ISSN 1347－6920

MMRC
ANNUAL REPORT OF MEDICAL MYCOLOGYRESEARCH CENTER, CHIBA UNIVERSITY 2019千葉大学 真菌医学研究センター

23

令和元年

報告

目

次

Content

はじめに

Preface for Annual Report for 2019

感染免疫分野 米山教授 感染応答プロジェクト

Project for Immune Response in Infections Diseases

3

Project for Cytokine Research

5

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis

7

Canjida glabrata Phenome Project10

Project of Clinical Investigation

12

Project for Host Response Network of Bacterial Infection

16

Project for Infection Control and Prevention

19

感染免疫分野 西城准教授 サイトカインプロジェクト
感染免疫分野 後藤准教授 微生物・免疫制御プロジェクト

病原機能分野 知花准教授 カンジダ・グラブラータフェノームプロジェクト
臨床感染症分野 亀井教授 臨床感染症プロジェクト
臨床感染症分野 山本特任教授 感染宿主応答ネットワークプロジェクト
感染症制御分野 石和田准教授 感染症制御プロジェクト

RNA 感染治療学分野 伊庭特任教授 RNA 制御プロジェクト
Project for RNA Regulation

24

Project for Systems Biology of Microorganisms

27

Management of Unit of Microbiological Resources

29

Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology
National BioResource Project Pathogenic Eukaryotic Microorganisms

32

Cooperative Research of Priority Areas with NEKKEN, Nagasaki University
Project for Collections, and morphological, physiological and molecular biologicalanalysis of human pathogenic fungi and actinomycetes in Africa

33

The project for prophylaxis, diagnosis, and treatment for aspergillosis and the othermycoses in aged and neonate patients

34

微生物資源分野 高橋准教授 微生物創生プロジェクト
微生物資源分野 矢口室長 バイオリソース管理室

文部科学省 ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原真核微生物」

長崎大学熱帯医学研究拠点特定領域共同研究「アフリカで発生している真菌症・放線菌症の原因菌の収集と形態学的，生理学的，分子生物学的解析」プロジェクト

高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発プロジェクト

AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「ブラジルと日本の薬剤耐性を含む真菌感染症診断に関する研究とリファレンス協力体制強化プロジェクト」

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for Sustainable
Development（SATREPS）
The establishment of a research and reference collaborative system for the
diagnoses of fungal infections including drug-resistant ones in Brazil and Japan

36

感染症研究革新イニシアティブ（J-PRIDE）
Japanese Initiative for Progress of Research on Infectious Disease for Global Epidemic（J-PRIDE）

38

Leading Research Promotion Program, Institute for Global Prominent Research
Advancced Research of Infection and Immunity Based on Integrative
Understanding of Host-Microbe Interactions

39

千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラム「 超個体 の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」

平成30年度 共同利用・共同研究報告2018 Fiscal Year Cooperative Research Program Report

感染症研究グローバルネットワークフォーラム2018
The 7th Global Network Forum on Infection and Immunity
2019年講演会
2019 Scientific Meetings & Seminars

40
59
61

は じ め に
我が国では高齢者の増加に伴い , 高度医療や生活習慣病に起因する日和見感染症や呼吸器疾患を基礎疾患とする難治性の真菌感染症が増加しています . また経済活動や観光等のグローバル化に伴い , 輸入真菌感染症等をはじめとするさまざまな感染症の脅威にも直面しています . このような背景で , 我が国唯一の真菌感染症の研究・治療拠点である真菌医学研究センターに求められる役割は以前にも増して重要になっています .
本センターは , 学内において感染症の研究はもとより , 免疫 , 病原微生物 , 細胞生物 ,ケミカルバイオロジー , 情報生命科学等を包含する領域の研究拠点として , 基礎研究者と共同研究を推進するとともに , 学外では文科省より認定された「共同利用・共同研究拠点」事業を通じて , 国内・海外の大学 , 公的研究機関 , 医療機関 , 企業等との緊密な共同研究を先導し , 病原真菌コミュニティーの発展と次世代の人材育成を目指しています .
本センターの特色として , 基礎研究と平行して臨床研究及び医療活動を積極的に行っていることが挙げられます . 真菌感染症の臨床研究・治療学の拠点として , 千葉大学附属病院に我が国初の真菌症専門外来を開設し , また全国の大学・医療機関からの要請に応じてコンサルテーションも長年に及び実施しています . さらに小児感染症においても , 附属病院の小児科・感染症管理治療部・感染症内科と連携した活発な臨床研究を行っています .
本センターは , 真菌感染症の研究を支える , 世界レベルの規模と品質を誇る病原真菌・放線菌のバイオリソースを有しています . 文科省より認定された「ナショナルバイオリ
サーチプロジェクト（NBRP）」の支援もとで , 病原真菌の収集 , 保存 , 分与 , オミックス
情報解析等を通じて , 基礎・臨床研究 , 共同利用・共同研究拠点事業 , 国際共同研究等を支えています . 昨年度は , 真菌講習会およびバイオリソースの機能強化を目指して , 旧ラ
ジオアイソトープ実験室を , バイオリソース管理室の占有スペースとしてリニューアルしました .
本年度も , ブラジル , 米国 , ドイツ , 英国 , ポルトガル , 中国等の真菌研究拠点と活発な
国際共同研究を行いました . 特に平成28年ブラジル・カンピーナス大学医学部と連携して地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）に採択されたことを契機に ,現地における薬剤耐性真菌による感染症の実態解明を目指して , 若手研究者の相互交流を通じて共同研究を実施しました .
本センターでは , 国内外より卓越した研究者を招請し , 毎年国際フォーラムを開催しています . 本年度は , マイクロバイオームを主題にして , 第８回感染症研究グローバルネッ
トワークフォーラムを2020年１月に千葉大学附属病院で開催しました . 参加者は述べ220
名を数え多くの共同研究も立ち上がりました .
本年も , 千葉大学 , 本センターの運営協議会メンバー , 特任教授 , 兼任教授 , 客員教授 ,グランドフェローはじめ , 国内外の多くの共同研究者による御指導 , 御支援を賜りました
ことに心より感謝致します .
令和2年4月
千葉大学真菌医学研究センター長

笹

川

千

尋

Preface for Annual Report for 2019
Our country has already become a super-aged society, and the incidences of fungal infectious
diseases are steadily increasing due to the increase in advanced medical care and lifestyle-relateddisorders in patients with opportunistic infectious diseases and respiratory diseases. Moreover, thedramatic increase in worldwide trade and tourists from abroad, along with the spread of severe
fungal infectious diseases, is a key issue within the aging population. The Medical Mycology
Research Center（MMRC）at Chiba University has become increasingly important because it plays
three roles: as a research organization, a medical activity, and a promoter of educational activities
aimed at raising public awareness.
In 2011, MMRC was certified as a Joint Usage/Research Center by the Ministry of Education,
Culture, Sports, Science and Technology（MEXT）. Since then, MMRC has been actively
engaged in medical mycology research and related fields, including infection immunology, infection
biology, bioinformatics, and infection disease sciences, through partnerships with universities,
public institutions, medical institutions, hospitals, and pharmaceutical companies. In 2014, we
opened a specialty clinical research facility for fungal infectious diseases at Chiba University
Hospital that is the only outpatient clinic for such diseases in Japan. In addition, we are actively
conducting clinical research on pediatric infectious diseases in cooperation with the Hospital s
departments of pediatrics, infectious disease management and treatment, and infectious disease
internal medicine.
MMRC has a fungal culture collection, designated as a national bioresource, that is a prerequisite
not only for promoting our own research but also for the fungal research community in Japan andaround the world. MMRC also has BSL-3 facility, the only such laboratories at Chiba University.
We are also enthusiastic about promoting international collaborations with several outstanding
fungal research groups in Brazil, US, UK, China, Portugal, and Germany. For example, in 2016,a team of the Division of Clinical Research at MMRC was adopted by SATREPS, a Japanese
government program that promotes international joint research. As part of this program, our teamhas collaborated with the fungal research team in Campinaus University in Brazil to investigate theimpact of drug resistance on fungal infectious diseases in Brazil.
Finally, we envision MMRC as the leading institution for excellent scientific research in fungal
infectious research, as well as a key resource for research on pathogenic fungi that will ultimately
advance the field of medical mycology.
April, 2020

Chihiro Sasakawa PhD

Director of MMRC

米山ＰＩ（感染応答）プロジェクト
Project for Immune Response in Infections Diseases
研究概要（Summary）

感染に対する生体防御は , 自然免疫と獲得免疫によって協調して行われている . 本プロジェクトでは , ウイルス感染に応答した自然免疫誘導に注目し , 感染センサー RIG-I-like 受容体（RLR）によるウイルス由来の非自己 RNA 検知の分子機構の解明と , それによって引き起こされる免疫応答の生理機能を解析することにより , ウイルス感染症に対する新たな治療戦略の開発を目指した解析を行っている.

Innate immune system plays an essential role in self-defense against infection of a variety of pathogens. In
this project, we focus on antiviral innate immunity, especially molecular machinery for detection of viral
RNA by retinoic acid-inducible gene I（RIG-I）-like receptors（RLRs）and subsequent immune responses.
The results obtained from the studies will help us to establish a novel therapeutic or preventive strategy
against RNA virus-induced infectious diseases.

教

授

助

教

特

任

助

教

技

術

職

員

技 術 補 佐 員

米山 光俊
尾野本浩司
小野口和英
常喜 儒彦
滝沢みゆき

Professor

Assistant Professor
Assistant Professor

Research Technician

Research Promotion Technician

1. Identification of a new autoinhibitor y domain ofinterferon-beta promoter stimulator-1（IPS-1）for thetight regulation of oligomerization-driven signal
activation

Takahasi K1, Onomoto K2, Horiuchi M3, Kato H4, Fujita
T , Yoneyama M
5

1

2

3

2

Department of Life Science, Gakushuin University, Tokyo,

Bonn, Bonn, 53105, Germany.

Laboratory of Molecular Genetics, Institute for FrontierLife and Medical Sciences, Kyoto University, Kyoto, 6068507, Japan.

Upon viral infection, retinoic acid-inducible gene-I（RIG-I ）-like receptors detect viral foreign RNAs andtransmit anti-viral signals via direct interaction with thedownstream mitochondrial adaptor molecule, interferon

171-0031, Japan.

（IFN）-β promoter stimulator-1（IPS-1）, to inhibit viral

Research Center, Chiba University, Chiba, 260 - 8673 ,oligomers on mitochondria to activate signaling, theDepartment of Chemistry, Division of Integrated Human

Here, we identified an autoinhibitory domain（AD）at amino

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology
Japan.

Sciences, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Health
Sciences University of Hokkaido, Hokkaido, 061-0293,

4

5

Mitsutoshi Yoneyama
Koji Onomoto
Kazuhide Onoguchi
Michihiko Jogi（〜 2019.8）
Miyuki Takizawa

Japan.

Institute of Cardiovascular Immunology, University of

千葉大学

replication. Although IPS-1 is known to form prion-likemechanisms that regulate oligomer formation remain unclear.

acids 180 - 349 to suppress oligomerization of IPS-1 in a
resting state and regulate activation of downstream signaling.

Size exclusion chromatography（SEC）analysis demonstrated

that AD was required to suppress auto-oligomerization of the

真菌医学研究センター報告

第 23 巻20193

caspase recr uitment domain（CARD ）of IPS- 1 via

intramolecular interactions. This was supported by theobservation that cleavage of a peptide bond between IPS-1
CARD and AD by Tobacco Etch virus（TEV ）protease

3. Molecular interaction between anti-viral innate

immune responses and endoplasmic reticulum（ER）
stress responses.

relieved autoinhibition. Conversely, deletion of this domain

Onoguchi K, Mochizuki Y, and Yoneyama M.

suggesting that IPS- 1 AD played a critical role in the

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

from IPS-1 enhanced signal activation in IFN-reporter assays,
regulation of IPS- 1-mediated anti-viral signal activation.

These findings revealed novel molecular interactions involvedin the tight regulation of innate anti-viral immunity.

2. Functional analysis of RNA binding proteins（RBPs）

that are responsible for induction of anti-viral innate
immunity via RNA-granule formation.

Onomoto K, Ban M, Kuroki Y, Tsutsuba C, Watanabe Y,
and Yoneyama M.

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

Research Center, Chiba University, Chiba, 260-8673, Japan.

We are interested in how the ER stress-induced response

communicates with RLR-mediated signaling in the virus-

infected cells. Recently, we have identified a novel moleculethat is involved in the activation of both signaling pathways,

suggesting a molecular interaction between these two stressinducible signaling cascades.
Publications

１）Takahasi, K., Onomoto, K., Horiuchi, M., Kato, H.,

Fujita, T., Yoneyama, M.（2019）. Identification of a

Research Center, Chiba University, Chiba, 260-8673, Japan.

new autoinhibitory domain of interferon-beta promoter

We demonstrated that viral infection induces RLRs tooligomerization-driven signal activation. Biochem

accumulate in cytoplasmic granular-like structure, anti-viralstimulator- 1（IPS- 1）for the tight regulation ofBiophys Res Commun, 517, 662-669.

stress granule（avSG）. We further revealed that avSG plays a２）Matsuo, K., Haku, A., Bi, B., Takahashi, H.,anti-viral signaling. Here, we are analyzing several RBPs that

Goto, Y. （2019）. Fecal microbiota transplantation

critical role as a platform for the initiation of RIG-I-mediatedKamada, N., Yaguchi, T., Saijo, S., Yoneyama, M.,

play a role in the regulation of both RIG-I-mediated signal

prevents Candida albicans from colonizing thenovel RBPs that can be involved in anti-viral innate immune

３）Ohto, T., Konishi, M., Tanaka, H., Onomoto, K.,

activation and avSG formation. We are also trying to identify
responses using several biochemical approaches.

gastrointestinal tract. Microbiol Immunol, 63, 155-163.
Yoneyama, M., Nakai, Y., Tange, K., Yoshioka, H.,

Akita, H. （2019）. Inhibition of the inflammatory
pathway enhances both the in vitro and in vivotransfection activity of exogenous in vitro-transcribed

mRNAs delivered by lipid nanoparticles. Biol Pharm
Bull, 42, 299-302.

4

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

西城ＰＩ（サイトカイン）プロジェクト
Project for Cytokine Research
研究概要（Summary）

生体は , 多種多様な細胞や組織が互いに時空的に作用することにより恒常性が維持される一つシス
テムであり , その維持においてサイトカインは中心的な役割を担っている . 多くの疾病は単に一つの臓器 , 組織の異常ではなく , 免疫系を始めとする種々のシステムの異常であることから , これらを統合するサイトカインの役割を知ることは非常に重要である . 本プロジェクトでは , 感染性疾患や炎症性疾患の病態形成におけるサイトカインの役割を解明し , 最終的に新たな治療薬の標的分子を見出すことを目的とする .

Cytokines play a central role in maintenance of homeostasis. Because, a disease is not caused by only one
problem of an organ, but caused by a systemic disorder, which is regulated by cytokines, it is important tostudy their functions. We aim to find new therapeutic targets for inflammatory diseases and infectious
diseases by investigating the roles of cytokines in pathogenesis.

准
助

教

授
教

特 任 研 究 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

西城
忍
矢部 力朗
ファビオ セイチ ヨシカワ ヤマダ
水口 潤子
鈴木 智明

Associate Professor
Assistant Professor

Post Doctoral Fellow

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Dectin- 1 and Dectin- 2 in innate immunity against

fungal infection.

Fabio Seiti Yoshikawa Yamada, Rikio Yabe and Shinobu Saijo
Division of Molecular Immunology, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

Dectin-1 and Dectin-2 are type Ⅱ transmembrane proteins

Shinobu Saijo
Rikio Yabe
Fabio Seiti Yoshikawa Yamada
Junko Minakuchi
Tomoaki Suzuki

is recruited to the ITAM and activates the caspase recruitment
domain family member 9（CARD9）–nuclear factor-κB axis,

resulting in the activation of various genes including those

encoding pro-inflammatory cytokines. Both β-glucans andα-mannans are major cell wall components of fungi including

Candida albicans（C. albicans）and Pneumocystis carinii（P.

carinii）. Recently, it was reported that Dectin-1 is importantin protection against P. carinii by inducing reactive oxygen
species, whereas both Dectin-1 and Dectin-2 play importantof the C-type lectin family with single carbohydrateroles in defense against C. albicans by preferentially inducing

They are expressed mainly in dendritic cells and macrophages.

fungal immunity.

signals through its immunoreceptor tyrosine-based activation

2. Inhibition of Dectin-1 Signaling Ameliorates Colitis byrecognition domains（CRDs）in their extracellular region.

Dectin-1 recognizes β-glucans with its CRD and transduces

motif（ITAM ）-like motif in the cytoplasmic domain,

whereas Dectin-2 recognizes α-mannans and transduces its

signal through association with the ITAM-containing Fc
receptor γ chain. Upon ligand binding, spleen tyrosine kinase

千葉大学

Th17 cell differentiation. These findings unveiled new anti-

Inducing Lactobacillus-Mediated Regulatory T Cell
Expansion in the Intestine.

M a r i T. I w a s a w a 1, Yu u m i Na k a mu r a 1*†, S e i i c h i ro

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

5

Wakabayashi 1, Seitaro Nakagawa 1, Yuki Katayama 1,

IL-17F redundantly play critical roles in the clearance of C.

Iwakuraand IL-17F promoted neutrophil recruitment to the epidermis

Mitsutoshi Yoneyama , Hiromitsu Hara , Yoichiro
2

2, 4, 5,

3

Aoi Akitsu , Naohiro Inohara , Gabriel
5

Nunez , Hiroyuki Matsue
6, 7

1

2

3

1, 2†

6, 7

and Shinobu Saijo

Department of Dermatology, Chiba University Graduate
School of Medicine, Chiba, 260-8670, Japanphagocytosis of hyphal forms of C. albicans was severely
impaired in IL- 17 -deficient neutrophils; however, it was

restored by stimulation with recombinant IL-17. The fungal

recognition receptor TLR 2 , and the adaptor signaling

Department of Immunology, Graduate School of Medical

albicans.

Research Center, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

Sakuragaoka, Kagoshima 890-8544, Japan

Center for Experimental Medicine and Systems Biology,

The Institute of Medical Science, The University of Tokyo,

5and the expression of antimicrobial peptides. Notably,

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

and Dental Sciences, Kagoshima University, 8 - 35 - 1

4albicans from infected skin using this ECC model. IL-17A

4-6-1 Shirokanedai, Minato-ku, Tokyo 108-8639, Japan

Center for Animal Disease Models, Research Institute for
Biomedical Sciences, Tokyo University of Science, Noda-

molecule, MyD88, was not essential for the clearance of C.

Publications

１）Miura, T., Kawakami, K., Kanno, E., Tanno, H.,

Tada, H., Sato, N., Masaki, A., Yokoyama, R.,

Kawamura, K., Kitai, Y., Takagi, N., Yamaguchi, K.,
Yamaguchi, N., Kyo, Y., Ishii, K., Imai, Y., Saijo, S.,

Iwakura, Y., Tachi, M. （2019）. Dectin-2-Mediatedshi, Chiba 278-0022, Japan

Signaling Leads to Delayed Skin Wound Healing

School, Ann Arbor, MI 48109, USA

and Neutrophil Extracellular Trap Formation. J Invest

6

Department of Pathology, University of Michigan Medical

7

Comprehensive Cancer Center, University of Michigan
Medical School, Ann Arbor, MI 48109, USA

IL- 17 -mediated immunity has become known as an

essential host defense mechanism against microbial infections.

We previously reported that IL-17 is required to the hostthrough Enhanced Neutrophilic Inflammatory Response
Dermatol. 139（3）, 702-711.

２）Suematsu, R., Miyamoto, T., Saijo, S., Yamasaki, S.,

Ta d a , Y., Yo s h i d a , H ., M i y a k e , Y. （2 0 1 9 ）.
Identification of lipophilic ligands of Siglec5 and -14 thatmodulate innate immune responses. J Biol Chem. 294（45）, 16776-16788.

defense against systemic candidiasis, however, the role of the３）Matsuo, K., Haku, A., Bi, B., Takahashi, H.,

To investigate Candida albicans（C. albicans）infection that

Goto, Y. （2019）. Fecal microbiota transplantation

cytokines in the cutaneous candidiasis has remained unclear.

Kamada, N., Yaguchi, T., Saijo, S., Yoneyama, M.,

more closely represents physiological skin infections inprevents Candida albicans from colonizing themouse model that does not require any epidermal disruption.

155-163.

humans, we developed an epicutaneous candidiasis（ECC）
Unlike systemic candidiasis, we identified that IL-17A and

6

千葉大学

gastrointestinal tract. Microbiol Immunol. 2019 63（5）,

真菌医学研究センター報告

第 23 巻

2019

後藤ＰＩ（微生物・免疫制御プロジェクト）
Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis
研究概要（Summary）

腸管は食餌性抗原や腸内細菌・真菌など多種多様な抗原に常に曝されている特殊な組織である . こ
れら無数の抗原に対処するため , 腸管では免疫細胞と上皮細胞が相互に作用しながら病原性微生物を排除し , 非病原性微生物と共存する基盤を形成することで腸管の恒常性維持に寄与している . この腸内微生物との共生関係の破綻は , 炎症性腸疾患に代表される腸疾患のみならず , 肥満や糖尿病などの全身性の疾患発症の素因となることから , 腸内微生物との共生システムや腸管免疫細胞と上皮細胞による腸管恒常性制御システムを理解することは重要な命題である . 本プロジェクトでは , 宿主と腸内細菌間の共生因子であり腸管上皮細胞が発現する α1, 2- フコースによる腸内細菌との共生機構を明らかにし ,腸管恒常性維持システムの解明とその破綻によって引き起こされる様々な疾患 , 特に感染症や代謝疾患の治療法の開発を目的としている .

Gastrointestinal tract is a unique organ which is constitutively exposed by various antigens including
dietary materials and commensal bacteria and fungi. In order to exclude pathogens and create symbiotic
environment to non-pahogenic microorganisms, intestinal epithelial cells（ECs ）and immune cells
contribute to establish homeostasis of intestinal microenvironment. Disruption of symbiotic relationshipbetween host and commensals predispose to the development of inflammatory bowel diseases and systemic
disorders such as obesity and diabetes. Therefore, it is important to understand the mechanism of symbiotic
and homeostatic condition regulated by intestinal ECs and immune cells. In this project, we aim to uncover
the symbiotic system with commensal micro- and mycobiota mediated by epithelial α1, 2-fucose. We further
investigate the role of commensal microbes in the establishment of intestinal homeostasis and develop novel
therapeutic approaches for the treatment of diseases such as infection and metabolic syndrome caused by the
disruption of intestinal homeostasis.

准

教

授

大

学

院

生

大

学

院

生

大

学

院

生

大

学

院

生

技 術 補 佐 員

後藤
畢
川島
白
寺山
藤本

義幸
蓓蓓
秀介
旭
千晶
恭子

Associate Professor
Graduate Student
Graduate Student
Graduate Student
Graduate Student

Research Promotion Technician

1. Innate and acquired immune system regulates intestinal

epithelial α1, 2-fucosylation

Yoshiyuki Goto

1 , 2, 3123

Mycology Research Center, Chiba University

Division of Mucosal symbiosis

International Research and Development Center for
Mucosal Vaccine, Institute for Medical Science, The, and Hiroshi Kiyono

3, 4Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andPathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical

千葉大学

Yoshiyuki Goto
Bei Bei Bi
Shusuke Kawashima
Akira Haku
Chiaki Terayama
Kyoko Fujimoto

4

University of Tokyo

Division of Mucosal Immunolog y, Department ofMicrobiology and Immunology, The Institute of Medical

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

7

Science, The University of Tokyo

modulate gut homeostasis and dysbiosis triggers various kinds

α1, 2-fucosyl linkages located to terminal carbohydratediseases, it is unclear how these commensal fungi colonize

moiety expressed on intestinal epithelial cells is catalyzed byfucosyltransferase 2（Fut2）. Epithelial α1, 2-fucose is one ofsymbiotic factors which mediate host-microbiota interaction.

For example, epithelial α1, 2-fucose is utilized as a dietarycarbohydrate by various symbiotic bacteria such as
Bacteroides. Therefore, disruption of Fut2 leads to dysbiosis

both in mice and human and predisposed to the developmentof host diseases including infection and inflammatory bowel
and aﬀect host physiology. In addition, C. albicans are also
known to exert pathogenic eﬀects in the immunocompromised

host and expand to the systemic compartments, which iscalled invasive candidiasis, one of the serious infectious

diseases in the world. Importantly, colonization of C. albicans
in the gut trigger invasive candidiasis. Therefore, it isimportant to identify how C. albicans colonize in the gut. In

of inflammatory diseases such as Crohn’s disease. Despite ofthis study, we aim to uncover the mechanism by whichmolecular and cellular mechanisms of the induction ofdevelopment of host diseases. We examine the role ofthe importance for intestinal and systemic homeostasis, theepithelial Fut2 and subsequent α1, 2-fucosylation remain
unknown. We found that group 3 innate lymphoid cells（ILC 3）are critical inducers of intestinal epithelial Fut 2

expression and fucosylation that is mediated by the productionof interleukin 22 and lymphotoxin from ILC3 in a commensal

bacteria-dependent and -independent manner, respectively.

In addition, IL- 10 -producing CD 4 T cells negatively＋

regulate intestinal epithelial α1, 2-fucosylation. These data
unveil a novel function of innate and acquired immune cells increating the appropriate symbiotic environment throughregulating the epithelial α1, 2-fucosylation.

2. Commensal bacteria and host immune system regulate

fungi colonization in the gut

Haku Akira1 , Bei bei Bi1 , Chiaki Terayama1, Yoshiyuki

Goto
1

1, 2

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andPathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical

2

Mycology Research Center, Chiba University

Division of Mucosal symbiosis, International Research andDevelopment Center for Mucosal Vaccine, Institute for
Medical Science, The University of Tokyo.

Tremendous numbers of microorganisms colonize in thecommensal fungi colonize in the gut and affect thecommensal bacteria and gut immune system in the regulationof fungi colonization and develop novel therapeutic
approaches for the treatment of host diseases.
Publications

１）Ichikawa, T., Hirahara, K., Kokubo, K., Kiuchi, M.,

Aoki, A., Morimoto, Y., Kumagai, J., Onodera, A.,
Mato, N., Tumes, D, Goto, Y., Hagiwara, K.,

Inagaki, Y., Sparwasser, T., Tobe, K., Nakayama, T.

（2019）. CD 103 hi Treg cells constrain lung fibrosis

induced by CD103low tissue-resident pathogenic CD4 T
cells. Nat Immunol. 20, 1469-1480.

２）Fujimoto, K., Kawaguchi, Y., Shimohigoshi, M,

Gotoh, Y., Nakano, Y., Usui, Y., Hayashi, T.,
Kimura, Y., Uematsu, M., Yamamoto, T., Akeda, Y.,

Rhee, JH., Yuki, Y., Ishii, KJ., Crowe, SE., Ernst,

PB., Kiyono, H., Uematsu, S. （2019）. Antigen-specific Mucosal Immunity Regulates Development ofIntestinal Bacteria-mediated Diseases. Gastroenterology.
157, 1530-1543. e4.

３）Goto, Y.（2019）. Epithelial Cells as a Transmitter ofSignals From Commensal Bacteria and Host Immune
Cells. Front Immunol. 10, 2057.

４）Saku, A., Hirose, K., Ito, T., Iwata, A., Sato, T.,

Kaji, H., Tamachi, T., Suto, A, Goto, Y., Domino,SE., Narimatsu, H., Kiyono, H., Nakajima, H.

gut of their host. Several specific fungi including Saccharomyces（2019）. Fucosyltransferase 2 induces lung epithelial

the human gut. Although commensal bacteria are known to

airway inflammation. J Allergy Clin Immunol. 144,

cerevisiae and Candida albicans have been reported to reside in

8

千葉大学

fucosylation and exacerbates house dust mite-induced

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

698-709. e9.

５）Matsuo, K., Haku, A., Bi, B., Takahashi, H.,

Kamada, N., Yaguchi, T., Saijo, S., Yoneyama, M.,

千葉大学

Goto, Y. （2019）. Fecal microbiota transplantation

prevents Candida albicans from colonizing thegastrointestinal tract. Microbiol Immunol. 63, 155-163.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻20199

知花ＰＩ（カンジダ・グラブラータフェノーム）プロジェクト
Candida glabrata Phenome Project
研究概要（Summary）

病原性酵母カンジダ・グラブラータの全遺伝子改変株を利用し , 抗真菌薬の開発ならびに病原性に関する遺伝子の特定と機能解析を進めている .
Using the systematically constructed full genome mutant library in pathogenic yeast Candida glabrata, weare performing development of anti-fungal drugs, gene identification and functional analyses involved inpathogenicity.

准
技

教
術

授
職

員

特 別 研 究 員
グランドフェロー
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

知花 博治
高橋
梓
佐藤美智代
山口 正視
笹本
要
大岩 真理
中野 恵子
津田 一恵

Associate Professor

Research Technician

JSPS Research Fellow
Grand Fellow

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

Hiroji Chibana
Azusa Takahashi
Michiyo Sato
Masashi Yamaguchi
Kaname Sasamoto
Mari Ohiwa
Keiko Nakano
Kazue Tsuda

Role of major facilitator superfamily transporter Qdr2p in

biofilm formation limits drug penetration and is associatedWidiasih Widiyanto T1, Chen X1, Iwatani S1, Chibana H2,

type strain. Cells were analysed for metabolism activity andbiofilm formation by Candida glabrata

Kajiwara S1.

1

2

with persistent infection. The fungal cells in biofilms werecompared between a C. glabrata ∆ qdr2 mutant and its wild-

drug susceptibility（using tetrazolium assay ）, adhesion
activity, growth assay and intracellular pH（using flow

School of Life Sience and Technology, Tokyo Institute ofcytometry）. Compared to the wild type, the C. glabrata

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

susceptibility when assessed as a biofilm. The mutant also

Technology, Yokohama, Japan.
Chiba, Chiba, Japan.

Candida glabrata represents the second-most frequent causeof candidiasis infections of the mucosa, bloodstream andgenito-urinary tract in immunocompromised individuals. The
incidence of C. glabrata infection has increased significantly inthe last two decades, mainly due to this species’ abilities toresist various antifungal drugs and to form biofilms. We

focused on the relationship between biofilm formation and the
product of Q DR 2 , a C. glabrata member of the major

facilitator superfamily（MFS）gene family, given that fungal

10

千葉大学

∆qdr2 showed lower adhesion activity and higher fluconazole

showed decreased metabolic activity during biofilm formation.

Furthermore, the mutant grew more slowly under neutral-basic pH conditions. The qdr2 deletion in C. glabrata resulted

in an impaired ability to maintain pH homeostasis, which led
in turn to a reduction of cell growth and of adherence to an

artificial matrix. These results suggested that the Q dr 2 pfunction is needed for proper biofilm formation and biofilm

maintenance in C. glabrata as well as biofilm drug resistancetowards fluconazole. Qdr2p may play an important role in C

glabrata ’ s ability to form biofilms on implanted medical

devices in human bodies.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

Publications

mmy/myz105.

１）Onami, JI., Kobayashi, N., Watanabe, M., Yamada,

４）Widiasih Widiyanto, T., Chen, X., Iwatani, S.,

H., Kamata, Y. （2019）. An updated data portal for

facilitator superfamily transporter Q dr 2 p in biofilm

Bioinformation. 11; 15（11）, 820-823.

1163.

O., Mizutani, O., Yokoyama, K., Haruo, T., Chibana,
fungal allergens with curated information.

Chibana, H., Kajiwara, S. （2019）. Role of major

formation by Candida glabrata. Mycoses. 62（12）, 1154-

２）Shiratori, R., Furuichi, K., Yamaguchi, M., Miyazaki,５）I k e z a k i , S., C h o, T., N a g a o, J I ., Ta s a k i , S.,

Glycolytic suppression dramatically changes the

Chibana, H., Ikebe, T., Tanaka, Y. （2019）. Mild

N., Aoki, H., Chibana, H., Ito, K., Aoki, S.（2019）.
intracellular metabolic profile of multiple cancer cell lines
in a mitochondrial metabolism-dependent manner. Sci, 18699.
Rep. 10; 9（1）３）Huang, Y., Fujii, K., Chen, X., Iwatani, S., Chibana,

Yamaguchi, M., Arita-Morioka, KI., Yasumatsu, K.,

Heat Stress Affects on the Cell Wall Structure in
Candida albicans Biofilm. Med Mycol J. 60（2）, 29-37.

６）Horinouchi, Y., Yamaguchi, M., Chibana, H.,

Togashi, T.（2019）. Nuclear behavior and roles indicate

H., Kojima, S., Kajiwara, S.（2019）. Fungal NOX isthat Codiolum phase is a sporophyte in Monostroma

hepatocytes. Med Mycol. pii: myz105. doi: 10. 1093/

534-542.

an essential factor for induction of TG 2 in human

千葉大学

angicava（Ulotrichales, Ulvophyceae）. J Phycol. 55,

真菌医学研究センター報告

第 23 巻

2019

11

亀井ＰＩ

臨床感染症プロジェクト

Project of Clinical Investigation
研究概要（Summary）

我が国における「真菌症リファレンスセンター」（輸入真菌症を含む）として , 一般施設では実施困難な菌種同定 , 遺伝子検査など特殊検査を毎年400-500件あまり受け入れており , 並行して全国から寄せられる真菌症の診断・治療のコンサルテーションにも対応している . 本年はさらに日本感染症学会
及び日本臨床微生物学会から先進的感染症検査が実施可能な施設として「先進的感染症検査施設」に認定された . また附属病院に設置した真菌症専門外来も , 全国から患者が来院するなど , 活発な臨床活動を行っている . 研究面では国内のさまざまな研究機関 , 医療施設と協力した臨床・基礎研究を行って
おり , アスペルギルス症に代表される難治性真菌症の感染機構や診断・治療法の開発研究を進めているが , その中でもアスペルギルス耐性株の疫学と耐性機構の研究などにも力を入れ , 多くの画期的な論文を発表するなど高い成果を挙げている . また , 2016年から開始したブラジル・カンピーナス大学感染症内科との SATREPS（地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム）に代表されるように , 国際連
携による共同研究も盛んに行っている .

We have been doing basic and clinical research primarily on fungal infections along with seeing patients in
the Specialty Clinic for Fungal Infections at the University Hospital. Working as the Reference Center forfungal infections, we were designate as an Advanced Progressive Laboratory by JSID and JSCM, taking
consulting services on fungal diseases from all over the country（ca. 400-500 cases/year）. With regard toresearch activities, we are investigating the mechanisms of infection of intractable fungal diseases and thedevelopment of their diagnostic and therapeutic methods in collaboration with various universities/
pharmaceutical companies. The epidemiology and mechanisms of antifungal resistance also hold a prominent
part of our research, and a collaborative study with Sao Paulo State University of Campinas, Brazil（SATREPS）, which has started in 2016, has made this topic as its main target.
教

授

准

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

特

任

助

教

研

究

員

外国人研究者
グランドフェロー
再 雇 用 職 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

12

亀井 克彦
渡辺
哲
村長 保憲
新居 鉄平
ハジム O. A カリファ
東江 昭夫
賀
丹
田口 英昭
鎗田 響子
八尋 真希
関
里亜
土屋由紀子
井上 京子

Professor

Associate Professor

Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Research Assistant Professor
Researcher

Foreign Researcher
Grand Fellow

Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

千葉大学

真菌医学研究センター報告

Katsuhiko Kamei
Akira Watanabe
Yasunori Muraosa
Teppei Arai
Hazim O. Abdelgalil Kahlifa（2019.7 〜）
Akio Toh-e
Dan He（〜 2019.10）
Hideaki Taguchi
Kyoko Yarita
Maki Yahiro（〜 2019.11）
Rio Seki
Yukiko Tsuchiya
Kyoko Inoue

第 23 巻2019

1. Characterisation of novel-cell-wall LysM-domain

proteins LdpA and LdpB from the human pathogenic
fungus Aspergillus fumigatus.

Yasunori Muraosa, Takahito Toyotome, Maki Yahiro and
Katsuhiko Kamei

Aspergillus fumigatus, a filamentous fungus that is

ubiquitous in the environment, causes several humanpulmonary disorders, including chronic and acute invasive
infections and allergic diseases. Lysin motif（LysM）is a

small protein domain that binds chitin, a major component ofhypothesized that S. commune can exacerbate asthma. To test
this hypothesis, we evaluated the direct immunomodulatory

activities of S. commune in allergic airway inflammationinduced by non-fungal sensitization. Ovalbumin（OVA ）-induced asthma model mice were generated using wild-type（WT）and Il-17a-/-Il-17f-/- mice that were intratracheallyexposed to S. commune, then immune responses in the lungs
were assessed after 24 h. Intratracheal administration of S.

commune in OVA-induced asthma model mice enhanced

neutrophilic airway inflammation, increased the mRNA
expression of CXCL1 and CXCL2 in the lungs, and provoked

IL-17A, and IL-17F production in BAL fluid. In addition,

fungal cell wall polysaccharides. Several secreted LysM-

neutrophilic airway inflammation was significantly inhibited

have been identified. They act as virulence factors in plantmice. We demonstrated that S. commune induces neutrophilic

domain proteins without catalytic function（LysM eﬀectors）
pathogenic fungi by preventing the immune response inducedby chitin; however, LysM proteins in mammalian pathogenic

in Il-17a-/-Il-17f-/- mice compared with those found in WT
airway inflammation in OVA-induced asthma model mice,and IL-17A and IL-17F had central roles in this activity. As

fungi remain largely unexplored. We describe two novel

S. commune inhabits the general environment, including

Functional analyses of single and double knockouts revealed

is a causative agent of asthma exacerbation. This study has

LysM-domain proteins, LdpA and LdpB, in A. fumigatus.

no significant effects on cell wall chitin content, cell wall

integrity, fungal morphology and fungal growth. Fluorescentsignals from LdpA-green fluorescent protein（GFP ）and

LdpB-GFP were observed in cell wall and extracellularmatrix. In a mouse model of invasive pulmonary aspergillosis,

survival did not differ between ∆ ldpA/B and wild-type

infection; however, further studies are required to reveal theirfunctions in fungal-host interactions.

2. Schizophyllum commune induces IL- 17 -mediatedneutrophilic airway inflammation in OVA-induced
asthma model mice.

Jun Hanashiro, Yasunori Muraosa, Takahito Toyotome,
Koichi Hirose, Akira Watanabe, Katsuhiko Kamei

Schizophyllum commune is a ubiquitous basidiomycetous

fungus typically found across the world, which has been
detected in indoor and outdoor air. Some studies indicatedthat sensitization to S. commune is correlated with asthma

severity in patients. Patients with chronic severe or acute fatal
asthma have neutrophil-dominant airway inflammation. We

千葉大学

indoor and outdoor air, our results suggested that S. commune
provided clues regarding the mechanisms behind fungi andasthma exacerbation.

3. A simple method to detect point mutations inAspergillus fumigatus cyp51A gene using a Surveyor

Nuclease assay.

Teppei Arai, Hidetaka Majima, Akira Watanabe andKatsuhiko Kamei

One of the main mechanisms of azole-resistance ofAspergillus fumigatus is thought to be a reduction in the drugaﬃnity to the drug target molecule Cyp51A due to its aminoacid mutation（s ）. It is known that the azole-resistancepattern is closely related to the mutation site（s ）of themolecule. In this study, we tried to develop a simple andrapid detection method for cyp51A mutation（s）using theendonuclease Surveyor Nuclease. Surveyor Nuclease assay wasverified using several azole-resistant strains of A. fumigatusthat possesses point mutations in Cyp51A. For validation ofSurveyor Nuclease assay, blind tests were conducted using 48
strains of A. fumigatus（17 azole-resistant and 31 azole-

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201913

susceptible strains）. Surveyor Nuclease assay could rapidly

sensitivity of two new species of Diaporthe isolated. J

tested strains harboring different cyp 51 A single point

４）Yagi, K., Ushikubo, M., Maeshima, A., Konishi, M.,

Surveyor Nuclease assay is a simple method that can detect

Oyamada, Y., Oshima, H.（2019）. Invasive pulmonary

detect cyp51A mutations with one primer set. Also, all themutations could be clearly distinguished from wild type.
cyp51A mutations rapidly.

4. The genetic basis of C. glabrata resistance to azole andechinocandins antifungal agents.

Hazim O. Abdelgalil Kahlifa, Teppei Arai, Yasunori
Muraosa, Akira Watanabe and Katsuhiko Kamei

Infect Chemother. 25（2）, 96-103.

Fujimoto, K., Tsukamoto, M., Araki, K., Kamei, K.,

aspergillosis due to Aspergillus lentulus in an adult patient:
A case report and literature review. J Infect Chemother.
25（7）, 547-551.

５）Muraosa, Y., Toyotome, T., Yahiro, M., Kamei, K.

（2019）. Characterisation of novel-cell-wall LysM-

domain proteins LdpA and LdpB from the humanpathogenic fungus Aspergillus fumigatus. Sci Rep. 9（1）,3345.

The genetic basis of azole and echinocandins resistance in６）Kobayashi, K., Asakura, T., Kawada, I., Hasegawa,with the genetic relationship between the isolates by

H., Fujishima, S., Iwata, S., Umeyama, T., Katano,clinical C. glabrata isolates in Japan was investigated along

multilocus sequence typing（MLST ）. The isolates werechecked phenotypically for resistance to different classes of

H., Chubachi, S., Ohara, K., Kuramoto, J., Sugiura,
H ., U w a m i n o, Y., M i y a z a k i , Y., K a m e i , K .,Hasegawa, N., Betsuyaku, T. （2019）. Disseminatedantifungal agents, and genotypically to detect the mutations

histoplasmosis from a calcified lung nodule after long-（HS2）, and hot spot 3（HS3）, of FKS1, and HS1 and HS2

A case report. Medicine（Baltimore）. 98（17）, e15264.

in PDR 1 , ERG 11 , and hot spot 1（HS 1）, hot spot 2

term corticosteroid therapy in an elderly Japanese patient:of FKS2. Through the analysis the phenotypic/genotypic７）Fujita, Y., Ishiwada, N., Takei, H., Suwabe, SI.,

and MLSTT genotyping revealed 13 diﬀerent sequence types

Shimojo, N. （2019）. Usefulness of gastric aspirate

patterns of antifungal resistance was clearly demonstrated,（ST）, with three new STs. This result is expected to clarify

the molecular mechanisms underlying fungal resistanceleading to new strategies to prevent their epidemic spread.
Publications

１）Abe, N., Fujita, Y., Nagaoka, K., Ohkusu, M.,

Ya s u d a , S., K a m e i , K ., Ta t s u m i , K . （2 0 1 9 ）.
Disseminated cryptococcosis with bronchiolitis andYarita, K., Ohkusu, M., Muraosa, Y., Kamei, K.,

culture for diagnosing congenital immunodeficiency in
an infant with fungal pneumonia caused by Rasamsonia
piperina. Tohoku J Exp Med. 247（4）, 265-269.

８）Takeda, K., Suzuki, J., Watanabe, A., Matsuki, M.,

Higa, K., Inoue, E., Akashi, S., Shimada, M.,

Kawashima, M., Ohshima, N., Fukami, T., Masuda,
K., Yamane, A., Tamura, A., Nagai, H., Matsui, H.,
Tohma, S., Kamei, K.（2019）. Species identification,

cellulitis. Am J Respir Crit Care Med. 199（2）, 235-

antifungal susceptibility, and clinical feature association

２）Toyotome, T., Hamada, S., Yamaguchi, S., Takahashi,

respiratory tract. Med Mycol. 2019 Jun 26. pii: myz072.

236.

H., Kondoh, D., Takino, M., Kanesaki, Y., Kamei,

K.（2019）. Comparative genome analysis of Aspergillus

flavus clinically isolated in Japan. DNA Res. 26（1）, 95103.

３）Ozawa, K., Mochizuki, K., Takagi, D., Ishida, K.,

Sunada, A., Ohkusu, K., Kamei, K., Hashimoto, A.,

Tanaka, K. （2019）. Identification and antifungal

14

千葉大学

of Aspergillus section Nigri isolates from the lower
doi: 10. 1093/mmy/myz072. [Epub ahead of print]９）Hashimoto, S., Tanaka, E., Ueyama, M., Terada, S.,

Inao, T., Kaji, Y., Yasuda, T., Hajiro, T., Nakagawa,T., Noma, S., Honjo, G., Kobashi, Y., Abe, N.,

Kamei, K., Taguchi, Y. （2019）. A case report ofpulmonary Botrytis sp. infection in an apparently healthy
individual. BMC Infect Dis. 19（1）, 684.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201910）Ito, A., Ishiguro, T., Takaku, Y., Kagiyama, N.,

antimicrobial evaluation of all synthetic stereoisomers of

K a m e i , K ., Ta k a y a n a g i , N . （2 0 1 9 ）. A l l e r g i c（16Z, 20E）-eushearilide and（16E, 20E）-eushearilide.

commune: A special interest in positive culture of other13）Ishizaki, S., Watanabe, S., Sawada, M., Ninomiya, J.,11）Suda, K., Yamashita, T., Kawase, Y., Yarita, K.,（2019）. A case of tinea pedis in a child caused by

Sato, S.（2019）. Cutaneous phaeohyphomycosis caused

phenotypes on primary culture. Med Mycol J. 60（4）,bronchopulmonary mycosis caused by Schizophyllum
basidiomycetes fungi. Intern Med. 58（24）, 3569-3572.

Yoshizaki, A., Akamata, K., Asano, Y., Kamei, K.,

by Alternaria alternata in an immunosuppressed patient.
J Dermatol. 46（12）, e448-e449.

12）Tonoi, T., Inohana, T., Sato, T., Noda, Y., Ikeda, M.,

Akutsu, M., Murata, T., Maekawa, Y., Tanaka, A.,
Seki, R., Ohkusu, M., Kamei, K., Ishiwada, N.,

Shiina, I. （2019）. Total synthesis and antimicrobial

evaluation of 23 -demethyleushearilide and extensive

千葉大学

Molecules. 24（19）: pii: E3437.

Otani, T., Tanaka, M., Harada, T., Kamei, K.

Trichophyton interdigitale with two different colony
91-95.

14）Hanashiro, J., Muraosa, Y., Toyotome, T., Hirose, K.,

Watanabe, A., Kamei, K. （2019）. Schizophyllum

commune induces IL-17-mediated neutrophilic airway

inflammation in OVA-induced asthma model mice. Sci
Rep. 9（1）, 19321.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201915

山本（感染宿主応答ネットワーク）プロジェクト
Project for Host Response Network of Bacterial Infection
研究概要（Summary）

本プロジェクトでは , 細菌感染と発症のメカニズムを分子レベルで解明し , 研究成果を感染症の予防と治療へ役立てることを目指している . 感染現象は , ２つの異なる生物（病原体と宿主）の間に形成される新たな生命現象である . 細菌感染のメカニズムを分子レベルで解き明かすことにより , 細菌と生体の間に展開される複雑系の生命現象を解き明かすことを合わせて目指している .
「主要な研究テーマ」（Ⅰ）サルモネラ属細菌をモデルとした , 食細胞内寄生性を有する病原細菌の全身感染症発症機序並びに持続感染機構の解明（Ⅱ）AAA＋プロテアーゼ ClpXP の研究成果に基づいた慢性感染症治療薬となる anti-persister の探索研
究Research Focus（Ⅰ）Dissecting the molecular mechanisms of systemic infection and persistent infection by facultative
intracellular bacteria through the study of Salmonella-host interplay: We focus on the Salmonella

effectors, which we have identified through a meta-analytic approach to the accurate prediction ofeffectors, to elucidate the dynamic interplay with their host targets and bacterial strategies forwithstanding the host innate- and acquired-immune systems.
（Ⅱ）Identification and development of anti-persister compounds as a new class of antibiotics to treat chronic
infection: Our previous studies on the AAA＋ protease, ClpXP allowed us to hypothesize that thedysregulation of proteolysis by activation of ClpP core in the absence of the regulatory ClpX ATPase maylead to corruption of bacterial physiology and eventually death of dormant cells. The compounds leading
such uncontrolled proteolysis could be potential as a new class of antibiotics to treat chronic infection.
特

任

教

授

技 術 補 佐 員

山本 友子
野村祐理子

Professor

Research Promotion Technician

1. Humoral Immunity vs. Salmonella

Tomoko Yamamoto
Yuriko Nomura

In primary infection with Salmonella, it has been reported

─ without consideration of Salmonella’ s functions ─ that

Akiko Takaya , Tomoko Yamamoto and Koji Tokoyoda

humoral immunity plays no role in the clearance of bacteria.

Laboratory of Microbiology and Immunology, Graduate

humoral immunity, including B cell lymphopoiesis, B cell

1

1

2

3

School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University

2

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,

3

Deutsches Rheuma-Forschungszentrum（DRFZ）Berlin,

Medical Mycology Research Center, Chiba University

Germany

16

In fact, Salmonella targets and suppresses several aspects ofactivation, and IgG production. In particular, the suppressionof IgG-secreting plasma cell maintenance allows thepersistence of Salmonella in tissues. Therefore, the criticalrole（s）of humoral immunity in the response to Salmonella

infection, especially at the late phase, should be re-investigated. The suppression of IgG plasma cell memory

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

strongly hinders vaccine development against non-typhoidal

stabilize SsaH and a middle substrate, SseB. We also foundhumoral immune memory against other bacteria and viruses,

substrates SsaG and SsaI and then promotes the translocation

Salmonella（NTS ）because Salmonella can also reduce

obtained from previous vaccination or infection. We propose
a new vaccine against Salmonella that would not impairthat SsaE regulates cellular SsaH levels to translocate the earlyof SseB by stabilizing it. In summary, our results indicate thatthe class Ⅲ chaperone SsaH facilitates SsaI secretion, and ahumoral immunity, and which could also be used as aheterodimer of SsaH and the type V chaperone SsaE thendeplete pathogenic long-lived plasma cells, by utilizing thechaperone system that regulates both early and middle

treatment for antibody-dependent autoimmune diseases to
Salmonella ’ s own suppression mechanism of humoral
immunity.

2. Secretion switching from early to middle substrates inswitches secretion to SsaG. This is the first report of a
substrates during substrate switching for T3SS assembly.

3. Salmonella infection prevents an efficient humoral

immune response by interfering with IgG＋ plasma cellthe type Ⅲ secretion system encoded by Salmonella
pathogenicity island 2

Tomoko Yamamoto1, Yuriko Nomura1 and Akiko Takaya2
1

2

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,

persistence in the bone marrow

Akiko Takaya1 Tomoko Yamamoto2 and Koji Tokoyoda3
1

Laboratory of Microbiology and Immunology, Graduate
School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University

Medical Mycology Research Center, Chiba University

2

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,

School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University3

Deutsches Rheuma-Forschungszentrum（DRFZ）Berlin,

Laboratory of Microbiology and Immunology, Graduate

The bacterial type Ⅲ secretion system（T3SS）delivers

virulence proteins, called effectors, into eukaryotic cells.

Medical Mycology Research Center, Chiba University

Germany

Serum IgG, which is mainly generated from IgG-secreting

T3SS comprises a transmembrane secretion apparatus and aplasma cells in the bone marrow（BM）, protects our body

substrates to this secretion apparatus. However, the regulation

SiiE of Salmonella is both required and suﬃcient to prevent ancomplex network of specialized chaperones that target proteinof secretion switching from early（needle and inner rod）tomiddle（tip/filament and translocators ）substrates isincompletely understood. Here, we investigated chaperone-

mediated secretion switching from early to middle substrates

in the T3SS encoded by Salmonella pathogenicity island 2（SPI 2）, essential for systemic infection. Our findings

revealed that the protein encoded by ssaH regulates thesecretion of an inner rod and early substrate, SsaI. Structuralagainst various pathogens. We show here that the protein
efficient humoral immune response against the pathogen by

selectively reducing the number of IgG-secreting plasma cells
in the BM. Attenuated SiiE-deficient Salmonella induces highand lasting titers of specific and protective Salmonella-specific

IgG, and qualifies as a novel efficient vaccine against
Salmonella. A SiiE-derived peptide with homology to laminin

β1 is suﬃcient to ablate IgG-secreting plasma cells from theBM, identifying laminin β1 as a novel component of niches

modeling revealed that SsaH is structurally similar to class Ⅲ

for IgG-secreting plasma cells in the BM, and furthermore,

pathogenic bacteria. The SPI2 protein SsaE was identified as

IgG-secreting plasma cells in autoimmune diseases andchaperones, known to associate with proteins in various

a class V chaperone homolog and partner of SsaH. A
pulldown analysis disclosed that SsaH and SsaE form aqualifies it as a unique therapeutic option to selectively ablate
multiple myeloma.

heterodimer, which interacted with another early substrate,

the needle protein SsaG. Moreover, SsaE also helped

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201917

4. Identification and development of anti-persistercompounds as a new class of antibiotics

Tomoko Yamamoto , Akiko Takaya , Yuriko Nomura , and121

Walid Houry3

1

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,

2

Laboratory of Microbiology and Immunology, Graduate

3

Medical Mycology Research Center, Chiba University
School of Pharmaceutical Sciences, Chiba University

those compounds, we established a system for evaluating
ClpP proteolysis in vitro. Then, we have been conducting ahigh-through-put screening by exploiting various chemical
libraries. Very recently, we have found that one of suchc o m p o u n d s , AC P b 1 （AC P : A c t i v a t o r s o f S e l f Compartmentalizing Protease）originally showing no antimicrobial activity can kill a variety of bacteria under certain
condition.

Publications

Department of Biochemistry, University of Toronto, Canada

１）Männe, C., Takaya, A., Yamasaki, Y., Mursell, M.,

Chronic infections are difficult to treat with antibiotics,

Cornelis, R., Hahne, S., Cheng, Q., Kawamoto, T.,

Hojyo, S., Wu, TY., Sarkander, J., McGrath, MA.,

which kill bacteria by corrupting their targets but these are

H i e p e , F., K a u f m a n n , S H E ., Ya m a m o t o, T.,reasoned that a compound capable of corrupting a target inprevents an efficient humoral immune memory byinactive in dormant persisters, leading to tolerance. We
dormant, energy-deprived cells could kill persisters. Our

previous studies on the energy-dependent ClpXP-proteaseRadbruch, A., Tokoyoda, K.（2019）. Salmonella SiiE

interfering with IgG＋ plasma cell persistence in the bonemarrow. Proc Natl Acad Sci USA. 116（15）, 7425-7430.

allowed us to hypothesize that the dysregulation of proteolysis２）Takaya, A., Takeda, H., Tashiro, S., Kawashima, H.,

ClpX ATPase may lead to corruption of bacterial physiology

switching from early to middle substrates in the type Ⅲ

by activation of ClpP core in the absence of the regulatory
and eventually death of dormant cells. The compounds

leading such uncontrolled proteolysis could be potential as a
new class of antibiotics to treat chronic infection. To identify

18

千葉大学

Yamamoto, T.（2019）. Chaperone-mediated secretionsecretion system encoded by Salmonella pathogenicity
island 2. J Biol Chem. 294（10）, 3783-3793.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

石和田（感染症制御）プロジェクト
Project for Infection Control and Prevention
研究概要（Summary）

インフルエンザ菌 , 肺炎球菌 , B 群レンサ球菌（GBS）の病原性解析ならびにインフルエンザ菌感染症と肺炎球菌感染症 , GBS 感染症の疫学研究を継続的に行っている . 結合型ワクチン導入後 , 新しく問題となっているワクチン非含有株の病原因子の解析を行い , 新たな予防法の開発を目指す . また , 難治性呼吸器感染症の診断 , 治療法開発のための臨床研究を実施している . 同時に , 附属病院における診療活動及び学内外でのコンサルテーションも行っている . さらに , ワクチンのリスク教育に関する研究にも取り組んでいる .
Our research focuses on epidemiology and pathogenesis of Haemophilus influenzae , Streptococcus
pneumoniae and Streptococcus agalactiae. We organize several clinical researches for development of diagnostic

and therapeutic methods of intractable respiratory infectious diseases collaborating with clinicians and carefor the patients in Chiba University Hospital. We also recently conduct the research on risk education for
vaccination.
准

教

授

特

任

助

教

技

術

職

員

非常勤技術職員

石和田稔彦
竹内 典子
大楠美佐子
大畑美穂子

Associate Professor
Assistant Professor

Research Technician

Adjunct Research Technician

1. Two pediatric cases of Pneumocystis jirovecii pneumonia

diagnosed by polymerase chain reaction of gastriclavage.

Takei H1, Ishiwada N2, Hishiki H1, Takeshita K1, Naito S1,Endo M , Shimojo N
1

1

2

1

Department of Pediatrics, Chiba University Graduate
School of Medicine

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center, Chiba University

Detecting Pneumocystis jirovecii by bronchoalveolar lavage

or lung biopsy is the gold standard for diagnosis of P. jirovecii

Naruhiko Ishiwada
Noriko Takeuchi
Misako Ohkusu
Mihoko Ohhata

treated. To date, there are no reported cases of using PCR ofgastric lavage to diagnose PJP. On the day of PJP onset, boththe infants required respiratory support and infiltrative
shadows were obser ved in both lung fields on chest
radiography. Furthermore, their（1→3）-β-D glucan levels
were elevated. P. jirovecii was detected by PCR of gastriclavage and trimethoprim-sulfamethoxazole was administeredfor 3 weeks, following which their condition improved. They
were long-term steroid users, but without any prophylaxis.

PCR of gastric lavage in cases of suspected PJP may help in
confirming the diagnosis in children who have mild tomoderate airway symptoms, or have difficulty with invasive
examination like bronchoscopy.

pneumonia（PJP）; however, these techniques are not always
applicable in children because of their high invasiveness. We
report two pediatric cases of PJP diagnosed by polymerase

chain reaction（PCR）of gastric lavage that were successfully

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201919

2. Usefulness of gastric aspirate culture for diagnosing

congenital immunodeficiency in an infant with fungal
pneumonia caused by Rasamsonia piperina.

Ohkusu M , Muraosa Y , Kamei K , Shimojo N .

1

2
3

3

3

3
4

Fujita Y1, 2, Ishiwada N3, Takei H1, Suwabe S2, Yarita K3,
3

2

1

5
6

Department of Pediatrics, Chiba University Graduate
School of Medicine.

Department of Pediatrics, Kimitsu Chuo Hospital.

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

Research Center, Chiba University

Wada Pediatric Clinic.

Kurosawa Children’s and Internal Medicine Clinic

Division of Laboratory Medicine and Clinical Genetics,
Chiba University Hospital

Medical Mycology Research Center, Chiba University

Division of Pulmonary, Allergy & Critical Care Medicine,

Department of Medicine, The University of Alabama at
Birmingham

The prevalence of nonencapsulated Streptococcus pneumoniae

Research Center, Chiba University.

（NESp）has increased with the introduction of pneumococcal

Chronic granulomatous disease（CGD ）is a type ofcharacteristics of NESp have not been suﬃciently clarified. In

primar y immunodeficiency disease, which increases
susceptibility to recurrent bacterial and fungal infections.

Sputum and bronchoalveolar lavage fluid are often obtainedusing bronchoscopy from adult patients for pathogenic

diagnosis, although this approach is much more invasive for
infants. We report the case of a 2-month-old boy with CGD,

conjugate vaccines in children; however, the bacteriologicalthis study, NESp strains isolated from the nasopharyngeal
carriage of children from four nursery schools in Japan wereanalyzed for molecular type, antibiotic susceptibility, andbiofilm productivity. A total of 152 putative S. pneumoniae
strains were identified by optochin-susceptibility analysis, ofwhich 21 were not serotypeable by slide agglutination,in which gastric aspirate culture was used to diagnose fungal

quellung reaction, or multiplex PCR. Among these 21

aspirate, and the patient was successfully treated withpneumoniae. The remaining 18 strains were positive for lytA,

pneumonia. Rasamsonia piperina was isolated from the gastricmicafungin based on the drug susceptibility test results for thefungal isolate. The acid tolerance test revealed that R. piperina

could grow at pH 2, indicating high acid resistance. Although
we can only report our experience with a single case, gastricstrains, three were lytA-negative and, therefore, not S.
ply, pspK, and bile solubility and were confirmed as NESp.

Therefore, the isolation rate of NESp in the S. pneumoniae
strains in this study was 12.0%（18/149）. Molecular-typing

analyses classified five strains as two existing sequence types

aspirate culture may be a useful tool for detecting fungal（STs; ST 7502 and ST 7786）, and 13 strains formed fourimmunodeficiency. Detecting these pathogens may help

with the same ST were often isolated from the same nursery

respirator y pathogens in children with primar y
improve outcomes, as early diagnosis and appropriate

treatment are extremely important for immunocompromised
patients with respiratory infections.

3. Molecular typing, antibiotic susceptibility, and biofilm

production in nonencapsulated Streptococcus pneumoniae
isolated from children in Japan

Takeuchi N , Ohkusu M , Wada N , Kurosawa S , Miyabe
1

1

2

3

novel STs. Horizontal spread was suspected, because strains
school. The NESp isolates were generally susceptible to mostantimicrobials, with the exception of macrolides; however, allisolates possessed more than one abnormal penicillin-binding
protein gene. Furthermore, NESp strains were more eﬀective

than encapsulated counterparts at forming biofilms, whichshowed obvious differences in morphology. These data
indicated that NESp strains should be continuously monitored
as emerging respiratory pathogens.

A4, Yamaguchi M5, Nahm MH6, Ishiwada N1
1

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

20

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

4. Clonal spread of serotype 12 F ST 4846 Streptococcus
pneumoniae

Ohkusu M , Takeuchi N , Ishiwada N , Ohkusu K
1

1

2

1

1

5. Identification of Haemophilus influenzae serotype estrains missing the fucK gene in clinical isolates fromJapan.

2

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center Chiba University

Department of Microbiology, Tokyo Medical University

Hoshino T1, Takeuchi N2, Ohkusu M2, Hachisu Y3, Hirose

S1, 4, Fukasawa C1, Kubota T5, Ishida M6, Watanabe H7,
Oishi K8, Ishiwada N2

1

Introduction. In 2016-2017, there was an increase in the2cases caused by Streptococcus pneumoniae serotype 12F in Chiba

3

number of paediatric invasive pneumococcal disease（IPD）

Division of Infectious Diseases, Chiba Children’s Hospital

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center, Chiba University

Chiba Prefectural Institute of Public HealthPrefecture, Japan. Serotype 12F is one of the major causative

4

conjugate vaccine 13（PCV13）, and outbreaks of IPD caused

5

Department of Hematology and Respiratory Medicine,countries.

6

Department of Infectious Diseases, Chikamori Hospital

serotypes of IPD following the introduction of pneumococcal

by serotype 12 F have recently been reported in several

Aim. Our goal here was to clarify the relationship among

7

countries, and for this we analysed clinical isolates of serotype

8

local outbreak strains and the outbreak strains in other
12F using several genetic identification methods.

Methodology. All reported IPD cases caused by serotype

12F were reviewed and bacterial strains were collected andanalysed. We also analysed S. pneumoniae serotype 12 F
strains isolated from other time periods, geographical areas,

cases of adult IPD and respiratory specimens as control
strains. Multi-locus sequence typing, PFGE and multi-locus
variable number tandem repeat analysis（MLVA ）were

conducted on all isolates.

Results. All 26 S. pneumoniae serotype 12 F isolates,

including control strains, belonged to a single sequence type

（ST4846）that was the specific ST in Japan. All tested strains

Department of Pediatrics, Tokyo Women ’ s Medical
University Yachiyo Medical Center

Kochi Medical School, Kochi University

Department of Infectious Control and Prevention, Kurume
University School of Medicine

Toyama Institute of Health

Abstract

Introduction. Certain nontypeable Haemophilus influenzae

cannot be assigned a sequence type（ST ）by Multilocus

Sequence Typing（MLST）due to the lack of the fucK gene,one of seven MLST loci in H. influenzae, which encodes afucose-operon enzyme.

Aims. To confirm whether the loss of fucK is also found in

the encapsulated strains, we analysed clinical isolates of H.
influenzae serotype e（Hie）.

Methodolog y. We conducted MLST, PFGE, andantimicrobial susceptibility tests of 45 Hie strains; the majority

demonstrated five MLVA patterns and two PFGE patterns.

（n=43）were derived from respiratory samples of pediatricof IPD in Chiba Prefecture was caused by clonally related

2016 . The two remaining strains were obtained from thecaused by serotype 12F is important for evaluating the impact（IHiDs）between 2015 and 2016 at general hospitals. For the

introduction era, and MLVA could be a useful tool for

performed.

Conclusion. We determined that the 2016-2017 outbreakisolates of serotype 12F. The continuous monitoring of IPD

of re-emerging pneumococcal serotypes following the PCV13
identification of outbreak strains.

patients at Chiba Children’ s Hospital between 2000 andblood of elderly patients with invasive H. influenzae diseases

fucK-negative strains, PCR analysis for fucose operon was also
Results. Four STs（ST 18 , 122 , 621 and 1758）were

assigned to 13 strains, and remaining 32（including one
associated with IHiD ）were fucK-negative, completely

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201921

missing the fucose operon. The allelic profiles of six other lociwere identical among 31 strains and to that of ST18, 122 andcomparison with AH 1pdm vaccine（2009）in Japan.

Yakugaku-Zasshi. 139, 469-74.

621, and these strains were genetically closely related. Forty

２）Takeuchi, N., , Ohkusu, M., Wada, N, Kurosawa, S.,

Conclusions. The loss of fucK was frequently observed inN.（2019）. Molecular typing, antibiotic susceptibility,of 45 isolates were ampicillin-sensitive.

clinical isolates of Hie from children. Moreover, fucKnegative Hie may be the cause of IHiD in adult patients. The
majority of Hie, including fucK-negative strains, were shown
to be clonally related and were ampicillin sensitive. This

represents the first report examining fucK losses in
encapsulated H. influenzae.

Miyabe, A, Yamaguchi, M., Nahm, MH., Ishiwada,

and biofilm production in nonencapsulated Streptococcus
pneumoniae isolated from children in Japan. J InfectChemother. 25, 750-7.

３）Komatsu, K., Kinai, E., Sakamoto, M., Taniguchi, T.,

Nakao, A., Sakata, T., Iizuka, A., Koyama, T., Ogata,T., Inui, A., Oka, S. （2019）. HIV-Associated
Neurocognitive Disorders in Japanese（J-HAND）Study

6. Total synthesis and antimicrobial evaluation ofGroup （The J-HAND S tudy Group ）. Var ious

evaluation of all synthetic stereoisomers of（16Z, 20E）

diﬀerent neurocognitive functions: detailed analysis of a23-demethyleushearilide and extensive antimicrobial-Eushearilide and（16E, 20E）-Eushearilide.

Tonoi T , Inohana T , Sato T , Noda Y , Ikeda M , Akutsu
1

1

1

1

1

M , Murata T , Maekawa Y , Tanaka A , Seki R , Ohkusu
1

1

1

1

2

M , Kamei K , Ishiwada N , Shiina I .
2

1

2

2

2

1

Department of Applied Chemistry, Faculty of Science,
Tokyo University of Science

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Research Center, Chiba University

associations of aging and long-term HIV infection withJapanese nationwide multicenter study. J Neurovirol. 25,
208-20.

４）Ohkusu, M., Takeuchi, N., Ishiwada, N., Ohkusu, K.

（2019）. Clonal spread of serotype 12 F ST 4846

Streptococcus pneumoniae. J Med Microbiol. 68, 1383-90.

５）Hoshino, T., Takeuchi, N., Ohkusu, M., Hachisu, Y.,

Hirose, S., Fukasawa, C., Kubota, T., Ishida, M.,

Watanabe, H., Oishi, K., Ishiwada, N. （2019）.
Identification of Haemophilus influenzae serotype e strains

missing the fucK gene in clinical isolates from Japan. J
Med Microbiol. 68, 1534-9.

A novel stereoisomer of eushearilide, 23-demethyleushearilide,６）Tonoi, T., Inohana, T., Sato, T., Noda, Y., Ikeda, M.,

this compound along with known eushearilide stereoisomers

Seki, R., Ohkusu, M., Kamei, K., Ishiwada, N.,

was synthesized, and the structure-activity relationships ofwere investigated in order to design novel lead compounds forthe treatment of fungal infections. It was discovered that all

Akutsu, M., Murata, T., Maekawa, Y., Tanaka, A.,
Shiina, I.（2019）. Total and antimicrobial evaluation of
23 -demethyleushearilide and extensive antimicrobialof these congeners, together with the natural product,

evaluation of all synthetic stereoisomers of（16Z, 20E）

only fungi but also against bacteria, including methicillin-

24（19）. pii: E3437.

exhibited a wide range of antimicrobial activity against notresistant Staphylococcus aureus（MRSA ）and vancomycin-

resistant enterococci（VRE）.

７）Takei, H., Ishiwada, N., Hishiki, H., Takeshita, K.,

Naito, S., Endo, M., Shimojo, N. （2019）. Twopediatric cases of Pneumocystis jirovecii pneumonia

Publications: original articles

１）Yamazaki, S., Fujiwara, M., Inoue, C., Watanabe, M.,diagnosed by polymerase chain reaction of gastric lavage.
J Infect Chemother. 25, 477-9.

Takayanagi, S., Taniguc hi, T., Watanabe, A.,８）Ogata, H., Nagasawa, K., Takeuchi, N., Hagiwara, S.,

the introduction of quadrivalent influenza vaccine in

Takatani, R., Takatani, T., Nakano, T., Hishiki, H.,

Ishiwada, N., Igari, H.（2019）. Adverse events after

22-Eushearilide and（16E, 20E）-Eushearilide. Molecules.

千葉大学

Sawada, D., Umimura, T., Konno, Y., Yamaide, F.,

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

Ishiwada, N., Shimojo, N. （2019）. Psoitis andpiperina. Tohoku J Exp Med. 247, 265-9.

multiple venous thromboses caused by Panton Valentine

10）Yamada, Y., Yamaguchi, H., Ito, Y., Takeuchi, N.,

aureus in a 12 -year-old girl: A case report. J Infectpneumococcal serotype 16F in a child. Pediatr Int. 61,

９）Fujita, Y., Ishiwada, N., Takei, H., Suwabe, S.,11）Abe, N., Fujieda, Y., Nagaoka, K., Ohkusu, M.,

Shimojo, N. （2019）. Usefulness of gastric aspirate

Disseminated Cryptococcosis with bronchiolitis andLeukocidin-positive methicillin-sensitive Staphylococcus
Chemother. 25, 630-4.

Yarita, K., Ohkusu, M., Muraosa, Y., Kamei, K.,

culture for diagnosing congenital immunodeficiency in
an infant with fungal pneumonia caused by Rasamsonia

千葉大学

Kasai, M. （2019）. Pyogenic sacroiliitis caused by
1267-1268.

Ya s u d a , S ., K a m e i , K ., A t s u m i , T. （2 0 1 9 ）.
cellulitis. Am J Respir Crit Care Med. 199, 235-236.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201923

伊庭ＰＩ（RNA 制御）プロジェクト
Project for RNA Regulation
研究概要（Summary）

遺伝子発現の制御ネットワークは , その細胞の発生 , 分化 , 増殖に関する特異性はもちろん , 真菌・細菌・ウイルス等の寄生体に対する宿主の応答性や competency をも規定している . 平成28年４月に開始された本プロジェクトではこのような制御ネットワークを形成する主要な因子として１）各遺伝子のプロモーター上で作用する転写制御因子 , ２）クロマチンの活性化状態を規定するクロマチン構造
変換因子 , ３）多数の遺伝子群の発現を post-transcriptional レベルで一括して負に制御する miRNA の３者に注目する . そして病因となる遺伝子制御ネットワークの乱れの原因を解明し , それを制御する方法論を開発する橋渡し研究を展開して感染症 , がんを初めとしたヒト疾患の制圧をめざす .

Gene regulatory networks determine not only cellular specificity of development, differentiation, andproliferation but also cellular response or competency to virus, bacterial, and mycete. Whereas gene
expression patterns are regulated by many factors, this project, which has started in April 2016, concentrateon the following three factors that are closely related; 1）transcriptional factors, which operate on the
promoter region of their target genes, 2）chromatin remodeling factors that modulate epigenetical states ofthese genes, 3）miRNA, which suppresses expression of many genes at the post-transcriptional level, todevelop translational research of new therapeutic strategies for human infectious diseases and cancer.

特

任

教

授

特 任 准 教 授
特

任

助

教

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

伊庭
原口
小林
桜井
相川

英夫
健
和善
典子
尚美

Professor

Research Associate Professor
Research Assistant Professor

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Development of drug delivery system（DDS）of Super-

S-TuD to establish RNA medicine for cancer therapy.

Takeshi Haraguchi, Kazuyoshi Kobayashi and Hideo Iba

Hideo Iba
Takeshi Haraguchi
Kazuyoshi Kobayashi
Noriko Sakurai
Naomi Aikawa

folds enhancement in its specific activity of the target miRNA
inhibition. For the efficient deliver y of systemicallyadministrated Super-S-TuD into tumor tissues is the major
challenge at present. We previously established basic

formulation for Lipid nanoparticle（LNP）preparation using

Division of RNA Therapy, Medical Mycology Research

COATSOME-X（developed by NOF）and Super-S-TuD

We previously developed the RNA decoy suppressing

shown to suppress the formed tumors efficiently when

Center, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

specific miRNA activity very eﬃciently, which was designated

TuD（Tough Decoy）and expressed from viral vectors. S-TuD（Synthetic TuD ）, which mimics the unique secondary

structure of TuD was also developed as RNA medicine. It has
been further improved as Super-S-TuD, which showed 3-7

24

千葉大学

141 / 200 c（hybrid type Super-S-TuD that suppresses theentire miR- 200 family ）encapsulated by such LNPs was

intravenously administrated into nude mice bearing tumors
formed by a human tumor cell line.

For innovative therapy for broad spectrum of tumors, we

now target miR- 21 , which is expressed in almost all theepithelial tumors at very high levels and has been shown to be

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

strong causative of cancer through the inhibition of manytumor proliferation, indicating that the d4-family proteins are

21 is one of the most abundant miRNA species in cancer

In this project, we address the isolation of low-molecularimportant tumor suppressor genes simultaneously. Since miR-promising targets cancer therapy.

cells, both high dosage of Super-S-TuD21（targeting miR-

weight inhibitors of NF- κ B. In collaboration withdosage of Super-S-TuD encapsulated by COATSOME-X wasscreening based on the binding of low molecular weight21）and efficient DDS would be required. However, hightoxic to nude mice. We therefore used newly developed

COATSOME-Y instead, which shows ver y effective

instracellular delivery and much lower toxicity in mice. By
optimizing other LNP components such as accessory lipids

and PEGlylated lipids as well as the formulation of LNP, we

can now fully suppress miR-21 activity in cancer cell lines byadding Super-S-TuD 21 encapsulated by COATSOME-Y

into the culture at the dosage of 300pM（Nucleic acids）.
Such LNP showed high retentivity in blood and good

SEEDSUPPLY INC., which can perform high-throughput

compounds to a certain protein using a compound library, we
have now screening binding compounds to d4-family proteins.

3. Development of armed Oncolytic Virus by introducing

shRNA expression unit

Takeshi Haraguchi1, Kazuyoshi Kobayashi1, Tomoki Todo2
and Hideo Iba1

pharmacokinetics with specific accumulation of LNP into1

bearing mice.

2

tumor tissues, when administrated into tail vain of tumor

2. Isolation of small-molecular weight compounds that

inhibit NF-κB activity

Division of RNA Therapy, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba 260-8673, Japan

Division of Innovative Cancer Therapy, and Department ofSurgical Neuro-Oncology, The Institute of Medical Science,
The University of Tokyo, Tokyo 108-8639, Japan

Glioblastoma is a highly malignant tumor and new

1, 2, 4

Kazuyoshi Kobayashi, Takeshi Haraguchi, and Hideo Iba

therapeutic approach has been needed. We have previously

Division of RNA Therapy, Medical Mycology Research

factor, the SWI/SNF complex associates with a novel

Center, Chiba University, Chiba 260-8673, JapanThe transcription factor NF- κ B is involved in many

inflammatory responses and replication of microorganisms.

Since it is constitutively activated in many solid tumors,

shown that（1）in glioblastoma cells, a chromatin remodelingcorepressor complex including TLX and LSD 1 forming alarger complex,（2）DPF1 or DPF3a（d4-family members）
functions as an adaptor protein linking these two complexes,

and（3）knockdown of either DPF1 or DPF3a in primarycells originated from glioblastoma patients（TGSO1）strongly

leukemias and myelomas, NF-κB can be a promising target

suppresses the neurosphere formation in vitro, a good marker

inhibitors do indirectly target NF-κ B by suppressing theshDPF1 or shDPF3a expression unit into the third-generation

for cancer therapy. But most of the currently available NF-κB

upstream key molecules in the NF-κB activating pathways.

Since these molecules often locate at the cross-road of signaltransduction pathway, their biological effects are inevitablyof cancer stemness. In this project, we have introduced theoncolytic herpes virus, G47∆ to enhance its anti-oncogenic
activity.

We designed several sequences of shDPF1 and shDPF3a,broad and not specific. We previously reported that the d4-

respectively and evaluated each knockdown eﬃciency without

adaptor proteins linking NF-κB with the SWI/SNF complex.

lentivrus vectors carr ying the corresponding shRNA

family proteins（DPF 1 , DPF 2 , DPF 3 a/b ）function as

We have demonstrated that their N-terminal regions retain
full adaptor function and the C-terminal regions include
essential domains for NF-κB activation and maintenance of

千葉大学

aﬀecting expression levels of other d4-family members using

expression unit. To obtain in vitro proof that knockdown of
DPF 1 or DPF 3 a can suppress tumors formed by TGS 01
inoculation into nude mice, independent of G47∆ infection.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201925

We have now successfully designed siDPF1 and siDPF3a bysynthesized siRNA is now introduced into the tumor bearing

corresponding shRNAs to give resistance to RNase in vivo

nanoparticles using a newly developed non-cationic lipid,

modification of several nucleotides in the sequence of the

without aﬀecting their original knockdown eﬃciency. These

26

千葉大学

nude mice intravenously after encapsulating siRNA into lipid
COATSOME-Y.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

高橋ＰＩ（微生物創生）プロジェクト
Project for Systems Biology of Microorganisms
研究概要（Summary）

我々はコンピュータ解析によって , 次世代シーケンサーを含む様々な生物実験で得られる大量デー
タからの新規生物学的知見の創出 , 並びに , 数理モデルアプローチによる生命現象の解明に取り組んでいます . 大量データによる生命の「構成要素の理解」, 数理モデルによる「挙動の理解」という二つのコンセプトの下 , 病原真菌を含む微生物を対象に細胞機能の分子レベルでの理解を目指しています .

Our research areas are Bioinformatics and Systems Biology. Our Bioinformatics approach aims to deeply
and clearly understand massive biological experiment data, e. g., sequence data by next generation
sequencers. Systems Biology aims to understand how biological systems work and help the experimental
design mainly by mathematical modelling approach.

准

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

高橋 弘喜
楠屋 陽子
石原 潤一
守
涼子
全 真知子

Associate Professor

Research Assistant Professor
Research Assistant Professor

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Investigation of the relationships between heterogeneity

against environmental stresses and pathogenicity inpathogenic fungi Aspergillus fumigatus

Yoko Kusuya, Cai Bian, Jun-ichi Ishihara, Hiroki Takahashi

Hiroki Takahashi
Yoko Kusuya
Jun-ichi Ishihara
Ryoko Mori（〜 2019.6）
Machiko Zen

2. Systems biology for understanding the stress responses

in bacteria

Kengo Itadera, Jun-ichi Ishihara, Hiroki Takahashi
It is conceivable that the heterogeneity could be one of theStress responses and pathogenicity have been extensively

adaptation mechanisms to a diverse of environments inof life-threatening aspergillosis. The heterogeneity in thisapproaches; one is the systems biology approach where we

studied in Aspergillus fumigatus, the main causative pathogen
pathogen has recently attracted increasing attention. In thisproject, we used more than 100 clinically isolated strains toinvestigate several properties relevant to the pathogenicity of
A. fumigatus, namely, hypoxia growth, adaptation to
nutrients such as copper, mimicking human lung. We

compared these strains in whole genome level and tried touncover genomic variations. In addition, we conductedcomparative transcriptome analysis to uncover the genes
underpin the heterogeneity.

bacteria. We address the heterogeneity of bacteria by two

derive the mathematical model and conduct the simulation oftranscriptional regulation in metal response, and second is the

microfluidic device to directly measure the single cell behaviorof bacteria. We launched the assembling of device andsucceeded the microfluidic device which could be useful todetect the single cell behavior.

3. Development for genome analysis tools and bioinformatic

analysis for collaborative projects.

Mohammad Vahed, Jun-ichi Ishihara, Hiroki Takahashi

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201927

Since NGS development, genome and omics data are

Almeida, F., de Assis, L., Manfiolli, A., Takahashi-

to analyze their own genome and omics data, and give theH., Wang, X., Obar, J., Rokas, A., Goldman, G.

rapidly accumulating. We collaborate with several researchers

Nakaguchi, A., Kusuya, Y., Hagiwara, D., Takahashi,

overview of the data by using multivariate and statistical（2019）. Nutritional Heterogeneity Among Aspergillus

DIpartite enables ab initio prediction of conserved motifs

S t r a i n - a n d Hos t -D e p e n de n t M a n n e r. Front .

analysis. In addition, we developed software DIpartite.

based on not only PWM, but also DWM. We evaluated thefumigatus Strains Has Consequences for Virulence in a
Microbiol. 10, 854.

performance of DIpartite by comparing it with freely available３）Matsuo, K., Haku, A., Bi, B., Takahashi, H.,

Taken the obtained findings together, DIpartite performs

Goto, Y. （2019）. Fecal microbiota transplantation

tools, such as MEME, BioProspector, BiPad, and AMD.

Kamada, N., Yaguchi, T., Saijo, S., Yoneyama, M.,

equivalently to or better than these other tools, especially forprevents Candida albicans from colonizing therequires users to specify the motif lengths, gap length, and163.

detecting bipartite motifs with variable gaps. DIpartite
PWM or DWM. DIpartite is available for use at https://github.com/Mohammad-Vahed/DIpartite.

gastrointestinal tract. Microbiol. Immunol. 63, 155４）Shimizu, M., Kusuya, Y., Alimu, Y., Bian, C.,

Takahashi, H., Yaguchi, T. （2019）. Draft Genome

Sequence of Aspergillus awamori IFM 58123 NT.

Publications

Microbiol. Resour. Announc. 8, e01453-18.

１）Vahed, M., Ishihara, J. I., Takahashi, H. （2019）.

５）Toyotome, T., Hamada, S., Yamaguchi, S., Takahashi,

considering base interdependencies. PLoS One 14 ,K.（2019）. Comparative genome analysis of Aspergillus

DIpartite: A tool for detecting bipartite motifs by
e0220207.

２）Ries, L., Steenwyk, J. L., de Castro, P., de Lima, P.,

28

千葉大学

H., Kondoh, D., Takino, M., Kanesaki, Y., Kamei,

flavus clinically isolated in Japan. DNA Res. 26, 95-

103.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

バイオリソース管理室
Management of Unit of Microbiological Resources
研究概要（Summary）

病原真菌・放線菌の「保存・管理・提供」体制を整備し , 最新情報が付加された信頼できる菌株の提供を通じて , 真菌症ならびにその原因菌の研究・教育の基盤を支援している .

We are developing a system for preservation, management and distribution of pathogenic fungi andactinomycetes. We support the base of research and education of mycoses and their pathogens in order tosupply reliable strains that are added new information.

准

教

授

助

教

助
技

教
術

職

員

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

矢口 貴志
田中 玲子
伴 さやか
伊藤 純子
長村 由美
樋口芳緒美

Associate Professor
Assistant Professor
Assistant Professor

Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Aspergillus takadae , a novel heterothallic species ofAspergillus section Fumigati isolated from soil in China.

Matsuzawa T , Abliz P , Yaguchi T , Gonoi T , Horie Y .
1

1

2

3

3

4

University of Nagasaki, Siebold Campus, 1-1-1 Manabino,

Nagayo-cho, Nishi-Sonogi-gun, Nagasaki, 851 - 2195 ,

2

Japan

Department of Dermatology, The First Aﬃliated Hospitalof Xinjiang Medical University, No.1 Liyushan Road,smooth wall. The validation of these novel species is supported
further by the analyses of the b-tubulin, calmodulin, actin,

and RPB2 sequences. In addition, the phylogenetic tree and
DDBJ accession numbers of all the species of Aspergillus

section Fumigati are presented. We report on the crossing of
A. takadae species and the result of crossing A. takadae with aclosely related species, A. spathulatus.

2. Genes encoding proteolytic enzymes fungalysin andsubtilisin in dermatophytes of human and animal

Urumqi, Xinjang Uygur Autonomous Region, 830053 ,

3

4

China

Takashi Yaguchi
Reiko Tanaka
Sayaka Ban
Junko Ito
Yumi Osamura
Kaomi Higuchi

origin: A comparative study

Medical Mycology Research Center, Chiba University, 1-8-

K aplan E 1, 2, Gonc a S 1, K andemir H 3, 4, Dö ğ en A 5,

Former Natural History Museum and Institute, Chiba,

S8, Nenoﬀ P8.

Japan

1

1, Inohana, Chuo-ku, Chiba 260-8673, Japan

955-2 Aoba-cho, Chuo-ku, Chiba-shi, China, 260-86,

Aspergillus takadaeis characterized by its heterothallic

Hilmioğlu-Polat S6, Ilkit M3, Tanaka R7, Yaguchi T7, Uhrlaβ2surfaces, and broadly ellip-soidal to ovate conidia with a

千葉大学

Application Center, Mersin University, Mersin, Turkey

Department of Pharmaceutical Microbiology, Faculty of
Pharmacy, University of Zonguldak Bülent Ecevit,

reproduction, pale yellow cleistothecia, broadly lenticular

ascospores with two short equatorial crests and smooth convex

Advanced Tec hnolog y Educ ation, Researc h, and3

Zonguldak, Turkey

Division of Mycology, Department of Microbiology, Faculty

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201929

of Medicine, University of Çukurova, Adana, Turkey

Yaguchi T.

Medical Centre/Canisius Wilhelmina Hospital, Nijmegen,

Faculty of Science, Chiba University, 1 - 33 , Yayoi-cho,

Department of Pharmaceutical Microbiology, Faculty of

Medical Mycology Research Center, Chiba University, 1-8-

6Department of Microbiology, Faculty of Medicine,

Molecular Chirality Research Center, Chiba University,

7

Medical Mycology Research Center, Chiba University, 1-8-

4

5

8

Centre of Expertise in Mycology, Radboud University
The Netherlands

Pharmacy, University of Mersin, Mersin, Turkey
University of Ege, Izmir, Turkey

1 Inohana, Chuo-ku, Chiba 260-8673, Japan

Inage-ku, Chiba 263-8522, Japan

1, Inohana, Chuo-ku, Chiba 260-8673, Japan
1-33, Yayoi-cho, Inage-ku, Chiba, Japan

Species of the Aspergillus section Nigri are taxonomically

Laboratory for Medical Microbiology, Mölbis, Germany

very complex. The taxonomic assignment of Aspergillus

Dermatophytes are among the most successful fungalsequence of A. awamori strain IFM 58123NT.

pathogens in humans, but their virulence mechanisms have

not yet been fully characterized. Dermatophytic fungi secrete
proteases in vivo, which are responsible for fungal

colonization and degradation of the keratinized tissue during
infection. In the present study, we used PCR to investigate

awamori is unclear. Here, we present the draft genome

Publications

１）Hama, M., Elshamy, A., Yoneyama, T., Kasai, Y.,

Yamamoto, H., Tanigawa, K., Oshiro, A., Noji, M.,

Ban, S., Imagawa, H., Umeyama, A. （2019）. New

the presence of genes encoding fungalysins（MEP ）andalkaloidal metabolites from cultures of entomopathogenic

incidence is increasing in Europe: the anthropophilic

Fitoterapia. 139, e104364.

subtilisins（SUB ）in three dermatophyte species whose

Trichophyton rubrum（n = 58）, zoophilic Microsporum canis（n = 33）, and Trichophyton benhamiae（n = 6）. MEP2 and

SUB4 genes were significantly correlated with T. rubrum;

fungus Cordyceps takaomontana NBRC 101754 .

２）Kaplan, E., Gonca, S., Kandemir, H., Döğ en, A.,

Hilmioğlu-Polat, S., Ilkit, M., Tanaka, R., Yaguchi,T., Uhrlaβ, S., Nenoff, P. （2019）. Genes encoding

MEP3 and SUB1 were mostly frequently harbored by M.

proteolytic enzymes fungalysin and subtilisin in

harbored by T. benhamiae isolates（p < 0.05）. Furthermore,comparative study. Mycopathologia. Published Online:

canis; and MEP1, 2, and 4 and SUB3–7 were most frequently

MEP1–5 and SUB1–3 genes were significantly more prevalentdermatophytes of human and animal origin: A
02 August 2019.

among human clinical isolates of M. canis（n = 17）than

３）Kato, I., Furuya, M., Baba, M., Kameda, Y., Yasuda,0.05）. Unidentified MEP and/or SUB genes in some isolates

Ogawa, O., Niino, H., Nakaigawa, N., Yano, Y.,among asymptomatic cat isolates of M. canis（n = 16; p <in the current study may suggest that other gene repertoires

may be involved in the degradation of keratin. The presentedM., Nishimoto, K., O yama, M., Yamasaki, T.,
Sakamoto, K., Urata, Y., Mikami, K., Yamasaki, S.,
Tanaka, R., Takagi, T., Kondo, T., Nagashima, Y.

analysis of the incidence of MEP and SUB virulence genes in（2 0 1 9 ）. R B M 1 0 -T F E 3 r e n a l c e l l c a r c i n o m ainsight into the host–fungus interaction and dermatophyte

closely split signals in break-apart fluorescence in-situ

three dermatophyte species of diverse origins provides anpathogenesis.

3. Draft genome sequence of Aspergillus awamori IFM
58123 .
NT

Shimizu M, Kusuya Y, Alimu Y, Bian C, Takahashi H,

30

千葉大学

characterised by paracentric inversion with consistenthybridisation: study of 10 cases and a literature review.
Histopathology. 75, 254-265.

４）Kurosawa, S., Sekiya, N., Doki, N., Yaguchi, T.,

Kishida, Y., Nagata, A., Yamada, Y., Konishi, T.,
Kaito, S., Yoshifuji, K., Shirane, S., Uchida, T.,

Inamoto, K., Toya, T., Igarashi, A., Najima, Y.,

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

Muto, H., Kobayashi, T., Kakihana, K., Sakamaki,９）Noguchi, H., Matsumoto, T., Hiruma, M., Kimura,following allogeneic hematopoietic stem cell（2019）. Tinea unguium caused by terbinafine-resistantInfect Dis. 89, 154-162.

fosravuconazole. J Dermatol. 46, e446-e447.

H., Ohashi, K.（2019）. Emergence of rare nocardiosis

transplantation in the era of molecular taxonomy. Int J

U., Kano, R., Yaguchi, T., Fukushima, S., Ihn, H.

Tr ich o ph y to n r u b r u m s u c c e s s f u l l y t re a t e d w it h５）Matsuo, K., Haku, A., Bi, B., Takahashi, H.,

10）Noguchi, H., Matsumoto, T., Hiruma, M., Kimura,

Goto, Y. （2019）. Fecal microbiota transplantation（2019）. Interdigital hyalohyphomycosis caused by

gastrointestinal tract. Microbiol Immunol. 63, 155-163.

Dermato-Venereologica. 99, 835-836.

Kamada, N., Yaguchi, T., Saijo, S., Yoneyama, M.,

pre vents Candida albicans from colonizing theU., Yaguchi, T., Hirose, M., Fukushima, S., Ihn, H.

members of the Fusarium solani species complex. Acta

６）Matsuzawa, T., Abliz, P., Yaguchi, T., Gonoi, T.,

11）Sato, T., Kitahara, H., Honda, H., Katsukawa, F.,

heterothallic species of Aspergillus section Fumigati

middle finger of a Japanese Judo Athlete due to７）Miyashita, K., Matsuo, A., Johno, M., Noguchi, H.,

12）Shimizu, M., Kusuya, Y., Alimu, Y., Bian, C.,

Yaguchi, T., Ihn, H. （2019）. Subcutaneous cystic

sequence of Aspergillus awamori IFM 58123NT. Microbiol

Horie, Y. （2019）. Aspergillus takadae, a novel
isolated from soil in China. Mycoscience. 60, 354-360.

Matsumoto, T., Hiruma, M., Kimura, U., Kano, R.,

phaeohyphomycosis caused by Exophiala jeanselmei. J
Dermatol. 46, e449-e451.

８）Noguchi, H., Matsumoto, T., Kimura, U., Hiruma,

M., Kano, R., Yaguchi, T., Fukushima, S., Ihn, H.

（2019）. Fungal melanonychia caused by Candida

parapsilosis successfully treated with oral fosravuconazole.
J Dermatol. 46, 911-913.

千葉大学

Hiruma, M., Yaguchi, T.（2019）. Onychomycosis of

Trichophyton tonsurans. Med Mycol J. 60, 1-4.

Takahashi, H., Yaguchi, T. （2019）. Draft genome
Resour Announc. 8, e01453-18.

13）Yamate, R., Matono, T., Yaguchi, T., Fujii, Y., Goto,

Y., Tobino, K., Imura, H., Nagano, S. （2019）.
Disseminated nocardiosis with Nocardia brasiliensis
bacteremia in a patient with rheumatoid arthritis using
tocilizumab. J Infect Chemother. 25, 552-555.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201931文部科学省 ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原真核微生物」
Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology

National BioResource Project Pathogenic Eukaryotic Microorganisms
文部科学省では2002年度からナショナルバイオリソー

BioResource Project（NBRP）to construct the framework for

スプロジェクト（NBRP）を開始し , 国が戦略的に整備

systematic collection, preservation, and distribution of

存 , 提供などを行うための体制を整備してきた . その後

development by the national government. After the reviewing

れた .

started.

ることとなり , NBRP 病原真核微生物には千葉大学真菌

Mycology Research Center（pathogenic fungi/actinomycetes）,

することが重要な生物資源について体系的に収集 , 保
５年ごとの見直しを行い , 2017年度より第４期が開始さ第４期より病原細菌と病原真菌・原虫は別々に活動す

医学研究センター（病原真菌・放線菌 , 中核機関）と長

bioresources, with a focus on those that required strategic

the NBRP every five years, in FY2017, the forth phase hasThis project is carried out by Chiba University’s Medical

and Nagasaki University ’s Institute of Tropical Medicine

崎大学熱帯医学研究所（病原性原虫）は , 相互の機関の（pathogenic protozoa）. Together, they cooperate in various

体制を整備して , 高度情報を賦与した信頼できる病原微diseases and pathogens. Specifically, they are developing

連携を図り , これらの病原微生物株の収集・保存・提供

eﬀorts to support education and research pertaining to infectious

生物株として提供し , 感染症と病原体の教育・研究をすa system for collection, preservation, and distribution of

本プロジェクトは , 今後いかなる感染症が発生してもof pathogenic microorganisms that are backed by high-level

る人々を支援している .

対応できる病原真核微生物コレクションを目指している .

In FY2002, the Ministry of Education, Culture, Sports,

Science and Technology（MEXT）implemented the National

32

千葉大学

pathogenic microorganisms, and they supply reliable strains

information.

Even if any infection develops, the project aims at thepathogenic microorganism collection to deal with it.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019長崎大学熱帯医学研究拠点特定領域共同研究「アフリカで発生している真菌症・放線菌症の原因菌の収集と形態学的 , 生理学的 , 分子生物学的解析」プロジェクト

Cooperative Research of Priority Areas with NEKKEN, Nagasaki University
Project for Collections, and morphological, physiological and molecular biological analysis
of human pathogenic fungi and actinomycetes in Africa
長崎大学熱帯医学研究所ケニア拠点の助力を得て , ケ

ニア国周辺の食糧のカビ毒汚染やヒト真菌症に関するプ
ロジェクトを展開している . 現在までにケニア全土の主を深めるために努力を継続している .

Under assistance of Kenya Research Station, Inst. NEKKEN,

要穀物（トウモロコシ , 小麦）やミルクなどを汚染する

Nagasaki univ., we are analyzing toxins contaminating major

析を進め , 現地食物の多くが , 世界の安全基準値を大きWe found the local foods were contaminated by the toxins at

カビ毒（発がん性アフラトキシン他）とその生産菌の解く上回るカビ毒で汚染されていることを明らかにしてきた . 結果は , 現地のマスコミにも取り上げられ , 大きな

local grains（maze, wheat）and milks, and also producer fungi.

concentrations far above the international standards. The result

has been announced in newspapers, and received large attention.

反響を呼び起こした . さらに環境中のアスペルギルス症

Furthermore, we have examinated the resistance properties agaistも行っている .

aspergillosis in the environment.

原因菌種の抗真菌薬に対する耐性 , 耐性部位などの調査
海外での共同研究は , 現地の研究者や監督官庁との信頼関係を築き , 許可を得るなど多くの課題を解決しなけ

れば推進できない . しかし , 現地の医療に貢献し , 人々の生活の質（QOL）の向上を図り , さらに日本との友好

千葉大学

antifungals and resistance mechanism on the isolates causative
We are building develop trusting relationships with Kenyan

researchers and regulator y agencies, and promoting

collaborative research project while solving the problems.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201933

高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発プロジェクト
The project for prophylaxis, diagnosis, and treatment for aspergillosis
and the other mycoses in aged and neonate patients

先進各国と同様に , 我が国で最も死亡者が多い深在性真菌症（内臓真菌症）はアスペルギルス症であり , その

また , 慶應大学病院等との国内共同疫学研究では , 昨

年までの研究で , 我が国の慢性肺アスペルギルス症では中でも特に高齢化や慢性閉塞性肺疾患（COPD）等の慢

欧米と異なり Aspergillus section Nigri による症例が多いこる . 本プロジェクトはこれらの疾患の疫学 , 増悪因子 ,section Nigri の中でも高頻度に検出される A. tubingensis にるアゾール薬に対する耐性）に関する研究 , さらに早産

りも感染症例が多いことを示し , 実際の難治化に深く関り , 新規診断法 , 治療法 , 予防法の開発を通じた本疾患についてさらに詳細な解析を進めている .

性肺疾患に好発する慢性肺アスペルギルス症が重要であ重要な難治化因子である薬剤耐性（とくに主力薬剤であ

低出生体重児を中心とした新生児等の真菌症の解析によの制圧を目指してきた .

これまで当センターは真菌症リファレンスセンターとして全国の医療施設からの高度な検査を引き受けるなどとを明らかにしたが , 今回 , 症例の詳細な解析により ,おいてアゾール系薬感受性が低いこと , さらに定着例よ与していることを確認した . 現在収集した薬剤耐性菌株

新生児領域における研究に関しては , 新生児深在性真菌感染症発症状況全国調査を実施し , 国内の実態を明らかにしたが , 本調査で糸状菌分離例の報告はなく , そのの活動をしてきたが , 新たに日本感染症学会及び日本臨背景として新生児・乳児における病原診断の難しさが根れ , 研究や症例収集のためのより強力なネットワークを的高く , また , 採取が容易なことに着目し , 胃液の真菌

床微生物学会により「先進的感染症検査施設」に認定さ底にあると考えた . そこで , 乳児では胃液の pH が比較形成することが可能となった . これに慶應大学呼吸器内培養による糸状菌感染症診断を試みたところ , 真菌に易病院も加えた共同研究等を利用して , アスペルギルス症

症例から糸状菌のひとつである Rasamsonia piperina の分科および感染制御部・感染制御センター及び NHO 東京
難治化の一因である Aspergillus fumigatus 耐性化の研究を続けている . Cyp51A 変異を伴うアゾール耐性に関する研究と並行して Cyp51A に変異を持たないアゾール耐性株について研究を進めており , 既に HMG-CoA reductase の変

感染性を示すことで知られる慢性肉芽腫症の乳児肺炎離に成功し , 論文を公表した . また , 新生児の Aspergillus

fumigatus による髄膜炎・脳室炎症例に対して , 血中と髄液中のボリコナゾール濃度を経時的に測定することで ,適切な治療を行うことが出来た症例を経験し . 論文公表

異によるアゾール耐性の可能性を論文で示したが , 本年した . さらに , 当センターに全国の医療機関からこれまする臨床分離株をもちい , CRISPR/Cas9システムによる由来糸状菌の臨床背景 , 菌株情報についてのデータを分は cyp51A 遺伝子の変異と hmg1遺伝子の変異との両方を有変異導入株の作出により , hmg1遺伝子の変異が独立してでコンサルテーションを受け , 菌株の解析を行った小児析し , 学会発表を行った . その他 , 新生児集中治療室.
アゾール薬耐性を付与することを証明した（論文準備中）（NICU）の環境中の真菌に関する調査を行った . これら

規病原因子の探索研究を行った . その結果 , 新たな病原策定において極めて重要な情報を提供するものである .

さらに難治化を克服するための研究アプローチとして新因子の候補分子としてアスペルギルス細胞壁タンパク質である２種類の Lysin motif（LysM）- domain proteins を発の検討結果は , 新生児アスペルギルス症の診断・治療法

This project aims to cope with the intractable fungal disease,

見し , Scientific Reports（IF 4.525）に発表した . 現在 , さaspergillosis in elderly and neonates by investigating the

しての役割について解析を進めている .

such as drug resistance. Fungal infections in neonates have been

らに免疫学的アプローチを駆使し , これらの病原因子と

34

千葉大学

epidemiology, exacerbating factors and obstacles for treatment

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

an unexplored field of investigation.

colonization, and was less susceptible to azoles. Detailed

We developed a rapid detecting system of cyp51A mutation,

analysis of antifungal-resistant strains collected is in progress.

fumigatus using surveyor nuclease（published in Antimicrobial

conducted a nationwide retrospective survey in order toazole-resistant aspergilli without Cyp51A mutations, weThrough this surveillance, the situation of neonatal IFI in Japan

which is a major factor of azole resistance, in Aspergillus

Agents and Chemotherapy, in press. IF 4.715）. For thealready proposed a hypothesis that mutations in HMG-CoA

reductase could be another cause of resistance. Recently we

For the study of deep-seated mycosis among neonates, we

determine numbers of invasive fungal infections（IFI）in Japan.

was clarified. However, no neonatal mold infection wasreported in this survey because of the diﬃculty of pathogenic

found clinical isolates possessing both cyp51A gene mutation

diagnosis. Based on this background, we reported the utilize of

we demonstrated that mutations in the hmg 1 gene

fungal pneumonia caused by Rasamsonia piperina. We also

In the search for the exacerbating factors of aspergilli, we found

Aspergillus fumigatus. The continuous monitoring of serum andand hmg1 gene mutation. Using the CRISPR / Cas9 system,

independently confer azole-resistance.（paper in preparation）.
two Lysin motif（LysM）-domain proteins in cell walls of thegastric aspirate fungal culture for the diagnosis of infantile

reported neonatal meningitis and ventriculitis caused by

cerebral fluid voriconazole concentration was useful for thefungus, which could be new candidates for exacerbation

appropriate treatment of this severe case. We also performed

In the collaborative studies with other domestic hospitals

clinical consultations to Medical Mycology Research Center.

（published in Scientific Reports: IF 4.525）.

such as Keio University Hospital, we previously found thatepidemiological study of pediatric mycoses using database of

Furthermore, environmental fungal survey in neonatal intensive

Aspergillus section Nigri is a major pathogen through ancare unit was performed in this year. Above study results gave

we investigated the lower respiratory tract specimens of these

diagnosis, and treatment for aspergillosis and the other mycoses

analysis of chronic pulmonary aspergillosis in Japan. This year
patients. We found that, among section Nigri, A. tubingensis

had a tendency to cause pulmonary infection rather than

千葉大学

us the important information for the establishment ofin neonate patients.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

35

AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「ブラジルと日本の薬剤耐性を含む真菌感染症診断に関する研究とリファレンス協力体制強化プロジェクト」

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for
Sustainable Development（SATREPS）

The establishment of a research and reference collaborative system for the diagnoses offungal infections including drug-resistant ones in Brazil and Japan
真菌感染症患者数は近年増加の一途をたどっている .

これまでに , ブラジルでの臨床検体から検出された

その背景として , 免疫抑制薬の投与 , 造血幹細胞移植や真菌のうち , 最も重篤な感染症を引き起こす Aspergillus

者 , また慢性肺疾患（肺結核症や肺気腫など）を基礎疾

ゾール系薬に耐性を有する菌株を見出した . これらの株

固形臓器移植を受けている等による全身的免疫低下患
患に有する患者等の局所的免疫低下患者などが増えており , そのような患者での発症頻度が高いことが挙げられ

fumigatus を解析したところ , 抗真菌薬の一種であるアは薬剤の標的遺伝子の上流のプロモーター領域に特徴的な繰り返し配列を有していることが明らかとなった . こる . 一般に深在性真菌症は難治で致死率が高いことが知のタイプの遺伝子変異は欧州に多く見られるものである

療分野のみならず社会的にも極めて高いと言える .

はこの知見についてブラジルで初めて論文発表を行っられており , その意味で , 真菌感染症のインパクトは医さらに加えて近年 , ヨーロッパ諸国を皮切りに抗真菌が , ブラジルでの状況は不明であった . 我々のグループ
た . 一方で我が国においては薬剤の標的遺伝子の変異パ薬に対する耐性を有した多種多様な真菌が問題となりつターンが欧州及びブラジルとは大きく異なることをすでつある . 最近 , 米国 CDC は , 最も差し迫った脅威となに我々は見出している . すなわち , 抗真菌薬耐性のメカ

る５種の微生物のうちのひとつに薬剤耐性真菌をリストアップした . 薬剤耐性真菌は全世界で広がりを見せておニズムは国や地域によって異なる可能性が示唆され , 耐性遺伝子検出法を開発するうえで国情を考慮すべきであり , まさに地球規模の問題となりつつある . 薬剤耐性真ることが確認された .

ることが予想される . 実際 , 薬剤感性真菌による感染症

出法の開発を開始した . ブラジルで検出された遺伝子変異

菌の出現 , 増加は疾病の難治化 , 致死率の上昇に直結すよりも薬剤耐性真菌による感染症の方が致死率が高いとの報告もある . 一方で , ブラジルを含めた南米での状況

以上のようなブラジルの状況を踏まえ , 耐性遺伝子検

タイプの耐性株を用い , LAMP（Loop-Mediated Isothermal

Amplification）法による検出について検討を重ね , 手法をはほとんど調査されておらず , 不明のままであるため ,確立した . この知見については現在論文準備中である .

本研究では , ブラジルのサンパウロ州立カンピーナス

スマッチ箇所特異的なエンドヌクレアーゼを応用し , 耐

よる感染症の実態を明らかにし , 耐性真菌の検出法を開速簡便な方法を確立し , 論文発表を行った . この手法はその早急な実態解明はまさに社会的要請である .

大学と連携し , カンピーナス首都圏における耐性真菌にまた , Surveyor Nuclease とよばれる , ２本鎖 DNA 内のミ性遺伝子内の点突然変異（point mutation）を検出する迅

発することを通じ , ブラジルにおける難治性真菌感染症

すでにブラジルにおいて実際の臨床株において施行開始

ピーナス大学を中心とした耐性真菌感染症研究拠点研究

ブラジル国内の研究ネットワークのツールとして ,の治療戦略を構築するとともにブラジルにおけるカン

REDCap（米国 Vanderbilt 大学が開発したデータ集積管

ネットワークの構築を目指す .

36

されている .

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

理システム）をカンピーナス大学に導入し , これを基にmight differ depending on the region/country, and it was

みとして , ブラジルの複数の医療機関が連携し , 多施設

developing a method for detecting a resistance gene.

真菌症の症例データベースを構築した . 現在南米初の試共同で真菌症の症例データベースが構築されつつあり ,これまでに160症例を超える症例数が集積されている .

また , このコンソーシアムを利用し , 研究機関も含めた真菌株保存バンクを設立し , 実際に菌株の保存を開始した . 保存する菌株としては複数の医療機関からの臨床分離株に加え , 環境（土壌 , 空気 , 植物 , 水など）からの分離真菌も含める予定である .

The number of fungal infections has been increasing in recent

years because of the advances in clinical practice such ashematopoietic stem cell transplantation, solid organ transplantation. Also, patients with chronic lung disease（pulmonary

tuberculosis, COPD, etc.）are generally susceptible toconfirmed that each situation should be considered when
We are developing some resistance gene detection methods.

Using several resistant strains, we partially established thedetection method by LAMP（Loop-Mediated Isothermal

Amplification）. A manuscript regarding this study is inpreparation. We also established a simple and rapid method todetect point mutations in resistance genes using Surveyor

Nuclease, a mismatch site-specific endonuclease in double-

stranded DNA, and published a paper. This assay has alreadybeen implemented in Brazil for clinical strains.

As a research network tool in Brazil, REDCap®, a systemfor data collection and management developed by Vanderbilt
University, was introduced to the University of Campinas.

Four medical institutions in Brazil have participated in apulmonary fungal infection. In general, fungal infections are

multi-center database of mycosis cases, and more than 160 cases

the impact of fungal infections is extremely high, not only in

In addition, using this consortium, a bio-resource bank forrefractory diseases and their mortality is high. In these aspects,

have been already enrolled.

the medical field but also in society.

fungal strain has been established, and the fungal preservation

have become a serious problem. Recently, CDC in the US has

only clinical isolates but also environmental isolates（from the

Recently, various fungi possessing resistance to antifungals

listed drug-resistant fungi as one of the five “urgent threats.”
The emergence and increase of drug-resistant fungi are expected

was already started. The strains to be preserved will include notsoil, air, plants, water）.

to directly lead to refractory disease and increased mortality. In

fact, it has been reported that infections caused by drug-re-sistant fungi have a higher mortality rate than the ones causedby drug-sensitive fungi. However, the situation in SouthAmerica, particularly in Brazil, has been little investigated andremains unclear. Given these situations, this project was started
between Medical Mycology Research Center, Chiba University

and the University of Campinas.

Among clinical strains of Aspergillus fumigatus isolated in

Brazil, we found azole-resistant strains. These strains have atandem repeat in the promoter region upstream of theantifungal target gene. This type of mutation is known to becommon in Europe. We have published the first paper in Brazilon this finding.

On the other hand, we have already found that mutation

patterns of drug target genes in Japan are significantly diﬀerent

from those in Europe and Brazil. In other words, it wassuggested that the mechanism of antifungal drug resistance

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201937

感染症研究革新イニシアティブ（J-PRIDE）
Japanese Initiative for Progress of Research on
Infectious Disease for Global Epidemic

病原真菌 Aspergillus fumigatus によるアスペルギルス症

Aspergillus fumigatus is a major cause of aspergillosis fromは先進国を中心に増加傾向にある . 既存の抗真菌薬の抗allergic bronchopulmonary aspergillosis（ABPA）to invasive

薬開発が求められている . 本プロジェクトでは , 自然環

promised individuals. The efficacy of antifungal therapy is,

菌力は十分とは言えず極めて難治であるため , 新規治療

境中での形質変化をモデル化することで病原性を規定する形質の同定を目指している . 「どのような形質変化がどのような環境因子によって生み出されるか」を明らかにして , 病原性と環境因子を繋げることを計画している .

これまでに , 本菌の環境応答能を分子レベルで解析するとともに , 表現形質を徹底的に調べた . 調べた限りのpulmonary aspergillosis（IPA）, particularly in immunocom-

however, incomplete, because of emergence of resistance strains
wor ld w ide. Besides, the molecular mechanisms ofpathogenicity in A. fumigatus has not been fully elucidated yet.

Of critical importance is further understanding of themechanisms behind infections with A. fumigatus. In thisproject, we propose the elucidation of the quantitative eﬀect of

菌株においては , 系統的に近縁であっても , 株間で異なenvironmental conditions related with adaptation in A.

的系統などから簡便に推定することの難しさを浮き彫り

modelling framework to decipher the phenotypic heterogeneity

る表現型を示す可能性があり , 本菌の環境応答能を遺伝にした . このことは , 本菌の病原性が複雑な表現形質の総体によっていることを改めて教示する結果であった .

また , 大学院生を英国の研究グループに長期に滞在させるなど , 国際研究協力を進めた .

38

千葉大学

f umigatus. Toward this goal, we explore the statisticalof A. fumigatus. We utilize both clinical isolates and strainsobtained by experimental evolution to derive and validate themodel, where phenotypic heterogeneity can be explained bytranscriptome data.

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラム「 超個体の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」

Leading Research Promotion Program, Institute for Global Prominent Research
Advanced Research of Infection and Immunity Based on
Integrative Understanding of Host-Microbe Interactions
千葉大学では , 学内での研究の核となる新たな研究グ

克服へつながる新規イノベーション創生を目指している .

幹」を設置しており , 当センター教員が中心となった研The research group, composed of the researchers in MMRC,

ループの創出を目指す「グローバルプロミネント研究基

究プロジェクト「“ 超個体 ” の統合的理解に基づく次世代

School of Medicine, Faculty of Pharmaceutical Sciences, and育成プログラムに採択され , 活動を実施している . 本プ

Promotion Program of Chiba University. The members focus

型「感染制御学」研究推進拠点」が , リーディング研究

ログラムでは , 感染免疫分野の教員が中心となり , 医学

University Hospital, was selected as the Leading Researchon the understanding of molecular interactions between hosts

研究院 , 薬学研究院 , 附属病院の研究者と連携し , 共生and microbes, especially commensal fungi and bacteria, using

そこへ侵入する病原体による恒常性の破綻と感染症の発digestive organs. The members aim to reveal the molecular

微生物と宿主である個体の免疫システムとの相互作用 ,症機序などについての基礎研究を , 皮膚 , 呼吸器 , 消化器など各種器官でのモデル実験系を用いて解析し , そこthe model assay systems targeting the skin, respiratory, andmachinery underlying the disruption of homeostatic balance inthe hosts by invasive pathogens, which induce infectiousから得られる成果を統合的に理解することで , 感染症・

diseases. The findings obtained from the project will help to「感染制御学」を創出し , 我々の健康維持と感染症などのdiseases and lead to the improvement of human health.

免疫制御の分子メカニズムを明らかにする次世代型の千葉大学

create innovative achievements in therapeutics of infectious

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201939

平成30年度 共同利用・共同研究報告2018 Fiscal Year Cooperative Research Program Report
研究課題

’18－１

が知られている . 本研究で , Fut2欠損マウスに C. albicansを経口投与しても野生型マウスと同様に腸管から排除さClostridium difficile 感染抵抗性における宿主
粘膜糖鎖修飾の役割れた . このことから , 腸管上皮細胞における糖鎖 α1, 2-

フコースは C. albicans の腸管定着には影響しないと考えられた . 一方 , 申請者は後藤准教授と共同で , 腸内細菌

鎌田信彦
（Division of Gastroenterology, University of Michigan

Medical School）

後藤義幸（千葉大学真菌医学研究センター）

The role of host glycosylation in the preventionof Clostridium diff icile infection
Nobuhiko Kamada

が C. albicans の腸管における定着を阻害する機能を有していることを見出した .

発表論文１）Matsuo, K., Haku, A., Bi, B., Takahashi, H., Kamada, N.,
Yaguchi, T., Saijo, S., Yoneyama, M., Goto, Y.（2019）.
Fecal microbiota transplantation prevents Candida albicans
from colonizing the gastrointestinal tract. Microbiol
Immunol. 63（5）, 155-163.

（Division of Gastroenterology, University of Michigan

研究課題

Yoshiyuki Goto

感染に応答した自然免疫誘導の分子機構の解析

Medical School）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果

’18－２

藤田尚志・加藤博己（京都大学ウイルス・再生医科学研究所）

ヒト腸内の常在細菌叢は Clostridium difficile 感染抵抗性に重要な役割を果たしており , 抗生剤の乱用は本病原細米山光俊・尾野本浩司（千葉大学真菌医学研究センター）

菌により惹起される偽膜性腸炎のリスクと密接に関与している . 申請者らの研究グループは , 真菌医学研究セン
ター後藤義幸准教授のグループと共に , 腸内細菌の定着により活性化される宿主 Interleukin（IL）-22が宿主粘膜

上皮・粘液の糖鎖修飾を介して Clostridium difficile 感染抵抗性に重要であることを見出した . IL-22刺激による宿主

糖鎖修飾は腸内細菌叢の構成を変化させ , C. difficile の腸管内増殖に必要なコハク酸やアミノ酸といった腸管内代謝物濃度を減少させることが分かった . その結果 , C.

difficile は腸管内で効率よく増殖・定着できず , 感染を成Innate immune responses against pathogen
infection
Takashi Fujita, Hiroki Kato（Institute for Frontier Life and Medical Science, Kyoto

University）

Mitsutoshi Yoneyama, Koji Onomoto（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

立させることができない . 本共同研究成果は現在 , 国際

研究成果

は細菌以外に真菌も常在しており , 特に日本人の腸内に然免疫において重要な役割を担うウイルス感染センサー誌に原著論文として投稿中である . また , ヒトの腸内には Candida albicans や Saccharomyces cerevisiae が存在すること

40

千葉大学

本共同研究では , 高等脊椎動物における抗ウイルス自である RIG-I-like 受容体（RLR）に着目し , それらによ

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

るウイルス RNA 検知の分子機構と生理機能について継研究成果てきた細胞内ストレス顆粒（SG）の形成を介した RLRによるクリプトコックス症のアウトブレイクが発生し ,に局在する新規 RNA 結合タンパク質（RBP）についてつある . 2007年には , わが国でも国内感染と考えられるのノックアウトマウスを作出し , in vivo における抗ウイ後も症例が増加している . 通常の C. neoformans によるク

続して解析を行っている . 2018年度には , これまで行っ

活性化の分子機構について , 昨年度までに同定した SGの機能解析を進めた . CRISPR/Cas9系を用いたこの分子

1999年にカナダのバンクーバー島で Cryptococcus gattii

その後アメリカ合衆国の北西沿岸地域を中心に拡大しつ

C. gattii によるクリプトコックス症例が報告され , そのルス応答への関与について検討したところ , A 型インフリプトコックス症と異なり , 健常者でも中枢神経感染症（IFN）遺伝子誘導が有意に減弱していることを示唆す

ス症とも呼ばれており , 今後新興感染症として重要な問

ルエンザウイルス感染に応答した I 型インターフェロンを発症し , その高い致死率から高病原性クリプトコック

る結果が得られたことから , この分子が抗ウイルス応答

題に発展することが懸念される . 本研究では , C. gattii と並行して , RBP である当該分子が , どのような分子と会感染症の病態解明の手掛かりを探ることを目的とした .

を正に制御する因子であることが強く示唆された . 現在合しているのかについての生化学的な解析および結合す

C. neoformans に対する免疫応答性を比較することで , 本

これまでに我々は , 本真菌の病原性に重要な莢膜多糖る RNA の網羅的な解析を含め , どのように抗ウイルスと C 型レクチン受容体の Dectin-2との応答性を解析し ,いる. 一方で, 学習院大学のグループとの共同研究

Dectin-2への結合性 , Dectin-2レポーター細胞の活性化 ,応答シグナルに関与しているかについて解析を実施してで , RLR の下流のシグナルアダブター分子である IPS-1

が , ウイルス非感染時に不活性型で維持されるために必要な分子内ドメインの同定を行い , 当該分子が分子内相互作用を介して自己活性化の抑制を行うという分子機構を明らかにし , 論文投稿を行い , 2019年度内での論文報

以下のことを明らかにした . １）C. neoformans 由来では骨髄由来樹状細胞の活性化を示したのに対して , C. gattii

由来ではいずれの活性も低下していた . ２）ConA に結合する莢膜多糖成分として galactoxylomannan（GalXM）,

mannoprotein（MP）が知られているが , 抗 GalXM 抗血
清 , 精製 GalXM を用いた解析から目的の活性は GalXM

告を目指している .

とは異なる可能性が示唆された . ３）本真菌の主要な MP

研究課題

胞の活性化が観察された . これらの結果から , 本真菌のである chitin deacetylase によって Dectin-2レポーター細’18－３

新興強毒性真菌Cryptococcus gattii の高病原性機序の免疫学的解析

与する可能性が示唆された .

樹状細胞は , 抗原を提示することでナイーブ T 細胞を活性化し , 感染防御に重要な Th1細胞への分化を誘導す川上和義・石井恵子

る . その第一ステップとして , 樹状細胞による本真菌の（東北大学大学院医学系研究科）

亀井克彦・川本

細胞壁多糖と Dectin-2との相互作用が病原性の違いに関貪食が重要となる . そこで本研究では , 両真菌種の病原進性の違いに , 樹状細胞による本真菌の貪食への Dectin-2（千葉大学真菌医学研究センター）の役割を解析することにした . 野生型（WT）マウスに

Immunological analysis of a mechanism for highpathogenicity of Cryptococcus gattii
Kazuyoshi Kawakami, Keiko Ishii

比べ Dectin-2遺伝子欠損（KO）, CARD9KO マウス由来の骨髄由来樹状細胞による C. neoformans の貪食は有意に低下した . また , C. neoformans より精製された Dectin-2リガンドを添加することで貪食は抑制された . シグナル

伝達分子の Syk を阻害すると Dectin-2存在下でのみ貪食

（Tohoku University Graduate School of Medicine）の抑制がみられ , PI3K を阻害すると貪食が完全に抑制（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

によって阻害すると , C. neoformans の貪食は完全に抑制

Katsuhiko Kamei, Susumu Kawamoto

千葉大学

された . 貪食に重要なアクチン重合をサイトカラシン D

され , 貪食時にみられるアクチン重合は WT マウスに比真菌医学研究センター報告

第 23 巻201941

べて Dectin-2KO マウスで有意に低下した .

学研究センター所蔵の各菌の臨床分離株をサブロー寒天

カベンジャー受容体のように直接的に貪食を誘導する可質活性を試験した . その結果 , M. canis を除く菌株の培養以上の結果より , Dectin-2は C. neoformans に対してス能性が示唆された . さらに , Dectin-2がアクチン重合及培地で培養し培養抽出物を用いて枯草菌に対する抗生物抽出物に活性が認められた . T. rubrum において本活性をび貪食を誘導する際に Syk-PI3K を介したシグナル伝達

示す画分を分離精製し , 精密質量や評品との比較などか答における Dectin-2の新たな機能が明らかとなった .

Viomellein は赤色色素化合物であり , 肝腎毒性 , 抗グラ経路が重要なことも示唆され , C. neoformans 感染免疫応

研究課題

’18－４

ら本化合物が viomellein であることが明らかになった .

ム陽性細菌活性 , 殺虫性などが報告されている . これまで に , Aspergillus ochraceus や Penicillium cireoviride な ど か ら

白癬菌が産生する二次代謝産物の体系的解析
研究

産生の報告があるが , 白癬菌による産生は初めて確認された . また , 枯草菌に活性を示した他の３種でも , 同様に培養液中に viomellein の産生が認められた .

T. rubrum をサブロー寒天培地に植えて , シールでシャー萩原大祐

レの通気を遮断した場合 , 本化合物の産生は阻害された .

（筑波大学生命環境系）

また , サブロー液体培地での培養においても , viomellein

矢口貴志の産生は認められなかった . そこで , これらの産生条件（千葉大学真菌医学研究センター）

および非産生条件における培養菌体から RNA を抽出し ,Functional analysis of secondary metabolism indermatophytic fungi
Daisuke Hagiwara

RNA-sequencing 解析を行い , viomellein 生合成遺伝子の推定を試みた . その結果 , 29個の二次代謝コア遺伝子のうち５つが化合物の産生量に相関した発現パターンを示
し , これらのうち構造的に可能性の高い PKS 遺伝子を２つ見出している . 今後 , この２つの遺伝子が viomellein の（Faculty of Life and Environmental Sciences, University

生合成に関与しているか検証する予定である .

Takashi Yaguchi

研究課題of Tsukuba）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
足白癬（水虫）などの原因となる皮膚糸状菌 Trichophyton

属が産生する二次代謝化合物に関して , 現在までにほとんど知見が無く , 皮膚感染における本属菌の分泌代謝物の役割は全く不明である . 本研究はその端緒を拓く基盤

情報を提供することを目的とし , １）利用可能な複数のTrichophyton 属菌ゲノムから , 二次代謝遺伝子を同定し ,比較 , 分類する . ２）培養液から抗菌活性など活性を示す物質の単離を行う . ３）ゲノム , トランスクリプトーム

データと照合して該当する生合成遺伝子の同定を目指す .
ゲ ノ ム 情 報 が 利 用 可 能 で あ っ た , T. r ubr um, T.

mentagrophytes, T. tonsurans, Microsporum canis, M. gypseumの ５ 菌 種 の 二 次 代 謝 コ ア 遺 伝 子（NRPS, PKS, PKS-

NRPS）を同定した . その結果 , それぞれ計29, 32, 28,

44, 36個の因子が見出された . 続いて , 千葉大学真菌医

42

千葉大学

’18－５

Antifungal drug resistance in Candida glabratafrom transcriptional control to drug extrusion:
aiming improved diagnosis and therapeutics
Miguel C Teixeira（Institute for Bioengineering and Biosciences, Instituto

Superior Técnico/Bioengineering Department）

Hiroji Chibana（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
In order to new molecular mechanisms behind azole
resistance, a transcriptomics analysis of the evolution of a
Candida glabrata clinical isolate（isolate 044）from azole

susceptibility to posaconazole resistance（21st day）
, clotrimazole
resistance（31 st day ）, and fluconazole and voriconazole

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

resistance（45th day）, induced by longstanding incubation

with fluconazole, was carried out. All the evolved strains
were found to accumulate lower concentrations of azole drugs

than the parental strain, while the ergosterol concentration
remained mostly constant. However, only the population

displaying resistance to all azoles was found to have a gain-offunction mutation in the C. labrata PDR1 gene, leading to

the upregulation of genes encoding multidrug resistancetransporters. Intermediate strains, exhibiting posaconazole/

clotrimazole resistance and increased fluconazole/voriconazole
MIC levels, were found to display alternative ways to resist
azole drugs. Particularly, posaconazole/clotrimazole

resistance after 31 days was correlated with increased
expression of adhesin genes. This finding led us to identify

亀井克彦・渡辺哲・新居鉄平

（千葉大学真菌医学研究センター）

Development of a simple method to differentiate
the type of azole-resistant Aspergillus fumigatus
Takahito Toyotome（ Department of Veterinar y Medicine, O bihiro

University of Agriculture and Veterinary Medicine）

Katsuhiko Kamei, Akira Watanabe, Teppei Arai

（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
近年 , cyp51A 遺伝子のプロモーター領域に繰り返し配

the Epa3 adhesin as a new determinant of azole resistance.

列（繰り返し塩基数によりいくつかのタイプに分類されwas found to decrease the intracellular accumulation of azoleの野外環境で拡散を続けており , 日本国内でもこれら耐Besides being required for biofilm formation, Epa3 expression

る）を獲得したアゾール耐性 Aspergillus fumigatus が海外

antifungal drugs. Altogether, this work provides a glimpse of性菌による感染症症例報告が増加している . アスペルギ

the transcriptomics evolution of a C. glabrata population

ルス症の原因菌がアゾール耐性か否かを知ることは初期

nature of the acquisition of azole resistance and pointing out a

迅速・簡便な検査方法は限られている . Toyotome らはこ

toward multiazole resistance, highlighting the multifactorial
new player in azole resistance.

発表論文
１）Cavalheiro, M., Costa, C., Silva-Dias, A., Miranda,
IM., Wang, C., Pais, P., Pinto, SN., Mil-Homens,D., Sato-Okamoto, M., Takahashi-Nakaguchi, A.,
Silva, RM., Mira, NP., Fialho, AM., Chibana, H.,
Rodrigues, AG., Butler, G., Teixeira, MC.（2018）. A

治療の薬剤選択に重要な情報となるが , 現在利用可能な

れまでに繰り返し配列をターゲットとした検査法を開発してきた（Med. Mycol., 2018）. 本法によって繰り返し

配列の有無により全タイプの耐性菌を検出することが出来る . 一方でどのタイプであるかを決定することは出来ない . そこで本研究では各タイプに付随して存在する塩

基置換をサイクリングプローブ法を用いて検出する方法を検討した .

34塩基対繰り返し配列とともに存在する L98H 変異もTranscriptomics Approach To Unveiling the Mechanisms

しくは46塩基対繰り返し配列とともに存在する Y121F お

a Candida glabrata Clinical Isolate. Antimicrob Agentsびプローブを設計した . これらプライマーセットおよびof In Vitro Evolution towards Fluconazole Resistance ofChemother. 63（1）.

研究課題

よび T289A 変異を標的として , プライマーセットおよプローブ , 増幅により得られた標的配列を用いて変異の検出を試みたところ , 標的配列が数十コピーという少コ’18－６

ピー数でも検出することが可能であった . また , 感受性

タイプ別アゾール耐性Aspergillus fumigatus
検出法の開発株および耐性株のゲノム DNA を用いた検討においても対象配列内変異を特異的に検出することが可能であった .

このように本法を用いることにより各繰り返し配列タイプとともに現れる変異を特異的に検出することが可能で

豊留孝仁（帯広畜産大学獣医学研究部門）あった . 更に既報の繰り返し配列を検出する方法と組み合わせることにより , より確実な耐性菌検出とどのタイプであるかを決定できるという二つのメリットを得られ

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201943

ると期待する .

テロメラーゼの欠損は直ちには致死とはならないこと

研究課題利用できる可能性がある .

から , この違いが C. neoformans 特異的な治療戦略として’18－７

Cryptococcus neoformans のユニークなゲノ
ム維持機構を標的とした新規治療戦略の開発に向けて（その２）松浦

既知のヒトテロメラーゼ阻害剤を増殖中の C. neoformansに投与したところ , CnEST2 遺伝子のコピー数と相関して増殖の低下がみられた . しかし , その増殖阻害活性は治療に用いるには十分ではなかったため , 本年度は以下の二つの戦略で研究を進めた .

彰①（千葉大学大学院理学研究院）

テロメラーゼホロ酵素を構成する RNA コンポーネントの同定：テロメラーゼの試験管内活性には , テロ

渡邊凌人

メラーゼ触媒サブユニット（C. neoformans では CnEst2）（千葉大学理学部）

高橋弘喜・亀井克彦・川本進・東江昭夫（千葉大学真菌医学研究センター）に加えて RNA コンポーネントが必須である . RNA コン

ポーネントをコードする遺伝子を単離し , 取り扱いが容易な多細胞種（例えば出芽酵母 S. cerevisiae）で組換

Towards development of novel therapeuticstrategies targeting the unique mechanism of
genome maintenance in Cryptococcus neoformans
Akira Matsuura

え体を発現させることで , C. neoformans テロメラーゼ

特異的な阻害剤のスクリーニング系を構築することを目指した . 鋳型配列として想定される十塩基程度の配列を元にゲノムをスクリーニングしたところ , タンパ

ク質に翻訳されない転写産物をコードする , 複数の候補遺伝子が見つかった . そのうちの３遺伝子の破壊株（Graduate School of Science, Chiba University）

を作成したものの , 単独破壊ではテロメア構造の異常（Faculty of Science, Chiba University）

コードしていると結論することはできなかった .

Ryoto Watanabe

Hiroki Takahashi, Katsuhiko Kamei, Susumu Kawamoto,
Akio Toh-e（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
Cryptococcus neoformans は環境に常在する担子菌酵母であり , 主に免疫機能の低下した人に感染し重篤なクリプ
トコックス症を引き起こす日和見感染真菌として知られている . 本菌は , 染色体末端に存在するテロメア配列の維持に関連するユニークな性質を有することが報告されが 誘 導 さ れ な か っ た た め , RNA コ ン ポ ー ネ ン ト を②

C. neoformans テ ロ メ ラ ー ゼ 活 性 測 定 法 の 確 立：C.

neoformans は厚い莢膜を持ち , 高いプロテアーゼ活性を有している . このため細胞抽出液中の酵素活性を測定するのは容易ではなく , 前年度まではテロメラーゼ

活性の測定に成功していなかった . 細胞破砕法を改変

し , さらに活性測定に用いるオリゴヌクレオチドの３’ 配列を工夫することで , 細胞溶解液中のテ ロメ

ラーゼ活性を測定することに初めて成功した .

今後 , ②で確立した方法により , 増殖阻害活性を指標に単離した C. neoformans テロメラーゼ阻害剤候補の中かて い る（Edman, 1992）, 本 研 究 で は , C. neoformans の こ

ら , より阻害活性の高い化合物を探索する予定である .

戦略の開発を目指している .

研究課題DNA を維持・修復する過程を解析し , C. neoformans のCandida glabrata 糖鎖合成遺伝子欠損株の自然免疫系との反応性の解析の性質の分子機構を解明し , これを標的とした新規治療

これまで , 遺伝学的 , 分子生物学的手法によりゲノム

染色体末端の維持・修復に必須なテロメラーゼの触媒
サブユニット CnEST2 遺伝子を同定している . さらに ,CnEST2 の欠損細胞が , 一倍体で致死性を示すという ,ユニークな現象を発見した . 他の多くの生物種では ,

44

千葉大学

’18－８

柴田信之・佐々木雅人・伊藤文恵・田中（東北医科薬科大学感染生体防御学教室）

真菌医学研究センター報告

第 23 巻

2019

大

研究課題

知花博治・山口正視’18－９（千葉大学真菌医学研究センター）

Reactivity of an innate immune system withcarbohydrate transferase deletion mutant of
Candida glabrata

Aspergillus fumigatus の病原性におけるガラ
クトフラノース含有糖鎖の機能解析
岡拓二（崇城大学応用微生物工学科）

Nobuyuki Shibata, Masato Sasaki, Fumie Ito,
Yutaka Tanaka

萩原大祐

Hiroji Chibana, Masahi Yamaguchi（千葉大学真菌医学研究センター）（筑波大学生命環境系）（Tohoku Medical and Pharmaceutical University）

亀井克彦・渡辺（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

田中

哲

大・柴田信之（東北薬科大学感染生体防御学研究室）

研究成果
病原真菌の細胞壁は , 宿主との接点であり免疫応答性に大きな影響を及ぼす . Candida glabrata の細胞壁糖鎖生合成に関与する各種の遺伝子欠損株について細胞壁の構造および性質の解析をこれまで続けてきた . 今回は特に大きく変化の見られた alg6Δ株と mnn2Δ株について細胞壁に与える影響を詳細に解析した . alg6Δ株は SDS,

Calcofluor white 等の薬剤感受性 , β-1,3-グルカナーゼ感

受性が上昇し , TEM でもマンナン層が薄く不鮮明になっていた . しかし , micafungin およびキラートキシンに対する感受性は逆に低下し , キチン含量は野生株の２倍以Funct ional anal y sis of g alactofur anosecontaining oligosaccharides in the pathogenicityof Aspergillus fumigatus
Takuji Oka（Department of Applied Microbial Technology, Sojo

University）

Daisuke Hagiwara（Faculty of Life and Environmental Sciences, Universityof Tsukuba）

上に増加していた . alg6Δ株はマンナンの構造に変化がKatsuhiko Kamei, Akira Watanabe

はマンナンの側鎖が失われ α-1,6- 結合の直鎖構造に変化

Yutaka Tanaka, Nobuyuki Shibata

見られなかったが分子サイズは低下していた . mnn2Δ株していた . しかし , 薬剤感受性等に著しい変化は見られなかった . カイコを用いた感染実験の結果 , alg6Δ株は野生株と比較して大きく病原性の低下していることが明ら（Medical Mycology Research Center, Chiba University）（Department of Infection and Host Defense, Tohoku

Medical and Pharmaceutical University）

かとなった . これらの結果は特に alg6Δ株では細胞壁合研究成果

ら病原性の低下につながっていることを示唆している .

のマンナン主鎖の生合成を担う酵素の同定を試みた . 申

菌薬の新たなターゲットとなる可能性を示唆している .

ン側鎖の生合成を担うβ-1,5- ガラクトフラノース転移酵

成系の酵素活性の低下が生じ , 細胞壁 integrity の低下か

以上のように細胞壁構築不全に関連する遺伝子は , 抗真糸状菌の細胞壁を覆う真菌型ガラクトマンナン（FTGM）

請者らは , これまでに GfsA が FTGM 中のガラクトフラ

素であることを明らかにしてきた . しかし , FTGM 中のマンナン主鎖の生合成を担う酵素は不明であった . 病原性糸状菌 Aspergillus fumigatus におけるマンナン主鎖生合成の候補遺伝子 cmsA 及び cmsB の遺伝子破壊株より FTGMを抽出し , NMR による構造解析およびゲルろ過クロマト

グラフィーを用いた分子量の定量を行ったところ , cmsA 及び cmsB の遺伝子破壊株由来の FTGM ではマンナン主鎖

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

45

の構造が失われていることが明らかになった . また , 組

Minoru Nagi

還元末端のマンノース残基の２位の水酸基にマンノース

Hiroji Chibana, Michiyo Sato, Azusa Takahashi

換え酵素 CmsA は GDP- マンノースを糖供与体として非を転移する酵素活性を有していた . CmsA はパラニトロ- 1→2）- マンノビオースおよ
フェノール - マンノース , α（（National Institute of Infectious Diseases）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）- 1→6）- マンノビオースを受容基質とすることがで
び α（

研究成果

ンノビオースに対する比活性の31倍であった . 以上のこ

トファジー（マイトファジー）は , 鉄欠乏条件において- 1→2）- マンノース転移酵素であること
生合成を担う α（

不明である . 鉄欠乏条件においてマイトファジーに必須

壊株は , 菌糸伸長速度および分生子形成能が著しく低下

かっており , ATG32の遺伝子発現調節によってマイト- マンノビオースに対する比活性はα（1→2）-マき, α（1→6）とから , CmsA および CmsB は FTGM のマンナン主鎖のを明らかにすることができた . cmsA 及び cmsB の遺伝子破していた . また , 菌糸を観察すると菌糸が膨潤した構造が高頻度に観察された . このことは , FTGM のマンナン
主鎖が糸状菌の正常な細胞壁形成や分化に必要不可欠な

病原真菌 Candida glabrata のミトコンドリア選択的オー活性化する事が報告されているが , その活性調節機構はな 遺 伝 子 で あ る ATG32の 発 現 量 が 増 加 す る こ と が わ
ファジーの活性調節を行っていることが予想される . 30

年度は , ATG32の発現調節機構解明を目的とし , ATG32の転写活性化に必要な領域の同定を試みた . まず , 5’-

RACE 法により , ATG32の転写開始点が1st ATG から199多糖であることを示している .

発表論文
１）Ota, R., Okamoto, Y., Vavricka, CJ., Oka, T.,
Matsunaga, E., Takegawa, K., Kiyota, H., Izumi, M.

bp 上流部位であることを明らかにした . 次に , ATG32上

流領域を用いたレポーターアッセイを行い , ATG32の鉄依存的転写抑制因子結合配列を同定した . さらにこの配列を用いてゲルシフトアッセイを行い , 鉄依存的にこの（2019）. Chemo-enzymatic synthesis of p-nitrophenyl

配列に結合するタンパク質の存在を確認し , 初年度の研fungal-type galactomannan. Carbohydr Res. 473, 99-103.

い , この領域に結合するタンパク質の同定を試みてお

β-D-galactofuranosyl disaccharides from Aspergillus sp.

２）Onoue, T., Tanaka, Y., Hagiwara, D., Ekino, K.,

Watanabe, A., Ohta, K., Kamei, K., Shibata, N.,

究目標を達成することができた . 現在 , 質量分析を行り , 前倒しで研究が進行中である .

Goto, M., Oka, T.（2018）. Identification of two

研究課題

fungal-type galactomannan α-core-mannan structure in

自然免疫応答が RNA サイレンシングによる遺伝子ネットワークを制御する機構の解析

mannosyltransferases contributing to biosynthesis of theAspergillus fumigatus. Sci Rep. 8, 16918.

研究課題’18－10’18－11

程久美子・高橋朋子（東京大学大学院理学系研究科）

Candida glabrata におけるマイトファジー関連
遺伝子ATG32 の転写活性化領域の同定
名木稔
梓（千葉大学真菌医学研究センター）

Identification of promotor regions of CgATG32
in Candida glabrata.
46

千葉大学

（千葉大学真菌医学研究センター）

Analysis of mechanism for regulating RNA
silencing-mediated gene expression network byinnate immune response（国立感染症研究所）

知花博治・佐藤美智代・髙橋

米山光俊・尾野本浩司

Kumiko Ui-Tei, Tomoko Takahashi（Graduate School of Science, The University of Tokyo）

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

Mitsutoshi Yoneyama, Koji Onomoto（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
Laboratory of genetics and physiology 2（LGP2） は , 細胞内へ侵入したウイルスを外来の RNA と区別して感知する細胞内ウイルスセンサータンパク質の一つであり ,ウイルスに対する初期応答システムとして重要な , 自然免疫において機能すると想定されてきた. しかし,
LGP2は下流因子へのシグナル伝達ドメインをもたない

F., Komori, C., Suzuki, Y., Yoneyama, M., Ui-Tei, K.

（2018）. LGP2 virus sensor regulates gene expression

network mediated by TRBP-bound microRNAs. Nucleic
Acids Res. 46, 9134-9147. （*same contribution）

研究課題’18－12

天然化合物ライブラリーを用いた抗真菌薬の開発研究

ことから , その機能は不明であった . 我々は , LGP2が五十嵐雅之

protein（TRBP）と相互作用し , RNA サイレンシング機

知花博治・佐藤美智代・髙橋RNA サイレンシング促進因子である TAR-RNA binding

構を制御することで , 生体防御機構において機能することを見い出した .

TRBP は RNA サイレンシングに関わる Dicer タンパク質と相互作用する二本鎖 RNA 結合タンパク質であるが , TRBP が二本鎖 RNA と結合する部位と同じ部位を介（微生物化学研究所第２生物活性研究部）

梓（千葉大学真菌医学研究センター）

Development of antifungal drugs from naturalchemical compound library

して LGP2と相互作用することが明らかになった . すな

Masayuki Igarashi

TRBP が 結 合していた microRNA（miRNA）を遊 離させ

Hiroji Chibana, Michiyo Sato, Azusa Takahashi

わち , LGP2は TRBP と相互作用することで , それまでる . TRBP と 結 合 し て い た miRNA を , TRBP を 用 い た

RNA 免 疫 沈 降 シ ー ク エ ン ス に よ り 同 定 し た と こ ろ ,（IMC, Lab. Head, Microbial Chemistry）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

TRBP は特徴的な二次構造を形成する miRNA と結合し研究成果離放出されることで , 前駆体 miRNA から成熟型 miRNA

報告となる . 本研究計画では , 微生物化学研究所が保有やすいことがわかった . これらの miRNA は TRBP から遊本共同研究は平成29年度より開始し , 今回２年度目のへの生合成が阻害される . そのため , これらの miRNAする放線菌や真菌由来の天然化合物ライブラリーを分与が増加することになる . このような発現増加する遺伝子性物質をスクリーニング , 得られた抗真菌活性物質につ群を特定すると , アポトーシスに関連する遺伝子群であ定することを目的としている . 平成29年度は , 1,000種類が制御する標的遺伝子は , LGP2の誘発によって , 発現群を情報科学的に推定し , 実際に発現が上昇した遺伝子

し , 千葉大学真菌医学研究センターにおいて , 抗真菌活

いてヒト培養細胞を用いた毒性試験と薬剤標的分子を同ることがわかった . すなわち , LGP2は , TRBP との相互の化合物のうち644種類について , 一次スクリーニングでう生体防御機構を制御しているウイルスセンサーである

出ポンプ制御因子欠損株）を用いて生育阻害活性を測定

作用を介して , ウイルス感染におけるアポトーシスといは , カンジダ・グラブラータの薬剤高感受性株（薬剤排した結果 , 140サンプルに生育阻害活性（IC50＜100µM）と考えられる .

発表論文
１）Takahashi, T., Nakano, Y., Onomoto, K., Yoneyama,
M., Ui-Tei, K.（2018）. Virus sensor RIG-I represses
RNA interference by interacting with TRBP throughLGP2 in mammalian cells. Genes（Basel）9, 511.
２）Takahashi, T*., Nakano, Y*., Onomoto, K., Murakami,

千葉大学が確認された . 二次スクリーニングでは , ８種類の病原性真菌について , 生育阻害活性を測定し , それぞれの菌種について生育阻害活性を測定し , 62サンプルを選抜した . 例えば興味深い物質の一つに , Aspergillus fumigatus にのみ活性を持たず , その他の真菌には高い活性を示すサンプルが含まれており , それは A. fumigatus が産生する

グリオトキシンであった . 平成30年度は , 1,000種類の化

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201947

合物のうち残る356サンプルの一次スクリーニングならびに二次スクリーニングを実施し , 41サンプルを選抜

し , 前年度分を合わせて103サンプルの抗真菌活性物質を見いだすことができた . それら103サンプルについて

RiPS 因子）は Fungi 界全体に広く多様に保存されていることが分かってきた . 本因子のカビの生存戦略における役割を知るため , 本研究では , 種俯瞰的かつ詳細なドラ

イ解析に基づく機能推定と , 機能発現している本因子の培養細胞を用いた呼吸阻害活性を測定し , 低毒性物質33

複数の手法による探索を行った .

標的分子同定作業と同工程に必要なサンプル量の調整をノム情報に対して , インハウスアルゴリズムを構築し本サンプルを抗真菌薬シーズ候補として選抜した . 現在 ,因子を探索したところ , ほぼ全ての株に存在し , 一株平進めている .

研究課題

公共データベース上で利用可能な857株の Fungi 界ゲ

均2.8個 , 合計2,423個検出された . 化合物の骨格構造と’18－13なる配列は1,500種類以上に分類され , その３割は酵母

病原性真菌が産生する新規分泌性ペプチドの生存戦略における機能解析

ら , 本因子が自身の特定の機能を持つ細胞の分化を誘導する可能性が示唆された .

本因子が他生物に対して機能する可能性を考え , ２種

梅村舞子
（産業技術総合研究所生物プロセス研究部門）

萩原大祐

類の本因子（rps1a および rps2a）を持つ A. fumigatus を他の２種類の糸状菌と共培養し , 本因子遺伝子発現量の変化を見たところ , rps1a では作用させる株に応じて発現量（筑波大学生命環境系）の増減が見られた . 一方 , ヒト肺上皮細胞への侵入性お豊留孝仁

よび免疫抑制マウスへの感染性において有意な作用を示（帯広畜産大学獣医学研究部門）

亀井克彦・渡辺

接合因子と相同性を持っていた . 周辺構造の解析等かした rps2a については , 十分な発現誘導が見られなかっ哲

たことから , rps1a と rps2a は異なる機能を有する可能性（千葉大学真菌医学研究センター）がある .

Survival strategy using secreted peptides in
infectious fungi
Maiko Umemura（Bioproduction Research Institute, National Institute ofAdvanced Industrial Science and Technology）

Daisuke Hagiwara

また本因子が真菌の病原性に作用する可能性を考え ,A. flavus 臨床分離株10株における本因子遺伝子７種類の保存を見たところ , １種類１株での例外を除き , 多少の欠損や繰返し回数の違いはあるものの , 全10株で保存されていた . うち１株において発現を確認したところ , ７

種類のうち５つは強く発現しており , 本因子の A. flavus

臨床株における重要性が示唆された . 今後 , 他の病原真菌に対象を広げ , 本因子のカビ生存戦略における機能を（Faculty of Life and Environmental Sciences, University

明らかにしていく予定である .

Takahito Toyotome

発表論文
１）Ye, Y., Ozaki, T., Umemura, M., Liu, C., Minami,A., Oikawa, H.（2018）. Heterologous production ofasperipin- 2 a: proposal for sequential oxidative
macrocyclization by a fungi-specific DUF3328 oxidase.
Org Biomol Chem. 17, 39-43.

of Tsukuba）（ Department of Veterinar y Medicine, O bihiro

University of Agriculture and Veterinary Medicine）

Katsuhiko Kamei, Akira Watanabe（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
我々が近年カビで初めて見出したリボソームペプチド
生合成経路は , 分泌性の環状ペプチドを生合成するもの

で , その化合物の骨格構造となる前駆体ペプチド（ust-

48

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻

2019

研究課題

’18－14

研究課題

真菌細胞壁成分の認識ならびに自然免疫惹起に関与する因子の探索’18－15

メタボローム解析による真菌類の薬剤耐性と産生成分の調査河合太郎

細江智夫・武田尚・若菜大悟（奈良先端科学技術大学院大学バイオサイエンス研（星薬科大学 薬化学教室）

矢口貴志

究科）

米山光俊

（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）

Search for innate immune receptors for thefungal cell wall component
Taro Kawai（ Graduate School of Science and Technology, Nara

Institute of Science and Technology）

Mitsutoshi Yoneyama（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
アレルギーや炎症を引き起こす真菌の構成成分キチン
に対する自然免疫応答について解析を行った . 植物のキチン受容体の一つとして知られる CERK1受容体のキチ
ン認識モチーフ Lysine motif（LysM）と相同性を示すヒト及びマウスの蛋白質をデータベース検索から６種類（LysM1-6とする）見つけ出した . そのうち４つは , 似たドメイン構造を有することからこれら４つに着目して解析を行った . ２種類（LysM2, 4）を欠損する二重欠損マ

ウスについてはキチン投与後の肺胞洗浄液中の免疫細胞（好中球 , 好酸球 , マクロファージ等）の集積や炎症関Cor relation between dr ug resistance andsecondary metabolites of fungi by metabolomics
Tomoo Hosoe, Hisashi Takeda, Daigo Wakana（Department of Organic chemistry, Hoshi University）

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
我々は , 薬剤耐性 Aspergillus fumigatus を , 化学成分の観点から感受性株と判別することが可能ではないかと考え ,その検討を試みている . これまでに , AMPH 耐性及び感受性 A. fumigatus を PDB 培地を用い , 25℃もしくは５％CO2 条件下37℃の２種の条件での培養を行い , その代謝産物の 1H-NMR スペクトルを用いメタボローム解析を行ったところ , 感受性株が特徴的に産生する芳香族化合物由来ピークから感受性株と耐性株の分類が可能と判断した . 本年度は , アゾール系抗真菌薬に耐性を有する

A. fumigatus の隠蔽種である A. udagawae 及び A. viridinutansの培養条件の検討を行った .

A. udagawae 及び A. viridinutans 各８菌株を PDB 培地及

連遺伝子（IL-6等）の発現については野生型と比べ有意び Czapek-Dox yeast extract（CDY）培地を2mL ずつ24 well

システムを用いたゲノム編集により , ４種類（LysM1-4）

および 21日間培養し , 得られた培養エキスの HPLC 分な差は認められなかった . また , 今年度は CRISPR/Cas9をすべて欠損するクワドロノックアウトマウスの樹立に成功した . 今後 , このマウス系統の繁殖 , 維持を行い ,キチン投与後の自然免疫応答を中心に解析を行う .

plate の各 well に分注し , 対象菌を植菌後 , ５, ８, 11, 14, 18
析を行った .

PDA, CDY 両培地とも培養１週間で十分な菌の発育が観測された . PDB 培地培養では培養期間８日で主要な産生成分が観測され , さらに培養日数を延長するに従い

産生成分量 , 種類の増加が観測され , 多くの菌株で培養期間14日間でほぼ定常状態に達していた . また , MIC が8μg/mL の耐性菌株では感受性菌株とくらべ , 今回の培養期間を通し産生成分が少ない傾向が見られた .

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201949

以上から , 十分な産生成分を観測するためには培養期・２次スクリーニング通過基準：４種の Aspergillus に対し

mL 以上の耐性菌株では感受性株と比較し明確に産生成

２次スクリーニング通過株の内 Hypomyces sp. FKI-9008

間14日間が必要であることが判明した . また , MIC8μg/

10μL, 50μL/disc で濃度依存的に生育阻害を示す

分が少ないため , 両者を化学成分の観点から分類できる

株 , Penicillium sp. FKI-9132株 , 未同定糸状菌 FKI-8979株

をさらに検討後 , メタボローム解析を行うことにより耐結果 , 新規化合物が１成分 , 既知化合物が４成分を活性可能性が強く示唆されたため , 今後培地種や培養条件等性株と感受性株を分類可能な成分の探索を試みる予定で物質として見出した .

また単離化合物ライブラリーについてもスクリーニン

ある .

研究課題

の計３株から活性物質の単離・構造解析を行った . そのグを実施した . 80化合物で評価した結果 , 10化合物が１次’18－16

スクリーニングを通過し , ５化合物が２次スクリーニン

Aspergillus fumigatus およびその関連菌を対象とした抗真菌薬シーズの探索

グを通過した . その内の１つが Trichoderma sp. FKI-6626
株が生産する新規 cytosporone 類縁体であった .

研究課題’18－17

野中健一

ITAM 共役受容体 Trem2 のカンジダ感染防御における役割の解明（北里大学北里生命科学研究所）

矢口貴志（千葉大学真菌医学研究センター）

原

Search for anti-fungal seeds against Aspergillus

fumigatus and related species

博満・豊永憲司（鹿児島大学大学院医歯学総合研究科）

西城

忍（千葉大学真菌医学研究センター）

Kenichi Nonaka（Kitasato Institute for Life Sciences, Kitasato University）

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
病原真菌である Aspergillus fumigatus およびその関連菌は薬剤感受性が異なるため , 診療の現場のみならず創薬においても正確な分類が求められる . そのため , 真菌医学

研究センター・バイオリソース管理室で確立された分類

Studies on the role of the ITAM-coupled receptor
Trem2 in anti-fungal defense
Hiromitsu Hara, Kenji Toyonaga（Kagoshima University Graduate School of Medical and

Dental Sciences）

Shinobu Saijo（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

本年度は , 陸上および海洋由来糸状菌600株を４種の研究成果
DAP12会合型 ITAM 共役受容体である Trem2のカンジ
ダ感染防御における役割を明らかにするため , Trem2–/–
マウスを用いた Candida albicans（SC5314株）感染試験を実施した . その結果 , 死亡率 , 感染臓器内菌数およびサ

ペーパーディスク法にて以下の通過基準で抗真菌活性物

らかな差は認められなかった . In vitro における検討で ,法により正確に分類された臨床分離 A. fumigatus およびその関連菌３種を対象に , 北里生命科学研究所・創薬グループが保有する糸状菌ライブラリーを用いて新たな抗真菌薬シード化合物の探索を目的とした .

培地で培養した糸状菌培養液2,400サンプルを利用し ,質の探索を行った .

・ １ 次 ス ク リ ー ニ ン グ 通 過 基 準：A. fumigatus に 対 し
10μL/disc で生育阻害を示す

50

千葉大学

イトカイン産生について野生型コントロールマウスと明Trem2欠損マクロファージは Dectin-2リガンド刺激後のサイトカイン産生は増強するが , Dectin-1リガンド刺激での応答は増強しないことから , Trem2は Dectin-2に依

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

存した真菌感染初期防御の制御に重要である可能性がある . これを明らかにするため , 次回は Dectin-1非依存カ

ンジダ株（ATCC18804）を用いた感染試験を行ってその役割を検討する予定である .

研究課題

Penicil lium 属 , Cutaneotrichos poron 属 , Trichos poron 属 ,Debaryomyces 属菌が , 肛門からは , Trichoderma 属 , Hypocrea

属 , Cladosporium 属 , Trichosporon 属 , Cutaneotrichosporon 属 ,Debaryomyces 属菌が分離された . これらの結果より , 消化管から分離される菌種に地域的バックグラウンドおよ’18－18び成貝・稚貝による差は認められず , 幅広い真菌種が生

長万部および寿都産ホタテガイより分離される真菌が産生する二次代謝産物の解析

息することが確認された .

研究課題’18－19

新規抗菌剤の体内動態及び薬理評価

清水公徳・原田啓樹・久保田雅大（東京理科大学基礎工学部）

知花博治・高橋梓

椎名（千葉大学真菌医学研究センター）

勇（東京理科大学理学部第一部応用化学科）

亀井克彦・石和田稔彦

Analysis of secondary metabolites produced by
the filamentous fungi isolated from the scallops
collected at Oshamanbe and Suttu
Kiminori Shimizu, Keijyu Harada, Masahiro Kubota（ Department of Biological Science and Technology,

Tokyo University of Science）

Hiroji Chibana, Azusa Takahashi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
共同研究初年度 , 岩手県のホタテガイ（成貝）および北海（千葉大学真菌医学研究センター）

Pharmacokinetics-phrarmacodynamics（ PK/PD）analysis of a newly developed antibicerial/
antimicrobial agent
Isamu Shiina（Department of Applied Chemistry, Faculty of Science,

Tokyo University of Science）

Katsuhiko Kamei, Naruhiko Ishiwada（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

道産のホタテガイ（成貝または稚貝）から中腸腺 , 腸管 , 肛門研究成果

を培養・分離した . 分離した菌の DNA 配列情報を取得し ,2016年に Eupenicillium shearii より単離・構造決定されたの３つの組織をそれぞれ取り出したのち培地に接種し , 真菌

東京理科大学理学部第一部応用化学科椎名研究室ではBLAST 解析により菌種同定を行った . その結果 , 岩手県産ホユーシェアリライド天然物（24員環マクロライド）の全

属 , Wickerhamomyces 属 , Pichia 属 , Ttichoderma 属菌が , 中腸

ユーシェアリライド類縁体（光学異性体およびジアステ

タテガイの腸管からは , Geotrichum 属 , Galactomyces 属 , Candida

合成方法を確立した . また , 独自の不斉合成技術により腺からは , Penicillium 属菌が , 肛門からは , Penicillium 属とレオマー）のライブラリーを構築している . また , 2017年

は , Penicillium 属 , Trichoderma 属 , Pichia 属菌が , 腸管からは ,然型のユーシェアリライド類縁体の合成にも取り組み ,C ystobasidium 属 , Pichia 属 , Debar yomyces 属 , Candida 属までの共同研究では , カンジダやクリプトコッカスなど

Wickerhamomyces 属菌が , 北海道産ホタテガイ（成貝）の中腸腺
Penicillium 属, Cladosporium 属, Trichoderma 属, Rhodotorula 属,

Rhodosporidium 属, Trichosporon 属菌が , 肛門からは, Penicillium

属 , Pichia 属 , Candida 属菌が , 北海道産ホタテガイ（稚貝）の中腸腺からは , Penicillium 属 , Pichia 属 , Debaryomyces 属 ,Cutaneotrichosporon 属 , Trichosporon 属 菌 が , 腸 管 か ら は ,千葉大学には置換基を天然のものから違えた構造に変換した非天数種類の人工化合物の製造を行なった . 2016-2017年度の真菌と MRSA などの多剤耐性グラム陽性菌に対するユーシェアリライド立体異性体（８種類）の薬剤感受性試験に加え , 上記非天然型ユーシェアリライドを用いた真菌と細菌に対する薬剤感受性試験を実施した . 2018年

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

51

度の共同研究では , 天然物よりも抗真菌活性と抗細菌活とにより , 細胞障害を誘導することが示唆された . 更

活性相関解析を実施した . また , 予備的な PK 試験を開とによりワクチン効果を減弱させることを見出した . 以

性ともに高い候補化合物を選定し , それを合成し , 構造
始し , マウス投与時の体内残留時間を観測した .

発表論文
１）Tonoi, T., Inohana, T., Sato, T., Yoshida, T., Shiina,
I.（2018）. Total Synthesis and Antimicrobial Activities
of All Stereoisomers of（16Z, 20E）-Eushearilide and（16 E, 20 E ）-Eushearilide. The Journal of Organic
Chemistry. 83（15）, 7886-7899.

研究課題’18－20に , SiiE はサルモネラ特異的な IgG 産生を低下させるこ
上より , サルモネラは記憶免疫応答を抑制することで持続感染を成立させる機構があることが強く示唆された .

サルモネラの持続感染では , 菌は臓器マクロファージ内で生存する . このマクロファージ内環境に応答すると , SiiE の発現が低下した . このことから , サルモネラ

は SiiE 以外にも記憶免疫応答を制御する因子を有すると考えられる . 現在 , サルモネラ Lon 欠損株以外のマウ

スに持続感染する弱毒株を用いて記憶免疫応答制御に関わる因子の同定と分子機構について研究を進めており ,更に , 持続感染を抑制する宿主因子についても検討してマウス感染時に起こる病原細菌遺伝子発現の
網羅的解析
高屋明子
（千葉大学・大学院薬学研究院）

後藤義幸・高橋弘喜・山本友子

いる .

発表論文
１）Männe, C., Takaya, A., Yamasaki, Y., Mursell, M.,
Hojyo, S., Wu, TY., Sarkander, J., McGrath, MA.,
Cornelis, R., Hahne, S., Cheng, Q., Kawamoto, T.,

Hiepe, F., Kaufmann, SHE., Yamamoto, T., Radbruch,（千葉大学真菌医学研究センター）

A., Tokoyoda, K.（2019）. Salmonella SiiE prevents an

Tr a n s c r i p t o m e a n a l y s i s o f S a l m o n e l l a
Typhimurium during infection of mouse
Akiko Takaya

efficient humoral immune memory by interfering with
IgG＋ plasma cell persistence in the bone marrow. Proc

Natl Acad Sci USA. 116（15）, 7425-7430.

２）Takaya, A., Takeda, H., Tashiro, S., Kawashima, H.,

Yamamoto, T.（2019）. Chaperone-mediated secretion（Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

switching from early to middle substrates in the type III

Yoshiyuki Goto, Hiroki Takahashi, Tomoko Yamamoto

island 2. J Biol Chem. 8 ; 294（10）, 3783-3793.

University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
細胞内寄生細菌であるサルモネラは宿主に長期間持続感染することがあるが , サルモネラの記憶免疫応答からsecretion system encoded by Salmonella pathogenicity３）Imamura, K., Takaya, A., Ishida, Y., Fukuoka, Y.,

Taya, T., Nakaki, R., Kakeda, M., Imamachi, N.,
Sato, A., Yamada, T., Mizutani, R., Akizumi, G.,

Tanu, T., Tao, K., Miyao, S., Suauki, Y., Nagahama,M., Yamamoto, T., Jensen, T., Akimitsu, N.（2018）.

の回避機構については未だ解明されていない . 我々が樹Diminished nuclear RNA decay upon Salmonella

り記憶免疫細胞動態を調べたところ , サルモネラによる

EMBO J. 37（13）.

立したサルモネラ Lon 欠損株持続感染マウスモデルによ骨髄 IgG 分泌プラズマ細胞を特異的に障害する機構を新

infection upregulates antibacterial noncoding RNAs.

たに見出した . サルモネラが分泌するタンパク質 SiiE はlaminin β1と高い相同性を有する領域をもち , この領域

が骨髄 IgG 分泌プラズマ細胞の integrin β1とストローマ

細胞上の laminin β1との相互作用を特異的に阻害するこ

52

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻

2019

研究課題

’18－21

評価に向けて準備を進めている .

未利用微生物を素材とした新しい抗真菌薬
シーズの探索研究課題’18－22

アスペルギルスのバイオフィルム形成および抗真菌薬耐性に関連する新規遺伝子群の探索

久保田高明（昭和薬科大学）

矢口貴志

梅山（千葉大学真菌医学研究センター）（国立感染症研究所）

隆・宮﨑義継高橋弘喜・亀井克彦

Search for new antifungal drug seeds fromunutilized microorganism
Takaaki Kubota（千葉大学真菌医学研究センター）

Screening of novel genes involved in biofilm
formation and antifungal resistance in Aspergillus
fumigatus（Showa Pharmaceutical University）

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
海綿動物からは多くの生物活性天然物が単離 , 構造決

定されており , それらをもとに新たな医薬品が開発されている . 近年 , メタゲノム解析により , これら生物活性

天然物の真の生産者は海綿動物に共生する難培養性微生物であることが明らかになってきている . 一方 , 微細藻類の一群である渦鞭毛藻は , 他の生物種からは得られな

い特異な化学構造のマクロリドを生産するにも関わらず ,医薬品シード化合物探索の素材としてあまり注目されていない . 今回 , 沖縄で採取した数種の海綿動物および渦鞭毛藻を対象に , 深在性真菌症の原因真菌に対して抗真Takashi Umeyama, Yoshitsugu Miyazaki（National Institute of Infectious Diseases）

Hiroki Takahashi, Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
深在性真菌症の中でも Aspergillus fumigatus を主要病原菌とするアスペルギルス症は増加傾向にあり , 予後が非

常に悪い . 近年 , アスペルギルスのバイオフィルム形成がアスペルギルス感染に関与することが示唆されている . 特にアスペルギローマの菌糸塊に見られる菌糸周囲には厚い細胞外マトリクスが観察されている . このようなバイオフィルムを形成する状態では , いくつかの抗真菌活性を示す新たな生物活性天然物の探索を行った .

菌薬に対する感受性が低下する現象が示され , 難治性のアルカロイドを , Theonella 属海綿から１個の新規ポリケチ

バイオフィルム形成 , および , それによる抗真菌薬耐性

その結果 , Amphimedon 属海綿から１個の新規ピリジン

ドを , Symbiodinium 属渦鞭毛藻から１個の新規マクロリド

原因の１つになっていると考えられる . しかしながら ,の詳細な分子メカニズムは不明な点が多い . 本研究でを , Stylissa 属海綿から１個の新規環状ペプチドを , Plakortis

は , バイオフィルム形成に関わる新規遺伝子を同定し ,毛藻から４個の新規ポリケチドを , Suberea 属海綿から２個る . 平成30年度では , Cas9/CRISPR ゲノム編集技術によら１個の新規ジテルペンアルカロイドを , Halichondria

開発した .

造決定した .

で応用し , 次世代シーケンサーと組み合わせた CRISPR

化合物の , 深在性真菌症原因真菌に対する抗真菌活性のに必須と予想される遺伝子の取得を試みていたが , 最終属海綿から１個の新規ポリケチドを , Amphidinium 属渦鞭の新規ブロモチロシンアルカロイドを , Agelas 属海綿か属海綿から１個の新規ステロイドを , それぞれ単離 , 構
現在 , これらの新規化合物および同時に得られた既知

千葉大学

抗真菌薬耐性との関連性を明らかにすることを目的とす
る変異導入の効率を上げるためのプラスミドベクターを昨年度まで , Cas9/CRISPR ゲノム編集技術を A. fumigatus

スクリーニングを行うことによって , 血清存在下の生育

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201953

的に望む遺伝子の取得には至らず , その理由な１つとして , 変異導入の効率が低いことが考えられた . そこで ,プラスミドベクターの改良を行い , 変異導入の高効率化を試みた . 従来のプラスミドベクターでは single-guided

RNA（sgRNA）を発現するためのプロモータとして出芽酵母の SNR52プロモータを使用していたが , sgRNA の発現量を上げるために , tRNA を sgRNA と融合させ , 転Keita Takeda, Junko Suzuki（ National Hospital Organization Tokyo National

Hospital）

Akira Watanabe, Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果

写後のプロセッシングにより sgRNA を生成させた . 分【目的】下気道検体による真菌培養で Aspergillus section

による色素の消失を指標として , 改良ベクターの変異導特徴を検討する .

生子の緑色の色素生産を担う pksP 遺伝子への変異導入

Nigri と形態学的に同定された症例の細菌学的 , 臨床的入効率を比較したところ , 従来のベクターでの8.3％に【対象と方法】2012年２月 – 2017年１月に東京病院で下気た . この結果から , sgRNA の発現量が , CRISPR/Cas9に症例）について Internal transcribed spacer 領域 , Domein1/

対し , 改良ベクターでは93％にまで飛躍的に向上していよる変異導入には必要であることが示唆された .

今後 , Cas9/CRISPR による変異導入の効率を上げた

プラスミドベクターを用いて , 新しく遺伝子ライブラリを作製し , CRISPR スクリーニング法を確立することに道検体から Aspergillus section Nigri が検出された44検体（43Domein2 領域 , β-tubulin 遺伝子を解析して菌種を同定し ,Clinical and Laboratory Standards Institute M38 3rd editionに準じてアゾール系抗真菌薬の薬剤感受性試験を行い ,臨床背景を検討した .

より , 血清刺激に応答するシグナル伝達機構の解明を目【結果】菌種同定では A. welwitschiae が50％を占め , 次いで発表論文
１）Umeyama, T., Hayashi, Y., Shimosaka, H., Inukai, T.,
Yamagoe, S., Takatsuka, S., Hoshino, Y., Nagi, M.,
Nakamura, S., Kamei, K., Ogawa, K., Miyazaki, Y.

のは A. tubingensis 70.6％, A. welwitschiae 4.5％で , いずれも指す .

A. tubingensis が38.6％, A. niger が9.1％, A. uvarum が2.3％であった . MIC が epidemiologic cutoﬀ values を超えていた
アゾール使用歴の影響は認めなかった . 全43症例の病型

は colonization が24例 , 慢性肺アスペルギルス症（CPA）

は17例 , アレルギー性気管支肺アスペルギルス症が２例（2018）. CRISPR/Cas9 genome editing to demonstrateであった . Colonization は A. welwitschiae が72.7％ , CPA は

resistance in Aspergillus fumigatus. Antimicrob Agents【結論】病型により Aspergillus section Nigri の菌種割合が

the contribution of Cyp 51 A Gly 138 Ser to azole
Chemother. 62（9）, e00894-18.

研究課題

異なることが示された . CPA でアゾール系抗真菌薬に多くが低感受性である A. tubingensis の割合が高いことは治’18－23

療選択に注意が必要であることを示唆している .

Aspergillus 呼吸器検体臨床分離株の菌種同定・
薬剤感受性の検討

研究課題’18－24

マウス細菌性肺炎モデルにおけるシベレス
タットとトロンボモジュリンによる炎症反応制御

武田啓太・鈴木純子（独立行政法人国立病院機構東京病院）

渡辺

A. tubingensis が58.8％と有意に多く検出された .

哲・亀井克彦渡邉栄三（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学大学院医学研究院総合医科学講座）

Species identification and antifungal
susceptibility of Aspergillus species from thelower respiratory tract
54

千葉大学

川口留以
（千葉大学大学院医学研究院救急集中治療医学）

真菌医学研究センター報告

第 23 巻

2019

研究課題

石和田稔彦

’18－25（千葉大学真菌医学研究センター）

Regulation of inflammator y response withsivelestat and thrombomodulin in murine
bacterial pneumonia model

千葉大学が保有するオリジナル化合物ライブ
ラリーを用いた抗真菌薬シーズの開発
荒井孝義（千葉大学大学院理学研究科）

知花博治・佐藤美智代・髙橋Eizo Watanabe（General Medical Science, Chiba University）

Rui Kawaguchi（Emergency and Critical Care Medicine, Chiba University）

Naruhiko Ishiwada（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
マウス肺炎球菌肺炎モデルにおけるリコンビナント・
トロンボモジュリン（rTM）の敗血症病態への効果を明らかにする目的で , マウスに肺炎球菌を気管内に注入し梓（千葉大学真菌医学研究センター）

Development of antifungal seeds from chemicalcompound library owned by Chiba University
Takayoshi Arai

（Graduate School of Science, Chiba University）

Hiroji Chibana, Michiyo Sato, Azusa Takahashi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

肺炎モデルを作成し検討を行った . 肺炎モデルマウスに

研究成果

rTM（10mg/kg BW）を腹腔内投与し , 菌液投与24時間

事項を制限し報告する .

き , 電子顕微鏡を用いて肺血管内皮細胞表面の glycocalyx

ち , 12サ ン プ ル に つ い て , Candida albicans, C. glabrara,

対し菌液（（血清型19A）2×10 CFU）投与３時間後に7後に犠死させたマウスにおいて , rTM 投与の有無につ

本研究課題は , 製薬企業の参画が生じたため情報開示
千 葉 大 学 が 保 有 す る 合 成 化 合 物620サ ン プ ル の う

layer の形態学的評価を行った . 肺組織に対しては , 硝酸

Cryptococuss neoformans, Aspergillus fumigatus に対する抗真菌

し , 脱水・樹脂包埋処置を経て作成した超薄切片を , 酢

ち５サンプルでは , HepG2（ヒト肝癌細胞）に対する毒

ランタン含有固定液による灌流固定後 , 浸漬固定を施

酸ウラニルで電子染色して観察した . その結果 , rTM 投与によって , 肺炎球菌肺炎の肺血管内皮細胞表面におけ活性（IC50<50µM）が認められた . それらサンプルのう性（IC50＞400µM）が確認されず , ４サンプルでは弱い毒性（IC50＝100-400µM）, ３サンプルで強い毒性が見る glycocalyx layer は , 非投与の個体よりも温存される傾られた（IC50＜80µM）. 標的分子迅速探索法によって標

い て , glycocalyx layer を 構 成 す る 糖 鎖 の ひ と つ で あ る

RNA ポリメラーゼ I とリボゾームタンパクを示唆する結向を認めた . 前年度までの結果から , 同肺炎モデルにお的分子を解析したところ , ２化合物については , 各々

Syndecan-1の血中濃度は , rTM 投与によって有意に低下果が得られた . それ以外の３化合物については , 標的分の裏付けが得られた . さらに , rTM 投与によって血清ド遺伝子が生育必須ではないか , あるいはタンパク質以および血球系細胞群の Flow Cytometry 解析では , rTM 投伝子群に対して過剰発現株を作製し , 耐性化を確認するを示していた . したがって , 同肺炎モデルに対する rTMては , ヒト遺伝子との相同性が高いため , 抗真菌薬候補

していることも判明しており , 今回形態学的にその現象

TNF, IL-10濃度はいずれも低下傾向であり , 肺血管内皮

与によって TNF 発現率は低下 , IL-10発現率は上昇傾向の抗炎症作用は , glycocalyx layer 障害の軽減にも寄与している可能性が示唆された .

千葉大学

子を示唆する結果が得られなかった可能性として , コー

外の分子であることが考えられる . 今後 , 標的候補の遺ことにより標的を検証する . RNA ポリメラーゼ I についとして適していないが , リボゾームタンパクは相同性が低く , 抗真菌薬シーズ候補として敵合する可能性がある .

真菌医学研究センター報告

第 23 巻

2019

55

研究課題

’18－26

児における肺炎球菌・インフルエンザ菌 b 型の免疫原性

小児無脾症患者における肺炎球菌血清型特異IgG 抗体・オプソニン活性 , インフルエンザ菌
b 型特異抗体価保有状況に関する検討
星野を研究することで , これらの児におけるワクチン接種の必要性を検討していく .

研究課題’18－27

基礎疾患のある小児患者における侵襲性肺炎
球菌感染症予防法の評価

直（千葉県こども病院感染症科）

竹下健一（千葉大学大学院医学研究院小児病態学）

宮入烈

石和田稔彦・竹内典子（国立成育医療研究センター感染症科）（千葉大学真菌医学研究センター）

石和田稔彦・竹内典子（千葉大学真菌医学研究センター）

The analysis of serotype specific IgG antibody,opsophagocytic activity of Stre ptococcus pneumoniae
and anti polyribosyl ribitol phosphate antibody
of Haemophilus influenzae among children withasplenia
Tadashi Hoshino（ Division of Infectious Diseases, Chiba Children ’ s

Hospital）

Kenichi Takeshika（Department of Pediatrics, Chiba University Graduate

School of Medicine）

Naruhiko Ishiwada, Noriko Takeuchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果

Evaluation of Preventable Measures Against
Invasive Pneumococcal Disease in Children with
Underlying Disease
Isao Miyairi（Division of Infectious Diseases, National Center forChild Health and Development）

Naruhiko Ishiwada, Noriko Takeuchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
肺炎球菌結合型ワクチン（PCV）の定期接種化以降 ,PCV13非 含 有 血 清 型 の 肺 炎 球 菌 に よ る 感 染 症 の 増 加（serotype replacement）が問題となっている . 本年度は侵襲性肺炎球菌感染症４例の分離株について解析を加え2016年２月から2017年４月の期間に千葉県こども病院
外来通院中の小児無脾症患者18名について , 肺炎球菌血清型特異 IgG 抗体を ELISA 法で測定した . 13価肺炎球菌

た . ３例に基礎疾患が有り , 全例に肺炎球菌ワクチン接種歴があったものの , ワクチン非含有血清型の肺炎球菌による感染症を発症し , 現行の予防方法では不十分であ結合型ワクチン（PCV13）に含まれる６血清型（1, 3, 5, 6A,る事が確認された .

小児の過去報告より有意に低値であることがわかった .

10A sequence type（ST）11189のペニシリン耐性肺炎球菌

7F, 19A）中 , ４血清型で対象者の幾何平均抗体価が健常

基礎疾患のない１例は , 国内では報告のない血清型

23価肺炎球菌莢膜多糖体ワクチンを１回接種し , PCV13（PRSP）による髄膜炎例であった . 生来健康な女児で型で有意に低値であり , PPSV 単回接種では長期的な抗イルスに感染し , 症状の改善がないため医療機関を複数が未接種である児に限定すると , ６血清型のうち５血清PCV13は４回接種済みであった . １歳５か月時に RS ウ

体維持ができない可能性が示唆された . インフルエンザ回受診したのちに , 血液検査で汎血球減少 , CRP 高値 ,低下は認めなかった . 肺炎球菌に関しては , 現在 , 血清液培養から , ペニシリン G の MIC ＝4µg/mL の PRSP が菌 b 型特異抗体に関しては , 健常小児と比較して有意な型特異オプソニン活性の測定を試みている . ハイリスク

56

千葉大学

髄液検査では細胞数上昇と髄液糖低下を認め , 血液・髄分離された . セフォタキシム , バンコマイシンで加療を

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

開始したが , 患者はその後に硬膜下膿瘍 , 脳実質の複数菌は70株分離され , 莢膜型は全て13価肺炎球菌ワクチンの微小膿瘍を来し , 複数回の穿頭ドレナージを要するな（PCV13）非含有株であった . 莢膜型別でみると , 15A がリン結合蛋白（PBP1A, 2X, 2B）に変異を認めていた .

５株 , 15B と21が各４株 , 10A が２株 , 11A と22F が各１株

PCV13導入後 , serotype replacement により分離数が増加,
いては , PCG MIC ≦0.06μg/ml の PSSP 株は57.1％（40/70）

ど , 治療に難渋した . 後に行った菌株解析では , ペニシ

10A 型は PCV13に含まれない血清型であり , 本邦でもしているが , MLST 解析では ST11189と国内ではこれまでに報告のない株であった . 10A 型は通常ペニシリン G

15株 , 23B が９株 , 34と23A が各７株 , 15C が６株 , 35B がであった . 無莢膜株は８株分離された . 薬剤感受性につMIC 0.12〜1μg/ml の PISP 株は35.7％（25/70）, MIC 2μg/

ml ≦の PRSP 株は7.1％（5/70）であった . PRSP 株は莢膜に対する MIC は低い株が多く , 肺炎球菌の β- ラクタム

型15A と無莢膜株であった . また , これまで継続した保であるものが主であるとされていたが , 今回は３つのすと同定された株について , MLST 解析 , 一部の無莢膜株

渋した要因の一つであった可能性がある . 今後の検出動

イオフィルム産生能 , 薬剤耐性遺伝子保有状況については , 学会発表 , 論文作成を検討中である .

膜株は , 多様性はあるものの , 全て pspK 遺伝子を有して研究課題

園児間の水平伝播が示唆された . また , 無莢膜株は莢膜系薬耐性に重要な PBP に関しても , １〜２か所の変異
べてに変異を認める gPRSP であったことが , 治療に難向に注意が必要であると考えられた . 本症例に関して

菌調査から cpsA 遺伝子（莢膜多糖体）を有さず無莢膜株が持つとされる表面蛋白である pspK 遺伝子の有無 , バ
検討したところ , 保育園児から分離された肺炎球菌無莢

おり , 同一の保育園で同じ ST 型が分離されたことから ,’18－28

保育園児から分離される肺炎球菌株の病原性解析
和田紀之

株と比較し , バイオフィルム産生能が高く , 薬剤耐性遺伝子を保有する株が多いことから , 今後呼吸器感染症の原因菌としての重要性が増すことが懸念される .

発表論文
１）Takeuchi, N., Ohkusu, M., Wada, N., Kurosawa, S.,
Miyabe, A., Yamaguchi, M., Moon, H., Nahm, MH.,
Ishiwada, N.（2019）. Molecular typing, antibiotic（和田小児科医院）

黒澤サト子（くろさわ子ども＆内科クリニック）

石和田稔彦・竹内典子・大楠美佐子

susceptibility, and biofilm production in nonencapsulated（千葉大学真菌医学研究センター）

Streptococcus pneumoniae isolated from children in Japan.

Pathogenesis of Streptococcus pneumoniae isolated

from children in nursery school

J Infect Chemother. 25（10）, 750-757.

研究課題’18－29Aspergillus fumigatus 関連種の日本国内における分布の実態解明

Noriyuki Wada

（Wada Shounikaiin）

Satoko Kurosawa（Kurosawa Kodomo & Naika Clinic）

廣瀬（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

矢口貴志

Naruhiko Ishiwada, Noriko Takeuchi, Misako Ohkusu

大（日本大学薬学部）（千葉大学真菌医学研究センター）

研究成果
2018年度 , 都内の保育園４施設に入園した０〜１歳児に対して上咽頭の保菌調査を行い , 分離された肺炎球菌株の莢膜血清型解析と薬剤感受性測定を行った . 肺炎球

千葉大学

Investigation of distribution on the related
species of Aspergillus fumigatus in Japan

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201957

Dai Hirose

養温度： 35℃, 培養期間： 7⊖10日間）により行った . 各（School of Pharmacy, Nihon University）

分離菌株について形態観察およびカルモジュリン遺伝子

Takashi Yaguchi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
本年度は伊豆諸島三宅島の自然環境中における Aspergillus

fumigatus 関連種の種多様性と種の分布特性を明らかにした . 三宅島は限られた面積の中に異なる乾生遷移段階がみられることから , 2018年６月に本島の異なる遷移段階の部分塩基配列に基づき種同定を行い , 各地点における各菌種の出現頻度を算出した . それらの結果 , ４種

（A. pseudoviridinutans, A. parafelis, A. felis, A. udagawae）の分布が確認された . ４種のうち A. pseudoviridinutans 以外の 種 の 出 現 地 点 数 や 出 現 頻 度 は 非 常 に 低 か っ た . A.

pseudoviridinutans の出現頻度は , 遷移後期の森林よりも遷移初期の裸地や荒原において著しく高かった . この分布特性は森林で出現率の高い A. fumigatus と対照的である .

を含む11地点において土壌を採取した . 各地点では５m

昨年度調査した神津島では A. felis の出現頻度が荒原にお実験室に持ち帰った . 土壌試料からの Aspergillus 属菌のfelis を含む A. viridinutans complex の自然環境における分以上の間隔で15もしくは16試料（合計167試料）採取し ,分離培養は , 滅菌トウモロコシ粒を用いたベイト法（培

58

千葉大学

いて著しく高かったことから , A. pseudoviridinutans や A.
布の中心は遷移初期の裸地や荒原であると推測された .

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

感染症研究グローバルネットワークフォーラム2018
The 7th Global Network Forum on Infection and Immunity
共催：国立感染症研究所 , 千葉大学真菌医学研究セン【午前の部】

千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディン

徳久剛史（千葉大学学長）

ター共同利用・共同研究拠点「真菌感染症研究拠点」,

グ研究育成プログラム「“ 超個体 ” の統合的理解に基づく

次世代型「感染制御学」研究推進拠点」【開会の挨拶】

座長：知花博治（千葉大学真菌医学研究センター）【Poster Session】

１．橋本大吾（北海道大学大学院）

日時：平成30年11月30日

14：30〜16：30

場所：千葉大学医学部附属病院３階【Oral Presentation】

日時：平成30年12月１日

セミナー室３“Crosstalk between microbiota and host immune systemaffects the outcomes of hematopoietic stem celltransplantation”

２．Alistair J. P. Brown（University of Aberdeen, UK）

９：00〜16：15

場所：千葉大学医学部附属病院３階

ガーネットホール“ Adaptation to specific host signals triggers immune

evasion in Candida albicans, a major fungal pathogen ofhumans”

世話人：

座長：高橋弘喜

宮﨑義継（国立感染症研究所真菌部）
坪井良治（東京医科大学皮膚科学教室）（千葉大学真菌医学研究センター）

倉島篤行（複十字病院呼吸器センター）

３．Matthew C. Fisher（Imperial College, UK）

亀井克彦・西城忍・渡邉哲・知花博治・矢口貴志・

石和田稔彦・高橋弘喜・米山光俊（千葉大学真菌医学研“ Emergence of antifungal resistance – challenges tohuman health”

４．Ruoyu Li（Peking University, China）

究センター）“CARD9 deficiency and dematiaceous fungal infections”

研究成果「千葉大学感染症研究ネットワーク」は感染症研究の【午後の部】

ネットワーク構築を目指し , 当センターが中心となって

座長：西城

回目を迎えることとなった . 本年度は , 国立感染症研究

５．Maria Luiza Moretti（University of Campinas, Brazil）

心とした国内外の著名な研究者を招聘しすべての講演を

６．Mihai G. Netea（Radboud University Medical Center,平成24年度から開始された会であり , 平成30年度で第７所の宮﨑義継先生に世話人をお願いし , 真菌症研究を中英語で実施するという「国際フォーラム」として開催した . また , 新たな取り組みとして , 前日に若手研究者を中心とするポスターセッションを開催した .

初日はポスター57題の発表が , 二日目は招待講演12題

忍（千葉大学真菌医学研究センター）“Neglected endemic mycoses in Brazil”

the Netherlands）“Functional genomics identification of novel pathways ofhuman antifungal immune responses”（日本 , ブラジル , 中国 , 英国 , オランダ）の発表が行わ

座長：渡邉

通じて新しい国際ネットワーク形成を目指した有意義な７．萩原大祐（筑波大学）

れた . 二日間で延べ239人の参加があり , 活発な議論を意見交換が行われた .

哲（千葉大学真菌医学研究センター）“Discovery of a novel regulator of azole drug response in千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201959Aspergillus fumigatus”

11．豊留孝仁（帯広畜産大学）“Roles of Dectin-1 in allergic airway inflammation”

12．上野圭吾（国立感染症研究所）

８．廣瀬晃一（国際医療福祉大学病院）
９．宮崎泰可（長崎大学大学院）“Translational research on invasive candidiasis”
座長：亀井克彦（千葉大学真菌医学研究センター）“Biofilm formation by Aspergillus fumigatus”“A dendritic cell-based systemic vaccine induces long-

lived lung-resident memory Th17 cells and ameliorates
pulmonary cryptococcosis”【閉会の挨拶】

10．清水公徳（東京理科大学）

宮﨑義継（国立感染症研究所）“Involvement of PMT2 gene of the human pathogen

Cryptococcus neoformans in fungal taxonomy”

60

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

2019年講演会
2019 Scientific Meetings & Seminars
The 8th Global Network Forum on Infection and Immunity
Poster Session

日時：令和２年１月10日

Oral Presentation

日時：令和２年１月11日「Multi layered symbiotic system in the termite gut」
松木隆広（ヤクルト中央研究所）

14：30〜16：30

場所：千葉大学医学部附属病院３階

本郷裕一（東京工業大学）

セミナー室３「 Key genetic factors for human milk oligosaccharides

utilization aﬀect infant gut microbiota development」

９：50〜17：15

場所：千葉大学医学部附属病院３階

ガーネットホール「東京大学医科学研究所─千葉大学真菌医学研究セン
ター

国際共同利用・共同【特別講演】

合同成果報告会」

Elaine Y. Hsiao（UCLA, USA）

日時：平成31年３月５日「Host microbiome interactions through the gut serotonergic

system」

研究拠点事業

場所：東京大学医科学研究所

２号館２階

平成30年度大講義室【午後の部】

大野博司（理化学研究所）【特別講演】「Gut microbiota and host diseases, especially autoimmune

新藏礼子（東京大学定量生命科学研究所）

diseases」「腸管 IgA 抗体による腸内細菌制御機構の解析」

Noah Palm（Yale University, USA）

【合同成果報告会】「 Illuminating the ‘ dark matter ’ of the gut microbiota《千葉大学真菌医学研究センター成果報告》

Andreas Diefenbach（Charite-Berlin University of Medicine,「迅速・簡便なアゾール耐性 Aspergillus fumigatus 検出法のmetabolome」

豊留孝仁（帯広畜産大学）

Germany）「 Microbiota induced tonic type I interferons instruct atranscriptional, epigenetic and metabolic program thatdefines the basal state of conventional dendritic cells」

Jakob von Moltke（University of Washington, USA）

「Intestinal tuft cells : Sentinels and effectors of the type 2

immune response」

開発」

田中

大（東北医科薬科大学）「Candida glabrata 遺伝子変異株コレクションを用いた真菌細胞壁保全機構の解析」

細江智夫（星薬科大学）「メタボローム解析による真菌類の薬剤耐性と産生成分の調査研究」

佐々木伸雄（慶應義塾大学）「 The study of epithelial crosstalk at the host microbes

interface using organoid」

千葉大学

竹下健一（千葉大学）「小児無脾症患者における肺炎球菌抗体価に関する研究」

真菌医学研究センター報告

第 23 巻201961

《感染症・免疫共同研究領域》「真菌医学研究センター市民向け公開セミナー」

高村祥子（愛知医科大学）

日時：令和元年６月４日「MD-1による脂質シグナル制御機構の解明」

場所：ペリエホール（ペリエ千葉７階）

岡野

石和田稔彦（真菌医学研究センター 准教授）

翼（東京医科歯科大学）

13：55〜16：30「iPS 細胞を用いた顆粒球・単球・樹状細胞系細胞の分化・「おとなに必要な予防接種のお話」

一戸猛志（東京大学医科学研究所）「身の回りのカビの危険性とその防ぎ方」

機能探索に関する研究」

矢口貴志（真菌医学研究センター 准教授）
「ウイルス感染による NLRP3 inflammasome の制御」
森田英明（国立成育医療研究センター）

山口正視（千葉大学 グランドフェロー）「深海微生物と真核生物の起源」「二本鎖 RNA に対する胎盤免疫応答機構の解明」
平石尚久（東京大学）「真菌医学研究センター セミナー」「肺線維症における IL-33, IL-25, TSLP の機能解析」

日時：令和元年11月19日

16：00〜17：00

場所：千葉大学真菌医学研究センター
山﨑

大会議室

晶（大阪大学微生物病研究所 教授 , 千葉大学真菌

医学研究センター客員教授）「Bacterial lipids promote deleterious inflammation throughC-type lectin receptors」

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千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 23 巻2019

令和 2 年 6 月発行
発行者

June 2020

千葉大学真菌医学研究センター
センター長

笹川

〒260-8673

千葉市中央区亥鼻 1－8－1

電話千尋

043－222－7171（代表）

Published by

Chihiro Sasakawa, Ph.D.

Director, Medical Mycology Research Center
Chiba University

1-8-1 Inohana, Chuo-ku, Chiba 260-8673, Japan

TEL: 81-43-222-7171
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