）に採択されており ,ス感染（LCNI）モデルを作成するとともに , 肺内にお究課題から新規に見いだされるパーシスターをターゲッ（Tm）細胞の解析を実施した . さらに , LCNI モデルに免

このモデルを確立することにより , AMED-CREST の研トとした候補薬剤の生体内での , 評価が可能となった .

また , COVID-19関連の黄色ブドウ球菌２次感染による肺炎から単離された菌株の全ゲノム・全メチル化解析をける真菌特異的エフェクターT（Teﬀ）細胞やメモリー T

疫抑制剤を投与することで内因性再燃モデルの作成を試みた .

CnT-II マウスの肺内にクリプトコックス B3501株を感行うことにより , これまで , NICU で得られた院内黄色ブ

染させると , 肺内生菌数は徐々に減少し , 感染２, ３ヶ発生や , 抗生剤耐性獲得に関わっていることを見出した .

イトメトリー解析では , 肺内の CD4陽性 Tm 細胞 , Teﬀ 細

ドウ球菌感染症と共通する菌の進化形態が , パーシスター

研究課題

’21－４

月後に102〜103CFU/ マウス程度で安定した . フローサ

胞 , エ フ ェ ク タ ーTm（Tem）細 胞 が 増 加 す る と と もに , Teﬀ 細胞や Tm 細胞において細胞内 IFN-γ の発現が観Analysis of immunological mechanism for latent
infection with Cryptococcus neoformans and its
reactivation using a murine model

察された . 病理学的解析では , 肺内に肉芽腫が多数形成
され , その中で真菌を貪食するマクロファージや多核巨細胞とともに , その周囲に集積する T 細胞と濾胞様構造を形成する B 細胞が観察された . これらの細胞からは ,肉芽腫の形成維持に重要な TNF-α や IFN-γ, MCP-1の発

Kazuyoshi Kawakami, Jun Kasamatsu, Ko Sato

現が確認された . 次に , LCNI マウスに臨床で用いられKatsuhiko Kamei

与したが , 残念ながら肺内生菌数の再増加として観察さ（Tohoku University Graduate School of Medicine）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

潜在性クリプトコックス感染と内因性再燃の動物モデルの作成と免疫学的機序の解析

る免疫抑制剤の一つであるタクロリムス（FK506）を投れる内因性再燃は認められなかった . 一方 , クリプト

コックスをタクロリムスとともに in vitro で培養するとその増殖が有意に抑制された .

本研究において , CnT- Ⅱマウスにクリプトコックスを感染させることで潜在性感染モデルの作製に成功する

川上和義（東北大学大学院医学系研究科）

笠松

純

多核巨細胞に潜伏する真菌周囲に Tm 細胞や Teﬀ 細胞の集積が観察され肉芽腫の形成維持に関与している可能性（東北大学大学院医学系研究科）

佐藤とともに , 肺に形成された肉芽腫内のマクロファージや光（東北大学大学院医学系研究科）

亀井克彦

が示唆された . タクロリムス投与では内因性再燃モデルの作成には至らず , 今後は他の免疫抑制剤についても検討する必要があるものと考えられた .

（千葉大学真菌医学研究センター）

60

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

発表論文１）Sato K, Matsumoto I, Suzuki K, Tamura A, Shiraishi

尾野本浩司（千葉大学真菌医学研究センター）

A, Kiyonari H, Kasamatsu J, Yamamoto H, Miyasaka

高橋朋子

A, Kawamura K, Kitai Y, Umeki A, Kanno E, Tanno

浅野吉政

T, Tanno D, Miyahara A, Zong T, Kagesawa T, Oniyama

H, Ishii K, Tsukita S, Kawakami K: Deficiency of lung-specific claudin-18 leads to aggravated infection with

（埼玉大学大学院理工学研究科）（東京大学大学院理学系研究科）

Cryptococcus deneoformans through dysregulation of the

研究成果

21110, 2021. doi: 10.1038/s41598-021-00708-6.

タンパク質を介して I 型インターフェロンを誘導して細胞

J, Kanno E, Tanno H, Hara H, Yamasaki S, Saijo

よって自滅することで周辺の細胞を守ることが知られていthe phagocytosis of Cr yptococcus neoformans by

みに保存された高次生体防御機構であるが , アポトーシス

microenvironment in lungs. Scientific Reports, 11 :２）Kitai Y, Sato K, Tanno D, Yuan X, Umeki A, Kasamatsu

哺乳類細胞にウイルスが感染すると , ウイルスセンサーを防御する . 一方で , ウイルス感染細胞はアポトーシスにS, Iwakura Y, Ishii K, Kawakami K: Role of Dectin-2 in

る . 両者はともにウイルス感染から自身を守る , 哺乳類の: e0033021, 2021.
dendritic cells. Infect. Immun. 89（10）が起こるメカニズムは , これまで不明であった . 受入教員

doi: 10.1128/IAI.00330-21.

研究課題の米山教授は , ウイルスセンサータンパク質である RIG-I

like receptors（RLRs）として RIG-I, MDA5, LGP2といっ’21－５

た３つの因子を見出している . RIG-I と MDA5はそれぞMolecular mechanism of microRNA-mediatedhuman defense system induced by RNA viral
infection

れ異なる特徴をもつウイルス性 RNA を認識し IFN を誘導するのに対し , LGP2はその機能が不明であった . 我々はこれまでの研究により , ウイルス感染により発現誘導され た LGP2は , RNA サイレンシングの主 要因 子 である

TRBP と相互作用することで , TRBP によって生合成されKumiko Ui-Tei

るはずであった microRNA の生合成を阻害することを見Mitsutoshi Yoneyama

RNA サイレンシングが起こらなくなるため , その標的遺（Graduate School of Science, The University of Tokyo）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

出した . さらに , 生合成が阻害された microRNA による伝子であるアポトーシス関連遺伝子群の発現が誘導されKoji Onomoto

ることを見出した . 本研究では , ウイルス感染と同様のTomoko Takahashi

を用いて LGP2と TRBP の相互作用を介した microRNA のUniversity）

した . その結果 , LGP2-TRBP 相互作用によって生合成過（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Graduate School of Science and Engineering, Saitama

Yoshimasa Asano

インターフェロン応答を示す , 合成核酸である poly（I: C）
制御による遺伝子発現ネットワークの全貌の解明を目指

程が抑制される microRNA 群は特徴的な二次構造をもつ（Graduate School of Science, The University of Tokyo）

ことを 明 ら か にし た . す な わ ち , 塩 基 対 合 確 率（BaseRNA ウイルス感染による microRNA を介したヒトの生体防御の分子機構解明

ことを明らかにした . さらに , それらが発現制御する

pairing probability）の高い siRNA は TRBP と結合しやすい

mRNA 群をウェブツールによる予測と RNA シークエン

シングによる予 測を 組 みあわ せることによって 特 定

程久美子（東京大学大学院理学系研究科）

米山光俊（千葉大学真菌医学研究センター）

千葉大学

し , microRNA-mRNA ネットワークの詳細を明らかにした . poly（I: C）によって駆動する microRNA を介した遺伝子発現制御ネットワークは , 極めて複雑であるにもかかわらず , 最終的にはアポトーシス経路に収束するという

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

61

興味深い結果が得られた . 本成果は現在論文投稿準備中

である .

発表論文
１）Pais P, Galoc ha M, Calif or nia R , V iana R , O la

M, Okamoto M, Chibana H, Butler G, Teixeira MC:

研究課題 ’21－６

Characterization of the Candida glabrata Transcription

Transcription regulation of antifungal drug resistanceand biofilm formation in Candida glabrata:
aiming improved diagnosis and therapeu
Miguel C Teixeira（Institute for Bioengineering and Biosciences, Instituto

Superior Técnico/Bioengineering Department）

Hiroji Chibana, Michiyo Sato-Okamoto, Azusa
Takahashi-Nakaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
To understand the molecular basis of azole drug resistancein C. glabrata, this collaborative study focused on CgMar 1（Multiple Azole Resistance 1）, a transcription factor encoded

Factor CgMar1: Role in Azole Susceptibility. J Fungi（Basel）, 7; 8（1）: 61. 10, 2022.

研究課題

Search for anti-fungal seeds using geneticallyengineered Candida glabrata library
Masato Iwatsuki, Kenichi Nonaka, Satoshi Omura（OSMI, Kitasato University）

Hiroji Chibana, Azusa Takahashi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Aspergillus 属菌の二次代謝に影響を及ぼす
マイコウイルスの探索と解析

by ORF CAGL 0 B 03421 g, to investigate its role in azole

岩月正人

results of RNA sequencing showed that the biofilms were渡邊善洋

revealed that CgMar1 regulates 337 genes under fluconazole

大村Among these, CgMar1 and its target, CgRSB1, encoding a

知花博治

contribute to plasma membrane sphingolipid uptake and高橋

resistance and its association with biofilm formation. The
associated with azole resistance. First, RNA sequencing

stress, including genes related to lipid biosynthetic pathways.

sphingoid long-base efflux transporter, were found tomembrane permeability, reducing fluconazole accumulation

CgMar1 was found to be associated with the promoter of’21－７（北里大学大村智記念研究所）（北里大学大村智記念研究所）

智（北里大学大村智記念研究所）（千葉大学真菌医学研究センター）

梓（千葉大学真菌医学研究センター）CgRSB 1 and bound, and a promoter containing two

研究成果

activation during fluconazole stress. This suggests that the

同研究のテーマとして開始された . また AMED BINDS

CCCCTCC consensus was found to be required for CgRSB1

pathway regulating azole sensitivity in C. glabrata is due to the

本共同研究は令和元年度より千葉大学 共同利用・共支援課題としても進めている . 深在性真菌症の適応薬

neofunctionalization of Hap 1 -like transcription factors.

は , 核酸合成を阻害するピリミジン系 , エルゴステロー

formation in RPMI medium compared to the parental wild

阻害剤であるアゾール系 , 細胞壁合成阻害剤であるエキ

However, the Δ cgmar1 strain showed no change in biofilm
strain. These results were summarized in the following paper.

ルと結合するポリエン系 , エルゴステロール合成酵素のノキャンディン系の４系統しかなく , いずれも副作用や耐性菌の出現が問題になっており , 新規の作用機序をもつ抗真菌薬の開発が必要である . そこで , 本研究では ,大村智記念研究所が保有する化合物ライブラリーを用い

62

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

たスクリーニングによって得られた候補化合物の薬剤標的分子を同定し , 新規抗真菌薬の創出をめざしている .

令和元年度には , 600種類の天然化合物コレクション

病原真菌における重要な適応特性の発現を支える制御回路の再解析（大村ライブラリー）に対して Candida glabrata の薬剤高感研究成果グを実施した結果 , 80サンプルに生育阻害活性が確認さ栄養素とストレスの適応を制御する制御回路の再構築を

ングでは , 48種類の病原性真菌について , 生育阻害活性

規模な助成金である Wellcome Trust の獲得に向けて , 予

らに , 培養細胞を用いた呼吸阻害活性を測定した . これ

書の作成が主な共同研究となった . 予備実験について

受性株を用いて生育阻害活性を指標に一次スクリーニン

れ , 二次スクリーニングへと移行した . 二次スクリーニを測定し , それぞれの菌種について MIC を決定した . さらの結果より , ８サンプルが真菌特異的に阻害活性を有しており , 抗真菌薬シーズ候補として選抜した .

令和２年度には , 抗真菌薬シーズ候補として選抜した

本プロジェクトは , Candida glabrata と Candida albicans

目的にしており , まずは本研究の発展のために英国の大備実験と綿密なメール会議を繰り返すことによって申請
は , 前年度は千葉大学真菌医学研究センターにおいて ,組換え体コレクションの中から1,000株を用いてハイス

ループット解析の条件検討を進めた . 多数の組み換え体

８種の化合物について Candida glabrata 遺伝子組み替え体を混合した状態で各株の優占率を測定する既知の方法をついて特異的な候補遺伝子を抽出することができた .

C. glabrata の遺伝子組み換え体1,000株を同時に感染させライブラリーを用いた標的分子探索を実施し , ２種類に構築した. 令和３年度は同手法を用いて, マウスに

令和３年度には , 抗真菌薬シーズ候補として選抜した

１週間後に臓器を回収し各菌株の占有率を測定する実験

８種の化合物について Candida glabrata 感染マウスモデル
における in vivo 治療実験を実施するために評価系の構築を行った . C. glabrata は病原性が低いためマウスの生存率を得るためには , 免疫抑制剤（シクロフォスファミド）の投与が必要であるが , 投与量の調整が難しいため詳細

系を構築した . この手法を基盤とした Wellcome Trust への研究提案書を申請した . 研究提案書の審査は第三ス

テージまで達したが , 最終審査で不採択となった . 今
後 , 更に予備実験を積み重ね再提案することになった .

な調整を行った . その結果 , シクロフォスファミドを菌研究課題定する方法を取った . これにより , マウスのロットによGenetic analysis of SARS-CoV-2 variants and basic
research for drug discovery against COVID-19

体接種前に175mg/kg ２回投与しながら３回目の投与を決る感受性の相違への対応が可能となった . 並行して感染実験に必要な量を確保するために候補化合物の発酵と抽出を実施した . また令和２年度に引き続き有望な抗真菌薬シーズの標的分子について検証実験を進めている .

研究課題

’21－８

’21－９

Kengo Saito（Graduate School of Medicine, Chiba University）

Eiji Ido（Graduate School of Medicine, Chiba University）

Rewiring of the regulatory circuitry underlying theexpression of key fitness attributes in major fungal
pathogens of humans
Alistair J. P. Brown（ MRC Centre for Medical Mycology, University of

Exeter, UK）

Hiroji Chibana, Azusa Takahashi-Nakaguchi,
Michiyo Sato-Okamoto

Hiroshi Shirasawa（Graduate School of Medicine, Chiba University）

Mitsutoshi Yoneyama（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

SARS-CoV-2変異株の遺伝子解析とCOVID-19
治療薬探索に向けた基礎的研究
齋藤謙悟（千葉大学医学研究院）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

63

研究課題

井戸栄治

’21－10（千葉大学医学研究院）

白澤浩

Evaluation of siderophore type antifungal derivative（千葉大学医学研究院）

米山光俊

Minoru Yoshida, Tomoshige Hiratsuka, Yoshinobu
Hashizume（千葉大学真菌医学研究センター）

尾野本浩司（Center for Sustainable Resource Science, RIKEN）

Hiroji Chibana, Azusa Takahashi, Kaname Sasamoto（千葉大学真菌医学研究センター）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
2019年末に出現した新型コロナウイルスによる急性呼吸 器 感 染 症（COVID-19）は , 瞬 く 間 に 世 界 中 に 拡 大

シデロフォア型抗真菌薬誘導体の薬効試験

し , 今尚猛威を奮っている . 病原体は１本鎖 RNA をゲ

吉田

がら新たな流行の波を起こしている . 最近 mRNA ワク

平塚知成

染やワクチン接種によって成立した免疫から逃避するよ橋爪良信

うに新しい変異株が出現するため , 常に流行株の状況を（理化学研究所環境資源科学研究センター）ノムとするウイルス SARS-CoV-2で , 変異を繰り返しなチンが開発され , 大きな予防効果が示されたものの , 感

稔（理化学研究所環境資源科学研究センター）（理化学研究所環境資源科学研究センター）

監視する必要がある . 治療薬については , 幾つかの薬剤

知花博治

し, 完全な治療法として定着している薬剤は未だな

高橋

析法を確立すると共に新規治療薬探索に向けた基礎研究

笹本として様々な化合物の抗ウイルス活性を評価することを（千葉大学真菌医学研究センター）が臨床の現場で使われ重症化阻止に貢献している . しかい . そこで本研究では , SARS-CoV-2の分離と遺伝子解目的とした .

（千葉大学真菌医学研究センター）

梓（千葉大学真菌医学研究センター）

要法を確立し , 千葉大学附属病院の入院患者鼻腔拭い液を研究成果
ASP2397は , アステラス社の研究グループによって真株 , α 変異株 , δ 変異株 , オミクロン変異株など）計20株

た新規シデロフォア型抗真菌薬である . 理研グループ

先ず VERO-E6/TMPRSS2細胞を用いたウイルス分離

出発材料として当地で流行した種々の変異株（R1系統

菌アクレニウム・ペルシシヌムから単離・構造決定されの分離に成功した . 遺伝子解析については , 特に Spikeは , 環状アミノ酸構造の側鎖に関する構造活性相関研究

確立し , 国立感染研から分与された標準６株（β, γ 変異

導体合成に成功した . 新規 ASP2397誘導体について薬効遺伝子領域を中心に感度の良い OneStep-RT-PCR 法をを進め , ASP2397に匹敵する抗真菌活性を有する新規誘株など）を含めて計40株以上の解析を行った .

薬理評価を進めたところ , in vitro 抗菌活性試験ではいく

スタット（各々10 μM）に加え , クロロキン , 酢酸アビ

り, マ ウ ス 感 染 モ デ ル を 用 い た 薬 効 試 験 に お い て

治療薬探索としては , 既知のレムデシビルやナファモ

ラテロン , ダクラタスビル , イベルメクチンのいずれか

を 添 加（5 μM）す る と , ク ロ ロ キ ン で は10 TCID50ま3で , 他の３種類の薬剤では105 TCID50までの高ウイルス量に対して抑制効果があることが判明した . 単剤ではな

く複数の抗ウイルス剤併用による治療という新しいアプ
ローチの可能性が示されたものと考える .

64

千葉大学

つかの菌種において , in vitro での活性が ASP2397を上回

ASP2397と同等以上の効果が示されていた . 本共同研究

初年度において , 新規 ASP2397誘導体を用いて , 既存の抗真菌薬に対する耐性株を含む６種11株のカンジダ属病
原 真 菌 を 用 い て 詳 細 な 活 性 試 験 を 行 っ た. そ の 結

果 , C. glabrata に対して ASP2397と比較し誘導体が約２倍の強い活性（MIC: 0.03 µg/ml）が確認された . さらに

C. auris に対しては APS2397が MIC ＞50 µg/ml に対して

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

新規誘導体では MIC: 1 – 4 µg/ml の新規活性が示された . C. auris については , CDC や AMED で最も注目すべき薬剤耐性菌としてリストアップされており〈https://id3catalyst.jp/apid/list.html〉本誘導体の期待は大きい . 現誘導体の排出機能があることがわかり , 白癬菌の元々の性質であるクロラムフェニコール耐性の一端を MFS1が担っていたことが判明した .

Trichophyton indotineae は , 数年前に新種として提案さ

在 , マウスを用いて新規誘導体の in vivo での薬効評価実れた人好性白癬菌である . 申請者らは , 日本国外で分離

もとに PCT 特許を出願し , 企業連携体制の構築を進める感受性調査を実施し , 薬剤低感受性が認められる複数

験を進めている . 研究成果としてこれまでの実験結果を
ている .

研究課題

された多数の T. indotineae を対象に , ITC と VRC に対すの株を見出した . そこで , これらの株に共通する薬剤低感受性化の要因を解析し , アゾールの作用標的の１つで’21－11ある CYP51B（lanosterol 14α-demethylase）をコードする

Elucidation of the mechanisms of azole resistancein dermatophytes
Tsuyoshi Yamada（Institute of Medical Mycology, Teikyo University）

CYP51B 遺伝子に繰り返し重複が起こり , ゲノム中でタ

ンデムリピート化したことにより CYP51B が過剰発現したことが主な原因であると結論づけた . 病原真菌ではこのような薬剤低感受性機構の報告がなく , 新規メカニズムの発見となった .

（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

発表論文
１）Yamada T, Yaguchi T, Salamin K, Guenova E, Feuermann（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

dermatophytes that plays a key role in their intrinsic

Takashi Yaguchi
Sayaka Ban

白癬菌に拡がるアゾール系抗真菌薬耐性化の分子メカニズムの解析
山田

M, Monod M: MFS 1 , a pleiotropic transporter inresistance to chloramphenicol and fluconazole. J Fungi（Basel）, 7: 542, 2021. PMID: 34356921.

２）Yamada T, Yaguchi T, Maeda M, Alshahni MM, Salamin

K, Guenova E, Feuermann M, Monod M: Gene

剛

amplification of CYP51B: a new mechanism of resistance（帝京大学医真菌研究センター）

to azole compounds in Trichophyton indotineae.

矢口貴志

Antimicrob Agents Chemother, 66: e0005922, 2022.

（千葉大学真菌医学研究センター）

PMID: 35546111.

伴さやか

研究課題

（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果
白癬菌 Trichophyton rubrum TIMM20092は , アゾール

系抗真菌薬イトラコナゾール（ITC）およびボリコナ

ゾール（VRC）に低感受性を示す . 申請者らは , 本株の

ITC・VRC 低感受性化の要因の解析を進める過程で , 細

胞外へのアゾールの排出との関連が示唆される６個の薬’21－12Comprehensive analysis of effect of mycovirus
on mycotoxin production
Daisuke Hagiwara（Faculty of Life and Environmental Sciences, Universityof Tsukuba）

剤排出トランスポーター（ポンプ）を見出した . そこ

Syun-ichi Urayamaに排出する薬剤（基質）の解析を実施したところ , majorof Tsukuba）

で , 遺伝子工学的手法を用いて , これらの分子が細胞外

facilitator superfamily に属する MFS1にはフルコナゾール（Faculty of Life and Environmental Sciences, University（トリアゾール）に加え , クロラムフェニコールとその千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

65

Akihiro Ninomiya

ビ毒生産への影響について確定的なデータは得られな

of Tsukuba）て , ウイルス感染の有無による差異が認められたセット（Faculty of Life and Environmental Sciences, University

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

マイコウイルスによるカビ毒産生に対する影響の体系的解析

かった . その一方で , 培養抽出物の HPLC 解析においが存在し , マイコウイルスが宿主糸状菌の二次代謝に影響を及ぼすことが再確認された .

研究課題’21－13

Antibacterial/antimicrobial activity analysis of
newly developed macrolide antibiotics

萩原大祐（筑波大学生命環境系）

浦山俊一

Isamu Shiina（筑波大学生命環境系）（Department of Applied Chemistry, Faculty of Science

二宮章洋

Division I, Tokyo University of Science）

Naruhiko Ishiwada, Katsuhiko Kamei（筑波大学生命環境系）

矢口貴志（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（千葉大学真菌医学研究センター）

新規マクロライド系抗菌剤の抗真菌活性ならびに抗細菌活性研究

研究成果
マイコウイルスは糸状菌宿主に持続的に感染し , 時として生理機能に影響を及ぼすことが報告されている . 特椎名

響に注目が集まっており , 2020年には植物病原菌イネい石和田稔彦

イコウイルスの感染により促進されることを当グループ

亀井克彦が発見した . 糸状菌の毒素産生に対するウイルスの影響（千葉大学真菌医学研究センター）に近年は , 糸状菌二次代謝に対するマイコウイルスの影

もち病菌の毒素の一つであるテヌアゾン酸の生産が , マ

は , より広範な菌株においても起こる可能性が考えら

勇（東京理科大学理学部第一部応用化学科）（千葉大学真菌医学研究センター）

れ , 体系的解析が必要となる . そこで本研究では , 食品

研究成果

ウイルス感染株のスクリーニングを実施した .

員環マクロライド）と比較し , カンジダ , アスペルギル

汚染の原因菌となる３種のカビ毒生産菌を対象として ,千葉大学真菌医学研究センター所蔵の A. flavus（72株）, A. parasiticus（20株）, A. ochraceus（38株） を 対 象に , RNA ウイルス感染の指標となる dsRNA を電気泳動

これまでの共同研究で , ユーシェアリライド（天然24スなどに対する抗真菌活性および MRSA を含むグラム陽性菌に対する抗細菌活性が , いずれも高いユーシェア

リライド類縁体（EU-N）を見出し , その供給法を確立

により検出することでウイルス探索を実施した . その結した . さらに構造活性相関解析から , ユーシェアリライ

た . 続いて , A. flavus の感染ウイルスに着目し , そのゲ

官能基であることを見出した . すなわち , 活性発現の端果 , それぞれ８, ５, 25株のウイルス感染株が見つかっドに含まれるホスホリルコリン基が活性の発現に必須のノム配列を FLDS 法により明らかにし , 感染ウイルス種緒となるユーシェアリライド分子の細胞膜表面への静電ルスの脱離を試み , フリー化株を得た . ウイルス感染株

2021年度は , 過去に実施した薬剤感受性測定結果と構を同定した . さらに , 抗ウイルス化合物を利用してウイ的な結合におけるコリン残基の関与が示唆された .

とウイルスフリー化株のセットにおいて , 生育 , 胞子形

造活性相関解析結果に基づき , 候補化合物の絞り込みをトキシンの生産能を持たない株が多数含まれており , カ

規ユーシェアリライド類縁体の製造を行い , in vitro 活性

成能 , 二次代謝プロファイルを比較した . 元来 , アフラ

66

千葉大学

行い , 合成法をより簡略化し短工程で供給可能とした新真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

試験の実施ならびに in vivo 用大量合成法の確立を試み

XRN1の遺伝子破壊株と野生株について鉄欠乏による発た . その結果 , 検討したユーシェアリライド類縁体（EU-

現変動を比較するため , RNA-seq 解析を行った . XRN1て , Candida albicans と Aspergillus fumigatus に対する抗真菌の発現が特に大きく（ミトコンドリア関連の218遺伝子

TON, EU-TON-OH, EU-N-2）のうち , EU-TON におい
活性が認められた .

研究課題

破壊株では野生株と比較してミトコンドリア関連遺伝子が ４ 倍以上に増加）増加していることが明らか にな

り , XRN1は ATG32だけではなく , 複数遺伝子の発現調’21－14

節に関与していることが明らかとなった . また , ウエス

Identification of transcriptional regulatory
mechanism of CgATG32
Minoru Nagi

タンブロット解析の結果から , XRN1遺伝子破壊株ではミトコンドリア局在タンパク質の量が増加しており , ミ

トコンドリア染色試薬を用いた顕微鏡観察の結果からもミトコンドリア量の増加が示唆された .

（National Institute of Infectious Diseases）

研究課題（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Function and secretory mechanism of cyclic
peptides produced by wide variety of fungi

Hiroji Chibana, Michiyo Sato, Azusa Takahashi

Candida glabrata におけるマイトファジー
関連遺伝子ATG32 の転写調節機構の解明
名木Maiko Umemura（Bioproduction Research Institute, National Institute of稔

Advanced Industrial Science and Technology（AIST））

Daisuke Hagiwara（国立感染症研究所）

知花博治（Faculty of Life and Environmental Sciences, University（千葉大学真菌医学研究センター）of Tsukuba）

佐藤美智代

Takahito Toyotome（千葉大学真菌医学研究センター）高橋’21－15（Department of Veterinary Medicine, Obihiro University

梓of Agriculture and Veterinary Medicine）

Takashi Yaguchi（千葉大学真菌医学研究センター）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
病原真菌 Candida glabrata は鉄欠乏下でミトコンドリア

選択的オートファジー（マイトファジー）を活性化させるが , その活性調節機構は不明である . 鉄欠乏下で発現量が増加し , マイトファジーに必須である ATG32に着目

し , ATG32の発現調節機構を解明することを本研究の目的とした . 2020年度までに , ATG32の転写調節に必要なプロモーター領域の同定 , その領域に結合する転写因子

Akira Watanabe（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

真菌類が広く多様に産生する生理活性ペプチ
ド群の機能に応じた発現・分泌機構解明

候補遺伝子の同定 , 候補タンパク質の遺伝子破壊株を作

梅村舞子

が鉄依存的リプレッサーとして働くことが示唆され

萩原大祐

た . また , ウエスタンブロットおよびクロマチン免疫沈（筑波大学生命環境系）

製 , 解析を行った結果 , エキソリボヌクレアーゼ XRN1

降アッセイを行った結果 , XRN1は鉄依存的に ATG32上流領域に結合していることが示唆された . 2021年度は千葉大学（産業技術総合研究所生物プロセス研究部門）

豊留孝仁（帯広畜産大学獣医学研究部門）

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

67

研究課題

矢口貴志

’21－16（千葉大学真菌医学研究センター）渡辺

哲

Establishment of an assay to evaluate water-insoluble
trichothecene toxicity in vitro（千葉大学真菌医学研究センター）

亀井克彦

Takahito Toyotome（千葉大学真菌医学研究センター）（Department of Veterinary Medicine, Obihiro University

研究成果
近年我々が見出した分泌性環状ペプチド生合成因子
は , ほぼ全てのカビ・キノコに広く多様に保存されており , 小胞体への移行シグナルペプチドと高い繰り返し配列を持つ . その糸状菌子嚢果形成への影響を解析するため , 糸 状 菌 Aspergillus nidulans お よ び Neosartorya fischeri について , 千葉大学真菌医学研究センターが保有する株か

of Agriculture and Veterinary Medicine）

Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

難水溶性トリコテセン類の in vitro での毒性評価法の確立ら , 子嚢果形成度の異なるものを昨年度の各２株に加え豊留孝仁

果 , A. nidulans における３つの当該因子のうち１つにつ

亀井克彦てさらに各２株ずつ選抜し , ゲノム解析を行った . 結

いて , 子嚢果形成度と配列繰り返し回数が相関していることを見出した . そこで , 本因子について , 子嚢果形成（帯広畜産大学獣医学研究部門）（千葉大学真菌医学研究センター）

条件下で遺伝子発現を調べたところ , 子嚢果形成度に相研究成果

嚢果形成度の高い系列株から破壊したところ , 限定的結られている . ムギ類で赤カビ病を引き起こす病原菌がト

本因子が子嚢果形成に関与することが示唆された .

ることがよく知られている . 日本でも , 天候不順等によ

発表論文
１）Maiko Umemura, Kaoru Kuriiwa, Linh Viet Dao,
“Tandem repeats in precursor protein stabilize transcript

キシニバレノール汚染につながることから , 非常に重要の化合物群であることも一つの特徴である . これらの毒

synthesized and post-translationally modified peptideた方法が報告されている . 2020年度の研究では水溶性の（2022）. 10.1016/j.fgb.2022.103691.

て , 0.5mLPCR チューブでの無細胞系のタンパク質合成

Yoko Kusuya, Masaaki Shimizu, Syunichi Urayama,

測定する方法を確立した . 一方で , 難水溶性トリコテセ

Daisuke Hagiwara, “Interspecies genomic variation and度に確立した方法で同様に測定ができるか , 不明であっ関して遺伝子発現が上昇していた . さらに , 本因子を子果ではあるが , 子嚢果が形成されなくなったことから ,levels and production levels of the fungal ribosomally

ustiloxin B”, Fungal Genetics and Biology, 160: 103691

２）Hiroki Takahashi, Maiko Umemura, Akihiro Ninomiya,

Akira Watanabe, Katsuhiko Kamei, Takashi Yaguchi,transcriptional activeness of secondary metabolism-

related genes in Aspergillus Section Fumigati”, Frontiersin Fungal Biolog y, 2 : 6 5 6 7 5 1 （2 0 2 1 ）. 1 0 .3 3 8 9 /ﬀunb.2021.656751.

トリコテセン類は , 食の安全を脅かすカビ毒として知リコテセンの一種であるデオキシニバレノールを産生する赤カビ病発生およびそれに伴う小麦の質的低下がデオ視をされるカビ毒である . トリコテセン類は200種以上性を評価・比較する方法として , 動物や培養細胞を用いトリコテセンであるデオキシニバレノールを用いシステムを用いて , 翻訳反応の阻害活性を迅速・簡便にン類については有機溶媒に溶解する必要があり , 2020年
た . そこで , 有機溶媒に溶解したトリコテセン類を用いて , 無細胞系のタンパク質合成システムによる毒性評価が可能であるかどうかを検討した .

本研究ではアセトニトリルに溶解したデオキシニバレ

ノールと難水溶性トリコテセンである T-2トキシンおよび HT-2トキシンをこれまでに確立した方法に適用し

68

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

た . その結果 , アセトニトリルに溶解したトリコテセン

床分離株に与える影響を調べる目的で , 千葉県こども病

トニトリルに溶解したトリコテセン類が利用できること

たインフルエンザ菌のうち , TFLX の MIC ≧0.5 μg/mL類でも本法が利用可能であることを明らかとした . アセ

は本法の応用範囲を大幅に広げるものである . なお , こ

院において2010年〜2018年の期間に , 小児から分離されの16株について , キノロン耐性決定領域（GyrA, GyrB,

れらの成果は2021年に Toxins 誌にて報告した .

ParC, ParE）変異の有無について検討を行った . その結

発表論文
１）Toyotome, T. , Kamei, K: In Vitro Assay of Translation

受性株であってもキノロン耐性決定領域の１か所および

Inhibition by Trichothecenes Using a Commercially

Available System. Toxins（Basel）. 13: 696, 2021. doi:
10. 3390/toxins13100696.

研究課題

果 , キノロン薬の使用の有無にかかわらずキノロン低感

２か所の変異がみられる株が多くみられており , 同一のsequence type が存在することが判明し , 耐性変異株が水平伝播していることが示唆された .

黄色ブドウ球菌については , 県内複数施設からの小児の臨床由来株の収集を行っており , 各種トキシンの有無’21－17について解析を行い , 発表を予定している .

Analysis of antimicrobial susceptibility, drug
resistance, and pathogenic genes of major pathogenic
bacteria derived from pediatric clinical specimens.
Tadashi Hoshino（ Division of Infectious Diseases, Chiba Children ’ s

Hospital）

Naruhiko Ishiwada,（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

発表論文
１）Takeuchi N, Ohkusu M, Hoshino T, Yamamoto
S, Segawa S, Murata S, Ishiwada N.

Emergence of H aemo philus in f luenzae with low

susceptibility to quinolones isolated from pediatric patientsin Japan.

（21）00062-3.
J Infect Chemother. 2021 Mar 1: S1341-321X

doi: 10.1016/j.jiac.2021.02.022.

Noriko Takeuchi

研究課題

Misako Ohkusu

Bacterial analysis of S. pneumoniae isolated frompediatric invasive disease in Yogyakarta（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

小児臨床検体由来の主要病原細菌の抗菌薬感受性と薬剤耐性,および病原遺伝子に関する検討星野’21－18Eggi Arguni（ Department of Child Health, Faculty of Medicine,

Public Health and Nursing Universitas Gadjah Mada,

直

Indonesia）

Naruhiko Ishiwada（千葉県こども病院感染症科）

石和田稔彦（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（千葉大学真菌医学研究センター）

Noriko Takeuchi

竹内典子（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（千葉大学真菌医学研究センター）

大楠美佐子

研究成果
The purpose of the research is to observe invasive pneumococcal（千葉大学真菌医学研究センター）

disease（IPD）incidence, serotype distribution, and antibiotic

研究成果
小児用キノロン製剤（TFLX）のインフルエンザ菌臨

千葉大学

susceptibility of Streptococcus pneumoniae isolated frompediatric IPD patients in Yogyakarta, Indonesia. This study is

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

69

act as baseline data of clinical profiles of pediatric IPD in

民の健康の保持及び増進に関する調査 , 研究 , 国民の栄Dr. Sardjito General Hospital in Yog yakarta, Due to

養その他国民の食生活に関する調査及び研究等を行うこ

continuing ethical clearance for this study again, and will向上に資することを事業目的としている . 薬用植物資源

bacterial culture system. During vacuum period, we searched

センターとして , 野生植物を中心とする植物や生薬 , コ

have the positive culture of S. pneumoniae. We prepared theリーを保有しており , 様々な疾患治療薬の探索源として

Yogyakarta, Indonesia: A case series”, and submitted it inとして体系的に使用された実績はなかった . そこで今

COVID-19 pandemic, we postponed the study. We applied forcontinue to recruit the patient June 2022. We will improve oursecondary data from medical record of pediatric patients who
manuscript entitled “Pediatric invasive pneumococcal disease in
Global Pediatric Health.

研究センターは , 薬用植物に関する国内唯一の総合研究

ケ類のエキスを約10,000種類保存したエキスライブラも用いられてきたが , これまで抗真菌活性物質の探索源

回 , 真菌を用いて網羅的なスクリーニングを行った . 一

次スクリーニングとして , 実験的取り扱いが簡便で薬剤

eaay4068. 2020.

研究課題とにより , 公衆衛生の向上及び増進を図り , 国民保健の耐性の問題が生じている Candida glabrata の液体培地中で’21－19濁度を指標にして生育阻害活性を測定した. その結

Screening of the antifungal substance from the plant
extract library

果 , 10,000種類のエキスサンプルのうち233サンプルで阻
害活性が確認された . 今後 , ヒト培養細胞に対する生育阻害活性や , その他の病原真菌に対する生育阻害活性が確認されたサンプルについては , 分画精製を進め物質を

Hiroyuki Fuchino

同定する予定である .

Hiroji Chibana

研究課題

Azusa Takahashi

Joint Research for Fight against Rubella in Chiba
City by University, Health Center and Medical
Association（Research Center for Medicinal Plant Resources）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Masashi Yamaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

植物エキスライブラリーを用いた抗真菌活性物質のスクリーニング

Kazuto Tamai（Chiba City Medical Association）

Masahiro Shiina（Chiba City Health Center）

渕野裕之（医薬基盤健康・栄養研究所薬用植物資源研究センター）

Naruhiko Ishiwada（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

千葉市における大学・行政・医師会が連携した風疹対策共同研究

知花博治（千葉大学真菌医学研究センター）高橋’21－20梓（千葉大学真菌医学研究センター）

玉井和人

山口正視

（千葉市医師会）（千葉大学真菌医学研究センター）

椎名政昭（千葉市保健福祉局）

石和田稔彦

研究成果
国立研究開発法人 医薬基盤・健康・栄養研究所は , 国

70

千葉大学

（千葉大学真菌医学研究センター）

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

研究課題

研究成果
国内での風疹流行に対して2019年４月より MR ワクチ

ン５期定期接種が国事業として開始された . 千葉市では以前より市独自事業として , 妊娠希望の女性や風疹抗体価の低い妊婦 , これらの配偶者・家族に対する抗体検査

助成 , 風疹抗体価が低い全ての人を対象とした MR ワク’21－21

Screening of novel genes involved in biofilm
formation and antifungal resistance in Aspergillus
fumigatus

チン接種助成を行ってきた . 私たちは千葉市在住の対象

Takashi Umeyama, Yoshitsugu Miyazaki

検査申込書 , MR ワクチン接種予診票を , 個人情報を削

Hiroki Takahashi, Katsuhiko Kamei

者に対して行われた国事業および千葉市事業の風疹抗体除した後に全例回収し , 千葉大学真菌医学研究センター
にて集計・傾向を分析した（当センター倫理審査委員会
承認番号 No. 18）.

これまでの解析の結果 , 千葉市における国事業の実施

状 況 は 約40,000人（ 対 象 者 の 約30 ％）が 抗 体 検 査 を 受（National Institute of Infectious Diseases）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

アスペルギルスのバイオフィルム形成および抗真菌薬耐性に関連する新規遺伝子群の探索

け , 8,000人（抗体陰性者の約90％）がワクチン接種を受

梅山

日に医療機関を受診している人が多かった . 一方 , 千葉宮崎義継

人が抗体検査を受け , 約5,600人がワクチン接種を受け

高橋弘喜

これらの結果は毎月１回ニュースレターとして千葉市

亀井克彦

けている状況である . 抗体検査 , ワクチン接種共 , 土曜

市事業に関しては , 現在までこの事業を利用し , 約9,500ていた . 千葉市事業には , 産婦人科が多く関与していた .

および千葉市医師会にフィードバックしている . また ,中間報告を論文公表し , 第25回日本ワクチン学会学術集会において発表した . 共同研究の成果は , 千葉市の作成した市民向け風疹対策広報用ポスターに紹介されている .

MR ワクチン５期定期接種の延長が決まったこともあ

り , 千葉大学・千葉市・千葉市医師会の３者で今後の市

隆（国立感染症研究所）（国立感染症研究所）（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果
深在性真菌症の中でも Aspergillus fumigatus を主要病原菌とするアスペルギルス症は増加傾向にあり , 予後が非
常に悪い . 近年 , アスペルギルスのバイオフィルム形成

民への啓発方針に協議を行うことを予定している .

がアスペルギルス感染に関与することが示唆されてい発表論文
１）Takeshita K, Takeuchi N, Ohkusu M, Ohata M, Suehiroには厚い細胞外マトリクスが観察されている . このようる . 特にアスペルギローマの菌糸塊に見られる菌糸周囲なバイオフィルムを形成する状態では , いくつかの抗真M, Maejima H, Abe H, Ohta F, Ohama Y, Tamai

菌薬に対する感受性が低下する現象が示され , 難治性のPopulation-based study of a free rubella-specific antibody

バイオフィルム形成 , および , それによる抗真菌薬耐性

response to the 2018-2019 nationwide rubella outbreak

本研究では , バイオフィルム形成に関わる新規遺伝子

K, Haraki M, Ishiwada N.

testing and immunization campaign in Chiba city inin Japan.

（6）: 1779-1784. ’20－22
Hum Vaccin Immunother. 2021; 17

原因の１つになっていると考えられる . しかしながら ,の詳細な分子メカニズムは不明な点が多い .

を同定し , 抗真菌薬耐性との関連性を明らかにすることを目的とする . 2021年度では , A. fumigatus の全遺伝子から 設 計 し た ガ イ ド RNA に 対 す る pooled oligo DNA を

CRISPR/Cas9ゲノム編集技術による変異導入のためのプ

ラスミドベクターにクローニングし作製したプラスミド
ライブラリの A. fumigatus への形質転換効率を検討した .

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

71

昨年度は , １つのライブラリ中に10,371種類の配列が含まれていることが確認できた CRISPR ライブラリを大腸菌で構築できた . 次の段階として , A. fumigatus に形質

矢口貴志（千葉大学真菌医学研究センター）

転換する必要があるが , 通常の protoplast-PEG 法による研究成果

ブラリスケールを得るために , より効率の高い形質転換

行われていない未利用生物資源を素材として , 深在性真ポレーション法について様々な条件検討を行った . 使用

性天然物の探索を行った .

社の ECM600を用いた . 電気パルスの形状・電圧・時間

Pseudoseratina 属と Suberea 属の海綿動物からそれぞれ単離形質転換では効率が低く , スクリーニングに必要なライ方法が求められた . その方法の候補として , エレクトロ機 種 と し て , ThermoFisher 社 の Neon system お よ び BTX

本研究では , 海綿動物や渦鞭毛藻など , 十分に研究が菌症の原因真菌に対して抗真菌活性を示す新たな生物活
その結果 , Agelas 属 , Dysidea 属 , Hippospongia 属 , および等の様々な条件検討を行っており , より良い条件を確立した１個の新規ジテルペノイド , １個の新規ポリヒドロキ

イブラリを A. fumigatus に高効率に形質転換し , CRISPR

ブ ロ モ チ ロ シ ン ア ル カ ロ イ ド, な ら び に ３ 種 の答するシグナル伝達機構の解明を目指す .

ドおよび１個の長鎖ポリケチドについて , 各種スペクトル

発表論文
１）Tateno, M. et al. Examination of Cyp 51 A-Mediatedを行い , 平面構造および一部の立体化学を明らかにした .

すべく検討を継続中である . 今後 , 作製した CRISPR ラ

スクリーニング法を確立することにより , 血清刺激に応

システロール , ５個の新規メロテルペノイド , ３個の新規

Amphidinium 属渦鞭毛藻から単離した２個の新規マクロリ

および計算化学により得られたデータに基づいて構造解析

これらのうち , Dysidea 属の海綿動物から単離したポリヒ

Azole Resistance in Aspergillus lentulus Using CRISPR/

ド ロキ シ ステロー ル は , ４ 種 の 真 菌（Candida albicans,（2022）doi: 10.3314/mmj.21-00024.

neoformans）に対して IC50 8〜16 μg/mL で抗 真菌活性を ,Cas 9 Genome Editing. Medical Mycol J 21 - 00024

Trichophyton mentagrophytes, Aspergillus niger, Cryptococcus

２）Miyazawa, K. , Umeyama, T. , Hoshino, Y. , Abe, K. &３ 種 の 細 菌（Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus

Growth of Aspergillus fumigatus in Liquid Culture byとが明らかになっている . 今後 , 他の化合物についても抗Miyazaki, Y. Q uantitative Monitoring of Mycelial.
Optical Density. Microbiol Spectr 10, e00063-21（2022）

研究課題’21－22

subtilis）に対して MIC ４〜16 μg/mL で抗細菌活性を示すこ

菌活性を評価する予定である .

研究課題

Search for new antifungal drug seeds from unutilizedbiological resources
Takaaki Kubota

Editing by CRISPR-Cas9 of ergosterol biosynthesis
in Aspergillus fumigatus : Effects of sterol composition
on fungal growth and development（ Faculty of Medicine, Dentistry, and Pharmaceutical

Ruoyu Li

Takashi Yaguchi

Wei Liu

Sciences, Okayama University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

未利用生物資源を利用した新たな抗真菌薬
シーズの獲得（Professor, Beijing University First Hospital）（Professor, Beijing University First Hospital）

Yoshitsugu Miyazaki（National Institute for Infectious Diseases, director）

Katsuhiko Kamei（Professor, MMRC, Chiba University）

久保田高明（岡山大学学術研究院 医歯薬学域）

72’21－23

千葉大学

Akira Watanabe（Associate Professor, MMRC, Chiba University）

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

研究課題

Teppei Arai

（Professor, MMRC, Chiba University）

ゲノム編集を用いたAspergillus fumigatus における erogsterol 生合成遺伝子の機能解析
李若瑜（Division of Infectious Diseases, National Center for

偉（刘 伟）

Child Health and Development）

Naruhiko Ishiwada（北京大学第一医院皮膚科学教室 教授）

宮崎義継（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

Noriko Takeuchi（国立感染症研究所真菌部 部長）

亀井克彦（千葉大真菌センター 教授 臨床感染症分野）

渡辺

Evaluation of Preventable Measures Against Invasive
Pneumococcal Disease in Children with Underlying
DiseaseIsao Miyairi（北京大学第一医院皮膚科学教室 教授）

劉’21－24哲（千葉大真菌センター 准教授 臨床感染症分野）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

基礎疾患のある小児患者における侵襲性肺炎
球菌感染症予防法の評価

新居鉄平（千葉大真菌センター 特任助教 臨床感染症分野）

宮入

烈（国立成育医療研究センター感染症科）

研究成果
Mutations in cyp51A are considered important as azole

石和田稔彦

impact of a loss of function of Cyp51A on azole sensitivity has（千葉大学真菌医学研究センター）

resistance mechanism in A. fumigatus. On the other hand, thenot been discussed in depth. In this study, we identified（千葉大学真菌医学研究センター）

竹内典子

environmental isolates with an insertional mutation（insertion

研究成果

clinical isolate with a nonsense mutation（change of the

以降 , PCV13非含有血清型の肺炎球菌による感染症の増

The MICs（in µg/ml）of each isolate were fluconazole（FLCZ）

究では , 侵襲性肺炎球菌感染症を発症した小児から分離

of four GTGG sequences between L464 and G465）and asequence of G395 to a stop codon）in cyp51A, respectively.

13価肺炎球菌結合型ワクチン（PCV13）の定期接種化

加（serotype replacement）が問題となっている . 本共同研

32, itraconazole（ITCZ）0.25, and voriconazole（VRCZ）0.25

された肺炎球菌株と罹患時の患者の肺炎球菌に対する抗VRCZ 0.5 for the nonsense mutant strain. To verify theている .

for the insertion mutant strain and FLCZ 32, ITCZ 0.25, andcorrelation between loss of Cyp51A function and MIC, we

体保有状況を解析し , 評価することを目的として実施し2021年度は , 本共同研究で解析を行った基礎疾患のなtransformed the laboratory strain AfS35 using the CRISPR/

い血清型10A sequence type（ST）11189のペニシリン耐性

observed in the transformants with the cyp51A region in each

また , 胆道閉鎖症に対して生後半年に生体肝移植が施

Cas9 system. The increase of azole susceptibility was also

肺炎球菌による髄膜炎例について論文を作成した .

strain, with FLCZ 32, ITCZ 0.25, and VRCZ 0.25 in the

行されシクロスポリンを内服中の３歳児の尿からムコイ

0.25 in the nonsense mutant strain. These results are similar toと 罹 患 前 後 で の 血 清 中 の 特 異 抗 体 価, オ プ ソ ニ ン

mutant insertion strain and FLCZ 32, ITCZ 0.25, and VRCZ

ド型肺炎球菌が分離された症例について , 分離菌の解析

the previously reported increase of the azole susceptibility in（OPA）活性を測定した . 本症例では尿から肺炎球菌の

contributes to the increased azole susceptibility.

OPA 活性の上昇を認めた点を併せて肺炎球菌による尿Δcyp51A strains, suggesting that loss of Cyp51A function

千葉大学

みが分離され, 治療反応性と罹患後の特異抗体価と真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

73

路感染症と診断した . 臓器移植後で免疫抑制剤内服中で管理室で保有する臨床分離 A. fumigatus およびその関連

血清型３型肺炎球菌が起炎菌であったことが , 本症例で有する真核生物寄生菌類を中心とする微生物ライブラ

ワクチン接種後にも関わらず同菌による尿路感染症を発リーを用いて新たな抗真菌薬シード化合物の探索を行う

症した原因と考えられた . 本解析結果について学会発表ことを目的とした .

あったこと , ワクチンによる特異免疫が誘導されにくい

し , 論文化を進めている .

発表論文１）Minato S, Yoshida M, Shoji K, Yotani N, Takeshita
K, Takeuchi N, Ishiwada N, Kubota M, Ishiguro

菌３種を対象に , 大村智記念研究所・創薬グループが保・１次スクリーニング通過基準：A. fumigatus に対し
10 mL/disc で生育阻害を示す

・２次スクリーニング通過基準：４種の Aspergillus に対し
10 mL, 50 mL/disc で濃度依存的に生育阻害を示す

２次スクリーニングまで通過した菌株から新規化合物

A, Miyairi I

３成分を含む全14成分を活性成分として取得した . 14成Emerging Strain of Penicillin-Resistant Non-Vaccineて血清の有無で活性の変化を評価した . その結果 , 中程

Jpn J Infect Dis. 2021 Sep 22 ; 74（5）: 477 - 480 . doi:

等の活性を維持したが , Ophioborin K, F2928-1および（－）

A Case Report of Bacterial Meningitis Caused by an
Serotype 10A.

10. 7883/yoken.JJID.2020.841.

研究課題

分の骨格は６系統に分類されるため , 代表６成分につい度の活性を示した Cladobotric acid E は血清中でもほぼ同-N-Hydroxyapiosporamide は活性が完全に消失した . 今回取得した中で最も強い活性を示した Phoslactomycin E およ’21－25び F は , 血清中で活性が低下したものの , 依然として強い

Search for effective anti-fungal seeds against
Aspergillus in serum
Kenichi Nonaka（Omura Satoshi Memorial Institute, Kitasato University）

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

血清中で有効な Aspergillus 症治療薬シーズの探索活性を示す結果となった . 血清中で活性を示した３成分

は in vivo 試験での成果が期待される .

研究課題’21－26

Pathological analysis of invasive infectious disease
due to nontypeable Haemophilus influenza
Kenji Gotoh（ Department of Infection Control and Prevention,

Kurume University School of Medicine）

Naruhiko Ishiwada

野中健一（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（北里大学大村智記念研究所）

無莢膜型インフルエンザ菌による侵襲性感染症の病態解析

矢口貴志（千葉大学真菌医学研究センター）

後藤憲志

研究成果
寒天培地上で Aspergillus に対する強力な抗真菌活性を（久留米大学医学部感染制御学講座）

示す化合物が見出されても , 血清中で活性が低下または

田中悠平

清培地による拡散法を導入することで疑陽性を排除す石和田稔彦

る . その際に , 真菌医学研究センター・バイオリソース（千葉大学真菌医学研究センター）

消失する場合がある . そこで , 初期スクリーニングで血

74

千葉大学

（久留米大学医学部小児科学講座）

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

研究課題

研究成果
インフルエンザ菌莢膜ｂ型ワクチン普及後に , 顕在化して き て い る 無 莢 膜 型 イ ン フ ル エ ン ザ 菌（nontypeable

Haemophilus influenzae：NTHi）による侵襲性感染症の病態解明のため , 侵襲性感染症由来の NTHi 株を用いた病原因子の解析を共同で行っている . 2021年度は , 新生児の無菌部位から分離された NTHi のバイオフィルム産生能をplate assay 法を用いて解析した . 新生児由来株は , 小児由’21－27

Characterization and ecological sur vey ofphomopsin-producing fungi
Toshiki Furuya（Faculty of Science and Technology, Tokyo University of

Science）

来侵襲性感染症由来の NTHi の biofilm 産生能と比較し著

Takashi Yaguchi

新生児侵襲性感染症由来 NTHi：１株と新生児以外の侵襲

Sayaka Ban

形態の評価を行った . 菌株形態の評価方法として coverslip

Maiko Watanabe

DRAQ5染 色 後 に confocal microscopy 用 い て 形 態 観 測 をHaruo Takahashi

ムは一部剥離を認め biomass も少なかった . 新生児以外のKazuhiro Hashimoto

しくバイオイルム産生能が低かった . この結果をふまえ ,性感染症由来 NTHi：１株を用いて Drip Flow assay 法での上に形成されたバイオフィルムを Live/Dead 染色後および行った . 新生児侵襲性感染症由来 NTHi 産生バイオフィル
侵襲性感染症由来 NTHi 産生バイオフィルムは培地の循環での影響をほとんど受けておらず , 均一なバイオフィル（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（National Institute of Health Sciences）（National Institute of Health Sciences）（National Hospital Organization Sagamihara National

Hospital）

ムが作成され , 表面に extracellular DNA の皮膜を形成してHiroyuki Nakagawaとは異なるメカニズムで侵襲性感染症をきたしていると考

Takahito Toyotome

いるのが確認できた . 新生児由来株はバイオフィルム産生

えられる . また , これらの結果からバイオフィルム制御シ
ステムとして分泌型ヌクレアーゼが重要である可能性が高

く , HI1296遺伝子の発現解析を開始している . 新生児以外の侵襲性感染症由来株においては planktonic phase とバイ

オフィルム内の HI1296遺伝子の発現の比較においては（National Agriculture and Food Research Organization）（Obihiro University）

カビ毒ホモプシン産生菌の機能解析および生態学的研究log102.0以上の差を認めており , バイオフィルム内の環境

古屋俊樹

下で菌が有意に発現している遺伝子であることが確認でき（東京理科大学理工学部）

た . 一 方 , 新 生 児 由 来 株 に お い て は planktonic phase と矢口貴志

ム内で発現を認めていたが , 侵襲性感染症由来株ほどの伴さやか数の菌株を用いて解析を行う . 今後 , バイオフィルムを維

渡辺麻衣子の factor の検討を継続し , 侵襲性 NTHi 感染症の病態解明

髙橋治男

文を作成中である .

橋本一浩

biofilm 内において HI1296の発現に関して , バイオフィル

差は認めなかった . ともに１株ずつの解析であり , 今後複持するシステムにおいて auto-inducer として働いている他を行い , 予防策に繋げたい . 現在 , 本研究成果について論（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）（国立医薬品食品衛生研究所）（国立医薬品食品衛生研究所）（国立病院機構相模原病院）

中川博之（農業食品産業技術総合研究機構）

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻

2022

75

豊留孝仁

ところ , Beauveria bassiana がホモプシン類合成遺伝子を保持していること , およびホモプシン類を産生すること（帯広畜産大学）が示唆された . 本年度は , Beauveria bassiana の培養液中の研究成果
ホモプシン類は , 真菌 Diaporthe toxica の代謝産物とし代謝産物成分を固相カラムにより濃縮し , 昨年度までに確立した手法による LC-MS 分析を繰り返したところ ,て単離・構造決定されたカビ毒で , 産生菌の着生したマホモプシン類と推定される化合物由来のイオンシグナル

知られている . 欧州食品安全機関（EFSA）の報告によを利用して当該化合物の構造決定を試みたが , 現在まで

な限り低く抑えることが望ましい」とされており , 近年

精製法や分析条件等を詳細に検討し , 構造決定を試み

ン類産生菌の国内における分布はほとんど調査されてい取し, これらのルピナス試料について成分抽出を行

メ科植物を家畜が摂取すると肝障害を引き起こすことがると , 「ヒト及び家畜のホモプシン類への暴露量を可能
その安全性が注目されている . しかしながら , ホモプシない . そこで本研究では , 国内のマメ科植物を中心にホが再現よく検出された . さらに , 高分解能質量分析装置のところ構造決定には至っていない . 引き続き , 濃縮・る . 一方 , 北海道に自生するマメ科植物のルピナスを採

い , LC-MS 分析に供した . その結果 , いくつかの試料でモプシン類産生菌の存在を調査することを目的としていホモプシン類の存在を示唆する化合物イオンシグナルがる . 昨年度までの研究において , 微生物保存機関に登録検出された . 今後は , これらの試料についてより詳細なされている真菌についてホモプシン類産生能を調査した

76

千葉大学

解析を進める .

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

感染症研究グローバルネットワークフォーラム2022
The 9th Global Network Forum on Infection and Immunity
共催：千葉大学真菌医学研究センター共同利用・共同研
究拠点「真菌感染症研究拠点」が行われた . 二日間で延べ125人の参加があり , 活発な議論を通じて新しい国際ネットワーク形成を目指した有意義な意見交換が行われた .

【Poster Session】

日時：令和５年２月10日（金） 13時30分〜 15時50分【開会の挨拶】

場所：千葉大学医学系総合研究棟

澁谷和俊

３階

第２講義室

（東邦大学医学部）【Oral Presentation】

日時：令和５年２月11日（土） ９時20分〜 16時10分【午前の講演】

場所：千葉大学医薬系総合研究棟Ⅱ 地下１階 大会議室

午前の講演：Morning Session

組織委員長

座長：萩原大祐先生（筑波大学）

澁谷和俊（東邦大学医学部）

１ . Dr. Robert A. Cramer（Geisei School of Medicine,

USA）

組織委員

“Aspergillus fumigatus biofilms: Form and Function in

萩原大佑（筑波大学生命環境系）
渡辺哲（千葉大学真菌医学研究センター）

Disease”

高橋弘喜（千葉大学真菌医学研究センター）

座長：渡邉

知花博治（千葉大学真菌医学研究センター）

２ . Dr. Donald Sheppard（McGill University, Canada）

矢口貴志（千葉大学真菌医学研究センター）
米山光俊（千葉大学真菌医学研究センター）

哲先生（千葉大学真菌医学研究センター）“Understanding the role of galactosaminogalactan inAspergillus virulence: a sticky problem”

研究成果

座長：知花博治先生（千葉大学真菌医学研究センター）「感染症研究グローバルネットワークフォーラム」は３ . Dr. Suzanne Noble（UCSF, USA）

感染症研究のネットワーク構築を目指し , 当センターが“Candida albicans is a fungal pathobiont of mammalian

中心となって平成24年度から開始され , 2022年度で第９hosts”

は , 東邦大学の澁谷和俊博士が世話人となり , 「真菌」

【午後の講演】

回目を迎えることとなった . 本年度の国際フォーラムをテーマとし , 現在世界的に注目されている真菌感染症

午後の講演：Afternoon Session

真菌の薬剤耐性からその病原性機構まで、幅広い分野で

座長：渡邉

世界最先端の研究成果について , ご講演いただいた . さ

４ . 萩原大祐先生（筑波大学）

ムについてもご紹介いただき , 大変内容の濃いフォーラ

the agricultural environment”

研究を牽引する国内外の著名な研究者を招聘した . 病原らに , 感染時の宿主との相互作用のみならず , メカニズ

ムとなった .

初日はポスター 28題の発表が , 二日目は招待講演９

題（日本・カナダ・イギリス・アメリカ・中国）の発表

千葉大学

哲先生（千葉大学真菌医学研究センター）“Antifungal-resistant strains of Aspergillus fumigatus in

５. Hazim O. Khalifa（United Arab Emirates Universit）“Genetic Basis and Genotyping of Non-albicans Candida

in Japan”

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

77

座長：後藤義幸先生（千葉大学真菌医学研究センター）

座長：高橋弘喜先生（千葉大学真菌医学研究センター）

６. Fabio Seiti Yamada Yoshikawa（Chiba University）

８. Xiao-wen Wang（Beijing Hospital, China）“Revisiting the role of C-type lectin receptors in the

immune response to Aspergillus fumigatus”

７. 目黑和行先生（千葉大学）“SBNO２deficiency, a novel inherited immunodysregulatory

syndrome, reveals new molecular mechanisms in hostdefenses”“ New insights on the pathogenicity of Trichophyton

mentagrophytes complex”

９. Darius Armstrong-James（Imperial College London,UK）“Phenotypic and clinical correlates of genomic diversity

in Aspergillus fumigatus”【閉会の挨拶】
高橋弘喜先生（千葉大学真菌医学研究センター）

78

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

2022 Scientific Meetings & Seminars

2022年講演会「東京大学医科学研究所─千葉大学真菌医学研究セン【領域３：感染症・免疫共同研究領域】

ター

森田英明（国立成育医療研究センター研究所）

国際共同利用・共同研究拠点事業

2022年度成果

報告会」「アレルギー性炎症の抑制に関与する新規自然リンパ球
サブセットの探索」

日時：令和５年３月13日（月）〜３月15日（水）場所：ハイブリッド開催

澤洋文（北海道大学）「新型コロナウイルスの感染病態解明に向けた研究」
令和５年３月14日（火）【特別講演】

川合

高橋大介（慶應義塾大学准教授）「ボリビアリスザルを用いた熱帯熱マラリアの in vivo お「有機化学を基盤とした人獣共通感染症に対する糖鎖医薬開発への挑戦」

覚（獨協医科大学）

よび in vitro 実験系の確立」

渡辺登喜子（大阪大学）【合同成果報告会（千葉大学真菌医学研究センター）】「鳥インフルエンザウイルスのリスク評価に資する研究」

後藤憲志（久留米大学）「無莢模型インフルエンザ菌による侵襲性感染症の病態「真菌医学研究センター セミナー」

解析」

オンライン開催

平塚知成（理化学研究所）

日時：令和４年４月19日（火）16時〜17時「シデロフォア型抗真菌薬誘導体の薬効試験」

講師：国立感染症研究所
治療薬・ワクチン開発研究センター

第十室

田代将人（長崎大学）

氣駕恒太朗室長「アスペルギローマの病態解析 」「細菌を翻弄するバクテリオファージ─薬剤耐性菌問題の救世主になり得る」

松岡悠美（大阪大学）「パーシスター全身感染症克服法の開発」

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

79

Tendai

To Narita

To Anagawa I.C

Chib

Route 14

Chiba

16

National

Inohana
CampusteLinea LineuRo

Keisei Chibal

JR Sobu

n
tio

ail

hiba

Midoridai

NaorHigashi-ChibaNishi-C

To Keisei-Tsudanuma

To Tokyoon

To TokyoaM

Nishi-Chiba
Campus

Yamato Bridge

Keisei-ChibaPrefecturalOﬃce

Chiba-Chuo

Inohana Park

Chiba City Hall

Hon-Chiba
Miyako River

Memorial Hall,
School of Medicine

To

To

C

hi

Facilities for Student's
Circle Activity
Library of Health Sciences
Lecture Building of
School of Nursing

ha

ra

K

is

ar

da

az

u

i

University Hospital
Gymnasium

Medical Mycology
Research Center
School of Medicine

Center Gate

Kyodokan
Bus Stop

School of Medicine
Bus Stop

Faculty of Pharmaceutical Sciences
Bus Stop

Medical andPharmaceutical
Science Building

令和 5 年 3 月発行
発行者

March 2023

千葉大学真菌医学研究センター
センター長

笹川

〒260-8673

千葉市中央区亥鼻 1－8－1

電話

Chibadai Inohana
Innovation Plaza

千尋

043－222－7171（代表）

Published by

Chihiro Sasakawa, Ph.D.

Director, Medical Mycology Research Center
Chiba University

1-8-1 Inohana, Chuo-ku, Chiba 260-8673, Japan

TEL: 81-43-222-7171
印刷

株式会社

正文社

Printed by Seibunsha, Ltd. Chiba, Japan

80

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 26 巻2022

CHIBA UNIVERSITY
2022