平成 23 年度

共同利用・共同研究報告

研究課題 ’11－01

析・考察を進めた . また , 低酸素関連候補遺伝子の病原

病原真菌の環境応答シグナル伝達機構の解析 :クリプトコックスの低酸素ストレス応答機構を中心として性への関与を効率的に検証するため , カイコを用いた C.

neoformans 感染モデル系の確立と抗真菌剤評価法の構築を行い , 報告した .

研究発表
川本

進・清水公徳・大楠美佐子

原著論文（千葉大学真菌医学研究センター）

英文Raclavsky, Vladislav（チェコ・パラツキー大学）
Sipiczki, Matthias（ハンガリー・デブレツェン大学）

1 ）Virtudazo EV, Suganami A, Tamura Y, Kawamoto S:

関水和久・松本靖彦

neoformans: Structure-function relationship of G1 andG1/S cyclins homologue CnCln1. Biochem Biophys Res（東京大学大学院薬学系研究科）

田村三浦Towards understanding cell cycle control in Cryptococcus

裕（千葉大学大学院医学研究院）
恵・園田智子Commun 416（1-2）: 217-221, 2011.

2 ）Matsumoto Y, Miyazaki S, Fukunaga D-H, Shimizu K,（横浜市立大学大学院医学研究科）

邦彦（鹿児島大学大学院農学研究科）

畑
五味勝也（東北大学大学院農学研究科）

Kawamoto S, Sekimizu K: Quantitative evaluation of

cryptococcal pathogenesis and antifungal drugs using asilkworm infection model with Cryptococcus neoformans. JAppl Microbiol 112（1）: 138-146, 2011.

研究成果

学会シンポジウム・研究集会での招待講演

生育に酸素が必須である偏性好気性病原酵母 Cryptococcus1 ）Kawamoto S: Towards understanding of cell cycle

え脳髄膜へ移行して病原性を発揮して行く際 , 高酸素

2 nd Symposium on Microbial Engineering between

neoformans は肺で感染後 , 血流に乗って血液脳関門を越環境から低酸素環境への酸素欠乏ストレス条件に打ち勝ってはじめて増殖し , 病原性を発揮して行く . 我々
は , 本菌の細胞周期制御機構を研究中 , 低酸素環境条件下では細胞周期制御が flexible になるという , 本菌のユニークな低酸素ストレス応答現象を見出した . そこでAgrobacerium を用いた , ゲノムランダム挿入遺伝子変異体ライブラリーを構築してスクリーニングし , 低酸素応答遺伝子として「転写因子 A」（同定済み , 但し本稿では非公開）及び「遺伝子 B」を得て , 分子機能解析を進

control in pathogenic yeast Cryptococcus neoformans. TheKyoto University - Kyungpook National University,Daegue, Korea, June 21, 2011.

2 ）Kawamoto S: Towards understanding cell cycle regulation

in medically-important pathogenic yeast, Cryptococcus

neoformans. 2011 International Symposium & Annual

Meeting of the Korean Society for Microbiology andBiotechnology“Translational Research in Microbiology

and Biotechnology”, Gyeongju, Korea, June 22-24, 2011.

3 ）川本

進 : 病原性出芽酵母 Cryptococcus neoformans 細めた . 更に , 我々は関連して , 以前に我々自身が分子ク胞周期制御機構の解明に向けて . Basic Science Joint

鍵分子 , 本菌サイクリン依存性キナーゼ（CnCdk1）と2011.

ローニングして解析を進めて来た細胞周期制御機構のその制御因子 G1 サイクリン（CnCln1）の相互作用のバイオインフォマテイクス解析を行うなど , Cryptococcus

neoformans の細胞周期制御機構や低酸素応答機構の解

千葉大学

Meeting, 千葉大学医学研究院 , 千葉 , 12 月 2 日 ,4 ）川本 進 : 病原性出芽酵母 Cryptococcus neoformans“細胞周期エンジン”の分子機能解析 , 第 181 回酵母細胞研究会 , 横浜 , 12 月 2 日 , 2011.

真菌医学研究センター報告

第 16 巻

2012

55

学会発表

染症研究 . 第 86 回日本細菌学会総会ワークショッ

国際学会, 千葉 , 3 月
プ「真菌症研究のニューフロンテイア」

1 ）Kawamoto S, Virtudazo EV, Ohkusu M, Tamura Y,

18 ～ 20 日 , 2013.（2013 年 3 月 国内学会 招待講

of Cell Cycle Control Genes in Cryptococcus neoformans.

3 ）Kawamoto S, Virtudazo EV, Suganami A, Tamura M:

Cryptococcosis（ICCC8）, Charleston, South Carolina,

Cryptococcus neoformans: Structure-function relationshipShimizu K, Yamaguchi M, Takeo K: Characterization

8 th International Conference on Cryptococcus andUSA, May 1-5, 2011.

2 ）Ohkusu M, Virtudazo EV, Sato T, Shimizu K, Toe

演 発表予定）.

Cell cycle regulation mechanism in pathogenic yeast,of G1 and G 1 /S cyclins homologue CnCln 1 . 2013

Annual Meeting of American Society for BiochemistryA, Yamaguchi M, Kawamoto S: Cryptococcus neoformans

and Molecular Biology（Experimental Biology 2013）,

checkpoint. International Union of Microbiological（2013 年 4 月 国際学会 発表予定）

Wee1 kinase has an important role in controlling G2-M

Boston, Massachusetts, USA, Apr. 20 - 24 , 2013 .

Societies（IUMS）2011 Sapporo Congress, Sapporo,

September 6-10, 2011.

3 ）Kawamoto S, Virtudazo EV, Suganami A, Ohkusu M,

Tamura Y: Towards understanding cell cycle control in

Cryptococcus neoformans: Structure-function relationshipof G 1 and G 1 /S cyclins homologue CnCln 1 . 18 thCongress of the International Society for Human andAnimal Mycology（ISHAM 2012）, Berlin, Germany,

June 11-15, 2012.

国内学会1 ）Kawamoto S, Virtudazo EV, Ohkusu M, Tamura

Y, Moretti ML, Takeo K: Molecular and funactional

カンジダ・グラブラータ遺伝子組換えライブ
ラリーと次世代シーケンサーを用いた病原因子のスクリーニング
知花博治（千葉大学真菌医学研究センター）
青山俊弘（鈴鹿工業高等専門学校）
長
環・永尾潤一（福岡歯科大学）

characterization of two key players（cyclin and cyclin-

研究成果

pathogenic yeast, Cryptococcus neoformans. 第 84 回日本など）は , 表皮 , 粘膜 , 口腔 , 食道 , 腸 , 肛門など人体

dependent kinase 1）of cell cycle control genes in

カンジダ属（Candida albicans, C. glabrata, C. tropicalis

生化学会大会 , 京都 , 9 月 21 ～ 24 日 , 2011.の様々な部位に常在する真菌であり , 易感染状態の患者

Study on cell cycle control mechanism in pathogenic

我々はこの感染成立過程に関与する遺伝子を解析するこ

relationship of G1 and G1/S cyclins homologue CnCln1.

る . そこで , 病原性カンジダ属菌種の中で実験的な取扱

2012.

的な遺伝子組換え体ライブラリー構築し , これを用いて2 ）Kawamoto S, Virtudazo EV, Suganami A, Tamura M:

yeast, Cryptococcus neoformans: Structure-function

第 85 回日本生化学会大会 , 福岡 , 12 月 21 ～ 24 日 ,その他:「病原真菌 Cryptococcus1 ）佐藤隆文（指導教授：川本 進）

neoformans における低酸素応答関連因子の探索とそ, 千葉大学大学院 医学薬学府 医学領の機能解析」

域 医科学修士課程 修士論文（2013 年 3 月修士論文 発表予定）.

治 , 川本では , 腸管粘膜より侵襲し , 重篤な全身感染症を起す .とより感染現象を理解する道筋が得られると考えていいが最も容易なカンジダ・グラブラータを用いて , 体系

病原性に関する遺伝子解析を進めた . カンジダの感染では , 感染に先立ち腸管粘膜への付着と増殖が必要であるが , 低糖状態である腸管粘膜上での栄養源が不明であった . そこで , 我々は遺伝子組換え体ライブラリーの中か

ら乳酸と酢酸の代謝に関与する遺伝子について着目し ,それの欠損株についてマウスを用いた腸管定着実験を試2 ）松本靖彦 , 上野圭吾 , 清水公徳 , 金城雄樹 , 知花博

56

課題番号 ’11－02

進 , 関水和久 : カイコを用いた真菌感

千葉大学

みた . その結果 , 乳酸の資化性に必須である Cyb2p（乳酸脱水素酵素）が , 腸管定着のために必要な因子である

真菌医学研究センター報告

第 16 巻2012

ことが見出され , カンジダグラグラータは腸管に定着するために乳酸を資化していることが示された .

今後は多数の組換え体を同時に解析する手法 , すなわりハイスループット化を計る必要性がある . 次世代シーケンサーのデータ解析技術の取得や , そのための予備実
験として 100 種類の組換え体を混合し , ゲノム DNA を抽出し , 次世代シーケンサーを用いスクリーニングする

研究課題 ’11－03

カンジダ属のキャディン系抗真菌薬耐性化機構の研究
田辺公一（国立感染症研究所・生物活性物質部）
知花博治（千葉大学真菌医学研究センター）

ことによって組換え体の個体数比を算出する技術を開発中である .

研究成果

研究業績
1 ）Ueno K, Matsumoto Y, Uno J, Sasamoto K, Sekimizu
K, Kinjo Y, Chibana H: Intestinal resident yeast
Candida glabrata requires Cyb 2 p-mediated lactate

は 2002 年に国内で上市され , 深在性真菌症治療の第一assimilation to adapt in mouse intestine. PLoS One.

6（9）: e24759. 2011.

（招待講演）

1 ）知花博治 , 笹本

要 , 上野圭吾 , 三谷宏樹 , 青山俊弘 , 大野道代 , 中山浩伸 , 宇野

月 21 日 , 2011.

選択薬になりつつあるが , 諸外国では既に耐性株の出現が報告されている . ミカファンギンの標的タンパクは

β -1,3 グルカン合成酵素である . カンジダグラブラータの FksP をコードする遺伝子には FKS1 と FKS2 が存在

し , 両遺伝子のどちらか一方の単独欠損株を作製し感受性を調べたところ , ミカファンギンの感受性に変化は確認されなかった . 一方 , ミカファンギンに耐性化した臨

潤 : Candida glabrata

床分離株について両遺伝子の DNA 塩基配列内を決定しランチョンセミナー . 東京 . 5の終止コドンに変異があることを見出した . これらの変の網羅的遺伝子破壊により得られた知見 . 第 32 回

関東医真菌懇話会

キャンディン系抗真菌薬ミカファンギン（MCFG）受賞

1 ）第 55 回日本医真菌学会学術集会ポスター賞（代たところ , FKS1 内のホットスポット突然変異と FKS2異を付与した遺伝子を導入したところ , 臨床分離株と同様に耐性化が確認された .

また , 真菌医学研究センター保存菌株のうち , 深部

: 知花博治 , 上野圭吾 , 青山俊弘 , 中山浩伸 , 宇表）

臓器への感染が疑われる Candida glabrata 18 株について

Candida glabrata の体系的遺伝子組換え体ライブラ4 μg/ml 以上）であった . これらは , 2009 年以降に分離

野潤 : 病原因子のデータベース構築をめざした

リーの作製 . 2011 年 10 月 22 日 .

一般発表1 ）大野道代 , 青山俊弘 , 中山浩伸 , 照屋盛実 , 塚原正

薬剤感受性試験を行ったところ , 2 株は耐性株（MICされたものであり , FKS1 にこれまでに報告されていない遺伝子変異が認められた .

俊 , 知花博治 : 次世代シーケンサー SOLiD を用い研究業績

p. 7, さぬき市 , 11 月 13 ～ 14 日 , 2011.

1 ）Niimi K, Woods MA, Maki K, Nakayama H,

たゲノム解析 , 第 7 回真菌分子細胞研究会

要旨集2 ）中山浩伸 , 青山俊弘 , 上野圭吾 , 知花博治 : Candida

論文

Hatakenaka K, Chibana H, Ikeda F, Ueno K, Niimi

glabrata 遺伝子の転写開始点の解析 , 第 7 回真菌分M, Cannon RD, Monk BC: Reconstitution of high-14 日 , 2011.

of Candida glabrata identifies functional homozygosity

子細胞研究会要旨集 p. 17, さぬき市 , 11 月 13 ～level micafungin resistance detected in a clinical isolate

in glucan synthase gene expression. J Antimicrob
Chemother. 67（7）. 1666-76, 2012.

学会発表

1 ）Tanabe K, Ohno H, Umeyama T, Yamagoe S, Chibana

H, Miyazaki Y: Genetic analysis of echinocandin-

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 16 巻201257

resistant Candida glabrata isolated in Japan. 18th Congressである .

Mycology（ISHAM 2012）, Berlin, Germany, June 11-

研究発表

of the International Society for Human and Animal

15, 2012.

2 ）田辺公一 , 大野秀明 , 梅山

隆 , 山越智 , 知花博治, 宮﨑義継: 病原性真菌キャンディン耐性

Candida glabrata 株の遺伝子解析 . 真菌症フォーラ

ム , 東京 , 2 月 , 2012．

論文
1 ）Iwakura Y, Ishigame H, Saijo S, Nakae S: Functional

Specialization of Interleukin- 17 family members.
Immunity 34: 149-162. 2011.

研究課題 ’11－05
研究課題 ’
11－04
真菌性肺炎の発症機序の解明
真菌感染防御における IL-17 産生機構に関する研究
岩倉洋一郎

センター・システムズバイオロジー研究分野）（東京大学医科学研究所・システム疾患モデル研究センター・細胞機能研究分野）

西城

中江 進
（東京大学医科学研究所・システム疾患モデル研究新江
西城賢（杏林大学保健学部・免疫学教室）
忍（千葉大学真菌医学研究センター）

忍（千葉大学真菌医学研究センター）
研究成果

研究成果
IL-17A は主に活性化 CD4＋ T 細胞から産生され , 細胞外寄生菌に対する感染防御や自己免疫疾患の発症において中心的な役割を担っている . この IL-17 産生性気道や腸管上皮 , また , 皮膚表皮では , 細胞と細胞の間が様々な接着分子を介して連結され（tight junction）,外来抗原の侵入を防いでいる . その tight junction の破壊に , 外来および内在性の protease が関与していること

CD4＋ T 細胞は , 新しい T 細胞サブセットとして Th17が示されつつある . したがって , 真菌 Aspergillus によるて Th17 の分化誘導が可能であることが知られていた

く , Aspergillus が産生する protease による宿主の気道上と名付けられた . In vitro では , TGF-β と IL-6 によっが , 申請者らは , マウス骨髄由来樹状細胞（BMDC）を

肺炎は , Aspergillus 自体の感染による免疫応答だけでな皮の破壊が発症及び症状の重症化に関わっている可能

Candida albicans（C. albicans）で刺激し , その培養上清が性が強く示唆される . 実際に , マウスに Aspergillus 由来

一方 , IL-17A ノックアウトマウスに C. albicans を感染伴う強い気道炎症が認められた . さらに , 各種欠損マウ低下することを明らかにした . しかし最近 , CD4＋細胞

炎症は , T 細胞 , B 細胞 , NKT 細胞 , マスト細胞非依存naïve T 細胞を Th17 細胞に分化させることを見出した .
させると野生型（WT）マウスと比較し生存率が有意に以外にも IL-17 を産生する細胞が見出され , Th17 と他の IL-17 産生細胞との機能の違いが注目されている .

そこで , マウスに C. albicans を感染させ IL-17 の産生細胞等を解析したところ , C. albicans の感染に伴い ,CD4＋ T 細胞からの IL-17 産生が増加するともに , CD4＋T 細胞以外の細胞でも IL-17 産生が増加することが確認の protease を吸入させると , 組織破壊と好中球の浸潤をスを用いた結果 , Aspergillus protease による好中球性気道的であることが明らかになった . また , この Aspergillus

protease による好中球性気道炎症は IL-6 および TNF 欠

損マウスでも野生型マウスと同レベルで観察され , IL-6,

TNF 以外に好中球の浸潤を誘導するサイトカインなどの関与が示唆された .

された . 今後は , ノックアウトマウスやノックインマウ

スと細胞移植の系などを組み合わせ , どの細胞種が感染防御に重要な役割を担っているのかを明らかにする予定

58

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 16 巻2012

研究課題 ’
11－06

研究課題 ’
11－07

接合菌症の簡易診断法開発に向けた抗原検索の研究

新規レクチンによる抗病原真菌機能の解明と抗真菌剤の開発

宮﨑義継・大野秀明・山越智

舘野浩章（国立感染症研究所）（独立行政法人産業技術総合研究所・幹細胞工学研

掛屋 弘（長崎大学大学院感染免疫学講座）
亀井克彦（千葉大学真菌医学研究センター）

究センター）

五ノ井透・大荒田素子・酒井香奈江（千葉大学真菌医学研究センター）

成果概要
背景 . 接合菌症は診断法・治療法が事実上ないに等しい情況である . そこで , 接合菌症として頻度が高いもの

研究成果て , 当該真菌の細胞表面に存在する , あるいは , 真菌細Dectin-1, MBL, DC-SIGN など C タイプレクチンが抗現量の多かったペプチドに関して機能の解析と , これをしそのレパートリーは完全ではなく , これら以外にも抗成果 . 23kDa 蛋白と 46kDa 蛋白質をコードする遺伝れる . これまでにヒトでは約 100 種類のレクチンが同定の一つであるリゾプス属の簡易診断法構築を目的とし胞外に分泌されるペプチドを検出した . 本研究では , 発検出することによる診断応用の可能性を検証した .

子をクローン化し , tag によるペプチドの精製を可能と各種病原真菌に対する生体防御分子の有力候補として糖鎖結合タンパク質・レクチンが挙げられる . 例えば ,真菌機能を担っていることが明らかにされている . しか真菌機能を有するレクチンは多数存在していると考えらされており , 構造的に 10 種類以上のファミリーに分類した . ペプチドの機能は一次構造からは推定不可能でされているが , 我々がバイオインフォマティクスを援用

当該遺伝子を保有していることを臨床分離株で確認し回る数（～ 500 種類）のレクチン候補遺伝子の存在が浮た . ②当該遺伝子を Saccharomyces cerevisiae に導入し , 当かび上がった . 申請者らが開発した糖鎖複合体アレイをとを , 抗 tag 抗体により確認した . ③接合菌における遺グを行った結果 , 高密度マンノースに結合特異性を示すあり , 病原性の検討はできていない .

度マンノースに被覆されたカンジダやマラセチアなど各体を用いて , 実験マウスの血清や尿から抗原が検出可能織分布を調べてみると , 上部から下部の消化器系の外分あったが , 二つの蛋白質が , ①他の Rhizopus oryzae 株も該蛋白質は両蛋白質とともに培養上清中に分泌されるこ

伝子のノックダウンやノックアウトの実験系は未確立でしてデータマイニングを行った結果 , それをはるかに上用いて 78 種類のヒトレクチン候補分子のスクリーニン

新規レクチン ZG16 を発見した . 更に本レクチンが高密今後の予定 . 作成した当該蛋白質のモノクローナル抗種ヒト病原真菌に強く結合することを明らかにした . 組か否かを検証する . 検体から検出できれば , 高感度の系泌性の細胞に局在していることが分かった . 糖鎖結合特を作成しヒト検体で検証する .

異性と組織分布から , 本レクチンは真菌に対する防御分子として働いていると考えられた . しかし小腸上皮細胞への接着阻害や真菌の増殖抑制などの機能は見られなかった . 本レクチンの特異性や局在から考えると消化器系上皮のムチン層に局在している他の抗真菌分子と協調的に働き , 真菌の感染を阻害している可能性は高い . 本

共同研究により構築した関係を足がかりに , 引き続き更なる機能解析を実施して , 抗真菌機能を明らかにしていく.

千葉大学真菌医学研究センター報告

第 16 巻201259

研究発表

作製した . その結果 , 従来の指標である 16S rRNA 遺伝

論文発表

子を用いた解析に比べ , より解像度の高い系統樹が得1 ）Tateno H, Yabe R, Sato T, Shibazaki A, Shikanai T,られた . さらに指標遺伝子の絞り込みを行い , 以下 12

recognizes pathogenic fungi through non-self polyvalentsodA, trpB, ychF）の遺伝子のうち , 5 種の遺伝子を使用

Gonoi T, Narimatsu H, Hirabayashi J. Human ZG16p種（atpD, dnaJ, groL1 , groL2 , gyrB, recA, rpoA, secA, secY,

mannose in the digestive system. Glycobiology 22（2）:することで , ゲノム全体を反映した系統樹を作製できる2 ）Shibazaki A, Tateno H, Akikazu A, Hirabayashi

2 ）Nocardia 属のゲノム情報を利用した二次代謝産物の210-220, 2012.

J, Gonoi T. Profiling the cell surface glycome of live
fungi using lectin microarray. Journal of Carbohydrate

Chemistry 30（3）: 147-164, 2012.

ことが示唆された .

生合成遺伝子の比較解析

N. otitidiscaviarum IFM 10847, N. asteroides NBRC 15531T,

N. brasiliensis IFM 11049, N. brasiliensis NBRC 14402T のゲ
ノム配列から , 代表的な二次代謝産物の生合成遺伝子である type-I polyketide synthases（PKS-Is）と nonribosomal

研究課題 ’11－08

peptide synthetases（NRPSs）を特定した . その結果 , それ病原性放線菌 Nocardia 属細菌のゲノム解析
による遺伝子情報の整備, 22 個（NBRC 15531）,
ぞれの菌株から 17 個（IFM 10847）

30 個（IFM 11049）, 27 個（NBRC 14402） の PKS-I とNRPS 遺伝子クラスターが確認された . このことから ,Nocardia 属が創薬のための探索源として産業上有用であ藤田信之・山崎秀司・山副敦司・細山 哲
黄地祥子・市川夏子・小牧久幸・田村朋彦
浜田盛之

ることがゲノム情報からも示唆された .

（製品評価技術基盤機構バイオテクノロジーセン

き続き Nocardia 属の遺伝子基盤情報の整備を行う予定でター）

五ノ井透（千葉大学真菌医学研究センター）

今後は , 本共同研究により構築した関係を維持しつ

つ , 本成果を足がかりに他の種にも解析対象を広げ , 引ある .

研究発表
研究成果

論文発表

ノカルジア症の適切な抗菌薬を選択するために , 正1 ）Tamura T, Matsuzawa T, Oji S, Ichikawa N, Hosoyama

Nocardia 属の種に特異的な遺伝子を指標とした分子生物

Gonoi T, Fujita N: A genome sequence-based approach

確な起炎菌の同定を行うことが重要である . このため ,学的手法による同定法の開発が望まれている . さらに ,同属は多様な生理活性物質の生産菌であることも知られているため , 二次代謝産物の生合成に関わる遺伝子情報の整備が求められている .

そこで , Nocardia 属研究の基盤となるゲノム情報を収集するために , 下記のテーマに沿って研究を実施した .

1 ）Nocardia 属のハウスキーピング遺伝子を指標とした新規系統分類手法の開発

本研究で新たにドラフトゲノム解析を実施した4株をA, Katsumata H, Yamazoe A, Hamada M, Suzuki K,to taxonomy of the genus Nocardia. Antonie Van

Leeuwenhoek 102（3）: 481-91, 2012.

学会発表

1 ）Tamura T, Matsuzawa T, Ohji S, Katsusmata H,

Ichikawa N, Hamada M, Suzuki K, Gonoi T and Fujita
N: Taxonomic approach based on genome sequencing ofthe genus Nocardia, 国際放線菌学会 16th InternationalSymposium on the Biology of Actinomycetes Mexico Dec.

2011.

含めた計 26 株の Nocardia 属基準株について比較ゲノム2 ）Komaki H, Ichikawa N, Hosoyama A, Takahashi

キーピング遺伝子を特定した . 26 菌種間で遺伝子ごと

Genome-wide Analysis of Type-I Polyketide Synthase

解析を実施し , 26 株すべてに存在する 438 個のハウスに配列の類似性を計算し , 近隣結合法により系統樹を60

千葉大学

A, Matsuzawa T, Suzuki K, Fijita N and Gonoi T: Aand Nonribosomal Peptide Synthase Gene Clusters in

真菌医学研究センター報告

第 16 巻2012

the genus Nocardia, 国際放線菌学会 16th International型糖鎖に関しては各酵母ともサイズ分画 HPLC 上にて

2011.

本病原性担子菌酵母ではモデル子嚢菌酵母で見られるハSymposium on the Biology of Actinomycetes Mexico Dec.

3 ）小牧久幸 , 市川夏子 , 細山

Hex5-11GlcNAc2-PA の糖鎖が検出された . この結果より哲 , 関根光雄 , 田村朋

イパーマンノシレーション糖鎖が付加しない事が示唆さ

木 健 一 朗 , 藤 田 信 之 : Intrageneric diversity of type-I

素遺伝子の同定 , 本酵素の阻害剤の探索の効率化が達成

彦 , 山崎秀司 , 高橋 梓 , 松澤哲宏 , 五ノ井 透 , 鈴

れた . これらの情報を元に将来的には糖鎖生合成関連酵

polyketide synthase genes in the genus Nocardia（Nocardia

され , 効果的な抗真菌剤の開発へと発展することが期待属におけるⅠ型ポリケタイド合成酵素遺伝子の多様性 , 2011 年度（第 26 回）日本放線菌学会大会 札幌
2011 年 9 月 .

される .

研究業績
学会発表1 ）大橋貴生 , 酒井香奈江 , 五ノ井

研究課題 ’11－09透 , 藤山和仁 : 病

原 性 担 子 菌 酵 母 Cryptococcus neoformans, Malassezia

病原性担子菌酵母の細胞表層糖鎖の構造解析

furfur, Rhodotorula mucilaginosa の糖鎖構造解析 . 日本農芸化学会 2012 年度大会 . 3 月22 ～ 26日 , 2012.

大橋貴生・藤山和仁

研究課題 ’
11－10（大阪大学生物工学国際交流センター）

五ノ井透（千葉大学真菌医学研究センター）

日和見真菌症原因菌 Aspergillus section Nigriの感染性とマイコトキシン産生性

研究成果
病原性真菌類は他のモデル真菌類と同様に細胞表層染メカニズムに深く関与していると考えられている . こ

度 , 宿主細胞への接着・侵入 , 宿主の免疫応答などの感

横山耕治（真菌医学研究センター）
久米田裕子・坂田淳子（大阪府公衆衛生研究所）
浅野勝佳・陰地義樹

れらの病原性真菌類では糖鎖生合成不全変異により病（奈良県保健環境研究センター）原性の低下が報告されているが , 病原性担子菌酵母であ

田端節子・千葉隆司ては , C. neoformans の夾膜多糖を除いて , ほとんど糖鎖

川上裕司・橋本一浩の病原性担子菌酵母より細胞表層糖鎖構造の基礎的な知中川博之（農研機構食品総合研究所）
渡辺麻衣子・髙橋治男（国立医薬食品衛生研究所）
橋本ルイコ（千葉県衛生研究所）

は糖鎖からなる細胞壁で覆われており , 細胞の物理的強る C. neoformans, M. furfur および R. mucilaginosa におい

構造解析された例がない . そこで本研究では上述の 3 種見を得るために , 詳細な細胞表層糖鎖の構造解析を試みた.

各病原性担子菌酵母を培養後 , ヒドラジン分解－ピ（東京都健康安全研究センター）（（株）エフシージー総合研究所）

リジルアミノ化法を用いて , ピリジルアミノ化糖鎖を研究成果

鎖の分画 , 次いで LC-MS/MS による質量分析を行っその近縁菌 , 40 株について , マイコトキシンであるフモしては各酵母とも Hex1-4-PA の糖鎖の存在が明らかとた . まず , 培地としては , 製麹を想定した白米培地での調製後 , サイズ分画 HPLC によるピリジルアミノ化糖た . サイズ分画 HPLC 解析により , O- 結合型糖鎖に関実用黒麹菌（10 株）を含めた Aspergillus niger ならびにニシンとオクラトキシン産生と遺伝子型の類別を検討しなった . さらなる LC-MS/MS 解析により , C. neoformans

産生性をみたところ , IFO 保存株を含めた約 20％の株（Pent-）Hex-PA の糖鎖が検出された . N- 結合て , Hex-は , いずれの産生株も , 特定の遺伝子型（D5-1）に属し ,においてモデル酵母では見られない特異的な糖鎖とし千葉大学にフモニシン B2 の産生がみられた . 遺伝子解析の結果

真菌医学研究センター報告

第 16 巻201261また , オクラトキシン産生能を有した株群も全く同一の遺伝子型に属することを示した .

コメ培地で , オクラトキシン産生も認められることから , 両マイコトキシンの産生能を有する株では , コメ培

地中に , いずれのマイコトキシンも産生される可能性があると推定された .

一方 , 実際に醸造などに用いられている実用麹菌も ,特定の遺伝子型（D9-1 など）に集中したが , これまでの結果では , 明らかにマイコトキシンを産生する菌群とは遺伝子型が異なることを示した .

（Poster Presentation）.

2 ）Takahashi H, Hashimoto R., Onji Y, Asano K, Takino

M, Tabata S, Yokoyama K.: Mycotoxin production and
DNA typing of Aspergillus niger and related species

including black-koji molds. International Union of

Microbiological Societies（ IUMS ）2011 Congress,September 9, 2011, Sapporo（Poster Presentation）.

3 ）陰地義樹 , 橋本ルイコ , 浅野勝佳 , 滝埜昌彦 , 各務清美 , 田端節子 , 久米田裕子 , 横山耕治 , 髙橋治男 :Aspergillus niger および亜あその近接種のフモニシン

また , フモニシンの生合成に欠かせない遺伝子とされ産生 . 日本マイコトキシン学会第 69 回学術講演会 ,認められた遺伝子型に属した株では , 明らかに陽性反応

4 ）横山耕治 : 黒麹菌の遺伝子分類とマイコトキシン産る Fum8 遺伝子検出を試みたところ , フモニシン産生のが認められ , 概ねフモニシン産生との相関性も認められた.

A. niger の中で , オクラトキシン , フモニシンを産生する株の病原性を調べたところ , マウス肺感染モデルにおいて , 感染性のあることが確認された . しかし , トキシンの産生性とのかかわりに関しては , 今後の課題として残された .

以上の結果から , 実用麹菌は , Aspergillus niger と系統的に異なり , マイコトキシン産生性をも有しない可能性も示唆した .

2011 年 1 月 7 日 , タワーホール船堀 .

生 . 第 27 回焼酎研究会 , 6 月 22 日 , 2012. 浅野勝佳 , 渡嘉敷唯章 , 廣瀬（安元）美奈 , 高良
里哲也 , 吉野コ, 劉亮, 豊

敦 , 池端真美 , 陰地義樹 , 橋本ルイ

瑩 , 横山耕治 , 髙橋治男 : 黒麹菌のマイコ

トキシン産生について . 日本マイコトキシン学会

第 70 回学術講演会 , タワーホール船堀 , 1 月 6 日 ,2012.

5 ）川上裕司 , 橋本一浩 , 橋本ルイコ , 浅野勝佳 , 陰地義樹 , 横山耕治 , 髙橋治男 : 沖縄県泡盛醸造工場内における section Nigri の調査と mycotoxin 産生能 .

また , 今年度は , 沖縄などにおける黒麹菌の収集を

日本マイコトキシン学会第 71 回学術講演会 . 沖縄

共同研究契約（資料添付）を結び , 黒麹菌の安全性確立

6 ）中川博之 , 佐合由紀 , 橋本ルイコ , 清水公徳 , 小西

行っている（株）トロピカルテクノセンター（TTC）のための研究を推進する体制を整えた .

県市町村自治会館ホール , 7 月 6 日 , 2012.

良子 , 髙橋治男 , 横山耕治 : 国産ワインにおけるAspergillus niger 産生マイコトキシンの分析 . 日本マ研究発表

イコトキシン学会第 71 回学術講演会 . 沖縄県市町学会発表

村自治会館ホール , 7 月 6 日 , 2012.

1 ）Yokoyama K, Liu Y, Wang L, Kumeda Y, Hashimoto7 ）橋本ルイコ , 陰地義樹 , 浅野勝佳 , 中川博之 , 横山of conidial wall of black-koji molds Aspergillus section

れた Section Nigri とそのカビ毒産生性 . 日本マイコ

R, Takahashi H.: DNA typing and SEM observation

Nigri. International Union of Microbiological Societies（IUMS）2011 Congress, September 9, 2011, Sapporo

62

千葉大学

耕治 , 髙橋治男 : ベトナム産コーヒー豆から分離さトキシン学会第 71 回学術講演会 . 沖縄県市町村自治会館ホール , 7 月 6 日 , 2012.

真菌医学研究センター報告第 16 巻2012