ISSN 1347−6920

MMRC
ANNUAL REPORT OF MEDICAL MYCOLOGYRESEARCH CENTER, CHIBA UNIVERSITY 2016
千葉大学 真菌医学研究センター

20

平成28年

報告

目

次

Content

はじめに Preface

感染免疫分野 米山教授 感染応答プロジェクト

Project for Immune Response in Infections Diseases

3

Project for Cytokine Research

5

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis

7

Project for Bacterial Infection Immunology

9Canjida glabrata Phenome Project11

Project to Link Basic Sciences and Clinical Medicine

14

Project for Host Response Network of Bacterial Infection

18

Project for Infection Control and Prevention

22

感染免疫分野 西城准教授 サイトカインプロジェクト
感染免疫分野 後藤准教授 微生物・免疫制御プロジェクト

感染免疫分野 芦田特任准教授 細菌感染免疫プロジェクト

病原機能分野 知花准教授 カンジダ・グラブラーダ・フェノームプロジェクト
臨床感染症分野 亀井教授 臨床感染症プロジェクト
臨床感染症分野 山本特任教授 感染宿主応答ネットワークプロジェクト
感染症制御分野 石和田准教授 感染症制御プロジェクト

RNA 感染治療学分野 伊庭特任教授 RNA 制御プロジェクト
Project for RNA regulation

28

微生物資源分野 五ノ井教授 真菌・放線菌と宿主の分子相互作用研究プロジェクト
Project for Host Pathogen（fungi/actinomycetes）Molecular Interaction
31
微生物資源分野 高橋准教授 微生物創生プロジェクト

Project for Systems Biology of Microorganisms

36

Management of Unit of Microbiological Resources

38

Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology
National BioResource Project Pathogenic Microorganisms

41

Cooperative Research of Priority Areas with NEKKEN, Nagasaki University

42

The Project for Prophylaxis, Diagnosis, and Treatment for
Aspergillosis and the Other Mycoses in Aged and Neonate Patients

43

微生物資源分野 矢口室長 バイオリソース管理室
文部科学省 ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原微生物」

長崎大学熱帯医学研究拠点特定領域共同研究

高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発プロジェクト

AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）
AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for
Sustainable Development（SATREPS）

45

千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラム『 超個体 の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点』

Leading Research Promotion Program, Institute for Global Prominent Research『Advancced Research of Infection and Immunity Based on
Integrative Understanding of Host-Microbe Interactions』

平成27年度 共同利用・共同研究報告2015 Fiscal Year Cooperative Research Program Report

感染症研究グローバルネットワークフォーラム2015
The 4th Global Network Forum on Infection and Immunity
2016年講演会
2016 Scientific Meeteing & Seminars

47
48
67
69

は

じ

め

に

我が国では超高齢社会の到来により , 癌や高度医療に伴う日和見感染症に加え , 生活習慣病や呼吸器病の増大とそれに伴う難治性真菌症も増加し , 近年真菌感染症の脅威は , 社会に広くクローズアップされてきました . ま
た多剤耐性真菌や多剤耐性細菌の増加と拡散は , 医療現場においても益々大きな脅威となっています . さらに経済のグローバリゼーションと国際旅客数の増加により , 高度病原真菌をはじめとするさまざまな病原微生物による輸入感染症の脅威にも直面しています . このような状況の中で , 本センターは , 我が国唯一の公的な真菌症の研究・教育機関として , また千葉大学においては , 感染症・免疫・病原体の研究プラットホームとして , その使命は以前にも増して重要になっています . 本センターは , 病原真菌による感染症研究の共同利用・共同研究拠点として文部科学大臣による認定を受け , 平成22年より , 大学 , 国公立研究機関 , 千葉大学関係部局 , 医療機関 , 企
業と緊密に連携して , 共同利用 , 共同研究 , 教育活動を積極的に行ってきました . 同時に本センターでは , 文部科学省によるナショナルバイオリソースプロジェクトにおける「病原微生物」の中核拠点として , 病原真菌・放線菌の収集・保存・分与を行うとともに , 薬剤耐性遺伝子 , 病原性遺伝子をはじめとする真菌のゲノム情報解析を行っています . さらにこれらの事業と平行して , 独立研究グループリーダー制（PI 制度；Principal Investigator）による基盤研究 , 臨床研究 , 創薬研究を推進しています . 平成26年10月には附属病院において我が国初の真菌症専門外来を開設し , また平成28年度からは , 新規抗真菌薬の標的とシーズ化合物の探索研究や , 千葉大学グローバ

ルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラムに採択された本センター教員を中心にした研究グ
ループにより , 真菌を含めた微生物叢と宿主免疫の相互作用の研究も開始されました . したがって本センターでは , 「共同利用・共同研究 , バイオリソース拠点事業」, 「感染症・免疫基盤研究」, 「臨床・創薬研究」の三つを柱として , 今後も我が国の真菌医学の発展に先導的な役割を果たす所存です .

平 成 29 年 １ 月
千葉大学真菌医学研究センター長

笹

川

千

尋

Preface
The advent of a ‘super-aging’ society in Japan has led to an increasing number of people with opportunistic

infections, concomitant with cancer and the need for advanced medical care. In addition, increases in the incidenceof lifestyle and respiratory diseases have led to similar increases in intractable mycosis. Consequently, the threat offungal infections has attracted a great deal of attention in recent years. Moreover, the proliferation of multi-drugresistant fungi and bacteria represents a dire threat in clinical settings. We are also faced with dramatic increases inworldwide trade and international travel, which has increased the risk of importing infectious diseases via transport ofpathological microorganisms, including highly pathogenic fungi. The Medical Mycology Research Center（MMRC）

at Chiba University is the only public research and educational institution in Japan devoted to fungal diseases, and has
become an increasingly important platform for research on infectious diseases, immunity, and pathogens. MMRC

has been recognized by the Minister of Education, Culture, Sports, Science and Technology as a Joint Usage /Research Center. Accordingly, since 2010, MMRC has been actively engaged in medical mycology research andrelated educational activities through partnerships with universities, public institutions, medical institutions, andpharmaceutical companies. MMRC also serves as a key institution in the National BioResource Project（NBRP）
recognized by the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology, and is involved in a number ofactivities including the collection, preservation, and distribution of pathogenic fungi and Actinomycetales, as well as

fungal genome analysis aimed at investigating drug-resistance and virulence genes. In parallel, MMRC continues tosupport basic, clinical, and drug-development research through a principal investigator system. A specialty outpatient

facility for fungal infections was opened at the Chiba University Hospital in October 2014. Additionally, in 2016,

MMRC began exploratory research aimed at identifying seed compounds and novel antifungal agents, as well asinteractions between microbial flora and host immunity, with research groups selected by the Institute for Global

Prominent Research and the Leading Research Promotion Program. We envision MMRC as the leading institution

for scientific research excellence in microbiology, immunology, and clinical and drug-development research, as well asa joint-use, collaborative, bioresource center, with the ultimate goal of advancing the field of medical mycology.
January, 2017

Chihiro Sasakawa
Director of MMRC

米山教授

感染応答プロジェクト

Project for Immune Response in Infections Diseases
研究概要（Summary）

感染に対する生体防御は , 自然免疫と獲得免疫によって協調して行われている . 本プロジェクトでは , ウイルス感染に応答した自然免疫誘導に注目し , 感染センサーRIG-I-like 受容体（RLR）によるウ
イルス由来の非自己 RNA 検知の分子機構の解明と , それによって引き起こされる免疫応答の生理機能を解析することにより , ウイルス感染症に対する新たな治療戦略の開発を目指した解析を行っている .

Innate immune system plays an essential role for self-defense against infection of a variety of pathogens. In
this project, we focus on antiviral innate immunity, especially molecular machinery for detection of viral RNA
by retinoic acid-inducible gene I（RIG-I）-like receptors（RLRs）and the subsequent immune responses. The
results obtained from the studies will help us to establish a novel therapeutic or preventive strategy against
RNA virus-induced infectious diseases.
教

授

助

教

米山 光俊
尾野本浩司
滝澤香代子
常喜 儒彦
滝沢みゆき

非常勤技術職員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

Professor

Assistant Professor

Adjunct Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Leader-containing uncapped viral transcript activates

RIG-I in antiviral stress granules
1

2

2, 3

Seong-Wook Oh , Koji Onomoto , Mai Wakimoto ,Kazuhide Onoguchi 4, Fumiyoshi Ishidate 5, 6, Takahiro
Fujiwara6, Mitsutoshi Yoneyama2, Hiroki Kato1, 3 and Takashi

Fujita1, 3
1

2

3

Laboratory of Molecular Genetics, Institute for Virus
Research, Kyoto University, Kyoto, Japan

Kyoto, Japan

RIG-I triggers antiviral responses by recognizing viralRNA（ vRNA ）in the cytoplasm. However, the spatio-

temporal dynamics of vRNA sensing and signal transduction

remain elusive. We investigated the time course of eventsin cells infected with Newcastle disease virus（NDV）, a

non-segmented negative-strand RNA virus. RIG-I was

recruited to viral replication complexes（vRC）and triggered

Laboratory of Molecular and Cellular Immunology,

subsequently localized to antiviral stress granules（avSG）

Japan

attenuated secondary IFN production, suggesting avSG as

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Department of Microbiology and Immunology, Universityof California, San Francisco, California, United States of5

Center for Meso-Bio Single-Molecule Imaging, Institutefor Integrated Cell-Material Sciences, Kyoto University,

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

Graduate School of Biostudies, Kyoto University, Kyoto,

4

6

Mitsutoshi Yoneyama
Koji Onomoto
Kayoko Takizawa
Michihiko Jogi
Miyuki Takizawa

America

Carl Zeiss MicroImaging Co., Ltd., Tokyo, Japan

千葉大学

minimal primary type I interferon（IFN）production. RIG-I

induced after vRC formation. The inhibition of avSG
a platform for efficient vRNA detection. avSG selectively

captured positive-strand vRNA, and pol derived from read-through transcription was sensed by RIG-I in avSG. These
results highlight how viral infections stimulate host stress

真菌医学研究センター報告

第 20 巻20163

responses, thereby selectively recruiting uncapped vRNA to

avSG, in which RIG-I and other components cooperate in an

activate RIG-I in vitro. As a model RNP, we preparedartificial influenza A virus（IAV）RNP generated in 293T cells

efficient antiviral program.

and confirmed that the artificial RNP forms a horseshoe-like

2. Functional analysis of RNA binding proteins（RBPs）,

previous report. Our data indicated that IAV RNP can activate

which are responsible for induction of anti-viral innate

immunity via RNA-granule formation

Koji Onomoto, Takaaki Ito, Marie Ban, Eri Miyamoto andstructure using the atomic force microscope, as reported in therecombinant RIG-I（rRIG-I）-mediated antiviral signalingin our assay system. However, we failed to observe directinteraction between viral RNP and rRIG-I by density gradientcentrifugation analysis, suggesting possible requirement of

Mitsutoshi Yoneyama

additional molecule（s）for the interaction between them. This

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

Scientific Research（B）（26293101）and Grant-in-Aid for

We demonstrated that viral infection induces RIG-I to

4. Functional analysis of RLR-mediated signal transduction

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

accumulate in cytoplasmic granular-like structure, avSG. We

work was supported by JSPS KAKENHI, Grant-in-Aid for

Challenging Exploratory Research（16K15279）.

further revealed that avSG plays a critical role as platform

Koji Onomoto, Koutaro Okita and Mitsutoshi Yoneyama

understand the molecular machinery for avSG formation,

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

for initiation of RIG-I-mediated antiviral signaling. To

we identified several RBPs that are associated with RIG-I invirus-infected cells, and examined their function in antiviral

immune responses. As a result, we found out that several

RBPs play an important role for regulation of both RIG-I-

mediated signal activation and avSG formation. This work

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

RLRs are viral RNA sensors to initiate antiviral innate

immunity, including gene activation of type I and III IFNs.

To understand RLR-mediated signaling, we established thewas supported by MEXT KAKENHI, Grant-in-Aid for

artificial RLR activation system that is based on chemically-

JSPS KAKENHI, Grant-in-Aid for Young Scientist（B）

RIG-I（ARIAD Pharmaceuticals）. This system can deliver

Scientific Research on Innovative Areas（15H01252）and（26293101）.

3. Recognition of viral ribonucleoprotein complex（RNP）

by RIG-I

Michihiko Jogi, Chiaki Sakuma and Mitsutoshi Yoneyama
Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

induced oligomerization of caspase recruitment domain of

RLR-mediated signaling into the cells without viral infection.
The recent data indicated that the RLR-mediated signaling

induces both cell death and growth inhibition to the cells. We
try to reveal the molecular machinery underlying these RLRinduced cellular responses.
Publications

１）Oh SW, Onomoto K, Wakimoto M, Onoguchi K,

Ishidate F, Fujiwara T, Yoneyama M, Kato H, Fujita

T: Leader-containing uncapped viral transcript activates

It has remained unc lear how RIG-I detects viral

RIG-I in antiviral stress granules. PLoS Pathog, 12:

genomic RNA and viral proteins, in the virus-infected

２）Yoneyama M, Jogi M, Onomoto K: Regulation of

for RIG-I activation and examined whether viral RNP can

RNA granules. J Biochem, 159: 279-286, 2016.

ribonucleoprotein complex（RNP）, which consists of viralcells. Recently, we established in vitro reconstitution system

4

千葉大学

e1005444, 2016.

antiviral innate immune signaling by stress-induced

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

西城准教授サイトカインプロジェクト

Project for Cytokine Research
研究概要（Summary）

生体は , 多種多様な細胞や組織が互いに時空的に作用することにより恒常性が維持される一つシス
テムであり , その維持においてサイトカインは中心的な役割を担っている . 多くの疾病は単に一つの臓器 , 組織の異常ではなく , 免疫系を始めとする種々のシステムの異常であることから , これらを統合するサイトカインの役割を知ることは非常に重要である . 本プロジェクトでは , 感染性疾患や炎症性疾患の病態形成におけるサイトカインの役割を解明し , 最終的に新たな治療薬の標的分子を見出すことを目的とする .

Cytokines play a central role in maintenance of homeostasis. Because, a disease is not caused by only one
problem of an organ, but caused by a systemic disorder, which is regulated by cytokines, it is important tostudy their functions. We aim to find new therapeutic targets for inflammatory diseases and infectious diseases
by investigating the roles of cytokines in pathogenesis.
准
助

教

授
教

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

西城
矢部
森本
鈴木

忍
力朗
雅子
智明

Associate Professor
Assistant Professor

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Dectin- 1 and Dectin- 2 in innate immunity against

fungal infection

Shinobu Saijo
Rikio Yabe
Masako Morimoto
Tomoaki Suzuki

domain family member 9（CARD9）–nuclear factor-κB axis,
resulting in the activation of various genes including those
encoding pro-inflammatory cytokines. Both β-glucans and α-

Shinobu Saijo and Rikio Yabe

mannans are major cell wall components of fungi including

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

carinii）. Recently, it was reported that Dectin-1 is important

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Dectin- 1 and Dectin- 2 are type II transmembraneproteins of the C-type lectin family with single carbohydrate

recognition domains（CRDs）in their extracellular region.

They are expressed mainly in dendritic cells and macrophages.

Dectin-1 recognizes β-glucans with its CRD and transduces

signals through its immunoreceptor tyrosine-based activation

Candida albicans（C. albicans）and Pneumocystis carinii（P.

in protection against P. carinii by inducing reactive oxygen

species, whereas both Dectin-1 and Dectin-2 play importantroles in defense against C. albicans by preferentially inducing
Th17 cell differentiation. In this review, we briefly revisit

the structures, ligands, signal transduction and functionalroles of Dectin-1 and Dectin-2 in host defense against fungal
infection.

motif（ ITAM ）-like motif in the cytoplasmic domain,
whereas Dectin-2 recognizes α-mannans and transduces its

signal through association with the ITAM-containing Fc

receptor γ chain. Upon ligand binding, spleen tyrosine kinase
is recruited to the ITAM and activates the caspase recruitment

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻20165

2. Dectin-1 and Dectin-2 promote control of the fungal

２）Higashino-Kameda M, Yabe-Wada T, Matsuba S,

IL-17 and adaptive immunity in experimental deep

Saijo S, Iwakura Y, Toga H, Nakamura A: A critical

pathogen Trichophyton rubrum independently ofdermatophytosis

1, 2

1

Fabio SY Yoshikawa , Rikio Yabe , Yoichiro Iwakura
2

3,

1

Sandro R de Almeida and Shinobu Saijo
1

2

3

Division of Molecular Immunology, Medical Mycology
Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Department of Clinical and Toxicological Analysis, Faculty

Takeda K, Anzawa K, Mochizuki T, Makimura K,role of Dectin- 1 in hypersensitivity pneumonitis.
Inflamm Res, 65: 235-244, 2016.

３）Ito T, Hirose K, Norimoto A, Tamachi T, Yokota M,

Saku A, Takatori H, Saijo S, Iwakura Y, Nakajima H:

Dectin-1 Plays an Important Role in House Dust Mite-

Induced Allergic Airway Inflammation through theActivation of CD11b+ Dendritic Cells. J Immunol. 2016
in press.

of Pharmaceutical Sciences, University of Sao Paulo, Sao４）Kimura Y, Inoue A, Hangai S, Saijo S, Negishi H,

Division of Experimental Animal Immunology, Center for

T: The innate immune receptor Dectin- 2 mediates thePaulo, Brazil

Animal Disease Models, Research Institute for Biomedical
Science, Tokyo University of Science, Chiba, Japan

Nishio J, Yamasaki S, Iwakura Y, Yanai H, Taniguchi

phagocytosis of cancer cells by Kupffer cells for the

suppression of liver metastasis. Proc Natl Acad Sci USA,113: 14097-14102, 2016.

Dermatophytoses are chronic fungal infections, the５）Lee MJ, Yoshimoto E, Saijo S, Iwakura Y, Lin X,

rubrum ）. Despite their high occurrence worldwide, the3 -Kinase δ Regulates Dectin- 2 Signaling and theremain largely unknown. Here, we uncovered the C-type

197: 278-287, 2016.

main causative agent of which is Trichophyton rubrum（T.
immunological mechanisms underlying these diseases

Katz HR, Kanaoka Y, Barrett NA: Phosphoinositide

Generation of Th2 and Th17 Immunity. J Immunol,

lectin receptors, Dectin-1 and Dectin-2, as key elements

６）Saijo S: Roles of C-type lectin receptors in inflamematoryof deep dermatophytosis. In vitro, we observed thatand Takatsu K. eds., Springer Japan, 333-344, 2016.

in the immune response to T. rubrum infection in a model
deficiency in Dectin-1 and Dectin-2 severely compromised

cytokine production by dendritic cells. In vivo, mice lacking
Dectin- 1 and/or Dectin- 2 showed an inadequate pro-

responses. In Chronic inflammation Miiyasaka M.

７）Yabe R, Saijo S: Dectin-2 in antimicrobial immunity andhomeostasis. In C-type lectin receptors in immunity ,Yamasaki S. ed. Springer Japan, 3-13, 2016.

inflammatory cytokine production in response to T. rubrum８）Yoshikawa FS, Yabe R, Iwakura Y, de Almeida SR,

adaptive immunity nor IL-17 response were required forfungal pathogen Trichophyton rubrum independently

infection, impairing its resolution. Strikingly, neither

fungal clearance, highlighting innate immunity as the main
checkpoint in the pathogenesis of T. rubrum infection.

Publications

１）Akahori Y, Miyasaka T, Toyama M, Matsumoto I,

Miyahara A, Zong T, Ishii K, Kinjo Y, Miyazaki Y,

of IL-17 and adaptive immunity in experimental deep
dermatophytosis. Innate Immun, 22: 316-324, 2016.

９）W i t t m a n n A ,L a m p r i n a k i D, Bo w l e s K M ,Katzenellenbogen E, Knirel YA, Whitfield C, Nishimura

T, Matsumoto N, Yamamoto K, Iwakura Y, Saijo
S, Kawasaki N: Dectin-2 Recognizes Mannosylated

Saijo S, Iwakura Y, Kawakami K: Dectin-2-dependent

O-antigens of Human Opportunistic Pathogens andpneumoniae. BMC Immunol, 17: 1, 2016.

Cells. J Biol Chem, 291: 17629-17638, 2016.

host defense in mice infected with serotype 3 Streptococcus

6

Saijo S: Dectin-1 and Dectin-2 promote control of the

千葉大学

Augments Lipopolysaccharide Activation of Myeloid

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

後藤准教授微生物・免疫制御プロジェクト

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis and Pathogenesis
研究概要（Summary）

腸管は食餌性抗原や腸内細菌・真菌など多種多様な抗原に常に曝されている特殊な組織である . これら無数の抗原に対処するため , 腸管では免疫細胞と上皮細胞が相互に作用しながら病原性微生物を排除
し , 非病原性微生物と共存する基盤を形成することで腸管の恒常性維持に寄与している . この腸内微生物との共生関係の破綻は , 炎症性腸疾患に代表される腸疾患のみならず , 肥満や糖尿病などの全身性の疾患発症の素因となることから , 腸内微生物との共生システムや腸管免疫細胞と上皮細胞による腸管恒常性制御システムを理解することは重要な命題である . 本プロジェクトでは , 宿主と腸内細菌間の共生因子であり腸管上皮細胞が発現する α１, ２- フコースを介した腸内細菌との共生機構を明らかにし , 腸
管恒常性維持システムの解明とその破綻によって引き起こされる様々な疾患 , 特に感染症や代謝疾患の治療法の開発を目的としている .

Gastrointestinal tract is a unique organ which is constitutively exposed by various antigens including dietary
materials, commensal bacteria, and fungi. In order to exclude pathogens and create symbiotic environment
to non-pahogenic microorganisms, intestinal epithelial cells（ECs）and immune cells contribute to establish
homeostasis of intestinal microenvironment. Disruption of symbiotic relationship between host andcommensals predispose to the development of inflammatory bowel diseases and systemic disorders such as
obesity and diabetes. Therefore, it is important to understand the mechanism of symbiotic and homeostatic
condition regulated by intestinal ECs and immune cells. In this project, we aim to uncover the symbiotic
system with commensal micro- and mycobiota mediated by epithelial α1, 2-fucose. We further investigate
the role of commensal microbes in the establishment of intestinal homeostasis and develop novel therapeutic
approaches for the treatment of diseases such as infection and metabolic syndrome caused by the disruption ofintestinal homeostasis.
准教

授

研究生・技術補佐員
技 術 補 佐 員

後藤
松尾
高木

義幸
謙蔵
弘子

Associate Professor

Research student/Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. The role of commensal bacteria and fungi against

infection of pathogenic microorganisms
1

1

1, 2, 3

Kenzo Matsuo , Hiroko Takagi and Yoshiyuki Goto
1

Project for Host-Microbial Interactions in Symbiosis andPathogenesis, Division of Molecular Immunology, Medical

2

Mycology Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Division of Mucosal Symbiosis, International Research andDevelopment Center for Mucosal Vaccine, Institute for

千葉大学

3

Yoshiyuki Goto
Kenzo Matsuo
Hiroko Takagi

Medical Science, The University of Tokyo, Tokyo, Japan

AMED-PRIME, Japan Agency for Medical Research andDevelopment, Tokyo, Japan

In our gastrointestinal tract, numerous numbers of bacteria

and fungi peacefully colonize and create mutual relationshipwith their host. These commensals contribute to prevent

infection of pathogenic microorganisms. However, it isstill unclear what kind of and how commensal bacteria andfungi interrupt the pathogenic infections. In this study, we

真菌医学研究センター報告

第 20 巻20167

investigate the mechanism of symbiotic colonization bybacteria and fungi in the intestine. We also aim to isolate

α1, 2-fucosyl linkages, which work as a biological interface forthe host–microbe interaction. Emerging studies have shown

beneficial commensal bacteria and fungi for the developmentthat epithelial α1, 2-fucosylation is regulated by commensal

After the establishment of this system, we further target other

Dysregulation of the gene（FUT2）encoding fucosyltransferase

cancer, and metabolic syndrome.

associated with various human disorders, including pathogenic

of novel therapeutic targets for human infectious diseases.
human diseases such as inflammatory bowel diseases, allergy,

2. Epithelial α1, 2-fucose induced by commensal bacteria

and immune cells regulate gut and systemic homeostasis
1

1

2

Kenzo Matsuo , Hiroko Takagi , Hiroshi Kiyono andYoshiyuki Goto1, 3, 4

microbes and by group 3 innate lymphoid cells（ ILC 3）.

2, an enzyme governing epithelial α1, 2-fucosylation, is

infection, Crohn’s diseases, type I diabetes, primary sclerosing

cholangitis, psoriasis, and Behcet’s disease. This suggests a

critical role for an interaction between microbes, epithelial cells
and ILC3 mediated via glycan residues. We aim to identify

detail molecular mechanism how epithelial glycosylation iscontrolled by immune cells and luminal microbes. We also

address the pathophysiological contribution of epithelial α1,1Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

2-fucosylation to pathogenic and commensal microbes as well

2

Division of Mucosal Immunology, Institute of Medical

as previously unexploited targets in the development of new

3

4

Research Center, Chiba University, Chiba, Japanas the potential of α1, 2-fucose and its regulatory pathway

Science, The University of Tokyo, Tokyo, Japan

therapeutic approaches for human diseases.

Development Center for Mucosal Vaccine, Institute for

Publications

Division of Mucosal Symbiosis, International Research andMedical Science, The University of Tokyo, Tokyo, Japan

AMED-PRIME, Japan Agency for Medical Research andDevelopment, Tokyo, Japan１）Goto Y, Uematsu S, Kiyono H: Epithelial glycosylationin gut homeostasis and inflammation. Nat Immunol, 17:1244-1251, 2016.

Intestinal epithelial cells apically express glycans, especially

8

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

芦田特任准教授

細菌感染免疫プロジェクト

Project for Bacterial Infection Immunology
研究概要（Summary）

病原細菌と疾患との関係は比較的明瞭だが , 感染の成立と発症の分子メカニズムはまだよく理解されていない . 本プロジェクトでは腸管病原細菌をモデルとして , 菌の病原因子と宿主因子の感染における相互作用を細胞 , 組織で時空列的に解明することにより , 病原細菌の感染メカニズムと新規な感染現象を明らかにし , その知見を細菌感染症の予防・治療へ積極的に応用ことを目的としている .

Research in this project is directed toward understanding the complex interactions that occur between
pathogenic bacteria and the gastrointestinal epithelium and the process of infectious diseases. Our special
interest is focused upon the molecular pathogenicity of enteropathogenic bacteria, such as Shigella,enteropathogenic E. coli and enterohemorrhagic E. coli, and aim to dissect the mechanisms of bacterial
infectious systems and discover new infectious aspects. We are also searching for effective methods to protect
or regulate bacterial infection by using knowledge accumulated, and interested in developing vaccine andantibacterial drug.
特 任 准 教 授

芦田浩

Hiroshi Ashida

Associate Professor

1. Bacterial pathogens manipulate host immune responses

by delivering effector proteinsemphasis on strategies that bacteria use to manipulate

inflammatory outputs of host cell responses such as membranetrafficking and innate immune responses.

Hiroshi Ashida
Division of Molecular Immunology, Medical Mycology

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

The intestinal epithelium deploys multiple defense systems

against microbial infection to sense bacterial components

2. Manipulation of the host cell death pathway by bacterial

pathogens

Hiroshi Ashida
Host cells deploy multiple defenses against microbial

and danger alarms, as well as to induce intracellular signal

infection. One prominent host defense mechanism, the death

immune system, which are pivotal for bacterial elimination.

eliminating pathogens, removing replicative niches, exposing

transduction cascades that trigger both the innate and adaptive

However, many enteric bacterial pathogens, including
Shigella, deliver a subset of virulence proteins（effectors）via

of infected cells, plays a pivotal role in clearing damaged cells,
intracellular bacterial pathogens to extracellular immune

surveillance, and presenting bacteria-derived antigens to

the type III secretion system（T3SS）that enable bacterial

the adaptive immune system. Although cell death can occur

pathogens are able to efficiently colonize the intestinal

it acts as an innate defense mechanism against bacterial

enteropathogenic E. coli（EPEC）, and enterohemorrhagic

many bacterial pathogens, including Shigella, EPEC, andevasion from host immune systems; consequently, theseepithelium. We are searching interactions between Shigella,
E. coli（EHEC）and host immune responses, with particular

千葉大学

under either physiological or pathophysiological conditions,pathogens by limiting their persistent colonization. However,

EHEC, have evolved mechanisms that manipulate host cell

真菌医学研究センター報告

第 20 巻20169

are trying to develop mice intestinal infection model thatdeath for their own benefit.
3. Developing animal model for studying the bacterial

pathogensdevelopment, and screening for novel antibacterial drug.
Publications

１）Ashida H, Sasakawa C: Bacterial E3 ligase effectors

Hiroshi Ashida
Because many enteric bacterial pathogens are highly

human adapted and unable to colonize mice intestine, lack ofappropriate animal infection models are becoming bottleneckfor developing vaccine and novel drugs. Therefore, we

10would be suitable to in vivo bacteria-host interplay, vaccine

千葉大学

exploit host ubiquitin systems. Curr Opin in Microbiol,
2016 in press.

２）Ashida H, Sasakawa C: Shigella IpaH family effectors as

a versatile model for studying pathogenic bacteria. Front

Cell Infect Microbiol, 5: 100, 2016.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

知花准教授カンジダ・グラブラータフェノームプロジェクト

Candida glabrata phenome project
研究概要（Summary）

病原性酵母カンジダ・グラブラータの全遺伝子改変株を作製し , 病原性に関する遺伝子の特定と機能解析ならびに抗真菌薬の開発を行う .

Using the pathogenic yeast Candida glabrata, we are systematically constructing mutants for gene
identification and functional analyses working on the pathogenicity and for developing of anti-fungal drug
targets.
准

教

授

技

術

職

員

特

任

助

教

グランドフェロー
研究員

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

知花 博治
高橋
梓
佐藤美智代
山口 正視
宇野
潤
相田 優子
大岩 真理

Associate Professor

Research Technician
Assistant Professor
Grand Fellow
Researcher

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

Hiroji Chibana
Azusa Takahashi
Michiyo Sato
Masashi Yamaguchi
Jun UnoYuko Aida
Mari Ohiwa

1. Membrane Proteome-Wide Response to the Antifungal

resistance when compared with Candida albicans, thus

the Transcription Factor CgPdr1 and the Drug:H+

mechanisms in fungal pathogens. Since resistance often relies

Drug Clotrimazole in Candida glabrata: Role ofAntiporters CgTpo1_1 and CgTpo1_2
1

1

1

Pedro Pais , Catarina Costa , Carla Pires , Kiminori
2

2

1

Shimizu , Hiroji Chibana and Miguel C. Teixeira .
1

Department of Bioengineering and Institute for

Bioengineering and Biosciences, Biological Research Group,

Instituto Superior Técnico, Universidade de Lisboa, Lisbon,
2

being an interesting subject for the study of azole resistanceon the action of membrane transporters, including drug efflux
pumps from the ATP-binding cassette family or from theDrug:H（+）antiporter（DHA）（1）family, an iTRAQ-based

membrane proteomics analysis was performed to identify all

the membrane-associated proteins whose abundance changes

in C. glabrata cells exposed to the azole drug clotrimazole.

Proteins found to have significant expression changes in thiscontext were clustered into functional groups, namely: glucose

Portugalmetabolism, oxidative phosp horylation, mitochondrial

Chiba, Japanlipid metabolism, multidrug resistance transporters, cell

Azoles are widely used antifungal drugs. This family ofof 37 proteins. Among these, the DHA transporter

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

import, ribosome components and translation machinery,wall assembly, and stress response, comprising a totalcompounds includes triazoles, mostly used in the treatment

CgTpo 1 _ 2（ ORF CAGL 0 E 03674 g ）was identified asoften used in the case of superficial infections. Candidaclotrimazole. Functional characterization of this putativeof systemic infections, and imidazoles, such as clotrimazole,glabrata is the second most common cause of candidemia

worldwide and presents higher levels of intrinsic azole

千葉大学

overexpressed in the C. glabrata membrane in response to
drug:H（+）antiporter, and of its homolog CgTpo1_1（ORF

CAGL 0 G 03927 g ）, allowed the identification of these

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201611

proteins as localized to the plasma membrane and conferring
azole drug resistance in this fungal pathogen by actively

Despite the crucial role played by the glyoxylate cyclein the virulence of pathogens, seed germination in plants,

extruding the drug to the external medium. The cell walland sexual development in fungi, we still have much tothrough cell wall remodeling. Finally, the transcription

uncharacterized SCF（ Ucc 1）ubiquitin ligase mediates

protein CgGas1 was also shown to confer azole drug resistancefactor CgPdr1 in the clotrimazole response was observed tocontrol the expression of 20 of the identified proteins, thus

highlighting the existence of additional unforeseen targets ofthis transcription factor, recognized as a major regulator oflearn about its regulation. Here, we show that a previously

proteasomal degradation of citrate synthase in the glyoxylate

cycle to maintain metabolic homeostasis in glucose-growncells. Conversely, transcription of the F box subunit Ucc1 isdownregulated in C2-compound-grown cells, which requireazole drug resistance in clinical isolates.

increased metabolic flux for gluconeogenesis. Moreover, in

2. Microbially cleaved immunoglobulins are sensed by thethrough the glyoxylate cycle induces a conformational

innate immune receptor LILRA2
12

vitro analysis demonstrates that oxaloacetate regeneratedchange in citrate synthase and inhibits its recognition andubiquitination by SCF（Ucc1）, suggesting the existence of an

Kouyuki Hirayasu , Fumiji Saito , Tadahiro Suenaga

oxaloacetate-dependent positive feedback loop that stabilizes

Toshifumi Yamaoka3, Hiroyuki Murota3, Hiroji Chibana5,

regulation of citrate synthase acts as a metabolic switch for

1, 2

1

2, 3

4

T , Kyoko Shida , Noriko Arase , Keita Oikawa ,Ichiro Nakagawa6, Tomoko Kubori7, Hiroki Nagai7, Yuji
8

39

Nakamaru , Ichiro Katayama , Marco Colonna M and

Hisashi Arase
1

2

3

4

5

6

7

1, 2

Laboratory of Immunochemistry, WPI Immunology

9

the glyoxylate cycle in response to changes in carbon source,
thereby ensuring metabolic versatility and flexibility.

3. Q uant itat ive measurement of hydrophilicit y/hydrophobicity of the plasma-polymerized naphthalenefilm（Super Support Film）and other support films andFrontier Research Center, Osaka University, Osaka, Japan

grids in electron microscopy

Department of Immunochemistry, Research Institute forMicrobial Diseases, Osaka University, Osaka, Japan

Department of Dermatology, Graduate School of Medicine,

Masashi Yamaguchi1, Toshihiro Aoyama2, Norihiro Yamada3

Osaka University, Osaka, Japan.

and Hiroji Chibana1

Japan

1

Chiba, Japan

2

School of Medicine, Kyoto, Japan3

Department of Otolaryngology, Tenshi Hospital, Hokkaido,
Medical Mycology Research Center, Chiba University,
Department of Microbiology, Kyoto University Graduate
Laboratory of Combined Research on Microbiology and

Immunology, Research Institute for Microbial Diseases,

8

citrate synthase. We propose that SCF（ Ucc 1）-mediatedMedical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

National Institute of Technology, Suzuka College, Mie,
Japan,

Faculty of Educations, Chiba University, Chiba, Japan
Hydrophilicity/hydrophobicity of the surfaces of plasma-

Osaka University, Osaka, Japanpolymerized naphthalene film（Super Support Film, Nisshin

Hokkaido University Graduate School of Medicine,and copper and nickel grids were quantitatively estimated by

Department of Otolaryngology–Head and Neck Surgery,
Hokkaido, Japan.

Department of Pathology and Immunology, Washington

University School of Medicine, St Louis, MO

12

千葉大学

EM Co. Ltd., Tokyo）, carbon and formvar support films,
contact angles measured from diameters and heights of water
droplets placed on various specimens. With treatment of glow

discharge, the surfaces of plasma-polymerized naphthalene

and carbon support films became fully hydrophilic in 20 s.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

They remained hydrophilic for 6 h. The surfaces of copper2016.

and nickel grids became fully hydrophilic with 60 s of glow６）Stepanova AA, Vasilyeva NV, Yamaguchi M, Chibana

h. This information is useful for nega-tive staining, ultrathin

Cryptococcus neoformans. Prob Med Mycol, 18: 47-52,

discharge treatment. They remained hydrophilic for only 1

sectioning and rapid freezing of biological specimens using
the sandwich method.

H: Ultrastructure of senescent and desiccated cells of
2016.

７）Stepanova AA, Yamaguchi M, Chibana H, Vasilyeva

NV: Ultrastructural aspects of cell components migration

Publications

１）Hirayasu K, Saito F, Suenaga T, Shida K, Araseduring budding in the yeast Cryptococcus leurentii. Prob

Med Mycol, 18: 24-29, 2016.

N, Oikawa K, Yamaoka T, Murota H, Chibana

８）Tanaka Y, Sasaki M, Ito F, Aoyama T, Sato-Okamoto

Katayama I, Colonna M, Arase H: Microbially cleaved

N: KRE 5 Suppression Induces Cell Wall Stress

H, Nakagawa I, Kubori T, Nagai H, Nakamaru Y,
immunoglobulins are sensed by the innate immune
receptor LILRA2. Nat Microbiol, 25: 16054, 2016.

２）Nakayama M, Hosoya K, Shimizu-Imanishi Y, Chibana

H, Yaguchi T: Development of rapid identification andrisk analysis of Moniliella spp. in acidic processed foods.

M, Takahashi-Nakaguchi A, Chibana H, Shibata

and Alternative ER Stress Response Required for

Maintaining Cell Wall Integrity in Candida glabrata.

PLoS One, 11: e0161371, 2016.

９）Toh-E A, Ohkusu M, Shimizu K, Takahashi-

Nakaguchi A, Kawamoto S, Ishiwada N, Watanabe

Biocont Sci, 21: 73-80, 2016.

A, Kamei K: Putative orotate transporter of Cryptococcus

Teixeira MC: Membrane Proteome-Wide Response totransporter super family and its loss causes attenuation ofRole of the Transcription Factor CgPdr 1 and the₁₀）Yamaguchi M, Aoyama T, Yamada N, Chibana

３）Pais P, Costa C, Pires C, Shimizu K, Chibana H,

the Antifungal Drug Clotrimazole in Candida glabrata:

Drug:H+ Antiporters CgTpo1_1 and CgTpo1_2. Mol

neoformans, Oat1 , is a member of the NCS 1 /PRT
virulence. Curr Genet, 2016 in press.

H: Q uantitative measurement of hydrophilicity/

Cell Proteomics, 15: 57-72, 2016.

hydrophobicity of the plasma-polymerized naphthalene

Teixeira MC: Membrane proteomics analysis of thegrids in electron microscopy. Microscopy, 65: 444-450,４）Pais P, Pires C, Costa C, Okamoto M, Chibana H,

Candida glabrata response to 5-flucytosine: unveiling thefilm（Super Support Film）and other support films and2016.

role and regulation of the drug efflux transporters CgFlr1

11）Yamaguchi M, Yamada H, Higuchi K, Yamamoto５）Stepanova AA, Vasilyeva NV, Yamaguchi M, Chibana

MS, Chibana H: High-voltage electron microscopy

and CgFlr2. Front Microbiol, 7: 2045, 2016.

H, Bosak IA: Ultrastructural aspects of the interactions

between the murine lung macrophages and the Aspergillus

fumigatus hyphal cells. Prob Med Mycol, 18: 20-25,

千葉大学

Y, Arai S, Murata K, Mori Y, Furukawa H, Uddin

tomography and structome analysis of unique spiralbacteria from the deep sea. Microscopy, 65: 363-369,

2016.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

13

亀井教授

臨床感染症プロジェクト

Project to Link Basic Sciences and Clinical Medicine
研究概要（Summary）

附属病院の真菌症専門外来における診療と並行して , 全国から寄せられる真菌症のコンサルテーショ
ンに対応している . また , 一般施設では実施困難な菌種同定 , 遺伝子検査などの特殊検査を年400件あまり受け入れており , 名実ともに我が国における「真菌症リファレンスセンター」（輸入真菌症を含む）
として活動している . 研究面では臨床研究に加えて , 特にアスペルギルス症に代表される難治性真菌症の感染機構の研究とこれに基づく診断・治療法の開発を中心に進めているが , 近年はアスペルギルス耐性株の疫学と耐性機構の研究なども積極的に進め , 本年から SATREPS によるブラジル・カンピーナス
大学感染症内科との共同研究も開始している .

We have been doing basic and clinical research primarily on fungal infections along with seeing patientsin the Specialty Clinic for Fungal Infections at the University Hospital. Working as the Reference Centerfor fungal infections, we also take ca. 400 consulting services on fungal diseases from all over the country
every year. From the aspect of research, we are investigating the mechanisms of infection of intractable
fungal diseases, particularly aspergillosis, while developing their diagnostic and therapeutic methods incollaboration with various universities/pharmaceutical companies. The epidemiology and mechanisms of
antifungal resistance also hold a prominent part of our research, and a collaborative study with Sao Paulo
State University of Campinas（Brazil）was started this year（SATREPS）.
教

授

准

教

授

特

任

助

教

特

任

助

教

客員教授・グランドフェロー
研究員

グランドフェロー
技

術

職

員

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

亀井 克彦
渡辺
哲
村長 保憲
萩原 大祐
川本
進
東江 昭夫
田口 英昭
鎗田 響子
八尋 真希
関
里亜
土屋由紀子
井上 京子

Professor

Associate Professor
Assistant Professor
Assistant Professor

Guest Professor/Grand Fellow
Researcher

Grand Fellow

Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

Research Promotion Technician

1. Epidemiological study of Fusarium species causing

invasive and superficial fusariosis in Japan

Yasunori Muraosa, Misato Oguchi, Maki Yahiro, Akira

Watanabe, Takashi Yaguchi and Katsuhiko Kamei

14

千葉大学

Katsuhiko Kamei
Akira Watanabe
Yasunori Muraosa
Daisuke Hagiwara
Susumu Kawamoto
Akio Toh-e
Hideaki Taguchi
Kyoko Yarita
Maki Yahiro
Rio Seki
Yukiko Tsuchiya
Kyoko Inoue

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

In Japan, Fusarium species are known etiological agents ofhuman fungal infection; however, a large-scale epidemiologicalstudy on the etiological agents of fusariosis has not been

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

reported. A total of 73 Fusarium isolates from patientswith invasive fusariosis（IF, n = 36）or superficial fusariosis（ SF, n = 37）, which were obtained at hospitals locatedin 28 prefectures in Japan between 1998 and 2015, wereby deletion of srbA, encoding a direct regulator of cyp51A.

The loss of SrbA did not affect colony growth or conidia
production, but decreased expression of cyp51A. The srbA

deletion strain showed hyper-susceptibility to medical azoles

used for this study. Fusarium isolates were identified using

as well as azole fungicides, while its sensitivity to non-azole

specific real-time PCR and partial DNA sequences of thethat deletion of a regulator of cyp51A can sensitise an azole-

Fusarium- and Fusarium solani species complex（FSSC）-

elongation factor- 1 alpha gene and the nuclear ribosomalinternal transcribed spacer region. FSSC was predominately

fungicides was unchanged. This is the first demonstration

resistant A. fumigatus strain. This finding may assist in thedevelopment of new drugs to help combat life-threatening

isolated from both patients with IF and SF（IF, 77.8% andazole-resistant fungal pathogens.

isolates from patients with IF and SF exhibited different

3. Multi-azole resistant Aspergillus fumigatus harboringSF, 67.6%）. Distribution of the phylogenetic species of FSSC

spectra; specifically, F. keratoplasticum（FSSC 2）（25.0%）

was the most frequent isolate from patients with IF, whereas

Cyp51A TR46/Y121F/T289A isolated in JapanF. falciforme（FSSC 3 + 4）
（32.4%）was the most frequent

Daisuke Hagiwara1, Hiroki Takahashi2, Masanori Fujimoto3,

second most frequent isolate from both patients with IF and

Itoyama5, Akira Watanabe1 and Katsuhiko Kamei1

isolate from patients with SF. Fusarium sp.（FSSC 5）was theSF（IF, 22.2% and SF, 24.3%）. Notably, F. petroliphilum

Mai Sugahara3, Yoshiki Misawa4, Tohru Gonoi2, Satoru（FSSC 1）was isolated only from patients with IF. Each1epidemic was not observed. This is the first epidemiological2

species was isolated from a broad geographic area, and an
study of Fusarium species causing IF and SF in Japan.

2. Sensitisation of an azole-resistant Aspergillus fumigatus

strain containing the Cyp 51 A-related mutation bydeleting the SrbA gene

3

4

5

Daisuke Hagiwara, Akira Watanabe and Katsuhiko Kamei
Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

Azoles are widely used for controlling fungal growth inboth agricultural and medical settings. The target protein

Division of Clinical Research, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba, Japan

Division of Bio-resources, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba, Japan

Department of Internal Medicine, Mitsui Memorial

Hospital, Tokyo, Japan

Department of Infection Control and Prevention, The

University of Tokyo Hospital, Tokyo, Japan

Department of Infection Control and Prevention, Mitsui
Memorial Hospital, Tokyo, Japan

Multi-azole resistant Aspergillus fumigatus carrying TR46/

Y121F/T289A was isolated from a patient inJapan in Dec

2013. This strain grouped into the same clade of the ones

which were clinically isolated in France and Germany. A.

fumigatus harboring this mutation could be rapidly diffusedof azoles is CYP51, a lanosterol 14-α-demethylase involved

outside the Eurasian continent.

resistance mechanism has arisen in pathogenic fungal species

4. Comparative transcriptome analysis revealing dormant

bp tandem repeat（TR）in the promoter of cyp51A, and havespecies: an essential role for AtfA in conidial dormancy.

in the biosynthesis of ergosterol. Recently, a novel azole
Aspergillus fumigatus. Resistant strains contain a 34-bp or 46-

disseminated globally in a short period of time. In this study,

we investigated whether an azole-resistant strain with a 46-

bp TR（TR46/Y121F/T289A）could be sensitised to azoles

千葉大学

conidia and germination associated genes in Aspergillus

Daisuke Hagiwara 1, Hiroki Takahashi 1, 2, Yoko Kusuya 1,

Susumu Kawamoto1, Katsuhiko Kamei1 and Tohru Gonoi1

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

15

1

2

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Aspergillus conidial dormancy.

Molecular Chirality Research Center, Chiba University,

Publications

Chiba, Japan

Chiba, JapanBACKGROUND: Fungal conidia are usually dormant unless

１）de Castro PA, Dos Reis TF, Dolan SK, Manfiolli

AO, Brown NA, Jones GW, Doyle S, Riaño-Pachón

DM, Squina FM, Caldana C, Singh A, Del Poeta

the extracellular conditions are right for germination. Despite

M, Hagiwara D, Silva-Rocha R, Goldman GH:

molecular mechanism underlying entry to, maintenance of,

SakAHOG1 MAP kinase activity and it is essential forthe importance of dormancy, little is known about theand exit from dormancy. To gain comprehensive and inter-

The Aspergillus fumigatus SchA SCH9 kinase modulates
virulence. Mol Microbiol, 102: 642-671, 2016.

species insights, transcriptome analyses were conducted across２）de Oliveira Bruder Nascimento AC, Dos Reis TF, deRESULTS: We found transcripts of 687, 694, and 812 genes

LN, Rocha MC, Malavazi I, Brown NA, ValianteA. fumigatus, A. niger, and A. oryzae, respectively（conidia-

Mitogen activated protein kinases SakAHOG1 and MpkC

and 749 genes were increased in the 1 h-cultured conidia

Microbiol, 100: 841-859, 2016.

Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, and Aspergillus oryzae.

were enriched in the resting conidia compared with hyphae inassociated genes ）. Similarly, transcripts of 766 , 1 , 241 ,compared with the resting conidia（germination-associatedgenes）. Among the three Aspergillus species, we identified
orthologous 6,172 genes, 91 and 391 of which are common

conidia-and germination-associated genes, respectively. A

Castro PA, Hori JI, Bom VL, de Assis LJ, Ramalho

V, Brakhage AA, Hagiwara D, Goldman GH:
collaborate for Aspergillus fumigatus virulence. Mol３）Fu j i t a T, I k a r i J, Wa t a n a b e A , Ta t s u m i K :Clinical characteristics of pulmonary nocardiosis in

immunocompetent patients. J Infect Chemother, 22:738-743, 2016.

variety of stress-related genes, including the catalase genes,４）Hagiwara D, Sakamoto K, Abe K, Gomi K: Signaling

ribosome-related genes were significantly enriched among

species: stress biology in the post-genomic era. Biosci

were found in the common conidia-associated gene set, andthe germination-associated genes. Among the germination-

pathways for stress responses and adaptation in Aspergillus
Biotechnol Biochem, 48: 1667-1680, 2016.

associated genes, we found that calA-family genes encoding５）Hagiwara D, Takahashi H, Fujimoto M, Sugawara M,

germination stage in all Aspergillus species tested here. In A.

K: Multi-azole resistant Aspergillus fumigatus harboring

expressed in a bZIP-type transcriptional regulator AtfA-

Chemother, 22: 577-579, 2016.

a thaumatin-like protein were extraordinary expressed in early

fumigatus 63% of the common conidia-associated genes were

Misawa Y, Gonoi T, Itoyama S, Watanabe A, Kamei
Cyp51A TR46/Y121F/T289A isolated in Japan. J Infectdependent manner, indicating that AtfA plays a pivotal role in６）Hagiwara D, Takahashi H, Kusuya Y, Kawamoto S,

the precocious expression of the germination-associated calArevealing dormant conidia and germination associatedthe maintenance of resting conidial physiology. Unexpectedly,

and an abnormal metabolic activity were detected in theresting conidia of the atfA mutant, suggesting that AtfA wasinvolved in the retention of conidial dormancy.

CONCLUSIONS: A comparison among transcriptomes ofhyphae, resting conidia, and 1 h-grown conidia in the three

Aspergillus species revealed likely common factors involved in

Kamei K, Gonoi T: Comparative transcriptome analysis

genes in Aspergillus species: an essential role for AtfA inconidial dormancy. BMC Genomics, 17: 358, 2016.

７）Hagiwara D, Watanabe A, Kamei K, Goldman GH:

Epidemiological and Genomic Landscape of Azole

Resistance Mechanisms in Aspergillus Fungi. Front
Microbiol, 7: 1382, 2016.

conidial dormancy. AtfA positively regulates conidial stress-

８）Hagiwara D, Watanabe A, Kamei K: Sensitisation of an

related to germination, suggesting a major role for AtfA in

the Cyp51A-Related Mutation by Deleting the SrbA

related genes and negatively mediates the gene expressions

16

千葉大学

Azole-Resistant Aspergillus fumigatus Strain containing

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

Gene. Sci Rep, 6: 38833, 2016.

９）Ishiwada N, Takeshita K, Yaguchi T, Nagasawa

Kagawa Y, Kurokawa R, Sone K, Uozumi Y, Ohkusu

M, Kamei K, Koga H: Cryptococcus gattii Genotype

K, Takeuchi N, Hishiki H, Watanabe A, Kamei K,

VGIIa Infection in an Immunocompetent Japanese

Infections Due to Emericella nidulans var. echinulata

55: 3021-3024, 2016.

Shimojo N: The First Case of Invasive Mixed-Mold

and Rasamsonia piperina in a Patient with Chronic
Granulomatous Disease. Mycopathologia, 181: 305-

309, 2016.

10）Kohno S, Tamura K, Niki Y, Izumikawa K, Oka S,

Ogawa K, Kadota J, Kamei K, Kanda Y, Kiuchi T,
Shibuya K, Takakura S, Takata T, Takesue Y, Teruya
K, Tokimatsu I, Fukuda T, Maesaki S, Makimura

Patient: A Case Report and Mini-review. Intern Med,

16）Nanno S, Nakane T, Okamura H, Nishimoto M,

Koh H, Nakamae H, Ohsawa M, Yarita K, Kamei
K, Hino M: Disseminated Hormographiella aspergillata

infection with involvement of the lung, brain, and small

intestine following allogeneic hematopoietic stem celltransplantation: case report and literature review. Transpl
Infect Dis, 18: 611-616, 2016.

K, Mikamo H, Mitsutake K, Miyazaki Y, Mori

17）Toh-E A, Ohkusu M, Shimizu K, Takahashi-

Executive Summary of Japanese Domestic Guidelines for

A, Kamei K: Putative orotate transporter of Cryptococcus

M, Yasuoka A, Yano K, Yamanaka N, Yoshida M:

Management of Deep-seated Mycosis 2014. Med Mycol
J, 57: E117-E163, 2016.

11）Kunitake E, Hagiwara D, Miyamoto K, Kanamaru K,

Nakaguchi A, Kawamoto S, Ishiwada N, Watanabe
neoformans, Oat1 , is a member of the NCS 1 /PRT

transporter super family and its loss causes attenuation ofvirulence. Curr Genet, 2016. in press.

Kimura M, Kobayashi T: Regulation of genes encoding18）Toyotome T, Takahashi H, Kamei K: MEIS 3 isnidulans. Appl Microbiol Biotechnol, 100: 3621-3635,

and the repression contributes to the deleterious effect. J12）Kusuya Y, Sakai K, Kamei K, Takahashi H, Yaguchi T:19）Uesono Y, Toh-E A, Kikuchi Y, Araki T, Hachiya

Fungus Aspergillus lentulus IFM 54703 T. Genome

Anesthetics and Antipsychotic Phenothiazines Interact

cellulolytic enzymes by Pal-PacC signaling in Aspergillus
2016.

Draft Genome Sequence of the Pathogenic Filamentous
Announc, 4: e01568-15, 2016．

13）Muraosa Y, Toyotome T, Yahiro M, Watanabe

repressed in A549 lung epithelial cells by deoxynivalenol
Toxicol Sci, 41: 25-31, 2016.

T, Watanabe CK, Noguchi K, Terashima I: Local

Nonspecifically with Membranes and Inhibit Hexose

Transporters in Yeast. Genetics, 202: 997-1012, 2016.

A, Shikanai-Yasuda MA, Kamei K: Detection of20）Reichert-Lima F, Busso-Lopes AF, Lyra L, Peron

probe-based real-time PCR and nested real-time PCR.

Schreiber AZ: Evaluation of antifungal combination

14）Murasosa Y, Oguchi M, Yahiro M, Watanabe A,21）Watanabe M, Hayama K, Fujita H, Yagoshi M, Yarita

species causing invasive and superficial fusariosis inby Sporothrix globosa in Japan. Ann Dermatol, 28: 251-

Histoplasma capsulatum from clinical specimens by cycling

Med Mycol, 54: 433-438, 2016.

Yaguchi T, Kamei K: Epidemiological study of Fusarium

Japan. Med Mycol J, 2016 in press.

15）Nakao M, Muramatsu H, Takahashi T, Niwa S,

千葉大学

IH, Taguchi H, Mikami Y, Kamei K, Moretti ML,
against Cryptococcus spp. Mycoses, 59: 583-93, 2016.

K, Kamei K, Terui T: A Case of Sporotrichosis Caused
252, 2016.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201617

山本特任教授

感染宿主応答ネットワークプロジェクト

Project for Host Response Network of Bacterial Infection
研究概要（Summary）

本プロジェクトでは , 細菌感染と発症のメカニズムを分子レベルで解明し , 研究成果を感染症の予防と治療へ役立てることを目指している . 感染現象は , ２つの異なる生物（病原体と宿主）の間に形成される新たな生命現象である . 細菌感染のメカニズムを分子レベルで解き明かすことにより , 細菌と生体の間に展開される複雑系の生命現象を解き明かすことを合わせて目指している .
「主要な研究テーマ」（Ⅰ）サルモネラ属細菌をモデルとした , 食細胞内寄生性を有する病原細菌の全身感染症発症機序並びに持続感染機構の解明（Ⅱ）RNA エピジェネティクスとリボソームターゲッティング薬の抗菌活性（Ⅲ）AAA ＋プロテアーゼ ClpXP の研究成果に基づいた慢性感染症治療薬となる anti-persister の探索
研究

Research Focus（I）Dissecting the molecular mechanisms of systemic infection and persistent infection by facultative

intracellular bacteria through the study of Salmonella-host interplay: We focus on the Salmonella
effectors, which we have identified through a meta-analytic approach to the accurate predictionof effectors, to elucidate the dynamic interplay with their host targets and bacterial strategies forwithstanding the host innate- and acquired-immune systems.
（II）RNA epigenetics and bacterial susceptibility to ribosome-targeting antibiotics: This project is basedon our recent findings that post-transcriptional modifications（epigenetic alterations）of 23S rRNAby intrinsic enzymes are essentially responsible for susceptibility of pathogenic bacteria to several
ribosome-targeting antibiotics.
（III）Identification and development of anti-persister compounds as a new class of antibiotics to treat
chronic infection: Our previous studies on the AAA+ protease, ClpXP allowed us to hypothesize thatthe dysregulation of proteolysis by activation of ClpP core in the absence of the regulatory ClpX ATPasemay lead to corruption of bacterial physiology and eventually death of dormant cells. The compounds
leading such uncontrolled proteolysis could be potential as a new class of antibiotics to treat chronic
infection.
特

任

教

授

技 術 補 佐 員

山本 友子
野村祐理子

Professor

Research Promotion Technician

1. The RNA chaperons, CspC and CspE, mediate the1

upregulation of mRNAs in Salmonella surviving inmacrophages after phagocytosis

18

千葉大学

Department of Microbiology and Molecular Genetics,

Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

2

Akiko Takaya1 and Tomoko Yamamoto2

Tomoko Yamamoto
Yuriko Nomura

University, Chiba, Japan

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,
Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

CspC and CspE, members of bacterial cold shock protein

Eukaryotic genomes are pervasively transcribed, resulting

family that includes well-conserved small acidic proteins,in the production of many unstable nuclear long noncoding

RNA, thereby modulating the target RNAs at the post-（nSLiTs）. However, the biological significance and turnover

CspE are involved in the systemic infection of Salmonella

identified 145 nSLiTs that accumulated in HeLa cells upon

function as RNA chaperones through direct binding totranscriptional level. We here demonstrate that CspC andenterica serovar Typhimurium. Double disruption of cspC

and cspE impairs the ability to survive intracellularly atRNAs such as nuclear short-lived noncoding transcripts
mechanism of nSLiTs are largely unknown. Here, we
Salmonella infection through RNA stabilisation, of which 26

mapped to enhancer regions（enSLiTs）and 119 mapped toearly stages after phagocytosis within murine macrophage-

non-enhancer regions（linSLiTs）. Knockout studies showed

PCR using RNAs prepared from the intracellularlyof distinct classes of immune genes. enSLiT degradation was

STM3132 and STM3133, were found to be regulated post-

SKIV2L2/MTR4. In contrast, degradation of linSLiTs wasby macrophages. STM1867 encodes PagK 1 , which is apathway that also involves MTR4. Interestingly, MTR4 andlike RAW264.7 cells. By analysis of RNA-seq and qRT-

surviving bacteria, 4 transcripts, STM 1630 , STM 1867 ,transcriptionally by both CspC and CspE after phagocytosisthat linSLiT08211 and enSLiT07573 regulated the expression

aided by the nuclear exosome targeting complex containing

executed by a novel HNRNPH 1 -dependent RNA decay

virulence protein. STM3132 and STM3133 are located in

the exosome component RRP6 disappeared upon infection,

and CspE stabilized STM1630 transcript, newly identified

findings highlight the importance of regulated nuclear RNA

Salmonella pathogenicity island 13 . Furthermore, CspC

among mRNAs upregulated in response to the intracellularenvironment after phagocytosis. Analysis of a target regionof CspC and CspE with transcriptional STM1630 -gfp-

fusions suggested that CspE, but not CspC, could bind tomultiple stem-loops within the coding region of STM1630.

resulting in collapsing nuclear RNA decay complexes. Ourdegradation in host immune responses.

3. R e d u c t i o n o f b o n e m a r r o w i m m u n o g l o b u l i n

G-secreting plasma cells by Salmonella infection

These findings suggest that CspC and CspE are critical

Akiko Takaya1, Koji Tokoyoda2 and Tomoko Yamamoto3

post-transcriptional regulation of several RNA molecules in

1

2. Collapse of nuclear RNA decay machines by infection

2in the early intracellular survival of Salmonella induced byresponse to the phagosomal environment.

invokes immune response11

Katsutoshi Imamura , Akiko Takaya , Nobuyoshi Akimitsu

2and Tomoko Yamamoto3
1

3

Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

3

University, Chiba, Japan

German Rheumatism Research Center, Berlin, Germany

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,
Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

Host innate and adaptive immune responses confer

Department of Microbiology and Molecular Genetics,

crucial protection against Salmonella infection. On the other

University, Chiba, Japanby producing virulence factors, leading to establishment ofGraduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

2

Department of Microbiology and Molecular Genetics,

hand, Salmonella can escape from the host immune system

Radioisotope Centre, The University of Tokyo, Tokyo,

systemic infection. To understand the mechanism by which

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,on the influence of Salmonella infection on the production ofJapan

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

千葉大学

Salmonella escapes the adaptive immune response, we focused

immunoglobulin（Ig）-secreting plasma cells. We showed thatthe great majority of bone marrow IgG-secreting plasma cells

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201619

was diminished within 4 days after intraperitoneal infectionof live Lon-deficient attenuated Salmonella, whereas bonemarrow IgM-secreting and splenic IgG-secreting plasma cells

were unaffected. The infection also reduced total IgG titers
in serum. This selective diminishment was also induced byof iNTS has been demonstrated to be primarily human tohuman, rather than zoonotic, but little is known about
the relationship of invasive disease to diarrheal Salmonelladisease. To understand the iNTS diseases, we focus on thehost-pathogen interaction, i.e. bacterial pathogenesis andculture supernatants from Salmonella but not by those fromhost immune responses, in iNTS infection. We analyzed

The culture supernatant depleted of ligands for Toll-like

Saharan Africa during the period 2011 - 2014 using next

Escherichia coli within 24 hours after intraperitoneal injection.

receptors, lipopolysaccharide and flagellin, also reduced theplasma cells. This study revealed that Salmonella reducesbone marrow IgG-secreting plasma cells which are the main

source of serum IgG, leading to escape from the host humoral

the whole genomes of various iNTS strains isolated in Subgeneration sequencing.

5. Identification and development of anti-persistercompounds as a new class of antibiotics to treat chronic

immunity. It is suggested that Salmonella-specific component
is involved in the reduction.

4. Invasive non-typhoidal Salmonella（ iNTS ）disease:

Host pathogen interaction in iNTS infection andappropriate vaccine candidate
1

2

Yuriko Nomura1, Kentaro Oka4 and Motomichi Takahashi4

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,
Medical Mycology Research Center, Chiba University,

2

Chiba, Japan

Department of Microbiology and Molecular Genetics,

Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

3

4

Tomoko Yamamoto1, Akiko Takaya2, Yuriko Nomura1, andWalid Houry3
1

University, Chiba, Japan

Project for Host Response Network of Bacterial Infection,
Medical Mycology Research Center, Chiba University,

3

Tomoko Yamamoto , Akiko Takaya , Hiroki Takahashi ,1

infection

2

Chiba, Japan

Department of Microbiology and Molecular Genetics,

Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

3

University, Chiba, Japan

Department of Biochemistry, University of Toronto,
Toronto, Canada

Chronic infection is often difficult to treat, even whencaused by a pathogen that is not resistant to antibiotics. This

Project for Systems Biology of Microorganisms, Medical

is the essential paradox of chronic infection. In most cases,

Tokyo R&D Center, Miyarisan Pharmaceutical Co., Ltd,

Regular antibiotics kill bacteria by corrupting their targets

Mycology Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

chronic infections are accompanied by dormant persisters.

Tokyo, Japanin active cells but targets are inactive in persisters, leading

Non-typhoidal Salmonella（NTS）serovars such as serovar

variants of normal bacteria and pathways to dormancy are

Typhimurium generally cause in humans, self-limited

gastroenteritis, associated with intestinal inflammation anddiarrhea. Nevertheless, in developed countries up to 5% of
NTS cases may be invasive, extra-intestinal disease leading tobacteremia and focal systemic infections. Moreover, in Sub-

Saharan Africa invasive non-typhoidal Salmonella（iNTS）

have emerged as a major cause of bloodstream infection in

immunocompromised and debilitated host. Transmission

20

千葉大学

to tolerance to antibiotics. The tolerance is phenotypic

redundant, making it challenging to develop anti-persistercompounds which could prevent persister formation or

awake the dormant cells and thereby turn those susceptible

to conventional antibiotics. We reasoned that a compound
leading to corrupting physiology of dormant, energy-deprived
cells will be an anti-persister. Our previous studies on theenergy-dependent ClpXP-protease allowed us to hypothesizethat the dysregulation of proteolysis by activation of ClpP

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

core in the absence of the regulatory ClpX ATPase may

University. We will evaluate the bactericidal activity of

we aim to identify the compounds to activate ClpP core,aureus, Pseudomonas aureginosa, Escherichia coli, etc. ）atprovide innovative perspectives on developing a new class ofchronical infection in mouse at the next stage.

（ i ）We have completed the system evaluating ClpP

Publications

corrupt physiology of dormant cells. In the present project,leading to the dysregulation of proteolysis. This study will
antibiotics to treat chronic infection.

proteolysis in vitro. We have already succeeded in purificationof the components necessary for the system through thestudies on ClpXP-protease.

（ ii ）We have started the high-through-put screeningof compounds with activity provoking ClpP-protease by

exploiting the chemical libraries mainly established in Chiba

千葉大学

candidates using a different species of bacteria（Staphylococcus

several states, dormancy in stationary phase or in biofilm, and

１）Ishiwada N, Takaya A, Kimura A, Watanabe M, Hino

M, Ochiai H, Matsui M, Shibayama K, Yamamoto T:

Linezolid-resistant Staphylococcus epidermidis associatedwith long-term, repeated linezolid use in a pediatricpatient. J Infect Chemother, 22: 187-190, 2016.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201621

石和田准教授

感染症制御プロジェクト

Project for Infection Control and Prevention
研究概要（Summary）

インフルエンザ菌の病原性解析ならびにインフルエンザ菌感染症 , 肺炎球菌感染症 , B 群溶血性レンサ球菌感染症の疫学調査を継続的に行っている . 結合型ワクチン導入後 , 新しく問題となっているワク
チン非含有型株による病原因子の解析を行い , 新たな予防法の開発を目指す . また , 難治性呼吸器感染症の診断 , 治療法開発のための臨床研究を実施している . 同時に , 附属病院における小児科・感染症内科での診療活動及び学内外でのコンサルテーションを行っている .

Our research focuses on sero-epidemiology and pathogenesis of Haemophilus influenza, Streptococcus
pneumoniae and Streptococcus agalactiae. We organize several clinical researches for the development of
diagnostic and therapeutic methods for respiratory infectious diseases collaborating with clinicians and alsocare for patients in the clinic of the University Hospital.
准

教

石和田稔彦
竹内 典子
大楠美佐子

授

特

任

助

教

技

術

職

員

Assistant Professor

Research Technician

1. Inhaled Laninamivir Octanoate as Prophylaxis for

Influenza in Children

Takashi Nakano1, Naruhiko Ishiwada2, Tokuhito Sumitani3,
43

Mitsutoshi Uemori and Koji Isobe ; Laninamivir Prophylaxis
Study Group

1

2

3

4

Naruhiko Ishiwada
Noriko Takeuchi
Misako Ohkusu

Associate Professor

Department of Pediatrics, Kawasaki Hospital, Kawasaki

Methods: We conducted a double-blind, multicenter,randomized, placebo-controlled study to determine whether

the efficacy of a single 20-mg dose of inhaled laninamivir
octanoate to prevent the development of influenza wassuperior to that of placebo as prophylaxis for influenza inpediatric（<10 years ）household members of index cases.

Eligible subjects without influenza, in contact with an

influenza-infected index case living in the same household,

Medical School, Okayama, Japan

were blindly randomly assigned in a 1:1 ratio to receive 20

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

point was the proportion of subjects who developed clinical

Department of Infectious Diseases Medical Mycology
Clinical Development Department, Daiichi Sankyo Co,

Ltd, Tokyo, Japan

Clinical Data and Biostatistics Department, Daiichi Sankyo
Co, Ltd, Tokyo, Japan

Background: A single 20-mg dose of inhaled laninamivir

octanoate is an effective treatment of influenza. However,
the efficacy of laninamivir octanoate for the preventionof influenza in children <10 years of age has not yet been

established.

22

千葉大学

mg of laninamivir octanoate or placebo. The primary end
influenza during a 10-day period.

Results: A total of 343 subjects were randomly assigned, with
341 subjects included in the full analysis set for the primary

analysis. The proportions of subjects who developed clinicalinfluenza were 11%（18/171）in the laninamivir octanoategroup and 19%（33/170）in the placebo group（P = .02）. The

relative risk reduction was 45.8%（95% confidence interval,

7.5% to 68.2%）. The incidence of adverse events was similar

in both groups.

Conclusions: A single 20-mg dose of inhaled laninamivir

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

octanoate was effective and well tolerated as prophylaxis fordesignated OAT2）whose expression is under the control of

influenza.

nitrogen metabolite repression at least in part. We found that

2. Putative orotate transporter of Cryptococcus neoformans,

neoformans var. neoformans.

Oat1, is a member of the NCS1/PRT transporter superfamily and its loss causes attenuation of virulence1

1

the OAT1 gene is necessary for full pathogenic activity of C.

3. Analysis of Streptococcus pneumoniae and Haemophilus

influenzae isolated from middle ear fluid before and2

after the introduction of government subsidies for

Akio Toh-E , Misako Ohkusu , Kiminori Shimizu , Azusa

Takahashi-Nakaguchi 1, Susumu Kawamoto 1, Naruhikopneumococcal and H. influenzae type b vaccines in

Ishiwada1, Akira Watanabe1 and Katsuhiko Kamei1
1

2

Japan

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Tadashi Hoshino 1, Noriko Takeuchi 2, Chie Fukasawa 1,

Tokyo University of Science, Katsusika-ku, Tokyo, Japan

Yukiko Arimoto4, Atsuko Nakano4 and Naruhiko Ishiwada2

Chiba, Japan

Shoko Hirose1, Hideyuki Okui1, Hiroko Sato3, Mari Sato3,

It is well known that 5-fluoroorotic acid（5-FOA）-resistant1

are exclusively either ura 3 or ura5 mutants. Unexpectedly,2

selective regime were Ura+. We identified CNM 00460

3

belongs to the nucleobase cation symporter 1/purine-related

4

mutants isolated from wild-type Cryptococcus neoformans

many of the 5 -FOA-resistant mutants isolated in ouras the gene responsible for these mutations. Cnm00460

transporter（NCS1/PRT）super family of fungal transporters,

representative members of which are uracil transporter,
uridine transporter and allantoin transporter of Saccharomyces
cerevisiae. Since the CNM00460 gene turned out to be

Division of Infectious Diseases, Chiba Children’s Hospital,
Chiba, Japan

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Division of Clinical Laboratory, Chiba Children’s Hospital,
Chiba, Japan

Division of Otorhinolaryngology, Chiba Children ’ s
Hospital, Chiba, Japan

This study aimed to identify trends in frequency, serotype,and antimicrobial susceptibility of Streptococcus pneumoniae

involved in utilization of orotic acid, most probably as

and Haemophilus influenzae isolated from middle ear fluid

1（OAT1）. This is the first report of orotic acid transporterand after the introduction of the 7 -valent pneumococcal

transporter, we designated this gene Orotic Acid Transporterin this family. C. neoformans has four members of the NCS1/

PRT family, including Cnm00460, Cnm02550, Cnj00690,

specimens of children aged ≤15 years（mean, 2 years）, before
conjugate vaccine（PCV 7）and the H. influenzae type b

vaccine, at a pediatric facility in Japan. Sixty-six S. pneumoniae

and Cnn 02280 . Since the cnm 02550 ∆ strain showed

and 88 H. influenzae strains were isolated from 820 middle

encodes uridine permease and designated it URidine Permease

testing were performed. The study time-frame was divided

resistance to 5-fluorouridine, we concluded that CNM02550
1（URP1）. We found that oat1 mutants were sensitive to

5-FOA in the medium containing proline as nitrogen source.

A mutation in the GAT1 gene, a positive transcriptional

regulator of genes under the control of nitrogen metabolite
repression, in the genetic background of oat1 conferred thephenotype of weak resistance to 5-FOA even in the medium

using proline as nitrogen source. Thus, we proposed theexistence of another orotic acid utilization system（tentatively

千葉大学

ear fluid samples. Serotyping and antimicrobial susceptibility

into period 1（2007 - 2010）and period 2（2011 - 2014）,

according to the availability of vaccine public funding. The

S. pneumoniae detection rate decreased from 9.6% in period

1-6.1% in period 2（p = 0.042）. PCV7 serotypes decreased

from 56.8% to 9.1%（p = 0.0002）. No significant change wasobserved for the 13-valent pneumococcal conjugate vaccine（PCV13）serotypes: 72.7% in period 1 and 59.1% in period

2. Penicillin-resistant strains（penicillin G-MIC ≥2μg/mL）

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201623

decreased from 25% to 4.5%（p = 0.038）. Detection rates for

documented in all patients. Thirteen of the 24 patients were

H. influenzae did not change significantly: 10.3% in period 1

cured using appropriate antibiotics（true infection group）;

97 . 9 % in period 1 and 90 . 2 % in period 2 , and only one

antibiotic therapy or no antibiotics（contamination group）.

of ampicillin-resistant strains（ MIC ≥ 4μg/mL ）did notof true C. striatum bloodstream infection.

otitis media due to S. pneumoniae. PCV7 was replaced withconsidered a contaminant when isolated in culture. Instead,and 11.3% in period 2. Serotypes were mostly non-typeable:

serotype b strain was isolated in each period. The frequencychange. These results show a preventative effect of PCV7 on
PCV13 in 2013 in Japan; therefore, a further decrease inpneumococcal otitis media is anticipated in the future.

4. Clinical and bacteriological analyses of bacteremia due

to Corynebacterium striatum
12

2

Naruhiko Ishiwada , Masaharu Watanabe , Shota Murata ,1

3

Noriko Takeuchi , Toshibumi Taniguchi and Hidetoshi Igari
1

2

3

however, 11 of the 24 patients were cured using inappropriate

Malignancy and neutropenia significantly increased the odds

Conclusions: The Cor ynebacterium species is often

particularly when the strain is isolated from blood, the species
should be considered clinically relevant and identified to thespecies level; in addition, antimicrobial susceptibility testing is

recommended.

5. Characterization and Evaluation of Newly Developed

Immune- C hromatog raphic Method Targeting

Mycoplasma pneumoniae Ribosomal Protein L7/L12

3

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

Go Sano1, Tsutomu Itagaki2, Naruhiko Ishiwada3, Keita

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Matsubara4, Satoshi Iwata4, Yoshitaka Nakamori5, Kenji

Chiba, Japan

Homma1 and KazuhiroTateda8

Division of Clinical Laboratory, Chiba University Hospital,
Department of Infectious Diseases, Chiba University
Hospital, Chiba, Japan

Background: Corynebacterium striatum was recently recognizedMatsuyama6, Katsuya Watanabe7, Yoshikazu Ishii8, Sakae

1

Department of Respiratory Medicine, Toho University

2

Yamanobe Pediatric Clinic, Yamagata, Japanas a potential pathogen of various infectious diseases.

3

been clearly identified. Therefore, we analyzed C. striatum

4

determinants.

5

from whom C. striatum isolates were recovered from blood

6

course including response to antimicrobial therapy and7

Results: During the 5-year study period（January 2010 to

8

However, the clinical entity of this microorganism has not

isolates from blood culture and explored their clinical
Methods: We reviewed the medical records of all patients

culture for analysis of the patients’ backgrounds and clinicalprognosis.

December 2014）, 24 C. striatum strains were isolated fromblood samples, and the frequency of C. striatum bacteremia

increased. The majority of the strains were multidrug resistant.

All of the tested strains were susceptible to only vancomycin.

The age at onset of C. striatum bacteremia encompassed all

adult age groups, and at least one underlying condition was

24

千葉大学

Omori Medical Center, Tokyo, Japan

Department of Pediatrics, Graduate School of Medicine,

Chiba University, Chiba, Japan

Department of Pediatrics, National Hospital Organization
Tokyo Medical Center, Tokyo, Japan

Department of Respiratory Diseases, Mishuku Hospital,

Tokyo, Japan

Healthcare R&D Center, Asahi Kasei Corporation,
Shizuoka, Japan

R&D Group, Diagnostics Department, Asahi Kasei

Pharma Corporation, Shizuoka, Japan

Department of Microbiology and Infectious Disease, Toho
University School of Medicine, Tokyo, Japan

Point-of-c are testing （ PO CT ） f or Mycoplasma

pneumoniae infection may be ideal and useful, becausesignificant numbers of the cases will be seen as an outpatient.

Recently, a new immune-chromatographic method（ICM）

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

targeting M. pneumoniae ribosomal protein L7/L12（RP-L7/L12）became available in Japan, although clinical data
and basic information regarding efficacy and characterization

To our knowledge, this is the first report of the use ofreal-time reverse transcription-polymerase chain reaction

to assess changes in viral load in a patient with congenitalof this ICM are limited. The present study examined the

rubella syndrome（CRS）. Rubella-specific antibody titers

L12）during the growth in-vitro and correlation between M.

born to a primipara with rubella infection at 10 weeks offate of M. pneumoniae ribosomal protein L7/L12（RP-L7/

pneumoniae number in clinical samples and positivity in RPL7/L12 ICM. Also, usefulness of RP-L 7/L12 ICM waswere also determined. The patient was a male neonate

gestation. He had no symptoms at birth, but rubella virus
was detected in his pharynx, blood, and urine. His mental

investigated in 176 pharyngeal swabs from M. pneumoniae

and physical development was normal for 1 year; however, hecases）. In-vitro analysis, the detection limit was shown to bepatient was diagnosed with CRS. Rubella infection in theinfection-suspected patients（children 137 cases; adults 39

was diagnosed with deafness at 13 months of age. Thus, the

1.1 × 104 CFU/mL for M. pneumoniae. Production of RP-pharynx was almost constant until 5 months of age; however,

and a half-life was calculated to be approximately 2 days in-

was detected at 13 months. Rubella-specific immunoglobulin

L7/L12 was paralleled with viable M. pneumoniae number,vitro. Five other Mycoplasma species and 14 representative
respirator y pathogens exhibited negative even in a

it increased dramatically at 6 months of age. No infection

M titer was consistently low until 9 months of age and thendecreased gradually until it became negative at 20 months

concentration of 106 CFU/mL. The sensitivity and specificity

of age. Rubella-specific immunoglobulin G titer was high（130/141）, comparing to culture method. Clinical samples

again at 4 months. This titer peaked at 〜9 months and thenof RP-L7/L12 were respectively 57.1%（20/35）and 92.2%
with M. pneumoniae burden of 106 CF U/mL or moreat birth. However, it decreased at 3 months and increased

decreased again at 13 months. This case shows that the period

exhibited ICM positive in 13 of 18 cases（72.2%）. These data

after the decline in maternal antibody titers, not the neonatal

RP-L7/L12 in-vitro, in addition to sensitivity, specificity andCRS.

of M. pneumoniae.

7. The impact of heptavalent pneumococcal conjugate

demonstrated characteristics of ICM targeting M. pneumoniae
positivity in clinical samples with different bacterial number

period, may be the most contagious period in patients withvaccine on the incidence of childhood community-

6. Congenital Rubella Syndrome: A Case Report on

acquired pneumonia and bacteriologically confirmed

Koo Nagasawa 1, Naruhiko Ishiwada 2, Atsushi Ogura 3,

Sachiko Naito1, Junko Tanaka1, Kengo Nagashima2, Bing

pneumococcal pneumonia in Japan

Changes in Viral Load and Rubella Antibody Titers.

Tomoko Ogawa3, Noriko Takeuchi2, Haruka Hishiki4 andNaoko Shimojo4
1

2

3

4

Department of Pediatrics, Kawasaki Hospital, Kawasaki

Chang 3, Haruka Hishiki 1, Yoshiko Takahashi 1, Junko

Oikawa1, Koo Nagasawa1, Naoki Shimojo1 and NaruhikoIshiwada4

Medical School, Okayama, Japan1

Department of Pediatrics, Chiba University Graduate

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

2

Clinical Research Centre, Chiba University Hospital,

Health, Chiba, Japan.

3

Department of Bacteriology I, National Institute of

School of Medicine, Chiba, Japan

4

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology
Division of Virology, Chiba Prefectural Institute of Public
Department of Pediatrics, Chiba University Graduate

School of Medicine, Chiba, Japan
Chiba, Japan

Infectious Diseases, Tokyo, Japan

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201625

Heptavalent pneumococcal conjugate vaccine（PCV7）was

introduced to Japan in 2010. We investigated the impact of

PCV7 on childhood community-acquired pneumonia（CAP）

and pneumococcal pneumonia（PP）. Children aged <5 years

living in Chiba city, Japan, who were admitted to hospitals

were enrolled to estimate the incidence of CAP based on the
mid-year population. PP was determined by the presenceof Streptococcus pneumoniae in cultured blood and/or sputum

A 16-year-old boy with chronic granulomatous disease

presented with pneumonia and rib osteomyelitis. Emericellanidulans var. echinulata was isolated from his sputum. After
starting voriconazole, Rasamsonia piperina was isolated fromthe rib swelling. A combination therapy of voriconazole

and micafungin effectively eradicated this invasive mixedmold infection. In immunocompromised patients, a precise

pathogenic diagnosis is clinically useful for administration ofsamples of CAP patients. The incidence of CAP and S.

an appropriate treatment regimen.

（ April 2008 -March 2009）and after（ April 2012 -March

9. Linezolid-resistant Staphylococcus epidermidis associatedpneumoniae isolated from PP patients was compared before2013）the introduction of PCV7 immunization. The annualwith long-term, repeated linezolid use in a pediatricincidence of CAP was reduced［incidence rate ratio 0·81,
95% confidence interval（CI）0·73-0·90］. When comparing

patient

post-vaccine with pre-vaccine periods, the odds ratio for PP

Naruhiko Ishiwada 1 , Akiko Takaya 2 , Asahi Kimura 2 ,covered serotypes markedly decreased（66·6% in pre-vaccine

Mari Matsui5, Keigo Shibayama5 and Tomoko Yamamoto1, 6

incidence was 0·60（95% CI 0·39-0·93, P = 0·024）. PCV7-

vs. 15·6% in post-vaccine, P < 0·01）, and serotypes 6C, 15A,

Masaharu Watanabe 3, Moeko Hino4, Hidemasa Ochiai 4,

15C and 19A increased. Multidrug-resistant international

1

Taiwan19F-14/ST236）decreased, while Sweden15A-25/

2

clones in the pre-vaccine period（ Spain 6 B- 2 /ST 90 ,ST63 was the dominant clone in the post-vaccine period.

A significant reduction in the incidence of both CAP

hospitalizations and culture-confirmed PP of vaccine serotypes

was observed at 2 years after PCV7 vaccination.

3

to Emericella nidulans var. echinulata and Rasamsonia

5

Disease6

piperina in a Patient with Chronic Granulomatous

1

2

3

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

Department of Microbiology and Molecular Genetics,

Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

4

8. The First Case of Invasive Mixed-Mold Infections Due

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

University, Chiba, Japan

Division of Laboratory Medicine, Chiba University

Hospital, Chiba, Japan

Department of Pediatrics, Chiba University Hospital,

Chiba, Japan

Department of Bacteriology II, National Institute of

Infectious Diseases, Musashimurayama, Tokyo, Japan

Department of Microbiology and Molecular Genetics,

Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Chiba

Naruhiko Ishiwada , Kenichi Takeshita , Takashi Yaguchi ,University, Chiba, Japan

Watanabe1, katsuhiko Kamei1 and Naoki Shimojo2

We report an 8 -year-old patient with catheter-related

Koo Nagasawa2, Noriko Takeuchi1, Haruka Hishiki2, Akira

1

2

3

Department of Infectious Diseases, Medical Mycology

Research Center, Chiba University, Chiba, Japan

bacteremia caused by linezolid-resistant Staphylococcus

epidermidis that was isolated after the long-term, repeateduse of linezolid. Three S. epidermidis strains isolated from

Department of Pediatrics, Graduate School of Medicine,

this patient were bacteriologically analyzed. While theDivision of Bioresources, Medical Mycology Researchlinezolid, two strains after linezolid therapy displayed low-

Chiba University, Chiba, Japan

Center, Chiba University, Chiba, Japan

26

千葉大学

strain isolated prior to linezolid initiation was susceptible tolevel linezolid susceptibility（MIC, 4 mg/L）and linezolid

resistance（MIC, 16 mg/L）. T2500A mutation in two copies

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

and G2575T mutations in three copies of 23S rRNA weredetected in the low-susceptible strain and the resistant strain,

respectively. Linezolid-resistant S. epidermidis infection israre, but may occur with the long-term administration oflinezolid.

Infect Chemother, 22: 790-793, 2016.

５）Nagasawa K, Ishiwada N, Ogura A, Ogawa T,

Takeuchi N, Hishiki H, Shimojo N: Congenital Rubella

Syndrome: A Case Report on Changes in Viral Load andRubella Antibody Titers. Pediatrics, 137: e20153333,
2016.

Publications

１）Hoshino T, Takeuchi N, Fukasawa C, Hirose S, Okui

H, Sato H, Sato M, Arimoto Y, Nakano A, Ishiwada

６）Naito S, Tanaka J, Nagashima K, Chang B, Hishiki

H, Takahashi Y, Oikawa J, Nagasawa K, Shimojo N,
Ishiwada N: The impact of heptavalent pneumococcal

N: Analysis of Streptococcus pneumoniae and Haemophilus

conjugate vaccine on the incidence of childhood

after the introduction of government subsidies forconfirmed pneumococc al pneumonia in Japan.

influenzae isolated from middle ear fluid before andpneumococcal and H. influenzae type b vaccines inJapan. J Infect Chemother, 2016 in press.

２）Ishiwada N, Takaya A, Kimura A, Watanabe M, Hino

M, Ochiai H, Matsui M, Shibayama K, Yamamoto T:

Linezolid-resistant Staphylococcus epidermidis associatedwith long-term, repeated linezolid use in a pediatricpatient. J Infect Chemother, 22: 187-190, 2016.

３）Ishiwada N, Takeshita K, Yaguchi T, Nagasawa

community-acquired pneumonia and bacteriologically
Epidemiol Infect, 144: 494-506, 2016.

７）Nakano T, Ishiwada N, Sumitani T, Uemori M, Isobe

K; Laninamivir Prophylaxis Study Group: Inhaled

Laninamivir Octanoate as Prophylaxis for Influenza inChildren. Pediatrics, 138: e20160109, 2016.

８）Sano G, Itagaki T, Ishiwada N, Matsubara K, Iwata

S, Nakamori Y, Matsuyama K, Watanabe K, Ishii Y,

Homma S, Tateda K: Characterization and evaluation

K, Takeuchi N, Hishiki H, Watanabe A, Kamei K,of newly developed immune-chromatographic method

Infections Due to Emericella nidulans var. echinulata

L12. J Med Microbiol, 65: 1105-1110, 2016.

Shimojo N: The First Case of Invasive Mixed-Mold

and Rasamsonia piperina in a Patient with Chronic
Granulomatous Disease. Mycopathologia, 181: 305-

309, 2016.

４）Ishiwada N, Watanabe M, Murata S, Takeuchi N,

Taniguchi T, Igari H: Clinical and bacteriologicalanalyses of bacteremia due to Corynebacterium striatum. J

千葉大学

targeting Mycoplasma pneumoniae ribosomal protein L7/９）Toh-E A, Ohkusu M, Shimizu K, Takahashi-

Nakaguchi A, Kawamoto S, Ishiwada N, Watanabe

A, Kamei K: Putative orotate transporter of Cryptococcus
neoformans, Oat1 , is a member of the NCS 1 /PRT

transporter super family and its loss causes attenuation ofvirulence. Curr Genet, 2016 in press.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201627

伊庭特任教授 RNA 制御プロジェクト
Project for RNA Regulation
研究概要（Summary）

細胞内でみられる遺伝子発現の制御ネットワークは , その細胞のもつ発生 , 分化 , 増殖に関する特異性はもちろん , 真菌・細菌・ウイルス等の寄生体に対する宿主の応答性や competency をも規定している . 平成28年４月に開始された本プロジェクトでは発現の様式を制御する因子のなかでも特に , １）各遺伝子のプロモーター上で作用する転写制御因子群 , ２）クロマチンの活性化状態を規定するクロマ
チン構造変換因子 , ３）多数の遺伝子群の発現を post-transcriptional レベルで一括して負に制御する
miRNA の３者に注目して , これらが形成する遺伝子制御ネットワークの解明を進め感染症をはじめとしたヒト疾患の制圧をめざす .

Gene regulatory networks in a cell determine not only cellular specificity of development, differentiation,and growth activity but also cellular response or competency to virus, bacterium, and mycete. Whereas these
expression patterns are regulated by many factors, this project, which has started in April 2016, concentrateon the following three factors; 1）transcriptional factors, which operate on the promoter region of their target
gene, 2）chromatin remodeling factors that modulate the state of chromatin activity, 3）miRNA, which
suppresses expression of many genes at the post-transcriptional level to establish new therapeutic methods forhuman infectious diseases.

特

任

教

授

特

任

助

教

特 任 研 究 員
技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

伊庭
原口
小林
桜井
古田

英夫
健
和善
典子
杏望

Professor

Research Assistant Professor
Research Fellow

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. MiR-199a Inhibits Secondary Envelopment of Herpes

Simplex Virus-1 through downregulation of Cdc 42-

3

Kyousuke Kobayashi1, Yasushi Ino2, Kazuyoshi Kobayashi1, 4,

4

specific GTPase activating protein

1, 4

1, 4

Hiroaki Hiramatsu , Takeshi Haraguchi , Kazuo
3

2

3

Kurokawa , Tomoki Todo , Akihiko Nakano and Hideo

Iba1, 4
1

Division of Host-Parasite Interaction, Department ofMicrobiology and Immunology, The Institute of Medical
2

Hideo Iba
Takeshi Haraguchi
Kazuyoshi Kobayashi
Noriko Sakurai
Anmi Furuta

Tokyo, Tokyo, Japan

Laboratory of Developmental Cell Biology, Department of

Biological Science, Graduate School of Science, Universityof Tokyo, Tokyo, Japan.

Division of RNA Therapy, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba, Japan

Several different research groups including us reported

that miR-199a inhibits replication of herpesviruses（HSV-

1, HCMV, MCMV, and MHV-68）, Semliki Forest Virus,

hepatitis B virus, hepatitis C virus, retrovirus, and lentivirus.

Science, The University of Tokyo, Tokyo, Japan

We here examined how miR-199a exerts its antiviral effects

Research Center, Institute of Medical Science, University ofsimplex virus-1（HSV-1）. Whereas exogenous expression

Division of Innovative Cancer Therapy, Advanced Clinical

28

千葉大学

using epithelial tumour cell lines infected with herpes

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

of either miR-199a-5p or -3p didn’t affected HSV-1 virus
gene expression, we found that both miR-199a-5p and -3p

inhibit secondary envelopment of HSV- 1 by suppressing

their common target, ARHGAP 21 , a Golgi-localized

GTPase-activating protein for Cdc42. We have also shown

NF-κB has a wide variety of target genes that are involved indevelopment, differentiation, growth, and inflammation, as

well as those showing widespread expression（housekeeping
genes）. For this reason, complete suppression of NF-κB

target genes could affect normal cells, including immunethat the trans-cisterna of the Golgi apparatus is a potential

cells that contribute to tumor-eliminating activity. Therefore,

virus. Exogenous expression of either pre-miR-199a or sh-

only a specific subset of NF-κB target genes and have strong

function in uninfected cells, inhibition of HSV- 1 secondary

genes.

membrane compartment for secondary envelopment of this
ARHGAP21 exhibited shared phenotypes: alteration of Golgi

envelopment, and reduction of trans-Golgi proteins upon

there is a need for new NF-κB inhibitors that can suppress

tumor suppressor activity without effects on housekeeping
In this report, we show that the d4 protein family, which

HSV-1 infection. Importantly, a constitutively active form

we have previously reported to function as adaptor proteins

Endogenous levels of miR- 199 a in a panel of epithelial

excellent targets for cancer therapy. We first show that severalof Cdc 42 also inhibited HSV- 1 secondary envelopment.
tumour cell lines were negatively correlated with the efficiencyof HSV-1 secondary envelopment in them. These results

between the SWI/SNF complex and NF-κB dimers, areepithelial tumor cell lines express the genes of this family̶DPF1, DPF2, DPF3a, and DPF3b̶at various levels

indicate that miR-199a is a crucial regulator of Cdc42 activity

and that knockdown of any of them reduces anchorage-of Golgi function and for the secondary envelopment of HSV-

（which we have named CT1 ）composed of the 84 highly

on Golgi membranes, which is important for the maintenance1 upon its infection.

2. Tumor suppression via inhibition of SWI/SNF

complex-dependent NF-κB activation

Kazuyoshi Kobayashi 1, 2, Hiroaki Hiramatsu 1, 2, Shinya
1

1

1, 2

Nakamura , Kyousuke Kobayashi , Takeshi Haraguchi
1, 2Hideo Iba
1

andDivision of Host-Parasite Interaction, Department ofMicrobiology and Immunology, The Institute of Medical
2

Science, The University of Tokyo, Tokyo, Japan

Division of RNA Therapy, Medical Mycology Research

independent growth（ AIG ）. We found that a peptide

homologous N-terminal amino acids of the d 4 protein

family can function as a strong dominant negative mutant
that reduces the NF-κB–activating activity of the entire d4

protein family. Proximity ligation assays clearly showed that

CT1 retains full adaptor function linking SWI/SNF complex

with NF-κB dimers, indicating that the C-terminal domainof d4 protein family contains essential function for NF-κ

B activation. CT1 suppressed AIG much more effectively

than knockdown of any d4 protein alone without affecting

growth in monolayer cultures. The peptide also suppressedtumorigenicity in a mouse xenograft model.

Using microarray analysis, we were able to separate NF-κB

target genes into two subtypes, SWI/SNF complex-dependent

Center, Chiba University, Chiba, Japan（CT1-sensitive）genes and SWI/SNF complex-independent

NF-kappaB（ NF- κ B ）is one of the most importantcomprised about three-quarters of all NF- κ B genes and,transcriptional factor that are involved in infection,
immunological response, inflammation and cancer. Indeed,（ CT 1 -insensitive ）genes. The CT 1 -insensitive genes

unlike the CT1-sensitive genes, included many housekeeping
genes and key transcription factors that are important toin numerous epithelial tumor cell lines, an elevated basal

amplify the immunoresponse. We further indentified IL-6

to tumor formation activity. Although it has been considered

activity.

expression level of NF-kappaB（NF-κB）strongly contributes

a promising cancer therapy target, few inhibitors of NF-κ

as one of the CT-sensitive genes that are required for AIG

B can effectively suppress cancer. This may be partly because

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201629

3. Inhibition of miR- 200 -family suppresses tumor

formation by triple-negative breast cancer
1, 2

1

1

Takeshi Haraguchi , Ryo Uchikawa , Masayuki Kondo ,Takanobu Shimizu1, 3, Hiroaki Ito1, Kazuyoshi Kobayashi1, 2,
Hiroaki Hiramatsu1, 2, Kouhei Sakurai4, Kazuya Shiogama5,
4, 5

5

6

Ken-ichi Inada , Yutaka Tsutsumi , Ryo Tamura , Akifumi
63

3

Hamada , Junji Inokoshi , Hiroshi Tomoda , Seisuke
Hattori6 and Hideo Iba1, 2

1

3

4

5

6

cells to non-cancer stem cells.

SUM149PT, a cell line originated from triple-negative

breast cancer, consists of ESA（epithelial specific antigen）（+）and ESA（-）cells. Each subpopulation can convert to theother subpopulation. Cells in ESA（+） fraction has strong

tumorigenicity indicating it contains breast cancer initiating

cells, whereas cells in ESA（-）fraction has low tumorigenicity.
We found that the expression of miR-200 family membersin the ESA（+）fraction was enriched and miR-200 family

Division of Host-Parasite Interaction, Department of

was a key regulator of transition between two subpopulations.

Science, The University of Tokyo, Tokyo, Japan

ESA（-）fraction by transducing lentivirus vectors expressing

Microbiology and Immunology, The Institute of Medical
2

is a promising therapeutic target to differentiate cancer stem

Division of RNA Therapy, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba University, Chiba, JapanD e p a r t m e n t o f P h a r m a c y, G r a d u a t e S c h o o l o f
Pharmaceutical Sciences, Kitasato University, Tokyo, Japan

Department of Diagnostic Pathology II, Fujita Health
University, Aichi, Japan

Department of Pathology, Faculty of Medicine, Fujita

We suppressed the miR-200 family in either the ESA（+）or

TuD RNA against miR-200 family members. We found thatthe strong tumorigenicity of ESA（+）fraction was drasticallyreduced, and that the marginal tumorigenicity of the ESA（-）

fraction, which likely arose from cells that had stochasticallyconverted to ESA（+）cells in vivo, was completely suppressed.
This result showed that the strong suppression of miR-200

family activity could have potential therapeutic benefit in

Health University, Aichi, Japan

triple-negative breast cancer.

Sciences, Kitasato University, Tokyo, Japan

Publications

Division of Biochemistry, School of Pharmaceutical

Mammary tumors have been shown to contain multiple

subpopulations with distinct phenotypic characteristics. In
heterogeneous populations, there are cancer stem cells withmalignant characteristics that are high tumorigenicity, selfrenewal, differentiation, and drug-resistance. Therefore, it

30

千葉大学

１）Haraguchi T, Kondo M, Uchikawa R, Kobayashi

K, Hiramatsu H, Kobayashi K, Chit UW, Shimizu
T, Iba H: Dynamics and plasticity of the epitherial tomesenchymal transition induced by miR-200 family

inhibition. Sci Rep, 6: 21117, 2016.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

五ノ井教授 真菌・放線菌と宿主の分子相互作用研究プロジェクト
Project for Host Pathogen（fungi/actinomycetes）Molecular Interaction
研究概要（Summary）

微生物資源分野では , バイオリソース管理室と協力し , 日本国内および海外のヒトや動物に由来する
病原真菌・病原放線菌を収集 , 管理 , 分譲している . これらの菌株数は , 現在約２万に達するが , 菌のマーカー遺伝子やゲノムを解析し , また薬剤感受性や電子顕微鏡による形態観察 , ２次代謝産物の解析などを行い菌株資源 , 遺伝子資源としての付加価値の向上に努めている . さらなる独自の研究テーマ（PI プロジェクト）については下記『主なテーマ』を参照してください .
主なテーマ（Research Focus）
1）ヒト・動物の病原真菌・病原放線菌の収集 , 分類 , 系統解析 , ２次代謝産物の解析 , 病原因子解析 ,２次代謝産物生合成遺伝子 , ゲノムの解析を行っている .
2）真菌・放線菌のヒトへの感染機構の解明を分子生物学的手法 , 動物モデル , ゲノム解析などを用いて行っている . 特に , 近年は ,（Ⅰ）糖鎖と糖鎖受容体を介した菌と宿主の相互作用解明 ,（II）ヒト
病原糸状菌の寄生ウイルスが病原性に及ぼす影響を調べることに力を入れている .
3）真菌感染発症と宿主の栄養状態やストレス状態との関連を , 動物モデルなどを用いて研究している .
特に代謝関連分子と免疫関連分子の機能的リンクに焦点を当てている .

In cooperation with Bio-Resource management office, we collect pathogenic fungi and actinomycetes inboth inside and outside of Japan. We identify pathogenic fungi and actinomycetes as a public service, andanalyze their phylogenetic relations. We store fungi and actinomycetes with the support of the National
BioResource Projects in Japan, and distribute them upon request. Currently we stock approximately 20,000
strains. We analyze sequences of marker genes and genomes, drug-sensitivities, and observe fine structuresusing electron-microscopy, to enhance biodiversity values. Other projects are listed below.
1）We collect, identify and phylogenetically analyze of human and animal pathogenic fungi andactinomycetes. We also analyze 2nd metabolites and their synthetic enzymes, pathogenic factors, andgenomes.
2）We analyze infection mechanisms of human pathogenic fungi and actinomycetes using molecularmethods, animal models, and genome analysis. In particular, we are trying to understand（I）roles ofcell surface glycans and their receptors（lectins）of human and fungi in infection, and also（II）studying
influence of mycovirus on pathogenicity of filamentous fungi.
3）We study effects of diets and mental stresses on fungal infections mainly using animal models andmolecular methods. We are trying to clarify yet unknown links between metabolism and immune-related
molecules.
教

授

助

教

特

任

助

教

技 術 補 佐 員

五ノ井 透
大荒田素子
酒井香奈江
川名 直美

Professor

Assistant Professor

Research Assistant Professor

Research Promotion Technican

千葉大学

真菌医学研究センター報告

Tohru Gonoi
Motoko Oarata
Kanae Sakai
Naomi Kawana

第 20 巻201631

1. Nocardia shinanonensis sp nov., isolated from a patientis proposed. The type strain is IFM 11456（T）（= NBRC

Takehisa Matsumoto1, Tatsuya Negishi1, Moriyuki Hamada2,

2. Successful treatment of primary cutaneous Nocardia

1

Shigeki Numata1, Tokio Numata2, Toru Gonoi 3 and Kayoko

with endophthalmitis

Hisayuki Komaki2, Tohru Gonoi T3 and Takashi Yaguchi323

Department of Laboratory Medicine, Shinshu University
Hospital, Matsumoto, Nagano, Japan

Biological Resource Center, National Institute of

109590（T）= TBRC 5149（T））.

brasiliensis infection with oral potassium iodide

Matsunaga1

Technology and Evaluation（NBRC）, Kisarazu, Chiba,

1

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

2

Japan

Chiba, Japan3

School of Medicine, Toyoake, Japan

Kamei Hifuka Numata Clinic, Okazaki, Japan

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

A nocardioform strain IFM 11456（T）was isolated fromthe aqueous humor from a patient with endophthalmitis andDepartment of Dermatology, Fujita Health University

Nocardia species are soil-borne aerobic actinomycetes

was characterized to its taxonomic position. IFM 11456（T）

responsible for systemic or cutaneous infections. Nocardia

in whole-cell hydrolysates and mycolic acids that co-migrated

combined antibiotics therapies are commonly effective incontained arabinose, galactose and meso-diaminopimelic acidbrasiliens is the predominate cutaneous nocardiosis. Althoughwith those from the type strain of Nocardia asteroides. The acyl

nocardiosis, few reports show efficacy of the treatment withlipids were phosphatidylethanolamine, diphosphatidylglycerol

nocardiosis due to N. brasiliensis who was successfully treatedtype of muramic acid was N-glycolyl. The diagnostic polar

and two unidentified glycolipids and the predominantmenaquinone was MK-8（ H- 4 , omega-cycl. ）. These

characteristics are typical of members of the genus Nocardia.

Results of phylogenetic analyses based on 16S rRNA genesequences indicated that the isolate represented a novel species

potassium iodide（KI）. We report a case of primary cutaneouswith oral KI with a review of the published work.

3. Multi-azole resistant Aspergillus fumigatus harboring

Cyp51A TR46/Y121F/T289A isolated in Japanof the genus Nocardia and was most closely related to the type

Daisuke Hagiwara1, Hiroki Takahashi1, Masanori Fujimoto2,

Nocardia aobensis IFM 0372（T）（98.1%）. However, analysis

Itoyama4, Akira Watanabe1 and Katsuhiko Kamei1

strains of Nocardia mikamii JCM 15508（T）（98.1%）andof partial gyrB sequences showed that strain IFM 11456

Mai Sugahara2, Yoshiki Misawa3, Tohru Gonoi1, Satoru（T）had 90.2% similarity to Nocardia concava IFM 0354（T）

1

DNA relatedness values for strain IFM 11456（T）compared2

and N. concava IFM 0354（T）ranged from 24.4 to 39.9%.

3（ T）from phylogenetically related species were growth at4

and 90% to Nocardia niigatensis IFM 0330（T）. The DNA-

with N. mikamii JCM 15508（T）, N. aobensis IFM 0372（T）
Phenotypic characteristics that differentiated IFM 11456

45 degrees C, utilization of citrate and growth with inositol

as a sole carbon source. On the basis of this polyphasic

study, the isolate represents a novel species within the genus

Nocardia, for which the name Nocardia shinanonensis sp. nov.

32

千葉大学

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Japan

Department of Internal Medicine, Mitsui Memorial

Hospital, Tokyo, Japan

Department of Infection Control and Prevention, The

University of Tokyo Hospital, Tokyo, Japan

Department of Infection Control and Prevention, Mitsui
Memorial Hospital, Tokyo, Japan

Multi-azole resistant Aspergillus fumigatus carrying TR46/

Y121F/T289A was isolated from a patient in Japan in Dec

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

2013. This strain grouped into the same clade of the ones

Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, and Aspergillus oryzae.

which were clinically isolated in France and Germany. A.

Results: We found transcripts of 687, 694, and 812 genes

outside the Eurasian continent.

A. fumigatus, A. niger, and A. oryzae, respectively（conidia-

4. Hyrtinadines C and D, New Azepinoindole-Typeand 749 genes were increased in the 1 h-cultured conidia

fumigatus harboring this mutation could be rapidly diffused

Alkaloids from a Marine Sponge Hyrtios sp.

Takaaki Kubota1, 2, Kenta Nakamura2, Kanae Sakai3, Jane4

3

2

Fromont , Tohru Gonoi and Jun’ichi Kobayashi
1
2

3

4

Showa Pharmaceutical University, Tokyo, Japan

were enriched in the resting conidia compared with hyphae inassociated genes ）. Similarly, transcripts of 766 , 1 , 241 ,compared with the resting conidia（germination-associatedgenes）. Among the three Aspergillus species, we identified
orthologous 6,172 genes, 91 and 391 of which are common

conidia-and germination-associated genes, respectively. A

variety of stress-related genes, including the catalase genes,
were found in the common conidia-associated gene set, andGraduate School of Pharmaceutical Sciences, Hokkaido

ribosome-related genes were significantly enriched among

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

associated genes, we found that calA-family genes encoding

Western Australian Museum, Western Australia, Australia

germination stage in all Aspergillus species tested here. In A.

New bisindole alkaloids, hyrtinadines C（1）and D（2）,expressed in a bZIP-type transcriptional regulator AtfA-

University, Hokkaido, Japan

Chiba, Japanthe germination-associated genes. Among the germination-a thaumatin-like protein were extraordinary expressed in early

fumigatus 63% of the common conidia-associated genes were

have been isolated from an Okinawan marine sponge Hyrtios

dependent manner, indicating that AtfA plays a pivotal role inelucidated based on analyses of the spectral data. Hyrtinadines

the precocious expression of the germination-associated calAsp. The structures of hyrtinadines C（1）and D（2）wereC（1）and D（2）were the relatively rare alkaloids possessing

a 3, 4-fused azepinoindole skeleton. Hyrtinadines C（1）andD（2）showed antimicrobial activity.

5. Comparative transcriptome analysis revealing dormant

conidia and germination associated genes in Aspergillus

the maintenance of resting conidial physiology. Unexpectedly,

and an abnormal metabolic activity were detected in theresting conidia of the atfA mutant, suggesting that AtfA wasinvolved in the retention of conidial dormancy.

Conclusions: A comparison among transcriptomes of hyphae,
resting conidia, and 1 h-grown conidia in the three Aspergillus

species revealed likely common factors involved in conidial

species: an essential role for AtfA in conidial dormancy

dormancy. AtfA positively regulates conidial stress-related

Daisuke Hagiwara, Hiroki Takahashi, Yoko Kusuya, Susumu

germination, suggesting a major role for AtfA in Aspergillus

genes and negatively mediates the gene expressions related to

Kawamoto, Katsuhiko Kamei and Tohru Gonoi

conidial dormancy.

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

6. Aflatoxin M1 Contamination of Milk and Its Products

Background: Fungal conidia are usually dormant unless the

Gladys Langat1, Matsusawa Tetsuhiro 2, Tohru Gonoi 2,

Chiba, Japanin Bomet County, Kenya

extracellular conditions are right for germination. Despite theVivienne Matiru3 and Chrisine Bii4

mechanism underlying entry to, maintenance of, and exit

1

importance of dormancy, little is known about the molecularfrom dormancy. To gain comprehensive and inter-species

insights, transcriptome analyses were conducted across

千葉大学

Institute of Tropical Medicine and Infectious Diseases,

Jomo Kenyatta University of Agriculture and Technology,
Nairobi, Kenya

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

33

2

3

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

Department of Botany, Sub-Department of Medical

Microbiology, Jomo Kenyatta University of Agriculture and4Technology, Nairobi, Kenya

Centre of Microbiology Research, Kenya Medical Research

7. Nocardia elegans infection: a case report and literature

review

Itaru Nagakura1, Tomoki Nagakura2, Hiroaki Fujita3, Shinji
Fukusima3 and Tohru Gonoi4
1

Department of Infection Control and Prevention, Tokyo

Aflatoxin M1（AFM1）is a major carcinogenic compound2

Department of Anesthesiology, Tokyo Medical University,

ingestion of aflatoxin B1 by dairy animals. The study aimed

3

products from Bomet County. A total of 185 samples（1504Institute, Nairobi, Kenya

that may be found in milk and dairy products resulting fromat determining the level of aflatoxin M1 in milk and milk

raw milk and 35 processed milk and milk products）were

randomly collected from milk collection sites and randomly
selected milk kiosks respectively. The AFM1 was analyzed

using a commercial ELISA kit（Ridascreen, aflatoxin M1

Medical University Hospital, Tokyo, JapanTokyo, Japan

Department of Infection Control and Prevention, Tokyo
Medical University Hospital, Tokyo, Japan

Department of Microbiology, Tokyo Medical University,
Tokyo, Japan

A case of disseminated nocardiosis caused by Nocardia

elegans in a 72 -year-old man with rheumatoid arthritis,

R-Biopharm, Product code, R5812, Darmstadt, Germany）.

treated with tacrolimus and prednisolone, is reported

for AFM1, an overall contamination rate of 84.32%. The

with endophthalmitis and an abdominal skin abscess. He

Out of 185 samples investigated, 156 samples were positive

samples with levels higher than the tolerance limit of 0.05μg/l

recommended by Food and Agriculture Organization（FAO）

and World Health Organization（WHO）limits were 43.8%
mainly contributed by the raw milk compared to processed

milk（52.0% versus 8.6%）. Processed milk had insignificant

level of contamination with aflatoxin M1（Median 0.00（IQR:
0.00, 0.00μg/l）with a minimum of 0.00μg/l and a maximumof 0.69μg/l. Raw milk showed significant contamination,

herein. The patient had impaired vision and was diagnosed

was started on trimethoprim–sulfamethoxazole treatment,
followed by cefepime. The patient was then switched to

a combination of imipenem–cilastatin and minocycline.
Although the patient survived as a result of surgery andprolonged antibiotic treatment, he eventually lost vision

after the infection became resistant to antibiotic treatment.
Molecular analysis of samples from the abscess and vitreous

fluid confirmed the extremely rare pathogen N. elegans,median 0.09（IQR: 0.00, 0.50）μg/l with a minimum of 0.00

which accounts for only 0.3–0.6% of infections caused bysignificant differences in AFM1 levels with study sites（P =with pulmonary infection, and disseminated infections are

μg/l and a maximum of 2.93μg/l. Although there was no0.217）; the median levels of aflatoxin M1 was high in sites

Nocardia species. This organism is almost always associatedrare. As with previously reported norcardial infections, the1, 3, and 7. The sites that had median aflatoxin M1 levels

current case was treated successfully with trimethoprim–

2, 4 and 6. Due to high incidence of AFM1 contamination

However, the clinical characteristics of this organism

below the WHO/FAO acceptable limits of 0.05μg/l were sitesof milk and milk samples in Bomet County, there is need forregular monitoring and regulation of AFM1 contamination inmilk and its products in the County.

34

千葉大学

sulfamethoxazole, carbapenems, and aminoglycosides.
remain unclear. Further studies are therefore required todevelop more effective treatment protocols for disseminatednocardiosis caused by this problematic pathogen.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

8. First case report of pulmonary nocardiosis caused by

Nocardia mexicana
1

2

2

Tomokazu Kuchibiro , Takeshi Ikeda , Hirotaka Nakanishi ,Yukiko Morishita2, Katsuyuki Houdai1, Junko Ito3 and Tohru

Gonoi
1

2

3

3

Department of Clinical Laboratory, Naga Municipal

Hospital, Wakayama, Japan

Department of Respiratory Medicine, Naga Municipal

Hospital, Wakayama, Japan

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

Introduction: Nocardia species usually cause opportunistic

amikacin and oral linezolid.

Conclusion: Despite its rarity, the species require attention
owing to the existence of multidrug-resistant strains.
Publications

１）Hagiwara D, Takahashi H, Fujimoto M, Sugahara M,

Misawa Y, Gonoi T, Itoyama S, Watanabe A, Kamei

K: Multi-azole resistant Aspergillus fumigatus harboring
Cyp51A TR46/Y121F/T289A isolated in Japan. J InfectChemothera, 22: 7-8, 2016.

２）Hagiwara D, Takahashi H, Kusuya Y, Kawamoto S,

Kamei K, Gonoi T: Comparative transcriptome analysis

revealing dormant conidia and germination associatedgenes in Aspergillus species: an essential role for AtfA inconidial dormancy. BMC Genomics, 17: 358, 2016.

infections, and the frequency of these infections is increasing３）Kubota T, Nakamura K, Sakai K, Fromont J,

hosts. However, Nocardia species may sometimes cause

Azepinoindole-Type Alkaloids from a Marine Spongeowing to the growing population of immunocompromised
an infection disease in immunocompetent hosts. Nocardia

mexicana infections are the least common and are very rare.

Case presentation: Herein, we report the first case of apulmonary infection with N. mexicana in a 61 -year-old

Japanese woman with a history of hyperlipidaemia and

Gonoi T, Kobayashi J: Hyrtinadines C and D, New

Hyrtios sp. Chem Pharm Bull, 64: 975-978, 2016.

４）Langat G, Matsusawa T, Gonoi T, Matiru V, Bii C:

Aflatoxin M1 Contamination of Milk and Its Products

in Bomet County, Kenya. Adv Microbiol, 6: 528-536,

2016.

bronchiectasis and a 6 -month history of non-productive５）Matsumoto T, Negishi T, Hamada M, Komaki H,

by bronchofiberscopy showed filamentous branching gram-isolated from a patient with endophthalmitis. Int J Syst

hacking cough. A sample of bronchial lavage fluid obtained
positive rods and acid-fast filamentous branching rods, anda colony of suspected Nocardia was cultured. Based on 16S
rRNA, gyrB, rpoB, secA1 and hsp65gene sequence analyses

and biochemical and physiological properties, the strain

Gonoi T, Yaguchi T: Nocardia shinanonensis sp nov.,
Evol Microbiol, 66: 3324-3328, 2016.

６）Nakamura I, Nagakura T, Fujita H, Fukusima S, Gonoi

T: Nocardia elegans infection: a case report and literature

review. Int J Infect Dis, 54: 15–17, 2016.

was identified as N. mexicana. The strain was resistant７）Numata S, Numata T, Gonoi T, Matsunaga K:

clarithromycin, minocycline, gentamycin, tobramycin,

barsiliensis infection with oral potassium iodide. J

to the antimicrobial agents amoxicillin-clavulanic acid,ciprofloxacin and trimethoprim-sulfamethoxazole. The

patient was treated with biapenem followed by intravenous

千葉大学

Successful treatment of primary cutaneous Nocardia

Dermatol, 43: 843-844, 2016.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201635

高橋准教授微生物創生プロジェクト

Project for Systems Biology of Microorganisms
研究概要（Summary）

我々はコンピュータ解析によって , 次世代シーケンサーを含む様々な生物実験で得られる大量データからの新規生物学的知見の創出 , 並びに , 数理モデルアプローチによる生命現象の解明に取り組んでいます . 大量データによる生命の「構成要素の理解」, 数理モデルによる「挙動の理解」という二つのコ
ンセプトの下 , 病原真菌を含む微生物を対象に細胞機能の分子レベルでの理解を目指しています .

Our research areas are Bioinformatics and Systems Biology. Our Bioinformatics approach aims to deeply
and clearly understand massive biological experiment data, e.g., sequence data by next generation sequencers.
Systems Biology aims to understand how biological systems work and help the experimental design mainly bymathematical modelling approach.

准

教

高橋
楠屋
石原
守

授

特

任

助

教

特

任

助

教

技 術 補 佐 員

弘喜
陽子
潤一
涼子

Associate Professor
Assistant Professor
Assistant Professor

Research Promotion Technician

1. Comparative transcriptome analysis revealing dormant

conidia and germination associated genes in Aspergillus
species: an essential role for AtfA in conidial dormancy
1

1, 2

1

Daisuke Hagiwara , Hiroki Takahashi , Yoko Kusuya ,1

1

1

Susumu Kawamoto , Katsuhiko Kamei and Tohru Gonoi
1

2

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

Molecular Chirality Research Center, Chiba University,

Hiroki Takahashi
Yoko Kusuya
Jun-ichi Ishihara
Ryoko Moriin A. fumigatus, A. niger, and A. oryzae, respectively（conidia-associated genes）. Similarly, transcripts of 766,
1,241, and 749 genes were increased in the 1 h-cultured

conidia compared with the resting conidia（germination-

associated genes）. Among the three Aspergillus species, we

identified orthologous 6,172 genes, 91 and 391 of which

are common conidia-and germination-associated genes,
respectively. A variety of stress-related genes, including thecatalase genes, were found in the common conidia-associatedgene set, and ribosome-related genes were significantly

Chiba, Japan

enriched among the germination-associated genes. Among

BACKGROUND: Fungal conidia are usually dormant unlessgenes encoding a thaumatin-like protein were extraordinary

the importance of dormancy, little is known about the moleculartested here. In A. fumigatus 63% of the common conidia-

dormancy. To gain comprehensive and inter-species insights,

regulator AtfA-dependent manner, indicating that AtfA plays

the extracellular conditions are right for germination. Despitemechanism underlying entry to, maintenance of, and exit fromtranscriptome analyses were conducted across Aspergillus

fumigatus, Aspergillus niger, and Aspergillus oryzae.

RESULTS: We found transcripts of 687, 694, and 812 genes

were enriched in the resting conidia compared with hyphae

36

千葉大学

the germination-associated genes, we found that calA-family

expressed in early germination stage in all Aspergillus species

associated genes were expressed in a bZIP-type transcriptionala pivotal role in the maintenance of resting conidial physiology.

Unexpectedly, the precocious expression of the germination-

associated calA and an abnormal metabolic activity weredetected in the resting conidia of the atfA mutant, suggesting

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

that AtfA was involved in the retention of conidial dormancy.

transcriptional pausing. This effect stems from the increased

hyphae, resting conidia, and 1 h-grown conidia in the three

is entropy-dominated. This report shows a linkage between

conidial dormancy. AtfA positively regulates conidial stress-

regulation of RNAP pausing driven by thermal fluctuations.

CONCLUSIONS: A comparison among transcriptomes ofAspergillus species revealed likely common factors involved inrelated genes and negatively mediates the gene expressions
related to germination, suggesting a major role for AtfA in

Aspergillus conidial dormancy.

2. Control of transcriptional pausing by biased thermal

fluctuations on repetitive genomic sequences

Masahiko Imashimizu1, 2, 3, Ariel Afek4, 5, Hiroki Takahashi2, 6,

Lucyna Lubkowska7 and David B Lukatsky8
1

2

3

4

5

6

7

8

microscopic heterogeneity of an elongation complex, and thus

repetitive sequence elements encoded in the genome andPublications

１）Hagiwara D, Takahashi H, Fujimoto M, Sugahara M,

Misawa Y, Gonoi T, Itoyama S, Watanabe A, Kamei
K: Multi-azole resistant Aspergillus fumigatus harboring
Cyp51A TR46/Y121F/T289A isolated in Japan. J InfectChemother, 22: 577-579, 2016.

２）Hagiwara D, Takahashi H, Kusuya Y, Kawamoto S,

Kamei K, Gonoi T: Comparative transcriptome analysis

revealing dormant conidia and germination associatedCenter for Cancer Research, National Cancer Institute,genes in Aspergillus species: An essential role for AtfA in

Medical Mycology Research Center, Chiba University,３）Han R, Rai A, Nakamura M, Suzuki H, Takahashi H,

Institute of Medical Science, University of Tokyo, Tokyo,

Analysis of Medicinal Plants for Gene Discovery in

Department of Chemistry, Ben-Gurion University of the

Enzymol, 576: 19-45, 2016.

Frederick, MD
Chiba, JapanJapan

Negev, Be’er Sheva, Israel

Department of Biostatistics and Bioinformatics, Duke

University Medical Center, Durham, NC

Molecular Chirality Research Center, Chiba University,
Chiba, Japan

Center for Cancer Research, National Cancer Institute,conidial dormancy. BMC Genomics, 17: 358, 2016.

Yamazaki M, Saito K: De Novo Deep Transcriptome

Biosynthesis of Plant Natural Products. Methods４）Imashimizu M, Afek A, Takahashi H, Lubkowska L,

Lukatsky DB: Control of transcriptional pausing by biased

thermal fluctuations on repetitive genomic sequences.
Proc Natl Acad Sci USA, 113: 7409-7417, 2016.

５）Rai A, Kamochi H, Suzuki H, Nakamura M, Takahashi

H, Saito K, Yamazaki M: De novo transcriptome

Frederick, MD

assembly and characterization of nine tissues of Lonicera

Negev, Be’er Sheva, Israelin chlorogenic acid, luteolosides, and secoiridoid

Department of Chemistry, Ben-Gurion University of thejaponica to identify potential candidate genes involved
biosynthesis pathways. J Nat Med, 2016 in press.

In the process of transcription elongation, RNA polymerase

６）Rai A, Nakamura M, Takahashi H, Suzuki H, Saito

genomic DNA, broadly regulating transcription; however,novo transcriptome assembly of Swertia japonica to（ RNAP ）pauses at highly nonrandom positions acrossK, Yamazaki M: High-throughput sequencing and demolecular mechanisms responsible for the recognition of such

identify genes involved in the biosynthesis of therapeuticcombination of statistical mechanical modeling and high-７）Rai A, Yamazaki M, Takahashi H, Nakamura M,

the effect of thermal fluctuations on the regulation of RNAP

analysis of Panax japonicus, and its comparison withwhich is biased by repetitive DNA sequence elements, causes

the saponins biosynthesis. Front Plant Sci, 7: 481, 2016.

pausing positions remain poorly understood. Here, using athroughput sequencing and biochemical data, we evaluatepausing. We demonstrate that diffusive backtracking of RNAP,

千葉大学

metabolites. Plant Cell Rep, 35: 2091-2111, 2016.

Kojoma M, Suzuki H, Saito K: RNA-seq transcriptome

other Panax species to identify potential genes involved in

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

37

矢口室長

バイオリソース管理室

Management of Unit of Microbiological Resources
研究概要（Summary）

病原真菌・放線菌の「保存・管理・提供」体制を整備し , 最新情報が付加された信頼できる菌株の提供を通じて , 真菌症ならびにその原因菌の研究・教育の基盤を支援している .

We are developing a system for preservation, management and distribution of pathogenic fungi andactinomycetes. We support the base of research and education of mycoses and their pathogens in order tosupply reliable strains that are added new information.

准

教

授

助

教

技

術

職

員

技 術 補 佐 員
技 術 補 佐 員

矢口
田中
伊藤
長村
山中

貴志
玲子
純子
由美
美花

Associate Professor
Assistant Professor

Research Technician

Research Promotion Technician
Research Promotion Technician

1. Studies in phylogeny, development of rapid identification,

antifungal susceptibility and growth rates on clinicalstrains of Sporothrix schenckii complex in Japan
1, 2

1

1

Rumi Suzuki , Alimu Yikelamu , Reiko Tanaka , Ken

Igawa2, Hiroo Yokozeki2 and Takashi Yaguchi1
1

2

Takashi Yaguchi
Reiko Tanaka
Junko Ito
Yumi Osamura
Mika Yamanaka

newly designed species-specific primers; 291 strains were S.

globosa and 9 strains were S. schenckii sensu stricto（in narrow
sense, s. s.）. S. globosa strains were further clustered into two

subclades and S. schenckii s. s. strains were divided into threesubclades. In 38 strains of S. globosa which were determined
antifungal profiles, four strains（11%）showed high minimal

inhibitory concentrations（MIC）value for itraconazole. All

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

tested strains of S. schenckii s. s. and S. globosa showed low

Department of Dermatology, Graduate School of Medical

for treatment of sporotrichosis when infection is severe. S.

Chiba, Japanand Dental Sciences, Tokyo Medical and Dental University,

sensitivity for amphotericin B. These antifungals are usedschenckii s. s. grew better than S. globosa, especially S. globosa

Tokyo, Japan

showed restricted growth at 35℃ and didn’t grow at 37℃.

Sporotrichosis is a fungal infection caused by the Sporothrix

agent of sporotrichosis in Japan. It is important to determine

Our molecular data showed that S. globosa is the main causal

species, which have distinct virulence profiles and geographic

the antifungal profiles of each case, in addition to species-

morphologically identified as S. schenckii from clinicalsporotrichosis.

distributions. We performed a phylogenetic study in strains
specimens in Japan, which were preserved at the Medical

Mycology Research Center, Chiba University. In addition,
we examined the in vitro antifungal susceptibility and growthrate to evaluate their physiological features. 300 strains were

examined by sequence analysis of the partial calmodulin
gene, or polymerase chain reaction（PCR）method using

38

千葉大学

level accurate identification, to strategize the therapy for2. Development of rapid identification and risk analysis ofMoniliella spp. in acidic processed foods

Motokazu Nakayama1, Kouichi Hosoya1, Yumi Shimizu-

Imanishi2, Hiroji Chibana3 and Takashi Yaguchi3

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

1

2

Global R&D-Safety Science, Kao Corporation, Tokyo,
Japan

Department of Applied Material and Life Science, College

of Engineering, Kanto Gakuin University, Kanagawa,3

We have previously proposed a rapid identification method

for bacterial strains based on the profiles of their ribosomal
subunit proteins（RSPs）, observed using matrix-assisted

laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry

Japan（MALDI-TOF MS）. This method can perform phylogenetic

Chiba, Japan

biomarkers, ideally calculated from amino acid sequence

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

characterization based on the mass of housekeeping RSP
information registered in public protein databases. With the

The number of spoilage incidents in the food industry

aim of extending its field of application to medical mycology,

increased, but the risk of food spoilage has not yet been evaluated.

of eukaryotic fungi registered in public protein databases

attributable to a species of the genus Moniliella has recently
The purpose of this study was to develop a method to rapidly

identify high-risk species and to conduct a risk analysis study

this study investigates the actual state of information of RSPs

through the characterization of ribosomal protein fractions

extracted from genome-sequenced Aspergillus fumigatus strainsof Moniliella spp. Acetic acid resistance of M. acetoabutens andAf293 and A1163 as a model. In this process, we have foundMoniliella species. All examined strains of M. acetoabutens

names are in confusion, so we have provisionally unified

ethanol resistance of M. suaveolens were higher than for otherdeveloped a high tolerance to acetic acid by culturing twice inliquid media containing low concentrations of acetic acid. Thesefinding indicate that M. acetoabutens and M. suaveolens are
high-risk species for food spoilage and must be discriminatedfrom other fungi. We developed species-specific primers to
identify M. acetoabutens and M. suaveolens using polymerase

chain reaction to amplify the D1/D2 domain of 28S rDNA.

that the public protein databases harbor problems. The RSPthem using the yeast naming system. The most serious

problem is that many incorrect sequences are registered in

the public protein databases. Surprisingly, more than half ofthe sequences are incorrect, due chiefly to mis-annotationof exon/intron structures. These errors could be corrected by

a combination of in silico inspection by sequence homology

analysis and MALDI-TOF MS measurements. We were also

Polymerase chain reaction using the primer sets designed for M.

able to confirm conserved post-translational modifications

were specific to the target species and did not detect other fungi

31 expressed RSPs under 20 , 000 Da could be accurately

acetoabutens（Mac_F1/R1）and M. suaveolens（Msu_F1/R1）

involved in food spoilage or environmental contamination. Thismethod is expected to be effective for the surveillance of raw
materials and components of the food production proess.

3. Verification of ribosomal proteins of Aspergillus

fumigatus for the use of biomarkers in MALDI–TOF
MS identification
1

1

2

Sayaka Nakamura , Hiroaki Sato , Reiko Tanaka andTakashi Yaguchi2
1

Environmental Management Research Institute, National

Institute of Advanced Industrial Science and Technology,
2

in eleven RSPs. After these verifications, the masses ofconfirmed. These RSPs have a potential to be usefulbiomarkers for identifying clinical isolates of A. fumigatus.

4. Draft genome sequence of the pathogenic filamentous

fungus Aspergillus lentulus IFM 54703T

Yoko Kusuya, Kanae Sakai, Katsuhiko Kamei, Hiroki

Takahashi and Takashi Yaguchi

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

Chiba, Japan

Aspergillus lentulus, a sibling species of Aspergillus f umigatus,

Tsukuba, Japan

has been reported as a causative agent of aspergillosis, and exhibited

Chiba, Japan

sequence of A. lentulus strain IFM 54703T for the first time.

Medical Mycology Research Center, Chiba University,

千葉大学

low susceptibility to azole. Here, we present the draf t genome

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201639

Publications

１）Furuya M, Sato T, Tanaka R, Yamamoto M, Yokota

NR, Miyagi E: Metachronous serous endometrial

intraepithelial carcinoma and serous peritoneal

carcinoma: Analysis of probable independent lesions.
Diagn Pathol, 11: 130, 2016.

２）Fur uya M, Yao M, Tanaka R , Nagashima Y,

Draft genome sequence of the pathogenic filamentous
fungus Aspergillus lentulus IFM 54703 T. Genome

Announc, 4: e01568-15, 2016.

８）Matsumoto T, Negishi T, Hamada M, Komaki H,

Gonoi T, Yaguchi T: Nocardia shinanonensis sp. nov.,
isolated from a patient with endophthalmitis. Int J Syst

Evol Microbiol, 66: 3324–3328, 2016.

Kuroda N, Hasumi H, Baba M, Matsushima J,９）Nakamura S, Sato H, Tanaka R, Yaguchi T: Verification

clinicopathologic studies of Japanese Asian patients withbiomarkers in MALDI-TOF MS identication. Mass

Nomura F, Nakatani Y: Genetic, epidemiologic andBirt-Hogg-Dubé syndrome. Clin Genet, 90: 403-412,

2016.

３）Ishikawa K, Sato F, Itabashi T, Wachi H, Takeda H,

Wakana D, Yaguchi T, Kawai K, Hosoe T: Asnovolins

A-G, spiromeroterpenoids isolated from the fungus

Aspergillus novofumigatus, and suppression of fibronectin

expression by asnovolin E. J Nat Prod, 79: 2167-2174,

2016.

４）Ishiwada N, Takeshita K, Yaguchi T, Nagasawaof ribosomal proteins of Aspergillus fumigatus for use as

Spectromet, 5: A0049, 2016.

10）Nakayama M, Hosoya K, Shimizu-Imanishi Y, Chibana

H, Yaguchi T: Development of rapid identification andrisk analysis of Moniliella spp. in acidic processed foods.
Biocont Sci, 21: 73-80, 2016.

11）Ogawa A, Matsumoto Y, Yaguchi T, Shimmura S,

Tsubota K: Successful treatment of Beauveria bassiana

fungal keratitis with topical voriconazole. J InfectChemother, 22: 257-260, 2016.

K, Takeuchi N, Hishiki H, Watanabe A, Kamei

12）Saito T, Itabashi T, Wakana D, Takeda H, Yaguchi T,

infections due to Emericella nidulans var. echinulata

of new phthalide and phthalane derivatives, isolated as

K, Shimojo N: The first case of invasive mixed-moldand Rasamsonia piperina in a patient with chronic

granulomatous disease. Mycopathologia, 181: 305-309,

2016.

５）Iribe Y, Yao M, Tanaka R, Kuroda N, Nagashima

Kawai K, Hosoe T: Isolation and structure elucidation

antimicrobial agents from Emericella sp. IFM 57991. J
Antibiot, 69: 89-96, 2016.

13）Shigemura T, Nishina S, Nakazawa H, Matsuda

K, Yaguchi T, Nakazawa Y: Early detection of

Y, Nakatani Y, Furuya M: Genome-wide uniparental

Rhizopus DNA in the serum of a patient with rhino-carcinomas associated with Birt-Hogg-Dubé syndrome.

hematopoietic stem cell transplantation. Int J Hematol,

disomy and copy number variations in renal cell

Am J Pathol, 186: 337-346, 2016.

orbital-cerebral mucormycosis following allogeneic

103: 354-355, 2016.

６）Kuboi T, Okazaki K, Inotani M, Sugino M, Sadamura

14）Suzuki R, Yikelamu A, Tanaka R, Igawa K, Yokozeki

Yaguchi T: A case of cutaneous Paecilomyces formosus

rapid identification, antifungal susceptibility and growthT, Nakano A, Kobayashi S, Ota A, Nishimura K,
infection in an extremely premature infant. J InfectChemother, 22: 339-341, 2016.

７）Kusuya Y, Sakai K, Kamei K, Takahashi H, Yaguchi T:

40

千葉大学

H, Yaguchi T: Studies in phylogeny, development ofrates on clinical strains of Sporothrix schenckii complex in

Japan. Med Mycol J, 57: E47-E57, 2016.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016文部科学省 ナショナルバイオリソースプロジェクト「病原微生物」
Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology
National BioResource Project“Pathogenic Microorganisms”

文部科学省では2002年度からナショナルバイオリソー

development by the national government. After the reviewing

スプロジェクト（NBRP）を開始し , 国が戦略的に整備

the NBRP every five years, now the selection of the forth phase

供などを行うための体制を整備してきた . その後５年ご

Chiba Universit y ’ s Medic al Mycolog y Researc h

することが重要なものについて体系的に収集 , 保存 , 提

has been stared.

との見直しを行い , 現在 , 第４期の公募が開始された .

Center（MMRC）is the NBRP Center for pathogenic, 大阪大学微生物病研究究センター（病原真菌・放線菌）（pathogenic fungi/actinomycetes）, Osaka University’s Research

大学熱帯医学研究所（病原性原虫）は , 相互の機関の連University ’ s Graduate School of Medicine（ pathogenic制を整備して , 高度情報を賦与した信頼できる病原微生

Medicine（pathogenic protozoa）. Working together, theyNBRP 病原微生物中核機関である千葉大学真菌医学研所および岐阜大学大学院医学研究科（病原細菌）と長崎携を図り , これらの病原微生物株の収集・保存・提供体
物株として提供し , 感染症と病原体の教育・研究をする

人々を支援している .

本プロジェクトは , 今後いかなる感染症が発生しても対応できる病原微生物コレクションを目指している .

In FY2002, the Ministry of Education, Culture, Sports,

Science and Technology（MEXT）implemented the National

BioResource Project（NBRP）to construct the frameworkfor systematic collection, preservation, and distribution ofbioresources, with a focus on those that required strategic

千葉大学

microorganism, and this project is carried out by MMRC
Institute for Microbial Diseases（pathogenic bacteria）, Gifu

bacteria）, and Nagasaki University’s Institute of Tropicalcooperate in various efforts to support education and researchpertaining to infectious diseases and pathogens. Specifically,
they are developing a system for collection, preservation, anddistribution of pathogenic microorganisms, and they supply
reliable strains of pathogenic microorganisms that are backed byhigh-level information.

The project aims to establish a reliable and sufficient at

the collection to deal with infectious diseases carried by any

pathogenic microorganisms.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201641

長崎大学熱帯医学研究拠点特定領域共同研究「熱帯地域 , 特にアフリカおよびベトナムで発生している真菌症・放射菌症の原因菌の収集と形態学的 , 生理学的 , 分子生物学的解析」プロジェクト

Cooperative Research of Priority Areas with NEKKEN, Nagasaki University
Project for Morphological, Physiological and Molecular Biological Analysis of Pathogenic
Fungi and Actinomycetes Collected in Africa and Vietnam
長崎大学熱帯医学研究所ケニア拠点の助力を得て , ケ

ニアを中心に上記表題のプロジェクトを展開しています .

現在までにケニア全土の主要穀物（トウモロコシ , 小麦）やミルクなどを汚染するカビ毒（発がん性アフラトキシ

ン他）とその生産菌の解析を進め , 現地の食糧の多くが ,世界の安全基準値を大きく上回るカビ毒で汚染されていることを明らかにしてきました . 結果は , 順次現地のマスコミにも取り上げられ , 大きな反響を呼び起こしました . さらに , フザリウム属菌 , アスペルギルス属菌など ,食糧植物を汚染し人体に健康被害を及ぼす菌についても2012 年 2 月

ケニア国スキム市の病院・研究施設訪問

現地研究員を日本に招聘するなどして共同研究を続けています . さらに現地に蔓延するエイズの患者さんの命をCryptococcal fungi in HIV-infected patients has been launchedに疫学的調査を行なっています .

doctors from UCSF, USA.

奪う原因菌のひとつであるクリプトコッカス属菌を中心
海外での研究は , 現地の研究者や監督官庁と信頼関係

in collaboration with Kenya Medical Res. Insti.（KEMRI）andIn 2016 we imported approximately 300 hundreds of fungal

を築き , 適切な許可を得るなど多くの問題を解決しなけ

strains from Kenya with collaboration of Kenyan researchers andの生活の質（QOL）の向上を図り , さらに日本との友好

agencies, started analyzing them by morphological, molecular

は地球のグローバル化 , 温暖化 , 環境・食糧事情の悪化

describing new fungal species from Kenya.

大きく貢献するはずです .

contamination of the domestic beer, busaa, which is very popular

れば前進できません . しかし , 現地の医療に貢献し , 人々を深めるために努力を重ねています . 一方これらの研究が進む中で , 日本の人々の医療や QOL の維持にも , 将来

Under assistance of Kenya Research Station, Inst. NEKKEN,

Nagasaki univ., we are analyzing toxins contaminating major local

under appropriate permission of Kenyan and Japanese regulatory

and physiological methods. We are preparing new papers
In 2014 we published on the high risk mycotoxin

in Kenyan local areas and served in several types of celebrations.
The results were published in an academic journal and alsoannounced in nationwide papers. In October 2014, we invited

grains（maze, wheat, rice etc. ）milks, local beers and so on.

Mr. Olga, a research officer of Kenya Medical Research Institutefoods are contaminated by several toxins at concentrations far

started collaborative works on food contaminating fungi and

We also analyze fungal producers of toxins. We found the local

above the international standards. The result has been publishedin a scientific papers and announced in newspapers, receiving

large public attention. A new project for epidemiological study of

42

千葉大学

to Medical Mycology Research Center, Chiba University, andmycotoxins, human pathogenic Cryptococcus in HIV patients,
and dermatophytes in Kenya.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016高齢者・新生児アスペルギルス症制圧へ向けた予防・診断・治療開発プロジェクト
The Project for Prophylaxis, Diagnosis, and Treatment for Aspergillosis
and the Other Mycoses in Aged and Neonate Patients

真菌が内臓に感染する深在性真菌症は難治性で死亡率が高く重要な疾患である . 我が国で最も死亡者が多い真菌症はアスペルギルス症であるが . 我が国で懸念されている高齢化や COPD の増加はいずれも慢性肺アスペル

いた . 深在性真菌症は34症例の報告があったが , 原因菌

はカンジダ属が27例と最も多く , また６例が死亡していた . これは日本における新生児深在性真菌症の実態を明らかにしたはじめての研究であり , 新生児深在性真菌症

ギルス症の発症要因であり , 本疾患の増加に対する対策の発症率は低いものの致死率が約20％の予後不良な感染

ルギルスにおいて , その主力薬剤のアゾール薬に対する療・予防法に関する指針を策定する必要があると考えら

生存率50-60％とされている本疾患の予後が更に悪化すの結果を基に , 日本新生児成育医学会・感染対策予防接スペルギルス症を始めとした深在性真菌感染症はしばし査を実施すること , 症例から分離された菌株の保存の徹が急務と考えられる . さらに近年は原因菌であるアスペ耐性化が欧米を中心に急速に進んでいることから , ５年ることが予測されている . 一方 , 新生児領域におけるア
ば致死的とされるが , その症例数や疾患の種類 , 詳細な予後などの実態は全く不明である . 本プロジェクトは ,このような COPD 等の慢性呼吸器疾患に併発するアス

ペルギルス症 , さらには新生児における真菌症を含めて症であることが明らかとなったことから , その診断・治. これた（第61回日本新生児成育医学会において発表）

種委員会において , 新生児深在性真菌感染症の前向き調
底と真菌センターでの解析を行うことを提言した . 現

在 , 全国調査結果に関して論文を作成中である .

Aspergillosis is the most serious deep-seated mycosis in

疫学調査を行いその実態を把握するとともに , 新規診断

Japan with high mortality rate. The recent changes in our

すものである .

COPD patients, are both predisposing factors for chronic

法 , 治療法 , 予防法の開発を行って本疾患の制圧を目指

本年 , 慢性呼吸器疾患を対象とした慢性肺アスペルギ

society, such as aging of the population and the increase of

pulmonary aspergillosis. Rapidly prevailing azole drug

ルス症の研究では , COPD などの慢性肺疾患に合併する

resistance among aspergilli is expected to make the disease

呼吸器内科と共同研究を開始した . その検討の中で , 対

is another threat to our society. It is often fatal, but the

慢性肺アスペルギルス症の疫学調査において , 慶応大学

more intractable. Deep-seated mycosis among neonates

象を COPD 患者から更に拡大して , 気管支拡張症 , 非結

epidemiology of the disease is not yet known. The aim of

礎疾患にもつ患者も対象とすることとし , 同大の担当教

diseases, i. e. aspergillosis among chronic pulmonary disease

核性抗酸菌症 , ALI（acute lung injury, 急性肺傷害）を基

this project is to make the epidemiological analyses of these官と症例登録を進めている . 更に症例を増やして検討すpatients and deep-seated mycoses among neonates, and to

立した .

measures to counteract the plagues.

では , 日本新生児成育医学会・感染対策予防接種委員

diseases patients, we started out a collaborative study with the

るため , 新たに同大感染制御センターとも協力関係を確
一方 , 新生児領域における深在性真菌感染症の研究

find seeds for the new diagnostic/therapeutic/preventive
In the study for the aspergillosis among chronic pulmonary

会の協力を得て , 新生児を取扱う全国の医療機関を対象

Department of Pulmonary Medicine, Keio University for the

査を行った . その結果 , 新生児に対する抗真菌薬の予防

being accumulated. To enhance the network for the study,に , 国内ではじめてとなる深在性真菌感染の発症状況調

投与は55施設で , 母体への予防投与は31施設で行われて千葉大学

surveillance of the disease, and registered patients are now
collaboration with the Department of Infectious Diseases is

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201643

also discussed.

identified in 29 patients. Candida species（n= 27）was the

For the study of deep-seated mycosis among neonates,

mist common pathogen. The mortality rate of IFI cases wasdetermine numbers of invasive fungal infections（IFI）from

medical facilities（43.0%）. Fungal prophylaxis for mothers

we conducted a nationwide retrospective survey in order toJanuary in 2014 to October in 2015. This is the first study

17.6%. Neonatal fugal prophylaxis was done in, 55 of 128

who colonized fungus was done in 31 of 128 facilities（24.2%）.

on nationwide surveillance of neonatal IFI in Japan. The

In Japan, diagnosis, treatment and prevention of neonatal

facilities that regularly take care of the high-risk neonate.

the treatment regimen against neonatal IFI were required

rate of reply was 41.4%. In 24 of 128 centers experienced

We are planning prospective surveillance on neonatal IFI

primary questionnaire survey was performed for 309 medical

The 128 centers replied the primary questionnaire and the

34 IFI. The estimated annual IFI incidence was 0.57 per

1,000 beds. The patient’s information at the onset of IFI wasavailable all 34 patients. The causative microorganisms was

44

千葉大学

IFI were varied. Continuous surveillance and established

for the improvement of outcome of high risk neonates.

collaboration with the members of Japanese Society for

Neonatal Health and Development.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

AMED/JICA 地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム（SATREPS）「薬剤耐性真菌検出のための新規検査法の開発とブラジルにおける疫学調査等への応用」

AMED/JICA Science and Technology Research Partnership for
Sustainable Development（SATREPS）“Development of innovative diagnostic tools to detect drug-resistant fungi
and their application to the epidemiological surveillance in Brazil”
SATREPS（感染症分野）とは , 国立研究開発法人日本医療研究開発機構（AMED）と独立行政法人国際協力

research funds for science and technology projects, and theJapan International Cooperation Agency（ JICA ）which

機構（JICA）が共同で実施している , 地球規模課題解決

provides development assistance（ODA）. Based on the needs

が共同で研究を行う研究プログラムである . 本課題は平issues and lead to research outcomes of practical benefit toと将来的な社会実装に向けて日本と開発途上国の研究者
成28年に採択された .

真菌感染症患者は世界的に急増している . なかでも薬剤耐性真菌による感染症は致死率が極めて高い . 真菌が耐性を獲得するメカニズムについては十分に解明されていないが , 農地に散布される農薬（抗真菌薬類似の成分を含む）の影響によるもの , 慢性真菌感染症患者に対するアゾール系抗真菌薬の長期使用などが原因として考えられている . その一方 , ブラジルでは薬剤耐性真菌の実態は十分解明されていない状況にある . 本研究では , ブ
ラジルのサンパウロ州立カンピーナス大学と連携し , カ
ンピーナス首都圏における耐性真菌による感染症の実態を明らかにし , 耐性真菌の検出法を開発することを通じ , ブラジルにおける難治性真菌感染症の治療戦略を構築するとともにブラジルにおけるカンピーナス大学を中心とした耐性真菌感染症研究拠点研究ネットワークの構築を目指す . 平成29年からのプロジェクト開始に向け ,平成29年１月に現地に詳細計画策定調査団（渡辺哲准教

授が参加）が赴き , カンピーナス大学のスタッフとプロジェクトについて詳細な意見交換を行う予定である .

SATREPS is a Japanese government program that promotesof developing countries, the program aims to address global
both local and global society. Our proposal was selected in

2016.

The incidence of fungal infections is increasing worldwide.

The fungi’s drug resistance has strengthened along with theincreased frequency and the mortality rate of the patients

having contracted drug-resistant fungal infections is high.

The mechanism how fungi gains drug resistance has not beenclarified. For example, it could be through the exposure topesticides containing ingredients similar to medical antifungal

drugs in the fields（fungicides）, or in the body of a patientwith chronic fungal infection who has undergone a treatmentusing azole-based drugs for a long time. Moreover, there

are few public data within Brazil that shows the frequency

of identification regarding fungal strains that cause drug

resistance. In these situation, we planned our porojectin collabration with the State University of Campinas in
Brazil（UNICAMP）. Aims of our project are to clarify the

epidemiology of drug-resistant fungi’s causing drug resistancein Campinas Metropolitan area, develop a new detection
method for the drug resistant fungi and establish an optimum

treatment system and research network regarding the drug-international joint research. The program is structured as afungi centered in UNICAMP.

and Development（ AMED ）which provides competitive

survey team（including Associate Professor A. Watanabe）

collaboration between the Japan Agency for Medical Research

千葉大学

The project will be started in 2017, and detailed planning

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201645

will visit Brazil, and framework of the project will be

46

千葉大学

thoroughly discussed with the staff of UNICAMP.

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016千葉大学グローバルプロミネント研究基幹・リーディング研究育成プログラム「“超個体”の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点」

Leading Research Promotion Program, Institute for Global Prominet Research
Advanced Research of Infection and Immunity Based on
Integrative Understanding of Host-Microbe Interactions
千葉大学で2016年度から開始された『グローバルプロ
ミネント研究基幹』において , 当センターの教員が中心となって申請した研究プロジェクトが , リーディング研

究育成プログラムの一つとして採択された .

本プログラムでは , 当センターの感染免疫分野及び微The research proposal submitted by MMRC, School of

Medicine, Faculty of Pharmaceutical Sciences and University

Hospital has been selected as Leading Research Promotion

Program by Chiba University. In this program, we focus onunderstanding of molecular interactions between hosts and生物資源分野の教員が中心となり , 医学研究院 , 薬学研

microbes, especially commensal fungi and bacteria, using theである個体の免疫システムとの相互作用 , そこへ侵入すof mouse and human. We also aim to reveal the molecular

究院 , 附属病院の研究者と連携して , 共生微生物と宿主る病原体による恒常性の破綻と感染症の発症機序などについての基礎研究を , 皮膚 , 呼吸器 , 消化器など各種器

model assay system in skin, respiratory and digestive organs
machinery underlying disruption of the homeostatic balance

by invasive pathogens and the pathogenesis of infectious

官でのモデル実験系を用いて解析し , そこから得られる

diseases. The results obtained from our projects will help

子メカニズムを明らかにする次世代型の「感染制御学」

infectious diseases and lead to improvement of human health.

成果を統合的に理解することで , 感染症・免疫制御の分を創出し , 我々の健康維持と感染症などの克服へつながto create innovative achievements in therapeutics of theる新規イノベーション創生を目指している .

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201647

平成 27 年度 共同利用・共同研究報告2015 Fiscal Year Cooperative Research Program Report
研究課題

’15－１

の生物学的機能があると思われる . 我々は A. nidulans の糸状菌の感染免疫応答と形態形成を支配する
細胞表層 α-1, 3- グルカンの生合成制御（東北大学大学院農学研究科 生物産業創成科学専攻）

啓（東北大学未来科学技術共同研究センター）

川本

ことを明らかにしたが , その他の生物学的機能はいまだ不明である . A. nidulans には無性世代と有性世代の生活環が存在することが知られている . 有性生殖器官（ク

阿部敬悦
吉見

AG 欠損株を用いて , AG が菌糸同士の接着因子である進・清水公徳・萩原大祐

ライストセシア）の形成には , 菌糸先端にある細胞の菌糸融合が必要である . そこで , ２種ある AG 合成酵素
遺伝子 agsA および agsB の遺伝子破壊株を用いて , 有性生殖能を検討した結果 , agsAΔ 株および agsBΔ 株は有性世代不全であることを見出した . 有性世代不全は agsA

（千葉大学真菌医学研究センター）

Δ 株でより顕著であった . 以上より , AG の接着因子とBiogenesis of cell wall α-1, 3-glucan controlling
fungi-host immune-responses and fungal
morphogenesis
Keietsu Abe（Graduate School of Agricultural Science, Tohoku

University）

Akira Yoshimi

しての機能が有性生殖にも寄与することが予想された .

A. nidulans の栄養生長時には , agsB が主として機能して

おり , CWI 経路による制御を受ける（総説１, 関連原著

関連総説１）. 以上の知見を総合すると , A.

論文１,nidulans に存在する２種の α-1,3- グルカン合成酵素は ,栄養生長時と有性生殖器官形成時に AG 合成の役割分担をしており , agsA がフェロモン経路の制御により有性生殖へ寄与するという全く新しい知見を与える可能性が考えられた . 現在 , フェロモン経路の人為的活性化株を作（New Industry Creation Hatchery Center, Tohoku

出中であり , 引き続き , フェロモン経路の人為的活性化

Susumu Kawamoto, Kiminori Shimizu, Daisuke
Hagiwara（２）「Aspergillus 属糸状菌における α-1,3- グルカンの細University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
（１）
「A. nidulans の CWI 経路 , フェロモン経路 , AG 生
合成酵素遺伝子の各欠損株の有性生殖能の解析」および「AG 合成酵素遺伝子の転写制御の CWI 経路とフェロモン経路への依存度の評価」

糸状菌の細胞壁 α-1, 3- グルカン（AG）は , 細胞壁の最外層に位置し , 内層の β-1, 3- グルカン（BG）やキチンを被覆することで感染宿主の免疫認識を回避するス

テルス因子として機能することが知られている . しかし , 麹菌などの非感染性の糸状菌にも AG が存在することから , 宿主に対するステルス性以外にも AG には未知

48

千葉大学

時の agsA および agsB 遺伝子の転写レベルを確認する予定である .

胞接着性への寄与の検証」

糸状菌は液体培養において菌糸が絡まり菌糸塊となってしまうことが多いことから , AG が Aspergillus 属糸状菌一般の菌糸接着因子であることが予想された . モデ

ル糸状菌 A. nidulans においても , 産業糸状菌 Aspergillus

oryzae で も 液 体 培 養 時 に 菌 糸 塊 が 形 成 さ れ る . 麹 菌

Aspergillus oryzae は agsA, agsB, agsC の３種の AG 合成酵素

遺伝子を有していることから , これら３種の遺伝子を破壊した agsAΔagsBΔagsCΔ 株（AG 欠損株）を造成した .

その結果 , 液体培養において , 麹菌の AG 欠損株の菌糸は , A. nidulans のような菌糸の完全分散性状にはならなかったが , 野生株に比べて小さな菌糸塊を形成し（野生株比直径が約60% に減少）, 培養総菌体量は増加した .

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

さらに , 組換えタンパク質の生産量も野生株比1.7倍に増加した . これらの結果は , 麹菌においても AG は菌糸接着因子であるが , AG の他にも菌糸接着因子が存在することを示唆している . AG 欠損株における酵素生産性の向上は , AG 欠損株を物質生産用の宿主株として用いることにより , 従来よりも一培養当たりの生産性の大幅菌である Aspergillus fumigatus にも共通のオーソログとして見出され , それぞれの atrR 遺伝子の破壊株では , 野生株より100倍も低い薬剤濃度でも感受性を示すことが見出された . A. fumigatus において AtrR の機能解析を行った結果 , AtrR がアゾール耐性に関わる ABC トランス

ポーターCdr1B の発現を制御していることを世界で初な改善が可能であることを示唆した（論文投稿中）.

めて明らかにするとともに , アゾール薬標的分子である

発表論文
１）Yoshimi A, Fujioka T, Mizutani O, Marui J, Hagiwara
D, Abe K: Mitogen-activated protein kinases MpkAand MpkB independently affect micafungin sensitivity inAspergillus nidulans. Biosci Biotech Biochem, 79: 836-

する酵素遺伝子の発現にも関わっていることを見出し

844, 2015

研究課題

た . AtrR が本菌のアゾール薬耐性メカニズムにおいて中心的な役割を果たしており , AtrR の機能阻害剤の開発はアゾール薬の治療効果を格段に高め , 耐性株に対しても卓効を示すことが期待される . 本研究では AtrR による

cdr1B および cyp51A 遺伝子の発現調節機構の解明を目指すとともに , Cyp51A に耐性変異を有するアゾール耐性’15－２

A. fumigatus 株における AtrR の機能阻害の重要性を検証

Aspergillus fumigatus の転写因子 AtrR による
アゾール系薬剤耐性関連遺伝子の発現制御の分子メカニズム

することを目的とした .

Cyp51A を含むエルゴステロール生合成酵素遺伝子の発現制御を担う転写因子としてすでに bHLH 型転写因子 SrbA が報告されていたことから , A. fumigatus の atrR

破壊株に加えて srbA 破壊株も作製して , アゾール耐性や

五味勝也

低酸素条件下における生育 , マウスに対する病原性な（東北大学大学院農学研究科）

川本

Cyp51A をはじめとしてエルゴステロール生合成に関与

どの違いを比較した . atrR 破壊株と srbA 破壊株ともにア進・清水公徳・萩原大祐

ゾール薬剤に感受性が高くなっていたが , atrR 破壊株の（千葉大学真菌医学研究センター）

方が感受性が高くなっていた . 一方 , 低酸素条件下におMolecular mechanisms for the regulation ofgenes involved in azole drug resistance by
the transcription factor, AtrR, in Aspergillus
fumigatus

ける生育はともに悪くなったが , 株間での差異はほとん

ど認められず , マウスに対する病原性も同等に低下していた . 両破壊株ともに cyp51A, erg3B, erg24A, erg25A のエルゴステロール生合成遺伝子の顕著な発現量低下を示したが , ABC トランスポーター遺伝子（cdr1B）の発現は atrR 破壊株のみで著しく低下していた . また , マウス

Katsuya Gomiを用いた感染性試験により , いずれの破壊株も病原性のUniversity）

AtrR を用いたクロマチン免疫沈降（ChiP）解析を行っ（ Graduate School of Agricultural Science, Tohoku

Susumu Kawamoto, Kiminori Shimizu, Daisuke
Hagiwara（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
麹菌 Aspergillus oryzae において見出されたアゾール系
薬剤耐性に関する新規 Zn2Cys6型転写因子 AtrR は , モデ
ル糸状菌の Aspergillus nidulans やアスペルギルス症起因

千葉大学

著しい低下が認められた . さらに , HA タグを付加したたところ , コントロールのアクチン遺伝子（act1）プロ

モーターは濃縮されなかったのに対して , cyp51A および

cdr1B のプロモーターはそれぞれ20倍 , 33倍に濃縮されたことから , AtrR がこれらのプロモーター領域に結合することが示された . また , AtrR は cyp51A の上流－69～－415の領域に , cdr1B の上流－675～－982の領域に強く結合することが示唆された . Cyp51A の G54E 置換変異による A. fumigatus のアゾール耐性株（IFM 61567）につ

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201649

いて atrR の破壊を行ったところ , イトラコナゾールやポいにより正確な解析が妨げられる可能性が懸念されるた野生株でも耐性を示すフルコナゾールに対しても感受性

真菌種における共通抗原として発現させた C. neoformans

サコナゾールに対して高い感受性を示しただけでなく ,を示すことが分かった . これはアゾール耐性株の atrR 破壊によって cyp51A および cdr1B のいずれも発現量が著しく低下したことによるものと考えられた .

なお , 以上の得られた成果を取りまとめた論文を５月

め , 卵白アルブミン（OVA）遺伝子を導入することで両株（YC-13, YC-11, H99） と C. gattii 株（R265） を 作

製した . その中で , YC-13と H99に OVA 遺伝子を導入した各１株（YC-13-OVA6, H99-OVA4）において OVA

mRNA の発現が検出され , YC-13-OVA6では感染マウス

中旬に PLoS Pathogen 誌に投稿した .

の所属リンパ節細胞が OVA の刺激により IFN-γ 産生を

研究課題

スジェニックマウス（OT-II）の脾細胞は YC-13-OVA6

示した . また , OVA 特異的な TCR を高発現したトラン’15－３

新興強毒性真菌Cryptococcus gattii の高病原性機序の免疫学的解析 — その２に YC-13ま た は YC-13-OVA6を 感 染 さ せ る と , YC-13-

OVA6感染マウスにおいて肺内の IFN-γ 産生及び菌の排除が有意に亢進していた . 一方 , OT-II マウス由来の脾川上和義・石井恵子

細胞を抗原エピトープである OVA323-339で刺激する際に ,（東北大学大学院医学系研究科）

川本に反応して IFN-γ を産生した . さらに , OT-II マウス

H99または R265の破砕物を添加したところ , H99の破砕

進・清水公徳物でのみ有意な IFN-γ 産生の増加が認められた . この違（千葉大学真菌医学研究センター）

いは各菌種の DNA に起因しており , TLR9を介すること

Immunological analysis of a mechanism for highpathogenicity of Cryptococcus gattii
Kazuyoshi Kawakami, Keiko Ishii（Tohoku University Graduate School of Medicine）

Susumu Kawamoto, Kiminori Shimizu（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
1999年にカナダのバンクーバー島で Cryptococcus gattiiが明らかとなった . さらに , H99由来の DNA は R265と比較して , 骨髄由来樹状細胞からの IL-12産生をより強く誘導する結果が得られた . 現在 , 両菌種で TLR9を刺激する CpG DNA のメチル化に相違がないか検討しているところである .

本研究を通して C. gattii 感染症の高病原性における免疫機序が明らかになることにより , 新たな治療・予防法の開発に繋がることが期待される . これらの成果は , 第

26回日本生体防御学会学術総会及び第44回日本免疫学会
学術集会にて報告した .

によるクリプトコックス症のアウトブレイクが発生し ,その後アメリカ合衆国の北西沿岸地域を中心に拡大しつつある . 2007年には , わが国でも国内感染と考えられる

C. gattii によるクリプトコックス症例が報告され , その後も症例が増加している . 通常の C. neoformans によるク

リプトコックス症と異なり , 健常者でも中枢神経感染症を発症し , その高い致死率から高病原性クリプトコックス症とも呼ばれており , 今後新興感染症として重要な問題に発展することが懸念される . 本研究では , C. gattiiと C. neoformans に対する免疫応答性を比較することで ,本感染症の病態解明の手掛かりを探ることを目的とした.

異なるクリプトコックス菌種での解析では抗原性の違

50

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

研究課題

’15－４

の CnEST2破壊株の取得率は極めて低く , CnEST2遺伝子が増殖に極めて重要な役割を果たしていることが示

Cryptococcus neoformans の特異な染色体末端維持機構を標的とした新規治療戦略の開発に向けて
松浦

遺伝子を欠損した後 , 数十回は正常に分裂を続けることが可能であることが知られている . 我々の発見は , C.

neoformans 特有のゲノム維持機能にテロメラーゼが深く

彰・久保田俊介

関与し , テロメラーゼの欠損が早期に増殖阻害をもたら（千葉大学大学院融合科学研究科）

川本

唆された . S. cerevisiae など他の生物種ではテロメラーゼ

進・高橋弘喜・清水公徳・東江昭夫（千葉大学真菌医学研究センター）

す可能性を示唆している .

そこで本年度は , 二倍体 C. neoformans において CnEST

２欠損のヘテロ接合体を取得した . 胞子形成により一倍

Towards development of novel therapeuticstrategies targeting the specific regulation of
telomere maintenance in Cryptococcus neoformans
Akira Matsuura, Shunsuke Kubota（Graduate School of Advanced Integration Science,

Chiba University）

Susumu Kawamoto, Hiroki Takahashi, Kiminori
Shimizu, Akio Toh-e（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
Cryptococcus neoformans は環境に常在する担子菌酵母であり , 主に免疫機能の低下した人に感染し重篤なクリプ
トコックス症を引き起こす日和見感染真菌として知ら体を取得し , テロメラーゼ欠損後どのタイミングで増殖が低下するかを確認したところ , テロメラーゼと相同組換え遺伝子との二重欠損株が取得できなかったのみならず , テロメラーゼ単独変異株の出現率も極めて低いことが示された . この結果により , テロメラーゼを抑制した条件で C. neoformans の増殖率が大幅に低下することが確認され , テロメラーゼを標的として C. neoformans 特異的治療が可能であることが示された .

今後は , テロメラーゼ活性の制御に必要な分子の探索をさらに進めつつ , テロメラーゼ , 組換え関連因子を含めた DNA 末端修復機構の選択制の違いが生じる機構

を分子の側から解析することで , この生物種の特異なDNA 損傷修復のメカニズムと生理的意義を明らかにし ,本菌に対する新規治療戦略の開発につなげたいと考えている .

れている . 本菌は , 環状プラスミドが維持できない , 遺伝子ターゲティングの効率が悪く , 導入された直鎖状DNA 断片の末端に高頻度でテロメア反復配列が付加される , など DNA 修復に関連するユニークな性質をもつ

ことが明らかにされている（Edman, 1992）. 本研究では ,染色体末端の維持機構という観点から C. neoformans 特有のゲノム維持機構を明らかにし , さらにこの特有なゲノム維持機構と C. neoformans の生活環との関連を明らかにすることを目的としている .

これまでに , C. neoformans よりテロメア DNA 伸長酵

素テロメラーゼ触媒サブユニットの相同遺伝子 CnEST2を単離している . C. neoformans 一倍体細胞で CnEST2の遺伝子破壊を行い , CnEST2遺伝子の細胞増殖における機能を解析した結果 , 本菌においても他生物種と同様 , 染色体末端の維持にはテロメラーゼの活性が必須であることが明らかになった . しかし , 一倍体細胞で千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

51

研究課題

’15－５

Tah18のオルソログ遺伝子（CgTAH18）が C. grabrata の生育および病原性の発現に必須であることを示す結果を

病原真菌における一酸化窒素の合成機構と生理的役割の解析

２）C. neoformans：プロモーター部位を改変して Tah18のオルソログ遺伝子（CnTAH18）の発現抑制株を構築

高木博史（奈良先端科学技術大学院大学バイオサイエンス研究科）

川本

得た（知花 , 高木ら：論文投稿中）.

進・知花博治・東江昭夫・萩原大祐（千葉大学真菌医学研究センター）

したところ , 生育が抑制されたことから , CnTAH18 は必須遺伝子であることが示唆された .

３）A. fumigatus：培養時に , 過酸化水素添加や高温ストレス処理すると , NO 特異的蛍光プローブによる染色が菌糸内に確認できたことから , これらのストレスに応答

Analysis of synthetic mechanism andphysiological role of nitric oxide in pathogenic
fungusHiroshi Takagi（Graduate School of Biological Sciences, Nara Instituteof Science and Technology）

Susumu Kawamoto, Hiroji Chibana, Akio Toh-e,
Daisuke Hagiwara（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

した NO の生成が示唆された .

今後 , Mpr1, Tah18, Dre2のオルソログ遺伝子の破壊

株 , 発現抑制株 , 高発現株を用いて , 細胞内 NO レベルを定量するとともに , カイコやマウスの感染実験によって NO がストレス耐性や病原性に及ぼす影響を多面的に評価する .

研究課題

’15－６

マイコウイルス由来タンパク質の異種発現シ
ステムを利用した病原性真菌の生育制御系の開発

研究成果
一 酸 化 窒 素（NO） は シ グ ナ ル 分 子 と し て , 哺 乳類の幅広い生命現象に関与している . 高木らは酵母

Saccharomyces cerevisiae において , NO がアセチルトランス

フェラーゼ Mpr １およびフラボタンパク質 Tah18依存
的にアルギニンから合成され , 酸化ストレス耐性に寄与することを見出した . また , Tah18と複合体を形成す

る Dre2タンパク質が酸化ストレスセンサーとして働き ,Tah18依存的な NO 合成を制御する機構を提唱した . 一
方 , 病原真菌はヒトに感染する際 , 温度・低酸素などのストレスに応答して耐性を獲得し , 病原性を示すことから , NO がストレス耐性や病原性に関与する可能性がある.

本研究では , S. cerevisiae と同様の NO 合成経路の存在が示唆される病原真菌（Candida glabrata, Cryptococcus

neoformans, Aspergillus fumigatus）について , NO と増殖・

森山裕充
（東京農工大学大学院農学府研究院）

五ノ井透・川本進（千葉大学真菌医学研究センター）

Development of novel regulation system for thehuman pathogenic fungi utilizing mycoviralproteins.
Hiromitsu Moriyama（Graduate School of Agriculture, Tokyo University ofAgriculture and Technology）

Susumu Kawamoto, Tohru Gonoi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

感染・病原性との関連性を解析する . 平成27年度には ,研究成果

１）C. glabrata：カイコ幼虫のテトラサイクリン転写

Magnaporthe oryzae chrysovirus, MoCV1-A が 宿 主 菌 に 対以下の研究成果が得られた .

抑制系を用いた in vivo 必須遺伝子の判定法を開発し ,

52

千葉大学

我々はイネいもち病菌に感染するマイコウイルス
して , 菌糸生育抑制 , 異常な色素沈着や分生子形成抑

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

制などの生育阻害現象をもたらすことを見出しており ,

研究課題

うち , パン酵母 Saccharomyces cerevisiae の遺伝子発現系の抗真菌薬標的タンパクのインシリコ予測と実験的検証

MoCV1-A ウイルスの遺伝子がコードするタンパク質の利用により ORF4が抗菌性タンパク質をコードすることを明らかにしてきた . また , メタノール資化酵母（Pichia’15－７

pastoris）で産生させた ORF4タンパク質をイネいもち病

中井謙太

菌の分生子に添加すると菌糸の伸長抑制が見られること（東京大学医科学研究所）

も示してきた .

知花博治・宇野本研究成果として ORF4タンパク質の部分領域をパン酵母に発現させることで , 抗菌活性領域を調査したところ , MoCV1-A の近縁ウイルス間で保存性の高い , 中

央部の領域（SUa 領域）に活性があることが確認された . そこで , ピキア酵母の高密度培養による SUa タンパ

An in silico prediction and exper imental
evaluation of antifungal drug targets

ク質の産生を試みている . さらに , パン酵母細胞内でのKenta Nakai

現した , 生育促進を示す変異株を利用した抗菌活性タン

Tokhyo）

ORF4タンパク質の C 末端側領域（24領域）発現時に出パク質産生法の検討中である .

病原真菌 Aspergillus fumigatus はアスペルギルス症の主な原因菌である . 五ノ井教授の研究グループにより , マ

潤（千葉大学真菌医学研究センター）（The Institute of Medical Science, The University of

Hiroji Chibana, Uno Jun（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

ウスに対する A. fumigatus の病原性を抑制する２種のマ研究成果の応用を目指している . 本共同研究プロジェクトにお点を絞り , 実験研究者と連携することで生物学的な発見

タンパク質（以下 ORF）のうち , 宿主菌の病原性抑制

菌感染症は増加傾向にあるが , 既存の抗真菌薬は４系統

fumigatus（KU 株）にウイルス由来の各 ORF をそれぞれ

こで , 本研究課題では , 新しい抗真菌薬の開発に貢献す

イコウイルスが見出されており , 新規抗真菌薬としていては , マイコウイルスの各ゲノムがコードする ORFに関与する ORF を特定するため , ウィルス未保有株 A.

我々の研究分野は , ゲノム情報（in silico）の解析に焦や医療などへの貢献を目的としている . 近年 , 深在性真しか存在せず , 副作用や耐性菌の問題が生じている . そ個別に強制発現させ , 宿主の形態 ･ 生育速度 ･ ストレスることを目的に , 副作用が少なく , 広域性の高い抗真菌

ORF が存在することが確認され , 病原性の抑制に , マイ

る . まず , パン酵母 , 分裂酵母を中心とする真菌の培地

た.

ダグラブラータのゲノムに含まれる相同遺伝子 , 1,160

耐性などの表現型を比較した結果 , 生育不良が生じる
コウイルス由来のタンパク質が関与する事が示唆され

今後 , C. neoformans に短縮など加工された ORF4タンパ

ク質を発現させたり , 異種発現させた ORF4タンパク質を外部から作用させた時の生育抑制効果などを検討していきたい . また A. fumigatus に関しても , MoCV1-A 由来の ORF4タンパク質や , 短縮配列である SUa 配列を発現させて , その生育阻害効果を評価する .

薬の開発が期待できる分子標的の同定を目的としてい上での（in vitro）生育必須遺伝子情報を収集し , カンジ個を抽出した . それら1,160遺伝子について知花准教授が作製した遺伝子改変株を用いてカンジダグラブラー

タにおいて生育上必須か否かの評価を行ったところ , 約

900についての生育上必須であるとの判定が出された .

これら900遺伝子についてヒト遺伝子との相同性解析を行った結果 , 192遺伝子が極めて低い相同性しか示さなかった . 現在 , これらの192遺伝子の改変株を用いてカ

イコあるいはマウスを用いた感染時（in vivo）必須遺伝

子の評価実験を進めている .

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

53

研究課題

’15－８

が失われ α-1,6- 結合マンノースからなる主鎖のみに変化

Candida glabrata 細胞壁構築関連遺伝子欠損
が菌体の性質に及ぼす影響
柴田信之・佐々木雅人・伊藤文恵・田中

大（東北医科薬科大学感染生体防御学教室）

知花博治・山口正視

していた . Alg6p は小胞体での糖タンパク質合成に関与しているが , Δalg6株は細胞壁へのストレスをシグナル伝達する MAPK（Slt2p）の活性化が起きていた . これは Alg6p の欠損で生じる小胞体ストレスが細胞壁の構築不全が起きており , その結果が Slt2の活性化に表れているものと考えられる . カイコを用いた感染実験でも野生型と比較して Δalg6株では病原性が低下していたが , 復（千葉大学真菌医学研究センター）

帰株では野生株と同等の病原性を示したことから , 細胞

Deletion effect of genes involved in cell wall
integrity of Candida glabrata

壁の強度の維持は病原性に関与すると考えられる . この

細胞壁構築不全に関連する遺伝子は , 抗真菌薬の新たなターゲットとなる可能性を示唆している .

Nobuyuki Shibata, Masato Sasaki, Fumie Itoh,
Yutaka Tanaka（Tohoku Medical and Pharmaceutical University）

Hiroji Chibana, Masashi Yamagushi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
真菌の細胞壁は環境に対する適応に必要なだけでなく病原性にも関与していることが指摘されている . そこで

C. glabrata の細胞壁糖鎖生合成に関与する各種の遺伝子

欠損株について細胞壁の構築 , 化学構造さらに病原性を含む性質を調べることにより , ALG6, MNN2, MNN10,

HOC1の細胞壁構築への関与について解析した . マンナンの構造解析はアセトリシス , 1H NMR 分析 , メチル化

分析により行った . 細胞壁成分はアルカリ可溶性画分 ,酸可溶性画分 , アルカリ・酸不溶性画分に分画し , キチンの定量はエルソン・モルガン法により行った . 細胞壁
グルカン層およびマンナン層の形態変化は透過型電子顕微鏡により解析した . また , 病原性の変化はカイコへの感染実験により解析した . Δalg6株は細胞壁成分に親和性を示す Calcofluor White, Congo Red, SDS などの薬剤に対する感受性 , β-1,3- グルカナーゼ感受性が上昇していた . 一方 , micafungin に対する感受性は逆に低下し ,キチン含量は野生株の２倍以上に増加していた . 電子顕微鏡による細胞壁の解析でもマンナン層が薄く不鮮明になっていた . 野生株と比較してマンナンの主鎖と側鎖から成るくし型構造に変化は見られなかったが , その分子量はかなり低下していた . 一方 , Δmnn2株では薬剤感受性に著しい変化は見られなかったが , マンナンの側鎖

54

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

研究課題

’15－９

を行い , 同データベースに追加した . 相同性検索の結果 ,10種の既知カビアレルゲン遺伝子と類似のアレルゲン候

ゲノム情報を利用したAspergillus niger 及び醸造黒麹菌のアレルゲン遺伝子の同定

補遺伝子が , 上記麹菌等にあることを明らかにした . 複

数種の Aspergillus 属菌からゲノム DNA および RNA を抽出した . RNA は cDNA 化し , DNA と共に次世代シーク

鎌田洋一

エンシンサーによるゲノムおよび発現遺伝子解析を行っ（岩手大学農学部）

た . その成績をカビアレルゲンデータベースと照合する

山田修

ことによって , 実験を行わずに , アレルゲン遺伝子を選（酒類総合研究所）

抜できるか検討した . Aspergillus 属中に , 未同定であるが , 現在までに報告されているアレルゲン遺伝子と高度

高橋治男に相同性のある遺伝子が10種以上検出された . cDNA の（山形大学農学部）

橋本ルイコ

次世代シークエンシングでは , その塩基配列の解析結果（千葉県衛生研究所）

が直ちに遺伝子のクローニングに有効だった . 合計６種

渡辺麻衣子のアレルゲン候補遺伝子の全長のクローニングと , 発現

（国立医薬品食品衛生研究所）

ベクターへの導入 , 大腸菌における組換えアレルゲンタ

川上裕司・橋本一浩

ンパク質の発現が確認された . ６種の内 , 可溶性タンパ（エフシージー総合研究所）

ク質としてペルオキシゾーム局在性のタンパク質が精製

知花博治・清水公徳

された . 同組換えアレルゲンタンパク質は , アレルギー（千葉大学真菌医学研究センター）性気管支肺アスペルギルス症患者血清中の IgE 抗体と結Identification of allergen genes of Aspergillus
niger and its related koji molds by using of theirgenomic information
Yoichi Kamata（Department of Agriculture, Iwate University）

Osamu Yamada

合した . 同組換えアレルゲンの接種は , マウスに IgE 抗体産生を誘導した . 以上の成績は , カビアレルゲンの同定に , 従来の粗アレルゲンと患者血清との反応 , 粗アレ

ルゲンの精製・アミノ酸配列解析・遺伝子クローニング ,さらに組換えタンパク質の調製という過程を経ずにカビ

アレルゲンが同定できることを示し , カビアレルゲンの同定にゲノム情報を利用する有効性が確認された .

（National Research Institute of Brewing）

Haruo Takahashi, Ruiko Hashimoto（Chiba Prefecture Institute of Public Health）

Maiko Watanabe（National Institute of Health Sciences）

Yuji Kawakami, Kazuhiro Hashimoto（FCG Research Institute）

Hiroji Chibana, Kiminori Shimizu（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
これまでの千葉大学真菌医学研究所共同研究の成果として , カビアレルゲンに特化したデータベースを作製していた . 麹菌 , 白麹菌 , A. niger のゲノム情報を入手し ,作製したカビアレルゲンデータベースとの相同性検索

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

55

研究課題

’15－10

研究課題

千葉大学が保有する化合物ライブラリーを用いた抗真菌薬シーズ開発’15－11

新規ユビキチンリガーゼ SCFUcc1によるカンジダ・グラブラータの感染制御機構の解明

荒井孝義

中務邦雄

（千葉大学大学院理学研究科）（名古屋大学大学院理学研究科）

知花博治・佐藤（岡本）美智代

知花博治・佐藤（岡本）美智代（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学真菌医学研究センター）

Development of antifungal seeds from chemicalcompound library owned by Chiba University
Takayoshi Ari（ Graduate School of Science and Tecnology, Chiba

University）

Hiroji Chibana, Michiyo Okamoto（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
千葉大学が保有する1,000種類のオリジナル合成化合物のうち450種類の化合物について , 一次スクリー

Functional analysis of a novel ubiquitin ligase
complex, SCFUcc1, in the virulence of Candida
glabrata
Kunio Nakatsukasa（Division of Biological Science, Graduate School of

Science, Nagoya University）

Hiroji Chibana, Michiyo Okamoto（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
微生物や植物に特有の代謝経路であるグリオキシル酸

ニングを終了した. その結果, ６種類の化合物につ回路は , 病原性酵母の感染や植物の種子の発芽においてCryptococcus neoformans 等の主要な病原真菌に対して生育はグルコースが不足すると酢酸や脂肪酸を材料にグリオ

マウスの培養細胞を用いて呼吸阻害活性を指標とした細反応によりグルコースを合成する . これまで , 代謝酵素

いて Candida albicans, C. glabrata, Aspergillus fumigatus,

必須の役割を果たすことが知られている . これらの生物阻害活性が確認された . 次にこれらの化合物について ,キシル酸回路→クエン酸回路→糖新生という一連の代謝

胞毒性を測定したところ , １種類の化合物に細胞毒性がの転写を介したグリオキシル酸回路の活性化 , 不活性化行った . また , 日本化学療法学会のこれを元に製薬企業

キチン・プロテアソーム系を介した代謝酵素の分解に

同研究契約を締結することになった . 平成28年度は550

キシル酸回路において最初の反応を触媒するクエン酸合

確認されず , 抗真菌薬「シーズ候補」とし , 特許出願をの機構は報告されていた . 我々は本研究において , ユビに対して抗真菌薬の共同研究を提案し , 平成28年度に共よるグリオキシル酸回路の制御機構を見出した . グリオ

種類の化合物について , これまでと同様に , シーズ候補

成酵素 Cit2は , グルコースが豊富にあるとユビキチンリ解明に取組んで行くことにした .

ロテアソームによって分解された . また , グルコースがのスクリーニングを進めると共に , 化合物の作用機序のガーゼ複合体 SCF Ucc1によるユビキチン修飾を受け , プ

不足して酢酸や脂肪酸からグルコースを合成する必要が生じると , SCF Ucc1は Cit2をユビキチン化できなくなり安定化した Cit2がグリオキシル酸回路を活性化した . この研究は , 代謝経路の活性が代謝酵素の分解により制御されるというユニークなスイッチング機構を明らかにしたものと言える . 現在 , Candida glabrata の感染におけるSCF Ucc1ホモログの役割について , in vivo 解析を進めた .

56

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

まず , カイコ幼虫の体液中に菌体を感染させ生存率を比菌によって壊された免疫グロブリンをリガンドとして較した結果 , Cit2の欠損株は野生株と比較して有意差が認識することを発見した . しかしながら , 真菌感染にお貪食実験系を確立させ , 現在本実験を用いた Cit2の機能において , 病原真菌カンジダアルビカンスから分泌され得られなかった . 次にマウスのマクロファージを用いた解析を進めている .

発表論文
１）Nakatsukasa K, Nishimura T, Byrne SD, Okamoto
M, Takahashi-Nakaguchi A, Chibana H., Okumura
F, Kamura T: The Ubiquitin Ligase SCF Ucc1 Acts as a
Metabolic Switch for the Glyoxylate Cycle. MolecularCell, 59: ２-34, 015

研究課題’15－12

ける LILRA2の役割は明らかではなかった . 本研究課題
たプロテアーゼによって分解された免疫グロブリンも

LILRA2を介した生体防御機構を活性化することを明らかにし , これまでの成果と合わせて論文発表を行った .

研究課題’15－13

ショウジョウバエ感染系を用いた真菌病原性発現機構のゲノムワイド解析
倉田祥一朗・倉石貴透（東北大学大学院薬学研究科）

真菌感染におけるペア型受容体を介した生体防御機構の解明荒瀬尚

知花博治・佐藤（岡本）美智代（千葉大学真菌医学研究センター）

Genome-wide analysis of fungal virulencemechanism using Drosophila infection system（大阪大学微生物病研究所）

平安恒幸（大阪大学免疫学フロンティア研究センター）

知花博治・佐藤（岡本）美智代

Shoichiro Kurata, Takayuki Kuraishi（Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Tohoku（千葉大学真菌医学研究センター）

University）

Host defense mechanism by paired immune
receptors in fungal infection

Hiroji Chibana, Michiyo Okamoto（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
日和見感染症に代表される感染症を引き起こす病原真Hisashi Arase（ Research Institute for Microbial Diseases, Osaka

University）

Kouyuki Hirayasu

菌の病原性発現機構は , 依然として不明であり , 大きな脅威となっている . 真菌医学研究センター知花准教授は ,Candida glabrata を用いて , 5249遺伝子を組換えた変異体（WPI Immunology Frontier Research Center, Osaka

ライブラリーを作成している . このリソースを用いる

Hiroji Chibana, Michiyo Okamoto

できる . しかしながら , マウスなどの哺乳動物を宿主とUniversity）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
ペア型受容体は , 細胞外ドメインが非常に相同性の高と , 病原性の発現に関わる遺伝子をゲノムワイドに探索して用いて網羅的に解析することは , 現実的に不可能である . 一方 , 自然免疫研究によく利用されているショウ

ジョウバエは , 生活環が短く網羅的解析に優れている .

また , すでに確立されている自然免疫変異体を用いるこい活性化型と抑制化型のペアからなる受容体であり , 主とができる . そこで , 本研究では , センターの有する真レセプターの一つである活性化レセプターLILRA2が細ら病原真菌の病原性発現機構の解明に迫ることにした .

に自然免疫系の細胞に発現している . 代表者は , ペア型

千葉大学

菌のリソースを利用した , ショウジョウバエでの解析か

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

57

そのために , 昨年度の本共同利用・共同研究（採択番号14-11）で確立した易感染ショウジョウバエ系統を用いた網羅的感染実験系を用いて , 倍地上での生育が正常

virus（NDV）感染に応答した RIG-I の挙動と SG 形成について詳細に解析した . その結果 , NDV 感染細胞内では , まず RIG-I は NDV ウイルスの増殖複合体に集積すな2,026の遺伝子欠損株を解析した . 合計７万匹以上のることで少量の I 型インターフェロン産生を誘導するこい , 病原性が低下した57株同定した . さらに , このうちことにより SG を足場としてさらに強力なインターフェ

ショウジョウバエを用いた四次スクリーニングまで行と , またそのあと遅れて形成されてくる SG へ移動する

14株において , ショウジョウバエ体内での菌の増殖を調

ロン産生を誘導すること , さらに , この時 NDV 由来の調べた . その結果 , 14株中11株では , 宿主体内での増殖

SG に共局在しており , この RNA が非自己として RIG-I

べ , 宿主体内での菌の増殖と , 病原性の低下との関係を能が低下していたが , ３株では野生型と同等の増殖能を示した . 本菌において , このような病原因子を示唆する

報告は未だない . 今後 , これら３株において , 宿主体内で増殖しているにもかかわらず , 病原性が低下する理由を明らかにすることで , 病原真菌の病原性発現機構の本質を明らかにすることが期待できる .

研究課題’15－14５’ 末端にキャップ構造を持たないリードスルーRNA がにより検知されていることを明らかにした .
発表論文

１）Yoneyama M, Onomoto K, Jogi M, Akaboshi T, Fujita

T: Viral RNA detection by RIG-I-like receptors. Curr
Opin Immunol, 32: 48-53, 2015.

研究課題

感染に応答した自然免疫誘導の分子機構の解析’15－15

真菌核酸に対する自然免疫応答の解析
河合太郎

藤田尚志・加藤博己（奈良先端科学技術大学院大学バイオサイエンス研（京都大学ウイルス研究所）究科）

米山光俊・尾野本浩司

米山光俊・高橋（千葉大学真菌医学研究センター）（千葉大学・真菌医学研究センター）

Innate immune responses against pathogen
infection

梓

Recognition of fungal nucleic acids by patternrecognition receptors

Takashi Fujita, Hiroki Kato

Taro Kawai

Mitsutoshi Yoneyama, Koji Onomotoof Science and Technology）（Institute for Virus Research, Kyoto University）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
高等脊椎動物における抗ウイルス自然免疫において ,RIG-I-like 受容体（RLR）は細胞内に侵入した非自己RNA を検知するセンサー分子として必須な役割を担っ（Graduate School of Biological Sciences, Nara InstituteMitsutoshi Yoneyama, Azusa Takahashi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
本研究では , ウイルスや真菌由来の RNA に対する自然免疫応答惹起のメカニズムを明らかにすることを目ている . 本研究は , 最近明らかにした細胞内ストレス顆

指した . そこで , 自然免疫による RNA 認識機構の詳細について解析することを目的とした . 本年度は , これま発現誘導可能な分子の発現スクリーニングを行い , Hu

粒（SG）の形成を介した RLR シグナル誘導の分子機構での SG についての共同研究を進め , New castle disease

58

千葉大学

をさらに理解するため , I 型インターフェロン遺伝子のAntigen R（HuR）を得た . HuR は RNA 結合ドメインを

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

持つタンパク質であり , AU リッチ配列をもつ mRNA の研究課題

編集技術を用いて HuR を欠損するマウスマクロファー

遺伝子サイレンシングと自然免疫反応のス
イッチング機構の解析

安定化に寄与することが知られている . そこで , ゲノム

ジ RAW264.7細胞を樹立した . 合成二本鎖 RNA アナロ

グ Poly（I:C）に対する応答を解析したところ , HuR 欠’15－16損細胞ではインターフェロン β やケモカイン遺伝子の発程久美子・高橋朋子

現が野生型細胞と比べ顕著に限弱していた . また , HuR（東京大学大学院理学系研究科）

は未刺激状態では核に局在しており , Poly（I:C）刺激に

より細胞質内に移行し顆粒状の局在を示した . このドッ
トはストレス顆粒であることが示されている . ストレス顆粒は , ストレス刺激やウイルス感染によって形成される細胞質内顆粒であり , mRNA, RNA 結合蛋白質 , リボ

ゾーム等が含まれており , ストレス時における翻訳抑

米山光俊・尾野本浩司（千葉大学真菌医学研究センター）

Switching mechanism between gene silencing
and innate immune response

制に関与すると考えられている . ウイルス RNA もスト

Kumiko Ui-Tei, Tomoko Takahashi

RNA がここで認識されることが示唆される . 今後 , HuR

Mitsutoshi Yoneyama, Koji Onomoto

レス顆粒に局在することが報告されており , 病原体のの細胞内局在の詳細や結合する RNA の同定を通して ,真菌やウイルスに対する防御機構における HuR の役割を明らかにしていく必要がある .

発表論文
１）Kumar S, Ingle H, Mishra S, Mahla RS, Kumar A,
Kawai T, Akira S, Takaoka A, Raut AA, Kumar H:
IPS- 1 differentially induces TRAIL, BCL2, BIRC3
and PRKCE in type I interferons-dependent and-independent anticancer activity. Cell Death Dis, 6:e1758, 2015

（Graduate School of Science, The University of Tokyo）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
近年 , ゲノムからはタンパク質をコードしないノ
ンコーディング RNA が多く転写されることが明らかになっている . ノンコーディング RNA の中でも smallinterfering RNA（siRNA）, microRNA（miRNA）, PIWIinteracting RNA（piRNA）といった内在性の小分子２本鎖 RNA は , 遺伝子サイレンシングという塩基配列特異的な遺伝子抑制機構によって , 広く多様な生命現象を制御している . 一方 , ウイルスは , ほぼすべての生物に感染する病原体であり , 生物はウイルス感染に対するさま
ざまな防御機構を発達させてきているが , 哺乳類特異的な現象として , ウイルスなどの外来性２本鎖 RNA により惹起される抗ウイルス応答反応が存在する . これら２つの機構は , 共通に RNA によって惹起される機構であるにも関わらず , 相互の関連は不明である . 申請者
らは , 両方の経路に共通に関わる因子として TAR-RNAbinding protein（TRBP）を同定している . 本研究では ,TRBP の機能を足がかりに , これら２つの経路のクロス
トークやスイッチングの分子機構を明らかにすることを目指している .

RNA サイレンシングでは , 小分子 RNA が Argonauteと呼ばれるタンパク質へ取り込まれて , 初めてその遺 伝 子 抑 制 機 能 を 発 揮 す る . TRBP は 小 分 子 RNA のArgonaute への取り込みを促進して RNA サイレンシン

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201659

グ活性を促進する . 米山らはウイルス感染を細胞質内研究成果

MDA-5, LGP2を発見している . TRBP は , これらのう化し致命率も高い . また , 移植患者で感染症とならんでで感知するウイルスセンサータンパク質として RIG-I,

同種造血幹細胞移植後の真菌感染症は , しばしば重症

ち LGP2と直接相互作用するが , RIG-I や MDA5とは相危険な合併症である移植片対宿主病（GVHD）は , ドウイルスセンサータンパク質の RNA サイレンシング効

胞を攻撃する難治性の疾患である . GVHD は細菌感染

互作用しないことが明らかになった . そこで , これらの果に対する影響を , それらのノックダウンによるレポー

ターアッセイや強制発現系をもちいて検討したところ ,RIG-I と LGP2は RNA サイレンシング活性を抑制する作用があるが , MDA5には抑制作用はないことがわかった . さらに , 小分子 RNA と TRBP やウイルスセンサー

タンパク質との相互作用をゲルシフトアッセイで解析した結果 , TRBP だけでなく , RIG-I と LGP2も小分子

RNA と結合するが , MDA5はほとんど結合しないことが明らかになった . RNA サイレンシング活性と siRNA結合活性の結果は , RIG-I と LGP2の siRNA への結合が遺伝子サイレンシング活性を何らかの形で制御している結果と推定された . 今後は , このような遺伝子サイレン

シング活性制御の機構と TRBP との相互作用の関連を明らかにすることで , ２つの経路のクロストークの機構をナーの移植片に混入した T リンパ球がレシピエントの細によって増悪をきたすことが知られているが , 真菌感染症が GVHD に及ぼす影響は不明であった . そこで , 本

研究ではマウスモデルを利用して真菌感染症が GVHDに及ぼす影響を解明し , 移植後の真菌感染症予防の意義について再検討することを目的とした .

まず , マウス GVHD モデルに C. albicans 死菌 , あるいはその細胞壁構成糖鎖である α- マンナンを投与したと

ころ , 病態は有意に悪化し , 特に肺で顕著であった . そのメカニズムを解析するため , 肺に浸潤している炎症性細胞を調べたところ , α- マンナンを投与したレシピエントマウスで , ドナー由来 T 細胞が顕著に Th17細胞への分化していることが明らかとなった . また , この Th17細胞分化の亢進は , レシピエントマウスの Dectin-2を介したものであった . これらの結果から , 同種造血幹細胞移解明する予定である .

植後の真菌感染症は , 単に感染症として問題になるばか

研究課題な病態を引き起こしている可能性が示唆された .

りではなく , 肺における GVHD の悪化要因として重篤’15－17

同種造血幹細胞移植後の Candida 感染による移植免疫反応の修飾
豊嶋崇徳（北海道大学大学院医学研究科）

橋本大吾

pulmonary graft-versus-host disease in mice. Blood, 125:

（北海道大学病院）

西城

発表論文
１）Uryu H, Hashimoto D, Kato K, Hayase E, Matsuoka
S, Ogasawara R, Takahashi S, Maeda Y, Iwasaki H,
Miyamoto T, Saijo S, Iwakura Y, Hill GR, Akashi
K, Teshima T: α -Mannan induces Th 17 -mediated3014-3023, 2015.

忍（千葉大学真菌医学研究センター）

α-Mannan induces Th17-mediated pulmonary

graft-versus-host disease in mice

Takanori Teshima, Daigo Hashimoto（Department of Hematology, Hokkaido University

Graduate School of Medicine）

Shinobu Saijo（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

60

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

研究課題

’15－18innate lymphoid cells（ILC3）と γδT 細胞であることが明カンジダ感染に対する IL-17A/F を介した皮膚真菌症防御機構の解明らかとなった . これらの結果から , 皮膚では Th17細胞ではなく , ILC3と γδT 細胞から分泌される IL-17が感染防御に必須であることが示された .

研究課題

岩澤真理・松岡悠美・若林正一郎’15－19（千葉大学医学部附属病院）

西城

肺炎球菌認識と感染防御における Dectin- ２の役割に関する研究忍（千葉大学真菌医学研究センター）

IL- 17 is pivotal for host defense against
epicutaneous candidiasis
Mari Iwasawa, Yuumi Nakamura, Seiichiro
Wakabayashi（Chiba University Graduate School of Medicine）

Shinobu Saijo（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
Candida albicans（C. albicans）は , 健常人においては皮膚や粘膜に常在真菌として定着し , 通常は症状を起こすことはない . 一方 , 多湿や不衛生 , 抗生剤投与による菌交代現象などにより , 主に間擦部に紅斑 , 鱗屑 , 小膿疱 ,びらんなどを生じる . ヒトの慢性皮膚粘膜カンジダ症においては Dectin-1, CARD9, STAT3, IL-17レセプター遺伝子など複数の遺伝子異常が報告され , これらの分子を介した生体防御機構が C. albicans 排除に重要であることが示唆される . しかしながらマウスの経皮感染モデルは確立されておらず , その詳細な分子機構は不明である .
そこで本研究では , １）経皮感染マウスモデルの作成 ,２）各種ノックアウトマウスを用いた感染防御機構の解川上和義・石井恵子（東北大学大学院医学系研究科）

西城

忍（千葉大学真菌医学研究センター）

Role of Dectin- 2 in the host defense topneumococcal infection
Kazuyoshi Kawakami, Keiko Ishii（Tohoku University Graduate School of Medicine）

Shinobu Saijo（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
肺炎球菌は市中肺炎の原因細菌として最も頻度が高
い . 特に , 高齢者や慢性心肺疾患 , 糖尿病などの基礎疾患を有する患者では重症化することが多く , 高齢化社会のわが国では重要な問題となっている . これらのハイリ
スク患者には莢膜多糖ワクチンが用いられ一定の予防効
果を上げてきたが , 胸腺非異存性抗原であるため臨床効
果に十分でない点も存在し , より有効なワクチンの開発が望まれている . 肺炎球菌は , 真菌と同様に多糖に富む

明 , を目的とし研究を開始した . まず , マウスの背部を莢膜を有しており , 免疫細胞による認識に何らかの C タ付・密封したところ , Day2をピークに感染局所で好中球る.

と炎症の収束が認められ , C. albicans 経皮感染モデルので , 本細菌に対する感染防御への Dectin-2の役割につい

剃毛し , 一定量の C. albicans 懸濁液に浸したガーゼを貼の浸潤を伴う炎症が認められ , Day7で C. albicans の排除

イプレクチン受容体が関与している可能性が予想され

本研究では , マウス肺炎球菌肺炎モデルを用いること確立に成功した . そこで , IL-17のノックアウト（KO）て , Dectin-2遺伝子欠損（KO）マウスと野生型コントロー

C. albicans が排除できず , 皮膚における感染防御に IL-17

マウス , Dectin-2KO マウスの肺内に血清型３型の肺炎マウスを用いて同様の実験を行ったところ , Day7でもが必須であることが示された . さらに , IL-17の産生細胞を探索したところ , これまで考えられてきた Group3

千葉大学

ル（WT）マウスを比較検討することで解析した . WT球菌を感染させたところ , KO マウスでは WT マウスに比べて生存期間が短縮し , ３日後の肺内菌数が有意に増

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

61

加した . Dectin-2KO マウスでは , 好中球の感染局所への集積の異常はみられなかったが , 好中球による菌の貪

定着しバイオフィルムを形成すると , 化学療法や宿主防御機構に対する抵抗性が増強することが知られてい食が有意に低下した . 一方 , 肺炎球菌のオプソニン化にる . 近年 , 真菌においても Aspergillus fumigatus や Candida

特異的な IgG 量が Dectin-2KO マウスでは WT マウスとた . 感染症は , 単独の病原体だけでなく , 複数の病原体重要と考えられる血清や気管支肺胞洗浄液中の莢膜多糖

albicans がバイオフィルムを形成することが報告され比べて有意な低下 , もしくは低下傾向を示した . また ,によるもの（混合感染 , 重複感染）もあり , 複数の病からの IL-12p40産生が , Dectin-2KO マウスでは WT マ

き , 重症化の可能性もある . 臨床例として , Streptococcus

ち , ConA-sepharose 結合性物質が BM-DCs の Dectin-2にる . 本研究では , 未だ知見の乏しい S. pneumoniae と A.

から , Dectin-2による肺炎球菌多糖の認識が , 感染局所

析した .

肺炎球菌培養上清による骨髄由来樹状細胞（BM-DCs）
ウスに比べ有意に低下していた . 肺炎球菌由来成分のう
よって認識され , IL-12p40産生を誘導した . 以上の結果

への好中球動員よりも好中球による貪食機能に関与することで , 感染防御において重要な役割を担うことが明ら

原体による場合は , 異なる病原体の間で相互作用が起pneumoniae と A. fumigatus の 重 複 感 染 が 報 告 さ れ て い

fumigatus の混合バイオフィルムの構造・性状について解S. pneumoniae と A. fumigatus を24ウェルプレートにおいて同時にバイオフィルム形成開始させると , 24時間かになった .

後では既に S. pneumoniae のみからなるバイオフィルム

らかになることで , より有効なワクチンの開発に繋がる

オフィルムに S. pneumoniae を加えると , バイオフィル

本研究を通して免疫系による肺炎球菌の認識機構が明が観察された . 予め24時間形成させた A. fumigatus バイ

ことが期待される .

ムの減少および菌糸の減少・切断が観察された . この

研究課題

る血清糖タンパク質 fetuin を添加しても観察された . S.

現象は , A. fumigatus のバイオフィルム産生を増強させ’15－20

肺 炎 球 菌 混 合 感 染 に お け るAspergillus
fumigatus バイオフィルム産生についての研
究
渡邊

浩・岩橋

pneumoniae 培養上清を A. fumigatus バイオフィルムに加えると , バイオフィルムの減少および菌糸の減少・切断が見られたが , 培養上清を熱処理すると影響は見られず ,S. pneumoniae 培養上清中の熱感受性因子が A. fumigatus
バイオフィルム破壊に関与することが示唆された .

潤

今後は , S. pneumoniae 培養上清中の A. fumigatus バイオ（久留米大学医学部感染制御学講座）

フィルム破壊因子の同定を行う予定である .

亀井克彦（千葉大学真菌医学研究センター）

Studies on biofilm formation by Aspergillus
fumigat us co-cultured with St reptococcus
pneumoniae
Hiroshi Watanabe, Jun Iwahashi（ Department of Infection Control and Prevention,

Kurume University School of Medicine）

Katsuhiko Kamei（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
ヒトの病原体となる細菌の多くが , ヒト体内において

62

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

研究課題

’15－21とから , ５つの分泌蛋白質が血清刺激に応答したバイオ

アスペルギルスのバイオフィルム形成および抗真菌薬耐性に関連する新規遺伝子群の探索
梅山

フィルム形成に関与することが示唆された . 今後 , 血清

刺激に応答したバイオフィルム形成におけるシグナル伝達機構の役割を解明していく .

今後の新規遺伝子探索に応用するために , 幅広い生物

隆・宮㟢義継種で用いられている Cas9/CRISPR ゲノム編集技術を A.

（国立感染症研究所）

fumigatus で利用可能にした . ゲノム上の標的部位の20塩

亀井克彦

基を含む sgRNA と Cas9蛋白質を一度の形質転換で導入（千葉大学真菌医学研究センター）するためのプラスミドを構築した . このシステムを用い

Screening of novel genes involved in biofilm
formation and antifungal resistance in Aspergillus
fumigatus

ることにより , ゲノムの特定の部位を切断し , 変異導入などの編集を行うことが可能になる . 今後 , この技術を用いて , 血清刺激に応答する新しい遺伝子群の探索に応用したい .

Takashi Umeyama, Yoshitsugu Miyazaki

研究課題

Katsuhiko Kamei

動物感染モデルを用いたボリコナゾール局所投与による真菌症治療に向けた基礎研究（National Institute of Infectious Diseases）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果’15－22

長内理大・山崎伸吾・石井伊都子

深在性真菌症の中でも Aspergillus fumigatus を主要病原菌とするアスペルギルス症は増加傾向にあり , 予後が非
常に悪い . 近年 , アスペルギルスのバイオフィルム形成（千葉大学医学部附属病院薬剤部）

渡辺哲・亀井克彦・五ノ井透・高橋梓（千葉大学真菌医学研究センター）がアスペルギルス感染に関与することが示唆されている . 特にアスペルギローマ（菌球）の菌糸塊に見られる菌糸周囲には厚い細胞外マトリクスが観察されている .

このようなバイオフィルムを形成する状態では , いくつ

Effects of local administration of voriconazole
onto mycosis in animal infection model

かの抗真菌薬に対する感受性が低下する現象が示され ,Arihiro Osanai, Shingo Yamazaki, Itsuko Ishii

ながら , バイオフィルム形成 , および , それによる抗真Tetsu Watanabe, Katsuhiko Kamei, Toru Gonoi,
Azusa Takahashi

難治性の原因の１つになっていると考えられる . しかし
菌薬耐性の詳細な分子メカニズムは不明な点が多い . 本

研究では , バイオフィルム形成に関わる新規遺伝子を同定し , 抗真菌薬耐性との関連性を明らかにすることを目的とする . 平成27年度では , 分泌蛋白質と予測される A.

fumigatus の５遺伝子について血清刺激によるバイオフィ

ルム形成に及ぼす影響を検討した . また , Cas9/CRISPR（Pharmacy, Chiba University Hospital）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果
ボリコナゾール（VRCZ）はカンジダやアスペルギル

ス症などの真菌感染症に対して広く用いられる抗真菌

ゲノム編集技術を A. fumigatus に導入した .

薬である . 有効性が高く , 広く利用されることが期待さを A. fumigatus AfS35株に形質転換し , ５つの分泌蛋白質

内の変動が大きいことから治療濃度を管理するのが難し

ハイグロマイシン耐性マーカーを含むカセット DNA

をコードする遺伝子の破壊株をそれぞれ作製した . 親株
では血清添加によってバイオフィルム形成量が増加す

るが , 遺伝子破壊株ではその増加は観察できなかったこ

千葉大学

れる反面 , 治療域が狭く薬物動態の個体間あるいは個体い薬物である . 本研究ではアスペルギルス膿胸に対し ,VRCZ を胸腔内投与することにより , 胸腔内での VRCZ

濃度並びに全身での血中濃度がどのように変動するか ,真菌医学研究センター報告

第 20 巻201663

また胸腔内投与による治療効果を検討することを目的と

研究成果
インフルエンザ菌ｂ型ワクチン導入後に分離された小した .

まず , 千葉大学医学部附属病院における患者症例を

児侵襲性感染症由来インフルエンザ菌株を収集し PCR

VRCZ200mg/ 回 , １日２回を静脈内で投与したが , 血中判定した28株について , 臨床背景 , 薬剤感受性 , 生物型 ,腔内に VRCZ200mg を投与し , 血中濃度の推移を検討し検討を行った . 臨床背景として発症年齢が新生児から学検討した . 71歳 , アスペルギルス膿胸の患者に対し ,濃度は1.45mg と目標濃度に到達しなかった . そこで , 胸たところ , 12時間後濃度は一過性に1.69mg まで上昇したが , 24時間後では再び1.53mg と低下した . そこで , 肺ド

レーンを留置し , 週２～３回繰り返し投与することとし

法で血清型解析を実施した . 血清型解析で無莢膜株とMLST 解析 , バイオフィルム産生能 , 付着因子について童まで幅広い年齢層に認められた . 基礎疾患を有する症

例からの分離例が多く , 全体の42.9％を占めた . ３例が死亡しており , 予後不良例も認めた . 薬剤感受性は良好

投与量も300mg/ 回 , 400mg/ 回と増量したところ , 血中な株が多かったが , ２株が β ラクタマーゼ産生クラブラ

ため , 300mg/ 回に戻して治療した . B-D- グルカン値はなる可能性が示唆された . ST 型は28株中26株が異なっ

濃度は5.63mg まで上昇した . 血中濃度が中毒域となった

開窓術を行った Day51には陰性化し , その後患者は回復し退院することができた . 以上のことから , アスペルギ

ルス膿胸に対する VRCZ の胸腔内局所投与は臨床上有効な治療法であることが示唆された .

なお , マウスでのアスペルギルス膿胸のモデル作成を試みたが , 安定した胸腔内注入モデルの作製に手間取

ン酸アモキシシリン耐性株であり , 今後臨床的に問題とており多様であった . 生物型はⅡ型が最も多くついでⅢ型であり , インフルエンザ菌ｂ型株とは異なっていた .

バイオフィルム産生能 , 付着因子保有状況は多様であり , 呼吸器から分離される無莢膜株との大きな違いは認めなかった .

り , データを得るに至らなかったため報告書には記載し

研究課題や投与スケジュールについて詳細な検討がなされること

天然物を素材とした新規抗感染症薬リード化合物の獲得なかった . 今後 , 動物実験感染モデルを確立し , 投与量が期待される .

研究課題’15－23’15－24久保田高明（昭和薬科大学）

侵襲性感染症由来インフルエンザ菌の病原因子に関する研究西順一郎（千葉大学真菌医学研究センター）

Development of lead compound for new antiinfective agent from natural resources（鹿児島大学大学院医歯学総合研究科）

石和田稔彦（千葉大学真菌医学研究センター）

Takaaki Kubota

Pathogenesis of Haemophilus influenzae isolated
from patients with invasive disease（Showa Pharmaceutical University）

Tohru Gonoi（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果

Junichiro Nishi（Kagoshima University Graduate School of Medical and

Dental Sciences）

Naruhiko Ishiwada（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

64

五ノ井透

千葉大学

沖 縄 で 採 取 し た Verongida 目 の 海 綿 か ら , 単 離 し た

新規ブロモチロシンアルカロイド Tyrokeradine G および H を単離 , 構造決定した . Tyrokeradine G および H はAspergillus niger に対して穏やかな抗真菌活性を示した .

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

Tyrokeradine G は Cryptococcus neoformans に対しても穏やか

おいて , アゾール薬に対して耐性があることが知られまた , 沖縄で採取した Hyrtios 属の海綿から , 単離した

報告はこれまでになく , その分布の実態は解明されてルカロイド Hyrtinadine B および C を単離 , 構造決定し

み , その遺伝子型および薬剤感受性を解析し , 耐性株

真菌活性を示した . Hyrtinadine C は Escherichia coli および比べ低頻度ではあるが南北問わず幅広い地域の土壌かな抗細菌活性を示した .

アゼピノインドール骨格を持つ新規ビスインドールア

た . Hyrtinadine B は , Aspergillus niger に対して穏やかな抗ている . しかし , 国内の環境中から関連種の正式な分離いない . そこで , 国内各地の土壌から関連種の分離を試の分布の実態把握を行った . この結果 , A. fumigatus にBacillus subtilis に対して穏やかな抗細菌活性を示した .

ら A. fumigatus 関連種である A. lentulus, A. udagawae, A.

継続して行う予定である .

これら関連種が生息していることが確認された . また ,今後も , 顕著な抗菌活性を示す新たな天然物の探索を

発表論文
１）Kubota T, Watase S, Sakai K, Fromont J, Gonoi T,
Kobayashi J: Tyrokeradines G and H, new bromotyrosine
alkaloids from an Okinawan Verongid sponge. Bioorg
Med Chem Lett, 25: 5221-5223, 2015.

研究課題’15－25薬剤感受性は , A. lentulus, A. udagawae においては臨床および環境分離株の多くにおいて ITCZ に耐性があるのに対して , A. viridinutans は臨床株 , 環境株とも多くの株において ITCZ, VRCZ に耐性みられた . これらの耐性は環境株 , 臨床株とも同程度であることから , 自然耐性と推定される .

研究課題

Aspergillus fumigatus 関連種における臨床株と環境株の比較広瀬

viridinutans を分離することができ , 国内の自然環境中に’15－26

白癬菌が産生・分泌するプロテアーゼによる
表皮角層ケラチン分解様式に関する形態学的解析

大（日本大学薬学部）

山田

矢口貴志

（帝京大学医真菌研究センター）剛（千葉大学真菌医学研究センター）

矢口貴志・田中玲子（千葉大学真菌医学研究センター）

Studies on comparison between clinical andenvironmental isolates on relatives of Aspergillus
fumigatus

Morphological analyses of keratin degradation
mechanisms by dermatophytes

Dai Hirose

Tsuyoshi Yamada

Takashi Yaguchi

Takashi Yaguchi, Reiko Tanaka（School of Pharmacy , Nihon University）（Teikyo University Institute of Medical Mycology）（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果（Medical Mycology Research Center, Chiba University）

研究成果

ア ス ペ ル ギ ル ス 症 主 要 原 因 菌 で あ る Aspergillus

白癬の原因菌である白癬菌による表皮角化組織へのfumigatus のアゾール薬に対する耐性株の増加は世界的

侵入様式は今なお不明な点が多いが , タイプの異なる

所 , 耐性株は殆ど発見されていないのが現状である . 一

への菌の侵入初期の重要なプロセスであると長年考えに問題視されているが , 日本国内においてはこれまでの方 , A. fumigatus の関連種は国内の多くの臨床分離株に

千葉大学

プロテアーゼ群を段階的に利用した酵素的分解が組織られてきた . 申請者らは , 角化組織の酵素的分解への関

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

65

与が指摘されているメタロプロテアーゼ４（MEP ４）,間を利用して菌糸が組織内部に伸長していることが判明

ロイシンアミノペプチダーゼ２（Lap ２）およびジペした . さらに , 作出に成功した MEP ４/DPPIV 二重破壊

織への菌の侵入様式との関連性を解析した . 白癬菌 A.

子を全て破壊した五重破壊株においても同様の解析結果

プチジルペプチダーゼ４（DPPIV）について , 角化組

株 , そして別途作出したゲノム上に５個ある MEP 遺伝

vanbreuseghemii をホストに用いて , 上記プロテアーゼ遺が得られた .

爪を唯一のタンパク質源とする最小寒天培地（簡易的 inの白癬菌の侵入様式に対し , MEP ファミリー, Lap2お伝子の一重および多重破壊株を作出し , （ヒト由来の）vitro 爪白癬モデル）を用いて感染実験を行った . しかし ,すべての一重破壊株とホスト株との間で爪への感染（増以上のことから , 酵素的分解に基づく表皮角化組織へ

よび DPPIV の関与の可能性は低いと考えられる . また ,ホスト株および MEP4一重破壊株感染爪の走査型電子顕殖）速度の差が認められなかった他 , 光学顕微鏡観察に

微鏡観察結果から , 酵素的分解よりもむしろ組織表面のト株および MEP4一重破壊株の菌糸で覆われた爪の走査

内への菌の侵入を促す重要な要素になっているのではな

おいても形態学的差異は認められなかった . また , ホス型電子顕微鏡観察を行ったところ , 爪表面に見られる隙

66

千葉大学

物理的なスペース（細胞間の隙間 , 傷など）が角化組織いかと考えられる .

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

感染症研究グローバルネットワークフォーラム2015
The 4th Global Network Forum on Infection and Immunity
共催：千葉大学真菌医学研究センター 共同利用・共同, 東京大学医科学
研究拠点事業『真菌感染症研究拠点』

研究所 細菌感染生物学社会連携研究部門・特別推進研

座長：山本友子（千葉大学真菌医学研究センター

特任教授）
松本智成（一般財団法人 大阪府結核予防会 大阪病院

究『病原細菌の自然免疫克服戦略の解明とその応用』

診断検査部長）『結核菌のゲノム解析』

研究成果
第４回目となる感染症研究グローバルネットワーク
フォーラムを開催した . 当初 , 千葉大学内の感染症研究のネットワーク化を目指して始まったこのフォーラムであるが , 毎年その規模を拡大し , 日本の代表的研究者の座長：巽浩一郎（千葉大学大学院医学研究院教授）

伊藤功朗（京都大学医学部附属病院 呼吸器内科学 助教）『COPD と感染症』

みならず , 世界各地の研究者が集う極めて高レベルの会

座長：猪狩英俊（千葉大学医学部附属病院 感染制御部

染制御部の猪狩部長を代表世話人として下記のようなプ

加藤康幸（国立研究開発法人 国立国際医療研究センターとなっている . 本年度は医学部附属病院感染症内科 / 感

ログラムに基づき , 平成27年11月14日に医学部記念講堂

部長）
医長）

で開催された . 当日の参加者は学外を含め , 87名であり ,『エボラ出血熱など輸入感染症について』

日時：平成27年11月14日（土） ９：30～16：40【午後の部】 International Forum

活発な討議が交わされた .

Chair: Yasuyuki Kato（Medical director, National Center for

場所：千葉大学医学部記念講堂
猪狩英俊（千葉大学医学部附属病院 感染制御部
亀井克彦（千葉大学真菌医学研究センター

部長）

教授）

笹川千尋（千葉大学真菌医学研究センター長 , 東京大学
名誉教授）

Global Health and Medicine）

Cevayir Coban（Professor , IFReC, Osaka University）“Tissue-specific immunopathology during malaria”

Chair: Mitsutoshi Yoneyama（Professor , Medical Mycology
R e s e a r c h C e n t e r, C h i b a【午前の部】

University）

Gordon Brown（Professor , The Institute of Medical Sciences,【開会の挨拶】

University of Aberdeen, UK）

徳久剛史（千葉大学学長）
座長：野村文夫（千葉大学医学部附属病院

特任教授）

谷口俊文（千葉大学医学部附属病院 感染制御部

助教）『米国における HIV 診療最前線』
座長：羽田“C-type lectins: key players in antifungal immunity”

Chair: Naoki Shimojo（Professor , Graduate School of Medicine,
Chiba University）

明（千葉大学大学院医学研究院

教授）

Yoshiyuki Goto（Associate Professor , Medical Mycology
Research Center, Chiba University

加藤誠也（公益財団法人 結核予防会結核研究所 副所長）

Visiting Lecturer, The Institute of Medical
Science, The University of Tokyo）『結核をめぐる国際的な課題と国内の課題について』“Innate lymphoid cells regulate intestinal epithelial barrier

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201667

【Closing Remarks】

system against bacterial infection”
Chair: Kiyoshi Hirahara（Associate Professor, Graduate School

Chihiro Sasakawa（Director, Medical Mycology ResearchCenter, Chiba Universityof Medicine, Chiba University）

Emeritus Professor, The University of

Yumiko Imai（Professor, Graduate School of Medicine, Akita

Tokyo）

University）“Dynamic nuclear interactions between influenza virus and its

host”

68

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

2016年講演会
2016 Scientific Meetings & Seminars「感染症研究グローバルネットワークフォーラム 2016」

Yasushi Kawaguchi“ The 5 th Global Network Forum on Infection and（Professor, The Institute of Medical Science, The University（千葉大学真菌医学研究センター 共同利用・共同研究拠『Strategies of herpesviruses to hijack host cell machinery』

Immunity”

点「真菌感染症研究拠点」, 千葉大学大学院医学研究院

小児病態学 共催）

日時：平成28年11月12日

ガーネットホール【午前の部】

human enteric parasite』（Head, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, New York,

USA）

隆典

（慶應義塾大学医学部 消化器内科

教授）『Microbiota-mediated defense against intestinal infection』『腸内細菌が教える「医と食」の融合研究』
長澤『Unique evolution of mitochondria and metabolism in the

Eric G. Pamer【特別講演】
金井

Tomoyoshi Nozaki（Director, National Institute of Infectious Diseases）

９：30～17：00

場所：千葉大学附属病院３階

of Tokyo）「東京大学医科学研究所─千葉大学真菌医学研究セン

耕男（国立感染症研究所 感染症疫学センター 任期付研究員）

ター

共同利用・共同研究拠点事業（HRSV）F 遺伝子の分子『Human respiratory syncytial virus

成果報告会」

平成27年度 合同

進化』

日時：平成28年３月15日（火）大塚岳人（新潟大学医学部 小児科学

13：00～16：50（午後の部）
助教）

場所：東京大学医科学研究所 ２号館２階 大講義室

『アンチセンス療法：新しい抗微生物薬とその応用』【午後の部】
松岡悠美【特別講演】（千葉大学大学院医学研究院 皮膚科学

助教）

『アトピー性皮膚炎および健常者における黄色ブドウ球
菌ゲノム進化と生着のメカニズム』

荒瀬尚（大阪大学微生物病研究所教授）『ペア型レセプターを介した宿主病原体相互作用』【午後の部】
International Forum【合同成果報告会】

Trinad Chakraborty《千葉大学真菌医学研究センター成果報告》

Research Centre Seltersberg, Justus-Liebig-University,

中務（Professor, Institute of Medical Microbiology, Biomedical

Giessen, Germany）『Exploring the One Health paradigm with antimicrobial

resistance: Insights from genome-based epidemiology』

千葉大学

邦雄

（名古屋大学大学院講師）『新規ユビキチンリガーゼ SCFUcc １ によるカンジダ・
グラブラータの感染制御機構の解明』

真菌医学研究センター報告

第 20 巻

2016

69

倉田

祥一朗

（東北大学大学院

福井
教授）

竜太郎

（東京大学医科学研究所『ショウジョウバエ感染系を用いた真菌病原性発現機構『自然炎症を基盤とするマウスの遺伝的表現型と関連遺のゲノムワイド解析』

伝子群の探索』

程

熊谷

久美子

（東京大学大学院

准教授）

雄太郎

（大阪大学免疫学フロンティア研究センター『遺伝子サイレンシングと自然免疫応答のスイッチング
機構の解析』
西城

助教）

特任助教）

『抗ウイルス免疫応答の網羅的データからのモデリングと制御』

忍（千葉大学真菌医学研究センター准教授）『カンジダ感染に対する IL-17A/F を介した皮膚真菌症「真菌医学研究センターMonthly セミナー」
場所：真菌医学研究センター

大会議室１）日時：平成28年２月16日

17：30～18：30

防御機構の解明』

新《感染症・免疫共同研究領域》

幸二（慶應義塾大学 医学部 微生物学・免疫学教室 助教）
朴『腸内細菌による宿主免疫系の活性化機構』

恩正（三重大学大学院（千葉大学リーディング研究育成プログラム推進候准教授）『免疫系と血栓・凝固系とのクロストークによる臓器特補課題・“超個体”の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点 , 東京大学医科学研究

異的ホーミングの制御』

所 細菌感染生物学社会連携研究部門 共催）

丸山史人（京都大学大学院

２）日時：平成28年３月10日

准教授）『A 群レンサ球菌における病原因子獲得機構の時空間的
解析』

今清水

17：30～18：30

正彦（千葉大学真菌医学研究センター

特任助教）『熱揺らぎの影響を踏まえた転写調節機構』
今村健志（愛媛大学大学院（千葉大学リーディング研究育成プログラム推進候教授）

補課題・“超個体”の統合的理解に基づく次世代型『革新的 in vivo 光イメージングを駆使した粘膜免疫機構
における細胞動態とシグナル可視化』

西田「感染制御学」研究推進拠点 , 東京大学医科学研究
所 細菌感染生物学社会連携研究部門 共催）

３）日時：平成28年３月23日

圭吾

16：00～17：00（鈴鹿医療科学大学 准教授）

小野口

『細菌感染における亜鉛 / 亜鉛トランスポーターの役割』（Department of Microbiolog y and Immunolog y,中川『ショウジョウバエをモデルにした小胞体ストレス一路（京都大学大学院教授）

和英

University of California, San Francisco, USA）と抗ウイルス免疫機構の解析』『細菌表層機能分子をターゲットとした分子標的薬開発』（千葉大学リーディング研究育成プログラム推進候
補課題・“超個体”の統合的理解に基づく次世代型「感染制御学」研究推進拠点共催）

70

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016４）日時：平成28年６月14日
原口

11：00～12：00

辻健（千葉大学真菌医学研究センター

特任助教）『高効率 microRNA 阻害法による乳癌幹細胞を標的とした治療法の開発』

５）日時：平成28年７月１日
佐野９）日時：平成28年11月15日

16：00～17：30

典子（国立研究開発法人 産業技術総合研究所 バイオメ
ディカル研究部門 免疫恒常性研究特別チーム長）『“管として生きる”個体の腸内環境と免疫機能』
10）日時：平成28年11月29日
知花

晃之

18：00～19：30

16：00～17：00

博治（Skirball Institute of Biomolecular Medicine, New York

（千葉大学真菌医学研究センター『共生細菌により生み出される Th17細胞の分化誘導

た病原性研究と抗真菌薬開発』

University School of Medicine, New York, USA）

准教授）

『カンジダ・グラブラータ全遺伝子組換え体を用いとその活性化の分子機構』（千葉大学リーディング研究育成プログラム推進候
補課題・“超個体”の統合的理解に基づく次世代型「第５回 細胞間クロノ・コミュニケーション研究会」「感染制御学」研究推進拠点共催）（千葉大学リーディング研究育成プログラム推進候補課
題・細胞間クロノ・コミュニケーション主催）６）日時：平成28年７月26日
芦田

16：00～17：00

浩

日時：平成28年７月７日

17：00～18：00

場所：真菌医学研究センター（千葉大学真菌医学研究センター

大会議室

特任准教授）『赤痢菌感染分子機構の解明とその応用』

大島

拓（奈良先端科学技術大学院大学 バイオサイエンス研究科
７）日時：平成28年９月27日
西城

16：00～17：00

忍助教）『水平伝搬における細菌の転写サイレンサーの役割』（千葉大学真菌医学研究センター

准教授）『C 型レクチンによる生体防御機構の解明』
８）日時：平成28年10月25日

15：30～17：00

Jean-Marc Reichhart（Professor, The University of Strasbourg, CNRS,France）『The Drosophila Immune System, an evolutionary

perspective』

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻201671

平成 29 年 3 月発行
発行者

千葉大学真菌医学研究センター
センター長

笹川

〒260-8673

千葉市中央区亥鼻 1－8－1

電話千尋

043－222－7171（代表）March 2017
Published by

Chihiro Sasakawa, Ph.D.

Director, Medical Mycology Research Center
Chiba University

1-8-1 Inohana, Chuo-ku, Chiba 260-8673, Japan

TEL: 81-43-222-7171
印刷

株式会社

正文社

Printed by Seibunsha, Ltd. Chiba, Japan

72

千葉大学

真菌医学研究センター報告

第 20 巻2016

CHIBA UNIVERSITY
2016