2011年（48巻）第2号
第２号（英⽂誌）
研究報告
遺伝・育種
エジプト在来ハト品種の遺伝的多様性(要旨）

Sherif RAMADAN・阿部秀明・⼭浦純⼀・⼩野⽥智昭・三宅武・井上-村⼭美穂
飼料・栄養
鶏の腸管各部位におけるコメのアミノ酸消化率(要旨）

本⽥和久・上曽⼭博・池上賢伍・⻑⾕川信
絶⾷処理ブロイラーの筋特異的ユビキチンリガーゼatrogin-1/MAFbxの遺伝⼦発現と⾻格筋タンパク質分解との間には⾼い正の相関がある

要旨

⼤塚彰・川富典⼦・中島⼀喜・荒⽊太郎・林國興
⽣理・繁殖
ブロイラーにおける孵化4⽇前の孵卵温度操作が孵化率、孵化後の能⼒、暑熱適応能に及ぼす影響(要旨）

Ingrid Halle・Barbara Tzschentke
ニワトリ7⽇胚⽣殖巣⽣殖細胞の新規分離法の開発(要旨）

中島友紀・峰松健夫・内藤充・⽥島淳史
孵卵19⽇⽬ニワトリ胚精巣と卵巣より採取した⽣殖細胞(gonocytes)の培養とレシピエント胚⽣殖巣への導⼊(要旨）内藤充・春海隆・桑名貴
⿃類卵殻クチクラ層の多様性(要旨）

楠⽥哲⼠・岩澤淳・⼟井守・⼤⽮豊・ 吉崎範夫
急性単離ストレスに対するニワトリヒナの⾎液性状と間脳CRHおよびAVT遺伝⼦発現の時間経過的変化(要旨）

柳⽥光⼀ ・⽩⽯純⼀ ・河上眞⼀ ・豊後貴嗣(研究ノート)グレリンのin ovo投与と初⽣雛のプロラクチンレベルへの影響(要旨）

Alireza Lotﬁ ・Habib Aghdam Shahryar ・Jamshid Ghiasi Ghaleh-Kandi ・Hiroyuki Kaiya ・ Alireza Ahmadzadeh
環境・管理
産卵鶏排泄物におけるアンモニア排出の経時的変化 (要旨）
Justin H. Chepete・H. Xin・H. Li(研究ノート)家禽敷料の揮発性脂肪酸低減効果に関する化学薬品添加の影響―検査実験―(要旨）

Sam Churl Kim・Seong Joon Yi ・In Hag Choi要旨第２号（英⽂誌）
エジプト在来ハト品種の遺伝的多様性
Sherif RAMADAN1、 2・阿部秀明1・⼭浦純⼀3・⼩野⽥智昭4・三宅武4・井上-村⼭美穂1
1京都⼤学野⽣動物研究センター、京都市 606-8203
2ベンハ⼤学獣医学部、モシュトホル、エジプト
3⽇本鳩レース協会常南連合会、柏市277-0087
4京都⼤学⼤学院農学研究科、京都市 606-8502
ハトは⾷⽤、観賞⽤、レース⽤、実験⽤など多様な⽬的で改良されており、エジプトでは古来より、⾷⽤のみならず通信にも⽤いられてきた。本
研究では、エジプトの6品種（n = 110）と⽇本のレースバト（n = 23）計133個体の遺伝的多様性を解析した。品種あたり1個体のミトコンドリアCOI配列を解析し、また全個体のマイクロサテライト11座位の型判定を⾏った。COI配列の⽐較により、7集団はすべてドバト（Columba livia）と同⼀クラスターに属することがわかった。マイクロサテライト11座位の型判定により、計89アレルが⾒いだされ、座位あたりの平均アレル数は8.1であった。ヘテロ接合率の期待値はエジプト6品種で0.580、⽇本のレースバトで0.630であった。7集団のFSTは0.203と⽐較的⾼い分化を⽰した。エジプトのZagelと⽇本のレースバトの組合せは、FST（0.108）とNeiの遺伝距離（0.154）の両⽅で最も低い値を⽰した。ハトは農業および産業的に重要な家禽であり、本研究で得られた情報は、本種の持続的な選抜改良計画に役⽴つと考えられる。

キーワード︓エジプト在来品種、遺伝的多様性、マイクロサテライト、ミトコンドリアCOI、ハト
鶏の腸管各部位におけるコメのアミノ酸消化率
本⽥和久・上曽⼭博・池上賢伍・⻑⾕川信神⼾⼤学⼤学院農学研究科 神⼾市 657-8501
近い将来、飼料及び燃料⽤のトウモロコシの世界的需要は急速に上昇すると考えられる。コメはトウモロコシの代替品の候補となる穀物の⼀つである。しかしながら、ニワトリの消化管におけるコメのアミノ酸消化率は未だ調べられていない。本研究では、腸管にフィステルを装着したニワトリを⽤いて、コメ（⽞⽶）のアミノ酸消化率を調べた。鶏の空腸遠位部、回腸中央部、回腸遠位部或いは直腸遠位部にフィステルを装着した。腸管内消化物をそれぞれの部位で採取し、消化物中のアミノ酸含量を測定した。ニワトリにはコメ飼料、コメ－⿂粉飼料或いはトウモロコシ主体飼料を給与した。ニワトリの腸の部位間における真のアミノ酸消化率に有意な違いは認められなかった。しかしながら、コメ飼料において、アルギニンを除く、測定した総てのアミノ酸の消化率は、トウモロコシ主体飼料のそれに⽐べ有意に⾼かった。⼜、コメ－⿂粉飼料において、チロシンを除く測定した総てのアミノ酸の消化率は、トウモロコシ主体飼料のそれに⽐べ有意に⾼かった。これらの結果から、ニワトリの飼料において、コメがトウモロコシの代替品として使⽤できる可能性が⽰唆された。
キーワード︓アミノ酸消化率、トウモロコシ、⿂粉、フィステル、コメ
絶⾷処理ブロイラーの筋特異的ユビキチンリガーゼatrogin-1/MAFbxの遺伝⼦発現と⾻格筋タンパク質分解との間には⾼い正の相関がある
⼤塚彰1・川富典⼦1・中島⼀喜2・荒⽊太郎1・林國興1
1⿅児島⼤学農学部 ⽣物資源化学科 ⿅児島市郡元1-21-24 890-0065
2畜産草地研究所 分⼦栄養研究チーム つくば市池の台2 305-0901
本研究では、ブロイラーの⾻格筋タンパク質分解と筋特異的ユビキチンリガーゼatrogin-1/MAFbxの遺伝⼦発現に対する絶⾷の影響を調べた。24時間あるいは48時間の絶⾷に応答して、体重および胸筋重量は時間依存的に減少した。筋原線維タンパク質分解の指標である筋組織の遊離Nt-メチルヒ
スチジン含量は絶⾷24時間で給餌対照区の1.8倍に、48時間では2.5倍にまで増加した。絶⾷に応答してatrogin-1/MAFbx遺伝⼦発現は時間依存的に顕増し、48時間ではmRNAの誘導は給餌対照区の20倍にまで上昇した。⼀⽅、20SプロテアソームC1およびC2サブユニットの遺伝⼦発現は絶⾷時間に伴って減少する傾向を⽰した。ユビキチン遺伝⼦の変化に有意差はなかった。Atrogin-1/MAFbx遺伝⼦発現量は、胸筋重量とは直線的な⾼い負の相関（r2=0.754, P<0.001）を⽰し、⼀⽅で筋遊離Nt-メチルヒスチジン含量とは直線的な⾼い正の相関（r2=0.784, P<0.001)を⽰した。以上の結果よりatrogin-1/MAFbxは⾻格筋タンパク質分解の促進に重要な役割を果たしており、その遺伝⼦発現はタンパク質分解の信頼できる指標となることが⽰された。
キーワード︓

atrogin-1/MAFbx、ブロイラー、絶⾷、⾻格筋タンパク質分解、Nt-メチルヒスチジン

ニワトリ7⽇胚⽣殖巣⽣殖細胞の新規分離法の開発
中島友紀1・峰松健夫2・内藤充3・⽥島淳史1
1. 筑波⼤学⽣命環境科学研究科、〒305-8572 茨城県つくば市天王台1-1-1
2. 東京⼤学医学系研究科、アドバンストスキンケア（ミスパリ）寄附講座 〒113-0033 東京都⽂京区本郷7-3-1
3. 農業⽣物資源研究所、遺伝⼦組換え家畜研究センター、 〒305-8602 茨城県つくば市池の台２
ニワトリにおける⽣殖系列キメラの作製は⿃類遺伝資源の保存に⼤変有効である。⽣殖系列キメラの作製には、ニワトリ初期胚より回収可能な始原⽣殖細胞および⽣殖巣⽣殖細胞（GGCs）が⽤いられている。これまで様々なGGCsの回収⽅法が報告されてきたが、いずれも効率的ではなく、より効率的な回収⽅法の開発が求められている。そこで本研究では、ニワトリ初期胚におけるGGCsの新規分離法を開発することを⽬的とした。ニワトリ7⽇胚から取り出した⽣殖巣をCa2+およびMg2+を含まないリン酸緩衝⽣理⾷塩⽔（PBS[-]）に浸漬し、37.8℃で24時間培養した。培養開始後30分に⽣殖巣からGGCsが遊離されるのが観察された。遊離したGGCs数は培養開始後12時間まで増加した。⼀⽅、遊離した総細胞数に対するGGCs数の⽐率（純度）は培養開始後90分までは約50％であったが、その後低下した。雌胚においては、右側⽣殖巣に⽐べ左側⽣殖巣から有意に多くのGGCsが遊離した（P<0.05）。本⽅法を⽤いて遊離したGGCsの移住能を検討するため、50個の遊離GGCsをPKH26で蛍光染⾊した後、2⽇胚の⾎管内に移植した。移植5⽇後、レシピエント胚の⽣殖巣からPKH26陽性で形態的にGGCsを⽰す細胞が観察された。以上の結果より、初期胚由来の⽣殖巣をPBS[-]内で培養することにより、レシピエント胚⽣殖巣への移住能を有するGGCsを⾼純度で回収することが可能であることが⽰された。
キーワード︓ニワトリ、⽣殖巣⽣殖細胞、分離、PBS[-]
孵卵19⽇⽬ニワトリ胚精巣と卵巣より採取した⽣殖細胞(gonocytes)の培養とレシピエント胚⽣殖巣への導⼊
内藤充１・春海隆１・桑名貴２

１農業⽣物資源研究所、茨城県つくば市305-8602

２国⽴環境研究所、茨城県つくば市 305-8506
ニワトリ胚精巣中の⽣殖細胞(gonocytes)には幹細胞が含まれており、この細胞を培養増殖することにより精原幹細胞を樹⽴できる可能性がある。精原幹細胞は精⼦に特異的に分化できるため、遺伝⼦操作等にとって極めて有⽤な細胞になると考えられる。本研究では、ニワトリ胚精巣と卵巣から採取した⽣殖細胞を集めて、インビトロで培養増殖することを試みた。孵卵19⽇⽬胚（横斑プリマスロック種）より精巣と卵巣を採取し、トリプシン処理により細胞を分散した後、ディッシュで培養した。培養した細胞は⼤多数が体細胞であることから、⽣殖細胞を濃縮するためディッシュを軽く振盪して⾮接着細胞を集め、培養を継続した。培養中の⽣殖細胞はCVH抗体により同定し、増殖能を調べた。⼀⽅で、培養した精巣由来⽣殖細胞に蛍光ラベルし、孵卵2.5⽇⽬のレシピエント胚（⽩⾊レグホーン種）の⾎流中あるいは体腔上⽪へ移植し、⽣殖巣への導⼊を試みた。ディッシュへの⾮接着細胞を集めることにより、体細胞を排除し、⽣殖細胞を濃縮することができた。培養した精巣由来⽣殖細胞は⼀部で増殖が認められた。CVH抗体により調べた結果、⽣殖細胞が分散して増殖している場合と、塊になって増殖している場合が観察された。培養した⽣殖細胞をレシピエント胚の体腔上⽪へ移植した場合のみ、⼀部の細胞ではあるが、レシピエント胚⽣殖巣へ導⼊された。しかし、卵巣から採取した⽣殖細胞はインビトロでの増殖は観察されなかった。以上の結果より、ニワトリ胚精巣から採取した⽣殖細胞のインビトロでの培養は可能であり、培養⽣殖細胞の⼀部はレシピエント胚⽣殖巣へ導⼊できることが明らかになった。
キーワード︓ニワトリ、培養、胚、⽣殖系列キメラ、⽣殖細胞
⿃類卵殻クチクラ層の多様性
楠⽥哲⼠1・岩澤淳1・⼟井守1・⼤⽮豊2・ 吉崎範夫11 応⽤⽣物科学部、岐⾩⼤学、岐⾩市501-1193
2 ⼯学部、岐⾩⼤学、岐⾩市501-1193
Key words: calcite, cuticle layer, eggshell, phosphorus, vaterite.
卵殻クチクラ層の構造とミネラル成分が、５種類の⿃類で調べられた。卵殻結晶柱の最頂部で測定したクチクラ層の厚さは、⾚⾊野鶏で約1?m、モモイロペリカンで約130?m、⽇本ウズラで約10?m、ヨーロッパフラミンゴで約110?m、フンボルトペンギンで約45?mであった。EDTAで脱灰したクチクラ層の基質は、すべての⿃で共通して、いろいろなサイズの⼩胞で構成されていた。Ｘ線微⼩分析装置で検出されたクチクラ物質中の主要な元素は、O、C、CaとPで、これらの原⼦数の割合はこの順番で減少した。ウズラ、フラミンゴとペンギンのクチクラ中のPの割合は、⾚⾊野鶏とペリカンのそれと⽐べて有意に⾼かった。⾛査電顕像に元素マッピングを⾏うと、Caのシグナルは卵殻層に強く、クチクラ層に弱く現れた。⼀⽅、Pのシグナルはほとんどクチクラ層に限って現れた。Ｘ線回折装置で卵殻の内側から結晶回折を⾏うと、すべての⿃類で炭酸カルシュウムのカルサイト結晶型を⽰した。クチクラ物質中では、その型は⾚⾊野鶏ではカルサイト型、ペリカンではカルサイトとバテライトの混合型であった。ウズラ、フラミンゴとペンギンのクチクラ物質は結晶の存在を⽰す結果が得られなかったが、このことはミネラル化合物が⾮結晶型であることを⽰している。これらの結果は、クチクラ層のミネラル構造の多様性は、クチクラ基質の構造に加えて、リンの存在によってもたらされることを⽰唆している。
急性単離ストレスに対するニワトリヒナの⾎液性状と 間脳CRHおよびAVT遺伝⼦発現の時間経過的変化
柳⽥光⼀ 1)・⽩⽯純⼀ 1)・河上眞⼀ 1)・豊後貴嗣 1, 2)１） 広島⼤学⼤学院⽣物圏科学研究科、東広島市 739-8528
２） 広島⼤学⽇本鶏資源開発プロジェクト研究センター、東広島市 739-8528
ストレス刺激を評価することは、家禽の⽣産性のみならずアニマルウェルフェアの観点からも重要な課題である。本研究では、ニワトリヒナにおける単離ストレスの影響について評価することを⽬的とし、単離（5、10あるいは30分）後の⾎漿グルコース、遊離脂肪酸およびコルチコステロン（CORT）ならびに間脳のコルチコトロピン放出ホルモン（CRH）およびアルギニン?バソトシン（AVT）のmRNAを調査した。⾎漿グルコース濃度
は、処理の有無およびその時間に関わらず変化は認められなかったが、⾎漿遊離脂肪酸の場合、単離30分のヒナにおいて無処理ヒナと⽐較して有意に⾼い値を⽰した（P<0.01）。⾎漿CORT濃度については、単離5および10分のヒナにおいて無処理ヒナよりも⾼い値を⽰したものの（P<0.01）、単離30分のヒナにおいて差は認められなかった。間脳遺伝⼦発現量では、単離10分のヒナにおいてのみCRHが⾼い値を⽰したが、AVTの場合、処理の有無およびその時間に関わらず差は認められなかった。以上の結果から、ニワトリヒナ中枢において、CORTのフィードバックによるCRH合成抑制は、単離30分以前に⽣じること、さらに間脳AVTの遺伝⼦発現量は、急性単離ストレスの評価指標として適切でないことが⽰唆された。
キーワード︓単離ストレス、コルチコステロン、CRH、AVT、間脳、ニワトリヒナ