日本家禽学会誌，53 : J 45-J 49，2016

Copyright ©2016, Japan Poultry Science Association

烏骨鶏選抜集団第 5 世代における 8 番染色体上の DNA マーカーと生産形質との関連性
西山由紀1・MD ミザヌル ラハマン1, 2・阿南加治男3・山中賢一1, 2・和田康彦1, 2
1

佐賀大学農学部，佐賀市本庄町 840-8502
鹿児島大学連合農学研究科，鹿児島市郡元 890-8580
3大分県農林水産研究指導センター畜産研究部豚・鶏チーム，豊後大野市三重町赤嶺 879-7111
2

烏骨鶏は絹糸状の羽毛，黒い皮膚などの特徴をもつ鶏品種で，古くから人間の健康に結びつくとして肉と卵が高値で取引されてきた。しかし，他の鶏品種と比較して小型で産卵率が低いために生産効率が悪いことが問題となっている。著者
らはこれまでに産卵率や発育の改良を目的として大分県で選抜されている烏骨鶏選抜集団の第 5 世代を供試して，他の採卵鶏で産卵率に関連する QTL が報告されている 2 番染色体および Z 染色体上の DNA マーカーと産卵率などの生産形質との関連性について検討してきた。本研究では，さらに関連する QTL が報告されている 8 番染色体上の DNA マーカーと生産形質との関連性について検討した。8 番染色体上の In/Del マーカー（AAMm77）と 3 つの PCR-RFLP マーカー
（RZ-M75，RZ-M76，RZ-M77）を用いて，烏骨鶏選抜集団第 5 世代の雌 195 羽と雄 58 羽のジェノタイピングを行った。
DNA マーカーのハーディーワインベルグ平衡に対する χ2 値を求めたところ，雄雌ともに RZ-M77 と AAMm77 において平衡条件から有意に異なることが明らかとなった。タイピング結果と 150∼300 日齢での産卵率，294∼300 日齢の平均卵重，294∼300 日齢の平均卵殻強度，および 50 日齢（雌のみ），100 日齢，150 日齢，300 日齢，450 日齢の体重との関連性について，統計言語 R を用いて分散分析を行った。雌では AAMm77 と卵重との間に有意な関連性が認められた（p＜0.05）。雄では AAMm77 と 450 日齢の体重との間に有意な関連性が認められた（p＜0.05）。これらの結果を踏まえて，卵重や雄の発育との関連性が認められた AAMm77 の周辺に新たなマーカーを開発して検討を進める必要があると考えられた。
キーワード : 烏骨鶏，8 番染色体，産卵率，卵殻強度，発育──────────────────────────緒

きたが，ある程度の改良はできるものの産卵率は 50% 程度で頭言打ちになっている（野口ら，2001 ; 和田ら，2008a）。一方，大分県

烏骨鶏（Gallus gallus var domesticus）は，ニワトリの 1 品種でで 11 の鶏系統の能力調査と交配試験を経て作出された「おおいあり，全身が絹糸状の羽毛で覆われており，皮膚，骨，肉，内臓た冠地どり」の雄系には食味性の改善の観点から烏骨鶏を交配しにメラニン色素が沈着し暗紫色を呈しており，古来から薬用や愛て作出されており，今後も烏骨鶏が新たな地鶏作出の基礎品種と玩用に用いられてきた。烏骨鶏の原産地については諸説存在し明して利用されていくと思われる（阿南と津田，2008）。

確にはなっていないが，分布は東南アジア地域の広範囲に及んで和田ら（2008a, b）は，日本における 53 羽の烏骨鶏，および大分いる。日本には 17 世紀（江戸時代初期）に渡来したと言われてお県の烏骨鶏選抜集団第 4 世代 311 羽（雄 69 羽，雌 242 羽）についり，1943 年に天然記念物に指定された。平均体重は約 1.2 kg とやて，2 番染色体上のプロラクチン（PRL）遺伝子のプロモーター

や小ぶりだが，肉は締まっていて，脂肪は少ない。烏骨鶏には就領域に位置する 24 bp の挿入の有無（Jiang et al., 2005）について巣性と呼ばれる産んだ卵を抱いて温める行動があるために，産卵

遺伝子型判定を行った。その結果，Jiang et al.（2005）が用いた烏数は年間に 50 から 200 個程度で他の産卵鶏品種と比べて生産効

骨鶏集団では，In 型対立遺伝子がほとんど見られなかったが，In率が極めて低い（野口ら，2001）。近年，烏骨鶏の産卵率を改良す

型対立遺伝子はヘテロ個体として確認された。また，この選抜集

る選抜試験が大分県，東京都，栃木県，和歌山県などで行われて団第 4 世代において生産形質とこの In/Del 座位との間に有意な関連性は認められなかったものの，Del/Del 型のピーク産卵率が2015 年 10 月 27 日受付，2016 年 5 月 25 日受理
連絡者 : 和田康彦
〒840-8502 佐賀県本庄町 1 番地
Tel : 0952-28-8787
Fax : 0952-28-8787
E-mail : ywada@cc.saga-u.ac.jp

50∼55% であったのに対して In/Del 型のピークは 60∼65% であり，In/Del 型のピークが約 10% 程度高い産卵率を示した。また，
岳ら（2011）は PRL 遺伝子周辺に烏骨鶏と白色レグホーン間に連鎖不平衡ブロックが存在していることを示した。
ローシャンら（2012）は，就巣性の除去による産卵率の向上な

J45

日 本 家 禽 学 会 誌

53 巻

J 2 号（2016）

ど，烏骨鶏の生産性の向上を目指して，2 番染色体上の候補遺伝

体上の 4 つの DNA マーカーについて遺伝子型判定を行い，産卵子である PRL 遺伝子プロモーター領域の 24 bp の挿入の有無と，率などの生産形質との関連性について検討した。

プロラクチンの分泌に関与しているといわれる vasoactive intes-

材 料 と 方 法

tinal peptide 受容体 1（VIPR1）遺伝子領域の 1 塩基置換（Xu et
1． 供試鶏al.，2011）および視床下部における摂食刺激に対する反応に関与しているとされる neuropeptide Y（NPY）遺伝子領域の 1 塩基置

大分県農林水産研究指導センターにおいて，宮崎，青森，東京，

換（Xu et al., 2011）に関して，烏骨鶏選抜集団第 5 世代の遺伝子

佐賀，大分の各都県畜産試験場などから導入した烏骨鶏を用いて型判定を行い，産卵率などの生産形質との関係性を検討した。そ基礎集団を作成し，雌は産卵率で雄は発育と体型で選抜した烏骨の結果，50 日齢体重，100 日齢体重，150 日齢体重，300 日齢体重，

鶏選抜集団を構築している。本研究では第 5 世代の雌 195 羽，雄450 日齢体重，産卵率，卵殻強度のすべての形質で父鶏の効果と58 羽を使用した。
2． 飼育方法と表現型の測定の有意な関連性を明らかにした。
Rahman et al.（2014a）は，烏骨鶏選抜集団第 4 世代で PRL 遺鶏は 3 つの異なる期間に孵化し，異なる鶏舎において飼育され伝 子 プ ロ モ ー タ ー 領 域 の 24 bp の 挿 入 を ヘ テ ロ で も つ 個 体

た。全期間にわたって，市販の配合飼料を自由に与えた。雛は 40（In/Del 型）どうしで交配させ，In/In 型の烏骨鶏個体を生産し日齢までバタリーケージで飼育され，80 日齢までは中雛用ケーた。そ し て In/Del×In/Del 集 団 に お い て 3 つ の 候 補 遺 伝 子

ジ，120 日齢までは大雛用ケージ，450 日齢までは成鶏用シングル（PRL 遺伝子，VIPR1 遺伝子，NPY 遺伝子）の DNA マーカーとケージ（226×393×455 mm）で飼育された。生産形質として雌で生産形質との関連性を検討し，卵殻強度と NPY 遺伝子，雄の 50

は，50，100，150，300，450 日齢での体重，150∼300 日齢での産日齢体重と PRL 遺伝子，VIPR1 遺伝子で有意な関連性を明らか

卵率，294∼300 日齢での平均卵重と平均卵殻強度を測定し，雄でにした。

は，100，150，300，450 日齢での体重を測定した。卵殻強度の測Tuiskula-Haavisto et al.（2002）は 2 つの採卵鶏系統の交雑家系

定には卵殻強度計Ⅱ（富士平工業，東京）を使用した。
3． DNA 抽出と遺伝子型判定を用いて生産形質との QTL 解析を実施し，4 番染色体，8 番染色体および Z 染色体上に産卵数に関与する QTL を検出している。

尺骨静脈からヘパリン入り採血管を用いて採血を行い，−20℃

Rahman et al.（2014b）は，烏骨鶏選抜集団第 5 世代においてプロで保存し，Pure Gene キット（フナコシ，東京）を使用して DNA

ラクチン受容体や成長ホルモン受容体が座乗している Z 染色体を抽出した。DNA マーカーとしては Riztyan et al.（2011）および上の 5 つの DNA マーカーについて PCR-RFLP で遺伝子型判定Maw et al.（2012）の情報をもとに 8 番染色体の In/Del マーカーを行い，一部の DNA マーカーにおいて，産卵率，卵重，雌の 150（AAMm77）と 3 つの PCR-RFLP マーカー（RZ-M75，RZ-M76，

日齢体重，雄の 150，300 日齢体重との間に有意な関連性が存在す

RZ-M77）を用いた。抽出したゲノム DNA をテンプレートとしることを明らかにした。しかし，これら 2 番染色体や Z 染色体なて，PCR によって各 DNA マーカー用のプライマー（表 1）を使どの DNA マーカーによって示されたゲノム領域だけでは遺伝分

用して DNA の増幅を行った。PCR 酵素には Takara ExTaq Hot

散の一部しか説明できていないと考えられるため，これらの領域

start version（タカラバイオ，滋賀）を使用した。 PCR 条件は 95

以外にも，烏骨鶏選抜集団において生産形質に関与するゲノム領分で 5 分間の前加熱を行い，95℃ 30 秒間の熱変性，表 1 に示すア
ニーリング温度で 30 秒間のアニーリング，72℃ 1 分間の伸長反域が存在することが示唆された。

応を 40 サイクル行った後，72℃ 10 分間の伸長反応を行った。

Tuiskula-Haavisto et al.（2002）は採卵鶏の 2 系統を交雑して得られた F2 家系について QTL 解析を実施し，14 箇所のゲノムワ

In/Del マーカーについては 1.2% アガロースゲル電気泳動によりイドでの有意な QTL を検出した。その中で 18∼40 週の産卵数

遺伝子型判定を行い，PCR-RFLP マーカーについては PCR 産物については Z 染色体のほかに 8 番染色体にも QTL を検出していを制限酵素 PstI で 37℃ 3 時間処理後，3.0% アガロースゲル電気る。そこで本研究では烏骨鶏選抜集団第 5 世代において 8 番染色

泳動により遺伝子型判定を行った。

表 1． DNA マーカーとプライマー情報
DNA
マーカー

染色体上
の位置

RZ-M755897948

RZ-M7614459355

RZ-M7722507694

AAMm7727438242

プライマーの配列
CAT ATT TCA TCA TCG TAC GGT TCA CAGAC CAG CAT GGA AGA GTT GAG
AAG TAC CTC TCA ATT AAC ATT TAC CAT
AAG TAG AAG GTT CAA CAA CAT ATC AG
GTG CTA ACC AAG CAG CGA ACATT CGG CTG CCA CGA GAC
CAT TTG GGG CAG CAG TAT TC
CAC CTC CCA AAC TTG CAT CT

J46

アニーリ
ング温度

PCR 産物長
（bp）

制限酵素

60.0

1010

Pst Ⅰ

61.0

937

Pst Ⅰ

61.0

883

Pst Ⅰ

62.5

363/339─西山ら : 烏骨鶏の DNA マーカー
4． 統計解析

分散分析の結果から，DNA マーカーと生産形質との間に有意な遺伝子型頻度がハーディー・ワインベルグ平衡に達しているか関連性が認められたものについてチューキーの多重範囲検定を実どうか確認するため POPGEN version1.32（http://www.ualberta.

施した。

ca/~fyeh/）を用いて χ2 検定を実施した。また，遺伝子型と産卵結率などの生産形質との関連性について，遺伝子型と飼養管理グ

果ループを主効果とする二元配置分散分析により統計処理言語 R

DNA マーカーごとの遺伝子型判定の結果を表 2 に,ヘテロ接合（Ihaka and Gentleman, 1996）を用いて判定した。雌は 50，100，

体頻度とハーディーワインベルグ平衡に対する χ2 値を表 3 に示

150，300，450 日齢体重，産卵率，卵重，卵殻強度との関連性を分した。観測されたヘテロ接合体頻度は RZ-M75 の雌で 0.14，雄で0.21 と低く，AAMm77 では雌で 0.41，雄で 0.66 と高かった。期析し，雄は 100，150，300，450 日齢体重との関連性を分析した。

待されたヘテロ接合体頻度は，RZ-M75 で雄雌ともに 0.2 未満と低く RZ-M77，AAMm77 では雄雌ともに 0.40 以上と高かった。

表 2． 各 DNA マーカーにおける遺伝子型別の羽数
性別
雌DNA マーカー

遺伝子型

羽数

平衡に対する χ2 値が雄雌ともに 5% 水準で有意であり，ハーRZ-M75

AA
AG

168
27

ディーワインベルグ平衡に達していないことが示された。

TT
TG
GG

155
36
4

T/T
T/C

26
55

C/C

114

AAMm77

In/In
In/DelDel/Del

54
79
62

RZ-M75

AA
AG

46
12

TT
TG

42
14

GG

2

T/T
T/C

10
19

C/C

29

In/In
In/DelDel/Del15
38
5

RZ-M76

RZ-M77雄

χ2 検定の結果，RZ-M77 と AAMm77 のハーディーワインベルグ

RZ-M76

RZ-M77

AAMm77雌について DNA マーカーと 50，100，150，300，450 日齢体重，
産卵率，卵重，卵殻強度との関連性を分析した結果（表 4），その結果，AAMm77 と卵重との間に 5% 水準の有意な関連性が認められた。体重では，すべての日齢で DNA マーカーと有意な関連性は認められなかった。
雄について DNA マーカーと 100，150，300，450 日齢体重との有意な関連性を分析した結果（表 5），AAMm77 と 450 日齢体重との間に 5% 水準で有意な関連性が認められた。
分散分析の結果から DNA マーカーと生産形質との間に有意な関連性が認められたものについてチューキーの多重範囲検定を実施した結果を表 6 に示した。その結果，AAMm77 では Del/Del
型で有意に卵重が重いことが示された（p＜0.05）。雄の 450 日齢
体重では，AAMm77 の Del/Del 型が有意に重いことが示された（p＜0.05）。

考察

烏骨鶏の肉と卵は古来より漢方薬の原料や健康食品として高額で取引されているが，産卵率が他の鶏品種と比べて著しく低いために生産効率が悪いことが問題となっている。そこで本研究では烏骨鶏の産卵率を改良することを目的として，産卵率を中心に選抜されている烏骨鶏選抜集団を用いて DNA マーカーと生産形質との関連性を検討した。

表 3． ヘテロ接合体頻度とハーディーワインベルグ平衡に対する χ2 値
性別
雌

雄

* p＜0.05

DNA
マーカー

観測された
ヘテロ接合体頻度期待された
ヘテロ接合体頻度

ハーディーワインベルグ
平衡に対する χ2 値

RZ-M75
RZ-M76
RZ-M77
AAMm77

0.14
0.18
0.28
0.41

0.13
0.20
0.40
0.50

1.04
1.28
16.92**
7.11**

RZ-M75
RZ-M76
RZ-M77

0.21
0.24
0.33

0.19
0.26
0.45

AAMm77

0.66

0.49

0.70
0.46
4.40*
6.78**** p＜0.01

J47

日 本 家 禽 学 会 誌

53 巻

J 2 号（2016）

表 4． 雌の生産形質に対する各 DNA マーカーの分散分析結果
DNA
マーカー

50 日

100 日

齢体重

齢体重

0.00

0.93

RZ-M77

0.65
2.30

0.91
1.65

AAMm77

0.41

1.03

RZ-M75
RZ-M76

150 日
齢体重
0.14
0.79

300 日
齢体重
0.35

0.82

1.59
0.02

0.89

0.70

450 日
齢体重
0.12
0.67
0.59
0.17

卵殻

産卵率

卵重

0.12

0.72

0.47

0.01
1.34

0.34
1.06

0.38
2.91

0.07

3.29*

1.20

強度

数値 : F 値** p＜0.01 * p＜0.05
産卵率は 150∼300 日齢の産卵率，卵重は 294∼300 日齢の平均卵重，
卵殻強度は 294∼300 日齢の平均卵殻強度。

表 5． 雄の生産形質に対する各 DNA マーカーの分散分析
結果
DNA
マーカー

100 日
齢体重

150 日
齢体重

300 日
齢体重

450 日
齢体重

RZ-M75
RZ-M76

0.09
0.10

0.24
0.80

0.26
1.19

0.13
1.98

RZ-M77
AAMm77

0.31
0.76

0.21
2.56

1.30
2.27

1.79
3.22*

数値 : F 値** p＜0.01

表 6． 遺伝子型別の最小自乗平均値
生産形質

卵重（g）

雄の 450 日
齢体重（g）* p＜0.05

DNA
マーカー
AAMm77

AAMm77

遺伝子型

最小自乗
平均値

In/In
In/DelDel/Del39.17a39.51a

In/In
In/Del1505.88a1524.37a1635.73b

Del/Del

40.42ba, b ; 異なる肩文字間に有意差あり（p＜0.05）
卵重は 294∼300 日齢の平均卵重χ2 検定の結果，RZ-M77 と AAMm77 とでハーディーワインベ
ルグ平衡に対する χ2 値が雄雌ともに 5% 水準で有意な値となったため，ハーディーワインベルグ平衡に達していないことが示さ

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Riztyan, Katano T, Shimogiri T, Kawabe K and Okamoto S.

れた。このことより，このマーカー付近に対して，何らかの選抜
圧が生じている可能性が考えられる。
分散分析の結果から AAMm77 について卵重（p＜0.05）と雄の450 日齢体重（p＜0.05）に有意な関連性が認められた。体重の増加とともに卵のサイズも増加すると考えられるため，二つの形質は同一の QTL に支配されている可能性が考えられる。近年，烏骨鶏を地鶏の食味性の改善に使用する動きもあり，烏骨鶏の発育の改良についても必要性が増してきている。そこで，卵重と雄の体重との関連性が認められた AAMm77 について，周辺に新たなDNA マーカーを開発して，詳細な検討を進める必要がある。
日本では烏骨鶏卵の需要が高いわりには産卵率が低く，産卵率の遺伝的な改良が待たれている。大分県などによる烏骨鶏の選抜試験の結果を見ると，表現型による選抜だけでは現状以上の産卵率の改良は困難であると推察される（阿南ら，2008）。一方，
DNA マーカーによるマーカーアシスト選抜は有効と考えられるが，今回の分析では産卵率と有意な関連性を持つ DNA マーカーを発見できなかった。Tuiskula-Haavisto et al.（2002）は 8 番染色体に産卵率の QTL を発見しており，8 番染色体上の他の DNA
マーカーをさらにタイピングしていくことによって，産卵率と関連性のある DNA マーカーを発見できる可能性がある。

引

用

文

献

阿南加治男・津田 剛．新大分地鶏の作出．大分県畜産試験場試
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J48

西山ら : 烏骨鶏の DNA マーカー
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Relationship between Production Traits and DNA Markers on
the 8th Chromosome in the 5th Generation of Selection
Program of Japanese Silky Fowl
Yuki Nishiyama1, MD. Mijanur Rahman1, 2, Kajio Anann3,
Ken-ichi Yamanaka1, 2 and Yasuhiko Wada1, 2
1
2
3Faculty of Agriculture, Saga University, Saga, 840-8502

The United Graduate School of Agriculture, Kagoshima University, Kagoshima, 890-5880

Livestock Research Institute, Oita Prefectural Agriculture, Forestry and Fisheries Research Center, Bungo-Ohno, 879-7111

Silky fowl is a famous chicken breed which has a beautiful silky feather and black skin. The meat and egg of Silkyfowl have been traded at a high price for human health. However, it becomes the problem in comparison with otherchicken breeds in small size and that a production egg rate is low. The QTLs for egg production rate were reported on
the 2nd and Z chromosome. Authors also studied the relationship between the DNA markers on these chromosomes andthe production traits in the fifth generation of the selection program of Japanese Silky fowl. In this study, the relationship between five DNA markers on the 8th chromosome and the production traits in the fifth generation of theselection program of Japanese Silky fowl was examined. For the known an In/Del markers (AAMm77) and three PCRRFLP markers (RZ-M75, RZ-M76, RZ-M77) on the 8th chromosome, 195 females and 58 males were genotyped. The
results of χ2 test for Hardy-Weinberg equilibrium showed the significant difference for RZ-M77 and AAMm77. The
ANOVA was performed using R language for the study of the association with production traits. The significant
associations with average egg weight for AAMm77 (p＜0.05) were showed in the female birds. In the male birds, thesignificant associations with body weight at 450 days of age for AAMm77 (p＜0.05) were detected. These results suggested the needs of the new DNA markers around AAMm77 for egg weight and male growth.
(Japanese Journal of Poultry Science, 53 : J45-J49, 2016)
Key words : egg strength, GGA8, growth, production egg rate, Silky fowl

J49