第 68 回 日 本 大 学 歯 学 会 総 会 ・ 学 術 大 会〔 抄 録 〕
期日

平成 28 年 5 月 29 日（日）会場

日本大学歯学部

大講堂《特別講演》《一般講演》

機能水研究を通じて解ってきたこと
alarmin 分泌促進と創傷治癒

1．根管充填処置歯からの DNA 型判定◯伊澤

光 1,2，堤博文 1,2，丸山日本大学歯学部法医学講座

浅野正岳

日本大学歯学部病理学講座

澄 1,2，小室歳信 1,2

1

日本大学歯学部総合歯学研究所社会歯学研究部門 2

食塩水を電気分解して得られる電解酸性機能水（以下 functional

目的water；FW）は，pH2.7， 有 効 塩 素 濃 度 20~30 ppm を 呈 す る。

歯は経年的変化が少なく，形態が安定しているために死後数十FW を用いることにより，臨床的には「癌の増殖を抑制した」，「火

年経過しても，歯髄組織から DNA を抽出し，DNA 型判定は可

傷の治りを早めた」などとする臨床経験が多数報告されている。

能である。

FW のこうした生理学的機能はどのようにして発揮されるのか。

被検試料とされる歯については，多量の DNA 抽出を視野にう

このメカニズム解明のために，培養上皮細胞に FW を作用させる

歯や根管処置歯などを除いた，いわゆる健全歯を選別し行ってきことで生じる変化について cytokine array という方法を用いて実た。しかし，鑑定の実務上，常に健全歯を入手することができる験を行った。その結果，interleukin-1 α（IL-1 α ）の分泌が増強さわけでもなく，根管処置歯を試料とせざるを得ないこともある。

れ る と い う 現 象 を 見 出 し た。

歯は解剖学的に根管側枝やイスムスなどを有することから，DNAの 実 験 か ら，FW に よ る

IL-1 α 分泌亢進は，遺伝子発現の変化に依存せず，細胞内に予め型判定は可能であると考えられる。

蓄積された IL-1 α が細胞外に放出される現象であることが明らか

そ こ で， 根 管 処 置 歯 を 試 料 と し， 歯 の 保 存 年 数 を 考 慮 し たとなった。細胞が障害を受けた際に，その周囲の細胞に生体の置DNA 型判定の可否について検討した。

かれた危機的な状況を知らしめ生体防御効果を発揮する分子は材料および方法

alarmin と呼ばれ，IL-1 α はその代表的なものであることが知ら試料は，当講座に保存された抜去歯の中からエックス線写真撮れている。それでは FW により分泌された IL-1 α はどのような影を行い，根管充填歯 19 歯（男性 9 歯，女性 10 歯，抜去後 10 年効果を有しているのだろうか。IL-1 α は炎症反応に関与するサイ〜抜去後 33 年）および健全歯 15 歯（男性 7 歯，女性 8 歯，抜去後トカインであるのに加え，創傷治癒促進効果があるとされている。

10 年 〜 15 年 ）を 用 い た。DNA 抽 出 は TBONE EX KIT（DNA

そこで，FW は alarmin である IL-1 α 分泌を促進することで創傷チップ研究所）を用い，PCR 増幅は Globalfiler PCR Amplifica-治癒を促進するのではないかとの着想を得た。これに基づき，マtion kit（life technologies）および PowerPlex Y23 System（Pro-

ウスの皮膚に人為的に創傷を作成し，FW の創傷面積縮小に対すmega）に従って行った。電気泳動は 3130 Genetic Analyzer（life

る効果を観察したところ，生理食塩水などに比較して，約 20% 面

technologies）で行い，型判定は GeneMapper ID-X Software

積 縮 小 を 促 進 す る 効 果 を 示 し た。 ま た 同 様 の 実 験 を IL-1 α

Version1.4（life technologies）を使用した。

knockout mouse を用いて行ったところその効果は相殺された。

成績および考察

以上の結果は，FW 刺激が細胞障害刺激であり，障害を受けた細34 歯の常染色体 STR21 ローカスを検討した結果，根管充填歯胞は alarmin である IL-1 α 分泌を通じて創傷治癒を促進させると19 歯では 2 ローカス検出できなかったものが 2 歯，1 ローカス検いうことを示していた。本発表では，IL-1 α による創傷治癒メカ

出できなかったものが 5 歯であった。また，健全歯では 1 ローカ

ニズムについて最近の知見を含めて報告したいと考えている。

ス検出できなかったものが 2 歯あった。
男性 16 歯の性染色体 STR23 ローカスを検討した結果，根管充填歯 9 歯では 5 ローカス検出できなかったものが 2 歯，4 ローカ
ス検出できなかったものが 1 歯，1 ローカス検出できなかったものが 4 歯であった。また，健全歯では全てのローカスにおいて検出可能であった。
本研究において，健全歯はもとより根管処置歯について 20 ロー
カス程度の DNA 型判定が可能であり，法医鑑識領域における個人識別には十分利用できることが判明した。

189

2．三叉神経脊髄路核および上部頸髄投射ニューロン
における Extracellular Signal-regulated Kinaseのリン酸化1○斎藤弘人 ，片桐綾乃

3,4

，岩田幸一

3,4

，祇園白信仁3．電解酸性機能水（functional water；FW）により誘導される alarmin について
○楠2,5

正文 1，五條堀孝廣 2,3，太田裕崇 1，菅野直之 4,5，

浅野正岳 2,3，佐藤秀一 4,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅰ講座 2日本大学歯学部病理学講座 2

日本大学歯学部生理学講座

3

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門

日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 34日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 45

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 5

目的

目的

口腔顔面領域における侵害情報の上行路は，三叉神経脊髄路核

ヒト口腔扁平上皮癌由来培養細胞（OSCC）に FW を作用させる

中間亜核（Vi），三叉神経脊髄路核尾側亜核（Vc）および上部頸髄ことにより誘導されるサイトカインについて網羅的な解析を行っ（C1）の侵害受容ニューロンを経由し，視床後内側腹側核固有部

た と こ ろ， こ れ ま で に 明 ら か と な っ て い る IL-1 α に 加 え て（VPM）および視床内側核群床へ投射する 2 経路と，橋の結合腕

EMMPRIN（extracellular matrix metalloproteinase inducer）の傍核（PBN）に投射する経路が存在する。しかし，これら投射ニュー発現増強を確認した。EMMPRIN は細胞外基質分解酵素（matrix

ロンの形態学的特徴や情報伝達機構には不明な点が多い。そこで

metalloproteinase；MMP）を誘導する因子として知られている。

本研究では，侵害刺激に反応する神経興奮マーカーである phos-

細胞障害に伴って細胞から分泌される分子として各種 alarmin のphorylated Extracellular Signal-regulated Kinase（pERK）およ

存在が知られており，IL-1 α は代表的な alarmin とされている。

び P 物 質 の 受 容 体 で あ る Neurokinin 1（NK1）受 容 体 の 投 射

FW により IL-1 α と同時に EMMPRIN が誘導されるという点にニューロンにおける発現分布を検討し，侵害情報を伝える投射

着目し，EMMPRIN が alarmin の一種なのではないかとの着想をニューロンの投射様式解明を目的とした。

得た。本研究では EMMPRIN 誘導のメカニズムと EMMPRIN とIL-1 α の分泌様式の違いについて検討することとした。

材料及び方法SD 雄性ラットの右側 VPM，内側中心核（CM）および PBN に材料および方法

逆行性神経トレーサー Fluorogold（FG）を注入した。7 日後，左側

OSCC（HSC3，Ca9-22）を，FW（pH2.7，酸化還元電位 1,100 mV

上 唇 に カ プ サ イ シ ン 刺 激 を 施 し，Vi-C1 に お け る FG 標 識 投 射

以上，遊離有効塩素濃度 30 ppm，三浦電子）で 30 秒間刺激した後，ニューロン，pERK 陽性細胞，NK1 陽性細胞の発現を免疫組織学

培養液中でさらに 1，3，6，12 時間培養した。培養上清および細的に解析した。

胞溶解液を回収し，ELISA 法により EMMPRIN タンパク発現量

成績及び考察を測定した。遺伝子発現については上記と同様に FW で処理した

Vi-C1 において，視床投射ニューロンは FG 注入側の対側に，細 胞 を 0.5，1，3，6 時 間 培 養 し，RNA 抽 出，cDNA 作 製 後 にPBN 投射ニューロンは両側性に分布が認められた。pERK ／ NK1

real-time PCR 法 に よ り 比 較 し た。FW 以 外 の 刺 激 に よ る

陽性の VPM 投射ニューロンは Vc に限局していたのに対し，CM

EMMPRIN 発現については，酸化ストレス（H2O2）およびヒート

投射ニューロンは，数が少なく，分布に偏りは認められなかった。

ショック（42℃）を行った細胞を 2 時間培養し，培養上清および細pERK ／ NK1 陽性の PBN 投射ニューロンは Vc から C1 に広く分胞溶解液を回収し，ELISA 法により測定した。

布していた。pERK ／ NK1 陽性の FG 標識投射ニューロンは 10%成績および考察

ほどで，侵害受容ニューロンの多くは介在ニューロンであること

HSC および Ca9-22 の両細胞において FW 作用後 1 時間で培養が示唆された。また，pERK ／ NK1 陽性投射ニューロンは投射先

上清中の EMMPRIN の有意な増加がみられた。一方，細胞溶解によって Vi-C1 における吻尾側的な分布様式が違っていたが，こ液においては FW 作用群では EMMPRIN の有意な減少がみられの結果は三つの投射経路の機能的な違いを反映していると考えらた。また，HSC3 および Ca9-22 の両細胞において FW 作用群とれる。

control 群 で は EMMPRIN 遺 伝 子 の 発 現 に 有 意 差 は な か っ た。
H2O2 お よ び 42℃ の ヒ ー ト シ ョ ッ ク 群 で は， 培 養 上 清 中 に
EMMPRIN の有意な増加がみられ，IL-1 α においても同様の結果がみられた。以上の結果から，FW は遺伝子発現増強によらず，細胞内に蓄積された EMMPRIN を細胞外に分泌させる可能性が考えられる。また，EMMPRIN は alarmin の一種である可能性が示唆された。

190

療を行う上で大きな問題となる。このような異所性異常疼痛のメ

4．電解酸性機能水の線維芽細胞および骨芽細胞に対する影響○本澤慶子 1,2，齋木あかり 1,2，浅野正岳 3,5，本吉

カニズムの一つとして侵害受容ニューロンの異常興奮が考えられているがその詳細は不明である。本研究では，急性歯髄炎によっ

満 2,4，て引き起こされる歯痛錯誤発症における末梢神経機構の一端を解清水典佳 2,4

明することを目的とした。

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

材料及び方法日本大学歯学部歯科矯正学講座 2，病理学講座 3右側上顎第一臼歯歯髄（M1）内への Complete Freundʼs Adju-

日本大学歯学部総合歯学研究所 臨床研究部門 4，生体防御部門 5vant（CFA）投与 3 日目で，ラットを浅麻酔し，その後，同側顎二目的腹筋に双極電極を挿入し筋放電量が安定するまで静置し，同側上

電解酸性機能水（FW）は食塩水を電解することにより得られる

顎第二臼歯（M2）を露髄させ髄腔内に Capsaicin 投与を行った。

水である。高い殺菌効果を有しており，この点については多くのそれぞれの群で投与前後の反射性顎二腹筋活動を経時的に計測し報告がある。一方，臨床的には抜歯窩の治癒促進など FW が生体

筋活動量の解析を行った。また，M1 への CFA 投与および M2 へに対して何らかの効果を示すことが知られている。そこで本研究の Fluorogold（FG）投与 3 日目に，ラットを麻酔し，灌流固定をでは歯周組織を構成する線維芽細胞や骨芽細胞に着目し，FW の行った。その後，三叉神経節内で Satellite 細胞の活性化マーカー

作用がこれらの細胞にどのような影響を及ぼすかについて検討しである Glial Fibrillary Acidic Protein（GFAP）および Gap 結合のた。

構成タンパクである Connexin43（Cx43）発現を免疫組織学的手法

材料および方法

にて検索し，GFAP および Cx43 陽性細胞に取り囲まれた FG 陽

実験には，子宮頸癌由来株化線維芽細胞（HeLa）およびマウス

性細胞数について解析を行った。さらに，歯髄炎モデルラットの頭蓋冠由来株化骨芽細胞（MC3 T3-E1）を用いた。FW 刺激によるTG 内に Cx43 阻害薬（Gap26）を，CFA 投与前 3 日より 7 日間持サイトカイン分泌の変化については Human XL Cytokine Array

続投与し，M2 への Capsaicin 刺激後の反射性顎二腹筋活動を経

Kit（R&D）を用いて検索した。方法としては FW で HeLa を 30 秒

時的に計測し解析を行った。
成績

間刺激し，さらに 6 時間培養後の培養上清を cytokine array に供した。また，MC3 T3-E1 に recombinant human（rh）EMMPRIN

反射性顎二腹筋活動は CFA 群で有意な増加を示した。Cx43 を

および rh basic FGF（bFGF）（R&D）を 60 分間作用させ，さらに発現している GFAP 陽性細胞によって囲まれた FG 陽性神経節細24 時 間 培 養 後 の 培 養 上 清 を 回 収 し，Quantikine ELISA Kit

胞数の割合は CFA 群で有意に多かった。TG 内への Gap26 投与（R&D）を用いて IL-6 および VEGF 濃度を測定した。

により，反射性顎二腹筋活動は有意に抑制された。
考察及び結論

結果および考察
Cytokine Array の結果，HeLa に FW を作用させることによM1 歯髄炎は M2 に痛覚過敏が引き起こすことが示された。発り EMMPRIN，bFGF および Endoglin の分泌上昇が認められ，症メカニズムの一つとして，M1 の炎症により三叉神経節内でのELISA により EMMPRIN および bFGF の分泌増強を確認した。

Satellite 細胞の活性化およびそれに引き続く Cx43 の発現増加にそこで，EMMPRIN，bFGF に注目し，骨芽細胞に対するこれら

よって活性型 Satellite 細胞が M2 支配神経節細胞周囲にまで波及の 影 響 に つ い て 検 討 し た 結 果，MC3 T3-E1 に 対 し て rh

し，M2 神経節細胞活動を亢進され，結果的に M2 の痛覚過敏が

EMMPRIN を作用させた群では IL-6 および VEGF ともにコント

引きこされたと考えられる。さらに，活性型 Satellite 細胞の拡散

ロール群と比較し発現量の差はみられなかった。一方，rh bFGFには Satellite 細胞に存在する Cx43 が関与する可能性が示されを作用させた群では 3 nM をピークに IL-6 および VEGF の発現た。

量 は 増 加 し， そ の 後 は 低 下 し た。 さ ら に rh EMMPRIN と rh

6．骨粗鬆症ラット頭頂骨の骨増生に対する PTH（1-34）の影響

bFGF を同時に作用させたところ IL-6 の発現の減少が確認された。以上より，HeLa から分泌された bFGF は MC3 T3-E1 に対して増殖・分化促進に働き，EMMPRIN とは相互にシグナル系に○久保田達也 1，津徳亮成 2，小澤康正 1，山本崇申 1，

おいてクロストークしていることが示唆された。

築根直哉 1，蓮池

聡 2，佐藤秀一 2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

5．急性歯髄炎により誘導される歯痛錯誤の末梢神経機構
1○古宮宏記 ，清水康平

1,3

，岩田幸一

2,4

，小木曾文内日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 2
日本大学歯学部総合歯学研究所 高度先端医療研究部門 3

1,3

目的

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅱ講座 1

現在，骨粗鬆症薬として使用されている PTH（1-34）が骨形成を日本大学歯学部生理学講座 2

促進することが示唆されている。本研究では，骨粗鬆症における日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3

PTH（1-34）の 骨 増 生 に 対 す る 影 響 を 検 討 す る こ と を 目 的 に，

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 4

Ovariectomized（OVX）ラット頭頂骨に Guided Bone Augmenta-目的tion（GBA）モデルを設置し，PTH（1-34）を腹腔内投与，PTH（1-34）

急性歯髄炎が発症した際に起きる歯痛錯誤は，適切な診断と治の骨増生に対する影響を検討した。

191

材料と方法mRNA 発現が有意に減少していた。一方，

雌性 Wistar ラット 12 匹を 2 群に分け，6 週齢時に，OVX 手に増加していた。また，mRNA は有意については両者間に有意な差は認められなかった。

術を行った。さらに 8 週間飼育をした。

hemi において DNA メチル化酵素である

14 週齢時に頭頂骨を露出させ，トレフィンバーを用いて左右対，や DNA 脱メ

称に 5 mm の外周溝を形成し，ラウンドバーにてその内側に 5 カ

チル化酵素である

所の骨髄穿通孔を形成した。そして，規格化されたプラスティッ

たことから，hemi の孤束核では離乳前に既に DNA メチル化レベの mRNA 発現に変化が認められクキャップ（内径 4.4 mm，高さ 1.5 mm）を設置した。実験群に，ルが変化している可能性が考えられた。今後，

週 3 回 PTH（1-34）（35μl/kg）を腹腔内投与，対照群には，生理食のような機序で DNA メチル化関連遺伝子の発現に影響を与えた

塩水を週 3 回腹腔内投与した。実験動物用 3 D マイクロエックス

かについて検討する予定である。

の欠損がど

線 CT を用いて，手術日を 0 週とし 12 週まで毎週撮影し，新生

8．シランモノマーの違いがシリカガラスとアクリル
レジンとの接着に及ぼす影響

骨様組織の定量分析を行った。その後，軟組織を含む骨組織を採取し，組織切片を作製，組織学的評価を行った。
結果と考察○岡崎智世 1,2，小泉寛恭 2,3，野川博史 2,3，赤澤伸隆 1,2，マイクロ CT の観察結果から術後 4 週から 12 週まで実験群，平場晴斗 1,2，松村英雄 2,3対照群ともに新生骨の形成が観察された。術後 8 週から 12 週で日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

は，実験群は，対照群と比較して有意に新生骨の形成が促進され

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2た。

日本大学歯学部総合歯学研究科高度先端医療研究部門 3

結論目的OVX ラット GBA モデルにおいて，PTH（1-34）の投与は，骨外側方向への骨増生を有意に促進した。従って，PTH（1-34）の間歇

シラン化合物はケイ素酸化物とレジンの接着に有効であるが，投与は，骨粗鬆症においても骨増生を促進する可能性が示唆され接着耐久性には改善の余地があることが知られている。解決策のた。

一つとして疎水性の高いシランの応用が考えられるが，異なるモ
ノマーの性能について評価を行った報告は少ない。本研究の目的

7．

の欠損が孤束核での DNA メチル化関連
遺伝子発現に及ぼす影響

は，シランモノマーの種類および加熱処理の有無が，ケイ素酸化物とアクリルレジンとの接着耐久性に及ぼす影響を比較検討することである。

○伊藤寿典 1,2，石山未紗 2，岩佐聡子 2，浅野正岳 3，

材料及び方法白川哲夫 2

シリカガラス円形平板試料を，耐水研磨紙にて研削後，アセト

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

ン溶液中にて 10 分間超音波洗浄を行った。シランとして 3-（トリ日本大学歯学部小児歯科学講座 2

メトキシシリル）プロピルメタクリレート（3-TMSPMA，東京化日本大学歯学部病理学講座 3成工業）と 3-（4-メタクリロイルオキシフェニル）プロピルトリメ
トキシシラン（3-MPPTS）の 2 種を採用し，メタクリル酸メチル

目的
遺伝子の異常により引き起こされるレット症候群で（MMA，東京化成工業）の 1 および 2 mol% 溶液を調製した。こは，臨床症状の一つとして摂食機能の異常がみられる。レット症

れらは試料表面にプライマーとして塗布された。比較対照群はプ候群モデル雄マウスにおいても 5 週齢以降に摂食機能の低下がみ

ライミング処理なしとし，合計 5 条件の設定とした。さらに，各られるが，その病態の詳細は明らかではない。今回，を欠群半数の試料に対し，加熱重合器（KL-310，クラレノリタケデン

損したレット症候群モデル雄マウスについて，嚥下運動に関与しタル）にて熱処理を行った。表面処理後，被着面にステンレス鋼ている延髄孤束核（NTS）での DNA メチル化関連遺伝子の発現変製リングを固定し，アクリル（MMA-TBB）レジンを充填した。接化について検討した。

着 試 験 体 は 37℃ 水 中 24 時 間 浸 漬 後， 水 中 熱 サ イ ク ル を 0 回，
10,000 回負荷し，接着試験を行った。

方法

成績及び考察ヘテロ欠損雌マウスと C57 BL/6 J 雄マウスを交配して得られた

シラン処理を施した群において，加熱処理を行った群が，行わ

欠損雄仔マウス（hemi）を用いた。また野生型雄なかった群と比較して有意に高い接着強さを示した。

仔マウス（wild）をコントロールとして用いた。

水中熱サイクル 10,000 回負荷後，3-MPPTS 塗布＋加熱処理群

2 週齢の hemi と wild を 10％イソフルランにて麻酔したのち脳が他の群に比して有意に高い接着強さを示した。

を全摘出し , クリオスタット上で左右両側の延髄孤束核をパンチ

以上の結果から，シリカガラスとアクリルレジンの接着においアウトした。得られた組織より RNA を抽出し ,cDNA を合成し
て，

，

，

，

，

，

ては，疎水性がより高いとされる 3-MPPTS による表面処理が耐の mRNA 量

久性の向上に有効であることが示唆された。

をリアルタイム PCR で測定した。
結果および考察
hemi と wild を比較したところ，2 週齢で体重に差はみられな
か っ た が，wild に 比 べ hemi で は

，

，

の

192

9．ラット下歯槽神経切除モデルにおける GDNF 局所投与による知覚回復の評価

10．延髄腹側呼吸ニューロン群でのエピジェネティック制御○渡辺雅弘 1，篠田雅路 2，吉沼直人 3,4，菅野直之 3,4，
2

岩田幸一 ，佐藤秀一

○木舩

3,4

発現とその

崇 1,2，石山未紗 2，岩佐聡子 2，浅野正岳 3，

白川哲夫 2

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻応用口腔科学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

日本大学歯学部生理学講座 2

日本大学歯学部小児歯科学講座 2

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座

3

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門

日本大学歯学部病理学講座 34目的
メチル化 CpG 結合タンパク 2 をコードする遺伝子

目的の異常が原因で発症する疾患としてレット症候群があり，同症候群

神経成長因子 Glial Cell Line-Derived Neurotrophic Factor（GDNF）は軸索形成を促進することで断裂した神経組織を再生す

では無呼吸や過呼吸などの呼吸異常がみられる。今回，をることが知られており，運動機能と感覚機能の回復を図るために欠損したマウスについて，ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤の一

様々な調査が進められている。本研究はラット下歯槽神経切除モつであるバルプロ酸（VPA）を発達期に投与し，呼吸機能ならびにデルを作製し，切除部位へ GDNF を局所投与することで下歯槽呼吸中枢での CpG メチル化とヒストンアセチル化レベルがどの神経の組織的再生と機能回復を併せて評価を行い，末梢での神経ような影響を受けるかを検討した。
材料及び方法組織再生機構の一端を解明することを目的とした。

ノックアウトマウス（hemi）と野生型マウス（wild）を用材料および方法
SD ラ ッ ト（6-7 週 齢， ♂ ）に 三 種 混 合 麻 酔 薬（ ド ミ ト ー ル

いて，全身型プレチスモグラフにより 2 週齢の hemi および wild

0.375 mg/kg，ミダゾラム 2 mg/kg，ベトルファール 2.5 mg/kg）のマウスの呼吸を記録した。また 2 週齢の hemi および wild の脳を腹腔内投与し，メスで頬部を切開し，歯科用電動式ハンドピーを摘出して延髄腹側の呼吸関連ニューロン群（ventral respiratory

ス（Tas-35 LX，OSADA）と 滅 菌 歯 科 用 ス チ ー ル バ ー（ISOgroup，VRG）のパンチアウトを行い，得られた組織より RNA を

No.1/008-1/012，JOTA，Switzerland）で下顎骨を切削し，下歯抽出し，槽神経を明示し約 2 mm 切除した。切除部位に GDNF1.25μg と出し生理活性物質徐放剤 2.5 mg（Medgel ® , メドジェル）を混和したもらにクロマチン免疫沈降法にて，大脳皮質ののをフィブリン製剤 80μg（ ベリプラスト P，CSL ベーリング）と上での MBD1，MBD2 の結合を調べた。また生後 8 日より 7 日間，共に填入した。

VPA（200 mg/kg）を腹腔内投与し，その影響について調べた。

mRNA 量を測定した。また VRG より DNA を抽プロモーターの CpG メチル化レベルを測定した。さプロモーター

成績及び考察Vehicle 群には GDNF と同量の 0.1 MPBS と生理活性物質徐放Hemi と wild を 2 週齡で比較すると，hemi は無呼吸回数が有剤の混和物をフィブリン製剤と共に填入した。患部を 4-0 ナイロ
ン糸で縫合し，術後 1 日目から隔日で 13 日目までイソフルラン

意に多く，VRG での吸入による浅麻酔下でラット下唇の機械刺激に対する疼痛反射閾

与により hemi では無呼吸回数が減少し，mRNA 量は減少していた。VPA 投値の測定を行った。

し た。

mRNA 量は増加

プ ロ モ ー タ ー の CpG メ チ ル 化 に つ い て，hemi がwild に比べメチル化率が有意に高かったが，VPA 投与によりメ処置後 3，5 日目のラットを三種混合麻酔薬にて深く麻酔し，チル化率が低下した。

通法に従いラットの灌流固定を行った。その後，下歯槽神経切除

hemi では部位を摘出し，連続組織標本を作成後，シュワン細胞のマーカー

mRNA 発現の低下が無呼吸回数増加の原因のである Glial Fibrillary Acidic Protein（GFAP）および GDNF 受

一 つ と 考 え ら れ，Gad1 プ ロ モ ー タ ー の 高 メ チ ル 化 が容体である GFR- α 1 の発現を免疫組織学的手法にて検索し，解析

mRNA 発現の低下に関与している可能性が示唆された。

を行った。

11．シリカガラスに対する表面処理の違いがレジン系
装着材料との接着強さに及ぼす影響

成績および考察Antibody 投与群と比較して GDNF 投与群は 9 日目で知覚回復に有意な差を認めた。Vehicle 群と比較して GDNF 投与群は 5，7○守世里奈 1,2，伏木亮祐 2，矢川彰悟 1,2，小峰

太 2,3，

日目で知覚回復に有意な差を認めた。以上の成績から，GDNF は

松村英雄

知覚の回復を優位に促し，GDNF 受容体（GFR- α 1）ブロックによ日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

2,3

り知覚の回復が優位に抑制されたことから，GDNF は感覚神経の日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2

機能回復を促進する可能性が示唆された。

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3

目的
表面処理の違いがシリカガラスとレジン系装着材料との接着強さに及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。
材料及び方法被着体として直径 11.0 mm と直径 8.0 mm，厚さ 2.5 mm のシ

193

リカガラスの円形平板を用いた。平面部を被着面とし＃ 1500 のされている。このような背景を踏まえ，コラーゲン膜に OP-1 を耐水研磨紙にて注水研削した後，直径 5.0 mm の穴の開いたマス

添加することで骨組織再生機転を促進する可能性を想定した。そキングテープで接着面積を規定した。接着面積を規定後，クリア

こで，OP-1 添加コラーゲン膜がラット下顎角骨欠損モデルに対フィルフォトボンドボンディングエージェント（CPB，クラレノする骨再生に及ぼす影響についてエックス線学的および組織学的リタケデンタル），クリアフィルポーセレンボンドアクチベーターに検討することを目的とした。
材料および方法（Act， ク ラ レ ノ リ タ ケ デ ン タ ル ），CPB と Act の 等 量 混 和 液（CPB+Act），CPB のキャタリストのみ（CPBC）と Act の等量混

9 週齢の雄性近交系ラット（F344/jcl）の下顎角に，内径 4.0 mm

和液（CPBC+Act），CPB のユニバーサルのみ（CPBU）と Act ののトレファインバーを用いて，下顎角臨界骨欠損モデルを作製し等量混和液（CPBU+Act），さらにプライマー未塗布（NP）を加えた。欠損のみ（Control 群），欠損をコラーゲン膜で被覆（CM 群），

た計 6 条件にて各被着体に対し表面処理を行った。

欠損をコラーゲン膜に OP-1 を 0.5μg（CM/OP-1［L］群），もしく

その後，クリアフィルエステティックセメント（ユニバーサル，

は 2.0μg（CM/OP-1［H］群）添加し被覆した群に分けた。実験動物

クラレノリタケデンタル）を用いて，5 N の荷重下において直径の用 3 D マイクロ CT（μCT）を用いて同一個体における経時的（2，

異 な る 試 料 ど う し を 接 着 し， 試 料 に 対 し て 垂 直 方 向 に 光 照 射

4 および 6 週）な骨再生をエックス線学的に観察した。また，術後（Optilux 501，Kerr）を 5 秒間行った。製作した試料を，室温下

6 週の組織切片をヘマトキシリン・エオジン染色し，光学顕微鏡

にて 30 分間放置後，37℃精製水中に 24 時間浸漬した。せん断接下で評価を行った。

着試験は，万能試験機（Type 5567，インストロン）を用いてクロ

成績および考察スヘッドスピード毎分 0.5 mm の条件で行った。せん断接着試験

術後 2，4 および 6 週において，μCT 像から Control 群と比較

後，実体顕微鏡（Stemi DV4，Carl Zeiss）を用いて，試料の破壊

して CM 群，CM/OP-1［L］群，CM/OP-1［H］群で欠損部に骨様組様式を観察した。

織の再生を認めた。また，CM/OP-1［L］群と比較し，CM/OP-1［H］

成績及び考察群において骨欠損の顕著な改善が見られた。新生骨量，骨密度おCPB+Act が他のプライマーと比較し有意に高い接着強さを示

よび骨欠損閉鎖率についても同様の結果が得られた。組織学的所した。次いで，CPBC+Act が Act，CPB，CPBU+Act，NP に比見においても CM/OP-1［H］群において既存骨から連続した明ら

較し有意に高い接着強さを示した。

かな骨の再生像を認めた。

以上のことから，CPBC に含まれる酸性機能性モノマーである

以上より，ラット下顎角骨欠損モデルにおいて，OP-1 添加コ

MDP が，シランの加水分解を促進させることで，高い接着強さ

ラーゲンメンブレンが骨再生を積極的に促すことが示されたことを獲得できることが示唆された。また，CPBC+Act に比較してから，今後新たな再生療法の構築の足掛かりとなる可能性が示唆

CPB+Act が有意に高い接着強さを示したことから，CPBU に含された。

まれる化学重合促進剤が，CPBC に含まれる化学重合触媒と反応

13．姿勢の変化が安静時と咀嚼時の唾液分泌量に及ぼす影響することで，強固な接着を獲得できたと考えられる。

12．ラット下顎角骨欠損に対する Osteogenic protein-1
添加コラーゲン膜の影響
1○尾崎愛美 ，髙山忠裕

2,4

1

1

1

田邉奈津子

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

1，山本崇申 ，小澤康正 ，
1

井口慎也 ，鈴木大悟 ，長尾麻由 ，中嶋
5,7○平井皓之 1，中山渕利 2,3，植田耕一郎 2,3

，鈴木直人

5,7

，前野正夫

6,7

昭

3,4

日本大学歯学部摂食機能療法学講座 2

，

，佐藤秀一

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 3
2,4

目的

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

摂食嚥下障害患者において，誤嚥防止や食塊移送を補助する目

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 2

的で体幹を倒したリクライニング位で経口摂取を行うことがあ日本大学歯学部歯科矯正学講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門る。しかし，近年の研究ではリクライニング位において咀嚼効率4が低下し，咀嚼時間が延長することが報告されている。また，唾

日本大学歯学部生化学講座 5

液分泌量の低下が咀嚼効率と咀嚼時間に関連することから，本研

日本大学歯学部衛生学講座 6

究では姿勢の変化が唾液分泌量に及ぼす影響について検証した。

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 7

対象および方法
健常成人（男性 5 名，女性 7 名，平均：30±3.0 歳）を対象とし，目的
現在，歯周組織再生誘導（GTR）法や骨組織再生誘導（GBR）法な30 仰臥位，90 座位，前屈位における安静時唾液分泌量と咀嚼時

どの再生療法が臨床において広く応用されている。その一つとし

唾液分泌量を測定した。安静時唾液分泌量については，左右耳下てコラーゲン膜を用いた方法があり，これはスペースメイキング

腺乳頭部と舌下小丘部にガーゼを 3 分間留置した後，その重量変の役割として使用され，再生過程に単独で積極的に働くものでは化を測定値とした。咀嚼時唾液分泌量については，唾液を嚥下しないことは周知の事実である。また，成長因子である Osteogenic

ないよう注意しながらガーゼを咀嚼してもらい，1 分ごとにガー

protein-1（OP-1）は医科領域で応用されており，未分化間葉系細胞

ゼと一緒に口腔内の全ての唾液を吐き出すことを 3 回連続して行や骨芽細胞前駆細胞を成熟骨芽細胞へ分化誘導させることが報告

い，各々の重量変化を測定値とした。各試行順は被験者ごとに予194

め無作為に決め，試行間に 50 cc の飲水と 7 分間の休憩を入れた。

4 D はともにグループ間で有意差が認められなかった。このこと

以上の操作を 2 日間，同時刻に行い，その平均値を用いて有意差から，接着から 24 時間後においては，デュアルキュア型と光重の検定を行った。

合型レジン系装着材料の接着強さは同等であることが示された。

結果および考察15．歯根肉芽腫における SIRT1 遺伝子の発現

安静時の耳下腺唾液分泌量は，前屈位，90 座位，30 仰臥位の順で低下する傾向にあり，左側耳下腺唾液分泌量で 30 仰臥位と○工藤前屈位の間に有意差を認めた。

洋 1，武市

小木曾文内

咀嚼時唾液分泌量でも同様の傾向が認められ，咀嚼開始から 1

収 1,2，羽鳥啓介 1,2，牧野公亮 1，

1,2

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅱ講座 1

分後で 30 仰臥位と 90 座位，および 30 仰臥位と前屈位の間に有日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 2

意差を認め，2 分後，3 分後も同様の結果であった。
背景

以上の結果から，リクライニング位は他の姿勢に比べて唾液分

SIRT1 は NAD＋依存性ヒストン脱アセチル化酵素であり，細胞泌量が低下する可能性が示唆され，そのことが咀嚼能率の低下や内の NF-κB，p53 などの標的タンパク質に作用することで生体内口腔乾燥症状の悪化に関連する可能性があると考えられた。

において多様な働きを担っており，SIRT1 は生体組織内での炎症14．レジン系装着材料の重合様式の違いが高透過性ジルコニアとの接着強さに及ぼす影響○矢川彰悟 1,2，守
小峰

太

2,3

やアポトーシスに影響を与えることが知られている。慢性根尖性歯周炎は種々の炎症により根尖部歯周組織に生じる病変であり，慢性炎症内での SIRT1 が炎症性細胞の活性や根尖病巣の成長に

世里奈 1,2，岩崎太郎 2，伏木亮祐 2，，松村英雄

関与している可能性がある。

2,3

研究目的

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

根尖病巣内での SIRT1 の局在と同酵素の炎症性細胞活性化に

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2

ついて，Real-time PCR 法及び蛍光抗体法を用いた免疫組織化学

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3

的染色により検討する。
材料及び方法目的

1．供試試料 : 臨床的に難治性根尖性歯周炎と診断され，歯内外レジン系装着材料の重合様式の違いが高透過性ジルコニアとの科処置または抜歯処置が適応とされた患者を被験者として，根尖接着強さに及ぼす影響を明らかにすること。
材料及び方法

病巣組織（n ＝ 27）を外科的に採取した。採取されたサンプルはた被着体として高透過性ジルコニア円形平板（以下 UTML，カタ

だちに分割し，一方は RNA 抽出，他方は 5μm の凍結切片を作

ナジルコニア UTML，クラレノリタケデンタル）を使用した。被製した。すべてのサンプルは HE 染色を施し，病理組織学的に歯着 体 は， 直 径 11.4 mm と 直 径 8.0 mm， 厚 さ 2.5 mm の 2 種 類 の根肉芽腫と診断された試料（n ＝ 20）のみを実験に用いた。また，ジルコニア円形平板とし，ジルコニア表面を #600 の耐水研磨紙

完全水平埋伏歯の抜歯の際に採取した健常歯肉組織（n ＝ 5）をコ

（3 M）にて注水研削を行った。その後，内径 5.0 mm の穴が開い

ントロールとして用いた。なお，試料の採取にあたっては歯学部

た厚さ 50μm の片面テープで接着面積を規定し，各種レジン系装倫理委員会の承認を得て実施した。
（ 倫許 2014-6 号） 2．細胞培

着材料を用いて，直径の異なるジルコニア試料を接着した。レジ

養：U-937 を 1×106/ml に 調 整 し，LPS（

ン系装着材料として，デュアルキュア型であるパナビア V5（ 以下Resveratrol にて刺激を行った。3．免疫組織化学的検索 : 凍結切

0111:B4 由 来 ），PV5，クラレノリタケデンタル）とクラパール DC（以下 DC，ク

片を用いて，抗ヒト SIRT1 ラビットモノクローナル抗体を用いラレノリタケデンタル），光重合型であるクラパール LC（以下た蛍光染色を行った。

LC， ク ラ レ ノ リ タ ケ デ ン タ ル ）を 用 い た。 そ の 後， 光 照 射 器

胞から mRNA を抽出し SIRT1 特異的プライマーを用いて遺伝子（Optilux 501，Kerr）を用いて，試料に対して垂直方向に 40 秒間発現を検索した。

光照射を行った群（以下 1 D）および試料の 4 方向から接着面に対成績及び考察4．Real-time PCR 法 : 組織または培養細し 45 度の角度で 10 秒間ずつ光照射を行った群（以下 4 D）の 2 群

歯根肉芽腫中のリンパ球，マクロファージに SIRT1 タンパクに分けて光照射を行った。製作した試料は，室温下の暗室中にてが発現しており，SIRT1 遺伝子の発現量は健常歯肉と比較して有1 時間（以下 1 H）と 24 時間（以下 24 H）の 2 条件で保管した。せ意に高いことが確認された。U-937 は LPS または Resveratrol のん断接着強さの測定は，万能試験機（インストロン，Type 5567）

単独刺激よりも双方の刺激により SIRT1 遺伝子の発現量増加がを用いてクロスヘッドスピード毎分 0.5 mm の条件で行った。せ

確認された。以上により，SIRT1 は炎症が生じた場合に強く発現

ん断接着試験後，各試料は実体顕微鏡にて破壊形式を観察した。

し炎症治癒に関与している可能性が示唆された。

成績及び考察PV5 に お い て 1 H と 24 H と も に，4 D は 1 D に 比 較 し て 有 意に高いせん断接着強さを示したことから，PV5 に含まれる重合促
進剤が十分な光照射により機能し，高い接着強さが得られたと考察される。また，1 H における 4 D において PV5 が，他のグループに比較し有意に高い接着強さを示したが，24 H において 1 D と

195

CAD/CAM レジンブロックとして松風 HC ブロック A3-LT（松16．切端咬合及び咬合高径の増加が嚥下時の舌骨上筋群に与える影響○林風）を用いた。
ウシ下顎前歯歯冠部の唇側中央部に象牙質平坦面が得られるよ

晃成 1，佐藤光保 2,3，大西紗也子 1，早田真由美 1，

う，耐水性 SiC ペーパーの #600 を用いて調整し，象牙質被着面

植田耕一郎 2,3とした。

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 ¹

CAD/CAM レジンブロックを直径 4 mm，高さ 2 mm の円柱状

日本大学摂食機能療法学講座 ²に加工した後，アルミナ粒子でサンドブラスト処理し，超音波洗日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 ³

浄したものを CAD/CAM 試片とした。
CAD/CAM 試片および象牙質被着面を各製造者指示条件で処目的
咬頭嵌合位における咬合高径の変化が嚥下時の舌圧や舌骨上筋理した後，練和したセメントを塗布した CAD/CAM 試片を荷重群に与える影響についての報告はあるが，咬合位を変えて咬合高0.2 N の条件で圧接，余剰セメントを除去した。セメントを Dual-

径を変化させたときの影響はほとんど報告されていない。そこで

cure で硬化させる条件では，CAD/CAM 試片の 2 方向から照射

切端咬合位での咬合挙上が嚥下時の舌骨上筋群に与える影響につ

強度をそれぞれ 400 あるいは 800 mW/cm 2 に設定し，30 秒間光いて表面筋電図を用いて検討を行った。

照射を行った。Self-cure で硬化させる条件では，5 分間圧接したものを接着試験用試片とした。

対象および方法

これら試片を 37±1℃，相対湿度 90±5% の条件で 24 時間保管対象は顎関節症や不正咬合がない健常成人 7 名（男性 5 名，女した後，剪断接着強さを測定した。

性 2 名：平均年齢 29±3.4 歳）とした。表面電極設定部位は舌骨上成績および考察

筋群のオトガイ下導出とし，咬頭嵌合位，切端咬合位および切端咬合位で舌圧子（一枚の厚径が 1.5 mm）を 1 〜 3 枚咬ませた 3 種

供試したレジンセメントの 24 時間後の接着強さは，Self-cureの厚径の異なる状態で嚥下開始から終了までの筋活動電位の活動条件と比較して Dual-cure 条件で有意に高い値を示した。また，

時間と積分値を測定した。測定値は paired-t test 及び一元配置分

レジンセメントへの照射強度の違いでは，いずれのセメントにお散分析で有意差の検定を行った。なお有意水準は 5％とした。

いても，照射強度が高い条件で CAD/CAM レジンブロックの象結果および考察

牙質への接着強さは上昇する傾向を示し，とくに，PV および RU

切端咬合位では喉頭嵌合位に比べ嚥下時の舌骨上筋群の筋活動では 400 mW/cm2 と比較して，800 mW/cm2 の条件で有意に高時間と積分値に有意な増加が認められた。これは切端咬合位でのい値を示した。このように，レジンセメントへの照射強度の違い

下顎の軽度前方移動に伴い舌骨上筋群の伸展が起こり，また臼歯が接着強さに影響を及ぼした要因としては，セメントに使用され部での咬合接触がなくなることにより嚥下時の下顎骨の強固な固る重合開始材系の違いなどが考えられた。
結論

定ができないことで円滑な嚥下動作が行えず，嚥下にかかる時間が延長し，舌骨上筋群に対する負荷が増大した可能性が考えられ

CAD/CAM レジンブロックの象牙質に対する接着強さは，レる。切端咬合位で舌圧子を咬ませた場合には厚径が増すに伴い測

ジンセメントへの照射強度に影響を受けることが明らかとなっ定値は増加傾向を示すものの，舌圧子を咬ませない切端咬合位にた。

比べ有意な変化は認められなかった。切端咬合位での軽度な咬合18．歯根肉芽腫における FOXO3A の発現

高径の増加は舌骨上筋群の筋活動時間および積分値に影響しない
ことが分かった。

○石井佳笑 1，羽鳥啓介 1,2，武市
小木曾文内

17．レジンセメントへの照射強度が CAD/CAM レジ
ンブロックの象牙質接着性に及ぼす影響
○柴崎
遠藤

翔

1,2

，黒川弘康

2,3

，川本

諒

2,3

収 1,2，牧野公亮 1，

1,2

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅱ講座 1
日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 2

2，村山良介 ，

背景

肇 2，高見澤俊樹 2,3，宮崎真至 2,3Forkhead box O3A（FOXO3A）は，種々の癌において腫瘍抑制

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1の役割を果たす転写因子であり，関節リウマチをはじめとする慢

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅰ講座 2性炎症で発現し，細胞のアポトーシス誘導性転写因子である Fas

日本大学総合歯学研究所生体工学研究部門 3

ligand（FASL）の伝達機構を制御することで，慢性炎症を抑制す

目的ると報告されている。このことから，口腔内の慢性炎症であり，デュアルキュア型レジンセメントへの照射強度が，CAD/CAM

骨吸収を伴う根尖性歯周炎である歯根肉芽腫においてもレジンブロックの象牙質接着性に及ぼす影響について検討した。

FOXO3A が発現し，その病態に関与していることが示唆される。

材料および方法

研究目的

レジンセメントして，Estecem Adhesive Resin Cement（EC，

免疫組織化学的検索および Real time PCR 法を行い歯根肉芽腫における FOXO3A および FASL の発現を検討する。

トクヤマデンタル），RelyX Ultimate Adhesive Resin Cement（RU，3 M ESPE），ResiCem Dental adhesive Resin Cement（RC，

材料および方法

松 風 ）お よ び Panavia V5（PV， ク ラ レ ノ リ タ ケ デ ン タ ル ）を，

1．口腔内診査およびエックス線診査に基づき慢性根尖性歯周196

炎で外科的歯内療法または抜歯が適応とされた患者の根尖群）の 3 群とした。それぞれのキャップを接着性レジンで溝に固病巣組織を採取し，直ちに分割した後パラフィン切片の作定した後，骨膜で被覆し，さらに，皮膚を縫合した。術直後を 0製および RNA 抽出を行った。ヘマトキシリン・エオジン染

週とし，以後 2 週ごとにマイクロ CT（R-mCT，リガク）を 12 週

色を行い歯根肉芽腫と診断された試料を本研究に用いた。

間行い，経時的にキャップ内の新生骨様組織を観察評価した。まなお完全水平埋伏智歯の抜去の際に採取した健常歯肉組織

た，術後 12 週の組織切片をヘマトキシリン・エオジン染色し光をコントロールとして用いた。
（ 日本大学歯学部倫理委員会

学顕微鏡下で観察した。
結果と考察

倫許 2014-6）
2．供試試料中の FOXO3A 発現を酵素抗体法にて免疫組織化学

観察結果より，3 群ともに経時的に骨外側方向に新生骨様組織

的に検索を行った。併せてマーカーとして CD3，CD79 αの増生が認められた。とくに，Ti 群は開放群および PC 群と比較

および Neutrophil Elastase を用いてそれぞれ T リンパ球，

して有意な骨増生を認めた。しかし，開放群と PC 群間の骨増生

B リンパ球および好中球における FOXO3A の発現を二重蛍に有意差は認められなかった。
以上のことより，ラット GBA モデルのキャップ上面にチタン

光染色にて検索を行った。

メッシュを設置し，骨膜で被覆すると骨外側方向への骨増生が促

3．歯根肉芽腫での FOXO3A および FASL 遺伝子発現を検索進する可能性が示唆された。

するため，FOXO3A と FASL の特異的プライマーを用いて，Real time PCR 法を行った。各試料の遺伝子発現レベルは20．間接修復用コンポジットレジンを応用したインプ
ラント上部構造の破壊強度

GAPDH の発現量により標準化を行った。コントロールとして，健常歯肉においても同様に行った。
成績および考察○高田宏起 1,2，神尾伸吾 2，本田順一 1,2，田口耕平 2，

免疫組織化学的検索において，FOXO3A は健常歯肉組織では

小峰

太 2,3，松村英雄 2,3発現は認められず，歯根肉芽腫中の T リンパ球，B リンパ球およ日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

び好中球での発現が認められた。Real time PCR 法において，歯日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2根肉芽腫における FOXO3A 遺伝子および FASL 遺伝子発現量日本大学歯学部総合歯学研究所

高度先端医療研究部門 3は，健常歯肉組織と比べ有意に高かった。以上のことから，歯根目的

肉芽腫中において FOXO3A および FASL が発現していることが間接修復用コンポジットレジンを応用したセメント固定式イン

明らかとなった。

プラント上部構造の破壊強度を比較検討する。

19．ラット頭頂骨 GBA モデルを用いた骨外側方向の骨増生に対する骨膜の影響
1

1

1○山本崇申 ，小澤康正 ，久保田達也 ，佐藤秀一

材料および方法
下顎第一大臼歯欠損に対するインプラント治療を想定し，インプラント体をポリエステル樹脂に植立した。インプラント上部構

2,3

造 は， ジ ル コ ニ ア フ レ ー ム に 前 装 用 陶 材 を 前 装 し た ク ラ ウ ン

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1（ZAC），ジルコニアフレームに間接修復用コンポジットレジンを日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 2

前装したクラウン（ZIC），ジルコニアフレームに CAD/CAM で

日本大学歯学部総合歯科学研究所 高度先端医療研究部門 3製作された前装用コンポジットレジンを接着したクラウン

目的（ZCC），CAD/CAM で製作されたモノリシィックコンポジット

これまで，ラット Guided Bone Augmentation（GBA）モデルを

レジンクラウン（MCC）の計 4 条件とした。

用いて骨外側方向の骨増生を検討してきた。しかし，骨外側方向

ジルコニアフレームは全周 0.5 mm の厚みとし，歯科用 CAD/に十分な骨を常に増生させることは困難である。その理由の一つ

CAM により製作した。ZAC および ZIC は，ジルコニアフレーム

として , ラット GBA モデルにおける骨増生は既存骨側から起こにそれぞれ陶材および間接修復用コンポジットレジンを築盛，前るため，骨外側方向での骨増生が不十分となるためではないかと装した。ZCC はジルコニアフレーム，MCC はアバットメントに考えた。そこで，本研究ではラット GBA モデルのプラスチック

それぞれスキャニング用ワックスアップを行い，それを基に，歯キャップ上面を開放し，骨外側方向への骨増生に対する骨膜の影科用 CAD/CAM を用いてコンポジットレジンブロックから前装

響を放射線学的および組織学的に検討した。

部およびクラウンを製作した。その後，ZCC については，ジルコ

材料と方法

ニアフレームと前装部コンポジットレジンをレジン系装着材料に

雄性 Fischer ラット（9 週齢）に吸入麻酔後，全身麻酔を施した。

て接着した。

次いで，頭頂部に局所麻酔を施し，矢状縫合に沿って切開を加え全ての試料をレジン系装着材料にて , アバットメントに接着し皮膚骨膜弁を形成，剥離，翻転した。そして，矢状縫合を中心にた。試料を 37℃精製水中に 24 時間保管後，万能試験機を用いて左右対称に直径 5 mm のトレファインバーにて，脳硬膜に達しな破壊強度試験を行った。
成績及び考察い深さの外周溝を作製し，＃ 2 のラウンドバーを使用し，5 カ所
骨髄穿通し，実験母地とした。実験はプラスチックキャップの上

MCC の破壊強度（3.9±0.3 kN）は ZIC（3.3±0.5 kN）と比較して面に穴を開けた群（開放群），上面にチタンメッシュ（Jeli Ti メッ

有意に高い値を示した。ZAC（3.5±0.6 kN），ZIC および ZCC（3.7±

シュ）を設置した群（Ti 群）およびプラスチックキャップ群（PC0.5 kN）間，また ZAC，ZCC および MCC 間の破壊強度に有意差197

あることが明らかとなった。

は認められなかった。
本研究で評価された全てのインプラント上部構造は，臼歯部の22．イントラカインとしての IL-1α の機能

最大咬合力に耐えうる破壊強度を有していることが示された。また，ジルコニアフレームに前装する上部構造において，間接修復○大林美穂 1,2，塩野目尚 2，齋藤五月 1,2，尾曲大輔 3,4，用コンポジットブロックを応用して前装部を CAD-on した上部構

浅野正岳 3,4，石上友彦 2,5造は，陶材および間接修復用コンポジットレジンを築盛法で前装

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

した上部構造と同程度の破壊強度を有することが示唆された。

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅱ講座 2
日本大学歯学部病理学講座 3

21．異なる部位の根管象牙質に対するレジンコアの接
着性
○松吉佐季

1,2

，坪田圭司

2,3

2

，鈴木崇之 ，島村日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 4日本大学歯学部総合歯学研究所臨床研究部門 5

2

穣 ，
目的

田村ゆきえ 2，瀧本正行 2，陸田明智 2,3，宮崎真至 2,3
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野

IL-1 は炎症や感染防御に重要な役割を果たす炎症性サイトカイ

1

ンとして知られている。もともと内在性発熱因子やリンパ球活性

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅰ講座 2

化因子，胸腺細胞増殖因子，破骨細胞活性化因子などとして同定

日本大学総合歯学研究所生体工学研究部門 3

されたことからも分かるように，多様な生物活性を持つ。
IL-1 には α と β の二種類の分子種が存在し，遺伝子は同じク

目的
近年，失活歯症例に対して，健全歯質の保存を目的として直接

ロモソーム上に近接して存在する。そのなかで IL-1 α は 34 kDa

法による支台築造が行われる頻度が増加している。しかし，直接の precursor form（pIL-1 α ）として細胞内で産生された後，カル支台築造用レジン（コア用レジン）を用いた歯冠修復法においてパインによりプロセシングされ，中央部分から C 末端側のみのは，高い予知性を得るためのエビデンスは十分とは言えないのがmature form（mIL-1 α ）となって細胞外に分泌され，様々な機能現状である。そこでコア用レジンを用いた臨床技法の確立を目的を発揮する。しかし，pIL-1 α は mIL-1 α と同等な生物活性を有として，市販のレジンコアシステムの根管象牙質の異なる部位にすることや，通常の ER-Golgi の transport 経路をとらないことな

対する接着性について，接着強さ試験および接合界面の走査電子

ど，IL-1β とは異なった性質をもっている。なかでも pIL-1 α は顕微鏡（SEM）観察を行うことによって検討した。

核移行シグナルを持ち，核内で遺伝子の転写を control する機能材料および方法を有していることから intrakine とも呼ばれおり，きわめて興味供試したコア用レジンは，ビューティコア（BC，松風），DC コ

深い分子である。

アオートミックス ONE（DC，クラレノリタケデンタル），ユニフィ

本 研 究 で は IL-1 α の intrakine と し て の 働 き を み る た め にルコア（UC，ジーシー）およびエステコア（EC，トクヤマデンタル）

IL-1 α 強制発現細胞を用いて新たな target gene を検索すると共の合計 4 製品とした。

に，これらの発現と誘導にどのような影響を与えるかを目的とし被着体としては，2 〜 3 歳齢のウシ下顎前歯を用いた。歯根部

た。

の根尖側 2/3 を切除した後，頬舌方向で縦切した。さらに，歯頸材料および方法部および歯頸部から切端側 8 mm の部位で切断し，切端側から切ヒト子宮頸癌由来細胞株（HeLa）および口腔扁平上皮癌細胞株

縁群，歯頸群および歯根群とに分類した。これらの試片を，通法（HSC-3）は 10% ウ シ 胎 児 血 清 加 DMEM 培 地 に よ り 培 養 し た。

に従って研削したものを接着試片とした。各製造者指示条件で歯

full length IL-1 α を expression vector pcDNA に subcloning し面処理を行った後，レジンペーストを填塞，光重合したものを接（pcDNA-IL-1 α ）トランスフェクションに用いた。transfection は

着試験用試片とした。これらの試片を 37℃精製水中に 24 時間保Thermo Fisher Scientific 社製 Lipofectamine plus 試薬を用い管した後，万能試験機を用いて剪断接着強さを測定するとともに，た。transfection 後， 培 養 上 清 お よ び 細 胞 溶 解 液 を 回 収 し，コア用レジンと根管象牙質との接合状態について SEM を用いて

ELISA kit（R&D SYSTEMS）を用いて IL-1 α および IL-8 濃度を観察した。

測 定 し た。IL-8 mRNA 発 現 は real-time PCR に よ り， ま た，

成績および考察IL-8 遺 伝 子 の 転 写 レ ベ ル で の 発 現 調 節 に つ い て は luciferase

供試したコア用レジンの接着強さは，いずれの製品においてもassay により検討した。

頬舌側間での接着強さに違いは認められなかったものの，切端群

成績および考察および歯頸群に比較して歯根群で接着強さは低くなる製品もあっ

pcDNA-IL-1 α transfectant （IL-1 α transfectant）は培養上清た。製品間での接着強さは，EC が他の製品と比較して接着強さ

および細胞溶解液中に高濃度の IL-1 α を産生した。また IL-1 α

は高くなる傾向が認められた。SEM 観察においては，いずれのtransfectant では mock transfectant に比較して有意に IL-8 産生システムにおいてもギャップは認められず良好な接合界面が認めが増強されていた。real-time PCR の結果，この増強は転写レベられた。

ルで誘導されていることが明らかとなった。IL-1 α は intrakine

結論として細胞核内で様々な遺伝子発現の調節に関与する可能性が示

本実験の結果から，コア用レジンの根管象牙質接着強さは，製唆された。

品によって異なるものの歯根群で接着強さが低下するシステムが198